## AKTIFITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL 60% DAN  EKSTRAK AIR KULIT BUAH NAGA MERAH  TERHADAP BAKTERI STAPHYLOCOCCUS AUREUS DAN ESCHERICIA COLI
(Antibacterial Activity of Ethanol 60%  and Distilled Water Extract from Red Pitaya (Hylocereus Polyrhizus) Peel to Bacteria Staphylococcus Aureus and Eschericia Coli)
Anni Faridah*, Daimon Syukri**, Rahmi Holinesti* *Fakultas Teknik Universitas Negeri Padang **Fakultas Teknik Pertanian Universitas Andalas faridah.anni@gmail.com

## Abstract
The purpose of this study was to compare the antibacterial activity of 60% ethanol and extracts distilled  water  from  red  pitaya  (Hylocereus  polyrhizus)  peel  to  bacteria  Staphylococcus  aureus  and Escherichia coli. The treatment used was the concentration of the extract with some dilution treatment. Antibacterial  activity  test  performed  using  paper  disc  diffusion  method  and  observation  of  inhibitory zone.  The  results  showed  that  the  antibacterial  activity  of  ethanol  extract  of  60%  and  distilled  water from red pitaya peel differ in inhibiting bacteria Staphylococcus aureus and Escherichia coli, where the ability of antibacterial against Staphylococcus aureus bacteria better than bacteria Escherichia coli.
Keywords: ethanol 60% extract, distilled water, red pitaya peel, antibacterial

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbandingan aktivitas antibakteri ekstrak etanol 60% dan  ekatrak  air  dari  kulit  buah  naga  merah  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus  dan  Eschericia coli . Perlakuan yang digunakan adalah konsentrasi ekstrak dengan beberapa perlakuan pengenceran. Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  difusi  kertas  cakram  serta pengamatan  zone  hambat.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol 60% dan air kulit buah naga merah berbeda dalam menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia  coli, dimana  kemampuan  antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus lebih  baik dari pada bakteri Eschericia coli.
Kata kunci : ekstrak etanol 60%, air, kulit buah naga merah, antibakteri

