BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 4 (2020): 508-513 E-ISSN: 2714-8564

## Aplikasi Jamur  Pelapuk Putih pada metode Biopulping berbahan dasar Limbah Daun Kayu Putih (Melaleuca leucadendron)

## Syifa Mubarrak*, Aris Mumpuni,  Nuraeni Ekowati
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman Jalan dr. Suparno 63 Purwokerto 53122 email: syifamubarrak77@gmail.com
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 13/10/2020
Disetujui  : 15/02/2021

## Abstract
This study aims to determine the effect of white rot fungus (JPP) on lignin and cellulose levels in the biopulping process of old eucalyptus leaves and new eucalyptus leaf waste and to find out the best  JPP  for  the  biopulping  process  of  eucalyptus  leaf  waste.  The  research  used  experimental methods  with  completely  randomized  design  (CRD).  The  treatment  was  inoculating  JPP (Phanerochaete  chrysosporium,  Ganoderma  lucidum,  and  Pleurotus  tuberregium),  each  treatment was  repeated  3  times.  The  research  variables  consisted  of  independent  variables  in  the  form  of different  types  of  JPP  and  age  of  waste,  the  dependent  variable  was  the  ability  of  JPP biodelignification on eucalyptus leaf waste. The main parameters observed were lignin levels and cellulose  levels  before  and  after  the  incubation  period  of  eucalyptus  leaves.  The  supporting parameters observed were the weight of waste before and after incubation, pH, and media weight. The  results  showed  that  there  was  a  decrease  in  lignin  and  cellulose  levels  in  all treatments.  The result  of  the  largest  average  reduction  in  lignin  levels  was  the  treatment  of  the  fungus  P. tuberregium on old eucalyptus leaves by 0.014%. The highest level of final cellulose in the largest fungal  treatment  was  G.  lucidum  to  old  eucalyptus  leaf  waste  which  experienced  the  largest decrease in cellulose of 3.22%.
Key Word : Biodeligninfication, Biopulping, Eucalyptus leaves, White rot Fungi, pulp

## Abstrak
Penelitian  ini bertujuan untuk  mengetahui  pengaruh  jamur pelapuk  putih  (JPP) pada kadar  lignin dan  selulosa  dalam  proses biopulping limbah  daun  kayu  putih  lama  dan  limbah  daun  kayu  putih baru  dan  mengetahui  JPP  terbaik  untuk  proses biopulping limbah  daun  kayu  putih.  Penelitian menggunakan  metode  eksperimental dengan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL). Perlakuan  berupa menginokulasikan  JPP  ( Phanerochaete  chrysosporium,  Ganoderma  lucidum, dan Pleurotus tuberregium ),  tiap  perlakuan  diulang  sebanyak  3  kali.  Variabel  penelitian  terdiri  atas  variabel bebas  berupa  jenis  JPP  yang  berbeda  dan  umur  limbah,    variabel  terikat  berupa  kemampuan biodelignifikasi  JPP  pada  limbah  daun  kayu  putih.  Parameter  utama  yang  diamati  adalah  kadar lignin  dan  kadar  selulosa  sebelum  dan  sesudah  masa  inkubasi  daun  kayu  putih.  Parameter pendukung  yang  diamati  adalah  berat  limbah  sebelum  dan  sesudah  inkubasi,  pH,  dan  Berat Media.Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  terjadi  penurunan  kadar  lignin  dan  selulosa  pada seluruh perlakuan. Hasil rata-rata penurunan kadar lignin terbesar yakni pada perlakuan jamur P. tuberregium terhadap  limbah  daun  kayu  putih  lama  sebesar  0,014%.  Penurunan  kadar  selulosa akhir tertinggi pada perlakuan jamur terbesar adalah pada jamur G. lucidum terhadap limbah daun kayu putih lama mengalami rata-rata penurunan selulosa terbesar 3,22%. Kata kunci : Biodeligninfikasi , Biopulping, Daun kayu putih, Jamur Pelapuk Putih, pulp

