## UNPAD

## Radiochemical Purity Test of Fractionated Sestamibi Kit Labelled with Technetium-99m
Hasna Chaerunisa 1 , N. Elly NE Rosilawati 3 , Muchtaridi Muchtaridi 2 * 1 Program Studi Profesi Apoteker, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Sumedang, Indonesia 2 Departemen Analisis Farmasi dan Kimia Medisinal, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Sumedang, Indonesia 3 Departemen Kedokteran Nuklir, Fakultas Kedokteran, Universitas Padjadjaran, Sumedang, Indonesia.
Submitted 10 May 2021; Revised 11 May 2021; Accepted 30 November 2022; Published 31 December 2022 *Corresponding author: muchtaridi@unpad.ac.id

## Abstract
Coronary Heart Disease (CHD) is a heart disorder caused by blockage of blood vessels. CHD can be detected by Myocardial Perfusion Imaging (MPI). MPI is performed by injecting a radiopharmaceutical into  the  patient's  body. 99m Tc-sestamibi  is  a  radiopharmaceutical  that  is  commonly  used  in  MPI. Sestamibi is available in the form of a multidose vial, but the cost of the examination will be expensive if it is only used for one patient. Cost effectiveness can be increased by fractionating the sestamibi kit before labelled by 99m Tc. 99m Tc-sestamibi needs to be tested for quality control before it is administered to the patients. One of the tests is the radiochemical purity test. The aim of this study was to determine the radiochemical purity of the fractionated sestamibi kit labelled by 50 mCi 99m Tc. 2 vials of sestamibi kit were fractionated by adding 5 mL of 0.9% NaCl solution to each vial and divided into 10 new vials. Radiochemical purity was measured using the thin layer chromatography (TLC) method. The results of this study indicated that all samples had radiochemical purity of 100% up to 6 hours after labelling.
Keywords: Radiopharmaceutical, 99m Tc-sestamibi, fractionation, radiochemical purity.

## Uji Kemurnian Radiokimia Kit Sestamibi Difraksinasi dengan Penandaan Technetium-99m

## Abstrak
Penyakit  Jantung  Koroner  (PJK)  adalah  gangguan  jantung  yang  disebabkan  oleh  penyumbatan pembuluh darah. PJK dapat dideteksi dengan Sidik Perfusi Miokard (SPM). SPM dilakukan dengan menyuntikkan radiofarmaka ke dalam tubuh pasien. 99m Tc-sestamibi adalah radiofarmasi yang umum digunakan dalam SPM. Sestamibi tersedia dalam bentuk vial multidosis, namun biaya pemeriksaannya akan  mahal  jika  hanya  digunakan  untuk  satu  pasien.  Efektivitas  biaya  dapat  ditingkatkan  dengan memfraksinasi  kit  sestamibi  sebelum  diberi  label 99m Tc. 99m Tc-sestamibi  perlu  diuji  untuk  kontrol kualitas sebelum diberikan kepada pasien. Salah satu pengujian tersebut adalah pengujian kemurnian radiokimia. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui kemurnian radiokimia kit sestamibi fraksinasi  berlabel  50  mCi 99m Tc.  2  vial  kit  sestamibi  difraksinasi  dengan  menambahkan  5  mL larutan NaCl 0,9% pada setiap vial dan dibagi menjadi 10 vial baru. Kemurnian radiokimia diukur menggunakan metode kromatografi lapis tipis (KLT). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa semua sampel memiliki kemurnian radiokimia 100% hingga 6 jam setelah penandaan.
Kata Kunci: Radiofarmaka, 99mTc-sestamibi, fraksinasi, kemurnian radiokimia.

## 1.  Pendahuluan
Penyakit  Jantung  Koroner  merupakan keadaan  dimana  pasokan  darah  yang  tidak memadai  karena  penyumbatan  pembuluh darah.  Prevalensi  penyakit  jantung  koroner di  Indonesia  tahun  2013  sebesar  0,5% atau  diperkirakan  sekitar  883.447  orang, dimana  jumlah  penderita  penyakit  jantung koroner terbanyak terdapat di Provinsi Jawa Barat  sebanyak  160.812  orang.  Angka  ini diperkirakan akan terus bertambah dan dapat menyebabkan kematian hingga 23,3 juta pada tahun 20301.
Penyakit jantung koroner perlu dideteksi secara dini untuk mencegah semakin buruknya penyakit dan kematian dini. Penyakit jantung koroner  dapat  dideteksi  dengan  metode pencitraan jantung yang bersifat non-invasif, salah  satunya  yaitu  Sidik  Perfusi  Miokard (SPM)2. Sidik  Perfusi  Miokard  (SPM) digunakan oleh beberapa rumah sakit (RS) di Indonesia yang memiliki fasilitas kedokteran nuklir. Sidik Perfusi Miokard dapat dilakukan dengan  menginjeksikan  radiofarmaka  ke dalam  tubuh  dan  dilihat  menggunakan Single-Photon Emission Computed Tomography (SPECT). Radiofarmaka terdiri dari  radionuklida  dan  farmaka.  Farmaka dipilih berdasarkan lokalisasinya pada organ tertentu atau perannya dalam fungsi fisiologis organ,  lalu  farmaka  tersebut  ditandai  oleh radionuklida yang sesuai sehingga terbentuk radiofarmaka  yang  dapat  digunakan  untuk melihat  struktur  morfologi  atau  fungsi fisiologis  suatu  organ.  Radionuklida  yang digunakan untuk SPM ini yaitu Technetium- 99m ( 99m Tc). 99m Tc banyak digunakan karena memiliki  beberapa  kelebihan,  antara  lain dapat  langsung  diproduksi  oleh  generator 99 Mo/ 99m Tc,  memiliki  waktu  paruh  sekitar  6 jam sehingga mudah dieliminasi oleh tubuh, dan memiliki energi sinar-γ sebesar 140keV
sesuai  untuk  deteksi  menggunakan  kamera gamma menghasilkan pencitraan yang baik3.
