Jurnal : Jurnal Kesehatan Prima Volume
: 10, No.2, Agustus 2016, Halaman : 1709-1716
ISSN Print : 1978 – 1334, ISSN Online : 2460 – 8661

## ___________________________________________________________________________
Maruni Wiwin Diarti, Erlin Yustin Tatontos, Aden Turmuji : Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Mataram, Jl. Prabu Rangkasari Dasan Cermen Sandubaya Mataram

## LARUTAN PENGENCER ALTERNATIF NaCl 0,9 % DALAM PENGECATAN GIEMSA PADA PEMERIKSAAN MORFOLOGI SPERMATOZOA

## Maruni Wiwin Diarti, Erlin Yustin Tatontos, Aden Turmuji
Abstrak :  Kualitas  hasil  pewarnaan  morfologi  spermatozoa  menggunakan  cat  Giemsa  sangat  dipengaruhi  oleh jenis bahan pengencer cat Giemsa. Syarat pengencer yang dapat digunakan adalah memiliki sifat buffer. Larutan NaCl  0,9%  selain  memiliki  sifat  buffer  juga  memiliki  harga  yang  lebih  murah.    Penelitian  ini  merupakan penelitian  deskriptif  yang  bertujuan  mengetahui  NaCl  0,9%  sebagai  larutan  pengencer  alternatif  dalam pengecatan Giemsa pada pemeriksaan morfologi spermatozoa. Penelitian ini dilakukan dengan membandingkan kualitas  pewarnaan  morfologi  spermatozoa  menggunakan  cat  Giemsa  yang  diencerkan  dengan  larutan  NaCl 0,9%  dan  larutan  Buffer  Fosfat.  Hasil  penelitian  pengecatan  Giemsa  dengan  larutan  NaCl  0,9%  didapat penyerapan  cat  morfologi  spermatozoa  baik  adalah  71,625%  dan  penyerapan  cat  morfologi  spermatozoa  tidak baik  adalah  28,375  %.  Hasil  penelitian  yang  menggunakan  larutan  Buffer  Fosfat  didapat  penyerapan  cat morfologi  spermatozoa  baik  adalah  81,563  %  dan  penyerapan  cat  morfologi  spermatozoa  tidak  baik  adalah 18,438  %.  NaCl  0,9  %  dapat  digunakan  sebagai  larutan  pengencer  alternatif  dalam  pengecatan  Giemsa  pada pemeriksaan morfologi spermatozoa.
Kata Kunci: Cat Giemsa, Larutan NaCl 0,9% , Morfologi Spermatozoa.

## THE ALTERNATIVE DILUTE SOLUTION OF NaCl 0.9% AT THE GIEMSA STAINING ON THE INVESTIGATION THE MORPHOLOGY OF SPERMATOZOA
Abstract  : The  quality  of  staining,  the  morphology  of  spermatozoon  applays  The  Giemsa  dye,  is  strongly influenced by the type of Giemsa thinner. The terms of diluent that can be used is having a buffer property. The solution of NaCl 0.9 %, besides having buffer properties also has a cheaper price. The research is a descriptive study  that  aims  to  determine  NaCl  0.9%  as  the  alternative  of  diluting  solution  at  Giemsa  staining  on morphological examination of spermatozoon. This study was conducted to compare the quality of spermatozoon morphology staining by using Giemsa which was diluted with 0.9% NaCl solution and the solution of Phosphate Buffer.  The  result  of  the  study  indicated  The  Giemsa  staining  with  NaCl  0.9%  solution,  is  obtained  the outstanding  spermatozoon  morphology  staining  absorption  was  71.625%  and  the  poor  spermatozoon morphology  staining  absorption  was  28.375%.  The  results  of  study  which  was  applied  the  Phosphate  Buffer solution, was obtained the outstanding spermatozoon morphology staining absorption was 81.563% and the poor spermatozoon  morphology  staining  absorption  was  18.438%.  The  NaCL  0.9%  can  be  used  as  an  alternative dilute solution at Giemsa staining on morphological examination of spermatozoon.
