Status  antioksidan  dan  oksidatif  laki-laki  yang  mengalami  kegemukan dengan pemberian minuman rosela ungu
Sriyanti * , Evy Damayanthi, Faisal Anwar

## ABSTRACT
Background : Rosela (Hibiscus sabdariffa L.) is an anthocyanin-rich plant that has good antioxidant capacity . However, the utilization was limited to red roselle, while previous studies showed that anthocyanin content was found to be higher in the thick roselle.therefore, this is an opportunity to develop purple roselle products as a preventive effort for degenerative diseases in men with fatness. Subjects in this study were male by considering the effect of estrogen on women which could play a role in suppressing oxidative stress.
Objectives : This study aimed to analyze antioxidant (SOD/Superoxide dismutase) and oxidative status (MDA/malondialdehyde) level in obese adult men after administration of purple rosela drinks . Methods : This study was quasi-experimental with pre-post test. Eighteen obese subjects in the security unit were divided into two groups, namely the intervention group and control group. Intervention group (n = 9) was given purple rosela drinkin the amount of 480 mL/day, while the control group (n = 9) was given an equivalent amount of purple rosela drink without rosela. The subjects were daily administered for 6 weeks. Characteristic, anthropometric, food consumption and blood sample data were  collected  at  the  beginning  and  end  of  the  intervention.  Data  analysis  was  performed  by  descriptively,  paired  t-test, independent t-test, ANCOVA.
Results : The analysis showed that purple rosela drink tend to increase SOD levels (0.45 ± 0.14; 1.35 ± 0.71; p-value = 0.008) but this value was not significantly different from the control group (p-value = 0.128). MDA levels did not significantly different between the intervention and control groups (0.025 ± 0.083;-0.125 ± 0.60; p-value = 0.473).
Conclusion : These results showed that administering 480 ml of purple rosela drink did not improve antioxidant and oxidative status in obese adult men.
Keywords : anthocyanin; antioxidant; obesity; purple roselle; stres oksidatif

## ABSTRAK
Latar Belakang : Rosela (Hibiscus  sabdariffa L.)  merupakan tanaman kaya antosianin yang memiliki kapasitas antioksidan baik.  Namun,  pemanfaatan  masih  terbatas  pada  rosela  merah,  sementara  penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa kandungan  antosianin  ditemukan  lebih  tinggi  pada  kelopak  rosela  yang  berwarna  pekat.  Hal  tersebut  menjadi  peluang pemanfaatan dan pengembangan produk berbahan dasar rosela ungu sebagai salah satu upaya preventif penyakit degeneratif pada  laki-laki  dengan  kegemukan.  Subjek  dalam  penelitian  berjenis  kelamin  laki-laki  dengan  pertimbangan  efek  hormon estrogen pada perempuan yang dapat berperan menekan stres oksidatif.
Tujuan  : Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  status  kadar  SOD  (superoksida  dismutase)  dan  oksidatif (MDA/malondialdehid) pada laki-laki dewasa gemuk setelah pemberian minuman rosela ungu.
Metode  : Penelitian  ini  merupakan  kuasi  eksperimental  dengan  pre-post  test.  Delapan  belas  subjek  laki-laki  gemuk  satuan pengaman dibagi dua kelompok yaitu kelompok intervensi (n = 9) mendapatkan minuman ekstrak rosela ungu dan kontrol (n = 9)  mendapatkan  minuman  tanpa  rosela  masing-masing  dengan  volume  480  mL/hari  selama  6  minggu.  Data  karakteristik, antropometri, konsumsi makanan dan sampel darah dikumpulkan di awal dan akhir intervensi. Analisis data dilakukan secara deskriptif, paired t-test, independent t-test, ANCOVA.
Hasil : Hasil analisis menunjukkan pemberian minuman ekstrak rosela ungu cenderung meningkatkan kadar SOD (0.45±0.14; 1.35±0.71; p-value = 0.008) namun tidak berbeda signifikan dengan kelompok kontrol (p-value = 0.128). Kadar MDA tidak berbeda signifikan antara kelompok intervensi dan kontrol (0.025 ± 0.083; -0.125 ± 0.60; p-value = 0.473). Simpulan  : Hasil  ini  memperlihatkan  bahwa  pemberian  480  ml  minuman  ektrak  rosela  ungu  tidak  memperbaiki  status antioksidan dan oksidatif pada laki-laki dewasa gemuk.
Kata Kunci : antosianin; antioksidan; obesitas; rosella ungu; stres oksidatif

## PENDAHULUAN
Kegemukan  ditandai  dengan  peningkatan  berat badan  yang  menyebabkan  akumulasi  lemak  tubuh berlebihan  dengan  kategori  indeks  massa  tubuh  (IMT)
≥23,0  kg/m 2 . 1 Riskesdas  (2018)  menunjukkan  bahwa prevalensi  kegemukan  yang  meliputi  kelebihan  berat badan dan obesitas mengalami peningkatan dari tahun ke tahun.  Penyebab  kegemukan  berkembang  dari  faktor gaya  hidup  seperti  konsumsi  alkohol 2,3 ,  merokok 4 ,
Departemen Gizi Masyarakat, Fakultas Ekologi Manusia, Institut Pertanian Bogor. Jl. Lingkar Kampus, Babakan, Dramaga, Bogor, Jawa Barat 16680, Indonesia *Korespondensi : E-mail: dya_tillah@yahoo.com, Telp/HP. 085255505294
Submitted: 17 Januari 2019, Accepted: 11 Juni 2019 Tersedia Online di https://ejournal.undip.ac.id/index.php/jgi/

## Jurnal Gizi Indonesia
konsumsi  makanan  tinggi  lemak  dan  konsumsi  buah sayur  rendah 5 ,  serta  aktivitas  fisik  yang  rendah 6 .  Studi menunjukkan bahwa orang gemuk akan mengalami stres oksidatif dan peradangan kronis yang dapat berkembang menjadi penyakit degeneratif seperti penyakit kardiovaskuler, diabetes mellitus, dan kanker. Sementara itu,  penyakit  degeneratif  menjadi  penyebab  kematian terbesar  di  dunia  saat  ini.  Satuan  pengaman  (satpam) merupakan salah satu profesi dengan pola aktivitas yang berisiko  mengalami  kegemukan.  Hal  ini  disebabkan karena  dalam  pelaksanaan  tugasnya  lebih  banyak melakukan aktivitas dengan intensitas ringan. Apriawan (2013)  juga  menemukan  bahwa  43,06%  satpam mengalami kegemukan.
