Growth of Bacteria Bacillus cereus in Liquid Media with

## Different Protein Sources
Pranata Rangga Mukti 1* , Feliatra 2 , Irwan Effendi 2
1 Student of The Faculty of Fisheries and Marine Universitas Riau, Pekanbaru
2 Lecturer at the Faculty of Fisheries and Marine Universitas Riau, Pekanbaru Corresponding Author: ranggamukti9@gmail.com
Diterima/Received: 6 Juli 2020; Disetujui/Accepted: 05 Agustus 2020

## ABSTRACT
The aim of this research was to determine the optimal media composition and incubation time for the growth of Bacillus cereus and B. cereus isolate consortium with other strains isolate. Using an experimental method, which was testing 2 groups of bacterial isolates; B.  cereus strain SN7 (isolate N) and bacterial consortium (combination of 5 isolates of B. cereus with different strains). Each group of isolates was grown in sago waste media added with two different protein sources (egg whites and skim  milk)  and  3  different  concentrations  in  each  protein  source  (8%,  10%,  and  12%)  with  3 replications in each treatment. Bacterial culture was measured every 6 hours for 24 hours using three methods;  total  agar  plate  count,  spectrophotometric  methods,  and  bacterial  cell  biomass  methods. There  was  no  significant  difference  between  the  growth  of  these  two  groups  of  bacterial  isolates. Optimal growth of each isolate was in the sago waste media which was added with egg white but with different  concentrations,  namely  10%  in B.  cereus SN7  and  12%  in  the  consortium. B.  cereus consortium showed higher growth than B. cereus SN7. The optimal time for bacteria to grow was in the range of 12 to 24 hours.
Keywords : Bacillus cereus, optimal growth, protein, media, incubation time.

## 1. PENDAHULUAN
Seiring perkembangan di bidang bioteknologi,  bakteri  dapat  menghasilkan produk  yang  memiliki  nilai  guna  tinggi, contohnya  pemanfaatan  bakteri  probiotik  yang sudah  banyak  dijadikan  sebagai  produk  untuk keuntungan  manusia.  Supriatna et  al .  (2016) menyatakan, bakteri probiotik menjadi preparasi  sel  mikroba  atau  komponen  sel mikroba yang memiliki pengaruh menguntungkan  bagi  kesehatan  dan  kehidupan inang  yang  menjadi  tempat  pertumbuhannya. Salah  satu  manfaat  dari  bakteri  probiotik  yaitu menjadi  sumber  protein  yang  dapat  dijadikan produk dalam bidang bioteknologi dengan nilai guna yang tinggi.
Umumnya  protein  yang  bersumber  dari bakteri lebih banyak dimanfaatkan di- bandingkan  dengan  hewan  dan  fungi.  Hal tersebut  didasarkan  dari  pernyataan  Inuhan et al .  (2016)  pertumbuhan  dari  bakteri  sangat cepat,  tidak  membutuhkan  media  atau  ruangan yang  besar  dan  proses  regenerasinya  sangat cepat.  Protein  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  ini disebut  juga  protein  sel  tunggal  (PST),  yang mempunyai  kandungan  protein  yang  tinggi
yaitu mencapai 50% - 65%, hal ini menunjukan dimana  protein  sel  tunggal  berpotensi  sebagai bahan  pakan  sumber  protein  (Purwaningtyas, 2019).  Pemanfaatan  dari  protein  ini    dapat menjadi pengganti protein dari sumber konvensional dalam bidang pertanian, perikanan,  dan  peternakan.  Bakteri  yang  dapat menjadi sumber protein harus memiliki kriteria yaitu  tidak  bersifat  patogen  (probiotik), memiliki  nilai  nutrisi  yang  baik,  dapat digunakan  sebagai  makanan  atau  pakan,  tidak mengandung  senyawa yang beracun, dan biaya produksinya murah.
