SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAUN SIRSAK ( ANNONA MURICATA L)  DENGAN METODE 1,1-DIFENIL-2-PIKRYLHIDRAZYL (DPPH)
Rosalina Y. Kurang 1 , Bepang Adang 2 E-mail: rosalinayuliana89@gmail.com Program Studi Kimia, Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tribuana Kalabahi

## ABSTRACT
Antioxidants  are substances  that can protect  the body from various degenerative diseases  caused  by  free  radicals  by  neutralizing  them.  Plants  that  contain antioxidants,  chemotaxonomically  are  characterized  by  chemical  compounds derived  from  phenolics.  One  type  of  plant  containing  phenolic  compounds  is Soursop (Annona muricata L). This plant is one type of plant from Alor Island, East Nusa  Tenggara,  which  has  never  been  reported  before.  In  this  study, phytochemical  screening  and  the  antioxidant  activity  of  Soursop  leaf  (Annona muricata L) using the DPPH method will be conducted. The results showed that the class of compounds contained in soursop leaves (Annona muricata L.) is a class of alkaloid  and  flavonoid  compounds.  Soursop  leaves  (Annona  muricata  L.)  have weak  antioxidant  activity  compared  to  Vitamin  C,  with  IC50  values  of  soursop leaves  of  292,727  mg/L  and  vitamin  C  of  117,140  mg/L  but  still,  have  the potential as antioxidants.
Keywords: Soursop (Annona muricata L ), antioxidant, DPPH

## PENDAHULUAN
Antioksidan merupakan  zat yang mampu memperlambat  atau mencegah proses oksidasi. Antioksidan juga dapat  didefinisikan sebagai senyawa-senyawa yang melindungi sel dari efek berbahaya radikal bebas oksigen reaktif (Winarsi, 2007).  Tubuh  manusia,  sesungguhnya  mempunyai  sistem  antioksidan  yang berupa enzim. Enzim tersebut antara lain yaitu superoksid dismutase, katalase, dan    glutation,  akan    tetapi  jumlahnya  seringkali  tidak  cukup  untuk menetralkan  radikal  bebas  yang  masuk  ke  dalam  tubuh  dalam  jumlah  yang berlebih,  sehingga  diperlukan  makanan  yang  mengandung  bahan  antioksidan, seperti  flavonoid,  vitamin  A,  vitamin  C,  vitamin  E  (Prakash,  2001). Keseimbangan  antara  antioksidan    dan  radikal  bebas  menjadi  kunci  utama pencegahan penyakit-penyakit kronis yang dihasilkan akibat radikal bebas.
Untuk mengetahui tumbuhan yang bersifat antioksidan dapat  dilakukan dengan  memanfaatkan  pengetahuan  fitokimia.  Fitokimia  adalah  salah  satu
cabang  ilmu  kimia  organik  yang  mengkaji  mengenai  senyawa-senyawa  kimia yang terdapat dalam tumbuh-tumbuhan yang berhubungan dengan zat-zat aktif, struktur  kimia,  biosintesis,  metabolisme,  efek  fisiologis  dan  farmakologis. Tumbuhan  yang  mengandung  antioksidan,  secara  kemotaksonomi  ditandai dengan  adanya  senyawa-senyawa  kimia  turunan  fenolat  seperti  flavonoid, kumarin, santon, benzofenon, tannin, lignin dan antrakuinon (Ersam, 1999).
Berdasarkan hasil penelitian sebelumnya menunjukan bahwa salah satu tanaman  yang  dapat  digunakan  sebagai  tanaman  obat  adalah  tanaman  Sirsak ( Annona  muricata L).  Tanaman  ini  merupakan  tanaman  tropis,  dimana  daging buahnya  berwarna  putih  susu,  rasanya  manis  asam  dan  bentuk  bijinya  kecil dan  juga  dikenal  sebagai  tanaman  buah.  Bagian  tanaman  sirsak  mulai  dari daun, buah, bunga, biji, kulit  batang sampai akar dapat  dimanfaatkan sebagai obat. Daun sirsak menurut beberapa penelitian sebelumnya mempunyai khasiat menghambat  sel  kanker,  sitotoksik,  anti  jamur,  antidiabetes,  vasodilator, analgesik,  antimalaria,  antihepatotoksik,  insektisida,  antihipertensi,  relaksan otot  polos,  obat  jantung  dan  dapat  menghambat  radikal  bebas.  Asetogenin merupakan  senyawa  dalam  daun  sirsak  yang  dapat  menghambat  sel  kanker secara spesifik.
Salah  satu  daerah  yang  memiliki  tumbuhan  ini  adalah  Kabupaten  Alor, Kecamatan  Teluk  Mutiara  khususnya  di  Desa  Adang  Buom.  Sebagian masyarakat menggunakan daun tumbuhan ini sebagai obat sakit maag. Namun sampai saat  ini belum semua  masyarakat  menggunakan tumbuhan ini sebagai tanaman obat dan juga belum ada penelitian tentang tumbuhan Sirsak ( Annona muricata L) dari daerah ini. Oleh karena itu perlu melakukan skrining fitokimia dan pengujian aktivitas antioksidan dari daun tumbuhan Annona muricata L.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yanbg  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun sirsak (Annona  muricata  L.) yang  diambil  dari  kebun  ,  larutan  H 2 SO 4 pekat, metanol, HgCl 2, HCl  pekat,  FeCl 3 0,1%,  serbuk  Magnesium,dan kristal  1,1- difenil-2-pikrihidrazil (DPPH) dan Vitamin C.
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  spektofotometer  UV-Vis  timbangan analitik,  inkubator,  rotary  vacum  evaporator,  aluminium  foil,  spatula,  blender dan peralatan gelas.

