Maesaroh, U., Dono, N. D., Zuprizal (2019) Aplikasi Teknologi Nanoenkapsulasi sebagai Delivery System Fitobiotik Alami untuk Ternak. Buletin Profesi Insinyur 2(2) 091-095

## Aplikasi Teknologi Nanoenkapsulasi sebagai Delivery System Fitobiotik
Alami untuk Ternak
Teknologi nanoenkapsulasi merupakan suatu teknologi  penyalutan  partikel  dimana  memiliki diameter ukuran dari mikrometer sampai nonometer yang  menggunakan  suatu  bahan  enkapsulan  khusus hingga  membuat  partikel  tersebut  mempunyai  sifat fisikokimia yang diinginkan. Dalam sistem pengantaran komponen bioaktif fitobiotik pada target organ,  nanoenkapsulasi  berperan  sebagai  pembawa (carrier)  senyawa  bioaktif  yang  ada  di  dalam matriksnya.  Nanopartikel  memiliki  ukuran  yang sangat kecil akan tetapi luas permukaan untuk proses terjadinya  reaksi  kimia  lebih  lebar,  sehingga menjadikan  pencernaan  dan  pemanfaatan  nutrien dalam  tubuh  ternak  lebih  optimal.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  karakteristik  dari nanoenkapsulasi  fitobiotik  alami  untuk  ternak. Karakteristik  dari  nanenkapsulasi  fitobiotik  alami diteliti  dengan  menggunakan  metode  gelasi  ionik antara  ekstrak  daun  sirsak,  kitosan  dan  STPP. Parameter yang diamati yaitu karakteristik nanoenkapsulasi ekstrak daun sirsak (NEDS) meliputi ukuran  partikel,  morfologi,  dan  zeta  potensial. Ukuran  partikel  dan  potensial  zeta  diamati  dengan menggunakan  particle  size  analyzer  (PSA),  dan morfologi nanopartikel diamati dengan menggunakan transmission  electron  microscopy  (TEM).  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  NEDS  memiliki ukuran  sebesar  234,00  ±  21,5  nm,  dengan  morfologi berbentuk  bulat,  dan  muatan  zeta  potensial  sebesar 38,20 ± 1,93 mV.
Kata kunci : nanokapsulasi, fitibiotik, daun sirsak, kitosan
Diajukan: 13 September 2019 Direvisi: 14 September 2019 Diterima:  2 Oktober  2019 Dipublikasikan online: 3 Oktober 2019

## Umi Maesaroh, Nanung Danar Dono, dan Zuprizal
Departemen  Nutrisi  dan  Makanan  Ternak,  Fakultas Peternakan,  Universitas  Gadjah  Mada.  Jl.  Fauna  No.  3 Bulaksumur, Yogyakarta 55281 Telp. +62-274-513363.
 zuprizal@ugm.ac.id

