Potensi Ekstrak Etanol Herba Apu-Apu ( Pistia stratiotes ) dan Fraksi-Fraksinya Sebagai Antioksidan Dengan Metode DPPH
Potency of Ethanolic Extract of Pistia stratiotes Herbs and Its Fractions as Antioxidants using DPPH Method
Dewi Dianasari * , Irawati Firdiyansari Fakultas Farmasi, Universitas Jember, Jember, Indonesia *Email: dewi.dianasari@unej.ac.id
Received: 01 November 2019; Accepted: 26 Desember 2019; Published: 27 Desember 2019

## Abstrak
Radikal  bebas  berperan  penting  pada  terjadinya  kerusakan  sel  dan  penyakit  degeneratif  seperti  penyakit jantung  koroner,  stroke,  penuaan  dini  dan  lain-lain.  Senyawa  yang  dapat  menghambat  radikal  bebas  yaitu antioksidan. Salah satu tumbuhan yang memiliki kandungan senyawa fenolik tinggi dan bisa menjadi sumber antioksidan alami yakni apu-apu atau Pistia stratiotes . Penelitian ini dilakukan untuk membuktikan secara ilmiah adanya aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol herba apu-apu ( Pistia stratiotes ) dan fraksi-fraksinya dengan  metode  DPPH.  Sampel  yang  digunakan  berupa  semua  bagian  apu-apu  (herba  apu-apu)  yang didapatkan  dari  daerah  Kecamatan  Sumbersari,  Kabupaten  Jember.  Pada  penelitian  ini  digunakan  metode DPPH dengan konsentrasi DPPH sebesar 0,1 mM, waktu inkubasi ekstrak etanol 40 menit, fraksi n- heksana 50 menit, fraksi etil asetat 45 menit, fraksi etanol- air 40 menit, vitamin C 35 menit dan diukur pada pada panjang gelombang 517 nm. Hasil rata- rata aktivitas antioksidan (IC 50 ) yaitu ekstrak etanol herba apu-apu 16,675 µg/mL ± 0,239, fraksi n-heksana 29,915 µg/mL  ±  0,156,  fraksi etil asetat 11,875 µg/mL ± 0,038, fraksi etanol-air 9,090 µg/mL ±0,122, dan vitamin C 3,263 µg/mL ± 0,032. Vitamin C  sebagai kontrol positif memiliki aktivitas yang paling tinggi, sedangkan sampel apu-apu yang memiliki aktivitas antioksidan tertinggi yaitu  fraksi  etanol-air,  dan  yang  terendah  adalah  fraksi  n-  heksana.  Dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak etanol herba apu-apu dan fraksi-fraksinya memiliki aktivitas antioksidan, yaitu dari yang tinggi ke rendah secara berurutan : fraksi etanol-air, fraksi etil asetat, ekstrak etanol herba apu-apu, fraksi n-heksana. Kata Kunci : apu-apu, DPPH, ekstrak, fraksi

## Abstract
Free  radicals  play  an  important  role  in  cell  damage  and  degenerative  diseases  such  as  coronary  heart disease, stroke, premature aging and others. Compounds that can inhibit free radicals are antioxidants. One of the plants that has a high phenolic compound and can be a source of natural antioxidants, apu-apu or Pistia stratiotes. This research was conducted to scientifically prove the antioxidant activity of the apu-apu herbal extract (Pistia stratiotes) and its fractions by the DPPH method. The sample used in the form of all parts apu-apu (apu-apu herb) obtained from the Sumbersari District, Jember Regency. In this study the DPPH method  was  used  with  a  DPPH  concentration  of  0.1  mM,  incubation  time  of  ethanol  extract  40  minutes, fraction of n-hexane 50 minutes, ethyl acetate fraction 45 minutes, ethanol-water fraction 40 minutes,vitamin C 35 minutes and measured at wavelength 517 nm . The results of the average antioxidant activity (IC50) were apu-apu herbal extract 16.675 µg / mL ± 0.239, n-hexane fraction 29.915 µg / mL ± 0.156, ethyl acetate fraction 11.875 µg / mL ± 0.038, ethanol-water fraction 9.090 µg / mL ± 0.156, ethyl acetate fraction 11.875 µg / mL ± 0.038, ethanol-water fraction 9.090 µg / mL ± 0.156, ethyl acetate fraction 11.875 µg / mL ± 0.038 / mL ± 0.122, and vitamin C 3.263 µg / mL ± 0.032. Vitamin C as a positive control had the highest activity, whereas the apu-apu sample which had the highest antioxidant activity was the ethanol-water fraction, and the lowest was the n-hexane fraction. The conclusion of this study is apu-apu herbal ethanol extract and its fractions  have  antioxidant  activity,  from  high  to  low  sequentially:  ethanol-water  fraction,  ethyl  acetate fraction, apu-apu herbaceous fraction, n- fraction hexane.
