## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i2.5398

## Uji Sitotoksisitas Ekstrak Etanol Daun Bayam Duri (Amaranthus spinosus L.) dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Ziza Putri Aisyia Fauzi * , Ridwanto Ridwanto, Zulmai Rani, Khairil Fikri Arifin
Program Studi, Farmasi Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Nusantara Al-Wasliyah Medan, Indonesia Email: 1,* zizafauzi43@gmail.com, 2 rid.fillah66@gmail.com, 3 zulmairani22@gmail.com, 4 khairilfikriarifin@gmail.com Email Penulis Korespondensi: zizafauzi43@gmail.com (*: coressponding author)
Abstrak −Radikal bebas dapat menyebabkan penyakit yang bersifat kronis yaitu dibutuhkan waktu bertahun-tahun untuk penyakit tersebut menjadi nyata atau bersifat akumulatif. Salah satu kemungkinan yang dapat terjadi sebagai akibat kerja radikal bebas seperti kanker. Kanker merupakan salah satu penyakit tidak menular yang menjadi masalah kesehatan masyarakat, baik di dunia maupun di Indonesia. Salah satu tanaman yang memiliki potensi sebagai antikanker adalah tanaman bayam duri ( Amaranthus spinosus L.). Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  daun  bayam  duri  mengandung  antioksidan  yang  tergolong  kuat.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  golongan senyawa  metabolit sekunder  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  daun  bayam  duri dan  daya sitotoksisitas ekstrak etanol dau bayam duri dengan melihat nilai LC 50 yang diujikan dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Penelitian ini meliputi skrining fitokimia ekstrak daun bayam duri dan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan melihat jumlah kematian larva Artemia salina leach (LC 50 ). Hasil pengujian skrining fitokimia menunjukkan bahwa daun bayam duri positif  mengandung  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  tannin,  steroid  dan  glikosida.  Hasil  uji  sitotoksisitas  dengan  analisis  probit menunjukkan nilai LC 50 yaitu 269,15 µg/mL sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun bayam duri bersifat toksik dan berpotensi sebagai antikanker.
Keywords: Daun Bayam Duri; BSLT; Radikal Bebas; Sitotoksisitas
Abstract− Free radicals can cause chronic disease, it takes years for the disease to become real or accumulative. One possibility that can occur as a result of the work of free radicals such as cancer. Cancer is one of the non-communicable diseases that is a public health problem, both in the world and in Indonesia. One of the plants that has the potential as an anticancer is Amaranthus spinosus L. The results showed that thorn spinach leaves contain strong antioxidants. This study aims to determine the class of secondary metabolites contained in the ethanolic extract of thorn spinach leaves and the cytotoxicity of the ethanolic extract of A.spinosus by looking at the LC 50 value which was tested using the Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method. This research includes phytochemical screening of A.spinosus extract and Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method by looking at the number of larvae mortality of Artemia salina leach (LC 50 ). The results of the phytochemical screening test showed that A.spinosus were positive for flavonoids, alkaloids, saponins, tannins, steroids and glycosides. The results of the cytotoxicity test using probit analysis showed an LC50 value of 269.15 g/mL, so it can be concluded that the ethanolic extract of A.spinosus is toxic and has potential as an anticancer.
Keywords: Amaranthus spinosus L; BSLT; Free Radicals; Cytotoxicity

## 1. PENDAHULUAN
Pada era modern dengan perkembangan teknologi dan ilmu pengetahuan saat ini, terjadi perubahan pola hidup masyarakat yang  berdampak  buruk  bagi  kesehatan.  Sehingga  menyebabkan  adanya  penurunan  produksi  senyawa  yang  menjaga kondisi  tubuh, yaitu antioksidan alami  yang digunakan untuk  menetralisir radikal bebas  (Arnanda &  Nuwarda, 2019). Radikal bebas dapat  dihasilkan dari hasil metabolisme tubuh  dan faktor eksternal  seperti asap rokok, hasil penyinaran ultra violet, zat kimiawi dalam makanan dan polutan lain. Tubuh manusia dapat menetralisir radikal bebas bila jumlahnya tidak  berlebihan.  Berbagai  tanaman  yang  ada  di  Indonesia  dan  lazim  dikonsumsi  ternyata  ada  yang  mengandung antioksidan (Nurmazela et al., 2022). Radikal bebas dapat menyebabkan penyakit yang bersifat kronis yaitu dibutuhkan waktu bertahun-tahun untuk penyakit tersebut menjadi nyata atau bersifat akumulatif. Berbagai kemungkinan yang dapat terjadi sebagai akibat kerja radikal bebas seperti gangguan fungsi sel, kerusakan struktur sel, penyakit autoimun, penyakit degeneratif, hingga kanker (Rani, 2021).
Kanker merupakan salah satu penyakit tidak menular yang menjadi masalah kesehatan masyarakat, baik di dunia maupun di Indonesia. Ironisnya, kasus kanker ini akan terjadi lebih cepat di negara miskin dan berkembang. Meskipun kemajuan signifikan dalam berbagai pengobatan/tindakan antikanker telah dikumpulkan selama bertahun-tahun, namun masih  terdapat  banyak aspek yang perlu disempurnakan  (Rani  et al., 2022).  Dalam perkembangan dibidang kesehatan telah ditemukan obat-obat antikanker dan dilakukan kemoterapi, namun obat antikanker yang telah ada umumnya selain memiliki khasiat antikanker, obat tersebut juga bersifat merusak sel-sel yang normal serta faktor biaya yang mahal juga menjadi  kendala.  Hal  ini  mendorong  masyarakat  untuk  melakukan  pengobatan  menggunakan  bahan  alam  atau  obat tradisional.  Senyawa  aktif  tanaman  herbal  merupakan  salah  satu  alternatif    dalam  pencarian  antikanker  baru  karena dipercaya maemiliki efek samping minimal. Antikanker dari tanaman herbal dapat berupa ekstrak tanaman atau senyawa aktif  tunggal  yang  diisolasi  dari  tanaman  (Zafrial  &  Amalia,  2018).  Senyawa-senyawa  metabolit  sekunder  banyak digunakan  sebagai  antioksidan,  antiinflamasi,  antipiretik  serta  antimikroba  terutama  untuk  golongan  senyawa  fenolik, flavonoid  dan  alkaloid  (Hasim  et  al.,  2019).  Senyawa-senyawa  ini  diketahui  juga  memiliki  aktifitas  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  dan  membunuh  sel  kanker  atau  sebagai  antikanker.  Senyawa-senyawa  toksik  yang  dapat

