Efektifitas Antibakteri Ekstrak Rimpang dan Bunga Lempuyang Wangi ( Zingiber aromaticum Val. ) terhadap Porphyromonas gingivalis Penyebab Periodontitis
Antibacterial Effectiveness of Lempuyang Wangi (Zingiber aromaticum Val.) Rhizome and Flower Extracts against the Periodontitis-causing Bacterium Porphyromonas gingivalis
Sofie Nastiti 1 , Diana Setya Ningsih 2 , Zaki Mubarak 1
1 Departement of Oral Biology, Faculty of Dentistry. Universitas Syiah Kuala
2 Departement of Dental Material, Faculty of Dentistry. Universitas Syiah Kuala Correspondence Email to: zakimubarak@usk.ac.id
Received: 20 August 2023; Revised: 9 October 2023; Accepted: 23 October 2023; Published: 27 October 2023

## ABSTRAK
Periodontitis merupakan penyakit inflamasi multifaktorial yang akan memicu kehilangan tulang secara progresif  hingga  terjadi  kehilangan  gigi  apabila  tidak  segera  dirawat.  Periodontitis  dipicu  oleh  plak biofilm dari mikroorganisme di rongga mulut seperti Porphyromonas gingivalis . Pemberian antibiotik dapat  menyebabkan  resistensi  dalam  penggunaan  jangka  panjang  maka  perlu  mengembangkan  agen antibakteri dari bahan alam yaitu rimpang dan bunga Lempuyang Wangi ( Zingiber aromaticum Val. ). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  perbedaan  kemampuan  antibakteri  ekstrak  rimpang  dan bunga Lempuyang Wangi terhadap P. gingivalis . Metode penelitian secara eksperimental laboratoris dengan menggunakan ekstrak etanol rimpang dan bunga Lempuyang Wangi dengan konsentrasi 50%; 25%;  12,5%;  6,25%;  3,125%.  Kontrol  positif  menggunakan metronidazole .  Sampel  diuji  dengen metode mikrodilusi dan pengukuran nilai absorbansi dengan spektrofotometer (λ = 600 nm). Analisis data  menggunakan  uji Saphiro-Wilk dan  uji  non-parametrik Kruskal-Wallis .  Hasil  penelitian menunjukkan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ekstrak rimpang dan bunga Lempuyang Wangi berada  pada  konsentrasi  50%.  Uji time  killing dengan  konsentrasi  50%  menunjukkan  ekstrak  bunga Lempuyang  Wangi  memiliki  kemampuan  antibakteri  terhadap  bakteri P.  gingivalis yang  lebih  baik daripada rimpang pada waktu 48 jam.  Disimpulkan bahawa ekstrak rimpang dan bunga Lempuyang Wangi memiliki kemampuan antibakteri yang berbeda terhadap bakteri Porphyromonas gingivalis . Kata  Kunci: Ekstrak  Rimpang  dan  Bunga  Lempuyang  Wangi  ( Zingiber  aromaticum  Val. ), Konsentrasi Hambat Minimum (KHM), Porphyromonas gingivalis , time - killing .

## ABSTRACT
Periodontitis is a multifactorial inflammatory disease that will trigger progressive bone loss resulting in  tooth  loss  if  not  treated  immediately.  Periodontitis  is  triggered  by  plaque  biofilm  from microorganisms in the oral cavity, such as Porphyromonas gingivalis . Administering antibiotics can cause  resistance  in  long-term  use,  it  is  necessary  to  develop  antibacterial  agents  from  natural ingredients including the rhizome and flowers of Lempuyang Wangi (Zingiber aromaticum Val.). This study aims to determine the differences in the antibacterial ability of the Lempuyang Wangi rhizome and  flower  extracts  against P.  gingivalis .  The  research  method  was  laboratory  experimental  using ethanol extract of Lempuyang Wangi rhizomes and flowers with a concentration of 50%, 25%, 12.5%, 6.25%,  and  3.125%.  The  positive  control  used  metronidazole.  Samples  were  tested  using  the microdilution  method  and  measuring  the  absorbance  value  with  a  spectrophotometer  (λ  =  600  nm). Data  analysis  used  the  Shapiro-Wilk  test  and  the  Kruskal-Wallis  non-parametric  test.  The  research results showed that the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of Lempuyang Wangi rhizome and flower  extract  was  at  a  concentration  of  50%.  The  time-killing  test  with  a  concentration  of  50% showed  that Lempuyang  Wangi flower  extract  had  better  antibacterial  ability  against P.  gingivalis bacteria  than  rhizomes  at  48  hours.  It  was  concluded  that Lempuyang  Wangi rhizome  and  flower extracts had different antibacterial abilities against Porphyromonas gingivalis bacteria.
