Isolat Biji Mahoni ( Swietenia macrophylla King)

## Memperbaiki Gambaran Histopatologi Hepar Tikus Model DM Tipe 2
Muthmainah 1 , Ida Nurwati 2 , Selfi Handayani 3 , Betty Saptiwi 4 , Siti Ma’rufah 5
1. Bagian Histologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret 2. Bagian Biokimia, Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret
3. Bagian Anatomi, Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret
4. Bagian Gigi dan Mulut, Rumah Sakit Universitas Sebelas Maret
5. Bagian Farmakologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret
Korespondensi : muthmain@gmail.com

## ABSTRAK
Pendahuluan : Kasus diabetes mellitus (DM) di dunia terus meningkat, dan sebagian besar merupakan DM tipe 2. Diabetes melitus yang tidak terkontrol dapat menimbulkan berbagai komplikasi, antara lain berupa hepatopati. Komplikasi dapat dicegah dengan pengendalian kadar  glukosa  darah.  Biji  mahoni  ( Swietenia  macrophylla King)  diketahui  mengandung isolat  1,4-bis-(3,4,5-trimetoksi-fenil)-tetrahidro-furo(3,4-c)  furan  yang  dapat  menurunkan kadar  glukosa  darah.  Penelitian  mengenai  pengaruh  isolat  tersebut  terhadap  gambaran histopatologi hepar pada kasus DM belum pernah dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  pengaruh  isolat  biji  mahoni  tersebut  terhadap  gambaran  histopatologi  hepar tikus model DM tipe 2.
Metode : Penelitian eksperimental laboratorium ini  menggunakan rancangan post test only control  group  design .  Sampel  36  tikus  putih  dibagi  menjadi  6  kelompok  secara  random: KN  (kontrol  normal),  K(-)  (DM  tanpa  perlakuan),  K(+)  (DM+glibenklamid),  P1,  P2,  dan P3 (DM+isolat biji mahoni berturut-turut 10 mg/kg BB, 20 mg/kg BB, dan 40 mg/kg BB). Induksi  terjadinya  DM  menggunakan  streptozotosin  dan  nikotinamid.  Setelah  21  hari perlakuan,  tikus  putih  dikorbankan,  kemudian  organ  hepar  diambil  untuk  dibuat  preparat histopatologi dengan pengecatan HE. Dengan mikroskop cahaya, jumlah sel-sel hepar yang mengalami  kerusakan  akibat  nekrosis  dari  tiap  100  sel  hepar  di  sekitar  vena  sentralis dihitung. Data dianalisis dengan uji Kruskal Wallis , dilanjutkan uji Mann Whitney. Hasil :  Uji Kruskal  Wallis menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  (p=0,000).  Uji Mann Whitney menunjukkan rerata sel rusak pada kelompok perlakuan dengan isolat biji mahoni (P1,  P2,  P3)  lebih  sedikit  secara  signifikan  dibandingkan  kelompok  DM  tanpa  perlakuan (K(-)).
Kesimpulan :  Isolat  1,4-bis-(3,4,5-trimetoksi-fenil)-tetrahidro-furo(3,4-c)  furan  dari  biji mahoni  ( Swietenia.  macrophylla King)  dapat  memperbaiki  gambaran  histopatologi  hepar tikus model DM tipe 2.
Kata Kunci: Isolat biji mahoni; histopatologi hepar; diabetes melitus

## ABSTRACT
Introduction : The cases of diabetes mellitus (DM) increase continuously, and most of them are  type  2  diabetes.  Uncontrolled  DM  can  cause  various  complications,  including hepatopathy. Complications can be prevented by  controlling blood glucose levels. 1,4-bis- (3,4,5-trimethoxy-phenyl)-tetrahidro-furo  (3,4-c)  furan  isolate  of  mahogany  (Swietenia macrophylla King) seed can reduce blood glucose levels. This study aims to determine the effect  of  the  mahogany  seed  isolate  on  the  histopathological  image  of  the  liver  on  type  2 diabetes rat model.
Methods :  This  study  used  36  rats  divided  randomly  into  6  groups:  KN  (normal  control), K(-)  (DM without treatment), K(+)  (DM+glibenclamide),  P1, P2, and P3 (DM+10 mg/kg BW, 20 mg/kg BW, and 40 mg/kg BW of mahogany seed isolate respectively). Induction of DM  using  streptozotocin  and  nicotinamide.  After  21  days  of  treatment,  the  rats  were sacrificed,  then  the  liver  was  taken  to  make  histopathological  preparations  with  HE staining.  Under  light  microscope,  the  number  of  liver  cells  that  damaged  by  necrosis  of every 100 liver cells around the central vein was counted. The data were analyzed using the Kruskal Wallis test, followed by the Mann Whitney test.
Results :  The  Kruskal  Wallis  test  showed  a  significant  difference  (p  =  0.000).  Mann Whitney test showed that the mean of damaged cells in the mahogany seed isolate treatment group (P1, P2, P3) was significantly less than the DM group without treatment (K (-)). Conclusion :  1,4-bis-(3,4,5-trimethoxy-phenyl)-tetrahidro-furo(3,4-c)  furan  isolate  from mahogany  (Swietenia.  Macrophylla  King)  seeds  can  improve  the  histopathological  image of the liver on type 2 diabetes rat model.
