Penerapan Ekstraksi Cair Tekanan Uap Tinggi Menggunakan Bahan Halal untuk Optimasi Antioksidan
The Application of High-Pressure Extraction Using Halal Ingredients for Optimization of Antioxidant
Akhmad Endang Zainal Hasan 1a , Ike Yulia Wiendarlina 2 , Witdiastuti 2
1 Departemen Biokimia, FMIPA, Institut Pertanian Bogor, Kampus IPB Darmaga, 16680, Indonesia 2 Program Studi Farmasi, FMIPA, Universitas Pakuan, Bogor, 16143, Indonesia
a Korespondensi : Akhmad Endang Zainal Hasan, E-mail: zainalhasan@apps.ipb.ac.id Diterima: 04 – 04 – 2022, Disetujui: 28 – 04 – 2022

## ABSTRACT
One of the plants used in traditional medicine is soursop. Antioxidants are compounds that can delay, slow down, or inhibit oxidation reactions. This study aims to determine the antioxidant activity due to the effect of variations in extraction time and the comparison of the number of samples with solvent in the  high-pressure  extraction  method.  The  study  made  13  treatments  using  the  Response  Surface Methodology  (RSM)  design  with  the  fit  of  the  Central  Composite  Design  (CCD)  model.  The  results showed that from the 13 treatments, the extraction time affected the percent yield with the equation Y = -51.97 + 24.20 X1 + 1.30 X2. The extraction time (X1) has a value greater than the ratio of sample powder to the volume of distilled water (X2) as well as the IC50 value as shown in the equation Y = 171.98+ 13.83 X1 – 4.11 X2. Extraction time (X1) has a greater value when compared to simplicia with solvent volume (X2). The results of the research on extract yield optimal values used an extraction time of 6.3 minutes at a ratio of sample powder to the solvent volume of 1:61.2. The optimal antioxidant activity value was obtained at the extraction time of 4.3 minutes, and the ratio of the sample powder to the volume solvent was 1:78.2. The yield and antioxidant activity correction factors were 2.48% and 4.43%, respectively.
Keywords : antioxidant, CCD, extraction, RSM, soursop

## ABSTRAK
Salah  satu  tanaman  yang  digunakan  sebagai  obat  tradisional  adalah  sirsak.  Antioksidan  adalah senyawa  yang  mampu  menunda,  memperlambat,  atau  menghambat  reaksi  oksidasi.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan akibat pengaruh variasi waktu ekstraksi dan nisbah sampel  dengan  pelarut  pada  metode  ekstraksi  tekanan  tinggi.  Penelitian  membuat  13  perlakuan menggunakan desain Response Surface Methodology (RSM) dengan fit model Central Composite Design (CCD). Hasil penelitian menunjukkan bahwa dari 13 perlakuan waktu ekstraksi berpengaruh terhadap persen rendemen dengan persamaan Y = -51.97 + 24.20 X 1 + 1.30 X 2 . Waktu ekstraksi (X1) memiliki nilai yang lebih besar dibandingkan dengan nisbah sampel dengan volume aquades (X 2 ) serta nilai IC 50 seperti terlihat pada persamaan Y = 171.98 + 13.83 X 1 – 4.11X 2 . Waktu ekstraksi (X 1 ) memiliki nilai yang  lebih  besar  jika  dibandingkan  dengan  simplisia  dengan  volume  pelarut  (X 2 ).  Hasil  penelitian rendemen ekstrak optimal diperoleh dengan menggunakan waktu ekstraksi 6,3 menit dengan nisbah sampel dengan volume pelarut 1:61.2.  Hasil nilai aktivitas antioksidan optimal diperoleh pada waktu ekstraksi 4.3 menit dan nisbah sampel dengan volume pelarut adalah 1:78.2.  Faktor koreksi untuk hasil dan aktivitas antioksidan masing-masing adalah 2.48% dan 4.43%.
Kata kunci : antioksidan, CCD, ekstraksi, RSM, sirsak
Hasan, A. E. Z., Wiendarlina, I. Y., & Witdiastuti. (2022).  Penerapan ekstraksi cair tekanan uap tinggi menggunakan bahan halal untuk optimasi antioksidan. Jurnal Agroindustri Halal, 8(1), 116 – 127.

## PENDAHULUAN
Pemanfaatan  obat dari bahan alam pada mulanya digunakan dalam bentuk aslinya yaitu merupakan  tanaman  segar  yang  langsung  digunakan  oleh  masyarakat  untuk  pengobatan penyakit (Sumarni et al., 2019), yang diolah berdasarkan pengalaman dan keterampilan yang dieroleh  dari  generasi  sebelumnya.    Daun  sirsak  merupakan  bagian  tumbuhan  yang  dapat dijadikan sebagai obat tradisional.  Adapun  pengolahan daun sirsak sebagai obat tradisional dilakukan  dengan  cara  perebusan  atau  penggodokan.  Secara  empiris  72  gram  daun  sirsak diseduh dalam 150 ml air,  lalu diminum dapat menurunkan kadar kolesterol dalam darah (Cornelia et al., 2019).
