Online: https://jurnal.fk.uisu.ac.id/index.php/ibnunafis
Jurnal Kedokteran Ibnu Nafis
ISSN 2252-6870 (Print) | ISSN 2613-9359 (Online)

## Artikel Penelitian
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI HASIL FRAKSINASI  DAUN NYAMPLUNG (CALOPHYLLUM INOPHYLLUM) DENGAN METODE DPPH (1,1-DIFENIL-2- PIKRILHIDRAZIL)
ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST FROM THE RESULTS OF NYAMPLUNG LEAF (CALOPHYLLUM INOPHYLLUM) FRACTIONATION WITH DPPH METHOD (1,1-DIPHENYL-2-PICRYLHYDRAZIL)
Andika Indra Purwantoro a , Afghani Jayuska b , In’am Ilmiawan b a Mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sumatera Utara, Jl. STM No. 77,Medan, Indonesia
b Dosen FK Universitas Tanjungpura, Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak, Indonesia
HistoriArtikel ABSTRAK Diterima: 11 Mei 2021 Revisi: 27 Mei 2021 Terbit: 1 Desember 2021 Radikal bebas adalah senyawa yang memiliki elektron tidak berpasangan. Radikal bebas yang tinggi dapat  mengakibatkan  stress  oksidatif yang  akan  memicu  munculnya berbagai  penyakit. Tubuh  membutuhkan  antioksidan  yang  dapat  memproteksi  tubuh  dari  radikal  bebas.  Studi literatur  menunjukkan  bahwa  daun  nyamplung  ( Calophyllum  inophyllum )  mengandung senyawa  metabolit  yang  memiliki  efek  antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  menguji  aktivitas antioksidan  dari  hasil  fraksinasi  daun  nyamplung.  Simplisia  daun  nyamplung  dipartisi  secara sokletasi  bertingkat  menggunakan  pelarut  metanol,  n-heksan  dan  etil  asetat  menghasilkan ekstrak total, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol. Kemudian diuji antioksidan secara kualitatif maupun kuantitatif. Dari hasil uji kualitatif ditemukan hasil bahwa larutan uji dapat meredam radikal bebas DPPH ditandai dengan perubahan warnalarutan DPPH dari ungu menjadi kekuningan. Hasil uji secara kuantitatif didapatkan bahwa nilai IC 50 dari ekstrak total 12.65  ppm,  fraksi  n-heksan  46.44  ppm,  fraksi  etil  asetat  4.62  ppm  dan  fraksi  metanol  53.19 ppm.  Daun  nyamplung (Calophylum  inophyllum) memiliki  aktivitas  antioksidan  sangat  kuat dan kuat yaitu ekstrak total dan fraksi etil asetat dengan aktivitas antioksidan sangat kuat, serta fraksi n-heksan dan fraksi metanol dengan aktivitas antioksidan kuat.
Kata Kunci ABSTRACT Antioksidan, Fraksinasi, Daun Nyamplung, DPPH A free radical is an atom that has an unpaired electron. The free radicals can trigger the  various  diseases  caused  by  oxidative  stress.  The  body  needs  antioxidant  which can protect  the  body  from  the  free  radicals.  Literature  studies  explained  nyamplung leaves  (Calophyllum  inophyllum)  contain  chemical  compounds  which  have  an antioxidant effect. Objectives:  The aim of research was to test the antioxidant activity from  nyamplung  leaves  fractionation  Results.  Methods:  Nyamplung  leaves  simplicia partitied with leveled soxhletation with methanol, n-hexane, and ethyl-acetate which outcomes were the total extract, methanol, n-hexane and ethyl-acetate fraction. They were  tested  with  quantitative  and  qualitative  test.  Results  :  the  test  solvents  can inhibit  the  DPPH’s  free  radicals  which  was  marked  by  the  degradation  of  DPPH solvent  from  purple  to  yellow.  In  the  quantitative  test,  the  result  indicates  that  IC 50 value from total extract was 12.65 ppm, n-hexane fraction was 46.44 ppm and ethyl- acetate  was  4.62  ppm  was  a  fraction,  and  methanol  fraction  was  53.19  ppm.  The research  outcomes  :  the  fractionation  of  Calophylum  inophyllum  L.  Leaves  have strong  to  very  strong  antioxidant  activity:  Total  extract  and  ethyl-acetate  fraction with  very  strong  activity,  n-hexane  fraction  and  methanol  fraction  with  strong activity.