99m Tc  diperoleh  dari  proses  peluruhan 99 -Molibdenum  ( 99 Mo)  dalam  sebuah generator. Generator 99 Mo/ 99m Tc  terdiri  atas kolom alumina (Al2O3) yang berisi molibdat dalam  bentuk  kimia 99 MoO4 2− .  Kolom alumina (Al2O3) digunakan untuk pertukaran ion  dan  pHnya  diatur  menjadi  asam  untuk meningkatkan  pengikatan.  Peluruhan 99 Mo menjadi 99m Tc  mengarah  pada  pembentukan pertechnetate ( 99m TcO4 −) dan  dielusi  dengan larutan saline membentuk 99m Tc- Sodium Pertechnetate (Na 99m TcO4).  Struktur  dari pertechnetate terdapat pada Gambar 1 4,5 . 99 Mo  mengalami  peluruhan  sebanyak 13,95% akan membentuk 99 Tc dan sebanyak 86,05%  membentuk 99m Tc  dalam  keadaan metastabil6.  Eluat dari generator 99 Mo/ 99m Tc mengandung anion pertechnetate ( 99m TcO4 − ). Senyawa  koordinasi  ini  memiliki  struktur geometri tetrahedral dengan tingkat oksidasi +7. Pertechnetate ,  tingkat  oksidasi  tertinggi untuk  logam  ini  sangat  stabil  dalam  larutan air. Pertechnetate ketika  akan  digunakan untuk  penandaan  pada  molekul  tertentu, perlu  menghilangkan  atom  oksigen  yang terikat pada logam dengan zat pereduksi dan digantikan dengan ligan baru7.
99m Tc  dapat  direaksikan  dengan  ligan methoxyisobutylisonitrile (MIBI/sestamibi) dan tetrofosmin untuk SPM. Ligan sestamibi banyak  digunakan  untuk  SPM,  terutama karena  memiliki  kualitas  gambar  hasil pencitraan  yang  lebih  baik  dibandingkan tetrofosmin8  Ligan  sestamibi  digunakan secara luas untuk diagnosis perfusi miokard untuk  mendeteksi  lokasi  miokardium  yang abnormal9. Ligan sestamibi memiliki kualitas pencitraan  yang  baik  karena  penangkapan pada  jantung  yang  tinggi,  sedangkan  pada liver dan paru rendah 10 . Ligan sestamibi sudah banyak digunakan untuk SPM pada fasilitas
Gambar 1. Struktur Pertechnetate 5
kedokteran nuklir di Indonesia.
Kit  sestamibi  tersedia  dalam  bentuk vial multidosis. Satu vial kit sestamibi dapat digunakan untuk SPM pada beberapa pasien, apabila jumlah pasiennya sedikit, biaya yang dikeluarkan  untuk  penandaan  cukup  besar karena  kit  sestamibi  memiliki  harga  yang relatif  mahal.  Upaya  untuk  meningkatkan efisiensi  biaya  perlu  dilakukan  pada  SPM menggunakan 99m Tc-sestamibi ini. Salah satu upaya  yang  dipertimbangkan  yaitu  dengan melakukan  fraksinasi  terhadap  kit  kering- beku sestamibi sebelum dilakukan penandaan dengan 99m Tc. Fraksinasi adalah salah satu cara paling efektif untuk melakukan efisiensi biaya tanpa mengurangi  kualitas  pencitraan  dan  terbukti mampu menghemat biaya yang dikeluarkan. Penelitian  mengenai  fraksinasi  kit  sestamibi ini  dapat  digunakan  sebagai  acuan  untuk kedokteran  nuklir,  khususnya  kedokteran nuklir  yang  baru  berdiri  untuk  melakukan efisiensi  biaya,  tetapi  penelitian  yang dilakukan terkait fraksinasi kit sestamibi ini masih  sedikit.  Fraksinasi  dilakukan  dengan merekonstitusi kit radiofarmaka secara aseptik dalam  larutan  NaCl  0,9%  dan  membaginya menjadi beberapa bagian, kemudian disimpan pada suhu -20°C   dan dapat digunakan hingga 12 hari setelah difraksinasi 11 . Kit  sestamibi  yang  telah  difraksinasi perlu  ditandai  dengan 99m Tc  sehingga membentuk  radiofarmaka 99m Tc-sestamibi. 99m Tc-sestamibi  diberikan  secara  intravena, lalu pada ruang ekstraseluler akan melewati membran sel dengan mekanisme difusi pasif transmembran  lipofilik  dan  terdistribusi di  dalam  tubuh  mengikuti  konsentrasi dan  gradien  (karena  ruang  intraseluler bermuatan negatif) dan terakumulasi di dalam mitokondria7. Penurunan fungsi mitokondria dalam sel miokard menyebabkan penurunan potensi  matriks  mitokondria,  sehingga menurunkan akumulasi 99m Tc-sestamibi 12 . Radiofarmaka 99m Tc-sestamibi  perlu diuji  kualitasnya  sebelum  digunakan  pada pasien, salah satu pengujian yang digunakan yaitu uji kemurnian radiokimia. Uji kemurnian radiokimia  merupakan  fraksi  dari  total radioaktivitas  dalam  bentuk  kimiawi  yang
