## UJI FITOKIMIA DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN
EKSTRAK ETANOL UMBI PAKU ATAI MERAH ( Angiopteris ferox COPEL)
Reksi Sundu, Sapri, dan Henny Nurhasnawati Akademi Farmasi Samarinda Email : reksi.sundu@gmail.com

## Abstrak
Umbi paku atai merah (angiopteris ferox Copel) biasa dimanfaatkan sebagai obat tradisional  oleh  suku  dayak.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui metabolit  sekunder  dan  aktivitas  antioksidan  pada  umbi  paku  atai  merah.  Pada penelitian  ini  telah  dilakukan  uji  fitokimia  dan  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak yang ditentukan dengan metode DPPH ( 1,1-Difenil-2-pikrilhidrazil) menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis.  Hasil  uji  fitokimia  menunjukan  bahwa ekstrak  etanol  umbi  paku  atai  merah  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  tanin, saponin  dan  steroid.  Sementara  itu  aktivitas  antioksidan  ekstrak  tersebut tergolong kuat dengan nilai IC 50 sebesar 193,20 ppm .
Kata  Kunci  :  Antioksidan,  fitokimia,  paku  atai  merah  (A ngiopteris  ferox Copel).

## Abstract
Paku atai merah tubers (angiopteris ferox Copel) commonly used as tradisional medicines by dayak tribes. The aims of this research were to know the secondary metabolites and antioxidant activity in  the ethanolic extract of paku atai merah tubers. This research had been conducted on phytochemical test and antioxidant activity  of  extract  was  determined  by  the  DPPH  method  (1,1-Difenil-2- pikrilhidrazil) using spectrophotometer UV-Vis. The result of phytochemical tests showed that the ethanolic extract of paku atai merah tubers contained alkaloids, flavonoids,  tannins,  saponins  and  steroids.  While  it  had  a  strong  antioxidant activity with the IC 50 values of 193,20 ppm .
Key  word : Antioxidant,  phytochemical,  Paku  atai  merah  tubers  (Angiopteris ferox Copel) .

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  didefinisikan sebagai  atom  atau  molekul  yang memiliki  elektron  tak  berpasangan. Spesies oksigen reaktif (ROS), seperti radikal  superoksida  (•  O2-),  radikal hidroksil  (•  OH),  hidrogen  peroksida (H 2 O 2 )  dapat  dihasilkan  selama proses  metabolisme  normal  atau karena  faktor  dan  agen  eksogen.
Berbagai  penyakit  seperti  kanker, penyakit kardiovaskular, osteoporosis, dan penyakit degeneratif  dapat  terjadi  karena
pembentukan  ROS,  yang  dapat menyebabkan  kerusakan  oksidatif pada  sel  manusia.  Beberapa  senyawa yang  dikenal  sebagai  antioksidan memiliki kemampuan untuk menunda atau  menghambat  inisiasi  atau propagasi  reaksi  rantai  oksidatif  dan dengan  demikian  mencegah  atau memperbaiki  kerusakan  oksidatif yang  dilakukan  pada  sel  tubuh melalui oksigen (Velioglu, 1998).
Tumbuhan  paku  merupakan salah  satu  tumbuhan  yang  hampir dapat  ditemukan  diseluruh  wilayah Indonesia  (Arini  dan  Kinho,  2012) dan  lebih  dari  10.000  jenis  paku terdapat  di  Indonesia  (Suraida,  et  al,
2013).  Kalimantan  adalah  pulau terbesar  di  Indonesia  yang  memiliki tingkat  keanekaragaman  hayati  yang sangat  melimpah  memiliki  potensi sebagai  tumbuhan  yang  berkhasiat obat,  salah  satu  tanaman  yang dimanfaatkan sebagai obat tradisional oleh  suku  dayak  adalah  tumbuhan paku  atai  merah( Angiopteris  ferox Copel) yang digunakan sebagai obat.
Secara  empiris  masyarakat
Kutai  Barat  di  Kecamatan  Linggang
Bigung Kalimantan Timur menggunakan  paku  atai  merah sebagai  obat  yang  berpotensi  sebagai anti  racun.  Bagian  paku  atai  merah yang digunakan oleh suku dayak yang berada  di  daerah  tersebut  adalah bagian daun, batang, getah dan umbi.
