## EduMatSains
Jurnal Pendidikan, Matematika dan Sains
http://ejournal.uki.ac.id/index.php/edumatsains

## KAJIAN FITOKIMIA DAN SIFAT ANTI BAKTERI JAMUR ENDOFITIK RS-1 PADA RANTING ANDROGRAPHIS PANICULATA (SAMBILOTO) DENGAN MEDIA PERTUMBUHAN BERAS MERAH
Melisa Yolanda 1 , Sri Benti Etika 2 , Riga Riga 3*
1,2,3 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Padang Diterima: 23 Mei 2022     Direvisi: 03 Juni 2022     Diterbitkan : 05 Juli 2022

## ABSTRACT
Andrographis  paniculata (Sambiloto)  was  reported  to  produce  secondary  metabolites  with  various  biological activities including antibacterial. The antibacterial compounds from sambiloto can also be explored from other sources. One of them is their endophytic fungi. The purpose of this research was to determine the antibacterial activity of endophytic fungi cultivated in red rice media. The steps of this research were isolation, cultivation, extraction, antibacterial test and test the content of secondary metabolites from endophytic fungi  derived from the twigs of A. paniculata .  An  endophytic  fungus  labelled with  RS-1  has  been isolated  from the  twigs  of A. paniculata. The results of the antibacterial activity test showed that the ethyl acetate extract of the fungus RS-1 had the ability to inhibit the growth of all tested bacteria at concentrations of 1%, 3%, and 5%. The ethyl acetate extract  of  the  endophytic  fungus  RS-1  isolated  from  the A.  paniculata has  potential  to  produce  antibacterial compound.
Keywords: endophytic fungus, antibacterial, sambiloto

