ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 18 (2) (2015) : 67 – 72
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi, Identifikasi Senyawa Alkaloid dari Daun Rivina humilis L. serta Uji Sitotoksik Menggunakan Metode BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test )
Edwin Fadhly a , Dewi Kusrini a* , Enny Fachriyah a
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: dewi.kusrini@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords:
Alkaloid, Rivina humilis L. , BSLT
Research  on  phytochemical  screening,  isolation,  alkaloid  identification  from  leaves  of getih-getihan ( Rivina humilis L.) and cytotoxicity test by BSLT method have been done. Isolation of alkaloids was preceded by maceration of leaves of h Rivina humilis L. with 96% ethanol  solvent,  followed  by  chlorophyll  removal  by  aquades  (1:  1).  The  maceration product  is  then  partitioned  with  n-hexane  solvent,  obtained  by  n-hexane  extract  and ethanol-water extract. The ethanol-water extracts were carried out by alkaloid isolation to obtain a reddish brown alkaloid extract of 0.7323 grams. Separation of alkaloids was done by preparative thin layer chromatography and purity test using KLT method with various  eluent  obtained 1  stain  on  band  A1.  Isolate  alkaloid  A1  is  white  solid  and  has  a melting point of 290-292°C. The result of UV-Vis spectrophotometer analysis estimated that  alkaloid  compound  A1  has  indole  base  structure.  Analysis  with  FTIR spectrophotometer showed the presence of N-H, O-H, = C-H aromatic, CH 2 , C=N, C=O, C=C aromatic,  and  C-O  ether groups.  While LC-MS  chromatogram showed  the  highest peak at retention time of 1.8 minutes and had molecular weight of 267.27 g/mol. The result of cytotoxic test showed that alkaloid extract had LC 50 price of 25,439 ppm.

## A b s t r a k
Kata Kunci:
Alkaloids, Rivina humilis L. , BSLT
Penelitian  tentang  penapisan  fitokimia,  isolasi,  identifikasi  alkaloid  dari  daun  getih- getihan ( Rivina humilis L.) serta uji sitotoksisitas dengan metode BSLT telah dilakukan. Isolasi  alkaloid  diawali  dengan  maserasi  daun Rivina  humilis L.  dengan  pelarut  etanol 96%, dilanjutkan penghilangan klorofil dengan menggunakan aquades (1:1). Selanjutnya hasil maserasi tersebut dipartisi dengan pelarut n-heksana, diperoleh ekstrak n-heksana dan  ekstrak  etanol-air.  Ekstrak  etanol-air  dilakukan  isolasi  alkaloid  hingga  diperoleh ekstrak alkaloid berwarna coklat kemerahan sebanyak 0,7323 gram. Pemisahan alkaloid dilakukan  dengan  metode  kromatografi  lapis  tipis  preparatif  dan  uji  kemurniannya menggunakan metode KLT dengan berbagai eluen didapatkan 1 noda pada pita A1. Isolat alkaloid A1 berbentuk padatan putih dan mempunyai titik leleh sebesar 290-292°C. Hasil analisis  spektrofotometer  UV-Vis  memperkirakan  bahwa  senyawa  alkaloid  A1 mempunyai  struktur  dasar  indol.  Analisis  dengan  spektofotometer  FTIR  menunjukkan adanya gugus N-H, O-H, =C-H aromatik, CH2, C=N, C=O, C=C aromatik, dan C-O eter. Sedangkan kromatogram LC-MS menunjukkan puncak tertinggi pada waktu retensi 1,8 menit  dan  memiliki  bobot  molekul  sebesar  267.27  g/mol.  Hasil  uji  sitotoksik menunjukkan bahwa ekstrak alkaloid mempunyai harga LC 50 sebesar 25,439 ppm.

