## Deteksi Spesies Megalocytivirus pada Budidaya Ikan Laut di Kepulauan Riau
[Detection of Megalocytivirus Species on Marine Culture in Riau Islands]
Achmad Bahtiar Rifai 1 , Anak Agung Gede 1 ,
Lucky Putra P Kusuma 1 , Yani Maulani 2
1 Stasiun Karantina Ikan Kelas I Batam
2 Stasiun Karantina Ikan Kelas I Bandung

## Abstrak
Penyakit yang dapat menyebabkan kerugian ekonomi yang sangat tinggi adalah virus dan salah satunya adalah Megalocytivirus . Megalocytivirus mempunyai tiga spesies yaitu Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus (ISKNV), Red Sea Bream Iridovirus (RSIV), dan Turbot Redy Body Iridovirus (TRBIV) . Gejala klinis pada ikan yang terinfeksi Megalocytivirus pada umumnya terlihat dari perubahan tingkah laku yaitu nafsu makan berkurang, berenang lemah, dan malas bergerak. Tubuh ikan yang terinfeksi terlihat lebih gelap baik pada permukaan tubuh sirip, dan bagian ekor. Metode  uji  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  pengambilan  sampel,  pengujian histopatologi, deteksi spesies Megalocytivirus dengan polymerase chain reaction (PCR). Sampel ikan yang menunjukan gejala klinis diambil dari beberapa kabupaten/kota yang ada di kepulauan Riau antara lain Batam, Tanjungpinang, Bintan, Tanjung Balai Karimun dan Natuna. Sampel ikan adalah ikan kakap dan kerapu dari keramba jaring apung dan hatchery. Tujuan dari penelitian ini adalah mendeteksi spesies Megalocytivirus pada budidaya ikan laut yang ada di Kepulauan Riau. Pada uji histopatologi ditemukan lesio berupa badan inklusi, nekrosa, melano makrofag center pada  hati,  ginjal  dan  limpa.  Badan  inklusi  dan  nekrosa  yang  menyebar  pada  organ  tersebut merupakan karakteristik Megalocytivirus . Hasil identifikasi PCR dengan menggunakan gen Major Capsid  Protein pada  panjang  amplikon  777  bp  berhasil  mendeteksi Megalocytivirus .  deteksi spesies Megalocytivirus dibeberapa  Kabupaten/Kota  di  Kepulauan  Riau  menunjukan  semua sampel ikan air laut terinfeksi ISKNV, sedangkan untuk spesies RSIV dan TRBIV tidak berhasil dideteksi pada penelitian ini. Infeksi Mengalocytivirus sudah menyebar pada budidaya ikan laut diseluruh kabupaten/Kota di Propinsi Kepulauan Riau. Spesies Megalocytivirus yang terdeteksi di Kepulauan Riau adalah ISKNV.
Kata kunci: ISKNV, Megalocytivirus , PCR, RSIV, TRBIV.

## Abstract
Viruses  that  can  caused  very  high  economic  losses  were  viruses  and  one  of  them  was Megalocytivirus . Megalocytivirus has  three  species  including  the  Infectious  Spleen  and  Kidney Necrosis  Virus  (ISKNV),  Red  Sea  Brid  Iridovirus  (RSIV),  and  Turbot  Redy  Body  Iridovirus (TRBIV). The clinical summary of fish released by Megalocytivirus in general can be seen from changes in behavior, namely decreased appetite, weak swimming, and lazy to move. Fish body that looks better on the surface and on the fins and tail. The test methods used in this researched were  sampling,  histopathological  testing,  detection  of Megalocytivirus species  by  polymerase chain reaction (PCR). Fish samples taken showed several samples of districts / cities in the Riau archipelago  between  Batam, Tanjungpinang,  Bintan,  Tanjung  Balai  Karimun  and  Natuna. Fish samples  taken  from  snapper  and  grouper  from  floating  net  cages  and  hatcheries.  In  the histopathology  test  found  lesio  consists  of  inclusion  bodies,  necrosa,  melano  central macrophages in the liver, kidneys and spleen. The inclusion body and necrosa which spread to these organs are characteristic of Megalocytivirus . The results of approving PCR used the gene Major Capsid protein at the amplicon length 777 bp managed to convince  Megalocytivirus. The detection of Megalocytivirus species in several regencies / cities in the Riau Islands showed that all samples of sea water needed by ISKNV, while those of the RSIV and TRBIV species were not detected  successfully  in  this  researched. Mengalocytivirus infection  has  spread  to  marine  fish
cultivation  in  all  districts  /  cities  in  the  Riau  Islands.  The Megalocytivirus species  added  to  the Riau Islands is ISKNV.
Keywords: ISKNV, Megalocytivirus, PCR, RSIV, TRBIV.

