## JANHUS Journal of Animal Husbandry Science
Jurnal Ilmu Peternakan Fakultas Pertanian, Universitas Garut P ISSN : 2548-7914, E ISSN : 2775-0469
VIABILITAS POST EKUILIBRASI DAN RECOVERY RATE SPERMATOZOA SAPI SIMMENTAL DENGAN PENAMBAHAN LAKTOSA DAN SUKROSA DALAM PENGENCER ANDROMED
( Post Equilibration Viability and Recovery Rate of Simmental Bull Sperm with Addition of Lactose and Sucrose in Andromed ® Diluent )
1 Farhan Syaifullah, 2 Khaeruddin, 3 Agus, 4 Azmi Mangalisu, 5 Rajmi Faridah, 6 Sitti Farida,
7 Junaedi
1 Program Studi Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Muhammadiyah Sinjai. Jl. Teuku Umar No. 8, Sinjai Utara 92611, Sulawesi Selatan, Indonesia
2 Unit Pelaksana Teknis Pelayanan Inseminasi Buatan dan Produksi Semen, Dinas Peternakan dan Kesehatan Hewan, Sulawesi Selatan, Indonesia
3 Program Studi Peternakan, Fakultas Pertanian Perikanan dan Peternakan, Universitas Sembilanbelas November Kolaka, Jl. Pemuda No. 339, Kolaka 93517, Sulawesi Tenggara, Indonesia
Email: erukhaeruddin@gmail.com

## Abstrak
Tujuan  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui  pengaruh  berbagai  konsentrasi penambahan  laktosa  dan  sukrosa  dalam  pengencer  AndroMed  terhadap  viabilitas spermatozoa  sapi  Simmental  post-ekuilibrasi  dan  recovery  rate.  Rancangan  acak lengkap  (RAL)  digunakan  pada  penelitian  ini dengan  7  taraf  perlakuan  berupa penambahan  sukrosa  0,  0.4,  0.6,  0.8%,  penambahan  laktosa    0.4,  0.6,  0.8%  dalam pengencer  AndroMed,  setiap  perlakuan  diulang  sebanyak  3  kali  ulangan.  Semen  sapi dikoleksi  menggunakan  vagina  buatan,  segera  setelah  koleksi  semen  dilakukan pengenceran  sesuai  perlakuan.  Semen  cair  dikemas  dalam straw dengan  jumlah spermatozoa  minimal  25  juta  setiap  straw.  Ekuilibrasi  semen  dilakukan  selama  2  jam pada  suhu  5 o C,  dilanjutkan  tahap  pre-freezing,  freezing,  dan thawing 30  detik  pada suhu  37 o C.  Parameter  penelitian  ini  adalah  karakteristik  semen  segar,  viabilitas spermatozoa  post  ekuilibrasi  dan recovery  rate. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa penambahan  sukrosa  dan  laktosa  dengan  konsentrasi  berbeda  dalam  pengencer AndroMed ® berpengaruh  nyata  (P<0.05)  terhadap  viabilitas  spermatozoa  setelah ekulibrasi  dan recovery  rate .  Persentase  laktosa  0.4-0.6%  menghasilkan  viabilitas spermatozoa  tertinggi,  sedangkan  Recovery  rate  tidak  berbeda  antara  kontrol  dengan penambahan  sukrosa  dan  laktosa  kecuali  laktosa  0.8%  yang  menghasilkan  nilai terendah.
Kata-kata  kunci:  Viabilitas  spermatozoa, recovery  rate, laktosa,  sukrosa, pengencer,
Vol. 7 No. 1; Desember 2022 Halaman 38-48

## Abstract
The  aim  of this  study  was  to  determine  the  effect of various  concentrations  of lactose  and sucrose  addition  in  AndroMed  diluent on  post-equilibration  Simmental cattle  spermatozoa viability  and  recovery  rate.  Completely  randomized  design  (CRD)  was  used  in  this  study with  7  treatment  levels  in  the  form  of  0,  0.4,  0.6,  0.8%  sucrose  addition,  0.4,  0.6,  0.8% lactose addition in AndroMed diluent, each treatment was repeated 3 times. Cow semen was collected  using  an  artificial  vagina,  immediately  after  collection  the  semen  was  diluted according to the treatment. Liquid semen is packaged in straws with a minimum number of spermatozoa of 25 million per straw. Semen equilibration was carried out for 2 hours at 5 oC,  followed  by  pre-freezing,  freezing,  and  thawing  for  30  seconds  at  37  oC.  The parameters  of  this  study  were  the  characteristics  of  fresh  semen,  post-equilibration spermatozoa viability and recovery rate. The results showed that the addition of sucrose and lactose  with  different  concentrations  in  AndroMed®  diluent  had  a  significant  (P<0.05) effect  on  spermatozoa  viability  after  equilibration  and  recovery  rate.  The  percentage  of lactose  0.4-0.6% resulted  in  the highest  spermatozoa  viability, while  the  recovery  rate  did not  differ  between  the  controls  with  the  addition  of  sucrose  and  lactose  except  for  0.8% lactose which produced the lowest value.
Keywords: Sperm viability, recovery rate, lactose, sucrose, Simmental, diluent

