THE ACTIVITY ASSAY OF SURI CUCUMBER SEED NANOPARTICLES AS ANTIMICROBIAL AGAINST CANDIDA ALBICANS AND STREPTOCOCCUS MUTANS
Fania Putri Luhurningtyas*, Rissa Laila Vifta, Andi Pradana, Yurike

## Tatengkeng
Program Studi Farmasi, Universitas Ngudi Waluyo Jl. Diponegoro No. 186, Ungaran, Semarang, Jawa Tengah, 50512, Indonesia
*Corresponding author: Fania Putri Luhurningtyas ( faniaputri@unw.ac.id )

## ARTICLE HISTORY
Received: 4 June 2021                                   Revised: 23 July 2021                                  Accepted: 27 July 2021

## Abstract
Suri  cucumber  seeds  contain  active  compounds  which  act  as  antibacterial  and antifungal. Increased activity of secondary metabolites of cucumber suri seeds as anti- microbial  was  carried  out  by  forming  nanoparticles.  Suri  cucumber  seeds  were extracted  using  maceration  method  with  ethanol  solvent.  Nanoparticle  formation through  ionic  gelation  method  using  chitosan  and  NaTPP  polymers.  Testing  of antimicrobial activity against Candida albicans and Staphylococcus mutans was tested in  vitro  using  the  method  of  microdilution.  The  optimal  comparison  of  chitosan  with NaTPP is a ratio of 1: 5. The value of MIC and MBC nano chitosan-cucumber suri seed extract against Candida albicans fungi was 15,63 mg/mL and 62,5 mg/mL. The value of MIC  and  MBC  nano  chitosan-cucumber  suri  seed  extract  on Streptococcus  mutans bacteria was 3,90 mg/mL and 125 mg/mL. The results of the study concluded that suri cucumber seed nanoparticles were more effective than the extract dosage forms.
Key words: , antimicroba, Candida albicans, cucumber seeds, nanoparticles, Streptococcus mutans

## UJI AKTIVITAS NANOPARTIKEL BIJI TIMUN SURI SEBAGAI ANTIMIKROBA TERHADAP CANDIDA ALBICANS DAN STREPTOCOCCUS MUTANS

## Abstrak
Biji  timun  suri  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  dan  tanin  yang  berperan  sebagai antibakteri  dan  antifungi.  Peningkatan  aktivitas  metabolit  sekunder  biji  timun  suri sebagai anti mikroba dilakukan dengan melakukan pembentukan nanopartikel. Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  potensi  antimikroba  dari  nanopartikel  yang didapatkan dari biosintesa menggunakan ekstrak biji timun suri. Sampel biji timun suri diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol.  Pembentukan nanopartikel  melalui  metode  gelasi  ionik  dengan  menggunakan  polimer  kitosan  dan natrium  tripolifosfat  (NaTPP).  Pengujian  aktivitas  antimikroba  terhadap Candida albicans dan Staphylococcus  mutans diuji  secara in vitro  menggunakan  metode
mikrodilusi.  Perbandingan  kitosan  dengan  NaTPP  yang  optimal  adalah  perbandingan 1:5.  Nilai  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  dan  Konsentrasi  Bunuh  Minimum (KBM)  nano  ekstrak  kitosan-biji  timun  suri  terhadap  jamur Candida  albicans adalah 15,63  mg/mL  dan  62,50  mg/mL.  Nilai  KHM  dan  KBM  nano  ekstrak  kitosan-biji  timun suri terhadap bakteri Streptococcus mutans adalah 3,90 mg/mL dan 125 mg/mL. Hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa nanopartikel biji timun suri menghasilkan aktivitas yang  lebih  baik  dibandingkan  bentuk  sediaan  ekstraknya.  Nanopartikel  mampu memperbaiki  bioavaibilitas  dan  meningkatkan  sistem  penghantaran  bioaktif  timun  suri sehingga aktivitas antimikrobanya lebih efektif.
Kata kunci: antimikroba, biji timun suri, Candida albicans, nanopartikel, Streptococcus mutan