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i2.5398
membunuh sel kanker tersebar di berbagai tanaman. Salah satu tanaman yang berpotensi adalah tanaman kakao (Nabila & Fitrianingsih, 2023). Salah satu tanaman yang memiliki potensi sebagai antikanker adalah tanaman bayam duri.
Bayam duri adalah tanaman bercabang banyak dengan daun yang halus dan berbulu, kadang-kadang mengkilap sedangkan batangnya memanjang berwarna hijau  kecoklatan. Bayam  duri  dapat  tumbuh dengan mudah, baik  di  lahan kering maupun basah, namun tanaman ini tumbuh lebih baik pada tanah yang memiliki kelembaban rendah. Salah satu manfaat bagi kesehatan yang terdapat dalam bayam duri yaitu dapat menangkal radikal bebas. Seperti kita ketahui, radikal bebas bertanggung jawab atas pembentukan sel-sel kanker ganas (Purnomo, 2023). Hasil penelitian menunjukkan bahwa daun  bayam  duri  mengandung  antioksidan  yang  tergolong  kuat  dengan  dengan  nilai  IC 50 sebesar  76,66  µg/mL  serta mengandung senyawa metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, steroid dan triterpenoid. Senyawa flavonoid dan alkaloid dikatakan terbukti toksik sebagai antikanker (Fatmawat, 2019). Peranan antioksidan sangat penting dalam meredam efek radikal bebas yang berkaitan erat dengan terjadinya penyakit degeneratif yang didasari oleh proses biokimia dalam tubuh. Flavonoid berperan sebagai antioksidan dengan cara mendonasikan atom hidrogennya atau melalui kemampuannya  mengikat  logam,  berada  dalam  bentuk  glukosida  (mengandung  rantai  samping  glukosa)  atau  dalam bentuk bebas yang disebut aglikon (Ratu & Mugiyanto, 2018).
Adapun cara untuk mengetahui suatu tumbuhan memiliki kandungan senyawa yang berpotensi sebagai antikanker adalah dengan melakukan penelitian awal. Penelitian ini dilakukan sebagai  indikator awal  dalam pengujian sitotoksik. Mayer  mengemukakan  juga  bahwa  salah  satu  metode  awal  untuk  uji  sitotoksik  adalah Brine  Lethality  Test (BSLT) (Puspitasari  &  Rozirwan,  2018).  Uji  toksisitas  yang  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  BSLT  ( Brine  Shrimp Lethality Test ) ditujukan untuk menentukan potensi suatu senyawa bersifat racun dengan mengetahui tingkat toksisitasnya (Ridwanto,  Saragih,  et  al.,  2023). Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  merupakan  salah  satu  metode  yang  banyak digunakan  untuk  uji  sitotoksisitas  /  skrining  senyawa  antikanker  baru  yang  berasal  dari  tanaman  menggunakan  larva Artemia salina leach sebagai hewan uji (Ridwanto, Pratiwi, et al., 2023). Metode BSLT telah terbukti memiliki korelasi dengan aktivitas antikanker. Metode ini mudah dikerjakan, murah, cepat, dan cukup akurat. Larva Artemia salina leach dianggap  mewakili  organisme  zoologis  untuk  uji kematian  secara  in  vivo (F.  A.-U.  Nasution  et  al.,  2023).  Uji  BSLT dilakukan dengan mengamati tingkat kematian yang ditimbulkan setelah diberi ekstrak terhadap larva udang jenis Artemia salina leach  setelah  diinkubasi  selama  1x24  jam.  Hasil  yang  diperoleh  kemudian  dihitung  sebagai  nilai  LC 50 ( lethal concentration ) ekstrak, dimana konsentrasi  ekstrak yang dapat  menyebabkan kematian Artemia  salina leach sebanyak 50% (Chusniasih & Tutik, 2020). Uji toksisitas di lakukan untuk mengetahui adanya efek toksik dalam penggunaan suatu senyawa. Uji toksisitas merupakan uji untuk mengetahui kemampuan racun yang dapat menimbulkan kerusakan Ketika masuk  kedalam  tubuh  dan  organ  yang  rentang terhadapnya  (Sepvina  et  al.,  2022).  Berdasarkan  uraian  di  atas  penulis tertarik untuk melakukan penelitian mengenai daun bayam duri sebagai bahan alam yang potensial untuk dikembangkan sebagai agen  antikanker dengan menguji sitotoksisitas ekstrak daun bayam duri menggunakan  metode BSLT.

## 2. METODE PENELITIAN
Penelitian yang dilakukan adalah penelitian eksperimental yaitu berupa pengambilan dan pengeringan daun bayam duri, karakterisasi simplisia daun bayam duri, ekstraksi simplisia daun bayam duri, skrining fitokimia ekstrak bayam duri dan uji sitotoksisitas. Pengujian sitotoksisitas dilakukan dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) terhadap larva udang Artemia salina leach.

## 2.1 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah timbangan analitik, lemari pengering, alumunium foil, mikroskop, blender, rotary evaporator , tanur, cawan penguap, desikator, wadah maserasi, vial, bejana penetasan telur Artemia salina leach, alat-alat gelas laboratorium.

## 2.2 Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun bayam duri ( Amaranthus spinosus L.), telur Artemia salina leach, garam laut, aquadest, etanol 96%, asam asetat anhidrat, bismut nitrat, asam sulfat pekat, kloroform, toluen, raksa (II) klorida, timbal (II) asetat, besi (III) klorida, serbuk magnesium, kloral hidrat, natrium hidroksida, asam klorida pekat, iodium, alfa naftol, kalium iodida, asam nitrat dan eter.

## 2.3 Determinasi sampel
Determinasi/Identifikasi pada tumbuhan dilakukan di Herbarium Medanense Universitas Sumatera Utara.

## 2.4 Pengumpulan sampel
Pengumpulan sampel daun bayam duri ( Amaranthus spinosus L.) di ambil di sekitar daerah Kecamatan Medan Amplas, Medan Kota, Provinsi Sumatra Utara. Proses pengumpulan daun bayam duri dilakukan secara purposive sampling yaitu tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain.

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i2.5398

## 2.5 Pengolahan sampel
Sampel  daun  bayam  duri  ( Amarantus  spinosus L.)  yang  telah  dikumpulkan,  disortasi  basah  yang  bertujuan  untuk memisahkan sampel dari kotoran-kotoran atau bahan asing lainnya yang ikut dalam pengumpulan sampel. Sampel dicuci dengan air yang mengalir yang bertujuan untuk menghilangkan tanah dan benda asing lainnya yang melekat dan ditiriskan dan kemudian dirajang halus (Syahputra et al., 2021). Sampel selanjutnya dimasukkan kedalam lemari pengering dengan suhu  40-50 ° C.  Proses  pengeringan  dilakukan  sampai  bahan  baku  mudah  dipatahkan.  Lalu  disortasi  kering  untuk memisahkan  simplisia  dari  benda-benda  asing  yang  ikut  dalam  proses  pengeringan.  Kemudian  simplisia  diserbukkan dengan menggunakan blender, diayak dan ditimbang. Serbuk simplisia yang diperoleh disimpan dalam satu wadah bersih yang tertutup rapat dan disimpan pada suhu kamar dan terlindung cahaya (Pulungan et al., 2022).

## 2.6 Karakterisasi Simplisia
Pemeriksaan  karakterisasi  simplisia  meliputi:  pemeriksaan  makroskopik  simplisia,  pemeriksaan  mikroskopik  serbuk simplisia, penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut dalam air, penetapan kadar sari larut dalam etanol, penetapan kadar abu total, penetapan kadar abu tidak larut asam.

## 2.6.1 Pemeriksaan Makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan cara memperhatikan bentuk, warna, rasa dan bau terhadap simplisia daun bayam duri ( Amaranthus spinosus L.) (Rafita et al., 2022).

## 2.6.2 Pemeriksaan Mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia daun bayam duri ( Amaranthus spinosus L.) dengan cara serbuk simplisia ditaburkan di atas objek glass yang telah ditetesi dengan kloral hidrat sebanyak 1 tetes dan ditutup dengan deck glass , kemudian diamati di bawah mikroskop (H. M. Nasution et al., 2022).