## 1 Pendahuluan
Inseminasi buatan (IB) adalah teknologi reproduksi yang dapat digunakan untuk meningkatkan populasi dan sekaligus mutu genetik sapi lokal Indonesia. Setiawan (2018), keuntungan IB pada sapi  di  Indonesia  antara  lain  peningkatan  mutu  genetik  yang  lebih  cepat  karena  menggunakan semen dari pejantan unggul, dapat menghemat biaya pemeliharaan pejantan lain dan penularan penyakit  kelamin  dari  ternak  yang  diinseminasi  dapat  dibatasi  atau  dicegah.  Sapi  Simmental merupakan  salah  satu  jenis  sapi  yang  dipelihara  sebagai  pejantan  unggul  di  Balai  Inseminasi Buatan.
Spermatozoa sapi Simmental di balai inseminasi buatan diolah dengan teknologi kriopreservasi. Ciptadi  (2012),  kriopreservasi  merupakan  suatu  metode  penyimpanan  sel  gamet  dalam  waktu lama, relatif tidak terbatas, yang dilakukan dalam bentuk beku pada suhu -196 o C yang biasanya dilakukan  dalam  container  nitrogen  cair,  dalam  medium  yang  sesuai  untuk  sel  gamet  dengan penambahan  zat  pelindung  yang  disebut  krioprotektan.  Kualitas  spermatozoa post-thawing dapat  dipengaruhi  oleh  jenis  pengencer  yang  digunakan.  Pengencer  AndroMed  adalah pengencer  komersial  yang  umum  digunakan  di  balai-balai  inseminasi  buatan  di  Indonesia. Pengencer  andromed  diketahui  lebih  baik  dari  pengencer  lain  berbahan  dasar  hewani  seperti kuning telur (Susilawati, 2011).
Krioprotektan  ekstraseluler  biasanya  mempunyai  ukuran  molekul  besar  sehingga  tidak  dapat menembus membran sel seperti karbohidrat, protein, lipoprotein, kuning telur, serum darah dan susu  (Herdis  dan  Darmawan,  2012).    Karbohidrat  dapat  berfungsi  sebagai  senyawa krioprotektan ekstraseluler  sekaligus  berperan  sebagai  substrat  sumber energi,  karbohidrat  dari golongan  disakarida  terdiri  atas  unit  monosakarida  yang  dapat  dimetabolisme  spermatozoa untuk  menghasilkan  adenosine  triphosphate  (ATP)  sebagai  sumber  energi  untuk mempertahankan motilitas dan daya hidup spermatozoa (Labetubun dan Siwa, 2011). Salah satu jenis  karbohidrat  yang  dapat  digunakan  sebagai  krioprotektan  adalah  laktosa  dan  sukrosa. Laktosa  dan  sukrosa  adalah  jenis  disakarida  dengan  dua  monomer  gula  sederhana.  Penelitian sebelumnya    menunjukkan  bahwa  disakarida  lebih  baik  dalam  melindungi  spermatozoa  babi jika dibandingkan monosakarida (Gómez-Fernández et al ., 2012)
Vol. 7 No. 1; Desember 2022 Halaman 38-48
Laktosa  telah  banyak  digunakan  sebagai  tambahan  pengencer  dalam  penelitan-penelitian sebelumnya yaitu pada spermatozoa kambing (Wayan Bebas et al ., 2018; Souhoka et al ., 2009; Tambing et al ., 2003), domba (Karja et al ., 2018; Mukherjee et al ., 2016), dan kerbau (Sianturi et  al .,  2012).  Pengencer  tris  sukrosa  dilaporkan  lebih  baik  dalam  mempertahankan  motilitas spermatozoa  rusa  jika  dibandingkan  tris  glukosa  (Nalley  et  al.,  2011).  Panyaboriban et  al. (2015)  menyatakan  bahwa  motilitas  spermatozoa  domba post-thawing lebih  tinggi  dengan penggunaan sukrosa jika dibandingkan penggunaan glukosa. Ditambahkan oleh  Thananurak et al. (2019) bahwa  sukrosa  lebih  baik  dalam  meningkatkan  kualitas  dan  fertilitas  spermatozoa ayam  yang  dibekukan  jika  dibandingkan  raffinosa.  Hasil  penelitian  Herdis et  al. (2019) menunjukkan  bahwa  penambahan  sukrosa  0,4-0,6%  dalam  pengencer  meningkatkan  motilitas spermatozoa domba Garut post-thawing.
Namun laporan kaji banding penggunaan berbagai level sukrosa dengan laktosa pada pengencer semen  sapi  belum  dilakukan  sehingga  penulis  melakukan  penelitian  ini  dengan  harapan  dapat meningkatkan  kualitas  spermatozoa  sapi  Simmental  pada  proses  kriopreservasi.    Dengan demikian,  tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  pengaruh  penambahan  laktosa  dan sukrosa  dalam  pengencer  AndroMed  terhadap  viabilitas  spermatozoa  sapi  Simmental  post- ekuilibrasi dan recovery rate.

