ISSN: 1410-8917 e-ISSN: 2597-9914
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 206 – 212

## Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi
Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Identifikasi Senyawa Aktif Ekstrak Buah Mengkudu ( Morinda citrifolia L.) dan Potensinya sebagai Antioksidan
Sogandi a,* , Rabima a
a Fakultas Farmasi, Universitas 17 Agustus 1945 Jakarta, Sunter, Jakarta Utara 14356, Indonesia
* Corresponding author: sogandi@uta45jakarta.ac.id https://doi.org/10.14710/jksa.22.5.206-212
Art ic le   Info

## Ab s t rac t
Article history:
Received: 13 July 2019
Revised: 13 August 2019 Accepted: 20 August 2019 Online: 30 September 2019
Keywords: Antioxidant; Bioactive;
DPPH; Noni fruits
( Morinda citrifolia L)
Title: Identification of Active Compound Extracts from Noni Fruit ( Morinda citrifolia

## L.) and Its Potential as Antioxidants
Antioxidants  are  compounds  that  can  inhibit  oxidation  reactions  by  binding  to free radicals and highly reactive molecules. One form of reactive oxygen compounds is free radicals, these compounds are formed in the body and are triggered by various factors. Noni fruits have been used by the community as a medicine for high blood pressure, beriberi,  urinating,  inflammation  of  bile,  inflammation  of  the  intestine,  dysentery, constipation, spleen pain, liver pain, diabetes and lumbago. Nevertheless, research on the identification of the active compounds of noni fruit which act as antioxidants yet. This study aims to extract and fractionation  of Noni fruit, determine the antioxidant activity of Noni fruit extract, and identify the types of bioactive compounds that act as antioxidants. Noni fruit was extracted used maceration technique with 96% ethanol and  then  fractionated  using  n-hexane,  chloroform  and  ethyl  acetate  solvents. Antioxidant activity from the results of noni fruit fractionation was measured by the DPPH  (1.1  diphenyl-2-picrylhydrachyl)  method  and  identification  of  bioactive compounds  was  carried  out  by  GCMS.  The  results  showed  the  greatest  antioxidant activity was found in chloroform fraction with a percentage  of inhibition of 78.19%. For the first time this study revealed the types of bioactive compounds from noni fruit ethyl  acetate  fraction  which  act  as  antioxidants  are  n-hexadecanoic  acid, squalene, pyridin-3-carboxamide, oxime, n- (2-trifluoro methyl phenyl), and beta-sitosterol

## Ab s t rak
Kata Kunci: Antioksidan; Bioaktif; DPPH; Mengkudu ( Morinda citrifolia L) Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  dapat  menghambat  reaksi  oksidasi  dengan mengikat radikal bebas dan molekul yang sangat reaktif. Salah satu bentuk senyawa oksigen reaktif adalah radikal bebas, senyawa ini terbentuk di dalam tubuh dan dipicu oleh bermacam-macam faktor. Tanaman mengkudu sudah dimanfaatkan masyarakat sebagai obat tekanan darah tinggi, beri-beri, melancarkan kencing, radang empedu, radang  usus,  disentri,  sembelit,  nyeri  limpa,  sakit  liver,  kencing  manis  dan  sakit pinggang. Namun belum ada penelitian mengenai identifikasi senyawa aktif dari buah mengkudu  yang  berperan  sebagai  antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengekstraksi  dan  melakukan  fraksinasi  buah  mengkudu,  mengetahui  aktivitas antioksidan  ekstrak  buah  mengkudu,  serta  mengidentifikasi  jenis  senyawa  bioaktif yang  berperan  sebagai  antioksidan.  Buah  mengkudu  diekstraksi  secara  maserasi menggunakan  pelarut  etanol  96%  kemudian  difraksinasi  secara  bertingkat menggunakan pelarut n-heksan, klorofom, dan etil asetat. Aktivitas antioksidan dari hasil  fraksinasi  buah  mengkudu  diukur  dengan  metode  DPPH  ( 1,1  difenil-2- pikrilhidrakzil )  dan  identifikasi  senyawa  bioaktif  dilakukan  dengan  GCMS.  Hasil penelitian menunjukkan aktivitas antioksidan terbesar terdapat pada fraksi klorofom dengan  persen  inhibisi  sebesar  78,19%.  Untuk  pertama  kalinya  penelitian  ini
mengungkapkan  jenis  senyawa  bioaktif  dari  buah  mengkudu  fraksi  etil  asetat  yang berperan  sebagai  senyawa  antioksidan  adalah  n-hexadecanoic  acid,  squalene, pyridin-3-carboxamide, oxime, n-(2-trifluoro methyl phenyl), dan beta – sitosterol.

