## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN KECOMBRANG Etlingera elatior (Jack) R.M.Sm TERHADAP Salmonella typhi
Submitted : 23 Maret 2015 Edited : 10 Mei 2015 Accepted : 20 Mei 2015
Eko Kusumawati 1 , Risa Supriningrum 2 , & Reza Rozadi 2
1 Program Studi Biologi FMIPA Universitas Mulawarman Samarinda
2 Akademi Farmasi Samarinda E-mail : ike_dara@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Research  Test  Antibacterial  Activity  of  Ethanol  Extracts  of  Leaves kecombrang  against  Salmonella typhi aims to determine the antibacterial activity of ethanol extract of leaves kecombrang against Salmonella typhi.  The  extract  used  is  kecombrang  leaf  extract  prepared  by  maceration  using  ethanol  95%,  extracts obtained test chemical classes of compounds to determine the content of the active compound. Antibacterial activity test conducted at five concentrations of the extract is 20%, 40%, 60%, 80%, and 100%. Inhibition zone  measurement  results  are  then  analyzed  using  One  Way ANOVA  with  SPSS  20  to  determine  whether there is a difference at each concentration. The results showed kecombrang leaf ethanol extract 20%, 40%, 60%, 80%, and 100% produce inhibition zone diameter 3.9 mm; 6.5 mm; 6.75 mm; 7:45 mm; and 9:28 mm, 0 mm for the negative control and positive control 32.61 mm. The test results show the class of secondary metabolites  kecombrang  leaf  ethanol  extract  contains  tannin,  saponin,  and  flavonoids.  Of  statistical  tests concluded  there  were  significant  differences  of  treatment  results  in  inhibition  of  the  respective concentrations of ethanol extracts of leaves kecombrang

## K eywords : kecombrang (Etlingera elatior), identification secondary metabolites, antibacterial

## PENDAHULUAN
Kecombrang  merupakan  salah satu  jenis rempah-rempah  yang  sejak  lama  dikenal  dan dimanfaatkan  oleh  manusia  sebagai  obat-obatan berkaitan  dengan  khasiatnya,  yaitu  sebagai penghilang  bau  badan  dan  bau  mulut 1 .  Bagian yang  biasa  digunakan  dari  tanaman  ini  adalah bunga,  daun  dan  batangnya.  Beberapa  penelitian menunjukkan bunga  dan  daun  kecombrang memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri gram  positif  maupun  gram  negatif 2 . Ningtyas 3 melakukan  penelitian  tentang  uji  antioksidan  dan antibakteri ekstrak air daun kecombrang (Etlingera elatior)  sebagai  pengawet  alami terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus. Dari  hasil penelitiannya  ekstrak air  daun kecombrang  memiliki  beberapa  senyawa  yang di asumsikan memiliki keterkaitan dengan kemampuan  antibakteri  dari  ekstrak  tersebut, yaitu  golongan  fenolik,  golongan  alkohol, golongan  monoterpen  dan  aromatik.  Konsentrasi yang digunakan yaitu, 20%, 40%, 60%, 80%, dan 100%.  Setelah  dilakukan  penelitian,  diketahui bahwa  ekstrak  air  daun  kecombrang  dapat
menghambat  bakteri E.  coli pada  konsentrasi 100% dan S. aureus pada konsentrasi 20%.
Bahan  antibakteri  diartikan  sebagai  bahan yang mengganggu pertumbuhan dan metabolisme bakteri, sehingga bahan tersebut dapat menghambat pertumbuhan atau bahkan membunuh  bakteri 4 .  Menurut  David  Stout, berdasarkan  cara  kerjanya  antibakteri  dibedakan menjadi dua yaitu bakteriostatik dan bakteriosida. Antibakteri  bakteriostatik  bekerja  menghambat perbanyakan populasi bakteri dan tidak mematikan, sedangkan bakteriosida bekerja membunuh bakteri. Bakteriostatik dapat bertindak sebagai  bakteriosida  dalam  konsentrasi  tinggi. Kadar minimal yang dibutuhkan untuk menghambat bakteri atau membunuhnya, masing- masing  dikenal  sebagai  Kadar  Hambat  Tumbuh Minimal  (KHTM)  dan  Kadar  Bunuh  Minimal (KBM).
