BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 2 (2020): 203 - 209 E-ISSN: 2714-8564
Pengaruh Asam Askorbat terhadap Pertumbuhan Colletotrichum coccodes Penyebab Antraknosa pada Tanaman Cabai Merah

## Fadhila Meilasari, Juni Safitri Muljowati, Aris Mumpuni
Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman Jalan dr. Suparno 63 Purwokerto 53122 Email: fadhilameilasari65@gmail.com
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 14/09/2019
Disetujui  : 17/06/2020

## Abstract
Pathogen Colletotrichum coccodes is one of the pathogens that can infect chili plants and cause anthracnose  disease,  especially  in  the  fruit  and  leaves.  Plants  with  high  ascorbic  acid  content have  a  higher  resistance  to  pathogen  attack.  Resistant  chili  plants  have  higher  ascorbic  acid content  compared  to  tolerant  and  vulnerable  chili  plants.  The  purpose  of  this  study  was  to determine  the  ability  to  grow  pathogens  of C.  coccodes on  ascorbic  acid  medium  and  to determine  the  effect  of  inoculation  of C.  coccodes pathogens  on  ascorbic  acid  content  in  chili leaves.  This  study  uses  two  tests,  namely  the  in  vitro  test  and  the  in  planta  test  with  the experimental method completely randomized design (CRD), in vitro test using A) Medium PDA given  ascorbic  acid;  B)  PDB  medium  was  given  ascorbic  acid  with  the  treatment  of  adding ascorbic acid as much as 0 mg. L -1 (control); 0,25 mg. L -1 ; 0.50 mg. L -1 ; 0,75 mg. L -1 ; and 1 mg L -1 . The main parameters are colony diameter and mycelium dry weight. In planta test uses three varieties  of  chili  (V1: hot  chili red  chili;  V2  curly  red  chili;  V3:  big  red  chili),  The  main parameters are the intensity of the disease, and supporting parameters are the incubation period, ascorbic acid content in chili leaves, temperature, humidity and soil pH . The results of in vitro tests show that the pathogen of C. coccodes has good growth ability on PDA and PDB medium with  the  addition  of  ascorbic  acid.  In  the  in  planta  test,  inoculation  of  the  pathogen  of C. coccodes on the red chili leaves causes symptoms of leaf spot disease and increases the content of ascorbic acid in the red chili plants.
Keyword : Colletotrichum coccodes , Red Chili, Anthracnose, Ascorbic Acid.

## Abstrak
Patogen Colletotrichum coccodes merupakan salah satu patogen yang dapat menginfeksi tanaman cabai  dan  menyebabkan  penyakit  antraknosa  terutama  pada  bagian  buah  dan  daun.  Tanaman dengan kandungan asam askorbat tinggi memiliki ketahanan yang lebih tinggi terhadap serangan patogen.  Tanaman  cabai  yang  tahan  memiliki  kandungan  asam  askorbat  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  tanaman  cabai  toleran  maupun  rentan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah mengetahui  kemampuan  tumbuh  patogen C.  coccodes pada  medium  yang  diberi  asam  askorbat dan mengetahui pengaruh inokulasi patogen C. coccodes terhadap kandungan asam askorbat pada daun cabai. Penelitian ini menggunakan dua uji yaitu uji in vitro dan uji in planta dengan metode eksperimental  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL),  Uji in  vitro menggunakan  A)  Medium  PDA diberi asam askorbat; B) Medium PDB diberi asam askorbat dengan perlakuan penambahan asam askorbat  sebanyak  0  mg.L -1 (kontrol);  0,25  mg.L -1 ;  0,50  mg.L -1 ;  0,75  mg.L -1 ;  dan  1  mg.L -1 , diulang  sebanyak  lima  kali.  Parameter  utama  yaitu  diameter  koloni  dan bobot  kering  miselium. Uji in  planta menggunakan  tiga  varietas  cabai  (V1:  Cabai  merah hot  chili ;  V2  Cabai  merah keriting;  V3:  Cabai  merah  besar).  Parameter  utama  yaitu  intensitas  penyakit,  dan  parameter pendukung yaitu periode masa inkubasi, kandungan asam askorbat pada daun cabai, temperatur, kelembaban  dan  pH  tanah.  Hasil  penelitian  pada  uji in  vitro menujukkan  bahwa  patogen C. coccodes memiliki kemampuan tumbuh yang baik pada medium PDA dan medium PDB dengan penambahan  asam  askorbat.  Hasil  penelitian  pada  uji in  planta, inokulasi  patogen C.  coccodes pada daun cabai merah dapat meningkatkan kandungan asam askorbat pada tanaman cabai merah Kata kunci : Colletotrichum coccodes, Cabai Merah, Antraknosa, Asam askorbat.

