## SENYAWA BIOAKTIF BAKTERI SIMBION PADA KARANG LUNAK Sinularia flexibiliS DAN S. polydactyla
BACTERIAL SYMBIONT BIOACTIVE COMPOUND OF SOFT CORAL Sinularia flexibilis AND S. polydactyla
Rozirwan 1* , Dietriech G. Bengen 2 , Chaidir 3 , Neviaty P. Zamani 2 , dan Hefni Effendi 2 1 Program Studi Ilmu Kelautan, FMIPA, Universitas Sriwijaya, Ogan Ilir, Sumatera Selatan
2 Departemen Ilmu dan Teknologi Kelautan, FPIK, Institut Pertanian Bogor, Bogor
3 Pusat Teknologi Farmasi dan Medika, BPPT, Jakarta *E-mail: rozirwan@gmail.com

## ABSTRACT
Symbiont  bacteria  on  soft  coral  can  produce  bioactive  compounds  that  plays  an  important  role  in chemical  ecology  and  as  a  marine  natural  product. The  purpose  of  this  study  was  to  find  and characterize the antibacterial activities of active compounds extracted from bacterial symbionts of soft coral  S.  flexibilis  and  S.  polydactyla.  The  methods  used  in  this  study  were  culture  and  isolation  of bacterial  symbionts,  extraction  of  compounds,  antibacterial  bioassay,  and identification  of  bioactive compounds  using  the  LC-MS  analyses.  Four  isolates  of bacterial  symbionts  were  obtained  from  two samples  of  soft  corals,  2  isolates  of  Pseudomonas  diminuta  (A1)  and  Edwardsiellla  hoshinae  (A2) from  soft  coral  S.  flexibilis,  and  2  isolates  of  E.  hoshinae  (B1)  and  P.  acidovorans  (B4)  from  S. polydactila.  Antibacterial  activity  were  found  only  from  the  extracts  of  bacterial  symbionts  P. diminuta (A1) and from  S. flexiblis about 10.16 ± 0.3mm (for B. subtilis), 8.66 ± 0.8 mm (E. coli) and 9.86  ±  1.7mm  (S.  dysentri).  No  antibacterial  activity  found  from  the  extracts  of  S.  polydactyla.  The results  of  LC  MS  analysis  showed  that  the  group  of  diterpenes  sinularin  produced  by  soft  corals  S. flexibilis and bacterial symbionts isolates of P. diminuta (A1).
Keywords: Bacterial Symbiont, Bioactive Compound, Antibacterial Activity, Soft Coral, Sinularia flexibilis, Sinularia polydactyla

## ABSTRAK
Bakteria  simbion  pada  karang  lunak  dapat  menghasilkan  senyawa  bioaktif  yang  berperan  penting secara ekologi kimia dan sebagai produk alamia laut. Penelitian ini bertujuan untuk menemukan isolat bakteri  simbion  dari  karang  lunak  spesies S.  flexibilis dan S.  polydactyla yang  berpotensi  meng- hasilkan  senyawa  bioaktif.  Metodologi  penelitian  ini  dilakukan  seperti  mengisolasi,  karakterisasi bakteri  simbion,  kulturisasi  dan  ekstraksi,  bioassai  antibakteri  dan  identifikasi  senyawa  bioaktif menggunakan  analisis  LC-MS.  Hasil  menunjukkan,  ada  empat isolat  bakteri  simbion telah  diperoleh dari  dua  sampel  karang  lunak,  dimana  2  isolat Pseudomonas  diminuta (A1) dan Edwardsiellla hoshinae (A2)  dari  spesies S.  flexibilis, dan  2  isolat E.  hoshinae (B1) dan P.  acidovorans (B4) dari spesies S.  polydactila .  Aktivitas  antibakteri ditemukan  hanya  pada  bakteri  simbion P.  diminuta (A1) dari spesies S. flexibilis berkisar 10.16 ± 0.3mm (untuk B. subtilis), 8.66 ± 0.8 mm (E. coli) dan 9.86 ± 1.7mm (S. dysentri), dan tidak ditemukan dari isolat spesies S. polydactyla . Berdasarkan hasil analisis LC-MS menunjukkan kelompok senyawa diterpen Sinularin yang dihasilkan karang lunak S. flexibilis ditemukkan juga dihasilkan isolat bakteri simbion P. diminuta (A1).
Kata kunci: Bakteri Simbion, Karang Lunak, Senyawa Bioaktif, Sinularia flexibilis, Sinularia polydactyla

