## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL, ETIL ASETAT,
DAN n -HEKSAN DARI DAUN SESEWANUA ( Clerodendron squamatum Vahl.)
Yosina M.  Huliselan 1) , Max R.J. Runtuwene 2) , Defny S. Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado
2) Jurusan Kimia FMIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
Sesewanua ( Clerodendron squamatum Vahl.) empirically has been used by people in several areas  in  North  Sulawesi  to  treat  fever,  fractures  ,and  reducing  swelling. Sesewanua  leaves contains  flavonoids  and  alkaloids  that  can  be  potentially  as  an  antioxidant.  The  purpose  of this study was to determine the total phenolic content and antioxidant activity of the ethanol, ethyl  acetate  and n- hexane  extracts  from  the  leaves  of  sesewanua.  The  extraction  of sesewanua  leaves  is  using  the  maceration  method.  Determination  of  total  phenolic  contents use the Folin Ciocalteau method and testing of antioxidant activity using the 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl  (DPPH)  method.  Based  on  the  results  obtained,  the  highest  total  phenolic content ethyl acetate extract of 36.25 mg/L, followed by ethanol extract of 14.659 mg/L, and the n -hexane extract of 5.795 mg/L. Based on the calculation of the IC 50, ethyl acetate extract has the highest antioxidant activity (13.084 mg/L), followed by ethanol extract (17.85 mg/L), and n -hexane extracts (23.737 mg/L).
Keywords: Leaves of Sesewanua ( Clerodendron squamatum Vahl.), Total phenolic, Antioxidant, DPPH

## ABSTRAK
Sesewanua  ( Clerodendron  squamatum Vahl.)  secara  empiris  telah  digunakan  oleh masyarakat di beberapa daerah di Sulawesi Utara untuk mengobati demam, patah tulang, dan penurun  bengkak.  Daun  sesewanua  mengandung  flavonoid  dan  alkaloid  yang  dapat berpotensi  sebagai  antioksidan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  menentukan  kandungan total  fenolik  dan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol,  etil  asetat,  dan n -heksan  dari  daun sesewanua.  Ekstraksi  daun  sesewanua  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  maserasi. Penentuan  kandungan  total  fenolik  menggunakan  metode  Folin  Ciocalteau  dan  pengujian aktivitas antioksidan menggunakan metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH). Berdasarkan hasil  yang  diperoleh  ekstrak  etil  asetat  memiliki  kandungan  total  fenolik  tertinggi  sebesar 36,25 mg/L, diikuti ekstrak etanol sebesar 14,659 mg/L, dan ekstrak n -heksan sebesar 5,795 mg/L.  Berdasarkan  hasil  perhitungan  IC 50 ekstrak  etil  asetat  daun  sesewanua  memiliki aktivitas  antioksidan  tertinggi  dengan  nilai  IC 50 sebesar  13,084  mg/L,  diikuti  ekstrak  etanol sebesar 17,85 mg/L, dan ekstrak n -heksan sebesar 23,737 mg/L.
Kata kunci: Sesewanua ( Clerodendron squamatum Vahl.), Total Fenolik, Antioksidan, DPPH.

