EFEK EKSTRAK DAUN CEREMAI ( PHYLLANTHUS ACIDUS (L.) SKEELS ) TERHADAP PENYEMBUHAN LUKA MUKOSA TIKUS WISTAR (RATTUS NORVEGICUS)
THE EFFECT OF CEREMAI LEAF EXTRACT (PHYLLANTHUS ACIDUS (L.) SKEELS) ON WOUND HEALING OF WISTAR RATS (RATTUS NORVEGICUS)

## Fakhrurrazi, Rachmi Fanani Hakim, Astari Chairunissa
Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Syiah Kuala Corresponding Author: rachmifananihakim@unsyiah.ac.id

## Abstrak
Luka  merupakan  terjadinya  gangguan  pada  struktur  normal  tubuh.  Tubuh  akan  merespon  melalui proses  penyembuhan  luka.  Kerusakan  dan  regenerasi  jaringan  memerlukan  peran  kolagen.  Ketika proses  penyembuhan  jaringan  kolagen  disintesis  dan  didepositkan  oleh  fibroblas.  Daun  ceremai bermanfaat  untuk  penyembuhan  luka  karena  mengandung  senyawa  aktif  Terpenoid,  Saponin  dan flavonoid. Tujuan penelitian untuk menetapkan potensi ekstrak daun ceremai (Phyllanthus acidus (L.) Skeels)  sebagai  obat  herbal  terhadap  penyembuhan  luka  tikus  Wistar  (Rattus  norvegicus).  Sepuluh ekor  tikus  jantan  dengan  berat  200-300  gram  dan  usia  8-12  minggu  dibagi  ke  dalam  2  kelompok, kelompok perlakuan dan kelompok kontrol. Luka pada gingiva bagian labial tikus dibuat sepanjang 5 mm dan kedalaman mencapai tulang alveolar. Ekstrak daun ceremai 100% diberikan pada kelompok perlakuan topikal 2 kali sehari selama 7 hari. Akuades diberikan pada kelompok kontrol. Pengamatan histologis (pewarnaan hematoksilin eosin) menunjukkan hasil rerata jumlah fibroblas pada kelompok kontrol  20,4±1,3  dan  kelompok  perlakuan  31,0±3,3.  Uji  T  tidak  berpasangan  menunjukkan  nilai signifikansi yakni 0,001 (p<0,05) menunjukkan bahwa terdapat perbedaan bermakna jumlah fibroblas pada  penyembuhan  luka  antara  ekstrak  daun  ceremai  dibanding  kontrol.  Ekstrak  daun  ceremai konsentrasi 100% mempunyai efek terhadap jumlah fibroblas pada luka gingiva tikus Wistar.
Kata Kunci: Penyembuhan Luka, Ekstrak Daun Ceremai, Fibroblas

## Abstract
Injury is a disturbance in the normal structure of the body. The body will respond through the process of  wound  healing.  Tissue  damage  and  regeneration  require  the  role  of  collagen.  When  the  healing process  of  collagen  tissue  is  synthesized  and  deposited  by  fibroblasts.  Ceremai  leaves  are  useful  for wound healing because they contain the active compounds Terpenoid, Saponin and flavonoids known. The purpose of this study was to determine the effect of ceremai leaf extract (Phyllanthus acidus (L.) Skeels)  on  wound  healing  of  Wistar  (Rattus  norvegicus)  wounds.  10  male  rats  weighing  200-300 grams  and  aged  8-12  weeks  were  divided  into  2  groups,  the  treatment  group  and  the  control  group. The  gingival  wound  in  the  labial  part  of  the  rat  was  made  5  mm  long  and  the  depth  reached  the alveolar bone. Ceremai leaf extract was given to the topical treatment group 2 times a day for 7 days. Aquades  are  given  in  the  control  group.  Histological  observations  showed  the  average  number  of fibroblasts in the control group was 20.4 ± 1.3 and the treatment group was 31.0 ± 3.3. The unpaired T  test  showed  a  significance  value  of  0.001  (p  <0.05),  indicating  that  there  was  a  significant difference  in  the  number  of  fibroblasts  in  wound  healing  between  ceremai  leaf  extract  compared  to controls. The 100% concentration of ceremai leaf extract had an effect on the number of fibroblasts in the gingival wound of Wistar rats.
