ISSN 2085-2916  e-ISSN 2337-3652 Tersedia daring http://jai.ipb.ac.id J. Agron. Indonesia, Agustus 2019, 47(2):156-162 DOI: https://dx.doi.org/10.24831/jai.v47i2.23328

## PENDAHULUAN
Azotobacter adalah Plant  Growth  Promoting Rhizobacteria (PGPR) penting karena mampu menyediakan N  tersedia  untuk  tanaman  melalui  fiksasi  dinitrogen  (N 2 ) nonsimbiotik. Rizobakteri ini juga memproduksi fitohormon dan  eksopolisakarida  (EPS)  serta  bersifat  antagonistik terhadap  fitopatogen.  Secara  alami,  EPS Azotobacter dibentuk untuk melindungi sistem nitrogenase dari oksigen (Wang et al ., 2017), toleransi terhadap kekeringan, induksi pembentukan  sista  dan  biofilm  serta    resistensi  terhadap antimikroba (Gauri et al. , 2012). Di rizosfer, EPS berperan dalam stabilitas koloid tanah (Liu et al ., 2013),  pembentukan

## ­­Peran­­Eksopolisakarida­­ Azotobacter ­­dan­­Bahan­­Organik­­untuk­­
Meningkatkan­­Nodulasi­­dan­­Biomassa­­Kedelai­­pada­­Dua­­Ordo­­Tanah­­
Role of Azotobacter’s Exopolysaccharide and Organic Matter on Increasing Nodulation and Biomass of Soybean Grown on Two Soil Order
Reginawanti­­Hindersah 1* ,­­Neni­­Rostini 1 ,­­Arief­­Harsono 2 ,­­dan­­Agustinus­­Marthin­­Kalay 3
1 Fakultas Pertanian, Universitas Padjadjaran Jl. Raya Bandung-Sumedang Km. 21 Jatinangor 45363, Indonesia
2 Balai Penelitian Aneka Kacang dan Umbi Litbang Pertanian Kementrian Pertanian Jl. Raya Kendalpayak km 8, PO Box 66 Malang
3 Fakultas Pertanian, Universitas Pattimura, Jl.  Ir. M Putuhena, Kampus Poka Ambon 97223 Diterima 20 September 2018/Disetujui 30 April 2019

## ABSTRACT
Exopolysaccharide (EPS) produced by nitrogen-fixing bacteria Azotobacter protect nitrogenase from oxygen. In legume, EPS plays a role in the immobilization of rhizobia to the roots. The objective of this experiment was to study the effect of EPS Azotobacter and organic matter on increasing number of nodules and biomass of soybeans grown in Inceptisols and Ultisols; as well as nitrogen-fixing bacteria population in soybean rhizosphere. The experiment was set up in a completely randomized block design with five replications to test combined treatments of two doses of crude EPS and organic matter. Nodule number, shoot dry weight and nitrogen uptake, as well as Azotobacter and Rhizobium population in soybean grown in Inceptisols following crude EPS and compost application, were higher than those grown in Ultisols. The application of EPS and compost In Ultisols did not affect the number of nodule and other traits, but in Inceptisols, adding 6.25 g of compost and 20 mL of EPS to each plant increased the number of nodules and shoot weight at 42 days after planting. However, the highest N uptake was demonstrated by soybean received 10 mL and 20 mL EPS along with 12.5 g compost.
Keywords: Azotobacter, exopolysaccharide, nodule, soybean, shoot dry weght

## ­­ ABSTRAK
Eksopolisakarida  (EPS)  yang  dihasilkan  bakteri  pemfiksasi  nitrogen  Azotobacter  memproteksi  nitrogenase  dari oksigen. Pada tanaman legume EPS berperan dalam imobilisasi rizobia ke perakaran. Tujuan percobaan ini adalah untuk mendapatkan informasi peran aplikasi EPS Azotobacter dan bahan organik terhadap jumlah nodula dan biomassa kedelai yang ditanam di tanah ordo Ultisols dan Inceptisols; serta populasi bakteri pemfiksasi N 2 di rizosfer kedelai. Percobaan dirancang dalam rancangan acak kelompok dengan lima ulangan untuk menguji dua dosis bahan organik dan suspensi EPS. Jumlah nodula dan bobot kering tajuk serta populasi Azotobacter dan Rhizobium di kedelai yang ditanam di tanah ordo Inceptisols lebih tinggi daripada di Ultisols setelah pemberikan bahan organik dan suspensi EPS. Pada Ultisols, aplikasi kompos dan EPS tidak mempengaruhi jumlah nodula dan karakter lainnya, tetapi pada Inceptisols, pemberian kompos 6.25 g dan EPS 20 mL per tanaman meningkatkan jumlah nodula dan tinggi tanaman pada 42 hst. Namun serapan N tajuk tertinggi diperoleh dari kedelai yang mendapatkan 10 mL dan  20 mL EPS yang diberikan bersamaan dengan  12.5 g kompos.
