Pengaruh Pemberian Berbagai Konsentrasi NAA ( Naphthalene Acetic Acid ) dan BAP ( Benzyl Amino Purine ) terhadap Multiplikasi Tunas Tanaman Tebu ( Saccharum officinarum L.)
The Effect of Various Concentrations of NAA (Naphthalene Acetic Acid) and BAP (Benzyl Amino Purine) on The Multiplication of Sugar Cane (Saccharum officinarum L.)
Isna Lutfiani *) , Ani Lestari 2) , Nurcahyo Widyodaru 3) , Sri Suhesti 4)
1) Mahasiswa Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Singaperbangsa Karawang. Jl. H.S Ronggowaluyo Telukjambe Timur Kabupaten Karawang. 41361.
2,3) Dosen Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Singaperbangsa Karawang. Jl. H.S Ronggowaluyo Telukjambe Timur Kabupaten Karawang. 41361.
4) Peneliti Pusat dan Penelitian dan Pengembangan Perkebunan Jalan Tentara Pelajar No. 1 Bogor, 16111
* Penulis untuk korespondensi: lutfiani181@gmail.com
Diterima 04 Januari 2022 / Disetujui 05 Maret 2022

## ABSTRACT
Sugarcane (Saccharum officinarum L.) is one of the plantation commodities that have high economic value because  it  is  the  main  raw  material  in  the  manufacture  of  sugar.  Generally,  sugarcane  propagation  was  done  by vegetative  cuttings,  but  this  method has  drawbacks.  In  vitro  plant,  culture  is  an  alternative  technique  for producing quality sugarcane seed, a high number of seeds with shoot multiplication. This research aims to review the influence of concentration NAA and BAP on shoot multiplication of sugarcane (Saccharum officinarum L.). The study was conducted in  the  Laboratory  of  Superior  Farm  Seed  Management  Unit,  Indonesian  Agency  for  Agricultural  Research  and Development from June until August 2021. Explant material used was young rolled leaves collected from AMS variety sugarcane. The experiment was arranged in Factorial Completely Randomized Design (RAL),  with 12 treatments, and five replication. Explants were cultured during 8 weeks in MS media with concentration NAA ( 0 ppm, 0.5 ppm, and 1 ppm), and BAP (0 ppm, 1 ppm, and 2 ppm, 3 ppm). The parameters measured were the date of shoot initiation, number of shoots, length of shoot, number of leaves, date of root initiation, number of the root, length of root, and color of the shoot. The data were analyzed using ANOVA at the confidence level of 95%. The results showed that interaction between NAA and BAP in promoting Saccharum officinarum L. Micro cutting growth was observed. The combination between NAA of 0 ppm and BAP of 2 ppm was found to be the best in date of shoot initiation, number of shoots, and number of the  leaf.  The  combination between  NAA  1  ppm  and BAP 0  ppm  was  recommended  to  promote  the  root  number  and length of the root.
Key words: Saccharum officinarum, multiplication, tissue culture NAA,  BAP, shoot

## ABSTRAK
Tebu (Saccharum officinarum L.) merupakan salah satu komoditas perkebunan yang bernilai ekonomis cukup tinggi  karena  sebagai  bahan  baku  utama  dalam  pembuatan  gula.  Perbanyakan  tanaman  tebu  umumnya  dilakukan secara vegetatif  menggunakan setek, namun metode tersebut memiliki kekurangan. Multiplikasi tunas dengan teknik kultur in vitro merupakan teknik alternatif untuk memperbanyak bibit tebu yang berkualitas, dalam jumlah yang besar dan  waktu  yang  singkat.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkaji  pengaruh  konsentrasi  NAA  dan  BAP  terhadap multiplikasi  tunas  tanaman  tebu  (Saccharum  officinarum  L.).  Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Unit  Pengelola Benih  Unggul  Pertanian,  Pusat  Penelitian  dan  Pengembangan  Perkebunan,  Bogor  dari  bulan  Juni  sampai  Agustus 2021.  Bahan  tanaman  tebu  yang  digunakan  adalah  daun  muda  varietas  AMS  yang  masih  menggulung.  Percobaan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang disusun secara factorial, dengan 12 perlakuan dan diulang lima kali. Eksplan dikulturkan selama 8 minggu pada media MS dengan konsentrasi NAA (0 ppm, 0.5 ppm, dan 1 ppm), dan BAP (0 ppm, 1 ppm, 2 ppm, dan 3 ppm). Parameter yang diukur adalah waktu munculnya tunas, jumlah tunas, panjang tunas,  jumlah  daun,  waktu  munculnya  akar,  jumlah  akar,  panjang  akar,  dan  warna  tunas.  Data  yang  diperoleh kemudian  dianalisis  menggunakan  uji  ANOVA  pada  taraf  signifikan  95%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa terdapat interaksi antara NAA dan BAP dalam menacu pertumbuhan Saccharum officinarum L. Kombinasi antara NAA 0 ppm dan BAP 2 ppm merupakan kombinasi terbaik dalam waktu munculnya tunas, jumlah tunas, dan jumlah daun. Sementara itu, kombinasi antara NAA 1 ppm dan BAP 0 ppm disarankan untuk memacu jumlah akar dan panjang akar Saccharum officinarum L.
Kata kunci:  Saccharum officinarum, multiplikasi, kultur jaringan, NAA, BAP, tunas