## I. PENDAHULUAN
Pemanfaatan  senyawa  bioaktif  pada karang  lunak  secara  terus  menerus  dapat mengancam kelestariannya di perairan karena pertumbuhan biota ini relatif lambat. Menurut Arafat  (2009)  laju  pertumbuhan  spesies Sinuaria  dura berkisar  0,07-0,24  cm  per bulan dan lebar 0,08-0,28 cm per bulan. Oleh karena  itu,  berbagai  upaya  dilakukan  dalam mempertahankan  sumberdaya  tersebut  di alam,  diantaranya  kajian  mikroorganisme yang  bersimbiosis  dengan  karang  lunak  itu. Bakteri  simbion  pada  karang  diduga  dapat menghasilkan  senyawa  bioaktif  yang  mirip dengan karang lunak sebagai inangnya.
Isolat  bakteri  simbion Pseudomonas sp  yang  diperoleh  dari  karang  lunak S. polydactyla menunjukkan  aktivitas  anti- bakteri  dengan  terdeteksinya  zona  inhibisi dengan diameter berkisar 15,76 mm (Radjasa et  al., 2007).  Pada Sinularia sp  juga  berhasil diisolat  dua  bakteri  simbion  yang  mem- produksi  senyawa  aktif  yang  menunjukkan sebagai  antibakteri  Tuberculosis  (Sulistiyani et  al., 2010).    Apabila  terbukti  senyawa bioaktf  pada  isolat  bakteri  simbion  mirip dengan  inangnya  maka  produksi  senyawa bioaktif akan lebih mudah dan tidak merusak habitat  karang  lunak  karena  bakteri  mudah dikembangbiakkan  atau  dikultur  di  laborato- rium  sehingga  dapat  menghasilkan  senyawa bioaktif  dalam  jumlah  yang  banyak.  Isolat bakteri  simbion  dari  karang  lunak  berhasil ditumbuhkan  dalam  media  Marine  Agar (Zheng et al., 2005). Begitu juga bakteri sim- bion  pada  spon  juga  berhasil  dengan  mudah tumbuh  dalam  media  Zobell  (Anand et  al., 2006).  Media  agar  zobell  2216E  juga digunakan dalam mengisolasi bakteri simbion dari karang lunak Sinularia sp dan Lobophytum sp  (Radjasa et  al., 2007; Sulistiyani et al., 2010).
Isolasi  senyawa  bioaktif  pada  bakteri simbion ini dapat menjadi salah satu alternatif dalam  upaya  pemanfaatan  senyawa  bioaktif pada  karang  lunak  tanpa  merusak  ekosistem perairan.  Kajian  ini  dilakukan  untuk  mene-
mukan  jenis-jenis  bakteri  simbion  penghasil senyawa  bioaktif  pada  karang  lunak S. flexibilis dan S.  polydactyla dan  menentukan kemiripan  senyawa  bioaktif  yang  diproduksi keduanya.

## II. BAHAN DAN METODE

## Pengambilan  sampel  karang  lunak
Sinularia  flexibilis dan S.  polydactyla dilakukan  pada  bulan  Maret  2014  dengan menggunakan  alat  selam  SCUBA  yang berlokasi  di  perairan  Pulau  Tegal,  Teluk Lampung  (Gambar  1).  Sampel  bakteri  sim- bion ditumbuhkan, dimurnikan dan diidentifi- kasi  di  Laboratorium  Mikrobiologi  FMIPA, Universitas  Sriwijaya  pada  bulan  Maret- Agustus  2014.  Kultur  dan  bioassai  aktivitas antibakteri  dilakukan  di  Laboratorium  Bio- logi Laut FMIPA, Universitas Sriwijaya pada bulan  Agustus-September  2014.  Analisis  ke- ragaman  senyawa  bioaktif  dilakukan  di  Lab tiap  BPPT  Serpong  pada  bulan  November 2014 sampai Maret 2015.

## 2.2. Penanganan Sampel dan Penumbuhan Bakteri Simbion
Bakteri  simbion  pada  karang  lunak diambil  pada  bagian  endofitik  dengan  prose- dur meliputi: sampel karang dicuci dengan air laut steril. Sampel diiris-iris menjadi tipis dan dimasukan  ke  dalam  media  pertumbuhan Zobell  cair  dengan  perbandingan  1:9  (g/v) (Tabel  1).  Sampel  di shaker dengan  kece- patan  150  rpm  pada  suhu  kamar  selama  4 hari.  Indikasi  pertumbuhan  bakteri  ditandai dengan  perubahan  warna  media  tumbuh menjadi  keruh  kecoklatan.  Untuk  tindakan pemurnian/isolasi sampel ditumbuhkan ( plan- ting )  pada  media  zobell  padat  (Benson, 2002).

## 2.3. Isolat dan Karakterisasi Bakteri Simbion
Langka-langka  isolasi  bakteri  meliputi sampel bakteri simbion diencerkan bertingkat (10 -1 , 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 , 10 -5 dan 10 -6 ).
Gambar 1. Peta lokasi pengambilan sampel karang lunak.
Tabel 1. Komposisi media pertumbuhan zobell (Modifikasi dari Atlas, 2005).
Bahan Total Agar 1) 15,0 g Peptone 2,5 g Yeast Extract 0,5 g Air Laut 1,0 l 1) ditambahkan untuk Zobell Padat
Pada  sampel  pengenceran  ketiga  ter- akhir  dilakukan  penanaman  dengan  dituang- kan  sebanyak  1  mL  masing-masing  cawan petri.  Kemudian  dituangkan  media  zobell berkisar  20  mL  per  cawan,  sambil  dihomo- genkan  dengan  digoncang  pelan  sampai media menjadi padat. Cawan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 4 hari, metode ini merujuk pada  metode  Benson  (2002).  Karakterisasi dilakukan pada masing-masing koloni bakteri simbion  dengan  pengamatan  morfologi  sel meliputi;  pewarnaan  gram,  endospore  dan motilitas (Hadioetomo, 1993; Cappucino and Sherman, 2008). Untuk uji biokimia meliputi;  hidrolisis  pati,  hidrolisis  gelatin, produksi  H 2 S  dan Triple  Sugar  Iron (TSI) (Lay,  1994),  hidrolisis  kasein  (Collins et  al., 1985),  fermentasi  karbohidrat  (glukosa,
sukrosa  dan  laktosa),  reduksi  nitrat  dan produksi  indol  (Benson,  2002),  produksi urease,  metil  merah  ( methyl  red ),  Voges- proskauer  dan  Simmon’s  sitrat  (Cappucino dan Sherman, 2008).

