Abstrak—  Salah satu mikroba yang berperan penting dalam proses biodegradasi bahan organik adalah yeast.  Yeast berpartisipasi dalam berbagai proses ekologis signifikan dalam laut, terutama di muara dan dekat pantai. Diantara peran tersebut adalah sebagai pendekomposisi substrat tumbuhan, daur ulang nutrisi, dan biodegradasi senyawa minyak. Penelitian ini dilakukan untuk mengisolasi dan mengkarakterisasi  yeast  dari rhizosphere Avicennia marina Wonorejo.  Karakterisasi  yeast  dilakukan hingga tingkat genus melalui pengamatan makroskopis, mikroskopis, dan uji fisiologis.  Hasil penelitian ini didapatkan  12 isolat yeast  dari rhizosphere Avicennia marina Wonorejo yang diduga masuk ke dalam genus Rhodotorula, Hansenula, Saccharomyces, Candida, Debaryomyces, Dekkera, dan Geotrichum.
Kata Kunci— yeast, Avicennia marina, rhizosphere

## I. PENDAHULUAN
EAST adalah salah satu mikroorganisme yang termasuk dalam golongan fungi uniseluler. Reproduksi vegetatif pada yeast terutama dengan cara pertunasan. Sebagai sel tunggal, yeast tumbuh dan berkembang biak lebih cepat dibandingkan dengan mold yang tumbuh dengan membentuk filamen  [1]. Yeast adalah kelompok polifiletik dari Basidiomycetes dan Ascomycetes [2].  Pertumbuhan yeast pada media tumbuh sangat tergantung pada sifat fisiologisnya.  Umumnya yeast tumbuh pada kondisi dengan persediaan cukup air.
Berdasarkan sifat metabolismenya yeast dapat dibedakan atas dua kelompok yaitu: bersifat fermentatif  dan oksidatif. Jenis fermentatif dapat melakukan fermentasi alkohol, yaitu memecah gula (glukosa) menjadi alkohol dan gas contohnya pada produk roti. Sedangkan oksidatif (respirasi) dapat menghasilkan carbon dioksida dan air  [1]. Yeast lebih berlimpah di substrat berlumpur dibandingkan dalam sedimen berpasir.  Genera yang paling sering terisolasi pada sedimen di  wilayah  perairan adalah Rhodotorula, Debaryomyces, Torulopsis, Cryptococcus dan Candida [2].
Mangrove Wonorejo merupakan salah satu muara sungai Pantai Timur Surabaya yang memiliki substrat  dengan kandungan bahan organik tinggi  [3]. Wilayah ini didominasi oleh mangrove Avicennia marina. Bagian perakaran mangrove atau rhizosphere  mangrove memiliki populasi mikroorganisme yang umumnya lebih melimpah dan beragam bila dibandingkan pada tanah yang bukan rhizosphere [4].
Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengkarakterisasi yeast dari  rhizosphere Avicennia marina Wonorejo. Isolat yang didapatkan dikarakterisasi hingga
tingkat genus melalui pengamatan makroskopis, mikroskopis, dan uji fiiologis yang terdiri dari: uji urease, uji fermentasi glukosa, uji askospora, dan uji pertumbuhan pada media cair.

## II. METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Mei 2013 sampai Juli  2013 di Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya (ITS).

## A. Pengambilan Sampel Tanah
Sampel  tanah diambil  pada bagian tanah Rhizosfer Mangrove Avicennia marina Wonorejo  Surabaya yang terletak dekat dengan muara.  Metode pengambilan sampel tanah dilakukan secara komposit. Sampel tanah diambil mulai dari top soil hingga kedalaman 20 cm dengan menggunakan cetok. Sampel yang telah diambil dibungkus dengan aluminium foil dan disimpan dalam ice box . Dilakukan pengukuran faktor fisik dan kimia tanah meliputi: temperatur tanah dengan menggunakan thermometer, kelembaban tanah (soil tester), pH tanah (pH meter), dan salinitas menggunakan hand salino refractometer.

## B. Preparasi Sampel dan Pengayaan
Sampel tanah ditimbang seberat 10 g dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang berisi 90 mL air fisiologis steril (NaCl).  Sebanyak 10 mL  supernatan  dimasukkan ke dalam 40  ml Yeast  Malt Broth (YMB)  dan  ditambah dengan kloramfenikol 200 mg/l. Kultur diinkubasi melalui pengocokan dengan menggunakan shaker selama  3  -  4  hari pada suhu 28-30 o C.

