Karakteristik Enzim Digesti, Protease dan Amilase, Ikan Gurami ( Osphronemus gouramy Lac.) pada Fase Pertumbuhan

## Untung Susilo, Edy Yuwono, Farida Nur Rachmawati, Slamet Priyanto dan Hana
Lab. Fisiologi Hewan Fakultas Biologi Unsoed, Purwokerto e-mail : susilo.utg@gmail.com Abstrak Suatu penelitian untuk mengetahui karakteristik enzim digesti, protease dan amilase pada ikan gurami, Osphronemus  gouramy Lac.,  telah  dilakukan  dengan  metode  survey.  Jumlah  ikan  yang digunakan untuk penelitian sebanyak 25 ekor yang dikelompokan menjadi tiga kelompok ukuran13,29, 35,86  dan  91,86  g/ekor.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  aktivitas  protease  digesti  ikan  gurami berbeda secara signifikan pada segmen usus dan pH buffer yang berbeda (P<.05). Aktivitas amilase digesti tidak berbeda secara signifikan diantara segmen usus yang diuji (P>.05), namun berbeda secara signifikan diantara ukuran ikan yang berbeda (P<.05), dan aktivitas amilase tertinggi dijumpai pada ikan dengan ukuran terkecil. Kesimpulan yang dapat diambil adalah bahwa aktivitas protease dan amilase dijumpai sepanjang saluran digestinya baik pada ikan yang berukuran kecil maupun besar. Aktivitas protease umumnya tinggi pada suasana asam dan netral pada usus depan dan tengah. Aktivitas protease ikan yang berukuran besar lebih rendah dari pada ikan yang berukuran lebih kecil. Aktivitas amilase tidak terdapat perbedaan diantara segmen usus yang diuji, namun aktivitas amilase tertinggi dijumpai pada ikan dengan berat rata-rata 13,29 g/ekor Kata kunci : amilase, gouramy, pertumbuhan. protease
Abstract A study to determine the characteristics of digestion enzymes, protease and amylase in gourami, Osphronemus gouramy Lac., has been conducted by survey method. The number of fish that are used for research as many as 25 animals were grouped into three groups 13,29, 35.86 and 91.86 g.  The results showed that the activity of digestive protease was significantly different at pH buffer intestinal segments and different (P <.05). The activity of amylase digestive did not differ significantly between intestinal segments tested (P> .05), but differed significantly among fish of different sizes (P <.05), and the highest amylase activity found in fish with the smallest size. The conclusion that can be drawn is that the protease and amylase activity were found along its gut of small or large fish. Protease activity was generally high in acidic and neutral at the front and middle intestine. Protease activity of large-sized fish was lower than the smaller  fish. Amylase  activity  there  was  no  difference  between  intestinal  segments,  but  the  highest amylase activity found in fish with an average weight of 13.29 g. Key words : amylase,gouramy, growth, protease

## Pendahuluan
Ikan gurami, Osphronemus gouramy Lac., telah lama dibudidayakan di Indonesia, termasuk di wilayah Banyumas. Ikan gurami ini juga termasuk ikan primadona di wilayah Banyumas. Namun, ikan gurami ini dikenal ikan  yang  pertumbuhannya  lambat,  sebab untuk  mencapai  ukuran  konsumsi  perlu waktu  pemeliharaan  yang  cukup  lama. Selain  pertumbuhan  yang  lambat,  kendala yang  juga  sering  dijumpai  pada  budidaya ikan  gurami  adalah  masalah  pakan,  baik kualitas maupun kuantitas. Kebutuhan jenis pakan yang tepat merupakan kendala utama dalam budidaya ikan gurami, sebab selama ini  budidaya  ikan  gurami  pengadaan pakannya masih  mengacu pada hasil studi
nutrisi  spesies  ikan  lain  yang  memiliki kebiasaan  makan  yang  hampir  sama. Kondisi demikian diduga menjadi salah satu faktor  penyebab  sulitnya  ikan  gurami mencapai pertumbuhan yang optimal. Beberapa  penelitian  telah  dilakukan untuk  mencari  pemecahan  permasalahan pertumbuhan  ikan  gurami,  diantaranya dengan  melakukan  evaluasi  pemanfaatan bahan  baku  lokal  untuk  memenuhi kebutuhan nutrisi ikan (Susilo et al ., 2000),
evaluasi  pengggunan  kedelai  dan suplementasi  minyak  ikan  lemuru  serta efeknya  terhadap  pertumbuhan,  komposisi tubuh dan retensi energy (Soedibya et al .,
2001; Soedibya et al , 2002), level pemberian pakan  dan  efeknya  pada  beberapa
Susilo, Untung , dkk . Karakteristik Enzim Digesti, Protease dan Amilase, Ikan Gurami pada Fase Pertumbuhan : 134 - 142 135
134
parameter pertumbuhan (Susilo et al , 2003) dan  kondisi  fisiologis  pada  pertumbuhan kompensatori  yang  diinduksi  dengan pembatasan  pakan  kadar  protein  dan efeknya terhadap pertumbuhan ikan gurami (Yuwono et al , 2008 & 2009; Hariyadi et al , 2010).  Namun,  studi  terdahulu  yang melakukan    pendekatan  pada  kebutuhan kualitas   dan efisiensi pakan kurang fokus pada  pemecahan  permasalahan,  sebab keterkaitan antara pertumbuhan, kebutuhan pakan  dan  kemampuan  memanfaatkan nutrisi  pada  ikan  gurami  juga  belum terungkap. Kemampuan    memanfaatkan  nutrisi yang dikonsumsi oleh ikan baik untuk ikan karnivora,  omnivora  maupun  herbivora sangat  tergantung  pada  kapasitas  fisiologi dan biokimia sistem digesti untuk melakukan proses  pencernaan  dan  transport  nutrisi yang dikonsumsinya. Kapasitas fisiologi dan biokimia  tersebut  diantaranya  adalah kapasitas enzim digesti, yang karakteristik- nya  akan  berbeda  diantara  ikan  sesuai dengan  keragaman  struktur  sistem  digesti dan  sumber  nutrisi  yang  dikonsumsinya. Oleh  karena  itu,  kapasitas  atau  aktivitas enzim  digesti  ikan  menjadi  penting  untuk dikaji,  sebab  akan  menjadi  dasar  untuk penentuan kualitas dan strategi pemberian pakan  agar  tercapai  kesepadanan  antara nutrisi  yang  diberikan  dengan  kesiapan sistem digesti. Kesepadanan ini diharapkan akan  meningkatkan  efisiensi  pemanfaatan nutrisi yang dikonsumsi oleh ikan gurami. Studi terdahulu tentang aktivitas enzim digesti  telah  dilakukan  baik  pada  spesies ikan tropika maupun subtropika, diantaranya pada  ikan  nila, Oreochormis  niloticus L., (Tengjaroenkul et  al .,  2000;  Chan et  al ., 2008; Klahan et al. , 2009), sidat sub-tropika, Anguilla anguilla (Hidalgo et al ., 1999). ikan sturgeon , Acipenser  naccarii dan rainbow trout , Oncorhynchus  mykiss (Furne at  al ., 2005), ikan snakehead , Parachanna obcura (Odedeyi,  2007),  dan  ikan  brek, Puntius orphoides C.V.  (Susilo et  al. ,  2010),  yang memperlihatkan  perbedaan  karakteristik enzim  digesti  diantara  spesies  ikan  yang telah  diteliti.  Namun,  belum  banyak informasi  yang  berkaitan  dengan  aktivitas enzim  digesti  pada  ikan  gurami  fase pertumbuhan.  Informasi  aktivitas  enzim digesti  ini  sangat  diperlukan  untuk memahami fisiologi digesti ikan gurami serta untuk  menopang  penetapan  kebutuhan
kualitas  nutrisi  dan  strategi  pemberian pakannya. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  karakteristik  enzim  digesti, terutama  protease  dan  amilase,  pada  tiga segmen  usus,  tiga  pH  aktivitas  dan  tiga ukuran  ikan  berbeda  sebagai  dasar  untuk penentuan kebutuhan kualitas pakan.

