## PENENTUAN AKTIVITAS ENZIM MANANASE DARI BERBAGAI MIKROORGANISME DI INDONESIA DAN PERANANNYA DALAM BIDANG PANGAN: KAJIAN PUSTAKA
Hermawan Seftiono
Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Universitas Trilogi Jl. Kampus Trilogi No 1, Kalibata Jakarta 12760,
hermawan_seftiono@trilogi.ac.id

## ABSTRACT
Mananase is an enzyme that is involved in producing prebiotic, namely manooligosaccharide. In  Indonesia,  research  about  mananase  enzyme  has  started  by  using  several  types  of microogranisms. Based on available reports, it seems that data collection is needed in order to determine  the  most  optimal  mananase  enzyme  producer.  From  among  20  microorganisms,  it showed that Isolat SM – 14 (Bacillus sp.) has 119.44 U / ml activity with 19.55 U / mg specific activity  in  locus  bean  gum  substrate.  The  highest  enzyme  activity  is  the  most  potential  when applied  as  manooligosaccharide  producer  in  food  industry.  Manooligosaccharide  can  be applied to various products such as cookies, chocolate, candy, and soft drinks.
Keywords : mananase, manooligosaccharide, enzyme activity, functional food

## PENDAHULUAN
Indonesia
memiliki
potensi
mikroorganisme  yang  belum  dioptimalkan. Berbagai  mikrooganisme  meliputi  bakteri, kapang dan khamir menghasilkan enzim yang dapat mendegradasi hemiselulosa (manan dan xilan).  Saat  ini  hasil  atau  limbah  perkebunan berupa  hemiselulosa  terdapat  pada  bungkil kelapa  sawit,  kopi,  kopra, suweg,  dan  kolang kaling.  Mikroorganisme  menghasilkan  enzim mananase yang dapat menghidrolisis hemiselulosa berupa manan menjadi manooligosakarida. Manooligosakarida
termasuk  pangan  fungsional  karena  berperan sebagai prebiotik bagi mikroflora usus.
Manan  diklasifikasikan  menjadi  4 subfamili meliputi manan linear, glukomanan, galaktomanan, dan galaktoglukomanan. Manan  linear  ditemukan  pada ivory  nut dan palm  kernet  oil  (minyak  inti  kelapa  sawit). Galaktomanan  termasuk  fraksi  hemiselulosa utama  pada  kayu  lunak.  Galaktomanan dihasilkan  oleh  locust  bean  gum,  tara  gum, guar  gum  dan  fenu  greek  gum  dengan  rasio galakto dan manosa yang bervariasi. Galaktoglukomanan  memiliki  struktur  rantai utama  yang  terdistribusi  secara  acak  atas ikatan  1-4  D-manosa  dan  D-glukosa  serta adanya  D-galaktosa  sebagai  cabang  pada
manosa  pada  rantai  utama  (Malgas  S et  al 2015).
Pemanfaatan  enzim  mananase  asal mikroorganisme memiliki beberapa keuntungan  diantaranya  proses  produksi enzim  yang  cepat,  biaya  produksi  yang  lebih murah  dan  ramah  terhadap    lingkungan (Sigres & Sutrisno 2015). Enzim  -mananase meliputi  endo-1,4-β-manosidase  atau  1,4-β-D mananase  (EC3.2.1.78)  merupakan  enzim penting  yang  mendegradasi  manan  secara acak  dengan  memutus  rantai  sehingga menghasilkan  -1.4-manooligomer dan menghasilkan rantai akhir baru. Mananase  memiliki  berbagai  fungsi serta  aplikasi  industri  termasuk  di  bidang teknologi  pangan.  Penerapannya  antara  lain dalam biokonversi biomassa menjadi manooligosakarida,  peningkatan  daya  cerna pakan  pada  ternak,  proses  pengolahan  biji kopi  (Adebayo-Tayo  et  al  2013)  Penelitian mengenai  pemanfaatan enzim mananase saat ini mulai banyak dilakukan akan tetapi belum terlihat  mikroorganisme  mana  yang  potensial serta dalam penerapan dalam industri pangan.
