## UJI EFEKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL 70 %, EKSTRAK DAN
ISOLAT SENYAWA FLAVONOID DALAM UMBI BINAHONG ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)

## Putri Rizkia, Akyunul Jannah, Hafidatul Hasanah
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
Binahong  (Anredera    cordifolia  (Ten.)    Steenis)  tuber  is  known  to  have  potential  as  an  antioxidant. Allah says in Quran surah Asy Syu’ara verse 7, Taha verse 53 and Luqman verse 10 that Allah has created good plants which can be used by man. One of the utilizations is being a medicine. The  aims  of  this  research are determining the effectiveness of antioxidant in 70 % ethanol extract and extract flavonoid of Binahong tuber, and determining antioxidant effectiveness of isolated flavonoid fraction of binahong tuber.
Extraction of active compounds from binahong tuber was conducted by maceration method using 70 % ethanol.  Result  of  extraction  was  hydrolyzed  with  HCl  2  N  and  partitioned  to  obtain  the  flavonoid  compound. The flavonoid compound and 70 % ethanol extract of binahong tubers were tested their antioxidant effectiveness using  various  concentration  of  DPPH  (1,1-diphenyl-2-pikrilhidrazil).  Identification  classes  of  the  active compounds  were carried out using reagent test and qualitative observation. Flavonoid was separated using thin layer chromatography (TLC)  technique. The eluents  was n-butanol-acetic acid-water (4:1:5). Then the isolated flavonoid fraction was tested its antioxidant effectiveness.
The results showed that flavonoid has antioxidant effectiveness better than 70 % ethanol extract. EC 50 values  of  flavonoid  is  178,68  mg/L  and  70  %  ethanol  extract  is  298,10  mg/L.  Separation  with  TLC  resulted  4 isolate fractions and the highest antioxidant effectiveness was given by the third isolate that is 7,16 %.
Keywords : Binahong tubers ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis), antioxidants, flavonoids

## ABSTRAK
Tanaman  Binahong  (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis)  diketahui  memiliki  potensi  sebagai antioksidan.  Salah  satunya  bagian  umbi  tanaman  binahong.  Sebagaimana  firman  Allah  SWT  dalam  QS.  Asy Syu’Araa’; 7, QS. Thaha; 53 dan QS. Luqman; 10 bahwasannya Allah menciptakan tumbuhan baik yang dapat dimanfaatkan oleh manusia. Salah satu pemanfaatan umbi binahong adalah sebagai obat. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas antioksidan dalam ekstrak etanol 70 %, ekstrak dan isolat senyawa flavonoid umbi binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis.
Ekstraksi  senyawa  aktif  umbi  tanaman  binahong  dilakukan  dengan  metode  maserasi  menggunakan etanol  70  %.  Hasil  ekstraksi  dihidrolisis  dengan  HCl  2N  dan  dipartisi  untuk  mendapatkan  ekstrak  senyawa flavonoid.  Ekstrak  etanol  70  %  dan  ekstrak  senyawa  flavonoid  umbi  binahong  diuji  efektivitas  antioksidannya menggunakan  metode    DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)  dengan  variasi  konsentrasi.  Identifikasi  golongan senyawa aktif dilakukan dengan penambahan reagen dan diamati secara kualitatif. Ekstrak flavonoid dipisahkan dengan  metode  KLT  menggunakan  eluen  n-butanol-asam  asetat-air  (4:1:5)  selanjutnya  isolat  diuji  antioksidan kembali.
Hasil  penelitian    menunjukkan  bahwa  ekstrak  flavonoid  memiliki  efektivitas  antioksidan  lebih  baik daripada ekstrak etanol 70 %. Nilai EC 50 ekstrak flavonoid sebesar 178,60 mg/L dan ekstrak etanol 70 % umbi binahong sebesar 298,10 mg/L. Hasil pemisahan KLT Preparatif didapatkan empat isolat, efektivitas antioksidan fraksi aktif senyawa flavonoid tertinggi terdapat pada isolat ketiga sebesar 7,16 %.
Kata Kunci: Umbi Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis), antioksidan, flavonoid.

## I. PENDAHULUAN
Senyawa antioksidan memiliki peranan  penting  dalam  kesehatan  karena mampu  meredam  radikal  bebas.  Manusia memiliki  antioksidan  endogen  dalam tubuhnya  yang  mampu  meredam  radikal
bebas.  Ketika,  jumlah  molekul  radikal bebas  di  dalam  tubuh  lebih  banyak daripada  antioksidan  dapat  menyebabkan terjadinya  kerusakan  sel.  Antioksidan eksogen  dari  luar  tubuh  membantu meredam dampak negatif radikal bebas.
