BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 4 Nomor 1 (2022):  28-37 E-ISSN: 2714-8564
Uji Viabilitas Polen Tanaman Kedelai ( Glycine max (L.) Merril) pada berbagai Lama Penyimpanan

## Hastya Tri Andini, Muachiroh Abbas*, Kamsinah
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman Jl dr. Suparno 63 Purwokerto 53122 *Email: muachiroh@gmail.com
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 26/07/2021 Disetujui  : 22/06/2022

## Abstract
Pollen  can  be  used  for  plant  identification  because  it  has  a  distinctive  structure  and ornamentation, besides that it can also be used as a plant breeding agent as a contributor to male parental characters. The character of pollen as parental male is very important in plant breeding. One way to know the quality of pollen is to look at its viability. Pollen viability can be tested by staining method or by germination method. Pollen viability is known to be lost over a certain period of time. The purpose of this study was to determine the effect of storage time on viability of soybean pollen, and to determine the best storage period with the highest viability of soybean pollen. This research was conducted experimentally with a Completely Randomized Design (CRD) consisting of 4 treatments, namely P0, Control. P1,  7  days  of  storage.  P2,  14  days  of  storage.  P3,  21  days  of  storage.  The  independent variable is variation in storage time while the dependent variable is pollen viability. The parameters  observed  were  the  number  of  stained  pollen,  germination  capacity,  and  the length of the germinating pollen tube as evidence that the pollen was viable. The research data obtained were analyzed using Analysis of Variance (ANOVA) with an error rate of 5%, then continued with the BNT test with an error rate of 5%. The results showed that the provision of  storage  time  treatment on  soybean  pollen had  an  effect  on  pollen  viability, namely by reducing pollen viability. The best shelf life to get the highest pollen viability in soybean pollen is 0 to 7 days after the sample is taken.
Key words : germination, pollen, soybean, storage time, viability.

## Abstrak
Polen  dapat  digunakan  untuk  identifikasi  tumbuhan  karena  memiliki  struktur  dan ornamentasi yang khas, selain itu juga dapat digunakan sebagai agen pemuliaan tanaman selaku  penyumbang  karakter  parental  jantan.  Karakter  polen  sebagai  parental  jantan sangatlah penting dalam pemuliaan tanaman. Salah satu cara mengetahui polen berkualitas adalah dengan melihat viabilitasnya. Viabilitas polen dapat diuji dengan metode pewarnaan maupun  dengan  metode  perkecambahan.  Viabilitas  polen  diketahui  dapat  hilang  pada periode  waktu  tertentu.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  lama penyimpanan  terhadap  viabilitas  polen  kedelai,  serta  mengetahui  lama  penyimpanan terbaik  yang  memiliki  viabilitas  polen  kedelai  paling  tinggi.  Penelitian  ini  dilaksanakan secara  eksperimental dengan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang terdiri dari 4 perlakuan yaitu  P0,  Kontrol.  P1,  lama  penyimpanan  7  hari.  P2,  lama  penyimpanan  14  hari.  P3,  lama penyimpanan 21 hari. Variabel bebasnya adalah variasi lama penyimpanan sedangkan variabel terikatnya adalah viabilitas polen. Parameter yang diamati adalah jumlah polen yang terwarnai, daya perkecambahan, dan panjang tabung polen yang berkecambah sebagai bukti polen tersebut viabel.  Data  hasil  penelitian  yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan Analysis  of  Varians (ANOVA) dengan tingkat kesalahan 5% dan 1%, kemudian dilanjutkan dengan uji BNT dengan tingkat kesalahan 5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian perlakuan lama simpan pada polen tanaman kedelai berpengaruh terhadap viabilitas polen, yaitu dengan menurunkan viabilitas polen. Lama simpan terbaik untuk mendapatkan viabilitas polen tertinggi pada polen tanaman kedelai yaitu 0 sampai 7 hari setelah sampel diambil.
Kata kunci : kedelai, lama penyimpanan, perkecambahan, polen, viabilitas.

## PENDAHULUAN
Tanaman  kedelai  ( Glycine  max (L.)  Merril) merupakan komoditas pangan paling penting setelah padi  dan  jagung.  Kedelai  sebagai  bahan  pangan memiliki  kandungan  asam  amino  essensial  yang lengkap.  Kedelai  memiliki  kandungan  protein  yang tinggi  menyebabkan  permintaan  akan  kedelai
menjadi  tinggi  (Astawan  &  Hazmi,  2016).  Menurut Permadi  (2015),  kebutuhan  kedelai  di  Indonesia setiap  tahun  meningkat  seiring  dengan  pertambahan penduduk  dan  pertambahan  perkapita,  sehingga untuk  memenuhi  kebutuhan  kedelai  dilakukan dengan  mengimpor  kedelai  dari  luar  negeri  karena produksi  dalam  negeri  belum  mampu  mencukupi
kebutuhan.  Putra et  al .  (2017),  upaya  produksi kedelai  untuk  mengurangi  ketergantungan  terhadap kedelai  impor  perlu  dilakukan,  yaitu  dengan mengembangkan varietas baru dan memperluas lahan budidaya.
Polen merupakan gametofit jantan dari tumbuhan  berbunga.  Polen  dapat  digunakan  untuk mengidentifikasi tumbuhan karena memiliki struktur dan  ornamentasi  yang  khas  (Azizah et  al., 2016). Selain untuk identifikasi tumbuhan, polen juga dapat digunakan  sebagai  agen  pemuliaan  tanaman  yang umumnya  dilakukan  dengan  menyilangkan  dua karakter  yang  berbeda  untuk  mendapatkan  tanaman dengan  perpaduan  terbaik  dari  dua  karater  tersebut (Putra et al., 2017). Karakter polen sebagai parental jantan  sangatlah  penting  dalam  pemuliaan  tanaman. Karakter  polen  yang  baik  dan  berkualitas  harus menghasilkan  polen  dalam  jumlah  yang  cukup banyak,  viabel,  mampu  berkecambah  dan  mampu melakukan fertilisasi terhadap genotip betina (Pillay & Tenkouano, 2011).
