## SELEKSI KETAHANAN ANGGREK
TERHADAP Odontoglossum ringspot virus (ORSV)
Irni Yuni Minarni, Mahfut * , Sri Wahyuningsih, Tundjung Tripeni Handayani Jurusan Biologi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Lampung Jl. Prof. Dr. Sumantri Brojonegoro No. 1, Kota Bandar Lampung, Lampung. 35144
* E-mail: mahfut.mipa@fmipa.unila.ac.id
Abstrak: Anggrek (Orchidaceae) merupakan salah satu tanaman hias yang digemari  karena  bentuk  dan  warna  bunganya  yang  bervariasi  serta  dapat digunakan sebagai bunga potong, tanaman pot, atau elemen taman. Penyakit infeksi  masih  menjadi  kendala  utama  dalam  budidaya  tanaman  anggrek  di Indonesia. Odontoglossum ringspot virus (ORSV) merupakan salah satu jenis virus  yang  paling  banyak  dilaporkan  menginfeksi  tanaman  anggrek  dan tersebar  luas  di  dunia,  termasuk  di  Indonesia.  Infeksi  menyebabkan perubahan  warna  dan  bentuk  daun  serta  bunga.  Penelitian  ini  dilakukan dengan  menginjeksi  virus  secara  mekanis  pada  anggrek Phalaenopsis amabilis atau Dendrobium Salaya  Fancy.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui gejala dan terjadinya penyakit, serta ketahanan anggrek terhadap ORSV. Hasil penelitian menunjukkan bahwa setiap anggrek memiliki gejala penyakit  yang  parah,  tingkat  keparahan  penyakit  pada  kedua  tanaman anggrek  sekitar  80%  serta  reaksi Phalaenopsis  amabilis sangat  rentan  dan respon Dendrobium Salaya  Fancy  toleran  terhadap  ORSV.  Hal  ini membuktikan  bahwa Phalaenopsis merupakan  jenis  virus  anggrek  yang paling mudah terinfeksi dibandingkan Dendrobium .
Kata  Kunci: anggrek, Odontoglossum  ringspot  virus ,  gejala,  kejadian penyakit, ketahanan tanaman

## PENDAHULUAN
ndonesia memiliki keanekaragaman spesies anggrek yang sangat besar. Diperkirakan 5.000 spesies anggrek telah tersebar di Indonesia. Anggrek mempunyai nilai tinggi karena bentuk, warna bunga serta karakteristik lainnya  yang unik sehingga banyak diminati oleh konsumen (Mahfut, 2020). Anggrek secara alami hidup menempel di dahan pohon. Sebagian anggrek sangat peka terhadap ketinggian tempat dikarenakan perbedaan ketinggian  tempat  memiliki  suhu  udara  yang  berbeda.  Tumbuhan  dapat  hidup  dengan baik  apabila  lingkungan  mampu  menyediakan  berbagai  keperluan  untuk  pertumbuhan selama daur hidupnya. Oleh karena sifat lingkungan tidak hanya bergantung pada kondisi fisik dan kimia tetapi juga karena organisme lain (Matthews, 1992; Muharam et al., 2013; Koh et al., 2014).
