EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr

## Pengaruh Konsentrasi Pupuk Walne Terhadap Laju Pertumbuhan dan Kandungan Klorofil-a Tetraselmis chuii
Nevanda Kusuma Wardani, Endang Supriyantini*, Gunawan Widi Santosa Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof.H.Soedarto S.H, Tembalang,Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail : supri_yantini@yahoo.com
ABSTRAK: Walne  merupakan  media  sintetis  yang  sering  digunakan  sebagai  media  kultur mikroalgae.   Pupuk Walne  sudah  cukup  memenuhi kebutuhan  nutrien  bagi  mikroalgae kultur jika dibandingkan  denga  pupuk  organik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  laju  pertumbuhan dan  kandungan  klorofil-a  mikroalga Tetraselmis  chuii pada  kultur  dengan  perbedaan  konsentrasi pupuk Walne.  Materi  yang  digunakan  adalah  mikroalga Tetraselmis  chuii dan  pupuk Walne  yang diperoleh  dari  Balai  Besar  Pengembangan  Budidaya  Air  Payau  (BBPBAP)  Jepara.  Metode penelitian  ini  adalah  percobaan  di  laboratorium  ( experimental  laboratory ).  Perlakuan  yang diberikan  adalah  dengan  pemberian  konsentrasi  pupuk  Walne  yang  berbeda.  Penelitian  ini menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  tiga  taraf  perlakuan,  yaitu  1  mL/L,  1,5 mL/L dan 2 mL/L. Puncak kepadatan sel dari konsentrasi 1 mL/L dan konsentrasi 1,5 mL/L terjadi pada  hari  ke-9,  dengan  jumlah  sel  259,25×10 4 sel/mL  dan  323,50×10 4 sel/mL,  sedangkan konsentrasi 2 mL/L mengalami puncak kepadatan pada hari ke-12 dengan jumlah sel 194,58 × 10 4 sel/mL.  Pemberian  pupuk  Walne  1,5  mL/L  menghasilkan  nilai  tertinggi  untuk  laju  pertumbuhan spesifik  dan  klorofil-a T.  chuii .  Nilai  laju  pertumbuhan  spesifik  tertinggi  adalah  0,38  sel/mL/hari dengan kandungan klorofil-a T.  chuii sebesar  2,392 mg/g  biomassa  basah.  Hasil  uji  ANOVA  dari data  laju  pertumbuhan  spesifik  dan  kandungan  klorofil-a  menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat perbedaan signifikan (p≥0,05). Konsentrasi yang bisa untuk meningkatkan laju pertumbuhan dan kandungan klorofil-a adalah konsentrasi 1,5 mL/L.

## Kata kunci: Kepadatan Sel; Kultur Mikroalgae; Makronutrien; Mikronutrien

## Effect of Concentration of Walne Fertilizer on Growth Rate and Content of Chlorophyll-a
Tetraselmis chuii
ABSTRACT:  Walne  is  a  synthetic  medium  that  is  often  used  as  a  microalgae  culture  medium. Walne  fertilizers  already  supply  a  complete  nutritional  needs  for  microalgae  cultivation  when compared  to  organic  fertilizer.  This  study  aims  to  determine  the  growth  rate  and  content  of chlorophyll-a  microalgae  Tetraselmis  chuii  in  cultures  with  different  concentrations  of  Walne fertilizer. The materials used were Tetraselmis chuii and Walne fertilizer obtained from Balai Besar Pengembangan  Budidaya  Air  Payau  (BBPBAP)  Jepara.  This  research  is  using  experimental laboratory  method.  The  treatment  given  was  to  differentiate  Walne  fertilizer  concentration.  This study used a completely randomized design (RAL) three levels treatment, which is 1 mL/L, 1.5 mL/L and  2  mL/L.  The  peak  of  cell  density  from  concentration  1  mL/L  and  concentration  1.5  mL/L occurred  on  day  9,  with  a  cell  number  of  259.25×104  cells/mL  and  323.50  ×  104  cells/mL,  while concentration 2 mL/L experienced a cell density peak on day 12 with a cell number of 194.58 × 104 cells/mL. The application of 1.5 mL/L Walne fertilizer resulted in the highest values  for the specific growth rate and chlorophyll-a of T. chuii. The highest specific growth rate value is 0.38 cell/mL/day with the  chlorophyll-a content of  T. chuii  is  2.392 mg /  g of wet biomass. The ANOVA test results from  the  growth  rate  and  chloropyll-a  content  showed  that  there  were  no  significant  differences (p≥0.05).  The  concentration  that  can  increase  the  growth  rate  and  chlorophyll-a  content  is  a concentration of 1.5 mL/L.