## Korespondensi
Telp.082252317499 Email: andikaip@gmail.com

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  adalah  atom  atau kelompok  atom  yang  memiliki  elektron tidak  berpasangan.  Keberadaan  elektron tidak  berpasangan  dalam  suatu  senyawa mengakibatkan  senyawa  tersebut  bersifat sangat  reaktif  untuk  mengikat  elektron  lain di  sekelilingnya. 1 Peningkatan  elektron tidak  berpasangan  yang  tinggi  memiliki dampak negatif pada tubuh dengan menyebabkan  stress  oksidatif  yang  dapat memicu berbagai penyakit. 2
Oxidative  Stress (Stress  Oksidatif) ialah  kondisi  ketika  kadar  radikal  bebas melampaui kemampuan tubuh untuk menyeimbangkannya. Stress oksidatif mengakibatkan intensitas proses oksidasi sel  -  sel  tubuh  normal menjadi  semakin  tinggi  dan  menimbulkan kerusakan  yang  lebih  banyak. 1 Stress oksidatif  mempunyai  peran  besar  dalam perkembangan  penyakit  degeneratif  dan kronik    seperti  kanker,  kelainan  autoimun, penuaan, katarak, rematoid arthritis, penyakit  kardiovaskular  dan  penyakit neurodegeneratif. 2 Saat ini penyakit degeneratif telah menjadi penyebab kematian  tertinggi  di  dunia.  Tahun  2016 kasus  kematian  akibat  penyakit  degeneratif di  dunia  sejumlah  987.122.278  jiwa.  Oleh karena itu, tubuh membutuhkan antioksidan untuk  memproteksi  tubuh  dari  serangan radikal bebas.
Antioksidan merupakan molekul yang dapat meredam reaksi oksidasi dengan cara mengikat  molekul  yang  sangat  reaktif dengan radikal bebas. 3 Antioksidan berdasarkan  sumbernya    dapat    dibedakan menjadi    antioksidan    sintetik    dan    alami. Antioksidan  alami  digolongkan  menjadi enzim  dan  vitamin.  Antioksidan  berupa enzim  yang  dihasilkan  oleh  tubuh  berupa superoxide  dismutase (SOD), glutation peroxidase , dan katalase . Sedangkan antioksidan alami seperti vitamin dihasilkan dari bahan alam bisa didapat dari buah dan sayur,  misalnya  vitamin  A,  C,  dan  E. Antioksidan  alami  yang  berasal  dari tumbuhan  pada  umumnya  adalah  senyawa fenol. 3 Antioksidan sintetik banyak digunakan dalam campuran produk makanan.  Senyawa  ini  dapat  berasal  dari derivat  antioksidan  alami  (misalnya analog alfatokoferol ),  antioksidan  golongan fenol (misalnya butylated  hydroxytoluen dan butylated  hydroxyanisole ),  dan  senyawa yang mengandung gugus sulfhidril (misalnya thiazolidin, ebselen, dan dithiolethion ). 4
Produksi  antioksidan  yang  terjadi secara alami didalam tubuh untuk mengkondisikan  kadar  radikal  bebas  dalam keadaan seimbang didalam tubuh. Antioksidan berfungsi sebagai sistem proteksi terhadap tingginya senyawa radikal dengan elektron tidak berpasangan didalam tubuh.  Akan  tetapi  senyawa  radikal  dapat
mengalami  peningkatan  karena  faktor- faktor  tertentu,  seperti  radiasi  sinar  UV, faktor  stress,  polusi,  menurunnya  sistem imun. Oleh karena itu diperlukan tambahan antioksidan  dari  luar  tubuh  (antioksidan eksogen). Antioksidan eksogen dapat ditemukan  dengan  wujud  alami  dan sintesis. Antioksidan sintetis seperti buthylated hidroksianisol (BHA), buthylatedhydroxytoluene  (BHT), dan ters- butylhydroquinone (TBHQ) dapat menghambat oksidasi secara efektif. 4
Penggunaan  antioksidan  dari  bahan alam  menjadi  motivasi  dilaksanakannya penelitian  lebih  lanjut,  setelah  senyawa- senyawa  sintetis  yang  digunakan  sebagai antioksidan
seperti buthylated
hidroksianisol
(BHA), buthylated
hydroxytoluene (BHT), dan ters- butylhydroquinone  (TBHQ) dibatasi  karena bersifat  karsinogenik  bila  digunakan  dalam jangka panjang. 4 Berbagai penelitian mengenai  berbagai  antioksidan  sintetik sebagai  contohnya  ialah  BHT  dan  BHA membuktikan  bahwa  pada  hewan  coba, molekul  ini  dapat  memicu  tumbuhnya massa  berupa  tumor  dan  kanker  dalam penggunaan  jangka  panjang.  Dampak penggunaan jangka panjang dari antioksidan  sintetik  yaitu hepatomegali , dengan  mempengaruhi  aktivitas  enzim  di hati  serta  sifatnya  yang karsinogenik, menimbulkan  motivasi  penelitian  untuk
menjadikan  antioksidan  alami  sebagai alternatif antioksidan tersebut. 4
Tumbuhan  nyamplung  ( Calophyllum inophyllum ) adalah salah satu dari tumbuhan tropis dengan kandungan antioksidan polifenol yang tinggi. Penggunaan  nyamplung  secara  tradisional diantaranya  adalah  penggunaan  daunnya sebagai obat berbagai kelainan kulit, seperti erupsi,  ulkus dan  luka.  Selain  itu,  daun keringnya  digunakan  untuk  reumatik  dan infus daunnya digunakan untuk disentri dan sakit mata. Penggunaan medis Calophyllum inophyllum sebagai antimikroba, antioksidan, anti  dislipidemia,  analgesik, larvisida, HIV 1 -integrase , dan enzim reverse-transcriptase inhibitor dan protease . 5
Pada  penelitian  sebelumnya,  aktivitas antioksidan  daun Calophyllum  inophyllum diketahui  masih  terbatas  pada  pengujian tingkat  ekstrak  total  metanol.    Diketahui bahwa jumlah kandungan fenol dari ekstrak total  metanol  dari Calophyllum  inophyllum berturut-turut sebesar 97 ± 9,2 dan 140,28 ± 17,1  mg/g.  Diketahui  bahwa  jumlah kandungan  flavonoid  dari  larutan  dan ekstrak metanol dari Calophyllum inophyllum berturut-turut  sebesar  88,94  ± 2.94 dan 177,06 ± 5.29 mg/g. 5 Berdasarkan hal  tersebut  diketahui  bahwa  nilai  reaksi antioksidan  daun  nyamplung  ( Calophyllum inophyllum) masih  terbatas  pada  uji terhadap  ekstrak  total  metanol  saja.
Pengkajian yang lebih mendalam mengenai penilaian  uji  reaksi  antioksidan  dari  hasil fraksinasi  belum  dilakukan.  Maka  dari  itu perlu  adanya  pengkajian  lebih  mendalam mengenai  uji  reaksi  antioksidan  dari  hasil fraksinasi  daun  nyamplung  dalam  berbagai tingkat kepolaran larutan.