## 2.4. Kultur dan Ekstrasi Bakteri Simbion
Kulturisasi  dilakukan  pada  bakteri simbion  yang  sudah  murni.  Masing-masing koloni  bakteri  dibiakkan  pada  media  Zobell secara  bertingkat  mulai  dari  10  ml,  100  ml dan  500  ml.  Isolat  bakteri  diinokulasi  se- banyak  2-3  ose  ke  media  zobell  cair  seba- nyak  10  ml  dalam  tabung  reaksi  dan  diinku- basi pada suhu 37 o C selama 48 jam. Biakan dipindahkan  ke  media  zobell  100  ml  dalam labu  erlenmeyer  250  ml  dan  digoyang dengan  kecepatan  100  rpm  pada  suhu  37 o C selama  48  jam.  Kultur  dituangkan  pada media zobell 500 ml dan inkubasi pada suhu 37 o C  selama  72  jam.  Isolat  bakteri  simbion ditumbuhkan  pada  media  zobell  cair  seba- nyak  500  ml  selama  15  hari.  Kultur  bakteri dipanen, kemudian dimeserasi dengan pelarut EtOAc  (1:3  v/v)  selama  3  hari.  Selanjutnya larutan hasil rendaman dievaporasi pada suhu 45 o C  sampai  membentuk  ekstrak  berupa pasta,  kemudian  disimpan  pada  suhu  4 o C (Zheng et al., 2005; Chen et al., 2012).

## 2.5. Bioassai Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak Isolat Bakteri Simbion
Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah B. subtilis , E.  coli dan S.  dysentri .  Bakteri  uji diremajakan  pada  media  nuterien  agar  (NA) dalam cawan petri.  Paper disk  menggunakan pinset  dicelukpan  ke  dalam  ekstrak  isolat bakteri simbion dan dengan perlahan diletak- kan di atas media NA yang sebelumnya telah ditanam  bakteri  uji.  Kegiatan  ini  dilakukan secara  aseptik. Setelah itu media uji tersebut diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  48  jam. Daya  hambat  antibakteri  diukur  zona  bening yang  terbentuk  dengan  menggunakan  jangka sorong (Anand et al., 2006).

## 2.6. Analisis Komponen Metabolit Sekunder
Analisis  kandungan  metabolit  sekun- der  dilakukan  terhadap  ekstrak  dari  sampel Sinularia  flexibilis dan  isolat  bakteri  yang memiliki  aktivitas  anti-bakteri.  Hal  ini  be- tujuan  untuk  membandingkan  kemiripan profil  senyawa  aktif  yang  dihasilkan.  Se- banyak  10  µL  sampel  diinjekkan  ke  sektor kolom  symmetry  C18,5  m,  150x4,6  mm, LC-MS  (Tandem  HPLC  Alliance  2695 dengan  ESI-Tof-MS  LCT  Premier-XE, Waters)  dengan  menggunakan  fase  gerak MeOH  (A%)  dan  H2O  (B%).  Laju  elusi  0,2 ml/menit  dan  dilakukan  pada  suhu  ruang dengan  mode  gradient  timetable  (Tabel  2). Metode  tahapan  ini  merujuk  metode  modif- ikasi dari Margereth, (2012).
Tabel  2. Timetable  gradient perlarut  analisis LCMS.
Waktu (menit) MeOH (A%) H 2 O (B%) 0 10 90 5 25 75 10 50 50 15 75 25 20 50 50 25 25 75 30 10 90
Sektor MS dioperasikan dengan mode positif  dengan  kondisi  meliputi:  Capillary voltage: 2100 V, Sample cone voltage: 60 V, Desolvation  T:  300  dC,  Source  T:  120  dC, Desolvation  gas:  500  l/h  dan  Cone  gas:  10 L/h.  Spektrum  LC-MS  diidentifikasi  dengan cara perbandingan dengan bantuan data base ChemSpider (Margeretha, 2012).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Hasil
3.1.1. Jenis-jenis Bakteri Simbion
Hasil  isolasi  bakteri  simbion  dari  ke- dua jenis karang lunak S. flexibilis (SFTLS4) dan S.  polydactyla (SPTLS2)  diperoleh delapan  isolat  bakteri,  empat  isolat  bakteri dari  SFTLS4  yang  diberi  label  A1-A4  dan empat  isolat  bakteri  dari  SPTLS2  dengan lebel B1-B4.
Berdasarkan  pengamatan  morfologi, empat isolat bakteri simbion SFTLS4 menun- jukkan  karakteristik  yang  sama.  Kesamaan ini ditunjukkan pada hasil pengamatan secara makroskopis,  dimana  bentuk  koloninya  ada- lah Circullar,  entire,  convex,  unpig-mented, translucent (Tabel 3).
Pengamatan  mikroskopis  menunjuk- kan  seluruh  isolat  memiliki  sel  berbentuk batang  dan  tidak  menghasilkan  endospor. Hasil  pewarnaan  gram  juga  menunjukkan bahwa  semua  isolat  menghasilkan  warna merah,  ini  artinya  bahwa  isolat  bakteri  A1- A4  tersebut  dikelompokkan  pada  bakteri gram  negatif  (Gambar  2).  Hasil  pengamatan morfologi,  empat  isolat  bakteri  simbion SPTLS2  menunjukkan  karakteristik  yang sama.  Kesamaan  ini  ditunjukkan  pada  hasil pengamatan secara makroskopis dan mikros- kopis,  dimana  bentuk  koloninya  adalah Circullar,  entire,  convex,  unpigmented, translucent . Untuk bentuk  sel  adalah batang, gram  negatif,  tidak  menghasilkan  endospora dan motil (Tabel 4).
Pengamatan mikroskopis lainnya juga menunjukkan  seluruh  isolat  memiliki  sel berbentuk  batang  dan  tidak  menghasilkan endospore. Hasil pewarnaan gram menunjuk-
Tabel 3. Hasil pengamatan morfologi isolat bakteri (A1-A4) dari karang S. flexibilis.

