## ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF ETHANOL EXTRACT AND FRACTION FROM STEMS OF GEDI PLANT (ABELMOSCHUS MANIHOT L.)

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAN FRAKSI ETANOL DARI BATANG
TANAMAN GEDI (Abelmoschus manihot L.)
Luy Ruben Parala 1) , Herni E. I. Simbala 1) , Erladys M. Rumondor 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi
Luyparala105@student.unsrat.ac.id ; hsimbala@yahoo.co.id; erladys.rumondor@gmail.com

## ABSTRACT
Gedi plant (Abelmoschus manihot L.) is a plant that has a lot of potential as an active compound.  Gedi plants have many sources of antioxidant compounds found in their leaves.  Research on gedi stems aims to find out if gedi plant stems have the same amount of antioxidants as gedi leaves.  The research was conducted using an experimental method with the DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhidrazyl) method.  Extraction was carried out by maceration method to extract metabolite compounds.  Testing the results of the extracts and fractions was carried out using UV-Vis spectrophotometry at a wavelength of 517 nm. The test results obtained the amount of  activity  of  the  extracts  and  each  fraction,  namely:  82.08%  ethanol  extract,  77.65%  methanol  fraction, 85.66% chloroform fraction , n-hexane fraction 78.26%.

## Keywords: Antioxidants, DPPH, Abelmoschus manihot L

## ABSTRAK
Tanaman  gedi  ( Abelmoschus  manihot L.)  adalah  tanaman  yang  memiliki  banyak  potensi  sebagai  senyawa aktif. Tanaman gedi memilliki banyak sumber senyawa antioksidan yang terdapat pada daunnya.  Penelitian pada batang gedi bertujuan agar mengetahui jika batang tanaman gedi memiliki jumlah antioksidan yang sama dengan daun gedi. Penelitian yang dilakukan menggunakan metode eksperimental dengan metode DPPH (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil) .  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi  untuk  mengambil  senyawa  metabolit sekunder.  Pengujian  hasil  ekstrak  dan  fraksi  dilakukan  dengan  spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang gelombang 517 nm. Hasil pengujian diperoleh aktivitas ekstrak dari masing-masing fraksi yaitu: ekstrak etanol 82,08%, fraksi metanol 77,65 %,  fraksi kloroform 85,66%, n-heksan 78,26%.
Kata kunci : Antioksidan, DPPH, Abelmoschus manihot L

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  sekitar  30.000  spesies tumbuhan  dan  sekitar  7.000  spesies  berkhasiat obat  (90%  tumbuhan  obat  di  Asia).  Selain  itu, Indonesia  juga  diakui  sebagai  salah  satu  wilayah di  dunia  yang  masih  memungkinkan  satwa  liar sebagai  penyimpan  materi  genetik  yang  beragam untuk memenuhi kebutuhan manusia saat ini  dan masa depan Selanjutnya, kekayaan keanekaragaman  jenis  tumbuhan  yang  dimiliki Indonesia  merupakan  sumber  bahan  kimia  dan genetik  yang  potensial.  Potensi  ini  menjadi keunggulan  komparatif,  karena  saat  ini  semakin banyak  sumber  bahan  kimia  industri  untuk produksi  obat-obatan,  agrokimia,  kosmetik, pewarna, pengawet dan lain-lain (Simbala, 2016)
Tanaman  gedi  adalah  tanaman  perdu  yang banyak  terdapat  di  Sulawesi  Utara    (Mandey, et al ., 2014). Skrining fitokimia pada Tanaman gedi menunjukan  bahwa  tanaman  ini  mengandung senyawa  flavonoid,  polisakarida,  steroid,  asam amino,  dan  minyak  esensial  pada  bagian  bunga, batang,  daun,  dan  biji.  Senyawa-senyawa  pada tanaman  gedi  memiliki  khasiat  diantaranya antioksidan,  antikonvulsan,  antidipogenik,  anti- inflamasi, analgesik, dan sebagainya (Luan, et al ., 2020).  Menurut  Tuty  (2021),  penelitian  pada batang  kulit  tanaman  gedi  yang  diambil  dari Manoko Lembang menunjukkan adanya senyawa antioksidan yang kuat.
Antioksidan  adalah  senyawa-senyawa  yang menghilangkan  penyakit  berhubungan  dengan stress  oksidatif  dengan  cara  melawan  efek  yang meperburuk dari ROS ( Reactive Oxygen Species ). Antioksidan  memiliki  peran  penting  dalam meredakan radikal bebas dan menjaga fungsi sel. (Rohman, et al ., 2010)
Penelitian  ini  menggunakan  metode  DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil dengan senyawa utama  yang  akan  berperan  sebagai  antioksidan adalah  senyawa  flavonoid  (Hirano, et  al .,  2001).
Metode ini digunakan untuk menetapkan aktivitas senyawa antioksidan. (Widyastusi, 2010).
Tujuan  penelitian  yaitu  mengetahui  aktivitas antioksidan  pada  batang    tanaman  gedi  dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis. as.