Kata kunci: Azotobacter, eksopolisakarida, nodula, kedelai, bobot kering tajuk
agregat tanah yang stabil (Alami et al., 2000),  dan sebagai cadangan  dan  penyalur  air  ke  akar  tanaman  ketika  air terbatas (Carminati et al., 2011). Eksopolisakarida Azotobacter adalah  polimer menyerupai  alginat  yang  mengandung  asam  organik dan  asam  uronat  (Patil et  al .,  2010).  Inokulasi  ganda Azotobacter dengan Bradyrhizobium pada tanaman kedelai berdampak  positif  terhadap  peningkatan  nodulasi  (Koziel et  al .,    2013)  maupun  populasi Azotobater di  tanah  dan hasil kedelai (Marinkovic et al ., 2018). Namun penelitian mengenai EPS pada kedelai jarang dilakukan padahal EPS Azotobacter maupun  kultur  sel Azotobacter pada  kedelai juga  menginduksi  pembentukan  nodula  kedelai  di  rumah kaca (Hindersah et al., 2018). Tanaman kacang-kacangan dapat memfiksasi 30-150 kg  N  ha -1 (Unkovich et  al .,  2008)  dan  kedelai  termasuk legum penting di Indonesia; dengan ekstensifikasi ke tanah suboptimal  seperti  Inceptisols  dan  Ultisols  (Dariah  dan Heryani,  2014).    Peran  EPS Azotobacter dalam  nodulasi akan berdampak terhadap penyerapan unsur hara nitrogen dan  selanjutnya  biomassa  tanaman.  Baik Azotobacter maupun Rhizobium bersifat  heterotrof  yang  memerlukan bahan organik sebagai sumber karbon dan energi (Bergey dan  Holt,  1994).  Bahan  organik  pada  pertanaman  kedelai berfungsi  bukan  saja  untuk  meningkatkan    kesuburan tanah tetapi juga menjamin proliferasi bakteri Azotobacter dan Rhizobium. Penelitian  ini  penting  dilakukan  untuk membandingkan efek EPS Azotobacter dan bahan organik terhadap  jumlah  nodula  dan  bobot  tajuk  kedelai  yang ditanam di tanah ordo Inceptisols dan Ultisols; serta serta populasi  bakteri  pemfiksasi  N 2 nonsimbiotik Azotobacter dan bakteri pemfiksasi N simbiotik Rhizobium di rizosfer kedelai.

## BAHAN­­DAN­­METODE
Percobaan dilakukan di Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran, Jatinangor, Kabupaten Sumedang, Jawa Barat dengan  ketinggian  tempat  772.5  m  di  atas  permukaan laut pada Juni-Agustus 2015. Bakteri pemfiksasi nitrogen Azotobacter sp. penghasil EPS dan Bradyrhizobium diisolasi dari  rizosfer  kedelai  kultivar Anjasmoro  yang  ditanam  di Balai  Penelitian  Aneka  Kacang  dan  Umbi  Malang  pada April 2015.
Tanah  Inceptisols  dan  Ultisols  dari  Jatinangor bertekstur  masing-masing  liat  berdebu  dan  liat  dengan karakteristik kimia pada Tabel 1, diambil secara komposit dari lapisan atas tanah sampai kedalaman 20 cm sebelum dicampur dengan kompos kotoran sapi. Komposisi kompos adalah C organik 33.53%, N organik 1.8%, rasio C/N 18, kadar air 22.34%, pH 6.21, P 2 O 5 1.2% dan K 2 O 3.71%; yang diberikan dua dosis yaitu setara 2.5 ton ha -1 dan 5 ton ha -1 . Percobaan  dirancang  dalam  Rancangan  Acak Kelompok yang menguji 5 kombinasi perlakuan dosis bahan organik dan EPS pada dua ordo tanah yaitu Inceptisols dan Ultisols.  Kombinasi  perlakuan  bahan  organik  dan  EPS
adalah:  Kontrol  (tanpa  bahan  organik  dan  tanpa  EPS), Kompos  6.25  g,  suspensi  EPS Azotobacter 10  mL  per polibag, Kompos 6.25 g, suspensi EPS Azotobacter 20 mL per polibag, Kompos 12.5 g, suspensi EPS Azotobacter 10 mL per polibag, Kompos 12.5 g, suspensi EPS Azotobacter 20 mL per polibag.
Lima perlakuan di atas diaplikasikan pada kedua ordo tanah sehingga terdapat 10 perlakuan yang masing-masing diulang lima kali sehingga terdapat 50 polibag.