## METODE

## Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Daun nyamplung (Calophyllum inophyllum) yang digunakan sebagai sampel  diperoleh  dari  daerah  pesisir  pantai di daerah Kota Singkawang.

## Pembuatan Fraksinasi
Metode pembuatan fraksinasi dilakukan dengan metode sokletasi bertingkat.  Simplisia  sebanyak  40  gram dibungkus  kertas  saring,  ikat  dengan benang,  kemudian  diletakkan  kedalam  alat soklet,  dan  tambahkan  pelarut  metanol sebanyak  400  mL  dan  dilakukan  sokletasi dengan suhu 70 o C sampai larutan mendekati  tidak  berwarna  (tersari  semua). Hasil  ekstraksi  pertama  ini  disebut  ekstrak total,  kemudian  simpan.  Simplisia  yang tersisa  (fraksi  residu)  hasil  proses  sokletasi pertama kemudian ditambahkan ke peralatan  sokletasi,  kemudian  diulang proses  sokletasi  dengan  larutan  n-heksan sebanyak  400  mL  pada  suhu  suhu  70 o C.
Hasil  ekstraksi  kedua  ini  disebut  fraksi  n- heksan.  Fraksi  residu  kemudian  dilakukan ekstraksi  ketiga  menggunakan  pelarut
nonpolar  (etil  asetat)  untuk  didapatkan fraksi non polar (etil asetat). Kemudian dari fraksi  residu  dilakukan  re-ekstraksi  dengan pelarut  polar  (metanol)  dengan  cara  yang serupa  seperti  fraksi  sebelumnya  dan dihasilkan fraksi polar (metanol). 6
Skrining Fitokimia

## Pemeriksaan Alkaloid
Sebanyak 1 ml infusa ditambahkan ke tabung reaksi. Kemudian 1 ml asam klorida (HCL) 2 N ditambahkan. Setiap 1 ml filtrat diambil  dan  ditambahkan  kedalam  tabung reaksi  yang  telah  diberi  label  1,2  dan  3. Setelah  hal  tersebut,pada  tabung  reaksi  1 dimasukkan  2  tetes  pereaksi mayer ,  dan pada  tabung  reaksi  2  ditambahkan  2  tetes pereaksi wagner ,  dan  pada  tabung  reaksi  3 ditambahkan  2  tetes  pereaksi dragendorff . Pemeriksaan alkaloid menunjukkan  hasil positif  bila  terbentuk  endapan  putih  pada tabung  reaksi  1,  endapan  coklat  pada tabung  reaksi  2,  dan  endapan  jingga  pada tabung  reaksi  3.  Pemeriksaan  ini  dilakukan pengulangan sebesar 3 kali. 6