Keywords: Wound Healing, Ceremai Leaf Extract, Fibroblast

## PENDAHULUAN
Luka  diartikan  sebagai  terganggu  dan rusaknya struktur serta fungsi normal dari suatu struktur  tubuh. 1,  2 Luka  dapat  diklasifikasikan berdasarkan banyak aspek. Berdasarkan struktur yang terlibat luka beragam dimulai dari yang  sederhana  seperti  hilangnya  integritas epitel  kulit  sampai  terjadinya  kerusakan struktur  lain  seperti  tulang. 2 Terdapat  banyak penyebab  terjadinya  luka,  salah  satunya  adalah prosedur  perawatan  gigi  dan  mulut  seperti ekstraksi,  insisi,  dan  lainnya.  Saat  mengalami luka,  usaha  untuk  penyembuhan  luka  tubuh akan memberikan respon. 3 Proses penyembuhan  luka  yang  komplek  dan  dinamis melibatkan beberapa proses koordinasi sel yang terdiri  dari  pertama  hemostasis,  kedua  proses koagulasi,  ketiga  inisiasi  respon  mediator inflamasi akut, regenerasi, migrasi dan proliferasi,  serta  keempat  remodeling  untuk pembentukan  kolagen  sehingga  mendapatkan kembali kontinuitas anatomi dan fungsi struktur tersebut. 1, 2, 4
Pembentukan  kolagen  dan  sel  epitel merupakan proses penyembuhan luka. Kolagen dibutuhkan  untuk  memperbaiki  kerusakan  dan mengembalikan (meregenerasi jaringan) struktur  dan  fungsi  struktur  anatomi  tubuh. Fibroblas  merupakan sel  jaringan  ikat berperan mensintesis  dan  mendepositkan  kolagen  untuk penyembuhan  jaringan.  Fibroblas  berperan penting  dalam  penyembuhan  luka  karena fibroblas  berperan  membentuk  jaringan  ikat yang  baru. 5-7 Herbal  atau  ekstrak  bahan  alami telah  banyak  dipercaya  dan  diteliti  dapat digunakan  sebagai  bahan  herbal  topikal penyembuh luka pada hewan coba. 5
Salah  satu  tanaman  yang  berpotensi adalah  daun  ceremai  (Phyllanthus  acidus  (L.) Skeels). Sebuah tanaman asli India yang secara tradisional  digunakan  untuk  menyembuhkan beberapa penyakit inflamasi 8 Menurut penelitian  Jagessar  (2008)  daun  ceremai (Phyllanthus  acidus  (L.)  Skeels)  mempunyai daya  antimikroba  seperti  antibakteri  dan antijamur. 9 Agen antibakteri mengurangi kolonisasi  dan  infeksi  bakteri  luka,  untuk meningkatkan  proses  penyembuhan.  Agen antibakteri  memperpendek periode peradangan, untuk  mempersingkat  waktu  penyembuhan. Inflamasi  merupakan  respon  pertama  selama masa penyembuhan sebagai mekanisme pertahanan  jaringan,  durasi  yang  singkat  pada fase  inflamasi  dapat  mempersingkat  proses penyembuhan luka. 10
Pratiwi  dkk.  (2013)  melaporkan  bahwa setelah  uji  fitokimia,  kandungan  ekstrak  daun ceremai  ( Phyllanthus  acidus  (L.)  Skeels )  yaitu senyawa  flavonoid,  tanin,  dan  saponin. 11
Menurut  Afifah  dkk.  (2013)  kandungan simplisia  daun  ceremai  adalah  flavonoid, kuinon,  polifenol,  saponin,  dan  terpenoid. 12 Triterpenoid  dapat  memodulasi  ekspresi  gen pada  kultur  sel  fibroblas. 13 Senyawa  saponin dipercaya membantu proses penyembuhan luka melalui  pembentukan  kolagen. 14 Flavonoid dapat  meningkatkan  pembentukan  kekuatan dari  serat  kolagen  yang  diperlukan  dalam penyembuhan luka. 5 Senyawa saponin, flavonoid,  tanin  dapat  dijadikan  obat  topikal penyembuh  luka  karena  mempunyai  sifat antibakteri  dan  antijamur  sehingga  dapat mempercepat  penyembuhan  luka. 14 Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  ekstrak daun ceremai sebagai obat topikal penyembuhan luka mukosa oral.

## BAHAN DAN METODE
Semua  prosedur  telah  disetujui  oleh Badan  Etik  Penelitian  Fakultas  Kedokteran Gigi, Universitas Syiah Kuala untuk Perawatan dan  Penggunaan  Hewan  sebelum  penelitian dimulai.  Nomor  izin  etis  011  /  KE  /  FKG  / 2020.
Ekstraksi Ekstrak
Daun Ceremai (Phyllanthus acidus (L.) Skeels)
Daun  ceremai  (Phyllanthus  acidus  (L.)