## PENDAHULUAN
Penyalahgunaan  antibiotik  merupakan salah  satu  masalah  yang  cukup  serius  dalam dunia kesehatan dam menyebabkan terjadinya  resistensi  antibiotik  terhadap berbagai  jenis  bakteri.  Hal  ini  disebabkan oleh beberapa penyebab, seperti penggunaan antibiotik tanpa resep dokter, serta konsumsi terhadap antibiotik yang berlebihan sehingga menyebabkan mutasi bakteri resistensi secara alami  (Abraham  2015).  Oleh  sebab  itu, diperlukan usaha untuk melakukan pencarian sumber  alternatif  yang  dapat  menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  yang  potensial dalam memproduksi senyawa bioaktif adalah jamur endofitik.
Jamur  endofitik  merupakan  organisme yang  hidup  pada  jaringan  organ  dalam tumbuhan,  tanpa  menimbulkan  efek  negatif atau kerugian bagi tanaman inangnya. Jamur endofitik adalah suatu kelompok mikroorganisme  polifiletik  yang  sangat beraneka  ragam.  Jamur  endofitik  dapat tumbuh  pada  bagian  daun,  batang,  ranting, akar  maupun  bunganya  (Wang et  al .  2016;
Zhao et al . 2012).
Hubungan  yang  terjadi  antara  jamur endofitik  dan  tanaman  inangnya  adalah simbiosis  mutualisme  Secara  garis  besar, jamur endofitik dapat menghasilkan senyawa aktif  yang  sama  atau  berbeda  dengan tanaman inangnya. Jamur endofitik
dilaporkan  sebagai  salah  satu  sumber potensial yang dapat memproduksi metabolit sekunder  yang  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri.  Beberapa  golongan  metabolit sekunder yang diperoleh dari jamur endofitik berbeda  dengan  tumbuhan  inangnya.  Jamur endofitik  ini  dapat  mensintesis  berbagai metabolit  sekunder dalam waktu yang relatif singkat  sehingga  mudah  difermetasi  dan dikultur.  Oleh  karena  itu,  jamur  endofitik dapat  dikultivasi  dalam  rentang  waktu  yang singkat  dan  dapat  memproduksi  metabolit sekunder  dengan  jumlah  banyak  dengan waktu yang singkat (Riga et al . 2019; Wei et al . 2020). Penelitian sebelumnya melaporkan terdapat  beberapa  golongan  metabolit sekunder pada jamur endofitik seperti steroid, terpenoid,  alkaloid  dan  senyawa  turunan fenolik  lainnya  yang  memiliki  efek farmakologi.
Jamur endofitik potensial dapat ditemukan  pada  tanaman  yang  memiliki khasiat  sebagai  obat  tradisional,  salah satunya dilaporkan dari tumbuhan sambiloto. Sambiloto (Andrographis paniculata) tergolong  tumbuhan  obat  yang  dilaporkan mempunyai  aktivitas  antibakteri  sehingga berpotensi  sebagai  inang  yang  baik  bagi jamur endofitik.
Studi  literatur  terhadap  tumbuhan A. paniculata menunjukkan  berbagai  bagian tumbuhan  tersebut  banyak  digunakan  dalam mengekstrak fitokimia aktif (Abu Bin Nyeem et  al .  2017;  Kataky  dan  Handique  2010). A.
paniculata mempunyai  spektrum  efek farmakologis  yang  luas  seperti,  antibakteri, hepatoprotektif, antijamur, antioksidan, antiinflamasi,  antipiretik,  dan  antikanker. Berdasarkan  hal  tersebut, A.  paniculata berpotensi  sebagai  inang  yang  baik  untuk jamur endofitik (Pandey et al . 2019; Sharma et al . 2011).
Penelitian sebelumnya telah melaporkan  mengenai  analisis  kandungan kimia  dari  jamur  endofitik  pada  ranting tumbuhan A.  paniculata dengan  media tumbuh  yang  digunakan  berupa  media  beras putih (Anshar et al . 2021). Akan tetapi studi antibakteri  dari  jamur  endofitik  yang berasosiasi  dengan  bagian  ranting  tumbuhan A.  paniculata dengan  menggunakan  media tumbuh  berupa  media  beras  merah  baru pertama  kali  dilaporkan  pada  penelitian  ini. Berdasarkan  hal  tersebut,  tujuan  penelitian ini  adalah  melakukan  studi  terkait  potensi jamur  endofitik  yang  berasosiasi  dalam jaringan  ranting  tumbuhan A.  paniculata dengan  media  tumbuh  media  beras  merah sebagai sumber senyawa antibakteri.

## METODE PENELITIAN
Inokulasi Jamur Endofitik
Pada  penelitian  ini,  tumbuhan A. paniculata sebagai  tumbuhan  inang  untuk jamur endofitik diperoleh dari Tabing Banda Gadang,  Kecamatan  Nanggalo,  Padang  pada Bulan  Januari  2021.  Kemudian,  permukaan bagian ranting segar A. paniculata berukuran
2x2  cm  dibersihkan  dengan  air.  Ranting tersebut  selanjutnya  dilakukan  sterilisasi yang  bertujuan  untuk  mematikan  mikroba epifit yang terdapat di ranting A. paniculata . Ranting  tersebut  kemudian  direndam  selama 45  detik  dalam  larutan  etanol  70%  dan larutan  NaOCl  3,5%  selama  30  detik.  Ranting steril  ini  kemudian  ditempelkan  pada  media padat  PDA  sebagai  kontrol  negatif.  Bagian ranting yang dipotong berukuran 1x1 cm guna diinokulasi di media PDA dan diinkubasi pada suhu  28 o C.  Jamur  endofitik  yang  tumbuh setelah 7 hari kemudian, di sub-kultur ke media padat  lainnya  sehingga  menghasilkan  isolat tunggal jamur endofitik. Morfologi dan kriteria jamur  endofitik  yang  baik  akan  dipilih  untuk dilanjutkan  dengan  uji  fitokimia  (Riga  dan Hakim 2021).

