## PENGARUH ISOFLAVON KEDELAI TERHADAP JUMLAH KECEPATAN DAN MORFOLOGI SPERMATOZOA TIKUS PUTIH JANTAN ( RATTUS NORVEGICUS)
Elvina Sari Sinaga Dosen STIKes Widya Husada Medan
E-mail: elvinasarisinaga@yahoo.com

## ABSTRACT
The cases of infertility have increased since several years. Many experts ensure the rate of infertility has increased up to 15-20 percent of the approximately 50 million couples in Indonesia. In fact, it is currently known that the abnormalities also happen to men contributed 30% and 20% due to the abnormalities of both couples. Recent study shows that the possible cause of infertility is the negative effect of plant on the reproductive  function,  one  of  which  is  the  plant  containing  fitostrogen.  Fitostrogen  can  disturb  the balance of the hormonal system of animals and humans. Soy Isoflavones is one group of phytoestrogens. The  mechanism  of  biological  action  of  estrogen  acts  as  an  estrogen  agonist  or  antagonist.  Isoflavones acts antagonistic when estrogen level is high, whereas isoflavones is agonists when estrogen level is low. This study aims at finding out the effect of soy isoflavones given on the quantity, speed and spermatozoa morphology  of  male  white  rats  (Rattus  norvegicus).    This  research  approach  is  post  test  only  control group design, treated to the male white rats weighing 150-250 gr. The sample consisted of 25 rats, which were  divided  into  5  groups:  control  group  (K),  treatment  group  of  P1,  P2,  P3  and  P4.  The  treatment groups  were  orally  given  a  dose  of  isoflavones  for  each,  1.26mg/200grbb/day,  2.52mg/200grbb/day, 3.78mg/200grbb/day  and  5.04mg/200grbb/day  for  48  days.  After  48  days  of  treatment,  the  rats  were slaughtered and the quantity, speed and morphology spermatozoa were examined. Then, the results were analyzed  by  using  One  Way  ANOVA  and  continued  by  multiple  comparison  test  typed  Bonferroni.  The result  of  ANOVA  test  shows  the  average  decrease  of  quantity  and  speed  of  white  male  rats  (Rattus norvegicus)  start  from  group  P1,P2,P3  and  P4  compared  with  control  group  which  is  p  value  0,001 (p<0,05).  Then  there  is  an  average  increase  of  abnormal  spermatozoa  of  white  male  rats  (Rattus norvegicus) which is p value 0,001 (p<0,005). From the results, it is concluded that there is significant effect of soybean isoflavones to the decrease of white male rats (Rattus noevegicus) spermatozoa quantity and  speed  also  the  increase  of  its  abnormal  spermatozoa  morphology  male  white  rats  (Rattus norvegicus).
Keywords : Soy Isoflavones; Quantity; Speed; Morphology;  Spermatozoa.

## ABSTRAK
Kasus infertilitas sejak beberapa tahun terakhir meningkat. Para ahli memastikan angka infertilitas telah meningkat mencapai 15-20 persen dari sekitar 50 juta pasangan di Indonesia. Saat ini diketahui kelainan pada pria memberikan kontribusi 30% dan 20% disebabkan kelainan kedua belah pihak pasangan. Hasil penelitian  terkini  kemungkinan  penyebab  infertilitas  adalah  efek  yang  merugikan  dari  tumbuhan terhadap fungsi reproduksi, salah satunya adalah tumbuhan yang mengandung fitoestrogen. Fitoestrogen dapat  mengacaukan  keseimbangan  sistem  hormon  binatang  maupun  manusia.  Isoflavon  kedelai merupakan salah satu kelompok fitoestrogen. Mekanisme aksi biologis estrogen adalah bertindak sebagai estrogen  agonis  atau  antagonis.  Isoflavon  bersifat  antagonis  ketika  kadar  estrogen  tinggi,  sebaliknya isoflavon  bersifat  agonis  ketika  kadar  estrogen  rendah.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  pemberian  isoflavon  kedelai  terhadap  jumlah,  kecepatan  dan  morfologi  spermatozoa  tikus putih  jantan  (Rattus  norvegicus).  Penelitian  ini  menggunakan  metode  pendekatan  post  test  only  control group design, terhadap tikus putih jantan dengan berat badan 150 – 250 gr. Sampel terdiri dari 25 ekor tikus  yang  dibagi  5  kelompok  yaitu  kelompok  kontrol  (K),  kelompok  P1,  P2,  P3  dan  P4.  Kelompok perlakuan diberikan isoflavon dengan dosis masing masing 1,26mg/200grbb/hari; 2,52mg/200grbb/hari;

## Penelitian
3,78mg/  200grbb/hari  dan  5,04mg/200grbb/hari  diberikan  peroral  selama  48  hari.  Setelah  48  hari perlakuan tikus di korbankan dan diperiksa jumlah, kecepatan dan morfologi spermatozoa. Analisa data menggunakan  uji  One  Way  ANOVA  dan  dilanjutkan  dengan  uji  Multiple  Comparrison  jenis  Bonferroni Hasil uji ANOVA didapatkan penurunan rata-rata jumlah dan kecepatan spermatozoa tikus putih jantan (Rattus norvegicus) mulai dari kelompok P1,P2,P3 dan P4 dibanding dengan kelompok kontrol dengan nilai p value 0,001 (p<0,05). Terjadi peningkatan rata-rata morfologi abnormal spermatozoa tikus putih jantan, dengan nilai p value 0,001 (p<0,05). Dari hasil penelitian dapat disimpulkan terdapat pengaruh yang  signifikan  pemberian  isoflavon  kedelai  terhadap  penurunan  jumlah  spermatozoa  ,  kecepatan spermatozoa dan peningkatan morfologi abnormal spermatozoa tikus putih jantan (Rattus norvegicus).
Kata  kunci: Isoflavon,  Kedelai,  Kecepatan,  Morfologi,  Spermatozoa,  Rattus  Norvegicus,  Tikus  Putih Jantan.

