## DETEKSI GEN Mx AYAM TOLAKI MENGGUNAKAN TEKNIK EKSTRAKSI DNA YANG BERBEDA
Muhammad Amrullah Pagala 1* dan Niken Ulupi 2
1) Jurusan Peternakan Fakultas Peternakan Universitas Halu Oleo Jl.HEA Mokodompit Kampus UHO Anduonohu, Kendari 93232
2) Departemen Ilmu Produksi dan Teknologi Peternakan, Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor Jl Agatis Kampus IPB, Darmaga, Bogor, 16680
*E-mail:amroe74@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mencari metode yang efektif dalam teknik ekstraksi DNA dari  gen  Mx  (Myxovirus)  ayam  Tolaki.  Gen  Mx  adalah  gen  yang  bertanggungjawab terhadap  kemampuan  ayam  untuk  mertespon  serangan  penyakit  viral  seperti  penyakit Flu  Burung dan New  Castle  Disesase .  Penelitian  ini  dilaksanakan  mulai  bulan  April sampai dengan bulan Agustus 2013.  Sampel penelitan terdiri atas 25 ekor ayam Tolaki dewasa,  yang  diperoleh  dari  pemeliharaan  secara  ekstensif  oleh  masyarakat  di Kabupaten  Konawe.  Penelitian  ini  menggunakan  kedua  metode  ekstraksi  DNA  yakni metode  ekstraksi  DNA  secara  konvensional  dan  metode  Kit  ekstraksi  DNA. Selanjutnya hasil ekstraksi DNA diamplifikasi menggunakan mesin PCR. Produk DNA kedua  metode  tersebut  kemudian  dibandngkan  dan  dianalisis  secara  kualitatif.  Secara umum kedua metode tersebut cukup efektif untuk menghasilkan kualitas DNA gen Mx yang  baik.  Ekstraksi  DNA  gen  Mx  dari  kedua  metode  tersebut  menghasilkan  ukuran DNA dengan panjang 299 pb.
Kata Kunci : Gen Mx, Ayam Tolaki, Ekstraksi DNA, PCR

## ABSTRACT
The  objective  of  this  research  was  to  find  the  effective  method  that  is  producing DNA  of  Mx  gene  of  Tolaki  chicken.  Mx  gene  (Myxovirus)  gene  is the  specific  genes that  control  the  ability  of  the  animals  to  be  resistant  or  susceptible  to  virus  attacks ( Avian  influenza and Newcastle  Disease  virus) .  The  study  conducted  from  April  to August  2013.    A  total  25  chickens  Tolaki  (aged  8-12  months)  were  obtained  from extensive  maintenance  in  Konawe  Regency  communities.  The  research  was  used  both the DNA extraction conventional method and  DNA extraction kit method. The result of DNA fragmenth was amplified with PCR machine ( Polymerase Chain Reaction ).  The DNA  product  were  compared  and  analyzed  qualitatively.  Source  of  DNA  material  are blood  and  feathers  of  Tolaki  chicken.  The  study  showed  the  extraction  of  DNA  from blood samples showed slightly better quality of DNA (DNA band was thick and clean) compared with DNA samples from feathers (DNA band was thin and smear). However, generally the both techniques were effectively produced DNA. Extraction of DNA from both methods of DNA obtained with the Mx gene size was 299 bp .
Key Words : Mx gene, Tolaki chicken, DNA extraction, PCR