Uji  antimikroba  adalah  diperolehnya  suatu sistem pengobatan yang efektif dan efisien dengan melibatkan  hasil  metabolism  sekunder  dari mikroorganisme. Dilakukan dengan berbagai cara. Salah  satunya  adalah  metode disc  diffusion (tes
Kirby  &  Bauer).  Metode  ini  digunakan  untuk menentukan  aktivitas  agen  mikroba.  Piringan yang berisi agen anti mikroba diletakkan di media Agar  yang  telah  ditanami  mikroorganisme  yang akan  berdifusi  pada  media  Agar  tersebut.  Area jernih mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh agen antimikroba pada permukaan media Agar.
Berdasarkan  uraian  di  atas,  dalam  rangka pengembangan  obat  tradisional  yang  memiliki aktivitas    antibakteri,  maka  peneliti  tertarik
melakukan  penelitian  tentang  uji  aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  etanol  daun  kecombrang (Etlingera  elation)dengan  menggunakan  bakteri uji Salmonella  typhi dengan  menggunakan  etanol 95% sebagai larutan penyari. Etanol dipertimbangkan  sebagai  penyari  karena  lebih selektif,  kapang  dan  kuman  sulit  tumbuh  dalam etanol  20%  ke  atas,  netral,  absorbsinya  baik,  dan panas  yang  diperlukan  untuk  pemekatan  lebih sedikit 5 .

## METODE PENELITIAN Objek Penelitian
Objek  penelitian  adalah  daun  kecombrang yang  akan  dibuat  dalam  bentuk  ekstrak  dengan konsentrasi  20  %,  40  %,  60  %,  80  %  dan  100% selanjutnya  diujikan  terhadap  bakteri Salmonella typhi menggunakan  media Mueller  Hinton  Agar (MHA).

## Sampel dan Teknik Sampling
Daun  kecombrang  diperoleh  dari daerah  Samarinda  Kelurahan  Air  Putih.  Daun kecombrang  dipanen  langsung  dari  pohon,  yang tumbuh  di  kelurahan  Air  Putih  Samarinda.  Panen dilakukan  pada  pagi  hari.  Daun  yang  digunakan adalah daun tua dan dipetik dari beberapa pohon.

## Prosedur Penelitian
Pembuatan  ekstrak  etanol  simplisia  daun kecombrang
Daun kecombrang dicuci bersih, ditiriskan, selanjutnya dikeringkan dengan cara di  angin-anginkan selama  1  minggu.  Setelah itu  dirajang  dan  dibuat  serbuk  dengan  cara diblender kemudian diayak dengan menggunakan  ayakan  mesh  40.  Pembuatan ekstrak etanol serbuk simplisia daun kecombrang  dilakukan  secara  remaserasi dengan  cara  menimbang  simplisia  serbukan daun kecombrang sebanyak 200 g. Selanjutnya dimasukkan  sampel  ke  dalam  toples  kaca, ditambahkan 1 L etanol 95% kemudian diaduk selama  6  jam  pertama  lalu  didiamkan  selama 24  jam. Disaring  ekstrak  yang  diperoleh menggunakan kertas saring. Ampas dimaserasi kembali  dengan  1  L  etanol  95%,  kemudian diaduk  selama 6 jam pertama, lalu didiamkan kembali  selama  24  jam.  Ekstrak  yang diperoleh  disaring  dengan  kertas  saring. Kemudian  ekstrak  yang  didapat  dipekatkan dengan  cara  diuapkan. Ekstrak  yang  telah dikentalkan  dimasukkan  ke  dalam  wadah  dan ditimbang.

## Uji golongan senyawa kimia
Identifikasi golongan  senyawa  kimia dilakukan  pada  ekstrak    dengan  prosedur sebagai berikut:
1. Uji alkaloid
10  mg  ekstrak  daun  kecombrang dimasukkan  ke  dalam  tabung  ditambahkan 1 ml HCl 2 N lalu ditambahkan air suling 9 ml.  Dipanaskan  selama  2  menit  setelah dipanaskan kemudian disaring
menggunakan kertas saring sehingga didapat  ekstrak  daun  kecombrang.  Diambil 3  tetes  dari  filtrate  yang  diperoleh  lalu ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Meyer menghasilkan endapan putih/kuning.
