PENGARUH EKSTRAK BIJI COKELAT ( THEOBROMA CACAO L ) TERHADAP KADAR MALONDIALDEHID (MDA) TIKUS PUTIH JANTAN ( RATTUS NORVEGICUS STRAIN WISTAR ) DENGAN INDUKSI HIPERKOLESTEROL
Faiz  Zulkifli 1 ,  Sulistyo  Mulyo  Agustini 2 ,  Annisa’  Hasanah 3 Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Muhammadiyah  Malang Jl.  Bendungan  Sutami  No.  188  A  Malang,  65145
Email  :  faizzulkifli10@gmail.com

## ABSTRAK
Hiperkolesterol  menyebabkan  peningkatan  peroksidasi  lipid  dan  menghasilkan  Malondialdehid  (MDA)  sebagai indikator stres oksidatif. Ekstrak biji cokelat mengandung flavonoid sebagai antioksidan untuk menurunankan kadar MDA plasma tikus. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh ekstrak biji cokelat ( Theobroma Cacao L) terhadap kadar (MDA) tikus putih jantan ( Rattus novergicus strain wistar ) dengan  induksi hiperkolesterol. Metode yang digunakan Penelitian ini true experimental dengan  menggunaka post test  only control  group design. menggunakan  25  ekor  tikus  putih jantan, dibagi  menjadi 5 kelompok (kontrol negatif, kontrol positif, diberi ekstrak biji cokelat 1,8 mg, 3,6 mg dan 5,4 mg p.o selama 37 hari) dengan Parameter MDA plasma tikus metode spektofometri dan dianalisis menggunakan uji ANOVA, Post Hoc Benferoni, Korelasi serta  Regresi.  Hasil  Uji  ANOVA  menghasilkan  pengaruh  yang  signifikan  dengan  Sig  =  0,000  <  p  (0,05).  Uji  Post  hoc Benferoni menunjukkan pengaruh yang berbeda diantara masing-masing kelompok perlakukan kecuali antara perlakuan 1 dan perlakuan 2 yang tidak berbeda signifikan. Hasil uji korelasi menunjukkan pearson correlation = -0,961 yang berarti hubungan korelasi sangat kuat. Hasil uji regresi menunjukkan pengaruh yang signifikan (R² = 0,919; Sig 0,000 < p(0,05)). Kesimpulan penelitian ini Ekstrak biji cokelat dapat menurunkan kadar MDA tikus putih jantan dengan induksi hiperkolesterol.
Kata kunci : Ekstrak biji cokelat, hiperkolesterol, MDA.

## ABSTRACT
Hypercholesterol  causes  the  increase  of   lipid  peroxidation  and  produces  Malondialdehyde  (MDA)  as  an  indicator  of   oxidative stress.  The  extract  of   Cocoa  seed  extract  contains  flavonoid  as  antioxidant  to  decrease  of   MDA  level  of   rats’  plasma.  The  purpose  of the  research To  determine  the  effect  of   cocoa  seed  extract  (Theobroma Cacao  L)  on  the  levels  of   Malondialdehyde (MDA)  in male  white rats  (Rattus  novergicus  strain  wistar)  through  Hypercholesterol  induction.  The  true  experimental  research  used  the  post-test  only  control group  design.  The subjects  of  the  research  25  male  white  rats, divided  into 5  groups  (negative control,  positive  control,  and those  given  1.8 mg, 3.6 mg,  and 5.4  mg p.o within  37 days)  with parameters are  the MDA of  rats’  plasma  method by  spectrophotometry and analyzed by  ANOVA  test, Post  Hoc  Benferoni,  Correlation,  and  Regression.  The  Result  of ANOVA  test  was  resulted  the  significant  effect  with Sig = 0,000 < p (0,05). The post-hoc Benferoni test showed different effects between each group, except P1 and P2 which were not significant. The  result  of   the  correlation  test  showed  pearson  correlation  =  -0.961,  which  indicated  a  very  strong  correlation  relationship  and  showed as  the  higher  dosage  of   the  extract,  caused  lower  level  of   MDA.  Regression  test  showed  a  significant  effect  (R²  =  0,919;  Sig  0,000  < p(0,05)).  Conclusion  of   this  study  of   Cocoa  seed  extract  could  decrease  the  MDA  levels  of   male  white  rats  through  hypercholesterol induction.
