Abstrak—Tumbuhan  Waru  (Hibiscus  tiliaceus)  merupakan salah  satu  tumbuhan  yang  memiliki  kandungan  senyawa metabolit  sekunder  seperti  saponin,  alkaloid,  flavonoid sehingga dapat dimanfaatkan sebagai bioinsektisida. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efektivitas  formulasi bioinsektisida cair dari bahan aktif daun waru terhadap larva Spodoptera  litura  F.  Metode  yang  digunakan  untuk  ekstraksi daun  waru  yang  didapatkan  dari  kampus  ITS  Surabaya adalah  metode  maserasi  dengan  etanol  96%.  Rancangan penelitian  yang  digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  dengan  3  pengulangan  yang  terdiri  dari  konsentrasi ekstrak  0%,  10%,  20%,  30%,  40%,  50%,  60%,  70%,  80%, dan  90%  menggunakan  metode  celup  daun  pada  uji pendahuluan,  sedangkan  pada  uji  lanjutan  menggunakan metode  oles  daun  dengan  konsentrasi  0%,  35%,  40%,  45%, 50%, dan 55%. Data hasil pengamatan dianalisis menggunakan  ANOVA  one  way  dengan  uji  lanjutan  Duncan dan  nilai  LC 50 dianalisis  dengan  analisis  probit.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  formulasi  bioinsektisida  cair ekstrak  daun  waru  berpengaruh  terhadap  serangan  larva Spodoptera  litura  pada  tanaman  pakcoy  dengan  konsentrasi yang  paling  efektif  adalah  konsentrasi  ekstrak  45%.  Ciri-ciri larva  mati  akibat  pemaparan  bioinsektisida  adalah  tubuh larva  mengeras,  berwarna  cokelat  sampai  kehitaman,  dan tubuh mengkerut .
Kata  Kunci—bioinsektisida,  daun  waru,  formulasi,  mortalitas, Spodoptera litura

## I. PENDAHULUAN
AMPUS  ITS  Surabaya  merupakan  kampus  yang rindang  dan  hijau  dimana  ditumbuhi  banyak  sekali jenis  tumbuhan  salah  satunya  adalah  tumbuhan  waru ( Hibiscus  tiliaceus )  yang  keberadaannya  cukup  melimpah. Tumbuhan  waru  merupakan  termasuk  dalam  suku Malvaceae  yang  umumnya  digunakan  dalam  berbagai pengobatan  berbagai  penyakit  seperti  TB  paru-paru,    sesak napas,  dan  radang  usus  [1].  Para  peneliti  sebelumnya  telah melakukan  uji  aktivitas  farmakologi  dari  daun  waru  yaitu fraksi  daun  waru  bersifat  toksik  terhadap  larva Artemia salina Leach  [2].  Daun  waru  berpotensi  dijadikan  bahan dasar  biopestisida  karena  mengandung  senyawa  polifenol, alkaloid, saponin, tanin dan flavonoid [1].
Pakcoy (Brassica chinensis L.) jenis sayuran yang banyak digemari  oleh  masyarakat  karena  rasanya  enak,  mudah didapat,  dan  mudah  dibudidayakan  [3].  Berdasarkan  Badan Pusat  Statistik  Indonesia  tahun  2014  produksi  pakcoy  di Indonesia  pada  tahun  2013  sekitar  635.728  ton,  sementara itu produksi mengalami penurunan pada tahun 2014 dengan produksi  mencapai  602.478  ton.  Kebutuhan  pakcoy  di Indonesia semakin  tinggi  seiring dengan  meningkatnya laju pertumbuhan  penduduk  dan  kesadaran  manusia  akan pentingnya pemenuhan sumber gizi [4].
Ulat grayak ( Spodoptera  litura F.) dari ordo  Lepidoptera dan  Famili  Noctuidae  merupakan  salah  satu  hama  utama pada tanaman pakcoy yang dapat menyebabkan menurunnya hasil  panen.  Kehilangan  hasil  akibat  serangan  hama Spodoptera  litura dapat  mencapai  85  %,  bahkan  dapat menyebabkan  kegagalan  panen  (puso).  Hama  ini  memiliki sifat  polypag  yang  dimana  dapat  memakan  berbagai  jenis tanaman demi kelangsungan hidupnya [5]. Untuk menanggulangi  adanya  hama,  upaya  yang  dianggap  praktis oleh  petani  adalah  dengan  menggunakan  pestisida  sintetik yang  jika  dibiarkan  terus  menerus  dapat  menyebabkan dampak  buruk  bagi  lingkungan.  Salah  satu  aternatif  yang dilakukan  untuk  meminimalisir  penggunaan  pestisida sintetik  ialah  dengan  menggunakan  pestisida  nabati. Pestisida  nabati  ialah  hasil  ekstrak  dari  bagian  tertentu tumbuhan  yang  mengandung  bahan  aktif  berasal  dari tumbuhan  dan  berpotensi  untuk  mengendalikan  hama  pada tanaman [4].
Perkembangan  biopestisida  saat  ini  dapat  diproduksi dalam  berbagai  formulasi  sesuai  dengan  kebutuhan  dan efektifitasnya.  Salah  satunya  adalah  formulasi  bentuk  cair. Pembuatan  formulasi  pada  biopestisida  bertujuan  untuk menjaga  agar  bahan  aktif  biopestisida  berada  dalam  suatu sediaan  yang  stabil  dan  tidak  mudah  rusak  kandungan berkhasiatnya.  Selain  itu,  pembuatan  formulasi  juga  dapat membantu  dalam  lama  waktu  penyimpanan,  penanganan, meningkatkan efektivitas dan keamanan dalam pengaplikasiannya [6].
