Jurnal Agrotek  Tropika, Agustus  2023,  Vol  11,  No.  3,  pp.  365  -  374 DOI  :  http://dx.doi.org/10.23960/jat.v11i3.5783 ISSN:  2337-4993  (Print),  2620-3138  (Online)

## PENGARUH CENDAWAN ENDOFIT TANAMAN MAJA TERHADAP

## Colletotrichum acutatum PC3  PENYEBAB ANTRAKNOSA PADA CABAI MERAH IN VITRO
THE  EFFECT  OF  ENDOPHYTIC  FUNGI  OF  CALABASH  TREE AGAINST  Colletotrichum  acutatum PC3  CAUSING ANTHRACNOSE IN RED PEPPER IN VITRO
Noorkomala Sari* Jurusan Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Lambung Mangkurat, Kalimantan Selatan, Indonesia *Email: noorkomala.sari@ulm.ac.id
* Corresponding Author, Diterima: 24 Mar. 2022, Direvisi: 28 Mar. 2023, Disetujui: 30 Apr. 2023

## ABSTRACT
The use of biocontrol agents using endophytic fungi has been studying widely because of its ability to increase plant resistance to disease. This study to identified endophytic fungi from Calabash Tree leaves collected from the campus of Institut Teknologi Sepuluh Nopember and discovered its resisting capacity against Colletotrichum acutatum  causing  anthracnose  in  Red  Pepper,  by  in  vitro.  The  research  results  are  obtained  descriptive  and quantitative data. Descriptive data are collected from the isolation and the identification of endophytic fungi while  quantitative  data  is  the  percentage  of  inhibition.  The  endophytic  fungi  that  have  been  isolated  from Calabash Tree Leaves, there are Colletotrichum spp.; Rhizoctonia spp.; Sporidesmium sp.; Neonectria sp. and Mycelia sterilia. Percent inhibition of endophytic fungi against C. acutatum there are Neonectria sp. is 71.43%, Sporidesmium sp. is 68.67% and Binucleate Rhizoctonia sp. is 71.43%.
Keywords : Biocontrol agent, percent inhibition, plant diseases, plant resistant

## ABSTRAK
Pengunaan agen biokontrol menggunakan cendawan endofit telah banyak dilakukan karena kemampuannya dalam meningkatkan  ketahanan tanaman terhadap serangan  penyakit.  Penelitian ini  bertujuan untuk  mengidentifikasi cendawan endofit dari Tanaman Maja koleksi Kampus Institut Teknologi Sepuluh Nopember serta mengetahui kemampuan antagonismenya terhadap Colletotrichum acutatum penyebab penyakit antraknosa pada cabai merah secara in vitro . Hasil penelitian yang diperoleh adalah data deskriptif dan kuantitatif. Data deskriptif berupa hasil identifikasi cendawan endofit sedangkan data kuantitatif yaitu persen daya hambat. Cendawan endofit yang berhasil diidentifikasi dari Tanaman Maja adalah Colletotrichum spp.; Rhizoctonia spp.; Sporidesmium sp.; Neonectria sp.  dan  miselia  steril.  Persen  penghambatan  cendawan  endofit  Tanaman  Maja  terhadap C.  acutatum ,  dimana Neonectria sp. yaitu 71,43%, Sporidesmium sp. 68,67% dan Rhizoctonia sp. 71,43%.
Kata kunci :  Agen biokontrol, penyakit tanaman, ketahanan tanaman, persen hambat

## 1.  PENDAHULUAN
Antraknosa merupakan penyakit buah busuk yang sering menyerang budidaya cabai merah di Indonesia.  Penyakit  ini  mampu  mengakibatkan penurunan produksi 20-90% (Semangun, 2008). Patogen penyebab antraknosa pada cabai merah salah  satunya  disebabkan  oleh Colletotrichum acutatum (Sari & Kasiamdari, 2021). Pengendalian
penyakit antraknosa dengan menggunakan fungisida tidak  hanya  menyebabkan  peningkatan  biaya produksi,  tetapi  juga  mengakibatkan  resiko kesehatan petani dan konsumen, serta kerusakan lingkungan.  Oleh  karena  itu  penggunaan  agen biokontrol merupakan alternaif lain untuk mengatasi masalah penyakit antraknosa. Salah satu kandidat biokontrol  serangan  cendawan  patogen  pada tanaman  yaitu  menggunakan  cendawan  endofit
sebagai agen antagonis (Wilia, 2010; Mehetre & Deshmukh, 2011). Keberadaan cendawan endofit pada  jaringan  tanaman  memberikan  respon pertahanan  yang  lebih  baik  terhadap  serangan patogen (Rodriguez et al ., 2009; Faeth & Fagan, 2002) dibandingkan yang tidak bersimbiosis dengan cendawan endofit (Istikorini, 2008).  Cendawan endofit dilaporkan memiliki kemampuan hambat terhadap  patogen  tanaman  Hal  ini  dikarenakan cendawan  endofit  mampu  menghasilkan mikotoksin, enzim atau senyawa antibiotik dalam mengendalikan pertumbuhan patogen (Rodriguez et al ., 2009; Gao et al ., 2010).
