## ANALISIS RESPONS STRES OKSIDATIF, ANTIOKSIDAN, DAN ADAPTASI FISIOLOGIS JARINGAN OTAK PASCA INDUKSI HIPOKSIA HIPOBARIK INTERMITEN PADA TIKUS SPRAQUE DOWLEY
Wardaya 1 , Marjani 2 , Asep Edi 3
1 Akademi Keperawatan RSP TNI AU, wrdfaal@yahoo.com
2 Poltekes TNI AU Ciumbuleuit Bandung, mjkhoirunnisa@gmail.com
3 Poltekes TNI AU Ciumbuleuit Bandung, a.ediapt@gmail.com

## ABSTRAK
Penurunan konsentrasi oksigen dapat terjadi pada kondisi fisiologis tubuh maupun patologis. Hipoksia merupakan  salah  satu  faktor  yang  berkontribusi  dalam  patomekanisme  serangan  jantung,  stroke, hipertensi pulmonal dan penyakit-penyakit lain yang dapat menyebabkan kematian. Dasar ilmiah dari latihan  hipoksia  hipobarik  intermiten  pada Hypobaric  chamber  training ini,  terutama  mengenai manfaatnya,  hingga  saat  ini  masih  belum  banyak dipublikasikan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk menganalisis  respons  stres  oksidatif,  antioksidan, dan  adaptasi  fisiologis  jaringan  otak pasca  induksi hipoksia  hipobarik  intermiten  pada  tikus Spraque  dowley. Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental in vivo dengan menggunakan hewan coba. Kegiatan penelitian ini dilaksanakan selama 5  (lima)  bulan  yaitu  mulai  bulan  Agustus  sampai  dengan  Desember.  Tempat  kegiatan  penelitian  di Laboratorium  Aerofisiologi  Lakespra  Saryanto  dan  Laboratorium  Biokimia  Biomolekuler  FKUI Salemba. Penelitian yang telah dilakukan menunjukkan bahwa pada pemeriksaan kadar MDA pada otak tikus didapatkan hasil peningkatan kadar MDA pada kelompok hari ke-21 yaitu tikus yang mengalami tiga kali pemaparan hipoksia hipobarik walaupun tidak bermakna, sedangkan pada kelompok tikus yang mendapat paparan ulang hipoksia hipobarik (kelompok hari ke-7, 14 dan 28), didapatkan kadar MDA yang lebih rendah secara signifikan dibandingkan kontrol (p<0,005).
Kata Kunci: Adaptasi fisiologis, Antioksidan, Hipoksia hipobarik intermiten, Stres oksidatif

## ABSTRACT
The  decrease  in  oxygen  concentration  level  could  occur  in  both  physiological  and  pathological conditions. Hypoxia was one of the factors that contributed to the pathomechanism of heart attacks, strokes,  pulmonary  hypertension  and  other  diseases  that  could  cause  death.  The  scientific  basis  of intermittent  hypobaric  hypoxic  training  in  Hypobaric  chamber  training,  especially  regarding  its benefits, has not been widely publicized. The purpose of this study was to analyze the oxidative stress responses,  antioxidants,  and  physiological  adaptations  of  brain  tissue  after  intermittent  hypobaric hypoxic  induction  in  Spraque  Dowley  rats.  This  research  was  an  in-vivo  experimental  study  using experimental  animals.  These  research  activities  was  carried  out  for  5  (five)  months,  from  August  to December.  and conducted in the Lakespra Saryanto Aerophysiology Laboratory and the Biomolecular Biochemistry  Laboratory  Universitas  Indonesia  Medical  Faculty  Salemba.  Results  of  this  research showed an increased level of MDA levels in the 21st day group are mice that experienced three times hypobaric  hypoxic  exposure  even  though  it  was  not  significant,  whereas  in  the  group  of  mice  that received repeated exposure to hypobaric hypoxia (day group 7th, 14th and 28th), significantly lower MDA levels were obtained compared to controls (p <0.005).
Keywords:  Physiology  adaptation,  antioxidant,  intermitten  hypoxia  hypobaric,  oxidative stress.