## PENDAHULUAN
Kasus  infertilitas  sejak  beberapa  tahun terakhir meningkat. Dahulu perhatian terfokus  hanya  pada  pihak  wanita  saja sebagai  penyebab  ketidaksuburan  pasangan. Saat  ini  diketahui  kelainan  pada  pria memberikan  kontribusi  30%  dan  20% disebabkan  kelainan  kedua  belah  pihak pasangan.  Oleh  karena  itu,  faktor  pria  atau suami  memegang  kontribusi  50%  pada pasangan  infertil  atau  dengan  kata  lain  baik suami  ataupun  istri  mempunyai  kontribusi yang  sama  (Trilsky,2008).  Infertilitas  adalah pasangan  yang  menjalani  hubungan  seksual secara  teratur  tanpa  perlindungan  selama  12 bulan dan tidak terjadi kehamilan (Llewellyn,2001). Kini, para ahli memastikan angka  infertilitas  telah  meningkat  mencapai 15-20 persen dari sekitar 50 juta pasangan di Indonesia.
Banyak penelitian telah dilakukan untuk mengungkapkan
penyebab masalah infertilitas.  Hasil  penelitian  terkini  bahwa adanya  kemungkinan  efek  yang  merugikan dari  toksin  lingkungan,seperti  dari  tumbuhan terhadap fungsi reproduksi. Tumbuhan menghasilkan berbagai bahan untuk manusia, baik  yang  menguntungkan  maupun  yang merugikan.  Salah  satu  bahan  yang  dapat merugikan  adalah  fitoestrogen.  Fitoestrogen suatu  senyawa  yang  banyak  ditemukan  di lingkungan  sekitar  dan  diketahui  dapat mengacaukan  keseimbangan  sistem  hormon binatang  maupun  manusia  (Gultekin  dan Yildizz  2006,  Atanassova  dan  Mc.Kinnel 2000). Pada tahun 1940, pertama kali disadari bahwa komponen yang berasal dari beberapa
tanaman mempunyai efek estrogenik
(Karahalil, 2006). Domba-domba yang mengkonsumsi semanggi merah setiap harinya,  mengalami  sindrom  infertilitas  atau yang  lebih  dikenal  dengan clover  disease . Dalam daun semanggi ini terkandung banyak isoflavon  formononetin  dan  biochanin  A (Gultekin danYildiz, 2006).
Isoflavon merupakan salah satu kelompok  fitoestrogen.  Senyawa  isoflavon terdistribusi secara luas pada berbagai bagian tanaman  ,  baik  pada  bagian  akar,  batang daun,  maupun  buah.  Tanaman  golongan Leguminoceae,  khususnya  pada  tanaman kedelai mengandung senyawa isoflavon yang cukup  tinggi.  Bagian  tanaman  kedelai  yang mengandung  senyawa  isoflavon  lebih  tinggi terdapat  pada  biji  kedelai,  khususnya  pada bagian  hipokotil (germ) yang  akan  tumbuh menjadi tanaman. Sebagian lagi terdapat pada kotiledon  yang  akan  menjadi  daun  pertama dari tanaman (Hernawati, 2009).
Kandungan  isoflavon  pada  kedelai berkisar 2-4 mg/g kedelai. Senyawa isoflavon tersebut  pada  umumya  berupa  senyawa kompleks  atau  konjugasi  dengan  senyawa ikatan  glukosida  (Synder  dan  Kwon,1987). Kedelai  mengandung  12  macam  isoflavon, yang  terdapat  dalam  bentuk  glukosida  dan bentuk  aglikon.  Proses  pencernaan  atau permentasi  kedelai  atau  hidrolisis  enzimatis akan melepaskan molekul gula dari isoflavon glikosida  sehingga  menghasilkan  isoflavon aglikon (Muchtadi, 2010).
Kacang kedelai dikenal sebagai fitoestrogen karena struktur molekul isoflavon  kedelai  mirip  dengan  struktur molekul  estrogen.  Hal  ini  menyebabkan
isoflavon  kedelai  dapat  berikatan  dengan Receptor  Estrogen (RE),  namun  afinitas  RE ligan  tersebut  lebih  rendah  dibanding estrogen  endogen  sel  epitel  dari  jaringan reproduksi  seperti  kelenjar  susu,  ovari  dan testis.  Mekanisme  aksi  biologis  estrogen adalah  kemampuannya  untuk  bertindak sebagai estrogen agonis yang dapat berikatan dengan RE dan menstimulasi respon estrogen,  atau  bertindak  sebagai  estrogen antagonis  yang  dapat  berikatan  dengan  RE namun menghambat respon estrogen.
Isoflavon  bersifat  antagonis  ketika  kadar estrogen  tinggi,  sebaliknya  isoflavon  bersifat agonis ketika kadar estrogen rendah (Robertson, 2000).
Berbagai  penelitian  yang  berkaitan dengan terpaparnya fitoestrogen dalam tubuh hewan  dan  dampaknya  terhadap  reproduksi sudah banyak diteliti, baik pada hewan jantan maupun betina. Hasil penelitian menunjukkan pengaruh  fitoestrogen  terhadap  fertilitas  dan perkembangan  hewan  bervariasi,  ada  yang berdampak positif dan ada juga yang negatif. Hal  tersebut  disebabkan  respon  biologis fitoestrogen  pada  hewan  bergantung  pada faktor-faktor  species,  umur,  jenis  kelamin, dosis,  cara  pemberian  dan  metabolisme (Hernawati, 2009).
Puspasari  (2007)  dalam  penelitiannya menemukan  rerata  morfologi  spermatozoa abnormal  paling  rendah  pada  kelompok mencit  yang  tidak  diberi  ekstrak  kedelai  dan paling  tinggi  pada  kelompok  ekstrak  kedelai 780mg/hari, Peningkatan abnormalitasini disebabkan  karena  adanya  fitoestrogen, terutama  isoflavon  yang  terkandung  didalam kedelai. Pemberian fitoestrogen dapat mengganggu jalannya spermatogenesis, karena  fitoestrogen  dapat  menghambat  kerja enzim 17-βhidroksis teroid oksidoreduktase,enzim yang dibutuhkan untuk  sintesis  testosteron.  Hambatan  kerja dari  enzim  menyebabkan  penurunan  kadar testosteron serta
hambatan pada perkembangan  sistem  saraf  pusat  dan gonodal.  Efek  antiandrogenik  fitoestrogen juga  dapat  menghambat  sekresi  LH  pada hipofisis,yang  berakibat  penurunan  kadar sekresi testosteron pada sel leydig.
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Astuti (2009)  pemberian  tepung  kedele  kaya
isoflavon  dengan  dosis  3  mg/ekor/hari  tidak memberikan  pengaruh  yang  berarti  terhadap konsentrasi  spermatozoa  dan  perkembangan berat testis akan tetapi pada dosis 6mg/kg/hari akan menghambat perkembangan testis dan menyebabkan atropi testis.  Hal  ini  diduga  adanya  reaksi  estrogen agonis pada dosis isoflavon tertinggi (6mg/ekor/hari) menyebabkan rusaknya struktur membran plasma mitokondria spermatozoa  akibat  proses  oksidasi  oleh radikal  bebas  sehingga  menurunkan  fungsi dan kualitas spermatozoa.
Pernyataan  yang  berbeda  dinyatakan oleh Committee  on  Toxicity  of  Chemicals  in Food, Consumer Products and the Environment. Komite  ini  telah  menyelidiki efek  pemberian  isoflavon,  suatu  fitoestrogen yang  terdapat  pada  kedelai,  terhadap  kadar hormon  seksual  dan  kualitas  semen  pria. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian  suplemen  isoflavon  (40  mg/hari) selama  2  bulan  terhadap  pria non-vegetarian berusia  18-35  tahun  tidak  mempengaruhi kadar estradiol, testosteron, LH, FSH, volume semen,  jumlah,  motilitas,  dan  morfologi sperma,  ataupun  pada  besar  testis.  (Hughes 2003).  Pernyataaan  serupa  juga  dituliskan dalam  sebuah  kepustakaan,  bahwa  tidak  ada pengaruh  pemberian  isoflavon  pada  hormon reproduksi pria, besar testis, maupun kualitas semen (Watanabe, 2006).
Berdasarkan latar belakang diatas terlihat  dua  pernyataan  yang  berbeda  maka dianggap penting untuk meneliti sejauh mana “Pengaruh isoflavon kedelai terhadap jumlah, kecepatan  dan  morfologi  spermatozoa  tikus putih ( Rattus norvegicus )”.

## Tahap pelaksanaan
a.   Larutan  isoflavon  kedelai  diberikan secara oral dengan menggunakan semprit  yang  ujung  jarumnya  dibuat tumpul  berbentuk  sonde.  Perlakuan diberikan pada masing-masing kelompok  secara  berulang  dengan  dosis 1,26 mg, 2,52 mg, 3,78 mg dan 5,04 mg selama  48  hari  (selama  satu  tahap spermatogenesis tikus).
b.   Setelah  hari  ke-48  disiapkan  untuk dilakukan pematahan batang otak, kemudian  dilaparatomi  dan  selanjutnya
dilakukan pemotongan terhadap vasdeferen masing – masing 2 cm c.   Selanjutnya dilakukan pengambilan
spermatozoa  vas  deferens  dengan  cara memijat  vas  deferens  yang  telah dipotong  dan  kemudian  ditampung dengan  menggunakan  gelas  arloji  yang berisi larutan NaCl 0,9 %.