Menurut Gavamukulya et al. (2017); Mutakin et al. (2022) dinyatakan  bahwa semua bagian  tanaman  dari  sirsak  ini  dapat  dimanfaatkan  untuk  obat.    Menurut  Wahab et  al., , (2018)disebutkan  bahwa terdapat  kandungan steroid, tanin, saponin, alkaloid dan flavonoid dalam  daun  sirsak.Daun  sirsak  dapat  dimanfaatkan  untuk  antipasmodik,  vasodilator, antimikroba,  antihipertensi  dan  dan  antioksidan  (Chowdhury et  al., 2021).    Menurut Chowdhury et al. (2021), Hasmila et al. (2019),  Budiarti & Ulfah (2016), komponen flavonoid daun  sirsak  dapat  dimanfaatkan  sebagai  antioksidan.  Daun  sirsak  yang  diekstrak  dengan etanol  96%  mempunyai  aktivitas  antioksidan  IC 50 18  µg/mL,  namun  ekstrak  etanol  70% mempunyai kekuatan aktioksidan yang lebih kuat dibandingkan dengan konsentrasi pelarut lainnya (Budiarti & Ulfah, 2016). Hasil penelitian Santos-Sánchez et al. (2019), menyebutkan bahwa senyawa yang mampu menghambat reaksi oksidasi, bahkan menunda reaksi oksidasi disebut sebagai senyawa antioksidan. Pengaruh buruk dari radikal bebas ini dapat dikurangi dengan adanya senyawa antioksidan. Menurut Shahidi & Zhong (2015); Santos-Sánchez et al. (2019),  dengan  adanya  senyawa  antioksidan  ini  maka  proses  penuaan,  aterosklerosis  dan kerusakan jaringan karena kanker dapat dicegah.
Senyawa aktif yang terdapat pada tumbuhan, dapat diekstraksi dengan beberapa cara, antara lain dengan  metode ekstraksi cair  tekanan uap tinggi. Metode ini  adalah suatu cara untuk  menghasilkan  ekstrak  dari  suatu  tanaman  dengan  menggunakan  pelarut  air  disertai dengan pemberian tekanan uap yang  tinggi. Cara ekstraksi ini merupakan penyederhanaan dari metode Supercritical Fluid Extraction (SFE) yang  menghasilkan suatu metode ekstraksi tekanan tinggi. Pada umumnya tekanan yang diberikan sekitar 1 hingga 15 bar pada metode ekstraksi tekanan tinggi ini.  Metode ekstraksi tekanan tinggi ini pertama kali dipelajari pada tahun 2004 dan ditemukan untuk secara efektif dan efisien dalam proses ekstraksi (Khan et al., 2019). Menurut Cardoso et al. (2013) yang menggunakan metode tekanan tinggi lebih baik dibandingkan  dengan  metode  SFE  pada  kulit Solanum  stenotum dalam  kemampuannya sebagai antioksidan.   Selain metode ekstraksi, waktu dan jumlah pelarut juga mempengaruhi mutu ekstrak yang dihasilkan. Menurut penelitian Saifullah et al. (2022), nisbah pelarut dan lama  paparan  mikrowave  mempengaruhi  hasil  rendemen  dan  total  flavonoid.      Menurut Prasad et  al. (2008),  ekstraksi  menggunakan  metode  tekanan  tinggi  lebih  baik  hasilnya dibandingkan dengan metode konsensional untuk hasil total fenolik dan antioksidan dari kulit buah  lengkeng.  Nilai  aktivitas  antioksidan  yang  kuat  dapat  diperoleh  dengan  ekstraksi menggunakan tekanan tinggi dibandingkan dengan cara ekstraksi yang lain (Lu et al., 2020). Ekstraksi  dengan  tekanan  tinggi  menunjukkan  bahwa  rendemen  yang  dihasilkan,  senyawa fenolik, aktivitas antioksidan dan anti-tirosinase dari bunga Chenopodium formosanum lebih baik dibandingkan dengan cara lainnya (Wang et al., 2022).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan akibat pengaruh variasi waktu  ekstraksi  dan  nisbah  sampel  dengan  pelarut  pada  metode  ekstraksi  tekanan  tinggi. Diharapkan  hasil  penelitian  ini  dapat  memberikan  informasi  tentang  ekstrak  yang  halal karena menggunakan pelarut air dan zat tambahan nabati seperti maltodekstrin atau bahan- bahan lain  yang sudah mempunyai sertifikat halal.

## MATERI DAN METODE

## Materi
Penelitian ini menggunakan bahan daun sirsak, metanol, serbuk vitamin C, 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil (DPPH) ,  HCL,  kloroform  (Merck),  pereaksi  Mayer,  dan  Dragendorff,  pereaksi Lieberman-Burchard,  larutan  besi  (III)  klorida  10%,  dan  maltodekstrin  (Budi  Starch  & Sweetener).
Metode Penelitian

## 1. Persiapan Simplisia (Zambrano et al., 2019)
Pada penelitian ini, daun sirsak yang digunakan diambil di kebun sekitar Balai Penelitian Tanaman  Obat  dan  Rempah-Rempah,  Bogor.  Daun  segar  dibersihkan  dengan  hati-hati  dan disortir  untuk  menghilangkan  yang  rusak  kemudian  dikeringkan  dengan  cara  menjemur dengan  sinar  matahari.  Daun  kering  digiling  menjadi  simplisia  halus  dan  disaring  dengan menggunakan  saringan  berdiameter  60  mesh,  dimasukkan  dalam  kantong  polietilen  dan disimpan pada suhu kamar (25 ± 2 °C) sampai dilakukannya analisis.
2. Penetapan Kadar Air (Zambrano et al., 2019)
Penetapan  kadar  air  menggunakan  moisture  balance.  Jumlah  bahan  yang  digunakan sebanyak 5 gram. Kemudian bahan tersebut dimasukkan dalam alat hasilnya dicatat dalam satuan persentase.
3. Penetapan Kadar Abu (Liu, 2019)
Penetapan  kadar  abu  menggunakan  cawan  yang  sduah  ditera  dan  melakukan  pijar terhadap  bahan  hingga  jadi  abu  dalam  tanur  pada  suhu  700 o C,  setelah  itu  dinginkan,  dan timbang.
𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑎𝑏𝑢 (%) =   ( (𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑐𝑎𝑤𝑎𝑛+𝑎𝑏𝑢)−𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑐𝑎𝑤𝑎𝑛 𝑘𝑜𝑠𝑜𝑛𝑔 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑙𝑒 )  𝑥100% (1)
4. Ekstraksi Daun Sirsak
a. Penentuan Pengaruh Waktu Ekstraksi (Hannachi et al., 2019)
Sebanyak  10  g  simplisia  kering  daun  sirsak  diekstraksi  dengan  alat  autoklaf  dengan menggunakan  akuades sebagai pelarut dengan perbandingan simplisia 1:1. Diatur tekanan autoklaf pada 1 (satu) atmosfer (atm).  Dilakukan ekstraksi dalam waktu yang berbeda mulai dari  1  menit  hingga  15  menit.  Kemudian  dilakukan  penyaringan  terhadap  larutan  yang diperoleh. Filtrat yang didapatkan ditambah dengan maltodextrin dengan jumlah yang sama (1:1), kemudian dengan vacuum dryer dikeringkan.  Serbuk yang terbentuk kemudian dibuat dalam  larutan  1000  ug/mL  dan  dilakukan  pengukuran  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak kering yang didapat untuk mengetahui pengaruh waktu terhadap ekstraksi.
b. Penentuan Pengaruh Nisbah Pelarut (Mustofa et al., 2019);(Wu et al., 2017)
Waktu  terbaik  ekstraksi  dengan  akuades  yang  didapat  kemudian  digunakan  sebagai dasar  untuk  penentuan  nisbah  jumlah  serbuk  simplisia  pada  ekstraksi.  Penentuan  nisbah jumlah serbuk simplisia dilakukan dengan jumblah pelarut yang sama yaitu, 300 mL akuades. Jumlah simplisia yang  digunakan yaitu  berbanding 1:10 hingga 1:50 dengan menggunakan akuades sebagai pelarut  sebanyak 300 mL yang digunakan selama waktu tertentu  dengan tekanan  1  (satu)  atmosfer  (atm).  Setelah  itu,  larutan  disaring.  Filtrat  yang  didapatkan ditambahkan  dengan  maltodextrin  sama  banyak  dengan  serbuk  simplisia  yang  ditimbang (1:1), lalu dikeringkan dengan alat pengering vakum. Serbuk yang terbentuk kemudian dibuat dalam  larutan  1000  ugmL -1 dan  dilakukan  pengukuran  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak kering  yang  didapat  untuk  mengetahui  pengaruh  nisbah  sample  dengan  pelarut  pada ekstraksi.
c. Analisis Fitokimia Ekstrak Daun Sirsak
Uji fitokimia yang meliputi alkaloid, flavonoid, steroid, saponin, dan tannin mengikuti prosedur  Hasan et al. (2016).
d. Uji Aktivitas Antioksidan DPPH (Huang et al., 2019)
Pekerjaan  yang  pertama  dilakukan  pada  pengujian  antioksidan  adalah  menentukan waktu  inkubasi  yang  menghasilkan  aktivitas  antioksidan  maksimum.  Selanjutnya  adalah membuat larutan uji yang terdiri dari larutan DPPH yang ditambahkan metanol.
Pengujian antioksidan dilakukan dengan menggunakan spektrometer.  Kontrol positif menggunakan vitamin C.   Persentase penghambatan dihitung menggunakan persamaan :
Penghambatan (%) = Aborban Blanko−Absorban Sampel Absorban Blanko X 100%                              (2) Dengan diperolehnya nilai dalam selang yang tertentu maka diperoleh nilai IC 50 yang meruapakan garis perpotongan antara daya hambat (%) dengan konsentrasi (Damasuri et al., 2020).

## Analisis Data
Pengolahan data yang dihasilkan dilakukan dengan metode RSM (Montgomery, 2013). Data hasil dan variable diolah menggunakan software Minitab 14 ( trial ).   Rancangan yang dilakukan untuk penelitian ini berdasarkan peneilitian pendahuluan dari waktu pemanasan dengan  tekanan  tinggi  dan  nisbah  sample  dengan  pelarut.    Minitab  Release  14  (trial) digunakan sebagai bantuan dalam analisis statistika.   Adapun model persamaan yang akan diterapkan adalah Y=  0 +  = k i 1  i X i +  = k i 1  ii X 2 i +   j i  ij X i X j +  ij , dengan Y : respon (rendemen atau  aktivitas  antioksidan),  0 :  tetapan,  i,  ii,  ij :  koefesien  variabel  bebas  (X),  X i adalah variabel bebas dengan tanpa sandi (waktu = X i taraf 3.2, 4, 6, 8, dan 8.8 menit ; nisbah pelarut air-sampel = X 2 taraf  nisbah 1 dengan 21.7, 30, 50, 70, dan 78.3, dan  adalah galat (Tabel 1). Tabel 1.  RSM dengan kecocokan model CCD waktu ekstraksi dan nisbah pelarut dengan
sampel Perlakuan Satuan Level - α -1 0 1 α Waktu (x1) Menit 3,2 4 6 8 8,8 Nisbah akuades – sampel µgmL -1 21,7 30 50 70 78,3

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penetapan kadar air sample simplisia sebesar 9.15%,  sedangkan kadar air ekstrak kering berdasarkan rancangan perlakuan dengan metode RSM berkisar antara 3,10%-4,16%. Menurut  ketentuan  BPOM  (2014)  bahwa  kadar  air  suatu  sample  harus ≤ 10%.    Kadar  ini berhubungan  dengan  medium  tumbuh  bagi  bakteri  dan  mikroorganisme.    Sebagai  contoh kadar air simplisia dari Clerodendrum minahassae mempunyai kadar air ≤ 10% (Utami et al., 2017).   Hasil penentuan kadar abu total  diperoleh rata-rata sebesar 1.96 %.  Kadar abu ini sangat  bervariasi  antara  satu  bahan  dengan  bahan  lainnya  (Indriyanti et  al., 2017). Kandungan mineral suatu bahan ditentukan dari kadar abu total (BPOM, 2014).
Secara  kwalitatif  kandungan  fitokimia  ekstrak  adalah  flavonoid,  steroid,  saponin  dan tanin, steroid, dan saponin (Tabel 2).  Komponen alkaloid tidak terdeteksi pada ekstrak daun sirsak.