## PENDAHULUAN
Hipoksia  sistemik,  baik  kontinyu  mau  pun intermiten,  pada  tahap  awal  akan  menimbulkan respons pada sistem kardiovaskuler dan respirasi yang  kemudian  jika  berlangsung  terus  akan menimbulkan responss lanjutan pada target organ dari kedua sistem tersebut, termasuk otak.
Otak  selain  berisi  sel  neuron  juga  terdapat neuroglia.  Neuroglia  merupakan  sel  penyokong dan  pelindung  dari  sel  neuron.  Jumlah  sel  glia hampir dua kali lipat sel neuron. Karena anatomi dan fungsinya, otak sangat sensitif terhadap keku- rangan pasokan oksigen. Kebutuhannya terhadap oksigen  juga  sangat  tinggi  (untuk  berat  yang hanya  2%  dari  berat  tubuh,  otak  mengkonsumsi 20% dari total oksigen tubuh). Sementara itu lebih dari  50%  kebutuhan  energi  sel  otak  digunakan untuk  transpor  ion  melewati  membran  sel  otak dalam rangka mempertahankan homeostasis ion di tingkat  sel.36  Karenanya,  hanya  dalam  beberapa menit  sejak  pasokan  oksigen  berkurang  atau terputus,  otak  bisa  mengalami  iskemia.  Akibat paparan  hipoksia,  otak  mudah  mengalami  stres oksidatif.  Hal  tersebut  tidak  terlepas  akibat tingginya  jumlah  kalsium  yang  melewati  mem- bran  sel  neuron,  terdapatnya excitatory  amino acid ,  tingginya  kebutuhan  oksigen  per  unit  jari- ngan  otak, dan  adanya  sejumlah  neurotransmiter yang autoxidizable  molecules .  Selain  itu  juga karena cairan otak tidak dapat mengikat besi yang terlepas,  dan  mudah  terjadinya  peroksidasi  lipid akibat membran sel neuron terdiri dari asam lemak tak  jenuh,  serta  terbentuknya  H202  pada metabolisme di otak (misalnya oksidasi dopamin) juga memudahkan otak mengalami stres oksidatif. Telah  diketahui  juga  bahwa  pertahanan  anti oksidan  di  otak  cukup  rendah,  disisi  lain  ada kemampuan mikroglia untuk membentuk superoksida dan H202, dan terdapatnya sitokrom P450  yang  isoformnya  bisa  membentuk  SOR (senyawa  oksigen  reaktif).  Semua  itu  membuat proses  nekrosis  dan  apoptosis  di  otak  mudah terjadi pada kondisi hipoksia.
Senyawa  oksigen  reaktif  (SOR)  merupakan oksidan  (senyawa  pengoksidasi)  yang  sesuai namanya  berasal  dari  oksigen  atau  turunan oksigen  yang  mudah  bereaksi.  SOR  dapat mengoksidasi dan merusak sel, termasuk sel otak, termasuk  diantaranya  yang  terpenting yaitu  lipid
yang merupakan bagian dari membran sel, protein dan  DNA.  SOR  sebagian  diantaranya  berbentuk radikal seperti radikal hidroksil, peroksil, dan ion superoksida,  dan  sebagian  lagi  bukan  radikal. Karena  itulah  kita  sering  menyebutnya  sebagai radikal  bebas  ( free  radical ).  Umumnya  radikal bebas  lebih  berbahaya  (yang  paling  berbahaya adalah  radikal  hidroksil)  dibanding  non  radikal, karena  dapat  menimbulkan  reaksi  berantai8. Beberapa  penelitian  melaporkan  bahwa  paparan tekanan  hipobarik  dapat  menyebabkan  pening- katan  kadar  SOR.  Hal  ini  disebabkan  karena rendahnya  tekanan  parsial  oksigen  pada  kondisi hipobarik  yang  akan  mengakibatkan  hipoksia. Peningkatan produksi SOR pada keadaan hipoksia terjadi  di  kompleks  III  mitokondria.37  Ini  yang akan  memberi  sinyal  pada  stabilisasi hypoxia- inducible  factor- 1α (HIF- 1α),  faktor  transkripsi yang  berperan  sebagai  regulator  utama  untuk homeostasis  oksigen24.  Di  samping  berperan dalam  sinyal  hipoksia,  peningkatan  SOR  yang berlebihan  juga  dapat  menimbulkan  stres oksidatif.  Sifat  reaktif  SOR  dapat  menyerang makromolekul  di  dalam  tubuh  seperti  lipid, protein  dan  DNA  yang  menyebabkan  kerusakan sel. Lipid akan mengalami peroksidasi oleh SOR dan menghasilkan peroksida lipid (malondialdehid).  Karena  itulah,  peroksida  lipid (MDA)  banyak  digunakan  untuk  mendeteksi kerusakan  akibat  peroksidasi  lipid  yang  terjadi akibat  asam  lemak  tidak  jenuh  jamak  dari membran  atau  lipoprotein.  Dampak  SOR  juga dialami  oleh  makromolekul  lain  seperti  protein, polisakarida dan DNA.