## Pelaksanaan Penelitian
Tikus  ditempatkan  didalam  kandang yang terbuat dari bahan plastik ( ukuran 30 x 20 x10 cm) yang ditutup dengan kawat kasa. Dasar  kandang  dilapisi  dengan  sekam  padi setebal  0,5-1  cm  dan  diganti  setiap  3  hari. Cahaya  ruangan  dikontrol  persis  jam  12 terang  (pukul  06.00  sampai  dengan  pukul 18.00) dan 12 jam gelap (pukul 18.00 sampai pukul  06.00),sedangkan  suhu  kelembaban ruangan  dibiarkan  berada  pada  kisaran alamiah. Pakan (pelet) dan minum (air PAM) disuplai  setiap  hari.  Persetujuan  Ethical clearance  dari  Komisi  Etika  Penelitian Fakultas Kedokteran Universitas Andalas
Pengamatan  Untuk  Jumlah,  Kecepatan dan Morfologi Spermatozoa
Setelah  diberi  perlakuan  suplemen isoflavon  kedelai  selama  48  hari,masing- masing hewan coba dikorbankan dengan cara dislokasi  leher  dan  selanjutnya  dibedah. Kemudian  dilakukan  pengamatan  sebagai berikut:

## Pengambilan Sekresi Vas Deferens
Untuk  mendapatkan  sperma  di  dalam sekresi  Vas  deferens  dilakukan  menurut Suhadi  dan  Arsyad  (1983)  sebagai  berikut  : setelah  48  hari  perlakuan  masing-masing hewan  coba  dikorbankan  dengan  cara dislokasi leher dan selanjunya dibedah.
Kemudian  organ  testis  dikeluarkan beserta  vas  deferens  .  Vas  deferens  diambil dan  diletakkan  ke  dalam  cawan  petri  yang berisi  NaCl  0,9%.  Membuat  larutan  stok dengan  jalan  meletakkan  vas  deferens  dalam cawan petri yang berisi NaCl fisiologis 0,9% tersebut,  disebut  sebagai  larutan  stok  yang digunakan  untuk  mengetahui  kualitas  dan kuantitas  spermatozoa  seperti  dibawah  ini (Soehadi dan Arsyad, 1983). Suspensi sperma dari Vas  deferens  yang  telah  diperoleh  dapat
digunakan  untuk  pengamatan  yang  meliputi: jumlah, kecepatan dan morfologi spermatozoa.

## Menghitung Jumlah Spermatozoa
Sperma  yang  telah  diaduk  homogen dihisap  dengan  pipet  eritrosit  sebanyak  0,5 ml,  selanjutnya  ditambahkan  larutan George 0,5  ml,  setelah  diaduk  rata  diteteskan  diatas kotak  kamar  hitung improved  newbauer, kemudian  dilihat  dibawah  mikroskop  dan dihitung  menggunakan stopwatch jumlah spermatozoa  pada  32  kotak  besar  pada improved  neubauer .  Selanjutnya  teteskan sperma  yang  dicampur  larutan  fisiologis (NaCl  0,9  %),  kemudian  dihitung  jumlah spermatozoa  yang  mati,  setelah  kedua  hasil didapat  maka  dihitung  jumlah  spermatozoa yang  mati  oleh  larutan George dikurang jumlah  spermatozoa  yang  mati  oleh  larutan NaCl,  setelah  didapatkan  hasil  maka  didapat jumlah  motil  spermatozoa,  setelah  itu dikalikan  dengan  1  juta.  Adapun  yang  biasa digunakan untuk satuan jumlah total spermatozoa adalah juta/ml.

## Pemeriksaan Kecepatan Spermatozoa
Pemeriksaan  dapat  dilakukan  sejalan dengan pemeriksaan jumlah total spermatozoa.  Sperma  diteteskan  sebanyak  1 tetes diatas kamar hitung Improved Neubauer, kemudian lihat dibawah mikroskop  cahaya  dengan  pembesaran  10x. Hitung  sebanyak  25  ekor.  Hitung  kecepatan pada  bilik  kecil  dari  garis  ke  garis  (atas  ke bawah  atau  kiri  ke  kanan)  dengan  gerakan lurus kedepan secara aktif dan lincah disertai gerak  ekor  yang  teratur.  Hitung  dalam  detik. Untuk mencari rata-rata kecepatan, hasil yang didapat dijumlahkan kemudian dibagi 25.

## Pemeriksaan Morfologi Spermatozoa
Dilakukan  dengan  cara  ambil  larutan stok  sebanyak  ±  5  mikro  liter  (ul)  larutan stok.  Kemudian  teteskan  pada  kaca  objek. Buat hapusan dengan cara mendorong larutan tersebut  dengan  kaca  objek  lain  ke  depan. Biarkan  mengering,  fiksasi  dengan  alkohol 70  %,  biarkan  mengering  selama  15  menit. Beri  pewarnaan  giemsa  5  mikro  liter  (ul) (merck  chemical  Co,  Jerman)  dan  dibiarkan
mengering selama 15 menit. Bilas dengan air mengalir dan dibiarkan kering.
Amati dibawah mikroskop cahaya dalam beberapa  lapangan  pandang  terhadap  sperma yang abnormal, dengan pembesaran 400 kali, kemudian  dilakukan  penghitungan  jumlah morfologi spermatozoa normal dan abnormal. Ciri  sperma  normal  mempunyai  bentuk kepala  seperti  kait  pancing  dan  ekor  panjang lurus,  sedangkan  sperma  yang  abnormal mempunyai  bentuk  kepala  tidak  beraturan, dapat  berbentuk  seperti  pisang  atau  tidak beraturan (amorphous), atau terlalu bengkok, dan ekornya tidak lurus bahkan tidak berekor, atau  hanya  terdapat  ekornya  saja  tanpa kepala.  Hitung  jumlah  sperma  terhadap keseluruhan  total  sperma  yang  terhitung dengan  beberapa  kali  lapangan  pandang (kriteria WHO minimal 5x lapangan pandang) (Tadjudin,1998).

