UJI EFEKTIVITAS EKSTRAK DAUN PANDAN ( Pandanus amaryllifolius Roxb.)

## SEBAGAI LARVASIDA ALAMI TERHADAP LARVA Aedes Aegypti
Diah Mutiarasari*, Lady Liberties Bubun Tangke Kala’Tiku
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Tadulako *Email korespondensi: diah.mutiarasari@yahoo.com

## ABSTRAK
Penyakit Demam Berdarah Dengue (DBD) hingga saat ini masih merupakan salah satu masalah kesehatan masyarakat  di  Indonesia.  Kasus  tertinggi  DBD  pada  provinsi  Sulawesi  Tengah  yaitu  Kota  Palu.  Daun pandan juga diketahui sebagai larvasida. Adanya efek daun pandan wangi ( Pandanus amaryllifolius Roxb.) terhadap nyamuk Aedes aegypti. Pada daun pandan terdapat senyawa kimia yang terkandung di dalamnya seperti saponin, alkaloid, flavonoid, tanin, dan polifenol. Untuk mengetahui efektifitas ekstrak daun pandan wangi  ( Pandanus  amaryllifolius Roxb . )  sebagai  larvasida  alami  terhadap  larva Aedes  aegypti .  Pada penelitian ini menggunakan desain penelitian eksperimental dengan rancangan true experimental posttest control. Bentuk true  experimental dalam  penelitian  ini  adalah posttest  only  control  design .  Desain penelitian ini dipilih karena dalam desain ini terdapat dua kelompok  yang masing-masing dipilih secara random. Sampel yang digunakan untuk setiap perlakuan sebanyak 25 larva Aedes aegypti , sehingga untuk mengetahui  jumlah  keseluruhan  sampel  yang  dibutuhkan  yaitu  dengan  perhitungan  25  larva  ×  jumlah perlakuan  =  25  ×  24  =  500  larva Aedes  aegypti .    Dari  hasil  uji  pendahuluan  didapatkan  hasil  pada konsentrasi 0,5%, 0,6%, 0,7% dan 1% tidak terdapat larva yang mati setelah paparan 24 jam. Dari hasil ini terlihat bahwa ekstrak daun pandan tidak memiliki efek yang berarti sebagai larvasida pada larva nyamuk Aedes  aegypti .  Hasil  ini  menunjuk  bahwa  kematian  pada  sampel  larva  nyamuk Aedes  aegypti yang mengindikasi bahwa larva resisten terhadap ekstrak daun pandan. Pada kontrol (+) yaitu bubuk abate yang menyebabkan kematian 100% pada larva nyamuk. Ekstrak daun pandan ( Pandanus amaryllifolius Roxb.) tidak efektif digunakan sebagai larvasida pada larva Aedes aegypti.
Kata Kunci: Efek daun pandan wangi ( Pandanus amaryllifolius Roxb.), larva Aedes aegypti

## ABSTRACT
Dengue Hemorrhagic Fever (DHF) is still one of public health problems in Indonesia. The highest number of cases of DHF in Central Sulawesi is in Kota Palu. Pandan leaf (Pandanus amaryllifolius Roxb.) is also known as larvacide which affects Aedes aegypti mosquitoes. Pandan leaves contain chemical compounds such as saponins, alkaloids, flavonoids, tannins, and polyphenols. to know the effectiveness of pandan leaf (Pandanus  amaryllifolius  Roxb.)  extract  as  natural  larvacide  to  Aedes  aegypti  larvae.  This  study  was experimental with true experimental posttest-only control design. Samples were divided into two treatment groups and chosen in randomly fashion. The number of samples used in each treatment group was 25 Aedes aegypti larvae, therefore the total number of samples needed was calculated as follows: 25 larvae × number of treatment group = 25 × 24 = 500 Aedes aegypti larvae.  Preliminary test gave result of no larvae died at  the  concentrations  of  0.5%,  0.6%,  0.7%  and  1%  after  24-hour  exposure.  This  result  suggested  that pandan leaf extract had no significant effect as larvacide to Aedes aegypti mosquito larvae; or the zero mortality of the larvae indicated the larvae had resistance to pandan leaf extract. Treatment in positive control group (abate powder) caused 100% mortality of the larvae. Pandan leaf (Pandanus amaryllifolius Roxb.) extract was not effective to be used as larvacide to Aedes aegypti larvae.