## Pendahuluan
Rongga  mulut  adalah  tempat  bersarangnya  bakteri,  baik  yang  bersifat  komersial maupun  opportunistik,  antara  lain  bakteri Streptococcus  mutans dan  jamur Candida albicans . 1 Kedua  mikroba  ini  merupakan  microflora  normal  rongga  mulut  yang  dapat menjadi  patogen,  apabila  terdapat  faktor  presdiposisi  dapat  menyebabkan  invasi  ke jaringan tubuh manusia. 2
Streptococcus mutans  adalah  bakteri  yang  yang  menyebabkan  terjadinya  karies gigi  dan  menjadi  masalah  kesehatan  gigi  dan  mulut  yang  sering  terjadi  di  Indonesia. Streptococcus  mutans berperan  di  dalam  proses  fermentasi  karbohidrat  sehingga menghasilkan asam yang akan menyebabkan terjadinya infeksi pada rongga mulut dan demineralisasi gigi. 3 Jamur Candida albicans dapat menyebabkan sariawan oral. Jamur ini  akan  memproduksi  enzim  fosfolipase  yang  berfungsi  menghidrolisis  fosfolipid membran  sel  epitel.  Selain  itu  jamur Candida  albicans juga  memproduksi  enzim protease dan enzim lain yang bersifat keratolitik yang memudahkan penetrasi ke dalam bagian epidermis. 1,4
Penggunaan  bahan  alam  di  dalam  pengobatan  semakin  tinggi,  karena  mudah didapat  dan  efek  samping  yang  kecil.  Penelitian  menunjukkan  biji  timun  suri mempunyai  aktivitas  biologis  sebagai  anti  bakteri  dan  anti  fungi  Hal  ini  diperkuat karena kandungan metabolit sekunder alkaloid, tannin dan flavonoid. Ekstrak biji buah timun  suri  mempunyai  aktivitas  terhadap  jamur Candida  albicans dengan  nilai Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  sebesar  25%.  Hasil  konsentrasi  hambat minimum  yang  dihasilkan  masih  terlalu  besar,  sehingga  apabila  dibuat  sediaan formulasi, tentu menjadi kurang efektif di dalam penggunaannya. 5
Bentuk  dan  ukuran  partikel  merupakan  salah  satu  faktor  yang  mempengaruh efektivitas  suatu  obat,  terutama  di  dalam  proses  kelarutan,  absorbsi  serta  distribusi. Nanoteknologi  adalah  teknologi  yang  dapat  menghasilkan  bahan  aktif  obat  dalam partikel  dengan  ukuran  nano.  Beberapa  jenis  pengembangan  nanoteknologi  yang dikembangkan  di  Indonesia  terutama  untuk  herbal  antara  lain  nanoemulsi,  dan nanopartikel. 6 Sistem  nanopartikel  memiliki  ukuran  partikel  yang  sangat  kecil dibandingkan nano emulsi, yaitu 1-100 nm, sehingga memiliki karakteristik kimia, fisika, dan  biologi  yang  unik.  Semakin  kecil  ukuran  nanopartikel,  maka  menyebabkan  luas kontak permukaan dengan mikroba semakin tinggi, dan dapat meningkatkan sifat anti jamur  dan  antibakterinya.  Aplikasi  nanopartikel  hasil  biosintesa menggunakan  ekstrak biji timun suri belum pernah dilaporkan, maka pada penelitian ini dilakukan uji potensi antimikroba nanopartikel ekstrak biji timun suri.
Pembuatan  nanopartikel  ekstrak  biji timun  suri menggunakan  metode  gelasi  ionik, yaitu  menambahkan  Natrium  Tripolifosfat  (NaTPP)  sebagai  bahan  pengikat  silang dengan  kitosan.  Metode  gelasi  ionik  merupakan  metode  sederhana  di  dalam pembuatan  nanopartikel  kitosan.  Prinsip  metode  ini  adalah  adanya  interaksi elektrostatik  antara  grup  amina  kitosan  dan  grup  muatan  negatif  polianion  Natrium Tripolifosfat (NaTPP). Keuntungan pembuatan nanopartikel dengan reaksi gelasi ionik yaitu  reaksinya  mudah  dan  tidak  membutuhkan  proses  pemanasan,  sehingga rusaknya senyawa aktif di dalam biji timun suri dapat dihindarkan. 7
Kitosan  merupakan  bahan  nanopolimer  yang  digunakan  untuk  meningkatkan sistem  penghantaran  zat  aktif  di  dalam  jaringan,  sehingga  efek  zat  aktif  dapat maksimal.  Penambahan  Natrium  Tripolifosfat  (NaTPP)  digunakan  cross-linking  agent, untuk  menstabilkan  polimer  nanopartikel.  Penggunaan  kitosan  menjadi  bentuk nanopartikel  diharapkan  dapat  merubah  ukuran,  sehingga  mengoptimalkan kemampuan kitosan sebagai zat pembawa. 7
Pada  penelitian  ini  biji  timun  suri  setelah  dimaserasi,  kemudian  ekstrak dienkapsulasi  dengan  metode  gelasi  ionic. 8 Untuk  mengetahui  aktivitas  antimikroba nanopartikel ekstrak biji timun suri, dilakukan pengujian aktivitas anti bakteri terhadap Streptococcus mutans dan anti jamur terhadap Candida albicans . Pengujian dilakukan secara  in  vitro,  menggunakan  metode  mikrodilusi.  Pengembangan  obat  bahan  alam dengan sintesa nanopartikel ini diharapkan dapat menjadi sumber pengembangan obat herbal yang dapat digunakan sebagai terapi komplementer infeksi mikroba.