Cara  mengetahui  polen  berkualitas  adalah dengan  melihat  viabilitasnya.  Uji  viabilitas  adalah menguji  daya  hidup  polen  (Winarto  &  Rahmawati, 2007).  Djanaguiraman et  al. (2013),  melaporkan bahwa  viabilitas  polen  kedelai  dapat  diuji  dengan metode  pewarnaan  menggunakan  larutan  yodium kalium  iodida  (I ₂ KI)  ataupun  larutan  tetrazolium ( 2,3,4-triphrnyl tetrazolium chloride ), yang diaplikasikan  pada slide kaca  benda  bersih  bersama polen diatasnya. Menurut Ridha (2016), uji viabilitas polen  juga  dapat  dilakukan  melalui  metode perkecambahan.  Metode  perkecambahan  dilakukan dengan  membuat  media  perkecambahan  yang berfungsi  sebagai  substrat  untuk  merangsang  polen berkecambah. Anitasari et al. (2018), polen dikatakan berkecambah apabila panjang tabung polen mencapai minimal  sama  dengan  diameter  polen  tersebut. Menurut  Nirmala et  al. (2013),  pengukuran  perlu dilakukan  untuk  mengetahui  panjang  tabung  polen yang  berkecambah  untuk  mengetahui  viabilitas polen. Ridha (2016), dalam penelitiannya menyebutkan  bahwa  media  yang  umum  digunakan adalah media Brewbaker dan Kwack.
Berdasarkan  penelitian  Samudra  &  Herawati (2020), hasil polen yang viabel menggunakan metode pewarnaan  I ₂ KI  akan  terwanai  biru  menandakan polen  masih hidup sedangkan polen yang  mati akan berwarna  kuning  transparan  atau  merah  muda transparan.  Hasil  penelitian  Hasrianda et  al. (2020), terhadap perkecambahan polen pada media Brewbaker dan Kwack, ditemukan polen berkecambah dengan ciri muncul buluh tabung pada polen  yang  keluar  dari  butir  polen.  Penelitian  uji viabilitas polen yang telah dilakukan oleh Rahmawati &  Prayitno  (2013)  dengan  menggunakan  spesies cabai  ( Capsicum  annum )  didapatkan  bahwa  lama penyimpanan  polen  tidak  berpengaruh  secara  nyata
terhadap viabilitas polen cabai. Nirmala et al. (2013) dalam penelitian uji viabilitas polen tanaman kelapa ( Cocos nucifera ) menyebutkan bahwa kondisi umum daya  perkecambahan  polen  selama  empat  minggu terkontrol dengan baik.
Tujuan dari penelitian adalah untuk mengetahui pengaruh  lama  penyimpanan  terhadap  viabilitas polen  kedelai,  serta  mengetahui  lama  penyimpanan terbaik yang memiliki viabilitas polen kedelai paling tinggi.

## MATERI DAN METODE
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah object  glass,  cover  glass, spatula, hotplate , magnetic stirer , pipet tetes, pinset, mikroskop cahaya binokuler, hand  tally  counter ,  gunting,  plastik ziplock , baki preparat, alumunium foil dan alat tulis. Sedangkan  bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  polen  kedelai,  larutan  yodium  kalium iodide (I ₂ KI), akuades, kertas label, kertas pH, HCl 1N, NaOH 1N, kuteks bening dan media Brewbaker dan Kwack (komposisi 10 g sukrosa, 0,010 g H3BO3, 0,030  g  Ca(NO3)2.4H2O,  0,020  g  MgSO4.7H2O, 0,010 g KNO3, dan akuades 100 mL)
Penelitian  ini  dilakukan  di  Desa  Bobosan Kecamatan Purwokerto Utara, Kabupaten Banyumas (7 ⁰ 24’7,6”S,  109 ⁰ 13’31,1”E)  dan  dilanjutkan  di Laboratorium Struktur dan Perkembangan Tumbuhan dan  Laboratorium  Fisiologi  Tumbuhan,  Fakultas Biologi,  Universitas  Jenderal  Soedirman  selama  5 bulan dari bulan Januari-Mei 2021.
Rancangan Penelitian Penelitian ini dilaksanakan secara eksperimental  dengan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  yang  terdiri  dari  4  perlakuan  dengan  3  kali pengulangan,  sehingga  ada  12  unit  percobaan. Perlakuan yang dilakukan adalah P0 (Kontrol), lama penyimpanan  0  hari.  P1,  lama  penyimpanan  7  hari. P2,  lama  penyimpanan  14  hari.  P3,  lama penyimpanan 21 hari.
Variabel yang diamati adalah lama penyimpanan  sebagai  variabel  bebas  dan  variabel terikatnya  viabilitas  polen.  Parameter  yang  diamati adalah  daya  perkecambahan,  panjang  tabung  dan polen yang terwarnai.

## Cara Kerja a. Penanaman Sampel
Lahan  untuk  penanaman  kedelai  dicangkul terlebih  dahulu  agar  tanah  menjadi  gembur.  Benih yang  digunakan  adalah  benih  kedelai  lokal  varietas grobogan  sebanyak  40  benih.  Penanaman  dilakukan dengan  cara  manual,  yaitu  pembuatan  lubang  pada lahan dengan jarak tanam 25 x 40 cm. Setiap lubang diisi dengan 2-3 benih kemudian ditutup tipis dengan tanah. Perawatan tanaman kedelai meliputi pengairan dan  penyiangan.  Pengairan  dilakukan  dengan mengalirkan  air  di  saluran  air  setiap  satu  minggu
sekali agar kebutuhan air selalu tercukupi. Sedangkan penyiangan  dilakukan  dengan  membuang  tanaman pengganggu untuk memperkecil terjadinya persaingan nutrisi ( Kuntyastuti & Taufiq, 2014) .

## b. Pengambilan Sampel
Pengambilan  sampel  dilakukan  3  hari  setelah bunga  mekar  dari  tanaman  kedelai    yang ditumbuhkan  di  lahan  Desa  Bobosan  Kecamatan Purwokerto  Utara,  Kabupaten  Banyumas.  Sampel bunga diambil menggunakan gunting dan dimasukkan kedalam plastik ziplock dan diberi label. Penyimpanan  polen  dilakukan  dengan  memisahkan anther dengan  bagian  bunga  yang  lain. Anther ditempatkan  dalam  plastik ziplock ,  diberi  label ditempatkan dalam baki preparat kemudian disimpan selama  0,  7,  14,  dan  21  hari  pada  suhu  ruang  (25- 29 ⁰ C) (Samudra & Herawati, 2020).