## PENDAHULUAN
Tumbuhan  memiliki  respons  fisiologis  yang sangat  bervariasi  terhadap  berbagai  jenis  tekanan lingkungan.  Untuk  mencegah  kerusakan  yang disebabkan  oleh  serangan  patogen  dan  untuk adaptasi  terhadap  perubahan  lingkungan,  tanaman memiliki  mekanisme  baik  secara  langsung  maupun tidak  langsung  untuk  menanggapi  rangsangan
patogen.  Asam  askorbat  diproduksi  pada  tanaman sebagai  respon  tidak  langsung  terhadap  serangan patogen  pada  lokasi  yang  berbeda  pada  tumbuhan. Ekspresi  terhadap  respon  ini  dapat  berupa  rentan ataupun resisten terhadap patogen. Tanaman dengan kandungan asam askorbat tinggi memiliki ketahanan yang  lebih  tinggi  terhadap  serangan  patogen  (Khan et al ., 2011).
Asam askorbat terlibat dalam tanaman sebagai tanggapan  terhadap  tekanan  biotik  dan  akan mengalami perubahan pada tanaman yang berinteraksi  dengan  patogen  (Khan et  al .,  2011). Kandungan  asam  askorbat  yang  lebih  tinggi dijumpai  pada  tanaman  yang  terserang  patogen maupun pada tanaman yang tahan terhadap patogen. Tanaman  yang  tahan  terhadap  penyakit  adalah tanaman  yang  mampu  menghambat  perkembangan patogen,  sehingga  patogen  tidak  dapat  berkembang dan menyebar.
Ketahanan  yang  dimiliki  oleh  suatu  tanaman terhadap  patogen  bervariasi.  Varietas  tahan  adalah varietas  dengan  sifat-sifat  yang  memungkinkan tanaman  itu  pulih  kembali  dari  serangan  penyakit pada  keadaan  yang  mengakibatkan  kerusakan. Varietas  rentan  adalah  varietas  dengan  sifat-sifat memungkinkan  tanaman  terinfeksi  penyakit  dan keparahan penyakit lebih besar (Palupi et al ., 2015).
Salah  satu  jenis  tanaman  yang  memiliki  banyak varietas adalah tanaman cabai merah. Setiap varietas mempunyai  kemampuan  tertentu  untuk  beradaptasi dengan  lingkungan  tempat  tumbuhnya.  Varietas cabai  merah  yang  banyak  dikonsumsi  dan dibudidayakan  oleh  masyarakat  antara  lain  varietas cabai  merah  keriting,  cabai  merah  besar  dan  cabai merah hot chili (Ashari & Andi, 2000)
Produktivitas  cabai  merah  baik  secara kualitas  maupun  kuantitas  saat  ini  terhalang  oleh berbagai  hama  dan  penyakit.  Penyakit  utama  yang sering  ditemukan  pada  tanaman  cabai  merah  di antaranya yaitu penyakit antraknosa yang disebabkan oleh patogen dari genus Colletotrichum . Colletotrichum merupakan  genus  besar  yang  terdiri dari  sejumlah  spesies  penting  dan  merupakan patogen  yang  banyak  menjadi  penyebab  beragam penyakit  buah-buahan  dan  sayur-sayuran  pada daerah  tropis  dan  subtropis.  Tanaman  cabai merupakan salah satu tanaman yang rentan terhadap satu  atau  lebih  spesies Colletotrichum (Dean et  al., 2012). Colletotrichum mampu menginfeksi tanaman cabai  pada  bagian  buah,  daun  dan  ranting  muda. Daun  muda  pada  tanaman  cabai  lebih  rentan terhadap antraknosa dibandingkan dengan daun tua. Daun  –  daun  muda  hanya  rentan  selama  kurang lebih  5  hari  pada  waktu  kuncup  membuka,  setelah itu  daun  membuka  penuh,  warnanya  berubah menjadi  hijau  pucat.  Kutikula  daun  kemudian terbentuk dan daun menjadi cukup tahan (Semangun, 2008).
Guna  mengkaji  peranan  asam  askorbat  dalam hal  ketahanan  tanaman  cabai  merah  terhadap patogen C.  coccodes, maka  perlu  dilakukan pengujian  kemampuan  tumbuh C.  coccodes dalam kaitannya  dengan  keberadaan  asam  askorbat  baik secara  secara in  vitro maupun  secara in  planta. Berdasarkan uraian diatas maka muncul permasalahan  bagaimana  kemampuan  tumbuh patogen C. coccodes pada medium yang diberi asam askorbat.  Apakah  pengaruh  inokulasi  patogen C.
coccodes terhadap  kandungan  asam  askorbat  pada daun cabai merah.
Berdasarkan  kenyataan  tersebut  penelitian  ini bertujuan  1).  mengetahui  kemampuan  tumbuh patogen C. coccodes pada medium yang diberi asam askorbat;  2).  mengetahui  pengaruh  inokulasi patogen C.  coccodes terhadap  kandungan  asam askorbat pada daun cabai merah.
Penelitian  ini  dapat  memberi  manfaat  melalui kajian secara in vitro guna  mengetahui  kemampuan tumbuh  patogen C.  coccodes pada  medium  kultur dengan  penambahan  asam  askorbat  serta  melalui kajian  secara in  planta guna  mengetahui  virulensi patogen C.  coccodes yang dapat  meningkatkan kandungan  asam  askorbat  pada  tanaman  cabai merah.

