## PENGARUH WAKTU MILLING DENGAN UKURAN NANO  SERBUK DAUN KELOR (Moringa oleifera) DAN HUBUNGANYA DENGAN BIOAVAILABILITAS SECARA IN-VITRO DAN IN-VIVO
(Effect of Milling time with Nano size particles of Kelor powder (Moringa oleifera) and the correlations with In-vitro and In-vivo bioavailability)
Syahrial 1 * , Marni Handayani 2
1 Program Studi Kesehatan Masyarakat, Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Andalas, Padang, Indonesia. E-mail: abilwawa@gmail.com
2 Politeknik Kesehatan Kemenkes Padang, Sumatera Barat, Indonesia. E-mail: marni2000@gmail.com
Received:  10/01/2020                      Accepted:  12/7/2020                      Published online: 3/11/2020

## ABSTRAK
Kekurangan kalsium dalam tubuh disebabkan oleh kalsium yang  belum  optimal  terabsorpsi  oleh  tubuh  sehingga berakibat pada terjadinya defesiensi kalsium. Kalsium tidak dapat  diserap  maksimal  oleh  tubuh  apabila  dalam  bentuk molekul  yang  besar,  sehingga  kalsium  akhirnya  terbuang. Untuk itu diperlukan bentuk ukuran nano sehingga kalsium tersebut  dapat  terserap  oleh  tulang  dengan  baik.  Tujuan penelitian ini untuk melihat pengaruh waktu milling dengan ukuran nano partikel serbuk daun kelor (Moringa oleifera) dan  hubungan  dengan  bioavailabilitas  secara  invitro  dan invivo.  Metode  penelitian  menggunakan  rancangan eksperimen  laboratorik,  dengan  sampel  daun  kelor  dalam bentuk  serbuk,  dan  nano  partikel  akan  dilakukan  analisis proximat,  analisis  zat  gizi,  uji  kelarutan  dan  uji bioavailabilitas.  Hasil  penelitian  menunjukkan  terdapat pengaruh lama waktu milling dengan ukuran partikel nano. Ada perbedaan kadar air, abu, energi, serat dan gula total antara  daun  kelor  serbuk  dan  nano  (p<0,05).  Selain  itu kandungan vitamin A, vitamin C dan vitamin K antara bentuk serbuk  dan  nano  partikel  daun  kelor  juga  menunjukan perbedaan  bermakna  (p<0,05).  Terdapat  perbedaan signifikan  kadar  kalsium,  magnesium,  fosfor,  kalium  dan natrium antara ukuran serbuk dengan ukuran nano partikel daun  kelor  (p<0,05).  Direkomendasi  mengkonsumsi  nano partikel tepung daun kelor dapat dijadikan sebagai sumber bahan  makanan  untuk  meningkatkan  pertumbuhan  tulang dan kepadatan tulang.
Kata kunci:  Daun kelor, kalsium, nanopartikel

## ABSTRACT
Calcium deficiency in the body is caused by calcium that has not  optimal  absorption  by  the  body,  resulting  in  the occurrence  of  calcium  defesiensi.  Calcium  can  not  be absorbed  maximally  by  the  body  when  in  large  molecular
* Penulis untuk korespondensi: abilwawa@gmail.com
form,  so  the  calcium  is  finally  wasted.  Therefore,  it  is necessary  to  form  nano  size  so  that  the  calcium  can  be absorbed by the bones well. The purpose of this research is to see the effect of Milling time with Nano size particles of Kelor powder (Moringa oleifera) and the correlations with Invitro and Invivo bioavailability.The research method is to use the research draft of laboratory experiments, with the sample of the Kelor leaves in powder form, and nano particles will be carried  out  proximate  analysis,  nutrient  analysis,  solubility test and bioavailability test. The results showed there was a long influence of milling time with nano particle size. There is a difference in moisture content, ash, energy, fiber and total sugar  between  the  leaves  of  the  powder  and  nano  Kelor (p<0,05). There are significant differences in the content of vitamin  A,  vitamin  C  and  vitamin  K  between  the  form  of powder  and  nano  leaf  particles  (p<0,05).  There  are significant  differences  in  the  levels  of  calcium,  magnesium, phosphorus,  potassium  and  sodium  between  the  size  of  the powder  to  the  nano  leaf-size  particles  (p<0,05).  The recommendation of consuming nano particles kelor flour can be  used  as  a  source  of  food  ingredients  to  increase  bone growth and bone density.