Keywords: Isolate of mahogany seeds; liver histopathology; diabetes mellitus

## PENDAHULUAN
Perkembangan  ilmu  pengetahuan  dan teknologi  yang  pesat  serta  urbanisasi  yang meningkat  dapat  berdampak  pada  perubahan gaya  hidup  berupa sedentary  life dan  pola makan  kebarat-baratan  yang  mengandung banyak  protein,  lemak,  gula,  dan  garam, namun  sedikit  serat.  Perubahan-perubahan tersebut  dapat  berakibat  pada  meningkatnya prevalensi  penyakit  degeneratif  antara  lain diabetes melitus (DM). 1,2
Jumlah  penderita  DM  di  dunia  terus meningkat, termasuk di Indonesia. Di Indonesia  jumlah  penderita  DM  dewasa  (usia 20-79  tahun)  pada  tahun  2015  sebanyak  10,0 juta dan diperkirakan meningkat menjadi 16,2 juta  pada  tahun  2040.  Pada  tahun  2015 Indonesia  menduduki  peringkat  ke-7  dalam kaitannya  dengan  jumlah  penderita  DM,  dan diperkirakan  menduduki  peringkat  ke-6  pada tahun 2040. 3
Diabetes  melitus  adalah  penyakit metabolik  yang  ditandai  oleh  hiperglikemia sebagai  akibat  dari  kelainan  sekresi  insulin, kerja  insulin  atau  kedua-duanya.  Pada  DM tipe  1  terjadi  kelainan  sekresi  insulin  karena kerusakan  sel  β  pankreas  oleh  proses autoimun,  sedangkan  pada  DM  tipe  2  terjadi kombinasi  kelainan  sekresi  insulin  dan resistensi  (kelainan  kerja)  insulin. 4,3 Sebagian
besar kasus DM di dunia merupakan DM tipe 2, demikian pula di Indonesia. 5
Diabetes melitus yang tidak terkontrol dapat menimbulkan komplikasi pada berbagai sistem  organ  dalam  tubuh,  seperti:  nefropati, retinopati, vasculopathy , neuropati dan penyakit  kardiovaskular,  serta  hepatopati. Penelitian  menunjukkan  bahwa  DM  yang tidak terkontrol berhubungan dengan sejumlah kelainan  hepar,  salah  satu  diantaranya  adalah non-alcoholic  steatohepatitis (NASH)  yang ditandai  oleh  adanya  inflamasi  dan  nekrosis pada  jaringan  hepar.  Kondisi  NASH  yang berkepanjangan  akhirnya  dapat  berakibat sebagai  kegagalan  fungsi  hepar  stadium akhir. 6
Mekanisme terjadinya komplikasi pada DM tidak lepas dari peran stres oksidatif dan inflamasi sebagai akibat dari hiperglikemia yang tidak terkendali.
Hiperglikemia  yang  tidak  terkendali  dapat memicu  terjadinya  stres  oksidatif.  Stres oksidatif selanjutnya dapat memicu terjadinya peristiwa  inflamasi.  Stres  oksidatif  bersama- sama  dengan  inflamasi  berperan  dalam menimbulkan berbagai komplikasi pada DM. 7
Untuk mencegah timbulnya komplikasi  diperlukan  pengendalian  kadar glukosa darah seoptimal mungkin di sepanjang waktu seumur hidup. 8 Bila pengendalian  kadar  glukosa  darah  secara  non
medikamentosa  belum  berhasil,  maka  harus ditambah  dengan  terapi  medikamentosa  yaitu terapi dengan obat-obatan. 1,9
Pada  saat  ini  terapi  dengan  obat- obatan  yang  berasal  dari  tanaman,  telah dikembangkan oleh berbagai negara termasuk Indonesia.  Indonesia  mengembangkan  obat- obatan  yang  berasal  dari  tanaman,  karena selain
Indonesia kaya dengan
keanekaragaman hayati, juga semakin banyak masyarakat  yang  memanfaatkan  tanaman sebagai  obat  untuk  mengatasi  berbagai masalah kesehatan. Masyarakat merasa bahwa obat modern/sintetis harganya mahal dan efek sampingnya banyak. 10,11
Salah  satu  tanaman  yang  berpotensi untuk dikembangkan sebagai tanaman obat di
Indonesia adalah mahoni ( Swietenia macrophylla King/ S.  macrophylla King). Mahoni  banyak  ditanam  di  Indonesia  dan pohon  ini  kaya  manfaat. 12 Biji  mahoni diketahui  mengandung  berbagai  senyawa kimia  yang  berkhasiat  menurunkan  kadar glukosa  darah.  Mursiti  (2009)  berhasil mengisolasi  lima  senyawa  dari  biji  mahoni yang  berkhasiat  menurunkan  kadar  glukosa darah,  salah  satu  diantaranya  adalah  1,4-bis- (3,4,5-trimetoksi-fenil)-tetrahidro-furo(3,4-c) furan.  Isolat  tersebut  mempunyai  efek menurunkan  kadar  glukosa  darah  (pada  tikus yang  diberi  pembebanan  glukosa)  paling efektif  dibandingkan  empat  isolat  lainnya. 13 Hal  ini  diperkuat  oleh  penelitian  Nugraha (2012)  yang  berhasil  membuktikan  secara docking  molecular bahwa  isolat  tersebut mempunyai  efek  yang  paling  kuat  dalam menurunkan kadar glukosa darah. 14
Penelitian mengenai isolat biji mahoni 1,4-bis-(3,4,5-trimetoksi-fenil)-tetrahidro- furo(3,4-c)  furan  belum  banyak  dilakukan. Penelitian  yang  mengkaji  pengaruh  isolat tersebut  terhadap  gambaran  histopatologi hepar  pada  tikus  model  DM  tipe  2,  belum pernah dilakukan. Berdasarkan hal-hal tersebut  di  atas,  maka  peneliti  tertarik untuk
meneliti pengaruh isolat 1,4-bis-(3,4,5-
trimetoksi-fenil)-tetrahidro-furo(3,4-c)  furan dari  biji  mahoni  ( S.  macrophylla King) terhadap  gambaran  histopatologi  hepar  tikus model DM tipe 2.

