Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology Journal Homepage : http://jurnal.unpad.ac.id/ijpst/

## UNPAD

## Piroxicam Percutaneous Permeation from Gels Through Membrane Models of Shed Snakeskin and Cellulose
Anis Y. Chaerunisaa 1* , Marline Abdassah 1 , Jutti Levita 2 , Ellin Febrina 2 , Ulfiana Hafni 3
1Departemen Farmasetika dan Teknologi Farmasi Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jatinangor, Indonesia 2Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jatinangor, Indonesia
3Program Studi Sarjana Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jatinangor, Indonesia
Submitted 09 August 2020; Revised 27 January 2021; Accepted 10 February 2021; Published 21 June 2021 *Corresponding author: anis.yohana.chaerunisaa@unpad.ac.id

## Abstract
Skin has a very important role in determining percutaneous absorption of active substance in topical administration. Study on percutaneous permeation of piroxicam from gel had been conducted using Franz Diffusion Cell with membrane model of shed snakeskin and cellulose. Piroxicam gels were made using Aqupec HV-505 base with 0; 2.5; 5; and 7.5% of DMSO as an enhancer. The results showed that the most stable gel preparation was the one with 5% DMSO (F2), so it was used for further investigation to which percutaneous permeation test. The permeation test was conducted in preparation without and with 5% DMSO (F2) in vitro through shed snakeskin and cellulose membranes. The results showed that F2 increased the permeation rate by as much as 0.0281% per minute. In comparison, the permeation rate of formulation without DMSO (F0) was 0.012% per minute. It can be concluded that DMSO can increase piroxicam penetration through shed snakeskin. Permeation study using cellulose membrane on formula F2 revealed permeation rate as much as 0.006% per minute whereas that without DMSO (F0) was 0.0112% per minute.
Keywords: DMSO, cellulose membrane, percutaneous permeation, piroxicam, shed snakeskin.

## Permeasi Perkutan Piroksikam dari Sediaan Gel Melalui Model Membran Kulit Ular dan Selulosa

## Abstrak
Kulit memiliki peran penting dalam menentukan absorpsi perkutan zat aktif pada rute pemberian obat secara topikal. Penelitian mengenai permeasi perkutan piroksikam dari sediaan gel telah dilakukan dengan menggunakan alat Franz Diffusion Cell dengan kulit ular dan selulosa sebagai model membran. Gel piroksikam dibuat dengan basis Aqupec HV-505 menggunakan dimetil sulfoksida (DMSO) sebagai enhancer dengan konsentrasi 0; 2,5; 5; dan 7,5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sediaan gel dengan DMSO 5% merupakan sediaan yang paling stabil sehingga sediaan ini digunakan untuk tahapan selanjutnya yaitu pengujian permeasi perkutan. Uji permeasi dilakukan terhadap sediaan tanpa DMSO (F0) dan dengan DMSO 5% (F2) secara invitro  melalui membran kulit ular dan membrane selulosa. Hasil pengujian  menunjukkan bahwa formula F2 mengalami peningkatan laju permeasi piroksikam sebesar 0,0281% per menit.  Sebagai perbandingan,  laju permeasi dari sediaan tanpa DMSO (F0) adalah sebesar 0,012% per menit. Dari hal ini dapat diartikan bahwa DMSO terbukti dapat meningkatkan penetrasi piroksikam ke dalam kulit dengan model membran kulit ular. Uji permeasi melalui membran selulosa untuk sediaan dengan formula F2 menunjukkan nilai laju permeasi piroksikam sebesar 0,006% per menit sedangkan formula tanpa DMSO (F0) sebesar 0,0112% per menit.
Kata Kunci: DMSO, membran kulit ular, membran selulosa, permeasi perkutan, piroksikam.

