Diana et al./Galenika Journal of Pharmacy

## UJI AKTIVITAS ANTIJAMUR INFUSA UMBI BAWANG PUTIH
( Allium sativum L.) TERHADAP Candida albicans SERTA PROFIL KROMATOGRAFINYA
ANTIFUNGAL ACTIVITY OF INFUSION OF ALLIUM SATIVUM AGAINST Candida albicans AND ITS CHROMATOGRAPHY PROFILE
Khusnul Diana 1 *
1 Jurusan Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Palu, Indonesia
Received 01 Februari 2016, Accepted 28 Februari 2016

## ABSTRAK
Sebagai  obat  tradisional,  umbi  bawang  putih  ( Allium  sativum L.)  berkhasiat  sebagai  antibakteri  dan antijamur  selain  itu  dapat  juga  berkhasiat  sebagai  antihipertensi,  obat  maag,  karminativa  (pada  keadaan dyspepsia),  ekspektoransia  dan  penurun  koleserol.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  antijamur infusa umbi bawang putih terhadap Candida albicans serta identifikasi kandungan komponen kimia.Uji aktivitas antijamur dilakukan dengan  metode dilusi  cair. Parameter  yang digunakan pada penentuan aktivitas antijamur yaitu Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM). Konsentrasi yang digunakan adalah 17,5%;  16,25%;  15%;  13,75%;  12,5%;  dan  11,25% v / v . Uji  aktivitas  dilakukan  dengan  menginkubasi  infusa ditambahkan pada suspensi jamur dalam media cair CYG DS dan diinkubasi pada suhu 37˚C selama 18-24 jam. Identifikasi komponen kimia dilakukan dengan kromatografi kertas dan kromatografi lapis tipis. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  KHM  infusa  umbi  bawang  putih  terhadap Candida  albicans tidak  bisa  diamati  sebab larutan sudah keruh. Hasil KBM terhadap Candida albicans adalah 15 % v /v. Hasil uji tabung dan kromatografi menunjukkan bahwa infusa umbi bawang putih mengandung flavonoid dan saponin.
Kata kunci: umbi bawang putih ( Allium sativum L.), antijamur, Candida albicans

## ABSTRACT
As  traditional  medicine, bawang  putih or  garlic  ( Allium  sativum L.)  can  cure  as  antibacterial  and antifungal beside on can restorative as antihypertension, antacid, carminativa (in the dyspepsia) , expectorancia and  anticolesterol.  This research was conducted  in order to know the antifungal  activity of  infusion of Allium sativum against Candida albicans and to identify chemical component’s of this infusion. The antifungal activity was  done  by  liquid  dilution  method.  The  MIC  (Minimal  Inhibitory  Concentration)  and  MFC  (Minimal Fungicidal Concentration) value were used as parameter to determine the antifungal activity. Concentration used in this reseach were 17,5% ; 16,25% ; 15% ; 13,75% ; 12,5% dan 11,25% v / v for Candida albicans. The activity was done by  incubating the  infusion with  fungal  in  CYG DS  media of 37ºC for 18-24 hours. Identification of chemical  component  was  carried  out  by  paper  chromatography  and  thin  layer  chromatography.  The  result showed that the MIC (Minimum Inhibitor Concentration) for Candida albicans could not be observed because the mixture was turbid. The MFC (Minimum Fungicidal Concentration) for Candida albicans was 15% v / v. The tube test and chromatogram showed that the infusion of Allium sativum contained flavonoid, and saponin.
Key word: Allium sativum L., Antifungal, Candida albicans .