Penelitian  enzim  mananase  dalam menguraikan  manan  saat  ini  mulai  banyak dilakukan  terutama  di  Indonesia,  namun belum ada proses pendataan aktivitas
mananase  dari  berbagai  mikroorganisme. Pendataan ini berperan untuk  melihat sumber mananase yang optimal serta pemanfaatannya untuk industri pangan.

## PEMBAHASAN Penentuan Aktivitas Enzim Mananase
Mananase  merupakan  enzim  yang berperan  dalama  menguraikan  heteromanan menjadi  manosa,  glukosa,  dan  galaktosa.  - mananase (  -1,4-D manan manohidrolase, EC 3.2.1.78)  menghidrolisis  -1,4-D  manopirosil dalam  rangka  utama  polimer  manan  yang kemudian menghasilkan rantai pendek manooligosakarida. Selanjutnya senyawa tersebut  dihidrolisis  oleh  -manosidase  (  - manosidase, EC 3.2.1.25) dan  -galaktosidase (EC  3.2.1.22)  menghasilkan    manosa  dan galaktosa  (Duffaud et  al .  1997).  penguraian manan  oleh  mananase  akan  menghasilkan manosa  dan  manooligosakarida.  Manosa termasuk  kedalam  monosakarida  sedangkan manooligosakarida  berupa  oligosakrida  dari karbohidrat  yang  berperan  sebagai  probiotik. Manan  bisa  ditemukan  pada  biji  dan  dinding sel  berbagai  tanaman,  termasuk  tanaman kacang-kacangan.
Aktivitas  enzim  mananase  berbeda- beda  tergantung  dari  sumbernya.  Enzim  ini dihasilkan  dari  berbagai  sumber  diantaranya tumbuhan,  hewan,  serta  mikroorganisme (bakteri,  kapang  dan  khamir).  Umumnya mananase  diperoleh  dari  mikroba  karena dapat  dihasilkan  dalam  jumlah  banyak  bisa berupa enzim intraseluler dan enzim ekstraseluler  serta  lebih  mudah  dalam melakukan  proses  isolasi.  Penentuan  waktu produksi    enzim  optimum  dilihat  dari  nilai aktivitas mananase tertinggi.
Aktivitas  enzim  menunjukkan  dari jumlah  mikromol  substrat  yang  diubah menjadi  produk  per  unit  waktu  pada  kondisi suhu  dan  pH  yang  optimal.  Substrat  yang digunakan  oleh  beberapa  peneliti  diantaranya bungkil  inti  sawit, locus  bean  gum dan porang.    Aktivitas  enzim  adalah  ukuran kuantitas keadaan aktif enzim dan tergantung pada  kondisi  yang  harus  spesifik.  Satuan internasional (SI) unitnya adalah katal dengan satuan 1 mol s -1 untuk tiap unitnya. Nilai yang umum dan sering digunakan ialah enzim unit
(U)  dengan    1  U  =  1  μmol  min -1 .  Nilai  1  U setara  dengan  16,67  nanokatal  (Bintang 2010).
Aktivitas mananase (U/ml) =
manosa BM x t x fp x x Xk Xs 1000 2 ) ( 
dengan Aktivitas mananase  : Jumlah enzim yang
dapat menghasilkan satu µmol manosa permenit (U/ml). Xs : kadar manosa sampel Xk : kadar manosa kontrol t : waktu inkubasi (menit) fp : faktor pengenceran BM manosa :  bobot  molekul  manosa 180 g/mol
Aktivitas  spesifik  enzim  merupakan unit  umum  lainnya  selain  aktivitas  enzim karena  aktivitas  spesifik  lebih  menunjukkan aktivitas  enzim  yang  bekerja  per  milligram protein. Aktivitas spesifik mengukur kemurnian  dari  enzim  yaitu  jumlah  dari produk yang dibentuk oleh enzim pada waktu tertentu  dengan  kondisi  per  miligram  enzim. Aktivitas  spesifik  setara  dengan  rataan  dari reaksi  dikali  dengan  volume  reaksi  dibagi dengan  berat  dari  enzim.  SI  unit  nya  adalah katal Kg -1 , tapi unit yang lebih praktis adalah μmol mg -1 min -1 .