Antioksidan  sintetik  seperti  BHT (Butylated  ydroxytoluen),  BHA(Butilated Hydroxyanisole) dan TBHQ (Terbutylhydroxyquinone)
mempunyai aktifitas  biologis  meredam  radikal  bebas. Namun,  penggunaannya  dibatasi  karena BHA  dan  BHT  dapat  mengubah  stabilitas genomik  sel  (Tran,  2013).  Antioksidan alami  seperti  asam  askorbat,  tokoferol, karetonoid,  senyawa  fenol  dan  flavonoid menjadi  alternatif  pemenuhan  antioksidan yang aman (Nunes dkk., 2012).
Umbi binahong Anredera cordofolia  (Ten.)  Stennis  merupakan  salah satu antioksidan alami. Kandungan golongan  senyawa  aktif  umbi  tanaman binahong  terdiri  dari  fenol,  flavonoid, saponin,  terpenoid,  steroid  dan  alkaloid
(Astuti, 2013). Saleh dkk., (2013)
melakukan  pengujian  fitokimia  reagen dalam  ekstrak  etanol  umbi  binahong didapatkan  golongan  senyawa  flavonoid, steroid dan fenolik.
Flavonoid telah terbukti
memperlihatkan efektivitas penangkal berbagai  macam  senyawa  oksigen  reaktif seperti  anion  superoksida  dan  radikal hidroksil. Flavonoid juga bertindak sebagai peredam  singlet  oksigen  (Harbone  dan Williams, 1992).
Ekstraksi  senyawa  flavonoid  umbi binahong  menggunakan  metode  maserasi dengan  pelarut  etanol  70  %  (Makalalag, 2013).  Ekstrak  etanol  70  %  yang didapatkan selanjutnya
dihidrolisis menggunakan  HCl  2  N  (Tensiska  dkk., 2007) untuk  mendestruksi  ikatan glikosida (Bimakra dkk., 2010).
Proses  ekstraksi  senyawa flavonoid umbi  binahong  dilanjutkan  dengan  partisi menggunakan  pelarut  kloroform  dan  air dengan perbandingan 1:1 (Arishandy, 2010 dan  Inayah,  2011).  Pemisahan  senyawa flavonoid menggunakan kromatografi lapis tipis  (KLT)  merupakan  cara  sederhana untuk pemisahan senyawa flavonoid
berdasarkan perbedaan distribusi fasa diam dan  fasa  gerak  sehingga  akan  didapatkan isolat  senyawa  flavonoid  (Gandjar  dan Rohman, 2007) .
Pengujian  efektivitas  antioksidan dilakukan menggunakan metode peredaman radikal DPPH. DPPH
merupakan  radikal    bebas  yang  stabil, parameter yang digunakan untuk mengetahui  aktivitas  antioksidan  ialah EC 50 (konsentrasi  sampel  yang  dapat menyebabkan berkurangnya 50 % aktivitas DPPH)  (Molyneux,  2003).  Metode  DPPH dipilih karena sederhana, mudah, cepat dan peka  serta  hanya  memerlukan  sedikit sampel.  Berdasarkan  uraian  diatas,  perlu dilakukan  penelitian  untuk  mengetahui keefektivan  antioksidan  ekstrak  etanol  70 %,  ekstrak  dan  isolat  senyawa  flavonoid dalam umbi binahong.

## II. METODE PENELITIAN Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  diantaranya  umbi  binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis), aquades, DPPH (1,1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl), BHT (Butylated
hydroxytoluene)  p.a,  standar  vitamin  C, gas  N 2 ,  HCl  2  N,  etanol  70  %,  etanol  p.a, reagen Dragendroff,  reagen Mayer, reagen Lieberman  Burchard, metanol 50%, logam Mg,  HCl  2%,  HCl  pekat,  kloroform,  asam asetat  anhidrat,  larutan  FeCl 3 1%,  H 2 SO 4 , HCl  1  N,  uap  ammonia  dan  KLT  Gel  60 F 254 .

## Peralatan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  diantaranya  seperangkat  alat gelas,  ayakan  60  mesh,  blender,  oven, cawan  porselen,  desikator,  gelas  arloji, neraca  analitik,  shaker,  pipet  tetes,  lemari asam,  bola  hisap,  pisau,  kertas  saring, corong  buchner  vacuum,  inkubator,  rotary evaporator  vacuum,  corong  pisah,  hot plate, stirer, botol larutan, bejana pengembang,    plat  silika  gel  F 254, spektronik 20+ dan  spektrofotometer UV- Vis Varian Carry.
