Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-35 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Utilization Of Secondary Metabolite Compounds from 96% Ethanol Extract of Pidada Leaves ( Sonneratia caseolaris L ) as an Antibacterial against Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa Bacteria
Pemanfaatan Senyawa Metabolit Sekunder dari Ekstrak Etanol 96% Daun Pidada (Sonneratia caseolaris L) sebagai Antibakteri terhadap Bakteri Bacillus subtilis dan Pseudomonas aeruginosa
Kony Putriani 1, Nadya Putri Auliya Serawaidi 2, Eva Roswatidi 3, Febria Andini 4 1,2,4 Fakultas Farmasi dan Ilmu Kesehatan, Universitas Abdurrab, Pekanbaru, Indonesia 3 Fakultas Kedokteran, Universitas Abdurrab, Pekanbaru, Indonesia Email: konyputriani@univrab.ac.id

## Abstract
Infectious diseases are still a serious problem, and it is important to increase other sources of antimicrobial drugs from natural ingredients, one of which is the pidada plant.  This  research  aims  to  determine  the  content  of  secondary  metabolite compounds found in pidada leaves and determine the inhibitory power of pidada leaf extract against the bacteria Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa. This  type  of  research  is  a  real  experimental  laboratory  with  a  maceration extraction method using 96% ethanol solvent and antibacterial testing using the well  diffusion  method  with  variations  in  extract  concentration  of  80%,  60%, 40% and 20%. The research results show that the extract contains flavonoids, phenolic compounds, saponins, tannins and steroids. The results of the antibacterial activity test showed that there was an inhibitory power at a concentration of 80%, namely Bacillus subtilis bacteria of 19.13 mm in the intermediate category and Pseudomonas aeruginosa bacteria of 17.18 mm in the intermediate category. The results showed that the ethanol extract of pidada leaves can inhibit the growth of Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa bacteria . Keywords: Pidada leaf; Bacillus subtilis; Pseudomonas aeruginosa

## Abstrak
Penyakit  infeksi  masih  menjadi  masalah  serius  dan  pentingnya  ditingkatkan sumber obat antimikroba lain dari bahan alam, salah satunya yaitu tanaman pidada.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada daun pidada dan mengetahui daya hambat  ekstrak  daun  pidada  terhadap  bakteri Bacillus  subtilis dan Pseudomonas  aeruginosa .  Jenis  penelitian real  eksperimental  laboratories dengan metode ekstraksi secara maserasi menggunakan pelarut etanol 96% dan  uji  antibakteri  menggunakan  metode  difusi  sumuran  dengan  variasi konsentrasi  ekstrak  80%,  60%,  40%  dan  20%  Hasil  penelitian  menunjukan ekstrak  positif  mengandung  senyawa  flavanoid,  fenolik,  saponin,  tanin  dan steroid.  Hasil  dari  pengujian  aktivitas  antibakteri  menunjukan  adanya  daya hambat pada konsentrasi 80% yaitu bakteri Bacillus subtilis sebesar 19,13 mm dengan kategori daya hambat sedang dan bakteri Pseudomonas aeruginosa sebesar  17,18  mm  dengan  kategori  daya  hambat  sedang.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  pidada  memiliki  kemampuan menghambat  pertumbuhan  bakteri Bacillus  subtilis dan Pseudomonas aeruginosa.
Article Info

## Article history
Received date: 2024-06-04 Revised date: 2024-07-11
Accepted date: 2024-07-21
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-35 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Kata Kunci: Daun Pidada; Bacillus subtilis; Pseudomonas aeruginosa

## PENDAHULUAN
Di  Indonesia  penyakit  infeksi  masih  menjadi masalah serius sampai saat ini dan pentingnya ditingkatkan sumber obat antimikroba lain dari bahan  alam,  karena  semakin  meluasnya resistensi  mikroba  terhadap  obat-obatan antibiotika  yang  sudah  menyebabkan  infeksi, dimana  mikroba  masuk  ke  dalam  jaringan. Infeksi  bakteri Bacillus  cereus menyebabkan keracunan  dengan  gejala  muntah  dan  diare, bakteri  ini  termasuk  bakteri  gram  positif tersebar luas di alam seperti tanah, perairan, tumbuhan,  hewan  dengan  spora  yang  lebih tahan  terhadap  stres  misalnya  pemanasan dehidrasi,  radiasi.  Bakteri Pseudomonas aeruginosa adalah  termasuk  bakteri  gram negatif,  bakteri  ini  menyebabkan  infeksi nosokomial  yaitu  terutama  menyebabkan infeksi  saluran  kemih  dan  pneumonia  karena penggunaan ventilator. Namun bakteri ini juga bisa  menyebakan  infeksi  luka  dan  saluran nafas bagian bawah pada pasien imunokompromis. Bakteri Pseudomonas aeruginosa diatasi dengan pemberian antibiotik.  Terapi  antibiotik  bisa menimbulkan dampak negatif seperti resistensi antibiotik jika terapi  antibiotik  yang  diberikan  tidak  tepat [1]. Penggunaan  obat  tradisional  dinilai memiliki  efek  samping  yang  lebih  kecil dibandingkan  dengan  obat  yang  dibuat  dari bahan  kimia.  Keuntungan  lainya  bahan  baku mudah untuk didapatkan dan harganya relatif lebih  murah,  ini  menyebabkan  masyarakat kebanyakan  memilih  obat  tradisional  yang berasal  dari  bahan  alam  salah  satunya tanaman  pidada.  Menurut  penelitian  [2]. Senyawa  kimia  aktif  alkaloid,  steorid, triterpenoid,  flavonoid,  quinon,  saponin,  dan lain-lain  banyak  ditemukan  ditanaman mangrove,  bahwa  kandungan  metabolit sekunder  ini  memiliki  aktivitas  sebagai antimikroba dan antioksidan.
