117
Isolasi Dan Karakterisasi Asam Humat .....

## ISOLASI DAN KARAKTERISASI ASAM HUMAT DARI TANAH GAMBUT

## Atik Rahmawati
Prodi Tadris Kimia Fakultas Tarbiyah IAIN Walisongo

## Abstrak
Telah dilakukan penelitian tentang isolasi dan kara- kterisasi asam humat hasil isolasi tanah gambut yang be- rasal dari Desa Sambutan, Kecamatan Samarinda Ilir, Sa- marinda, Kalimantan Timur.
Isolasi asam humat dari tanah gambut menggunakan metode ekstraksi alkali,  pemurnian dan penentuan kand- ungan gugus fungsional asam humat secara titrasi poten- siometri.
Hasil penelitian menunjukkan gugus fungsional utama asam humat hasil isolasi tanah gambut adalah gu- gus –COOH dan gugus –OH. Secara kuantitatif kandungan gugus fungsional tersebut masing-masing sebesar 426,2 cmol/kg (gugus –COOH), 289,6 cmol/kg (gugus –OH fenolat) dan 37,0 cmol/kg (gugus –OH alkoholat).
Kata kunci: Asam humat, Tanah Gambut, Isolasi, Karak- terisasi

## PENDAHULUAN
Senyawa humat merupakan senyawa organik alami yang

## Atik Rahmawati
terdapat pada berbagai kompartment lingkungan, baik terestrial maupun perairan. Senyawa humat secara tradisional dide fi nisi- kan berdasarkan kelarutannya, yaitu : (i) asam fulvat, merupak- an bahan humat yang larut dalam air pada semua pH, (ii) asam humat, merupakan bahan humat yang tidak larut pada pH asam (pH<2) tetapi larut pada pH yang lebih tinggi, (iii) humin, meru- pakan bahan humat yang tidak larut dalam air pada semua nilai pH.
Senyawa humat dapat terbentuk dari dekomposisi jarin- gan tanaman dan hewan dan dapat ditemukan di lingkungan perairan, tanah dan sedimen. Pembentukan senyawa humat di- anggap sebagai proses biologis, namun demikian dengan sifat heterogenitasnya yang tinggi menunjukkan bahwa yang terlibat pada pembentukan senyawa humat tidak hanya enzim-enzim, tetapi juga keberagaman katalis kimia (Huang dkk., 1982 dalam Sanchez dkk., 2000).
Senyawa humat memegang peranan penting dalam mem- pengaruhi kesuburan tanah dan spesiasi kimia tanah dan perai- ran. Kandungan senyawa humat dalam tanah bervariasi, mulai dari 0 sampai 10%. Pada air permukaan, kandungan humat din- yatakan sebagai karbon organik terlarut ( dissolved organic carbon : DOC), konsentrasinya bervariasi dari 0,1 hingga 50 mg/L. Pada permukaan air laut kandungan karbon organik terlarut berva- riasi dari 0,5 hingga 1,2 mg/L dan pada air yang lebih dalam ( groundwater ) bervariasi dari 0,1 hingga 10 mg/L (Choppin dan Allard, 1985 dalam Gaffney dkk., 1996).
Sejumlah metode isolasi/ekstraksi senyawa humat pada berbagai jenis sampel lingkungan, baik lingkungan tanah, per- airan maupun sedimen telah dilaporkan oleh sejumlah peneliti. Stevenson (1982) dalam Aiken dkk. (1985) menyatakan bahwa ada beberapa kriteria metode ekstraksi senyawa humat dari ta- nah secara ideal yaitu : (1) metode yang digunakan untuk isolasi tidak menimbulkan perubahan bahan-bahan yang diekstraksi, (2) senyawa-senyawa humat yang terekstrak bebas dari kontam- inan anorganik seperti lempung dan kation-kation polivalen, (3) proses ekstraksi berlangsung sempurna, dan dapat meng-
119
Isolasi Dan Karakterisasi Asam Humat .....
gambarkan fraksi-fraksi dari seluruh rentang berat molekul, (4) metode bersifat universal, dapat diaplikasikan pada semua jenis tanah.
Meskipun banyak penelitian yang telah dilakukan tentang isolasi asam humat dari tanah gambut, namun penelitian ten- tang hal ini masih memerlukan pengamatan yang lebih jauh mengingat asam humat merupakan bahan organik alami yang sangat heterogen dan kompleks.
Berdasarkan uraian di atas, maka dalam penelitian ini permasalahan pokok yang dikemukakan yaitu : (1) bagaimana isolasi asam humat dari tanah gambut, (2) bagaimana komposisi gugus fungsional utama asam humat yang diekstrak dari tanah gambut yang berasal dari Desa Sambutan, Kecamatan Samarin- da Ilir, Kabupaten Samarinda.