## METODOLOGI PENELITIAN Bahan
N-heksan,  kloroform,  metanol  80%,  etanol 95%,  DPPH  ( 1,1difenil-2-pikrilhidrazil ),  dan batang tanaman gedi ( Abelmochus manihot L.)

## Metode
Penelitian ini dilakukan pada bulan November 2022-  Febuari  2023  di  Laboratorium  Farmasi lanjut Program studi Farmasi, Fakultas Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam Ratulangi.    Bentuk  dari  penelitian  ini  adalah eksperimental  laboratorium  yang  akan  menguji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH  ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil )  dari  fraksi batang tanaman gedi ( Abelmochus manihot L.)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Batang  tanaman  gedi  ( Abelmoschus  manihot L) diambil  dari  Desa  Raranon,  Kecamatan  Langowan Barat, Kabupaten Minahasa, Sulawesi Utara masing- masing seberat 1173 g dan 1200 g dengan total 2373 g.  sampel  dicuci  hingga  tidak  ada  kotoran  yang menempel  kemudian  di  potong  tipis-tipis  dan dimasukkan  kedalam  oven  dengan  suhu  sebesar  30- 35°C.  Sampel  dikeringkan  menggunkan  oven  pada suhu  30-35  °C  selama  5-7  hari  agar  dapat mengeringkan kandungan air dalam simplisia dan juga menjaga agar kandungan dalam sampel tidak berubah sepenuhnya  jika  menggunakan  suhu  yang  tinggi. (Roshanak, et al . 2015). Sampel lalu diblender hingga menjadi  serbuk  halus.  Serbuk  yang  didapat  masing masing sebanyak 118 g dan 121 g dengan total 239 g. Simplisia yang kering dan telah menjadi serbuk lebih mudah  untuk  dilakukan  ekstraksi  untuk  senyawa senyawa yang ingin diekstrak (Zhang, et al ., 2018). Metode ekstraksi yang digunakan adalah metode maserasi. Maserasi dilakukan sebanyak 7 kali dengan menggunakan wadah kaca besar
Tabel 1. Rendemen ekstrak dan fraksi batang gedi ( Abelmoschus manihot L) No. Sampel Berat Sampel (g) Berat Ekstrak (g) Rendemen (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 239 10,237 4,282 Hijau Pekat 2 Ekstrak Metanol 2 0,487 24,35 Hijau 3 Ekstrak Kloroform 2 0,102 5.1 Oren Pudar 4 Ekstrak n-Heksan 2 0,092 4.6 Hijau Pudar
sebagai  penampung.  Pelarut  yang  digunakan  adalah etanol  95%  dengan  volume  500  ml  setiap  satu  kali maserasi.  Sampel  dimaserasi  selama  3  x  24  jam dengan  setiap  1  x  24  jam  sampel  diaduk  merata menggunakan  batang  pengaduk.  Dengan  maserasi, senyawa  yang  ada  pada  batang  gedi  dapat  diekstrak secara  keseluruhan  dan  tidak  mengalami  perubahan jika  senyawa  tersebut  bersifat  termolabil.  (Zhang, et al .,  2018).  Pelarut  yang  digunakan  adalah  pelarut etanol  95%  dikarenakan  etanol  95%  lebih  bisa melarutkan  senyawa  antioksidan  yang  ada  didalam sampel  dibandingkan  dengan  air  (Basito,  2011). Etanol  95%  lebih  aman  digunakan  dan  tingkat produktifitas  yang  tinggi  sehingga  dapat  dilakukan berkali-kali.  (Puripattanavong. et  al., 2013).  Sampel yang  sudah  dimaserasi  dievaporasi  menggunakan laboratory  waterbath .  Hasil  ekstrak  yang  didapat setelah dievaporasi adalah 10,237 g.