## 1. Pendahuluan
Kerusakan  oksidatif  dari  komponen  sel  merupakan salah  satu  faktor  penting  yang  berhubungan  dengan beberapa  penyakit  seperti  diabetes  melitus, kanker,  dan kardiovaskular  [1].  Kerusakan  oksidatif  terutama  dipicu oleh senyawa radikal bebas ROS ( reactive oxygen species ). Oksigen reaktif (ROS) yang terdiri dari SAFR (O-2), HFR (OH-),  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 ),  dan  oksigen  tunggal (O 2 ) dibentuk melalui proses endogen pada metabolisme makanan  ataupun  proses  eksogen  [2].  Radikal  bebas  di dalam  tubuh  menyebabkan  kerusakan  pada  membran lipid, protein, DNA, dan RNA [3].
Antioksidan berfungsi dalam menghambat pembentukan radikal, pembentukan hidrogen peroksida, pengambilan radikal, dan peroksida lainnya. Antioksidan dapat berasal dari dalam tubuh (endogen) atau luar tubuh (eksogen).  Antioksidan  dapat  diproduksi  oleh  semua organisme diantaranya superoksida dismutase, katalase, dan  antioksidan  non-enzimatik  (biomolekul)  yaitu glutation [4]. Keperluan tubuh terhadap antioksidan yang sangat  tinggi  menyebabkan  antioksidan  endogen  tidak mencukupi. Oleh karena itu, diperlukan antioksidan luar yang  berasal  dari  asupan  makanan  untuk  mengurangi kerusakan  [5,  6].  Beberapa  antioksidan  eksogen  dapat disintesis secara kimiawi yaitu butylated hydroxyanisole (BHA),  butylated  hydroxytoluene  (BHT)  dan  n-propyl gallate  (PG)  juga  dapat  digunakan  namun  lebih  banyak pada bidang industri makanan.
Indonesia  merupakan  negara  yang  memiliki biodiversitas  tinggi  dan  memiliki  kawasan  hutan  hujan tropis  yang  luas.  Berbagai  penelitian  telah  dilakukan untuk  mengidentifikasi  senyawa-senyawa  bioaktif  dari tumbuhan yang dapat dijadikan sebagai bahan baku obat. Saat ini, banyak dilakukan pencarian tumbuhan obat yang belum teridentifikasi secara ilmiah di daerah pedalaman atau  daerah  hutan.  Tanaman  yang  sudah  banyak digunakan  sebagai  obat  adalah  tanaman  mengkudu (Morinda  citrifolia  L.) .  Buah  mengkudu  merupakan  salah satu tanaman yang sering digunakan dalam pengobatan tradisional sebagai obat tekanan darah tinggi, beri-beri, melancarkan  kencing,  radang  empedu,  radang  usus, disentri, sembelit, nyeri limpa, sakit liver, kencing manis dan sakit pinggang [7].
Penelitian mengenai ekstrak dari tanaman mengkudu  telah  banyak  dilakukan,  namun  penelitian tentang  identifikasi  jenis  senyawa  aktif  dari  hasil fraksinasi  ekstrak  buah  mengkudu (Morinda  citrifolia  L.) sebagai penghasil senyawa antioksidan belum diketahui. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengekstraksi  dan melakukan  fraksinasi  buah  mengkudu,  mengetahui aktivitas  antioksidan  ekstrak  buah  mengkudu,  serta mengidentifikasi  jenis  senyawa  bioaktif  yang  berperan sebagai antioksidan.

## 2. Metode Penelitian

## 2.1. Ekstraksi Sampel
Buah  mengkudu  diperoleh  dari  BALITRO  dan determinasi  dilakukan  di  LIPI.  Simplisia  kering  disortir dan  dipilih  buah  mengkudu  yang  bebas  dari  jamur maupun  karakteristik  yang  kurang  baik,  kemudian simplisia dicuci bersih. Buah mengkudu yang telah bersih dikeringkan  dan  dirajang  membentuk  potongan  kecil, kemudian  dihaluskan  [8].  Sebanyak  2,5  kg  buah mengkudu  yang  telah  dihaluskan  dimasukkan  ke  dalam bejana  kaca,  diekstraksi  dengan  teknik  maserasi menggunakan pelarut etanol 96% dengan perbandingan ekstrak  dan  pelarut  adalah  1:3,  dengan  volume  pelarut tiga  kali  lebih  banyak  dari  jumlah  serbuk  simplisianya yaitu  7,5  L.  Maserasi  dilakukan  dalam  waktu  24  jam dengan tiga kali pengadukan selama 3 hari. Maserat yang diperoleh,  dievaporasi  dengan rotary  evaporator pada suhu  50°C  dan  diputar  dengan  kecepatan  60  rpm  untuk memisahkan ekstrak dengan pelarut. Ekstrak etanol yang diperoleh kemudian dihitung nilai rendemennya [9].

## 2.2. Fraksinasi Ekstrak
Ekstrak  etanol  kental  buah  mengkudu  ditimbang sebanyak  50  gram,  lalu  diencerkan  dengan  100  mL  air panas, kemudian ditambahkan 100 mL n-heksan, diaduk dan  dimasukkan  kedalam  corong  pemisah,  didiamkan sampai  terpisah  menjadi  dua  lapisan.  Fraksi  n-heksan dipisahkan,  fraksi  air  difraksinasi  dengan  kloroform sebanyak  100  mL,  sehingga  diperoleh  fraksi  kloroform dan  fraksi  air.  Fraksi  air  dilanjutkan  fraksinasinya menggunakan etil asetat sebanyak 100 mL, lalu kocok dan diamkan  sampai  diperoleh  dua  lapisan.  Pisahkan  fraksi etil asetat dan fraksi air. Masing-masing fraksi yang telah ditampung  kemudian  dipekatkan  dengan  menggunakan rotary evaporator [9] .