Maja  telah  dilaporkan  mempunyai  potensi sebagai  antibakteri  dan  antifungal  karena kandungan fitokimia yang dimilikinya yaitu polifenol, saponin dan flavonoid (Lien, 2002). Daun Maja mempunyai  potensi  yang  tinggi  dalam  menekan pertumbuhan  bakteri  gram  negatif  (Sari et  al ., 2020), gram positif dan cendawan (Lien, 2002). Studi melaporkan bahwa keberadaan endofit erat hubungannya  dengan  kemampuan  inang  ( host ) dalam  memproduksi  bahan  metabolit  sekunder (Alam et al ., 2021) sehingga akhir-akhir ini banyak dilakukan isolasi cendawan endofit dari tanaman obat  (Sari,  2020)  salah  satu  contohnya  adalah cendawan endofit yang diisolasi dari daun jarak pagar  mampu  menghambat  pertumbuhan F.oxysporum penyebab busuk umbi bawang merah dengan  nilai  hambat  sebesar  38,27  –  74,48% (Nahdah et al ., 2020).
Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi  jenis  cendawan  endofit  yang berasal dari daun Tanaman Maja serta mengetahui kemampuan  daya  antagonismenya  terhadap patogen Colletotrichum acutatum penyebab antraknosa pada cabai merah secara in vitro .

## 2.  BAHAN  DAN  METODE

## 2.1 Isolasi dan Identifikasi Cendawan Endofit dari Tanaman Maja
Daun  Maja  dikoleksi  dari  Kampus  Institut Teknologi  Sepuluh  Nopember.  Permukaan  daun disterilisasi, dan dipotong secara aspetis 0,5 cm x 0,5 cm dan ditanam pada permukaan PDA selama 7 hari. Miselia cendawan yang tumbuh keluar dari daerah  potongan  daun  dikarakteristik  secara makroskopik  dan  mikroskopik.  Referensi  kunci identifikasi  mengacu  pada  buku  identifikasi Watanabe (2002). Konfirmasi identifikasi lebih lanjut untuk  jenis  spesies  yaitu Neonectria sp.  oleh
Bryford et  al .  (2004), Sporidesmium sp.  oleh Itturiaga et al . (2008) dan Binucleate Rhizoctonia sp. oleh Blazier & Conway (2004).
2.2 Kultur Cendawan patogenik C. acutatum PC3
Isolat patogen C. acutatum PC3 diperoleh dari hasil isolasi dan identifikasi dari buah cabai merah bergejala Antraknosa yang di dikoleksi dari Desa Kricaan,  Magelang  (Sari  &  Kasiamdari,  2021). Peremajaan  isolat C.  acutatum PC3  dilakukan pada  media  PDA  hingga  7  HSI  (Hari  Setelah Inokulasi).
2.3  Uji  Antagonisme  Cendawan  Endofit Tanaman Maja dengan C. acutatum
Uji antagonisme secara in vitro dilakukan pada cawan  petri  berisi  media  PDA  (Tuite,  1969). Miselium fungi endofit dan fungi patogen (yang telah ditumbuhkan sebelumnya pada media PDA) berukuran 0,5 cm diambil dari masing-masing koloni diletakkan secara berdampingan dengan jarak 5 cm  pada  cawan  petri  diameter  9  cm.  Sebagai kontrol adalah fungi patogen dan water agar yang ditumbuhkan  pada  media  PDA.  Selanjutnya diinkubasi pada suhu 25-30 0 C hingga hifa patogen kontrol mencapai pinggir petri.
Gambar  1.  Ilustrasi  Uji Antagonisme In  Vitro. Keterangan:  a=    cawan  perlakuan: fungi patogen (P) dengan fungi endofit (E), b=  cawan kontrol: fungi patogen (P) dengan water agar plug (K)
Pengukuran jarak pertumbuhan fungi patogen dan fungi endofit saat fungi patogen pada kontrol pertumbuhannya  telah  mencapai  tepi  petri. Selanjutnya  dihitung  persentase  zona  hambat menggunakan  rumus  yang  dikenalkan  oleh Skidmore & Dickinson (1976) dan pada penelitian lainnya (Rahman et al ., 2009; Situmorang, 2011; Mehetre & Deshmukh, 2011):
Keterangan: P  = persentase penghambatan, r1 = jarak pertumbuhan fungi patogen mendekati
P (%)  =   𝑟1 − 𝑟2 𝑟1   ×  100       (1)
water  agar  plug  pada  cawan  kontrol,  r2=jarak pertumbuhan  koloni  fungi  patogen  mendekati pertumbuhan fungi endofit pada cawan perlakuan Data persen hambat dianalisis dengan ANOVA dan  uji  DMRT  ( Duncan  Multiple  Range  Test ) signifikansi 5%.

## 3.  HASIL  DAN  PEMBAHASAN

## 3.1 Isolasi dan Identifikasi Cendawan Endofit dari Daun Maja
Telah diisolasi 23 isolat cendawan endofit (Tabel 1, Gambar 2). Isolat EB1a, EB2a, EB2b, EB3a, EB3b dan  EB4  termasuk  genus Colletotrichum sp.  1 dengan ciri-ciri makroskopik: warna koloni dari putih abu-abu  hingga  orange,  membentuk  zonasi, permukaan velvety ,  adanya  sedikit  hifa  aeral (Gambar 2) sedangkan isolat EC1, EC3b dan EC4a termasuk Colletotricum sp. 2 dengan warna koloni yang berbeda yaitu putih dengan permukaan cottony, banyak hifa aeral, dan terdapat peritechia orange di tengah permukaan (Gambar 2).
