UNPAD Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology
Journal Homepage : http://jurnal.unpad.ac.id/ijpst/

## Tyrosinase Inhibitor Activity Measurement of Crude and Purified Extract

## of Moringa Leaves ( Moringa oleifera L.)
Zainal Abidin*, Ummu Khaeriah, Zuhrina, Mamat Pratama, Muzakkir Baits

## Universitas Muslim Indonesia, Makassar, Indonesia
Submitted 11 Oktober 2018; Revised 3 Desember 2018; Accepted 14 Januari 2019; Published 31 Maret 2019 *Corresponding author: zainal.abidin@umi.ac.id

## Abstract
Moringa leaves is one of the plants that have antioxidant activity. The compounds that have strong antioxidant  activity  also  have  strong  antityrosinase  activity.  Moringa  leaves  contain  flavonoid compounds that can inhibit tyrosinase activity in the melanin formation process. This study aimed to determine tyrosinase inhibitor activity of crude and purified extract of moringa leaves ( Moringa oleifera L.). Tyrosinase inhibitory activity measurement was done by in vitro studies with measuring dopachrome from the oxidation of L-tyrosine in the mechanism of melanogenesis. The crude extract obtained  by  use  maceration  extraction  method  and  ethanol  solvent,  whereas  the  purified  extract obtained by use liquid-liquid extraction method and ethyl acetate solvent. The results showed that hydroquinone has IC 50 value of 18,234 μg/mL while crude extract of moringa leaves shows IC 50 value of 4405,24 μg/mL and purified extract of moringa leaves shows IC 50 value of 401,6228 µg/mL. Purified extract of moringa leaves more active as tyrosinase inhibitor than its crude extract but less active than hydroquinone.
Keywords: Moringa leaves, Purified extract, Tyrosinase Inhibitor, UV Rays
Penentuan Aktivitas Penghambat Tirosinase Dari Ekstrak Kasar Dan Ekstrak Terpurifikasi Daun Kelor ( Moringa oleifera L.)

## Abstrak
Daun kelor merupakan salah satu tanaman yang memiliki aktivitas antioksidan. Senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan yang kuat juga memiliki aktivitas antitirosinase yang kuat.  Daun kelor mengandung senyawa flavonoid yang dapat menghambat aktivitas tirosin dalam proses pembentukan melanin. Tujuan penelitian ini untuk menentukan aktivitas penghambatan  tirosinase dari  ekstrak kasar dan ekstrak terpurifikasi daun kelor ( Moringa oleifera L.). Pengukuran aktivitas penghambatan tirosinase dilakukan secara in vitro dengan pengukuran dopakrom dari oksidasi L-tirosin pada mekanisme melanogenesis. Ekstrak kasar didapat dengan menggunakan metode ekstraksi maserasi dan pelarut etanol, sedangkan ekstrak terpurifikasi didapat dengan menggunakan metode ekstraksi cair-cair dan pelarut etil asetat. Hasil penelitian menunjukkan bahwa hidrokuinon mempunyai nilai IC 50 sebesar 18,234 μg/mL, sementara ekstrak kasar daun kelor menunjukkan nilai IC 50 sebesar 4405,24 μg/mL dan ekstrak terpurifikasi daun kelor menunjukkan nilai IC 50 sebesar 401,6228 μg/mL. Ekstrak terpurifikasi daun kelor lebih aktif sebagai penghambat tirosinase dari pada ekstrak kasarnya tapi lebih kurang aktif dari pada hidrokuinon.
Kata kunci: Daun Kelor, Ekstrak terpurifikasi, Penghambat tirosinase, Sinar UV

