Jurnal Pembelajaran Dan Biologi Nukleus Volume 6 (2): 112-119, September 2020

## Identification Of Cu Resistant Bacteria From Tin Mining-Affected
Sea Sediment
Identifikasi Bakteri Resisten Cu Dari Sedimen Laut Terdampak Aktivitas Tambang Timah
Rahmad Lingga 1* , Budi Afriyansyah 1
1 Jurusan Biologi Universitas Bangka Belitung Jl. Kampus Terpadu UBB, Balunijuk, Kec. Merawang, Kota Bangka , Provinsi Kepulauan Bangka Belitung 33172 *Email: linkgarahmad@gmail.com
Diterima 16 April  2020 dan Disetujui 17 Mei 2020

## Abstrak
Aktivitas  pertambangan  timah  di  laut  memberikan  pengaruh  buruk  terhadap kondisi lingkungan salah satunya adalah cemaran logam berat yang dapat mempengaruhi kehidupan  biota  perairan.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengisolasi  dan  menguji resistensi bakteri sedimen laut terdampak aktivitas tambang timah terhadap logam berat Cu.  Pengambilan  sampel  dilakukan  pada  area  penambangan  timah  di  laut  sampai  ke hamparan lumpur kawasan mangrove terdekat. Isolasi bakteri dilakukan dengan metode cawan sebar dan karakterisasi bakteri meliputi pengamatan bentuk sel, pewarnaan Gram dan uji biokimia. Isolat bakteri selanjutnya diuji resistensinya terhadap logam Cu dengan konsentrasi  10  ppm,  20  ppm,  40  ppm,  80  ppm  dan  100  ppm.  Hasil  penelitian memperlihatkan bahwa isolat bakteri yang berasal dari sedimen laut terdampak aktivitas tambang  timah  memiliki  resistensi  terhadap  perlakuan  logam  berat  Cu  pada  berbagai konsentrasi. Isolat B6, B8 dan A10 memperlihatkan resistensi tertinggi terhadap Cu sampai pada konsentrasi 100 ppm.
Kata kunci: bakteri resisten, logam berat Cu, tambang timah, Bangka Belitung, sedimen laut
Abstract
Tin mining activity at sea has various negative influences on the environment. One of them is heavy metal contamination that can affect the life of fisheries biota. This research was conducted to isolate  and  test  the  Cu  heavy  metal  resistance  of  marine  sediment  bacteria  that  are  affected  by  tin mining activity. Sediment sampling was carried out in the area of tin mining to the mudflat neared to the  mangrove  area.  Bacterial  isolation  was  carried  out  by  spread  plate  method  and  bacterial characterization  included  cell  shape,  Gram  staining  and  biochemical  tests.  Furthermore,  bacterial isolates were tested for resistance to metals with concentrations of 10 ppm, 20 ppm, 40 ppm, 80 ppm and 100 ppm. The results showed that bacterial isolates originating from marine sediments affected by mining activity were resistant to Cu heavy metal at various concentrations. Isolates B6, B8 and A10 showed the highest resistance up to the concentration of 100 ppm . Keywords: resistant bacteria, heavy metal, tin mining, Bangka Belitung, marine sediment

## PENDAHULUAN
Provinsi  kepulauan  Bangka  Belitung  merupakan  daerah  yang  memiliki  kekayaan mineral terutama timah  yang  sangat  besar.  Keberadaan  cadangan  timah  yang  sangat  besar tersebut  telah  menjadikannya  sebagai  sumber  penghasilan  utama  bagi  pemerintah  dan masyarakat Provinsi kepulauan Bangka Belitung. Misalnya pada tahun 2017, PT Timah dapat