## c. Uji Viabilitas Polen dengan Metode Pewarnaan
Polen kedelai (lama simpan 0, 7, 14, dan 21 hari) dipisahkan  dari  satu anther menggunakan  pinset diatas object glass . Kemudian ditetesi dengan larutan I ₂ KI satu tetes. Polen diratakan menggunakan pinset. Setelah  itu,  sampel  ditutup  dengan cover  glass dan diberi label (Djanaguiraman et al ., 2013).
Preparat  pewarnaan  polen  disimpan  dalam cawan  petri  dan  dibiarkan  selama  2  jam.  Preparat diamati dibawah mikroskop cahaya dengan perbesaran  100X  dan  dihitung  jumlah  polen  yang terwarnai  (viabel)  dan  yang  tidak  terwarnai  (tidak viabel).  Persentase  viabilitas  polen  dihitung  dengan rumus sebagai berikut (Ridha, 2016).
Viabilitas polen (%) = Jumlah polen yang terwarnai Total polen yang diamati x 100%
d. Uji Viabilitas Polen dengan Metode Perkecambahan
Uji  perkecambahan  polen  dilakukan  dengam membuat  media  Brewbaker  &  Kwack  dengan komposisi  yang  terdiri  dari  sukrosa  10  g,  H3BO3 0,010  g,  Ca(NO3)2.4H2O  0,030  g,  MgSO4.7H2O 0,020  g,  KNO3  0,010  g,  dan  akuades  100  mL. Masing-masing  bahan  ditimbang  menggunakan timbangan  analitik  dan  dimasukkan  kedalam  gelas Beaker  dan  bahan  dilarutkan  dengan  akuades. Selanjutnya, media dipanaskan dengan hot plate dan dihomogenkan dengan magnetic stirrer . Pengecekan pH media dilakukan dengan menggunakan kertas pH. Media  yang  baik  memiliki  pH  sebesar  5,5  -  5,8 (Brewbaker & Kwack, 1963).
Sampel polen kedelai (lama simpan 0, 7, 14, dan 21  hari)  dipisahkan  dari  satu anther menggunakan pinset  dan  diletakkan  di  atas object  glass .  Polen ditetesi  media  Brewbaker  &  Kwack,  kemudian ditutup dengan cover glass . Sampel disimpan dalam
cawan  petri  dan  dibiarkan  berkecambah  pada temperatur ruang (25 - 29 ⁰ C). Dalam rentang waktu 30  menit,  1  jam,  dan  3  jam,  sampel  diamati menggunakan  mikroskop  cahaya  perbesaran  100X dan didokumentasikan (Samudra & Herawati, 2020). Serta  dihitung  daya  perkecambahannya  dengan rumus sebagai berikut:
Daya perkecambahan (%) = Jumlah polen yang berkecambah Jumlah polen yang teramati x 100%

## e.  Pengukuran Panjang Tabung Polen
Pegukuran  panjang  tabung  polen  dilakukan bertujuan  untuk  mengetahui  ukuran  dan  bentuk  dari polen  tanaman  kedelai.  Pengukuran  panjang  tabung polen  dilakukan  dengan  meletakan  polen  kedelai (lama simpan 0, 7, 14 dan 21 hari) diatas object glass kemudian  ditetesi  dengan  media  Brewbaker  & Kwack . Setelah itu, dalam rentang waktu 30 menit, 1 jam,  dan  3  jam,  panjang  tabung  polen  diukur  dari tempat  keluarnya  tabung  polen  pada  butir  polen sampai  ujung  tabung  polen.  (Samudra  &  Herawati, 2020).

## f. Kalibrasi
Kalibrasi  dilakukan  dengan  menera  nilai mikrometer  okuler.  Mikrometer  okuler  di  pasang pada  tabung  lensa  okuler  sedangkan  mikrometer objektif  dipasang  pada  meja  peparat.  Garis  skala  0 mikrometer okuler diatur agar berimpit dengan garis skala 0 mikrometer objektif dan dihitung jumlah garis skala yang berimpit pada kedua mikrometer tersebut (Samiyarsih et  al., 2020).    Nilai  skala  mikrometer okuler dihitung dengan rumus:
Nila skala mikrometer okuler = Skala objektif Skala okuler x 10 μm

## 4. Metode Analisis
Data  hasil  penelitian  dianalisis  menggunakan Analysis  of  Varians (ANOVA)  dengan  tingkat kesalahan  sebesar  5%  dan  1%  yang  dilanjutkan dengan uji BNT dengan tingkat kesalahan 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Viabilitas polen tanaman kedelai yang disimpan pada berbagai lama penyimpanan diperoleh dari hasil pengamatan polen yang terwarnai, daya perkecambahan  dan  pertumbuhan  panjang  tabung polen  yang  disimpan  selama  0,  7,  14  dan  21  hari. Berdasarkan  hasil  penelitian,  persentase  polen  yang terwarnai dari polen tanaman kedelai yang disimpan pada beberapa lama penyimpanan dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar  1. Histogram  Viabilitas  Polen  Tanaman  Kedelai  melalui  Metode  Pewarnaan  pada  Berbagai  Lama Penyimanan.
Keterangan :  (P0) polen dengan lama penyimnan 0 hari; (P1) polen dengan lama penyimnan 7 hari; (P2) polen dengan lama penyimnan 14 hari; (P3) polen dengan lama penyimnan 21 hari.
Pengamatan  viabilitas  polen  tanaman  kedelai melalui  metode  pewarnaan  pada  berbagai  lama penyimpanan  menunjukkan  bahwa  rerata  persentase polen yang terwarnai pada perlakuan P1, P2, dan P3 mengalami  penurunan  dari  perlakuan  P0.  Rerata persentase  tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  P0 sebesar 85,31%. Sedangkan, polen dengan perlakuan lama simpan P3 memiliki rerata persentase terendah yakni sebesar 48,41% (Gambar 1).
Berdasarkan  hasil  uji  F  diketahui  pula  bahwa lama penyimpanan polen berpengaruh nyata terhadap viabilitas  polen.  Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa lama  penyimpanan  polen  dapat  menurunkan persentase  polen  yang  terwarnai  pada  tanaman kedelai.  Hal  ini  dikarenakan  rusaknya  bahan terkandung,  terutama  zat  pati  dalam  polen  akibat pengaruh faktor lingkungan seperti suhu yang terlalu tinggi dan kelembapan yang terus berubah pada saat proses penyimpanan polen. Rusaknya zat pati dalam polen,  menyebabkan  jumlah  polen  yang  terindikasi viabel  (terwarnai)  saat  pengamatan  menjadi  terus berkurang  seiring  bertambahnya  waktu  simpan, sehingga  persentase  polen  terwarnainya  menjadi menurun.  Sesuai  pendapat  Shivanna et  al. (1991); Gibernau et  al. (2003),  hilangnya  viabilitas  ditandai dengan  penurunan  persentase  polen  terwarnai.  Hal tersebut  disebabkan  oleh  suhu,  kondisi  lingkungan, dan kelembapan udara yang relatif, yang menyebabkan  kerusakan  pada  bahan  kandungan polen.
