## PENGARUH SECRETOME SEL PUNCA MESENKIMAL TERHADAP EKSPRESI INTERLEUKIN-1β DAN

## CASPASE-1

## THE EFFECT OF MESENCHYMAL STEM CELL SECRETOME TOWARD
INTERLEUKIN-1β AND CASPASE-1 EXPRESSION
Toumi Shiddiqi, Zainal Arifin Adnan, Arifin, Arief Nurudhin Sub Bagian Reumatologi, Bagian Ilmu Penyakit Dalam FK UNS / RSUD Dr. Moewardi Surakarta Korespondensi: dr. Toumi Shiddiqi, Sp. PD. Email: toumi.shiddiqi.05@gmail.com

## ABSTRAK
Systemic  Lupus  Erythematosus  adalah  penyakit  inflamasi  autoimun  kronis  dengan  manifestasi  klinis beragam dan luas. Pemberian injeksi pristan intraperitoneal dapat menginduksi lupus pada mencit. IL-1β merupakan sitokin inflamasi yang berperan pada patogenesis SLE melalui jalur Caspase-1. Secretome sel punca mesenkimal mengandung Stanniocalcin-1 yang berperan sebagai antiinflamasi. Tujuan Penelitian adalah untuk mengetahui pengaruh  secretome  sel  punca  mesenkimal  terhadap  ekspresi  IL-1β  dan  Caspase-1    pada  mencit  model  lupus dengan induksi pristan. Penelitian eksperimental dengan metode post test only control group design, sampel 21 ekor mencit betina Mus Musculus galur Balb/C, dibagi 3 kelompok yaitu kelompok kontrol (injeksi intraperitoneal NaCl 0,9% 0,5 ml), kelompok pristan (injeksi pristan intraperitoneal 0,5 ml) dan kelompok pristan+secretome (injeksi intraperitoneal pristan 0,5 ml dan secretome 0,45 ml). Penelitian dilakukan selama 3 minggu, secretome diberikan pada akhir penelitian. Dinilai ekspresi IL-1β dan Caspase-1 secara imunohistokimia. Analisis  statistik menggunakan IBM SPSS 20 dengan uji ANOVA dilanjutkan uji post hoc LSD. P bermakna jika p<0,05. Hasil penelitian  menunjukkan  rata-rata  ekspresi  IL-1β  pada  ketiga  kelompok  yaitu  kontrol  (22,75±8,30);  pristan (79,67±18,24); pristan+secretome (19,94±6,41), dengan kemaknaan p=0,000. Terdapat perbedaan bermakna ekspresi IL-1β antara kelompok kontrol vs pristan (-56,92±6,69; p=0,000), kelompok pristan vs pristan+secretome (61,31±6,69; p=0,000). Rata-rata ekspresi Caspase-1 pada ketiga kelompok yaitu kontrol(17,04±6,30); pristan (81,25±17,32); pristan+secretome (21,97±12,59), dengan kemaknaan p=0.000. Terdapat perbedaan bermakna ekspresi Caspase-1 antara kelompok kontrol vs pristan (-64,21±6,69; p=0,000) dan kelompok pristan vs pristan+secretome (59,28±6,69; p=0,000).Simpulan yang dapat diambil adalah  secretome sel punca mesenkimal menurunkan ekspresi IL-1β dan Caspase-1 pada mencit model lupus dengan induksi pristan.
Kata Kunci: Caspase-1, Interleukin-1β, Pristan, Secretome, Systemic Lupus Erythematosus.

