Pengaruh Penggunaan Tris Dalam Pengencer Susu Skim Terhadap Resistensi Spermatozoa Sapi Simmental Pasca Pembekuan

## Fachroerrozi Hoesni
Fakultas Peternakan Universitas Jambi Kampus Pinang Masak Jl. Jambi-Muaro Bulian KM . 15 Mendalo Darat Jambi
Intisari
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh penggunaan tris dalam susu pengencer skim terhadap  resistens  spermatozoa  sapi  Simmental  setelah  pembekuan.  Rancangan  penelitian  yang digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Kelompok  dengan  5  perlakuan  dan  6  kelompok  ejakulasi. Seperti untuk pengobatan P 0 = 93% pengencer susu skim  tanpa tris + pengencer tris + 20% + 7% gliserol, P 1 = 83% skim susu pengencer tris + 10% + 7% gliserol, P 2 = 73% susu skim 4 = skim susu pengencer  trsi 53% + 40% + 7% gliserol, P 3 = susu skim pengencer tris 63% + 30% + 7% gliserol, P +  7%  gliserol  dan  P 4 =  susu  skim  pengencer  tris  53%  + 40%  + 7%  gliserol,  P  + 7%  gliserol. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penggunaan susu skim dalam  pengencer tris pada perlakuan P 2 berbeda sangat nyata (P <0,01) dalam mempertahankan kelangsungan hidup spermatozoa setelah pembekuan  sapi  Simmental.  Hasil  penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa  penggunaan  tris  dalam susu  dilusi  skim  sampai  sebatas  20%  untuk  menjaga  vitalitas  spermatozoa  setelah  pembekuan sapi Simmental.
Keyword: Skim Milk Dilusi, Daya Tahan, Spermatozoa

## Abstract
This  study  aimed  to  determine  the  effect  of  the  use  of  tris  in  skim  milk  diluent  in  immune Simmental  cattle  spermatozoa  after  freezing.  Randomized  block  design  with  5  treatments  and  6 blocks of ejaculation was applied. The treatments were P 0 = 93% skim milk diluent without tris + + 7% glycerol, P 1 = 83% skim milk diluent tris + 10% + 7% glycerol, P 2 = 73% skim milk diluent tris + 20% + 7% glycerol, P 3 = skim milk diluent tris 63% + 30% + 7% glycerol, P 4 = skim milk diluent trsi 53%  +  40%  +  7%  glycerol.  The  results  showed  that  the  use  of  skim  milk  diluent  tris  in  the  P 2 treatment  exert  a  highly  significant  (P  <0.01)  in  maintaining  the  survival  of  spermatozoa  after freezing  Simmental  cattle.  The  results  of  this  study  concluded  that  the  use  of  tris  in  skim  milk dilution  to  the  extent  of  20%  to  maintain  the  vitality  of  spermatozoa  after  freezing  Simmental cattle.
Keyword :  Skim Milk Dilution, Resistance, Spermatozoa

## Pendahuluan
Inseminasi  buatan  merupakan salah  satu  metode  perkawinan  yang efektif    untuk  menghasilkan  mutu genetik  ternak  yang  unggul.  Pelak- sanaan inseminasi buatan diperlukan ketersediaan  semen  secara  kontinyu dengan  kualitas  dan  kuantitas  baik serta mempunyai daya fertilitas yang tinggi.  Dalam  hal  ini  upaya  untuk menjamin  ketersediaan  semen  yang dibutuhkan  dalam  setiap  saat  dan keadaannya  masih  baik  serta  layak
untuk  inseminasi  dapat  dilakukan dengan mengawetkan semen.