Keywords: Zingiber  aromaticum  Val .  Rhizomes  and  Flowers  Extract,  Minimum  Inhibitory Concentration (MIC), Porphyromonas gingivalis , time-killing.

## PENDAHULUAN
Periodontitis  merupakan  penyakit inflamasi multifaktorial akibat adanya aktivitas mikroba  pada  area  subgingiva  dan  infiltrat imuno-inflamasi  pada  jaringan  periodontal. 1,2 Periodontitis  menduduki  peringkat  keenam penyakit paling banyak terjadi di seluruh dunia yang  memengaruhi  hampir  50%  populasi  di dunia  khususnya  negara  berkembang. 3,4 Periodontitis  dipicu  oleh  plak  biofilm  yang terbentuk  dari  mikroorganisme  rongga  mulut seperti Porphyromonas gingivalis . 1 Porphyromonas gingivalis dapat memicu  proses  periodontitis  karena  adanya kandungan  lipopolisakarida  (LPS)  pada membran  luarnya  yang  akan  berintegrasi dengan  bakteri  komensal  rongga  mulut. 5 Lipopolisakarida
(LPS) menyebabkan
pengaktifan  jalur  TLR2  dan  TLR4  yang  akan meningkatkan  produksi  sitokin  pro-inflamasi dan kemokin sehingga menyebabkan terjadinya  kerusakan  jaringan  periodontal  dan kehilangan  tulang  alveolar. 5,6 Berdasarkan penelitian  Kuboniwa  (2017),  koagregasi  dan interaksi P. gingivalis dan S.  gordonii di  plak subgingiva  menghasilkan  efek  destruktif terhadap  jaringan  periodontal. 7 Yan  li  (2015) menyatakan P.  gingivalis jika  berinteraksi dengan F.  nucleatum dapat  meningkatkan invasi dan adhesi pada penderita periodontitis. 8 Interaksi P. gingivalis dengan mikroorganisme  komensal  rongga  mulut  serta adanya  pengaruh  aktivitas  struktur  sel  bakteri mengakibatkan kerusakan jaringan periodontal menjadi  semakin  progersif. 5 Oleh  karena  itu, diperlukan perawatan untuk mencegah kerusakan  lebih  lanjut.  Perawatan  pada penderita  periodontitis  idealnya  dilakukan secara  mekanis  ( scaling dan root  planing (SRP))  dan  kimiawi  (terapi  antibiotik sistemik). 9 Perawatan  secara  mekanik  mutlak dilakukan pada penderita periodontitis disertai perawatan secara kimiawi dengan mengkonsumsi  antibotik  sistemik  seperti metronidazole dan amoxicillin jangka panjang. 9-11 Konsumsi antibiotik dalam jangka panjang akan menimbulkan reaksi hipersensitifitas,  gangguan  sistem  pencernaan, gangguan hematologi dan resistensi antibiotik. 12 Oleh  karena  itu,  mayoritas  orang cenderung  meninggalkan  obat-obatan  di pasaran dan beralih ke tanaman herbal. 13
Tanaman  herbal  yang  sudah  pernah diteliti  manfaatnya  terhadap  periodontitis diantaranya  adalah Curcuma  longa. 14 , Green tea 15 , Azadirachta  indica 16, dan Aloe  vera 17 . Namun,  belum  ada  penelitian  terkait penggunaan  Lempuyang  Wangi  ( Zingiber aromaticum  Val. )  sebagai  obat  alternatif penyakit periodontitis.
Analisis Gas chromatography-mass  spectrometry (GC-MS) pada rimpang dan bunga menunjukkan adanya kandungan  senyawa  kimia  berupa zerumbone , α-humulen atau α-caryophyllene , linalool , nerolidol,  β-caryophyllene , , camphene dan lain-lain. 18 Walaupun  senyawa  kimia  yang terkandung  cenderung  sama,  namun  terdapat perbedaan pada jumlah senyawa dominan yang dimiliki  rimpang  dan  bunga.  Rimpang mengandung zerumbone (46,83%)  dan α- humulen atau α-caryophyllene (19,00%), sedangkan  bunga  mengandung (Z)-nerolidol (36,9%) dan β-caryophyllene (13,2%). 18 Senyawa  kimia  rimpang, zerumbone dan α-caryophyllene memliki  potensi  sebagai antibakteri  dikarenakan  keduanya  memiliki kemampuan  dalam  menekan  ekspresi effluxs pump-related  genes (bmeB)  yang  berfungsi sebagai mekanisme pertahanan bakteri terhadap  antibiotik  sehingga  berpotensi sebagai  agen  antibakteri. 19,20 Sedangkan  pada bunga,  Chan  (2016)  menyatakan nerolidol berpotensi sebagai antibakteri karena menyebabkan  kebocoran  ion  K + pada  sel. 21 Yoo  (2019)  menyatakan β-caryophyllene menunjukkan aktivitas antimikroba terhadap P. gingivalis dan T. forsythia
dengan menghambat kerja LPS dalam
mengekspresikan sitokin proinflamasi. 22
Melihat  adanya  potensi  antibakteri  pada rimpang  maupun  bunga  Lempuyang  Wangi, peneliti  tertarik  ingin  melihat  perbedaan kemampuan  antibakteri  dari  kedua  bagian tersebut  terhadap  bakteri P.  gingivalis penyebab periodontitis.