Senyawa aktif yang paling banyak ditemukan pada tumbuhan pidada adalah senyawa steroid  yaitu  terdapat  disemua  bagian tumbuhan  pidada.  Senyawa  aktif  saponin terdapat pada semua bagian kecuali bagian batang  sedangkan  senyawa  quinon  terdapat pada  akar  dan  kulit  pidada.  Sedangkan senyawa aktif paling sedikit ditemukan adalah senyawa  alkaloid  dan  flavanoid  yaitu  hanya terdapat  pada  akar  untuk  alkaloid  dan  kulit pada  flavanoid.  Kadar  senyawa  metabolik sekunder ekstrak metanol kulit buah mangrove pidada  di  identifikasikan  sebagai  senyawa golongan alkaloid dalam bentuk bubuk kristal putih  kulit  buah  mangrove  pidada  dalam senyawa  murni  [3].  Senyawa  metabolit sekunder  yang  terdapat  dalam  ekstrak  etil asetat  kulit  batang  mangrove  pidada (Sonneratia  Caseolaris) adalah  senyawa turunan flavanoid [4].
Penelitian  yang  dilakukan  sebelumnya  daun pidada  mengandung  senyawa  metabolit sekunder  seperti  alkaloid,  flavanoid,  fenolik dan tanin yang berperan sebagai antibakteri, ekstrak  daun  pidada  dapat  mengambat pertumbuhan  dari  bakteri Salmonella  sp . Ekstrak etanol daun pidada dapat menghambat  dari  pertumbuhan  bakteri Profionibacterium  acnes dan Staphylococcus epidermis pada  konsentrasi  15%,  25%,  50%, dan 75% dengan menghasilkan zona hambat pada bakteri Profionibacterium acnes berturut- turut  3,3%,  4,43%,  6,48%  dan  8,45% sedangkan  pada  bakteri Staphylococcus epidermis 11,08%,  12,27%,  15,38%  dan 16,78% [5].
Tanaman  mangrove  spesies  dari Sonneratia caseolaris ,  masyarakat  pada  umumnya menyebut dengan nama pohon perepat namun sering  juga  disebut  dengan  pidada  atau rambai  laut  tergantung  asal  daerah tumbuhnya. Tumbuhan ini banyak ditemukan di kalimantan  khususnya  kalimantan  selatan  dan
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-35 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
digunakan  pada  masyarakat  setempat sebagai  salep  untuk  luka  dan  untuk menghilangkan luka dari kulit yang digunakan adalah  bagian  daunya.  Telah  dibuktikan secara empiris daun rambai laut menyembuhkan berbagai penyakit seperti luka dan obat cacar [6].
Tanaman pidada sudah lama diketahui banyak memiliki banyak khasiat sebagai obat-obatan tradisional  namun  untuk  pemanfaatan  belum banyak diketahui oleh masyarakat luas. Oleh karena itu dilakukan penelitian “Pemanfaatan Senyawa  Metabolit  Sekunder  Dari  Ekstrak Etanol 96% Daun Pidada ( Sonneratia caseolaris L )  Sebagai  Antibakteri  Terhadap  Bakteri Bacillus subtilis Dan Pseudomonas aeruginosa”.

## METODE
Jenis dari penelitian ini merupakan penelitian real  eksperimental  laboratories .  Ekstraksi  yang dilakukan  menggunakan  pelarut  etanol  96%. Pada  uji  metabolit  sekunder  dilakukan  uji senyawa alkaloid, flavanoid, saponin dan tanin lalu dilakukan uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri  gram  postif  yaitu Bacillus  cereus dan bakteri  gram  negatif  yaitu Pseudomonas aeruginosa terhadap  ekstrak  daun  pidada (Sonneratia  caseolaris  L) dengan  konsentrasi 80%;  60%;  40%;  dan  20%,  ciprofloxacin sebagai  kontrol  positif  dan  akuades  sebagai kontrol  negatif.  Penelitian  ini  menggunakan metode difusi dengan metode sumuran. Sampel yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah daun pidada (Sonneratia caseolaris L) . Sampel diambil di Kecamatan Pelangiran, Kebupaten Indragiri Hilir, Riau.