Isolat EB1a, EB2a, EB2b,  EB3a, EB3b dan
EB4 termasuk genus Colletotrichum sp. 1 dengan ciri-ciri makroskopik: warna koloni dari putih abu- abu hingga orange, membentuk zonasi, permukaan velvety, adanya sedikit hifa aeral sedangkan isolat EC1,  EC3b  dan EC4a  termasuk Colletotricum sp. 2 dengan warna koloni yang berbeda yaitu putih  dengan  permukaan  cottony,  banyak  hifa aeral, dan terdapat peritechia orange di tengah permukaan (Gambar 2).
Terdapat dua spesies Colletotrichum pada hasil isolasi  endofit  dari  daun  Maja  berdasarkan perbedaan warna dan permukaan koloni dan secara mikroskopik isolat Colletotrichum memiliki setae dan koninidia yang berbentuk fusiform atau cylindrical (Gambar  3). Colletotrichum merupakan  fungi endofit yang banyak ditemukan pada daun tanaman contohnya pada tanaman Mangrove (Costa et al ., 2012) dan lima tanaman obat dari India (Gautam, 2014). Colletotrichum dapat  bersifat  sebagai asimtomatik  (endofitik)  maupun  simtomatik (patogenik) (Rojas et al ., 2010), hal ini tergantung kondisi  lingkungannya.  Kondisi  lingkungan memungkinkan fungi ini untuk tumbuh melimpah dan berkembang pesat (Semangun, 2008).
Gambar 2. Kultur endofit asal Tanaman Maja pada media PDA (7 HSI). A: EA2b, B: EB2a, C: EB1a, D: EB3b, E: EC3a, F: EC3b, G: ED1a, H: ED3, I: ED2, J: EC4a, K: EA1, L: EC4b, M: EB4, N: EA3, O: EC, P: EC2, Q: EA4, R: EB3a, S: EA2a, T: EB1b, U: ED4, V: ED1b, W: EB2b
368 Jurnal Agrotek Tropika 11(3): 365-374, 2023
Tabel 1. Karakteristik Fungi Endofit Hasil Isolasi dari Daun Maja ( Crescentia cujete L.) Koleksi Lahan Kampus ITS Surabaya
No. Kode isolat Karakteristik makroskopik Karakteristik mikroskopik Growth rate (cm/7 hari) Hasil Identifikasi 1 EA1 Warna  koloni  hijau  kehitaman; permukaan cottony ,  pinggiran
tidak  rata,  berlekuk  ( Gambar  2 . K) Bersepta;  tidak  adanya  spora; adanya hifa moniliod;
percabangan  hifa  dengan  90 0 ,
multinukleat  hifa  ( Gambar  4 . A-B) 2,1 Rhizoctonia sp. (multinukleat) 2 EA2a Warna hijau kehitaman; permukaan sloppy (tidak rata/berkerut),  tidak  adanya  hifa aeral;  adanya  zonasi;  pinggiran tidak  rata,  berlekuk  ( Gambar    2 . S) Bersepta;  tidak  adanya  spora; adanya hifa moniliod, percabangan hifa angular ( Gambar 8 . A-C) 2,35 Mycelia sterilia 3 EA2b Warna  putih  dengan  perithecia hitam; permukaan cottony , adanya hifa  aerial;  pinggiran  rata,  halus ( Gambar 2 .A) Bersepta;  konidia cylindrical ; asci  terdiri  atas  8  ascospora; peritchia merah orange ( Gambar 6 ) 9 Anamorf: Neonectria sp. Telemorf: Cylindrocarpon sp. 4 EA3 Warna  hijau  kehitaman, sloppy
(tidak rata/berkerut), adanya zonasi,  pinggiran  tidak  rata, berlekuk ( Gambar 2 . N) Bersepta;  tidak  adanya  spora; adanya hifa moniliod, percabangan hifa angular ( Gambar 8 . D-F) 3,4 Mycelia sterilia 5 EA4 Warna hijau kehitaman, permukaan sloppy (berkerut), adanya  zonasi,  pinggiran  tidak rata, berlekuk ( Gambar 2 . Q) Bersepta;  tidak  adanya  spora; adanya hifa moniliod, percabangan hifa angular ( Gambar 8 . G-I) 3,4 Mycelia sterilia 6 EB1a Warna  abu-abu  hingga  orange; permukaan velvety (beludru);
adanya  zonasi;  pinggiran  rata
( Gambar  2 . C) Bersepta;  konidia cylindrical , abundant ,  hialin;  adanya  setae, panjang  dan  berwarna  hitam
( Gambar 3 . B) 9 Colletotrichum sp. 1 7 EB1b Warna abu-abu kecoklatan; permukaan cottony ,  adanya  hifa aerial;  adanya smooth sclerotia berwarna  cokelat  gelap  pada tengah koloni ( Gambar 2 . T)
Bersepta;  tidak  adanya  spora; percabangan hifa 90 0 ; binukleat ( Gambar 5 ) 6,7 Rhizoctonia sp. (binukleat) 8 EB2a Warna
orange abu-abu;
permukaan velvety (beludru); adanya  zonasi;  pinggiran  rata
( Gambar 2 . B)
Bersepta;  konidia cylindrical , abundant ,  hialin;  seta  panjang dan berwarna hitam ( Gambar 3 .