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  perlakuan  P0 berbeda nyata dengan perlakuan P1, P2, maupun P3. Perlakuan P1 berbeda nyata dengan perlakuan P0 dan P3, tetapi tidak berbeda nyata dengan perlakuan P2. Sedangkan,  Perlakuan  P3  berbeda  nyata  dengan perlakuan  P0,  P1,  dan  P2.  Persentase  daya perkecambahan polen pada perlakuan P1 mengalami
Tabel 1. Uji  Beda  Nyata  Terkecil  (BNT)  Pengaruh Lama  Penyimpanan  Terhadap  Viabilitas  Polen Tanaman Kedelai melalui Metode Pewarnaan
Perlakuan Persentase Polen yang Terwarnai (%) P0 85,31ᵃ P1 63,33ᵇ P2 62,01ᵇ P3 48,41ͨ
Keterangan :  Nilai yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom  yang  sama  menyatakan    berbeda  tidak  nyata berdasarkan Uji BNT pada taraf 5%.
penurunan dan terus menurun pada perlakuan P2 dan P3.  Hal  ini  terjadi  karena  polen  pada  perlakuan  P1, zat  yang  terkandung  dalam  polen  mulai  mengalami kerusakan, kemudian  terus berlanjut pada perlakuan P2  dan  P3  dimana  zat-zat  tersebut  terus  mengalami kerusakan dan lama kelamaan akan menghilang lalu dikeluarkan  dari  polen  melalui  porus.  Kandungan polen yang rusak dan hilang ini menyebabkan polen tidak  membentuk  reaksi  tertentu  dengan  larutan pewarna,  sehingga  persentase  polennya  terus mengalami penurunan seiring dengan lamanya waktu simpan.  Perlakuan  P0  merupakan  perlakuan  yang paling efektif dibandingkan dengan perlakuan P1, P2, dan  P3,  karena  dapat  dilihat  pada  perlakuan  P0, persentase polen terwarnainya terbilang paling tinggi dibandingkan  perlakuan  lain.  Menurut  Samudra  & Herawati  (2020),  keadaan  polen  masih  segar  serta bahan  yang  terkandung  dalam  polen  belum mengalami  kerusakan  dan  dehidrasi,  menyebabkan persentase  polen  terwarnai  pada  uji  viabilitasnya tinggi.
Persentase polen  yang terwarnai pada tanaman kedelai  dengan  perlakuan  P0  tergolong  memiliki viabilitas  yang tinggi  yakni  sebesar  85,31%.  Hasil
Gambar 2. Hasil Uji Viabilitas Polen Metode Pewarnaan Perbesaran 100x Keterangan: a) Polen yang viabel; b) Polen yang tidak viable.
yang  tinggi  ini  juga  mengindikasikan  bahwa  polen kedelai pada perlakuan P0 tergolong produktif karena dapat menghasilkan polen yang viabel dalam jumlah yang  banyak.    Hal  ini  didasarkan  pada  penelitian Oliveira et  al. (2019), bahwa  polen  dapat  dikatakan memiliki  viabilitas  yang  tinggi  jika  memiliki persentase viabilitas lebih dari 70%. Hasrianda et al. (2020),  menambahkan  bahwa  viabilitas  polen  yang tinggi  dapat  menghasilkan  buah  dan  biji  yang  baik pada  proses  penyerbukan  dan  merupakan  kandidat parental  jantan  yang  baik.  Sedangkan,  persentase polen terwarnai pada perlakuan P1, P2, dan P3 dapat dikatakan  memiliki  viabilitas  yang  rendah  karena persentasenya  tidak  lebih  tinggi  dari  70%.  Menurut Oliveira et  al. (2019),  hasil  yang  rendah  ini kemungkinan  dapat  menyebabkan  masalah  pada polen  tanaman  kedelai  saat  penyerbukan,  seperti gagal  terbentuknya  tabung  polen  ataupun  terjadinya infertilitas.
Salah satu bahan yang terkandung dalam polen adalah  zat  pati.  Keberadaan  zat  pati  pada  polen
menunjukkan bahwa polen tersebut viabel, sehingga memudahkan  untuk  dibedakan  antara  polen  yang viabel  dan  tidak  viabel.  Hasil  pengamatan  viabilitas polen kedelai dengan metode pewarnaan menggunakan larutan yodium kalium iodida (Gambar 2.)  menunjukkan  ada  2  warna  yang  berbeda  pada polen  kedelai,  yaitu  warna  merah  keunguan  dan kuning bening. Polen yang berwarna merah keunguan diketahui  merupakan  polen  yang  viabel,  sedangkan polen yang berwarna kuning bening merupakan polen yang  tidak  viabel,  hal  ini  disebabkan  karena perbedaan  kandungan  zat  pati  dalam  polen berdampak  terhadap  warna  polen  setelah  ditetesi dengan  larutan  yodium-kalium  iodida.  Hal  tersebut sesuai dengan hasil penelitian Anitasari et al. (2019), yang  menyatakan  bahwa  polen  yang  viabel  akan berwarna  merah  keunguan  jika  ditetesi  dengan larutan yodium-kalium iodida, sedangkan polen yang tidak  viabel  tidak  menunjukkan  warna  yang mengindikasikan  tidak  terdapat  zat  pati  didalam polen.
Gambar 3. Histogram Viabilitas Polen melalui Metode Perkecambahan Polen Tanaman Kedelai pada Berbagai Lama Penyimpanan.
Keterangan : (P0) polen dengan lama penyimnan 0 hari; (P1) polen dengan lama penyimnan 7 hari; (P2) polen dengan lama penyimnan 14 hari; (P3) polen dengan lama penyimnan 21 hari.
