## DOI: 10.30644/rik.v8i2.388
Isolasi senyawa antibakteri dari batang sembung rambat ( Mikania cordata (Burm.fil.))
Santi Perawati*, Lia Anggresani, Ulfha Deni Swinche, Barmi Hartesi Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Harapan Ibu Jambi, Jambi, Indonesia, 36132 *Email korespondensi: santiperawati@gmail.com
Accepted: 03 Juni 2020; revision: 03 Juni 2020; published: 30 Juni 2020

## Abstrak
Latar  Belakang :  Tumbuhan  sembung  rambat  merupakan  gulma  yang  memiliki  potensi  antibakteri yang  sangat  besar.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mendapatkan  isolat  metabolit  sekunder  dari  batang sembung rambat yang mempunyai aktivitas antibakteri.
Metode :  Isolasi  senyawa  antibakteri  dari  batang  sembung  rambat  dilakukan  dengan  metode separation  guided  by  activity dimulai  dengan  pembuatan  simlisia,  ekstraksi  dengan  pelarut  etanol 70%,  skrining  fitokimia,  fraksinasi  dengan  metode  ekstraksi  cair-cair  (ECC),  Subfraksinasi  dengan metode kromatografi cair vakum (KCV), isolasi menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) Preparatif, dan  pemurnian  isolat  dengan  KLT  2  arah.  Aktivitas  antibakteri  dilakukan  pada  hasil  disetiap  tahap pemisahan  senyawa.  Kemudian  isolat  yang  paling  baik  daya  antibakterinya  dilanjutkan  dengan karakterisasi senyawa menggunakan  spektrofotometer UV-Vis dan FTIR.
Hasil : Penapisan fitokimia ekstrak batang sembung rambat mengandung metabolit sekunder alkaloid, flavonoid,  polifenol,  saponin,  steroid,  tannin  dan  kuinon.  Uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  ekstrak, fraksi  etil  asetat  (Mc-II),  subfraksi  (Mc-II-A)  dan  isolat  (Mc-II-A 3 )  menunjukkan  efektivitas  terbesar terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Kesimpulan :  Identifikasi  isolat  aktif  antibakteri  (Mc-II-A 3 )  dilakukan  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  dan  FTIR.  Spektrum  UV  menunjukkan  panjang  gelombang  222  nm  dan analisis  FTIR  menunjukkan  adanya  C=C  aromatis  dan  C=O.  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa isolat aktif antibakteri dari batang sembung rambat diduga senyawa mikanolide.
Kata kunci: antibakteri, isolasi, Mikania cordata (Burm.fil.)

## Abstract
Background :  Sembung  rambat  (Mikania  cordata  (Burm.fill.))  Is  a  weed  that  has  a  very  large antibacterial  potential.  The  purpose  of  this  study  was  to  obtain  secondary  metabolite  isolates  from vines that have antibacterial activity.
Method :  Isolation  of  the  antibacterial  compound  from  the  stem  of  Mikania  cordata  is  done  by  the separation  guided  by  activity  method  starting  with  the,  extraction  with  70%  ethanol  solvent, phytochemical screening, fractionation by the liquid-liquid extraction (LLC) method, subfactionation by vacuum liquid chromatography (KCV) method, isolation using Preparative thin layer chromatography (TLC), and purification of isolates with 2-way TLC. Antibacterial activity was carried out at each stage of  compound  separation.  Then  the  isolates  with  the  best  antibacterial  power  were  followed  by  the characterization of compounds using UV-Vis and FTIR spectrophotometers.
Results :  Phytochemical  screening  of  extracts  of  stems  of  Mikania  cordata  containing  secondary metabolites  of  alkaloids,  flavonoids,  polyphenols,  saponins,  steroids,  tannins  and  quinones. Antibacterial activity tests on extracts, ethyl acetate (Mc-II), subfraction (Mc-II-A) and isolate (Mc-II-A 3 ) showed the greatest effectiveness against Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Conclusion : Identification of antibacterial active isolates (Mc-II-A 3 ) was carried out using UV-Vis and FTIR  spectrophotometers.  The  UV  spectrum  shows  a  wavelength  of  222  nm  and  FTIR  analysis shows the presence of aromatic C = C and C = O. so it can be concluded that the antibacterial active isolate from the stem is seem like to be Mikanolide.
Key words: antibacterial, isolation, Mikania cordata (Burm.fil.)