Fraksinasi  dilakukan  dengan  menggunakan larutan  metanol,  kloroform  dan  n-heksan.  Fraksinasi dilakukan secara bertahap mengikuti tingkat kepolaran suatu  larutan  mulai  dari  polar,  semipolar,  dan  non polar..  Pelarut  ini  digunakan  untuk  melarutkan senyawa polar dan non polar yang ada dalam ekstrak (Mutiasari,, 2012). Akan terbentuk 2 lapisan pada saat dilakukan  fraksinasi  dan  setiap  lapisan  akan  diambil secara  terpisah  dan  setelah  itu  dimasukkan  kedalam waterbath untuk dikeringkan hingga didapati  ekstrak kental.  Massa  rendemen  ekstrak  dan  rendemen fraksinasi ditunjukkan pada Tabel 1 .
Uji antioksidan dilakukan dengan metode DPPH. ( 1,1difenil-2-pikrilhidrazil ).  Metode  DPPH  Cocok digunakan  untuk  menguji  senyawa  fenolik  karena fenolik mampu mendonorkan atom H yang digunakan untuk  mengetahui  kekuatan  dan  jenis  senyawa
antioksidan yang terdapat pada ekstrak (Goupy et al, 2003).  Metode  ini  cukup  teliti,  cepat,  dan  dapat menguji  untuk  setiap  larutan.  (Widyastuti,  2010). DPPH  memiliki  keunggulan  seperti  biaya  murah, mudah  digunakan  dalam  penelitian,  reproduktifitas yang  tinggi,  dapat  digunakan  pada  suhu  kamar,  dan kemungkinan  untuk  otomatisasi  (Munteanu  dan Apetrei, 2021). DPPH diuji pada panjang gelombang 517  nm  dikarenakan  DPPH  menunjukan  absorbansi yang kuat pada panjang gelombang tersebut. (Kedare dan  Singh,  2011).  Pada  pengujian.  DPPH  kontrol menunjukan absorbansi sebesar 0.716 pada gelombang  517  nm.  Hasil  pembacaan  menunjukkan bahwa ekstrak etanol dan fraksi kloroform mempunyai nillai inhibisi rata-rata yang besar yaitu 82,08 % dan 85,66%.  Hasil  perhitungan  persen  inhibisi  terdapa pada Tabel 2.
Pada penelitian antioksidan di Vanda robxburghii (Uddin et al , 2015), kloroform menunjukkan aktivitas senyawa  tinggi  dengan  jumlah  fenolik  yang  tinggi yang  menunjukan  bahwa  batang  gedi  memiliki senyawa fenolik yang tinggi. Ekstrak etanol memiliki kekuatan  antioksidan  kedua  terbesar  dikarenakan pelarut  etanol  95%  bersifat  universal  sehingga  dapat menarik senyawa polar, semipolar dan nonpolar. Hasil kekuatan antioksidan tidak berhubungan dengan hasil rendemen dikarenakan rendemen menghitung seberapa  banyak  ekstrak  yang  dapat  ditarik  dengan pelarut  tanpa  melihat  kekuatan  antioksidan  dari metabolit sekunder.
Tabel 2. Hasil pengujian aktivitas antioksidan ekstrak dan fraksi batang gedi ( Abelmoschus manihot L)
Larutan Pengulangan I II III Rata-Rata Ekstrak 78.49 % 83.52 % 84.21 % 82.08 % Metanol 78.21% 77.09 % 77.65 % 77.65 % Kloroform 86.87 % 85.34 % 84.78 % 85.66 % n-Heksan 79.61 % 78.49 % 76.68 % 78.26 %