Pembuatan Simplisia Tanaman yang digunakan pada penelitian ini adalah daun pidada. Dilakukan sortasi basah untuk  pembersihan  dari  kotoran  yang menempel pada daun yang diambil misalnya tanah,  kerikir  atau  pengotor  lainya  lalu  cuci dengan air bersih yang mengalir sebanyak 2 hingga 3 kali kemudian dirajang dan dipotong kecil-kecil untuk mempercepat proses pengeringan  atau  penghalusan.  Selanjutnya
keringkan dengan cara diangin-anginkan, lalu dilakukan  sortasi  kering  yakni  memisahkan kotoran,  bahan  organik  asing,  dan  sebagian simplisia yang rusak akibat proses sebelumnya kemudian  dihaluskan  dengan  menggunakan diblender hingga diperoleh serbuk, setelah itu diayak menggunakan ayakan nomor 40 mesh [7].

## Pembuatan Ekstrak
Sebanyak  750-gram  sampel  daun  pidada ditimbang  lalu  dilakukan  ekstraksi  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96% dengan perbandingan sampel dan pelarut 1:4. Maserasi dilakukan selama 3 x 24 jam dengan 3  kali  pengulangan  dan  setiap  pengulangan dilakukan  penyaringan  untuk  memisahkan ekstrak  etanol  dengan  residunya.  Ekstrak etanol  yang  dihasilkan  digabung  lalu dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator. Selanjutkan  dilakukan  Uji  Senyawa  Metabolit sekunder  antara  lain:  Uji  senyawa  Alkaloid, Flavonoid, Saponin dan Tanin.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pada  uji  ini  dilakukan  menggunakan  metode sumuran dengan cara suspensi bakteri uji yang telah  disetarakan  dengan  larutan  standar Mc.Farland  lalu  diinokulasi  pada  media  MHA yang  sudah  memadat  menggunakan  cotton bad yang sebelumnya sudah dicelupkan pada suspensi bakteri dan goreskan secara zig-zag lalu  diamkan  hingga  suspensi  terserap  ke dalam  media.  Sumuran  pada  media  MHA dibuat menggunakan cork borer berdiameter 6 mm,  lalu  tiap  larutan  kontrol  positif,  kontrol negatif  dan  ekstrak  etanol  daun  pidada dengan  berbagai  konsentrasi  dimasukan sebanyak  150 μ l  kedalam  masing-masing sumuran yang telah dibuat menggunakan mikro pipet.  Lubang  sumuran  diberi  lebel  sesuai dengan isi larutanya, lalu inkubasi selama 24 jam  dengan  suhu  37 o C.  Amati  zona  hambat dan ukur menggunakan jangka sorong [8].

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji Skrining Fitokimia
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-35 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Ekstrak  etanol  daun  pidada (Sonneratia caseolaris Engl ) dilakukan identifikasi senyawa dengan  melakukan  uji  skrining  fitokimia didapatkan  hasil  positif  flavanoid,  fenolik, saponin,  tanin  dan  steroid  hasil  dapat  dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji skrining fitokimia ekstrak etanol daun pidada (Sonneratia   caseolaris Engl )
Dari  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol daun  pidada (Sonneratia  caseolaris Engl ) terhadap  bakteri Bacillus  subtilis dan Pseudomonas  aeruginosa didapatkan  hasil diameter  zona  hambat  pada  tiap  perlakuan dan  pengulangan 1, 2, 3 hasil dapat dilihat pada tabel 2 dan 3.