## PENDAHULUAN
Ayam  lokal  atau  lazim  dikenal sebagai  ayam  buras  (bukan ras) memiliki  sejumlah  sifat  ekonomis, namun  dalam  pengembangannya  ayam lokal di Indonesia sampai saat ini masih belum  ditangani  secara  serius  dan kontinu,  upaya  ke  arah  seleksi  yang terarah  pada  karakteristik  fenotipik tertentu  masih  sangat  terbatas.  Hal  ini dapat dilihat masih tingginya keragaman  sifat-sifat  yang  dimiliki, baik  sifat-sifat  tampilan  fisik  maupun produktivitasnya (Mansjoer, 2003). Tingginya keragaman sifat yang dimiliki  ayam  lokal  merupakan  potensi dasar  dalam  pembentukan  galur  ayam lokal  asli  yang  murni  dan  unggul, melalui program seleksi yang berkesinambungan  dan  karakterisasi pada sifat-sifat khas yang menonjol. Ayam  Tolaki  temasuk  dalam kategori  ayam  lokal  yang  memiliki fenotip  yang  khas  selain  ayam  lokal lainnya seperti: ayam
Nunukan, Bangkok,  Pelung,  Nagrak,  Sentul, Merawang, Merawas, Kedu hitam/putih, Kokok  Balenggek,  Tukong,  Kate  dan ayam  Berugo.  Ayam  Tolaki  termasuk salah satu dari 31 jenis ayam lokal yang memiliki  karakteristik  penampilan  yang khas  (Nataamidjaja  dan  Dwiyanto, 1994).  Ayam  Tolaki  adalah  ayam  lokal asli  Sulawesi  Tenggara.    Ayam  ini memiliki  pola  warna  bulu  yang  mirip dengan  ayam  hutan  merah  ( Gallus gallus ), sehingga ada yang
menyebutnya  sebagai  ayam  hutan. Sampai  saat  ini  ayam  Tolaki  masih dikelompokkan  sebagai  ayam  aduan, namun  sesungguhnya  dengan  menilik postur  tubuhnya,  maka  ayam  Tolaki dapat  diarahkan  untuk  tujuan  produksi daging  dan  telur.  (Pagala  dan  Nafiu, 2012;Pagala dan Aku, 2010).
Ayam  lokal  diketahui  memiliki sejumlah  sifat  ekonomis,  diantaranya
kemampuan  adaptasi  yang  tinggi  pada lingkungan  yang    kurang  baik  dan memiliki  daya  tahan  terhadap  sejumlah serangan  penyakit  viral  meskipun  di lingkungan  tropis  seperti  Indonesia prevalensi  penyakit  relatif  lebih  tinggi. Kondisi ini menyebabkan kinerja produksi  ayam  lokal  menjadi  tidak optimal. Beberapa hasil penelitian mengungkapkan ayam lokal di Indonesia  memiliki  ketahanan  cukup tinggi terhadap terhadap  serangan penyakit  viral  seperti Avian  Influenza (AI) dan Newcastle Disease (ND). Sifat antiviral ini diketahui dikontrol oleh gen Mx  (Maeda,  2005;  Sulandari, et  al. , 2010; Pagala, et al., 2013).
Penggunaan teknik molekuler dengan  memilih  genotipe  gen  kandidat yang resisten terhadap penyakit tertentu sebagai Marker  Assisted  Selection (MAS)  diharapkan  dapat  mempercepat pembentukan  jenis  ayam  lokal  resisten terhadap beberapa penyakit yang mematikan seperti AI dan ND. Salah  satu  teknik  dasar  molekuler untuk mengidentifikasi keberadaan sejumlah  gen  adalah  teknik  isolasi genom  dan  ekstraksi  DNA.  Bahan ekstraksi  DNA  dapat  diperoleh  dari bagian tubuh/jasad suatu makhluk hidup dengan  asumsi  bahwa  DNA  terdapat pada  semua  bagian  tubuh  makhluk hidup.  Sumber  atau  asal  suatu  bahan ekstraksi  serta  metode  ekstraksi  yang digunakan dapat mempengaruhi kualitas dan kuantitas DNA yang dihasilkan.
Berdasarkan  hal  tersebut,  maka penelitian  analisis  gen  Mx  ayam  Tolaki dengan  teknik  ekstraksi  DNA  yang berbeda dilakukan untuk melihat efektifitas  metode  serta  kualitas  DNA yang dihasilkan.

## MATERI DAN METODE

## Tempat dan Waktu
Lokasi penelitian bertempat diLaboratorium Lapang Kandang Unggas Unit Pembibitan  Fakultas Peternakan  Universitas  Halu  Oleo. Ekstraksi  DNA  dan  amplifikasi  DNA gen  Mx  dilakukan  di  Laboratorium Pemuliaan  dan  Genetika  Molekuler Departemen  IPTP  Fakultas  Peternakan IPB. Penelitian dilaksanakan pada bulan April sampai dengan Agustus 2013.