Keywords  : Cocoa  seed  extract,  hypercholesterol,  MDA

## 8 VOLUME 12 NOMOR 1 JUNI 2016

## LATAR BELAKANG
Hiperkolesterolemia merupakan salah satu faktor risiko penyakit kardiovaskuler yang menjadi penyebab utama kematian dan kesakitan di seluruh dunia (Bantas, Krisnawaty, dkk. 2012) . Berdasarkan laporan World  Health  Organization (WHO)  pada tahun  2002,  Mencatat  sebanyak  4,4  juta  kematian akibat hiperkolesterol atau sebesar 7,9% dari jumlah total  kematian  di  usia  muda.  Menurut  Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) tahun 2013, prevalensi hiperkolesterolemia  di  Indonesia  pada  usia  >  15 tahun sebesar 35,9%.
Hiperkolesterol menyebabkan peningkatan peroksidasi  lipid  sehingga  terjadi  kerusakan    pada sel yang di tandai dengan Lipid Perioxidation Potential (LPP) di dalam jaringan. Malondialdehide  (MDA) merupakan    Produk      yang    dihasilkan    akibat peroksidasi    lipid.  Kadar  MDA    yang    tinggi menunjukkan  bahwa  sel mengalami  stress oksidatif yang disebabkan produksi  radikal  bebas berlebih, tanpa    diimbangi    dengan  antioksidan    sehingga mengakibatkan kerusakan  jaringan.
Biji  Cokelat  sendiri  memiliki  sifat antioksidan karena dalam biji cokelat mengandung senyawa  flavonoid.  Kandungan  flavonoid  dalam biji  cokelat  sekitar  12-18%.  Dalam  mekanisme kerjanya,  flavonoid  yang  merupakan  antioksidan endogen  akan  menghambat  reaksi  radikal  bebas dalam  tubuh  dan  meningkatkan  antioksidan endogen.  Senyawa  polifenol  yang  paling  menarik dari  cokelat  adalah  golongan flavanols . Flavanols merupakan  sub  kelas  dari  flavonoid  yang  terbagi menjadi monomer dan dimer. Kandungan flavanols yang  terbanyak  di  kandung  dalam  biji  cokelat golongan cathechin dan epichatechin sekitar 35%  dan berperan sebagai  zat antioksidan.
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara pembudidaya  tanaman  kakao  paling  luas  di  dunia dan termasuk negara penghasil kakao terbesar ketiga setelah  Pantai  Gading  dan  Ghana,  yang  nilai produksinya  mencapai  1.315.800  ton/thn.  Dalam kurun  waktu  5  tahun  terakhir  dari  2005  sampai 2010,  perkembangan  luas  areal  perkebunan  kakao meningkat secara pesat dengan tingkat pertumbuhan rata-rata  8%/thn  dan  saat  ini  mencapai  1.462.000 ha.  Hampir  90%  dari  luasan  tersebut  merupakan perkebunan  rakyat  yang  banyak  berada  di  Jawa khususnya Jawa Timur dan Sumatera. Berdasarkan latar  belakang  tersebut,  maka  penelitian  ini bermaksud untuk  membuktikan pengaruh ekstrak
biji cokelat terhadap kadar malondialdehid tikus putih jantan  ( Rattus  Norvegicus  strai  wistar )  induksi hiperkolesterol.

## TINJAUAN  PUSTAKA
Hiperkolesterolemia  merupakan  gangguan metabolisme yang terjadi secara primer atau sekunder akibat  berbagai  penyakit  yang  dapat  berkontribusi terhadap  berbagai  jenis  penyakit.