## Jurnal Pembelajaran Dan Biologi Nukleus
Volume 6 (2): 112-119, September 2020
memproduksi 31.317 ton bijih timah dengan pendapatan usaha sebesar Rp. 9,217 triliyun dan jumlah  laba  yang  diperoleh  sebesar  Rp.  502,4  miliyar  (PT  Timah  2017).  Aktivitas penambangan  timah  sendiri  telah  berlangsung  hampir  300  tahun  lamanya,  dengan penambangan timah di laut baru berlangsung kurang lebih 30 tahun. Pencabutan status timah sebagai  komoditas  strategis  telah  mendorong  maraknya  penambangan  timah  secara inkonvensional di laut. Penambangan timah di laut dilakukan oleh PT. Timah maupun pihak swasta sebagai mitra. Kegiatan penambangan timah di laut dilakukan dengan menggunakan kapal  hisap.  Sebagai  contoh,  Kapal  Isap  Produksi  PT.  Timah  dapat  menggali  sampai kedalaman  25  meter  di  bawah  permukaan  laut  (www.timah.com).  Aktivitas  penambangan timah di laut juga melibatkan penambangan inkonvensional yang dikenal dengan TI apung yang biasanya dilakukan oleh masyarakat maupun pengusaha swasta.
Di  samping  manfaatnya  secara  ekonomi,  aktivitas  penambangan  timah  dapat memberikan dampak negatif bagi lingkungan maupun kependudukan. Marfirani dan Adiatma (2012) mencermati tentang pengaruh penambangan timah di laut terhadap kualitas ekologis dan  pendapatan  penduduk  yang  bergantung  perikanan  laut.  Hasil  penelitian  mereka mengungkapkan  bahwa  seringkali  keberlanjutan  lingkungan  diabaikan  demi  kepentingan ekonomi. Pertambangan timah apung yang dilakukan masyarakat telah berdampak buruk bagi keberlanjutan ekologi. Pertambangan ini merupakan bagian dari trade off antara ekonomi dan lingkungan yang menyingkirkan peran lingkungan demi bertahan hidup. Aktivitas pertambangan apung atau tambang inkonvensional (TI) apung menyebabkan peningkatan  kerusakan  lingkungan  pesisir  karena  pengambilan  pasir  timah  menjadi  sulit dikendalikan. Limbah penambangan yang berupa tanah dan lumpur langsung dibuang ke laut. Akibatnya,  kawasan  perairan  yang  menjadi  kawasan  penambangan  umumnya  terlihat berwarna  lebih  gelap.  Sedimentasi  tanah  menutup  dan  mematikan  terumbu  karang,  dan sebaliknya  alga  merajalela  yang  menyebabkan  kerusakan  ekosistem  pesisir.  Kerusakan  ini membawa  dampak  yang  sangat  negatif  bagi  lingkungan  perairan.  Seperti  yang  diketahui, terumbu  karang  merupakan  tempat  pemijahan  ikan,  penyeimbang  ekosistem  di  lautan. (Marfirani dan Adiatma 2012). Di antara berbagai efek negatif yang mungkin terjadi sebagai efek samping pertambangan adalah keberadaan logam berat. Keberadaan logam berat pada konsentrasi tinggi menyebabkan efek negatif pada semua bentuk kehidupan (Martinez 2009).
Permasalahan  lain  yang  perlu  mendapatkan  perhatian  adalah  potensi  pencemaran logam berat sebagai buangan dari proses penambangan dan pengolahan timah. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengisolasi  bakteri  dari  sedimen  laut  yang  terdampak  aktivitas  tambang timah inkonvensional dan menguji resistensinya terhadap logam berat Cu.

## METODE Lokasi dan teknik pengambilan sampel
Penelitian ini dilakukan pada bulan Juni sampai dengan Desember 2019. Penelitian dilakukan di  kawasan  sekitar Pantai  Sampur Desa Kebintik, Kecamatan Koba,  Kabupaten Bangka Tengah, Provinsi Kepulauan Bangka Belitung. Lokasi penelitian terletak pada posisi 2º09’10.95”LS dan 106º10’49.47”BT. Pemilihan lokasi dilakukan dengan mempertimbangkan keberadaan  pertambangan  timah  di  laut  di  sekitar  daerah  tersebut.  Jumlah  stasiun  yang diambil adalah empat stasiun yaitu tepi pantai, tengah, lokasi tambang, dan lumpur mangrove.
Sampel sedimen diambil dengan menggunakan sediment core sampai kedalaman 10 cm ( sediment  core dibuat  dengan  menggunakan  pipa  paralon  PVC  dengan  diameter  4,8  cm). Karakteristik  fisik-kimia  lokasi  pengambilan  sampel  diukur  langsung pada saat  yang  sama. Sampel  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  plastik  steril  dan  disimpan  dalam cool  box untuk dibawa ke laboratorium.

