Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## PERKEMBANGAN OVARIUM IKAN WADER PARI (Rasbora lateristriata
Bleeker, 1854): PENDEKATAN HISTOLOGI
THE DEVELOPMENT OF OVARIAN WADER PARI FISH (Rasbora lateristriata Bleeker, 1854): HISTOLOCAL APPROACH
Zulfadhli 1 Nastiti Wijayanti 2 Bambang Retnoaji 2
1 Program Studi Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu kelautan, Universitas Teuku Umar, Aceh Barat
2 Program Studi Biologi, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta Korespondesi : bambang.retnoaji@ugm.ac.id

## Abstract
This  study  was  to  determinte  of  development  ovarian  wader  pari  fish  ( Rasbora lateristriata ) as part of the process of reproduction, which is the basic for information to R.  lateristriata management.  This  study  was  done  in  october  2014  -  april  2015  at Histology and Embryology Animal Laboratory of Gadjah Mada University. The object of the research was larva R. lateristriata with average weight of 0.02 grams. They were kept during 3 months. The result data of histology were analized and observed discussed descriptively.  The  results  of  observation  showed  that  ovarian R.  lateristriata indicated asincronous development patterns. The development of ovarian in the 1 st month was at the  chromatin  nucleolar  phase,  while  perinucleolar  phase  appeared  in  the  2 nd and  3 rd month.
Keywords: Rasbora lateristriata, develompment, ovarian, histology

## I. Pendahuluan
Ikan  wader  pari  ( Rasbora  lateristriata )  merupakan  ikan  air  tawar,  yang  hidup  di alam  liar  seperti  sungai  atau  sawah.  Penyebaran  ikan  wader  di  indonesia  sangat  luas, antara  lain  Sumatra,  Jawa,  Kalimatan,  Bali,  Nusa  Tenggara,  dan  Sulawesi  (Budiharjo, 2002).  Ikan wader bisa dijadikan alternatif bahan pangan baru yang yang  penting bagi masyarakat sebagai ikan konsumsi dengan cita rasa daging yang lezat, sehingga dinilai sebagai  ikan  “liar”  yang  mempunyai  potensi  ekonomi  tinggi.  Tingginya  permintaan pasar menjadikan eksploitasi ikan wader sangat tinggi, sehingga dikhawatirkan ikan ini terancam keberadaannya di alam. Salah satu cara untuk mengatasi  hal tersebut dengan usaha  domestikasi  dan  budidaya  intesif  ikan  wader,  dengan  harapan  kedepannya  para penjual  ikan  tidak  lagi  menangkap  di  habitat  alami  yang  menyebabkan  ikan  wader terancam  keberadaannya.  Di  sisi  lain,  informasi  penting  dan  mendasar  biologi  ikan seperti  perkembangan  gonad  yang  merupakan  bagian  dari  proses  reproduksi  belum tersedia.
Ovarium  merupakan  organ  reproduksi  pada  ikan  betina.  Proses  perkembangan gonad  betina  pada  ikan  teleostei  dipengaruhi  oleh  faktor  internal  dan  eksternal.  Faktor internal  seperti  kinerja  hormon  dan  faktor  eksternal  dapat  berupa  kondisi  lingkungan dan  asupan  makanan  (Norris,  2007).  Pengamatan  tahap  perkembangan  gonad  dapat dilakukan  secara  mikroskopis  (histologi).  Keunggulan  pengamatan  secara  histologi dapat memberikan informasi yang akurat dan mendetail di tingkat jaringan. Kajian yang berhubungan  dengan  perkembangan  ovarium  ikan  yang  pengamatannya  dilakukan
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
secara histologi sudah  banyak dilakukan oleh peneliti, seperti pada Zebrafish (Clelland et  al.,  2009); Cyprinus  carpio (Shabanipour  &  Hossayni,  2010); Melichthys  niger (Branco et al., 2013).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perkembangan ovarium ikan wader pari sebagai  bagian  dari  proses  reproduksi,  yang  merupakan  informasi  dasar  dalam pengelolaan  ikan  wader  pari.  Dengan  harapan  memberikan  informasi  berupa  pola/tipe perkembangan ovarium dan fase perkembangannya.

## II. Metode Penelitian

## 2.1. Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan oktober 2014 sampai april 2015 bertempat di Laboratorium Histologi dan Embriologi Hewan Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada.