Aktivitas Spesifik = ) / ( mg U protein Total aktivitas Total dengan Aktivitas Total (U)  = volume enzim (ml) x aktivitas (U/ml) Total Protein (mg)  = volume enzim (ml) x kadar protein (mg/ml) Aktivitas enzim mananase dari
berbagai mikroorganisme di Indonesia menunjukkan  nilai  aktivitas  dan  aktivitas spesifik  yang  bervariasi  (Tabel  1).  Berbagai variasi  ini  disebabkan  karena  perbedaan isolat,  lama  waktu  inkubasi,  sumber  karbon, pH,  suhu  dan  agitasi.  Aktivitas  enzim mananase  basanya  memiliki  nilai  yang  tinggi pada  pada  pH  3.0-7,5  dan  suhu  45-92  °C. (Purnawan  2013).  Penelitian  Rahayu  (2013) menunjukkan  mananase  yang  berasal  dari
Isolat  5  dan  Isolat  6  memiliki  dua  puncak aktivitas.  Isolat  5  memiliki  puncak  aktivitas pada  jam  ke-18  dan  jam  ke-54  sedangkan isolat 6 memiliki puncak pada jam ke-30 dan jam ke-66. Hal ini dikarenakan enzim tersebut merupakan  isoenzim  yaitu  berperan  dalam mengkatalisis reaksi yang sama namun urutan asama  amino  dan  sifatnya  yang  berbeda (Williams & Wilkins 1996). Produk hidrolisis seperti  mano-oligosakarida  (MOS)  akan menghambat sintesis enzim dalam menguraikan  poliskarida  akan  tetapi  aktivitas enzim  akan  meningkat  pada  puncak  kedua dari  enzim  karena  kadar  monosakrida (manosa)  akan  berkurang  karena  digunakan oleh  bakteri  sebagai  sumber  karbon  untuk nutrisi  dan  bereproduksi  setelah  itu  bakteri mulai meproduksi enzim kembali (Meryandini et al. 2008a, Purnawan 2013). Penelitian Ambarwati (2005)
memperlihatkan  bahwa  perbedaan  sumber karbon  berpengaruh  terhadap  aktivitas  enzim mananase,  penggunaan  substrat locust  bean gum menunjukkan  aktivitas  mananase  yang lebih  tinggi  dan  waktu  yang  lebih  singkat yaitu  0.0107  U/mL  (0.179  nkat/ml)  dalam waktu  2  hari  dibandingkan  dengan  bungkil kelapa  yaitu  0.0031  U/mL  (0.051  nkat/ml) dalam  waktu  4  hari  hal  ini  menurut Ambarwati  (2005) locust  bean  gum lebih dapat  menginduksi  pembentukan  mananase Streptomyces sp. galur 45I-3 daripada bungkil kelapa  selain  itu  kandungan  galaktomanan locust bean gum lebih tinggi dibandingkan di bungkil  kelapa  yaitu  sebesar  88%  sedangkan dibungkil  kelapa  hanya  61%.  Hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  Purnawan  (2013)  bahwa biomassa locust bean gum mempunyai tingkat kemurnian  yang  tinggi  selain  itu  bungkil kelapa mirip dengan bungkil inti kelapa sawit (BKIS)  sehingga  kemungkinan  serat  kasar terikat  secara  kuat  dengan  lignin  membentuk lignoselulosa  sehingga  enzim  mananase
mengalami kesukaran untuk menembus dinding  sel  BIKS.  Tabel  2  menunjukkan bahwa  setiap  substrat  yaitu  LBG,  BIKS  dan umbi  porang  memiliki  kandungan  serat  kasar yang  berbeda-beda.  BKIS  memiliki  kadar serat  kasar  yang  terbesar  yaitu  18.35%, selanjutnya  umbi  porang  (11.52%)  dan  LBG (3%).