Tanaman anggrek dalam pertumbuhannya mendapatkan gangguan penyakit seperti jamur  patogen,  bakteri,  maupun  virus.  Gejala  yang  ditimbulkan  seperti  busuk  hitam, busuk  akar,  layu,  busuk  lunak,  bercak  daun,  mosaik,  dan ringspot .  Infeksi  virus  pada tumbuhan anggrek  yaitu  yang paling umum diamati adalah  mosaik, nekrosis, nekrotik, I
dan klorotik (Navalienskie et al., 2005). Selain itu dijumpai gejala curling leaf dan wilting leaf .  Sejumlah  virus  yang  sudah  menginfeksi  tanaman  anggrek  sudah  teridentifikasi adalah  ORSV  (Mahfut  &  Daryono,  2019;  Mahfut,  2020;  Mahfut  &  Anggraeni,  2020). Virus  yang  menginfeksi  anggrek  tidak  mematikan  tetapi  menyebabkan  daya  tahan tanaman melemah sehingga memudahkan datangnya penyakit susulan. Tanaman anggrek yang  telah  terinfeksi  virus  tidak  bisa  dieridikasi  dengan  pestisida,  hanya  dapat  diatasi dengan membakar anggrek dan mensterilkan kembali area tanam. Infeksi virus memiliki kisaran inang  yang berbeda jenis tanaman. Penelitian ini dilakukan untuk memberikan rekomendasi daerah endemik infeksi virus terhadap pemilihan jenis anggrek yang tahan terhadap infeksi ORSV.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  penelitian  deskriptif  eksploratif  yang  dilakukan menggunakan  inokulum  virus  ORSV  dari  isolat  Magelang  yang  sudah  dianalisis sebelumnya  (Mahfut  et  al.,  2016).  Inokulasi  dilakukan  pada  tanaman  indikator  dan tanaman  inang.  Selanjutnya  dilakukan  pengamatan  gejala  penyakit,  kejadian  penyakit, dan tingkat ketahanan tanaman.
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah: spidol permanen, gelas ukur, spektrofotometer  UV,  kuvet,  kertas whatman no.1,  flakon,  mortar,  alu,  cawan  petri, erlenmeyer,  corong,  tabung  reaksi,  sentrifuge,  kertas  label,  selotip,  penggaris,  gunting, sarung tangan, tissu kering, plastik bening, karet gelang, botol semprot, polybag,  pena, buku  catatan  dan  kamera  digital.  Bahan  yang  digunakan  adalah:  tembakau  ( Nicotiana tabacum ),  tomat  ( Solanum  lycopersicum ),  timun  ( Cucumis  sativus ),  anggrek Phalaenopsis  amabilis ,  anggrek Dendrobium Salaya  Fancy,  inokulum  virus, karborundum 400 mesh, air, etanol, dan media tanam.
Penelitian  ini  meliputi  6  tahap  yaitu:  1)  Proses  perkecambahan;  2)  Penanaman kecambah tanaman indikator pada media tanah; 3) Seleksi inokulum virus; 4) Inokulasi virus pada tanaman indikator; 5) Inokulasi virus pada tanaman inang; 6) Pengamatan.
1. Proses  perkecambahan: biji  masing-masing  tanaman  indikator  dikecambahkan dengan  cara  merendam  biji  dengan  air  selama  4  jam.  Biji  kemudian  ditiriskan  dan dibersihkan  dengan  air  mengalir  lalu  diletakkan  diatas  cawan  petri  yang  dilapisi beberapa lembar tisu lembab. Selanjutnya untuk menjaga kelembabannya dengan cara memercikkan air pada pagi hari dan sore hari. Biji yang sudah diletakkan pada cawan petri diletakkan ditempat gelap. 3 atau 4 hari berselang, biji mulai berkecambah. Pada hari ke 7 kotiledon telah membuka dan biji siap untuk ditanam di media tanah.
2. Penanaman  kecambah  tanaman  indikator  pada  media  tanah: persiapan  media tanah pada penelitian ini diberi 4 perlakuan yaitu kontrol, ulangan 1, ulangan 2, dan ulangan 3 pada masing-masing jenis tanaman.
3. Seleksi  inokulum  virus: seleksi  inokulum  diperoleh  dari  hasil  inokulasi  isolat Magelang pada tanaman tembakau.