## Pemeriksaan Fenol
Sebanyak  1  ml  sampel  ditambahkan ke  tabung  reaksi.  Kemudian  masukkan  3 tetes air panas dan 3 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%. Pemeriksaan fenol menunjukkan hasil positif  ditandai  dengan perubahan warna larutan membentuk warna biru,  hijau,  atau  ungu.  Pemeriksaan  ini dilakukan pengulangan sebesar 3 kali. 6

## Pemeriksaan Flavonoid
1  ml  sampel  ditambahkan  ke  tabung reaksi, kemudian dimasukkan serbuk magnesium  sebanyak  1  gram  dan  1  ml larutan  asam  klorida  pekat.  Keberadaan flavonoid ditandai  dengan  berubahnya warna larutan dalam tabung reaksi membentuk  warna kuning. Pemeriksaan ini dilakukan pengulangan sebesar 3 kali. 6
Pemeriksaan Steroid dan Terpenoid
1  ml  sampel  ditambahkan  ke  tabung reaksi,  kemudian  dimasukkan  asam  asetat glasial  sebesar  1  ml  dan  asam  sulfat  pekat sebesar  1  ml.  Keberadaan terpenoid ditandai  dengan  berubahnya  warna  larutan dalam  tabung  reaksi  membentuk  warna merah.  Sementara  itu,  keberadaan steroid ditandai ditandai dengan berubahnya warna larutan  dalam  tabung  reaksi  membentuk warna  biru  atau  ungu.  Pemeriksaan  ini dilakukan pengulangan sebesar 3 kali. 6
Pemeriksaan Saponin
2  ml  sampel  dimasukkan  ke  tabung reaksi,  lalu  masukan  air  sebanyak  10 ml.Kemudian  tabung  reaksi  digoyang dengan waktu 10 menit dengan kuat lalu 10 menit  berikutnya  tabung  reaksi  didiamkan. Keberadaan saponin ditandai dengan terbentuknya busa  atau buih yang menetap dalam  waktu lebih  dari  10  menit. Pemeriksaan  ini  dilakukan  pengulangan sebesar 3 kali. 6

## Pemeriksaan Tanin
1  ml  sampel  ditambahkan  ke  tabung reaksi,  lalu  3  tetes  besi  (III)  klorida  5% ditambahkan.  Keberadaan tanin ditandai dengan  berubahnya  warna  larutan  pada tabung  reaksi  membentuk  warna  biru  tua. Pemeriksaan  ini  dilakukan  pengulangan sebesar 3 kali. 6
Uji  Reaksi  Antioksidan  melalui  Metode DPPH (1,1 Difenil-2-Pikril-Hidrazil) Pembuatan Larutan DPPH 0,1 mM
1,97  mg  Kristal  DPPH  ditambahkan ke  labu  ukur  50mL.  Kemudian  tambahkan larutan  metanol p.a hingga  50  mL  lalu dihomogenkan.  Larutan  DPPH  yang  telah dihomogenkan harus dilindungi dari cahaya dan harus segera dinilai aktivitasnya 6
Penetapanλ maks (Panjang Gelombang

## Maksimum) Larutan DPPH 0,1 mM
Penetapan aktivitas reaksi antioksidan hasil  fraksinasi  daun  nyamplung    diawali dengan menentukan λ maks (panjang gelombang  maksimum)  DPPH  0,1  mM dalam metanol
menggunakan spektrofotometri. Larutan tersebut dipastikan  absorbansinya  dengan  λ maks dalam rentang 400-800 nm. 6
Pengerjaan Larutan Sampel Standar 100  mg  sampel  uji  ditambahkan  ke labu  ukur  10  mL.  Kemudian  dilarutkan dengan  larutan  metanol p.a hingga  10  mL pada konsentrasi 10000 μg/mL (konsentrasi 1%). 6

## Pembuatan LarutanVitamin C Standar
Serbuk  vitamin    sebanyak  5  mg ditimbang, kemudian dimasukkan ke dalam labu  ukur  50  mL  dan  dilarutkan  dengan larutan  metanol p.a hingga  50  mL  pada konsentrasi 100 μg/mL (konsentrasi
0,01%). 6

