Vol. 08 No. 3, Desember 2017, Hal 170-176 ISSN: 2086-8227

## KEEFEKTIFAN KITOSAN DALAM MENGENDALIKAN
Botryodiplodia theobromae Pat. PENYEBAB MATI PUCUK PADA BIBIT JABON ( Anthocephalus cadamba (Roxb.) Miq)
Chitosan’s Effectiveness in Controlling Dieback by Botryodiplodia theobromae Pat on Jabon Seeding (Anthocephalus cadamba (Roxb. Miq)
Desi Nurafida 1 , Achmad 2 , dan Syamsul Falah 3
1) Program Studi Silvikultur Tropika, Sekolah Pascasarjana IPB,
2) Departeman Silvikultur, Fakultas Kekutanan IPB,
3) Departemen Biokimia, Fakultas MIPA IPB.

## ABSTRACT
Dieback disease by the fungus Botryodiplodia theobromae in Jabon seedlings ( Anthocephalus cadamba ) inhibits the regeneration of Jabon plant. Synthetic fungicides utilization to several problems such as residue on the environment and pathogen  resistance.  Chitosan  is  a  potential  natural  compound  used  as  an  alternative  to  control  plant  disease.This research  aims  to  examine  the  effectiveness  of  chitosan  to  control B.  theobromae as  causal  agent  of  dieback  on  Jabon seedlings and to examine the effect of chitosan to control the viscosity of dieback disease on Jabon seedlings. The results showed that the chitosan solution can decrease the severity of disease in Jabon seedlings. However, it was different with the  disease  incidence  rate  parameter.  Chitosan  solution  was  not  significantly  affecting  the  disease  because B. theobromae caused  dieback  symptoms  on  Jabon  seedlings.    The  most  effective  treatment  was  chitosan  solution  with  a concentration  of    0.1%  before  inoculation  with  the  severity  of  the  disease  by  25%.  Chitosan  solution  viscosity  was responsible in affecting the percentage of dieback disease in Jabon seeds. The higher the viscosity of chitosan, the higher the  percentage  of dieback  disease  attacks.  The  best  viscosity  to  suppress  the development  of dieback  disease  on  Jabon seedlings was 8.80 with 7.90% attack.
Key words: Anthocephalus cadamba , Botryodiplodia theobromae , chitosan, dieback.

## PENDAHULUAN
Jabon  merupakan  jenis  pohon  cepat  tumbuh  yang berpotensi  untuk  dikembangkan  dalam  pembangunan hutan tanaman, hutan rakyat, maupun tujuan lain.  Pada masa yang akan datang Jabon memiliki peranan penting ketika  terjadi  penurunan  pasokan  kayu  industri  dari hutan  alam  (Pratiwi  2003).  Tanaman  ini  dapat digunakan  sebagai  bahan  pembuatan  peti,  papan  tipis, korek  api,  pensil,  kayu  lapis,  serta  pulp  dan  kertas (Wahyudi  2012).  Oleh  sebab  itu,  seiring  penanaman Jabon  secara  masal,  gangguan  penyakit  di  area pembibitan  menjadi  salah  satu  potensi  kendala  dalam usaha  pembibitan  tanaman  Jabon.  Kondisi  bibit  yang masih  sekulen  menjadikan  tanaman  rentan  terhadap gangguan  penyakit  sehingga  bibit  Jabon  di  persemaian berpotensi  menjadi  inang  bagi  patogen  (Aisah et  al . 2015).  Penyakit yang banyak menyerang bibit Jabon di persemaian  yaitu  mati  pucuk  yang  disebabkan  oleh cendawan Botryodiplodia sp. (Aisah 2014). Menurut  Anggraeni et  al .  (2011), Botryodiplodia sp.  dapat  menyerang  tanaman  kehutanan  di  Indonesia yang  menyebabkan  bercak  daun  pada  pulai,  merbau, bakau  dan  makaranga.  Selain  itu  menyebabkan  busuk akar  pada  meranti  dan  penyakit  batang  pada  gaharu. Aisah  (2014)  melaporkan  bahwa  kejadian  penyakit  dan keparahan  penyakit  pada  bibit  Jabon  mencapai  100%. Selain  itu,  Yanti et  al .  (2015)  juga  telah  melaporkan
bahwa kejadian penyakit pada bibit jabon putih dengan perlakuan  pelukaan  mencapai  100%  dengan  tingkat keparahan hingga 62%.
Pengendalian  terhadap  serangan Botryodiplodia sp. pada  tanaman  Jabon  penting  dilakukan  untuk  menekan kerugian produksi bibit maupun penurunan produktivitas  pohon.    Pengendalian  yang  sering dilakukan  yaitu  menggunakan  fungisida  sintetik berbahan  aktif  bahan  kimia  sepeti  mancozeb  atau  yang lainnya  akan  memberikan  dampak  terhadap  lingkungan serta  menimbulkan  residu  (Sugipriatini  2009).  Adanya residu fungisida pada lingkungan terutama di dalam air yang melebihi ambang batas keamanan untuk air minum dapat membahayakan kehidupan manusia maupun biota air. Penggunaan fungisida sintetik secara berlebih dapat menyebabkan  patogen  lebih  resisten  dan  beresiko terhadap  kesehatan  manusia  (Lauzardo et  al .  2008), sehingga  pengendalian Botryodiplodia sp.  secara  alami sangat  dibutuhkan  untuk  mengurangi  kerusakan lingkungan akibat penggunaan fungisida.  Pengendalian hayati  menjadi  alternatif  yang  lebih  aman  terhadap manusia  dan  juga  lingkungan  (Sharma et  al. 2009). Salah  satu  bahan  alam  yang  berpotensi  untuk mengendalikan  penyakit  tanaman  adalah  kitosan.  Hasri (2010)  dan  Trisnawati  (2013)  telah  meloporkan  bahwa kitosan  memiliki  sifat  biologi  dan  mekanik  yang  tinggi diantaranya biorenewable , biodegradable , dan biofungsional sehingga aman untuk lingkungan.