## PENDAHULUAN
Kayu putih ( Melaleuca leucandendron) merupakan  tanaman  yang  mampu  menghasilkan minyak  kayu  putih.  Minyak  kayu  putih  merupakan atsiri  oksida  yang  diperoleh  dari  hasil  penyulingan daun-daun  kayu  putih.  Daun  tanaman  kayu  putih yang  sudah  berumur  4  tahun  yang  dapat  digunakan sebagai  minyak  kayu  putih.  Pemetikan  dilakukan setiap  6  bulan  sekali  (Sutapa  dan  Hidayat,  2011). Daun-daun  yang  sudah  disuling  sudah  tidak digunakan kembali,  sehingga bisa  dikatakan  menjadi limbah.
Kertas  merupakan  lembaran-lembaran  tipis yang dihasilkan dengan kompresi serat dari pulp yang telah mengalami pengerjaan pengeringan. Serat yang
digunakan  berupa  serat  alam  yang  mengandung selulosa dan hemiselulosa.  Kebutuhan akan kertas di dunia  semakin  lama  semakin  meningkat  setiap tahunnya. Indonesia pada tahun 2011 menjadi urutan ke tiga belas dalam urutan konsumsi kertas terbanyak di dunia, yakni sebesar 30,1 kg pertahun (Taringan et al, 2011).  Meningkatnya  kebutuhan  atas  kertas membuat  dampak  yang  kurang  baik  terhadap lingkungan.  Kurangnya  bahan  baku  alternatif  pulp adalah  penyebab  utamanya,  dikarenakan  selama  ini bahan  baku  utama  pulp  ialah  kayu.  Akibatnya penebangan  hutan  menjadi  merajalela.  Selain  itu proses  pulping  yang  dilakukan  menggunakan  bahan kimia  yag  sukar  diurai  secara  alami.  Salah  satu alternatif  untuk  mengurangi  efek  yang  kurang  baik
ini  adalah  dengan  menggunakan  bahan  nonkayu sebagai  bahan  baku  pulp  dan  mencari  proses  yang lebih  ramah  terhadap  lingkungan  menggunakan metode biopulping (Bahri,  2015). Biopulping menggunakan  jamur  pelapuk  putih  (JPP).  JPP  ialah jamur  yang  paling  atraktif  dalam  menurunkan  lignin (Sun & Cheng, 2002).
Biopulping merupakan  teknologi  ramah lingkungan  yang  digunakan  dalam  produksi  pulp. Penerapannya dilakukan sebelum pemasakan menggunakan  bahan  kimia. Biopulping dapat menggurangi  konsumsi  klorin  dikarenakan  jamur pelapuk  putih  dapat  menurunkan  kadar  lignin (Purwita  &  Risdianto,  2016).  Degradasi  lignin bersifat  oksidatif  dan  terjadi  secara  aerobik.  Jamur pelapuk putih memiliki kemampuan yang unik untuk depolimerisasi, memecah ikatan C-C, dan memineralisasi  lignin  dengan  enzim  ligninolitiknya (Isroi et al. , 2011)
Purwita  &  Risdianto,  (2016)  melakukan penelitian  mengenai biopulping pada  rami  dengan JPP,  Fatriasari et  al. (2017)  mengenai biopulping pada  bambu  betung  menggunakan  JPP.  Penelitian tersebut  membuktikan  JPP  dapat  mempermudah proses pulping dan meningkatkan kualitas pulp dalam menurunkan  kadar  lignin  dan  meningkatkan  kadar selulosa.  (Fatriasari et  al., 2010;  Manavalan et  al., 2012; Gaitan-Hernandez et al., 2011; Adejumo et al., 2015;  Purwita  &  Krisdianto,  2016).  Atas  dasar tersebut,  penelitian  ini  menggunakan  JPP  yakni P. chrysosporium,  G.  lucidum, dan P.  tuberregium . Hasil penelitian Laksmi (2018) jamur P. chrysosporium, G. lucidum, dan P. tuberegium dapat menurunkan  lignin  pada  limbah  daun  minyak  kayu putih
Limbah  daun  kayu  putih  mengandung  lignin dan  selulosa.  Kandungan  didalamnya  sama  halnya dengan  biomassa  kayu  yang  selama  ini  digunakan sebagai  bahan  dasar  utama  pembuatan  kertas. Menurut  Reyes et  al, (2015)  kayu  dapat  digunakan sebagai  bahan  dasar  untuk  pembuatan pulp .  Kualitas pulp dipengaruhi oleh kadar lignin selulosa, abu, dan air.  Sehingga  diterapkan  perlakuan biopulping yang menggunakan jamur prlapuk putih.
Penelitian Laksmi (2018) menggunakan limbah  daun  kayu  putih  baru,  jamur-jamur  yang digunakan yakni ( P. chrysosporium , P. ostreotus , T. versicolor  L.  edodes,  A.  auricular,  G.  lucidum ) mampu  menurunkan  kadar  lignin  dan  selulosa  pada akhir  masa  inkubasi.  Penelitian  ini  telah  menguji  3 spesies  jamur  terbaik  dari  hasil  penelitian  tersebut. Ketiga  jamur  tersebut  diinokulasikan  pada  limbah daun  kayu  putih  lama  dan  limbah  daun  kayu  putih baru.
Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengetahui  jenis jamur  dan  umur  limbah  daun  kayu  putih  yang dimungkinkan mempengaruhi kemampun delignfikasi dari jamur-jamur yang diuji. Jenis jamur dapat  berinteraksi  dengan  umur  limbah  daun  kayu putih  yang  kadar  lignin  dan  selulosa  awalnya berbeda.  Kadar  lignin  dan  selulosa  awal  berbeda dikarenakan    secara  alamiah  sudah  mengalami
pelapukan.  Hal  ini  akan  mempengaruhi  efektifitas penurunan kadar lignin dan selulosa daun kayu putih.