## PENDAHULUAN
Tebu (Saccharum  officinarum L. ) merupakan  salah satu komoditas perkebunan yang bernilai ekonomis cukup tinggi karena sebagai bahan baku utama dalam pembuatan gula.  Tanaman  tebu  mengandung  nira  yang  dapat  diolah dalam  perindustrian  sebagai  kristal-kristal  gula.  Industri gula  di  Indonesia  semakin  berkembang  pesat,  hal  ini dikarenakan  gula  berperan  penting  dalam  pemenuhan kebutuhan  pokok  masyarakat  dan  dapat  menciptakan lapangan pekerjaan bagi masyarakat (Rasullah et al ., 2013) Produksi  gula  nasional  hanya  mencapai  angka  2,17 juta ton. Sementara, kebutuhan gula nasional mencapai 66 juta ton. Ini menandakan Indonesia baru mampu memenuhi 3,29%  dari  total  kebutuhan  nasional,  sehingga  lebih  dari 96%  defisit  kebutuhan  gula  nasional  yang  belum  mampu dan harus dipenuhi Indonesia (Kemenperin 2019).
Kementerian  Pertanian  menargetkan  dapat  mencapai swasembada  gula  konsumsi  pada  tahun  2023.  Untuk mencapai  target  ini,  Kementerian  Pertanian  pun  akan melakukan  intensifikasi  dan  ekstensifikasi  (Minka  2020). Demi  terealisasinya  target  tersebut  maka  dibutuhkan penyediaan bibit tebu yang bermutu dalam jumlah banyak yang diproduksi dalam waktu relatif singkat.
Perbanyakan  tanaman  tebu  umumnya  dilakukan secara vegetatif melalui setek. Di beberapa negara tropis, 2- 3 bagian buku (nodus) batang tebu digunakan sebagai bahan tanaman  baru  (Jalaja et  al .,  2008 dalam Sukmadjaja  dan Mulyana,  2011),  Perbanyakan  vegetatif  melalui  stek menghasilkan  laju  perbanyakan  yang  tidak  dapat mencukupi  untuk  perbanyakan  massal  sedangkan  untuk keperluan produksi bibit tebu diperlukan teknik perbanyakan  yang  dapat  memenuhi  kebutuhan  produksi baik secara kualitas maupun kuantitas. Penggunaan teknik kultur  jaringan  bertujuan  untuk  mengatasi  keterbatasan pengadaan  benih  tebu  secara  konvensional.  Hal  ini disebabkan  faktor  penggandaannya  yang  tinggi  sehingga varietas  unggul  cepat  diperbanyak,  benih  lebih  terjamin kesehatannya, membutuhkan ruang yang relatif kecil, bahan tanam  dan  pohon  induk  sedikit,  dan  eksplan  dapat diproduksi secara cepat dan banyak (Mariska dan Rahayu, 2011).
Media  kultur  merupakan  salah  satu  faktor  penentu keberhasilan  perbanyakan  tanaman  secara  kultur  jaringan. Media Murashige dan Skoog (MS) merupakan media yang paling  banyak  digunakan  dalam  penelitian  yang  telah dimodifikasi  guna  eksplan  tumbuh  dan  berkembang  pada media kultur jaringan dan terbebas dari kontaminasi (Fauzy et  al. ,  2016).  Kombinasi  zat  pengatur  tumbuh  yang digunakan atau ditambahkan ke dalam medium merupakan faktor utama penentu keberhasilan kultur in vitro . Golongan ZPT  (Zat  Pengatur  Tumbuh)  yang  sangat  penting  adalah auksin dan sitokinin. Interaksi dan perimbangan antara ZPT yang diberikan dalam  media dan yang diproduksi oleh sel secara  endogen  menentukan  arah  perkembangan  suatu kultur  sehingga  mempengaruhi  proses  pertumbuhan  dan morfogenesis (Astuti dan Andayani, 2005).
Untuk  regenerasi  tunas  pada  penelitian  ini  hormon auksin yang digunakan  adalah NAA dan hormon sitokinin
yang  digunakan  adalah  BAP.  NAA  ( Naphthalene Acetic  Acid )  merupakan  ZPT  dari  golongan  auksin yang bersifat lebih stabil daripada IAA, karena tidak mudah terurai oleh enzim-enzim yang dikeluarkan sel atau  pemanasan  pada  proses  sterilisasi  (Wetter  dan Constabel, 1991 dalam Sugianto, 2008). BAP ( Benzyl Amino  Purin )  merupakan  sitokinin  sintetis  yang berperan dalam menginduksi tunas (Schmulling, 2004 dalam Praseptiana, 2017). BAP mempunyai aktivitas lebih stabil dan tahan terhadap oksidasi dibandingkan sitokinin  lainnya  (Nurjanah,  2009).  Penelitian  yang dilakukan oleh (Tilaar dan Tulung, 2013) menjelaskan bahwa  BAP  2  ppm  mampu  mempercepat  waktu bertunas.
Jumlah  auksin  dan  sitokinin  yang  perlu ditambahkan  ke  dalam  kultur  tergantung  kandungan auksin  dan  sitokinin  endogen  pada  eksplan. Berdasarkan  uraian  masalah  di  atas,  perlu  dilakukan penelitian untuk mendapatkan komposisi zat pengatur tumbuh  NAA  ( Naphthalene  Acetic  Acid )  dan  BAP ( Benzyl Amino Purine ) yang tepat untuk meningkatkan multiplikasi tunas tanaman tebu.

## BAHAN DAN METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian  dilaksanakan  di  Balai  Pusat Penelitian dan
Pengembangan Perkebunan, Laboratorium Somatik Embriogenesis Unit Pengelola Benih Unggul Pertanian (UPBUP), Jl. Tentara Pelajar, RT.01/RW.11, Ciwaringin, Kecamatan Bogor Tengah, Kota Bogor, Jawa Barat 16124. Dengan titik koordinat 6°34’40”S 106°47’11”E.
Waktu dilaksanakan penelitian dari bulan Juni 2021 sampai Agustus 2021.

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  dipergunakan  dalam  penelitian ini antara lain eksplan tebu varietas AMS, larutan stok makronutrien  MS,  mikronutrien  MS,  Fe  EDTA, vitamin  dan  myoinositol,  larutan  stok  zat  pengatur tumbuh NAA dan BAP, larutan NaOH, larutan HCl, agar-agar ( Swallow ), gula, alkohol 70%, alkohol 96%, spirtus,  aquades.  Peralatan  yang  digunakan  dalam percobaan  ini  antara  lain  timbangan  analitik, timbangan  digital, Laminar  Air  Flow  Cabinet (LAFC), autoclave , oven ,  lemari  pendingin, beaker glass ,  erlenmeyer, gelas ukur, hot plate dan magnetic stirrer ,  pipet  tetes, micro  pipet ,  pH  meter,  spatula, hand  sprayer ,  botol  semprot,  alat  pelabelan, peristaltic  pump ,  lampu  bunsen,  alat  diseksi  (pinset, scalpel , gunting), blade , cawan petri, rak kultur.