Peningkatan  stres  oksidatif  pada  kegemukan disebabkan  oleh  sintesis  sitokin  pro-inflamasi  pada jaringan  adiposa  yang  memengaruhi  respon  inflamasi dengan  memproduksi  spesies  oksigen  reaktif  (ROS). ROS  dalam  jumlah  berlebih  akan  mengoksidasi komponen lipid membran sel sehingga terjadi peroksida lipid.    Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa terjadi peningkatan stres oksidatif pada individu dengan kegemukan  dibandingkan  individu  dengan  berat  badan normal  yang  ditandai  dengan  peningkatan  peroksida lipid, seperti produk MDA (malondialdehid) . Superoksida  dismutase (SOD)  merupakan  antioksidan enzim yang berperan sebagai sistem pertahanan pertama terhadap  senyawa  radikal  bebas.  Namun  beberapa penelitian  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  seperti SOD pada kegemukan lebih rendah dibandingkan pada berat  badan  normal. 7,8 Hal  ini  memperlihatkan  terjadi ketidakseimbangan  antara  aktivitas  antioksidan  dengan produksi  radikal  bebas  dalam  tubuh.  Pemberian makanan/minuman  kaya  antioksidan  diharapkan  dapat meningkatkan  pertahanan  antioksidan  tubuh  yang selanjutnya dapat mengurangi stres oksidatif.
Antosianin merupakan kelompok flavonoid yang telah  terbukti  memiliki  efek  menguntungkan  dalam bidang kesehatan, diantaranya meningkatkan antioksidan  tubuh 9,10 memperbaiki  profil  lipid 11 , memperbaiki status oksidatif 12,13 , efek anti inflamasi 14,15 , serta  menurunkan  berat  badan 16,17 .  Rosela    merupakan salah satu tanaman kaya antosianin 18 dengan antioksidan kuat 19 dan  memiliki  efek  positif  terhadap  aktivitas antioksidan dan penurnan peroksida lipid pada tikus 20,21 . Penelitian  dengan  subjek  manusia  memberikan  kapsul rosela  (@kapsul  450  mg  ekstrak  rosela)  dengan kandungan  antosianin  25,463  mg  selama  6  minggu menunjukkan  penurunan  yang  signifikan  pada  kadar MDA  dan  peningkatan  kapasistas  antioksdan  total (TAC) 22 . Namun, sejauh ini pemanfaatan masih terbatas pada rosela merah., khususnya dalam bidang kesehatan.
Suatu penelitian menunjukkan bahwa kandungan antosianin  rosela  segar  ungu  lebih  tinggi  (487,18  ppm) dibandingkan dengan rosela merah (255,83 ppm) dengan pigmen  sari  rosela  yang  jauh  lebih  pekat  pada  rosela
ungu. Penelitian lain menyatakan bahwa semakin pekat warna  merah  pada  rosela  menunjukkan  kandungan antosianin  yang  semakin  tinggi.  Hasil  yang  serupa ditemukan oleh Tahir tahun 2017 yang membandingkan tiga  jenis  varietas  rosela  menunjukkan  rosela  dengan warna  kelopak  merah  pekat  memiliki  kandungan antosianin  paling  tinggi  dibanding  dua  varietas  lainnya (rosela merah dan putih) 23 . Sementara itu, pemanfaatan rosela  dalam  bentuk  crude  (bubuk)  tidak  memberikan efek  perbaikan  pada  biomarker  stress  oksidatif disebabkan  karena  konsentrasi  polifenol  yang  rendah dibandingkan  dalam  bentuk  ekstrak  bubuk 24 .  Oleh karena  itu,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis pengaruh  intervensi  minuman  ekstrak  kelopak  rosela ungu terhadap SOD dan MDA laki-laki dewasa gemuk. Pemilihan subjek penelitian pada jenis kelamin laki-laki dengan  pertimbangan  bahwa  adanya  efek  hormon estrogen  pada  perempuan  yang  dapat  berperan  dalam menekan stres oksidatif.

## BAHAN DAN METODE
Desain  penelitian  adalah quacy  experimental dengan  pendekatan pre-post  test .  Subjek  dipilih  secara purposive sampling berdasarkan  kriteria  inklusi  dan eksklusi. Penelitian dilakukan pada Januari sampai Mei 2018  di  Kampus  Institut  Pertanian  Bogor  Dramaga, Kabupaten  Bogor.  Analisis  kadar  SOD  dan  MDA dilakukan  di  Laboratorium  Departemen  Biokimia  dan Biologi  Molekuler  Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia. Penelitian ini telah mendapatkan persetujuan etik dari Komite Etik Manusia Institut Pertanian Bogor dengan  Nomor:  039/IT3.KEPMSM-IPB/SK/2018  serta informed consent dari semua subjek.
Subjek  penelitian  adalah  satpam  IPB  dengan kriteria inklusi meliputi laki-laki gemuk berusia 30 – 55 tahun  dengan  nilai  IMT  ≥  23,0  kg/m 2 dan/atau  lingkar pinggang  >90cm,  tidak  sedang  menjalani  pengobatan dari  dokter,  tidak  sedang  mendapatkan  intervensi (minuman  antioksidan)  serupa,  bersedia  berpartisipasi dan  menandatangani informed consent . Kriteria eksklusi pada penelitian ini adalah memiliki penyakit kronis atau penyakit kardiovaskular, memiliki penyakit atau riwayat penyakit  lambung,  rutin  mengonsumsi  suplemen antioksidan  dan/atau  fitofarmaka.  Skrining  dilakukan terlebih dahulu berdasarkan pengukuran IMT. Sebanyak 82 satpam gemuk yang ditemukan dari hasil skrining dan diwawancara untuk mendapatkan data karateristik sosial ekonomi,  tingkat  pengetahuan  gizi,  gaya  hidup,  serta konsumsi  pangan  dan  ditampilkan  secara  deskriptif untuk  mengetahui  sebaran  satpam  gemuk.  Namun  1 orang tidak mengisi kuesioner dengan lengkap sehingga dikeluarkan  dari  analisis  data.  Skrining  kedua selanjutnya  adalah  berdasarkan  kriteria  inklusi  dan ekslusi  yang  telah  ditetapkan.  Sebanyak  30  subjek memenuhi kriteria inklusi dan eksklusi yang selanjutnya
dikelompokkan menjadi dua kelompok perlakuan. Total subjek hingga di akhir intervensi sebanyak 18 orang.
Bahan yang digunakan yaitu kelopak rosela kering yang  didapatkan  dari  Blitar  (Jawa  Timur),  garam, sukralosa,  air,  dan  bahan-bahan  kimia.  Pembuatan minuman  diawali  dengan  ekstraksi  rosela  ungu  kering secara  infusa  dalam  1  liter  air  dengan  suhu  70  sampai 80 o C. Campuran diaduk selama 15 menit dan kemudian disaring.  Hasil  filtrasi  dipekatkan  hingga  20  kali menggunakan  evaporator  untuk  menghasilkan  ekstrak
rosela ungu. Minuman intervensi dibuat dari 10 g ekstrak rosela  ungu  (antosianin  40,58  mg)  dan  dicampurkan dengan sukralosa (0,05 g), garam (0,2 g) dan air (229,75 mL). Minuman dikemas dalam botol dengan volume 480 mL  (81,16  mg  antosianin).  Sementara  itu,  kelompok kontrol  diberikan  minuman  plasebo  yang  memiliki warna  serupa  dengan  minuman  intervensi  berupa minuman  sirup  namun  tidak  mengandung  antosianin dengan volume yang sama. Minuman intervensi/plasebo diberikan pada pagi hari untuk konsumsi dua kali sehari.