Ikatan  peptida  dan  rantai  samping  asam amino  pada  protein  akan  mengalami  kerusakan akibat SOR dan menghasilkan senyawa karbonil. Serangan  SOR  terhadap  karbohidrat  juga menghasilkan  kelompok  senyawa  yang  sama. DNA  juga  akan  mengalami  serangan  oleh  SOR dan menghasilkan senyawa 8-OhdG.
Makhluk  hidup  dilengkapi  dengan  sistem antioksidan  di  seluruh  tubuh,  termasuk  juga  di otak, untuk mencegah dan meredam aktifitas SOR yang  merupakan  produk  normal  dari  proses biologis. Antioksidan sendiri terdiri dari dua jenis, yaitu  antioksidan  yang  mencegah  terhimpunnya SOR  secara  berlebihan  ( preventive  anti  oxidant ) dan  antioksidan  yang  berfungsi  memutus  reaksi
berantai SOR ( chain-breaking antioxidant ). Anti- oksidan yang dikenal saat ini adalah yang berupa enzim-enzim,  seperti superoksida  dismutase (SOD), glutation  peroksidase dan katalase . Superoksida  dismutase (SOD)  merupakan  enzim yang  mengurai  radikal  bebas  anion  superoksida (O2• -)  yang  sangat  reaktif  menjadi  hidrogen peroksida (H2O2) yang kurang reaktif. Hidrogen peroksida selanjutnya didetoksifikasi menjadi air oleh  enzim  katalase  dan  glutation  peroksidase. Katalase  akan  mengkatalisis  hidrogen  peroksida menjadi  air  dan  oksigen.  Sementara  glutation dalam  bentuk  tereduksi  (GSH)  akan  mendo- nasikan  elektron  ke  SOR  sehingga  SOR  yang menjadi penerima elektron akan menjadi senyawa yang tidak reaktif lagi.
Iskemia  otak,  adalah  suatu  keadaan  dimana aliran  darah  ke  otak  tidak  adekuat  dengan kebutuhannya  untuk  mendapatkan  oksigen  dan nutrien dalam rangka mempertahankan integritas metabolik  neuronal  (40%  sampai  45%  dari  total cerebral  metabolic  rate  for  oxygen  consumption [CMR02])  dan  fungsi  (55%  to  60%  CMR02). Otak  akan  mengalami  hipoksia  jika  pasokan oksigen  yang  kurang,  yang  berlanjut  menjadi iskemia.38  Aliran  darah  ke  otak  yang  tidak adekuat  lebih  lanjut  akan  menyebabkan  matinya sel  otak/infark  serebri.  Iskemia  otak  akan menyebabkan gangguan dalam metabolisme otak, turunnya metabolic  rate ,  dan  terjadinya  krisis energi di otak. Krisis energi dimulai ketika usaha untuk  mempertahankan  konsumsi  energi  seperti pada  keadaan  normoksia  tidak  dapat  dilakukan akibat  keadaan  hipoksia  berat.  Dengan demikian maka  produsen  ATP  di  tingkat  sel  tidak mencukupi,  sehingga  cadangan  fosfat  berenergi tinggi  akan  digunakan,  Ketika  ATP  mencapai tingkat dibawah 50 % dari kondisi normal, maka membran  sel  akan  mengalami  depolarisasi, sehingga gradien ion akan hilang26. Dengan tidak adanya  ATP,  otomatis  sel  akan  melakukan responss  darurat  karena  bisa  menyebabkan kematian  sel.  Kondisi  ketidakseimbangan  energi akan  berwujud  dalam  bentuk  perubahan  jumlah metabolit energi yang dipakai. Fosfokreatin(PCr) akan  berfungsi  sebagai  dapar  ATP.  Namun akhirnya  cadangan  PCr  pun  akan  turun  drastis hingga 10-20% dari nilai normal , dan kemudian ATP akan didegradasi menjadi ADP, dan AMP.