## MATERI DAN METODE
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  limbah  daun  kayu  putih  dari  Pengolahan Minyak  Kayu  Putih  LMDH  Dadi  Makmur  Desa Ujungmanik  Kecamatan  Kawunganten  Kabupaten Cilacap,  sumber  inokulum  jamur  ( P.  chrysosporium, G. lucidum, dan P. tuberregium) yang diperoleh dar Lab.  Mikologi  dan  Fitopatologi  Fakultas  Biologi , PDA  instant,  biji  jagung  CaCO 3 ,  gypsum,  akuades, kapas,  alkohol  70%,  NaOH  17,5%,  NaOH  8,3%,  air suling, asam asetat 2N, dan asam sulfat 72%.
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  kantong  plastik polypropylene ,  cawan  petri, botol  kaca, plastic wrapper, jarum  ose,  bunsen, autoklaf, Laminar  Air  Flow (LAF),  timbangan neraca,  timbangan  analitik,  oven,  erlenmeyer,  gelas ukur,  pipet,  gelas  piala,  corong,  batang  pengaduk, kertas  saring,  kamera,  tutup  baglog  dan  ring, eksikator, dan furnace.

## Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Mikologi & Fitopatologi Fakultas Biologi Universitas Jenderal  Soedirman,  dan  Panti  Asuhan  Kristen Siloam.  Waktu  penelitian  dilakukan dari  bulan  April sampai Maret 2020.

## Rancangan Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental. Rancangan percobaan yang digunakan yaitu rancangan acak lengkap (RAL). Perlakuan yang diujikan  terdiri  atas  6  perlakuan,  berdasarkan kombinasi  jenis  jamur  pelapuk  putih  dan  umur limbah, yaitu:
Pc1  ( P.  chryosporium pada  limbah  daun  kayu  putih baru)
Pc2  ( P.  chryosporium pada  limbah  daun  kayu  putih lama)
Gl1 ( G. lucidum pada limbah daun kayu putih baru) Gl2 ( G. lucidum pada limbah daun kayu putih lama) Pt1  ( P.  tuberregium pada  limbah  daun  kayu  putih baru)
Pt2  ( P.  tuberregium pada  limbah  daun  kayu  putih lama)
Setiap  perlakuan  diulang  sebanyak  3  kali sehingga diperoleh 18 unit  percobaan

## Variabel dan Parameter Percobaan
Variabel  penelitian  ini  terdiri  dari  variabel bebas  dan  variabel  terikat.  Variabel  bebas  berupa jenis  jamur  pelapuk  putih  dan  umur  limbah  daun kayu  putih  yang  berbeda,  sedangkan  variabel  terikat yaitu  kemampuan  biodelignifikasi  jamur  pelapuk putih pada limbah daun kayu putih.
Parameter  yang  diukur  dalam  penelitian  ini yaitu  parameter  utama  dan  parameter  pendukung. Parameter utama yaitu kadar lignin, dan selulosa pada limbah  daun  kayu  putih  selama  inkubasi,  sedangkan parameter  pendukung  meliputi  berat  limbah  sebelum
dan  sesudah  inkubasi,  pH  media,  temperatur  ruang inkubasi.

## Pembuatan Media PDA
Pembuatan  medium Potato  Dextrose  Agar (PDA)  instant  dilakukan  dengan  merebus  PDA instant 39g kedalam akuades 1L. Media dihomogenkan  setelah  homogen  media  dimasukkan ke  dalam labu  erlenmeyer dan  tabung  reaksi sebanyak 5mL setiaptabung reaksinya. Medium PDA yang  sudah  dituang  disumbat  dengan  sumbat  kapas, setelah diisi kemudian tabung reaksi, labu Erlenmeyer yang berisi media PDA dan caawan petri yang  sudah  disiapkan  ditutup  dengan wrap dan disampul  dengan  kertas  merang,  lalu  disteriilisasi menggunakan  autoklaf  selama  15-20  menit.    Media PDA  pada labu  Erlenmeyer yang  sudah  diseterilkan dimasukan  ke  dalam  cawan  petri  sebanyak  10mL dalam keadaan steril, setelah itu ditutup menggunakan wrap.

## Pembuatan Isolat Jamur
Inokulum  jamur  JPP  ( P.  chrysosporium,  G. lucidum, dan P.  tuberregium) diinokulasikan  ke media  PDA  pada  cawan  petri  yang  sudah  disiapkan, kemudian ditutup dengan wrap . Inokulum jamur JPP diinokulasikan  kedalam  media  dan  diinkubasi  di temperatur  ruang  selama  5-7  hari.  Dilakukan perbanyakan  JPP  dengan  cara  diinokulasikan  ke media PDA pada tabung reaksi.