## Materi dan Metode
Materi  yang  digunakan  adalah  ikan gurami pada fase pertumbuhan yaitu pada ukuran  berat  13,29,  35,86  dan  91,86 gram/ekor.  Ikan  uji  diambil  dari  kelompok petani ikan di wilayah Kecamatan Sumbang, Kabupaten  Banyumas.  Ikan  uji  yang diperoleh selanjutnya dibedah untuk diambil saluran  digestinya.  Selain  ikan  uji,  untuk keperluan  penelitian  ini  juga  diperlukan bahan-bahan seperti akuadest, es balok dan reagen  kimia  untuk  analisis  enzim  digesti. Peralatan yang digunakan untuk keperluan penelitian ini meliputi akuarium fiber, aerator, homogenizer  elektrik,  spektrofotometer, sentrifuge  suhu  dingin,  freezer,  alat  bedah dan timbangan analitik. Penelitian dilakukan di  laboratorium  Fisiologi  Hewan  Fakultas Biologi  Unsoed  dan  Laboratorium  Riset Unsoed, Purwokerto.
Saluran  digesti  yang  diperoleh  lalu dipartisi  menjadi  tiga  yaitu  segmen  usus depan  ( foregut ),  tengah  ( midgut )  dan belakang  ( hindgut )  (Gambar  1).  Masing- masing  segmen  usus  tersebut  selanjutnya diukur aktivitas enzimnya pada pH asam (2- 3), pH netral (6-7) dan pH basa (8-9) untuk aktivitas  protease,  namun  untuk  aktivitas amilase hanya diukur pada pH netral.
Untuk keperluan pengukuran aktivitas enzim digesti, saluran digesti ikan yang telah diisolasi,  terlebih  dahulu  dihancurkan menggunakan  homogeniser  listrik  dalam 0,05 M Tris HCl (pH 6-7) dingin dengan rasio 1 : 2. Homogenat yang diperoleh kemudian disentrifugasi  menggunakan  sentrifuse o bersuhu 4   C pada kecepatan 10.000   rpm selama  10  menit,  dan  supernatan  yang diperoleh siap digunakan untuk uji aktivitas enzim  (Natalia et  al .,  2004).  Kadar  protein supernatan  ditentukan  dengan  metode Lowry ( Furne et al ., 2005), menggunakan albumin sebagai standar.

## Biosfera 32 (2) Mei 2015

## Karakteristik Enzim Digesti, Protease dan Amilase, Ikan Gurami ( Osphronemus gouramy Lac.) pada Fase Pertumbuhan

## Untung Susilo, Edy Yuwono, Farida Nur Rachmawati, Slamet Priyanto dan Hana
Lab. Fisiologi Hewan Fakultas Biologi Unsoed, Purwokerto e-mail : susilo.utg@gmail.com
Abstrak Suatu penelitian untuk mengetahui karakteristik enzim digesti, protease dan amilase pada ikan gurami, Osphronemus  gouramy Lac.,  telah  dilakukan  dengan  metode  survey.  Jumlah  ikan  yang digunakan untuk penelitian sebanyak 25 ekor yang dikelompokan menjadi tiga kelompok ukuran13,29, 35,86  dan  91,86  g/ekor.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  aktivitas  protease  digesti  ikan  gurami berbeda secara signifikan pada segmen usus dan pH buffer yang berbeda (P<.05). Aktivitas amilase digesti tidak berbeda secara signifikan diantara segmen usus yang diuji (P>.05), namun berbeda secara signifikan diantara ukuran ikan yang berbeda (P<.05), dan aktivitas amilase tertinggi dijumpai pada ikan dengan ukuran terkecil. Kesimpulan yang dapat diambil adalah bahwa aktivitas protease dan amilase dijumpai sepanjang saluran digestinya baik pada ikan yang berukuran kecil maupun besar. Aktivitas protease umumnya tinggi pada suasana asam dan netral pada usus depan dan tengah. Aktivitas protease ikan yang berukuran besar lebih rendah dari pada ikan yang berukuran lebih kecil. Aktivitas amilase tidak terdapat perbedaan diantara segmen usus yang diuji, namun aktivitas amilase tertinggi dijumpai pada ikan dengan berat rata-rata 13,29 g/ekor Kata kunci : amilase, gouramy, pertumbuhan. protease
Abstract A study to determine the characteristics of digestion enzymes, protease and amylase in gourami, Osphronemus gouramy Lac., has been conducted by survey method. The number of fish that are used for research as many as 25 animals were grouped into three groups 13,29, 35.86 and 91.86 g.  The results showed that the activity of digestive protease was significantly different at pH buffer intestinal segments and different (P <.05). The activity of amylase digestive did not differ significantly between intestinal segments tested (P> .05), but differed significantly among fish of different sizes (P <.05), and the highest amylase activity found in fish with the smallest size. The conclusion that can be drawn is that the protease and amylase activity were found along its gut of small or large fish. Protease activity was generally high in acidic and neutral at the front and middle intestine. Protease activity of large-sized fish was lower than the smaller  fish. Amylase  activity  there  was  no  difference  between  intestinal  segments,  but  the  highest amylase activity found in fish with an average weight of 13.29 g.
Key words : amylase,gouramy, growth, protease

## Pendahuluan
Ikan gurami, Osphronemus gouramy Lac., telah lama dibudidayakan di Indonesia, termasuk di wilayah Banyumas. Ikan gurami ini juga termasuk ikan primadona di wilayah Banyumas. Namun, ikan gurami ini dikenal ikan  yang  pertumbuhannya  lambat,  sebab untuk  mencapai  ukuran  konsumsi  perlu waktu  pemeliharaan  yang  cukup  lama. Selain  pertumbuhan  yang  lambat,  kendala yang  juga  sering  dijumpai  pada  budidaya ikan  gurami  adalah  masalah  pakan,  baik kualitas maupun kuantitas. Kebutuhan jenis pakan yang tepat merupakan kendala utama dalam budidaya ikan gurami, sebab selama ini  budidaya  ikan  gurami  pengadaan pakannya masih  mengacu pada hasil studi
nutrisi  spesies  ikan  lain  yang  memiliki kebiasaan  makan  yang  hampir  sama. Kondisi demikian diduga menjadi salah satu faktor  penyebab  sulitnya  ikan  gurami mencapai pertumbuhan yang optimal. Beberapa  penelitian  telah  dilakukan untuk  mencari  pemecahan  permasalahan pertumbuhan  ikan  gurami,  diantaranya dengan  melakukan  evaluasi  pemanfaatan bahan  baku  lokal  untuk  memenuhi kebutuhan nutrisi ikan (Susilo et al ., 2000),
evaluasi  pengggunan  kedelai  dan suplementasi  minyak  ikan  lemuru  serta efeknya  terhadap  pertumbuhan,  komposisi tubuh dan retensi energy (Soedibya et al .,
2001; Soedibya et al , 2002), level pemberian pakan  dan  efeknya  pada  beberapa
Susilo, Untung , dkk . Karakteristik Enzim Digesti, Protease dan Amilase, Ikan Gurami pada Fase Pertumbuhan : 134 - 142 135 134
parameter pertumbuhan (Susilo et al , 2003)
dan  kondisi  fisiologis  pada  pertumbuhan kompensatori  yang  diinduksi  dengan pembatasan  pakan  kadar  protein  dan efeknya terhadap pertumbuhan ikan gurami (Yuwono et al , 2008 & 2009; Hariyadi et al , 2010).  Namun,  studi  terdahulu  yang melakukan    pendekatan  pada  kebutuhan kualitas   dan efisiensi pakan kurang fokus pada  pemecahan  permasalahan,  sebab keterkaitan antara pertumbuhan, kebutuhan pakan  dan  kemampuan  memanfaatkan nutrisi  pada  ikan  gurami  juga  belum terungkap. Kemampuan    memanfaatkan  nutrisi yang dikonsumsi oleh ikan baik untuk ikan karnivora,  omnivora  maupun  herbivora sangat  tergantung  pada  kapasitas  fisiologi dan biokimia sistem digesti untuk melakukan proses  pencernaan  dan  transport  nutrisi yang dikonsumsinya. Kapasitas fisiologi dan biokimia  tersebut  diantaranya  adalah kapasitas enzim digesti, yang karakteristik- nya  akan  berbeda  diantara  ikan  sesuai dengan  keragaman  struktur  sistem  digesti dan  sumber  nutrisi  yang  dikonsumsinya. Oleh  karena  itu,  kapasitas  atau  aktivitas enzim  digesti  ikan  menjadi  penting  untuk dikaji,  sebab  akan  menjadi  dasar  untuk penentuan kualitas dan strategi pemberian pakan  agar  tercapai  kesepadanan  antara nutrisi  yang  diberikan  dengan  kesiapan sistem digesti. Kesepadanan ini diharapkan akan  meningkatkan  efisiensi  pemanfaatan nutrisi yang dikonsumsi oleh ikan gurami. Studi terdahulu tentang aktivitas enzim digesti  telah  dilakukan  baik  pada  spesies ikan tropika maupun subtropika, diantaranya pada  ikan  nila, Oreochormis  niloticus L., (Tengjaroenkul et  al .,  2000;  Chan et  al ., 2008; Klahan et al. , 2009), sidat sub-tropika, Anguilla anguilla (Hidalgo et al ., 1999). ikan sturgeon , Acipenser  naccarii dan rainbow trout , Oncorhynchus  mykiss (Furne at  al ., 2005), ikan snakehead , Parachanna obcura (Odedeyi,  2007),  dan  ikan  brek, Puntius orphoides C.V.  (Susilo et  al. ,  2010),  yang memperlihatkan  perbedaan  karakteristik enzim  digesti  diantara  spesies  ikan  yang telah  diteliti.  Namun,  belum  banyak informasi  yang  berkaitan  dengan  aktivitas enzim  digesti  pada  ikan  gurami  fase pertumbuhan.  Informasi  aktivitas  enzim digesti  ini  sangat  diperlukan  untuk memahami fisiologi digesti ikan gurami serta untuk  menopang  penetapan  kebutuhan
kualitas  nutrisi  dan  strategi  pemberian pakannya. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  karakteristik  enzim  digesti, terutama  protease  dan  amilase,  pada  tiga segmen  usus,  tiga  pH  aktivitas  dan  tiga ukuran  ikan  berbeda  sebagai  dasar  untuk penentuan kebutuhan kualitas pakan.