## METODE
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  in  vivo  dengan  menggunakan hewan coba. Kegiatan penelitian ini dilaksanakan selama 5 (lima) bulan yaitu mulai bulan Agustus sampai  dengan  Desember.  Tempat  kegiatan penelitian di Laboratorium Aerofisiologi Lakespra Saryanto dan Laboratorium
Biokimia Biomolekuler FKUI Salemba.
Prosedur penelitian:
1. Tikus  ditempatkan  dianimal  house  selama  1 minggu untuk adaptasi, makan dan minum ad libitum.
2. Induksi  hipoksia  hipobarik  sesuai  prosedur hipoksia  hipobarik  intermiten  dari  Mulyawan (2012)  yang  dimodifikasi:  Sampel  dibagi menjadi 5 kelompok, yaitu kelompok kontrol, kelompok  perlakuan  1  kali pemaparan,  2 kali pemaparan, 3 kali pemaparan dan 4 kali pema- paran, dengan tenggang waktu tiap pemaparan adalah 7 hari. Perlakuan yang diberikan adalah tikus dimasukkan ke dalam hypobaric chamber dengan  simulasi  sesuai  dengan  latihan  para penerbang, yaitu sebagai berikut:
a. Naik  dari  ketinggian  0  kaki  (setinggi permukaan laut/ground level) ke ketinggian 35.000  kaki  dengan  rate  of  ascent  5.000 kaki/menit.  Ketinggian  35.000  kaki  ini dipertahankan selama 1 menit.
b. Kemudian  turun  dari  ketinggian  35.000 kaki ke 30.000 kaki dengan rate of descent 5.000  kaki/menit,  dan  ketinggian  ini dipertahankan selama 3 menit.
c. Kemudian turun lagi dari ketinggian 30.000 kaki ke 25.000 kaki dengan rate of descent 5.000  kaki/menit,  dan  ketinggian  ini dipertahankan selama 5 menit.
d. Kemudian turun lagi dari ketinggian 25.000 kaki ke 18.000 kaki dengan rate of descent 5.000  kaki/menit,  dan  ketinggian  ini dipertahankan  selama  30  menit.  Setelah selesai  dilakukan  simulasi  penurunan  ke ground level.
3. Setelah  sampai  di  ground  level,  dilakukan pemeriksaan fungsi neuromuscular, vestibulomotorik,  kompleksmotorik,  deficit neurologis dan fungsi kognisi.
4. Dilakukan  pematahan  tulang  leher  tikus, dilakukan pembedahan jaringan otak tikus.
5. Jaringan  otak  dilakukan  pemeriksaan  gam- baran  stress  oksidatif  (kadar  MDA,  kadar karbonil).
6. Jaringan otak dilakukan pemeriksaan gambaran  aktifitas  antioksidan  (aktivitas spesifik katalase, aktivitas spesifik gluthation). 7. Jaringan otak dilakukan pemeriksaan imunohistokimia untuk analisisglutamat dengan anti NMDAR1 antibody (ab17345). 8. Jaringan otak dilakukan pemeriksaan imunohistokimia untuk analisis GABA dengan anti GABA B receptor antibody (ab55051).
9. jaringan  otak  dilakukan  pemeriksaan  protein PSD95.

