## Kajian Manfaat Senyawa Aktif dalam Ekstrak Kulit Buah  Coklat (Theobroma Cacao )

## Studi of Benefits of Active Compounds in Cacao Pod Rind Extract (Theobroma Cacao)
Sukatik 1) , Yuli Yetri 1) , Rahmi Hidayati 1) , Roni Tri Putra 1) & Ratih Paramitha 2)
1 ) Politeknik Negeri Padang, Kampus Limau Manis, Padang, 2) STIKes Nurliana Medan Email: sukatikwiryosentono@gmail.com

## ABSTRACT
Identification of active compounds in cacao pod rind has been done. Cacao pod rind contained active compound alkaloid,  theobromine  (3,7-dimethylxanthine).  Cacao  pod  rind  extract  contained  some  other  active  compounds mixed  flavonoid  or  condensed  tannin  such  as  anthocyanin,  anthocyanidin,  catechin,  epicatechin, epigallocatechin, and leucoanthocyanidin.
Cacao pod rind was extracted by maceration using methanol 70% and fractionated with hexane and ethyl acetate to  obtain  polar  extracts.  This  study  used  an  experimental  method  that  was  analyzed  descriptively  using  Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) and Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS). Phytochemical  screening  test  showed  cocoa  pod  rind  extracts  contained  alkaloids,  flavonoids,  tannins, terpenoids, and saponins. GC-MS analysis showed that cacao pod rind extracts contained 24 compounds. Polar extracts  analysis  with  LC-MS  obtained  10  compounds  contained  hydroxy  groups,  which  can  be  used  as corrosion  inhibitors  on  metal.  The  result  of  this  study  showed  that  cocoa  pod  rind  has  potential  as  corrosion inhibitor. It also has potential as an anti-bacterial and antioxidant.
Key words : C ocoa peel extract, Phytochemicals, Polar extrac, C orrosion inhibitors, Anti-bacterial

## PENDAHULUAN
Indonesia  adalah  negara  penghasil kakao  nomor  3  terbesar  di  dunia  setelah Ghana  dan  Pantai  Gading  (pidato  Mentan 2012).  Tanaman  kakao  mempunyai  tinggi sekitar  5-10  m,  batang  berkayu  (lignosus), bulat, percabangan monopodial, dan berwarna  coklat  kotor,  dengan  nama latin Theobroma  cacao, dan  termasuk dalam  genus Theobroma. Bagian  terbesar dari  buah  kakao      terdiri  dari  kulit  luar (mesokarp)  yang  keras  yang  mencapai 75%, plasenta berwarna putih dan biji yang berwarna  coklat.  Peningkatan  produksi buah  kakao,  akan  mengakibatkan  semakin meningkat  pula  kulit  buah  kakao  yang dihasilkan.  Kulit  buah  kakao  adalah limbah industri perkebunan yang merupakan sumber energi dan protein yang cukup  baik  dengan    kandungan  protein  9- 19%  dan  serat  kasar  13-26%,    energi metabolis  2400  kkal/kg,  lemak  4,6%,
kalsium 0,61% dan fosfor 0,06%
(Mulyatni A. S, et al , 2012).
Tumbuhan kakao mengandung senyawa  tanin  (Figuera,  2008).  Tanin merupakan senyawa organik komplek yang terdiri dari polifenoldan mempunyai sejumlah  gugus  hidroksi  dan  adakalanya terdapat dalam bentuk glikosida. Selain itu kulit  buah  kakao  diketahui  mengandung senyawa aktif alkaloid yaitu theobromin(3,7–
dimethylxantine )
(Helmestein,  2010).  Tannin  yang  terdapat dalam  kulit  buah  kakao  mengandung gugus  aktif  yang  dapat  berfungsi  sebagai inhibitor korosi (Osman et al , 2004) (Yetri Y et  al ,  2015),  antimikroba(Agni  Rimba Mawan,  2018),  dan  antioksidan  (Shanab, 2007).  Senyawaaktif  tersebut  diketahui memiliki  sifat  antibakteri  (Matsumoto et.al, 2004).
