Jambura Fish Processing Journal Vol. 6 No. 1 (2024) Mile et al., / JFPJ, 6 (1): 74 - 84
PENGUJIAN AKTIVITAS ANTIBAKTERI GEL HAND SANITIZER KITOSAN DENGAN PENAMBAHAN EKSTRAK DAUN SIRSAK ( ANNONA MURICATA L )
Lukman Mile 1 , Rahim Husain 1 , Muh Rizki Stirman 1 1 Jurusan Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Kelautan dan Teknologi Perikanan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl.Jenderal Sudirman No.06, Kota Gorontalo 96128, Gorontalo, Indonesia
Diterima Januari 04-2024; Diterima setelah revisi Januari 30-2023; Disetujui Januari 31-2023
*Korespodensi: lukmanmile@ung.ac.id

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini untuk menganalisa gel hand sanitizer berbahan kitosan yang diformulasi dengan ekstrak daun sirsak ( Annona muricata L) sebesar 8 mL, 10 mL, 12 mL dan 14 mL terhadap daya hambat bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Penelitian terdiri dari beberapa tahapan, yaitu pengujian kitosan terhadap daya hambat bakteri uji, pembuatan ekstrak daun sirsak, pengujian karakteristik gel hand sanitizer dengan parameter uji meliputi homogenitas,    daya  sebar  dan  daya  hambat  bakteri.  Desain  penelitian  menggunakan  metode  rancangan  acak lengkap (RAL) non faktorial. Analisis data menggunakan ANOVA, apabila ada pengaruh maka diuji lanjut Duncan. Hasil penelitian menunjukkan daya hambat kitosan rata-rata sebesar 10,17 mm untuk bakteri E.coli dan 11,47 mm untuk  bakteri S.aureus. Hasil  ektraksi  daun  sirsak  dari  280  gram  menghasilkan  ekstrak  238,08  gram,  randemen 117,6%, handsanitzer telah bercampur dengan sempurna, daya sebar berkisar 5 sampai 7 cm. Gel hand sanitizer memberikan  pengaruh  nyata  terhadap  daya  hambat  bakteri E.  coli  dan  S.  aureus. Daya  hambat  yang  dihasilkan terhadap bakteri S.aureus sebesar 7,3 mm hingga 17,5 mm dan terhadap bakteri E.coli sebesar 7,2 mm sampai 9 mm.  Berdasarkan  hasil  tersebut  rata-rata  diameter  daya  hambat  yang  terbentuk  tergolong  dalam  kategori  sedang hingga kuat.
Kata Kunci: Daun sirsak ; Escherichia coli ; Hand sanitizer; Kitosan; Staphylococcus aureus
Antibacterial Activity Test Of  Gel Hand Sanitizer Chitosan With Addition Of Soursop Leaf Extract (Annona muricata L)

## ABSTRACT
The objective of this study was to analyze a chitosan hand sanitizer gel formulated with an 8 mL, 10 mL, 12 mL and 14 mL leaf extract ( Annona muricata L) against the bacterial inhibition of Staphylococcus aureus and Eschericia coli . The research consists of several stages, namely the test of chemicals against bacterial barrier resistance of the test, the  manufacture  of  leaf  extract,  the  testing  of  characteristics  of  hand  sanitizer  gels  with  test  parameters  including homogenity,  barrier  and  bacteria  barrier.  The  research  design  uses  a  non-factorial  complete  randomized  design (RAL) method. Data analysis using ANOVA, when there is influence then further testing Duncan. The results showed an average barrier inhibition of 10.17 mm for E. coli and 11.47 mm for S. aureus . The result of the extraction of 280 grams of sardine leaves yielded 238.08 grams extract, a randement of 117.6%, the handsanitzer has been mixed perfectly, the strength ranging from 5 to 7 cm.  Hand sanitizer gel gives a real effect on the bacterial resistance of E. coli and S. aureus . The resulting inhibition for S.aureus bacteria is 7.3 mm to 17.5 mm and for E.coli bacteria is 7.2 mm to 9 mm. Base on these results, the average diameter of the inhibition formed is classified as moderate to strong.
Keywords: Chitosan; Escherichia coli ; Hand sanitizer; Soursop leaf; Staphylococcus aureus
P-ISSN: 2655-3465     E-ISSN: 2720-8826