## 1.  Pendahuluan
Melanin merupakan pigmen warna kulit, yang diproduksi pada sel melanosit dan didistribusikan di antara keranosit pada lapisan dasar epidermis kulit 1 . Pembentukan melanin akan lebih cepat apabila enzim tirosinase dalam keadaan aktif, akan tetapi keberadaan melanin pada kulit sangat mempengaruhi warna kulit, di mana warna kulit yang cerah merupakan dambaan banyak orang, namun jika pembentukan melanin berlebih dan terdistribusi tidak merata dapat menyebabkan hiperpigmentasi seperti; wajah tampak lebih gelap dan timbul noda hitam 1-3 . Sintesis melanin dimulai dengan oksidasi  asam  amino  (L-Tirosin)  menjadi L-DOPA oleh enzim tirosinase dan kemudian mengoksidasi L-DOPA menjadi dopaquinon. Dopaquinon yang terbentuk bereaksi secara spontan membentuk dopakrom dan kemudian membentuk melanin 5 . Enzim tersebut dapat dihambat  dengan  penghambat  (inhibitor) tiosinase, dimana inhibitor ini dikatalis oleh tirosinase dan membentuk ikatan kovalen sehingga enzim menjadi tidak aktif selama reaksi katalitik berlangsung 5 . Hidroquinon merupakan bahan kosmetik yang dapat menghambat pembentukan melanin dan memutihkan kulit. Tetapi penggunaan dalam jangka panjang dapat menyebabkan ookronosis yaitu kulit berbintil dan berwarna coklat kebiruan, serta terasa seperti terbakar dan gatal 6 . Oleh karena itu sangat perlu untuk mencari bahan arternatif dari bahan alam seperti tumbuhan yang digunakan sebagai inhibitor tirosinase. Kandungan  flavonoid  pada  tumbuhan  yang merupakan senyawa aktif sebagai inhibitor tirosinase.  Senyawa  flavonoid  memiliki aktivitas inhibitor tirosinase dan pengkelat Cu, di mana gugus hidroksil pada cincin A dan B yang menghambat kerja enzim tirosinase 5 . Selain itu, tanaman yang mempunyai aktivitas antioksidan yang kuat juga memiliki aktivitas antitirosinase yang kuat 7 . Salah satu sumber antioksidan alami yaitu daun tanaman kelor ( Moringa oleifera
L.). Daunnya telah diuji mengandung tanin,  steroid  dan  triterpenoid,  flavonoid, saponin, antarquinon, dan alkaloid 8 . Salah
satu golongan flavonoid yang dimiliki kelor ( Moringa oleifera L.) yaitu kuersetin, dimana kuersetin merupakan antioksidan yang lebih kuat dari vitamin C dan E 9 . Di mana ekstrak etanol  daun  kelor  ( Moringa oleifera L.) memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat dengan nilai IC 50 sebesar 22,1818 ppm 10 . Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui aktivitas inhibitor tirosinase dari ekstrak    kasar  dan  terpurifikasi  dari  daun kelor.

## 2.  Metode
2.1.  Alat Alat yang digunakan dalam penelitian ini Bejana Maserasi, Mikropipet (Eppendorf), Oven  (Memmert ® ),  pH  meter  (Schot), Spektrofotometer  UV-Vis  (Apel),  dan Timbangan analitik (Sortorius),
2.2.  Bahan Bahan kimia yang digunakan dalam penelitian ini yaitu Etanol 96%, Larutan dapar fosfat  pH  6,8,  DMSO  ( Dimethyl Sulfoxide ), dan L-tirosin yang dibeli dari PT Merck, serta Enzim tirosinase yang dibeli dari PT Sigma. Sampel daun kelor ( Moringa oleifera L.) yang diperoleh di Kelurahan Talaka, Kecamatan Bonto-bonto, Kabupaten Pangkajene dan Kepulauan, Provinsi Sulawesi Selatan.
2.3.  Prosedur a. Ekstrak Kasar Simplisia daun kelor sebanyak 40 gram diekstraksi dengan etanol 96% dengan
metode maserasi. Ekstraksi dilakukan dengan pengadukan dan perendaman selama 24 jam, kemudian dilakukan penyaringan dengan corong dan kertas saring untuk memisahkan filtrat  dari  residu.  Residu  yang  diperoleh dimeserasi dengan etanol beberapa kali hingga proses ekstraksi sudah dianggap sempurna. Hal ini dilakukan sebanyak 3 kali replikasi. Filtrat diuapkan hingga diperoleh ekstrak kental, lalu dihitung rendemen yang diperoleh 11 .
b. Ekstrak Terpurifikasi
Ekstrak kasar sebanyak 3 gram dimasukkan ke dalam 30 mL air mendidih kemudian didinginkan dalam kulkas selama 12 jam. Setelah itu disaring dan diekstraksi cair-cair dengan etil asetat : aquades (masing- masing 30 : 30 mL). Ekstrak etil asetat terpurifikasi  diuapkan  hingga  diperoleh ekstrak kental. Kemudian dihitung rendemen yang diperoleh 12-14 .
c. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Larutan dapar fosfat pH 6,8 sebanyak 0,9 mL dimasukkan ke dalam vial, ditambahkan sebanyak 0,1 mL enzim tirosinase 0,93 u/ mL lalu ditambahkan 2 mL larutan substrat L-Tirosin 1,3 mM, kemudian dihomogenkan. Campuran tersebut diinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit dan serapannya diukur pada panjang gelombang 450 - 485 nm menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
d. Optimasi Waktu Inkubasi Larutan dapar fosfat pH 6,8 sebanyak 0,9 mL dimasukkan ke dalam vial, ditambahkan sebanyak 0,1 mL enzim tirosinase 0,93 u/ mL lalu ditambahkan 2 mL larutan substrat
L-Tirosin 1,3 mM, kemudian dihomogenkan. Campuran tersebut diinkubasi pada suhu kamar dan serapannya diukur setiap 30 menit, pada panjang gelombang 480 nm menggunakan spektrofotometer UV-Vis.