## LANDASAN TEORI

## Pengertian Senyawa Humat
Bahan organik tanah dan perairan sering kali dibagi atas bahan terhumi fi kasi dan tak terhumi fi kasi. Yang termasuk ba- han-bahan tak terhumi fi kasi adalah senyawa-senyawa dalam tanaman seperti karbohidrat, asam amino, protein, lipid, asam nukleat, dan lignin. Sedangkan fraksi terhumi fi kasi yang dike- nal sebagai humus atau disebut sebagai senyawa humat, diang- gap sebagai hasil akhir dekomposisi bahan tanaman dalam ta- nah (Tan, 1998).
Istilah senyawa humat pertama kali dikemukakan oleh Ber- zelius pada tahun 1830. Senyawa humat merupakan senyawa makromolekul dengan berat molekul tinggi sebagai hasil per- uraian bahan organik tanaman dan berperan penting dalam mempengaruhi sifat-sifat tanah dan spesies kimia dalam tanah dan perairan.
Senyawa humat dide fi nisikan oleh Aiken dkk. (1985) seb- agai kategori umum dari bahan organik tanah heterogen yang terjadi secara alami. Secara umum, senyawa humat dikarakteri- sasikan berwarna kuning hingga hitam dengan berat molekul

## Atik Rahmawati
besar dan bersifat refraktori. Struktur kimianya tidak dapat digambarkan sebagai satu bentuk tunggal karena merupakan campuran yang kompleks dari polielektrolit fenol dan karbo- hidrat yang bervariasi dari satu molekul ke molekul yang lain (Hayes dan Himes, 1986).
Senyawa humat memiliki berat molekul dan ukuran dalam rentang yang luas, mulai dari beberapa ratus sampai beberapa ratus ribu unit massa atom. Secara umum, asam fulvat memi- liki berat molekul lebih rendah dibanding asam humat (Choppin dan Allard, 1985; Stevenson, 1982 dalam Gaffney dkk., 1996). Se- nyawa humat terdiri atas kerangka karbon dengan karakter aro- matis yang tinggi dan memiliki gugus-gugus fungsional yang sebagian besar mengandung atom oksigen (Manahan, 2000). Karakteristik terpenting dari senyawa humat adalah kualitas dan kuantitas gugus fungsionalnya, ukuran molekulnya serta aromatisnya, karena parameter-parameter ini akan menentukan sifat-sifat kimia dan biologi senyawa humat.

## Struktur Senyawa Humat
Model struktur senyawa humat seperti monomer asam humat telah diusulkan dengan pendekatan integrasi berbagai macam metode analisis. Model senyawa humat sangat pent- ing mengingat sebagian besar bahan organik tanah (70-80%) merupakan senyawa humat dan semua aspek kimia (kapasitas adsorpsi besar, pengompleks logam yang sangat baik, medium bagi mikrobia, dapat menyediakan nutrien) dapat dijelaskan berdasarkan struktur asam humat sebagai senyawa humat yang utama di lingkungan (Ghosh dan Schnitzer, 1980).
Para ahli berpendapat bahwa warna, reaktivitas, dan sifat fi sika-kimia senyawa humat ditentukan oleh strukturnya. Meskipun struktur yang tepat belum dapat ditentukan, namun struktur senyawa humat telah diusulkan dengan mendasarkan pada model atau struktur rata-rata senyawa humat yang telah ada, sehingga dapat digunakan untuk studi lebih lanjut. Model struktur senyawa humat yang diusulkan mengacu pada hasil penelitian mengenai komposisi unsur-unsur penyusun, gugus-
121
Isolasi Dan Karakterisasi Asam Humat .....
gugus fungsional, produk degradasi, data spektroskopi, dan si- fat fi sika-kimia senyawa humat.
Sejumlah struktur senyawa humat yang masih meru- pakan struktur hipotetik telah diajukan oleh beberapa peneliti, seperti Fuch, Dragunov, Flaig dan Stevenson  (Stevenson, 1994).
Fuch, seorang ilmuwan Jerman, telah mengusulkan struktur asam humat yang ditunjukkan pada Gambar 2.1. Struk- tur tersebut merupakan hasil deduksi berbagai penelitian ten- tang struktur asam humat yang dihasilkan dari batubara, yang terdiri atas sistem cincin aromatik yang mengandung gugus -COOH dan –OH (Stevenson, 1994).
O COOH HO HO HO O COOH O COOH COOH HO OH H 3 CO COOH OH Gambar 2.1 Struktur hipotetik asam humat menurut Fuch
(Stevenson, 1994)
Berdasarkan gugus fungsional reaktif hasil degradasi asam humat, maka struktur inti asam humat terdiri atas cincin aromatik, di-, atau trihidroksifenol yang dijembatani oleh –O-, -(CH 2 )-, -NH- dan :N-. Selain itu, gugus-gugus fungsional utama yang terdapat pada asam humat adalah gugus –COOH, -OH dan kuinon. Pada keadaan alami, molekul-molekul tersebut mengandung residu protein dan karbohidrat yang sebagian be- sar dihubungkan oleh ikatan kovalen pada struktur inti.
Struktur pertama yang menggunakan konsep tersebut