## Prosedur Kerja

## Ekstraksi
Ekstraksi  sampel  dilakukan  secara  maserasi  menggunakan  pelarut metanol.  Ditimbang sebanyak 500 gr serbuk daun sirsak, kemudian dimaserasi dengan    2  L  metanol  selama  1  hari  lalu  disaring  dengan  kertas  saring.  Filtrat yang diperoleh di evaporasi sehingga mendapatkan ekstrak pekat metanol.

## Uji alkaloid
Sebanyak  1  mg  ekstrak  ditambah  2  mL  HCl  kemudian  diaduk  dan disaring. Filtrat  ditambahkan 2 tetes HgCl 2 . Apabila  terbentuk endapan kuning jingga atau putih menunjukkan bahwa sampel tersebut mengandung alkaloid.

## Uji Fenolik
Sebanyak  1  mg  ekstrak  ditambahkan  2  tetes  FeCl 3 1%.  Ekstrak  positif mengandung  fenol  apabila  menghasilkan  warna  hijau,  merah,  ungu,  biru  atau hitam pekat.

## Uji Flavonoid
Sebanyak  1  mg  ekstrak  ditambahkan  metanol  4  mL  kemudian dipanaskan.  Filtratnya  ditambahkan  H 2 SO 4 .  Terbentuknya  warna  merah menunjukkan adanya flavonoid.

## Uji Saponin
Sebanyak  1  mg  sampel  dimasukan  kedalam  tabung  reaksi  kemudian ditambahkan  5  mL  air  tambahkan  1  tetes  HCl  lalu  di  kocok  selama  20  detik, diamati perubahan yang terjadi. Apabila terbentuk busa (tidak hilang selama 20 menit) maka menunjukkan adanya saponin.

## Uji Tanin
Ekstrak sebanyak 1 mg ditambahkan 10 mL air dan dididihkan selama 5- 10  menit.  Selanjutnya  campuran  disaring  dan  filtratnya  ditambahkan  FeCl 3 .
Warna biru tua atau hitam kehijauan menunjukkan adanya tanin.