Keberadaan flavonoid menurut Kumar & Pandey (2013) dengan melihat pembentukan warna merah, jingga atau kuning pada lapisan amilalkohol.  Hal ini disebabkan oleh adanya reaksi antara magnesium dengan flavonoid. Menurut  (Chaves et al., 2020) senyawa flavonoid yang  bersifat  polar  karena  adanya  gugus  gula  yang  terikat  pada  senyawa  flavonoid
menjadikan  senyawa  ini  mudah  larut  dalam  air.  Adapun  keberadaan  saponin  yang ditunjukkan dengan adanya buih menunjukkan gugus hidrofob yang berikatan dengan udara (Góral & Wojciechowski, 2020).
Tabel 2. Hasil uji fitokimia ekstrak daun sirsak ( Annona muricata L.) Analisis Ekstrak kering (waktu terbaik) Ekstrak kering (nisbah terbaik Alkaloid - - Flavonoid + + Steroid + + Saponin + + Tannin + +
Keterangan : (+) positif = terdeteksi ada senyawa, (-) negatif = tidak terdeteksi ada senyawa
Hasil  penentuan  waktu  ekstraksi  ditampilkan  pada  Tabel  3.    Hasil  perhitungan rendemen ekstrak diperoleh  bahwa waktu terbaik terletak pada 6 menit dengan nisbah 1:30. Menurut  Kristanti et  al. (2019),  waktu  ini  sangat  berpengaruh  terhadap  rendemen  hasil ekstraksi.   Namun tidak semua pengaruh waktu berbanding lurus dengan rendemen yang dihasilkan.
Tabel 3. Rendemen ekstrak kering daun sirsak berdasarkan waktu  ekstraksi
Waktu (menit) Nisbah Bobot awal(g) Bobot Malto(g) Bobot Akhir+malto(g) Rendemen 1 1:30 10.03 10.03 8,09 40,33% 2 1:30 10.03 10.02 8,33 41,54% 3 1:30 10.02 10.03 10,31 51,42% 4 1:30 10.03 10.03 9,22 45,96% 5 1:30 10.02 10.04 9,77 48,70% 6 1:30 10.02 10.01 11,02 55,02% 7 1:30 10,03 10,02 10,66 53,17% 8 1:30 10,02 10,03 10,23 51,02% 9 1:30 10,04 10,04 9,94 49,50% 10 1:30 10,01 10,02 9,49 46,75% 11 1:30 10,02 10,03 9,24 46,08% 12 1:30 10,03 10,01 9,32 46,51% 15 1:30 10,01 10,02 9,27 46,28%
Pada  Tabel  3  terlihat  pula  bahwa  dalam  waktu  15  menit  rendemen  yang  diperoleh sebesar  46.28  %.  Hal  yang  serupa  terlihat  pada  penelitian  Kristanti et  al. (2019)  bahwa penambahan waktu 6 menit hanya menambah nilai rendemen sebanyak 0.67 %.  Kenaikan rendemen  sekitar  0.84%  dialami  oleh  Putra et  al. (2020)  pada  ekstraksi  kulit  buah  kakao. Menurut Ince et al. (2013) penambahan bahan terlarut akan terhenti setelah kondisi optimum. Adanya  kondisi  rendemen  yang  tidak  berbanding  lurus  dengan  waktu  ini  ditemukan  juga dalam penelitian Yudharini et al. (2016).
Tabel 4. Rendemen ekstrak kering daun sirsak berdasarkan nisbah
Waktu (menit) Nisbah Bobot awal(g) Bobot Malto(g) Bobot Akhir+malto(g) Rendemen 6 1:10 30.03 30.01 28.53 47.52% 6 1:20 15.05 15.03 14.66 48.74% 6 1:30 10.02 10.03 10.31 51.42% 6 1:40 7.52 7.54 8.42 55.90% 6 1:50 6.04 6.03 7.65 63.34%
Berdasarkan  hasil  dalam  Tabel  3,  digunakan  untuk  menentukan  pengaruh  nisbah sampel (g) dengan pelarut air pada perbandingan 1:10, 1:20 1:30,  1:40 dan 1:50 terhadap rendemen  hasil  ekstraksi.  Hasil  pengaruh  nisbah  sample  dengan  pelarut  air  dengan  lama waktu ekstraksi 6 menit disajikan pada Tabel 4. Makin besar nisbah sampel dengan pelarut makin besar rendemen hasil yang diperoleh. Hal tersebut sesuai dengan pernyataan Yudharini et  al. (2016),  bahwa  makin  besar  jumlah  pelarut  makin  besar  pula  jumlah  rendemen  yang diperoleh.
Pada pengukuran aktivitas antioksidan diperoleh hasil yang ditunjukkan pada Gambar 1.  Dari Gambar 1 tersebut terlihat bahwa dengan waktu ekstraksi 6 menit pada nisbah 1:50 didapatkan nilai IC 50 sebesar 89,75 ug/mL.  Selain mempengaruhi nilai IC 50 , nisbah sampel dan pelarut ini  juga mempengaruhi % rendemen yang didapat, makin kecil serbuk simplisia yang  digunakan  maka  makin  besar  %  rendemen  yang  dihasilkan.  Selama  ekstraksi berlangsung  maka  akan  terurai  komponen  tersekstrak  dari  sampel  dan  makin  besar rendemen yang diperoleh.  Hal ini menunjukkan bahwa komponen terekstrak makin banyak (Stéphane  &  Batiha,  2012).  Oleh  karena  itu  kemungkinan  banyaknya  komponen  yang terekstrak  akan  berpengaruh  terhadap  keaktifannya  sebagai  bahan  antioksidan (Yulianingtyas & Kusmartono, 2016).