## Perwarnaan Gram
Koloni
Gambar 1.  Pewarnaan Gram dan bentuk koloni bakteri simbion yang diperoleh pada sampel SfTLS4.
Morfologi Isolat Isolat bakteri simbion A1 A2 A3 A4 Makroskopis koloni Circullar, entire, convex, unpigmented, translucent. Circullar, entire, convex, unpigmented, translucent. Circullar, entire, convex, unpigmented, translucent. Circullar, entire,  convex, unpigmented, translucent. Mikroskopis sel Sel  berbentuk batang,  Gram Negatif, Tidak menghasilkan endospora. Sel berbentuk batang,  Gram Negatif, Tidak menghasilkan endospora. Sel  berbentuk batang,  Gram Negatif, Tidak menghasilkan endospora. Sel berbentuk batang, Gram Negatif,  Tidak menghasilkan endospora. Motilitas Motil Motil Motil Motil
Tabel 4. Hasil pengamatan morfologi isolat bakteri (B1-B4) dari karang S. polydactyla.
Morfologi isolat Isolat bakteri B1 B2 B3 B4 Makroskopis koloni Circullar, entire, convex, unpigmented, translucent. Circullar, entire, convex, unpigmented, translucent. Circullar, entire, convex, unpigmented, translucent. Circullar, entire, convex, unpigmented, translucent. Mikroskopis sel Sel berbentuk batang, Gram Negatif, Tidak menghasilkan endospora. Sel berbentuk batang, Gram Negatif, Tidak menghasilkan endospora. Sel berbentuk batang, Gram Negatif, Tidak menghasilkan endospora. Sel berbentuk batang, Gram Negatif, Tidak menghasilkan endospora. Motilitas Motil Motil Motil Motil
kan bahwa semua isolate menghasilkan warna merah,  artinya  bahwa  isolat  bakteri  B1-B4 tersebut  dikelompokkan  pada  bakteri  gram negatif.  Empat  isolat  bakteri  B1-B4  menun- jukkan karakteristik  yang sama dengan isolat bakteri A1-A4 (Gambar 3). Hasil pengamatan uji  biokimia  pada  kedelapan  isolat  bakteri simbion  menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri tersebut  dapat  dikelompokan  menjadi  empat spesies  isolat  bakteri  simbion.  Pada  empat isolat  bakteri  karang  lunak S.  flexibilis diperoleh  kesamaan  hasil  pada  masing- masing dua isolat, dimana isolat A1 memiliki kesamaan dengan isolat A3, sedangkan isolat A2  memiliki  kesamaan  dengan  A4,  sehingga dari  keempat  isolat  tersebut  dapat  dike- lompokkan  menjadi  dua  dimana  diberi  label A1  (isolat  A1  &  A3)  sementra  label  A2 (isolat  A2  dan  A4).  Untuk  perbedaan  isolat bakteri  A1  dan  A2  ditunjukkan  pada  uji biokimia, dimana ada perbedaan dari hasil uji hidrolisis  pati,  fermentasi  glukosa  dan sukrosa,  uji  metil  merah,  TSI,  Simmon’s sitrat  dan  Reduksi  nitrat.  Hasil  identifikasi dari  isolat  bakteri  pada  karang  lunak S. flexibilis dapat disimpulkan bahwa isolat bak- teri A1 adalah spesies Pseudomonas diminuta dan untuk isolat A2 adalah spesies Edwardsiellla  hoshinae (Tabel  5).  Hasil  uji biokimia pada keempat isolat bakteri simbion (B1-B4)  pada S.  polydactyla diperolehi kesamaan  pada  keseluruhan  uji  yang  dilaku-
kan pada masing-masing isolat, dimana isolat B1  memiliki  kesamaan  dengan  isolat  B2  dan B3,  Perbedaan  isolat  bakteri  B1  dan  B4 ditunjukkan  pada  uji  biokimia,  dimana  ada perbedaan  dari  hasil  uji  hidrolisis  pati, fermentasi  glukosa  dan  sukrosa,  uji  metil merah, TSI, dan Simmon’s sitrat. Hasil iden- tifikasi menunjukkan bahwa isolat bakteri B1 diidentifikasi  sebagai Edward-siellla  hoshi- nae dan  isolat  bakteri  B4  adalah Pseudo- monas acidovorans (Tabel 6).

