42
POTENSI DAUN ASAM JAWA ( Tamarindus indica L . ) SEBAGAI ALTERNATIF ANTIINFLAMASI: STUDI IN SILICO
ANTI-INFLAMMATORY POTENTIAL OF TAMARIND ( Tamarindus indica L.) LEAVES: STUDY IN SILICO
Erma Yunita 1 , Siti Fatimah 1 , Deni Yulianto 1 , Vedy Trikuncahyo 1 , Zihan Khodijah 1 1 Program Studi Diploma III Farmasi Akademi Farmasi Indonesia Yogyakarta Korespondensi: ermayunita@ac.afi.id

## INTISARI
Daun asam jawa ( Tamarindus indica L . ) merupakan tanaman yang memiliki banyak khasiat. Kandungan senyawa kimia yang terkandung salah satunya Kuersetin. Kuersetin merupakan senyawa flavonoid yang dapat digunakan sebagai anti inflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi aktivitas Kuersetin dari daun asam jawa sebagai anti inflamasi terhadap protein COX-1 dan COX-2 secara in silico . Ekstrak daun asam jawa diperoleh dengan maserasi bertingkat menggunakan heksan dan etanol. Kadar Kuersetinnya dihitung secara spektrofotometri UV- Vis. Konfirmasi aktivitas antiinflamasi dilakukan secara in silico . Protein yang digunakan adalah 6COX, 3PGH, dan 1EQH. Kuersetin sebagai senyawa aktif sedangkan Aspirin digunakan sebagai zat pembanding. Preparasi ligan Kuersetin menggunakan MarvinSketch kemudian preparasi protein target 6COX, 1EQH, dan 3PGH menggunakan YASARA. Selanjutnya melakukan molecular docking menggunakan program PLANTS. Parameter evaluasi validasi dapat dilihat dari nilai Root Mean Square Deviation (RMSD), dimana nilai RMSD yang diterima adalah kurang dari 2Å. Kadar Kuersetin yang diperoleh dalam ekstrak dalam daun asam jawa sebesar 31,26 mg/g. Hasil docking menunjukkan bahwa Kuersetin mampu berinteraksi dengan 1EQH, 3PGH, dan 6COX dimana skor docking nya masing-masing adalah -77,6195; -75,1344; dan -82,2454, sedangkan hasil docking Aspirin masing-masing adalah -69,8784; -75,2421; dan - 72,0884. Kuersetin memiliki potensi sebagai anti inflamasi yang lebih baik dibandingkan dengan Aspirin namun memiliki resiko lebih tinggi menyebabkan ulkus lambung dibanding Aspirin. Kata kunci : Tamarindus indica L., Kuersetin, Docking molecular, COX, Antiinflamasi

## ABSTRACT
Tamarindus indica L. is a plant that has many benefits. The content of chemical compounds contained one quercetin. Quercetin a flavonoid compound that can be used as an anti-inflammatory. This study aims to determine the potential activity of quercetin from tamarind leaves as an anti-inflammatory to protein COX-1 and COX-2 in silico. Tamarind leaves extract is obtained by macerating graded using hexane and ethanol. Quercetin levels calculated by UV- Vis spectrophotometry. Confirmation of anti-inflammatory activity performed in silico. Protein used is 6COX, 3PGH, and 1EQH. Quercetin as an active compound, while Aspirin is used as a comparison substance. Preparation of quercetin ligands using MarvinSketch then target protein preparation 6COX, 1EQH, and 3PGH use YASARA. Molecular docking using a program PLANTS. Evaluation parameter validation can be seen from the Root Mean Square Deviation (RMSD), where the value of RMSD received is less than 2Å. Quercetin levels obtained in extracts in tamarind leaves at 31.26 mg/g. The results showed that quercetin docking able to interact with 1EQH, 3PGH, and 6COX wherein each docking score is -77.6195; -75.1344; and -82.2454, while the results of each docking score of Aspirin is -69.8784; - 75.2421; and -72.0884. Quercetin has potential as an anti-inflammatory that is better than aspirin but has a higher risk than Aspirin causes stomach ulcers.