## Penulis Korespondensi
Achmad Bahtiar Rifai | abherifai@gmail.com

## PENDAHULUAN
Kepulauan  Riau  merupakan  salah satu provinsi yang memiliki sumber daya kelautan  dan  perikanan  terbesar  di Indonesia.  Jenis  budidaya  ikan  yang menjadi  unggulan  adalah  budidaya  ikan air  laut  karena  banyak  diminati  oleh nelayan  di  pesisir  pantai.  Salah  satu kendala pada sektor perikanan budidaya adalah  serangan  penyakit  yang  sampai saat  ini  masih  menjadi  perhatian  baik pemerintah  pusat  maupun  pemerintah daerah. Beberapa faktor yang menyebabkan terjadinya serangan penyakit  antara  lain  suhu,  lingkungan dan polusi pada air (Lafferty et al. 2015).
Penyakit patogen yang sering menginfeksi  budidaya  ikan  antara  lain parasit,  jamur,  bakteri,  dan  virus.  Salah satu penyakit yang menyebabkan kerugian  ekonomi  yang  sangat  tinggi adalah Megalocytivirus .
Megalocytivirus merupakan  salah satu genus terbaru dari famili Iridoviridae , genus  selanjutnya  yaitu Ranavirus,
Lymphocytivirus dan Iridovirus (Kurita dan  Nakajima  2012). Megalocytivirus memiliki  tiga  genus,  dua  diantaranya sudah  terdeteksi  di  Indonesia,  yakni
Infectious  Spleen  and  Necrosis  Virus (ISKNV) dan Red  Sea  Bream  Iridovirus (RSIV) (Abidin 2013), sedangkan Turbot Redy  Body  Iridovirus  (TRBIV) hanya ditemukan di Korea dan Cina (Shiu et al. 2018). Megalocytivirus
dapat menyebabkan  penyakit  yang  sistemik dan dapat menyebabkan kematian pada lebih  dari  30  spesies  ikan  air  laut konsumsi (Kurita et al. 2002).
Megalocytivirus pertama kali terdeteksi  pada  tahun  1990  di  Jepang pada  ikan  kakap  merah  dan  dinyatakan sebagai  RSIV  pada  tahun  1991  (Inouye et  al. 1992). Megalocytivirus telah dilaporkan  di  beberapa  negara  antara lain  Australia,  Jepang,  Korea,  Cina, Thailand,  Malaysia, Philipina, Singapura dan  Indonesia  (Go et  al. 2006;
Murwantoko,  Handayani,  dan  Pratiwi 2009; Office International des Epizooties 2012). Kasus di Jepang biasanya terjadi pada musim panas dimana periode suhu air relatif menjadi tinggi. Sampai saat ini Megalocytivirus menginfeksi ikan air laut maupun ikan air tawar.
Gejala  klinis  pada  ikan  yang terinfeksi
Megalocytivirus pada umumnya terlihat dari perubahan tingkah
laku  yaitu  nafsu  makan  berkurang, berenangnya lemah, dan malas bergerak.  Tubuh  ikan  yang  terinfeksi terlihat lebih gelap baik pada permukaan maupun  pada  sirip  dan  bagian  ekor (Mahardika,  Zafran  Yamamoto,  dan Miyazaki 2004). Secara patologi anatomi terlihat  anemia  berat, ptechiae pada insang dan limpa serta ginjal membesar.
Secara  umum  pengobatan  untuk Megalocytivirus belum  ditemukan.  Oleh karena  itu,  Kementerian  Kelautan  dan Perikanan berdasarkan Surat Keputusan Menteri  no  81  tahun  2015  menjadikan Megalocytivirus sebagai  hama  penyakit ikan karantina golongan 1,  pengawasan dan  pencegahan  yang  ketat  sangat diperlukan  supaya  tidak  memperluas penyebaran  ke  daerah  yang  masih
bebas dari agen penyakit Megalocytivirus . Di samping
pengawasan dan pencegahan diperlukan juga pendeteksian secara dini yang  tepat  dan  cepat  tentang  penyakit tersebut.  Oleh  karena  itu,  pemerintah provinsi,  daerah  ataupun  kota  dituntut untuk  siap  mendukung  setiap  upaya pencegahan  dan  penularan  terhadap agen  penyakit Megalocytivirus agar industri  perikanan  budidaya  air  laut  dan air tawar secara ekonomi tidak mengalami kerugian yang tinggi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendeteksi spesies Megalocytivirus
pada  budidaya  ikan  laut  yang  ada  di Kepulauan Riau.