Skeels)  yang  dipilih  dan  dipisahkan  dari  daun rusak  sehingga  didapatkan  daun  ceremai (Phyllanthus  acidus  (L.)  Skeels)  yang  baik sebanyak  1  kg. 15 Daun  ceremai  (Phyllanthus acidus  (L.)  Skeels)  yang  telah  dikumpulkan dicuci  dengan  air  mengalir  dan  dikeringkan selama  7  hari  dengan  tidak  terkena  cahaya matahari  langsung. 10 Setelah  itu,  daun  yang mengering  dihaluskan  menjadi  serbuk  daun dengan  bantuan  blender  atau  grinder  dan disimpan  di  dalam air-tight  container . 16,  15
Selanjutnya  serbuk  daun  diletakkan  dalam flat bottomed glass container dan direndam dengan 1 L metanol. Lalu ditutup dan dibiarkan selama 3  hari  disertai  sesekali  dilakukan  pengadukan dan pengocokan. Hasil campurannya kemudian difiltrasi  menggunakan white  cotton  material diikuti  dengan  filtrasi.  Filtrat  didapat  dari penguapan  menggunakan  Whatmann filter paper dan  ekstrak  daun  ceremai  (Phyllanthus acidus  (L.)  Skeels)  didapat  dari  penguapan dengan rotary vacuum evaporator . 10, 17
Tahapan  Persiapan  Tikus  Wistar  ( Rattus norvegicu s) Tikus putih galur Wistar ( Rattus norvegicus )  jantan  usia  8-12  minggu  dan  berat 200-300  gr  diadaptasikan  dengan  lingkungan laboratorium  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas Syiah Kuala dengan cara dikandangkan  secara  individual  pada  suhu ruangan sekitar 25 0 C, ventilasi yang baik. Tikus diberi makan dengan standart laboratory pellet diet dan air secara ad libitum selama minimal 5 hari. 8,16 Tikus  putih  galur  Wistar  (Rattus norvegicus)  dipelihara  dalam  kandang  yang terbuat  dari  bahan  plastik  dengan  alas  sekam serta  kawat  sebagai  penutupnya.  Kandang tersebut  dibersihkan  minimal  2  kali  dalam seminggu. 18

## Pembuatan Luka Insisi pada Gingiva Bagian Labial Tikus Wistar (Rattus norvegicus)
Tikus coba dibagi menjadi dua kelompok.  Masing-masing  kelompok  terdiri dari  5  ekor  tikus  Wistar  (Rattus  norvegicus) jantan.  Daerah  yang  dibuat  perlukaan  adalah gingiva  bagian  labial  di  bawah  kedua  gigi anterior  mandibula.  Pertama,  semua  tikus dianestesi  dengan  menggunakan  injeksi  single intramuskular 1-2 mg/kg xylazine hydrochloride dan 10 mg/kg ketamine hydrochloride. 5,19 Perlukaan dibuat pada gingiva  bagian  labial  di  bawah  kedua  gigi anterior  mandibula  menggunakan  blade  dan scalpel  sepanjang  5  mm  dan  kedalaman mencapai tulang alveolar. 17, 20
Aplikasi Ekstrak Daun Ceremai
(Phyllanthus  acidus  (L.)  Skeels)  pada  Luka Insisi
Pada  kelompok  perlakuan  diaplikasikan ekstrak  daun  ceremai  (Phyllanthus  acidus  (L.) Skeels)  secara  topikal  dengan  kapas  steril sebanyak  100μl  setiap  harinya  sampai  hari  ke- 7.  Diaplikasikan  2  kali  sehari  selama  1  menit, yaitu  pada  pagi  hari  dan  sore  hari  yakni  pukul 08.00  dan  16.00  selama  7  hari.  Akuades diaplikasikan  pada  kelompok  kontrol. 19, 20
Setelah  selesai  diberikan  perlakuan,  maka semua  tikus  putih  Wistar  (Rattus  norvegicus) jantan  kemudian  dieutanasia  dengan  ether, yakni  kapas  yang  dibasahi  dengan  ether diletakkan  dalam  satu  wadah  yang  sesuai dengan besar hewan cobanya. 21 Kemudian tikus Wistar  dimasukkan  satu  per  satu  ke  dalam wadah  tersebut  ditunggu  hingga  mati.  Setelah
dilakukan  pemotongan  jaringan  maka  tikus Wistar dikuburkan. 22
Pembuatan dan Pengamatan Preparat Histologi
Bagian  yang  diberi  perlakuan  dilakukan pemotongan jaringan dan difiksasi  dengan cara memasukkan  potongan  jaringan  ke  dalam larutan  Neutral  Buffer  Formalin  (10%)  selama 18-24  jam. 57 selanjutnya  jaringan  dipotong dengan ketebalan sekitar 2-3 mm.  Perendaman bertingkat,  pertama  dalam  alkohol  70% dilakukan  selama  15  menit,  selanjtnya  alkohol 80%  selama  1  jam,  dan  alkohol  95%  selama  2 jam,  96%  selama  1  jam  dan  alkohol  100% selama  3  jam.  Perendaman  dalam  larutan  xylol (clearing)  dialkukan  sebanyak  3  kali  pada wadah  yang  berbeda  dengan  rentang  waktu  1 jam,  2  jam  dan  2  jam  pada  perendaman terakhir. Setelah itu jaringan diinfiltrasi dengan menggunakan  paraffin  selama  1,5  jam. 17,  23 Selanjutnya  dilakukan  penanaman  jaringan pada  paraffin  block  dan  pemotongan  jaringan dengan menggunakan mikrotom dengan ketebalan 5mikron. 24