Tabel 2. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak daun pidada ( Sonneratia caseolaris Engl) terhadap bakteri Bacillus subtilis
Tabel 3. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak daun pidada ( Sonneratia caseolaris Engl) terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa Uji Fitokimia Pereaksi Pengamatan Hasil Alkaloid : a. Mayer b. Wagner c. Dragendrof HCl + 9 mL akuades + Mayer HCl + 9 mL akuades + Wagner HCl + 9 mL akuades + Dragendr of Tidak terbentuk endapan putih Tidak terbentuk endapan coklat Terbentuk endapan jingga (-) (-) (+) Flavonoid Etanol + HCl P + Mg Merah kecoklatan (+) Fenolik FeCl 3 Hitam pekat (+) Saponin Air panas + HCl Terbentuk buih setinggi 2 cm selama 10 menit tidak hilang setelah penambahan HCl (+) Tanin Air panas + FeCl 3 Hijau kehitaman (+) Steroid CH 3 COOH +H 2 SO 4 Hijau (+)
Perlaku an Diameter Zona Hambat (mm) Mean±SD Kate gori Ham bat P1 P2 P3
80 % 19, 1 19,1 19, 2 19,13±0,05  Kuat 60% 17, 2 17,25 17, 1 17,18±0,07  Kuat 40% 14, 05 13,4 14, 15 13,86±0,40  Kuat 20% 11, 05 11 11, 05 11,03±0,02  Kuat K (+) 32, 1 32,2 32, 2 32,16±0,05 San gat kuat K (-) 0 0 0 0±0 Tida k ada Perlakuan Diameter Zona Hambat (mm) Mean ±SD Kateg ori Ham bat P1 P2 P3 80 % 17,1 17,3 17, 15 17,18 ±0,1 0 Kuat 60% 14,15 14,15 14, 1 14,13 ±0,0 2 Kuat 40% 11,1 11,2 11, 1 11,13 ±0,0 5 Kuat 20% 8,3 9,1 9,2 5 8,88 ±0,5 1 Seda ng K (+) 34,1 34,1 34 34,06 ±0,5 Sang at kuat K (-) 0 0 0 0±0 Tidak ada
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-35 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun pidada (Sonneratia  caseolaris Engl ) terhadap bakteri Bacillus  subtilis dan Pseudomonas aeruginosa. Pada penelitian ini digunakan daun tanaman  pidada (Sonneratia  caseolaris Engl ) yang  diambil  di  Kecamatan  Pelangiran, Kabupaten  Indragiri  Hilir,  Riau.  Determinasi tanaman  yang  dilakukan  di  Laboratorium Botani  Jurusan  Biologi  Fakultas  Matematika dan    Ilmu  Pengetahuan  Alam  (FMIPA) Universitas  Riau  menunjukan  bahwa  tanaman pidada  termasuk  familia Lythraceae dengan spesies Sonneratia caseolaris Engl, determinasi ini  dilakukan  untuk  mengetahui  kebenaran identitas  dari  tanaman  sehingga  menghindari kesalahan  dalam  pengumpulan  bahan  baku penelitian.
Tahap awal pengerjaan adalah mengumpulkan  daun  pidada  untuk  dibuat simplisia, kriteria daun yang dipilih ialah dari pohon yang besar, daun tua, berwarna hijau, segar,  tidak  rusak  dan  diambil  satu-persatu pada  sore  hari  sebanyak  2500  gram. Kemudian sampel disortasi basah dan dicuci 2 hingga 3 kali dengan air bersih yang mengalir untuk memisahan dari kotoran yang menempel pada  daun  yang  digunakan  seperti  tanah, kerikil atau pengotor lainya. Lalu dirajang dan dipotong kecil-kecil bertujuan untuk mempercepat  proses  pengeringan  dan penghalusan.
Selanjutnya  daun  yang  sudah  dirajang kemudian  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan  lalu  dilakukan  sortasi  kering  untuk memisahkan kotoran, bahan organik asing dan simplisia yang rusak akibat proses sebelumnya. Lalu  haluskan  menggunakan  blender  dan diayak  dengan  ayakan  nomor  40  mesh, bertujuan untuk memperluas permukaan bahan baku  sehingga  proses  ekstraksi  lebih  optimal dan lebih banyak senyawa yang tersaring dari simplisia.
Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  pidada dilakukan dengan metode maserasi. Maserasi dipilih  karena  teknik  pengerjaan  yang
sederhana  serta  metode  ini  tidak  merusak senyawa metabolit sekunder yang tidak tahan terhadap  pemanasan,  langkah  pertama simplisia  daun  pidada (Sonneratia  caseolaris Engl) ditimbang dan diekstraksi sebanyak 750 gram dengan perbandingan 1:4 menggunakan pelarut etanol 96%. Pelarut ini dipilih karena merupakan  pelarut  yang  bersifat  umum  dan polar,  selain  itu  dipilih  karena  tidak  toksik, selektif, absorbansinya yang baik. Lalu tiap 24 jam  selama  perendaman  sampel  sesekali diaduk  untuk  membantu  mempercepat  difusi zat  dari  sampel  ke  dalam  pelarut  dan  untuk mengurangi  kejenuhan  pelarut  terhadap sampel.
Kemudian dilakukan proses penyaringan untuk memisahkan maserat dengan residunya pada tiap  pengulangan.  Selanjutnya  maserat  yang dihasilkan  dipekatkan  menggunakan rotary evaporator dengan suhu 50 0 C yang bertujuan untuk memisahkan pelarut yang masih berada di  dalam  ekstrak  sehingga  dihasilkan  ekstrak kental yang diinginkan dan diperoleh ekstrak kental  sebanyak  143,48  gram  dengan rendemen  ekstrak  19,13%.  Menurut  Wijaya (2018)  Semakin  tinggi  nilai  rendemen  maka semakin banyak ekstrak yang dihasilkan [9]. Selanjutnya  dilakukan  uji  skrining  fitokimia yang merupakan tahap awal untuk mengidentifikasi  kandungan  senyawa  ekstrak etanol  daun  pidada  dan  didapatkan  hasil yaitu  ekstrak  etanol  daun  pidada  positif mengandung  senyawa  flavanoid  dengan terbentuknya warna merah kecoklatan, fenolik terbentuk  warna  hitam  pekat,  saponin terbentuk buih setinggi 2 cm selama 10 menit, tanin  terbentuk  warna  hijau  kehitaman  dan steroid  terbentuk  warna  hijau.  Hasil  ini berbeda  dengan  penelitian  yang  dilakukan Fitriani & Nashihah 2021 yang mendapatkan hasil  ekstrak  etanol  daun  pidada  positif mengandung senyawa flavanoid, fenolik, tanin, saponin  dan  triterpenoid.  Perbedaan  hasil yang  didapat  pada  pengujian  ini  adalah positif mengandung senyawa steroid sedangkan  penelitian  sebelumnya  positif
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-35 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
mengandung senyawa
triterpenoid, perbedaan  ini  bisa  saja  disebabkan  oleh daerah  tempat  tumbuh  tanaman  yang berbeda [7].