## Materi dan Metode
Materi  yang  digunakan  adalah  ikan gurami pada fase pertumbuhan yaitu pada ukuran  berat  13,29,  35,86  dan  91,86 gram/ekor.  Ikan  uji  diambil  dari  kelompok petani ikan di wilayah Kecamatan Sumbang, Kabupaten  Banyumas.  Ikan  uji  yang diperoleh selanjutnya dibedah untuk diambil saluran  digestinya.  Selain  ikan  uji,  untuk keperluan  penelitian  ini  juga  diperlukan bahan-bahan seperti akuadest, es balok dan reagen  kimia  untuk  analisis  enzim  digesti. Peralatan yang digunakan untuk keperluan penelitian ini meliputi akuarium fiber, aerator, homogenizer  elektrik,  spektrofotometer, sentrifuge  suhu  dingin,  freezer,  alat  bedah dan timbangan analitik. Penelitian dilakukan di  laboratorium  Fisiologi  Hewan  Fakultas Biologi  Unsoed  dan  Laboratorium  Riset Unsoed, Purwokerto.
Saluran  digesti  yang  diperoleh  lalu dipartisi  menjadi  tiga  yaitu  segmen  usus depan  ( foregut ),  tengah  ( midgut )  dan belakang  ( hindgut )  (Gambar  1).  Masing- masing  segmen  usus  tersebut  selanjutnya diukur aktivitas enzimnya pada pH asam (2- 3), pH netral (6-7) dan pH basa (8-9) untuk aktivitas  protease,  namun  untuk  aktivitas amilase hanya diukur pada pH netral. Untuk keperluan pengukuran aktivitas enzim digesti, saluran digesti ikan yang telah diisolasi,  terlebih  dahulu  dihancurkan menggunakan  homogeniser  listrik  dalam 0,05 M Tris HCl (pH 6-7) dingin dengan rasio 1 : 2. Homogenat yang diperoleh kemudian disentrifugasi  menggunakan  sentrifuse
o bersuhu 4   C pada kecepatan 10.000   rpm selama  10  menit,  dan  supernatan  yang diperoleh siap digunakan untuk uji aktivitas enzim  (Natalia et  al .,  2004).  Kadar  protein supernatan  ditentukan  dengan  metode Lowry ( Furne et al ., 2005), menggunakan albumin sebagai standar.
A B C Gambar 1. Ikan gurami yang digunakan dalam penelitian dengan usus yang dipartisi menjadi tiga bagian. A. Usus depan ; B. Usus tengah ; C. Usus belakang A k t i v i t a s   p r o t e a s e   d i u k u r menggunakan  metode  hidrolisis  kasein (metode Walter, 1984 dalam Hidalgo et al ., 1999).  Uji  dilakukan  menggunakan  buffer 0,1 M Glisin-HCl (pH 2-3), 0,1 M tris-HCl (pH o 6-7) dan 0,05 M Na2HPO4 (pH 8-9) pada 25
C.  Reaksi  enzim  dimulai  dengan mencampurkan 1 % (w/v) kasein dalam air (0,5 ml), buffer (0,50 ml) dan sampel enzim (0,25 ml)   dan diinkubasi selama 60 menit
o pada  37   C.  Reaksi  dihentikan  dengan penambahan 0,75 ml dari 8 % (w/v) asam trichloroacetat  (TCA).  Setelah  diendapkan dalam  refrigerator  selama  60  menit, campuran  reaksi  disentrifugasi  pada kecepatan  6.000  rpm  selama  15  menit. Absorbansi  dicatat  pada  panjang gelombang  280  nm.  Tirosine  digunakan sebagai  standard  dan  satu  unit  aktivitas enzim  didefinisikan  sebagai  jumlah  enzim yang  diperlukan  untuk  mengkatalisa pembentukan 1 µ g tirosine permenit. Untuk kontrol,  TCA  ditambahkan  ke  ekstrak sebelum  ditambah  substrat.  Aktivitas protease yang terukur sebagai jumlah tirosin yang  dihasilkan  permenit  ditentukan menggunakan kurva kalibrasi tirosin Aktivitas  amilase  ditentukan  dengan metode  hidrolisis  pati  (Robyt  and  Whelan, 1968 dalam Hidalgo et al ., 1999).   Substrat pati disiapkan sebagai 1 % (w/v) larutan pati (dalam  10  mM  phosphate  buffer  berisi  6,0 mM NaCl). Pada substrat amilum sebanyak 0,75 ml ditambahkan  0,25 ml ekstrak enzim. Campuran  reaksi  diinkubasi  selama  30 o o menit pada 37  C dan 27 C. Setelah inkubasi tambahkan  larutan  2  %  (w/v)  3,5- dinitrosalicylic  acid  (DNS)  segera homogenkan.  Campuran  reaksi  kemudian
dimasukkan kedalam air mendidih selama 5 menit.  Setelah  dingin  tambahkan  akuades sebanyak 1,5 ml. Absorbansi dicacat pada panjang  gelombang  540  nm.  Jumlah maltosa yang dilepas dari uji ini ditentukan dari  kurva  standard.  Aktivitas  amilase dikalkulasi dari rasio antara jumlah maltosa yang dilepaskan (µmol) dengan bobot enzim (mg)    dalam  reaksi  campuran  kali  lama inkubasi (Hidalgo et al ., 1999).
Data aktivitas enzim digesti, protease d a n   a m i l a s e ,   d i a n a l i s a   d e n g a n menggunakan univariate  analysis  of variance (Steel dan Torrie, 1981).

