e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume IV No 2 Februari 2016 ISSN: 2302-3600

## PENGGUNAAN TEPUNG BIOFLOK SEBAGAI AGEN IMUNOSTIMULAN  PADA SISTEM PERTAHANAN NON SPESIFIK IKAN LELE SANGKURIANG (Clarias gariepinus)
Melinda Oktafiani *† , Supono ‡ , Esti Harpeni ‡ , Berta Putri ‡

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  efektifitas  pemberian  tepung  bioflok sebagai agen imunostimulan dan mengetahui perlakuan terbaik pemberian tepung bioflok  dalam  menstimulasi  sistem  pertahanan  non  spesifik  dan  SR  ikan  lele sangkuriang. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Februari sampai dengan April 2015  di  Laboratorium  Perikanan,  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Lampung. Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 4 perlakuan (0% tepung bioflok + 100% pakan, 5% tepung bioflok + 95% pakan, 10% tepung bioflok +  90%  pakan,  dan  15%  tepung  bioflok  +  85%  pakan)  dengan  3  kali  ulangan. Penelitian berlangsung selama 35 hari dan diamati pada awal (H0), tengah (H18) dan akhir (H35) penelitian. Data hematologi (persentase hematokrit, total leukosit, diferensial leukosit, aktivitas fagositosis), SR dan relative percent survival (RPS) dianalisis  dengan  analisis  ragam  (Anova).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa pemberian  tepung  bioflok  berpengaruh  terhadap  peningkatan  sistem  pertahanan non  spesifik  namun  tidak  berpengaruh  terhadap  SR.  Perlakuan  terbaik imunostimulan tepung  bioflok  yang  mampu  menstimulasi  sistem  pertahanan  non spesifik  (total  leukosit,  diferensial  leukosit,  dan  aktivitas  fagositosis)  ikan  lele sangkuriang adalah 15% tepung bioflok + 85% pakan.
Kata kunci: lele sangkuriang, sistem pertahanan non spesifik, bioflok, hematologi, survival rate
Pendahuluan
Ikan lele sangkuriang ( C. gariepinus )
merupakan  salah  satu  komoditas  yang digemari  masyarakat  Indonesia  dan memiliki potensi besar untuk dikembangkan. Namun, penyakit menjadi  salah  satu  masalah  dalam budidaya lele karena dapat menghambat keberhasilan  budidaya,  yaitu  selain
* Mahasiswa Jurusan Budidaya Perairan Universitas Lampung
† email : melinda_oktafiani@yahoo.com
‡ Dosen Jurusan Budidaya Perairan Universitas Lampung Jl. Prof. Soemantri Brodjonegoro Gedung Meneng No. 1 Bandar Lampung 34145
menurunkan  kualitas  produk  juga menyebabkan kematian massal.
Salah satu alternatif penanggulangan penyakit ikan yang aman adalah dengan pemberian imunostimulan untuk meningkatkan  sistem  pertahanan  non spesifik ikan. Alternatif imunostimulan yang murah, mudah didapat dan mudah pengaplikasiannya, salah satunya
adalah  bioflok.  Avnimelech  (2009) menyatakan  bahwa  bioflok  mampu meningkatkan sistem imun pada tilapia, nila  dan  udang  vanamei.  Bioflok tersusun atas bakteri, mikroalga, zooplankton, dan kelompok mikroorganisme  lainnya  (Crab et  al ., 2009). Bakteri sebagai penyusun utama bioflok  mampu menghasilkan  senyawa polyhydroxybutyrate (PHB) yang berfungsi  sebagai  pembentuk  ikatan, serta  berperan  sebagai  imunostimulan (de  Schryver et  al. ,  2010).  Dinding  sel bakteri juga mengandung peptidoglikan dan  lipopolisakarida  (LPS)  dimana kedua senyawa tersebut mampu merangsang  fagositosis  sel hialin (Smith et  al. ,  2003)  sehingga  dapat digunakan sebagai imunostimulan. Berdasarkan uraian tersebut, bioflok mempunyai  potensi  sebagai  suplemen pakan  untuk  meningkatkan  sistem pertahanan non spesifik ikan. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis efektifitas  pemberian  tepung  bioflok sebagai agen imunostimulan dan mengetahui perlakuan terbaik pemberian tepung bioflok dalam menstimulasi  sistem  pertahanan  non spesifik dan SR ikan lele sangkuriang.