Selanjutnya,  diambil  3  tetes  filtrate  yang diperoleh, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat  menghasilkan  endapan  coklat- hitam. Diambil  3  tetes  filtrat,  lalu ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Dragendrof menghasilkan endapan merah bata. Alkaloid  dianggap  positif  jika  terjadi endapan  atau  paling  sedikit  2  atau  3  dari percobaan di atas 6 .
2. Uji tanin
10  mg  ekstrak  daun  kecombrang dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi ditambahkan  1  sampai  2  tetes  larutan Fe(Cl) 3 1%.  Bila  terbentuk  warna  biru  tua dan hijau kehitaman, menunjukkan  adanya tanin  atau  sepuluh  tetes  ekstrak  daun kecombrang  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi ditambahkan 1 sampai 2 tetes larutan gelatin.  Bila  timbul  endapan  menunjukkan adanya tanin.
3. Uji Flavonoid
10  mg  ekstrak  daun  kecombrang dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi ditambahkan  5  tetes  HCl pekat,  sedikit serbuk  Mg  dan  5  tetes  amil  alkohol kemudian  dikocok.  Bila  terbentuk  warna merah, jingga,  atau  kuning  menunjukkan adanya flavonoid.
4. Uji Saponin 10  mg  ekstrak  daun  kecombrang dimasukkan kedalam tabung ditambahkan 5 ml air panas dan dikocok selama 15 menit, lalu ditambahkan 1 sampai 2 tetes HCl 2 N. Jika terbentuk busa permanen menunjukkan adanya saponin 6 .

## Uji aktivitas antibakteri
Disiapkan  7  cawan  petri  yang  sudah disterilkan,  setelah  itu  dituang  media  MHA sebanyak  20  ml  ke  dalam  cawan  kemudian didiamkan  hingga  memadat.  Lalu  diusapkan suspensi Salmonella  typhi menggunakan cotton  swap kepermukaan  media  hingga merata.  Setelah  itu  diambil  kertas  cakram menggunakan pinset steril, dimasukkan kedalam  ekstrak  etanol  daun  kecombrang kosentrasi  20%,  40%,  60%,  80%,  dan  100% yang  sebelumnya  telah  dilarutkan  dengan larutan  DMSO  1%,  kemudian  diletakkan dipermukaan media dan masing-masing
konsentrasi  dibuat  3  kali  pengulangan  pada setiap  cawan.  Dilakukan  hal  yang  sama  pada perlakuan kontrol positif menggunakan larutan kloramfenikol  0,1%  dan  kontrol  negatif menggunakan  larutan  DMSO  1%.  Setelah  itu diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  24  jam. Diamati  dan  diukur  zona  hambat  yang terbentuk.

## Analisis Data
Data  hasil  penelitian  yang  diperoleh dianalisis  dengan  uji  Statistic  menggunakan SPSS  IBM  20.  Apabila  data  yang  diperoleh berdistribusi  normal,  maka  digunakan  One Way  ANOVA  dan  apabila  data  tidak berdistribusi  normal  maka  menggunakan Kruskal- Wallis  signifikansi  (α  =  5%).  Metode analisis  yang  digunakan  adalah  deskriptif, yaitu  data  berupa  zona  hambat  (mm)  dan golongan  senyawa  metabolit  sekunder  yang terkandung dalam daun kecombrang (Etlingera elatior (Jack) R.M.Sm).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi Daun Kecombrang
Sebanyak  200  g  serbuk  simplisia  disari menggunakan etanol 95%.