## MATERI DAN METODE

## Rancangan Penelitian
Uji secara in vitro
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental  dengan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL).  Uji  secara in  vitro dilakukan  dengan  dua pengujian  yaitu  pada  medium  (1)  Uji  pada  medium Potato  Dextrose  Agar (PDA) , dan  (2)  Uji  pada medium Potato  Dextrose  Broth (PDB).  Kedua pengujian  ini  masing-masing  menggunakan  asam askorbat  dengan sesuai  perlakuan  yaitu  0  mg.L -1
(kontrol); 0,25 mg.L -1 ; 0,50 mg.L -1 , 0,75 mg.L -1 ; dan 1 mg.L -1 , diulang sebanyak lima kali.

## Uji secara in planta
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental  dengan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL).  Uji  secara in  vivo dilakukan  dengan  dua pengujian  yaitu  (1)  uji  intensitas  penyakit  oleh C. coccodes , dan (2) uji kandungan asam askorbat pada daun tanaman cabai merah.

## Cara Kerja Penelitian
Uji in vitro 1. Pembuatan  medium  PDA  ( Potato  Dextrose Agar ) (Dharmaputra et al., 1989) Kentang dikupas dan ditimbang seberat 200 g,  kemudian  dicuci  bersih  dan  dipotong  dadu. Kentang  tersebut  direbus  dengan  500  mL akuades  dan  dimasukkan  dalam beaker  glass volume 1000 mL, direbus hingga kentang lunak. Air  rebusan  disaring  dengan  saringan  dan  hasil saringannya  ditampung  dalam beaker  glass volume 1000 mL. Sebanyak  20 g dextrose , 15 g agar, 1 g chloramphenicol dan ditambahkan 500 mL  akuades  sampai  volume  akhir  1000  mL, kemudian dipanaskan menggunakan hotplate dan stirrer .  Selanjutnya  dituang  ke  dalam  labu Erlenmeyer,  kemudian  disumbat  menggunakan kapas  dan  disterilisasi  menggunakan  autoklaf pada temperatur 121 o C, tekanan 2 atm selama 15 menit.
2. Peremajaan isolat jamur C. coccodes (Choi et al., 1999) Biakan  murni  isolat C.  coccodes diambil  1  plug dengan  bor  gabus  berdiameter  8  mm  dan diinokulasikan  pada  medium  PDA  kemudian diinkubasi pada temperatur ruang selama 7 hari.
3. Inokulasi C.  coccodes pada  medium  PDA  yang diberi Asam Askorbat (Mahiout et al., 2018) Isolat C.  coccodes diambil  1  plug  dengan  bor gabus  berdiameter  8  mm  dan  diinokulasikan pada  medium  PDA  yang  diberi  asam  askorbat kemudian  diinkubasi  pada  temperatur  ruang selama 12 hari.
4. Pengukuran  diameter  koloni  (Achmad et  al., 2013)
Pengukuran  diameter  koloni C.  coccodes dilakukan  setiap  hari  selama  12  hari.  Rumus untuk  menghitung  diameter  koloni  adalah    :
D=
5. Pembuatan  medium  cair  PDB  ( Potato  Dextrose Broth ) yang diberi asam askorbat (Achmad et al., 2013)
Pembuatan  medium  cair  PDB  sebanyak  2,5  L untuk  25  perlakuan  dengan  masing-masing perlakuan sebanyak 100 mL. Pembuatan medium cair PDB diawali dengan mengupas kentang dan ditimbang seberat 500 g, kemudian dicuci bersih dan  dipotong  dadu.  Kentang  tersebut  direbus dengan  akuades  hingga  lunak.  Air  rebusan disaring  dengan  saringan  dan  hasil  saringannya ditampung  dalam beaker  glass . Dextrose sebanyak  50  g,  dan  2,5  g chloramphenicol dipanaskan dan ditambahkan air rebusan kentang yang  telah  disaring.  Medium  PDB  diberi penambahan  asam  askorbat  sesuai  perlakuan. Medium  dituang  dalam  labu  erlenmeyer  dengan volume  100  mL  dan  disterilisasi  menggunakan autoklaf  pada  tekanan  1  atm  dan  temperatur 121°C selama 15 menit.
6. Inokulasi  jamur  C.  coccodes  pada  medium  cair PDB  yang  diberi  asam  askorbat  (Hanif  et  al., 2012)
Biakan C. coccodes diambil 3-5 plug dengan bor gabus  berdiameter  8  mm  dan  diinokulasikan pada medium cair PDB yang diberi asam akorbat sesuai  dengan  perlakuan.  Selanjutnya  diinkubasi selama 14 hari pada temperatur ruang.
7. Pengukuran  bobot  kering  biomassa  miselium (Subowo, 2010)
Kultur  yang  telah  diinkubasi  selama  14  hari disaring  dengan  menggunakan  kertas  Whatman no.41. Miselium yang telah tersaring dioven pada temperatur  50-60°C  selama  48  jam.  Miselium yang telah kering kemudian ditimbang.