## PENDAHULUAN
Kulit  buah  naga  merah  ( Hylocereus polyrhizus )  yang  berwarna  merah  atau  merah violet  merupakan  sumber  pigmen  betalain. Betalain  merupakan  pigmen  berwarna  merah- violet dan kuning-orange yang banyak terdapat pada  buah,  bunga,  dan  jaringan  vegetatif (Strack et  al .,  2003).  Betalain  adalah  pigmen kelompok  alkaloid  yang  larut  air,  pigmen bernitrogen, dan merupakan pengganti antosianin pada sebagian besar family tanaman ordo Caryophyllales , termasuk Amaranthaceae, dan  bersifat  mutual  eksklusif dengan  pigmen  antosianin  (Cai et  al .,  2005; Grotewold,  2006).  Sifat  ini  berarti  bahwa pigmen  betalain  dan  antosianin  tidak  pernah dijumpai  bersama-sama  pada  satu  tanaman. Oleh  karena  itu  pigmen  betalain  sangat signifikan dalam penentuan taksonomi tanaman  tingkat  tinggi.  Menurut  Saati  (2011), kulit buah naga merah berjumlah 30-35 % dari berat  buahnya  dan  seringkali  hanya  dibuang sebagai  sampah.  Padahal  hasil  penelitian menunjukkan kulit buah naga merah
mengandung  antioksidan  dan  juga  dapat menurunkan  kadar  kolesterol  (Kanner et  al .,
2001) dan antibakteri (Sri Amalia dkk., 2014). Aplikasi  ektrak  kulit  buah  naga  merah yang sangat luas tidak lepas dari faktor pelarut yang  digunakan  pada  saat  proses  ekstraksi dilakukan, pelarut pengekstrak yang digunakan harus juga merupakan pelarut yang aman  dan  ramah  lingkungan,  karena  apabila ada  residu  pelarut  yang  tinggal  diekstrak  tidak akan  membahayakan  terhadap  lingkungan baik  terhadap  manusia  maupung  lingkungan secara umumnya. Penggunaan pelarut pengekstrak juga akan mempengaruhi konsentrasi  zat  aktif  yang  diinginkan.  Pelarut yang  digunakan  juga  harus  dipertimbangkan, jika  ekstrak  yang  dihasilkan  diperuntukkan untuk  pangan.  Penelitian  ini  mencoba  melihat efektifitas penggunaan pelarut yang aman dan ramah  lingkungan  dalam  proses  ekstraksi betalain  dari  kulit  buah  naga  merah  terhadap kemampuan aktifitas antibakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia coli
METODOLOGI Buah naga merah ( Hylocereus polyrhizus )  yang  didapatkan  disekitar  kota Padang,  Sumatera  Barat  dan  disimpan  5  hari. Bahan kimia yang digunakan yaitu etanol 60%, aquades, cotton  bud ( cotton  swab ),  media Mueller  Hinton  Agar (MHA) ,  Buffer  Pepton Water biakan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Eschericia coli.
Penelitian ini dilaksanakan di laboratorium Teknologi Hasil Pertanian
Fakultas  Teknologi  Pertanian  Universitas Andalas pada tahun 2015. Alat yang digunakan  yaitu  blender,  thermoshaker,  alat- alat gelas, timbangan digital, penyaring vakum, kertas saring, dan vacum evaporator.