## 2.6.3 Penetapan Kadar Air
Kedalam labu alas bulat dimasukkan 200 ml toluen dan 2 ml air suling, lalu didestilasi selama 2 jam, biarkan mendingin selama 30 menit didinginkan dan volume air dalam tabung penampung dibaca. Selanjutkan ke dalam labu dimasukkan 5 g  serbuk  simplisia  yang  telah  ditimbang  seksama,  lalu  dipanaskan  hati-hati  selama  15  menit.  Setelah  toluen  mulai mendidih,  kecepatan  tetesan  diatur  2  tetes  tiap  detik  hingga  sebagian  air  tersuling,  kemudian  kecepatan  penyulingan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air tersuling, bagian dalam pendinginan dibilas dengan toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin sampai suhu kamar, setelah air dan toluen memisah  sempurna  volume  dibaca  dengan  ketelitian  0,05  ml.  selisih  kedua  volume  air  yang  dibaca  sesuai  dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (Robiatun et al., 2022).

## 2.6.4 Penetapan Kadar Sari Yang Larut Dalam Air
Ditimbang 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml airkloroform (2,5 kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam kemudian disaring, sejumlah 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan pada suhu 105 ° C sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Rani et al., 2023).

## 2.6.5 Penetapan Kadar Sari Yang Larut Dalam Etanol
Ditimbang  5  g  serbuk  simplisia  yang  telah  dikeringkan  di  udara  dimaserasi  selama  24  jam  dalam 100  ml  etanol  96% dalam  labu  bersumbat  sambil  dikocok  berkali-kali  selama  6  jam  pertama  dan  kemudian  dibiarkan  selama  18  jam. Selanjutnya disaring, 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan dangkal berdasarkan rata yang telah ditara dan sisanya dipanaskan pada suhu 105 ° C sampai bobot tetap. Kadar sari larut dalam etanol dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (F. A.-U. Nasution et al., 2023).

## 2.6.6 Penetapan Kadar Abu Total
Sebanyak 2 g serbuk simplisia yang ditimbang seksama, dimasukkan ke dalam kurs porselin yang telah dipijar dan ditara. Kurs  dipijar  pada  suhu  600 ° C  sampai  arang  habis,  dinginkan  dan  ditimbang  sampai  diperoleh  bobot  tetap,  kadar  abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Septiana et al., 2024).

## 2.6.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Dalam Asam
Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu total ditambahkan dengan 25 ml asam klorida encer dan didihkan selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam  asam  dikumpulkan, disaring melalui kertas saring  bebas abu, kemudian dicuci dengan air panas. Residu dan kertas saring dipijarkan pada suhu 600 ° C sampai bobot tetap, kemudian didinginkan dan

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i2.5398
ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Ridwanto, Trizaldi, et al., 2023).

## 2.7 Pembuatan Ekstrak
Prosedur ekstraksi dilakukan menggunakan metode maserasi dengan cara menimbang 500 gram serbuk simplisia daun bayam duri dimasukkan ke dalam bejana, kemudian dituangkan dengan 75 bagian (3750 ml) cairan penyari etanol lalu diaduk-aduk sesekali. Setelah 5 hari campuran diserkai dan ampasnya diperas. Dicuci ampasnya dengan cairan penyari etanol secukupnya hingga diperoleh 100 bagian (5000 ml) maserat. Lalu dipindahkan ke dalam bejana tertutup, dibiarkan di tempat sejuk terlindung dari cahaya selama 2 hari dan disaring. Maserat dipekatkan dengan alat rotary evavorator pada temperatur tidak lebih dari 70 ° C dan diperoleh ekstrak kental (H. M. Nasution et al., 2024).

## 2.8 Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini  meliputi  pemeriksaan  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tannin,  dan steroid/triterpenoid.

## 2.8.1 Pemeriksaan Alkaloid
Serbuk simplisia dan ekstrak ditimbang 0,5 g ditambahkan 1 ml HCl 2 N ditambahkan 9 ml air suling, lalu dipanaskan diatas penangas air selama 2 menit, didinginkan lalu disaring filtrat dipakai untuk pemeriksaan alkaloid. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan dengan 2 tetes pereaksi Mayer, akan terbentuk endapan menggumpal berwarna putih atau kuning. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan dengan 2 tetes pereaksi Bouchardat, akan terbentuk endapan berwarna coklat sampai hitam. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan dengan 2 tetes pereaksi Dragendroff akan terbentuk coklat atau jingga. Jika terjadi endapan atau kekeruhan pada paling sedikit 2 tabung reaksi pada percobaan di atas, maka alkaloid positif (Suryani et al., 2024).

## 2.8.2 Pemeriksaan Flavonoid
Sebanyak  10  g  simplisia  dan  ekstrak  daun  bayam  duri  ditimbang,  kemudian  ditambahkan  100  ml  air  panas,  didihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas. Filtrat yang diperoleh kemudian diambil 5 ml lalu ditambahkan 0,1 g serbuk Mg dan 1 ml asam  klorida pekat dan  2 ml amil  alkohol lalu dikocok  kemudian dibiarkan memisah. Flavonoid positif jika terbentuk warna merah, kuning, jingga pada lapisan alcohol (Nasri et al., 2024).

## 2.8.3 Pemeriksaan Tanin
Sebanyak 0,5 g simplisia dan ekstrak daun bayam duri dimasukkan kedalam tabung reaksi, ditambahkan 10 ml akuades, dikocok dan di saring. Filtrat diencerkan dengan akuades sampai tidak berwarna. Larutan di ambil 2 ml  ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi besi (III) klorida. Jika terjadi warna biru kehitaman atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Nasri et al., 2023).

## 2.8.4 Pemeriksaan Saponin
Sebanyak 0,5 g simplisia dan ekstrak daun bayam duri dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan kocok selama 10 detik. Jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak berkurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Rambe et al., 2021).

## 2.8.5 Pemeriksaan Steroida/Triterpenoida
Sebanyak 1 g simplisia dan ekstrak daun bayam duri di maserasi dengan 20 ml eter selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat di uapkan dalam cawan penguap kemudian ditambahkan 5 tetes asam asetat anhidrat dan 5 tetes asam sulfat pekat (pereaksi Liberman-Burchardad).  Terbentuknya  warna  ungu  sampai  merah  ungu  menunjukkan  adanya  triterpenoid  dan terbentuknya warna biru hijau menunjukkan adanya steroid (Kaban et al., 2022).

## 2.8.6 Pemeriksaan Glikosida
Sampel simplisia dan ekstrak daun bayam duri ditimbang sebanyak 3 g lalu ditambahkan dengan 10 ml campuran etanol 95 % dam akuades (7:3) dan 10 ml asam klorida 2 N, direfluks selama 10 menit, didinginkan dan disaring. Ambil 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml akuades dan 25 timbal (II) asetat 0,4 M dikocok, diamkan selama 5 menit lalu disaring. Filtrat dimasukkan ke dalam corong pisah dan disari dengan 20 ml campuran isopropanol dan kloroform (2:3) sebanyak 3 kali. Lapisan  air  dan  lapisan  campuran  isopropanol-kloroform  dipisahkan  dan  masing-masing  ditambah  natrium  sulfat anhidrat, disaring dan diuapkan pada suhu tidak lebih dari 50ºC. Residu dilarutkan dalam 2 ml  metanol dan digunakan untuk percobaan berikut : Filtrat dari lapisan air (komponen gula) sebanyak 0,1 ml di dalam tabung reaksi diuapkan diatas penangas air, ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes pereaksi molish. Ditambahkan asam sulfat pekat perlahan lahan melalui dinding  tabung,  terbentuknya  cincin  berwarna  ungu  pada  batas  kedua  cairan  menunjukkan  adanya  komponen  gula (glikon). Filtrat dari lapisan campuran kloroform-isopropanol (komponen non-gula) sebanyak 0,1 ml ditambah 5 ml asam

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i2.5398
asetat anhidrat dan 10 tetes asam sulfat pekat terjadi warna biru atau hijau (reaksi Liberman-Bourchard) menunjukkan adanya komponen non-gula (aglikon) (Syahputra et al., 2023).