## HASIL
1. Penelitian  yang  telah  dilakukan  menunjukkan bahwa  pada  pemeriksaan  kadar  MDA  pada otak tikus didapatkan hasil peningkatan kadar MDA  pada  kelompok  hari  ke-21  yaitu  tikus yang mengalami tiga kali pemaparan hipoksia hipobarik  walaupun  tidak  bermakna,  sedang- kan  pada  kelompok  tikus  yang  mendapat paparan  ulang  hipoksia  hipobarik  (kelompok hari ke-7, 14 dan 28), didapatkan kadar MDA yang  lebih  rendah  secara  signifikan  diban- dingkan kontrol (p<0,005).
2. Pada  pemeriksaan  karbonil  otak  didapatkan hasil yang lebih rendah secara tidak bermakna pada kelompok kelompok hari ke-7, 14, 21 dan 28 dibandingkan kontrol (p=0,095).
3. Pada pemeriksaan kadar GSH otak didapatkan hasil yang lebih tinggi pada kelompok hari ke- 7,  14,  21  dan  28  dibandingkan  kelompok kontrol.  Tetapi  perbedaan  secara  bermakna peningkatan kadar GSH yaitu pada kelompok hari  ke-14  dan  28  dibandingkan  kontrol (P<0,05), sedangkan pada kelompok hari ke-7 dan 21 terjadi peningkatan kadar GSH secara tidak bermakna (p=0,076 dan 0,175). Hasil ini menunjukkan terjadinya peningkatan aktivitas antioksidan  dalam  sel  otak  tikus  dalam upayanya mengatasi stress oksidatif.
4. Pada  pemeriksaan  kadar  Katalase  otak didapatkan  hasil  lebih  rendah  dibandingkan kelompok  kontrol  dan  berbeda  secara bermakna pada kelompok hari ke-7, 14 dan 28 (p<0,05), sedangkan pada kelompok hari ke-21 kadar katalase tidak berbeda secara bermakna.

## PEMBAHASAN
Latihan  hipoksia  hipobarik  intermiten  pada Hypobaric  chamber  training ini,  terutama mengenai  manfaatnya,  hingga  saat  ini  masih belum  banyak  dipublikasikan.  Baru  ada  2 penelitian (kedua-duanya dari Lakespra Saryanto) terkait  hipoksia  hipobarik  intermiten  pada Hypobaric chamber training ini, yaitu penelitian Hidayat  dkk  (2011)  yang  meneliti  efek  paparan hipoxia  preconditioning terhadap  stress  oksidatif dan apoptosis pada sel jantung tikus dan penelitian Mulyawan (2012) yang meneliti respons adaptasi di tingkat biomolekuler yang terjadi pada jaringan otak  tikus  terhadap  induksi  hipoksia  hipobarik intermiten.  Padahal  telah  diketahui  terbentuknya radikal bebas sebagai efek negatifnya, merupakan salahsatu kondisi yang dapat terjadi pada hipoksia di ketinggian,sehingga penelitian respons adaptasi fisiologis  jaringan  otak  pasca  induksi  hipoksia hipobarik intermiten sangat diperlukan.
Hipoksia di ketinggian merupakan salahsatu bidang  kajian  fisiologis  penting  di  dunia kedokteran penerbangan. Terbang memungkinkan untuk  makin  tinggi  akibat  kemajuan  teknologi, namun penerbangan seperti itu memberikan resiko terjadinya  hipoksia.  Pesawat-pesawat,  baik pesawat  militer,  patroli,  mau  pun  komersial, dilengkapi  dengan  alat-alat  canggih pressurized cabin untuk  melindungi  awak  pesawat  dan penumpang dari resiko dekompresi dan hipoksia. Namun  kerusakan  alat-alat  di  pesawat  dapat menimbulkan hilangnya tekanan kabin yang dapat mengakibatkan  bencana,  dan  karenanya  awak kabin  harus  waspada  mengenai  resiko  itu  : mengenali  gejalanya  dan  melakukan  tindakan yang tepat.42,43 Federal Aviation Administration (FAA),  regulator  penerbangan  sipil  di  Amerika Serikat  mendefinisikan  hipoksia  (hipobarik) sebagai  suatu  kondisi  kekurangan  oksigen  untuk memenuhi kebutuhan tubuh yang mengakibatkan terganggunya  fungsi  otak  dan  organ  lainnya66 Hipoksia menimbulkan gangguan di penglihatan, pengambilan  keputusan,  kontrol  motrorik  dan berakibat  tejadi  hendaya  (inkapasitasi),  bahkan kematian4. Efek hipoksia terlihat pada orang sehat setelah  mencapai  ketinggian  10000  kaki  /3048 m.44  Pada  sebagian  individu  bahkan  sudah nampak  pada  ketinggian  yang  lebih  rendah. Secara umum, gejala awal berupa pernafasan yang
cepat, sakit kepala ringan sampai berat, rasa lelah, mual, gangguan tingkah laku (eforia, iritabilitas), bicara  ngaco,  dan  turunnya  kemampuan  berfikir dan analisa (FAA, 2002b).