## 2.3. Uji Bebas Etanol
Sebanyak  0,5  gram  ekstrak  etanol  buah  mengkudu dimasukkan kedalam tabung reaksi ditambah 1 mL asam asetat  glasial,  dan  1  mL  asam  sulfat  pekat.  Kemudian dihomogenkan  dan  dipanaskan,  lalu  tutup  bagian  atas tabung dengan kapas. Jika tidak tercium  bau ester maka larutan tersebut positif bebas etanol [10].

## 2.4. Skrining Metabolit Sekunder

## 2.4.1. Identifikasi antrakuinon
Uji  identifikasi  antrakuinon  dilakukan  dengan  cara uji  Brontrager.  Dua  mililiter  ekstrak  diuapkan  sampai kering,  lalu  setelah  dingin  ditambah  10  mL  aqudest kemudian disaring. Filtrat diekstrak kembali dengan 5 mL toluen.  Hasil  ekstrak  dibagi  menjadi  2  bagian,  bagian  A dan  B.  Filrat  A  digunakan  sebagai  blangko  dan  filtrat  B ditambahkan  5  mL  ammonia  kemudian  dikocok,  bila terdapat warna merah berarti hasil positif [10].
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 206 – 212

## 2.4.2. Identifikasi alkaloid
Dua  tetes  ekstrak  ditambahkan  satu  tetes  HCl,  jika terbentuk  larutan  yang  bening,  maka  dapat  langsung diuji  dengan  pereaksi  mayer,  dragendorf,  dan bouchardat.  Jika  tidak  bening  ekstrak  ditambahkan NH 4 OH  kemudian  ditambahkan  CHCl 3 ,  dikocok  dan kemudian diambil lapisan CHCl 3 kemudian ditambahkan lagi HCl 2N, dikocok lalu diambil lapisan air dan langsung direaksikan  dengan  pereaksi  mayer,  dragendorf,  dan bouchardat.  Adanya  senyawa  alkaloid  ditandai  dengan terbentuknya  endapan  berwarna  putih  jika  direaksikan dengan  pereaksi  mayer,  merah  atau  jingga  dengan pereaksi  dragendorf,  dan  coklat  dengan  pereaksi bouchardat [10].

## 2.4.3. Identifikasi tanin
Ekstrak sebanyak 1-2 tetes ditambah dengan larutan FeCl 3 1%  sebanyak  3  tetes.  Adanya  senyawa  alkaloid ditandai  dengan  terbentuknya  endapan  warna  biru kehijauan atau hijau tua [10].

## 2.4.4. Identifikasi flavonoid
Ekstrak buah mengkudu sebanyak 0,5 g ditambahkan dengan 20 mL air panas, didihkan selama 5 menit, kemudian disaring. 5 mL filtrat ditambahkan 0,05 g serbuk Mg dan 1 mL HCl pekat, kemudian dikocok kuat- kuat. Positif mengandung flavonoid apabila terbentuknya endapan warna merah, kuning atau jingga [10].

## 2.4.5. Identifikasi steroid dan triterpenoid
Ekstrak buah mengkudu sebanyak 2  tetes ditambah asam  asetat  glasial  10  tetes  dan  asam  sulfat  pekat sebanyak 2 tetes. Larutan dikocok perlahan dan dibiarkan selama  beberapa  menit.  Positif  mengandung  steroid apabila  terbentuk  warna  biru  atau  hijau,  sedangkan triterpenoid terbentuk warna merah atau ungu [10].

## 2.4.6. Identifikasi golongan Saponin
Sebanyak 0,5 g ekstrak buah mengkudu ditambahkan  10  mL  air  panas  lalu  didinginkan,  setelah dingin  langsung  dikocok  kuat  selama  10  detik,  jika terbentuk  adanya  buih  yang  stabil  selama  10  menit setinggi 1-10 cm dan setelah ditambahkan 1 tetes HCl 2N buihnya  tidak  hilang,  maka  menunjukkan  adanya senyawa saponin [10].

## 2.5. Pengukuran aktivitas antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode DPPH  ( 1,1  difenil-2-pikrilhidrakzil )  yang  dibuat  dengan konsentrasi  100  ppm  menggunakan micoplate  96  well . Pengukuran nilai absorbansi menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  517 nm  menggunakan  mesin  Elisa reader .  Digunakan pembanding yakni asam askorbat sebagai kontrol positif dari  aktivitas  antioksidan.  Larutan  induk  dibuat  dengan melarutkan  10  mg  sampel  dalam  10  mL  methanol  p.a, sehingga  diperoleh  konsentrasi  larutan  induk  100  ppm. Sebanyak 1 mL larutan sampel ditambahkan dengan 2 mL methanol p.a, kemudian ditambah larutan DPPH 100 ppm 1 mL. Setelah itu dikocok dengan vortex hingga homogen. Lalu diinkubasi di tempat gelap pada suhu ruang selama
30  menit.Absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang maksimum 517 nm [11].