Cara kerja
1. Preparasi Sampel
Sampel  umbi  binahong  (Anredera cordifolia  (Tenn.)  Steenis)  sebanyak  2  Kg dicuci  dan  dikeringkan  dengan  oven  pada
suhu 40 O C (Astuti, 2013). Umbi binahong yang  kering  dilakukan  pemblenderan  dan dilakukan  pengayakan  dengan  ayakan  60 mesh.

## 2. Analisis Kadar Air
Umbi  binahong  yang  didapatkan dianalisis kadar airnya pda suhu  100-105º C  sampai  didapatkan  berat  yang  konstan. Serbuk umbi binahong (Anredera
cordifolia  (Ten.)  Steenis)  yang  digunakan dalam ekstraksi harus memiliki kadar air ≤
10 %. 3. Ekstraksi Umbi Binahong

## Menggunakan Etanol 70 %
Serbuk  Umbi  Binahong  ukuran  ≥ 60  mesh  ditimbang  600  gram  dan  dibagi menjadi 6 bagian masing-masing 100 gram kemudian masing-masing diekstraksi dengan menggunakan etanol 70 % (Bimakra  dkk.,  2010)  sebanyak  300  mL selanjutnya  dimaserasi  selama  3  hari, setiap  hari  digojok  menggunakan  shaker selama  3  jam.  Residu  dilakukan  maserasi kembali  sampai  didapatkan  filtrat  yang berwarna bening. Filtrat dipekatkan dengan vacuum  rotary  evaporator  pada  suhu  tidak lebih  dari  60 O C  sampai  diperoleh  ekstrak pekat. Selanjutnya  ekstrak pekat dialiri gas N 2 dan  ekstrak  pekat  yang  diperoleh dihitung rendemennya.
4. Ekstraksi Senyawa Flavonoid
Ekstrak pekat etanol 70 % sebanyak  10  gr  dihidrolisis  dengan menambahkan  20  ml  asam  klorida  (HCl) 2N  ke  dalam  ekstrak  pekat  selama  1  jam menggunakan  magnetic  stirrer  hot  plate pada  suhu  ruang  (Tensiska  dkk.,  2007). Selanjutnya  diekstraksi  cair-cair  dengan pelarut  air  :  kloroform  (1  :1)  sebanyak (3x35 mL) (Arishandy, 2010; Inayah, 2011 dan Markham, 1988). Fraksi air dan fraksi organik  yang  diperoleh  masing-masing dipisahkan  dan  dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator  dan  dihitung  nilai rendemennya.  Hasil  uji  fitokimia  reagen senyawa  flavonoid  yang positif dari kedua fraksi  dilakukan  pengujian  antioksidan menggunakan  DPPH,  uji  fitokimia  reagen dan diidentifikasi menggunakan KLT.
5. Pemisahan Senyawa Flavonoid
dengan KLTP
Pemisahan  dengan  KLT  preparatif menggunakan  plat  silica  Gel  60  F 254 Ekstrak  pekat  flavonoid  dilarutkan  dalam etanol  70  %.  Selanjutnya  dielusi  dengan menggunakan pelarut n-butanol-asam asetat-air (4:1:5) (Andrieyani dan Pradana, 2014).    Noda-noda  diperiksa  di  bawah sinar UV pada panjang gelombang 366 nm. Noda yang terbentuk, diukur harga Rf nya. Noda yang diperoleh dikerok dan dilarutkan dalam metanol kemudian disentrifugasi untuk mengendapkan silikanya.  Filtrat  hasil  sentrifuge  diuapkan pelarutnya  dengan  dimasukkan  dalam desikator vakum kemudian dihitung rendemennya dan diuji efektivitas antioksidan  dengan  konsentrasi  pada  EC 50 senyawa flavonoid.
6. Uji  Efektivitas  Antioksidan  Metode
DPPH Pengujian  efektivitas  antioksidan diawali dengan penentuan panjang gelombang  maksimum.  Larutan  DPPH dengan  konsentrasi  0,2  mM  sebanyak  1,5 mL  dan  ditambahkan  etanol  p.a  sebanyak 4,5 mL selanjutnya diukur absorbansinya.
Pengujian waktu kestabilan dilakkan  pada  larutan  ekstrak  800  ppm, sampel  diinkubasi  pada  suhu  37 O C. Larutan  dicari  waktu  kestabilan  pada rentangan  waktu  5-120  menit  dengan interval  5  menit  dan  diukur  pada  anjang gelombang maksimum yang didapatkan.