## 1.  Pendahuluan
Obat
antiinflamasi nonsteroid (AINS)  sering  digunakan  pada  pengobatan osteoartritis dan rematoid artritis. Piroksikam merupakan  salah  satu  obat  anti-inflamasi nonsteroid  dengan  struktur  oksikam. 1,2
Pemberian  oral  piroksikam  biasanya diikuti  dengan  adanya  efek  samping  seperti kerusakan  gastrointestinal,  kerusakan  hati, dan kerusakan fungsi ginjal. Untuk mengatasi masalah  ini  dapat  digunakan  OAINS topikal.  Pemberian  OAINS  secara  topikal memberikan  keuntungan  antara  lain  lebih mudah  diterima  pasien  dan  memberikan efek  local  pada  jaringan  yang  dituju  tanpa memberikan efek samping yang didapat jika diberikan secara oral. 3-5 Pemberian piroksikan secara  topikal  memberikan  kadar  obat  aktif yang  cukup  tinggi  pada  sendi  dan  jaringan di bawah kulit tempat obat dioleskan, tanpa menimbulkan  efek  samping  yang  berarti. 6-9
Meskipun  pemberian  piroksikan  secara perkutan  tidak  sama  efektivitasnya  dengan pemberian  secara  oral,  beberapa  studi  telah membuktikan  bahwa  piroksikam  memiliki efektivitas ketika diberikan secara perkutan. 6
Beberapa  studi  bahkan  sudah  mempelajari dan memprediksi absorpsi piroksikam secara perkutan  dengan  menggunakan  beberapa macam  peningkat  penetrasi. 10-15 Salah  satu bentuk  sediaan  topikal  yang  telah  banyak dipakai  untuk  sediaan  dengan  zat  aktif yang  memiliki  aktivitas  inflamasi  dan  anti rheumatik  sehingga  diharapkan  membantu absoprsi perkutan adalah gel. 16-19 Pada rute pemberian obat secara topikal, kulit  merupakan  bagian  yang  berperan penting karena menentukan absorpsi perkutan zat aktif. 20 Pada umumnya absorpsi perkutan obat disebabkan oleh penetrasi langsung obat melalui stratum korneum. 21 Stratum korneum sebagai  jaringan  keratin  akan  bertindak sebagai  membran  yang  semipermeabel  dan molekul obat berpenetrasi dengan cara difusi pasif. 22,23 Faktor-faktor yang berperan dalam absorpsi  perkutan  obat  adalah  sifat  obat  itu sendiri,  sifat  pembawa,  kondisi  kulit  dan adanya air. 12,14
Berdasarkan  sifat  sawar  kulit,  maka dalam mengembangkan produk farmasi yang
bertujuan  untuk  digunakan  pada  kulit  dan menyediakan pengobatan untuk penghantaran ke kulit, sangat dianjurkan untuk melakukan pengujian secara in vitro untuk mempelajari penetrasi obat tersebut ke dalam kulit. 10,14,20
Dalam  pengujian  permeasi  perkutan secara in  vitro ,  jumlah  obat  yang  masuk dan  berpenetrasi  ke  dalam  kulit  dihitung berdasarkan  konsentrasi  zat  aktif  yang terdapat di dalam cairan reseptor. Jumlah zat aktif ini merupakan zat aktif yang diabsorpsi oleh  membran  permeasi  yang  merupakan model  dari  stratum  korneum  pada  jaringan kulit manusia. Berbagai jenis model membran permeasi  telah  digunakan  pada  pengujian permeasi in vitro . Kulit kadaver manusia dan kulit  mamalia  yang  berbulu  sedikit  seperti tikus berbulu halus, tikus tidak berbulu, dan kulit  babi  sering  digunakan  pada  pengujian in  vitro . 14 Membran  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah membran kulit ular dan membran selulosa nitrat. Membran kulit ular dipilih sebagai membran uji karena memiliki kesamaan  struktur,  komposisi,  kandungan lipid,  dan  permeabilitas  air  dengan  stratum korneum  kulit  manusia.  Telah  dilaporkan bahwa  terdapat  kesesuaian  antara  epidermis yang telah mengelupas dari dua spesies ular, yaitu Python  morulus ( Indian  Phyton )  dan Elaphe obsoleta ( American black rat snake ), sebagai model membran kulit manusia pada studi  absorpsi. 24 Telah  melaporkan  bahwa terdapat  kemiripan  antara  kulit  ular  yang telah  mengelupas  dari Elaphe  obsoleta dengan stratum korneum manusia dalam hal ketebalan,  permeabilitas  air,  dan  kandungan lipid. 24 Selain  itu,  tingkat  permeabilitas berbagai senyawa serta peran berbagai gugus fungsi  membran  kulit  ular  juga  menyerupai membran  kulit  manusia.  Keuntungan penggunaan membran kulit ular yang lainnya adalah  tidak  melukai  dan  tidak  membunuh binatang  karena  didapat  dari  lepasan  kulit pada  siklus  pelepasan  normal  dari  ular. Selain  itu  membran  kulit  ular  relatif  mudah penanganannya.  Sedangkan  kelemahannya adalah  perlu  waktu  yang  cukup  lama  untuk mendapatkan  membran  kulit  ular  tersebut karena  membran  tersebut  dilepaskan  setiap dua  sampai  tiga  bulan  sekali. 24 Karena
ketersediaan Elaphe  obsoleta yang  terbatas maka  studi  permeasi  dilakukan  dengan menggunakan  kulit  ular  kobra  spesies Naja naja  khaotia sebagai  model  membran.  Dari penelitian  tersebut  dilaporkan  bahwa  profil permeasi  nikotin patches melalui  kulit  ular kobra dan epidermis manusia memiliki profil kinetik yang identik. Hal tersebut ditunjukkan oleh  adanya  hubungan  yang  linear  antara jumlah  kumulatif  nikotin  yang  berpermeasi dengan t 1/2 . Bhasi, et al. ,  menyatakan bahwa kulit  ular Morelia  virdis ( Chondrophyton viridis )  dan Acrantophds  dunerill dapat digunakan  untuk  evaluasi  efektivitas  tabir surya. 24,25 Selain membran kulit hewan, dapat digunakan pula membran buatan atau sintesis, misalnya  membran  selulosa  nitrat,  sebagai pengganti membran sel manusia. 24,26
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  bagaimana  permeasi  perkutan piroksikam  dari  sediaan  gel  dengan  basis Aqupec HV-505 menggunakan membran kulit ular sebagai model membran dan mengetahui sejauh  mana  perbedaan  penetrasi  perkutan melalui  membran  kulit  ular  dibandingkan dengan melalui membran selulosa.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk memberikan  informasi  mengenai  permeasi perkutan sediaan gel piroksikam dengan basis Aqupec  HV-505 dengan  variasi  konsentrasi enhancer DMSO melalui membran kulit ular dan membran selulosa.