## PENDAHULUAN
Infeksi  sering  terjadi  disebabkan  oleh bakteri.    Kejadian  penyakit  infeksi  masih menjadi  masalah  dimasyarakat.  Dimana infeksi  dapat  disebabkan  oleh  bakteri, jamur,  virus,  maupun  parasit.  Saat  ini antibiotik  merupakan  obat  yang  digunakan untuk  mengatasi  infeksi  bakteri.  Namun antibiotik  menjadi  kurang  efektif  terhadap penyakit tertentu karena dapat menghasilkan  toksisitas  sebagai  resistensi obat 1 .  Penyakit  yang  disebabkan  oleh infeksi  diantaranya  yaitu  diare,  tipus,  bisul dan  meningitis.  Penyakit  diare  merupakan salah  satu  kasus  penyakit  yang  setiap tahunnya  meningkat  di  Provinsi  Jambi.  Hal ini  dapat  dilihat  dari  prevalensi  diare berdasarkan  diagnosis  tenaga  kesehatan Provinsi  Jambi  dari  tahun  2013 –  2018 yakni 2,5 % menjadi 5,0 %. Ini dapat dilihat terjadinya peningkatan sebesar 50% selama 5 tahun 2 .
Dari hasil penelitian tiga jenis tumbuhan yakni, Mikania  cordata , Mikania  micrantha , dan  M ikania  scandens yang  memiliki  sifat antibakteri signifikan adalah ekstrak Mikania cordata dan  juga  memiliki  senyawa  yang dapat  berguna  sebagai  agen  antimikroba spektrum luas 1 . Tumbuhan sembung rambat Mikania cordata (Burm. fil.) termasuk  ke  dalam  salah  satu  gulma  yang ada  di  Indonesia.  Masyarakat  mengenal dan  memanfaatkan  tumbuhan  sembung rambat  biasa  digunakan  daun  untuk  luka, sakit  perut,  borok,  gatal-gatal,  kudis  dan penyakit  kulit  lainnya 3 .  Masyarakat  Jambi biasa  menggunakan  tumbuhan  sembung rambat sebagai pakan ternak sapi.
Penelitian  ini  betujuan  untuk  mendapatkan isolat  metabolit  sekunder  dari  batang sembung rambat yang mempunyai aktivitas antibakteri.

## METODE
Sampel yang digunakan adalah
simplisia  batang  dari  tanaman  sembung rambat Mikania cordata (Burm. fil.) sebanyak  2,5  kg.  Proses  isolasi  dimulai dengan
pengekstraksian
simplisia
menggunakan pelarut etanol 70% 4 , fraksinasi  secara  ekstraksi  cair-cair  (ECC) menggunakan  pelarut n -heksan,  etil  asetat, dan n -butanol  dengan  perbandingan  (1:1) 5 , subfraksinasi  dengan  kromatografi  cair vakum  (KCV)  dengan  campuran  pelarut n -heksan, etil asetat, dan etanol menggunakan berbagai gradient perbandingan.  Pemisahan  isolat  dengan kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  Preparatif menggunakan  plat  kaca  berlapis  silika fluoresensi  berukuran  15x15  cm,  dan pemurnian  isolat  dengan  KLT  2  arah dengan eluen arah pertama yaitu n -heksan : etil asetat  (1:1) dan eluen arah kedua yaitu kloroform  :  metanol  (7:3) 6 .  Uji  aktivitas antibakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli dilakukan pada setiap hasil dari  proses  tahapan  pemisahan  senyawa dari  ekstrak,  fraksi,  subfraksi,  dan  isolat dalam  konsentrasi  tinggi,  sedang,  dan rendah. Kontrol negatif berupa DMSO yang digunakan  sebagai  pelarut  dari  berbagai bahan  uji 7 .  Skrining  fitokimia  menggunakan beberapa reagen dilakukan terhadap ekstrak  dan  fraksi  untuk  mengetahui kandungan metabolit sekundernya 8, 9 . Sedangkan isolat yang menunjukkan aktivitas  antibakteri  yang  besar  dilanjutkan dengan
karakterisasi senyawanya menggunakan  spektrofotometer  Uv-Vis  dan FTIR 10 .