## PENDAHULUAN
Udang  hasil  pembudidayaan  merupakan  produk  perikanan  Indonesia  yang  sangat  penting.  Cara pembekuan  udang  yang  paling  umum  untuk  diperdagangkan  menghasilkan  60  -  70%  limbah  dari  berat udang.  Limbah  tersebut  berupa  cangkang  yang  efektif  membusuk  dan dapat  menyebabkan pencemaran ekologi  (Nadia et  al ,  2014).  Cangkang  udang  atau  kepiting  merupakan  bahan  alami  pembuat  kitin  dan kitosan. Kitosan merupakan senyawa polimer yang dihasilkan dari ekstraksi makhluk bercangkang keras (kerang) dan merupakan biomaterial yang paling banyak jumlahnya setelah selulosa (Rochima et al , 2018).
Kemampuan  kitosan  untuk  diterapkan  di  berbagai  bidang  industri  saat  ini,  misalnya  obat-obatan, kimia  alami,  produk  perawatan  kecantikan,  usaha  makanan  dan  material,  mendorong  kemajuan  dalam pengembangan  berbagai  eksplorasi  memanfaatkan  kitosan,  termasuk  penyelesaian  bahan  atau penyesuaian  aktual  kitosan  (Suptijah et  al ,  2011).  Penelitian  Kusumawati et  al., (2017),  mengenai hand sanitizer berbahan kitosan menunjukan daya hambat terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dengan daya hambat masing-masing 2,49 mm dan 4,57 mm, dimana menunjukan daya hambatnya tergolong  lemah.  Sari et  al., (2019),  menyatakan  bahwa  kitosan  diketahui  hanya  dapat  menghambat beberapa  bakteri  tertentu  dan  belum  maksimal  sebagai  antioksidan.  Harga  kitosan  saat  ini  di  pasaran tergolong  mahal.  Diperlukannya  senyawa  metabolit  sekunder sebagai  antibakteri  untuk  memaksilmalkan kemampuan antibakteri dari kitosan. Tanaman yang berfungsi sebagai metabolit sekunder yaitu daun sirsak ( Annona muricata L .).
Daun sirsak menunjukkan campuran dinamis yang mengandung alkaloid, tanin, flavonoid. Tanaman yang mengandung flavonoid dan alkaloid menunjukkan kemampuan menghambat perkembangan mikroba penyebab  kanker.  Perbedaan  keadaan  alam  dimana  suatu  tanaman  berkembang  dapat  menyebabkan perbedaan  jenis  dan  ukuran  metabolit  opsional  yang  terkandung  dalam  tanaman  tersebut (Rahman et al. , 2017). Daun sirsak merupakan salah satu bahan alami yang mengandung tanin, alkaloid, saponin dan flavonoid yang mampu sebagai antibakteri. Melisa et al, (2015) menemukan bahwa setelah inkubasi  24  jam  pada  suhu  37  derajat  Celcius,  ekstrak  daun  sirsak  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus.
Penggunaan hand sanitizer saat ini sudah banyak diketahui masyarakat luas karena penggunaannya yang  pragmatis  dan  menyenangkan.  Hurria  (2014),  sediaan  gel  yang  digunakan  pada hand  sanitizer komersial  mengandung  bahan  aktif  seperti  etanol  dan triclosan .  Komponen  utama  pembersih  tangan adalah  bahan  kimia  seperti  alkohol  dan  triloksan  (Asngad et al .,  2018),  bahan-bahan  tersebut  dapat
mengiritasi kulit dan menyebabkan sensasi terbakar (Asngad et al ., 2018). Penelitian ini akan coba dikaji efektifitas dak karakteristik penggunaan kitosan dengan penambahan ekstrak daun sirsak sebagai senyawa antibakteri dalam sediaan gel hand sanitizer.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian yaitu kitosan bubuk (komersil) dari cangkang udang, daun sirsak,  air  bersih,  etanol  96%,  carbomer  940,  ekstrak  daun  sirsak,  gliserin,  Triatenolamin  (TEA),  metil paraben, aquades, aluminium foil, bakteri uji E.coli dan S.aureus dan media Nutrient Agar.
Alat yang digunakan dalam penelitian yaitu pisau, blender, toples kaca, rotary evaporator, timbangan digital, mortir dan stamper, beaker gelas, Erlenmeyer, cawan petri, autoclave, pipet micro, Bunsen, Laminar air flow, jangka sorong.