diinginkan  dalam  radiofarmaka.  Pengotor radiokimia yang terdapat dalam radiofarmaka dapat  menyebabkan  kualitas  gambar  yang buruk  dan  memberikan  dosis  radiasi  yang tidak  perlu  kepada  pasien.  Pengotor  dapat terjadi  karena  adanya  radioisotop  bebas, produk degradasi, atau produk limbah selama proses  reaksi.  Contoh  pengotor  radiokimia dalam  kompleks  bertanda 99m Tc  adalah pertechnetate    ( 99m TcO4 - )  bebas  dan  99mTc terhidrolisis 13,14 . Uji  kemurnian  radiokimia  harus dilakukan  dengan  waktu  yang  singkat  agar efisien  karena  radioisotop  yang  terkandung didalam radiofarmaka mudah meluruh dengan waktu paro yang cukup singkat. Uji kemurnian radiokimia  umumnya  menggunakan  metode kromatografi lapis tipis karena pengerjaannya relatif mudah, waktu yang digunakan singkat, serta biaya pengerjaan relatif murah 15 . Pelat  KLT  dianalisis  menggunakan Radio-TLC Scanner , dimana detektor radiasi bergerak  sepanjang  pelat  untuk  mengukur radiasi yang dipancarkan di sepanjang pelat. Hasil  pengukuran  dianalisis  sesuai  dengan rasio  jarak  dari  spot  asli  dan  radioaktivitas. Radio-TLC Scanner umumnya menunjukkan grafik  jumlah  radioaktivitas  gamma dipancarkan  oleh  komponen  radiofarmaka, termasuk radioisotop tertentu 16,17 . Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  perlu dilakukan  penelitian  terkait  uji  kemurnian radiokimia 99m Tc-Sestamibi  menggunakan metode  kromatografi  lapis  tipis  untuk mengetahui kualitas kit Sestamibi difraksinasi yang ditandai dengan 99m Tc.

## 2.  Metode
2.1.  Alat Alat  yang  digunakan  antara  lain dispossible syringe 1  mL  dan  5  mL, dose calibrator (Capintec), generator 99 Mo/ 99m Tc (Enviro), pelat KLT silica gel GF254 (Merck), kontainer Pb, spektrometer gamma (Raytest), tabung eppendorf microtube , radio-TLC scanner (Raytest), dan waterbath .
2.2.  Bahan Bahan yang digunakan antara lain etanol absolut    (Merck),  kit  kering-beku  sestamibi
(PoltechMIBI), larutan Na 99m TcO4 steril yang didapat  dari generator 99 Mo/ 99m Tc  (Enviro), dan larutan NaCl 0,9% (Otsu-NS®).
2.3.  Prosedur
2.3.1. Uji Visual dan Uji pH
Pemeriksaan  visual  larutan  dilakukan dengan  cara  mengamati  larutan  Na 99m TcO4 hasil elusi dari generator 99 Mo/ 99m Tc. Uji pH dilakukan  dengan  cara  larutan  Na 99m TcO4 diteteskan  pada  kertas  pH  indikator  dan diamati perubahan warna yang terjadi.
2.3.2. Uji Kemurnian Radionuklida Na99mTcO4 Larutan Na 99m TcO4
dengan radioaktivitas    1  mCi  diencerkan  dengan  5 mL larutan NaCl 0,9%. Sebanyak 5 μL larutan uji diambil dan dimasukkan ke dalam tabung eppendorf microtube ,  kemudian  diukur dengan menggunakan spektrometer gamma.
2.3.3. Uji kemurnian radiokimia  Na 99m TcO4 Pelat  silica  gel  GF254  ukuran  1  cm  x 5  cm  disiapkan  dengan  ujung  bawah  pelat diberi garis dengan jarak 1 cm. Sebanyak 5 μL larutan  Na 99m TcO4 ditotolkan pada garis yang  sudah  ditandai  sehingga  membentuk lingkaran.  Fase  gerak  yaitu  larutan  NaCl 0,9%  dimasukkan  ke  dalam chamber dan dijenuhkan terlebih dahulu. Pelat KLT yang telah ditotolkan larutan  Na 99m TcO  diletakkan ke dalam chamber secara hati-hati dan tegak lurus.  Pelat  dielusi  sampai  batas  atas,  lalu diangkat dan dibiarkan mengering. Kemudian, pelat  dimasukkan  kedalam  alat radio-TLC scanner untuk dilakukan pengukuran Rf dan
Persentase Kemurnian Radiokimia (KRK).
2.3.4. Fraksinasi Kit Sestamibi Kit  sestamibi  direkonstitusi  dengan  5 mL larutan NaCl 0,9% dan dibagi ke dalam 5 vial steril masing-masing 1 mL secara aseptik.
