## HISTOPATOLOGI HEPAR TIKUS PUTIH (Rattus Novergicus) YANG DIINDUKSI DENGAN PARASETAMOL DOSIS TOKSIK PASCA PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUN KELOR (Moringa Oleifera)

## Noer Kumala Indahsari
Departemen Biokimia, Fakultas Kedokteran Univesitas Wijaya Kusuma Surabaya email: noerkumala04176@gmail.com
Received 16 Oktober 2017 Accepted 28 Nopember 2017

## Abstrak
Hepar tempat utama metabolisme obat yang disebut juga sebagai biotransformasi dan hasil akhir dari reaksi ini berupa substansi yang tidak aktif dan lebih larut dalam air, sehingga cepat diekskresi melalui empedu dan urin. Setiap gangguan hati dapat menghambat fungsi normal tubuh. Kerusakan sel-sel hepar dapat disebabkan antara lain oleh obat, virus, dan berbagai  senyawa  kimia  lain  mempunyai  daya  hepatotoksik,  antara  lain  adalah parasetamol.Penelitian  ini  menggunakan  5  kelompok  Tikus  Putih  (masing-masing kelompok 5 ekor tikus) yang diinduksi parasetamol dosis toksik kemudian diberikan ekstrak Etanol Daun Kelor ( Moringa Oleifera ) dengan dosis 250mg/200BB, 500mg/200 BB, dan 1000mg/200BB selama 7 hari untuk kelompok P1, P2 dan P3 sedangkan kelompok Kontrol positif hanya diberi pakan dan minum biasa, serta kelompok control negatif hanya diberikan parasetamol dosis toksik saja. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kelompok perlakuan P3 dengan pemberian ekstrk etanol dosis tinggi yaitu 1000 mg/200 BB dapat melindungi hepar tikus yang telah diinduksi dengan parasetamol dosis toksik, hal ini dapat dibuktikan dengan melihat  gambaran  histopatologi  hepar  tikus  yang  mengalami  pengurangan  baik  dari  sisi peradangan, nekrosis maupun degenerasi.
Katakunci: parasetamol, ekstrak etanol daun kelor, gambaran histopatologi hepar

## Abstract
Hepar the main place of drug metabolism is also referred to as biotransformation and the end  result  of  this  reaction  is  inactive  substance  and  more  soluble  in  water,  so  quickly excreted through bile and urine. Any liver disorder can inhibit the normal functioning of the body. Damage to hepatic cells can be caused among others by drugs, viruses, and various other chemical compounds have hepatotoxic power, such as paracetamol. This research uses 5 groups of White Rats (each group 5 rats) induced paracetamol toxic dose and then given the extract of Etanol Leaves Kelor (Moringa Oleifera) with dose 250mg / 200BB, 500mg / 200BB and 1000mg / 200BB for 7 days for group P1, P2 and P3 while the positive control group was given only regular feed and drink, and the negative control group was given only toxic  doses  of  paracetamol.  The  results  showed  that  P3  treatment  group  with  high  dose ethanol extract of 1000 mg / 200 BW can protect the induced mouse liver with toxic doses of paracetamol, this can be proved by looking at the histopathologic picture of liver of mice that experienced a good reduction in inflammation, necrosis or degeneration.
Keywords: paracetamol, leaf moringa ethanol extract, histopathology hepar figure .

