UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK BUAH KAWISTA ( Limonia Acidissima ) MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS
Antioxidant Activity Test From Fruit Extract Kawista (Limonia acidissima) Using Uv-Vis Spectrofotometer
Waode Rustiah 1* , Nur Umriani 2
1 Department of Chemistry, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Hasanuddin University
2 Study Program of Health Analyst, Academy of Health Analyst Muhammadiyah Makassar-Indonesia
* Corresponding  author:  waoderustiah79@gmail.com
Received: May 2018 Published: July 2018

## ABSTRACT
Antioxidant activity test has been done from kawista fruit. This study aims to determine the antioxidant activity of  kawista  based  on  the  test  using  UV-Vis  spectrophotometer  conducted  wavelength  (  )  516  nm.  The  kawista fruit  is  extracted  by  reflux  using  methanol  solvent.  The  extracts  were  made  at  concentrations  of  50  ppm,  100 ppm,  150  ppm,  200  ppm  and  250  ppm.  The  results  showed  that  the  antioxidant  activity  based  on  IC 50 values obtained  on  kawista  fruit  extract  samples  had  a  concentration  of  1275  mg/ml.  The  results  obtained  are  at  the level of IC 50 > 150  g/ml, this indicates that the kawista fruit have weak antioxidant ability.
Keywords : Kawista (Limonis acidissima), antioxidant, activity, IC 50 , DPPH, extract.

## PENDAHULUAN
Salah  satu  pemanfaatan  tumbuhan  adalah sebagai  sumber  vitamin.  Vitamin  merupakan  zat pengatur yang meskipun jumlah yang dibutuhkan sangat  sedikit,  tetapi  harus  ada  agar  system metabolism  tubuh  dapat  seimbang  (Frei,  1994; Sediaoetama,  2008).  Jika  vitamin  tidak  terdapat dalam  tubuh  atau  tidak  memenuhi  kebutuhan normal tubuh, maka seseorang dikatakan menderita hipovitaminosa (Frei, 1994; Sediaoetama, 2008).
Belakangan  ini,  antioksidan  alami  yang berasal  dari  tanaman  herbal  menjadi  pilihan masyarakat (Ji dkk., 2004; Li dkk., 2011, Rustiah dkk,  2018).  Beberapa  tanaman  telah  banyak digunakan  sebagai  antioksidan  alami  (Thomas, 2009), sebagai obat tradisional untuk pengobatan penyakit  infeksi,  salah  satunya  adalah  buah kawista  ( Limonia  acidissima )  yang  berasal  dari kabupaten  Bima,  yang  secara  empiris  berkhasiat sebagai  penurun  panas,  tonikum,  sakit  perut  dan sebagai antioksidan. Aktivitas antioksidan dipengaruhi  oleh  komponen  kimia  dalam  buah. Komponen  kimia  tersebut  dipengaruhi  oleh tingkat  kematangan  dari  buah  tersebut.  Selain berpotensi sebagai antioksidan, buah kawista juga
berpotensi  sebagai  antidiabetes,  serta  daun kawista  berpotensi  sebagai  anti  hepatoprotektif (Nugroho, 2012).