## Pembuatan Larutan Uji Sampel
Larutan  standar  sampel  masing- masing  dipipet  sebanyak  100  μL,  200  μL, 300 μL, dan 400 μL ke dalam labu ukur 10
mL,  lalu  ditambahkan  metanol p.a hingga 10  mL  sehingga  diperoleh  larutan  uji sampel dengan 4 seri konsentrasi yaitu 100 μL, 200 μL, 300 μL, dan 400 μL. 6

## Pembuatan Larutan Uji Vitamin C
Larutan  standar  vitamin  C  masing- masing  diambil  menggunakan  pipet  mikro sebanyak  100,  200,  300,  dan  400  μL  ke dalam  labu  ukur  10  mL.  Metanol p.a kemudian dimasukkan  hingga mencapai 10 mL  sehingga  diperoleh  larutan  uji  vitamin C  dengan  seri  konsentrasi  100,  200,  300 dan 400 μL. 6
Pengukuran Absorbansi Peredaman

## Radikal
Penilaian  aktivitas  reaksi  anioksidan dapat  dilakukan  dengan  uji  DPPH  ( 1,1- Difenil-2-Pikrilhidrazil ). Larutan uji sampel (dengan berbagai konsentrasi) sebesar 1 mL ditambahkan ke 2 mL DPPH 0,1 mM. yaitu 100,  200,  300,  dan  400  μg/mL.  Masing  – masing  larutan  uji  diambil  1  ml  dan ditambahkan  ke  2  mL  DPPH  0,1  mM,  lalu
dikocok  dan  disimpan  dalam  suhu  ruangan dalam waktu setengah jam di tempat gelap. Kemudian diukur absorbansi dengan spektrofotometer  UV-Vis  (λ maks =515  nm– 520  nm). 6 Setelah  didapat  absorbansi, dihitung IC 50
% (IC 50 ) = ×100%
Keterangan :
A = Nilai absorbansi

## HASIL

## Pemrosesan Sampel
Sampel  daun  nyamplung  dari  pohon pada  waktu  pagi  hari  sekitar  pukul  08.00- 11.00  dengan  cuaca  yang  cerah.  Bagian daun yang diambil adalah daun yang masih berwarna  hijau  muda,  tidak  layu  dan  tidak terlalu  tua.  Daun  diambil  dengan  cara memetik  langsung  dari  dahan  tanpa menggunakan alat. Banyaknya daun seberat 2  kilogram.  Daun  yang  telah  diambil kemudian dibersihkan dari kotoran menggunakan  sikat  lembut  dan  dibilas dengan  air  mengalir  dari  air  PAM  sampai bersih. Daun kemudian dilakukan pengeringan  dengan  metode  penjemuran dibawah  sinar  matahari  untuk  digunakan selanjutnya  untuk  pembuatan  simplisia. Simplisia  selanjutnya  dilakukan  pemisahan /  sortasi  kering  dan  diblender  hingga  halus dan  didapatkan  1000  gram  simplisia  halus. Kemudian dilakukan pemeriksaan kadar air. Hasil  pemeriksaan  kadar  air  pada  simplisia
didapatkan kadar air senilai 7,9%. Kadar air dengan nilai dibawah 10% memperlihatkan baiknya proses pengeringan dan mempunyai  karakteristik  simplisia  yang baik untuk disimpan. 7
Penapisan  (Skrining)  Fitokimia  dari Ekstrak Total Daun Nyamplung
Penapisan  ( skrining ) fitokimia pada
berbagai
fraksi daun nyamplung
menunjukkan keberadaan kandungan senyawa  fitokimia  antara  lain flavonoid, fenol, terpenoid, steroid dan tanin . Sementara  itu  senyawa  fitokimia  berupa alkaloid ,  dan saponin tidak  ditemukan. Hasil  skrining fitokimia terhadap  daun nyamplung ( Calophyllum inophyllum )
ditunjukkan di Tabel 1 Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Daun Nyamplung No. Pemeriksaan Pereaksi Hasil
Keterangan 1 Alkaloid Mayer - Tidak terbentuk endapan putih Dragendorff - Tidak terbentuk endapan jingga Wagner - Tidak Terbentuk endapan coklat 2 Fenol Air panas, FeCl 3 1% + Terbentuk warna hijau 3 Flavonoid Mg, HCl + Terbentuk warna kuning 4 Steroid CH 3 COOH,
H 2 SO
4 + Terbentuk warna biru atau ungu 5 Terpenoid CH 3 COOH,
H 2 SO 4 + Terbentuk warna merah
6 Saponin Aquadest panas - Tidak  Terbentuk  buih/busa  yang  bertahan  lebih  dari 10 menit 7 Tanin FeCl 3 5% + Terbentuk warna biru tua