## 2.2. Alat dan Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  ikan  wader  pari  ( Rasbora Lateristriata )  sebagai  hewan  uji.  Bahan-bahan  pembuatan  preparat  histologi  (larutan Bouin,  Alkohol  (30,  40,  50,  60,  70,  80,  90,  96%,  absolut),  Akuades,  Toluol,  Parafin, Xylol,  Mayer  albumin,  Ehrlich  hematoxylin,  Eosin  Y,  larutan  Acid  fuchsin  0,1%, larutan  PMA  1%,  larutan  Mallory,  Entelan,  kertas  label,  kertas  penghisap,  dan  pakan ikan.
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  akuarium  sebagai  wadah, serok, selang, aerasi, ember, dissecting set, cawan petri, timbangan analitik, silet, botol flakon,  oven,  mikrotom  putar  (RMT-20),  pisau  mikrotom,  holder  kayu,  kuas,  pisau scalpel,  kaca  benda,  cover  gelas,  hot  plate,  pipet,  layar  LCD  (Philips  191EL  19”), mikroskop cahaya dan kamera (Canon Eos 1100d).

## 2.3. Prosedur Penelitian

## 2.3.1. Pemeliharaan ikan
Pemeliharaan ikan selama penelitian dalam akuarium dengan ukuran 30x20x15cm yang  diisi  air  sebanyak  70%.  Air  yang  digunakan  berasal  dari  PDAM  dan  telah diendapkan  selama  2  hari.  Aerasi  dipasangkan  pada  setiap  akuarium  untuk  menyuplai oksigen  terlarut.  Ikan  yang  digunakan  merupakan  larva  wader  pari  ( Rasbora Lateristriata ) dengan berat rata-rata 0,02 gram. Sampel ikan uji diaklimasi dalam wadah pemeliharaan  terlebih  dahulu.  Pemeliharaan  ikan  dalam  akuarium  dilakukan  selama  3 bulan.  Frekuensi pemberian pakan sebanyak 3 kali  sehari (pagi  hari pukul 07.00-07.30 wib, siang  hari pukul 12.00-12.30, sore hari pukul 17.00-17.30 wib) secara ad  libitum. Pakan  yang  diberikan  berupa  pelet  merek  takari,  dengan  kandungan  nutrisi  yaitu: protein 30 %, lemak 3 %, serat 4 %, abu 12 %, kadar air 12 %. Pengelolaan kualitas air dilakukan  dengan  penyifonan  dan  pergantian  air.  Penyifonan  dilakukan  untuk membuang  kotoran  didasar  akuarium  menggunakan  selang  kecil,  dilakukan  sebelum pemberian pakan. Pergantian air 1-2 hari sekali sebanyak 25% dari total volume air.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## 2.3.2. Pembuatan Preparat Histologi
Perkembangan  ovarium  diamati  dengan  pembuatan  preparat  histologis menggunakan  metode  parafin.  Pewarnaan  menggunakan  Hematoxylin  Eosin  (HE). Pengambilan  data  dengan  pengamatan  fase  perkembangan,  perhitungan  proporsi  dan diamter folikel ovarium.
Prosedur pembuatan preparat histologis adalah :
1. Jaringan target (ovarium)
Secara  serial,  bagian  badan  ikan  yang  digunakan  untuk  pembuatan  preparat, bagian kepala dan ekor dibuang.
2. Fiksasi
Upaya  mempertahankan  struktur  jaringan  sampel.  Menggunakan  bouin,  fiksatif selama ±24 jam.
3. Pencucian (washing)
Menggunakan alkohol 70% sampai warna kuning berkurang.
4. Dehidrasi
Menggunakan alkohol bertingkat, yaitu:
− Alkohol 70% : 4x30 menit
− Alkohol 80% : 2x30 menit
− Alkohol 90% : 2x30 menit
− Alkohol 96% : 1x30 menit
− Alkohol absolut : 1x30 menit
5. Clearing (dealkoholisasi)
Penarikan  alkohol  dari  jaringan  dengan  toluol.  Sebelum  ke  toluol  jaringan  dari alkohol absolut diletakan dulu dikertas hisap. Clearing di toluol selama ±12 jam.
6. Infiltrasi
Upaya  menyusupkan  parafin  ke  dalam  jaringan  sampel.  Prosesnya  dalam  oven (inkubator) dengan temperatur 55 o - 60 o C.
− Campuran toluol parafin (1:1) :30 menit
− Parafin I : 50 menit
− Parafin II : 50 menit
− Parafin III : 50 menit
7. Embedding
Penanam jaringan dalam parafin padat. Buat kotak-kotak kecil dari karton, tuang parafin  murni  cair  ke  dalam  kotak  tersebut,  dengan  cepat  pindahkan  jaringan yang  telah  diinfiltrasi  tadi  kedalam  kotak  yang  berisi  parafin  cair  tersebut,  atur letak preparat sesuai potongan.
8. Sectioning
Iris  blok  parafin  dengan  scalpel,  permukaan  yang  akan  diiris  dengan  pisau mikrotom  berbentuk  segi  empat  teratur.  Tempelkan  blok  parafin  pada  holder kayu. Pasang holder dengan blok parafin tersebut pada mikrotom.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Persiapa  sebelum  section  :  kotak  tempat  pita  preparat,  kuas  untuk  mengambil coupes  dari  pisau  mikrotom,  pisau  scalpel,  kapas  yang  dicelup  xylol  untuk membersihkan pisau mikrotom. Selanjutnya atur ketebalan irisan (6 mikron) lalu mulai section.
9. Afiksing
Penempelan  jaringan  hasil  irisan  (coupes)  pada  gelas  benda  dengan  mayer albumin,  dengan  cara:  kaca  benda  yang  telah  dioles  mayer  albumin,  ditetesi aquadest  secukupnya,  letakkan  sejumlah  coupes  diatas  aquadest  tersebut.  Kaca benda  kemudian  diletakkan  diatas  hot  plate  dengan  suhu  40 0 C  -  45 0 C.  Letak coupes  diatur,  sisa  aquadest  dihisap  dengan  pipet,  biarkan  sampai  kering,  baru disimpan  dalam  map  preparat,  pewarnaan  dilaksanakan  sebaiknya  sesudah  24 jam.
10. Staining
Deparafinasi  dengan  mencelupkan  kaca  benda  yang  telah  ada  coupes  tersebut dalam xylol minimal selama 10 menit untuk menghilangkan parafin.
Pewarnaan  Ehrlich  Hematoxylin  –  Eosin  (HE)  :  Kaca  beda  dari  xilol  dihisap xilolnya dengan kertas filter. Lalu celupkan ke dalam  alkohol 96%, 90%, 80%, 70%,  60%,  50%,  40%,  30%  dan  akuades.  Selanjutnya  masukan  ke  Ehrlich Hematoxylin selama 3-7 detik. Cuci dengan air mengalir selama 10 menit, celup ke dalam aquadest, alkohol 30%, 40%, 50%, 60% 70%, lalu  masukan kedalam Eosin selama 1-2 menit. Selanjutnya celupkan ke alkohol 70%, 80%, 90%, 96% lalu pel diantara kertas filter, kemudian masukan ke xilol minimal 10 menit.
11. Mounting
Merupakan  proses  penutupan  sediaan  dengan  cover  gelas.  Sediaan  dari  xilol ditetesi entelan kemudian ditutup dengan cover gelas. Tunggu sampai kering.
12. Pembacaan sediaan
Menggunakan mikroskop.