## Keywords:  Calcium, kelor leaves, nanoparticles

## PENDAHULUAN
Daun kelor ( Moringa oleifera ) merupakan  salah  satu  tanaman  yang  dikenal sebagai  tanaman  serbaguna  yang  merupakan spesies dari famili monogenerik Moringaceae . Walaupun M.  oleifera berasal  dari  Himalaya, beberapa  negara  seperti  Afrika,  Amerika Tengah  dan  Selatan,  Sri  Lanka,  India, Meksiko,  Malaysia,  Indonesia  dan  Filipina juga    banyak  membudidayakannya.  Beberapa
negara,  M.  oleifera  disebut  sebagai  “pohon paha” atau “kuda pohon lobak”. Hampir semua bagian  tanaman Moringa  oleifera dapat digunakan sebagai bahan pengobatan beberapa penyakit  seperti  asites,  rematik,  gigitan binatang  berbisa,  penyakit    jantung    dan stimulan sirkulasi darah. Beberapa bagian  dari Moringa oleifera telah diketahui menunjukkan efek  antitumor,  antiinflamasi,  antibakteri, antihelmintik, antioksidan, hipotensif, cardioprotective ,  efek  okular,  antiurolitiatik, antipasmodik, hepatoprotective , dan antipiretik. 1,2,3
Mineral adalah zat gizi yang dibutuhkan tubuh  untuk  menjaga  kesehatan  (seperti tembaga,  besi,  kalsium,  dan  kalium)  yang diperlukan tubuh dalam jumlah  kecil.  Mineral merupakan    zat    anorganik  yang  merupakan unsur  atau  senyawa  kimia  yang  ditemukan  di alam. 4
Beberapa  mineral  yang  terdapat  di  alam yaitu berasal dari Moringa oleifera terdiri dari kalsium,  kromium,  tembaga,  fluorin,  besi, mangan,  magnesium,  molybdenum,  fosfor, kalium,  yodium,  selenium,  sulfur,  zink, potassium. 5 Nanoteknologi    didasarkan    pada kata  awal  “nano”  dari  bahasa  Yunani  yang berarti “kerdil”. Kata “nano” berarti 10-9 atau sepermiliar. Nanoteknologi tidak selalu teknologi  baru  untuk  desain,  proses,  dan penggunaan  material  pada  skala  nanometer (nm).  Nano  kalsium  salah  satunya  dapat langsung diserap oleh tubuh dengan sempurna dibandingkan  makro  kalsium  dan  sangat bermanfaat  dalam  pemenuhan  kalsium  tubuh yang  optimal  dan  dapat  dikonsusmsi  oleh segala usia. 6
Analisis  bioavailabilitas  terhadap  nano kalsium  menunjukkan  bahwa  kalsium  yang terserap oleh tubuh pada menit ke-3, ke-5, dan ke-7  sebesar  8,5%,  9,6%,  dan    63,3%. Tingginya  bioavailabilitas  nano  kalsium memberikan banyak keuntungan bagi manusia. Nanokalsium  dapat  difortifikasikan  pada bahan  pangan  sehingga  dapat  memenuhi kebutuhan  kalsium  harian  orang  dewasa sekitar  800  mg/hari.  Nano  kalsium  juga mengandung  komponen  mineral  lain  yaitu magnesium,  kalium,  natrium,  fosfor,  besi, zink,  dan  mangan.  Nano  kalsium  yang
dihasilkan  memiliki    nilai    pH  sebesar  9,40. Ukuran  partikel  nanokalsium  berkisar  37-127 nm 2 . 5,7
Kalsium  tidak  akan  dapat  diserap  tubuh apabila  ditambahkan  dengan  molekul  yang besar.  Oleh  sebab  itu,  diperlukan  bentuk ukuran nano pada kalsium agar dapat terserap oleh  tulang  dengan  baik.  Bubuk  nanometer secara signifikan dapat meningkatkan bioavailabilitas kalsium dan memiliki manfaat gizi  yang  penting berdasarkan evaluasi dalam pertumbuhan tikus model. 8
Kelainan  metabolik  tulang  ditandai dengan  berkurangnya  massa  tulang,  adanya kerusakan pada tekstur tulang, terjadi peningkatan kerapuhan tulang, dan menyebabkan  risiko  fraktur  (NIH  1993). Massa  tulang  yang  berkurang  akan  membuat tulang  semakin  keropos  dan  rapuh  sehingga mudah keropos yang disebut osteoporosis. 9 Berdasarkan  uraian  di  atas  diperoleh informasi  bahwa Moringa  oleifera memiliki sumber    kalsium  yang  tinggi  dan  teknologi nano  akan  dapat  membantu  zat  gizi  terutama kalsium  lebih  cepat  diserap  tubuh  (tulang). Oleh  sebab  itu,  penelitian  ini  mempunyai tujuan  yaitu  untuk  mengukur  pengaruh waktu milling  dengan  ukuran  nano  partikel  serbuk daun  kelor  ( Moringa  oleifera )  dan  hubungan dengan  bioavailabilitas  secara Invitro dan Invivo .

