## KINERJA OIL SPILL DISPERSANT DALAM PROSES BIOREMEDIASI TANAH TERCEMAR MINYAK BUMI
(STUDI KASUS TANAH TERCEMAR MINYAK BUMI LAPANGAN XYZ)

## PERFORMANCE OF OIL SPILL DISPERSANT IN BIOREMEDIATION PROCESS OF PETROLEUM CONTAMINATED SOIL
(CASE STUDY OF PETROLEUM CONTAMINATED SOIL FROM XYZ FIELD)
Imam Chanif 1) , Erliza Hambali 1,2) , dan Mohamad Yani 1)*
1) Departemen Teknologi Industri Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Kampus Dramaga, Bogor 16680, Indonesia
2) Surfactant and Bioenergy Research Center, LPPM, Institut Pertanian Bogor, Kampus Baranangsiang, Bogor 16143, Indonesia Email: f226yani@gmail.commoh.yani@ipb.ac.id
Makalah: Diterima 21 Agustus 2017; Diperbaiki 18 November 2017; Disetujui 12 Desember 2017

## ABSTRACT
Oil spill dispersant (OSD) is a surfactant product that serves as dispersant. OSD has been widely used and proven to be effective in oil spills both in the sea and in the land. The OSD-SBRC (Surfactant and Bioenergy Research Center) IPB was produced from palm oil, while the commercial product of OSD S200 was made from LAS  (Linear  Alkyl  Benzene  Sulfonate)  based  from  petroleum.  Application  of  OSD  in  bioremediation  testing occurred on petroleum contaminated soil from the field with initial total petroleum hydrocarbon of 6-10%. The treatment  of  dispersant  to  oil  ratio  (DOR)  was  at  0.5:1  and  1:1.  The  contaminated  soil  was  added  with Pseudomonas aeruginosa  and  fertilizers  (Urea  and  SP36)  to  support  bacterial  growth.  The  environmental  soil conditions during the bioremediation process were observed as pH, moisture content, and temperature. The OSD performance in bioremediation process was measured as TPH (Total Petroleum Hydrocarbon) and TPC (Total Plate Count).  The results showed that pH, moisture content and temperature levels were at optimum condition for bacterial growth to optimally degrade the hydrocarbon. The result of TPC value showed that treatment with the addition of OSD S200 caused inhibition of microbial growth P. aeruginosa bacteria. The TPH measurements showed that treatment with OSD SBRC with DOR (0.5:1) was able to degrade hydrocarbons up to 89.62%.  The bioremediation process using OSD-SBRC was better than OSD S200.
Keywords: bioremediation, hydrocarbon, OSD, surfactant

## ABSTRAK
Oil spill dispersant (OSD) merupakan produk surfaktan yang berfungsi sebagai dispersant. OSD banyak digunakan  untuk  menghilangkan  minyak  di  laut  maupun  di  tanah.  Produk  OSD  SBRC  (Pusat  Penelitian Surfaktan  dan  Bioenergi)  IPB  berbahan  dasar  surfaktan  minyak  sawit,  sedangkan  OSD  komersil  S200  berasal dari  LAS  ( liniear  alkylbenzene  sulfonat )  yang  berbahan  dasar  dari  minyak  bumi.  Aplikasi  OSD  dalam  proses bioremediasi  dilakukan  pengujian  pada  tanah  tercemar  minyak  bumi  yang  berasal  dari  lapangan  dengan  nilai TPH  ( total  petroleum  hydrocarbon )  sebesar  6-10%.  Perlakuan  penelitian  menggunakan  DOR  OSD  0,5:1  dan 1:1).  Tanah  terkontaminasi  ditambahkan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa dan  nutrisi  (urea  dan  SP36)  untuk mendukung pertumbuhan bakteri. Pengamatan kondisi lingkungan selama proses bioremediasi dilakukan dengan mengukur  suhu,  pH  dan  kadar  air  yang  ada  didalam  tanah.  Uji  kinerja  OSD  dalam  bioremediasi  dilakukan pengukuran TPH dan TPC. Hasil pengamatan suhu, pH, dan kadar air menunjukkan kondisi yang optimum untuk pertumbuhan bakteri dalam mendegradasi hidrokarbon. Hasil TPC menunjukkan perlakuan dengan penambahan OSD  S200  menyebabkan  penghambatan  pertumbuhan  bakteri P.  aeruginosa .  Hasil  pengukuran  TPH menunjukkan  OSD  SBRC  dengan  DOR  (0,5:1)  dapat  mendegradasi  hidrokarbon  89,62%.  Hasil  bioremediasi pada penelitian ini penggunaan OSD SBRC lebih baik dibandingkan OSD S200.
Kata kunci: bioremediasi, hidrokarbon, OSD, surfaktan

## PENDAHULUAN
Pencemaran  tanah  oleh  minyak  disebabkan melalui dua cara diantaranya  dari tumpahan  minyak ataupun minyak yang sudah terkubur dalam tanah itu sendiri (Helmy et al., 2015). Pencemaran minyak ini menyebabkan kerusakan lingkungan yang mempengaruhi  ekosistem  khususnya  ekosistem  di
dalam tanah. Menurut Khalilova (2015) dampak dari pencemaran  minyak  terhadap  tanah  menyebabkan kecilnya  jumlah  mineral  yang  tersedia  di  dalam tanah.  Hal  tersebut  menyebabkan  ekosistem  yang ada  di  dalam  tanah  menjadi  terganggu,  sehingga jumlah  organisme  yang  dapat  menyuburkan  tanah menjadi  hilang.  Penanggulangan  yang  dilakukan untuk  menghilangkan  pencemar  minyak  bumi  salah
Jurnal Teknologi Industri Pertanian 27 (3):336-344 (2017) ISSN: 0216-3160    EISSN: 2252-3901
Tersedia online http://journal.ipb.ac.id/index.php/jurnaltin Nomor DOI: 10.24961/j.tek.ind.pert.2017.27.3.336
satunya dengan cara biologi. Cara biologi atau biasa disebut  bioremediasi  terbukti  efektif  dan  murah, selain  itu  juga  tidak  menyebabkan  pencemaran  lain pada lingkungan.