Keywords: Pandan leaf (Pandanus amaryllifolius Roxb.) extract effect, Aedes aegypti larvae.

## PENDAHULUAN
Penyakit  Demam  Berdarah  Dengue (DBD) adalah penyakit yang disebabkan oleh  virus  dengue  yang  tergolong Arthropod-Borne Virus , genus Flavivirus, dan famili Flaviviridae . [1]
DBD  Ditularkan  melalui  gigitan nyamuk  dari  genus Aedes ,  terutama Aedes  aegypti atau Aedes  albopictus.
Penyakit  DBD  dapat  muncul  sepanjang tahun  dan  dapat  menyerang  seluruh kelompok  umur.  Penyakit  ini  berkaitan dengan kondisi lingkungan dan perilaku masyarakat. [2]
Menurut Word Health Organization populasi di Dunia diperkirakan  berisiko terhadap penyakit DBD mencapai 2,5-3 miliar  terutama  yang  tinggal  di  daerah perkotaan di negara tropis dan subtropis. Pada  tahun  2015  terdapat  sebanyak  21 provinsi  (61,8%)  yang  telah  mencapai target  renstra  2015.  Provinsi  dengan angka  kesakitan  DBD  tertinggi  tahun 2015  yaitu  Bali  sebesar  257,75, Kalimantan  Timur  sebesar  188,46,  dan Kalimantan  Utara  sebesar  112,00  per 100.000 penduduk. [2]
Kasus  DBD  yang  tertinggi  di Propinsi  Sulawesi  Tengah  yakni  Kota Palu dengan jumlah 650 kasus dengan IR
168,50/100.000  penduduk,  kabupaten yang  tidak  ada  kasusnya  yakni kabupaten Banggai Laut. Angka kesakitan Insidence  Rate (IR)  yang paling  tinggi  adalah  Kota  Palu  yaitu 168,50 per 100.000 penduduk kemudian Kabupaten  Buol  dengan  IR  162,01  per 100.000 penduduk dan disusul Kabupaten  Toli-Toli  dengan  IR  101,13 per  100.000  penduduk,  serta  ke  empat adalah Kabupaten Poso dengan IR 80,88 per 100.000 penduduk. [3]
Perkembangan insektisida baru yang lebih  ramah  lingkungan  dan  tidak membahayakan  mulai  berkembang. Penggunaan bioinsektisida tampak menjanjikan  karena  bioinsektisida  atau insektisida  biologi  adalah  insektisida yang  berasal  dari  tumbuhan  dan  berisi bahan  kimia  (bioaktif)  yang  dapat meracuni serangga tapi mudah terurai di alam bagi manusia, selain itu insektisida alami juga selektif. [4] Terdapat beberapa penelitian tentang  tumbuhan  yang  bermanfaat sebagai alternatif insektisida yang aman digunakan  dalam  jangka  panjang. Tumbuhan  ini  mengandung  zat  aktif yang  dapat  membunuh  nyamuk  dan larvanya.  Daun  pandan  juga  diketahui sebagai  larvasida.  Pada  daun  pandan terdapat senyawa kimia yang terkandung didalamnya  seperti  saponin,  alkaloid, flavonoid, tanin, dan polifenol. [5]
Saponin  memiliki  rasa  yang  pahit dan  tajam  serta  dapat  menyebabkan iritasi  lambung  bila  dimakan.  Apabila saponin kontak dengan permukaan kulit nyamuk akan merusak mukosa kulit dan terabsorbsi akan terjadi hemolisis darah sehingga enzim pernafasan akan terhambat dan mengakibatkan kematian. Flavonoid  bertindak  sebagai  inhibitor pernapasan.  Flavonoid  adalah  racun kontak yang memberikan efek menghambat  sistem  pernapasan  dan mengganggu  sistem  saraf  kemudian merusak  sistem  pernapasan  sampai nyamuk  mati.  Alkaloid  merupakan antikolines yang berfungsi menghambat kerja enzim kolinestrase yang mempengaruhi  transmisi  impuls  saraf. Kemudian  terjadi  gangguan  transmisi rangsang  yang  dapat  menyebabkan
menurunnya koordinasi otot dan kematian. [6]

## METODE PENELITIAN
Desain  penelitian  menggunakan rancangan true  experimental. Disebut juga true  experimental ,  karena  dalam desain  ini  peneliti  dapat  mengontrol semua  variabel  yang  mempengaruhi jalannya  eksperimen.  Bentuk true experimental dalam penelitian ini adalah posttest  only  control  design, dalam desain  ini  terdapat  dua  kelompok  yang masing-masing dipilih secara random.