Keywords : DPPH,apu-apu, extract, fraction

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  berperan  penting  pada terjadinya  kerusakan  sel  dan  penyakit degeneratif  seperti  penyakit  jantung  koroner, stroke, penuaan dini dan lain-lain (Kumalaningsih, 2006). Radikal bebas umumnya  merupakan  senyawa  reaktif  yang memiliki  elektron  terluar  tidak  berpasangan. Sehingga  senyawa  ini  cenderung  memiliki kereaktifan  tinggi  yang  menimbulkan  reaksi berantai  dengan  sel  penting  di  dalam  tubuh (Badarinath et al. 2010). Senyawa yang dapat menghambat radikal bebas yaitu antioksidan. Senyawa  ini  memiliki  struktur  molekul  yang dapat  memberikan  elektron  (donor  elektron) pada  molekul  radikal  bebas  sehingga  dapat memutus  reaksi  berantai  (Halliwell  & Gutteridge, 2000).
Dalam sistem biologis manusia, secara alami diproduksi senyawa antioksidan seperti enzim SOD  ( superoksida  dismutase ), glutathione , dan katalase. Senyawa  tersebut  dapat melindungi tubuh dari kerusakan jaringan oleh oksidasi reactive oxygen species (ROS), serta menghambat terjadinya peroksidasi lipid pada makanan.  Ketersediaan  antioksidan  yang diproduksi secara alami oleh tubuh seringkali tidak mencukupi sehingga dibutuhkan asupan dari luar seperti  antioksidan  dari  bahan  alam dan sintetis. Namun menurut penelitian Ito et al. (1986),  menyatakan  bahwa  penggunaan antioksidan  sintetik  dapat meningkatkan resiko karsinogenesis .  Adapun  antioksidan dari  bahan  alam  seperti  makanan  dengan kandungan vitamin E, C, betakaroten maupun antioksidan  fitokimia  dari  golongan  fenol (Kumalaningsih, 2006).
Salah satu tumbuhan yang memiliki kandungan  fenol  yaitu  Apu-apu  ( Pistia stratiotes )  (Khare,  2005).  Apu-apu  sering dianggap  gulma  oleh  petani.  Namun  tidak jarang digunakan sebagai penghias kolam oleh masyarakat. Kandungan dalam apu-apu yakni 92,9%  air,  1,4%  protein,  0,.3%  lemak  2,6% karbohidrat,  0,9%  serat  kasar,  1,9%  mineral. Selain  itu  tumbuhan  apu-apu  memiliki kandungan  kimia  seperti  alkaloid,  flavonoid, glikosida,  vitamin,  stigmasterol  dan  asam
palmitat, vicenin,  vitexin,  orientin .  Tanaman apu-apu  memiliki  aktivitas  farmakologis sebagai  analgesik,  antiinflamasi,  antipiretik, antioksidan,  bronkodilator,  diuretik,  antigout (Kumar et al ., 2011 dan Pallavi et al ., 2011). Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka  dilakukan penelitian  untuk  membuktikan  secara  ilmiah adanya  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak etanol  herba  apu-apu  ( Pistia  stratiotes )  dan fraksi-fraksinya. Ekstrak etanol herba apu-apu akan difraksinasi untuk memisahkan kandungan  metabolit  sekunder  berdasarkan kepolarannya,  sehingga  dapat  dibandingkan aktivitas antioksidan ekstrak yang mengandung semua metabalit sekunder  yang terkestraksi  dengan  fraksi-fraksinya  yang hanya  mengandung  metabolit  sekunder tertentu.

## METODE PENELITIAN Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah timbangan analitik (Santorius), vacuum rotary evaporator (Heidolph ), spektrofotometer  UV-Vis  (Hitachi  U-1800), mikropipet  10-1000µL  (Socorex),  dan  alat- alat gelas (Pyrex Germany dan Iwaki).
Bahan Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  herba  apu-apu  ( Pistia stratiotes ),  akuades;  bahan  kualitas  p.a.  E. Merck  yaitu:  etanol,  metanol,  n- heksana, etil  asetat, bahan kualitas p.a. Sigma-Aldrich yaitu: DPPH (1,1difenil-pikrilhidrazil); vitamin C (PT. Brataco), natrium karbonat. Pembuatan Ekstrak Etanol Herba Apu-Apu Ekstraksi  serbuk  simplisia  herba  apu-apu ( Pistia  stratiotes )  dengan  metode  maserasi dalam  pelarut  etanol  96%  (1:10),  selama  3 hari.  Maserat  yang  didapatkan  diuapkan dengan rotavapour dan dikeringkan.