## PENDAHULUAN
Indonesia  adalah  negara  yang  beriklim tropis.  Dengan  iklim  dan  keadaan  yang  seperti ini,  tidak  mengherankan  bila  sebagian  besar masyarakat Indonesia pernah mengalami infeksi  jamur  pada  kulit.  Banyaknya  penyakit jamur  di  daerah  tropis  antara  lain  disebabkan oleh  faktor  keringat  dan  kebersihan  pribadi yang  kurang  terjaga.  Kebanyakan  masyarakat mengabaikan  pengobatan  penyakit  ini,  padahal bila  dibiarkan,  akan  sangat  mengganggu penampilan  dan  fungsi  hidup  orang  sehari-hari (Dewi, 2004).
Di  alam  telah  ditemukan  ribuan  jenis jamur,  namun  hanya  100-200  jenis  jamur  yang dapat  menimbulkan  penyakit  pada  manusia. Dari  jumlah  ini  sebagian  dapat  menyerang organ  dalam  sehingga  menimbulkan  penyakit serius, jamur yang kontak dengan kulit manusia dapat  menyebabkan  penyakit  kulit  bahkan  ada sebagian  jamur  yang  dapat  menghasilkan metabolit beracun (Jawetz et al .,1995).
Jamur merupakan organisme  yang bersifat eukaryotik, biasanya dibagi dalam ragi, kapang dan jamur. Metabolismenya bersifat heterotrofik dan absortif, mengadakan reproduksi  secara  khas  melalui  mekanisme kawin  (seksual)  dan  tak  kawin  (aseksual) (Johnson et  al ,  2001).  Infeksi  jamur  (mikosis) bisa  kutan,  subkutan,  superfisial  dan  sistemik. Infeksi  sistemik  paling  banyak  terjadi  pada pasien immunocompromised (pasien  AIDS, kortikosteroid, obat-obat antikanker).
C.  albicans tampak  sebagai  sel  lonjong, bertunas,  Gram  positif,  berukuran  2-3  X  4,6 µm,  yang  menghasilkan pseudomiselium baik dalam  biakan  maupun  dalam  jaringan  dan eksudat.  Pada  agar sabouroud yang  dieramkan pada  suhu  kamar,  berbentuk  koloni-koloni lunak  berwarna  coklat  yang  menyerupai  bau seperti  ragi. Candida  albicans adalah  anggota flora normal selaput mukosa saluran pernafasan,  saluran  pencernaan  dan  genital wanita. C.  albicans dapat  menyebabkan penyakit  sistemik  progresif  jika  kekebalan tubuh terganggu. C.albicans lebih sering terjadi pada spesies Candida lain dalam menyebabkan infeksi yang simtomatik (Jawetz, et al ., 1995).
Candida  albicans  dapat  diatasi  dengan menggunakan bahan alam, salah satunya adalah bawang  putih.  Bawang  putih  ( Allium  sativum L.)  biasanya  digunakan  sebagai  campuran dalam  pengolahan  masakan,  tapi  disamping  itu dapat  juga  digunakan  untuk  pengobatan tradisional  yang  memiliki  beragam  khasiat
seperti antimikroba, antikolesterol (menurunkan kadar kolesterol darah), antihipertensi  (penurun  tekanan  darah)  dan imunomodulator (meningkatkan
sistem kekebalan  tubuh)  (Hardianto,  2005).  Umbi lapis Allium  sativum L.  mengandung  saponin, flavonoid, polifenol dan minyak atsiri (Anonim, 2000).
Flavonoid  bersifat  merusak  membran  sel sehingga  terjadi  perubahan  permeabilitas  sel yang
mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel atau matinya sel dan polifenol dapat  mendenaturasi    protein  sel  jamur. Saponin dapat mengubah  tegangan permukaan dengan  mengikat  lipid  yang  dapat  merusak permeabilitas selektif dari membran sel bakteri (Pelczar dan Chan, 1988).
Senyawa flavonoid dan polifenol merupakan  kelompok  senyawa  fenol  yang berfungsi sebagai antijamur sehingga flavonoid dan polifenol dapat digunakan sebagai antijamur  (Ganiswarna,  1995).  Hal  inilah  yang mendorong  perlunya  dilakukan  kajian  ilmiah yang  lebih  mendalam  mengenai  tanaman bawang  putih  ini  terutama  bagian  umbinya untuk mengetahui aktivitasnya sebagai antijamur.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  untuk  infundasi  :  panci  infusa,  labu takar,  timbangan  analitik,  gelas  ukur,  kain flannel,  corong,  kertas  saring.  Alat  untuk  uji mikrobiologi  :  cawan  petri,  pipet  ukur,  lampu spritus,  mikropipet,  tabung  reaksi,  rak  tabung, propipet,  ose, yellow  tip , blue  tip ,  alat-alat gelas, inkubator, autoclave.
Bahan utama yang digunakan adalah umbi bawang  putih  yang  telah  dikeringkan  dan dipotong kasar kemudian disari dengan metode infundasi.  Bahan  untuk  pembuatan  infusa: umbi  bawang  putih,  aquadest.  Bahan  untuk  uji aktivitas  antifungi:  Jamur Candida  albicans yang merupakan koleksi Laboratorium
Fitokimia  Universitas  Ahmad  Dahlan,  media jamur  yang  digunakan  adalah  media  padat ( Sabouraud  Dextrose  Agar )  dalam  tabung reaksi,  bahan  lain  yang  digunakan  adalah aquadest steril, NaCl fisiologis, media CYG DS ( Casein Yeast Glucose Double Strength ).

## Determinasi tanaman
Untuk mengetahui kebenaran sampel umbi bawang  putih  yang  digunakan  maka  dilakukan determinasi  tanaman  di  Laboratorium  Biologi,
Fakultas MIPA Universitas Ahmad Dahlan. Hal tersebut  dimaksudkan  untuk  mencocokkan  ciri makroskopinya  dan  ciri  morfologinya  terhadap pustaka yang ada.

## Penyiapan dan pembuatan simplisia
Umbi  bawang  putih  dicuci  dengan menggunakan  air  mengalir  sampai  bersih. Kemudian  dipotong-potong  tidak  terlalu  tipis lalu  dikeringkan  di  oven  pengering  kemudian bahan  yang  sudah  kering  dipotong  kecil-kecil untuk memudahkan penyarian.

## Pembuatan infusa
Diambil  simplisia  umbi  bawang  putih sebanyak  10  gram  kemudian  dimasukan kedalam  panci  infundasi  dan  diisi  aquadest sampai  100 ml,  tambahkan  air  ekstra  sebanyak 2  kali  berat  bahan  yaitu  20ml.  Campuran  ini dipanaskan diatas penangas air selama 15 menit dihitung dari suhu 90 0 C sambil sesekali diaduk. Campuran  ini  diserkai  selagi  panas,  saring melalui kain flannel kemudian ditambahkan air panas  secukupnya  melalui  ampas  sampai  di dapat  volume  infusa  100  ml.  Pemekatan dilakukan  untuk  mendapatkan  stok  infusa dengan kadar 100% b / v dengan cara menguapkan  infusa  tadi  diatas  penangas  air sampai didapat volume 10 ml, dari stok tersebut kemudian  diencerkan  sesuai  dengan  seri  kadar yang  dikehendaki  yaitu  35%  ;  32,5%  ;  30%  ; 27,5% ; 25% dan 22,5% v / v .