Keywords: Giemsa dye , 0.9 % NaCl solution , Sperm Morphology .

## LATAR BELAKANG
Angka  infertilitas  pasangan  suami-istri  di seluruh  dunia  menurut  Badan  Kesehatan  Dunia ( World  Health  Organization,  WHO )  dan  laporan lainnya,  diperkirakan  8-12  %  pasangan  yang mengalami masalah infertilitas selama masa reproduktif  mereka.    Sedangkan  data  infertilitas  di Indonesia    yang  mengalami  kesulitan  untuk mendapatkan  anak  sekitar  10%.    Faktor  yang menyebabkan infertilitas berasal dari suami, istri atau keduanya.  Menurut penelitian yang dilakukan WHO 1989,  faktor  penyebab  yang  berasal  dari  suami sebesar  40%  (Kuswondo,  2002).  Faktor-faktor penyebab kasus infertil pada pria antara lain genetik, umur,  infeksi,  autoantibodi,   defisiensi  testosteron, hipogonadisme,    kanker,  faktor  lingkungan,  efek samping  dari  pengobatan, retrograde  ejaculation, vasectomy,  varicocele ,  dan  kualitas  spermatozoa (Aryoseto, 2009).  Kasus infertilitas dapat diketahui dengan  cara  pemeriksaan  sperma  atau  analisis semen.  Analisis  semen  atau  disebut  pemeriksaan sperma  merupakan  salah  satu  pemeriksaan  yang penting untuk penilaian kesuburan pria.  Pemeriksaan analisis  semen  ini  penting  tidak  hanya  untuk  para ahli  andrologi  yang  menangani  masalah  pria  tetapi juga  penting  untuk  para  ahli  ginekologi  yang menangani  para  wanita.      Analisis  semen  manusia berguna  bagi  pasangan  yang  ingin  melakukan program  Keluarga  Berencana  dan  pada  pria  yang telah  dilakukan  vasektomi  untuk  mengetahui  apakah semen  mereka  masih  fertil  ataukah  sudah  tidak mengandung spermatozoa lagi (Soeradi,2003).
Kualitas   spermatozoa  salah   satunya   ditentukan oleh morfologi dari  spermatozoa.  Pemeriksaan  morfologi
spermatozoa  ditujukan  dengan  melihat  bentuk- bentuk  spermatozoa.    Dengan  pemeriksaan  ini diketahui  beberapa  bentuk  spermatozoa  normal  dan abnormal.    Untuk  pemeriksaan  morfologi  sperma yang biasa digunakan di laboratorium adalah dengan pulasan giemsa.  Giemsa cukup akurat dan sederhana untuk pemeriksaan morfologi (Arsyad, 2011).