## 2 Metodologi

## Waktu dan Tempat
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Produksi  Semen,  Unit  Pelaksana  Teknis  Pelayanan Inseminasi Buatan dan Produksi Semen, Provinsi Sulawesi Selatan.

## Metode Penelitian

## Rancangan Penelitian
Rancangan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu rancangan acak lengkap (RAL), dengan 7 taraf perlakuan yang diulang sebanyak tiga kali. Taraf perlakuan yang digunakan yaitu kontrol (pengencer AndroMed), p engencer AndroMed + sukrosa 0,4%, pengencer AndroMed + sukrosa 0,6%, pengencer AndroMed + sukrosa 0,8%, p engencer AndroMed + laktosa 0,4%, pengencer AndroMed + laktosa 0,6%, pengencer AndroMed + laktosa 0,8% .

## Prosedur Penelitian
Prosedur penelitian ini adalah sebagai berikut:

## Penyiapan pengencer, koleksi semen dan pengemasan semen
Pengencer yang digunakan adalah larutan AndroMed ® (Minitube, Jerman) dengan perbandingan 1  bagian  AndroMed ® dan  4  bagian  akuades.  Metode  koleksi  semen  yang  digunakan  adalah vagina  buatan  pada  saat  pejantan  melakukan  mounting.  Semen  yang  diperoleh  selanjutnya diencerkan  dan  ditambahkan  sukrosa  serta  laktosa  sesuai  perlakuan.  Pengemasan  semen  cair menggunakan automatic  filling & sealing  machine dengan    konsentrasi  spermatozoa  pada masing-masing straw minimal 25 juta.
Vol. 7 No. 1; Desember 2022 Halaman 38-48

## Tahap ekuilibrasi dan Pre-freezing
Ekuilibrasi dilakukan dengan menempatkan straw di atas rak dan didinginkan pada refrigerator suhu 5 o C selama 2 jam. Kemudian dilakukan pre-freezing dengan menempatkan straw di atas permukaan nitrogen cair sejauh ± 6 cm selama 15 menit.

## Tahap freezing dan thawing
Freezing (pembekuan) dilakukan dengan merendam straw dalam nitrogen cair (suhu -196 o C). Selanjutnya, thawing dilakukan dengan merendam straw dalam air bersuhu suhu 37 o C selama 30 detik.

## Analisis Data
Uji Normalitas Shapiro wilk dilakukan untuk menguji normalitas data. Data yang berdistribusi normal  dilanjutkan  dengan  analisis  of  covarian  (ANOVA).  Apabila  terdapat  pengaruh  yang signifikan  antar  perlakuan  maka  dilakukan  uji  Jarak  Berganda  Duncan.  Data  ini  dianalisis menggunakan aplikasi SPSS 16.

## Peubah yang diamati

## Evaluasi semen segar
Pengamatan semen segar secara makroskopis berupa volume, konsistensi, warna dan pH semen. Dilanjutkan  dengan  pengamatan  mikroskopis  yaitu  motilitas  dan    konsentrasi  spermatozoa menggunakan  photometer  SDM ( Minitube ).  Abnormalitas  spermatozoa  diamati  dengan menggunaka  preparat  apus  spermatozoa  yang  telah  dibuat  menggunakan  pewarnaan  eosin- nigrosin  kemudian  diamati  pada  mikroskop  perbesaran  40  x  (Boeco,  Jerman),  kemudian dihitung dengan rumus :

## Viabilitas spermatozoa
Pengamatan  viabilitas  spermatozoa  dilakukan  setelah  ekuilibrasi  menggunakan  metode pewarnaan  eosin-nigrosin  (Arifiantini,  2012).  Pewaraan  dilakukan  dengan  mencampur  semen dengan pewarna, kemudian dihomogenkan dan diapus tipis pada kaca preparat dan dikeringkan. Pengamatan spermatozoa hidup/mati dilakukan pada mikroskop (Boeco, Jerman) perbesaran 40 x. Rumus yang digunakan yaitu:

## Recovery rate spermatozoa
Pengamatan  motilitas  spermatozoa  dilakukan  setelah  pengenceran  dan  setelah thawing. Penilaian  dilakukan  pada  mikroskop  cahaya  pembesaran  40x  secara  subjektif  dengan  melihat keaktifan pergerakan spermatozoa. Rumus Recovery rate spermatozoa yang digunakan yaitu:
Vol. 7 No. 1; Desember 2022 Halaman 38-48