Menurut  Mismawati  et  al (2015),  menunjukan  bahwa  ekstrak metanol daun paku gajah ( Angiopteris evecta )  positif  mengandung  alkaloid, flavonoid,  saponin,  steroid  dan karbohidrat.  Aktivitas  antiokasidan sampel  ini  termasuk  kategori  kuat dengan  nilai  IC 50 80  ppm.  Hasil  ini berkorelasi dengan kandungan metabolit  sekunder  yang  terkandung didalamnya.
Mengingat  besarnya  potensi yang  dimiliki  tumbuhan  paku  atai merah untuk dikembangakan menjadi obat  tradisional  dan  kurangnya penelitian tumbuhan ini maka peneliti tertarik  untuk  melakukan  penelitian tentang  uji  aktivitas  antioksidan ekstrak etanol umbi paku atai merah.

## BAHAN DAN METODE
Bahan
Simplisia  umbi  paku  atai merah,  aquades,  kloralhidrat,  asam klorida  2N,  asam  asetat  anhidrat, asam  sulfat  pekat,  besi  (III)  klorida
1%,  etanol  70%,  pereaksi  meyer,
pereaksi bouchardat, pereksi
dragendrof,  DPPH  (1,1-diphenyl- picrylhydrazyl),  vitamin  C,  DMSO
( Dimethyl Sulfoxide ).

## METODOLOGI
Determinasi Tanaman
Determinasi  tanaman  paku
atai  dilakukan  di  Laboratorium Anatomi  dan  Sistematika  Tumbuhan Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam (MIPA) Universitas Mulawarman Samarinda. Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Umbi Paku Atai
Simplisia  yang  telah  kering dibuat  serbuk  lalu  di  maserasi.
Simplisia  serbuk  sebanyak  300  gram dimasukan  ke  dalam  wadah  tertutup rapat,  dituang  dan  direndam  3  L penayari  etanol  70%.  Didiamkan selama 24 jam sambil sesekali diaduk selama  6  jam  pertama,  selanjutnya dibiarkan  selama18  jam.  Simplisia yang tercampur dalam etanol dimaserator selama 2 jam, didiamkan 30  menit  kemudian  disaring.Filtrat diambil,  ampas  dimaserasi  dengan  1 L  penyari  etanol  70%.  Hasil remaserasi dimaserator kembali selama  2  jam  kemudian  disaring. Filtrat hasil maserasi diuapkan di atas penangas air sampai diperoleh ekstrak kental.  Ekstrak  kental  ditimbang  dan dihitung  hasil  rendemennya  yakni perbandingan  antara  ekstrak  yang diperoleh terhadap simplisia awal.

## Uji Fitokimia Ekstrak
Analisis  fitokimia  dilakukan dengan  uji  perubahan  warna  yang mengacu  pada  Harborne  (1987)  dan Kokate  (2001)        untuk  menguji adanya senyawa  aktif yang meliputi: .  a.      Pengujian  Alkaloid  (Kokate, 2001)
Sebanyak  5  ml  ekstrak ditambahkan 2 ml HCl, kemudian  dimasukkan  1  ml
larutan Dragendorff. Perubahan warna larutan menjadi  jingga  atau  merah mengindikasikan  bahwa  ekstrak mengandung alkaloid.
b.      Pengujian  Flavonoid    (Kokate, 2001)
Sebanyak  1  ml  ekstrak tumbuhan  diberikan  beberapa tetes  natrium  hidroksida  encer (NaOH 1%).   Munculnya warna kuning  yang  jelas  pada  larutan ekstrak    dan  menjadi  tidak berwarna  setelah  penambahan asam  encer  (HCl  1  %)
mengindikasikan adanya flavonoid. c.      Pengujian  Saponin  (Harborne, 1987)
Pengujian  dilakukan  dengan memasukkan sebanyak 10 ml air panas  ke  dalam  tabung  reaksi yang berisi 1 ml sampel uji yang telah  dilarutkan  dalam  aseton. Selanjutnya larutan didinginkan      dan      dikocok selama      10      detik. Terbentuknya buih mantap selama  kurang  lebih  10  menit dengan ketinggian 1–10 cm dan tidak  hilang bila  ditambahkan  1 tetes  HCl  2N  menandakan
bahwa  ekstrak  yang  diuji mengandung saponin.