## Keywords: Cell Density; Microalgae Culture; Macronutrient; Micronutrient

## PENDAHULUAN
Mikroalgae merupakan salah satu contoh organisme yang memiliki peran sangat luas dalam bidang bioteknologi. Aplikasi mikroalgae sebagai produk bioteknologi diantaranya adalah sebagai
Journal of Marine Research Vol 11, No.1 Februari 2022, pp. 77-85
sumber  biodiesel,  agen remediasi  perairan tercemar,  dan  pakan  hewan  budidaya  (Schüler et  al. , 2020). Tetraselmis sp.  merupakan  mikroalgae  yang  tersebar  luas,  umum  ditemukan,  dan  terdiri dari berbagai spesies. Satu atau lebih spesies dari genus ini dapat dengan mudah ditemukan pada setiap  pengambilan  sampel  perairan  (Butcher,  1965). Tetraselmis sp.  memiliki  potensi  untuk dibudayakan  sebagai  pakan  alami  pada  kegiatan  budidaya  (Iksan et  al .,  2016).  Penggunan mikroalgae  seperti Tetraselmis sp.  sebagai  pakan  alami  seringkali  terkendala  pada  penyediaan dan  pertumbuhan  biomassanya.  Kandungan  pigmen  tertinggi  pada  mikroalgae  ini  adalah  klorofil dan karotenoid, dimana kedua pigmen tersebut dapat digunakan sebagai antioksidan, zat pewarna dan immunostimulan (Zainuddin et al. , 2017; Pereira et al. , 2019). Menurut Elmi (2018), diperlukan upaya  penyediaan  pakan  alami  yang  baik  dari  segi  kualitas  maupun  kuantitas.  Ketersediaan mikroalgae  secara  terus  menerus  dan  mudah  untuk  didapatkan  sangat  diperlukan  untuk menunjang  kegiatan  budidaya.    Salah  satu  spesies  Tetraselmis  yang  banyak  ditemukan  di perairan tropis adalah Tetraselmis chuii . Pemenuhan kebutuhan Tetraselmis chuii dari alam akan sangat  sulit  apabila  dilakukan  secara  terus  menerus,  sehingga  harus  dilakukan  produksi  massal secara baik. Ketersediaan Tetraselmis chuii dapat diperbanyak salah satunya dengan melakukan teknik kultur skala laboratorium (Setyawati et al. , 2018).
Penggunaan  media  kultur  dengan  pupuk  Walne  dinilai  lebih  baik  untuk  meningkatkan pertumbuhan mikroalgae hijau dibandingkan dengan media Guillard karena kandungan nutrisinya yang  lebih  baik  (Putri  dan  Alaa,  2019).  Penggunaan  pupuk  sintesis  seperti  pupuk  Walne  untuk kultur  mikroalga  juga  dinilai  lebih  praktis  karena  kandungan  nutriennya  yang  sudah  lengkap dibandingkan  dengan  pupuk  organik  (Budiono et  al. ,  2018).  Penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh Wiryadi  dan  Witono  (2018),  dengan  penambahan  konsentrasi  NaNO 3 mengakibatkan pertumbuhan Nannochloropsis sp.  yang  semakin  meningkat.  Ezeani  dan  Abu  (2019),  melakukan penelitian  terhadap  pigmen Chlorella sp.  dengan  pupuk  yang  berbeda.  Perbedaan  pupuk  yang diberikan  dalam media kultur Chlorella sp.  menghasilkan kadar klorofil  yang  berbeda  hampir  dua kali  lipat.  Berdasarkan  latar  belakang  yang  telah  diuraikan,  maka  perlu dilakukan  penelitian  lebih lanjut  mengenai  laju  pertumbuhan  dan  kadar  klorofil-a  pada  mikroalga Tetraselmis  chuii dengan perbedaan konsentrasi pupuk Walne dalam media kulturnya.

## MATERI DAN METODE
Kultivasi  mikroalga  dilakukan  pada  tanggal  18  Februari  -  08  April  2021  di  Laboratorium Biologi  Laut  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  Universitas  Diponegoro.  Preparasi  sampel ekstrak  klorofil  mikroalga  dilakukan  di  Laboratorium  Molekuler  dan  Laboratorium  Biologi  Laut Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  Universitas  Diponegoro  pada  tanggal  02 –  13  April  2021 dan pembacaan spektrofotometri dilakukan di Laboratorium  Balai Pengujian dan Peralatan (BP2) Semarang  pada  tanggal  14  April  2021.  Bibit  mikroalgae Tetraselmis  chuii dan pupuk  Walne diperoleh  dari  Balai  Besar  Pengembangan  Budidaya  Air  Payau  (BBPBAP)  Jepara.  Alat  yang digunakan  untuk  penelitian  antara  lain  :  botol  kaca  steril,  aerator,  mikroskop,  pH  meter, Refraktometer,  pipet  tetes, haemocytometer , sentrifuge dan  spektrofotometer.  Bahan  yang digunakan  untuk  penelitian  antara  lain  :  air  laut steril,  bibit  mikroalga Tetraselmis  chuii ,  Akuades, Aseton, Lugol dan Kertas Whatmann . Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode percobaan  di  laboratorium  ( experimental  laboratory ),  yang  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  perlakuan  dengan  tiga  taraf  perlakuan  penelitian,  dimana  masing-masing  taraf perlakuan diulang tiga kali. Taraf perlakuan tersebut berupa pemberian konsentrasi pupuk Walne 1 mL/L, 1,5 mL/L dan 2 mL/L. Penentuan konsentrasi pupuk didasarkan oleh penelitian Pramusinta et  al .  (2012),  dimana  penambahan  pupuk  cair  sebagai  nutrien  tambahan  memiliki  batas  optimal pada 1,5 mL/L. Data kepadatan sel dan data pendukung kualitas air berupa pH, salinitas, oksigen terlarut dan suhu diukur setiap hari pukul 10.00 pagi.
Langkah awal untuk memulai kultur adalah sterilisasi alat dan bahan kultur yang dilakukan untuk  membunuh  mikroorganisme  yang  dapat  menjadi  kontaminan  pada  saat  kultur  mikroalgae. Sterilisasi botol kaca dilakukan dengan menggunakan Lampu UV dan alkohol 70% (Ilhamdy et al. , 2020). Air laut disetrilkan dengan cara disaring menggunakan kapas yang diletakkan pada corong air,  kemudian  air  laut  direbus  selama  kurang  lebih  15  menit  atau  hingga  mendidih.  Air  laut  yang telah direbus kemudian dibiarkan hingga suhunya turun lalu disaring kembali dengan kapas filter.
Journal of Marine Research Vol 11, No.1 Februari 2022, pp. 77-85
Peralatan  kultur  lainnya,  seperti  plastik,  botol  vial,  pipet  dan  selang  dapat  disterilkan  dengan alkohol 70% dengan cara menyemprotkan alkohol pada alat dan dibiarkan hingga kering (Putra et al. , 2015).
