## Saponin Biji Klabet pada Organ Reproduksi Tikus Jantan Sprague Dawley®
Sri Nita 1 , Ummi Hiras Habisukan 2 , dan Nyayu Fauziah Zen 3
1,3 Biologi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Sriwijaya. 2 STIK, Siti Khadijah, Palembang
Abstract: Fenugreek seed saponin is one alternative of antifertilitas medicinal plants. Research purposes is to determine the effect of the fenugreek seeds  saponin againts the reproductive organ, that is weight and histological structure of the testis and epididymis Sprague Dawley® rat. Research design using randomized design complete. The control group was given  distilled  water,  the  treatment  group  were  given  fenugreek  seed    saponin  with  doses  of  40, 80,  &  120  mg/kg  bw. Treatment is administered orally 1x/day for 24 days. Award saponin start dose of 40 mg/kg bw can reduce the weight of the  testes    and  reduce  the  size  of  the diameter  of  seminiferous  tubules.  Thick  germ  cells  begin  to be  affected  at  higher doses, 120 mg/kg bw. Epididymis weight is reduced significantly compared to the control start at dose 80 mg/kg bw and giving a higher dose, 120 mg/kg bw significantly  further reduces the weight of the  epididymis. Saponin administration starting dose of 80 mg/kg bw already significantly reduced  the thickness of the epithelium of the epididymis. Giving a higher dose of 120 mg/kg bw increasingly signifcant cause epididymal epithelium thickness thinner. It can be concluded that  the administration of saponin fenugreek seeds caused a reduction in weight and histological changes in the testis and epididymis structure  of rat Spraque Dawley ®
Keywords: Saponin  Biji  Klabet,  Berat  Testis  dan  Epididimis,  Diameter  Tubulus  Seminiferus,  Tebal  Epitel Germinal, Tebal Epitel Epididimis
Email: Srinita1970@gmail.com, umihira@gmail.com

## 1 PENDAHULUAN
ertumbuhan  penduduk  Indonesia  dalam  kurun waktu  10  tahun  terakhir  telah  mengalami  pe- ningkatan sebesar 1,49%. Dengan jumlah penduduk 245  juta  pada  Maret  2012,  Indonesia  berada  pada urutan  ke-empat  setelah  Tiongkok,  India,  dan Amerika  Serikat.  Salah  satu  upaya  yang  dilakukan pemerintah  untuk  menekan  laju  pertumbuhan  ini adalah  dengan  program  Keluarga  Berencana  (KB). Jumlah penduduk yang telah mengikuti program KB sebesar  61%.  Dari  jumlah  ini  hanya  8,5%  pria  yang merupakan  akseptor  KB,  selebihnya  adalah  wanita (BKKBN, 2013).
Ada beberapa faktor yang menyebabkan rendah- nya  partisipasi  pria  untuk  ikut  serta  dalam  program KB.  Diantaranya  adalah  kurangnya  konseling  pada pria mengenai KB, faktor sosial budaya yang meng- anggap  KB  hanya  untuk  wanita,  kurangnya  penge- tahuan  serta  kesadaran  pria  untuk  berpartisipasi, dan yang paling utama adalah terbatasnya jenis atau pilihan alat kontrasepsi (BKKBN, 2013).
Alat  kontrasepsi  yang  sesuai  untuk  pria  harus dapat mencegah terjadinya fertilisasi, tidak memiliki efek samping, mempunyai kinerja yang cepat, aman, serta  yang  terpenting  tidak  mempengaruhi  libido dan  potensi  seksual.  Untuk  memenuhi  kriteria  ter- sebut saat ini banyak peneliti yang melakukan riset.
Salah satunya adalah pengembangan kontrasepsi pil yang  berbahan  dasar  tanaman  obat  yang  diyakini memiliki khasiat sebagai antifertilitas pria.
Tanaman Trigonella  foenum-graecum L.  yang dikenal  dengan istilah fenugreek dalam bahasa Ing- gris dan klabet dalam bahasa Indonesia merupakan salah  satu  tanaman  obat  alternatif  antifertilitas.  Biji tanaman ini mengandung saponin berupa diosgenin yang  merupakan  prekursor  steroid  yang  sering digunakan sebagai bahan dasar pembuatan hormon steroid (Tarigan, 1980).
Senyawa  antifertilitas  pada  prinsipnya  bekerja dengan  dua  cara  yaitu  melalui  efek  sitotoksik  dan melalui efek hormonal yang menghambat laju meta- bolisme  sel  spermatogenik  dengan  cara  menggang- gu keseimbangan hormon (Kusumah, 1999).  Menu- rut  Wiryawan  dkk.,  (2009),  pemberian  ekstrak  biji klabet  pada  kelinci  jantan  menyebabkan  kerusakan tubulus  seminiferus  dan  penurunan  jumlah  sel spermatozoa.
Penelitian bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian  Saponin  Biji  Klabet  ( Trigonella  foenum- graecum L.) terhadap perubahan berat dan struktur histologis  testis  dan  epididimis  tikus  Sprague Dawley®.
P

