## INDONESIA
Analisis Fitokimia Dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Pelarut Kulit Batang Tumbuhan “At Anonse” (Annona reticulata L.)
Noviana Mery Obenu* 1 , Emilia Juliyanti Bria 1 , Maria Magdalena Kolo 1 , Jenrigo Klaumegio Mere 1 , Anastasia Tse 1
1 Universitas Timor, Kefamenanu, Indonesia
*alamat email korespondensi: noviobenu3@gmail.com

## Abstrak
Antioksidan adalah senyawa yang berfungsi untuk melawan radikal bebas dan melindungi sel dari efek toksik yang dihasilkan. Sumber antioksidan dapat berasal dari dalam dan luar tubuh.  Antioksidan  yang  berasal  dari  luar  tubuh  dapat  diperoleh  dari  tanaman  yang mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  seperti  senyawa  fenolik,  flavonoid,  alkaloid, tanin,  steroid  dan  terpenoid.  Berdasarkan  hasil  eksplorasi  dan  identifikasi  tumbuhan Annona reticulata L. juga dimanfaatkan sebagai tumbuhan obat. Penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui senyawa metabolit sekunder dalam ekstrak tumbuhan dan aktivitas  antioksidannya.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etil  asetat  dan  metanol  sedangkan  uji  aktivitas  antioksidan  di  lakukan  dengan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Hasil analisis fitokimia menunjukkan bahwa golongan  senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etil  asetat  dan  metanol  adalah golongan triterpenoid, tanin, saponin, fenolik, flavonoid, dan alkaloid. Aktivitas antiosidan kedua ekstrak pelarut tersebut tergolong dalam kategori sedang dengan nilai IC 50 ekstrak etil asetat sebesar 177,1325 μg/mL dan metanol sebesar 235,4198 μg/mL.
Kata Kunci: Analisis Fitokimia; Annona reticulata L.; DPPH

## Abstrak
Antioxidants are substances that work to fend off free radicals and shield cells from the damage they cause. Antioxidants can be found both inside and outside of the body. Plants that  contain  secondary  metabolites  such  as  phenolic  chemicals,  flavonoids,  alkaloids, tannins,  steroids,  and  terpenoids  can  provide  antioxidants  that  come  from  outside  the body. An additional purpose for Annona reticulata L. is as a medicinal plant, according

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
to  the  results  of  the  exploration  and  identification.  The  purpose  of  this  study  was  to identify the secondary metabolites present in plant extracts and their antioxidant activity. The  antioxidant  activity  test  was  performed  using  the  DPPH  (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl) method, and the extraction was performed using the maceration method using ethyl acetate and methanol. Triterpenoids, tannins, saponins, phenolics, flavonoids, and  alkaloids  were  the  classes  of  substances  found  in  the  ethyl  acetate  and  methanol extracts,  according  to  the  analysis's  findings.  The  IC50  values  for  the  two  solvent extracts—177.1325 g/mL for ethyl acetate and 235.4198 g/mL for methanol—were used to classify the antioxidant activity as moderate.
Keyword: Phytochemical analysis, Annona reticulata L.; DPPH

## I. PENDAHULUAN
Antioksidan  merupakan  senyawa  yang dapat menghambat terjadinya  reaksi oksidasi [1]dan berfungsi melawan radikal bebas serta melindungi  sel  dari  efek  toksik  yang dihasilkan.  Selain  itu,  antioksidan  juga berperan  dalam  pencegahan  penyakit  dalam tubuh  [1].  Sumber  antioksidan  dapat  berasal dari dalam dan luar tubuh. Antioksidan yang berasal  dari  luar  tubuh  bersumber  dari tanaman yang mengandung senyawa-senyawa metabolit  sekunder  seperti  senyawa  fenolik, flavonoid,  alkaloid,  triterpenoid,  steroid  dan tanin. Senyawa-senyawa tersebut dimanfaatkan  untuk  menjaga  kesehatan  dan mengobati berbagai penyakit [2].
Metabolit sekunder merupakan senyawa organik  yang  disintesis  oleh  tumbuhan  dan tidak  memiliki  peran  secara  langsung  dalam pertumbuhan  serta  perkembangan  tumbuhan
tersebut  tetapi  memiliki  sifat  aktif  terhadap suatu  penyakit[2]  [1][3].  Senyawa  metabolit sekunder  dapat  diisolasi  dari  organ-organ bagian  tumbuhan  seperti  akar,  batang,  daun, bunga, buah, dan biji [1]. Metabolit sekunder yang  dihasilkan  oleh  tumbuhan  sangat bervariasi  antara  satu  spesies  dengan  spesies lainnya [4].
Tumbuhan Annona reticulata L.
termasuk dalam famili Annonaceae , umumnya  merupakan  pohon  kecil  yang dikenal  di  Indonesia  sebagai  tumbuhan  nona atau  mulwo.  Tumbuhan  mulwo  juga  dikenal dengan  nama  “ Apel  custard ”  dalam  bahasa Inggris  dan  “ Sharifa ”  dalam  bahasa  Hindia [5].  Pulau  Timor,  khususnya  di  Kabupaten Timor  Tengah  Utara  (TTU),  mengenal tumbuhan ini dengan nama “ At anonse ”.
Senyawa-senyawa  metabolit  sekunder yang  diketahui  terkandung  dalam  famili