Salah satu bakteri dengan genus Bacillus yang  berpotensi  sebagai  sumber  produksi protein  yaitu Bacillus  cereus ,  hal  ini  terbukti dari  beberapa  penelitian  sebelumnya  yang menyatakan B.  cereus menjadi  probiotik  yang dapat  menghambat  beberapa  bakteri  patogen dan juga  merupakan  bakteri  heterotrofik  yang dapat  mendegradasi  bahan  organik  yang bersifat  toksik  di  lingkungan  terutama  perairan (Nainggolan, 2019; Siregar, 2019). Selain itu B. cereus merupakan bakteri probiotik yang masih jarang  diaplikasikan  sebagai  produk  yang bermanfaat dalam bioteknologi.
Melimpahnya sumber alam dapat
digunakan sebagai media alternatif pertumbuhan  bakteri  dari  bahan-bahan  yang mudah  didapat  dan  tidak  memerlukan  biaya yang  mahal.  Pertumbuhan  dan  perkembangan bakteri  dipengaruhi  oleh  faktor  nutrisi  dan faktor  lingkungan  (Fitria  &  Zualika,  2018). Mikroba penghasil protein sel tunggal umumnya  tumbuh  pada  limbah  yang  memiliki unsur  karbon  dan  nitrogen  yang  menjadi komponen  utama  dari  karbohidrat  dan  protein sebagai  media  pertumbuhannya  (Inuhan et  al ., 2016).
Salah satu media yang dapat diasumsikan cocok  untuk  pertumbuhan  bakteri B.  cereus yaitu limbah sagu. Pernyataan  ini didasari oleh pendapat  dari  Ahmad et  al .  (2019)  yang menyatakan  bahwa,  limbah  cair  sagu  yang mengandung  karbohidrat  cukup  tinggi  dan bersifat  asam  mempunyai  prospek  untuk dimanfaatkan sebagai media fermentasi bakteri.
Protein  berfungsi  sebagai  sumber  nutrisi yang  dibutuhkan  oleh  sel  sebagai  penyusun struktural  sel  itu  sendiri  (Azhar,  2016).  Dalam pertumbuhan  bakteri,  protein  berguna  dalam proses  pembentukan  sel  bakteri.  Selain  itu, Hindersah et  al .  (2014)  menyatakan,  kadar nitrogen  yang  rendah  pada  limbah  cair  sagu dapat menghambat proliferasi bakteri, sesampai diperlukan penambahan protein sebagai sumber nitrogen  untuk  memperkecil  C/N.  Oleh  karena itu,  media  dari B.  cereus harus  mengandung protein  yang  baik  untuk  dimanfaatkan  secara optimal bagi pertumbuhan bakteri ini. Terdapat dua sumber protein yang diasumsikan berpotensi dalam mengoptimalkan pertumbuhan  bakteri B.  cereus ,  yaitu  susu  dan telur.

## 2. METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Maret  s/d  April  2020  di  Laboratorium Mikrobiologi  Laut  Jurusan  Ilmu  Kelautan Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan  Universitas Riau

## Metode Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode eksperimen yang menggunakan  2  isolat  bakteri B.  cereus yaitu bakteri B.  cereus strain  SN7  (isolat  N)  dan isolat  bakteri  konsorsium  (gabungan  dari beberapa  isolat B.  cereus dengan  strain  yang
berbeda).  Metode  ini  menggunakan  enam perlakuan  pada  setiap  isolat B.  cereus ,  yaitu penambahan  sumber  protein  yang  berbeda (putih telur dan susu skim) dan tiga konsentrasi yang  berbeda  pada  setiap  sumber  protein dengan 3 kali ulangan pada setiap perlakuan.
Media  yang  digunakan  pada  kultur bakteri B. cereus ini adalah media pertumbuhan dengan  cara memodifikasi  limbah  cair menjadi media  pertumbuhan  bagi B.  cereus .  Limbah cair  sagu  yang  telah  didapatkan  dicampurkan dengan  mikronutrien  lain  seperti  Vitamin  B12, larutan  buffer  seperti  larutan  K 2 HPO 4 dan KH 2 PO 4 ,  dan  juga  garam  mineral  seperti  NaCl yang  dilarutkan  akuades.  Sebanyak  1,5  ml limbah  cair  sagu  ditambahkan  dengan  0,1  g K 2 HPO 4 ,  0,15  g  KH 2 PO 4 ,  5  mg  Vitamin  B12 dan  0,9  g  NaCl,  kemudian  dilarutkan  dalam akuades  sampai  volumenya  100  ml.  Media limbah  cari  modifikasi  kemudian  disterilisasi menggunakan autoclave dengan  suhu  121°C, tekanan 1 atm.