## 3 Hasil dan Pembahasan

## Karakteristik Semen Sapi Simmental
Volume  semen  sapi  Simmental  pada  penelitian  ini  5.9  ml  lebih  rendah  dari  penelitian sebelumnya yaitu 6.19 ml (Sukirman et al., 2019), 6.9-9.2 ml (Nyuwita et al ., 2015) dan 7 ml (Pratiwi et al ., 2015), namun mendekati beberapa penelitian lainnya yaitu 5.2-7.1 ml (Sholikhah et al. , 2021) dan 5.8-7.4 ml (Yanuarista et al ., 2022). pH semen yang diperoleh pada penelitian ini  6.4  sesuai  dengan  laporan  sebelumnya  oleh  Nyuwita et  al. (2015)  dan  Yanuarista et  al. (2022).  Konsentrasi  spermatozoa  1.18  milyar/ml  cukup  konsisten  dengan  laporan  sebelumnya yaitu 1.18-1.36 milyar (Sholikhah et al ., 2021) bahkan lebih tinggi dari laporan Susilowati et al. (2021)  yaitu  1.03  milyar/ml,  namun  beberapa  laporan  menyatakan  konsentrasi  spermatozoa yang  lebih  tinggi  yaitu  1.25-1.7  milyar/ml  (Nyuwita et  al .,  2015),  1.49-1.7  milyar/ml (Yanuarista et al., 2022), dan 1.85 milyar/ml (Pratiwi et al ., 2015). Motilitas spermatozoa dalam penelitian ini 70% konsisten dengan laporan sebelumnya yaitu 69-71% (Yanuarista et al ., 2022) dan  66.3-72.1%  (Nyuwita et  al .,  2015),  namun  lebih  rendah  dari  laporan  Haris et  al .  (2020) yaitu  73.01%,  Pratiwi et  al. (2015)  yaitu  75%  dan  laporan  Sholikhah et  al. (2021)  yaitu  76.3- 80.7%
Tabel 1. Karakteristik makroskopis dan mikroskopis semen sapi Simmental
Parameter Rata-rata (SEM) Volume semen (ml) Konsistensi Warna Bau pH Konsentrasi spermatozoa (10 9 /ml) Motilitas spermatozoa (%) Abnormalitas spermatozoa (%) 5.90±0.97 kental krem khas 6.4±0.00 1.18±0.20 70±0.00 5.66±0.16
Abnormalitas  spermatozoa  pada  penelitian  ini  5.66%  hampir  sama  dengan  penelitian sebelumnya yaitu 5.25% (Susilowati et al ., 2021), hasil ini lebih baik dari laporan Menon et al. (2011)  yaitu  20.64%,  sedangkan  Mentari et  al. (2014)  melaporkan  abnormalitas  spermatozoa yang  lebih  rendah  yaitu  1.71-2.21%  (Mentari  et  al.,  2014).  Pada  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  spermatozoa  yang  tidak  normal  pada  umumnya  adalah  pembengkokan  pada  bagian tengah  ( mid  piece )  yang  menyebabkan  ekor  menyimpul  (Gambar  1).    Kelainan  pada  bagian tengah  dalam  penelitian  ini  umumnya  tergolong  distal mid-piece  reflex .  Hasil  ini  mendukung pernyataan  sebelumnya  bahwa  abnormalitas  yang  umum  ditemukan  pada  spermatozoa  sapi setelah  ejakulasi  adalah distal  mid-piece  reflex (Menon et  al .,  2011;  Perry et  al .,  2002). Gangguan  pada  proses  termoregulasi  testis,  rendahnya  kadar  testosteron,  paparan  larutan hipotonik, cold  shock atau  faktor  genetik  dapat  menyebabkan  abnormalitas distal  mid-piece reflex ini  (McGowan et  al .,  1995).  Serupa  dengan  pernyataan  Perry et  al. (2021) bahwa abnormalitas ini dapat disebabkan spermatozoa berada dalam larutan hipotonik, cold shock, atau dalam  larutan  dengan  pH  di  atas  7.  Abnormalitas  kategori distal  midpiece  reflex ini  juga terbentuk  ketika  spermatozoa  berada  di  dalam cauda  epididymis selama  16  hari  setelah  sapi mengalami asidosis (Callaghan et al ., 2016).
Vol. 7 No. 1; Desember 2022 Halaman 38-48
Gambar 1. Abnormalitas spermatozoa yang diamati menggunakan mikroskop perbesaran 40x. Tanda  panah  menunjukkan  abnormalitas  pada  bagian  tengah  ( distal  mid-piece reflex ).