## METODE

## Desain
Desain  penelitian  yaitu  dilakukan  secara eksperimen,  yang  dilakukan  pada  laboratorium gizi  masyarakat  di  Institut  Pertanian  Bogor (IPB).  Penelitian  telah  dilakukan  pada  bulan September  sampai  November  2017.  Tempat yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah  untuk pembuatan  serbuk  daun  kelor  dilakukan  di Perkebunan  daun  kelor  Blora    Jawa  Tengah, selanjutnya  menjadikan  tepung  daun  kelor menjadi  bentuk  nano  partikel  dilakukan  di Puspitek  Balai  Teknologi  Bukit  Serpong  Jawa Barat  selanjutnya  analisis  proksimat  dilakukan di  bioteknologi  LIPI  serpong  Jawa  Barat  untuk Analisis Mineral dilakukan  di bioteknologi LIPI
serpong Jawa Barat selanjutnya analisis vitamin dan  kelarutan  dilakukan  di  laboratorium saraswanti Bogor Jawa Barat dan uji
Bioavailabilitas  secara ivitro dan invivo dilakukan di Laboratorium Gizi masyarakat IPB.

## Alat dan Bahan
Perlakuan  terhadap  pengeringan  daun kelor  yaitu  dengan  cara  diagin-anginkan  dan pembuatan  tepung  daun  kelor  digunakan Hummer    mill dan Desk  mill ,  untuk menjadikan  tepung  daun  kelor  menjadi  nano partikel  digunakan Hight  Energy  Miling (HEM)  menggunakan  analisis  proksimat selanjutnya analisis mineral dengan menggunakan metode AAS ( Atomic absorpsion  spectrofotometry) untuk  Analisis Vitamin digunakan metode HPLC selanjutnya uji kelarutan (serbuk dan nano partikel serbuk daun kelor) terus dilakukan uji bioavailabilitas  (serbuk,    dan  nano  partikel serbuk daun kelor).
Prosedur  pembuatan  daun  kelor,  untuk pembuatan  tepung Hummer  mill dan Desk  mill menggunakan  prosedur  dibawah  ini,  yang dilakukan  oleh  perkebunan  daun  kelom  yaitu sebagai berikut:

## Gambar 1. Prosedur pembuatan daun kelor
Selanjutnya  dilakukan  pembuatan  nano partikel  dari  hasil  pengayakan  daun  kelor, digunakan metode Hight Energy Miling (HEM). Prosedur  pembuatan  nano  partikel  adalah disajikan pada gambar 2 berikut:
Gambar 2. Prosedur pembuatan nano
partikel Analisis Proksimat (Standar Nasional

## Indonesia SNI-2891-1992)
Daun  kelor  dalam  bentuk  serbuk,  bentuk mikro dan nano partikel  dilakukan  uji proksimat untuk  melihat  kandungan  energi,  karbohidrat lemak,  protein,  kadar  abu,  serat  kasar  serta  air dan serat pangan.

## Analisis  Mineral  (Aoac  Official  Methods  of Analysis, 2005)
Daun  kelor  dalam    bentuk    serbuk    di analisisis  dengan  metode  AAS  untuk  melihat kandungan mineral seperti kalsium, magnesium, fosfor, kalium dan zinc.
Analisis  Vitamin  (Aoac  Official  Methods  Of Analysis, 2005)
Daun  kelor  dalam  bentuk  serbuk  akan  di analisisis  dengan  metode  HPLC  untuk  melihat kandungan  vitamin  seperti  vitamin  A,  vitamin C, vitamin D dan vitamin K.
Analisis Uji Kelarutan dan Uji