Berdasarkan  uraian  tersebut  maka  perlu  dilakukan perbaikan  cara  pengendalian  organisme  pengganggu tanaman  seperti  penggunaan  pestisida  nabati.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas formulasi bioinsektisida  cair  dari  bahan  aktif  daun  Waru  ( Hibiscus tiliaceus )  dalam  menekan  serangan  larva Spodoptera  litura pada tanaman pakcoy ( Brassica chinensis ).

## II. METODOLOGI

## A. Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Februari  sampai dengan April 2021 di Labortaorium Biosains dan Teknologi Tumbuhan  Departemen  Biologi,  Fakultas  Sains  dan Analitika  Data,  dan  Urban  Farming,  Institut  Teknologi Sepuluh Nopember, Surabaya.

## B. Penanaman  dan  Pemeliharaan  Tanaman  Pakcoy (Brassica chinensi)
Media  tanam  yang  digunakan  berupa  tanah,  pupuk kandang/kompos,  dan  arang  sekam  yang  dicampur  dengan perbandingan  1:1:1.  Benih  yang  akan  disemai  direndam dengan menggunakan air hangat kuku sekitar 45 o C selama 1

## Uji Efektivitas Formulasi Bioinsektisida Ekstrak
Daun Waru ( Hibiscus tiliaceus ) terhadap Larva

## Spodoptera litura F.
Nurlaily Alviani dan Kristanti Indah Purwani Departemen Biologi, Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya (ITS)
e-mail : kristanti475@gmail.com
K
jam  kemudian  dipilih  biji  yang  tenggelam  [7].  Penyemaian dilakukan  pada  wadah  plastik  yang  berisi  media  tanam  [6]. Kemudian  benih  pakcoy  ditaburkan  diatasnya,  kemudian ditutup  lagi  dengan  ditaburkan  media  tanam.  Penyemaian dilakukan  selama  2-3  minggu  atau  telah  berdaun  4-5  helai kemudian  bibit  dipindahkan  kedalam polybag yang  berisi media tanam. Pada setiap polybag hanya ditanam satu bibit yaitu dipilih bibit yang  seragam, daun hijau  dan tidak  layu, tidak terkena penyakit serta tumbuh tegak [7].
C. Pembuatan Bioinsektisida Ekstrak Daun Waru (Hibiscus tiliaceus)
Daun waru diambil dari ruang terbuka hijau kampus ITS Surabaya  tepatnya  di  dekat  Departemen  Teknik  Fisika. Langkah  awal  dimulai  dengan  pembersihan  daun Hibiscus tiliaceus dengan  pencucian  menggunakan  air  mengalir  dan pembilasan  dengan  akuades.  Kemudian  bahan  dipotong- potong dengan panjang satu sampai dua cm lalu dikeringkan anginkan  pada  suhu  ruang.  Bahan  yang  sudah  dikeringkan ini  kemudian  dihaluskan  menggunakan  blender  [6].  Bahan yang sudah dihaluskan, selanjutnya dieksraksi menggunakan metode maserasi atau perendaman dalam pelarut etanol 96% [8].  Metode  maserasi  dilakukan  dengan  perbandingan sampel  dan  pelarut  1  :  3  (10  gram  serbuk  dengan  30  ml etanol)    [9].    Perendaman  (maserasi)  dilakukan  pada  suhu kamar  selama  24  jam  [10].  Hasil  maserasi  disaring menggunakan  corong  Buchner  yang  dialasi  kertas  saring. Hasil  ekstrak  daun Hibiscus  tiliaceus kemudian  diencerkan dengan  akuades  dan  dibantu  dengan  beberapa  tetes pengemulsi  dimetil  sulfoksida  (DMSO)  dan  etanol  yang diperoleh  konsentrasi  10%,  20%,  30%,  40%,  50%,  60%, 70%, 80%, dan 90%. Sedangkan sebagai kontrol digunakan akuades dengan tambahan beberapa tetes DMSO dan etanol serta  terdapat  perlakuan  kontrol  tanpa  pencelupan  bahan sama sekali.
D. Persiapan Larva Ulat Grayak (Spodoptera litura)
Larva Spodoptera  litura didapatkan  dari  Balai  Penelitian Tanaman  Pemanis  dan  Serat  (Balittas)  Malang  dan dimasukkan ke dalam toples, toples lalu ditutup dengan kain putih  dan  diikat  dengan  karet.  Larva  tersebut  dipelihara hingga  berubah  menjadi  larva  instar  III,  makanan  yang diberikan  untuk  pemeliharaan  larva  ini  adalah  daun  pakcoy ( Brassica  chinensis )  segar  yang  diganti  setiap  hari  serta kotorannya  dibersihkan  dengan  kuas  sampai  memasuki instar III yang siap untuk digunakan sebagai larva uji [11].
E. Uji Pendahuluan : Uji Pengaruh Bioinsektisida Ekstrak Daun Waru terhadap Mortalitas Larva
Pengujian  pestisida  nabati  pada  uji  pendahuluan  adalah pemberian  daun  pakcoy  sebagai  pakan  larva Spodoptera litura yang  dicelup  menggunakan  ekstrak  daun Hibiscus tiliaceus yang terdiri dari konsentrasi 10%, 20%,30%, 40%,
50%, 60%, 70%, 80% dan 90% serta kontrol 0% dan kontrol tanpa  perlakuan  dengan  masing-  masing  sebanyak  3  kali ulangan.