Pembuatan  media  kultur  menggunakan  botol  yang  masing –  masing  berkapasitas  1  liter dan  diisi  air  laut  sebanyak  kurang  lebih 700 mL/botol  yang  sudah  diukur  salinitasnya  sebesar  30 ppt.  Media  air  laut  ditambahkan  pupuk  dengan  konsentrasi  yang  telah  disesuaikan  dan  diberi aerasi (Zainuddin et al. , 2017).
Bibit T.  chuii terlebih  dahulu  dilakukan kultur  starter  yang  bertujuan  untuk  memperpendek masa  adaptasi  mikroalgae  pada  media  kultur  yang  lebih  besar. Starter mikroalga T.  chuii dibuat sebanyak  3  liter  dalam  1  botol  kultur  yang  berkapasitas  3,2  L.  Pembuatan starter menggunakan perbandingan  air  laut  :  mikroagae  sebesar  70  :  30.  Setiap  botol  kultur  yang  telah  berisi starter kemudian  ditambahkan  dengan  pupuk  Walne  sebanyak  1  mL/L  sebagai  sumber  nutriennya  dan diberi  aerasi.  Masa  kultur starter dilakukan  selama  7  hari  atau  sampai  memasuki  fase  stasioner (Putra et al. , 2015).
Kultur  perlakuan T.  chuii pada  setiap  wadah  dibuat  dengan  perbandingan  antara mikroalgae starter dengan air laut steril adalah 30 : 70,  yaitu 300 mL inokulan mikroalgae dengan 700  mL  media  air  laut.  Kultur  mikroalgae  dilakukan  selama  kurang  lebih  10  hari  atau  setelah mencapai  fase  stationer  (Swandewi et  al .,  2017).  Pupuk  Walne  dengan  konsentrasi  yang  telah disesuaikan kemudian ditambahkan pada media kultur, masing – masing 1 mL/L; 1,5 mL/L; dan 2 mL/L. Masing – masing perlakuan konsentrasi dilakukan tiga kali pengulangan.
Perhitungan kepadatan sel mikroalgae T. chuii dilakukan sekali dalam 24 jam. Kepadatan sel dihitung  menggunakan haemocytometer ,  mikroskop  dan hand  counter .  Perbesaran  mikroskop yang digunakan adalah 40x. Sampel diambil sebanyak 0,1 –0,5 mL menggunakan pipet tetes, lalu ditambahkan  larutan  lugol  sebanyak  2  tetes,  selanjutnya  diteteskan  pada haemocytometer dan diamati dibawah mikroskop (Negara et al. , 2019). Tujuan penambahan larutan lugol adalah untuk mengawetkan  sampel  dan  memudahkan  dalam  perhitungan  sel  tanpa  merusak  sel  mikroalga (Bimantara et al ., 2017).
Perhitungan  kepadatan  sel  mikroalgae  dilakukan  dengan  menghitung  sel  mikroalgae  yang terdapat pada empat blok besar (blok A, C, G, I) haemocytometer . Rumus yang digunakan untuk menghitung  kepadatan  sel  mikroalgae  adalah  sebagai  berikut  (Endrawati et  al .,  2012).  Data  laju pertumbuhan  dihitung  menggunakan  data  kepadatan  sel  yang  sudah  didapat.  Laju  pertumbuhan spesifik sel mikroalgae dapat dihitung menggunakan rumus menurut Wahyuni et al . (2019).
Menurut Pisal dan Lele (2005), analisis pigmen klorofil-a dapat dilakukan dengan mengambil kultur  basah  mikroalga.  Pengambilan  ekstrak  mikroalgae  dilakukan  dengan  cara  pemanenan menggunakan  teknik  sentrifugasi  (Hartini et  al .,  2018).  Biomassa  mikroalgae  sebanyak  500  mL diambil  kemudian  disentrifugasi  dengan  kecepatan  3500  rpm  selama  5  menit.  Natan  lalu  diambil sebanyak 1 mL menggunakan pipet. Larutan aseton kemudian ditambahkan untuk mengencerkan filtrat  dengan  perbadingan  9  :  1  (9  mL  aseton  dan  1  mL  natan).  Sampel  yang  telah  diencerkan dengan aseton kemudian dihomogenisasi. Setelah dihomogenkan, sampel di-sentrifugasi kembali dengan  kecepatan  3500  rpm  selama  5  menit.  Supernatan  diambil  dengan  cara  disaring menggunakan  kertas whatmann no.  41.  Menurut  Nollet  (2004),  kadar  klorofil  dapat  dilakukan dengan cara mengukur nilai absorbansi supernatan mikroalgae pada panjang gelombang 645 nm dan 663 nm.