## Uji in planta
1.  Persiapan media tanam (Herwidyarti et al ., 2013)
Persiapan  media  tanam  dilakukan  dengan mencampurkan  tanah  dengan  pupuk  kandang kemudian  di  sterilisasi,  selanjutnya  dimasukkan ke dalam polybag dengan perbandingan 2:1.
2. Persemaian dan penanaman cabai merah (Marliah et al., 2011)
Benih  cabai  yang  baik  disemai  pada  baki  berisi tanah  steril  hingga  berumur  30  hari.  Bibit kemudian  dipindahkan  ke  media  tanam polybag berisi  1  bibit  tanaman.  Tanaman  cabai  disiram dan dilakukan perawatan seperti penyiraman dan penyiangan.
3. Pengukuran pH tanah, Temperatur dan Kelembapan Greenhouse (Pitojo, 2003)
Pengukuran  pH  tanah  pada  media  tanam menggunakan  alat soil  tester. Pengukuran  pH tanah    dilakukan  sebelum  penanaman  tanaman cabai  sebagai  pH  awal  dan  pH  akhir  diukur setelah tanaman diinokulasi patogen. Pengukuran temperatur dan kelembapan Greenhouse menggunakan  termohygrometer.  Pengukuran dilakukan  setiap  pagi  dan  sore  setelah  tanaman diinokulasi patogen.
4. Pembuatan  inokulum  jamur C.  coccodes dan inokulasi (Nabila, 2015)
Pembuatan  suspensi  cair  konidium  dibuat menggunakan  hasil  peremajaan  isolat  jamur C. coccodes pada media miring yang berumur 7 hari setelah inkubasi. Suspensi konidium C. coccodes dengan  kerapatan  5x10 5 konida/mL  diinokulasi pada  tanaman  cabai  saat  tanaman  cabai  mulai tumbuh  minimal  4-6  helai  daun  setelah  tanam. Inokulasi  dilakukan  pada  sore  hari  dengan  cara disemprotkan pada permukaan daun pada bagian atas  dan  bawah  dengan  menggunakan sprayer. Pengamatan  dilakukan  dengan  melihat  gejala infeksi  penyakit  yang  dapat  diamati  setiap minggu  dimulai  dari  sehari  setelah  inokulasi sampai 2 minggu hingga muncul gejala.
5. Pengamatan Periode
Masa Inkubasi (Purwantisari et al., 2016)
Masa inkubasi adalah waktu antara saat inokulasi patogen  sampai  timbulnya  gejala  awal  penyakit. Setelah  inokulasi  jamur  patogen,  pengamatan dilakukan  setiap  hari  untuk  mengetahui  kapan munculnya  gejala  penyakit  antraknosa  untuk pertama kali (waktu inkubasi).
6. Perhitungan  Intensitas  Penyakit  (Rahardjo  & Suhardi, 2008)
Intensitas  penyakit  merupakan  proporsi  luas permukaan  inang  yang  terinfeksi  terhadap  total luas permukaan inang yang diamati. Pengamatan intensitas  penyakit  dapat  dihitung  dengan  rumus sebagai berikut:
x 100%
I
7. Pengukuran  Kandungan  Asam  Askorbat  pada Daun Cabai (Badriyah & Manggara, 2015)

## Pembuatan larutan induk Asam askorbat
Asam  askorbat  ditimbang  50  mg,  dimasukkan dalam  labu  seukuran  500  mL  dan  dilarutkan dalam  akuades  sampai  tanda  batas  (sampai menunjukkan garis meniskus pada leher labu).

## Penentuan panjang gelombang maksimum Asam askorbat
Larutan asam askorbat 100 ppm dipipet sebanyak 1  mL  kedalam  labu  seukuran  50    mL,  lalu ditambahkan  akuades  sampai  tanda  batas (sampai menunjukkan garis meniskus pada leher labu)  dan  dihomogenkan.  Diukur  serapan maksimum pada panjang gelombang 200-400 nm dengan menggunakan blanko akuades.

## Pembuatan kurva kalibrasi asam askorbat
Larutan  Asam  askorbat  100  ppm  dipipet sebanyak  1  mL  kedalam  labu  seukuran  50    mL masing – masing sebesar 2 ml, 4 ml, 6 ml, dan 8 ml  (4  ppm,  8  ppm,  12  ppm,  dan  16  ppm). Kemudian  ditambahkan  akuades  hingga  tanda batas (sampai menunjukkan garis meniskus pada leher labu) lalu dihomogenkan, kemudian diukur serapannya  pada  panjang  gelombang  maksimum yang  diperoleh.  Panjang  gelombang  maksimum yang digunakan adalah 260 nm.

## Pengukuran kandungan Asam askorbat
Daun cabai diambil bagian daun muda dan daun tua  masing-masing  sebanyak  1  g,  dibersihkan kemudian dihancurkan hingga halus menggunakan mortar dan pestle .  Ditambah akuades  sebanyak  10  mL,  kemudian  disaring. Filtrat  yang  diperoleh  dimasukkan  dalam  labu seukuran    100  mL,  ditambah  akuades  hingga tanda batas (sampai menunjukkan garis meniskus pada leher labu) kemudian dihomogenkan. Filtrat kemudian diukur serapan menggunakan spektrofotometer  Ultraviolet  visible  (UV-Vis) pada panjang gelombang 260 nm.