Langkah  awal  yang  dilakukan  dalam  uji  pendahuan adalah disiapkan larva Spodoptera litura yang sudah instar 3 dimasukkan ke toples dengan masing-masing toples 10 ekor larva. Kemudian dilakukan pengujian menggunakan metode celup  daun  (leaf  dipping  methods)  [12].  Daun  pakcoy dicelupkan  ke  dalam  ekstrak  daun  waru  sesuai  dengan konsentrasi  uji  yang  telah  disiapkan  hingga  daun  pakcoy basah  merata  dan  digunakan  sebagai  makanan  larva Spodoptera litura . Masing- masing toples diberi satu lembar daun  pakcoy.  Daun  pakcoy  sebagai  makanan  larva  diganti setiap  24  jam  dengan  daun  yang  baru  dengan    perlakuan yang  sama.  Setiap  hari  kotoran  di  dalam  toples  uji dibersihkan dengan mengguakan kuas. Pengamatan mortalitas  larva  dilakukan  pada  waktu  yang  sama  setiap harinya  selama  48  jam  [11].  Setelah  itu,  ditentukan  nilai LC 50 menggunakan  analisis  probit  untuk  mengetahui konsentrasi ekstrak yang akan digunakan untuk uji lanjutan.

## F. Pembuatan Formulasi Bioinsektisida Bentuk Cair
Komposisi formulasi ekstrak daun waru ditampilkan oleh Tabel 1[6].

## G. Uji  Lanjutan  :  Uji  Pengaruh  Formulasi  Bioinsektisida Cair dari Daun Waru
Pengujian  dilakukan  dengan  menggunakan  metode pengolesan  daun  [13].  Formulasi  bioinsektisida  bentuk  cair yang  dibuat  yaitu  dari hasil  uji  pendahuluan  yang  memiliki mortalitas lebih  dari 50%, kemudian dioleskan menggunakan  kuas  pada  tanaman B.chinensis yang  telah dipindahkan  ke polybag dan  diberikan  larva S.  litura instar 3. Pemberian formulasi bioinsektisida bentuk cair dilakukan secara  preventif  yaitu  diberikan  sebelum  tanaman  diberi larva  (36  HSS).  Setiap  perlakuan  digunakan  hewan  uji sebanyak 5 ekor dengan pengulangan sebanyak 3 kali untuk tiap konsentrasi dan 1 kontrol. Pengamatan mortalitas larva dilakukan pada 24 jam setelah diberikan bioinsektisida [6].

## H. Parameter Pengamatan
Efek  toksisitas  ekstrak  terhadap  larva  dapat  diamati  dari pengamatan  %  mortalitas Spodoptera  litura .  Pengamatan yang  dilakukan  dengan  membandingkan  jumlah  hama dengan  jumlah  seluruh  hama  yang  ada  pada  setiap perlakuan, dan dinyatakan dalam bentuk persen (%).
Perhitungan mortalitas menggunakan rumus [14]:
Persen kematian (%) = ∑larva yang mati ∑total larva x 100%

## I. Rancangan Penelitian
Rancangan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  satu  faktor  yaitu konsentrasi  formulasi  bioinsektisida  bentuk  cair  berbahan aktif  ekstrak  daun  waru.  Setiap  perlakuan  konsentrasi dilakukan pengulangan sebanyak tiga kali ditambah kontrol yang  terdiri  dari  kontrol  0%  dan  kontrol  tanpa  diberi perlakuan sama sekali.

## J. Analisis Data
Analisis data dilakukan dengan hipotesis sebagai berikut :
Tabel 1.
Komposisi Formulasi Bioinsektisida Cair Jenis Bahan Komposisi Bahan Persentase Bahan aktif Ekstrak daun waru Konsentrasi 35%, 40%, 45%, 50%, dan 55% Perekat Okti Fenil Etilin 10% Surfaktan Tween 80 4% Pelarut Isopropil Alkohol Konsentrasi 35%, 40%, 45%, 50%, dan 55%
H 0 :  ekstrak  daun Hibiscus  tiliaceus tidak  berpengaruh sebagai bioinsektisida terhadap larva Spodoptera litura H 1 :  ekstrak  daun Hibiscus  tiliaceus berpengaruh  sebagai bioinsektisida terhadap larva Spodoptera litura.
Untuk  mengetahui  pengaruh  perlakuan  pada  parameter yang  diamati  yaitu  mortalitas  larva  uji  dilakukan  analisis probit dengan menggunakan SPSS versi  25  dan uji statistik ANOVA one  way dengan  taraf  kepercayaan  95%. Selanjutnya,  dilakukan  uji  lanjutan  menggunakan  Uji DMRT  untuk  mengetahui  perlakuan  yang  paling  efektif diantara masing-masing perlakuan.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Mortalitas larva S. litura pada Uji Pendahuluan
Uji pendahuluan bertujuan untuk melihat pada konsentrasi  berapa  saja  yang  mampu  menjadi  ekstrak  yang mematikan  50%  dari  larva  uji  yang  hidup    dengan menentukan nilai LC50.