Kemudian jaringan diletakkan  pada water  bath .  Selanjutnya, potongan  jaringan  dipindahkan  ke object  glass yang sebelumnya telah dioleskan albumingliserin  sebagai  perekat  didiamkan selama  12  jam. 23,  24 Lalu  dimasukkan  ke  dalam 2  tabung  larutan  xylol  selama  2-3  menit, kemudian  4  tabung  alkohol  masing-masing selama 3 menit, dan air mengalir sampai bersih. Setelah  itu  dilakukan  pewarnaan  preparat dengan  menggunakan  pewarnaan  hematoxylin eosin  (HE)  dengan  3  tahap  yaitu  pewarnaan, dehidrasi dan penjernihan. Pewarnaan dilakukan  dengan  pewarna  utama  hematoxylin selama  10-15  menit,  cuci  dengan  air  mengalir selama  20  menit,  celupkan  ke  dalam  acid alcohol,  celupkan  ke  dalam  air  dan  lakukan dengan  pewarna  pembanding  dengan  eosin  10- 15 menit. Dehidrasi dilakukan dengan menggunakan  alkohol  70%,  80%,  96%,  dan 100%  masing-masing  selama  2-3  menit. Penjernihan  dilakukan  dengan  larutan  xylol selama  60  menit  dan  diulangi  agar  hasil pewarnaan  dapat  terlihat  dengan  jelas.  Sediaan preparat  dikeringkan  dan  ditetesi  dengan perekat permount dan kemudian ditutup dengan cover  glass dan  ditunggu  beberapa  menit hingga  perekatnya  mengering. 17,  23 Preparat dapat diamati dengan  menggunakan  mikroskop dengan  pembesaran  400x  dan  pengamatan dengan  5  lapangan  pandang  untuk  melihat
jumlah fibroblas yang ada. 20, 21 Pengamatan dan perhitungan dengan 5 lapangan pandang adalah melakukan  perhitungan  sebanyak  5  kali pergantian  lapangan  pandang  berbeda  yang tampak  dalam  lensa  objektif  dengan  cara menggeser  lensa  ke  bagian  atas,  tengah  dan bawah preparat. Kemudian hasilnya dijumlahkan  dan  diambil  nilai  rata-ratanya untuk  mendapatkan  jumlah  fibroblas  setiap preparat. 25-27

## HASIL
Pengamatan  dan  perhitungan  jumlah fibroblas  pada  preparat  dilakukan  dengan menggunakan  mikroskop  Olympus  BX  41 dengan  400x  pembesaran  dan  5  lapangan pandang  setiap  preparat.  Pengamatan  ini dilengkapi  dengan  kamera  digital  DP-12.  Data
hasil perhitungan jumlah fibroblas menunjukkan nilai rata-rata luka tikus kelompok perlakuan sebanyak 31,0±3,3. Sementara  luka  tikus  kelompok  kontrol mempunyai rata-rata jumlah fibroblas sebanyak 20,4±1,3.  Berdasarkan  pengamatan  histologi yang  dilakukan,  menunjukkan  bahwa  jumlah fibroblas  pada  kelompok  perlakuan  lebih banyak  dibandingkan  dengan  pada  kelompok kontrol.
Tabel 1. Hasil Nilai Rata-Rata Jumlah Fibroblas
Gambar 1.  Gambaran Histologi Fibroblas (menggunakan pewarnaan HE) pada Kelompok Kontrol (A) dan Kelompok Perlakuan (B) Diamati menggunakan mikroskop cahaya (pembesaran 400x)

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  ini  didapatkan  dengan menghitung  rerata  jumlah  fibroblas.  Pada kelompok  kontrol  rerata  jumlah  fibroblas adalah  20,4±1,3.  Rerata  jumlah  fibroblas  pada kelompok perlakuan, yaitu 31,0±3,3. (Tabel 1.) Analisis  uji  t  tidak  berpasangan  didapat  nilai p=0,001 (p<0,05) menunjukkan t erdapat perbedaan  bermakna  antara  jumlah  fibroblas kelompok kontrol dibandingkan dengan kelompok  perlakuan.  Hal  ini  sesuai  dengan hasil  penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan oleh  Pradita  (2013)  mengenai  periodontal dressing  dengan  kandungan epigallocathechin gallate teh  hijau  meningkatkan  sel  fibroblas setelah  perlukaan  gingiva  yang  menyimpulkan bahwa  rerata  jumlah  fibroblas  pada  kelompok perlakuan lebih banyak dibandingkan kelompok kontrol dikarenakan terdapat
senyawa aktif yang diperlukan dalam penyembuhan luka. 28 Sementara pada kelompok kontrol hanya diaplikasikan akuades.