Keywords : Tamarindus indica L., Quercetin, molecular docking, COX, anti-inflammatory

## PENDAHULUAN
Salah satu tanaman obat yang memiliki banyak khasiat adalah tanaman asam jawa ( Tamarindus indica L.). Hampir semua bagian tanaman asam jawa dapat digunakan untuk berbagai keperluan. Asam jawa digunakan sebagai bumbu dapur, bahan obat, dan hingga kosmetika. Bunga tanaman asam jawa merupakan sumber madu yang bisa untuk membudidayakan lebah madu. Daging buah asam jawa bisa dimanfaatkan sebagai campuran obat tradisional dan bumbu dapur (Doughari, 2006). Senyawa flavonoid yang terkandung dalam daun asam jawa salah satunya adalah Kuersetin (Utami, 2008). Kuersetin berpotensi sebagai antivirus, antibakteri dan anti-inflamasi. Kuersetin memiliki aktivitas antibakteri yang baik karena adanya gugus fenol
43
dengan mekanisme kerja mengkoagulasi protein dengan menonaktifkan enzim-enzim dan mengganggu dinding sel sehingga memiliki sifat bakterisida yang baik (Katzung, 2004).
Inflamasi merupakan respon perlindungan setempat yang ditimbulkan oleh cedera atau kerusakan pada jaringan yang berfungsi untuk mengurangi, menghancurkan atau melokalisasi agen pencedera maupun jaringan yang tercedera (Dorland, 2002). Menurut Fahey dan Stephenson (2002), senyawa golongan flavonoid memiliki khasiat sebagai anti inflamasi. Aspirin dan obat anti inflamasi non steroid adalah salah satu kelas obat-obatan yang paling banyak digunakan. Pada jaringan inflamasi, obat anti inflamasi non steroid memiliki efek menguntungkan melalui penghambatan COX-2 dan efek toksik melalui penghambatan COX-1 yang dapat menyebabkan disfungsi renal dan ulserasi mukosa lambung (Sing and Triadafilopoulos, 2009). Peneliti ingin mengetahui interaksi dan senyawa asam amino yang terikat pada senyawa Kuersetin terhadap enzim COX-1 dan COX-2 dibandingkan efikasinya dengan Aspirin dengan molecular docking menggunakan aplikasi Protein Ligand ANT System (PLANTS).
Berdasarkan latar belakang yang telah dijabarkan, perlu dilakukan penelitian potensi daun asam jawa sebagai alternative terapi anti-inflamasi. Pada penelitian ini dilakukan penetapan kadar Kuersetin sebagai zat aktif dalam ekstrak daun asam jawa, kemudian dilanjutkan dengan konfirmasi aktivitas anti-inflamasi terhadap COX1 dan COX2 secara in silico .

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat Penelitian
Alat penelitian yang digunakan untuk penetapan kadar adalah Spektrofotometer Genesys 10S UV-Vis, sedangkan untuk uji in silico dibutuhkan Personal Computer (PC/Laptop) Lenovo G40-45 yang dilengkapi dengan perangkat lunak seperti sistem operasi Linux dan aplikasi pendukung yang digunakan adalah YASARA, Pymol, dan MarvinSketch.

## Bahan
Bahan yang digunakan digunakan untuk penetapan kadar Kuersetin adalah simplisia daun asam jawa yang berasal dari Mantrijeron Yogyakarta, etanol pro analysis (Merck), etanol 96% (CV. General Labora), Kuersetin (Sigma Aldrich), dan akuades (CV. General Labora). Sedangkan bahan untuk uji in silico berupa protein 6COX, 1EQH, dan 3PGH dalam bentuk file pdb yang diunduh dari situs resmi protein data bank (www.rscb.org). Prosedur Kerja 1. Penetapan Kadar Kuersetin Dalam Ekstrak Etanol Daun Asam Jawa a. Penyiapan Ekstrak Daun Asam Jawa
Simplisia daun asam jawa dimaserasi menggunakan n-heksan kemudian diaduk menggunakan pengaduk elektrik selama 1 jam. Rendaman didiamkan 3x24 jam. Hasil maserasi disaring, residu yang diperoleh kemudian dikeringkan dan dimaserasi etanol 96% lalu diaduk menggunakan pengaduk elektrik selama 1 jam. Rendaman dibiarkan selama 3x24 jam terlindung dari cahaya, sambil sesekali diaduk. Hasil maserasi disaring untuk memisahkan ampas dan filtratnya. Maserat dipekatkan dengan alat rotary evaporator dan dikentalkan di atas penangas air hingga terbentuk ekstrak kental. Ekstrak etanol yang di dapat dihitung rendemennya. b. Pembuatan larutan stok Larutan stok standar Kuersetin dan ekstrak daun asam jawa masing-masing dibuat pada konsentrasi 10.000 ppm. Larutan stok dibuat dengan mengunakan pelarut Etanol pa.