C) 8,5 Colletotrichum sp. 1 9 EB2b Warna  kuning  hingga  orange; permukaan velvety (beludru);
adanya  zonasi;  pinggiran  rata
( Gambar 2 . W)
Bersepta;  konidia cylindrical ,
hialin; percabangan hifa angular ( Gambar 3 . A) 7,83 Colletotrichum sp.1 10 EB3a Warna  abu-abu  hingga  orange;
permukaan velvety (beludru); Bersepta;  konidia cylindrical , abundant ,  hialin;  adanya  seta,
8,9 Colletotrichum sp. 1 12 EB4
Warna  abu-abu  hingga  orange; permukaan velvety (beludru);
adanya  zonasi;  pinggiran  rata
( Gambar 2 . M)
Bersepta;  konidia cylindrical , abundant ,  hialin;  adanya  seta,
panjang  dan  berwarna  hitam ( Gambar 3 . F) 8,3 Colletotrichum sp. 1 13 EC1 Warna putih dengan bercak orange pada  tengah;  permukaan cottony ;
adanya hifa aerial; pinggiran halus dan rata ( Gambar 2 . O)
Bersepta;  konidia cylindrica l, abundant ,  hialin;  seta  panjang dan bersekat ( Gambar 3 . G) 8,5 Colletotrichum sp. 2 14 EC2 Warna  abu-abu  hingga  hitam dengan pinggiran putih; permukaan waxy (halus)  dengan hifa  aerial; pinggiran rata;
sklerotia halus pada bagian tengah koloni ( Gambar 2 . P)
Bersepta;  percabangan  hifa angular;  adanya monilioid sel;
konidia  elips,  satu  sel,  hialin ( Gambar 8 . J) 6,5 Mycelia sterilia
Telah dilaporkan uji potensi biokontrol antara fungi endofit Colletotrichum dengan fungi patogen Phytophthora diantaranya pada tanaman cokelat (Rojas et al ., 2010) dan dilaporkan bahwa inokulasi endofit Colletotrichum mampu menurunkan gejala penyakit black  pod yang  disebabkan  oleh Phytophthora .
Rhizoctonia spp.  teridentifikasi  pada  isolat (EA1; EB1b; ED1a; ED1b; dan EC4b) dikarenakan karakteristik  mikroskopiknya  yaitu  mempunyai percabangan hifa angular (90 0 ), tidak mempunyai spora aseksual (konidia), adanya monilioid sel dan coil hif a (Gambar 4 dan Gambar 5) sesuai dengan referensi  Watanabe  (2002)  serta  Blazier  & Conway (2004).
15 EC3a Warna  putih  abu-abu  hingga kehitaman;  permukaan shrunken
(kasar)  dengan hairy ;  adanya zonasi; membentuk sklerotia hitam pada tengah koloni ( Gambar 2 . E) Bersepta;  percabangan  hifa hialin;  konidia  dewasa  dengan dinding  berwarna  gelap  dan bersepta,  konidia  muda  bersel satu dan hialin ( Gambar 7 ) 9 Sporidesmium sp. 16 EC3b Warna putih dengan bercak orange pada  tengah;  permukaan cottony ;
adanya hifa aerial; pinggiran halus dan rata ( Gambar 2 . F)
Bersepta;  konidia cylindrica l,
abundant,  hialin;  seta  panjang,
hitam ( Gambar 3 . H) 9 Colletotrichum sp. 2 17 EC4a Warna putih dengan bercak orange pada  tengah;  permukaan cottony ;
adanya hifa aerial; pinggiran halus dan rata ( Gambar 2 . J)
Bersepta;  konidia cylindrica l, abundant,  hialin;  seta  panjang,
hitam dan bersekat ( Gambar 3 . I) 9 Colletotrichum sp. 2 18 EC4b Warna  abu-abu  hingga  hitam dengan pinggiran putih; permukaan waxy (halus)  dengan
hifa  aerial; pinggiran rata;
sklerotia halus pada bagian tengah koloni ( Gambar 2 . L) Bersepta;  percabangan  hifa angular; tidak ditemukan konidia ( Gambar 4 . C-D) 6,1 Rhizoctonia sp. (multinukleat) 19 ED1a Warna abu-abu hingga kecolatan; permukaan cottony dengan  hifa aerial;  pinggiran  rata;  sklerotia kasar  pada  bagian  tengah  dan berjumlah banyak ( Gambar 2 . G)
Bersepta;  percabangan  hifa angular 90 0 ; tidak adanya spora;
hifa  multinukleat  ( Gambar  4 . E-G) 7,15 Rhizoctonia sp. (multinukleate) 20 ED1b Warna abu-abu hingga kecolatan; permukaan cottony dengan  hifa aerial;  pinggiran  rata;  sklerotia kasar  pada  bagian  tengah  dan berjumlah banyak ( Gambar 2 . V)
Bersepta;  percabangan  hifa angular 90 0 ; tidak adanya spora; hifa  multinukleat ( Gambar  4 . H) 6,3 Rhizoctonia sp. (multinukleate) 21 ED2 Warna hijau kehitaman, shrunken (berkerut), adanya zonasi,