## Viabilitas Spermatozoa Post Ekuilibrasi
Hasil  penelitian  menujukkan  bahwa  perlakuan  penambahan  karbohidrat  dengan  konsentrasi berbeda  pada  pengencer  AndroMed ® berpengaruh  nyata  (P<0.05)  terhadap  viabilitas spermatozoa (Tabel 2). Perlakuan dengan penambahan laktosa 0.4-0.6% menghasilkan viabilitas lebih  tinggi  dari  perlakuan  lainnya.  Hal  ini  disebabkan  laktosa  sebagai  disakarida  mampu mempertahankan  tekanan  osmotik  pengencer  dan  menjaga  integritas  membran  plasma,  serta memasok  substrat  energi  untuk  spermatozoa  selama  proses  penyimpanan  (Eriani et al .,  2017). Laktosa  adalah  salah  satu  komponen  yang  dapat  bertindak  sebagai  anti cold  shock dan  juga berperan sebagai sumber energi (Bebas et al ., 2016).  Laktosa merupakan karbohidrat golongan disakarida  yang  terdiri  atas  dua  unit  monosakarida,  yakni  satu  unit  glukosa  dan  satu  unit galaktosa    yang  semuanya  dapat  dimetabolisme  oleh  spermatozoa  untuk  menghasilkan  energi berupa ATP untuk mempertahankan daya hidup spermatozoa (Labetubun & Siwa, 2011).
Tabel  2  Viabilitas  spermatozoa  sapi  Simmental  post  ekuilibrasi  dengan  penambahan  sukrosa dan laktosa dalam pengencer AndroMed ®
Perlakuan Viabilitas (%) Kontrol Sukrosa 0.4% Sukrosa 0.6% Sukrosa 0.8% Laktosa 0.4% Laktosa 0.6% Laktosa 0.8% 76.16±0.71 b
79.68±1.29 c 78.37±2.05 bc 65.38±0.21 a 80.32±1.56 cd
82.71±2.57 d
65.56±0.15 a
Hasil  penelitian  ini  sejalan  dengan  penelitian  Eriani et  al .  (2017)  bahwa  penambahan  laktosa dalam  pengencer  mampu  meningkatkan  viabilitas  spermatozoa  kerbau.  Demikian  juga  dengan laporan  Labetubun  dan  Siwa  (2011)  bahwa  penambahan  laktosa  0.6  g  dalam  pengencer  tris- kuning  telur  meningkatkan  viabilitas  spermatozoa  sapi  Bali  yang  disimpan  selama  3  hari. Viabilitas  spermatozoa  dalam  penelitian  ini  menggunakan  laktosa  0.4-0.6%  hampir  sama dengan  penelitian  Kowalczyk  dan  Piątkowska  (2021)  yaitu  79.09-80.11%  pada  spermatozoa sapi  Simmental  menggunakan  pengencer  BIOXcell.  Namun  lebih  rendah  dari  laporan  lainnya yaitu 87.11% dengan pengencer menggunakan Andromed (Pratiwi et a l., 2015)
Vol. 7 No. 1; Desember 2022 Halaman 38-48
Gambar  2.  Hasil  pengamatan  viabilitas  spermatozoa  menggunakan  mikroskop  perbesaran  40x. Tanda panah menunjukkan spermatozoa menyerap warna.
Peningkatan  konsentrasi  laktosa  hingga  0.8%  menurunkan  viabilitas  spermatozoa  sapi peranakan  Simmental  setelah  ekuilibrasi.  Konsentrasi  laktosa  yang  terlalu  tinggi  cenderung merugikan  spermatozoa  selama  penyimpanan.  Hal  ini  juga  terlihat  pada  laporan  sebelumnya bahwa  peningkatan  level  laktosa  dalam  pengencer  meningkatkan  osmolaritas  dan  menurunkan motilitas  dan  integritas  membran  spermatozoa  unta  Baktrian (Niasari-Naslaji et  al .,  2006)  dan peningkatan  konsentrasi  laktosa  30  mM-90  mM  menurunkan  viabilitas  spermatozoa  kambing Saanen (Tambing et al ., 2003).
Penggunaan sukrosa 0.4-0.6% mampu meningkatkan viabilitas spermatozoa pada penelitian ini. Sejalan dengan penelitian sebelumnya bahwa  Konsentrasi sukrosa 0.2-0.6 g/100 ml pengencer mampu  meningkatkan  viabilitas  spermatozoa  domba  Garut  post-thawing  (Herdis et  al .,  2019). Penggunaan  pengencer  Andromed  yang  ditambahkan  sukrosa  0.4%  mampu  meningkatkan viabilitas spermatozoa kerbau belang setelah penyimpanan 12 jam pada suhu 4 o C (Surachman et al ., 2009). Penggunaan sukrosa 4% dan laktosa 4% tidak menghasilkan perbedaan viabilitas spermatozoa.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  sebelumnya  bahwa  viabilitas  spermatozoa domba  post-ekuilibrasi  tidak  berbeda  antara  penambahan  sukrosa  dengan  laktosa  pada konsentrasi  0.4  g/100  ml  pengencer    (Herdis et  al .,  2016).  Sukrosa  dan  laktosa  adalah karbohidrat  dari  golongan  disakarida  yang  efektif  meningkatkan  viabilitas  spermatozoa  pada sapi  Simmental.  Karbohidrat  akan  membantu  menstabilkan  membran  plasma  sel  spermatozoa selama masa transisi melewati zona suhu yang kritis, serta mengubah sifat mekanik pengencer (Labetubun & Siwa, 2011)

