## Abstract
Free  radical  is  Carbon  Tetra  Chloride,  which  is  organic  toxic  solution  through  liver,  heart,  and kidneys. Spirulina is green-blue algae which photosynthetic microalgae, spiral-shape, multicelullar and chemic-riched and able to correct body’s damage by free radicals, for instance Beta Carotene, amino acids, Gamma Linolenic Acid (GLA). The aims of this research is to discover whether Spirulina can  correct  kidneys  function  from  CCl 4 -induction  on  white  rats  (Rattus  norvegicus)  with  weight
 300 gram. Decreasing kidneys fungtion was evaluated by increasing blood ureum and creatinine levels. ANOVA analysis performed that CCl 4 effect blood ureum and creatinin (p<0,05). Spirulina at dose 3,471 ml/300gr body weight was the most effective through correction kidneys function.

## Abstrak
Radikal  bebas  Carbon  Tetra  Chloride  merupakan  pelarut  organik  yang  bersifat  toksik  terhadap hati, jantung, dan ginjal. Spirulina adalah alga hijau-biru yang merupakan mikroalga fotosintetik, berbentuk  spiral,  multiseluler  dan  kaya  senyawa  kimia  yang  dapat  memperbaiki  berbagai kerusakan  di  dalam  tubuh  yang  disebabkan  karena  radikal  bebas,  seperti  Beta  Carotene,  Asam Amino,  Gamma  Linolenic  Acid  (GLA).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  dari Spirulina  yang  dapat  memperbaiki  kerusakan  fungsi  ginjal  akibat  induksi  CCl 4 pada  tikus  putih dilihat dari kadar ureum dan kreatinin darah. Penurunan fungsi ginjal terjadi pada hari pertama setelah  aklimatisasi.  Penurunan  fungsi  ginjal  dapat  dilihat  dari  kenaikan  kadar  ureum  dan kreatinin  darah.  Hasil  uji  ANOVA  pemberian  CCl 4 berpengaruh  terhadap  kenaikan  ureum  dan kreatinin  darah  (p<0,05).  Spirulina  3,471  ml  /300grBB  merupakan  dosis  paling  efektif  dalam memperbaiki fungsi ginjal.

## PENGARUH PEMBERIAN SPIRULINA PERORAL YANG DIBERI CCL 4

## TERHADAP KADAR UREUM DAN KREATININ DARAH TIKUS PUTIH
1| Swandito Wicaksono Email Korespondensi : swandito.dr@gmail.com Departemen Fisiologi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Bengkulu, Indonesia
Kata Kunci: Radikal Bebas; Carbon Tetra Chloride (CCl 4 ); Ureum; Kreatinin; Spirulina

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  adalah  molekul  yang  sangat  reaktif,  karena  memiliki  elektron yang  tidak  berpasangan  dalam  orbital  luarnya,  sehingga  dapat  bereaksi  dengan molekul sel tubuh dengan cara mengikat elektron dari molekul sel tersebut(1). Salah satu  contoh  radikal  bebas  adalah  CCl 4 (Carbon  Tetra  Chloride)  yang  banyak ditemukan pada cat, tinta, tiner, bahan perekat, kosmetik, dan lain-lain. CCl 4 masuk ke dalam tubuh melalui jalur peroral, inhalasi, dan dermis(2). CCl 4 yang masuk ke dalam tubuh manusia dapat menimbulkan berbagai macam efek, diantaranya mual, muntah, gagal  ginjal  akut,  gagal  ginjal  kronik,  gangguan  hati,  dan  kerusakan  sistem  saraf pusat(3).
Gangguan  pada  hati  dapat  terjadi  setelah  1-2  hari  terpapar  CCl 4 ,  sedangkan gangguan  pada  ginjal  terjadi  setelah  7-10  hari  terpapar  CCl 4 (4).  CCl 4 menginduksi terjadinya  peroksidasi  lipid  yang  dipercaya  menjadi  penyebab  utama  kerusakan
87 Jurnal Kesehatan Vol (12) No (2) Tahun (2019)
membran ginjal yang mengawali terjadinya keadaan patologis ginjal. Gagal ginjal akut karena paparan CCl 4 dapat kembali normal dalam 6 bulan setelah paparan(5).