## Metode Analisis  (Steel dan Torrie, 1995)
Data  uji in  vitro dan  uji in  planta yang diperoleh  dianalisis  menggunakan  analisis  ragam (ANOVA)  dengan  tingkat  kepercayaan  95%,  dan perlakuan  yang  memberikan  perbedaan  nyata dilanjutkan dengan Uji Beda Nyata Jujur (BNJ) pada tingkat kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji in vitro 1. Pengukuran  diameter  koloni Colletotrichum coccodes Berdasarkan hasil penelitan rata-rata pengukuran  diameter  koloni  jamur Colletotrichum coccodes pada medium PDA (Tabel 1.)
Tabel 1. Hasil rata-rata diameter koloni C. coccodes pada medium PDA
Berdasarkan    Tabel  1.  pertumbuhan  koloni jamur C.  coccodes paling  baik  yaitu  pada  medium PDA tanpa penambahan asam askorbat dengan rata- rata pertumbuhan koloni 83,45 mm dan pertumbuhan koloni C.coccodes paling rendah yaitu pada  konsentrasi  asam  askorbat  0,5  mg.L -1 dengan rata-rata  pertumbuhan  koloni  dengan  64,96  mm. Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  pertumbuhah C. coccodes terhambat  dengan  adanya  asam  askorbat poada  medium  biakan.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Muljowati et  al. (2018)  bahwa  medium dengan penambahan asam askorbat pada konsentrasi 0,5  mg.L -1 kurang  sesuai  untuk  pertumbuhan  jamur
Colletotrichum.
Data  rata-rata  diameter  koloni C.  coccodes kemudian dianalisis dengan analisis ragam (ANOVA) pada tingkat  kesalahan 5%. Berdasarkan hasil  ANOVA,    penambahan  asam  askorbat  pada medium  PDA  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap diameter  koloni C.  coccodes. Penambahan  asam askorbat  dalam  media  PDA  memungkinkan C. coccodes tetap  mampu  tumbuh  dan  beradaptasi dengan lingkungannya.
2. pengukuran  bobot  kering  miselium C. coccodes
Berdasarkan hasil penelitian pengukuran bobot kering  miselium C.  coccodes pada  medium  PDB tanpa  penambahan  asam  askorbat  dan  dengan penambahan asam askorbat, jamur C. coccodes juga memiliki  kemampuan  tumbuh  yang  baik  pada medium kultur PDB. Data bobot kering miselium C. coccodes selanjutnya dianalisis menggunakan analisis ragam (ANOVA) pada tingkat kesalahan 5% (Lampiran 3.). Berdasarkan hasil ANOVA, penambahan  asam  askorbat  pada  medium  PDB berpengaruh  nyata  terhadap  pertambahan  bobot kering  miselium.  Menurut  Muljowati et  al. (2018) jamur C.  coccodes juga  memiliki  kemampuan tumbuh pada medium kultur PDB dengan penambahan  asam  askorbat  sama  hal  nya  seperti pada  medium  PDA  dengan  penambahan  asam askorbat.  Data  bobot  kering  miselium C.  coccodes diuji  lanjut  dengan  uji  BNJ  pada  tingkat  kesalahan 5% (Tabel 2).
Konsentrasi Asam
Askorbat ( mg.L -1 ) Rata-rata diameter koloni isolat C.coccodes (mm) 0 83,45 0,25 82,9 0,5 64,96 0,75 79,2 1 82,75
Tabel 2. Hasil  uji  lanjut  BNJ  Pengaruh  Pemberian Asam  Askorbat  Terhadap  Bobot  Kering  Miselium