Pada  uji  pendahuluan  menggunakan  ekstrak  daun Hibiscus  tiliaceus yang  terdiri  dari  konsentrasi  10%,  20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% dan 90% serta kontrol 0% dan  kontrol  tanpa  perlakuan  dengan  masing-  masing sebanyak  3  kali  ulangan.  Pemberian  konsentrasi  kelipatan 10  bertujuan  untuk  membuat  range  konsentrasi  antara  0- 100%.  Hasil  persentase  mortalitas  larva  pada  uji pendahuluan  dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Dapat  diketahui bahwa  nilai  mortalitas  larva  tertinggi  adalah  pada konsentrasi 90%  yaitu  100%  yang  berarti  dapat  membunuh atau  mematikan  jumlah  larva  uji seluruhnya.  Sedangkan kematian  terendah  pada  perlakuan  kontrol  dan  konsentrasi ekstak  0%  yaitu  dengan  nilai  mortalitas  0%  yang  berarti tidak  membunuh  larva  uji  sama  sekali.  Dari  hasil  ANOVA menunjukkan  nilai  signifikan  0,00  <  0,05  yang  berarti ekstrak  daun Hibiscus  tiliaceus berpengaruh  terhadap
mortalitas  larva Spodoptera  litura pada  uji  pendahuluan. Persentase  mortalitas  pada  kontrol  adalah  0%.  Menurut teori,  apabila  tidak  terjadi  kematian  pada  kontrol  maka persen  mortalitas  tidak  dikoreksi  Abbot.  Koreksi  Abbot diperlukan  apabila  pada  kontrol  terjadi  mortalitas  antara  5- 20%.  Apabila  hasil  koreksi  Abbot  menunjukkan  persen mortalitas  lebih  dari  20%,  maka  berarti  perlakuan  dalam penelitian  berjalan  kurang  baik  karena  ada  faktor  lain  yang mempengaruhi mortalitas, yaitu faktor lingkungan [15].
Hasil  uji  DMRT  pada  Tabel  2.  diketahui  ada  6 pengelompokkan  ekstrak,  yaitu  kelompok  a)  konsentrasi 90%,  kelompok  ab)  konsentrasi  80%,  70%,  dan  60%, kelompok  b)  konsentrasi  50%,  kelompok  c)  konsentrasi 40%,    kelompok  cd)  konsentrasi  30%  dan  20%,  dan kelompok d) konsentrasi 10%, 0%, dan kontrol. Dari tabel 2. terlihat  bahwa  nilai  mortalitas  tertinggi  yaitu  pada konsentrasi  ekstrak  90%  yaitu  sebesar  100%  yang  berarti dapat membunuh seluruh jumlah larva uji dan berbeda nyata dengan  konsentrasi  50%,  40%,  30%,  20%,  10%,  0%  dan kontrol  tetapi  tidak berbeda nyata dengan konsentrasi 80%, 70%,  dan  60%.  Dapat  diketahui  bahwa  pada  perlakuan kontrol  memiliki  nilai  mortalitas  terendah  yaitu  0%  yang berarti  tidak  dapat  membunuh  larva  uji  sama  sekali  dan berbeda nyata dengan konsentrasi 20%, 30%, 40%, 50% dan 60%,70%, 80%, dan 90% tetapi tidak berbeda nyata dengan konsentrasi  0%  dan  10%.  Berdasarkan  hasil  tersebut, kemudian  dilakukan  analisis  probit  (Tabel  3.)  untuk mengetahui  konsentrasi  spesifik  yang  mampu  membunuh larva 50% (LC50).
Analisis  probit  pada  uji  pendahuluan  didapatkan  nilai LC 50 sebesar 45,42% (Tabel 3.) hal ini menunjukkan bahwa ekstrak  daun  waru  pada  perlakuan  48  jam  memang berpengaruh  terhadap  larva Spodoptera  litura karena  pada pengenceran  sebesar  45,42%    sudah  dapat  membunuh  50% dari  dari  larva  uji.  Penentuan  konsentrasi  lanjutan  diambil dari  range  atau  batas  bawah  dan  batas  atas  konsentrasi 45,42% yaitu konsentrasi 35%-55% dengan nilai kelipatan 5 beserta konsentrasi ekstrak 0% dan kontrol.
B. Uji Formulasi Bioinsektisida Daun Waru (Uji Lanjutan) Uji lanjutan adalah menggunakan formulasi bioinsektisida  bentuk  cair  yang  dibuat  dengan  konsentrasi ekstrak  daun  waru  hasil  uji  pendahuluan  (nilai  LC 50 )  yaitu konsentrasi 35%, 40%, 45%, 50%, dan 55%, beserta kontrol yang  terdiri  dari  kontrol  0%  dan  kontrol  tanpa  diberi perlakuan  dengan  masing-masing  3  pengulangan,  serta ditambahkan  bahan-  bahan  tambahan  untuk  formulasi  yaitu okti  fenil  etilin,  tween  80,  dan  isopropil  alkohol  dengan komposisi yang telah ditentukan.  Persentase mortalitas pada uji lanjutan selama 24 jam ditunjukkan pada Tabel 4.
Tabel 2. Persentase Mortalitas Larva Spodoptera litura yang Diberi Perlakuan Ekstrak Daun Waru selama 48 jam
Uji Pendahuluan Perlaku- an Jumlah larva Larva mati tiap ulangan Rata-rata 1 2 3 Larva mati Mortalitas (%) K1 10 0 0 0 0 0 d K2 10 1 1 1 1 10 d P1 10 2 1 1 1 13 d P2 10 4 0 2 2 20 cd P3 10 0 4 2 2 20 cd P4 10 2 7 3 4
40 c P5 10 7 7 7 7 70 b P6 10 10 10 7 9
90 ab P7 10 10 10 8 9
93 ab P8 10 8 10 10 9
93 ab P9 10 10 10 10 10
100 a
Keterangan:
Notasi  :  Huruf  yang  sama  pada  kolom  menunjukkan  tidak  beda nyata berdasarkan Uji DMRT dengan taraf signifikan (5%). K1 : Kontrol 1 (Air) K2 : Kontrol 2 (Air + DMSO) P1 : Ekstrak daun waru 10% + DMSO P2 : Ekstrak daun waru 20% + DMSO P3 : Ekstrak daun waru 30% + DMSO P4 : Ekstrak daun waru 40% + DMSO P5 : Ekstrak daun waru 50% + DMSO P6 : Ekstrak daun waru 60% + DMSO P7 : Ekstrak daun waru 70% + DMSO P8 : Ekstrak daun waru 80% + DMSO P9 : Ekstrak daun waru 90% + DMSO
Tabel 3.