## 1. Pendahuluan
Tanaman  getih-getihan  ( Rivina  humilis  L. )  adalah salah  satu  tanaman  berfamili phytolaccaceae, yang merupakan tanaman asli dari Amerika Utara dan Tengah. Tanaman  ini dapat  tumbuh  di  Indonesia  yang  beriklim tropis. Daun tanaman getih-getihan dapat dimanfaatkan sebagai  obat  kista  sedangkan  buahnya  dimanfaatkan sebagai  bahan  campuran  untuk  tinta  dan  sebagai  zat warna  alami  [1] , serta  sebagai  pengganti  antioksidan sintetik [2] .
Pada daun  getih-getihan  terdapat  berbagai  macam jenis senyawa diantaranya adalah flavonoid, alkaloid dan juga  terpenoid.  Sedangkan  pada  buahnya  terkandung betaxanthin dan humilixanthin [1]. Salah satu tanaman berfamili phytolaccaceae lainnya  adalah Condonocarpus australis A.  Cunn  (Phytolaccaceae)  yang  telah teridentifikasi  mengandung  senyawa  alkaloid  yaitu condonocarpine [3], dan penelitian yang dilakukan oleh Krochmal  dan  Lequesne  [4]  berhasil  mengidentifikasi senyawa  golongan  alkaloid  pada Phytolacca  americana (Phytolaccaceae) yaitu betanin.
Penelitian  Kubec dkk. [5]  tanaman  berfamili phytolaccaceae mempunyai  aktivitas  antibakteri  dan bioinsektisida,  antikanker,  dan  antiinflamasi  terutama pada  tanaman  Singawalang  ( Petiveria  alliacea ) yang memiliki  kandungan  saponin  glikosida,  isoarborinol- triterpen, isoarborinol-asetat, steroid, alkaloid, isoarborinolsinnamat, flavonoid, dan tannin.
Tanaman  getih-getihan  belum  banyak  di  teliti beserta aktivitasnya oleh karena itu, pada penelitian ini akan  dilakukan  isolasi,  identifikasi  serta  uji  sitotoksik senyawa alkaloid dari daun Rivina humilis L.

## 2. Metode Penelitian

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  daun Rivina humilis  L. ,  aquades,  kloroform  pa  dan  teknis,  asam klorida,  anhidrida  asam  asetat,  asam  sulfat,  pereaksi Meyer,  pereaksi  Dragendorff,  serbuk  Mg,  amil  alkohol, eter, ammonium hidroksida, larutan feri klorida, etanol p.a dan teknis, metanol p.a, n -heksana p.a dan teknis, etil asetat  p.a  dan  teknis,  butanol  p.a,  aseton  p.a, diklorometana p.a, silica gel, KLT silika gel 60 F 254 , KLT aluminium  20x20  cm,  kertas  saring, Artemia  salina L. Sedangkan  alat-alat  yang  digunakan  adalah  alat  gelas standar penelitian, mortal porselin, pipet mikro, cawan porselin,  chamber  KLT,  botol  vial, rotary  evaporator , bejana penetasan telur Artemia salina L., neraca analitis, spektrofotometer  UV,  spektrofotometer  FTIR  dan  LC- MS.

## Preparasi sampel
Daun Rivina  humilis  L. diperoleh  dari  daerah Tawangmangu  Solo,  Jawa  Tengah  sebanyak  5  kg. Selanjutnya  dilakukan  pencucian,  pengeringan  dengan cara  diangin-anginkan,  dan  diblender  sampai  halus hingga diperoleh serbuk sebanyak 2 kg.

## Penapisan Fitokimia

## Sampel 1
Sepuluh gram serbuk simplisia daun Rivina humilis L. dilarutkan  kedalam  50  mL  etanol  di  maserasi  selama  3 jam, kemudian di saring untuk memisahkan residu dan juga  pelarutnya.  Larutan  akan  digunakan  untuk  uji alkaloid, flavonoid, saponin dan fenolat.