## e. Uji Aktivitas Inhibitor Tirosinase
Metode yang digunakan dengan sedikit modifikasi.  Masing-masing  konsentrasi larutan hidroquinon sebagai pembanding (10, 12, 14, 16, 18, dan 20 ppm) dalam campuran DMSO  (Dimethyl  Sulfoxide)  dan    air  (1  : 1) dan masing-masing konsentrasi larutan ekstrak  kasar  dan  terpurifikasi  daun  kelor dalam campuran DMSO dan air (1 : 1) (100, 300, 500, dan 700 ppm), digunakan sebanyak 0,9 mL, ditambahkan sebanyak 0,1 mL enzim tirosinase 0,93 u/mL lalu ditambahkan 2 mL larutan substrat L-Tirosin 1,3 mM, kemudian dihomogenkan. Campuran tersebut diinkubasi selama 2,5 jam pada suhu kamar, serapan diukur dengan pada panjang gelombang 480 nm. Masing-masing sampel memiliki  blanko pelarut  yaitu campuran DMSO dan air (1:1) sebanyak 0,9 mL ditambahkan dengan L-Tirosin  sebanyak 2 mL, lalu ditambahkan dengan enzim tirosinase sebanyak 0,1 mL kemudian diinkubasi selama 2,5 jam dan blanko sampel yaitu DMSO 1:1 sebanyak 0,9 mL ditambahkan dengan L-Tirosin sebanyak 2 mL, lalu ditambahkan dengan dapar fosfat sebanyak 0,1 mL kemudian diinkubasi selama 2,5 jam 15,16 .
f.
Analisis Data Persentase hambatan tirosinase dihitung sebagai berikut 15 : Hambatan Tirosinase (%) = [(A kontrol – (A sampel - A kontrol sampel))/ A Kontrol] x 100%
Keterangan A kontrol :  L-Tirosine + DMSO 1:1 + Enzim Tirosinase A Sampel : Sampel + L-Tirosine + Enzim Tirosinase A kontrol sampel  : Sampel + L-Tirosine + Dapar Fosfat
Selanjutnya dihitung IC 50 yaitu Konsentrasi ekstrak terpurifikasi dalam mg/L
Tabel 1. Hasil Ekstraksi Ekstrak Kasar dan Terpurifikasi
Jenis Ekstrak Berat Sampel (g) Berat Ekstrak (g) % Ren- demen Ekstrak Kasar 40 9,33 23,325 % Ekstrak Terpu- rifikasi 3 0,730 24,284 %
yang mampu menghambat sebanyak 50 %.
3.  Hasil 3.1.  Hasil Ekstraksi Ekstrak Kasar dan
Ekstrak Terpurifikasi Tabel 1, memperlihatkan hasil ekstraksi dari ekstrak kasar dengan penyari etanol, dan ekstrak terpurifikasi dengan penyari etil asetat. Untuk ekstrak kasar diperoleh dari simpilia sebanyak 40 gram yang diekstraksi dengan etanol dan didapatkan 9,33 gram ekstrak kasar, sehingga persen rendamennya 23,325%,  dan  untuk  ekstrak  terpurifikasi diperoleh dari ekstrak kasar sebanyak 3 gram yang diekstraksi dengan etil asetat dan didapatkan 0,730 gram ekstrak terpurifikasi, sehingga persen rendamennya 24,284%.
3.2.  Hasil Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum Pengujian Aktivitas Antitirosinase Tabel 2, memperlihatkan hasil pengukuran panjang gelombang maksimum pengujian aktivitas antitirosinase, pada berbagai panjang gelombang, dan didapatkan hasil absorban tertinggi pada panjang
gelombang 480 nm.
3.3.  Pengukuran Waktu Optimasi Inkubasi Pengujian Aktivitas Antitirosinase Tabel 3, memperlihatkan hasil pengukuran waktu optimal inkubasi pengujian aktivitas antitirosinase, pada beberapa waktu inkubasi dan didapatkan absorban tertinggi pada waktu inkubasi selama 2,5 jam.
3.4.   Hasil Pengujian Aktivitas Antitirosinase Pembanding Hidriquinon Tabel 4, memperlihatkan hasil pengujian aktivitas antitirosinase dari hidroquinon, pada berbagai konsentrasi dengan nilai IC 50 18,234 μg/mL.