## BAHAN DAN METODE
Pengambilan  sampel  dilakukan  di beberapa  kabupaten/kota  di  Propinsi Kepulauan  Riau  antara  lain  Batam, Tanjungpinang,  Bintan,  Tanjung  Balai Karimun dan Natuna. Jenis sampel yang diambil  adalah  ikan  kakap  dan  kerapu yang menunjukan gejala klinis Megalocytivirus .  Sampel  ikan  tersebut kemudian dinekropsi untuk diambil organ limpa dan ginjal untuk dilakukan pengujian  histopatologi  dan Polymerase Chain Reaction (PCR).

## Uji Histopatologi
Organ  limpa  dan  ginjal  untuk pengujian histopatologi kemudian dimasukan  ke  dalam  formalin  10%. Prosedur pembuatan preparat berdasarkan protokol yang telah ditetapkan  oleh  laboratorium  patologi Fakultas  Kedokteran  Hewan  Institut Pertanian  Bogor  antara  lain  organ  yang dalam  larutan  fiksatif  formalin  10% kemudian dicuci dengan aquades, selanjutnya dilakukan perendaman dengan  etanol  dengan  konsentrasi bertingkat.  Penjernihan  dengan  larutan propanol dengan konsentrasi bertingkat, dilanjutkan  dengan  infiltrasi  parafin  dan embeding . Embeding adalah
memasukan organ ke dalam parafin cair
sampai mengeras dan dilanjutkan dengan  pemotongan  pada  ketebalan 5 mm  dengan  mikrotom,  lalu  irisan ditempelkan  pada  gelas  objek  yang ditetesi  albumin.  Proses  deparafinisasi atau  perendaman  jaringan  yang  sudah ditempelkan  pada  gelas  objek  dengan larutan xylol secara  berurutan  selama  5 menit,  kemudian  dilakukan  pewarnaan dengan haematoxylin dan eosin .
Tahapan terakhir dari pembuatan preparat  histopatologi  yaitu  jaringan ditetesi dengan entelan kemudian ditutup dengan  kaca  penutup.  Pengamatan histopatologi  dilakukan  dengan  melihat kerusakan sel ataupun jaringan
menggunakan mikroskop dengan pembesaran 45 kali.

## Ekstraksi DNA Megalocytivirus
Ekstraksi  DNA  dilakukan  dengan menggunakan DNeasy® Blood  and
Tissue  Kit (Qiagen  Kit,  Germany) .
Prosedur ekstraksi DNA dilakukan berdasarkan  protokol  dari  perusahaan tersebut.