Antioksidan  dapat  menangkap  radikal  bebas dan mendetoksifikasinya. Antioksidan merupakan  senyawa  pemberi  elektron  (elektron donor) atau reduktan. Senyawa ini memiliki berat molekul  kecil,  tetapi  mampu  menginaktivasi berkembangnya  reaksi  oksidasi,  dengan  cara mencegah  terbentuknya  radikal.  Radikal  bebas adalah  atom  atau  molekul  yang  tidak  stabil  dan sangat reaktif karena mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital terluarnya.  Radikal  bebas  akan  bereaksi  dengan molekul di sekitarnya untuk memperoleh pasangan  elektron  supaya  mencapai  kestabilan atom  atau  molekul.  Reaksi  ini  akan  berlangsung terus  menerus  dalam  tubuh  dan  bila  tidak dihentikan  akan  menimbulkan  berbagai  penyakit seperti  kanker,  jantung,  katarak,  penuaan  dini, serta  penyakit  degeneratif  lainnya.  Oleh  karena itu  tubuh  memerlukan  suatu  substansi  penting, yaitu  antioksidan  yang  mampu  menangkap radikal  bebas  tersebut  sehingga  tidak  dapat menginduksi  suatu  penyakit  (Kikuzaki  and Nakatani 1993)
Antioksidan  juga  merupakan  senyawa  yang dapat  menghambat  reaksi  oksidasi,  dengan mengikat radikal bebas dan molekul  yang sangat reaktif.  Akibatnya,  kerusakan  sel  akan  dihambat (Halliwel, 1999; Winarsi dkk., 2003).
Berdasarkan  asalnya,  terdapat  dua  macam antioksidan, yaitu antioksidan alami dan antioksidan  sintetik.  Tubuh  manusia  tidak mempunyai  cadangan  antioksidan  dalam  jumlah berlebih,  sehingga  jika  terdapat  radikal  berlebih, maka  tubuh  membutuhkan  antioksidan  eksogen. Adanya  kekhawatiran  akan  kemungkinan  efek samping  yang  belum  diketahui  dari  antioksidan sintetik, menyebabkan antioksidan alami menjadi alternatif  yang  sangat  dibutuhkan.  Antioksidan alami  mampu  melindungi  tubuh  terhadap kerusakan  yang  disebabkan  spesies  oksigen reaktif,  mampu  menghambat  terjadinya  penyakit degenaratif  serta  mampu  menghambat  peroksida lipid  pada  makanan.  Meningkatnya  minat  untuk mendapatkan  antioksidan  alami  terjadi  beberapa tahun terkahir ini (Sayuti dan Rina, 2015).
Aktivitas  antioksidan  memiliki  hubungan yang  linier  positif  dengan  kandungan  fenol  di dalam  ekstrak  buah  kawista  (Nugroho,  2012). Senyawa  fenol  terutama  asam  fenolat  dan flavanoid  merupakan  antioksidan  alami  di  dalam buah,  sayur,  dan  tanaman  lain  (Kahkonen  et  al., 1999;  Prior  et  al.,  2005;  Rohman  dkk.,  2006; Tryasmono,  dkk.,  2016).  Aktivitas  antioksidan diukur  berdasarkan  peredaman  warna  ungu. Dimana  ketika  larutan  DPPH  dicampur  dengan bahan  antioksidan,  maka  akan  terjadi  reaksi penangkapan hydrogen yang berasal dari antioksidan  oleh  DPPH  yang  akan  diubah menjadi  1,1  difenil-2-pikrihidrazil  dan  ditandai dengan  perubahan  warna  dari  ungu  ke  kuning. Adapun  parameter  aktivitas  antioksidan  adalah nilai  IC 50 (50%  Inhibytor  concentration),  yang diperoleh  dari  persamaan  regresi  (Molineux, 2004). Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari buah kawista berdasarkan  metode  pengikatan  radikal  bebas, diphenyl picryl hidrazil (DPPH) secara spektrofotometri  UV-Vis,  berdasarkan  atas  nilai IC 50 .

## METODOLOGI

## Pengambilan dan pengolahan sampel
Sampel yang digunakan adalah sampel buah kawista  yang  berasal  dari  kota  Bima.  Sampel buah  kawista  dicuci  kemudian  ditiriskan,
dipotong-potong  kecil,  selanjutnya  dikeringkan di  bawah  sinar  matahari  langsung,  kemudian setelah  kering,  lalu  dibawa  ke  laboratorium untuk dilanjutkan ekstraksi.