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  untuk mengetahui aktivitas antibakteri  ekstrak etanol daun pidada terhadap bakteri Bacillus subtilis dan Pseudomonas  aeruginosa Kemudian dilanjutkan  dengan  uji  aktivitas  antibakteri ekstrak  etanol  daun  pidada (Sonneratia caseolaris Engl)  dengan  berbagai  konsentrasi yaitu  80%,  60%,  40%,  20%,  konsentrasi  ini dipilih  untuk  memvariasi  dan  membandingkan dengan konsentrasi dari penelitian sebelumnya dimana  konsentrasi  yang  digunakan  yaitu 15%,  25%,  50%  dan  75%.  Penelitian  ini menggunakan  konsentrasi  sedikit  lebih  tinggi dari penelitian tersebut untuk melihat apakah hasil  hambatanya  lebih  efektif.  Selanjutnya dilarutkan  menggunakan  DMSO (Dimetil sulfoksida) karena mampu melarutkan senyawa yang bersifat polar maupun non polar seperti ekstrak  tanaman  yang  sulit  larut  dalam  air. Selain  itu  DMSO  tidak  memberikan  daya hambat  pertumbuhan  bakteri  sehingga  tidak mengganggu  hasil  pengamatan  pengujian antibakteri .
Larutan  konsentrasi  yang  telah  dibuat digunakan pada pengujian aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  pidada (Sonneratia  caseolaris Engl)  terhadap  bakteri Bacillus  subtilis dan Pseudomonas  aeruginosa. Bakteri Bacillus subtilis dipilih sebagai bakteri uji karena bakteri ini mampu menginfeksi pada saluran  pencernaan  dan  masih  sering  terjadi pada masyarakat diakibatkan terkontaminasi dari makanan yang kurang bersih. Sedangkan untuk bakteri Pseudomonas aeruginosa merupakan  salah  satu  penyebab  infeksi nosokomial  berbahaya  yang  ditemui  pada kasus di rumah sakit serta dua bakteri ini belum pernah diuji pada penelitian antibakteri daun pidada.
Selanjutnya  pembuatan  media  yang  akan digunakan  sebagai  media  pengujian.  Media yang  digunakan  adalah  media  NA (Nutrient
Agar), karena  media  ini  merupakan  media universal  yang  sering  digunakan  dalam mengembangbiakan  dan  sebagai  media tumbuh  bakteri.  Mikroba  uji  diremajakan terlebih  dahulu  selama  24  jam  dalam inkubator,  setelah  bakteri  dipastikan  tumbuh dilanjutkan  dengan  pembuatan  suspensi bakteri  dalam  larutan  NaCl  fisiologis  karena menyerupai cairan di dalam tubuh  dan untuk menjaga keseimbangan ion dari mikroba [10]. Suspensi  yang  telah  dibuat  disetarakan kekeruhanya  dengan  larutan  Mc.Farland, penyerataan  dengan  larutan  Mc.Farland bertujuan  untuk  mempermudah  perhitungan bakteri satu persatu dan untuk memperkirakan kepadatan sel bakteri yang digunakan pada proses pengujian antimikroba [11].
Setelah  suspensi  bakteri  dipastikan  mencapai standar kekeruhan yang sama dengan larutan Mc.Farland , kemudian suspensi bakteri tersebut digoreskan  pada  permukaan  media  diamkan hingga menyerap. Dilanjutkan dengan membuat sumuran dengan menggunakan cork borer dengan diameter 6 mm dibuat sebanyak 6  sumuran,  lalu  tiap  larutan  konsentrasi  80%, 60%,  40%,  20%,  ciprofloxacin  yang digunakan  sebagai  kontrol  positif  (+)  dan DMSO  sebagai  kontrol  negatif  (-)  dimasukan sebanyak  20 µ l  kedalam  masing-masing sumuran  yang  telah  dibuat  menggunakan mikropipet. Penelitian ini menggunakan metode sumuran karena lebih mudah dalam mengukur zona  hambat  yang  terbentuk,  hal  ini disebabkan  karena  isolat  tidak  hanya beraktivitas  dipermukaan  media  agar  tetapi juga sampai ke bawah media agar sehingga daya  hambat  bakteri  lebih  kuat  dan  tampak lebih jelas.