## Materi Penelitian
Sampel  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  ayam  Tolaki  yang diambil  dari  beberapa  daerah  di Kabupaten  Konawe  Selatan  Propinsi Sulawesi  Tenggara  sebanyak  25  ekor. Pengambilan  sampel  darah  dan  bulu dilakukan  pada  tahap  I  (pertama) penelitian, selanjutnya analisis laboratorium pada tahap II di Laboratorium Departemen IPTP Fakultas  Peternakan  IPB.    Bahan  yang digunakan  adalah  bahan  kimia  untuk pengambilan  sampel  darah,  ekstraksi DNA,
amplifikasi
DNA, gel elektroforesis,  dan  Silver  Staining antara  lain  :  EDTA,  Trs,  HCL  pekat, potassium  aseat,  air  bebas  ion,  NaCl,
NaOH,  SDA,  natrium  asetat,  asam asetat, fenol, etanol absolute, kloroform, isoamil  alkohol,  dan  proteinase  K, agarose, bromfenolblue, etidium Bromida,  marker  DNA  leader  100  pb, Tris-Borat-EDTA,  Mgcl2,  dNTP,  Taq polymerase dan random primer.
Alat  yang  digunakan  mesin PCR,  elektroforesis,  autoclave,  vacuum tainer,  pipet  mikro,  pipet  tip,disposable glove,  sentrifuse,  vortex,gelas  piala, magnetic  stirrer,  tabung  eppendorf,  alat thremocycler, lampu UV, kamera paraloid.

## Metode Penelitian

## Ekstraksi DNA dari Sampel Darah
Sampel  darah  dalam  tabung EDTAdimasukkan  ke  dalam  tabung mikro (1.5 ml) lalu ditambahkan dengan 1000  µl  DW/TE  (NaCl  0.2%).   Setelah divortex  dan  didiamkan  5  menit, kemudian disentrifugasi pada kecepatan 8000  rpm  selama  5  menit.  Larutan supernatan  yang  terbentuk  dibuang. Tahap berikutnya dilakukan
penambahan  40  µl  SDS  10%,  10  µl proteinase  K  5  mg/ml,  dan  1  x  STE (Sodium  Tris  EDTA)  sebanyak  300  µl. Larutan  selanjutnya  dikocok  perlahan dalam inkubator bersuhu 55 0 C selama 2 jam.  Kemudian  ditambahkan  laruatn
phenol  400  µl,  400  µl  CIAA (Chloroform:Isoamyl  alkohol  =24  :1), dan 40 µl NaCL 5 M dikocok perlahan pada  suhu  ruang  selama  1  jam  lalu disentrifugasi  pada  kecepatan  12000 rpm selama 5 menit.
Larutan bening  yang mengandung DNA  dipindahkan  sebanyak  400  µl  ke tabung  eppendorf  1.5  ml  yang  baru. Selanjutnya  ditambahkan  800  µl  EtOH (etanol  absolut),  dan  40  µl  NaCl  5  M. Lalu  disimpan  dalam  freezer  selama semalam.  Tahap  berikutnya  larutan disentrifugasi  lagi  pada  kecepatan 12000  rpm  selama  5  menit,  supernatan yang  terbentuk  dibuang  lalu  didiamkan dalam  keadaan  terbuka  atau  dalam desikator  sampai  alkohol  hilang.  Tahap terakhir  ditambahkan  100  µl  TE  80% atau  Elution  Buffer  yang  berfungsi sebagai  buffer.  DNA  yang  diperoleh lalu  disimpan  dalam  freezer  sampai akan digunakan.

## Ekstraksi DNA dari Sampel Bulu
Sampel bulu yang dapat digunakan  merupakan  sampel  bulu utuh,ayam Tolaki  yang memiliki bagian kalamus.  Ekstraksi  DNA  dari  sampel bulu dilakukan menggunakan kit
ektraksi Phire  Animal  Tissue  Direct PCR  Kit (Thermo  Fisher  Scientific Inc.). Prosedur ektraksi dilakukan mengikuti  petunjuk  dari  produsen  kit sebagai  berikut:  ±  0.5  cm  bagian  awal (akar/kalamus) bulu
dipindahkan kedalam  tabung  1.5  ml,  kemudian dipotong  menjadi  beberap  bagian  kecil. Pada  tabung  1. 5  ml  ditambahkan  20  µl Dilution  Buffer dan  0. 5  µl DNA Release™ Additive .
Campuran  dalam  tabung  diaduk menggunakan  vortex  dan  kemudian disentrifugasi.  Setelah  itu  campuran diinkubasi  selama  2-5  menit  pada  suhu ruang  dan  dilanjutkan  selama  2  menit pada  suhu  98  °C.  Sampel  DNA  siap
digunakan atau disimpan pada suhu -20 °C untuk digunakan dikemudian hari.
Amplifikasi  Ruas  Gen  Mx  dengan PCR
Sampel DNA diamplifikasi
dengan  mesin  PCR (Polymerase  Chain
Reaction) (Muladno,  2010).  Primer spesifik untuk mengamplifikasi  gen Mx berdasarkan  Sironi et  al. (2010)  adalah primer  foward  (5’-GCA  CTG  TCA CCT  CTT  AAT  AGA-3’)  dan  reverse (5’-GTA  TTG  GTA  GGC  TTT  GTT GA-3’).  Amplifikasi  DNA  dilakukan pada total volume 25 µl terdiri dari 2 µl (10- 100  ng)  DNA,  15,75  µl  air  bebas ion  steril;  2,5  µl  10×  buffer  tanpa, meliputi  proses  denaturasi  awal  pada suhu  94  ºC  selama  4  menit.  Tahap  II dilakukan  dengan  30  x  siklus,  meliputi denaturasi  pada  suhu  94  ºC  selama  10 detik,  penempelan  primerpada  suhu  60 ºC  selama  1  menit,  pemanjangan molekul DNA pada suhu 72 ºC selama 2 menit.  Tahap  III  dilakukan  dengan  1  x siklus,  meliputi  pemanjangan  akhir molekul DNA pada suhu 72 ºC selama 7 menit.  Inkubasi  pada  4  °C  hingga digunakan untuk analisis lebih lanjut.

