homepage http://jurnal.polbangtanmanokwari.ac.id
Perbandingan Metode Isolasi pada Deteksi Kulit Sapi, Kerbau, Kambing, dan Babi sebagai Bahan Baku Rambak Kulit
Dyah Triasih 1* , Rulli Riana Dewi 2 , Yuny Erwanto 3 , Nanung Agus Fitrianto 4 1 Program Studi Pengolahan Hasil Ternak, Politeknik Negeri Banyuwangi
2,3,4 Departemen Teknologi Hasil Ternak, Fakultas Peternakan, Universitas Gadjah Mada
Kulit adalah hasil samping dari pemotongan ternak yang seiring waktu semakin  meningkat permintaan konsumen bersamaan dengan meningkatnya pertumbuhan penduduk. Hal ini yang mendorong produsen berinovasi menciptakan produk baru. Salah satu inovasi produk yaitu pada  rambak  kulit.  Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk mengidentifikasi  bahan  dasar  yang  digunakan  pada rambak  kulit.  Salah  satunya  dengan  analisis  genetik melalui  penanda molekuler.  Keberhasilan teknik molekuler  ditentukan  oleh  tertangkapnya  DNA  genom dari  sampel.  Tahapan  utama  analisis  genetik  adalah isolasi DNA. Metode Sambrook dan metode Wasko yang telah  dimodifikasi  digunakan  dalam  penelitian  ini. Sampel  yang  digunakan  berupa  kulit  sapi,  kerbau, kambing,  dan  babi  dalam  keadaan  segar  yang  telah diawetkan dalam freezer dengan suhu -20 o C. konsentrasi dan  kemurnian  DNA  diukur  dengan  spektrofotometer pada  λ260  dan  λ280.  Amplifikasi  gen  cytochrome  b menggunakan primer universal. Elektroforesis menggunakan  agarose  sebesar  0,8%  untuk  isoalsi  DNA dan 1,5% untuk amplifikasi PCR selama 30 menit dengan tegangan  100  volt.  Berdasarkan  hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  metode  Sambrook  yang  telah dimodifikasi memberikan hasil yang baik, pita DNA yang dihasilnya  terlihat  secara  jelas  dibandingkan  dengan menggunakan  metode  Wasko  yang  telah  dimodifikasi. Konsentrasi dan kemurnian DNA metode Sambrook lebih baik  dibandingkan  dengan  metode  Wasko.  Amplifikasi PCR  gen  cytochrome  b  menghasilkan  produk  PCR sebesar 359 bp pada kulit sapi, kerbau, kambing, dan babi.

## ABSTRAK ARTIKEL INFO
Sejarah artikel Diterima 18/05/2020
Diterima dalam bentuk revisi 25/06/2020 Diterima dan disetujui 26/06/2020 Tersedia online 30/06 /2020 Kata kunci : DNA Metode wasko Metode sambrook Kulit
PCR-RFLP
Jurnal Triton, Vol. 11 No. 1 (Juni, 2020) : 37-44
ISSN : 2085-3823

## ABSTRACT
Skin is the the side products from cattle slaughtering. Along  with the growth  of  the population, the needs of the food products increased. This encourages the manufacturer  to  innovate,  create  new  products according  to  the  market,  but  not  rarely  the manufacturer mix the raw materials used. One of the product innovations is skin rambak. The purpose of this research is to identify the basic materials used in  skin  rambak.  One  only  with  genetic  analysis through molecular markers. Result of the molecular technique is determined by the DNA is the genome from the sample. The main stages of genetic analysis is  the  isolation  of  the  DNA.  Sambrook  method  and the  modified  Wasko  method  used  in  this  research. The  sample  used  in  the  form  of  cow  skin,  buffalo, goats,  and  pigs  in  the  fresh  state  that  has  been
preserved in the freezer with the temperature -20 o C. The concentration and purity of DNA were measured with  spectrophotometer  on  λ260  and  λ280. Amplification of genes cytochrome b  using universal primary. Agarose 0.8 percent of isolate DNA and 1.5 percent  for  amplification  PCR for  30  minutes  with the  voltage  100  volts.  Based  on  the  results  of  the study  showed  that  the  modified  Sambrook  method provided good results, the result DNA band had been compared  using  a  modified  Wasko  method.  The concentration and purity of DNA Sambrook method were  better  than  the  Wasko  method.  Amplification PCR genes cytochrome b produces PCR products of 359 bp on the skin of a cow, buffalo, goats, and pigs.