pinggiran  tidak  rata,  berlekuk ( Gambar 2 . I) Bersepta;  tidak  adanya  spora; adanya hifa monilioid , percabangan hifa angular ( Gambar 8 . J-L) 3,13 Mycelia sterilia 22 ED3 Warna hijau kehitaman, shrunken
(berkerut), adanya zonasi,
pinggiran  tidak  rata,  berlekuk ( Gambar 2 . H) Bersepta;  tidak  adanya  spora; adanya hifa monilioid , percabangan hifa angular ( Gambar 8 . M) 2,45 Mycelia sterilia 23 ED4 Warna hijau kehitaman, shrunken
(berkerut), adanya zonasi,
pinggiran  tidak  rata,  berlekuk ( Gambar 2 . U) Bersepta;  tidak  adanya  spora; adanya hifa monilioid ,
percabangan hifa angular ( Gambar 8 . N-O) 3,33 Mycelia sterilia
Tabel 1. Karakteristik Fungi Endofit Hasil Isolasi dari Daun Maja ( Crescentia cujete L.) Koleksi Lahan Kampus ITS Surabaya (Lanjutan)
Rhizoctonia baik  binukleat  maupun multinukleat  digolongkan  sebagai anastomosis groups (AG) (Tuncer dan Eken, 2013). Isolat EA1, EC4b,  ED1a  dan  ED1b  digolongkan  kedalam Rhizoctonia multinukleat hal ini karena hifa dari isolat-isolat  tersebut  memiliki  banyak  nukleus (Gambar  4.  B;  G;  H). Rhizoctonia multinukleat juga  dilaporkan  sebagai  fungi  endofit  yang ditemukan melimpah di alam (Herr, 1995).
Isolat EB1b digolongkan sebagai Rhizoctonia binukleat karena hifa EB1b memiliki dua nukleas saja (Gambar 5. A)
Rhizoctonia sp. EB1b memiliki warna koloni abu-abu kecoklatan, permukaan cottony,  adanya hifa  aerial,  adanya smooth  sclerotia berwarna
cokelat gelap pada tengah koloni (Gambar 2. T) sedangkan secara mikroskopis hifa beseptat; tidak adanya  spora  aseksual,  percabangan  hifa  90 0 , binukleat hifa (Gambar 5) sesuai dengan referensi Blazier  dan  Conway  (2004) Rhizoctonia spp. binukelat dicirikan dengan ketidakhadiran spora aseksual,  ketidakhadiran clamp  connections , skelorotia  kecil,  bulat,  berwarna  cokelat  gelap ukuran >1mm, hifa binukleat (dimana multinukleat sebagai  ciri  khas R.  solani ),  miselia  berwarna cokelat terang, percabangan hifa right angel, letak septum pada percabangan hifa dekat dengan pusat hifa utama.
Binucleate Rhizoctonia spp.  (BNR)  telah dilaporkan  memiliki  potensi  sebagai  agen antivirulen dalam mengendalikan jamur patogen (Herr,  1995).  Kelompok  ini  memiliki  potensi pengendalian  pertumbuhan  dari  jamur  patogen (Tuncer & Eken, 2013). Sehingga untuk penelitian ini, endofit Rhizoctonia multinukleat dieliminasi dikarenakan  potensinya  sebagai  penyebab penyakit dan menggunakan Rhizoctonia binukleat (EB1b)  sebagai  kandidat  endofit  untuk  uji antagonisme.
Isolat  EA2b  memiliki  ciri  mikroskopis  hifa bersepta, konidia cylindrical , askus terdiri atas 8 askuspora, peritechia merah orange (Gambar 6). Isolat ini diidentifikasi sebagai Neonectria sp. sesuai literatur Brayford et al ., (2004) Neonectria
Gambar 3. Setae Colletotrichum spp. (ditunjukkan arah  panah) A.  EA2b,  B.  EB1a,  C. EB2a, D. EB3a, E. EB3b, F. EB4, G. EC1, H. EC3b, I. EC4a
Gambar 4.  Hifa Rhizoctonia spp. A  percabangan angular EA1, B. Multinukleat hifa EA1, C-D. Percabangan angular EC4b, E-F. percabangan angular ED1a G. Multi- nukleat hifa ED1a, H. Multinukleat hifa ED1b. Tanda panah menunjukkan inti sel
Gambar 5. Hifa binukleat Rhizoctonia sp. EB1b. A. binukleat  hifa,  B. monilioid sel,  C. percabangan hifa, D. coil hifa. Bar=100 μm
Gambar 7. Struktur mikroskopik Sporidesmium sp. EC3a. A.  Percabangan  hifa  hialin,  B. Germinating  conidium ,  C.  Konidia pada beberapa tahapan perkembangan,
D. konidia dewasa. Bar=100 μm
telemorf  memiliki peritechia berwarna  merah dengan hifa palisade hialin pada luar dinding selnya. Askospora berukuran 7-20 μm, hialin; sel-sel pada dinding permukaan peritechia membentuk sirkular atau  angular.  Askus  berbentuk  silinder  atau narrowly  clavate terdiri  atas  4-8  askuspora, uniseriat  dengan  overlaping  atau  biseriat  dan mengelompok/menumpuk pada bagian atas askus.