Pengujian  Efektivitas  Antioksidan pada  sampel  diawali  dengan  pengukuran absorbansi  kontrol  selanjutnya  sampel dilarutkan  dalam  etanol  70  %  dengan konsentrasi  5,  10,  25,  50,  100,  200,  400 dan  800  ppm  (Djamil  dkk.,  2012). Perbandingan larutan DPPH : ekstrak yang dilarutkan  dengan  konsentrasi  tertentu  1:3 selanjutnya  diinkubasi  dengan  suhu  37 O C pada waktu kestabilan dan diukur absorbansinya pada λ maks . Data
absorbansinya  yang  diperoleh  dari  tiap konsentrasi masing-masing ekstrak
dihitung  nilai  persen  (%)  efektivitas antioksidannya. Nilai tersebut
% Efektivitas Antioksidan = A 0 - A 1 A 0 ×100 %
Ket:  A 0 = Absorbansi kontrol A 1 = Absorbansi sampel
Setelah  didapatkan  persen  (%) efektivitas antioksidan, selanjutnya masing-masing  ekstrak dihitung nilai  EC 50 dengan  memperoleh  persamaan  regresi menggunakan  program  “GraphPad  prism5 software,  Regression  for  analyzing  dose- response  data”.  Pembanding  BHT  dan asam  askorbat  (Vitamin  C)  diperlakukan seperti  sampel  akan  tetapi  sampel  diganti dengan  larutan  BHT  dan  asam  askorbat (vitaminC).
7. Uji Fitokimia
Ekstrak  etanol  70  %  dan  ekstrak senyawa  flavonoid  diuji  fitokimia  dengan dilakukan  uji  alkaloid,  flavonoid,  tanin, saponin, dan terpenoid.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  preparasi  sampel  didapatkan serbuk  kering  umbi  tanaman  Binahong (Anredera cordifolia Ten. Steenis)
berwarna  coklat  muda  disimpan  dalam wadah  bersih,  kering  dan  terlindung  dari cahaya.
Hasil  analisis  kadar  air  umbi tanaman  binahong  (Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis) sebesar 5,38 %. Nilai kadar air  yang  diperoleh  kurang  dari  10  %,  hal ini  menunjukkan  bahwa  sampel  umbi tanaman  Binahong  (Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis)  dapat  disimpan  dalam jangka  waktu  panjang  dan  cukup  baik untuk dilakukan ekstraksi.
Ekstrak pekat umbi binahong 70 % berwarna  coklat  tua  dengan  rendemen sebesar  8,  62  %.  Ekstraksi  senyawa flavonoid  didapatkan  dua  fraksi  yaitu fraksi  organik  (kloroform)  dan  fraksi  air dengan  rendemen  42,58  %  dan  18,39  %. Kedua fraksi memiliki persentase rendemen  yang  cukup  tinggi.  Persentase rendemen  fraksi  kloroform  lebih  banyak daripada  fraksi  air.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  terdapat  banyak  senyawa  kurang polar  daripada  senyawa  polar  dalam
tanaman umbi binahong (Anredera cordifolia  (Tenn.)  Stenis).  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  fraksi  kloroform mengandung  senyawa  flavonoid.  Aglikon flavonoid  hasil  hidrolisis  memiliki  sifat kurang  polar  terbukti  bahwa  senyawa flavonoid larut pada fraksi kloroform yang bersifat  kurang  polar.  Senyawa  flavonoid dimungkinkan dari jenis isoflavon, flavanon,  flavon  serta  flavonol  (Markham,
1988).
Pengujian fitokimia reagen dilakukan pada ekstrak etanol 70 %, fraksi organik  (kloroform)  dan  fraksi  air  dari hasil  partisi  untuk  mendapatkan  senyawa flavonoid.  Ekstrak  ekat  etanol  70  dan fraksi organik (ekstrak senyawa flavonoid) memiliki  kandungan  senyawa  alkaloid, flavonoid,  saponin,  tanin  dan  terpenoid. Ekstak pekat fraksi air memiliki kandungan  senyawa  alkaloid  dan  saponin. Pengujian  efektifitas  antioksidan  diawali dengan  pengukuran  panjang  gelombang maksimum,  berdasarkan  hasil  penelitian didapatkan panjang gelombang maksimum sebesar 517 nm. Pengujan waktu kestabilan  dilakukan  pada  empat  sampel diantaranya  vitamin  C  dan  BHT  sebagai pembanding  dan  ekstrak  etanol  70  %  dan ekstrak  fraksi    senyawa  flavonoid.  Berikut ini hasil dari pengukuran waktu kestabilan:
Tabel 1. Hasil pengukuran waktu kestabilan Sampel Waktu kestabilan (Menit) Vitamin C 20 – 120 BHT 5 – 120 Ekstrak Etanol 70 % 25 – 75 Ekstrak Flavonoid 25 – 120
Pengujian  efektifitas  antioksidan sampel  diukur  pada  panjang  gelombang maksimum  dan  waktu  kestabilan  yang didapatkan.  Larutan  kontrol  digunakan pada  pengukuran  efektivitas  antioksidan berfungsi  untuk  mengetahui  absorbansi radikal  DPPH  sebelum  direduksi  oleh
sampel.  Selisih  antara  absorbansi  DPPH yang telah direduksi sampel dan absorbansi kontrol  merupakan  sisa  radikal  DPPH yang  terbaca  pada  spektrofotometer  UV- Vis.  Semakin  besar  selisihnya  semakin besar efektivitas antioksidan  sampel.