## Uji Alkaloid
Sebanyak  5  mL  filtrat  ditambahkan  5  mL  HCl, larutan  dibagi  menjadi  dua  bagian  masing-masing ditambahkan  dengan  pereaksi  Mayer  dan  Dragendorf. Adanya  kabut  putih  atau  endapan  putih  saat ditambahkan pereaksi Mayer menandakan sample positif alkaloid.  Sedangkan,  adanya  endapan  merah  bata  saat penambahan  pereaksi  Dragendorf  menadakan  bahwa sample positif alkaloid.

## Uji Flavonoid
Sebanyak 5 mL filtrat ditambahkan 3 mL NaOH 2M. Adanya flavonoid ditunjukkan dengan timbulnya warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amil.

## Uji Saponin
Sebanyak  5  mL  filtrat  ditambahkan  dengan  5  mL akuadest  kemudian  dikocok  secara  vertikal  selama  15 menit,  apabila  busa  tidak  hilang  selama  beberapa  saat maka sample positif mengandung saponin.

## Uji Fenolat
Sebanyak 5 mL filtrat dari uji flavonoid ditambahkan 3 tetes larutan FeCl 3 1%. Adanya senyawa fenolat ditandai dengan terbentuknya warna hijau atau merah.

## Sampel 2
Lima  gram  serbuk  serbuk  simplisia  daun Rivina humilis L . dilarutkan  dalam  10  mL  eter,  di  maserasi selama  3  jam  kemudian  di  saring  untuk  memisahkan residu  dan  juga  pelarut,  biarkan  pelarut  menguap kemudian dilakukan uji steroid /triterpenoid.

## Uji Steroid/Triterpenoid
Sebanyak  5  mL  filtrat  ditambahkan  pereaksi  2  mL Libemann – Buchard  (asam  asetat  anhidrat  +  asam sulfat), terbentuknya warna coklat menandakan didalam sample  positif  triterpenoid,  sedangkan  terbentuknya warna biru atau hijau menandakkan adanya steroid.

## Ekstraksi
Serbuk  daun Rivina  humilis  L. sebanyak  1,980  kg dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  5  L,  setiap  24  jam pearut  diganti  dan  disaring  dilakukan  secara  berulang kali sampai warna larutan hasil maserasi menjadi jernih. Selanjutnya  ekstrak  etanol  dipekatkan  dengan  rotary evaporator  sehingga  diperoleh  ekstrak  kental  etanol sebanyak 40,25 gram. Ekstrak kental etanol dihilangkan klorofilnya menggunakan aquades dengan perbandingan 1:1  dan  direndam  selama  1  hari  selanjutnya  disaring. Ekstrak  kental  etanol-air  dipartisi  menggunakan  n- heksana,  terbentuk  2  lapisan  yaitu  lapisan  n-heksana dan juga lapisan etanol-air.

## Isolasi Alkaloid
Ekstrak etanol-air yang telah didapatkan, kemudian ditambahkan  HCl  2M  sampai  pH  3,  selanjutnya  di ekstraksi  menggunakan  pelarut  etil  asetat,  terbentuk  2 lapisan yaitu lapisan etil asetat dan lapisan asam (garam alkaloid). Lapisan asam ditambahkan NH 4 OH sampai pH 8-9,  kemudian  diekstraksi  kembali  dengan  etil  asetat, terbentuk  2  lapisan  yaitu  lapisan  basa  dan  juga  lapisan etil  asetat  (alkaloid  bebas).  Selanjutnya,  lapisan  etil asetat  dipekatkan  dengan  menggunakan rotary evaporator dan  didapatkan  ekstrak  alkaloid  sebanyak 0,7323 gram. Selanjutnya, dilakukan pengujian senyawa alkaloid  dengan  penambahan  reagen  Mayer  dan Dragendrof.