## Deteksi Megalocytivirus dengan Polymerase Chain Reaction (PCR)
Deteksi Megalocytivirus menggunakan  primer  yang  dirancang spesifik  oleh  Kurita  dan  Nakajima, (2012).  Gen  yang  digunakan  adalah Major  Capsid  Protein ( MCP )  dengan panjang  amplikon  777  bp.  Amplifikasi menggunakan primer forward dan
reverse dengan urutan nukleotida sebagai berikut 5 ′- AGGTGTCGGTGTCATTAACGACCTG- 3 ′ dan reverse 5 ′-
TCTCAGGCATGCTGGGCGCAAAG-3 ′.
Amplifikasi  PCR  dilakukan  dengan  total volume 25 μL larutan reaksi yang terdiri dari  8.5  µL RNase-free  water ,  12.5  µL
HotStarTaq Master Mix 2× (Qiagen), 1 µL primer forward (10  µM),  1  µL primer reverse (10 µM) dan 2 μ L sampel DNA.
Siklus  amplifikasi  diawali  dengan  pre denaturasi  94  °C  selama  3  menit, dilanjutkan dengan 30 siklus yang terdiri dari  denaturasi  94  °C  selama  30  detik, annealing 58 °C selama 1 menit, ekstensi pada  suhu  72  °C  selama  1  menit  dan akhir  amplifikasi  dilanjutkan  dengan ekstensi akhir 1 siklus pada suhu 72 °C selama 10 menit. Hasil PCR selanjutnya divisualisasi dengan elektroforesis menggunakan  1.5% agarose  gel dan pewarnaan  menggunakan SYBR  Green 0.5  µg/ml.  Marker  yang  digunakan adalah DNA marker 100bp.

## Deteksi Spesies Megalocytivirus dengan Polymerase Chain Reaction
(PCR)
Sampel  yang  menunjukan  hasil positif  terhadap  deteksi Megalocytivirus kemudian  dilanjutkan  dengan  deteksi terhadap spesies
Megalocytivirus
menggunakan  metode  PCR.  Sekuen primer,  target  gen,  panjang  amplikon serta  spesies Megalocytivirus yang ditampilkan  pada  tabel  1.  Amplifikasi PCR sama dengan deteksi
Megalocytivirus .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Perolehan Sampel
Sampel pada penelitian ini didapatkan dari beberapa kabupaten/kota  di  propinsi  Kepulauan Riau antara lain: Batam, Tanjungpinang, Tanjung  Balai  Karimun  dan  Natuna. Jenis ikan yang diperoleh adalah kerapu dan  kakap  dengan  gejala  klinis  antara lain  mata  menonjol,  terdapat  luka  di badan,  tubuh  ikan  terlihat  gelap  dan nafsu  makan  berkurang.  Sedangkan secara patologi anatomi hati pucat, limpa dan  ginjal  mengalami  pembengkakan dan  banyak  terdapat  pelemakan  di  hati. Menurut  Mahardika et  al. (2004)  gejala klinis  yang  terlihat  pada Megalocytivirus adalah tubuh ikan terlihat lebih gelap baik
pada permukaan maupun pada sirip dan bagian  ekor.  Jumlah  sampel  yang diperoleh  di  beberapa  kabupaten  di Propinsi  Kepulauan  Riau  dapat  dilihat pada Tabel 2.

## Uji Histopatologi
Beberapa
sampel
yang menunjukan gejala klinis Megalocytivirus kemudian dinekropsi untuk diambil organ limpa dan ginjal untuk pengujian histopatologi  dan  molekuler.  Organ sampel  yang  diperiksa  histopatologi dimasukan  ke  dalam  larutan  formalin 10%  dan  untuk  molekuler  disimpan dalam freezer pada  suhu  -20 o C.  Hasil histopatologi menunjukan adanya perubahan  pada  organ  limpa  dan  ginjal antara  lain  badan  inklusi,  nekrosa, melano  makrofag  center,  sel  terlihat membesar. Hasil histopatologi ditampilkan pada Gambar 1. Tabel 1 Daftar primer spesies Megalocytivirus Gen Target spesies Sekuen primer a Panjang amplikon a MCP RSIV (F) 5 ′-CCCGCACTGACCAACGTGTCC-3′ (R) 5 ′-CACAGGGTGACTGAACCTCAGGTCG-3′ 191 bp MCP ISKNV (F) 5 ′-GGTGGCCGGCATCACCAACGGC-3′ (R) 5 ′-ACGGGGTGACTGAACCTG-3′ 415 bp MCP TRBIV (F) 5 ′-TTCATCGACATCTCCGCTTTC-3′ (R) 5 ′-TSTGACCGTTGGTGATACCGGAG-3′ 453 bp