Berikut  ini  grafik  pengukuran  efektivitas antioksidan sampel :
Gambar  1. Grafik  efektivitas  antioksidan sampel Semakin besar persentase
efektivitas antioksidan sampel maka semakin  berpotensi  sebagai  antioksidan. Grafik  diatas  dapat  dijelaskan  persentase efektivitas  antioksidan  tertinggi  terdapat pada  vitamin  C  diikuti  BHT,  ekstrak senyawa flavonoid dan ekstrak etanol 70 % umbi binahong. Ekstrak senyawa flavonoid dan  ekstrak  etanol  70  %  mengalami kenaikan  efektivitas  antioksidan  seiring dengan naiknya konsentrasi. Ekstrak senyawa flavonoid memiliki nilai efektivitas  antioksidan  yang  lebih  besar daripada  ekstrak  etanol  70  %  sehingga dapat disimpulkan ekstrak senyawa flavonoid  lebih  efektif  dalam  meredam radikal bebas DPPH.
Parameter  lain  yang  digunakan untuk  mengetahui  kekuatan  antioksidan ialah  EC 50 (Efficient  Concentration  50 Value). EC 50 merupakan konsentrasi sampel yang dapat menyebabkan berkurangnya  50  %  aktivitas  DPPH (Molyneux,  2003).  Berikut  ini  merupakan nilai EC 50 dari masing – masing sampel :
Tabel 2. Nilai EC 50 masing-masing ekstrak Ekstrak Nilai EC 50 (mg/L) Etanol 70 % 298,10 Flavonoid 178,60 Vitamin C 4,58 BHT 14,10 Semakin kecil nilai EC 50
menandakan  semakin  besar  efektivitas antioksidan  sehingga  konsentrasi  yang dibutuhkan  untuk  meredam  radikal  DPPH sebesar 50 % semakin kecil (Widyaningsih,  2010).  Nilai  EC 50 pada ekstrak  flavonoid  dan  ekstrak  etanol  70  % lebih besar berturut-turut 178,60 mg/L dan 298,10  mg/L  dibandingkan  dengan  EC 50 Vitamin  C  dan  BHT.    Suatu  sampel memiliki  kemampuan  meredam  radikal bebas jika menyamai nilai  EC 50 vitamin C dan  BHT.  Ekstrak  senyawa  flavonoid digolongkan  memiliki  tingkat  antioksidan lemah  dan  ekstrak  etanol  70  %  umbi binahong  digolongkan  sebagai  antioksidan sangat lemah.
Namun,  kedua  ekstrak  tersebut dapat digunakan sebagai antioksidan walaupun    memiliki  tingkat  antioksidan yang  lemah  dan  sangat  lemah.  Secara kualitatif  efektivitas  antioksidan  sampel dapat dilihat dari perubahan warnanya dari ungu  menjadi  kuning.  Hasil  pengukuran masing-masing ekstrak ketika ditambahkan larutan  DPPH  tidak  mengalami  perubahan warna dari ungu menjadi kuning, melainkan  hanya  terjadi  pemudaran  warna dari  ungu  menjadi  ungu  kemerahan  pada konsentrasi 800 mg/L.
Efektivitas antioksidan dalam sampel  berkorelasi  dengan  kandungan bioaktifnya. Berdasarkan
pengujian fitokimia  di  dalam  ekstrak  senyawa flavonoid  terkandung    senyawa  alkaloid, flavonoid,  saponin,  triterpenoid  dan  tanin begitu juga pada ekstrak etanol 70 % umbi binahong.  Perbedaannya  terdapat  pada kemampuan  zat  bioaktif  yang  terdapat pada masing-masing ekstrak dalam menangkal  radikal  bebas  DPPH.  Adanya
% akt iv itas ant iok isdan konsentrasi Grafik  Efektivitas Antioksidan Vitamin C BHT Eks. Etanol 70 %
Eks. Kasar Flavonoid
gugus gula dalam senyawa bioaktif ekstrak etanol  70  %  mengurangi  kemampuan dalam menangkal radikal bebas DPPH.