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
Annonacea yakni alkaloid, steroid, flavonoid, terpenoid,  tanin,  fenol,  asam  amino,  dan glikosida.  Penelitian  terdahulu  yang  sudah dilakukan oleh Zaman dan Pathak (2013)[6], melaporkan  bahwa  ekstrak  metanol  kulit batang  tumbuhan Annona  reticulata L. mengandung  senyawa  alkaloid,  tanin  dan fenolik.  Koto  et  al.,  (2018)  [7],  juga  telah melakukan  penelitian  analisis  fitokimia  kulit batang  tumbuhan Annona  reticulata L. menggunakan pelarut n -heksana dan melaporkan  mengandung  senyawa  tanin, alkaloid dan fenolik. Sedangkan Bharadwaj et al.,  (2019)  [8],  melaporkan  bahwa  ekstrak metanol akar tumbuhan Annona reticulata L. mengandung  senyawa  alkaloid,  asetogenin, karbohidrat,  flavonoid,  tanin,  dan  protein. Menurut  Chavan  et  al.  (2020)[9],  hasil  yang diperoleh  dalam  penelitian  studi  potensi ekstrak  etanolik  daun Annona  reticulata L. menunjukkan  adanya  senyawa  alkaloid, protein,  asam  amino,  flavonoid,  glikosida, saponin, tanin, dan karbohidrat.
Berdasarkan hasil eksplorasi dan identifikasi  tumbuhan  obat  yang  dilakukan oleh  Obenu  et  al.  (2021)  [10]  salah  satu tumbuhan  yang  digunakan  sebagai  obat adalah  tumbuhan Annona  reticulata L. Tumbuhan  ini  oleh  masyarakat  setempat dimanfaatkan  sebagai  obat  untuk  mengobati penyakit diare dan malaria dengan
menggunakan  bagian  daun.  Berdasarkan  hal tersebut,  maka  perlu  dilakukan  penelitian analisis  senyawa  metabolit  sekunder  dan  uji aktivitas antioksidannya.

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1 Preparasi dan Ekstraksi Sampel
Kulit  batang Annona  reticulata L. diambil dari pohon kemudian dibersihkan dari kotoran-kotoran  yang  menempel,  lalu  dicuci hingga  bersih  dan  ditiriskan.  Kulit  batang yang  sudah  bersih  selanjutnya  ditimbang kemudian dipotong kecil-kecil dan dikeringanginkan  (±  3  hari)  hingga  kering. Selanjutnya kulit batang kering tumbuhan ini ditimbang  dan  dihaluskan  sampai  menjadi serbuk halus.
Serbuk  halus  kulit  batang  selanjutnya ditimbang  sebanyak  170  gram  kemudian diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan  pelarut  etil  asetat  sebanyak 1000 mL, kemudian didiamkan selama 3 x 24 jam pada suhu ruang dan selanjutnya disaring dan diperoleh ekstrak etil asetat. Residu yang diperoleh  diremaserasi  lagi  menggunakan pelarut metanol selama 3 x 24 jam kemudian disaring  sehingga  mendapatkan  ekstrak metanol.  Ekstrak  etil  asetat  dan  metanol selanjutnya  dievaporasi  menggunakan rotary evaporator bertekanan  rendah  sehingga menghasilkan  ekstrak  pekat  etil  asetat  dan

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
metanol. Kedua ekstrak pekat ini selanjutnya ditimbang  dan  dilanjutkankan  ke  tahapan selanjutnya.

## 2.2 Analisis Fitokimia

## a) Uji Triterpenoid
Diambil  10  tetes  sampel  ekstrak dimasukkan  ke  dalam  plat  tetes  kemudian ditambahkan  10  tetes  asam  asetat  anhidrida dan  3  tetes  asam  sulfat  pekat  selanjutnya dikocok  larutan  tersebut  secara  perlahan  dan dibiarkan  selama  5  menit.  Selanjutnya diperhatikan  perubahan  warna  yang  terjadi. Jika  terbentuk  warna  merah  atau  ungu menandakan  positif  mengandung  senyawa triterpenoid.
b) Uji Tanin
Dimasukkan 10 tetes sampel ekstrak ke dalam plat tetes, ditambahkan 5 tetes air panas dan 5 tetes larutan FeCl 3 1 % dan diperhatikan perubahan warna yang terjadi. Jika terbentuk warna  biru  tua  atau  hijau  kehitaman menandakan  positif  mengandung  senyawa tanin.
c) Uji Saponin
Dimasukkan 0,5 mL sampel ekstrak ke dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan  air panas,  lalu  didinginkan  kemudian  dikocok selama  10  detik  lalu  diamati.  Jika  terbentuk busa  (±1-10  cm)  dan  tidak  kurang  dari  10 menit  serta  tidak  hilang  dengan  penambahan
HCl 2 N maka menunjukkan adanya senyawa saponin.

## d) Uji Fenolik
Dimasukkan 10 tetes sampel ekstrak ke dalam plat tetes lalu tambahkan larutan NaOH 10 % 10 tetes. Diperhatikan perubahan warna yang  terjadi.  Jika  terbentuk  warna  merah menandakan  positif  mengandung  senyawa fenolik.

## e) Uji Flavonoid
Dimasukkan 10 tetes sampel ekstrak ke dalam  plat  tetes  kemudian  ditambahkan  0,5 mL  HCl  pekat  dan  3-4  pita  logam  Mg  lalu dikocok  perlahan  kemudian  diperhatikan perubahan warna yang terjadi. Jika terbentuk warna merah, jingga, atau ungu menandakan positif senyawa flavonoid.
f) Uji Alkaloid
1. Pembuatan  larutan  dan  pereaksi  untuk uji alkaloid

## Pembuatan larutan kloroform beramonia
Sebanyak  1  mL  ammonia  pekat  28  % ditambahkan  ke  dalam  250  mL  kloroform. Kemudian,  campuran  dikeringkan  dengan menambahkan  2,5  gram  natrium  sulfat anhidrat dan campuran disaring.