Ekstrak kulit buah kakao
mengandung beberapa komponen senyawa
kimia  antara lain  campuran  flavonoid  atau tanin  terkondensasi.  Keberadaan  senyawa tersebut  di  dalam  kulit  buah  kakao  diduga menjadi    salah    satu  penyebab  tidak ditemukannya  penyakit  tanaman  kakao yang  disebabkan  oleh  bakteri.  Penelitian mengenai potensi ekstrak kulit buah kakao telah banyak dilakukan, salah satunya kulit buah  kakao  jenis  lindak  (Forastero) digunakan  sebagai  bahan  anti  bahteri (Mulyatni  A.S, etal ,  2012),  anti  oksidan dan obat (Andujar et al , 2012).
Dalam  tulisan  ini  disampaikan  cara  yang efektif  mengekstrak  komponen  kimia  dari kulit  buah  kakao  dan  menganalisanya secara lebih lanjut komponen fitokimianya secara  kualitatif  maupun  kuantitatif  serta mengkaji  potensi    manfaat  dari  senyawa kimianya.

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Peralatan yang dipakai dalam penelitian ini adalah  seperangkat  peralatan  gelas,  neraca analitik,  jangka  sorong  digital,  gerinda, oven, Heidolph WB 2000 rotary evaporator , hot  plate ,GC-MS  QP2010S SHIMADZU,  LC-MS-QMicro  QAA  842, Perkin  Elmer  System  2000  Fourier Transform Infra Red Spectroscopy
(FTIR).Bahan  yang  digunakan  yaitu:  kulit buah  kakao  segar,    metanol  teknis, aquades,  aquabides,  HCl  p.a,  aseton  p.a, FeCl 3, dan  H 2 SO 4, kloroform,  amoniak  etil asetat,  Dragendorf,  Meyer  dan  Wagner, Liebermen Burchard, asetat anhidrat dan n- heksana.
Pengujian fitokimia kulit buah kakao.
Analisis fitokimia dilakukan berdasarkan  Harbone  (1987).  Identifikasi yang  dilakukan  adalah  uji  alkaloid (Raman,  2006),  uji  flavonoid(Shanmugan et  al.,  2010),  uji  saponin  (Depkes  RI, 1989),uji  triterpenoid  dan  uji  steroid dengan  pereaksi  Liebermen  Burchard,  dan uji tannin/ fenolik(Kurin & Sankar, 2007).
Pembuatan ekstrak kulit buah kakao
Proses  pembuatan  ekstrak  kulit  buah kakao, analisa FTIRdengan a Nicolet iS10- FTIR  spectrophotometer  prosenya  sama dengan  yang  sudah  dilakukan  pada penelitian terdahulu (Yetri Y., et al , 2015).
Gas  Chromatography-Mass  Spectrometry dan  Liquid  Chromatography  -  Mass Spectrometry
Untuk  mengindentifikasi  senyawa apa  dan  komposisi  dari  ekstrak  kulit  buah kakao  dipelajari  lebih  dahulu  dengan menggunakan  gas  chromatography  mass spectrometry (GC-MS.)Pengujian dilakukan dengan GCMS-QP2010S SHIMADZU dengan parameter kolom:AGILENTJ%WDB-1,Panjang :30 meter,ID:  0,25  mm,gaspembawa:Helium, Pengionan:  EI70Ev,  model  injeksi:  Split, temperatur  injeksi:  310 o C,  temperature kolom: 70 o C dan maksimum 324 o C selama 50  menit,  aliran  kolom:  0,5  ml/min kecepatan linear:  25.9cm/sec.
Untuk  memisahkanbeberapa  senyawa  atau campuran senyawa berdasarkan kepolarannya  digunakan  metode Liquid Chromatograpy–Mass Spectroscopy . Analisa terhadap ekstrak tersebut menggunakan LC-Qmicro  QAA  842 dengan  parameter  initial  sebagai  berikut: kolom:repair  phase,  kelas  kolom:  standar polar,  pelarut:  methanol  air,  suhu  kolom: 40 o C,  suhu  sampel:  20 o C,  kecepatan: 0,4ml/min dan tekanan: 300 bar.