## 2 KAJIAN LITERATUR
Spermatozoa  dibentuk  dari  sel  germinal  primitif  di sepanjang  dinding  seminiferi  dalam  proses  yang disebut  spermatogenesis  (Guyton,  1997).  Spermato- genesis  dikendalikan  oleh  sistem  saraf  pusat  dan dapat berjalan normal jika jalur antara hipotalamus- hipofisis-testis  membentuk  sistem  neuroendokrin yang  berjalan  normal,  melaui  mekanisme  release dan  feed  back  antara  ketiga  organ  tersebut. Hipotalamus merupakan tempat sintesa GnRH yang melalui  sistem  release  akan  merangsang  hipofisis untuk  mensekresikan  Follicle  Stimulating  Hormone (FSH)  dan  Lutheinizing  Hormone  (LH)  yang  akan merangsang  testis  untuk  mensekresikan  testosteron dan  inhibin.  Inhibin  akan  berperan  sebagai modulator signal  feed  back ke  hipotalamus  untuk menghambat  sintesa  GnRH  yang  kemudian  akan berakibat  pada  hipofisis  untuk  menghambat  sekresi FSH dan LH (Nieschlag, 2001).
Penurunan jumlah sel spermatozoa diduga kare- na  penghambatan  sekresi  testosteron.  Hal  tersebut terjadi  karena  diosgenin  dalam  kandungan  saponin mempunyai  inti  steroid  dan  struktur  molekul  mirip kolesterol  yang  merupakan  prekursor  testosteron, sehingga  dapat  menempati  reseptor  testosteron. Dengan  ditempatinya  reseptor  testosteron,  maka menimbulkan feedback negatif, sehingga testosteron yang  dihasilkan  oleh  sel  leydig  juga  dihambat sekresinya  (Tarigan,  1980).  Testosteron  adalah  hor- mon  yang  mempunyai  fungsi  dalam  pembentukan spermatozoa (Guyton, 1997).
Sel  sertoli  berperan  dalam  menyediakan  laktat, transferin  dan  androgen  binding  protein  untuk metabolisme  sel  germinal  (Walker  &  Cheng,  2005). Fungsi  sel  sertoli  dikendalikan  oleh  Follicle  Stimu- lating  Hormone  dan  testosteron.  Penurunan  testos- teron  karena  efek  diosgenin  yang  dikandung  sapo- nin  menyebabkan  kinerja  sel  sertoli  menjadi  tidak optimal,  sehingga  terjadi  gangguan  proses  spermio- genesis,  gangguan  metabolisme  sel  germinal,  bah- kan  bisa  menyebabkan  apoptosis  sel  (Henriksen et al ., 1996).
Penurunan jumlah sel spermatozoa juga dimung- kinan  melalui  beberapa  mekanisme  seperti  adanya gangguan  dalam  proses  meiosis,  gangguan  proses spermiogenesis  awal  karena  lepasnya  spermatid  ke lumen  tubulus,  dan  karena  terjadi  apoptosis  sper- matid.  Penurunan  tersebut  dihubungkan  dengan penurunan  testosteron  dan  FSH.  Proses  meiosis spermatosit  primer  menjadi  spermatosit  sekunder dan  membentuk  spermatid  diatur  oleh  testosteron dan  atau  FSH  melalui  aksinya  pada  sel  sertoli  (Mc Lachlan, 2000).
Menurut  penelitian  Rekha  & Chndrasekhara (2014)  saponin  dalam  kandungan  daun  Ziziphus jujuba dapat menyebabkan menurunnya jumlah dan motilitas  sperma,  menurunkan  fertilitas,  menurun- kan  berat  testis  dan  epididimis,  dan  menyebabkan kerusakan  pada  tubulus  seminiferus  pada  tikus jantan.
Dari beberapa penelitian di atas diketahui ekstrak biji  klabet  mengandung  senyawa  yang  berpotensi sebagai  antifertilitas.  Hipotesis  pada  penelitian  ini terjadi perubahan berat dan struktur histologis testis dan  epididimis  pada  tikus  jantan  Sprague  Dawley® akibat  pemberian  fraksi  saponin  dalam  kandungan biji klabet ( Trigonella foenum-graecum L.)

## 3 METODE PENELITIAN

## Jenis Penelitian
Jenis  penelitian  ini  merupakan  penelitian  ekspe- rimen  dengan  menggunakan  rancangan  acak lengkap (RAL)

## Populasi dan Sampel Penelitian
Populasi hewan uji dalam penelitian ini adalah tikus jantan  ( Rattus  norvegicus )  strain  Sprague  Dawley®. Sampel  dibagi  ke  dalam  empat  kelompok  dengan cara complete  random  sampling sehingga  jumlah tikus yang digunakan adalah 24 ekor.