## Atik Rahmawati
dikemukakan oleh Dragunov (Konokova, 1966 dalam Stevenson, 1994) seperti terlihat pada Gambar 2.2. Pada struktur ini dapat dilihat cincin aromatis di- dan trihidroksilbenzena (1), nitrogen dalam bentuk siklis (2), nitrogen dalam rantai periperal (3) dan residu karbohidrat (4).
Gambar 2.2 Struktur hipotetik asam humat menurut Dragunov memperlihatkan : 1) cincin aromatik, 2) nitrogen dalam bentuk siklis, 3) nitrogen dalam rantai periperal dan 4) residu karbohidrat.
Struktur lain dikemukakan oleh Flaig, dimana asam hu- mat mengandung gugus –OH fenolat dalam jumlah cukup me- limpah, tetapi gugus karboksilatnya relatif sedikit (Stevenson, 1994), ditunjukkan pada Gambar 2.3.
C O OH OH OH (CH2)3 O O O O OCH3 COOH COOH C O Ar N H O O Ar O H OH OH O OH O HO
Gambar 2.3 Struktur hipotetik asam humat menurut Flaig
(Stevenson, 1994)
Struktur asam humat yang saat ini dianggap memenuhi konsep-konsep yang telah ada dikemukakan oleh Stevenson (1994). Pada struktur hipotetik ini, asam humat mengandung gugus –OH fenolat, -COOH yang terikat pada cincin aromatik
C H N C H C H 2 O O H 2 C O O H C 6 H 11 O 5 C H 3 C H N C 8 H 16 O 3 N H C N C H C H 2 HO O H 2 C O O H O O C H 2 C O O H O C H 3 O O H O (1) (1)
(1) (1) (1) (1)
(2) (2) (3) (4) (4) O H 2 C O
123
Isolasi Dan Karakterisasi Asam Humat .....
dan kuinon yang dijembatani oleh nitrogen dan oksigen (Gam- bar 2.4).
O COOH COOH HO OH OH HO O N RCH COOH O O O O H NH RCH CH CH-CH 2 O C=O C=O NH (HC-OH) 4 HC=O N O O OH O O O H OH COOH COOH gugus COOH aromatis (terisolasi) gugus OH fenolat (bebas) oksigen sebagai jembatan (peptida) (gula) gugus kuinon N siklik gugus COOH yang saling berdampingan gugus OH fenolat (ikatan hidrogen) Gambar 2.4 Struktur hipotetik asam humat menurut
Stevenson

## Ekstraksi dan Isolasi Senyawa-senyawa Humat
Isolasi senyawa-senyawa humat dari tanah pertama kali di- lakukan oleh Achard (1786) yang mengekstraksi tanah gambut dengan alkali dan diperoleh endapan amorf pada saat pengasa- man (Aiken dkk., 1985). Bahan yang larut dalam alkali dan tidak larut dalam asam ini selanjutnya dikenal sebagai asam humat.
Sejumlah metode isolasi/ekstraksi senyawa humat pada berbagai jenis sampel lingkungan, baik lingkungan tanah, per- airan maupun sedimen telah dilaporkan oleh sejumlah peneliti. Stevenson (1982) dalam Aiken dkk. (1985) menyatakan bahwa ada beberapa kriteria metode ekstraksi senyawa humat dari ta- nah secara ideal yaitu : (1) metode yang digunakan untuk isolasi tidak menimbulkan perubahan bahan-bahan yang diekstraksi, (2) senyawa-senyawa humat yang terekstrak bebas dari kontam- inan anorganik seperti lempung dan kation-kation polivalen, (3) proses ekstraksi berlangsung sempurna, dan dapat meng- gambarkan fraksi-fraksi dari seluruh rentang berat molekul, (4) metode bersifat universal, dapat diaplikasikan pada semua jenis tanah.
Senyawa humat tanah yang diekstraksi menggunakan laru-

## Atik Rahmawati
tan natrium hidroksida menghasilkan produk yang lebih besar (80%) dibandingkan hasil ekstraksi menggunakan larutan garam netral natrium pirofosfat yang hasil ekstraksinya hanya berkisar 30% (Stevenson, 1994). Asam humat dan fulvat larut dalam na- trium hidroksida, sedangkan humin dan senyawa non-humat lainnya tidak larut. Untuk memperoleh asam humat dari laru- tan natrium hidroksida perlu diasamkan sampai pH ± 2 dengan menggunakan asam klorida. Asam humat mengendap dan asam fulvat tertinggal dalam larutan bersama molekul-molekul kecil lainnya seperti gula sederhana dan asam-asam amino (Gaffney dkk., 1996).
Setelah proses ekstraksi senyawa humat, proses selan- jutnya adalah pemurnian senyawa humat tersebut dengan cara memisahkannya dari senyawa-senyawa non-humat. Pemurnian asam humat dilakukan dengan cara melarutkan asam humat ha- sil isolasi ke dalam larutan campuran 0,1 N HCl dan 0,3 N HF. Kedua pereaksi tersebut berfungsi untuk memisahkan kontami- nan berupa bahan-bahan anorganik dari asam humat terutama silika dan logam.