Cat  Giemsa  harus  diencerkan  terlebih dahulu  sebelum  dipakai  mewarnai  spermatozoa. Syarat  pengencer  giemsa  yang  ideal  yaitu:  isotonik, memiliki  kemampuan  menyangga  dengan  baik  dan mempunyai  pH  6,8  –  7,0  agar  tidak  berpengaruh pada  pewarnaan  morfologi  spermatozoa.    Terlalu asam  atau  berlebih  basa  maka  bisa    menimbulkan kualitas penyerapan cat oleh spermatozoa tidak baik, untuk    itu    diperlukan    larutan  buffer  supaya  asam dan  basa  seimbang.    Fungsi  dari  larutan  buffer adalah  menjadi  zat  yang  mempertahankan  keadaan pH saat sejumlah  kecil basa atau asam dimasukan  ke dalam larutan(Sherwood, 2001). Pewarnaan  Giemsa dalam  analisis  morfologi  spermatozoa  umumnya menggunakan  larutan  buffer  fosfat  yang  dibuat dengan  derajat  keasaman  6,8  -  7,2.    Pengenceran dengan  aquades  kurang  dianjurkan  karena  dapat menyebabkan  sel  spermatozoa  mengembang  dan pecah karena sifat aquades yang hipertonis.  Hal ini disebabkan  karena  cairan  aquades  masuk  ke  dalam sel  melalui  membran  semipermeabel.  Oleh  karena itu  cairan  yang  masuk  ke  dalam  sel  harus  bersifat isotonis agar sel tersebut tidak pecah atau mengkerut (Sherwood, 2001).       Buffer fosfat sebagai larutan buffer  karena  memiliki  sifat  isotonis  dan  mampu menahan perubahan pH ketika ion-ion hidrogen atau hidroksida  ditambahkan  atau  ketika  larutan  itu
diencerkan  disebut  larutan  penyangga  atau  larutan dapar (Day & Underwood, 2002).   Walaupun buffer fosfat  mudah  didapatkan,  namun  harganya  cukup mahal,  maka  perlu  larutan  alternatif  yang  bisa digunakan sebagai larutan pengencer dalam pengecatan  Giemsa  yang    lebih  murah  dan  mudah didapatkan  seperti  NaCl  dengan  konsentrasi  0,9  %. Larutan  NaCl  0,9%    memiliki  sifat  isotonis  pada cairan  sel  dan  mampu  mempertahankan  perubahan pH  sperma  pada  suhu  kamar  (Rahardianto,  2012); (Ansel  &  Prince,  2004).            Larutan  NaCl  0,9% memiliki  sifat  yang  mirip  dengan  buffer  dan berdasarkan  hasil  uji  pendahuluan  yang  telah dilakukan  oleh  peneliti,  larutan  NaCl  0,9%  tidak mempengaruhi  kondisi  fisik  spermatozoa  seperti kegunaan buffer fosfat sebagai larutan pengencer cat Giemsa.    Namun  perlu  diuji  apakah  larutan  NaCl 0,9%  memiliki  kualitas  yang  sama  dengan  larutan buffer  fosfat  sebagai  pengencer  cat  Giemsa  dalam analisis  morfologi  spermatozoa,  sehingga  perlu dilakukan  penelitian  mengenai  uji  NaCl  0,9% sebagai larutan pengencer alternatif dalam pengecatan  Giemsa  pada  pemeriksaan  morfologi spermatozoa.

## METODE
Penelitian ini bersifat observasional deskriptif,  yaitu  penelitian  yang  dilakukan  dengan tujuan  untuk  mengetahui  gambaran  atau  deskripsi tentang suatu keadaan secara obyektif.
(Notoatmodjo,  2002).  Penelitian  ini  akan  mengkaji kemampuan  NaCl  0,9%  sebagai  larutan  pengencer cat Giemsa pada pemeriksaan morfologi spermatozoa
dengan  menggunakan  Buffer  fosfat  pH  6,8  sebagai pembanding.
Bahan Penelitian : Cairan sperma dan Larutan NaCl 0,9 %
Besar  Unit Penelitian : Adapun cara menentukan besarnya unit penelitian berdasarkan rumus Federer pada buku Kemas Hanafiah (2010) yaitu  (t – 1) (r – 1)   ≥    15.
Variabel  Penelitian :
Variabel Bebas    : Larutan NaCl 0,9% Variabel terikat   :  Hasil pewarnaan pada pemeriksaan morfologi
spermatozoa.

## Definisi Operasional
1. Larutan  NaCl  0,9%  merupakan  larutan  isotonis yang  diperoleh  dari  0,9  gram  kristal  NaCl  yang dilarutkan dalam 100 ml aquades dan dinyatakan dalam % b/v.
2. Larutan  pengencer  merupakan  larutan  yang digunakan untuk mengencerkan cat giemsa dalam pemeriksaan morfologi spermatozoa.
3. Giemsa  adalah  pewarna  yang  digunakan  dalam pengecatan  sel  yang  akan  diencerkan  dengan larutan buffer posfat dan NaCl 0,9%.