## Proses Ekstraksi
Bahan  segar  berupa  kulit  buah  naga merah yang telah dicuci, dibersihkan dari sisik, serta  bagian  ujung  dan  bagian  pangkal.  Kulit yang  telah  bersih  dipotong-potong  menjadi bagian  yang  kecil,  kemudian  diblender  hingga halus.  Kulit  buah  naga  merah  yang  telah diblender kemudian ditimbang. Ekstraksi simplisia  dilakukan  dengan  metode  maserasi menggunakan pelarut etanol 60% dan aquades.  Maserasi  dilakukan  dengan  alat thermoshaker  dan  dibiarkan  selama  12  jam. Filtrat  yang  diperoleh  kemudian  disimpan dalam  wadah  tertutup,  ditempat  sejuk  dan terlindung dari cahaya selama 24 jam (diendap tuangkan),  filtrat  kemudian  disaring,  hasil seluruh filtrate dikumpulkan kemudian dipekatkan  dengan vacum  evaporator sampai didapatkan ekstrak kental.

## Uji bakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak kulit  buah  naga  merah  dilakukan  pada  bakteri Staphylococcus  aureus dan Eschericia  coli yang  diperoleh  dari  laboratorium  Mikrobiologi Fakultas Teknologi pertanian Universitas Andalas Padang.
Celupkan cotton  bud ( cotton  swab ) dalam  biakan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Eschericia  coli kemudian  tekan  kapas  ke sisi tabung agar air tiris. Ulaskan pada seluruh permukaan  cawan  Mueller-Hinton  agar  secara merata  lalu  biarkan  cawan  selama  5  menit. Kemudian  kertas  cakram  dicelupkan  dalam larutan  ekstrak  dengan  konsentrasi  tertentu
yang  dibuat  bertingkat.  Angkat,  biarkan sejenak  agar  tiris,  selanjutnya  l etakkan  kertas cakram pada permukaan agar. Kertas cakram ditekan menggunakan pipet supaya menempel sempurna  dipermukaan  agar.  Inkubasi  pada suhu 37̊ C selama 24-48 jam. Kemudian diukur diameter  zona  hambat  (mm)  antibakteriyang dihasilkan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi zat aktif dari tanaman biasanya  dilakukan  dengan  menggunakan proses ekstraksi pelarut. Pigmen betalain yang diduga  merupakan  komposisi  terbesar  dari kulit  buah  naga  merah  adalah  molekul  polar dan  akibatnya  lebih  larut  dalam  pelarut  polar. Selain  itu  kondisi  ekstraksi  juga  salah  satu faktor  kunci  dalam  kelarutannya.  Ekstraksi dipengaruhi  keseluruhan  kondisi  ekstraksi seperti  rasio  padat-cair,  suhu  inkubasi,  waktu inkubasi, jenis pelarut dan konsentrasi pelarut. Semua ini mempegaruhi stabilitas dan konsentrasi  betalain  yang  didapatkan  dari ekstrak  tanaman.  Metanol  merupakan  pelarut yang  paling  umum  digunakan,  tetapi  juga dianggap  lebih  beracun  dan  berbahaya  untuk menangani  dari  alkohol  lainnya.  Selain  air, etanol  merupakan  pelarut  yang  lebih  ramah lingkungan  dan  juga  dapat  mengekstak betalain  dengan  kualitas  dan  kuantitas  yang baik serta aman untuk pangan ( food grade ). Hasil  ekstraksi  yaitu  larutan  stok ekstrak  etanol  60%,  ekstrak  kulit  buah  naga merah  adalah 73 mg/L dan ekstrak air, ektrak kulit  buah  naga  merah  adalah,  7,72  mg/L. Kemudian  dilakukan  pengenceran  bertingkat untuk  membuat  variasi  konsentrasi  uji  dengan pola  pengenceran  sebagai  berikut:  tanpa pengenceran, pengenceran 2 kali,
pengenceran 4 kali dan pengenceran 8 kali. Penentuan  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol  60%  dan  air  kulit  buah  naga  merah dilakukan  dengan  metode disc  diffusion  Kirby- Bauer yaitu  penentuan  sensivitas  bakteri dengan  suatu  zat  tertentu  yang  kemungkinan memiliki aktivitas antibakteri dengan menggunakan cakram kertas. Hasil uji aktivitas ekstrak  etanol  60%  dapat  dilihat  pada  Tabe1 1,  sedang  hasil  uji  aktivitas  antibakteridari ekstark  air  memberikan  hasil  tidak  adanya zona inhibisi pada masing-masing konsentrasi.

## Tabel 1. Hasil Pengamatan Aktivitas Antibakteri Ektrak Etanol
Kulit Buah Naga Merah.

## Staphylococcus aureus
Konsentrasi Diameter Hambat Kertas Cakram Hasil (mm) 1 : 0 (73mg/L) 1.4 cm 0.9 cm 50 1 : 1 (36 mg/L 1.2 cm 0.9 cm 34 1 : 3 (18 mg/L) 1.3 cm 1.0 cm 30 1 : 7 (9 mg/L) 1.14 cm 0.87 cm 27 Ket : hasil = diameter hambat – kertas cakram