## Kultivasi  di  media  beras  merah  dan Ekstraksi Jamur Endofitik
Jumur endofitik yang dihasilkan berupa isolat  tunggal  kemudian  dikultivasi  pada Erlenmeyer  250  mL  yang  berisi  100  mL beras  merah  (nasi  merah)  dan  diinkubasi pada suhu 28 o C. Kemudian fermentasi jamur endofitik  dipanen  setelah  mencapai  waktu optimum  dan  dilanjutkan  proses  diekstraksi sebanyak  tiga  kali  dengan  pelarut  etil  asetat sehingga  diperoleh  ekstrak  pekat  etil  asetat. Ekstrak  etil  asetat  yang  dihasilkan  diuji aktivitas antibakteri dan kandungan metabolit sekunder.

## Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Jamue Endofitik
Uji  aktivitas  antibakteri  dari  ketiga ekstrak  jamur  endofitik  dilakukan  dengan menggunakan  metode  difusi  cakram.  Alat yang  digunakan  pada  tahapan  ini  adalah autoclave,  laminar,  cawan  petri,  gelas  ukur, kertas  cakram,  jarum  ose.  Semua  alat disterilisasi  terlebih  dahulu.  Bahan  yang digunakan antara lain media MHA, akuades, DMSO.  Tiga  bakteri  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus, dan Streptococcus pyogenes .
Sebanyak  20  μL  masing -masing ekstrak dengan konsentrasi 1%, 3%, dan 5% (pelarut: DMSO), kontrol positif dan kontrol negatif  diteteskan  pada  kertas  cakram  yang terletak  diatas  inokulan  masing-masing bakteri  uji.  Kontrol  positif  yang  digunakan adalah  amoksilin.  Setelah  diinkubasi  1x24 jam,  aktivitas  antibakteri  masing-masing ekstrak  diukur  dan  dinyatakan  dalam  zona hambat.  Aktivitas  antibakteri  dilakukan sebanyak  triplo  terhadap  tiga  bakteri  uji. Proses uji dilakukan kondisi aseptik.

## Uji Kandungan Metabolit Sekunder

## Terpenoid dan Steroid
Ekstrak  jamur  RS-1  dimasukkan  ke dalam  3  tabung  reaksi  yang  berbeda.  Setiap tabung rekasi ditambahkan amoniak- kloroform dan H 2 SO 4 2 N dan dikocok kuat, lalu diamkan sehingga terbentuk dua lapisan.
Gunakan
lapisan bawah
dengan menempatkan  di  plat  tetes  dan  dibiarkan menguap,  setelah  kering  ditambahkan  asam asetat  anhidrat  dan  H 2 SO 4 p.a.  Warna  hijau- biru  hasil  positif  terhadap  steroid  dan  hasil positif terpenoid menghasilkan warna merah.

## Alkaloid
Hasil  lapisan  atas  pada  uji  steroid  dan terpenoid  dimasukkan  kedalam  tiga  tabung reaksi.  Kedalam  setiap  tabung  reaksi  secara berurutan  ditambahkan  reagen  Dragendorf, reagen  meyer  dan  reagen  wagner.  Endapan coklat,  endapan  putih  dan  endapan  jingga yang  terbentuk  merupakan  hasil  positif  dari alkaloid.