## Recovery Rate Spermatozoa
Recovery  rate  adalah  kemampuan  spermatozoa  pulih  setelah  proses freezing .  Daya  motilitas spermatozoa  yang  hilang  selama  proses freezing berpengaruh  terhadap recovery  rate spermatozoa  setelah thawing (Garner  &  Hafez,  2000).  Hasil  penelitian  menujukkan  bahwa perlakuan  penambahan  karbohidrat  dengan  konsentrasi  berbeda  pada  pengencer  AndroMed ® berpengaruh  nyata  (P<0.05)  terhadap  recovery  rate  spermatozoa  (Gambar  3). Recovery  rate dalam  penelitian  ini  dengan  penambahan  laktosa  dan  sukrosa  menujukkan  nilai  paling  tinggi yaitu  69,8%-84,24%.  Hasil  penelitian  ini  lebih  tinggi  dibanding  dengan  penelitian  Witayanto (2018)  yaitu  59,70-62,25%  dan  penelitian  Komariah et  al (2014)  yaitu  56,27%  .  Berdasarkan data  ini,  Recovery  rate  pada  hasil  penelitian  ini  layak  untuk  diinseminasikan  karena  sesuai standar nasional Indonesia (SNI). Menurut SNI Recovery rate minimal 50% untuk semen beku sapi (Badan Standardisasi Nasional, 2017).
Vol. 7 No. 1; Desember 2022 Halaman 38-48
Gambar 3 Recovery rate spermatozoa sapi Simmental dengan penambahan sukrosa dan laktosa dalam pengencer AndroMed ®
Penambahan sukrosa 0.4-0.8% tidak menyebabkan perbedaan recovery rate dengan laktosa 0.4- 0.6%  dan  kontrol.  Hasil  ini  sejalan  dengan  penelitian  sebelumnya  bahwa  tidak  terdapat perbedaan  motilitas  total,  progresif  dan  parameter  gerak  spermatozoa  babi post-thawing yang ditambahkan  sukrosa  dan  laktosa  (Gómez-Fernández et  al .,  2012). Recovery  rate yang  tinggi pada penelitian ini dibandingkan penelitian terdahulu diduga karena pengencer yang digunakan berbeda.  Pengencer  AndroMed ® digunakan  dalam  penelitian  ini.  Menurut  Susilawati    (2011), AndroMed ® merupakan  bahan  pengencer  instan  yang  mengandung  fruktosa,  gliserol,  asam sitrat, buffer , phosfolipid , spectynomycine , lincomycine , tylocin , dan gentamycine . Pengencer ini juga  diakui  lebih  baik  dibandingkan  dengan  pengencer  tris  kuning  telur  dan  pengencer Triladyl TM .

## 4 Kesimpulan
Penambahan  sukrosa  dan  laktosa  dalam  pengencer  AndroMed ® mampu  mempengaruhi viabilitas  spermatozoa  post  ekuilibrasi  dan recovery  rate spermatozoa  sapi  Simmental. Persentase  laktosa  0.4-0.6%  adalah  perlakuan  terbaik  untuk  digunakan  dalam  pengencer AndroMed.

## 5 Ucapan Terimakasih
Ucapan  terima  kasih  penulis  sampaikan  kepada  Unit  Pelaksana  Teknis  Pelayanan  Inseminasi Buatan  dan  Produksi  Semen,  Dinas  Peternakan  dan  Kesehatan  Hewan  Provinsi  Sulawesi Selatan .