## Uji Aktivitas Antioksidan Hasil Fraksinasi Daun Nyamplung dengan Metode DPPH
Metode  uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  melalui  uji  DPPH.  Hasil  uji  aktivitas antioksidan daun nyamplung ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Daun Nyamplung (Calophyllum inophyllum L.) Metode DPPH
Sampel Konsentrasi (μg/mL) Absorbansi Blanko Absorbansi Sampel %Aktivitas antioksidan Persamaan IC 50 (μg/mL) Vitamin C
100 0,13
0.082
36.92
y = 15.769x + 15 R² = 0.9046 23.58 200 0.079 39.23 300 0.054 58.46 400 0.022 83.08
Ekstrak total 100 0,13
0.104 20.00 y = 7.4615x +
41.923 R² = 0.9909 12.65 200 0.094 27.69 300 0.078 40.00 400 0.066 49.23 Fraksi n-heksan 100 0,13
0.066 49.23 y = 11.154x -
1.5385 R² = 0.9481 4.62 200 0.055 57.69 300 0.048 63.08 400 0.036 72.31 Fraksi etil- asetat
100 0,13 0.114 12.31 y = 11.154x -
1.5385 R² = 0.9481 4.62 200 0.106 18.46 300 0.093 28.46 400 0.07 46.15 Fraksi metanol
100 0,13 0.057 56.15 y = 4.5385x +
50.385 R² = 0.932 53.19 200 0.054 58.46 300 0.049 62.31 400 0.039 70.00