## Pendahuluan
Antibiotik  sudah  umum  sebagai growth  promoters (AGPs) pada  pakan  ternak  untuk  meningkatkan produktivitas  dan  kesehatan  ternak  (Buchanan et  al ., 2008). Akan tetapi penggunaan antibiotik sebagai feed additive pada pakan ternak sudah dilarang karena dapat meninggalkan  residu  pada  produk  ternak  yang dihasilkan.  Pada  bulan  Januari  2018,  secara  resmi Pemerintah  Indonesia  telah  melarang  penggunaan antibiotik  untuk  ternak  yang  produknya  dikonsumsi oleh  manusia,  melalui  peraturan  Menteri  Pertanian (PERMENTAN)  nomor  14/PERMENTAN/PK.350/5/2017 (Amalia  dan  Adisasmito,  2017).  Penggunaan  antibiotik secara terus menerus dalam jangka waktu yang panjang dapat  mengakibatkan efek negatif berupa residu  pada produk  hasil  ternak  sehingga  tidak  aman  untuk dikonsumsi.  Oleh  karena  itu,  diperlukan  alternatif pengganti antibiotik yang dapat meningkatkan kesehatan saluran pencernaan dan dapat mengoptimalkan  kinerja  produksi  ternak  serta  produk yang dihasilkan aman bagi konsumen.
Fitobiotik  merupakan  salah  satu  alternatif  yang dapat digunakan sebagai pengganti antibiotik dan lebih aman  untuk  digunakan,  karena  tidak  meninggalkan
residu pada produk ternak yang dapat membahayakan konsumen.  Fitobiotik  atau  yang  dikenal  dengan tanaman  obat  merupakan feed  additive alami  dari tumbuhan yang dapat meningkatkan pertumbuhan dan efisiensi pakan, mencegah oksidasi lemak, memperbaiki morfologi  usus,  serta  dapat  berfungsi  sebagai antimikroba  sehingga  dapat  meningkatkan  daya  tahan tubuh ternak (Hosseini et al ., 2017). Salah satu fitobiotik alami yang dapat digunakan adalah ekstrak daun sirsak. Ekstrak daun sirsak ini mengandung senyawa metabolik sekunder seperti: flavonoid, tannin, fenol, dan alkaloid (Gavamukulya et  al .,  2014;  Sugayana et  al .,  2016). Senyawa-senyawa  tersebut  memiliki  kemampuan sebagai  antibakteri  alami  dengan  mekanisme  berupa: menghambat  sintesis  asam  nukleat,  menghambat fungsi  membran  sel  dan  menghambat  metabolisme energi.
Mekanisme  aksi  dari  komponen  bioaktif  pada daun sirsak tidak dapat bekerja secara optimal di dalam saluran  pencernaan  karena  bioaktif  tersebut  memiliki karakteristik  berupa  kelarutan  yang  rendah,  cepat terdegradasi,  bioavailabilitas  yang  rendah,  dan  cepat rusak  oleh  pengaruh  lingkungan  saluran  pencernaan sehingga  harus  dilindungi  dengan  penstabil  polimer nanoenkapsulasi  yang  dapat  memproteksi  komponen
bioaktif  tersebut  (Esfanjani  dan  Jafari,  2016).  Metode nanoenkapsulasi  dapat  melindungi  komponen  bioaktif dari pengaruh  negatif  lingkungan  saluran  pencernaan pada  ternak,  akan  tetapi  dalam  formulasi  pembuatan nanoenkapsulasi membutuhkan kajian tersendiri untuk menentukan  perbandingan  yang  tepat  antara  ekstrak, kitosan dan STPP.
Salah  satu  metode  yang  dapat  digunakan  untuk pembuatan  formulasi  nanoenkapsulasi  ekstrak  daun sirsak  adalah  metode  nanoenkapsulasi  dengan  gelasi ionik. Prinsip dari pembuatan nanoenkapsulasi dengan metode  ini  adalah  terjadinya  interaksi  ionik  antara gugus  amin  pada  kitosan  yang  bermuatan  positif dengan  polianion  yang  bermuatan  negatif  (Sundari et al .,  2014).  Teknologi  nanoenkapsulasi  dibuat  dengan proses gelasi ionotropik antara muatan negatif sodium tripolyphosphate (STPP) dan muatan positif gugus amin pada  kitosan.  Nanoenkapsulasi  senyawa  bioaktif  dari ekstrak daun sirsak dengan metode gelasi ionik kitosan dan STPP diharapkan dapat mengoptimalkan mekanisme  kerja  dari  masing-masing  bioaktif  sebagai antibakteri  untuk  menggantikan  antibiotik  yang digunakan sebagai feed additive untuk ternak.

## Metode

## Proses ektraksi
Tepung  daun  sirsak  diekstraksi  dengan  menggunakan etanol  96%  dengan  metode  maserasi  selama  tiga  hari (1:100 s/v). Hasil ekstraksi disaring dengan menggunakan  kertas  saring  untuk  menghilangkan partikel kasar yang tidak larut dalam etanol, kemudian dievaporasi  pada  suhu  60 o C  dengan  menggunakan waterbath. Maserat yang diperoleh kemudian dilarutkan dalam 2% aquades.
Proses nanoenkapsulasi Proses pembuatan formulasi nanoenkapsulasi menggunakan metode gelasi ionik dengan mencampurkan 2% ekstrak daun sirsak : 0,2% kitosan : 0,04%  STPP  (1  :  1  :  0,01).  Hasil  ekstrak  daun  sirsak dengan  96%  etanol  ditambahkan  dengan  kitosan  yang telah  dilarutkan  dalam  1,5%  asam  asetat,  diaduk menggunakan magnetic  stirrer selama  30  menit. Kemudian  ditambahkan  0,04%  STPP  yang  telah dilarutkan  dengan  aquades  dan  diaduk  menggunakan magnetic stirrer selama 30 menit (Sundari, 2014).