Isolat  EC3a  diidentifikasikan  sebagai Sporidesmium sp.  karena memiliki  karakterisasi yang  sama  baik  secara  mikroskopik  maupun mikroskopik sesuai literatur Itturiaga et al . (2008) yaitu koloni padat/tebal dan agak berambut (hairy) berwarna kecoklatan. Miselia berukuran 2-3 μm, bercabang, halus, berseptat, berwarna kecoklatan.
Miselia steril merupakan fungi endofit yang sering ditemukan ketika dilakukan pengisolasian pada daun tanaman obat (Gautam, 2014; Nayak, 2015;  El-Nagarebi et  al .,  2013).  Secara makroskopis semua isolat memiliki warna hijau gelap (hitam), permukaan shrunken, adanya zonasi, pinggiran tidak rata atau berlekuk (Gambar 2).

## 3.2 Uji Antagonisme Cendawan Endofit Daun
Maja  dengan Colletotrichum  acutatum
Penyebab Antraknosa pada Cabai Merah secara in vitro
Berdasarkan Tabel 1 dapat diambil kandidat endofit  dengan  laju  pertumbuhan  tertinggi menggunakan Neonectria sp. EA2b, Sporidesmium sp. EC3a dan BNR EB1b. Dimana ketiga isolat itu memilik jarak pertumbuhan tertinggi dibandingkan lainnya  dan  bersifat  asimtomatik  atau  pernah dilaporkan sebagai agen biokontrol penyakit.
Secara keseluruhan nilai jarak pertumbuhan C.acutatum pada cawan perlakuan yaitu 2 - 2,20 cm, hal ini menunjukkan bahwa pertumbuhan koloni C. acutatum lebih baik pada media kontrol karena tidak terjadi kompetisi dengan jamur endofit seperti pada media uji antagonisme. Pertumbuhan koloni C.acutatum pada media uji antagonisme pun tidak
begitu beragam karena nilai R2 pada perlakuan A dan C sama yaitu 2 cm sedangkan pada B  2,20 cm.
Nilai persen penghambatan oleh jamur endofit dimana Neonectria sp. (71,43%), Sporidesmium sp.  (68,57%)  dan  Binukleat Rhizoctonia sp. (71,43%) (Tabel 2). Neonectria sp. memiliki nilai hambat  yang  sama  dengan  BNR  sedangkan Sporidesmium sp. memiliki nilai hambat terendah. Persen  hambat  antara  spesies  endofit  berbeda secara signifikan. Hal ini dapat dipengaruhi oleh mekanisme  penghambatan  yang  spesifik  oleh masing-masing fungi endofit dalam menghambat pertumbuhan cendawan patogen.
Untuk mengetahui mekanisme interaksi yang fungi  endofit  terhadap  patogen  maka  dilakukan pengamatan  secara  mikroskopik  pada  daerah wilayah bertemunya kedua hifa ini di cawan uji antagonisme (Gambar 9).
Persen hambat Neonectria sp. sama dengan BNR menunjukkan bahwa kemampuan antagonis endofit ini sama. BNR tidak memiliki kemampuan mikoparasitisme  namun  dilaporkan  mampu meningkatkan sistem resistensi tanaman inang (Herr, 1995).
Perlakuan Rerata Jarak pertumbuhan C.acutatum (cm)  Rerata Daya Hambat (%) r1 r2 K 7 - 0 ± 0,0 a Neonectria sp. - 2 71,43 ± 0,0 c Sporidesmium sp. - 2,20 68,57 ± 1,2 b Binukleat Rhizoctonia sp. - 2 71,43 ± 0,0 c
Tabel 2.  Rerata Persen Daya Hambat Cendawan Endofit terhadap C. acutatum
Keterangan:  Angka-angka pada setiap kolom yang diikuti huruf yang tidak sama berbeda nyata menurut uji DMRT 5%, n=3
Gambar 8. Uji Antagonisme secara In Vitro Endofit Asal  Daun  Maja  dengan C.  acutatum pada Minggu ke-3. A. Neonectria sp . , B. Sporidesmium sp., C. BNR, D. Kontrol
Konidia C. acutatum pada kontrol (Gambar 9.A) sedangkan pada media uji antagonisme dengan Neonectria sp.  jumlah  konidia C.  acutatum dijumpai sedikit (Gambar 9.B). Hal ini menunjukkan bahwa  proses  perkembangbiakan  spora C. acutatum terhambat  akibat  kolonisasi/kehadiran endofit Neonectria sp.  selain  itu  hifa  dari C. acutatum menjadi bentuk spiral dan melengkung tidak  beraturan  dan  mengalami  pemendekan. Sebagian  hifa  mengalami  kekusutan  dan pembengkakan dinding sel (Gambar 9.B). Hal ini dikarenakan  jamur  endofit  mampu  melepaskan senyawa  antiobiotik  yang  mampu  menghambat elongasi  hifa  patogen  (Nurzannah et  al .,  2014). Neonectria sp.  mempunyai  anamaorph Cylindrocarpon. Cylindrocarpon dilaporkan memiliki kemampuan  melepaskan  enzim  yang  mampu mendegradasi dinding sel (Songxixia, 2007) yaitu enzim β 1,3 glukanase (Cao et al ., 2009).  Sehingga enzim yang dilepaskan oleh endofit tersebut mampu mendegradasi susunan dinding sel Colletotrichum yang  mengakibatkan  patogen  terhambat  dalam melakukan pertumbuhan hifa.