2.3.5. Penandaan 99mTc-Sestamibi Sebanyak 1 mL larutan  Na 99m TcO4 steril dengan  radioaktivitas  50  mCi  dimasukkan ke  dalam  vial  yang  terdapat  pada  perisai timbal.  Vial  dikocok  menggunakan vortex mixer hingga  isinya  larut  sempurna  (sekitar 1  menit).  Vial  ditempatkan  secara  tegak  di dalam waterbath dan dididihkan selama 10-12 menit (pengaturan waktu 10-12 menit dimulai segera setelah air mendidih). Vial dikeluarkan dari  waterbath,  kemudian  dimasukkan  ke dalam kontainer timbal dan dibiarkan dingin selama 15 menit.
2.3.6. Uji  Kemurnian  Radiokimia 99m Tc- Sestamibi Pelat silica gel GF254 ukuran 1 cm x 5 cm disiapkan  dengan  ujung  bawah  pelat  diberi garis  dengan  jarak  1  cm  untuk  penempatan sampel. Sebanyak 5 μL larutan 99m Tc-sestamibi ditotolkan  pada  garis  yang  sudah  ditandai sehingga  membentuk  lingkaran.  Fase  gerak etanol absolut dimasukkan ke dalam chamber dan  didiamkan  hingga  jenuh.  Pelat  KLT yang telah ditotolkan larutan 99m Tc-sestamibi dimasukkan  ke  dalam chamber secara  hati- hati  dan  garis  pada  pelat  KLT  tidak  boleh terendam oleh fase gerak. Pelat dielusi sampai pelarut bergerak sekitar 3 cm dari garis awal. Pelat  KLT  dikeluarkan  dari chamber dan
Gambar 2. Kemurnian radionuklida larutan  eluat Na 99m TcO4    diukur  dengan  spektrometer gamma (Raytest)
dibiarkan  hingga  kering.  Kemudian,  pelat dimasukkan kedalam alat TLC scanner untuk dilakukan  pengukuran  Rf  dan  persentase Kemurnian Radiokimia (KRK).
3.  Hasil
3.1.  Uji Visual dan Uji pH Pemeriksaan  visual  larutan  Na 99m TcO4 menunjukan larutan bening, jernih dan tidak berwarna.  Hasil  tersebut  sesuai  dengan persyaratan  yang  tertera  pada European Pharmacopoeia Edisi ke-10 18 bahwa kualitas larutan Na 99m TcO4 yaitu larutan harus bening dan tidak berwarna. Selain itu, pH dari Larutan Na 99m TcO4  juga  diuji  dan  menunjukkan pH  sebesar  5.  Hasil  tersebut  sesuai  dengan persyaratan  yang  tertera  pada European Pharmacopoeia Edisi ke-10 18 bahwa larutan Na 99m TcO4 memiliki pH  antara 4,0 – 8,0.
3.2.  Uji Kemurnian Radionuklida Na 99m TcO4 Hasil  uji  kemurnian  radionuklida menggunakan spektrometer gamma menunjukkan adanya puncak pada energi 140 keV.  Puncak  tersebut  spesifik  menunjukkan adanya 99m Tc yang terdapat di dalam larutan eluat  Na 99m TcO4.  Pada  energi  740keV dan  780keV  tidak  terdapat  puncak  yang menunjukkan  adanya  radionuklida  induk 99 Mo.  Hasil  uji  kemurnian  radionuklida terdapat  pada  Gambar  2.  Berdasarkan  hal tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  larutan eluat Na 99m TcO4 mengandung 99m Tc murni dan tidak ada pengotor 99 Mo.
3.3.  Uji Kemurnian Radiokimia Na 99m TcO4
Uji  kemurnian  radiokimia  dilakukan dengan  metode  kromatografi  lapis  tipis (KLT).  Fase  diam  yang  digunakan  pada  uji kemurnian  radiokimia  ini  yaitu  pelat  KLT SGF254.  Fase  gerak  yang  digunakan  pada uji  kemurnian  radiokimia  ini  yaitu  larutan NaCl  0,9%.  Uji  kemurnian  radiokimia  ini menunjukkan Rf sebesar 0,9. Uji kemurnian radiokimia ini juga menunjukkan KRK sebesar 100%.  Syarat  KRK  Na 99m TcO4berdasarkan European  Pharmacopoeia  Edisi  ke-10 18 yaitu  KRK  ≥95%.  Maka,  hasil  pengujian memenuhi persyaratan dan larutan Na 99m TcO4 dapat  digunakan  untuk  penandaan  senyawa Sestamibi.
3.4.  Fraksinasi Kit Sestamibi Kit  sestamibi    tersedia  dalam  bentuk serbuk  berwarna  putih,  dimana  tiap  vialnya mengandung  1  mg  senyawa  sestamibi. Fraksinasi  kit  sestamibi  dilakukan  dengan merekonstitusi  kit  sestamibi  dalam  larutan NaCl  0,9%  dan  membaginya  menjadi beberapa  bagian.  Kit  sestamibi  yang digunakan pada penelitian ini yaitu sebanyak 2  vial  dan  masing-masing  vial  ditambahkan 5  mL  larutan  NaCl  0,9%.  Masing-masing vial  kit  sestamibi  dibagi  ke  dalam  5  vial baru secara aseptik sehingga pada penelitian ini  terdapat  10  vial  kit  sestamibi  yang telah  difraksinasi.  Kit  sestamibi  yang  telah difraksinasi  menunjukkan  larutan  yang tidak  berwarna  dan  jernih.  Hal  tersebut menunjukkan bahwa kit sestamibi telah larut sempurna dalam larutan NaCl 0,9% dan dapat digunakan untuk penandaan oleh 99m Tc.