Kitosan  adalah  poli–(2-amino-2-deoksi-β-(1-4)-D- glukopiranosa)  dengan  rumus  molekul  (C 6 H 11 NO 4 ) n (Sugita et  al .  2009).    Kitosan  memperoleh  banyak perhatian  di  bidang  pertanian  karena  bentuk  dan sifatnya  yang  khas  dalam  menghambat  pertumbuhan banyak  cendawan  patogen  dan  kemampuannya  sebagai ketahanan  tanaman  (El  Gaouth et  al. 1992).    Beberapa hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pelapisan  kitosan pada  buah  apel,  kiwi,  pir,  stroberi,  dan raspberry juga efektif  mengendalikan  busuk  pascapanen  pada  saat penyimpanan  (Banos et  al .  2004).  Meng et  al. (2010) telah  melaporkan  bahwa  kitosan  efektif  dalam mengendalikan Alternaria kikuchiana dan Physalospora piricola penyebab  kerusakan  pascapanen  buah  pir  pada konsentrasi 0.1%.
Penelitian kitosan dengan konsentrasi 0.1 juga efektif sebagai antifungi Aspergilus niger (Li et  al .  2008).    Anirban  (2013)  melaporkan bahwa  kitosan  efektif  dalam  mengendalikan  persen perkecambahan spora Fusarium solani dengan konsentrasi  0.2%.  Selain  itu,  penyakit  busuk  buah kakao,  kerdil  hampa  pada  padi,  busuk  akar Fusarium pada tomat, Alfalfa Mosaic Virus , Potato Spindle Tuber Viroid pada  daun  tomat,  dan  antraknosa  buah  pepaya juga  dapat  dikendalikan  dengan  kitosan  (Nawar  2005). Liu et al. (2006) juga telah menunjukkan bahwa kitosan dapat  menghambat  perkecambahan  spora  cendawan patogen  penyebab  kapang  biru  pada  buah  tomat, Penicillium  expansum dan Botrytis  cinerea secara signifikan. Aplikasi penggunaan kitosan pada komoditas kehutanan  terutama  Jabon  belum  banyak  dilaporkan, maka  perlu  dilakukan  studi  lebih  lanjut  mengenai keefektifaannya  serta  aplikasi  penggunaannya.    Oleh karena itu, dalam penelitian ini dilakukan uji keefektifan kitosan  dalam  mengendalikan  mati  pucuk  pada  bibit Jabon.

## BAHAN DAN METODE

## Alat dan Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  meliputi: isolat Botryodiplodia  theobromae yang  diperoleh  dari Laboratorium  Patologi  Hutan  Fakultas  Kehutanan  IPB, larutan  kitosan  yang  diperoleh  dari  Departemen Teknologi  Hasil  Perikanan  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan  IPB,  bibit  Jabon  putih  umur  4  bulan,  media potato dextrose agar (PDA), aquades, kapas, aluminium foil .  Peralatan  digunakan  dalam  penelitian  meliputi: autoclave ,  kabinet Laminar  Air  Flow , corebore , mikroskop,  jarum  suntik,  termometer, object  glass , kompor, panci, gelas ukur 1000 mL, gelas ukur 10 mL, spatula,  cawan  petri,  labu  erlenmeyer, sprayer ,  pipet tetes,  timbangan  analitik, Viskometer  Brookfield , hidrometer.

## Prosedur Penelitian

## Penyiapan Larutan Kitosan
Kitosan  cangkang  udang  dalam  bentuk  serbuk diperoleh  dari  Departemen  Teknologi  Hasil  Perikanan, Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan  IPB.    Larutan  kitosan 1% diperoleh dengan melarutkan 1 gram serbuk kitosan
dalam 20 mL asam asetat 1.5%, kemudian ditambahkan aquades  hingga  mencapai  volume  100  mL  (Pranomo 2012).