## Bahan dan Metode
Penelitian  dilakukan  pada  bulan
Februari  hingga  April  2015.  Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 4 perlakuan (A : 0% tepung bioflok + 100% pakan, B : 5%  tepung  bioflok  +  95%  pakan,  C  : 10% tepung bioflok + 90% pakan, dan
D  : 15% tepung bioflok + 85% pakan) dan  3  kali  ulangan.  Ikan  uji  yang digunakan adalah ikan lele sangkuriang berukuran  5-6  cm  dengan  berat  2-2,5 gram.    Ikan  diadaptasikan  selama  satu minggu  sebelum  diberi  perlakuan dengan  jumlah  ikan  yang  digunakan
sebanyak 10 ekor per wadah (30 liter). Selama  masa  adaptasi  dan  perlakuan, ikan  diberi  pakan  sebanyak  tiga  kali (pagi, siang, malam).

## Pembuatan Pakan Bioflok
Pada  tahap  pembuatan  bioflok digunakan  tiga  wadah,  masing-masing wadah  diisi  air  sebanyak  500  liter. Sebanyak 250 gram pakan (protein 28% yang  telah  difermentasi  selama  2  hari) ditambah  dengan  236  gram  molase dimasukkan  ke  dalam  masing-masing wadah  dan  diaerasi  menggunakan blower .  Biakan  bakteri Bacillus sp. sebanyak 50 ml kepadatan 10 6 CFU/ml dimasukkan ke dalam bak fiber tersebut.
Proses pembentukan bioflok
berlangsung  selama  15  hari.  Setelah bioflok  terbentuk,  bioflok  diendapkan selama 1-2 jam dan air dibuang. Bioflok dikeringanginkan  selama  kurang  lebih 24  jam.  Bioflok  yang  telah  kering kemudian dijadikan tepung dan dicampurkan  dengan  pakan  sesuai dengan perlakuan yang digunakan.
Parameter Penelitian
Parameter  penelitian  yang  diamati meliputi hematologi, survival rate (SR), relative  percent  survival (RPS),  dan kualitas  air.  Pengamatan  hematologi dilakukan  untuk  mengetahui  tingkat imunitas ikan uji. Pengamatan hematologi  ikan  dilakukan  pada  awal (H0), tengah (H18) dan akhir penelitian (H35)  sebanyak  3  ekor  atau  30%  dari total  ikan  per  wadah.  Parameter hematologi  yang  diamati  meliputi persentase  hematokrit,  total  leukosit, diferensial  leukosit  (monosit,  limfosit dan neutrofil), dan aktivitas fagositosis atau phagocytic  activity (PA).  Kualitas air  yang  diamati  selama  penelitian meliputi  suhu,  pH  dan  DO  yang dilakukan  setiap  7  hari  sekali  dan  uji amoniak  pada  awal  (H0)  dan  akhir (H35) pemeliharaan.
Analisis Data Data  hematologi,  SR,  dan  RPS dianalisis dengan analisis varian (Anova)  dengan  selang  kepercayaan 95%  sementara  data  kualitas  air dianalisis secara deskriptif.