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  di Laboratorium Kesehatan Daerah Sulawesi  Tengah,  dan  sampelnya  di ambil di Balai Penelitian dan Pengembangan  Pengendalian  Penyakit Bersumber  Binatang  Donggala.  Sampel yang diambil berdasarkan kriteria inklusi dan  kriteria  ekslusi,  dimana  kriteria inklusi  terdiri  dari  larva Aedes  aegypti yang telah mencapai instar III dan larva yang  bergerak  aktif  dan  kriteria  ekslusi terdiri dari larva Aedes aegypti yang mati sebelum perlakuan.
Jumlah  perlakuan  sebanyak  6  kali dan jumlah pengulangan sebanyak 4 kali, maka  jumlah  perlakuan  adalah  24  kali. Sampel  yang  digunakan  untuk  setiap perlakuan  sebanyak  25  larva Aedes aegypti ,  sehingga  untuk  mengetahui jumlah  keseluruhan  sampel  yang dibutuhkan yaitu dengan perhitungan 25 larva × jumlah perlakuan = 25 × 24 = 500 larva Aedes aegypti .
Teknik  pengambilan  sampel  dari penelitian  ini  menggunakan  teknik Non random sampling , karena teknik pengambilan  sampel  dari  populasi dimana  setiap  anggota  populasi  tidak
mempunyai  kesempatan  yang  sama untuk  diambil  sebagai  sampel.  Bentuk Non random sampling pada pengambilan sampel ini adalah
Purposive  sampling, karena  metode pemilihan sampel berdasarkan atas ciri- ciri  atau  sifat  tertentu  yang  berkaitan dengan  karakteristik  populasi.  Bentuk pengambilan  sampel  purposive  yang digunakan adalah criterion sampling.

## HASIL
Ekstrak  Daun  Pandan  ( Pandanus

## Amaryllifolius Roxb.)
Penelitian  ini  dimulai  dengan pengumpulan  daun  pandan  kemudian dicuci  lalu  dipotong.  Pengeringan  daun dilakukan  di  bawah  sinar  matahari  dan ditutupi  oleh  kain  hitam  agar  sinar matahari  tidak  mengenai  daun  secara langsung  sehingga  kandungan  kimia dalam  daun  tidak  mudah  rusak  dan dilakukan  selama  3  hari  sebanyak  8 wadah daun pandan. Daun pandan yang kering  kemudian  diblender  untuk mendapatkan  simplisia  dalam  bentuk serbuk. Setelah dilakukan ekstraksi pada 3  kg  daun  pandan  yang  telah  menurun beratnya  menjadi  1  kg  dalam  bentuk simplisia  serbuk  dengan  menggunakan etanol 96% sebanyak 5 L dengan teknik maserasi  selama  5x24  jam  yang kemudian dikentalkan dengan menggunakan  rotary  evaporator,  maka diperoleh  hasil  ekstrak  kental  yang berwarna hijau kehitaman. Uji Pendahuluan Aktivitas Insektisisda
Sebelum  dilakukan  uji  aktivitas larvasida  ekstrak  daun  pandan  yang sebenarnya,  terlebih  dahulu  dilakukan uji pendahuluan pada konsentrasi 0,5%. 0.6%,  0,7%  dan  1.  Uji  pendahuluan dilakukan  untuk  mengetahui  apakah ekstrak tersebut memiliki efek larvasida terhadap larva Aedes aegypti yang akan diuji dan juga melakukan kontrol positif dan  kontrol  negatif.  Dari  hasil  uji pendahuluan yang dilakukan didapatkan bahwa  ekstrak  daun  pandan  ( Pandanus amaryllifolius Roxb.)  tidak  memiliki efek terhadap konsentrasi tersebut.