## Pembuatan pereaksi Meyer
Senyawa HgCl 2 sebanyak 1,5 gram dilarutkan dengan  60  mL  akuades.  Ditempat  lain

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
dilarutkan KI sebanyak 5 gram dalam 10 mL akuades.  Kedua  larutan  yang  telah  dibuat kemudian  dicampur  dan  diencerkan  dengan akuades sampai volume 100 mL dan disimpan dalam botol gelap.

## Pembuatan pereaksi Wagner
Padatan  KI  sebanyak  2  gram  dan  iodin sebanyak 1,3 gram dilarutkan dengan akuades sampai  volumenya  100  mL  kemudian disaring.  Pereaksi  ini  juga  disimpan  dalam botol gelap.

## Pembuatan pereaksi Dragendorff
Bismut subnitrat sebanyak 1 gram dilarutkan dalam  campuran  10  mL  asam  asetat  glasial dan 40 mL akuades. Ditempat lain 8 gram KI dilarutkan  dalam  20  mL  akuades.  Kedua larutan ini dicampur dan kemudian diencerkan sampai volume 100 mL. Selanjutnya disimpan dalam botol gelap dan hanya dapat digunakan selama beberapa minggu setelah dibuat.

## 2. Uji Alkaloid
Bahan  tumbuhan  sebanyak  5-10  gram diekstraksi dengan kloroform beramonia lalu disaring  kemudian  dimasukkan  0,5-1  mL asam sulfat 2 N dan dikocok sampe terbentuk dua  lapisan.  Lapisan  asam  (atas)  dipipet  dan dimasukkan  pada tiga  tabung  reaksi.  Tabung reaksi pertama ditambahkan dua tetes pereaksi meyer,  tabung  kedua  ditambahkan  2  tetes
pereaksi wagner, tabung ketiga ditambahkan 2 tetes  pereaksi  dragendorff  kemudian  diamati hasilnya.  Alkaloid  dikatakan  positif  apabila terjadi  endapan  putih  pada  tabung  reaksi pertama  dan  timbulnya  endapan  berwarna coklat  kemerahan  pada  tabung  reaksi  kedua serta ketiga.
g) Steroid
Diambil  10  tetes  sampel  ekstrak dimasukkan  ke  dalam  plat  tetes  kemudian ditambahkan  10  tetes  asam  asetat  anhidrida dan  3  tetes  asam  sulfat  pekat  lalu      dikocok larutan secara perlahan dan  dibiarkan selama 5  menit  dan  diamati.  Perhatikan  perubahan warna yang terjadi. Jika terbentuk warna biru atau hijau positif senyawa steroid.

## 2.3 Uji Aktivitas Antioksidan
a) Pembuatan Larutan Uji Uji aktivitas antioksidan dilakukan menggunakan ekstrak etil asetat dan metanol. Disiapkan  1000  mg  ekstrak  etil  asetat  dan metanol,  masing-masing  ekstrak  ditambah 1000  mL  metanol  p.a.  Kemudian  dilakukan pengenceran  dengan  variasi  konsentrasi  50, 125, 250, dan 500 ppm.
b) Pembuatan Larutan stok DPPH 50 ppm
Dibuat  larutan  stok  DPPH  50  ppm  dengan cara ditimbang padatan DPPH sebanyak 5 mg kemudian  dilarutkan  dalam  100  mL  metanol p.a sehingga diperoleh larutan DPPH 50 ppm. c) Pembuatan Larutan Kontrol

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
Dibuat  larutan  kontrol  dengan  cara  2  mL metanol  p.a  ditambah  1  mL  DPPH  50  ppm sehingga diperoleh larutan kontrol, selanjutnya diinkubasi pada suhu 37℃ selama 30  menit.  Larutan  kontrol  yang  telah diinkubasi  diukur  nilai  absorbansi  dengan Spektrofotometer UV-Vis pada λ = 517 nm.
d) Penentuan nilai IC 50
Ekstrak  etil  asetat  dan  metanol  diambil sebanyak 2 mL dari masing-masing konsentrasi,  kemudian  ditambah  larutan DPPH  2  mL  dengan  pengujian  dilakukan sebanyak 2 kali. Sampel selanjutnya diinkubasi pada suhu 37℃ selama 30 menit.
Sampel  yang  telah  diinkubasi  diukur  nilai absorbansi  dengan  Spektrofotometer  UV-Vis pada λ = 517 nm.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1  Preparasi dan Ekstraksi Sampel
Preparasi  sampel  merupakan  proses persiapan sampel sebelum dilakukan analisis. Ada beberapa tahapan dalam proses preparasi sampel  yaitu:  persiapan  sampel,  pencucian, penimbangan,  pengeringan  dan  pengecilan ukuran  sampel.  Tahap  pencucian  sampel dilakukan  untuk  menghilangkan  pengotor yang  menempel  pada  kulit  batang  sampel. Selanjutnya  sampel  dicacah  dan  dilakukan pengeringan.  Hal  tersebut  didukung  oleh penelitian (Obenu 2019)[4], yang menyatakan bahwa pengeringan dilakukan untuk
mengurangi kadar air sehingga terhindar dari mikroba.  Proses  pengeringan  dilakukan dengan  cara  dikering  anginkan  pada  suhu ruang agar senyawa yang terkandung didalam sampel tidak rusak. Sampel yang telah kering ditimbang  lagi  dan  diperoleh  hasil  sebanyak 695  gram.  Pengecilan  ukuran  sampel dilakukan dengan tujuan yaitu dapat memperbesar  luas  permukaan.  Hal  ini disebabkan  karena  semakin  luas  permukaan sampel  maka  akan  memperbesar  kontak antara  pelarut  dan  sampel  sehingga  proses ekstraksi  berlangsung  lebih  cepat  dan maksimal[4]
Ekstraksi merupakan proses pemisahan
suatu zat berdasarkan perbedaan kelarutannya[11].  Metode  ektraksi  terbagi menjadi dua bagian yaitu ekstraksi panas dan ekstraksi  dingin.  Penelitian  ini  digunakan ekstraksi  dingin  yakni  maserasi.  Metode  ini tidak  melibatkan  pemanasan  selama  proses ekstraksi,  sehingga  dapat  terhindar  dari rusaknya  struktur  senyawa  yang  akan diekstrak [11][3]. Maserasi dilakukan dengan cara merendam simplisia sebanyak 170 gram menggunakan  pelarut  etil asetat  dan  metanol sebanyak  1000  mL.  Penggunaan  pelarut  etil asetat  dan  metanol  dalam  proses  maserasi memiliki  tujuan  untuk  melarutkan  senyawa- senyawa berdasarkan prinsip like dissolve like pada suatu pelarut[12].