Tabel 1. Rf hasil uji kemurnian radiokimia 99m Tc-Sestamibi
Vial Rf Jam Ke-0 Jam Ke-1 Jam Ke-2 Jam Ke-3 Jam Ke-6 1 0,3 0,4 0,5 0,3 0,4 2 0,3 0,4 0,4 0,4 0,4 3 0,4 0,5 0,5 0,4 0,4 4 0,4 0,4 0,5 0,4 0,4 5 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 6 0,4 0,5 0,5 0,5 0,5 7 0,4 0,4 0,5 0,4 0,5 8 0,4 0,5 0,4 0,4 0,4 9 0,4 0,5 0,4 0,6 0,4 10 0,4 0,4 0,4 0,5 0,4

## 3.5.  Penandaan
99m Tc-sestamibi Pada penelitian ini, masing-masing vial kit sestamibi yang telah difraksinasi ditandai oleh 99m Tc  dengan  radioaktivitas  50  mCi. Sestamibi  tersedia  dalam  bentuk  kompleks [Cu(MIBI)4]BF4.  Proses  penandaan  ini membutuhkan pemanasan untuk melepaskan sestamibi  dari  kompleks  [Cu(MIBI)4]BF4, selain  itu  sestamibi  memiliki  kelarutan yang  rendah  pada  larutan aqueous sehingga  membutuhkan  pemanasan  untuk meningkatkan kelarutannya 13 . Larutan 99m Tc-sestamibi yang terbentuk menunjukkan  larutan  yang  jernih  dan  tidak berwarna.  Larutan  ini  memiliki  pH  5. Berdasarkan European Pharmacopoeia Edisi ke-10 18 , kualitas larutan 99m Tc-sestamibi yaitu larutan  harus  bening  dan  tidak  berwarna, serta pH sekitar 5,0 - 6,0. Maka larutan 99m Tc- sestamibi memenuhi persyaratan yang tertera pada European Pharmacopoeia Edisi ke-10.
3.6.  Uji  Kemurnian  Radiokimia 99m Tc- Sestamibi Uji  kemurnian  radiokimia  dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT). Fase diam yang digunakan pada uji kemurnian radiokimia 99m Tc-sestamibi  ini  yaitu  pelat KLT  SGF254.  Fase  gerak  yang  digunakan pada  uji  kemurnian  radiokimia  ini  yaitu etanol absolut. Uji kemurnian radiokimia ini dilakukan untuk mengetahui Rf dan KRK. Rf dan KRK diukur pada jam ke-0, 1, 2, 3, dan 6.  Hal  ini  dilakukan  untuk  melihat  kualitas
99m Tc-sestamibi  setelah  penandaan  hingga  6 jam setelah penandaan. Hasil uji kemurnian radiokimia 99m Tc-sestamibi  pada  jam  ke-0 hingga  jam  ke-6  terdapat  pada  Tabel  1  dan Tabel 2. Rf dari 10 vial pada jam ke-0 hingga jam  ke-6  menunjukkan  hasil  yang  beragam dengan rentang 0,3 - 0,6.
Hasil pengukuran %kemurnian radiokimia 99m Tc-Sestamibi  yang  terdapat pada Tabel 2 menunjukkan bahwa seluruh vial memiliki KRK 99m Tc-Sestamibi sebesar 100% pada  jam  ke-0,  1,  2,  3,  dan  6.  Persyaratan KRK 99m Tc-Sestamibi berdasarkan European Pharmacopoeia Edisi ke-10 yaitu ≥94%. Hal ini menunjukkan bahwa semua vial memenuhi persyaratan  %kemurnian  radiokimia.  Maka, 99m Tc-Sestamibi dapat digunakan untuk SPM hingga 6 jam setelah penandaan.