## Skrining fitokimia Uji keberadaan gugus kromofor
Larutan  infusa  yang  dihasilkan  bila berwarna  kuning  sampai  merah  menunjukkan adanya  senyawa  yang  mengandung  kromofor (flavonoid,  antrakinon  dan  sebagainya)  dengan gugus  hidrofilik  (gula,  asam  fenolat  dan sebagainya).  Bila  larutan  ditambah  larutan KOH  (3  tetes),  warna  larutan  akan  menjadi intensif.

## Uji flavonoid
Infusa  umbi  bawang  putih  diteteskan  di atas  kertas  saring  dan  kemudian  dilewatkan pada  uap  ammonia  timbul  warna  kuning  pada sampel yang diteteskan tadi.

## Uji saponin
Infusa umbi bawang putih (2 gram) kocok kuat-kuat  selama  30  detik,  apabila  timbul  buih setinggi  kurang  lebih  3  cm  menunjukkan
adanya  saponin,  dan  ditambah  HCl  encer  buih tetap stabil.

## Uji Mikrobiologi Penyiapan media
Media  cair  CYG  DS  didapat  dari laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran  UGM  dan  media  padat  SDA didapat dari laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi UAD.

## Sterilisasi alat-alat
Semua  peralatan  yang  akan  digunakan, seperti cawan petri, pipet ukur, blue tip , yellow tip, tabung  reaksi,  dan  alat-alat  gelas  lainnya disterilisasi  pemanasan  kering  dengan  udara panas  atau  oven.  Tabung  reaksi  ditutup menggunakan  kapas  kemudian  dibungkus dengan  kertas  sebelum  dimasukkan  dalam oven.  Pemanasan  dilakukan  dengan  suhu  180° C selama 2 jam. Sedangkan media dan aquadest disterilkan  dalam  autoclave  pada  suhu  121°  C pada  2  atm  selama  15  menit  (Volk  dan Wheeler, 1993).

## Uji Aktivitas Antijamur Pembuatan larutan uji
Konsentrasi  infusa  umbi  bawang  putih yang  digunakan  untuk C.  albicans adalah konsentrasi akhir (setelah penambahan susupensi jamur) yaitu 17,5% ; 16,25% ; 15% ; 13,75% ; 12,5% dan 11,25% v / v .

## Penentuan KHM
Jamur C.  albicans diambil  dari  suatu biakan  dengan  menggunakan  ose,  sebanyak  1 koloni. Goreskan ose tersebut pada media SDA pada  suatu  tabung  yang  kemudian  diinkubasi selama  18-24  jam  pada  suhu  37°  C.  Setelah biakan C.  albicans tersebut  tumbuh,  tabung tersebut  disimpan  dalam  almari  pendingin (suhu 4° C) sebagai stok.
Diambil  1  ose  biakan C.  albicans yang berumur  satu  hari  kemudian  dimasukkan  ke dalam  kurang  lebih  2  ml  garam  fisiologis, dikocok  homogen  dan  disamakan  dengan standart Mc.  Farland ,  kemudian  diencerkan dengan media CYG DS (1 : 100)
Suspensi  jamur  10 6 CFU/ml C.  albicans diambil  0,5  ml dan  dimasukkan  ke  dalam  tiap- tiap  tabung  uji  yang  berisi  0,5  ml  larutan  uji dalam berbagai konsentrasi. Kemudian diinkubasi pada suhu 37  C selama 18-24 jam.
Diamati kejernihan larutan dibandingkan dengan larutan kontrol, untuk menentukan pada
konsentrasi  berapa  infusa  umbi  bawang putih mulai menghambat pertumbuhan jamur.

## Penentuan KBM
KBM  ditentukan  dengan  menggoreskan larutan  hasil  uji  dilusi  cair  pada  media  agar untuk C.  albicans digunakan  media  agar  SDA. Dengan  melihat  ada  tidaknya  pertumbuhan jamur dari goresan pada media yang dibandingkan  dengan  kontrol  maka  dapat ditentukan  berapa  konsentrasi  terendah  larutan infusa  umbi  bawang  putih  yang  dapat membunuh jamur.

## Analisis Data Uji antijamur
Kadar  hambat  minimum  ditandai  dengan kejernihan  pada  larutan  uji  pada  media Casein Yeast  Glucose  Double  Strenght .  Masing- masing  sampel  dalam  tabung  uji  digoreskan pada  media  S abouraud  Dextrose  Agar .  Kadar bunuh minimum ditandai dengan tidak terjadinya pertumbuhan jamur C. albicans pada media  dan  hasilnya  dibandingkan  dengan kontrol.