## Persiapan bahan uji
Biji  klabet  diekstraksi  dengan  cara  maserasi  meng- gunakan pelarut metanol.Maserasi dilakukan selama 3 x 24 jam sampai terekstraksi sempurna. Kemudian filtrat  dipekatkan  dengan  rotary  evaporator  sampai menjadi ekstrak kental. Selanjutnya masuk ke tahap fraksinasi.  Sejumlah  261  gram  ekstrak  metanol kental  dilarutkan  dengan  300  ml  metanol  destilat, dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  (1000  ml), ditambahkan  300  ml  n-heksana  destilat,  dikocok selama  ±  15  menit  dengan  sesekali  kran  dibuka untuk  membuang  gas  yang  terbentuk,  diamkan sehingga  terbentuk  2  lapisan,  lapisan  atas  (fase  n- heksan), lapisan bawah (fase metanol).
Fase  metanol  dituang  ke  dalam  erlenmeyer, sedangkan fase  n-heksana ditampung dalam wadah (botol),  fase  metanol  dimasukkan  kembali  kedalam corong  pisah  kemudian  ditambahkan  300  ml  n- heksana  untuk  dipartisi  kembali.  Partisi  dilakukan berulang-ulang  dengan  menambahkan  300  ml  n- heksan  redestilat  pada  setiap  kali  partisi  sampai warna  fase  n-heksana  mendekati  warna  n-heksan destilat.
Fase  n-heksan  yang  terkumpul,  dipekatkan menggunakan  rotavapor  dengan  suhu waterbath
±40°C,  kecepatan  putaran  labu  rotavapor  80-90 rpm  dan  suhu  chiller  10-15°C.  Fase  metanol  dike- ringkan  kembali  dengan  menggunakan  rotavapor. Setelah  kering  dilarutkan  kembali  dengan  300  ml akuades,  dimasukkan  kedalam  corong  pisah  (1000 ml).  Etil  asetat  destilat  dijenuhkan  dengan  akuades dan  ditambahkan  kedalam  corong  pisah  sejumlah 300  ml,  kocok  selama  ±  15  menit  dengan  sesekali kran  dibuka  untuk  membuang  gas  yang  terbentuk, diamkan  sehingga  terbentuk  2  lapisan,  lapisan  atas (fase etil asetat), lapisan bawah (fase akuades).
Fase  akuades  dituang  ke  dalam  erlenmeyer  dan fase etil asetat ditampung. Fase akuades dimasukkan kembali  ke  dalam  corong  pisah,  kemudian  ditam- bahkan  300  ml  etil  asetat  destilat  untuk  mengulang partisi  sampai  warna  fase  etil  asetat  mendekati warna etil asetat destilat.  Fase akuades dimasukkan kedalam  corong  pisah  (1000  ml)  kemudian  ditam- bahkan  200  ml  n-butanol  destilat  jenuh  air,  kocok selama  ±  15  menit  dengan  sesekali  kran  dibuka untuk  membuang  gas  yang  terbentuk,  diamkan sehingga  terbentuk  2  lapisan,  lapisan  atas  (fase  n- butanol),  lapisan  bawah  (fase  akuades).  Fase  akua- des dituang ke dalam erlenmeyer dan fase n-butanol ditampung.  Fase  air  dimasukkan  kembali  ke  dalam corong  pisah,  kemudian  ditambahkan  300  ml  n- butanol  destilat  untuk  mengulang  partisi  sampai warna  fase  n-butanol  mendekati  warna  n-butanol destilat.
Fase  n-butanol  dipekatkan  dengan  rotavapor pada  suhu  waterbath  ±  45°C,  kecepatan  putaran labu  rotavapor  80-90  rpm  dan  suhu  chiller  10-15°C sehingga diperoleh fraksi kental n-butanol. Fraksi n- butanol  selanjutnya  dicuci  dengan  eter,  setelah  itu dilarutkan  dalam  metanol,  disaring  dan  kemudian filtrat metanol  ditambah eter berlebih dan endapan disaring dan merupakan saponin.
Sebelum  digunakan,  dilakukan  skrining  fitokimia untuk mengetahui  dan mengkonfirmasi keberadaan kandungan  saponin  pada  fraksi  yang  didapatkan, diuji dengan cara sebagai berikut diambil 0,2 g fraksi biji Klabet lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 7 ml air panas, didinginkan dan kemu- dian dikocok vertikal selama 10 detik. Pembentukan busa  setinggi  1  –  10  cm  yang  stabil  selama  kurang lebih  10  menit  menunjukkan  adanya  saponin.  Pada penambahan  1  tetes  HCl  2N,  busa  tidak  hilang (Depkes RI, 1989).