4. Pemeriksaan  morfologi  spermatozoa  merupakan bagian  dari  pemeriksaan  sperma  yang  meliputi pengamatan  gambaran  bagian  sel  spermatozoa (kepala, leher dan ekor).

## Data yang Dikumpulkan
Data  yang  dikumpulkan  dalam  penelitian  ini  adalah hasil  pewarnaan  Giemsa  dan  hasil  pemeriksaan morfologi  spermatozoa  menggunakan  buffer  fosfat pH  6,8  (  sebagai  pembanding)  dan  NaCl  0,9  %
sebagai  larutan  pengencer  Giemsa  yang  diamati secara mikroskopis.
Instrumentasi  penelitian  : Glass  bekker, Objek glass,  Cover  glass, Bak  pewarnaan,  Pipet  pastur,
Pipet  ukur,  Botol  cat,  Mikroskop  .  Reagen  :  Cat Giemsa  induk  dengan  konsentrasi  10  %,  Buffer fosfat pH 6,8 dan Prosedur kerja : Pembuatan Buffer fosfat pH 6,8
1) Dibuat  larutan  stok  A:  Ditimbang  NaH 2 PO 4 sebanyak  27,8  gram,  dilarutkan  dalam  1  liter aquades.
2) Dibuat  larutan  stok  B:  Ditimbang  Na 2 HPO 4 . 12H 2 O  sebanyak  71,1  gram,  dilarutkan  dalam  1 liter aquades.
3) Dipipet 51,0 ml larutan dari stok A masukkan ke glass bekker.
4) Ditambahkan 49,0 ml larutan dari stok B
5) Dihomogenkan,dimasukkan  ke  botol  lalu  di  beri label.
Pembuatan larutan NaCl 0,9 %
1) Ditimbang kristal NaCl sebanyak 0,9 gram.
2) Dilarutkan  dalam  aquades  100  ml  sehingga didapat konsentrasi 0,9%.
Pembuatan  larutan  stok  Giemsa  dengan  pengencer Buffer  fosfat  pH  6,8  sebanyak  5  ml  (diencerkan  5 kali ).
1) Dipipet giemsa pokok sebanyak 10 ml.
2) Ditambahkan 40 ml Buffer fosfat.
3) Dimasukkan  ke  dalam  botol,  kemudian  diberi label.
Pembuatan  stok  giemsa  dengan  pengencer  larutan
NaCl 0,9% sebanyak 50 ml (diencerkan 5 kali).
1) Dipipet Giemsa pokok sebanyak 10 ml.
2) Ditambahkan  larutan  NaCl  0,9  %  sebanyak  40 ml.
3) Dimasukkan  ke  dalam  botol,  kemudian  diberi label.
Pembuatan hapusan sperma
1) Diteteskan  sperma  ke objek  glass sebanyak  1 tetes (40 µ).
2) Dibuat hapusan dengan mendorong menggunakan cover  glass dengan  kemiringan cover 25  –  30 0 , kemudian dikeringkan.
Pewarnaan  hapusan  dengan  cat  Giemsa  stok  dengan pengencer Buffer fosfat
1) Diletakkan hapusan diatas rak pewarnaan.
2) Difiksasi dengan methanol selama 5 menit.
3) Diwarnai  dengan  pewarnaan  Giemsa,  biarkan selama 15-20 menit.
4) Dibilas dengan air suling.
5) Diletakkan  hapusan  dalam  sikap  vertikal  dan biarkan mengering oleh udara.
Pewarnaan  hapusan  dengan  cat  Giemsa  stok  dengan pengencer NaCl 0,9 %
1) Diletakkan hapusan diatas rak pewarnaan.
2) Difiksasi dengan methanol selama 5 menit.
3) Diwarnai  dengan  pewarnaan  Giemsa  stok, biarkan selama 15 - 20 menit.
4) Dibilas dengan air suling.
5) Diletakkan  sediaan  dalam  sikap  vertikal  dan biarkan mengering oleh udara.