## Analisis Kromatografi
Bercak  yang  timbul  sebelum  disemprot dapat  dilihat  di  bawah  UV  254  dan  366  nm warna  yang  timbul  nantinya  dapat  diamati. Selanjutnya plate disemprot dengan penyemprot  yang  sesuai.  Warna  dan  Rf  bercak dibandingkan dengan literatur. HASIL DAN PEMBAHASAN Tanaman  bawang  putih  yang  digunakan dalam penelitian ini dideterminasi di Laboratorium Biologi Fakultas MIPA Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta. Tujuan determinasi  adalah  untuk  mengetahui  identitas tanaman  dengan  jelas,  sehingga  terhindar  dari kesalahan dalam pengambilan sampel.
Tabel 1. Hasil uji aktivitas antijamur infusa umbi bawang putih terhadap C. albicans No Konsentrasi Perlakuan % v/v HASIL PENGAMATAN Replikasi I Replikasi II Replikasi III K/J Koloni K/J Koloni K/J Koloni 1. 17,5% K - K - K - 2. 16,25% K - K - K - 3. 15% K - K - K - 4. 13,75% K + K + K + 5. 12,5% K + K + K + 6. 11,25% K + K + K + Kontrol 7. K I K - K - K - 8. K II J - J - J - 9. K III J - J - J - 10. K IV K + K + K +
Keterangan :
J = Jernih K = Keruh
+ = Ada koloni jamur
- = Tidak ada koloni jamur Kontrol K I  Kontrol sampel = 0,5 ml infusa umbi bawang putih+0,5 ml CYG DS K II  Kontrol media = 1 ml CYG DS
K III Kontrol pelarut
= 0,5 ml aquadest steril + 0,5 ml CYG DS
K IV Kontrol suspensi jamur  = 0,5 ml suspensi jamur + 0,5 ml CYG DS
Gambar 1. Hasil uji aktivitas antijamur infusa umbi bawang putih terhadap C. albicans
Tabel 2. Hasil Pemeriksaan Kromatografi Kertas untuk Flavonoid dari Infusa Umbi Bawang Putih
Cuplikan R f Deteksi Dugaan Flavonoid UV 254 nm UV 366 nm Uap amoniak Infusa umbi bawang putih kadar 100% 0,15 Coklat kekuningan Coklat gelap Kuning intensif + Rutin 0,58 Kuning Coklat gelap Kuning intensif +
Gambar 2. Hasil Pemeriksaan Kromatografi Kertas untuk Flavonoid dari Infusa Umbi Bawang Putih
Keterangan :
Cuplikan :
A
: Sampel infusa umbi bawang putih kadar 100% B : Pembanding Rutin Deteksi   : I :  UV 254nm II :  UV 366nm
III : Pereaksi semprot uap ammonia
11,25% 12,5% 16,25% 17,5% 13,75% 15% k.jamur k.sampel k. pelarut k.media
A  B A  B A I III II B
Penelitian ini menggunakan metode penyarian infundasi karena beberapa kandungan  senyawa  kimia  umbi  bawang  putih bersifat polar (mudah larut dalam air) sehingga kandungan  zat  aktif  yang  larut  dalam  air tersebut akan tersari dengan baik dan penyarian ini mudah dilakukan oleh masyarakat. Menurut Anonim  (1995)  kecuali  dinyatakan  lain  dan untuk  simplisia  yang  tidak  berkhasiat  keras, infusa  dibuat  menggunakan  10% b / v simplisia.
Infusa  yang  diperoleh  tidak  boleh  digunakan lebih dari 24 jam karena penyarian menggunakan  air  akan  menghasilkan  sari  yang mudah    tercemar  oleh  kuman  maupun  kapang (Anonim, 1995).
Pembuatan  infusa  dengan  menimbang simplisia  sebanyak  10  gram  dalam  aquadest 100 ml ditambah air extra 20 ml yaitu sebanyak 2X berat  bahan,  dimaksudkan  untuk  mencegah kehilangan  bahan  karena  proses  penguapan yang terjadi. Infundasi dilakukan menggunakan panci  infusa,  dipanaskan  suhu  90 0 C  selama  15 menit,  kemudian  dipekatkan  sampai  didapat volume  stok  10  ml  dengan  labu  takar.  Didapat stok  infusa  dengan  konsentrasi  100% b / v kemudian diencerkan dengan variasi kadar 35% ; 32,5% ; 30% ; 27,5% ; 25% dan 22,5% v / v .
Sterilisasi  dilakukan  pada  semua  alat  dan bahan  yang  akan  digunakan.  Tujuannya  adalah untuk menghilangkan, mematikan atau menghancurkan  semua  mikroorganisme  hidup, baik  yang  patogen  maupun  yang  tidak.  Untuk alat-alat  gelas  disterilisasi  menggunakan  oven dengan  suhu  180 0 C  selama  2  jam.  Media, infusa  dan  bahan-bahan  lain  yang  akan digunakan  disterilisasi  dengan  autoclave  pada suhu  121 0 C  selama  15  menit.  Hasil  sterilisasi dari alat dan bahan yang akan digunakan dapat dilihat  dari  kontrol  yang  jernih  dan  tidak ditumbuhi jamur dan mikroba lain.
Hasil  uji  aktifitas  antijamur  infusa  umbi bawang putih terhadap C.albicans Uji  aktifitas  antijamur  umbi  bawang  putih terhadap jamur C.albicans ini dilakukan dengan menggunakan  sediaan  berupa  infusa  dengan kadar 100% b / v kemudian dilakukan pengenceran dengan variasi kadar  ekstrak 35% ;  32,5%  ;  30%  ;  27,5%  ;  25%  dan  22,5% v / v menggunakan pelarut aquadest steril.
Penelitian  ini  menggunakan  metode  dilusi cair.  Dipilih  metode  dilusi  cair  karena  pada metode  ini  dapat  menghemat  media  dan  bahan uji serta tebal tipisnya media tidak berpengaruh. Selain itu pada metode dilusi cair
dapat digunakan untuk menentukan KHM suatu bahan  antijamur.  Pada  dasarnya  metode  ini dilakukan  dengan  mengencerkan  larutan  bahan obat  hingga  didapat  suatu  seri  kadar  dan  pada masing-masing kadar obat ditambahkan suspensi  jamur  ke  dalam  media  cair  sehingga memungkinkan  berinteraksinya  bahan  obat yang  akan  diuji  dengan  suspensi  jamur  yang tersebar  merata,  maka  penghambatan  terhadap jamur menjadi lebih sensitif.
Variasi konsentrasi ekstrak terdiri dari 35%
;  32,5%  ;  30%  ;  27,5%  ;  25%  dan  22,5% v / v yang  dibuat  dari  stok  100% b / v, kemudian dilakukan  uji  aktivitas  antijamurnya  dengan metode  dilusi  cair  yaitu  dengan  menambahkan suspensi  jamur  sebanyak  0,5  ml  sehingga dengan  perhitungan  pengenceran  yang  dapat dilihat  di  lampiran  6,  didapat  konsentrasi  akhir 17,5%  ;  16,25%  ;  15%  ;  13,75%  ;  12,5%  dan 11,25% v / v .
Parameter  yang  digunakan  untuk  uji aktivitas  antijamur  adalah  KHM  yaitu  kadar hambat  minimum  dari  infusa  umbi  bawang putih  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan jamur. KHM dapat dilihat dari kejernihan  yang tampak  dari  larutan  setelah  diinkubasi  selama 18-24  jam.  Pada  penelitian  nilai  KHM  tidak dapat  diketahui  karena  larutan  yang  berwarna keruh  dikarenakan  didalam  infusa  umbi bawang  putih  tersebut  terdapat  fragmen- fragmen yang menyerupai pertumbuhan jamurnya,  kemudian  dilakukan  penggoresan pada  media  SDA  untuk  mencari  KBM  (Kadar Bunuh  Minimum)  nya.  Media  agar Sabouraud dextrose  agar dipilih  karena  media  tersebut merupakan pembenihan yang mampu menyuburkan  pertumbuhan  jamur  tetapi  dapat menghambat  pertumbuhan  kuman  atau  bakteri. Dari  hasil  penggoresan  pada  media  SDA terlihat  bahwa  pada  konsentrasi  13,75%  ; 12,5%  dan  11,25% v / v ada  pertumbuhan  jamur sedangkan  pada  konsentrasi  17,5%  ;  16,25% dan  15% v / v tidak  ada  pertumbuhan  jamur. Dapat  ditarik  kesimpulan  bahwa  KBM  yang didapat  yaitu  pada  kadar  15% v / v yaitu  kadar terkecil yang dapat membunuh jamur.
Pada penelitian ini dibuat 4 larutan  kontrol antara  lain  kontrol  sampel,  kontrol  media, kontrol pelarut, kontrol suspensi jamur. Larutan kontrol  ini  memudahkan  kita  pada  saat pengamatan  hasil  penelitian.  Kontrol  sampel digunakan  untuk  melihat  kejernihan  yang menunjukkan  sterilitas  sampel  yang  digunakan yaitu  infusa  umbi  bawang  putih  ditambah media  CYG  DS.  Kontrol  pelarut  berfungsi
sebagai pembanding yang menunjukkan sterilitas pelarut yang digunakan yaitu aquadest ditambah media CYG DS dan untuk mengetahui  apakah  pelarut  yang  digunakan memiliki aktivitas antifungi atau tidak. Kontrol media  berisi CYG DS tanpa jamur, diperlukan untuk  mengetahui  sterilitas  dari  media  uji  dan tidak  boleh  ditemukan  adanya  pertumbuhan jamur. Jika hal itu terjadi maka dapat dipastikan adanya  kontaminan  pada  media  tersebut. Kontrol  suspensi  jamur  digunakan  untuk memastikan ada tidaknya pertumbuhan mikroba.  Data  hasil  uji  aktivitas  antijamur infusa umbi bawang putih terhadap C. albicans dapat dilihat pada Tabel I.