4.  Pembahasan 4.1.  Uji Kemurnian Radionuklida Na 99m TcO4 Uji  kemurnian  radionuklida  dilakukan untuk mengetahui adanya pengotor radionuklida  yang  terkandung  didalam larutan  eluat  Na 99m TcO4.  Radionuklida  yang diinginkan dalam eluat generator 99 Mo/ 99m Tc adalah 99m Tc.  Pengotor  radionuklida  yang paling  umum  dalam  eluat generator 99 Mo/ 99m Tc adalah radionuklida induk, 99 Mo. Jumlah 99 Mo  dalam  eluat  harus  sekecil mungkin, karena memiliki umur yang panjang dan  dapat  meningkatkan  dosis  radiasi  tanpa memberikan manfaat apapun bagi pasien 19 . Uji  kemurnian  radionuklida  dilakukan menggunakan spektrometer gamma. Larutan
Vial Kemurnian radiokimia (%) Jam Ke-0 Jam Ke-1 Jam Ke-2 Jam Ke-3 Jam Ke-6 1 100 100 100 100 100 2 100 100 100 100 100 3 100 100 100 100 100 4 100 100 100 100 100 5 100 100 100 100 100 6 100 100 100 100 100 7 100 100 100 100 100 8 100 100 100 100 100 9 100 100 100 100 100 10 100 100 100 100 100 Rata-rata 100±0 (n=10) 100±0 (n=10) 100±0 (n=10) 100±0 (n=10) 100±0 (n=10)
Tabel 2. Hasil uji kemurnian radiokimia 99m Tc-Sestamibi
eluat  Na 99m TcO4  diencerkan  terlebih  dahulu menggunakan  NaCl  0,9%  dan  dianalisis menggunakan  spektrometer  gamma  Mucha (Raytest)  dengan  detektor  NaI(Tl)  untuk melihat  spektrum  puncak  energi  foton ( photopeak )  yang  dipancarkan  oleh  sinar gamma  dari  radionuklida  yang  terkandung didalam  larutan  tersebut. 99m Tc  akan menghasilkan  puncak  pada  energi  140  keV, sedangkan pengotor 99 Mo akan menghasilkan puncak pada energi 740 keV dan 780 keV.
4.2.  Uji kemurnian radiokimia Na 99m TcO4 Uji  kemurnian  radiokimia  dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT). Metode  KLT  dipilih  karena  pengerjaannya relatif mudah, waktu yang digunakan singkat, serta  biaya  pengerjaan  relatif  murah.  Selain itu,  sampel  tetap  berada  pada  pelat  dan tidak  ada  radioaktivitas  yang  hilang  selama pengujian. Kromatografi lapis tipis dilakukan berdasarkan  prinsip  adsorpsi  dan  partisi, dimana  radiofarmaka  ditotolkan  pada  pelat (fase diam) dan akan dielusi oleh fase gerak 15 . Fase  diam  yang  digunakan  pada  uji kemurnian  radiokimia  ini  yaitu  pelat  KLT SGF254. Fase gerak yang digunakan pada uji kemurnian radiokimia ini yaitu larutan NaCl 0,9%. Larutan NaCl 0,9% merupakan pelarut polar yang dapat mempengaruhi migrasi dari pertechnetate  bebas. Pertechnetate bebas bersifat hidrofilik dan migrasinya didasarkan pada  kelarutannya  terhadap  pelarut  yang digunakan.
Uji  kemurnian  radiokimia  dilakukan untuk mengetahui adanya pengotor radiokimia yang dapat menyebabkan kualitas gambar  yang  buruk  dan  memberikan  dosis radiasi yang tidak perlu kepada pasien 13 . Uji kemurnian radiokimia ini menunjukkan KRK sebesar  100%,  hal  tersebut  menunjukkan bahwa  tidak  ada  pengotor  radiokimia  yang terkandung dalam larutan Na 99m TcO4.
4.3.  Fraksinasi Kit Sestamibi
Kit  sestamibi  tersedia  dalam  bentuk serbuk  berwarna  putih,  dimana  tiap  vialnya mengandung  1  mg  senyawa  sestamibi. Fraksinasi  kit  sestamibi  dilakukan  dengan merekonstitusi  kit  sestamibi  dalam  larutan
NaCl  0,9%  dan  membaginya  menjadi beberapa  bagian.  Fraksinasi  ini  dilakukan untuk menghemat biaya dalam praktik rutin institusi  kedokteran  nuklir.6  Larutan  NaCl 0,9% digunakan pada fraksinasi ini karena kit ini digunakan untuk injeksi secara intravena, sehingga pelarut yang digunakan harus steril dan  memiliki  karakteristik  yang  serupa dengan  darah.  Lima  vial  kit  sestamibi  hasil fraksinasi  memiliki  karakteristik  fisik  yang serupa dan memiliki pH yang sama, yaitu 5.