Perlakuan  pH  dan  suhu  berpengaruh terhadap  aktivitas  enzim  mananase  hal  in dapat  terlihat  pada Streptomyces  cyaenus dengan  mengkondisikan  sesuai  dengan  pH dan  suhu  optimum  nya  yaitu  pH  8  dan  suhu 50  °C    maka  aktivitas  mananase  meningkat dari  0.702  U/mL  menjadi  1.706    U/mL.  hal yang sama terjadi pada Streptomyces violascens BF  3.10    dikondisikan  dengan  pH dan  suhu  optimum  nya  yaitu  pH  6  dan  suhu 70  °C    maka  aktivitasnya  meningkat  dari 0.981 U/mL menjadi 16.38 U/mL serta waktu inkubasi  menjadi  lebih  singkat  dari  144  jam menjadi 72 jam. Selain itu agitasi berpengaruh  terhadap  meningkatnya  aktivitas mananase  pada Bacillus  subtilis dengan perlakuan agitasi 200 rpm maka  aktivitasnya meningkat  dari  15.64  U/mLmenjadi  37.7 U/mL  selain  itu  waktu  inkubasinya  menjadi lebih  singkat  dari  96  menjadi  24  jam  (Tabel 1).
Aktivitas  mananase  dari  20  isolat  yang ada  di  Indonesia    menunjukkan  bahwa  Isolat SM-1.4  ( Bacillus sp)    memiliki  aktivitas tertinggi  yaitu  119,44  U/mL  dan  aktivitas spesifik  19.55  U/mg  dengan  waktu  inkubasi 48 jam. Hal ini menunjukkan bahwa kedepan isolat ini potensial sebagai penghasil mananase. Terlihat dari nilai aktivitas spesfik isolat  ini  dari  1  milligram  enzim  (protein) menghasilkan  aktivitas  19.55  unit  paling tinggi  dibanding  dengan  isolate  yang  lain. Aktivitas  spesfik  akan  sebanding  dengan tingkat kemurnian enzim (Tabel 1).
Tabel 1 Perbandingan aktivitas enzim mananase dari berbagai mikroorganisme di Indonesia No Mikroorganisme waktu inkubasi Aktivitas Aktivitas Spesifik Substrat Literatur (jam) (U/mL) (U/mg) 1 Isolat 5 18 0.039 0.045 bungkil inti sawit (Rahayu WP 2013) 54 0.051 0.070 bungkil inti sawit 2 Isolat 6 30 0.041 0.105 bungkil inti sawit (Rahayu WP 2013) 66 0.058 0.120 bungkil inti sawit 3 Isolat SM-1.4 ( Bacillus sp) 48 119,440 19.550 locus bean gum ( Harnentis et al. 2013) 4 Aspergillus niger NRRL 337 96 0.102 0.450 bungkil inti kelapa (Yopi et al. 2006) 5 Eupenicillum javanicum BS4 96 0.088 0.436 bungkil inti kelapa (Yopi et al. 2006) 6 Streptomyces lipmanii 96 0.032 0.208 bungkil inti kelapa (Yopi et al. 2006) 7 Saccharopolyspora flava 96 0.133 0.555 bungkil inti kelapa (Yopi et al. 2006) 8 Bacillus Pumilus 72 4.200 4.000 locus bean gum (Yusuf AI, 2012) 9 Streptomyces cyaenus hari ke2 0.702 - locus bean gum (Purnawan 2013) 1.706 a - 10 Streptomyces sp. GALUR 45I-3 2 hari 0.0107 (0.179 nkat/ml) 0.064 1.065nkat/mg) locust bean gum (Ambarawati 2005) 4 hari 0.003 (0.051 nkat/ml) 0.022 (0.367nkat/mg) bungkil kelapa (Ambarawati 2005) 11 Bacillus subtilis 96 15,640 - Porang (Nugraha IP 2014) 24 37.700 b - Porang 12 Isolat W6 96 0.0265 - locust bean gum (Asyariyah L 