## Metode Penelitian
Metode yang digunakan merupakan metode eksperimental dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktorial dengan dua faktor perlakuan yaitu  konsentrasi  NAA  ( Naphthalene  Acetic  Acid ) terdiri dari 3 taraf (0 ppm, 0.5 ppm, 1 ppm) dan
konsentrasi BAP ( Benzyl Amino Purine ) terdiri dari 4 taraf (0 ppm, 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm) dan diulang sebanyak 5 kali sehingga terdapat 60 unit percobaan. Data  hasil penelitian dianalisi secara statistik dengan menggunakan uji F dengan taraf  5%.  Apabila  hasil  yang  didapat  berbeda  nyata, dilakukan uji lanjut DMRT pada taraf nyata 5%. Parameter yang  diamati  pada  penelitian  ini  antara  lain  suhu  dan kelembapan  ruang  inkubasi,  persentase  eksplan  hidup, waktu  muncul  tunas,  dan  presentase  eksplan  membentuk tunas.
Tabel  1.  Perlakuan  Interaksi  Berbagai  Konsentrasi Naphthalene  Acetic  Acid (NAA)  dan Benzyl Amino Purine (BAP) Konsentrasi NAA (N) Konsentrasi BAP (B) ) B 0 (0 ppm) B 1 (1 ppm) B 2 (2 ppm) B 3 (3 ppm) N 0 (0 ppm) N 0 B 0 N 0 B 1 N 0 B 2 N 0 B 3 N 1 (0.5 ppm) N 1 B 0 N 1 B 1 N 1 B 2 N 1 B 3 N 2 (1 ppm) N 2 B 0 N 2 B 1 N 2 B 2 N 2 B 3

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil analisis ragam menunjukkan terdapat interaksi yang    berbeda  nyata  terhadap  jumlah  tunas,  tinggi  tunas, jumlah  daun,  jumlah  akar,  dan  panjang  akar.  Sedangkan, pada  parameter  waktu  muncul  tunas  menunjukkan  hasil yang tidak berbeda nyata (Tabel 2).
Tabel 2. Rekapitulasi analisis ragam pertumbuhan tunas in vitro tebu dengan pemberian berbagai konsentrasi NAA dan BAP
Parameter Pengamatan NAA BAP Interaksi Waktu Muncul Tunas 0.02tn 0.62tn 0.22tn Jumlah Tunas 20.35* 8.76* 8.80* Tinggi Tunas 11.84* 1.40tn 7.99* Jumlah Daun 15.05* 3.43* 5.84* Jumlah Akar 11.42* 112.10* 11.42* Panjang Akar 9.85* 34.34* 9.85*
Keterangan  : *= nyata pada taraf 5%, **= nyata pada taraf 1%, tn= tidak nyata. .

## Waktu Muncul Tunas
Pembentukan  tunas in  vitro sangat  menentukan keberhasilan  produksi  bibit  yang  cepat  dan  banyak.  Hasil analisis ragam menunjukkan bahwa aplikasi NAA dan BAP serta  interaksi  kedua  faktor  perlakuan  tidak  berpengaruh nyata  terhadap  waktu  muncul  tunas,  tetapi  terdapat perbedaan waktu muncul tunas pada setiap perlakuan. Hal ini  karena  di  dalam  eksplan  terkandung  hormon  endogen yang sudah mencukupi, sehingga penambahan zat pengatur tumbuh  eksogen  tidak  dapat    lagi  mempengaruhi  waktu munculnya  tunas.  Menurut  Zulfikar et  al .,  (2009) pertumbuhan  dan  morfogenesis  tanaman  secara in  vitro dikendalikan oleh zat pengatur tumbuh endogen yang ada di dalam eksplan.
Perlakuan  N0B2  (NAA  0  ppm  +  BAP  2  ppm) memberikan waktu muncul tunas lebih cepat dibandingkan dengan  perlakuan  lain  yaitu  dengan  kecepatan  tumbuh
12.00 hsi (hari setelah inisiasi), hal ini karena sitokinin yang dibutuhkan untuk memacu waktu muncul tunas menghasilkan  respon  yang  baik  dan  pada  perlakuan BAP 2 ppm terdapat zat pengatur tumbuh yang sesuai untuk  memacu  pembentukan  tunas.  Hal  ini  sejalan dengan  pernyataan  Harjadi  (2009),  pemberian  BAP memacu  sintesis  protein  sehingga  mendorong terjadinya  pembelahan  sel  yang  menginduksi terbentuknya  tunas.  Sedangkan  menurut    Strosse et al .,  (2004) dalam Elma et  al .,  (2017),  kemampuan eksplan  bertunas  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor salah satunya genotip tanaman, dalam meningkatkan multiplikasi tunas (proliferasi) juga dipengaruhi oleh jenis sitokinin dan konsentrasi yang digunakan.
Kecepatan  pertumbuhan  tunas  yang  terjadi disebabkan adanya interaksi yang tepat antara hormon endogen  eksplan  dengan  penambahan  zat  pengatur tumbuh  eksogen.  Keseimbangan  konsentrasi  auksin eksogen  yang  ditambahkan  dalam  media  dengan hormon  endogen  mengakibatkan  proses  fisiologis dalam  eksplan  dapat  berlangsung  efektif  dalam memacu  pertumbuhan  tunas.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan Ali et al ., (2004) dalam Praseptiana et al.,
(2017),  induksi  tunas  tebu  terjadi  karena  proses pembelahan  sel  dan  diferensiasi  sel  meristem  yang dipengaruhi oleh keseimbangan dan interaksi hormon eksogen dengan hormon endogen.
Sedangkan  N0B0  (NAA  0  ppm  +  BAP  0 ppm) merupakan perlakuan yang menghasilkan waktu muncul  tunas  lebih  lambat  dibanding  dengan perlakuan  lain  dengan  kecepatan  tumbuh  19.20  hsi (hari  setelah  inisiasi).  Kondisi  ini  kemungkinan karena  tidak  adanya  asupan  zat  pengatur  tumbuh eksogen  yang  memacu  multiplikasi  tunas  di  dalam media  tumbuh,  sehingga  belum  mampu  untuk pembentangan dan diferensiasi sel pada eksplan.

