Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Gamal Terhadap Bakteri Escherichia coli yang diisolasi dari Sarang Penyu Semi Alami di Pantai Boom Banyuwangi
The Effect of The Gamal Leaf Ethanol Extract on The Growth of Escherichia coli Isolated from Semi Natural Sea Turtle Nest in Boom Beach, Banyuwangi
Ryan David Pandapotan Hutahaean 1* , Dewa Ketut Meles 2 , Ratih Novita Praja 3 , Jola Rahmahani 3 , Prima Ayu Wibawati 4
1 Mahasiswa Pendidikan Dokter Hewan, 2 Departemen Kedokteran Dasar, 3 Departemen Mikrobiologi Veteriner, 4 Departemen Kesehatan Masyarakat Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga, Kampus C Mulyorejo, Surabaya, Jawa Timur, Indonesia, 60115 . * Corresponding author : ryan.hutahaean@gmail.com

## Abstrak
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi aktivitas antibakterial ekstrak etanol daun gamal ( Gliricidia sepium ) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli yang diisolasi dari sarang semi alami penyu Lekang ( Lepidochelys olivacea ) di Pantai Boom, Banyuwangi. Uji antibakteri dilakukan dengan metode difusi disk. Oksitetrasiklin 30µg (Oxoid CT0041B) digunakan sebagai Kontrol Positif (K+). CMC Na 0,5% digunakan sebagai Kontrol Negatif (K-). Perlakuan (P1, P2, P3, P4) menggunakan ekstrak etanol daun gamal dengan berbagai konsentrasi yaitu 40%, 50%, 60%, dan 70%. Penelitian dilakukan dengan enam perlakuan dan empat ulangan. Data yang diperoleh dianalisis dengan  Anova, kemudian dilanjutkan dengan uji Duncan jika hasil menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05). Hasil zona hambat dari K+ adalah 24,70 c ± 7.04; dan K- adalah 0,00 a ± 0,00. Seluruh perlakuan ekstrak menghasilkan zona hambat yang berbeda, konsentrasi 1 (P1) adalah 10,41 b ± 3,10; konsentrasi 2 (P2) 8,14 b ± 0,45; konsentrasi 3 (P3) 8,08 b ± 0,47; dan konsentrasi 4 (P4) 8,01 b ±  0,29.  Hasil  ini  membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  gamal  memiliki  aktivitas  antibakterial  untuk menghambat E. coli yang diisolasi dari pasir sarang penyu Lekang semi alami di Pantai Boom, Banyuwangi.
Kata kunci: antibakterial, Escherichia coli , Gliricidia sepium , Lepidochelys olivacea

## Abstract
The aim of this study was to identify the antibacterial activity potention of gamal leaf (Gliricidia sepium) ethanol  extract  against  Escherichia  coli  growth  which  isolated  from  Olive  Ridley  Sea  Turtle  (Lepidochelys olivacea) semi-natural nest in Boom beach, Banyuwangi. The antibacterial test used disk diffusion method. Oxytetracycline 30 µg (Oxoid CT0041B) was used as the Positive Control (K+). CMC Na 0,5% was used as the Negative Control (K-). The treatment (P1, P2, P3, P4) used various concentrations of gamal leaves ethanol extract,  which  is  40%,  50%,  60%,  and  70%.  The  study  assigned  six  treatments  and  four  replication.  The obtained data were analyzed by ANOVA, then continued with the DUNCAN test if the results showed significant differences (p<0,05). The inhibition result of positive control (K+) was 24,70 c ± 7.04; and the negative control was 0,00 a ± 0,00. All extract concentration result different inhibition, concentration 1 (P1) was 10,41 b ± 3,10; concentration 2 (P2) 8,14 b ± 0,45; concentration 3 (P3) 8,08 b ± 0,47; and concentration 4 (P4) 8,01 b ± 0,29. These results indicated that the gamal leaves ethanol extract has antibacterial activity to inhibit the growth of E. coli isolated from Olive Ridley semi-natural nest in Boom beach, Banyuwangi.
Keywords: antibacterial, Escherichia coli, Gliricidia sepium, Lepidochelys olivacea
Received: 11 May 2021 Revised: 15 February 2022 Accepted: 16 March 2022

## PENDAHULUAN
Enam  dari  tujuh  jenis  penyu  yang  ada  di dunia  dapat  ditemukan  di  Indonesia,  dan  empat
diantaranya  dapat  ditemukan  di  Banyuwangi. Penyu Lekang adalah salah satu jenis penyu yang banyak  ditemukan  di  sekitar  laut  Banyuwangi. Penyu  Lekang  telah  dinyatakan  terancam  punah
oleh  perdagangan  dunia  internasional  dan termasuk  dalam  daftar International  Union  for Conservation  of  Nature (IUCN) Red  List , sedangkan  dalam Convention  on  International Trade  in  Endangered  Species (CITES)  penyu tercantum dalam Appendix I (Anwar et al ., 2014). Penyu Lekang ( Lepidochelys olivacea ) dapat ditemui  di  pesisir  Pantai  Banyuwangi  Kota. Wilayah  pesisir  Pantai  Banyuwangi  Kota merupakan  destinasi  wisata  yang  sangat  ramai pengunjung (Permana, 2016). Tingkat pencemaran  tanah  dan  air  akibat  ulah  manusia sangatlah tinggi pada di pantai Banyuwangi kota, lebih  tepatnya  Pantai  Boom.  Pencemaran  yang terjadi  dapat  menyebabkan  peningkatan  bakteri patogen  pada  pantai  (Azaria et  al .,  2014)  dan berdampak pada penyu terutama pada keberhasilan  penetasan  telur  penyu  pada  musim bertelur (Al-Bahry et al ., 2011).