## Skrining Fitokimia Hasil skrining fitokimia
Sebelum dilakukan uji kromatografi untuk mengetahui senyawa yang terkandung di dalam umbi  bawang  putih,  terlebih  dahulu  dilakukan skrining fitokimia. Skrining fitokimia dilakukan  untuk  mengetahui  zat  kimia  dalam umbi  bawang  putih    ( Allium  sativum L.)  yang kemungkinan  berhubungan  dengan  aktivitas biologi  dari  sediaan  infusa  tersebut.  Hasil skrining fitokimia diharapkan dapat memberikan gambaran senyawa yang terkandung  dalam  infusa  umbi  bawang  putih yang  berkhasiat  sebagai  antijamur.  Skrining fitokimia  dilakukan  menggunakan  uji  tabung, senyawa-senyawa  yang  diuji  meliputi:  gugus kromofor,  polifenol,  tanin,  saponin  dan flavonoid.
Dari  uji  tabung  diperoleh  larutan  uji  yang berwarna  kuning  orange  dan  jika  ditambahkan KOH warna larutan menjadi lebih intensif. Hal ini  menunjukkan  bahwa  umbi  bawang  putih mengandung gugus kromofor.
Uji saponin dilakukan dengan metode buih yaitu  dengan  menggojok  infusa  umbi  bawang putih  dalam  air  suling  dan  dibiarkan  lalu diamati  tinggi  buih  yang  dihasilkan.  Hasil dinyatakan  positif  bila  hasil  penggojokan menghasilkan  buih  kurang  lebih  3  cm  dari permukaan dan bersifat stabil  setelah ditambah asam.  Hasil  yang  diperoleh  untuk  uji  saponin adalah positif karena setelah ditambahkan asam buihnya tetap stabil.
Uji keberadaan golongan flavonoid dilakukan  dengan  cara  infusa  umbi  bawang putih  diteteskan  di  atas  kertas  saring  dan kemudian  dilewatkan  pada  uap  ammonia timbul  warna  kuning  pada  infusa  yang diteteskan tadi.
Skrining  fitokimia  dengan  metode tabung yang menghasilkan uji positif dilanjutkan  dengan  kromatografi  sedangkan untuk  hasil  negatif  tidak  dilanjutkan  uji kromatografi.