Data  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini  berupa  data  laju  pertumbuhan  dan  kandungan klorofil-a dari mikroalgae T. chuii yang sudah diberi perlakuan beberapa konsentrasi pupuk Walne. Semua  data  akan  dianalisis  menggunakan Analysist  of  Variance (ANOVA)  satu  arah  dengan menggunakan software SPSS  25  untuk  mengetahui  pengaruh  perlakuan.  Sebelum  dilakukan  uji ANOVA  terlebih  dahulu  dilakukan  uji  normalitas  dan  homogenitas.  Derajat  kepercayaan  yang digunakan sebesar 95% atau dengan taraf signifikan sebesar 5% (Jayardi et al. , 2017). Data hasil penelitian  kemudian  dianalisis  dengan  statistika  inferensial,  dimana  metode  ini  merupakan  cara objektif  untuk  mengumpulkan,  mengolah,  dan  menganalisis  data  kuantitatif  untuk  menarik kesimpulan (Sutopo dan Slamet, 2017).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kepadatan awal sel Tetraselmis chuii yang dikultur adalah 33,5x10 4 sel/mL, namun satu hari setelahnya ketiga perlakuan konsentrasi kultur mengalami penurunan jumlah sel. Menurut Negara et al. (2019), fase adaptasi mikroalga Tetraselmis chuii terjadi selama 1 – 3 hari. Fase adaptasi ini dapat  dipengaruhi  oleh  ketersediaan  nutrien  pada  media  kultur.  Semakin  sedikit  nutrien  pada media, maka semakin lama masa adaptasi Tetraselmis chuii karena harus menyesuaikan nutrien yang  ada.  Pertumbuhan Tetraselmis  chuii (Tabel  1)  menunjukkan  peningkatan  jumlah  sel  pada hari ke-2 hingga hari ke-9 untuk perlakuan yang diberikan konsentrasi pupuk 1 mL/L dan 1,5 mL/L, sedangkan  peningkatan jumlah  sel  pada konsentrasi  pupuk  2 mL/L terjadi  pada  hari ke-2  hingga hari ke-12.
Putri et  al .  (2013),  menyebutkan  bahwa  fase  eksponensial  mikroalga  ditandai  dengan adanya  peningkatan jumlah  sel  mikroalga.  Fase ini  menunjukkan  bahwa Tetraselmis  chuii sudah dapat  memanfaatkan  nutrien  yang  ada  untuk  pertumbuhan  dan  pembelahan  selnya.  Puncak kepadatan perlakuan pupuk 1 mL/L dan 1,5 mL/L terjadi pada hari ke-9 dengan nilai kepadatan sel konsentrasi  1  mL/L  259,25  ×  10 4 sel/mL  dan  konsentrasi  1,5  mL/L  323,50    ×  10 4 sel/mL, sedangkan  perlakuan  pupuk  2  mL/L  mengalami  puncak  kepadatan  pada  hari  ke-12  dengan  nilai 194,58  ×  10 4 sel/mL.  Menurut  Negara et  al. (2019),  fase  stasioner  merupakan  fase  dimana mikroalga  mencapai  puncak  kepadatannya.  Fase  ini  terjadi  karena  sel  telah  mencapai  titik  jenuh sehingga tingkat pertumbuhan sama dengan tingkat kematian selnya.
Pratiwi et  al. (2019),  menyebutkan  bahwa  pemberian  nutrisi  berlebih  akan  mengakibatkan kondisi stress pada  mikroalgae  budidaya  dan  berujung  pada  penurunan biomassa.  Pertumbuhan mikroalga  dipengaruhi  oleh  ketersediaan  nutrisi  pada  media  tumbuh  yang  terbagi  menjadi makronutrien  dan  mikronutrien.  Menurut  Brahmantara et  al. (2015),  nitrat  dan  fosfor  merupakan nutrient makro yang dibutuhkan untuk pertumbuhan sel mikroalga. Kandungan fosfor yang berlebih akan mempengaruhi pertumbuhan sel mikroalga. Kelebihan konsentrasi fosfor pada media tumbuh akan  berdampak  pada  terhambatnya  proses  asimilasi  senyawa  fosfor  untuk  pertumbuhan mikroalga  (Swandewi et  al .,  2017).  Pertumbuhan  mikroalgae  dipengaruhi  juga  oleh  ketersediaan mikronutrien  dalam  media  tumbuhnya.  Mikronutrien  yang  terkandung  dalam  pupuk  Walne  yang diberikan pada kultur Tetraselmis chuii antara lain Fe, Cu, Co, Zn dan Mn. Pranajaya et al. (2014), menyebutkan  bahwa  konsentrasi  Cu  yang  berlebih  dalam  media  dapat  berakibat  toksik  bagi  sel mikroalga  dan  menghambat  pertumbuhan.  Ion  logam  Cu  dapat  menganggu  metabolisme mikroalgae  karena  Cu  akan  berkompetisi  dengan  senyawa  lain  pada  sisi  aktif  enzim  sehingga pertumbuhan mikroalgae menjadi rendah atau tidak tumbuh sama sekali.
Tabel 1. Kepadatan Sel Harian Tetraselmis chuii
Hari ke - Kepadatan Sel Rata – Rata (x10 4 sel/mL) Kontrol 1,5 ml/L 2 ml/L 0 33,50±0 33,50±0 33,50±0 1 23,58±1,28 14,83±2,25 6±0,90 2 74,58±3,45 52,83±7,84 11,83±2,70 3 132±28,23 111±7,51 20,75±3,03 4 158,42±24,38 148,67±36,97 40,17±17,95 5 162,08±29,04 165,50±5,86 57,17±36,46 6 215,17±87,35 196,17±29,77 85,42±36,28 7 184,58±55,81 220,08±29,17 108±43,05 8 248,50±89,79 223,67±40,88 121,92±47,82 9 259,25±121,62 323,50±69,74 119,25±80,89 10 238,50±93,74 317,42±55,02 112,08±72,50 11 242,42±57,07 301,67±51,84 167,92±69,88 12 215,42±41,21 283,50±111,71 194,58±63,75 13 189,08±48,92 226,42±45,31 178,17±65,75
Journal of Marine Research Vol 11, No.1 Februari 2022, pp. 77-85
Nilai  laju  pertumbuhan  spesifik  rata-rata  sel  mikroalga Tetraselmis  chuii disajikan  dalam Tabel  2.  Nilai  laju  pertumbuhan  spesifik  tertinggi  ada  pada  konsentrasi  pupuk  1,5  mL/L,  yaitu sebesar  0,38  sel/mL/hari.  Laju  pertumbuhan spesifik  pada konsentrasi  2 mL/L memiliki  nilai  0,36 sel/mL/hari, sedangkan pada konsentrasi 1 mL/L memiliki nilai laju pertumbuhan spesifik sebesar 0,29 sel/mL/hari.