Proses  penyembuhan  luka  terjadi  secara teratur bertujuan untuk mengembalikan keutuhan  jaringan  yang  telah  rusak. 29 Proses penyembuhan  luka  dipengaruhi  juga  oleh jaringan  dan  jenis  luka. 30 Penyembuhan  primer terjadi  pada  luka  yang  tidak  terinfeksi,  bersih, dan  luka  segera  melekat  dengan  bantuan jahitan. Luka mengalami penyembuhan sekunder  jika  penyembuhannya  berjalan  secara alami,  jaringan  granulasi  dan  epitel  akan mengisi bagian jaringan yang terluka. 29, 30
Pada  kelompok  kontrol  tetap  terjadi penyembuhan luka karena proses penyembuhan yang  berlangsung  adalah  proses  penyembuhan yang normal, yakni mengalami fase hemostasis, inflamasi,  proliferasi  dan  remodeling.  Setelah
Variabel Kelompok Mean±SD Jumlah Fibroblas Perlakuan Kontrol 31,0±3,3 20,4±1,3
terjadi  dilatasi  pembuluh  darah  daerah  luka, maka  sel  darah  putih  (neutrofil,  eosinofil), monosit,  makrofag  sebagai  sel  inflamasi  akut bermigrasi  ke  jaringan  luka. 31,32 Fase  ini merupakan fase  inflamasi dimana neutrofil  dan makrofag  merupakan  sel  dominan  yang berperan  untuk  memfagosit  mikroorganisme dan  sel-sel  mati. 31 Kemudian  makrofag, limfosit, dan trombosit merangsang pembentukan  fibroblas  dengan  mensekresikan sitokin (IL-1 dan TNF) dan faktor pertumbuhan seperti  TGF-β,  bFGF,  PDGF.  PDGF  (platelet- derived  growth  factor)  menginduksi  migrasi dan  proliferasi  fibroblas,  sel  otot  polos  dan monosit.  bFGF  (basic  fibroblast  growth  factor) memediasi  makrofag  dan  fibroblas  di  bagian terjadinya luka dan menginduksi tahapan untuk angiogenesis.  TGF-  β  (transforming  growth factor-  β)  menginduksi  sintesis  dan  sekresi PDGF,  merangsang  kemotaksis  fibroblas  dan produksi kolagen. 29
Fibroblas adalah sel yang dominan dalam fase  proliferasi. 28 Fibroblas  bermigrasi  dan berproliferasi  untuk  membentuk  jaringan  ikat baru dan mensintesis kolagen yang mempengaruhi tensile   strength dan   kekuatan pada tempat penyembuhan luka. 33 Peningkatan fibroblas  pada  kelompok  perlakuan  terjadi disebabkan  kelompok  perlakuan  diaplikasikan ekstrak  daun  ceremai  yang  kandungannya adalah senyawa aktif seperti flavonoid, saponin,  alkaloid,  polifenol  dan  steroid. Senyawa  aktif  ini  dapat  berpengaruh  dalam proses  penyembuhan  luka.  Efek  utama  dari  zat aktif  pada  ekstrak  tanaman  yang  mempunyai potensi  terhadap  penyembuhan  luka  adalah  zat yang  mempunyai  aktivitas  antimikroba,  zat yang  bermanfaat  sebagai  antioksidan,  serta komponen  aktif  yang  meningkatkan  proliferasi sel, angiogenesis, produksi kolagen. 34
Senyawa yang dikenal mempunyai kemampuan sebagai antioksidan adalah polifenol  dan  flavonoid. 35,36 Senyawa  yang berperan  sebagai  antioksidan  dapat  mencegah terjadinya  kerusakan  atau  nekrosis  jaringan dengan  cara  meningkatkan  vaskularisasi  dan menghambat  lipid  peroksidasi.  Terhambatnya lipid peroksidasi diketahui dapat meningkatkan kekuatan serabut kolagen dengan meningkatkan sintesis  DNA  pembentuk  kolagen  tersebut, yakni  IGF-1  (insulin-like  growth  factor)  yang berperan  sebagai  mediator  proliferasi  fibroblas dan sintesis kolagen. 32,35,37 Flavonoid diketahui dapat menghambat TNF-α yang berperan dalam apoptosis  sel  fibroblas. 32 Selain  itu,  flavonoid