## Deteksi Megalocytivirus dan
Spesiesnya.
Deteksi
Megalocytivirus dan spesiesnya dilakukan menggunakan gen Major  Capsid  Protein dengan  panjang amplikon  777  bp  pada Megalocytivirus ,
415  pada  ISKNV  dan  191  pada  RSIV.
Dari  delapan  belas  total  sampel  yang diperoleh  dari  beberapa  kabupaten  di Propinsi  Kepulauan  Riau  terdapat  10 sampel  yang  positif Megalocytivirus , sedangkan  sisanya  (8  sampel)  negatif
Megalocytivirus .  Masing-masing  sampel yang  positif Megalocytivirus kemudian dideteksi  spesiesnya.  Hasilnya,  semua sampel yang positif
terhadap
Megalocytivirus , positif terinfeksi spesies ISKNV.

## Pembahasan
Megalocytivirus merupakan  salah satu  genus  baru  dari  family  Iridoviridae yang  diusulkan  oleh  Chinchar et  al. ,
Tabel 2. Perolehan sampel ikan di Provinsi Kepulauan Riau.
Kabupaten/kota Jenis sampel Total sampel Batam Kerapu 5 Tanjungpinang Kerapu 3 Tanjung Balai Karimun Kakap putih 5 Natuna Kerapu 5 Total 18
Gambar 1. Perubahan pada organ limpa dan ginjal antara lain badan inklusi, nekrosa dan MMC (melano makrofag center).

## (2005).  Berdasarkan  laporan  kedelapan
International Committee on Taxonomy of Virus  (ICTV) ,  genus Megalocytivirus tergabung  dalam  family  iridoviridae bersama  empat  genus  lainnya  yaitu Iridovirus,  Chloriridovirus,  Ranavirus , dan Lymphocystivirus . Megalocytivirus dapat dibagi menjadi 3 spesies berdasarkan gen MCP dan ATPase yaitu RSIV,  ISKNV  dan  TRBIV.  Perbedaan asam amino di antara 3 spesies tersebut kecil, tetapi terdapat besaran/magnitude yang sama (Kurita dan Nakajima 2012).
Hasil  histopatologi  pada  penelitian ini  menunjukan  sampel  yang  diperoleh terinfeksi Megalocytivirus ,  hal  tersebut terlihat  dari  perubahan  dan  lesio  antara lain  badan  inklusi  dan  nekrosa  yang menyebar  luas.  Perubahan  histologi yang  terjadi  pada  organ  dalam  ikan khususnya limpa merupakan karakterisasi  dari  terjadinya  infeksi Megalocytivirus ,  karena  organ  limpa merupakan target organ dari infeksi virus ini (Chao et al. 2004) . Karakteristik yang paling  jelas  dari  infeksi Megalocytivirus adalah nekrosa yang menyebar luas dan pembesaran sel, limpa dan ginjal adalah organ yang paling terpengaruh pada ikan terinfeksi (Kurita et al. 1998; Miyata et al.
1997;  Oshima et  al. 1998).  Sel  yang mengalami pembesaran ditemukan pada beragam jaringan, diantaranya limpa dan ginjal. Pembentukan sel yang membesar pada  limpa,  jantung,  ginjal,  hati  dan
insang  dari  ikan  terserang  merupakan karakteristik infeksi Megalocytivirus
(Nakajima dan Sorimachi 1994) .
Seluruh  sampel  (10  sampel)  dari provinsi  Kepulauan  Riau  menunjukan positif  terinfeksi  ISKNV,  sedangkan untuk RSIV dan TRBIV menunjukan hasil yang  negatif. Infectious  Spleen  and Kidney Necrosis Virus (ISKNV) pertama kali dideteksi pada ikan mandarin di Cina (He et al. 2000) dan tersebar luas di Asia Tenggara pada ikan laut maupun ikan air tawar.  Gejala  klinis  yang  terlihat  antar spesies Megalocytivirus sangat  identik, sehingga diagnosis tidak bisa berdasarkan  pada  gejala  klinis.  Salah satu uji konfirmasi untuk Megalocytivirus adalah  PCR  konvensional  dan  qPCR yang sampai saat ini masih digunakan.
Major Capsid Protein (MCP) merupakan  gen  yang  digunakan  untuk mendeteksi Megalocytivirus dan spesienya.  Gen  MCP  merupakan  gen yang  sangat  penting  yang  digunakan untuk menganalisis hubungan genetik di antara Family anggota Iridoviridae karena MCP merupakan protein struktural  yang  memiliki  banyak  bagian- bagian  penting  yang  membungkus informasi paling detail dari virus tersebut (Go et  al. 2006). Major  Capsid  Protein ( MCP ) terletak di antara lapisan amplop luar dan membran dalam sehingga MCP merupakan suatu  penanda  yang  sangat
penting  pada  saat  identifikasi  secara molekuler (Dong et al. 2011).