2014) 13 Isolat RA 05 32 0.1776 (2.96±0.7nkat/ml) 6.120 (102±0.7nkat/mg) locust bean gum (Meryandini et al. 2008) 0.576 (9.60±1 nkat/ml) 6.3 00 (105±1.7nkat/mg) bungkil kelapa 0.000 0.000 kolang kaling 14 Bacillus pumilus 24 0.000079 0.0002 locust bean gum (Aurora DD 2003) 15 Streptomyces violascens BF 3.10 144 0.981 - locust bean gum Safitri AH 2014 72 16.380 c - 16 Bacillus subtilis 48 20.978 - locust bean gum (Ramadana  RM 2014) 17 Streptacidiphilus luteoalbus 69 0.217 0.190 locust bean gum (Seftiono H 2008) 18 Streptomyces purpurances 72 0.328 1.064 locust bean gum (Setiangningrum K 2009) 19 Geobacillus stearothermophilus L-07 48 0.750 3.100 locust bean gum (Sumardi 2005) 20 isolat Pari 3 48 2,474 - locust bean gum (Djohan AC 2012)
Ket:
a= pada pH 8 dan suhu 50 °C ; b= agitasi 200 rpm ; c=pada pH 6 suhu 70 °C
Tabel 2 Hasil analisis proksimat dari BIKS, umbi porang, dan LBG Jenis Analisis (%) Sampel BIKS Umbi porang LBG Kadar air 6,67 8,50 12,00 Kadar abu 3,96 8,61 0,80 Lemak 10,26 0,97 1,00 Protein 16,10 13,92 6,00 Serat Kasar 18,35 11,52 3,00 Sumber: Purnawan (2013) Peran Enzim Mananase dalam Industri Pangan Penelitian mengenai potensi mikroorganisme penghasil enzim yang bermanfaat  bagi  kehidupan  manusia  ( enzyme bioprospecting )  merupakan  penelitian  yang penting  dibidang  mikroorganisme  dan  enzim. Kebutuhan pasar enzim dunia akan penggunaan  enzim  sangat  tinggi  hal  ini terlihat    pada  tahun  2004  mencapai  2  milyar dollar  USD  (20  trilyun  rupiah)  serta  akan mengalami  kenaikan  setiap  tahunnya  sebesar 3.3  %  (Oetomo 2012).
Enzim  industrial  yang  dibutuhkan dalam  jumlah  tinggi  adalah  enzim  hidrolitik yaitu  mencapai  80%,  enzim  hidrolitik berperan  dalam  memecah  molekul  kompleks menjadi  lebih  sederhana.  Enzim  mananase termasuk  kedalam  enzim  hidrolitik  dalam menghidrolisis  manan.  Penelitian  yang  saat ini menarik untuk dilakukan adalah mengenai bioprospecting  mikroorganisme  penghasil enzim  mananase  (Oetomo  2012).  Enzim  β- mananase  yang  dihasilkan  oleh Bacillus lentus .  saat  ini  secara  komersial  telah dipasarkan (Wu et al . 2005).
Indonesia  memiliki  sumber  biomasa yang  melimpah.  Menurut  Purnawan  (2013) manan  banyak  terdapat  dalam  biomassa bungkil inti kelapa sawit, bungkil kelapa, biji kopi  dan  lainnya.  Selain  itu,  manan  juga terdapat pada jenis umbi porang ( Amorphophallus  muelleri  blume ),  sejenis dengan umbi konjak ( Amorphophallus konjac ). Berbagai biomasa yang mengandung polisakarida  komplek    mampu    didegradasi dengan  bantuan  enzim  mananase  menjadi mano-oligosakarida dan manosa. Oleh karena itu  enzim  ini  dibutuhkan  diberbagai  industri
seperti  pangan,  pakan,  deterjen  dan  industri pulp dan kertas.