Hiperkolesterolemia  berhubungan  erat dengan  hiperlipidemia  dan  hiperlipoproteinemia. Hiperkolesterolemia  dapat  terjadi  akibat  kelainan kadar  lipoprotein  dalam  darah  yang  dalam  jangka panjang  mempercepat  kejadian  arteriosklerosis. (Bantas,  Krisnawaty,  dkk.  2012) Kolesterol memainkan peran utama dalam kesehatan  jantung  manusia.  Kolesterol  bisa  baik dan buruk. High-density lipoprotein (HDL) adalah kolesterol  baik dan  low-density  lipoprotein  (LDL) adalah kolesterol jahat. kolesterol tinggi dalam serum merupakan  faktor  risiko  utama  untuk  penyakit jantung  manusia  seperti  penyakit  jantung  koroner dan  stroke  -  nomor  satu  Amerika  pembunuh.
Kolesterol merupakan substansi lipid yang terdapat  pada  membrane  sel  dan  berperan  dalam berabagai biosintesis sterol : asam empedu, hormone adrenokortikal,  androgen  dan  esterogen.  Banyak penelitian membuktikan bahwa kenaikan kolesterol plasma  merupakan  faktor  resiko  penting berkembangnya  Penyakit  Jantung  Koroner  (PJK). Kadar  kolesterol  total  >  6,5  mmol/L  melipat gandakan  risiko  PJK  mematikan  dan  jika  >7,8 mmol/L  meningkatkan  resiko  sampai  empat  kali lipat. Penurunan kadar kolesterol total sebesar 20% akan  menurunkan  resiko  koroner  sebesar  10%.
Metabolism  lipoprotein  dari  kolesterol dapat  dibagi  atas  3  jalur  yaitu  jalur  metabolism eksogen, jalur metabolism endogen dan jalur reverse cholesterol transport . Kedua jalur pertama berhubungan dengan  metabolism  kolestero-LDL  dan  TG, sedangkan  jalur reverse  cholesterol transport  khusus mengenai  metabolism  kolesterol  HDL. Pertama yaitu jalur eksogen, Ada 2 sumber kolesterol yaitu berasal dari diet dan kolesterol dari hati yang diekskresi bersama empedu ke usus halus, Baik lemak di usus halus yang berasal dari makanan maupun  yang  berasal  dari  hati  disebut  lemak eksogen. TG dan kolesterol dalam usus halus akan di serap ke dalam enterosit mukosa usus halus. TG akan  diserap  sebagai  asam  lemak  bebas  sedang
9 kolesterol sebagai kolesterol dicampur dengan lesitin, lysolecithin,  dan  garam  empedu  menjadi  larut. Didalam usus halus asam lemak akan bebas akan diubah lagi menjadi TG, sedangkan kolesterol akan mengalami esterifikasi menjadi kolesterol ester dan  keduanya  bersama  dengan  fospolipid  dan apolipoprotein  yang  dikenal  dengan  kilomikron. Kilomikron ini masuk ke saluran limfe dan akhirnya melalui  duktus  torasikus  akan  masuk  ke  aliran darah.  TG  dalam  kilomikron  akan  mengalami hidrolisis  oleh  enzim lipoprotein  lipase yang  berasal dari  endotel  menjadi  asam  lemak  bebas  ( free  faty acid (FFA) = non-esterified fatty acid (NEFA).