Ekstraksi dilakukan  dengan  metode  remaserasi,  dengan tujuan untuk mendapatkan zat aktif yang lebih banyak  dari  proses  ektraksi  tersebut.  Metode maserasi  atau  remaserasi  dipilih,  karena metode ini cara pengerjaannya sederhana dan mudah.  Selain  itu  faktor  kerusakan  zat  aktif lebih  kecil  karena  pada  metode  ini  tidak menggunakan  panas  yang  mungkin  dapat
merusak  zat  aktif  yang  ditarik.  Etanol  95% dipilih  karena  tidak  toksik  dan  senyawa flavonoid, saponin dan tanin dapat larut dalam pelarut  yang  polar  sehingga  senyawa  aktif yang  dapat  memberikan  aktivitas antibakteri dapt ditarik. Etanol tidak bersifat racun, tidak eksplosif  bila  bercampur  dengan  udara,  tidak korosif dan mudah diperoleh 7 . Uji Golongan Senyawa Kimia
Berdasarkan  uji  golongan  senyawa kimia, diperoleh hasil sebagai berikut:
Tabel 1. Hasil Uji golongan senyawa kimia Uji Pereaksi Hasil Pustaka Keterangan Alkaloid Meyer tidak ada endapan Endapan Putih _ Bouchardat Endapan coklat Endapan Coklat- Hitam + Dragendorf tidak ada endapan Endapan Merah Bata _ Tanin FeCl 3 1% Hijau Kehitaman Biru Tua atau Hijau Kehitaman + Flavonoid HCl Pekat + Mg, +  Amil Alkohol Kuning Merah, Kuning, Jingga + Saponin HCl 2N Berbuih Buih tidak hilang +
Dari  tabel  di  atas,  dapat  diketahui bahwa ekstrak  etanol daun kecombrang yang diperoleh peneliti mengandung tanin, flavonoid dan saponin. Berdasarkan literature untuk  uji  alkaloid, alkaloida dianggap positif
jika terjadi endapan  atau paling sedikit 2 atau 3  dari  percobaan  diatas.  Dalam  pengujiannya yang  lakukan,  hanya  1  pereaksi  saja  yang positif,  ini  dapat  dikatakan  ekstrak  daun kecombrang  yang  pratikkan  miliki  tidak
mengandung  alkaloid.  Pada  Uji  flavonoid, dalam  literatur  disebutkan  bahwa  flavonoid positif  jika  terjadi  warna  merah,  kuning,  dan jingga.  Berdasarkan  pengujian  yang  lakukan di  dapatkan  warna  kuning  jingga  dan  dapat disimpulkan bahwa ekstrak positif mengandung  flavonoid.  Untuk  uji  tanin  yang lakukan  didapatkan  hasil  yang  positif  atau mengandung  tanin,  ini  ditandai  dengan terbentuknya warna hijau kehitaman.
Berdasarkan  literatur,  jika  terjadi  warna  biru atau  hijau  kehitaman  menunjukkan  adanya tanin.  Secara  kimia  terdapat  dua  jenis  utama tanin  yang tersebar tidak  merata  dalam  dunia tumbuhan. Tanin terkondensasi hampir terdapat  semesta  di  dalam  paku-pakuan  dan gimnospermae,  serta  tersebar  luas  dalam angiospermae,  terutama  pada  jenis  tumbuhan berkayu. Sebaliknya, tanin yang terhidrolisiskan penyebarannya terbatas kepada tumbuhan berkeping dua 8 .
Jenis  tanin  yang  terkandung  di  dalam ekstrak etanol daun kecombrang adalah tanin- terkondensasi,  karena  jenis  tumbuhan  yang digunakan yaitu tumbuhan kecombrang bersub-divisi angiospermae. Kandungan senyawa  kimia  saponin  juga  terdapat  dalam ekstrak  etanol  daun kecombrang,  ini  ditandai dengan terbentuknya buih selama kurang dari 10  menit  dan  tidak  hilang  pada  penambahan asam  klorida  2N.  Dalam  literatur  disebutkan bahwa  apabila  buih  tidak  hilang  pada penambahan  1  tetes  asam  klorida  2N menunjukkan adanya saponin.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol daun  kecombrang  terhadap Salmonella  typhi dilakukan  dengan  metode disc  diffusion menggunakan  media  MHA  (Mueller  Hinton
Agar).  Aktivitas  antibakteri    tampak dengan terbentuknya  zona  hambat  di  sekitar  kertas cakram  yang  diukur  menggunakan  jangka sorong.  Pada  penelitian  ini  digunakan  media Mueller  Hinton  Agar,  karena  media  ini  telah direkomendasikan oleh FDA dan WHO untuk tes  antibakteri  terutama  bakteri  aerob dan facultative  anaerobic  bacteria  untuk  makanan dan  materi  klinis.  Media  agar  ini  juga  telah terbukti  memberikan  hasil  yang  baik  dan reproduksibel.  Dalam  penelitian  ini  peneliti menggunakan  metode disc  diffusion atau kertas  cakram  dikarenakan  bakteri  yang ditanam pada media dalam metode ini bersifat aerob  yaitu  tumbuhnya  bakteri  memerlukan oksigen  sehingga  bakteri  tersebut  tumbuh  di permukaan  media.  Metode disc  diffusion dilakukan dengan menggunakan piringan atau kertas  cakram  (Wathman  nomor  4)  yang berisi agen anti mikroba, diletakkan di media agar  yang  telah  ditanami  mikroorganisme yang akan berdifusi pada media agar tersebut. Area jernih mengindikasikan adanya hambatan  pertumbuhan  mikroorganisme  oleh agen  antimikroba  pada  permukaan  media agar 9 .
