Identifikasi Senyawa Flavonoid Dan Uji Antioksidan Ekstrak Etanol Rimpang Temu Hitam ( Curcuma aeruginoa Roxb ) Dengan Metode DPPH

## Rika Puspita Sari
Fakultas Farmasi, Institut Kesehatan Deli Husada Deli Tua
rikapuspitatambunan@gmail.com

## ABSTRAK
Pada saat ini obat tradisional sedang dicari oleh kalangan masyarakat. Maka hal ini obat tradisional memiliki efek samping lebih kecil dibandingkn dengan obat-obat dari bahan kimia murni, murah dan mudah di ramu sendiri.  Antioksidan  adalah  senyawa  kimia  yang  dapat  menyumbangkan  satu  atau  lebih  electron  kepada radikal  bebas,  sehingga  radikal  bebas  tersebut  diredam.  Suatu  tanaman  dapat  memilki  aktifitas  antioksidan apabila  mengandung  senyawaan  yang  mampu  menangkal  radikal  bebas  seperti  fenol  dan  flavonoid. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  flavonoid  dan  untuk  melihat  daya  hambat Antioksidan  dalam  rimpang  temu  hitam.  Penelitian  ini  menggunkan  eksperimental  dengan  ekstraksi  secara maserasi  menggunakan  pelarut  etenol  96%. Pengujian  Antioksidan  ekstark  dan  Vitamin  C  melakukan  hasil rata-rata perendaman 2ppm ; 22,88 , 4ppm ; 36,48 , 6ppm ; 49,75 , 8pp ; 60,43 dan hasil vit c 2ppm ; 25,91 , 4ppm ; 43,71 , 6ppm ; 64,72 , 8ppm ; 90,28. Hasil yang didapatkan IC50 EERTH yaitu : 6,0313µg/ml dan hasil  yang  didapatkan  IC50  Vit  C  yaitu  :  5,46  µm/ml,  dapat  disimpulkan  bahwa  EERTH  memiliki  daya hambat antioksidan yang sangat tinggi karena setara dengan pembanding Vitamin C
Kata Kunci : Temu hitam, Antioksidan, DPPH, Spektrofotometri

## ABSTRACT
At  this  time  folk  remedies  are  being  sought  after  by  the  people.  So  this  traditional  medicine  has  less  side effects  than  drugs  from  pure  chemicals,  cheap  and  easy  to  find  yourself.  Antioxidants  are  chemical compounds that can contribute one or more electrons to free radicals, so that the free radicals are muted. A plant  can  have  antioxidant  activity  if  it  contains  compounds  that  are  able  to  ward  off  free  radicals  such  as phenols  and  flavonoids.  This  study  aims  to  determine  the  content  of  flavonoid  compounds  and  to  see  the inhibitory  power  of  antioxidants  in  the  rhizome  of  black  temu.  This  study  used  experimental  extraction  by maceration using a 96% etenol solvent. Testing of expatant antioxidants and Vitamin C performed an average soaking  result  of  2ppm  ;  22.88  ,  4ppm  ;  36.48,  6ppm;  49.75,  8pp;  60.43  and  vit  c  yield  of  2ppm  ;  25.91, 4ppm; 43.71, 6ppm; 64.72, 8ppm; 90.28. The results obtained by IC50 EERTH are: 6.0313μg / ml and the results obtained by IC50 Vit C which are: 5.46 μm / ml, it can be concluded that EERTH has a  very high antioxidant inhibition power because it is equivalent to the comparison of Vitamin C
Keywords : Black meet, Antioxidant, DPPH, Spectrophotometry