## Prosedur Penelitian
Proses Ekstraksi Daun Sirsak (Widyawati et al., 2017)
Pembuatan  pemisahan  daun  sirsak  dilakukan  dengan  cara  maserasi.  Langkah  awal  daun  sirsak dicuci bersih kemudian dikeringkan dan dipotong kecil-kecil ± 1 cm. Daun sirsak dihaluskan menggunakan blender. Ditimbang 500 gram sampel daun sirsak dimasukkan kedalam toples dan ditambahkan etanol 96% dengan  lama  perendaman ± 8  hari.  Selanjutnya  disaring  menggunakan  kertas  saring  dan  diuapkan  di evaporator hingga diperoleh konsentrat kental. Rumus rendemen yaitu:
Randemen (%) = 𝐸𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑘𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙 (𝑔𝑟𝑎𝑚) 𝑆𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘 𝑑𝑎𝑢𝑛 𝑠𝑖𝑟𝑠𝑎𝑘 (𝑔𝑟𝑎𝑚) 𝑥 100%

## Proses Pembuatan Hand sanitizer
Pembuatan hand sanitizer gel mengacu pada Widyawati et al., (2017).Tahap pertama, mortar dan stamper sudah siap. Karbomer 940 ditimbang sebanyak 2 gram dan dipercikkan lebih dari 20 mL akuades hangat. Carbomer 940 yang ditaburi dicampur dengan cepat dalam mortar sampai terbentuk massa gel dan ditambahkan  2,5  gram  TEA.  Metilparaben  ditimbang  sebanyak  0,2  gram  dan  dipecah  dalam  5  mL  air bersih, dimasukkan ke dalam mortar, diaduk hingga homogen. Mortar diisi dengan gliserin, diaduk hingga homogen.
Tahap  kedua,  daun  sirsak  ditimbang  dan  dicacah  dalam  56,05  mL  air  bersih  lalu  diaduk  hingga hancur. Perencanaan konsentrasi kitosan menurut Mustapa et al. , (2017) kitosan 1% (b/v) dibuat dengan
cara melarutkan serbuk kitosan dalam larutan korosif asam 1%. Campuran tersebut dicampur selama 30 menit, kemudian didinginkan dan kemudian diayak dengan saluran bulu kaca untuk menghilangkan partikel yang  tidak  larut.  Susunan  kitosan  dimasukkan  ke  dalam  lesung  kemudian  daun  sirsak  yang  sudah dihaluskan dimasukkan ke dalam lesung, diblender hingga homogen dan disaring hingga berbentuk gel dan diaduk hingga homogen. Berikut formulasi hand sanitizer dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Rancangan sediaan gel hand sanitizer kitosan Bahan F1 F2 F3 F4 Kitosan* Ekstrak daun sirsak* Carbomer 940 Metilparaben TEA Gliserin Aquades 5 ml 8 gr 2 gr
0,2 gr 2,5 gr 10,25 ml 100 ml 5 ml 10 gr 2 gr 0,2 gr 2,5 gr 10,25 ml 100 ml 5 ml 12 gr 2 gr 0,2 gr 2,5 gr 10,25 ml 100 ml 5 ml 14 gr 2 gr 0,2 gr 2,5 gr 10,25 ml 100 ml
Sumber: Widyawati et al, (2017) yang dimodifikasi (*)

## Pengujian Antibakteri Kitosan
Tahap  awal  membuat  media  suplemen  bersih  kemudian  mendinginkannya  pada  suhu  40  -  45°C. Cawan petri diisi dengan 20 mL media nutrien agar dan 0,02 mL suspensi kultur bakteri. Homogenkan dan biarkan hingga mengeras. Cakram kosong kemudian direndam dalam sediaan antibakteri kitosan selama 15 sampai 30 menit sebelum ditempatkan dalam cawan petri yang berisi media nutrisi agar. Penyusunan kitosan dibuat dengan cara menimbang 6 gram kitosan kemudian dimasukkan ke dalam wadah berukuran 100 mL dan ditambahkan asam korosif CH 3 COOH 1% hingga tanda 100 mL. Kemudian cawan ditutup dan ditetaskan  selama  1  x  24  jam  pada  suhu  37°C,  kemudian  pada  titik  tersebut  diperkirakan  lebar  daya pengekangan (Cahyaningtyas et al. , 2019).