## Bioavailabilitas
Analisis  akhir  yaitu  dilakukan  untuk  uji kelarutan, serbuk, dan nano partikel. Setelah itu, baru  dilakukan  uji  bioavailabilitas  serbuk,  dan nano  partikel secara invitro dan invivo .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Waktu Milling dan Ukuran Nano Partikel Serbuk Daun Kelor
Waktu  milling  daun  kelor  ukuran  nano partikel  dilakukan  sebanyak  tiga  kali  yaitu  1 jam,  30  menit  dan  15  menit.  Berikut  hasil penelitian (gambar 3) waktu miling Daun kelor segar dilakukan proses pencucian
Pengeringan dengan cara dianginkan Penghancuran daun kelor jadi serbuk Pengayakan serbuk daun Desk mill Hummer
Serbuk Daun Kelor HEM
Ukur partikel serbuk dan nano partikel PSA
menunjukkan  perbedaan  diameter  ukuran  nano partikel. Secara lebih detil, ukuran rata-rata nano
partikel  daun  kelor  berdasarkan  waktu  milling disajikan pada tabel 1.
Gambar 3. Perbedaan diameter nano partikel berdasarkan waktu milling
Tabel 1. Ukuran nano partikel daun kelor dengan waktu milling 1 jam, 30 menit dan 15 menit Waktu Milling Diameter Nano Partikel (nm) Standar Deviasi 1 jam 1.012,8 1.725,4 30 menit 669,7 189,7 15 menit 2.214,1 626,4 2. Analisis  Proksimat  dalam  Bentuk  Serbuk dan Nano Partikel Daun Kelor
Analisis  proksimat  merupakan  suatu metode analisis untuk mengetahuikandungan zat gizi  suatu  bahan  pangan  yaitu  kandungan
protein, lemak,energi, serat, kadar air dan kadar abu, dengan membandingkan  nilai standar nilai gizi  yang  telah  ditentukan.  Analisis  proksimat pada penelitian ini dilakukan sebanyak dua kali ulangan, kemudian dirata-ratakan.
Milling= 1 jam
Milling= 30 menit
Milling= 15 menit
Tabel 2. Kandungan zat gizi dalam 100 gram takaran saji Parameter Ukuran Partikel Nilai p Serbuk Nano Kadar air (%) 4,81 ± 0,43 8,32 ± 0,14 0,000* Kadar abu (%) 10,79 ± 0,03 10,56 ± 0,04 0,001* Kadar lemak (%) 4,25 ± 0,90 4,32 ± 0,59 0,916 Kadar protein (%) 26,83 ± 0,31 26,22 ± 0,65 0,177 Kadar energi (kkal) 358,85 ± 0,01 346,08 ± 0,01 0,000* Kadar serat 9,74 ± 0,29 7,75 ± 0,72 0,011* *Signifikan pada CI: 95% (p < 0,05)
Tabel  2  menunjukkan  bahwa  analisis proksimat meliputi kadar air, kadar abu, energi, serat  dan  gula  total  berbeda  signifikan  antara daun  kelor  serbuk  dan    nano    (p  <  0,05), sedangkan  kadar  lemak  dan  protein  tidak berbeda signifikan antara daun kelor serbuk dan nano (p > 0,05).
Kadar air merupakan salah satu karakteristik penting pada bahan pangan, karena penampakan,  tekstur,  dan  cita    rasa    yang terdapat dalam bahan pangan dapat dipengaruhi oleh air. Bahan pangan yang memiliki kadar air yang tinggi dapat menyebabkan bakteri, kapang dan  khamir  menjadi  lebih  mudah  untuk berkembang  biak.  Hal  ini  dapat  menyebabkan perubahan pada bahan pangan tersebut. 10 Kadar air  pada  serbuk  nano  lebih  besar  (8,32%) dibandingkan    dengan    serbuk    daun    kelor (4,81%).   Kandungan   kadar   air   pada   serbuk daun kelor sebesar 10,74 gram. Perbedaan kadar air  pada  serbuk  daun  kelor  kemungkinan disebabkan  oleh  perbedaan  jenis  dan  daerah daun kelor tersebut. 9
Kadar abu merupakan kadar mineral total yang  terdapat  dalam  suatu  bahan  pangan. 11 Jongrungruangchok  et  al,  telah  melaporkan bahwa  terdapat  perbedaan  signifikan  kadar  abu serbuk daun kelor dengan ukuran nano partikel (p < 0,05), dengan rerata 10.79 % pada  ukuran serbuk dan 10,56% pada ukuran nano. Penelitian menunjukkan  bahwa  rerata  kadar  abu  serbuk daun kelor di Thailand yaitu 7,07%. 12
Kadar lemak pada serbuk daun kelor tidak berbeda signifikan dengan ukuran nano partikel (p > 0,05), dengan rerata 4,25% pada serbuk dan 4,32% pada ukuran nano partikel. Kadar lemak pada daun kelor masih tergolong rendah, hal ini berbeda  dengan  penelitian  yang  menyebutkan
bahwa    kandungan    lemak  pada  serbuk  kering daun keor yaitu 6,50. 13
Daun  kelor  merupakan  sumber  protein nabati yang sangat baik untuk vegetarian. Daun kelor  mengandung  semua  jenis  asam  amino esensial  yang  merupakan  bahan  pembangun protein  dan  sanggat  bermanfaat  bagi  orang- orang  yang  tidak  mendapatkan  protein  yang bersumber  dari  pangan  hewani.  Kandungan protein  ukuran  serbuk  tidak  berbeda  signifikan dengan ukuran  nano  (p > 0,05),  dengan rerata kadar protein 26,83 % pada ukuruan serbuk dan 26,22% pada ukuran nano partikel.  Kandungan protein pada serbuk dan nano partikel daun kelor tergolong  tinggi.  Penelitian  mengemukakan bahwa  kandungan  protein  pada  serbuk  daun kelor  sebesar  26,3%. 14
Kandungan energi pada serbuk  daun  kelor lebih besar dibandingkan dengan  nano  partikel. Hal ini kemungkinan disebabkan oleh perbedaan ukuran  partikel  daun  kelor.  Kandungan  serat serbuk    daun    kelor  berbeda  signifikan  dengan ukuran nano partikel (p < 0,05), kandungan serat pada  daun  kelor    ukuran    nano  lebih  sedikit dibandingkan    dengan    serbuk,    sejalan  dengan enelitian  yang  menyebutkan  bahwa  kandungan serat serbuk daun kelor sebesar 19,91%. 12
3. Analisis  Vitamin  dalam  Bentuk    Serbuk dan Nano Partikel Daun Kelor
Vitamin merupakan suatu molekul organik yang  sangat  diperlukan  tubuh  untuk  proses metabolisme  dan  pertumbuhan  yang  normal. Vitamin-vitamin  tidak  dapat dibuat oleh tubuh manusia  dalam  jumlah  yang  cukup,  oleh  sebab itu  harus  diperoleh  dari  bahan  pangan  yang dikonsumsi. 10 Moringaoleifera Lam (kelor) telah dianjurkan  sebagai  tanaman  indigenous  yang
merupakan sumber  protein yang mudah dicerna, kalsium, besi, Vitamin C, dan karotenoid. 15
Hasil  penelitian  (tabel  3),  menunjukkan bahwa terdapat perbedaan signifikan kandungan vitamin  A,  vitamin  C  dan  vitamin  K  antara bentuk serbuk dan nano partikel daun kelor (p <
0,05),  sedangkan  vitamin  D  tidak  berbeda signifkan  antara  kedua  kelompok  (p  >  0,05). Kandungan vitamin A berbeda signifikan antara kedua  kelompok  ukuran  partikel  (p  <  0,05), dengan rerata 152,22 IU pada ukuran serbuk dan 143,96 IU pada ukuran nano.