## I. PENDAHULUAN

## 1. Latar Belakang
Pada  saat  ini  obat  tradisional  sedang  dicari  oleh  kalangan  masyarakat.  Maka  hal  ini  obat tradisional  memiliki  efek  samping  lebih  kecil  dibandingkn  dengan  obat-obat  dari  bahan kimia  murni,  murah  dan  mudah  di  ramu  sendiri.  Namun  kelemahan  dari  obat-obat tradisional  adalah  kurangnya  informasi  mengenai  kandungan  kimia  serta  aktivitasnya (Nugrahaningtyas,  2005) . Radikal  bebas  merupakan  atom  atau  molekul  yang orbitalterluarnya  terdapat  electron  yang  tidak  berpassangan  sehingga  bersifat  reaktif  dan menyerang  atom  atau  molekul  yang  ada  disekitarnya  (Michael  L,  Alisa  P.  Marks,2018). Untuk  melawan  radikal  bebas  dan  metabolit  reaktif,  diperlukan  senyawa  yang  dapat memproteksi dari efek toksiknya, yaitu antioksidan. Antioksidan dapat mencegah oksidasi molekul  oleh  radikal  bebas  maupun  metabolit  reaktif  (Durackova  Z,2014).  Selain  itu, antioksidan  baik  dalam  meningkatkan  kualitas  hidup  karena  mencegah  penyakit degenerative  (Alam  N,  Bristi  NJ,  Rafiquzzaman  M,2013) . Antioksidan  adalah  senyawa kimia yang dapat menyumbangkan satu atau lebih electron kepada radikal bebas, sehingga radikal  bebas  tersebut  diredam  (Suhartono  et  al.,  2002).  Suatu  tanaman  dapat  memilki aktifitas  antioksidan  apabila  mengandung  senyawaan  yang  mampu  menangkal  radikal bebas seperti fenol dan flavonoid. Flavonoid merupakan senyawa polifenol yang memiliki sifat  sebagai  penangkap  radikal  bebas  sehingga  dapat  berfungsi  sebagai  antioksida (Emelda,2019).Senyawa  flavonoid  memberikan  piqmen  warna  pada  sayur,  buah,  biji, daun,  bunga,  dan  kulit  kayu  (Hamid  A,  Aeyelaagbe  O,  Ameen  O,  Lawal A,2010).Flavonoid  terbukti  mempunyai  efek  biologis  antioksidan  yang  sangat  kuat  yaitu sebagai  antioksidan  yang  dapat  menghambat  penggumpalan  keeping-keping  sel  darah, merangsang  pembentukan  pruduksi  nitrit  oksida  (NO)  yang  berperan  melebarkan pembuluh  darah  dan  juga  menghambat  pertumbuhan  sel  kanker(Winarsi  H,2009). Tanaman  yang  berpotensi  sebagai  antioksidan  adalah  Temu  hitam  (Curcuma  aeruginosa Roxb). Tanaman ini banyak digunakan untuk merehabilitas Kesehatan dan mencegah serta menyembuhkan penyakit. Tanaman temu hitam dikenal dengan jahe merah muda dan biru, salah  satu  tumbuhan  yang  kurang  digunakan  secara  etnomedis  (Sugiata.  P.,  Octaviana., Wuktisari.  T.,  Rahayu.  D.  U.  C,  2018).  Disamping  itu  temu  hitam  ini  dilaporkan mengandung  oleorosin  dari  ektrak  diklorometana  rimpang  temu  hitam  menunjukan aktifitas  antioksidan  (Rachman  et  al.,  2008  dan  Rajmma  et  al.,  2012) . Temu  Hitam merupakan  tanaman  yang  dapat  mengobati  berbagai  macam  penyakit  diantaranya  adalah gangguan  pernafasan  dan  gangguan  pencernaan.  Temu  hitam  umumnya  tumbuh  liar. Pemanfaatan temu hitam tersebut kurang maksimal. Ciri temu hitam tersebut memiliki akar atau  rimpang  dan  daun  yang  mengandung  bahan  aktif  yang  memiliki  beberapa  efek farmakologis (Dapartement Kesehatan RI,1977).

## 2. Perumusan Masalah
Rumusan masalah pada penelitian ini yaitu :
1. 1.  Apakah  Ekstrak  Etanol  Temu  Hitam/Temu  ireng  Mengandung  Metabolit  Sekunder Flavonoid
2. Apakah  Ekstrak  Metanol.p.a.  Temu  hitam/Temu  Ireng  memiliki  Daya  Hambat antioksidan
3. Pada  Konsentrasi  Berapakah  Ekstrak  Metanol  p.a  Temu  Hitam  (Curcuma  aeruginosa Roxb) Memiliki Daya Hambat yang Tinggi

## 3. Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah :
1. Penelitian  dapat  mengetahui  Kandungan  Metabolit  Sekunder  Flavonoid  PadaTemu hitam/Temu ireng (Curcuma aeruginosa Roxb)
2. Peneliti  dapat  mengetahui  Daya  Hambat  Antioksidan  pada  Temu  hitam/Temu  ireng (Curcuma aeruginosa Roxb)
3. Untuk  Mengetahui  Pada  Konsentrasi  berapa  ekstrak  Rimpang  Temu  Hitam  (Curcuma aeruginosa Roxb) Memberikan Aktifitas Antioksidan