## METODE
Penelitian  eksperimental  laboratorium ini  menggunakan  rancangan post  test  only control  group  design .  Perlakuan  terhadap tikus  putih  dilakukan  di  Laboratorium  Pusat Studi  Pangan  dan  Gizi,  gedung  Pusat  Antar Universitas  (PAU)  Universitas  Gadjah  Mada. Pembuatan  preparat  histopatologi  hepar  dan pembacaan preparat dilakukan di
Laboratorium  Histologi  Fakultas  Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta. Protokol eksperimental telah mendapat persetujuan dari Komisi  Etik  Fakultas  Kedokteran  Universitas Sebelas Maret Surakarta.
Sampel  penelitian  berupa  36  tikus putih diperoleh dari Laboratorium Pengembangan Hewan Coba Fakultas Farmasi
Universitas  Gadjah  Mada.  Sampel  diambil secara purposive  sampling. Kriteria  inklusi meliputi:  Tikus  putih  jantan,  galur  Wistar, umur  8-10  minggu,  berat  badan  200–250  g, tidak cacat fisik, dan aktivitas tampak normal. Kriteria eksklusi berupa tikus putih yang pada 3  hari  pasca  induksi  STZ  dan  NA menunjukkan  kadar  glukosa  darah  puasa (GDP) ≤ 250 mg/dL dan tikus putih yang mati dalam  masa  perlakuan.  Sesudah  dilakukan adaptasi  selama  1  minggu,  tikus  putih  dibagi menjadi  6  kelompok  secara  random,  masing- masing  kelompok  terdiri  dari  6  tikus  putih, yaitu:
KN (Kontrol Normal)  : Tikus putih normal. K(-) (Kontrol Negatif)  :  Tikus  putih  DM tidak diberi perlakuan.
K(+) (Kontrol Positif)  :  Tikus  putih  DM diberi glibenklamid 0,45 mg/kg BB.
P1 (Perlakuan 1) :  Tikus  putih  DM diberi isolat 10 mg/kg BB. P2 (Perlakuan 2) :  Tikus  putih  DM diberi isolat 20 mg/kg BB.
P3 (Perlakuan 3) :  Tikus  putih  DM diberi isolat 40 mg/kg BB. Isolat biji
mahoni maupun glibenklamid dilarutkan dalam Na CMC 0,5% dan diberikan dengan volume 2 ml untuk tiap tikus  putih  secara  peroral  dengan  sonde lambung  selama  21  hari  berturut-turut.  Isolat biji  mahoni  diperoleh  dari  Laboratorium Kimia FMIPA Universitas Negeri Semarang.
Model  DM  pada  tikus  putih  dibuat dengan  cara  menginjeksi  tikus  putih  dengan STZ  dan  NA.  Sebelum  diinjeksi  dengan  STZ dan  NA  tikus  putih  pada  kelompok  K(-), K(+),  P1,  P2,  dan  P3  dipuasakan  selama semalam/ overnight. Injeksi  dengan  NA  110 mg/kg  BB  secara  ip  dilakukan  15  menit sebelum  tikus  putih  diinjeksi  dengan  STZ  45 mg/kg  BB  secara  ip.  Larutan  NA  dibuat dengan  melarutkan  serbuk  NA  dalam normal saline .  Volume  larutan  NA  yang  diinjeksikan adalah  2  ml  untuk  tiap  tikus  putih.  Larutan STZ  dibuat  dengan  melarutkan  serbuk  STZ dalam  0,1  M  buffer  sitrat  pH  4,5.  Volume larutan STZ yang diinjeksikan untuk tiap tikus putih  sebesar  2  ml. Setelah  72  jam  (3  hari) pasca  injeksi,  dilakukan  pengambilan  darah dari  vena  retroorbital  menggunakan  pipa mikrokapiler pada semua tikus putih. Sebelum pengambilan  darah,  tikus  dipuasakan  selama semalam.  Lima  menit  sebelum  tikus  putih diambil  darahnya  dari  vena  retroorbital,  tikus putih dianestesi dengan ketamin 45 mg/kg BB secara  im.  Darah  yang  terambil  kemudian diperiksa kadar glukosanya untuk memastikan bahwa tikus putih yang diinjeksi dengan STZ dan  NA  telah  mengalami  DM.  Tikus dinyatakan mengalami DM jika setelah 3 hari pasca injeksi STZ dan NA, kadar GDP > 250 mg/dL.  Pengukuran  kadar  glukosa  darah dilakukan  dengan  metode  enzimatik Glucose Oxidase-Phenol  Aminoantypiryn (GOD-PAP) test. Pengukuran  kadar  glukosa  darah  puasa (GDP),  selain  dilakukan  pada  saat  3  hari setelah  injeksi  STZ  dan  NA,  juga  dilakukan saat  sebelum  tikus  putih  dibuat  model  DM (sebelum diinjeksi STZ dan NA) dan di akhir
perlakuan  (setelah  21  hari  perlakuan  dengan isolat  biji  mahoni)  sebelum  tikus  putih dikorbankan.