## C. Purifikasi Mikroorganisme
1mL suspensi dari erlenmeyer, dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi aquades steril sebanyak 9 mL dan didapatkan seri pengenceran 10 -1 , 10 -2 , dan 10 -3 .  Masing- masing seri pengenceran, diambil sebanyak 0,1 mL suspensi dan dimasukkan ke dalam cawan Petri yang berisi  medium Yeast Malt Extract Agar (YMEA)  yang telah ditambahkan larutan kloramfenikol 1% melalui metode sebar.  Setelah  itu diinkubasi pada suhu 28-30 o C selama 3 - 4 hari.
D. Karakterisasi Yeast
Metode dalam mengkarakterisasi yeast ini didasarkan pada buku panduan The Yeast a Tacxonomic Study [5,6], meliputi:
Pengamatan Makroskopis dan Mikroskopis

## Isolasi dan Karakterisasi Yeast dari Rhizosphere Avicennia Marina Wonorejo
Sitatun Zunaidah dan Nur Hidayatul Alami
Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111
e-mail : hidayatulalami@bio.its.ac.id
Y
Pengamatan karakter makroskopis dilihat berdasarkan kenampakan koloni yang tumbuh  pada media padat ( Yeast Malt Ekstract Agar ), meliputi: tekstur koloni, warna koloni, tepi/margin koloni, elevasi, dan permukaan koloni.
Pengamatan  karakter  mikroskopis dilakukan dengan melihat karakteristik reproduksi vegetatif, seperti pembentukan budding ,  bentuk sel (bulat, oval, silinder, ovoid,  dan  spheroid), ukuran sel,  dan ada tidaknya pseudohifa/hifa sejati (miselium). Pengamatan secara mikroskopis dilakukan dengan pewarnaan aktofenol dan diamati dengan mikroskop perbesaran 400x.

## Uji Fermentasi Gula
Uji fermentasi gula dilakukan dengan menginokulasi sebanyak 1 ose isolat  yang  telah berumur 48  -  78  jam  ke dalam medium steril mengandung glukosa  dan ditambahkan bromthymol blue (sebagai indikator). Hasil positif tampak jika terjadi perubahan warna pada medium dari hijau menjadi kuning.

## Uji Urease
Uji urease menggunakan media Urea Broth .  Satu ose isolat yeast diinokulasi pada media mengandung urea secara aseptis  dan diinkubasi pada suhu  28-30 o C.  Pertumbuhan yeast diamati setiap hari selama 7 hari. Jika yeast positif menghasilkan urease, media akan berubah warna dari merah kuning menjadi merah keunguan.

## Uji Askospora
Uji ini dilakukan dengan metode modifikasi Schaeffer- Fulton’s. Suspensi yeast yang sebelumnya dikultur pada media Corn meal agar dioleskan (dibuat smear) di atas gelas obyek dan diberi malachite green 0,5%. Kemudian dipanaskan dengan uap air selama 5 menit dan  sesekali ditetesi malachite green .  Dibilas dengan air selama 30 detik dengan hati-hati. Selanjutnya,  smear yeast ditetesi safranin 0,5% selama 30 detik. Preparat diamati di bawah mikroskop perbesaran 400x dan 1000x  dengan  bantuan  minyak imersi. Askospora dewasa akan berwarna hijau, sedangkan sel vegetatif akan tampak merah.

## Uji Pertumbuhan pada Media Cair
Isolat yeast diinokulasi pada media Yeast Malt Broth (YMB) pada suhu ruang dan diamati pertumbuhannya setiap hari sampai hari ke-7.  Karakter makroskopik yang diamati adalah keberadaan cincin,  membran, dan  pelikel pada permukaan media,  serta endapan pada dasar media (sedimen).

## III. H ASIL DAN DISKUSI
Dari hasil isolasi dan karakterisasi didapatkan 12 isolat yeast , dikode dengan; M 1.1, M 1.2, M 1.3 , M 1.4, M 1.5, M 2.1, M 2.2, M 2.3, M 2.4, M 3.1, M 3.2, dan M 3.3.  Secara berturut-turut diduga berasal dari genus; Hansenula, Saccharomyces, Candida, Hansenula, Rhodotorula, Debaryomyces, Geotrichum, Saccharomyces, Dekkera, Debaryomyces, Candida, Candida . 1. Karakter genus Hansenula Genus Hansenula adalah kelompok telemorphic Ascomycetes yeast atau kelompok perfect yeast yakni memiliki alat perkembangbiakan seksual yang jelas berupa askospora. Berdasarkan hasil pengamatan uji askospora
a) b) c) d) e) f)
Gambar 1. Karakter Isolat M 1.1.
Keterangan: (a) koloni bentuk sirkuler, (b) sel berbentuk bulat, oval, tidak membentuk pseudohifa/hifa, budding multilateral, (c) askospora dibebaskan (hijau), sel vegetatif (merah), (d) pelikel di permukaan media dan sedimen di dasar media (e) uji urease negatif (-), Kontrol (K) negatif (-) warna merah orange, jika positif warna merah gelap, dan (f) fermentasi glukosa positif (+) warna kuning, Kontrol (K) negatif (-) warna hijau . a) b) c) d) e) f)
Gambar 2. Karakter Isolat M 1.4.
Keterangan: (a) Koloni berbentuk sirkuler, (b) sel berbentuk elongate hingga silindris, pseudohifa (-), (c) askospora di dalam askus berwarna hijau, sel vegetatif berwarna merah, (d) permukaan media bermembran, sedimen di dasar media, (e) uji urease negatif, K (-) warna merah orange, dan (f) fermentasi glukosa (+), K (-) warna hijau.
dalam penelitian ini, genus Hansenula tampak memiliki askospora yang dibebaskan (Gambar 1). Hansenula dikelompokkan sebagai ascosporogenous yeast yakni, mampu membentuk ascocarp atau kantung askus yang menyelimuti askospora [5,6].