## 4. Manfaat Penelitian
Manfaat dari pelaksanaan penelitian ini adalah :

## 4.1 Bagi peneliti
a. Menambah informasi dan pengetahuan tentang cara mengekstraksi simplisia pada bahan yang  diteliti,  dan  juga  mengetahui  Kandungan  Metabolit  sekunder  di  Rimpang  Temu Hitam (Curcuma aeruginosa Roxb)
b. Melatih  kemampuan dalam melaksanaan penelitian eksperimental

## 4.2 Bagi Masyarakat
a.  Memberikan  Informasi  bagi  masyarakat  yang  Berhubungan  dengan  Rimpang  Temu Hitam
b.    Memberikan  Informasi  Bagi  Masyarakat  Bahwa  Rimpang  Temu  Hitam  Sangat  bagus dalam Tubuh

## 4.3 Bagi Institusi
1. Sebagai Referensi acuan bagi peneliti selanjutnya yang berkeinginan menggembangkan terkait Rimpang Temu HItam (Curcuma aeruginosa Roxb).
2. Memberikan  pengetahuan  berupa  informasi  terkait  Rimpang  Temu  Hitam  (Curcuma aeruginosa Roxb)

## 4.4 Bagi Akademis
1. Hasil  Penelitian  ini  diharapkan  dapat  digunakan  sebagai  referensi  dalam  bidang penelitian dan dapat dijadikan tambahan pustaka dalam pengembangan penelitian
2. Dalam bidang masyarakat penelitian ini sebagai edukasi bagi masyarakat bahwa Temu hitam Sangat bagus untuk digunakan dalam pengobatan.

## II. METODE
Metode  penelitian  ini  menggunakan  metode  Eksperimental.  Dengan  bertujuan  untuk mengetahui kandungan senyawa flavonoid dan daya hambat dalam Ekstrak rimpang temu hitam (Curcuma aeruginosa Roxb) untuk melihat antioksidan

## 1. Alat
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  alat  vakum  rotary  evaporator, Erlenmeyer,  timbangan  analitik,  blender,  hot  plate,  spatula,  batang  pengaduk,  gelas  ukur, pinset,  alumunium  foil,  kapas  steril,  kertas  kering,  pipet  tetes,  cawan  petri,  autoklaf, ayakan 60 mesh, bejana kaca, Bunsen, gelas kimia, gunting,oven, Tabung reaksi, Bejana

## 2. Bahan
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  amoniak,  asam  asetat  anhidrat,  asam klorida, asam sulfat, aquadest, vitamin C, Temu hitam (yang belum dikeringkan sebanyak
8,5kg  yang  diperoleh  dari  Kecamatan  Helvetia  Medan),  etanol  70%,  FeCl3,  Kloroform, control negative (aquadest), control positive Vitamin C, DPPH, Metanol p. a.

## 3. Prosedur Penelitian

## Persiapan Sample
Rimpang  temu  ireng  yang  sudah  diambil  disortir  untuk  didapatkan  rimpang  yang  bagus. Rimpang  kemudian  dicuci  dengan  air  mengalir  dan  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan  tanpa  terkena  sinar  matahari  langsung.  rimpang  yang  sudah  kering  dihaluskan dengan  blender  dan  diayak  dengan  mesh  60  untuk  mendapatkan  ukuran  yang  seragam. Serbuk  di  timbang  dengan  100  gram  dan  kemudian  dimasukkan  kedalam  wadah  untuk keperluan ektraksi dengan metode meserasi

## Ekstraksi Sample
Sampel  rimpang  temu  hitam  yang  telah  menjadi  serbuk  simplisia  kemudian  dimaserasi dengan pelarut etanol 70%. Maserasi dilakukan selama 7x24jam pada suhu kamar. Diasuk sekali-kali  setiap  1x24jam  kemudian  disaring  dengan  kertas  saring  .Selanjutnya  filtrate dipekatkan dengan rotary evaporator. Setelah itu dihitung rendemen ekstraknya.