## Analisis Karakteristik dan Daya Hambat Gel Hand sanitizer

## Uji Homogenitas
Indikator suatu zat tercampur sempurna atau homogen adalah homogenitas. Tidak adanya butiran kasar  pada  suatu  campuran  zat  biasanya  menunjukkan  homogenitas  (Direktorat  Jenderal  Badan  POM, 1985). Pengujian diselesaikan dengan mengoleskan hand sanitizer pada cawan petri dan kemudian dilihat apakah sintesis kombinasinya homogen.

## Pengujian Daya Sebar
Uji daya sebar dilakukan untuk menjamin dispersi gel yang merata pada saat diaplikasikan pada kulit yang  selesai  setelah  gel  dibuat.  Timbang  0,5  gram  gel  kemudian  masukkan  ke  dalam  timbangan  kaca
berbentuk bulat. Tempatkan gelas bundar lain atau bahan sederhana lainnya dan isi di atas gel dan biarkan selama 1 menit. Diameter penyebaran kemudian harus dicatat. Daya sebar gel yang bagus antara 5-7 cm.

## Pengujian Daya Hambat
Langkah awal membuat media agar kemudian mendinginkannya pada suhu 40 - 45°C. Media agar suplemen  sebanyak  20  mL  yang  telah  dicampur  dengan  0,02  mL  suspensi  kultur  bakteri S . aureus dan E . coli diisi setiap cawan petri kemudian dihomogenisasi dan dibiarkan hingga mengeras. Kemudian piring kertas sudah siap, kemudian lingkaran kertas tersebut ditempelkan dan diresapi dengan perencanaan gel hand  sanitizer dengan  penambahan  kitosan  dan  daun  sirsak  secara  terpisah.  Sistem  penyiraman diselesaikan selama 10-15 menit setelah itu cawan kertas dikeluarkan dan dimasukkan ke dalam cawan petri yang telah diatur sebelumnya. Kemudian cawan ditutup dan dierami selama 1 x 24 jam pada suhu 37°C,  kemudian  pada  saat  itu  diperkirakan  luas  zona  penghalang  yang  tampak  (Cahyaningtyas et  al. , 2019).

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dianalisa  menggunakan  statistik  parametrik.  Pengujian  statistik  parametrik dilakukan dengan menggunakan sidik ragam yaitu ANOVA dan jika berpengaruh nyata, maka dilanjutkan uji lanjut Duncan .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Aktivitas Antibakteri Kitosan
Uji antibakteri kitosan menunjukkan adanya daya hambat terhadap mikroorganisme S. aureus dan E. coli . Hal ini dapat dilihat dari memperkirakan zona yang dibingkai, yaitu area yang wajar di sekitar kertas pelat yang menyerap sistem kitosan. Dalam pengujian ini, Clorafemnikol digunakan sebagai kontrol positif. Hasil pegujian antibakteri kitosan yaitu E.coli 10,17 mm, S. aureus 11,47 mm dan Clorafemnikol (K+) 25,12 mm.  Solihah  (2009)  kekuatan  antibakteri  dikategorikan  menjadi  3  yaitu  kuat  jika  menghasilkan  diameter daya  hambat  lebih  dari  8 mm,  sedang  jika  menghasilkan  diameter  daya  hambat  lebih  dari  7-8  mm,  dan lemah jika menghasilkan diameter daya hambat. kurang dari 7 mm. Kitosan dapat mengikat bakteri karena mengandung gugus amino bebas yang bermuatan positif.
Sistem aktivitas zat antimikroba secara umum merusak struktur dasar sel mikroba, misalnya dinding sel, sitoplasma, ribosom, dan lapisan sitoplasma. Adanya zat antimikroba (susunan kitosan yang bersifat asam) akan menyebabkan denaturasi protein. Keadaan ini akan menyebabkan inaktivasi kimia, sehingga
sistem  metabolisme  terganggu  atau  rusak  dan  pada  akhirnya  tidak  akan  terjadi  pergerakan  sel  mikroba (Volk dan Wheeler, 2003). Zona bening pada cawan petri menunjukkan bahwa larutan kitosan menghambat aktivitas bakteri. Zona wajar menunjukkan sejauh mana kitosan dapat menekan kerja mikroorganisme yang diuji. Semakin luas zona hambatan yang diberikan menunjukkan semakin kuat daya hambat kitosan dalam menghambat perkembangan bakteri. Tindakan antibakteri bervariasi tergantung pada jenis mikroorganisme yang diuji dan konvergensi kitosan (Islam et al. , 2011).