Pembacaan morfologi spermatozoa
1) Diletakkan  hapusan  diatas  mejak  objektif mikroskop.
2) Ditetesi dengan oil imersi .
3) Diamati  morfologi  spermatozoa  berdasarkan  dari kualitas  penyerapan  cat  warna  giemsa  pada
kepala,  leher  dan  ekor  spermatozoa  dengan kriteria sebagai berikut:
Penyerapan  Cat  Baik  :  Bila  hasil  pewarnaan bersih,  bisa  membedakan  dengan  jelas  bagian spermatozoa (kepala, leher dan ekor), spermatozoa terlihat jelas dan tidak rusak, kepala berwarna  ungu  dan  leher  dan  ekor  abu-abu sampai ungu.
Penyerapan  Cat  Tidak  Baik  :  Bila  hasil pewarnaan  kotor,  bagian  spermatozoa  tidak terlihat dengan jelas dan spermatozoa rusak.
Analisis Data : Data yang diperoleh mengenai hasil pewarnaan  dan  pemeriksaan  morfologi  spermatozoa menggunakan  pulasan  Giemsa  dengan  pengencer NaCl  0,9  %,  dan  buffer  posfat  pH  6,8      (sebagai pembanding)  disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan dianalisis dengan cara deskriptif.

## HASIL PENELITIAN
Hasil  pengecatan  Giemsa  yang  diencerkan dengan  NaCl  0,9%  pada  pemeriksaan  morfologi spermatozoa  meliputi  penyerapan  cat  oleh  kepala, leher dan ekor dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1  Hasil pengecatan Giemsa yang
diencerkan NaCl 0.9 % pada
pemeriksaan morfologi spermatozoa No Kualitas penyerapan cat Giemsa Morfologi spermatozoa Rerata (sel) Persentase 1 Penyerapan Cat Baik 71,63 71,63% 2 Penyerapan Cat Tidak Baik 28,38 28,38% Jumlah 100 100%
Tabel  4.1  menunjukkan  bahwa  hasil  pemeriksaan morfologi  spermatozoa  menggunakan  cat  Giemsa yang  diencerkan  dengan  larutan  NaCl  0.9%  dan dihitung  dalam  100  sel/replikasi  didapatkan    jumlah morfologi  spermatozoa  dengan  kategori  penyerapan
cat    baik  sebanyak  71,63%.  Sedangkan  jumlah morfologi  spermatozoa  dengan  kategori  penyerapan cat tidak baik sebanyak 28,38%.
Hasil  pengecatan  Giemsa  yang  diencerkan dengan  Buffer  Fosfat  pada  pemeriksaan  morfologi spermatozoa  meliputi  penyerapan  cat  oleh  kepala, leher dan ekor dapat dilihat pada tabel 4.2.
Tabel 4.2 Hasil pengecatan Giemsa yang diencerkan  dengan  larutan  Buffer
Fosfat  pada  pemeriksaan  morfologi
spermatozoa
No Kualitas penyerapan cat Giemsa Morfologi spermatozoa Rerata (sel) Persentase 1 Penyerapan Cat Baik 81,56 81,56% 2 Penyerapan Cat Tidak Baik 18,44 18,44% Jumlah 100 100%
Tabel  4.2  menunjukkan  bahwa  hasil  pemeriksaan morfologi  spermatozoa  menggunakan  cat  Giemsa yang  diencerkan  dengan  larutan  Buffer  Fosfat  dan dihitung  dalam  100  sel/replikasi  didapatkan    jumlah morfologi  spermatozoa  dengan  kategori  penyerapan cat  baik  sebanyak  81,56%.    Sedangkan  jumlah morfologi  spermatozoa  dengan  kategori  penyerapan cat tidak baik sebanyak 81,56%.