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  molekul yang  tidak  stabil  dan  sangat  reaktif  karena mengandung  satu  atau  lebih  elektron  tidak berpasangan  pada  orbit  terluarnya.  Untuk mencapai  kestabilan,  radikal  bebas  akan bereaksi  dengan  molekul  disekitarnya  untuk memperoleh  pasangan  elektron.  Reaksi  ini akan berlangsung terus menerus dalam tubuh dan apabila tidak dihentikan akan menimbulkan  berbagai  penyakit  seperti penuaan  dini,  kanker,  lever  serta  penyakit degeneratif  lainnya.  Karena  sangat  reaktif, radikal bebas sangat mudah  menyerang sel- sel  sehat  di  dalam  tubuh,  oleh  karena  itu tubuh memerlukan pertahanan untuk menetralkan  radikal  bebas  tersebut  (Hernani dan Raharjo, 2005).
Antioksidan dapat menetralkan radikal bebas dengan cara mendonorkan satu atom  protonnya  sehingga  membuat  radikal bebas  stabil  dan  tidak  reaktif  (Singh,  2004). Terdapat sistem enzim dalam tubuh manusia misalnya  enzim  superoksida  dismutase  yang dapat  berfungsi  sebagai  antioksidan,  namun jika  jumlah  radikal  bebas  lebih  banyak daripada  enzim  yang  terdapat  dalam  tubuh maka tubuh perlu tambahan antioksidan dari luar.  Berdasarkan  sumbernya  antioksidan terbagi  menjadi  dua  jenis,  yaitu  antioksidan buatan  dan  antioksidan  alami  (Meenakshi et al ., 2009).
Antioksidan  buatan  seperti  asam benzoat, Butil Hidroksi  Anisol (BHA), Butil Hidroksi  Toluen  (BHT)  dan  Tert-Butil
Hidroksi Quinon (TBHQ) dapat
menimbulkan  efek  samping  pada  kesehatan tubuh.  BHA  dan  BHT  telah  diteliti  dapat menimbulkan  tumor  pada  hewan  uji  jika digunakan  dalam  jangka  waktu  yang  lama dan  juga  dapat  menimbulkan  kerusakan  hati jika dikonsumsi secara berlebihan (Andarwulan et  al .,  1996).  Efek  samping yang ditimbulkan oleh penggunaan antioksidan
buatan mendorong perkembangan penelitian terhadap antioksidan alami yang lebih aman dan lebih mampu  dalam  mengurangi  radikal  bebas dalam    tubuh.  Antioksidan  alami  dapat
diperoleh  dari  tumbuh-tumbuhan  atau  buah- buahan (Ukieyanna, 2012).
Tumbuhan  mengandung  metabolit sekunder  yang  dapat  berpotensi  sebagai antioksidan,  diantaranya  adalah  alkaloid, flavonoid,  senyawa  fenol,  steroid,  dan terpenoid (Marliana, 2007). Senyawa antioksidan  dari  tumbuhan  dapat  diperoleh dengan  cara  ekstrasi  menggunakan  pelarut. Perbedaan polaritas dari pelarut menghasilkan  perbedaan  jumlah  dan  jenis senyawa  metabolit  sekunder  yang  didapat (Fajarullah, 2014). Sesewanua ( Clerodendron squamatum Vahl.)  secara  empiris  telah digunakan  oleh  masyarakat  dibeberapa daerah  di  Sulawesi  Utara  untuk  mengobati berbagai  macam  penyakit  seperti  demam, patah tulang, dan penurun bengkak. Menurut Moot et  al. (2013)  senyawa  yang  diduga bersifat sebagai antipiretik dalam infusa daun sesewanua  adalah  flavonoid.  Selain  itu menurut Sangi et al. (2008) daun sesewanua dianalisis mengandung alkaloid dan flavonoid.
Kandungan  metabolit  sekunder  pada daun  sesewanua  seperti  flavonoid  dan alkaloid  yang  dapat  berpotensi  sebagai antioksidan  serta  perbedaan  polaritas  pelarut yang  dapat  menghasilkan  perbedaan  jumlah dan  jenis  metabolit  sekunder  yang  didapat mendorong  penulis  untuk  meniliti  aktivitas antioksidan ekstrak etanol, etil asetat, dan n - heksan dari daun sesewanua.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  diantaranya:  pisau,  blender, timbangan  ( A&D  company  limited ),  ayakan 60 Mesh, sudip, alat-alat gelas ( pyrex ), kertas alumunium,  kertas  saring,  cawan  porselen, oven  ( memmerf ),  pipet  tetes,  mikro  pipet, rotari  evapotator  ( eyla  N-1000 ),  penangas air, vortex, spektrofotometer UV-VIS
( Shimadzu 1800 ).

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  diantaranya:  daun  sesewanua yang diambil dari daerah Malalayang, etanol, etil  asetat, n -heksana,  metanol,  besi  (III) klorida  5%,  besi  (III)  klorida  1%,    asam klorida  pekat,  asam  klorida  2  N,  serbuk magnesium,  asam  sulfat  2  N,  asam  sulfat pekat,    natrium  hidroksida  10%,  pereaksi wagner,  air,  asam  asetat,  dietil  eter,  reagen Folin-Ciocalteu ,  natrium  karbonat  7,5%, kristal 1,1 difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH).

## Pengambilan Sampel
Sampel diambil dari daerah Malalayang, Manado. Bahan yang digunakan adalah bagian daun sesewanua.

## Identifikasi Tanaman
Identifikasi  tanaman  dilakukan  di Laboratorium Taksonomi Tumbuhan, Jurusan  Biologi    Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,    Universitas  Sam Ratulangi Manado.

## Preparasi Sampel
Daun sesewanua dicuci pada air kran yang mengalir untuk menghilangkan kotoran yang  menempel,  dikeringanginkan,  dirajang menjadi potongan yang kecil-kecil, dikeringanginkan  kembali  diudara  terbuka. Setelah  kering  daun  sesewanua  dihaluskan dengan  blender  sehingga  berbentuk  serbuk kemudian diayak dengan ayakan.