Bioremediasi  merupakan  suatu  teknologi untuk  mengurangi  atau  menghilangkan  kontaminan yang  berbahaya  menjadi  tidak  berbahaya  dengan menggunakan  mikroorganisme.  Melalui  proses mineralisasi, mikoorganisme akan mengubah kontaminan  yang  berbahaya  menjadi  bahan  yang tidak  berbahaya.  Proses  tersebut  yaitu  mengubah kontaminan  dengan  struktur  kimia  organik  yang komplek  menjadi  struktur  kimia  anorganik  yang tidak  komplek  dan  mudah  terdegradasi  (Adams et al., 2015). Teknik bioremediasi untuk tanah tercemar minyak  bumi  berjalan  tidak  sempurna  dikarenakan minyak  terjerat  oleh  partikel  tanah,  sehingga  akan menurunkan  kecepatan  biodegradasi  oleh  bakteri (Allen et  al .,  1998).  Oleh  karena  itu  perlu  adanya pengembangan  terkait  dengan  teknologi  dalam teknik bioremediasi. Salah satunya dengan memanfaatkan  agen  pendispersi  seperti oil  spill dispersant (OSD).
OSD  merupakan  produk  yang  berbahan utama  surfaktan.  Surfaktan  akan  menurunkan tegangan  permukaan  antara  minyak  dan  air.  OSD sudah  banyak  dikembangkan  sejak  tahun  1960 sampai  saat  ini.  Perkembangan  OSD  saat  ini  telah berfokus kepada bahan yang bersifat tidak toksik dan biodegradable. Salah  satu  produk  OSD  yang  sudah banyak  digunakan  sebagai  agen  bioremediasi  yaitu OSD S200. Bahan baku utama surfaktan dalam OSD S200  yaitu  LAS.  Surfaktan  LAS  merupakan surfaktan  yang  berbahan  dasar  minyak  bumi. Surfaktan  ini  banyak  digunakan  pada  produk deterjen.  Hasil  penelitian  Charlena et  al. (2011) menunjukkan  penambahan  surfaktan  LAS  dengan konsentrasi  yang  rendah  mampu  meningkatkan kelarutan hidrokarbon dalam air.
Saat  ini  SBRC-IPB  juga  telah  berhasil mengembangkan  produk  OSD  yang  berasal  dari surfaktan  yang  dihasilkan  dari  minyak  sawit.  Hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Adlina et  al .  (2017) terkait dengan kinerja OSD SBRC yang dikombinasikan  dengan Pseudomonas  aeruginosa pada  tanah  simulasi  tercemar  hidrokarbon  sebesar 6%  menunjukkan  pemberian  OSD  SBRC  sudah dapat  menurunkan  TPH  sampai  84,32%  selama  40 hari.  Berdasarkan  potensi  dari  produk  OSD  SBRC yang  dihasilkan  maka  perlu  dilakukan  penelitian lanjutan  yang bertujuan untuk  menguji kinerja OSD SBRC  yang  akan  dibandingkan  dengan  OSD  yang sudah  komersil.  OSD  S200  dipilih  sebagai  OSD pembanding  karena  OSD  ini  sudah  banyak digunakan  dalam  proses  bioremediasi  sejak  tahun 1994 hingga saat ini. Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk  mengevaluasi  kemampuan  OSD  SBRC  dan OSD  S200  dalam  proses  bioremediasi  tanah tercemar  minyak  bumi  dari  lapangan  pengeboran minyak.

## BAHAN DAN METODE
Persiapan Inokulum Bakteri (Starter )
Bakteri  yang  digunakan  pada  penelitian  ini yakni Pseuodomonas  aeruginosa IPBCC.b11662. Bakteri  diperbanyak  terlebih  dahulu  pada  media nutrient broth , sebelum digunakan bakteri diadaptasi pada  media  minimum  yang  mengandung  10% hidrokarbon.  Bakteri  diinokulasikan  pada  media adaptasi  sebesar  10%.  Bakteri  diinkubasi  pada waterbath shaker dengan kecepatan 120 rpm dengan suhu  37 o C  selama  5  hari  (Zhang et  al .,  2005). Bakteri  yang  diadaptasi  ini  selanjutnya  digunakan dalam proses bioremediasi.

## Aplikasi Bioremediasi
Tanah  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini berasal  dari  lapangan  pengeboran  minyak  dari Lapangan  XYZ.  Tanah  tercemar  minyak  dilakukan analisis  awal  berupa  TPH  untuk  menentukan perlakuan dan persiapan tanah. Penelitian bioremediasi dilakukan pada box berukuran 39 x 31 x  13  cm 3 .  Campuran  tanah  dan  pasir  dengan perbandingan  4:2.  Tanah  ditambahkan  bakteri sebanyak 10% (v/w) dan  nutrisi  untuk pertumbuhan bakteri  dengan  rasio  C:N:P  (100:10:1).  Perlakuan OSD disajikan pada Tabel 1.  OSD  yang digunakan pada penelitian ini yaitu OSD SBRC dan OSD S200.
Tabel  1.  Komposisi  masing-masing  perlakuan bioremediasi
Perlakuan Tanah (Kg) OSD Dispersant to oil ratio (DOR) P0 6 - - P1 6 SBRC 0,5:1 P2 6 SBRC 1:1 P3 6 S200 0,5:1 P4 6 S200 1:1
*Keterangan: DOR ( Dispersant to Oil ratio )

## Pengamatan Suhu, Kadar Air dan pH
Pengamatan  kondisi  lingkungan  berupa suhu,  kadar  air  dan  pH  dilakukan  setiap  1  minggu sekali  untuk  mengontrol  kondisi  optimum  selama proses  bioremediasi.  Kondisi  yang  sesuai  akan membuat  proses  bioremediasi  berjalan  secara optimum. Metode yang digunakan dalam pengukuran  kadar  air  ini  yaitu  dengan  cara gravimetri.  Sedangkan  pengukuran  suhu  tanah dilakukan  dengan  menggunakan  alat  termometer. Pengukuran  pH  dilakukan  berdasarkan  standar  SNI 06-6989.11-2004.

## Pengamatan Pertumbuhan Populasi Bakteri
Pengukuran  TPC  ini  dilakukan  dengan menumbuhkan  bakteri  ke  dalam  medium,  sehingga mikroba  tersebut  akan  berkembang  biak  dan membentuk  koloni.  Koloni  tersebut  yang  kemudian dihitung.  Pengukuran  TPC  ini  berdasarkan  metode APHA,  9215C.  Pengukuran  TPC  dilakukan  dua
minggu  sekali  untuk  melihat  perkembangan  dari bakteri tersebut.