Tikus  putih  yang  telah  diberi  isolat biji  mahoni  maupun  glibenklamid  selama  21 hari berturut-turut dan telah diambil darahnya, dikorbankan  dengan  cara neck  dislocation . Tindakan neck  dislocation ini  dilakukan  pada saat  tikus  masih  dalam  keadaan  teranestesi dengan  ketamin  yang  diinjeksikan  sebelum pengambilan  darah  dari  vena  retroorbital. Tikus  yang  telah  dikorbankan  kemudian diambil organ heparnya. Organ hepar kemudian  dimasukkan  ke  dalam  larutan fiksatif  yaitu  buffer  formalin.  Dari  tiap  organ hepar  dibuat  dua  irisan  untuk  dibuat  preparat histopatologi.  Irisan  tersebut  diambil  pada bagian  tengah  dari  lobus  kanan  hepar.  Tebal tiap  irisan  adalah  4  µm.  Jarak  antara  irisan satu dengan irisan berikutnya adalah 100 µm. Selanjutnya  irisan  tesebut  dibuat  preparat histopatologi dengan pengecatan Haematoxyllin Eosin (HE). Pembacaan preparat histopatologi hepar  dilakukan  menggunakan  mikroskop cahaya  Olympus  CX-21  yang  dihubungkan dengan  kamera  mikroskop  digital  “Optilab” yang  dilengkapi  dengan software  Optilab Viewer .  Pengamatan  preparat  mula-mula dilakukan  dengan  perbesaran  100x  untuk melihat seluruh bagian irisan hepar dalam satu preparat. Selanjutnya dengan perbesaran 400x kita  pilih  secara  acak  satu  area  yang mengelilingi  vena  sentralis,  dan  kemudian dengan  perbesaran  1000x  kita  hitung  jumlah sel  hepar  yang  mengalami  kerusakan  (intinya piknosis, karyoreksis, atau karyolisis) dari tiap 100  sel  di  sekeliling  vena  sentralis.  Untuk mendapatkan jumlah 100 sel, lapang pandang mikroskop  dengan  perbesaran  1000x  digeser mengikuti  arah  jarum  jam  di  sekeliling  vena sentralis.
Data mengenai gambaran histopatologi hepar yang berupa rerata jumlah sel  hepar  yang  mengalami  kerusakan  pada masing-masing  kelompok  diperbandingkan
dengan  uji  statistik,  dengan  taraf  kemaknaan  =0,05.  Analisis  data  dilakukan  dengan program Statistical  Product  and  Service Solutions (SPSS) versi 25.0 for Windows .

## HASIL

## Kadar glukosa darah
Hasil  pengukuran  kadar  glukosa  darah puasa  sebanyak  tiga  kali,  yaitu  sebelum  tikus putih  dibuat  model  DM  (H-),  sesudah  dibuat model DM namun belum diberikan perlakuan (H0),  dan  sesudah  21  hari  perlakuan  (H21) dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Rerata kadar GDP tikus putih saat H-, H0,
dan H21 pada masing-masing kelompok Kelompok Kadar GDP (mg/dL) Mean ± SD H- H0 H21 KN 62,05 ± 2,25 62,81 ± 2,09 64,75 ± 1,72 K(-) 60,99 ± 1,17 255,70 ± 1,37 256,88 ± 1,63 K(+) 63,87 ± 3,22 256,80 ± 2,74 98,39 ± 2,42 P1 63,31 ± 1,21 258,09 ± 2,19 151,98 ± 1,75 P2 65,13 ± 0,96 257,72 ± 3,47 130,11 ± 2,04 P3 65,55 ± 2,96 258,83 ± 4,63 101,55 ± 3,47
Keterangan:  H-:  saat  tikus  putih  belum  dibuat model  DM;  H0:  saat  tikus  putih  sudah  dibuat model  DM  namun  belum  diberi  perlakuan;  H21: setelah  21  hari  perlakuan  dengan  isolat  biji mahoni.
Dari  tabel  1  terlihat  bahwa  saat  tikus putih  belum  diinduksi  dengan  STZ  dan  NA atau belum dibuat model DM (saat H-), rerata kadar GDP tikus putih pada  semua kelompok masih  dalam  batas  normal.  Kadar  GDP  tikus putih  dalam  keadaan  normal  berkisar  antara 47,52 - 94,68 mg/dL. 15
Pada  saat  3  hari  setelah  tikus  putih diinduksi  dengan  STZ  dan  NA  (sudah  dibuat model  DM),  namun  belum  diberi  perlakuan dengan  isolat  biji  mahoni  (saat  H0),  kadar GDP tikus putih kelompok yang dibuat model DM,  yaitu:  K(-),  K(+),  P1,  P2,  dan  P3
menunjukkan  kadar  GDP  yang  tinggi  (>  250 mg/dL). Hal ini menunjukkan bahwa pembuatan  model  DM  telah  berhasil.  Tikus dinyatakan mengalami DM jika setelah 3 hari pasca injeksi STZ dan NA, kadar GDP > 250 mg/dL. 16,17,18
Setelah  21  hari  perlakuan  (saat  H21), kadar GDP tikus putih kelompok yang dibuat model  DM  dan  tidak  mendapat  perlakuan, yaitu  kelompok  K(-),  kadar  GDP  tetap  tinggi (>250  mg/dL).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa pembuatan  model  DM  dapat  dipertahankan sampai di akhir penelitian (perlakuan).