## Gambar 1. Penentuan nisbah terbaik
Perolehan  waktu  terbaik  dan  nisbah  terbaik  dilanjutkan  melakukan  optimasi menggunakan metode respon permukaan (RSM).   Hasil yang diperoleh disajikan pada Tabel 5.    Pada  Tabel  5  terlihat  rendemen  maksimum  terdapat  pada  sampel  no  5  pada  waktu pemanasan 6 menit dan nisbah akuades – daun sirsak 300 mL dengan bobot simplisia yang ditambah  maltodextrin  7,69  gram  dan  bobot  ekstrak  didapatkan  4,92  gram  yang menghasilkan  persentase  rendemen  63,98  %,  dan  nilai  rendemen  minimal  terdapat  pada sampel no 3 pada waktu pemanasan 8 menit dan nisbah akuades – daun sirsak 300 mL dengan bobot simplisia yang ditambah maltodextrin menjadi 20,06 gram namun pada kondisi akhir bobot ekstrak yang dihasilkan sebanyak 6,55 gram atau mempunyai rendemen 32,65 %.
Tabel 5. Nilai rendemen ekstak daun sirsak berdasarkan RSM
No  Waktu (Menit)  Nisbah Bobot Awal (g) Bobot Malto (g) Bobot Akhir+ Malto(g) Rendemen 1 6 1:22 13.64 13.65 12.41 45.47% 2 6 1:50 6.03 6.02 7.66 63.57% 3 8 1:30 10.04 10.02 6.55 32.65% 4 6 1:50 6.05 6.02 7.61 63.05% 5 6 1:78 3.85 3.84 4.92 63.98% 6 4 1:30 10.04 10.03 9.21 45.89% 7 9 1:50 6.04 6.02 6.89 57.13% 8 8 1:70 4.28 4.28 4.12 48.13% 9 6 1:50 6.02 6.03 7.65 63.49% 10 4 1:70 4.28 4.26 4.42 51.76% 11 3 1:50 6.04 6.03 4.66 38.61% 12 6 1:50 6.04 6.02 7.72 60.31% 13 6 1:50 6.03 6.03 7.35 60.95%
89,75 0 100 200 300 01:10 01:20 01:30 01:40 01:50 N ilai IC50 ( µg m L -1 ) Nisbah sampel dengan pelarut nilai IC 50
Makin besar pelarut yang digunakan saat mengekstrak, makin besar kesempatan bahan terekstrak akhirnya akan makin besar pula rendemen yang diperoleh.  Hal ini berhubungan dengan adanya ruang dalam pelarut yang diisi oleh bahan terekstrak sehingga mengakibatkan rendemen menjadi lebih banyak (Zhang et al., 2018). Berdasarkan hasil rendemen pada Tabel 5 tersebut kemudian diperoleh persamaan :
Y = -51,9692 + 24,2030 X 1 + 1,2984 X 2 (3)
Persamaan RSM tersebut menunjukan bahwa perubahan waktu mempunyai pengaruh terhadap hasil ekstrak.  Nilai koefisien waktu  ekstraksi (X 1 ) memiliki nilai yang lebih besar daripada  nisbah  (X 2 ).  Hasil  rendemen  ekstrak  banyak  dipengaruhi  oleh  waktu  ekstraksi dengan perubahaan nisbah dalam autoklaf (Orak et al., 2019) .
Dilihat dari Gambar 2 di atas dapat disimpulkan nilai rendemen optimal didapatkan pada waktu optimal  6  menit  dengan  nisbah  antara 1:60  sampai  1:70.  Hasil  tersebut  merupakan daerah  zona  dengan  rendemen  lebih  dari  60%.  Berdasarkan  persamaan  pada  rancangan statistik RSM, waktu optimum dan nisbah dihasilkan pada waktu 6.3 menit dan nisbah 1:61.2 memperoleh rendemen sebesar 64,1%.  Untuk verifikasi hasil dugaan berdasarkan persamaan tersebut, maka dilakukan pengulangan ekstraksi pada kondisi optimum dan diperoleh nilai rendemen sebesar 62,51%.   Dengan melakukan pengurangan nilai rendemen antara dugaan dan hasil verifikasi ekstraksi diperoleh nilai perbedaan sebesar 2.48%.   Adanya perbedaan antara hasil ekstraksi dengan nilai dugaan ini adalah merupakan hal yang lumrah,  seperti hal yang dijumpai pada penelitian Koocheki et al. (2009).  Perbedaan hasil dugaan dari persamaan RSM dengan hasil verifikasi pada penelitian Faustin et al. (2017), dijumpai sebesar 3.06%.
Gambar 2. Countour plot respon optimasi rendemen Dari Gambar 3, tampak bahwa hasil % rendemen meningkat pada nisbah akuades – daun sirsak 1:40 sampai berkisar antara 1:70 dan 1:80 dan pada waktu ekstraksi dalam kisaran 5- 7 menit. Dan penurunan hasil ekstraksi terlihat setelah pada menit ke 8. Hal ini dikarenakan pemanasan tinggi pada waktu yang lama menyebabkan komponen pada daun sirsak rusak atau komponen pada daun sirsak tersebut tidak terlarut lagi (Cornelia et al., 2019).
Gambar 3. Surface plot 3D untuk hasil rendemen
waktu ni sb ah 8 7 6 5 4 70 60 50 40 30 > – – – <   30 30 40 40 50 50 60 60 rendemen % Contour Plot of % rendemen vs nisbah, waktu 20 40 4 6 60 80 60 40 20 8 % rendemen nisbah waktu
Surface Plot of % rendemen vs nisbah, waktu
Hasil aktivitas antioksidan dapat dilihat pada Tabel 6.   Aktivitas antioksidan maksimum terdapat pada sampel no 5 pada waktu pemanasan 6 menit dan nisbah 3,85 gram : 300 mL yang  menghasilkan  nilai  IC 50 sebesar  52.81  ug  mL -1 dan  aktivitas  antioksidan  minimum terdapat pada sampel no 6 pada waktu ekstraksi 4 menit dan nisbah akuades – simplisia 10 gram : 300 mL yang menghasilkan nilai IC 50 118.55 ug mL -1 .