## Pengamatan Total Petroleum Hydrocarbon
Pengukuran  hasil  pengujian  bioremediasi dilakukan dengan mengukur TPH yang ada di dalam tanah. Pengukuran TPH dilakukan selama 6 minggu dengan  intensitas  pengukuran  setiap  2  minggu sekali.  Pengukuran  TPH  merupakan  parameter  hasil bioremediasi  yang  paling  penting  dalam  proses bioremediasi.  Pengukuran  TPH  dilakukan  dengan cara  gravimetri  dengan  metode  USEPA  1664 (USEPA,  1998).  Proses  pengukuran  TPH  ini dilakukan  terhadap  10  g  sampel  tanah  yang  akan diekstrak  dengan  menggunakan  pelarut  n-heksan sebanyak 100 mL. Proses ekstraksi dilakukan selama 6  jam  dengan  suhu  70 o C.  Setelah  proses  ekstraksi selesai  selanjutnya  dilakukan  evaporasi  dengan rotary  evaporator. Kemudian  dilakukan  pemanasan selama 45 menit dengan suhu 70 o C, dan didinginkan dengan desikator dan ditimbang. Berat yang didapat merupakan  berat  gemuk  atau  TOG  (total  oil  and grease),  sehingga  untuk  menghilangkan  senyawa polar ditambahkan silika gel serta n-heksana. Setelah itu  dilakukan  evaporasi  kembali  dan  penimbangan untuk mendapatkan hasil TPH.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  selanjutnya  dianalisis dengan  menggunakan  analisis  ragam  (ANOVA) ataupun  dengan  analisis  secara  deskriptif.  Apabila pada analisis ragam didapatkan pengaruh nyata pada perlakuan, maka  dilanjutkan  analisis  dengan menggunakan Tukey’s  test pada  taraf  kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Perubahan Suhu Kadar Air dan pH pada Proses Bioremediasi
Suhu dapat mempengaruhi tingkat degradasi  dari  hidrokarbon,  karena  jika  suhu  yang terlalu  rendah  akan  meningkatkan  viskositas  dari minyak  yang  menyebabkan  volatilitas  dari  alkana rantai  pendek  akan  menurun  sehingga  akan  lebih sulit  untuk  didegradasi  (Retno  dan  Mulyana,  2013).
Hasil  pengukuran  suhu  selama  proses  bioremediasi berkisar  antara  24  –  27 o C  (Gambar  1).  Peningkatan suhu menunjukkan bahwa terdapat aktifitas mikroorganisme.  Kondisi  suhu  yang  optimal  akan membuat  pertumbuhan  mikroorganisme  optimal, sehingga proses degradasi hidrokarbon akan optimal. Menurut  hasil  penelitian  dari  Sari et  al. (2015) kondisi optimum untuk
pertumbuhan
mikrooganisme yaitu antara 20-40 o C.
Penurunan TPH yang terjadi akibat aktifitas mikrooganisme  ini  tidak  diiringi  dengan  adanya peningkatan suhu secara signifikan, karena dimungkinkan  aktifitas  eksoterm  yang  dilakukan oleh mikroorganisme tidak cukup untuk meningkatkan suhu di dalam tanah. Kondisi tersebut dapat  dilihat  pada  minggu  ke-2,  dimana  terdapat penurunan  TPH  yang  signifikan  tetapi  suhu  tanah yang  terukur  tidak  berbeda  jauh  dengan  suhu lingkungan  pada  saat  proses  bioremediasi.  Kondisi tersebut  diperkuat  dengan  adanya  penurunan populasi  mikroorganisme  pada  minggu  ke-2,  karena adanya  proses  adaptasi  yang  dilakukan  oleh mikroorganisme.  Jumlah  populasi  mikroorganisme yang  mengalami  penurunan  menyebabkan  aktifitas biodegradasi hidrokarbon tidak cukup untuk meningkatkan suhu yang ada di dalam tanah. Hal ini sesuai  dengan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh Putri et  al. (2013)  bahwa  penurunan  TPH  yang disebabkan adanya aktfitas mikroorgasnime Bacillus subtilis dalam  mendegradasi  hidrokarbon  tidak cukup  untuk  meningkatkan  suhu  tanah  pada  saat proses bioremediasi.
Kondisi lingkungan lain yang perlu diperhatikan  yaitu  tingkat  keasaman  dari  tanah  atau pH.  Pengukuran  pH  dilakukan  setiap  satu  minggu sekali  untuk  mengontrol  pH  yang  optimal  untuk pertumbuhan  bakteri.  Pada  hasil  pengukuran  pH (Gambar  2)  menunjukkan  pH  awal  saat  diberikan perlakuan  masih  normal,  dimana  antara  pH  7,45- 8,14.  Pada  pengamatan  setelah  perlakuan  selama  2 minggu  menunjukkan  adanya  peningkatan  pH menjadi  8,79-8,87,  hal  ini  dikarenakan  adanya penambahan pupuk anorganik berupa urea dan SP36 pada awal untuk mendukung pertumbuhan mikroorganisme.
Gambar 1. Pengaruh perubahan suhu ( o C) selama proses bioremediasi
24 25 26 27 0 1 2 3 4 5 6 S u h u ( °C) Waktu (Minggu) P0 P1 P2 P3 P4 Lingkungan
Hasil  pH  yang  terukur  tersebut  masih  dalam kondisi bakteri masih dapat tumbuh. Hasil penelitian yang dilakukan oleh Kumar dan Philip (2006) bahwa bakteri  dan  jamur  yang  digunakan  dalam  proses bioremediasi masih dapat mendegradasi hidrokarbon hingga  pH  10.  Selain  itu  adanya  kenaikan  pH  ini disebabkan  karena  adanya  aktifitas  mikroorganisme dalam mendegradasi hidrokarbon yang mengakibatkan peningkatan pH.