## 2.6. Identifikasi senyawa bioaktif
Senyawa  bioaktif  dari  fraksi  buah  mengkudu  yang memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi  diidentifikasi menggunakan  GCMS  (Agilent  Technologies  7890).  Jenis kolom  yang  digunakan  adalah  HP  Ultra  2. Capilarry Coloumn (30  m  ×  0.20  mm  LD,  0.11  µm film  thickness ) dengan kondisi temperatur kolom 250°C, helium sebagai gas  pembawa  memiliki  laju  alir  30  cm/detik,  rasio 1/30, temperatur  sumber ion  230°C, dan  suhu  ion  permukaan adalah 280°C.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Penelitian ini diawali dengan melakukan determinasi  sampel  tanaman  mengkudu  di  LIPI  Bogor untuk memastikan spesies sampel yang akan digunakan adalah benar dari tanaman mengkudu. Berdasarkan hasil determinasi  diketahui  bahwa  tanaman  yang  menjadi sampel dalam penelitian ini adalah Morinda citrifolia L.
3.1. Ekstraksi dan Fraksinasi Buah Mengkudu
Metode ekstraksi yang digunakan adalah menggunakan  teknik  maserasi  dengan  pelarut  etanol 96%.  Maserasi  adalah  proses  pengekstrakan  simplisia dengan  menggunakan  pelarut  dengan  beberapa  kali pengocokan  atau  pengadukan  pada  temperatur  kamar. Prinsip  maserasi  adalah  ekstraksi  zat  aktif  yang dilakukan dengan perendaman dalam pelarut yang sesuai selama  beberapa  hari  pada  temperatur  kamar  dan terlindung  dari  cahaya  [12].  Pemilihan  metode  maserasi ini merupakan metode yang sesuai untuk tekstur serbuk buah  mengkudu  yang  lunak.  Pelarut  etanol  96%  ini dipilih sebagai cairan penyari dalam penelitian ini karena etanol  96%  merupakan  pelarut  yang  bersifat  universal, sehingga  dengan  menggunakan  etanol  96%  diharapkan metabolit  sekunder  yang  ada  didalam  sampel  sebagian besar  dapat  terambil  oleh  etanol.  Etanol  memiliki  sifat dapat  bercampur  dengan  air  pada  segala  perbandingan dan panas yang dibutuhkan untuk pemekatan juga lebih rendah  [10].  Selain  itu  juga,  etanol  96%  lebih  efisien dalam  mendegradasi  dinding  sel,  sehingga  metabolit sekunder  dapat  tersari  lebih  banyak.  Etanol  96%  juga lebih  meminimalisir  kontaminasi  dan  pertumbuhan mikroorganisme  lain  pada  ekstrak  karena  hanya mengandung 4% air [12]. Proses pemekatan ekstrak cair dilakukan  dengan  menggunakan  alat  rotary  evaporator pada  kisaran  suhu  40-50°C,  alasan  penggunaan  rotary evaporator  sebagai  alat  penguap  karena  pelarut  dapat menguap  dibawah  titik  didihnya,  hal  ini  dimaksudkan untuk  mencegah  terjadinya  kerusakan  senyawa  aktif yang  terkandung  di  dalam  ekstrak  selama  proses penyarian.
Hasil maserasi ekstrak kental buah mengkudu yang diperoleh sebanyak 180,5 gram dengan persen rendemen 7,22%  serta  kadar  air  8,27%.  Kriteria  ini  memenuhi standar  yang  sudah  ditetapkan  oleh  Badan  Pemeriksa Obat  dan  Makanan  (BPOM)  [13].  Selanjutnya  dilakukan standardisasi  terhadap  ekstrak  etanol  yang  dihasilkan. Standardisasi  ini  dilakukan  untuk  mengontrol  atau
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 206 – 212
menjaga  mutu  simplisia  ataupun  ekstrak  sehingga didapatkan ekstrak yang bermutu, aman dan bermanfaat berdasarkan  parameter  nonspesifik  dan  parameter spesifik  suatu  sample  [10].  Hasil  standardisasi  dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Standardisasi Ekstrak Etanol Buah
Mengkudu ( Morinda citrifolia L.) Pengamatan Hasil Rendemen 7,22% Organoleptis Bentuk Ekstrak kental Warna Kuning kecoklatan Rasa Pahit Bau Khas mengkudu
Ekstrak kental yang didapat selanjutnya difraksinasi. Fraksinasi  adalah  suatu  metode  pemisahan  senyawa organik  berdasarkan  kelarutan  senyawa-senyawa tersebut dalam dua pelarut yang tidak saling bercampur, biasanya  antara  pelarut  air  dan  pelarut  organik. Fraksinasi  dilakukan  secara  bertingkat  berdasarkan tingkat kepolarannya yaitu dari nonpolar, semi polar, dan polar. Senyawa yang memiliki sifat nonpolar dapat larut dalam  pelarut  nonpolar,  semi  polar  larut  dalam  pelarut yang bersifat semi polar, dan yang bersifat polar pun akan larut  kedalam  pelarut  yang  bersifat  polar  juga  yang diken al dengan prinsip prinsip “ Like dissolve like ” [14].
Fraksinasi  menggunakan  pelarut  organik  yang memiliki  kepolaran  yang  berbeda,  yaitu  n-heksan, klorofom,  dan  etil  asetat.  Fraksi  heksan  dan  klorofom untuk menarik senyawa yang bersifat non-polar, pelarut etil asetat akan menarik senyawa yang bersifat semi polar dan  senyawa  yang  bersifat  polar  akan  tertarik  dengan pelarut air [15].