## C.coccodes
Keterangan: Angka dengan notasi yang berbeda menunjukkan berbeda nyata dengan tingkat kesalahan 5%
Berdasarkan hasil uji lanjut BNJ, pertumbuhan miselium C.coccodes pada medium kultur PDB pada perlakuan  konsentrasi  asam  askorbat  0,5  mg.L -1 memiliki  hasil  yang  berbeda  nyata  dengan  keempat perlakuan  lainnya  yaitu  pada  konsentrasi  asam askorbat  0  mg.L -1 ,  0,25  mg.L -1 ,  0,75  dan  1  mg.L -1 . Hal  ini  sejalan  dengan  pertumbuhan  koloni  jamur C.coccodes pada  medium  PDA  yaitu  medium dengan konsentrasi asam askorbat 0,5 mg.L -1 kurang sesuai untuk pertumbuhan jamur Colletotrichum.
Uji in planta 1. Perhitungan intensitas penyakit
Perhitungan nilai kerusakan tanaman berdasarkan  kategori  yang  diamati  pada  waktu pengamatan  yang  dilakukan  pada  akhir  penelitian yaitu  14  hari  setelah  inokulasi C.coccodes. Data intensitas  penyakit  antraknosa  pada  daun  cabai dianalisis  menggunakan  analisis  ragam    (ANOVA) pada  tingkat  kesalahan  5%.  Berdasarkan  hasil ANOVA, perlakuan inokulasi C.coccodes pada daun cabai  merah  berpengaruh  nyata  terhadap  intensitas penyakit antraknosa pada daun cabai.
Data  hasil  intensitas  penyakit  diuji  lanjut dengan  uji  BNJ  pada  tingkat  kesalahan  5%  (Tabel 3).
Tabel  3 .  Hasil  uji  lanjut  BNJ  Pengaruh  Inokulasi C.coccodes Terhadap  Intensitas  Penyakit  Pada  Daun Cabai Merah
Keterangan: Angka dengan notasi yang berbeda menunjukkan berbeda nyata dengan tingkat kesalahan 5%
V1P0 =Varietas cabai merah hot chili tidak diinokulasi patogen V2P0=Varietas cabai merah keriting tidak diinokulasi patogen V3P0=Varietas cabai merah besar tidak diinokulasi patogen V1P1= Varietas cabai merah hot chili diinokulasi patogen V2P1=Varietas cabai merah keriting diinokulasi patogen . V3P1=Varietas cabai merah besar diinokulasi patogen
Berdasarkan  hasil  uji  lanjut  BNJ,  pengaruh inokulasi  patogen C.  coccodes terhadap  intensitas penyakit  pada  daun  cabai  merah  diketahui  pada
perlakuan  V1P0,  V2P0,  V3P0  tidak  menunjukkan perbedaan  dikarenakan  tidak  adanya  perlakuan inokulasi  patogen.  Perlakuan  V2P1  menunjukkan hasil  yang  berbeda  nyata  dari  perlakuan  V1P1  dan V3P1.  Hal  ini  disebabkan  tanaman  cabai  varietas cabai  merah  keriting  memiliki  kriteria  ketahanan ‘agak  tahan’,  sedangkan  varietas  cabai  merah  besar dan  varietas hot  chili memiliki  kriteria  ketahanan ‘agak  rentan’  berdasarkan  skor  dan  kriteria ketahanan cabai merah terhadap penyakit antraknosa (Lampiran  6.).  Menurut  Agrios  (1997)  ketahanan terhadap  penyakit  dapat  dikelompokkan  ke  dalam ketahanan  struktural  dan  ketahanan  fungsional. Contoh  ketahanan  struktural  antara  lain  tebal tipisnya  epidermis,  adanya  lignin  pada  dinding  sel, adanya  lapisan  lilin  pada  permukaan  daun. Ketahanan  fungsional  antara  lain  meningkatnya aktivitas enzim tertentu atau terbentuknya ketahanan zat  toksik  tertentu  seperti  fitoaleksin  yang  dapat mematikan patogen. Kombinasi antara sifat struktural dan reaksi biokimia yang digunakan untuk pertahanan  bagi  tanaman  berbeda  antara  setiap sistem kombinasi inang-patogen, bahkan pada inang yang  sama,  kombinasi  tersebut  dapat  berbeda dengan  berbedanya  jenis  organ  dan  jaringan tanaman  yang  diserang,  keadaan  hara  tanaman  dan kondisi cuaca.