d.   Pengujian Tanin (Kokate, 2001) Pengujian  dilakukan  dengan
memasukkan  10  ml  larutan ekstrak  ke  dalam  tabung  reaksi dan  ditambahkan  larutan  timbal asetat (CH3COO)2Pb 1%. Tanin  dinyatakan  positif apabila pada  reaksi  terbentuk  endapan kuning. e.   Pengujian Triterpenoid dan Steroid (Harborne, 1987) Identifikasi dilakukan dengan  menggunakan  campuran asam  asetat  anhidrid  dan  asam sulfat  pekat  yang  biasa  dikenal dengan  pereaksi  Liebermann- Burchard.  Pada  pengujian  ini 10  tetes  asam  asetat  anhidrid dan  2  tetes  asam  sulfat  pekat ditambahkan  secara  berurutan ke  dalam  1  ml  sample  uji  yang telah  dilarutkan  dalam  aseton. Selanjutnya  sampel  uji  dikocok dan  dibiarkan  beberapa  menit. Reaksi  yang  terjadi  diikuti dengan perubahan warna,
apabila terlihat warna merah dan ungu  maka  uji  dinyatakan positif  untuk  triterpenoid  dan apabila  terlihat  warna  hijau  dan
biru maka uji dinyatakan positif adanya steroid.
Uji Aktivitas Antioksidan
Metode  uji  antioksidan  yang digunakan  pada penelitian  ini
berdasarkan  metode  yang  pernah dilakukan  oleh  Arung  et  al  (2006). Uji  dilakukan  dengan  menggunakan UV/VIS spektrofotometer pada temperatur  ruangan  (25ºC)  dan dengan  aktivitas  antioksidan  dapat ditentukan  melalui  dekolorisasi  dari larutan DPPH ( 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl ) pada panjang gelombang 514 nm.
Sampel  uji  ditimbang  sebanyak 7,5  mg  dilarutkan  dalam  DMSO sebanyak 500 µ l. Sampel dimasukkan ke  dalam cuvette sebanyak  33 µ L, 467 µ L  etanol  dan  ditambahkan  500 µ L  larutan  DPPH  .  Pencampuran dicukupkan  apabila  volume  sampel telah  sampai  1000 µ l  (1  ml).  Sampel di  inkubasi  selama  20  menit  dalam ruangan yang minim akan cahaya dan dengan  suhu  ruangan.  Pengujian dilakukan  dengan  konsentrasi  yang berbeda-beda, yaitu 150, 125, 100, 75 dan 50 ppm.  Digunakan  vitamin  C sebagai  kontrol  positif  dan sebagai pembanding.
Aktivitas antioksidan ditentukan berdasarkan  persentase  reduksi  dari penyerapan  DPPH  menggunakan persamaan, yaitu sebagai berikut: Persentase reduksi dari
penyerapan DPPH:
A DPPH( t ) – A sample( t )  x 100% ` A DPPH(t) Dimana :
A DPPH( t ) adalah penyerapan dari DPPH dalam waktu t A sample( t ) adalah penyerapan dari sampel dalam waktu t
Analisis Data
Metode analisis data yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode deskriptif yaitu berupa data kualitatif dan kuantitatif. Data kuantitatif berupa grafik dan table.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Uji Fitokimia
Salah  satu  langkah  penting  dalam upaya  mengungkap  potensi  sumber daya  tumbuhan  obat  adalah  melalui uji fiotkimia. Uji ini dapat memberikan informasi jenis golongan metabolit  sekunder  seperti  alkaloid, flavonoid,  fenolik,  steroid,  saponin dan triterpenoid. Tabel 1 menunjukan bahwa  umbi  paku  atai  positif menunjukan positif alkaloid,
flavonoid, tanin, saponin dan steroid.