## Uji aktivitas antioksidan  dengan metode DPPH
Metode  yang  digunakan  untuk  mengukur  aktivitas  antioksidan  adalah metode  DPPH.  Langkah  pertama,  pembuatan  larutan  DPPH  radikal  6  ×  10 −5 M dilakukan  dengan  melarutkan  1.182  mg  DPPH  kedalam  50  mL  metanol. Pembuatan larutan uji dilakukan dengan melarutkan 10 mg sampel ke dalam 1 mL metanol. Larutan uji dipipet 33.33 𝜇 L dan dimasukkan ke dalam tube yang terlindung dari cahaya, kemudian ditambahkan 1mL DPPH. Campuran larutan tersebut  divortex  mixer  selama  10  detik  untuk  menghomogenkan.  Selanjutnya,
larutan  tersebut  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  30  menit.  Selama  proses reduksi oleh antioksidan, larutan DPPH radikal akan berubah warna dari  ungu menjasi kuning pucat. Penurunan absorbansi ini diukur pada spektrofotometer UV  pada  panjang  gelombang  515  nm  (As).  Larutan  Blanko  yang  digunakan terdiri  dari  33.33 𝜇 L  metanol  dalam  1  mL  DPPH  yang  diukur  pada  panjang gelombang  yg  sama  (Ab).  Asam  askorbat  digunakan  sebagai  control  positif. Perlakuan  pada  uji  DPPH  ini  dilakukan  dengan  dua  kali  pengulangan  (duplo). Aktivitas penghambatan radikal dapat dihitung dengan menggunakan rumus di bawah ini :
Ket : Ab : absorbansi blanko
As : absorbansi senyawa uji
Setelah  diperoleh  persentase  inhibisi  dari  masing-masing  konsentrasi, persamaan      y  =  Ax  +  B  ditentukan  dengan  perhitungan  secara  regresi  linear dimana x adalah konsentrasi (μg/mL) dan y adalah persentase inhibisi. Aktivitas antioksidan  dinyatakan  dengan  Inhibisi  Concentration  50%  yaitu  konsentrasi larutan uji yang dapat meredam radikal DPPH sebanyak 50% (Liu, et al., 2010).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Skrining  fitokimia  merupakan  suatu  teknik  untuk  mengetahui  atau menganalisis kandungan kimiayang  terdapat  dalam bagian tumbuhan.  Analisis fitokimia ini bersifat kualitatif sehingga kandungan kimia dari tumbuhan dapat diketahui.  Secara  umum  kandungan  kimia  tumbuhan  dapat  dikelompokan  ke dalam golongan senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, fenolik dan saponin.  Untuk mengetahui  kandungan  senyawa  tersebut  dilihat  dari  perubahan  warna  yang terjadi  dan  endapan  yang  terbentuk.  Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  metanol  daun sirsak ( Annona muricata L)  dapat dilihat pada Tabel 1.