## Presentase Eskplan Membentuk Tunas
Persentase eksplan membentuk tunas digunakan  untuk  mengukur  kemampuan  regenerasi eksplan. Terbentuknya tunas menunjukkan keberhasilan regenerasi eksplan yang diinokulasi pada kultur  jaringan,  semakin  cepat  tunas  muncul  maka semakin  cepat  pula  mendapatkan  bahan  tanam  yang digunakan  untuk  perbanyakan  tanaman.  Persentase eksplan  membentuk  tunas  pada  setiap  media perlakuan  memiliki  kemampuan  menghasilkan tunas yang  berbeda-beda.  Respon  eksplan  yang  dihasilkan terhadap  media  ditandai  dengan  pembengkakan eksplan hingga akhirnya  menghasilkan pembentukan tunas (Gambar 1).
Pemberian berbagai konsentrasi Naphthalene  Acetic  Acid (NAA)  dan Benzyl  Amino Purine (BAP)  memberikan  presentase  eskplan membentuk  tunas  yang  tinggi.  Presentase  eksplan membentuk  tunas  tertinggi  yaitu  100%  pada perlakuan N0B0, N0B1, N0B2, N0B3, N1B0, N1B2, N2B0  dan  N2B3.  Sedangkan  pada  dua  perlakuan menunjukkan  presentase  paling  rendah  sebesar  60% yaitu pada perlakuan N1B1, dan N2B2 (Tabel 3).
Tingginya  presentase  eksplan  tebu  membentuk tunas diduga karena adanya kandungan yang terdapat pada media Murashige dan Skoog (MS) dan pada pemberian zat pengatur tumbuh auksin (NAA) dan sitokinin (BAP) yang sesuai.  Hal  ini  sejalan  dengan  pendapat  Lestari  (2011), bahwa  penambahan  auksin  dan  sitokinin  ke  dalam  media kultur dapat meningkatkan konsentrasi zat pengatur tumbuh endogen  di  dalam  sel,  sehingga  menjadi  faktor  pemicu dalam proses tumbuh dan perkembangan jaringan. Menurut George et  al .,  (2008) dalam Suhesti  (2015),  kandungan mineral  media  media  MS  cukup  tinggi  sehingga  dapat mencukupi  kebutuhan  unsur  hara  yang  diperlukan  dalam pertumbuhan  selama  dalam  kultur.  Media  dasar  MS  telah banyak dilaporkan efektif digunakan dalam kultur jaringan tebu (Jalaja et al ., 2008 dalam Suhesti, 2015).
Perlakuan tanpa zat pengatur tumbuh N0B0 (NAA
0 ppm + BAP 0 ppm)  tetap menginduksi munculnya tunas,  hal  tersebut  karena  eksplan  mengandung hormon  endogen,  serta  pada  medium  MS  tersedia nutrisi  untuk  pertumbuhan  eksplan.  Hal  ini  sesuai pernyataan  Lack  (2001) dalam Praseptiana et  al ., (2017),  eksplan  memiliki  hormon  endogen  yang berperan  dalam  pembelahan  sel  dan  diferensiasi  sel serta  mengatur  pertumbuhan  dan  perkembangan tumbuhan,  akan  tetapi  hormon  tersebut  dimilki tumbuhan dengan konsentrasi rendah.
Ngomuo  et  al.,  (2013)  dalam  Elma  et  al., (2017) , menyatakan rendahnya pertumbuhan eksplan membentuk  tunas  diduga  karena  eksplan  sangat bergantung dengan faktor endogen eksplan itu sendiri, selain  itu  terjadi  peranan  zat  pengatur  tumbuh  bila kondisi  fisiologis  eksplan  dalam  kondisi  yang  baik untuk tumbuh.
Tabel 3. Pengaruh berbagai konsentrasi NAA dan BAP terhadap pertumbuhan tebu in vitro , umur 2 bulan
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama berbeda tidak nyata pada uji DMRT taraf 5%
Gambar 1. Tahap pembentukan tunas pada eksplan eksplan daun menggulung tanaman tebu. (a) Eksplan tanaman tebu; (b) pembengkakan pada eksplan; (c) pembentukan dan pemanjangan tunas; (d) Tunas membentuk daun