## 3.1.2. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Isolat Bakteri
Hasil pengamatan aktivitas antibakteri pada  isolat  bakteri  simbion  ditemukan  hanya isolat  A1  memiliki  zona  hambat  terhadap bakteri B.  subtilis, E.  coli, dan S.  dysentri . Isolat  B1  dan  B4  ditemukan  tidak  memiliki zona  hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri pathogen, ini artinya hanya satu isolat bakteri yang  berpotensi  memiliki  senyawa  bioaktif sebagai antibakteri (Gambar 3).
Aktivitas  antibakteri    ekstrak  A1  ter- hadap bakteri B. subtilis dengan zona hambat berkisar  10,16±0,3  mm  yang  dikategorikan daya  hambat  kuat,  sedangkan  terhadap bakteri S. dysentri berkisar 9,86±1,7 mm dan terhadap bakteri E. coli berkisar 8,66±0,8mm, keduanya dikategorikan daya hambat sedang. Ekstrak  isolat  B1  dan  B4  ditemukan  tidak memiliki aktivitas antibakteri (Tabel 7).
Perwarnaan Gram Koloni
Gambar  2.  Pewarnaan  gram  dan  bentuk  koloni  bakteri  simion  yang  diperoleh  pada  sampel SPTLS2.
Tabel 5. Hasil uji biokimia isolat bakteri simbion pada sampel karang SFTLS4.
Uji biokimia Isolat Bakteri A1 A2 A3 A4 Hidrolisis pati - + - + Hidrolisis lemak - - - - Hidrolisis kasein - - - - Hidrolisis gelatin - - - - Fermentasi glukosa - + - + Fermentasi sukrosa - + - + Fermentasi laktosa - - - - Produksi H 2 S - - - - Produksi indol - - - - Produksi urease - - - - Uji metil merah - + - + Voges-Proskauer - - - - Uji TSI - + - + Simmon’s sitrat + - + - Reduksi nitrat - + - +
Tabel 6. Hasil uji biokimia isolat bakteri simbion pada sampel karang SPTLS2.
Uji biokimia Isolat Bakteri B1 B2 B3 B4 Hidrolisis pati + + + - Hidrolisis lemak - - - - Hidrolisis gelatin - - - - Fermentasi glukosa + + + - Fermentasi sukrosa + + + - Fermentasi laktosa - - - - Produksi H 2 S - - - - Produksi indol - - - - Produksi urease - - - - Uji metil merah + + + - Voges-Proskauer - - - - Uji TSI + + + - Simmon’s sitrat - - - + Reduksi nitrat + + + +

## 3.1.3. Kandungan Metabolit Sekunder Karang Lunak dan Simbion
Hasil  analisis  ini  biasanya  diguna- kan  untuk  mengetahui  profil  kandungan bahan kimia serta data spektrum MS masing- masing  senyawa.  Dari  nilai total  ion  current
(TIC)  dari  ekstrak  karang  lunak S.  flexibilis (SFTLS4)  dan  isolat  bakteri  simbion  A1 terlihat memiliki puncak ( peak ) retention time (Rt)  yang  sama  yaitu  Rt  15,25;  15,93;  dan 20,19,  sedangkan  pada  ekstrak  isolat  bakteri simbion A2 tidak ditemukan (Tabel 8).
( B. subtilis ) ( E. coli ) ( S. dysentri )
Gambar 3. Aktivitas antibakteri isolat bakteri simbion dari S. flexibilis dan S. polydactyla.
Tabel 7.  Daya hambat ekstrak isolat bakteri simbion pada karang lunak S. flexibilis dan S. polydactyla.
Isolat bakteri Kode ekstrak Spesies karang lunak Zona hambat (mm) B. subtilis E. coli S. dysentri P. diminuta A1 S. flexibilis 10.16±0.3 8.66±0.8 9.86±1.7 E. hoshinae A A2 S. flexibilis - - - E. hoshinae B B1 S. polydactyla - - - P. acidovorans B4 S. polydactyla - - -
Tabel 8. Data total ion current (TIC) dari nilai m/z ekstrak karang lunak S. flexibilis dan isolat bakteri simbion.
SFTLS4 m/z Simbion A1 m/z Simbion A2 m/z 1,9 - 1,27 - - - 11,16 - 10,65 210 11,33 210 12,18 - 12,35 244 12,86 244 14,74 - 15,25 334 16,44 339 15,25 334 15.,93 339 17,63 339 15,93 364 17,12 452 19,67 452 17,29 345 18,66 - - - 17,97 364 19,34 212 - - 20,19 - 20,19 - - -
Berdasarkan spektrum  MS TIC kedua sampel menunjukkan bahwa ada tiga nilai Rt (15,25;  15,93;  dan  20,19)  yang  sama  dengan membentuk pola spektrum MS yang berbeda.
Sampel  SFTLS4 menunjukkan peak tertinggi pada Rt  15,93;  20,19;  dan 15,25. Sampel  A1 peak  tertinggi  ditunjukkan  pada  Rt  20,19; 15,93; dan 15,25 (Gambar 4).
Waktu Retensi (menit)
Waktu Retensi (menit)
Gambar 4. Spektrum TIC senyawa yang sama, A) S. flexibilis (SFTLS4); dan B) Isolat simbion A1.
Waktu Rentensi (menit)
Waktu Retensi (menit)
Gambar  5.  Spektrum  senyawa  aktif,  A)  spesies S.  flexibilis (SFTLS4);  dan  B)  isolat  bakteri simbion A1.
Berdasarkan  hasil  spektrum MS menunjukkan  bahwa  puncak  dengan  Rt  335 memiliki  spektrum  yang  sama  dengan  bobot molekul  senyawa  334  ( m/z =  335  M+H) (Gambar  5).  Senyawa  ini  diduga  merupakan
senyawa  aktif  golongan  diterpen  Sinularin yang  dikandung  oleh  Genus Sinularia .  Profil yang  sama  juga  terlihat  dari  hasil  spektrum senyawa dari isolat bakteri simbion A1, yang menunjukkan  bahwa  senyawa  aktif  diterpen
A B B A [M+H] + [M+H] +
Sinularin  juga  dihasilkan  oleh  isolat  bakteri simbion A1.