## Isolasi dan Identifikasi Bakteri
Jurnal Pembelajaran Dan Biologi Nukleus Volume 6 (2): 112-119, September 2020
Sebanyak 20 sampel sedimen yang diambil kemudian dibawa ke laboratorium dengan menggunakan cool box untuk prosedur selanjutnya. Di laboratorium, prosedur pertama yang dilakukan  adalah  homogenisasi  sampel  yang  dilakukan  selama  1  menit.    Setelah homogenisasi,  sebanyak  1  gram  sampel  sedimen  ditambahkan  ke  dalam  100  mL  akuades. Cairan  sampel  kemudian  diencerkan  secara  bertingkat  sampai  pengenceran  10 -7 .  Sampel kemudian  divorteks  sebelum  disimpan  selama  24  jam  pada  suhu  ruang.  Sebanyak  100  µl sampel  kemudian  disebar  pada  Media  Zobell  Agar.  Selanjutnya,  dilakukan  perhitungan jumlah koloni dan pengamatan ciri-ciri koloni yang mewakili karakter tertentu seperti bentuk, tepi,  warna,  tekstur  dan  elevasinya.  Koloni  terpilih  kemudian  disubkultur  dan  dimurnikan sesuai  dengan  karakteristik  masing-masing.  Karakterisasi  dan  identifikasi  yang  dilakukan meliputi pengamatan bentuk sel, pewarnaan Gram dan uji biokimia yang meliputi uji Metil Red (MR), Voger Proskauer (VP), Sitrat, Indol.

## Uji Resistensi terhadap Logam Berat Cu
Stok larutan (1M) logam berat ( copper sulphate ) disiapkan air deionisasi dan disterilkan dengan  diautoklaf  pada  suhu  121°C  selama  15  menit.  Konsentrasi  logam  berat  Cu  yang digunakan sebanyak 5 variasi konsentrasi yaitu 10 ppm, 20 ppm, 40 ppm, 80 ppm dan 100 ppm.  Media tumbuh  yang telah  disuplementasi  dengan  logam  berat  Cu,  dituang ke dalam cawan Petri dan didinginkan. Selanjutnya, dilakukan inokulasi bakteri dengan metode cawan gores.  Masing-masing  perlakuan  dibuat  sebanyak  3  ulangan.  Cawan  disimpan  dalam inkubator dengan posisi terbalik selama 2x24 jam. Pengamatan dilakukan pada biakan yang disimpan suhu 30°C.
Analisis Data Analisis data dilakukan secara deskriptif dengan menampilkan data dalam bentuk tabel dan grafik. Karakteristik sel bakteri ditampilkan dalam bentuk gambar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Isolat Bakteri Sedimen Laut
Jumlah total isolat bakteri sedimen laut yang diperoleh dari beberapa titik di kawasan Pantai  Sampur  adalah  sebanyak  25  isolat,  yang  memperlihatkan  keragaman  dari  segi morfologi sel dan ciri biokimianya (Tabel 1). Secara biokimia (uji MR, VP, sitrat dan indol), sebagian besar isolat menunjukkan karakteristik yang sama yaitu MR negatif, VP negatif, MR negatif, VP negatif. Ciri yang berbeda ditemukan pada 3 isolat lainnya yaitu isolat A2, A8 dan B15. Isolat A2 dan A8 memperlihatkan ciri MR positif, VP negatif, sitrat negatif dan indol negatif. Sementara itu isolat B8 memperlihatkan ciri MR negatif, VP negatif, MR positif, VP positif. Keragaman ciri sel dan uji biokimia tersebut memperlihatkan bahwa jenis bakteri yang berhasil dikarakterisasi memiliki kemungkinan yang beragam, baik secara taksonomis maupun secara  ekologi.  Ciri  biokimia  bakteri  yang  berbeda  menjadi  indikasi  perbedaan  cara  hidup bakteri tersebut, seperti kemampuan dalam memanfaatkan sumber karbon yang tersedia. Hal ini sejalan dengan keberadaan bakteri yang dikenal memiliki peranan penting dalam siklus biogeokimia di lingkungan perairan (Santos et al 2011).
Tabel 1. Karakteristik Isolat Bakteri Sedimen Dari Pantai Sampur Bangka Selatan
No Isolat MR VP  Sitrat   Indol Gram Penampakan Sel 1 A1 - - - - Negatif Diplococcus 2 A2 + - - - Negatif Coccus, berantai 3 A3 - - - - Positif Coccus, tunggal 4 A4 - - - - Positif Basil, tunggal