## HASIL

## Jumlah Spermatozoa
Tabel  1. Hasil  Uji  Normalitas  Kolmogorov- Smirnov Jumlah Spermatozoa (juta/ml) Tikus Putih  Jantan  Dewasa  ( Rattus  Norvegicus) setelah Pemberian Isoflavon Kedelai
Mean 97,64 SD 39,90 p 0,059 Jumlah Spermatozoa
Berdasarkan Tabel 1 didapatkan hasil uji normalitas dengan nilai p value sebesar 0,059 yang  berarti  data  tersebut  terdistribusi normal,  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji ANOVA untuk  melihat  adakah  pengaruh pemberian isoflavon kedelai terhadap jumlah spermatozoa  tikus  putih  jantan  ( Rattus norvegicus )
Tabel  2. Hasil  Uji ANOVA terhadap  Jumlah Spermatozoa  (juta/ml)  Tikus  Putih    Jantan
Dewasa ( Rattus norvegicus) setelah Pemberian Isoflavon Kedelai Kelompok Mean SD p (juta/ml) Kontrol 164,80 40,40 0,001 P1 96,20 10,99 P2 82,20 5,63 P3 81,20 6,72 P4 63,80 3,70 Dari  hasil  uji ANOVA didapatkan penurunan rata-rata jumlah spermatozoa tikus putih  jantan  pada  kelompok  yang  diberi isoflavon kedelai dibandingkan dengan kelompok yang tidak diberi isoflavon kedelai (kontrol)  dan  diperoleh  nilai p value  sebesar 0,001  ( p <0,05)  yang  berarti  ada  pengaruh pemberian isoflavon kedelai terhadap jumlah spermatozoa.  Untuk  melihat  signifikasi  antar kelompok  perlakuan  dilanjutkan  dengan  uji PostHocBonferroni
Ket : a= p <0,05       b= p ≥ 0,05
Grafik  1. Hasil  Uji  Multiple  Comparisons Bonferroni  Jumlah  spermatozoa  (juta/ml) Tikus  Putih  Jantan  ( Rattus  norvegicus )  pada KelompokKontrol  dan  Kelompok  Perlakuan yang telah Diberi Isoflavon.
Dari  grafik  1  diketahui  bahwa  antara kelompok  kontrol  dengan  kelompok  P1, kelompok  kontrol  dengan  kelompok  P2,
Kelompok P4 P3 P2 P1 Kontrol Mean o f Jum lah 175 150 125 100 75 a a a a
b b b                 b bbbb
kelompok  kontrol  dengan  kelompok  P3, kelompok  kontrol  dengan  P4  menunjukkan perbedaan  yang  signifikan  ( p <  0,05).  Untuk antar  kelompok  perlakuan,  kelompok  P1 dengan  kelompok  P2,  kelompok  P1  dengan kelompok P3, kelompok P1 dengan kelompok P3, kelompok P2 dengan kelompok P3, kelompok P2 dengan kelompok P4, kelompok P3 dengan kelompok  P4  tidak  terdapat  perbedaan  yang bermakna ( p> 0,05)

## Kecepatan Spermatozoa
Tabel  3. Hasil  Uji  Normalitas  Kolmogorov-
Smirnov  Kecepatan  Spermatozoa  (Detik) Tikus Putih Jantan Dewasa ( Rattus Norvegicus) setelah  Pemberian  Isoflavon Kedelai Mean 1,64 SD 0,47 p 0,43 Kecepatan Spermatozoa (detik)
Berdasarkan Tabel 3 didapatkan hasil uji normalitas  dengan  nilai p value  sebesar  0,43 yang  berarti  data  tersebut  terdistribusi normal,  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji ANOVA untuk  melihat  adakah  pengaruh pemberian isoflavon kedelai terhadap kecepatan  spermatozoa  tikus  putih  jantan ( Rattus norvegicus )
Tabel  4. Hasil  Uji ANOVA terhadap Kecepatan  Spermatozoa  (Detik)  Tikus  Putih Jantan  Dewasa  ( Rattus  norvegicus) setelah Pemberian Isoflavon Kedelai Kelompok Mean SD P (detik) Kontrol 1,14 0,22 0,001 P1 1,26 0,15 P2 1,52 0,24 P3 2,11 0,1 P4 2,18 0,17 Dari  tabel  uji ANOVA didapatkan penurunan  rata-rata  kecepatan  spermatozoa tikus  putih  jantan.  Penurunan  kecepatan spermatozoa  tikus  putih  jantan  mulai  dari kelompok  P1  sampai  kelompok  P4,  nilai p value sebesar 0,001 (p<0,05) yang berarti ada pengaruh pemberian isoflavon kedelai terhadap  kecepatan  spermatozoa  tikus  putih jantan.  Untuk  melihat  signifikasi  antar
kelompok  perlakuan  dilanjutkan  dengan  uji Post Hoc Bonferroni.
Tabel 5. Uji Multiple Comparisons Bonferroni  terhadap  KecepatanSpermatozoa Tikus Putih Jantan Dewasa ( Rattus Norvegicus) setelah  Pemberian  Isoflavon Kedelai (I) Dosis  (J) Dosis Mean Sig 95% Confidence Interval perlakuan perlakuan Difference Lower Bound Upper Bound (I-J) Kontrol P1 -0,12 1,000 -0,49 0,25 P2 -0,38* 0,039 -0,75 -0,13 P3 -0,97* 0,000 -1,35 -0,65 P4 -1,04* 0,000 -1,41 -0,66 P1 P2 -0,26 0,357 -0,63 0,10 P3 -0,85* 0,000 -1,23 -0,48 P4 -0,92* 0,000 -1,29 -0,54 P2 P3 -0,59* 0,001 -0,96 -0,21 P4 -0,65* 0,000 -1,02 -0,28 P3 P4 -0,62 1,000 -0,43 0,31
Hasil  uji  Multiple  Comparisons  (tabel 5.5)  terlihat  bahwa  rata-rata  kecepatan spermatozoa  antara  kontrol  dengan  P2,  P3, dan  P4  menunjukkan  perbedaan  kecepatan spermatozoa yang signifikan (p<0,05), demikian  juga  untuk  antar  perlakuan  yaitu  : P1 dengan P3, P1 dengan P4, P2 dengan P3, P2  dengan  P4  menunjukkan  perbedaan kecepatan  spermatozoa  yang  signifikan (p<0,05),  akan  tetapi    antara  kontrol  dengan P1,  P1  dengan  P2,  P3  dengan  P4  tidak menunjukkan perbedaan kecepatan spermatozoa yang signifikan (p>0,05)

## Morfologi Spermatozoa
Tabel  6. Hasil  Uji  Normalitas  Kolmogorov- Smirnov  Morfologi  Abnormal  Spermatozoa (%)  Tikus  Putih  Jantan  Dewasa  ( Rattus Norvegicus) setelah    Pemberian  Isoflavon Kedelai Morfologi Abnormal Spermatozoa (%) Mean 23,96 SD 9,78 P 0,97
Berdasarkan Tabel 3 didapatkan hasil uji normalitas  nilai p value  sebesar  0,97  yang berartidata  tersebut  terdistribusi  normal, kemudian  dilanjutkan  dengan  uji ANOVA untuk  melihat  adakah  pengaruh  pemberian
isoflavon kedelai terhadap morfologi abnormal spermatozoa tikus putih jantan.
Tabel  7. Hasil  Uji ANOVA terhadap Morfologi Spermatozoa Abnormal (%) Tikus
Putih  Jantan  Dewasa  ( Rattus  Norvegicus) setelah pemberian Isoflavon Kedelai Kelompok Mean (%) SD p Kontrol P1 P2 P3 P4 9,60 22,20 26,00 29,20 31,40 2,30 4,21 2,65 9,78 9,02 0,001
Dari  tabel  uji ANOVA didapatkan peningkatan  rata-rata  morfologi  abnormal spermatozoa tikus putih jantan. Peningkatan morfologi  abnormal  spermatozoa  mulai  dari kelompok  P1  sampai  kelompok  P4,  nilai p value  sebesar  0,001  (p<0,05)  yang  berarti ada  pengaruh  pemberian  isoflavon  kedelai terhadap  morfologi  spermatozoa.  Untuk melihat signifikasi antar kelompok perlakuan  dilanjutkan  dengan  uji Post  Hoc
Bonferroni .
Tabel 8. Uji Multiple Comparisons Bonferroni  terhadap  Morfologi  Spermatozoa Tikus Putih Jantan Dewasa ( Rattus Norvegicus) setelah  Pemberian  Isoflavon Kedelai (I) Dosis  (J) Dosis Mean Sig (95% Confidence Interval perlakuan perlakuan Difference Lower Bound Upper Bound (I-J) Kontrol P1 -14,00* 0,026 -26,84 -1,16 P2 -16,40* 0,007 -29,24 -3,56 P3 -19,60* 0,001 -32,44 -6,76 P4 -21,80* 0,000 -34,64 -8,96 P1 P2 -2,40 1,000 -15,24 10,44 P3 -5,60 1,000 -18,44 7,24 P4 -7,80 0,697 -20,64 5,04 P2 P3 -3,20 1,000 -16,04 9,64 P4 -5,40 1,000 -18,24 7,44 P3 P4 -2,20 1,000 -15,04 10,64 Hasil  uji  Multiple  Comparisons  (tabel 5.8) didapatkan, morfologi abnormal
spermatozoa antara kelompok kontrol dengan kelompok  P1,P2,P3  dan  P4  menunjukkan perbedaan  yang  signifikan  (p<0,05),  tetapi untuk  antar  kelompok  perlakuan  yaitu  : antara  kelompok  P1  dengan  kelompok  P2, kelompok P1 dengan kelompok P3, kelompok P1 dengan kelompok P4,
kelompok P2 dengan kelompok P3, kelompok  P2  dengan  kelompok  P4  dan kelompok  P3  dengan  kelompok  P4  tidak menunjukkan  perbedaan  morfologi  abnormal spermatozoa yang signifikan (p>0,05)