## 3.5.   Hasil Pengujian Aktivitas Antitirosinase Ekstrak Kasar
Tabel 5, memperlihatkan hasil pengujian aktivitas antitirosinase dari ekstrak kasar, pada berbagai konsentrasi dengan nilai IC 50 4.405,24 μg/mL.

## 3.6.  Hasil Pengujian Aktivitas Antitirosinase
Ekstrak Terpurifikasi
Tabel 2. Hasil Pengukuran Panjang Gelombang
Konsentrasi (ppm) Absorban (A) 450 0,394 460 0,415 470 0,427 475 0,430 480 0,431 485 0,430 Tabel 3. Hasil Pengukuran Waktu Optimasi Inkubasi Waktu Inkubasi (jam) Absorban (A) 1 0,275 2 0,435 2,5 0,440 3 0,431 3,5 0,420
Tabel 4. Hasil Uji Aktivitas Inhibitor Pembanding Hidriquinon
Konsentrasi (ppm) Absorbansi (A) % Inhibisi Persamaan Linear IC 50 ( μg /mL ) kontrol 0,417 y = 5,3511x - 47,575 r² = 0,9924 r  = 0,9961
18,234
10 0,384 7,91 12 0,361 13,43 14 0,302 27,58 16 0,254 39,09 18 0,213 48,92 20 0,170 59,23
Tabel 6, memperlihatkan hasil pengujian aktivitas antitirosinase dari ekstrak terpurifikasi,  pada  berbagai  konsentrasi dengan nilai IC 50 401,6228 μg/mL.
4.  Pembahasan Kelor ( Moringa oleifera L.) merupakan tanaman yang dikenal sebagai The Miracle Tree atau pohon ajaib karena terbukti secara alamiah merupakan sumber gizi dan berkhasiat sebagai obat yang kandungannya diluar kebiasaan kandungan tanaman pada umumnya 17 . Pada penelitian ini dilakukan proses ekstraksi secara maserasi menggunakan etanol untuk mendapatkan ekstrak kasar dan dilanjutkan dengan ekstraksi cair-cair menggunakan etil asetat untuk mendapatkan ekstrak terpurifikasi.
Penggunaan penyari etanol karena merupakan penyari yang baik untuk senyawa golongan polifenol, dan aman untuk manusia, namun pada ekstrak kasar, masih mengandung senyawa karbohidrat dan atau lipid dalam jumlah yang besar, sehingga konsentrasi senyawa fenolik didalamnya menjadi lebih kecil.  Ekstraksi  purifikasi  dilakukan  untuk mengeliminasi adanya senyawa karbohidrat dan atau lipid dalam ekstrak kasar, sehingga kadar fenoliknya menjadi lebih besar dalam ekstrak  terpurifikasi 12,13 .  Metode  purifikasi yang biasa digunakan adalah ekstraksi cair- cair (ECC) atau solid phase extraction (SPE). Pada penelitian ini digunakan metode ECC, karena peralatan yang digunakan lebih murah dan sederhana dibandingkan metode SPE, dan menurut penelitian M. Waksmundzka-Hajnos et al. (2007), bahwa besarnya kandungan asam fenolik yang didapat dengan metode ECC sama dengan metode SPE 12 . Penyari yang
digunakan pada ekstraksi cair-cair adalah etil asetat dan air dengan perbandingan yang sama. Penyari air diharapkan dapat menyari senyawa polar sedangkan senyawa non-polar tidak tersari dari ekstrak kasar, kemudian didiamkan pada suhu dingin agar mengendap, sehingga dapat dipisahkan dan selanjutnya ekstrak air diekstraksi cair-cair dengan etil asesat. Penggunaan penyari etil asetat, karena penyari ini mampu menyari senyawa flavonoid lebih banyak dibandingkan dengan air 18 , sehingga pada proses ektraksi cair-cair diharapkan penyari etil asetat lebih banyak menarik senyawa flavonoid. Banyaknya hasil ekstraksi yang diperoleh dapat dilihat pada tabel 1. Pengujian inhibisi enzim tirosinase dilakukan dengan cara in vitro menggunakan substrat L-tirosin.  Hidroquinon digunakan sebagai pembanding, karena merupakan salah satu inhibitor tirosinase yang digunakan sebagai bahan kosmetik yang berfungsi sebagai pelindung kulit dari sinar ultraviolet dan dapat memutihkan kulit. Tetapi penggunaan dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan kulit dengan efek permanen sehingga diperlukan bahan alternatif sebagai inhibitor tirosinase dari bahan alam 6 . Inhibitor tirosinase berikatan secara kovalen dengan enzim tirosinase, yang menyebabkan enzim tirosinase tidak berikatan dengan  substraknya  (L-Tirosin)  sehingga tidak terjadi pembentukan melanin secara berlebihan. Jika pembentukan melanin tidak berlebih maka tidak akan terjadi pigmentasi ataupun kerusakan kulit 6 . Pada uji pendahuluan dilakukan penentuan panjang gelombang maksimum dan didapatkan absorbansi tertinggi pada