## Analisis distribusi ukuran partikel nanoenkapsulasi
Metode yang digunakan untuk analisis distribusi ukuran partikel nanoenkapsulasi adalah metode Dynamic Light Scattering (DLS).  Pengukuran  dilakukan  dengan scattering angle 90 o dan temperatur dari holder 24,8 o C. Hasil  yang  didapatkan  berupa  kurva  data  ukuran partikel dan Polydispersity Indek (PI) (Liang et al ., 2017).

## Analisis morfologi NEDS
Morfologi  NEDS  dianalisis  dengan  menggunakan  TEM. Sebanyak satu tetes sampel NEDS diletakkan pada grid tembaga kemudian dilapisi dengan karbon dengan alat auto  carbon  coated selama  5  detik,  kemudian dikeringkan  pada  suhu  ruang.  Grid  tembaga  dengan sampel  NEDS  dilapisi  dengan  2%  asam  fosfotungstat dan  kemudian  diamati  menggunakan  TEM  dengan percepatan  tegangan  120  kV  dan  magnifikasi  120.000 (Liang et al ., 2017).

## Analisis zeta potensial
Zeta potensial dianalisis menggunakan metode Dynamic Light Scattering (DLS), dengan PSA (Liang et al ., 2017).

## Hasil dan Analisis

## Ukuran partikel Nanoenkapsulasi Ekstrak Daun Sirsak
Ukuran partikel NEDS dengan perbandingan 1 : 1 : 0,01 (kitosan : ekstrak : STPP) sebagaimana yang ditunjukkan pada  Gambar  1  adalah  sebesar  234,00  ±  21,5  nm (Gambar  1)  dengan  nilai  indeks  polidispersitas  yang rendah, yaitu sebesar 0,42 ± 0,20. Hasil tersebut sesuai dengan penjelasan Martien et al. (2012) serta Esfanjani dan  Jafari  (2016)  bahwa  nanopartikel  merupakan partikel  yang  memiliki  ukuran  dibawah  1  mikron  atau 1000  nanometer.  Perera et  al .  (2015)  menyatakan bahwa  partikel  dengan  ukuran  <500  nanometer memiliki  kecepatan  terbaik  untuk  dapat  melewati mukosa  usus  sehingga  dapat  mengoptimalkan  proses penyerapan dan meningkatkan bioavailabilitas di dalam saluran  pencernaan.  Katouzian  dan  Jafari  (2016)  juga menambahkan  bahwa  ukuran  nanopartikel  akan mempengaruhi  distribusi  dan  pelepasan  bioaktif  yang dibawanya.  Semakin  kecil  ukuran  nanopartikel  maka proses  distribusi  dan  pelepasan  bioaktif  menjadi  lebih cepat  dibandingkan  dengan  ukuran  nanopartikel  yang lebih besar (50 > 200 > 500).
Ukuran nanopartikel sebagai drug delivery system atau  sistem  penghantaran  obat  penting  diperhatikan karena  memengaruhi  distribusi  obat  secara in  vivo , tingkat  toksisitas,  kesesuain  dengan  target  organ, muatan obat, proses pelepasan obat, serta stabilitas in vivo dan in vitro . Beberapa faktor yang mempengaruhi besar kecilnya ukuran nanopartikel sebagai penghantaran  obat  adalah  ukuran  dari  polimer  yang digunakan,  proses  formulasi,  dan  proses  persiapan (Motiei et  al. ,  2017).  Al-Beitawi et  al .  (2016) menjelaskan bahwa nanopartikel memiliki ukuran yang lebih  kecil  akan  tetapi  memiliki  luas  permukaan  untuk proses  terjadinya  reaksi  kimia  lebih  lebar  sehingga proses  penghantaran  obat  menjadi  lebih  optimal  di dalam tubuh ternak.