Kontrol positif  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah kloramfenikol. Kloramfenikol  dipilih  karena  berspektrum luas  yaitu  efektif  untuk  bakteri  gram  positif dan gram negatif serta mikroorganisme lain 10 . Mekanismenya  dengan  menghambat  sintesis protein,  mencegah ujung  aminoasil  t-RNA bergabung  dengan  peptidil  tranferase  (enzim yang  menghubungkan  asam  amino  dengan rantai peptide selama proses sintesis protein) 11 .  Pada  pengujian  antibakteri  ini diperoleh hasil yang disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat  ekstrak  etanol  daun  kecombrang  terhadap Salmonella typhi.
Konsentrasi Zona Hambat (mm) Rata-rata (mm) I II III Kontrol Negatif 0 0 0 0 20% 5.65 3.35 2.7 3.90 40% 7.1 6.75 5.65 6.50 60% 8.2 6.3 5.8 6.76 80% 8.85 7.85 7.3 7.45 100% 12.15 9 6.7 9.28 Kontrol Positif 32 33,8 32,05 32.61

## Gambar 1. Aktivitas antibakteri daun kecombrang terhadap bakteri Salmonella typhi
Keterangan : a = kontrol negatif
b = perlakuan dengan konsentrasi 20%
c = perlakuan dengan konsentrasi 40%
d = perlakuan dengan konsentrasi 60%
e = perlakuan dengan konsentrasi 80%
f = perlakuan dengan konsentrasi 100%
g = kontrol positif  =  kloramfenikol
Berdasarkan dari data  yang telah tersaji pada Tabel 2 dan Gambar 1 di atas untuk rata- rata  diameter  zona  hambat  terbesar  terletak pada konsentrasi 100%. Penentuan konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  kecombrang
sangat  berpengaruh  terhadap  terbentuknya zona  hambat  yang  dihasilkan.  Menurut Ningtyas 3 bahwa semakin tinggi  konsentrasi yang  digunakan  maka  semakin  tinggi  daya hambatnya,  hal  ini  dikarenakan  semakin
a b c d e f g
tinggi konsentrasi semakin banyak kandungan bahan aktif antibakterinya. Jenie dan Kuswanto 12 menyatakan  bahwa  keefektifan suatu  zat  antimikroba  dalam  menghambat pertumbuhan  tergantung  pada  sifat  mikroba uji,  konsentrasi  dan  lamanya  waktu  kontak, dan  sifat  biostatistik  dapat  meningkat  dengan semakin tingginya konsentrasi yang ditambahkan.
Menurut  tabel  David  Stout,  daya hambat  antibakteri  ekstrak  etanol  daun kecombrang pada konsentrasi 100% menghasilkan zona hambat sebesar  9.28 mm yang  masuk  dalam  kategori  antibakteri  kerja sedang.  Daya  antimikroba  ekstrak  daun kecombrang  ini  disebabkan  oleh  karena adanya  bahan-bahanaktif  yang  terkandung  di dalamnya  yang  berperan  utama dalam menghambat pertumbuhan maupun membunuh  bakteri Salmonella  typhi.  Bahan aktif  tersebut  diantaranya  adalah  saponin, flavonoid dan tanin.
Saponin adalah senyawa penurun tegangan permukaan yang kuat yang menimbulkan  busa  bila  dikocok  dalam  air. Sifat saponin menyerupai sabun (bahasa latin sapo  berarti  sabun).Saponin  bekerja  sebagai antimikroba  dengan  mengganggu stabilitas membran  sel  bakteri  sehingga  menyebabkan sel bakterilisis. Flavonoid berefek antimikroba melalui kemampuan untuk membentuk kompleks dengan protein
ekstraseluler  dan  protein yang  dapat  larut serta  dengan  dinding  sel  bakteri13.  Senyawa tanin merupakan senyawa metabolit sekunder yang  tergolong  senyawa  fenol  terkondensasi dan banyak terdapat pada tumbuhan Angiospermae.  Tanin  dalam  konsentrasi rendah  mampu  menghambat  pertumbuhan kuman maupun pada konsentrasi tinggi dapat bersifat  membunuh  bakteri.  Senyawa  fenolik bekerja  sebagai  antimikroba  dengan  cara mengkoagulasi atau menggumpalkan potoplasma  kuman  sehingga  terbentuk  ikatan yang  stabil  dengan  protein  kuman  dan  pada saluran  pencernaan,  tanin  diketahui  mampu mengeliminasi toksin14.