4. Inokulasi  virus  pada  tanaman  indikator: virus  yang  sudah  diidentifikasi, selanjutnya  diinokulasi  ke  tanaman  indikator  dan  dilakukan  dalam  4  kali  ulangan. Pengamatan dilakukan dengan mencatat waktu saat inkubasi dan gejala yang muncul setelah  inokulasi.  Tanaman  indikator  yang  terinfeksi  lebih  cepat  dan  menunjukkan gejala  yang  paling  parah  akan  diambil  dan  diinokulasikan  pada  tanaman  inang. Tahapan untuk inokulasi virus secara mekanik yaitu tahapan pertama ditimbang 1 g daun tembakau yang merupakan sumber inokulasi virus, kemudian daun digerus dalam mortar steril dengan menambahkan 10 ml larutan penyangga fosfat atau buffer fosfat
0,01 M (pH 7) (w:v = 1:10). Sebelum diinokulasi serbuk karborundum ditaburkan pada bagian permukaan atas daun, lalu virus dioleskan ke permukaan daun sebanyak 1 kali dengan tangan menggunakan sarung tangan. Setelah sap (virus) mengering dilakukan pembilasan terhadap sisa-sisa sap yang masih melekat pada permukaan daun tanaman uji  dengan  menyemprotkan  air  steril.  Selanjutnya  dilakukan  pengamatan  setiap tiga hari sekali selama 30 hari.
5. Inokulasi  virus  pada  tanaman  inang: inokulasi  virus  pada  tanaman  inang  adalah tahapan yang dilakukan setelah diperoleh hasil dari inokulasi pada tanaman indikator. Setiap tanaman anggrek diberi perlakuan sama dengan cara mengoleskan virus pada dua helai daun termuda yang telah membuka penuh. Selama waktu inkubasi dilakukan pengamatan  untuk  mengetahui  respon  diantara  tanaman  inang  yang  lebih  cepat terinfeksi dengan adanya gejala penyakit.
6. Pengamatan: variabel yang diamati adalah analisis gejala penyakit, analisis kejadian penyakit, dan analisis ketahanan tanaman.
Data inokulasi ORSV pada tanaman indikator dan inang adalah data kualitatif dan kuantitatif. Data kualitatif disajikan dalam bentuk deskriptif dan didukung foto.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Pengamatan Gejala Infeksi
Inokulasi  ORSV  pada  masing-masing  tanaman  indikator  dan  tanaman  inang dilakukan pada waktu yang berbeda-beda tergantung cepat atau lambatnya pertumbuhan tanaman dan ditandai cukup tidaknya jumlah daun. Respon tanaman setelah dilakukan inokulasi virus menunjukan bahwa ORSV dapat menginfeksi semua tanaman indikator dan tanaman uji dengan berbagai macam variasi gejala dan waktu inkubasi yang berbeda- beda. Berdasarkan pengamatan, secara umum respon mulai muncul sekitar 2-3 minggu setelah dilakukan inokulasi pada semua tanaman.
Gejala infeksi ORSV yang sering ditimbulkan pada tanaman indikator diantaranya yaitu  tembakau  diawali  dengan  munculnya  gejala  klorotik  pada  hari  ke-9  setelah inokulasi,  selanjutnya  pada  hari  ke-17  gejala  berubah  menjadi  mosaik.  Gejala  mosaik merupakan gejala lanjutan dari gejala yang muncul sebelumnya yaitu klorotik, gejala ini menunjukan bahwa infeksi virus pada tanaman tembakau menjadi lebih parah. Pada hari ke-26  adanya  variasi  gejala  yaitu  terjadi  perubahan  bentuk  daun  (malformasi  daun) merupakan  gejala  kelanjutan  dari  mosaik.  Pada  penelitian  sebelumnya  (Mahfut  & Daryono,  2020),  juga  diketahui  bahwa  infeksi  ORSV  pada  tanaman  tembakau  akan muncul gejala klorotik, mosaik dan malformasi daun pada hari ke-5, ke-9 dan ke-12.
Gejala infeksi pada tomat hari ke-20 setelah inokulasi ditandai dengan munculnya gejala  kerdil  pada  daun  muda  (s tunting ).  Kemudian  pada  hari  ke-30  gejala  berubah menjadi  mosaik  yang  menunjukan  bahwa  infeksi  virus  menjadi  semakin  parah. Selanjutnya pada hari ke-40 munculnya gejala malformasi daun yaitu adanya perubahan pada daun yang tidak sama pada bentuk semula. Pada penelitian sebelumnya (Listihani et al., 2018), juga diketahui bahwa infeksi ORSV pada tanaman tomat akan muncul gejala mosaik dan malformasi daun pada hari ke-4.