## Gambaran histopatologi hepar
Hasil pengamatan gambaran histopatologi  hepar  yang  berupa  jumlah  sel hepar  yang  mengalami  kerusakan  (ditandai oleh inti sel yang piknosis, karyoreksis, dan karyolisis) pada masing-masing
kelompok, dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel  2.  Rerata  jumlah  sel  hepar  yang  rusak  dari
tiap 100 sel di sekitar vena sentralis. Kelompok Tikus Putih Rerata Jumlah Sel Rusak Mean ± SD KN (Kontrol Normal) K(-) (Kontrol Negatif) K(+) (Kontrol Positif) P1 (Kelompok Perlakuan 1) P2 (Kelompok Perlakuan 2) P3 (Kelompok Perlakuan 3) 9,08 ± 1,83 73,67 ± 6,92 34,83 ± 5,10 59,58 ± 3,29
47,00 ± 2,76 36,92 ± 2,27 0 10 20 30 40 50 60 70 80 KN K(-) K(+) P1 P2 P3 Rer a ta J u ml a h S el Ru sa k

## Kelompok Tikus Putih
Gambar 1. Diagram rerata jumlah sel hepar yang rusak pada masing-masing kelompok.
Dari  tabel  2  dan  gambar  1,  terlihat  bahwa jumlah  sel  yang  rusak  pada  kelompok  model DM yang mendapat perlakuan dengan isolat
biji  mahoni  (P1,  P2,  P3)  menunjukkan  rerata yang  lebih  rendah  daripada  kelompok  DM tanpa perlakuan (K(-)).
Gambar  2.  Gambaran  Mikroskopis  Hepar  (Pengecatan  HE,  perbesaran  1000x).  KN:  Kelompok kontrol  normal;  K(-):  Kelompok  kontrol  negatif;  K(+):  Kelompok  kontrol  positif;  P1:  Kelompok perlakuan  1;  P2:  Kelompok  perlakuan  2;  P3:  Kelompok  perlakuan  3.  Pada  gambar  terlihat  bahwa pada KN gambaran mikroskopis hepar tampak normal dengan inti sel yang normal, sebaliknya pada kelompok  kontrol  negatif  (tikus  DM  tanpa  perlakuan)  tampak  sebagian  besar  selnya  mengalami kerusakan  dengan  inti  sel  karyoreksis  dan  karyolisis.  Adapun  pada  kelompok  perlakuan  dengan isolat biji mahoni (P1, P2, P3) dan glibenklamid (K(+)) memperlihatkan gambaran jumlah sel yang rusak lebih sedikit daripada kelompok K(-), namun masih lebih banyak daripada kelompok KN. N: inti sel normal, P: inti sel piknosis, R: inti sel karyoreksis, L: inti sel karyolisis.
KN K(- ) P2 P1 P3 K(+) N R L R L P P L R P L P L
Data  rerata  jumlah  sel  yang  rusak selanjutnya  diperbandingkan  secara  statistik dengan  uji  non  parametrik Kruskal  Wallis , karena syarat untuk menggunakan uji parametrik One  Way  Anova tidak  terpenuhi (varians data tidak homogen, meskipun sudah dilakukan  transformasi  data).  Hasil  uji
Kruskal Wallis menunjukkan adanya perbedaan  yang  bermakna  diantara  semua kelompok  tikus  putih  (p=0,000). Data selanjutnya  dianalisis  dengan  uji Mann Whitney untuk mengetahui letak perbedaan  terdapat  pada  perbandingan diantara kelompok mana.
Tabel 3. Ringkasan Hasil Uji Mann Whitney
Hasil  uji Mann Whitney menunjukkan perbedaan  yang  signifikan  pada  semua perbandingan  diantara  dua  kelompok,  kecuali antara  kelompok  P3  dan  K(+)    dengan  nilai p=0,451(p>0,05).

## PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini  model  DM  tipe  2 pada  tikus  putih  berhasil  dibuat  dengan  cara menginduksi tikus putih dengan STZ dan NA. Streptozotosin (STZ) pada penelitian ini dapat menginduksi  terjadinya  hiperglikemia,  karena STZ  dapat  menyebabkan  metilasi  DNA  sel  β pankreas sehingga DNA mengalami fragmentasi,  yang  selanjutnya  dapat  memicu
terjadinya  overstimulasi  enzim  poly(ADP- ribose)  polymerase  (PARP),  yaitu  enzim untuk repair DNA.  Overstimulasi  PARP dapat  menyebabkan  deplesi  NAD+  yang diikuti  dengan  terjadinya  deplesi  ATP. 19,20 Deplesi  ATP  dapat  memicu  terjadinya serangkaian  peristiwa  yang  berakibat  pada kematian sel karena pecahnya sel. Mula-mula deplesi  ATP  akan  mengakibatkan  penurunan aktivitas pompa natrium ( Na + pump ) sehingga natrium terakumulasi di dalam sel. Selanjutnya  natrium  akan  menarik  air  (H2O) ke  dalam  sel  sehingga  sel  menjadi  bengkak ( swelling ),  dan  lebih  lanjut  sel  pecah  dan akhirnya  sel  mati. 21,22 Adapun  pemberian nikotinamid  (NA)  pada  tikus  putih  15  menit sebelum  pemberian  STZ  bertujuan  agar  sel  β pankreas tidak semuanya mengalami kematian  akibat  pengaruh  STZ.  Nikotinamid berfungsi  untuk  menghambat  aktivitas  enzim PARP sehingga deplesi NAD+ dapat dikurangi,  dan  lebih  lanjut  deplesi  ATP  juga dapat dikurangi. Dengan demikian jumlah sel β  pankreas  yang  mengalami  kematian  juga dapat  dibatasi. 23,24 Kombinasi  STZ  dan  NA telah  banyak  digunakan  sebagai  penginduksi untuk membuat model DM tipe 2 pada hewan coba. 24