## Uji Sitotoksik
Untuk mengetahui aktivitas alkaloid maka dilakukan uji  sitotoksik  menggunakan metode BSLT. Hal  pertama yang dilakukan adalah menetaskan telur Artemia salina L. dalam bejana penetasan telur Artemia salina L. setelah 24 jam telur menetas dan dalam waktu 48 jam Artemia salina L.  bisa  digunakan  untuk  pengujian  sitotoksik. Selanjutnya,  membuat  larutan  induk  dari  ekstrak alkaloid  dengan  konsentrasi  2500  ppm  dan  dibuat  dari larutan induk pengenceran dengan konsentrasi 10, 100, 1000  µg/ml.  Pengujian  dilakukan  dengan  memasukkan 10 ekor larva Artemia salina L. dalam tabung reaksi yang telah  berisi  ekstrak.  Setelah  24  jam  jumlah  larva  yang mati  dihitung  dan  dilakukan  analisis  probit  untuk menentukan aktivitas sitotoksik (Meyer, dkk., 1982).

## Pemisahan Senyawa Alkaloid
Esktrak  alkaloid  terlebih  dahulu  dilakukan pemisahan  dengan  KLT  menggunakan  eluen  tunggal yaitu metanol, diklorometana, etil asetat, kloroform, n- heksana, dan dengan berbagai campuran eluen yaitu Etil asetat : Kloroform (10:8), Etil asetat : Diklorometana (1:1) dan  Kloroform  :  Etanol  (7:3)  dengan  fasa  diam  berupa silica  gel,  terlihat  pemisahan  yang  terbaik  yaitu  3 noda dengan  eluen  Kloroform  :  Etanol  (7:3),  selanjutnya dilakukan  pemisahan  komponen  alkaloid  dengan menggunakan  KLT  preparatif.  Sebelum  dilakukan  KLT preparatif dilakukan uji senyawa alkaloid menggunakan metode  KLT  ukuran  18x2cm  dengan  eluen  Kloroform  : Etanol  (7:3),  selanjutnya  di  semprot  dengan  pereaksi Dragendorf. KLT preparatif dilakukan ke plat KLT ukuran 20cm  x  20cm,  dengan  eluen  Kloroform  :  Etanol  (7:3). Hasil dari KLT preparatif yaitu terdapat empat pita (A1, A2,  A3,  A4)  yang  kemudian ditandai dan dikerok  untuk dilarutkan  dalam  etil  asetat.  Pita  A1,  A2  dan  A3  yang positif  alkaloid  selanjutnya  dilakukan  uji  kemurnian dengan berbagai pengembang.

## Uji Kemurnian Alkaloid
Isolat  alkaloid  pita  A1,  A2  dan  A3  selanjutnya dilakukan  uji  kemurnian  menggunakan  metode  KLT dengan berbagai eluen tunggal yaitu etanol,  kloroform, butanol, etil asetat dan campuran yaitu etanol : etil asetat (1:1), Kloroform : etil asetat (1:1). Kemurnian ditunjukkan dengan  terbentuknya  noda  tunggal  pada  pita  A1, kemudian  diuapkan  sehingga  didapatkan  padatan bewarna  putih  sebanyak  0,0423  gram  dan  mempunyai
titik  leleh  sebesar  290-292 o C.  Selanjutnya  dilakukan karakterisasi terhadap isolat alkaloid A1.