## Jurnal Pembelajaran Dan Biologi Nukleus
Volume 6 (2): 112-119, September 2020
5 A6 - - - - Negatif Batang pendek, tunggal 6 A7 - - - - Positif Dipobasil 7 A8 + - - - Positif Coccus, tunggal 8 A9 - - - - Negatif Coccus, tunggal 9 A10 - - - - Negatif Basil, tunggal 10 A12 - - - - Positif Coccus, tunggal 11 A13 - - - - Negatif Basil, tunggal 12 A15 - - - - Negatif Batang pendek, tunggal 13 A16 - - - - Negatif Basil, tunggal 14 B1 - - - - Negatif Batang pendek, tunggal 15 B2 - - - - Negatif Basil, tunggal 16 B3 - - - - Negatif Basil, rantai 17 B4 - - - - Negatif Basil, tunggal 18 B5 - - - - Negatif Basil, tunggal 19 B6 - - - - Positif Basil, tunggal 20 B7 - - - - Negatif Basil, tunggal 21 B8 - - + + Negatif Basil, tunggal 22 B9 - - - - Positif Coccus, tunggal 23 B10 - - - - Negatif Batang pendek, tunggal 24 B12 - - - - Negatif Basil, tunggal 25 B15 - - - - Negatif Batang pendek, tunggal
Dari  hasil  pewarnaan  gram  diketahui  sebanyak  7  isolat  bakteri  tergolong  ke  dalam bakteri  Gram  positif  dan  18  isolat  lainnya  tergolong  ke  dalam  bakteri  Gram  Negatif. Berdasarkan penampakan sel, sebanyak 11 isolat yang memiliki bentuk sel basil dan penataan tunggal, 5 isolat dengan bentuk kokus dengan penataan tunggal, 5 isolat dengan bentuk batang pendek dengan penataan tunggal, 1 isolat dengan bentuk diplokokus, 1 isolat kokus berantai, 1 isolat diplobasil, dan 1 isolat basil dengan penataan berantai (Gambar 1).
B A