## 3.2. Identifikasi Senyawa Fitokimia Buah Mengkudu
Hasil  skrining  senyawa  fitokimia  terhadap  ekstrak etanol  dan  hasil  fraksinasi  ekstrak  buah  mengkudu memberikan  hasil  positif  yang  berbeda  pada  setiap fraksinya.  Ekstrak  etanol  mengandung  senyawa antrakuinon,  alkaloid,  tannin,  flavonoid,  steroid, saponin,  dan  fenolik  sedangkan  untuk  fraksi  heksan mengandung, antrakuinon, alkaloid, flavonoid, triterpenoid, saponin dan senyawa fenol. Fraksi klorofom mengandung  antrakuinon,  alkaloid,  flavonoid,  steroid, triterpenoid,  saponin,  dan  fenolik.  Fraksi  etil  asetat mengandung antrakuinon, alkaloid, flavonoid, triterpenoid,  dan  saponin.  Sedangkan  fraksi  air mengandung  senyawa  antrakuinon,  alkaloid,  dan triterpenoid.  Hasil  identifikasi  senyawa  fitokimia  dari berbagai  hasil  fraksinasi  ekstrak  buah  mengkudu  dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Kandungan senyawa fitokimia buah mengkudu
Senyawa fitokimia Fraksi Etanol  Heksan  Klorofom Etil asetat  Air Antrakuinon + + + + + Alkaloid + + + + + Tanin + - - - - Flavonoid + + + + - Steroid + - + - - Triterpenoid - + + + + Saponin +
+ + + - Fenolik + + + - -
Keterangan :  (+)  memberikan  reaksi  positif,  (-)  memberikan reaksi negatif
Hasil  positif  pengujain  senyawa  antrakuinon  pada semua  fraksi  menunjukkan  bahwa  senyawa  ini  dapat terlarut  dalam  pelarut  polar  maupun  nonpolar.  Reaksi antrakuinon  dalam  larutan  benzena  dan  asam  sulfat membentuk  cincin  benzen  yang  merupakan  hasil  reaksi antara  sulfonasi  benzena  dengan  antrakuinon.  Reaksi sulfonasi adalah reaksi kimia yang terjadi pada benzena dan asam sulfat dengan adanya pemanasan. Produk yang dihasilkan  dalam  reaksi  sulfonasi  adalah  asam  benzena sulfonat dan air yang merupakan reaksi reversibel (reaksi yang dapat balik). Senyawa antrakuinon sudah diketahui memiliki aktivitas antioksidan dan terdapat bada bagian akar dan batang tanaman mengkudu [16].
Pengujian alkaloid pada ekstrak etanol menggunakan  pereaksi  Dragendorff  ditandai  dengan terbentuknya  endapan  coklat  muda  yang  diakibatkan oleh atom nitrogen membentuk ikatan kovalen koordinat dengan  ion  logam  kalium  (K+).  Identifikasi  flavonoid menunjukkan  warna  jingga  yang  berarti  positif  adanya flavonoid.  Magnesium  dan  asam  klorida  pada  uji  ini bereaksi  membentuk  gelembung-gelembung  yang merupakan  gas  hidrogen, sedangkan  logam  magnesium dan  asam  klorida  pekat  berfungsi  untuk  mereduksi  inti benzopiron  yang  terdapat  pada  struktur  flavonoid sehingga terbentuk perubahan warna menjadi jingga.

## 3.3. Pengukuran Aktivitas Antioksidan
Penentuan  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  etanol dan fraksi buah mengkudu didasarkan pada penangkapan radikal  bebas  DPPH  dan  aktivitasnya  ditentukan menggunakan metode spektroskopi. Radikal bebas DPPH memiliki warna ungu yang ditunjukkan oleh pita absorpsi dalam  pelarut  metanol  pada  panjang  gelombang maksimum 517 nm. DPPH merupakan radikal bebas yang stabil  dan  tidak  membentuk  dimer  akibat  delokalisasi dari  elektron  bebas  pada  seluruh  molekul.  Jika  elektron DPPH  berpasangan  dengan  elektron  pada  sampel  maka akan  terjadi  perubahan  warna  dari  ungu  tua  menjadi kuning  kecoklatan,  yang  menandakan  adanya  aktivitas antioksidan [17]. Aktivitas antioksidan diketahui dengan menghitung  persentase  inhibisi,  yaitu  banyaknya aktivitas  senyawa  antioksidan  yang  dapat  menangkap radikal bebas DPPH.
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 206 – 212
Reaksi  yang  terjadi  antara  senyawa  flavonoid  dan DPPH  adalah  dengan  memberikan  atom  hidrogen  dari senyawa  flavonoid  untuk  mereduksi  radikal  DPPH. Selanjutnya  radikal  aril  dari  flavonoid  mengalami resonansi  dan  memberikan  atom  hidrogennya  kembali kepada  radikal  DPPH.  Pembentukan  kompleks  antara antioksidan  dan  DPPH  bergantung  pada  kestabilan  dan potensial  reaksi  dari  struktur  molekulnya.  Berdasarkan mekanisme  tersebut,  maka  dapat  dikatakan  bahwa senyawa antioksidan mempunyai sifat yang relatif stabil dalam bentuk radikalnya [18]. Sifat ini yang menyebabkan golongan  senyawa  flavonoid,  terpenoid,  dan  alkaloid memiliki  potensi  sebagai  antioksidan.  Prinsip  dari pengujian  aktivitas  antioksidan  menggunakan  DPPH  ini adalah  terjadinya  perubahan  warna  larutan  yaitu perubahan  warna  ungu  menjadi  kuning  kecoklatan, perubahan  warna  ini  dikarenakan  adanya  penurunan absorptivitas molar dari molekul DPPH [18].
Gambar 1. Aktivitas antioksidan masing-masing fraksi buah mengkudu
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  pada  Gambar  1 menunjukkan  bahwa  fraksi  klorofom  buah  mengkudu memiliki  aktivitas  antioksidan  paling  kuat,  hal  ini ditunjukkan dengan nilai inhibisi ekstrak klorofom yakni 78,19%, diikuti dengan fraksi heksan 61,59%, dan fraksi etanol  59,19%.  Oleh  sebab  itu,  fraksi  klorofom  dipilih untuk dilakukan analisis lebih lanjut dengan GCMS untuk mengidentifikasi jenis kandungan senyawa bioaktifnya.
Hasil  pengujian  aktivitas  fraksi  klorofom  buah mengkudu  ini  berbeda  dengan  hasil  pengujian  aktivitas antioksidan  di  buah  mengkudu  yang  fraksi  teraktifnya adalah  fraksi  air  diikuti  dengan  fraksi  etil  asetat  dan kemudian  fraksi  klorofom  [7].  Sebagai  pembanding digunakan  vitamin  C  dengan  aktivitas  inhibisi  sebesar 87,92%. Vitamin C bekerja dengan mereduksi dua radikal bebas  dari  DPPH  melalui  pelepasan  dua  atom hidrogennya,  sehingga  dapat  membentuk  DPPH  yang nonradikal. Vitamin C merupakan salah satu antioksidan sekunder  dan  memiliki  cara  kerja  yang  sama  dengan vitamin  E,  yaitu  dengan  menangkap  radikal  bebas  dan mencegah terjadinya reaksi berantai [19].
Reaksi  yang  terjadi  antara  DPPH  dan  senyawa antioksidan  akan  menghasilkan  dehidrogenasi  pada
molekul antioksidan, sedangkan DPPH berubah menjadi DPPHn  dengan  n  menunjukkan  jumlah  atom  H  yang diterima  oleh  DPPH  dari  antioksidan.  DPPH  berwarna violet dan DPPHn tak berwarna sehingga memungkinkan pengukuran  dengan  spektrofotometri  dari  penurunan intensitas  warna  DPPH.  Absorbansi  yang  rendah menunjukkan kapasitas penangkapan radikal DPPH yang lebih tinggi.