## 2.9 Pengujian Sitotoksisitas dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

## 2.9.1 Pembuatan Air Laut Buatan
Air laut buatan dibuat dengan cara melarutkan 38 gram garam tanpa iodium dalam 1 liter air, lalu diaduk sampai homogen. Kemudian disaring dengan kertas Whatman (Rani et al., 2022).

## 2.9.2 Penetasan Telur Artemia Salina Leach
Penetasan telur dilakukan dalam wadah bening yang berisi media air laut buatan. Wadah yang digunakan dibagi menjadi dua bagian oleh sekat berlubang, yaitu bagian gelap dan bagian terang. Sekat berlubang menjadi jalan untuk larva yang telah menetas untuk bergerak secara alamiah ke arah terang. Kemudian pada bagian gelap dimasukkan satu sendok telur. Pada wadah bagian gelap ditutup dengan alumunium foil atau lakban hitam. Pada wadah bagian terang diberi penerangan dengan cahaya lampu agar suhu penetasan 25-30°C tetap terjaga. Telur udang dibiarkan terendam selama 48 jam sampai telur  menetas.  Telur  akan  menetas  dalam  waktu  24-36  jam  dan  akan  bergerak  secara  alamiah  menuju  daerah  terang sehingga larva udang terpisahkan dari bagian telur atau kulit telur. Larva yang telah aktif bergerak siap digunakan sebagai hewan uji dalam penelitian (Fadli et al., 2019).

## 2.9.3 Pembuatan Larutan Konsentrasi
Larutan ekstrak etanol daun bayam duri ( Amaranthus spinosus L.) dibuat menjadi 10 konsetrasi  untuk terlebih dahulu digunakan sebagai orientasi, yaitu konsentrasi 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, dan 500 µg/ml dan 1 tabung digunakan untuk blanko (Panggabean et al., 2020).

## 2.9.4 Uji Sitotoksisitas Ekstrak Daun Bayam Duri (Amaranthus spinosus L.)
Disiapkan  vial  yang  sudah  berisi  larutan  konentrasi  ektrak  sesuai  tingkat  konsentrasi  masing-masing  dengan replikasi sebanyak 3 kali. Vial diisi dengan sampel yang telah dilarutkan dengan air laut buatan sebanyak 10 ml. Sebanyak 10 ekor larva Artemia  salina leach  dimasukkan  ke  dalam masing-masing  vial.  Kontrol  negatif  (blanko)  diberi  perlakuan  yang sama seperti larutan uji tetapi tidak ditambahkan dengan ekstrak. Tingkat toksisitas ditentukan dengan menghitung jumlah larva  yang mati  dalam tiap vial setalah 24 jam. Kriteria  standar untuk  menilai kematian  larva udang adalah bila larva udang tidak menunjukkan pergerakan selama beberapa detik observasi (Kurniawan & Ropiqa, 2021).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1 Pengolahan Sampel Daun Bayam Duri (Amaranthus spinosus L.)
Sampel  daun  bayam  duri  yang  telah  dikumpulkan  didapatkan  bobotnya  sebanyak  6.500  gram,  setelah  dilakukan pengeringan dengan suhu 50oC maka diperoleh bobot simplisia sebanyak 600 gram dan hasil susut pengeringan ( loss on drying ) didapatkan sebesar 90,77%. Tujuan penentuan susut pengeringan adalah memberikan batasan maksimal (rentang) tentang besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan. Hasil susut pengeringan berat simplisia tidak saja karena berkurangnya kadar air, namun juga ada beberapa zat atau senyawa lain yang hilang (menguap).

## 3.2 Karakterisasi Simplisia
Hasil  dari  karakterisasi  simplisia  yaitu  pada  pengujian  makroskopis,  bentuk  fisik  dari  simplisia  daun  bayam  duri ( Amaranthus spinosus L.) yaitu berwarna hijau, tidak berbau dan rasa sedikit asam. Hasil uji mikroskopis pada serbuk simplisia daun bayam duri didapatkan adanya berkas pembuluh penebalan tangga, rambut penutup dan hablur kalsium oksalat bentuk roset. Hasil karakterisasi simplisia Daun Bayam Duri dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Karakterisasi Simplisia Daun Bayam Duri
No Parameter Hasil Pemeriksaan 1 Kadar Air 5,3 % 2 Kadar Sari Larut Air 7,50% 3 Kadar  Sari Larut Etanol 2,52 % 4 Kadar Abu 5,49 % 5 Kadar Abu Larut Asam 0,62%
Pada  penetapan  kadar  air  dilakukan  untuk  memberikan  103ingkat  minimal  atau  rentang  tentang  besarnya kandungan  air  dalam  bahan.  Hasil  dari  penetapan  kadar  air  simplisia  daun  bayam  duri  ini  diperoleh  kadar  presentase

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i2.5398
sebesar 5,3 %. Kadar air dalam sampel (simplisia) tidak boleh lebih dari 10% karena kelebihan air dalam simplisia akan mendorong pertumbuhan mikroorganisme dan kapang (jamur), reaksi pembusukan, reaksi enzimatis, yang pada akhirnya diikuti oleh reaksi hidrolisis senyawa kimia dalam simplisia. Metode yang digunakan dalam penetapan kadar air yaitu metode destilasi azeotroph. Prinsip metode destilasi ini adalah penggabungan dua buah pelarut yang memiliki titik didih berbeda serta kepolaran berbeda. Destilasi digunakan untuk memisahkan campuran yang terdiri dari dua komponen atau lebih yang sulit dipisahkan. Pelarut yang digunakan pada penetapan kadar air ini adalah  toluen. Toluen memiliki berat jenis lebih rendah dari air, berat jenis toluen yaitu 0,866 g/ml. Penggunaaan pelarut yang mempunyai berat jenis lebih ringan dari air bertujuan agar air berada di bagian bawah gelas penampung sehingga pengukuran volume lebih mudah. Air dan pelarut (toluen), terkondensasi sehingga terjadi pengembunan dan jatuh pada tabung berskala, ditandai dengan terbentuknya lapisan dua fasa, yaitu air dan toluen. Fasa air berada di bawah sedangkan toluen berada diatas. Air berada di bawah karena berat jenis air lebih besar dibandingkan toluen (Yuza et al., 2023).
Pada pengujian kadar sari larut dalam air serbuk simplisia daun bayam duri didapatkan persentase kadar sebesar 7,72 %, sedangkan untuk pengujian kadar sari larut dalam etanol serbuk simplisia daun bayam duri diperoleh persentase kadarnya  sebesar  2,52 %.  Hasil  kadar  yang  didapatkan  ini  memenuhi  persyaratan  dimana  untuk  kadar  sari  yang  larut dalam air tidak kurang dari 7% dan kadar sari yang larut dalam etanol tidak kurang dari 2,5% (Depkes, 1989). Kadar sari larut air dan etanol merupakan pengujian untuk penetapan jumlah kandungan senyawa yang dapat terlarut dalam air (kadar sari larut air) dan kandungan senyawa yang dapat terlarut dalam etanol (kadar sari larut etanol) (Ningtias & Rani, 2023)
Pada penentuan kadar sari larut air dan etanol, simplisia terlebih dahulu dimaserasi selama ± 24 jam dengan air dan etanol (96%). Ketika penentuan kadar sari larut air, simplisia ditambahkan kloroform terlebih dahulu, penambahan kloroform  tersebut  bertujuan  sebagai  zat  antimikroba.  Karena  pada  saat  maserasi  hanya  digunakan  air  saja,  mungkin ekstraknya  akan  rusak  karena  air  merupakan  media  yang  baik  untuk  pertumbuhan  mikroba  dan  dikhawatirkan  terjadi proses hidrolisis yang akan merusak ekstrak sehingga menurunkan mutu  dan kualitas dari ekstrak tersebut. Sementara pada penentuan kadar sari larut etanol tidak ditambahkan kloroform, karena etanol sudah memiliki sifat antibakteri jadi tidak perlu ditambahkan kloroform. Data kadar sari dalam pelarut tertentu biasanya diperlukan untuk menentukan pelarut yang akan digunakan untuk mengekstraksi senyawa tertentu agar zat-zat yang terekstraksi lebih banyak yang terekstrak dari simplisia yang akan diekstrak (H. M. Nasution et al., 2022).
Pada pengujian kadar abu total serbuk simplisia daun bayam duri didapatkan persentase kadar sebesar 5,49 % dan untuk pengujian kadar abu tidak larut asam didapatkan persentase kadarnya sebesar 0,62 %. Hasil penetapan kadar abu ini masih memenuhi persyaratan dimana untuk kadar abu total tidak lebih dari 10% dan kadar abu yang tidak larut dalam asam  tidak  lebih  dari  1%  (Depkes,  1989).  Penentuan  kadar  abu  bertujuan  untuk  memberikan  gambaran  kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak. Prinsipnya ekstrak dipanaskan hingga senyawa organik dan turunannya terdestruksi dan menguap sampai hanya unsur mineral dan anorganik saja yang tersisa. Besarnya kadar abu total dalam setiap ekstrak menunjukkan bahwa ekstrak yang diperoleh dari proses maserasi banyak mengandung mineral. Sedangkan adanya kadar abu yang tidak larut dalam asam menunjukkan adanya pasir atau pengotor lainnya yang masih ada (Indriyanti et al., 2018).