Tabel 1. Hasil uji fitokimia No Uji Hasil 1 Alkaloid + 2 Flavonoid + 3 Tanin + 4 Saponin + 5 Steroid + Keterangan : + = Mengandung senyawa kimia
- =  Tidak  mengandung  senyawa kimia Uji Antioksidan Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak dilakukan dengan menggunakan metode DPPH. Interaksi  antioksidan  dengan  DPPH
baik  secara  transfer  electron  atau radikal  hidrogen  pada  DPPH  akan menetralkan radikal bebas dari DPPH merupakan prinsip dari metode DPPH (Gurav et al, 2007). Perubahan warna yang  terjadi  pada  larutan  DPPH dalam etanol yang semula ungu pekat menjadi  kuning  pucat  menunjukan adanya  aktivitas  antioksidan  (Sundu et al, 2015). Metode ini dipilih karena ujinya  sederhana,  mudah  cepat  dan
serta  hanya  memerlukan  sedikit sampel (Hernani, 2005).
Aktivitas  antioksidan  dari
ekstrak  umbi  paku  atai  merah dinyatakan dalam persen (%) penghambatannya  terhadap  radikal DPPH. Untuk mendapatkan persentase  penghambatan  dilihat  dari perbedaan  serapan  antara  absorben sampel yang diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 514 nm. Kemudian  dari  grafik  hubungan antara  konsentrasi  sampel  dengan persen penghambatan DPPH diperoleh regresi linier yang
digunakan  untuk  mencari  nilai  IC 50 . Perolehan  nilai  IC 50 digunakan  untuk menentukan besarnya aktivitas antioksidan  dimana  IC 50 adalah konsentrasi  larutan  sampel  yang dibutuhkan  untuk  menghambat  50% radikal  bebas  DPPH  (Andayani, 2008).  Berdasarkan  Amrun,  2007, Semakin kecil nilai IC 50 menunjukkan aktivitas antioksidan pada bahan yang diuji  semakin  besar.  Hasil  pengujian ekstrak  etanol  dan  vitamin  C  dapat dilihat pada gambar 1 dan 2.
Gambar 1. Grafik hubungan antara konsentrasi ekstrak umbi paku atai merah dengan %
daya antioksidan Berdasarkan  hasil  analisis regresi linier hubungan antara konsentrasi  ekstrak  etanol  dengan persen  peredaman  absorban  DPPH diperoleh  persamaan  regresi  linier  : y  =  0,337x-15,11  seperti  disajikan dalam Gambar 1. Sedangkan persamaan regresi linier untuk kontrol positif (Vitamin C) adalah y= 3,629x
+ 3.,030 (Gambar 2).
Gambar 2. Grafik hubungan antara konsentrasi kontrol positif (vitamin C) dengan % daya antioksidan
Persamaan  regresi  linier
yang  diperoleh  dapat  ditentukan  nilai IC 50 yakni  konsentrasi  ekstrak  etanol
yang mampu meredam 50% absorben
DPPH. Dari hasil perhitungan diperoleh    nilai  IC 50 sebesar  193,20
y = 0,337x - 15,119 R² = 0,99289 0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 35,00 40,00 0 50 100 150 200 Da ya A nt io ks id an (% ) Konsentrasi  sampel (ppm ) y = 3,6295x + 3,0309 R² = 0,99701 0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 0,0 5,0 10,0 15,0 Da ya An tio ks id an (% ) Konsentrasi Vit C (ppm)
ppm  sedangkan  nilai  IC 50 Vitamin  C yaitu 12,94 ppm. Hal ini menunjukan bahwa  ekstrak  etanol  umbi  paku  atai merah  memiliki  aktivitas  antioksidan yang  kuat  karena mempunyai  nilai IC 50 kurang  dari  200  ppm  (Kuntorini et  al,  2011).  Data  hasil  uji  aktivitas antioksidan  tersebut  didukung  oleh kandungan  metabolit  sekunder  yang terdapat  pada  ekstrak  etanol  umbi paku atai merah.