## Hasil dan Pembahasan

## Aktivitas Protease Digesti Ikan Gurami
Aktivitas  protease  digesti  pada  ikan gurami  dengan  rerata  berat  tubuh  13,29  g tertera pada gambar 2.a. Pada gambar 2.a terlihat  bahwa  aktivitas  protease  berkisar antara  2,629  U/mg  protein  pada  hindgut dengan buffer Na2HPO4 dan 6,416   U/mg protein pada midgut dengan buffer Tris-HCl. Hasil  analisis  varian  menunjukkan  adanya perbedaaan  yang  signifikan  diantara aktivitas  protese  pada  segmen  usus  dan buffer  berbeda  (P<.05).  Jadi  tampaknya pada ikan gurami ukuran berat rerata 13,29 g aktivitas protease terjadi di sepanjang usus, namun  pada  usus  belakang  aktivitas protease  lebih  rendah  dibandingkan aktivitas  protease  pada  usus  depan  dan tengah.  Pada ikan ukuran rerata berat 13,29 g ini aktivitas protease dijumpai tinggi pada usus tengah dan usus depan dengan buffer dalam  suasana  netral,  dan  umumnya
136 aktivitas  protease  rendah  pada  suasana basa dengan pH 8 – 9 (Gambar 2.a). Aktivitas  protease  digesti  pada  ikan gurami  dengan  rerata  berat  tubuh  35,86 g/ekor  tertera  pada  gambar  5.1.c.  Pada gambar  2.b.  terlihat  bahwa  aktivitas protease berkisar antara 2,579 U/mg protein pada hindgut dengan buffer Na2HPO4 dan 6,222   U/mg protein pada hindgut dengan buffer  Tris-HCl.  Hasil  analisis  varian menunjukkan  adanya  perbedaaan  yang signifikan  diantara  aktivitas  protease  pada buffer  berbeda  (P<.05),  tidak  terdapat perbedaan  aktivitas  protease  diantara segmen  usus  berbeda  (P>.05).  Jadi tampaknya pada ikan gurami ukuran berat rerata 35,86 g/ekor aktivitas protease juga terjadi di sepanjang usus. Pada ikan ukuran rerata  berat  35,86  g/ekor  ini  aktivitas protease  dijumpai  tinggi  pada  usus  depan dan  usus  belakang  dengan  buffer  dalam suasana asam hingga netral, dan umumnya aktivitas  protease  rendah  pada  suasana basa dengan pH 8 – 9 terutama pada usus belakang (Gambar 2.b). Aktivitas  protease  digesti  pada  ikan gurami  dengan  rerata  berat  tubuh  91,86 g/ekor  tertera  pada  gambar  2.c.  Pada gambar 2.c, terlihat bahwa aktivitas protease berkisar  antara  1,585  U/mg  protein  pada hindgut dengan buffer Na2HPO4 dan 4,824 U/mg  protein  pada  foregut  dengan  buffer Tris-HCl. Hasil analisis varian menunjukkan adanya perbedaaan yang signifikan diantara aktivitas  protease  pada  segmen  usus  dan buffer  berbeda  (P<.05).  Jadi  tampaknya pada ikan gurami ukuran berat rerata 91,86 g/ekor  aktivitas  protease  juga  terjadi  di sepanjang usus, namun pada usus tengah dan belakang aktivitas protease lebih rendah dibadingkan  aktivitas  protease  pada  usus depan.  Pada ikan ukuran rerata berat 91,86 g/ekor ini aktivitas protease dijumpai tinggi pada  usus  depan  dengan  buffer  dalam suasana asam hingga netral, dan umumnya aktivitas  protease  rendah  pada  suasana basa dengan pH 8 – 9 terutama pada usus tengah dan belakang (Gambar 2.c).
Susilo, Untung , dkk . Karakteristik Enzim Digesti, Protease dan Amilase, Ikan Gurami pada Fase Pertumbuhan : 134 - 142
A B C
Gambar 1. Ikan gurami yang digunakan dalam penelitian dengan usus yang dipartisi menjadi tiga bagian. A. Usus depan ; B. Usus tengah ; C. Usus belakang
A k t i v i t a s   p r o t e a s e   d i u k u r menggunakan  metode  hidrolisis  kasein (metode Walter, 1984 dalam Hidalgo et al ., 1999).  Uji  dilakukan  menggunakan  buffer 0,1 M Glisin-HCl (pH 2-3), 0,1 M tris-HCl (pH o 6-7) dan 0,05 M Na2HPO4 (pH 8-9) pada 25 C.  Reaksi  enzim  dimulai  dengan mencampurkan 1 % (w/v) kasein dalam air (0,5 ml), buffer (0,50 ml) dan sampel enzim (0,25 ml)   dan diinkubasi selama 60 menit o pada  37   C.  Reaksi  dihentikan  dengan penambahan 0,75 ml dari 8 % (w/v) asam trichloroacetat  (TCA).  Setelah  diendapkan dalam  refrigerator  selama  60  menit, campuran  reaksi  disentrifugasi  pada kecepatan  6.000  rpm  selama  15  menit. Absorbansi  dicatat  pada  panjang gelombang  280  nm.  Tirosine  digunakan sebagai  standard  dan  satu  unit  aktivitas enzim  didefinisikan  sebagai  jumlah  enzim yang  diperlukan  untuk  mengkatalisa pembentukan 1 µ g tirosine permenit. Untuk kontrol,  TCA  ditambahkan  ke  ekstrak sebelum  ditambah  substrat.  Aktivitas protease yang terukur sebagai jumlah tirosin yang  dihasilkan  permenit  ditentukan menggunakan kurva kalibrasi tirosin Aktivitas  amilase  ditentukan  dengan metode  hidrolisis  pati  (Robyt  and  Whelan, 1968 dalam Hidalgo et al ., 1999).   Substrat pati disiapkan sebagai 1 % (w/v) larutan pati (dalam  10  mM  phosphate  buffer  berisi  6,0 mM NaCl). Pada substrat amilum sebanyak 0,75 ml ditambahkan  0,25 ml ekstrak enzim. Campuran  reaksi  diinkubasi  selama  30 o o menit pada 37  C dan 27 C. Setelah inkubasi tambahkan  larutan  2  %  (w/v)  3,5- dinitrosalicylic  acid  (DNS)  segera homogenkan.  Campuran  reaksi  kemudian
dimasukkan kedalam air mendidih selama 5 menit.  Setelah  dingin  tambahkan  akuades sebanyak 1,5 ml. Absorbansi dicacat pada panjang  gelombang  540  nm.  Jumlah maltosa yang dilepas dari uji ini ditentukan dari  kurva  standard.  Aktivitas  amilase dikalkulasi dari rasio antara jumlah maltosa yang dilepaskan (µmol) dengan bobot enzim (mg)    dalam  reaksi  campuran  kali  lama inkubasi (Hidalgo et al ., 1999).
Data aktivitas enzim digesti, protease d a n   a m i l a s e ,   d i a n a l i s a   d e n g a n menggunakan univariate  analysis  of variance (Steel dan Torrie, 1981).

## Hasil dan Pembahasan

## Aktivitas Protease Digesti Ikan Gurami
Aktivitas  protease  digesti  pada  ikan gurami  dengan  rerata  berat  tubuh  13,29  g tertera pada gambar 2.a. Pada gambar 2.a terlihat  bahwa  aktivitas  protease  berkisar antara  2,629  U/mg  protein  pada  hindgut dengan buffer Na2HPO4 dan 6,416   U/mg protein pada midgut dengan buffer Tris-HCl. Hasil  analisis  varian  menunjukkan  adanya perbedaaan  yang  signifikan  diantara aktivitas  protese  pada  segmen  usus  dan buffer  berbeda  (P<.05).  Jadi  tampaknya pada ikan gurami ukuran berat rerata 13,29 g aktivitas protease terjadi di sepanjang usus, namun  pada  usus  belakang  aktivitas protease  lebih  rendah  dibandingkan aktivitas  protease  pada  usus  depan  dan tengah.  Pada ikan ukuran rerata berat 13,29 g ini aktivitas protease dijumpai tinggi pada usus tengah dan usus depan dengan buffer dalam  suasana  netral,  dan  umumnya