Pengawetan  semen  adalah usaha  untuk  memperpanjang  daya hidup  spermatozoa,  motilitas,  dan fertilitasnya.  Penggunaan  pengencer dimaksudkan  untuk  mengurangi kepadatan  spermatozoa  serta  men- jaga  kelangsungan  hidup  sperma- tozoa  sampai  batas  waktu  tertentu pada  kondisi  penyimpanan  di  atas atau  di  bawah  titik beku.  Kehidupan spermatozoa  dapat  bertahan  lama merupakan  salah  satu  bentuk  nyata
bahwa  media  pengencer  yang digunakan  cocok.  Media  pengencer harus  dapat  menyediakan  zat-zat makanan,  tidak  bersifat  racun  dan sebagai  penyangga  (buffer).  Semen sapi  yang  diperoleh  dari  pejantan, memiliki  volume  yang  sedikit  dan tidak dapat bertahan lama pada suhu kamar.  Untuk  menambah  volume sehingga  lebih  banyak  ternak  betina yang  dapat  diinsemintasi  dari  satu ejakulat,  perlu  dilakukan  pengen- ceran dengan larutan pengencer yang secara fisik dan kimia dapat menjaga spermatozoa dari kerusakan.
Bahan  pengencer  yang  diguna- kan  harus  mempunyai  syarat  antara lain  tidak  mengandung  toksin,  (baik terhadap  spermatozoa  alat  repro- duksi  betina),  mudah  didapat, praktis.  Sedangkan  fungsinya  adalah menyediakan zat-zat makanan sebagai sumber energi bagi spermatozoa,  menyediakan  suatu penyangga  (buffer)  untuk  mencegah perubahan  pH  akibat  pembentukan asam  laktat  dari  hasil  metabolisme spermatozoa, mempertahankan tekanan  osmotik  dan  keseimbangan elektrolit  yang  sesuai  dengan  dan mencegah pertumbuhan kuman.
Larutan tris merupakan larutan yang  mengandung  asam  sitrat  dan fruktosa  yang  berperan  sebagai penyangga  (buffer)  untuk  mencegah perubahan  pH  akibat  asam  laktat dari  hasil  metabolisme  spermatozoa serta mempertahankan tekanan osmotic dan keseimbangan elektrolit, sumber  energi  dan  melindungi spermatozoa  dari  kejut  dingin  (cold shock) (Djanuar, 1985).
Susu  skim  merupakan  bahan pengencer  yang  banyak  digunakan karena  susu  dapat  melindungi
spermatozoa  dari  kejut  dingin dengan  daya  pelindung  berupa lipoprotein  dan  lesitin  yang  bekerja pada  selubung  sel  spermatozoa disamping  itu  susu  skim  juga mengandung glukosa, protein, vitamin yang larut dalam lemak yang menguntungkan  bagi  sel  sperma- tozoa (Djanuar, 1985).
Pembekuan adalah suatu fenomena  pengeringan  fisik.  Apabila suatu  larutan  dibekukan,  maka pelarut  yang  air  membeku  menjadi Kristal–Kristal  es, dan  bahan  terlarut tidak bersatu dengan kristas – Kristal tersebut  melainkan  berakumulasi dan  makin  pekat.  Kristal-kristas  es entraseluler  dapat  merusak  sperma- tozoa  secara  mekanik.  Konsentrasi elektrolit  yang  berlebihan  akan melarutkan  selubung  lipoprotein dinding  sel  spermatozoa  dan  pada waktu  pencairan  kembali  (thawing), permeabilitas  membran  sel  akan berubah  dan  menyebabkan  kematian spermatozoa  (Toelihere,  1985).  Smith dan  Polge  dalam  Toelihere  (1985), gliserol memodifikasi proses pembentukan Kristal es dan meleburkannya  di  dalam  medium, sehingga  kerusakan  sel,  karena tekanan  dan  pengaruh  mekanik lainnya dikurangi. Dinding sel sangat permeabilitas terhadap gliserol. Gliserol  berdifusi  menembus  dan memasuki  spermatozoa  semudah fruktoza  dan  dapat  dipakai  oleh spermatozoa untuk aktifitas metabolism  oksidatif.  Gliserol  yang memasuki  sel  akan  menggantikan sebagian  air  yang  bebas  dan mendesak  keluar  elektrolit-elektrolit, menurunkan  konsentrasi  intraseluler elektrolik-elektrolit  tersebut  dan
mengurangi daya
perusaknya terhadap spermatozoa. Penggunaan tris dalam pengencer  susu  skim  pada  kadar yang  optimal  diharapkan  mampu mempertahankan  daya  tahan  hidup
spermatozoa  sapi  Simmental  pasca pembekuan.  Atas  dasar  tersebut penulis mencoba melakukan penelitian untuk mengetahui “Pengaruh  Penggunaan  Tris  Dalam Pengencer  Susu  Skim  Terhadap Resistensi Spermatozoa Sapi Simmental Pasca Pembekuan”.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  pengaruh  penggunaan tris  dalam  pengencer  susu  skim terhadap  resistensi spermatozoa  sapi Simmental pasca pembekuan. Hasil  penelitian ini  diharapkan mampu memberikan informasi tentang  pengaruh  penggunaan  tris dalam pengencer susu skim terhadap resistensi spermatozoa sapi Simmental pasca Pembekuan.