## Persiapan Inokulan dan suspensi eksopolisakarida
Kultur cair Azotobacter diproduksi pada media molase 1% dengan NH 4 Cl 0.5%, diperkaya sistein dan serin. Setelah media disterilisasi pada 121 o C selama 20 menit, sebanyak 5%  biakan  murni Azotobater dengan  kepadatan  10 8 CFU per gram tanah diinokulasikan. Media ditempatkan di dalam fermentor ukuran 2 L pada suhu kamar dengan pengadukan 115  rpm.  Pada  hari  ketiga  inokulan  cair Azotobacter disentrifugasi pada kecepatan 9000 rpm dengan suhu 4 o C selama  20  menit  dan  supernatan  yang  mengandung  EPS dikoleksi sebagai suspensi eksopolisakarida.

## Persiapan Media Tanam dan Penanaman
Tanah  ordo  Inceptisol  dan  Ultisols  asal  Kampung Ciparanje,  Desa  Hegarmanah,  Kecamatan    Jatinangor, Kabupaten Sumedang, dikeringanginkan, ditimbang seberat 5  kg  dan  dimasukan  ke  dalam  polibag  dengan  diameter 18  cm  dan  tinggi  22  cm.  Tanah  dicampur  dengan  pupuk kandang  sapi  sesuai  dosis  dan  suspensi  EPS Azotobacter yang masing mengandung Azotobacter sebanyak 10 2 CFU mL -1 .  Suspensi  EPS  dengan  volume  10  mL  atau    20  mL diencerkan sampai volume 100 mL,  disemprotkan merata ke  tanah,  dan  tanah  diaduk  merata.  Tanah  ditutup  terpal selama 7 hari.
Benih kedelai varietas Anjasmoro diinokulasi dengan inokulan cair Bradyrhizobium yang diproduksi pada media agar mannitol ragi pada kepadatan 10 7 CFU mL -1 . Inokulasi dilakukan dengan merendam 100 butir benih di dalam 110 mL  inokulan  cair  selama  10  detik.  Lubang  tanam  pada tanah  di  polibag  dibuat  dengan  cara  tugal  sedalam  5  cm dan dua benih  kedelai ditanam di satu lubang. Penjarangan dilakukan pada dua minggu setelah tanam dan hanya satu tanaman terbaik yang dipelihara sampai fase vegetatif akhir yaitu 42 hari setelah tanam (hst) dengan kondisi air tanah pada kapasitas lapang.
Tanaman dipupuk dengan 0.2 g urea, 0.25 g SP-36 dan 0.25 g KCl (75 kg Urea ha -1 , 100 kg SP-36 ha -1 dan 100 kg KCl  ha -1 ).  Pupuk  diaplikasikan  pada  4  hari  setelah  tanam (hst) dengan cara ditugal di dua lubang dengan kedalaman 5 cm dekat dengan perakaran tanaman. Satu lubang untuk Urea dan satu lubang lagi untuk SP-36 dan KCl. Pengendalian lalat bibit Agromyza phaseoli yang menyerang tanaman kedelai pada umur 3-5 hari menggunakan pestisida berbahan aktif Deltametrin 25 g L -1 dengan konsentrasi 2 mL L -1 .

## Pengukuran Parameter dan Analisis Statistik
Pada  fase  vegetatif  akhir,  minggu  ke  enam,  tajuk tanaman  dipisahkan  dari  bagian  akar;  kemudian  tajuk dikeringkan  pada  60 o C  sampai  berat  konstan  selama  2 hari, Jumlah nodula efektif dihitung yang ditandai dengan ukurannya lebih dari 2 mm, bernas dan berwarna merah jika nodula  dibelah  menandakan  keberadaan  leghemoglobin. Konsentrasi  N  tajuk  ditetapkan  dengan  metode  Kjeldahl sedangkan kadar C-organik tanah dengan metode Walkley and Black (Sulaeman dan Eviati, 2012). Serapan N dihitung dengan  mengalikan  persentase  nitrogen  dengan  bobot kering tajuk tanaman kedelai. Bobot isi tanah  ditetapkan menggunakan contoh tanah utuh yang diambil dengan ring sampel diamter 5 cm setelah ring sample dipanaskan 105 o C selama 24 jam.
Tanah rizosfer dikoleksi dari permukaan akar setelah bongkahan tanah dihilangkan. Sampel berasal dari sampel komposit  yang  menggabungkan  tanah  rizosfer  dari  lima ulangan dengan perlakuan yang sama. Sampel dikompositkan karena tanah rizosfer di perakaran satu tanaman kedelai tidak mencukupi  untuk  analisis  penghitungan  bakteri  dengan metode  plat  pengenceran  berseri.  Bakteri Azotobacter dan Bradyrhizobium di  rizosfer  masing-masing  dihitung menggunakan  media  agar Ashby  bebas  nitrogen  dan  agar manitol ragi dengan bromthymol blue . Seluruh data kecuali populasi  bakteri  dianalisis  dengan  analisis  ragam  (Uji  F) dan dilanjutkan dengan Uji Duncan pada taraf 5%.