## METODE PENELITIAN

## Isolasi Asam Humat
Dua ribu gram tanah gambut diekstraksi dengan 20.000 mL NaOH 0,1 N (perbandingan tanah dengan pelarut 1 : 10), digojog dengan shaker selama 24 jam di bawah kondisi atmosfer nitrogen. Supernatan yang bersifat alkalis dipisahkan dari res- idunya dengan cara disentrifugasi, kemudian diasamkan den- gan larutan HCl 6 N hingga pH 1 dan didiamkan selama 16 jam pada temperatur kamar, sehingga terbentuk dua lapisan yaitu lapisan atas berupa supernatan (asam fulvat fraksi I) dan lapisan bawah berupa endapan (asam humat). Supernatan asam fulvat dan asam humat terpresipitasi dipisahkan dengan cara disen- trifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 10.000 rpm. Padatan yang diperoleh merupakan asam humat kotor (crude humic acids) sehingga perlu pemurnian lebih lanjut.
125
Isolasi Dan Karakterisasi Asam Humat .....

## Pemurnian Asam Humat
Asam humat kotor (crude humic acids) yang diperoleh, di- larutkan ke dalam 2500 mL larutan KOH 0,1 N di bawah kon- disi atmosfer nitrogen. Ke dalam larutan ditambahkan sejumlah tertentu garam KCl hingga konsentrasi ion K + dalam larutan te- pat 0,3 M dan kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 12.000 rpm selama 6 menit, sehingga terbentuk dua lapisan. Lapisan atas berupa supernatan (asam humat dan asam fulvat) dipisah- kan dari pengotor padatan yang berada pada lapisan bawah dengan cara didekantir. Selanjutnya supernatan yang meru- pakan campuran asam humat dan asam fulvat diasamkan den- gan larutan HCl 6 N hingga pH 1 dan didiamkan selama 16 jam, sehingga dalam sistem terbentuk dua lapisan yaitu lapisan atas merupakan supernatan asam fulvat fraksi II dan lapisan bawah merupakan padatan asam humat. Supernatan dan endapan dip- isahkan dengan cara disentrifugasi dengan kecepatan 12.000 rpm selama 6 menit. Padatan asam humat yang diperoleh dima- sukkan ke dalam wadah plastik yang berisi larutan campuran 0,1N HCl/ 0,3 N HF dan didiamkan selama 7 hari pada temper- atur kamar. Endapan dan supernatan dipisahkan dengan cara disentrifugasi dengan kecepatan 12.000 rpm selama 6 menit. Di- ambil endapannya yang merupakan asam humat murni. Proses pemurnian tersebut dilakukan sebanyak 2 kali. Dalam proses pemurnian tersebut banyak menggunakan HCl sehingga san- gat mungkin asam humat banyak mengandung ion Cl - . Untuk menghilangkan ion Cl - dilakukan pembilasan dengan akuades secara berulang. Uji Cl - dilakukan dengan cara menambahkan larutan AgNO 3 ke dalam air bilasan asam humat. Jika terbentuk endapan putih AgCl, berarti di dalam asam humat tersebut ma- sih mengandung ion Cl - sehingga perlu pembilasan lebih lanjut. Pembilasan dihentikan jika dalam air bilasan asam humat tidak terbentuk endapan putih dengan penambahan larutan AgNO 3 . Setelah selesai proses pemurnian, asam humat dikeringkan den- gan freeze dryer . Asam humat yang diperoleh berbentuk serbuk coklat kehitaman.

## Atik Rahmawati

## Penetapan Kadar Abu Asam Humat
Untuk mengetahui kemurnian asam humat hasil isolasi, asam humat kotor dan asam humat hasil pemurnian yang di- peroleh ditetapkan kadar abunya. Ditimbang masing-masing se- banyak 100 mg asam humat tanpa pemurnian, asam humat satu kali pemurnian, asam humat dua kali pemurnian, masing-mas- ing dimasukkan ke dalam cawan porselin, kemudian dipanas- kan dalam tungku (furnace) hingga temperatur 750 o C. Sesudah dipanaskan, ditimbang dan dicatat beratnya. Pengukuran kadar abu masing-masing sampel dilakukan tiga kali pengulangan.

## Karakterisasi Kandungan Gugus Fungsional Asam Humat
Kandungan gugus fungsional asam humat yang ditentukan secara kuantitatif dalam penelitian ini adalah gugus karboksilat (-COOH), -OH fenolat dan –OH alkoholat. Kandungan gugus – OH fenolat ditentukan sebagai selisih antara keasaman total dan kandungan gugus –COOH. Selanjutnya kandungan –OH alko- holat ditentukan sebagai selisih antara kandungan gugus –OH total dan gugus –OH fenolat (Stevenson, 1994).