## Uji Viskositas Kitosan dan Penentuan Bobot Molekul
Uji  viskositas  relatif  (η r )  kitosan  dilakukan  di Laboratorium PT. Saraswanti Indo Genetech.  Sebanyak 500  mL  larutan  kitosan  dimasukkan  ke  dalam  gelas piala  500  mL. Spindle pada Viskometer  Brookfield dicelupkan  pada  larutan  kitosan  yang  telah  disiapkan, kemudian  nilai  kekentalan  diamati  pada  layar  monitor setelah  menunjukkan  angka  yang  stabil  ( Manual  book Viskometer  Brookfield PT.  Saraswanti  Indo  Genetech). Pengukuran  juga  dilakukan  untuk  beberapa  konsentrasi kitosan  lainnya  dengan  dua  kali  ulangan.  Nilai  yang diperoleh  dalam  pengukuran  merupakan  viskositas relatif  (η r )  kemudian  di  konversi  menjadi  viskositas spesifik (η sp ) dapat dilihat pada Tabel 2. Bobot molekul kitosan  dihitung  dengan  menggunakan  rumus    Mark- Houwink (Yuliana 2011):
η  = KM α
Ket: η = Viskositas intrinsik K = 1.64 x 10 -30 x DD 14
α
= (-1.02x10 -2) X DD + 1.82 M
= Bobot molekul

## Penyiapan Patogen dan Uji Virulensi
Isolat B. theobromae patogen mati pucuk pada bibit Jabon  diperoleh  dari  Laboratorium  Patologi  Hutan Fakultas  Kehutanan  IPB.  Perbanyakan  isolat  dilakukan dengan  menggunakan  media  PDA.    Sebelum  isolat digunakan  pada  uji  efektifitas  kitosan,  terlebih  dahulu dilakukan  uji  virulensi  patogen  pada  bibit  Jabon berumur  4  bulan  dengan  metode  inokulasi  blok  agar tempel  mengacu  pada  Ismail  (2012) dalam Aisah (2014).  Isolat B. theobromae sebagai sumber inokulum diperoleh  dengan  cara  memotong  bagian  ujung  koloni isolat  cendawan  umur  7  hari  dengan cork  borer (Ø  6 mm).  Setelah  itu,  potongan  agar  ditempel  pada  batang tanaman  bibit  Jabon  yang  telah  dilukai  dengan  jarum suntik.  Potongan  blok  agar  yang  ditempel  pada  bagian batang  bibit  tersebut  selanjutnya  ditutup  dengan  kapas lembab  dan  alumunium  foil.  Gejala  penyakit  diamati selama 14 hari setelah inokulasi.

## Reisolasi
Isolasi  cendawan  dari  jaringan  tanaman  dilakukan berdasarkan  metode  Akrofi  dan  Amoah  (2009) dalam Aisah  (2014)  dengan  modifikasi  pada  penggunaan bahan  disinfektan  untuk  sterilisasi  permukaan  jaringan tanaman. Langkah pertama, jaringan yang memperlihatkan  gejala  sakit  dipotong.  Potongan jaringan  kemudian  disterilisasi  permukaan  dengan  cara direndam  dalam  larutan  alkohol  70%  selama  1  menit, lalu dicuci dengan air steril sebanyak 3 kali,  selanjutnya dikeringkan  di  atas  kertas  saring  steril  yang  ada  di dalam  cawan  petri.    Jaringan  tanaman  sakit  tersebut kemudian  dipotong  pada  bagian  antara  yang  sehat  dan sakit,  lalu  dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  berisi media PDA ( Potato Dextrose Agar ). Potongan jaringan
tanaman  pada  media  PDA  selanjutnya  diinkubasi selama  7  hari.    Koloni  miselium  yang  tumbuh  dari potongan  jaringan  yang  diisolasi  kemudian  dimurnikan dan  diperbanyak  pada  media  PDA.  Isolat  cendawan yang  diperoleh  selanjutnya  digunakan  sebagai  bahan untuk identifikasi dan sumber inokulum.
Uji Efektivitas Kitosan In-vivo
Uji  efektifitas  kitosan  dilakukan  dengan  cara menyemprotkan  masing-masing  konsentrasi  kitosan pada  bibit  Jabon  satu  hari  sebelum  inokulasi  dan  satu hari  setelah  inokulasi.  Inokulasi  dilakukan  dengan menggunakan metode penempelan blog agar berdasarkan  Yanti (2015)  dengan  modifikasi.    Isolat B. theobromae yang  digunakan  berumur  7  hari.  Batang Jabon  sehat  dilukai  dengan  jarum  suntik  steril, kemudian  isolat B. theobromae pada  media  tumbuh PDA  (diambil  menggunakan corebore berdiameter  6 mm)  ditempelkan  pada  batang  yang  telah  dilukai  dan dilapisi dengan kapas lembab. Potongan agar mengandung  patogen  yang  digunakan  adalah  kultur berumur 7 hari. Kemudian batang ditutup menggunakan alumunium foil untuk menjamin potongan patogen tidak terlepas selama 14 hari pengamatan. Kelembaban kapas dijaga dengan memberikan beberapa tetes aquades steril setiap  hari.  Tanaman  kontrol  diinokulasi  dengan  blok agar  tanpa  isolat.  Parameter  yang  diamati  adalah kejadian  dan  keparahan  penyakit  yang  disebabkan  oleh B.  theobromae pada  bibit,  serta  temperatur  dan kelembaban udara dalam rumah kaca.