Tabel Analisis Probit pada Uji Pendahuluan Lethal Concentration (LC) Concentration Extract (%) Lower Bound Upper Bound 10 29,447 12,119 38,686 20 34,171 16,876 42,932 30 38,040 21,355 46,437 40 41,692 26,007 49,856 50 45,421 31,089 53,588 60 49,484 36,809 58,152 70 54,235 43,321 64,608 80 60,376 50,682 75,584 90 70,061 59,541 99,422
Komposisi bahan dalam membuat formulasi bioinsektisida masing- masing perlakuan 100 ml :
K1 : Kontrol 1 (Air)
K2  :  Kontrol  2  (Okti  Fenil  Etilin  10%  +  Tween 80 4% + Isopropil Alkohol 100% + Air)
P1 : Ekstrak daun waru 35% + Oktil Fenil Etilin 10%  +  Tween  80  4%  +  Isopropil  Alkohol 51% + Air
P2 : Ekstrak daun waru 40% + Oktil Fenil Etilin 10%  +  Tween  80  4%  +  Isopropil  Alkohol 46% + Air
P3 : Ekstrak daun waru 45% + Oktil Fenil Etilin 10%  +  Tween  80  4%  +  Isopropil  Alkohol 41% + Air
P4 : Ekstrak daun waru 50% + Oktil Fenil Etilin 10%  +  Tween  80  4%  +  Isopropil  Alkohol 36% + Air
P5 : Ekstrak daun waru 55% + Oktil Fenil Etilin 10%  +  Tween  80  4%  +  Isopropil  Alkohol 31% + Air
Hasil  uji  lanjutan  yaitu  Uji  DMRT,  diketahui  ada  5 pengelompokkan  ekstrak,  yaitu  kelompok  a)  konsentrasi 55% dan 50%, kelompok ab) konsentrasi 45%, kelompok b) konsentrasi  40%,  kelompok  c)  konsentrasi  35%,  dan kelompok  d)  konsentrasi  0%  dan  kontrol.  Dari  Tabel  4. terlihat  bahwa  nilai  mortalitas  tertinggi  yaitu  pada konsentrasi  ekstrak  55%  yaitu  sebesar  93%  yang  berarti dapat  membunuh  hampir  seluruh  jumlah  larva.  Dapat diketahui bahwa pada perlakuan kontrol dan konsentrasi 0% memiliki  nilai  mortalitas  terendah  yaitu  0%  yang  berarti tidak  dapat  membunuh  larva  uji  sama  sekali  dan  berbeda nyata  dengan  konsentrasi  35%,  40%,  45%,  50%  dan  55%. Konsentrasi  ekstrak  35%  berbeda  nyata  dengan  konsentrasi 40%,  45%,  50%  dan  55%.  Konsentrasi  40%  tidak  berbeda nyata  dengan  konsenrasi  45%  tetapi  berbeda  nyata  dengan konsentrasi 50% dan 55%. Konsentrasi 45%, 50%, dan 55% tidak berbeda nyata.
Berdasarkan  Tabel  4.  dapat  diketahui  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak  yang  diujikan,  maka  pola mortalitas juga akan semakin tinggi, dimana semakin tinggi konsentrasi maka semakin banyak pula kandungan senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  pakan  yang bersentuhan  dan  dikonsumsi  oleh  larva  [16].  Dari  hasil tersebut,  dapat  dilihat  bahwa  pada  konsentrasi  45%  lebih efektif  digunakan  karena  pada  konsentrasi  45%,  50%  dan 55%  persentase  mortalitas  hasilnya  tidak  berbeda  nyata.
Lebih  efektif  apabila  menggunakan  konsentrasi  45% dikarenakan  lebih  meminimalisir  atau  hemat  dalam penggunaan bahan yaitu ekstrak daun waru.
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  pada  pengolesan  secara preventif  dengan  konsentrasi  bahan  aktif  daun  waru  0% memiliki  nilai  mortalitas  larva  yang  sama  dengan  tanaman kontrol yaitu sebesar 0% yang berarti tidak membunuh larva uji  sama  sekali,  hal  ini  membuktikan  bahwa  bahan pembantu  ( adjuvant )  dalam  formulasi  tidak  mengandung bahan penolak makan serangga ( antifeedant ) dan tidak dapat menyebabkan  kematian  pada  larva.  Bahan  pembantu ( adjuvant )  yang  ditambahkan  dalam  formulasi  meliputi Tween 80, Oktil Fenol Etilin dan Isopropil alkohol [6].
