## SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK ETANOL BIJI KOPI ARABIKA (Coffea arabica) YANG TUMBUH DI DAERAH GAYO DENGAN METODE DPPH
Nasirah Maulidia Ajhar*, Debi Meilani
Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Nusantara Alwasliyah, Medan
*Penulis korespondensi: lidiaajhar@gmail.com

## ABSTRAK
Buah kopi termasuk buah  musiman yang hanya muncul pada bulan bulan tertentu. Di daerah Gayo kopi merupakan minuman yang hampir setiap hari di konsumsi. Kopi diduga mempunyai  aktivitas  antioksidan  sehingga  mampu  merendam  aktivitas  radikal  bebas. Tujuan  dari  penelitian  ini  melakukan  skrining  fitokimia  dan      mengetahui  aktivitas antioksidan  dari  ekstrak  etanol  biji  kopi  arabika  dengan  metoda  2,2-Diphenyl-2- picrylhydrazyl  (DPPH).  Ekstrak  biji  kopi  arabika  di  buat  dengan  cara  perkolasi  dengan menggunakan pelarut etanol dan ekstrak yang diperoleh di pekatkan menggunakan rotary evaporator,  selanjutnya  ekstrak  etanol  di  uji  kekuatan  aktifitas  antioksidannya  dengan menggunakan  metoda  2,2-Diphenyl-2-picrylhydrazyl  (DPPH)  pada  panjang  gelombang maksimum 516 nm, sebagai  kontrol positif digunakan vitamin C. Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji kopi arabika mengandung golongan senyawa tanin, alkaloid, saponin, flavonoid, dan steroid. Hasil penelitian menunjukkan aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji kopi arabika termasuk kategori sangat kuat dengan IC 50 12,427 ppm dan vitamin C dengan IC 50 0,273 ppm.
Kata kunci : Skrining Fitokimia, Antioksidan, Ekstrak Biji Kopi Arabika, DPPH.

## PHYTOCHEMICALS SCREENING AND ANTIOXIDANT ACTIVITY FROM ARABICA COFFEE (Coffea arabica) ETHANOL EXTRACT WHICH GROW IN GAYO AREA WITH DPPH METHOD

## ABSTRACT
Coffee seasonal fruit that only appears in certain months. In the Gayo area, coffee is a beverage which was is consumed almost every day. Coffee allergrdly has antioxidant activity  that  can  can  immerse  free  radical  activity.  This  study  aimed  to  screen phytochemicals and determine the antioxidant activity of ethanol extracts of Arabica coffee beans using the DPPH method. Arabica coffee beans extract was made by percolation using ethanol solvent and the extract obtained is concentrated using a rotary evaporator, then it was is tested for its antioxidant activity strength by using the 2,2-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) method at a maximum wavelength of 516 nm, as a positive control was used vitamin C.  Phytochemical  screening  results  indicated  that  the  ethanol  extract  of  Arabica  coffee beans contains a group of tannins, alkaloids, saponins, flavonoids, and steroids. The results showed  the  antioxidant  activity  of  Arabica  coffee  bean  ethanol  was  very  strong  with category with IC 50 12.427 ppm and vitamin C with IC50 0.273 ppm. Keywords: Phytochemical Screening, Antioxidants, Arabica Coffee Bean Extract, DPPH .