## ABSTRACT
Systemic  lupus  Erythematosus  is  a  chronic  autoimmune  inflammatory  disease  with  extensive  clinical features and diverse course of the disease. Giving intraperitoneal pristane can induce lupus in mice. IL-1β is a inflammatory cytokine that role in SLE pathogenesis via Caspase-1 pathway. Mesenchymal Stem cells secretome consist stanniocalcin-1, which is role as antiinflammatory. The objectives is Knowing mesenchymal stem cells secretome  effect  on  the  expression  of  IL-1β  and  Caspase-1  in  murine  lupus  models  induced  by  pristane.  A randomized experimental study, post test only control group design, sample of 21 female Mus Musculus mice strain Balb/C, divided into 3 groups : control group (intraperitoneal injection of 0.5 ml of  0.9% NaCl), pristane group (intraperitoneal injection of 0.5 ml pristane), and pristane + secretome group (intraperitoneal injection of 0.5 ml pristane and 0.45 ml of secretome). The study carried out for 3 weeks, secretome given at the end of study. Expression of IL-1β and Caspase-1 (immunohistochemistry) assessed after administration of secretome. Statistical analysis using IBM SPSS 20 using ANOVA test and LSD post hoc test.  Significant if p<0,05. Results: The average expression of IL-1β in  three groups are : control group (22,75±8,30); pristan group (79,67±18,24); pristan+secretome group (19,94±6,41), p=0,000. There are significant differences in the expression of IL-1β in the control group vs pristane group (-56,92±6,69; p=0,000), pristan group vs pristan+secretome group (61,31±6,69; p=0,000). The average expression of Caspase-1 in three groups are : control groups (17,04±6,30); pristan group (81,25±17,32); pristan + secretome group (21,97±12,59), p=0.000. There are significant differences expression of Caspase-1 in control group vs pristan groups (-64,21±6,69; p=0,000) and pristane group vs pristane + secretome
group (59,28±6,69; p=0,000). Conclusions:  Mesenchymal stem cells secretome decreased the expression of IL-1β and Caspase-1 in murine lupus models induced by pristane.
Keywords: Caspase-1, Interleukin-1β, Pristane, Secretome, Systemic Lupus Erythematosus.
PENDAHULUAN Systemic  Lupus  Erythematosus (SLE) merupakan penyakit autoimun heterogen dengan ciri inflamasi kronis yang melibatkan banyak organ berbeda dengan gambaran klinis yang bervariasi (Kuhn, et al ., 2015; Schaper et al ., 2014; Zickert, 2013). Etiopatologi  SLE melibatkan  interaksi yang kompleks dan multifaktorial antara variasi genetik dan faktor lingkungan (Suarjana, 2014). Penyakit ini terutama menyerang wanita usia reproduksi dengan angka kematian yang cukup tinggi. Insidensi SLE pada wanita 9 kali lebih tinggi dibanding pria (Sterner, et  al., 2014). Faktor genetik, imunologik dan hormonal serta lingkungan diduga berperan dalam patofisiologi SLE (Perhimpunan Rematologi Indonesia, 2011).
Karakteristik SLE yaitu terbentuknya autoantibodi terhadap komponen inti sel, deposisi kompleks imun, dan kerusakan organ yang diperantarai  sel  inflamasi.  Sistem  imun  alami berperan dalam patogenesis penyakit. Salah satu abnormalitas yang terjadi yaitu stimulasi sinyal toll like  receptor (TLR) oleh kompleks imun, aktivasi respon persisten IFN 1, dan produksi berlebihan neutrophil  extracellular  traps (NET) (Kahlenberg dan Kaplan, 2014). Inflammasome yaitu kompleks molekul multiprotein sitosol, yang bila terinduksi oligomerisasi akibat respon terhadap patogen dan penanda bahaya lainnya, akan mengaktifkan caspase-1 , yang merupakan enzim utama yang bertanggungjawab dalam mengaktivasi sitokin proinflamasi IL-1β dan IL-18 (Vanaja et al ., 2015). Aktivasi inflammasome , khususnya bila terjadi infeksi intraseluler, akan menyebabkan kematian sel yang diperantarai caspase-1 , yang disebut pyroptosis . Kompleks imun yang terbentuk sekunder dari pengenalan antibodi dari antigen DNA atau RNA, diketahui menstimulasi aktivasi inflammasome melalui peningkatan aktivasi TLR-dependent Nuclear  Factor-κB (NF-κB)  dan  aktivasi  NLRP3 inflammasome . Komplemen C3a, yang rilis saat aktivasi komplemen di jaringan, membantu aktivasi inflammasome melalui peningkatan sekresi ATP. Kedua proses tersebut, deposisi kompleks imun dan konsumsi komplemen pada organ, yang terjadi pada SLE, mengaktivasi inflammasome dan memperburuk
kerusakan organ (Kahlenberg dan Kaplan, 2014; Reeves, 2014; Bauernfeind dan Hornung, 2013).
Inflammasome memiliki peranan penting dalam patogenesis SLE, oleh karena itu, tatalaksana SLE salah satunya yaitu dengan memodulasi efek pada aktivitas inflammasome .