## Pendahuluan
Pusat metabolisme tubuh yang mempunyai  fungsi  sangat  kompleks  dan menempati sebagian besar kuadran kanan atas abnomen adalah Hepar. Hepar tempat utama metabolisme obat yang disebut juga sebagai  biotransformasi  dan  hasil  akhir dari reaksi ini berupa substansi yang tidak aktif  dan  lebih  larut  dalam  air,  sehingga cepat diekskresi melalui empedu dan urin. Setiap  gangguan  hati  dapat  menghambat fungsi  normal  tubuh.  Kerusakan  sel-sel hepar  dapat  disebabkan  antara  lain  oleh obat,  virus,  dan  berbagai  senyawa  kimia lain mempunyai daya hepatotoksik, antara lain  adalah  parasetamol  (Puspitasari, 2010).
Penggunaan parasetamol secara berlebihan  atau  melebihi  dosis  dapat mengakibatkan  kerusakan  hati.  Ikawati, 2010 menjelaskan bahwa kerusakan hepar oleh parasetamol secara berlebihan disebabkan karena terbentuknya metabolit reaktif  toksik  (N-asetil-p-benzoquinon) dan radikal bebas melaui proses biotrnaformasi oleh enzim sitokrom P450 dengan bantuan isoenzim CYP2EI. Metabolit reaktif toksik dan radikal bebas dapat mengganggu integritas membran sel dan  berlanjut  menjadi  kerusakan  hepar selanjutnya gagal ginjal. Overdosis parasetamol dapat terjadi pada penggunaan akut  maupun berulang. Hepatotoksisitas akan terjadi pada penggunaan  7,5-10  gram  dalam  waktu  8 jam atau kurang. Kematian bisa terjadi jika parasetamol digunakan samapi 15 gram Penumpukan  radikal  bebas  merupakan salah  satu  mekanisme  yang  berperan terhadap  kerusakan  hepar.  Radikal  bebas yang berlebihan akan menimbulkan stress oksidatif yang memicu proses peroksidasi terhadap  lipid,  sehingga  menimbulkan penyakit  kanker,  inflamasi,  ateroklerosis, dan mempercepat proses penuaan (Koch et a l., 2007). Malondialdehid (MDA)
merupakan  senyawa  yang  digunakan sebagai penanda terjadinya stress oksidatif,dan  sebagai  produk  oksidasi asam lemak tidak jenuh oleh radikal bebas
serta  metabolit  komponen  sel  yang dihasilkan  oleh  radikal  bebas.  Tingginya kadar  MDA  menunjukkan  adanya  proses oksidasi  dalam  membrane  sel,  bila antioksidan  tinggi  biasanya  diikuti  oleh penurunan kadar MDA (Ramatina, 2011)
Sehingga  untuk  menghindari  efek samping    pemberian  parasetamol  dosis toksis  sangat  diperlukan,  dengan  cara memberikan    hepatoprotektan  yang  dapat melindungi  hati.  Salah  satu  bahan  alami yang  berfungsi  sebagai  hepatoprotektor adalah  ekstrak  etanol  daun  kelor.  Daun Kelor merupakan tanaman yang mengandung senyawa-senyawa kimia yang  bermanfaat,  diantaranya  adalah senyawa  flavonoid.  Keberadaan  senyawa flavonoid  inilah  yang  dapat  menangkap radikal  bebas  penyebab  kerusakan  hepar (Tagliaferro, et  al. ,  2002).  Hampir  semua bagian  dari  tanaman  daun  kelor  dapat dijadikan  bahan  antimikroba  (Bukar  et al,2010).  Manfaat  lain  dari  daun  kelor diantaranya sebagai anti anemia (Oduro et al ., 2008), penurunan tekanan darah tinggi dan  obat  diabetes  (Giridhari et  al. ,2011), serta  sebagai  obat  radang  usus  besar (Fugli,1999).  Daun  kelor  digunakan  juga sebagai obat menurunkan kolestrol, diare, disentri,  colitis,  gonorhea,sakit  kepala, anemia, iritasi, infeksi, antialergi, antikarsinogenik,  antihelminthes  dan  anti inflamasi (Faizi,1995; Karr,2003;
Guevara,1999)

## Metode Penelitian
Alat dan Bahan Evaporator, alat sonde, papan paraffin, saringan Tip top, tissue Cassette, paraffin jar,  microtom,  mikroskop,  Etanol  96% aquades,  parasetamol,  Daun  Kelor,  pakan tikus  511,  reagen  MDA,  larutan  PBS, larutan  TCA  15%,  Larutan  TBA  0,37%, kloroform, buffer formalin, hepar tikus,

## Preparasi Hewan Coba
Hewan  Coba  tikus  putih  galur  wistar sebanyak  25  ekor  dengan  berat  200-300 gram.  Hewan  coba  yang  terkumpul diadaptasi  selama  satu  minggu  (diberi
pakan  biasa  dan  akuades).Hewan  coba yang  telah  diadaptasi  satu  minggu dikelompokkan  secara  acak  menjadi  5 kelompok.