Asam  lemak  bebas  dapat  di  simpan sebagai  TG  kembali  di  jaringan  lemak  (adiposa), tetapi  bila  terdapat  dalam  jumlah  yang  banyak sebagian  akan  diambil  oleh  hati  menjadi  bahan untuk  pembentukan  TG  hati.  Kilomikron  yang sudah  kehilangan  sebagian  besar  trigliserid  akan menjadi  kilomikron  remnant  yang  mengandung kolesterol  ester  dan  akan  dibawa  ke  hati. Kedua adalah Jalur Metabolisme Endogen Trigliserid  dan  kolesterol  yang  disintesis  dari  hati dan disekresi kedalam sirkulasi sebagai lipoprotein VLDL.  Apolipoprotein  yang  terkandung  kedalam VLDL  adalah  Apolipoprotein  B100.  Dalam sirkulasi,  trigliserid  di  VLDL  akan  mengalami hidrolisis  oleh  enzim Lipoprotein  lipase (LPL),  dan VLDL  berubah  menjadi  IDL  ( Intermediete  Density Lipoprotein) yang akan diambil oleh hati atau juga akan  mengalami  hidrolisis  dan  berubah  menjadi LDL. Ketiga  dengan  Jalur Reverse  Cholesterol Transport ,  HDL  dilepaskan  sebagai  partikel  kecil miskin kolesterol yang mengandung apolipoprotein (apo)  A, C,  E; dan  Apo A1 disebut HDL nascent . HDL nascent berasal dari usus halus dan hati, akan mendekati  makrofag  untuk  mengambil  kolesterol yang  tersimpan  di  makrofag.  Setelah  mengambil kolesterol bebas dari sel makrofag, kolesterol bebas akan  diesterifikasi  menjadi  kolesterol  ester  oleh enzim lecithin cholesterol acyltransferase (LCAT). Selanjutnya sebagian kolesterol  ester yang di  bawa  oleh  HDL  akan  mengambil  2  jalur.  Jalur pertama  ialah  ke  hati  dan  jalur  kedua  adalah kolesterol  ester  dalam  HDL  akan  dipertukarkan dengan  trigliserid  dari  VLDL  dan  IDL  dengan bantuan cholesterol ester transfer protein (CETP). Dengan demikian fungsi HDL sebagai penyerap kolesterol dari makrofag mempunyai dua jalur yaitu langsung ke hati dan jalur tidak langsung melalui VLDL dan
Intermediet Density Lipoprotein (IDL) untuk membawa kolesterol  kembali ke  hati. Banyaknya  LDL  yang  di  keluarkan  akan terjadi penumpukan LDL berlebih didalam sirkulasi yang berakibat mudahnya molekul LDL teroksidasi oleh logam transisional seperti iron (Fe) atau Cooper (Cu) yang banyak terdapat dalam tubuh. LDL yang teroksidasiakan  terbentuk  ox-LDL.  Ox-LDL  ini menyebabkan disfungsi endotel dikarenakan aktivasi lecithin-like  ox-LDL reseptor  (LOX-1).  LOX-1 merupakan  reseptor  ox-LDL  yang  terdapat  di  sel endotel  kapiler.  Ketika  ox-LDL  terikat  dengan LOX-1  akan  menginduksi  terbentuknya Reactive oxygen species (ROS). ROS kemudian akan berikatan dengan poly unsaturated  fatty  acid (PUFA)  yang  terdapat  di membran  sel.  Ikatan  ini  yang  akan  membentuk perioksidasi lipid melalui mekanisme rekasi berantai yang  kemudian  akan  terbentuk  senyawa  aldehid dan  terbentuk malondialdehid (MDA)  yang  sebagai biomarker  terjadinya  stress  oksidatif.  ROS  juga memicu  meningkatnya Nitrit  oxide  synthese yang akan  menghasilkan  NO  yang  tinggi  yang  akan menyebabkan  oksidasi  LDL.  Selain  sebagai biomarker,  MDA  tersusun  atas  molekul  aldehid yang  sangat  beracun.  Interaksinya  dengan  DNA maupun  protein  akan  menyebabkan  terjadinya mutagenik dan juga akan terjadinya aterosklerosis [4] . Saat ini  produk  kakao banyak  mendapat  perhatian karena    mempunyai  kemampuan  sebagai antioksidan. Polifenol  golongan  flavonoid  terutama katekin  dan epikatekin  adalah  komponen  utama dalam    produk    kakao  yang  berperan  sebagai antioksidan.  