Kejadian  penyakit  (KjP)  pada  bibit  Jabon  dihitung menggunakan rumus sebagai berikut (Rahma 2013) :
KjP = a x 100%
N Ket: a   = Jumlah tanaman yang bergejala N  = Jumlah tanaman yang diamati
Keparahan  penyakit  (KpP)  diukur  menggunakan rumus  Toensend  dan  Hoeberger dalam Rahma 2013 sebagai berikut :
KpP = ∑(ni x vi) x 100%
Z x N Ket: ni  =  Jumlah  tanaman  yang  terinfeksi  dalam  setiap kategori
vi  = Nilai numerik masing-masing kategori N  = Jumlah seluruh tanaman yang diamati Z  = Nilai numerik kategori serangan tertinggi
Nilai  numerik  dan  keparahan  penyakit  yang digunakan  pada  penelitian  ini  disajikan  pada  Tabel  1 dan Gambar 5.
Tabel 1  Nilai  numerik  dan  keparahan  penyakit  mati pucuk pada bibit Jabon Nilai Numerik Keterangan Keparahan Penyakit 0 Sehat (tidak ada gejala infeksi) 1 ≤ 25% bagian tanaman mengalami nekrosis
2 25.1-50% bagian tanaman mengalami nekrosis
3 > 50% bagian tanaman mengalami nekrosis
4 Tanaman mati Sumber: Aisah (2014)
Pengukuran  temperatur  dan  kelembaban  dilakukan pada pagi (pukul 06.00-07.00 WIB), siang (pukul 12.00-
13.00 WIB), dan malam (18.00-19.00 WIB). Pengukuran    temperatur  dan  kelembaban  udara bertujuan  untuk  mengontrol  lingkungan  agar  tanaman Jabon tetap tumbuh pada kondisi optimumnya.

## Analisis Data
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  dua  faktor dalam rancangan acak lengkap (Faktorial RAL) dengan 5 ulangan. Faktor pertama adalah waktu penyemprotan, yang terdiri atas dua taraf yaitu, sebelum inokulasi (T0) dan  setelah  inokulasi  (T1).  Faktor  kedua  adalah konsentrasi  larutan  kitosan  yang  terdiri  atas  enam  taraf 0.0%  (K00),  0.1%  (K01),  0.3%  (K03),  0.5%  (K05), 0.8%,  dan  1.0%  (K10).  Semua  data  hasil  uji  efektifitas larutan  kitosan  dianalisis  dengan  selang  kepercayaan 95%  menggunakan software SAS  9.3.1.    Apabila  hasil analisis menunjukkan pengaruh nyata, maka dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Viskositas dan Bobot Molekul
Hasil pengukuran viskositas larutan kitosan menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi larutan kitosan  maka  nilai  viskositasnya  pun  meningkat  (Tabel 2). Hal ini berarti konsentrasi larutan kitosan berbanding lurus dengan viskositasnya, sehingga konsentrasi larutan kitosan  rendah  lebih  encer  dan  mudah  bergerak, sedangkan  konsentrasi  larutan  kitosan  tinggi  lebih kental dan sulit bergerak.
Viskositas  suatu  fluida  merupakan  daya  hambat yang  disebabkan  oleh  gesekan  antara  molekul-molekul cairan,  yang  mampu  menahan  aliran  fluida  sehingga dapat dinyatakan sebagai indikator tingkat kekentalannya  (Warsito et  al .    2010).    Semakin  besar nilai  viskositas  suatu  fluida  maka  semakin  sulit  fluida tersebut  untuk  mengalir  dan  bergerak.    Nilai  viskositas dipengaruhi  oleh  konsentrasi  larutan  (Yulina  2011), sehingga  secara  bersama  viskositas  dan  konsentrasi larutan berpengaruh terhadap daya hambat pertumbuhan penyakit mati pucuk pada bibit Jabon.
Hasil  perhitungan  bobot  molekul  kitosan  yang digunakan  dalam  penelian  ini  sebesar  20.6  kDa  (Tabel 2). Goy  et  al .  (2009)  telah  mengklasifikasikan  kitosan berdasarkan  bobot  molekul  dibedakan  menjadi  3, meliputi kitosan dengan BM rendah yaitu ˂50 kDa, BM sedang  50-150  kDa,  dan  BM  tinggi  yaitu  ˂150  kDa. Berdasarkan  klasifikasi  tersebut  maka  kitosan  yang digunakan  termasak  ke  dalam  kitosan  dengan  BM rendah,  sehingga  diharapkan  dapat  berpengaruh  baik dalam menghambat pertumbuhan B. theobromae . Younes (2014) melaporkan tidak ada kecenderungan secara  umum  bahwa  aktivitas  antifungi  kitosan berhubungan  dengan  peningkatan  atau  penurunan  BM, tetapi  tergantung  jenis  fungi  tertentu.  Namun,  sebagian besar  penelitian  yang  telah  dilakukan  menyimpulkan bahwa  kitosan  dengan  BM  rendah  lebih  efektif  dalam menghambat  pertumbuhan  fungi  maupun  bakteri.  BM kitosan  berpengaruh  terhadap  ukuran  molekul  kitosan,
oleh  karena  itu  kitosan  dengan  BM  rendah  memiliki ukuran  molekul  yang  lebih  kecil.  Hal  ini  berpengaruh terhadap  kemampuan  kitosan  BM  rendah  dalam menembus  rongga  dinding  sel  sehingga  dapat menghambat metabolisme sel jamur, sedangkan kitosan dengan  BM  tinggi  tidak  dapat  menembus  rongga dinding  sel,  akibatnya  kitosan  BM  tinggi  hanya  dapat berinteraksi dengan  dinding sel jamur (Li et al . 2008).
