Jurnal Pharmascience, Vol. 04, No.01, Februari 2017, hal: 116 - 121 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 http://jps.unlam.ac.id/
Research Article
Daya Reduksi Ekstrak Etanol Biji Aquilaria microcarpa, Aquilaria malaccensis, dan Aquilaria beccariana terhadap Ion Ferri (Fe 3+ ) dengan Metode FRAP ( Ferric Reducing Antioxidant Power )
Liling Triyasmono 1 , Beny Rahmanto 2 , Wawan Halwany 2 , Fajar Lestari 2 ,
Muhammad Ikhwan Rizki 1,3 , Khoerul Anwar 1 *
1 Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru 2 Balai Penelitian dan Pengembangan Lingkungan Hidup dan Kehutanan, Banjarbaru 3 Program Studi Profesi Apoteker FMIPA Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru *Email: khoerul.anwar@unlam.ac.id

## ABSTRAK
Daya  reduksi  merupakan  salah  satu  indikator  potensi  aktivitas  suatu  senyawa sebagai  antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  menentukan  daya  reduksi  ekstrak etanol  biji Aquilaria  microcarpa , Aquilaria  malaccensis ,  dan Aquilaria  beccariana terhadap  Ion  Ferri  (Fe 3+ ).  Serbuk  kering  biji A.  microcarpa , A.  malaccensis ,  dan A. beccariana dimaserasi  menggunakan  etanol  70%.    Daya  reduksi  ditentukan  dengan metode  FRAP  ( ferric  reducing  antioxidant  power )  yang  didasarkan  atas  kemampuan senyawa dalam mereduksi senyawa besi(III)-tripiridil-triazin menjadi besi(II)-tripiridil triazin  pada  pH  3,6.  Absorbansi  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  598  nm.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak  etanol  biji A. microcarpa , A. malaccensis , dan A. beccariana mempunyai daya reduksi berturut-turut sebesar 6,39±1,58; 119,95±28,04; dan 62,12±6,57 µM ekivalen troloks/g ekstrak.
Kata kunci: biji, Aquilaria microcarpa , Aquilaria malaccensis , Aquilaria beccariana ,

## FRAP

## ABSTRACT
Reducing  power  is  one  indicator  of  potential  antioxidant  activity  of  a  compound. This  study  aims  to  determine  the  reduction  power  of  the  ethanol  extract  of  the  seeds  of Aquilaria microcarpa, Aquilaria malaccensis, and Aquilaria beccariana against Ferric ion (Fe 3+ ).  Dry  powder  of  A.  microcarpa,  A.  malaccensis,  and  A.  beccariana  seeds  was macerated  using  70%  ethanol.  Reducing  power  determined  using  FRAP  (ferric  reducing antioxidant  power)  that  is  based  on  the  ability  of  the  compounds  in  reducing  iron compounds (III) -tripiridil-triazine to iron (II) -tripiridil triazine at pH 3.6. The absorbance was measured using a UV-Vis  spectrophotometer at  a wavelength of 598 nm. The results showed ethanol extract of seeds of A. microcarpa, A. malaccensis, and A. beccariana have
reducing power of 6.39 ± 1.58; 119.95 ± 28.04; and 62.12 ± 6.57 µM troloks equivalents / g extract respectively.
Key words: seeds, Aquilaria microcarpa, Aquilaria malaccensis, Aquilaria beccariana, FRAP

## I. PENDAHULUAN
Suatu  hal  paling  umum  disebut dalam  patogenesis  penyakit  kronis  adalah stress  oksidatif  yang  melepaskan  radikal bebas sebagai penyebab kerusakan endogen  utama  dalam  sistem  biologi. Kerusakan  endogen  ini  sering  dikaitkan dengan  berbagai  gangguan  dan  penyakit degeneratif seperti kanker, penyakit kardiovaskular gangguan fungsi imun, dan penuaan  (Carocho  and  Ferreira,  2013). Radikal  bebas  merupakan  molekul  reaktif yang memiliki elektron tidak berpasangan. Untuk  mendapatkan  stabilitas,  radikal bebas  menangkap  elektron  dari  senyawa lain  sehingga  senyawa  tersebut  menjadi radikal  bebas  yang  akan  menyerang senyawa lain untuk mendapatkan stabilitas sehingga akan memicu reaksi berantai. Hal ini akan mengakibatkan disintegrasi membran  dan  komponen  sel,  termasuk lipid,  protein  dan  asam  nukleat  (Rahman, 2007). Kerusakan plasma darah juga dapat terjadi  akibat  adanya  radikal  bebas  (Rizki et al ., 2017)
Penelitian  ini  dilakukan  pada ekstrak  etanol  biji A.  microcarpa , A. malaccensis ,  dan A.  beccariana .  Tujuan
penelitian  ini  adalah  menentukan  daya reduksi  ekstrak  etanol  biji Aquilaria microcarpa , Aquilaria  malaccensis ,  dan Aquilaria  beccariana terhadap  Ion  Ferri (Fe 3+ ) dengan menggunakan metode FRAP.  Manfaat  penelitian  ini  diharapkan dapat mendukung pengembangannya tanaman  gaharu  sebagai  agen  antioksidan alami dengan melakukan skrining pada biji beberapa spesies tanaman penghasil gaharu.