## Hasil dan Pembahasan Pengamatan Hematologi
Hasil  pengukuran  kadar  hematokrit pada  berbagai  perlakuan  pada  awal penelitian (H0) menunjukkan teradinya defisiensi eritrosit karena nilai hematokrit  di  bawah  kisaran  normal, yaitu  di  bawah  30%.  Nilai  hematokrit kembali  normal  pada  pengamatan  H18 dan H35 yaitu 36,81% – 44,47%. Hal ini sesuai  dengan  pernyataan  Angka et  al . (1985)  bahwa  batas  normal  nilai hematokrit  lele  yaitu  sebesar  30,8  – 45,5%.  Persentase  kadar  hematokrit ikan  uji  yang  diberi  perlakuan  berada pada  kisaran  normal  dan  tidak  jauh berbeda  dengan  ikan  kontrol  berarti pemberian imunostimulan tepung bioflok  tidak  berdampak  buruk  bagi tubuh  ikan.    Hal  ini  sesuai  dengan pendapat Kwang (1996) yang menyatakan bahwa pemberian imunostimulan tidak menimbulkan efek samping  bagi  ikan.  Hasil  pengamatan menunjukkan bahwa persentase hematokrit  setelah  diberi  perlakuan berada  pada  kisaran  normal  dan mengalami perubahan serta memperlihatkan  bahwa  penambahan imunostimulan  tepung  bioflok  pada pakan  berpengaruh  positif  terhadap peningkatan  nilai  hematokrit.  Kadar hematokrit pada masing-masing perlakuan dapat dilihat pada Gambar 1.
Peningkatan  persentase  hematokrit ini  diiringi  dengan  peningkatan  total leukosit. Sel leukosit merupakan bagian dari sistem pertahan tubuh yang bersifat non  spesifik,  oleh  sebab  itu  total
lelukosit  menggambarkan  kemampuan pertahanan  tubuh  ikan.  Nilai  total leukosit selama penelitian berada dalam batas  normal  yaitu  59.322  –  122.050. Hal ini sesuai dengan pernyataan Lestari et  al .  (2012)  dan  Noercholis et  al .
(2013) yang menyatakan bahwa jumlah total  leukosit  normal  berkisar  antara 20.000  –  150.000  sel/mm 3 .  Pada  akhir perlakuan didapatkan hasil bahwa total leukosit tertinggi terdapat pada perlakuan  15%  tepung  bioflok  +  85% pakan (Gambar 2). Hal ini menunjukkan bahwa penambahan tepung bioflok pada pakan  mampu  meningkatkan  total leukosit ikan lele sangkuriang sehingga meningkatkan imunitas ikan. Perlakuan terbaik  untuk  meningkatkan  total leukosit  adalah  perlakuan  15%  tepung bioflok + 85% pakan.
Gambar  1.  Persentase  hematokrit  ikan lele sangkuriang pada berbagai perlakuan
Bila  terjadi  infeksi,  sel-sel  leukosit tersebut  akan  bergerak  aktif  menuju tempat  terjadinya  infeksi  kemudian memfagosit benda asing yang masuk ke dalam  tubuh.  Sel-sel  fagosit  yang mampu meningggalkan pembuluh darah  antara  lain  monosit  (makrofag monoklier),  limfosit  dan  trombosit, serta neutrofil (leukosit berinti banyak)
(Esteban et al. , 2001). Kisaran persentase  monosit  yang  didapatkan dari hasil pengamatan adalah 16 – 23% (Gambar  3).  Jumlah  tersebut  masih berada  dalam  kisaran  normal  monosit pada ikan yaitu berkisar 3 – 30% (Iwana dan  Nakanishi,  1966).  Pengamatan persentase limfosit terbaik pada hari ke- 18 terdapat pada perlakuan 15% tepung bioflok  +  85%  pakan  sebesar  64%  dan pada  hari-35  terdapat  pada  perlakuan 5% tepung bioflok + 95% pakan sebesar 64%.  Berdasarkan  hasil  pengamatan, semua  persentase  limfosit  berada  di bawah  kisaran  normal  (Gambar  4). Kisaran normal persentase limfosit pada ikan  teleostei  yaitu  sebesar  71,12  – 81,88% (Affandi dan Tang, 2002).
Gambar  2. Total  leukosit  ikan  lele sangkuriang pada berbagai perlakuan Gambar 3. Persentase monosit ikan lele sangkuriang  pada  berbagai perlakuan. Kisaran  persentase  neutrofil  pada  H0, H18  dan  H35  secara  berturut  turut adalah  14%,  17  –  20%  dan  17  –  23% (Gambar  5).  Peningkatan  persentase neutrofil  diduga  karena  stimulasi  dari tepung  bioflok  yang  berfungsi  sebagai agen  imunostimulan.  Hal  ini  sesuai dengan  pendapat  Fujaya  (2002)  yang menyatakan  bahwa  sel  neutrofil  keluar saat  terjadinya  infeksi  karena  adanya pengaruh rangsangan kimiawi eksternal, salah satunya oleh imunostimulan. Hasil uji Anova menunjukkan bahwa persentase monosit,  limfosit,  dan  neutrofil  pada ikan yang berbeda nyata sehingga dapat dikatakan  pemberian  tepung  bioflok berpengaruh  nyata  terhadap  persentase monosit, limfosit, dan neutrofil ikan lele sangkuriang.