## Rendemen Daun Sirsak
Daun  sirsak  halus  yang  digunakan  sebanyak  467,08  gram  dan  menghasilkan  ekstrak  sebanyak 280 gram. Konsentrat yang diperoleh melalui teknik maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 96% mempunyai rendemen sebesar 59,9%. Nilai hasil digunakan untuk menentukan nilai moneter suatu produk atau  bahan  yang  digunakan.  Semakin  tinggi  nilai  hasil  maka  semakin  tinggi  pula  nilai  ekonominya sehingga  pemanfaatan  bahan  tersebut  akan  lebih  murah  dan  efektif. Hasil  rendemen  yang  didapatkan sesuai dengan penelitian Srurbakti dan Nadiya (2018), dimana berat sampel yang digunakan 1500 gram dan  menghasilkan  98,532  gram  ekstrak  kental  dengan  perhitungan  randemen  6,5688%.  Penelitian Prawitasari et  al., (2015),  pembuatan  ekstrak  daun  sirsak  303,1  gram  menghasilkan  rendemen  19,46% ekstrak kental.

## Kualitas Gel Hand sanitizer

## Hemogenitas
Hasil penelitian menunjukkan hasil yang bagus dengan kekurangan butiran kasar yang menunjukkan bahwa  pembersih  tangan  telah  tercampur  dengan  sempurna.  Hal  ini  sesuai  dengan  temuan  penelitian Kuncoro dan Rohmani (2019) yang menemukan bahwa sediaan gel hand sanitizer memiliki komposisi yang seragam  dan  tidak  mengandung  komponen  yang  tidak  tercampur  dengan  baik.  Homogenitas  suatu perencanaan dapat mempengaruhi dosis zat aktif dalam suatu kesiapan, selanjutnya juga mempengaruhi kelangsungan  pengobatan  selanjutnya  (Rodhiya,  2016).  Sesuai  dengan  Mulyanti et  al. ,  (2015)  yang menyatakan  bahwa  penghilangan  daun  sirsak  dalam  bentuk  gel  tidak  mengubah  homogenitas  kesiapan bahkan  setelah  penampung  yang  lama.  Homogenitas  ekstrak  daun  sirsak  dan  gel  pembersih  tangan kitosan yang relatif stabil ditunjukkan dengan hal ini.

## Daya Sebar
Pengujian  daya  sebar  formulasi hand  sanitizer dilakukan  dengan  tujuan  untuk  mengetahui kemampuan  penyebaran gel  serta  daya  resapnya.  Pengukuran daya  sebar hand  sanitizer menghasilkan
nilai sebesar 5,5 cm (F11), 5,8 cm (F2), 6,1 cm (F3) dan 6,3 cm (F4). Daya sebar suatu sediaan gel akan lebih  menonjol  apabila  konsistensi  gel  sangat  cair  begitu  pula  sebaliknya  (Rodhiya,  2016). Penelitian Kuncoro dan Rohmani (2019) memanfaatkan kesiapan gel hand sanitizer dengan memanfaatkan ekstrak daun kemangi mendapatkan nilai daya sebar 6,80 cm hingga 8,65 cm. Hasil ini lebih besar dibandingkan standar nilainya, yaitu antara 5-7 cm. Daya sebar yang dihasilkan oleh sediaan gel hand sanitizer dengan penambahan ekstrak daun sirsak dan kitosan termasuk ke dalam kategori yang cukup baik karena berada dalam range nilai yang sesuai standar yaitu berkisar antra 5 sampi 7 cm.
Aktivitas Antibakteri Gel Hand sanitizer