## II. METODE

## A. Alat dan Bahan penelitian
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini,  yaitu  neraca    analitik (Ohaus),    blender  (Miyako),  alat  gelas (Iwaki  Pyrex),  ayakan,  desikator,  bejana maserasi, vacuum rotary evaporator (IKA),    oven  (Memmert),    pH    meter, mikropipet  (Socorex), waterbath ,  dan spektrofotometer UV-Vis (Shimidzu).
Bahan-bahan yang digunakan, yaitu  biji  tanaman  gaharu  dari  spesies A. microcarpa,  A.  malaccensis dan A.
beccariana , etanol 96% (Brataco), akuades,
bufer  asetat  300  mM  pH  3,6;  metanol  p.a (Merck),  HCl  (Merck),  troloks  (Sigma-
Aldrich),  TPTZ  (2,4,6-tri[2-pyridyl]-s- triazine)  (Sigma-Aldrich),  FeCl3·6H2O (Sigma-Aldrich,)  aquadest,  dan  kertas saring.

## B. Cara Kerja
1. Pembuatan Ekstrak Etanol Biji
Biji A. microcarpa, A. malaccensis ,
dan A. beccariana disortasi basah (dibersihkan  dari  benda-benda  asing  dan kotoran)  dan  dicuci  bersih  dengan  air mengalir. Setelah ditiriskan biji dikeringanginkan menggunakan oven sampai  kering.  Sampel  yang  kering disortasi  kering  (dipisahkan  dari  benda- benda asing). Biji dihaluskan menggunakan blender ,  lalu  serbuk  yag didapat  diayak  dengan  pengayak  no.  25 dan  kemudian  disimpan  dalam  wadah bersih.
Serbuk biji A. microcarpa, A. malaccensis ,  dan A.  beccariana masing- masing  dimaserasi  dengan  etanol  70%, selama 24 jam. Maserat disaring menggunakan  kertas  saring  dan  residu yang  tersisa  diremaserasi  sebanyak  2  kali. Seluruh  filtrat  yang  diperoleh  diuapkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator  hingga  terjadi  penyusutan ekstrak, selanjutnya di- waterbath sehingga didapatkan  ekstrak  kental.  Dari  ekstrak kental yang didapat, dilakukan penghitungan  rendemen  dan  pemeriksaan organoleptik.