Menurut  Messens  (2015),  infeksi  bakteri dalam  telur  umumnya  terjadi  melalui  pori-pori cangkang  telur  penyu.  Cemaran  bakteri  pada habitat sarang penyu mempengaruhi keberhasilan penetasan  telur  penyu  (Wicaksono et  al .,  2017). Hidayat et al . (2014) menyebutkan bahwa bakteri Esherichia  coli merupakan  bakteri  yang  sering teridentifikasi  mengkontaminasi  telur  penyu maupun  lingkungan  penyu.  Elfidasari et  al . (2017)  berhasil  mengidentifikasi E.coli pada sampel yang diambil dari habitat peneluran pada kawasan  konservasi  penyu  di  Pangumbahan, Sukabumi.  Selain  itu  Haprabu  (2018)  juga berhasil mengidentifikasi E.coli dari telur penyu Lekang  yang  gagal  menetas  pada  kawasan konservasi  di  Pantai  Boom,  Banyuwangi. Tindakan untuk menjaga kelestarian penyu perlu dilakukan.  Keberadaan Escherichia  coli juga dapat  membahayakan  manusia  terutama  pekerja yang  ada  di Banyuwangi  Sea  Turtle  Foundation (BSTF), salah satunya strain O157 H:7 dari E.coli yang bersifat zoonosis (Jawetz et al ., 2013).
Tanaman  gamal  merupakan  salah  satu tanaman yang tumbuh baik di daerah pantai tropis seperti  di  Indonesia.  Daun  gamal  memiliki potensi  sebagai  antibakteri  karena  kandungan senyawa metabolit sekunder yang dimiliki, antara lain  flavonoid,  saponin,  steroid,  dan  tannin (Abdulaziz et al ., 2019).
Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh  ekstrak  etanol  daun  gamal  sebagai antibakteri  penghambat  pertumbuhan  bakteri Eschericia  coli yang  diisolasi  dari  pasir  sarang penyu  semi  alami  Pantai  Boom,  Banyuwangi sehingga  dapat  mendukung  program  konservasi penyu di Banyuwangi.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan rancangan penelitian yang digunakan  yaitu  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL), dengan metode uji difusi disk. Bakteri E. coli diisolasi dari pasir sarang penyu semi alami yang gagal menetas milik BSTF yang terletak di pantai  Boom,  Kabupaten  Banyuwangi,  Jawa Timur, dan untuk uji pengaruh antibakterial daun gamal  dilakukan  di  Laboratorium  Instrumen Universitas  Airlangga  PSDKU  di  Banyuwangi. Daun  gamal  yang  digunakan  berasal  dari Kabupaten Banyuwangi.
Sampel  pasir  dari  sarang  penyu  semi  alami yang  gagal  menetas  diambil  dan  dimasukkan dalam wadah plastik steril. Selanjutnya dilakukan uji  isolasi  dan  identifikasi  bakteri E.  coli untuk mendapatkan isolat E.coli dari pasir sarang penyu semi alami yang gagal menetas. Sebanyak 1 gram sampel  pasir  yang  digunakan  dimasukkan  ke dalam  media Buffered  Peptone  Water (BPW) sebanyak 9 ml kemudian diinkubasikan selama 24 jam  pada  suhu  35  C.  Pasca  inkubasi,  bakteri dalam  media  BPW  diambil  dengan  ose  dan digoreskan ( streak ) pada media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA) kemudian diinkubasi selama 48  jam  pada  suhu  35  C.  Koloni  yang  diduga E. coli berwarna hitam atau gelap pada bagian pusat koloni dengan atau tanpa metalik kehijauan yang mengkilat.  Konfirmasi  biakan  bakteri  yang diduga  koloni E.  coli dilakukan  dengan  uji biokimia metode IMViC yaitu uji Indole dengan media Sulfide  Indole  Motility (SIM),  uji Methyl red (MR)  dan Voges  proskauer (VP)  dengan media  MR-VP  Broth,  dan  uji Citrate dengan media Simmons Citrate Agar (SCA). Isolasi dan identifikasi  dari  bakteri E.coli dalam  penelitian ini  mengacu  pada  SNI  01-2332.1-2015  carauji mikrobiologi.