## 3.4. Identifikasi Senyawa Bioaktif
Fraksi  klorofom  dengan  aktivitas  antioksidan tertinggi dianalisis menggunakan GCMS untuk mengetahui  jenis  kandungan  senyawanya  yang  diduga berperan  sebagai  senyawa  bioaktif  antioksidan.  Hasil identifikasi  senyawa  bioaktif  menggunakan  GCMS menunjukkan  adanya  beberapa  senyawa  turunan  dari alkaloid,  terpenoid  dan  steroid.  Kemampuan  fraksi klorofom  ekstrak  buah  mengkudu  sebagai  antioksidan terjadi  karena  adanya  kandungan  berupa  senyawa hexadecanoic  acid,  squalene,  pyridin-3-carboxamide, dan beta-sitosterol.
Gambar 2. Spektogram hasil GCMS fraksi klorofom Buah
Mengkudu
Tabel 3. Hasil GCMS fraksi etil asetat Buah Mengkudu
Nama Senyawa
Kandungan (%)  Golongan n-hexadecanoic acid 13,17% Asam Palmitat Squalene 13,32% Terpenoid Pyridin-3- carboxamide,oxime,N-(2- trifluoromethylphenyl) 8,05% Alkaloid Beta – sitosterol 7,19 Steroid
Senyawa n-hexadecanoic  acid merupakan  turunan lemak dan n-hexadecanoic acid adalah asam lemak jenuh yang  memiliki  formula  C 16 H 32 O 2 [20] . Senyawa  ini  juga diketahui terdapat pada fraksi klorofom tanaman Rumex vesicarius L tanaman  herbal  dari  India  [21].  Selain  itu n- hexadecanoic  acid juga  diketahui  memiliki  aktivitas  dan dimanfaatkan sebagai pestisida, antiandrogenik, hemolitik, dan sebagai 5-alpha reductase inhibitor [22].
Senyawa  squalene  termasuk  kedalam  golongan triterpenoid dan merupakan senyawa intermediet dalam biosintesis  senyawa  sterol  baik  di  tanaman  maupun  di hewan. Squalene banyak terdapat pada minyak  hati ikan hiu  dan  di  minyak  sayur.  Squalene  adalah  komponen utama lemak tak jenuh yang ada di permukaan kulit yang
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 206 – 212
berguna untuk  melunakan kulit serta sebagai antitumor serta  golongan  triterpen  juga  diketahui  melindungi terhadap beberapa bahan karsinogen [23]. Squalene juga diketahui  dapat  bersinergi dengan  senyawa α -tokoperol dan β -sitosterol  sebagai  antioksidan  dengan  squalene sebagai senyawa kompetitif dalam reaksi crocin bleaching dengan  menurunkan  tingkat  oksidasi.  Squalene  juga diketahui  dapat  stabil  ketika  disimpan  pada  suhu  40- 62°C  dalam  kondisi  gelap  dan  hanya  mengalami penyusutan 12% saat proses pemanasan 20 menit 150°C [24].  Squalene  adalah  antioksidan  alam  yang  bersifat hidropilik yang khasiat antiradikal serta antioksidannya bergantung  pada  cara  penyimpanan  dan  perlakuan  saat proses produksi, namun investigasi mengenai kemampuan antioksidan squalene di hewan dan manusia masih perlu dilakukan.
Pyridin-3-carboxamide, oxime,n-(2- trifluoromethylphenyl)  termasuk  kedalam  golongan alkaloid.  Senyawa Pyridin-3-carboxamide,oxime,N-(2- trifluoromethylphenyl) yang merupakan golongan alkaloid telah diketahui selain memiliki aktivitas antioksidan juga dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram  negatif (Escherichia coli) dan Gram positif (Staphylococcus aureus) serta  aktif  dalam  menghambat  pertumbuhan Candida albicans dan Aspergillus niger [17].
Beta  sitosterol  merupakan  golongan  sterol  atau steroid diketahui memiliki aktivitas seperti hormon dan aprodisiak  [25].  Beta  sitosterol  juga  diketehui  terdapat pada  ekstrak  metanol  umbi  tanaman Eulophia  herbacea dan  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat,  serta diduga memiliki khasiat lain sebagai hormon estrogenik, antifertilitas,  mencegah  penyakit  hati,  antikanker  dan antidiabetes [26].