## Gambar 1. Alur penelitian
Data yang dikumpulkan, diantaranya karakteristik sosial  ekonomi  dan  pengetahuan  gizi  yang  didapatkan melalui  wawancara  menggunakan  kuesioner.  Tingkat pengetahuan dikategorikan menjadi 3 kategori yaitu baik (>80%  -  100%),  sedang  (60%  -  80%),  kurang  (<60%). Data  gaya  hidup,  meliputi  kebiasaan  merokok  dan tingkat  aktivitas  fisik.  Data  kebiasaan  merokok dikumpulkan dengan menggunakan kuesiner, sementara data aktivitas fisik diperoleh dari formulir recall 2x24h , diisi  berupa  jenis  kegiatan  yang  dilakukan  subjek  dan lama waktu yang digunakan pada setiap aktivitas dalam 24  jam  yang  lalu  untuk  mendapatkan  nilai physical activity  level  (PAL) berdasarkan FAO/WHO/UNU Expert  Consultation 2001.  PAL  didapatkan  dengan mengalikan jumlah energi yang dikeluarkan untuk setiap jenis  kegiatan  yang  dilakukan  dibagi  24  jam.  Data
antropometri,  konsumsi  pangan  serta  sampel  darah dikumpulkan  sebelum  dan  setelah  intervensi.  Data antropometri  meliputi  tinggi  badan  menggunakan mikrotois  dengan  ketelitian  0,1  cm,  lingkar  pinggang menggunakan pita ukur dengan ketelitian 0,1 cm, berat badan,  persen  lemak  tubuh  dan  lemak  viseral  diukur menggunakan Bioelectrical  Impedance  Analysis (BIA) merek OMRON  Body  Composition  Monitor  HBF-375. Data  konsumsi  pangan  meliputi  asupan  makan menggunakan  formulir recall  2x24h dan  kebiasaan makan  menggunakan food  frequency  questionnaire (FFQ). Pengambilan sampel darah dilakukan oleh tenaga kesehatan  menggunakan  prosedur  terstandar.  Sebelum dilakukan  pengambilan  darah,  subjek  dipuasakan terlebih  dahulu  selama  minimal  8  jam.  Sampel  darah diambil  sekitar  5  cc  dari  masing-masing  subjek  untuk
Skrining satpam gemuk
(n = 82) Pengambilan data karakteristik sosial ekonomi, pengetahuan gizi, gaya hidup, status gizi dan pola konsumsi 1 subjek tidak mengisi kuesioner dengan lengkap (n = 81)
Skrining untuk subjek intervensi berdasarkan kriteria inklusi dan eksklusi (n = 30)
Intervensi (n=15) Kontrol (n=15) Intervensi minuman
rosela/plasebo (6 minggu) Pengambilan data akhir (BB, TB, persen lemak, lemak viseral, konsumsi pangan, pengambilan darah) Pengambilan data awal (BB, TB, persen lemak, lemak viseral, konsumsi pangan, pengambilan darah) - 2 subjek
mengundurkan diri - 1 subjek sakit
Intervensi (n=9)
1 subjek tidak mengikuti pengambilan darah
5 subjek memiliki data tidak lengkap
Kontrol (n=9)
1 contoh sakit 3 subjek memiliki data tidak lengkap
selanjutnya  digunakan  dalam  analisis  kadar  SOD (Randox  Manual/RX  Monza  Labs.  Cat.  No.  SD  125, Crumlin,  UK)  dan  MDA  (metode  Will’s).  Setiap kelompok diinstruksikan untuk mengonsumsi minuman rosela  ungu  atau  plasebo  selama  6  minggu.  Selama periode intervensi, kepatuhan subjek dikontrol menggunakan form  monitoring dengan  mengevaluasi volume  minuman  yang  dihabiskan.  Subjek  tetap mengonsumsi  makanan  rumah  sehari-hari  dengan pembatasan  pada  makanan  sumber  antosianin  ataupun suplemen  dan  obat-obatan  yang  dapat  memengaruhi hasil  intervensi.  Pada  akhir  intervensi,  dilakukan pengumpulan  data  kembali,  meliputi  antropometri, konsumsi makanan, dan parameter biokimia.
Data diolah dan dianalisis menggunakan program Microsoft Excel 2013, Nutrisurvey , dan SPSS 16.0. Data dianalisis  secara  deskriptif  untuk  mengetahui  sebaran subjek berdasarkan tiap parameter. Uji beda paired t-test dilakukan untuk melihat perubahan sebelum dan setelah intervensi  pada  masing-masing  kelompok.  Uji  beda Independent t-test untuk melihat perbedaan pada kedua grup.  Analisis  ANCOVA  dilakukan  untuk  mengetahui variabel kovariat yang dapat terlibat mempengaruhi hasil penelitian.  Hasil analisis  dikatakan  signifikan jika  nilai p<0.05.

## HASIL
Gambaran Umum Satuan Pengaman yang Mengalami Kegemukan
Tabel  1  menunjukkan  sebaran  satpam  yang mengalami  kegemukan  berdasarkan  parameter  yang ditentukan, meliputi umur, ukuran kuluarga, pendidikan, pendapatan,  pengetahuan  gizi,  kebiasaan  merokok, aktivitas  fisik,  IMT,  persen  lemak  tubuh,  dan  lemak viseral.  Skrining  awal  menunjukkan  bahwa  77,8% tersebar  dalam  kelompok  umur  dewasa  madya  dengan rata-rata  41,35±7,09  tahun  dan  75,3%  berasal  dari keluarga dengan anggota keluarga ≤ 4 orang. Sebanyak 96,2%  satpam  lulus  SMA/sederajat.  Sementara  tingkat pendapatan berkisar Rp 1.500.000 ke atas.
Sebanyak  82,7%  satpam  memiliki  kebiasaan merokok  dan  85,4%  memiliki  tingkat  aktivitas  fisik ringan  dengan  rata-rata  skor  1,57±0,23.  Nilai  IMT satpam sebagian besar tersebar dalam kategori obesitas (86,4%) dengan rata-rata 28,34±3,25 kg/m 2 . Sementara, 79,0% subjek memiliki persen lemak tubuh sangat tinggi dengan  rata-rata  26,90±3,42%  dan  67,9%  memiliki lemak viseral tinggi dengan rata-rata 14,66±4,28%.