## KESIMPULAN
Dalam penelitian ini dapat disimpulkan  bahwa aktivitas antioksidan dari ekstrakSI dan fraksi dari ekstrak etanol batang tanaman gedi ( Abelmoschus manihot L)  dengan  menggunakan  metode  DPPH ( 1,1-defenil-2-pikrilhidrazil )  yaitu  ekstrak  etanol 82,08%, fraksi metanol 77,65 %, fraksi kloroform 85,66 %, dan n-heksan 78,26%.

## SARAN
Dilakukan  pengujian  IC 50 Untuk  mengetahui kekuatan  antioksidan  dan  dilakukan  penelitian yang lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Abubakar  A  R,  Haque  M.  2020. Preparation  of Medical  Plants:  Basic  Extraction  and Fractination Procedures for Experimental
Purpose . J Pharm Bioallied Sci. 2020. 12 (1): 1-10 Basito. 2011. Efektivitas Penambahan Etanol 95% Dengan  Variasi  Asam  dalam  Proses Ekstrasi Pigmen Antosianin Kulit Manggis  (Garcinia  mangostana L,. ) . Jurnal Teknologi Hasil Pertanian,, Vol IV, No 2.
De  Caro  C.  A.,  Claudia  H.  2015 UV/Vis Spetrophotometry  –  Fundamental  and Applicaions Mettler Toledo:US Foti M. C., Daquino C. Geraci C. 2003. Electron Transfer Reaction of Cinnamic Acids and Their  Methyl  Esters  with  DPPH  Radical in  Alcoholic  Solution. J.  Org.  Chem,  69,
2309-2314
Goupy P, Dufour C, Loonis M, Dangles O. 2003.
Quantitative Kinetic Analysis of Hydrogen Transfer Reactions from Dietary  Polyphenols  to  the  DPPH Radical. J.  Agric.  Food  Chem,  51,  615-
622
Hirano R. Sasamoto W., Matsumoto A. Itakura H., Igarashi O., Kondo K., 2001. Antioxidant ability  of  various  flavonoids  against DPPH radicals and LDL oxidation . J Nutr
Sci Vitaminol. 47(5):357-62
Ibrahim  H.  A.  2019 Introductory  Chapter: Fractionation Intech London 10.5772/intechopen.78050
Kedare  S.  B.,  Singh  R.  P.  2011. Genesis  and development  of  DPPH  method  of antioxidant  assay. J  Food  Sci  Technol. 48(4): 412-422
Luan F., Wu Q., Yang Y., Lv H., Liu D., Gan Z.,
Zeng N. 2020 Traditional Uses, Chemical
Constituents, Biological Properties, Clinical  Settings,  and  Toxicities  of Abelmoschus manihot L,: A Comprehensive Review . Front Pharmacol 11:1068
Mandey J S., Soetanto H., Sjofjan O., Tulung B. 2014. Genetics characterization,
nutritional  and  phtyochemicals  potential of gedi leaves (Abelmoschus manihot ( L. )
Medik) growing in the North Sulawesi of Indonesia  as  a  poultry  feed .  Journal  of Research in Biology 4(2): 1276-1286 Munteanu  I.  G.,  Apetrei  C. Analytical  Methods Used in Determining Antioxidant Activity: A Review . Int J Mol Sci. 22(7): 3380 Mutiasari  I.  R.  2012 Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Jamur Pleurotus osteratus Dengan  Metode  DPPH  dan  Identifikasi
Golongan  Senyawa  Kimia  dar  Fraksi Teraktif . Indonesia Neha K., Haider M. R., Pathak A., Yar M. S. 2019.