## Pemberian saponin biji klabet
Hewan  percobaan  yang  terdiri  dari  24  ekor  tikus Sprague  Dawley®  jantan  umur  60  hari,  berat  280– 300  g  dibagi  menjadi  1  kelompok  kontrol  dan  3 kelompok  perlakuan  dosis  yang  dipilih  secara  acak.
Tiap-tiap kelompok terdiri  dari 6 ekor tikus. Kelom- pok  kontrol  diberikan  aquades  dan  kelompok perlakuan diberikan saponin biji klabet dengan dosis 40, 80 dan 120 mg/kg bb.Perlakuan diberikan secara oral  1x/hari  selama  24  hari.  Setelah  24  jam pemberian  dosis  terakhir  dilakukan  pembiusan dengan  cara  meletakkan  kloroform  pada  dasar stoples lalu tikus dimasukkan ke dalam wadah yang tertutup.  Hewan  dikeluarkan  dan  dapat  mulai dibedah  jika  sudah  kehilangan  kesadarannya.  Tikus didekapitasi  lalu  ronggaabdomen  dan  pelvisdibuka dengan  menggunakan  gunting  sirurgis  untuk  men- dapatkan testis dan epididimis. Pembuatan preparat histologis dilakukan di Laboratorium Patologi Anato- mi  Dyatnitalis  Palembang.  Pengamatan  dilakukan terhadap  berat,  diameter  &  tebal  epitel  germinal testis   serta berat dan tebal epitel epididimis.

## Pengamatan  Berat  dan  Sediaan  Histologi  Testis  Dan Epididimis Serta Pembuatan Mikrofoto
Organ  reproduksi  yang  ditimbang  adalah  testis  dan epididimis. Semua organ tersebut diambil dan diber- sihkan dalam larutan NaCl 0.9% sampai lemak yang menempel  pada  organ  tersebut  hilang,  kemudian dikeringkan dengan kertas tissu dan ditimbang
Setiap testis dan epididimis dari seekor tikus putih jantan  masing-masing  dibuat  1  sediaan  histologi. Pengamatan histologi testis dan epididimis menggu- nakan  mikroskop  dengan  pembesaran  100  kali. Pengukuran  diameter  tubulus  seminiferus,  tebal epitel germinal dan tebal epitel epididimis dilakukan dengan  menggunakan  mikrometer  okuler  sebelum- nya  dilakukan  penyetaraan  dengan  menggunakan mikrometer objektif.

## tebal sel germinal = Θ tubulus − Θ lumen 2
Untuk  satu  preparat  testis  diamati  5  tubulus  semi- niferus  yang  berbentuk  bulat,  karena  tubulus  semi- niferus  yang  berbentuk  bulat  berarti  terpotong melintang. Dari kelima pengamatan tersebut diambil rata-ratanya.  Histologi  mikroanatomi  testis  akan disajikan dalam bentuk foto perbesaran 100x.
Penghitungan tebal epitel epididimis dari sediaan histologi  epididimis  sebagai  berikut:  diameter  epidi- dimis dikurang diameter lumen epididimis kemudian dibagi dua. Untuk satu preparat epididimis diamati 3 potongan  di  daerah  cauda  epididimis.  Dariketiga pengamatan tersebut diambil rata-ratanya.

## Analisis Data
Semua data yang diperoleh ditampilkan dalam ben- tuk  rata-rata  ±  simpangan  baku  (rata-rata  ±SD). Dilakukan  pengujian  normalitas  dan  homogenitas data.  Apabila  data  berdistribusi  normal  dan  homo-
gen  dilakukan  uji  Anova  yang  dilanjutkan  dengan Post  Hoc  Benferroni  tahap  5%  untuk  melihat perbedaan  antar  kelompok  kontrol  dan  masing- masing perlakuan. Namun, apabila data berdistribusi tidak normal atau tidak homogen maka dilakukan uji Anova  yang  dilanjutkan  dengan  Post  Hoc  Games Howell (SPSS 21).