## 2.  Metode
2.1.  Alat
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah,  neraca  analitik  (Mettler  Toledo, AL204), Franz  Diffusion  Cell , magnetic stirrer ,  oven  (Memmert  200  dan  Memmert 400-800),  spatel,  viskometer  (Rion),  dan pH  meter  (Mettler  Toledo)  serta  alat  gelas lain yang umum digunakan di Laboratorium Farmasetika  Fakultas  Farmasi  Universitas Padjadjaran.
2.2.  Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  untuk formulasi gel dan uji permeasi adalah Aqupec HV-505 ®,  trietanolamin,  propilenglikol,
dimetil  sulfoksida  (DMSO),  natrium metabisulfit, nipagin, nipasol, dan air suling.
2.3.  Prosedur Rinci Penelitian  dilakukan  dengan  tahapan sebagai berikut:
2.3.1. Formulasi sediaan gel piroksikam basis Aqupec HV-505 dengan variasi konsentrasi enhancer DMSO Formula  sediaan  gel  piroksikam menggunakan  basis Aqupec  HV-505 dengan variasi  konsentrasi enhancer DMSO  dapat dilihat  pada  Tabel  1.  Peningkat  penetrasi atau enhancer DMSO  digunakan  karena merupakan salah satu enhancer yang efektif meningkatkan  penetrasi  perkutan  sediaan transdermal. 23
2.3.2. Pembuatan gel piroksikam dengan basis Aqupec HV-505 Aqupec  HV-505 dikembangkan  dalam sejumlah  air  panas  pada  mortir  selama  24 jam dan diaduk homogen. Kemudian sedikit demi  sedikit  trietanolamin  ditambahkan  ke dalam  basis  dan  diaduk  sampai  homogen. Piroksikam,  metil  paraben,  dan  propil paraben  masing-masing  dilarutkan  dalam propilenglikol. Ketiganya kemudian dicampur dan selanjutnya ditambahkan basis gel sedikit demi sedikit sambil diaduk hingga homogen. DMSO ditambahkan sedikit demi sedikit sambil terus diaduk hingga didapatkan massa gel yang homogen.
2.3.3. Evaluasi sediaan gel piroksikam
Evakuasi fisik yang dilakukan terhadap gel  piroksikam  yang  dibuat  meliputi pengamatan organoleptis, konsistensi, perubahan  pH  serta  perubahan  viskositas selama penyimpanan.
2.3.4. Penetapan kadar zat aktif piroksikam dalam sediaan gel dengan Spektrofotometer UV Penetapan  kadar  ini  bertujuan  untuk mengetahui  stabilitas  piroksikam  dalam sediaan  gel.  Tahapan  yang  dikerjakan meliputi pembuatan larutan baku piroksikam, penentuan  panjang  gelombang  serapan
maksimum  dari  piroksikam,  pembuatan kurva baku piroksikam, preparasi sampel dari sediaan  gel,  serta  penetapan  kadar  zat  aktif piroksikam dalam sediaan gel.
2.3.5. Uji Permeasi Perkutan
Tahapan uji permeasi perkutan meliputi:
a. Penyiapan Bahan 1.  Dapar fosfat pH 7,4
2.  Cairan Spangler, yaitu larutan yang digunakan  untuk  bacam  membran selulosa sehingga membran tersebut memiliki  sifat  fisik  dan  komposisi yang  mendekati  stratum  korneum. Komposisi cairan Spangler:
27 Asam Palmitat 10 g Asam Oleat 15 g Asam Stearat 5 g Minyak Kelapa 15 g Skualen 5 g Parafin 10 g Kolesterol 5 g Lilin Putih 15 g 3.  Semua bahan untuk cairan Spangler dicampurkan dan dilumerkan di atas penangas  air  pada  suhu  80 o C  dan diaduk sampai homogen.
b. Penyiapan Membran 1.  Membran kulit ular
Membran  kulit  ular  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  berasal  dari  lepasan
kulit  yang  dilepaskan  secara  periodik  setiap 3-4 bulan sekali dari tubuh ular piton spesies Chondropython  viridis yang  diperoleh  dari Kebun Binatang Bandung. Kulit ular bagian dorsal dicuci dengan air suling dan direndam dengan  air  suling  selama  24  jam.  Membran diangkat  dan  dikeringkan  pada  suhu  kamar dengan cara diletakkan di atas kertas saring untuk  mempercepat  pengeringan.  Membran dipotong  dengan  diameter  2,5  cm  dan membran siap digunakan.