## Ekstrak  buah  kawista  dengan  metode Refluks
Ekstrak  buah  kawista  ( Limonia  acidissima ) dibuat dengan menggunakan alat refluks dengan pelarut  methanol.  Sampel  ditimbang  sebanyak kurang  lebih  200  gram,  dimasukkan  ke  dalam labu  alas  bulat  dan  ditambahkan  pelarut  organic yaitu  methanol,  hingga  sampel  terendam  kurang lebih  2  cm,  diatas  permukaan  sampel  atau  2/3 dari  volume  labu  alas  bulat,  kemudian  labu  alas bulat  dipasang  kuat  pada  statif  dan  pada waterbath,  lalu  kondensor  dipasang  pada  labu alas bulat yang dikuatkan dengan klem dan statif. Aliran  air  dan  pemanas  (waterbath)  dijalankan sesuai  dengan  suhu  pelarut  yang  digunakan. Setelah  4  jam  dilakukan  penyaringan.  Filtratnya ditampung pada wadah penampung dan ampasnya  ditambahan  lagi  dengan  pelarut,  dan dikerjakan  seperti  diawal,  ekstraksi  dilakukan selama 3-4 jam. Filtrat yang diperoleh dikumpulkan  dan  dipekatkan  dengan  vakum rotavapor sampai diperoleh ekstrak kental.

## Pengujian aktivitas antioksidan menggunakan DPPH
Ditimbang  ekstrak  masing-masing  sebanyak 10  mg,  kemudian  ditambahkan  10  mL  methanol dan  disonikasi  selama  15  menit.  Selanjutnya, sampel dan standard dipipet sebanyak 10, 20, 30, 40  dan  50  L  dan  dimasukkan  ke  dalam  vial, kemudian  ditambahkan  methanol  hingga  5  mL. Dari  masing-masing  konsentrasi,  dipipet  1,5  mL dan  dimasukkan  ke  dalam  vial  yang  berbeda, kemudian  ditambahkan  1,5  mL  larutan  DPPH 0,04  mg/mL.  Vial  didiamkan  selama  30  menit, agar  reaksi  berjalan  optimum,  dihindarkan  dari kontak  langsung  dengan  cahaya.  Selanjutnya diukur serapannya dengan spektrofotometer UV- Vis pada panjanggelombang (  ) 516 nm.
Kemudian  dilanjutkan  pembuatan  larutan pembanding/control  positif,  yang  digunakan adalah vitamin C dengan variasi konsentrasi yaitu 2,  4,  6,  8  dan  10  ppm.  Setelah  semuanya  siap, dilakukan penentuan aktifitas antioksidan. Larutan  baku  dan  larutan  uji  masing-masing dipipet  sebanyak  1,0  ml,  dimasukkan  ke  dalam vial  yang  diluarnya  ditutupi  aluminium  foil. Kemudian ditambahkan 4,0 ml larutan DPPH 40
ppm,  dikocok  hingga  homogen  dan  dibiarkan selama  30  menit.  Selanjutnya  diukur  serapannya dengan spketrofotometer UV-Vis pada panjanggelombang  (  )  516  nm.  Sebelumnya dilakukan pengujian blanko dengan cara memipet sebanyak 1,0 ml etanol dan 4,0 ml larutan DPPH 40 ppm, dikocok dan dibiarkan selama 30 menit, lalu  diukur  serapannya  dengan  spektrofotometer UV-Vis.

## Pengumpulan dan Analisis Data
Data  penelitian  dikumpulkan  dan  diuji aktivitas antioksidan menggunakan rumus :
Keterangan : A blanko = Absorbansi blanko A sampel = Absorbansi sampel

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  tentang  uji  aktivitas  antioksidan  buah kawista  ( Limonia  acidissima )  dengan  metode DPPH  secara  spektrofotometri  UV-Vis,  maka didapatkan  hasil  seperti  pada  Tabel  1.  Metode DPPH  merupakan  metode  yang  paling  sering digunakan  untuk  menguji  aktivitas  antioksidan suatu tanaman.  Antioksidan merupakan senyawa pemberi electron (elektron donor) yang berperan dalam  menghambat  oksidasi  yang  diperantarai oksigen.