## Preparasi Ekstrak Etanol Daun Kelor
Daun kelor dicuci dan dikeringkan 2-4 hari, lalu diblender. Kemudian dihaluskan dan  ditimbang  1  kg  dimaserasi  dengan etanol  70%  selama  24  jam  dan  disaring. Rresidu  dimaserasi  lagi  sampai  filtrat jernih.  Filtrat/maserat  dikumpulkan  jadi satu, dipekatkan dengan vacuum evaporator (suhu 30-40°C, tekanan 75mmHg).

## Perlakuan terhadap hewan coba
a. Kelompok Kontrol Positif hanya diberi pakan biasa dan aquadest selama 14 hari
b. Kelompok Kontrol negatif diberi aquadest selama 10 hari+ parasetamol 2gr/200BB tikus pada hari ke 7
c. Kelompok P1 diberi ekstrak etanol daun kelor 250mg/200BB tikus selama 14 hari+parasetamol 2gr/200BBtikus pada hari ke 7
d. Kelompok P2 diberi ekstrak etanol daun kelor 500mg/200BB tikus selama 14 hari+parasetamol 2gr/200BB tikus pada hari ke 7
e. Kelompok P3 diberi ekstrak etanol daun kelor 1000mg/200BB tikus selama 14 hari+parasetamol 2gr/200BB tikus pada hari ke 7

## Pengambilan hepar hewan coba
Pengambilan  hepar  hewan  coba  pada semua kelompok dilakukan setelah proses terminasi tikus dengan pembedahan.

## Proses Penyondean Tikus
Untuk memasukkan dosis ekstrak daun kelor  dan  dosis  parasetamol  pada  tikus putih  dilakukan  penyondean  agar  semua perlakuan  dipastikan  bisa  masuk.  Berikut langkah-langkah  melakukan  penyondean pada tikus putih:
1. Sebelum perlakuan harus diperhatikan dan dipastikan bahwa semua kelompok
tikus  sudah  diberi  pakan  dan  minum, kemudian  setian  satu  minggu  sekali alas tikus atau sekam harus diganti dan kandang dibersihkan dari kotorannya.
2. Tikus  putih  dipegang  dengan  tangan kiri,  bagian  kepalanya  dijepit  dengan jari  tengah  dan  jari  manis.  Dalam  hal ini  tangan  harus  dilindungi  dengan sarung  tangan  supaya  aman  dari gigitan  tikus  dan  bahaya  penyakit lainnya.
3. Kemudian  posisi  tikus  dibalikkan sehingga  telentang  dengan  posisi kedua jari tetap menjepit kepala tikus.
4. Tikus  putih  Kelompok  P1A,P1B, P2A,  P2B  ,  P3A  dan  P3B  diberi perlakuan  larutan  ekstrak  daun  kelor sesuai  dengan  dosis  yang  sudah ditentukan
5. Kemudian  selang  waktu  2  jam  tikus putih  PIA,PIB,  P2A,  P2B  ,  P3A  dan P3B diberi perlakuan larutan parasetamol  dengan  dosis  yang  sudah ditentukan.
6. Tikus putih yang tanpa perlakuan yaitu kelompok kontrol negatif hanya diberi perlakuan larutan parasetamol saja
7. Tikus  putih  kelompok  control  positif hanya diberi pakan dan aquadest tanpa pemberian ekstrak daun kelor maupun parasetamol.
Pengamatan Histopatologi Hepar Tikus. Organ hepar dibuat preparat histopatologi dengan pewarnaan
Hematoksilin−Eosin.  Kemudian  preparat histopatologi  dikirim  ke  laboratorium Patologi  Anatomi  untuk  dikonsultasikan dengan ahli patologi anatomi.Pengamatan mikroskopis  dilakukan  oleh  peneliti sendiri.