## Metode

## Alat
Alat  yang  digunakan  adalah  seperangkat  alat  maserasi  (toples  kaca), autoclave (SMIC),  oven  (Memmert),  blender  (Maspion),  batang  pengaduk,  kertas  saring, erlenmeyer  (Iwaki),  gelas  ukur  (Iwaki),    mikroplate  U  (Iwaki),  mikro  pipet  (Socorex), inkubator  (Memmert),    spektrofotometer  (Shimadzu),  alat  sentrifugasi  (PLC  Series), magnetic  stirrer  (Cimarec+),  rotary  evaporator  (RE  100-Pro),  beker  glass  (Herma), neraca analitik (Ohaus), cawan petri, jarum ose, corong buchner, labu hisap, penjepit, tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet ukur 1 mL, pipet ukur 5 mL, pipet ukur 10 mL, pallus  ball,  kompor  listrik,  panci,  lemari  asam,  pipa  kapiler,  chamber  KLT,  lampu  UV- Vis, cawan porselen, tabung sentrifuge.

## Bahan
Bahan yang digunakan antara lain biji timun suri, suspensi fungi Candida albicans , suspensi  bakteri Streptococcus  mutans ,  media PGB ,  media SDA ,  media NA ,  media NB ,  sitroborat,  FeCl3  1%,  pereaksi  dragendorff,    H2SO4  10%,  BaCl2,  H2SO4  pekat, NaCl  0,9%,  n-heksan  p.a,  etil  asetat  p.a,  etanol  96%  p.a,etanol  teknis,  larutan Dimethylsulfoxide (DMSO 0,1%), Aquades (Bratachem), Natrium Tripolifosfat (NATPP) foodgrade, Kitosan.

## Prosedur

## a.  Pengumpulan dan determinasi tanaman
Timun suri yang digunakan di dalam penelitian diperoleh dari Sukabumi, Jawa Barat.  Determinasi  dilakukan  di  Laboratorium  Ekologi  dan  Biosistematik Departemen  Biologi  Fakultas  Sains  dan  Matematika  Universitas  Diponegoro Semarang.

## b.  Pembuatan ekstrak
Ekstrak  etanol  biji  timun  suri  dibuat  dengan  metode  maserasi  (perbandingan 1:8). Serbuk biji timun suri 1,5 kg direndam di dalam pelarut etanol 96% selama 24 jam. Kemudian dilanjutkan remaserasi sebanyak 1 kali selama 24 jam. Filtrat yang didapat,  dikentalkan  menggunakan vacuum  rotary  evaporator pada  suhu  80ºC, kemudian dipekatkan di atas waterbath sampai bobot konstan. 5

## c.  Identifikasi metabolit sekunder
Penapisan  fitokimia  dengan  menggunakan  metode  kromatografi  lapis  tipis (KLT) dilakukan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder yang terdapat di dalam  sampel . Fase  gerak  yang  digunakan  adalah  n-heksana:etil  asetat  dengan perbandingan 8:2. Identifikasi senyawa dilakukan dengan menggunakan beberapa pereaksi  semprot,  yaitu  identifikasi  flavonoid  (uji  dengan  H 2 SO 4 ),  identifikasi alkaloid (pereaksi Dragendorff ), identifikasi tanin (uji dengan FeCl 3 1%). 8

## d.  Pembuatan nanopartikel
Pembuatan  nanopartikel  kitosan  ekstak  biji  timun  suri  ini  menggunakan perbandingan  larutan  kitosan  dengan  larutan  NATPP.  Perbandingan  yang  dipilih adalah 5:1 (5 bagian larutan kitosan dengan 1 bagian larutan NATPP). Ekstrak biji timun suri sebanyak 1 mg dilarutkan dalam 10 mL etanol p.a, ditunggu selama 20 menit selanjutnya dipisahkan antara endapan dan larutan. Larutan yang dihasilkan siap  untuk  dienkapsulasi.  Selanjutnya  ditimbang  kitosan  sebanyak  0,069  gram dilarutkan  dalam  11  mL  asam  asetat  glasial  2,5%  pH  4.  Larutan  kitosan  yang didapatkan  ditambahkan  dengan  ekstrak  biji  timun  suri.  Optimasi  penambahan ekstrak  antara  5  mL.  Langkah  berikutnya,  larutan  distirrer  dengan  kecepatan  400 rpm  selama  20  menit.  Tahap  selanjutnya,  ditambahkan  larutan  NaTPP  dengan konsentrasi  0.25%  sebanyak  300µL  dan  distirrer  dengan  kecepatan  400  rpm selama 20 menit. Hasil formulasi yang didapatkan selanjutnya di sentrifuga dengan kecepatan  3000  rpm  selama  15  menit.  Hasil  formulasi  yang  tidak  mengendap dilakukan analisis berikutnya, meliputi uji karakteristik dan uji aktivitas. 9