2.  Membran selulosa Kertas Whatman no. 1 direndam dalam cairan Spangler selama 15 menit. Membran diangkat  dan  dikeringkan  pada  suhu  kamar dengan cara diletakkan di atas kertas saring untuk  mempercepat  pengeringan.  Membran dipotong  dengan  diameter  2,5  cm  dan membran siap digunakan.
c. Uji  Permeasi  perkutan  Sediaan  Gel Piroksikam
Uji  permeasi  perkutan  dilakukan dengan  menggunakan  alat Franz  Diffusion Cell . 28 Pada pengujian ini rangkaian alat yang dipakai  terdiri  dari  sel  permeasi  perkutan, pompa  peristaltik,  pengaduk, beaker  glass , penangas air, penampung reseptor, termometer dan  selang  silikon  dengan  diameter  4  mm. Formula  sediaan  uji  ditimbang  1  g  dan diratakan  di  atas  membran.  Suhu  sistem dijaga  37  ±  0,5 o C  dengan  cairan  reseptor
Tabel 1. Formula Sediaan Gel Piroksikam dengan Basis
Aqupec HV-505
Bahan Formula F0 F1 F2 F3 Aqupec HV-505 (%) 1,00 1,00 1,00 1,00 Piroksikam (%) 0,50 0,50 0,50 0,50 TEA (%) 3,00 3,00 3,00 3,00 Propilenglikol (%) 20,00 20,00 20,00 20,00 Metil Paraben (%) 0,20 0,20 0,20 0,20 Propil Paraben (%) 0,05 0,05 0,05 0,05 DMSO (%) - 2,50 5,00 7,50 Aquadest ad (mL) 100,00 100,00 100,00 100,00 Keterangan: F0 = Formula gel piroksikam tanpa enhancer DMSO
F1 = Formula gel piroksikam dengan DMSO 2,5% F2 = Formula gel piroksikam dengan DMSO 5%
100  mL.  Cairan  reseptor  ini  berisi  dapar fosfat  pH  7,4.  Pompa  peristaltik  menghisap cairan  reseptor  dari beaker  glass kemudian dipompa  ke  sel  permeasi  perkutan  sehingga terjadi aliran secara hidrodinamis. Kemudian cairan  dialirkan  lagi  ke  reseptor.  Proses dilakukan selama 5 jam. Setiap selang waktu 30 menit dilakukan pengambilan sampel dari cairan  reseptor  sebanyak  5  mL  dan  setiap pengambilan  selalu  diganti  dengan  dapar fosfat  pH  7,4  sebanyak  5  mL.  Konsentrasi piroksikam  yang  terdifusi  diukur      dengan spektrofotometer  ultra  violet  pada  panjang gelombang 354 nm.
2.3.6. Uji Keamanan Pengujian  keamanan  sediaan  gel piroksikam  dengan  berbagai  variasi konsentrasi enhancer DMSO  dilakukan terhadap  10  orang  sukarelawan  untuk memenuhi  syarat  analisis  statistik.  Tehnik yang  digunakan  adalah  uji  oles  pada kulit  tangan  ( Patch  test ).  Pelaksanaan  uji keamanan  telah  mendapatkan  ijin  etik  dari Komisi Etik Fakultas Kedokteran Universitas Padjadajaran.

## 3. Hasil
3.1.  Evaluasi Fisik Sediaan Gel Piroksikam dengan Variasi Konsentrasi Enhancer 3.1.1. Pengamatan organoleptis Pengamatan  organoleptis  terdiri  dari pengamatan  terhadap  warna,  bau,  tekstur, dan  konsistensi.  Pemeriksaan  organoleptis ini  dilakukan  pada  semua  formula.  Hasil pengamatan  menunjukkan  bahwa  semua
formula memiliki warna kuning  bening, tidak berbau, tekstur yang halus, dan tidak terjadi perubahan konsistensi.
3.1.2. Pengamatan  pH sediaan gel dengan variasi konsentrasi enhancer Berdasarkan British  Pharmacopoeia 2016 29 ,  pH  gel  piroksikam  adalah  6-8. Pengukuran pH dilakukan dengan mengencerkan  sediaan  gel  dengan  aquadest kemudian  diukur  pada  pH  meter  Mettler Toledo.  Hasil  pengukuran  memperlihatkan bahwa semua formula memenuhi persyaratan pH ideal gel piroksikam yaitu < 8. Hasil rata- rata pengukuran pH masing-masing formula gel piroksikam diperlihatkan pada Gambar 1.
3.1.3. Pengamatan viskositas Viskositas  atau  kekentalan  gel  diukur dengan  Viskometer  Brookfield.  Hasil  rata- rata pengukuran viskositas dapat dilihat pada Gambar 2. Dari Gambar 2 dapat dilihat bahwa formula  gel  piroksikam  tanpa enhancer DMSO  memiliki  nilai  viskositas  yang  lebih tinggi dibandingkan dengan formula gel yang mengandung DMSO.