## Penetapan Keasaman Total Asam Humat
Ditimbang sebanyak 100 mg asam humat murni dan di- masukkan ke dalam labu takar 100 mL, lalu ditambahkan 20 mL larutan jenuh Ba(OH) 2 sambil dialiri gas nitrogen. Setelah dialiri gas nitrogen, labu takar ditutup dan digojog selama 24 jam dengan shaker Marius Instrumen pada temperatur kamar. Secara simultan dilakukan pula terhadap larutan blangko yang mengandung 20 mL larutan jenuh Ba(OH) 2 . Suspensi yang ter- bentuk disaring menggunakan kertas saring Whatman 42 dan residu dibilas dengan akuades bebas CO 2 . Filtrat dan air bila- san di gabung lalu dititrasi secara potensiometri dengan larutan standar 0,25 N HCl hingga pH 8,4. Percobaan tersebut dilakukan tiga kali pengulangan.

## Penetapan Kandungan Gugus Karboksilat
Ditimbang sebanyak 100 mg asam humat murni dan dima- sukkan ke dalam labu takar 100 mL, kemudian ditambahkan 10
127
Isolasi Dan Karakterisasi Asam Humat .....
mL larutan Mg(CH 3 COO) 2 0,5 M dan 40 mL akuades bebas CO 2 . Secara simultan dilakukan pula terhadap larutan blangko yang mengandung 10 mL larutan Mg(CH 3 COO) 2 0,5 M dan 40 mL akuades bebas CO 2 , kemudian digojog dengan shaker selama 24 jam pada temperatur kamar. Suspensi yang terbentuk dis- aring dengan kertas saring whatman 42, residu dibilas dengan akuades bebas CO 2 . Filtrat dan air bilasan digabung, kemudian dititrasi secara potensiometri dengan larutan standar NaOH 0,1 M hingga pH 9,8. Percobaan tersebut dilakukan dengan tiga kali pengulangan.

## Penetapan Kandungan Gugus -OH Total
Ditimbang sebanyak 100 mg asam humat murni dan dit- ambah 5 mL campuran piridin dan asetat anhidirida (perband- ingan 1:1), kemudian dire fl uk selama 3 jam di bawah kondisi atmosfer nitrogen. Campuran didinginkan dalam air, lalu disar- ing. Padatan yang diperoleh dibilas dengan akuades dan diker- ingkan dalam kondisi vakum dengan bantuan silika gel. Ditim- bang padatan kering berupa sampel yang terasetilasi sebanyak 50 mg, kemudian dire fl uk dengan 25 mL larutan NaOH 3N se- lama 2 jam sambil dialiri gas nitrogen. Setelah didinginkan, ke dalam labu re fl uk ditambahkan 25 mL larutan H 2 SO 4 6 N dan 25 mL akuades bebas CO 2 kemudian didestilasi. Volume cam- puran destilasi dipertahankan konstan dengan menambahkan 25 mL akuades. Destilat yang diperoleh dititrasi dengan larutan standar NaOH 0,01 N menggunakan indikator fenoftalin (pp). Prosedur yang sama dilakukan terhadap larutan blangko yang dilanjutkan dengan destilasi sampai kedua larutan sampel dan blangko mencapai volume yang sama. Percobaan tersebut di- lakukan dengan tiga kali pengulangan.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Isolasi asam humat dari tanah gambut pada penelitian ini menggunakan metode ekstraksi alkali seperti yang direkomen-