## Zeta potential
Pengukuran zeta potensial dilakukan dengan menggunakan Particle  Size  Analyzer (PSA).  Hasil pengukuran  nilai  zeta  potensial  dari  nanoenkapsulasi ekstrak daun sirsak ditampilkan pada Gambar 2.
Berdasarkan hasil pengukuran dengan menggunakan  PSA,  nilai  zeta  potensial  dari  formulasi nanoenkapsulasi ekstrak daun sirsak yang dipilih adalah sebesar  +38,20  ±  1,93  mV  (Gambar  2).  Hasil  ini  sesuai dengan penelitian yang telah dilakukan oleh Dewandari et  al. (2013)  yang  menunjukkan  bahwa  perpaduan antara  kitosan  dan  STPP  dalam  proses  gelasi  ionik menghasilkan  muatan  zeta  potensial  positif.  Hal  ini disebabkan karena keberadaan gugus amin bebas yang mampu  meningkatkan  muatan  zeta  potensial  dari nanopartikel  yang  dihasilkan.  Pernyataan  tersebut didukung oleh Rampino et al. (2013) yang menyatakan bahwa  interaksi  ionik  dari  muatan  positif  kitosan  dan negatif STPP akan menghasilkan muatan utama adalah positif  dari  polianion  kitosan.  Motiei et  al .  (2017) menambahkan bahwa proses ionisasi dalam amino grup pada  kitosan  menyebabkan  kationik  yang  dapat menghasilkan  zeta  potensial  dengan  nilai  positif. Honary  dan  Zahir  (2013)  juga  menjelaskan  bahwa kitosan  merupakan  salah  satu  polimer  bermuatan positif  yang  dapat  berikatan  dengan  polymer  yang bermuatan negatif untuk menghasilkan sistem penghantaran obat ( drug delivery system ) dengan tidak mempengaruhi  kandungan  fisikokimia  dari  obat tersebut. Kitosan digunakan sebagai pelapis
nanopartikel  dan  menghasilkan  muatan  positif  untuk memudahkan  interaksi  dengan  sel  mukosa  yang memiliki muatan negatif.
Nilai  zeta  potensial  dari  nanoenkapsulasi  ekstrak daun sirsak sebesar 38,20 ± 1,93 mV menunjukkan hasil formulasi nanopartikel yang stabil. Hal ini sesuai dengan penjelasan  Motiei et  al. (2017)  bahwa  nilai  zeta potensial absolut untuk nanopartikel yang menunjukkan  kestabilan  dan  afinitas  yang  tinggi  pada membran  sel  adalah  >  25  mV.  Servat-Medina et  al . (2018) juga menjelaskan bahwa nilai zeta potensial yang kurang  −30  mV  atau  lebih  dari  30  mV  menunjukkan stabilitas partikel. Nilai zeta potential pada nanopartikel dipengaruhi  oleh  keberadaan  gugus  amino  dan  jenis muatan  yang  paling  dominan  dari  beberapa  polymer yang  digunakan.  Muatan  zeta  potensial  terbaik  dapat diperoleh dengan menentukan perbandingan formulasi yang  tepat  dari  polymer  yang  memiliki  muatan berlawanan.  Muatan  zeta  potensial  yang  tepat membuat nanopartikel dapat dengan mudah menembus barrier mukus serta memudahkan terjadinya  proses  endositosis  oleh  sel  endothelial sehingga  menjadikan  proses  pelepasan  obat  lebih maksimal  dan  dapat  dimanfaatkan  dengan  baik  oleh target organ (Perera et al ., 2015).

## Morfologi nanoenkapsulasi ekstrak daun sirsak
Morfologi  dari  nanoenkapsulasi  ekstrak  daun  sirsak diamati  dengan  menggunakan Trasmission  Electron Microscopy (TEM).  Hasil  TEM  dari  nanoenkapsulasi ekstrak daun sirsak ditampilkan pada Gambar 3.
Morfologi  dari  nanoenkapsulasi  ekstrak  daun sirsak  menunjukkan  bentuk  bulat  seperti  bola  dan berwarna  terang  pada  latar  belakang  gelap  dengan ukuran  yang  homogen  (Gambar  3).  Hasil  penelitian  ini sesuai  dengan  penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh Alves et  al .  (2016)  dengan  membuat  nanoenkapsulasi asam  galat  yang  dilihat  menggunakan  pengamatan S canning  Electron  Microscopy (SEM)  menghasilkan morfologi  nanopartikel  berbentuk  bulat.  Bentuk nanopartikel  dari  formulasi  nanoenkapsulasi  ekstrak daun  sirsak  yang  bersifat  non-agregat  atau  tidak menggumpal menunjukkan bahwa karakteristik nanopartikel stabil secara fisik (Badran et al ., 2014).
Gambar 3. Morfologi NEDS
Motiei et al . (2017) menyatakan bahwa nanopartikel  terdiri  dari  polimer  amfifilik  yang mengandung  senyawa  hidrofobik  yang  terkumpul dibagian  inti  dan  senyawa  hidrofilik  yang  mengelilingi partikel  tersebut  sehingga  mencegah  dari  pemisahan. Kitosan  dan  STPP  merupakan  polimer  amfifilik  yang mampu mengasilkan formulasi nanoenkapsulasi dengan  ukuran  partikel  stabil,  dan  bentuk  morfologi yang  kompak  (Rampino et  al .,  2013).  Morfologi nanopartikel  penting  untuk  diketahui  karena  bentuk partikel yang kurang sferis akan mempermudah kontak antar  partikel  yang  dapat  mengakibatkan  agregasi sehingga  dapat  membuat  nanopartikel  tidak  stabil (Martien et  al. ,  2012).  Alves et  al .  (2016)  menyatakan bahwa  setelah  proses  enkapsulasi  yang  terjadi  antara kitosan,  ekstrak  dan  STPP  maka  tidak  ada  lagi  proses interaksi  antara  polymer  penyalut  dengan  bioaktif  di dalamnya.