## Perendaman Besi dalam Larutan Media Korosi Tanpa Inhibitor 2.3.4.1
Variasi  pH  Sampel  besi  yang  telah disiapkan  masing-masing  direndam  dalam media  korosif  yaitu  pada  variasi  pH  4,  6, dan  8  selama  14  hari.  Kemudian  besi diambil  lalu  dibilas  dengan  HCl  1  N  dan dimasukkan  ke  dalam  oven  dengan  suhu 50-60oC  selama  10  menit.  Timbang  besi sebagai berat akhir.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengujian fitokimia
Hasil  identifikasi  senyawa  kimia  yang terkandung dalam ekstrak kulit buah kakao
dilakukan  dengan  cara  uji  fitokimia.  Hasil pengujian  fitokimia  menunjukan  bahwa ekstrak  kulit  buah  kakao  mengandung senyawa metabolit sekunder seperti diperlihatkan pada Tabel 1.
Tabel 1: Fitokimia ekstrak kulit buah kakao Senyawa Pereaksi Warna Keterangan Flavonoid H 2 SO 4 Orange ++++
Fenolik FeCl 3 Hijau kehitaman ++++ Terpenoid Lieberman
Burchard Merah bata +
Saponin Air busa +++ Steroid Lieberman Burchrd Hijau pudar + Alkaloid Meyer
Putih  sedikit kabut ++++ Analisa Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) Analisis GC-MS dilakukan untuk mengetahui  jenis  senyapa  kimia  yang terdapat  dalam  ekstrak  kulit  buah  kakao.
Hasil  spektrum  GC-MS  ekstrak  kulit  buah kakao sebelum dilakukan fraksinasi menunjukan  bahwa  ekstrak  kulit  buah kakao  mengandung  42  senyawa  dominan (puncak spektrum) yang dapat dilihat pada Gambar 1 dan Tabel 2.
Gambar 1. Grafik hasil analisa ekstrak kulit buah kakao dengan GC-MS Dari  ke  42  senyawa  tersebut,  bila dikelompokkan terdiri atas: 3 dari gologan benzene,  1  amida,  5  asam  karboksilat,  3 monoterpen,  1  aromatik,  5  alkana,  3 alkohol  2  keton  dan  1  steroaid  serta sisanya  tidak  dapat  ditentuka  karena  tidak ditemukan  literaturnya.  Puncak  senyawa
phenolik  tidak  muncul,  pada  hal  pada pengujian  awal  menunjukkan  adanya senyawa phenolik yang ditandai munculnya  warna  biru  pekat  pada  larutan setelah  ditetesi  dengan  FeCl 3 ,  tetapi  hasil analisis  dengan  GC-MS  justru  tidak menunjukkan  adanya  puncak  fenolik.  Hal ini mungkin disebabkan karena pengoperasian GC-MS menggunakan temperatur  tinggi,    sehingga  senyawa- senyawa  phenolik  sebelum  temperatur operasi GC-MS tercapai, senyawa- senyawa ini sudah menguap.