## 4. Kesimpulan
Penelitian  ini  mengungkapkan  bahwa  ekstrak  buah mengkudu  ( Morinda  citrifolia  L) memiliki  aktivitas antioksidan  dengan  persen  inhibisi  tertinggi  terdapat pada  fraksi  klorofom  yaitu  sebesar  78,19%.  Hasil identifikasi  kandungan  terbesar  buah  mengkudu  dalam fraksi  klorofom  adalah  senyawa n-Hexadecanoic  acid , Squalene, Pyridin-3-carboxamide, oxime, N-(2- trifluoromethylphenyl), dan Beta – sitostero.

## Daftar Pustaka
[1]  Roja  Rahimi,  Shekoufeh  Nikfar,  Bagher  Larijani, Mohammad  Abdollahi,  A  review  on  the  role  of antioxidants  in  the  management  of  diabetes  and  its complications, Biomedicine & Pharmacotherapy , 59, 7,
(2005) 365-373 https://doi.org/10.1016/j.biopha.2005.07.002
[2] Małgorzata Nita, Andrzej Grzybowski, The Role of the Reactive Oxygen Species and Oxidative Stress in the Pathomechanism of the Age-Related Ocular Diseases and  Other Pathologies  of  the  Anterior  and  Posterior Eye  Segments  in  Adults, Oxidative  Medicine  and Cellular Longevity , 2016, (2016) 23 https://doi.org/10.1155/2016/3164734
[3]  Yulong  Zhang,  Ping  Hu,  Lijiao  Lou,  Jianlong  Zhan, Min Fan, Dan Li, Qianwei Liao, Antioxidant Activities of  Lactic  Acid  Bacteria  for  Quality  Improvement  of
Fermented  Sausage, Journal  of  Food  Science ,  82,  12, (2017) 2960-2967 https://doi.org/10.1111/1750-3841.13975
[4]  Dixit  Rajiv  Ramesh,  Sanjay  C  Swami,  Total antioxidant  capacity  of  some  common  seeds  and effect  of  sprouting  and  its  health  benefits, International Journal of Chemical Studies , 4, 2, (2016) 25-27
[5]  S.  Kapila,  P.  R.  Sinha,  Antioxidative  and hypocholesterolemic effect of Lactobacillus casei ssp casei (biodefensive properties of lactobacilli), Indian journal of medical sciences , 60, 9, (2006) 361-370
[6]  Yiyun  Liu,  Haiming  Chen,  Wenxue  Chen,  Quipping Zhong,  Guanfei  Zhang,  Weijun  Chen,  Beneficial Effects  of  Tomato  Juice  Fermented  by  Lactobacillus Plantarum  and  Lactobacillus  Casei:  Antioxidation, Antimicrobial Effect, and Volatile Profiles, Molecules , 23, 9, (2018) 2366
https://doi.org/10.3390/molecules23092366
[7]  Abdul  Rohman,  Sugeng  Riyanto,  Nurul  Khusna Hidayati, Aktivitas  Antioksidan,  Kandungan  Fenolik Total, dan Flavonoid Total Daun Mengkudu ( Morinda citrifolia L), agriTECH , 27, 4, (2016) 147-151 https://doi.org/10.22146/agritech.9849
[8]  Sogandi,  Frensiska  Anggelia,  Lilih  Riniwasih,  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  96%  Daun Rambai  ( Sonneratia  Caseolaris ,(L.)  Engl)  Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  Coli , Indonesia Natural  Research  Pharmaceutical  Journal ,  2,  1,  (2017) 73-80
[9]  Anjar  Purba  Asmara,  Uji  Fitokimia  Senyawa Metabolit  Sekunder  dalam  Ekstrak  Metanol  Bunga Turi Merah ( Sesbania grandiflora L. Pers), Al Kimia , 5, 1, (2017) 48-59
[10] Direktorat Pengawasan Obat Tradisional - Departemen Kesehatan Republik Indonesia,
Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat, in, 2000.
[11]  Zeta  Kuntari,  Sumpono  Sumpono,  Nurhamidah Nurhamidah,  Aktivitas  Antioksidan  Metabolit Sekunder  Bakteri  Endofit  Akar  Tanaman Moringa oleifera L (Kelor), ALOTROP Jurnal Pendidikan dan Ilmu Kimia , 1, 2, (2017) 80-84
[12] Domnic Maxwell Colvin, A Review on Comparison of the Extraction Methods Used in Licorice Root: Their Principle,  Strength  and  Limitation, Medicinal  & Aromatic Plants , 7, 6, (2018) 1-4 https://doi.org/10.4172/2167-0412.1000323