mempunyai  daya  antibakteri  yang  berfungsi sebagai  kontrol  infeksi  dari  mikroorganisme. 38 Alkaloid diketahui dapat menstimulasi fibroblas  sehingga  meningkatkan  produksi kolagen. 39 Steroid merupakan senyawa antiinflamasi.  Aktivitas  antiinflamasi  dapat mencegah terjadinya inflamasi yang berkepanjangan, sehingga mempercepat penyembuhan  luka. 37 Saponin  adalah  senyawa aktif  yang  juga  mempunyai  aktivitas  sebagai antioksidan  dan  antimikroba.  Selain  itu, saponin dapat meningkatkan proliferasi fibroblas dan sintesis matriks ekstraseluler yang baru  yang  berkaitan  dengan  pembentukan kolagen  tipe  I  dan  III. 40 Menurut  Kanzaki (1998), saponin mempengaruhi dan meningkatkan  sintesis  dari  TGF-  β.  TGF-  β dilepaskan oleh platelet, makrofag, dan limfosit T  dan  berfungsi  sebagai  sinyal  utama  yang meregulasi  fungsi  fibroblas  sehingga  jumlah fibroblas meningkat. 41

## KESIMPULAN
Berdasar penelitian ini dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  ceremai ( Phyllanthus  acidus  (L .) Skeels )  berpotensi sebagai  bahan  herbal  topikal  penyembuh  luka mukosa  oral,  seperti  tampak  dari  studi  ini berdasarkan perbedaan signifikan jumlah fibroblas pada luka gingiva tikus Wistar ( Rattus norvegicus )  yang  diaplikasikan  ekstrak  daun ceremai.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Lazarus GS, Cooper DM, Knighton DR, et al. Definitions and Guidelines for Assesment  of  Wounds  and  Evaluation  of Healing. Wound  Repair  and  Regeneration 1994; 2(3): 165-70.
2. Velnar  T,  Balley  T,  Smrkolj  V.  The Wound  Healing  Process  :  an  Overview  of the  Cellular  and  Molecular  Mechanisms. Journal of International Medical Research 2009; 37(5): 1528-42.
3. Peterson  LJ.  Principles  of  Uncomplicated Exodontia.  In:  Peterson,  Ellis,  Hupp  JR, Tucker  MR,  editors. Contemporary  Oral and  Maxillofacial  Surgery .  4  ed.  United State of America: Mosby; 2003: 114.
4. Orsted  HL,  Keast  D,  RN  LF-L,  Francoise M,  MD  M.  Basic  Principles  of  Wound Healing. Wound  Care  Canada 2011; 9(2): 4-10.
5. Al-Henhena  N,  Mahmood  AA,  Al- Magrami  A,  et  al.  Histological  Study  of Wound  Healing  Potential  by  Ethanol  Leaf Extract  of  Strobilanthes  crispus  in  Rats. Journal  of  Medicinal  Plants  Research 2011; 5(16): 3660-66.
6. Diegelmann  RF,  Evans  MC.  Wound Healing:  An  Overview  of  Acute,  Fibrotic and  Delayed  Healing. Frontiers    in Bioscience 2004; 9: 283-89.
7. Montesano  R,  Orci  L.  Transforming growth factor f3 stimulates collagenmatrix contraction by fibroblasts: Implications for wound  healing. Proc.  Natl.  Acad.  Sci Medical Sciences 1988; 85: 4894-97.
8. Chakraborty  R,  De  B,  Devanna  N,  Sen  S. Antiinflammatory, antinociceptive and antioxidant activities of Phyllanthus acidus L.  extracts. Asian  Pacific  Journal  of Tropical Biomedicine 2012; 12: 953-61.
9. Jagessar  RC,  Mars  A,  G  G.  Selective Antimicrobial  properties  of  Phyllanthus acidus  leaf  extract  againts  Candida albicans, Escherichia coli and Staphylococcus  aureus  using  Stokes  Disc diffusion,  Well  diffusion,  Streak  plate  and a  dilution  method.  Nature  and  Science University of Guyana 2008; 6(2): 24-38.
10. Negut I, Grumezescu V, Grumezescu AM. Treatment Strategies for Infected Wounds. Molecules . 2018; 23(9): 2392.
11. Pratiwi  YC,  Haryono  T,  Rahayu  YS. Efektivitas Ekstrak Daun Ceremai (Phyllanthus  acidus)  terhadap  Mortalitas Larva  Aedes  aegypti  Lentera  Bio  Journal Universitas  Negeri  Surabaya  2013;  2(3): 197-201.