## 4 HASIL PENELITIAN
Hasil  pengamatan  terhadap  berat  dan  struktur histologis  testis  dan  epididimis  dapat  dilihat  pada Tabel 1dan Tabel 2.
______________________________________________________
Tabel 1. Rata-rata berat testis, diameter tubulus seminiferus, tebal sel-sel germinal kelompok kontrol dan perlakuan yang
diberi fraksi saponin klabet Kelompok Rata-rata Rata-rata Diameter Tubulus Rata-rata Tebal Berat Testis  ± SD (g) Seminiferus  ± SD (µm) Sel Germinal ± SD (µm) KA 1,35 ± 0,06 a 335,72 ± 3,10 a 86,68 ± 1,15 a KB 1,17 ± 0,03 b 327,47 ± 5,02 b 85,01 ± 1,24 a KC 1,06 ± 0,04 c 318,55 ± 4,33 c 84,63 ± 2,33 a KD 0,92 ± 0,08 d 300,14 ± 5,46 d 81,91 ± 0,71 b Post Hoc Test Bonferroni
Ket:   Akuades(KA)  , Dosis saponin biji klabet 40 mg/kg BB(KB)  , Dosis saponin biji klabet 80 mg/kg BB(KC)  ,  Dosis saponin biji klabet 120 mg/kg BB(KD). Huruf yang tidak sama menyatakan berbeda nyata ( p<0.05)
______________________________________________________
Rata-rata berat testis  kelompok perlakuan menu- run  secara  signifikan  dibandingkan  kelompok  kon- trol.  Demikian  juga  antar  kelompok  perlakuan terjadi  perbedaan  yang  nyata  dalam  penurunan berat  testis  akibat  pemberian  fraksi  saponin.  Dia- meter  tubulus  seminiferus  kelompok  yang  diberi fraksi saponin berbeda dari kelompok kontrol, yaitu diameternya  lebih  kecil  dibandingkan  kelompok kontrol.  Ukuran  diameter  tubulus  seminiferi  antar kelompok perlakuan juga berbeda signifikan.
Pemberian  fraksi  saponin  mulai  dosis  40  mg/kg bb  sudah  dapat  menurunkan  berat  testis  dan mengurangi  ukuran  diameter  tubulus  seminiferus. Bertambah  tingginya  dosis  yang  diberikan  makin menurun  pula  berat  testis  dan  ukuran  diameter tubulus  seminiferus.  Tebal  sel  germinal  baru terpengaruh  pada  dosis  tinggi,  yaitu  fraksi  saponin dosis 120 mg/kg bb (Tabel 1 dan Gambar 1).
Gambar 1.  (A)  Diameter Tubulus Seminiferus (      ) dan Tebal epitel  germinal Kontrol (       ). (B) Diameter Tubulus Seminiferus dan Tebal epitel germinal setelah diberi perlakuan fraksi saponin 120 mg/kg bb (Pembesaran 100 X)
Tabel 2. Rata-rata berat epididimis dan tebal epitel epididimis kelompok kontrol dan perlakuan yang diberi
fraksi saponin klabet Kelom- pok Rata-rata Berat Epididimis ± SD (g) * Tebal Epitel Epididi- mis  ± SD (µm) ** KA 0,42 ± 0,03 a 21,54 ± 1,35 a KB 0,36 ± 0,04 ab 19,73 ± 0,78 a KC 0,31 ± 0,04 b 15,96 ± 1,06 b KD 0,24 ± 0,04 c 12,84 ± 0,19 c
* Post Hoc Test Bonferroni ** Post Hoc Test Games Howell Ket:   (KA)  Akuades, (KB)  Dosis saponin biji klabet 40 mg/kg BB, (KC)  Dosis saponin biji klabet 80 mg/kg BB, (KD)  Dosis saponin biji klabet 120 mg/kg BB. Huruf yang tidak sama menyatakan berbeda nyata ( p<0.05)
Berat  epididimis  tikus  jantan  yang  diberi  fraksi saponin  klabet  terlihat  menurun  dibandingkan  kon- trol.  Berat  epididimis  dosis  40  mg/kg  bb  walaupun terjadi  penurunan  tetapi  belum  berbeda  nyata dibandingkan  kontrol.  Penambahan  dosis  menjadi 80  mg/kg  bb  berat  epididimisnya  makin  menurun tetapi  belum  berbeda  nyata  jika  dibandingkan dengan dosis 40 mg/kg bb.
Berat  epididimis  menurun  secara  nyata  diban- dingkan  kontrol  mulai  dosis  80  mg/kg  bb  dan  pem- berian  dosis  yang  lebih  tinggi  yaitu  120  mg/kg  bb secara  nyata  makin  menurunkan  berat  epididimis bahkan  jika  dibandingkan  dengan  pemberian  fraksi saponin klabet dosis 80 mg/kg bb.
Tebal  epitel  epididimis  terlihat  lebih  tipis  diban- dingkan  kontrol  (Gambar2).  Pemberian  fraksi  sapo- nin mulai dosis  80 mg/kg bb yang secara signifikan mengurangi  ketebalan  epitel  epididimis.  Pemberian
dosis yang  lebih tinggi, yaitu   120 mg/kg bb secara nyata menyebabkan tebal epitel epididimis lebih tipis bahkan jika dibandingkan pemberian dosis 80 mg/kg bb (Tabel 2).
Gambar 2. (A) Tebal epitel epididimis kontrol; (B) Tebal epitel epididimis setelah diberi perlakuan 120 mg/kg bb (Pembesaran 100 X)