## 136
aktivitas  protease  rendah  pada  suasana basa dengan pH 8 – 9 (Gambar 2.a). Aktivitas  protease  digesti  pada  ikan gurami  dengan  rerata  berat  tubuh  35,86 g/ekor  tertera  pada  gambar  5.1.c.  Pada gambar  2.b.  terlihat  bahwa  aktivitas protease berkisar antara 2,579 U/mg protein pada hindgut dengan buffer Na2HPO4 dan 6,222   U/mg protein pada hindgut dengan buffer  Tris-HCl.  Hasil  analisis  varian menunjukkan  adanya  perbedaaan  yang signifikan  diantara  aktivitas  protease  pada buffer  berbeda  (P<.05),  tidak  terdapat perbedaan  aktivitas  protease  diantara segmen  usus  berbeda  (P>.05).  Jadi tampaknya pada ikan gurami ukuran berat rerata 35,86 g/ekor aktivitas protease juga terjadi di sepanjang usus. Pada ikan ukuran rerata  berat  35,86  g/ekor  ini  aktivitas protease  dijumpai  tinggi  pada  usus  depan dan  usus  belakang  dengan  buffer  dalam suasana asam hingga netral, dan umumnya aktivitas  protease  rendah  pada  suasana basa dengan pH 8 – 9 terutama pada usus belakang (Gambar 2.b).
Aktivitas  protease  digesti  pada  ikan gurami  dengan  rerata  berat  tubuh  91,86 g/ekor  tertera  pada  gambar  2.c.  Pada gambar 2.c, terlihat bahwa aktivitas protease berkisar  antara  1,585  U/mg  protein  pada hindgut dengan buffer Na2HPO4 dan 4,824 U/mg  protein  pada  foregut  dengan  buffer Tris-HCl. Hasil analisis varian menunjukkan adanya perbedaaan yang signifikan diantara aktivitas  protease  pada  segmen  usus  dan buffer  berbeda  (P<.05).  Jadi  tampaknya pada ikan gurami ukuran berat rerata 91,86 g/ekor  aktivitas  protease  juga  terjadi  di sepanjang usus, namun pada usus tengah dan belakang aktivitas protease lebih rendah dibadingkan  aktivitas  protease  pada  usus depan.  Pada ikan ukuran rerata berat 91,86 g/ekor ini aktivitas protease dijumpai tinggi pada  usus  depan  dengan  buffer  dalam suasana asam hingga netral, dan umumnya aktivitas  protease  rendah  pada  suasana basa dengan pH 8 – 9 terutama pada usus tengah dan belakang (Gambar 2.c).
Susilo, Untung , dkk . Karakteristik Enzim Digesti, Protease dan Amilase, Ikan Gurami pada Fase Pertumbuhan : 134 - 142
Gambar 2.  Aktivitas protease ikan gurami pada tiga segmen usus dan tiga pH inkubasi pada rerata berat tubuh 13,29 g (a); 35,86 g (b); dan 91,86 g (c).
Fenomena adanya aktivitas protease di  sepanjang  saluran  digesti  dengan aktivitas yang tidak seragam juga dijumpai pada  penelitian  sebelumnya  pada  ikan, Sparus  aurata (Eroldogan et  al .,  2008), Oreochromis niloticus (Klahan et al ., 2009), Glyptosternum  maculatum (Xiong et  al ., 2009), Pangasianodon gigas (Tongsiri et al ., 2010), Boleophthalmus  pectinirostris  & Bostrichthys sinensis (Renxie et al ., 2010). Hasil  penelitian  ini  juga  lebih  tinggi  dari penelitian  sebelumnya  pada  ikan carp, goldfish,  seabream (Hidalgo  et  al.,  1999), C a t l a   c a t l a ,   l a b e o   r o h i t a d a n hypophthalmichthys  molitrix (Kumar  et  al., 2007) dan Scleropages formosus (Natalia et al.,  2004),  namun  lebih  rendah  dari  hasil penelitian  pada  ikan  trout, Oncorhynchus mykiss (Furne et  al .,  2005), Oreochromis niloticus (Klahan et al ., 2009), Pada  penelitian  ini  aktivitas  protease  lebih tinggi pada usus depan untuk ikan berukuran 13,29 g, namun pola ini berubah pada ikan ukuran yang lebih besar yaitu ukuran 35,86 g dan  91,86  g.  Pada  ikan  ukuran  35,86  g aktivitas  protease  tinggi  baik  pada  usus depan maupun usus tengah terutama pada inkubasi enzim pada suasana netral. Kondisi sebaliknya  terjadi  pada  ikan  ukuran  besar
yaitu  aktivitas  protease  rendah  pada inkubasi  pH  8-9.  Rendahnya  aktivitas protease yang dijumpai pada suasana pH 8- 9, diduga berhubungan dengan kebutuhan pH  yang  optimal  untuk  protease.  Pada penelitian  sebelumnya  aktivitas  protease alkalin perlu suasana alkalis o pH 10 dengan temperatur 45 C untuk ikan Sardinops  sagax  caerulea (Castillo- Yanez et al., 2004), perlu  pH 9-12 untuk ikan Oreochromis niloticus (Klahan et al ., 2009), dan perlu pH 8-10 dan temperatur optimal o 5 5 C   u n t u k   i k a n Z o s t e r i s e s s o r ophiocephalus,  Raja  clavata  &  Scorpaena scrofa ( Nasri et al., 2011 ) . Hasil  perhitungan  aktivitas  protease total terendah (2,08 U/mg protein) pada ikan dengan berat 91,86 g dan pH inkubasi 8-9, sedangkan aktivitas protease tertinggi (5,44
U/mg protein) diperoleh pada ikan dengan berat  tubuh  13,29  g  dan  pH  inkubasi  6-7 (Gambar  3).  Hasil  analisis  ragam  juga memperlihatkan  adanya  perbedaan  yang siginifikan baik antara pH inkubasi maupun berat ikan (P<.0,5). Jadi dapat disimpulkan bahwa aktivitas protease pada  ikan ukuran 91,86 g lebih rendah dari pada ikan ukuran yang  lebih  kecil,  demikian  juga  aktivitas protease lebih tinggi dijumpai pada pH 6-7. 139

## 138
Gambar 3. Aktivitas protease total ikan gurami dengan berat tubuh berbeda Aktivitas  protease  yang  lebih  tinggi pada ikan berukuran kecil dan pada kondisi inkubasi  pH  6-7,  mencerminkan  tingginya aktivitas digesti protein pada ikan yang lebih kecil  dibandingkan  ikan  ukuran  yang  lebih besar.  Hasil  penelitian  ini  dapat  menjadi bahan  pertimbangan  dalam  penyusunan formula  pakan  untuk  ikan  gurami.  Ikan gurami yang berukuran kecil diduga memiliki kebutuhan dan kemampuan digesti protein yang  lebih  tinggi  dari  pada  ikan  yang berukuran  lebih  besar.  Namun,  pola  ini berbeda dengan yang ditemukan pada ikan
Oreochromis  niloticus ,  yang  memiliki aktivitas  lebih  tinggi  pada  ikan  ukuran sedang dibandingkan ikan yang berukuran lebih  kecil  atau  lebih  besar  (Klahan et  al ., 2009), demikian juga yang ditemukan pada ikan  herbivora, Hyporhamphus  regularis ardelio .  Pada  ikan  ini  tidak  dijumpai perbedaan  aktivitas  protease  antara  ikan berukuran kecil dan besar (Day et al ., 2011).

## Aktivitas Amilase Digesti Ikan Gurami
Aktivitas  amilase  digesti  ikan  gurami yang  diukur  pada  segmen  usus  dan  berat tubuh  berbeda  serta  diukur  pada  pH  7-8, hasilnya  tertera  pada  gambar  4.  Aktivitas amilase  digesti  pada  usus  depan  berkisar antara  0,254  U/mg  protein  hingga  0,987
U/mg  protein,  pada  usus  tengah  berkisar antara  0,392  mmol/mg/mnt  hingga  0,616 U/mg  protein,  sedangkan  pada  usus belakang berkisar antara 0,431 U/mg protein hingga 0,511 U/mg protein (Gambar 4). Hasil analisis  sidik  ragam  menunjukkan  bahwa tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan aktivitas amilase digesti ikan gurami diantara
segmen  usus  yang  diukur  (P>.05),  namun terdapat perbedaan yang signifikan aktivitas amilase  digesti  diantara  berat  tubuh  ikan yang berbeda (P<.05). Tampaknya aktivitas amilase  digesti  ikan  gurami  tertinggi dijumpai pada daerah usus depan pada ikan dengan  berat  rata-rata  13,29  g/ekor (Gambar 3), sedangkan pada usus tengah dan  belakang  tampak  aktivitas  amilase digesti  dijumpai  tidak  berbeda,  yang menunjukan  bahwa  pada  semua  ukuran ikan aktivitas amilase pada usus tengah dan belakang  adalah  hampir  sama.  Rata-rata hasil  pengukuran  aktivitas  amilase  pada penelitian  ini  lebih  rendah  dari  yang diperoleh  Hidalgo et  al .  (1999)  pada  ikan carp, goldfish dan tench, namun lebih tinggi dari  pada  yang  diperoleh  pada  ikan  nila Tilapia (Klahan, et al ., 2009), tidak berbeda dengan  hasil  penelitian  Al-Tameemi et  al . (2010)  pada  spesies  Cyprinid.  Perbedaan asupan  nutrisi  yang  diperoleh  ikan nampaknya  merupakan  salah  satu  faktor penyebab  perbedaan  hasil  penelitian  ini dengan  penelitian  sebelumnya.  Pada penelitian ini, ikan gurami diambil langsung dari  pemelihara,  sehingga  tidak  diketahui secara  pasti  konsumsi  pakan  harian  ikan gurami. Namun, demikian hasil penelitian ini mengindikasikan  bahwa  ikan  gurami memiliki  kemampuan  untuk  mencerna karbohidrat dalam bentuk amilum yang tidak lebih  baik  dibandingkan  ikan  Adriatic sturgeon, Acipencer  naccarii dan  rainbow trout, Oncorhynchus  mykiss (Furne  et  al., 2 0 0 5 ) , M e k o n g   G i a n t   C a t f i s h , Pangasianodon gigas (Tongsiri et al, 2010), ikan  herbivora Hyporhamphus  regularis ardello (Day et al., 2011). Hasil penelitian ini
Susilo, Untung , dkk . Karakteristik Enzim Digesti, Protease dan Amilase, Ikan Gurami pada Fase Pertumbuhan : 134 - 142