## HASIL­­DAN­­PEMBAHASAN

## Jumlah nodula dan Pertumbuhan Tanaman
Sebelum percobaan, C-organik Ultisols lebih rendah daripada Inceptisols, dan tekstur Ultisols lebih berat daripada Inceptisols (Tabel 1) yang dapat menghambat pertumbuhan tanaman.  Kemasaman  kedua  ordo  tanah  yaitu  5.6  pada Ultisols  dan  6.4  pada  Inceptisols  sesuai  untuk  tanaman kedelai (Koesrini et al ., 2015).
Aplikasi  EPS  dan  kompos  pada  Ultisols  tidak mempengaruhi  jumlah  nodula,  tinggi  tajuk  dan  bobot kering tajuk; tetapi pada Inceptisol jumlah nodula dan bobot kering tajuk dengan nyata  meningkat (Tabel 2). Di akhir percobaan,  kemasaman  (pH)  tanah  Ultisol  lebih  rendah daripada  Inceptisol.  Secara  umum,  jumlah  nodula    dan bobot  kering  tajuk  kedelai  di  Ultisols  dengan  nyata  jauh lebih sedikit daripada di Inceptisols.
Secara keseluruhan jumlah nodula per tanaman adalah rendah, penghambatan pembentukan nodula pada Ultisols
menyebabkan bobot kering tajuk kedelai menurun meskipun tinggi tanaman tidak berbeda nyata. Peningkatan nodulasi pada Inceptisols ini sejalan dengan efek ekstrak kultur bebas sel A. vinelandii yang meningkatkan nodulasi legum melalui pembentukan  protein  yang  dapat  meningkatkan  nodulasi (Burns et  al .,  1981).  Peningkatan  jumlah  nodula  pada Inceptisols dengan kompos 12.5 g dan EPS 20 mL sejalan dengan efek positif koinokulasi R. leguminosarum dan A. chroococcum pada  jumlah  nodula Faba  bean (Dashadi et al ., 2011). Tekstur  Inceptisols  adalah  liat  berdebu  lebih  mudah untuk ditembus akar dibandingkan dengan Ultisols. Selain itu  tekstur  ringan  dapat  menginduksi  mobilisasi  rizobia ke  permukaan  akar  untuk  membentuk  benang  infeksi. Rendahnya jumlah nodula kedelai di tanah Ultisol sejalan dengan  penelitian  Sato et  al. (2003)  bahwa  bobot  nodula kedelai di tanah berat lebih rendah daripada di tanah ringan disertai  dengan  menurunnya  persentase  nodula  berukuran 2-5 mm.
Secara  umum,  jumlah  nodula  di  setiap  perlakuan adalah rendah. Pembentukan nodula erat kaitannya dengan nutrisi  tanah  terutama  nitrogen  dan  pH.  Ultisols  dan Inceptisols  mengandung  0.23%  dan  0.26%  N-total  yang termasuk dalam kategori sedang. Penambahan pupuk Urea serta  kompos  kotoran  sapi  dapat  meningkatkan  kadar  N tanah dan menekan nodulasi. Nitrogen tinggi menghambat pembentukan,  jumlah  dan  bobot  nodula  karena  nodulasi dipercepat  oleh  nitrogen  rendah  yaitu  <50 mg  L -1 (Xia et al .,  2017).  Nodula  berkembang  dengan  baik  dan  aktif jika  kandungan  nitrogen  tanah  rendah,  tanah  tidak  terlalu masam, meskipun beberapa strain rizobia toleran terhadap kemasaman rendah  (Ferguson et al ., 2013).
Bobot kering tajuk tanaman di Inceptisol lebih tinggi daripada Ultisols (Tabel 2). Peningkatan ini disebabkan oleh porositas Inceptisols lebih baik dan efek dari EPS. Alami et  al .  (2000)  membuktikan  bahwa  EPS  mempengaruhi pertumbuhan  tanaman  karena  serapan  unsur  hara  N  oleh akar meningkat sebagai respons dari peningkatan porositas tanah. Aplikasi 20 mL suspensi EPS disertai 6.25 g kompos pada Inceptisols meningkatkan bobot kering tajuk sampai 14.41 g yang berbeda nyata dengan perlakuan kontrol tetapi tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  lainnya.  Aplikasi EPS dan kompos  meningkatkan serapan N tajuk kedelai di kedua ordo tanah tetapi tidak mempengaruhi kadar N tajuk (Tabel 3).