## METODE
Jenis
penelitian ini adalah
eksperimental  laboratoris  dan  desain pretest - posttest with  control  group untuk  melihat perbedaan kemampuan antibakteri ekstrak dari rimpang  dan  bunga  lempuyang  wangi ( Zingiber  aromaticum  Val.) terhadap  bakteri Porphyromonas gingivalis.
Sampel  penelitian  ini  adalah  ekstrak rimpang  dan  bunga  Lempuyang  Wangi ( Zingiber  aromaticum  Val.) serta  bakteri Porphyromonas  gngivalis American      Type Culture   Collection (ATCC) 33327 yang berasal dari Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Gigi Universitas Syiah Kuala Banda Aceh.
Penelitian ini mengukur nilai pertumbuhan P.  gingivalis yang  dipaparakan ekstrak    rimpang  dan  bunga  Lempuyang Wangi dan kecepatan bunuh P. gingivalis oleh ekstrak    rimpang  dan  bunga  Lempuyang Wangi menggunakan metode mikrodilusi yang diukur dengan Spektrofotometer untuk mengetahui jumlah koloni P. gingivalis sesuai dengan nilai absorbansi yang muncul.
Prosedur Penelitian
Penelitian ini diawali dengan melakukan  pembuatan  ekstrak  etanol  rimpang dan  bunga  Lempuyang  Wangi  dengan  etanol 70%.  Setelah  itu  melakukan  standarsasi simplisia  dan  ekstrak  etanol  rimpang  dan bunga  Lempuyang  Wangi.  Setelah  itu dilakukan  pengenceran  hingga  mendapatkan konsentrasi  50%,  25%,  12,5%,  6,25%,  dan 3,125%.  Pengenceran  ekstrak  etanol  rimpang dan  bunga  Lempuyang  Wangi  diambil sebanyak  100  µl,  lalu  dimasukkan  ke  dalam masing-masing  sumuran.  Lalu  ditambahkan inokulum bakteri P. gingivalis (1x10 6 CFU/ml) sebanyak  100  µl  pada  masing-masing sumuran.  Kontrol  positif  menggunakan metronidazole dan kontrol negatif menggunakan  media  BHIB  ( Brain  Heart
Infusion  Broth ).  Dilanjutkan  inkubasi  selama 48 jam pada suhu 37 0 C dalam kondisi anaerob. Evaluasi pertumbuhan bakteri setelah diinkubasi  dengan  analisis  spektrofotometer (λ=600  nm)  untuk  menentukan  Konsentasi Hambat  Minimum (KHM)  atau  konsentrasi ekstrak  terendah  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri  dibuktikan  dengan menurunnya  nilai  absorbansi  sebelum  dan setelah diinkubasi.
Untuk  menentukan  kecepatan  bunuh bakteri dari ekstrak etanol rimpang dan bunga Lempuyang  Wangi,  dilihat  dari  kurva  waktu pembunuhan  ( time  killing ).  Tahapan  yang pertama yaitu menginokulasikan bakteri 1x10 6 CFU/ml  ke  dalam  sumuran  1  (KHM)  dan  2 (pembanding/konsentrasi  di  bawah  KHM) yang  berisi  100  µl  ekstrak.  Inokulum  bakteri
dan  BHIB  digunakan  sebagai  pembanding untuk  memperkirakan  fase  pertumbuhan  yang berbeda  dari  kurva  pertumbuhan.  Selanjutnya, inkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  37 0 C. Pertumbuhan  bakteri  dilihat  menggunakan spektrofotometer (600 nm) pada interval waktu inkubasi  0,  6,  24,  dan  48  jam.  Uji  dilakukan rangkap  tiga  dan  diulang  sebanyak  tiga  kali untuk mengkonfirmasi reproduktifitas hasil.

## HASIL
Standarisasi bahan baku perlu dilakukan  pada  simplisia  maupun  ekstrak untuk  menjamin  mutu  dan  keamanan  ekstrak tanaman obat.
Gambar 1 menunjukkan pada waktu 0 jam  terjadi  penurunan  nilai  absorbansi  yang berbanding lurus dengan menurunnya konsentrasi ekstrak etanol rimpang. Sedangkan pada  waktu  48  jam  terjadi  peningkatan  nilai absorbansi  pada  semua  konsentrasi  ekstrak etanol rimpang kecuali pada konsentrasi 50%. Peningkatan  nilai  absorbansi  yang  tertinggi pada  konsentrasi  12,5%  dan  nilai  absorbansi yang terendah berada pada kontrol positif.