## 3.3 Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Daun Bayam Duri
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk  menguji  ada  tidaknya  senyawa  metabolit  sekunder  diantaranya  seperti  alkaloid, flavonoid, saponin, steroid/triterpenoid, tannin dan glikosida. Hasil skirining fitokimia simplisia dan ekstrak etanol daun bayam duri dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Skrining Fitokimia No. Pemeriksaan Hasil Serbuk Hasil Ekstrak 1 Alkaloid + + 2 Flavonoid + + 3 Saponin + + 4 Tannin + + 5 6 7 Steroid Triterpenoid Glikosida - + + - + +
Keterangan : (+) : mengandung senyawa metabolit sekunder (-) : tidak mengandung senyawa metabolit sekunder
Berdasarkan  tabel  di  atas  menujukkan  Pada  pemeriksaan  alkaloid  terdapat  3  pengujian  yaitu  pengujian  dengan pereaksi Mayer, Bouchardat dan Dragendorf. Pada pengujian pertama dengan pereaksi Mayer menunjukkan hasil yang positif karena terbentuk endapan menggumpal berwarna putih atau kuning. Kemudian pengujian kedua dengan preaksi Dragendorf menunjukkan hasil yang positif ditandai dengan terbentuknya warna jingga. Pada pengujian ketiga dengan pereaksi Bouchardat juga menunjukkan hasil yang positif karena membentuk endapan cokelat. Dari hasil yang didapatkan diatas  dapat  disimpulkan  bahwa  simplisia  dan  ekstrak  daun  bayam  duri  positif  mengandung  alkaloid.  Hal  ini  sesuai

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i2.5398
dengan  literatur  bahwasanya  alkaloid  dianggap  positif  jika  terjadi  endapan  atau  kekeruhan  sedikitnya  2  reaksi  dari  3 percobaan. Pada dasarnya prinsip pengujian senyawa alkaloid pada reaksi pengendapan dengan ion logam berat. Atom nitrogen (bersifat basa) yang ada pada struktur alkaloid mempunyai kemampuan untuk berinteraksi dengan ion logam. Penambahan HCl 2 N dimaksudkan untuk menarik senyawa alkaloid dalam ekstrak karena alkaloid bersifat basa maka dengan  penambahan  asam  seperti  HCl  akan  terbentuk  garam,  sehingga  alkaloid  akan  terpisah  dengan  komponen- komponen  lain  dari  sel  tumbuhan  yang  ikut  terekstrak  dengan  mendistribusikannya  ke  fase  asam  (Rachmawati  & Suriawati, 2019).
Pada  pengujian  flavonoid  menunjukkan  hasil  yang  positif  pada  simplisia  dan  ekstrak  daun  bayam  duri ( Amaranthus  spinosus L.)  karena  terbentuknya  warna  jingga  pada  lapisan  amil  alkohol.  Senyawa  flavonoid  yang mengandung gugus hidroksil akan berinteraksi dengan ion Mg 2+ membentuk senyawa komplek yang berwarna. Reaksi senyawa flavonoid dengan logam Mg dan HCl akan terbentuk garam flavilium yang berwarna merah atau jingga (Yanti & Vera, 2019).
Pada  pemeriksaan  tannin  menunjukkan  hasil  yang  positif  terhadap  simplisia  dan  ekstrak  daun  bayam  duri ( Amaranthus  spinosus L.).  Hal  ini  disebabkan  karena  terbentuknya  senyawa  kompleks  antara  senyawa  fenolik  yang mengandung gugus hidroksil (OH) dengan ion besi (III). Atom oksigen mempunyai pasangan  elektron bebas sehingga bersifat reaktif terhadap ion positif membentuk senyawa komplek (Djindadi et al., 2020).
Pemeriksaan saponin menunjukkan hasil yang positif terhadap simplisia dan ekstrak daun bayam duri ( Amaranthus spinosus L.) karena buih yang terbentuk setelah pengocokan bertahan lama dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes HCl 2N. Buih terbentuk karena saponin mempunyai sifat yang dapat menurunkan tegangan permukaan air. Seperti sabun, saponin  mempunyai  molekul  besar  yang  mengandung  gugus  hidrofilik  dan  lipofilik.  Dalam  air,  molekul  saponin mensejajarkan diri secara vertikal pada permukaannya, dengan gugus lipofilik menjauhi air (Sahputra et al., 2019).
Pada pengujian triterpenoid didasarkan pada kemampuan senyawa triterpenoid dan steroid membentuk warna oleh H 2 SO 4 pekat  pada  pelarut  asetat  glasial  yang  membentuk  warna  ungu  sampai  merah  ungu  menunjukkan  adanya triterpenoid dan terbentuknya warna biru hijau menunjukkan adanya steroid. Bedasarkan hasil skrining fitokimia yang telah dilakukan, diketahui bahwa simplisia dan eksrak daun bayam duri positif mengandung senyawa Triterpenoid dan negatif mengandung steroid (Djindadi et al., 2020).
Pada  pemeriksaan  glikosida  menunjukkan  hasil  yang  positif  terhadap  simplisia  dan  ekstrak  daun  bayam  duri ( Amaranthus spinosus L.) karena tidak terbentuk cincin berwarna ungu pada batas cairan larutan sisa setelah penambahan pereaksi molisch dan asam sulfat pekat. Mekanisme terbentuknya cincin ungu berasal dari karbohidrat yang terhidrolisis oleh asam sulfat menjadi monosakarida kemudian keduanya terkondensasi membentuk furtural yang bereaksi sehingga membentuk cincin ungu (Nurbaity, 2020).