[13] Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan  Republik Indonesia,  Kriteria  dan  Tata  Laksana  Pendaftaran Obat  Tradisional,  Obat  Herbal  Terstandar  dan Fitofarmaka,  in:  B.P.O.d.M.R.  Indonesia  (Ed.), Jakarta, 2005.
[14] Louis J. Kirschenbaum, Ben Ruekberg, A Correlation of  the  Solubility  of  Water  in  Hydrocarbons  as  a Function of Temperature Based on the Corresponding  Vapor  Pressure  of  Pure  Water, Chemical Sciences Journal , 2013, CSJ-101, (2013)
[15] Divya  Gupta,  Mukesh  Kumar,  Evaluation  of  in  vitro antimicrobial  potential  and  GC – MS  analysis  of Camellia sinensis and Terminalia arjuna , Biotechnology Reports , 13, (2017) 19-25 https://doi.org/10.1016/j.btre.2016.11.002
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 206 – 212
[16] Rudiyansyah,  Chia  Lang  Lang,  Gusrizal  Gusrizal, Andi  Hairil  Alimuddin,  Senyawa  Antrakuinon  yang Bersifat  Antioksidan  dari  Kayu  Akar  Tumbuhan Mengkudu  ( Morinda  citrifolia ), Bulletin  of  The Indonesian  Society  of  Natural  Products  Chemistry ,  12, (2012) 9-13
[17] J  Helan  Chandra,  Harini  Gunasekaran,  Screening  of phytochemical,  antimicrobial  and  antioxidant activity  of Glycyrrhiz  glabra root  extract, Journal  of Environmental Biology , 38, 1, (2017) 161-165
[18] Irina I. Koleva, Teris A. van Beek, Jozef P. H. Linssen, Aede  de  Groot,  Lyuba  N.  Evstatieva,  Screening  of Plant  Extracts  for  Antioxidant  Activity:  a Comparative  Study  on  Three  Testing  Methods, Phytochemical Analysis , 13, 1, (2002) 8-17 https://doi.org/10.1002/pca.611
[19] Gloria    Sindora,  Andi  Hairil    Allimudin,  Harlia, Identifikasi  Golongan  Senyawa  Antraquinon  pada Fraksi  Kloroform  Akar  Kayu  Mengkudu  ( Morinda citrifolia, L), Jurnal Kimia Khatulistiwa , 6, 1, (2017) 37-
41
[20] Zhong-hui Pu, Yu-qun Zhang, Zhong-qiong Yin, Jiao Xu,  Ren-yong  Jia,  Yang  Lu,  Fan  Yang,  Antibacterial Activity of 9-Octadecanoic Acid-Hexadecanoic Acid- Tetrahydrofuran-3,4-Diyl  Ester  from  Neem  Oil, Agricultural Sciences in China , 9, 8, (2010) 1236-1240 https://doi.org/10.1016/S1671-2927(09)60212-1
[21] Shah  Ankita,  Singh  Tribhuwan,  Vijayvergia  Rekha, GC-MS Analysis of Bioactive Phytoconstituents from
Rumex  vesicarius L., International  Research  Journal  of Pharmacy , 6, 4, (2015) 269-272
[22] D  Sheela,  F  Uthayakumari,  GC-MS  analysis  of bioactive constituents from coastal sand dune taxon- Sesuvium portulacastrum (L.), Bioscience discovery , 4,
1, (2013) 47-53
[23] Zih-Rou Huang, Yin-Ku Lin, Jia-You Fang, Biological and  Pharmacological  Activities  of  Squalene  and Related  Compounds:  Potential  Uses  in  Cosmetic Dermatology, Molecules , 14, 1, (2009) 540-554 https://doi.org/10.3390/molecules14010540
[24] Rohan  V.  Tikekar, Richard  D.  Ludescher,  Mukund  V. Karwe, Processing Stability of Squalene in Amaranth and  Antioxidant  Potential  of  Amaranth  Extract, Journal  of  Agricultural  and  Food  Chemistry ,  56,  22,
(2008) 10675-10678 https://doi.org/10.1021/jf801729m
[25] Keshav  Mahajan  Ghanashyam,  Yashwant  Mahajan Arun,  Totaram  Mahajan  Raghunath,  Efficacy  of Aphrodisiac  Plants  towards  Improvement  in  Semen Quality  and  Motility  in  Infertile  Males, Journal  of Complementary  and  Integrative  Medicine , 9, 1, (2012) 1-12 https://doi.org/10.1515/1553-3840.1520
[26]Patil  Manisha,  Patil  Chandrashekhar,  Mahajan Raghunath, Phytochemical Investigation and Validation  of  Antioxidant  Potential  of β -Sitosterol from  Tubers  of Eulophia  herbacea and Eulophia ochreata , International  Journal  of  Pharmacognosy  and Phytochemical Research , 10, 8, (2018) 309-316