## DISKUSI
Dari  penelitian  ini  didapatkan  bahwa penilaian  aktivitas  reaksi  antioksidan  daun nyamplung  ( Calophyllum  inophyllum L.) melaluiuji  DPPH  menunjukkan  adanya hubungan  korelasi  positif  antara  kadar konsentrasi dengan nilai absorbansi, dimanameningkatnya  konsentrasi  sampel ujiakan berbanding lurus dengan penurunan absorbansi  DPPH. 8 Hal  ini  membuktikan bahwa  hasil  fraksinasi  daun  nyamplung memiliki  kemampuan  untuk  meredam radikal bebas sebagai antioksidan.
Standar  ukur  untuk  menilai  aktivitas reaksi  antioksidan  pada  eksperimen  ini adalah Inhibitory  Concentration (IC 50 ). 5
Berdasarkan  hasil  IC 50 dari  hasil  fraksinasi daun  nyamplung  yang  diperoleh  dapat ditarik  kesimpulan  bahwa  hasil  fraksinasi daun  nyamplung  mempunyai  potensi  mulai kuat hingga sangat kuat sebagai antioksidan
dimana  fraksi  etil  asetat  merupakan  fraksi yang  paling  kuat  dan  hasil  fraksinasi  daun nyamplung lebih baik daripada vitamin C sebagai antioksidan dalam meredam radikal bebas DPPH.
Pada  proses  fraksinasi  di  eksperimen ini, fraksinasi dilakukan berdasarkan kelarutan  senyawa  terhadap  pelarut  dengan tingkat  kepolaran  yang  berbeda.  Proses fraksinasi  dilakukan  dengan  pelarut  yang berbeda tingkat kepolarannya akan mempengaruhi  jenis  dan  kadar  senyawa bioaktif  serta  aktivitas  antioksidannya. 7
Fraksinasi  daun  nyamplung  dilakukan dengan  menggunakan  pelarutnon-polar  (n- heksan),  semi-polar  (etil-asetat)  dan  polar (metanol).
Fraksinasi dilakukan berdasarkan prinsip like dissolve like , yaitu pelarut polar akan melarutkan senyawa polar dan pelarut non-polar  akan  melarutkan  senyawa  non-
polar.  Pada  penelitian  ini,  fraksi  etil  asetat menunjukkan  efektifitas  yang  paling  tinggi sebagai antioksidan DPPH. Aktivitas antioksidan pada ekstrak etil-asetat berkaitan  erat  dengan  sifat  etil-asetat sebagai  pelarut  semi-polar  yang  mampu melarutkan  berbagai  komponen  bioaktif. 11
Hal  ini  disebabkan  struktur  etil  asetat  yang bersifat semipolar, sehingga mampu mengikat  senyawa  non-polar,  semi-polar dan polar. Senyawa fenol adalah antioksidan alami yang umumnya didapatkan  dari  tumbuhan.  Senyawa fenol juga  bersifat  semi  polar,  sehingga  lebih banyak terikat dengan larutan etil asetat. 9
Flavonoid memiliki ikatan difenilpropan , aktivitas antioksidannya bergantung pada jumlah kelompok hidroksil dan  posisinya  pada  molekul.
Potensi  antioksidannya  bergantung  dari struktur dalam hal delokalisasi elektron dari inti  aromatik. Untuk  asam fenolik seperti calophyllic  acid  (1A),  isocalophyllicacid (1B), dan  derivat  esternya,  aktivitas antioksidan  bergantung  pada  jumlah  ikatan hidroksil pada  molekul  yang  bergantung pada inhibisi sterik dari kelompok karboksilat yang  dimilikinya. Terpenoid memiliki ikatan ganda terkonjugasi sehingga memiliki potensi sebagai antioksidan,  karena  elektronnya  dapat disumbangkan  untuk  menstabilkan  muatan molekul reaktif. 10
Pada  daun  nyamplung  didapatkan Calophyllic-acid ( 1A )  dan isocalophyllic- acid ( 1B )dan  senyawa  ini  larut  dalam larutan non polar. Terpenoid jenis triterpenoid larut  pada  larutan  non-polar karena triterpenoid memiliki rantai hidrokarbon yang panjang sehingga bersifat hidrofob sementara monoterpenoid pada pelarut polar. Flavonoid larut dalam larutan polar,  kecuali flavonoid bebas  seperti isoflavon,  flavon,  flavanon dan flavonol termetoksilasi  dapat  dengan  lebih  mudah terlarut  didalam  larutan  semipolar. 11 Dari segi  kepolaran  larutan,  nilai  aktivitas antioksidan  dari  fraksi  etil  asetat  paling tinggi,  karena  larutan  etil  asetat  yang bersipat  semi-polar  mampu  mengekstrak fenol lebih baik. 8
Pada  penelitian  lain  yang  dilakukan Malarvizhi,  dilakukan  penilaian  aktivitas reaksi  antioksidan  dari  ekstrak  daun Calophyllum  inophyllum dengan  ekstrak aseton,  air  terdestilasi  dan  etil  asetat, didapatkan  bahwa  pada  pelarut  semi  polar yaitu  etil  asetat  didapatkan  aktivitas antioksidan paling tinggi. Hal ini diprediksi akibat  jumlah flavonoid dan polifenol pada pelarut  semi  polar.  Pada  ekstrak  total, aktivitas  reaksi  antioksidan  sebesar  12,65 ppm, lebih kecil daripada etil asetat sebesar 4,60ppm.  Hal  ini  menunjukkan  beberapa senyawa antioksi dan berinteraksi antagonis dalam  menetralkan  radikal  bebas.  Ekstrak total  masih  merupakan  paduan/asimilasi
dari  berbagai  senyawa  dalam  fraksi tersebut. Efek antagonis dapat menyebabkan  menurunnya  kemampuan reaksi  antioksidan  dari  ekstrak  total  dalam meredam radikal bebas dibandingkan fraksi etil asetat. 10
Senyawa fenol dapat  bekerja  secara saling  mendukung  (sinergis)  dan  antagonis dalam  menginhibisi  radikal  bebas.  Namun demikian penelitian in vitro untuk menganalisis korelasi antara aktivitas fenolik total  dan  antioksidan  total  tidak mencerminkan  karakteristik fenolik ini.
Adanya  gugus  lain  dalam  ekstrak  total dapat mengakibatkan flavonoid termetilasi. 12 Pengubahan  atom  -H  menjadi gugus  metil  (-CH3)  melalui  reaksi  metilasi dapat  menurunkan  aktivitas  antioksidan. 13
Penelitian  lebih  mendalam  secara in-vivo dibutuhkan  untuk  mengetahui  interaksi fenolik  karena  aktivitas  antioksidan  secara in - vitro tidak  dapat  menilai  efektivitas biologikal  dari  ekstrak.  Penelitian  lebih mendalam  yang  dibutuhkan  adalah  uji toksisitas, stabilitas dan farmakologi sehingga  daun  ini  dapat  menjadi  salah  satu referensi  penelitian  lebih  mendalam  di bidang farmakologi.