## 3.2. Pembahasan
Pada  karang  lunak S.  flexibilis ber- hasil didapatkan dua spesies bakteri simbion, yaitu Pseudomonas  diminuta (A1)  dan Edwardsiellla  hoshinae (A2).  Pada  karang lunak S.  polydactyla berhasil  diidentifikasi dua  spesies  bakteri E  hoshinae (B1)  dan P. acidovorans (B4). Bakteri simbion  yang ber- hasil diisolasi tersebut pernah dilaporkan oleh Radjasa et  al, (2007),  yang  juga  menemukan bakteri Pseudomonas sp  dari karang lunak S. polydactyla .
Keempat isolat bakteri yang diperoleh dikelompokkan bakteri gram negatif, berben- tuk  batang  dan  tidak  menghasilkan  endos- pora.  Ada  satu  isolat  bakteri  simbion  dari S. flexibilis diketahui berpotensi produksi senya- wa bioaktif. Chelossi et al. (2004), lima strain bakteri  dari  spons Petrosia  ficiformis diin- duksi  penghambatan  satu  atau  lebih  strain indikator  (patogen).  Dua  strain  yang  dipe- roleh dari spesimen spons yang sama (E1 dan L9)  menghasilkan  senyawa  antibiotik  yang aktif  terhadap  bakteri S.  aureus dan  bakteri gram  positif  lainnya.  Isolat  bakteri  simbion pada S.  polydactyla tidak  memiliki  daya hambat  antibakteri  baik  pada  spesies E. hoshinae maupun P. acidovorans .
Kemampuan aktivitas antibakteri yang ditunjukkan ekstrak isolat bakteri P. diminuta (A1)  terhadap  bakteri  pathogen B.  subtilis dengan  kategori  kuat , sedangkan E.  coli dan S.  dysentri dengan  kategori  sedang.  Isolat bakteri  pada Sinularia sp  yang  diambil  dari Laut  Jawa  juga  diperoleh  dua  isolat  yang memiliki  potensi  aktivitas  antibakteri  yang identik  dengan Pseudovibrio sp  (99%)  dan Alpha  proteobacterium (81%)  (Sulistiyani et al., 2010).  Isolat  bakteri  dari Nephtheidae sp dan Sarcophyton sp  yang  dikultur  tidak  me- nunjukkan  aktivitas  antibakteri,  begitu  juga dengan sampel Sinularia sp yang diambil dari lapangan (Chen et al., 2012).
Senyawa  aktif  isolat  bakteri  dari S. flexibilis dari perairan P. Tegal menunjukkan
aktivitas  antibakteri  yang  lebih  kuat  diban- dingkan  dengan  yang  dari  bakteri  simbion pada  spons Hymeniacidon  perleve (Zheng et al., 2005),  dan  yang  dari  isolat  bakteri  pada empat  jenis  spons  ( Echinodictyum sp., Spongia sp., Sigmadocia  fibulatus dan Mycale  mannarensis )  (Anand et  al., 2006). Shnit-Orland and Kushmaro (2008) menemu- kan  senyawa  aktif  isolat  bakteri  dari  mucus karang  keras  yang  memiliki  aktivitas  anti- biotik  lebih  banyak  dibandingkan  dengan senyawa  aktif  isolat  bakteri  karang  lunak. Distribusi  daya  hambat  sebagai  antibakteri dari  senyawa  bakteri  simbion  pada  karang lunak  ditemukan  bahwa  21,21%  aktivitas penghambatan  terhadap  bakteri  gram  positif ( S.  aureus ),  92,42%  menghambat  bakteri gram  negatif  ( E.  coli , V.  parahaemolyticus dan V.  shilonii ),  dan  13,64  %  menghambat kedua-dua  bakteri  gram  positif  dan  gram negatif (Chen et al., 2012).
Hasil  analisis  LCMS  dari  senyawa aktif  karang  lunak  menunjukkan  senyawa aktif  golongan  diterpen  Sinularin.  Senyawa aktif  tersebut  dihasilkan  juga  oleh  bakteri simbion.  Aktivitas  antibakteri  dari  senyawa aktif  bakteri  simbion  pada  karang  lunak  juga pernah dilaporkan oleh Radjasa et al., (2007). Senyawa  aktif  yang  dikandung S. flexibilis dengan  berat  molekul  334  adalah senyawa  dari  golongan  diterpen  Sinularin. Hal  ini  telah  dilaporkan  oleh  Tursch et  al. (1975)  yang  menemukan  senyawa  aktif Sinulariolide  dari S.  flexibilis .  Senyawa dengan  berat  molekul  yang  sama  dengan Sinularin  (I)  juga  ditemukan  pada  karang lunak S.  flexibilis (Weinheimer et  al., 1977). Senyawa  diterpen  lainnya  seperti  Flexilarin dilaporkan  diproduksi  juga  oleh S.  flexibilis (Lin et  al., 2009).  Senyawa  sinuladiterpenes A–F  (Lo et  al., 2009).  Senyawa  Flexibiliso- lides,  Flexibilisin  dan  11,12-Secoflexibillin (Shih et al., 2012).
Genus Sinularia merupakan salah satu karang  lunak  yang  paling  menyebar  dan banyak ditemukan mengandung senyawa bio- aktif. Sinularia sp dari Taman  Laut  Bunaken diperoleh  senyawa  diterpen  Sinularioside
(Putra et  al., 2012).  Sinulanor  cembranolide A (1) diproduksi karang lunak S. gaweli (Yen et  al., 2013).  Sesquiterpen  capillosananes  S– Z  (1–8)  diproduksi S.  capillosa (Chen et  al., 2014).  Norcembran  sinugyrosanolide  diha- silkan S. gyrosa (Cheng et al., 2014). Senya- wa diterpen Numerosol A–D (1–4) diperoleh pada S.  numerosa dari  perairan  Taiwan (Tseng et al., 2014). Senyawa Sinulolides A– H  (1–8)  berhasil  diisolat  dari  spesies Sinu- laria sp  (Yang et  al., 2014).  Senyawa  5- Episinuleptolide  (1)  dan  4α-Hydroxy-5- episinuleptolide  (2)  diperoleh  dari  spesies S. numerosa (Chen et al., 2015).