Caspase-1 dikenal juga sebagai interleukin-1 converting  enzime /ICE, memiliki peranan pada patogenesis SLE, yaitu mengubah pro IL-1β dan pro IL-18 menjadi bentuk aktifnya. Caspase-1 melalui NLRP3 ( salah satu gen inflammasome ) akan diaktivasi melalui 2 jalur, yaitu melalui TLR atau TNFαR dan secara langsung mengaktivasi NLRP3 oleh ATP atau toksin bakteri yang membentuk lubang pada membran sel, sehingga terjadi peningkatan konsentrasi ion Na dan K (Reeves, 2014).
IL-1β dan IL-18 adalah satu keluarga sitokin yang mempunyai efek pada berbagai proses biologis yang  berperan  pada  infeksi,  inflamasi,  dan  proses autoimun. Selain itu, keduanya berperan dalam perburukan dan keparahan dari nefritis lupus (Ka et al. , 2015; Zhao et al ., 2013). Penggunaan terapi imunosupresi pada SLE telah digunakan secara luas, baik kortikosteroid dan siklofosfamid, memberikan perbaikan dan penurunan progresivitas menuju gagal organ stadium akhir dalam dekade terakhir. Namun keduanya memiliki efek  samping  yang  signifikan. Agen  imunosupresi lain seperti mycophenolate  mofetil (MMF) dan rituximab, efektif pada SLE yang resisten, namun dibutuhkan biaya tinggi dan memiliki efek samping  yang  signifikan.  Meskipun  menggunakan agen imunosupresi yang poten, beberapa pasien mengalami refrakter dengan progresivitas yang meningkat dan mengancam pada kematian (Liang et al ., 2010).
Pemberian sel punca mesenkimal menunjukkan perbaikan pada pasien SLE berat yang refrakter (Sun et al ., 2010). Umbilical  cord mesenchymal stem cell transplantaion memberikan respon yang memuaskan pada SLE refrakter (Wang et al ., 2014). Sel punca mensekresikan sejumlah protein ( secretome ) termasuk faktor pertumbuhan, kemokin, sitokin, metabolit dan lipid bioaktif yang mengatur secara autokrin atau parakrin sambil merekayasa interaksi dengan lingkungan mikro
sekitarnya (Drago et al ., 2013). Beberapa stimulan dapat ditambahkan pada medium kultur, yaitu prekondisi  hipoksia,  inflamasi,  dan  penumbuhan sel kultur dalam bidang 3 dimensi akan merangsang sekresi dari berbagai faktor terapeutik potensial (Madrigal et al , 2014). Penelitian Oh et al . (2014) menunjukkan bahwa sel punca mesenkimal manusia mengurangi aktivasi inflammasome NLRP3 pada makrofag manusia atau makrofag tikus yang distimulasi dengan LPS dan ATP. Aktivasi caspase-1 dan rilis IL-1β  menurun  pada  makrofag  yang  di  kokultur dengan sel punca mesenkimal manusia. Sel punca mesenkimal menekan pembentukan reactive oxygen species mitokondria pada makrofag. Sel punca mesenkimal mensekresi stanniocalcin (STC-1), sebuah protein  antiapoptosis yang menghambat aktivasi inflammasome dan menekan produksi ROS.
Pristan ( Tetra methyl penta decane / TMPD) merupakan zat yang berperan untuk menginduksi SLE pada hewan (Kahlenberg et al ., 2014).  Pristan menginduksi SLE melalui jalur TLR 2 (Urbonaviciute et al ., 2013). Penelitian yang menggunakan secretome sel punca mesenkimal pada SLE belum ada sehingga peneliti ingin meneliti pengaruh secretome sel punca mesenkimal pada kultur medium terkondisi hipoksia terhadap ekspresi IL-1β dan Caspase-1 pada mencit model lupus dengan induksi pristan.