## Tabel 1. Hasil  Uji Fitokimia Ekstrak Metanol Daun Sirsak
No Uji Hasil Pengamatan Kesimpulan 1. Alkaloid Terbentuk endapan   kekuningan + 2. Flavonoid Terbentuk warna hijau kehitaman + 3. Fenolik Terbentuk warna hitam - 4. Saponin Tidak menghasilkan busa selama 20 detik - 5. Tanin Terbentuk warna hitam kehijauan -
Keterangan : (+) ada indikasi golongan senyawa dan (-) tidak ada indikasi golongan senyawa.
Berdasarkan hasil uji fitokimia, menunjukan bahwa ekstrak daun sirsak ( Annona  muricata L)  memiliki  kandungan  golongan  senyawa  alkaloid  dan flavonoid  yang  ditandai  dengan  terbentuknya  endapan  berwarna  kuning  dan berwarna  hijau  kehitaman.  Sedangkan  untuk  uji  fenolik,  saponin  dan  tanin tidak  menunjukan  adanya  golongan  senyawa  hal  ini  ditandai  dengan  todak terbentuknya warna khas dari golongan senyawa fenol, saponin dan tanin.
Alkaloid  termasuk  senyawa  yang  bersifat  basa  yang  mengandung  satu atau  lebih  atom  nitrogen  dan  biasanya  berupa  sistem  siklis.  Senyawa  alkaloid pada umumnya mengandung atom yang mengandung oksigen. Senyawa alkaloid banyak terkandung dalam akar, batang biji, daun, dari tumbuhan dan juga dari hewan.  Kegunaan  alkaloid  bagi  tumbuhan  adalah  sebagai  pelindung  dari serangan  hama,  penguat  tumbuhan  dan  pengatur  kerja  hormon  dan  juga alkaloid  merupakan  salah  satu  senyawa  pahit  yang  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri.
Flavonoid  termasuk  salah  satu  senyawa  fenol  yang  terbesar  yang ditemukan  di  alam.  Senyawa  ini  merupakan  hasil  metabolit  sekunder  yang terakumulasi dari tumbuh-tumbuhan. Senyawa  ini bertanggung jawab atas zat warna  merah,  unggu,  biru  dan  sebagai  zat  warna  kuning  dalam  tumbuhan. Selain  itu,  flavonoid  mempunyai  fungsi  sebagai  antioksidan    yang  berfungsi sebagai  pereduksi  radikal  bebas,  selain  itu  juga  mempunyai  peran  penting dalam menghambat mikroba atau sebagai antibiotik.
Uji Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  mengunakan  metode DPPH  (1,1-difenil-2-pikrihidrasil)  yang  merupakan  radikal  sintetik  berwarna ungu  (Molyneux,  2014).  Prinsip  dari  metode  ini  adalah  terjadinya  interaksi antioksidan  dengan  DPPH  secara  transfer  elektron  atau  radikal  hidrogen  pada DPPH  akan  menetralkan  radikal  bebas    dari  DPPH.  Jika  semua  elektron  pada radikal  bebas  DPPH  menjadi  berpasangan  maka  warna  larutan  berubah    dari ungu  tua  menjadi  kuning    dengan  panjang  gelombang  515  nm.  Kontrol  positif yang digunakan adalah vitamin C. Pengunaan kontrol positif untuk mengetahui seberapa kuat  potensi antioksidan yang ada pada ekstrak pekat metanol daun sirsak  jika  dibandingkan  dengan  vitamin  C.  Hasil  uji  DPPH  pada  ekstrak metanol  daun  sirsak  menunjukkan  data  absorbansi  terhadap  DPPH  dengan variasi konsentrasi yang diperoleh kemudian dihitung persen inhibisinya. Hasil
uji  aktivitas  antioksidan  daun  sirsak  ( Annona  muricata L)  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Pengukuran Absorbansi dengan Mengunakan Spektrofotometer UV-VIS
Sampel  Uji Konsentrasi Absorbansi Absorbansi Rata-Rata % Inhibisi I II III Daun Sirsak 125 250 500 0,270 0,442 0,766 0,261 0,442 0,766 0,261 0,441 0,766 0,264 0,4416 0,0766 49,4994 15,5263 85,3471 Vitamin  C 125 250 500 0,263 0,235 0,205 0,265 0,235 0,205 0,263 0,234 0,205 0,2636 0,2346 0,2050 49,5695 55,1176 60,7805 Absorbansi kontrol (Metanol) 0,5227
Setelah  diperoleh  presentase  inhibisi  dari  masing-masing  konsentrasi, persamaan  y  =  ax  +  b  maka  ditentukan  dengan  perhitungan  secara  regresi linear,  dimana  x  adalah  konsentrasi  (μg/mL)  dan  y  adalah  presentase  inhibisi sebagaimana terlihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Hubungan Konsentrasi dan % Inhibisi Ekstrak Metanol Daun Sirsak
Nilai  IC 50 ekstrak  pekat  metanol  daun  Sirsak  diperoleh  dengan menginterpolasikan nilai    y = 50 pada tiap ulangan dan diperoleh IC 50 292,727 mg/L.
Kontrol positif yang digunakan pada penelitian ini adalah asam askorbat (Vitamin  C).  Vitamin  C  merupakan  antioksidan  yang  larut  dalam  air. Penggunaan  kontrol  positif  pada  pengujian  aktivitas  antioksidan  ini  adalah untuk  mengetahui  seberapa  kuat  potensi  antioksidan  yang  ada  pada  ekstrak metanol  kulit  batang  tanaman  kersen  ( Muntingia  calabura )  jika  dibandingkan dengan  vitamin  C.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  terhadap  ekstrak  metanol daun  sirsak  menunjukkan  ekstrak  metanol  daun  sirsak  memiliki  aktivitas antioksidan yang lemah, bila dibandingkan dengan vitamin C         (Gambar. 2) sebagai kontrol positif (IC 50 117, 140 mg/L). Apabila nilai IC 50 sampel sama atau mendekati  nilai  IC 50 kontrol  positif  maka  dapat  dikatakan  bahwa  berpotensi sebagai salah satu  alternatif antioksidan yang sangat kuat. Menurut  Hanani et al (2005),  suatu  bahan  uji  dikatakan  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat apabila  memiliki  nilai  IC 50 kurang  dari  200  μg/mL,  sedangkan  untuk  senyawa murni  memiliki  nilai  IC 50 kurang  dari  100  μg/mL.  Selain  itu,  Molyneux  (2004) menyatakan bahwa bila nilai IC 50 yang diperoleh berkisar antara 200-1000 ppm, maka zat tersebut kurang aktif, namun masih berpotensi sebagai antioksidan.
Gambar 2. Hubungan Konsentrasi dan % Inhibisi Vitamin C Dari  hasil  perhitungan    didapat  nilai  IC 50 vitamin  C  117,  140  mg/L, sedangkan  nilai  IC 50 dari  ekstrak  pekat  metanol  daun  sirsak    adalah    sebesar 292,727 mg/L sehingga  daun sirsak memiliki aktivitas antioksidan yang lemah dibandingkan  dengan  vitamin  C  namun  masih  berpotensi  sebagai  antioksidan. Antioksidan  lemah  juga  dapat  dilihat  dari  beberapa  faktor  yaitu  senyawa  yang terdapat  dalam  ekstrak  pekat  metanol  masih  dalam  ekstrak  yang  tidak  murni yang  masih  berikatan  dengan  gugus  glikosida  yang  berikatan  dengan  flavon, sehingga  dapat  menurunkan  aktivitas  antioksidan.  Aktivitas  antioksidan  akan meningkat  dengan  bertambahnya  gugus    hidroksil  dan  akan  menurun  dengan adanya gugus glikosida .