Polifenol    kakao  mempunyai  manfaat yaitu dapat  mencegah  terbentuknya radikal bebas, dapat melindungi oksidasi LDL darah,  berpengaruh terhadap  antimutagenik,  dan  dapat menghambat tumor. Hasil  penelitian  berbeda  dengan  literatur, yaitu    dalam    penelitian    sebelumnya  ,  dengan bubuk    kakao    yang    sama    menunjukkan    total fenol    sebesar    935.000    mg/kg.  Polifenol  dalam biji  kakao  dapat  berkontribusi  sekitar  12%  -18% dari  berat  kering  dengan  katekin,  antosianin,  dan proantosianidins  merupakan  sekitar  37%,  4%  dan 58%  polifenol  biji  kakao  masing-masing. Senyawa  polifenol  yang  paling  menarik dari  cokelat  adalah flavanols . Flavanols merupakan sub kelas dari flavonoid, dan flavonoid merupakan turunan kelas  dari polifenol. Flavanols dapat  dibagi lebih  lanjut  menjadi  monomer  ( epicatechin dan cathechin ),  dimer  (yang  paling  umum  dalam  cokelat

## 10 VOLUME 12 NOMOR 1 JUNI 2016
B2  dan  B5,  yang  terbuat  dari  dua  unit epicathechin dengan  link  yang  berbeda),  atau  polimer  dari kombinasi  monomer  ini. (Andujar,  M.  2012) Ekstrak biji cokelat mengandung substansi polifenol dan zat antioksidan flavonoid yang tinggi. Flavonoid  memiliki  efek  antioksidan  intraseluler atau  ekstraseluler.  Radical  scavenging  adalah mekanisme  pertahanan  radikal  bebas  yang  bekerja untuk  menangkap  radikal  bebas  melalui  inisiasi penghambatan  reaksi  berantai  dan  memotong propagasi  reaksi  radikal  bebas.  Selain  Radical scavenging,  flavonoid  pada  biji  cokelat  berperan sebagai  chelation  logam  transisi  yaitu  mekanisme pertahanan  radikal  bebas  yang  ada  reaksi  dengan logam  transisi  yang  penting  dalam  produksi  zat radikal bebas seperti, tembaga, zat besi, zincum12.
Mekanisme  kerja  senyawa  flavanoid  yang lain terdapat dalam biji cokelat dalam menurunkan kolesterol  darah  diduga  bekerja  dengan  cara penghambatan  terhadap  HMG-CoA  Reduktase. Penghambatan  terhadap  HMGCoA  Reduktase menyebabkan  penurunan  sintesis  kolesterol  dan meningkatkan jumlah reseptor LDL yang terdapat dalam membran sel hepar dan jaringan ekstrahepatik sehingga  kadar  kolesterol  total  turun,  dengan penurunan kadar kolesterol maka LDL sebagai alat angkut  lipid  di  dalam  darah  juga  berkurang kadarnya. (Baskaran,  Gunasekaran,  et  al.  2015)
Metode  penelitian Penelitian  ini  merupakan  penelitian true experimental dengan  menggunakan  metode post  test only  control  group  design. Penelitian  ini  dilaksanakan selama kurang lebih 37 hari pada bulan Maret 2017 –  April  2017  bertempat  di  Laboratorium  Fakultas Kedokteran  Universitas  Muhammadiyah  Malang. Populasi  dalam  penelitian  ini  adalah  tikus  putih jantan ( Rattus novergicus strain wistar ). Sampel  yang dilakukan penelitian ini menggunakan teknik simple  random  sampling dari  populasi  tikus putih (Rattus norvegicus) berjenis kelamin jantan, umur 2-3  bulan,  berat  badan  150-200  gram  dengan kondisi  sehat  yang  ditandai  dengan    gerakannya yang  aktif.  Sampel  dikelompokkan  menjadi  5 kelompok.  Total  sampel  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah 25 ekor tikus putih jantan yang terbagi  dalam  satu  kelompok  kontrol  positif,  satu kelompok  kontrol  negative,  dan  tiga  kelompok perlakuan dengan masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor tikus putih jantan.
Bahan induksi tinggi kolesterol berasal dari Kolesterol 2 gram (minyak kambing), kuning telur
puyuh  1  gr,  asam  kolat  0,02  gram,  aquades  2  ml, pakan  BR-1  20  gram.