## Biosfera 32 (2) Mei 2015
Gambar 2.  Aktivitas protease ikan gurami pada tiga segmen usus dan tiga pH inkubasi pada rerata berat tubuh 13,29 g (a); 35,86 g (b); dan 91,86 g (c).
Fenomena adanya aktivitas protease di  sepanjang  saluran  digesti  dengan aktivitas yang tidak seragam juga dijumpai pada  penelitian  sebelumnya  pada  ikan, Sparus  aurata (Eroldogan et  al .,  2008), Oreochromis niloticus (Klahan et al ., 2009),
Glyptosternum  maculatum (Xiong et  al ., 2009), Pangasianodon gigas (Tongsiri et al ., 2010), Boleophthalmus  pectinirostris  & Bostrichthys sinensis (Renxie et al ., 2010). Hasil  penelitian  ini  juga  lebih  tinggi  dari penelitian  sebelumnya  pada  ikan carp, goldfish,  seabream (Hidalgo  et  al.,  1999), C a t l a   c a t l a ,   l a b e o   r o h i t a d a n hypophthalmichthys  molitrix (Kumar  et  al.,
2007) dan Scleropages formosus (Natalia et al.,  2004),  namun  lebih  rendah  dari  hasil penelitian  pada  ikan  trout, Oncorhynchus mykiss (Furne et  al .,  2005), Oreochromis niloticus (Klahan et al ., 2009),
Pada  penelitian  ini  aktivitas  protease  lebih tinggi pada usus depan untuk ikan berukuran 13,29 g, namun pola ini berubah pada ikan ukuran yang lebih besar yaitu ukuran 35,86 g dan  91,86  g.  Pada  ikan  ukuran  35,86  g aktivitas  protease  tinggi  baik  pada  usus depan maupun usus tengah terutama pada inkubasi enzim pada suasana netral. Kondisi sebaliknya  terjadi  pada  ikan  ukuran  besar
yaitu  aktivitas  protease  rendah  pada inkubasi  pH  8-9.  Rendahnya  aktivitas protease yang dijumpai pada suasana pH 8- 9, diduga berhubungan dengan kebutuhan pH  yang  optimal  untuk  protease.  Pada penelitian  sebelumnya  aktivitas  protease alkalin perlu suasana alkalis o pH 10 dengan temperatur 45 C untuk ikan Sardinops  sagax  caerulea (Castillo- Yanez et al., 2004), perlu  pH 9-12 untuk ikan Oreochromis niloticus (Klahan et al ., 2009),
dan perlu pH 8-10 dan temperatur optimal o 5 5 C   u n t u k   i k a n Z o s t e r i s e s s o r ophiocephalus,  Raja  clavata  &  Scorpaena scrofa ( Nasri et al., 2011 ) . Hasil  perhitungan  aktivitas  protease total terendah (2,08 U/mg protein) pada ikan dengan berat 91,86 g dan pH inkubasi 8-9, sedangkan aktivitas protease tertinggi (5,44 U/mg protein) diperoleh pada ikan dengan berat  tubuh  13,29  g  dan  pH  inkubasi  6-7 (Gambar  3).  Hasil  analisis  ragam  juga memperlihatkan  adanya  perbedaan  yang siginifikan baik antara pH inkubasi maupun berat ikan (P<.0,5). Jadi dapat disimpulkan bahwa aktivitas protease pada  ikan ukuran 91,86 g lebih rendah dari pada ikan ukuran yang  lebih  kecil,  demikian  juga  aktivitas protease lebih tinggi dijumpai pada pH 6-7.

## Gambar 3. Aktivitas protease total ikan gurami dengan berat tubuh berbeda
Aktivitas  protease  yang  lebih  tinggi pada ikan berukuran kecil dan pada kondisi inkubasi  pH  6-7,  mencerminkan  tingginya aktivitas digesti protein pada ikan yang lebih kecil  dibandingkan  ikan  ukuran  yang  lebih besar.  Hasil  penelitian  ini  dapat  menjadi bahan  pertimbangan  dalam  penyusunan formula  pakan  untuk  ikan  gurami.  Ikan gurami yang berukuran kecil diduga memiliki kebutuhan dan kemampuan digesti protein yang  lebih  tinggi  dari  pada  ikan  yang berukuran  lebih  besar.  Namun,  pola  ini berbeda dengan yang ditemukan pada ikan Oreochromis  niloticus ,  yang  memiliki aktivitas  lebih  tinggi  pada  ikan  ukuran sedang dibandingkan ikan yang berukuran lebih  kecil  atau  lebih  besar  (Klahan et  al ., 2009), demikian juga yang ditemukan pada ikan  herbivora, Hyporhamphus  regularis ardelio .  Pada  ikan  ini  tidak  dijumpai perbedaan  aktivitas  protease  antara  ikan berukuran kecil dan besar (Day et al ., 2011).

## Aktivitas Amilase Digesti Ikan Gurami
Aktivitas  amilase  digesti  ikan  gurami yang  diukur  pada  segmen  usus  dan  berat tubuh  berbeda  serta  diukur  pada  pH  7-8, hasilnya  tertera  pada  gambar  4.  Aktivitas amilase  digesti  pada  usus  depan  berkisar antara  0,254  U/mg  protein  hingga  0,987 U/mg  protein,  pada  usus  tengah  berkisar antara  0,392  mmol/mg/mnt  hingga  0,616 U/mg  protein,  sedangkan  pada  usus belakang berkisar antara 0,431 U/mg protein hingga 0,511 U/mg protein (Gambar 4). Hasil analisis  sidik  ragam  menunjukkan  bahwa tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan aktivitas amilase digesti ikan gurami diantara
segmen  usus  yang  diukur  (P>.05),  namun terdapat perbedaan yang signifikan aktivitas amilase  digesti  diantara  berat  tubuh  ikan yang berbeda (P<.05). Tampaknya aktivitas amilase  digesti  ikan  gurami  tertinggi dijumpai pada daerah usus depan pada ikan dengan  berat  rata-rata  13,29  g/ekor (Gambar 3), sedangkan pada usus tengah dan  belakang  tampak  aktivitas  amilase digesti  dijumpai  tidak  berbeda,  yang menunjukan  bahwa  pada  semua  ukuran ikan aktivitas amilase pada usus tengah dan belakang  adalah  hampir  sama.  Rata-rata hasil  pengukuran  aktivitas  amilase  pada penelitian  ini  lebih  rendah  dari  yang diperoleh  Hidalgo et  al .  (1999)  pada  ikan carp, goldfish dan tench, namun lebih tinggi dari  pada  yang  diperoleh  pada  ikan  nila Tilapia (Klahan, et al ., 2009), tidak berbeda dengan  hasil  penelitian  Al-Tameemi et  al . (2010)  pada  spesies  Cyprinid.  Perbedaan asupan  nutrisi  yang  diperoleh  ikan nampaknya  merupakan  salah  satu  faktor penyebab  perbedaan  hasil  penelitian  ini dengan  penelitian  sebelumnya.  Pada penelitian ini, ikan gurami diambil langsung dari  pemelihara,  sehingga  tidak  diketahui secara  pasti  konsumsi  pakan  harian  ikan gurami. Namun, demikian hasil penelitian ini mengindikasikan  bahwa  ikan  gurami memiliki  kemampuan  untuk  mencerna karbohidrat dalam bentuk amilum yang tidak lebih  baik  dibandingkan  ikan  Adriatic sturgeon, Acipencer  naccarii dan  rainbow trout, Oncorhynchus  mykiss (Furne  et  al., 2 0 0 5 ) , M e k o n g   G i a n t   C a t f i s h , Pangasianodon gigas (Tongsiri et al, 2010), ikan  herbivora Hyporhamphus  regularis ardello (Day et al., 2011). Hasil penelitian ini
Susilo, Untung , dkk . Karakteristik Enzim Digesti, Protease dan Amilase, Ikan Gurami pada Fase Pertumbuhan : 134 - 142
juga  menginformasikan,  bahwa  untuk mendukung  pertumbuhan  optimal  ikan gurami maka asupan pakan yang diberikan seyogyanya tidak mengandung karbohidrat
yang  tinggi,  karena  kemampuannya  yang terbatas  dalam  mendigesti  karbohidrat. Namun, demikian berapa kebutuhan optimal karbohidrat perlu kajian lebih lanjut. Gambar 4. Aktivitas amilase ikan gurami pada berbagai rerata berat tubuh. 141 140

## Simpulan
Aktivitas protease digesti ikan gurami dijumpai sepanjang saluran digestinya baik pada  ikan  yang  berukuran  kecil  maupun besar.  Aktivitas  protease  umumnya  tinggi pada suasana asam dan netral pada usus depan  dan  tengah. Aktivitas  protease  ikan yang  berukuran  besar  umumnya  lebih rendah dari pada ikan yang berukuran lebih kecil. Aktivitas  amilase  juga  dijumpai  pada semua  segmen  usus  yang  diuji,  dan  tidak terdapat  perbedaan  aktivitas  amilase diantara  segmen  usus  yang  diuji,  namun aktivitas amilase tertinggi dijumpai pada ikan dengan berat rata-rata terkecil.

## Ucapan Terimakasih
Ucapan  terimakasih  penulis sampaikan  kepada  Universitas  Jenderal Soedirman,  Purwokerto  yang  telah memberikan  dana  penelitian  melalui pendanaan  kompetisi  Riset  Institusional tahun  2011dengan  nomer  kontrak 1947.08/H23.9/PN/2011  tanggal  18  April 2012.