## Karakterisasi Struktur Kimia
Karakterisasi  isolat  alkaloid  A1  dilakukan  dengan alat spektrofotometer UV-Vis, FTIR, dan LC-MS.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Penapisan Fitokimia
Serbuk daun getih-getihan dilakukan  uji  skrinning dan  didapatkan  mengandung  senyawa  alkaloid, flavonoid dan steroid/triterpenoid.
Ekstrak  Alkaloid  dari  Daun  getih-getihan.  Ekstrak etanol  dibuat  dengan  metode  maserasi.  Serbuk  daun getih-getihan  dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  untuk mengambil semua senyawa yang terkandung dalam daun tersebut. Ekstrak etanol pekat yang didapatkan sebanyak 40,25 gram.
Selanjutnya  ekstrak  kental  etanol  dihilangkan klorofil  dengan  penambahan  aquades  (1:1).  Filtrat  hasil penyaringan dari proses ini merupakan ekstrak etanol- air.
Partisi  dilakukan  terhadap  ekstrak  etanol-air dengan  pelarut n- heksana  untuk  menghilangkan senyawa-senyawa  yang  bersifat  non  polar.  Ekstrak etanol-air  yang  diperoleh  selanjutnya  ditambahkan larutan  HCl  2M  sampai  pH  larutan  menjadi  3, penambahan  HCl  2M  berfungsi  untuk  mengubah senyawa alkaloid  menjadi  garam,  hal  ini  sesuai  dengan sifat  senyawa  alkaloid  yang  bersifat  basa  sehingga apabila  ditambahkan  asam  akan  terbentuk  garam alkaloid.
Larutan  asam  selanjutnya  diekstraksi  dengan pelarut  etil  asetat,  garam  alkaloid  yang  telah  terbentuk akan larut dalam air sedangkan senyawa lain akan larut dalam etil asetat. Ekstraksi menghasilkan 2 lapisan yaitu lapisan etil asetat dan lapisan asam. Lapisan asam yang diperoleh  selanjutnya  ditambahkan  NH 4 OH  sampai  pH mencapai  8-9,  penambahan  NH 4 OH  bertujuan  untuk mengubah  senyawa  garam  alkaloid  menjadi  alkaloid bebas  kembali.  Larutan  yang  dihasilkan  bersifat  basa dengan warna coklat kehitaman.
Larutan  basa  kemudian  diekstraksi  menggunakan larutan etil asetat untuk mengambil alkaloid bebas yang terdapat  pada  larutan  basa.  Penggunaan  etil  asetat disesuaikan  dengan  sifat  senyawa  alkaloid  bebas  yang dapat  larut  dalam  pelarut  organik  semipolar  sehingga dapat  digunakan  pelarut  etil  asetat.  Penambahan  etil asetat menghasilkan 2 lapisan yaitu lapisan basa dan juga lapisan  etil  asetat,  selanjutnya  dipisahkan.  Lapisan  etil asetat  yang  diperoleh  kemudian  dipekatkan  untuk menghilangkan  pelarut  etil  asetat  sehingga  diperoleh ekstrak alkaloid sebesar 0,7323 gram.
Ekstrak  alkaloid  yang  diperoleh  berupa  pasta berwarna coklat. Untuk memastikan ekstrak merupakan senyawa alkaloid dilakukan pengujian senyawa alkaloid menggunakan  pereaksi  Mayer  dan  Dragendorf  dan menunjukan  hasil  positif.  Pada  penambahan  pereaksi
Mayer  ditunjukkan  dengan  adanya  endapan  putih,  dan pada  penambahan  pereaksi  Dragendorf  ditunjukkan dengan adanya endapan berwarna coklat.

## Uji Sitotoksisitas dengan Metode BSLT
Uji BSLT sebagai uji awal dari ekstrak serta senyawa kimia yang telah diisolasi untuk menentukan toksisitas [6]  dan  sitotoksisitas  [7].  Uji  sitotoksisitas  terhadap ekstrak  alkaloid  dari  daun Rivina  humilis  L. pada penelitian ini dilakukan terhadap larva Artemia salina L. dengan  konsentrasi  10,  100  dan  1000  ppm  masing- masing  menggunakan  10  larva Artemia  salina L.  dan dilakukan pengulangan sebanyak tiga kali.
Hasil  analisis  probit  menggunakan  program  SPSS menunjukkan  harga  LC 50 sebesar  25,439  ppm.  Menurut Morshed dkk. [7]  suatu  ekstrak  mengindikasi  adanya sitotoksik  kuat  dan  berpotensi  dilakukan  analisis lanjutan bila harga LC 50 bernilai < 100 ppm, hal tersebut menandakan  bahwa  isolat  alkaloid  total  memiliki kemampuan yang sangat sitotoksik dan berpotensi untuk dilakukan analisis lanjutan.