## 5 PEMBAHASAN

## Fraksi Saponin Klabet terhadap Berat dan Histologi Testis
Pengamatan  berat  testis  dapat  secara  makroskopis untuk  mengetahui  ada  tidaknya  efek  pemberian fraksi  saponin.  Berat  testis  antara  lain  ditentukan oleh perkembangan  epithelium tubulus seminiferus. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  terjadi  penu- runan mulai dosis 80 mg/kg bb dan semakin menu- run bila dosis ditingkatkan. Di duga penurunan berat testis  dapat  disebabkan  oleh  atropi,  yaitu  suatu proses  penyusutan  atau  berkurang  besarnya  suatu organ tubuh atau jaringan dari keadaan semula atau dari  bentuk  normalnya  (Wahyuni,  2006).    Menurut Barbosa  (2014)  saponin  mempunyai  sifat  amfifilik dan  mempunyai  kemampuan  membentuk  komplek dengan fosfolipid dan protein membran sel sehingga akan merubah permeabilitas membran. Selanjutnya akan mengganggu aktivitas sel dan dapat menimbul- kan  kematian  sel.  Pengurangan  jumlah  sel  disebab- kan  oleh  ketidakseimbangan  proliferasi  dan  kema- tian sel dalam jangka waktu lama (Candrasoma dan Taylor, 2005). Hasil penelitian ini sama dengan hasil penelitian  Rekha&  Chndrasekhara  (2014)  yang menyatakan  bahwa  fraksi  saponin  dengan  dosis yang  semakin  tinggi  dan  pemberian  fraksi  saponin yang  lama  akan  menghambat  perkembangan  testis dan  menyebabkan  atropi  (pengecilan  ukuran)  testis dibanding kontrol.
Dari  hasil  penelitian  didapatkan  adanya  penge- cilan pada diameter tubulus seminiferus, hal tersebut diduga karena efek sitotoksik dari senyawa saponin, sehingga sel-sel spermatogenik yang mengisi tubulus seminiferus  tidak  dapat  mempertahankan  aktivitas- nya.  Dengan  demikian  timbul  adanya  perbedaan yang  bervariasi  pada  sel-sel  spermatogenik  di  tubu-
lus seminiferus. Tubulus  seminiferus  merupakan  ba- gian utama dari masa testis (sekitar 80%) yang meru- pakan  tempat  berlangsungnya  proses  spermato- genesis.
Pada  hewan  jantan,  Gonadotropin  Releasing Hormone  (GnRH)  disekresikan  dari  hypothalamus untuk  menstimulasi  pelepasan  Lutenising  Hormone (LH)  dan  Follicle  Stimulating  Hormone  (FSH)  dari pituitary  anterior.  LH  dan  FSH  mengatur  aktivitas testis.  LH  merangsang  sel-sel  Leydig  untuk  mem- produksi  testosteron.  FSH  akan  menstimulasi  sel-sel Sertoli  untuk  proses  pembentukan  sel-sel  germinal pada  spermatogenesis  (Hernawati,  2001).  Penuru- nan  FSH  dan  kadar  testosteron  inilah  yang  juga diduga menurunkan berat testis (Wahyuni, 2006).
Sel-sel endokrin yang mengeluarkan hormon tes- tosteron  (sel-sel  Leydig)  terletak  di  jaringan  ikat  an- tar  tubulus-tubulus  seminiferus.  Sel  leydig  mengan- dung  enzim  yang  dibutuhkan  untuk  sintesis  testos- teron. Setelah disekresikan testosteron yang disekresi diikat  oleh  ABP  (Androgen  Binding  Protein)  yang disekresikan oleh sel Sertoli masuk ke lumen tubulus seminiferus  untuk  proses  spermatogenesis  (Sher- wood,  2001).  Sejalan  dengan  hasil  penelitian sebelumnya  bahwa  penurunan  yang  terjadi  pada diameter  tubulus  seminiferus  diduga  dikarenakan terhambatnya  sekresi  LH  di  hipofisis  anterior  yang berfungsi untuk menstimulus pertumbuhan dan jum- lah  sel  Leydig.  Sehingga  sekresi  testosteron  berku- rang  dan  menghambat  sel  leydig  untuk  mempro- duksi  hormon  testosteron,  sehingga  terjadi  penuru- nan  kadar  hormon  testosteron.  Kurangnya  kadar hormon  testosteron  dan  FSH  inilah  yang  diduga dapat  menyebabkan  atrofi  tubulus  seminiferus (Wahyuni, 2006).
Dari gambar histologi di atas (gambar 1) terlihat bahwa  terjadi  pengurangan  ketebalan  sel-sel  ger- minal  tubulus  seminiferus  antara  kelompok  kontrol dengan  kelompok  perlakuan.  Saponin  terdiri  dari gugus  hidrofilik  (glikon)  dan  gugus  hidrofobik  (agli- kon)  berupa  senyawa  lain  steroid  dan  triterpenoid (Irwan  dkk.,  2007).  Kandungan  zat  aktif  biji  klabet yaitu  saponin  yang  digolongkan  dalam  glikosida  tri- terpen memiliki struktur dasar siklopentana pehidro- fenatrena  yang  dimiliki  oleh  steroid.  Di  ketahui bahwa steroid  dapat berperan sebagai penghambat spermatogenesis dan bersifat reversibel. Kandungan zat  aktif  klabet  yakni  saponin  tadi  dapat  mengham- bat  proses  mitosis  sehingga  perkembangan  sel-sel germinal  ikut  terhambat  bahkan  rusak,  terbukti dengan berkurangnya ketebalan sel-sel germinal.
Tubulus  seminiferus  merupakan  bagian  utama testis  yang  terdiri  dari  sejumlah  besar  sel-sel  ger- minal  (sel  benih)  yang  disebut  spermatogonia
(spermatogonium  =  tunggal).  Spermatogonia  terle- tak di dua sampai tiga lapisan di dalam tubulus semi- niferus.  Spermatogonia  terus  menerus  membelah untuk  memperbanyak  diri,  sebagian  dari  spermato- gonia  berdiferensiasi  melalui  tahap-tahap  perkem- bangan  tertentu  untuk  membentuk  sperma.  Dalam proses  spermatogenesis  testosteron  dan  FSH  memi- liki  peranan  yang  penting.  Tetapi  karena  steroid diketahui  dapat  menghambat  17-3-hidroksisteroid- oksidoreduktase, enzim yang dibutuhkan dalam sin- tesis  androstenodion  menjadi  testosteron,  sehingga pada defisiensi enzim tersebut mengakibatkan penu- runan  kadar  testosteron  yang  mengakibatkan  ter- ganggunya proses sprematogenesis dan atropi pada sel-sel  spermatogenik.  Menurut  Brinkworth  &  Han- delsman  (2000)  penurunan  jumlah  sel-sel  sperma- togenik akan menyebabkan berkurangnya tebal sel- sel germinal tubulus seminiferus.
Secara  fisiologis,  dalam  sistem  portal  Hipota- lamus-Hipofisis-Testis (HHT), hipotalamus mensekre- sikan  GnRH  untuk  menstimulus  hipofisis  anterior mensekresikan FSH dan LH, namun karena saponin yang  berikatan  dengan  RE  maka  menyebabkan pertumbuhan  dan  pematangan  sel  leydig  serta jumlah  sel  leydig  pun  berkurang  sehingga  sekresi hormon  testosteron  pun  berkurang  (Hanum,  2010). Apabila  testosterone  didalam  sel  leydig  berkurang maka  akan  mengakibatkan  proses  spermatogenesis juga  terganggu.  Menurut  Gufron  dan  Herwiyanti (2003),  bahwa  hambatan  atau  gangguan  sperma- togenesis dapat dilihat dari letak sel spermatogenesis yang tidak teratur sehingga lumen tidak mempunyai batas yang tegas.
Penurunan  tebal  sel-sel  germinal  tubulus  semini- ferus  pada  tikus  jantan  disebabkan  oleh  adanya gangguan aktifitas mitosis sel-sel spermatogenik oleh fraksi  saponin  yang  berakibat  pada  terganggunya proses  proliferasi  sel  spermatogenik  dalam  tubulus seminiferus (Faranita, 2009).