Pengamatan  vaibilias  polen  melalui  metode perkecambahan polen tanaman kedelai pada berbagai lama  penyimpanan menunjukkan  bahwa  rerata persentase  daya  perkecambahan  polen  yang  diberi perlakuan lama simpan P1 mengalami penurunan dari perlakuan  lama  simpan  P0.  Rerata  persentase  daya perkecambahan  polen  tertinggi  terdapat  pada perlakuan P0 yaitu sebesar 57,53%. Sedangkan rerata persentase terkecil yakni sebesar 2,53% terdapat pada perlakuan P3 (Gambar 3).
Berdasarkan hasil analisis uji F diketahui bahwa lama penyimpanan polen berpengaruh nyata terhadap daya  perkecambahan  polen.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  lama  penyimpanan  polen  dapat  menurunkan daya  perkecambahan  polen  pada  tanaman  kedelai. Daya  perkecambahan  polen  kedelai  pada  perlakuan P1  mengalami  penurunan  yang  sangat  jauh  yakni sebesar 49,97% dari perlakuan P0. Hal ini disebabkan karena kadar air yang berkurang menyebabkan daya perkecambahan mengalami penurunan dari perlakuan P0 ke P1 dan seterusnya. Kadar air pada polen terus berkurang  seiring  dengan  lamanya  penyimpanan menyebabkan  polen  terus  mengalami  dehidrasi  dari perlakuan satu ke perlakuan lain, dengan menurunnya kadar  air  maka  daya  perkecambahannya  juga  ikut menurun  karena  untuk  dapat  berkecambah  polen memerlukan  air.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Ulfah et al. (2016), bahwa penurunan daya kecambah ini  disebabkan  oleh  kondisi  bunga  yang  layu, sehingga kondisi stamen mulai merunduk dan polen mengalami  dehidrasi  selama  masa  penyimpanan. Polen yang mengalami dehidrasi dan kering di duga mengalami  kematian  sehingga  tidak  lagi  viabel. Penurunan  daya  perkecambahan  terus  terjadi  pada perlakuan  P2  dan  P3,  akan  tetapi  penurunan  yang terjadi  tidak  sebesar  pada  perlakuan  sebelumnya. Menurut  Perveen  (2007),  hal  ini  juga  dapat disebabkan  oleh  fluktuasi  suhu  dan  kelembapan harian pada kondisi lingkungan terbuka.
Tabel  2. Uji  Beda  Nyata  Terkecil  (BNT)  Pengaruh Lama Penyimpanan Terhadap Daya Perkecambahan Polen Tanaman Kedelai .
Perlakuan Persentase Daya Pekecambahan Polen (%) P0 53,51ᵃ P1 7,56ᵇ P2 3,11 ͨ P3 2,53 ͨ
Keterangan :  Nilai yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama menyatakan  berbeda tidak nyata berdasarkan Uji BNT pada taraf 5%.
Tabel  2  menunjukkan  bahwa  perlakuan  P0 berbeda  sangat  nyata  dengan  perlakuan  P1,  P2  dan P3.  Perlakuan  P1  berbeda  nyata  dengan  perlakuan lain, sedangkan perlakuan P2 berbeda nyata terhadap
perlakuan  P0  dan  P1  tetapi  tidak  berbeda  nyata dengan perlakuan P3. Persentase daya perkecambahan polen pada perlakuan P1 mengalami penurunan dan terus menurun pada perlakuan P2 dan P3. Perlakuan penyimpanan polen terhadap persentase  daya  perkecambahan  menunjukkan  hasil yang  berbeda  nyata  pada  masing-masing  perlakuan. Perlakuan  P0  dianggap  yang  paling  efektif  jika dibandingkan  dengan  perlakuan  penyimpanan  lain baik  P1,  P2  maupun  P3.  Hal  ini  disebabkan  karena pada  perlakuan  P0,  kandungan  air  dapat  dikatakan sangat cukup untuk polen melakukan perkecambahan, sehingga persentase daya perkecambahannya tinggi. Polen yang telah disimpan dengan perlakuan P1, P2, dan P3 kandungan air pada polen menjadi berkurang. Kurangnya kandungan air menyebabkan  polen  tidak  mampu  mengimbibisi  air sebagai  langkah  awal  proses  perkecambahan, kemudian  karena  proses  imbibisi  tidak  terjadi  maka pengaktifan  enzim-enzim  yang  memecah  senyawa karbohidrat  dan  protein  untuk  pertumbuhan  tabung polen  juga  terganggu,  sehingga  pada  perlakuan  P1, P2,  dan  P3  daya  perkecambahan  polennya  sangat rendah jika dibandingkan dengan  perlakuan P0. Hal ini  sesuai  pernyataan  Pratiwi et  al. (2017),  yang menyatakan  bahwa  menurunnya  kadar  air  pada  saat penyimpanan  menyebabkan  daya  perkecambahan polen menjadi menurun, karena kadar air yang tinggi merupakan  faktor  utama  untuk  polen  dapat melakukan perkecambahan.
Persentase daya perkecambahan polen tanaman kedelai  pada  perlakuan  P0  tergolong  tinggi,  yakni sebesar  57,53%.  Hasil  yang  tinggi  ini  disebabkan karena  pada  perlakuan  P0,  belum  dilakukan penyimpanan sehingga persentase daya perkecambahan  polen  pada  perlakuan  P0  masih tinggi. Hal ini sesuai dengan pernyataan Ulfah et al. (2016), bahwa viabilitas polen dalam metode in-vitro dapat  digolongkan  baik  apabila  persentase  daya kecambahnya  lebih  besar  dari  30%.  Menurut Hasrianda et  al. (2020)  daya  kecambah  polen  yang tinggi mengindikasikan bahwa polen tanaman kedelai mampu  membentuk  tabung  polen  di  dalam  organ kelamin  betina  sesaat  setelah  proses  penyerbukan terjadi.  Daya  perkecambahan  polen  pada  perlakuan P1,  P2  dan  P3  digolongkan  rendah  karena persentasenya  lebih  kecil  dari  30%,  yakni  masing- masing  secara  berurutan  sebesar  7,56%,  3,11%  dan 2,53%.