## Tabel 3. Kandungan vitamin berdasarkan ukuran partikel daun kelor
Parameter Ukuran Partikel Nilai p Serbuk Nano Vitamin A/Beta karoten (IU) 152,22 ± 0,90 143,96 ± 0,01 0,000* Vitamin C (mg) 26,65 ± 0,76 20,86 ± 0,02 0,000* Vitamin D (mg) 0,67 ± 0,01 0,67 ± 0,02 0,561 Vitamin K (mg) 36,33 ± 0,00 42,81 ± 0,01 0,000* *Signifikan pada CI: 95% (p < 0,05) Hasil  penelitian  ini  sesuai  dengan penelitian yang telah dilaporkan oleh Burhanuddin 16 ,  yang  menunjukkan  hasil  yang lebih tinggi yaitu 186 IU 2 . Kandungan vitamin C  pada  serbuk  daun  kelor  lebih  tinggi  secara signifikan  dibandingkan dengan  ukuran  nano, dengan  nilai  masing-masing  26,65  mg  dan 20,86 mg. Perbedaaan nilai kandungan vitamin C daun kelor dapat dipengaruhi oleh berbagai faktor.  Irwan  et  al,  menjelaskan  bahwa kandungan  zat  gizi  yang  terdapat  pada  bahan pangan nabati seperti pangan daun kelor dapat dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  yaitu  faktor genetik tanaman yang dipengaruhi oleh spesies dan  varietasnya,  asal  tanaman,  tingkat kematangan saat pemanenan dan saat dikonsumsi,  kondisi  tumbuh,  suhu,  cahaya matahari, jumlah air, jenis tanah dan kesuburan tanah 17 .
Kandungan   vitamin   D   tidak   berbeda signifikan  antara  ukuran  serbuk  dan  nano partikel  daun  kelor  (p  >  0,05),  dengan  nilai masing-masing  0,67  mg.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  ukuran  partikel  serbuk  daun  kelor  tidak mempengaruhi kandungan vitamin D. Kandungan  vitamin  K  lebih  tinggi  secara signifikan pada ukuran nano partikel dibandingkan     dengan     serbuk     daun   kelor dengan  nilai  42,81  mg  pada  nano  partikel  dan 36,33 pada serbuk daun kelor. 11

## 4. Analisis      Mineral  dalam  Bentuk  Serbuk dan Nano Partikel Daun Kelor
Sebagian  besar  bahan  makanan  yaitu terdiri dari bahan organik dan air yang mencapai sebesar  96%.  Sisanya  terdiri  dari  unsur-unsur mineral. 10 Daun    kelor    merupakan  salah  satu bahan pangan yang kaya akan mineral.