4.4.  Penandaan 99mTc-sestamibi Pada  penelitian  ini,  masing-masing vial  kit  sestamibi  yang  telah  difraksinasi ditandai oleh 99m Tc dengan radioaktivitas 50 mCi.  Radioaktivitas  50  mCi  dipilih  karena dosis 99m Tc yang dibutuhkan 1 pasien untuk SPM  yaitu  10  mCi  pada  kondisi  rest  dan 30  mCi  pada  kondisi  stress.    Dosis 99m Tc yang  digunakan  harus  berlebih  untuk mengantisipasi  peluruhan 99m Tc  agar  dosis yang diberikan pada pasien sesuai. Selain itu, 1 vial kit sestamibi dapat ditandai oleh 99m Tc dengan radioaktivitas maksimal 11 GBq atau sekitar 297 mCi, sehingga kit sestamibi dapat dibagi  menjadi  5  vial  yang  masing-masing ditandai oleh 99m Tc dengan radioaktivitas 50 mCi. Sestamibi merupakan ligan methoxyisobutylisonitrile (MIBI) yang mengandung  gugus  isonitril    dan  akan membentuk  kompleks  dengan 99m Tc.  Kit sestamibi  terdiri  dari  [Tetrakis  ( 2-methoxy- 2-methylpropyl-1-isocyanide ) copper (1+)] tetrafluoroborate,  stannous  chloride dihydrate,  sodium  citrate  dihydrate, L-cysteine  hydrochloride  monohydrate, dan D-mannitol 22 .    Penandaan 99m Tc-sestamibi dilakukan  dengan  metode ligand exchange . 99m Tc  akan  membentuk  kompleks  dengan ligan  yang  lemah,  kemudian  kompleks tersebut  akan  bereaksi  dengan  ligan  kedua yang  lebih  stabil.  Kedua  ligan  tersebut memiliki  stabilitas  yang  berbeda,  sehingga menyebabkan  terjadinya ligand  exchange dan  membentuk  kompleks 99m Tc  yang  lebih stabil dengan ligan kedua 13,22 . Proses  penandaan  diawali  dengan mengubah  tingkat  oksidasi  dari 99m Tc. 99m Tc
yang  terdapat  dalam  larutan  Na 99m TcO4 memiliki  tingkat  oksidasi  +7  dan  bersifat stabil  sehingga  sulit  digunakan  untuk penandaan ligan sestamibi. Stannous chloride dihydrate berperan  sebagai  agen  pereduksi yang akan menurunkan tingkat oksidasi 99m Tc dari +7 menjadi +4 berdasarkan pada reaksi berikut13 : 2 99m TcO4 - + 16H + + 3Sn
2+ ↔ 2 99m Tc4+ + 3Sn 4+ + 8H2O 99m Tc yang telah direduksi akan bereaksi dengan sodium citrate dihydrate yang berperan  sebagai  ligan  lemah  membentuk kompleks 99m Tc-citrate  .  Sestamibi  berperan sebagai  ligan  yang  lebih  kuat  dibandingkan sodium  citrate  dihydrate, sehingga  akan bereaksi  dengan  kompleks 99m Tc- citrate membentuk 99m Tc-sestamibi. Proses  penandaan  ini  membutuhkan pemanasan untuk melepaskan sestamibi dari kompleks [Cu(MIBI)4]BF4, selain itu sestamibi memiliki kelarutan yang rendah pada larutan aqueous sehingga membutuhkan pemanasan untuk  meningkatkan  kelarutannya 13 . 99m Tc- sestamibi  hasil  penandaan  disimpan  pada suhu ruang (25°C) untuk dilihat stabilitasnya hingga 6 jam setelah penandaan.
4.5.  Uji  Kemurnian  Radiokimia 99m Tc- Sestamibi Uji  kemurnian  radiokimia  dilakukan untuk  mengetahui  kemurnian  Na 99m TcO4Tc- sestamibi  di  dalam  sediaan.  Uji  kemurnian radiokimia  dilakukan  dengan  metode kromatografi lapis tipis (KLT). Fase diam yang digunakan  pada  uji  kemurnian  radiokimia 99m Tc-sestamibi  ini  yaitu  pelat  KLT  SGF254
yang bersifat polar. Fase gerak yang digunakan pada uji kemurnian radiokimia ini yaitu etanol absolut.  Etanol  absolut  merupakan  pelarut semipolar  yang  dapat  melarutkan  senyawa polar maupun nonpolar (lipofilik).
Ligan  sestamibi  mengandung  banyak rantai alkil hidrokarbon sehingga radiofarmaka 99m Tc-Sestamibi bersifat nonpolar, sedangkan pengotor 99m TcO4 - bersifat  polar.  Pemisahan senyawa  didasarkan  pada  kompetisi  antara senyawa  dengan  fase  gerak  untuk  berikatan pada fase diam. 99m TcO4 - memiliki Rf sebesar 0,75  dengan  kromatogram  seperti  yang terdapat  pada  Gambar  3.  Pengotor 99m TcO2 memiliki Rf sebesar 0,2 dengan kromatogram seperti yang terdapat pada Gambar 4. 99m Tc- Sestamibi  bersifat  nonpolar  sehingga  akan terelusi  oleh  fase  gerak  etanol  absolut  yang bersifat  semi  polar  dan  menghasilkan  Rf seperti yang terdapat pada Tabel 1. KRK dari 10  vial  hasil  fraksinasi  menunjukkan  angka 100%,  dimana  nilai  KRK  ini  lebih  tinggi dibandingkan  KRK  dari  hasil  fraksinasi yang  dilakukan  oleh  Mansur  (2006)  yang menunjukkan nilai 98 ± 1%.
5.  Kesimpulan Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa  pengujian  kemurnian  radiokimia menggunakan metode kromatografi lapis tipis dengan fase diam pelat KLT SGF254 dan fase gerak etanol absolut menunjukkan bahwa kit sestamibi  difraksinasi  yang  ditandai  dengan 99m Tc  dosis  50  mCi  memiliki  kemurnian radiokimia  sebesar  100%  hingga  6  jam setelah dilakukan penandaan.  Nilai tersebut
Gambar 3. Kromatogram pengotor 99m TcO4 - yang diukur  menggunakan radio-TLC scanner (Raytest)
Gambar 4. Kromatogram pengotor 99m TcO2 yang diukur  menggunakan radio-TLC scanner (Raytest)

## memenuhi persyaratan kemurnian radiokimia
99m Tc-sestamibi  yang  tertera  pada European Pharmacopoeia Edisi  ke-10,  dimana kemurnian  radiokimia 99m Tc-sestamibi  yaitu ≥94%.  Maka  dari  itu,  fraksinasi  ini  dapat dilakukan  oleh  kedokteran  nuklir  dimana hasil fraksinasi dapat disimpan di suhu ruang dan  digunakan  pada  hari  yang  sama,  tetapi perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk melihat  stabilitas  dari  kit  sestamibi  hasil fraksinasi dalam penyimpanan.