## PENDAHULUAN
Keamanan pangan merupakan salah satu faktor penting yang harus menjadi pertimbangan  dalam  menentukan  makanan yang  dapat dikonsumsi, tidak hanya berkaitan dengan  aspek  kesehatan  namun  kehalalan dalam  suatu  makanan  yang  harus  menjadi perhatian.  Hal  ini  karena  di  Indonesia penduduknya  mayoritas  beragama  muslim. Mengkonsumsi  produk  makanan  halal  agama islam untuk meningkatkan kualitas hidup yang dijamin  oleh  Undang  –  Undang  Dasar  1945, khususnya  Undang  –  Undang  Perlindungan Konsumen  Nomor  8  Tahun  1999  serta mengkonsumsi  yang  halal  itu  merupakan kewajiban bagi setiap muslim.
Pengolahan  makanan  di  era  modern sudah sangat kompleks.
Produsen
menggunakan berbagai teknologi untuk memproduksi  suatu  produk  makanan.  Namun dalam memproduksi makanan banyak dimasukkan  bahan  tambahan    termasuk  bahan pewarna.  Kurang  akses  komunikasi  antara produsen  dengan  konsumen  mulai  dari pengadaan  bahan  baku  dan  bahan  tambahan,
proses  pengolahan,  pengemasan,  distribusi pengangkutan,  dan  penjualan  akibatnya  sulit untuk  mengetahui  kehalalan  suatu  produk makanan.
Metode  analisis  yang  digunakan  dalam mendeteksi bahan dasar yang digunakan dalam suatu  produk  pangan  adalah  dengan  metode analisis berbasis protein maupun DNA. Metode berbasis  protein  meliputi  elektroforesis  SDS- PAGE sedangkan yang berbasis DNA meliputi PCR  amplifikasi  DNA  mitokondria,  analisis PCR-RFLP,  dan  PCR  Sequencing.  Kendala yang muncul dalam metode yang berbasis DNA adalah  mudah  tidaknya  isolasi  DNA.  DNA berkualitas  tinggi  yang  didapat  dalam  suatu ekstraksi  merupakan  suatu  kaidah  dasar  yang harus dipenuhi dalam studi molekuler.
Isolasi  DNA  merupakan  tahap  awal dalam  menentukan  tingkat  keberhasilan  untuk tahap  selanjutnya.  Belum  adanya  penelitian tentang  isolasi  DNA  pada  kulit  hewan  maka dari  itu  diperlukan  penelitian  tentang  isolasi DNA  pada  kulit  sebagai  bahan  dasar  dalam pembuatan  rambak  kulit.  Metode  umum  yang digunakan untuk isolasi DNA yang mengalami
modifikasi  sehingga  dapat  digunakan  untuk mengisolasi  kulit  hewan.  Oleh  karena  itu diperlukan suatu metode untuk menguji tingkat efektifitasnya  dalam  mengisolasi  DNA  untuk mendapatkan  hasil  yang  terbaik  secara kuantitas  dan  kualitas  DNA  yang  dihasilkan serta  efisiensi  waktu  dalam  pengerjaannya dalam  mengisolasi  DNA  kulit  hewan  untuk mendeteksi bahan dasar yang digunakan dalam rambak kulit. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk  mencari  metode  isolasi  DNA  yang terbaik  untuk  mendeteksi  bahan  dasar  pada produk rambak. Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada masyarakat  sebagai  identifikasi  bahan  dasar yang  digunakan  dalam  produk  rambak  kulit sehingga  dapat  digunakan  dalam  pencegahan terhadap pemalsuan produk makanan.