## Pemisahan dan Identifikasi Senyawa
Untuk  mengetahui  jumlah  senyawa  alkaloid  dan eluen  terbaik,  dilakukan  pemisahan  terhadap  ekstrak alkaloid  dengan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT) menggunakan beberapa eluen tunggal yaitu Metanol, Etil asetat,  Diklorometana  dan  campuran  yaitu  Etil  asetat  : Kloroform  (10:8)  Etil  asetat  :  Diklorometana  (1:1) Kloroform : Etanol (7:3)
Campuran  eluen  Kloroform  :  Etanol  (7:3) menunjukkan  adanya  3  noda  (Gambar  1).  Hal  tersebut mengindikasikan  adanya  pemisahan  senyawa  yang terbaik pada penggunaan eluen tersebut. Berikut adalah hasil  KLT  ekstrak  alkaloid  yang  ditunjukkan  pada Gambar 1.
Gambar 1. Ilustrasi hasil KLT ekstrak alkaloid dengan eluen Kloroform : Etanol (7:3)
Untuk  mengetahui  adanya  senyawa  alkaloid selanjutnya  dilakukan  KLT  dengan  ukuran  18x2cm  dan eluen  Kloroform  :  Etanol  (7:3),  kemudian  di  semprot penampak  bercak  menggunakan  pereaksi  Dragendorf. Hasil  penyemprotan  dengan  pereaksi  Dragendorf ditunjukkan pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil KLT ekstrak alkaloid dengan pereaksi Dragendorf pada pengamatan visual
Hasil KLT didapatkan 4 noda, yang diberi notasi A1, A2,  A3  dan  A4,  dan  noda  A1,  A2,  dan  A3  menunjukkan positif  adanya  alkaloid  dengan  terbentuk  warna  coklat kemerahan sedangkan pada noda A4 negatif karena tidak menunjukkan adanya perubahan warna.
Selanjutnya  ekstrak  alkaloid  dilakukan  pemisahan dengan metode kromatografi lapis tipis preparatif untuk memisahkan  keempat  noda  tersebut.  Hasil  pemisahan dengan  KLT  preparatif  yang  menggunakan  eluen Kloroform : Etanol (7:3) dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Hasil KLT preparatif ekstrak alkaloid dengan eluen Kloroform : Etanol (7:3) pada λ = 254 nm
Hasil  KLT  preparatif  terhadap  pita  A1,  A2  dan  A3 yang  positif  mengandung  alkaloid  dilarutkan  kedalam pelarut etil asetat. Selanjutnya dilakukan uji kemurnian menggunakan  berbagai eluen tunggal  maupun campuran.  Setelah  dilakukan uji  kemurnian didapatkan bahwa  pita  A2  dan  A3  mempunyai  2  noda  yang menandakan bahwa isolat belum murni.
Sedangkan pada pita A1 terdapat 1 noda yang diduga bahwa isolat telah murni. Hasil dari uji kemurnian pita A1 dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4. Uji kemurnian isolat alkaloid pita A1 menggunakan berbagai eluen, (a1) etanol : etil asetat
(1:1) (a2) etanol : etil asetat (1:1) dan disemprot pereaksi Dragendorf, (b1) Etanol (b2) etanol dan disemprot pereaksi Dragendorf (c1) Kloroform : etil asetat (1:1),
(c2) Kloroform : etil asetat (1:1) dan disemprot pereaksi Dragendorf
Isolat alkaloid pita A1 kemudian diuapkan sehingga dihasilkan  padatan  alkaloid  berwarna  putih  berbentuk amorf yang mempunyai titik leleh sebesar 290-292 o C.
Analisis Isolat A1
Analisis isolat alkaloid A1 dengan spektrofotometer UV-Vis dapat dilihat pada Gambar 5.
Gambar 5. Spektrum UV-Vis isolat alkaloid A1
Berdasarkan  hasil  analisis  menggunakan  UV-Vis didapatkan panjang gelombang isolat alkaloid A1 adalah 202  nm,  210  nm  219  nm  dan  252  nm.  Adanya  puncak serapan  pada  202  nm  merupakan  serapan  dari  cincin benzena. Puncak serapan pada 210 nm yang merupakan kerangka  dasar  dari  cincin  furan  yang  dimiliki  oleh alkaloid  indol.  Puncak  serapan  210,  219,  dan  252  nm berdasarkan  penelitian  Pramita  dan  Harlia  [8] merupakan  senyawa  alkaloid  jenis  indol.  Terbentuknya dua  buah  serapan  yang  berdekatan  dan  intensitasnya tidak terlalu besar menunjukkan ciri khas dari senyawa alkaloid  indol.  Sedangkan  serapan  pada  252  nm merupakan serapan secara keseluruhan senyawa alkaloid A1.  Beberapa  serapan  maksimal  senyawa  alkaloid  indol dapat dilihat pada Tabel 1.