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
Proses maserasi dilakukan selama 3 x 24 jam  kemudian  diremaserasi.  Semakin  lama suatu  simplisia  direndam  dengan  pelarut organik  maka  semakin  maksimal  senyawa- senyawa  metabolit  sekundernya  terekstrak. Hal  ini  disebabkan  karena    sampel  akan mengalami  pemecahan  dinding  sel  dan membran  sel  sebagai  akibat  perbedaan tekanan  di  dalam  dan  di  luar  sel  sehingga senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat dalam sel akan terlarut dalam pelarut organik [12].  Remaserasi  dilakukan  dengan  tujuan untuk  menarik  kandungan  senyawa  yang masih  tertinggal  pada  saat  maserasi  pertama. Remaserasi juga dilakukan dengan menggunakan pelarut yang berbeda kepolarannya. Setelah dilakukan partisi secara cair-cair  selanjutnya  ekstrak  dipekatkan menggunakan rotary  evaporator sehingga menghasilkan ekstrak kental[13].

## 3.2   Analisis Fitokimia
Analisis fitokimia dilakukan sebagai uji pendahuluan secara kualitatif untuk mengetahui  kandungan  senyawa  metabolit sekunder yang terdapat pada suatu sampel[14][15][16].  Hasil  analisis  fitokimia ekstrak  etil  asetat  dan  metanol  pada  kulit batang  tumbuhan Annona  reticulata L.  di sajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Uji Analisis Fitokimia Ekstrak Etil  Asetat  Dan  Metanol  Kulit  Batang Tumbuhan Annona reticulata L.
No  Nama Senyawa Ekstrak Etil Asetat Ekstrak Metanol 1 Triterpenoid + + 2 Tanin + + 3 Saponin + + 4 Fenolik + + 5 Flavonoid + + 6 Alkaloid + + 7 Steroid - - Sumber : Hasil Penelitian (2022)
Hasil Analisis fitokimia ekstrak etil asetat dan metanol  selanjutnya  dibandingkan  dengan hasil  analisis  fitokimia  ekstrak  metanol  kulit batang  tumbuhan Annona  reticulata L.  yang dilakukan  oleh  Zaman  &  Pathak  (2013)[6] yang ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Uji Analisis Fitokimia Ekstrak Metanol  Kulit  Batang  Tumbuhan Annona reticulata L.
Berdasarkan  hasil  analisis  fitokimia  yang telah dilakukan terlihat bahwa hampir semua
No Nama Senyawa
Ekstrak Metanol 1 Alkaloid - 2 Flavonoid - 3 Steroid - 4 Saponin - 5 Tanin + 6 Fenolik + 7 Triterpenoid -

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
senyawa  metabolit  sekunder  terkandung didalam sampel kulit batang Annona reticulata L.  dibandingkan  penelitian  oleh
Zaman  dan  Pathak  (2013)  [6]  yang  hanya memiliki  2  senyawa  metabolit  sekunder dengan  lokasi  pengambilan  sampel  di Sivasaga, India. Adanya perbedaan golongan senyawa  tersebut  disebabkan  karena  letak geografis  dari  suatu  daerah  tempat  tumbuh tumbuhan tersebut (Obenu, 2019) [4]. Daerah TTU merupakan daerah yang memiliki musim kemarau yang panjang sehingga kemungkinan tumbuhan  memproduksi  senyawa  metabolit sekunder  lebih  banyak  dari  daerah  lain [3][11]. Hal tersebut di dukung oleh penelitian Setyorini  dan  Yusnawan  (2017)  [17]  yang menyatakan bahwa produksi senyawa metabolit  sekunder  disebabkan  oleh  kondisi perubahan  lingkungan  pada  suatu  daerah. Hasil uji skrinning fitokimia ekstrak etil asetat dan  metanol  pada  kulit  batang  tumbuhan
Annona  reticulata L.  diuraikan  sebagai berikut:

## a) Saponin
Saponin  merupakan  senyawa  bahan  alam yang  termasuk  dalam  bentuk  glikosida  dan tersebar  luas  pada  tanaman  tingkat  tinggi Sifat  dari  senyawa  saponin  yaitu  memiliki sifat seperti sabun sehingga ketika dilarutkan ke  dalam  air  maka  akan  terbentuk  busa  atau buih. Hasil pengujian saponin dari ekstrak etil asetat  dan  metanol  kulit  batang  tumbuhan Annona  reticulata L.  menunjukan  bahwa terdapat senyawa saponin dengan adanya busa yang stabil selama 10 menit. Timbulnya busa menunjukkan adanya glikosida yang mempunyai  kemampuan  untuk  membentuk busa  dalam  air  yang  terhidrolisis  menjadi glukosa dan senyawa lain[18]. Reaksi tersebut dapat dilihat pada Gambar 1
CO H 2 OH C O OH O OH OH H 2 O CO 2 H + OH O CH 2 OH OH OH Glukosa Aglikon Gambar 1. Perkiraan Reaksi Pembentukan Saponin [18]

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
b) Fenolik
Senyawa  fenolik  merupakan  senyawa  yang memiliki  cincin  aromatik  dan  memiliki  satu atau lebih gugus hidroksi (OHˉ) serta banyak ditemukan  pada  tumbuhan  tingkat  tinggi [19][15]  Hasil  uji  ekstrak  etil  asetat  dan metanol  kulit  batang  tumbuhan Annona reticulata L.  positif  adanya  senyawa  fenolik pada  ekstrak  karena  terjadi  perubahan  warna dari cokelat tua menjadi warna merah. Hal ini didukung  oleh  peneliti  Bettuzi et  al .,
(2006)[20] yang menyatakan bahwa perubahan  warna  tersebut  disebabkan  karena adanya  adanya  gugus  hidroksil  di  dalam senyawa  fenolik  yang  dapat  mendonorkan atom  hidrogen  melalui  mekanisme  transfer elektron.
c) Flavonoid
Hasil  uji  skrining  pada  ekstrak  kulit  batang tumbuhan  Annona  reticulata  L.  positif
mengandung  flavonoid.  Hasil  pengujian flavonoid ditunjukkan dengan adanya perubahan  warna  jingga  pada  ekstrak  etil asetat  dan  metanol  yang  menunjukkan senyawa flavon.  Menurut Widyawati (2017) [21], Penambahan HCl pada metode ini untuk memberikan  suasana  asam  yang  ditandai dengan  berubahnya  warna  larutan  menjadi jingga sampai merah.
Mekanisme reaksi pada Gambar 2. menunjukkan  bahwa  pengujian  ekstrak menggunakan HCl dimana HCl akan bereaksi dengan  gugus  karbonil  pada  flavon  yang mengalami resonansi, kemudian akan terbentuk  ikatan  baru  yaitu  pelepasan  ikatan rangkap  dan  pembentukan  gugus  hidroksil. Reaksi yang terjadi merupakan pembentukan ikatan baru dimana adanya HCl yang mampu melarutkan flavon.
O OH O HCl O OH O + Cl O OH + Cl OH Flavonol O OH OH Cl
Gambar 2. Perkiraan Reaksi Uji Flavonoid [18]

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
d) Alkaloid
Analisa  alkaloid  digunakan  5  mL ekstrak kemudian ditambah 1 mL asam sulfat 2  N.  senyawa  alkaloid  pada  tanaman umumnya  ditemukan  dalam  bentuk  garam yang  bersifat  larut  dalam  air  sehingga  pada identifikasi  golongan  senyawa  alkaloid dilakukan  penambahan  asam  sulfat  2  N. Dilakukan penambahan pereaksi pengendapan  yaitu  Mayer,  Dragendorff,  dan Wagner.  Penambahan  pereaksi  tersebut, alkaloid  akan  bereaksi  dengan  nitrogen sehingga membentuk endapan. Hasil identifikasi menunjukkan positif pada ekstrak etil asetat dan metanol kulit batang tumbuhan Annona  reticulata L.  yang  ditunjukkan  oleh warna  larutan  yang  menjadi  keruh.  Uji
alkaloid menggunakan reagen mayer ditandai dengan  terbentuknya  endapan  putih  dan endapan  tersebut  adalah  kompleks  Kalium- alkaloid.  Hasil  uji  positif  alkaloid  dengan penambahan reagen wagner pada ekstrak etil asetat  dan  metanol  kulit  batang  tumbuhan Annona  reticulata L.  ditandai  dengan terbentuknya  endapan  coklat  muda  sampai kuning. Uji alkaloid ekstrak metanol dan etil asetat  kulit  batang  tumbuhan Annona reticulata L.  menunjukkan  hasil  positif dengan    reagen  dragendorff  juga  ditandai dengan  terbentuknya  endapan  coklat  muda sampai  kuning[18][14][22].  Perkiraan  reaksi uji mayer, wagner dan dragendorff ditunjukkan pada Gambar 3, 4 dan 5.
Gambar 3. Perkiraan Reaksi Uji Meyer [18]
Gambar 4. Perkiraan Reaksi Uji Wagner [18]
Gambar 5. Perkiraan Reaksi Uji Dragengdorff [18]