Dari Tabel 4 diperoleh persamaan :
Y = 171.98 + 13.83 X 1 – 4.11 X 2 (4)
Persamaan  tersebut  menunjukan  bahwa  perubahaan  waktu  mempunyai  pengaruh terhadap  hasil  ekstrak  sama  halnya  seperti  pada  persamaan  RSM  pada  rendemen.  Hal  ini dapat  dilihat  dari  koefisien  waktu  ekstraksi  (X 1 )  yang  memiliki  nilai  lebih  besar  daripada nisbah akuades – daun sirsak (X 2 ). Hasil ekstrak banyak terpengaruhi waktu ekstraksi dengan perubahaan nisbah dalam autoklaf.
Tabel 6. Hasil aktivitas antioksidan ekstrak daun sirsak No Waktu (menit) Nisbah Nilai IC 50 (µgmL -1 ) 1 6 1:22 156.54 2 6 1:50 88.57 3 8 1:30 130.50 4 6 1:50 90.99 5 6 1:78 52.81 6 4 1:30 118.55 7 9 1:50 101.00 8 8 1:70 85.83 9 6 1:50 95.30 10 4 1:70 67.77 11 3 1:50 57.15 12 6 1:50 89.25 13 6 1:50 86.52
Dilihat dari Gambar 4 dapat disimpulkan bahwa waktu pemanasan mempengaruhi nilai IC 50 dimana dengan waktu ekstraksi yang semakin lama menghasilkan nilai IC 50 > 150, yang menandakan  bahwa  antioksidan  bersifat  kurang  aktif.  Waktu  optimum  dan  nisbah  pada rancangan statistik RSM diperoleh yaitu selama 4.3 menit dan nisbah akuades – daun sirsak 1:78.2 dapat diperoleh nilai IC 50 sebesar 52.8 ug mL -1 .
Gambar 4. Contour plot respon optimasi nilai IC 50 Setelah  dilakukan  pengulangan  untuk  nilai  optimum  yang  diperoleh  pada  waktu ekstraksi 4.3 menit dan nisbah akuades – daun sirsak 1:78.2 diperoleh nilai IC 50 sebesar 55.25 µgmL -1 . Nilai yang diperoleh tidak menunjukan hasil nilai optimasi pada rancangan statistic RSM dengan kecocokan model CCD pada nilai IC 50 52.8 ugmL -1 .  Hasil ini menunjukan bahwa
waktu n is b a h 8 7 6 5 4 70 60 50 40 30 > – – – – <   50 50 75 75 100 100 125 125 150 150 Nilai IC50 Contour Plot of Nilai IC50 vs nisbah, waktu
nilai IC 50 hasil persamaan terkoreksi dengan adanya pengulangan tersebut.  Apabila dihitung, maka terjadi penyimpangan sebesar 4.43%.  Nilai koreksi ini merupakan hal yang biasa ada dalam  suatu  rancangan  RSM  dibandingkan  dengan  hasil  verifikasinya  (Hasan et  al., 2013). Menurut Faustin et al. (2017) perbedaan aktivitas antioksidan antara nilai optimum dengan hasil verifikasi dapat mencapai 3.06%.

## KESIMPULAN
Diperoleh  aktivitas  antioksidan  tertinggi  yaitu  52.81%  pada  lama  waktu  ekstraksi  6 menit  dan  nisbah  akuades – serbuk  simplisia  daun  sirsak  sebesar  1:78.    Hasil  analisa persentase rendemen ekstrak menggunakan analisis RSM diduga memiliki waktu ekstraksi 6.3 menit dan nisbah akuades – simplisia serbuk daun sirsak 1:78.2 menghasilkan rendemen yang optimum sebanyak 64.07%.   Aktivitas antioksidan optimal pada nilai IC50 sebesar 52.8 µgmL -1 diduga pada waktu ekstraksi 4.3 menit dan nisbah sample dan pelarut air 1:78.2.  Hasil verifikasi rendemen dan aktivitas antioksidan terjadi penyimpangan masing-masing sebesar 2.48% dan 4.43%.

## DAFTAR PUSTAKA
BPOM. (2014). Persyaratan Mutu Obat Tradisional. Badan Pengawas Obat Dan Makanan , 1 – 25.
Budiarti, A., Ulfah, M., & Oktania, F. A. (2016). Aktivitas Antioksidan Fraksi Kloroform Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata L.) dan Identifikasi Kandungan Senyawa Kimianya. Prosiding SNST Ke-5 Fakultas Teknik Universitas Wahid Hasyim Semarang , 2006 , 7 – 12.
Cardoso, L. C., Serrano, C. M., Quintero, E. T., López, C. P., Antezana, R. M., & De La Ossa, E. J. M.
(2013). High pressure extraction of antioxidants from Solanum stenotomun peel. Molecules ,
18 (3), 3137 – 3151. https://doi.org/10.3390/molecules18033137
Chaves, J. O., de Souza, M. C., da Silva, L. C., Lachos-Perez, D., Torres-Mayanga, P. C., Machado, A. P. da F., Forster-Carneiro, T., Vázquez-Espinosa, M., González-de-Peredo, A. V., Barbero, G.  F.,  &  Rostagno,  M.  A.  (2020).  Extraction  of  Flavonoids  From  Natural  Sources  Using Modern Techniques. Frontiers in Chemistry , 8 . https://doi.org/10.3389/fchem.2020.507887
Chowdhury, S. S., Tareq, A. M., Tareq, S. M., Farhad, S., & Sayeed, M. A. (2021). Screening of antidiabetic  and  antioxidant  potential  along  with  phytochemicals  of  Annona  genus:  a review. Future Journal of Pharmaceutical Sciences , 7 (1). https://doi.org/10.1186/s43094- 021-00300-9
Cornelia, M., Natania, K., Cahyana, H., & Sutiyono, E. (2019). Encapsulation of Soursop (Annona muricata  Linn.)  Leaf  Tea  Extract  Using  Natural  Mucilage. Reaktor , 19 (1),  26 – 33. https://doi.org/10.14710/reaktor.19.1.26-33
Damasuri, A. R., Sholikhah, E. N., & Mustofa. (2020). Cytotoxicity of ((E)-1-(4-aminophenyl)-3- phenylprop-2-en-1-one))  on  HeLa  cell  line. Indonesian  Journal  of  Pharmacology  and Therapy , 1 (2), 54 – 59. https://doi.org/10.22146/ijpther.606
Faustin, S. D., Selestin, D., & Njintang, Y. N. (2017). Aqueous Extraction Optimization of the Antioxidant  and  Antihyperglycemic  Components  of  Boscia  Senegalensis  Using  Central Composite Design Methodology.