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  isolat  bakteri E.  coli yang didapat dari sampel pasir sarang penyu semi alami yang  gagal  menetas,  ekstrak  etanol  daun  gamal, media  spesifik  untuk  isolasi  dan  identifikasi bakteri E.coli , antibiotika Oxytetracycline 30 µg (Oxoid  CT0041B),  cawan  petri,  erlenmeyer, tabung  reaksi,  pipet  ukur,  ose,  bunsen, rotary evaporator , autoclave , dan incubator .
Prosedur  pembuatan  ekstrak  etanol  daun gamal yaitu dengan melarutkan 500 gram serbuk daun gamal ke dalam etanol 96% dan dilakukan selama 48 jam dan disimpan pada suhu kamar 20- 29  C,  kemudian  dilakukan  penyaringan  dan evaporasi  sehingga  didapati  ekstrak  daun  gamal yang  kental  (Tedju,  2018).  Uji  pengaruh antibakterial ekstrak etanol daun gamal (EEDG) dilakukan  pada  media Mueller  Hinton  Agar (MHA). Suspensi bakteri yang digunakan sesuai dengan standar Mc Farland No. 1 yaitu 3x10 8 sel kuman/ml,  maka  dari  itu  perlu  dilakukan pengenceran dengan menggunakan NaCl fisiologis.  Langkah  kerja  pengenceran  dengan cara mengambil 1 ml suspensi kuman kemudian diencerkan  dengan  9  ml  NaCl  fisiologis,  cara yang  sama  diulang  sebanyak  tiga  kali  sehingga jumlah  suspensi  adalah  3x10 5 sel  kuman/ml. Suspensi  bakteri  sejumlah  0,2  ml  kemudian dimasukkan  ke  dalam  media  MHA  dengan dengan  menggunakan  pipet,  lalu  diratakan dengan spatula.
Ekstrak  etanol  daun  gamal  dibuat  dalam empat konsentrasi yaitu 40, 50, 60, serta 70%, dan telah  dilarutkan  dengan  CMC  Na  0,5%.  Ekstrak kemudian diteteskan pada paper disc atau cakram kertas sebanyak 20 µl menggunakan mikropipet. CMC  Na  0,5%  sebagai  kontrol  negatif  juga diteteskan  pada paper  disc dalam  jumlah  yang sama, sedangkan kontrol positif yang digunakan adalah antibiotik disk berisi antibiotika Oxytetracylince  30  µg  (Oxoid  CT0041B). Perlakuan,  kontrol  negatif,  dan  kontrol  positif kemudian  diletakkan  pada  media  MHA  lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37  C.
Hasil yang akan didapati berupa zona bening yang terbentuk di sekitar paper disc . Zona bening yang terbentuk adalah zona hambat pertumbuhan bakteri  yang  dihasilkan  dari  esktrak  dan  kontrol
yang digunakan. Sarudji et al . (2017) menyebutkan bahwa zona hambat tersebut diukur diameter  vertikal  dan  diameter  horizontalnya dalam satuan millimeter (mm) dengan menggunakan jangka sorong, kemudian dihitung dengan rumus diameter vertikal ditambah dengan diameter  horizontal  kemudian  hasilnya  dibagi dengan dua.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tahap awal yang dilakukan adalah identifikasi bakteri E.coli dari pasir sarang penyu Lekang  semi  alami  yang  gagal  menetas  milik BSTF  di  pantai  Boom,  Banyuwangi.  Empat sampel pasir diuji, dan didapati hanya satu sampel yang positif E.coli dari uji isolasi dan identifikasi dengan metode IMViC. Cappucino dan Sherman (1992) dalam Wulandari et al . (2014) menyatakan bahwa  ciri-ciri  dari E.coli yaitu  dengan  melihat sifat  biokimianya  melalui  uji  IMViC  dengan respon dari setiap uji yaitu Indole positif, Methyl red positif, Voges proskauer negatif, dan Citrate negatif  (++--)  pada  setiap  uji  tersebut.  Hasil isolasi dan identifikasi disajikan pada Tabel 1.
Teridentifikasinya bakteri E.coli pada sampel pasir sarang penyu gagal  menetas sesuai dengan  pernyataan  Hidayat et  al .(2014),  yang mana E.coli merupakan  bakteri  yang  sering teridentifikasi mengkontaminasi telur penyu dan lingkungan  sarang  penyu.  Wicaksono  (2017) menyebutkan  bahwa  tingginya  jumlah  cemaran bakteri berkorelasi dengan rendahnya keberhasilan penetasan telur penyu.
