Jurnal Ilmu Produksi dan Teknologi Hasil Peternakan ISSN 2303-2227 Vol. 03 No. 1, Januari 2015 Hlm: 1-3
Hubungan Keragaman Gen Insuline-like Growth Factor 2 (IGF2) terhadap Sifat Pertumbuhan pada Ayam Kampung
Association of Insuine-Like Growth Factor 2 (IGF2) with Growth Traits in Kampung Chicken R.P. Rahmadani 1 , C. Sumantri 2 , S. Darwati 2 , N.Ulupi 2
1 Fakultas Peternakan, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor 2 Departemen Ilmu Produkdi dan Teknologi Peternakan, Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor, Jl. Agatis, Kampus IPB Dramaga, Bogor 16680, Indonesia Correspondence author: ria.putri.rahmadani@gmail.com

## ABSTRACT
Kampung chicken is one of Indonesia native chickens which has slow growth and it needs to be improved. Growth is a quantitative trait which is controled by many genes. One of the genes which plays a crucial role in controling growth is IGF2 gene. The objective of this study was to analyze the association of IGF2 gene polymorphisms with growth traits in kampung chicken. A total of 56 male and female chicks were maintained for 16 weeks and genotyped using PCR-RFLP method.Result showed there was TC muation on IGF2 gene and it was polymorphic in kampung chicken. Frequency of heterozigous TCwas the highest than the others. There was no association between IGF2 gene polymorphismswith growth traits in kampung chicken. It can be caused by the synonimus mutation on IGF2 sequence that does not alter the amino acid. Bot of the nucleotides coded for histidine. It may not give different effect toward the growth traits in kampung chicken.
Keywords: growth traits, IGF2 gene, kampung chicken, polymorphisms

## PENDAHULUAN
Daging unggas memberikan konstribusi yang besar dalam memenuhi kebutuhan daging nasional yaitu sebesar 67.03% dengan kontribusi ayam ras pedaging yang paling dominan yaitu 52%(BPS 2014).Industri ayam ras pedaging memiliki kelemahan yaitu bergantung pada pasokan bibit dan bahan baku pakan dari luar negeri sehingga tidak dapat mendukung kemandirian pangan di Indonesia (Nataamijaya 2010). Kemandirian pangan dapat dicapai melalui usaha-usaha pemuliaan dan pengembangan ternak lokal unggul. Ayam kampung merupakan salah satu ayam asli Indonesia yang memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai bibit ayam pedaging unggul. Ayam kampung mampu beradaptasi dengan baik di lingkungan tropis (Zein dan Sulandari 2012) serta memiliki sistem imun yang kuat (Ulupi et al. 2013; Ulupi et al . 2014), namun ayam kampung memiliki kelemahan yaitu laju pertumbuhan yang lambat (Nataamijaya 2010). Laju pertumbuhan dapat ditingkatkan melalui seleksi yang terarah menggunakan penanda molekuler berbasis MAS (Marker Assissted Selection) yang terbukti dapat meningkatkan respon seleksi pada keturunan (Sartika et al . 2004).MAS dapat diperoleh melalui  identifikasi  gen-gen  utama  yang  mengontrol  sifat pertumbuhan pada ayam. Salah satu gen yang memegang peranan penting dalam mengontrol sifat pertumbuhan pada ayam adalah gen IGF2 (Insuline-like Growth Factor2).
Gen IGF2 pada ayam terletak di kromosom 5 terdiri dari 4 exon dan 3 intron (Ensembl nomor akses: 00000006555).Keragaman gen IGF2 diketahui berasosiasi
positif  dengan  bobot  badan  dan  bobot  karkas  umur  17 minggu pada ayam beijing you (Tang et al. 2010) serta pertambahan bobot badan (PBB) 0-6 minggu pada ayam broiler (Beccavin et al .  2001).  IGF2  berfungsi  sebagai promotor pertumbuhan melalui proliferasi sel dan amplifier fisiologis  dari  sekresi glucose-mediated insulin sehingga IGF2 berperan penting dalam menentukan perkembangan sel terutama sel tulang dan otot (Zhou et al . 1995). Penelitian ini bertujuan menganalisis hubungan keragaman gen IGF2 dengan sifat pertumbuhan pada ayam kampung.