## 3.4 Uji Sitotoksisitas Ekstrak Etanol Daun Bayam Duri (Amaranthus spinosus L.)
Uji sitotoksisitas ini dilakukan dengan metode BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test) menggunakan Artemia salina leach sebagai hewan uji. Fase artemia yang digunakan dalam penelitian ini adalah fase nauplius karena pada saat itu Artemia salina leach  berada  pada  fase  yang  paling  aktif  membelah  secara  mitosis  yang  identik  dengan  sel  kanker  yang  juga membelah  secara  mitosis.  Hal  ini  menyebabkan  uji  BSLT  ini  sering  digunakan  sebagai  penelitian  pendahuluan  dari aktivitas antikanker. Salah satu mekanisme kerja obat antikanker juga bersifat sitotoksik yaitu dengan cara menghambat pertumbuhan sel yang akhirnya menyebabkan kematian pada sel sedangkan mekanisme aktivitas sitotoksik pada Artemia salina leach  belum  diketahui  secara  pasti  (Sepvina  et  al.,  2022).  Metode  BSLT  ini  merupakan  metode  penapisan farmakologi awal yang mudah dan tidak mahal serta tidak membutuhkan spesialisasi tertentu dalam pengerjaannya. Juga merupakan metode yang telah teruji hasilnya dengan tingkat kepercayan 95% untuk mengamati toksisitas suatu senyawa di dalam ekstrak kasar tanaman (Ridwanto, Saragih, et al., 2023).
a b c d
Gambar 1 . Uji Sitotoksisitas Ekstrak Etanol Daun Bayam Duri (a) telur artemia, (b) air garam buatan, (c) proses penetasan, (d) Artemia salina leach

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i2.5398
Penetasan telur Artemia salina leach dilakukan dengan menggunakan media air laut buatan dalam wadah bersekat berlubang  yang  dibagi  menjadi  bagian  gelap  dan  bagian  terang.  Penggunaan  media  air  laut  buatan  bertujuan  untuk menyesuaikan lingkungan hidup Artemia sehingga hampir sama dengan air laut alami. Telur artemia ditaburkan di bagian gelap dan telur yang telah menetas akan bergerak secara alami ke bagian terang karena larva bersifat fototaksis positif. Larva yang digunakan untuk penelitian ini adalah larva yang berumur 48 jam karena pada umur 48 jam organ-organ pada artemia sudah terbentuk lengkap dan cadangan makanannya sudah habis sehingga nantinya pada saat pengujian kematian Artemia benar-benar disebabkan karena ekstrak daun bayam duri dalam berbagai konsentrasi tersebut (Putri et al., 2020). Larutan ekstrak etanol daun bayam duri dibuat menjadi 10 konsentrasi untuk terlebih dahulu digunakan sebagai orientasi, yaitu konsentrasi 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 dan 500 µg/mL dengan ditambah blanko sebagai kontrol negatif yang hanya berisi air garam dan larva udang. Penambahan blanko dilakukan untuk mengoreksi kematian larva  yang  bukan  disebabkan  oleh  pengaruh  ekstrak  etanol  daun  bayam  duri.  Uji  BSLT  ini  dilakukan  masing-masing sebanyak  3  kali  pengulangan  (triplo)  untuk  memperoleh  keakuratan  data  dan  mengurangi  kesalahan  dalam  proses penelitian. Pengamatan dilakukan 24 jam setelah perlakuan konsentrasi ekstrak. Perhitungan kematian larva dilakukan dengan cara mengamati pergerakan larva selama beberapa detik. Kematian larva dihitung jika tidak ada pergerakan pada larva tersebut. Hasil pengujian sitotoksisitas daun bayam duri ( Amaranthus spinosus L.) dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Pengujian Sitotoksisitas Daun Bayam Duri No Konsentrasi (µg/mL) Perlakuan 1 Perlakuan 2 Perlakuan 3 Rerata % mortalitas Larva mati % mortalitas Larva mati % mortalitas Larva mati % mortalitas 1 Blanko 0 0 0 0 0 0 0 2 150 2 20 3 30 3 30 26,7% 3 200 3 30 2 20 4 40 30 % 4 250 5 50 4 40 3 30 40 % 5 300 5 50 5 50 5 50 50 % 6 350 7 70 5 50 6 60 60 % 7 400 8 80 9 90 8 80 83,3 %
Berdasarkan data tersebut jumlah larva tiap perlakuan adalah 10 ekor dengan 3 kali perlakuan, sehingga totalnya 30 ekor. Tabel 3 dapat diketahui persentase mortalitas dari konsentrasi yang rendah 150 µg/mL ke konsentrasi yang paling tinggi terdapat pada konsentrasi 400 µg/mL mempunyai persentase yaitu sebesar 20-80%. Sedangkan pada blanko tidak memberikan mortalitas terhadap larva. Hal ini sesuai  dengan teori, bahwa semakin tinggi konsentrasi  ekstrak semakin banyak  jumlah  larva  yang  mati.  Selain  itu  dari  persentase  kematian  larva  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak  akan  menghasilkan  jumlah  kematian  larva  yang  semakin  tinggi  pula  (Rossa  et  al.,  2023). Kematian  larva Artemia  salina leach  disebabkan  oleh  kandungan  senyawa  bioaktif  yang  terdapat  dalam  ekstrak  daun bayam  duri. Pada kadar tertentu memiliki kemampuan yang dapat  menyebabkan kematian larva Artemia  salina leach. Mekanisme  kematian  larva  berhubungan  dengan  fungsi  senyawa  dalam  sampel  yang  dapat  menghambat  daya  makan larva ( antifedant ). Cara kerja senyawa-senyawa tersebut adalah dengan bertindak sebagai stomach poisoning atau racun perut. Oleh karena itu, bila senyawa-senyawa ini masuk ke dalam tubuh larva, alat pencernaannya akan terganggu. Selain itu, senyawa ini menghambat reseptor perasa pada daerah mulut larva. Hal ini mengakibatkan larva gagal mendapatkan stimulus  rasa  sehingga  tidak  mampu  mengenali  makanannya  sehingga  larva  mati  kelaparan.  Dalam  hal  ini  senyawa metabolit  sekunder  yang  di  duga  sebagai  zat  yang  menyebabkan  kematian  larva  Artemia  salina  leach  tersebut  adalah flavonoid dan alkaloid (Marliza & Oktaviani, 2021).
Data yang diperoleh pada Tabel 3 tersebut, kemudian dianalisis dengan menggunakan tabel analisis probit untuk mendapat nilai LC 50 ( lethal concentration 50) dan menggunakan SPSS V.20 untuk menunjukkan grafik yang dihasilkan. Menentukan  harga  LC 50 digunakan  analisis  persamaan  regresi  linier  antara  probit  sebagai  sumbu  Y  terhadap  log konsentrasi sebagai sumbu X sehingga didapatkan grafik persamaan garis lurus Y = 3,3873X  - 3,215 sedangkan kurva yang didapatkan dengan SPSS V.20 menunjukkan koefisien korelasi yang didapat yakni R 2 = 0,8407 yang berarti bahwa sebesar  84,07%  perubahan  nilai  probit  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  ekstrak.  Hal  ini  menunjukkan  meningkatnya konsentrasi  ekstrak  diikuti  dengan  meningkatnya  nilai  probit  (respon  kematian  larva)  Berdasarkan  nilai  R2  yang didapatkan tersebut dapat dikatakan bahwa tingkat hubungan yang dihasilkan tergolong sangat kuat (Panggabean et al., 2020).