3.2.  Penentuan  Kadar  Piroksikam  dalam Sediaan Gel Selama Penyimpanan Grafik kadar piroksikam dalam sediaan diperlihatkan pada Gambar 3. Hasil penelitian memperlihatkan bahwa selama penyimpanan, kadar  piroksikam  dalam  sediaan  gel  pada semua  formula  mengalami  peningkatan. Peningkatan  paling  tinggi  diperlihatkan oleh  F3  dimana  pada  pengukuran  hari  ke-0
Gambar 1. Grafik Hasil Rata-rata pH gel Piroksikam dengan Enhancer DMSO Selama Waktu
Penyimpanan 7 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8 0 10 20 30 40 50 60 pH Hari ke - F0, tanpa DMSO F1, DMSO 2,5%
F2, DMSO 5%
F3, DMSO 7,5%
konsentrasi zat aktif piroksikam sebesar 93% sedangkan  setelah  penyimpanan  56  hari, konsentrasi  piroksikam  yang  terukur  dalam gel meningkat menjadi 102%.
3.3.  Pengujian Permeasi Piroksikam Setelah  dilakukan  evaluasi  fisik  dan stabilitas  terhadap  sediaan  gel  piroksikam maka  F2  ditetapkan  sebagai  formula  yang memenuhi  kriteria  sebagai  formula  yang paling  stabil,  karena  memiliki  viskositas yang  paling  selama  penyimpanan  dan memperlihatkan  peningkatan  konsentrasi yang  paling  kecil  selama  penyimpanan, dibandingkan dengan formula lain. Terhadap formula  F2  ini  kemudian  dilakukan  uji permeasi perkutan melalui membran kulit ular dan  membran  selulosa.  Pengujian  permeasi perkutan juga dilakukan terhadap formula gel tanpa DMSO, sebagai formula blanko. Hasil pengukuran laju permeasi piroksikam melalui membran kulit ular terlihat pada Gambar 4.
Profil  permeasi  perkutan  piroksikam  dari sediaan gel melalui membran selulosa dapat dilihat pada Gambar 5.
4.  Pembahasan Dari  Gambar  1  dapat  dilihat  bahwa pH  semua  formula  gel  piroksikam  hampir sama  yaitu  7,78-7,92  dan  setelah  56  hari penyimpanan semua formula gel piroksikam secara statistika menunjukkan perubahan pH tetapi masih dalam rentang yang sesuai dengan British Pharmacopoeia 2016 . 29 Penambahan DMSO  ke  dalam  formula  gel  piroksikam tidak terlalu mempengaruhi nilai pH sediaan. Hal ini disebabkan karena sifat DMSO yang bersifat amfoter, yaitu asam lemah dan basa lemah.  Ditinjau dari perubahan pH sediaan, formula  yang  paling  konstan  adalah  pada sediaan  gel  dengan  DMSO  5%  (F2).  Oleh karena itu F2 dapat dianggap sebagai formula yang  paling  baik  dibandingkan  dengan  F1 dan F3.
Gambar 2. Grafik Hasil Rata-rata Viskositas Gel Piroksikam dengan Enhancer DMSO Selama Waktu Penyimpanan
Gambar 3. Grafik Kadar Piroksikam dalam Sediaan Gel
200 210 220 230 240 250 260 270 280 0 20 40 60 V isk os ita s, d Pa s Hari ke - F0, tanpa DMSO F1, DMSO 2,5% F2, DMS0 5% F3, DMSO 7,5%
Hasil  analisis  statistika  dengan Anava  menggunakan desain acak sempurna terhadap  pH  dengan  derajat  kepercayaan 95% menunjukkan bahwa Ho ditolak karena F hitung lebih besar daripada F tabel . Hal ini berarti bahwa  terdapat  perbedaan  harga  pH  gel terhadap  lama  penyimpanan  pada  masing- masing formula.
Pengamatan selama 56 hari terhadap gel piroksikam yang dibuat menunjukkan bahwa semua  formula  gel  mengalami  penurunan viskositas  yang  tidak  signifikan.  Penurunan viskositas  tersebut  dapat  disebabkan  oleh interaksi  DMSO  dengan  matriks  gel.  Dari Gambar 2 terlihat bahwa perubahan viskositas yang paling konstan terjadi pada formula gel piroksikam dengan enhancer DMSO 5% (F2). Hasil analisis statistika desain acak sempurna terhadap  harga  viskositas  dengan  derajat kepercayaan 95% memperlihatkan bahwa Ho ditolak karena F hitung lebih besar dibandingkan dengan  F tabel .  Hal  ini  berarti  bahwa  terdapat perbedaan  mengenai  harga  viskositas  gel terhadap  lama  penyimpanan  pada  masing- masing formula. Kekentalan atau viskosotas dari sediaan gel mengalami perubahan selama penyimpanan, yang disebabkan menguapkan air sebagai komponen penyusun gel. Untuk  mengetahui  stabilitas  sediaan selama  penyimpanan  dilakukan  pengamatan terhadap  kadar  piroksikam  dalam  sediaan yang diukur dengan spektrofotometer UV.