## Senyawa Fenolik
Ekstrak  jamur  RS-1  dimasukkan kedalam 3 lubang plat tetes, dan ditambahkan larutan FeCl 3 1%.  Warna  merah  muda menunjukkan hasil positif dari senyawa fenolik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tumbuhan A.  paniculata adalah tanaman  obat-obatan  dan  dapat  dipastikan bahwa  jamur  endofitik  yang  akan  tumbuh pada  media  inokulan  ialah  jamur  endofitik atau jamur yang hidup dalam jaringan ranting A.  paniculata. Di  mana  penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  jamur endofitik  dari  bagian  ranting  tumbuhan A. paniculata sebagai  senyawa  antibakteri. Ranting yang telah steril diinokulasi di media
PDA  yang  telah  ditambah  antibiotik. Jamur endofitik yang tumbuh setelah 7 hari kemudian, di sub-kultur ke  media padat lainnya sehingga menghasilkan  dua  isolat  tunggal  jamur endofitik.  Pengamatan  morfologi  jamur endofitik  dilanjutkan  pada  jamur  endofitik dengan kode RS-1.
Gambar 1. Morfologi jamur RS-1
Jamur  Rs-1  (Gambar  1)  memiliki  ciri makroskopik  seperti,  meiliki  warna  koloni putih  berbentuk  bulat  dengan  koloni  yang memusat.  Permukaan  koloni  jamur  RS-1 cukup  kasar  dan  tersebar  tipis  merata  ke seluruh  permukaan  media.  Koloni  berwarna putih  juga  terdapat  pada  permukaan  bagian bawah dari jamur endofitik RS-1. Jamur RS- 1  dengan  morfologi  makroskopik  tersebut belum  pernah  di  laporkan  dari  tumbuhan A. paniculata (Calvo et al . 2002).
Selanjutnya  jamur  RS-1  dikultivasi  ke dalam  25  Erlenmeyer  250  ml  yang  berisi media  beras  merah  (nasi  merah).  Kultivasi dengan  25  Erlemeyer  ini  dilakukan  untuk memperoleh  massa  ekstrak  dengan  jumlah yang  banyak.  Setelah  dikultivasi  dan  telah mencapai  tahan  stasioner,  jamur  endofitik RS-1  dapat  dipanen  dan  diekstraksi
menggunakan  pelarut  etil  asetat.  Ekstrak yang  dihasilkan  lalu  dipekatkan  sehingga didapat ekatrak pekat etil asetat.
Ekstrak  pekat  etil  asetat  yang dihasilkan  dilanjutkan  dengan  pengujian aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode cakram  (Riga et  al .  2019).  Tahapan  uji aktivitas  antibakteri  dilakukan  terhadap  tiga bakteri  uji,  yaitu E.  coli,  S.  aureus dan S. pyogenes serta  memvariasi  konsentrasi ekstrak sebanyak tiga variasi, yaitu 1%, 3%, dan  5%.  Amoksilin  merupakan  kontrol positif  yang  digunakan  pada  uji  antibakteri ini  (Riga  dan  Hakim  2021).  Hasil  uji  zona hambat  dilakukan  secara  triplo  untuk  uji
aktivitas  antibakteri  yang  dilaporkan  pada Tabel 1.
Tabel  1 menyajikan bahwa  ekstrak etil asetat  jamur  RS-1  hasil  isolasi  dari  ranting tumbuhan A. paniculata mempunyai kemampuan  dalam  mengenal  pertumbuhan semua bakteri uji. Kemampuan sebagai agen antibakteri  dipengaruhi  oleh  ekstrak  yang berkorelasi  positif  dan  memiliki  konsentrasi tinggi. Hal ini disebabkan oleh senyawa aktif yang  terkandung  dalam  ekstrak  tersebut semakin  besar.  Peningkatan  tersebut  akan menyebabkan  kemampuan  ekstrak  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji  juga semakin meningkat (Riga dan Hakim 2021).
Tabel 1. Data zona hambat ekstrak etil asetat terhadap bakteri uji Bakteri uji Diameter Zona Hambat* 1% 3% 5% Kontrol (+) E. coli 6,57±0,25  9,57±0,32 11,2±0,17 15,2±0,36 S. aureus 2,43±0,21   7,07±0,23 9,13±0,21 12,97±0,21 S. pyogenes 0 5,37±0,15 8±0,26 10,33±0,21
* Zona hambat ± standar deviasi
Uji  positif  antibakteri  terhadap  ekstrak etil  asetat  menandakan  terdapatnya  senyawa metabolit  sekunder  yang  berpotensi  sebagai senyawa  antibakteri.  Kemudian  ekstrak  etil asetat  dilakukan  uji  fitokimia  (kandungan metobolit sekunder) yaitu, alkaloid, terpenoid, steroid,  dan  fenolik.  Metabolit  sekunder golongan alkaloid memiliki mekanisme kerja dalam  menginhibisi  pertumbuhan  bakteri adalah  dengan  merusak  susunan  komponen
peptidoglikan  pada  jaringan  sel  bakteri. Sedangkan  steroid  dan  terpenoid  yang termasuk  senyawa  fenolik  yang  memiliki aktivitas antibakteri juga memiliki mekanisme  kerja  yaitu  dengan  cara mengganggu proses terbentuknya dinding sel atau  membran.    Sehingga  hal  tersebut menyebabkan  dinding  sel  tidak  akan terbentuk  secara  sempurna  (Kurniawan  dan Aryana  2015).  Senyawa  fenolik  yang
memiliki  aktivitas  antibakteri  dipengaruhi oleh lipofilisitas, sifat elektronik  dan muatan polifenol  yang  dapat  menginhibisi  sistem kerja  enzim  reverse  transkripsi  dan  DNA topoisomerase (Bouarab-Chibane et al . 2019;
Kursia et  al .  2018)  Hasil  uji  kandungan kimia ekstrak etil asetat jamur endofitik RS-1 ditampilkan  pada  Tabel  2.  Penelitian  terkait Uji  metabolit  sekunder  yang  memiliki  peran dalam  aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak jamur  RS-1  belum  pernah  dilakukan,  dan perlu dilanjutkan untuk melengkapi informasi  terkait  senyawa  yang  memiliki aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak  etil  asetat dari jamur endofitik RS-1.
Tabel 2. Hasil uji kandungan metabolit sekunder ekstrak etil asetat jamur RS-1
Uji Metabolit Sekunder Hasil Uji Terpenoid/steroid + Alkaloid + Fenolik +