## 2. Pengukuran  kandungan  Asam  askorbat pada daun cabai
Hasil  pengukuran  kandungan  asam  askorbat daun cabai  merah  menggunakan sampel daun  muda an  daun  tua  dari  ketiga  varietas  tanaman  cabai  di sajikan pada Gambar 1.
Gambar  1 .  Diagram  rata-rata  kandungan  asam askorbat pada daun cabai merah Keterangan: V1 = Varietas cabai merah hot chili V2 = Varietas cabai merah keriting V3 = Varietas cabai merah besar
Berdasarkan  Gambar  1.  dapat  dilihat  asam askorbat  pada  daun  tua  (daun  bagian  bawah) tanaman  cabai  merah  lebih  tinggi  dari  daun  muda (daun bagian atas). Hal ini dikarenakan inokulasi C. coccodes pada  daun  tua  dilakukan  lebih  awal  saat daun  muda  tanaman  cabai  merah  belum  muncul
Konsentrasi Asam
Askorbat ( mg.L -1 ) Rata-rata bobot kering miselium C.coccodes (mg) 0 380 a 0,25 244 a 0,5 174 b 0,75 234 a 1 220 a Perlakuan Rata-rata Intensitas Penyakit (%) V1P0 0,00 a V2P0 0,00 a V3P0 0,00 a V1P1 13,20 c V2P1 6,41 b V3P1 10,57 c
selama  periode  masa  inkubasi.  Data  kandungan asam  askorbat  kemudian  dianalisis  dengan  analisis ragam  (ANOVA)  pada  tingkat  kesalahan  5% (Lampiran 5). Berdasarkan hasil ANOVA, inokulasi C.  coccodes pada  daun  tanaman  cabai  merah berpengaruh  nyata  terhadap  kandungan  asam askorbat. Hal ini sesuai dengan pernyataan Boubakri (2017)  bahwa  kandungan  asam  askorbat  akan meningkat  seiring  dengan  terinfeksinya  tanaman. Data  kandungan  asam  askorbat  pada  daun  cabai merah  kemudian  diuji  lanjut  dengan  uji  BNJ  pada tingkat kesalahan 5% (Tabel 4).
Tabel 4. Uji BNJ pada tingkat kesalahan 5%
Perlakuan Rata-rata Kandungan Asam askorbat (mg.g -1 ) V1P1 42,589 a V2P1 65,697 b V3P1 30,522 a V1P2 64,223 a V2P2 152,049 b V3P2 74,582 a
Keterangan:   Angka dengan notasi yang berbeda menunjukkan berbeda nyata dengan tingkat kesalahan 5% Keterangan:
1. V1P1 =Daun muda (daun bagian atas) cabai merah hot chili 2. V2P1= Daun muda (daun bagian atas) cabai merah keriting
3. V3P1= Daun muda (daun bagian atas) cabai merah besar
4. V1P2= Daun tua (daun bagian bawah) cabai merah hot chili 5. V2P2= Daun tua (daun bagian bawah) cabai merah keriting
6. V3P2= Daun tua (daun bagian bawah) cabai merah besar
Berdasarkan  hasil  uji  lanjut  BNJ,  pengaruh inokulasi  patogen C.  coccodes terhadap  kandungan asam askorbat pada daun muda cabai merah keriting (V2P1)  berbeda  nyata  dengan  daun  muda  cabai merah hot  chili (V1P1)  dan  pada  daun  muda  cabai merah besar (V3P1). Kandungan asam askorbat pada daun  tua  cabai  merah  keriting  (V2P2)  juga menunjukkan hasil yang berbeda nyata dengan daun tua cabai merah hot chili (V1P2) dan daun tua cabai merah  besar  (V3P2).  Kemampuan  tanaman  cabai merah  varietas  cabai  merah  keriting  memproduksi asam  askorbat  lebih  banyak  sesuai  dengan pernyataan  Om  &  Khirbat  (2011)  bahwa  varietas tanaman  yang  tahan  terhadap  penyakit  antraknosa memiliki  kandungan  asam  askorbat  lebih  banyak dan gula lebih sedikit.
Kemampuan  tumbuh  dengan  baik  isolat C. coccodes pada  medium  kultur  PDA  maupun  PDB dengan  penambahan  asam  askorbat  menunjukkan bahwa  isolat C.  coccodes memiliki  virulensi  yang tinggi  dan  dapat  menginvasi  dengan  baik  jika diinokulasi  pada  tanaman  cabai  merah.  Varietas cabai merah keriting memiliki ketahanan yang lebih tinggi  terhadap  patogen C.  coccodes dibuktikan dengan  meningkatnya  kandungan  asam  askorbat sebagai  mekanisme  pertahanan  terhadap  serangan patogen.  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan Muljowati et  al. (2018)  bahwa  adanya  infeksi patogen  pada  tumbuhan,  maka  tumbuhan  akan
memberikan respon pertahanan dengan memproduksi asam askorbat berlebih, dibandingkan pada kondisi normal.

## SIMPULAN
Berdasarkan    pembahasan  tersebut  di  atas disimpulkan  bahwa  patogen  C.  coccodes  dapat tumbuh  dengan  baik  pada  medium  kultur  PDA  dan medium  kultur  PDB  dengan  penambahan  asam askorbat.  Inokulasi  patogen  C.  coccodes  dapat meningkatkan  kandungan  asam  askorbat  yang terdapat pada daun cabai merah.