Gambar 2. Salah satu rumus bangun senyawa Phenol
Analisa Liquid Chromatography-Mass Spectroscopy (LC-MS)
Hasil  iidentifikasi  ekstrak  polar kulit  buah  kakao  terdapat  senyawa  polar, maka  dilakukan  analisa  lanjutan  dengan menggunakan  LC-MS.  Identifikasi  dengan LC-MS  menghasilkan  10  puncak  dominan seperti pada  Gambar 3 berikut :
Gambar 3 :  Kromatogram hasil analisa ekstrak kulit buah kakao dengan LC-MS
30 92 40 60 80 4000 400 1000 1500 2000 2500 3000 3500 %T Wavenumber [cm-1]
Kromatogram  diatas  menunjukkan adanya
beberapa puncak yang memperlihatkan senyawa yang teridentifikasi dengan LC-MS mengandung senyawa dengan berat molekul  tinggi  berdasarkan  ion  fragmen dan  ion  molekul  yang  diperoleh  dari  data pengujian  (Anujar et  al ,  2012,  Velasco et al ,  2014).  Senyawa-senyawa  tersebut
mempunyai  gugus  heteroatom  yang  dapat berfungsi  sebagai  donor  elektron  (Sastri,
2011). Adapun senyawa-senyawa heteroatom  yang  terdapat  dalam  ekstraks kulit  buah  kakao  seperti  pada  tabel  3 berikut :
Tabel 2 : Senyawa hasil analisa ekstrak polar
kulit buah kakao dengan LC-MS Nama senyawa Formula Waktu retensi (min) Quercetin C 15 H 10 O 7 2.64
Catechin C 15 H 14 O 6 8.50 Gallic acid C 7 H 6 O 5 9.72 Epicatechin
C 15 H 14 O 7 12.18
Catechin C 15 H 14 O 6 16.19 Caffeic acid derivate
C 8 H 10 N 4 O 18.48
Salvianolic acid C 9 H 10 O 3 19.17
Kampferol 3-O-
Rutinoside C 15 H 10 O 6 19.85
Prosianidin B 2
C 31 H 28 O 12 20.8 Kampferol 3-O- (Sinapoyl)- Sophoside C 53 H 56 O 28 21.72

## Analisa Gugus Fungsi Dengan FTIR
Pengujian  gugus  fungsi  dengan  FTIR bertujuan  untuk  mendukung  data  yang diperoleh dari analisa GC-MS dan LC-MS.
Gambar 4: Spektra FTIR Ekstrak kulit buah kakao
Spektrum FTIR gambar 4  berfungsi untuk memperkirakan gugus fungsi yang berkaitan  dengan  mekanisme  adsorpsi
molekul  di  permukaan  baja.    Selain  dari pada  itu  juga  berfungsi  untuk  mendukung data analisa GC-MS dan LC-MS (Singh et al ,  2010,  Singh et  al ,  2012).  Dari  spektra diatas  teridentifikasi  beberapa    puncak yang  ada  dan  merupakan  puncak  gugus fungsi  dan  ditampilkan  secara  lengkap pada Tabel 4 berikut
Tabel 4 : Analisa Spektra FT-IR dari ekstrak
kulit buah kakao, ν (cm -1 ) Gugus Fungsi 1400 C-C=C (aromatik) dan C-C (aromatik 1051 C-O (str) 1603 C=O (str) dan C-H (str) 3422 O-H (fenolik)
Identifikasi  gugus  fungsi  ekstrak kulit  buah  kakao  pada  spektra  hasil  FT-IR adalah  fenolik,  cincin  aromatik  dan  eter (Kim  and  Keeney,  1983).  Bilangan gelombang  1051cm -1 menunjukan  gugus fungsi  C-O stretcing  vibration .  Puncak 1400cm -1 menunjukan  adanya  ikatan  C=C aromatik.  Munculnya  puncak  1603cm -1 menyatakan  adanya  gugus  C=O  karbonil dan puncak 3422cm -1 menunjukkan adanya  gugus  hidroksil  (C-OH)  pada senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak buah  kakao.  Hasil  FTIR  menunjukkan puncak-puncak yang muncul pada spektrum  mewakili  sebagian  gugus  fungsi dari  senyawa  fenolik  dan  gugus  fungsi lainnya  hasil  pengujian  GC-MS  seperti antosianin, antosianidin, katekin, epikatekin, epigallokatekin, dan leukoantosianidin  (Okuda  and  Ito,  2011, Hii1 C. L et al , 2009) (Chung et al , 2003 ) (T. Alemanno et al , 2003).
Analisis  potensi    manfaat  dari  senyawa kimia .