Food Science & Nutrition , 3 (1),
1 – 7. https://doi.org/10.24966/fsn-1076/100015
Gavamukulya, Y., Wamunyokoli, F., & El-Shemy, H. A. (2017). Annona muricata: Is the natural therapy to most disease conditions including cancer growing in our backyard? A systematic
review  of  its  research  history  and  future  prospects. Asian  Pacific  Journal  of  Tropical Medicine , 10 (9), 835 – 848. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.apjtm.2017.08.009 Góral, I., & Wojciechowski, K. (2020). Surface activity and foaming properties of saponin-rich plants  extracts. Advances  in  Colloid  and  Interface  Science , 279 ,  102145. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.cis.2020.102145
Hannachi,  H.,  Benmoussa,  H.,  Saadaoui,  E.,  Saanoun,  I.,  Negri,  N.,  &  Elfalleh,  W.  (2019).
Optimization  of  ultrasound  and  microwave-assisted  extraction  of  phenolic  compounds from  olive  leaves  by  response  surface  methodology. Research  Journal  of  Biotechnology ,
14 (7), 28 – 37.
Hasan, A. E. Z., Mangunwidjaja, D., Sunarti, T. C., Suparno, O., & Setiyono, A. (2016). Antibreast cancer activity of nanopropolis Indonesia on induced mammary gland tumor by dmba in virgin sprague-dawley rats.
Biotropia , 23 (1), 35 – 41. https://doi.org/10.11598/btb.2016.23.1.473
Hasmila,  I.,  Natsir,  H.,  &  Soekamto,  N.  H.  (2019).  Phytochemical  analysis  and  antioxidant activity  of  soursop  leaf  extract  (Annona  muricata  Linn.). Journal  of  Physics:  Conference Series , 1341 (3). https://doi.org/10.1088/1742-6596/1341/3/032027
Huang, H. W., Cheng, M. C., Chen, B. Y., & Wang, C. Y. (2019). Effects of high pressure extraction on  the  extraction  yield,  phenolic  compounds,  antioxidant  and  anti-tyrosinase  activity  of Djulis  hull. Journal  of  Food  Science  and  Technology , 56 (9),  4016 – 4024. https://doi.org/10.1007/s13197-019-03870-y
Ince, A. E., Şahin, S., & Şümnü, S. G. (2013). Extraction of phenolic compounds from melissa using microwave and ultrasound. Turkish Journal of Agriculture and Forestry , 37 (1), 69 – 75. https://doi.org/10.3906/tar-1201-1
Indriyanti,  E.,  Purwaningsih,  Y.,  &  Wigati,  D.  (2017).  Skrining  Fitokimia  dan  Standarisasi. Cendekia Eksakta , 3 (2), 20 – 25.
Khan, S. A., Aslam, R., & Makroo, H. A. (2019). High pressure extraction and its application in the  extraction  of  bio-active  compounds:  A  review. Journal  of  Food  Process  Engineering ,
42 (1), e12896. https://doi.org/https://doi.org/10.1111/jfpe.12896
Koocheki,  A.,  Taherian,  A.  R.,  Razavi,  S.  M.  A.,  &  Bostan,  A.  (2009).  Response  surface methodology for optimization of extraction yield, viscosity, hue and emulsion stability of mucilage  extracted  from  Lepidium  perfoliatum  seeds. Food  Hydrocolloids , 23 (8),  2369 – 2379. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.foodhyd.2009.06.014
Kristanti, Y., Widarta, I. W. R., & Permana, I. D. G. M. (2019). Pengaruh Waktu Ekstraksi dan Konsentrasi Etanol Menggunakan Metode Microwave Assisted Extraction (MAE) Terhadap Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Rambut  Jagung  (Zea  mays  L.). Jurnal  Ilmu  Dan  Teknologi Pangan (ITEPA) , 8 (1), 94. https://doi.org/10.24843/itepa.2019.v08.i01.p11
Kumar,  S.,  &  Pandey,  A.  K.  (2013).  Chemistry  and  Biological  Activities  of  Flavonoids:  An Overview. The Scientific World Journal , 2013 , 162750.
https://doi.org/10.1155/2013/162750
Liu, K. (2019). Effects of sample size, dry ashing temperature and duration on determination of  ash  content  in  algae  and  other  biomass. Algal  Research , 40 ,  101486. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.algal.2019.101486
Montgomery, D. C. (2013). Design and Analysis of Experiments Eighth Edition. Arizona State University. In Copyright (Vol. 2009, Issue 2005).
Mustofa, S., Alfa, N., Wulan, A. J., Rakhmanisa, S., Biokimia, B., Molekular, B., Fisiologi, D., &
Kedokteran,  F.  (2019).  Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Kulit  Batang  Bakau  Minyak (Rhizophora  apiculata)  Etanol  95  %  terhadap  Arteri  Koronaria  Tikus  Putih  (Rattus novergicus) Jantan Galur Sprague dawley yang Dipaparkan Asap Rokok. Jurnal Kedokteran Universitas Lampung , 3 (1), 28 – 33. http://juke.kedokteran.unila.ac.id/index.php/JK/article/view/2200
Mutakin, M., Fauziati, R., Fadhilah, F. N., Zuhrotun, A., Amalia, R., & Hadisaputri, Y. E. (2022).