## PEMBAHASAN
Pemeriksaan morfologi spermatozoa merupakan  salah  satu  parameter  penilaian  kualitas sperma  pria.    Pemeriksaan  morfologi  spermatozoa ditujukan dengan melihat bentuk-bentuk spermatozoa.    Dengan  pemeriksaan  ini  diketahui beberapa  bentuk  spermatozoa  normal  dan  abnormal. Untuk  pemeriksaan  morfologi  sperma  yang  biasa digunakan  di  laboratorium  adalah  dengan  pulasan giemsa.    Giemsa  cukup  akurat  dan  sederhana  untuk pemeriksaan morfologi ( Arsyad, 2011).
Agar  pH    cat  Giemsa  tetap  stabil  dan pemakaian  cat  menjadi  lebih  irit  pada  saat pewarnaan,  cat  Giemsa  diencerkan  terlebih  dahulu sebelum  mewarnai spermatozoa.  Larutan pengencer yang  digunakan  harus  memiliki  sifat  buffer  yaitu larutan yang bersifat isotonis dan mampu mempertahankan  keseimbangan  asam  dan  basa  dan memiliki  pH  6,8  –  7,2  agar  tidak  berpengaruh  pada pewarnaan  morfologi  spermatozoa.    Terlalu  asam atau berlebih  basa  maka bisa    menimbulkan kualitas penyerapan  cat  oleh  spermatozoa  tidak  baik (Sherwood, 2001).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa penggunaan  larutan  NaCl  0,9  %  dan  Buffer  Fosfat sebagai bahan pengencer cat Giemsa yang digunakan dalam mewarnai spermatozoa menunjukkan perbedaan kualitas penyerapan warna oleh spermatozoa.  Pada penggunaan larutan Buffer Fosfat masih adanya leher dan ekor yang tidak terlihat.  Hal ini  dapat  terjadi  karena  kondisi  abnormalitas spermatozoa.
Hasil morfologi spermatozoa dengan penggunaan  NaCl  0,9  %  sebagai  larutan  pengencer cat  Giemsa  menunjukkan    masih  ada  kepala,  leher dan  ekor  spermatozoa  yang  tidak  berwarna  ungu tetapi  berwarna  biru  muda,  hal  ini  dapat  disebabkan karena pH larutan NaCl 0,9 % lebih dari 7 sehingga inti  sel  spermatozoa  lebih  menyerap  zat  warna  basa ( Azur  bluish ),  yang  akan  menyebabkan  warna  sel spermatozoa  menjadi  biru  muda.    Hal  ini  sesuai dengan  hasil  penelitian  Widya  Bhakti  Suryanata tahun    2013  yang  menyatakan  bahwa  pH  pengencer cat  Giemsa  sangat  berpengaruh  terhadap  kualitas pewarnaan suatu sediaan apus.
Meskipun  masih  ada  beberapa  morfologi spermatozoa yang penyerapan catnya tidak baik atau tidak  memenuhi  kriteria  pewarnaan  pada  pemakaian NaCl  0,9  %  sebagai  pengencer  cat  Giemsa,  namun sebagian  besar  morfologi  spermatozoa  memenuhi kriteria baik yaitu spermatozoa utuh dan jelas, warna yang  kontras  dan  yang  paling  penting  morfologi spermatozoa dapat diamati.
Dasar dari pemeriksaan Romanowsky adalah penggunaan dua zat warna yang berbeda yaitu Azur  B  ( Bluish )  bersifat  basa  dan  Eosin  Y ( Yellowish )  bersifat  asam.      Azur  B  akan  mewarnai komponen  sel  yang  bersifat  asam  seperti  kromatin, dan  beberapa  struktur  sitoplasma  (DNA  dan  RNA) menjadi  warna  biru  sampai  ungu.    Sedangkan  Eosin Y  akan  mewarnai  komponen  sel  yang  bersifat  basa seperti  mitokondria  dan  granula  menjadi  warna merah  oren.    Ikatan  Eosin  Y  pada  Azur  B  yang beragregasi  dapat  menimbulkan  warna  ungu,  dan keadaan  ini  dikenal  sebagi  efek  Romanowsky giemsa.    Efek  ini  terjadi  sangat  nyata  pada  DNA tetapi  tidak  pada  RNA  sehingga  menimbulkan kontras  antara  inti  sel  yang  berwarna  ungu kemerahan  dengan  sitoplasma  yang  berwarna  ungu (Yuliana, 2013).