## METODE PENELITIAN
Gambar 1. Alur Penelitian
Rancangan penelitian ini yaitu penelitian eksperimental randomisasi dengan metode post test  only  control  group  design . Perlakuan pada hewan coba dilakukan sesuai dengan ethical clearance . Ekspresi imunohistokimia dinilai dengan Skor Histo (H) = (% inti sel terwarnai positif dengan intensitas lemah x1) + (% inti sel terwarnai positif dengan intensitas sedang x2) + (% inti sel terwarnai positif dengan intensitas kuat x3), penghitungan dilakukan pada 10 lapang pandang berbeda dengan mikroskop cahaya, perbesaran 400x Olympus BX 50 Model BX-50F-3. ScopeImage 9.0 Digital Camera 2.0 Megapixel. Data berupa rerata 10 lapang pandang tersebut (Fedchenko dan Reifenrath, 2014; Ma et al ., 2013). Analisis  statistik  menggunakan IBM SPSS 20. Uji beda 3 rerata menggunakan uji parametrik (ANOVA) jika data variabel berdistribusi normal lalu dilanjutkan dengan LSD Post  Hoc Test . Sedangkan bila datanya berdistribusi tidak normal digunakan uji Kruskal - Wallis yang akan dilanjutkan dengan Mann  whitney .  P bermakna jika p<0,05.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Data hasil penelitian ini yaitu variabel ekspresi IL-1β dan Caspase-1 berupa nilai rerata dan SD, didapatkan hasil:
Tabel 1. Deskripsi dan Uji Normalitas Variabel ekspresi
IL-1β Kelompok Rata-rata ± SD (unit) Uji Normalitas Stat-KS Sig 1. Kontrol 22,75 ± 8,30 0,151 0,200 2. Pristan 79,67 ± 18,24 0,192 0,200 3. Pristan + secretome 19,57 ± 6,41 0,186 0,200 Distribusi data variabel IL-1β semua berdistribusi normal. Tabel 2. Variasi atau Perbedaan Tiga Rata-rata Variabel IL-1β menurut Kelompok Sampel. Kontrol Pristan Pristan + Secretome Rata-rata SD Rata-rata Rata-rata SD Std 22,75 8,30 79,67 22,75 8,30 2,8431 Nilai F = 53,89 p = 0,000*
Keterangan :*) Signifikan pada derajat signifikansi 5 persen.
Hasil analisis variasi atau beda 3 rata-rata di atas menunjukkan bahwa perbedaan 3 rata- rata variabel IL-1β tersebut menghasilkan nilai F hitung =53,89 dengan tingkat signifikansi sebesar 0,000 yang berarti beda 3 rata-rata itu signifikan.
Gambar 2. Perbandingan  rata-rata IL-1β antar

## kelompok sampel
Hasil analisis beda 2 rata-rata sampel independen menggunakan  penelusuran Post Hoc Test dengan LSD diatas menunjukkan bahwa uji terhadap variabel IL-1β antara kelompok Kontrol dan  pristan  signifikan  pada  derajat  signifikansi sebesar 0,000 persen (p < 0,05). Hal itu dapat dikatakatan bahwa pada mencit kelompok pristan  rata-rata  IL-1β  lebih  tinggi  (meningkat) secara meyakinkan dibandingkan kelompok kontrol. Setelah diberikan terapi secretome (pristan+secretome) maka rata-rata variabel IL-1β lebih rendah (mengalami penurunan) dibandingkan pada kelompok pristan dengan tingkat signifikansi sebesar 0,000 (p < 0,05). Dengan demikian hipotesis pertama yang menyatakan bahwa: “ Pemberian secretome menurunkan IL-1β pada mencit model lupus induksi pristan ” benar-benar dapat terbukti secara  meyakinkan.  Perbedaan  rata-rata  IL-1β kelompok terapi pristan dan secretome sel punca mesenkimal dengan kelompok kontrol memiliki tingkat signifikansi sebesar p = 0,670 yang berarti tidak signifikan pada derajat signifikansi sebesar 5 persen (p > 0,05), sehingga dapat dikatakan bahwa pemberian secretome sel punca mesenkimal mampu  menurunkan  ekspresi  IL-1β mendekati ekspresi IL-1β kelompok kontrol.
Gambar 3. Perbandingan gambaran ekspresi IL-1β antar kelompok.
Ekspresi  IL-1β  pada  inti  sel  epitel glomerulus dan sel tubulus ginjal nampak berwarna coklat (panah). A: kelompok kontrol; B: kelompok Pristan; C: kelompok Pristan+ secretome Tabel 3. Deskripsi dan Uji Normalitas Variabel ekspresi Caspase-1 Kelompok Rata-rata ±  SD (unit) Uji Normalitas Stat-KS Sig 1.  Kontrol 17,04 ± 6,30 0,282 0,096 2.  Pristan 78,70 ± 14,47 0,185 0,200 3. Pristan + secretome 21,97 ± 12,59 0,339 0,015
Distribusi data variabel Caspase-1 berdistribusi normal pada kelompok kontrol dan pristan, sedangkan kelompok pristan + secretome tidak normal, maka selanjutnya ddilakukan uji one sample kolmogorov-Smirnov , dan didapatkan data distribusi normal.