Materi dan Metoda Penelitian  ini  dilaksanakan  di Laboratorium Dinas Peternakan Provinsi Jambi dengan lokasi penyadapan  di  Peternakan  Provinsi Jambi,  mulai  tanggal  10  Juni  sampai dengan 8 Juli 2015.
Materi penelitian yang digunakan  yaitu  semen  satu  ekor sapi  pejantan  Simmental  sebanyak  6 ejakulat.
Bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  larutan  tris, susu  krim,  gliserol,  aquadestila, NaCL  fisiologis  (0,9%),  NaCl  3%, eosin  2%  dan  antibiotic  (penicillin dan streptomycin), Nitrogen Cair Alat  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  tabung  reaksi biasa,  tabung  reaksi  berskala,  rak, spatula, gelas ukur, pipet biasa, pipet eritrosit,  kamar  hitung  Naubeaur, mikroskop,  objek  gelas,  cover  gelas, tabung  Erlenmeyer,  tissue,  counter,
lampu  spritus,  container,  lemari pendingin, straw, goblet, canister.
Rancangan  percobaan  yang digunakan  adalah  rancangan  acak kelompok  dengan  5  perlakuan  dan  6 kelompok.  Sebagai  kelompok  adalah ejakulat.
Adapun  perlakuan  yaitu  P 0 = pengencer susu skim 93% + tanpa iris +  7%  gliserol,  P 1 =  pengencer  susu skim 83% + tris 10% + 7% gliserol, P 2 =  pengencer  susu  skim  73%  +  tris 20%  +  7%  gliserol,  P 3 =  pengencer susu  skim  63%  +  tris  30%  +  7% gliserol,  P 4 =  pengencer  susu  skim 53% + tris 40% + 7% gliserol.
Data  yang  dihimpun  dianalisis dengan sidik ragam. Apabila terdapat  perbedaan  yang  nyata, maka dilanjutkan dengan uji Duncan untuk  membandingkan  rataan  hasil masing-masing  perlakuan  menurut petunjuk Steel and Torrie (1981).

## Hasil dan Pembahasan Keadaan Awal Semen Sapi
Gambaran  awal  semen  sapi Simmental  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Dari  tabel  1.  Terlihat  bahwa rataan  volume  semen  6,65  ml, motilitas             spermatozoa 79,42%, persentase  hidup  spermatozoa  83,00 %  dan  konsentrasi  1,27  milyar/ml.