Pada British  Pharmacopoeia 2016 disebutkan  bahwa  persyaratan  kandungan piroksikam  dalam  sediaan  gel  adalah  antara 95-105%. 29,30 Berdasarkan  hasil  pengukuran dengan  spektrofotometer,  kadar  piroksikam dalam  sediaan  gel  pada  semua  formula mengalami  peningkatan,  tetapi  peningkatan kadar  tersebut masih memenuhi persyaratan yang disebutkan pada British Pharmacopoeia tahun  2016 . 29 Peningkatan  kadar  ini disebabkan  karena  adanya  penguapan dari  air  sebagai  penyusun  basis  gel,  yang menyebabkan  terjadinya  efek  pengentalan pada  konsentrasi  piroksikam  sebagai  zat aktif.  Hasil  ini  juga  dapat  dijelaskan  dari hasil  pengukuran  viskositas  sediaan  dimana selama peningkatan memperlihatkan peningkatan  kekentalan.  Dapat  disimpulkan bahwa sediaan F0, F1, dan F2 stabil selama penyimpanan,  sedangkan  untuk  F3  terjadi peningkatan kadar.
Dari Gambar 4 terlihat bahwa formula gel  F2  dengan  DMSO  5%  memiliki  laju permeasi  dc/dt  =  0.0281%  per  menit sedangkan  laju  permeasi  formula  gel piroksikam  tanpa  DMSO  dc/dt  =  0.012% per  menit.  Laju  permeasi  formula  dengan DMSO 5% lebih tinggi dibandingkan dengan formula tanpa DMSO. Hal ini menunjukkan bahwa penetrasi piroksikam dari sediaan gel F2 lebih baik dibandingkan dengan formula blangko tanpa DMSO. Hal ini dapat diartikan
Gambar 4. Grafik Profil Permeasi Perkutan Piroksikam dalam Sediaan Gel Melalui Membran Kulit Ular
Keterangan: F0 = Formula gel Piroksikam tanpa enhancer DMSO F2 = Formula gel Piroksikam dengan DMSO 5%
bahwa  DMSO  terbukti  dapat  meningkatkan penetrasi piroksikam ke dalam membran kulit ular. Dari Gambar 5 terlihat bahwa formula gel  dengan  DMSO  5%  (F2)  memiliki  laju permeasi dc/dt = 0.006 % per menit sedangkan formula  gel  piroksikam  tanpa  DMSO  (F0) memiliki laju permeasi dc/dt = 0.0112 % per menit.    Laju  permeasi  formula  gel  dengan DMSO  5%  lebih  rendah  dibandingkan dengan formula tanpa DMSO. Secara teoritis penambahan DMSO sebagai enhancer pada formula gel seharusnya dapat meningkatkan penetrasi  zat  aktif.  Dari  Gambar  5  terlihat bahwa formula dengan DMSO 5% pada menit pertama dapat melepaskan zat aktif yang lebih tinggi daripada formula tanpa DMSO. Akan tetapi pada menit-menit berikutnya penetrasi zat  aktif  dari  sediaan  gel  sangat  sedikit. Hal  ini  berarti  bahwa  membran  selulosa kurang  sesuai  untuk  digunakan  dalam  uji permeasi yang menggunakan DMSO sebagai enhancer .  Hasil  yang  didapat  membuktikan bahwa penggunaan lepasan kulit ular sebagai membran  permeasi  memberikan  hasil  yang lebih  baik  yang  disebabkan  karena  susunan kimia dari membran ular lebih mirip dengan susunan  kimia  stratum  korneum  pada  kulit manusia  sehingga  proses  permeasi  lebih mendekati  keadaan  yang  sebenarnya  pada kulit.
Membran selulosa yang telah dibacam dengan cairan Spangler bersifat lipofilik sama halnya  dengan  piroksikam.  Kemungkinan yang  terjadi  adalah  ketika  piroksikam terabsorpsi ke dalam membran selulosa, maka piroksikam  terperangkap  pada  membran selulosa tersebut, karena sifatnya yang sama- sama  lipofilik.  Piroksikam  yang  terjerat dalam membran selulosa tersebut tidak dapat berpenetrasi  lebih  lanjut  ke  lapisan  stratum korneum,  sehingga  jumlah  piroksikam  yang terpenetrasi  melalui  membran  selulosa pada  menit-menit  selanjutnya  tidak  terlalu banyak. 24 Pengujian  keamanan  sediaan  gel piroksikam  dilakukan  terhadap  10  orang sukarelawan  dan  memberikan  hasil  bahwa formula  gel  tanpa  dan  dengan  DMSO  tidak menyebabkan  iritasi,  berupa  kemerahan atau  pembengkakan  pada  punggung  tangan 10  sukarelawan.  Dari  hasil  uji  keamanan tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  semua formula  gel  piroksikam  yang  dibuat  aman untuk digunakan.