## METODE
Bahan  yang  digunakan  sebagai  sampel dalam  penelitian  ini  adalah  kulit  sapi,  kulit kerbau,  kulit  kambing  dan  kulit  babi  dalam kualitas  kulit  segar  yang  diawetkan.  Bahan lainnya  seperti  buffer  TEN/STE  (10  mM  Tris HCl, 1 mM EDTA, 0,1 M NaCl) (Merc), larutan Phosphat  Buffer  Saline  (PBS)  (Merc),  larutan Sodium  dodecyl  sulfate  (SDS)  10%  (Merc), larutan  proteinase  K  (Thermo  Scientific), larutan  NaCl  5  M  (Merc)  ,  Larutan  Phenol (Merc),  larutan  Chloroform  Isoamyl  Alcohol (CIAA)  (Merc),  larutan  Chloroform  (Merc), Isoamil  alkohol  (Merc),  larutan  Ethanol  100% (Ethanol absolut), RNAase (Invitrogen) larutan Ethanol 70% (Merc), Larutan Tris EDTA (TE), Maxima  Hot  Start  Green  PCR  Master  Mix (Thermo  Scientific),  aquabidest,  buffer  Tris
Boric  EDTA  (TBE)  1X,  Ethidium  bromide, agarose  (Thermo  Scientific),  DNA  ladder (Thermo Scientific), dan Loading dye (Thermo Scientific).  Alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  mortar,  Refrigerated Microcentrifuge (>10.000 x g), tabung ependorf 0,2  ml,  tabung  ependorf  0,5  ml  atau  1,5  ml, kotak  penyimpanan  sampel,  rak  tabung eppendorf,  waterbath,  vortex  mixer,  pipetor atau pipetmen, tip pipet (warna  putih, biru dan kuning),  sarung  tangan  (hand  glove),  masker, autoclave,  nanodrop  spektrofotometer,  mesin Thermal cycler,  horizontal  agarose  gel electrophoresis  apparatus  (MUPID),  Well- forming combs (sisir pembentuk sumur), power supply, microwafe atau hotplate, UV transilluminator, dan camera digital. Kulit segar sapi, kerbau, kambing, dan babi dibeli dari RPH Giwangan  di  wilayah  Yogyakarta.  Kulit dipotong  kecil-kecil  secara  terpisah  untuk menghindari kontaminasi, setelah itu dilakukan pengepakan kulit kemudian disimpan pada suhu -20 o C sampai digunakan untuk penelitian dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel  1. Perbandingan  sampel    kulit  sapi,
kerbau, kambing dan kulit babi No.  Sampel Perbandingan Presentase Kulit 1. Kulit Sapi 100% 2. Kulit Kerbau 100% 3. Kulit Kambing 100% 4. Kulit Babi 100%
Primer  universal  yang  digunakan  dari gen cytochrome b sesuai publikasi Kocher et al.
(1989), dengan susunan basa sebagai berikut : Forward :  L14841  (5’-CCA  TCC  AAC  ATC TCA GCA TGA TGAAA-3’)
Reverse :  H15194  (5’-GCC  CCT  CAG  AAT GAT ATT TGT CCT CA-3’)
dan  menggunakan  enzim  restriksi  BamHI  dan BseDI  untuk  memotong  DNA  dari  gen cytochrome b .