## e.  Pembuatan Media, Media Kultur, dan Inokulum Uji
Sebanyak  65  gram  serbuk  media Sabouroud’s  Dextrose  Agar (SDA) dicampurkan  dengan  1  liter  aquades,  dipanaskan  selama  20  menit  sambil  diaduk hingga homogen. Sebanyak 20 gram serbuk media Peptone Glucose Broth (PGB) dicampurkan dengan 500 mL aquades, dipanaskan selama 20 menit sambil diaduk hingga homogen. Nutrient agar dibuat dengan cara mencampur 23 g nutrient  agar dengan  1  liter  air  suling  dan  dididihkan  sampai melarut sempurna, Sebanyak 8 gram  serbuk  NB  ditambahkan  1  liter  aquades  dipanaskan  sampai  homogen. Kemudian,  media  di  sterilisasi  di  dalam autoclave dengan  suhu  121°C  selama  15 menit. 10
Satu ose biakan jamur Candida albicans dimasukkan dalam 1 mL media SDA. Kemudian, jamur diinkubasi pada suhu 28±2ºC selama 18-24 jam. Satu ose biakan bakteri Streptococcus  mutans dimasukkan  dalam  1  mL  media  NA.  Kemudian bakteri diinkubasi pada suhu 35±2ºC selama 18-24 jam.
Koloni Candida albicans yang berumur 18-24 jam diambil menggunakan jarum ose steril, kemudian dimasukkan kedalam 10 mL larutan NaCl 0,9% steril.  Koloni bakteri Streptococcus mutans yang  berumur  18-24  jam  diambil  menggunakan jarum    ose  steril,  kemudian  dimasukkan  kedalam  10  mL  larutan  NaCl  0,9%  steril. Kekeruhan  didapat  lalu  disetarakan  dengan  standar  larutan Mc  Farland 0,5,  yaitu setara dengan jumlah pertumbuhan 1-2x10 8 CFU/mL. 10

## f.  Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)
Aktivitas  antibakteri  dan  antijamur  nanoekstrak  biji  timun  suri  dengan  metode mikrodilusi,  menggunakan  microplate  menurut  metode Clinical  and  Laboratory Standard Institute (11). Microplate terdiri dari 96 sumur, terdiri  dari 12 kolom dan 8 baris.  Baris  pertama  digunakan  sebagai  kontrol  negative,  diisi  100µL  media pertumbuhan  (PGB  atau  NB).  Baris  kedua  digunakan  sebagai  kontrol  positif,  diisi 50µL media pertumbuhan dan 50µL suspensi mikroba uji. Selanjutnya, semua sisa well diisi dengan 100µL media pertumbuhan.
Pada  baris  kelima  ditambahkan  100µL  nano  biji  timun  suri  atau  kontrol pembanding (ekstrak biji timun suri) dengan konsentrasi yang terbesar.  Dari kolom kedua  belas  diambil  100µL  campuran  dan  dipindahkan  kedalam  kolom  sebelas. Pengenceran  terus  dilakukan  hingga  kolom  pertama  yang  akan  memiliki konsentrasi  terkecil.  Konsentrasi  nano  ekstrak  dan  kontrol  pembanding  yang digunakan  adalah  500,  250,  125,  62,5,  31,25,  15,63,  7,82,  3,91,  1,96,  0,98,  0,49, dan  0,25  mg/mL.  Semua  proses  dilakukan  secara  triplo  untuk  nano  ekstrak  dan kontrol pembanding.
Langkah  selanjutnya Microwell-plate diinkubasi  pada  suhu  28±2ºC  untuk  uji jamur  dan  diinkubasi  suhu  35±2ºC  untuk  uji  bakteri  selama  24  jam.Selanjutnya diamati bagian yang jernih (tidak ada pertumbuhan jamur) dan ditetapkan sebagai KHM (Kadar Hambat Minimum). KHM (Kadar Hambat Minimum) ditentukan dengan membandingkan  warna  atau  kejernihan  larutan  uji  dan  kontrol  setelah  diinkubasi selama  24  jam.  Konsentrasi  terendah  yang  tidak  keruh  ditetapkan  sebagai konsentrasi  hambat  minimum.  Terbentuknya  koloni  dalam  larutan  (tidak  keruh) pada mikroplate U setelah diinkubasi menandakan adanya pertumbuhan jamur. 10