Diantara  kelima  senyawa  bioaktif dalam  umbi  binahong,  flavonoid  dikenal mempunyai  efektivitas  antioksidan  yang tinggi.  Hasil  pengujian  fitokimia  ekstrak senyawa flavonoid menunjukkan perubahan  warna  kuning  yang  tajam disertai  timbulnya  gelembung.  Flavonoid yang terglikosilasi menyebabkan flavonoid menjadi  kurang  reaktif  dalam  meredam radikal  bebas.  Senyawa  flavonoid  dan senyawa  gula  dihubungkan  dengan  ikatan glikosidik  sehingga  terbentuk  glikosida flavonoid.
Penambahan  HCl  sebagai  katalis asam  dapat  memutus  ikatan  glikosidik pada  glikosida  flavonoid  sehingga  akan terbentuk aglikon flavonoid dengan penambahan  gugus  hidroksil  dan  glikon dalam bentuk hemiasetal
siklik.
Penambahan gugus hidroksil dalam aglikon  flavonoid  mampu  meningkatkan keefektifan  antioksidan  dalam  flavonoid. Aglikon  flavonoid  tanpa  glikon  dapat mendonorkan  lebih  banyak  elektronnya kepada  radikal  bebas.  Albulescu  dan Puscau  (2008)  membandingkan  efektivitas antioksidan  dari  ekstrak  glikosida  kedelai dan  aglikon  isoflavon  kedelai  didapatkan nilai efektivitas antioksidan aglikon isoflavon  kedelai  lebih  besar  yaitu  82  % dibandingkan  dengan  ekstrak  glikosida kedelai sebesar 75 %.
Pemisahan senyawa flavonoid
menggunakan  KLT  preparatif  didapatkan empat isolat. Keempat noda yang terbentuk pada hasil KLT Preparatif diduga merupakan  senyawa  flavonoid.  Berikut  ini hasil identifikasi KLT Preparatif :
Tabel 3. Hasil Identifikasi KLTP
Isol at Rf Warna noda dengan sinar UV Tanpa NH3 Dengan NH3 1 0,29 Kuning Kuning 2 0,45 Hijau Hijau 3 0,56 Hijau-Kuning Hijau 4 0,95 Kuning Kuning
Koirewoa  dkk.  (2014)  menyatakan noda  yang  disinari  dengan  lampu  UV  366 nm  positif  flavonoid  dari  golongan flavonol  jika  berwarna  hijau  dan  terjadi perubahan  warna  sedikit  dari  warna  hijau setelah  diuapi  NH 3 .  Selain  itu,  noda standar  quersetin  yang  disinari  lampu  UV 366  nm  berwarna  kuning  dan  tidak mengalami perubahan warna setelah diuapi dengan  NH 3 .  Keempat    isolat  tersebut selanjutnya
diukur efektivitas antioksidannya.  Berikut  ini  efektivitas antioksidan isolat hasil KLTP:
Tabel 4. Hasil efektivitas antioksidan isolat  KLT  Preparatif  pada konsentrasi 178,60 mg/L Isolat % Efektivitas Antioksidan Warna Larutan Setelah Uji Efektivitas Antioksidan 1 3,470 Ungu 2 6,627 Ungu 3 7,160 Ungu 4 6,061 Ungu Perubahan warna larutan setelah uji efektivitas  antioksidan  pada  isolat  tidak terjadi.  Berdasarkan  penelitian  tersebut, isolat  senyawa  flavonoid  pada  konsentrasi 178,60  mg/L  belum  mampu  meredam  50 %    radikal  bebas  DPPH.  Vitamin  C  dan BHT digunakan sebagai pembanding untuk mengetahui  keefektifan  isolat  flavonoid dalam meredam radikal bebas DPPH. Nilai pengujian  efektivitas  antioksidan  vitamin C dan BHT tersaji dalam Tabel 5:
Tabel  5. Hasil  Uji  efektivitas  antioksidan Vitamin  C  dan  BHT  pada konsentrasi 178,60 mg/L Sampel % Efektivitas Antioksidan Vitamin C 96,418 BHT 88,187 Keempat  isolat  tersebut  diduga senyawa  flavonoid  berdasarkan  hasil  KLT Preparatif.  Efektivitas  peredaman  radikal bebas senyawa flavonoid dipengaruhi oleh jumlah dan posisi hidrogen dalam molekulnya.  Oleh  karena  itu,  efektivitas
antioksidan  kuat  akan  dihasilkan  oleh senyawa  flavonoid  yang  memiliki  jumlah gugus  hidroksil  lebih  banyak  pada  inti flavonoidnya.  Senyawa  flavonoid  pada isolat  diduga  memiliki  gugus  hidroksil dalam  jumlah  sedikit  sehingga  peredaman radikal  bebas DPPH  tidak  berjalan maksimal. Semakin banyak gugus hidroksil bebas yang