## Jurnal Pembelajaran Dan Biologi Nukleus
Gambar 1 . Pewarnaan Gram dan bentuk mikroskopis sel isolat bakteri sedimen (A. Isolat A, B. Isolat B4, C. Isolat B10, D. Isolat B3)
Resistensi terhadap logam berat Cu
Pengujian resistensi  isolat  bakteri  dilakukan  dengan  menggunakan  lima konsentrasi Cu berbeda yaitu 10 ppm, 20 ppm, 40 ppm, 80 ppm dan 100 ppm. Pemilihan konsentrasi ini didasarkan pada kenyataan bahwa belum ada studi pendahuluan tentang kadar logam berat Cu di lokasi tersebut sebelumnya, sehingga diambil pertimbangan bahwa ada kemungkinan bakteri di lokasi penelitian belum pernah atau telah terpapar logam berat Cu sebelumnya. Dari 25 isolat bakteri sedimen yang telah dimurnikan, dilakukan pengujian pada 10 isolat bakteri. Pemilihan  isolat  dilakukan  berdasarkan  pengelompokan  Gram  (Gram  positif  dan  Gram negatif), bentuk dan penataan selnya.
Tabel 2. Resistensi isolat bakteri sedimen terhadap logam berat Cu
Isolat Kelompok Gram Konsentrasi (ppm) 10 20 40 80 100 A2 Negatif ++ ++ + + + A8 Positif ++ ++ ++ ++ + B3 Negatif ++ ++ ++ + + B8 Negatif ++ ++ ++ ++ ++ A3 Positif ++ ++ ++ ++ + A4 Positif ++ ++ + + +
A9 Negatif ++ ++ ++ ++ + A10 Negatif ++ ++ ++ ++ ++ B6 Positif ++ ++ ++ ++ ++ B9 Positif ++ ++ ++ + +
Keterangan: ++ = kepadatan populasi bakteri tinggi +    = kepadatan populasi bakteri rendah
Hasil  pengujian  memperlihatkan  bahwa  seluruh  isolat  bakteri  yang  diuji  mampu tumbuh pada media yang telah disuplementasi dengan logam berat Cu (Tabel 2). Meskipun terlihat  adanya  perbedaan  tingkat  pertumbuhan  bakteri  berdasarkan  ketebalan  koloni  yang tumbuh dalam media. Hal ini didefenisikan sebagai tingkat resistensi terhadap logam berat Cu. Isolat bakteri yang memperlihatkan resistensi yang paling tinggi terhadap logam berat Cu adalah isolat B8, A10 dan B6. Masing-masing isolat terlihat dapat tumbuh dengan stabil pada semua  konsentrasi  logam  berat  Cu  yang  diujikan.  Sementara  itu,  isolat  bakteri  yang memperlihatkan tingkat resistensi paling rendah terhadap logam berat Cu adalah isolat A2 dan A4. Kedua isolat tersebut terlihat mengalami penurunan kepadatan sel pada konsentrasi 40 ppm,  80  ppm  dan  100  ppm,  sehingga  terlihat  adanya  pola  peningkatan  resistensi  bakteri
C D

## Jurnal Pembelajaran Dan Biologi Nukleus
Volume 6 (2): 112-119, September 2020
terhadap  konsentrasi  logam  berat  Cu  yang  lebih  tinggi.  Hal  ini  memperlihatkan  adanya perbedaan kemampuan bakteri tersebut dalam beradaptasi dengan kondisi lingkungan yang tercemar  logam  Cu.  Hal lain  yang  dapat  mempengaruhi  tingkat resistensi  ini  adalah  kadar logam berat di habitat tersebut.