12. Shilali  K,  Ramachandra  YL,  Rajesh  KP, BE  KS.  Assessing  The  Antioxidant Potential  Of  Phyllanthus  Acidus  Bark Extracts. International Journal of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences 2014; 6(6): 522-31.
13. Coldren  CD,  Hashim  P,  Ali  JM,  et  al. Gene  Expression  Changes  in  the  Human Fibroblast  Induced  by  Centella  asiatica Triterpenoid. Planta  Med 2003;  1(69): 725-32.
14. Oktiarni  D,  Manaf  S,  Suripno  Pengujian Ekstrak Daun Jambu Biji (Psidium guajava Linn.)  Terhadap  Penyembuhan  Luka Bakar  Pada  Mencit  (Mus  musculus). Bengkulu:  Program  Studi  Kimia  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas Bengkulu.
[http://repository.unib.ac.id/396/1/2- Dwita%20Gradien.pdf.  Accessed  22  Mei 2014].
15. Prakash  NKU,  Bhuvaneswari  S,  Divyasri D, et al. Studies on the Phytochemistry and Bioactivity  of  Leaves  of  Few  Common Trees  in  Chennai,  Tamil  Nadu,  India. International  Journal  of  Pharmacy  and Pharmaceutical Sciences 2013; 5: 88-91.
16. Yanadaiah  JP,  Lakshmi  SM,  Jayaveera KN,  Sudhakar  Y,  Reddy  KR.  Assesment of  Antidiabetic  Activity  of  Ethanol Extracts  of  Phyllanthus  acidus  Linn  and Basella  rubra  Linn  Leaves  Against Streptozotocin  Induced  Diabetes  in  Rats. International Journal of Universal Pharmacy  and  Bio  Sciences 2012;  1(2):
77-84
17. Cahyani D. Pengaruh ekstrak daun andong (Cordyline  fruticosa)  terhadap  jumlah fibroblas  gingiva  tikus  Wistar  (Rattus norvegicus)  jantan  secara  histopatologis (pada  hari  ke-7). Skripsi .  Banda  Aceh: Universitas Syiah Kuala; 2014: 24-25.
18. Hudson  A,  Romagnano  A.  Mice,  Rats, Gerbils,  and  Hamsters.  In:  Bonnie  B, Cheek  R,  editors. Exotic  Animal  Medicine for The Veterinary Technician . 2 ed. Iowa: Blackwell Publishing; 2010: 295-96.
19. Agdelia  G,  Dewi  AH,  Wahyudi  IA. Pengaruh  Pemberian  Gel  Kitosan  3% terhadap  Kekuatan  Tarik  Kulit  Tikus dalam  Proses  Penyembuhan  Luka  Pasca Insisi  (Kajian  in  vivo).  Proceeding  Book Lustrum  FKG  UGM  13  The  International Symposium  on  Oral  and  Dental  Sciences. Yogyakarta:  FKG  Universitas  Gadjah Mada; 2013; 124-28.
20. Indraswary  R.  Efek  Konsentrasi  Ekstrak Buah  Adas  (Foeniculum  vulgare  Mill.) Topikal  Pada  Epitelisasi  Penyembuhan Luka  Gingiva  Labial  Tikus  Sparague Dawley  In  Vivo. Jurnal  Majalah  Ilmiah Sultan Agung 2011; 49(124).
21. Prabakti  Y.  Perbedaan  Jumlah  Fibroblas Di  Sekitar  Luka  Insisi  Pada  Tikus  Yang
Diberi Infiltasi Penghilang Nyeri Levobupivakain  Dan  Yang  Tidak  Diberi Levobupivakain. Tesis. Semarang:
Universitas Diponegoro; 2005: 35.
22. Noorrafiqi MI, Yasmina A, Hendriyono F. Efek  Jus  Buah  Karamunting  (Melastoma malabathricum L.) Terhadap Kadar Trigliserida Serum Darah Tikus Putih yang
Diinduksi Propiltiourasil. Berkala Kedokteran 2013; 9(2): 219-27.
23. Syawat  M.  Potensi  Pemberian  Ekstrak Umbi Teki (Cyperus rotundus L) Terhadap Jumlah  Neutrofil  Jaringan  Granulasi  Post Ekstraksi  Gigi  Tikus  Wistar  Jantan. Skripsi .Jember:  Universitas  Jember;  2012; 5. 24. Balqis U, Rasmaidar, Marwiyah. Gambaran  Histopatologis  Penyembuhan Luka Bakar Menggunakan Daun
Kedondong  (Spondias  dulcis  F.)  dan Minyak  Kelapa  pada  Tikus  Putih  (Rattus norvegicus). Jurnal  Medika  Veterinaria 2014; 8(1): 31-36.