## 2. Karakter Genus Saccharomyces
Genus Saccharomyces adalah kelompok telemorphic Ascomycetes yeast atau kelompok perfect yeast . Termasuk ascosporogenous yeast yakni dengan ciri selalu berspora atau membentuk askospora (van-Rij, 1987;Kurtzman dan Fell, 1998). Saccharomyces termasuk genus yang juga dapat ditemukan di wilayah laut dan jumlahnya lebih melimpah pada bagian sedimen  [2].  Karakteristik Saccharomyces tampak seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2, dengan ciri memiliki askospora di dalam kantung askus dan tidak membentuk pelikel di permukaan media.
Sedimen Membran K (-) Multilateral budding M 1.4 M 1.4 K (-) Askospora Askospora Sedimen K (-) M 1.1 M 1.1 K (-) Pelikel Sel vegetatif Multilateral budding
a) b) c) d) e)
f)
Gambar 3. Karakter Isolat M 2.3.
Keterangan : (a) koloni berbentuk sirkuler, (b) sel berbentuk oval pendek hingga ellips, membentuk pseudohifa, reproduksi vegetatif dengan multilateral budding, (c) blastospora dan sel vegetatif warna merah (d) pelikel di permukaan media dan sedimen di dasar media, (e) uji urease (-), K (-) warna merah orange, dan (f) fermentasi glukosa (+), K (-) warna hijau.
a) b) c)
d) e) f)
Gambar 4. Karakter Isolat M 3.3. Keterangan : (a) koloni berbentuk sirkuler, (b) sel berbentuk globose, subglobose, tidak membentuk pseudohifa c) askospora berwarna hijau, sel vegetatif berwarna merah, (d) pelikel di permukaan media dan sedimen, (e) urease (-), K (-) warna merah orange, dan (f) fermentasi glukosa (+) warna kuning, K (-) warna hijau.

## 3. Karakter Genus Candida
Genus Candida merupakan yeast cosmopolitan , paling sering terisolasi dari wilayah  perairan dan tersebar di laut, sedimen, estuari,  maupun berasosiasi dengan alga, ikan, burung, dan mamalia laut. Selain itu Candida juga merupakan mikroorganisme asli yang menghuni wilayah laut. Diantara beberapa wilayah tersebut Candida paling dominan ditemukan pada bagian sedimen laut [2].  Karakteristik Candida tampak seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3, dengan ciri memiliki blastospora dan membentuk pseudohifa. 4. Karakter Genus Debaryomyces Genus Debaryomyces adalah kelompok telemorphic Ascomycetes yeast atau kelompok perfect yeast , merupakan yeast cosmopolitan yang sering terisolasi di wilayah perairan dan tersebar pada wilayah laut, sedimen, estuari, dan banyak yang berasosiasi dengan ikan [2].  Dari hasil penelitian ini, genus Debaryomyces tampak memiliki sel berbentuk globose dengan askospora di dalamnya serta memiliki koloni seperti kerang (Gambar 4).
b) b) c) d) e) f)
Gambar 5. Karakter Isolat M 2.2
Keterangan : (a) koloni berbentuk sirkuler, (b) sel berbentuk elongate hingga silindris, membentuk pseudohifa, dan multilateral budding, (c) askospora dan blastospora, (d) pelikel di permukaan media dan sedimen di dasar media, (e) urease (-), K (-) warna merah orange, dan (f) fermentasi glukosa (+) warna kuning, K (-) warna hijau.
c) Hifa   Fragmentasi Hifa b) Arthrospora c) d) e) f)
Gambar 6. Karakter Isolat M 3.2.
Keterangan : (a) koloni berbentuk sirkuler dengan permukaan berbulu, (b) sel berbentuk rectangular atau empat persegi panjang, membentuk hifa sejati, (c) arthrospora yang dibentuk dari segmentasi hifa, berbentuk empat persegi panjang, (d) sedimen di dasar media, tidak ada pelikel dipermukaan media, (e) urease negatif, K (-) warna merah orange, dan (f) fermentasi glukosa (+) warna kuning, K (-) warna hijau.