## Fraksi Saponin Klabet terhadap Berat dan Histologi Epididimis
Menurut  Arsyad  (1986)  penurunan  jumlah  testote- ron berpengaruh pada tebal epitel epididimis. Selain itu  menurut  Robaire  &  Viger  (1995)  testosteron berperan  mengatur  morfologi  sel  epitel  epididimis. Apabila  testoteron  menurun  maka  morfologi  sel epitel  epididimis  mengalami  penurunan  dan  bila semakin  lama  akan  terjadi  degenerasi  sel  epitel epididimis.  Bahan  bio  aktif  yang  bersifat  toksik seperti alkaloid, flavonoid dan saponin dapat berpe- ngaruh  terhadap  tebal  epitel  epididimis,  sehingga terjadi  degenerasi  pada  sel  epitel  epididimis  yang
berdampak  pada  penurunan  ketebalan  epitel epididimis.
Penurunan  tebal  epitel  epididimis  ini  diduga disebabkan  karena  saponin  yang  merupakan  pre- kursor  testosteron  mengakibatkan  sekresi  FSH menurun  dan  LH  terhambat.  Karena  sekresi  LH terhambat  maka  menyebabkan  pertumbuhan  dan jumlah  sel  leydig  berkurang  sehingga  sekresi hormon  testosteron  juga  ikut  berkurang.  Hal  ini dikarenakan sel leydig merupakan tempat terjadinya proses  steroidogenesis  yang  menghasilkan  testoste- ron,  jika  jumlah  atau  fungsinya  berkurang  maka produksinyapun akan berkurang (Hanum, 2010).
Setelah  disekresikan,  testosteron  tersebut  selan- jutnya  diikat  oleh  ABP  yang  disekresikan  oleh  sel sertoli (Sherwood, 2001). Karena testosteron menu- run  maka  sintesis  ABP  juga  menurun,  sehingga menyebabkan  penurunan  transport  testosteron  ke epididimis  sehingga  menyebabkan  atropinya  sel-sel epitel.