Tabel  1.  Gradien  perbandingan  pelarut  untuk subfraksinasi dengan KCV
n -heksan:etil asetat:etanol (ml)
100:0:0 80:20:0 60:40:0 40:60:0 20:80:0 0:100:0 0:80:20 0:60:40 0:40:60 0:20:80 0:0:100

## HASIL
1.  Rendemen ekstrak dan fraksi
Sebanyak  2,5  kg  simplisia  didapatkan ekstrak kental sebanyak 356,58 g. Kemudian  sebanyak  300  gekstrak  kental dilanjutkan dengan fraksinasi menggunakan pelarut n -heksan,  etil  asetat, n -butanol. Perolehan  rendemen  masing-masingnya dapat dilihat pada Tabel 2 berikut.
Tabel 2. Hasil ekstraksi dan fraksinasi Sampel Bobot (g) Rendemen (%) ekstrak 356,58 14.26 Fraksi n - heksan 20,7 6,9 Fraksi etil asetat 9,6 3,2 Fraksi n - butanol 103,5 34,5 Fraksi sisa 146,9 48,96

## 2.  Skrining Fitokimia ekstrak dan fraksi
Tabel  3.  Skrining  fitokimia  ekstrak  dan fraksi. Golongan senyawa Sampel a b c d e Alkaloid + - + - - Flavonoid + - + - - Polifenol + + + + - Tannin + - + - - Saponin + + - + - Terpenoid - - - - - Steroid + + + - - Kuinon + - + + - Keterangan:
+ : mengandung senyawa - : tidak mengandung senyawa
a : ekstrak b : fraksi n -heksan c : fraksi etil asetat d : fraksi n -butanol e : fraksi sisa
3.  Pemisahan senyawa dan Aktivitas antibakteri dari ekstrak batang Sembung Rambat Mikania cordata (Burm. fil.)
Gambar 1. KLT ekstrak dan fraksi
Keterangan:
a : ekstrak
b : fraksi n -heksan c : fraksi etil asetat
d : fraksi n -butanol e : fraksi sisa
Ekstrak dan fraksi dari batang Mikania cordata (Burm.  fil.)  mengandung  beberapa senyawa metabolit dapat dilihat dari bercak yang  ditimbulkan  pada  uji  KLT  yang  dilihat pada  2  jenis  sinar  UV  254  nm  dan  366  nm (Gambar  1).  Kemudian  ekstrak  dan  fraksi diujikan aktivitas antibakterinya pada konsentrasi  15  %  fraksi  etil  asetat  (Mc-II) menunjukkan  aktivitas  daya  hambat  yang kuat  dibandingkan  ekstrak  maupun  fraksi yang  lainnya  (Gambar  2).  Kemudian  Mc-II dilanjutkan  pemisahannya  dengan  KCV dihasilkan 2 subfraksi yaitu Mc-II-A dan Mc- II-B  (Gambar  3)  dan  diujikan  aktivitas antibakterinya  diketahui  subfraksi  Mc-II-A yang  paling  kuat  aktivitasnya  (Gambar  4).
Subfraksi Mc-II-A dilanjutkan pemisahannya dengan  KLT  preparatif  dihasilkan  7  isolat (Gambar  5)  sebelum  diujikan  aktivitas antibakterinya  masing-masing  isolat  diuji kemurniannya  dengan  KLT  2  arah.  Dari hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ke  7  isolat diketahui isolat Mc-II-A 3 menunjukkan aktivitas daya hambat yang kuat dibandingkan  isolat  lainnya  (Gambar  6). Bobot isolat Mc-II-A 3 sebesar 134,8 mg.