Banyak  faktor  yang  dapat  menyebabkan Stress  oksidatif  pada  manusia,  salah  satunya adalah  kondisi  hipoksia.  Radical  oxygen  species (ROS)  dibentuk  dan  dilepaskan  dalam  kondisi hipoksia  terutama  dari  mitokondria.  Kondisi hipoksia  mengakibatkan  peningkatan  pemben- tukan  ROS  di  dalam  sel.  Sumber  ROS  dalam kondisi hipoksia terutama berasal dari mitokondria  dan  aktivitas  enzim  NADP(H) oksidase  dan  xantin  oksidase.  Peningkatan pembentukan ROS ini tidak langsung menimbulkan kondisi stres oksidatif bagi sel. Sel akan  menjaga  keseimbangan  dengan  mening- katkan  pembentukan  senyawa  atau  reaksi  yang bersifat anti oksidan.
Beberapa  senyawa  yang  sering  dijadikan petunjuk  adanya  kerusakan  akibat  radikal  bebas ini  adalah  malondialdehid  (MDA),  glutation (GSH),  karbonil  dan  enzim  katalase.  MDA merupakan metabolit  hasil  peroksidasi  lipid oleh radikal  bebas.  GSH  memegang  peranan  dalam reaksi  penguraian  peroksida  menjadi  air.  Enzim katalase  memiliki  peranan  proses  penguraian peroksidase  menjadi  air  dan  oksigen.  MDA merupakan  salah  satu  senyawa  yang  dapat menggambarkan aktivitas oksidan (radikal bebas) dalam  sel,  sedangkan  glutation  dan  katalase menggambarkan aktivitas anti oksidan dalam sel. Keadaan  stress  oksidatif  biasanya  terjadi  bila jumlah  radikal  bebas  lebih  tinggi  dibandingkan jumlah antioksidan dalam tubuh.
Kadar  GSH  dan  aktivitas  enzim  katalase memiliki korelasi yang bermakna dan berbanding terbalik di organ otak pada penelitian ini. Terlihat belum  terjadi  pembentukan yang berlebihan  dari enzim  katalase  sebagai  usaha  tubuh  untuk mengatasi peningkatan senyawa oksidan. Tampaknya  GSH  lebih  berperan  dalam  sifatnya sebagai antioksidan dibandingkan katalase.
Hasil  penelitian  ini  menggambarkan  adanya proses  adaptasi  sel-sel  dalam  menghadapi lingkungan  hipoksia.  Sel-sel  menurunkan  proses metabolismenya  sehingga  energi  yang  ada  dapat dimanfaatkan untuk proses bertahan. Penelitian ini menjelaskan bahwa selain menimbulkan
peningkatan  terhadap  konsentrasi  ROS,  kondisi hipoksia  juga  akan  meningkatkan  pembentukan antioksidan  dalam  sel.  Pada  penelitian  adaptasi hipoksia, sel yang telah beradaptasi memiliki daya tahan yang lebih baik terhadap serangan iskemia ataupun  hipoksia  sesudahnya.  Hal  ini  terjadi karena  tubuh  telah  meningkatkan  pembentukan senyawa anti oksidan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan, maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut:
1. Paparan  hipoksia  hipobarik  intermitten menyebabkan  penurunan  stres  oksidatif  pada otak  tikus,  hal  ini  terbukti  adanya  penurunan kadar MDA pada kelompok hari ke-7, 14 dan 28,  sedangkan  penurunan  kadar  karbonil terjadi  pada  semua  kelompok  tikus  yang mendapatkan  paparan  hipoksia  hipobarik intermitten.