## 6 SIMPULAN
Pemberian  Saponin  Biji  Klabet  (Trigonella  foenum- graecum  L.)  menyebabkan  perubahan  berat  dan struktur histologis testis dan epididimis tikus Sprague Dawley®.

## Saran
Saran  bagi  penelitian  selanjutnya  adalah  dapat dilakukan penelitian mengenai uji saponin biji klabet secara in vitro terhadap sperma manusia.
REFERENSI _____________________________
[1] Arsyad, KM. 1986. Manfaat dan Dampak Klinik Penggunaan Androgen pada Pria.Majalah Andrologi Indonesia. Edisi:5. 142-148
[2] Barbosa, A.D.P. 2014 An Overview on the Biological & Pharmacological Activities of Saponins. International Journal of Pharmacy & Pharmaceutical Science 6(8): 47-50.
[3] BKKBN. 2013. Profil Kependudukan dan Pembangunan di Indonesia tahun 2013. pdf
[4] Brinkworth, M.H. & D.J. Handelsman. 2000. The Male Reproduction System. Saunders, Philadelphia USA.
[5] Candrasoma, C.R. Taylor. 2005. Ringkasan Patologi Anatomi ed.2. Alih bahasa Soedoko R. Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, Indonesia.
[6] Departemen Kesehatan RI.1989. Vademekum Bahan Obat Alam. Dirjen POM. Departemen Kesehatan RI. Jakarta.
[7] Faranita OV. 2009. Kualitas Spermatozoa pada TikusWistar Jantan. Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang.
[8] Gufron M. dan S. Herwiyanti. 1995. Gambaran Histologik Spermatogenesis Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) setelah Diberi Makan Terong Tukak ( Solanum tornum ). Jurnal Kedokteran Yarsi.
[9] Guyton AC., Hall JE. 1997. Fisiologi Kedokteran.ed.9. Alih Bahasa Setiawan I, Ken Ariata Tengadi LMA, Santoso A. Penerbit Buku Kedokteran EGC: Jakarta, Indonesia.
[10] Hanum, M. 2010. Biologi Reproduksi . Nuha Medika; Yogyakarta
[11] Henriksen, K.,M. Kangasniemi, M. Parvinen, A. Kaipia, H. Harkorvita. 1996. In Vitro Folicle Stimulating hormone Prevents apoptosis and Stimulated Dioxyribonucleic Acid Syntesis in the Rat Seminiferous Epithelium in a stage-Spesific Fashion. Endocrynology Journals.
[12] Hernawati, A. 2001. Efek Amfetamin Terhadap Ultrastruktur Sel Spermatogenik Tikus . Seminar PBI Cabang Jatim.
[13] Irwan, A., N. Komari & Rusdiana. 2007. Uji Aktivitas Ekstrak Saponin Fraksi n-butanol dari Kulit Batang Kemiri ( Aleurites moluccana WILLD) pada larva nyamuk Aedes aegypti. Sains & Terapan Kimia 1(2): 93-101.
[14] Kusumah, S. 1999. Kegunaan Uji Fungsional Spermatozoa untuk Pria Infertile dan Fertilisasi in Vitro . Jakarta: FKUI.
[15] Mc Lachlan, R.L. 2000. Male Hormonal Contraception, A safe, acceptable and Reversible Choice . MJA
[16] Nieschlag, E. 2000. Scope and Goals Andrology, In: Andrology Male Reproductive Health and Disfunction , Eds: Nieschlag, E, H.M. Behre. Berlin Heidenberg, Spinger Verlag, 2001.
[17] Rekha, S., S. Chandrasekhara, 2014. Antifertility Effect of Ziziphus jujuba mill. World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences.
[18] Robaire B., Viger R.S. 1995. Regulation of Epididymal Epithelial Cell Function. Biol. Reprod. Vol.3
[19] Sherwood L. 2001. Fisiologi Manusia dari Sel ke Sistem Edisi 2 . Jakarta; EGC.
[20] Tarigan, P. 1980. Sapogenin Steroid. Alumni: Bandung.
[21] Wahyuni S. 2006. Pengaruh Boraks terhadap Histologi Testis dan Epididimis Mencit Albino ( Mus musculus ).
Program Pasca Sarjana Universitas Sriwijaya.
[22] Walker,W.H., J. Cheng. 2005. FSH and Testosterone Signaling in Sertoli Cells. Reproduction. 130(1): 15-28. DOI: 10.1530/rep.1.00358.
[23] Wiryawan, I., A. Ida. 2009. Ekstrak Biji Klabet Menurunkan Jumlah Sel Spermatozoa pada Ke- linci. Jurnal Veteriner . Vol. 10 No.2: 71-76 ___________