## Hasil dan pembahasan
Ekstraksi Daun Kelor Daun Kelor yang telah dicuci, dikeringkan dengan cara diangin-anginkan selama  2-4  hari  untuk  menghindari rusaknya  kandungan  flavonoid  yang  ada didalam  daun  kelor.  Untuk  mendapatkan hasil  yang  benar-benar  kering  ternyata
membutuhkan  waktu  5  hari.  Untuk mendapatkan  hasil  daun  kelor  kering sebanyak 1 kg membutuhkan lebih dari 3 kg  daun  kelor  basah.  Didapatkan  763  gr serbuk  daun  kelor  yang  selanjutnya dievaporasi  menjadi  filtrat  etanol  daun kelor  dan  dari  hasil  evaporasi  didapatkan 3.950  mL  filtrate  hasil  evaporasi  yang setelah  dipekatkan  didapat  hasil  ekstrak etanol  daun  kelor  sebanyak  113  gram untuk digunakan sebagai terapi hepar yang diinduksi parasetamol dosis toksis.

## Analisis  Hasil  Gambaran  Histopatologi Hepar Tikus
Menurut Chyka PA, 2006, Sel hepatosit secara makroskopis mempunyai inti bulat, sitoplasma  jernih  dan  tersusun  sistematis membentuk  lempengan  radier  ke  arah lobules  pusat  (vena  sentralis).  Jika  sel hepar  terinduksi  parasetamol  dosis  toksik maka  sel  hepar  dapat  mengalami  cedera melalui  beberapa  proses  stress  oksidatif akibat  menumpuknya  metabolit  NAPQ1
(N-Acetyl p-benzoquinone) yang merusak mitrokondria
dan
menghambat pembentukan  energy  sel  hepatosit.  Tanda kerusakan  hati  yang  diakibatkan  oleh parasetamol di antaranya adalah menurunnya  jumlah  protein total  maupun glikogen. Hal itu terjadi karena berkurangnya  jumlah  sel  hepatosit  yang memproduksi protein dan glikogen sehingga berat organ hati secara keseluruhan lebih kecil dari berat normalnya.  Indikasi  kelainan  hati  antara lain  adanya  cloudy  swelling  (degenrasi butir) merupakan indikasi awal terjadinya nekrosis,  nekrosis  dimana  inti  sel  hilang, degenerasi, dan infiltrasi lemak.
Pada penelitian ini preparat kelompok kontrol  menunjukkan  adanya  banyak  sel Kupfer daripada radang, degenerasi sangat sedikit  sehingga  bisa  disimpulkan  bahwa kelompok  kontrol  dianggap  masih  dalam kondisi  normal,  hal  ini  bisa  ditunjukkan pada gambar 1.
Gambar 1. Sel hepatosit dengan perbesaran 10x, kelompok kontrol Positif, ada radang tetapi lebih banyak sel Kupfer, degenerasi tidak ada, nekrosis tidak ada.
Jika  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol  negatif  yang  diberi  parasetamol saja  maka  peradangan  lebih  banyak
bahkan terkumpul diluar segitiga Kiernan, dan  ada  banyak  nekrosis,  hal  ini  bisa ditunjukkan gambar 2
.
Gambar  2. Sel  Hepatosit  kelompok  Kontrol  Negatif  (merupakan  kelompok  yang  hanya diberi  parasetamol  dosis  toksik  saja  tanpa  ada  treatment  pengobatan),  menunjukkan  ada radang yang banyak dan banyak nekrosis.
Pada  gambar  2  merupakan  Kelompok kontrol negative yang merupakan kelompok  yang  hanya  diberi  parasetamol dosis  toksik  saja  tanpa  adanya  perlakuan perlindungan  hepar  tikus  dengan  ekstrak daun  kelor  menunjukkan  bahwa  ada peradangan  yang  banyak  (bintik-bintik
hitam  yang  tersebar  dan  terkonsentrasi pada  sekitar  dan  dekat  segitiga  Kiernan, dan  ada  banyak  nekrosis  (  sel  yang kehilangan intinya, terlihat dari tengah inti yang kosong), membuktikan bahwa parasetamol dapat mencederai hepar tikus.