Tanaman  kedelai  di  Inceptisols  lebih  responsif terhadap  aplikasi  EPS  karena  sifat  fisik  Inceptisols  lebih ringan dibandingkan Ultisols.  Di akhir percobaan,  bobot isi tanah Inceptisols lebih rendah daripada Ultisols  (Tabel 4)
Ordo Tanah pH C organik (%) N total (%) C/N Fraksi tanah (%) Tekstur Pasir Liat Debu Ultisols 5.6 1.69 0.23 7.3 4 44 52 Liat Inceptisol 6.4 2.06 0.26 7.9 8 40 52 Liat berdebu
Tabel 1. Karakteristik kimia tanah Ultisols dan Inceptisols sebelum percobaan
menjelaskan bahwa pertumbuhan akar di Inceptisols dapat lebih baik meskipun tidak diukur. Tekstur Inceptisols lebih mendukung  pembentukan  nodula  dan  fiksasi  N 2 karena sirkulasi udara dan ketersediaan air lebih baik (Al-Saedi et al ., 2016) dan meningkatkan serapan N (Tabel 3).

## Populasi Azotobacter dan Bradyrhizobium di rizosfer
Aplikasi EPS dan kompos pada berbagai dosis tidak mengubah populasi Azotobacter di kedua ordo tanah tetapi menurunkan populasi Bradyhizobium di Ultisols sebesar satu log (Tabel 5). Dibandingkan dengan populasi kedua bakteri sebelum percobaan yang ditetapkan dari bulk soil, populasi Azotobacter meningkat satu log sedangkan Bradyrhizobium hanya  meningkat  pada  Inceptisols.  Peningkatan  populasi bakteri  karena  adanya  eksudat  yang  dilepaskan  akar  dan menjadi  sumber  nutrisi  (Dennis et al ., 2010)  dan  aplikasi kompos.
Populasi Azotobacter dan Rhizobium di  Inceptisols pada kontrol masing-masing sekitar 13.5% dan 14.5% lebih tinggi daripada Ultisols yang menjelaskan bahwa mikroba pemiksasi  N 2 indigenus  mendapatkan  kondisi  lingkungan yang lebih baik di Inceptisols. Kadar C-organik Inceptisols pada setiap perlakuan lebih tinggi daripada Ultisols (Tabel 4). Azotobacter dan Rhizobium adalah  rizobakteri  yang bersifat  heterotrof,  menggunakan  bahan  organik  sebagai sumber karbon dan energi (Bergey dan Holt, 1994). Tekstur Inceptisol, liat berdebu dengan bobot isi lebih rendah (Tabel 3) memberikan lebih banyak oksigen untuk kedua bakteri pemfiksasi N 2 aerobik.
Penambahan  EPS  dan  kompos  sedikit  menurunkan populasi  kedua  bakteri  di  Ultisols  maupun  Inceptisols meskipun tidak sampai satu log. Pada Inceptisols, perlakuan 10 mL EPS menurunkan populasi kedua bakteri pemfiksasi N di rizosfer. Suspensi EPS mengandung hanya sekitar 10 2 CFU mL -1 Azotobacter ; penurunan populasi diduga karena Perlakuan pH Jumlah nodula Tinggi tajuk (cm) Bobot kering tajuk (g) Ultisols Kontrol 5.8 ± 0.29a 6.6 ± 1.67a 42.92 ± 3.24a 8.24 ± 1.30a EPS 10 mL, kompos 6.25 g 5.9 ± 0.25ab 6.8 ± 2.28a 39.88 ± 2.12a 7.64 ± 1.00a EPS 20 mL, kompos 6.25 g 5.8 ± 0.38a 6.2 ± 3.49a 41.72 ± 2.53a 8.50 ± 1.02a EPS 10 mL, kompos 12.5 g 5.8 ± 0.62a 6.0 ± 3.32a 42.54 ± 3.74a 7.40 ± 2.42a EPS 20 mL, kompos 12.5 g 6.1 ± 0.66ab 7.8 ± 2.87a 44.34 ± 2.86a 8.57 ± 1.00a Inceptisols Kontrol 6.3 ± 0.08bc 15.6 ± 5.94b 44.66 ± 2.75a 13.33 ± 1.53b EPS 10 mL, kompos 6.25 g 6.3 ± 0.08bc 13.2 ± 6.14ab 44.40 ± 6.35a 14.27 ± 1.72bc EPS 20 mL, kompos 6.25 g 6.4 ± 0.09b 26.8 ± 5.45d 46.02 ± 4.11a 14.41 ± 1.89c EPS 10 mL, kompos 12.5 g 6.4 ± 0.24b 13.4 ± 6.35ab 43.96 ± 2.04a 14.04 ± 2.23bc EPS 20 mL, kompos 12.5 g 6.4 ± 0.09b 18.2 ± 6.98c 45.04 ± 4.16a 13.88 ± 1.32bc
Tabel 2. ­­ Nodula dan pertumbuhan kedelai umur 42 hari setelah aplikasi suspensi EPS dan kompos pada Ultisols dan Incep- tisols
