Journal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR)
Volume 4 Nomor 2
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v4i2.14865

## Kromatografi Lapis Tipis (KLT): Pendekatan Pola
Kromatogram Untuk Mengkonfirmasi Rhodamin B Pada Perona Pipi
Sania Puspita Sari 1 , Retno Ikayanti 1 , Elok Widayanti 1 *
1 Jurusan Gizi, Program Studi D3 Analisis Farmasi dan Makanan Politeknik Kesehatan Kemenkes Malang Jl. Besar Ijen 77c, Malang 65112
* Penulis Korespondensi. Email: elok.widayanti@gmail.com

## ABSTRAK
Perona pipi merupakan kosmetik dekoratif yang tujuan penggunaannya untuk memperindah wajah  dan  mempertegas  bentuk  tulang  pipi.    Rhodamin  B  merupakan  zat  warna  sintetis berbentuk serbuk kristal yang dilarang penggunaannya dalam  kosmetik menurut Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan RI No. 18 Tahun 2015 tentang Persyaratan Teknis Bahan  Kosmetik,  karena  berbahaya  apabila  kontak  dengan  kulit.  Tujuan  penelitian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  ada  tidaknya  rhodamin  B  pada  perona  pipi  yang diperjualbelikan  di  Pasar  Kandat  Kabupaten  Kediri.  Dalam  penelitian  ini  digunakan  lima sampel yaitu sampel A, sampel B, sampel C, sampel D, dan sampel E. Metode analisis kualitatif pemeriksaan  yang  digunakan  Kromatografi Lapis  Tipis  (KLT).  Pada  metode  ini  digunakan eluen N-butanol:etil asetat:amonia dengan perbandingan (55 : 20 : 25). Hasil KLT jika dilihat secara visual akan berwarna merah muda, selanjutnya jika dilihat dibawah sinar UV 254 nm berfluoresensi kuning.  Dari kelima sampel didapatkan nilai Rf 0,52; 0,56; 0,61; 0,52 dan 0,57, sedangkan Rf dari larutan baku rhodamin rata-rata adalah 2,1. Sehingga dari kelima sampel tersebut dapat diketahui tidak mengandung zat pewarna rhodamin B.
Kata Kunci:
Rhodamin B, Perona Pipi, Kromatografi Lapis Tipis
Diterima: 23-04-2022 Disetujui: 30-05-2022 Online: 10-06-2022

## ABSTRACT
Blusher is a decorative cosmetic whose purpose is to beautify the face and emphasize the shape of the cheekbones. Rhodamine B is a synthetic dye in the form of a crystalline powder which is prohibited from being  used  in  cosmetics  according  to  the  regulation  by  Head  of  The  Indonesian  Food  and  Drug Administration No. 18 of 2015 concerning Technical Requirements for Cosmetic Materials, because they are dangerous if contact with the skin . The purpose of this study was to determine rhodamine B in blusher which is traded in Kandat Market, Kediri Regency. In this study, five samples were used, namely sample A, sample B, sample C, sample D, and sample E. The qualitative analysis method used was Thin Layer Chromatography (TLC). In this method, the eluent N-butanol:ethyl acetate:ammonia is used in the ratio (55: 20: 25). TLC results showed visually in pink color, then when viewed under UV light 254 nm was yellow fluorescence. From the five samples, the Rf value was 0.52; 0.56; 0.61; 0.52 and 0.57, while the average Rf of the standard solution of rhodamine was 2.1. So that from the five samples it can be seen that they do not contain rhodamine B dye.
Copyright © 2022 Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
Rhodamin B, Blush, Thin Layer Chromatography
Received: 2022 -04-23 Accepted: 2022 -05-30 Online: 2022 -06-10

## 1. Pendahuluan
Salah satu jenis produk kosmetik yang digunakan para wanita ialah perona pipi. Di pasaran, pemerah pipi banyak diperjualbelikan karena mempunyai nilai artistik dan memberikan  warna  yang  khas  sehingga  dapat  berfungsi  untuk  memperindah  kulit wajah  agar  lebih  diminati  oleh  konsumen  [1].  Perona  pipi  ( Blush  On ),  ialah  sediaan kosmetik  yang  umumnya  digunakan  oleh  wanita  untuk  memerahkan  pipi  sehingga memberikan penampilan yang lebih muda dan untuk menegaskan bentuk tulang pipi [2].
Berdasarkan Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan RI No. 18 Tahun 2015 tentang Persyaratan Teknis Bahan Kosmetik yang melarang penggunaan zat tertentu yang dinyatakan sebagai bahan berbahaya termasuk rhodamin B yang tidak boleh  dipergunakan  untuk  pemakaian  kosmetik  jenis  lipstik, eye  shadow ,  dan  rouge ( blush on ) [3]. Adanya produsen yang masih menggunakan zat pewarna yang dilarang pada produknya disebabkan oleh pengetahuan yang tidak memadai mengenai bahaya penggunaan bahan kimia tersebut pada kesehatan dan juga karena tingkat kesadaran masyarakat yang masih rendah. Selain itu, pewarna sintetis sering digunakan sebagai pewarna karena harganya relatif lebih murah, warna yang dihasilkan lebih menarik dan zat  warna  sintetis  lebih  stabil  daripada  pewarna  alami.  Ciri-ciri  produk  yang mengandung  pewarna  Rhodamin  B  adalah  warnanya  cerah  mengkilap  dan  lebih mencolok, terkadang warnanya terlihat tidak homogen (rata), adanya gumpalan warna pada produk, pada kemasan produk tidak mencantumkan kode, label, merek, informasi kandungannya, atau keterangan lengkap lainnya [1].
Menurut laporan hasil pemeriksaan BPOM pada tahun 2016, terdapat 39 jenis kosmetik yang masih ditemukan menggunakan rhodamin B. Pewarna tekstil tersebut disalahgunakan pada sediaan kosmetik lipstik dan produk dekoratif lain yaitu pemulas kelopak mata dan perona pipi. Sesuai dengan Peraturan Kepala Badan POM RI No. 18 Tahun 2015 tentang Persyaratan Teknis Bahan Kosmetik, penambahan bahan berbahaya dilarang dalam pembuatan kosmetika karena berisiko menimbulkan efek negatif bagi kesehatan, yaitu bersifat karsinogenik [4]. Rhodamin B dapat menyebabkan kanker pada jaringan ikat (sarkoma) pada studi mencit dan tikus [5] dan berbahaya apabila kontak dengan permukaan kulit .
Beberapa publikasi penelitian juga menemukan penggunaan rhodamin B dalam sediaan perona pipi. Berdasarkan penelitian Afrina (2012), bahwa 2 dari 7 sampel perona pipi tanpa mencantumkan izin edar yang beredar di pasar tradisional Sentral dan Pasar Butung Kota Makassar positif mengandung rhodamin B [6]. Demikian juga dengan hasil penelitian Winasih Rachmawati, Sophi Damayanti, dan Adi Mulyana (2014), bahwa 3 dari 6 sampel perona pipi yang diuji menunjukkan hasil positif mengandung rhodamin B  [1].  Kemudian  pada  tahun  2019  juga masih  ditemukan  3  sampel  perona  pipi  yang positif  mengandung  rhodamin  B  dari  9  sampel  yang  diuji  pada  pasar  Bandarjo Kecamatan  Ungaran,  Kabupaten  Semarang  [7].  Dan  pada  penelitian  yang  dilakukan oleh Tessa pada tahun 2020 menemukan adanya satu merek perona pipi yang sudah memiliki nomor registrasi BPOM ternyata mengandung pewarna rhodamin B [8]. Serta hasil  penelitian  Muhammad  Taupik  et  all  (2021),  bahwa  ditemukan  1  dari  5  sampel perona pipi yang diuji adalah positif mengandung rhodamin B [9].
Berdasarkan uraian diatas, bahwa masih ditemukannya perona pipi baik yang telah teregistrasi BPOM maupun yang belum memiliki nomor registrasi telah terdeteksi menggunakan  pewarna  rhodamin  B,  maka  perlu  dilakukan  identifikasi  terhadap kosmetik  yang  telah  beredar  di  masyarakat  khususnya  perona  pipi.  Salah  satunya adalah  melalui  penelitian  kandungan  Rhodamin  B  pada  kosmetik  perona  pipi  yang beredar  di  pasar  Kandat  Kabupaten  Kediri  dengan metode  Kromatografi Lapis Tipis (KLT).

## 2.  Metode
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Amonia  (merck),  Asam klorida pekat  (merck), aquadest, etil asetat  (merck), N-butanol  (merck), plat silika gel (merck), Metanol  (merck), Rhodamin B. Sampel yang digunakan adalah perona pipi yang  beredar  di  pasar  Kandat  dengan  merk  lokal  yang  terdaftar  BPOM  dan  tidak terdaftar BPOM dengan harga berkisaran antara Rp 10.000  – Rp 30.000 dan memiliki warna merah.

## Pembuatan larutan uji sampel perona pipi
Sampel ditimbang ± 300 mg dimasukkan kedalam gelas beaker, ditambahkan 4 tetes asam klorida 4 N dan 2 ml metanol dan dihomogenkan. Selanjutnya di pindahkan ke labu ukur 10 mL dicukupkan dengan metanol. Selanjutnya disaring menggunakan kertas saring sehingga di dapatkan larutan A

## Pembuatan larutan baku  dan larutan spike
Sejumlah 5 mg Rhodamin B dilarutkan dengan metanol kemudian di add kan sampai dengan 10 mL sehingga didapatkan larutan B. Sejumlah larutan A dan larutan B (1:1)dicampur kemudian dihomogenkan sehingga didapatkan larutan C

## Identifikasi sampel
Pada plat KLT diaktifkan dengan cara dipanaskan di dalam oven pada suhu 105 o C  selama  30  menit.  Larutan  A,  B,  dan  larutan  C,  ditotolkan  pada  plat  dengan menggunakan pipa kapiler 2 cm dari dasar plat. Plat KLT selanjutnya dimasukkan ke dalam chamber yang telah dijenuhkan dengan eluen N-butanol : etil asetat : amonia (55 : 20 : 25), dibiarkan eluen bergerak naik hingga jarak elusi ± 10 cm. Kemudian plat KLT diangkat dan dikeringkan. Diamati noda secara visual dan dibawah sinar UV 254 nm jika noda berflouresensi kuning [10] dengan lampu UV 254 nm menunjukkan adanya Rhodamin  B  dan  jika  secara  visual  berwarna  merah  muda  menunjukkan  adanya rhodamin B. Selanjutnya dihitung nilai Rf nya, hasil dinyatakan positif bila warna bercak antara sampel dengan baku sama atau saling mendekati [11].

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Analisis kandungan Rhodamin B pada perona pipi yang beredar di Pasar Kandat Kabupaten  Kediri  dilakukan  dengan  analisis  kualitatif  menggunakan  Kromatografi Lapis  Tipis.  Analisis  dilakukan  dalam  beberapa  tahapan yang meliputi  pengambilan sampel, pembuatan larutan sampel, pembuatan larutan baku rhodamin B, pembuatan larutan spike (campuran) dan  identifikasi sampel.
Pada pembuatan sampel ditambahkan HCl 4 N yang bertujuan untuk mengatur pH larutan. Selanjutnya ditambahkan metanol yang digunakan sebagai pelarut karena merupakan pelarut organik bersifat polar sehingga dapat melarutkan zat organik yang bersifat  polar.  Penggunaan  larutan  campuran  sebagai  larutan  c  berfungsi  sebagai larutan pembanding (kontrol positif) terhadap larutan sampel yang terindikasi adanya kandungan rhodamin B [6].
Pelat KLT dielusi dalam bejana yang berisi fase gerak, yaitu N-butanol:etil asetat: amonia dengan perbandingan 55:20:25 yang sudah dijenuhkan. Fase gerak ini dipilih berdasarkan fase gerak yang telah banyak digunakan pada penelitian sebelumnya untuk identifikasi  rhodamin  B  [6][12].  Fase  gerak  tersebut  dapat  memisahkan  noda  antara komponen sampel dengan rhodamin B dengan baik [6][12]. Pada dua penelitian tersebut identifikasi  rhodamin  B  dilakukan  secara  kualitatif  dengan  KLT  yang  dilanjutkan dengan pengukuran secara kuantitatif menggunakan spektrofotometri UV-Vis [6][12]. Pada penelitian ini tidak dilakukan uji kuantitatif lanjutan. Hasil kromatografi sampel yang telah dilakukan menunjukkan pemisahan yang baik dan warna fluoresensi kuning yang kuat tampak pada noda (larutan campuran/kontrol positif) yang sejajar dengan noda standar rhodamin B.
Eluen yang digunakan pada penelitian ini bersifat polar, dikarenakan etil asetat dan amonia yang bersifat polar dan n-butanol yang bersifat semipolar. Pada etil asetat, adanya gugus karboksil menyebabkan sifatnya semakin polar namun dengan semakin panjangnya  rantai  karbon  menyebabkan  sifat  polarnya  semakin  lemah  sehingga menyebabkan etil asetat bersifat polar [13]. Lalu pada n-butanol, adanya gugus hidroksil membuat zat ini bersifat semi polar sedangkan pada ammonia, adanya gugus amino akan  membuat  amonia  bersifat  polar.  Penggunaan  eluen  yang  bersifat  polar  ini berkaitan dengan sifat kebanyakan zat warna yang bersifat polar termasuk rhodamin B. Oleh karenanya digunakan eluen yang bersifat polar ini agar dapat mengelusi rhodamin B dengan baik sebab rhodamin B juga bersifat polar [13]. Jika proses elusi telah mencapai batas atas kemudian dilakukan pengamatan bercak dibawah sinar UV 254 nm.
Pada proses pemisahan ini plat yang digunakan sebagai fase diam adalah silika gel  GF  254.  Silika  gel  ini  mampu  berfluoresensi  dengan  baik  pada  sinar  UV  dengan panjang gelombang 254 nm. Salah satu hasil identifikasi yang dilakukan pada penelitian ini  yaitu  sampel  A  dapat dilihat  pada  Gambar 1.  Hasil  kromatografi  pada  sampel  A ( track b) yang dilihat dibawah sinar putih menunjukkan positif berwarna merah muda yang  kemudian  dikonfirmasikan  dengan  penyinaran  UV  254  nm  dan  tampak berfluoresensi  kuning  (Gambar  1).  Warna  noda  yang  tampak  pada track standar rhodamin B pada sinar putih adalah berwarna merah muda dan berfluoresensi kuning pada penyinaran dengan UV 254 [10]. Noda pada track sampel yang memiliki nilai Rf, warna pada penyinaran sinar putih dan warna pada penyinaran sinar UV 254 yang sama dengan noda standar rhodamin B diduga adalah rhodamin B. Setiap pengujian terhadap sampel  dilakukan  pengulangan  tiga  kali,  sebagaimana  dapat  dilihat  pada  sampel  A masing-masing  pengulangan  dilakukan  pada  plat  KLT  yang  berbeda  (Gambar  1). Penelitian  ini  dilakukan  secara  triplo  pada  masing-masing  sampel  tersebut  untuk mendapatkan keyakinan hasil analisis. Jika ketiga pengukuran menghasilkan data yang hampir sama dan ketiga data tersebut dapat dirata-rata sebagai hasil analisis [14].
Gambar 1. Hasil KLT sampel A pada sinar putih (kiri) dan sinar UV 254 nm (kanan) dengan 3 kali pengulangan (a=standar, b=sampel dan c=sampel + standar)
Tabel 1. Hasil uji KLT No Kode Sampel Visual sampel Nilai Rf Rhodamin B ( Track a) Nilai Rf Sampel ( Track b) Hasil Uji 1 A Orange* Ungu* 0,69 0,18 0,38 Negatif 2 B Orange* 0,69 0,19 Negatif 3 C Orange* 0,70 0,20 Negatif 4 D Orange* 0,74 0,18 Negatif 5 E Orange* 0,71 0,19 Negatif
Keterangan (* = tidak berfluoresensi) (** = berfluoresensi)
Berdasarkan  hasil  penelitian  dari  lima  sampel  perona  pipi,  tidak  ditemukan rhodamin B pada sampel A, B, C, D, dan E, hal ini dapat dilihat dari hasil uji secara visual bercak noda yang muncul pada track sampel (track b) yang tidak berwarna merah muda. Kemudian dilanjutkan dengan penyinaran pada lampu UV 254 nm terlihat pada track sampel (track b) juga tidak menunjukkan adanya noda yang berfluorosensi kuning (Tabel  1).  Pada  kelima  sampel  tersebut  tidak  terdapat  satupun  noda  yang  memiliki harga Rf yang sama dengan pembanding. Jadi dapat disimpulkan bahwa kelima sampel yang diuji tidak mengandung rhodamin B.
Nilai Rf rata-rata dari rhodamin B yang diperoleh pada penelitian ini adalah 0,71. Nilai  Rf  tersebut  tidak  jauh  berbeda  dengan  nilai  Rf rhodamin B  dengan  eluen  yang sama dari hasil penelitian Hiola et all (2021) yaitu 0,72 [12][15]. Sampel A dan sampel E adalah perona pipi yang sudah memiliki nomor registrasi BPOM diketahui mempunyai hasil  uji  yang  negatif  terhadap  rhodamin  B.  Begitu  juga  sampel  B,  C  dan  D  pada pengujiannya  didapatkan  hasil  negatif  terhadap  kandungan  rhodamin  B  meskipun ketiganya belum mencantumkan nomor registrasi BPOM.
a   b    c a   b    c a   b    c

## 4.  Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan terhadap lima sampel perona pipi merek  A,  B,  C,  D,  E    yang  diperjualbelikan  di  Pasar  Kandat  Kabupaten  Kediri menggunakan uji kualitatif dengan metode kromatografi lapis tipis , tidak teridentifikasi mengandung  zat  warna  rhodamin  B  yang  dilarang  penggunaannya  oleh  Menteri Kesehatan. Jadi  produk  perona  pipi  tersebut  memenuhi  persyaratan  keamanan  tidak menggunakan  pewarna  rhodamin  B  berdasarkan  Peraturan  Kepala  Badan  Pengawas Obat dan Makanan RI No. 18 Tahun 2015 tentang Persyaratan Teknis Bahan Kosmetik.

## Referensi
[1] Anonim  1990.  Keputusan  Direktur  Jenderal  Pengawasan  Obat  dan  Makanan tentang No.00386/C/SK/II/90 tentang Perubahan Lampiran Peraturan Menteri Kesehatan  No.  239/Menkes/Per/V/85  tentang  Zat  Warna  Tertentu  yang Dinyatakan sebagai Bahan Berbahaya. Jakarta: Departemen Kesehatan.
[2] Rachmawati,  W.  (2014).  Identifikasi  Zat  Warna  Rhodamin  B  pada  Kosmetik Pemerah Pipi dan Eye Shadow dengan Metode KLT dan KCKT. Jurnal Farmasi
Galenika , 1 (02)
[3] Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  (1985).  Formularium  Kosmetik Indonesia. Departemen Kesehatan RI: Jakarta.
[4] BPOM RI, (2015). Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan RI No. 18 Tahun 2015 tentang Persyaratan Teknis Bahan Kosmetik.
[5] Badan POM RI (6 Desember 2016). PENERTIBAN KOSMETIKA IMPOR ILEGAL DAN KOSMETIKA MENGANDUNG BAHAN BERBAHAYA “Berantas Produk Ilegal dan Berbahaya untuk Keadilan dalam Berusaha”. Disitasi dari internet URL https://www.pom.go.id/new/view/more/pers/339/PENERTIBAN- KOSMETIKA-IMPOR-ILEGAL-DAN--KOSMETIKA-MENGANDUNG- BAHAN-BERBAHAYA----Berantas-Produk-Ilegal-dan-Berbahaya-untuk- Keadilan-dalam-Berusaha----.html
[6] Bhooma, V., Nagasathiya, K., Vairamani, M., & Parani, M. (2020). Identification of synthetic dyes magenta III (new fuchsin) and rhodamine B as common adulterants in commercial saffron. Food chemistry , 309 , 125793.
[7] Arfina, A. (2012). Analisis Kandungan Rhodamin B Pada Kosmetik Perona Pipi Yang Beredar  Di  Pasar  Tradisional  Kota  Makassar .  Skripsi,  Universitas  Islam  Negeri Alauddin Makassar.
[8] Arisanti, U. (2019). IDENTIFIKASI DAN PENETAPAN KADAR RHODAMIN B DALAM SEDIAAN KOSMETIK PERONA PIPI DI PASAR BANDARJO
KECAMATAN UNGARAN KABUPATEN SEMARANG (Doctoral dissertation, Universitas Ngudi Waluyo).
[9] Tessa, T. N. (2020). IDENTIFIKASI KANDUNGAN RHODAMIN B PADA PERONA PIPI YANG TERDAFTAR DAN TIDAK TERDAFTAR DALAM BPOM DARI PRODUK YANG BEREDAR DI KECAMATAN LUBUK BEGALUNG
KOTA PADANG (Doctoral dissertation, Universitas Andalas)
[10] Taupik, M., Mustapa, M. A., & Gonibala, S. S. (2021). Analisis Kadar Rhodamin B Pada Blush-On Menggunakan Metode Spektrofotometri UV-Vis. Indonesian
Journal of Pharmaceutical Education , 1 (2), 119-126.
[11] Jiao, Y., Zhou, L., He, H., Yin, J., Gao, Q., Wei, J., ... & Peng, X. (2018). A novel rhodamine B-based “off-on’’fluorescent sensor for selective recognition of copper (II) ions. Talanta , 184 , 143-148.
[12] Wulandari, L. (2011). Kromatografi Lapis Tipis. Taman Kampus Presindo Jember.
[13] Hiola, F., Pakaya, M. S., & Akuba, J. (2021). Analisis Kadar Senyawa Rhodamin B Pada Sediaan Lipstik Menggunakan Metode Spektrofotometri UV-Vis. Journal Syifa Sciences and Clinical Research , 3 (2), 98-105.
[14] Sumarlin, La Ode., “Identifikasi Pewarna Sintetis pada Produk Pangan yang Beredar di Jakarta dan Ciputat”. 2010. Jurnal Valensi, 1 (6) 55-62.
[15] Sella. (2013). Analisis pengawet natrium benzoat dan pewarna rhodamin B pada saos tomat J dari pasar tradisional L kota Blitar. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas Surabaya, 2(2), 1-10.
[16] Purniati, N. K., Ratman, R., & Jura, M. R. (2015). Identifikasi Zat Warna Rhodamin B Pada Lipstik Yang Beredar Di Pasar Kota Palu. Jurnal Akademika Kimia , 4 (3), 155-160.