Aktifitas mikroorganisme yang menyebabkan  peningkatan  pH  saat  awal  proses bioremediasi  ini  dimungkinkan  karena  bakteri memiliki  kemampuan  dalam  toleransi  dengan  cara pompa  hidrogen.  Mekanisme  yang  terjadi  yaitu dengan  cara  menukar  kation  K + yang  berada  dalam sel  dengan  H + yang  berada  pada  lingkungan  (Retno dan Mulyana, 2013). Saat kondisi pH mencapai 8,87 dilakukan  penanggulangan  untuk  menurunkan  pH, karena  dikhawatirkan  jika  pH  terlalu  basa  akan menyebabkan  proses  biodegradasi  tidak  maksimal. Penambahan asam  yaitu H 2 SO 4 5%  menurunkan pH pada kondisi optimum. Pada pengamatan minggu ke 3  pH  tanah  kembali  pada  kondisi  optimum  yaitu 7,91 – 8,15. Menurut Vidali (2001) bahwa pH  yang sesuai  untuk  pertumbuhan  bakteri  yaitu  6,5  –  8. Penurunan pH pada minggu ke 3 sampai ke 6 secara berturut  karena  aktifitas  mikroorganisme  dalam proses  bioremediasi  yang  menghasilkan  asam-asam organik.  Menurut  Pawar  (2015)  penurunan  pH  saat proses  bioremediasi  diakibatkan  adanya  produksi asam-asam  organik  dari  hasil  proses  biodegradasi hidrokarbon oleh mikroorganisme.
Kadar  air  merupakan  indikator  lingkungan yang  memiliki  peranan  besar  dalam  proses bioremediasi.  Air  sangat  berpengaruh  terhadap aktivitas  mikroorganisme,  hal  ini  karena  sebagian besar  sel  dari  mikroorganisme  mengandung  air. Ketersediaan  air  dalam  tanah  harus  selalu  dijaga supaya aktifitas mikroorganisme dalam mendegradasi  hidrokarbon  dapat  maksimal.  Fungsi air  di  dalam  tanah  yaitu  sebagai  media  pembawa nutrisi  ke  dalam  sel  bakteri  dan  media  untuk perpindahan  bakteri  dari  satu  tempat  ke  tempat  lain (Yadav dan Hassanizadeh, 2011).
Kadar  air  yang  terukur  pada  proses bioremediasi  selama  6  minggu  yaitu  antara  18-24% (Gambar  3).  Kondisi  kadar  air  di  dalam  tanah dipertahankan  minimum  20%  untuk  menunjang pertumbuhan dari  mikroorganisme. Jika  kadar air di dalam tanah kurang akan menyebabkan pertumbuhan  dari  mikroorganisme  itu  sendiri menjadi  terhambat  dan  juga  proses  biodegradasi akan  terhambat.  Jika  terlalu  tinggi  kadar  air  dalam tanah akan menyebabkan ketersedian oksigen dalam tanah  menjadi kurang, sehingga proses biodegradasi senyawa  alifatik  secara  aerob  tidak  maksimal. Menurut  Yadav  dan  Hassanizadeh  (2011)  kadar  air yang  cukup  akan  mempermudah  bakteri  masuk  ke dalam polutan yanga berada di dalam tanah. Kondisi ini  akan  lebih  efektif  jika  terdapat  surfaktan  yang dapat  mendispersikan  hidrokarbon  ke  dalam  air tanah.  Hidrokarbon  akan  lebih  mudah  terdegradasi oleh mikroorganisme.
Gambar 2.  Pengaruh perubahan pH selama proses bioremediasi
Gambar 3. Pengaruh perubahan kadar air (%) selama proses bioremediasi
16 18 20 22 24 26 0 1 2 3 4 5 6 K ad ar air ( %) Waktu (Minggu) P0 P1 P2 P3 P4

## Perubahan Populasi Bakteri
Populasi  bakteri merupakan  indikator bagaimana  proses  bioremediasi  yang  dilakukan tersebut  dapat  berjalan  dan  berapa  jumlah  bakteri yang  berperan  dalam  proses  bioremediasi.  Hasil pengukuran  TPC  pada  penelitian  ini  yaitu  1x10 6 (SPK/g)  sampai  dengan  1x10 8 (SPK/g).  Setiap mikroorganisme  memiliki  lama  siklus  hidup  yang berbeda-beda. Bakteri P. aeruginosa memiliki waktu pertumbuhan eksponensial selama 4-20 jam sedangkan fase stasioner  yaitu 20-72 jam (Adlina et al., 2017).
Hasil  pengukuran  TPC  minggu  ke-2 (Gambar  4)  menunjukkan  penurunan  pada  semua perlakuan.  Hal  ini  karena  bakteri  ataupun  mikroba masih mengalami adaptasi pada lingkungan tersebut. TPH  awal  yang  tinggi  pada  penelitian  ini  juga berpotensi menyebabkan penurunan populasi bakteri pada  minggu  ke  2.  Perlakuan  dengan  penambahan OSD  S200  pada  pengamatan  minggu  pertama  dan kedua  merupakan  populasi  bakteri  yang  terendah dibandingkan  dengan  kontrol  maupun  dengan perlakuan menggunakan OSD SBRC. Pada pengamatan  minggu  ke-4  kedua  perlakuan  yaitu  P3 dan  P4  mengalami  kenaikan  jumlah  populasi  dan pada  akhir  pengukuran  pada  minggu  ke  6  jumlah populasi  tidak  berbeda  jauh  dengan  perlakuan  lain. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pada  perlakuan menggunakan  OSD  S200  mengalami  penghambatan pertumbuhan  mikroba  pada  awal  minggu  saat pengujian bioremediasi. Hasil penelitian ini diperkuat  oleh  penelitian  Murado et  al. (2004) bahwa jumlah bakteri (SPK/g) mengalami penurunan  jumlah  setelah  adanya  pemberian  OSD S200.  Hasil  analisis  DNA  yang  dilakukan  pada penelitian  tersebut  menunjukkan  bahwa  keragaman DNA  pada  perlakuan  OSD  S200  lebih  rendah dibandingkan dengan control.
Gambar  4.  Pengaruh  perubahan  populasi  bakteri selama proses bioremediasi
Proses  bioremediasi  yang  memanfaatkan bakteri sebagai pendegradasi hidrokarbon atau biasa disebut  bakteri  hidrokarbonalistik.  Secara  umum terdapat  3  cara  transpor  hidrokarbon  dalam  sel bakteri,  yaitu  (1)  interaksi  sel  dengan  hidrokarbon yang  terlarut  dalam  fase  air,  (2)  kontak  langsung dengan  (perlekatan)  sel  dengan  permukaan  tetesan
hidrokarbon,  dan  (3)  interaksi  sel  dengan  tetesan hidrokarbon  yang  teremulsi  atau  tersolubilisasi  oleh bakteri  (Lumbanraja,  2014).  Pada  penelitian  ini pemberian  surfaktan  bertujuan  agar  hidrokarbon teremulsi,  sehingga  transpor  hidrokarbon  di  dalam sel bakteri lebih mudah.