Perbedaan  pertumbuhan P.  gingivalis dengan uji Kruskal-Wallis berdasarkan konsentrasi  menunjukkan  bahwa  pada  semua konsentrasi terdapat perbedaan yang signifikan ( p <0,05)  (Gambar  1.  (A)).  Perbedaan bermakna pertumbuhan bakteri yang dipaparkan ekstrak etanol rimpang Lempuyang Wangi didapati pada waktu 0 dan 48 jam pada semua konsentrasi ( p <0,05) kecuali konsentrasi 25% ( p >0,05) (Gambar 1. (B)).
Gambar 1. P. gingivalis yang Dipaparkan Ekstrak Etanol Rimpang Berdasarkan Konsentrasi (A) dan
Berdasarkan Waktu Inkubasi (B) A * * * * * * * * * * * * * * * * B
Selain  itu,  dilakukan  juga  uji kecepatan  waktu  yang  diperlukan  ekstrak etanol  rimpang  Lempuyang  Wangi  dengan konsentrasi  50%  dan  25%  untuk  membunuh bakteri P.  gingivalis dengan  uji time  killing (Tabel  1).  Hasil  uji  menunjukkan  bahwa penurunan  nilai  absorbansi  pada  konsentrasi 50%  terjadi  pada  waktu  6  jam  dan  48  jam. Sedangkan pada konsentrasi 25% hanya terjadi pada  waktu  6  jam.  Pada  kontrol  negatif  tidak terjadi penurunan nilai absorbansi.
Uji Kruskal-Wallis (Tabel  1) untuk melihat perbedaan kecepatan bunuh bakteri P. gingivalis pada  waktu  0,  6,  24,  dan  48  jam terlihat adanya perbedaan bermakna kecepatan bunuh ekstrak etanol rimpang konsentrasi 25% ( p <0,05)  dan  pada  konsentrasi  50%  tidak terdapat  perbedan  bermakna  ( p >0,05).  Dari hasil  statistik  juga menunjukkan  adanya perbedaan bermakna pada konsentrasi terhadap semua  waktu  inkubasi  ( p <0,05)  kecuali  pada waktu  24  jam  ( p >0,05),  yang  artinya  pada konsentrasi 50% dan 25% memiliki kecepatan bunuh yang berbeda secara signifikan terhadap bakteri P.  gingivalis ,  kecuali  terhadap  waktu 24 jam.
Hasil  uji  pada  ekstrak  etanol  bunga Lempuyag  Wangi  (Gambar  2)  menunjukkan pada  waktu  0  jam  terjadi  penurunan  nilai absorbansi  yang  berbanding  lurus  dengan menurunnya konsentrasi ekstrak etanol bunga. Sedangkan  pada  waktu  48  jam  terjadi peningkatan  nilai  absorbansi  pada  semua konsentrasi  pengenceran  ekstrak  etanol rimpang  kecuali  pada  konsentrasi  50%  yang mengalami  penurunan  nilai  absorbansi. Peningkatan  nilai  absorbansi  yang  paling tinggi  terjadi  pada  konsentrasi  6,25%  dan peningkatan  yang  paling  rendah  berada  pada kontrol positif.
Uji  statistik Kruskal-Wallis untuk melihat  perbedaan  pertumbuhan P.  gingivalis berdasarkan  konsentrasi  menunjukkan  bahwa pada  semua  konsentrasi  terdapat  perbedaan yang signifikan ( p <0,05) (Gambar 2. (A)). Uji statistik  juga  menunjukan  adanya  perbedaan bermakna pertumbuhan bakteri yang dipaparkan  ekstrak  etanol  bunga  Lempuyang Wangi  pada  waktu  0  dan  48  jam  pada  semua konsentrasi  ( p <0,05)  kecuali  pada  konsentrasi 50% ( p >0,05) (Gambar 2. (B)).
Selain dilakukan uji untuk menentukan konsentrasi  terendah  ekstrak  etanol  bunga dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri, dilakukan  juga  uji  kecepatan  waktu  yang diperlukan  ekstrak  etanol  bunga  konsentrasi 50%  dan  25%  untuk  membunuh  bakteri P. gingivalis dengan  uji time  killing (Tabel  2). Hasil uji menunjukkan bahwa penurunan nilai absorbansi  pada  konsentrasi  50%  terjadi  pada waktu  6  jam  dan  48  jam.  Sedangkan  pada konsentrasi  25%  hanya  terjadi  pada  waktu  6 jam.  Sementara  kontrol  negatif  tidak  terjadi penurunan nilai absorbansi.