## Pembahasan
Kemampuan bakteri untuk bertahan terhadap kondisi lingkungan yang terkontaminasi logam  berat  tergantung  pada  beberapa  faktor  antara  lain  karakteristik  sel  dan  adaptasi mekanisme seluler yang dimilikinya. Shruti et al. (2012), menambahkan bahwa respon bakteri yang bervariasi terhadap logam berat berkaitan dengan perbedaan komposisi dinding sel dan mekanisme  resistensi  yang  berlangsung  dalam  sel.  Mekanisme  adaptasi  bakteri  terhadap logam berat antara lain dengan mengeluarkan (eksklusi) ion logam berat dari dalam sel dengan merubah sistem transpor membran yang terlibat dalam akumulasi seluler awal. Bakteri juga dapat melakukan Sequestrasi intraseluler atau ekstraseluler kompponen pengikat logam yang mirip dengan metallothionein. Mekanisme lain yang dapat dilakukan antara lain sistem eflux kation/anion yang dikode oleh gen resistensi serta detoksifikasi logam berat secara enzimatik untuk  mengurangi  tingkat  toksisitas  logam  berat  (Hynninen et  al 2009).  Pada  prokariot, misalnya bakteri Escherichia coli dikenal istilah Homeostasis Cu . (Dupont et al . 2014). Kelompok bakteri  tersebut  kemungkinan  tidak  memerlukan  Cu  sitoplasmik  dan  protein  yang memerlukan  Cu  secara  eksklusif  terletak  dalam  periplasma  atau  dalam  membran  plasma (Rensing  dan  Grass  2003).  Bakteri  Gram  Negatif  diketahui  memiliki  sistem  pertahanan terhadap kelebihan Cu, bahkan juga dapat ditemukan pada kelompok Gram Positif (Dupont et al . 2014). Sementara itu, penelitian Lo Giudice et al. (2013) menemukan bahwa toleransi terhadap logam berat dari bakteri berkaitan dengan konsentrasi loam berat di lokasi tersebut. Hasil penelitian mereka di Terra Nova Bay memperlihatkan konsentrasi logam berat secara berurutan adalah Cd > Cu > Zn > Hg.
Bakteri  yang  memperlihatkan  karakteristik  yang  resisten  terhadap  logam  berat  dan berasal dari daerah yang terpapar logam berat berpotensi untuk dijadikan agen bioremediasi cemaran logam berat (Chihomvu et al. 2014). Demikian halnya dengan temuan penelitian ini, resistensi  bakteri  asal  sedimen  laut  yang  terdampak  aktivitas  tambang  dan  terpapar  logam berat, dapat menjadi dasar pemikiran tentang untuk dimanfaatkan menjadi agen bioremediasi cemaran  logam  berat  di  lingkungan  perairan.  Akan  tetapi,  dibalik  peluang  pemanfaatan bakteri resisten logam berat tersebut dalam remediasi lingkungan tercemar logam berat ada permasalahan lain yang perlu mendapatkan perhatian. Hal tersebut berkaitan dengan adanya korelasi  positif  antara  resistensi  bakteri  terhadap  logam  berat  dengan  resistensi  terhadap antibiotik tertentu. Hal ini terjadi melalui adanya respons adaptif komunitas bakteri terhadap kondisi  lingkungan  dan  ada  kemungkinan  komunitas  tersebut  merupakan  reservoir  gen resistensi antibiotik (Beleneva et al . 2011). Resistensi antibiotik pada komunitas bakteri dapat dijadikan sebagai indikator pencemaran lingkungan (Zhang 2009).
Hal yang harus menjadi pertimbangan lain mengenai dampak pencemaran logam berat pada suatu ekosistem adalah adanya korelasi antara resistensi bakteri terhadap logam dengan biota lainnya. Jika bakteri mampu menoleransi keberadaan logam berat, dapat diduga bahwa hal tersebut menjadi indikator dari toksisitas potensial logam berat terhadap kelompok biota lainnya  (Hassen et  al. 1998).  Perbedaan  mekanisme resistensi  bakteri  terhadap  logam  berat dapat dijadikan sebagai dasar pertimbangan dalam pendekatan yang dilakukan dalam upaya bioremediasi (Filali et al. 2000; Malik 2004). Tomova et al . (2015) melaporkan bahwa beberapa genus  bakteri  yang  potensial  untuk  diaplikasikan  dalam  upaya  bioremediasi  logam  berat antara lain Pseudomonas , Janthinobacterium sp., Rhodococcus sp., Arthrobacter sp., Sporosarcina sp., Bacillus sp. Dan Burkholderia .