Gambar 4. Persentase limfosit ikan lele sangkuriang  pada  berbagai perlakuan
Gambar 5. Persentase neutrofil ikan lele sangkuriang  pada  berbagai perlakuan Salah satu cara untuk melihat respon imun  non  spesifik  adalah  dengan pengamatan aktivitas fagositosis.
Aktivitas fagositosis terjadi jika terdapat benda asing. Untuk menghancurkan  benda  asing  tersebut, maka  sel  leukosit  akan  memperluas membran plasmanya untuk membungkus  membran  di  sekeliling benda  asing  hingga  terbungkus.  Sel leukosit  yang  berfagosit  memiliki  tiga tahap  yaitu  pelekatan,  fagosit,  dan pencernaan. Peningkatan sistem pertahanan  tubuh  dapat  dilihat  dari
meningkatnya total leukosit. Peningkatan total leukosit akan meningkatkan persentase aktivitas fagositosis.  Peningkatan  persentase fagositosis  ini  menunjukkan  bahwa pemberian imunostimulan tepung bioflok  mampu  meningkatkan  sistem pertahanan  non  spesifik  ikan  lele sangkuriang.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  Johnny et  al. (2001)  bahwa imunostimulan  mampu  meningkatkan respon  imun  non  spesifik  ikan  dengan cara meningkatkan aktifitas fagositas.
Gambar  6.  Persentase  fagositosis  ikan
lele sangkuriang pada berbagai perlakuan.
Peningkatan  sistem  pertahanan  non spesifik  ikan  uji  dikarenakan  tepung bioflok mengandung polyhydroxybutyrate (PHB), lipopolisakarida  dan  peptidoglikan. Polyhydroxybutirate pada  bioflok  ini mampu  menghambat  serangan  bakteri Vibrio  alginolyticus sehingga  semakin tinggi dosis perlakuan maka persentase aktivitas fagositosis semakin tinggi. Hal ini sesuai dengan penelitian Boon et al. (2010)  yang  menyatakan  bahwa  PHB mampu  menghambat  patogen  di  usus dan  berperan  sebagai  antimikroba  bagi Vibrio , E  coli ,  dan Salmonella .
Penelitian  Suguna et  al. (2014)  bahwa PHB  yang  diekstrak  dari  bakteri
Bacillus thurigiensis mampu menstimulasi  sistem  imun  non  spesifik maupun  sistem  imun  spesifik  pada Oreochrimis  mossambicus .  Perlakuan terbaik  dalam  peningkatan  aktivitas fagositosis terdapat pada perlakuan 15% tepung bioflok + 85% pakan.