Fraksinasi Proses fraksinasi menggunakan metode partisi cair-cair  menggunakan  pelarut  etanol-air,  n- heksana, dan etil asetat. Masing-masing fraksi n-heksana,  etil  asetat  dan  fraksi  etanol-air diuapkan hingga pekat.
Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  dengan DPPH
Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanol herba  apu-apu  ( Pistia stratiotes )  dengan DPPH  dilakukan  berdasarkan  Molyneux (2004), dengan pembanding Vitamin C.
a. Penentuan Panjang
Gelombang Serapan Maksimum DPPH Larutan DPPH 0,1 mM sebanyak 1,5 mL dan 1,5  mL  metanol  sebagai  baseline  masing- masing dimasukkan ke dalam kuvet.
Kemudian,  larutan  tersebut  diukur  pada panjang  gelombang  400-800  nm  dengan spektrofotometer UV-Vis.
b. Penentuan Waktu Inkubasi Penentuan  waktu  inkubasi  dilakukan  dengan memipet 300µL larutan sampel dan vitamin C ditambahkan  dengan  1200µL  larutan  DPPH 0,1  mM.  Larutan  diamati  pada  panjang gelombang  maksimum  mulai  menit  ke-0 sampai menit ke-60 selang 5 menit.
c. Pembuatan Larutan sampel
Larutan  stok  2000  ppm  dibuat  dengan melarutkan  20  mg  ekstrak  ke  dalam  10  mL metanol (ditambah beberapa tetes DMSO jika sampel kurang larut dalam metanol). Kemudian,    larutan    diencerkan    dengan memipet    sejumlah    tertentu  larutan  dan dimasukkan ke dalam labu ukur ditambahkan metanol, sehingga diperoleh beberapa konsentrasi larutan uji akhir.
d. Pembuatan Larutan Vitamin C
Vitamin  C  ditimbang  25  mg  dimasukkan  ke dalam labu ukur 25 mL dan dilarutkan dengan metanol  sampai  batas  volume  sehingga konsentrasi vitamin C sebesar  1000  µg/mL. Larutan  dipipet  10,  20,  40,  50,  60,  80,  100 µL    dan  dimasukkan  labu  ukur  10  mL, ditambahkan  dengan  metanol  sampai  tanda batas.
e. Penetapan Aktivitas Antioksidan
Larutan  Uji  dan  Vitamin  C  Masing-masing sampel dipipet sebanyak 0,375 μL ditambahkan 1,125 μL larutan DPPH di dalam tabung reaksi, kemudian diinkubasi pada suhu ruang di dalam ruangan gelap (waktu inkubasi ekstrak etanol 40 menit, fraksi n- heksana 50 menit, fraksi etil asetat 45 menit, fraksi etanol-
air  40  menit,  vitamin  C  35  menit).  Sebagai kontrol positif, digunakan vitamin C yang juga diinkubasi  dengan  larutan  DPPH  dengan volume yang sama. Selanjutnya kadar serapan larutan  setelah  inkubasi  ditentukan  dengan spektrofotometri UV-Vis pada  panjang gelombang maksimum.
Analisis Data Perhitungan  persen  penghambatan  sampel terhadap DPPH sesuai dengan persamaan 1.

## % Inhibisi DPPH
= abs DPPH − abs larutan uji abs DPPH x100% … … … … . (1)
Konsentrasi  sampel  dan  persen  inhibisinya diplot  masing-masing  pada  sumbu  x  dan  y pada  persamaan  regresi  linear.  Persamaan tersebut  digunakan  untuk  menentukan  nilai IC 50 dari  masing-masing  sampel  dinyatakan dengan  nilai  y  sebesar  50  dan  nilai  x  yang diperoleh sebagai IC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada penelitian ini ekstrak herba apu-apu didapatkan  dari  metode  dengan  cara  dingin yaitu  maserasi  (Depkes  RI,  2000).  Pelarut yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu etanol  96%.  Etanol  merupakan  pelarut  polar yang  dapat  menarik  senyawa  polar  juga seperti  senyawa  fenol.  Persen  rendemen ekstrak  etanol  herba  Apu-apu  yaitu  12,5  %. Hasil  persen  rendemen  dipengaruhi  oleh jumlah  senyawa  yang  telarut  dalam  dalam tanaman tersebut.