2. Penurunan  stres  oksidatif  pada  paparan  ulang hipoksia  hipobarik  intermitten  terjadi  karena adanya  adaptasi  terhadap  kondisi  hipoksia yaitu dengan cara peningkatan aktivitas enzim antioksidan seperti GSH.
3. Paparan  ulang  hipoksia  hipobarik  intermitten dapat melindungi jaringan otak terhadap stres oksidatif,  hal  ini  disebabkan  karena  adanya mekanisme adaptasi jaringan terhadap kondisi hipoksia.
4. Status antioksidan pada otak berbeda, terbukti dari  pola  kadar  GSH  yang  meningkat, sedangkan ekspresi enzim antioksidan katalase yang  menurun.  Hal  ini  disebabkan  regulasi ekspresi  antioksidan  yang  berbeda  terhadap kondisi  banyaknya  paparan  hipoksia  yang dialami hewan coba.

## REFERENSI
Semenza GL. Hypoxia inducible factor 1: master regulator of O2 homeostasis.2000;588-594
Zhu et all. Apoptosis-inducing factor is a major contributor to neuronal  loss  induced  by  neonatal  cerebral  hypoxia- ischemia.  Cell  death  and  differentiation.2007;  14:775- 784
Ke Q, Costa M. hypoxia inducible factor 1 (HIF-1).molecular pharmacology.2006; vol 70:no.5
Lau  A,  Tymianski.  Glutamate  receptors,  neurotoxicity  and neurodegeneration.  Pflugers  Arch-Eur  J  Physiol.  2010; 460:525-542
Tian  X.  Analysis  of  ischemia  neuronal  injury  in  Cav2.1 channel  α1  subunit  mutant  mice.  Biochemical  and biophysical research communications. 2013; 434: 60-64 Wanandi SI, Dewi S, Paramita D. ekspresi relatif mRNA HIF
1α  pada  jantung,  otak  dan  darah  tikus  selama  induksi hipoksia sistemik. Makara sains 2006; 13:185-188 Wenger R. cellular adaptation to hypoxia:O2 sensing protein hydroxylase, hypoxia inducible transcription factors and O2 regulated gene expression. The FASEB Journal. 2002; 1151-1162.
Jones NM, Lee EM, Brown TG, Jarrot B, Beart PM. Hypoxic preconditioning  produces  differential  expression  of hypoxia inducible factor 1α (HIF 1α) and its regulatory enzyme HIF prolyl hydroxylase 2 in neonatal rat brain. Neuroscience letters. 2006;404:72-77
Applehoff  R,  et  all.  Differential  function  of  the  prolyl hydroxylases PHD1, PHD2 and PHD3 in the regulation of  hypoxia  inducible  factor.  The  journal  of  biological chemistry.2004; 279:38458-38465
Chavez  J,  Agani  F,  Pichiule  P,  Lamanna  J.  expression  of hypoxia inducible  factor  1A  in  the  brain  of  rats during
chronic hypoxia. Japp Physiology.org. 2000 Shao  G,  et  all.  Hypoxia  preconditioning  improves  spatial cognitive ability in mice. Neurosignals 2006.07(15):314- 321
Hidayat  A,  Wiradisastra  K,  Hernowo  B,  Achmad  TA.
Paparan  hipoksia  hipobarik  intermitten  menurunkan stress  oksidatif  dan  apoptosis  sel  jantung  pada  tikus jantan Sprague dawley. J Indon Med Assoc. 2011: vol 61 no 7
Bernaudin  et  all.  Normobaric hypoxia  induced tolerance  to focal permanent cerebral ischemia in association with an increased expression of hypoxia inducible factor 1 and its target genes, eritropoietin and VEGF, in the adult mouse brain.  Journal  of  cerebral  blood  flow  and  metabolism. 2002;22:393-403
Rybnikova EA, Khoizai. Expression of early gene proteins, structure changes in brain neurons in hypobaric hypoxia and reoxigenation and correcting effects  of preconditioning. Neurosci and behave physiol.2005;35(4):383-388