## Karakteristik Subjek
Tabel  2  menunjukkan  sebaran  subjek  yang mengikuti tahap intervensi berdasarkan data karakteristik  sosial  ekonomi  dan  status  gizi.  Data tersebut menunjukkan tidak ada perbedaan antara kedua kelompok sebelum intervensi ( p >0.005). Demikian pula
untuk  nilai  SOD  dan  MDA  menunjukkan  tidak  ada perbedaan  yang  signifikan.  Namun,  jika  dibandingkan dengan  kadar  SOD  normal  (164  –  240  U/mL),  kadar SOD subjek pada kedua kelompok tergolong rendah dan berada  di  bawah  kisaran  normal  dengan  rata-rata  SOD lebih tinggi pada kelompok intervensi.  Sementara, kadar MDA subjek pada kedua kelompok tergolong tinggi dan berada  di  atas  kadar  normal  (<0,1308  µg/mL)  dengan rata-rata  MDA  lebih  tinggi  pada  kelompok  kontrol. Tingginya  kadar  MDA  menandakan  bahwa  terjadi peningkatan stres oksidatif.
Tabel 1. Sebaran satuan pengaman dengan kegemukan
Karakteristik n % Kelompok umur (tahun) Dewasa awal (< 35)
Dewasa madya (36 – 55) Ukuran keluarga Kecil (≤ 4 orang) Sedang (5 – 6 orang) Besar (≥ 7 orang)
Pendidikan Lulus SMP/sederajat
Lulus SMA/sederajat
Lulus PT (D3-S3) Pendapatan < Rp 1.500.000,-/bulan Rp 1.500 000,- - Rp 2 500 000,-/bulan Rp 2 500 000,- - Rp 3 500 000,-/bulan > Rp 3 500 000,-/bulan Pengetahuan gizi Baik (>80% - 100%) Sedang (60% - 80%) Kurang (<60%) Kebiasaan merokok Ya Tidak Jumlah rokok/hari ≥ 21 batang/hari
11 – 20 batang/hari
≤ 10 batang/hari PAL
Ringan (1,40≤PAL≤1,69 Sedang (1,70≤PAL≤1,99) Berat (2,00≤PAL≤2,39)
IMT
Overweight ( 23,0 – 24,9 kg/m 2 ) Obesitas (> 30,0 kg/m 2 )
Lemak tubuh Normal (10 % - <20% BB) Tinggi (20% - <25% BB) Sangat tinggi (>25 BB %) Lemak viseral Normal (≤ 12) Tinggi (> 12) 18 63
61 17 3 2 78
1
8 37 23 13 3 48 30 67 14 30
29 8 70 10 2 11 70 3 14 64 26 55 22,2 77,8 75,3 21,0 3,7 2,5 96,3 1,2 9,9 45,7 28,4 16,0 3,7 59,3 37,0 82,7 17,3 44,8 43,3 11,9 85,4 12,2 2,4 13,6 86,4 3,7 17,3 79.0 32,1 67,9
Tabel 2. Sebaran subjek intervensi (data baseline) Fase Kelompok p-value Intervensi Kontrol Usia (tahun) Pendidikan Lulus SMA/sederajat Ukuran keluarga Kecil (≤ 4 orang)
Sedang (5-6 orang) Pendapatan (Rp)
<1 500 000/bulan 1 500 000 - 2 500 000/bulan 2 500 000 - 3 500 000/bulan
> Rp 3 500 000,-/bulan
Antropometri BB (kg) IMT (kg/m 2 ) Lingkar pinggang (cm) Gaya hidup Aktivitas fisik Parameter biokimia SOD (U/mL) MDA (µg/mL) 42,67±6,91 9 (100,0)
7 (77,8)
2 (22,8) 1 (11,1) 3 (33,3) 4 (44,4) 1 (11,1) 77,37±10,0 28,53±2,38 94,67±10,1 1,55±0,07 0,45±0,14 0,30±0,06 46,33±5,93 9 (100,0)
6 (66,7)
3 (33,3) 0 (0,0) 6 (66,7) 3 (33,7) 0 (0,0) 76,32±6,87 27,46±2,36 92,83±6,07 1,59±0,10 0,42±0,12 0,48±0,47 0,245 0,624 0,336 0,799 0,356 0,648 0,348 0,628 0,271 Keterangan: BB (Berat badan); IMT (indeks massa tubuh); SOD (superoksida dismutase); MDA (malondialdehid); signifikan p <0.05
Tabel 3. Efek minuman ekstrak rosela ungu terhadap antropometri
Parameter Fase Intervensi Kontrol p -value BB (kg) Sebelum Setelah Selisih p -value 77,37±10,0 76,29±9,77 -1,08±1,06 0,015 76,32±6,87 76,18±7,01 -0,14±1,73 0,808 0,183 IMT (kg/m 2 ) Sebelum Setelah Selisih p -value 28,53±2,38 28,14±2,36 -0,39±0,37 0,013 27,46±2,36 27,40±2,32 -0,06±0,62 0,769 0,190 Lingkar pinggang (cm) Sebelum Setelah Selisih p -value 94,66±10,14 91,77±8,72 2,88±2,73 0,013 92,83±6,06 91,05±6,12 1,77±1,78 0,017 0,323 Lemak viseral (%) Sebelum Setelah Selisih p -value 15,25±3,40 14,66±3,36 -0,58±0,72 0,043 14,13±3,06 14,06±2,96 -0,07±0,82 0,800 0,184 Lemak tubuh (%) Sebelum Setelah Selisih p -value 26,51±3,93 25,65±4,70 -0,86±2,10 0,254 26,53±2,23 26,44±3,00 -0,08±2,00 0,898 0,437
Keterangan: BB (Berat badan); IMT (indeks massa tubuh); signifikan p <0,05
Efek  Minuman  Ekstrak  Rosela  Ungu  terhadap Antropometri
Tabel  3  menunjukkan  efek  intervensi  terhadap parameter  antropometri  subjek  setelah  6  minggu  masa intervensi.  Hasilnya  menunjukkan  bahwa  ekstrak kelopak rosela ungu signifikan menurunkan berat badan, IMT,  lingkar  pinggang,  dan  lemak  viseral  pada kelompok intervensi, namun secara statistik efek tersebut tidak  berbeda  jika  dibandingkan  dengan  kelompok
kontrol.  Lemak  tubuh  pada  kelompok  intervensi  tidak berbeda signifikan, walaupun mengalami penurunan.
Tabel 4 menyajikan efek intervensi ekstrak rosela ungu terhadap kadar SOD dan MDA. Pemberian ekstrak rosela  ungu  signifikan  meningkatkan  kadar  SOD  pada kelompok  intervensi,  namun  secara  statistik  tidak berbeda signifikan dengan kelompol kontrol. Pemberian ekstrak rosela ungu tidak dapat menurunkan kadar MDA pada kelompok intervensi.