Pada  penelitian  ini  menggunakan  antibiotik ciprofloxacin sebagai kontrol positif. Mekanisme  kerja  ciprofloxacin  menghambat dari  sintesa  protein  dan  asam  nukleat  pada bakteri, antibiotik ini efektif  terhadap infeksi saluran  kemih  [12].  Antibiotik  ini  golongan kedua  dari  flurokuinolon,  termasuk  antibiotik yang berspektrum luas yaitu memiliki aktivitas
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-35 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
sedang  hingga  baik  terhadap  bakteri  gram positif dan beraktivitas sangat baik terhadap bakteri gram  negatif.
Media  yang  telah  diinkubasi  kemudian dilakukan pengamatan terhadap zona hambat atau  zona  bening  yang  merupakan  petunjuk kepekaan  terhadap  bahan  antibakteri  yang digunakan sebagai bahan uji dan dinyatakan dengan  diameter  zona  hambat.  Pengukuran zona  hambat  dari  tepi  sumur  ke  batas lingkaran zona hambat dengan menggunakan jangka sorong dengan ketelitian 0,05 mm. Tiap zona  hambat  dikategorikan  berdasarkan penggolongan pada kekuatan daya antibakterinya  [13].  kategori  penggolongan zona  hambat  menurut  [14],  dikelompokan menjadi  4  kategori  yaitu:  aktivitas  lemah (Diameter  zona  hambat ≤ 5  mm),  sedang (Diameter  5-10  mm),  kuat  (Diameter  11-20 mm) dan sangat kuat (Diameter ≥ 20 mm). Hasil pengujian antibakteri ekstrak etanol daun pidada  lalu  dilakukan  pengukuran  dan perhitungan  didapatkan  hasil  rata-rata diameter  zona  hambat  terhadap  bakteri Bacillus  subtilis pada  pengulangan  1,2  dan  3 konsentrasi  yaitu  80%  sebesar  19,13  mm, konsentrasi  60%  sebesar  17,18  mm, konsentrasi  40%  sebesar  13,86  mm  dan konsentrasi  20%  sebesar  11,03  mm  dengan rata  rata  zona  hambat  kontrol  positif  (+) sebesar  32,16  mm  dan  kontrol  negatif  (-) sebesar 0 mm.
Selanjutnya  hasil  rata-rata  diameter  zona hambat pada bakteri Pseudomonas aeruginosa pada pengulangan 1,2 dan 3 konsentrasi 80% sebesar  17,18  mm,  konsentrasi  60%  sebesar 14,13 mm, konsentrasi 40% sebesar 11,13 mm dan konsentrasi 20% sebesar 8.88 mm dengan rata-rata diameter zona hambat kontrol positif (+)  sebesar  34,06  mm  dan  kontrol  negatif sebesar  0  mm.Terjadi  perbedaan  diameter zona  hambat  pada  tiap  konsentrasi,  karena semakin besar suatu konsentrasi maka semakin besar  komponen  zat  aktif  yang  terkandung didalamnya [15].
Berdasarkan penelitian ini, ekstrak etanol daun pidada ( Sonneratia caseolaris Engl) menunjukan adanya  daya  hambat  terhadap  bakteri Bacillus  subtilis dan Pseudomonas  aeruginosa dengan  rata-rata  diameter  zona  hambat terbesar  pengujian  pada  konsentrasi  80% yaitu  19,13  mm  terhadap  bakteri Bacillus subtilis dengan  kategori    daya  hambat  kuat, diikuti  dengan  konsentrasi  80%  yaitu  17,18 mm terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dengan kategori daya hambat kuat. Aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun pidada  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri  karena  adanya  kandungan  senyawa metabolit  sekunder  seperti  flavanoid,  fenolik, saponin,  tanin  dan  steroid.  Senyawa  inilah yang memiliki peran penting dalam kemampuan  sebagai  antibakteri.  Mekanisme kerja  flavanoid  sebagai  antibakteri  yaitu dengan  cara  membentuk  senyawa  kompleks terhadap protein ekstraseluler yang mengganggu  keutuhan  membran    sel  bakteri. Mekanisme kerjanya dengan cara mendenaturasi protein sel bakteri dan merusak membran sel tanpa dapat diperbaiki lagi [16].
Mekanisme  kerja  fenolik  dalam  membunuh mikroorganisme yaitu dengan cara mendenaturasi  protein  sel.  Ikatan  hidrogen yang terbentuk antara fenol dan protein akan mengakibatkan struktur protein menjadi rusak. Ikatan hidrogen tersebut dapat mempengaruhi permeabilitas  dinding  sel  dan  membran sitoplasma  karena  keduanya  tersusun  atas protein.  Permeabilitas  dinding  sel  dan membran  sitoplasma  yang  terganggu  dapat menyebabkan ketidakseimbangan makromolekul  serta  ion  dalam  sel,  sehingga akan terjadi lisis pada sel [17].