## 5. Karakter Genus Rhodotorula
Rhodotorula merupakan salah satu yeast yang menghasilkan pigmen karotenoid. Selain itu Rhodotorula tidak bersifat fermentatif dan juga mampu menghasilkan urease (van-Rij, 1978;Nurhariyati et al ., 2004). Rhodotorula termasuk yeast yang hidup alami pada wilayah laut dan tersebar secara luas pada air laut maupun sedimen di daerah pesisir. Selain itu Rhodotorula adalah yeast oksidatif yang juga banyak ditemukan di sekitar wilayah estuari [2].
Dari hasil penelitian ini, genus Rhodotorula memiliki koloni berwarna merah, serta menghasilkan enzim urase dan tidak memfermentasi glukosa. Sel-selnya tampak berbentuk memanjang (Gambar 7).
K (-) Multilateral budding Pseudohifa Blastospora K (-)  M 2.3 M 2.3 Pelikel Sedimen Askospora di dalam askus K (-) K (-) Askospora Pelikel Sedimen M 3.3 M 3.3 Multilateral budding Blastospora Askospora Sedimen Pseudohifa Pelikel K (-) K (-) Multilateral budding M 2.2 M 2.2 Sedimen K (-) K (-)  M 3.2 M 3.2
d) b) c) d) e)
f)
Gambar 7. Karakter Isolat M 3.1.
Keterangan : (a) koloni berbentuk sirkuler, (b) sel berbentuk elongate hingga silindris, tidak membentuk pseudohifa, (c) blastospora berbentuk oval hingga elongate, (d) pelikel di permukaan media dan sedimen di dasar media, (e) urease (+) warna merah gelap, K (-) warna merah orange, dan (f) fermentasi glukosa (-) warna hijau, K (-) warna hijau .

## IV. KESIMPULAN/RINGKASAN
Kesimpulan penelitian ini adalah didapatkan 12 isolat yeast dari rhizosphere Avicennia marina Wonorejo yang diduga termasuk  genus Rhodotorula, Hansenula, Saccharomyces, Candida, Debaryomyces, Dekkera, dan Geotrichum.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  S.Z.  mengucapkan terima kasih kepada Allah SWT  yang telah memberikan  rahmat dan karunia sehingga naskah  tugas akhir ini dapat terselesaikan  dengan baik dan lancar. Kepada dosen pembimbing Ibu Nur Hidayatul Alami, S.Si., M.Si.,  para dosen penguji Ibu Dr.rer.nat. Ir. Maya Shovitri, M.Si., Bapak Aunurohim, S.Si., DEA, dan Ibu Kristanti Indah Purwani, S.Si., M.Si.,  Ibu Wirdhatul MuslihatinS.Si., M.Si. selaku Koordinator KP dan TA, dan Bapak Aunurrohim S.Si., DEA selaku dosen wali.  Serta kepada  keluarga, teman-teman  dan semua pihak yang telah banyak membantu dalam penyelesaian naskah tugas akhir ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan I. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
[2] Kutty, S.N., dan R. Phillip. 2008. Marine Yeasts - a Review . Review. 25: 465-483. Doi : 10.1002/yea.1599. India: Cochin University .
[3] Rahayu,  P.A. 2011. Uji Aktivitas Enzim Selulase dan Xilanase Isolat Kapang Tanah Wonorejo Surabaya. Skripsi .  Surabaya:  Jurusan Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS).
[4] Lynch, J.M. 1990. Introduction: Some Consequences of Microbial Rhizosphere Competence for Plant and Soil in:  Lynch,  J.M. (Editors). The Rhizosphere .  New York:  John Willey and  Sons,  P 1- 10 .
[5] van  Rij,  K. 1987. The Yeasts a Taxonomic Study . Amsterdam: Elsevier Science Publishers B.V.
[6] Kurtzman, C.P.danJ.W. Fell. 1998. The Yeasts, A Taxonomic Study,
4 th ed . Amsterdam: Elsevier, 1055.
[7] Loureiro, S.A., M.A.D.Q. Cavalcanti, R.P. Neves, dan J.Z.D.O. Passavante. 2005. Yeasts Isolated from Sand and Sea Water in Beaches of Olinda, Pernambuco  State, Brazil. Brazilian Jourmal of Microbiology 36: 333-337.
Sedimen Pelikel K (-) M 3.1 M 3.1 K (-) Blastospora Multilateral budding