Keterangan: Angka yang ditandai dengan huruf yang sama pada kolom sama tidak berbeda nyata menurut Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf nyata 0.05
Perlakuan Konsentrasi N tajuk (%) Serapan N tajuk (mg) Ultisols Inceptisols Ultisols Inceptisols Kontrol 3.87 ± 0.09ab 3.72 ± 0.27ab 315.66 ± 4.27a 502.86 ± 8.31a EPS 10 mL, kompos 6.25 g 3.96 ± 0.25ab 3.89 ± 0.31ab 322.12 ± 6.33a 555.30 ± 8.65b EPS 20 mL, kompos 6.25 g 4.12 ± 0.11b 2.14 ± 0.41a 334.14 ± 4.66b 568.76 ± 4.98c EPS 10 mL, kompos 12.5 g 3.60 ± 0.38a 4.18 ± 0.13b 315.66 ± 4.27b 597.96 ± 4.95d EPS 20 mL, kompos 12.5 g 3.94 ± 0.28ab 4.11 ± 0.20ab 342.80 ± 6.47b 602.94 ± 7.66d
Tabel 3. Persentase dan serapan  nitrogen tajuk  kedelai umur 42 hari setelah aplikasi suspensi EPS dan bahan organik pada Ultisols dan Inceptisols
Keterangan: Angka yang ditandai dengan huruf yang sama pada kolom sama tidak berbeda nyata menurut Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf nyata 0.05
ada interaksi negatif dengan mikroba indigenus karena hanya 10 mL suspensi EPS ditambahkan. Peningkatan dosis EPS menjadi 20 mL per polibag diduga menginduksi proliferasi kedua mikroba untuk meningkatkan atau mempertahankan populasinya di rizosfer.
Peningkatan populasi Rhizobium di kedua ordo tanah setelah  apliksi  EPS  20  mL  per  polibag  sejalan  dengan
hasil  penelitian  Sara et  al. (2014)  pada  tanah  Inceptisols di  musim  hujan.  Percobaan  jangka  panjang  selama  8 tahun  juga  memperlihatkan  bahwa  inokulasi Rhizobium dan Azotobacter mendukung proliferasi rizobia di rizosfer karena  tanaman  tumbuh  dengan  baik  akibat  penyedian  N (Rawat et al ., 2013).

## KESIMPULAN
Penambahan suspensi EPS dan bahan organik hanya meningkatkan pembentukan nodula kedelai di Inceptisols. Peningkatan  nodula  ini  menyebabkan  bobot  kering  tajuk tanaman  dan  serapan  N  Kedelai  di  Inceptisols  pada  42 hst lebih tinggi daripada Ultisols.  Namun tinggi tanaman kedelai  di  kedua  ordo  tanah  tidak  berbeda,  baik  tanaman yang  mendapatkan  EPS  maupun  tidak.  Pada  Inceptisols, pemberian  kompos  6.25  g  dan  EPS  20  mL  per  tanaman menghasilkan  tanaman  dengan  jumlah  nodula  tertinggi pada 42 hst.  Namun serapan N tajuk tertinggi diperoleh dari kedelai  yang  mendapatkan  10  mL  dan    20  mL  EPS  yang diberikan bersamaan dengan  12.5 g kompos. Populasi bakteri Azotobater dan Rhizobium di rizosfer kedelai di kedua ordo meningkat  dibandingkan  di  tanah  sebelum  percobaan.  Di akhir percobaan, populasi kedua bakteri di Inceptisols lebih
tinggi  daripada  di  Ultisols  karena  tekstur  Inceptisol  lebih ringan, bobot isi lebih rendah dan  C-organik lebih tinggi daripada Ultisols. Bobot isi dan C-organik kedua ordo tanah dengan  nyata  dipengaruhi  oleh  apliksi  EPS  dan  kompos. Peningkatan C-organik secara langsung dapat mendukung prolifersi sel Azotobacter yang berperan pula dalam fiksasi nitrogen;  sedangkan  penurunan  bobot  isi  memfasilitasi peningkatan serapan N oleh tajuk kedelai.

## UCAPAN­­TERIMA­­KASIH
Penelitian  ini  adalah  bagian  dari  skema  Penelitian Strategis  Nasional  2015  Dirjen  Pendidikan  Tinggi Kementerian Pendidikan RI. Kami berterimakasih kepada Yosaera  Thoriq  Ramadhan  yang  membantu  pelaksanaan penelitian.