## Escherichia coli
Konsentrasi Diameter Hambat Kertas Cakram Hasil (mm) 1 : 0 (73mg/L) 1.31 cm 0.9 cm 41 1 : 1 (36 mg/L 1.2 cm 0.9 cm 30 1 : 3 (18 mg/L) 1.15 cm 0.9 cm 25 1 : 7 (9 mg/L) - 0.9 cm 0
Ket : hasil = diameter hambat – kertas cakram
Berdasarkan  zona hambat dari semua konsentrasi  ekstrak  etanol  60%  kulit  buah naga  merah  kecuali  pada  konsentrasi  9  mg/L terhadap  bakteri Eschericia  coli ,  zona  hambat yang  dihasilkan  dapat  dinyatakan  peka terhadap antibakteri karena ini merujuk kepada pendapat dari Departemen Kesehatan RI yang menyebutkan  bahwa  zat  dinyatakan  peka terhadap  antibakteri    apabila  mempunyai ukuran  diameter  zona  inhibisi  (daerah  bening) sekitar  12-24  mm  (Depkes  RI,  1988).  Zona hambat terhadap bakteri Eschericia coli (Gram negatif)  pada  konsentrasi  73,  36,  18  mg/L berturut-turut 41, 30, dan 25 mm (Tabel 1).
Staphylococcus  aureus merupakan bakteri  Gram  positif.  Bakteri  Gram  positif memiliki  kepekaan  terhadap  antibakteri  lebih baik  dibandingkan  Gram  negatif  karena adanya  perbedaan  struktur  dinding  sel. Struktur dinding sel bakteri Gram negatif relatif lebih  kompleks,  berlapis  tiga  yaitu lapisan  luar yang  berupa  lipoprotein,  lapisan  tengah  yang berupa  lipopolisakarida  dan  lapisan  dalam berupa  peptidoglikan.  Sedangkan  struktur dinding  sel  mikroba  gram  positif  relatif  lebih sederhana  sehingga  memudahkan  senyawa antibakteri  untuk  masuk  ke  dalam  sel  dan menemukan  sasaran  untuk  bekerja  (Zuhud dkk, 2001).
Hal  ini  dapat  dilihat  dari  data  bahwa efektivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  60%  kulit buah  naga  merah  lebih  berpengaruh  terhadap bakteri  Gram  positif  dari  pada  bakteri  Gram negatif ( Eschericia coli), yang dilihat berdasarkan zona hambat yang dihasilkan.
Beberapa  senyawa  pada  ekstrak etanol  60%  yang  diduga  memiliki  aktivitas antibakteri  berdasarkan  hasil  skrining  fitokimia adalah  alkaloid  dan  terpenoid.    Betalain  yang merupakan  golongan  alkaloid  merupakan  zat
aktif  yang  terdapat  dalam  ektrak  etanol  60% kulit  buah  naga  merah  yang  diduga  sangat berperan  dalam  aktivitas  antimikroba  ini. Alkaloid  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri dengan cara mengganggu penyusun peptidoglikan  pada  sel  bakteri,  sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan  menyebabkan  kematian  sel  tersebut (Lamonthe,  2009).  Walaupun  di  dalam  ektrak air  kulit  buah  naga  merah  juga  mengandung betalain,  akan  tetapi  karena  konsentrasi  yang sangat  kecil  tidak  memberikan  pengaruh terhadap  aktivitas  antibakteri  (Anni  Faridah dkk, 2015).
Pada  penggunaan  pelarut  pengektrak air,  ektrak  air  kulit  buah  naga  merah  yang didapatkan  tidak  memberikan  efek  antibakteri. Hal  ini  dimungkinkan  karena  penggunaan pelarut air membuat proses penguapan pelarut untuk  mendapatkan  ektrak  kasar  sangat susah,  karena  dalam  proses  penguapan pelarut  menggunakan  rotary  evaporator  tidak bisa  menggunakan  suhu  evaporasi  yang tinggi, karena betalain sangat tidak stabil pada suhu  panas,  dengan  menggunakan  suhu evaporasi  yang  rendah,  akan  menyulitkan terjadinya  proses  penguapan  air,  sehingga ektrak kasar yang diujikan masih mengandung banyak air, yang  membuat  konsentrasi betalain didalam ekstrak menjadi sangat encer sehingga  memilki  aktivitas  antibakteri  yang sangat rendah.
Hal  ini  berbeda  dengan  penggunaan pelarut  campuran  etanol  60%..  Penggunaan etanol  60%  memberikan  banyak  keunggulan. Dengan  adanya  etanol,  proses  penyerapan pelarut  ke  dalam  pori-pori  bahan  akan  lebih baik  dari  pada  pelarut  air,  karena  pelarut etanol memiliki sifat mudah terserap dari pada air.  Selain  itu  dengan  proses  penguapan
pelarut  etanol  60%  dengan  rotary  evaporator juga lebih efektif karena terbentuknya azeotrop yang  membuat  titik  didih  pelarut  60%  lebih rendah  dari  pada  titik  tidih  air.  Denga  suhu evaporasi  yang  sama  dengan  pelarut  air efektivitas  penguapan  pelarut  etanol  60  % akan  lebih  banyak  dibandingkan  dengan pelarut air saja. Sehingga konsentrasi betalian di dalam ektrak akan menjadi tinggi.