## Skrinning Fitokimia a. Identifikasi Senyawa Alkaloid
Masukan  ekstrak  sebnayak  kurang  lebih  1  ml  dengan  1  ml  ammoniak  ke  dalam  tabung reaksi,  kemudian  panaskan  diatas  penangas  air,  kocok  dan  disaring.  Hasil  filtrate  dibagi menjadi  3  bagian  ke  dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan  masing-masing  3  tetes  asam sulfat  2N,  kocok  dan  diamkan  beberapa  menit  hingga  terpisah.  Uji  hasil  teratas  dari masing-masing  filtrate  dengan  peraksi  wagner  dan  dragendrof.  Terbentuknya  endapan jingga dan coklat pada masing-masing hasil uji enunjukan adanya alkaloid.

## b. Identifikasi Senyawa Flavonoid
Ekstrak rimpang temu hitam sebanyak 2 ml, dimasuka ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan  beberapa  milligram  serbuk  Mg,  dan  1  ml  larutan  HCl  P.Perubahan  warna larutan dari merah jingga menjadi merah ungu menunjukkan adanya flavonoid.

## c. Identifikasi Senyawa Saponin
Ekstrak  rimpang  temu  hitam  ebanyak  10  ml,  dikocok  secara  vertical  pada  tabung  reaksi selama 10 detik, kemudian didiamkan selama 10 detik. Terbentuknya busa setinggi 1-10cm selam  tidak  kurang  dari  10  menit  menujukkan  adanya  saponin.  Pada  penambahan  1  tetes HCl 2N busa tidak hilang.

## d.Identifikasi Senyawa Tanin
Sebanyak  0,5  g  serbuk  simplisia  disari  dengan  10  mL  air  suling  lalu  disaring,  filtratnya diencerkan sampai tidak berwarna. 2 mL larutan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%. Terbentuknya warna biru atau kehitaman menunjukkan adanya tannin.

## Kromatografi Lapis Tipis
Ekstrak etanol ditotolkan pada plat pra lapis, kemudian dimasukkan kedalam bejana yang telah  jenuh  dengan  uap  pengembang.  Ditutup  rapat  dan  dibiarkan  naiksampai  batas pengembang.  Plat  dikeluarkan  dan  dikeringkan,  catat  harga  Rf,  lalu  disemprot  dengan penempak bercak, diamati bercak yang terbentuk dan catat harga Rfnya.

## III. HASIL PENELITIAN Skrinning Fitokimia
Hasil Menunjukan bahwa rimpang temu hitam mengandung alkaloid, flavonoid, dan tanin. Rimpang  temu  hitam  memiliki  potensi  sebagai  antioksidan  diantaranya  adalah  flavonoid. Tujuan  dari  skrinning  fitokimia  yag  dilakukan  pada  simplisia  rimpang  temu  hitam  yaitu mendeteksi  komponen  senyawa  metabolit  sekunder  yang  positif  terkandung  di  dalam simplisia.  Skrinning  fitokimia  dilakukan  dengan  cara  sedikit  simplisia  dan  ditambahkan dengan  peraksi/reagen  yang  sesuai  dengan  yang  akan  didentifikasi.  Pada  simplisia Rimpang  temu  hitam  hasil  skrinning  fitokimia  terdapat  pada  kandungan  alkaloid, flavonoid,  dan  tanin.  Dengan  diperolehnya  data  skrinning  fitokimia  ini  dapat  mendukung dugaan mengenai Antioksidan yang terjadi (Willey,2008).
Jenis Senyawa Hasil Alkaloid + Flavonoid + Saponin + Tanin + Steroid +

## Kromatografi Lapis Tipis
Hasil kromatografi lapis tipis kertas ekstrak rimpang temu hitam secara mengguakan  fase gerak asam asetat;  methanol;  air dengan perbandingan (1:4:5) dengan fasediam silika  gel 60  F 254 .  Pengamatan  bercak  yang  dilakukan  secara  visual  adanya  dijumpai  noda  yang berwarna biru, ungu, serta kuning lemah setelah diuapi ammonia pada pengamatan dengan sinar  berwarna  kuning  dan  jingga  pada  UV  365  nm  menegaskan  adanya  kandungan flavonoid