## Pembuatan Isolat Jamur pada Media Jagung
Pembuatan media jagung dalam penghitungan 1kg  dilakukan  dengan  mencampurkan  800g  jagung dengan  10g  CaCO 3 dan  ditambahkan    10g dextrose diaduk  rata.  Akuades  ditambahkan  sedikit  demi sedikit.  Media  jagung  direbus  hingga  media  cukup lunak.  Medium  jagung  dimasukkan  ke  dalam  botol kaca  sebanyak  300g  dan  disumbat  menggunakan kapas  lalu  ditutup  dengan wrap. Medium  jagung disterilisasi  dengan  autoklaf  121°C  2  atm  selama  30 menit. Inokulum jamur yang berada di tabung reaksi, dipindahkan ke medium jagung 1 tabung reaksi untuk 2  botol  media  jagung  menggunakan  jarum  ose dengan keadaan steril. Kemudian botol disumbat dan ditutup dengan wrap. Penginkubasian dilakukan pada temperatur ruang selama 14 hari.
Pembuatan  Media  Subtrat  Limbah  Daun  Kayu Putih Lama dan Baru
Daun  dicuci  bersih,  kemudian  dikeringkan dengan  panas  matahari  selama  2  hari  atau  sampai kering. Daun dicacah menggunakan mesin penggiling sampai  berbentuk  serpih.  Substrat  limbah  daun  kayu putih dimasukkan ke dalam plastik PP dengan ukuran 20  cm  x  15  cm  sebanyak  300  g  dan  ditutup  dengan tutup baglog menggunakan ring.  Baglog yang sudah diisi  medium  substrat  limbah  daun  kayu  putih disterilisasi menggunakan autoklaf dengan temperatur  121 o C,  selama  45  menit.  Baglog  yang sudah  disterilisasi  dilakukan  pengukuran  berat sebagai berat awal sebelum masa inkubasi, dilakukan pengukuran  pH  awal,  diukur  lignin  dan  selulosa sebelum masa inkubasi.
Inokulasi  JPP  ke  Medium  Limbah  Daun  Kayu Putih
Inokulasi  dilakukan  dalam  keadaan  steril. Inokulum  JPP  dalam  media  jagung  dimasukkan  ke dalam  baglog  yang  berisi  substrat  limbah  daun  kayu putih.1 botol media jagung digunakan untuk 3 media limbah  daun  kayu  putih,  kemudian  ditutup  kembali menggunakan penutup ring banglog dan baglog yang sudah  diinokulasi  Inokulum  kemudian  diinkubasi didalam suhu ruang selama 21 hari atau sampai salah satu unit percobaan, pertumbuhan miseliumnya sudah memenuhi baglog.

## Uji Kadar Lignin (Saleh et al., 2009)
Pengujian  dilakukan  sebelum  dan  sesudah penginkubasian  jamur  pada  substrat.  Sampel  pulp dikeringkan  dalam  oven  dengan  temperature  105 o C selama  1  jam.  Pulp  kering  ditimbang  sebanyak  2  g, kemudian  dimasukkan  ke  dalam labu  erlenmeyer ukuran  250ml  dan  ditambahkan  sedikit  demi  sedikit 40ml  asam  sulfat  72%  sambil  diaduk  sampai  semua sampel  terendam  dan  terdispersi.  Setelah  terdispersi, Labu erlenmeyer ditutup dengan alumunium foil dan dijaga  temperaturnya  pada  20 o C  selama  2  jam. Sampel  ditambahkan  400ml  air  ke  dalam Labu erlenmeyer .  Kemudian  larutan  dididihkan  selama 4jam  di  dalam  gelas  beker.  Larutan  didiamkan sampai  endapan  lignin  mengendap.  Kemudian disaring  untuk  mendapatkan  lignin  menggunakan kertas  saring.  Lignin  dicuci  dengan  air  panas  lalu dikeringkan di dalam oven dengan temperatur 105 o C. Kemudian  lignin  didinginkan  dan  selanjutnya ditimbang  dengan  timbangan  analitik.  Pengujian kadar lignin dapat dihitung dengan persamaan:
𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑙𝑖𝑔𝑛𝑖𝑛 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑛𝑑𝑎𝑝𝑎𝑛 𝑙𝑖𝑔𝑛𝑖𝑛 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑥 100%
𝑃𝑒𝑛𝑢𝑟𝑢𝑛𝑎𝑛 𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑙𝑖𝑔𝑛𝑖𝑛 = 𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑙𝑖𝑔𝑛𝑖𝑛 𝑎𝑤𝑎𝑙 − 𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑙𝑖𝑔𝑛𝑖𝑛 𝑎𝑘ℎ𝑖𝑟
Uji Kadar Selulosa (Saleh et al., 2009)
Pengujian  dilakukan  sebelum  dan  sesudah penginkubasian  bibit  jamur  pada  substrat.  Sampel pulp  dikeringkan  dalam  oven  dengan  temperature 105 o C selama 1 jam, kemudian ditimbang sebanyak 3 g.  Pulp  kering  dipindahkan  ke Labu  erlenmeyer ukuran  250ml.  pulp  dibasahkan  dengan  15ml  NaOH 17,5%  dimaserasi selama 1 menit, lalu ditambahkan 10ml  NaOH  17,5%  dan  diaduk  selama  15  menit, dibiarkan  selama  3  menit.  Kemudian  ditambahkan lagi  3  x  10  ml  NaOH  17,5%  setelah  2,5;5;  dan  7,5 menit,  setelah  itu  dibiarkan  30  menit.  Selanjutnya ditambahkan  100  ml  air  suling  dan  dibersihkan dengan  25  ml  NaOH  8,3%.  Endapan  dicuci  dengan 5x50ml air suling, dan filtrat dipakai untuk penentuan hemiselulosa.  Kertas  saring  yang  berisi  endapan dipindahkan  ke  gelas  piala  yang  lain,  dan  endapan dicuci  dengan  400  ml  air  suling,  ditambahkan  asam asetat  2N  dan  diaduk  selama  5  menit,  kemudian endapan  dicuci  sampai  bebas  asam.  Endapan dikeringkan dalam oven temperatur 105 o C, kemudian didinginkan.  Setelah  dingin,  endapan  ditimbang. Kandungan selulosa dapat dihitung dengan:
𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑠𝑒𝑙𝑢𝑙𝑜𝑠𝑎 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑛𝑑𝑎𝑝𝑎𝑛 𝑠𝑒𝑙𝑢𝑙𝑜𝑠𝑎 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑥 100%
𝑃𝑒𝑛𝑢𝑟𝑢𝑛𝑎𝑛 𝑘𝑑𝑎𝑟 𝑠𝑒𝑙𝑙𝑜𝑠𝑎 = 𝑠𝑒𝑙𝑙𝑜𝑠𝑎 𝑎𝑤𝑎𝑙 −  𝑠𝑒𝑙𝑙𝑜𝑠𝑎 𝑎𝑘ℎ𝑖 r