## 6 Daftar Pustaka
Arifiantini, R. I. 2012. Teknik Koleksi dan Evaluasi Semen pada Hewan . IPB Press, Bogor.
Badan Standardisasi Nasional. 2017. SNI 4869-1:2017 Semen beku – Bagian 1: Sapi . BSN, Jakarta.
Bebas,  W.,  T.  Pemayun,  I.  Damriyasa,  dan  I.  Astawa.  2016.  Lactose-astaxanthin  Increases  Green Jungle Fowl’s Sperm Motility and Reduces Sperm DNA Fragmentation During 5 O C Storage. Bali Medical Journal 4(3) : 152–156.
Bebas,  W.,  W.  Gorda,  I.  G.  N.  B.  Trilaksana,  D.  N.  D.  I.  Laksmi,  dan  T.  G.  O.  Pemayun.  2018. Lactose-Astaxanthin Increased the Frozen Semen Quality of Gembrong Goat in Conservation
Vol. 7 No. 1; Desember 2022 Halaman 38-48
Efforts. Jurnal Veteriner 19(3) : 390–396.
Callaghan,  M.  J.,  P.  McAuliffe,  R.J.  Rodgers,  J.  Hernandez-Medrano,  dan  V.E.A.  Perry.  2016. Subacute ruminal acidosis reduces sperm quality in beef bulls. J Anim Sci 94 : 3215–3228.
Ciptadi, G. 2012. Bioteknologi Sel Gamet dan Kloning Hewan . UB Press, Malang.
Eriani, K., N. Sari, R. Rosnizar, D. Dasrul, S. Suhartono, dan M. Rizal. 2017. Cryopreservation of Aceh  Swamp  Buffalo  (Bubalus  bubalis)  Semen  with  Combination  of  Glycerol  and  Lactose. Biosaintifika: Journal of Biology & Biology Education 9(3) : 409–416.
Garner, D.  L., dan  E.  S.  E.  Hafez. 2000..  Spermatozoa and  seminal plasma. Dalam  E.  S. E.  Hafez dan  B.  Hafez  (Eds.), Reproduction  in  Farm  Animals (7th  ed.).  Lipincott  Williams  and Walkings, Philadelphia.
Gómez-Fernández, J., E. Gómez-Izquierdo, C. Tomás, E. Mocé, dan E. De Mercado. 2012. Effect of Different Monosaccharides and Disaccharides on Boar Sperm Quality after Cryopreservation.
Animal Reproduction Science 133(1–2) : 109–116.
Haris,  F.  Z.,  Y.  S.  Ondho,  dan  D.  Samsudewa.  2020.  Effect  of  Vitamin  E  Addition  to  Frozen Simmental Bull Semen Extender on Post-thawing Quality. E3S Web of Conferences 142: 1–6.
Herdis,  H.,  dan  I.  W.  A.  Darmawan.  2012.  Pengaruh  Maltosa  sebagai  Krioprotektan  Ekstraseluler dalam  Meningkatkan  Kualitas  Semen  Beku  Guna  Mendukung  Keberhasilan  Teknologi Inseminasi Buatan. Jurnal Sains Dan Teknologi Indonesia 14(3): 197–202.
Herdis,  H.,  I.  W.  A.  Darmawan,  dan  M.  Rizal.  2016.  Penambahan  Beberapa  Jenis  Gula  dapat Meningkatkan Kualitas Spermatozoa Beku asal Epididimis Ternak Domba. Jurnal Kedokteran Hewan 10(2) : 200–204.
Herdis,  H.,  M.  Surachman,  dan  I.  W.  A.  Darmawan.  2019.  The  Role  of  Sucrose  as  Extracellular Cryoprotectant  in  Maintaining  the  Garut  Rams  ’  Frozen  Semen  Quality. International Conference on Biology and Applied Science (ICOBAS). AIP Conference Proceedings 2120(1): 080019.
Karja, N. W. K., A. N., Prista, dan I. K. M. Andnyane. 2018. Effect of Different Type of Sugars on Post-Thawed Quality of Ram Spermatozoa. Proceedings of International Seminar on Livestock Production and Veterinary Technology 179–183.
Komariah, K., R. I. Arifiantini, dan F. W. Nugraha. 2014. Kaji Banding Kualitas Spermatozoa Sapi Simmental, Limousin, dan Friesian Holstein terhadap  Proses Pembekuan. Buletin Peternakan 37(3) : 143–147.
Kowalczyk,  A.,  dan  E.  C.  Piątkowska.  2021. Antioxidant  Effect  of  Elamipretide  on  Bull’s  Sperm Cells During Freezing/Thawing Process. Andrology 9(4) : 1275–1281.
Labetubun,  J.,  dan  I.  P.  Siwa.  2011.  Kualitas  Spermatozoa  Kauda  Epididimis  Sapi  Bali  dengan Penambahan  Laktosa  atau  Maltosa  yang  Dipreservasi  pada  Suhu  3–5 o C. Jurnal  Veteriner , 12(3) : 200–207.
McGowan, M. R.,  D.  Galloway, E.G.  Taylor,  K.  Entwistle, dan  P. Johnston. 1995. The  Veterinary Examination of Bulls . Australian Association of Cattle Veterinarians, Brisbane.
Menon,  A.  G.,  H.  W.  Barkema,  H.  W.,  R.  Wilde,  J.  P.  Kastelic,  dan  J.  C.  Thundathil.  2011. Associations  Between  Sperm  Abnormalities,  Breed,  Age,  and  Scrotal  Circumference  in  Beef
Vol. 7 No. 1; Desember 2022 Halaman 38-48
Bulls. Canadian Journal of Veterinary Research 75(4) : 241–247.
Mentari, F. K., Y.  S. Ondho, dan S. Sutiyono. 2014. Pengaruh Umur terhadap Ukuran Epididimis, Abnormalitas  Spermatozoa  dan  Volume  Semen  pada  Sapi  Simmental  di  Balai  Inseminasi Buatan Ungaran. Animal Agriculture Journal 3(4) : 523–528.
Mukherjee, K.  P.,  S. Basu,  A.  K.  Sahoo,  U.  Datta,  K.  Ray, dan  S. Chattaraj.  2016. Cryoprotective Effect  of  EDTA,  Lactose,  Ascorbic  Acid  and  L-cysteine  as  Additives  on  Garole  Ram  (Ovis aries ) Semen. International Journal of Advanced Reserch in Biological Sciences 3(7) : 92–98.