c. Penentuan panjang gelombang maksimum
Larutan stok konsentrasi 100 ppm sebanyak ±3 ml diukur serapan dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 200-800 nm dengan menggunakan blangko etanol p.a.
44
d. Pembuatan kurva baku Kuersetin Kurva baku dibuat dengan cara menghubungkan konsentrasi larutan standar pada seri konsentrasi 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm, dan 12 ppm dengan hasil serapannya yang diperoleh dari pengukuran dengan menggunakan spektrofotometri UV pada panjang gelombang 361,8 nm.
e. Penetapan kadar Kuersetin dalam ekstrak daun asam jawa
Larutan ekstrak daun asam jawa konsentrasi 250 ppm diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV pada panjang gelombang maksimum. Larutan sampel dibuat dalam 5 kali percobaan.

## 2. Uji In Silico
a. Preparasi Ligan Kuersetin dan Aspirin Gambar struktur senyawa Kuersetin dua dimensi secara manual menggunakan MarvinSketch. Struktur selanjutnya diprotonasi untuk mendapatkan struktur dalam kondisi yang disesuaikan dengan pH darah. Tahapan selanjutnya adalah membuat 10 konformasi yang mewakili posisi ligand. Langkah yang sama dilakukan untuk preparasi ligan Aspirin. b. Preparasi Protein Target
Struktur protein target 1EQH, 3PGH, dan 6COX diunduh dari website Protein Data Bank (http://www.rscb.org/pdb). Homologi modeling dilakukan dengan membuka YASARA. Sistem yang tidak diperlukan dalam protocol docking dihapus. Deterjen (NAG untuk 6COX dan 3PGH, NAG dan BOG untuk 1EQH) yang masih ada dalam sistem pun juga harus dihilangkan. Hidrogen ditambahkan dengan bantuan YASARA, sebab resolusi struktur kristal tidak mampu memprediksi keberadaan hidrogen. File yang sudah dipreparasi disimpan sebagai YASARA Object. Selanjutnya ligand asli (S58 untuk 6COX, FLP untuk 3PGH dan 1EQH) dihapus sehingga hanya menyisakan protein target saja dengan pocket untuk docking. File disimpan sebagai protein.mol2. Koordinat pocket dapat diketahui dengan merujuk pada koordinat ligand 3D asli. Untuk itu hanya diperlukan file mol2 yang hanya berisi ligand asli. c. Docking ligand Buat folder kemudian tambahkan file dari aplikasi PLANTS yakni, PLANTS, PLANTS.exe, PLANTS64, dan plantsconfig. Jalankan virtual oracle lalu klik open terminal kemudian isikan perintah docking berikut:
chmod u+x PLANTS ./PLANTS ./PLANTS --mode bind ref_ligand.mol2 5 protein.mol2 grep -Ev "#binding site definition"plantsconfig> temp_conf grep -Ev "bindingsite_" temp_conf > temp_conf2 cat temp_conf2 bindingsite.def > plantsconfig ./PLANTS --mode screen plantsconfig cd results/ more bestranking.csv
Jika running sudah selesai, pindahkan folder result ke flashdisk . Langkah yang sama dilakukan pada setiap protein untuk masing-masing senyawa uji.
d. Validasi Metode Docking
Jalankan YASARA. Load ref_ligand.mol2 dan file hasil docking . Simpan sebagai YASARA scene . Hapus atom hydrogen . Lakukan analisis nilai RMSD untuk tiap konformasi pada masing-masing protein. Nilai RMSD yang dapat diterima adalah kurang dari 2Å.
e. Visualisasi Hasil Docking
Buka aplikasi Pymol. Load file pdb. Klik A pada baris kedua>preset >ligands. Klik S pada menu bagian bawah. Klik S pada baris kedua>cartoon. Klik L pada baris kedua>residues.