Timun menunjukan gejala nekrotik pada hari ke-12 yang ditandai dengan adanya bercak-bercak putih pada daun terbawah. Timun adalah tanaman indikator kedua yang memiliki  gejala  paling  cepat  terinfeksi  terhadap  ORSV  setelah  tembakau.  Selanjutnya pada hari ke-30 gejala nekrotik tersebut semakin banyak dan melebar hampir menutupi seluruh permukaan daun. Hal ini menunjukan bahwa gejala nekrotik pada timun  semakin
parah. Pada penelitian sebelumnya (Listihani et al., 2018), diketahui bahwa infeksi ORSV pada tanaman timun menunjukan gejala klorotik dan mosaik pada hari ke-10 (Gambar 1).
Gambar 1. Gejala infeksi ORSV pada Nicotiana tabacum : Klorotik (A dan B); Mosaik (C dan D); Malformasi daun (E dan F), Solanum lycopersicum : Stunting (A dan B); Mosaik (C dan D); Malformasi daun (E dan F), Cucumis sativus : Nekrotik (A dan F). Bar=1 cm
Gejala infeksi virus pada tanaman inang tidak menunjukan gejala sampai dengan hari ke-30. Selanjutnya dilakukan reinokulasi dan diamati kembali hingga gejala terlihat. Pada Phalaenopsis  amabilis menunjukan  gejala  nekrotik  pada  hari  ke-18.  Pengamatan dilanjutkan sampai hari ke-30 dan menunjukan gejala nekrotik yang semakin parah. Pada penelitian sebelumnya (Mahfut & Daryono, 2020), juga diketahui bahwa infeksi ORSV pada tanaman Phalaenopsis sp. menunjukkan gejala nekrotik pada hari ke-23. Dendrobium Salaya  Fancy menunjukkan  gejala  nekrotik  pada  hari  ke-15.  Gejala nekrotik  pada Dendrobium lebih  cepat  terlihat  dibandingkan  pada Phalaenopsis . Berdasarkan hasil pengamatan gejala sampai dengan hari ke-25, gejala nekrotik berubah menjadi mosaik yang menunjukan infeksi ORSV pada Dendrobium semakin parah. Pada penelitian sebelumnya (Mahfut & Daryono, 2020), diketahui bahwa infeksi ORSV pada tanaman Dendrobium sp. juga muncul gejala nekrotik dan mosaik pada hari ke-15 dan ke-23 (Gambar 2).
Gambar 2. Gejala infeksi ORSV pada Phalaenopsis amabilis ;     : Nekrotik dan Dendrobium Salaya Fancy;     :Nekrotik,     : Mosaik. Bar= 1cm

## 2. Kejadian Penyakit
Hasil dari kejadian penyakit tanaman terhadap infeksi ORSV disajikan pada Tabel 1.

## Tabel 1. Analisis kejadian tanaman terhadap infeksi ORSV
Jenis Tanaman Kejadian Penyakit Nicotiana tabacum 75% Solanum lycopersicum 75% Cucumis sativus 75% Phalaenopsis amabilis 80% Dendrobium Salaya Fancy 80%
Berdasarkan Tabel 1 diperoleh hasil bahwa masing-masing jenis tanaman memiliki respon yang sama yaitu kejadian penyakit > 40% yaitu 75% pada tanaman indikator dan 80%  pada  tanaman  inang  serta  ditemukan  adanya  infeksi  penyakit.  Hal  tersebut membuktikan bahwa inokulasi ORSV pada keseluruhan tanaman indikator dan tanaman inang  berhasil  dilakukan.  Pada  penelitian  sebelumnya  (Mahfut,  2020),  juga  diketahui bahwa inokulasi ORSV pada tanaman Phalaenopsis sp. dan Dendrobium sp. menunjukan kejadian penyakit > 40% dan ditemukan adanya infeksi penyakit.