## Elektroforesis
Elektroforesis fragmen DNA hasil amplifikasi  dengan  PCR  dilakukan menggunakan  perangkat  elektroforesis pada  gel  agarosa  2%  (0,5  gram/25  ml 0,5 X TBE). Perangkat dijalan menggunakan  buffer  0,5  X  TBE,  pada tegangan  100  volt  selama  30  menit. Viasualisasi  gel  elktroforesis  dilakukan pada  perangkat  dokumentasi  gel  Alpha Imager (Alpha Imager).

## Analisis Data
Berdasarkan  hasil  ekstraksidan amplifikasi  DNA  selanjutnya  dilakukan analisis  secara  kualitatif  dengan  cara membandingkan  tampilan  pita  DNA
yang  dihasilkan  dari  kedua  metode
ektraksi DNA dalam gel elektroforesis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi DNA ayam Tolaki
Hasil  ekstraksi  DNA yang diperoleh dari ayam Tolaki menggunakan  metode  ekstraksi  yang berbeda  disajikan  pada  gambar  1  dan gambar 2

## M     1     2      3     4      5      6      7     8     9    10
Keterangan :   M =  DNA Marker 1 kb 1,2,3,...=  DNA Sampel
Gambar 1. Hasil ektraksi DNA darah ayam Tolaki M     1      2     3     4      5      6     7      8     910 Keterangan :   M =  DNA Marker 1 kb 1,2,3,...=  DNA Sampel Gambar 2. Hasil ektraksi DNA buluayam Tolaki
Teknologi  ekstraksi  DNA  pada organisme  eukaryot  (manusia,  hewan, dan  tumbuhan)  umumnya  dilakukan dengan  beberapa  tahapan  dasar  seperti degradasi  dinding  sel,  penghilangan RNA  dan  protein  serta  presipitasi  dan purifikasi DNA.
Prosedur  kerja  dalam  tahapan  ekstraksi ini dapat digunakan untuk ekstraksi dari berbagai  jaringan  tubuh,  darah,  rambut, feses, tulang, sperma, urine, daun, kayu, jamur  dan  sebagainya.  Berdasarkan prinsip dasar ini telah banyak dikembangkan berbagai teknik ekstraksi DNA, yang  dapat  dikelompokkan kedalam  teknologi  ekstraksi  DNA konvensional  dan  teknologi Kit DNA (Sulandari dan Zein, 2003). Berdasarkan  hasil  ekstraksi  DNA ayam  Tolaki  dengan  metode  ekstraksi darah  (teknik  DNA  konvensional)  dan bulu  (teknik  DNA Kit )  memperlihatkan kualitas DNA  yang cukup baik. Seluruh sampel  DNA  terkumpul  dengan  baik pada stocking  gel .    Ekstraksi  DNA  dari sampel  darah  menunjukkan  kualitas DNA sedikit lebih baik jika dibandingkan  dengan  sampel  DNA  dari bulu.    Hal  ini  dapat  dilihat  pada  pita DNA  yang    lebih  tebal  dan  bersih, sedangkan  pita  DNA  asal  bulu  lebih tipis  dan  memperlihatkan  sebaran  pita sedikti  smear.  Hasil  ekstraksi  DNA berupa  tampilan  pita  DNA  pada stocking  gel bermakna  bahwa  semua sampel  mengandung  gen  Mx,  namun belum  diketahui  berapa  panjang  ukuran DNA serta genotipe dari gen Mx ini. Kedua teknik ekstraksi DNA yang telah diaplikasikan di atas memperlihatkan kelebihan dan kekurangan masing-masing. Teknik DNA secara konvensional menunjukkan hasil  yang  lebih  baik  dari  teknik  DNA Kit, namun kekurangannya membutuhkan  waktu  pengerjaan  yang cukup  lama  dan  tahapan  lebih  rumit,