Laju  pertumbuhan T.  chuii yang  diberikan  pupuk  Walne  dengan  konsentrasi  1,5  mL/L memiliki nilai paling tinggi diantara taraf perlakuan lainnya. Tetraselmis chuii yang diberikan pupuk 1  mL/L  memiliki  nilai  laju  pertumbuhan  terendah  dibanding  taraf  perlakuan  lainnya.  Berdasarkan Wahyuni et  al .  2019),  nilai  laju  pertumbuhan  yang  rendah  dapat  disebabkan  karena  kandungan nitrogen  dan  fosfat  terlarut  yang  tidak  dapat  diserap  dengan  baik  oleh  sel  mikroalga.  Aulia et  al . (2021),  menyatakan  bahwa  nilai  laju  pertumbuhan  spesifik  yang  semakin  tinggi  menunjukkan bahwa  daya  dukung  media  terhadap  mikroalgae  semakin  baik.  Menurut  Oktaviani et  al .  (2017), semakin  tinggi  kadar  nitrat  pada  media  kultur,  maka  akan  semakin  tinggi  pula  nilai  laju pertumbuhan mikroalgae. Hal ini disebabkan karena nitrat merupakan makronutrien penting yang digunakan  untuk  pembentukan  klorofil,  sehingga  suplai  nitrat  yang  tinggi  akan  berakibat  pada pembelahan sel dan fotosintesis yang lebih tinggi.
Kandungan  rata – rata klorofil-a pada  mikroalga Tetraselmis  chuii (Gambar  3)  menunjukan nilai tertinggi hingga terendah pada konsentrasi pupuk 1,5 mL/L; 1 mL/L; dan 2 mL/L, yaitu berturut – turut sebesar 248,81 mg/L; 165,33 mg/L; dan 145,02 mg/L. Nilai klorofil-a yang diubah menjadi satuan  miligram  /  gram  biomassa  basah  pada  perlakuan  1,5  mL/L;  1  mL/L;  dan  2  mL/L  adalah 2,3924  mg/g  biomassa basah;  1,6370 mg/g  biomassa  basah;  dan  1,4217 mg/g  biomassa  basah. Qaishum et al . (2015), menyatakan bahwa kandungan total klorofil pada Tetraselmis chuii berkisar antara 3,65 – 19,20 mg/g.
Tabel 2. Laju Pertumbuhan Spesifik Rata- Rata Tetraselmis chuii ( x̄ ± SD, n = 3)
Konsentrasi/ Ulangan 1 mL/L 1,5 mL/L 2 mL/L 1 0,34 0,40 0,32 2 0,29 0,41 0,28 3 0,24 0,34 0,46 Rerata ± SD 0,29 ±0,05 0,38 ±0,04 0,36±0,09
Gambar 1. Kandungan Klorofil-a Tetraselmis chuii (mg/L)
a 165,33 a 248,81 a 145,02 0 50 100 150 200 250 300 350 400 Kontrol 1,5 mL/L 2 mL/L K lorof il- a (m g /L) Konsentrasi Perlakuan
Keterangan  :  Angka  dengan  huruf  yang  sama  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  nyata berdasarkan uji ANOVA pada taraf 5% (p≥0,05)
Apabila  kandungan  klorofil-a  (Gambar  1)  dikaitkan  dengan  kepadatan  sel Tetraselmis  chuii (Tabel  1),  maka  laju  petumbuhan  sel  sebanding  dengan  kadar  klorofil-a  yang  didapat.  Menurut Oktaviani et al .  (2017),  jumlah  biomassa  mikroalgae  berkaitan  dengan  proses  fotosintesis  oleh klorofil dan sintesis klorofil-a dapat berlangsung dengan baik apabila ketersediaan N dalam media sudah cukup sesuai. Nitrogen dibutuhkan sebagai elemen penyusun klorofil dan protein pada sel mikroalga.  Semakin  tinggi  kadar  nitrat  maka  semakin  tinggi  biomassa  dan  klorofil-a  yang dihasilkan.
Konsentrasi  unsur  mikro  yang  berbeda  dalam  pupuk  juga  akan  mempengaruhi  proses pembuatan  klorofil.  Menurut  Apriati  (2021),  unsur  yang  berperan  penting  dalam  pembentukan klorofil  pada  mikroalgae  adalah  Fe  dan  Mg.  semakin  tinggi  kandungan  Fe  dan  Mg  dalam  suatu media, maka semakin tinggi pula kadar klorofil yang dihasilkan. Berdasarkan Pratiwi et al . (2019), magnesium memiliki peranan fisiologis bagi tanaman karena merupakan komponen utama dalam molekul  klorofil.  Setidaknya  15 –30%  magnesium  yang  terdapat  pada  tanaman  tergabung  dalam molekul klorofil. Menurut Primaryadi et al . (2015), Magnesium (Mg) berperan dalam pembentukan klorofil pada proses pertumbuhan mikroalgae. Selain itu Mg juga mengatur penyerapan unsur lain seperti P dan K.
Pengukuran  parameter  media  kultur Tetraselmis  chuii dilakukan  setiap  hari  meliputi pengukuran suhu, salinitas, pH dan DO. Suhu media kultur pada ketiga perlakuan berkisar antara 18,5 o –21 o C, salinitas berkisar antara 28 –34 ppt, nilai pH antara 7,05–8,69 dan nilai DO antara 5,8– 7,5 mg/l (Tabel 3).