## Atik Rahmawati
dasikan oleh International Humic Substances Society (IHSS) (Calde- roni dan Schnitzer, 1984, dalam Tarchitzky dkk., 1993). Metode ini berlaku universal untuk semua jenis tanah dan pereaksi yang digunakan tidak merusak bahan yang diisolasi serta penanga- nannya relatif mudah dan sederhana (Tarchitzky dkk., 1993). Dalam penelitian ini, tanah gambut diekstraksi dengan larutan NaOH 0,1 M dengan perbandingan tanah : larutan NaOH adalah 1: 10 di bawah kondisi atmos fi r nitrogen. Kondisi atmos fi r nitro- gen dimaksudkan untuk mencegah terjadinya reaksi autooksidasi gugus-gugus yang ada dalam asam humat saat berlangsung proses ekstraksi.
Asam humat yang diperoleh dalam penelitian ini berwarna coklat kehitaman, dengan rendemen sebesar ± 5,8%. Asam hu- mat hasil isolasi tanah gambut yang telah dimurnikan diidenti fi - kasi secara spektroskopi inframerah, ditunjukkan pada Gambar 4.1.
Gambar 4.1 Spektra inframerah asam humat hasil pemur- nian
Interpretasi spektra inframerah asam humat hasil pemurni- an yang tersaji pada Gambar 4.1 adalah sebagai berikut : serapan kuat melebar pada bilangan gelombang 3435,0 cm -1 menunjuk-
129
Isolasi Dan Karakterisasi Asam Humat .....
kan vibrasi ulur –OH, serapan pada bilangan gelombang 2941,2 cm -1 mengidenti fi kasikan adanya vibrasi ulur C-H alifatik. Pita serapan yang muncul pada bilangan gelombang 1706,9 cm -1 menunjukkan vibrasi ulur -C=O dari gugus –COOH. Bilangan gelombang ini khas untuk -C=O dari gugus karboksilat akibat keterlibatan resonansi gugus -C=O dalam –COOH sehingga se- dikit lebih rendah dibandingkan bilangan gelombang serapan -C=O pada gugus karbonil terisolasi (1730 cm -1 ). Pita serapan pada bilangan gelombang 1624,0 cm -1 diinterpretasikan sebagai –C=C- aromatik atau C=O (keton terkonjugasi) yang mengikat hidrogen. Selain itu, –C=C- aromatik juga ditunjukkan dengan munculnya pita serapan lemah pada bilangan gelombang 1541,0 cm -1 dan 1560,3 cm -1 . Vibrasi tekuk -OH dari –COOH dan vibrasi ulur -C-O dari –COOH teridenti fi kasi dengan munculnya sera- pan pada bilangan gelombang 1226,6 cm -1 . Vibrasi ulur -OH dari –COOH diperkuat dengan munculnya pita serapan pada bilan- gan gelombang 2345,3 cm -1 dan 2362,6 cm -1 .
Bentuk spektra yang melebar pada bilangan gelombang 3435,0 cm -1 sebagai vibrasi ulur O–H dalam penelitian ini menun- jukkan adanya pengaruh ikatan hidrogen pada senyawa humat. Munculnya spektra di sekitar bilangan gelombang 1050 cm -1 di- duga sebagai senyawa polisakarida yang terdapat dalam asam humat. Selain itu, asam humat yang diisolasi dari tanah memi- liki ciri khas yaitu munculnya spektra pada bilangan gelombang sekitar 950-1150 cm -1 . Asam humat yang diisolasi dari sumber lain seperti danau dan sungai hampir tidak memberikan pita serapan pada bilangan gelombang ini.
Berdasarkan interpretasi spektra inframerah di atas dapat dinyatakan bahwa asam humat hasil penelitian ini didominasi gugus-gugus –COOH dan –OH. Dominasi gugus –OH ditandai dengan puncak serapan yang sangat karakteristik yaitu muncul- nya puncak serapan pada bilangan gelombang di sekitar 3435,0 cm -1 sebagai vibrasi ulur O–H. Sedangkan dominasi gugus – COOH ditandai dengan munculnya puncak serapan pada bilan- gan gelombang 1226,6 cm -1 sebagai vibrasi ulur gugus –OH dan –C-O dari gugus –COOH, serta pita serapan yang muncul pada

## Atik Rahmawati
bilangan gelombang 1706,9 cm -1 yang menunjukkan vibrasi ulur gugus -C=O dari gugus –COOH.
Pada spektra inframerah asam humat hasil pemurnian ti- dak tampak puncak pada bilangan gelombang sekitar 1380 cm -1 . Hal tersebut menunjukkan bahwa asam humat yang diperoleh sudah cukup murni (terbebas dari ion-ion logam). Hal ini terjadi karena pada tahap pemurnian digunakan larutan HCl dan HF yang diyakini mampu membebaskan asam humat dari pengotor bahan-bahan organik (Stevenson, 1994). Selain itu, HCl telah ter- bukti mampu menghidrolisis senyawa-senyawa yang mengand- ung nitrogen, karbohidrat dan bahan-bahan anorganik lain yang terserap pada asam humat (Riffaldi dan Schnitzer, 1972 dalam Stevenson, 1994). Dugaan ini diperkuat dengan hasil peneta- pan kadar abu asam humat tanpa pemurnian dan asam humat yang telah dimurnikan. Hasil penetapan kadar abu asam humat tanpa pemurnian dan asam humat yang telah dimurnikan ber- turut-turut adalah 11,43 dan 0,50% (b/b). Tingginya kadar abu asam humat tanpa pemurnian yang diperoleh dalam penelitian ini disebabkan karena asam humat tersebut kemungkinan ma- sih mengandung bahan-bahan anorganik seperti lempung dan logam-logam.