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa rerata jumlah  sel  hepar  yang  rusak  pada K(-) lebih banyak daripada KN, dan secara statistik menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan.  Hal ini  berarti  bahwa  DM  yang  terjadi  pada  tikus putih  dapat  menimbulkan  kerusakan  pada hepar yang ditandai oleh adanya inti sel hepar yang  piknosis,  karyoreksis,  dan  karyolisis. Tikus  putih  yang  dibuat  model  DM  akan mengalami  hiperglikemia,  yang  selanjutnya dapat  memicu  terjadinya  stres  oksidatif  dan lebih  lanjut  dapat  menyebabkan  kerusakan pada  berbagai  organ. 21 Hiperglikemia  melalui berbagai  mekanisme,  yaitu:  Aktivasi  jalur poliol, jalur protein kinase-C (PKC), dan jalur heksosamin,  serta  peningkatan  produksi advanced  glycated  end  products (AGEs)  dan ekspresi reseptor AGEs (RAGE) dan Perbandingan antar kelompok Nilai p KN - K(-) KN - K(+) KN - P1 KN - P2 KN - P3 K(-) - K(+) K(-) - P1 K(-) - P2 K(-) - P3 K(+) - P1 K(+) - P2 K(+) - P3 P1 - P2 P1 - P3 P2 - P3 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,451 0,000 0,000 0,000
ligannya,  dapat  menyebabkan  terbentuknya
Reactive Oxygen Species (ROS) yang berlebihan atau menimbulkan stres oksidatif. 25
Stres  oksidatif  atau  ROS  yang  berlebihan dapat  menyebabkan  kerusakan  pada  berbagai organ, salah  satu  diantaranya  adalah  hepar. Reactive  Oxygen  Species mula-mula  akan menyebabkan  peroksidasi  lipid  sehingga menyebabkan  terjadinya  kerusakan  membran sel,  yang  pada  tahap  lebih  lanjut  dapat menyebabkan  terjadinya  nekrosis.  Sel  yang mengalami  nekrosis  antara  lain  ditandai  oleh perubahan  pada  inti  sel  berupa  piknosis, karyoreksis, dan karyolisis. 21
Rerata  sel  hepar  yang  rusak  pada kelompok  perlakuan biji  mahoni  (P1,  P2,  P3) lebih  sedikit  dibandingkan  pada  kelompok DM  yang  tidak  diberi  perlakuan  (K(-)),  dan secara  statistik  menunjukkan  perbedaan  yang signifikan.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa pemberian isolat biji mahoni mampu mengurangi  terjadinya  kerusakan  sel  hepar pada  tikus  putih  model  DM.  Berkurangnya kerusakan  ini  dapat  terjadi  karena  isolat  biji mahoni  memiliki  efek  menurunkan  kadar glukosa  darah  dan  stres  oksidatif.  Beberapa penelitian  menunjukkan  bahwa  isolat  biji mahoni  dapat  menurunkan  kadar  glukosa darah  pada  tikus  putih  hiperglikemia. 13,14,26
Selain  itu,  isolat  biji  mahoni  juga  telah terbukti  dapat  menurunkan  stres  oksidatif pada  tikus  putih  model  DM. 26 Adanya kemampuan isolat biji mahoni dalam menurunkan  kadar  glukosa  darah  dan  stres oksidatif, selanjutnya akan mengurangi terjadinya kerusakan pada sel. Penurunan stres oksidatif dapat mengurangi kejadian peroksidasi  lipid,  sehingga  dapat  mengurangi jumlah sel yang rusak. 21
Perbandingan  diantara  tiga  kelompok perlakuan  yang  diberi  isolat  biji  mahoni menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan.  Antara  P1  dan  P2,  antara  P1  dan P3, antara P2 dan P3 terdapat perbedaan yang signifikan.  Semakin  tinggi  dosis  isolat  biji mahoni yang diberikan maka jumlah sel yang
rusak  semakin  sedikit.  Jumlah  sel  yang  rusak pada  kelompok  P3  paling  sedikit.  Apabila kelompok P3 dibandingkan dengan kelompok K(+)  yang  diberi  glibenklamid  terdapat perbedaan  yang  tidak  signifikan.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  pemberian  isolat  biji mahoni  dosis  40  mg/kg  BB  mempunyai  efek yang sebanding dengan pemberian glibenklamid  0,45  mg/kg  BB  selama  21  hari berturut-turut.  Hasil  ini  memberikan  harapan bahwa  isolat  biji  mahoni  nantinya  dapat dikembangkan  sebagai  obat  untuk  mencegah kerusakan  hepar  pada  penderita  DM.  Namun tentunya  masih  memerlukan  tahap-tahap penelitian lanjutan yang panjang.