## g.  Penentuan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM)
Dibuat  10  mL  media  agar  steril,  kemudian  dituangkan  ke  dalam  cawan  petri steril,  dibiarkan  memadat.  Sebanyak  5µL  alikuot  diambil  menggunakan  jarum  ose dari  setiap  bagian  jernih  pada  plat  mikrodilusi  yang  menunjukkan  nilai  KHM  serta seluruh sumur yang berada di atas nilai KHM. 10
Larutan tersebut digoreskan dalam media pertumbuhan yang sudah disiapkan. Cawan  petri  diinkubasi  pada  suhu  28±2ºC  untuk  mikroba  jamur  dan  diinkubasi suhu  35±2ºC  untuk  mikroba  bakteri  selama  24  jam.  Konsentrasi  terendah  dimana tidak terlihat adanya pertumbuhan jamur dan secara visual terlihat jernih ditetapkan sebagai KBM (Kadar Bunuh Minimum). 10

## Hasil
Tabel 1. Identifikasi Metabolit Sekunder Biji Timun Suri Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Fase Gerak N-Heksana:Etil Asetat (8:2)
Golongan Pereaksi identifikasi Visual UV 254 nm UV 366 nm Hasil Alkaloid Dragendorff Putih kekuningan Coklat kekuningan Kuning 0,9 Flavonoid Sitroborat Kuning Coklat Hijau 0,7 Tanin FeCl 3 1% Putih kekuningan Hijau kehitaman Hijau kehitaman 0,4
Tabel  2. Hasil  Penentuan  KHM  dan  KBM  Ekstrak  Dan  Nano  Ekstrak  Biji  Timun  Suri Terhadap Bakteri Staphylococcus mutans No. Sampel Sumur KHM(mg/mL) KBM (mg/mL) 1 Ekstrak 12 A-C 500 >500 2 Nano ekstrak 5 D-F 3,9 125
Gambar 1. Hasil Mikrodilusi Penentuan KHM Ekstrak dan Nano Ekstrak Biji Timun Suri Terhadap Bakteri Staphylococcus Mutans . A. Pengujian Antibakteri Ekstrak B. Pengujian Antibakteri Nano Ekstrak
Tabel  3. Hasil  Penentuan  KHM  dan  KBM  Ekstrak  Dan  Nano  Ekstrak  Biji  Timun  Suri Terhadap Jamur Candida Albicans No Sampel Sumur KHM (mg/mL) KBM (mg/mL) 1 Ekstrak 10 A-C 125 >500 2 Nano ekstrak 7 D-F 15,63 62,50
Gambar 2. Hasil Mikrodilusi Penentuan KHM Ekstrak dan Nano Ekstrak Biji Timun Suri Terhadap  Jamur Candida  Albicans .  A.  Pengujian  Antijamur  Ekstrak    B.
Pengujian Antijamur Nano Ekstrak

## Pembahasan

## Determinasi tanaman
Telah  dilakukan  pengujian  aktivitas  antimikroba  nanoekstrak  biji  timun  suri terhadap  bakteri Streptococcus  mutans dan  jamur Candida  albicans .  Sampel  timun suri  dilakukan  determinasi  terlebih  dahulu  untuk  mengetahui  jenis  tanaman  secara spesifik.  Hasil    determinasi    biji  timun  suri  ( Cucumis  melo L.  var)  adalah  sebagai berikut : kingdom Plantae, kelas Magnoliopsida, ordo Cucurbitales,  kingdom Plantae, divisi  Magnoliophyta,  kelas  Magnoliopsida,  ordo  Cucurbitales,  family  Cucurbitaseae, genus  Cucumis,  spesies Cucumis  melo L.  var  dan  nama  daerah  Timun  Suri. Determinasi  menunjukan  bahwa  sampel  yang  diperiksa  benar  merupakan  tanaman timun suri ( Cucumis melo L . var).

## Identifikasi metabolit sekunder biji timun suri
Hasil penapisan fitokimia menunjukkan biji timun suri positif mengandung alkaloid, flavonoid,  dan  tannin  (Tabel  1).  Berdasarkan  pengujian  menggunakan  Kromatografi Lapis  Tipis  (KLT),    ekstrak  biji  timun  suri  yang  direaksikan  dengan  pereaksi  identitas Dragendorff didapatkan bercak berwarna coklat kekuningan hijau pada UV 254 nm dan bercak  berwarna  biru  pada  UV  366  nm  yang  menunjukkan  adanya  kandungan alkaloid.
Identifikasi  menggunakan  pereaksi  sitroborat      didapatkan      bercak  berwarna coklat pada UV 254 nm dan bercak berwarna hijau pada UV 366 nm yang menujukkan adanya  kandungan  flavonoid.  Ekstrak  biji  timun  suri  juga  positif  terdapat  tannin, didapatkan bercak berwarna hijau kehitam pada UV 254 nm dan hijau kehitaman pada UV 366 nm, setelah disemprot dengan pereaksi FeCl3 1%.