Media limbah cair modifikasi yang telah disterilisasi  kemudian  ditambahkan  susu  skim dan  putih  telur  sebagai  sumber  protein  yang telah dipasteurisasi sebelumnya pada suhu 63 – 66  °C  selama  30  menit  sesuai  dengan  SNI  01- 3951-1995 (Wulandari et al ., 2017). Penambahan  protein  pada  media  limbah  cair dilakukan  dengan  konsentrasi  8%,  10%,  dan 12%.
Isolat  bakteri B.cereus strain  SN7  dan bakteri  konsorsium  disuspensikan  ke  dalam  10 ml  larutan  fisiologis  0,9%  NaCl  secara  aseptis dan dihomogenkan menggunakan vortex sampai  kekeruhan  suspensi  bakteri  setarakan dengan  larutan  standar  0,5  McFarland.  Kedua suspensi  bakteri B.  cereus 10  ml  kemudian dimasukkan  ke  dalam  media  pertumbuhan limbah  cair  sagu  yang  telah  ditambahkan perlakuan  sumber  protein.  Media  kultur  yang telah  berisi  bakteri  diletakkan  diatas Watter Bath  Shaker yang  diatur  dalam  suhu  37  °C dengan kecepatan 90 rpm selama 24 jam. Pengukuran  pertumbuhan  kultur  bakteri dilakukan  setiap  6  jam  selama  24  jam  dengan menggunakan  tiga  cara  yaitu  metode  TPC, metode spektrofotometri, dan mengukur pengukuran  biomassa  sel  bakteri.  Teknik  yang digunakan  pada  metode  TPC  dalam  penelitian ini  yaitu  teknik  cawan  sebar  ( spread  plate ).
Sampel  bakteri  pada  media  pertumbuhan diencerkan terlebih dahulu sampai pengenceran 10-5,  kemudian  0,1  ml  diambil  menggunakan mikropipet  dan  dimasukkan  ke  dalam  cawan
petri  yang  berisi  media  PCA.  Sampel  bakteri pada  media  kemudian  disebar  dan  diratakan menggunakan  batang  drigalski  secara  aseptis didekat  bunsen,  setelah  itu  sampel  bakteri diinkubasi  selama  24  jam  dalam  inkubator kemudian  koloni  bakteri  yang  tumbuh  pada media  PCA  dihitung  menggunakan colony counter .  Hasil  jumlah  koloni  yang  didapat kemudian dimasukkan kedalam rumus perhitungan  bakteri  sebagai  berikut  (Effendi, 2020; Yoswaty & Effendi, 2020).

## ∑ ∑
Metode spektrofotometri dilakukan untuk  menentukan  jumlah  sel  bakteri  dengan cara melihat kekeruhan suspensi sampel bakteri menggunakan spektrofotometer. Sampel bakteri pada media diambil kemudian dan dimasukkan kedalam  kuvet,  kemudian  kuvet  diletakkan dalam  spektrofotometer  dan  diukur  nilai absorbansinya  dengan  panjang  gelombang  630 nm.  Nilai  absorbansi  kemudian  dikonversikan kedalam  rumus  regresi  linear  dari  data  kurva standar McFarland, maka didapat nilai kepadatan sel bakteri.