Gagal  ginjal  akut  yang  disebabkan  karena  CCl 4 dapat  dideteksi  melalui pemeriksaan  laboratorium  ureum  dan  kreatinin  darah  untuk  mengevaluasi  fungsi ginjal(5).  Penentuan  kadar  ureum  bertujuan  untuk  mengukur  jumlah  urea,  suatu produk  buangan  dari  metabolisme  protein  di  dalam  darah.  Urea  dikeluarkan  dari aliran darah melalui ginjal, suatu uji yang menentukan jumlah urea yang ada dalam darah dapat digunakan untuk menguji fungsi ginjal. Kreatinin diekskresi dalam urine melalui  proses  filtrasi  dalam  glomerulus.  Meskipun  sejumlah  kecil  diekskresi,  uji kreatinin merupakan pemeriksaan yang dapat dipercaya untuk memperkirakan laju filtrasi glomerulus dalam klinik (6).
Penelitian yang dilakukan Henrikson (2000), menyebutkan bahwa kerusakan ginjal yang bersifat reversibel, seperti infeksi ginjal, sumbatan batu ginjal, penurunan fungsi  ginjal  dapat  diperbaiki  dengan  menggunakan  Spirulina(7).  Spirulina  adalah alga  hijau-biru  yang  merupakan  mikroalga  fotosintetik,  berbentuk  spiral, multiseluler(8). Spirulina banyak mengandung berbagai jenis senyawa kimia, antara lain, vitamin, mineral, fikosianin, asam lemak esensial, asam lemak non esensial, asam amino  esensial,  asam  amino  non  esensial,  enzim-enzim,  Beta  Carotene,  Gamma Linolenic Acid (GLA), dan nutrisi-nutrisi penting seperti Sulfopids, dan SOD(8). Beta Carotene  yang  terdapat  di  dalam  Spirulina  merupakan  satu  dari  substansi  yang sangat  efektif  untuk  menonaktifkan  molekul-molekul  dasar  yang  telah menghancurkan sel-sel (radikal bebas).  Beta Carotene merupakan antioksidan yang kuat  Antioksidan  mampu  bergabung  dengan  molekul-molekul  radikal  tersebut  dan mengurangi kerugian dari molekul-molekul tersebut(9).
Dengan dasar kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam Spirulina yang dipercaya  dapat  memperbaiki  penurunan  fungsi  ginjal,  maka  perlu  dilakukan penelitian mengenai manfaat dan khasiat Spirulina terhadap penurunan fungsi ginjal ditinjau  dari  kadar  ureum  dan  kreatinin  darah.  Apabila  terbukti  Spirulina  dapat memperbaiki  penurunan  fungsi  ginjal,  diharapkan  Spirulina  dapat  dijadikan  obat alternatif  dalam  memperbaiki  penurunan  fungsi  ginjal.  Efek-efek  CCl 4 yang  dapat merugikan kesehatan juga dapat dibuktikan dalam penelitian ini, terutama pengaruh CCl 4 dalam  mengakibatkan  penurunan  fungsi  ginjal  ditinjau  dari  kadar  ureum  dan kreatinin darah. Dalam penelitian ini digunakkan CCl 4 sebagai penginduksi kerusakan ginjal  tikus  putih.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  CCl 4 ,  mengetahui pengaruh Spirulina dalam memperbaiki  fungsi ginjal ditinjau dari kadar ureum dan kreatinin  darah  tikus  putih  yang  diinduksi  CCl 4 peroral  dan  mengetahui  dosis Spirulina yang paling efektif dalam menaikkan kadar ureum dan kreatinin tikus putih yang sebelumnya diinduksi CCl 4 peroral.