## PENDAHULUAN
Antioksidan  adalah  senyawa  yang  mempunyai  struktur  molekul  yang  dapat memberikan elektronnya kepada molekul radikal bebas dan dapat memutus reaksi berantai dari  radikal  bebas  (Kumalaningsih,  2006).  Tubuh  memiliki  mekanisme  pertahanan antioksidan dalam bentuk enzim antioksidan dan zat antioksidan untuk menetralisir radikal bebas, tetapi karena perkembangan industri yang pesat, manusia berkontak dengan berbagai sumber  radikal  bebas  yang  berasal  dari  lingkungan  dan  dari  kegiatan  fisik  yang  tinggi sehingga  sistem  pertahanan  antioksidan  dalam  tubuh  tidak  memadai  (Silalahi,  2006). Antioksidan merupakan sustansi nutrisi maupun non-nutrisi yang terkandung dalam bahan pangan, yang mampu mencegah atau memperlambat terjadinya proses oksidasi (Tamat et al ., 2007; Winarsi, 2007). Antioksidan sangat bermanfaat bagi kesehatan dan kosmetik serta berperan penting dalam mempertahankan mutu produk pangan (Tamat et al ., 2007).
Kopi  merupakan  salah  satu  hasil  perkebunan  yang  memiliki  nilai  ekonomis  yang cukup  tinggi  di  antar  tanaman  perkebunan  lainnya  dan  berpera  penting  sebagai  sember devisa  Negara.  Salah  satu  produksi  kopi yang  cukup  terkenal  di  Provinsi  Aceh  berada  di Kabupaten  Aceh  Tengah,  kopi  asal  Aceh  Tengah  terkenal  dengan  Kopi  Gayo.  Kopi merupakan  tanaman  yang  banyak  ditemukan  pada  beberapa  negara  dibelahan  dunia  dan telah  dikonsumsi  sebagai  minuman.  Negara  maju  dan  berkembang  tidak ingin  ketingalan untuk  mengkonsumsi  kopi.  Kopi  paling  sering  beredar  dipasaran  berasal  dari  biji  kopi robusta (Coffea canephora) dan biji kopi arabika (Coffea arabica) (Hanindyo, 2014)
Berdasarkan uraian di atas, maka penulis tertarik untuk meneliti antioksidan ekstrak etanol  biji  kopi  arabika  yang  tumbuh  di  daerah  gayo  dengan  metode 2,2-Diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH), karna di daerah gayo hampir semua masyarakatnya setiap harinya menggonsumsi kopi.

## BAHAN DAN METODE

## Desain Penelitian
Metode penelitian yang dilakukan adalah penelitian deskriptif atau non eksperimental, karena tidak ada subjek uji yang dimanipulasi atau dikenai kontrol. Penelitian ini dilakukan meliputi pengumpulan bahan, pembuatan ekstrak etanol, skrining fitokimia dan uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH dengan menggunakan alat spektrofotometer visibel.

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  terdiri  dari:  alat-alat  gelas,  cawan  penguap,  penangas  air ( waterbath ),  neraca  kasar,  neraca  listrik,  seperangkat  alat rotary  evaporator (Eyela)  dan spektofotometer UV-Vis (Shimadzu UV-1700).

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah biji kopi arabika segar berwarna merah. Bahan-bahan kimia lainnya adalah: 2,2- dipheny l-2 picrylhydrazyl (DPPH) , vitamin C, etanol,  metanol, isopropanol, eter, asam nitrat, α-naftol, asam sulfat, benzen, asam asetat anhidrat,natrium hidroksida, asam klorida pekat, iodium, raksa (II) klorida, timbal (II) asetat, besi (III) klorida, kloralhidrat, bismut (III) nitrat, kalium iodida, amil alkohol, arang aktif dan serbuk Mg.

## Prosedur Penelitian Identifikasi Sampel
Identifikasi  sampel  dilakukan  di  HERBARIUM  MEDANESE  (MEDA)  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara.

## Pengolahan Sampel
Bahan baku biji kopi arabika yang masih segar dikumpulkan, di bersih dari kotoran, di kupas biji kopi dari kulit kopi dan ditimbang beratnya 1 kg. Kemudian biji kopi arabika di belender hingga halus, dan kemudian di timbang 500 gram dan di masukkan ke wadah.

## Pembuatan Ekstrak Etanol Biji Kopi Arabika
Sebanyak  500  g  biji  kopi  arabika  dimasukan  ke  dalam  perkolator,  di  tambahkan etanol 99,9% secukupnya hingga terendam dan terdapat cairan penyari di atasnya, percolator di tutup dengan aluminium foil dan di biarkan selama 24 jam. Kran percolator di buka dan di biarkan cairan ekstrak menetes dengan kecepatan 20 tetes permenit dan di tambah etanol 99,9% berulang ulang secukupnya dan di atur kecepatan penetesan cairan penyaring sama dengan kecepatan tetesan perkolat, sehingga selalu terdapat  selapis cairan penyaringan di atas simpisia. Perkolasi di hentikan jika hasil perkolat tidak berwarna lagi (larutan bening). Perkolat  kemudian  di  uapkan  dengan  tekanan  rendah  pada  suhu  tidak  lebih  dari  50 o C menggunakan alat rotary evaporator sampai di peroleh ekstrak kental dari biji kopi arabika (Depkes, 1995).

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  meliputi  pemeriksaan  golongan  senyawa  alkaloida,  flavonoid, saponin, tanin, glikosida, glikosida antrakuinon dan steroida.