Adanya  kenaikan  suhu  pada  masa  kultur  berakibat  pada  menurunnya  kepadatan  sel konsentrasi  1  mL/L  dan  1,5  mL/L.  Kultur T.  chuii pada  konsentrasi  2  mL/L  mengalami  kenaikan suhu  menjadi  20 o C  pada  hari  ke-10  dan  seterusnya,  dimana  kepadatannya  mulai  mengalami penurunan  setelah  hari  ke-12  dan  seterusnya.  Hal  ini  sesuai  dengan  Endrawati  dan  Ita  (2013), bahwa kondisi suhu akan berpengaruh pada laju fotosintesis sel microalgae. Gas – gas seperti O 2 dan CO 2 yang digunakan dalam proses fotosintesis lebih mudah terlaruh dalam suhu yang rendah, akibatnya laju fotosintesis akan meningkat pada suhu yang rendah.
Apabila nilai pH kultur T. chuii dikaitkan dengan nilai kepadatan selnya maka sejalan dengan naiknya  nilai  pH,  kepatadan  sel T.  chuii juga  ikut  meningkat.  Hal  ini  sesuai  dengan  Sayadi et  al. (2016), bahwa nilai pH bertambah sesuai dengan bertambahnya jumlah sel mikroalga dan naiknya kadar  nitrat  dan  fosfat  pada  media.  Kenaikan  nilai  pH  disebabkan  karena  adanya  pengendapan fosfat pada media kultur.
Salinitas  awal  kultur Tetraselmis  chuii adalah  30  ppt,  namun  terjadi  penurunan  maupun kenaikan selama masa kultur.  Rata – rata salinitas media kultur masih ada dalam batas toleransi pertumbuhan Tetraselmis  chuii .  Berdasarkan  Fitriyanto  dan  Soeprobowati  (2013),  nilai  salinitas secara  alami  dapat  mengalami  peningkatan  karena  respirasi  dari  organisme  dalam  air  akan meningkatkan proses mineralisasi yang menyebabkan kadar garam meningkat.

## Tabel 3. Parameter Media Kultur
Konsentarasi/ Ulangan Kisaran hasil pengukuran Suhu (°C) Salinitas (ppt) pH DO (mg/l) 1 mL/L (Kontrol) 1 19 - 21 28 – 32 7,05 – 7,99 6,1 – 7 2 19 – 20,5 27 – 30 7,29 – 7,99 5,9 – 6,6 3 19 – 21 27 – 31 7,46 – 8,69 6,2 – 7,1 1,5 mL/L 1 19 – 20 28 – 30 7,29 – 8,32 6,2 – 6,9 2 19 – 20 29 – 31 7,33 – 8,68 6,2 – 6,9 3 19 – 21 29 – 31 7,12 – 8,39 6,3 – 6,8 2 mL/L 1 18,5 – 20,5 30 – 34 7,13 – 8,36 5,8 – 7,5
2 18,5 - 20 30 – 34 7,12 – 7,97 5,7 – 6,5 3 19 – 20,5 30 – 34 7,07 – 8,66 6,1 – 6,8
Ketersediaan  oksigen  terlarut  pada  media  kultur  berpengaruh  terhadap  pembentukan molekul  organik  melalui  proses  fotosintesis.  Kandungan  oksigen  terlarut  untuk  pertumbuhan mikroalgae  memiliki  nilai  optimal  antara  4,65 –  6,27  mg/l ( Maulana et  al .,  2017).  Nilai  oksigen terlarut  yang  diukur  pada  masa  awal  kultur  untuk  ketiga  taraf  perlakuan  bernilai  antara  6,8 –  7 mg/L.  Pengukuran  oksigen  terlarut  selama  masa  kultur  selanjutnya  menunjukkan  nilai  yang  lebih rendah,  dimana  nilai  oksigen  terlarut  berbanding  terbalik  dengan  nilai  suhu.  Ketika  suhu  kultur mengalami peningkatan maka nilai oksigen terlarut yang terukur akan mengalami penurunan. Nilai oksigen terlarut yang turun menandakan bahwa proses fotosisntesis tidak lancar (Nurhayati et al ., 2013).

## KESIMPULAN
Perbedaan  konsentrasi  pupuk  Walne  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap  peningkatan  laju pertumbuhan  (p=0,280)  dan  kandungan  klorofil-a  (p=0,463)  mikroalga Tetraselmis  chuii. Namun demikian  konsentrasi  pupuk  Walne  1,5  mL/L  dapat  meningkatkan  laju  pertumbuhan  dan kandungan klorofil-a Tetraselmis chuii sebesar 0,38 sel/ml/hari dan 248,81 mg/L atau 2,392 mg/g biomassa basah.

## DAFTAR PUSTAKA
Apriati,  D.  2021.  Kadar  Klorofil Chlorella  pyrenoidosa dalam  Berbagai  Konsentrasi  Limbah  Cair Tahu. UNBARA Environmental Engineering Journal , 01(02):1-8 Aulia, A.E., Maimunah, Y. & Suprastyani, H. 2021. Penggunaan Ekstrak Daun  Lamtoro ( Leucaena Leucocephala )  sebagai  Pupuk  dengan  Salinitas  yang  Berbeda  terhadap  Laju. Journal  of Fisheries and Marine Research , 5(1):47 –55.
Bimantara,  A.,  Santri,  D.J.  &  Susanti,  R.  2017.  Pengaruh  Pupuk  Cair  Anorganik  terhadap Kepadatan  Fitoplankton  dan  Sumbangannya  pada  Pembelajaran  Biologi  di Prosiding Seminar Nasional Pendidikan IPA , pp. 415 –427.
Brahmantara,  I.B.G.,  Anggreni,  A.A.M.D.  &  Gunam,  I.B.W.  2015.  Pengaruh  Konsentrasi Penambahan  Sodium  Nitrat  dan  Sodium  Fosfat  pada  Media  Guillard  terhadap  Konsentrasi Biomassa  Mikroalga Nannochloropsis sp. Jurnal  Rekayasa  dan  Manajemen  Agroindustri , 3(4):73-81.