Gambar 2. Aktivitas Antibakteri Ekstrak dan
Fraksi
Keterangan:
Mc-I :fraksi n -heksan Mc-II :fraksi etil asetat Mc-III :fraksi n -butanol Mc-IV :fraksi sisa E.coli :bakteri Escherichia coli SA :bakteri S taphylococcus aureus
Gambar 3. KLT subfraksi hasil KCV
Keterangan: A : subfraksi Mc-II-A
B : subfraksi Mc-II-B
Gambar 4. Aktivitas Antibakteri Subfraksi dari fraksi (Mc-II) Keterangan: Mc-II :fraksi etil asetat Mc-II-A :subfraksi  hasil  KCV  dari  fraksi etil asetat Mc-II-B :subfraksi  hasil  KCV  dari  fraksi etil asetat E.coli :bakteri Escherichia coli SA :bakteri S taphylococcus aureus
Gambar 5. Isolat dari subfraksi Mc-II-A
Keterangan: Mc-II-A 1 :isolat 1 Mc-II-A 2 :isolat 2
Mc-II-A 3 :isolat 3
Mc-II-A 4 :isolat 4
Mc-II-A 5 :isolat 5 Mc-II-A 6 :isolat 6 Mc-II-A 7 :isolat 7
Gambar 6. Aktivitas Antibakteri isolat dari subfraksi (Mc-II-A) Keterangan: Mc-II-A 1 :isolat 1 hasil KLT Preparatif dari subfraksi (Mc-II-A) Mc-II-A 2 :isolat 2 hasil KLT Preparatif dari subfraksi (Mc-II-A) Mc-II-A 3 :isolat 3 hasil KLT Preparatif dari subfraksi (Mc-II-A) Mc-II-A 4 :isolat 4 hasil KLT Preparatif dari subfraksi (Mc-II-A) Mc-II-A 5 :isolat 5 hasil KLT Preparatif dari subfraksi (Mc-II-A) Mc-II-A 6 :isolat 6 hasil KLT Preparatif dari subfraksi (Mc-II-A) Mc-II-A 7
:isolat 7 hasil KLT Preparatif dari subfraksi (Mc-II-A)
E.coli :bakteri Escherichia coli SA :bakteri S taphylococcus aureu
4.  Karakterisasi  isolat  Mc-II-A 3 dengan

## UV-Vis dan FTIR
Berdasarkan  hasil  spektrum  UV-Vis panjang  gelombang  maksimal  isolat  Mc-II- A 3 sebesar  222  nm.  Analisa  gugus  fungsi dari  spektrum  FTIR  didapat  7  bilangan gelombang pada Tabel 6.
Gambar 7. Spektrum Uv-Vis isolat Mc-II-A 3
Gambar 8. Spektrum FTIR isolat Mc-II-A 3
Tabel 6. Analisa gugus fungsi isolat 3 (Mc-II-A 3 ) Bilangan
gelombang (cm 1 ) Intensitas Bentuk puncak Interprestasi (11) 801,33 Kuat Tajam C-H aromatis 1069,13 Kuat Tajam C-O 1622,77 Kuat Tajam C=C (aromatis) 1756,90 Kuat Tajam C=O 2978,50 Kuat Tajam C-H (karbonil) 3398,40 Medium Lebar O-H

## PEMBAHASAN
Proses  ekstraksi  batang  sembung rambat  dilakukan  dengan  menggunakan metode  maserasi.  Tujuan  dari  maserasi
yaitu dengan perendaman sampel menggunakan pelarut organik pada temperatur  ruangan,  sehingga  pada  proses perendaman, sampel tumbuhan akan
mengalami pemecahan dinding dan membran  sel  akibat  perbedaan  tekanan antara  di  dalam  dan  di  luar  sel,  sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma  akan  terlarut  dalam  pelarut organik 12 .
Serbuk  simplisia  batang  sembung rambat  direndam  dengan  menggunakan etanol  70%  hingga  menutupi  semua permukaan  dengan  suhu  25-30°C  dan dihindarkan dari cahaya matahari. Pemilihan  pelarut  etanol  sebagai  pelarut ekstraksi karena merupakan pelarut universal  yang  paling  banyak  digunakan dalam  proses  isolasi  senyawa  organik bahan alam, karena etanol dapat meningkatkan  permeabilitas  dinding  sel simplisa  sehingga  proses  ekstraksi  lebih efisien  dalam  menarik  komponen  polar hingga  semipolar  dan  memiliki  titik  didih rendah  78,37  C  serta  tidak  beracun,  larut dalam air dan pelarut organik 13 . Hasil uji penapisan fitokimia memperlihatkan  bahwa  ekstrak  batang sembung  rambat  mengandung  metabolit sekunder berupa alkaloid, flavonoid, polifenol,  tannin,  saponin,  steroid  dan kuinon.  Hal  ini  didukung  oleh  penelitian yang  dilakukan  oleh  Nargis  S.  chowdhury dkk (2011) yang menyatakan bahwa ekstrak pada  tumbuhan  sembung  rambat  ( Mikania cordata (Burm  fill.))  mengandung  metabolit sekunder alkaloid, flavonoid, saponin, steroid,  dan  tannin.  Dari  hasil  penapisan fitokimia  terhadap  setiap  fraksi,  metabolit sekunder  yang  bersifat  antibakteri  berada pada  etil  asetat  seperti  alkaloid,  flavonoid, polifenol, tannin dan kuinon.