Ekstrak kental yang diperoleh selanjutnya  dilakukan  fraksinasi.  Tujuan dilakukan fraksinasi yaitu untuk memisahkan senyawa-senyawa berdasarkan tingkat kepolarannya.  Dalam  penelitian  ini  metode fraksinasi yang digunakan yaitu metode partisi cair-cair  menggunakan  corong  pisah.  Proses fraksinasi  dilakukan  bertingkat  dimulai dengan  pelarut  non  polar  ke  semipolar kemudian  ke  pelarut  polar.  Hal  tersebut dilakukan  agar  proses  distribusi  senyawa dapat  bertahap  sehingga  senyawa  dapat
tertarik sempurna (Edawati, 2012). Rendemen proses fraksinasi dapat dilihat pada Tabel 1.
Dapat  dilihat  bahwa  jenis  pelarut mempengaruhi  jumlah  rendemen  fraksi. Rendemen  fraksi  terbesar  yaitu  48,6%  pada fraksi etanol air, hal ini terjadi dimungkinkan banyaknya  senyawa  herba  apu-apu  yang memiliki  sifat  polar  sehingga  banyak terditribusi pada fraksi polar. Rendemen fraksi terkecil yaitu 2,3% pada fraksi etil asetat yang dimungkinkan  senyawa  yang  bersifat  semi polar sedikit.
Waktu inkubasi sampel dapat dilihat pada Tabel 2
Berdasarkan  hasil  optimasi  yang  telah dilakukan,  diperoleh  panjang  gelombang maksimum  sebesar  517  nm  untuk  larutan DPPH  yang  berwarna  ungu  (violet).  Hal  ini telah sesuai dengan teoritis yang menyatakan
bahwa panjang gelombang maksimum DPPH yaitu sebesar 515-520 nm..
Waktu  optimum  berlangsungnya  reaksi DPPH  dengan  larutan  uji  yaitu  30  menit, namun waktu inkubasi berbagai sampel akan bervariasi sesuai dengan karakteristik sampel terutama  karakteristik  antioksidan  sampel (Molyneux, 2004).
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  dapat dilihat pada Tabel 3. Hasil pengujian masing- masing  sampel,  memiliki  perbedaan  yang signifikan satu terhadap yang lain  (p=0,000) pada  uji one  way ANOVA dan  LSD .  Fraksi etanol-air  memiliki  nilai  rata-rata  IC 50 yang paling  kecil  yang  berarti  memiliki  aktivitas antioksidan  terbesar  yaitu  9,090  µg/mL ± 0,122 , diikuti fraksi etil asetat  11,875 µg/mL ± 0,038,   kemudian ekstrak etanol herba apu- apu  16,675  µg/mL ± 0,239,  sedangkan  fraksi n-heksana    menunjukan  nilai  IC 50 terbesar, dengan  aktivitas    antioksidan  terkecil  yaitu 29,915  µg/mL ± 0,156. Ekstrak dan fraksinya menunjukan  aktivitas  antioksidan  yang  lebih kecil daripada vitamin C dengan IC 50 sebesar 3,263 µg/mL ± 0,032.
Menurut Phongpaichit et al ., 2007, suatu senyawa dinyatakan sebagai antiradikal bebas sangat kuat apabila nilai IC 50 < 10 µg/mL, kuat apabila nilai IC 50 antara 10-50 µg/mL, sedang apabila  nilai  IC 50 berkisar  antara  50-100  µg/ mL,  lemah  apabila  nilai  IC 50 berkisar  antara 100-250  µg/mL  dan  tidak  aktif  apabila  IC 50 diatas  250  µg/mL.  Berdasarkan    nilai  IC 50 masing-masing sampel  menunjukkan  bahwa secara    umum    seluruh  sampel  mempunyai aktivitas antioksidan sangat kuat untuk fraksi
Tabel 2. Waktu Inkubasi Sampel Waktu Inkubasi (Menit) Ekstrak Etanol 40 Fraksi N-heksana 50 Fraksi Etil asetat 45 Fraksi Etanol-air 40 Vitamin C 35
Tabel 3. Hasil  Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Herba Apu-Apu dan Fraksi-
Fraksinya Sampel Rata-rata IC 50 (µg/mL)± SD Daya antioksidan Ekstrak Etanol 16,675 ± 0,239 a Kuat Fraksi N-heksana 29,915 ± 0,156 b Kuat Fraksi Etil asetat 11,875± 0,038 c Kuat Fraksi Etanol-air 9,090± 0,122 d Sangat Kuat Vitamin C 3,263 ± 0,032 e Sangat Kuat
Keterangan: Notasi huruf yang berbeda menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan antar kelompok (p<0,05)
Tabel 1. Rendemen Fraksinasi Ekstrak Etanol Herba Apu-Apu Jenis Fraksi Rendemen (%) N-heksana 33,3 Etil asetat 2,3 Etanol-air 48,6
etanol-air, dan kuat untuk ekstrak etanol  herba apu-apu dan fraksi lainnya.