Tabel 1.1 Tabel Hasil Uji Pendahuluan Kematian Larva Aedes aegypti Akibat
Pemberian Ekstrak Daun Pandan Pada Kelompok Perlakuan Dan Kelompok Kontrol Konsen-trasi (%) Jumlah Larva Uji Jumlah Kematian Larva Pada Perlakuan ke- Rata-Rata 1 2 3 4 Larva Mati % Larva Mati % Larva Mati % Larva Mati % Larva Mati % 0.5 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.6 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.7 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Abate (+) 25 25 100 25 100 25 100 25 100 25 100 Aquades (-) 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Berdasarkan tabel 1.1 dapat diketahui  bahwa  pada  kontrol  negatif ekstrak  daun  pandan  pada  waktu  pada jam  ke  1  jam  dan  ke  24  jam  tidak ditemukan  adanya  kematian  larva  pada semua ulangan. Pada kelompok
perlakuan  rata-rata  kematian  terendah terdapat  pada  konsentrasi  0,5%;  0,6%; 0,7%  dan  1%  sebanyak  0%  sedangkan rata-rata  kematian  larva  tertinggi terdapat  pada  kontrol  positif  dimana menggunakan  abate  sebanyak  25  larva
(100%). Dari  hasil  ini  bisa  dilihat  bahwa ekstrak  daun  pandan  pada  konsentrasi 0,5%, 0,6%, 0,7%, dan 1% belum efektif sebagai larvasida. Hasil ini menggambarkan  bahwa  ekstrak  daun pandan  tidak  mencapai  LC 50 (Lethal Consentration)  dimana  ekstrak  daun pandan  tidak  mampu  membunuh  larva Aedes  aegypti sebanyak  setengah populasi  sehingga  penelitian  dengan menggunakan replikasi tidak dilanjutkan.
Gambar 1.1 Grafik Konsentrasi Ekstrak Daun Pandan dengan Presentasi
Kematian Larva
Efektifitas  Ekstrak  Daun  Pandan Pada  Berbagai  Konsentrasi  Dalam
Membunuh Larva Aedes aegypti Efektivitas  ekstrak  daun  pandan pada setiap konsentrasi dalam membunuh larva Aedes aegypti dilakukan  dengan  uji  statistik  analisis varians (anova). Uji normalitas ( Kolmogrov-Smirnov ) dilakukan sebelum uji anova. Tabel 1.2 Uji Kolmogorov-Smirnov Konsentrasi Ekstrak Daun Pandan Dalam Membunuh Larva Aedes aegypti Selama 24 Jam. Nilai  Zona Hambat Kolmogorov-Smirnov Statistic df Sig. Perlakuan  0 .152 20 .200 *
Berdasarkan  Tabel  1.2  dapat  di ketahui  bahwa  efektifitas  ekstrak  daun pandan  dalam  membunuh  larva Aedes aegypti menggunakan  metode  uji Kolmogorov-Smirnov memperoleh nilai p = 0,2 (p > 0,05), maka data terdistribusi normal. Tabel 1.3 Uji Homogenitas Konsentrasi Ekstrak Daun Pandan Dalam Membunuh Larva Aedes aegypti Selama 24 Jam Levene Statistic df1 df2 Sig. 8.578 1 22 .008