## 2. Penentuan  daya  reduksi  dengan metode Metode FRAP
Pereaksi  FRAP  dibuat  dengan campuran  bufer  asetat  300  mM  pH  3,6; TPTZ  (2,4,6-tri[2-pyridyl]-s-triazine)  10 mM  dalam  40  mM  HCl;  dan  20  mM FeCl3·6H2O dengan nisbah 10:1:1.
Sebanyak 12,5 mg troloks ditimbang  seksama  dan  dilarutkan  dengan 10  mL  metanol  menggunakan  labu  ukur sehingga didapat konsentrasi trolox 5 mM. Sejumlah 0,4; 4; 8; 12; dan 16 ml trolox 5 mM diambil dan masing-masing dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  100  ml, kemudian ditambahkan metanol pa hingga tanda  batas  sehingga  didapatkan  seri konsentrasi  troloks  sebesar  20,  200,  400, 600,  dan  800  µM  trolox  (1  µM  =  10 -3 mmol/L). Sebanyak 150 µl masing-masing seri  larutan  troloks  tersebut  ditambahkan 4,5 ml pereaksi FRAP kemudian didiamkan  selama  30  menit  pada  suhu 30  °C  dan  diukur  absorbansinya  pada  598 nm  menggunakan  spektrofotometer  UV- Vis.  Persamaan  kurva  baku  dibuat berdasarkan data konsentrasi dan absorbansi seri larutan troloks
Sejumlah sampel ditimbang seksama,  kemudian  dilarutkan  ke  dalam pelarut  metanol  pa.  sehingga  didapat larutan sampel dalam konsentrasi tertentu.
Sebanyak  150  µl  larutan  sampel ekstrak  ditambahkan  4,5  ml  pereaksi FRAP  kemudian  didiamkan  selama  30
menit  pada  suhu  30  °C  dan  diukur absorbansnya  pada  598  nm.  Kapasitas antioksidan dinyatakan dalam µmol troloks/g ekstrak. Pengukuran ini dilakukan  dengan  replikasi  3  kali  untuk masing-masing  sampel  (Benzie  &  Strain, 1996).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Ketiga sampel dikeringkan
menggunakan oven suhu 50ºC.
Pengeringan  bertujuan  agar  bahan  dapat disimpan  dalam  waktu  lama.  Proses pengeringan  juga  dapat  menghentikan reaksi  enzimatik. Apabila reaksi enzimatis dihentikan,  maka  enzim  akan  menjadi tidak  aktif  sehingga  tidak  terjadinya penguraian  bahan  aktif  pada  biji  gaharu (Krisyanella et al , 2012).
Pelarut  yang  digunakan  untuk menyari yaitu etanol 70% karena memiliki penetrasi  yang  baik  dalam  menembus dinding  sel  sampel.  Penggunaan  pelarut etanol 70% lebih baik dibandingkan etanol murni  karena  mampu  menarik  senyawa metabolit sekunder lebih banyak (Tiwari et al ., 2011).
Nilai rendemen menunjukkan bobot  senyawa  metabolit  sekunder  yang dapat tersari dari suatu sampel. Rendemen dan  hasil  uji  organoleptik  dari  ekstrak ditunjukkan pada Tabel I.
Tabel  I. Rendemen  dan  organoleptik ekstrak
Sampel Rendemen (%) Organoleptik A. microcarpa 1,80 Warna coklat, bau khas lemak, rasa  getir, dan konsistensi semipadat A. malaccensis 2,00 Warna coklat muda, bau khas lemak (kuat), rasa  getir, dan konsistensi semipadat A. beccariana 4,20 Warna coklat, bau khas ekstrak, rasa getir, dan konsistensi semipadat Konsistensi : Semipadat
Pada ketiga ekstrak nilai rendemen terbesar  pada  ekstrak  etanol  biji A. beccariana, diikuti A. malaccensis, dan A. macrocarpa .  Semakin  tinggi  rendemen menunjukkan  semakin  banyak  ekstrak yang dapat diperoleh (Anwar dan Triyasmono, 2016). Rendemen pada sampel  biji  umumnya  tidak  sebesar  nilai rendemen  pada  daun  maupun  buah.  Daun dan buah mengkudu ( Morinda citrifolia L.) yang  diekstraksi  dengan  etanol  96% mempunyai rendemen berturut-turut sebesar  15,74  dan  15,78%  (Wigati et  al ., 2017).  Demikian  juga  dengan  ekstraksi herba  lampasau  ( Diplazium  esculentum Swartz.)  dengan  pelarut  etanol  70%  yang rendemennya 24,75% (Zaini et al ., 2016).
Biji  memiliki  karakteristik  yang keras,  sehingga  pelarut sulit untuk
menembus seluruh bagian sampel meskipun sudah dalam bentuk serbuk. Biji juga umumnya mengandung senyawa lipid, sehingga  metabolit  sekunder  tidak  banyak terkandung di dalamnya.
Hasil uji organoleptik ketiga ekstrak  menunjukkan  warna  yang  identik karena berasal  dari  genus  yang sama.  Bau dari  ketiga  ekstrak  berbau    khas  lemak. Hal tersebut disebabkan tingginya kandungan  lemak  (lipid)  di  dalam  biji. Rasa getir menunjukkan karakteristik khas dari  suatu  biji.  Konsistensi  dari  ketiga ekstrak  yaitu  semipadat.  Hal  tersebut disebabkan tujuan pembuatan ekstrak yaitu ekstrak  kental.  Selain  itu,  lipid  pada  biji juga  menyebabkan  ekstrak  tersebut  sulit menjadi kering.
Daya  reduksi  ekstrak  biji A. microcarpa,  A.  malaccensis ,  dan A. beccariana dengan metode FRAP ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar  1 .  Hasil  daya  reduksi  ekstrak  etanol  biji A.  microcarpa , A.  malaccensis ,  dan A. beccariana terhadap  Ion  Ferri  (Fe 3+ ) dengan Metode FRAP
Gambar  1  menunjukkan  bahwa esktrak etanol A. microcarpa, A. malaccensis ,  dan A.  beccariana memiliki kemampuan  mereduksi  ion  ferri  (Fe 3+ ).
Hal tersebut dapat menggambarkan bahwa ketiga sampel memiliki aktivitas antioksidan. Kemampuan mereduksi terbesar  ditunjukkan  oleh  ekstrak  biji A. malaccensis Hasil pengujian dengan metode FRAP dipengaruhi oleh banyaknya reduksi  dari ferri-tripyridyl  triazine (Fe (III)-TPTZ) berubah menjadi ferro- tripyridyl-triazine (Fe  (II)-TPTZ)  oleh pereduksi atau reduktan (Benzie dan Strain, 1996). Pembacaan menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang 598 nm. Larutan berwarna biru yang terbaca pada daerah visibel.
Kemampuan daya reduksi ion  ferri (Fe 3+ )  dengan  metode  FRAP  yang  dapat menggambarkan aktivitas antioksidan memiliki keterbatasan. Uji aktivitas antioksidan pada metoda FRAP  umumnya akan menggambarkan aktivitas antioksidan yang  tinggi  pada  senyawa  yang  bersifat polar dibandingkan yang bersifat nonpolar (Arif et al ., 2014). Diperlukan uji aktivitas antioksidan  dengan  metode  lain  untuk mendukung kemampuan antioksidan suatu sampel.
6,39 119,95 62,12 0 50 100 150 200 D aya Re duksi ( µ m ol e k ial en trol ok s/ g
ek st ra k ) Ekstrak Etanol