Salah satu golongan senyawa aktif  yang diduga berperan dalam memberikan aktivitas antioksidan pada ekstrak etanol herba apu-apu dan fraksi-fraksinya adalah golongan polifenol.  Senyawa  polifenol  mempunyai kemampuan  untuk  menyumbangkan  atom hidrogen kepada senyawa radikal bebas, maka aktivitas antioksidan senyawa polifenol dapat dihasilkan  pada  reaksi  netralisasi  radikal bebas  atau  pada  penghentian  reaksi  berantai yang terjadi (Yuhernita & Juniarti, 2011).

## KESIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian ini adalah ekstrak etanol  herba  apu-apu  dan  fraksi-fraksinya memiliki  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol herba  apu-apu  dan  fraksi-fraksinya  memiliki aktivitas antioksidan, yaitu dari yang tinggi ke rendah  secara  berurutan  :  fraksi  etanol-air, fraksi etil asetat, ekstrak etanol herba apu-apu, fraksi n-heksana.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini didanai oleh DIPA UNEJ Tahun 2019.

## Daftar Pustaka
Badarinath,  A . ,  Rao,   K.,  Chetty,   C. S.,  Ramkanth,  S.,  Rajan,  T,,  &  Gnanaprakash,  K. 2010.    A    Review    on    In-vitro    Antioxidant    Methods:    Comparisons, Correlations, and   Considerations. International   Journal   of   PharmTech Research. 1276-1285.
Depkes  RI.  2000. Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat (Edisi  1).  Jakarta: Direktorat  Jenderal  Pengawasan  Obat  dan  Makanan,  Direktorat  Pengawasan  Obat Tradisional.
Edawati,  Z.  2012.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Metanol Ascidia  Didemnum sp.  Dari Kepulauan  Seribu  dengan  Metode  1,1-Difenil-2  Pikrilhidrazil  (DPPH)  dan  Identifikasi Golongan Senyawa dari Fraksi Teraktif. Skripsi . FMIPA UI: Depok.
Halliwell, B. & Gutteridge, J. M. C. 2000. Free Radical in Biology and Medicine . Newyork: Oxford University Press.
Ito,  N.,  M.  Hirose,  S.  Fukishima,  H.  Tsada,  T.  Shirai,  &  M.  Ttematsu.  1986.  Studies  on Antioxidants:  Their  Anticarcinogenic  and  Modifying,  Effects  on  Chemichal Carcinogenesis. Food Chem. Toxico.l , (24):1099-1102.
Khan, M.A. et al . 2014. Pistia stratiotes L. (Araceae) : Phytochemistry, Use  In Medicines, Phytoremediation, Biogas, and Management Options. Pak. J. Bot ., 46(3): 851-860.
Khare,  C.P.  2005. Encyclopedia  of  Indian  medicinal  plants .  Berlin  Heidelberg,  Germany: Springer-Verlag .
Kumalaningsih, S., 2006. Antioksidan Alami . Surabaya: Trubus Agrisarana.
Kumar, H.K.S., M.B.V. Raju, S.C. Dinda, S. K. Sahu & M. Banerjee. 2011. Analgesic, anti- inflammatory and antipyretic activity of Pistia stratiotes L. Rasayan J. Chem ., 4(3): 506- 511.
Marinova,  D.,  Ribanova,  F.,  Atanassova,  M.  2005.  Total  Phenolics  and  Total Flavonoids in  Bulgarian  Fruits  and  Vegetables. Journal  of  the  University  of Chemical Technology and Metallurgy, (40): 255-260.
Molyneux,  P.  2004.  The  Use  of  Stable  Free  Radical  Diphenylpicryl  hydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity. Songklanakarin J. Sci. Technol , 26(2): 211-219.
Pallavi, T., S. Arora, R. Gupta & P. Mali. 2011. Diuretic activity of Pistia stratiotes leaf extract in rats. Int. J. of Pharmacy , 2(3): 249-251.
Phongpaichit, S., et al . 2007. Biological Activities of Extracts From Endophytic Fungi Isolated From Garcinia Plant. FEMS Immunology & Medical Microbiology , 51(3), 517 – 525.
Yuhernita  &  Juniarti.  (2011).  Analisis  Senyawa  Metabolit  Sekunder  dari  Ekstrak  Metanol Daun Surian yang berpotensi Sebagai Antioksidan. Makara Sains , 15(1), 48 – 52.