## Jumlah Tunas
Jumlah  tunas  merupakan  faktor  terpenting  dalam multiplikasi tanaman pada kultur in vitro Semakin banyak tunas  yang terbentuk akan berkorelasi  positif dengan bibit yang dapat dihasilkan melalui kultur jaringan. Tunas dapat terbentuk  karena  terdapat  mata  tunas  sehingga  ketika
eksplan ditanam pada media kultur terjadi pertumbuhan  tunas  tersebut.  Jumlah  tunas  yang berbeda-beda  dipengaruhi  oleh  kemampuan  eksplan dalam menyerap unsur hara yang ada di dalam media MS ( Murashige dan Skoog ) dan zat pengatur tumbuh yang diberikan.
Kode Code Formulasi media Media formulations Waktu Muncul Tunas (His) Pembentukan tunas (%) Jumlah tunas (buah) Tinggi tunas (cm) Jumlah daun (helai) Jumlah akar (buah) Panjang akar (cn) N0B0 NAA 0 ppm + BAP 0 ppm 19.20 a 100 2.00 d 1.74 cde 2.40 cd 1.60 c 1.58 c N0B1 NAA 0 ppm + BAP 1 ppm 13.60 a 100 9.80 a 3.80 ab 7.80 a 0.00 d 0.00 c N0B2 NAA 0 ppm + BAP 2 ppm 12.00 a 100 11.60 a 4.20 ab 8.20 a 0.00 d 0.00 c N0B3 NAA 0 ppm + BAP 3 ppm 12.80 a 100 10.60 a 3.34 bc 8.00 a 0.00 d 0.00 c N1B0 NAA 0,5 ppm + BAP 0 ppm 18.40 a 100 2.40 cd 1.14 de 2.60 cd 4.40 b 2.44 b N1B1 NAA 0,5 ppm + BAP 1 ppm 16.60 a 60 3.60 cd 0.78 e 3.20 cd 0.00 d 0.00 c N1B2 NAA 0,5 ppm + BAP 2 ppm 14.60 a 100 8.20 ab 2.46 bcd 6.60 ab 0.00 d 0.00 c N1B3 NAA 0,5 ppm + BAP 3 ppm 16.80 a 80 2.40 cd 0.89 de 3.80 cd 0.00 d 0.00 c N2B0 NAA 1 ppm + BAP 0 ppm 16.00 a 100 4.20 cd 6.12 a 4.20 bc 7.80 a 3.72 a N2B1 NAA 1 ppm + BAP 1 ppm 18.00 a 80 4.60 cd 2.20 cde 2.60 cd 0.00 d 0.00 c N2B2 NAA 1 ppm + BAP 2 ppm 19.00 a 60 2.60 cd 0.92 de 1.80 d 0.00 d 0.00 c N2B3 NAA 1 ppm + BAP 3 ppm 17.80 a 100 5.00 bc 1.14 de 3.60 cd 0.00 d 0.00 c KK (%) 5.45 7.62 6.45 7.45 17.52 7.56
Hasil  analisis  menunjukkan  bahwa  aplikasi  NAA dan BAP serta interaksi kedua faktor perlakuan berpengaruh nyata  dalam  mempengaruhi  jumlah  tunas  tanaman  tebu. Jumlah  tunas  tebu  terbanyak  terjadi  pada  kombinasi perlakuan N0B2 (NAA 0 ppm + BAP 2 ppm)  yaitu 11.60 tunas, perlakuan N0B3 (NAA 0 ppm + BAP 3 ppm) yaitu 10.60 tunas, perlakuan N0B1 (NAA 0 ppm + BAP 1 ppm) yaitu  9.80  tunas,  tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan N1B2 (NAA 0 ppm + BAP 1 ppm) yaitu 8.20 tunas,  namun berbeda  nyata  dengan  perlakuan  lainnya.  Jumlah  tunas dengan hasil terendah terdapat pada perlakuan N0B0 (NAA 0  ppm  +  BAP  0  ppm)  yaitu  2.00  tunas,  diduga  karena kandungan zat pengatur tumbuh tidak cukup tersedia untuk pertumbuhan tunas tanaman tebu.
Perlakuan  N0B2  (NAA  0  ppm  +  BAP  2  ppm) memberikan  hasil  rata-rata  jumlah  tunas  tertinggi  karena adanya  penambahan  zat  pengatur  tumbuh  sitokinin  (BAP) dalam  kadar  optimum  yang  dapat  memacu  pertumbuhan tunas  pada  eksplan.    Hal  ini  diduga  karena  kandungan auksin endogen pada eksplan cukup tinggi, sehingga tanpa penambahan NAA pun tanaman dapat manghasilkan tunas yang cukup banyak. Menurut George et al ., (2008), aplikasi pemberian  sitokinin  tunggal  mampu  menghasilkan  tunas yang  maksimal,  namun  pada  konsentrasi  tertentu  akan menghasilkan  kelainan pada tunas  yang diperoleh. Hal ini didukung  oleh  Purbaningsih  (2001),  media  yang  hanya mengandung  sitokinin  saja  sudah  dapat  mendukung pertumbuhan tunas.
Pemberian  BAP  menunjukkan  pertambahan jumlah  tunas,  semakin  tinggi  konsentrasi  yang  diberikan maka  jumlah  tunas  akan  terus  meningkat,  tetapi pertumbuhan  jumlah  tunas  belum  maksimal.  Menurut George  dan  Sherrington  (1984) dalam Zulkarnain  (2009), sitokinin  jenis  BAP  merupakan  sitokinin  yang  banyak berperan  dalam  pembentukan  dan  penggandaan  tunas  dan pengaruhnya  lebih  kuat  dibandingkan  sitokinin  lainnya seperti kinetin ataupun 2-iP. Menurut hasil penelitian Dewi dan  Hartati  (2014),  penggunaan  ZPT  BAP  2,0  mg/l merupakan media yang efektif pada multiplikasi tunas kopi Arabika.
Setiap  perlakuan  memiliki  perbedaan  jumlah tunasnya, hal ini diduga adanya perbedaan dalam menyerap nutrisi  atau  suplai  makan  beserta  hormon  yang  diberikan pada  media  (Yusrianti,  2002).  Menurut  Budi  (1999), medium  kultur  yang  hanya  mengandung  NAA  saja berpengaruh  tidak  signifikan  terhadap  persentase  eksplan dalam  pembentukan  tunas  majemuk,  dan  pemberian  BAP dengan konsentrasi tinggi ternyata menghambat pembentukan  tunas.  Berbeda  halnya  dengan  penambahan NAA  yang  seimbang  dapat  memberikan  pengaruh  yang lebih  baik  pada  pembentukan  tunas  tanaman.  Hal  ini didukung  oleh George dan Sherrington (1984),  apabila ketersedian sitokinin di dalam media kultur sangat terbatas maka pembelahan sel pada jaringan akan terhambat. Akan tetapi,  apabila  jaringan  tersebut  disubkulturkan  pada medium dengan kandungan sitokinin yang memadai maka pembelahan  sel  akan  berlangsung  secara  singkron sedangkan pada konsentrasi yang tinggi dapat menghambat pertumbuhan, meracuni bahkan mematikan tanaman.

## Panjang Tunas
Hasil pengamatan terhadap parameter panjang tunas tebu menunjukkan terdapat beda nyata antar  NAA  dan  BAP,  serta  ada  interaksi  yang  nyata antar  kedua  faktor  tersebut  (Tabel  2).  Rata-rata panjang  tunas  tebu  tertinggi  pada  perlakuan  N2B0 (NAA 1 ppm + BAP 0 ppm) yaitu 6.12 cm, yang tidak berbeda nyata dengan perlakuan N0B2 (NAA 0 ppm +  BAP  2  ppm)  yaitu  4.20  cm,  dan  perlakuan  N0B1 (NAA  0  ppm  +  BAP  1  ppm)  yaitu  3.80  cm,  namun berbeda  nyata  dengan  perlakuan  lainnya.  Artinya, perlakuan tersebut cukup baik dalam memacu panjang tunas.  Panjang  tunas  dengan  hasil  terendah  terdapat pada perlakuan N1B1 (NAA 0.5 ppm + BAP 1 ppm) sebesar 0.78 cm.
Dalam perpanjangan tunas dapat disebabkan karena  adanya  perimbangan  zat  pengatur  tumbuh yang ditambahkan kedalam media. Berdasarkan hasil penelitian  dapat  dikatakan  bahwa  eksplan  dengan jumlah  tunas  terbanyak  tidak  menghasilkan  panjang tunas tertinggi. Hal ini karena energi yang dibutuhkan untuk pemanjangan tunas digunakan untuk pembentukan  calon  tunas  lainnya,  sehingga  tinggi tunas dapat mengalami penghambatan. Meningkatnya jumlah tunas pada tanaman tebu tidak diikuti dengan panjang tunas, Handayani (2000) menyatakan apabila tunas yang dihasilkan lebih banyak, maka akan terjadi persaingan antar tunas dalam memperebutkan nutrisi makanan,  sehingga  akan  mengganggu  proses pertumbuhan  tunas-tunas  tersebut  yang  dapat menyebabkan perpanjangan tunas berjalan lambat.
Pemberian  NAA  dalam  penelitian  ini memberikan  pengaruh  nyata  terhadap  tinggi  tunas. Hal ini sesuai dengan peranan auksin (NAA) terhadap pemanjangan sel. Seperti yang diungkapkan Wattimena  (1992)  bahwa  mekanisme  kerja  auksin salah  satunya  dengan  mempengaruhi  perpanjangan sel.  Auksin  mendorong  elongasi  koleoptil  dan  ruas- ruas  tanaman.  Menurut  Pierik  (1987) dalam Zulkarnain (2009), menyatakan bahwa pada umumnya  auksin  meningkatkan  pemanjangan  sel, pembelahan sel, dan pembentukan akar adventif.
Gambar 1. Penampilan tunas in vitro tebu ( Saccharum officinarum L.) pada berbagai media perlakuan pada hari ke 60 setelah inisiasi