## 4. KESIMPULAN
Golongan senyawa yang positif terkandung di dalam daun bayam duri ( Amaranthus spinosus L.) dengan metode skrining fitokimia  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin,  triterpenoid  dan  glikosida.  Berdasarkan  hasil  uji  sitotoksisitas menggunakan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  bayam  duri

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i2.5398
( Amaranthus spinosus L.) bersifat toksik dan berpotensi sebagai antikanker dengan daya sitotoksisitas yang didapat yakni nilai LC50 = 269,15 µg/mL.

## REFERENCES
Arnanda, Q. P., & Nuwarda, R. F. (2019). Penggunaan radiofarmaka teknesium-99m dari senyawa glutation dan senyawa flavonoid sebagai deteksi dini radikal bebas pemicu kanker. Farmaka , 17 (2), 236–243.
Chusniasih, D., & Tutik, T. (2020). Uji Toksisitas Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (Bslt) Dan Identifikasi Komponen Fitokimia Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao (Theobroma cacao L.). Analit: Analytical and Environmental Chemistry , 5 (2), 192– 201.
Depkes, R. I. (1989). Materia Medika Indonesia, Edisi V, Jakarta. Departemen Kesehatan Republik Indonesia .
Djindadi, I. T., Tulandi, S. S., Mongi, J., & Palandi, R. R. (2020). Aktivitas Antibakteri Daun Bayam Duri Amaranthus Spinosus Linn Terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus. Majalah Info Sains , 1 (2), 22–29.
Fadli, F., Suhaimi, S., & Idris, M. (2019). Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Salam (Syzygium polyanthum (Wight) Walp.)
Dengan Metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test). Medical Sains: Jurnal Ilmiah Kefarmasian , 4 (1), 35–42. Fatmawat, S. (2019). Bioaktivitas dan konstituen kimia tanaman obat Indonesia . Deepublish.
Hasim, H., Arifin, Y. Y., Andrianto, D., & Faridah, D. N. (2019). Ekstrak etanol daun belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi) seba gai antioksidan dan antiinflamasi. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan , 8 (3), 86–93.
Indriyanti, E., Purwaningsih, Y., & Wigati, D. (2018). Skrining Fitokimia dan Standarisasi ekstrak kulit buah labu kuning (Cu curbita moschata). Cendekia Eksakta , 3 (2). https://publikasiilmiah.unwahas.ac.id/index.php/CE/article/view/2473 Kaban, V. E., Nasri, N., Gurning, K., Syahputra, H. D., & Rani, Z. (2022). Formulasi Sediaan Lip Cream Ekstrak Daun Miana (Coleus scuatellariodes [L] Benth.) sebagai Pewarna Alami. INSOLOGI: Jurnal Sains Dan Teknologi , 1 (4), 393–400.
Kurniawan, H., & Ropiqa, M. (2021). Uji toksisitas ekstrak etanol daun ekor kucing (Acalypha hispida Burm. F.) dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Journal Syifa Sciences and Clinical Research , 3 (2), 52–62.
Marliza, H., & Oktaviani, D. (2021). Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol Daun Kemumu (Colacasia Gigantea Hook. F) dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Bencoolen Journal Of Pharmacy , 1 (1), 38–45.
Nabila,  M.  P.,  &  Fitrianingsih,  S.  P.  (2023). Uji  Aktivitas  Sitotoksik  Ekstrak  dan  Fraksi Daun  Pelawan  (Tristaniopsis  Merguensis Griff.)  Menggunakan  Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT). Bandung  Conference  Series:  Pharmacy ,  9–16. https://proceedings.unisba.ac.id/index.php/BCSP/article/view/7681
Nasri,  N.,  Kaban,  V.  E.,  Satria,  D.,  Syahputra,  H.  D.,  &  Rani,  Z.  (2023).  Mekanisme  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Kemangi (Ocimum basilicum L.) terhadap Salmonella typhi. Journal of Pharmaceutical and Health Research , 4 (1).
Nasri, N., Satria, D., Kaban, V. E., Tania, C. G., Syahputra, H. D., & Rani, Z. (2024). Antibacterial Potential of Ethanolic  Extract of Avocado Leaves (Persea americana mill.) against Clinical Isolate of Klebsiella pneumoniae and Proteus mirabilis. Trends in Sciences , 21 (7), 7821–7821.
Nasution, F. A.-U., Ridwanto, R., & Rani, Z. (2023). Uji sitotoksisitas ekstrak etanol daun sirih cina (Peperomia pellucida [L.] Kunth) dengan metode brine Shrimp lethality test. Journal of Pharmaceutical and Sciences , 1927–1934.
Nasution, H. M., Rani, Z., Fauzi, Z. P. A., & Ridho, A. R. (2024). Antimicrobial Activity Test of Ethanol Extract of Senggani Leaves (Melastoma malabraticum L) Against Propionibacterium Acnes and Staphylococcus Epidermidis. Jurnal Sains Dan Kesehatan , 6 (2), 292–298.
Nasution, H. M., Yuniarti, R., Rani, Z., & Nursyafira, A. (2022). Phytochemical Screening And Antibacterial Activity Test Of Ethanol Extract  Of  Jengkol  Leaves  (Archidendron  Pauciflorum  Benth.)  IC  Nielsen  Against  Staphylococcus  Epidermidis  And Propionibacterium Acnes. International Journal of Science, Technology & Management , 3 (3), 647–653.
Ningtias, A., & Rani, Z. (2023). Simplicia Characteristics and Phytochemical Screening of Buni Fruit (Antidesma bunius L. Spreng).
Indonesian Journal of Science and Pharmacy , 1 (1), 1–7. Nurbaity, N. (2020). Efektivitas Pasta Gigi Ekstrak Etanol Daun Afrika (Vernonia Amygdalina Del) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus [PhD Thesis, Skripsi, Universitas Muhammadiyah Magelang]. http://eprintslib.ummgl.ac.id/id/eprint/2475 Nurmazela,  V.,  Ridwanto,  R.,  &  Rani,  Z.  (2022).  Antioxidant  Activity Test  of  Barangan  Banana  Hump’s  Ethanol  Extract  (Musa Paradisiaca  (L.))  with  DPPH  (1,  1  Diphenyl-2-Picrylhydrazyl)  Method. International  Journal  of  Science,  Technology  & Management , 3 (5), 1478–1483.
Panggabean, L., Nurhamidah, N., & Handayani, D. (2020). Profil fitokimia dan uji sitotoksik ekstrak etanol tumbuhan Zanthoxylum acanthopodium DC (Andaliman) menggunakan metode BSLT. ALOTROP , 4 (1).
https://ejournal.unib.ac.id/alotropjurnal/article/view/13711
Pulungan, A. F., Ridwanto, R., Dalimunthe, G. I., Rani, Z., Dona, R., Syahputra, R. A., & Rambe, R. (2022). Phytochemical Screening And Antioxidant Activity Testing Of Porang (Amorphophallus Muelleri Blume) Leaf Ethanol Extract From Kuta Buluh Region, North Sumatera. International Journal of Health and Pharmaceutical (IJHP) , 3 (1), 1–7.
Purnomo,  F.  O.  (2023).  REVIEW  TANAMAN  BAYAM  BERDURI  (Amaranthus  spinosus  L.):  SKRINING  FITOKIMIA  DAN PEMANFAATANNYA. Binawan Student Journal , 5 (1), 77–83.
Puspitasari, E., & Rozirwan, M. H. (2018). Uji toksisitas dengan menggunakan metode brine shrimp lethality test (BSLT) pada ekstrak mangrove (Avicennia marina, Rhizophora mucronata, Sonneratia alba dan Xylocarpus granatum) yang berasal dari Banyuasin, Sumatera Selatan. Jurnal Biologi Tropis , 18 (1), 91–103.
Putri, T., Supono, S., & Putri, B. (2020). Pengaruh jenis pakan buatan dan alami terhadap pertumbuhan dan kelangsungan hidup larva udang vaname (Litopenaeus vannamei). Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia, 8 (2), 176–192.
Rachmawati, S. R., & Suriawati, J. (2019). Characterization of moringa (moringa oleifera lam.) leaf water extracts by chemical and microbiology. SANITAS J Teknol Dan Seni Kesehat , 10 (2), 102â.