Tabel 2  Viskositas larutan kitosan dan bobot molekul Konsentrasi (%) η r (cP) η sp BM (kDa) 0.00 2.82 1.82 20.6 0.10 4.80 3.80 0.30 6.48 5.48 0.50 9.06 8.06 0.80 13.26 12.26 1.00 15.30 14.30
Uji  Efektifitas  Kitosan  terhadap  Pengendalian  Mati Pucuk Bibit Jabon oleh Cendawan B . theobromae Semua bibit Jabon yang diinokulasikan B.  theobromae menunjukkan  gejala  mati  pucuk, sehingga dapat dikatakan tingkat kejadian penyakit pada bibit  Jabon  sebesar  100%.  Hasil  tersebut  menunjukkan pemberian  larutan  kitosan  tidak  berpengaruh  nyata dalam  mengurangi  tingkat  kejadian  penyakit.  Akan tetapi, pemberian larutan kitosan mempengaruhi  tingkat keparahan penyakit (Tabel 3).
Tabel  3  Pengaruh  konsentrasi  larutan  kitosan  terhadap keparahan penyakit pada bibit jabon Konsentrasi (%) η sp KpP (%) 0.00 1.82 75.20 a 0.10 3.80 7.90 c 0.30 5.48 23.70 c 0.50 8.06 29.10 bc 0.80 12.26 51.00 ab 1.00 14.30 57.30 a
Konsentrasi  larutan  kitosan  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu 0.00, 0.10, 0.30, 0.50, 0.80, dan 1.00 %  dengan  masing-masing  keparahan  penyakit  mati pucuk  pada  bibit  Jabon  sebesar  75.20,  7.90,  23.70, 29.10, 51.00, dan 57.30%. Kitosan mampu menghambat perkembangan mati pucuk bibit Jabon secara nyata pada konsentrasi  0.10%  dengan  tingkat  keparahan  7.90%. Perlakuan  yang  paling  efektif  yaitu  pemberian  larutan kitosan  konsentrasi  0.1%  sebelum  dilakukan  inokulasi dengan  tingkat  keparahan  penyakit  sebesar  25%, sedangkan  bibit  Jabon  tanpa  penyemprotan  larutan kitosan  memiliki  tingkat  keparahan  penyakit  hingga 80% (Tabel 5). Hal ini diduga terkait dengan viskositas larutan  kitosan.  Tingginya  konsentrasi  larutan  kitosan menyebabkan  tingkat  kekentalan  larutan  yang  tinggi sehingga kemampuan mengalirnya lebih rendah.
Tabel 4 Pengaruh  waktu  penyemprotan  terhadap keparahan  penyakit  mati  pucuk  pada  bibit Jabon Waktu Penyemprotan KpP (%) Sebelum inokulasi 31.10 a Setelah inokulasi 50.30 b
Waktu  penyemprotan  dilakukan  satu  hari  sebelum dan  setelah  inokulasi.  Berdasarkan  hasil  pengamatan, waktu  efektif  penyemprotan  larutan  kitosan  dilakukan sebelum  inokulasi.  Bibit  Jabon  dengan  penyemprotan kitosan  sebelum  inokulasi  mengalami  keparahan penyakit  mati  pucuk  sebesar  31.10%,  sedangkan  bibit Jabon  dengan  penyemprotan  kitosan  setelah  inokulasi mengalami keparahan penyakit sebesar 50.30% (Tabel  4).  Dengan  demikian  waktu  penyemprotan larutan  kitosan  sebelum  inokulasi  lebih  baik  dalam menghambat  perkembangan  penyakit  mati  pucuk  pada bibit Jabon dibandingkan dengan penyemprotan larutan kitosan  setelah  inokulasi.    Hal  ini  sesuai  dengan  hasil penelitian  Simanjuntak  (2012)  mengenai  pengaruh kitosan  terhadap  penyakit  kerdil  hampa  pada  tanaman padi  yaitu  efektif  pada  perlakuan  penyemprotan sebelum  inokulasi  mampu  menghambat  keparahan penyakit hingga 40.74%.
Tabel 5  Kejadian dan keparahan penyakit Perlakuan KjP (%) KpP (%) T0K00 100 80 a T0K01 100 25 e T0K03 100 25 e T0K05 100 40 de T0K08 100 50 cde T0K10 100 60 abcd T1K00 100 80 a T1K01 100 30 de T1K03 100 55 abcd T1K05 100 45 bcde T1K08 100 70 abc T1K10 100 75 abc
Perlakuan  yang  paling  efektif  yaitu  pemberian larutan  kitosan  konsentrasi  0.1%  sebelum  dilakukan inokulasi  dengan  tingkat  keparahan  penyakit  sebesar 25%, sedangkan bibit Jabon tanpa penyemprotan larutan kitosan  memiliki  tingkat  keparahan  penyakit  hingga 80% (Tabel 5). Beberapa penelitian dengan konsentrasi lebih rendah menunjukkan bahwa semakin meningkatnya  konsentrasi  larutan  maka  daya  hambat terhadap  pertumbuhan  penyakit  semakin  besar  pula (Hamdayanty  2012),  namun  dalam  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  peningkatan  konsentrasi  tidak selalu meningkatkan daya hambat terhadap perkembangan  patogen.  Megasari et  al .  (2013) melakukan  penelitian  mengenai  pengaruh  kitosan terhadap  penularan Bean  common  mosaic  virus pada kacang  panjang  dengan  konsentrasi  paling  efektif  0.3 dan  0.5%,  sedangkan  pada  konsentrasi  lebih  tinggi mengalami  penurunan  aktivitas  antimikroba.  Hal  ini diduga  terkait  dengan  viskositas  larutan  kitosan. Tingginya  konsentrasi  larutan  kitosan  menyebabkan tingkat  kekentalan  larutan  yang  tinggi  sehingga kemampuan  mengalirnya  lebih  rendah.  Nurainy et  al . (2008)  menyatakan  bahwa  kosentrasi  larutan  kitosan yang rendah lebih mudah berdifusi pada media agar.