## Pengukuran Berat Media
Pengujian  dilakukan  sebelum  dan  sesudah masa inkubasi. Pengukuran dilakukan pada timbangan  digital.  Berat  baglog  yang  belum diinokulasi  ditimbang  sebagai  bobot  awal  dan  berat baglog  yang  sudah  diinokulasi  ditimbang  sebagai bobot akhir :
= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑏𝑎𝑔𝑙𝑜𝑔 𝑎𝑤𝑎𝑙 − 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑏𝑎𝑔𝑙𝑜𝑔 𝑎𝑘ℎ𝑖𝑟

## Pengukuran pertumbuhan miselium
Pertumbuhan  diameter  koloni  pada  baglog diamati  setiap  minggu  selama  masa  inkubasi. Pengukuran  rata-rata  diameter  miselium  dihitung dengan  mengukur  diameter  baglog  lalu  dibagi menjadi  4  bagian.  Miseliu  diukur  dari  titik  inokulasi hingga  ujung  miselium.  Miselium  diukur  dari  4 bagian yang sudah dipersiapkan.

## Pengukuran pH substrat
pH  substrat  sebelum  dan  sesudah  masa inkubasi  diukur  menggunakan  pH  meter  tanah.  pH meter  ditancapkan  ke  dalam  substrat  limbah  daun kayu  putih,  angka  yang  tertera  pada  pH  meter merupakan pH substrat.

## Pengukuran temperatur ruang inkubasi
Temperatur  ruang  inkubasi  diukur  setiap  tiga hari  sekali.  Temperatur    diukur  menggunakan termometer ruangan.