Malformasi  hifa  (spiral) C.  acutatum juga ditemukan  pada  media  uji  antagonisme menggunakan Sporidesmium sp. (Gambar 9. C). Sporidesmium dilaporkan  sebagai  jamur mikoparasitisme  karena  kemampuannya  dalam menurunkan jumlah skelerotia patogen (Martinson, 1999; Mendoza, 1999).
Hifa C.  acutatum juga  mengalami swelling (pembesaran  dinding  sel)  pada  media  uji antagonisme  dengan  BNR  (Gambar  9.  D). Penggembungan hifa dilakukan sebagai tahapan pertama  untuk  proses  pembentukan resting
sporangium (dorman) hal ini dikarenakan kondisi lingkungan  yang  kurang  optimum  untuk bergerminasinya  spora  (Steinhaus,  2012).  BNR mampu  melakukan  penghambatan  pertumbuhan patogen Colletotrichum dengan  mekanisme penghambatan  diantaranya  kompetisi  dan meningkatkan sistem ketahanan inang (Herr, 1995).

## 4.  KESIMPULAN
Telah didapatkan 23 isolat cendawan endofit dari daun maja diantaranya 9 isolat Colletotrichum spp.; 5 isolat Rhizoctonia spp.; 1 isolat Sporidesmium sp.; 1 isolat Neonectria sp. dan 7 isolat teridentifikasi sebagai  miselia  steril.  Persen  penghambatan cendawan endofit terhadap C. acutatum penyebab antraknosa pada cabai merah secara in vitro adalah Neonectria sp. 71,43%, Sporidesmium sp. 68,67% dan Rhizoctonia sp. 71,43%.
Gambar 9. Interaksi  hifa C.acutatum dengan. Neonectria sp . (B), Sporidesmium sp. (C), Binukleat Rhizoctonia sp. (D), kontrol (A)

## 5. DAFTAR  PUSTAKA
Alam, B., J. LĐ, Q. Gě, M. A. Khan, J. Gōng, S. Mehmood, Y.  Yuán,  &  W.  GÒng.  2021. Endophytic  Fungi:  From  Symbiosis  to Secondary Metabolite Communications or Vice  Versa?. Frontiers  in  Plant  Science. 12: 3060.
Blazier,  S.  R.,  &  K.  E  Conway.  2004. Characterization  of Rhizoctonia  solani Isolates Associated with Patch Diseases on Turfgrass. Proc. Okla. Acad. Sci . 84: 41-51 Bryford, D., B. M. Honda, F. R. Mantiri, & G. J.
Samuels.  2004. Neonectria and Cylindrocarpon : The Nectria Mammoidea
Group and Species Lacking Microconidia. Mycologia. 96 (3): 572-597 Cao, R., X. Liu, K. Gao, K. Mendgen, Z. Kang, J.
Gao,  Y.  Dai,  &  X.  Wang.  2009. Mycoparasitism of Endophytic Fungi Isolated from  Reed  on  Soilborne  Phytopathogenic Fungi and Production of Cell Wall-Degrading Enzymes  In Vitro. Current  Microbiology . 59: 584–592.
El-Nagerabi,  S. A.  F.,  E. A.  Elshafie,  &  S.  S. Alkanjari.  2013.  Endophytic  Fungi Associated With Ziziphus Species and New Records from Mountainous Area of Oman.
Biodiversita. 14 (1): 10-16 Faeth,  S.  H.  &  W.  F.  Fagan.  2002.  Fungal Endophytes: Common Host Plant Symbionts but  Uncommon  Mutualists. Integ.  And. Comp. Biol., 42: 360-368 Gao,  F.  K,  C.  C.  Dai,  &  X.  Z.  Liu.  2010. Mechanisms of Fungal Endophytes in Plant Protection Against  Pathogens. African  J Microbiol Res. 4 (13): 1346–1351. Gautam,  A.  K.  2014.  Diversity  of  Fungal Endophytes  in  Some  Medicinal  Plant  of Himachal Pradesh, India. Phytopathology. 47 (5): 537-44.
Herr, J. 1995. Biological Control of Rhizoctonia Solani by Binucleate Rhizoctonia spp. and Hypovirulent R.solani Agents .  Crop Protection. 14 (3): 179-186.
Istikorini, Y. 2008. Potensi Cendawan Endofit untuk Mengendalikan Penyakit Antraknosa pada Cabai ( Capsicum annum L.). Tesis. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Itturiaga, T.,  D.  L.  Hawksworth,  &  J.  L.  Crane.
2008. ‘ Sporidesmium’ lichenicola sp. nov., A New Lichenicolous Fungus on Leptogium from Venezuela. Mycologia. 100 (3): 392-396. Lien, F. N. 2001. Uji Toksisitas Ekstrak Metanol Daun  Beremuk  (Crescentia  cujete  L.) terhadap  Larva  Artemia  salina  Leach . Skripsi  Fakultas  Farmasi  Universitas Surabaya, Surabaya.