Cemaran  bakteri  yang  terdapat  pada  pasir berasal dari berbagai sumber, salah satunya pasir sebagai  media  inkubasi  telur  penyu.  Menurut Sukamto et al . (2016), masa inkubasi telur penyu dalam pasir selama 46  – 60 hari lamanya. Telur penyu berkontak dengan pasir dalam waktu lama sehingga  telur  penyu  rentan  terhadap  serangan mikroba dan berpotensi menyebabkan kegagalan penetasan (Praja et al ., 2018). Kelembaban yang tinggi pada lingkungan sarang dapat meningkatkan  pertumbuhan  bakteri  dan  sangat berpengaruh  terhadap  keberhasilan  penetasan (Al-Bahry, 2011). Kelembaban yang tinggi dapat disebabkan oleh tingginya kadar air dalam sarang.
Tabel 1. Hasil uji isolasi dan identifikasi bakteri E. coli
Sampel Koloni pada media EMBA Indol MR VP Citrate Keterangan Hasil Pasir 1 - N/A N/A N/A N/A N/A Pasir 2 Hitam + - + + N/A Pasir 3 Hijau metalik + + - + N/A Pasir 4 Hijau metalik + + - - E. coli Tabel 2. Rata-rata dan standar deviasi zona hambat setiap perlakuan Perlakuan Rata-rata ± Standar Deviasi Kontrol positif (Oxytetracycline 30 µg) 24,70 c ± 7.04 Kontrol negatif (CMC Na 0,5%) 0,00 a ± 0,00 Perlakuan 1 (EEDG 40%) 10,41 b ± 3,10 Perlakuan 2 (EEDG 50%) 8,14 b ± 0,45 Perlakuan 3 (EEDG 60%) 8,08 b ± 0,47 Perlakuan 4 (EEDG 70%) 8,01 b ± 0,29
Superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05).
Keene  (2012)  menyebutkan  bahwa  bakteri yang terdapat di laut dapat mengkontaminasi telur dan pasir dari sarang alami yang diakibatkan oleh ombak yang membasahi pasir pantai. Keberadaan muara aliran sungai yang berasal dari perkampungan  padat  penduduk  di  dekat  pantai Boom dapat  membawa cemaran bakteri patogen pada  pasir  pantai.  Limbah  rumah  tangga  yang merupakan sumber pencemaran biologis tertinggi banyak  ditemui  pada  aliran  sungai  tersebut. Limbah  rumah  tangga  diantaranya  berasal  dari limbah  anorganik  dapur,  kamar  mandi,  cucian, industry  rumah  tangga,  serta  kotoran  manusia (Pratama et al ., 2020). Bakteri yang berada dalam aliran  sungai  akan  menuju  laut  dan  pasir  pantai akan terkontaminasi melalui ombak. Keberadaan E.coli dalam  perairan  dapat  menjadi  indikator bahwa  perairan  telah  tercemar  oleh  kotoran manusia  ataupun  hewan  mamalia  (Rock  dan Rivera, 2014).
Keberadaan bakteri pada lingkungan sarang penyu  membahayakan  penetasan  telur  penyu. Telur  penyu  memiliki  struktur  cangkang  yang lunak  dan  berpori  yang  memiliki  fungsi  untuk pertukaran  gas  dan  penyerapan  air  (Al-Bahry et al .,  2011).  Messens et  al .  (2005)  menyebutkan kontaminasi  mikroorganisme  dalam  telur  penyu dapat disebabkan oleh masuknya mikroba melalui pori-pori cangkang telur dan selaput lendir induk. Selain  itu,  telur  memiliki  kandungan  zat  gizi sebagai  media  pertumbuhan  bakteri  sehingga telur mudah mengalami kerusakan.
Hasil uji pengaruh ekstrak etanol daun gamal terhadap  bakteri E.  coli yang  diisolasi  dari  pasir sarang penyu Lekang yang gagal menetas tampak bahwa setiap perlakuan ekstrak, yaitu P1 hingga P4,  dan  kontrol  positif  (K+)  yang  digunakan, Oksitetrasiklin  30  µg  (Oxoid  CT0041B), menghasilkan  zona  hambat.  Sedangkan  kontrol negatif,  CMC  Na  0,5%,  tidak  menghasilkan diameter  zona  hambat.  Hasil  yang  didapati  dari setiap  perlakuan  EEDG  adalah  tidak  berbeda nyata namun berbeda nyata terhadap K- dan K+ yang  digunakan.  Hasil  analisis  statistik  tersaji pada  Tabel  2  dengan  uji  One  Way  Anova menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  (p<0,05) kemudian dilanjutkan dengan uji Duncan.