Senyawa fenolik memiliki aktivitas biologik yang beraneka ragam, dan banyak digunakan dalam reaksi enzimatik oksidasi kopling  sebagai  substrat donor  H.  Reaksi oksidasi  kopling,  selain  membutuhkan suatu  oksidator  juga  memerlukan  adanya suatu  senyawa  yang  dapat  mendonorkan
H.  Senyawa fenolik  merupakan  contoh ideal dari senyawa yang mudah mendonorkan atom H.
Tannin  yang  terdapat  dalam  kulit buah  kakao  mengandung  gugus  aktif  yang dapat  berfungsi  sebagai  inhibitor  korosi (Osman et al , 2004) (Yetri Y et al , 2015), antimikroba(Agni  Rimba  Mawan,  2018), dan antioksidan (Shanab, 2007).
Senyawaaktif  tersebut  diketahui  memiliki sifat antibakteri (Matsumoto et.al, 2004).
Nilai  LC50.  Pengujian  toksisitas terhadap ekstrak kulit biji kakao dilakukan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality  Test  (BSLT)  dengan  larva Artemia salina sebagai hewan uji. Berdasarkan  hasil  pengujian,  semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak  kulit  biji  kakao, semakin  besar  pula  persentase  kematian larva  udang.  Cara  kerja  senyawa-senyawa tersebut  adalah  dengan  bertindak  sebagai stomach poisoning atau racun perut. Suatu zat  dikatakan  aktif  atau  toksik  bila  nilai LC50 < 1000 ppm untuk ekstrak dan < 30 ppm  untuk  suatu  senyawa  (Meyer  et  al., 1982  dikutip  Juniarti  et  al.,  2009).  Hasil perhitungan  rata-rata  LC50  menunjukkan bahwa  nilai  rata-rata  LC50  ekstrak  kulit biji  kakao  adalah  39.595,27  ppm,  artinya ekstrak  tersebut  tidak  bersifat  toksik  bagi larva  Artemia  salina.  Jika  hasil  uji  BSLT menunjukkan  bahwa  ekstrak  tumbuhan bersifat  toksik  (LC50  <  1000  ppm)  maka dapat  dikembangkan  untuk  obat  alternatif antikanker.  Menurut  Fowler  (2009),  kulit biji  kakao  dapat  dimanfaatkan  sebagai substitusi  pada  serbuk  kakao  untuk menambah  kandungan  seratnya.  Ekstrak kulit  biji  kakao  dapat  dimanfaatkan sebagai  antimikroba  karena  kandungan komponen fitokimianya. Kandungan komponen  fenoliknya  seperti  tanin  dan flavonoid  berpotensi  sebagai  sumber antioksidan alami (Sartini dkk, 2009).

## Penentuan Laju Korosi
Pengukuran laju korosi pada umumnya dilakukan dengan menggunakan metode  kehilangan  berat  yang  terjadi setelah beberapa waktu pencelupan. Dengan  mengukur    kembali  berat  benda
uji, kekurangan berat berat awal merupakan  nilai  kehilangan  berat  (Mufid, 2015).  Gambar    adalah  grafik  kehilangan berat  besi  seiring  bertambahnya  salinitas yang  menunjukkan  bertambahnya  persen (%) kehilangan berat
Gambar 5 . Grafik Hubungan salinitas terhadap kehilangan berat

## Pengaruh  Konsentrasi  Inhibitor  dan Salinitas terhadap laju Korosi Besi pada Media korosif air laut.
Gambar  berikut  menunjukkan  laju  korosi yang mengalami penurunan seiring dengan penambahan  konsentrasi  inhibitor  ekstrak kulit buah kakao.
Gambar 6. Grafik hubungan konsentrasi inhibitor ekstrak kulit buah kakao terhadap laju korosi pada variasi salinitas
Laju  korosi  tanpa  penambahan inhibitor  menunjukkan  nilai  terbesar,  dan merupakan  pembanding  yang  digunakan untuk melihat pengaruh variasi penambahan  konsentrasi  inhibitor  eksrak kulit  buah  kakao.  Pada  penambahan inhibitor 600 ppm dan 800 ppm menyebabkan penurunan laju korosi dibandingkan  tanpa  penambahan  inhibitor.