Dosis  ekstrak  biji  cokelat  yang  diberikan yaitu  1,8  mg/hari,  3,6  mg/hari  dan  5,4  mg/  hari yang diberikan masing-masing pada kelompok 1,2,3 selama  30  hari.  Biji  cokelat  yang  digunakan merupakan spesies coklat lindak yang diambil dari kota blitar. Proses adaptasi hewan coba dalam kandang selama 7 hari dengan tujuan agar tikus menyesuaikan diri  terhadap  lingkungan  yang  baru.  Diet hiperkolesterol  diberikan  peroral  dengan  sonde selama 30 hari di mulai pada hari ke 8. Pemberian ekstrak  biji  cokelat  selama  30  hari    melalui  sonde modifikasi  setiap  jam  12.00-17.00  WIB.
Kontrol negatif  hanya diberi pakan standar. Kontrol  positif  diberi  pakan  standar  dan  diet hiperkolesterol.  Perlakuan  1  dosis  ekstrak  1,8  mg, perlakuan 2 dosis 3,6 mg dan perlakuan 3 dosis 5,4 mg.  Pada  hari  ke  37  tikus  dibedah  selanjutnya dilakukan  pengukuran  kadar  MDA  plasma  tikus masing-masing  kelompok.  Hasil  pengamatan  akan dianalisis datanya menggunakan uji One Way Anova, uji post-hoc Bonferoni, uji korelasi dan uji Regresi linier.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  jumlah rerata  kadar  MDA  pada  K-  =  0,6119  nmol/ml, K+ = 1,1078 nmol/ml, P1 = 0,9838 nmol/ml, P2 =  0,9030  nmol/ml,  dan  P3  =  0,7305  nmol/ml. Pada  uji One  Way  ANOVA menunjukkan  bahwa nilai  Sig  =  0,00  lebih  kecil  dari  p  (0.05)  berarti terdapat  perbedaan  yang  bermakna  antara  kadar MDA  plasma  kelompok  perlakuan  dengan kelompok  kontrol  positif.
Berdasarkan  uji  korelasi  antara  perlakuan (pemberian ekstrak biji cokelat dengan variasi dosis 1,8  mg,  3,6  mg,  5,4  mg)  dengan  kadar  MDA plasma  menunjukkan  bahwa  nilai  sig  ( 2-tailed )  = 0,000  <  P  (0,05)  dengan  kekuatan  korelasi  =  - 0,961  hal  ini  menunjukkan  bahwa  data  berada dalam rentang 0,91-0,99 yang menunjukkan bahwa korelasi sangat kuat sekali dan berbanding terbalik. Hasil uji regresi linier menunjukkan R 2 =0,923 yang berarti penurunan kadar MDA plsama tikus jantan putih ( Rattus norvegicus strain wistar ) yang dipengaruhi oleh dosis pemberian ekstrak biji cokelat ( Theobroma cacao  L )  adalah  92,3%. Berdaasarkan  hasil  penelitian  dan  analisis statistik  didapatkan  adanya  pengaruh  pemberian ekstrak  biji  cokelat  ( Theobroma  Cacao  L )  terjadi
penurunan MDA plasma tikus putih jantan. Sesuai dengan penelitian fridayanti, dkk (2015) pada tikus putih  jantan  bahwa  ekstrak  etanol  kakao  dapat menurunkan  kadar  MDA  dan  meningkatkan  sel osteoblas  tikus  dengan  model  fraktur  tulang. Mekanisme  kerja  flavonoid  dalam menurunkan  kadar  MDA  sesuai  penelitian  yang dilaakukan sebelumnya oleh Heiss et al (2005) yang meneliti  pemberian  cacao  kaya  flavanol  terhadap perbaikan  disfungsi  endotel  pada  perokok, menunjukkan bahwa pemberian flavanols 100-300 mg  mampu  mengembalikan  disfungsi  endotel. Mekanisme  kerja  senyawa  flavanoid  yang lain  dalam  biji  cokelat    menurunkan  kolesterol darah  diduga  bekerja  dengan  cara  penghambatan terhadap  HMG-CoA  Reduktase.  Penghambatan terhadap  HMG  CoA  Reduktase  menyebabkan penurunan  sintesis  kolesterol  dan  meningkatkan jumlah  reseptor  LDL  yang  terdapat  dalam membran  sel  hepar  dan  jaringan  ekstrahepatik sehingga  kadar  kolesterol  total  turun,  dengan penurunan  kadar  kolesterol  maka  LDL  sebagai alat  angkut  lipid  di  dalam  darah  juga  berkurang kadarnya  sehingga  menurunkan  pembentukan MDA. (Baskaran,  Gunasekaran,  et  al.  2015) Sebuah  penelitian  oleh  Noori et  al (2009) terhadap  seekor  tikus  albino  di  dapatkan  hasil bahwa  antioksidan  yang  terdapat  dalam  cokelat dapat meningkatkan superoxide dismutase (SOD) yang merupakan  antioksidan  primer  didalam  tubuh sebesar  0,44  nmol/g.  SOD  adalah  enzim antioksidan  utama  yang  menyediakan  langkah enzimatik pertama tubuh dalam sistem pertahanan terhadap  stres  oksidatif.