0 20 40 60 80 100 120 0,5 0,6 0,7 1 0 P res en tas i K em at ian L ar va (% ) Konsentrasi (%) Persentasi Kematian Larva (%) Presentasi kematian Larva (%)
Berdasarkan  Tabel  1.3  dapat diketahui  bahwa  hasil  uji  homogenitas memperoleh nilai  p = 0,008 (p < 0,05), maka  dikatakan  bahwa  dari  dua  atau lebih  kelompok  populasi  data  adalah tidak sama. Tabel 1.4 Efektivitas Ekstrak Daun Pandan dalam Membunuh Larva Aedes aegypti setelah 24 Jam Perlakuan dengan Analisis Anova Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 10.800 1 10.800 4.014 .058 Within Groups 59.200 22 2.691 Total 70.000 23 Berdasarkan  Tabel  1.4  dapat diketahui  bahwa  tidak  ada  perbedaan antara  konsentrasi  ekstrak  daun  pandan dengan  rata-rata  kematian  larva Aedes aegypti . Hal ini dapat dilihat dari nilai p =  0,058  (p  >0,05),  dapat  disimpulkan bahwa  dari  hasil  uji  normalitas    data terdistribusi  normal  sedangkan  pada  uji homogenitas  didapatkan  data  tidak homogen sehingga tidak dapat dilanjutkan pada uji anova. Syarat untuk uji  Anova  yaitu  data  harus  terdistribusi normal  dan  data  harus  homogen.
Selanjutnya, kita melakukan uji Kruskal Wallis
. Tabel 1.5 Uji Kruskal  Wallis
Berdasarkan  tabel  1.5  uji Kruskal Wallis hasilnya  didapatkan  p  =  0,000 (p<0,05).  Dari  hasil  tersebut  dapat disimpulkan  bahwa  hipotesis  yang didapatkan adalah < 0,05 maka hipotesis pertama  ditolak  (H1)  dan  hipotesis  nol diterima  (H0)  bahwa  ekstrak  daun pandan  tidak  memiliki  efek  larvasida
tehadap  larva Aedes  aegypti .  Pada  uji post  hoc tidak  dapat  dilakukan  karena kurang  dari  tiga  kelompok.  Pada  uji probit untuk menentukan nilai LC 50 tidak dapat  dilakukan  karena  efek  esktrak daun  pandan  tidak  mampu  membunuh larva Aedes  aegypti sebanyak  setengah Nilai Zona Hambat Chi-Square 23.000 df 5 Asymp. Sig. .000
populasi  sehingga  penelitian  ini  tidak dilanjutkan.

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  ini  didapatkan  dari masing-masing variasi konsentrasi (0,5%, 0,6%, 0,7% dan 1%)  dan terdapat penambahan  ekstrak  daun  pandan setelah selama 24 jam tidak menimbulkan  efek  pada  larva Aedes aegypti.