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
e) Uji Aktivitas Antioksidan
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan dengan  menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1- difenil-2-pikrilhidrasil )  [23][22].  Pengujian aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH karena dapat mengukur aktivitas penghambatan  radikal  bebas,  mudah,  cepat, sederhana dan mempunyai tingkat sensitivitas tinggi.  DPPH  adalah  senyawa  radikal  yang dapat  digunakan  sebagai  indikator  proses reduksi  senyawa  antioksidan[24].  Setelah DPPH  bereaksi  dengan  antioksidan,  warna
ungu  DPPH  akan  berkurang  dan  berubah menjadi  kuning.  Perubahan  warna  dari  ungu menjadi kuning ini disebabkan karena adanya reaksi  yang  menyebabkan  berkurangnya ikatan  rangkap  terkonjugasi  pada  DPPH karena adanya proses penghambatan. Hasil uji aktivitas  antioksidan  ekstrak  etil  asetat  dan metanol  kulit  batang  tumbuhan Annona reticulata L.  serta  asam  askorbat  sebagai kontrol  positif  disajikan  pada Tabel  3 di bawah ini
Tabel 3. Hasil perhitungan nilai absorbansi, % Inhibisi, dan IC 50 Ekstrak Etil Asetat dan Metanol kulit batang tumbuhan Annona reticulata L. serta  Asam Askorbat
Sampel Uji Konsentrasi (ppm) Absorbansi Absorbansi Rata-Rata % Inhibisi Nilai IC 50 I II Ekstrak Etil Asetat 50 0,609 0,616 0,6125 29,55 %
177,1325 μg/mL 125 0,479 0,494 0,4865 44,04 % 250 0,314 0,32 0,317 63,54 % 500 0,063 0,066 0,0645 92,58% Ekstrak Metanol 50 0,706 0,717 0,7115
18,17%
235,4198
μg/mL
125 0,562
0,573 0,57 34,44% 250 0,407 0,386 0,365 54,39% 500 0,09 0,078 0,084 90,33% Ekstrak Asam Askorbat 0,5 0,537 0,513 0,525 31,37 %
1,8186 μg/mL 1,25
0,433 0,433 0,438 43,25% 2,5 0,291 0,293 0,292 61,83% 5 0,084 0,079 0,0815 89,73%
Sumber : Hasil penelitian (2021)

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
DPPH oleh antioksidan melalui proses donor hidrogen untuk membentuk DPPH stabil [25]. Tingkat  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode DPPH dapat digolongkan berdasarkan nilai IC 50 . Nilai IC 50 ( Inhibitory
Concentration) didefinisikan sebagai besarnya konsentrasi senyawa uji yang dapat meredam  radikal  bebas  sebanyak  50%. Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka  aktivitas peredaman radikal bebas semakin tinggi[25]
Berdasarkan hasil uji aktivitas antioksidan  pada Tabel  3 terlihat  bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka nilai % penghambatan semakin naik. Nilai tingkat
% penghambatan (inhibisi) meningkat seiring meningkatnya konsentrasi sampel dikarenakan semakin banyak senyawa antioksidan  pada  sampel  yang  menghambat radikal  bebas  DPPH  melalui  proses  donor hidrogen  membentuk  DPPH  stabil.  Hal  ini juga disertai dengan adanya perubahan warna larutan dari ungu menjadi kuning.
Nilai IC 50 ekstrak etil asetat dan metanol kulit  batang  tumbuhan Annona  reticulate L. sebesar  177,1325  μg/mL  dan  235,4198 μg/mL.  Sedangkan  nilai  IC 50 asam  askorbat yakni  1,8616  μg/mL.  Berdasarkan  kategori penentuan kekuatan aktivitas antioksidan nilai IC 50 oleh Nasution et  al .  (2015)[27]  kedua ekstrak  ini  berada  pada  kisaran  101-250 µg/mL  sehingga  digolongkan  dalam  tingkat aktivitas  sedang.  Jika  dibandingkan  antara
nilai  IC 50 vitamin  C  dan  ekstrak  maka  nilai IC 50 vitamin  C  lebih  kuat  dibandingkan dengan  ekstrak.  Hal  tersebut  dikarenakan vitamin  C  merupakan  zat  atau  senyawa tunggal  sedangkan  pada  ekstrak  masih gabungan antara komponen-komponen senyawa metabolit sekunder.
Berdasarkan  hasil  uji  antioksidan  yang telah dilakukan dibandingkan dengan penelitian  oleh  Jamkhande et  al. (2016)[5]. Dimana,  nilai  IC 50 pada  kedua  ekstrak tergolong  sedang  tetapi  juga  berpotensi sebagai antioksidan. Sedangkan pada penelitian  Jamkhande et  al .  (2016)  [5]  nilai IC 50 tergolong kuat. Perbedaan golongan nilai IC 50 disebabkan oleh bagian tumbuhan sampel yang digunakan.
Berdasarkan  hasil  analisis  fitokimia, diduga  golongan  senyawa  yang  memberikan aktivitas  antioksidan  dalam  ekstrak  adalah senyawa  flavonoid  dan  fenolik.  Menurut Rahmadani  (2021)[27],  senyawa  flavonoid berperan sebagai antioksidan karena memiliki gugus hidroksil yang dapat melepaskan proton dalam  bentuk  ion  hidrogen.  Ion  hidrogen hanya  memiliki  satu  buah  proton  dan  tidak memiliki  elektron,  sehingga  dalam  elektron radikal  yang  terdapat  pada  atom  nitrogen dalam  senyawa  DPPH  berikatan  dengan  ion hidrogen  dan  menghasilkan  DPPH  yang tereduksi[27].  Sedangkan  senyawa  fenolik diduga berperan dalam memberikan aktivitas

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
antioksidan  dengan  mekanisme  sekunder, yakni sebagai penangkap radikal bebas [28].