Pengukuran  biomassa  bakteri  dilakukan dengan  cara  menetukan  berat  kering  pada  sel bakteri. Microtube yang  menjadi  wadah  sel bakteri  ditimbang  terlebih  dahulu  dengan timbangan  analitik,  dicatat,  dan  dimasukkan  1 ml  bakteri  yang  diambil  pada  media  kultur. Microtube yang berisi isolat bakteri disentrifugasi  dengan  kecepatan  3000  rpm selama  10  menit  (Setyati,  2015).  Supernatan yang  telah  terbentuk  dibuang  menggunakan pipet  tetes  yang  sudah  disterilkan  dengan alkohol sampai hanya endapan sel bakteri yang tersisa. Microtube yang  berisi  sel  bakteri kemudian  di  oven  dengan  suhu  100  °C  selama 15  menit.  Setelah  di  oven,  mikrotube didinginkan dalam desikator kemudian ditimbang  berat  keringnya.  Berat  kering  yang telah  didapatkan  dikurang  dengan  berat microtube sebelumnya  sesampai  didapatkan berat kering yang sebenarnya dari bakteri

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertumbuhan  Jumlah  Koloni  Bakteri B. cereus
Hasil  pengukuran  metode  TPC  dirata- ratakan  berdasarkan  3  ulangan  pada  setiap perlakuan,  yang  kemudian  disajikan  dalam bentuk Tabel 1 dan Tabel 2.
Tabel 1. Hasil Pengukuran TPC bakteri B.
cereus SN7 Media (%) Waktu Pengukuran (Jam ke-) (x10 8 CFU’s/ml) 0 6 12 18 24 SS 8 1,32 2,22 2,08 1,70 1,20 10 1,35 2,33 2,17 1,51 1,08 12 1,30 2,25 1,96 1,38 1,10 ST 8 1,64 2,43 2,54 2,70 2,45 10 2,31 2,43 2,64 2,80 2,82 12 1,71 2,10 2,46 2,72 2,30 K (+) 2,10 2,68 2,78 2,86 2,95 K (-) 0,73 1,12 1,26 1,03 0,57 Tabel 2. Hasil Pengukuran TPC bakteri B. cereus Konsorsium Media (%) Waktu Pengukuran (Jam ke-) (x10 8 CFU’s/ml) 0 6 12 18 24 SS 8 2,30 2,59 2,45 1,43 1,26 10 2,57 2,87 2,72 2,31 1,90 12 2,69 2,95 2,61 2,36 1,80 ST 8 1,77 2,65 2,75 2,95 2,43 10 2,29 2,46 2,77 2,80 2,40 12 2,57 2,70 2,88 2,94 2,90 K (+) 1,85 2,41 2,33 2,35 2,21 K (-) 0,87 1,06 1,21 1,18 0,76 Keterangan:
SS : Media limbah sagu + susu skim, ST : Media limbah sagu + putih telur, K  :  Kontrol
Berdasarkan  hasil  pengukuran  TPC , pertumbuhan  pada  media  sagu  dan  telur,  rata- rata  ketiga  konsentrasi  mengalami  fase-fase yang  hampir  sama  yaitu  pada  jam  ke  0,  6  dan 12  merupakan  fase  eksponensial  dimana pertumbuhan bakteri meningkat namun berbeda-beda  dan  ada  yang  tidak  terlalu signifikan,  lalu  pada  jam  ke  18  dan  24  bakteri telah  mengalami  fase  stasioner.  Pertumbuhan bakteri  pada  media  sagu  susu  tidak  terlalu bagus,  dimana  pada  ketiga  konsentrasinya dalam  waktu  inkubasi  jam  ke  12  sampai  24 sudah mengalami fase kematian. Hal ini sesuai dengan  pernyataan  Rizal et  al. (2012),  yang menyatakan  bahwa  telur  mengandung  protein yang  cukup  tinggi  yaitu  12%,  serta  komposisi asam  amino  yang  terkandung  didalam  cukup komparatif  dibandingkan  dengan  daging  dan susu,  yang  artinya  telur  memiliki  kandungan protein  dengan  komposisi  asam  amino  yang lebih  baik  dan  kompleks  jika  dibandingkan dengan susu.
Pengukuran jumlah koloni pada penelitian  ini  menghasilkan  satu  pertumbuhan
yang  optimal  pada  masing-masing  isolat. Pertumbuhan  optimal  tersebut  dibandingkan
dengan  kontrol  positifnya  dan  disajikan  dalam bentuk grafik (Gambar 1 dan 2).