Hasil  penelitian  ini  didukung  oleh penelitian  lainnya  yang  menunjukkan bahwa  terdapat  pengaruh  ekstrak  daun pandan wangi ( Pandanus amaryllifolius Roxb.) terhadap kematian larva nyamuk Aedes  aegypti (p  =  0,000).  Efektivitas ekstrak  daun  pandan  wangi  ( Pandanus amaryllifolius Roxb.) dalam membunuh larva  nyamuk Aedes  aegypti pada konsentrasi 0,5% dapat membunuh larva rata-rata  sebesar  19,5  (20)  larva  (78%), konsentrasi  0,6%  membunuh  larva sebesar  20,75  (21)  larva  (83%), konsentrasi  0,7%  membunuh  larva sebesar  23  larva  (92%),  konsentrasi 0,8% membunuh  larva sebesar 24 larva (96%),  konsentrasi  0,9%  membunuh larva  sebesar  25  larva  (100%),  dan konsentrasi  1,0%  membunuh  larva sebesar  25  larva  (100%).  Konsentrasi ekstrak  daun  pandan  wangi  ( Pandanus amaryllifolius Roxb.) yang efektif dalam membunuh larva nyamuk Aedes aegypti adalah konsentrasi 0,9% yang merupakan  konsentrasi  terkecil  yang sudah  dapat  membunuh  larva  sebesar
100%.  Peningkatan  rata-rata  kematian larva Aedes  aegypti terjadi  seiring dengan peningkatan konsentrasi ekstrak daun pandan wangi ( Pandanus amaryllifolius Roxb.)  yaitu  semakin
tinggi  konsentrasi  maka  semakin  tinggi pula  rata-rata  kematian  larva Aedes aegypti . [7]
Hasil  penelitian    lainnya  terdapat hubungan  Ekstrak  etanol  daun  pandan wangi  ( Pandanus  amaryllifolius Roxb.) menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  pandan wangi,  semakin  tinggi  pula  persentase kematian  larva.  Ekstrak  etanol  daun pandan wangi ( Pandanus amaryllifolius Roxb.)  dengan  konsentrasi  0,125%, 0,25%,  0,5%,  1%,  2%,  dan  4%  efektif sebagai  larvasida  alami  bagi Aedes aegypti .  Nilai  LC 50 dan  LC 90 yang diperoleh  adalah  2,113%  dan  3,497%. Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi, efektif  sebagai  larvasida  alami  bagi
Aedes aegypti . Analisis data menunjukkan  terdapat  6  konsentrasi yang  efektif  dibandingkan  dengan kontrol,  yaitu  konsentrasi  0,125%, 0,25%,  0,5%,  1%,  2%,  dan  4%.  Hanya ada  1  konsentrasi  yang  tidak  efektif dibandingkan  dengan  kontrol,  yaitu konsentrasi 0,05%. [8] Pada penelitian ini terdapat kelemahan yaitu kurangnya pengontrolan  dalam  proses  penjemuran daun  pandan  dan  sebaiknya  tidak dibawah matahati, daun pandan seharusnya  hanya  dipotong  kecil-kecil dan  pada  saat  maserasi  sebaiknya dilakukan  selama  3x24  jam.  Faktor- faktor  yang  mempengaruhi  sehingga ekstrak tersebut tidak efektif yaitu faktor lingkungan  seperti  suhu,  kelembapan, intensitas  cahaya,  ketersediaan  air, mineral,  dan  karbondioksida  juga mempengaruhi  pertumbuhan  tanaman dan  mempengaruhi  produksi  metabolit
sekunder  tanaman.  Perbedaan  hasil penelitian sebelumnya ialah lama waktu penyimpanan  ekstrak  juga  berpengaruh terhadap hasil yang didapatkan. Ekstrak pada  penelitian  ini  tersimpan  selama kurang lebih 1 bulan di dalam pendingin sebelum  akhirnya  digunakan  untuk penelitian. [9] Pada  penelitian  lain terdapat  efek  toksik  ekstrak  biji Barringtonia  asiatica yang  digunakan untuk  larva  ulat  krop  kubis  mengalami penurunan akibat mengalami penyimpanan sepanjang 175 hari. Lama simpan  ekstrak  diduga  menguraikan senyawa  aktif  dari  ekstrak  biji Barringtonia  asiatica itu  sendiri,  dan berakibat pada penurunan efek
toksiknya.  Faktor-faktor  yang  bisa menyebabkan  penguraian  bahan  aktif adalah  seperti  keadaan  lembap,  suhu yang panas, keadaan kemasan, tekanan, reaksi  oksidasi,  derajat  keasaman, bakteri, serta jamur. [10]

## KESIMPULAN
Dari penelitian yang telah dilakukan dapat ditarik kesimpulan bahwa: Ekstrak daun  pandan  ( Pandanus  amaryllifolius
Roxb.)  pada  konsentrasi  0,5%,  0,6%,
0,7%  dan  1%  tidak  efektif  sebagai larvasida pada larva Aedes aegypti. Pada hasil  penelitian  didapatkan  bahwa ekstrak daun pandan tidak memiliki efek sebagai  larvasida  larva Aedes  aegypti sehingga  tidak  dapat  ditentukan  nilai LC 50 karena  ekstrak  tersebut  tidak mampu  membunuh  setengah  dari populasi.