## PEMBAHASAN
Penelitian terkini mengungkapkan penyebab  infertilitas  adanya  kemungkinan efek  yang  merugikan  dari toksin  lingkungan, seperti : tumbuhan yang dapat mempengaruhi sistem  reproduksi.  Tumbuhan  menghasilkan berbagai  bahan  untuk  manusia,  baik  yang menguntungkan  maupun  yang  merugikan. Salah  satu  bahan  yang  dapat  merugikan adalah  :  fitoestrogen.  Isoflavon  adalah merupakan salah satu kelompok fitoestrogen. (Attanassova 2000). Isoflavon banyak terdapat dalam kedelai. Kedelai mengandung 12  macam  isoflavon  yang  terdapat  dalam bentuk  glukosida  dan  bentuk  aglikon. Isoflavon utama  yang terdapat dalam kedelai adalah:  daidzein,genestein  dan  glisitein. Struktur  molekul  isoflavon  kedelai  mirip dengan  struktur  molekul  estrogen.  Hal  ini menyebabkan isoflavon kedelai dapat berikatan  dengan Receptor  Estrogen (RE), namun afinitas RE ligan tersebut lebih rendah dibanding  estrogen  endogen  sel  epitel  dari jaringan  reproduksi  seperti  kelenjar  susu, ovari dan testis.
Mekanisme aksi biologis estrogen adalah  kemampuannya  untuk  bertindak sebagai estrogen agonis yang dapat berikatan dengan RE dan menstimulasi respon estrogen,  atau  bertindak  sebagai  estrogen antagonis  yang  dapat  berikatan  dengan  RE namun menghambat respon estrogen.
Isoflavon  bersifat  antagonis  ketika  kadar estrogen  tinggi,  sebaliknya  isoflavon  bersifat agonis ketika kadar estrogen rendah. (Robertson 2000).

## Jumlah  Spermatozoa  Akibat  Pemberian Isoflavon Kedelai
Dari  hasil  penelitian  pada  tabel  5.2 menunjukkan  pemberian  isoflavon  kedelai memperlihatkan  respon  terhadap  penurunan rata-rata jumlah spermatozoa tikus mulai dari kelompok  P1  sampai  dengan  P4.  Penurunan rata-rata jumlah spermatozoa tertinggi
terdapat  pada  kelompok  P4  dengan  dosis tertinggi  (5,04  mg).  Pada  kelompok  kontrol rata-rata  jumlah  spermatozoa  adalah:  164,80 juta/ml,  kemudian  terjadi  penurunan  pada kelompok  P1:  96,20  juta/ml,  P2:  82,20 juta/ml,  P3:  81,20  juta/ml  dan  P4:  63,80 juta/ml.
Secara statistik dengan menggunakan uji ANOVA diperoleh p value  sebesar  0,001 ( p <0,05) yang berarti ada pengaruh pemberian isoflavon kedelai terhadap jumlah spermatozoa.  Untuk  mengetahui  perbedaan yang  signifikan  antara  kelompok  kontrol dengan
masing-masing kelompok perlakuan,maka  dilanjutkan  dengan  uji Post Hoc Bonferroni .
Berdasarkan grafik 5.1. antara kelompok kontrol  dengan  kelompok  P1,  kelompok kontrol  dengan  kelompok  P2,  kelompok kontrol  dengan  kelompok  P3,  kelompok kontrol  dengan  P4  menunjukkan  perbedaan yang  signifikan  ( p <  0,05).  Untuk  antar kelompok  perlakuan,  kelompok  P1  dengan kelompok P2, kelompok P1 dengan kelompok P3, kelompok P1 dengan kelompok P4, kelompok P2 dengan kelompok P3, kelompok P2 dengan kelompok P4, kelompok P3 dengan
kelompok  P4  tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan ( p> 0,05).
Jumlah  spermatozoa  yang  dihasilkan sangat tergantung pada proses langsung yang terjadi  selama  proses  spermatogenesis  dalam tubulus  seminiferus.  Bila  spermatogenesis berlangsung  normal  maka  akan  dihasilkan jumlah  spermatozoa  yang  normal  juga. Sebaliknya jika selama
proses spermatogenesis  terjadi  gangguan,  maka perkembangan  sel  spermatogonium  akan mempengaruhi  jumlah  spermatozoa  yang terbentuk.  Hal  ini  sangat  tergantung  pada besarnya  gangguan  yang  terjadi  selama proses spermatogenesis.
Penurunan  jumlah  spermatozoa  setelah pemberian isoflavon kedelai diduga isoflavon bersifat estrogen agonis yang dapat berikatan dengan Receptor Estrogen (RE) dan menstimulasi respon estrogen sehingga dapat mengganggu jalannya spermatogenesis.
Fitoestrogen  dapat  menghambat  kerja  enzim 17-β-  hidroksisteroidoksidoreduktase,  enzim yang  dibutuhkan  untuk  sintesis  testosteron.
Hambatan  kerja  dari  enzim  menyebabkan penurunan  kadar  testosteron  serta  hambatan pada  perkembangan  sistem  saraf  pusat  dan gonodal.  Efek  antiandrogenikfitoestrogen juga  dapat  menghambat  sekresi  LH  pada hipofisis,yang  berakibat  penurunan  kadar sekresi  testosteron  pada  sel  leydig  (Gultekin, 2006).
Hormon  testosteron  sangat  diperlukan untuk  mengawali,mempertahankan  proses spermatogenesis, serta mempertahankan kualitas  spermatozoa  hingga  keluar  dari tubuh.  Penurunan  kadar  testosteron  ini  dapat menyebabkan  proses  spermatogenesis  tidak berjalan optimal,yang pada akhirnya menurunkan  kualitas  spermatozoa,termasuk jumlah  spermatozoa.  (Matsumoto  2001). Jumlah  spermatozoa  yang  dihasilkan  testis tidak  cukup  untuk  mendiagnosa  fertil  atau infertilnya  seseorang.  Karena  adakalanya jumlah  spermatozoa  yang  normal  tetapi  bila memiliki  morfologi  dan  kecepatan  yang kurang  baik  akan  bisa  menyebabkan  infertil. Sebaliknya dengan jumlah spermatozoa yang sedikit tapi memiliki morfologi dan kecepatan  normal  maka  masih  bisa  fertil (Guyton, 1997).
Kecepatan Spermatozoa Akibat