Hasil pengukuran TPC (Gambar 5) menunjukkan semakin tinggi  konsentrasi OSD  yang diberikan semakin rendah hasil TPC yang didapatkan. Hal ini sama dengan penelitian Cueva et al. (2016) yang menunjukkan semakin tinggi jumlah surfaktan  tween  80  yang  diberikan  akan  semakin rendah jumlah populasi bakteri. OSD yang diberikan dalam  proses  bioremediasi  ini  dimungkinkan  dapat menghambat pertumbuhan dari bakteri. Penghambatan pertumbuhan bakteri akan menyebabkan  proses  biodegradasi  juga  terhambat. Bakteri  pada  dasarnya  sudah  dapat  menghasilkan biosurfaktan untuk membantu dalam proses bioremediasi. Bakteri P. aeruginosa yang digunakan dapat  menghasilkan  biosurfaktan Rhamnolipids (Urum et  al., 2004).  Surfaktan  dalam  proses bioremediasi  menurut  Mulligan et  al. (2001) memiliki manfaat dalam membantu mikroorganisme dalam  mendegradasi  hidrokarbon  dan  juga  dapat mendispersikan  polutan  yang  ada  dalam  air  tanah. Surfaktan ini memiliki banyak manfaat selain dalam mempercepat  proses  biodegradasi  juga  dapat mendispersikan polutan dalam air tanah. Syarat OSD yang  digunakan  untuk  proses  bioremediasi  yaitu tidak  toksik  dan biodegradable ,  hal  ini  bertujuan agar  tidak  timbul  cemaran  lain  akibat  pemberian OSD dalam proses bioremediasi.
Salah  satu  bahan  dasar  surfaktan  dalam OSD  S200  ialah  LAS  ( liniear  alkylbenzene sulfonate ).  Surfaktan  tersebut  merupakan  surfaktan yang  menggantikan  ABS  ( alkyl  benzene  sulfonate ) yang  pada  awalnya  bersifat  toksik.  Surfaktan tersebut merupakan surfaktan yang banyak digunakan dalam deterjen. Surfaktan LAS merupakan  surfaktan  yang  bersifat biodegradable , akan  tetapi  menurut  Budiawan et  al. (2009) menunjukkan  bahwa  gugus  benzene,  asam  benzoat, hidroksil  dan  karbon  alifatik  tidak  bisa  terdegradasi oleh  mikroorganisme.  Hal  tersebut  menunjukkan bahwa  surfaktan  tersebut  masih  memiliki  beberapa gugus toksik yang dapat mencemari lingkungan.
Mekanisme  bakteri  dapat  mendegradasi hidrokarbon yaitu pertama bakteri akan menghasilkan  enzim  sesuai  dengan  polutan  yang akan  didegradasi.  Enzim  tersebut  dihasilkan  selama proses  pengayaan  dari  bakteri  itu  sendiri  (Ravindra et al., 2014). Mikroorganisme akan mengubah bahan toksik  tersebut  menjadi  bahan  yang  tidak  toksik dengan beberapa mekanisme. Enzim yang dikeluarkan  setiap  mikroorgansime  tidak  sama, tergantung  dari  jenis  bakteri  dan  polutan  yang  akan didegradasi oleh bakteri tersebut. Proses biodegradasi  hidrokarbon  dengan  menggunakan bakteri  dari  genus Pseudomonas akan  berbeda
6 7 8 9 10 0 2 4 6 L og T P C ( S P k /g ) Waktu (Minggu) P0 P1 P2
P3
P4
dengan genus lain seperti Bacillus . Proses biodegradasi  hidrokarbon  oleh P.  aeruginosa menurut  Lumbanraja  (2014)  terbagi  menjadi  dua tergantung  dari  senyawa  yang  akan  didegradasi. Biodegradasi  senyawa  hidrokarbon  alifatik  dengan bakteri Pseudomonas dilakukan  dengan  cara aerobik.  Tanpa  adanya  oksigen  proses  biodegradasi tidak  akan  terjadi.  Proses  degradasi  yang  dilakukan bakteri  meliputi  oksidasi  molekuler  (O 2 )  sebagai sumber  reaktan  dan  penggabungan  antara  satu  atom oksigen ke dalam hidrokarbon teroksidasi. Sehingga beberapa  senyawa  akan  menguap  dan  terakumulasi di udara.
Proses  biodegradasi  bakteri P.  aeruginosa untuk  senyawa  hidrokarbon  aromatik  berbeda dengan  senyawa  alifatik.  Proses  biodegradasi senyawa  aromatik  akan  melibatkan  enzim  oksidase yang  melibatkan  plasmid  dan  kromosom  gen  xy/E dari  bakteri P.  aeruginosa .  Enzim  oksidase  yang diproduksi  dalam  gen  tersebut  yaitu  enzim  katekol 2,3-dioksigenase. Proses biodegradasi yang dilakukan  bakteri  diawali  dengan  pembentukan protocatechuate atau catecol atau  senyawa  yang secara  struktur  berhubungan  dengan  senyawa  ini. Selanjutnya  senyawa  tersebut  akan  didegradasi  oleh enzim  katekol  2,3-dioksigenase  menjadi  senyawa yang  dapat  masuk  ke  dalam  siklus  Krebs  (siklus asam  sitrat)  yaitu  suksinat,  asetil  KoA,  dan  purivat (Lumbanraja,  2014).  Berdasarkan  kedua  proses dalam  biodegradasi  yang  dilakukan  oleh  bakteri P. aeruginosa akan  menghasilkan  senyawa  yang  lebih mudah untuk didegradasi oleh  mikroorganisme lain. Karena  dalam  proses  bioremediasi  sendiri  tidak hanya  melibatkan  satu  jenis  mikroba,  akan  tetapi berbagai jenis mikroba.