Pharmacological  Activities  of  Soursop  (Annona  muricata  Lin.). Molecules , 27 (4),  1 – 17. https://doi.org/10.3390/molecules27041201
Orak, H. H., Bahrisefit, I. S., & Sabudak, T. (2019). Antioxidant activity of extracts of soursop (Annona  muricata  L.)  leaves,  fruit  pulps,  peels,  and  seeds. Polish  Journal  of  Food  and Nutrition Sciences , 69 (4), 359 – 366. https://doi.org/10.31883/pjfns/112654
Putra, I. K. W., Putra, G. P., & Wrasiati, L. P. (2020). Pengaruh Perbandingan Bahan dengan Pelarut  dan  Waktu  Maserasi  terhadap  Ekstrak  Kulit  Biji  Kakao  (Theobroma  cacao  L.) sebagai  Sumber  Antioksidan. Jurnal  Rekayasa  Dan  Manajemen  Agroindustri , 8 (2),  167. https://doi.org/10.24843/jrma.2020.v08.i02.p02
Saifullah, M., Akanbi, T. O., McCullum, R., & Van Vuong, Q. (2022). Optimization of commercial microwave  assisted-extraction  conditions  for  recovery  of  phenolics  from  lemon-scented tee  tree  (Leptospermum  petersonii)  and  comparison  with  other  extraction  techniques. Foods , 11 (1). https://doi.org/10.3390/foods11010050
Santos-Sánchez,  N.  F.,  Salas-Coronado,  R.,  Villanueva-Cañongo,  C.,  &  Hernández-Carlos,  B.
(2019).  Antioxidant  Compounds  and  Their  Antioxidant  Mechanism.  In  E.  Shalaby  (Ed.), Antioxidants . IntechOpen. https://doi.org/10.5772/intechopen.85270
Shahidi,  F.,  &  Zhong,  Y.  (2015).  Measurement  of  antioxidant  activity. Journal  of  Functional Foods , 18 , 757 – 781. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.jff.2015.01.047
Stéphane,  F.  F.  Y.,  Jules,  B.  K.  J.,  Batiha,  G.  E.-S.,  Ali,  I.,  &  Bruno,  L.  N.  (2012).  Extraction  of Bioactive  Compounds  from  Medicinal  Plants  and  Herbs.  In Intech (p.  13). http://dx.doi.org/10.1039/C7RA00172J%0A
Sumarni,  W.,  Sudarmin,  S.,  &  Sumarti,  S.  S.  (2019).  The  scientification  of  jamu:  A  study  of Indonesian’s  traditional  medicine. Journal  of  Physics:  Conference  Series , 1321 (3). https://doi.org/10.1088/1742-6596/1321/3/032057
Utami, Y. P., Umar, A. H., Syahruni, R., & Kadullah, I. (2017). Standardisasi Simplisia dan Ekstrak Etanol Daun Leilem ( Clerodendrum. Journal of Pharmaceutical and Medicinal Sciences , 2 (1), 32 – 39.
Wahab, S. M. A., Jantan, I., Haque, M. A., & Arshad, L. (2018). Exploring the leaves of Annona muricata L. as a source of potential anti-inflammatory and anticancer agents. Frontiers in Pharmacology , 9 (JUN), 1 – 20. https://doi.org/10.3389/fphar.2018.00661
Wang, W. H., Li, W. L., Chen, C. Y., Chang, M. Y., Huang, S. L., Shih, C. H., & Lin, Y. S. (2022).
Antioxidant ability of Chenopodium formosanum extracted using an ethanol – ammonium sulfate two-phase system. Chemical and Biological Technologies in Agriculture , 9 (1), 1 – 9. https://doi.org/10.1186/s40538-022-00283-6
Wu, S. J., Chen, Y. W., Wang, C. Y., & Shyu, Y. T. (2017). Anti-inflammatory properties of high pressure-assisted extracts of Grifola frondosa in lipopolysaccharide-activated RAW 264.7 macrophages. International  Journal  of  Food  Science  \&  Technology , 52 (3),  671 – 678. https://doi.org/https://doi.org/10.1111/ijfs.13320
Yudharini,  G.  A.  K.  F.,  Suryawan,  &  Wartini,  N.  M.  (2016).  Pengaruh  perbandingan  bahan
dengan pelarut dan lama ekstraksi terhadap rendemen dan karakteristik ekstrak pewarna dari buah pandan (Pandanus tectorius). Jurnal Rekaya Dan Manajemen Argoindustri , 4 (3), 36 – 46.
Yulianingtyas,  A.,  &  Kusmartono,  B.  (2016).  Optimasi  Volume  Pelarut  Dan  Waktu  Maserasi Pengambilan  Flavonoid  Daun  Belimbing  Wuluh  (Averrhoa  Bilimbi  L.)  Optimization  of Solvent Volume and Maceration Time on Extraction of Flavonoids From Averrhoa Bilimbi Leaves. Jurnal Teknik Kimia , 10 (2), 58 – 64.
Zambrano, M. V., Dutta, B., Mercer, D. G., MacLean, H. L., & Touchie, M. F. (2019). Assessment of moisture content measurement methods of dried food products in small-scale operations in developing countries: A review. Trends in  Food Science and Technology , 88 (December 2018), 484 – 496. https://doi.org/10.1016/j.tifs.2019.04.006
Zhang, Q. W., Lin, L. G., & Ye, W. C. (2018). Techniques for extraction and isolation of natural products:  A  comprehensive  review. Chinese  Medicine  (United  Kingdom) , 13 (1),  1 – 26. https://doi.org/10.1186/s13020-018-0177-x