## Uji Kadar Air (Modifikasi AOAC, 1999)
Cawan  porselen  dikeringkan  dalam oven  pada  suhu  40 o C.  Setelah  dingin  berat cawan  ditimbang,  sampel  daun  sesewanua ditimbang  sebanyak  2  g  dan  dimasukkan  ke dalam  cawan.  Cawan  yang  berisi  sampel dimasukkan  ke  dalam  oven  pada  suhu  40 o C selama  3  jam.  Setelah  didinginkan  cawan berisi  sampel  ditimbang  kembali.  Kadar  air dihitung dengan persamaan :

## Ekstraksi
Ekstraksi  daun  sesewanua  dilakukan dengan  cara  maserasi  menggunakan  pelarut etanol,  etil  asetat,  dan n -heksan.  Ditimbang sebanyak  200  g  simplisia  daun  sesewanua lalu  ditambahkan  pelarut  800  mL  hingga simplisia  terendam  seluruhnya.  Ekstraksi dilakukan  selama  3x24  jam  terlindung  dari cahaya  dan  dilakukan  pengadukan  setiap  24 jam. Pada hari ke 2 dan ke 3 pelarut disaring untuk dilakukan remaserasi sehingga diperoleh 3 filtrat untuk setiap pelarut. Filtrat kemudian dievaporasi dengan rotari evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental etanol,  etil  asetat,  dan n -heksan  dari  daun sesewanua.
Skrining Fitokimia (Harborne, 1996) Sebanyak 2 g serbuk daun sesewanua dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian diekstraksi dengan pelarut metanol sebanyak 10 mL. Setelah sampel mengendap, sampel disaring dengan menggunakan  kertas  saring  dan  filtrat  yang diperoleh dipindahkan ke tabung reaksi yang lain untuk dilakukan pengujian fitokimia.

## Uji Fenolik
Sebanyak  1  mL  ekstrak  metanol sampel daun sesewanua dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan  FeCl 3 5%  sebanyak  2-3  tetes. Sampel  yang  mengandung  fenolik  akan mengalami  perubahan  warna  menjadi  biru kehitaman.

## Uji Flavonoid
 Uji  Flavonoid  dengan  HCl  Pekat  dan Logam Magnesium
Sebanyak  1  mL  ekstrak  metanol sampel  daun  sesewanua  dimasukkan  ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan  HCl  pekat  sebanyak  2  tetes dan dikocok kuat. Setelah itu ditambahkan serbuk magnesium (Mg) dan dikocok kuat. Sampel positif mengandung flavonoid  bila  terdapat  buih  dengan intensitas  yang  banyak  dan  larutan  akan mengalami  perubahan  warna  menjadi warna jingga.
 Uji Flavonoid dengan H 2 SO 4 Sebanyak  1  mL  ekstrak  metanol sampel  daun  sesewanua  dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan H 2 SO 4 2 N sebanyak 2 tetes dan dikocok kuat. Sampel positif mengandung flavonoid bila larutan mengalami  perubahan  warna  yang  sangat mencolok  menjadi  warna  kuning,  merah, atau coklat.
 Uji Flavonoid dengan NaOH 10%
Sebanyak  1  mL  ekstrak  metanol sampel  daun  sesewanua  dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan NaOH 10% sebanyak 2 tetes dan dikocok kuat. Sampel positif mengandung  flavonoid  bila  terdapat warna yang sangat mencolok, yaitu warna kuning, merah, coklat, atau hijau.

## Uji Alkaloid
Sebanyak  1  mL  ekstrak  metanol sampel  daun  sesewanua  ditambahkan  10 tetes  H 2 SO 4 2  N  dan  dikocok  kuat. Kemudian  ditambahkan  reagen  Wagner. Sampel  kemudian  diamati.  Hasil  positif  bila penambahan  reagen  Wagner  menghasilkan endapan kecoklatan.

## Uji Lieberman Burchard (Uji Terpen dan Steroid)
Ekstrak  metanol  daun  sesewanua diteteskan  pada  plat  tetes  pada  3  titik  (titik pertama  untuk  standar  dan  dua  titik  lainnya untuk  pengujian  terpenoid  dan  steroid)  dan dibiarkan  hingga  kering.  Setelah  kering, ditambahkan  asam  sulfat  pekat  sebanyak  1 tetes, asam asetat sebanyak 1 tetes, dan dietil eter  sebanyak  2  tetes,  kemudian  diamati perubahan  warnanya.  Sampel  positif  bila mengalami  perubahan  warna  menjadi  merah atau coklat untuk terpenoid (triterpenoid) dan perubahan warna biru, ungu, atau hijau untuk steroid.