Gambar  1  Keparahan  penyakit  pada  bibit  Jabon.  (a)T0K00,  (B)T0K01,  (C)T0K03,  (D)T0K05,  (E)T0K08, (F)T0K10, (G)T1K00, (H)TIK01 , (I)TIK03 , (J)TIK05 , (K)TIK08, (L)TIK10
Hingga  saat  ini,  ada  tiga  kemungkinan  mekanisme kitosan  sebagai  antifungi.  Pertama,  interaksi  kitosan dengan  muatan  negatif  fosfolipid  membran  sel  yang mengakibatkan  peningkatan  permeabilitas  sel  dan menyebabkan  kebocoran  isi  sel  (Chatterje et  al .  2014). Kitosan  memiliki  gugus  fungsional  amina  (-NH 2 ) bermuatan positif  yang sangat reaktif, sehingga  mampu berikatan  dengan  dinding  sel  yang  bermuatan  negatif. Kedua,  kitosan  berperan  dalam  mengikat  elemen tertentu sehingga beberapa nutrisi penting tidak tersedia dan  pertumbuhannya  menjadi  tidak  normal.    Gugus (–NH 2 )  juga  memiliki  pasangan  elekton  bebas,  maka gugus  ini  dapat  menarik  mineral  CA 2+ yang  terdapat pada  dinding  sel  dengan  membentuk  ikatan  kovalen koordinasi (Killay 2013, Trisnawati et al . 2013). Ketiga, penetrasi  kitosan  ke  dalam  dinding  sel  dan  berinteraksi dengan  DNA  sehingga  berpengaruh  terhadap  produksi protein dan enzim penting (Younes 2014).

## Temperatur dan Kelembaban
Perkembangan  penyakit  didukung  oleh  tiga  faktor, yaitu  inang  yang  rentan,  patogen  yang  virulen,  dan lingkungan  yang  mendukung.  Kondisi  lingkungan merupakan bagian penting bagi perkembangan penyakit, seperti  temperatur  dan  kelembaban.  Hasil  rata-rata pengukuran temperatur pada penelitian ini yaitu 25.6 0 C pada  pagi  hari,  31.1 0 C  pada  siang  hari,  dan  26.4 0 C pada malam hari (Tabel 6). Rataan kelembaban berkisar 91.1% pada pagi  hari,  siang  78.7%, dan  malam  86.9%. Temperatur  tersebut  merupakan  temperatur  optimum bagi  pertumbuhan B.  theobromae sehingga  luas serangan  mati pucuk pada bibit Jabon mencapai 100 % dan cukup parah. Hal ini sesuai dengan  hasil penelitian Kausar et  al. (2009)  menyatakan  bahwa,  25  ±  2  °C merupakan temperatur optimum pertumbuhan miselium Lasiodiplodia  theobromae dan F.  Solani. Selain  itu, Penelitian  Sato et al. (2008)  juga  menunjukkan bahwa L.  theobromae tumbuh  optimal  pada  temperatur  30  °C. Menurut  Martawijaya et  al. (1989),  bahwa  temperatur
maksimum  pertumbuhan  Jabon  berkisar  32-42  °C  dan temperatur minimum berkisar 3-15.5 °C. Selama 14 hari pengamatan,  kondisi  lingkungan  berada  pada  kisaran temperatur  optimum  dalam  mendukung  pertumbuhan bibit,  sehingga  gejala  yang  terjadi  merupakan  akibat serangan patogen, bukan faktor abiotik yang berasal dari temperatur atau kelembaban udara sekitar bibit.
Tabel 6  Temperatur dan kelembaban
Hari ke- Temperatur (°C) Kelembaban (%) Pagi Siang Malam Pagi Siang Malam 0 27 31 26 89 72 86 2 26 32 26 91 77 87 3 25 29 27 94 82 85 4 25 31 28 91 83 85 5 27 30 27 91 83 86 6 25 32 26 91 81 86 7 25 31 26 93 81 86 8 27 31 27 89 73 88 9 26 32 26 91 67 87 10 27 32 25 92 75 92 11 23 29 26 88 86 85 12 25 33 27 92 83 88 13 25 32 26 92 81 87 14 26 31 26 91 78 88 Rata-rata  25.6 31.1 26.4 91.1 78.7 86.9

## KESIMPULAN
Pemberian larutan kitosan dapat menekan keparahan penyakit mati pucuk yang disebabkan oleh cendawan B. theobromae pada  bibit  Jabon.  Konsentrasi  optimum larutan  kitosan  dalam  mengendalikan  penyakit  mati pucuk pada bibit Jabon yaitu 0.1%. Waktu penyemprotan  larutan kitosan  terbaik  dilakukan sebelum  inokulasi  patogen.  Interaksi  faktor  konsentrasi dan  waktu  penyemprotan  larutan  kitosan  tidak berpengaruh  nyata  terhadap  keparahan  penyakit  mati pucuk pada bibit Jabon.