## Survival  Rate  (SR)  dan  Relatives Percent Survival (RPS)
Penambahan tepung bioflok pada pakan setelah  dianalisis  dengan  Anova  tidak berpengaruh  nyata  terhadap  nilai  SR
dan RPS ikan lele sangkuriang, namun secara  deskriptif  penambahan  tepung bioflok pada pakan mampu meningkatkan  nilai  SR  dan  RPS. Tepung  bioflok  mampu  meningkatkan SR dan RPS karena memiliki kandungan PHB. Hal ini sesuai dengan penelitian  Laranja et  al. (2014)  bahwa PHB  mampu  meningkatkan  SR  dan pertumbuhan Panaeus  monodon pada fase  postlarva.  Nilai  SR  dan  RPS  pada masing-masing  perlakuan  dapat  dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Nilai SR dan RPS
Perlakuan SR (%) Kematian Tiap Ulangan Rerata Kematian (%) RPS (%) U1 U2 U2 A 73±5,77 2/10 3/10 3/10 27 a - B 77±11,55 3/10 3/10 1/10 23 a 15 C 77±11,55 3/10 3/10 1/10 23 a 15 D 80±10,00 2/10 1/10 3/10 20 a 26
Keterangan : a huruf yang sama menunjukkan hasil tidak berbeda nyata

## Kualitas Air Penelitian
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa nilai  pH  dan  DO  masih  berada  pada kisaran optimum kebutuhan hidup ikan lele,  nilai  pH  dan  DO  secara  berturut- turut yaitu 7,72  – 7,92 dan 4,69 – 8,05 mg/l.  Untuk  nilai  amoniak  pada  awal penelitian  (H0)  berada  di  bawah  batas baku  mutu  nilai  amoniak  yaitu  yaitu
0,004  mg/l,  namun  di  akhir  penelitian (H35)  nilai  amoniak  melebihi  batas optimum  yaitu  0,099  mg/l.  Meskipun nilai  amoniak  berada  di  atas  kisaran normal,  namun    ikan  masih  bergerak aktif dan tumbuh dengan baik,  Tabel 2 menunjukkan  parameter  kualitas  air (suhu,  pH,  DO,  dan  amoniak)  selama penelitian.

## Tabel 2. Kualitas Air Pemeliharaan Ikan Lele Sangkuriang
Variabel Waktu Pengamatan Perlakuan Standar Optimum A B C D Suhu (°C) Pagi 27-28 27-28 27-28 27-28 25 – 30 (BSN, 2000) Siang 29-31 29-31 29-31 29-31 Sore 29-31 29-31 29-31 29-31 pH Pagi 7,86 7,81 7,77 7,72 6,5 – 8,6 (BSN, 2000) Siang 7,79 7,92 7,85 7,77 Sore 7,88 7,80 7,77 7,73 DO (mg/l) Pagi 6,05 5,55 6,40 5,72 >4 (BSN, 2002) Siang 7,80 8,05 7,83 7,96 Sore 5,21 4,69 5,29 5,18 Amoniak (mg/l) Awal 0,004 0,006 0,004 0,009 <0,01 (BSN, 2002) Akhir 0,094    0,099     0,066   0,083

## Kesimpulan
Penggunaan  tepung  bioflok  sebagai imunostimulan  berpengaruh  terhadap peningkatan  sistem  pertahanan  non spesifik,  namun  tidak  berpengaruh terhadap SR. Perlakuan terbaik imunostimulan  tepung  bioflok  yang mampu menstimulasi sistem pertahanan non  spesifik  (total  leukosit,  diferensial leukosit, dan aktivitas fagositosis) ikan lele  sangkuriang  adalah  15%  tepung bioflok + 85% pakan komersial.

## Daftar Pustaka
Affandi,  R.  dan  U.M.  Tang.  2002. Fisiologi hewan Air . Uni Press. Riau.
Anderson, D.P. dan A.K. Siwicki. 1993. Basic  Hematology  and  Serology  for
Fish Health Programs . Asian Fisheries Society. 17 hal.
Angka  S.L.,  G.T.  Wongkar,  and Karwani.  1985.  Blood  Picture  and Bacteria  Isolated  from  Ulcered  and Crooked  Black  ( Clarias  batrachus ).
Symposium  On  Pract.  Measure  for
Preventing  and  Controlling  Fish
Disease. BIOTROP. 17 hal.
Avnimelech, Y. 2009. Bioflokk Technology  –  A  Practical  Guide book . The World Aquaculture
Society.  Baton  Rouge,  Lousiana, United States. 182 hal. Boon, N., T. Defoirdt, W. de Windt, T. Van  De  Wiele  dan  W.  Verstraete. 2010. Hydroxybutyrate and PolyHydroxybutyrate as Components of Animal Feed or Feed Additives. Patent Application Publication . April : 1-4.
Badan  Standarisasi  Nasional.  2000.
Produksi  Benih  Ikan  Lele  Dumbo (Clarias  gariepinus  x  C.fuscus)
Kelas Benih Sebar . SNI : 01- 6484.4
– 2000. Badan  Standarisasi  Nasional.  2002. Ikan Lele Dumbo (Clarias gariepinus)  Kelas  Pembesaran  di Kolam . SNI 01- 6484.5-2002.