Tabel 4. Efek minuman ekstrak rosela ungu terhadap kadar SOD dan MDA Parameter Fase Rosela Kontrol p-value SOD (U/mL) Sebelum Setelah selisih (Δ) p-value 0,45±0,14 1,35±0,71 0,89±0,77 0,008* 0,42±0,12 1,90±0,85 1,49±0,80 0,001* 0,128 MDA (µg/mL) Sebelum Setelah selisih (Δ) p-value 0,303±0,062 0,319±0,730 0,025±0,083 0,629 0,484±0,471 0,359±0,331 -0,125±0,60 0,554 0,473
Keterangan: SOD (superoksida dismutase); MDA (malondialdehid); signifikan p <0,05
Tabel 5. Hasil analisis kovariat (ANCOVA) berat badan
dan SOD Variabel kovariat p-value Variabel dependen: berat badan akhir Berat badan 0,000* Indeks massa tubuh 0,215 Lemak tubuh 0,172 Lemak viseral 0,196 Perlakuan 0,328 Variabel dependen : kadar SOD akhir Lemak tubuh 0,018* Indeks massa tubuh 0,004* Asupan Cu 0,107 Asupan Zn 0,061 Asupan Vitamin C 0,029* Asupan Vitamin E 0,101 Perlakuan 0,470 *signifikan p <0.05
Tabel  5  menyajikan  hasil  analisis  ANCOVA untuk  variabel  dependen  berat  badan  dan  SOD.  Uji ANCOVA  dilakukan  untuk  melihat  variabel  kovariat yang  mungkin ikut serta memengaruhi perubahan yang terjadi  pada  variabel  uji  selain  dari  perlakuan  yang diberikan. Hasil analisis ANCOVA menunjukkan bahwa variabel  kovariat  yang  dapat  memengaruhi  perubahan berat badan adalah berat badan awal ( p <0,05), sementara perubahan  kadar  SOD  dapat  dipengaruhi  oleh  indeks massa tubuh awal ( p <0,05).

## PEMBAHASAN
Skrining awal menunjukkan bahwa 77,8% satpam yang  mengalami  kegemukan  berusia  di  atas  36  tahun dengan  86,4%  mengalami  obesitas  dan  13,6% overweight.  Suatu  penelitian  mengatakan  bahwa obesitas meningkat seiring bertambahnya usia baik pada laki-laki  maupun  perempuan 25 .  Rentang  usia  tersebut merupakan masa produktif sehingga kejadian kegemukan  yang  terjadi  dapat  disebabkan  oleh  gaya hidup,  khususnya  aktivitas  fisik  yang  rendah  dan  pola konsumsi terkait pangan tertentu, seperti makanan tinggi lemak.  Sebanyak  79,0%  memiliki  lemak  tubuh  sangat tinggi.  Berdasarkan  hasil  analisis  didapatkan  korelasi yang signifikan antara indeks massa tubuh dengan persen lemak  tubuh  dan  lemak  viseral.  Penelitian  menyatakan
bahwa  indeks  massa  tubuh  berkorelasi  dengan  persen lemak  tubuh 26 dan  merupakan  faktor  risiko  penyakit tidak  menular.  Demikian  pula  dengan  lemak  viseral, sebanyak  67,9%  memiliki  lemak  viseral  tinggi  yang dapat dikaitkan dengan risiko obesitas sentral.
Sebanyak  82,7%  memiliki  kebiasaan  merokok dengan  rata-rata  jumlah  rokok  per  hari  sebanyak  11 batang atau lebih. Subjek merupakan perokok tetap atau rutin dengan rata-rata usia pertama  merokok sekitar 18 tahun.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  subjek  telah lama  memiliki  kebiasaan  merokok.  Penelitian  tahun 2015  menemukan  bahwa  terdapat  hubungan  positif antara  merokok  dengan  linkar  pinggang  dan  rasio pinggang pinggul dengan menghubungkan jumlah rokok serta  durasi  waktu  merokok.  Hal  ini  menunjukkan bahwa,  kebiasaan  merokok  dapat  memengaruhi  pola distribusi lemak khususnya lemak pada bagian adiposit sentral.  Mekanisme  biologi  yang  mungkin  terjadi  yaitu adanya  efek  antiestrogenik  yang  meningkatkan  2- hidroksilasi estradiol atau menginduksi ketidakseimbangan dalam androgenik terhadap aktivitas estrogenik. Merokok juga dapat meningkatkan pengaturan  dan  penyimpanan  asam  lemak  trigliserida oleh adiposit sehingga meningkatkan massa lemak 4 . Nilai rerata physical activity level (PAL) sebesar 1,576  dan  tergolong  ringan.  Aktivitas  fisik sedentary berkaitan dengan peningkatan IMT dan lemak tubuh 6,27 disebabkan oleh pengurangan pengeluaran energi untuk aktivitas fisik. Berdasarkan recall 24 hours aktivitas fisik menunjukkan  bahwa  aktivitas  subjek  lebih  banyak melakukan pekerjaan dengan intensitas ringan. Sementara,  salah  satu  prinsip  dalam  penurunan  berat badan adalah dengan melakukan aktivitas fisik. Aktivitas fisik selama 150 menit setiap minggu dengan intensitas sedang  hingga  tinggi,  misalnya  jalan  cepat  dapat mengurangi  berat  badan  sebesar  1%  hingga  3%. 28 Sementara,  berdasarkan hasil recall 24 hours menunjukkan tingkat kecukupan energi, protein, lemak, dan karbohidrat berada pada kategori defisit dengan rata- rata  asupan  berturut-turut  yaitu  1610,1±440,4  kal; 53.8±15,7 g; 60,4±24,4 g; 235,5±68,6 g.
Sebanyak  delapan  belas  subjek  mengikuti penelitian  tahap  intervensi  hingga  akhir.  Karakteristik subjek  dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Analisis  statistik menunjukkan karakteristik subjek pada kedua kelompok
tidak  memiliki  perbedaan  signifikan  ( p >0,05).  Kondisi homogen sebelum intervensi diharapkan untuk mengurangi  kemungkinan  bias  pada  hasil  penelitian. Pemberian  intervensi  minuman  rosela  ungu  signifikan menurunkan berat badan (1,08 kg) dan IMT (0,39 kg/m 2 ) pada kelompok intervensi. Begitu pula dengan kelompok kontrol, mengalami penurunan berat badan (0,14 kg) dan IMT  (0,06  kg/m 2 )  namun  penurunan  tersebut  tidak berbeda  signifikan.  Penurunan  nilai  antropometri  pada kelompok  intervensi  menunjukkan  adanya  efek  positif dari  kandungan  polifenol  rosela  ungu,  salah  satunya antosianin  dalam  penurunan  berat  badan.  Hal  tersebut telah  dibuktikan  pada  penelitian  sebelumnya  yang menyatakan  bahwa  pemberian  bahan  pangan  kaya antosianin  dapat  menurunkan  berat  badan 30 .  Penurunan nilai  antropometri  pada  kelompok  kontrol  diduga disebabkan oleh penurunan asupan makan selama proses intervensi.  Data recall  2x24hours setelah  intervensi menunjukkan  asupan  energi,  protein,  lemak,  dan karbohidrat  subjek  pada  kelompok  kontrol  mengalami penurunan dibanding sebelum intervensi dan penurunan tersebut  lebih  besar  dibandingkan  dengan  yang  terjadi pada  kelompok  intervensi    (Energi  1510,4±363,8  kkal menjadi 1432,7±297,3 kkal; protein 50,8±16,2 g menjadi 49,4±22,3; lemak 55,2±19,6 g menjadi 53,6±20,4 g; KH 221,0 ±49,4 g menjadi 211,4±39,8 g).