## Karakterisasi nanopartikel ekstrak biji timun suri
Ekstrak  biji  timun  suri  yang  telah  didapat,  dilakukan  enkapsulasi  menggunakan metode  gelasi  ionik.  Pembentukan  nanopartikel  menggunakan  metode  gelasi  ionik, yaitu mengenkapsulasi ekstrak biji timun suri yang sudah kental dengan perbandingan kitosan  dan  NaTPP  yang  sudah  dioptimasi.  Metode  gelasi  ionik  didasarkan  adanya proses  ikatan  sambung  silang  antara  kitosan  dengan  natrium  tripolifosfat  (NaTPP) sehingga  partikel  yang  terbentuk  kestabilannya  dapat  meningkat.  Perbandingan komposisi  kitosan  dan  NaTPP  mempengaruhi  karakteristik  ukuran  partikel  sampel yang  disintesa. 12 Pada  penelitian  ini  menggunakan  ratio  kitosan  :  NaTPP  dengan perbandingan  1:5,  hasil  menunjukkan  nanopartikel  yang  didapatkan  mempunyai ukuran yang lebih kecil dan persen transmittan yang besar.
Hasil  ukuran rata-rata  distribusi  partikel nano  ekstrak  biji  timun  suri  adalah  378.8 nm,  dengan  frekuensi  intensitas  85,3%.  Sehingga  berdasarkan  analisa  PSA,  ukuran yang  didapatkan  belum  didapatkan  ukuran  partikel  dalam  bentuk  nanometer  (1-100 nm).  Faktor  yang  mempengaruhi  hal  tersebut  dimungkinkan  karena  perbandingan pengambilan  NaTPP  dan  kitosan  yang  belum  optimal,  waktu  sentrifuge  yang  kurang lama sehingga menyebabkan partikel berukuran masih besar. 13