Dengan  demikian  ekstrak etanol  umbi  paku  atai  merah ( angiopteris  ferox COPEL)  memiliki
potensi  untuk  dikembangkan  sebagai bahan  antioksidan  alami.  Namun
penelitian lanjutan seperti uji farmakologis  dan  klinis  sangat diperlukan untuk menjamin keamanan  sebagai  bahan  antioksidan alami. KESIMPULAN Dari  hasil  penelitian  yang
telah  dilakukan  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  etanol  umbi  paku  atai merah ( angiopteris  ferox COPEL) mengandung senyawa metabolit sekunder golongan alkaloid, flavonoid,  tanin,  saponin  dan  steroid. Aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol
tersebut  tergolong  kuat  dengan  nilai IC 50 = 193,20 ppm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan    terima  kasih  disampaikan kepada  LPPM  Akademi  Farmasi Samarinda  yang  telah  mendanai penilitian  ini  lewat  hibah  dosen internal dosen Akfarsam.

## DAFTAR PUSTAKA
Amrun,  M.U  dan  Umayah  ,  E,  2007,
Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Air  dan  Ekstrak Metanol  Beberapa  Variasi Buah Kenitu ( Chryophyllumcainito L)  dari
Daerah  Jember,  Berk.  Panel.
Hayati . 13:45-50 Andayan,i  R.,  Lisawati,  Y.,  dan
Maimunah,  2008,  Penentuan Aktivitas  Antioksidan,  Kadar Fenol Total dan Likopen pada Buah Tomat ( Solanum lycupersicum L), Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi , 13(1)
Sundu,  R.,  Mingvanis,  W.,  Arung, E.T., Kuspradini, H., Khownium, K., 2015, Antioxidant and Antimicrobial Activities of Crude Methanolic Extract of Polyscias  guilfoylei Leaves, Pure Applied Chemistry International Conference (PACCON), Thailand: 161-165 Arini,  D.I.D  dan  Kinho,  J.,  2012,
Keragaman  Jenis  Tumbuhan
Paku  ( Pterophyta )  Di  Cagar Alam Gunung Ambang Sulawesi Utara, Balai Penelitian Kehutanan Manado, Info BPK Manado, 2 (1)
Arung, E.T., Shimizu, K., Kondo, R.,
2006,  Inhibitory  effect  of isoprenoid-substitutetd flavonoids    isolated    from
Artocarpus    heterophyllus    on melanin  biosynthesis, Planta
Medica, 72: 847-50.
Gurav,  S.,  Deshkar,  N.,  Duragkar, V.G.N.,  Patil,  A.,  2007,  Free Radical  Scavenging  Activity of  Polygala  chinensis  Linn, Pharmacologyline , 2:245-253 Harbone, J.B., 1987, Metode Fitokimia  Penuntun  Cara Modern Menganalisis Tumbuhan .  Penerbit  ITB: Bandung. Hernani, Raharjo, M., 2005, Tanaman Berkhasiat Antioksidan. Penebar Swadaya: Jakarta Kokate, C.K., 2001, Pharmacognosy . Ed  ke-16.  India  :  Nirali Prakashan.
Kuntorini,  E.M.,  Astuti,  M.D., Milina,  N.,  2011,  Struktur Anatomi  dan  Kerapatan  Sel Sekresi serta Aktivitas Antiokasidan  Ekstrak  Etanol dari  Rimpang  Temulawak ( Curcuma Xanthorrizha Roxb) Asal Kecamatan Pengaron  Kabupaten  Banjar Kalimantan  Selatan, Jurnal
Bioscientiae , 8(1):28-37
Mismawati,  A.,  Srisuwannaket,  C., Mingvanish,  W.,  Kuspradini, H.,  Kusumua,  I.W,    dan Niamnot, N., 2015, Phytochemical  Screening  and Bioactivity  of Angiopteris evecta Leaves  From  East Kalimantan. Pure  Applied Chemistry International Conference (PACCON) , Thailand: 151-154 Suraida,  Susanti,  T  dan  Amriyanto, R.,  2013,  Keanekaragaman Tumbuhan Paku ( Pteridophyta ) Di Hutan Kenali  Kota  Jambi. Prosiding SEMIRATA, Indonesia:  387- 392 Velioglu,  Y.S.,  Mazza,  G.,  Gao,  L and  Oomah,  B.D,  1998, J.
Agric.  Food  Chem .  46:  4113- 4117