## Jumlah Daun
Hasil pengamatan terhadap parameter jumlah daun menunjukkan  terdapat  beda  nyata  antar  NAA  dan  BAP, serta  ada  interaksi  yang  nyata  antar  kedua  faktor  tersebut (Tabel 2). Hasil pegamatan menunjukkan kemunculan daun diawali  dengan  pemunculan  tunas,  tunas  memanjang kemudian tumbuh berkembang membentuk daun. Sehingga jumlah  tunas  yang  tinggi  akan  menghasilkan  jumlah  daun yang  tinggi  pula  (Intias,  2011).  Jumlah  daun  dipengaruhi oleh  jumlah  tunas  yang  muncul,  sehingga  semakin  sedikit tunas yang muncul, maka jumlah daun yang terbentuk akan semakin banyak dan sebaliknya. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian yang diperoleh yaitu perlakuan yang menghasilkan  jumlah  tunas  terbanyak  juga  menghasilkan jumlah daun yang tinggi.
Jumlah  daun  terbanyak  diperoleh  pada  perlakuan N0B2 (NAA 0 ppm + BAP 2 ppm)  yaitu 8.20 helai, tidak berbeda nyata dengan perlakuan N0B3 (NAA 0 ppm + BAP 3 ppm) yaitu 8.00 helai, N0B1 (NAA 0 ppm + BAP 1 ppm) yaitu 7.80 helai, N1B2 (NAA 0 ppm + BAP 1 ppm) yaitu 6.60  helai  dan  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  lainnya. Sedangkan  rata-rata  jumlah  daun  terendah  diperoleh  pada perlakuan  N2B2    (NAA  1  ppm  +  BAP  2  ppm)  yaitu  1.80 helai.
Formulasi  media  regenerasi  dengan  penambahan auksin  dan  sitokinin  yang  berbeda-beda  menyebabkan perbedaan  rasio  antara  auksin  dan  sitokinin  sehingga memberikan respon yang berbeda-beda. Sitokinin  akan  memberikan  respon  lebih  dominan  pada
daerah adaksial sehingga memacu pertumbuhan tunas (Suhesti,  2015).  Konsentrasi  sitokinin  yang  lebih besar dibandingkan auksin akan mendorong pertumbuhan  tunas  dan  daun.  Kuantitas  dan  kualitas daun  pada  kultur in  vtiro selain  diperngaruhi  oleh media  juga  dipengaruhi  oleh  intensitas  cahaya  yang diberikan dalam percobaan (Nida, 2018).

## Jumlah Akar
Perakaran dengan kualitas  yang baik sangat menentukan  keberhasilan  dalam  tahap  aklimatisasi. Untuk  itu  formulasi  media  yang  tepat  sangat menentukan kualitas akar. Hasil pengamatan terhadap parameter  jumlah  akar  menunjukkan  terdapat  beda nyata  antar  NAA  dan  BAP,  serta  ada  interaksi  yang nyata antar kedua faktor tersebut.
Hasil  uji  lanjut  terhadap  parameter  jumlah akar tanaman tebu berdasarkan (Tabel 3). menunjukkan  rata-rata  jumlah  akar  terbanyak  pada perlakuan  N2B0  (NAA  1  ppm  +  BAP  0  ppm)  yaitu 7.80  akar  dan  berbeda  nyata  pada  semua  perlakuan. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pemberian  NAA  dan BAP  pada  konsentrasi  tersebut  dapat  menstimulan pertumbuhan  akar  pada  tanaman  tebu.  Jafari  and Khalid (2011) dalam Astuti et al ., (2020) menyatakan jika  konsentrasi  auksin  lebih  tinggi  maka  akan memacu  pertumbuhan  tinggi  dan  panjang  akar sedangkan  jika  sitokinin  lebih  tinggi  akan  memacu pertunasan.
Gambar 3. Jumlah Akar (a) perlakuan N0B0 (NAA 0 ppm + BAP 0 ppm); (b) perlakuan N1B0 (NAA 0.5 ppm + BAP 0 ppm); (c) perlakuan N2B0 (NAA 1 ppm + BAP 0 ppm)
Jumlah  akar  tanaman  mengindikasikan seberapa  luas  jangkauan  tanaman  dalam  menyerap nutrisi,  sehingga  semakin  banyak  jumlah  akar  maka semakin  luas  pula  jangkauan  tanaman  dan  semakin banyak  pula  nutrisi  yang  dapat  diserap.  Selain  itu, jumlah akar pada pertumbuhan secara kultur jaringan menunjukkan  eksplan  sehat  dan  mampu  menyerap nutrisi dari media secara optimal.
Sebagian  besar  eksplan  tidak  mampu menumbuhkan akar, sampai akhir waktu pengamatan 8  msi.  Sebanyak  tiga  buah  eksplan  mampu menumbuhkan akar yaitu perlakuan N0B0, N1B0 ,dan N2B0.  Menurut  Ambarwati  (1987) dalam Pratama (2014),  medium  tanpa  sitokinin  lebih  baik  daripada medium yang mengandung sitokinin untuk pembentukan  akar.  Menurut  Santoso  dan  Nursandi (2004),  dalam  kultur  jaringan,  penambahan  sitokinin dapat  menghambat  pembentukan  akar.  IAA,  NAA, dan  IBA  merupakan  ZPT  dari  golongan  auksin berpengaruh  terhadap  perkembangan  sel,  dan berfungsi  merangsang  pertumbuhan  akar  eksplan tanaman (Amin et al, 2009 dalam Astuti et al ., 2020).
Pada  penelitian  ini  pemberian  NAA  pada konsentrasi  1  mg/l  secara  tunggal  memiliki  jumlah akar  yang  tinggi,  Hal  ini  diduga  pemberian  NAA secara  tunggal  dengan  konsentrasi  yang  lebih  tinggi akan  memberikan  panjang  akar  yang  lebih  tinggi. Penelitian  yang  dilakukan  Mukhtar et  al .,  (2005) dalam Mandang  (2018),  bahwa  konsentrasi  2  mg/l NAA memberikan hasil terbaik terhadap panjang akar Citrus  reticulate .  Hal  ini  menunjukkan  bahwa konsentrasi  NAA  yang  optimum  dalam  induksi  dan pemanjangan  akar  setiap  tanaman  berbeda-beda  dan dipengaruhi  keseimbangan  antara  hormon  endogen dan eksogen.