## Uji Saponin
Sebanyak  1  mL  ekstrak  metanol sampel daun sesewanua
dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian
ditambahkan 5 mL air panas dan ditambahkan  2  tetes  HCl  2  N  dan  dikocok kuat.  Setelah  itu,  dilihat  apakah  terbentuk buih  setelah  didiamkan  selama  10  menit. Sampel  positif  mengandung  saponin  bila terdapat  buih dengan intensitas  yang banyak dan konsisten selama 10 menit.

## Uji Tanin
Sebanyak  1  mL  ekstrak    metanol sampel daun sesewanua dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan  FeCl 3 1%  sebanyak  2-3  tetes. Sampel  positif  mengandung  tanin  bila mengalami  perubahan  warna  menjadi  hijau kehitaman.

## Penentuan  Kandungan  Total  Fenolik (Murtijaya dan Lim, 2007)

## Pembuatan Kurva Baku Asam Galat
Sebanyak  300  μl  larutan  asam  galat dengan  konsentrasi  5,  10,  15,  20,  25,  30,  35 mg/L  masing-masing  dimasukkan  dalam tabung,  kemudian  ditambah  1,5  mL  reagen Folin  Ciocalteau  dan  digojog.  Setelah didiamkan  selama  3  menit,  masing-masing larutan  ditambah  1,2  mL  larutan  Na 2 CO 3 7,5%  digojog  homogen,  dan  didiamkan selama  60  menit  pada  suhu  kamar.  Semua larutan diukur absorbansinya pada λ 775 nm, kemudian  dibuat  kurva  kalibrasi  hubungan antara  konsentrasi  asam  galat  dengan absorbansi.

## Penetapan Kadar Total Fenolik
Ekstrak  etanol,  etil  asetat,  dan n - heksan  daun  sesewanua  dengan  konsentrasi 1000  mg/L  dipipet  sebanyak  300  μl  dan ditambahkan  dengan  1,5  mL  reagen  Folin- Ciocalteu  dan  digojog.  Setelah  didiamkan selama  3  menit,  ditambah  1,2  mL  larutan Na 2 CO 3 7,5% dan didiamkan lagi selama 60 menit  pada  suhu  kamar.  Absorbansi  ekstrak dibaca  dengan  spektrofotometer  UV-VIS pada λ 775 nm. Hasilnya dinyatakan sebagai ekuivalen asam galat dalam mg/L ekstrak.
Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  dengan Metode DPPH (Burda dan Olezek, 2001)
Sebanyak  1  mL  ekstrak  dengan konsentrasi  5,  10  ,15  ,  20  dan  25  mg/L masing-masing  ditambahkan  1  mL  larutan 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH)  90  µM dalam  etanol  dan  divorteks  selama  2  menit. Berubahnya  warna  larutan  dari  ungu  ke kuning  menunjukan  efisiensi    penangkal radikal  bebas.  Selanjutnya  pada  5  menit terakhir  menjelang  30  menit  inkubasi, absorbansi  diukur  pada  λ  517  nm  dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS. Aktivitas  penangkal  radikal  bebas  dihitung sebagai  presentase  berkurangnya  warna DPPH dengan menggunakan persamaan :
Aktivitas antioksidan (%) =
Penentuan Nilai IC 50 Hasil  perhitungan  dari  aktivitas antioksidan dimasukkan ke dalam persamaan garis  y  =  ax  +  b  dengan  konsentrasi  (mg/L) sebagai absis (sumbu x) dan nilai % aktivitas antioksidan  sebagai  ordinatnya  (sumbu  y). Nilai  IC 50 dari  perhitungan  pada  saat  % aktivitas  antioksidan  sebesar  50%  akan diperoleh dari persamaan garis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Identifikasi Sampel
Identifikasi  sampel  daun  sesewanua dilakukan di Laboratorium Taksonomi Tumbuhan  Program  Studi  Biologi  FMIPA Universitas Sam Ratulangi Manado. Identifikasi sampel bertujuan untuk mengetahui kebenaran  identitas sampel yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  benar daun  sesewanua,  sehingga  kesalahan  dalam pengumpulan sampel yang akan diteliti dapat dihindari.  Berdasarkan  hasil  identifikasi dapat  diperoleh  kepastian  bahwa  tanaman yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah jenis Clerodendron squamatum Vahl.

## Preparasi Sampel
Sampel yang  diperoleh  terlebih dahulu  dibersihkan  dari  pengotor  seperti
debu  dan  tanah  dengan  menggunakan  air mengalir.  Sampel  sebanyak  4  kg  dirajang dan  keringanginkan  pada  tempat  yang  tidak terkena sinar matahari secara langsung.
Pengeringan  dilakukan  selama  7  hari sehingga  diperoleh  sampel  kering  sebanyak 1,5  kg.  Sampel  kering  dihaluskan  dengan menggunakan  blender.  Serbuk  sampel  daun sesewanua yang diperoleh berwarna hijau tua diayak  dengan  ayakan  60  mesh  sehingga diperoleh serbuk sampel sebanyak 700 g.