## METODOLOGI PENELITIAN
88 Jurnal Kesehatan Vol (12) No (2) Tahun (2019)
Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimental  menggunakan  24  tikus putih  (Rattus  Norvegicus)  jantan,  dengan  berat  badan  rata-rata  300  gram,  yang dibagi  menjadi  4  kelompok.  Perhitungan  jumlah  sampel  menggunakan  rumus Federer, didapatkan hasil setiap kelompok terdiri dari 6 ekor tikus putih yang dipilih secara  acak.  Penelitian  ini  dilakukan  selama  1  bulan.  Sebelum  diberi  perlakuan, dilakukan aklimatisasi hewan coba selama 1 minggu. Pengukuran kadar ureum dan kreatinin  darah  dilakukan  dengan  cara  mengambil  darah  melalui  pembuluh  darah ekor tikus 3 minggu setelah pemberian Spirulina cair peroral. Analisis data dengan uji ANOVA dilanjutkan dengan Uji Post Hoc, selanjutnya dilakukan Uji Homogeneous
Tabel 1. Pembagian kelompok dan perlakuan hewan coba
Kelompok Dosis CCl 4 (ml/300grBB) Dosis Spirulina (ml/300grBB) Kontrol - - Perlakuan 1 (P1) 0,81 1,735 Perlakuan 2 (P2) 0,81 3,471 Perlakuan 3 (P3) 0,81 6,942

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 2. Rerata hasil pengukuran kadar ureum dan kreatinin darah tikus putih
1 hari setelah diberi CCl 4 peroral Kelompok Kadar Ureum (mg/dl) Kadar Kreatinin (mg/dl) Kontrol 38,8 0,7 Perlakuan 1 (P1) 70,5* 2,85* Perlakuan 2 (P2) 67,2* 3,05* Perlakuan 3 (P3) 63,2* 2,4*
Keterangan:  *p<0.05,  membandingkan  kelompok  kontrol  dengan  kelompok perlakuan 1,2, dan 3
Hasil  pengukuran  kadar  ureum  dan  kreatinin  darah  tikus  putih  setelah pemberian  CCl 4 peroral  0,81  ml/300grBB  tikus  putih  menunjukkan  adanya
89 Jurnal Kesehatan Vol (12) No (2) Tahun (2019)
peningkatan kadar ureum dan kreatinin darah pada kelompok perlakuan 1, 2, dan 3 dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa CCl 4 bersifat toksik terhadap ginjal, yang  ditandai  dengan  kenaikan  kadar  ureum  dan  kreatinin  darah,  hasil  ini  sesuai dengan  pernyataan  Damansjah  (1995)  yang  menyatakan  bahwa  CCl 4 merupakan pelarut organik yang bersifat toksik terhadap hati, jantung, dan ginjal.
Karbon tetraklorida (CCl 4 ) merupakan xenobiotik yang lazim digunakan untuk menginduksi  peroksidasi  lipid  dan  keracunan.  Dalam  retikulum  endoplasma retikulum hati CCl 4 dimetabolisme oleh sitokrom P450 2E1 (CYP2E1) menjadi radikal bebas  triklorometil  (CCl 3 ).  CCl 3 dengan  oksigen  akan  membentuk  radikal triklorometilperoxi  (CCl 3 O 2- )  yang  dapat  menyerang  lipid  membran  retikulum endoplasma  dengan  kecepatan  melebihi  CCl 3 ,  yang  kemudian  menyebabkan peroksidasi lipid dan akhirnya menyebabkan kematian sel(10).
Asam lemak penyusun membran sel, terutama asam lemak rantai Panjang tak jenuh  (PUFA  /  Poly  unsaturated  fatty  acid)  sangat  rentan  terhadap  radikal  bebas. Jumlah  PUFA  dalam  fosfolipid  membran  retikulum  endoplasma  akan  berkurang sebanding dengan jumlah CCl 4 yang diinduksikan. Pemberian CCl 4 dalam dosis tinggi dapat  merusak  retikulum  endoplasma,  mengakumulasi  lipid,  mengurangi  sintesis protein,  mengacaukan  proses  oksidasi,  menurunkan  berat  badan,  menyebabkan kerusakan pada hati dan ginjal(10).
Tabel 3. Rerata hasil pengukuran kadar ureum dan kreatinin darah tikus putih setelah pemberian Spirulina cair selama 3 minggu dengan dosis berbeda Kelompok Kadar Ureum (mg/dl) Kadar Kreatinin (mg/dl) Perlakuan 1 (P1) 42,5 0,88 Perlakuan 2 (P2) 35,2 0,82 Perlakuan 3 (P3) 45 0,88
Hasil  pengukuran  kadar  ureum  dan  kreatinin  darah  tikus  putih  setelah pemberian  Spirulina  cair  peroral  dengan  dosis  berbeda  setiap  kelompok  perlakuan selama  3  minggu  (kelompok  perlakuan  1,  2,  dan  3),  didapatkan  adanya  penurunan kadar ureum dan kreatinin darah dibandingkan dengan sebelum pemberian Spirulina cair  peroral.  Penurunan  kadar  ureum  dan  kreatinin  darah  tikus  putih  paling  tinggi dapat  terlihat  pada  kelompok  perlakuan  2,  diberi  Spirulina  cair  peroral  selama  3
90 Jurnal Kesehatan Vol (12) No (2) Tahun (2019)
minggu  dengan  dosis  3,471  ml/300grBB  tikus  putih.  Tetapi  secara  statistik,  tidak didapatkan dosis Spirulina cair peroral yang paling efektif dalam menurunkan kadar ureum dan kreatinin darah tikus putih (p>0.05)
Penurunan  kadar  ureum  dan  kreatinin  darah  tikus  putih  setelah  pemberian Spirulina cair peroral, diakibatkan karena Spirulina mengandung Beta carotene, yang dapat  mengikat  CCl 3 .  Pengikatan  CCl 3 oleh  Beta  carotene  menyebabkan  reaksi peroksidasi  lipid  tidak  dapat  berlangsung,  sehingga  memberikan  waktu  kepada  sel ginjal untuk memperbaiki diri(11).