5.  Simpulan Sediaan gel piroksikam  basis Aqupec HV-505 yang mengandung variasi konsentrasi enhancer DMSO  mempunyai  kestabilan fisik organoleptik dan konsistensi yang baik selama  56  hari  penyimpanan.  pH  sediaan
Gambar 5. Grafik Profil Permeasi Perkutan Piroksikam dalam Sediaan Gel Melalui Membran Selulosa
Keterangan: F0 = Formula gel Piroksikam tanpa enhancer DMSO F2 = Formula gel Piroksikam dengan DMSO 5%
gel basis Aqupec HV-505 yang mengandung variasi  konsentrasi enhancer DMSO  selama 56  hari  penyimpanan  masih  memenuhi persyaratan  seperti  yang  disebutkan  pada British Pharmacopeia yaitu 6-8. Laju permeasi formula gel piroksikam dengan  DMSO  5%  (F2)  melalui  membran kulit  ular  lebih  tinggi  (0.0281%  per  menit) dibandingkan  dengan  formula  tanpa  DMSO (F0)    (0.012%  per  menit).  Untuk  membran selulosa, laju permeasi formula gel piroksikam dengan DMSO 5% (F2) lebih rendah (0.006% per  menit)  dibandingkan  dengan  formula tanpa DMSO (F0) (0.0112% per menit). Laju permeasi piroksikam melalui membran kulit ular  lebih  baik  daripada    melalui  membran selulosa.
Semua  formula  gel  piroksikam yang  dibuat  aman  digunakan  karena  tidak menimbulkan  iritasi  pada  punggung  tangan sukarelawan  dengan  kriteria  sehat,  dewasa berumur  25-35  tahun  dengan  jenis  kelamin pria dan wanita.

## Daftar Pustaka
1.  Dignesh  M,  Ashish  D,  Dinesh  R.
Formulation  design  &  development  of piroxicam  emulgel.  Int.  J.  Pharm.  Tec. Res., 2012, 4 (3), 1332–1344.
2.  Curdy  C,  Kalia  YN,  Naik  A,  Guy  RH. Piroxicam  delivery  into  human  stratum corneum  in  vivo:  iontophoresis  versus passive  diffusion.  Journal  of  controlled release. 2001 Sep 11;76(1-2):73-9.
3.  Aliberti  AL,  de  Queiroz  AC,  Praça FS,  Eloy  JO,  Bentley  MV,  Medina WS.  Ketoprofen  microemulsion  for improved  skin  delivery  and  in  vivo anti-inflammatory effect. AAPS PharmSciTech. 2017 Oct;18(7):2783-91, DOI: 10.1208/s12249-017-0749-6.
4.  Nakamura A, Mori D, Tojo K. Evaluation of  the  predicted  time–concentration profile  of  serum  tulobuterol  in  human after  transdermal  application.  Chemical and  Pharmaceutical  Bulletin.  2012  Mar 1;60(3):300-5.
5.  Hatanaka T, Yoshida S, Kadhum WR, Todo H, Sugibayashi K. In silico estimation of
skin  concentration  following  the  dermal exposure  to  chemicals.  Pharmaceutical research. 2015 Dec;32(12):3965-74.
6.  Chakraborty,  A.,  Devi,  RKB.  Rita, S.  Sharatchandra,  Kh.  Singh,  Th.  I. Preliminary studies on anti-inflammatory and  analgesic  activities  of  Spilanthes acmella  in  experimental  animal  models. Indian  Journal  Pharmacology,  2014,  36 (3): 148-150.
7.  Oshizaka  T,  Kikuchi  K,  Kadhum  WR, Todo  H,  Hatanaka  T,  Wierzba  K,  et al.  Estimation  of  skin  concentrations of  topically  applied  lidocaine  at  each depth  profile.  International  journal  of pharmaceutics.  2014  Nov  20;475(1- 2):292-7.
8.  Polak S, Ghobadi C, Mishra H, Ahamadi M,  Patel  N,  Jamei  M,  et  al.  Prediction of  concentration–time  profile  and  its inter-individual  variability  following the  dermal  drug  absorption.  Journal of  pharmaceutical  sciences.  2012  Jul 1;101(7):2584-95.
9.  Jung  EC,  Maibach  HI.  Animal  models for  percutaneous  absorption.  Topical drug bioavailability, bioequivalence, and Penetration. 2014:21-40.
10. Shin  SC,  Cho  CW,  Oh  IJ.  Enhanced efficacy  by  percutaneous  absorption  of piroxicam from the poloxamer gel in rats. International  journal  of  pharmaceutics. 2000 Jan 5;193(2):213-8.
11. Derry  S,  Conaghan  P,  Da  Silva  JA, Wiffen  PJ,  Moore  RA. Topical  NSAIDs for  chronic  musculoskeletal  pain  in adults. Cochrane Database of Systematic Reviews. 2016(4).
12. Horita  D,  Hatta  I,  Yoshimoto  M,  Kitao Y,  Todo  H,  Sugibayashi  K.  Molecular mechanisms  of  action  of  different concentrations  of  ethanol  in  water on  ordered  structures  of  intercellular lipids  and  soft  keratin  in  the  stratum corneum.  Biochimica  et  Biophysica Acta  (BBA)-Biomembranes.  2015  May 1;1848(5):1196-202.