## Daftar Pustaka
Al-Tameemi,  R.,  Aldubaikul,    A.,  and  N.A. Salman, 2010. Comparative study of α-
amylase  activity  in  three  Cyprinid species of different feeding habits from Southern  Iraq.  Turkish  Journal  of Fisheries  and Aquatic  Sciences.  10  : 411 – 414. Castillo-Yanez, F.J., R. Pacheco-Aguilar, F.L. Gracia-Carreno,  M.A.N.  Toro,  2004. Characterization  of  acidic  proteolytic enzymes  from  monterey  sardine ( Sardinops  sagax  caerulea )  Viscera. Food Chemistry . 85: 343-350. Chan,  C-R.,  D-N.  Lee,  Y-H.  Cheng,  D.J-Y. Hsieh  and  C-F.  Weng,  2008.  Feed Deprivation  and  Re-feeding  on Alterations  of  Proteases  in  Tilapia, O r e o c h r o m i s   m o s s a m b i c u s . Zoological Studies , 47 (2) : 207 – 214. Day, R.D., D.P. German, J.M. Manjakasy, I. Farr, M.J. Hansen & I.R. Tibbetts, 2011. Enzymatic  digestion  in  stomachless fishes : how a simple gut accomodates both herbivory and carnivory. J. Comp. hysiol . B. 181: 603-613. Eroldoğan, O.T., C. Suzer, O. Taşbozan, and S.  Tabakoğlu,  2008.  The  Effects  of Rate-restricted  Feeding  Regimes  in Cycles  on  Digestive  Enzymes  of Gilthead  Sea-bream, Sparus  aurata . Turkish  Journal  of  Fisheries  and Aquatic Sciences. 8 : 49 – 54. Furne, M.C. Hidalgo, A. Lo´pez, M. Garcı´a- Gallego, A.E. Morales, A. Domezain, J.  Domezaine´,  A.  Sanz,  2005. Digestive Enzyme Activities in Adriatic Sturgeon Acipenser  naccarii and Rainbow  Trout Oncorhynchus mykiss .  A  Comparative  Study, Aquaculture . 250: 391– 398 Hariyadi,  B.,  E.  Yuwono,  U.  Susilo,  F.N. Rachmawati  dan  Y.  Sistina.  2010. Pertumbuhan  kompensatori  dan efisiensi  pakan  pada  ikan  gurami, Osphronemus  gouramy  Lac.  Yang mengalami  pembatasan  pakan secara  periodic.  Laporan  Penelitian F a k u l t a s   B i o l o g i ,   U n s o e d , Purwokerto. Hidalgo, M.C., E. Urea, and A. Sanz, 1999. Comparative  Study  of  Digestive Enzymes  in  Fish  with  Different Nutritional  Habits.  Proteolytic  and Amylase Activities. Aquaculture . 170 : 267 – 283. Klahan, R., N. Areechon, R. Yoonpundh and A.  Engkagul,  2009.  Characterization and Activity of Digestive Enzymes in Different  Sizes  of  Nile  Tilapia ( Oreochromis niloticus L.). Kasetsart J. (Nat. Sci.) 43 : 143 – 153 Kumar,  S.,  F.L.  Gracia-Carreno,  R. Chakrabarti,  M.A.N.  Toro  and  J.H. Cordova-Murueta,  2007.  Digestive Protease of Three Carps Catla catla, Labeo  rohita and Hypophthalmich- thys molitrix : Partial Characterization and  Protein  hydrolysis  Efficiency. Aquaculture Nutrition . 13: 381-388. Nasri, R., I. Younes, I. Lassoued, S. Ghorbel, O.  Ghorbel-Bellaaj  and  M.  Nasri, 2011.  Digestive  alkaline  proteases from Zosterisessor  ophiocephalus, Raja clavata and Scorpaena scrofa : Characteristics  and  aplication  in chitin extraction. Research Journal of Amono Acids .  d o i : 1 0 . 4 0 6 / 2 0 11 / 913616. Natalia, Y., R. Hashim, A. Ali, dan A. Chong, 2004.  Characterization  of  Digestive E n z y m e s   i n   a   C a r n i v o r o u s Ornamental  Fish,  the  Asia  Bony Tongoe, Scleropages  formosus (Osteoglossidae). Aquaculture . 233 : 305 – 320. Odedeyi, D.O., 2007. Digestive Enzymes in the  Gut  of  Snakehead  Fish, Parachanna  obscura (Gunter,  1861) (Chanidae)  in  River  Ose  South Western Nigeria. Journal of  Fisheries International . 2(2) : 178 – 181. Renxie, W., H. Wanshu and Z. Qiyong, 2010. Digestive  enzyme  activities  in mudskipper b o l e o p h th a l mu s pectinirostris and  chinese  black sleeper Bostrichthys  sinensis . Chinese Journal of Oceanology and Limnology .  28(4):  756-761. Journal of  The  World  Aquaculture  Society. 36(4): 437-443. Soedibya,  P.H.T.,  U.  Susilo,  dan  P. Brahmana.  2002.  Suplementasi Minyak  Ikan  Lemuru  Pada  Pakan Buatan  dan  Efeknya  Terhadap Komposisi  Tubuh  Serta  Retensi Energi  Ikan  Gurami, Osphronemus gouramy Lac. Sains Akuatik , Vol.5 (2) : 50 – 54. Soedibya, P.T.H., U. Susilo dan S. Rukayah, 2002.  Evaluasi  penggunaan  tepung kedelai sebagai sumber protein pada pakan berkadar protein berbeda yang disuplementasi minyak lemuru untuk ikan  gurami.  Laporan  Penelitian Fakultas, Unsoed, Purwokerto. Steel,  R.G.D.  and  J.H.  Torrie,  1981. Principles and Procedures of Statistic a Biometrical Approach2 nd. Mc Graw Hill Book Company, Singapore. Susilo,  U.,  B,  Hariyadi  dan    F.N. Rachmawati.  2000.  Pertumbuhan dan  Efisiensi  Protein  Ikan  Gurami, Osphronemus  gouramy Lac.,  yang Diberi  Pakan  Pelet  dengan  Bahan Baku Lokal. Saint Akuatik . Vol. 3 (1) : 20 – 27. Susilo,  U.,  F.N.  Rachmawati  dan  S. S u k m a n i n g r u m ,   2 0 0 3 .   E f e k perbedaan  level  pemberian  pakan terhadap  laju  konsumsi  pakan, pertumbuhan,  pemeliharaan  tubuh dan  efisiensi  konversi  pakan  ikan gurami, Osphronemus gouramy Lac. Laporan Penelitian Fakultas, Unsoed, Purwokerto. Susilo,  U.,  F.N.  Rachmawati  dan  N. Setyaningrum, 2010. Aktivitas  Enzim Digesti    Belut  Sawah, Monopterus albus Zuiew, dan Ikan Brek, Puntius orphoides C.V.,  serta  Responnya Terhadap  Stres  Nutrisi.  Laporan Penelitian  Fakultas,  Unsoed, Purwokerto. Tengjaroenkul, B., B.J. Smith, T. Caceci and S.A.  Smith,  2000.  Distribution  of Intestinal Enzyme Activities Along the
Intestinal  Tract  of  Cultured  Nile
Susilo, Untung , dkk . Karakteristik Enzim Digesti, Protease dan Amilase, Ikan Gurami pada Fase Pertumbuhan : 134 - 142

## Biosfera 32 (2) Mei 2015
juga  menginformasikan,  bahwa  untuk mendukung  pertumbuhan  optimal  ikan gurami maka asupan pakan yang diberikan seyogyanya tidak mengandung karbohidrat
yang  tinggi,  karena  kemampuannya  yang terbatas  dalam  mendigesti  karbohidrat. Namun, demikian berapa kebutuhan optimal karbohidrat perlu kajian lebih lanjut.
Gambar 4. Aktivitas amilase ikan gurami pada berbagai rerata berat tubuh.
141 140

## Simpulan
Aktivitas protease digesti ikan gurami dijumpai sepanjang saluran digestinya baik pada  ikan  yang  berukuran  kecil  maupun besar.  Aktivitas  protease  umumnya  tinggi pada suasana asam dan netral pada usus depan  dan  tengah. Aktivitas  protease  ikan yang  berukuran  besar  umumnya  lebih rendah dari pada ikan yang berukuran lebih kecil. Aktivitas  amilase  juga  dijumpai  pada semua  segmen  usus  yang  diuji,  dan  tidak terdapat  perbedaan  aktivitas  amilase diantara  segmen  usus  yang  diuji,  namun aktivitas amilase tertinggi dijumpai pada ikan dengan berat rata-rata terkecil.

## Ucapan Terimakasih
Ucapan  terimakasih  penulis sampaikan  kepada  Universitas  Jenderal Soedirman,  Purwokerto  yang  telah memberikan  dana  penelitian  melalui pendanaan  kompetisi  Riset  Institusional tahun  2011dengan  nomer  kontrak 1947.08/H23.9/PN/2011  tanggal  18  April 2012.