Mekanisme kerja saponin sebagai antibakteri yaitu dapat menyebabkan kebocoran protein serta enzim dari dalam sel [18]. Saponin dapat menjadi  antibakteri  karena  zat  aktif permukaannya  mirip  dengan  detergen, akibatnya saponin akan menurunkan tegangan permukaan  dinding  sel  bakteri  dan  merusak permeabilitas  membran.  Rusaknya  membran
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-35 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
sel ini akan mengganggu kelangsungan hidup bakteri  [19].  Saponin  berdifusi  melalui membran  luar  dan  dinding  sel  yang  rentan kemudian  mengikat  membran  sitoplasma sehingga  mengganggu  dan  mengurangi kestabilan membran sel. Hal ini menyebabkan sitoplasma bocor dan keluar dari sel kemudian mengakibatkan kematian sel. Agen antimikroba  yang  mengganggu  membran sitoplasma bersifat bakterisida [20]. Mekanisme  kerja  tanin  sebagai  antibakteri yaitu dapat mengerutkan dinding sel sehingga mengganggu  permeabilitas  dinding  sel  yang akibatnya  menghambat  pertumbuhan  bakteri atau  bahkan  hingga  bakteri  tersebut  mati. Selain  itu  diduga  dapat  bekerja  dengan mengadakan  komplek  hidrofobik  dengan protein,  menginaktivasi  enzim  dan  protein transport  dinding  sel,  sehingga  mengganggu pertumbuhan bakteri [21].
Serta  mekanisme  kerja  steroid  sebagai antibakteri  berhubungan  dengan  membran lipid  serta  sensitivitas  terhadap  komponen steroid yang akan mengakibatkan kebocoran pada liposom [18]. Steroid dapat berinteraksi dengan  membran  fosfolipid  sel  yang  bersifat permeable terhadap senyawa-senyawa lipofilik  sehingga  menyebabkan  integritas membran  akan  menurun  dan  morfologi membran  sel  berubah  yang  menyebabkan kerapuhan dan lisis pada sel [22].

## SIMPULAN
Adapun simpulan dari penelitian ini yaitu: 1. Ekstrak  etanol  daun  pidada  ( Sonneratia caseolaris Engl)  mengandung  senyawa metabolit  sekunder  flavanoid,  fenolik, saponin, tanin dan steroid.
2. Ekstrak  etanol  daun  pidada  ( Sonneratia caseolaris Engl)  memiliki  daya  hambat terhadap  bakteri Bacillus  subtilis dan Psedomonas  aeruginosa pada  konsentrasi 80%  yaitu bakteri Bacillus subtilis sebesar 19,13  mm  dengan  kategori  daya  hambat sedang dan bakteri Pseudomonas
aeruginosa sebesar  17,18  mm  dengan kategori daya hambat sedang.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Faradina  AS,  Mastra  N,  Karta  IW.  Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Akar Encok (Plumbago zeylanica L .) Terhadap Pertumbuhan  Pseudomonas  aeruginosa Secara In Vitro. Jurnal Analisis Kesehatan Poltekkes Denpasar . 2019; vol. 7, no. 2, pp. 110–118. [2] Srinengri  L,  Arryati  H,  Yuniarti. Identifikasi Kandungan Fitokimia Tumbuhan Pidada (Sonneratia caseolaris) dari  Hutan  Mangrove. Jurnal  Sylva Scienteae. 2019; vol. 2, no. 4: pp. 605-
611.
[3] Mutiara R, Djangi MJ, Herawati N.  Isolasi dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Senyawa Metabolit Sekunder Ekstrak Metanol Kulit Buah  Mangrove  Pidada (Sonneratia caseolaris )  Isolation  and  Antioxidant Activity  Test  of  Secondary  Metabolites Compound Methanol Extract of
Mangrove  Pidada  Rind  ’  s  ( sonneratia caseolaris ). Jurnal  Chemica .  2016;  vol. 17, pp. 52–62.
[4] Hasmila  I,  Natsir  H,  Soekamto  NH. Phytochemical  analysis  and  antioxidant activity  of  soursop  leaf  extract  ( Annona muricata Linn .). Journal of Physics . 2019; vol. 13, pp. 1-6.
[5] Fitriani T, Nashihah S. Uji Daya Hambat Ekstrak Etanol Daun Rambai (Sonneratia caseolaris  (L)  Engl) terhadap  Bakteri Propionibacterium acnes dan Staphylococcus epidermidis . Jurnal Farmasi Indonesia . 2021; vol. 13, no. 1, pp. 40-53.
[6] Syamsul  ES,  Supomo  JS.  Karakterisasi Simplisia  dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  dan  Fraksi  Daun  Pidada  Merah (Sonneratia caseolaris L). Kovalen: Jurnal Riset Kimia . 2020; vol. 6, no. 3, pp.184- 90.