Selain  dikenal  memiliki  banyak  manfaat terhadap kesehatan, namun apabila intake flavonoid berlebihan akan menimbulkan  efek toksik  bahkan efek letal dari flavonoid. Penelitian ini menyebutkan bahwa  intoksikasi  akut  pada  tikus  putih  dapat terjadi  apabila  intake  flavonoid  mencapai  dosis letal yang dapat menyebabkan kematian pada 50% populasi  hewan  coba  (LD50)  2  gr/KgBB/hr.

## KESIMPULAN  DAN  SARAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah Pemberian ekstrak biji cokelat ( Theobroma Cacao L ) berpengaruh  terhadap  penurunan  kadar  MDA plasma tikus putih jantan hiperkolesterol dan Ekstrak biji cokelat dengan  Dosis 1,8 mg, 3,6  mg dan 5,4 mg    memiliki  efek  antioksidan  yang  berpengaruh terhadap  penurunan  kadar  MDA  plasma  tikus.
Saran  untuk  penelitian  lebih  lanjut  Perlu dilakukan  penelitian  dengan  variasi  dosis  ekstrak biji  cokelat  (Theobroma  Cacao  L)  dengan  kadar
yang lebih tinggi untuk mengetaahui dosis maksimal dalam  menurunkan  kadar  MDA  plasma  tikus.

## DAFTAR  PUSTAKA
Andujar, M. 2012. Cocoa Polyphenols and Their Potential Benefits For Human Health . Article of  Oxidative Medicine and Celluler Longevity . ID 906252. Bantas,  Krisnawaty,  dkk.  2012.  Risiko Hiperkolesterolemia pada Pekerja di Kawasan Industri.  Jurnal  Kesehatan  Masyarakat Nasional.  Vol.  6.  No.  5.
Baskaran,  Gunasekaran, et  al .  2015. HMG-CoA reductase  inhibitory  activity  and  phytocomponent investigation  of  Basella  alba  leaf  extract  as  a treatment  for  hypercholesterolemia .  Drug  Design, Development and Therapy Journal. 9: 509– 517.
Del Rio, Daniel, et al . 2005. A review of  recent studies on malondialdehyde as toxic molecule and biological marker of  oxidative stress . Nutrition, Metabolism & Cardiovascular Diseases. No. 15. 316-328.