## KESIMPULAN
Ektrak  etanol  60%  kulit  buah  naga merah  memberikan  efek  antibakteri  yang berbeda  dengan  ekstrak  air  kulit  buah  naga merah.  Efek  antibakterimemiliki  daya  yang lebih  peka  terhadap  bekteri  Gram  positif ( Staphylococcus  aureus) dari  pada  bakteri Gram  negatif  ( Eschericia  coli) .  Betalain  yang terdapat  di  dalam  ekstrak  memiliki  peranan terhadap  aktivitas  antibakteri  karena  aktivitas antibakteri  berhubungan  dengan  kandungan betalain di dalam ekstrak.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  sangat  berterimakasih  atas pendanaan  penelitian  ini  kepada  Dikti  melalui Lembaga Penelitian Universitas Negeri Padang,  dengan  sumber  dana  penelitian
Hibah  Fundamental  anggaran  tahun  2014 – 2015.

## PUSTAKA
Anni  Faridah,  Daimon  Syukri,  Rahmi  Holinesti 2015. Simple Characterization of Betalain Compound  from  RED  Pitaya  (Hylocereus Polyrhizus)  Peel  Solution.  International Journal on Advanced science Engineering
Information Technology. 5 (3): 56 -60
Cai  Y.,  M.  Sun  &  H.  Corke.  2005.  HPLC characterization of betasianins from plants in  the  Amaranthaceae,  J.  Chromatogr. Sci., 43, 454-60.
Departemen  Kesehatan  RI.  1988. Inventaris Obat  Indonesia Jilid  I.  Badan  Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Jakarta.
Grotewold,  E.  2006.  The  genetics  and biochemistry of floral pigments. Ann. Rev. Plant Biol. 57:761-780. Stintzing, F.C. dan R.  Carle.  2007.  Betalains –  emerging prospects  for food  scientists.  Tends  Food Sci. Technol. 18 : 514 – 525.
Kanner,  K.,  Harel,  S.,  and  Granit,  R.  2001.
Betalains –  A  new  class  of  dietary cationized antioxidants. Journal of Agricultural  and  Food  Chemistry,  49, 5178 –5185.
Lamothe,  R.G.,  Mitchell,  G.,  Gattuso,  M., Diarra,  M.S.  dan  Malouin,  F.  2009.  Plant Antimicrobial  Agents and Their Effects on Plant and Human Pathogens. International Journal of Molecular Sciences. 10:3400-3419.
Saati.  E.  2011.  Identifikasi  dan  uji  kualitas pigmen kulit buah naga merah (Hylocareus costaricensis) pada beberapa umur  simpan  dengan  perbedaan  jenis pelarut.http://research report.umm.ac.id
/research/download /abstract
_research_report_  176.pdf  diakses  Maret
2013 Sri  Amalia,  Sri Wahdaningsih  and  Eka  Kartika Untari. 2014. Uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksa kulit buah naga merah ( Hylocereus  polyrhizus Britton  &  Rose) terhadap  bekteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923.  Trad.  Med.  J.,  May  2014 Vol. 19(2), p 89-94
Strack, D., Vogt, T.,and Schliemann, W. 2003. Recent  advances  in  betalain  research. Phytochemistry, 62, 247 –269.
Zuhud,  EAM.,  Rahayu, WP., Wijaya, CH.,  dan Sari,  PP.  2001.  Aktivitas  Antimikroba Ekstrak  Kedawung  (Parkia  roxburghii  G. Don)  terhadap  Bakteri  Patogen.  Jurnal Teknologi  dan  Industri  Pangan.  12(1)  :  6- 12
.