Rata-rata  diameter  zona  hambat  yang terbentuk  pada  perlakuan  1  (P1)  adalah  10,41  ± 3,10;  P2  adalah  8,14  ±  0,45;  P3  adalah  8,08  ± 0,47;  dan  P4 adalah 8,01 ±  0,29.  Oksitetrasiklin 30  µg  (Oxoid  CT0041B)  sebagai  kontrol  positif yang digunakan menghasilkan rata-rata diameter daya  hambat  sebesar  24,7  mm.  CMC  Na  0,5% yang  digunakan  sebagai  kontrol  negatif  tidak memberikan hambatan terhadap bakteri E.coli . Kontrol negatif pada penelitian ini menggunakan  larutan  CMC  Na  0,5%  dan  tidak terdapat  adanya  zona  hambat  disekitar  disk kontrol  negatif  ini.  Hasil  ini  sesuai  dengan penelitian Pangalinan (2012) yang menunjukkan larutan  CMC  Na  tidak  mampu  memberikan hambatan  terhadap  mikroorganisme,  sehingga mengindikasikan larutan CMC Na yang
digunakan pada perlakuan tidak memiliki potensi dalam menghambat pertumbuhan bakteri (Musdalifah et al ., 2017).
Oksitetrasiklin  30  µg  (Oxoid  CT0041B) sebagai kontrol positif yang digunakan menghasilkan  rata-rata  diameter  daya  hambat sebesar 24,7 mm. Oksitetrasiklin adalah antibiotik  yang  merupakan  golongan  dari tetrasiklin  dengan  aktivitas  spektrum  luas  dan efektif  terhadap  bakteri  Gram  positif  dan  Gram negatif (Tjay dan Rahardja, 2007). Oksitetrasiklin telah  secara  intensif  digunakan  dalam  sistem peternakan  dan  budidaya  perairan  serta  dalam pengobatan pada manusia (Prameswari, 2019).
Antibiotika  golongan  tetrasiklin  memiliki mekanisme  untuk  mengganggu  sintesis  protein bakteri.  Mekanismenya  yaitu  dengan  mengikat subunit  ribosom  30S  bakteri  dan  mencegah aminoacyl -t-RNA  terikat  kepada  ribosom  A (Plumb, 2009).
Perlakuan  ekstrak  etanol  daun  gamal  yang digunakan terdiri dari konsentrasi yang berbeda- beda  yaitu  40%,  50%,  60%,  dan  70%.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol daun  gamal  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri E.  coli yang  diisolasi  dari  pasir  sarang penyu semi alami secara in vitro .
Artaningsih et al . (2018) menjelaskan bahwa semakin  besar  konsentrasi  maka  zona  hambat yang terbentuk juga semakin besar. Berdasarkan analisis data, perlakuan 1 menghasilkan rata-rata diameter zona hambat tertinggi sebesar 10,41 mm yang  tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan lainnya.  Rata-rata  zona  hambat  yang  terbentuk pada  P2  adalah  8,14  mm;  P3  sebesar  8,08  mm; dan  P4  sebesar  8,01  mm.  Artinya  pada konsentrasi  yang  semakin  tinggi  diperoleh  hasil nilai  rata-rata  diameter  zona  hambat  yang semakin menurun tetapi tidak berbeda nyata (p > 0,05).
Diameter zona hambat yang terbentuk dapat dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  diantaranya sensitivitas  organisme,  medium  kultur,  kondisi inkubasi,  dan  kecepatan  difusi  agar.  Kecepatan difusi  agar  dapat  dipengaruhi  oleh  konsentrasi mikroorganisme, komposisi media, suhu inkubasi,  dan  waktu  inkubasi  (Schlege,  1994). Pengukuran konsentrasi suspensi
mikroorganisme sebaiknya dengan menggunakan alat  nephelometer  agar  kekeruhan  suspensi bakteri  lebih  akurat  saat  dibandingkan  dengan kekeruhan bakteri yang telah disetarakan dengan Mc Farland No.1 dan telah diencerkan sebanyak tiga kali (Zeniusa et al ., 2019). Keterbatasan alat menjadi faktor pengukuran kekeruhan dilakukan makroskopis secara visual.
Kepekatan  suatu  antimikroba  yang  diserap oleh paper  disc mempengaruhi  permeabilitas, sehingga proses difusi terpengaruh dan berhubungan dengan aktivitas antibakteri (Ture et al .,  2008).  Konsentrasi  ekstrak  yang  semakin tinggi akan berpengaruh terhadap kelarutan yang semakin  rendah  akibat  ekstrak  yang  mengental. Kondisi  tersebut  akan  memperlambat  difusi bahan  aktif  ekstrak  ke  dalam  media  dan  dapat mengurangi kemampuan ekstrak dengan konsentrasi tinggi untuk menghambat pertumbuhan  bakteri E.coli (Handajani,  2008). Konsentrasi  perlakuan  yang  pekat  berdampak pada  kemampuan paper  disc menyerap  ekstrak dan  senyawa  yang  ada  untuk  berdifusi  sehingga hasil yang didapatkan kurang maksimal.
E.  coli merupakan  bakteri  Gram  negatif dengan dinding sel yang terlapisi oleh membrane luar  yang  mengandung  protein,  fospolipid,  dan lipopolisakarida  (Karlina et  al .,  2013).  Hau  dan Rohyati  (2017)  menyebutkan  bahwa  kandungan dalam  membran  berfungsi  sebagai  pertahanan bakteri  terhadap  lingkungan  luar  dan  terhadap antimikroba.  Dinding  luar E.coli memiliki  sifat permeabilitas  tinggi  sehingga  zat  dalam  ekstrak tidak  dapat  masuk  secara  maksimal  dan berpengaruh  dalam  optimalisasi  ekstrak  untuk menghambat pertumbuhan bakteri.