Tabel 4. Variasi atau Perbedaan Tiga Rata-rata Variabel Caspase-1 menurut Kelompok Sampel.
Kontrol Pristan Pristan + Secretome Rata-rata ± SD Rata-rata ± SD Rata-rata ± SD 17,04 ± 6,30 78,70 ± 14,47 21,97±12,57 F=53,89 p = 0,000*
Keterangan :*) Signifikan pada derajat signifikansi 5 persen.
Hasil analisis variasi atau beda 3 rata-rata di atas menunjukkan bahwa perbedaan 3 rata-rata variabel Caspase-1 tersebut menghasilkan nilai F hitung =53,89 dengan tingkat signifikansi sebesar 0,000 yang berarti beda 3 rata-rata itu signifikan.
Gambar 4. Perbandingan  rata-rata Caspase-1 antar kelompok sampel
Hasil analisis beda 2 rata-rata sampel independen menggunakan  penelusuran Post Hoc Test dengan LSD diatas menunjukkan bahwa uji terhadap variabel Caspase-1 antara kelompok kontrol  dan  pristan  signifikan  pada  derajat signifikansi  sebesar  0,000  persen  (p  <  0,05). Hal itu dapat dikatakatan bahwa pada mencit kelompok pristan rata-rata Caspase-1 lebih tinggi (meningkat) secara meyakinkan dibandingkan kelompok kontrol. Setelah diberikan terapi secretome (pristan+ secretome ) maka rata-rata variabel Caspase-1 lebih rendah (mengalami penurunan) dibandingkan pada kelompok pristan dengan  tingkat  signifikansi  sebesar  0,000  (p  < 0,05). Dengan demikian hipotesis kedua yang menyatakan bahwa: “ Pemberian  secretome menurunkan Caspase-1 pada mencit model lupus induksi  pristan ”  benar-benar terbukti secara meyakinkan Perbedaan rata-rata Caspase-1 kelompok terapi pristan dan secretome sel punca mesenkimal dengan kelompok kontrol memiliki tingkat signifikansi sebesar p = 0,439 yang berarti tidak signifikan pada derajat signifikansi sebesar 5 persen (p > 0,05), sehingga dapat dikatakan bahwa pemberian secretome sel punca mesenkimal mampu menurunkan ekspresi Caspase-1 mendekati ekspresi Caspase-1 kelompok kontrol. Pada penelitian ini, pemberian secretome sel punca mesenkimal pada mencit model lupus yang diinduksi pristan dapat menurunkan ekspresi  IL-1β  dan Caspase-1. Hal ini terbukti dari  ekspresi  IL-1β  dan Caspase-1 lebih rendah pada kelompok pristan + secretome dibandingkan dengan kelompok pristan. Dimana ekspresi IL-1β
dan Caspase-1 pada kelompok pristan + secretome tidak berbeda secara signifikan dengan kelompok kontrol.
Gambar 5. Perbandingan gambaran ekspresi Caspase-1 antar kelompok. Ekspresi Caspase-1 pada inti sel epitel glomerulus dan sel tubulus ginjal nampak berwarna coklat (panah). A: kelompok kontrol; B: kelompok Pristan; C: kelompok Pristan+ secretome
Hal ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Oh et al ., 2014 dimana pemberian pemberian sel punca mesenkimal dapat menghambat NLRP3 inflammasome dengan menurunkan reactive  oxygen  species (ROS) mitokondria. ROS berperan penting dalam mengaktivasi NLRP3 inflammasome (Martinon, 2010). NLRP3 inflammasome berperan penting dalam mengaktivasi caspase-1 yang akan mengubah  pro  IL-1β  menjadi  IL-1β  aktif  yang berperan  pada  mekanisme  inflamasi  pada  SLE (Reeves, 2014). Oleh karena itu, penghambatan aktivasi NLRP3 inflammasome dijadikan sebagai target terapi dalam tatalaksana SLE, khususnya nefritis lupus (Zhao et al ., 2013).