Tabel 1. Keadaan Awal Semen Sapi Simmental Sebelum Perlakuan No Keadaan Semen Rataan 1. 2. 3. 4 Volume Semen (ml) Persentase Hidup Spermatozoa (%) Motilitas Spermatozoa (%) Konsentrasi Spermatozoa (Milyar/ml) 6,65 ± 0,55 83,00 ± 0,89 79,42 ± 0,78 1,27 ± 0,063
Hasil  rataan  keadaan  awal semen  tersebut  memberikan  indikasi bahwa  semen  masih        memenuhi syarat dalam proses pengenceran dan pengawetan.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Toelihere  (1985),  bahwa pada  keadaan  normal  volume  semen sapi  berkisar  5  –  8  ml  dengan konsentrasi  1,0  –  1,8  milyar/ml  dan
motilitas  spermatozoa  65,00%  serta persentase hidup spermatozoa 80,00%. Pengaruh Perlakuan terhadap Persentase Hidup Spermatozoa Rataan persentase hidup spermatozoa  pada  masing  –  masing perlakuan  setelah  pembekuan  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Rataan Persentase Hidup Spermatozoa pada Masing – Masing Perlakuan
Pasca Pembekuan Perlakuan Persentase hidup spermatozoa Keterangan P 0 P 1 P 2 P 3 P 4
45,50 47,58
55,00 50,42 49,33 D CD A B BC
Dari  tabel  2  terlihat  bahwa pengaruh  penggunaan  tris  dalam pengencer  susu  skim sangat  berbeda nyata  (P<0,01)  terhadap  persentase hidup  spermatozoa.  Keadaan  ini memperlihatkan bahwa pada perlakuan  P 2 memberikan  hasil terbaik  diikuti  perlakuan  P 3 ,  P 4 ,  P 1 , dan  P 0 .  Kondisi  ini  menunjukkan pada  P 2 terjadi  keseimbangan  yang paling  baik  tris  dengan  susu  skim dalam  mengatasi  kejut  dingin  (chold shock),  perubahan  pH,    perubahan tekanan  osmotic  dan  keseimbangan elektrolit.  Pada  perlakuan  P 0 rataan persentase hidup spermatozoa terjadi penurunan,  hal  ini  diduga  pada  P 0 tidak  terdapat  tris  sehingga  kurang mampu  dalam  mengatasi  kejut
dingin  (chold  shock), perubahan  pH, perubahan  tekanan  osmotic  dan keseimbangan  elektrolit.  Hal  ini sesuai  dengan  pendapat  Djanuar (1985),  tris  merupakan  larutan  yang mengandung asam sitrat dan fruktosa  yang  berperan  sebagai penyangga  (buffer)  untuk  mencegah perubahan  pH  akibat  asam  laktat dari  hasil  metabolism  spermatozoa serta mempertahankan tekanan osmotic dan keseimbangan elektrolit, sumber  energy  dan  melindungi spermatozoa dari kejut dingin (chold shock).
Pada  perlakuan  P 3 dan  P 4 diduga  mempunyai  pengaruh  yang kurang baik bagi kehidupan spermatozoa,  karena  tidak  terjadi
keseimbangan  antara  tris  dengan susu  skim  dalam  mengatasi  kejut dingin  (chold  shock)  perubahan  pH, perubahan  tekanan  osmotic  dan keseimbangan  elektrolit,  dimana  tris memberikan  tekanan  osmotic  yang hipertonik, sehingga tekanan osmotic diluar  sel  lebih  tinggi  dibandingkan didalam  sel  dan  diduga  adanya suplai  energy  yang  berkurang  dari susu  skim.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan    Umiyasih  (1993),  yang mengatakan  jika  tekanan  osmotic larutan  diluar  sel  lebih  besar dibandingkan  di  dalam sel,  sehingga tekanan  tersebut  menjadi  hipertonik dan  mengakibatkan  sel  menjadi keriput. Sukardjo (1984), menjelaskan tekanan  osmotic  yang  hipertonik akan  menyebabkan  mengkerutnya membran  sel.  Ismadi  (1993),  bahwa pada  larutan  yang  hipertonik, dimana  tekanan  osmotic  diluar  sel lebih  besar  daripada  di  dalam  sel,
sehingga cairan di luar sel cenderung menarik  cairan  di  dalam  sel  sampai menyebabkan  tekanan  osmotic  di luar  dan  di  dalam  sama  akibatnya sela  akan  menjadi  keriput  dan  lama kelamaan  akan  kering  atau  mati. Sedangkan pada perlakuan P 1 terjadi penurunan,  diduga  tris  memberikan tekanan osmotic yang  hipotonik. Hal ini  sesuai  dengan  pernyataan  Ismadi (1993),  mengatakan  bahwa  pada larutan yang hipotonik menyebabkan air  bergerak  ke  dalam  sel  sehingga memperbesar  atau  membengkak ukuran  sel  dan  lama  kelamaan  sel akan pecah atau mati.