Daun gamal mengandung beberapa komponen  senyawa  yang  berpotensi  sebagai antibakteri antara lain flavonoid, saponin, steroid, dan  tannin  (Abdulaziz et  al .,  2019).  Seluruh  zat aktif  yang  bersifat  antibakteri  akan  merusak lapisan terluar bakteri.
Flavonoid memiliki mekanisme kerja dengan  menghambat  fungsi  membrane  sel  dan metabolisme  energi  bakteri.  Penghambatan fungsi  membrane  sel  bakteri  oleh  flavonoid dengan  cara  membentuk  senyawa  kompleks dengan protein ekstraseluler sehingga membrane
sel  bakteri  akan  rusak  diikuti  dengan  keluarnya senyawa intraseluler bakteri (Nuria et al ., 2009).
Cushine  dan  Lamb  (2005)  menyebutkan  bahwa metabolisme  energi  bakteri  dihambat  oleb flavonoid dengan  cara menghambat  penggunaan oksigen oleh bakteri.
Saponin memiliki kemampuan untuk meningkatkan tegangan permukaan sel yang akan mengakibatkan  kerusakan  dinding  sel  bakteri. Saponin  akan  membentuk  senyawa  kompleks dengan  sel  bakteri  melalui  ikatan  yang  dapat menghancurkan permeabilitas dinding sel bakteri (Siqueira,  2011).  Bakteri  yang  berinteraksi dengan saponin akan pecah atau lisis (Poeloengan dan Praptiwi, 2012).
Steroid  memiliki  mekanisme  kerja  dengan merusak  membrane  sel  bakteri  (Monalisa et  al ., 2011).  Steroid  akan  merusak  membrane  lipid sehingga liposom mengalami kebocoran (Madduliri et  al .,  2013).  Steorid  memiliki  sifat yang  permeabel  terhadap  senyawa-senyawa lipofilik sehingga menyebabkan integritas membrane menurun dan morfologi membran sel berubah yang mengakibatkan sel rapuh dan lisis.
Tannin memiliki fungsi untuk mengkerutkan dinding  sel  atau  membrane  sel  bakteri  sehingga menyebabkan  bakteri  tidak  dapat  melakukan aktivitas hidup sehingga pertumbuhannya terngganggu  bahkan  mati  (Tula et  al .,  2012).
Selanjutnya  flavonoid  dapat  masuk  ke  dalam bagian  seluler  bakteri  dan  merusak  inti  bakteri saat dinding bakteri telah rusak.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun gamal dapat menghambat  bakteri E.  coli yang  diisolasi  dari pasir  sarang  penyu  Lekang  yang  gagal  menetas, dengan konsentrasi EEDG 40-70% efektif dapat menghambat  bakteri E.  coli yang  diisolasi  dari pasir sarang penyu Lekang yang gagal menetas.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  kepada  Laboratorium  Program Studi  Pendidikan  Dokter  Hewan  PSDKU Universitas Airlangga di Banyuwangi yang telah memfasilitasi pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdulaziz, A. A., Dapar, M. L. G., Manting, M.
M. E., Torres, A. J., Aranas, A. T., Mindo, R. A. R., & Demayo, C. G. (2019). Qualitative evaluation of the antimicrobial, antioxidant, and  medicinally  important  phytochemical constituents  of  the  ethanolic  extracts  of  the leaves of
Gliricidia sepium (Jacq.). Pharmacophore , 10(4), 72-83.
Al-Bahry,  S.  N.,  Mahmoud,  I.,  Elshafie,  A.,  Al- Harthy,  A.,  Al-Ghafri,  S.,  Al-Amri,  I.,  & Alkindi,  A.  (2011).  Bacterial  Flora  and Antibiotic  Resistance  from  Eggs  of  Green Turtles  ( Chelonia  mydas )  An  Indication  of
Polluted Effluents. Marine Pollution Bulletin , 58, 720-725.
Alfaro,  A.,  Køie,  M.,  &  Buchmann,  K.  (2006).
Synopsis of Infections in Sea Turtles Caused by  Virus,  Bacteria  and  Parasites:  an Ecological Review. University the Copenhagen, p.30.
Anwar,  S.,  Febria,  F.  A.,  &  Nasir,  N.  (2014).
Identifikasi  Koleksi  Jamur  dari  Cangkang dan  Pasir  Sarang  Telur  Penyu  Lekang ( Lepidochelys  olivacea L. )  di  Penangkaran Pariaman. Jurnal Biologi UNAND , 3(1).