Pengujian  viabilitas  polen  dengan  metode perkecambahan polen dianggap sebagai metode yang lebih akurat dibandingkan dengan metode pewarnaan (Warid  &  Palupi,  2009).  Metode  perkecambahan yang  dilakukan  menggunakan  media  Brewbaker  & Kwack,  dengan  hasil  yang  didapatkan  dari  uji  ini yaitu  berupa  persentase  daya  perkecambahan  polen. Daya perkecambahan polen  merupakan  kemampuan polen dalam membentuk kecambah jika ditumbuhkan
Gambar 4. Histogram Pertumbuhan Panjang Tabung Polen Tanaman Kedelai pada Berbagai Lama Penyimanan Keterangan : (P0) polen dengan lama penyimnan 0 hari; (P1) polen dengan lama penyimnan 7 hari; (P2) polen dengan lama penyimnan 14 hari; (P3) polen dengan lama penyimnan 21 hari.
dalam  media  tertentu  yang  mengandung  substrat pengecambah (Ulfah et al., 2016). Media Brewbaker & Kwack memiliki kandungan asam borat (H ₃ PO ₄ ) yang  merangsang  pertumbuhan  tabung  polen  saat perkecambahan  terjadi  (Ahmad et  al., 2012). Kemudian  kandungan  lain  seperti  sukrosa  yang digunakan sebagai sumber energi dan mineral seperti magnesium  sulfat  (MgSO ₄ .7H ₂ O)  dan  kalsium nitrat  (Ca(CO ₂ ) ₃ .4H ₂ O)  sebagai  kelengkapan nutrisi sangat mendukung pertumbuhan tabung polen saat perkecambahan (Patel & Makand, 2015; Kavand et al., 2014).
Parameter  viabilitas  polen  selanjutnya  yaitu berupa pertumbuhan panjang tabung polen.
Berdasarkan  hasil  penelitian,  persentase  daya perkecambahan polen dapat dilihat pada Gambar 4.
Pengamatan petumbuhan panjang tabung polen tanaman  kedelai  pada  berbagai  lama  penyimpanan menunjukkan  rerata  panjang  tabung  polen  kedelai terpanjang adalah pada perlakuan P0 dengan rata-rata panjangnya  adalah  505,55  μm.  Sedangkan  rerata panjang  tabung  polen  terpendek  terdapat  pada perlakuan  P3  dengan  panjang  rata-ratanya  yaitu 280,55 μm (Gambar 4).
Berdasarkan hasil analisis uji F diketahui bahwa lama  penyimpanan  polen  dapat  berpengaruh  nyata terhadap pertumbuhan panjang tabung polen. Hal ini menunjukkan bahwa lama penyimpanan polen dapat menurunkan  kemampuan  polen  dalam  membentuk tabung  polen  sehingga  panjang  tabung  mengalami penurunan dari perlakuan satu ke perlakuan lain. Hal tersebut  menurut  Samudra  &  Herawati  (2020), disebabkan  karena  semakin  lama  polen  disimpan maka  sel-sel  polen  akan  mengalami  penuaan  yang mengakibatkan  proses  metabolisme  pada  polen terganggu,  sehingga  menyebabkan  pembentukan energi yang dibutuhkan untuk menjalankan berbagai
aktivitas yang mendukung polen untuk berkecambah juga  mengalami  gangguan.  Sedangkan  menurut Devitasari  (2004),  menyebutkan  bahwa  penurunan daya  perkecabahan  ini  terjadi  disebabkan  karena fertilitas  yang  menurun  seiring  dengan  semakin lamanya periode simpan polen.
Tabel 3. Uji  Beda  Nyata  Terkecil  (BNT)  Pengaruh Lama
Penyimpanan Terhadap Daya Perkecambahan Polen Tanaman Kedelai Perlakuan Panjang Tabung Polen (μm) P0 505,55 c P1 280,55ᵃᵇ P2 372,55ᵇ c P3 202,77ᵃ
Keterangan :  Nilai yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom  yang  sama  menyatakan    berbeda  tidak  nyata berdasarkan Uji BNT pada taraf 5%.
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  perlakuan  P0 berbeda  nyata  dengan  perlakuan  P1  dan  P3,  tetapi berbeda tidak nyata dengan perlakuan P2. Perlakuan P3 berbeda nyata dengan perlakuan P0 dan P2 tetapi berbeda tidak nyata dengan perlakuan P1. Perlakuan P0  dianggap  sebagai  perlakuan  paling  efektif  jika dibandingkan dengan perlakuan lain karena menghasilkan  rerata  panjang  tabung  polen  yang paling  tinggi.  Panjang  tabung  polen  pada  perlakuan P0  ditemukan  paling  panjang  karena  proses pembentukan  tabung  polennya  tidak  terdapat  faktor penghambat seperti terjadinya dehidrasi atau penuaan sel,  lain  halnya  pada  perlakuan  P1,  P2,  dan  P3 disebabkan karena dehidrasi yang berlebih serta sel- sel polen yang mengalami penuaan saat penyimpanan menyebabkan  proses  pembentukan  panjang  tabung polennya  tidak  maksimal.  Menurut  Ridha  (2016), disebabkan  karena  kandungan  air  dan  zat-zat  yang
terkandung  dalam  polen  pada  lama  simpan  satu minggu  masih  memungkinkan  polen  membentuk kecambah  (buluh  tabung).  Dengan  demikian perlakuan lama penyimpanan secara nyata mempengaruhi pertumbuhan panjang tabung polen.
Penurunan rata-rata panjang tabung polen yang terjadi dari perlakuan P0 rata-rata panjangnya 505,55 μm menjadi 280,55 pada perlakuan P1. Akan tetapi, mengalami kenaikan kembali pada perlakuan P2, dari yang rata-rata panjangnya 280,55 μm pada perlakuan P1  menjadi  372,55  μm.  Selanjutnya  penurunan kembali  terjadi  pada  perlakuan  P3,  yakni  dari sepanjang  372,55  μm  pada  perlakuan  P2  menjadi 202,77 μm. Terjadinya ketidak konstanan penurunan panjang  tabung  polen  ini  dapat  disebabkan  oleh berbagai  faktor,  salah  satunya  adalah  metode penyimpanan  yang  kurang  efisien  (Rahmawati  & Prayitno, 2013). Metode penyimpanan yang digunakan saat pengamatan adalah metode penyimpanan  jangka  pendek  yakni  penyimpanan langsung  (tanpa  pengeringan)  pada  suhu  ruang. Menurut  Tambunan  &  Mariska  (2003),  metode penyimpanan jangka pendek tidak mampu mempertahankan  viabilitas  polen  jika  dibandingkan dengan  metode  penyimpanan  jangka  panjang contohnya  pengeringan.  Rahmawati  &  Prayitno (2013),  menambahkan  bahwa  faktor  lainnya  adalah kondisi fisiologis dari sampel polen yang berbeda dari setiap bunga. Suhu ruang yang dipilih sebagai tempat penyimpanan juga mempengaruhi aktivitas fisiologis polen  tersebut,  sehingga  pada  pertumbuhan  panjang tabung  polen  memungkinkan  terjadinya  perbedaan antara polen satu dengan yang lain.