Metode  ekstraksi  dan  purifikasi  DNA menggunakan prosedur Sambrook et al . (1989), yang  telah  dimodifikasi,  yaitu  sampel  ±30  mg sampel  dipotong  dan  digerus  dengan  mortar hingga  halus  dan  kemudian  dimasukkan  ke dalam tube kapasitas 1,5 ml. Ekstraksi diawali dengan menambahkan 500 μl  buffer TEN/STE setelah itu divortex,  dan 30 μl proteinase K , 50 µl 10% SDS, dan inkubasi kedalam water bath pada  temperatur  42°C  selama  18  –  19  jam. Sebanyak  50  µl 5M  NaCl, 400  µl phenol,  400 µl  CIAA  dan  inkubasi  kedalam water  bath dengan  suhu  37 ° C  selama  1  jam.  Kemudian sentrifugasi 3.000 rpm dengan suhu 4 ° C selama 5 menit. Pindahkan supernatan ke tabung baru dengan menambahkan 50 µl 5M NaCl dan 800 µl ethanol absolut, kocok dengan tangan sampai terbentuk  benang  –  benang  putih.  Inkubasi  di freezer selama  1  jam  dengan  suhu  -20 ° C.
Sentrifugasi  8000  rpm  selama  5  menit, kemudian  buang  cairannya.  Tambahkan  1000 µl  ethanol  70%.  Kemudian  sentrifugasi  lagi 8000  rpm  dengan  suhu  4 ° C  selama  5  menit.
Buang  larutan  dan  tiriskan  hingga  tak  ada larutan tertinggal selanjutkan keringkan menggunakan  densikator  selama  ±19  jam sampai  benar-benar  kering  dan    yang  terakhir menambahkan  50  µl  TE  dan  simpan  di temperatur -20 ° C sampai digunakan.
Ekstraksi dan Purifikasi DNA
mengikuti  prosedur  Wasko et  al. (2003)  yang telah  dimodifikasi.  Sebanyak  ±30  mg  sampel dipotong  –  potong,  dimasukkan  ke  dalam tabung  eppendorf  1,5  ml.  PBS  dengan
perbandingan  1:1  dan  larutan  buffer  TNES sebanyak  400  µl  ditambahkan  dalam  tabung, kemudian  divortex.  5  µl RNAase ditambahkan dalam larutan. Larutan diinkubasi menggunakan waterbath pada  suhu  42 ° C selama 1 jam. Larutan ditambah 6 µl proteinase K ,  kemudian  diinkubasi  lagi  pada  suhu  42 O C semalaman  untuk melisiskan  jaringan.  Larutan ditambahkan  fenol,  kloroform,  dan  isoamil alkohol  (PCI)  dengan  perbandingan  25:24:1, kemudian  divortex  dan  diinkubasi  pada  suhu ruang  selama  5  menit  dan  diulangi  hingga  3 kali, kemudian disentrifugasi 10.000 rpm pada suhu 15 ° C selama 15 menit. Supernatan diambil dan  dipindah  ke  tabung  baru,  kemudian ditambah 1 M NaCl dan etanol absolut, vortex, dan diinkubasi pada suhu ruang selama 5 menit. Sentrifugasi 10.000 rpm pada suhu 15 ° C selama 15  menit.  Supernatan  yang  terbentuk  dibuang , pellet  diambil  kemudian  dicuci  dengan  100  µl etanol  70%,  kemudian  disentrifugasi  10.000 rpm  pada  suhu  5 ° C  selama  lima  menit. Pencucian  dilakukan  sebanyak  2  –  3  kali. Supernatan  yang  terbentuk  dibuang,  kemudian pellet dikeringkan. 30 µl TE buffer ditambahkan dalam tabung eppendorf, kemudian disimpan pada suhu -20 ° C.