Potensi enzim mananase dalam industri pangan  belum  banyak  dimanfaatkan.  Enzim ini  dapat  menghasilkan  produk  berupa manooligosakarida yang termasuk oligosakarida. Oligosakarida berperan sebagai pangan fungsional karena merangsang pertumbuhan mikroflora pada saluran pencernaan  seperti bifidobacterium  ( bakteri bifidus ) dan lactobacillus sehingga  menjaga keseimbangan mikloflora dalam inang. Selain itu  oligosakarida  berperan  dalam  mengatur regulasi kadar gula darah dan kolesterol serta meningkatkan penyerapan mineral. Industri pangan yang telah mengaplikasikan  enzim  mananase  adalah perusahaan  Ajinomoto  General  foods  dengan mengembangkan paten bagi produk kopi yang mengandung manooligokarida. Manooligosakarida ini diperoleh dari penguraian manan yang ada pada  ampas kopi (Toeda 2002). Manooligosakarida yang berasal dari biji kopi efektif dalam menurunkan  berat  badan.  Manooligosakarida dari  biji  kopi  yang  masuk  kedalam  saluran pencernaan  akan  menuju  usus  besar  tanpa dicerna  terlebih  dahulu.  Manooligosakarida tersebut    pada  usus  besar  akan  dicerna menjadi sakarida rantai pendek yang bermanfaat  bagi  pertumbuhan  bakteri  positif.
Selain  itu  adanya  manooligosakarida  diduga berperan    meningkatkan  sistem  kekebalan tubuh  serta    menurunkan  peluang  terikatnya bakteri pathogen seperti Salmonella enteriditis dan E.coli pada  sel  hal  ini  karena strukturnya  mirip  dengan  sakarida  yang  ada dipermukaan  sel  makhluk  hidup  (Purnawan 2013).
Potensi  manooligosakrida  kedepannya sebagai  pangan  fungsional  dalam  industri pangan.    Aplikasinya  pada  berbagai  produk seperti  cookies,  coklat,  permen,  minuman ringan dan sebagainya. Penelitian Naganagouda  K  (2009)  menunjukkan  bahwa produk manooligosakarida yang dari Aspergirus  niger tidak  menghasilkan  toksin, termasuk generally  recognized  as  safe (GRAS), dan aman bagi industri pangan

## KESIMPULAN
Enzim  mananase  akan  memainkan peran yang penting di bidang Industri pangan. Berbagai  kajian  mengenai  beberapa  sumber enzim  mananase  di  Indonesia  menunjukkan bahwa Isoalat SM-1,4 ( Bacillus sp) mepunyai nilai aktivitas yang paling tinggi yaitu 119.44 U/ml  dan  aktivitas  spesifik  19.55  U/mg. Tingginya  nilai  aktivitas  isolat  SM-1,4 ( Bacillus sp)  merupakan  potensi  dalam memproduksi  mananase.  Mananase  ini  akan bermanfaat  untuk  menghasilkan  probiotik seperti manooligosakarida.

## DAFTAR PUSTAKA
Adebayo-Tayo  B,  Elelu  T,  Akinola  G, Oyinloye  I.  2013.  Screening  and production  of  mannanase  byB bacillus strains  isolated  from  fermented  food condiments. Innovative Romanian Food Biotechnology 13: 53-62.
Ambarwati D. 2005. Karakterisasi mananase Streptomyces  sp.  Galur  45I-3 [skripsi yang  tidak  dipublikasi  pada  Institut pertanian Bogor]. Asyariyah  L.  2014. Produksi  prebiotik manooligosakarida (mos) serta pengujiannya  terhadap  pertumbuhan Salmonella  sp.  dan    Pediococcus pentosaceus. [skripsi  yang  tidak dipublikasi  pada  Institut  pertanian Bogor].
Aurora.2003. Isolasi  dan  karakterisasi  enzim mananase Bacillus  pumilus DYP-2. [skripsi  yang  tidak  dipublikasi  pada Institut pertanian Bogor].
Bintang  M.  2010. Biokimia : Tehnik Penelitian . 12th ed. Jakarta. Erlangga.
Djohan  AC.2012. Isolasi  dan  identifikasi bakteri  manolitik laut    dari  pulau  pari . [tesis    yang  tidak  dipublikasi  pada Institut pertanian Bogor].
Duffaud  GD et  al .  1997.  Purification  and
characterication of extremely thermostable  Mannanase,  - Mannosidase, and α-Galactosidase from the hyperthermophilic Eubacterium
Thermotoga  neapolitana 5068. Applied and Environ Microbiol 63: 169-177.
Harnentis,  Marlida  Y,  RizalY  dan    Mahata ME.  2013.  Isolation,  characterization
and  production  of  mannanase  from Thermophilic  Bacteria to  increase  the feed  quality. Pakistan  Journal  of Nutrition 12 (4): 360-364.