## 45

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Penetapan Kadar Kuersetin Dalam Ekstrak Daun Asam Jawa Pembuatan ekstrak daun asam jawa dilakukan dengan menggunakan metode maserasi. Maserasi merupakan metode sederhana yang paling banyak digunakan. Metode ini dilakukan dengan memasukkan serbuk tanaman dan pelarut yang sesuai ke dalam wadah inert yang tertutup rapat pada suhu kamar (Mukhriani, 2014). Maserasi dilakukan dengan menggunakan pelarut n-heksan kemudian dimaserasi kembali menggunakan etanol 70%. Ekstraksi dengan pelarut n-heksan bertujuan untuk melarutkan klorofil yang terdapat pada daun asam jawa karena klorofil akan mengganggu pada saat pembacaan absorbansi. Pelarut n- heksan dipilih karena klorofil tidak dapat larut dalam air, tetapi dapat larut dalam berbagai jenis pelarut organic (Riyono, 2007), sehingga dapat diketahui bahwa klorofil bersifat non polar dan untuk melarutkan klorofil dipilih pelarut yang mempunyai sifat sama dengan klorofil. Nilai rendemen ekstrak daun asam jawa yang diperoleh adalah 13,67%.
Panjang gelombang maksimum merupakan panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal. Penetapan panjang gelombang maksimum diperlukan untuk meningkatkan kepekaan dan meminimalkan kesalahan pada saat dilakukan pengukuran ulang (Gandjar dan Rohman, 2007). Penentuan λ max dilakukan dengan menggunakan larutan standar Kuersetin konsentrasi 100 ppm yang diukur pada rentang panjang gelombang 200-800 nm menggunakan spektrofotometri UV-Vis. Pengukuran serapan dilakukan pada rentang tersebut karena sinar UV dan visibel memiliki panjang gelombang dengan rentang 200-800 nm. Hasil pembacaan absorbansi larutan standar Kuersetin menunjukkan nilai absorbansi yang semakin meningkat pada panjang gelombang 361,0-361,8 nm kemudian mengalami penurunan nilai absorbansi. Hasil pembacaan λ max larutan Kuersetin adalah pada panjang gelombang 361,8 nm merupakan λ max dari Kuersetin. Penelitian lain menunjukkan bahwa Kuersetin memiliki λ max sebesar 380 nm (Bancirova, 2015). Pembuatan kurva baku dilakukan dengan menggunakan larutan standar Kuersetin dengan seri konsentrasi 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm, dan 12 ppm. Hasil absorbansi yang diperoleh dari masing-masing seri konsentrasi kemudian dibuat persamaan garis regresi linier yang dapat digunakan untuk menghitung kadar Kuersetin dalam ekstrak daun asam jawa. Hasil kurva baku Kuersetin ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1 . Kurva baku standar kuerstin pada panjang gelombang 361,8 nm.
Hasil kurva baku Kuersetin diperoleh nilai aksis intersep 0,0616 dan nilai slop -0,018, sehingga persamaan garis regresi linier yang diperoleh adalah y = 0,0616 x–0,018.
Penetapan kadar Kuersetin dilakukan dengan menggunakan larutan ekstrak daun asam jawa dengan konsentrasi 250 ppm. Pengujian dilakukan tiga kali dan dihitung rata-rata kadar Kuersetin dalam ekstrak daun asam jawa. Hasil pengukuran kadar ditunjukkan pada tabel I. Kadar Kuersetin dapat dihitung dengan cara mengolah data dari hasil pengukuran serapan dengan persamaan garis regresi linier.