Gambar  3 .  Sel  Hepatosit  perbesaran  20X  pada  kelompok  P1  (kelompok  tikus  dengan perlakuan dosis ekstrak Daun Kelor rendah yaitu 250 mg/200 g BB dan Parasetamol dosis toksik), terlihat ada banyak radang, ada degenerasi dan nekrosis.
Pada  gambar  3,  Kelompok  P1  yaitu kelompok tikus dengan perlakuan ekstrak daun  Kelor  dosis  250  mg/200g  BB ditambah  dengan  pemberian  parasetamol dosis  toksis,  menujukkan  bahwa  masih
terdapat  peradangan,  degenerasi  dan nekrosis namun tidak sebanyak kelompok control negative pada gambar 2.
Gambar 4. Sel Hepatosit Kelompok P2 (kelompok tikus dengan perlakuan dosis ekstrak Daun  Kelor  sedang  yaitu  500  mg/200  g  BB  dan  Parasetamol  dosis  toksik)  ,  ada  banyak nekrosis, radang , ada degenerasi.
Gambar  5. Sel  Hepatosit  perbesaran  10  ,  untuk  kelompok  P3  (kelompok  tikus  dengan perlakuan dosis ekstrak Daun Kelor tinggi yaitu 1000 mg/200 g BB dan Parasetamol dosis toksik), ada radang tapi lebih banyak sel Kupfer , nekrosis berkurang, hampir sama dengan kelompok Kontrol positif .
Pada  gambar  4,  Kelompok  P2  yaitu kelompok tikus dengan pemberian perlakuan  dosis  ekstrak  daun  kelor  dosis sedang  yaitu  500  mg/  200  gBB  dan parasetamol  dosis  toksik  menunjukkan bahwa  ada  banyak  peradangan,  nekrosis dan  degenerasi  namun  tidak  sebanyak kelompok  kontrol  negatif.  Hal  tersebut juga membuktikan bahwa adanya pemberian  ekstrak  daun  kelor  dapat menurunkan  cedera  yang  diakibatkan  zat toksik seperti parasetamol dosis toksis jika dibandingkan  dengan  kondisi  hepar  tikus ketika hanya diberi parasetamol saja.
Pada  gambar  5,  kelompok  P3  yaitu kelompok tikus dengan pemberian perlakuan ekstrak daun kelor dosis tinggi, 1000  mg/200  gBB  dan  parasetamol  dosis toksis, menunjukkan bahwa ada penurunan yang  signifikan  karena  jumlah  radang semakin  sedikit  dan  lebih  banyak  sel Kuppfer  (  sel  Kupfer  banyak  dijumpai  di sel  hepatosit  yang  normal),  jumlah nekrosis  juga  berkurang  sehingga  kondisi sel  hepar  hamper  sama  dengan  sel  hepar yang  normal,  berarti  hal  tersebut  dapat membuktikan  bahwa  pemberian  ekstrak daun kelor dosis 1000 mg/200 g BB dapat melindungi hepar tikus
Kondisi  normal  hepar  peradangan seringkali  ada,  tetapi  tidak  banyak.  Jika ada  senyawa  toksik  yang  dapat  meracuni hepar,  maka  jumlah  peradangan  semakin banyak,  disamping  ada  nekrosis  serta degenerasi sel hepar. Dengan membandingkan  gambaran  Histopatologi hepar tikus dapat disimpulkan bahwa dosis ekstrak  Etanol  Daun  Kelor  dengan  dosis tinggi  yaitu  1000  mg/200  gr  BB  dapat memperbaiki  kondisi  hepar  tikus  yang diberi  parasetamol  dosis  toksis.  Hal  ini dapat di buktikan dengan adanya penurunan jumlah peradangan dan penurunan  nekrosis  jika  dibandingkan dengan gambaran histopatologi kelompok kontrol negatif. Berntuk gambaran histopatologi  hepar  Tikus  kelompok perlakuan dengan pemberian ekstrak Daun kelor  dosis  tinggi  hampir  sama  dengan gambaran histopatologi kelompok kontrol positif  yang  normal.Sedangkan  untuk pemberian ekstrak daun kelor untuk dosis rendah  dan  sedang  belum  memberikan perbaikan yang bermakna terhadap pengaruh  pemberian  parasetamol  dosis toksik  akan  tetapi  dapat  menurunkan nekrosis  daripada  kelompok  kontrol negatif.
Tabel 1. Data Kondisi Hepar Tikus Kondisi Hepar Kontrol Positif Kontrol negatif P1 P2 P3 Radang + +++ + + + Nekrosis - +++ ++ ++ +(sedikit) Degenerasi - + + ++ +(sedikit)