Crab,  R.,  M.  Kochva,  W.  Verstraete, dan Y. Avnimelech. 2009. Bio-ﬂocs Technology  Application  in  Over- wintering  of  Tilapia. Aquaculture Engineering . 40 : 105 – 112.
De  Schryver,  P.,  A.K.  Sinha,  P.S. Kunwar,  K. Baruah,  dan  W. Verstraete. 2010. Poly-Beta- Hydroxybutyrate  (PHB)  Increases Growth  Performance  and  Intestinal Bacterial  Range-Weighted  Richness in  Juvenile  European  Sea  Bass, Dicentrarchus labrax . Applied Microbiology and Biotechnology . 86
: 1535 – 1541.
Esteban,  M.A.,  A.  Cuesta,  J.  Oetuna, dan J. Meseguer. 2001. Immunomodulatory Effects of Dietary Intake of Chitin on Gilthead Seabream ( Sparus auratus L) Innate Immun System. J. Fish and Shellfish
Immunology . Vol 11 : 303 – 313.
Fujaya,  Y.  2004.  Fisiologi  Ikan:  Dasar Pengembangan Teknologi Perikanan.  Penerbit  Rineka  Cipta,
Jakarta. Hal 95-109.
Johnny  F,  I.  Kuesharyani,  D.  Roza, Tridjoko, N.A. Giri, dan K. Suwirya. 2001.  Respon  Ikan  Kerapu  Bebek, Cromileptes altivelis terhadap Imunostimulan Peptidoglikan Melalui Pakan Pelet. Jurnal penelitian Perikanan Indonesia . Vol.
7 (4): 52-56
Iwana, G. dan T. Nakanishi. 1996. The Fish  immune  System,  Organism, Pathogen, and Environment . Academic Press. San Diago, California, USA. Kwang,  L.C.  1996.  Immune  Enhancer in  The  Control  of  Diseae  in
Aquaculture. Encap Technology Pte Ltd, Singapore . 99-128.
Laranja, J.L.Q., G.L. Ludevese-Pascual,
E.C. Amar, P. Sorgeloos, P. Bossier, dan  P.  De  Schryver.  2014.  Poly-b- hydroxybutyrate (PHB) Accumulating Bacillus spp. Improve The Survival, Growth and Robustness  of Penaeus  monodon (Fabricius, 1798) Postlarvae. Veterinary Microbiology . 173 : 310 – 317.
Lestari, E.P.,  Feliatra, dan D. Yoswati. 2012. Uji  Efektivitas  Bakteri  Asam Laktat  dalam  Mengatasi  Vibrio alginolyticus  pada  Ikan  Kerapu Macan  (Epinephelus  fuscoguttatus) . Fakultas Pertanian dan Ilmu Kelautan Universitas Riau. Pekanbaru. Noercholis,  A.,  M.A.  Muslim,  dan Maftuch.  2013.  Ekstraksi  Fitur Roundness untuk Menghitung Jumlah  Leukosit  dalam  Citra  Sel Darah Ikan. Jurnal EECCIS . 7 : 35 –
40.
Purnomo, P.D. 2012. Pengaruh Penambahan Karbohidrat pada Media Pemeliharaan terhadap Produksi  budidaya  Intensif  Nila ( Orechromis niloticus ). Skripsi . Universitas Diponegoro. Smith, V.J., J.H. Brown, dan C. Hauton. 2003. Immunostimulation in Crustaceans:  Does  it  Really  Protect Against  Infection. Fish  &  Shellfish Immunology . 15 : 71 – 90.
Suguna, P., C. Binuramesh, P. Abirami,
V.  Saranya,  K.  Poornima,  V. Rajeswari,  dan  R.  Shenbagarathai.
2014. Immunostimulation by poly- β
hydroxybutyrate – hydroxyvalerate (PHB – HV) from Bacillus thuringiensis in Oreochromis mossambicus . Fish  and  Shellfish Immunology . Vol 36 (1) : 90 – 97.