## Penentuan Kadar Air
Penentuan  kadar  air  daun  sesewanua dilakukan  dengan  pemanasan  oven  dan diperoleh  hasil  yaitu  4,68%.  Hasil  yang diperoleh  sudah  baik,  karena  menurut Herawati et  al .  (2012)  simplisia  yang  baik memiliki kadar air < 10%.

## Ekstraksi Daun Sesewanua
Ekstraksi daun sesewanua dalam penelitian ini menggunakan metode maserasi.  Menurut  Sie  (2013)  kandungan antioksidan  merupakan  kandungan  senyawa yang  tidak  tahan  panas  sehingga  metode maserasi  yang  merupakan  ekstraksi  secara dingin akan lebih optimal dalam mengekstraksi senyawa antioksidan.
Ekstraksi  dilakukan  selama  3x24  jam disertai  dengan  pengadukan  dan  setiap  24 jam ekstrak disaring dan dimaserasi kembali dengan  pelarut  yang  baru.  Remaserasi diperlukan  untuk  mengganti  larutan  yang telah  jenuh  dengan  pelarut  yang  baru sehingga  semua  senyawa  kimia  yang terkandung  dalam  tanaman  dapat  ditarik secara optimal.
Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  etanol,  etil  asetat,  dan n -heksan. Tujuan  penggunaan  tiga  pelarut  dengan polaritas yang berbeda adalah untuk mengetahui  rendemen  dan  mendapatkan senyawa aktif dari daun sesewanua berdasarkan  tingkat  kepolarannya.  Ekstraksi menggunakan pelarut dengan kepolaran yang berbeda  akan  menghasilkan  komponen polifenol  yang  berbeda  sehingga  sifat antioksidan  yang  dimiliki  oleh  setiap senyawa  yang  diperoleh  dari  ekstraksi
tersebut  juga  berbeda  (Pambayun et  al. , 2007).
Ekstrak  etanol  (EE)  memiliki  rendemen sebesar  6,6%,  ekstrak  etil  asetat  (EEA) memiliki  rendemen  sebesar  5%,  dan  ekstrak n -heksan  (ENH)  memiliki  rendemen  sebesar 2%. Hasil ini sesuai seperti  yang dinyatakan Priyanto  (2010)  bahwa  rendemen  ekstrak hasil  maserasi  dengan  pelarut  yang  berbeda akan menghasilkan rendemen yang berbeda.

## Skrining Fitokimia
Pada  Tabel    dapat  diketahui  hasil  uji skrining  fitokimia  dengan  metode  Harbone (1996) menunjukkan bahwa daun sesewanua mengandung  metabolit  sekunder  seperti fenolik, flavonoid, dan alkaloid.
Pada  pengujian  skrining  fitokimia untuk  metabolit  sekunder  saponin,  tanin, terpen  dan  steroid  diperoleh  hasil  yang negatif  karena  sampel  tidak  mengalami perubahan  warna  yang  sesuai  dengan indikator.

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Penentuan  kandungan  total  fenolik merupakan  perkiraan  kasar  jumlah  senyawa fenolik  yang  terdapat  dalam  suatu  bahan. Kebanyakan  senyawa  fenolik  biasanya bersifat antioksidan oleh karena itu pengukuran  total  fenolik  dapat  digunakan untuk  memperkirakan  aktifitas  antioksidan suatu bahan (Rahmat, 2009).
Pada penetapan kadar total fenolik, sampel  direaksikan  dengan  Folin  Ciocalteu dalam suasana alkalis kemudian dibaca pada λ  775  nm  setelah  didiamkan  selama  60 menit. Sebagai standar digunakan asam galat yang  merupakan  senyawa  fenolik  dan dikenal  sebagai  antioksidan  yang  kuat (Nurwaini et  al. ,  2006).  Kurva  baku  asam galat ditetapkan dengan menggunakan persamaan  regresi  linier,  yang  menyatakan hubungan  antara  konsentrasi  asam  galat dinyatakan  sebagai  x  dan  absorbansi  asam galat  dengan  pereaksi  Folin  Ciocalteu dinyatakan  sebagai  y.    Pada  penelitian  ini diperoleh  persamaan  kurva  baku  asam  galat yaitu y = 0,022x+0,323 dengan r 2 = 0,998.
Berdasarkan  gambar  dapat  diketahui kandungan  total  fenolik  dari  ekstrak  daun sesewanua  yang  paling  tinggi  terdapat  pada ekstrak etil asetat (EEA) yaitu sebesar 36,25 mg/L,  diikuti  ekstrak  etanol  (EE)  sebesar 14,659  mg/L,  dan  ekstrak n -heksan  (ENH) sebesar 5,795 mg/L.
Rohman et  al. (2006)  melaporkan bahwa pelarut  etil  asetat sangat  cocok untuk mengekstraksi  senyawa  fenolik,  hal  ini sesuai  dengan  hasil  yang  diperoleh  dimana kandungan  total  fenolik  tertinggi  terdapat pada ekstrak etil asetat daun sesewanua.

## Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  dengan Metode DPPH
Konsentrasi ekstrak sampel daun sesewanua yang digunakan adalah 5, 10, 15, 20,  dan  25  mg/L  dalam  pelarut  etanol.  Pada pengujian aktivitas antioksidan ini digunakan vitamin  C  sebagai  pembanding  dengan konsentrasi  2,  4,  6,  8,  10,dan  12  mg/L. Vitamin  C  digunakan  sebagai  pembanding
14,659 36.25 5.795 0 10 20 30 40 EE EEA ENH To tal F eno lik ( m g/ L) Uji Skrining Fitokimia Hasil Indikator
Fenolik + Berwarna biru kehitaman Flavonoid
a. HCl pekat + Mg b. H 2 SO 4 2 N c. NaoH 10%
+ +
+ Berbuih, berwarna jingga Berwarna kuning, merah atau jingga Berwarna kuning,merah, coklat atau hijau Alkaloid a. Reagen Wagner +
Terbentuk endapan kecoklatan Terpen dan Steroid - Berwarna merah atau coklat dan steoid jika berwarna biru, ungu atau hijau Saponin - Berbuih konstan selama 10 menit Tanin - Berwarna hijau kehitaman
karena menurut Youngson (2005) vitamin C merupakan antioksidan yang kuat.
Aktivitas  antioksidan  diukur  dengan menghitung  jumlah  pengurangan  intensitas cahaya  ungu  DPPH  yang  sebanding  dengan pengurangan konsentrasi DPPH. Perendaman tersebut dihasilkan oleh
bereaksinya  molekul  difenil  pikri  hirazil dengan  atom  hidrogen  yang  dilepaskan  oleh molekul komponen sampel sehingga terbentuk senyawa difenil pikril hidrazin dan menyebabkan  terjadinya  peluruhan  warna DPPH  dari  ungu  menjadi  kuning  (Zuhra et al ., 2008).
Aktivitas antioksidan merupakan kemampuan  suatu  senyawa  atau  ekstrak untuk  menghambat  reaksi  oksidasi  yang dapat dinyatakan dengan persentase penghambatan  atau persentase inhibisi.  Pada gambar  dibawah  dapat  dilihat  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  yang digunakan  maka  semakin  besar  aktivitas antioksidan yang diperoleh.
Parameter  yang  digunakan  untuk menunjukkan  aktivitas  antioksidan  adalah IC 50 yang  merupakan  konsentrasi  suatu  zat antioksidan  yang  dapat  menyebabkan  50% DPPH  kehilangan  karakter  radikal  atau konsentrasi  suatu  zat  antioksidan  yang memberikan  persentase  penghambatan  50% (Molyneux,  2004).    Dibuat  persamaan regresi  linear  antara  konsentrasi  (mg/L) sebagai  absis  (sumbu  x)  dan  nilai  aktivitas antioksidan  (%)  sebagai  ordinatnya  (sumbu y)  dari  persamaan  regresi  tersebut  dapat ditentukan nilai IC 50 masing-masing ekstrak.
Ekstrak Persamaan Grafik Nilai IC 50 (mg/L) Etanol y = 0,428x + 42,36 r 2 = 0,966 17,85 Etil Asetat y = 0,428x + 44,4 r 2 = 0,979 13,084 n -Heksan y = 0,38x + 40,98 r 2 = 0,964 23,737 Vitamin C y = 5,012x – 5,026 r 2 = 0,978 10,978