## MATERI DAN METODE

## Materi Ternak
Sebanyak 56 ekor ayam kampung terdiri dari 26 ekor jantan dan 30 ekor betina dipelihara selama 16 minggu dalam kandang kelompok. Pakan yang terdiri dari campuran pakan komersil dengan dedak (60:40) dan air diberikan ad libitum .
Parameter Pertumbuhan Parameter yang diamati yaitu laju pertumbuhan dan bobot potong. Laju pertumbuhan yang dianalisis yaitu PBB fase starter (0-8 minggu) dan PBB fase grower (9-16 minggu). Bobot potong yang dianalisis yaitu bobot potong umur 12, 14 dan 16 minggu.
Aplikasi PCR (Polymerase Chain Reaction) DNA diisolasi dari darah ayam dan diekstraksi menggunakan  metode  fenol  klorofom  berdasarkan
Gambar 1.Visualisasi hasil PCR-RFLP gen IGF2 pada ayam kampung. M= marker 100 pb, TT/TC/CC= genotipe individu 1-3.
Sambrook et al. (1989). Bagian exon 4 gen IGF2 diamplifikasi menggunakan primer forward 5’- GCTGGGGACCCAATAGAACC-3’ dan reverse 5’-TCCCCAGGAGATCACAAATCG-3’. Tahapan PCR terdiri dari pre-denaturasi pada suhu 95 o C selama 5 menit, dilanjutkan dengan 35 siklus yang terdiri dari denaturasi 95 o C  selama  10  detik,  amplifikasi  primer  60 o C selama 20 detik dan ekstensi 72 o C selama 30 detik kemudian diakhiri pos-ekstensi pada suhu 72 o C selama 5 menit. PCR dilakukan menggunakan mesin thermocycler (Eppendorf ® AG  22331).  Mix  PCR  terdiri  dari  0.3  μL  primer,  6.2  μL DW  (destilation  water)dan  7.3  μL  GoTaq ® Green Master Mix (Promega).
Genotyping Menggunakan RFLP (Restriction Fragmet
Length Polymorphisms)
Produk PCR dipotongmenggunakan enzim restriksi Nla III dengan suhu pemotongan 37 o C. Mix restriksi terdiri dari  5  μL  produk  PCR,  0.3  μL  enzim  restriksi,  0.7  μL  1 x buffer and  1  μL  DW.  Hasil  PCR-RFLP  dielektroforesis lalu divisualisasikan menggunakan UV transilluminator (AlphaImager ® EP).
Analisis Data Genotipe dan Fenotipe Frekuensi genotipe merupakan proporsi suatu genotipe relatif  terhadap  semua  genotipe  yang  ada  dalam  suatu populasi (Noor 2010). Frekuensi genotipepada populasi ayam kampung dihitung berdasarkan Nei dan Kumar (2000) dengan rumus sebagai berikut:

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penetuan Genotipe Gen IGF2 pada Ayam Kampung Bagian  exon  4  dari  gen  IGF2  berhasil  diamplifikasi dan menghasilkan produk PCR dengan panjang 395 pb. Beradasarkan hasil genotyping ditemukan 3 genotipe yaitu TT, TC dan CC (Gambar 1). Mutasi yang diperoleh yaitu perubahan basa timin (T) menjadi sitosin (C) pada basa ke- 138(basa ke-13161838 pada sekuen dengan nomor akses GenBank NC_006092.3). Mutasi ini merupakan mutasi transisi yaitu perubahan basa antar basa pirimidin dan bersifat synonimus karena tidak menyebabkan perubahan asam  amino(Hartl  dan  Clark  1997).  Kedua  basa  tersebut mengkode asam amino yang sama yaitu histidin (Amills et al . 2003).
Frekuensi  alel  merupakan  proporsi  suatu  alel  relatif terhadap semua alel yang ada dalam suatu populasi (Noor 2010). Frekuensi alel padapopulasi ayam kampung dihitung berdasarkan Nei dan Kumar (2000) dengan rumus sebagai berikut:
Keterangan: x ii = frekuensi genotipe ke- ii x i = frekuensi alel ke- i n ii = jumlah individu bergenotipe ii n ij = jumlah individu bergenotipe ij N  = jumlah sampel Hubungan  keragaman  gen  IGF2  dengan  sifat pertumbuhan pada ayam kampung dianalisa dengan prosedur General Linear Model (GLM) menggunakan program SAS (SAS 9.1) dengan model sebagai berikut:
Keterangan: Y ijk = parameter pertumbuhan µ  = rataan umum G i = pengaruh genotpe ke-i S j = pengaruh jenis kelamin ke-j
Ɛ ijk = pengaruh acak genotipe ke-i, jenis kelamin ke-j dan ulangan ke-k
Genotipe TT dan CC disebut genotipe homozigot karena individu dengan genotipe tersebut mewarisi alel yang sama dari kedua tetuanya. Genotipe TC disebut genotipe heterozigot karena individu dengan genotipe tersebut mewarisi alel yang berbeda dari kedua tetuanya (Noor 2010).
Keragaman Gen IGF2 pada Ayam Kampung Frekuensi genotipeTC pada ayam kampung lebih tinggi dibandingkan CC dan TC (Tabel 1). Frekuensi genotipe menunjukan peluang munculnya suatu genotip dalam populasi  (Hardjosubroto  2001).  Genotipe  TC  memili ki peluang muncul tertinggi pada populasi ayam kampung.
Suatu  alel  bersifat  polimorfik  apabila  memiliki
frekuensi  alel  kurang  dari  0.99  (Hartl  dan  Clark  1997). Frekuensi alel C ditemukan lebih tinggi daripada alel T, namun frekuensi keduanya kurang dari 0.99 sehingga gen IGF2 pada populasi ayam kampung yang dianalisa bersifat polimorfik.  Sifat  polimorfik  merupakan  salah  satu  syarat agar  sutau  gen  dapat  dijadikan  gen  kandidat  untuk  sifat tertentu (Hartl dan Clark 1997).
Hubungan Keragaman Gen IGF2 terhadap Sifat Pertumbuhan Ayam Kampung
Parameter yang diamati pada penelitian yaitu PBB fase  starter  sebagai  selisih  bobot  badan  umur  8  dengan  0 minggu,  PBB  fase  grower  sebagai  selisih  bobot  badan umur 16 dengan 9 minggu serta bobot potong umur 12, 14  dan  16  minggu.  Hasil  penelitian  menunjukkan  tidak ditemukan hubungan antara keragaman gen IGF2 dengan sifat  pertumbuhan  pada  ayam  kampung  (Tabel  2).  Hasil
Tabel 1. Frekuensi genotipe dan alel gen IGF2 Jenis Ayam N Frekuensi Genotipe Frekuensi Alel TT TC CC T C Kampung 56 0,16 (9) 0 , 6 1 (34) 0 , 2 3 (13) 0,46 0,54
ini sejalan dengan Amills et al . (2003) yang melaporkan tidak ditemukan pengaruh keragaman gen IGF2 terhadap performa pertumbuhan ayam black penedesenca meskipun terdapat perbedaan konsentrasi plasma IGF2 pada genotipe yang berbeda.
Tidak adanya asosiasi antara keragaman gen IGF2  dengan  sifat  pertumbuhan  pada  ayam  kampung kemungkinan disebabkan oleh beberapa faktor yaitu jenis mutasi  yang  terjadi  dan  faktor  internal  dari  tubuh  ayam. Mutasi yang terjadi yaitu mutasi basa timin (T) menjadi sitosin (C). Menurut Amills et al . (2003) yang melakukan penelitian pada ayam black penedesenca, mutasi tersebut merupakan mutasi synonimus yang mengkode asam amino yang sama yaitu histidin sehingga tidak memberikan pengaruh terhadap performa ayam.
Fenomena lain yang mungkin terjadi yaitu adanya pengalihan  energi  pada  tubuh  ayam  kampung.  Hal  ini sesuai dengan Despal et al. (2007) yang mengemukakan bahwa terdapat pengalihan energi pada tubuh ternak jika ternak harus bertahan hidup pada lingkungan yang ekstrim. Energi dalam tubuh digunakan utamanya untuk kehidupan pokok lalu untuk produksi dan reproduksi. Jika energi terlalu banyak digunakan untuk hidup pokok maka akan terjadi pengalihan penggunaan energi sehingga energi untuk kebutuhan produksi akan berkurang. Hal  ini  mungkin  terjadi  pada  ayam  kampung  yang hidup di lingkungan tropis dan terpapar banyak agen penyakit. Adanya interaksi genetik dan lingkungan dapat menyebabkan  suatu  gen  aktif  pada  kondisi  tertentu  dan tidak  aktif  pada  kondisi  lainnya  (Falconer  dan  Mackay 1996).  Untuk  memperoleh  performa  yang  optimal, sebaiknya ayam kampung dipelihara di lingkungan yang nyaman (comfort zone) sehingga energi untuk hidup pokok dapat diminimalisir dan energi untuk produksi dapat ditingkatkan.

## KESIMPULAN
Gen  IGF2  pada  ayam  kampung  bersifat  polimorfik. Genotipe  TC  memiliki  frekuensi  tertinggi  dibandingkan genotipe lainnya. Tidak ditemukan hubungan antara keragaman gen IGF2 dengan sifat pertumbuhan pada ayam kampung.