## KESIMPULAN
Dari  kedua  sampel  karang  lunak  ber- hasil  diperoleh  empat  isolat  bakteri  simbion, yaitu  dua  isolat  bakteri P  diminuta (A1)  dan E  hoshinae (A2)  dari  spesies S.  flexibilis , serta  dua  isolat  bakteri Edward-siellla hoshinae (B1)  dan P  acidovorans (B4)  dari spesies S. polydactyla .
Potensi  senyawa  bioaktif  sebagai antibakteri  ditunjukkan  hanya  pada  isolat bakteri  simbion P diminuta (A1)  dari spesies S.  flexibilis ,  sedangkan  senayawa  isolat bakteri  simbion  dari  karang  lunak S. polydactyla ditemukan  tidak  ada  aktivitas antibakteri.  Kandungan  senyawa  bioaktif isolat  bakteri  simbion P.  diminuta (A1)  di- ketahui  kelompok  diterpen  sinularin  yang sama  dengan  senyawa  bioaktif  yang  dihasil- kan oleh karang lunak S. flexibilis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  dibiayai  dari  DIPA Sains  Teknologi  dan  Seni  (Sateks)  Univer- sitas  Sriwijaya  dengan  Nomor  042.04.2. 400089/2015.  Terima  kasih  kami  ucapkan kepada  Kepala  Laboratorium  Mikrobiologi Jurusan  Biologi  dan  Laboratorium  Biologi Laut  Program  Studi  Ilmu  Kelautan,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas  Sriwijaya  yang  telah  memin- jamkan  peralatan-peralatan  seperti  peralatan
isolasi  bakteri  dan  peralatan  selam  SCUBA, kulturisasi  hingga  ekstraksi  sampel.  Terima kasih  juga  kepada  Kepala  Laboratorium LABTIAP  BPPT  Serpong  dan  Lab  Kesda DKI  Jakarta  yang  telah  membantu  dalam proses isolasi kandungan senyawa aktif.