Malgas  S,   van  Dyk  JS,    Pletschke  BI.  2015. A  review  of  the  enzymatic  hydrolysis of mannans and synergistic interactions between  b-mannanase,  b-mannosidase and  a-galactosidase World  J  Microbiol Biotechnol 31:1167–1175.
Meryandini  A,  Anggreandari  R,  Rachmania
N. 2008. Isolasi bakteri mananolitik dan karakterisasi  mananasenya. Biota .13 (2):82-88
Moreira LRS, Filho EX F. 2008. An overview of  mannan  structure  and  mannan- degrading enzyme systems. Appl Microbiol Biotechnol 79 : 165–178.
Nugraha  IP.  2014.  Optimasi  produksi  enzim mananase  dari  bakteri  laut Bacillus subtilis dengan substrat biomassa manan  [skripsi  yang  tidak  dipublikasi pada Institut pertanian Bogor].
Naganagouda,  K,    Salimath  PV  ,dan
Mulimani  VH.  2009.  Purification  and characterization of Endo- β -1,4 mannanase  from Aspergillus  niger gr for  application  in  food  processing industry. J.  Microbiol.  Biotechnol 19(10): 1184–1190.
Oetomo EG, 2012 Karakterisasi enzim dan kloning gen penyandi Mananase dari Bacillus subtilis asal tempe [tesis yang tidak dipublikasi pada  Institut pertanian Bogor].
Purnawan  A.  2013.  Hidrolisis  karbohidrat manan  (bungkil  inti  kelapa  sawit) dengan enzim mananase dari S treptomyses cyaenus untuk menghasilkan  oligosakarida  [tesis  yang tidak dipublikasi pada Institut pertanian Bogor].
Ramadana  RM.  2014.  Kondisi  optimum untuk produksi enzim mananase ekstraseluler  dari Bacillus subtilis yang diisolasi dari air laut bali. [skripsi yang tidak dipublikasi pada Institut pertanian Bogor]. Rahayu  WP.2013. Isolasi dan  pencirian bakteri mananolitik pendegradasi
bungkil  inti  sawit. [skripsi  yang  tidak dipublikasi  pada  Institut  Pertanian Bogor].
Setianingrum  K.  2009. Pemurnian  dan Karakterisasi  Mananase  Ekstraseluler Streptomyces purpurascens .  [tesis  yang tidak dipublikasi pada Institut pertanian Bogor]. Seftiono H.2008. Pemurnian dan karakterisasi mananase dari Streptacidiphilus  luteoalbus .  [skripsi yang  tidak  dipublikasi  pada    Institut pertanian Bogor].
Sigres  DP,  Sutrisno  A.  2015.  Enzim mananase  dan  aplikasi  di  bidang industri : kajian pustaka Jurnal Pangan dan Agroindustri 3: 899-908 Sumardi.2005. Isolasi,  karakterisasi  dan produksi  -Mananase ekstraseluler dari Geobacillus stearothermophilus L-
07 [disertasi  yang  tidak  dipublikasi pada  Institut pertanian Bogor].
Toeda  K.  2002.  Mananase,  microorganism capable  for  producing  and  methods  of producing. Patent Japan 2002-65257. Williams, Wilkins. 1996. Biokimia Kedokteran Dasar: Sebuah Pendekatan Klinis . Pendit BU, penerjemah;  Suyono  J,  Sadikin  V, Mandera LI, editor. Jakarta (ID): EGC. Terjemahan dari: Basic Medical Biochemistry:  A  Clinical  Approach . Ed ke-1.
Wu  G,  Bryant  MM,  Voitle  RA,  Roland  DA Sr.  2005.  Effects  of  β-Mannanase  in corn-soy diets on commercial leghorns in  second-cycle  hens. Poultry Science 84: 894-897.
Yusuf  AI.  2012 Purifikasi  parsial  dan karakterisasi  enzim  mananase  dari Bacillus  pumilus [tesis  yang  tidak dipublikasi  pada.Institut  pertanian Bogor].