dapat menyumbangkan  hidrogen  maka  semakin banyak  juga reduksi yang dapat dilakukan terhadap  DPPH  (Rahayu  dkk.,  2014). Berikut  ini  dugaan  reaksi  peredaman radikal bebas DPPH oleh flavonoid :
DPPH* DPPH-H O OH O* O O O O OH OH O OH O* DPPH* DPPH-H O O O O
Gambar 2. Reaksi  peredaman  radikal bebas  DPPH  oleh  flavonoid
(Marliana dkk., 2012)
Nilai persentase
efektivitas antioksidan  tiap  isolat  senyawa  flavonoid memiliki  nilai  lebih  rendah  daripada ekstrak  etanol  70  %  dan  ekstrak  flavonoid pada  konsentrasi  100-200  mg/L  beturut- turut sebesar 11,94-16,74 dan 25,67-41,70. Isolat flavonoid merupakan hasil pemisahan senyawa flavonoid yang terdapat  pada  ekstrak  flavonoid.  Keempat isolat  senyawa  flavonoid  diduga  memiliki efek  sinergis  yaitu  beberapa  senyawa memiliki  efektivitas  yang  lebih  besar daripada  masing-masing  senyawa  secara individual.  Efektivitas  antioksidan  isolat senyawa  flavonoid  berkurang    ketika masing-masing senyawa flavonoid terpisah namun  keefektifannya  bertambah  ketika senyawa flavonoid berkerja secara sinergis pada ekstrak senyawa flavonoid.
Keefektifan masing-masing isolat senyawa flavonoid berkurang karena semakin sedikit atom hidrogen yang dapat didonorkan kepada radikal DPPH.

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan Ekstrak senyawa flavonoid memiliki efektivitas antioksidan lebih baik daripada  ekstrak  etanol  70  %.  Ekstrak senyawa  flavonoid  memiliki  nilai  EC 50 sebesar 178,60 mg/L dan ekstrak etanol 70 %  umbi  binahong  sebesar  298,10  mg/L, keduanya  memiliki  efektivitas  antioksidan yang  lemah.  Hasil  efektivitas  antioksidan isolat  senyawa  flavonoid  paling  tinggi terdapat pada isolat ketiga sebesar 7,16 %.

## Saran
Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut untuk menguji efektivitas antioksidan pada bagian  lain  tanaman  umbi  binahong (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis)  yang berpotensi sebagai antioksidan.
Hasil  pengujian  fitokimia  reagen menunjukkan bahwa umbi binahong memiliki  kandungan    alkaloid  dengan terbentuknya perubahan warna yang tajam. Maka,  diperlukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  isolasi  alkaloid  pada umbi binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis).

## V. DAFTAR PUSTAKA
Albulescu, A. Puscau D. 2008. Antioxidant
Activity of Natural Extracts Containing Isoflavones. Jurnal
Series  Chemistry  17  (1)  (2008)
131-138.
Andrieyani.  2014.  Identifikasi  Senyawa
Flavonoid  dan  Efek  Terapi  Ekstrak Etanol  70  %  Umbi  Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.)
Steenis)  Terhadap  Kadar  Glukosa Darah  dan  Aktivitas  Sod  Pada Jantung  Tikus  (Rattus  novergicus) yang  Diinduksi  Aloksan. Skripsi. Malang:  Jurusan  Kimia  Fakultas Sains  dan  Teknologi  Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Arishandy,  D.N.A.T.A.  2011.  Isolasi  Dan
Identifikasi  Senyawa  Flavonoid dari Daun Sirih Merah ( Piper betle L.var  rebrum ).  Skripsi.  Malang: Jurusan  Kimia  Fakultas  Sains  dan
Teknologi Universitas Islam Negeri
Maulana Malik Ibrahim. Astuti,  M.S.  2013.  Skrining  Fitokimia  dan Uji  Aktifitas  Antibiotika  Ekstrak Etanol  Daun,  Batang,  Bunga  dan Umbi Tanaman Binahong ( Anredera cordifolia (Ten) Steenis ). Jurnal Balai Besar Pengujian Mutu dan Sertifikasi Obat Hewan ( BBPMSOH ) dan Fakulti Kejuteraan Kimia dan Sumber Asli (Bioproses). Indonesia-Malaysia, 1- 13.