Martinson, C. 1999. Biocontrol of Sclerotinia Stem
Rot  in  Soybeans  with Sporidesmium sclerotivorum . Leopold  Center  Progress Report. 8: 33-38
Mehetre, P. B. & H. Deshmukh. 2011. Effect of Antagonist on the Growth of Colletotrichum capsic i  Causing  Anthracnose  of  Yam ( Dioscora  alata L.)  by  Dual  Culture
Technology. International  Journal.  Plant Protec. 4(2): 417- 418.
Mendoza, L. E. del. R. 1999. Biological Control of Sclerotinia  Stem  Rot  of  Soybean  with Sporidesmium sclerotivorum . Thesis. Iowa State University.
Nahdah, F., N. Sari, A. Rizali, & R. Wahdah. 2020. Antagonisme  Fungi  Endofit  Daun  Jarak Pagar  ( Jatropha  curcas )  terhadap Fusarium oxysporum C2 Penyebab Busuk Umbi  pada  Bawang  Merah  in  Vitro. Agrotechnology Research Journal. 4 (1):
47 - 53.
Nayak, B. K. 2015. Studies on Endophytic Fungal Diversity From Differrent Leaf Samples of Pongamia  pinnata . International  Journal of MediPharm Research. 1 (2): 134-138 Nurzannah,  S.  E.,  Lisnawati  &  D.  Bakti.  2014. Potens  Jamur  Endofit Asal  Cabai  sebagai Agens Hayati Untuk Mengendalikan Layu Fusarium  ( Fusarium  oxysporum )  Pada Cabai  dan  Interaksinya. Jurnal  Online Agroekoteknologi. 2  (3):  1230-1238 Rodriguez, R. J., J. F. Jr. White, A. E. Arnold, & R.  S.  Sedman.  2009.  Tansley  Reviews: Fungal Endophytes: Diversity and Functional Roles. New Phytologist . 182 (2): 314-330. Rahman,  M. A.,  M.  F.  Begum,  &  M.  F. Alam. 2009. Screening of Trichoderma Isolates as  a  Biological  Control Agent  against Ceratocystis paradoxa Causing Pineapple Disease  of  Sugarcane.  Mycobiology.  37 (4): 277–285.
Rojas, E. I., S. A. Rehner, G. J. Samuels, S. A. V. Bael, E. A. Herre, P. Cannon, R. Chen, J. Pang,  R.  Wang, Y.  Zhang, Y.  Peng,  &  T. Sha. 2010. Colletotrichum gloeosporioides s.l. Associated With Theobroma Cacao And Other  Plants  in  Panama:  Multilocus Phylogenies  Distinguish  Host-Associated Pathogens From
Asymptoomatic Endophytes. Mycologia. 102 (6): 1318-1338. Sari, N., N. D. Kuswytasari, & A. P. D. Nurhayati. 2020. Antibacterial Activity Test of Wet and Dried  Extracts  of  Calabash  Tree ( Crescentia cujete L.) Against Aeromonas hydrophilla. Jurnal Biota . 6 (1): 5-11.
Sari, N., & R. S. Kasiamdari. 2021. Identifikasi dan Uji Patogenisitas Colletotrichum spp. dari  Cabai  Merah  ( Capsicum  annuum ): Kasus di Kricaan, Magelang, Jawa Tengah. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia. 26 (2):
243-250.
Sari,  N.  2020.  Review  of  Endophytic  Fungi  as Biocontrol Agents Against Plant Pathogen.
374 Jurnal Agrotek Tropika 11(3): 365-374, 2023
Gontor  AGROTECH  Science  Journal. 6 (1): 55-73.
Semangun, H. 2008. Penyakit-penyakit Tanaman Hortikultura  di  Indonesia .  UGM  Press, Yogyakarta.
Situmorang,  N.  2011.  Efektivitas  Fungi  Endofit Dalam  Pengendalian  Fungi  Patogen Penyebab Antraknosa  pada  Phalaenopsis amabilis (L.) Blume. Tesis. Fakultas Biologi UGM, Yogyakarta.
Skidmore, A. M., & Dickinson, C. H. 1976. Colony interactions and hyphal interference between Septoria  nodorum and  phylloplane  fungi. Transactions  of  the  British  Mycological Society. 66 (1): 57-64. Steinhaus, E. 2012. Insect Pathology V2: an Advanced Treatise. Elsevier.  http://books.google.co.id Diakses pada 10 Agustus 2014.
Tuite, J. 1969. Plant Pathological Methods. Fungi and Bacteria . Burgess Publishing Company Minneapolis, Minnesota. USA. 293pp Tuncer, S. & C. Eken. 2013. Anastomosis Grouping of Rhizoctonia  solani and  Binucleate Rhizoctonia spp.  Isolated  from  Pepper  in Erzincan,  Turkey. Plant  Protect.  Sci. 49 (3):127-131
Watanabe, T.  2002. Pictorial  Atlas  of  Soil  and Seed  Fungi (Morphologies  of  Cultured Fungi and Key to Species) 2nd Edition. CRC Press,  USA.
Wilia, W.  2010.  Potensi  Cendawan  Endofit  dan Khamir  untuk  Mengendalikan  Penyakit Antraknosa  ( Colletotrichum  acutatum L.) pada  Tanaman  Cabai. Tesis. Sekolah Pascasarjana  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor.