e-ISSN Number 2655 2967
Available online at https://jurnal.teknologiindustriumi.ac.id/index.php/JCPE/index

## Journal of Chemical Process Engineering
Volume 8 Nomor 1 (2023) SINTA Accreditation Number 28/E/KPT/2019 Published by *Corresponding Author Department of Chemical Engineering asyeni@ft.unsri.ac.id Faculty of Industrial Technology Universitas Muslim Indonesia, Makassar Address Jalan Urip Sumohardjo km. 05 (Kampus 2 UMI) Journal History Makassar- Sulawesi Selatan Paper received : 15 Juli 2022 Email : Received in revised : 23 Mei 2023 jcpe@umi.ac.id Accepted : 04 Juli 2023

## Pembuatan Bioetanol Berbahan Baku Chlorella Pyrenoidosa Dengan Metode Hidrolisis
Asam dan Fermentasi

## (Bioethanol Production from Chlorella pyrenoidosa Through Acid Hydrolysis and Fermentation Method)
Asyeni Miftahul Jannah 1* , Muhammad Yerizam 2 , Muhammad Yori Pratama 3 , Achmad Reza Aditya Amin 1
1 Teknik Kimia Fakultas Teknik Universitas Sriwijaya, Jl. Raya Palembang-Prabumulih KM 32, Inderalaya 30862, Indonesia
2 Teknik Kimia Univeristas Politeknik Negeri Sriwijaya, Jl. Srijaya Negara, Palembang 30137, Indonesia
3 Teknik Kimia Universitas Teknologi Bandung, Ganesha 10, Bandung 40132, Indonesia
Kata Kunci: Mikroalga; C. pyrenoidosa; Hidrolisis Asam; Fermentasi; Bioetanol
Key Words: Microalgae; C. pyrenoidosa; Acid Hydrolysis; Fermentation; Bioethanol

## Inti Sari
Mikroalga, seperti C. pyrenoidosa dapat digunakan sebagai bahan baku untuk produksi bioetanol  generasi  ketiga.  Pemanfaatan  karbohidrat  mikroalga,  seperti C.  pyrenoidosa untuk  produksi  bioetanol  memiliki  tiga  tahap  utama,  yaitu  pretreatment  bahan  baku, hidrolisis, dan fermentasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh hidrolisis asam  dan  waktu  fermentasi  pada  proses  pembuatan  bioetanol  berbahan  baku C. pyrenoidosa . C.  pyrenoidosa dihidrolisis  menggunakan  asam  sulfat  dengan  konsentrasi yang bervariasi (1, 2, 3, 4 dan 5) % pada suhu 80 o C selama 75 menit.  Produksi bioetanol dilakukan  dengan  fermentasi  glukosa  menggunakan Saccharomyces  cerevisiae dengan variasi  waktu  1,  2,  3,  4  dan  5  hari.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  konsentrasi glukosa yang didapatkan mengalami peningkatan seiring naiknya konsentrasi asam sulfat dengan  konsentrasi  glukosa  tertinggi,  yaitu  5,97  gr/L  didapatkan  setelah  hidrolisis menggunakan larutan asam sulfat 5%. Kadar bioetanol tertinggi, yaitu 19,28% diperoleh dari 5 hari fermentasi sampel hidrolisis 5% asam  sulfat.

## Abstract
Microalgae,  such  as  C.  pyrenoidosa  can  be  use  as  one  of  raw  materials  for  third- generation  bioethanol  production.  Utilization  of  C.  pyrenoidosa  for  bioethanol production  through  pretreatment,  hydrolysis,  and  fermentation  processes.  This  study aimed  to  analyze  the  effect  of  acid  hydrolysis  and  fermentation  time  for  bioethanol production  from  C.  pyrenoidosa.  The  microalgae  cells  of  C.  pyrenoidosa  were
hydrolyzed using sulfuric acid with various concentrations (1, 2, 3, 4 and 5) % at 80 o C for  75  minutes.  Production  of  bioethanol  was  carried  out  by  the  glucose  fermentation process by using Saccharomyces cerevisiae with time variations of 1, 2, 3, 4 and 5 days. The result showed that the glucose concentration increased by increasing concentrations of sulfuric acid with the highest glucose concentration of 5.97 gr/L for 5% sulfuric acid hydrolysis.    The  highest  bioethanol  content,  which  was  19.28%  was  obtained  from  the sample treated with 5% sulfuric acid hydrolysis and fermented for 5 days.

## PENDAHULUAN
Kebutuhan suatu bahan bakar fosil yang sangat tinggi tidak  diiringi  dengan  ketersediaan  sumber  daya  yang masih  ada  sampai  saat  ini,  dan  apabila  digunakan dalam  jangka  panjang  maka  akan  habis  dalam beberapa  tahun  mendatang.  Kebutuhan  energi  yang selama  ini  kita  gunakan  untuk  berbagai  aktivitas bukan  berasal  dari  sumber  energi  terbarukan  tetapi berasal  dari  sumber  energi  alam  dengan  keberadaan yang  semakin  sedikit  [1].  Bioetanol  dapat  dijadikan bahan  bakar  pengganti  bensin  serta  sebagai  bahan bakar  untuk  memasak  dalam  rumah  tangga,  dan terbuat  dari  berbagai  jenis  tanaman  dan  limbah. Produksi  dan  penggunaan  bahan  bakar  bioetanol  di Indonesia  saat  ini  masih  terbatas,  hal  ini  karenakan masyarakat masih bergantung pada bahan bakar fosil. Pada awalnya, bioetanol dapat dihasilkan memanfaatkan  kandungan  karbohidrat  yang  berasal dari  sumber  seperti  singkong  [2]  ataupun  jagung  [3], [4]. Seiring dengan pembaharuan teknologi, bioetanol dapat  dihasilkan  dari  limbah  yang  mengandung lignoselulosa seperti ampas tebu [5], jerami padi [6]– [9]  dan  Jerami  gandum  ,  serta  bahan  baku  [10]  yang mengandung  karbohidrat  seperti  seperti  makroalga [11]  dan  mikroalga  [12],  [13].  Bioetanol  yang dihasilkan  dari  proses  tersebut  didapat  dari  hasil fermentasi glukosa dengan bantuan ragi.
Bioetanol secara umum dibuat dengan beberapa proses  tahapan,  yaitu  pretreatment  bahan  baku, delignifikasi,  hidrolisis,  fermentasi,  dan  purifikasi. Jenis  proses  yang  dibutuhkan  dalam  pembuatan bioetanol  dipengaruhi  oleh  generasi  pembuatan bioetanol.  Generasi  pertama  pembuatan  bioetanol merupakan  metode  pembuatan  bioetanol  dengan menggunakan  bahan  pangan.  Bioetanol  generasi kedua memanfaatkan limbah biomassa sebagai bahan baku dengan mengolah kandungan lignoselulosa yang terdapat  pada  limbah.  Sedangkan  produk  bioetanol terbaru  memanfaatkan  kandungan  karbohidrat  yang ada  pada  alga  baik  mikroalga  maupun  makroalga yang dikenal dengan bioetanol generasi ketiga.
Keunggulan  dari  bioetanol  generasi  ketiga  adalah cepatnya  pertumbuhan  dari  jenis  alga  dan  cara bertahan  yang  baik  di  berbagai  lingkungan,  sehingga dapat  menggantikan  bahan  baku  bioetanol  yang terkendala  dengan  alasan  pangan  dan  terbatasnya ketersediaan  limbah  pertanian  [14].  Pada  penelitian ini  memanfaatkan  mikroalga C.  pyrenoidosa sebagai bahan baku pada proses pembuatan bioetanol  dengan metode  hidrolisis  menggunakan  asam  sulfat  dan kemudian difermentasikan menggunakan Saccharomyces  cerevisiae. Penggunaan  asam  sulfat pada  proses  hidrolisis C.  pyrenoidosa dengan konsentrasi  tertentu  dan  lamanya  waktu  ferementasi merupakan  keterbaruan  dari  penelitian  ini.  Hasil dari proses  hidrolisis  berupa  glukosa  akan  sangat dipengaruhi  oleh  konsentrasi  asam  sulfat  yang digunakan pada proses hidrolisis. Kadar glukosa yang dihasilkan  selanjutnya  akan  difermentasikan  dengan variasi  waktu  tertentu.  Hal  ini  dimaksudkan  untuk mendapatkan  waktu  optimum  konversi  glukosa menjadi  bioetanol  dengan  bantuan Saccharomyces cerevisiae.

## METODE PENELITIAN
Pada  penelitian  ini  menggunakan  bahan  baku berupa mikroalga C. pyrenoidosa yang dikembangbiakan  dengan  cara  kulturasi.  Selanjutnya dilakukan  proses  hidrolisis  dan  fermentasi  untuk mendapatkan produk bioetanol yang diinginkan.
Kultur C. pyrenoidosa
Mikroalga C.  pyrenoidosa diperbanyak  dengan mengkultur  500  mL  bibit  mikroalga  di  tambahkan dengan  500  mL  air  tawar  ke  dalam  media  dengan diberi  oksigen  dan  lampu  supaya  membantu mikroalga  untuk  dapat  melakukan  fotosintesis. Selanjutnya,  mikroalga  memasuki  fase  eksponensial pada hari ke 5 kultivasi dan siap untuk dipanen.
Persiapan bahan baku
Proses penamanenan C. pyrenoidosa dilakukan pada  hari  ke  5  dengan  menggunakan  plankton  net. Selanjutnya C.  pyrenoidosa dikeringkan  terlebih dahulu menggunakan sinar matahari untuk
menghilangkan  air  yang  terkandung  selama  3  hari hingga  beratnya  konstan.  Kemudian  mikroalga digerus  menggunakan  mortar  menjadi  membentuk bubuk.

## Hidrolisis
Pada  proses  hidrolisis  digunakan  bahan  baku mikroalga  kering  sebanyak  20  g  yang  selanjutnya diletakkan  dalam  erlenmeyer  berukuran  250  mL. Selanjutnya  dituangkan  sebanyak  200  mL  larutan H 2 SO 4 dengan konsentrasi  sebesar1, 2, 3, 4, dan 5%. Sampel  dihidrolisis  menggunakan hotplate pada temperatur  80 o C  dengan  waktu  hidrolisis  selama  75 menit. Setelah waktu hidrolisis selesai, larutan sampel didinginkan hingga mencapai suhu kamar. Setelah itu, dilakukan  penyaringan  untuk  memisahkan  filtrat  dan residu  hasil  hidrolisis  menggunakan  kertas  saring whatman  93  dengan  ukutan  pori  10  mikron.  Sampel filtrat  kemudian  dianalisa  untuk  mengetahui  kadar glukosa dengan metode Luffschoorl . Analisa Luffschoorl dilakukan dengan menimbang  seksama  sebanyak  5  g  sampel  yang diletakkan  ke  dalam  erlenmyer  berukuran  500  mL dan  dicampurkan  dengan  200  mL  larutan  HCl  3%. Selanjutnya  sampel  ini  kemudian  dipanaskan  selama 3  jam.  Sampel  selanjutnya  dibiarkan  pada  suhu ruangan  dan  ditambahan  larutan  NaOH  30%  dan CH 3 COOH  3%  agar  pH  menjadi  asam.  Kemudian sampel  disaring.  Sebanyak  10  mL  sampel  disaringan dan  dimasukkan  ke  erlenmeyer  berukuran  500  mL, lalu  ditambahkan  25  mL  larutan Luffschoorl dan  15 mL  aquadest.  Larutan  dipanaskan  hingga  mendidih selama 3 menit. Didihkan terus selama tepat 10 menit (dihitung  dari  saat  mulai  mendidih)  kemudian dinginkan  di  dalam  wadah  berisi  es.  Setelah  dingin, tambahkan 15 mL larutan KI 20%, dan 25 mL H 2 SO 4 25%  secara  perlahan.  Titar  secepatnya  dengan menggunakan  larutan  tio  0,1  N  dan  larutan  kanji  0,5 %  sebagai  indikator.  Kemudian  volume  larutan  tio yang  digunakan  dicatat  dan  digunakan  pada  blanko Luffschoorl untuk menghitung glukosa yang terkandung. Kandungan glukosa dihitung menggunakan rumus (1).
𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑔𝑙𝑢𝑘𝑜𝑠𝑎 = 𝑊 1 𝑥 𝑓 𝑝 𝑊 𝑥 100% … (1)
Keterangan : W1 = bobot cuplikan (mg) Fp = faktor pengenceran W = glukosa yang terkandung untuk ml tio yang dipergunakan (mg)

## Fermentasi
Hidrolisat  berupa  larutan  diambil  kemudian pH-nya  larutan  diatur  hingga  mencapai  pH  4,8 dengan  cara  menambahkan  larutan  NaOH  100-150 mL.  Kemudian  larutan  diaduk  menggunakan  stirrer hingga  homogen.  Filtrat  ditambahkan  dengan  ragi ( Saccharomyces  cerevisiae )  sebanyak  1%  (w/v)  dari volume  larutan  sampel.  Selanjutnya  sampel  diaduk menggunakan rotary  shaker dengan  kecepatan putaran  220  rpm  selama  1  menit  bertujuan  agar larutan homogen. Pada proses fermentasi, erlenmeyer ditutup  dengan  menggunakan  gabus,  kemudian bagian  corong  erlenmeyer  disambungkan  ke  wadah pendingin dengan menggunakan selang dengan tujuan untuk  mencegah  kontaminasi  udara  pada  proses fermentasi.  Sampel  difermentasi  dengan  variasi  1,  2, 3, 4, dan 5 hari di dalam inkubator dengan suhu 30 o C.
Gambar 1. Proses Pembuatan Bioetanol Berbahan Baku C. pyrenoidosa

## Purifikasi
Hasil  fermentasi  kemudian  dipurifikasi  dengan menggunakan  proses  distilasi.  Bioetanol  yang  telah dipurifikasi  disimpan  dalam  keadaan  tertutup  rapat, dan  dimasukkan  kedalam  lemari  pendingin  dengan suhu < 5℃ untuk menghindari terjadinya penguapan. Analisa kadar bioetanol dilakukan dengan menggunakan metode pengukuran densitas.
Pengukuran  densitas  setiap  sampel  menggunakan piknometer  5  mL.  Piknometer  5  mL  disiapkan  lalu ukur  berat  kosong,  lalu  di  isi  penuh  piknometer dengan  bioetanol  dan  ukur  beratnya  dan  densitas  zat padat diukur dengan rumus:
𝐷𝑒𝑛𝑠𝑖𝑡𝑎𝑠 =
𝑚 𝑝𝑖𝑘𝑛𝑜𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑖𝑠𝑖 𝑧𝑎𝑡−𝑚 𝑝𝑖𝑘𝑛𝑜𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑘𝑜𝑠𝑜𝑛𝑔 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 … (2)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh Konsentrasi H 2 SO 4 pada Proses

## Hidrolisis
Pada penelitian ini, proses hidrolisis melibatkan asam  sulfat  dengan  variasi  konsentrasi  1-5%  pada temperatur  80 o C  dan  waktu  75  menit.  Gambar  2. menunjukkan  hubungan  antara  konsentrasi  larutan asam  sulfat  yang  digunakan  pada  proses  hidrolisis dengan  kadar  glukosa  yang  dihasilkan.  Hidrolisis menggunakan  larutan  5%  asam  sulfat  menunjukkan kadar glukosa tertinggi, yaitu 26,52%. Hasil hidrolisis dengan  kadar  glukosa  terendah  dihasilkan  pada penggunaan  larutan  1%  H 2 SO 4 ,  yaitu  kadar  glukosa 13,57%.  Perubahan  yang  terjadi  terhadap  hasil hidrolisis C.  pyrenoidosa menggunakan  konsentrasi yang  berbeda,  terlihat  jelas  bahwa  konsentrasi glukosa  yang  dihasilkan  akan  meningkat  jika konsentrasi  larutan  H 2 SO 4 yang  digunakan  semakin banyak.  Pengaruh  konsentrasi  larutan  H 2 SO 4 yang digunakan memengaruhi kadar glukosa yang dihasilkan  pada  proses  fermentasi.  Peningkatan konsentrasi  larutan  asam  dan  penggunaan  asam  kuat akan meningkatkan hasil kadar glukosa setelah proses hidrolisis.
Peningkatan kadar glukosa yang dihasilkan dari hidrolisis  selaras  dengan  hasil  studi  yang  dilakukan [15]  yang  menggunakan  bahan  baku  mikroalga dengan  genus  yang  sama.  Berdasarkan  hasil  yang didapatkan,  hidrolisis C.  pyrenoidosa menggunakan 5%  larutan  H 2 SO 4 menghasilkan  konsentrasi  glukosa
sebesar  5,972  g/L.  Hidrolisis  dengan  mikroalga  juga pernah  diteliti  sebelumnya  dengan  menggunakan enzim  selulase,  menghasilkan  konsentrasi  glukosa tertinggi sebesar 5,35 g/L [16]. Hasil ini menunjukkan  bahwa  penggunaan  larutan  asam  sulfat dalam  proses  hidrolisis  memberikan  hasil  yang  lebih baik  dibandingkan  penggunaan  enzim  selulase berdasarkan konsentrasi glukosa yang dihasilkan.
Gambar 2. Pengaruh Larutan H 2 SO 4 Terhadap Kadar Glukosa Hasil Hidrolisis
Pada  penelitian  ini, asam  kuat  mampu mengkonversikan karbohidrat menjadi glukosa secara efektif  pada  suhu  80 o C  selama  75  menit.  Semakin besar konsentrasi H 2 SO 4 yang digunakan, maka kadar karbohidrat  yang  terkonversi  menjadi  glukosa semakin  besar.  Asam  kuat  dapat  bereaksi  memecah karbohidrat  menjadi  glukosa.  Konsentrasi  asam  yang rendah  dengan  suhu  tinggi  lebih  diinginkan  daripada konsentrasi  asam  yang  tinggi  karena  tidak  akan menyebabkan degradasi gula selama proses hidrolisis berlangsung  [17].  Selain  itu,  mengurangi  potensi terbentuknya  menjadi  senyawa  lain  yang  tidak menguntungkan  yang  difermentasi.  Demikian  juga, konsentrasi  asam  yang  rendah  lebih  memadai  dari pada konsentrasi  asam  yang tinggi  karena jumlah zat penetral  yang  lebih  sedikit  diperlukan  dan  akan  ada lebih  sedikit  kecenderungan  untuk  menimbulkan korosi  pada  peralatan  eksperimen.  Asam  yang ditambahkan  dalam  proses  hidrolisis  bertindak sebagai  katalis  untuk  mempercepat  reaksi  terminasi rantai  polisakarida  terhadap  glukosa  karena  proses hidrolisis  alami  menggunakan  air  untuk  waktu  yang sangat  lama.  Ini  secara  tidak  langsung  dapat
0 5 10 15 20 25 30 1 2 3 4 5 K ad ar Gl u k os a (% ) Konsentrasi H 2 SO 4 (%)
meningkatkan  konversi  bioetanol  yang  dihasilkan [18].

## Pengaruh  Waktu  Fermentasi  Terhadap  Kadar Bioetanol
Proses  selanjutnya  dari  penelitian  ini  adalah fermentasi  glukosa  untuk  menghasilkan  bioetanol. Proses  fermentasi  ini  bertujuan  untuk  mengubah glukosa  hasil  hidrolisis  menjadi  bioetanol  dengan bantuan Saccharomyces  cerevisiae .  Proses  diawali oleh  pembuatan  starter  dengan  cara  penambahan NaOH pada sampel hasil hidrolis dengan tujuan untuk mengkondisikan  pH  sampel  agar  bakteri  dapat  hidup pada kondisi  tersebut. Selain itu, penambahan NaOH ini  bertujuan  untuk  menaikkan  pH  dari  larutan hidrolisis,  Mulanya  larutan  hasil  hidrolisis  dengan menggunakan  asam  sulfat  yang  memiliki  pH  1 kemudian  dilakukan  penambahan  NaOH  sebanyak 100-150  mL  sampai  mencapai  pH  4-5.  Proses pengaturan  pH  ini  bertujuan  untuk  mengoptimalkan proses  aktivasi  karena Saccharomyces  cerevisiae tidak bertahan pada larutan yang terlalu asam. Setelah mencapai  pH  4-5,  diambil  200  ml  larutan  glukosa yang sudah sesuai pH nya dan dilakukan penambahan nutrien  yang  berupa  NPK  1%  (w/v)  dari  volume sampel.
Selain  sebagai  sumber  nitrogen,  NPK  juga merupakan sumber fosfor dan kalium bagi Saccharomyces  cerevisiae .  Unsur  N  berguna  untuk proses  terbentuknya  unsur  penting  seperti  asam nukleat  dan  asam-asam  amino.  Sedangkan  unsur  K merupakan  ko-faktor  enzim,  dan  unsur  P  berguna untuk  sintesis,  adenosin  trifosfat  (ATP)  dan  senyawa yang  mengandung  fosfor.    Penelitian  ini  dilakukan dengan penambahan nutrisi  NPK sebanyak 1% (w/v) untuk proses fermentasi. Setelah dilakukan penambahan nutrisi kemudian dilakukan penambahan Saccharomyces  cerevisiae ,  campuran  kemudian diaduk dengan rotary shaker pada 220 rpm  selama 1 menit  dengan  tujuan  agar  larutan  menjadi  homogen. Hasil yang didapat  dari  fermentasi  dapat  dilihat pada Gambar 3.
Pada Gambar 3. menunjukkan kadar bioetanol  yang  diproduksi  oleh  selama  proses fermentasi  berlangsung.  Produksi  bioetanol  tertinggi sebesar  19,28%  diperoleh  pada  perlakuan  hidrolisis asam  sulfat  5%  dan  waktu  fermentasi  5  hari, sedangkan  produksi  bioetanol  terendah  terdapat  pada perlakuan  hidrolisis  asam  sulfat  1%  dan  waktu
fermentasi  1  hari,  yaitu  2,13%.  Terlihat  dari  data, produksi  bioetanol  terus  meningkat  dalam  kurun  5 hari.  Besarnya  kadar  bioetanol  yang  dihasilkan  pada sampel  perlakuan  hidrolisis  H 2 SO 4 5%  disebabkan oleh  banyaknya  glukosa  yang  dihasilkan  pada  proses hidrolisis sebelumnya. Sehingga, keseluruhan glukosa yang  dihasilkan  pada  hidrolisis  berpeluang  dapat dikonversikan menjadi bioetanol dengan jumlah yang lebih  banyak  dibanding  perlakuan  menggunakan konsentrasi H 2 SO 4 yang lebih rendah.
Gambar 3. Pengaruh Waktu Fermentasi dan Kadar H 2 SO 4 terhadap Kadar Bioetanol
Lama  waktu  fermentasi  sangat  mempengaruhi jumlah  kadar  bioetanol  yang  dihasilkan.  Dalam jangka  waktu  5  hari,  glukosa  dapat  terfermentasi menjadi  bioetanol  lebih  banyak  dibandingkan  proses fermentasi  pada  rentang  waktu  kurang  dari  5  hari. Kondisi  ini  terjadi  karena  waktu  fermentasi  yang kurang  dari  5  hari  pada  sampel,  masih  terdapat kandungan  glukosa  yang  belum  terfermentasi  oleh ragi Saccharomyces  cerevisiae. Selain  itu,  ragi Saccharomyces  cerevisiae yang  digunakan  hingga waktu  fermentasi  5  hari  masih  berada  pada  kondisi optimum  untuk  mengkonversi  glukosa  menjadi bioetanol.  Hal  ini  juga  dipengaruhi  oleh  nutrisi  yang diberikan  pada  larutan  sampel.  Nutrisi  yang  ada berfungsi  agar  ragi  dapat  tetap  bertahan  hidup  dalam rentang  waktu  5  hari.  Penelitian  dengan  melibatkan Sacharomyces  cerevisiae pada  proses  fermentasi sangat  umum digunakan, namun hasil bioetanol  yang didapat  berbeda-beda  tergantung  dengan  bahan  baku
yang digunakan.
Pada penelitian dengan menggunakan bahan baku yang sama dan melibatkan Sacharomyces  cerevisiae pada  proses  fermentasinya yang dilakukan oleh Yerizam, fermentasi 5 hari hanya mampu  menghasilkan  konsentrasi  bioetanol  sebesar 6,19%  [19].  Konsentrasi  bioetanol  yang  dihasilkan pada  penelitian  ini  memiliki  kadar  yang  lebih  besar dibandingkan penelitian sebelumnya.

## KESIMPULAN
Kandungan  karbohidrat  yang  terdapat  dalam C. pyrenoidosa sebagai  bahan baku dapat  dikonversikan menjadi  glukosa  menggunakan  asam  sulfat  dengan hasil  maksimum  5%  konsentrasi  asam  sulfat  yang digunakan  menghasilkan  5,972  g/L  glukosa.  Serta lamanya  waktu  fermentasi  glukosa  menghasilkan kadar  bioetanol  lebih  banyak.  Kadar  bioetanol tertinggi,  yaitu  19,28%  setelah  fermentasi  5  hari sampel hidrolisis 5% H 2 SO 4 .

## DAFTAR PUSTAKA
[1] A.  Bin  Arif,  A et  al. ,  “Optimasi  Waktu Fermentasi  Produksi  Bioetanol  Dari  Dedak Sorgun  Manis  (Sorghum  Bicolor  L)  Melalui Proses  Enzimatis,” J.  Penelit.  Pascapanen Pertan. ,  vol.  14,  no.  2,  p.  11,  2017,  doi: 10.21082/jpasca.v14n2.2017.67-78.
[2] A. Bušić et al. , “Bioethanol Production From Renewable Raw Materials And Its Separation And Purification: A Review,” Food  Technol. Biotechnol. ,  vol.  56,  no.  3,  pp.  289–311, 2018, doi: 10.17113/ftb.56.03.18.5546.
[3] H.  S.  Tira et  al .,  “Karakteristik  fisik  dan kimia  bioetanol  dari  jagung  (Zea  mays  L),” Din.  Tek.  Mesin ,  vol.  8,  no.  2,  pp.  77–82, 2018, doi: 10.29303/dtm.v8i2.231.
[4] K.  Tolulope  Eunice,  “Enzymatic  and  Dilute Acid  Hydrolyses  of  Maize  Stalk  Substrate  in Bio-ethanol  Production,” J.  Energy,  Environ. Chem.  Eng. ,  vol.  6,  no.  1,  pp.  24–30,  2021, doi: 10.11648/j.jeece.20210601.14.
[5] E.  Restiawaty et  al. ,  “Bioethanol  Production from  Sugarcane  Bagasse  Using  Neurospora Intermedia  in  an  Airlift  Bioreactor,” Int.  J. Renew.  Energy  Dev. ,  vol.  9,  no.  2,  pp.  247– 253, 2020, doi: 10.14710/ijred.9.2.247-253.
[6] M.  R.  Swain et  al .,  “Bioethanol  Production From Rice- and Wheat Straw: An Overview,”
Bioethanol  Prod.  from  Food  Crop. ,  no.
January, pp. 213–231, 2019, doi: 10.1016/b978-0-12-813766-6.00011-4.
[7] W.  Xing et  al .,  “Novel  Dihydrogen-bonding Deep Eutectic Solvents:  Pretreatment  of Rice Straw  for  Butanol  Fermentation  Featuring Enzyme Recycling and High Solvent Yield,” Chem.  Eng.  J. ,  vol.  333,  no.  June  2017,  pp. 712–720, 2018, doi: 10.1016/j.cej.2017.09.176.
[8] M.  K.  Hassan et  al .,  “Energy  and Environmental  Impact  Assessment  of  Indian Rice  Straw  For  The  Production  of  Second- Generation  Bioethanol,” Sustain.  Energy Technol. Assessments , vol. 47, no. August, p. 101546, 2021, doi: 10.1016/j.seta.2021.101546.
[9] K. Gupta and T. S. Chundawat, “Zinc Oxide Nanoparticles  Synthesized  Using  Fusarium
Oxysporum to Enhance Bioethanol Production  From  Rice-Straw,” Biomass  and Bioenergy ,  vol.  143,  no.  July,  p.  105840, 2020, doi: 10.1016/j.biombioe.2020.105840.
[10] B. Tsegaye et al ., “Optimization  of Microwave  and  NaOH  Pretreatments  of Wheat  Straw  for  Enhancing  Biofuel  Yield,” Energy  Convers.  Manag. ,  vol.  186,  pp.  82– 92, 2019, doi: 10.1016/j.enconman.2019.02.049.
[11] I.  S.  Tan et  al .,  “Advances  of  Macroalgae Biomass  For  The  Third  Generation  Of Bioethanol  Production,” Chinese  J.  Chem. Eng. ,  vol.  28,  no.  2,  pp.  502–517,  2020,  doi: 10.1016/j.cjche.2019.05.012.
[12] M. E. S. Smachetti et al ., Microalgal Biomass as  an  Alternative  Source  of  Sugars  for  the Production of Bioethanol , no. August. 2018.
[13] A.  Raheem et  al .,  “A  review  on  Sustainable Microalgae  Based  Biofuel  and  Bioenergy Production: Recent Developments,” J. Clean. Prod. ,  vol.  181,  pp.  42–59,  2018,  doi: 10.1016/j.jclepro.2018.01.125.
[14] M.  Jeguirim  and  L.  Limousy,  “Strategies  for Bioenergy  Production  from  Agriculture  and Agrifood Processing Residues,” Biofuels , vol.
9, no. 5, pp. 541–543, 2018, doi: 10.1080/17597269.2018.1506277.
[15] A.  Z.  Yaser, Engineering  for  Campus Sustainability . Springer International Publishing, 2020.
[16] W. O. Putri et al ., “Pengaruh pH Pada Proses
Hidrolisis  Mikro  Alga  Chlorella  Vulgaris Menjadi Glukosa Menggunakan Enzim
Selulase,” JOM  FTEKNIK ,  vol.  2,  no.  1,  pp. 1–5, 2015.
[17] L.  M.  Chng et  al .,  “Synergistic  Effect  of Pretreatment  and  Fermentation  Process  on
Carbohydrate-Rich  Scenedesmus  dimorphus for Bioethanol  Production,” Energy  Convers.
Manag. , 2016,
doi: 10.1016/j.enconman.2016.10.026.
[18] F.  Putri, et  al .,  “Starch  Producing  in Microalga  Biomass  as  a  Raw  Material  for Bioethanol,” in MATEC Web of Conferences , 2018, vol. 13018, pp. 1–4, doi: https://doi.org/10.1051/matecconf/201819713 018.
[19] M.  Yerizam et  al .,  “Bioethanol  Production from  Chlorella  Pyrenoidosa  by  Using Enzymatic  Hydrolysis  and  Fermentation Method,” J. Ecol. Eng. , vol. 24, no. 1, pp. 34– 40, 2023, doi: 10.12911/22998993/156000.