Apabila  kelompok  P3  dibandingkan dengan kelompok KN (kontrol normal), maka jumlah  sel  yang  rusak  pada  kelompok  P3 masih lebih banyak secara signifikan dibandingkan kelompok KN. Dengan demikian  pemberian  dosis  isolat  yang  paling tinggi  pada  penelitian  ini  (40  mg/kg  BB) selama  21  hari  berturut-turut  belum  dapat memberikan hasil yang sama seperti kelompok  kontrol  normal.  Hal  ini  mungkin dapat disebabkan oleh masih kurang tingginya dosis  yang  diberikan,  atau  mungkin  juga karena masih kurang lamanya waktu perlakuan. Penelitian sebelumnya mengenai pengaruh isolat biji mahoni terhadap gambaran  histopatologi  hepar  belum  pernah dilakukan. Penelitian sebelumnya yang pernah dilakukan antara lain penelitian yang mengkaji pengaruh isolat biji mahoni terhadap kadar  glukosa  darah  tikus  putih  yang  diberi pembebanan  glukosa  secara  per  oral.  Isolat biji mahoni tersebut ternyata secara signifikan mampu  menurunkan  kadar  glukosa  darah tikus  putih  hiperglikemia  yang  diberi  larutan glukosa  per  oral  1,75  g/kg  BB. 13 Penelitian lainnya  menunjukkan  bahwa  isolat  biji mahoni  secara  signifikan  dapat  menurunkan kadar  glukosa  darah  dan  meningkatkan ekspresi  insulin  pada  pankreas  tikus  putih model diabetik yang diinduksi STZ. 14
Penelitian  yang  mengkaji  efek  isolat  biji mahoni  dalam  menurunkan  tingkat  stres oksidatif  pada  tikus  putih  model  DM  juga pernah  dilakukan.  Isolat  biji  mahoni  tersebut mampu  menurunkan  kadar  malondialdehid (MDA) darah tikus putih yang diinduksi STZ- NA secara signifikan. 26 Malondialdehid merupakan  salah  satu  bentuk  produk  akhir dari  peroksidasi  lipid  yang  sering  digunakan sebagai marker untuk mengetahui tingkat stres oksidatif. 27,28 Isolat  biji  mahoni  juga  telah terbukti  dapat  menurunkan  resistensi  insulin pada  tikus  model  DM  tipe  2  melalui pengurangan  nilai  indeks Homeostasis  Model Assesment of Insulin  Resistance (HOMA-IR). Indeks  HOMA-IR  pada  tikus  yang  mendapat perlakuan dengan isolat biji mahoni menunjukkan  nilai  yang  lebih  rendah  secara signifikan  dibandingkan  tikus  DM  yang  tidak mendapat perlakuan. 29
Penulis  menyadari  terdapat  beberapa keterbatasan  pada  penelitian  ini,  yaitu:  Dosis dan  lama  waktu  perlakuan  dengan  isolat  biji mahoni  yang  masih  terbatas  variasinya, sehingga hasil yang dicapai pada penelitian ini belum optimal seperti pada kelompok kontrol normal.  Selain  itu  parameter  yang  digunakan untuk  menilai  gambaran  histopatologi  hepar pada  penelitian  ini  masih  terbatas  pada gambaran  nekrosis  sel  yang  dilihat  pada preparat  pengecatan  HE.  Parameter  untuk melihat gambaran histopatologi hepar lainnya seperti gambaran apoptosis tidak dilakukan.

## KESIMPULAN
Isolat  1,4-bis-(3,4,5-trimetoksi-fenil)- tetrahidro-furo(3,4-c)  furan  dari  biji  mahoni ( S.  macrophylla King)  dapat  memperbaiki gambaran  histopatologi  hepar  tikus  model DM  tipe  2,  dengan  mengurangi  jumlah  sel hepar yang mengalami nekrosis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  banyak  terima kasih  kepada  berbagai  pihak,  yaitu:  Dr. Mursiti,  M.Kes,  Apt.  dari Laboratorium Kimia  FMIPA  Universitas  Negeri  Semarang yang  telah  membantu  pengadaan  isolat  biji mahoni, Laboratorium Pusat Studi Pangan dan Gizi,  gedung  Pusat  Antar  Universitas  (PAU) Universitas  Gadjah  Mada  yang  telah  banyak membantu  jalannya  penelitian,  Laboratorium Pengembangan Hewan Coba Fakultas Farmasi
Universitas Gadjah Mada yang telah menyediakan  hewan  coba  untuk  penelitian, dan Laboratorium Histologi
Fakultas
Kedokteran  Universitas  Sebelas  Maret  yang telah  banyak  membantu  pada  pembuatan preparat histopatologi.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Soelistijo  SA,  Novida  H,  Rudijanto  A, Soewondo  P,  Suastika  K,  Manaf  A, et  al. Konsensus  Pengelolaan  dan  Pencegahan Diabetes  Mellitus  Tipe2  di  Indonesia  2015. Pengurus  Besar  Perkumpulan  Endokrinologi Indonesia  (PB  Perkeni),  2015:  vi,  10-11,  16- 17.
2. Suyono  S.  Diabetes  melitus  di  Indonesia. Dalam:  Setiati  S,  Alwi  I,  Sudoyo  AW, Simadibrata  M,  Setiyohadi  B,  Syam  AF (eds). Buku  Ajar  Ilmu  Penyakit  Dalam .  Jilid II,  edisi  ke-6.  Jakarta:  Interna  Publishing Pusat Penerbitan Ilmu Penyakit Dalam; 2014: 2315-2316.
3. International Diabetes Federation. IDF
Diabetes Atlas. 7th ed. IDF, 2015: 22, 28-29,
51-52.
4. American  Diabetes  Association.  Diagnosis and  classification  of  diabetes  Mellitus. Diabetes Care 2010; 33(1): 562-569.
5. Fatimah  RN.  Review:  Diabetes  Melitus  Tipe 2. J. Majority , 2015; 4(5): 93-101.
6. Mohamed  J,  Nazratun  NAH.,  Zariyantey AH.,  Budin  SB.  Review:  Mechanisms  of Diabetes-Induced Liver Damage; The role of oxidative  stress  and  inflammation. Sultan Qaboos  University  Med  J 2016;  16(2):  132–
141.
7. Wright  E,  Bacon  JLS,  Glass  LC.  Oxidative stress  in  type  2  diabetes:  The  role  of  fasting and  postprandial  glycaemia. Int  J  Clin  Prac
2006; 60(3): 308–314.