Budiono,  R.,  Juahir,  H.  &  Mamat,  M.  2018.  Modelling  Interaction  of  CO 2 Concentration  and  the Biomass Algae Due to Reduction of Anthropogenic Carbon Based on Predator-Prey Model. International Journal of Applied Environmental Sciences , 13(1):27 –38. Butcher, R.W. 1965. An Introductory Account of the Smaller Algae of British Coastal Waters. Part V.  Bacillariophyceae  (Diatoms). London:  Ministry  of  Agriculture,  Fisheries  and  Food.  DOI  : 10.2307/2258001.
Ezeani, S. & Abu, O.G. 2019. Commercial Microalgae Culture in Inorganic Fertilizer Media. Current Journal of Applied Science and Technology , 38(4):1 –9. DOI: 10.9734/cjast/2019/v38i430372. Elmi,  D.  2018.  Pengaruh  Pemberian  Darah  Ikan  Tongkol  ( Euthynnus  affinis )  dengan  Dosis  yang Berbeda terhadap Laju Pertumbuhan dan Kepadatan Populasi Infusoria The Effect of Blood Tuna Fish ( Euthynnus affinis ) With Different Doses on the Growth Rate and Population Den, Jurnal Ilmiah Mahasiswa Kelautan dan Perikanan Unsyiah , 3(1):33-38.
Endrawati,  H.,  Manulang,  C.  &  Widianingsih,  2012.  Densitas  dan  Kadar  Total  Lipid  Mikroalga Spirulina  platensis yang  Dikultur  pada  Fotoperioda  yang  Berbeda. Buletin  Oseanografi Marina , 1(3):33-38. DOI: 10.14710/buloma.v1i3.6908. Endrawati,  H.  &  Ita,  R. 2013.  Kadar  Total  Lipid  Mikroalga Nannochloropsis  oculata yang  Dikultur dengan  Suhu  yang  Berbeda. Buletin  Oseanografi  Marina ,  2(1):  25-33.  DOI: 10.14710/buloma.v2i1.6923.
Fitriyanto,  E.B.  &  Soeprobowati,  T.R.  2013.  Pemanfaatan  Plasma  Lucutan  Pijar  Korona  sebagai Sumber  Nutrien  Alternatif  pada  Monokultur Dunaliella  salina (Dunal), Prosiding  Seminar
Nasional Biologi , 1:277 –279.
Hartini,  H.,  Lasmini,  T,  Pratiwi,  M.  &  Juita,  E.  2018.  Potensi  Biopigmen Chlorella sp.  sebagai Antibakteri Staphilococcus aureus . Jurnal Sains dan Teknologi Laboratorium Medi k, 3(1):1-7. Iksan, Junaidi, M. & Mukhlis, A. 2016. Pengaruh Pemberian Ragi Roti dengan Dosis yang Berbeda terhadap Pertumbuhan Populasi Brachionus Plicatilis. Jurnal Biologi Tropis , 16(1):1 –9. DOI:
10.29303/jbt.v16i1.218.
Ilhamdy,  A.F.,  Jumsurizal,  Darwin,  &  Tambunan,  Y.F.S.  2020.  Kultivasi Spirulina  platensis Menggunakan Media Walne dalam Skala Laboratorium. Marinade, 3(2):114-120. Jayardi,  A., Irawan,  H.  &  Julianto, T.  2017.  Pengaruh  Pemberian  Fitoplankton( Tetraselmis  Chuiii, Tetraselmis  Suecica dan Nanochloropsis  Oculata )  yang  Berbeda  terhadap  Pertumbuhan Kopepoda Apocyclops sp. Intek Akuakultur , 1(2): 23 –42.
Maulana,  P.M.,  Karina,  S.  &  Mellisa,  S.  2017.  Pemanfaatan  Fermentasi  Limbah  Cair  Tahu Menggunakan  Em4  sebagai  Alternatif  Nutrisi  bagi  Mikroalga Spirulina sp. Jurnal  Ilmiah Mahasiswa Kelautan dan Perikanan Unsyiah , 2(1):104 –112.
Negara,  B.F.S.P.,  Nursalim,  N.,  Herliany,  N.E.,  Renta,  P.P.,  Purnama,  D.  &  Utami,  M.A.F.  2019. Peranan dan Pemanfaatan Mikroalga Tetraselmis chuii sebagai Bioetanol, Jurnal Enggano, 4(2):136-147.
Nollet,  L.M.  2004. Handbook  of  Food  Analysis: Volume  1:  Physical  Characterization  and  Nutrient Analysis. CRC Press, United States.
Nurhayati,  T.,  Mustofa,  L.  &  Mochammad,  B.H.  2013.  Penggunaan  Fotobioreaktor  Sistem  Batch Tersirkulasi terhadap Tingkat Pertumbuhan Mikroalga Chlorella vulgaris , Chlorella sp . dan Nannochloropsis oculata , Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis dan Biosistem , 1(3): 249 –257. Oktaviani, D., Adisyahputra & Amelia, N. 2017, Pengaruh Kadar Nitrat terhadap Pertumbuhan dan Kadar Lipid Mikroalga Melosira sp. sebagai Tahap Awal Produksi Biofuel, Jurnal Risenologi KPM UNJ , 2(1): 1 –13.
Pereira, H., Silva, J., Santos, T., Gangadhar, K.N., Raposo, A., Nunes, C., Coimba, M.A., Gouveia, L.,  Barreira,  L.  &  Varela,  J.  2019.  Nutritional  Potential  and  Toxicological  Evaluation  of Tetraselmis sp.  CTP4  Microalgal  Biomass  Produced  in  Industrial  Photobioreactors. Molecules , 24(17):1 –18. DOI: 10.3390/molecules24173192. Pisal,  D.S.  &  Lele,  S.S.  2005.  Carotenoid  Production  from  Microalga, Dunaliella  salina . Indian Journal of Biotechnology , 4(4):476 –483.