46
Tabel I . Kadar Kuersetin dalam Ekstrak Daun Asam Jawa Replikasi Absorbansi (A) Kadar Kuersetin (ppm) 1 0,467 7,873 2 0,460 7,760 3 0,452 7,630 4 0.470 7,922 5 0.468 7,890 x 7,815 SD 0,120
Hasil pengukuran menunjukkan bahwa kadar Kuersetin sebesar 7,815 ppm dalam 250 ppm ekstrak daun asam jawa, sehingga dapat diketahui bahwa dalam 1 gram ekstrak daun asam jawa terdapat 31,26 mg Kuersetin. Pengukuran kadar ini dapat berguna untuk menentukan banyaknya ekstrak daun asam jawa yang diperlukan dalam pembuatan obat dengan bahan alami, sehingga dapat tercapai efek farmakologi yang diinginkan.

## 2. Uji In Silico Kuersetin Terhadap Protein 1EQH, 3PGH dan 6COX

## a. Docking Ligan Native
Aplikasi Docking yang digunakan adalah PLANTS. Untuk menjalankan program PLANTS didukung dengan program Virtual Oracle. Ada 3 ligan native yang akan dilakukan docking , yakni 1EQH, 3PGH, dan 6COX. File yang dibutuhkan dari protein dalam format file .yob, ligand.mol2, ligand_2D.mrv, protein.mol2, dan ref_ligand.mol2 kemudian file tambahan dari program PLANTS yakni PLANTS, PLANTS.exe, PLANTS64, dan plantsconfig. Masing-masing protein untuk tiap senyawa uji disimpan dalam 1 folder berbeda. Program docking dijalankan dalam sistem linux menggunakan aplikasi virtual oracle.
b. Validasi Metode Docking Validasi metode docking pada penelitian ini dilakukan dengan men- docking ligan native pada tiap kelompok protein yang diunduh dari situs PDB. Untuk evaluasi validasi, parameter yang dilihat adalah RMSD dan pose secara visual (Moitessier et al ., 2008). RMSD merupakan pengukuran dua pose dengan membandingkan posisi atom antara struktur eksperimental dengan struktur yang di- docking -kan atau yang diprediksi (Hawkins et al , 2008). Nilai RMSD < 2,0 Å biasanya digunakan sebagai kriteria kesuksesan metode docking (Jain and Nicholls, 2008; Moitessier et al , 2008). Semakin kecil nilai RMSD menunjukkan bahwa pose ligan yang diprediksi semakin baik karena semakin mendekati konformasi native . Akan tetapi, sebenarnya belum ada standar nilai RMSD yang digunakan sebagai parameter kesuksesan metode docking . Validasi RMSD dilakukan menggunakan aplikasi YASARA. Validasi metode docking diawali dengan menggabungkan ref_ligand.mol2 dari masing-masing protein dan 1 konformasi hasil docking ligand native di aplikasi YASARA. Hasil validasi metode Docking protein dapat dilihat pada Tabel II.
Tabel II . Hasil Interpretasi Protein 1EQH Native Protein Nilai RMSD Skor Docking 1EQH 1.7995 A -94.2519 3PGH 0.7373 A -89.2603 6COX 1.3373 A -77.3716
Dari ketiga validasi metode docking didapatkan hasil untuk protein 1EQH nilai RMSD 1,7995 Å dan skor docking -94,2519. Nilai RMSD protein 3PGH 0,7373 Å dengan skor docking -89,2603, sedangkan nilai RMSD protein 6COX 1,3373 Å dengan skor docking -77,3716. Dari hasil tersebut ketiga protein memiliki RMSD dibawah 2 Å, sehingga diketahui protokol docking yang digunakan sudah tervalidasi.
c. Docking Kuersetin Docking PLANTS didasarkan pada kelas alogaritma optimasi stokastik yang disebut koloni semut. Dalam kasus docking protein-ligan, sebuah koloni semut buatan digunakan untuk menemukan konformasi energi minimum ligan. Proses docking diawali dengan preparasi ligan uji, yaitu Kuersetin serta ligan pembanding yaitu Aspirin dengan perangkat lunak MarvinSketch version 5.2.5.1. Preparasi dilakukan dengan menggambarkan molekul ligan uji dan pembanding secara manual pada jendela MarvinSketch version 5.2.5.1, dilanjutkan dengan protonasi dan pencarian 10 konformasi yang optimal. Ligan yang telah dipreparasi kemudian di- docking -kan pada protein-protein yang telah divalidasi sebelumnya.
d. Docking Kuersetin Pada Protein 1EQH Dalam uji in silico ( docking ) senyawa Kuersetin sebagai inhibitor enzim siklooksigenase-1 (COX-1), dipilih protein 1EQH yang merupakan kompleks enzim COX-1 dengan flurbiprofen. Sebagai senyawa pembanding digunakan Aspirin. Skor docking ligan native , ligan Kuersetin, maupun Aspirin dengan enzim COX-1 dapat dilihat pada tabel III.