Sebelum  dilakukan  pengujian  ekstrak etanol  simplisia  batang  sembung  rambat diidentifikasi komponennya dengan menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dengan mencoba berbagai campuran pengembang untuk menghasilkan campuran  pengembang  yang  baik.  Setiap noda  yang  terbentuk  di  analisis  dengan menggunakan  uji  penampak  bercak  AlCl 3 5% yang digunakan untuk melihat senyawa metabolit sekunder golongan flavonoid yang
ditandai dengan dihasilkannya noda berfluoresensi  kuning  atau  biru,  sedangkan H 2 SO 4 10  %  digunakan  karena  larutan  ini merupakan  penampak  bercak  yang  umum digunakan  untuk  melihat  senyawa  organik yang memberikan warna merah, coklat dan merah 14 .
Fraksinasi bertujuan untuk
memisahkan  senyawa  berdasarkan  tingkat kepolarannya. Senyawa-senyawa yang bersifat  non  polar  cenderung  larut  dalam pelarut non polar sedangkan senyawa yang bersifat polar cenderung larut dalam pelarut polar.  Pelarut n -heksan  yaitu  pelarut  non polar  yang  digunakan  untuk  melarutkan senyawa-senyawa non polar seperti minyak,  karotenoid,  steroid  dan  terpenoid. Sedangkan untuk pelarut semi polar seperti etil  asetat  dapat  melarutkan  senyawa flavonoid aglikon 15 . Uji aktivitas antibakteri terhadap ekstrak,  fraksi,  subfraksi  dan  isolat  dapat dilihat  bahwa  semakin  kecil  pemisahan yang  dilakukan  maka  semakin  besar  pula aktivitas  antibakteri  yang  terbentuk.  Hal  ini dikarenakan  senyawa  tersebut  semakin spesifik terhadap aktivitas antibakteri. Berdasarkan penelitian sebelumnya
terhadap isolat daun sembung rambat dapat diketahui bahwa aktivitas antibakteri memiliki kategori sedang dan kuat terhadap bakteri E.coli .  dan  bakteri S.aureus ,  tetapi nilai  zona  hambat  yang  terbentuk  lebih besar  pada  batang  sembung  rambat dibandingkan pada daun sembung rambat 6 . Dari hasil pengukuran panjang gelombang  pada  isolat  batang  sembung rambat  didapat  hasil  panjang  gelombang maksimum  yaitu  222  nm.  Studi  literatur yang  telah  dilakukan  terhadap Mikania cordata, khususnya bagian batang. Metabolit  sekunder  yang  dilaporkan  dari bagian  batang Mikania  cordata antara  lain yaitu deoxymikanolide,
mikanolide, dhydromikanolide, 11 β-hydroxy-13-
chloromikanolide acetate, 3 β-hydroxy-
deoxy- mikanolide,
3β-hydroxy- deoxymikanolide 16 .
Gambar 9. Struktur Mikanolide 17
Spektroskopi FTIR  dipilih  karena dapat  mengetahui  gugus  fungsi  suatu senyawa  dengan  menentukan  vibrasi  atom suatu molekul pada masing-masing bilangan gelombang. Pada literatur senyawa  penanda mikanolide yaitu  terletak pada  pita  1767  dan  1652  cm -1 yang menandakan  adanya  gugus  benzen,  pada pita  1630  cm -1 yang  menandakan  adanya gugus  C=O  aldehid 1718 . Berdasarkan  hasil studi  literatur,  dengan  metabolit  sekunder yang berhasil diisolasi dari batang Miakania cordata senyawa  ini  mempunyai  kesamaan dengan senyawa mikanolide. Untuk memastikan  isolat  ini  merupakan  senyawa mikanolide maka  perlunya  karakterisasi senyawa lebih lanjut.

## KESIMPULAN
Isolat metabolit sekunder dari batang sembung rambat mempunyai aktivitas  antibakteri  dengan  kategori  kuat untuk S.aureus (13.233  mm)  dan  kategori sedang  untuk E.coli (8.03  mm).  Aktivitas antibakteri  dalam  bentuk  isolat  lebih  kuat dibanding bentuk ekstrak.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Khatun,  R.,  Nasrin,  L.,  Roy,  S., Tantry, M. A. & Abdur Rahman, M. A. Comparative  antimicrobial  evaluation of  available  Mikania  species  in Bangladesh. Int. J. Plant Res. 7, 36 –
38 (2017). 2. Kesehatan, B. P. dan P. in Kementrian Kesehatan Republik Indonesia 1 –100 (2018). doi:1 Desember 2013 3. Tari,  M.  &  Lely,  N.  Uji  Aktivitas Antibakteri Terhadap Beberapa Fraksi Daun Sembung Rambat (Mikania  micrantha  Kunth)  Terhadap Bakteri Penyebab Penyakit Kulit. 49 – 54 (2016). 4. Mukhriani. Ekstraksi, pemisahan senyawa,  dan  identifikasi  senyawa aktif. J. Kesehat. 7, 361 –367 (2014).