Hal  ini  menunjukkan  adanya  pengaruh inhibitorpada  proses  korosi  besi,  yang disebabkan  oleh  adanya  lapisan  tipis sebagai rotektf
molekul-molekul teradsorbsi  pada  permukaan  logam  dalam larutan elektrolit (Ali, dkk. 2014).
Laju korosi terendah diperoleh pada penambahan  inhibitor  1200  ppm  dan salinitas  2,8  x  10 -5 mmd.  Konsentrasi inhibitor  ini  merupakan  jumlah  yang efektifpada pembentukan senyaa kompleks yang  dapat  melindungi  proses  oksidasi pada  logam  besi.  Konsentrasi  inhibitor dapat mempengaruhi laju korosi jika sesuai dengan media korosif yang digunakan.

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil skrining fitokimia,  ekstrak  kulit  biji  kakao  fraksi etanol 70% mengandung alkaloid,
flavonoid, tanin, saponin, dan triterpenoid.
Pengamatan menggunakan
GC-MS
menunjukkan  terdapat  3  dari  gologan benzene,  1  amida,  5  asam  karboksilat,  3 monoterpen,  1  aromatik,  5  alkana,  3 alkohol 2 keton dan 1 steroaid.
Ekstrak  kulit  biji  kakao  dapat dimanfaatkan  sebagai  antimikroba  karena kandungan komponen fitokimianya.
Kandungan  komponen  fenoliknya  seperti tanin  dan  flavonoid  berpotensi  sebagai sumber  antioksidan  alami.dan  juga  dapat berfungsi  sebagai  inhibitor  terhadap  laju korosi logam besi.

## UCAPAN TERIMA KASIH.
Penulis pertama mengucapkan terimakasih pada Politeknik Negeri Padang atas Hibah Penelitian Unggulan Perguruan Tinggi  dengan    kontrak    No.  DIPA  : 042.05. 28. 3421/2019.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Agni  Rimba  Mawan,  Sri  Endah Indriwati,  Suhadi.  (2018).  Aktivitas
Anti  bakteri  Ekstrak  Metanol  Buah Syzygium
polyanthum terhadap
Pertumbuhan Bakteri Escherchiacoli . Bio eksperimen, Vol.4 (1), 64-68.
[2] Alemanno.L,
T.Ramos,
A.
Gargadenec, C.Andary, and N.
Ferriere,  2003,    Lacalization  and Identification of Phenolic Compounds in Theobroma  cacao  L Somatic Embryogenesis, Annals of Botany , 92, 613-623.
[3] Ali, F., Saputri, D. Dan Nugroho, RF, (2014) “Pengaruh Waktu Perendaman dan  Konsentrasi  Ekstrak  Daun  Jambu Biji  ( Psidium  guajava  Linn )  sebagai inhibitor terhadap laju korosi Baja SS 304  dalam  larutan  garam  dan  Asan, Teknik Kimia, 20(1): 28-37
[4] Andujar  I,  Recio  M.C  ,  Giner  R.M and Rios J.L, 2012, Cocoa Poliphenol and  Their  Potential  Benefits  for Human  Health,  Oxidative  Medicine and Cellular
Longevity,
HindawiPublishing  Corporation ,  Vol.
2012, article ID. 906252, 23 pages.
[5] Chung. B. Y, Kenji Ilyama, and Kang- Wan Han, 2003, Compositional Characterization of Cacao ( Theobroma cacao L ) Hull,
Agriculture  Chemical  Bioethanol ,  46 (1), 12-16.
[6] Figueira.  A,  and  Janick,  2008,  New products  from Theobroma  cacao .
Seed  pulp  and  pod  gum, Advances  in Botanical Research , 55, 885-892.
[7] Harborne.  J.  B.,  and  Simmonds  N.W, 1964,  Phytochemical  Dictionary:  A Handbook  of  Bioactive  Compounds from  Plants,  2 nd edition,  Academic Press, New York, 490-517.