Mortalitas  pada  larva  uji  disebabkan  oleh  senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  ekstrak  daun waru yang memiliki sifat toksik dan dapat membunuh. Daun waru  memiliki  kandungan  metabolit  sekunder  antara  lain yaitu  senyawa  polifenol,  alkaloid,  saponin,  flavonoid,  dan tanin  [17]. Penelitian  sebelumnya  menemukan  komponen fitogenik  pada  daun Hibiscus  tiliaceus yang  dianalisis dengan  GC-MS  pada  senyawa  organik  utama  adalah  asam lemak  dan  ester  (31%),  senyawa  nitrogen  (18,28%)  dan kuinolin  (23%).  Kuinolin  adalah  alkaloid  dan  memiliki aktivitas antiprotozoa dan antioksidan [18]. Isolat daun waru mengandung  senyawa  golongan  steroid  kelompok  sterol dengan  kemungkinan  gugus  fungsi  O-H,  CH  alifatik,  serta C=C alifatik yang tidak terkonjugasi [1].
Senyawa  zat  toksik  yang  terkadung  dalam  daun  waru masuk dapat masuk melalui dinding tubuh larva dan melalui mulut  karena  larva  biasanya  mengambil  makanan  dari tempat hidupnya [19]. Mekanisme masuknya racun atau zat toksik  dari  insektisida  ke  dalam  tubuh  serangga  sasaran dibedakan  menjadi  racun  perut  (pencernaan),  racun  kontak, racun pernapasan, dan racun saraf [20].
Pada  penelitian  ini  yang  terjadi  adalah  larva  mengalami kematian setelah 24 jam perlakuan yang mempunyai ciri-ciri tubuh  larva  mengeras,  berwarna  cokelat  sampai  kehitaman, tubuh  memanjang  dan  lentur  (Gambar  1c),  serta  dinding tubuh  larva  mengkerut  (Gambar1d).  Sedangkan  pada  larva kontrol  dan  larva  konsentrasi  ekstrak  )%  tubuhnya  masih
Gambar  1. Perbandingan  larva  kontrol  dengan  yang  mati  setelah pemaparan  (a)  larva  hidup  kontrol,  (b)  larva  hidup  pada  konsentrasi 0%,  (c)  larva  mati  pada  konsentrasi  35%,  (d)  larva  mati  pada konsentrasi 55% (Perbesaran 4x menggunakan mikroskop stereo).
Tabel 4.
Persentase Mortalitas Larva Spodoptera litura yang Diberi Perlakuan Forrmulasi Bioinsektisida Daun Waru selama 24 jam
Uji Lanjutan
Konsentrasi (%) Jumla h larva Larva mati tiap ulangan Rata-rata 1 2 3 Larva mati Mortalitas (%) Kontrol 5 0 0 0 0 d 0 0 5 0 0 0 0 d 0 35 5 2 3 2 2,33 c 47 40 5 4 3 3 3,33 b 67 45 5 4 4 4 4 ab 80 50 5 4 4 5 4,33 a 87 55 5 5 4 5 4,67 a 93
Keterangan:
Notasi : Huruf yang sama pada kolom menunjukkan tidak beda nyata berdasarkan Uji DMRT dengan taraf signifikan (5%).
terlihat sehat dan utuh dengan warna hijau (Gambar 1a dan Gambar 1b).
Perubahan  warna  kulit  pada  tubuh  larva  dan  gerakan tubuh  yang  melambat  bila  dirangsang  dengan  sentuhan diduga  disebabkan  oleh  senyawa  saponin  yang  merupakan glikosida  triterpena  dan  glikosida  sterol  yang  merupakan senyawa  aktif  permukaan  dan  bersifat  seperti  sabun  yang menimbulkan  keracunan  [21].  Ciri-  ciri  morfologi  bahwa tubuh  larva  mengkerut  dan  berwarna  coklat  kehitaman (Gambar  1c)  yang  diduga  larva  mati  akibat  racun  kontak, hal  itu  disebabkan  oleh  senyawa  alkaloid  yang  terkandung dalam  ekstrak  daun  waru  dan  bertindak  sebagai  racun kontak  dan  racun  perut.  Alkaloid  berupa  garam  sehingga dapat mendegradasi membran  sel  saluran pencernaan untuk masuk  kedalam  dan  merusak  sel  dan  juga  dapat mengganggu  sistem  kerja  saraf  larva  dengan  menghambat kerja  enzim  asetilkolinesterase.  Dimana  enzim  ini  tidak dapat  melaksanakan  tugasnya  dalam  tubuh  terutama meneruskan pengiriman perintah kepada saluran pencernaan larva ( midgut ) sehingga gerakanya tidak dapat dikendalikan [22].  Tubuh larva semakin lembek dan pergerakan melemah disebabkan  karena  senyawa  flavonoid  yang  merupakan senyawa  kimia  yang  memiliki  sifat  insektisida  dimana menyerang  saraf  pada  beberapa  organ  vital  serangga, sehingga  timbul  suatu  pelemahan  saraf,  seperti  pernafasan dan  menyebabkan  kematian  [23].  Senyawa  tanin  dapat mengganggu  serangga  dalam  mencerna  makanan  karena tanin  akan mengikat  protein  dalam  sistem  pencernaan yang diperlukan  serangga  untuk  pertumbuhan  sehingga  proses penyerapan  protein  dalam  sistem  pencernaan  menjadi terganggu [24].