## SIMPULAN
Megalocytivirus terdeteksi di seluruh
kabupaten/kota
Propinsi
Kepulauan  Riau  antara  lain  Batam, Tanjungpinang, Tanjung Bakai Karimun, dan  Natuna.  Seluruh  sampel  terinfeksi ISKNV, namun tidak terinfeksi RSIV dan TRBIV.

## PERSANTUNAN
Terimakasih kepada Kepala
Stasiun  Karantina  Ikan  Pengendalian Mutu  dan  Keamanan  Hasil  Perikanan Kelas  I  Batam  dan  Bandung  yang  telah mengijinkan  penulis  untuk  melakukan penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Abidin,  La  Ode  Baytul.  2013.  “Deteksi
Molekuler  Megalocytivirus pada
Ikan  Budidaya  dengan  Metode Polymerase Chain Reaction- Restriction Fragment Length Polymorphism  [Tesis].”  Universitas
Gadjah Mada.
Chao, Chia-Ben, Chun-Yao Chen, Yueh- Yen Lai, Chan-Shing Lin, dan Hung- Tu  Huang.  2004.  “Histological, ultrastructural, and in situ
hybridization study on enlarged cells in  grouper  Epinephelus  hybrids infected  by  grouper  iridovirus  in
Taiwan (TGIV).” Diseases of aquatic organisms 58(2 –3):127–42.
Chinchar,  VG,  S.  Essbauer,  JG  He,  A.
Hyatt, T. Miyazaki, V. Seligy, dan T. Williams. 20 05. “Family Iridoviridae.”  in Virus  Taxonomy Eighth  Report  of  the  International Committee on Taxonomy of
Viruses ,  diedit  oleh  C. M.  Fauquet,
M.  A.  Mayo,  J.  Maniloff,  U. Desselberger, dan L. A. B. T.-V. T. Ball. London (GB): Academic Press.
Dong,  C. F., X.  P. Xiong, F. Shuang, S. P. Weng, J. Zhang, Y. Zhang, Y. -w. Luo,  dan  J.  G.  He.  2011.  “Global
Landscape of Structural Proteins of Infectious Spleen and Kidney
Necrosis Virus.” Journal of Virology
85(6):2869 –77.
Go,  Jeffrey,  Malcolm  Lancaster,  Kylie Deece, Om Dhungyel, dan Richard Whittington.  2006.  “The  molecular epidemiology of iridovirus in Murray cod  (Maccullochella  peelii  peelii) and  dwarf  gourami  (Colisa  lalia) from distant biogeographical
regions  suggests  a  link  between trade  in  ornamental  fish  and emerging iridoviral diseases.”
Molecular  and  Cellular  Probes
20(3 –4):212–22.
He,  J.  G.,  S.  P.  Wang,  K.  Zeng,  Z.  J. Huang,  dan  S.  M.  Chan.  2000. “Systemic  disease  caused  by  an iridovirus-like  agent  in  cultured
mandarinfish, Siniperca chuatsi
(Basilewsky),  in  China.” Journal  of Fish Diseases 23(3):219 –22. Inouye, Kiyoshi, Keisuke Yamano, Yukio Maeno, Kazuhiro Nakajima, Manabu Matsuoka, Yuji Wada, dan Minoru  Sorimachi.  1992.  “Iridovirus Infection  of  Cultured  Red  Sea B ream, Pagrus major.” Fish Pathology 27(1):19 –27.