Data yang diperoleh dianalisis mengunakan  SPSS  IBM  20.  Terlebih  dahulu data  dianalisis  untuk  mengetahui  apakah berdistribusi  normal.  Pada  uji  One-Sampel Kolmogorov-Smirnov test menunjukan bahwa nilai D (Absolute) lebih besar dari 0,05 atau  signifikansi  lebih  besar  dari  0,05, ini menunjukkan  bahwa  data  yang  diperoleh peneliti  berdistribusi  normal.  Selanjutnya dilakukan analisis menggunakan uji One Way ANOVA. Berdasarkan Uji One Way ANOVA menunjukkan  bahwa  uji  tersebut  memiliki signifikansi kurang dari 0,05 dengan keputusan  yang berarti  terdapat  perbedaan bermakna  dari  hasil  perlakuan  pada  daya hambat  masing-masing  konsentrasi  ekstrak etanol daun Kecombrang.

## SIMPULAN
Dari hasil penelitian mengenai aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  kecombrang terhadap  bakteri Salmonella  typhidiperoleh
kesimpulan bahwa semakin besar konsentrasi ekstrak  etanol  kecombrang,  semakin  besar pula zona hambat yang dihasilkan.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Hidayat  dan  Hutapea.  1991. Inventaris  Tanaman  Obat  Indonesia. Balai  Penelitian  dan Pengembangan Departemen Kesehatan RI.
2. Hudaya,  Adeng.  2010. Uji  Antioksidan  dan  Antibakteri  Ekstrak  Air Bunga  Kecombrang  (Etlingera elatior)  Sebagai  Pangan  Fungsional  Terhadap  Staphylococus  aureus  dan  Eschericia  coli.  Skripsi. Jakarta: Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah.
3. Ningtyas, Rina. 2010. Uji Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Air Daun Kecombrang (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith). Skripsi. Jakarta: Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah.
4. Lathifah,  Qurrotua’yunin.  2008. Uji  Efektifitas  Ekstrak  Kasar  Senyawa  Antibakteri  Pada  Buah Belimbing  Wuluh (Averrhoabilimbi L.) Dengan  Variasi  Pelarut.  Skripsi.  Malang:  Universitas  Islam Negeri Malang.
5. Departemen Kesehatan RI. 1986. Sediaan Galenik. Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
6. Departemen  Kesehatan  RI.  1987. Analisis  Obat  Tradisional.  Jakarta:  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.
7. Handoko, T. 1995. Farmakologi dan Terapi. Edisi Empat. Jakarta: Gaya Baru.
8. Harbone, J.B. 1987. Metode Fitokimia. Bandung : Institut Teknologi Bandung.
9. Pratiwi., S. T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Erlangga.
10. Mycek, MJ. 2001. Farmakologi Ulasan Bergambar Edisi I.Jakarta.Widya Medika.
11. Olson. J. 2004. Belajar Mudah Farmakologi. Cetakan 1. EGC. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran.
12. Jenie,  B.S.L.  dan  Kuswanto.  1994.  Aktivitas  antimilcroba  dari  pigmen  angkak  yang  diproduksi  oleh Monasnrs  purpuracs terhadap  beberapa  milcroba  patogen  dan  perusak  makanan.Prosiding  Pertemuan Ilmiah Tahunan Permi.
13. Ardananurdin,  Alhamfaib.  2004.Uji  Efektivitas  Dkok  Bunga  Belimbing  Wuluh  (Averrhoa  bilimbi) Sebagai  Anttimikroba  Terhadap  Bakteri Salmonella  Typhi Secara  in vitro.  Jurnal  kedokteran.  FK Unibraw.
14. Hapsari, Lukyta Setyo. 2013. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Akar Rumput Belulang (Eluesine indicaGaerin). Samarinda.: Akademi Farmasi Samarinda.