## Uji kualitatif secara kromatografi
Uji kualitatif secara kromatografi dilakukan  untuk  mempertegas  uji  tabung. Pemeriksaan kandungan kimia dilakukan terhadap  senyawa  flavonoid  dan  saponin  yang diduga berkhasiat sebagai antijamur.
Kromatografi  kertas  dapat  digunakan untuk  memisahkan  senyawa  flavonoid  dalam infusa. Fase gerak yang biasa digunakan adalah n-butanol : asam asetat glasial : air dengan hasil memuaskan  karena  memberikan  bercak  yang kompak. Komponen dari BAW (4:1:5) v / v yang digunakan  fase  atasnya  (Pramono,  1989).  Fase diam  yang  digunakan  adalah  kertas  Whatman no.1 dengan fase  gerak  n-butanol  : asam asetat glasial : air (4:1:5) v / v fase atas. Cuplikan dibuat dengan  konsentrasi  100%  dan  ditotolkan sebanyak  3  totolan  dengan  menggunakan  pipa kapiler.  Setiap  penotolan  dilakukan  setelah totolan  sebelumnya  kering.  Jumlah  penotolan harus  optimum,  disebabkan  karena  apabila penotolan  terlalu  banyak  maka  penotolan  akan terlalu  pekat  sehingga  susah  digerakkan  oleh cairan  pengembang  atau  fase  gerak,  sedangkan apabila  penotolan  terlalu  sedikit  maka  bercak yang dihasilkan samar (Gritter dkk, 1991).

## Pemeriksaan Flavonoid
Senyawa golongan flavonoid dalam infusa umbi bawang putih dielusi dengan menggunakan  fase  gerak  n-butanol  :  asam asetat  glasial  :  air  (4:1:5) v / v fase  atas  dan  fase diam  kertas  Whatmann  diuapi  ammoniak. Menurut  Wagner  (1984)  flavonoid  dapat berwarna  hitam  atau  berfluoresensi  kuning, orange  dan  hijau  tergantung  tipe  strukturnya bila dilihat pada UV 366 nm flavonoid dengan sinar  tampak  dapat  memberikan  warna  jingga, merah, merah kuning atau merah jambu, coklat tua atau hitam, hijau kuning atau coklat tua dan setelah  disemprot  sitroborat  atau  diuapi ammoniak  akan  berwarna  kuning  (Harborne, 1996).
Dari  kromatografi  kertas  menunjukkan bahwa infusa umbi bawang putih kemungkinan mengandung  senyawa  flavonoid.  Ini  dapat dilihat  dari  bercak  yang  mempunyai  harga  Rf 0,15. Jika dilihat dengan UV 254 nm berwarna coklat  kekuningan,  pada  UV  366  nm    coklat
gelap  dan  setelah  diuapi  dengan  uap  amonia memberikan bercak warna  kuning intensif. Hal ini  disebabkan  dengan  penambahan  ammonia (basa)  akan  menyebabkan  gugus  hidroksil terionisasi, sehingga terjadi pergeseran panjang gelombang  yang  diserap  dan  terbentuk  warna kuning yang lebih intensif.
Senyawa  flavonoid  memiliki  inti  fenol sehingga  kemungkinan  mekanisme  aksi  umbi bawang  putih  dalam  membunuh  fungi  adalah sama  dengan  mekanisme  aksi  senyawa  fenol pada  umumnya  yaitu  melalui  denaturasi  dan koagulasi protein sel-sel fungi.
Flavonoid  akan  membentuk  komplek dengan  protein  membran  sel  jamur  dan pembentukan  komplek  tersebut  menyebabkan kebocoran  isi  sel  dan  kematian  bakteri. Flavonoid  juga  dapat  menyebabkan  koagulasi protein,  sehingga  sel  mengalami  lisis  karena perubahan  permeabilitas  membran  sel  jamur (Simbara, 2008).