## Uji Antibakteri S. aureus
Hasil pegujian antibakteri gel hand sanitizer dengan penambahan ekstrak daun sirsak dan kitosan terhadap bakteri Staphylococcus aureus dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Grafik antibakteri hand sanitizer dengan penambahan kitosan dan ekstrak daun sirsak konsentrasi berbeda terhadap bakteri S.aureus
Berdasarkan  grafik  diatas,  formulasi  dengan  daya  hambat  terbesar  terdapat  pada  perlakuan  F4 dengan nilai rata-rata 17,56 mm yang menunjukan bahwa penambahan ekstrak daun sirsak memberikan pengaruh  nyata  (p<0,05)  terhadap  kemampuan  antibakteri  gel hand  sanitizer .  Uji  lanjut Duncan menunjukkan bahwa F1 tidak berbeda nyata dengan perlakuan F2 dan F3 dimana hal ini disebabkan selisih daya hambat yang dihasilkan dari ke 3 perlakuan tergolong kecil sehingga perlakuaannya tidak berbeda nyata. Sedangkan perlakuan F4 berbeda nyata dengan semua taraf perlakuan disebabkan diameter daya hambat yang di hasilkan mendapatkan nilai yang tinggi.
7.37±0.09 a 8.45±0.52 a 9.93±0.90 a 17.5±0.08 b 0 5 10 15 20 F1 F2 F3 F4 D iam et er da ya ha m ba t ( m m ) Konsentrasi Ekstrak daun Sirsak
Perbedaan  nilai  zona  keempat  hand  sanitizer  gel  dengan  penambahan  ekstrak  daun  sirsak  dan kitosan disebabkan oleh perbedaan konvergensi ekstrak daun sirsak yang digunakan. Hal ini ditunjukkan oleh  hasil  pengujian  terukur  di  mana  zona  penghalang  dari  keempat  produk  gel  pembersih  tangan semuanya  unik.  Hasil  tersebut  sesuai  dengan  penelitian  Sriarumtias et  al .,  (2017)  pada  uji  coba  aksi pengaturan etanol daun sirsak terhadap mikroba S.aureus menghasilkan daya hambat sebesar 7-15 mm. Mulyanti et  al., (2015)  menemukan  bahwa  nilai  daya  hambat  10  mm  hingga  17,9  mm  dicapai  dengan penggunaan  ekstrak  etanol  daun  sirsak  pada  konsentrasi  berkisar  antara  0,1%  hingga  10%  terhadap bakteri S. aureus .

## Uji Antibakteri E. coli
Hasil pegujian antibakteri gel hand sanitizer dengan penambahan ekstrak daun sirsak dan kitosan terhadap bakteri E. coli dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar 2. Grafik antibakteri hand sanitizer penambahan kitosan dan daun sirsak terhadap bakteri E.coli
Data rata-rata diameter daya hambat dengan konsentrasi daun sirsak yang  berbeda menghasilkan diameter yang berbeda-baeda. Data diameter daya hambat diuji menunjukkan bahwa penambahan ekstrak daun sirsak tidak berpengaruh nyata (p>0,05) terhadap kemampuan antibakteri gel hand sanitizer . Uji lanjut Duncan menunjukkan bahwa perlakuan F1 tidak berbeda nyata dengan perlakuan F2 dan F4 sedangkan perlakuan F3 berbeda nyata dengan perlakuan F1 tetapi tidak berbeda nyata dengan perlakuan F2 dan F4.
Hal ini dibuktikan dengan adanya perbedaan pada hasil uji statistik daya hambat yang dihasilkan dari keempat  formulasi  gel hand  sanitizer, dimana  semakin  tinggi  penggunaan  ekstrak  daun  sirsak  maka samakin tinggi pula kemampuan daya hambat yang dihasilkan. Hasil uji tersebut sesuai dengan penelitian
7.29±0.09 a 8.07±0.52 ab 8.24±0.08 ab 9.08±0.90 b 0 4 8 12 F1 F2 F3 F4 D iam et er da ya ha m ba t ( m m ) Konsentrasi Ekstrak Daun sirsak
Ersita dan Kardewi (2016), mengenai uji aktivitas daun sirsak ( Annona muricata L ) terhadap bakteri E.coli dengan menggunakan variasi konsentrasi 0,2 – 2 mg/ml menghasilkan rata-rata daya hambat 7,40 – 10,6 mm.
Febrianasari (2018), mengemukakan kapasitas  daya hambat suatu perencanaan dapat dipisahkan berdasarkan  nilai  yang  diciptakan.  Zona  pembatas  dikatakan  lemah  jika  diameternya  kurang  dari  5  mm, sedang  jika  diameternya  antara  5  hingga  10  mm,  kuat  jika  diameternya  antara  10  hingga  20  mm,  dan sangat kuat jika lebih besar dari 20 mm. Berdasarkan standar tersebut maka daya hambat antibakteri hand sanitizer  dengan  perluasan  ekstrak  daun  sirsak  ( Annona  muricata L .)  dan  kitosan  terhadap  mikroba Staphylococcus aureus dengan konsentrasi konsentrat daun sirsak 8 gr (7,3 mm), 10 gr ( 8,4 mm), 12 gr (9,9  mm),  dan  14  gr  (17,5)  yang  mana  hasil  ini  termasuk  dalam  area  kekuatan  sedang.  Sementara  itu, pengaruh penghambatan konsentrat terhadap organisme mikroskopis Escherichia coli dengan konsentrasi ekstrak daun sirsak 8 gr (7,2 mm), 10 gr (8 mm), 12 gr (8,2 mm), dan 14 gr (9 mm), dimana hasil tersebut masuk dalam klasifikasi menengah hingga tinggi.