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  biji A. microcarpa , A.  malaccensis ,  dan A. beccariana mempunyai  daya  reduksi berturut-turut sebesar
6,39±1,58;
119,95±28,04; dan 62,12±6,57 µM ekivalen troloks/g ekstrak.

## DAFTAR PUSTAKA
Anwar,  K.,  dan  Triyasmono,  L.,  2016,
Kandungan  Total  Fenolik,  Total Flavonoid, dan Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Buah
Mengkudu  ( Morinda  citrifolia L.),
Jurnal Pharmascience , 3(1): 83 -92
Arif, Y., Jose, C., Teruna, H., 2014, Total
Fenolik,Flavonoid  Serta  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  N-Heksana, Diklorometan dan Metanol Amaranthus Spinosus L Em5- Bawang Putih, JOM FMIPA VOLUME 1 No. 2 Oktober 2014 Benzie,  I.F.F.  dan  Strain  J.J.  (1996).  The ferric reducing ability of plasma as a measure of “antioxidant power” The FRAP assay. Analitycal
Biochemitical 239 : 70-76.
Carocho  and  Ferreira,  2013,  A  review  on antioxidants, prooxidants and related controversy:  Natural  and  synthetic compounds,  screening  and  analysis
methodologies
and future perspectives, Food  and  Chemical
Toxicology 51 (2013) 15–25
Krisyanella,  Dachriyanus,  dan  Marlina.
2012.  Karakterisasi  Simplisia  dan Ekstrak  serta  Isolasi  Senyawa  Aktif Antibakteri dari Daun Karangmunting ( Rhodomyrtus tomentosa (W.Ait)  Hassk). Artikel
Program Master . Universitas Andalas, Padang
Rahman,  2007,  Studies  on  free  radicals, antioxidants, and co-factors, Clinical
Interventions  in  Aging 2007:2(2)
219–236. Rizki,  M.,  Nurkhasanah.,  Yuwono,  T., Nuraini,  L.,  Kraisintu,  K.,  2017, Antioxidant Activity Of Nanoparticle From Rosella (Hibiscus sabdariffa L) Calyx Extract
Originated Indonesia And Thailand.,
RJPBCS,  8(1S),  January  –  February 2017(Suppl.) Tiwari,  P.,  Kumar  B.,  Kaur  M.,  Kaur  G., dan  Kaur  H.  2011.  Phytochemical Screening  and  Extraction  :  A Review.
International
Pharmaceutica  Scienca . 1 (1)  :  98-
106.
Wigati,  D.,  Anwar,  K.,  Sudarsono,  dan
Nugroho,  A.E.,  2017,  Hypotensive Activity  of  Ethanolic  Extracts  of Morinda  citrifolia L.  Leaves  and Fruit  in  Dexamethasone-Induced Hypertensive Rat. Journal of Evidence-Based Complementary and
Alternative Medicine 22(1):107-113
Zaini,  M.,  Biworo,  A.,  dan  Anwar,  K.,
2016, Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak  Etanol  Herba  Lampasau ( Diplazium esculentum
Swartz)
Terhadap Mencit Jantan Yang Diinduksi Karagenin-Λ. Jurnal
Pharmascience , 03(02): 119 -130