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat  disimpulkan  bahwa  golongan senyawa  yang  terkandung  pada  daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  adalah senyawa  alkaloid  dan  flavonoid.  Daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  memiliki aktivitas antioksidan yang lemah dibandingkan dengan Vitamin C, dengan nilai IC 50 daun  sirsak  sebesar  292,727  mg/L  dan  vitamin  C  sebesar  117,140  mg/L namun masih berpotensi sebagai antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Denny, A., F. 2014. Pengaruh Konsentrasi Pelarut terhadap Aktifitas Antioksidan Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak  ( Annona  muricata L.)  dengan  Metode Perendaman Radikal Bebas DPPH. Skripsi . UIN Jakarta.
Ersam,  T.,  Achmad,  S.A.,  Ghisalberti,  E.L.,  Hakim,  E.H.,Tamin,R..,  1999,  Two Isoprenylated Flavones from the Root Bark of Artocarpus altilis(Parkinson) Fosberg, Proc National Seminar , 97 –103.
Hanani, E., Mun’im A, Sekarni R.2005. Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam Spons callyspogia sp. dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian .
Liu, J., Wang, C., Wang, Z., Zhang, C., Lu,S., Liu,J (2010). The antioxidant and free-radical  scavenging  activities  of  extract  and  fractions  from  corn  silk (Zea mays L.) and related flavone glycosides. Food Chemistry 261–269.
Moulyneux,  P.,  2004.  The  Use  Of  Stable  Free  Radical  Diphenylpicrylhidrazil (DPPH)  Forestimating  Antioxidanactifity  Songklanakarin .  J.  Sci.Thecnol.
26(2),211-219.
Panosvka, T, K., Kulevanova, S., dan stefova. 2005. In Vitro Antioxidan ActivityOf Some Teucrium Spesies (Lamiaceae). Acta Pharm . 55, 207-214.
Pham-Huy  LA.,  H,  H.,  dan  Pham-Huy  C.2008.  Free  Radicals,  Anatioxidan  In Disease AndHealt. International journal of blomedical science . 4(2):89-96.
Rauf, R. U. Santoso., dan Suparno. 2010. Aktivitas Penangkapan Radikal DPPH Ekstrak Gambir (Uncaria Gambir Roxb). Agritec h. Vol. 30, 1 : 1-11.
Winarsi, H., 2007,  Antioksidan Alami & Radikal Bebas (Potensi dan Aplikasinya dalam Kesehatan), Kanisius, Yogyakarta.