Gambar  1.  Grafik  Pertumbuhan  Optimal
Koloni Bakteri B.cereus SN7 Gambar  2.  Grafik  Pertumbuhan  Optimal Bakteri B.cereus Konsorsium
Pertumbuhan  optimal  isolat B.  cereus konsorsium  pada  media  limbah  cair  sagu ditambah  12%  putih  telur  lebih  tinggi dibandingkan  dengan B.  cereus SN7  pada media  limbah  cair  sagu  ditambah  10%  putih telur. Pertumbuhan tertinggi dari isolat konsorsium  terdapat  pada  jam  ke  18  dengan nilai  2,94  x  10 8 CFU’s/ml,  sedangkan  pada isolat B.  cereus SN7    terdapat  pada  jam  ke  24 dengan nilai 2,82 x 10 8 CFU’s/ml.
Pertumbuhan Kepadatan Sel Bakteri

## B.cereus
Hasil  pengukuran  dengan  menggunakan spektrofotometer  dirata  -  ratakan  berdasarkan tiga  ulangan  pada  setiap  perlakuan,  kemudian disajikan dalam bentuk Tabel 3 dan Tabel 4.
Tabel  3.Hasil  Pengukuran  Spektrofotometri bakteri B. cereus SN7 Media (%) Waktu Pengukuran (Jam ke-) (x10 8 sel/ml) 0 6 12 18 24 SS 8 3,32  2,88 8,86 7,32 8,98 10  3,87  5,58  10,19 5,75 7,26 12  4,69  9,39  10,16 6,03 5,49 ST 8 3,25  3,23 8,50 12,65  10,20 10  3,15  3,34 8,83 11,84  13,50 12  3,00  3,57  12,48  11,21  12,66 K (+) 1,08  4,40  12,62  13,78  16,60 K (-) 0,61  0,57 0,48 0,28 0,09
Tabel 4. Hasil Pengukuran Spektrofotometri bakteri B. cereus Konsorsium Media (%) Waktu Pengukuran (Jam ke-) (x10 8 sel/ml) 0 6 12 18 24 SS 8 2,30 2,59 2,45 1,43 1,26 10 2,57 2,87 2,72 2,31 1,90 12 2,69 2,95 2,61 2,36 1,80 ST 8 1,77 2,65 2,75 2,95 2,43 10 2,29 2,46 2,77 2,80 2,40 12 2,57 2,70 2,88 2,94 2,90 K (+) 1,85 2,41 2,33 2,35 2,21 K (-) 0,87 1,06 1,21 1,18 0,76 Keterangan: SS : Media limbah sagu + susu skim,
ST : Media limbah sagu + putih telur, K  :  Kontrol
Pertumbuhan pada pengukuran spektrofotometri berbanding lurus dengan hasil pengukuran TPC, yaitu pada nilai absorbansinya.  Isolat B.  cereus SN7  memiliki pertumbuhan  yang  paling  optimal  yaitu  pada media  sagu  yang  ditambahkan  putih  telur sebagai  sumber  proteinnya  dengan  konsentrasi 10%  (Tabel  4).  Begitu  juga  dengan  isolat konsorsium  yang  menunjukkan  hasil  dimana media  dengan  pertumbuhan  bakteri  yang optimal  terdapat  pada  media  limbah  cair  sagu yang ditambahkan 12% telur sebagai proteinnya (sama dengan hasil pada pengukuran  TPC).  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Lizayana et  al. (2016),  semakin tinggi  jumlah  bakteri  maka  semakin  banyak cahaya yang akan diserap oleh bakteri tersebut, sesampai  cahaya  yang  dilewatkan  sangat sedikit.
2,31 2,43 2,64 2,80 2,82 2,10 2,68 2,78 2,86 2,95 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 0 6 12 18 24 Waktu Pengukuran (Jam ke-) Jum la h S el B akt er i (x 10 8 C F U 's /m l) Sagu Telur 10% Kontrol (+) 2,57 2,70 2,88 2,94 2,90 1,85 2,41 2,33 2,35 2,21 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 0 6 12 18 24 Waktu Pengukuran (Jam ke-) Jum la h S el B akt er i (x 10 8 C F U 's /m l) Sagu Telur 12% Kontrol (+)

## Pertumbuhan Biomassa Sel Bakteri B.cereus
Hasil  pengukuran  metode  biomassa  sel dirata-ratakan  berdasarkan  3  ulangan  pada setiap  perlakuan,  yang  kemudian  disajikan dalam bentuk Tabel 5 dan Tabel 6.