## 2.4. Analis Data
Data  histologi  ovarium  ikan  wader  pari  ( Rasbora  lateristriata )  dianalisis  dan dibahas secara deskriptif.

## III. Hasil dan Pembahasan
Ovarium  ikan  wader  pari  merupakan  organ  reproduksi  yang  terletak  di  lateral saluran  pencernaan  dan  tepat  di  dekat pneumatocyst. Ovarium  pada  ikan  wader  pari berjumlah  sepasang  dan  pada  saat  kondisi  matang  ovarium  akan  memanjang  dan memenuhi rongga abdomen. Perkembangan ovarium ikan wader pari dapat dilihat pada Gambar 1.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Gambar  1.  Perkembangan  ovarium  ikan  wader  pari  ( Rasbora  lateristriata )  A=bulan pertama,  B=bulan  kedua,  C=bulan  ketiga.  1=ovarium,  2=liver,  3=usus, 4=gelembung  renang.  a=  fase  kromatin  nukleolar,  b=  fase  perinuklear, c= tunika albuginea, d= nukleolus. Pewarnaan Hematoxilin Eosin (HE).
Berdasarkan  hasil  penelitian,  ovarium  ikan  wader  pari  setiap  bulan  mengalami perkembangan  dari  bulan  pertama  sampai  bulan  ketiga.  Pengamatan  perkembangan ovarium ikan wader pari dilakukan dengan pengamatan struktur histologis, diameter dan jumlah  persentase folikel ovarium. Pengamatan struktur histologis ovarium  ikan wader pari  pada  bulan  pertama  menunjukkan  fase  perkembangan  yang  sama,  yaitu  fase  I, sedangkan  pada  bulan  kedua  dan  ketiga  menunjukkan  pola  asinkronous.  Pola asinkronous  merupakan  pola  perkembangan  folikel  telur  dalam  satu  ovarium  berada pada fase  yang berbeda pada waktu yang bersamaan (Tyler & Sumpter, 1996). Hal  ini sama seperti pada ikan zebra dewasa yang memiliki pola ovarium asinkronous. Ovarium
B 200 µm 4 1 3 2 C 200 µm 4 1 2 3 50 µm A 50 µm B a b c 50 µm C d 200 µm A 2 3 4 1 a b Perbesaran 200x Perbesaran 20x
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
ikan  zebra  mulai  berkembang  pada  umur  10  hari  setelah  menetas  dan  ikan  menjadi matang secara seksual pada umur 3 bulan (Clelland et al., 2009).
Pada  bagian  luar  ovarium  ikan  wader  pari  terdapat  selaput  pembungkus  yang sangat  tipis  disebut  tunika  albuginea.  Rahmawati  (2014)  dalam  penelitiannya menyebutkan  bahwa  tunika  albuginea  pada  ikan  wader  pari  tersusun  oleh  sel  pipih berlapis.  Menurut  Clelland et  al., (2009)  ovarium  ikan  zebra  terdiri  dari  epitel  tipis, oogonium  dan  folikel  yang  mengandung  oosit  dikelilingi  oleh  sel-sel  somatik  dan jaringan interstitial (stroma).
Berdasarkan  hasil  pengamatan  struktur  histologis  ovarium,  terdapat  dua  fase perkembangan  ovarium  ikan  wader  pari  dalam  penelitian  ini.  Pertama  fase  kromatin nukleolar  dan  kedua  fase  perinuklear  (Gambar  1).  Fase  kromatin  nukleolar  dicirikan dengan  ukuran  sel  kecil  dengan  kisaran  diameter  berkisar  6-25  µm.  Ovum  terlihat bergerombol  dan  inti  mendominasi  bagian  sel  dengan  sitoplasma  sedikit.  Sel  bersifat basofilik dan bagian inti selnya terlihat lebih gelap dibandingkan sitoplasmanya. Bagian inti  terdapat  kromatin  dalam  jumlah  banyak  sehingga  terpulas  lebih  gelap.  