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i2.5398
Rafita, R. Y., Nasution, H. M., Rani, Z., & Fahmi, F. (2022). The Buas Buas Leaf Utilization of Buas Buas Leaf (Premna pubescens Blume)  Ethanol  Extract  as  Liquid  Soap  With  Anti-Bacteria  Activity. International  Journal  of  Science,  Technology  & Management , 3 (3), 733–743.
Rambe, R., Rani, Z., & Thomas, N. A. (2021). Uji Efektivitas Mukolitik Ekstrak Umbi Bawang Dayak (Eleutherine bulbosa (Mill) Urb). Journal Syifa Sciences and Clinical Research , 3 (2), 71–77. Rani, Z. (2021). Evaluasi Sediaan Nanokrim Anti-Aging dari Vco (Virgin Coconut Oil) dengan Menggunakan Gliserol Produk Samping Transesterifikasi Minyak Goreng Bekas Sebagai Kosurfaktan . Universitas Sumatera Utara.
Rani, Z., Pulungan, A. F., Ningtias, A., & Nasution, H. M. (2023). Krim Pelembab Kulit Semangka . LPPM UMNAW.
Rani, Z., Ridwanto, R., Miswanda, D., Yuniarti, R., Sutiani, A., Syahputra, R. A., & Irma, R. (2022). Cytotoxicity Test of Cocoa Leaf Ethanol  Extract  (Theobroma  Cacao  L.)  With  Brine  Shrimp  Lethality Test  (BSLT)  Method. Indonesian  Journal  of  Chemical Science and Technology (IJCST) , 5 (2), 80–87.
Ratu, A. P., & Mugiyanto, E. (2018). Uji Toksisitas Daun Ketepeng (Cassia Alata L.), Kulit Buah Pisang Ambon (Musa Paradisiaca L.  Var  Sapientum)  Dan  Kulit  Rimpang  Kencur  (Kaempferia  Galanga  Linn.)  Dengan  Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Prosiding University Research Colloquium , 189–194.
http://repository.urecol.org/index.php/proceeding/article/download/112/109
Ridwanto, R., Pratiwi, A., & Rani, Z. (2023). Isolation and Toxicity Test of Chitosan from Green Mussels (Perna viridis L.) With Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Method. Jurnal Sains Dan Kesehatan , 5 (5), 759–765.
Ridwanto, R., Saragih, D. S., Rani, Z., Pulungan, A. F., Syahputra, R. A., Kaban, V. E., & Nasri, N. (2023). TOXICITY TEST OF VANAME  SHRIMP  (Litopenaeus  vannamei)  SKIN  CHITOSAN  USING  BRINE  SHRIMP  LETHALITY  TEST  (BSLT) METHOD. Rasayan Journal of Chemistry , 16 (4).
Ridwanto, R., Trizaldi, A., Rani, Z., Daulay, A. S., Nasution, H. M., & Miswanda, D. (2023). Antioxidant Activity Test Of Met hanol Extract  Of  Gaharu  (Aquilaria  Malaccensis  Lam.)  Bark  With  Dpph  (1,  1  Diphenyl-2-Picrylhydrazyl)  Method. International Journal of Health and Pharmaceutical (IJHP) , 3 (2), 232–240.
Robiatun, R. R., Pangondian, A., Paramitha, R., Rani, Z., & Gultom, E. D. (2022). Formulation And Evaluation Of Hand Sanitizer Gel From Clove Flower Extract (Eugenia aromatica L.). International Journal of Science, Technology & Management , 3 (2), Article 2. https://doi.org/10.46729/ijstm.v3i2.472
Rossa, A., Daulay, A. S., Ridwanto, R., & Rahayu, Y. P. (2023). Aktivitas antioksidan dan uji toksisitas ekstrak kulit batang kayu raru (Cotylelobium  lanceolatum  Craib)  dengan  menggunkan  metode  DPPH  dan  metode  BSLT. Journal  of  Pharmaceutical  and Sciences , 339–352.
Sahputra, A., Sadarun, B., & Sahidin, I. (2019). KARAKTERISASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER DAN UJI ANTI BAKTERI SPONS Phyllospongia sp. DI PERAIRAN YANG BERBEDA . Jurnal Sapa Laut (Jurnal Ilmu Kelautan), 4(4), 153 Septiana, L., Winata, H. S., Panggabean, F. E. W., Rani, Z., & Rambe, R. (2024). FORMULASI SEDIAAN GEL EKSTRAK KULIT BATANG  ASAM  KANDIS  (Garcinia  xanthochymus  Hook.  F.  Ex.  Anderson)  DAN  UJI  ANTIINFLAMASI  TERHADAP TIKUS PUTIH JANTAN. Forte Journal , 4 (1), 183–190.
Sepvina, N. I., Ridwanto, R., & Rani, Z. (2022). Uji Toksisitas Kitosan Cangkang Kerang Bulu (Anadara antiquata) Dengan Metod e Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Jurnal Ilmiah Ibnu Sina , 7 (2), 380–389.
Suryani, M., Rani, Z., & Surbakti, C. I. (2024). PEMANFAATAN EKSTRAK ETANOL DAUN MIANA (Coleus scutellariodies (L.)
Benth) SEBAGAI PEWARNA ALAMI PADA SEDIAAN LIPSTIK. Forte Journal , 4 (1), 217–224.
Syahputra,  R.  A.,  Fajrina,  R.,  Rani,  Z.,  &  Rahmadani,  A.  (2023).  Producing  Polyurethane  as  Wound  Plaster  using  Glycerol Transesterified  of  Waste  Cooking  Oil  with  Moringa  Leaf  Extract  (Moringa  Oleifera  Lam.)  as  an  Antimicrobial. Trends  in Sciences , 20 (12), 6963–6963.
Syahputra, R. A., Sutiani, A., Silitonga, P. M., Rani, Z., & Kudadiri, A. (2021). Extraction and phytochemical screening of ethanol extract and simplicia of moringa leaf (Moringa oleifera Lam.) from sidikalang, north sumatera. International Journal of Science, Technology & Management , 2 (6), 2072–2076.
Yanti, S., & Vera, Y. (2019). Skrining fitokimia ekstrak daun belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi). Jurnal Kesehatan Ilmiah Indonesia (Indonesian Health Scientific Journal) , 4 (1), 41–46.
Yuza, M., Ridwanto, R., & Rani, Z. (2023). Determination Of Total Flavonoid Content Of Yellow Wood (Arcangelisia Flava (L.) Merr) Extract And Antibacterial Activity Against Staphylococcus aureus. Journal of Agromedicine and Medical Sciences , 9 (3), 140–145.
Zafrial, R. M., & Amalia, R. (2018). Anti kanker dari tanaman herbal. Farmaka , 16 (1), 15–23.