Tabel III . Skor docking ligan native , Kuersetin dan Aspirin dengan enzim COX-1 (1EQH) Konformasi Ligan Native Ligan Kuersetin Ligan Aspirin 1 -94.2230 -77.6195 -68.8443 2 -94.0626 -75.7412 -68.0691 3 -94.2519 -77.1029 -68.1363 4 -93.8915 -75.7542 -68.1041 5 -93.8717 -75.0558 -66.8703 6 -93.4515 -76.6219 -68.6354 7 -94.1186 -77.1873 -68.9438 8 -93.7667 -75.8960 -68.9890 9 -93.6433 -75.1547 -69.8294 10 -93.2652 -76.9962 -69.8784 Keterangan: Skor Docking paling negative
Dari hasil docking yang memprediksi interaksi senyawa Kuersetin dengan enzim COX-1 dari protein dengan kode PDB 1EQH, diketahui bahwa skor dari senyawa Kuersetin tersebut masih lebih tinggi bila dibandingkan dengan ligan native -nya, yaitu flurbiprofen. Hal ini dapat menunjukkan bahwa senyawa Kuersetin memiliki resiko ulserasi lambung yang lebih kecil dibandingkan dengan ligan native . Sedangkan apabila dibandingkan dengan senyawa pembandingnya (Aspirin), nilai docking Kuersetin lebih rendah, yang mengindikasikan bahwa resiko terjadinya ulserasi pada di lambung lebih besar daripada Aspirin. Kuersetin memiliki resiko ulserasi pada lambung yang lebih tinggi dibanding dengan Aspirin, akan tetapi memiliki resiko ulserasi lambung lebih rendah dibanding ligan native.
e. Docking Kuersetin Pada Protein 3PGH Dalam uji in silico ( docking ) senyawa Kuersetin sebagai inhibitor enzim siklooksigenase-2, dipilih protein 3PGH dan 6COX. PDB dengan kode protein 3PGH merupakan kompleks enzim COX-2 dengan inhibitor non-selektif flurbiprofen. Skor docking ligan native , ligan Kuersetin, maupun Aspirin dengan protein 3PGH dapat dilihat pada Tabel IV.
Dari hasil docking yang memprediksi interaksi senyawa Kuersetin dengan enzim COX-2 dari protein dengan kode PDB 3PGH, terlihat bahwa Kuersetin memiliki skor lebih tinggi dibandingkan ligan native (FLP). Hal ini menunjukkan bahwa kompleks antara protein dengan ligan Kuersetin tersebut kurang stabil dibandingkan dengan kompleks protein–ligan native . Apabila dibanding dengan ligan Aspirin, skor docking Kuersetin masih lebih rendah, yang mengindikasikan bahwa kompleks protein dengan Kuersetin lebih stabil
48
(kuat) dibandingkan dengan kompleks protein dengan senyawa pembanding. Hal ini menunjukkan bahwa Kuersetin memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai agen antiinflamasi yang cukup poten
Tabel IV . Skor docking ligan native , Kuersetin dan Aspirin dengan enzim COX-2 (3PGH) Konformasi Ligan Native Ligan Kuersetin Ligan Aspirin 1 -86.0840 -74.4021 -74.6603 2 -87.1203 -74.1186 -74.4135 3 -88.7605 -74.0972 -74.4977 4 -880.166 -74.3194 -74.4139 5 -84.9740 -73.5509 -72.6775 6 -85.6957 -73.5838 -74.6947 7 -88.7822 -73.8408 -74.8789 8 -89.2603 -75.1344 -74.9694 9 -85.0529 -74.4428 -75.2026 10 -85.3141 -73.5281 -75.2421 Keterangan: Skor Docking paling negative
f. Docking Kuersetin Pada Protein 6COX Dalam uji in silico ( docking ) senyawa Kuersetin sebagai inhibitor enzim siklooksigenase-2, dipilih protein 3PGH dan 6COX. PDB dengan kode protein 6COX merupakan kompleks enzim COX-2 dengan inhibitor selektif SC-58. Skor docking ligan native , ligan Kuersetin, maupun Aspirin dengan protein 6COX dapat dilihat pada Tabel V.