## Pemberian Isoflavon Kedelai
Kecepatan  spermatozoa  adalah  waktu yang  dibutuhkan  untuk  menempuh  jarak tertentu  oleh  seekor  spermatozoa  yang mempunyai  gerak  aktif,  progresif,  dan  lurus maju  kedepan.  Hasil  penelitian  dengan menggunakan  uji  statistik ANOVA diperoleh nilai p value  sebesar  0,001  (p<0,05)  yang berarti  ada  pengaruh  pemberian  isoflavon kedelai  terhadap  kecepatan  spermatozoa. Rata-rata  kecepatan  spermatozoa  kelompok perlakuan  lebih  lambat  bila  dibandingkan dengan kontrol (1,14/detik). Lebih lambatnya kecepatan  spermatozoa  sebanding  dengan dosis isoflavon kedelai yang diberikan selama 48  hari.  Semakin  tinggi  dosis  isoflavon kedelai  yang  diberikan,  semakin  berkurang kecepatan spermatozoa. Penurunan kecepatan yang  paling  tinggi  adalah pada  kelompok  P4 dengan pemberian isoflavon kedelai (5,04mg)
Kecepatan  spermatozoa  ditentukan  oleh berbagai  faktor  diantaranya  bentuk  anatomi spermatozoa, metabolisme dan cairan semen.
Faktor inilah yang nantinya akan mempengaruhi gerakan spermatozoa
sehingga  dihasilkan  suatu  gerak  yang  aktif, progresif dan lurus kedepan.Gerakan spermatozoa  normal  berasal  dari  gerak kepala, leher dan ekor yang berirama teratur. Gerakan  ini  membutuhkan  energi  yang disuplai  dari  bagian  tengah  spermatozoa  dan dialirkan  ke  ekor.  Pada  bagian  itu  terdapat mitokondria  yang  memecah  bahan-bahan tertentu  untuk  mengeluarkan  energi.  Energi dibagian  tengah  disalurkan  ke  distal  atau ekor,  dan  ekor  kemudian  bergerak.  Energi yang  keluar  menyebabkan  dua  macam gerakan.  Pertama  gerakan  bergelombang keujung  ekor,  kedua  bersifat  sirkular.  Energi yang keujung ekor itu tidak lurus kebelakang, tetapi  arahnya  melingkari  batang  tubuh bagian  tengah,  terus  keujung  ekor  (Hafes dkk, 2000).
Adenosin Tri Phospat (ATP) didapatkan dari enzymatic hydrolisis ATP dan menyebarkan gelombang ke flagella spermatozoa.  Fosfatagen  lainnya  (fosfat berenergi  tinggi)  dalam  sel  sperma  dapat bertindak  sebagai  cadangan  pendukung.  Sel- sel  sperma  mengandung  sekitar  150  moles ATP  dan  85  mole  ADP  ditambah  sekitar  20 moles  fruktosa  1,6  –  diphospate  dan  triose phospate yang digabungkan. Fruktosa
dihasilkan  oleh  kelenjer  vesikula  seminalis dan disekresikan pada plasma semen. Banyak asam  dikarboxyli,  tricarboxylic  dan  asam lemak  yang  masuk  ke  dalam  metabolisme sperma  melalui  siklus  krebs  (Hafes  dkk, 2000).
Spermatozoa memiliki sistem
pertahanan  enzimatik  atau  non  enzimatik untuk  menetralkan  pengaruh  toksik  senyawa ROS pada spermatozoa, sehingga ROS hanya terdapat  dalam  jumlah  kecil  yang  diperlukan untuk  menjaga  fungsi  spermatozoa  tetap normal.  Sistem  pertahanan  radikal  bebas, baik  enzimatik  maupun  non  enzimatik, meliputi proteksi terhadap berbagai kompertemen  sel  antara  lain  mitokondria, retikulum
endoplasma, peroksisom, sitoplasma  dan  membran  sel.  Pemeliharaan integritas  sel  tergantung  pada  keseimbangan antara  pembentukan  radikal  bebas  dengan sistem  pertahanan  radikal  bebas.  Terjadinya kerusakan sel dihasilkan oleh
ketidakseimbangan antara pembentukan ROS dan  aktivitas  pertahanan  enzim  antioksidan. (Astuti, 2009).
Penurunan kecepatan spermatozoa diduga  isoflavon  bersifat  sebagai  estogen agonis  dengan  menstimulasi  respon  estrogen sehingga  berpotensi  menimbulkan  gangguan, mengakibatkan  rusaknya  struktur  membran plasma  mitokondria  spermatozoa  akibat proses oksidasi radikal bebas dan menyebabkan  peningkatan  peroksidasi  lipid. Struktur  internal  mitokondria  yang  tidak sempurna sehingga
mengakibatkan terganggunya proses metabolisme spermatozoa.  Terbentuknya  perosidasi  lipid berhubungan
dengan peningkatan pembentukan  radikal  bebas  dan  berkorelasi dengan  penurunan  kecepatan  spermatozoa, penurunan  fosforilasi  protein  pada  aksonem dan berkurangnya ATP intrasel. Ketidakseimbangan antara pembentukan ROS dan aktivitas pertahanan enzim antioksidan ( scavenger ) dari isoflavon kedelai  dapat  mengakibatkan  kerusakan  sel spermatozoa  terutama  membran  plasma mitokondria yang berperan dalam memproduksi  energi  dalam  bentuk  ATP, dimana ATP
dibutuhkan untuk kontraksi/pergerakan spermatozoa.