Medicinal  prospects  of  antioxidants:  A review .  European  Journal  of  Medicinal Chemistry. 178: 687-704. Preston,  S.  R.  1988. Aibikia/Bele-Abelmochus manihot  ( L. )  Medik .  International  Plant Genetic  Resource  Institute  Publication: Roma Puripattanavong  J,  Songkram  C,  Lomlim  L, Amnuaikit  T.  2013. Development  of
Concentrated Emulsion containing Nicotiana  tabacum  Extract  for  Use  as Pesticide . Journal
of Apllied Pharmaceutical Science Vol. 3 (11)
Rocha  F.  S.,  Gomes  A.  J.,  Lunardi  C.  N.,
Kaliaguine  S.,  Patience.  G.  S.  2018.
Experimental  Methods  in  Chemical Engineering: Ultraviolet Visible Spectroscopy-UV-Vis . The Canadian Journal of Chemical Engineering. Vol 96: 2512-2517
Rohman  A,  Riyanto  S,  Yuniarti  N,  Saputra  WR, Utami  R,  Mulatsih  W. 2010. Antioxidant Activity,  Total  Phenolic  and  Total Flavanoid  of  Extracts  and  Fractions  of Red  Fruit  (Padanus  conoideus  Lam). International  Food  Research  Journal. 17 :
97-106.
Roshanak S, Rahimmalek M, Goli S. A. H., 2015,
Evaluation  of  seven  different  drying treatments  in  respect  to  total  flavonoid, phenolic,  vitamin  C  content,  chlorophyll, antioxidant activity and color of green tea (Camellia sinensis or C. assamica) leaves. J Food Sci Technol. 53(1): 721-729 Simbala  H.  E.  I.  2016. Proses  Produksi  dan Formulasi  Produk  Ekstrak  Buah  Pisang Yaki Areca Vestiaria Sebagai Bahan Aktif Produk Fitofarmaka Antikanker. Manado: FMIPA Universitas Sam Ratulangi. Tuty  S.,  Ridwan  F.  A.,  Maryani  S.,  2021.
Determination  of  Total  Flavonoid  Levels and  Antioxidant  Activity  from  Ethanol Extracts Gedi Bark (Abelmoschus manihot L. Medik) with DPPH Method (2, 2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl) . World Journal  of  Pharmaceutical  and  Medical Research. Vol 7, Issue 13 Uddin M. N., Afrin R, Uddin M. J., Uddin M. J., Alam  A.  H.,  Rahman  A.  A.,  Sadik  G. 2015. Vanda  roxburghii  chloroform extract  as  a  potential  source  of
polyphenols with antioxidant and cholinesterase inhibitory activities: identification  of  a  strong  phenolic antioxidant. BMC  Complement  Altern Med 15:195 Utomo, A.R. Retnowati, R., Guswono, U.P. 2013.
Pengaruh  Konsentrasi  Minyak  Kenanga (Cananga odorata) Terhadap Aktivitasnya Sebagai Anti Radikal Bebas .
Kimia Student Journal. 1( 2 ). Hal. 265. Widyastuti  N.  2010. Pengukuran  Aktivitas Antioksidan  Dengan  Metode  CUPRAC, DPPH  dan  FRAP  Serta  Korelasinya Dengan Fenol dan Flavonoid Pada Enam
Tanaman. Bogor  :  FMIPA  Institut Pertanian. Zhang  Q.  W.,  Lin  L.  G.,  Ye  W.  C.  2018 Techniques  for  exctraction  and  isolation of  natural  products:  a  comprehensive review . Chin Med 13, 20 Zhu K. Y., Bi C.Y. 2010 Observation of effect of Huang  Kui  capsule  in  the  treatment  of chronic
glomerulonephritis
with
proteinuria . Chin. Pract. Med. 5, 122-123