## Karakterisasi Kandungan Gugus Fungsional Asam Humat Ta- nah Gambut
Hasil analisis kandungan gugus fungsional asam humat yang diekstraksi dari tanah gambut yang berasal dari Desa Sam- butan, Kecamatan Samarinda Ilir, Kabupaten Samarinda tersaji pada Tabel 4.1. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kandun- gan gugus –COOH relatif lebih tinggi dibandingkan dengan gu- gus –OH fenolat dan –OH alkoholat. Hal ini merupakan akibat dari asam humat sebagai hasil biodegradasi lanjut dari lignin. Menurut teori Lignin tentang pembentukan asam humat yang dikemukakan oleh Flaig (Stevenson, 1994), gugus –COOH yang terdapat pada asam humat merupakan hasil oksidasi rantai samping lignin seperti –CH 2 OH. Selain itu, gugus –COOH dapat pula bersumber dari hasil pemecahan cincin komponen aroma-
131 Jurnal PHENOMENON , Volume 2 Nomor 1, November 2011
Isolasi Dan Karakterisasi Asam Humat .....
tik lignin.
Tabel 4.1 Kandungan gugus fungsional asam humat tanah gam- but
No. Gugus Fungsional Kadar dalam asam humat (cmol/kg) Penelitian ini Penelitian Schnitzer 1 2 3 4 Keasaman total Gugus hidroksil –OH a. Fenolat b. Alkoholat -OH total Gugus -COOH 715,8 289,6 37,0 326,6 426,2 570 – 890 t.d t.d 270 – 350 150 – 570

## t.d = tidak ditetapkan

## Kandungan Keasaman Total
Salah satu ciri asam humat adalah memiliki keasaman to- tal lebih rendah dibandingkan asam fulvat. Keasaman total atau kapasitas tukar asam humat disebabkan oleh adanya proton yang dapat terdisosiasi atau pelepasan ion-ion H + pada gugus- gugus karboksilat dan gugus hidroksil fenolat. Dalam penelitian ini penetapan kandungan keasaman total asam humat menggu- nakan metode barium hidroksida ( Baryta Absorption Methods ). Metode tersebut menggunakan pendekatan titrasi potensiometri dan didasarkan pada pelepasan ion H + dari gugus-gugus fung- sional asam humat yang bersifat asam. Sampel direaksikan den- gan Ba(OH) 2 berlebih, sisa Ba(OH) 2 yang tidak bereaksi dengan sampel dititrasi secara potensiometri dengan larutan standar asam (HCl 0,25 N) hingga pH 8,4. Reaksi yang terjadi dimodel- kan sebagai berikut (Stevenson, 1994) :

## Atik Rahmawati
Dimana R adalah makromolekul dan H adalah proton gu- gus –COOH atau -OH yang bersifat asam.
Keasaman total asam humat tanah gambut yang di- peroleh dalam penelitian ini sebesar 715,8 cmol/kg. Menurut Schnitzer, secara umum keasaman total asam humat tanah yang bersifat asam berkisar 570-890 cmol/kg (Stevenson, 1994). Hal ini berarti ada kesusaian antara hasil penelitian dengan hasil yang dikemukakan oleh Schnitzer.

## Kandungan Gugus Karboksilat (-COOH)
Sejumlah metode tersedia untuk penetapan jumlah gu- gus karboksilat dalam asam humat, misalnya metode pertu- karan ion, dekarboksilasi, iodometri, esteri fi kasi, dan prosedur Ca-asetat. Pada penelitian ini, digunakan metode Ca-asetat yang di adaptasi dari prosedur Schnitzer (Stevenson, 1994). Metode tersebut menggunakan pendekatan titrasi potensiometri dan didasarkan pada pertukaran ion. Berdasarkan metode tersebut, sampel direaksikan dengan Ca-asetat, kemudian asam asetat yang dibebaskan dititrasi secara potensiometri dengan larutan standar basa NaOH 0,1 M hingga pH 9,8. Reaksi yang terjadi merupakan suatu reaksi yang menghasilkan pembentukan dan pelepasan asam asetat (Tan,1998):
Menurut Schnitzer, kandungan gugus –COOH asam humat tanah yang bersifat asam berkisar 150-570 cmol/kg (Stevenson, 1994). Hasil penelitian kandungan gugus –COOH dalam asam humat tanah gambut sebesar 426,2 cmol/kg. Hal ini berarti ada kesesuaian kandungan gugus –COOH yang diperoleh dari pene- litian ini dengan kandungan gugus –COOH yang dikemukakan
2 RH  +  Ba(OH) 2 (berlebih) R 2 Ba   + 2 H 2 O
Ba(OH) 2 (sisa) +  2 HCl                           BaCl 2 + 2 H 2 O
2 R-COOH  +  Ca(CH 3 COO) 2 Ca(R-COO) 2 +  2 CH 3 COOH
133
Isolasi Dan Karakterisasi Asam Humat .....
oleh Schnitzer.

## Kandungan OH Total
Penetapan -OH total dalam penelitian ini menggunakan metode asetilasi (Metode Asetilasi dengan Asetat Anhidrida) . Gu- gus -OH total yang ditentukan dengan metode asetilasi adalah gugus –OH fenolat dan alkoholat.
Asam humat tanah gambut direaksikan dengan asetat an- hidrida, kemudian dire fl uk dalam medium piridin membentuk makromolekul ester asetat (sampel terasetilasi) dan asam asetat sebagai hasil samping. Reaksi yang terjadi dapat dimodelkan se- bagai berikut (Stevenson, 1994) :
Makromolekul ester asetat yang telah kering dire fl uk den- gan NaOH. Setelah dire fl uk, larutan campuran tersebut direak- sikan dengan H 2 SO 4 dalam medium air lalu didestilasi. Destilat yang diperoleh dititrasi dengan larutan standar basa (NaOH 0,01 N) dengan menggunakan indikator fenolftalin.
Menurut Schnitzer, kandungan gugus -OH total asam humat tanah yang bersifat asam berkisar 270-350 cmol/kg (Ste- venson, 1994). Sedangkan kandungan gugus -OH total dalam asam humat tanah gambut yang diperoleh dalam penelitian ini sebesar 326,6 cmol/kg. Hal ini berarti ada kesesuaian antara kandungan gugus –COOH yang diperoleh dari penelitian ini dengan kandungan OH total yang dikemukakan oleh Schnitzer.