Tabel V . Skor docking ligan native , Kuersetin dan Aspirin dengan enzim COX-2 (6COX) Konformasi Ligan Native Ligan Kuersetin Ligan Aspirin 1 -77.1290 -81.9582 -71.2181 2 -77.3407 -81.2034 -71.2000 3 -77.3716 -81.9501 -71.4044 4 -76.7638 -82.0974 -71.3801 5 -76.7626 -81.4018 -69.1637 6 -76.8138 -81.8134 -71.3633 7 -77.1658 -82.1551 -72.0382 8 -76.8783 -81.6031 -72.0884 9 -77.2992 -81.5528 -72.0645 10 -76.8393 -81.2454 -72.0795 Keterangan: Skor Docking paling negative
Dari hasil docking yang memprediksikan interaksi senyawa Kuersetin dengan protein 6COX, terlihat bahwa Kuersetin memiliki skor yang lebih rendah dibandingkan dengan ligan native (S58) dan ligan pembanding (Aspirin). Hal ini menunjukkan bahwa kompleks protein dengan ligan uji lebih stabil dibandingkan dengan kompleks protein ligan native . Dari hasil skoring docking Kuersetin sangat poten untuk dikembangkan sebagai agen antiinflamasi.
Tabel VI . Hasil Skor Docking Kuesetin Pada Protein 1EQH, 3PGH dan 6COX Senyawa 1EQH 3PGH 6COX Native -94.2519 -89.2603 -77.3716 Aspirin -69.8784 -75.2421 -72.0884 Kuersetin -77.6195 -75.1344 -82.2454 Berdasarkan hasil skoring docking pada tabel VI diketahui kalau Kuersetin memiliki potensi sebagai antiinflamasi yang lebih baik dibandingkan dengan Aspirin. Akan tetapi Kuersetin memiliki resiko lebih tinggi menyebabkan ulkus lambung daripada Aspirin.
g. Visualisasi Hasil Docking Kuersetin Visualisasi hasil docking dilakukan untuk melihat interaksi ligan Kuersetin dengan protein target secara 3D dan melihat residu asam amino yang terikat pada ligan Kuersetin. Visualisasi hasil docking menggunakan Pymol. Hasil visualisasi antara Kuersetin dengan protein 1EQH terlihat bahwa senyawa Kuersetin dapat berinteraksi dengan asam amino PHE 209, PHE 210, THR 206, TYR 385, dan SER 530. Visualisasi Kuersetin dengan protein 3PGH terlihat bahwa Kuersetin berinteraksi dengan asam amino PHE 209, PHE 210, THR 206, TYR 385, dan SER 530. Sedikit berbeda dengan hasil visualisasi Kuersetin dengan protein 6COX terlihat bahwa senyawa Kuersetin dapat berinteraksi dengan asam amino PHE 209, PHE 210, SER 530, TYR 385, dan TRP 387. Posisi interkasi antara ligand dan asam-asam amino pada protein target dapat menggambarkan perkiraan site ligand pada protein target dibandingkan dengan pembanding. Adapun perbandingan interksi antara Kuersetin dan Aspirin dapat dilihat pada Gambar 2; Tabel VII.
(2.a)
(2.b)
(2.c)
(2.d)
(2.e)
(2.f)
Gambar 2 . Visualisasi Kuersetin terhadap protein 1EQH (2.a), Aspirin terhadap protein 1EQH (2.b), Kuersetin terhadap protein 3PGH (2.c), Aspirin terhadap protein 3PGH (2.d), Kuersetin terhadap protein 6COX (2.e) dan Aspirin terhadap protein 6COX (2.f).