Bimakra,  M;  Rahman,  R.A;  Taip,  F.S;
Ganjloo,  A;  Salleh,  L.M;  Selamat, J;  Hamid,  A;  Zaidul,  I.S.M.  2010. Comparisson of Different Extraction Methods for the Extraction  of  Major  Bioactive Flavonoid Compounds from Spearmint  ( Mentha  spicata  L.) Leaves. Jurnal Food and Bioproducts Procesing . Malaysia. Djamil, R., Wahyudi, Wahono, dan Hanafi, M.  2012.  Antoxidant  Activity  of
Flavonoid From Anredera cordifolia  (Ten.)  Steenis  Leaves. International  Research  Journal  of Pharmacy. Jakarta: Universitas Indonesia. Gandjar,  I.B.,  dan  Rohman,  A.  2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Harbone,  J.B  dan  Williams,  C.A.  2000. Advances  in  Flavonoid  Reseach  in 1992. Jurnal Phitochemistry Hal.481-500. Derpatement of Botany, School of Plant Sciences.
Inayah,  F.  2011.  Isolasi  Dan  Identifikasi Senyawa  Flavonoid  Dari  Ekstrak Methanol  Tanaman  Anting-Anting ( Achalypha  indica  linn ).  Skripsi Tidak Diterbitkan. Malang: Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi  Universitas  Islam  Negri (UIN) Maliki Malang.
Koirewoa, Y. A.,  Fatimawali, Wiyono, W. I.  2014.  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Flavonoid  Dalam  Daun Beluntas  ( Pluchea  indica L.).
Jurnal.  Manado:  Program  Studi Farmasi FMIPA UNSRAT.
Makalalag,  I.  Wullur  A.  dan  Wiyono  K. 2013.  Uji  Ekstrak  Daun  Binahong ( Anredera cordifolia Steen .) Terhadap  Kadar  Gula  Darah  pada Tikus  Putih  Jantan  Galur  Wistar (Rattus norvegicus) yang Diinduksi Sukrosa. Manado. Pharmacon
Jurnal  Ilmiah  Farmasi Volume.  2 No.  01  Februari    ISSN  2302  – 2493: 29-34. Markham, K.R. 1988. Cara mengidentifikasi Flavonoid . Bandung: ITB. Molyneux, P. 2003. The Use of the Stable fre  radical  diphenyilpicrylhdrazyl (DPPH)  for  estimating  antioxidant activity. Article. Songklanakarin  J.
Sci. Technol.
Nunes,  X.P;  Silva,  F.S;  Almeida,  J.R.G.S;
Junior,  L.J.Q;  Filho,  J.M.B.  2012. Biological Oxidations and
Antioxidant  Actyvity  of  Natural Products. Jurnal Phytochemicals as
Nutraceuticals .
Brazil-
Universidade  federal  do  Vale  do Sao Francisco. Pradana, Fery. 2014. Identifikasi Flavonoid Dengan Pereaksi Geser dan Pengaruh  Ekstrak  Etanol  70  % Umbi Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.)  Steenis)  Terhadap Kadar Glukosa Darah Tikus
Induksi  Aloksan.  Skripsi.  Malang:
Jurusan  Kimia  Fakultas  Sains  dan Teknologi Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Rahayu,  D.S.,  Dewi,  K.,  Enny,  F.  2010.
Penentuan  Aktivitas  Antioksidan dari Ekstrak Etanol Daun Ketapang  (Terminalia  catappa  L) dengan  Metode  1,1  difenil  2 Pikrilhidrazil (DPPH). Skripsi Diterbitkan. Semarang: Jurusan Kimia FMIPA Universitas Diponegoro Tensiska,  Marsetio,  Silvia,  O.N.Y.  2007. Pengaruh  Jenis  Pelarut  Terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Kasar  Isoflavon  Dari  Ampas  Tahu .
Hasil  Penelitian  Dosen  Jurusan Teknologi Industri Pangan. Bandung: Universitas Padjadjaran. Tran,  A.V.  2013.  Do  BHA  and  BHT Induce Morphological Changes and DNA  Double-Strand  Breaks  in Shizosaccharomyces Pombe?. Scripps  Senoir  Theses .  Claremont.
Science Departement.
Widyaningsih  ,W.  2010.  Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun
Dewa ( Gynura procumbens )
dengan  Metode  DPPH  (1,1-difenil- 2-pikrilhidrazil). Prosiding Seminar Nasional  Kosmetika  Alami  ISBN  : 978-979-18458-2-3