Artaningsih,  N.  L.  B.,  Habibah,  N.,  &  Nyoman,
M.  (2018).  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol Daun Gamal ( Gliricidia sepium ) pada Berbagai Konsentrasi terhadap Pertumbuhan Bakteri  Streptococcus  mutans  secara  In- Vitro. Jurnal Kesehatan , 9(3), 336-345.
Azaria, D. (2014). Perlindungan Lingkungan Laut Samudra  Pasifik  dari  Gugusan  Sampah Plastik  Berdasarkan  Hukum  Lingkungan Internasional (Doctoral
dissertation,
Universitas Brawijaya).
Cappucino,  J.  G.,  &  Sherman,  N.  (1992). Microbiology,  A  Laboratory  Manual.  The
Benyamins/Cummings Publishing Co., Inc.,
New York.
Elfidasari,  D.,  Toufan,  G.,  &  Irawan,  S.  (2017).
Deteksi  Cemaran  Mikroorganisme  pada Kawasan Konservasi Penyu di Pangumbahan Sukabumi. Al-Azhar Indonesia Seri Sains dan Teknologi , 4(1), 28.
Handajani,  N.  S.,  &  Purwoko,  T.  (2008).
Aktivitas Ekstrak Rimpang Lengkuas (Alpinia  galangal)  Terhadap  Pertumbuhan Jamur  Aspergillus  sp.  Penghasil  Aflatoksin dan  Fusarium  moniliforme. Biodiversitas , 9(3), 161-4.
Haprabu, B. R. S. (2018). Isolasi dan Identifikasi Cemaran  Bakteri Escherichia  coli pada Telur Penyu Lekang yang Gagal Menetas di Sarang Semi Alami Pantai Boom Banyuwangi [Skripsi]. Fakultas Kedokteran Hewan. Universitas Airlangga. Hau,  E.  E.  R.,  &  Rohyati,  E.  (2017).  Aktivitas Antibakteri  Nira  Lontar  Terfermentesi Dengan  Variasi  Lama  Waktu  Fermentasi Terhadap Bakteri Gram Positif (Staphylococcus Aureus) Dan Gram Negatif ( Escherichia Coli ). Jurnal Kajian
Veteriner , 5(2), 91-98.
Hidayat,  O.,  Febria,  F.  A.,  &  Nasir,  N.  (2014). Isolasi dan Karakterisasi Bakteri pada Pasir
Sarang  dan  Cangkang  Telur  Penyu  lekang
( Lepidochelys olivaceae ) yang Menetas dan Gagal Menetas. Jurnal Biologi UNAND , 3(2).
Jawetz,  E.,  Melnick,  J.,  &  Adelberg.  (2004). Mikrobiologi  Kedokteran  Edisi  23.  EGC. Jakarta.
Karlina,  C.  Y.,  Ibrahim,  M.,  &  Trimulyono,  G.
(2013). Aktivitas Antibakteri Ekstrak Herba Krokot  (Potulaca  oleracea  L.)  Terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Lentera Bio , 2(1), 87-93.
Keene, E. L. (2012). Microorganism From Sand Cloacal  Fluid  and  Eggs  of Lepidochelys olivacea and  Standart  Testing  of  Cloacal Fluid  Antimircobial  Properties  [Thesis]. Faculty of Purdue University
Madduliri, S., Rao, K. B., & Sitaram, B. (2013).
In  Vitro  Evaluation  of  Five  Indegenous Plants  Extract  Against  Five  Bacterial Phatogens of Humans. International Journal of  Pharmacy  and  Pharmaceutical  Science ,
5(4), 679-684.
Messens,  W.,  Grijspeerdt,  K.,  &  Herman,  L.
(2005). Eggshell Characteristics and
Penetration by Salmonella Enterica Serovar
Enteritidis Through the Production Period of a  Layer  Flock. British  Poultry  Science , 46(6), 694-700.
Monalisa,  D.  T.,  Handayani,  &  Sukmawati,  D.
(2011).  Uji  Daya  Antibakteri  Ekstrak  Daun Tapak  Liman  (Elephantopus  sacber  L.) Terhadap Staphylococcus aureus dan Salmonella  typhi. Jurnal  Biomia ,  9(2),  13- 20.
Musdalifah, M., Khumaidi, A., & Suwastika, I. N. (2017).  Uji  Daya  Hambat  dan  Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Macaranga tanarius (L.) Mull. Arg Sebagai Antibakteri
Salmonella typhi. Natural  Science:  Journal of Science and Technology , 6(3).
Nuria, M. C., & Faizatun, A. (2009). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Jarak Pagar (Jatropha  Curcas  L)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923,
Escherichia coli ATCC 25922, dan Salmonella typhi ATCC 1408. Mediagro , 5(2).
Pangalinan,  F.,  Kojong,  N.,  &  Yamlean,  P.
(2012).  Uji  Aktivitas  Antijamur  Ekstrak Etanol Kulit Rambutan (Nephelium lappaceum  L.)  terhadap  Jamur  Candida albicans  Secara  In  Vitro. Pharmacon ,  1(1), 7- 12.