## Tabel 5. Hasil Uji Aktivitas Inhibitor Ekstrak Kasar
Konsentrasi (ppm) Absorbansi (A) % Inhibisi Persamaan Linear IC 50 ( μg /mL ) Kontrol 0,707 y = 0,01x + 5,9476 r² = 0,9973 r  = 0,9986 4405,24 100 0,657 7,072 300 0,645 8,769 500 0,630 10,891 700 0,615 13,012
panjang gelombang 480 nm. Waktu inkubasi optimum adalah 2,5 jam yang menunjukkan nilai absorban paling tinggi. Sedangkan penggunaan pelarut DMSO karena pelarut ini dapat melarutkan ekstrak sampel yang digunakan, namun karena DMSO murni dapat menghambat kerja enzim 2 , maka DMSO dicampur dengan air dengan perbandingan 1:1. Pengujian inhibitor tirosinase dilakukan terhadap pembanding hidroquinon dan sampel ekstrak, dengan berbagai variasi konsentrasi untuk mendapatkan persen IC 50 -nya. Hasil pengujian pembanding hidroquinon dapat dilihat pada tabel 4, dengan hasil IC 50 18,234 μg/mL,  sedangkan  Hasil  pengujian  ekstrak kasar dapat dilihat pada tabel 5, dengan hasil IC 50 4405,24  μg/mL,  dan  hasil  pengujian ekstrak terpurifikasi dapat dilihat pada tabel 6, dengan hasil IC 50 401,6228 μg/mL.