## KESIMPULAN
Ekstrak etil asetat jamur endofitik RS-1 yang  diisolasi  dari  tumbuhan A.  paniculata menunjukan  hasil  uji  aktivitas  antibakteri yaitu  dengan  memiliki  kemampuan  dalam menghambat  pertumbuhan  terhadap  tiga bakteri  uji  yaitu E.  coli,  S.  aureus dan S. pyogenes.

## DAFTAR PUSTAKA
Abraham,  E.  P.  2015.  “The  Antibiotics.”
Comprehensive Biochemistry
11(4):181 – 224.
Abu  Bin  Nyeem,  Mohammad,  Md  Abdul Mannan,  Mohammad  Nuruzzaman, KM  Kamrujjaman,  and  Samir  Kumar Das.  2017.  “Indigenous  King  of  Bitter (Andrographis Paniculata): A Review.” ~  318  ~  Journal  of  Medicinal  Plants Studies 5(2):318 – 24.
Anshar,  Varel,  Al  Khairi,  Sri  Benti  Etika,
Mariam Ulfah, Riga Riga, Article Info, Natural  Sciences,  and  Universitas Negeri  Padang.  2021.  “Eksakta.”
Eksakta 21(02):137 – 44.
Bouarab-Chibane,  Lynda,  Valérian  Forquet,
Pierre Lantéri, Yohann Clément, Lucie Léonard-Akkari, Nadia Oulahal, Pascal Degraeve,  and  Claire  Bordes.  2019.
“Antibacterial Properties
of Polyphenols:  Characterization  and
QSAR  (Quantitative  Structure-Activity
Relationship)  Models.” Frontiers  in Microbiology 10(APR).
Calvo, Ana M., Richard A. Wilson, Jin Woo Bok,  and  Nancy  P.  Keller.  2002. “Investigating  the  over  Sporulation Effect of A . Fumigatus Induced by P . Aeruginosa.” Microbiology and Molecular Biology Reviews 66(3):51.
Kataky,  A.,  and  P.  J.  Handique.  2010.  “A Brief  Overview  on  Andrographis Paniculata  (Burm.  f)  Nees.,  a  High