Berdasarkan dari hasil penelitian terlihat bahwa  tanaman pakcoy  mengalami  kerusakan  khususnya  pada  bagian  daun akibat  dimakan  larva  ulat  grayak  seperti  terlihat  pada Gambar  2.  Gambar  2  menunjukkan  perbedaan  kondisi tanaman  pakcoy  pada  tanaman  kontrol  dan  perlakuan pengolesan  bioinsektisida  cair  daun  waru  akibat  serangan larva Spodoptera  litura .  Tanaman  kontrol  (Gambar  2a) merupakan tanaman yang  tidak diberikan perlakuan apapun hanya  disiram  2  kali  sehari  pada  pagi  dan  sore  hari  tanpa diberikan  pestisida,  sehingga  memungkinkan  larva S.litura yang  diberikan pada  tanaman  masih  tetap  dapat mengkonsumsi daun pakcoy untuk menunjang pertumbuhannya.  Hal  ini  merupakan  penyebab  tingginya tingkat  kerusakan  daun  pada  tanaman  kontrol.  Efektivitas formulasi  bioinsektisida  cair  dari  daun  waru  ditinjau  dari mortalitas  larva  dan  waktu  kematian  larva  selama  24  jam menunjukkan  toksisitas  bersifat    akut.  Uji  toksisitas  akut merupakan  bagian  dari  uji  praklinik  yang  dirancang  untuk mengukur  efek  toksik  suatu  senyawa.  Toksisitas  akut mengacu  pada  efek  toksik  yang  terjadi  setelah  pemberian oral  dosis  tunggal  dalam  selang  waktu  24  jam  [25].  Ulat grayak yaitu memiliki tipe mulut menggigit dan mengunyah yang  dimana  memakan  daun  tanaman  hingga  daun berlubang-  lubang  kemudian  robek-robek  atau  terpotong- potong  [26].  Larva  ulat  grayak  merusak  daun  dengan meninggalkan sisa-sisa epidermis bagian atas/transparan dan tinggal  tulang-tulang  daun  saja  [5].  Sedangkan  pada tanaman pakcoy yang diberi biopestisida ekstrak daun waru tidak mengalami kerusakan pada daun (Gambar 2b). Hal ini diduga  karena  biopestisida  tersebut  masih  menempel  pada
tanaman  dan  tidak  disukai  oleh  larva  serta  menyebabkan larva  menolak  makan  ( antifeedant )  sehingga  menyebabkan larva akan mati dan jatuh ke bagian pangkal batang tanaman dan media tanam.

## IV. KESIMPULAN
Formulasi bioinsektisida cair ekstrak daun waru ( Hibiscus tiliaceus ) berpengaruh terhadap mortalitas larva Spodoptera litura . Konsentrasi ekstrak daun waru yang efektif terhadap mortalitas  larva Spodoptera  litura yaitu  pada  konsentrasi 45% (LC 50 = 45,42%).

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  N.  L.  Rustini,  K.  Ariati,  A.  A.I.P  Dewi,  and  I.  M.D.  Swantara,  “Uji toksisitas  ekstrak  daun  waru  (Hibiscus  Tiliaceus  L.)  terhadap  larva artemia salina leach serta identifikasi golongan senyawanya,” J. Kim. , vol. 9, no. 1, pp. 47–52, 2015.
[2]  S.  Oktavia,  Ifora,  and  A.  D.  Putri,  “Uji  toksisitas  akut  ekstrak  daun waru  (Hibiscus  tiliaceus  L.)  pada  mencit  putih  jantan,” J.  Farm. Higea , vol. 10, no. 1, 2018.
[3]  A. D. Alsyah, A. Darmawati, and Sumarsono, “Respon pertumbuhan dan  produksi  tanaman  pakchoy  (Brassica  chinensis  L.)  akibat pemberian berbagai pupuk limbah organik,” J. Agro Complex , vol. 2, no. 1, pp. 59–67, 2018.
[4]  F.  C.  Dumanauw,  H.  L.  Rampe,  and  E.  L.  Baideng,  “Intensitas serangan  akibat  hama  pemakan  daun  setelah  aplikasi  ekstrak  daun jeruk nipis (Citrus aurantifolia (Cristm.) Swingle) pada tanaman sawi (Brassica juncea L.),” J. Ilm. Sains , vol. 19, no. 2, 2019.
[5]  R.  Tarigan,  M.  U.  Tarigan,  and  S.  Oemry,  “Uji  efektivitas  larutan kulit  jeruk  manis  dan  larutan  daun  nimba  untuk  mengendalikan Spodoptera Litura F. (Lepidoptera: Noctuidae) pada tanaman sawi di lapangan,” J. Online Agroekoteknologi , vol. 1, no. 1, 2012.
[6]  K. M Fajrin and K. I Purwani, “Uji bioinsektisida cair berbahan aktif ekstrak  daun  ketapang  (Terminalia  catappa  L.)  terhadap  tingkat kerusakan  daun  dan  produktivitas  pada  tanaman  Brassica  rapa  L,” J. Sains dan Seni ITS , vol. 10, 2020.
[7]  U.  Sumpena  and  A.  Permana,  “Budidaya  Caisin  dan  Pakcoy Menggunakan Pot / Polybag,” Agro Inovasi , Bandung, 2018.
[8]  A.  Yulianingtyas  and  B.  Kusmartono,  “Optimasi  volume  pelarut  dan waktu  maserasi  pengambilan  flavonoid  daun  belimbing  wuluh (Averhoa Bilimbi L.),” J. Tek. Kim. , vol. 10, no. 2, 2016.
[9]  M.  Sayuti,  “Pengaruh  perbedaan  metode  ekstraksi,  bagian  dan  jenis pelarut  terhadap  randemen  dan  aktifitas  antioksidan  bambu  laut  (Isis hippuris),” Technol. Sci. Eng. J. , vol. 1, no. 3, pp. 166–174, 2017.
[10]  S.  W.  Hikmatunnisa,  “Isolasi  Nikotin  Dari  Batang  Tanaman Tembakau  dan  Penentuan  Pengaruh  Isolat  Kasar  Nikotin  Sebagai Insektisida Alami pada Ulat Grayak (Spodoptera litura),” Universitas Negeri Malang, 2017.