25. Nurdan  C,  Erdem,  Ozben.  Evaluation  of the  Effects  of  Losartan  on  a  Random Pattern  Skil  Flap  Model  in  Rats.  Turkish Journal  of  Trauma  &  Emergency  Surgery 2011; 17(2): 97-102.
26. Sihardo  L.  Pengaruh  Pemberian  Minyak Pandanus  conoideus  terhadap  Gambaran
Histologis  Ginjal  pada  Mencit  Swiss  yang Diinfeksi  Plasmodium  berghei  Anka. Semarang: Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro; 2006: 6.
27. Putri  SS.  Potensi  Perasan  Daun  Pepaya (Carica  Papaya  L.)  Terhadap  Jumlah  Sel Fibroblas  Pasca  Gingivektomi  Pada  Tikus Wistar Jantan. Skripsi. Jember: Universitas Jember; 2012; 33-34.
28. Pradita  AU,  Dhartono  AP,  Ramadhany CA,  Taqwim  A.  Periodontal  Dressing- containing  Green  Tea  Epigallocathechin gallate  Increases  Fibroblasts  Number  in Gingival  Artifical  Wound  Model. Journal of Dentistry Indonesia 2013; 20(3): 68-72.
29. Mitchell  RN,  Cotran  RS.  Pemulihan Jaringan:  Regenerasi  dan  Fibrosis  Sel.  In: Kumar V, Cotran RS, Robbins SL, editors. Robbins  Buku  Ajar  Patologi .  Jakarta: EGC; 2007: 78.
30. Sugiaman  VK.  Peningkatan  Penyembuhan Luka  di  Mukosa  Oral  Melalui  Pemberian Aloe  Vera  (Linn.)  secara  Topikal. Jurnal Kedokteran  Maranatha 2011;  11(1):  70- 79.
31. Dewi  IALP,  Damriyasa  IM,  Dada  IKA. Bioaktivitas  Ekstrak  Daun  Tapak  Dara (Catharanthus  roseus)  Terhadap  Periode Epitelisasi  Dalam  Proses  Penyembuhan
Luka  Pada  Tikus  Wistar. Indonesia Medicus Veterinus 2013; 2(1): 58-75.
32. Sabirin  IPR,  Maskoen  AM,  Hernowo  BS.
Peran  Ekstrak  Etanol  Topikal  Daun Mengkudu  (Morinda  citrifolia  L.)  pada Penyembuhan Luka Ditinjau dari Imunoekspresi  CD34  dan  Kolagen  pada Tikus  Galur  Wistar. Majalah  Kedokteran Bandung 2013; 45(4): 226-33.
33. Hanna  JR,  JA  G.  A  Review  of  Wound Healing  and  Wound  Healing  Dressing Products. Journal  of  Foot  and  Ankle Surgery 1997; 36(1): 2-14.
34. Ghosh  PK,  Gaba  A.  Phyto-Extracts  in Wound  Healing. Journal  Pharmacy  and Pharmaceutical  Sciences 2013;  16(5):
760-820.
35. Redha A. Flavonoid:Struktur, Sifat Antioksidatif dan Peranannya dalam Sistem Biologis. Jurnal Belian 2010; 9(2): 196-202.
36. N Tamilselvi, Krishnamoorthy P, Arumugam  P,  Sagadevan  E.  Analysis  of total  phenols,  total  tannins  and  screening of phytocomponents in Indigofera aspalathoides  (Shivanar  Vembu)  Vahl  EX DC.
Journal of Chemical and
Pharmaceutical  Research 2012;  4(6):
3259-62.
37. Arun  M,  Satish  S,  Anima  P.  Herbal  Boon For  Wounds. International  Journal  of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences 2013; 5(2): 1-12.
38. Subekti  EN  Penyembuhan  Luka  dengan Jati.  Surabaya:  Universitas  Airlangga. [http://skp.unair.ac.id/repository/webpdf/w eb_Penyembuhan_luka_dengan_jati_ERLI SA_NURWAHIDA_SUBEKTI.pdf.] Accessed 30 April 2014.
39. Werning  JW.  Oral Precancer.  In:  Werning JW,  editor. Oral  Cancer:  Diagnosis.
Management, and
Rehabilitation . Stuttgart: Thieme; 2011: 15.
40. Exclusive  NA.  Asiatic  Centella  Eco. Provital  Group  Natural  Efficacy  2011; 1(3): 1-8.
41. Kanzaki T, Morisaki N, Shiina R, Saito Y. Role  of  Transforming  Growth  Factor-Beta Pathway  in  the  Mechanism  of  Wound Healing  by  Saponin  from  Ginseng  Radix rubra The  British  Journal  Pharmacology 1998; 125(2): 255-62.