## Morfologi Spermatozoa Akibat Pemberian Isoflavon Kedelai
Dari  hasil  penelitian  pada  tabel  5.6 didapatkan bahwa pemberian isoflavon kedelai  dengan  beberapa  dosis  yang  berbeda memperlihatkan respon terhadap peningkatan rata-rata  morfologi  abnormal  spermatozoa tikus  putih  jantan,  dimana  mulai  dosis terendah  perlakuan  (P1)  telah  menunjukkan peningkatan  rata-rata  morfologi  abnormal spermatozoa  tikus.  Peningkatan  morfologi abnormal  spermatozoa  sebanding  dengan tingkat  dosis  yang  diberikan  setiap  hari selama  48  hari.  Terlihat  bahwa  semakin tinggi dosis isoflavon kedelai yang diberikan maka  semakin  tinggi  peningkatan  morfologi abnormal  spermatozoa  yang  terjadi.  Pada kelompok kontrol rata-rata morfologi abnormal spermatozoa adalah 9,60%, kelompok  P1  terjadi  peningkatan  menjadi 22,20%.  Peningkatan  terus  terjadi  pada
kelompok  P2  :  26,00%  ,  kelompok  P3  : 29,20%  dan  pada  kelompok  P4  menjadi 31,40%.
Secara  statistik  dengan  menggunakan menggunakan  uji ANOVA diperoleh p value sebesar  0,001  ( p <0,05)  yang  berarti  ada pengaruh pemberian isoflavon kedelai terhadap  morfologi  abnormal  spermatozoa.
Untuk mengetahui perbedaan yang signifikan antara  kelompok  kontrol  dengan  masing- masing
kelompok perlakuan,maka dilanjutkan  dengan  uji Post  Hoc  Bonferroni . Berdasarkan  grafik  5.3.  antara  kelompok kontrol  dengan  kelompok  P1,  kelompok kontrol  dengan  kelompok  P2,  kelompok kontrol  dengan  kelompok  P3,  kelompok kontrol  dengan  P4  menunjukkan  perbedaan yang  signifikan  ( p <  0,05).  Untuk  antar kelompok  perlakuan,  kelompok  P1  dengan kelompok P2, kelompok P1 dengan kelompok P3, kelompok P1 dengan kelompok P4, kelompok P2 dengan kelompok P3, kelompok P2 dengan kelompok P4, kelompok P3 dengan kelompok  P4  tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan ( p> 0,05).
Meningkatnya bentuk spermatozoa yang abnormal  dapat  terjadi  karena  berbagai macam gangguan dalam proses spermatogenesis terutama pada tahap spermiogenesis. Gangguan ini bisa disebabkan  oleh  akibat  hormonal,  radikal bebas  dan  bahan  kimia  (Yatim,  1994). Spermatogenesis dapat terjadi melalui beberapa  tahap  pembelahan.  Tahap  awalnya spermatogonia  akan  mengalami  perubahan menjadi spermatosit primer, kemudian menjadi  spermatosit  sekunder  dan  menjadi spermatid. Sebelum spermatid menjadi spermatozoa ada fase yang dilewati spermatid yang  disebut  fase  spermiogenesis.  Fase  ini terdiri  dari  fase  golgi,  tutup,  akrosom  dan pematangan  bertujuan  untuk  membentuk morfologi  normal  spermatozoa  yang  terdiri dari  kepala,  leher  dan  ekor  yang  normal (Rugh, 1997).
Peningkatan  abnormalitas  morfologi  ini dapat disebabkan karena adanya fitoestrogen, terutama  isoflavon  yang  banyak  terkandung dalam  kedelai.  Pemberian  fitoestrogen  dapat mengganggu jalannya spermatogenesis, karena fitoestrogen  menghambat  kerja  enzim
17-β-hidroksisteroidoksidoreduktase,  enzim yang  dibutuhkan  untuk  sinstesis  testosteron. Hambatan kerja enzim tersebut menyebabkan penurunan  kadar  testosteron  serta  hambatan pada  perkembangan  sistem  saraf  pusat  dan gonodal  (Karahalil  2006  dan  Attanassova et.al 2000).
Efekantiandrogenik  fitoestrogen  juga dapat menghambat sekresi LH pada hipofisis, yang  berakibat  penurunan  kadar  sekresi testosteron  pada  sel  leydig  (Gultekin  2006). Hormon  testosteron  sangat  diperlukan  untuk mengawali,mempertahankan proses spermatogenesis, serta mempertahankan kualitas spermatozoa hingga dikeluarkan dari tubuh.  Penurunan  kadar  testosteron  inilah yang  menyebabkan  proses  spermatogenesis tidak  berjalan  optimal,  yang  pada  akhirnya menurunkan  kualitas  spermatozoa,  termasuk morfologi  spermatozoa  (Glenn  1995  dan Matsumoto 2001).

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  pengaruh  isoflavon kedelai  terhadap  jumlah,  kecepatan  dan morfologi  spermatozoa  tikus  putih  jantan ( Rattus Norvegicus ) dapat disimpulkan bahwa:
1. Terdapat  pengaruh  yang  signifikan pemberian  isoflavon  kedelai  terhadap penurunan  jumlah  spermatozoa  tikus puti jantan (Rattus Norvegicus)
2. Terdapat  pengaruh  yang  signifikan pemberian  isoflavon  kedelai  terhadap penurunan  kecepatan  spermatozoa  tikus putih jantan (Rattus Norvegicus)
3. Terdapat  pengaruh  yang  signifikan pemberian  isoflavon  kedelai  terhadap peningkatan morfologi
abnormal spermatozoa  tikus  putih  jantan (Rattus Norvegicus)

## SARAN
Berdasarkan hasil
penelitian, pembahasan  dan  kesimpulan  diatas  maka disarankan untuk peneliti selanjutnya agar:
1. Melakukan  pemeriksaan  lebih  lanjut terhadap  kadar  hormon  testosteron  yang juga dapat berpengaruh terhadap kesuburan pria
2. Melakukan penelitian lebih lanjut terhadap  histologi  sel  leydig,  sel  sertoli dan spermatogenesis
3. Melakukan  penelitian  tentang  pengaruh isoflavon kedelai terhadap sistem reproduksi wanita.
4. Melakukan penelitian lebih lanjut tentang  pengaruh  isoflavon  kedelai terhadap  sistem  organ  lain  selain  sistem reproduksi