## Panjang Akar
Hasil pengamatan terhadap parameter jumlah akar menunjukkan terdapat beda nyata antar NAA dan BAP, serta ada interaksi yang nyata antar kedua faktor tersebut.  Berdasarkan  Tabel  3.  Hasil  pengukuran panjang  akar,  menunjukkan  bahwa  perlakuan  tanpa penambahan  sitokinin  N2B0  (NAA  1  ppm  +  BAP  0 ppm) merupakan perlakuan terbaik yang mempengaruhi  penambahan  panjang  akar  dengan panjang  akar  terpanjang  3.72  dan  berbeda  nyata dengan  perlakuan  lainnya.  Hasil  ini  menunjukkan bahwa peningkatan konsentrasi sitokinin menghambat perpanjangan akar. Sesuai dengan pernyataan George & Sherrington (1984) dalam Sari et al ., (2017), bahwa aktivitas  sitokinin  dapat  menghambat  pembentukan akar, menghalangi pertumbuhan akar, dan menghambat  pengaruh  auksin  terhadap  inisiasi  akar pada  kultur  jaringan  sejumlah  spesies  tertentu sehingga  biasanya  tidak  digunakan  untuk  tahap pengakaran pada mikropropagasi.
Pemberian NAA pada penelitian berpengaruh
nyata  pada  pertumbuhan  jumlah  dan  panjang  akar, semakin  tinggi  konsentrasi  yang  diberikan  maka jumlah  akar  dan  panjang  akar  semakin  meningkat. .Tingginya pertumbuhan akar pada eksplan dikarenakan  adanya  interaksi  yang  tepat  antara hormon  endogen  dan  hormon  eksogen  yang ditambahkan.  Pembentukan  akar  pada  eksplan dipengaruhi  oleh  auksin  dalam  hal  ini  adalah  NAA. Menurut  Rukmana  (2009),  zat  pengatur  tumbuh auksin  NAA  merangsang  pertumbuhan  yang  sangat berpengaruh  dalam  pembentukan  akar-akar  dan panjang akar yang dapat menyebabkan tanaman dapat menyerap  air  beserta  unsur  hara  yang  lebih  banyak untuk  pertumbuhan  tanaman.  Panjang  akar  penting bagi pertumbuhan eksplan pada kultur in vitro . Jumlah akar  yang  semakin  banyak  dan  panjang  bagus  untuk penyerapan  nutrisi  dari  media.  Hal  itu  disebabkan karena  semakin  banyak  dan  semakin  panjang  akar maka  bidang  penyerapan  nutrisi  dari  media  akan semakin luas pula.

## KESIMPULAN
Terdapat pengaruh nyata pemberian berbagai konsentrasi Naphthalene  Acetic  Acid (NAA)  dan Benzyl  Amino  Purine (BAP)  jumlah  tunas,  panjang tunas,  jumlah  daun,  jumlah  akar,  dan  panjang  akar. Pemberian  sitokinin  tunggal  pada  perlakuan  N0B2 (NAA  0  ppm  +  BAP  2  ppm)  menghasilkan  waktu muncul  tunas  tercepat  dengan  kecepatan  tumbuh  12 hsi (hari setelah inisiasi), menghasilkan jumlah tunas terbaik sebesar 11.60 tunas, dan jumlah daun terbaik sebesar  8.20  helai.  Pemberian  auksin  tunggal  pada perlakuan  N2B0  (NAA  1  ppm  +  BAP  0  ppm) menghasilkan  jumlah  akar  dan  panjang  akar  terbaik yaitu 7.80 akar dan panjang sebesar 3.72 cm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada kepala Pusat Penelitian dan Pengembangan Perkebunan  yang  telah  memberikan  dana  untuk penelitian ini. Terima kasih juga disampaikan kepada Dr.  Sri  Suhesti,  S.P.,  M.P  sebagai  Kepala Laboratorium Somatik Embriogenesis, Unit Pengelola Benih Unggul Pertanian (UPBUP).