## Tabel 4. Kandungan mineral berdasarkan ukuran partikel daun kelor
Parameter Ukuran Partikel Nilai p Serbuk Nano Kalsium 60.225 ± 25,03 53.187 ± 4,04 0,000* Magnesium 765 ± 15,50 1.997 ± 7,51 0,000* Fosfor 4.598 ± 49,33 4.697 ± 7,57 0,026* Seng 15,7 ± 3,55 21,4 ± 1,50 0,000* Kalium 2.859 ± 1,00 6.658 ± 1,00 0,000* Natrium 396 ± 7,57 94,4 ± 0,100 0,000* *Signifikan pada CI: 95% (p < 0,05)
Hasil  penelitian  (tabel  4)  menunjukkan bahwa  terdapat    perbedaan  signifikan  kadar kalsium,    magnesium,  fosfor,  kalium  dan natrium  antara  ukuran    serbuk  dengan  ukuran nano  partikel  daun  kelor  (p <  0,05),  sedangkan kandungan  seng  tidak  berbeda  signifikan  antar kedua kelompok partikel serbuk daun kelor (p > 0,05).
Jumlah  kalsium  yang  terdapat  di  dalam tubuh  orang  dewasa adalah  1,5  -  2%  dari  berat badan atau kurang lebih sebanyak 1 kg. Di dalam jaringan  keras  yaitu  tulang  dan  gigi  terdapat sebanyak  99%  dari    jumlah  tersebut,  terutama dalam  bentuk  hidroksiapatit.  Kalsium  tulang seimbang dengan kalsium plasma pada konsentrasi kurang lebih 2,25 – 2,60 mmol/l (9- 10,4  mg/100  ml) 1 .  Daun  kelor  mengandung kalsium  yang  cukup  tinggi.  Berdasarkan  hasil penelitian  dipeoleh  bahwa  kandungan  kalsium pada  daun  kelor  ukuran  serbuk  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  ukuran  nanopartikel, dengan nilai 60.225 ppm pada serbuk dan 53.187 ppm.
Kandungan  magnesium  pada  daun    kelor ukuran  nano  partikel  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  ukuran  serbuk,  dengan  nilai  1.997  ppm pada  nano  dan  765  pada  serbuk.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  semakin  kecil  ukuran permukaan daun kelor, semakin tinggi kandungan  magnesium.  Kandungan  fosfor  juga lebih tinggi pada daun kelor dengan ukuran nano dibandingkan  dengan  ukuran  serbuk,  dengan nilai  4.598  ppm  pada  serbuk  dan  4.697  pada ukuran nano partikel daun kelor.
Kandungan seng  tidak  berbeda signifikan antara  kedua  kelompok  ukuran  partikel  daun kelor, namun pada ukuran nano cenderung lebih tinggi  dibandingkan  dengan  serbuk  daun  kelor, dengan nilai masing-masing 15,7 ppm dan 21,4 ppm. Kandungan  kalium juga lebih tinggi secara signifikan pada ukuran nano partikel dibandingkan  dengan  serbuk,  dengan  nilai
masing-masing  6.658    ppm    dan  2.859  ppm. Sedangkan,    kandungan    natrium  lebih  tinggi pada  ukuran  serbuk  dibandingkan  dengan ukuran nano partikel.

## 5. Uji  Kelarutan  dalam  Bentuk  Serbuk  dan Nano Partikel Daun Kelor
Hasil  penelitian  terhdap  kelarutan  serbuk dan nano partikel pada daun kelor diketahui tidak begitu  baik.  Pada  serbuk  daun  kelor  uji parameter  kelarutan  tidak  dapat  terlarut sempurna,  begitu  juga  pada  nano  partikel hasilnya juga menunjukkan tingkat kelarutannya adalah tidak sempurna.
Kelarutan  merupakan  keadaan  suatu senyawa  baik  padat,  cair,  ataupun  gas yangterlarut  dalam  padatan,  cairan,  atau  gas yang  akan  membentuk  larutan  homogen. Kelarutan  merupakan  parameter  penting  bagi suatu  obat  dalam  mencapai  konsentrasi  yang dibutuhkan untuk menghasilkan respon farmakologi.  Banyak  obat  memiliki  kelarutan yangburuk  di  dalam  air,  padahal  obat  harus berada  dalam  bentuk  terlarut  ketika  akan diabsorpsi. 18 Kelarutan  suatu  bahan  pangan berkolerasi dengan bioavaibilitas.