Pada  Tabel  diatas  dapat  diketahui bahwa  slope  pada  persamaan  regresi  linear dari  ekstrak  etanol  dan  etil  asetat  adalah sama  yaitu  0,428  sehingga  dapat  dikatakan bahwa  aktivitas  antioksidan  kedua  ekstrak tersebut  sama  tetapi  lebih  tinggi  dari aktivitas  antioksidan  ekstrak n -heksan  yang memiliki slope 0,38.
Berdasarkan hasil perhitungan IC 50 ekstrak  etil  asetat  memiliki  aktivitas antioksidan  tertinggi  dengan    nilai  IC 50 sebesar  13,084  mg/L  dibandingkan  dengan ekstrak  etanol  dan  n-heksan,  tetapi  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  lebih  rendah  dari vitamin C yang memiliki IC 50 sebesar 10,978 mg/L.
Menurut  Molyneux  (2004)  secara spesifik  suatu  senyawa  dikatakan  sebagai antioksidan  sangat  kuat  jika  nilai  IC 50 <  50 mg/L.  Sehingga  berdasarkan  hal  tersebut, ekstrak  etanol,  etil  asetat,  dan n -heksan  dari daun  sesewanua  dapat  dikatakan  sebagai antioksidan yang sangat kuat karena memiliki IC 50 < 50 mg/L.
Ekstrak  etil  asetat  memberikan pengaruh  efektifitas  yang  tinggi  sebagai antioksidan  terhadap  radikal 2,2  diphenyl-1- picrylhydrazil (DPPH). Keefektifan antioksidan  pada  ekstrak  etil  asetat  dalam menetralkan  radikal  bebas  diduga  berkaitan dengan  sifat  etil  asetat  yang  semi  polar sehingga  banyak  komponen  bioaktif  yang larut di dalamnya.
0 10 20 30 40 50 60 0 5 10 15 20 25 30 A k ti v it as A n ti o k si d an ( %) Konsentrasi (mg/L) Etanol Etil Asetat N-Heksan vitamin C
Hubungan antara IC 50 dengan kandungan  total  fenolik  ekstrak  daun sesewanua mempunyai koefisien korelasi (r 2 ) sebesar  0,91.  Adanya  keeratan  hubungan antara  total  fenolik  (sumbu  y)  dengan  IC 50 pada  masing-masing  ekstrak  ditunjukkan dengan  harga  koefisien  korelasi  yang mendekati satu.
Menurut  Huang et  aI .,  (2005) Aktivitas  antioksidan  berbanding  lurus dengan total fenol, semakin tinggi kandungan fenol dalam suatu bahan semakin tinggi  pula  aktivitasnya  sebagai  antioksidan. Hal  ini  sesuai  dengan  hasil  yang  diperoleh dimana ekstrak etil asetat memiliki kandungan  total  fenolik  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol  dan ekstrak n -heksan sehingga ekstrak etil  asetat dari  daun  Sesewanua  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  lebih  kuat  dibandingkan dengan  ekstrak  etanol  dan  ekstrak n -heksan dari daun sesewanua.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan dapat diambil kesimpulan : a. Ekstrak  etil  asetat  dari  daun  sesewanua memiliki kandungan total fenolik tertinggi sebesar 36,25 mg/L, diikuti ekstrak etanol sebesar  14,659  mg/L,  dan  ekstrak n - heksan sebesar 5, 795 mg/L.
b. Ekstrak  etil  asetat  daun  sesewanua memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi dengan  nilai  IC 50 sebesar  13,084  mg/L, diikuti ekstrak etanol sebesar 17,85 mg/L, dan  ekstrak n -heksan  sebesar  23,737 mg/L.