## Metode Analisis Data
Data  uji  kadar  lignin,  dan  selulosa  dianalisis dengan  menggunakan  analisis  ragam  (uji  ANOVA atau  F-test)  dengan  tingkat  kepercayaan  95%  dan 99%  untuk  mengetahui  pengaruh  perlakuan  terhadap perubahan  kadar  lignin  dan  selulosa.  Hasil  analisis variansi yang berpengaruh nyata, dilakukan uji lanjut dengan Duncan’s  Multiple  Range  Test (DMRT) untuk  menentukan  perlakuan  paling  efektif  pada perbandingan  lignin  dan  selulosa  terkait biopulping limbah daun kayu putih.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  penurunan kadar lignin pada perlakuan inokulasi jamur terhadap limbah  daun  kayu  putih  lama  dan  baru.  Tabel  1. menunjukkan  penurunan  lignin  terhadap  daun  kayu putih  lama  dan  baru.  Rata-rata  persentase  penurunan lignin  pada  kelompok  Pt1  0,014%,  kelompok  Pc1 0,008%  kelompok  Gl1  0,010%,  kelompok  Pt2 0,013%,  kelompok  Pc2  0,005%  dan  kelompok  Gl2 0,0011%.  rata-rata  persentase  penurunan  lignin terbesar  adalah  pada  kelompok  Pt1 mengalami  rata- rata  penurunan  lignin  terbesar  yakni  0,014%, sedangkan  penurunan  kadar  lignin  terkecil  pada kelompok Pc2 terhadap limbah daun kayu putih baru sebesar 0,005%.
Tabel 1. Rata-rata  penurunan  kadar  lignin  pada limbah daun kayu putih lama dan baru Perlakuan Penurunan Kadar lignin (%) Pt1 0,015 Pc1 0,008 Gl1 0,010 Pt2 0.013 Pc2 0,005 Gl2 0,011
Berdasarkan  hasil  pengujian anova  pada  tabel diatas  dapat  diketahui  bahwa  nilai  Fhit  0,929<3,11 sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  tidak  ada pengaruh  signifikan.  penurunan  kadar  lignin  pada bahan uji, sehingga tidak dilanjutkan pada uji DMRT. Efektivitas  jamur  pelapuk  putih  pada  proses biopulping  diindikasikan  dengan  penurunan  kadar lignin  selama  inkubasi  (Purwita  &  Kisdianto,  2016). Penelitian  kali  ini  mengalami  penurunan  kadar  ligin pada  setiap  perlakuan  setelah  masa  inkubasi,  namun hasil  anova  menyatakan  tidak  ada  pengaruh  atau signifikansi  pada  penurunan  lignin  di  limbah  daun kayu putih baru dan lama. Hasil akhir kadar lignin di setiap perlakuan memiliki nilai lebih rendah daripada kadar lignin awal. Hal tersebut menunjukkan adanya degradasi lignin di setiap perlakuan. (Rouches et al., 2016).  Efektivitas  biopulping  didasarkan  adanya penurunan lignin pada substrat selama masa inkubasi. Nazarpour et  al. (2013)  menyatakan  jamur  pelapuk putih  adalah  satu-satunya  mikroorganisme  yang mampu mendegradasi lignin secara efisien.
Tabel 2. Rata-rata  penurunan  kadar  selulosa  pada limbah daun kayu putih lama dan baru Perlakuan Penurunan Kadar selulosa (%) Pt1 0,88 Pc1 1,83 Gl1 3,22 Pt2 1,07 Pc2 1,66 Gl2 2,60
Dapat  diketahui  pada  tabel  diatas  nilai  rata- rata  penurunan  kadar  selulosa  pada  masing-masing kelompok  perlakuan  (Tabel  2).  Rata-rata  persentase penurunan  selulosa  pada  kelompok  Pt1  0,88% kelompok  Pc1  1,83%,  kelompok  Gl1  3,22%, kelompok  Pt2  1,07%,  kelompok  Pc2  2,50%  dan, kelompok  Gl2  2,60%  Apabila  dilihat  dari  rata- ratanya, maka rata-rata penurunan persentase selulosa terkecil  adalah  pada  kelompok  Pt1  sebesar  0,88%. rata-rata  persentase  penurunan  selulosa  terbesar adalah  pada  kelompok  Gl1 mengalami  rata-rata penurunan selulosa terbesar 3,22%.
Tabel 3. Penghitungan  DMRT  Rata-rata  penurunan kadar  lignin  pada  limbah  daun  kayu  putih lama dan baru Perlakuan Rata-rata Gl1 7,4100 a Gl2 7,5267 a Pc2 8,4633 b Pc1 8,8000 b Pt2 9,0600 b Pt1 9,7500 c
Berdasarkan  hasil  pengujian  oneway  anova dapat  diketahui  bahwa  nilai  Fhitung  >  Ftabel sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  ada  perbedaan signifikan  persentase  selulosa  antara  kelompok perlakuan. Untuk  mengetahui  kelompok  yang  saling berbeda  nyata  maka  dilakukan  uji  lanjut  DMRT (Tabel 3.). Hasil uji DMRT menunjukkan bahwa Pt1 mempunyai kemampuan terbesar dalam mempertahankan  kadar  selulosa  disbanding  Gl1. Kelompok  yang  saling  berbeda  nyata  yakni;  Gl1 dengan  Pc2,  Pc1,  Pt2  dan,  Pt1.  Gl2  dengan  Pc2, Pc1,Pt2  dan,  Pt1.  Pc2  dengan  Pt1.  Pc1  dengan  Pt1. Pt2 dengan Pt1