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti,  S.  H.  P.,  Indrawati,  W.,  Supriyatdi,  D.,  & Kusuma, J. 2020. Respons Kalus Embriogenik  Tanaman  Tebu  (Saccharum officinarum) Var. Kidang Kencana  terhadap Berbagai  Modifikasi  Media  Kultur  dalam Proses  Induksi  Akar.  Agritrop:  Jurnal  Ilmu-
Ilmu  Pertanian  (Journal  of  Agricultural Science), 18(2) : 217-224.
Astuti,  Y.  T.  M.,  dan  Andayani,  N.  2005.  Pengaruh
Pemberian BAP dan NAA terhadap
Pertumbuhan Krisan (Chrysanthemum morifolium,  Ram.)  dalam  Kultur  Jaringan.
Jurnal  Ilmiah  Ilmu-Ilmu  Hayati,  10(1)  :  31- 35.
Budi, R. S. 2020. Uji Komposisi Zat Pengatur Tumbuh terhadap  Pertumbuhan  Eksplan  Pisang
Barangan (Musa paradisiaca L.) Pada Media
MS  Secara  in  vitro.  BEST Journal  (Biology Education,  Sains  and  Technology),  3(1)  : 101-111.
Elma,  T.,  Suminar,  E.,  Mubarok,  S.,  Nuraini,  A.,  & Ariyanto,  N.  B.  2017.  Multiplikasi  tunas mikro  pisang  (Musa  paradisiaca  l.)‘raja bulu’secara in vitro pada berbagai jenis dan konsentrasi sitokinin. Kultivasi, 16(3).
Fauzy,  E.,  Mansyur,  dan  Ali,  H.  2016.  Pengaruh Penggunaan  Media  Murashige  dan  Skoog (MS) dan Vitamin terhadap Tekstur, Warna, dan Berat Kalus Rumput Gajah (Pennisetum purpureum)  CV. Hawai Pasca Radiasi Sinar Gamma pada Dosis LD50 (In vitro). Students e-Journal, 5(4) : 1-22.
Handayani, T. 2000. Perbanyakan Tanaman Kantong Semar (Nepenthes spp.) dengan Stek Batang.
Prosiding  Seminar  Hari  Cinta  Puspa  dan Satwa Nasional, 171-175.
Harjadi, S.S. 2009. Zat Pengatur Tumbuh. Swadaya : Jakarta.
Intias,  S.  2011.  Pengaruh  Pemberian  Berbagai
Konsentrasi  2,4-D  dan  BAP  terhadap Pembentukan  Kalus  Purwoceng  (Pimpinella pruatjan)  secara  in-vitro.  Skripsi.  Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Kementerian Perindustrian Republik Indonesia. 2019, Industri Gula Digenjot. Melalui:
https://kemenperin.go.id/artikel/20447/indus tri-gula-digenjot [24/07/21].
Lestari,  E.  G.  2011.  Peranan  Zat  Pengatur  Tumbuh dalam Perbanyakan Tanaman Melalui Kultur Jaringan. Jurnal AgroBiogen, 7(1) : 63-68.
Lestari,  F.  W.,  Suminar,  E.,  &  Mubarok,  S.  2018. Pengujian Berbagai Eksplan Kentang
(Solanum tuberosum L.) dengan Penggunaan Konsentrasi  BAP  dan  NAA  yang  Berbeda. Jurnal Agro, 5(1) : 66-75.
Mandang  J.S.  2013.  Media  Kultur  Jaringan. Banyumedia Publishing, Manado.
Mandang, J. S. 2018. Pengaruh BAP (Benzyl Amino Purine) dan Air Kelapa terhadap
Pertumbuhan  Tunas  Pucuk  dan  Kandungan Sulforafan Brokoli (Brassica oleracea L. Var. Italica  Plenck)  cecara  In-Vitro.  Agri- Sosioekonomi, 14(1) : 439-450.
Mariska,  I.,  dan  Rahayu  S.  2011.  Pengadaan  Bibit Tebu melalui Kultur Jaringan. Jurnal Libang Pertanian. Edisi 6-12 No.3413. Minka. 2020. Kementan RI Target Swasembada Gula Konsumsi pada 2023. Melalui:
https://sijori.id/read/kementan-ri-target- swasembada-gula-konsumsi-pada-2023 [20/03/2021].
Nurjanah,  E.  2009.  Pengaruh  Kombinasi  NaCl  dan ZPT  IBA  pada  Media  MS  terhadap Pertumbuhan  Galur  Mutan  Padi  Secara  In Vitro. Skripsi. Prodi Biologi, Fakultas Islam Negeri Syarif Hidayatullah, Jakarta.
Praseptiana, C., Darmanti, S., & Prihastanti, E. 2017. Multiplikasi  Tunas  Tebu  (Saccharumo officinarum  L  Var.  Bululawang)  dengan Perlakuan  Konsentrasi  BAP  dan  Kinetin Secara  In  Vitro.  Buletin  Anatomi  dan Fisiologi (Bulletin of Anatomy and Physiology), 2(2) : 153-160.
Pratama,  A.  R.,  Sugiyono,  S.,  Prayoga,  L.,  &  Husni, A.  2014.  Upaya  Memacu  Pertumbuhan Tunas  Mikro  Kentang  Kultivar  Granola dengan  Jenis  dan  Konsentrasi  Sitokinin Berbeda. Scripta Biologica, 1(3) : 209-215.
Pratama,  J.  2018.  Modifikasi  Media  MS  dengan Penambahan  Air  Kelapa  untuk  Subkultur  I Anggrek Cymbidium. Jurnal Agrium, 15(2) : 91-109.
Rasullah,  F.F.F.,  Nurhidayati,  T.,  Nurmalasari,  N. 2013.  Respon  Pertumbuhan  Tunas  Kultur Meristem Apikal Tanaman Tebu (Saccharum officinarum) Varietas NXI 1-3 secara in vitro pada Media MS dengan Penambahan Arginin dan Glutamin. Jurnal Sains dan Seni ITS, 2(2) : 99-104.
Rukmana  R.  2009.  Kultur  Jaringan  Tanaman.  UMM
Press, Malang.
Santoso,  U.,  dan  Nursandi,  F.  2004.  Kultur  Jaringan Tanaman. Universitas Muhammadiyah Malang Press, Malang
Sari,  D.  A.  2014.  Induksi  Tunas  Kentang  (Solanum tuberosum  L.)  menggunakan  BAP  (Benzil Amino  Purine).  Skripsi.  Fakultas  Pertanian Universitas Jember.
Sari, H. S., Dwiati, M., & Budisantosa, I. 2017. Efek NAA  dan  BAP  terhadap  Pembentukan Tunas,  Daun,  dan  Tinggi  Tunas  Stek  Mikro Nepenthes  ampullaria  Jack.  Majalah  Ilmiah Biologi  BIOSFERA:  A  Scientific  Journal, 32(3) : 95-201. Suhesti, S., Khumaida, N., Husni, A., Hadipoentyanti,
E.,  &  Hartati,  R.  2015.  Induksi  Kalus  dan
Regenerasi  Dua  Varietas  Tebu  (Saccharum officinarum L.) secara In Vitro. Jurnal Littri, 21(2) : 77-88.
Sukmadjaja,  D.,  dan  Mulyana,  A.  2011.  Regenerasi dan  Pertumbuhan  Beberapa  Varietas  Tebu (Saccharum officinarum L.) secara In Vitro. Jurnal AgroBiogen, 7(2) : 106-118.
Tilaar,  W.,  &  Tulung,  S.  2013.  Induksi  Kalus  dan Tunas dari Eksplan Pucuk Brokoli (Brassica oleracea  L.  sub  var.  italica  Planch)  pada Medium MS yang Diberikan NAA Dan BAP. Eugenia, 19(1) : 57-65.
Wattimena,  Q.A.  1992  Bioteknologi  Tanaman. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan II, Bogor.
Yusrianti,  H.  2002.  Pengaruh  Sumber  Eksplan  dan Konsentrasi  Zat  Pengatur  Tumbuh  Pada Perkembangan Ulin (Eusideroxylon zwageri T. et. B) Dengan Sistem Kultur Jaringan. Skripsi. Fakultas Kehutanan Untan. Pontianak.
Zulfikar,  A.  2010.  Pertumbuhan  dan  Perkembangan Tumbuhan. Melalui: http://www.gudangmateri.com/2010/08/pertu mbuhan-dan-perkembangantumbuhan.html. [26/08/2021].
Zulkarnain.  2009.  Solusi  Perbanyakan  Tanaman Budidaya.  Kultur  Jaringan  Tanaman.  Bumi Aksar,  Jakarta.