## Pemeriksaan saponin
Saponin  adalah  senyawa  yang  bersifat polar sehingga dimungkinkan dapat larut dalam air.  Glikosida  saponin  jika  dideteksi  dengan menggunakan  pereaksi  semprot  vanilin  asam sulfat  atau  anisaldehid  asam  sulfat  akan memberikan  warna  biru  sampai  biru  violet terkadang  berupa  bercak  berwarna  merah  atau berupa  kuning-coklat.  Saponin  tidak  terdeteksi dalam UV 254 nm dan UV 366 nm (Wagner, 1984). Menurut Harborne (1996) adanya senyawa  saponin  ditunjukkan  dengan  warna bercak  biru,  violet  biru  atau  kadang-kadang kekuningan  setelah  disemprot  dengan  pereaksi Vanilin-asam  sulfat.  Pemeriksaan  senyawa saponin  dalam  infusa  umbi  bawang  putih menggunakan fase gerak kloroform : metanol : air  dengan  perbandingan  (1:3:1) v / v .  Fase  diam yang  digunakan  adalah  silika  gel  GF  dengan jarak  perambatan  8  cm.  Hasil  kromatografi lapis tipis diketahui bahwa infusa umbi bawang putih  kemungkinan  mengandung  senyawa saponin,  hal  ini  dapat  dilihat  dari  adanya  2 bercak    yang  memiliki  harga  Rf 1 sebesar  0,31 dan  Rf 2 sebesar  0,84.  Pada  UV 254 nm terjadi pemadaman  bercak  dan  pada  UV 366 nm bercak tidak  terdeteksi.  Setelah  disemprot  pereaksi vanilin-asam  sulfat  memperlihatkan  bercak berwarna kuning kecokelatan. Dari kromatogram dapat diduga bahwa pemeriksaan saponin  dengan  menggunakan  kromatografi lapis  tipis  menunjukkan  bahwa  pada  sampel terbukti  adanya  saponin,  hanya  saja  pada
pemeriksaan UV 254 nm diduga terdapat senyawa lain yang menumpuk sehingga terjadi pemadaman bercak.
Saponin  termasuk  senyawa  terpen  dan diduga  memiliki  aktivitas  antimikroba,  dengan mengganggu  membran  sel  pada  bagian  atau komponen  lipofil  dari  membran  mikroba (Robinson,  1995).  Seluruh  saponin  triterpen dan kelompok saponin monodesmosida mempunyai  aktivitas  menghemolisis  darah, sedangkan saponin bis-desmosida tidak (Rahalison et al , 1995).
Hasil dari skrining fitokimia menunjukkan infusa  umbi  bawang  putih  mengandung flavonoid  dan  saponin.  Senyawa  fenol  akan mendenaturasi  protein  sel  dan  mengerutkan dinding  sel  sehingga  dapat  melisiskan  dinding sel  jamur.  Senyawa  fenol  juga  dapat  merusak membran  sel  sehingga  terjadi  perubahan permeabilitas  sel  yang  akan  mengakibatkan terhambatnya  pertumbuhan  sel  atau  matinya sel.  Saponin  adalah  senyawa  aktif  permukaan yang kuat yang menimbulkan busa jika dikocok dalam  air  dan  pada  konsentrasi  yang  rendah sering menyebabkan hemolisis sel darah merah. Beberapa  saponin  bekerja  sebagai  antimikroba (Robinson, 1995).
Dengan berbagai mekanisme
penghambatan pertumbuhan jamur oleh flavonoid,  dan  saponin  terhadap Candida albicans maka  dapat  dikatakan  bahwa  infusa umbi  bawang  putih  mempunyai  aktivitas antijamur,  kemungkinan  dengan  merusak membran  sel  jamur,  mendenatuasi  protein  sel serta  mengganggu  permeabilitas  membran  sel jamur.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Khatib,  I.A.M.  (2005). Bawang  Dalam Pengobatan Islam , Cetakan ketiga, Penerbit Bumi Aksara, Jakarta, hal 6.
Alexopoulus,  C.J.  (1970). Introductory  of Micology ,  2 nd edition,  John  Willey  Inc,
New York, hal 408-411.
Anonim.  (1986). Cara  Pembuatan  Simplisia , Departemen  Kesehatan  RI,  Jakarta,  hal  4- 11.
Anonim.  (1995). Materia  Medika  Indonesia , Jilid  V,  Departemen  Kesehatan  RI, Jakarta, 236-239.
Anonim.  (1995). Farmakope  Indonesia ,  Edisi IV,  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia, Jakarta.
Anonim.  (2000). Inventaris  Tanaman  Obat Indonesia (I) Jilid 1, Departemen
Kesehatan  &  Kesejahteraan  Sosial  RI
Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Kesehatan, Jakarta, 15-16.