Viskositas  larutan  kitosan  berpengaruh  dalam menekan perkembangan penyakit mati pucuk pada bibit Jabon.  Nilai  viskositas  lebih  rendah  memberikan  efek lebih  baik  dalam  menekan  keparahan  penyakit. Viskositas  larutan  kitosan  yang  efektif  dalam  menekan keparahan  penyakit  mati  pucuk  pada  bibit  Jabon  yaitu 3.80.

## DAFTAR PUSTAKA
Aisah  AR.    2014.    Identifikasi  dan  patogenitas cendawan penyebab primer penyakit  mati pucuk pada  bibit  jabon  ( Anthocephalus  cadamba (Roxb.)  Miq)  [tesis].    Bogor  (ID):  Institut Pertanian Bogor.
Aisah AR, Soekarno BPW, Achmad.  2015.  Isolasi dan identifikasi  cendawan  yang  berasosiasi  dengan penyakit mati pucuk pada bibit jabon ( Anthocephalus  cadamba (Roxb.)  Miq). Jurnal Penelitian Hutan Tanaman . 12(3): 153-163. Anggraeni  I,  Lelana  NI.  2011. Diagnosis  Penyakit Tanaman  Hutan .  Haneda  NF,  Rahayu  S,  editor. Bogor (ID): Pusat Litbang Peningkatan Produktivitas Hutan.
Anirban.    2013.    Fungicidal  potencial  of  chitosan against phytopathogenic Fusarium solani.
Journal of Experimental Biology and Sciences . Banos  SB,  Lauzardoa  ANH,  Vallea  MHL,  Barkab  EA,
Molinac  EB,  Wilsond  CL.  2004.  Chitosan  as  a potential  natural  compound  to  control  pre  and postharvest diseases
of horticultural commodities. Crop  Prot .  [Internet].  [diunduh 2012 Sept 14];25(2006):108-118. Tersedia pada: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/ S0261219405001110.
Chatterje S, Chatterje BP, Guha AK.  2014.  A study on antyfungal  activity  of  water  soluble  chitosan against Macrophomina  paseolina .  Internasional Journal  of  Biological  Macromolecules.    67:452- 457.  doi:10.1016/j.ijbimac.2004.04.008.
El  Gaouth  A,  Arul  J,  Asselin  A,  Benhamou  N.    1992. Antifungal  activity  of  chitosan  on  post-harvest pathogens:  induction  of  morphological  and cytological  alterations  in Rhizopus  stolonifer . Mycol  Res .  9:769–779.  doi:10.1016/S0953- 7562(09)80447-4.
Goy  RC,  Douglas  B,Odilio  BGA.    2009.    A  review antimicrobial  activity  of  chitosan .    J  Polymer 19:1-7.
Hamdayanty,  Yunita  R,  Amin  NN,  Damayanti  TA. 2012. Pemanfaatan kitosan
untuk mengendalikan antraknosa pada pepaya ( Colletrotichum gloeosporioides ) dan
meningkatkan  daya  simpan  buah. J  Fitopatol Indones . 8(4):97-102.
Hasri.  2010.  Prospek kitosan dan kitosan termodifikasi sebagai  biopolimer  alami  yang  menjanjikan.
Jurnal Chemica . 11(2):1-10.
Kausar  P,  Sobia  C,  Rashida  P.  2009.  Physiological studies  on Lasiodiplodia  theobromae and Fusarium  solani :  the  cause  of  Shesham  decline. Mycopath 7(1): 35-38.
Killay  A,  Nurpudji  A,  Suryani  A,  Meta  M.    2015.
Chitosan  as  antimicrobial  agent  and  fatty  acid absorber  in  smoked  skipjack  tuna  processed using  coconut  shell. American  Journal  of  Life Sciences . 3(2):93-99. doi: 10.11648/j.ajls.20150302.16. Lauzardo ANH, Banos SB, Valle MGV, Montealvo M, Rifera  MMS,  Perez  LAB.    2008.    Antifungal effects  of  chitosan  with  different  moleculas weight  on  in  vitro  development  of Rhizopus stolonifer . J  Carbohydrate  Polymers .  73:541- 547. doi:10.2016/j.carbpol.2007.12.020.
Li.    2008.    Effects  of  molecular  weight  and concentration  of  chitosan  on  antifungal  activity against Aspergilus  niger.    Iranian  Polymer Jornal .  17(11):843-852.
Liu J, Tian S, Meng X, Xu Y. 2006. Effects of chitosan on control of postharvest diseases and physiological responses of tomato fruit. Postharv Biol  Tech. [Internet].  [diunduh  2012  Sept 14];44(2007):300-306. Tersedia
pada:http://tianlab.ibcas.ac.cn/04fbwz/2007/liujia -2007-PBT.pdf.