Dari hasil visualisasi pada Tabel VII menunjukkan bahwa pada protein 1EQH memiliki kesamaan asam amino yang terikat pada ligan Aspirin dan ligan Kuersetin yakni THR 206, PHE 209, PHE 210, dan TYR 385 sehingga 1EQH memiliki resiko terjadinya ulkus lambung. Protein 3PGH memiliki kesamaan asam amino yang terikat pada ligan Aspirin dan ligan Kuersetin yakni THR 206, TYR 385, PHE 209, dan PHE 210. Sedangkan protein 6COX memiliki kesamaan asam amino yang terikat pada ligan Aspirin dan ligan
50
Kuersetin yakni PHE 209, PHE 210 dan TYR 385 sehingga ligan Kuersetin dapat dikembangkan sebagai agen anti-inflamasi berbasis bahan alam.
Tabel VII . Hasil Interaksi Ligan dengan Asam Amino Pada Protein 1EQH, 3PGH dan 6COX Protein 1EQH 3PGH 6COX Ligan Aspirin Kuersetin Aspirin Kuersetin Aspirin Kuersetin Asam Amino PHE 209 THR 206 PHE 210 TYR 385 PHE 209 THR 206 PHE 210 TYR 385 SER 530 THR 206 PHE 209 PHE 210 TYR 385 PHE 209 PHE 210 THR 206 TYR 385 SER 530 PHE 209 PHE 210 TYR 385 PHE 205 PHE 209 PHE 210 SER 530 TYR 385 TRP 387 Keterangan: PHE : Phenylalanile SER: Serin THR: Threonine LEU: Leukin TYR: Tyrosin TRP: Tryptophan

## KESIMPULAN
Kadar Kuersetin yang diperoleh dalam ekstrak dalam daun asam jawa sebesar 31,26 mg/g. Kuersetin memiliki efektivitas yang lebih poten dibandingkan dengan Aspirin, namun memiliki resiko lebih tinggi menyebabkan ulkus lambung daripada Aspirin secara in silico .

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima kasih kepada Kementerian Riset, Teknologi dan Pendidikan Tinggi Republik Indonesia yang telah membiayai penelitian ini melalui Hibah Penelitian Dosen Pemula Tahun 2019.
DAFTAR PUSTAKA Bancirova, M. 2015 Changes of the Quercetin Absorption Spectra in Dependence on Solvent. Chemistry Journal , 1(2):31-34. Dorland, 2002. Kamus Kedokteran . EGC, Jakarta. Doughari, J.H., 2006. Antimicrobial activity of Tamarindus indica Linn. Tropical Journal of Pharmaceutical Research , 5 (2), pp.597-603.
Fahey, J.W., Stephenson, K.K. 2002. Kuersetin from Honey and Thai Ginger (Boesenbergia pandurata): A Potent Flavonoid Inducer of Mammalian Phase 2 Chemoprotective and Antioxidant Enzymes. J. Agric. Food Chem . 50, 7472–7476. https://doi.org/10.1021/jf025692k. Hawkins PC, Warren GL, Skillman AG, Nicholls A. 2008. How to do an evaluation: pitfalls and traps. J Comput Aided Mol, 22(3–4):179–190. Gandjar, I.G., Rohman A.. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar, Yogyakarta. Jain, A.N., Nicholls, A. 2008. Recommendations for evaluation of computational methods. J. Comput. Aided Mol , 22:133–139.
Katzung, B.G., Masters, S.B. and Trevor, A.J., 2004. Basic and Clinical Pharmacology. ; 2004. International Edition , 9 . Moitessier, N., Englebienne, P., Lee, D., Lawandi, J. and Corbeil, A.C., 2008. Towards the development of universal, fast and highly accurate docking/scoring methods: a long way to go. British journal of pharmacology , 153 (S1), pp.S7-S26.
Mukhriani. 2014 Ekstraksi, Pemisahan Senyawa, Indentifikasi Senyawa Aktif. Jurnal Kesehatan , 7(2).
Riyono S.H. 2007. Beberapa Sifat Umum dari Klorofil Fitoplankton. Oseana , 32(1):24. Sing, G., Triadafilopoulos, G., 2009. Appropriate choice of proton inhibitor therapy in the prevention and management of NSAID-related gastrointestinal damage 1 , 1210–7.
Utami. 2008. Buku Pintar Tanaman Obat: 431 Jenis Tanaman Penggempur Aneka Penyakit.