Pada penelitian ini, terjadi penurunan ekspresi  IL-1β  dan Caspase-1 pada kelompok pristan + secretome, hal ini kemungkinan disebabkan oleh penghambatan aktivasi NLRP3 inflammasome sehingga tidak terjadi aktivasi caspase-1 yang menyebabkan tidak terbentuknya IL-1β. Penghambatan aktivasi NLRP3 inflammasome disebabkan karena secretome sel punca mesenkimal mengandung stanniocalcin -1 (STC-1) yang juga berperan dalam menghambat produksi ROS (Oh et al ., 2014).
Pristan digunakan pada penelitian ini karena pristan dapat menginduksi mencit menyerupai kondisi pada pasien SLE (Rottman and Willis, 2010) SLE yang terjadi pada mencit sangat mirip
dengan yang terjadi pada manusia dalam hal produksi autoantibodi dan keterlibatan penyakit ginjal. Mencit betina lebih mudah menderita SLE. Salah satu cara menginduksi mencit strain normal menjadi lupus adalah dengan injeksi pristan (minyak hidrokarbon) dosis tunggal yang menyebabkan mencit memberikan gambaran klinis seperti pada manusia penderita SLE. Gambaran klinis tersebut adalah artritis, serositis, nefritis, vaskulitis, antigen anti smith, anti dsDNA, anti ribosomal P, dan anti small nuclear ribonucleoprotein (Reeves et al , 2009; Rottman and Willis, 2010). Injeksi pristan intraperitoneal pada mencit normal memicu timbulnya sindrom autoimun seperti lupus (Kahlenberg et al ., 2014). Pristan dengan dosis tunggal 0,5 ml intraperitoneal menginduksi apoptosis in  vitro dan in  vivo pada sel-sel limfoid kavum peritoneal yang menjadi inti autoantigen (Calvani et al , 2005). Pristan menginduksi autoimunitas dengan adanya produksi interferon 1, yaitu berupa IFN  α  dan  IFN  β.  IFN  1  akan  berikatan  dengan reseptornya IFNAR dan menyebabkan aktivasi respon imun innate dan adaptif. Adanya inflamasi pada peritoneum akan menyebabkan pengeluaran dari monosit imatur Ly6C dari sumsum tulang. Monosit imatur Ly6C inilah yang berperan memproduksi IFN 1 melalui berbagai mekanisme yang komplek. Monosit ini akan berubah menjadi makrofag di jaringan. Adanya sisa apoptosis dari sel akan dikenali oleh TLR7, suatu sensor untuk unmethylated  CpG  DNA yang dapat mengenali asam nukleat (Reeves et  al., 2009) Rangsangan endosomal TLR 7 selanjutnya akan merangsang molekul adaptor MyD88 (Kawai dan Akira, 2007). Langkah selanjutnya melibatkan kinase IRF ( interferon  regulatory  factor) 7. Sinyal dari IRF 7 ini akan menyebabkan transkripsi gen IFN 1 dan terjadi produksi IFN 1 yaitu IFN α dan IFN β (Reeves et al , 2009). Pristan juga menginduksi produksi autoantibodi melalui peran toll like receptor-2 (TLR 2). HMGB1 yang berasal dari sel yang apoptosis, akan berikatan pada TLR-2 dan menginduksi produksi autoantibodi (Urbonaviciute et al ., 2013). Penggunaan pristan akan terjadi reaksi inflamasi  akibat  bahan-bahan  kimiawi  (pristan) dan fragmentasi sel ataupun molekul damage - associated  molecular  pattern (DAMP) akibat
proses apoptosis dapat menimbulkan aktivasi makrofag,  menginduksi terjadinya aktivasi NFkβ dan  memproduksi  sitokin  proinflamasi.  Sitokin IL-6 akan menginduksi endotelin, endotelin akan mengaktifkan NADPH dan terbentuklah ROS. Selain itu, TNF-α juga akan mengaktifkan NADPH untuk membentuk ROS (Boeltz, 2013). Ekspresi gabungan sitokin dan ROS menghasilkan inflamasi ginjal  dan fibrosis, yang mengakibatkan kerusakan jaringan kumulatif baik di tingkat glomerular dan tingkat tubular (Nowling dan Gilkeson, 2011).