## Pengukuran Absorbansi DPPH Setelah Penambahan Sampel
Larutan  sampel  dipipet  0,5  ml  ;  1  ml  ;  1,5  ml  ;  2ml,  kemudian  masing  masing dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml (untuk mendapatkan konsentarsi larutan uji 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, dan 80 ppm ). kedalam masing masing labu tentukur ditambahkan 5 ml  larutan  DPPH  0,5  mM  (konsentrasi  40  ppm)  lalu  volumenya  dicukupkan  dengan methanol  sampai  garis  tanda  kemudian  di  diamkan  di  tempat  gelap  selama  9  menit. Pengukuran dilakukan sebanyak 3 kali.

## Pengukuran Absorbansi DPPH Setelah Penambahan Vitamin C
Ditimbang sebanyak 50 mg vitamin C Kristal kemudian dilarutkan dengan metanol dalam  labu  tentukur  50  ml.  Volumenya  dicukupkan  dengan  metanol  sampai  garis  tanda (konsetrasi 1000 ppm). Kemudian dipipet 0,5 ml; dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml volumenya  dicukupkan  dengan  methanol  sampai  garis  tanda  (konsentrasi  10  ppm). Kemudian dipipet 0,75 ml ; 1 ml ; 1,25 dan 1,5 ml dimasukkan ke dalam labu terukur 25 ml lalu ditambahkan 10 ml larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 40 ppm) Konsentrasi vitamin C 0,3  ppm,  0,4  ppm,  0,5  ppm  dan  0,6  ppm.  Kemudian  diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombnag  maksimum,  pengukuran  dilakukan  sebanyak  3  kali  pengulangan  setelah didiamkan setelah 9 menit.

## Penentuan % Peredaman
Kemampuan antioksidan diukur sebagai penurunan serapan larutan DPPH (peredaman warna  ungu  DPPH)  akibat  adanya  penambahan  larutan  uji.  Nilai  serapan  larutan  DPPH sebelum (kontrol) dan sesudah penambahan larutan uji (sampel) tersebut dihitung sebagai persen peredaman.
% 100 ) ( % X A A A peredaman kontrol sampel kontrol − =
Keterangan :  A kontrol = absorbansi tidak mengandung sampel
A sampel =
absorbansi mengandung sampel
Penentuan Nilai IC 50
Nilai IC 50 merupakan bilangan yang menunjukan konsentrasi sampel uji (µg/ml) yang memberikan  peredaman  DPPH  sebesar  50%  (mampu  menghambat/meredam  proses
oksidasi sebesar 50%). Nilai 0% berarti tidak mempunyai aktivitas antioksidan, sedangkan nilai  100%  berarti  peredaman  total  dan  pengujian  perlu  dilanjukan  dengan  pengenceran larutan uji untuk melihat batas konsentrasi aktivitasnya. Hasil perhitungan dimasukkan  ke dalam persamaan regresi dengan konsentrasi ekstrak (µg/ml) sebagai absis (sumbu X) dan nilai % peredaman (antioksidan) sebagai ordinatnya (sumbu Y).

## Tabel 1. Kategori kekuatan aktivitas antioksidan
Kategori Konsentrasi Antioksidan (ppm) Sangat kuat <50 Kuat 50-100 Sedang 101-150 Lemah 151-200 (Sumber : Mardawati et al ., 2008).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Nilai IC 50 diperoleh berdasarkan persamaan regresi linier yang didapatkan dengan cara memplot  konsentrasi  larutan  uji  dan  %  peredaman  DPPH  sebagai  parameter  aktivitas antioksidan,  dimana  konsentrasi  larutan  uji  (ppm)  sebagai  absis  dan  nilai  %  peredaman sebagai kordinat. Hasil persamaan regresi linier dari ekstrak etanol biji kopi arabika dilihat pada table 2 dibawah ini.
Tabel 2. Hasil persamaan regresi linier ekstrak etanol biji kopi arabika
Larutan Uji Persamaan regresi Ekstrak etanol biji kopi arabika Y = 1,04095 X+ 37,064 r = 0,7973
Hasil  analisis  nilai  IC 50 yang  diperoleh  berdasarkan  perhitungan  persamaan  regresi dapat dilihat pada tabel  3 dan 4 dibawah ini.
Tabel 3. Nilai IC 50 ekstrak etanol biji kopi arabika
Sampel IC 50 (ppm) Ekstrak etanol biji kopi arabika
12,427ppm
Tabel 4. Nilai IC 50 vitamin C
Sampel
IC 50 (ppm) Vitamin C 0,273 ppm
Pada tabel 3 diatas menunjukan bahwa ekstrak etanol biji kopi arabika memiliki aktivitas antioksidan kategori kuat.

## Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Biji Kopi Arabika
Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol buah biji kopi arabika menunjukan golongan senyawa-senyawa kimia seperti yang terlihat pada tabel 5 dibawah ini:
Tabel 5. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol buah biji kopi arabika
Senyawa Metabolit Sekunder Metode Hasil Alkaloid Uji Mayer Uji Bouchardat Uji Dragendrof + + + Glikosida Uji Salkwoski - Flavonid Uji Sianidin + Stroid Uji Lieberman - Buchardat + Saponin Uji busa + Tanin Uji warna +
Keterangan :
(+) : mengandung golongan senyawa (-)  : tidak mengandung golongan senyawa
Hasil yang diperoleh pada table 5 diatas menunjukan bahwa ekstrak etanol biji kopi arabika  mengandung  golongan  senyawa  flavonoid,  saponin,  tanin,  alkaloid,  dan  steroid. Hasil pemeriksaan flavonoid terbentuk warna merah kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol, pada alkaloid terjadi endapan atau kekeruhan pada dua dari tiga tabung reaksi, pada tanin  diperoleh  warna  hijau  kehitaman  yang  menunjukan  adanya  tanin  dan  pada steroid/triterpenoida terbentuk warna biru hijau, hasil pemeriksaan saponin terbentuk busa setinggi 1-3 cm, dan pada steroid/triterpenoida terbentuk warna biru hijau (Depkes, 1995).
Biji  kopi  arabika  memiliki  kandungan  antioksidan  karena  kandungan  polifenolnya. Polifenol  merupakan  mikronetrien  yang  terdapat  pada  beberapa  asupan  makanan  dan flavonoid merupakan salah satu metabolit sekunder dari senyawa polifenol yang cenderung larut  dalam  pelarut  polar.  Polifenol  bersifat  antioksidan  sehingga  dapat  meredam  radikal bebas (Hanindyo, 2014).

## KESIMPULAN
Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  biji  kopi  arabika  mengandung  golongan  senyawa flavonoid,  tanin,  saponin,  alkaloid,  dan  steroida  menunjukkan  bahwa  senyawa  tersebut mempunyai aktivitas antioksidan. Pemeriksaan aktivitas antioksidan dengan menggunakan spektrofotometer visible pada panjang gelombang 517 nm dengan metode DPPH di peroleh nilai IC 50 ekstrak etanol biji kopi arabika 12,427 ppm dan termasuk kedadam katagori sangat kuat, sedangkat vitamin C IC 50 0,273 ppm termasuk ke dalam kategori sangat kuat.

## DAFTAR PUSTAKA
Depkes RI. Farmakope Indonesia. Edisi Ketiga . Jakarta: Departemen Kesehatan RI. 1995.
Hanindyo, R. Uji Aktifitas Antioksidan Pada Ekstrak Biji Kopi Robusta (Coffea canephora) Dengan Metoda DPPH . Skripsi . UIN Syarif Hidayatullah. Jakarta. 2014.
Kumalaningsih,  S. Antioksidan  Alami .  Cetakan  Pertama.  Surabaya:  Trubus  Agrisarana. 2006.
Mardawati,  E.,  Achyar,  C.S,  dan  Marta,  H.  Kajian  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Kulit Manggis  ( Garcinia  mangostana L.)  Dalam  Rangka  Pemanfaatan  Limbah  Kulit Manggis  di  Kecamatan  Puspahiang  Kabupaten  Tasikmalaya. Laporan  Akhir Peneltian . Bandung: Fakultas Teknologi Industri Pertanian UNPAD. 2008. Halaman 2-3.
Silalahi, J. Makanan Fungsional . Yogyakarta: Penerbit Kanisius. 2006.
Tamat, S.R., Wikanta, T dan Maulina, L.S. Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Senyawa Bioaktif  dari  Ekstrak  Rumput  Laut  Hijau  Ulva  Reticulata  Forsskal. Jurnal  Ilmu Kefarmasian Indonesia , 2007; 5(1).
Winarsi, H. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas . Yogyakarta: Penerbit Kanisius. 2007.