## Valued  Medicinal  Plant:  Boon  over
Synthetic  Drugs.” Asian  Journal  of Science and Technology 6(Oktober):113-118. Kurniawan,  B.,  and  W.  Aryana.  2015. “Binahong  (Cassia  Alata  L.)  For Inhibiting  The  Growth  of  Bacteria Escherichia Coli.” J Majority 4(4):100 – 104.
Kursia,  Sukriani,  Rahmad  Aksa,  and  Maria Magdalena  Nolo.  2018.  “Potensi Antibakteri  Isolat  Jamur  Endofit  Dari
Daun Kelor (Moringa Oleifera Lam.).” Pharmauho:  Jurnal  Farmasi,  Sains, Dan Kesehatan 4(1):30 – 33.
Pandey, A., Smiley Gulati, Amit Gupta, and

## Y.  Tripathi.  2019.  “Variation  in
Andrographolide Content among Different  Accessions  of  Andrographis
Paniculata.” The  Pharma  Innovation Journal 8(4):140 – 44.
Riga, Riga, and Euis Holisotan Hakim. 2021.
“Aktivitas  Sitotoksik  Dan  Antibakteri Ekstrak  Etil  Asetat  Jamur  Endofitik
Colletotrichum
Gloeosporioides.”
Jurnal Farmasi Udayana 10(2):193.
Riga,  Riga,  Nizar  Happyana,  Armin
Quentmeier,  Chantale  Zammarelli, Oliver  Kayser,  and  Euis  Holisotan Hakim.  2019.  “Secondary  Metabolites from  Diaporthe  Lithocarpus  Isolated
from Artocarpus Heterophyllus.” Natural Product Research 35(14):2324 – 28.
Sharma,  Pramod,  Nitin  Kumar,  and  Rupesh
Dudhe.
2011. “Pharmacological
Activity  of  Andrographis  Panicu lata :
A Brief Review Pharmacologyonline 2 : 1-10 ( 2011 ) Pharmacological Activity of  Andrographis  Paniculata :  A  Brief Review.”

## Pharmacologyonline
2(January):11.
Wang,  Qinghu,  Jinmei  Jin,  Nayintai  Dai, Narenchaoketu  Han, Jingjing  Han, and Baiyinmuqier  Ba o.  2016.  “Anti -
Inflammatory Effects, Nuclear Magnetic Resonance Identification, and High-Performance Liquid Chromatography  Isolation  of  the Total
Flavonoids  from  Artemisia  Frigida.” Journal  of  Food  and  Drug  Analysis 24(2):385 – 91.
Wei,  Jie,  Feng  Chen,  Yumei  Liu,  Azierguli Abudoukerimu,  Qian  Zheng,  Xiaobo
Zhang,  Yuping  Sun,  and  Delixiati
Yimiti. 2020. “Comparative Metabolomics  Revealed  the  Potential Antitumor  Characteristics  of  Four Endophytic Fungi of Brassica Rapa L.”
ACS Omega 5(11):5939 – 50.
Zhao,  Jintong,  Yujie  Fu,  Meng  Luo,
Yuangang  Zu,  Wei  Wang,  Chunjian Zhao,  and  Chengbo  Gu.  2012. “Endophytic  Fungi  from  Pigeon  Pea [  Cajanus  Cajan  (L.)  Millsp.]  Produce Antioxidant  Cajaninstilbene  Acid.” Journal  of  Agricultural  and  Food Chemistry 60(17):4314 – 19.
Melisa Yolanda, Sri Benti Etika, Riga Riga / Edumatsains 7 (1) (2022) 91-98