Secretome sel punca mesenkimal pada penelitian ini diperoleh dengan metode hipoksia, sehingga  mendukung aktivasi caspase 3, Bcl-2, MTP-2,  TGF-  β1  pada  sel  target  meningkatkan resistensi apoptosis; meningkatkan kapasitas regeneratif dari otot dan sel-sel endotel (Madrigal, 2014). Media sekresi sel punca mesenkimal mempunyai efek imunomodulasi. Pada prekondisi hipoksia akan menyebabkan sekresi dari VEGF, HGF 1, IGF -1, SDF-1. (Madrigal et al , 2014) VEGF akan meningkatkan angiogenesis dan mencegah apoptosis endotel sehingga akan mengurangi derajat vaskulitis. HGF berperan dalam menurunkan aktifitas autoreaktif sel limfosit B (Kuroiwa et al ., 2006), sehingga produksi antibody akan menurun. Selain itu HGF juga akan menurunkan apoptosis endotel sehingga akan menurunkan vaskulitis. IGF 1 berperan dalam menurunkan apoptosis endotel dan meningkatkan toleransi dari sel APC. Sedangkan SDF akan meningkatkan  apoptosis sel T autoreaktif dan menurunkan sel B autoreaktif (Madrigal et al , 2014). STC-1 berperan menghambat NLRP3 inflammasome sehingga tidak terbentuk sitokin pro inflamasi (Oh et al ., 2014). Sehingga dengan pemberian media sekresi sel punca mesenkimal ini akan terjadi perbaikan dari kerusakan organ sasaran.
Penelitian ini memiliki beberapa kelemahan yaitu jumlah sampel yang sedikit, penilaian imunohistokimia menggunakan cara manual, dan lama penelitian 2 minggu. Perlu dilakukan penelitian mengenai kandungan dari secretome , dan penelitian lanjutan dengan subyek penelitian yang lebih besar agar peran secretome sel punca mesenkimal dapat diterapkan pada manusia.
SIMPULAN Berdasarkan hasil-hasil penelitian yang dilakukan maka dapat diambil kesimpulan sebagai berikut :
a. Pemberian secretome sel punca messenkimal berpengaruh terhadap penurunan ekspresi IL-1β  pada  mencit  model  lupus  induksi pristan b. Pemberian secretome sel punca messenkimal berpengaruh terhadap penurunan ekspresi Caspase-1 pada mencit model lupus induksi pristan

## DAFTAR PUSTAKA
Bauernfeind F dan Hornung V. 2013. Of inflammasomes and pathogens - sensing of microbes by the inflammasome. Embo Mol Med 5: 814–26
Boeltz S, Kienhoefer, D, and Hoffmann,MH.,  2013. Wolves in sheeps’s clothing: how chemically inert hydrocarbon oil induce autoimmunity. Immunome Research , vol. 10, hlm. 1-5.
Calvani N, Caricchio R, Tucci M, Sobel ES, Silvestris F, Tartaglia P, Richards HB , 2005. Induction of apoptosis by the hydrocarbon oil pristane: implications for pristane-induced lupus. The Journal of Immunology , vol.175, no.7, hlm.4777-82.
Drago D, Cossetti C, Iraci N, Gaude E, Musco G, Bachi A, Pluchino S. 2013. The stem cell secretome and it’s role in brain repair. Biochimie, no. 95, hlm. 2271-2285.
Fedchenko  N  and  Reifenrath  J.  2014.  Different  approaches  for  interpretation  and  reporting  of immunohistochemistry analysis results in the bone tissue – a review. Diagnostic Pathology . 9:221
Ka, SM, Lin JC, Lin TJ, Liu FC, Chao LK, CL, et al . 2015, Citral alleviates an accelerated and severe lupus  nephritis  model  by  inhibiting  the  activation  signal  of  NLRP3  inflammasome  and enhancing Nrf2 activation . Arthritis Research & Therapy , 17:331.
Kahlenberg JM ,dan Kaplan MJ. 2014. The Inflammasome and lupus another innate immune mechanism contributing to disease pathogenesis. Curr Opin Rheumatol ; 26(5): 475–81
Kawai T dan Akira S. 2006. Innate immune recognition of viral infection. Nature Immunology , vol. 7, hlm. 131–137.
Kuhn A, 2015. The diagnosis and treatment of systemic lupus erythematosus. Dtsch Arztebl Int . 112: 423–32.
Kuroiwa T, Iwasaki T, Sano H. 2006. Hepatocyte growth factor prevents lupus nephritis in murine lupus model of chronic graft-versus_host disease. Arthritis Research and Therapy , vol. 8, no. 4, hlm.1-8.
Liang J, Zhang H, Hua B, Wang H, Lu L, Shi S, Hou Y, Zeng X, Gilkeson GS, Sun L. 2010. Allogenic mesenchymal stem cell transplantation in refractory systemic lupus erythematosus : a pilot clinical study. Annals of the Rheumatic Disease , no. 69, hlm.1423-29.