## 6. Bioavailabilitas
Hasil  penelitian  (tabel  5)  menunjukkan bahwa  bioavailabilitas  kalsium  daun  kelor ukuran  nano  300  lebih  besar  dibandingkan dengan  ukuran  nano  600  dan  bentuk    serbuk, dengan    nilai    63,49%    pada  nano    300,  dan sebesar  55,04%  pada  nano  600  serta  sebesar 26,17%  untuk  ukuran  serbuk.  Uji  korelasi pearson menunjukkan hubungan negatif antara ukuran partikel daun kelor dengan bioavailabilitas kalsium dengan  p= 0,020 serta nilai  r    yaitu    -0,833.  Hal  ini  menunjukkan bahwa semakin kecil ukuran partikel daun kelor maka  tingkat  bioavabilitas  kalsium  semakin tinggi.
Tabel 5. Perbandingan  ukuran  partikel daun kelor
Parameter Ukuran Partikel Nilai p Nilai r Nano 300 Nano 600 Serbuk Kalsium (%) 63,49 55,04 26,17 0,020 -0,833 Magnesium (%) 22,43 37,46 41,89 0,001 +1,000 Fosfor (%) 21,63 25,33 21,47 0,261 +0,108
Bioavailabilitas  magnesium    daun    kelor tertinggi terdapat pada bentuk serbuk yaitu 41,89 %, sedangkan ukuran nano 600 yaitu 37,46% dan tingkat bioavailabilitas yang paling rendah yaitu ukuran nano 300 dengan nilai 22,43%. Hasil uji korelasi antara ukuran partikel dengan bioavalabilitas  menunjukkan  hubungan  positif signifikan  (p=  0,001),  dengan  nilai  korelasi sebesar  1,000.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa semakin besar ukuran partikel daun kelor maka semakin tinggi tingkat bioavailabilitas magnesium  daun  kelor tersebut.
Selanjutnya,  pada  bioavailabilitas  posfor tertinggi terdapat pada ukuran partikel nano 600 yaitu  sebesar  25,33%,  sedangkan  tingkat bioavailabiltas    ukuran  nano  300  dan  bentuk serbuk  cenderung  sama  yaitu  masing-masing 21,63% dan 21,47 %.  Berdasarkan uji korelasi menunjukkan bahwa tidak terdapat hubungan (p >  0,05)  yang  signifikan  antara  ukuran  partikel dengan bioavailabilitas posfor daun kelor.
Bioavailabilitas  kalsium  atau  ketersedian biologis  dari  kalsium  adalah  jumlah  kalsium yang  tersedia  dalam  bahan  pangan  yang  dapat diserap dan dimanfaatkan oleh tubuh. Kebutuhan  yang  semakin  meningkat  dan persediaan  kalsium  yang  rendah  dalam  tubuh akan  menyebabkan  absorpsi  kalsium  semakin efisien.  Kebutuhan  kalsium  akan  semakin meningkat  pada  saat  pertumbuhan,  kehamilan, menyusui, kekurangan kalsium, dan peningkatan densitas  tulang  berdasarkan  tingkatan  aktivitas fisik. 19
Nano  kalsium  salah  satunya  dapat langsung  diserap  oleh  tubuh  dengan  sempurna dibandingkan  makro  kalsium  dan  sangat bermanfaat  dalam  pemenuhan  kalsium  tubuh yang optimal dan dapat dikonsusmsi oleh segala usia. 6

## KESIMPULAN
Penentuan  ukuran  nano  partikel  dan waktu milling pada serbuk daun kelor menurut lama  waktu  dalam  proses  pembuatan  nano partikel tidak berpengaruh kepada ukuran nano partikel, karena semua proses dalam pembuatannya  tergantung  pada  jenis  bahan. Secara umum terdapat pengaruh waktu milling
dengan ukuran nano partikel serbuk daun kelor ( Moringa oleifera ), serta mempunyai hubungan signifikan secara invitro dan invivo . Sedangkan ukuran partikel dengan bioavailabilitas  posfor  daun  kelor  tidak menunjukkan hubungan bermakna.