## Kandungan Gugus –OH Fenolat dan –OH Alkoholat
Seperti telah diuraikan dalam tinjauan pustaka bahwa kan- dungan gugus –OH fenolat merupakan selisih dari keasaman total dengan kandungan gugus –COOH. Sedangkan gugus –OH alkoholat merupakan selisih dari kandungan -OH total den- gan –OH fenolat. Dari hasil penelitian diperoleh kandungan – OH fenolat sebesar 289,6 cmol/kg dan –OH alkoholat sebesar 37,0 cmol/kg. Hasil penelitian yang telah dilaporkan sejumlah
R-OH  +  (CH 3 CO) 2 O                            CH 3 COOR  +  CH 3 COOH

## Atik Rahmawati
peneliti menunjukkan bahwa umumnya kandungan gugus –OH fenolat lebih tinggi dari –OH alkoholat.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan, dapat di- ambil kesimpulan sebagai berikut :
1.  Data spektra inframerah asam humat murni menunjukkan gugus fungsional utama dalam asam humat hasil isolasi ta- nah gambut adalah gugus –COOH dan –OH.
2.  Analisis secara kuantitatif menunjukkan kandungan gugus – COOH sebesar 426,2 cmol/kg, -OH total sebesar 326,6 cmol/ kg yang terdiri atas –OH fenolat sebesar 289,6 cmol/kg dan -OH alkoholat sebesar 37,0 cmol/kg.
135 Jurnal PHENOMENON , Volume 2 Nomor 1, November 2011
Isolasi Dan Karakterisasi Asam Humat .....

## DAFTAR PUSTAKA
Aiken, G.R., McKnight, D.M.,Wershaw, R.L. dan P. MacCarthy, P., 1985, “ Humic Substance in Soil, Sediment and Water” : Geochemistry, Isolation, and Characterization, John Wiley
& Sons, New York .
Gaffney, J.S., Marley, N.A., Clarck, S.B., 1996, Humic and Fulvic Acids : Isolation, Structure and Environmental Role, Amer- ican Chemical Society, Washington, DC.
Gosh, K., dan Schnitzer, M., 1980, “Macromolecular Structures of Humic Substances”, Soil Science , 129
Hayes, M.B., dan Himes, F.L., 1986, “Nature and Properties of Humus-Mineral Complexes”, In : “Interaction of Soil Mineral with Natural Organics and Microbes” (P.M.
Huang dan M.Schnitzer), Soil Sci. Soc . Am. Special Publ.,
17 , Soil Sci. Am., Madison, WI : 103-158.
Ishiwatari, R., 1985, “Geochemistry of Humic Subtances in Lake Sediments ” (dalam Aiken, dkk, 1985, Humic Subtances in Soils, Sediment and Water : Geochemistry, Isolation, and Characterization, John Wiley & Sons, New York .
Manahan, S.E., 2000, ” Environmental Chemistry ”, Seventh Edi- tion, Willard Grant Press, Boston.
Sanchez-Cortez, S., Francioso, O., Garcia-Ramos, J.V., Marzadori, C., and Gessa, C.C.C., 2000, “Formation of Humic-like

## Atik Rahmawati
substances from Phenols by means SERS Spectroscopy, p.121, In : Proceedings 10 th International Meeting of the In- ternational-Humic Substances Society, IHSS 10 , 24-28 July 2000-Touluse (France).
Schnitzer, M., 1986, “ Pengikatan Bahan Humat oleh Koloid Mineral Tanah ”, (dalam Huang, P.M, dan Schnitzer, M., 1986,
“Interaksi Mineral Tanah dengan Organik Alami dan Mik-
roba ”, Terjemahan : Goenadi, D.H., 1997), Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.
Stevenson, F.J., 1994, “Humus Chemistry : Genesis, Composition,
Reactions” , John Wiley & Sons Inc., New York.
Tan, K.H., 1998, “Dasar-dasar Kimia Tanah”, Gadjah Mada Uni- versity Press, Yogyakarta.
Tarchitzky, J., Y.Chen., dan A.Banin, 1993, “Humic Subtances and pH Effects on Sodium-and Calcium-Montmoril- lonite Flocculation and Dispersion”, Soil Science Soc.
Am. J , 57 : 367-372.