## Hasil pengujian aktivitas antimikroba
Pengujian  aktivitas  antimikroba  dilakukan  menggunakan  metode  mikrodilusi, karena  metode  ini  memiliki  tingkat  sensibilitas  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  metode
uji lainnya. 14 Nano ekstrak biji timun suri dan kontrol ekstrak biji timun suri diuji aktivitas antimikroba terhadap bakteri S.mutans dan C.albicans. Pengujian Konsentrasi Hambat Minimum  (KHM)  bertujuan  untuk  mengetahui  konsentrasi  minimal  yang  dibutuhkan, yang masih mampu menghambat pertumbuhan mikroba. Di dalam metode mikro dilusi, tidak adanya kekeruhan menunjukkan aktivitas antimikroba. Hasil penetapan nilai KHM ekstrak  dan  nano  ekstrak  biji  timun  suri  terhadap  bakteri S.mutans dan  C.  albicans dapat dilihat pada tabel 2 dan tabel 3.
Nilai KHM nanopartikel biji timun suri terhadap C.albicans dan S. mutans berturut- turut yaitu 15,63 dan 3,9  mg/mL. Nanopartikel biji timun suri mempunyai aktivitas anti mikroba  yang  lebih  baik  dibandingkan  ekstraknya,  ditunjukkan  dengan  nilai  KHM nanopartikel  timun  suri  lebih  kecil  dibandingkan dari  sediaan  ekstrak.  Pada  pengujian aktivitas  antimikroba  menggunakan  mikrodilusi  (Gambar  1  dan  Gambar  2 ), semakin kecil  nilai  konsentrasi  yang  dibutuhkan  untuk  menghambat  pertumbuhan  mikroba, maka semakin poten senyawa tersebut.
Kadar  Bunuh  Minimum  (KBM)  bertujuan  untuk  mengetahui  konsentrasi  minimal yang  mampu  membunuh  seluruh  pertumbuhan  mikroba,  dan  ditetapkan  pada konsentrasi  yang  mampu  memberikan  zona  jernih  tanpa  pertumbuhan  mikroba  pada media  agar  dengan  pengamatan  secara  visual.  Aktivitas  anti  mikroba  dapat ditingkatkan  dari  bakteriostatik/fungistatic  menjadi  bakteriosida/fungsidal,  dengan meningkatkan konsentrasi sampel uji diatas nilai KHM
Nilai KBM nano ekstrak biji timun suri C.albicans dan S.mutans adalah 62,50 dan 125 mg/mL, ditunjukkan dengan tidak ada adanya pertumbuhan mikroba pada media. Nano ekstrak biji timun suri mempunyai aktivitas sebagai bakteriosidal dan fungisidal, walaupun  konsentrasi  bunuh  minimal  yang  dibutuhkan  masih  terlalu  besar.  Hasil pengamatan  aktivitas  antibakteri  dan  antijamur  berdasarkan  nilai  KHM  dan  KBM, menunjukkan nano ekstrak biji timun suri mempunyai aktivitas biologis yang lebih baik dibandingkan  ekstraknya.  Ekstrak  biji  timun  suri  yang  dienkapsulasi  dengan  kitosan mampu menurunkan konsentrasi penggunaan dan dapat mengurangi resiko terjadinya toksiksitas, tanpa mengurangi efektifitas dari zat aktifnya.
Metabolit  sekunder  yang  berperan  sebagai  antibakteri  dan  antifungi  pada  biji timun  suri  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  dan  tannin.  Zat  aktif  tersebut  bioavailabilitasnya rendah  dan  sulit  diabsorbsi,  maka  diformulasikan  dalam  bentuk  nanopartikel. Pembuatan  nanopartikel  bertujuan  untuk  memperbaiki  bioavailabilitas  dan  mengatasi kelarutan  zat  aktif  yang  sukar  larut,  sehingga  sistem  penghantaran  nano  ekstrak  biji timun  suri  dapat  lebih  maksimal  untuk  pengujian  aktivitas  anti  bakteri  dan  antifungi. 15 Sistem nanopartikel menyebabkan luas kontak permukaan partikel menjadi lebih besar sehingga  meningkatkan  jumlah metabolit  sekunder,  dan  dapat  dengan mudah  masuk ke  dalam  sel  mikroba.  Kitosan  sebagai  matriks  pembawa  zat  aktif  berperan  penting mengantarkan  zat  aktif  dapat  menembus  membrane  mikroba. 16 Kitosan  sebagai polimer enkapsulasi meningkatkan adsorbsi zat aktif menembus membran mikroba. 17 Mekanisme antibakteri pada biji timun suri disebabkan karena adanya kandungan senyawa  kimia  golongan  alkaloid,  tannin  dan  flavonoid.  Alkaloid  dan  tanin  diduga dapat  menginaktifkan  adhesin  sel  mikroba,  enzim  serta  menggangu  transport  protein sel,  sehingga  pembentukan  dinding  sel  menjadi  kurang  sempurna. 18 Flavonoid  akan berinteraksi  dengan  muatan  negatif  pada  dinding  mikroba,  dan  menyebabkan perubahan  permeabilitas  dinding  sel  serta  tekanan  sel  menjadi  tidak  seimbang. Sehingga  terjadi  pengeluaran  elektrolit  intraselular  dalam  jumlah  banyak,  yang  akan menyebabkan  sel  mikroba  lisis,  kemudian  mati. 12 Pada  organisme  jamur,  ekstrak  biji timun  suri  yang  telah  dienkapsulasi  dengan  kitosan  menghambat  pertumbuhan  jamur dengan  mengganggu  membrane  sel.  Pada  sel  jamur,  dinding  sel  mempunyai  fungsi sebagai pelindung, pemberi bentuk atau morfologi sel, dan proses metabolism nutrisi. 13

## Kesimpulan
Hasil  uji  aktivitas  antimikroba  nanopartikel  biji  timun  suri  terhadap C.albicans dan S.mutans menunjukkan  nilai  KHM  berturut-turut  adalah  15,63  dan  3,90  mg/mL. Pengujian dilanjutkan dengan mengetahui daya bunuh nanopartikel, dengan nilai KBM terhadap C.abicans dan S.mutans berturut-turut yaitu 62,5 dan 125 mg/mL. Enkapsulasi ekstrak biji timun suri dengan kitosan menunjukkan aktivitas antimikroba yang lebih baik daripada ekstrak etanol 96% biji timun suri.

## Ucapan Terima Kasih
LPPM Universitas Ngudi Waluyo melalui pendanaan hibah penelitian internal tahun 2018 berserta rekan mahasiswa tim penelitian nanopartikel ekstrak biji timun suri.