Sedangkan fase  perinuklear  merupakan  fase  perkembangan  selanjutnya  dari  fase  kromatin nukleolar.  Pada  fase  ini  diameter  sel  berkisar  antara  22-114  µm.  Ovum  berbentuk polihedral  dengan  inti  sel  membulat  atau  oval.  Sitoplasma  sel  bersifat  basofilik sedangkan  bagian  inti  sel  bersifat  kurang  basofilik.  Pada  fase  ini  dijumpai  adanya vesikula  germinalis,  yaitu  nukleoli  yang  berjumlah  banyak  dan  terletak  di  tepi  inti. Perkembangan  folikel  ovarium  bulan  pertama  berada  pada  fase  kromatin  nukleolar, sedangkan  fase  perinuklear  mulai  terlihat  pada  pemeliharaan  bulan  2  dan  bulan  3 (Gambar 1).
Persentase jumlah folikel ovarium bulan pertama 100% di dominasi oleh sel muda atau fase kromatin nukleolar, selanjutnya pada bulan kedua jumlah folikel lebih banyak didominasi oleh fase kromatin nukleolar (fase 1= 63,21% : fase 2= 36,79%), sedangkan pada bulan ketiga lebih banyak didominasi oleh fase perinuklear (fase 1= 48,52% : fase 2= 51,48%). Hasil pengukuran diamater folikel ikan wader pari secara keseluruhan fase I  berkisar  6-25  µm  dan  fase  II  berkisar  22-114  µm.  Diameter  oosit  ikan  wader  pari berbeda bila dibandingkan dengan diameter oosit pada ikan mas  ( Cyprinus carpio ) dan ikan  trigger  hitam  ( Melichthys  niger ).  Menurut  Shabanipour  &  Hossayni  (2010) diameter  oosit  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio )  fase  I:  diameter  rata-rata  sekitar  60  µm sedangkan  fase  II  diameter  rata-rata  oosit  sekitar  160  µm.  Pada  ikan  trigger  hitam ( Melichthys  niger )  fase  I:  diameter  berkisar  6-23  µm  sedangkan  fase  II:  diameter berkisar  24-83  µm  (Branco et  al., 2013).  Menurut  Shinozaki,  2008 dalam Branco (2013)  setiap  spesies  tampaknya  memiliki  karakteristik  diameter  oosit  tersendiri. Abascal & Madinah (2005) menambahkan bahwa terminologi dan fitur yang digunakan untuk  membedakan  dan  mengidentifikasi  tahap  yang  berbeda  dari  formasi  oosit  dapat bervariasi menurut penulis dan spesies yang dipelajari.
Menurut  Clelland et  al., (2009)  diferensiasi  ovarium,  proses  perkembangan folikel,  pematangan  oosit  dan  ovulasi  adalah  peristiwa  kompleks  yang  memerlukan koordinasi.  Proses  perkembangan  gonad  betina  pada  teleostei  dipengaruhi  oleh  faktor
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
internal dan eksternal. Faktor internal seperti kinerja hormon dan faktor eksternal dapat berupa  kondisi  lingkungan  dan  asupan  makanan.  Mekanisme  hormonal  pada perkembangan  ovarium  yaitu:  Otak  memproduksi  GnRH  ( Gonadotropin  Releasing Hormone )  yang  bekerja  di  hipofisis  untuk  menstimulasi  sekresi  LH  ( Luteinizing Hormone )  dan  FSH  ( Follicle  Stimulating  Hormone ).  Gonadotropin,  selanjutnya meregulasi  folikulogenesis.  Tahap  pertumbuhan  terjadi  di  bawah  kendali  FSH sementara fase maturasi terjadi di bawah pengaruh LH (Patino et al. , 2001). Selanjutnya Norris  (2007)  menambahkan  bahwa  FSH  merupakan  hormon  yang  berperan  dalam mesintesis estrogen  selama masa perkembangan folikel.