## Total Petroleum Hydrocarbon (TPH)
Aplikasi  bioremediasi  yang  dilakukan mengacu pada Keputusan Menteri Negara Lingkungan Hidup No 123 Tahun 2003 tentang tata cara  dan  persyaratan  teknik  pengelolaan  minyak bumi  dan  tanah  terkontaminasi  minyak  bumi  secara biologis.  Pengukuran  dilakukan  dengan  cara mengukur  kondisi  awal  dari  TPH  yang  tidak  lebih dari  15%,  sedangkan  hasil  akhir  dari  pengolahan bioremediasi  yaitu  1%  (Kemen  LH,  2003).  Nilai awal  TPH  yang  terukur  dari  tanah  terkontaminasi minyak  bumi  yaitu  11-13%.  Nilai  awal  TPH  yang terukur  dari  ke-5  perlakuan  tidak  sama,  hal  ini karena  tanah  yang  digunakan  merupakan  tanah terkontaminasi  minyak  yang  diambil  dari  lapangan pengeboran  minyak  bumi.  Kondisi  lapangan  yang memiliki  banyak  faktor  penyebab  yang  antara  lain jumlah  minyak  yang  mencemari  tanah  yang  tidak merata  menyebabkan  kondisi  TPH  awal  dari  tanah berbeda-beda.  Pada  proses  persiapan  tanah  sudah dilakukan  penyaringan  dan  pengadukan  untuk mendapatkan hasil TPH yang sama setiap perlakuan, akan  tetapi  tidak  terjadi  perbedaan  kandungan  TPH pada awal.
Hasil  TPH  terendah  setelah  6  minggu proses  bioremediasi  pada  penelitian  ini  yaitu  P1  = 1,35%.  Perlakuan  lain  masing-masing  P2  =  1,95%; P3 = 2,79% dan P4 = 2,78%, sedangkan P0 = 3,34% (Gambar  5).  Berdasarkan  hasil  TPH  menunjukkan perlakuan  OSD  SBRC  lebih  rendah  dibandingkan perlakuan  OSD  S200.  Hasil  pengukuran  TPH  pada semua  perlakuan  pada  minggu  ke-2  mengalami penurunan  secara  tajam.  Hal  ini  diduga  karena bakteri P.  aeruginosa langsung  memanfaatkan sumber hidrokarbon tersebut dalam metabolismenya. Penambahan  OSD  yang  berbahan  baku  utama surfaktan  akan  mempercepat  proses  bioremediasi, karena akan menurunkan tegangan permukaan antara minyak  dan  air  dengan  membentuk  mikroemulsi, sehingga  proses  biodegradasi  akan  lebih  efektif. Selain  itu  juga  bakteri  akan  lebih  mudah  dalam merombak  senyawa  hidrokarbon  menjadi  senyawa CO 2 ,  H 2 O  dan  asam-asam  organik  yang  lebih sederhana (Charlena et al., 2011).
Gambar  5.  Pengaruh  perubahan  TPH  selama  proses bioremediasi
Hasil analisis ANOVA degradasi TPH pada minggu ke-6 menunjukkan perlakuan jenis OSD dan DOR  OSD  berpengaruh  terhadap  penurunan  TPH (P>0,01)  (Gambar  6).  Hasil  analisis  lanjut Tukkey’s test dengan taraf kesalahan sebesar 0,05 menunjukkan perlakuan P1 yaitu OSD SBRC (DOR 0,5:1)  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  kontrol (tanpa  penambahan  OSD),  sedangkan  dengan perlakuan lain tidak berbeda nyata (Gambar 6). Hasil tersebut  menunjukkan  bahwa  perbedaan  DOR  dan jenis  OSD  yang  ditambahkan  tidak  berpengaruh terhadap  penurunan  TPH  secara  statistik.  Hasil degradasi  TPH  tertinggi  pada  penelitian  ini  yaitu pada  perlakuan  OSD  SBRC  pada  P1  (89,62), sedangkan  perlakuan  lain  pada  P2  yaitu  81,11%. Perlakuan  dengan  penambahan  OSD  S200  pada perlakuan  P3  dan  P4  menunjukkan  hasil  penurunan yaitu  75,29% dan  75,09%. Perlakuan  kontrol  (tanpa OSD) yaitu 71,13%.
Penambahan  OSD  pada  penelitian  ini bertujuan  untuk  melepaskan  minyak  yang  terjerat oleh  matriks  tanah.  Menurut  Thapa et  al. (2012) bahwa penambahan pembersih yang memiliki bahan
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 T P H ( %) Waktu (Minggu) P0 P1 P2 P3 P4
surfaktan  dapat  meningkatkan  ketersediaan  minyak dalam mikroba dan mempercepat proses biodegradasi  minyak.  Hal  ini  karena  surfaktan memiliki  kemampuan  dalam  menurunkan  tegangan permukaan  minyak  dan  air  sehingga  minyak  akan larut dalam air dan mikroba akan lebih mudah dalam memanfaatkan  hidrokarbon  sebagai  sumber  karbon dalam metabolismenya. Surfaktan yang ditambahkan dalam proses bioremediasi ini juga akan dimanfaatkan  oleh  bakteri P.  aeruginosa sebagai sumber  karbon.  Hal  tersebut  karena  komponen surfaktan yang mudah didegradasi oleh mikroorganisme, sehingga surfaktan yang ditambahkan  juga  akan  dimanfaatkan  sebagai sumber karbon.
Gambar  6.  Pengaruh  perubahan  degradasi  TPH selama proses bioremediasi
Mikroorganisme  pada  dasarnya  juga  dapat menghasilkan  biosurfaktan  yang  akan  memudahkan mikrooganisme  dalam  mendegradasi  hidrokarbon. Biosurfaktan  akan  diproduksi  oleh  mikroorganisme jika  kondisi  lingkungan  seperti  suhu  dan  pH  sesuai dengan  pertumbuhan  mikroorganisme  (Abha  dan Swaranjit, 2012). Jumlah biosurfaktan yang dihasilkan  oleh  bakteri P.  aeruginosa berupa rhamnolipids mungkin  tidak  bisa  mencangkup seluruh  tanah  yang  ada  sehingga  perlu  adanya penambahan  surfaktan  dari  luar.  Surfaktan  akan menurunkan tegangan permukaan antara hidrokarbon dengan medium, sehingga minyak akan terlepas  dari  matriks  tanah  (Benyahia  dan  Embaby, 2016). Penambahan surfaktan pada proses bioremediasi  serta  biosurfaktan  yang  dihasilkan bakteri,  akan  meningkatkan  efektifitas  proses biodegradasi. Hal ini sesuai dengan penelitian  Urum et  al. (2004)  bahwa  penambahan  surfaktan  dalam proses penghilangan kontaminasi minyak bumi lebih
efektif  dibandingkan  dengan  tanpa  penambahan surfaktan,  selain  itu  kombinasi  surfaktan  dan biosurfaktan  akan  lebih  efektif  dalam  proses bioremediasi minyak bumi.