## Daftar Pustaka
1. Metwalli KH, Khan SA, Krom BP, Jabra-Rizk MA. Streptococcus Mutans, Candida Albicans, and the human mouth: a sticky situation. Plos Pathog. 2013;9(10):10 –4.
2. Bachtiar  EW,  Bachtiar  BM,  Zainal-Abidin  Z.  Relationship  Between  Candida Albicans  And  Streptococcus  Mutans  in  early  childhood  caries,  evaluated  by quantitative pcropen peer review Version 1 , National. 2018;(0):1 –15.
3. Sullivan R, Santarpia P, Lavender S, Gittins E, Liu Z, Anderson Mh, Et Al. Clinical efficacy  of  a  specifically  targeted  antimicrobial  peptide  mouth  rinse:  targeted elimination  of  streptococcus  mutans  and  prevention  of  demineralization.  Caries Res. 2011;45(5):415 –28.
4. Mayer  L,  Wilson  D,  Hube  B.  Candida  Albicans  pathogenicity.  Virulence. 2013;4(2):119 –28.
5. Vifta Rl, Khotimah SK, Luhurningtyas FP. Uji aktivitas antifungi ekstrak etanol biji timun  suri  (Cucumis Melo  L.)  terhadap  pertumbuhan  candida  albicans  secara  in vitro. Indones J Pharm Nat Prod. 2018;01(1):1.
6. Martien R, Adhyatmika, Irianto LDK, Farida V, Sari DP. Perkembangan teknologi nanopartikel sebagai sistem penghantaran obat. Farm Univ Gadjah Mada. 2012;
7. Abdassah M. Nanopartikel Dengan Gelasi Ionik. J Farmaka. 2017;15(1):45 –52.
8. Sutomo, Kiptiah M, Nurmaidah,  Arnida. Identifikasi Potensi senyawa antioksidan dari  fraksi  etil  asetat  daun  mundar  (  Garcinia  Forbesii  King  .)  Asal  Kalimantan Selatan. Pros Semin Nas Lingkung Lahan Basah. 2021;6(3).
9. Ayumi  D,  Sumaiyah  S,  Masfria  M.  Pembuatan  dan  karaterisasi  nanopartikel ekstrak  etanol  daun  ekor  naga  (Rhaphidophora  Pinnata  (L.F.)  Schott) menggunakan metode gelasi ionik. Talent Conf Ser Trop Med. 2018;1(3):029 –33. 10.   Suryana  S,  Nuraeni  YYA,  Rostinawati  T.  Aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  dari lima  tanaman  terhadap  bakteri  Staphylococcus  epidermidis  dengan  metode mikrodilusi M7 – A6clsi. Indones J Pharm Sci Technol. 2017;4(1):1.
11.   Clsi.  Performance  standards  for  antimicrobial  susceptibility  testing;  clinical  and laboratory standards institute. 2013.
12.   Choiri  Z,  Martien  R,  Dono    ND,  Zuprizal  Z.  Biosintesis  dan  karakterisasi  nano- enkapsulasi  ekstrak  buah  mengkudu  (Morinda  citrifolia)  dengan  kitosan-sodium tripolifosfat  sebagai  kandidat  antioksidan  alami.  Prosiding  Simposium  Nasional, Penelitian dan Pengembangan Peternakan Tropik Tahun, 2016, 22-28.
13.   Kurniasari  D,  Atun  S.  Pembuatan  dan  karakterisasi  nanopartikel  ekstrak  etanol temu kunci (Boesenbergia Pandurata) pada berbagai variasi komposisi kitosan. J Sains Dasar. 2017;6(1):31.
14.   Balouiri  M,  Sadiki  M,  Ibnsouda  SK.  Methods  for  in  vitro  evaluating  antimicrobial
activity:  a  review.  J  Pharm  Anal  [Internet].  2016;6(2):71 –9.  Available  From: Http://Dx.Doi.Org/10.1016/J.Jpha.2015.11.005
15.   Subekti  S,  Molek,  Sim  M.  Kadar  hambat  minimum  (khm)  dan  kadar  bunuh minimum  (Kbm)  ekstrak  biji  pepaya  (Carica  Papaya  L)  terhadap  bakteri Streptococcus Mitis. Dk. 2018;1(1).
16.   Ningsih  N,  Yasni  S,  Yuliani  S.  Sifat  fungsional  produk  enkapsulasinya  [ nanoparticle  of  red  mangosteen  peel  extract  synthesis  and  the  functional characteristics of its encapsulated products ]. J Teknol Dan Ind Pangan. 2017;
17.   Nagpal  K,  Singh  Sk,  Mishra  Dn.  Chitosan  nanoparticles:  a  promising  system  in novel drug delivery. Chem Pharm Bull. 2010;58(11):1423 –30.
18.   Yaghoubi A, Ghojazadeh M, Abolhasani S, Alikhah H, Khaki-Khatibi F. correlation of  serum levels of vitronectin, malondialdehyde and hs-crp with disease severity in coronary artery disease. J Cardiovasc Thorac Res [Internet]. 2015;7(3):113 –7.
Available From: Http://Dx.Doi.Org/10.15171/Jcvtr.2015.24
19.   Othman  L,  Sleiman  A,  Abdel-Massih  Rm.  Antimicrobial  activity  of  polyphenols and alkaloids in middle eastern plants. Front Microbiol. 2019;10(May).