Tabel  5.  Hasil  Pengukuran  biomassa  sel bakteri B.cereus SN7 Media (%) Waktu Pengukuran (Jam ke-) (g/ml) 0 6 12 18 24 SS 8 0,076  0,095  0,118  0,037  0,112 10  0,095  0,110  0,123  0,065  0,095 12  0,129  0,154  0,098  0,080  0,086 ST 8 0,020  0,069  0,079  0,083  0,065 10  0,071  0,022  0,106  0,116  0,124 12  0,068  0,096  0,141  0,130  0,094 K (+) 0,025  0,040  0,118  0,122  0,135 K (-) 0,020  0,100  0,033  0,030  0,014
Tabel  6.  Hasil  Pengukuran  biomassa  sel bakteri B. cereus Konsorsium Media (%) Waktu Pengukuran (Jam ke-) (g/ml) 0 6 12 18 24 SS 8 0,072  0,113  0,121  0,098  0,080 10  0,091  0,133  0,135  0,056  0,055 12  0,100  0,115  0,137  0,027  0,080 ST 8 0,044  0,088  0,125  0,111  0,064 10  0,069  0,099  0,129  0,136  0,108 12  0,057  0,131  0,138  0,107  0,084 K (+) 0,097  0,117  0,131  0,128  0,123 K (-) 0,015  0,029  0,101  0,024  0,009
Keterangan :
SS : Media limbah sagu + susu skim, ST : Media limbah sagu + putih telur, K  :  Kontrol
Media  dengan  nilai  biomassa  tertinggi pada  kedua  isolat  ini  memiliki  fase  adaptasi ( lag  phase )  yang  lebih  singkat  dari  pada masing-masing  kontrol  positifnya.  Hal  ini sesuai  dengan  pernyataan  dari  Yeni et  al . (2016),  yang  menyatakan  bahwa  media pertumbuhan bakteri harus mengandung nutrisi
yang  sesuai  kebutuhan  bakteri  dan  harus memiliki  kesamaan  dengan  media  produksi sehingga  dapat  meminimalkan  waktu  adaptasi dari  kultur  starter,  mengurangi  fase  lag  dan mengoptimalkan waktu dari fase stasioner.
Berdasarkan penelitan yang telah dilakukan  oleh  Septiani et  al .  (2014),  media limbah  cair  dengan  nutrien  yang  cukup  dalam kadar  tertentu  dapat  menghasilkan  kultur mikroalga dan bakteri heterotrofik yang mampu mengkonversi  bahan  organik  menjadi  sel-sel baru dari limbah itu sendiri sehingga meningkatkan  pertumbuhan  biomassa  dari kultur  mikroba,  hal  ini  menujukkan  bahwa limbah  cair  sagu  dapat  menjadi  sumber  bahan organik  sebagai  nutrien  bagi  isolat  bakteri  B. cereus  yang  dibuktikan  dari  pertambahan biomassa isolat B. cereus SN7 dan konsorsium yang diikubasi selama 24 jam.

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN
Media pertumbuhan  yang paling optimal untuk  isolat  bakteri B.  cereus SN7  (isolat  N) yaitu  media  limbah  cari  sagu  yang  ditambah dengan  putih  telur  sebanyak  10%  sebagai sumber protein, sedangkan pada isolat konsorsium  terletak  pada  media  yang  sama namun  dengan  konsentrasi  yang  berbeda  yaitu 12%.  Pertumbuhan  optimal  pada  isolat B. cereus konsorsium dibandingkan dengan pertumbuhan optimal dari B. cereus SN7 Pertumbuhan  bakteri B.  cereus SN7  dan konsorsium  pada  setiap  media  perlakuan memiliki  pola  pertumbuhan  yang  hampir  sama di  awal  yaitu  mengalami  fase  eksponensial pada  6  sampai  12  jam  waktu  inkubasi.  Waktu optimal pertumbuhan bakteri terletak pada fase stasioner dimana pembelahan  sel bakteri  sudah mendekati batasnya sesampai didapatkan kultur bakteri  yang  maksimal,  pada  peneltian  ini waktu  pertumbuhan  optimal  terletak  pada kisaran 12 sampai 24 jam

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  S.W.,  N.A.  Yanti  &  N.H.  Muhiddin.  (2019).  Pemanfaatan  Limbah  Cair  Sagu  untuk Memproduksi Selulosa Bakteri. Jurnal Biologi Indonesia . 15(1):  33-39.