Deniel JR,  Helen HH,  2012, Disorder of Lipoprotein Metabolism in Harrison’s  Principles  of   Internal Medicine Eighteenth Edition , The McGraw Hill, USA,  pp  3145-3148.. Fridayanti, Febriana S, dkk. 2015. Hubungan antara Kadar  Malondialdehyde  (MDA)  dengan Histopatologi  Jaringan  Tulang  pada  Tikus Wistar Jantan Model Fraktur Tulang. Journal of  Agromedicine  and  Medical  Sciences  1. Vol.  1  No.  1. Grotto, Denise, et al . 2009. Low levels of  methylmercury induce  DNA  damage  in  rats:  protective  effects  of selenium .  Arch  Toxicol.  83:  249–254. Heiss  C,  Kleinbongard  P,  Dejam  A et  al ,  2005, Acute  consumption  of  flavanolrich  cocoa  and  the reversal of endothelial dysfunction in smokers , J Am Coll  Cardiol  46(7):1276–1283. Imes,  Christopher.  2013. Low-Density  Lipoprotein Cholesterol, Apolipoprotein B, and Risk of  Coronary Heart  Disease:  From  Familial  Hyperlipidemia  to Genomics . Biol Res Nurs . 15(3): 292–308. Karmawati  E,  Mahmud  Z,  2010,  Budidaya  dan Pasca  Panen  Kakao.  Pusat  Penelitian  dan Pengembangan  Perkebunan,  Bogor.
Khan, Nasiruddin, et al . 2014. Cocoa Polyphenols and Inflammatory Markers of  Cardiovascular Disease . Journal  Nutrient. 6.  844-880:  ISSN  2072- 6643.
Kwan, Bonnie C.H. 2007. Lipoprotein Metabolism and Lipid  Management  in  Chronic  Kidney  Disease . Journal  of  the  American  society  of nephrology.  18:  1246–1261.

## 12 VOLUME 12 NOMOR 1 JUNI 2016
Larsson,  Karin,  2016.  Formation  of malondialdehyde  (MDA),  4-hydroxy-  2- hexenal  (HHE)  and  4-hydroxy-2-nonenal (HNE)  in  fish  and  fish  oil  during  dynamic gastrointestinal in vitro digestion. Journal The Royal  Society  of   Chemistry.  DOI:  10.1039 Laurence,  D.R.,  and  A.L.,Bacharach.,  1964,
Evaluation of drug activities: pharmacometrics, 1th  ed. Academic  Press. London Lorante, Leonardo, et al . 2015. Serum Malondialdehyde Levels in Patients with Malignant Middle Cerebral Artery  Infarction  Are  Associated  with  Mortality . Plos  One  10.1371.
Ma,  Hongbao.  2006. Cholesterol  and  Human  Health . The Journal of American Science. 2(1) : 46- 50. Noori,  S, et  al .  2009. Effects  Of   Cocoa  Powder  On Oxidant/  Antioxidant  Status  In  Liver,  Heart And Kidney Tissuees Of  Rats .  The  Journal  of Animal  and  plant  Sciences.  Pages:  174-178 ISSN:  1018-7081. Rasyid,  HN et  al .  2012. The  Efficacy  of   Flavonoid Antioxidant  from  Chocolate  Bean  Extract: Prevention of Myocyte Damage Caused by Reperfusion Injury  in  Predominantly  Anaerobic  Sports . Malaysian  Orthopaedic  Journal.  Vol  6.  No.
3.
Tapas, AR. 2008. Flavonoids as Nutraceuticals . Tropical Journal  of   Pharmaceutical  Research.  7  (3): 1089-1099
Wignjosoesastro,  Ccintyadewi.  2014.  Pengaruh
Bawang  Putih  ( Allium  Sativum )  terhadap Pencegahan Hiperkolesterolemia Pada Tikus. Damianus Journal  Of   Medicine .  Vol.  13.  No.
01. Wijaya,  andi,  dkk.  2014.  Aktivitas  Antioksidan Sediaan Nanopartikel Kitosan Ekstrak Etanol Kelopak  Rosela  ( Hibiscus  Sabdariffa L)  Pada Tikus  Hiperkolesterol  :  Pengukuran  Kadar Malondialdehid (Mda). Kartika Jurnal Ilmiah Farmasi.  ISSN  2354-6565.
Winarsi.  2007.  Bentuk  Produk  Oksidasi.  In: Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Edisi 1, Kanisius. Yogyakarta.Pp.50-58
Zahrawardani,  Diana,  dkk.  2013.  Analisis  Faktor
Risiko  Kejadian  Penyakit  Jantung  Koroner di  RSUP  Dr  Kariadi  Semarang.  Jurnal Kedokteran  Muhammadiyah.  Vol.  1.  No.2.