Beta  carotene  merupakan  salah  satu  senyawa  karotenoid,  yang  merupakan kelompok  pigmen  dan  antioksidan  alami  yang  mempunyai  fungsi  dalam  menunda, memperlambat  dan  mencegah  proses  oksidasi  lipid  yang  disebabkan  oleh  radikal bebas,  dengan  cara  menunda  atau  mencegah  terjadinya  reaksi  autooksidasi  radikal bebas dalam oksidasi lipid(11).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa Spirulina  cair  yang  diberikan  secara  peroral  selama  3  minggu  dapat  memperbaiki kerusakan ginjal akibat pemberian CCl 4 dilihat dari nilai ureum dan kreatinin darah. Tetapi  dosis  Spirulina  cair  peroral  yang  paling  efektif  dalam  menurunkan  kadar ureum dan kreatinin darah setelah pemberian CCl 4 belum dapat ditentukan melalui penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Wijaya A. Radikal bebas dan parameter status antioksidan. Bandung: Lab Klinik Prodia; 1996. 1–6 p.
2.   Tang D, Hu S, Dai F, Yi R, Gordin ML, Chen S, et al. Self-Templated Synthesis of Mesoporous  Carbon  from  Carbon  Tetrachloride  Precursor  for  Supercapacitor Electrodes. ACS Applied Materials and Interfaces. 2016;8(11):6779–83.
3.   Suzek  H,  Celik  I,  Dogan  A,  Yildirim  S.  Protective  effect  and  antioxidant  role  of sweetgum  (Liquidambar  orientalis)  oil  against  carbon  tetrachloride-induced hepatotoxicity  and  oxidative  stress  in  rats.  Pharmaceutical  Biology. 2016;54(3):451–7.
4.   Scholten D, Trebicka J, Liedtke C, Weiskirchen R. The carbon tetrachloride model in mice. Laboratory Animals. 2015;49:4–11.
5.   Yilmaz-Ozden  T,  Can  A,  Karatug  A,  Pala-Kara  Z,  Okyar  A,  Bolkent  S.  Carbon tetrachloride-induced  kidney  damage  and  protective  effect  of  Amaranthus lividus L. in rats. Toxicology and Industrial Health. 2014;32(6):1143–52.
91 Jurnal Kesehatan Vol (12) No (2) Tahun (2019)
6.   Rajendran N, SR SK, K TM, P J. Biochemical evaluation of creatinine and urea in patients  with  renal  failure  undergoing  hemodialysis.  Journal  of  Clinical Pathology and Laboratory Medicine. 2017;1(2):1–5.
7.   Henrikson R, Yoro C, Ruppert R. Fifth Printing, Revised Edition Online. 1989.
8.   La  RDE,  Ciencias  FDE.  Sp/Rulina  (Arthrospira)  an  Edible  Microorganism  a Review. Universitas Scientiarum. 2003;8(1):7–24.
9.   Kirschweng  B,  Tátraaljai  D,  Földes  E,  Pukánszky  B.  Natural  antioxidants  as stabilizers for polymers. Polymer Degradation and Stability. 2017;145:25–40.
10.   Chowdhury  MRH,  Sagor  MAT,  Tabassum  N,  Potol  MA,  Hossain  H,  Alam  MA. Supplementation  of  Citrus  maxima  Peel  Powder  Prevented  Oxidative  Stress, Fibrosis,  and  Hepatic  Damage  in  Carbon  Tetrachloride  (CCl<inf>4</inf>) Treated  Rats.  Evidence-based  Complementary  and  Alternative  Medicine. 2015;2015.
11.   Pisoschi AM, Pop A. The role of antioxidants in the chemistry of oxidative stress: A review. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;97:55–74.