Azhar, M. (2016). Biomolekul Sel Karbohidrat, Protein, dan Enzim . Padang: UNP Press Padang.
Effendi, I. 2020. Metode Identifikasi dan Klasifikasi Bakteri. Pekanbaru: Oceanum Press. 142 hlm Fitria,  A.N., & E. Zulaika. (2018). Aklimatisasi pH dan Pola Pertumbuhan Bacillus cereus S1 pada Medium MSM Modifikasi. Jurnal Sains dan Seni ITS . 7(2): E39-E41.
Hindersah, R., A.M. Kalay, A. Jacob & A. Talahaturuson. (2014). Limbah Sagu: Potensi Lokal untuk Media Pupuk Hayati. Jurnal Agroekotek . 6 (1) : 12 – 24.
Inuhan, B., S. Arreneuz & M.A. Wibowo. (2016). Optimasi Produksi Protein Sel Tunggal (PST) dari Bakteri  yang  Terdapat  pada  Gastrointestinal  (GI)  Ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus )  dan  Ikan Kembung ( Scomber canagorta ). Jurnal Kajian Komunikasi. 5(1): 24 – 28.
Lizayana., Mudatsir &  Iswadi. (2016). Densitas Bakteri pada  Limbah Cair Pasar Tradisional. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Pendidikan Biologi . 1(1): 95-106.
Nainggolan,  A.H.  (2019).  Uji  Metabolit  Bakteri  Heterotrofik  dari  Muara  Sungai  Siak  Terhadap Bakteri Patogen. Skripsi . Pekanbaru. Fakultas Perikanan dan Kelatuan Universitas Riau.
Purwaningtyas,  Y.R.  (2019).  Produksi  Protein  Sel  Tunggal Gluconacetobacter  xylinus dengan Medium Limbah Cair Tempe Menggunakan Metode Air - Lift Bioreactor. Skripsi. Yogyakarta. Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Sanata Dharma. 110 hlm.
Rizal,  B.,  A.  Hintono  &  Nurwantoro.  (2012).  Pertumbuhan  Mikroba  pada  Telur  Pasca  Pasteurisasi. Animal Agriculture Journal . 1(2): 208 – 218.
Septiani,  W.D.,  A.  Slamet  &  J.  Hermana.  (2014).  Pengaruh  Konsentrasi  Substrat  terhadap  Laju Pertumbuhan Alga dan Bakteri Heterotropik. Jurnal Teknik POMITS . 3(2): 98 – 103.
Siregar,  I.A.  (2019).  Efektifitas  Penggunaan  Bakteri  Heterotrofik  terhadap  Pertumbuhan  Ikan  Nila Merah  ( Oreochromis  niloticus ). Skripsi .  Pekanbaru.  Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan Universitas Riau. 80 hlm
Supriatna,  I.,  I.B.  Hismayasari,  I.G.A.  Bidiadnyani,  M.  Sayuti  &  A.  Yani.  (2016).  Analisis Karakteristik Bakteri Probiotik. Jurnal Airaha . 5(2) : 130-132.
Wulandari,  Z.,  E.  Taufik  &  M.  Syarif.  (2017).  Kajian  Kualitas  Produk  Susu  Pasteurisasi  Hasil Penerapan Rantai Pendingin. Jurnal Ilmu Produksi dan Teknologi Hasil Peternakan . 5(3): 94- 100.
Yeni.,  A.  Meryandini  &  T.C.  Sunarti.  (2016).  Penggunaan  Substrat  Whey  Tahu  untuk  Produksi Biomassa oleh Pediococcus Pentosaceus E.1222. Jurnal Teknologi Industri Pertanian . 26 (3): 284-293
Yoswati, D. & I. Effendi. 2020. Bioteknologi Kelautan. Pekanbaru: Oceanum Press. 92 hlm