## Sediaan cair nanoenkapsulasi ekstrak daun sirsak
Sediaan  cair  dari  nanoenkapsulasi  ekstrak  daun  sirsak diformulasi  dengan  menggunakan metode gelasi  ionik antara  ekstrak  daun  sirsak,  kitosan  dan  STPP  yang ditampilkan pada Gambar 4.
Gambar 4 . Sediaan cair NEDS
Target  khusus  dari  penelitian  ini  adalah  untuk memperoleh  formulasi  yang  tepat  pada  proses pembuatan  nanoenkapsulasi  ekstrak  daun  sirsak dengan  karakteristik  yang  tepat,  memperoleh  produk teknologi tepat guna dalam inovasi pembuatan sediaan cair  nanoenkapsulasi  ekstrak  daun  sirsak  dan  pada penelitian tahap selanjutnya mengkaji tentang pengaruh  penggunaannya  secara in  vivo pada  ternak ayam  broiler.  Dengan  demikian  penelitian  terobosan
aplikasi  nanoenkapsulasi  ekstrak  daun  sirsak  sediaan cair  sebagai  antibakteri  alami  untuk  menghasilkan produk  hewani  dari  ayam  broiler  yang  bebas  residu antibiotik, aman dan sehat, ini original  dan belum ada yang  meneliti  serta  sangat  perlu  dilakukan  guna pengembangan ilmu pengetahuan (iptek), peningkatan efektivitas dan efisiensi produksi.

## Kesimpulan
Penggunaan  teknologi  nanoenkapsulasi  ekstrak  daun sirsak  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan  metode gelasi ionik dengan  memanfaatkan perbedaan  muatan antara kitosan STPP, dan menghasilkan ukuran sebesar 234,00  ±  21,5  nm,  dengan  morfologi  berbentuk  bulat, dan  memiliki  muatan  zeta  potensial  sebesar  38,20  ± 1,93  mV,  yang  menandakan  bahwa  formulasi  tersebut bersifat  stabil  dan  homogen  sehingga  potensial  untuk digunakan  sebagai  sistem  penghantaran  obat  dari bioaktif yang ada di dalam ekstrak daun sirsak.

## Ucapan Terimakasih
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Laboratorium  Teknologi  Farmasi,  Universitas  Islam Indonesia  dan  Laboratorium  Ilmu  Makanan  Ternak, Departemen  Nutrisi  dan  Makanan  Ternak,  Fakultas Peternakan, Universitas Gadjah Mada Yogyakarta yang telah  menyediakan  fasilitas  untuk  penelitian  ini.  Kami juga  ingin  menyampaikan  terima  kasih  kepada Kementerian  Riset,  Teknologi,  dan  Pendidikan  Tinggi Republik Indonesia atas pendanaan untuk pelaksanaan dari penelitian ini.