## Kesimpulan
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan terhadap gambaran histopatologi  hepar  Tikus  Putih  yang diinduksi dengan parasetamol dosis toksik pasca pemberian ekstrak etanol daun Kelor
dapat  dibuktikan  bahwa  dosis  pemberian ekstrak etanol daun kelor sebesar 1000 mg/ 200  BB  bisa  memperbaiki  kondisi  hepar Tikus  Putih  yang  telah  rusak  karena diinduksi parasetamol dosis toksik.

## Daftar Pustaka
Bukar,A.,  Uba,A.  And  Oyeyi,  T.I.  2010. Antimicrobial  Profile  of  Moringa oleifera  Lan.  Extracts  Agains  Some Food-Bornr Microorganisms . Bayero Journalof Pure and Applied Sciences, 3(1): 43-48.
Chyka  PA, et  al ,  2006,  Acetaminophen
Poisoning, an Evidence Based, Consensus  Guideline  for  Out  of Hospital Management, Clinical Toxicology ; 44(1):1-18 Faizi  S.  Siddiqui  BS.  Saleem  R.  1995. Fully  Acetylared  Carbamate  and Hypotensive Thiocarbonated
Glycosidea From Moringa Oleifera. J. Phytochemistry.38:957-963.
Giridhari, V.V A., D. Malathi., K. Geetha.
2011 .  Anti  Diabetic  Property  of
Drumstick  (Moringa  oleifera)  Leaf Tablets . Int J Health Nutr 2011 2(1):1-
5.
Guevara  Ap.  Vargas  C,  Sakurai  H  et  al.
1999.  An  Antitumor  Promoter  from Moringa  Oleifera  Lam.Muttat  Res. 440:181-188
Hardman  Joel  G.2007.  Goodman  and Gilman  Dasar  Farmakologi  Terapi. Jakarta:EGC Ikawati  Zullies.2010.Cerdas  Mengenali Obat. Yogyakarta.Kanisiuss. Karr  A,  Choudhry  BK.  Bandyopadhyay NG. 2003. Comparative Evaluation of Hypoglycaemic  Activity  of  Some Indian  Medical  Plants  in  Allxan Diabetics  Rats.  J.  Ethnopharmacol 84:105-108
Koch,  D  dan  Jeratnam,  2009,  Buku  Ajar dan Praktik Kedokteran Kerja, Jakarta:EGC.
Makkar,  Becker  K.1997.  Nutrients  and Antiquality  Factors  in  Different Morfphological Parts of The Moringa Oleifera Tree, J Agric Sci, Cambridge.
128:311-322
Murugesh,
K.S., et al, 2005,
Hepatoprotective and antioxidant role of Berbens Tinctona Lasch Leaves on Parasetamol induced Hepatic Damage in  Rats,  Iranian,  J.  Pharmacol Therapeutic (IJPT) 4(1): 64-69 Oduro, I., W. O. Ellis and D. Owusu. 2008.
Nutritional  potential  of  two  leafy vegetables:  Moringa  oleifera  and Ipomoea  batatas  leaves .  Scientific Research  and  Essy  Vol.3(2),pp.057- 060.
Puspitasari  ika.2010.  Jadi  Dokter  Untuk Diri Sendiri. Yogyakarta:B First. Ramatina.2011. Efektifitas Berbagai Suplemen Antioksidan Terhadap Penurunan Status Oksidatif Malondialdehyd (MDA Plasma) Pada Mahasiswa Alih jenis Ipb.Skripsi.Institut Pertanian Bogor.Bogor Roloff,  A.,  H.  Weisgerber.,  U.  Lang.,  B.
Stimm.  2009. Moringga  oleifera LAM .,  1785.  WILEY-VCH  Verlag GmbH & Co. KgaA, Weinheim.
Tagliaferro, A.R., et all ., 2002, Flavonoid
Antioxidants: Chemistry, Metabolismand Structure  activity Relationship,  Journal  of  Nutritional Biochemistry, 13:572-584