Beberapa  faktor  yang  dapat  mempengaruhi kualitas hasil pewarnaan antara lain kualitas Giemsa induk,  kualitas  pengencer  cat  Giemsa,  kebersihan slide,  lama  fiksasi  dengan  methanol  dan  ketebalan sediaan.    Kualitas  cat  Giemsa  yang  digunakan  harus dicek  mutunya  dan  dilihat  tanggal  kadaluwarsa  cat tersebut.    Giemsa  yang  mutunya  jelek  atau  sudah rusak  tidak  akan  mengeluarkan    warna  ungu  atau merah ( Suryanta, dkk, 2012).
Penelitian  ini  membuktikan  bahwa    larutan NaCl  0,9  %  dapat  dijadikan  sebagai  larutan pengencer  alternatif  cat  Giemsa.  Penelitian  ini didukung  oleh  hasil  penelitian    Adianto  tahun  2013 yang  menyatakan  bahwa  larutan  pengencer  cat Giemsa yang memiliki sifat buffer akan menunjukkan  hasil  pewarnaan  yang  lebih  baik dibandingkan dengan aquades.

## KESIMPULAN
Larutan  NaCl  0,9%    memiliki  kemampuan  sebagai pengencer  alternatif  dalam  pengecatan  Giemsa  pada pemeriksaan  morfologi  spermatozoa.  Larutan  NaCl 0,9% memiliki sifat isotonis yang dilihat dari bentuk fisik  spermatozoa  yang  tidak  berubah. Larutan  NaCl 0,9%  sebagai  larutan  pengencer  cat  Giemsa  dalam pemeriksaan morfologi spermatozoa memiliki kualitas yang lebih rendah dari larutan Buffer Fosfat dengan  selisih  morfologi  spermatozoa  kategori penyerapan cat baik adalah 9,938%.

## Saran
Bagi petugas laboratorium sebaiknya menggunakan  larutan  NaCl  0,9%  sebagai  larutan pengencer    cat  Giemsa,  karena  memiliki  harga  yang lebih murah.

## DAFTAR PUSTAKA
Adianto, W. (2013). Perbedaan Morfologi Sel Darah Pada  Pengecatan  Giemsa  Yang  Diencerkan Menggunakan  Aquades  Dan  Buffer  pH  6,8.
Karya Tulis Ilmiah . Universitas Muhammadiyah Semarang, Semarang
Alimul  Hidayat,  A.  A.,  &  Uliyah,  M.  (2008).
Keterampilan Dasar Praktik Klinik Kebidanan (2nd  ed.,  p.  45).  Jakarta:
Penerbit Salemba Medika.
Analis  Kesehatan  Maram.  2013. Diktat  Praktikum Cytohistoteknologi. Analis Kesehatan
Poltekkes Kemenkes Mataram.
Ansel,  H.  C.,  &  Prince,  S.  J.  (2004). Kalkulasi Farmasetik . Jakarta: EGC.
Arios,  R.,  Tomuka,  D.,  &  Kristanto,  E.  (2014).
Efektifitas Deteksi Spermatozoa
Menggunakan  Pewarna  Malachite  Green.
Jurnal E-CliniC(eCl), Manado .
Aryoseto,  L.  (2009).  Hubungan  Antara  Jumlah
Leukosit  Dengan  Morfologi  Spermatozoa
Pada  Pasien  Infertilitas  Di  Rumah  Sakit
Dokter Kariadi. Tesis. Universitas Diponegoro. Semarang Bhakti  Suryanata,  W.  (2013).  Pengaruh  pH  Buffer Pada Pengencer Giemsa Terhadap Gambaran Mikroskopis Sediaan Apus
Malaria. Karya  Tulis  Ilmiah. Universitas Muhammadiyah Semarang, Semarang.