## DAFTAR PUSTAKA
Anand,  T.P.,  A.W.  Bhat,  Y.S.  Shouche,  U. Roy,  J.  Siddharth,  and  S.P.  Sarma. 2006.  Antimicrobial  activity  of marine  bacteria  associated  with sponges  from  the  waters  off  the coast of South East India. Microbio- logical Research , 161(3):252-262.
Arafat,  D.  2009.  Pertumbuhan  karang  lunak (Octocorallia:  Alcyonacea) Lobo- phytum strictum, Sinularia dura dan perkembangan gonad Sinularia dura hasil  fragmentasi  buatan  di  Pulau Pramuka,  Kepulauan  Seribu.  Tesis. Institut Pertanian Bogor. 82hlm. Atlas,  R.M.  2005.  Handbook  of  Media  for Environmental  Microbiology.  2 nd ed. Taylor & Francis. London. 664p. Benson,  H.J.  2002.  Microbiological  applica- tions  a  laboratory  manual  in  gene- ral  microbiology.  8 th ed.  McGraw Hill. Boston. 478p.
Cappucino,  J.G.,  and  N.  Sherman.  2008.
Microbiology  a  laboratory  manual. 8th  ed.  Benjamin  Publish.  New York. 544p.
Chelossi,  E.,  M.  Milanese,  A.  Milano,  R.
Pronzato,  and  G.  Riccardi.  2004. Characterisation  and  antimicrobial activity  of  epibiotic  bacteria  from
Petrosia  ficiformis (Porifera,  De- mospongiae). J. Experimental Marine  Biology  and  Ecology ,  309 (1):21-33.
Chen,  D.,  W.  Cheng,  D.  Liu,  L.  van Ofwegen,  P.  Proksch,  and  W.  Lin. 2014. Capillosananes S-Z, new sesquiterpenoids  from  the  soft  coral Sinularia capillosa . Tetrahedron Letters , 55(19):3077-3082.
Chen, W.F., C.T. Yin, C.H. Cheng, M.C. Lu, L.S. Fang, W.H. Wang, Z.H. Wen, J.J. Chen,  Y.C.  Wu,  and  P.J.  Sung.  2015. Norcembranoidal  diterpenes  from  the cultured-type octocoral Sinularia numerosa . Int J Mol Sci ., 16(2):3298- 3306.
Chen,  Y.H.,  J.  Kuo,  P.J.  Sung,  Y.C.  Chang, M.C.  Lu,  T.Y.  Wong,  J.K.  Liu,  C.F. Weng,  W.H.  Twan,  and  F.W.  Kuo. 2012.  Isolation  of  marine  bacteria with antimicrobial activities from cul- tured  and  field-collected  soft  corals. World  J.  Microbiol  Biotechnol .,  28 (12):3269-3279.
Cheng,  S.Y.,  N.L.  Shih,  C.T.  Chuang,  S.F. Chiou,  C.N.  Yang,  S.K.  Wang,  and C.Y.  Duh.  2014.  Sinugyrosanolide  A, an unprecedented C-4 norcembranoid, from  the  Formosan  soft  coral Sinu- laria  gyrosa . Bioorganic  and  Medi- cinal  Chemistry  Letters ,  24(6):1562- 1564.
Collins,  H.C.,  Lyne,  and  M.  Patricia.  1985. Microbiological  Methods.  5th  ed. Butterworths. London. 456p.
Hadioetomo,  R.S.  1993.  Mikrobiologi  dasar dalam  praktek:  teknik  dan  prosedur dasar  laboratorium.  Gramedia  Pus- taka. Jakarta. 163hlm
Kelman,  D.,  A.  Kushmar,  Y.  Loya,  Y. Kashman,  and  Y.  Benayahu.  1998. Antimicrobial  activity  of  a  Red  Sea soft  coral, Parerythropodium  fulvum fulvum :  reproductive  and  develop- mental  considerations. Mar.  Ecol. Prog. Ser ., 169:87-95.
Lay,  B.W.  1994.  Analisis  mikroba  di laboratorium.  Raja  Grafindo  Persada. Jakarta. 168hlm.
Lin, Y.S., C.H. Chen, C.C. Liaw, Y.C. Chen, Y.H.  Kuo,  and  Y.C.  Shen.  2009. Cembrane  diterpenoids  from  the Taiwanese soft coral Sinularia flexibi- lis . Tetrahedron , 65(45):9157-9164. Lo,  K.L.,  A.T.  Khalil,  Y.H.  Kuo,  and  Y.C. Shen.  2009.  Sinuladiterpenes  A-F, new  cembrane  diterpenes  from Sinul-
aria flexibilis . Chem Biodivers , 6(12):
2227-2235.
Margeretha, I. 2012. Kajian senyawa bioaktif propolis Trigona spp.  sebagai  agen antikaries  melalui  pendekatan  analisis kimia  dipandu  dengan  bioassay. Disertasi. Universitas Indonesia. 203hlm.
Putra,  M.Y.,  A.  Ianaro,  E.  Panza,  G.
Bavestrello, C. Cerrano, E. Fattorusso, and  O.  Taglialatela-Scafati.  2012. Sinularioside,  a  triacetylated  glycol- lipid  from  the  Indonesian  soft  coral Sinularia sp.,  is  an  inhibitor  of  NO release. Bioorganic  and  Medicinal Chemistry Letters , 22(8):2723-2725.
Radjasa, O.K., S.I.O. Salasia, A. Sabdono, J. Weise,  J.F.  Imhoff,  C.  Lammler,  and M.J. Risk. 2007. Antibacterial activity of  marine  bacterium Pseudomonas sp associated  with  soft  coral Sinularia polydactyla and against Streptococcus equi Subsp. zooepidemicus .  Int. J.  of pharmacology , 3(2):170-174.
Shih,  H.J.,  Y.J.  Tseng,  C.Y.  Huang,  Z.H. Wen,  C.F.  Dai,  and  J.H.  Sheu.  2012. Cytotoxic  and  anti-inflammatory  di- terpenoids  from  the  Dongsha  Atoll soft  coral Sinularia  flexibilis . Tetra- hedron , 68(1):244-249.
Shnit-Orland,  M.,  and  A.  Kushmaro.  2008.
Coral  mucus  bacteria  as  a  source  for antibacterial  activity.  Proceedings  of 11 th International  Coral  Reef  Sympo- sium,  Ft.  Lauderdale.  Florida,  7-9 Julay 2008. 257-259pp.
Sulistiyani, S.A. Nugraheni, O.K. Radjasa, A.
Sabdono,  and  M.M.  Khoeri.  2010. Antibacterial  activities  of  bacterial symbionts  of  soft  coral Sinularia sp. against  Tuberculosis  bacteria. J. Coastal Development , 14(1):45-50. Tseng, Y.J., Y.C. Yang, S.K. Wang, and C.Y. Duh.  2014.  Numerosol  A–D,  new cembranoid  diterpenes  from  the  soft coral Sinularia  numerosa . Marine Drugs, 12(6):3371-3380.
Tursch,  B.,  J.C.  Braekman,  D.  Daloze,  M. Herin,  R.  Karlsson,  and  D.  Losman. 1975.  Chemical  studies  of  marine invertebrates-XI:  Sinulariolide,  a  new cembranolide  diterpene  from  the  soft coral Sinularia flexibilis (coelenterata, octocorallia,  alcyonacea). Tetrahed- ron , 31(2):129-133.
Weinheimer,  A.J.,  J.A.  Matson,  M.B. Hossain,  and  D.  van  der  Helm.  1977. Marine  anticancer  agents:  sinularin and  dihydrosinularin,  new  cembra- nolides  from  the  soft  coral, Sinularia flexibilis . Tetrahedron Letters , 18(34): 2923-2926.
Yang, B., X. Wei, J. Huang, X. Lin, J. Liu, S. Liao, J. Wang, X. Zhou, L. Wang, and Y.  Liu.  2014.  Sinulolides  A-H,  new cyclopentenone  and  butenolide  deri- vatives  from  soft  coral Sinularia sp.
Marine drugs , 12(10):5316-5327.
Yen, W.H., Y.D. Su, Y.C. Chang, Y.H. Chen, Y.H.  Chen,  C.F.  Dai,  Z.H.  Wen,  J.H. Su,  and  P.J.  Sung.  2013.  Sinula- norcembranolide  A,  a  novel  norcem- branoidal diterpene from the octocoral Sinularia gaweli . Tetrahedron Letters ,
54(18):2267-2270.
Zheng,  L., H. Chen, X.  Han, W.  Lin, and X. Yan.  2005.  Antimicrobial  screening and  active  compound  isolation  from marine  bacterium  NJ6-3-1  associated with  the  sponge Hymeniacidon  per- leve .  W. J.  Microbiology  and  Bio- technology , 21:201-206.
Diterima : 9 September 2015 Direview : 6 Oktober 2015 Disetujui : 15 Desember 2015