Martawijaya  A,  Kartasujana  I,  Mandang  YI,  Prawira SA, Kadir K. 1989. Atlas Kayu Indonesia Jilid II . Bogor:  Pusat  Penelitian  dan  Pengembangan Hasil Hutan Bogor.
Megasari  D,  DamayantiTA,  Santoso  S.    2014. Pengendalian  Aphis  craccivora  Koch.  dengan kitosan  dan  pengaruhnya  terhadap  penularan Bean  common  mizaic  virus  starin  Black  eye cowpea  (BCMV-BIC)  pada  kacang  panjang. Jurnal Entomologi Indonesia. 11(2):72-80. Doi:10.5994/jei.11.2.72.
Meng  X,  Yang  L,  Kennedy  JF,  Tian  S.    2010.    Effects of chitosan and oligo chitosan on growth of two fungal pathogens and physiological properties in pear fruit. Elsevier . 81:70-
75.doi:10.1016/j.carbpol.2010.01.057.
Nurainy  F,  Rizal  S,  Yudiantoro.    2008.    Pengaruh konsentrasi kitosan terhadap aktivitas antibakteri dengan  metode  difusi  agar    (sumur). Jurnal Teknologi Industri dan Hasil Pertanian . 12(2):117-125.
Nawar  LS.  2005.  Chitosan  and  three Trichoderma spp. to control Fusarium crown and root rot of tomato in  Jeddah,  Kingdom  Saudi  Arabia. Egypt  J Phytopathol .  [Internet].  [diunduh  2012  Sept 14];33(2005):45-58. Tersedia pada: http://www.onasseef.kau.edu.sa/Files/195/Resear ches/5620026534.pdf.
Pratiwi.    2003.    Prospek  Pohon  Jabon  untuk
Pengembangan Hutan Tanaman. Buletin Penelitian dan Pengembangan Kehutanan 4(1):62-66.
Pranomo  E,  Prabowo  PSA,  Purnawan  C,  Wulansari  J. 2012.    Pembuatan  dan  karakterisasi  kitosan vanilin  sebagai  membran  polimer  elektrolit.
Jurnal Penelitian Kimia . 8(1):70-78.
Rahma  H.    2013.    Penyakit  layu  stewart  ( Pantoea stewartii  subsp.  Stewartii )  pada  jagung  dan upaya  pengendaliannya  [disertasi].    Bogor(ID): Institut Pertanian Bogor.
Sato  T,  Yumi  I,  Keisuke  T,  Satoshi  T,  Atsushi  O,
Kazaku  T.  2008.  Black  band  of  Jew’s  marrow caused  by Lasiodiplodia  theobromae . J  Gen Plant  Pathol 74:91-93.doi:10.1007/s10327-007- 0056-2.
Sharma  RR,  Dinesh  S,  Rajbir  S.  2009.  Biological control  of  postharvest  diseases  of  fruits  and vegetables  by  microbial  antagonists:  A  review. Biol  Contr. [Internet].  [diunduh  2012  Desember 17];50(2009): 205–221.
Tersedia pada:http://www.sciencedirect.com/science/articl e/pii/S10499644090012-36.
Sugipriatini D.  2009.  Potensi penggunaan  khamir dan kitosan untuk pengendalian busuk buah Lasiodiplodia  theobromae (Pat.)  Griffon  & Maubl.  (syn. Botryodiplodia  theobromae Pat.) pada  buah  mangga  selama  penyimpanan  [tesis]. Bogor(ID): Institut Pertanian Bogor.
Sugita  P,  Sjahtiza  TWA,  Wahyono  D.    2009. Kitosan Sumber  Biomaterial  Masa  Depan. Bogor(ID): IPB Press.
Trisnawati  E,  Andesti  D,  Saleh  A.    2013.    Pembuatan kitosan  dari  limbah  cangkang  kepiting  sebagai
bahan  pengawet  buah  dukudengan  variasi  lama pengawetan. Jurnal Teknik Kimia .  2(19):17-26. Wahyudi.    2012.    Analisis  pertumbuhan  dan  hasil tanaman jabon ( Anthocephalus cadamba ).
Yanti  LA.    2015.    Uji  resistensi  bibit  jabon  putih  dan merah  ( Anthocephalus spp.)  terhadap  serangan Botryodiplodia theobromae penyebab  penyakit mati pucuk [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Yanti LA, Achmad, Khumaida N.  2015.  Uji resistensi bibit  jabon  ( Anthocephalus spp.)  terhadap Botryodiplodia theobromae (Pat.) penyebab mati pucuk. J. Silvikultur Tropika.  6(2):83-92.
Younes I,  Sellimi S, Rinaudo M, Jellouli K, Moncef N.
2014.  Influence  of  acetilation  degree  and molecular  weight  of  homogenous  chitosans  on antibacterial and antifungal activities.
International Journal of Food Microbiology .  1- 30. doi:10.2016/j.jifoodmicro.2014.04.029.
Yuliana  IK.    2011.    Aktivitas  antibakteri  kitosan berdasarkan  perbedaan  derajat  deasetilasi  dan bobot  molekul  [tesis].    Bogor  (ID):  Institut Pertanian Bogor.