Analisis  pada  penelitian  ini  dilakukan dengan menggunakan instrument spektrofotometer  UV-Vis,  yang  diukur  pada panjanggelombang (  ) 516 nm, karena sederhana,  mudah  dalam  pengerjaannya,  cepat, akurat  dan  hanya  memerlukan  sedikit  sampel, serta  cocok  digunakan  untuk  analisis  sampel yang  memiliki  kemampuan  sebagai  senyawa antioksidan.  Pengujian  aktivitas  antioksidan dilakukan  berdasarkan  metode  DPPH,  karena cepat dan efektif untuk  memperkirakan aktivitas antiradikal  dari  suatu  senyawa,  dimana  ketika larutan DPPH dicampur dengan bahan antioksidan, maka akan terjadi reaksi penangkapan hidrogen  yang berasal dari antioksidan  oleh  DPPH  yang  akan  diubah menjadi  1,1  difenil-2-pikrihidrazil  dan  ditandai dengan  perubahan  warna  dari  ungu  ke  kuning (Molineux, 2003).
Vitamin  C  memiliki  aktivitas  antioksidan lebih  kuat  dibanding  ekstraknya.  Ekstrak  buah kawista  memiliki  kandungan  kimia  yang berkhasiat  sebagai  tonikum,  menurunkan  panas. Selain  itu,  vitamin  C  juga  bermanfaat  menjaga ketahanan tubuh terhadap penyakit infeksi racun, antioksidan dan menurunkan kolesterol.
Tabel 1. Hasil pengukuran, presentasi pengikatan DPPH dan nilai IC 50 dari ekstrak methanol buah kawista dan pembanding vitamin C
Sampel % pengikatan DPPH IC 50 (ppm) Nilai IC 50 (ppm) Vitamin C 2,27 22,85 Sangat Kuat < 50 ppm
3,48
6,75 18,90 8,60 Ekstrak Buah Kawista ( Limonia acidissima ) 0,33 1275 Lemah > 150 ppm 3,31
4,42 6,50 11,4
Aktivitas  antioksidan  ditunjukkan  dengan nilai  IC 50 .  Dimana  nilai  IC 50 menyatakan besarnya  konsentrasi  larutan  sampel  (ekstrak ataupun  vitamin  C)  yang  dibutuhkan  untuk mereduksi radikal bebas DPPH sebesar 50%. Zat yang  mempunyai  aktivitas  antioksidan  tinggi, akan  mempunyai  nilai  IC 50 yang  rendah.  Hasil uji  aktivitas  antioksidan  pembanding,  yaitu vitamin  C,  berada  pada  kisaran  nilai  IC 50 dibawah  50  ppm,  yaitu  sebesar  22,85  mg/ml. Hasil nilai yang didapatkan, dikategorikan sangat kuat dalam kemampuannya sebagai antioksidan.
Setelah  dilakukan  pengujian,  diperoleh bahwa  ekstrak  methanol  buah  kawista  ( Limonia accidissima )  memiliki  kemampuan  sebagai antioksidan.  Namun  aktivitas  antioksidan  yang terkandung  pada  buah  kawista  masuk  dalam kategori lemah (kecil). Hal ini dapat dilihat pada nilai konsentrasi pengikatan DPPH dan IC 50 pada ekstrak buah kawista, yaitu sebesar 1275 mg/ml, berada di atas 150  g/ml (data literatur). Lemah atau kecilnya efek antioksidan dari ekstrak buah kawista  yang  diperoleh  dikarenakan  tidak terdapat senyawa asam askorbat yang berpotensi sebagai antioksidan yang sangat kuat.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  nilai  IC 50 ekstrak  buah kawista, mempunyai nilai IC 50 dengan nilai 1275 ppm, yang dikategorikan lemah dalam kemampuannya sebagai antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Frei,  1994,  Reactive  Oxygen  Species  and Antioxidant  Vitamins:  Mechanisms  of Action.  American  Jurnal  of  Medicine. Excerpta Medica Inc.