Peneliti  berharap  adanya  penelitian lebih lanjut mengenai efek ekstrak daun pandan ( Pandanus amaryllifolius Roxb.) sebagai  larvasida  menggunakan  metode ekstraksi  yang  lain  seperti:  perkolasi, refluks,  soxhletasi,  digesti,  infus, destilasi uap.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Kepala  Balai  Penelitian  dan Pengembangan  Pengendalian  Penyakit
Bersumber  Binatang  Donggala  yang telah membantu peneliti dalam pengambilan data sampel.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Kementrian  Kesehatan  Republik Indonesia. Profil  Kesehatan Indonesia  Tahun  2015. Palu: Profil  Kesehatan  Indonesia; 2016. 2. Kementrian  Kesehatan  Republik Indonesia. Profil  Kesehatan Indonesia  Tahun  2014. Palu: Profil  Kesehatan  Indonesia; 2015. 3. Dinas Kesehatan. Profil Kesehatan  Provinsi  Sulawesi Tengah Tahun 2015 . Palu: Dinas Kesehatan  Provinsi  Sulawesi Tengah; 2016.
4. Komansil  A,  Abadi,  Abdul  L, Yanuwiadi,  Bagyo,  David  AK. Isolation  and  identification  of Biolarvacide from Soursop (Annona Muricata Linn) seeds to Mosquito (Aedes aegypti) Larvae. International Journal  of  Engineering  &
Technology.  Vol.  12,  No.  3. cited  2016  Oct  10.  Available from <www.ijens.org>.
5. Prasetyowati  H,  Widawati  M.
Efektifitas  Ekstrak  Buah  Beta
vulgaris  L.  (Buah  Bit)  dengan berbagai Fraksi Pelarut Terhadap Mortalitas Larva Aedes aegypti. Lokasi Penelitian dan   Pengembangan  Penyakit Bersumber  Binatang  (P2B2)
Ciamis; 2013.
6. Sugiharti FR. Uji Potensi Ekstrak Daun Pandan Wangi (Pandanus amaryllifolius  Roxb.)  Sebagai Insektisida  Terhadap  Nyamuk
Culex  sp.  Dewasa  dengan Metode  Elektrik .  Tugas  Akhir Program Studi Pendidikan Dokter  Fakultas  Kedokteran Universitas Brawijaya Malang; 2012. 7. Pratama, B.A Pemanfaatan ekstrak  daun  pandan  wangi (Pandanus  Amryllifolius  Roxb) sebagai  larvasida  alami.  Jurnal
Kesehatan, 2012.
8. Purnamasari,  M.R,  Sudarmaja I.M,  Swastika  I.K,  Potensi Ekstrak  Etanol  Daun  Pandan Wangi  (Pandanus  Amryllifolius Roxb)  sebagai  larvasida  alami bagi  Aedes  Aegypti.  E-jurnal Medika, vol.6 No. 3. 2017 9. Ramakrishna  A,  Ravishankar
G.A, Influence of Abiotics stress Signal on secondary metabolitest in  plants.  Plants  Signal  Behav, 2011 10. Dono,  D.  Santosa  E,  Inangsih F.P. Pengaruh Lama Penimpanan Ekstrak Biji Barringtonia Asiatica (L) Kurz (Lecythidaceae) terhadap toksisitasnya pada larva Crocidolomia  Pavonana  (F) (Lepidoptera:  Pyralidae).  New Bionatura), 2011