[11]  B.  W.  Syah  and  K.  I.  Purwan,  “Pengaruh  ekstrak  daun  belimbing wuluh  (Averrhoa  bilimbi)  terhadap  mortalitas  dan  perkembangan larva Spodoptera litura,” J. Sains dan Seni ITS , vol. 5, no. 2, pp. 23– 28, 2016.
[12]  W.  E.L.  Chenta  and  D.  Prijono,  “Kerentanan  Plutella  xylostella  dari Kejajar  Dieng,  Kabupaten  Wonosobo,  Jawa  Tengah  Terhadap  Lima
Gambar 2. Perbandingan kerusakan daun Pakcoy  (a) tanaman kontrol yang  rusak  dimakan  ulat  grayak,  (b)  tanaman  pakcoy  yang  telah dioles  biopestisida  ekstrak  daun  waru  konsentrasi  55%  terlihat  utuh dan segar.

## Jenis  Insektisida  Komersial  dan  Ekstrak  Buah  Piper  aduncum,”  in
Seminar Nasional dan Rapat Tahunan Dekan Bidang Ilmu Pertanian, BKS-PTN Wilayah Barat , 2014, pp. 673–679.
[13]  L. Lodjo, C. J. Lamangantjo, and Z. Zakaria, “Pengaruh filtrat batang gulma  siam  (C.odorata)  terhadap  antifeedant  ulat  grayak  Spodoptera litura (Lepidoptera: Noctuidae),” Jambura Edu Biosf. J. , vol. 2, no. 2, 2020.
[14]  S.  Utami,  “Aktivitas  insektisida  bintaro  (Cerbera  odollam  Gaertn) terhadap  hama  Eurema  spp.  pada  skala  laboratorium,” J.  Penelit. Hutan Tanam. , vol. 7, pp. 211–220, 2010.
[15]  B.  K.  Udiarto  and  W.  Setiawati,  “Suseptibilitas  dan  kuantifikasi resistensi  4  strain  Plutella  xylostelacla  L.  terhadap  beberapa insektisida,” J. Hortik. , vol. 17, no. 3, pp. 277–284, 2007.
[16]  R.  Safirah,  N.  Widodo,  and  M.  A.  K.  Budiyanto,  “Uji  efektifitas insektisida  nabati  buah  Crescentia  cujete  dan  bunga  Syzygium aromaticum  terhadap  mortalitas  Spodoptera  litura  secara  In  Vitro sebagai  sumber  belajar  biologi,” J.  Pendidik.  Biol.  Indones. ,  vol.  2, no. 3, pp. 265–276, 2016.
[17]  S.  Kumar,  D.  Kumar,  and  O.  Prakash,  “Evaluation  of  antioxidant potential,  phenolic  and  flavanoid  contents  of  Hibiscus  tiliaceus flowers,” Electron.  J.  Environ.  Agric.  food  Chem. ,  vol.  7,  no.  4,  pp. 2863–2871, 2008.
[18]  M.  Bata  and  S.  Rahayu,  “Study  of  Hibiscus  tiliaceus  leaf  extract carrier as additive in the diets for fattening of local cattle (in vitro),” Pakistan J. Nutr. , vol. 15, no. 11, pp. 969–974, 2016.
[19]  E. A. Yunita, N. H. Suprapti, and J. S. Hidayat, “Ekstrak daun teklan
(Eupatorium  riparium)  terhadap  mortalitas  dan  perkembangan  larva Aedes aegypti,” J. Bioma , vol. 11, no. 1, pp. 11–17, 2009.
[20]  Sastrodiharjo, Pengantar  Entomologi  Terapan .  Bandung:  ITB  Press,
1984.
[21]  Kartina,  Shulkipli,  Mardhiana,  and  S.  Egra,  “Potensi  ekstrak karamunting  (Melastoma  malabathricum  L.)  sebagai  insektisida nabati  untuk  mengendalikan  ulat  grayak  (Spodoptera  litura  F.),” J.
Agroteknologi dan Ilmu Pertan. , vol. 4, no. 1, pp. 28–41, 2019.
[22]  C. M.G. Yuantari, “Studi Ekonomi Lingkungan Penggunaan Pestisida dan  Dampaknya  pada  Kesehatan  Petani  di  Area  Pertanian Hortikultura  Desa  Sumber  Rejo  Kecamatan  Ngablak  Kabupaten Magelang  Jawa  Tengah,”  Magister  Kesehatan  Lingkungan Universitas Diponegoro, 2009.
[23]  A.  Y.  Agnetha,  “Efek  Ekstrak  Bawang  Putih  (Allium  sativum  L) sebagai Larvasida Nyamuk Aedes sp,” Universitas Brawijaya, 2008.
[24]  W.  Widodo, Tanaman  Beracun  pada  Kehidupan  Ternak .  Malang: UMM Press, 2005.
[25]  M. A. Mustapa, T. S. Tuloli, and A. M. Mooduto, “Uji toksisitas akut yang  diukur  dengan  penentuan  Ld50  ekstrak  etanol  bunga  cengkeh (Syzygium  aromaticum  L.)  terhadap  mencit  (Mus  musculus) menggunakan metode Thompson-Weil,” J. Sains dan Teknol. , vol. 1, no. 1, 2018.
[26]  A. Rusdy, “Efektivitas ekstrak nimba dalam pengendalian ulat grayak (Spodoptera  litura  F.)  pada  tanaman  selada,” J.  Floratek ,  vol.  4,  pp. 41–54,
2009.