## Uji Antioksidan Hasil persen peredaman DPPH terhadap EEKBL dan vitamin C
dapat  dilihat  semakin  besar  konsentrasi  larutan  uji  maka  semakin  besar  pula  % peredamannya.  Hal  ini  disebabkan  karena  terjadi  penurunan  absorbansi  pada  saat pengukuran.  Pada  konsentrasi  6  µg/mL,  %peredaman  larutan  uji  terhadap  DPPH  telah mencapai 49,75%. Dari Tabel 4.3 juga dapat dilihat adanya peningkatan % peredamanoleh vitamin  C  pada  setiap  kenaikan  konsentrasi.  Pada  konsentrasi  6  µg/mL,  %  peredaman vitamin  C  terhadap  DPPH  telah  mencapai  64,72%.  Penurunan  nilai  absorbansi menunjukkan  aktivitas  antioksidan  yang  semakin  besar.  EERTH  menunjukkan  nilai  % peredaman DPPH yang lebih kecil dibandingkan vitamin C.
Penurunan  nilai  absorbansi  terjadi  karena  larutan  uji  memerangkap  DPPH  dan pemerangkapan  terjadi  karena  senyawa  yang  bereaksi  sebagai  penangkap  radikal  yang akan  mereduksi  DPPH  membentuk  DPPH-H  yang  tereduksi.    Reaksi  ini  diamati  dengan adanya  perubahan  warna  dari  ungu  menjadi  kuning  ketika  elektron  ganjil  dari  radikal DPPH  telah  berpasangan  dengan  hidrogen  dari  senyawa  penangkap  radikal  bebas. Keberadaan  antioksidan  dalam  ekstrak  tumbuhan  akan  menetralisasi  radikal  dengan menyumbangkan  elektron  kepada  DPPH,  menghasilkan  perubahan  warna  dari  ungu menjadi  kuning  atau intensitas  warna  ungu  larutan  jadiberkurang  (Molyneux,  2004) . Penghilangan  warna  akan  sebanding  dengan  jumlah  elektron  yang  diambil  oleh  DPPH sehingga dapat diukur secara spektrofotometris (Garcia, et al., 2012).
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  EERTH  diperoleh  persamaan  regresi  linier  dengan  cara memplot konsentrasi larutan uji dan persen peredaman DPPH, dimana konsentrasi sampel (µg/mL)  sebagai  absis  dan  nilai  %inhibisi  sebagai  ordinat  yaitu  Y  =  7,3865X  +  12,836. Dari  persamaan  tersebut  maka  dapat  di  peroleh  nilai  IC 50 EEKBL  sebesar  6,0313  µg/mL termasuk dalam kategori sangat kuat yaitu lebih kecil dari 50 µg/mL.

## IV. KESIMPULAN
Dari hasil penelitian yang dilakukan maka dapat diambil kesimpulan sebagai berikut:
a. Kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  sebagai  antiokidan  terdapat  pada  ektrak rimpang temu hitam (Curcuma aeruginosa)
b. Ekstrak  rimpang  temu  hitam  (Curcuma  aeruginoa  Roxb)  memiliki  daya  hambat sebagai antioksidan
c. Antioksidan Yang tinggi terihat pada konsentrasi 8 ppm

## DAFTAR PUSTAKA
Depkes RI, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan ObatCetakan Pertama , Jakarta, 2000.
Molineux,  P.  (2004).  The  Use  of  Stable  Free  radical  Diphenyl  Picrylhidrazil  (DPPH)  for Estimating Antioxidant Activity .Sonklanakarin J. Sci. Technol. , 26(2), 211-219 Nugrahaningtyas, K. D., Matsjeh, S. dan Wahyuni, T. D. (2005). “Isolasi dan Identifikasi Senyawa  Flavonoid  dalam  Rimpang  Temu  Ireng  (Curcuma  aeruginosa  Roxb.) Isolation  and  identification  of  flavonoid  compounds  from  Curcuma’  s  rhizome,” 3(1), hal. 32–38.
Rachman F, Logawa ED, Hegartika H, S. P. (2008). “Aktivitas antioksidan ekstrak tunggal dan kombinasinya daari tanaman Curcuma spp.,” J Ilmu Kefarmasian Indonesia, hal. 69–74.
Sugiata.  P.,  Octaviana.,  Wuktisari.  T., Rahayu.  D.  U.  C,  2018.  Chemical  Constituent  and antioxidant activity of methanol extract  from  Indonesian Curcuma  aeruginosa roxb. Journal of Pharmacy Recearch Vol. 12.
Accepted Date Revised Date Decided Date Accepted to Publish 19 Februari 2024 21 Maret 2024 06 April 2024 Ya