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti S. (2009). Kualitas Spermatozoa Tikus Jantan  yang  Diberi  Tepung  Kedelai Kaya  Isoflavon .  Lampung:  Fakultas Pertanian Universitas Lampung. Adiyono W. (2005). http.//w.w.w.suaramerdeka.com/harian/0 503.28/ragam01htm,  dikutip  tanggal  10 Maret 2011. Attanassova N, Mckinnel. (2000). Comparative Effects Of Neonatal Exposure  of  Male  Rats  to  Potent  And Weak  (Environmental)  Estrogens  On Spermatogenesis  at  Puberty  and  The
Relationship  to  Adult  Testis  Size  and Fertility:  Evidence  for  Stimulatory Effects of Low Estrogen Levels . Axelson  M,  KDR  Setchell.  (1981). The Excretion  Of  Lignans  In  Rats-Evidence For  An  Intestinal  Bacterial  Source  For This  New  Group  Of  Compounds .  FEBS Lett,123:337-342. Budisantoso,  Hieronymus.  (1994). Susu  dan Yogurt Kedelai . Yogyakarta: Kanisius.
Brzozowski  AM  et  al.  (2002). Molecular Basis  Of  Agonism  And  Antagonism  In The Estrogen Receptor . Nature (Lond).389:753-758. Cotroneo.  (2001). Sex  Steroid  Receptor Regulation By Genestein In The Pubertal Rat Uterus, Moll Cell Endocrinol . Carnerro and Kelly. (1998). Sistem Reproduksi  Pria,  dalam  (Tambayong  J,
Alih Bahasa) Histology Dasar , Edisi ke- 8. Jakarta: EGC.
Cunningham  AR,  Klopman  G,  Rosenkranz HS.  (1997). A  Dichotomy  In  The Lipophilicity  Of  Natural  Estrogens,
Xenoestrogens, And  Phytoestrogens. Environ Health Perspect . 105:665-668. Fritz  WA. ( 2002). Dietary  Genistein  Down- Regulates  Androogen  and  Estrogen Receptor Expression in The Rat Prostate, Moll Cell Endocrinol Greenspan, Baxter, 1998. Endokrinologi Dasar  dan  Klinik ,  Ed  IV,  alih  bahasa Caroline  Wujaya,  maulany,  Sonny Samsudin. Jakarta: EGC.
Gultekin  E,  Yildiz  F.  (2006 ).  Introduction to Phytoestrogen,  In  :  Yildiz  F,  Editor, Phytoestrogen  in  Functional  food,  Boca Raton .  Florida:  CRC  Press  Taylor  & Francis Group LLC.
Guyton,  AC,  Hall  JE.  (1997). Buku  Ajar Fisiologi  Kedokteran  Edisi  9 .  Jakarta: EGC.
Glover  A  and  Assinder  S.J.  (2006). Acute Exposure Of Adult Male Rats To Dietary Phytoestrogen  Reduces  Fecundity  And Alters  Epididymal  Steroid  Hormon Receptor  Expression .  Jour.Endoc.189: 565-573. Hugges  I,Woods  HF.  (2003). Phytoestrogen and Health .  London:  Committe on Toxicity of Chemicals in
Food,Consumer Product and The
Environment.
Hafez,  E,  S.E.  (1996). Human  Semen  and Fertility  Regulation  in  Men .  The
Mosbyuni. Hess, R.A. (1999). Spermatogenesis, Overview in Encyclopedia of Reproduction 4: 539-545. Hernawati. (2009). Perbaikan Kinerja Reproduksi  Akibat  Pemberian  Isoflavon Dari Tanaman Kedelai . Bandung: Jurusan  Pendidikan  Biologi  FMIPA Universitas Pendidikan Indonesia Bandung .
Hawkesworth  G,BS  Drasar  dan  MJ  Hill.
(1971). Intestinal  Bacteria  And  The Hidrolysis  Of  Glisidic  Bonds.  J  Med Microbiol . 4:451-459.
Junqueira  LC,  Carneiro J, Kelly  RO.  (1997).
Textbook of Basic Hystology.8th ed=Histologi  dasar  Edisi  8 .  Jakarta:
EGC.
Joannou  GE  et.al.  (1995). A  Urinary  Profil Study  Of  Dietary  Phytoestrogens.The Indentification And Mode Of
Metabolism  Of  New  Isoflavonoids.J Steroid  Biochem  Molec  Biol ,  54:167- 184. Kang KS, Che JH, and Lee YS. (2002). Lack Of  Adverse  Effects  In  The  F1  Offspring Maternally  Exposed  To  Genistein  At Human  Intake  Dose  Level,  Food  Chem Toxical . Karahalil  B.  (2006). Benefits  And  Risk  Of Phytoestrogens,  In:  Yildiz  F,  Editor, Phytoestrogen  In  Functional  Foods,
Boca  Raton .  Florida:  CRC  Press  Taylor & Francis Group LLC.
Kim  H,  Peterson  TG,  Barnes  S.  (1998). Mechanism  Of  Action  Of  The  Soy Isoflavone Genistein : Emerging Role Of Its Effects Through Transforming
Growth  Factor  Beta  Signaling .  Am  J Clin Nutr.68: 1418S-1425S.
Ketaren,  S.  (1986). Pengantar  Teknologi Minyak Dan Lemak Pangan . Jakarta: UI
Press. Kusumawati  D.  (2004). Bersahabat  Dengan Hewan  Coba .  Yogyakarta:  Gajah  Mada University Press . Khaidir  M.  (2006). Studi  Literatur  Penilaian Tingkat Fertilitas dan Penatalaksanaannya  Pada  Pria ,  Jurnal Kesehatan Masyarakat. King  RA.  (2002). Soy  Isoflavones  In  Foods: Processing Effects And Metabolism .  ASA  Tech  Bull,87  (10):  1- 10. Leclerq G, Heuson JC. (1979). Physiological And Pharmacological Effect Of
Estrogen  In  Breast  Cancer .  Biochem
Biophys Acta.560:427-455.
Llewellyn  D.  (2001). Dasar-dasar  Obstetri dan Ginekologi Ed VI . Jakarta:
Hipokrates.
Matsumoto  AM. The  testis.  (2001).  In:  Felig
P,  Frohman  LA,  editors. Endocrinology andmetabolism,  4th  ed .  USA:  The McGraw-Hill Companies Inc.: 635-58. Moeloek N. (1994). Reproduksi dan Embriologi:  dari  Satu  Sel  Menjadi Organisme . Jakarta: Fakultas
Kedokteran Universitas Indonesia.
Muchtadi  D.  (2010). Kedelai  Komponen Bioktif  untuk  Kesehatan .  Bandung: Alpabeta.
Nasution,  A.W.  (1993). Biologi  Kedokteran (Reproduksi) . Padang: Fakultas Kedokteran Universitas Andalas Padang. Nasution,  A.W.  (1999). Andrologi .  Padang: Fakultas Kedokteran Universitas Andalas Padang. Puspasari  D.  (2007). Pengaruh  Pemberian Ekstrak Kedelai Dosis Bertingkat Terhadap Morfologi Spermatozoa Mencit Jantan Strain Balb/C . Semarang: Fakultas Kedokteran Universitas Dipanegoro Semarang. Robertson  KM,  O’Donnell  L,Simpson  ER, Jones MEE. (2002). The Phenotype  Of  Aromatase  Knockout Mouse Reveals Dietary Phytoestrogensimpact  Significantly  On Testis Fuction. Endocrinology .
Rugh.  (1997). The  Mouse  is  Reproduction and Development Mineopolis: Burgess. Rudolf  Stromberg.  (1986). The  Anatomy  Of Laboratory Rat. Baltimore : The
Williams and Wilking Company.
Budidaya  Kedelai .  Bandung:  Pustaka  Buana. Hal 13-15.
Saleh  RA  dan  Agarwal  A.  (2002). Oxidative Stress And  Male
Infertility: From
Research  Bench  To  Clinical  Practice .  J Androl.23(6): 737-52 . Sanocka  D  dan  Kurpisz  M.  (2004). Reactive Oxygen  Species  and  Sperm  Cells. Reprod Biol Endocrinol 2:12. Santoso.S.  (2001). Buku  Latihan  SPSS Statistik  Non  Parametrik .  Jakarta:  Elek Media Komputindo.
Soehadi  Koentjoro.  (1992). Analisis  Sperma . Surabaya: Airlangga University Press. Snyder,  H.E.  and  W.  Kwon,  T.  (1987).
Soyhean  Untiluzatin.  an  AVI  Book . Newyork: Van Nostrad Rein Hold Company.
Setchell  KDR,  Aldercreutz  H.  (1998).
Mammalian  Lignans  and  Phytoestrogen Recent  Studies  On  Their  Formation, Metabolism  and  Biological  Role  In Health And Disease . In: Role of The Gut Flora  in  Toxicity  and  Cancer  (Rowland IR.ed). Pp 315-345.Ac Press. London.UK.
Schmidl  MK,  Labuza  TP.  (2000). Essentials of  Fungctional  Foods .  Gaithersburg
Maryland: Aspen Publisher. Siswono.  (2003). Infertilitas  pada  Pria. Dalam Afriani 2010 Gambaran Kecemasan  Pasangan  Infertil  yang berkunjung  ke  RS  Adenan  Adenin . Medan: Fakultas Keperawatan USU. Trilsky. (2008). Infertilitas Pria . http://trilsky.wordpress.com/2008/01/09 / infertilitas -pria-2/dikutip tanggal
09.05.2011.
Tjitrosomo  and  Sugiri.  (1996). Biologi . Jakarta: Erlangga. Winarsi. (2005). Isoflavon, Berbagai Sumber,
Sifat  dan  Manfaatnya  pada  Penyakit Degeneratif . Yogyakarta: UGM University Press. Watanabe  S,  Gang  Zhoo  V,  Melby  MK, Ishiwata N, Kimira M. (2006). Systematic Review Of Intervention Using Isoflavon Supplement And Proposal For Further Studies.In: Sugono m,editor. Soy In Health And Disease Prevention Boca Raton .  Florida  :  CRC  Press  Taylor  & Francis Group LLC. WHO.  (1994). Penuntun  Laboratorium  Who untuk  Pemeriksaan  Semen  Manusia  dan Interaksi Sperma-Getah Serviks . Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia . Xu  et.al.  (1995). Bioavaibilility  of  soybean isoflavones depens upon gut microflora  in  women .  J  Nutr,  130:798- 801. Yatim.  Wildan.  (1994). Reproduksi  dan Embriologi. Bandung: Tarsito.