Amplifikasi gen cyt b dilakukan dalam volume akhir 25 μl yang mengandung dH 2 O 2 μl,Green  PCR master  mix 20  μl  (2X  hot  start PCR buffer, 400 µM dATP, 400 µM dGTP, 400 µM  dCTP,  400  µM  dTTP,  dan  4  mM  Mg 2+ ) (Thermo Scientific), primer universal reverse 1 µl  (20  pmol)  (Thermo  Scientific), primer universal  forward 1  µl  (20  pmol)  (Thermo
Scientific)  dan  DNA  hasil  ekstraksi  1  µl. Amplifikasi dilakukan dengan program sebagai
Jurnal Triton Vol. 11 No. 1 (Juni, 2020) : 37-44
berikut:  predenaturasi  94 ° C  selama  2  menit, denaturasi  95 ° C  selama  36  detik, annealing 53 ° C selama 72 detik, extension 72 ° C selama 84 detik, dengan siklus PCR diulang sebanyak 35 kali. Post  extension 72 ° C  selama  3  menit, kemudian  suhu  diturunkan  sampai  mencapai 30 ° C. kemudian diambil 8 µl masing – masing sampel dari hasil PCR ditambahkan loading dye 2 µl di elektroforesis pada 100 V gel agarose 2 %  selama  30  menit  dalam    buffer  TBE  1X. Marker 100 bp (Thermo Scientific) digunakan sebagai DNA ladder. Hasil PCR disimpan pada suhu  -20 ° C  sampai  digunakan  untuk  analisis selanjutnya.
Elektroforesis. Pengecekan  kualitas DNA  pada  isolasi  DNA  dengan  elektroforesis diambil  12  µl  masing  –  masing  sampel  dari isolasi  DNA  ditambahkan  3  µl loading  dye dimasukkan kedalam gel agarose 1% ditambahkan ethidium bromida sebanyak 5 µl, tegangan 100 volt selama 30 menit dalam buffer TBE 1X. Pada amplifikasi PCR gen cytochrome b dengan elektroforesis diambil 10 µl masing – masing sampel dari hasil PCR ditambahkan 3 µl loading dye dimasukkan  kedalam  gel  agarose 2% ditambahkan ethidium bromida sebanyak 5 µl,  tegangan  100  volt  selama  30  menit  dalam buffer  TBE  1X. Marker 100  bp  (Thermo Scientific) digunakan sebagai DNA ladder .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Isolasi DNA
Pada penelitian memungkinkan menghasilkan  isolat  DNA  yang  berbeda  pada metode  isolasi  yang  digunakan.  Hal  ini tergantung  pada  efektifitas  metode  tersebut dalam menghasilkan isolat DNA baik dari segi
kualitas maupun kuantitas serta efisiensi waktu isolasinya.  Metode  isolasi  sangat  bervariasi baik dalam pelaksanaannya dalam mendapatkan data, tata cara, maupun tingkatan target data yang diinginkan sesuai pelaksanaannya, sumberdaya manusia, fasilitas, dan dana penelitian (Ardiana, 2009).
Metode  Wasko et  al. (2003),  dan metode  Sambrook et  al. (1989),  yang dimodifikasi  merupakan  metode  isolasi  untuk jaringan hewan. Metode Sambrook dinilai lebih tepat diaplikasikan pada jaringan hewan karena mampu menghasilkan kualitas DNA yang lebih baik  dibandingkan  dengan  metode  Wasko (Gambar 1).
Berdasarkan  hasil  penelitian  isolasi DNA  didapatkan  hasil  bahwa  dengan  metode sambrook  yang  telah  dimodifikasi  didapatkan hasil  yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan metode Wasko. Terlihat adanya pita – pita DNA yang  terlihat  jelas  dan  terang  pada  keempat sampel  kulit  dibandingkan  dengan  metode Wasko,  namun  pada  keempat  sampel  kulit nampak adanya smear . Adanya smear menandakan adanya kontaminasi RNA, DNAnya  mengalami  degradasi  saat  isolasi dimana  fragmen  –  fragmen  DNA  dengan ukuran  yang  berbeda  tertahan  oleh  gel  sesuai dengan ukurannya (Vivikanada, 2014). Metode sambrook  memiliki  hasil  isolasi  DNA  yang lebih baik dibandingkan dengan metode Wasko. Hal  ini  disebabkan  karena  adanya  perbedaan langkah  –  langkah  dalam  tahap  isolasi  DNA seperti pada penggunaan reagen tertentu dengan volume  yang  lebih  besar  dan  perbedaan konsentrasi  yang  digunakan  (Fitrianingsih, 2013).