## Tabel 1: Data Spektroskopi Ultraviolet beberapa senyawa
alkaloid indol
Berdasarkan beberapa penelitian diatas, maka dapat diperkirakan  bahwa  senyawa  alkaloid  A1  mempunyai struktur  dasar  indol.  Gambar  6  menunjukkan  struktur dasar alkaloid indol.
Gambar 6. Kerangka dasar alkaloid indol
Untuk mengetahui gugus fungsi yang terdapat pada isolat alkaloid A1, selanjutnya dilakukan analisis dengan FTIR. Hasil spektogram FTIR dapat dilihat pada Gambar 7.
Gambar 7. Spektogram FTIR isolat alkaloid A1
Berdasarkan  spektrum  diatas  isolat  alkaloid  A1 mempunyai gugus fungsi yang dapat dilihat pada Tabel 2.

## Tabel 2: Pola serapan FTIR
Isolat alkaloid A1 kemudian dianalisis dengan Liquid Chromatograph-Mass  Spectrometry (LC-MS)  untuk mengetahui  kemurnian  dan  juga  berat  molekul. Kromatogram  isolat  alkaloid  A1  dapat  dilihat  pada Gambar 8.
Hasil analisis menggunakan LC menunjukkan bahwa isolat alkaloid A1 belum murni, yang ditunjukkan dengan munculnya  3  puncak.  Intensitas  tertinggi  ditunjukkan oleh  puncak  pertama  dengan  waktu  retensi  pada  1,8 menit. Berikut spektogram isolat alkaloid A1 dari puncak pertama yang ditampilkan pada Gambar 9.
Hasil  kromatogram  LC-MS  dari  puncak  pertama dengan waktu retensi sebesar 1,8 menit dan mempunyai puncak [M+H + ] adalah  268.28  g/mol  yang berarti  berat molekul  isolat  alkaloid  A1  adalah  267,  27  g/mol. Berdasarkan  data  dari  spektrofotometer  UV-Vis,  FTIR dan  LC-MS  Isolat  alkaloid  A1  diprediksi  mempunyai kerangka dasar alkaloid indol, dengan gugus fungsi N-H, O-H, =C-H aromatik, CH 2 , C=N, C=O, C=C aromatik, C-N, C-O eter, dan mempunyai berat molekul 267, 27 g/mol.
Gambar 8. kromatogram isolat alkaloid A1
Gambar 9. Kromatogram LC-MS isolat alkaloid A1
Dari  hasil  identifikasi  diatas  diduga  bahwa  isolat alkaloid A1 memiliki struktur dasar alkaloid indol. Tetapi, struktur lengkap senyawa isolat alkaloid A1 belum dapat ditentukan.