## Jurnal Pembelajaran Dan Biologi Nukleus
Volume 6 (2): 112-119, September 2020

## KESIMPULAN
Isolat  bakteri  yang  berasal  dari  sedimen  laut  terdampak  aktivitas  tambang  timah memiliki resistensi terhadap perlakuan logam berat Cu pada berbagai konsentrasi. Resistensi bakteri sedimen terlihat lebih rendah pada konsentrasi yang lebih tinggi. Isolat B6, B8 dan A10 merupakan  isolat  yang  memperlihatkan  resistensi  tertinggi  terhadap  Cu  sampai  pada konsentrasi 100 ppm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  disampaikan  kepada  LPPM  Universitas  Bangka  Belitung  yang telah mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Beleneva,  IA,.  Kukhlevskya,  AD.,  Kharchenko  UV.,  Kovalchuk,  Y.  2011.  Resistance  to Copper Ions and Antibiotics in Marine Heterotrophic Bacteria in the Coastal Waters of Vietnam. Microbiol . 37(4): 284-290.
Chihomvu  P.,  Stegmann  P.,  Pillay  M.  2014.  Identification  and  Characterization  of  Heavy Metal  Resistant  Bacteria  from  the  Klip  River. Internatio  J  Biol  Biomol  Agri  Food Biotechnol Enginee . 8(11): 1178-1188.
Dupont,  CL.,  Grass  G,  Rensing  C.  2014.  Copper  Toxicity  and  the  Origin  of  Bacterial Resistance—New Insights and Applications. Metallomics. DOI: 10.1039/c1mt00107h.
Filali, BK, Taoufik J, Zeroual Y, Dzairi FZ, Talbi M, Blaghen M. 2000. Waste Water Bacterial Isolates Resistant To Heavy Metals and Antibiotics. Curr Microbiol . 41:151–156.
Hassen, A, Saidi N., Cherif M., Boudabous A. 1998. Resistance of Environmental Bacteria to Heavy Metal. Bioresour Technol . 64:7–15.
Hynninen, A., Touze T., Pitkanen L, Mengin-Lecreulx D, Virta M. 2009. An efflux transporter PbrA and a phospatase PbrB cooperate in a lead-resistance mechanism in bacteria. Mol. Microbiol . 74: 384-394.
Lo  Giudice,  A,  Casella  P,  Bruni  V,  Michaud  L.  2013.  Response  of  bacterial  isolates  from Antarctic  shallow  sediments  towards  heavy  metals,  antibiotics  and  polychlorinated biphenyls. Ecotoxicology. 22:240–250.
Malik, A. 2004. Metal Bioremediation Through Growing Cells. Environ Int . 30:261–278.
Marfirani,  R.,  Adiatma  I.  2012.  Pergeseran  Mata  Pencaharian  Nelayan  Tangkap  Menjadi Nelayan  Apung  di  Desa  Batu  Belubang. Prosiding  Seminar  Nasional  Pengelolaan Sumberdaya Alam dan Lingkungan. Semarang, 11 September 2012.
Martinez,  JL.  2009.  Environmental  Pollution  by  Antibiotics  And  by  Antibiotic  Resistance Determinants. Environ Pollut . 157: 2893-2902.
PT Timah Tbk. 2017. Laporan Tahunan. ID: Pangkal Pinang.

## Jurnal Pembelajaran Dan Biologi Nukleus
Volume 6 (2): 112-119, September 2020
Rensing,  C.,  Grass  G.  2003. Escherichia  coli Mechanisms  Of  Copper  Homeostasis  In  A Changing Environment, FEMS Microbiol. Rev . 27:197–213.
Santos,  HF.,  Carmo  FL,  Paes  JES,  Rosado  A,  Peixoto  RS.  2011.  Bioremediation  of Mangroves Impacted By Petroleum. Water, air, and Soil Pollution. 216: 329-350.
Tomova, I., Stoilova-Disheva M, Lazarkevich I., Vasileva-Tonkova E. 2015. Antimicrobial Activity And Resistance To Heavy Metals And Antibiotics Of Heterotrophic Bacteria Isolated  From  Sediment  And  Soil  Samples  Collected  From  Two  Antarctic Islands. Frontiers in Life Science , 8(4): 348-357. DOI: 10.1080/21553769.2015.1044130.
Zhang, XX., Zhang T, Fang HHP. 2009. Antibiotic Resistance Genes In Water Environment. Appl Microbiol Biotechnol . 82: 397–414.