Menurunnya  kadar  selulosa  terjadi  karena enzim  yang  dihasilkan  JPP  turut  mendegradasi selulosa.  Beberapa  jenis  jamur  pelapuk  putih  dapat menyebabkan  penurunan  selulosa  karena  jamur tersebut  menggunakan  turunan  selulosa  sebagai sumber  karbon  (Rouches et  al., 2016).  Daun  kayu putih  mengandung  kadar  minyak  atsiri  yang  cukup tinggi (Helfiansah et al ., 2013). Minyak atsiri mampu menghambat  pertumbuhan  jamur  (Utami et  al., 2019),  sehingga  proses  penurunan  kadar  lignin  dan proses  mempertahankan  kadar  selulosa  kurang maksimal.  Selain  itu,  kandungan  lignin  dan  selulosa pada  limbah  daun  kayu  putih  sangat  rendah.  Kadar ligin  pada  limbah  daun  kayu  putih  lama  dan  baru memiliki  kadar  lignin  awal  sebesar  0,065%.  Kadar selulosa  limbah  daun  kayu  putih  lama  sebesara 10,63%  dan  pada  limbah  daun  kayu  putih  baru sebesar  10,13%.  Menurut  Anindyawati  (2010), kandungan  ligoselulosa  terdiri  dari  selulosa  (35- 50%), hemiselulosa (20-35%) dan lignin (10-25%).
Tabel 4. pH  substrat  sebelum  dan  sesudah  perlakuan inkubasi jamur pelapuk putih Perlakuan Sebelum Sesudah Pt1 7 6 Pt2 7 6 Pc1 7 6 Pc2 7 7 Gl1 7 6 Gl2 7 6
Setelah  perlakuan  inokulasi,  beberapa  pH substrat  mengalami  penurunan  (Tabel  4),  yaitu
Pleurotus tuberregium,
Phanerochaeta Chryosporium dan Ganoderma  lucidum .  tingkat keasaman  media  yang  terlalu  tinggi  atau  terlalu
rendah  menjadikan  waktu  pertumbuhan  miselium menjadi semakin lama dan produktivitas jamur tiram menurun.  Jamur  tumbuh  optimum  pada  pH  media  6 sampai  8  (Seswati et al .,  2013).  Sumarsih  (2010) menyatakana bahwa perubahan pH pada media tanam terjadi akibat adanya proses perombakan lignoselulosa  dan  senyawa  organik  lain.  Pengukuran pH  mendukung  parameter  utama  yakni  penurunan lignin.  Media  yang  mengalami  penurunan  pH memliki kemampuan lignin lebih besar.
Tabel 5. Temperatur ruang inkubasi selama masa inkubasi Hari ke- temperatur (°C) 0 30 3 29 6 29 9 30 12 29 15 27 18 28 21 30 Rata-Rata 29
Berdasarkan  table  5,  diatas  dapat  diketahui hasil  pengukuran  temperatur  ruang  inkubasi.  Rata- rata  temperatur  ruang  inkubasi  selama  tiga  minggu dengan pengukuran setiap tiga hari sekali menunjukkan  rata-rata  29°C.    Rosyida et  al. (2013) menyatakan tingkat suhu ruang inkubasi berpengaruh nyata  terhadap  diameter  koloni  JPP.  JPP  mampu tumbuh  baik  pada  suhu  ruangan  29°C.  selain pertumbuhan misselium, pH, dan suhu ruangan factor lain  yang  mempengaruhi  penurunan  lignin  yakni penurunan media selama inkubasi.
Tabel 6. Penurunan  media  selama  masa  inkubasi jamur pelapuk putih
Perlakuan Sebelum Sesudah Penurunan Pc1 300g 278,7g 21,3g Pc2 300g 277,5g 22,5g Pt1 300g 275,5g 24,5g Pt2 300g 265g 35g Gl1 300g 267g 33g Gl2 300g 261,4g 38,6g
Berat awal limbah daun kayu putih yakni 300g pada  tabel  6,  di  atas  menunjukkan  bahwa  setiap perlakuan  pada  limbah  daun  kayu  putih  mengalami penurunan  pada  akhir  masa  inkubasi.    Limbah  daun kayu  putih  yang  diinokulasi  P.  chrysosporium,  P. tuberregium,  dan  jamur  G.  lucidum mengalami penurunan berat media. menyebabkan semakin tinggi penurunan  berat  pada  subtrat.  Anita et  al (2011) menyatakan  penurunan  berat  selama  masa  inkubasi disebabkan  oleh  hilangnya  komponen  kimia  seperti zat  ekstratif,  lignin,  selulosa,  dan  hemiselulosa. Perbedaan  penurunan  berat  pada  setiap  media  JPP disebabkan  oleh  perbedaan  enzim  yang  diproduksi oleh  masing-masing  jamur  dalam  mendegradasi lignoselulosa.