Nalley, W. M. M., R. Handarini, R. I. Arifiantini, T. L. Yusuf, B. Purwantara, dan G. Semiadi. 2011. Deer Frozen Semen Quality in Tris Sucrose and Tris Glucose Extender with Different Glycerol Concentrations. Media Peternakan 34(3) : 196–200.
Niasari-Naslaji, A., S. Mosaferi, N. Bahmani, A. Abarghani, A. A. Gharahdaghi, A. Ghanbari, dan A.  Gerami.  2006.  Comparing  Different  Levels  of  Osmolality  of  Sucrose  Extender  on  the Viability of Spermatozoa in Bactrian Camel (Camelus bactrianus). Reproduction, Fertility and Development 18(2) : 160.
Nyuwita, A., T. Susilawati, dan N. Isnaini. 2015. Kualitas Semen Segar dan Produksi Semen Beku Sapi Simmental pada Umur yang Berbeda. Ternak Tropika 16(1) : 1–8.
Panyaboriban, S., J. Suwimonteerabutr, dan N. Phutikanit. 2015. Effect of Various Combinations of Sugar Supplementation in The Extender on Frozen-Thawed Ram Semen Quality and Fertility. The Thai Journal of Veterinary Medicine 45(2) : 229–237.
Perry, V.  E.  A.  2021. The  Role  of  Sperm  Morphology  Standards  in  the  Laboratory  Assessment of Bull Fertility in Australia. Frontiers in Veterinary Science 8(672058).
Perry, V. E., N. Phillips, G. Fordyce, B. Gardiner, K. Entwistle, P. Chenoweth, dan V. J. Doogan. 2002.  Semen  Collection  and  Evaluation.  In  G.  Fordyce  (Ed.), Bull  Fertility:  Selection &Management in Australia . Australian Association of Cattle Veterinarians, Brisbane.
Pratiwi, R. I.,  S.  Suharyati, dan  M. Hartono. 2015. Analisis  Kualitas Semen  Beku  Sapi  Simmental Menggunakan  Pengencer  Andromed ® dengan  Variasi  Waktu  Pre  Freezing. Jurnal  Ilmiah Peternakan Terpadu 2(3) : 8–15.
Setiawan,  D.  2018.  Artificial  Insemination  of  Beef  Cattle  UPSUS  SIWAB  Program  Based  on  the Calculation  of  Non-Return  Rate,  Service  Per  Conception  and  Calving  Rate  In  The  North Kayong Regency. The International Journal of Tropical Veterinary and Biomedical Research 3(1) : 7–11.
Sholikhah,  E.  V.,  S.  Sumartono,  dan  I.  Dinasari.  2021.  Analisis  Kualitas  Semen  Segar  Sapi Simmental pada Umur yang Berbeda. Jurnal Dinamika Rekasatwa 4(2) : 200–206.
Sianturi,  R.  G.,  B.  Purwantara,  I.  Supriatna,  A.  Amrozi,  dan  P.  Situmorang.  2012.  Pengaruh Glutation  dan  Penggantian  Plasma  Semen  Kerbau  dengan  Plasma  Semen  Sapi  terhadap Kualitas  Semen  Beku  Kerbau  Rawa  (Bubalus  bubalis). Jurnal  Ilmu  Ternal  dan  Veteriner , 17(3) : 169–178.
Souhoka,  D.  F.,  M.  J.  Matatula,  W.  M.  Mesang-Nalley,  dan  M.  Rizal.  2009.  Laktosa Mempertahankan  Daya  Hidup  Spermatozoa  Kambing  Peranakan  Etawah  yang  Dipreservasi dengan Plasma Semen Domba Priangan. Jurnal Veteriner 10(3) : 135–142.
Sukirman, I., E. Sukmawati, S. D. Rasad, dan N. Solihati. 2019. The Influence of Breed and Type of
Vol. 7 No. 1; Desember 2022 Halaman 38-48
Extender on the Quality of Bull Semen. Animal Production 21(2) : 64–70.
Surachman, M., H. Herdis, Y. Yulnawati, M. Rizal, dan H. Maheshwari. 2009. Kualitas Semen Cair Asal  Epididimis  Kerbau  Belang  dalam  Bahan  Pengencer  Andromed  yang  Mendapat Penambahan Sukrosa. Media Peternakan 32(2) : 88–94.
Susilawati, T. 2011. Spermatology . UB Press, Malang.
Susilowati, S., T. Sardjito, I. Mustofa, O. S. Widodo, dan R. Kurnijasanti. 2021. Effect of Green Tea Extract  in  Extender  of  Simmental  Bull  Semen  on  Pregnancy  Rate  of  Recipients. Animal Bioscience 34(2) : 198–204.
Tambing,  S.  N.,  I.  Sutama,  dan  R.  I.  Arifiantini.  2003.  Efektivitas  Berbagai  Konsentrasi  Laktosa dalam  Pengencer  Tris  terhadap  Viabilitas  Semen  Cair  Kambing  Saanen. Jurnal  Ilmu  Ternak dan Veteriner 8(2) : 84–90.
Thananurak,  P.,  N.  Chuaychu-Noo,  A.  Thélie,  Y.  Phasuk,  T.  Vongpralub,  dan  E.  Blesbois.  2019. Sucrose  Increases  the  Quality  and  Fertilizing  Ability  of  Cryopreserved  Chicken  Sperms  in Contrast to Raffinose. Poultry Science 98(9) : 4161–4171.
Witayanto, D. A. 2018. Perbandingan Kuantitas, Kualitas, dan Recovery Rate Semen Sapi Bali dan Sapi Simmental pada Umur yang Sama. Skripsi . Universitas Brawijaya, Malang.
Yanuarista, W., E. T. Setiatin, dan D. Samsudewa. 2022. Pengaruh Umur Pejantan Sapi Simmental terhadap Tingkah Laku Reproduksi, Kualitas Semen Segar dan Jumlah Produksi Semen Beku. Livestock and Animal Research 20(1) : 38–47.