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan  maka  dapat  disimpulkan  bahwa: Senyawa  metabolit  sekunder  ekstrak  pelarut yang  terkandung  di  dalam  kulit  batang tumbuhan Annona reticulata L. di Kabupaten TTU  adalah  senyawa  triterpenoid,  tanin, saponin,  fenolik,  flavonoid,  dan  alkaloid. Aktivitas antioksidan pada kedua ekstrak baik etil asetat  maupun  metanol tergolong  sedang dengan  nilai  IC 50 ekstrak  etil  asetat  sebesar 177,1325  μg/mL  dan  metanol  sebesar 235,4198 μg/mL.

## V. UCAPAN TERIMA KASIH
Terimahkasih kepada Universitas Timor melalui  LPPM  yang  telah  mendukung penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] P.  S.  W.  and  D.  B.  S.  Machindra  J.
Chavana, “Analgesic and anti-
inflammatory activities of the sesquiterpene  fraction  from  Annona reticulata  L.  bark,” Nat.  Prod.  Res. , Vol.  26,  N,  pp.  1515–1518,  doi: 10.1016/j.sajb.2019.06.006.
[2] N. M. Obenu, R. E. Y. Adu, and Y. A. A.  Bria,  “Ekstraksi  Dan  Uji  Aktivitas
Antioksidan  Ekstrak  Non  Polar  Kulit
Batang  Tumbuhan  ‘  At  Anonse  ’  ( Annona  reticulata L  .),” Inovasi Penelitian  dan  Pembelajaran  Kimia dalam Era New Normal , 2022, pp. 118– 125.
[3] T. Ersam, KIMIAWI MAKROMOLEKL
TUMBUHAN
ARTOCARPUS .
Surabaya: ITS PRESS, 2012.
[4] N.  M.  Obenu,  “Ekstraksi  dan Identifikasi Komposisi Metabolit Fraksi Diklorometana  dan  Aquades  Ektrak Metanol Daun Sirsak (Annona muricata Linn),” J. Saintek Lahan Kering , vol. 2, no. 1, pp. 17–19, 2019, doi: 10.32938/slk.v2i1.717.
[5] P. G. Jamkhande, A. S. Wattamwar, A. D.  Kankudte,  P.  S.  Tidke,  and  M.  G.
Kalaskar,  “Assessment  of  Annona reticulata  Linn.  leaves  fractions  for invitro antioxidative effect and antimicrobial potential against standard human  pathogenic  strains,” Alexandria J. Med. , vol. 52, no. 1, pp. 19–25, 2016, doi: 10.1016/j.ajme.2014.12.007.
[6] K. Zaman and K. Pathak, “Pharmacognostical and Phytochemical Studies of Annona Reticulata Linn,” J.
Pharmacogn.
Phytochem.
Pharmacogn. ,  vol.  1,  no.  5,  pp.  477–
482, 2013.
[7] K.-T.-N. Ngbolua et al. ,
“Phytochemistry  and  Bioactivity  of

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
Annona  reticulata  L.  (Annonaceae):  A Mini-review,” South Asian Res. J. Nat.
Prod. , vol. 1, no. 1, pp. 1–11, 2018, doi: 10.9734/SARJNP/2018/39633.
[8] R.  Bharadwaj,  J.  Haloi,  and  S.  Medhi, “Topical  delivery  of  methanolic  root extract of Annona reticulata against skin cancer,” South African J. Bot. , vol. 124, pp. 484–493, 2019, doi:
10.1016/j.sajb.2019.06.006.
[9] C.  Akshay,  C.  Rohankumar,  M.
Swapnali,  D.  Srushti,  and  P.  Subhash,
“Study  of  Anthelmintic  Potential  of
Ethanolic Extract of Annona Reticulata Linn Leaves,” World J. Pharm. Pharm.
Sci. , vol. 9, no. 5, pp. 1352–1360, 2020, doi: 10.20959/wjpps20205-16092.
[10]  N.  Obenu  and  E.  Juliyanti  Bria,
“Ethnobotany  Medicinal  Plants  of Dawan  Ethnic  in  North  Central  Timor Regency,” Biotropika J. Trop. Biol. , vol.
9,  no.  3,  pp.  246–252,  2021,  doi: 10.21776/ub.biotropika.2021.009.03.09
.
[11]  A.  N.  Kristanti,  N.  S.  Aminah,  M. Tanjung, and B. Kurniadi, BUKU AJAR FITOKIMIA ,  I.  Surabaya:  Airlangga University Press, 2008.
[12]  N.  Amaliah,  P.  Salempa,  and  M. Muharram,  “Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Metabolit  Sekunder  Fraksi Metanol Batang Belajang Susu
(Scindapsus  pictus  Hassk.),” Chem.  J.
Ilm.  Kim.  dan  Pendidik.  Kim. ,  vol.  21,
no. 1, p. 78, 2020, doi: 10.35580/chemica.v21i1.14841.
[13]  L.  Malangngi,  M.  Sangi,  and  J. Paendong,  “Penentuan  Kandungan Tanin  dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Biji  Buah  Alpukat  (Persea americana Mill.),” J. MIPA , vol. 1, no. 1, p. 5, 2012, doi:
10.35799/jm.1.1.2012.423.
[14]  Rahmi,  N.  Herawati,  and  I.  Dini, “Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa Metabolit Sekunder Ekstrak Etil Asetat Kulit  Batang  Belimbing  Wuluh  ( Averrhoa bilimbi Linn ),” J. Chem. , vol.
17, no. 1, pp. 98–107, 2016.
[15]  A. R. Wahid and S. Safwan, “Skrining Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder Terhadap  Ekstrak  Tanaman  Ranting Patah  Tulang  (Euphorbia  tirucalli  L.),”
Lumbung  Farm.  J.  Ilmu  Kefarmasian , vol.  1,  no.  1,  p.  24,  2020,  doi: 10.31764/lf.v1i1.1208.
[16]  G.  Nogueira  da  Silva  Avelino  Oliveira Rocha, L. M. Dutra, V. P. Lorenzo, and J.  R.  Guedes  da  Silva  Almeida, “Phytochemicals and biological properties  of  Annona  coriacea  Mart. (Annonaceae):  A  systematic  review from  1971  to  2020,” Chemico- Biological  Interactions ,  vol.  336,  no.