## KESIMPULAN
Daun nyamplung ( Calophylum inophyllum  L.) mempunyai  aktivitas  reaksi antioksidan  dengan  nilai  IC 50 pada  masing- masing  hasil  fraksinasi  yaitu  ekstrak  total
sebesar  12.65  ppm,  fraksi  n-heksan  46.44 ppm,  fraksi  etil  asetat  4.62  ppm  dan  fraksi metanol sebesar 53.19 ppm. Daun nyamplung  ( Calophylum  inophyllum  L.) mempunyai  aktivitas  antioksidan  dalam rentang  sangat  kuat  dan  kuat  yaitu  ekstrak total  dan  fraksi  etil  asetat  dengan  aktivitas antioksidan  sangat  kuat,  serta  fraksi  n- heksan  dan  metanol  dengan  aktivitas antioksidan  kuat.  Penelitian  terkait  isolasi senyawa pada daun nyamplung ( Calophylum  inophyllum  L.) diperlukan untuk  menghasilkan  senyawa  –  senyawa tunggal murni serta hendaknya direncanakan  penelitian  lebih  mendalam mengenai  daun  nyamplung  secara in  vivo yaitu uji toksisitas, sensitivitas dan farmakologi.

## DAFTAR REFERENSI
1. Victor  W  Rodwell,  Kathleen  M.
Botham,  P.  Anthony  Weil,  Peter  J. Kennelly,  Robert  K.  Murray  DAB. Biokimia  Harper.  30th  ed.  EGC; 2017.
2. Winarsi  H.  Antioksidan  Alami  Dan Radikal Bebas: Potensi Dan Aplikasi Dalam Kesehatan. Kanisius; 2007.
3. Sunarni  T,  Pramono  S,  Asmah  R. Antioxidant–free  radical  scavenging of  flavonoid  from  The  Leaves  of Stelechocarpus burahol (Bl.) Hook f.
& Th . Indones J Pharm . 2017;18(3):111-116.
4. Fitri  N. Butylated  hydroxyanisole
sebagai  Bahan  Aditif  Antioksidan pada Makanan dilihat dari Perspektif Kesehatan. J  Kefarmasian  Indones . 2013;4(1):41-50.
5. Dutta  S,  Ray  S.  Evaluation  of Antioxidant Potentials of Leaf
Aqueous  and  Methanolic  Extracts  of
Calophyllum  Inophyllum in  Relation to Total Phenol and
FlavonoidContents . Int J Pharma Bio
Sci . 2014;5:441-450.
6. Huang  D,  Ou  B,  Prior  RL.  The Chemistry Behind Antioxidant Capacity  Assays. J  Agric  Food
Chem . 2005;53(6):1841-1856. doi:10.1021/jf030723c
7. Khan  MA,  Rahman  AA,  Islam  S,  et al.  A  Comparative  Study  on  the Antioxidant  Activity  of  Methanolic Extracts  from    Different  Parts  of Morus alba L. (Moraceae ). BMC Res
Notes .  2013;6:24.  doi:10.1186/1756- 0500-6-24
8. Varsha  G,  Uma  Maheswari  B, Ramasamy M, Karunanithi M. Effect of  Ethanolic  Extract  of Calophyllum
Inophyllum Leaves  On  Oxidative Stress  Complications  in  Mouse Model. Asian  J  Pharm  Clin  Res . 2016;9(3):2-4.
9. Kedare  SB,  Singh  RP.  Genesis  and Development  of  DPPH  Method  of
Antioxidant  Assay .  J  Food  Sci Technology . 2011;48(4):412-422. doi:10.1007/s13197-011-0251-1 10. Malarvizhi  P,  Ramakrishnan  N. Biogenic  Silver  Nanoparticles  Using Calophyllum Inophyllum Leaf Extract : Synthesis , Spectral. World J Pharm Res . 2014;3(2):2258-2269.
11. Jaikumar  K,  Sheik  Noor  Mohamed M,  John  Wyson  W,  et  al.  In  silico docking analysis of bioactive compounds from Calophyllum inophyllum  l. Ethanol  leaf  extract against  epidermal  growth  factor receptor  (EGFR)  protein .  Asian  J Pharm  Clin  Res .  2017;10(8):214- 219.doi:10.22159/ajpcr.2017.v10i8.1 8972
12. Govindappa  M,  Hemmanur  KC,
Nithin  S,  Chinna  Poojari  C,  Bhat  G, Channabasava  K.  In  Vitro  Anti-HIV
Activity of Partially Purified Coumarin(s) Isolated  from Fungal Endophyte,  Alternaria  Species of Calophyllum inophyllum . Pharmacol &Pharm . 2015; 06(07):321-328. doi:10.4236/pp.2015.67034
13. Malarvizhi  P,  Ramakrishnan  N. GC- MS Analysis  of  Biologically  Active
Compounds
In Leaves of Calophyllum  Inophyllum  L . Int  J ChemTech  Res .  2011;3(2):806-809.