## IV. Kesimpulan
4.1. Kesimpulan
Simpulan  yang  dapat  diambil  dari  hasil  kajian  “Perkembangan  ovarium  ikan wader pari ( R. lateristriata ): pendekatan histologi” adalah perkembangan ovarium ikan wader pari menunjukkan pola/tipe perkembangan ovarium  Asinkronous. Perkembangan ovarium  pada  pemeliharaan  bulan  pertama  berada  pada  fase  kromatin  nukleolar, sedangkan fase perinuklear mulai terlihat pada pemeliharaan bulan 2 dan bulan 3.

## 4.2. Saran
Perlu  adanya  penelitian  lanjutan  tentang  perkembangan  ovarium  ikan  wader  pari yang pemeliharaannya lebih dari 3 bulan sampai ovarium matang seksual.

## Daftar Pustaka
Abascal,  F.  J.  and  Medina  A.  2005.  Ultrastructure  of  oogenesis  in  the  bluefin  tuna, Thunnus thynnus . Journal of Morphology . 264: 149-160.
Budiharjo,  A.  2002.  Seleksi  dan  potensi  budidaya  jenis-jenis  ikan  wader  dari  genus Rasbora . Biodiversitas . 3 (2): 225-230.
Branco, I.S.L., Viana, D.L., Felix, R.T.S., Veras, D.P., and Hazin, F.H.V. 2013. Oocyte development  and  ovarian  maturation  of  the  black  triggerfish, Melichthys  niger (Actinopterygii:  Balistidae)  in  Sao  Pedro  e  Sao  Paulo  Archipelago,  Brazil. Neotropical Ichthyology . 11(3): 597-606.
Clelland,  E.  and  Peng,  C.  2009.  Endocrine/paracrine  control  of  zebrafish  ovarian development. Molecular and Cellular Endocrinology . 312: 42–52. Norris, D.O. 2007. Vertebrate Endocrinology. 4th ed. Elsevier. USA. pp: 372-391
Patino, R., Yoshizaki, G., Thomas, P., and Kagawa, H., 2001. Gonadotropic control of ovarian  follicle  maturation:  the  two-stage  concept  and  its  mechanisms. Comparative  Biochemistry  and  Physiology  Part  B:  Biochemistry  and  Molecular Biology . 129: 427–439. Rahmawati, S. 2014. Indeks Gonadosomatik Dan Struktur Histologi Gonad Ikan Wader Pari  (Rasbora  lateristriata  Bleeker,  1854)  Pada  Tahap  Perkembangan  Pra Dewasa dan Dewasa . Skripsi. Fakultas Biologi. UGM. Yogyakarta. Shabanipour,  N.,  and  Hossayni,  S.N.  2010.  Histological  and  ultrastructural  study  of Zona  Radiata  in  oocyte  of  common  carp Cyprinus  carpio (Linnaeus  1758). Micron . 41: 877–881.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Tyler, C.R. and J.P. Sumpter. 1996. Oocyte Growth and Development In Teleost. Rev. Fish Biology and Fisheries. 6: 287-318.