5. Mirwan,  A.  Pada  Ekstraksi  Cair-Cair Kolom  Isian. Konversi 2, 32 –39 (2013).
6. Andriani, L., Perawati, S., Pratiwi, P., Sagita,  D.  &  Yulianis.  Isolation  Of Antibacterial  Compound  From  The Leaves  Of  Mikania. JPSR 1 –6 (2018).
7. Perawati,  S.,  Andriani,  L.,  &  Pratiwi, P. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun  Sembung  Rambat  (  Mikania micrantha  Kunth  ). Chempublish Journal, 3, 40 –45 (2018).
8. Zhang, Q. W., Lin, L. G. & Ye, W. C. Techniques for extraction and isolation  of  natural  products :  a comprehensive  review. Chin.  Med. 1 –26  (2018).  doi:10.1186/s13020- 018-0177-x
9. Minarno, E. B. Skrining Fitokimia Dan Kandungan  Total  Flavanoid  Pada Buah  Carica  Pubescens  Lenne  &  K. Koch  Di  Kawasan  Bromo,  Cangar, Dan  Dataran  Tinggi  Dieng. Am.  J. Trop. Med. Hyg. 5, 73 –82 (2015).
10. Mohammed Golam Rasul. Extraction, Isolation  and  Characterization  of
Natural  Products  from  Medicinal Plants. Int.  J.  Basic  Sci.  Appl. Comput. 2, 1 –6 (2018).
11. Herz  W,  Subramaniam,  Santhanam, H.  allen  l.  Structure  Elucidation  of Sesquiterpene Dilactones
from Mikania  Scandens  (L.)  Wild. J.  Org. Chem. 35, 1453 –64 (2013).
12. Nurcahyanti,  P.  A.  H.  dan  H.
Ekstraksi  Minyak  Atsiri  Daun  Zodia (Evodia Suaveolens) Dengan Metode Maserasi  dan  Distilasi  Air. J.  Bahan Alam Terbarukan http//journal.unnes.ac.id/nju/index.ph p/jbat 4, 1 –7 (2015).
13. Wati,  M.  &  Tarigan,  D.  Isolasi  dan identifikasi senyawa metabolit sekunder  dari  fraksi  etil  asetat  pada daun berwarna merah pucuk merah ( Syzygium  myrtifilium  wal  p  .  ) isolation and identification of secondary  metabolites  compounds from  ethyl  acetate  fraction  on  red colored pu. J. Kim. Mulawarman Vol. 14  Nomor  2  Mei  2017  Kim.  FMIPA Unmul (2017).
14. Lestari, P. P., Kusrini, D. & Anam, K.
Anthocyanin Identification of Methanol-HCl  Extract  Active  Fraction in  Rosella  (  Hibiscus  Sabdariffa  .  L  ) and Its Potential as Xanthine Oxidase Inhibitor Jurnal Sains dan Matematika. J.  Sains  dan  Mat. 22,
72 –78 (2014).
15. Dwi  Dinni  Aulia  Bakhtra,  Junuarty Jubahar,  E.  Y.  Uji  Aktivitas  Fraksi
Dari Ekstrak Daun Sambung Nyawa ( Gynura procumbens (Lour)Merr.) Terhadap Bakteri Shigella dysenteriae. J.  Farm.  Higea 10,
(2018).
16. Rufatto, L. C., Gower, A. &
Schwambach,  J.  Gen us  Mikania : chemical composition and
phytotherapeutical activity.
Rev.
Bras.  Farmacogn.  brazilian  J.  pf Pharmacogn. 22, 1384 –1403 (2012).
17. Li,  Y.,  Li,  J.,  Li,  Y., Wang,  X.  &  Cao, A.  Antimicrobial  Constituents  of  the Leaves of Mikania. 8, (2013). 18. Hemavathy, A., Shanthi, P.,
Sowndharya, C., S, T. S. & Priyadharshni,  K.  Extraction  and Isolation  of  Bioactive  Compounds from  a  Therapeutic  Medicinal  Plant  - Wrightia tinctoria ( Roxb .) R . Br . 11,
199 –204 (2019).