sedangkan  teknik  DNA  kit  prosesnya cukup  mudah,  cepat  dan  sederhana, namun untuk menghasilkan kulaitas pita DNA  yang  baik  membutuhkan  jumlah sampel  yang  cukup  banyak  (Fatchiyah, et al ., 2011).
Amplifikasi DNA Ayam Tolaki
Hasil  amplifikasi  DNA  dengan PCR  ditampilkan  pada  Gambar  3  dan Gambar 4
400 pb 300 pb 100 pb
299 pb
299 pb Keterangan :   M =  Marker 1 kb 1,2,3,...=  Jumlah sampel Gambar 3  Hasil Amplifikasi PCR DNA
sampel darah Ayam Tolaki
400 pb 300 pb
100 pb
299 pb
Keterangan :   M =  Marker 1 kb 1,2,3,...=  Jumlah sampel Gambar 4  Hasil Amplifikasi PCR DNA sampel bulu Ayam Tolaki Berdasarkan hasil amplifikasi PCR  DNA  pada  sampel  darah  ayam
Tolaki  diperoleh  informasi  bahwa semua  sampel  ayam  Tolaki  memiliki gen  Mx  pada exon 13  dengan  ukuran pita  DNA  sebesar  299  pb.  Produk  PCR hasil  ekstraksi  DNA  dari  sampel  darah memperlihatkan  kualitas  DNA  yang lebih  baik,  hal  ini  dapat  dilihat  dari tampilan  pita  DNA  yang  lebih  tebal dibandingkan  pita  DNA  hasil  ekstraksi DNA  dari  sampel  bulu  yang  sedikit lebih  tipis.  Meskipun  demikian  kedua metode  ekstraksi  DNA  diatas  cukup efektif dan cukup baik digunakan dalam mendeteksi keberadaan gen Mx. Gen Mx adalah gen yang bertanggungjawab terhadap kemampuan ayam  dalam  mempertahankan  diri terhadap  serangan  virus  flu  burung (Maeda 2005: Sulandari et al. 2011;Sartika, 2010)) dan virus Newcastle Disease (Pagala et  al , 2013). Ukuran  pita  DNA  gen  Mx  pada  ayam Tolaki  sebesar  299  pb  relatif  sejalan dengan  hasil penelitian  yang dilaporkan oleh  Sironi, et  al. (2010)  yang menemukan  adanya  gen  Mx  pada exon 13  ayam  jenis White  Leghorn dan New
Hampshire sebesar 300 pb. Penelitian  awal  terkait  gen  Mx pada  ayam  sebelumnya  telah  dilakukan oleh Ko, et al . (2002) dan Maeda (2005) yang  menunjukkan  gen  Mx  terletak pada  kromosom  1,  dengan  panjang fragmen  20.767  pasang  basa  (pb), terdiri  atas  13 exon ,  1.115  pb coding region ,  dan  sisanya  705  asam  amino.
Gen Mx cukup efektif digunakan dalam program breeding yang ditujukan  untuk meningkatkan  mutu  genetik  rumpun ayam  lokal  yang  tahan  terhadap  infeksi virus avian  influenza dan Newcastle Disease (Sartika, et al ., 2011; Pagala, et al ., 2013)

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil penelitian, dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut
:
1. Metode ekstraksi darah menggunakan teknik DNA konvensional  dan  metode  ekstraksi bulu    menggunakan  teknik  DNA Kit memperlihatkan  kualitas  DNA yang cukup baik.
2. Hasil  ekstraksi  DNA  menggunakan teknik ekstraksi konvensional menghasilkan  kulaitas  DNA  yang relatif sedikit lebih baik dibandingkan  menggunakan  teknik DNA Kit
3. Melalui  ekstraksi  DNA  dan  hasil amplifikasi  dengan  mesin  PCR diperoleh  DNA  gen  Mx  dengan panjang ukuran 299 bp.
Untuk  mendapatkan  validasi  hasil ekstraksi  DNA  yang  lebih  akurat menggunakan  kedua  metode  ekstraksi DNA tersebut, maka dibutuhkan jumlah sampel  yang  lebih  banyak  dan  proses optimasi yang lebih lama.