## 3. Ketahanan Tanaman
Adapun  hasil  yang  diperoleh  dari  analisis  ketahanan  tanaman  terhadap  infeksi ORSV disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Analisis ketahanan tanaman terhadap infeksi ORSV
Jenis Tanaman Respon Tanaman Nicotiana tabacum Sangat Rentan Solanum lycopersicum Sangat Rentan Cucumis sativus Sangat Rentan Phalaenopsis amabilis Sangat Rentan Dendrobium Salaya Fancy Toleran
Berdasarkan  tabel  diatas  maka  diperoleh  hasil  bahwa  seluruh  jenis  tanaman memiliki  respon  yang  sama  yaitu  rentan  terhadap  ORSV.  Pada  penelitian  sebelumnya (Mahfut et  al .,  2016;  Mahfut  dan  Anggraeni,  2020),  melaporkan  bahwa Phalaenopsis merupakan tanaman inang jenis anggrek yang sangat rentan dan paling mudah terinfeksi ORSV.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa tanaman  indikator  dan  tanaman  inang memiliki  gejala  penyakit  yang  cukup  parah  dengan  berbagai  macam  variasi  gejala. Masing-masing  tanaman  memiliki  respon  yang  sama,  tanaman  indikator  memiliki kejadian penyakit > 40% yaitu 75% sedangkan tanaman inang dengan kejadian penyakit >  40%  yaitu  80%.  Respon  tanaman  indikator  dan  inang  terhadap  ORSV  yaitu  sangat rentan, kecuali pada tanaman inang anggrek Dendrobium Salaya Fancy memiliki respon toleran terhadap ORSV.

## DAFTAR PUSTAKA
Koh, K.W., Lu, H.C., & Chan, M.T. (2014). Virus Resistance in Orchid. Journal of Plant Science , 228: 26- 38.
Listihani., Damayanti, T.A., Hidayat, S.H., & Wiyono, S. (2018). Karakteristik Molekuler Papaya Ringspot Virus Tipe P Pada Tanaman Mentimun di Jawa. J. Fitopatol . Indones, 14(3), 75-83.
Mahfut, & Anggraeni, M. (2020). Evolusi Virus Anggrek di Indonesia. Prosiding Seminar Nasional Biologi di Era Pandemi COVID-19, 19 September 2020. Gowa. ISBN 978-602-72245-5-1, hal 1-5.
Mahfut,  &  Daryono,  B.S.  (2019).  Variation  Symptoms  and  Resistance  of  Different  Types  on  Orchids (Orchidaceae) against Odonttoglossum ringspot virus (ORSV) Infection. INSIST , 4 (2), 246-249. Mahfut,  Daryono,  B.S.,  Joko,  T.,  &  Somowiyarjo,  S.  (2016).  Survey Odontoglossum  ringspot  virus (ORSV)  yang  Menginfeksi  Anggrek  Alam  Tropis  Di  Indonesia. Jurnal Perlindungan  Tanaman Indonesia , 20(1), 1-6.
Mahfut.  (2020).  Variation  of  Resistance  Responses  on  Indicator  Plants  against Odontoglossum  ringspot virus (ORSV) Infection. International Journal of  Advanced Science and Technology , 29(3), 11780- 11785. Matthews, R. (1992). Plant Fundamental of Plant Virology . California: Academic Press inc. Muharam, A., Sulyo, Y., Rahardjo, I.B., Diningsih, E., & Suryanah. (2013). Penyebaran Tobacco Mosaic Virus . Agroradix , 2(1), 2621-0665.
Navalienskie,  M.J.,  Raugalas,  &  Samuitie,  M.  (2005).  Viral  Desease  of  Flower  Plants:  Identification of Viruses Affecting Orchid ( Cymbidium sp.). Jurnal Biologika , 2, 29-34.