Hasil  uji  statistik  dengan Kruskal- Wallis (Tabel  2) untuk  melihat  perbedaan kecepatan  bunuh  bakteri P. gingivalis pada
Tabel 1. Uji Time Killing Ekstrak Etanol Rimpang Konsentrasi 50% dan 25% Terhadap P. gingivalis Pada
Waktu 0, 6, 24, dan 48 Jam
* * * * * * * * * * * * * * * A * B Gambar 2. Pertumbuhan P. gingivalis yang
Dipaparkan Ekstrak Etanol Bunga, A (Berdasarkan Konsentrasi), B (Berdasarkan Waktu Inkubasi). Perlakuan Waktu Inkubasi 0 Jam* 6 Jam* 24 Jam 48 Jam* R 50% 2.02 1.95 2.03 2.02 R 25%* 1.28 1.22 1.82 2.33 KN 0.07 0.18 1.77 1.88
waktu 0, 6, 24, dan 48 jam  didapatkan  adanya perbedaan  bermakna  kecepatan  bunuh  ekstrak etanol bunga pada semua konsentrasi ( p <0,05) sehingga  hal  ini  menunjukkan  bahwa  adanya perbedaan  konsentrasi  berpengaruh  secara signifikan  terhadap  akivitas  bunuh  bakteri P. gingivali s. Dari hasil statistik juga menunjukkan  adanya  perbedaan  bermakna pada  konsentrasi  terhadap  semua  waktu inkubasi  ( p <0,05)  kecuali  pada  waktu  48  jam ( p >0,05),  yang  artinya  ada  perbedaan kecepatan  bunuh  bakteri P.  gingivalis yang signifikan  pada  konsentrasi  50%  dan  25%  di semua waktu yang diuji kecuali pada waktu 48 jam.
Hasil  uji  statistik  untuk  melihat perbedaan  pertumbuhan P.  gingivalis yang dipaparkan  ekstrak  etanol  rimpang  dan  bunga pada waktu 0 dan 48 jam menunjukkan adanya perbedaan  bermakna  pada  pertumbuhan P. gingivalis yang  dipaparkan  ekstrak  rimpang dan  bunga  di  semua  konsentrasi  ( p <0,05), kecuali pada konsentrasi 3,125% pada waktu 0 jam dan pada konsentrasi 25% pada waktu 48 jam  ( p >0,05).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  rimpang  dan  bunga  memiliki efek  yang  berbeda  pada  beberapa  konsentrasi terhadap pertumbuhan P. gingivalis.
Hasil  uji  statistik  untuk  melihat perbedaan kecepatan bunuh bakteri P. gingivalis pada waktu 0, 6, 24, dan 48 jam ekstrak  etanol  rimpang  dan  bunga  dengan konsentrasi  50%  dan  25%  menunjukkan adanya  perbedaan  bermakna  pada  kecepatan bunuh  bakteri P.  gingivalis ekstrak  rimpang dan  bunga  di  semua  konsentrasi  dan  waktu yang  diuji  ( p <0,05),  kecuali  pada  konsentrasi 25% pada waktu 48 jam ( p >0,05). Hal tersebut
menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  rimpang dan  bunga  memiliki  kecepatan  bunuh  yang berbeda terhadap P. gingivalis di semua waktu yang diuji kecuali pada waktu 48 jam terhadap konsentrasi 25%.

## PEMBAHASAN
Hasil  uji  standarisasi  ekstrak  rimpang dan  bunga  menunjukkan  adanya  kandungan senyawa  bioaktif  berupa  flavonoid,  saponin, dan  alkaloid  yang  diketahui  memiliki kemampuan  antibakteri.  Oleh  karena  itu dilakukan  uji  kemampuan  antibakteri  dengan melihat  hambat  pertumbuhan  dan  kecepatan bunuh P.  gingivalis oleh  ekstrak  etanol rimpang dan bunga Lempuyang Wangi.
Daya  hambat  pertumbuhan  bakteri P.  gingivalis yang  dipaparkan  ekstrak  etanol rimpang  dan  bunga  Lempuyang  Wangi (Gambar  1(B)  dan  2(B))  terlihat  dari menurunnya  nilai  absorbansi  pertumbuhan P. gingivalis dari sebelum diinkubasi (0 jam) dan setelah diinkubasi (48 jam). Pada Gambar 1(B) dan 2(B) menunjukkan adanya penurunan nilai absorbansi  konsentrasi  50%  ekstrak  etanol rimpang  dan  bunga  Lempuyang  Wangi  pada kurun  waktu  48  jam.  Hal  ini  terjadi  karena pengaruh  dari  fase  pertumbuhan P.  gingivalis yang  kemungkinan  sedang  dalam  fase stasioner,  dimana  nutrisi  yang  dibutuhkan bakteri  untuk  tumbuh  mulai  habis  sehingga menyebabkan  beberapa  sel  bakteri  mati.  Fase stasioner  merupakan  fase  dimana  mulai habisnya  nutrisi  untuk  pertumbuhan  bakteri dan  adanya  akumulasi  produk  beracun  yang menyebakan  pertumbuhan  bakteri  berhenti, kematian  bakeri  pada  fase  ini  cenderung lambat  namun  seimbang  dengan  pertumbuhan bakteri  yang  baru. 23 Sedangkan  pada konsentrasi  25%,  12,5%,  6,25%  dan  3,125% mengalami  peningkatan  nilai  absorbansi  yang menandakan tidak adanya hambat pertumbuhan  bakteri  oleh  ekstrak  etanol rimpang  dan  bunga  Lempuyang  Wangi. Pengaruh  fase  pertumbuhan  inilah  yang menyebabkan  terjadinya  peningkatan  ataupun penurunan nilai absorbansi.
Selain  waktu  inkubasi,  pertumbuhan bakteri  juga  dipengaruhi  oleh  konsentrasi ekstrak  etanol  rimpang  dan  bunga  yang dipaparkan pada P. gingivalis (Gambar 1A dan 2A). Hasilnya  didapati  sebelum   diinkubasi
Tabel 2 Uji Time Killing Ekstrak Etanol Bunga Konsentrasi 50% dan 25% Terhadap P. gingivalis Pada Waktu 0, 6, 24, dan 48 Jam Perlakuan Waktu Inkubasi 0 Jam*  6 Jam* 24 Jam* 48 Jam B 50%* 2.94 2.63 2.85 2.32 B 25%* 2.04 1.9 1.97 2.47 KN 0.07 0.18 1.77 1.88
nilai  absorbansi  yang  semakin  kecil  seiring dengan  menurunnya  konsentrasi,  hal  ini kemungkinan  terjadi  karena  ekstrak  dengan konsentrasi  kecil  konsistensinya  lebih  encer daripada  ekstrak  dengan  kosentrasi  tinggi. Sejalan  dengan  hasil    penelitian  Stevenson 24 dan  Djuminar 25 yang  menyatakan  bahwa peningkatan  nilai  absorbansi  menujukkan semakin  banyaknya  kandungan  ekstrak  atau semakin  pekat. 24,25 Tetapi  setelah  diinkubasi (48  jam)  terjadi  perbedaan  pertumbuhan bakteri P.  gingivalis pada  masing-masing konsentrasi  ekstrak  etanol rimpang  dan  bunga dimana  penurunan  nilai  absorbansi  hanya terjadi  pada  konsentrasi  50%,  sedangkan konsentrasi  lainnya  mengalami  peningkatan nilai absorbansi. Hasil ini menunjukkan bahwa konsentrasi  50%  ekstrak  etanol  rimpang  dan bunga Lempuyang Wangi merupakan konsentrasi  terendah  yang  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri P. gingivalis (KHM). Hambat  pertumbuhan  bakteri P. gingivalis kemungkinan terjadi karena senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung dalam  ekstrak  etanol  rimpang  dan  bunga Lempuyang  Wangi  yaitu  berupa  flavonoid, saponin,  dan  alkaloid.  Diketahui  senyawa flavonoid  memiliki  kemampuan  antibakteri dengan  menyerang  fosfolipid  pada  membran sitoplasma  bakteri  yang  berakibat  pada kebocoran  membran  sitoplasma,  kebocoran inilah  yang  kemungkinan  menjadi  penyebab bakteri P. gingivalis mengalami kematian atau terhambat pertumbuhannya. 26,27 Selain flavonoid  ada  juga  senyawa  saponin  dan alkaloid  yang  berperan  dalam  meningkatkan permeabilitas  membran  sel  bakteri  sehingga membran  sel  menjadi  tidak  stabil  dan  terjadi hemolisis  dalam  sel  yang  berakibat  pada pelepasan  komponen  penting  dalam  sel sehingga bakteri akan lebih cepat mati. 28,29
Penelitian ini juga dilakukan uji untuk melihat  kecepatan  bunuh  bakteri P.  gingivalis dengan  uji time  killing yang  diuji  pada  waktu 0,  6,  24  dan  48  jam  dengan  menggunakan konsentrasi  ekstrak  etanol rimpang  dan  bunga 50%  dan  25%  (Tabel  1  dan  2).  Kecepatan bunuh bakteri P. gingivalis pada ekstrak etanol rimpang  dan  bunga  dengan  konsentrasi  50% dan 25% didapati hasil  nilai absorbansi yang
naik  turun,  hal  ini  bisa  jadi  berhubungan dengan  fase  pertumbuhan  bakteri  (lag,  log, stasioner,  dan  kematian).  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  terdapat  penurunan  nilai absorbansi  di  waktu  6  jam  dan  48  jam  pada konsentrasi  50%  sedangkan  konsentrasi  25% hanya terjadi di waktu 6 jam. Penurunan nilai absorbansi  pada  waktu  6  jam  karena  bakteri dalam proses adaptasi dengan lingkungan baru dan pertumbuhan bakteri cenderung lambat. 23 Sejalan  dengan  hasil  penelitian Stevenson 24 bahwa  perubahan  nilai  pada absorbansi terjadi karena sel bakteri yang lisis dan memicu terjadinya kebocoran material sel bakteri  ketika  bakteri  tumbuh  dengan  paparan antibiotik. 24 Hal  ini  menunjukkan  bahwa aktivitas  ekstrak  etanol  rimpang  dan  bunga Lempuyang  Wangi  dengan  konsentrasi  50% dapat  mempengaruhi  pertumbuhan  bakteri P. gingivalis .  Penurunan  nilai  absorbansi  ekstrak etanol  rimpang  dan  bunga  Lempuyang  Wangi di  waktu  48  jam  pada  konsentrasi  50%  yang lebih  besar  pada  ekstrak  etanol  bunga menunjukkan  adanya  perbedaan  kemampuan yang  dimiliki  kedua  bagian  tersebut  dalam menghambat pertumbuhan P. gingivalis.
Perbedaan  kadar  senyawa  metabolit sekunder  dapat  mempengaruhi  aktivitas antibakteri, sehingga saat ekstrak etanol bunga dipaparkan  dengan P.  gingivalis selama  48 jam,  ekstrak  ini  masih  bisa  menyebabkan penurunan  nilai  absorbansi  yang  lebih  besar daripada  rimpang.  Sejalan  dengan  hasil penelitian  Djuminar 25 semakin  lama  ekstrak dipaparkan dengan bakteri maka akan semakin sedikit  kandungan  senyawa  yang  bersifat antibakteri pada ekstrak tersebut. 25

## SIMPULAN
Ekstrak  etanol  rimpang  dan  bunga Lempuyang  Wangi  memiliki  Konsentrasi Hambat  Minimum  (KHM)  yang  sama  yaitu pada konsentrasi 50%. Uji time killing terdapat perbedaan  penurunan  nilai  absorbansi  yang signifikan  pada  waktu  48  jam,  hal  ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  bunga Lempuyang  Wangi  memiliki  kemampuan antibakteri  yang  lebih  baik  daripada  ekstrak rimpang Lempuyang Wangi.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Jia L, Han N, Du J, Guo L, Luo Z, Liu Y. Pathogenesis  of  important  virulence factors  of  Porphyromonas  gingivalis  via toll-like  receptors. Frontiers  in  Cellular and Infection Microbiology . 2019;9(3):1– 14.
2. Hajishengallis  G.  Periodontitis:  From microbial immune subversion to systemic inflammation. Nature Reviews
Immunology . 2015;15(1): 30–44.
3. James SL, Abate D, Abate KH, Abay SM, Abbafati C, Abbasi N, et al. A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017. The Lancet . 2018;392:1789– 858.
4. Bernabe  E,  Marcenes  W, Hernandez  CR, Bailey  J,  Abreu  LG,  Alipour  V,  et  al.  A Systematic  Analysis  for  the  Global Burden of Disease 2017 Study. Journal of Dental Research . 2020;99(4):362–73.
5. Zhang  S,  Yu  N,  Arce  RM.  Periodontal inflammation:  Integrating  genes  and dysbiosis.
Periodontology 2000 . 2020;82(1):129–42.
6. Gu Y, Han X. Toll-like receptor signaling and  immune  regulatory  lymphocytes  in periodontal disease. International Journal of Molecular Sciences . 2020;21(9):3-4
7. Kuboniwa  M,  Houser  JR,  Hendrickson EL, Wang Q, Alghamdi SA, Sakanaka A, et  al.  Metabolic  crosstalk  regulates P. gingivalis colonization  and  virulence during  oral  polymicrobial  infection.
Nature Microbiology . 2017;2(11):1493–9.
8. Li  Y,  Guo  H,  Wang  X,  Lu  Y,  Yang  C, Yang  P.  Coinfection  with Fusobacterium nucleatum can  enhance  the  attachment and  invasion  of P.  gingivalis or A.  actinomycetemcomitans to  human gingival epithelial cells. Archives of Oral Biology . 2015;60(9):1387–93.
9. Munasur  SL,  Turawa  EB,  Chikte  UME, Musekiwa  A.  Mechanical  debridement with  antibiotics  in  the  treatment  of chronic  periodontitis:  Effect  on  systemic biomarkers-A systematic review.
International  Journal  of  Environmental
Research and Public Health . 2020;17(15):1–19.
10. Feres M, Retamal-Valdes B, Fermiano D, Faveri M, Figueiredo LC, Mayer M, et al. Microbiome changes in young periodontitis patients treated with adjunctive metronidazole and amoxicillin. J. Periodontology . 2021:92(4):467–78.
11. Hupp  JR,  Ellis  EI,  Tucker  MR. Contemporary  Oral  and  Maxillofacial Surgery.  7th  Ed.  Philadelphia:  Elsevier; 2019. P:699.
12. Heta  S,  Robo  I.  The  Side  Effects  of  the Most  Commonly  Used  Group  of Antibiotics  in  Periodontal  Treatments. Medical Sciences . 2018;6(1):1-6.
13. Eid  Abdelmagyd  HA,  Ram  Shetty  DS, Musa  Musleh  Al-Ahmari  DM.  Herbal medicine  as  adjunct  in  periodontal therapies-  A  review  of  clinical  trials  in past decade. Journal of Oral Biology and Craniofacial Research . 2019;9(3):212–7.
14. Bhatia  M,  Urolagin  SS,  Pentyala  KB, Urolagin SB, Menaka KB, Bhoi S. Novel therapeutic  approach  for  the  treatment  of periodontitis  by  curcumin. Journal  of Clinical  and  Diagnostic  Research . 2014;8(12):65–9.
15. Gadagi JS, Chava VK, Reddy VR. Green tea  extract  as  a  local  drug  therapy  on periodontitis  patients  with  diabetes mellitus:  A  randomized  case-control study. Journal  of  Indian  Society  of Periodontology . 2013;17(2):198–203.
16. Vennila K, Elanchezhiyan S, Ilavarasu S. Efficacy of 10% whole Azadirachta indica (neem)  chip  as  an  adjunct  to  scaling  and root  planning  in  chronic  periodontitis:  A clinical and microbiological study. Indian Journal  of  Dental  Research .  2016 Jan;27(1):15–21.
17. Shah  R,  Gayathri  G,  Mehta  D. Application  of  herbal  products  in management  of  periodontal  diseases:  A mini  review .  International  Journal  of Oral Health Sciences . 2015;5(1):38.
18. Silalahi  M.  Botani  dan  Bioaktivitas Lempuyang  (Zingiber  zerumbet  (L.) Smith.). 2018;2(2):147–60
19. Kim  HR,  Rhee  KJ,  Eom  Y  bin.  Anti- biofilm  and  antimicrobial  effects  of zerumbone  against  Bacteroides  fragilis.
Anaerobe. 2019;57(2):99–106.
20. Jang  HI,  Rhee  KJ,  Eom  Y  bin. Antibacterial and antibiofilm effects of α- humulene  against  Bacteroides  fragilis. Canadian  Journal  of  Microbiology . 2020;66(6):389–99.
21. Chan WK, Tan LTH, Chan KG, Lee LH, Goh  BH.  Nerolidol:  A  sesquiterpene alcohol with multi-faceted pharmacological and biological activities.
Molecules . 2016;21(2):1-40
22. Yoo  HJ,  Jwa  SK.  Efficacy  of  β- caryophyllene  for  periodontal  disease related factors. Archives of Oral Biology . 2019;10:113–8.
23. Carroll  KC,  Butel  J,  Morse  S.  Jawetz
Melnick & Adelbergs Medical
Microbiology.  28th  Edition.  Mc  Graw Hill; 2015.
24. Stevenson  K,  McVey  AF,  Clark  IBN, Swain PS, Pilizota T. General calibration of microbial growth in microplate readers. Scientific Reports . 2016;6(4):1-7.
25. Djuminar  A,  Wahyuni  Y,  Rahayu  IG. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Pisang Muli  (Musa  acuminata  L.)  Terhadap
Pertumbuhan Staphylococcus aureus Metode Makrodilusi. Jurnal Riset Kesehatan . 2019;11(1):306–13.
26. Qomariyah L, Panjaitan FUA. Antibacterial  Effectifity  Of  Flavonoid Fraction Of Ramania Leaf Extract ( Bouea macrophylla Griffith ) Against Porphyromonas  gingivalis . Dentino :
Jurnal Kedokteran Gigi . 2021;6(1):72-8.
27. Hajishengallis  G,  Lamont  RJ.  Breaking bad: Manipulation of the host response by Porphyromonas  gingivalis . European Journal  of  Immunology .  2014;44(2):328– 38.
28. Sutanti  V,  Fuadiyah  D,  Hidayat  LH, Agnizarridlo  T,  Anggiarta  KS.  Analysis of  the  effect  of  extracted  yellow  kepok banana peels ( Musa paradisiaca l. ) on the size  and  morphology  of Enterococcus faecalis . Journal  of  Physics:  Conference Series . 2020;1665(1):1–6.
29. Maharani  ES,  Puspitawati  R,  Gunawan HA.  Antibacterial  effect  of  binahong ( Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis )  leaf infusion against black pigmented bacteria. Journal  of  Physics:  Conference  Series. 2018;1073(3).1-7