Berdasarkan  laporan  dari  USEPA  bahwa OSD  S200  sudah  digunakan  dalam  bioremediasi sejak  tahun  1994,  pada  laporan  tersebut  OSD  S200 dapat mendegradasi TPH sebesar 27,82% selama 28 hari  pengamatan  (USEPA,  2017).  Hasil  kajian tersebut  menunjukkan  penggunaan  OSD  S200 sebagai  agen  bioremediasi  sudah  lama  digunakan akan  tetapi  dimungkinkan  kurang  maksimal.  Bahan yang digunakan oleh OSD S200 salah satu surfaktan utamanya  yaitu  LAS  yang  memiliki  ikatan  benzene didalamnya.  Surfaktan  yang  berasal  dari  minyak sawit  yang  digunakan  OSD  SBRC  ini  memiliki kelebihan  ramah  lingkungan, biodegrable dan  tidak toksik serta tidak menimbulkan cemaran lain. Hal ini sesuai dengan pernyataan dari Guodong et al. (2015) bahwa  saat  ini  fokus  pengembangan  OSD  yaitu bahan yang digunakan tidak toksik dan biodegradable.
Produksi  tanaman  sawit  di  Indonesia  yang tinggi  sebesar  33,5  juta  ton  pada  tahun  2016 menunjukkan  adanya  potensi  yang  besar  dalam memanfaatkan  bahan  yang  berasal  dari  minyak sawit. Pemanfaatan ini ditujukan untuk meningkatkan nilai tambah dari tanaman sawit. Hasil kinerja  OSD  SBRC  pada  proses  bioremediasi  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  OSD  S200.  Hasil  ini diperkuat hasil analisis karakteristik fisika-kimia dari OSD (Tabel 2).
Berdasarkan  karakteristik  fisika  kimia  dari kedua  OSD  yang  digunakan  menunjukkan  OSD SBRC  memiliki  tegangan  permukaan  lebih  rendah dibandingkan dengan OSD S200. Tegangan permukaan merupakan jumlah energi yang dibutuhkan  dalam  meningkatkan  luas  permukaan. Semakin  rendah  tegangan  permukaan  maka  energi yang  dibutuhkan  untuk  menurunkan  tegangan permukaan  antara  minyak  dan  air  semakin  rendah. Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  kemampuan  OSD SBRC dalam melarutkan hidrokarbon lebih baik jika dibandingkan  OSD  S200.  Menurut  Charlena  (2010) menyatakan bahwa meningkatnya kelarutan hidrokarbon  akan  meningkatkan  kinerja  bakteri dalam  mendegradasi  hidrokarbon,  sehingga  proses bioremediasi dapat maksimal.
Tabel 2.  Perbandingan bahan baku dan sifat fisik kimia OSD SBRC dan OSD S200
Faktor OSD SBRC OSD S200 Surfaktan LAS 60% sebesar 8% DEA sebesar 1,5% MES sebesar 0,9% Densitas (30 o C) 0,9957 g/cm 3 0,9993 g/cm 3 Viskositas 1,17 cP 3,6 cP Tegangan Permukaan 23,57 dyne/cm 29,28 dyne/cm

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  Proses  bioremediasi  dengan penambahan OSD SBRD menunjukkan kinerja lebih baik  dibandingkan  OSD  S200  dalam  mendegradasi hidrokarbon. Hasil  kinerja dapat diketahui dari hasil nilai TPH dan TPC. Hasil nilai TPH pada perlakuan OSD  SBRC  masing-masing  sebesar  89,62%  dan 81,11%,  sedangkan  perlakuan  OSD  S200  sebesar 75,29%  dan 75,09%. Hasil nilai TPH tertinggi pada penelitian ini yaitu pada perlakuan OSD SBRC DOR (0,5:1).  Hasil  populasi  bakteri  pada  perlakuan  OSD S200  mengalami  penghambatan  pada  awal  aplikasi, sehingga menghambat proses bioremediasi.

## Saran
Penelitian  yang  dilakukan  ini  masih  pada tahap aplikasi pada laboratorium. Penelitian selanjutnya pada skala pilot perlu dilakukan sebelum nantinya diaplikasikan di lapangan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  atas masukan  yang  diberikan  oleh reviewer dan  dewan editor  untuk  meningkatkan  isi  dari  naskah  ini. Penelitian  ini  didukung  oleh  Insentif  Riset  Sistem Inovasi  Nasional  (INSINAS)  Kemenristekdikti Indonesia, pada nomor 1965/IT3.11/PN/2017.

## DAFTAR PUSTAKA
Abha  S  dan  Swaranjit  CS.  2012.  Hydrocarbon pollution:  effects  on  living  organisms, remediation of contaminated  environments, and effects of heavy metals co- contamination on bioremediation. Di dalam Romero-Zerón  L  (Ed), Bioremediation  of Crude Oil Contaminated Soil by Petroleum- Degrading  Active  Bacteria .  InTech  Press. P185-206.
Adams  GO,  Fufeyin  PT,  Okoro  SE,  Ehinomen  I.
2015.  Bioremediation,  biostimulation  and bioaugmention:  a  review. International Journal  Evironmetal  Bioremediation  and Biodegradation . 3 (1): 28-39.
Adlina  S,  Yani  M,  dan  Hambali  E.  2017.  Oil  spill dispersant  (OSD)  formulation  of  palm  oil base  surfactant  for  bioremediation  of  soil contaminated  hydrocarbons. Chemical  and
Process Engineering Research. 53: 1-12. Allen  CCR,  Boyd  DR,  Hempenstall  F,  Larkin  MJ, Sarma  ND.  1999.  Contrasting  effect  of  a nonionic surfactan on the biotransformation of  polysiclic  aromatic  hydrocarbons  to cis - dihydrodiols  by  soil  bacterial. Appl. Environ. Microbiol. Applied and
Enviromental  Microbiology .  65  (3):  1335- 1339.
Benyahia  F  dan  Embaby  AS.  2016.  Bioremediation of crude oil contaminated desert soil: effect of  biostimulation,  bioaugmentation  and bioavailability  in  biopile  treatment  system.
International Journal
Environmental Research Public Health . 13 (219):     1-11.