## DAFTAR PUSTAKA
Fatchiyah, E.L.Aruminingtyas, S. Widyarti, S.Rahayu. 2011. Biologi  molekuler  Prinsip  dasar analisis.    Penerbit  Erlangga. Jakarta. Maeda.  2005 . Polymorphism  of  Mx Gene in Asian Indigenous chicken population.    Seminar  Nasional Tentang  Unggas  Lokal  III:  25 Agustus 2005. Universitas Diponegoro. Semarang Mansjoer SS. 2003. Potensi ayam buras di  Indonesia.  Makalah  semiloka pengkajian
pengembangan
produksi  bibit  ayam  Buras  dan
Itik,  Cisarua  Bogor,  Tanggal  11  - 12 Desember 2003.
Nataamidjaja  A.G.  dan  K.  Diwyanto, 1994.    Konservasi  Ayam  Buras Langka.  Proceeding,  Koleksi dan Karakterisasi Plasma Nutfah
Pertanian,  Bogor.
Pagala,  M.A.,  Muladno,  C.Sumantri  & S.Murtini.    2013.Association  of
Mx Gene Genotype with Antiviral and  Production  Traits  in  Tolaki Chicken.J.  Poult  Sci.  12  (12): 735-739. Pagala  MA,  dan  L.O.  Nafiu.  2012. Identifikasi  molekuler  sifat  anti viral  ayam  Tolaki  melalui  deteksi gen  Mx  sebagai  marka  genetik. Agriplus. 23:139-144. Pagala M.A, dan A.S. Aku.  2010. Studi Sebaran  dan  Pemetaan  Populasi Ayam  Tolaki  di  Kabupaten Kolaka  dan  Kolaka  Utara  dalam rangka pelestarian plasma nutfah asli  Sulawesi  Tenggara.  Warta
Wiptek Volume 18 Edisi Januari 2010.
SambrookJ.,  F.Fritsch,  &  T.  Maniatis. 1989.  Molecular  Cloning.  A
Laboratory Manual 2 nd ed.  (US) :
Cold  Spring  Harbor  Laboratory Press. Sartika T., S. Sulandari, & MSA. Zein,.
2011.  Selection  of  Mx  gene genotype  as  genetic  marker  for
Avian  Influenza  resistance  in Indonesian  native  chicken.  BMC Proceed. 2011, 5(Suppl 4):S37. Sartika,  T.  2005.  Gen  Mx + sebagai penyeleksi  resistensi  flu  burung. Warta Penelitian dan pengembangan pertanian (27).2005.
Schwarz  H,  O.Harlin,  A.Ohnemus, B.Kaspers,  &  P.Staeheli.    2004. Synthesis  of  IFN- β  by  virus infected  chicken  embryo  cells demonstrated with spesific antisera and new bioassay. J Interf Cyt Res. 24:179-184. Sironi,  L.,  P.  Ramelli,  J.L.Williams,  & P.Mariani. 2010. PCR-RFLP Genotyping  Protocol  for  Chicken Mx  Gene  G/A  Polymorphism associated with the S631N
Mutation. Genet Mol Res. 9(2):1104-1108. Staeheli  P,  R.  Grob,  E.  Meir,  J.
Sutcliffe,  &  O.Haller.  1998. Influenza-susceptible  mice  carry Mx  genes with  a  large deletion or a  nonsense  mutation.  Mol  Cell Biol. 8(10):4518-4523. Sulandari  S.,  MSA  Zein,  D.  Astuti,  & T.Sartika.    2009.    Genetic polymorphisms  of  the  chicken antiviral  Mx  gene  in  a  variety  of Indonesia indigenous chicken
breeds. J Vet. 10(2): 50-56. Sulandari,  S,  dan  M.S.A.  Zein.    2003. Panduan  Praktis  Laboratorium DNA.  Buku.    Edisi  Pertama. Bidang  Zoologi,  Pusat  Penelitian Biologi. Lembaga Ilmu Pengetahuan  Indonesia.    Bogor. hlmn.125.