Gambar 5. Hasil Pengamatan Pertumbuhan Panjang Tabung  Polen  Tanaman  Kedelai  Perlakuan  PO Perbesaran 400X Keterangan : a). Inkubasi 30 menit, b) Inkunasi 1 jam, c). Inkubasi 3 jam
Gambar 6. Hasil Pengamatan Pertumbuhan Panjang Tabung  Polen  Tanaman  Kedelai  Perlakuan  P1 Perbesaran 400X Keterangan : a). Inkubasi 30 menit, b) Inkunasi 1 jam, c). Inkubasi 3 jam
Gambar 7. Hasil Pengamatan Pertumbuhan Panjang Tabung  Polen  Tanaman  Kedelai  Perlakuan  P2 Perbesaran 400X Keterangan : a). Inkubasi 30 menit, b) Inkunasi 1 jam, c). Inkubasi 3 jam
Gambar 8. Hasil Pengamatan Pertumbuhan Panjang Tabung  Polen  Tanaman  Kedelai  Perlakuan  P3 Perbesaran 400X Keterangan : a). Inkubasi 30 menit, b) Inkunasi 1 jam, c). Inkubasi 3 jam
Tabung  polen  tanaman  kedelai  yang  diketahui melalui  pengamatan  memiliki  bentuk  kecambah panjang,  Menurut  Hasrianda et  al. (2020), pengukuran  panjang  tabung  polen  ini  digunakan untuk  menentukan  panjang  maksimum  tabung tersebut  untuk  dapat  mencapai  ovarium  agar  proses pembuahan  dapat  terjadi.  Pengamatan  (Gambar  5); (Gambar  6);  (Gambar  7)  dan  (Gambar  8) menunjukkan  pertumbuhan  panjang  tabung  polen pada  beberapa  perlakuan  penyimpanan.  Hasil pengamatan menunjukkan polen mengalami pemanjangan  tabung.  Tabung  polen  ini  muncul  dari butir  polen  melalui  pori  yang  terdapat  pada  lapisan luar  polen.  Saat  penyerbukan  terjadi  di  dalam  putik tabung  polen  terbentuk  karena  adanya  sinyal  yang diperkirakan  dating  dari  ovulum.  Kemudian  stigma memproduksi eksudat yang mendukung pemanjangan  tabung  polen  hingga  menghantarkan polen mencapai ovulum. Pemanjangan tabung polen ini  kemudian  akan  terus  terjadi  hingga  tabung berhasil menembus ovulum. Menurut Hasrianda et al. (2020), keberhasilan tabung polen menembus ovulum merupakan  proses  penting  yang  berpengaruh terhadap proses pembentukan buah dan biji.
Hasil pengamatan pertumbuhan panjang tabung polen ini digunakan untuk menunjang viabilitas polen dalam  proses  pembuahan  di  dalam  ovarium. Pengamatan  panjang  tabung  polen  ini  dimaksudkan untuk  memperkirakan  panjang  tabung  maksimal untuk  dapat  terjadi  pembuahan  (Hasrianda et  al., 2020).    Kuantitas  polen  viabel  yang  berhasil membuahi  sel  telur  akan  menentukan  kualitas  dan kuantitas  biji.  Viabilitas  polen  juga  menentukan viabilitas  benih  yang  dihasilkan.  Polen  dengan viabilitas  yang  tinggi  akan  dengan  cepat  membuahi sel  telur  dan  menghasilkan  buah  bermutu  baik  serta benih berviabilitas tinggi (Ridha, 2016).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan  dapat disimpulkan  bahwa  Perlakuan  lama  penyimpanan berpengaruh  terhadap  viabilitas  polen  tanaman kedelai  ( Glycine  max (L.)  Merril)  yaitu  dengan menurunkan viabilitas polen, semakin lama penyimpanan  maka  viabilitas  polennya  semakin menurun  dan  viabilitas  polen  tanaman  kedelai  yang tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  P0  kemudian disusul perlakuan P1 dan lama simpan terbaik untuk mendapatkan viabilitas yang tinggi adalah antara 0-7 hari setelah pengambilan sampel.

## DAFTAR REFERENSI
Ahmad S., A. Rana, R. Sharma, & R. K. Agnihotri.,
2012.  Effect  of  Different  Media  and  Boric Acid on Pollen Germination and Tube Growth of Tribulus  Terretris -  A  Medicinal  Plant.
International  Journal  of  Pharmaceutical Science  Review  and  Research 13(2),  pp.77– 79.
Anitasari,  S.  D.,  Astarini,  I.  A.,  Defiani,  M.  R., Pharmawati,  M.,  &  Prayantini,  D.  C.,  2019. Pollen  Viability  and  Microspore  Culture  in Three Broccoli Cultivars (Brassica oleracea L. var.  italica  Plenck). Jurnal  Biota ,  5(2), pp.118-127.
Anitasari, S. D., Winingsih, A. R., Waris, W., Sari, D. N. R., Astarini, I. A., & Defiani, M. R., 2018. Pengaruh  Variasi  Media  Terhadap  Viabilitas Pollen  Tanaman  Tebu  ( Saccharum Sp.).  In Prosiding  Seminar  Nasional  SIMBIOSIS . Jember, 2018.
Astawan,  M.,  &  Hazmi,  K.,  2016.  Karakteristik
Fisikokimia Tepung Kecambah Kedelai. Jurnal Pangan , 25(2), pp.105-112.
Azizah, N., Suedy, S. W. A., & Prihastanti, E., 2016. Keanekaragaman  Tumbuhan  Berdasarkan Morfologi  Polen  dan  Spora  dari  Sedimen Telaga  Warna  Dieng,  Kabupaten  Wonosobo, Jawa  Tengah. Buletin  Anatomi  dan  Fisiologi dh Sellula , 24(1), pp.66-75.
Brewbaker,  J.  L.,  &  Kwack,  B.  H.,  1963.  The Essential  Role  of  Calcium  Ion  in  Pollen Germination  and  Pollen  Tube  Growth. American  Journal  of  Botany .  50(9),  pp.859- 865.