## PENUTUP
Berdasarkan hasil pengujian antibakteri kitosan terhadap bakteri S.aureus dan E.coli masing -masing mendapatkan  daya  hambat  12,10  mm  dan  10,84  mm  untuk  bakteri S.aureus ,  11,70  mm  dan  8,63  mm terhadap  bakteri E.coli dimana  hasil  tersebut  termasuk  dalam  kategori  sedang  hingga  kuat. Daya  sebar yang diahasilkan sebesar 5-6 cm serta telah memenuhi standar. Pengunaan kitosan dengan penambahan ekstrak  daun  sirsak  pada  gel hand  sanitizer berpengaruh  terhadap  aktivitas  bakteri S.aureus dengan menghasilkan  daya  hambat  sebesar  7,3  mm  hingga  17,5  mm  dan  terhadap  bakteri E.coli menghasilkan daya hambat sebesar 7,2 mm sampai 9 mm. Berdasarkan hasil tersebut rata-rata diameter daya hambat yang terbentuk tergolong dalam kategori sedang hingga kuat.

## DAFTAR PUSTAKA
Asngad,  Aminah,  Aprilia,  R.,  &  Nopitasari.  (2018).  Kualitas  Gel  Pembersih  Tangan  ( Hand  sanitizer )  dari Ekstrak Batang Pisang dengan Penambahan Alkohol, Triklosan dan Gliserin yang Berbeda Dosisnya. Jurnal Bioeksperimen , 4 (2), 61–70.
Cahyaningtyas, F., Ukrima, Z., Nora, & Amaria. (2019). Pemanfaatan Ekstrak Biji Teratai Sebagai Bahan Aktif Antibakteri Untuk Pembuatan Hand sanitizer . Jurnal Indonesian Chemisty And Application , 3 (1),
7–13.
Ersita, & Kardewi. (2016). Uji Efekyivitas Antibakteri Fraksi Aktif Daun Sirsak ( Annona muricata L ) Terhadap Bakteri Escherichia coli . Jurnal Kedokteran Dan Kesehatan , 3 (2), 96–107.
Febrianasari,  &  Florensia.  (2018).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Kirinyu  (Chromolaena  odorata) Terhadap  Staphylococcus  aureus.  [Skripsi].  Pendidikan  Biologi,  Universitas  Sanata  Dharma, Yogyakarta.
Hurria. (2014). Formulasi, Uji Stabilitas Fisik, dan Uji Aktifitas Sediaan Gel Hand sanitizer Dari Air Perasan Jeruk Nipis ( Citrus aurantifolia ) Berbasis Karbomer. Jurnal Farmasi Fik Uinam , 2 (1), 28–33.
Islam, M., Masumb, S., Mahbuba, K., & Haque, Z. (2011). Antibacterial Activity of Crab-Chitosan against Staphylococcus aureus and Escherichia coli . Journal of Advenced Scientific Research , 2 (4), 63–66. Kusumawati,  E.,  Supomo,  &  Libiyah.  (2017).  Uji  Daya  Antibakteri  Pada  Sediaan Hand  sanitizer Kitosan Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Jurnal Sains Dan Terapan Politeknik Hasnur , 5 (1), 1–8.
Melisa.  (2015).  Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Daun  Sirsak  ( Annona  muricata  L )  Terhadap  Pertumbuhan Staphylococcus aureus Secara In Vitro. Jurnal Ilmiah Farmasi , 4 (4), 1–5.