## 5. Kesimpulan
Aktivitas inhibitor tirosinase ekstrak terpurifikasi  daun  kelor  lebih  kuat  jika dibandingkan dengan ekstrak kasarnya, namun jauh lebih kurang aktif dari pada hidrokuinon.
Daftar Pustaka 1.  Hermana. Ekstraksi Senyawa Aktif Penghambat Melanogenesis dari Daun Dadap  ( Erytrina subumbrans (Hassk.) Merr) (skripsi). Institut Pertanian Bogor. Bogor. 2002
2.  Hartanti, L & Setiawan, H, K. Inhibitory Potential of Some Synthetic Cinnamid Acid Derivatives Towards Tyrosinase Enzyme. Indo J. Chem. 2009;9(1): 158-
168
3.  Juwita N, K, Djajadisastra J, and Azizahwati. Uji Penghambatan Tirosinase dan Stabilitas Fisik Sediaan Krim Pemutih yang Mengandung Ekstrak Kulit Batang Nangka  ( Artocarpus heterophyllus ). Majalah  Ilmu  Kefarmasian.  2013;8(2):
105-125
4.  Hindritiani, R, Dhianawaty, D, Sujatno,M, Sutedja, E dan Setiawan. Penurunan Aktivitas Tirosinase dan Jumlah Melanin oleh Fraksi Etil Asetat Buah Malaka ( Phyllantus emblica ) pada Mose Melanoma B 16 Cell- Line. MKB. 2013;45(2): 119
5.  Chang TS. An Updated Review of Tyrosinase Inhibitor. International Jurnal of Molecular Science. 2009;10: 2440- 2475
6.  Astuti, D, Prasetya, H, & Irsalina, D.  Identifitikasi  Hidroquinon  pada Krim Pemutih Wajah yang Dijual di Minimarket Wilayah Minomartani. Journal of Agromedicine and Medical Scinces. 2016;2(1): 14-19
7.  Masuda T, Yamashita D, Takeda Y, Yoneromi S. Potensi Ekstrak Rhizophora sp sebagai Inhibitor Tirosinase. Journal Biochemistry, Bioscience, Biotechnology, Biochemstry. 2005;69(1): 197-201.
8.  Kasolo, JN, Bimeya, GS, Ojok, L, Ochieng, J, Okwal-Okeng, JW. Phytochemicals and Uses of Moringa oleifera Leaves in Uganda Rural Communities. Journal of Medical Plant Research. 2010;4(9): 753-
757.
9.  Hardiyanthi F. Pemanfaatan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Kelor ( Moringa oleifera ) Dalam Sediaan Hand and Body Cream (Skripsi). Fakultas Sains
Tabel 6. Hasil Uji Aktivitas Inhibitor Ekstrak Terpurifikasi
Konsentrasi (ppm) Absorban (A) % Inhibisi Persamaan Linear IC 50 ( μg /mL )
Kontrol 0,340 y = 124,85x–162,65 r² = 0.9978 r  = 0,9988 401,6228 100 0,300 11,764 300 0,214 37,058 500 0,121 64,411 700 0,048 85,882
IJPST - SUPP1(1), 2019; 52 - 58 dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah, Jakarta, 2015.
10. Rizkayanti, M.Diah, A. W, & Jura, M, R. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air dan Ekstrak Etanol Daun Kelor ( Moringa oleifer L.). Akademika Kimia. 2017;6(2): 125-131.
11. Zaputri  A. DJ. ‘Analisis Kandungan Flavonoid Ekstrak Kulit Pisang Cere ( Musa paradisiaca L.) dengan Metode Spektrofotometri  UV-Vis  (Skripsi). Universitas Muslim Indonesia, Makassar. 2017.
12. Hajnos M,W, Oniszczuk A, Szewczyk K,  and Wianowska  D.  Effect  of  Sample Preparation Methods on The HPLC Quantitation of Some Phenolic Acids in Plant Materials. Acta Chromatographica. 2007; 19: 227-237
13. Dai J., and Mumper R.J. Plant Phenolics: Extraction, Analysis and Their Antioxidant and Anticancer Properties. Molecul Journal. ISSN 1420-3049. 2010: 7313–7352.
14. Abidin Z., Adelah A., Marwa, Susilastuti D., Risal. Analysis Phenolic Compound
and Antioxidant Activity of Ethyl Acetate Purification  Extract  of  Sawo  Manila ( Manilkara zapota ). Proceeding. The 3nd International Seminar of Natural Product; April. ISSN 2443-3675, Makassar; 2017.
15. Ozer O., Mutlu B., and Kivcak B. Antityrosinase Activity of Some Plant Extracts and Formulation Containing Ellagic Acid. Pharmaceutical Biology, Vol. 2007;45(6): 519 – 524.
16. Moon J, Y, Yim E,Y, Song G, Lee, N, H. Screening of Elastase and Tyrosinase Inhibitor activity from Jeju Island Plants. Eur Asian Journal of BioSciences. 2010.
17. Toripah S, S, Abidjulu J, Wehantouw F. Aktivitas Antioksidan dan Kandungan Total Fenolik Ekstrak Daun Kelor ( Moringa Oleifera LAM). Pharmacon Jurnal Ilmu Farmasi-UNSRAT. 2014; 3(4) : 37- 43
18. Stankovic M. S. Total Phenolic Content, Flavonoid Concentration and Antioxidant Activity of Marrubium peregrinum L.
Extract. Kragujevac Jounal Science.
2011;33: 63 – 72