Rosela ungu merupakan pangan kaya antosianin, sehingga  berpotensi  digunakan  dalam  pencegahan maupun  pengobatan  kegemukan.  Pengobatan  dianggap berhasil jika mampu mencegah penambahan berat badan lebih lanjut dan menginduksi penurunan berat badan 5 – 10% dari berat badan awal. Suatu penelitian menyatakan bahwa  pemberian  ekstrak  rosela  yang  mengandung 33,64  mg  total  antosianin  mengurangi  kenaikan  berat badan  9,6%  pada  tikus 31 .  Efek  antiobesitas  dari antosianin  dapat  melalui  perubahan  jalur  pensinyalan mitogen  activated  protein  kinase (MAPK)  dan nuclear factor- kB (NF-kB) yang menunjukkan peran sitoprotektif dan antiinflamasi dalam patologi obesitas 32 . Selain itu juga melalui pengurangan lemak intraperitoneal  dan  peningkatan  aktivitas peroxisome proliferator-activated  receptor (PPAR)  pada  jaringan adiposa putih dan otot skeletal tikus. 16
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  minuman rosela ungu dapat meningkatkan 0,89 U/mL kadar SOD subjek  pada  kelompok  intervensi.  Kelopak  rosela memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi  dibandingkan bagian lainnya seperti daun dan batang rosela 33 dengan jenis  antioksidan  yang  kuat.    Hasil  ini  serupa  dengan penelitian sebelumnya bahwa kelopak rosela kaya akan vitamin C (141 mg/100 g), antosianin (252 mg/100 g), β- karoten  (1.88  mg/100  g),  dan  likopen  (164  µg/100g) 34 . Namun,  aktivitas  antioksidan  ini  akan  mengalami penurunan  jika  mengalami  penyimpanan  pada  suhu rendah  (0  sampai  5 o C)  setelah  30  hari 35 .  Jika dibandingkan  rata-rata  peningkatan  kadar  SOD  pada
kedua  kelompok,  kelompok kontrol  mengalami peningkatan  yang  lebih  tinggi.  Analisis  ANCOVA menunjukkan  bahwa  IMT,  lemak  tubuh,  dan  asupan vitamin  C  signifikan  memengaruhi  kadar  SOD. Amirkhizi  tahun  2014  menyatakan  bahwa  kadar  SOD pada  kondisi  kegemukan  lebih  rendah  dibandingkan pada  berat  badan  normal.  Produksi  radikal  bebas  yang tinggi  pada  kegemukan  akan  menekan  antioksidan enzim, salah satunya SOD. Data awal sebelum intervensi menunjukkan  rerata  IMT  pada  kelompok  rosela  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  kontrol,  walaupun  secara statistik  tidak  berbeda  secara  signifikan.  Selain  itu, asupan  vitamin  pada  kelompok  kontrol  lebih  tinggi dibandingkan kelompok rosela walaupun tidak berbeda signifikan  secara  statistik.  Hal  ini  diduga  yang mempengaruhi kadar SOD pada kelompok kontrol.
Selain  faktor  yang  telah  disebutkan  sebelumnya, peningaktan kadat SOD yang lebih tinggi pada kelompok kontrol diduga dipengaruhi oleh asupan asupan mineral mikro  pada  subjek,  khususnya  mineral  Cu  dan  Zn. Asupan  Cu  dan  Zn  pada  kelompok  kontrol  ditemukan lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  kelompok  intervensi sebelum  intervensi.  Sementara  itu,  SOD  merupakan antioksidan  metaloenzim,  yaitu  antioksidan  yang mekanisme  kerja  dan  aktivitasnya  melibatkan  serta dipengaruhi oleh logam katalitik, diantaranya Cu dan Zn. Zn berperan terhadap peningkatan aktivitas SOD melalui pelipatan protein dan kestabilan SOD. Selain itu, dengan cara  menstimulasi  limfosit  T  untuk  berproliferasi sehingga  memacu  aktivitas  enzim  selular. 36 Sementara, ion Cu berperan dalam aktivitas SOD dalam mengais ion superoksida melalui reaksi  reduksi  dan  reoksidasi pada lokasi  SOD 37 .  Hal  ini  menjelaskan  bahwa,  kondisi terbatasnya senyawa logam, utamanya Cu dan Zn dapat memengaruhi  aktivitas  dan  kestabilan  SOD  khususnya dalam menangkal radikal bebas.
Penelitian ini juga menemukan bahwa pemberian  intervensi  minuman  rosela  ungu  tidak memberikan  perbedaan  sginifikan  pada  kadar  MDA. Hasil  ini  sejalan  dengan  penelitian    yang  dilakukan kepada  pasien  sindrom  metabolik  dengan  pemberian kapsul berisi 500 mg tepung rosela (antosianin sebesar 6 mg/g  tepung)  selama  4  minggu  tidak  menunjukkan perbaikan  pada  kadar  MDA.  Demikian  pula  dengan penelitian  pada tikus yang diberikan makanan diperkaya antosianin  (total  antosianin  110  mg/kg  dwb)  selama  2 bulan  menunjukkan  peningkatan  pada  peroksida  lipid. Meskipun dalam penelitian ini tidak ditemukan adanya perbaikan  kadar  MDA  dengan  pemberian  rosela  ungu, namun  beberapa  penelitian  telah  menunjukkan  adanya perbaikan  tingkat  stres  oksidatif  setelah  pemberian rosela  yaitu  penurunan  kadar  MDA.  Penelitian  Ilyas et al. (201 7 ) pada tikus yang mendapat overtraining, diberi perlakuan rosela 400 mg/kg/hari selama 11 minggu dapat menurunkan MDA serta meningkatkan antioksidan GPx. Demikian pula penelitian yang dilakukan oleh Hadi et al.
(2016) pada atlit sepak bola dengan memberikan kapsul yang  mengandung  antosianin  25,463  mg  selama  6 minggu menunjukkan penurunan MDA secara signifikan. Aktivitas antioksidan dari antosianin menunjukkan  efek  penghambatan  pada  pembentukan MDA.  Penghambatan  pembentukan  MDA  tergantung pada  konsentrasi  setiap  antosianin  yang  ditambahkan. Beberapa  antosianin  dapat  menghambat  NADPH mikrosomal  dan  menghasilkan  hibridasi  pembentukan MDA, namun beberapa diantaranya juga memungkinkan untuk tidak dapat menghambat. Hal tersebut tergantung pada  struktur  antosianinnya  yang  dipengaruhi  oleh jumlah  gugus  hidroksil  pada  cincin  B  dan  gugus karbonilnya. Jumlah gugus hidroksil pada cincin-B yang meningkat  akan  meningkatkan  aktivitas  pemulungan radikal  bebas  pada  tingkat  glikosida,  sementara keberadaan gugus glukosa pada posisi C-3 melemahkan aktivitas  pemulungan  OH - antosianin.  Selain  itu, flavylium antosianin stabil dalam kondisi asam dan akan mengalami  perubahan  struktur  pada  kondisi  netral  dan basa,  bahkan  mengalami  kerusakan  sehingga  tidak mampu  melakukan  aktivitas  pemulungan  ROS  atau radikal hidroperoksida lipid.