## DAFTAR REFERENSI
Achmad,  Herliana,  E.N.  &  Octaviani,  E.A.  2013. Pengaruh  pH,  Penggoyangan  Media  dan Penamahan Serbuk Gergaji Terhadap
Pertumbuhan  Jamur Xylaria sp. Jurnal Silvikultur Tropika , 4(2), pp. 57-61.
Agrios, G. N. 1997. Ilmu Penyakit Tumbuhan . Edisi ke tiga, Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Arrigoni, O., L, D.G., F, T. & R, L. 1992. Changes in  the  ascorbate  system  during  seed development  of  Vicia  faba  L. Plant Physiology . pp. 235-238.
Ashari, S. & Andi, S., 2000. Pertumbuhan dan Hasil Dua  Varietas  Mentimun        ( Cucumis  sativus L.). Jurnal  ilmu-ilmu  hayati. Universitas Brawijaya Malang.
Awadalla,  O.A.  2008.  Induction  of  Systemic Acquired  Resistance  In  Tomato  Plants Against  Early  Blight  Disease. J.  Exp.  Biol. (Bot.), 4, pp. 53 – 59.
Badriyah,  L.,  &  Manggara,  A.B.  2015.  Penetapan kadar  vitamin  C  pada  cabai  merah  ( Capsicum annuum L.)  menggunakan  spektrofotometri UV-Vis. Jurnal Wiyata, 2 (1), pp. 25-28.
Boubakri,  H.  2017.  The  Role  of  Ascorbic  Acid  in Plant–Pathogen  Interactions.  In Ascorbic Acid  in  Plant  Growth,  Development  and Stress  Tolerance .  Springer  International Publishing AG. pp.255-71.
Choi, Y.W., Hyde , K.D. & Ho, W.H. 1999. Single spore  isolation  of  fungi. Journal  Fungal Divers , 3, pp. 29-38.
Dean,  R.,  Van  Kan,  J.A.L.,  Pretorius,  Z.A., Hammond-Kosack, K.E., Di Pietro, A. 2012. The  Top  10  fungal  pathogens  in  molecular plant  pathology.  Mol. Plant  Pathol ,  13,  pp. 414-430.
Dharmaputra, O,S., Agustin, W.G, & Napiah. 1989. Mikologi Dasar . Bogor: Departemen
Pendidikan  dan  Kebudayaan  Direktorat Jenderal  Pendidikan  Tinggi  Pusat  Antar Universitas  Ilmu  Hayati  Institut  Pertanian Bogor.
Hanif,  A.,  Suryanto,  D.  &  Nurwahyuni,  I.  2012.
Pemanfaatan Bakteri Kitinolitik dalam Menghambat  Pertumbuhan Curvularia sp.
Penyebab  Penyakit  Bercak  Daun  Pada Tanaman  Mentimun. Jurnal  Saintia  Biologi , 1, pp. 33-39.
Herwidyarti, K.H., Ratih , S. & Sembodo Dad, R.J. 2013.  Keparahan  Penyakit  Antraknosa  pada Cabai  ( Capsicum  annuum L)  dan  Berbagai Jenis  Gulma. Jurnal  Agrotek  Tropika ,    1(1), pp. 102-106.
Khan,  T.A.,  Mazid,  M.  &  Mohammad,  F.  2011. Role  of  Ascorbic  Acid  Against  pathogenesis in  Plants. Journal  of  Stress  Physiology  & Biochemistry, 7 (3), pp. 222-234
Mahiout,  D.,  Bendahmane,  B.S.,  Benkada,  M.Y. Mekouar,  H.,  Berrahal,  N.,  &  Rickauer,  M. 2018. First Report of Colletotrichum gloeosporioides on citrus in Algeria. Phytopathologia  Mediterannea ,  57(2),  pp. 355-359.
Marliah,  A.,  Nasution,  M.  &  Armin.  2011. Pertumbuhan  dan  Hasil  Beberapa  Varietas Cabai  Merah  Pada  Media  Tumbuh  Yang Berbeda. J Floratek , 6, pp.84-91.
Muljowati,  J.S.,  Dwiputranto,  U.,  &  Chasanah,  T. 2018.  Pengaruh  Asam  Askorbat  Terhadap Pertumbuhan Colletotrichum acutatum simmonds. Prosiding  Seminar  Nasional  dan Call  for  Papers  ”Pengembangan  Sumber Daya  Perdesaan  dan  Kearifan  Lokal Berkelanjutan VIII. pp. 76-84.
Nabila,  R.Y.  2015.  Perkembangan  Cendawan Helminthosporium sp.  dan Curvularia sp. pada  Tanaman  Gandum  ( Triticum  aestivum L.). Skripsi. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Om, P & S.K. Khirbat. 2011. Biochemichal basis of resistance  to  fruit  rot  ( Colletotrichum capsici )  in  chilli  genotype. Plant  Disease Research , 26(2), p.180.
Palupi,  H.,  Yulianah,  I.  &  Respatijarti.  2015.  Uji Ketahanan  14  Galur  Cabai  Besar  ( Capsicum annuum L.)  terhadap  Penyakit  Antraknosa ( Colletotrichum spp)  dan  Bakteri  ( Ralstonia solanacearum ). Jurnal  Produksi  Tanaman , 3(8), pp. 640-648.
Pitojo,  S.  2003. Benih  Kedelai. Yogyakarta:
Kanisius.
Purwantisari,  S.,  Priyatmojo,  A.,  Sancayaningsih, R.P.,  &  Kasiamdari,  R.S.  Masa  inkubasi gejala penyakit hawar daun tanaman kentang yang  diinduksi  ketahanannya  oleh  jamur antagonis Trichoderma viride. Bioma, 18 (1), pp. 41-47.
Rahardjo,  I.B  &  Suhardi.  2008.  Insidensi  dan Intensitas  Serangan  Penyakit  Karat  Putih Pada  Beberapa  Klon  Krisan. J.  Hort. 18(3), pp. 312-318.
Steel,  R.G.D  &  J.H.  Torrie.  1995.  Prinsip  dan Prosedur Statistika: Suatu Pendekatan Biometrik. Penerjemah: Sumantri, B. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Subowo,  Y.B.  2010.  Uji  Aktifitas  Enzim  Selulase dan  Ligninase  Dari  Beberapa  Jamur  dan Potensinya Sebagai Pendukung Pertumbuhan Tanaman  Terong  ( Solarium  melongena). Berita biologi. 10 (1), pp. 1-6.