Ma H, Lu Y, Marchbanks PA, Folger SG, Strom BL, McDonald JA, Simon MS, Weiss LK, Malone KE, Burkman RT, Sullivan-Halley J, Deapen DM, Press MF and Bernstein L. 2013. Quantitative measures of estrogen receptor expression in relation to breast cancer-specific mortality risk among white women and black women. Breast Cancer Research, 15:R90
Madrigal M, Rao KS, Riordan NH. 2014. A review of therapeutic effects of mesenchymal stem cell secretions  and  induction  of  secretory  modification  by  different  culture  methods. Journal  of Translational Medicine , vol. 12, no. 260, hlm. 1-14.
Martinon F. 2010. Activation mechanisms Signaling by ROS drives inflammasome activation. Eur. J. Immunol .40: 595–653
Nowling TK. dan Gilkeson GS. 2011. Mechanism of tissue injury in lupus nephritis. Arthritis Research and Therapy , vol. 13, hlm. 250.
Oh, JY., Ko, JH., Lee, HJ., Yu, JM., Choi, H., Kim, MK., Wee, WR., dan Prockop, DJ. 2014. Mesenchymal Stem/Stromal Cells Inhibit the NLRP3 Inflammasome by Decreasing Mitochondrial Reactive Oxygen Species. Stem Cells Express, 32:1553–63
Perhimpunan Rematologi Indonesia, 2011. Rekomendasi Perhimpunan Reumatologi Indonesia Untuk Diagnosis dan Pengelolaan  Lupus Eritematosus Sistemik.
Reeves, WH. 2014. SLE Death by fire and ICE. Arthritis Rheumatol ; 66(1): 6–9.
Reeves, W.H.,  Lee PY, Weinstein JS, Satoh M, Lu L, 2009. Induction Of Autoimmunity By Pristane And Other Naturally Occurring Hydrocarbons. Trends Immunology , vol. 30, no.9, hlm. 455–464. Rottman JB dan Willis CR. 2010. Mouse models of systemic lupus erythematosus reveal a complex pathogenesis. Veterinary Pathology, vol. 47, no. 4, hlm. 664-676.
Schaper F, Westra J, and Bijl M. 2014. Recent developments in the role of high-mobility group box 1in systemic lupus erythematosus. Molmed . 20: 72-79.
Sterner RM, Hartono SP, dan Grande JP. 2014. The pathogenesis of lupus nephritis. J Clin Cell Immunol . ; 5(2):
Suarjana, I.N., 2014. ImunopatogenesisLupus Eritematosus Sistemik. hlm. 3331-45. Dalam : Simadibrata M., et al . (editors). Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Jilid III Edisi VI. Jakarta : Interna Publishing FK UI.
Sun, L., Wang, D., Liang, J., Zhang, H., Feng, X., Wang, H. 2010. Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell Transplantation in Severe and Refractory Systemis Lupus Erythematosus.Arthritis & Rheumatism, vol. 62, no. 8, hlm. 2467-2475.
Urbonaviciute V, Starke C, Pirschel W, Pohle S, Frey S, Daniel C, Amann K, Schett G, Herrmann M, and Reinhard E. 2013. Toll-like receptor 2 is required for autoantibody production and development of renal disease in pristane-induced lupus. American College of Rheumatology . 65: 1612–23
Vanaja SK, Rathinam VAK, dan Fitzgerald KA. 2015. Mechanisms of inflammasome activation: recent advances and novel insights .  Trends in Cell Biology . (25):5
Wang D, Li J, Zhang Y, Zhang M, Chen J, Li X, Hu X, Jiang S, Shi S and Sun L. 2014. Umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation in active and refractory systemic lupus erythematosus: a multicenter clinical study. Arthritis Research & Therapy. 16:R79
Zhao J, Wang H, Dai C, Wang H, Zhang H, Huang Y, Wang S, Gaskin F, Yang N, and Fu SM. 2013. P2x7 blockade attenuates murine lupus nephritis by inhibiting activation of the nlrp3/asc/caspase 1 pathway. Arthritis Rheum . 65(12): 3176–3185.
Zickert, A. 2013. Studies on lupus nephritis.Tesis, Department of medicine, Karolinka Institute, Stockholm, Sweden.