[8] Helmestein.  AM  2010,  Theobromine Chemistry:
Theobromine is Chocolates, diambil dari
 http://chemistry.about.com/old/facts structures/a/theobrominechemistry.ht m  .
[9] Hii  C.  L,  C.L.  Law,  S.  Suzannah, Misnawi  and  M.  Cloke1,  2009,
Polyphenols  in  Cocoa  ( Theobroma cacao  L ), AsianJournal  of  Food Agriculture Industri , 2 (4), 702-722.
[10] Kim,  H  and  Keeney,  P.  G,  1983, Method of Analysis for (-)
Epicatechin  in  Cocoa  Beans  by HPLC, Journal  of  Food  Science ,  48 (2), 548-551.
[11] Kurian,  A.  &  Sankar,  M.A.(2007).
Medicinal Plants : Vol.02.Horticulture  Science  Series. New India Publishing Agency
(NIPA), New Delhi.
[12] M.  Afdhal,  Maming,  St.  Fauziah,  “ Pemanfaatan  Ekstraks  Kulit  Buah Kakao  ( Theobroma  Cacao )  sebagai Inhibitor  pada  Proses  Korosi  Besi” Artikel Penelitian
[13] Matsumoto M, Mikami M, and Kondo K,  (2006),  Separation  of  Organic
Nitrogen  Compounds  by  Supported Liquid  Membranes  Based  on  Ionic liquids, Journal  Japan  Petrolium Institute , 49, 256-261.
[14] Okuda  T  and  H.Ito,  2011,  Tannin  of Constant  Structure  in  Medical  and Food Plant, Hydrolyzable Tannins and Polyphenol Related to Tannins, Journal  of  Moleculer  Structure, 16, 2191-2217.
[15] Osman  H,  R.  Nasarudin,  S.L.  Lee, 2004,  Extracts  of  cocoa  ( Theobroma cacao L .) leaves and their antioxidation potential, Food
Chemistry, 8 (6), 41-46.
[16] Raaman,N.(2006). PhytochemicalTech niques .NewIndiaPublishingAgency,N
ewDelhi.
[17] Sastri.  V.  S,  2011, Adsorption  in Corrosion Inhibition,Green Corrosion Inhibitor ,  Wiston  Revie,  Canada, pp.103-105.
[18] Shanab,  S.M.M..  2007.  Antioxidant and  Antibiotic  Activities  of  Some Seaweeds (Egyptian Isolates). Agriculture and Biology , IX (2),  220– 225.
[19] Shanmugam,S.,Kumar,T.S.&Selvam, K.P.(2010). Laboratory  Handbook  on
Biochemistry . PHI LearningPrivateLimited,NewDelhi.
[20] Singh  A,  Singh  V.K,  and  Quraishi, M.A, 2010, Aquos extrast of Kalmegh ( Andrographis  paniculata )  Leaves  as Green  Inhibitor  for  mild  steel  in Hydrochloric. International Journal of Corrosion , 1-10.
[21] Singh  A,I,  E.  E.  Ebenso,  and  M.  A. Quraishi,  2012,  Corrosion  Inhibition of  Carbon  Steel  in  HCl  Solution  by Some  Plant  Extracts, International Journal of Corrosion, 10, 1-20 .
[22] Sri  Mulyatni  A,  Budiani  A  dan Taniwiryono  D , 2012,  Aktivitas  anti bakteri  ekstrak  kulit  buah  kakao ( Theobroma cacao L.) terhadap Escherichia coli, Bacillus subtilis, dan Staphylococcus aureus, Menara
Perkebunan, 80 (2), 77-84 .
[23] Vermerris  and  Nicholson,  2006, Phenolic  Compound    Biochemistry, Springer, Netherland.
[24] Yetri  Y,  Emriadi,  Jamarun  N, Gunawarman, 2015, Corrosion
inhibitor  of  mildsteel  by  polar  extract of Theobroma  cacao peelsinhydro chloric acid solution. Asian Journal of Chemistry , 27(3): 875-81