Ansel, H.C. (1989). Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, edisi ke-4, Universitas  Indonesia Press, Jakarta, 411-418.
Backer, C.A., & van den Brink, R.C.B. (1968). Flora  of  Java ,  Volume  III,  NVP, Noordhoff Broningen, The Netherland.
Clayton, C. (1986). Keputihan & Infeksi Jamur Kandida Lain , Arcan, Jakarta.
Dewi,  D.K.  (2004). Infeksi  Jamur  Pada  Kulit , Bali Post, 19 Desember 2004.
Edberg,  S.  C.,  &  Berger,  S.A.  (1986),
Antibiotik  dan  Infeksi ,  Penerjemah  dari Candra Sanusi, EGC, Jakarta.
Gandahusada, S. (1992).
Parasitologi
Kedokteran ,  Edisi  III,Fakulas  Kedokteran Universitas  Indonesia,  UI  Press,  Jakarta, 315.
Gritter,  R.J.,  Bobbit,  J.M.,  Schwarting,  A.E.
(1991). Pengantar  Kromatografi ,  Edisi  II, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, Penertbit ITB, Bandung.
Harborne.  (1996). Metode  Fitokimia  Penuntun Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan , Cetakan ke-2, Diterjemahkan oleh
Kokasih Padmawinata dan Iwang Soediro, Penerbit ITB Bandung, 5, 102, 104.
Jawetz, E., Melnick. J.L., Adelberg. A. (1995).
Mikrobiologi Kedokteran , alih bahasa oleh Nugroho  E., Edisi 20, Jakarta,242-243.
Johnson,  A.G.  et  al. (2000). Mikrobiologi  dan Imunologi Seri  Ringkasan,  Binarupa Aksara, Jakarta, 167-183.
Markham,  K.R.  (1998). Cara  Identifikasi Flavonoid ,  Diterjemahkan  oleh  Kokasih Padmawinata, Penerbit ITB Bandung.
Marsh,  R.W.  (1977). Sistemic  Fungicides ,  2 nd Edition, Longman, London, hal 131-133.
Neal,  M.J.  (2005). At  a  Glance  Farmakologi Medis ,  Edisi  Kelima,  Erlangga  Medical
Series, Jakarta, hal 86-87.
Nurani, L.H. (2008). Diktat Kuliah Farmakognosi , Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta. Pelczar,  M.S.,  &  Chan.  (1986). Dasar-Dasar Mikrobiologi , diterjemahkan oleh  Ratna Sri  Hadiutomodkk,  UI-Press,  Jakarta,  41, 46-47, 116-118, 202.
Rahalison, L., Hamburger, M. Hostettmann, K, Morod,  M.,  &  Frenk  E,A.  (1991).
Bioautographic  Agar  Overlay  Method  for the  Detection  of  Antifungal  Coumpound from Higer Plants,
Phytochemical
Analysis , 2.
Robinson,  T.  (1991). Kandungan  Organik Tumbuhan Tinggi , Edisi VI, Diterjemahkan oleh Kokasih Padmawinata, Penerbit ITB Bandung, 156-
157.
Roser,  D.  (2005). Bawang  Putih  Untuk Kesehatan ,  Edisi  keempat,  Alih  Bahasa: Dr.  Djaja  Surya  Atmadja,  Bumi  Aksara, Jakarta.
Sastrohamidjoyo,  H.  (1991). Kromatografi , Edisi  II,  Cetakan  ke-2,Penerbit  Liberty, Yogyakarta.
Sianturi,  M.H.R.  (2005). Keputihan  Suatu Kenyataan Dibalik Suatu Kemelut , Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, 1-4.
Simbara,  Ari.  (2008). Bahan  Kuliah  Kimia
Medisinal ,  Fakultas  Farmasi  Universitas Ahmad  Dahlan,  Yogyakarta,  20  Februari 2008.
Stahl,  E.  (1985). Analisis  Obat  secara
Kromatografi  dan  Mikroskopi ,  Penerbit ITB Bandung, 3-4, 16-17.
Sudarsono, dkk. (1996). Tumbuhan Obat , Pusat Penelitian  Obat  Tradisional  Universitas Gadjah  Mada  (PPOT-UGM)  Yogyakarta, hal 10-19.
Syamsuhidayat,  S.S.,  Hutapea,  J.  R.  (2001). Inventaris  Tanaman  Obat  (I)  Jilid  2,
Departemen Kesehatan RI Badan Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan,
Departemen Kesehatan RI, Jakarta, 163.
Tyler, L. & Brandy, L. (1970).
Pharmacognosy ,    6 th ,  Lea  and  Febiger, Philadelphia, 186.
Voigt, Rudolf. (1986). Buku Pelajaran
Teknologi  Farmasi ,  Diterjemahkan  oleh
Soendani Noerono Soewandhi dan Matilda B.  Widianto,  edisi  V,  Penerbit  Gadjah Mada Press, Yogyakarta, 564-574.
Volk, W.A, Wheeler, M.F. (1990). Mikrobiologi  Dasar ,  Edisi  5,  Jilid  II, diterjemahkan oleh
Markham,
Penerbit Erlangga, Jakarta, 148. 152-153.
Wagner,  H.,  Bladt,  S.  (1984). Plant  Drug Analysis , Springer-Verlag Berlin Heidelberg, Germany, 170, 306.