Budiawan,  Fatisa  Y,  Khairani  N.  2009.  Optimasi biodegradabilitas  dan  uji  toksisitas  hasil degradasi  surfaktan  linear  alkilbenzena sulfonat  (las)  sebagai  bahan  deterjen pembersih. Makara Sains . 13 (2): 125-133.
Charlena,  Sjahrizal  A,  dan  Roni.  2011.  Profil Kelarutan Limbah Minyak Bumi dalam Air dengan Penambahan Surfaktan Anionik dan Laju Pengadukan. Seminar Nasional Kimia Terapan  Indonesia  2011. (Gedung  Graha Widya  Bhakti,  Puspiptek  Serpong  (ID),  24 Mei 2011.
Charlena. 2010. Bioremediasi tanah tercemar limbah minyak  berat  menggunakan  konsorsium bakteri [Disertasi]. Institut Pertanian Bogor. Bogor (ID).
Cueva  SG,  Rodriguez  CH,  Cruz  NOS,  Contreras JAR,  Miranda  JL.  2016.  Changes  in bacterial populations during bioremediation of  soil  contaminated  with  petroleum hydrocarbons. Water  Air  Soil  Pollut .  227 (91): 1-12.
Guodong  Q,  Yupeng  Z,  Xuhe  R,  Jie  C.  2015. Research on development and effectiveness evaluation technology of new environment- friendly  oil  spill  dispersant. Aquatic Procedia . 3: 245-253.
Helmy  Q,  Laksmono  R,  dan  Kardena  E.  2015. Bioremediation  of  aged  petroleum  oil contaminated  soil:  from  laboratory  scale  to full  scale  aplication. Procedia  Chemistry . 2015 (14): 326-333.
[Kemen  LH]  Kementerian  Negara  Lingkungan
Hidup. 2003. Keputuhan Menteri Lingkungan  Hidup  No  128  tahun  2003 Tentang  Tatacara  dan  Persyaratan  Teknis Pengolahan  Limbah  Minyak  Bumi  dan Tanah  Terkontaminasi  Limbah  Minyak Bumi  Secara  Biologis.  Jakarta  (ID):.
Kementrian Negara Lingkungan Hidup.
Khalilova HK. 2015. The impact of oil contamination on soil ecosystem. Biological  and  Chemical  Research .  2015. 133-139.
Kumar  M  dan  Philip  L.  2006.  Bioremediation  of endosulfan  contaminated  soil  and  water— Optimization  of  operating  conditions  in laboratory  scale  reactors. Journal  of Hazardous Materials . 136: 354-364. Lumbanraja  P.  2014. Matakuliah  Pengelolaan Limbah dan Bioremediasi: Mikroorganisme
dalam  Bioremediasi .  Universitas  Sumatra
Utara. Medan (ID).
Mulligan  CN,  Yong  RN,  dan  Gibbs  BF.  2001.
Surfactant-enhanced remediation
of contaminated  soil:  a  review. Engineering Geology . 2001 (60): 371-380.
Murado  MA,  Miron  J,  Gonzalez  MP,  Vazquez  JA,
Cabo  ML  and  Pintado  J.  2004.  Prestige  oil spill.  Results  of  bioremediation  assays  on supratidal  roks  of  salvora  island  (galice, spain). Consejo Superior de Investigaciones Cientifas .
Pawar  RM.  2015.  The  effect  of  soil  pH  on bioremediation  of  polycyclic  aromatic hydrocarbons (PAHS). Journal
Bioremediation  and  Biodegradation. 3(6): 1-14.
Putri MD, Ali F, dan Zulkifliani. 2013. Bioremediasi tanah  yang  terkontaminasi  minyak  bumi dengan metode bioventing terhadap penurunan kadar total petroleum hidrokarbon dan BTEX. Universitas Indonesia (ID).
Ravindra  S,  Pushpendra  S,  dan  Sharma  R.  2014. Microorganism  as  a  tool  of  bioremediation technology  for  cleaning  environment:  A review. Proceedings  of  the  International
Academy  of  Ecology  and  Environmental Sciences. 4 (1): 1-6.
Retno DL dan Mulyana N. 2013. Bioremediasi lahan tercemar limbah
lumpur
minyak menggunakan  campuran  bulking  agents yang  diperkaya  konsorsia  mikroba  berbasis kompos  iradiasi. Jurnal  Ilmiah  Aplikasi Isotop dan Radiasi: A Scientific Journal for The Applications of Isotopes and Radiation . 2 (9): 139-150.
Sari  GL,  Mizwar  A,  dan  Trihadiningrum  Y.  2015. Potensi  co-composting  untuk  bioremediasi tanah  terkontaminasi  polycyclic  aromatic hydrocarbon  (PAH). Prosiding  Seminar Nasional  Manajemen  Teknologi  XXII . Surabaya, 24 Januari 2015.
Thapa  B.  Kumar  AKC,  dan  Ghimire  A.  2012.  A review  on  bioremediation  of  petroleum hydrocarbon contaminants in soil. Kathmandu  University  Journal  of  Science, Engineering  and  Technology .  1  (8):  164- 170.
Urum  K,  Pekdemir  T,  dan  Çopur  M.  2004. Surfactants treatment of crude oil contaminated  soils. Journal  of  Colloid  and Interface Science . 276:456–464.
[USEPA]  United  Sates  Environmental  Protection Agency.  1998. Method  1664,  Revision  A: N-Hexane  Extractable  Material  (HEM;  Oil and  Grease)  and  Silica  Gel  Treated  N- Hexane  Extractable  Material  (SGTHEM; Non-polar  Material)  by  Extraction  and Gravimetry .  Washington  (DC).  USEPA Press.
US  EPA.  2017. Guide  to  using  the  ncp  subpart product schedule technical notebook .
Washington (DC). USEPA Press.
Vidali M. 2001. Bioremediation. An overview. Pure and Applied Chemistry . 73 (7):1163-1172 Yadav  BK  dan  Hassanizadeh  SM.  2011.  An overview  of  biodegradation  of  lnapls  in coastal  (semi)-arid  environment. Water  Air Soil Pollut . 220:225–239.
Zhang  G,  Yue-ting  W,  Xin-ping  Q,  Qin  M.  2005.
Biodegradation of crude oil by Pseudomonas aeruginosa in the presence of rhamnolipids. Journal of Zhejiang University Science . 6B (8): 725-73.