Day, R. ., & Underwood, A. . (2002). Analisis Kimia Kuantitatif (Edisi  Keen,  p.  148).  Jakarta: Penerbit Erlangga.
Depkes,  RI.  (2005).  Good  Laboratory  Practice.
Depkes, RI.
E.  Johnson,  K.  (2011). Quick  Review  Histologi  & Biologi Sel . Jakarta: Binampa Aksara.
Eka  Pramana  W,  R.,  Suryani,  M.,  &  Supriyono,  M. (2015). Efektivitas Pengobatan Madu Alami Terhadap  Penyembuhan  Luka  Infeksi  Kaki Diabetik (IKD), 5–10.
Ferdinan  P,  F.,  &  Ariebowo,  M.  (2007). Praktis Belajar  Biologi (1st  ed.,  p.  184).  Jakarta: Visindo Media Persada.
Gandosoebrata,  R.  (2010). Penuntun  Laboratorium Klinik . Jakarta: Dian Rakyat.
Joseph,  &  Hadjiza,  B.  W.  (2013). Basic  Physical Pharmacy . (W. Brotmiller, Ed.). Burlington. Arsyad.  (2011).  Morfologi  Sperma. Perkumpulan Andrologi Indonesia , 1486.
Lefever  Kee,  J.  (2008). Pedoman  Pemeriksaan Laboratorium  &  Diagnostik .  (R.  P.  Kapoh,
Ed.)  (6th  ed.,  p.  415).  Jakarta:  Penerbit Buku Kedokteran EGC.
M.  Horne,  M.,  &  L.  Swearingen,  P.  (2001). Keseimbangan  Cairan,  Elektrolit  dan  Asam Basa (2nd  ed.,  p.  11).  Jakarta:  Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Novel,  S.  S.  (2010). Kamus  Bilogi  SMA (p.  94). Jakarta: Gagas Media.
Permata  Sari,  O.  (2007).  Pengaruh  Pemberian Ekstrak  Kedelai  Dosis  Bertingkat  Terhadap Jumlah  Spermatozoa  Mencit  Jantan  Strain.
Karya  Tulis  Ilmiah. Fakultas  Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang.
Rahardhianto,  A.,  Abdulgani,  N.,  &  Trisyani,  N.
(2012). Pengaruh Konsentrasi Larutan Madu dalam  NaCl  Fisiologis  terhadap  Viabilitas dan  Motilitas  Masa  Penyimpanan. Jurnal Sains Dan Seni. ISSN: 2301-928X
Sherwood,  Lauralle  (2001). Fisiologi  Manusia  dari Sel ke Sistem . Jakarta : EGC.
Subartha,  I.  M.  (2000). Analisis  Sperma  Rutin . Denpasar: Penerbit Upada Sastra.
Sunanda,  P.,  Panda,  B.,  &  Dash,  C.  (2014). Prevalensi  Spermatozoa  Abnormal  Pada Laki  -  laki  Subur  Pengunyah  Tembakau.
Jurnal  of  Human  Reproductive  Sciences. India
Suryanta, Soebiono, & Kurniati, E. (2012). Pengaruh Variasi Konsentrasi Giemsa  Terhadap Hasil Pewarnaan  Sediaan  Darah  Tipis  Pada Pemeriksaan Plasmodium  sp.  Karya  Tulis
Ilmiah. Poltekkes Kemenkes Yogyakarta.
WHO,  Edition,  F.  (2010). Laboratory  Manual  For The Examination And Processing Of Human Semen (pp. 13 - 18). Brazil:WHO
Yuliana,  R.  (2013).  Kualitas  Pewarnaan  Pada
Sediaan  Apusan  Darah  Tebal  Malaria Dengan Teknik Penggenangan Dan Perendaman. Karya Tulis Ilmiah. Universitas Muhammadiyah Semarang,
Semarang.
.