Halliwel,  B.,  1999,  Gutteridge,  I.  M.C. Free Radicals  in  Biology  and  Medicine. Edisi  3.
Oxford University Pres: London. Ji,  K,  Lieu et  al .,  2004, DPPH  Radical Scavenging  Activity  of  Ten  Natulan  p- Terphenyl Derivatives Obtained from Three Edible  Mushrooms  Indigenous  to  China , Chemistry and Biodiversity Vol. 1.
Kunming Institute of Botani, Thess Chinese Academy  of  Sciences,  Kunming  650204, P.R. China.
Kahkonen  M.P.,  Hopia  AI,  Vourea  HJ,  Rauha JP,  Pihlaja  K,  Kujala  TS,  Heinonen  M, 1999,  Antioxidant  activity  of  extracts containing  phenolic  compounds, Journal  of Agriculturer and Food Chemistry , 47, 3954- 3962.
Kikuzaki  H,  Nakatani  N.,  1993,  Antioxidant effects of some ginger constituents. Journal of Food Science, 58,1407–1410.
Li, P., Huo, L., W., Lu, R., Deng, C., Liu, L., Deng,  Y.,  Guo,  N.,  Lu,  C.  He,  C.,  2011, Free Radical Scavenging Capacity,
Antioxidant  Activity  and  Phenolic  Content of  ( Pouzolzia  zeylanica),  College  of Pharmacy, J. Serb. Chem. Soc., 76 (5), 709-
717. Molineux, P., 2004, The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for Estimating Antioksidan Activity, Songklanakarin  J.Sci.  Techol .,  26  (2).  211- 219.
Nugroho  I.A.,  2012,  Keragaman  Morfologi  dan Anatomi Kawista (Limonia acidissima L) di Kabupaten  Rembang, Skripsi, Departemen Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Prior  R.L.,  Wu  X,  Schaich  K.,  2005, Standardized  methods  for  the  determination of  antioxidant  capacity  and  phenolics  in foods  and  dietary  supplements, Journal  of Agricultural  and  Food  Chemistry, 55,  2698
A-J.
Rohman A., Riyanto S., Utari D., 2006, Aktivitas antioksidan,  kandungan  fenolik  total  dan kandungan flavonoid total ekstrak etil asetat buah  mengkudu  serta  fraksi-fraksinya, Majalah Farmasi Indo-nesia, 17, 136-142.
Rustiah,  W.,  Andriani,  Y.,  2018,  Analysis  of Kelor  Seed  Powder  (Moringa  Oleifera, Lamk)  in  Reducing  COD  and  BOD  Levels on  Wastewater  Services  Laundry, Indo.  J.
Chem Res., 5 (2), 508-512.
Sayuti,  K.,  Rina,  Y.,  2015, Antioksidan  Alami dan  Sintetik ,  Padang:  Andalas  University Press.
Sediaoetama,  Djaeni,  A.,  2008,  Vitaminologi: Bagi  Umum  dan  Tenaga  Profesi  di Indonesia, Balai Pustaka Jakarta.
Tryasmono,  L.  Anwar,  K.,  2016,  Kandungan Total  Fenolik,  Total  Flavonoid,  dan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Buah Mengkudu  ( Morinda  citrifolia L), Jurnal Pharmasaence , 8(1), 83-92.
Winarsi,  H,  D.  Muchtadi,  F.R.  Zakaria,  B.
Purwantara, 2003, Status Antioksidan Wanita Premenoupause yang diberi Minuman  Suplemen:  Susumeno, Prosiding , Seminar Nasional PATPI. Yogyakarta.