Permana,  I.  (2016).  Desain  Konseptual  Marina
Dengan  Theory  Of  Constraint:  Studi Kasus
Pantai Boom Kabupaten Banyuwangi  (Doctoral  dissertation,  Institut Teknologi Sepuluh Nopember). Plumb,  Donald,  C.  (2009).  Veterinary  Drug Handbook 7th Edition. Pharmavet.
Stockholm, Wisconsin.
Poeloengan,  M.,  &  Praptiwi,  P.  (2010).  Uji aktivitas  antibakteri  ekstrak  kulit  buah manggis (Garcinia mangostana Linn). Media Penelitian dan Pengembangan Kesehatan , 20(2). Praja,  R.  N.,  Yudhana,  A.,  &  Haditanojo,  W.
(2018).  Isolasi  dan  Identifikasi  Jamur  pada
Cangkang Telur Penyu Lekang ( Lepidochelys  olivacea )  Gagal  Menetas  di Pantai  Boom  Banyuwangi. Jurnal  Medik Veteriner , 1(2), 43-47.
Prameswari,  R.  A.  (2019).  Deteksi  Residu
Antibiotik Oksitetrasiklin Pada Susu
Kambing  Peranakan  Etawa  Di  Kelurahan
Kalipuro  Kecamatan  Kalipuro  Banyuwangi
Dengan Metode Uji Bioassay. Jurnal Medik Veteriner , 2(2), 112.
Pratama, G., Kurniawan, I. D., & Ilhamdy, A. F.
(2020).  Pengendalian  Pencemaran  Limbah
Domestik sebagai Upaya Rehabilitasi Pesisir di Desa Malangrapat, Kabupaten
Bintan. PRIMA:  Journal  of  Community
Empowering and Services , 4(1), 45-50.
Rock, C., & Rivera, B. (2014). Water quality, E. coli  and  your  health.  The  University  of Arizona-College  of  Agriculture  and  Life Sciences-Cooperative Extension.
Sarudji,  S.,  Chusniati,  S.,  Tyaningsih,  W.,  & Handijanto,  D.  (2017).  Petunjuk  Praktikum
Penyakit Infeksius I Program S-1 Kedokteran Hewan, Departemen
Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas Airlangga. Hal: 32-37.
Siqueira,  J.  F.,  &  Rocas,  I.  N.  (2011).
Microbiology and Treatment of Endodontic Infections.  In  Cohen’s  Pathways  of  The Pulp.  10th  eds.  Hargreaves  KM,  Cohen  S.
China: Elsevier. pp: 565-84.
Sukamto,  T.,  Muryanto,  &  Sarbini,  R.  (2016).
Teknik  Penetasan  Telur  Penyu  Hijau (Chelonia  mydas)  di  Kawasan  Konservasi, Pantai Pangumbahan, Kabupaten Sukabumi,
Jawa Barat. Buletin Teknik Litkayasa (BTL) Sumber Daya dan Penangkapan , 14(1), 29- 32.
Tedju, J. B., Bukit, M., & Johannes, A. Z. (2018). Kajian  Awal  Sifat  Optik  Senyawa  Hasil Ekstraksi  Daun  Gamal  ( Gliricidia  Sepium ) Asal  Kota  Kupang. Jurnal  Fisika:  Fisika
Sains dan Aplikasinya , 3(2), 142-146.
Tjay,  T.  H.,  &  Rahardja,  K.  (2007).  Obat-obat Penting Khasiat, Penggunaan dan Efek-efek Sampingnya.  Edisi  ke  IV.  PT  Elex  Media Komputindo. Jakarta. Hal: 19, 58.
Tula, M. Y., Azih, A. V., Iruojale, F. O., Okojie,
R. O., Elimian, K. O., & Toy, B. D. (2012). Systematic Study on Comparing Phytochemicals  and  The  Antimicrobial
Activities  from  Different  Parts  of  V.
Amygdalina. African Journal of Microbiology Res , 6(43), 7089-7093.
Wicaksono, M. A., Nurhasanah, F., Elfidasari, D., & Sugoro, I. (2017). Cemaran Mikroba Pada Telur Penyu Sisik (Eretmochelys imbricata) di Pulau Kelapa Dua, Taman Nasional Laut Kepulauan  Seribu,  DKI  Jakarta. Jurnal  Al- azhar
Indonesia Seri Sains dan Teknologi , 4(2), 83-90.
Wulandari, C., Nasir, N., & Agustien, A. (2014).
Kondisi  bakteriologis  air  sumur  di  sekitar tempat  pembuangan  akhir  air  dingin  kota Padang. Jurnal Biologi UNAND , 3(4).
Zeniusa, P., Ramadhian, M. R., Nasution, S. H., &  Karima,  N.  (2019).  Uji  Daya  Hambat Ekstrak Etanol Teh Hijau Terhadap Escherichia coli Secara In Vitro. Jurnal Majority , 8(2), 136-143.
***