## Referensi
Buchanan,  N.P.,  J.M.  Hott,  S.E.  Cutlip,  A.L.  Rack,  A. Asamer,  and  J.S.  (2008)  Moritz, The  effects  of  a natural antibiotic alternative and a natural growth promoter feed additive on broiler performance and carcass  quality ,  The  Journal  of  Applied  Poultry Research 17 : 202-210.
Amalia,  Z.  and  W.  Adisasmito,  (2017) Analysis  of  policy making factors on the prohibition of hormones and antibiotics use for feed as a public health protection ,
Journal of Indonesian Health Policy and Administration 2 : 14-19.
Hosseini, S., M. Chamani, A. Seidavi, A.A. Sadeghi, and Z.
Ansari-Pirsareai, (2017) Effect on feeding Thymolina®  powder  in  the  carcass  characteristics dan  morphology  of  small  intestine  of  Ross  308 broiler chickens , Acta Scientiarum 39 : 45-50. Gavamukulya, Y., F. Aboi-Elella, F. Wamunyokoli, and H. AEI-Shemy,  (2014) Phytochemical  screening,  anti- oxidant activity dan in vitro anticancer potential of ethanolic  dan  water  leaves  extracts  of  Annona muricata
(Graviola) , Asian Pacific
Journal of Tropical Medicine 7 : S355-S363.
Sugayana,  M.,  M.  Magela,  and  G.  Rubalakshmi,  (2016) New Era about treatment-evaluation of anticancer properties  of  evergreen  medicinal  plant  Annona muricata (Graviola) , International Journal of Recent Scientific Research 7 : 10954-10956..
Esfanjani,  A.F.,  and  S.M.  Jafri,  (2016) Biopolymer  nano- particles  and  natural  nano-carriers  for  nano- encapsulation of phenolic compounds , Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 146 : 532-543. Sundari, Zuprizal, T. Yuwanta and R. Martien, (2014) The effect nanocapsule of turmeric extracts in rations on nutrient  digestibility  of  broiler  chickens ,  Animal Production 16 : 107-113.
Liang, J., H. Yan, X. Wang, Y. Zhou, X. Gao, P. Puligundla, and X. Wan, (2017) Encapsulation of epigallocatechin gallate in zein/chitosan nanoparticles  for  controlled  applications  in  food systems , Food Chemistry 231 : 19-24.
Martien, R., A. Adhyatmika, V. Farid dan D.P. Sari, (2012) Technology  developments  nanoparticles  as  drug delivery systems , Majalah Farmaseutik 8 : 133-144. G. Perera, M. Zipser, S. Bonengel, W. Salvenmoser, and A. Bernkop-Schnürch, (2015) Development of phosphorylated  nanoparticles  as  zeta  potential inverting systems , European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 97 : 250-256. Katouzian, I. and S.M. Jafari, (2016) Nano-encapsulation as a promising approach for targeted  delivery and controlled  release  of  vitamins ,  Trends  in  Food Science & Technology 53 : 34-48.
Al-Beitawi, N.A., M.M. Shaker, K.N. El-Shuraydeh, and J. Blaha, (2017) Effect of nanoclay minerals on growth performance, internal organs and blood biochemistry  of  broiler  chickens  compared  to vaccines and antibiotics , Journal of Applied Animal Research 45 : 543-549. Dewandari, K.T., S. Yuliani, and S. Yasni, (2013) Extraction and  characterization  nanoparticle  red  betel  leaf
(Piper crocatum) , Indonesian Journal of Agricultural Postharvest Research 10 : 58-65.
Rampino, A., M. Borgogna, P. Blasi, B. Bellich, A. Cesàro, (2013) Chitosan  nanoparticles:  Preparation,  size evolution  and  stability ,  International  Journal  of Pharmaceutics 455 : 219-228.
Motiei, M.,  S. Kashanian, L.A. Lucia., M. Khazaei, (2017) Intrinsic  parameters  for  the  synthesis  and  tuned properties  of  amphiphilic  chitosan  drug  delivery nanocarriers ,  Journal  of  Controlled  Release 260 (2017): 213-225.
Honary S., and F. Zahir, (2012) Effect of zeta potential on the  properties  of  nano-drug  delivery  systems  -a review (Part 2) , Tropical Journal of Pharmaceutical Research 12 : 265-273.
Servat-Medina  L,  A.  González-Gómez,  F.  Reyes-Ortega, I.M.O.  Sousa,  N.C.A.  Queiroz,  P.M.W.  Zago,  M.P. Jorge, K.M. Monteiro, J.E. de Carvalho, J.S. Román, and M.A.  Foglio, (2015) Chitosan-tripolyphosphate nanoparticles  as  Arrabidaea  chica  standardized extract carrier: synthesis, characterization, biocompatibility,  and  antiulcerogenic  activity , International  Journal  of  Nanomedicine 10 :  3897- 3909.
Alves,  A.C.S.,  R.M.  Mainardes,  and  N.M.  Khalil,  (2016) Nanoencapsulation of gallic acid and evaluation of its  cytotoxicity  and  antioxidant  activity ,  Materials Science and Engineering 60 : 126-134.
Badran, M.M., E.I. Taha, M.M. Tayel, and S.A. Al-Suwayeh, (2014) Ultra-fine self nanoemulsifying drug delivery system  for  transdermal  delivery  of  meloxicam: dependency  on  the  type  of  surfactants, Journal of Molecular Liquids 190 : 16-22.