## SIMPULAN
Pemberian  minuman  rosela  ungu    dengan kandungan antosianin 81,16 mg selama 6 minggu dapat meningkatkan SOD sebesar 0,89 U/mL. Hasil ini dapat dianggap  sebagai  potensi  pemanfaatan  rosela  ungu dalam meningkatkan kadar antioksidan pada kegemukan.  Sementara,  kadar  MDA  tidak  berbeda signifikan  pada  kedua  kelompok.  Oleh  karena  itu diperlukan  penelitian  lanjutan  dengan  ukuran  sampel yang  lebih  besar,  serta  periode  waktu  intervensi  yang lebih  lama  dengan  berbagai  takaran  dosis  pemberian untuk mendeteksi manfaat kandungan antosianin rosela ungu bagi kegemukan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan
Sorong dan Badan
Pengembangan  dan  Pemberdayaan  Sumber  Daya Manusia  Kesehatan  Kementerian  Kesehatan  RI  yang telah memberikan dukungan atas  terlaksananya penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
1. WHO.  Obesity  and  Overweight  [internet].  Media
Center  World  Health  Organization.  2017  (diakses pada 1 Agustus 2017) di alamat http://www.who.int/gho/ncd/risk_factors/overweig
ht/en/
2. Park  KY,  Park  HK,  Hwang  HS.  Relationship between  abdominal  obesity  and  alcohol  drinking pattern  in  normal-weight,  middle-aged  adults:  the korea  national  health  and  nutritional  examination survey  2008-2013.  Publ  H  Nutr.  2017.  20(12): 2192-2200. doi: 10.1017/S1368980017001045
3. Selvant,  Ramadurg,  Dorle,  Ghattargi,  Banada.  A Cross-Sectional  Study  on  Pattern  of  Alcohol Consumption and Body Mass Index Among Health Institution Students in Bagalkot. J Clin Diagn Res. 2015. 9(12): 6-9
4. Canoy  D,  Wareham  N,  Luben  R,  Welch  A, Bingham S, Day N, Khaw KT. Cigarette Smoking and  Fat  Distribution  in  21.  828  British  Men  and Women: A Populationbased Study. Obes Res. 2005. 13(2005)
5. Drapeau  V,  Despres  JP,  Bouchard  C,  Allard  L, Fournier G, Leblanc C, Tremblay A. Modification in food-group consumption are related to long-term body-weight  changes.  AJCN.  2004.  80(2004):29- 37. doi:  10.1093/ajcn/80.1.29.
6. Jakicic JM, Greg E, Knowler W, Kelley DE, Lang W,  Miller  GD,  Pi-Sunyier  FX,  Regensteiner  JG, Rejeski  WJ,  Ribisl  P, et  al. Activitiy  patterns  of obese  adults  with  type  2  diabetes  in  the  Look AHEAD  study. Med  Sci  Sports  Exerc. 2010. 42(11):1995-2005.
doi: 10.1249/MSS.0b013e3181e054f0.
7. Vincent  HK,  Innes  KE,  Vincent  KR.  Oxidative stress  and  potential  interventions  to  reduce oxidative  stress  in  overweight  and  obesity. Diabetes,  Obes,  Met.  2007.  9(2007):813-839.  doi: 10.1111/j.1463-1326.2007.00692.x
8. Amirkhizi  F,  Siassi  F,  Djalali  M,  Shahraki  SH. Impaired  enzymatic  antioxidant  defense  in erythrocytes of women with general and abdominal obesity.  Obes  Res  Clin  Prac.  2014.  8(2014):e26- e34. doi: 10.1016/j.orcp.2012.07.004
9. Basu  A,  Betts  NM,  Ortiz  J,  Simmons  B,  Wu  M, Lyons  TJ.  Low-energy  cranberry  juice  decrease lipid  oxidation  and  increases  plasma  antioxidant cpacity  in  women  with  metabolic  syndrome.  Nutr Res. 2011. 31(2011):190-196. doi: 10.1016/j.nutres.2011.02.003
10. Jansakova K, Babickova J, Havrientova M, Hodosy J,  Kraic  J,  Celec  P,  Tothova  L.  The  effects  of anthocyanin rich wheat diet on the oxidative status and behavior of rats. Croat Med J. 2016. (57):119- 129. doi: 10.1016/j.jep.2003.09.008
11. Qin Y, Xia M, Ma J, Ho Y, Liu J, Mou H, Cao L, Ling  W.  Anthocyanin  supplementation  improves serum  LDL-  and  HDL-cholesterol  concentrations associated  with  the  inhibition  of  cholesteryl  ester transfer protein in dyslipidemic subjects. Am J Clin Nutr. 2009. (90):485-492. doi:
10.3945/ajcn.2009.27814
12. Suarez  JMA,  Giampieri  F,  Tulipani  S,  Casoli  T, Stefano GD, Ana M, Paramas G, Buelga CS, Busco F,  Quiles  JL,  et  al.  One-month  strawberry-rich anthocyanin supplementation ameliorates cardiovascular  risk,  oxidative  stress  markers  and platelet  activation  in  humans.  J  Nutr  Biochem.
2014. (25):289-294.
doi:10.1016/j.jnutbio.2013.11.002
13. Basu A, Du M, Leyva MJ, Sanchez K, Betts NM, Wu M, Aston CE, Lyons TJ. Blueberries decrease cardiovasculer risk factors in obese men and women with metabolic syndrom. J Nutr. 2010.