Kurita,  Jun  dan  Kazuhiro  Nakajima.
2012.  “Megalocytiviruses.” Viruses 4(4):521 –38.
Kurita,  Jun,  Kazuhiro  Nakajima,  Ikuo Hirono,  dan  Takashi  Aoki.  1998. “Polymerase Chain Reaction (PCR) Amplification  of  DNA  of  Red  Sea Bream  Iridovirus  (RSIV).” Fish Pathology 33(1):17 –23.
Kurita,  Jun,  Kazuhiro  Nakajima,  Ikuo Hirono,  dan  Takashi  Aoki.  2002. “Complete  genome  sequencing  of Red  Sea  Bream  Iridovirus  (RSIV).”
Fisheries  science 68(sup2):1113 – 15.
Lafferty,  Kevin  D.,  C.  Drew  Harvell,  Jon M.  Conrad,  Carolyn  S.  Friedman, Michael  L.  Kent,  Armand  M.  Kuris, Eric N. Powell, Daniel Rondeau, dan Sonja M. Saksida. 2015. “Infectious Diseases  Affect  Marine  Fisheries
and Aquaculture Economics.” Annual  Review  of  Marine  Science
7(1):471 –96.
Mahardika, K., A. Zafran Yamamoto, dan T. Miyazaki. 2004. “Susceptibility of juvenile humpback grouper Cromileptes  altivelis  to  grouper sleepy disease iridovirus (GSDIV).” Diseases  of  Aquatic  Organisms 59:1 –9.
Miyata,  M.,  K.  Matsuno,  S.  J.  Jung,  Y.
Danayadol,  dan  T.  Miyazaki.  1997. “Genetic  similarity  of  iridoviruses from  Japan  and  Thailand.” Journal of Fish Diseases 20(2):127 –34.
Murwantoko, Christina Retna Handayani,
dan Rarastoeti Pratiwi. 2009. “Cloning and Sequence Analysis of Capsid  Protein  Gene  of  Iridovirus Indonesian  Isolates.” Indonesian Journal of Biotechnology 14(1):1117 –23. Nakajima, Kazuhiro dan Minoru Sorimachi.  1994.  “Biological  and Physico-chemical  Properties  of  the Iridovirus  Isolated  from  Cultured Red  Sea  Bream,  Pagrus  major.”
Fish Pathology 29(1):29 –33.
Office International des Epizooties. 2012.
Manual Diagnostic Test for Aquatic Animals . Paris (FR).
Oshima,  S.,  JI  Hata,  N.  Hirasawa,  T.
Ohtaka,  I.  Hirono,  T.  Aoki,  dan  S. Yamashita.  1998.  “Rapid  diagnosis of red sea bream iridovirus infection using the polymerase chain reaction.” Diseases  of  Aquatic
Organisms 32:87 –90.
Shiu,  Jing-Yi,  Jiann-Ruey  Hong,  Chen- Chun  Ku,  dan  Chiu-Ming  Wen.
2018. “Complete genome sequence
and phylogenetic analysis of
megalocytivirus RSIV-Ku: A natural recombination infectious spleen and kidney  necrosis  virus.” Archives  of Virology 163(4):1037 –42.