Perlakuan Bobot isi (g cm 3 ) C organik (%) Ultisols Inceptisols Ultisols Inceptisols Kontrol 0.77 ± 0.04a 0.74 ± 0.02c 1.70 ± 0.02c 2.05 ± 0.02a EPS 10 mL, kompos 6.25 g 0.87 ± 0.04b 0.67 ± 0.06b 1.76 ± 0.11c 2.11 ± 0.04b EPS 20 mL, kompos 6.25 g 0.88 ± 0.04b 0.61 ± 0.02a 1.73 ± 0.01c 2.14 ± 0.01b EPS 10 mL, kompos 12.5 g 0.90 ± 0.12b 0.58 ± 0.01a 1.81 ± 0.13b 2.33 ± 0.06c EPS 20 mL, kompos 12.5 g 0.93 ± 0.04b 0.57 ± 0.08a 2.06 ± 0.06a 2.36 ± 0.01c
Tabel 4. Bobot isi tanah Ultisols dan Inceptisols yang ditanami kedelai sampai  umur 42 hari setelah aplikasi bahan organik dan suspensi EPS
Keterangan: Angka yang ditandai dengan huruf yang sama pada kolom sama tidak berbeda nyata menurut Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf nyata 0.05
Perlakuan
Populasi Azotobacter*
(x 10 5 CFU g -1 ) Populasi Rhizobium* (x 10 7 CFU g -1 ) Ultisols Inceptisols Ultisols Inceptisols Kontrol 0.25 ± 0.08 0.75 ± 0,23 15.4 ± 0.71 5.7 ± 1.20 Kompos 6.25 g, EPS 10 mL 8.10 ± 0.29 9.30 ± 0.68 11.6 ± 0.40 13.4 ± 0.61 Kompos 6.25 g, EPS 20 mL 3.80 ± 0.55 6.90 ± 0.42 9.4 ± 0.89 7.6 ± 0.75 Kompos 12.5 g, EPS 10 mL 5.60 ± 0.61 9.80 ± 1.15 9.6 ± 0.50 15.6 ± 1.20 Kompos 12.5 g, EPS 20 mL 6.50 ± 1.13 7.40 ± 0.75 6.8 ± 0.58 12.2 ± 0.26 Tabel 5. Populasi Azotobacter dan Rhizobium di rizosfer kedelai yang ditanam di tanah ordo Ultisols dan Inceptisols
Keterangan: * Data berasal dari dua kali pengukuran pada sampel yang sama

## DAFTAR­­PUSTAKA
Alami,  Y.,  W.  Achouak,  C.  Marol,  T.  Heulin.  2000. Rhizosphere  soil  aggregation  and  plant  growth promotion  of  sunflowers  by  an  exopolysaccharide- producing Rhizobium sp.  strain  isolated  from sunflower roots. Appl. Environ. Microbiol. 66:3393- 3398.
Al-Saedi, S.A.,  I.B. Razaq,  N. A. Ali. 2016. Effect of soil textural classes on the biological nitrogen fixation by Bradyrhizobium measured by 15 N dilution analysis.
Baghdad Sci. J.  13:734-743.
Bergey.  D.H.,  J.G.  Holt.  1994.  Bergey’s  Manual  of Determinative  Bacteriology.  Williams  &  Wilkin, Baltimore, USA.
Burns,  T.A.,  P.E.  Bishop,  D.W.  Israel.  1981.  Enhanced nodulation  of  leguminous  plant  roots  by  mixed cultures  of Azotobacter  vinelandii and  rhizobium. Plant Soil 62:399-412.
Carminati,  A.,  C.L.  Schneider,  A.B.  Moradi,  M. Zarebanadkouki,  D.  Vetterlein,  H.J.  Vogel,  A. Hildebrandt,  U.  Weller,  L.    Schüler,  S.E.  Oswald. 2011.  How  the  rhizosphere  may  favor  water availability to roots. Vadose Zone J. 10:988-998.
Dariah, A., N. Heryani. 2014. Pemberdayaan lahan kering suboptimal untuk mendukung kebijakan diversifikasi dan ketahanan pangan.  J. Sumberdaya Lahan Edisi Khusus:1-16.
Dashadi, M., H. Khosravi, A. Moezzi, H. Nadian, M. Heidari, R. Radjabi. 2011. Co-inoculation of Rhizobium and Azotobacter on  growth  indices  of  faba  bean  under water  stress  in  the  green  house  condition.  Adv. Studies Biol. 3:373-385.
Dennis,  P.G.,  A.J.  Miller,  P.R.  Hirsch.  2010.    Are  root exudates  more  important  than  other  sources  of rhizodeposits  in  structuring  rhizosphere  bacterial communities?. FEMS Microbiol. Ecol. 72:313-327.
Ferguson, B.J.,  M.H  Lin, P. M. Gresshoff. 2013. Regulation of  legume  nodulation  by  acidic  growth  conditions. Plant Signal Behav. 8:e23426.