## Obenu, dkk., Akta Kimia Indonesia 9(1), 2024, 17-32
January. Elsevier B.V., p. 109390, 2021,
doi: 10.1016/j.cbi.2021.109390. [17]  S. D. Setyorini, “Peningkatan
Kandungan Metabolit Sekunder Tanaman Aneka Kacang sebagai Respon Cekaman Biotik,” Iptek Tanam. Pangan ,  vol.  11,  no.  2,  pp.  167–174,
2017.
[18]  A. M. Kopon, A. B. Baunsele, and E. G. Boelan,  “Skrining  Senyawa  Metabolit Sekunder Ekstrak Metanol Biji Alpukat (Persea  Americana  Mill.)  Asal  Pulau Timor,” Akta Kim. Indones. , vol. 5, no.
1, p. 43, 2020, doi:
10.12962/j25493736.v5i1.6709.
[19]  Faskalia and M. A. Wibowo, “Skrining
Fitokimia,  Uji  Aktivitas,  Antioksidan Dan  Uji  Sitotoksik  Ekstrak  Metanol Pada  Akar  Dan  Kulit  Batang  Soma ( Ploiarium  alternifolium ),” Jkk ,  vol.  3, no. 3, pp. 1–6, 2014.
[20]  S.  Bettuzzi,  M.  Brausi,  F.  Rizzi,  G. Castagnetti, G. Peracchia, and A. Corti, “Chemoprevention  of  human  prostate cancer  by  oral  administration  of  green tea  catechins  in  volunteers  with  high- grade prostate intraepithelial neoplasia: A  preliminary  report  from  a  one-year proof-of-principle study,” Cancer Res. , vol. 66, no. 2, pp. 1234–1240, 2006, doi: 10.1158/0008-5472.CAN-05-1145.
[21]  A. F. Hafid, N. Puliansari, N. S. Lestari,
L.  Tumewu,  A.  Rahman,  and  A. Widyawaruyanti,  “Skrining  Aktivitas
Antimalaria
Beberapa
Tanaman Indonesia  Hasil  Eksplorasi  Dari  Hutan Raya  Cangar,  Batu-Malang,  Jawa Timur,” J. Farm. Dan Ilmu
Kefarmasian  Indones. ,  vol.  3,  no.  1,  p. 7, 2017, doi: 10.20473/jfiki.v3i12016.7- 11.
[22]  R. Y. Kurang and B. Adang, “Skrining
Fitokimia Dan Uji Aktivitas Antioksidan  Daun  Sirsak  (Annona Muricata  L)  Dengan  Metode  1,1- Difenil-2-Pikrylhidrazyl (DPPH),”
PARTNER , vol. 23, no. 1, p. 567, 2018, doi: 10.35726/jp.v23i1.299.
[23]  F.  R.  Mondong,  “Skrining  Fitokimia dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Daun  Patikan  Emas  (Euprorbia prunifolia  Jacq.)  dan  Bawang  Laut (Proiphys  amboinensis  (L.)  Herb),” J. MIPA ,  vol.  4,  no.  1,  p.  81,  2015,  doi: 10.35799/jm.4.1.2015.6910.
[24]  P.  Molyneux,  “Molineux  07-DPPH,” Songklanakarin J. Sci. Technol , vol. 26, pp. 211–219, 2004.
[25]  R.  Mutiara,  M.  J.  Djangi,  and  N. Herawati,  “Isolasi  dan  Uji  Aktivitas Antioksidan Senyawa
Metabolit Sekunder  Ekstrak  Metanol  Kulit  Buah Mangrove Pidada ( Sonneratia
caseolaris  ),” J.  Chem. ,  vol.  17,  no.  2,
pp. 52–62, 2016.
[26]  P.  A.  Nasution,  R.  Batubara,  and Surjanto, “Tingkat Kekuatan
Antioksidan  dan  Kesukaan  Masyarakat Terhadap  Teh  Daun  Gaharu  (Aquilaria malaccensis Lamk) Berdasarkan Pohon Induksi dan Non-Induksi,” Peronema -
For. Sci. Journal. , vol. 4, no. 1, pp. 10– 18, 2015.
[27]  D.  dan  N.  Rahmadani,  “Potensi Antioksidan  Fraksi  Etil  Asetat  Dan Fraksi N-Heksana Terhadap
Penangkapan  Radikal  Bebas  Potential Antioxidants  Of  Ethlacetate  Fraction
And  N-Hexana  Fraction  Of  Ethanol Extract Of Java Acid Fruit ( Tamarindus Indica  L  .)  On  Free  Radical  Capture Prog,” Farmasainkes , vol. 1, no. 1, pp.
28–37, 2021.
[28]  W. Budilaksono, S. Wahdaningsih, and A. Fahrurroji,
“Uji
Aktivitas
Antioksidan  Fraksi  Kloroform  Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus lemairei Britton dan Rose) Menggunakan Metode DPPH (1,1-Difenil-2- Pikrilhidrazil),” J.  Mhs.  Farm.  Fak. Kedokt. UNTAN , vol. 1, no. 1, pp. 1–11, 2014.