140(2010):1582-1587. doi: 10.3945/jn.110.124701 14. Zhu Y, Ling W, Guo H, Song F, Ye Q, Zou T, Li D, Zhang  Y,  Li  G,  Xiao  Y  et  al.  Anti-inflammatory effect of purified dietary anthocyanin in adults with hypercholesterolemia:  A  randomized  controlled trial.  Nutr,  Metabolisme  and  Cardiovascular Disease. 2013. 23:843-849. doi: 10.1016/j.numecd.2012.06.005 15. Vendrame  S,  Daugherty  A,  Kristo  AS,  Riso  P,
Zacas DK. Wild blueberry (Vaccinium angustifolium)
consumption
improves
inflammatory status in the obese Zucker rat model of the metabolic syndrome. J Nutr Biochem. 2013. (24):1508-1512. doi:10.1016/j.jnutbio.2012.12.010 16. Seymour EM, Tanone II, Daniel E, Llanes U, Lewis Sk,  Kirakosyan  A,  Kondoleon  MG,  Peter  B, Kaufman,  Bolling  SF.  J  Med  Food.  2011. 14(12):1511-1518. doi:10.1089/jmf.2010.0292
17. Wu  T,  Tang  Q,  Gao  Z,  Yu  Z,  Song  H,  Zheng  X, Chen  W.  Blueberry  and  Mulberry  Juice  Prevent Obesity Development in C57BL/6 Mice. Plos One. 2013. 8(10):e77585
18. Suzery  M,  Lestari  S,  Cahyono  B.  Penentuan  total antosianin  dari  kelopak  bunga  rosela  (Hibiscus sabdariffa  L)  dengan  metode  maserasi  dan sokshletasi. J Sains Math. 2010. 18(1):1-6.
19. Djaeni M, Ariani N, Hidayat R, Utari FD. Ekstrak antosianin  dari  kelopak  bunga  rosela  (Hibiscus sabdariffa L.) berbantu ultrasonik:tinjauan aktivitas antioksidan. J Apl Tekn Pang. 2017. 6(3):148-151. doi: 10.17728/jatp.236
20. Ezzat  SM,  Salama  MM,  el-Din  SHS,  Saleh  S, Lakkany NME, Hammam  OA, Salem MB, Botros SS.  Metabolyc  profile  and  hepatoprotective activityof  the  anthocyanin-rich  etract  of  Hibiscus sabdariffa calyces. Pharm Biol. 2016. 1(2016):1-10. doi: 10.1080/13880209.2016.1214739.
21. Ilyas EII, kartinah NT, Andriani T, Goernarjo RA, Kahanjak  DN,  Freisleben  HJ.  Effects  of  Hibiscus sabdariffa Linn. on malondialdehyde and glutathione  peroxide  in  an  overtraining  rat  model characterized  by  growth  hormone,  insulin-like growth  factor-1,  and  insulin-like  growth  factor
binding potein-3. Biomed Pharm J. 2017. 10(1):19- 27. doi:10.13005/bpj/1076.
22. Hadi A, Pourmasoumi M, kafeshani M, Karimiah J, Maracy MR, Entezari MH. The effect of green tea and sour tea (Hibiscus sabdariffa L.) supplementation  on  oxidative  stress  and  muscle damage  in  athletes.  J  Diet  Supp.  2016.  0(0):1-12. doi: 10.1080/19390211.2016.1237400.
23. Christian KR, Jackson JC. Changes in total phenolic and  monomeric  anthocyanin  composition  and antioxidant  activity  of  three  varieties  of  sorrel (Hibiscus  sabdariffa)  during  maturity.  J  Food Composit and Anal. 2009. 22:663-667. doi:10.1016/j.jfca.2009.05.007
24. Asgary  S,  Soltani  R,  Zolghadr  M,  Keshvari  M, Sarrafzadegan N. Evaluation of the effects of roselle (Hibiscus  sabdariffa  L.)  on  oxidative  stress  and serum levels of lipids, insulin, and hs-CRP in adults patients  with  metabolic  syndrome:  a  double  blind placebo-controlled  clinical  trial.  J  Complement Integr  Med.  2016.  (2016):1-6.  doi:  10.1515/jcim- 2015-0030.
25. Serra  LM,  Bautista  IC.  Etiology  of  obesity:  two “key issues” and other emerging factors. Nutr Hosp. . 2013. 28(5):32-43.
26. Zhao  D,  Li  Y,  Zheng  L,  Yu  K.  Brief Communication: Body Mass Index, Body Adiposity
Index, and Percent Body Fat in Asians. American J Phys Anthro. 2013. (00):00- 00.doi:10.1002/ajpa.22341
27. Thibault  H,  Contrand  B,  Saubusse  E,  Baine  M, Tison SM. Risk factor for overweight and obesity in French  adolescent:  Physical  activity,  sedentary behavior  and  parental  characteristics. Nut. 2010. 26(2010):192-200. doi: 10.1016/j.nut.2009.03.015
28. Jakicic JM, Kelliann K, Davis. Obesity and physical activity. Psychiatr Clin N Am. 2011. 34(2011):829- 840. doi: 10.1016/j.psc.2011.08.009
29. Dam  RM,  Seidell  J.  Carbohydrate  intake  and obesity. European J Clin Nutr. 2007. 61(1):575-599.
30. Azzini  E,  Giacometti  J,  Russo  GL.  2017. Antiobesity  effects  of  anthocyanins  in  preclinical and  clinical  studies.  Hindawi.  2017:1-12.doi: 10.1155/2017/2740364
31. Aguilar  F,  Zamilpa  A,  Garcia  D,  Almanza  J, Romero  E,  Campos  E,  Carillo  L,  Ramos  R.  2007. Effect  of  Hibiscus  sabdariffa  on  obeity  in  MSG mice. J Ethnopharmacology . 114:66-71.doi: 10.1016/j.jep.2007.07.020
32. DeFuria  J,  Bennett  G,  Strissel  et  al.  Dietary blueberry attenuates whole-body insulin resistance in  high  fat-fed  mice  by  reducing  adipocyte  death and  its  inflammatory  sequelae.  J  Nutr.  2009. 139:1510-1516
33. Furukawa  S,  Fujita  T,  Shimabukuro  M,  Iwaki  M, Yamada Y, Nakajima Y, Nakayama O, Makishima
M,  Matsuda  M,  Shimomura  I.  Increased  oxidative stress  in  obesity  and  its  impact  on  metabolic syndrome.  J  Clin  Inves.  2004.  (114):1752-1761. doi:10.1172/JCI200421625
34. Esa NM, Hern FS, Ismail A, Yee CL. Antioxidant activity  in  different  parts  of  roselle  (Hibiscus sabdariffa L.) extracts and potential exploitation of the  seeds.  Food  Chem.  2010.  (122):1055-1060. doi:10.1016/j.foodchem.2010.03.074
35. Wong  PK,  Yusof  S,  Ghazali  HM,  Man  YBC.
Physico-chemical characteristics of roselle (Hibiscus  sabdarriffa  L.).  Nutr  Food  Scien.  2002.
32(2): 68-73. doi:10.1108/00346650210416994 36. Juniarka  IGA,  Lukitaningsih  E,  Noegrohati  S. Analisis  aktivitas  antioksidan  dan  kandungan antosianin total ekstrak dan liposom kelopak bunga rosela  (Hibiscus  Sabdariffa  L.).  Majalah  Obat Tradisi. 2011. 16(3):115-123 37. Tanaka Y, Shiozawa S, Morimoto I, Fujita T. Zinc inhibit pokeweed mitogen-induced development of immunoglobulin-secreting cells
through augmentation  of  CD4  and  CD8  cells.  Int  J Immunopharmachol. 1989. 11(6):673-679777