Mulyanti, D., Rismawati, E., Maulana, I., Febriani, D., & Dewi, Y. (2015). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol  Daun  Sirsak  ( Annona  muricata  L )  pada  Bakteri Propionibacterium  acnes , Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermis . Prosiding Seminar Nasional Penelitian Dan PKM Kesehatan , 1 (1), 325–330.
Nadia,  L.,  Suptijah,  P.,  &  Ibrahim,  B.  (2014).  Produksi  Dan  Karakterisasi  Nano  Kitosan  Dari  Cangkang Udang Windu Dengan Metode Gelasi Ionik. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia (JPHPI) , 17 (2), 119–126.
Prawitasari, N., Suter, I., & Putra, N. (2015). Pemanfaatan Ekstrak Daun Sirsak ( Annona muricata L ) dalam Meningkatkan Umur Simpan Dodol. Jurnal Teknologi Pangan Dan Industri , 2 (2), 111–118.
Rahman, F., Haniastuti, T., & Utami, T. (2017). Skrining Fitokimia dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Sirsak ( Annona muricata L ) Pada Streptococcus mutans ATCC 35668. Majalah Kedokteran Gigi Indonesia , 3 (1), 1–7.
Rochima,  M.,  Fiyanih,  E.,  Afriato,  E.,  Joni,  Subhan,  U.,  &  Panatarani,  C.  (2018).  Efek  Penambahan Suspensi Nanokitosan Pada Edible Coating Terhadap Aktivitas Antibakteri. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 21 (1), 127–136.
Rodhiya, N. (2016). Formulasi Sediaan Gel Hand Sanitizer Ekstrak Etanol Daun Ashitaba ( Angelica keikei ) Dengan Variasi Basis Carbopol 940 dan CMC-Na. [Skripsi]. Universitas Setia Budi. Surakarta Rohmani, S., & Kuncoro, M. (2019). Uji Stabilitas dan Aktivitas Gel Hand sanitizer Ekstrak Daun Kemangi. Journal of Pharmaceutical Science and Research , 1 , 16–28.
Sari,  S.,  Baehaki,  A.,  &  Lestari,  S.  (2019).  Pemanfaatan  Kitosan  dengan  Variasi  Gula  Sebagai  Potensi Pengawet  Alami  Makanan  (Pengujian  Bakteri Pseudomonasaeruginosa dan Bacillus  subtilis ). Prosiding Seminar Nasional II Hasil Litbangyasa Industri , 190–195.
Sriarumtias, F., Sa’adah, M., & Akmal. (2017). Formulation and Stability Test of Gel Hand sanitizer of Leaf Ethanol Extract ( Annona muricata L ). Jurnal Ilmiah Farmako Bahari , 8 (2), 22–30.
Suptijah, P., Jacoeb, A., & Racmania, D. (2011). Karakterisasi Nano Kitosan Cangkang Udang Vannamei ( Litopenaeus vannamei ) Dengan Metode Gelasi Ionik. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia ,
14 (2), 78–84.
Volk,  &  Wheeler.  (2003).  Mikrobiologi  Dasar .  Terjemahan  Oleh  Soenarto  Adisoemarno.  Surabaya : Erlangga .
Widyawati,  L.,  Mustariani,  B.,  &  Purmafitriah,  E.  (2017).  Formulasi  Sediaan  Gel Hand  sanitizer Ekstrak Etanol Daun Sirsak ( Annona muricata L ) Sebagai Antibakteri Terhadap Staphylococcus aureus . Jurnal Farmasetis , 6 (2), 47–57.