## Daftar Pustaka
1.  Kemenkes. Info Datin : Situasi Kesehatan Jantung. Jakarta: Kemenkes RI; 2014.
2.  Vlodaver  Z,  Wilson  RF,  Garry  DJ. Coronary  Heart  Disease :  Clinical, Pathological,  Imaging,  and  Molecular Profiles. New York: Springer; 2012.
3.  Doroudi  A,  Saraji  F,  Erfani  M,  Saadati SM,  Kisast  A,  Ahmadi  F,  et  al.  The stability  of  99mTc-MIBI  (Sestamibi) complex  samples  which  prepared  under ultrasound  irradiation  technique  versus boiling water bath method. J Appl Pharm Sci. 2016;6(11):126–34.
4.  Boschi A, Uccelli L, Martini P. A Picture of Modern  Tc-99m  Radiopharmaceuticals: Production, Chemistry, and Applications in  Molecular  Imaging.  Appl  Sci. 2019;9(2526).
5.  NCBI.  PubChem  Compound  Summary for CID 9543089, Pertechnetate [Internet]. 2020  [cited  2020  May  30].  Available from:  https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ compound /Pertechnetate
6.  Muchtaridi.  Dasar-dasar  Radiofarmasi : Pengembangan  Untuk  Diagnosis  dan Terapi. Yogyakarta: Deepublish; 2014.
7.  Orsini F, Lorenzoni A, Erba PA, Mariani G. Radiopharmaceuticals for Single Photon Emission  Imaging  and  for  Therapy.  In: Nuclear  Oncology:  Pathophysiology and  Clinical  Applications.  New  York: Springer Science+Business Media; 2013. p. 21–34.
8.  Vrachimis  A,  Hermann  S,  Máthé  D, Schober  O,  Schäfers  M.  Systematic evaluation  of  99mTc-tetrofosmin  versus 99mTc-sestamibi  to  study  murine
myocardial  perfusion  in  small  animal SPECT/CT. EJNMMI Res. 2012;2(1):1–
9.
9.  Daruwati  I,  Sriyani  ME,  Oekar  NK, Hanafiah  A,  Zainuddin  N.  Profile  of MIBI  liquid  phase  radiopharmaceutical for  myocardial  imaging. Atom  Indones. 2016;42(1):27–32.
10. Bucerius J, Ahmadzadehfar H, Biersack H. 99mTc-Sestamibi :  Clinical  Application. Berlin: Springer Berlin Heidelberg; 2012.
11. Mansur  MS,  Mushtaq  A,  Jehangir  M. Fractionation  of  lyophilized  MIBI  kit for99mTc  labeling.  J  Radioanal  Nucl Chem. 2006;268(1):141–3.
12. Matsuo  S,  Nakajima  K,  Kinuya  S. Evaluation  of  Cardiac  Mitochondrial Function by a Nuclear Imaging Technique using  Technetium-99m-MIBI  Uptake Kinetics. Asia  Ocean  J  Nucl  Med  Biol. 2013;1(1):39–43.
13. Saha  GB.  Fundamentals  of  Nuclear Pharmacy. 7th ed. Ohio: Springer; 2018.
14. Muchtaridi  M,  Setyawati  LU,  Islamiaty RR, Lie KR, Nurhidayah W. The purity identification  and  radiolabeling  of α-mangostin with technetium-99m. J Adv Pharm Technol Res. 2020;11(1):6–12.
15. Zolle I. Technetium-99m Pharmaceuticals : Preparation and Quality  Control  Nuclear  Medicine. Berlin: Springer; 2007.
16. Jeon SJ, Kim KM, Lim I, Song K, Kim JG.  Pixelated  scintillator-based  compact radio thin layer chromatography scanner for radiopharmaceuticals quality control. J Instrum. 2017;12(11).
17. Wang  J,  Rios  A,  Lisova  K,  Slavik  R, Chatziioannou AF, van Dam RM. High- throughput  radio-TLC  analysis.  Nucl Med  Biol  [Internet].  2020;82–83:41–8.
Available from: https://doi.org/10.1016/j. nucmedbio.2019.12.003 18. Council of Europe. European Pharmacopoeia.  Strasbourg:  Council  of Europe; 2019.
19. Ziessman  HA,  O’Malley  JP,  Thrall JH.  Radiopharmaceuticals.  In:  Nuclear Medicine.  Philadelphia:  Elsevier  Inc.; 2014. 1–15 p.
20. Gilmore  GR.  Practical  Gamma-ray Spectrometry.  2nd  ed.  Warrington:  John Wiley & Sons; 2008.
21. Boria  AJ,  Rucinski  BD,  Abraham  SA, Dawson AS, Jawad AH, Miklos JA, et al. 137Cs  Dosimeter  Irradiation  Facilities: Calibration  Frequency,  Precision,  and Accuracy. Health Phys. 2017;112(4):357–
63.
22. POLATOM.  PoltechMIBI  [Internet]. 2018 [cited 2021 Jan 20]. Available from: https://www.polatom.pl/sites/default/ files/2018.02.09  PoltechMIBI SPCh-A2 zmniejszyc do A3.pdf