Gauri,  S.S.,  S.M.  Mandal,  B.R.  Pati.  2012.  Impact  of Azotobacter exopolysaccharides  on  sustainable agriculture.  Appl.  Microbiol.  Biotechnol. 95:331- 338.
Hindersah,  R.,  N.  Rostini,  D.S.  Sara, A.  Harsono.    2018. Increasing soybean nodulation and growth following inoculation  of  exopolysachharide  producing Azotobacter in  pot  culture.  Asian  J.  Microbiol. Biotech. Env. Sci. 20:S52-S58.
Juandi, M., Y. Hasanah, S. Silitonga. 2013. Produksi kedelai ( Glycine max L. Merill) dengan pemberian berbagai sumber unsur hara N dan perbedaan kondisi air tanah. Agroekotek. 1:535-541.
Koesrini,  K.  Anwar  dan  E.  Berlian.  2015.  Penggunaan kapur dan varietas adaptif untuk meningkatkan hasil kedelai di lahan sulfat masam aktual.  Berita Biologi. 14:155-161.
Kozieł, M., B. Gębala, S. Martyniuk.  2013. Response of soybean  to  seed  inoculation  with Bradyrhizobium japonicum and with mixed inoculants of B. japonicum and Azotobacter  chroococcum .  Pol.  J.  Microbiol. 62:457-460.
Liu  Liu,  X.,  K.  Eusterhues, J.    Thieme, V.  Ciobota, C. Höschen, C.W.  Mueller, K.  Küsel,   I.  Kögel- Knabner, P.  Rösch, J.  Popp,  K.U.  Totsche.  2013. STXM  and  NanoSIMS  investigations  on  EPS Fractions  before  and  after  adsorption  to  Goethite. Environ. Sci. Technol.  47:3158-3166.
Marinković, J., D. Bjelić, B. Tintor, J. Miladinović.  V. Dukić,
V. Đorđević. 2018. Effects of soybean co-inoculation with  plant  growth  promoting  rhizobacteria  in  field trial. Rom. Biotech. Lett. 23:13401-13408.
Patil,  S.V.,  R.B.  Salunkhe,  C.D.  Patil,  D.M.  Patil,  B.K. Salunke.  2010.  Bioflocculant  exopolysaccharide production  by Azotobacter  indicus using  flower extract  of Madhuca  latifolia L.  Appl.  Biochem. Biotechnol. 162:1095-108.
Rawat,  A.K.,  D.L.N.  Rao,  R.K.  Sahu,  2013 . Effect  of soybean inoculation with Bradyrhizobium and wheat inoculation  with Azotobacter on  their  productivity and  N  turnover  in  a  Vertisol.  http://agris.fao.org/ agris-search/search.do?recordID= US201500160199 [14 November 2016].
Sara, D.S., R. Hindersah, M.R. Setiawati. 2014. Peningkatan populasi Bradyrhizobium di rizosfer dan pertumbuhan vegetatif  kedelai  melalui  aplikasi  eksopolisakarida Azotobacter .    hal.  319-323. Dalam D.  Kurnia,  D. Chaerani,  L.  Safriani  ( Eds. ).  Prosiding  Seminar Nasional MIPA. Jatinangor 18 Oktober 2014.
Sato, T., Y.  Kaneta, N.  Furuta, H. Kobayashi, H. Shindo, T. Ota, A. Sato. 2003. Effect of soil physical properties on  soybean  nodulation and  N 2 fixation at the early growth  stage  in  heavy  soil  field  in  Hachirougata Polder, Japan. J. Soil Sc. Pl. Nutr. 49:695-702.
Sulaeman,  Eviati.  2012.  Petunjuk  Teknis  Analisis  Kimia Tanah, Tanaman, Air dan Pupuk. Badan Penelitian dan Pengembangan  Pertanian,  Kementerian  Pertanian,
Jakarta.
Unkovich,  M.,  D.  Herridge,  M.  Peoples,  G.  Cadisch, R.  Boddey,  K.  Giller,  B.  Alves,  P.  Chalk.  2008.
Measuring  plant-associated  nitrogen  fixation  in agricultural  systems. ACIAR  Monograph  No.  136, 258 pp.
Wang,  D., A.  Xu,  C.  Elmerich,  L.Z.  Ma.  2017.  Biofilm formation  enables  free-living  nitrogen-fixing rhizobacteria  to  fix  nitrogen  under  aerobic conditions. The ISME Journal 11:1602-1613.
Xia, X., C. Ma, S. Dong,Y. Xu, Z. Gong. 2017. Effects of nitrogen concentrations on nodulation and nitrogenase activity in dual root systems of soybean plants. Soil Sci. Plant Nutr. 63:470-482.