## Daftar Pustaka
Al-Tameemi,  R.,  Aldubaikul,    A.,  and  N.A. Salman, 2010. Comparative study of α-
amylase  activity  in  three  Cyprinid species of different feeding habits from Southern  Iraq.  Turkish  Journal  of Fisheries  and Aquatic  Sciences.  10  :
411 – 414.
Castillo-Yanez, F.J., R. Pacheco-Aguilar, F.L. Gracia-Carreno,  M.A.N.  Toro,  2004. Characterization  of  acidic  proteolytic enzymes  from  monterey  sardine ( Sardinops  sagax  caerulea )  Viscera. Food Chemistry . 85: 343-350. Chan,  C-R.,  D-N.  Lee,  Y-H.  Cheng,  D.J-Y. Hsieh  and  C-F.  Weng,  2008.  Feed Deprivation  and  Re-feeding  on Alterations  of  Proteases  in  Tilapia, O r e o c h r o m i s   m o s s a m b i c u s . Zoological Studies , 47 (2) : 207 – 214. Day, R.D., D.P. German, J.M. Manjakasy, I. Farr, M.J. Hansen & I.R. Tibbetts, 2011. Enzymatic  digestion  in  stomachless fishes : how a simple gut accomodates both herbivory and carnivory. J. Comp. hysiol . B. 181: 603-613. Eroldoğan, O.T., C. Suzer, O. Taşbozan, and S.  Tabakoğlu,  2008.  The  Effects  of Rate-restricted  Feeding  Regimes  in Cycles  on  Digestive  Enzymes  of Gilthead  Sea-bream, Sparus  aurata . Turkish  Journal  of  Fisheries  and Aquatic Sciences. 8 : 49 – 54.
Furne, M.C. Hidalgo, A. Lo´pez, M. Garcı´a- Gallego, A.E. Morales, A. Domezain, J.  Domezaine´,  A.  Sanz,  2005.
Digestive Enzyme Activities in Adriatic
Sturgeon Acipenser  naccarii and Rainbow  Trout Oncorhynchus mykiss .  A  Comparative  Study, Aquaculture . 250: 391– 398 Hariyadi,  B.,  E.  Yuwono,  U.  Susilo,  F.N. Rachmawati  dan  Y.  Sistina.  2010. Pertumbuhan  kompensatori  dan efisiensi  pakan  pada  ikan  gurami, Osphronemus  gouramy  Lac.  Yang mengalami  pembatasan  pakan secara  periodic.  Laporan  Penelitian F a k u l t a s   B i o l o g i ,   U n s o e d , Purwokerto.
Hidalgo, M.C., E. Urea, and A. Sanz, 1999.
Comparative  Study  of  Digestive Enzymes  in  Fish  with  Different Nutritional  Habits.  Proteolytic  and Amylase Activities. Aquaculture . 170 : 267 – 283. Klahan, R., N. Areechon, R. Yoonpundh and A.  Engkagul,  2009.  Characterization and Activity of Digestive Enzymes in Different  Sizes  of  Nile  Tilapia ( Oreochromis niloticus L.). Kasetsart J. (Nat. Sci.) 43 : 143 – 153 Kumar,  S.,  F.L.  Gracia-Carreno,  R. Chakrabarti,  M.A.N.  Toro  and  J.H. Cordova-Murueta,  2007.  Digestive Protease of Three Carps Catla catla, Labeo  rohita and Hypophthalmich- thys molitrix : Partial Characterization and  Protein  hydrolysis  Efficiency.
Aquaculture Nutrition . 13: 381-388. Nasri, R., I. Younes, I. Lassoued, S. Ghorbel, O.  Ghorbel-Bellaaj  and  M.  Nasri, 2011.  Digestive  alkaline  proteases from Zosterisessor  ophiocephalus, Raja clavata and Scorpaena scrofa : Characteristics  and  aplication  in chitin extraction. Research Journal of Amono Acids .  d o i : 1 0 . 4 0 6 / 2 0 11 / 913616. Natalia, Y., R. Hashim, A. Ali, dan A. Chong, 2004.  Characterization  of  Digestive E n z y m e s   i n   a   C a r n i v o r o u s Ornamental  Fish,  the  Asia  Bony Tongoe, Scleropages  formosus (Osteoglossidae). Aquaculture . 233 : 305 – 320. Odedeyi, D.O., 2007. Digestive Enzymes in the  Gut  of  Snakehead  Fish, Parachanna  obscura (Gunter,  1861) (Chanidae)  in  River  Ose  South Western Nigeria. Journal of  Fisheries International . 2(2) : 178 – 181.
Renxie, W., H. Wanshu and Z. Qiyong, 2010. Digestive  enzyme  activities  in mudskipper b o l e o p h th a l mu s pectinirostris and  chinese  black sleeper Bostrichthys  sinensis . Chinese Journal of Oceanology and Limnology .  28(4):  756-761. Journal of  The  World  Aquaculture  Society. 36(4): 437-443. Soedibya,  P.H.T.,  U.  Susilo,  dan  P. Brahmana.  2002.  Suplementasi Minyak  Ikan  Lemuru  Pada  Pakan Buatan  dan  Efeknya  Terhadap Komposisi  Tubuh  Serta  Retensi Energi  Ikan  Gurami, Osphronemus gouramy Lac. Sains Akuatik , Vol.5 (2) : 50 – 54. Soedibya, P.T.H., U. Susilo dan S. Rukayah, 2002.  Evaluasi  penggunaan  tepung kedelai sebagai sumber protein pada pakan berkadar protein berbeda yang disuplementasi minyak lemuru untuk ikan  gurami.  Laporan  Penelitian Fakultas, Unsoed, Purwokerto.
Steel,  R.G.D.  and  J.H.  Torrie,  1981. Principles and Procedures of Statistic a Biometrical Approach2 nd. Mc Graw Hill Book Company, Singapore.
Susilo,  U.,  B,  Hariyadi  dan    F.N. Rachmawati.  2000.  Pertumbuhan dan  Efisiensi  Protein  Ikan  Gurami, Osphronemus  gouramy Lac.,  yang Diberi  Pakan  Pelet  dengan  Bahan Baku Lokal. Saint Akuatik . Vol. 3 (1) : 20 – 27. Susilo,  U.,  F.N.  Rachmawati  dan  S. S u k m a n i n g r u m ,   2 0 0 3 .   E f e k perbedaan  level  pemberian  pakan terhadap  laju  konsumsi  pakan, pertumbuhan,  pemeliharaan  tubuh dan  efisiensi  konversi  pakan  ikan gurami, Osphronemus gouramy Lac. Laporan Penelitian Fakultas, Unsoed, Purwokerto.
Susilo,  U.,  F.N.  Rachmawati  dan  N. Setyaningrum, 2010. Aktivitas  Enzim Digesti    Belut  Sawah, Monopterus albus Zuiew, dan Ikan Brek, Puntius orphoides C.V.,  serta  Responnya Terhadap  Stres  Nutrisi.  Laporan Penelitian  Fakultas,  Unsoed, Purwokerto.
Tengjaroenkul, B., B.J. Smith, T. Caceci and S.A.  Smith,  2000.  Distribution  of Intestinal Enzyme Activities Along the Intestinal  Tract  of  Cultured  Nile
Susilo, Untung , dkk . Karakteristik Enzim Digesti, Protease dan Amilase, Ikan Gurami pada Fase Pertumbuhan : 134 - 142
Tilapia, Oreochromis  niloticus L., Aquaculture . 182 : 317 – 327. Tongsiri,  S.,  K.  Mang-Amphan  and  Y. P e e r a p o r n p i s a l ,   2 0 1 0 . Characterization  of  amylase, cellulase and proteinase enzyme in stomach and intestin of the mekong giant  catfish  fed  with  various  diets consisting  of Spirulina . Current Research  Journal  of  Biological Sciences . 2(4): 268-274. Xiong, D.M., C.X. Xie, H.J. Zhang and H.P.
Liu, 2009. Digestive enzymes along digestive  tract  of  a  carnivorous  fish G l y p t o s t e r n u m   m a c u l a t u m (Sisoridae,  Siluriformes). Journal  of Animal  Physiology  and  Animal Nutrition . 95: 56-64.
Yuwono, E., P. Sukardi dan U. Susilo, 2008. Kondisi Fisiologis Pada Pertumbuhan Kompensatori yang Diinduksi Dengan Pembatasan  Pakan  Sebagai  Upaya Optimasi  Produksi  Ikan  Gurami. Tahun I. Laporan Penelitian Fakultas, Unsoed, Purwokerto.
Yuwono, E., P. Sukardi dan U. Susilo, 2009. Kondisi Fisiologis Pada Pertumbuhan Kompensatori yang Diinduksi Dengan Pembatasan  Pakan  Sebagai  Upaya Optimasi  Produksi  Ikan  Gurami. Tahun II. Laporan Penelitian Fakultas, Unsoed, Purwokerto.

## 142