Devitasari,  R.,  2004. Fertilitas  dan  Kompatibilitas Persilangan  pada  Empat  Varietas  Unggul Lokal  Durian  (Durio  zibethinus  Murr.). Skripsi. Malang: Jurusan Budidaya Pertanian Universitas Brawijaya.
Djanaguiraman,  M.,  Prasad,  P.  V.,  Boyle,  D.  L.,  & Schapaugh,  W.  T.,  2013.  Soybean  Pollen Anatomy,  Viability  and  Pod  Set  Under  High Temperature Stress. Journal of Agronomy and Crop Science , 199(3), pp.171-177.
Gibernau, M., Macquart, D., & Diaz, A., 2003. Pollen Viability  and  Longevity  in  Two  Species  of Arum  italicum and A.  aculatum . Aroideana,
26 , pp.58–62.
Hasrianda, E. F., Zaelani, A., & Poerba, Y. S., 2020. Jumlah,  Uji  Viabilitas  dan  Daya  Kecambah Polen  31  Aksesi  Pisang  ( Musa sp.)  Koleksi Kebun  Plasma  Nutfah  Pisang  Lipi. Berita Biologi , 19(2), pp.197-206.
Kavand A., A. Ebadi, Y. D. Shuraki, & V. Abdosi., 2014.  Effect  of  Calcium  Nitrate  and  Boric Acid  On  Pollen  Germination  of  Some  Date Palm  Male  Cultivars. European  Journal  of Experimental Biology , 4(3), pp.10–14.
Kuntyastuti,  H.,  &  Taufiq,  A.,  2014.  Komponen Teknologi  Budidaya  Kedelai  di  Lahan Kering. Buletin Palawija , (16), pp.1-17.
Nirmala, S., Kriswiyanti, E., & Darmadi, A. K., 2013. Uji  Viabilitas  Serbuk  Sari  Secara  In-Vitro Kelapa (Cocos nucifera L.“Rangda”) Dengan Waktu dan Suhu Penyimpanan Yang Berbeda. Jurnal Simbiosis , 1(2), pp.59-69.
Oliveira, W., e Silva, J. L. S., de Oliveira, M. T. P., Cruz-Neto, O., da Silva, L. A. P., Borges, L. A.,  &  Lopes,  A.  V.,  2019.  Flowering  and Fruiting  Synchronization,  Pollen  Number, Floral  Visitors  and  Reproductive  Success  of Paubrasilia echinata (Brazilwood;
Leguminosae)  in  Tropical  Urban  Ecosystem in Comparison to Atlantic Forest Remnant: A dataset. Data in brief , 25 , 104177.
Patel  E.,  &  A.  Mankad.,  2015.  Sucrose  Needs  for Pollen  Germination  of Impatiens  Balsamina L. International  Journal  of  Innovative Research  in  Sci,  Eng.  and  Tech. 4(10), pp.10242–10244.
Permadi,  G.  S.,  2015.  Analisis  Permintaan  Impor Kedelai  Indonesia. Eko-Regional:  Jurnal Pembangunan  Ekonomi  Wilayah ,  10(1), pp.23-31.
Perveen,  A.,  2007.  Pollen  Germination  Capacity, Viability and Maintanence of Pisium sativum L  (Papilionaceae). Middle-East  Journal  of Scientific Research 2, pp.79–81.
Pillay,  M.,  &  Tenkouano,  A.,  2011. Banana Breeding:  Progress  and    hallenges .  Boca Raton, FL, USA: CRC Press.
Pratiwi, W., Kuswanto, K., & Purnamaningsih, S. L., 2017.  Studi  Viabilitas  Polen  Melalui  Silang Diri  Pada  Tiga  Genotipe  Tanaman  Kecipir ( Psophocarpus Tetragonolobus ). Jurnal Produksi Tanaman , 5(3), pp.425-432.
Putra, A. D., Siti, Z., & Heru, K., 2017. Karakterisasi Pollen Plasma Nutfah Kedelai ( Glycine max L. Merril). Seminar  Nasional  Pendidikan  Sains . Surakarta, 2017.
Rahmawati,  D.,  &  Prayitno.,  2013.  Viabilitas  Polen
Cabai  Keriting  (Ck004)  Pada  Berbagai Kombinasi Pengeringan
dan Lama
Penyimpanan. Jurnal  Ilmiah  Inovasi ,  13(3), pp.213-216.
Ridha,  R.,  2016.  Uji  Viabilitas  Polen  Beberapa
Varietas Padi ( Oryza sativa L.) Introduksi. Jurnal Penelitian Agrosamudra , 3(2), pp.81-89.
Samiyarsih,  S.,  Fitrianto,  N.,  Rohma,  A.,  & Sasongko, N. D., 2020. Profil Mikromorfologi Kecipir  ( Psophocarpus  tetragonolobus (L.) DC)  Mutan  Akibat  Iradiasi  Sinar  Gamma Cobalt-60. PLANTROPICA:  Journal  of Agricultural Science , 5 (2), pp.95-206.
Samudra, P. C., & Herawati, M. M., 2020. Pengaruh Suhu  dan  Lama  Simpan  Terhadap  Viabilitas Polen  Petunia  ( Petunia  Inflata ). Jurnal Penelitian Pertanian Terapan , 20(2), pp.135- 141.
Shivanna, K. R., Linkens, H. F. & Cresti, M., 1991. Pollen  Viability  and  Pollen  Vigor. Theor. Appl. Genet. 81, pp.38-42.
Tambunan,  I.  R.,  &  I.  Mariska.,  2003. Pemanfaatan Teknik  Kriopreservasi  dalam  Penyimpanan Plasma  Nutfah  Tanaman. Buletin  Plasma Nutfah , 9(2), pp.10-18.
Ulfah,  S.  M.,  Dorly,  &  Rahayu,  S.,  2016. Perkembangan  Bunga  dan  Uji  Viabilitas Serbuk  Sari  Bunga  Lipstik  Aeschynanthus radicans var.'Monalisa'di Kebun Raya Bogor. Buletin Kebun Raya , 19(1), pp.21-32.
Warid,  &  Palupi,  E.  R.,  2009.  Korelasi  Metode Pengecambahan In  Vitro dan  Pewarnaan dalam  Pengujian  Viabilitas  Polen.  Skripsi. Jurusan  Agronomi  dan  Holtikultura  Fakultas Pertanian. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Winarto,  B.,  &  Rachmawati.,  2007.  Teknik  Kultur Anther  Pada  Pemuliaan  Anthurium. Jurnal Hortikultura, 17(2), pp.127-137.