## DAFTAR  PUSTAKA
1.   Gopalakrishnan  L,  Doriya  K,  Kumar  DS. Moringa  oleifera:  A  review  on  nutritive importance  and  its  medicinal  application. Food science and human wellness . 2016;5(2):49-56. doi:https://doi.org/10.1016/j.fshw.2016.04.
001.
2.   Paikra  BK,  Dhongade  HKJ,  Gidwani  B. Phytochemistry  and  Pharmacology  of Moringa oleifera Lam. Journal of pharmacopuncture . 2017;20(3):194-200.
doi:10.3831/KPI.2017.20.022.
3.   Anwar  F,  Ashraf  M,  Bhanger  MI.
Interprovenance variation in the composition  of  Moringa  oleifera  oilseeds from Pakistan. Journal of the American Oil Chemists’ Society . 2005;82(1):45-51. doi:10.1007/s11746-005-1041-1.
4.   Nweze  NO,  Nwafor  FI.  Phytochemical, proximate  and  mineral composition  of  leaf extracts  of  Moringa  oleifera  Lam.  from Nsukka,  South-Eastern  Nigeria. IOSR Journal  of  Pharmacy  and  Biological Sciences (IOSR-JPBS) . 2014;9(1):99-103.
5.   Krisnadi AD. Kelor Super Nutrisi .
Kunduran.  Yogyakarta:  Blora  (ID):  Pusat Informasi  dan  Pengembangan  Tanaman
Kelor Indonesia. Lembaga Swadaya
Masyarakat  Media  Peduli  Lingkungan (LSMMEPELING); 2012. 6.   Suptijah  P,  Jacoeb  AM,  Deviyanti  N. Karakterisasi dan bioavailabilitas nanokalsium  cangkang  udang  vannamei (Litopenaeus  vannamei). Jurnal  Akuatika . 2012;3(1).
7.   Syahrial  S,  Rimbawan  R,  Damayanthi  E, Astuti DA, Suptijah P. Pengaruh pemberian nano daun kelor (moringa oleifera) terhadap kadar  mineral  serum  dan tulang  pada  tikus sprague dawley jantan tumbuh. Jurnal Gizi
Indonesia  (The  Indonesian  Journal  of Nutrition) . 2019;7(2):114-120. doi:https://doi.org/10.14710/jgi.7.2.114-
120.
8.   Gao H, Chen H, Chen W, Tao F, Zheng Y,
Jiang Y, Ruan H. Effect of nanometer pearl powder on calcium absorption and utilization  in  rats. Food  Chemistry . 2008;109(3):493-498.
doi:https://doi.org/10.1016/j.foodchem.200 7.12.052.
9.   El Sohaimy SA, Hamad GM, Mohamed SE, Amar  MH,  Al-Hindi  RR.  Biochemical  and functional  properties  of  Moringa  oleifera leaves  and  their  potential  as  a  functional food. Global Advanced Research Journal of Agricultural Science . 2015;4(4):188-199. 10.  Winarno F. Kimia Pangan Dan Gizi: Edisi Terbaru . Jakarta: Gramedia Pustaka Utama;
2008.
11.  Berdanier  CD,  Dwyer  JT,  Feldman  EB. Handbook  of  Nutrition  and  Food .  Florida: CRC press; 2007.
12.  Jongrungruangchok S, Bunrathep S,
Songsak  T.  Nutrients  and  minerals  content of  eleven  different  samples  of  Moringa oleifera  cultivated  in  Thailand. Journal  of Health Research . 2010;24(3):123-127.
13.  Moyo B, Masika PJ, Hugo A, Muchenje V. Nutritional  characterization  of  Moringa (Moringa  oleifera  Lam.)  leaves. African Journal of Biotechnology . 2011;10(60):12925-12933.
doi:10.5897/AJB10.1599.
14.  Manzoor M, Anwar F, Iqbal T, Bhanger MI.
Physico-Chemical Characterization of
Moringa  concanensis  Seeds  and  Seed  Oil. Journal  of  the  American  Oil  Chemists’
Society . 2007;84(5):413-419. doi:10.1007/s11746-007-1055-3.
15.  Fahey JW. Moringa oleifera: a review of the medical  evidence  for  its  nutritional, therapeutic,  and  prophylactic  properties. Part  1. Trees  for  life  Journal .  2005;1(5):1-
15.
16.  Burhanuddin WR. Pengaruh variasi pengolahan  dan  pemanasan  ulang  terhadap kandungan  zat  gizi  dan  bioavailabilitas mineral  daun  kelor.  [Tesis]. Institut Pertanian Bogor . 2017.
17.  Irwan  Z,  Salim  A,  Adam  A.  Pemberian cookies tepung daun dan biji kelor terhadap berat  badan  dan  status  gizi  anak  balita  di wilayah  kerja  Puskesmas  Tampa  Padang. AcTion:
Aceh Nutrition Journal .
2020;5(1):45-54.
doi:http://dx.doi.org/10.30867/action.v5i1.1 98.
18.  Pamudhita  WYPA,  Hendriani  R.  Teknik Peningkatan  Kelarutan  Obat. Farmaka . 2016;14(2):288-297. doi:https://doi.org/10.24198/jf.v14i2.1086 6.
19.  Mardiah  M.  Analisa  Kadar  Kalsium  (Ca) Pada Daun Kelor (Moringa oleifera). Jurnal Ilmu  Alam  dan  Lingkungan .  2018;8(1):49- 52.
doi:https://doi.org/10.20956/jal.v8i1.3930.