## DAFTAR PUSTAKA
Amills, M., N. Jimenez, D. Villalba, M. Tor, E. Molina, D. Cubilo, C. Marcos, Francesch, A. Sanchez, & J. Estany. 2003.Identification  of  three  single  nucleotide polymorphisms in the chicken insuline-like growth factor 1 and 2 genes and their associations with growth and feeding traits. Poultry Sci.82:1485-1493.
Badan Pusat Statistik .2014.Statistik Indonesia.Badan Pusat Statistik Indonesia, Jakarta.
Beccavin, C., B. Chevalier, L. A. Cogburn, J. Simon,
& M. J. Duclos . 2001. Insulin-like growth factors and body growth in chickens divergently selected for high or low growth rate. J Endocrinol. 168:297-306.
Despal, D. A. Astuti, D. M. Suci, D. Evvyerni, I. G. Permana, N. E. Sigit, R. Mutia, Sumiati, T. Tohormat, & W. Hermana .2007.Pengantar Ilmu Nutrisi. Dept. Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan IPB, Bogor.
Falconer, D. S., & T. F. C. Mackay. 1996. Quantitative Genetics. 4 th ed. Longman Group Ltd, Edinburgh. Hardjosubroto, W. 2001.Genetika  Hewan.  Universitas Gadjah Mada Press, Yoygyakarta. Hartl, D. L., & A. G. Clark .1997.Principles of Population Genetics. 3 rd ed. Sinauer Associate Inc, Sunderland. Nataamijaya, A. G . 2010. Pengembangan potensi ayam lokal untuk menunjang peningkatan kesejahteraan petani. J Litbang Pertanian. 29:131-138.
Nei, M., & S.  Kumar. 2000.Molecular Evolution and Phylogenetics. Oxford Univ Press, New York. Noor, R. R . 2010. Genetika Ternak. Penebar Swadaya, Jakarta.
Sambrook, J., E. F. Fritsch, & T. Maniatis. 1989. Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual.  CSH Laboratory Press, USA.
Sartika, T., S. Iskandar, L. H. Prasetyo, H. Takahashi, & M. Mitsuru . 2004. Kekerabatan genetik ayam kampung, pelung, sentul dan kedu hitam dengan menggunakan penanda DNA mikrosatelit: I. Grup pemetaan pada makro kromosom. JITV. 9:81-86.
Tang, S., D. Sun, J. Ou, Y. Zhang, & G. Xu. 2010. Evaluation  of  the  IGFs  (IGF1  and  IGF2)  genes  as candidates for growth, body measurement, carcass, and reproduction traits in beijing you and silkie chickens. Animal Biotech. 21:2.
Ulupi, N., Muladno, C. Sumantri, & I. W. T. Wibawan . 2013.  Association  of  TLR4  gene  genotype  and resistance against Salmonella enteritidisnatural infection in kampung chicken. IJPS. 12:445-450.
Ulupi, N, Muladno, C. Sumantri, & I. W. T. Wibawan. 2014.Study  of  kampung  chicken  resistance  against Salmonella enteritidis using TLR4 gene as marker. IJPS. 13:467-472.
Zein, M. S. A., & S. Sulandari . 2012. Keragaman genetik dan distribusi haplogrup ayam kampung dengan menggunakan hipervariabel-I daerah kontrol DNA mitokondria. JITV. 17:120-131.
Zhou, M., Z. Ma, & W. S. Sly . 1995. Cloning and expression of the cDNA of chicken cation independent mannose-6-phosphate receptor. Proc Natl Acad Sci. 92:9762-9766.
Tabel 2.  Asosiasi gen IGF2 terhadap pertumbuhan ayam kampung
Parameter Genotipe TT TC CC PBB 0-8 mg (g/8 mg) 446,63 ± 32,09 424,89 ± 16,36 434,71 ± 26,48 PBB 9-16 mg (g/8 mg) 536,82 ± 50,55 524,26 ± 25,77 494,49 ± 41,71 BB 12 mg (g) 742,34 ± 47,72 718,34 ± 24,33 740,17 ± 39,38 BB 14 mg (g) 808,94 ± 60,36 833,23 ± 30,78 827,96 ± 49,80 BB 16 mg (g) 1116,74 ± 71,81 1099,12 ± 36,62 1078,73 ± 59,26 Keterangan: PBB (Pertambahan Bobot Badan), BB (Bobot Badan)