13. Dancik  Y,  Anissimov  YG,  Jepps  OG, Roberts  MS.  Convective  transport  of highly  plasma  protein  bound  drugs
facilitates  direct  penetration  into  deep tissues  after  topical  application.  British journal  of  clinical  pharmacology.  2012 Apr;73(4):564-78.
14. Abd E, Yousef SA, Pastore MN, Telaprolu K,  Mohammed  YH,  Namjoshi  S,  et  al. Skin models for the testing of transdermal drugs.  Clinical  pharmacology:  advances and applications. 2016;8:163.
15. Oesch F, Fabian E, Guth K, Landsiedel R. Xenobiotic-metabolizing enzymes in the skin of rat, mouse, pig, guinea pig, man, and  in  human  skin  models. Archives  of Toxicology. 2014 Dec 1;88(12):2135-90.
16. Uzor  PF,  Mbah  CJ,  Omeje    EO. Perspectives  on  Transdermal  Drug Delivery.  Journal  of  Chemical  and Pharmaceutical  Research.  2011,  3(3): 680-700.
17. Ashley  NT,  Weil  ZM,  Nelson  RJ. Inflammation:  mechanisms,  costs,  and natural  variation.  Annual  Review  of Ecology,  Evolution,  and  Systematics. 2012 Dec 1;43:385-406.
18. Harirforoosh  S,  Asghar  W,  Jamali F.  Adverse  effects  of  nonsteroidal antiinflammatory  drugs:  an  update of gastrointestinal, cardiovascular and  renal  complications.  Journal  of Pharmacy  &  Pharmaceutical  Sciences. 2013;16(5):821-47.
19. Zeng C, Wei J, Persson MS, Sarmanova A, Doherty M, Xie D, et al. Relative efficacy and  safety  of  topical  non-steroidal  anti- inflammatory  drugs  for  osteoarthritis: a  systematic  review  and  network  meta- analysis  of  randomised  controlled trials  and  observational  studies.  British journal  of  sports  medicine.  2018  May 1;52(10):642-50.
20. Tippavajhala  VK,  de  Oliveira  Mendes T,  Martin  AA.  In  vivo  human  skin penetration  study  of  sunscreens  by confocal  Raman  spectroscopy.  AAPS PharmSciTech.  2018  Feb;19(2):753-60. DOI: 10.1208/s12249-017-0852-8
21. Zhang J, Sun M, Fan A, Wang Z, Zhao
Y.  The  effect  of  solute–membrane interaction  on  solute  permeation  under supersaturated  conditions.  International
journal  of  pharmaceutics.  2013  Jan 30;441(1-2):389-94.
22. Panzade PS, Puranik P. Iontophoresis: A Functional Approach for Enhancement of Transdermal Drug Delivery Asian Journal of  Biomedical  and  Pharmaceutical Sciences 2(11) 2012, 01-08.
23. Jung E, Kang YP, Yoon IS, Kim JS, Kwon SW, Chung SJ, et al. Effect of permeation enhancers  on  transdermal  delivery  of fluoxetine: in vitro and in vivo evaluation. International  journal  of  pharmaceutics. 2013 Nov 18;456(2):362-9.
24. Itoh  T,  Xia  J,  Magavi  R,  Nishihata  T, Rytting  JH.  Use  of  shed  snakeskin  as  a model membrane for in vitro percutaneous penetration  studies:  comparison  with human  skin.  Pharmaceutical  research. 1990 Oct;7(10):1042-7.
25. Bhasi  K,  Riga  AT,  Alexander  KS. Characterization  of  snakeskin  by thermoanalytical  techniques.  Journal  of thermal  analysis  and  calorimetry.  2004 Jan;75(1):269-76.
26. Lee  KE,  Choi  YJ,  Oh  BR,  Chun  IK, Gwak  HS.  Formulation  and  in  vitro/in vivo evaluation of levodopa transdermal delivery systems. International journal of pharmaceutics. 2013 Nov 18;456(2):432- 6.
27. Agoes  G.  Penelitian  Difusi  Asam Salisilat dan Kloramfenikol dari Sediaan Semisoloda  dengan  Pembawa  Vaselin, Campuran  Vaselin  Propilenglikol  dan Vaselin  Lemak  Bulu  Domba  secara  In vitro. Acta Pharmaceutica IX (3). 1986.
28. Ujwala  A,  Shinde  UA,    Modani  SH, Singh  KH.  Design  and  Development of  Repaglinide  Microemulsion  Gel for  Transdermal  Delivery.  AAPS PharmSciTech, 2018, Vol. 19(1), January 2018.
29. British  Pharmacopoiea  Comissi  on, British  Pharmacopoiea  2016,  London, TSO, 2016
30. Khullar  R,  Kumar  D,  Seth  N,  Saini  S. Formulation and evaluation of mefenamic acid  emulgel  for  topical  delivery.  Saudi pharmaceutical  journal.  2012  Jan 1;20(1):63-7.