Jurnal Triton Vol. 11 No. 1 (Juni, 2020) : 37-44
Gambar  1. Elektroforesis  Hasil  Isolasi  DNA. Metode  Wasko  pada  bagian  atas:    Lajur  1  = Sampel  kulit  sapi,  Lajur  2  =  Sampel  kulit kerbau,  Lajur  3  =  Sampel  kulit  kambing,  dan Lajur 4= sampel  kulit babi. Metode Sambrook pada  bagian  bawah  :  Lajur  1  =  Sampel  kulit sapi, Lajur 2 = Sampel kulit kerbau, Lajur 3 = Sampel  kulit  kambing,  dan  Lajur  4=  sampel kulit babi.
Kosentrasi  dan  Kemurnian  Metode  Isolasi DNA
Nilai absorbansi 260 pada spektrometer merupakan  angka  penyerapan  maksimal  oleh nukleotida,  sedangkan  absorbansi  280  nm adalah penyerapan maksimal protein. konsentrasi DNA didapatkan dengan mengalihkan  nilai  absorbansi  260  nm  x  50  x faktor pengenceran (Sulandari dan Zein , 2003).
Nilai kuantitas DNA genom dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2 . Nilai Kuantitas DNA Genom
Metode Sampel Panjang Gelombang Konsentrasi DNA  template (µg/ml) Rasio kemurnian DNA λ 260 (nm)  λ 280 (nm) Wasko Kulit sapi 0,147 0,168 367,5 0,875 Kulit kerbau 0,135 0,153 337,5 0,882 Kulit kambing 0,155 0,169 387,5 0,917 Kulit babi 0,159 0,165 397,5 0,964 Sambrook Kulit sapi 0,152 0,175 380 0,868 Kulit kerbau 0,141 0,161 352,5 0,876 Kulit kambing 0,158 0,178 395 0,887 Kulit babi 0,169 0,172 422,5 0,983
Berdasarkan  nilai  kuantitas  isolasi DNA genom didapat nilai kemurnian antara 0,8 – 0,9, hal ini menunjukkan bahwa DNA sampel tersebut  telah  terkontaminasi  oleh  protein  atau phenol  didalam  larutan  (Brown,  2010). Menurut  Sambrook et  al. (1989),  hasil  isolasi DNA  dikatakan  murni  apabila  memiliki  nilai kemurnian  antara  1,8  hingga  2,0.  Secara
kuantitas metode Sambrook memiliki lebih baik daripada  metode  Wasko.  Perbedaan  tingkat konsentrasi  DNA  mengakibatkan  perbedaan ketebalan  pita.  Hal  ini  karena  perlakuan  fisik yang berbeda dan kemampuan buffer ekstraksi dalam  memecah  sel.  Fungsi buffer ekstraksi untuk  mempermudah  dalam  memecahkan  sel dan  menentukan  konsentrasi  DNA  yang
dihasilkan.  kesimpulannya  bahwa  metode isolasi  memiliki  pengaruh  besar  terhadap kualitas dan kuantitas DNA hasil isolasi. Amplifikasi PCR Gen Cytochrome b Pada penelitian ini amplifikasi template DNA menggunakan pasangan primer universal L14841 (5’- CCA TCC AAC ATC TCA GCA TGA  GCA  TGA  TGA  AA  –  3’)  sebagai forward dan H15194 (5’-GCC CCT CAG AAT GAT  ATT  TGT  CCT  CA-3’)  sebagai reverse primer.  Pasangan  primer  ini  menghasilkan amplikon  sebesar  359  bp.  Hasil  amplifikasi DNA  sampel  kulit  sapi,  kerbau,  kambing,  dan babi dengan menggunakan metode Wasko dan metode Sambrook dapat dilihat pada Gambar 2 dan 3.
Gambar  2. Elektroforesis  Produk  PCR.
Metode  Wasko  :Lajur  1  =  Sampel  kulit  sapi, Lajur 2 = Sampel kulit kerbau, Lajur 3 = Sampel kulit kambing, dan Lajur 4= sampel kulit babi.