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Kesimpulan yang dapat diambil dari penelitian ini  meliputi P.  chrysosporium, P.  Tuberregium ,  dan G.  lucidum mengurangi  kadar  lignin  dan  selulosa dalam    proses  biopulping  limbah  daun  kayu  putih lama  dan  baru.  Jenis  JPP  terbaik  untuk  proses biopulping  limbah daun  kayu  putih  lama  dan  limbah daun  kayu  putih  baru  adalah Pleoratus  Tuberregium dapat  menurunkan  lignin  masing-masing  sebesar 0,015% dan 0,013%, meskipun keduanya mengalami penurunan  kadar  selulosa  sebesar  masing-masing sebesar 0,88% dan 1,07%.

## Saran
Sebaiknya  perlu  dilakukan  uji  lanjut  sampai tahap  pembuatan  kertas  dan  uji  kualitas  kertas. Penerapan  biopulping  lebih  baik  diterapkan  pada limbah daun kayu putih lama.

## DAFTAR REFERENSI
Adejumo,  T.O.,  Coker,  M.E.,  Ogundeji,  J.S.,  dan
Adejero, D.O. 2015. Qualitative
Determination  of  Lignocellulolytic  Enzymes in  Eight  Wood-Decomposing  Fungi. Journal of Natural Sciences Research. 5(14):  1-7
Anindyawati  Trisanti.  2010.  Potensi  Selulase  dalam Mendegradasi Lignoselulose Limbah
Pertanian untuk Pupuk. Berita Selulosa . Pusat Penelitian Bioteknologi-LIPI.  45(2):10-77.
Anita,  S.  H.,  Euis,  H., &amp;  Raden,  P.  B.  L. 2011. The  Effect  of  Fungal  Pretreatment  By  Mix- Culture  White-Rot  Fungi  Phanerochaete crysosporium,  Pleurotu  ostreatus,  Trametes versicolor on Lignin and Cellulose Content of Bagasse. Jurnal Selulosa, 1(2), pp. 81-88.
Bahri  S,  2015.  Pembuatan  Pulp  Menggunakan Pelepah  Pisang. Jurnal  Teknologi  kimia. Jurusan  Teknik  Kimia,  Fakultas  Teknik, Universitas  Malikussaleh.  Loksumawe.  4(2): 36-50
Fatriasari,  W.,  Anita,  S.H.,  Falah,  F.,  Adi,  T.N.,  dan Hermiati, E. 2010. Biopulping Bambu Betung Menggunakan  Kultur  Campur  Jamur  Pelapuk Putih ( Trametes versicolor, Pleurotus ostreatus, dan Phanerochaete chrysosporium) . Berita Selulosa. 45(2): 44-56
Fatriasari, W., dan Risanto, L. 2011. Sifat Pulp Kraft Kayu  Sengon  ( Paraserianthes  falcataria) Perbedaan  Konsentrasi  Bahan  Pemasak  dan Tahap Pemutihan. Widyariset . 14(3): 589-598
Gaitan-Hernandez,  R.,  Esqueda,  M.,  Gutierrez,  A., dan  Beltran-Garcia,  M.  2011.  Quantitative Changes  in  the  Biochemical  Composition  of
Lignocellulosic Residues During The Vegetative  Growth  of Lentinula  edodes.
Brazilian Journal of Microbiology. 42: 30-40
Helfiansah Risq, Hardjono, S., Riyanto. 2013. Isolasi,
Identifikas dan Pemurnian Senyawa 1,8 Sineol Minyak Kayu Puth ( Maleleuca Leucadendron ). ASEAN  Journal  of  Systems Engineering , 1(1):19-24
Isroi,  Millati,  R.,  Syamsiah,  S.,  Niklasson,  C., Cahyanto,  M.  N.,  Lundquist,  K.  and Taherzadeh,  M.  J.  (2011)  ‘Biological pretreatment  of  lignocelluloses  with  white-rot fungi  and  its  applications:  A  review’, BioResources, 6(4):. 5224–5259.
Manavalan,  T.,  Manavalan,  A.,  Thangavelu,  K.P., dan  Heese,  K.  2012.  Secretome  Analysis  of Ganoderma  lucidum Cultivated  in  Sugarcane Bagasse. Journal of Proteomics. 77: 298-309
Nazarpour,  F.,  Abdullah,  D.  K.,  Abdullah,  N.  and Zamiri,  R.  2013  ‘Evaluation  of  biological pretreatment  of  rubberwood  with  white  rot fungi  for  enzymatic  hydrolysis’, Materials , 6(5) : 2059–2073.
Purwita  C,A  dan  Risdianto  H,  2016.  Pengaruh Aplikasi Jamur Pelapuk Putih pada Biopulping Rami( Bhohemia nivea) terhadap Kualitas Pulp Belum  Putih. Jurnal  Selulosa. Balai  Besar Pulp dan Kertas, Bandung. 6(2):105-114
Reyes,  P.,  Pereira,  M.,  dan  Mendonca,  R.T.  2015. Effect  of  Hemicelluloses  on  the  Properties  of Pinus radiata Chemimechanical Pulps. BioResources. 10(4): 7442-7454
Rosyida  Vita  Taufika  ,  Darsih  Cici,  Wahono  Satriyo K.  2013.  Pengaruh  Media  dan  Lingkungan Terhadap  Pertumbuhan  Miselium  Jamur Pelapuk  Putih  serta  Potensinya  sebagai Pendegradasi Lignin pada Tebu. Biodeversitas dan Bioteknologi Sumberdaya. 5(7): 106-113
Seswati, R., Nurmiati, & Periadnadi. 2013. Pengaruh Pengaturan  Keasaman  Media  Serbuk  Gergaji terhadap  Pertumbuhan  dan  Produksi  Jamur Tiram  Coklat  (Pleurotus  cystediosus  O.K. Miller ).  Jurnal  Biologi  Universitas  Andalas , 2(1): 31-36.
Sumarsih, S. 2010. Untung Besar Usaha Bibit Jamur Tiram. Penebar Swadaya. Jakarta.
Sutapa, J.P.G., dan Hidayat, A.N. 2011. Pemanfaatan Limbah  Daun  dan  Ranting  Penyulingan Minyak  Kayu  Putih  ( Melaleuca  cajuputi Powell)  untuk  Pembuatan  Arang  Aktif. Prosiding  Seminar  Nasional  Masyarakat Peneliti  Kayu  Indonesia    (MAPEKI)  XIV.
Yogyakarta
Utami  Rohula,  Mustika  Sari  Ardhea,  Nursiwi  Asri, Ashari  Dyah  Ayu.  2019.  Efek  Antimikroba Kombinasi  Nisin  dengan  Minyak  Atsiri Curcuma  pada  Mikroorganisme  Patogen  dan Pembusuk Pangan. Agritech, 39 (1): 78-86