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-35 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
[7] Fitriani T, Nashihah S. Uji Daya Hambat Ekstrak Etanol Daun Rambai (Sonneratia caseolaris  (L)  Engl) terhadap  Bakteri Propionibacterium acnes dan Staphylococcus epidermidis . Jurnal Farmasi Indonesia . 2021; vol. 13, no. 1, pp. 40-53.
[8] Winastri  NLAP,  Muliasari  H,  Hidayati  E. Aktivitas  Antibakteri  Air  Perasan  dan Rebusan Daun Calincing (Oxalis cornicaluta  L.) terhadap Streptococcus mutans . Jurnal Ilmu-Ilmu Hayati .2020; vol. 19, no. 2, pp.127-244.
[9] Wijaya, H., Novitasari, J. S., & Jubaidah, S.  Perbandingan  metode  ekstraksi terhadap rendemen ekstrak daun rambai laut (Sonneratia caseolaris L. Engl). Jurnal Ilmiah Manuntung, 2018; vol. 4, no. 1, pp. 79-83. https://doi.org/10.51352/jim.v4i1.148 . [10] Adrianto  Rizki.  Pemantauan  Jumlah Bakteri  Coliform  Di  Perairan  Sungai Provinsi  Lampung.  Majalah  Teknologi Agro Industri, 2018; vol. 10, no. 1, pp. 1– 6.
[11] Sutton,  S.  Penentuan  Inokulum  Untuk Pengujian  Mikrobiologi. Jurnal  Ilmiah ,
2011; vol. 15, no. 3, pp. 49-53.
[12] Ningsih,  N.  K.  S.  S.,  &  Setyawati,  T. Perbandingan Efektivitas Antibiotik (Ciprofloxacin,  Cefotaxime,  Ampicilin, Ceftazidime Dan Meropenem) Terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus Penyebab Ulkus  Diabetik  Dengan  Menggunakan Metode  Kiirby-Bauer. Jurnal  Ilmiah
Kedoktera n, 2016; vol. 3, no. 2, pp. 40– 50.
[13] Nurhamidin,  A.  P.  R.,  Fatmawali  and
Antasionasti,  I.  Uji  Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak  N-Heksan  Biji  Buah  Langsat (Lansium  domesticum  Corr)  Terhadap Bakteri  Staphylococus  aureus  Dan Klebsiella  pneumoniae’, Pharmacon ,
2021; vol. 10, no. 1, pp. 748–755.
[14] Davis,  W.W.,  dan  Stout,  T.R.  Disc  Plate Method  of  Microbiological  Antibiotic
Assay. Applied Microbiology , 1971; vol.
22, no. 1, pp. 659-665.
[15] Khasanah,  I.  A.,  &  Sarwiyono,  S.  P.
Ekstrak  Etanol  Daun  Kersen  ( Muntingia calabura L .) Sebagai Antibakteri terhadap Streptococcus agalactiae Penyebab  Mastitis  Subklinis  pada  Sapi Perah. Jurnal  Ternak  Tropika , 2014;  vol. 15, no. 2, pp. 7-14.
[16] Juliantina,  F.,  Citra,  D.  A.,  Nirwani,  B., Nurmasitoh,  T.,  &  Bowo,  E.  T.  Manfaat sirih  merah (Piper  crocatum) sebagai agen  anti  bakterial  terhadap  bakteri gram  positif  dan  bakteri  gram negatif. Jurnal kedokteran dan kesehatan indonesia , 2009; vol. 1, no. 1, pp. 12-20.
[17] Pelczar,  M.  J.,  &  Chan,  E.  C.  S.  (2010). Dasar–Dasar  Mikrobiologi ,  Jilid  1, Penerjemah: Hadioetomo, RS.
[18] Madduluri, S., Rao, K. B., & Sitaram, B. In vitro  evaluation  of  antibacterial  activity of five indigenous plants extract against five bacterial pathogens of
human. International Journal of Pharmacy and  Pharmaceutical  Sciences , 2013;  vol.
5, no. 4, pp. 679-684.
[19] Harborne, J.B. Metode Fitokimia. Edisi 2. Bandung: ITB. 2006.
[20] Cavalieri, S.J., I.D. Rankin., R.J. Harbeck., R.S. Sautter., Y.S. McCarter., S.E. Sharp., J.H. Ortez., dan C.A. Spiegel. Manual of Antimicrobial Susceptibility Testing. American Society for Microbiology, USA. 2005. [21] Hashem,  F.M.,  El-Kiey,  M.A.  Nigella Sativa  seeds  of  Egypt,  Journal  of Pharmaceutical  Sciences,  2002;  vol.  3, no.  1,pp. 121-33. [22] Ahmed, B. Chemistry of Natural Products. New Delhi: Department of Pharmaceutical  Chemistry  Faculty  of Science Jamia Hamdard. 2007.