Pramusinta, G., Masithah, E.D., & Rahardja, B.S. 2012. Pengaruh Pemberian Pupuk Cair Limbah Ikan  Lemuru  terhadap  Kandungan  Karotenoid Spirulina  platensis. Journal  of  Marine  and Coastal Science , 1(1):91 –100.
Pranajaya,  R.H.,  Ali,  D,  &  Bambang,  Y.  2014.  Pengaruh  Tembaga  terhadap  Kandungan  Pigmen dan Pertumbuhan Mikroalga Merah Porphyridium cruentum . Ilmu Kelautan , 19(2):97 –104. Pratiwi,  A.,  Rohmat  &  Purba,  E.  2019,  Penentuan  Jumlah  Nutrisi  Magnesium  dari  MgSO 4 .7H 2 O dan  Besi  dari  FeSO 4 .7H 2 O  pada  Kultivasi Tetraselmis  chuii terhadap  Kandungan  Lipid Maksimum. Jurnal Kelitbangan, 7(1):75-86. Primaryadi, I.N.B., Anggreni, A.A.M.D. & Wartini, N.M. 2015. Pengaruh Penambahan Magnesium Sulfat  Heptahidrat  dan  Feri  Klorida  pada  Blue  Green  Medium-11  terhadap  Konsentrasi Biomassa Mikroalga Tetraselmis chuii. Jurnal Rekayasa dan Manajemen Agroindustri , 3(2): 92-100.
Putra,  I.K.R.W.,  Anggreni,  A.A.M.D.  &  Arnata,  I.W.  2015.  Pengaruh  Jenis  Media  terhadap Konsentrasi Biomassa dan Klorofil Mikroalga Tetraselmis chuii. Jurnal Rekayasa , 3(2):40 –46. Putri, B., Vickry, A.H., & Maharani, H.W. 2013. Pemanfaatan Air Kelapa sebagai Pengkaya Media.
Prosiding Seminar FMIPA Universitas Lampung , pp. 135 –142.
Putri, D.S. & Alaa, S. 2019. The Growth Comparison of Haematococcus pluvialis in Two Different Medium. Biota , 12(2):90 –97. DOI: 10.20414/jb.v12i2.202. Qaishum,  F.,  Amun,  A.  &  Syelvia,  P.U.  2015.  Hidrolisis  Mikroalga Tetraselmis  chuii Menjadi Glukosa  Menggunakan  Solvent  H 2 SO 4 dengan  Variasi  Waktu  Hidrolisis, Jom    Fteknik , 2(1):1 –5.
Sayadi,  M.H.,  Ahmadpour,  N.,  Capoorchali,  M.F.  &  Rezaei,  M.R.  2016.  Removal  of  Nitrate  and Phosphate from Aqueous Solutions by Microalgae: An experimental study. Global Journal of Environmental Science and Management , 2(4): 357 –364. DOI: 10.22034/gjesm.2016.02.04.005.
Schüler, L.M., Santos, T., Pereira, H., Duarte. P.,Gangadhar, K.N., Floroindo, C., Schulze, P.S.C., Barreira, L. & Varela, J.C.S. 2020. Improved Production of L utein and β-carotene by Thermal and Light Intensity Upsift in the Marine Microalga Tetraselmis sp. CTP4’, Algal Research , 45: 1 –9. DOI: 10.1016/j.algal.2019.101732. Setyawati, F., Satyantini, W.H., Arief, M. & Kismiyati, 2018. Tenik Kultur Tetraselmis chuii dalam Skala  Laboratorium  DI  PT.  Central  Pertiwi  Bahari,  Rembang,  Jawa  Tengah. Journal  of Aquaculture and Fish Health , 7(2):63-69.  DOI: 10.20473/jafh.v7i2.11249. Sutopo, E.Y., & Slamet, A. 2017. Statistik Inferensial, Penerbit Andi,Yogyakarta. Swandewi,  I.G.A.P.A.P.,  Anggreni,  A.A.M.D.  &  Ahmadi,  B.  2017.  Pengaruh  Penambahan  NaNO 3 dan  K 2 HPO 4 pada  Media  BG-11  terhadap  Konsentrasi  Biomassa  dan  Klorofil Tetraselmis chuii. Jurnal Rekayasa , 5(1):1 –11.
Wahyuni,  N.,  Rahardja,  B.S.  &  Azhar,  H.  2019,  Pengaruh  Pemberian  Kombinasi  Konsentrasi Ekstrak  Daun  Kelor  ( Moringa  oleifera) dengan  Pupuk  Walne  dalam  Media  Kultur  terhadap Laju  Pertumbuhan  dan  Kandungan  Karotenoid Dunaliella  salina. Journal  of  Aquaculture Science , 4(1):37 –49.
Wiryadi,  F.  &  Witono,  J.R.B.  2018,  Pengaruh  Aerasi  dan  Penambahan  Nitrogen  terhadap  Laju Pertumbuhan Nannochloropsis sp., Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia “Kejuangan” , Yogyakarta 12 April 2018, pp. 1 –6.
Zainuddin,  M.,  Hamid,  N.,  Mudiarti,  L.,  Kursistyanto,  N.  &  Aryono,  B.  2017,  Pengaruh  Media Hiposalin  dan  Hipersalin  terhadap  Respon  Pertumbuhan  dan    Biopigmen Dunaliella  salina , Jurnal Enggano , 2(1):46 –57. DOI: 10.31186/jenggano.2.1.46-57.