Gambar 3. Elektroforesis Produk PCR Metode Sambrook: Lajur 1 = Sampel kulit sapi, Lajur 2 = Sampel kulit kerbau, Lajur 3 = Sampel kulit kambing, dan Lajur 4= sampel kulit babi.
Berdasarkan hasil amplifikasi PCR gen cyt  b DNA  yang  diperoleh  dari  metode Sambrook  yang  dimodifikasi    dengan  metode Wasko  mampu  mengamplifikasi  sampel  kulit sapi,  kerbau,  kambing,  dan  babi.  Amplifikasi gen  cyt  b  pada  sampel  kulit  menghasilkan ukuran  fragment  359  bp.  Hal  sesuai  dengan penelitian Erwanto et al . (2011), menghasilkan ukuran  fragmen  359  bp  pada  sampel  daging babi  dan  daging  ayam.  Terlihatnya  pita  DNA yang  sejajar  menunjukkan  bahwa  keberadaan sampel  kulit  telah  diisolasi  pada  metode Sambrook maupun Wasko dan dapat terdeteksi sehingga  menunjukkan  bahwa  metode  isolasi DNA dapat digunakan.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Isolasi  DNA  pada  kulit  sapi,  kerbau, kambing,  dan  babi  dengan  menggunakan metode Sambrook yang dimodifikasi menghasilkan kualitas dan kuantitas DNA yang lebih baik dibandingkan dengan metode Wasko. Hasil amplifikasi DNA gen cyt b menghasilkan ukuran fragmen sebesar 359 bp.

## DAFTAR PUSTAKA
Ardiana, D.W. (2009). Teknik isolasi DNA genom  tanaman  pepaya  dan  jeruk dengan menggunakan modifikasi bufer CTAB. Buletein Teknik Pertanian, 14, 12 – 16.
Brown,  T.A.  (2010).  Gene  Cloning  and  DNA Analysis. Sixth Edition. Faculty of Life
Science. University of Manchester.
Erwanto,  Y.,  M.Z.  Abidin,  A.  Rohman,  & Sismindari. (2011). PCR – RFLP Using BseDI  enzyme  for  pork  authentication in sausage and nugget products. Media Peternakan, 14 – 18.
Fitrianingsih.  2013.  Optimalisasi  Isolasi  DNA pada  Daging  Olahan  sebagai  Dasar untuk  Deteksi  Kontaminasi  Daging Babi.  (Tesis).  Program  Pascasarjana
Fakultas
Peternakan. Universitas Gadjah Mada.
Kocher,  Z.,A.  S.V.  Thomas,  S.  Meyer, Edwards  &  F.X.  Paabo.  (1989). Dynamic  of  mitochondrial  DNA evolution in animal: amplifications and secuencing  with  conversed  primers. Proceedings  of  the  National  Academy of science of the USA, 86, 6169 – 6200.
Sambrook,  J.,  E.F.  Fritch  and  T.  Maniatis.
(1989). Molecular Cloning, A.
Laboratory  Manual.  2 nd .  Cold  Spring Harbour Lab. Press. New York.
Sulandri,  S.  &  M.S.A.  Zein  (2003).  Panduan Praktikum Laboratorium DNA. Bidang Zoologi.  Pusat  Penelitian  Biologi. Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.
Vivikananda, E. (2014). Deteksi DNA Babi dan
DNA  Sapi  dengan  Menggunakan Metode Insulated Isothermal Polymerase  Chain  Reaction (PCR).
(Skripsi).  Program  Sarjana  Fakultas Farmasi.  UIN  Syarif  Hidayatullah
Jakarta.
Wasko,  A.P.,  C.  Martins,  C.  Oliveira,  &  F. Foresti. (2003).
Non-destructive
genetic sampling of fish. An improved method  for  DNA  extraction  from  fish
fins  and  scale.  Hereditas,  138,  161  – 165.