8. Manaf A. Genetical  abnormality  and glucotoxicity  in  diabetes  mellitus:  The background  of  tissue  damage  and  infection. Pekanbaru: PDPI; 2008. 9. Soegondo S. Farmakoterapi pada pengendalian  glikemia  diabetes  melitus  tipe
2.  Dalam:  Setiati  S,  Alwi  I,  Sudoyo  AW, Simadibrata  M,  Setiyohadi  B,  Syam  AF (eds). Buku  Ajar  Ilmu  Penyakit  Dalam .  Jilid II,  edisi  ke-6.  Jakarta:  Interna  Publishing
Pusat Penerbitan Ilmu Penyakit Dalam; 2014: 2328-2333.
10. Dewoto.  Pengembangan  obat  tradisional Indonesia  menjadi  fitofarmaka. Maj  Kedokt Indon 2007; 57(7): 205-211.
11. Febrianty  PP. Ketergantungan  Bahan  Baku
Obat  Impor .  Bagian  Farmasi  Unhas,  2015. Diunggah dari URL: http://www.kompasiana.com 12. Krisnawati  H,  Kallio  M,  Kanninen  M. Swietenia macrophylla King: Ecology, Silviculture and Productivity . Bogor: CIFOR; 2011: 1-5.
13. Mursiti  S.  Isolasi,  karakterisasi,  dan  uji aktivitas  hipoglikemik  senyawa  dalam  biji mahoni  bebas  minyak  dan  minyak  biji mahoni ( Swietenia macrophylla King). Laporan  Penelitian .  Semarang:  UNNES; 2009.
14. Nugraha  A. Docking molekuler  dan  aktivitas antihiperglikemik  senyawa  aktif  hasil  isolasi dari  ekstrak  metanol  biji  mahoni  ( Swietenia macrophylla King)  pada  tikus  diabetes setelah induksi streptozotocin [Tesis]. Yogyakarta: Program Studi S2 Ilmu
Kedokteran  Dasar  dan  Biomedis  Universitas Gadjah Mada; 2012.
15. Wang  Z, Yang  Y, Xiang  X, Zhu  Y, Men J, He  M. Estimation  of  the  normal  range  of blood  glucose  in  rats. Wei  Sheng  Yan  Jiu 2010; 39(2):133-7, 142.
16. El-Gohary  A  and  Said  MA.  Protective  effect of exenatide (glucagon-like peptide-1
receptor agonist) on renal ischemia- reperfusion injury in diabetic rats. Benha Med J 2016; 33: 24-30.
17. Sankaranarayanan C and Pari L. Influence of thymoquinone  on  glycoprotein  changes  in experimental  hyperglycemic  rats. Int  J  Nutr Pharmacol Neurol Dis 2011; 1: 51-55.
18. Rajarajeswari N and Pari L. Antioxidant role of  coumarin  on  streptozotocin-nicotinamide- induced  type  2  diabetes  rats. IJPSR 2011; 2(4): 968-978.
19. Lenzen  S.  The  mechanisms  of  alloxan  and streptozotocin - induced diabetes.
Diabetologia 2008; 51: 216–226.
20. Eleazu  CO,  Elazu  KC,  Chukwuma  S,  Essien UN.  Review  of  the  mechanism  of  cell  death resulting  from  streptozotocin  challenge  in experimental  animals,  its  practical  use  and potential  risk  to  humans. J  Diabetes  Metab Disord 2013; 12(60): 1-7.
21. Kumar  V,  Abbas  AK,  Aster  JC. Robbins Basic  Pathology .  Ninth  edition.  Canada: Elsevier  Saunders;  2013:  13-16,  19,  29-49,
58, 68-69.
22. Weerasinghe  P  and  Buja  LM.  Review: Oncosis: An important non apoptotic mode of cell  death .  Exp  Mol  Pathol 2012;  93:  302–
308.
23. Szkudelski  T.  Minireview:  Streptozotocin- nicotinamide-induced  diabetes  in  the  rat. Caracteristics of the experimental model. Exp Biol Med , 2012; 237: 481-490.
24. Ghasemi  A,  Khalifi  S,  Jedi  S.  Review: Streptozotocin-nicotinamide-induced
rat model of type 2 diabetes. Acta Physiol Hung
2014; 101(4):408-420.
25. Giacco  F  and  Brownlee  M.  Oxidative  stress and  diabetic  complications. Circ  Res 2010; 107: 1058-1070.
26. Muthmainah,  Kristanto  YY,  Bambang  P, Ambar M, Mustofa. 1,4-bis-3,4,5-trimethoxy-
phenyl-tetrahydro-furo(3,4-c) furan from
mahogany  ( Swietenia  macrophylla King) seed  significantly  reduces  glucose  and malondialdehyde  levels  in  diabetic  Wistar rats. Bali Med J 2019; 8 (2): 570-575.
27. Ho  E,  Galougahi  KK,  Liu  CC,  Bhindi  R, Figtree  GA.  Biological  markers  of  oxidative stress:  Aplications  to  cardiovascular  research and  practice. Redox  Biology 2013;  1:  483–
491.
28. Ayala  A,  Munoz  MF,  Arguelles  S.  Lipid peroxidation:  Production,  metabolism,  and signaling  mechanisms  of  malondialdehyde and  4-hydroxy-2-nonenal. Oxid  Med  Cell Longev 2014; 2014: 1-31 29. Yusuf  M.  Pengaruh  isolat  1,4-bis-(3,4,5- trimetoksi-fenil)-tetrahidrofuro  (3,4-c)  furan terhadap  resistensi  insulin  dan  ekspresi protein serin 307 IRS-1 di jaringan otot skelet pada  tikus  DM  tipe  2  [Tesis].  Yogyakarta: Program  Studi  S2  Ilmu  Kedokteran  Dasar dan  Biomedis  Universitas  Gadjah  Mada; 2016 .