## SARAN
Sebaiknya  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  untuk  mengaplikasikan  ekstrak  dari daun sesewanua ke dalam bentuk formulasi.

## DAFTAR PUSTAKA
Andarwulan,  N.,  Wijaya,  H.,  Cahyono,  T. 1996. Aktivitas Antioksidan  dari  Daun Sirih (Piper  betle L). Teknologi  dan Industri Pangan . 7: 6-9.
Association  of  Official  Analytical  Chemist. 1999. Official  Methods  of  Analysis.
13th  Edition .  Association  of  Official Analytical Chemist, Washington D.C.. Burda, S., W. Olezek. 2001. Antioxidant and Antiradical  Activities  of  Flavonoids. Journal  Agricultural  Food  Chemistry. 49: 2774-2779.
Fajarullah,  A.  2014. Ekstraksi  Senyawa Metabolit Sekunder Lamun Thalassodendron ciliatum Pada Pelarut  Berbeda .  FIKP  UMRAH, Tanjung Pinang.
Harborne. 1996. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan
Terbitan Kedua . Terjemahan K. Padmawinata  dan  I.  Soediro.  ITB. Bandung.
Herawati,  D.,  Nuraida,  L.,  Sumarto.  2012.
Cara  Produksi  Simplisia  yang  Baik . Seafast Center IPB, Bogor.
Hernani.,  Raharjo,  M.  2005. Tanaman Berkhasiat Antioksidan . Penebar Swadya, Jakarta. Huang,  D.,  Ou  B.,  Prior  R.  L.  2005.  The Chemistry Behind Antioxidant Capacity Assays. Journal
of
Agricultural  and  Food  Chemistry .  54: 1841-1856.
Marliana,  E.  2007.  Analisis  Senyawa Metabolit Sekunder dari Batang Spatholobus ferrugineus (Zoll & Moritzi)  benth  yang  berfungsi  sebagai antioksidan. Jurnal Penelitian Mipa. 1: 23-25.
Meenakshi,  M.,  Veeru,  P.,  Kishor,  M.  P. 2009.  Screening  of  Medicinal  Plant Extracts  for  Antioxidant  Activity.
R² = 0,914 0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25 30 35 40 IC 50 ( mg /L ) Total Fenolik (mg/L)
Journal  of  Medicinal  Plant  Research .
3: 8-12.
Molyneux,  P.  2004.  The  Use  of  The  Stable
Free  Radical  Diphenylpicryl-hydrazyl (DPPH)  for  Estimating  Antioxidant Activity. Journal  of  Science  and Technology . 26: 211-219.
Moot, C. Luigy., W. Bodhi., J. Mongi. 2013. Uji  efek  antipiretik  infusa  daun sesewanua  ( Clerodendron  squamatum Vahl.)  terhadap  kelinci  jantan  yang diinduksi vaksin DTP HB. Pharmacon .
2: 58-61.
Murtijaya,  J.,  Lim  Y.Y.  2007.  Antioxidant Properties of Phylanthus amarus Extracts  as  Affected  by  Different Drying Methods. Food Science Technolology. 40: 1664-1669. rohNurwaini, S., Sofiana, Y. R., Noor. I. R., Rahayu,  R.  2006.  Uji  Aktivitas Antiradikal  Ekstrak  Herba  Cakar Ayam (Selaginella
doederleinii
Hieron), Herba Keladi Tikus (Typhonium  divaricatum  (L)  Decne)
dan  Daun  Eugenia  uniflora  Linn sebagai  Sumber  Alternatif  Pencegahan
Degeneratif. Laporan PKMP . 2: 1-11. Pambayun, R., Gardjito, M.,  Sudarmadji, S., Kuswanto,  K.R.  2007.  Kandungan fenol dan sifat antibakteri dari berbagai jenis  ekstrak  produk  gambir  ( Uncaria gambir Roxb ). Majalah Farmasi Indonesia . 18: 141 – 146.
Priyanto,  R.A.  2012. Aktivitas  Antioksidan Dan  Komponen  Bioaktif  Pada  Buah
Bakau  (Rhizophora  mucronata  Lamk.) [Skripsi].  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor.
Rahmat,  H.  2009. Identifikasi  Senyawa Flavonoid pada Sayuran Indegenous di
Jawa Barat [Skripsi]. ITB, Bogor.
Rohman,  A.,  Riyanto,  S.,  Utari,  D.  2006.
Aktivitas Antioksidan, Kandungan
Fenolik Total dan Kandungan Flavonoid  Total  Ekstrak  Etil  Asetat Buah Mengkudu serta Fraksi- Fraksinya. Majalah Farmasi Indonesia. 17: 136-142.
Sangi,  M.,  Runtuwene,  M.R.J.,  Simbala,
H.E.I., Makang, V.M.A. 2008. Analisis
Fitokimia
Tumbuhan Obat di
Kabupaten  Minahasa  Utara. Chemistry Progress . 1: 47-53.
Sie,  J.  O.  2013.  Daya Antioksidan  Ekstrak Etanol  Kulit  Buah  Manggis  ( Garcinia Mangostana Linn.)  Hasil  Pengadukan dan Reflux. Calyptra . 2: 1-10.
Singh, R.P., Sharad. S., Kapur. S. 2004. Free Radicals  and  Oxidative  Stress  in Neurodegenerative Diseases.
Relevance  of  Dietary  Antioxidants. 5:
218-25.
Ukieyanna,  E.  2012.  A ktivitas  antioksidan,
kadar  fenolik,  dan  Flavonoid  total tumbuhan suruhan ( Peperomia pellucida L. Kunth). ITB, Bogor. Youngson,  R.  2005. Antioksidan  Manfaat Vitamin  C  dan  E  Bagi  Kesehatan . Arcan, Jakarta.
Zuhra,  C.F.,  Juliati,  B.T.,  Herlince,  S.  2008. Aktivitas Antioksidan
Senyawa
Flavonoid  dari  Daun  Katuk  ( Sauropus androgunus  (L)  Merr. ). Jurnal  Biologi Sumatra . 3:7-10.