## 4. Kesimpulan
Hasil  penelitian  yang  dilakukan  terhadap  daun getih-getihan  ( Rivina  humilis  L. )  dapat  disimpulkan bahwa  uji  Penapisan  fitokimia  daun Rivina  humilis  L.
mengandung senyawa alkaloid, flavonoid dan triterpenoid/steroid. Isolat alkaloid A1 diduga mempunyai  struktur  dasar  alkaloid  indol  dengan  titik leleh  290-292  oC,mempunyai  gugus  N-H,  O-H,  =C-H aromatik, CH 2 , C=N, C=O, C=C, C-N, C-O eter, dan berat molekul sebesar 267.27 g/mol. Hasil uji sitotoksik ekstrak alkaloid memiliki harga LC 50 sebesar 25,439 ppm.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  Dieter Strack, Doris Schmitt, Hans Reznik, Wilhelm Boland, Lutz Grotjahn, Victor Wray, Humilixanthin a new betaxanthin from Rivina humilis , Phytochemistry , 26, 8, (1987) 2285-2287
http://dx.doi.org/10.1016/S0031-9422(00)84702-0
[2]  Anis Arnous, Dimitris P. Makris, Panagiotis Kefalas, Effect  of  Principal  Polyphenolic  Components  in Relation to Antioxidant Characteristics of Aged Red Wines, Journal of Agricultural and Food Chemistry , 49, 12, (2001) 5736-5742 http://dx.doi.org/10.1021/jf010827s
[3]  R. W. Doskotch, A. B. Ray, W. Kubelka, E. H. Fairchild, C. D. Hufford, J. L. Beal, Codonocarpus alkaloids — III: The structure of codonocarpine, Tetrahedron , 30, 18,
(1974)  3229-3236 http://dx.doi.org/10.1016/S0040- 4020(01)97493-9
[4]  A. Krochmal, P. W. Lequesne, Pokeweed (Phytolacca americana):  possible  source  of  a  molluscicide, Research Papers. U.S.D.A. Forest Serv. , (1970) 8 pp.
[5]  Roman  Kubec,  Seokwon  Kim,  Rabi  A.  Musah,  The lachrymatory  principle  of  Petiveria  alliacea, Phytochemistry , 63, 1, (2003) 37-40
http://dx.doi.org/10.1016/S0031-9422(02)00759-8
[6]  B.  N.  Meyer,  N.  R.  Ferrigni,  J.  E.  Putnam,  L.  B. Jacobsen,  D.  E.  Nichols,  J.  L.  McLaughlin,  Brine Shrimp:  A  Convenient  General  Bioassay  for  Active Plant Constituents, Planta Med , 45, 05, (1982) 31-34 http://dx.doi.org/10.1055/s-2007-971236
[7]  M  Alam  Morshed,  Azim  Uddin,  Akhlaqur  Rahman, Tahrim Hasan, Saurov Roy, AA Amin, Rajibul Ahsan, Rezuanul  Islam,  In  vitro  antimicrobial  and cytotoxicity screening of Terminalia arjuna ethanol extract, International  Journal  of  Biosciences ,  1,  2,
(2011) 31-38
[8]  Diasyti Pramita, Endah Sayekti Harlia, Karakterisasi Senyawa Alkaloid Dari Fraksi Etil Asetat Daun Kesum (Polygonum Minus Huds) , Jurnal Kimia Khatulistiwa , 2, 3, (2013)
0 3 6 9 12 15 Retention Time (Min) 405.2 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % I n t en si t y BPI=>NR(2.00) T1.8 T3.2 99.0 319.2 539.4 759.6 979.8 1200.0 Mass (m/z) 0 442.7 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % I n t en si t y Mariner Spec /47:49 (T /1.77:1.85) -40:43 (T -1.77:1.85)  ASC=>NR(2.00)[BP = 268.3, 443] 268.2808 269.2913 136.1381 231.2315 207.2808 290.2630 439.5014 973.4310 734.1709 134.1569 653.0443