## Pengaruh
Perlakuan Terhadap Motilitas Spermatozoa Rataan  motilitas  spermatozoa pada masing-masing perlakuan pasca  pembekuan  dapat dilihat  pada
Tabel 3. Tabel  3.  Rataan  Motilitas  Spermatozoa  pada  Masing  –  Masing  Perlakuan  Pasca Pembekuan Perlakuan Persentase hidup spermatozoa Keterangan P 0 P 1 P 2 P 3 P 4 40,00 41,83
46,83 43,00 42,67 D BCD A
B
BC
Ket. Huruf Besar yang berbeda menunjukkan sangat berbeda nyata (P<0,01).
Dari  tabel  3.  Menunjukkan bahwa  pengaruh  penggunaan  tris dalam  pengencer  susu  skim  berbeda nyata  (P<0,01)  terhadap  motilitas. Perlakuan P2 memberikan persentase motilitas yang lebih tinggi dibandingkan  dengan  P 3 ,  P 4 ,  P 1 dan P 0 .  Hal  ini  diduga  perlakuan  P 2 mampu  mempertahankan  pH  semen dan  adanya  media  yang  isotonic
sehingga pada kondisi tersebut dapat mencegah  perubahan  pH,  sejalan pernyataan BIB Singosari, (1992),  tris merupakan penyanggah untuk mencegah  perubahan  pH  akibat asam laktat dan metabolisme spermatozoa  serta  mempertahankan tekanan  osmotic  dan  keseimbangan elektrolit.  Spermatozoa  tetap  motil
untuk  waktu  yang  lama  didalam media yang isotonic (Toelihere 1985).
Dari  hasil  rataan  masing– masing perlakuan terhadap spermatozoa  dapat  diihat  bahwa pada  perlakuan  P 3 ,  P 4 ,  dan  P 1 menunjukkan
kecenderungan motilitas  menurun,  hal  ini  diduga terjadi perubahan pH dan perubahan tekanan osmotic
sehingga mengakibatkan  banyak  spermatozoa yang  mati.  Sukarjo  (1984),  bahwa tekanan  osmotic  yang  berubah mengakibatkan rusaknya fungsi membrane plasma.
P 0 rataan  motilitas  spermatozoa terjadi  penurunan,  keadaan  ini diduga  karena  pada  P 0 tidak terdapatnya penyangga (buffer) sehingga tidak dapat mempertahankan pH semen, mengatasi kejut dingin (chold shock),
dan  keseimbangan  elektrolit.  Hal  ini sejalan penyataan Fachroerrozi (1997),  bahwa  tris  mempunyai kemampuan dalam mempertahankan motilitas  spermatozoa  yang  lebih tinggi,  karena  tris  lebih  banyak mengandung  zat  –  zat  makanan antara  lain  fruktosa,  asam  sitat  yang dapat  berperan  sebagai  buffer  dan meningkatnya aktivitas spermatozoa.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini dapat  disimpulkan  bahwa  peng- gunaan  tris  dalam  pengencer  susu skim  sampai  taraf  20%  dapat mempertahankan  resistensi  sperma- tozoa sapi Simmental pasca pembekuan.

## Daftar Pustaka
Balai  Inseminasi  Buatan  Singosari. 1992.  Prosedur  Kerja  Produk
Distribusi  Semen  Beku  serta Pemeliharaan Ternak. Dep. Tan. Dirjen Peternakan. Bandung. Djanuar,  1985.  Fisiologi  Reproduksi dan  Inseminasi  Buatan  Pada Sapi.  Gajah  Mada  University Press.  Yogyakarta.  Terjemahan dari  Salisbury  Van  Demark. 1961
(Physiology of Reproduction  and  Artificial Insemination of Cattle).
Fachroerrozi,
H. 1977. Tesis.
Pengaruh  Kadar  Telur  Dalam
Berbagai  Pengencer  Terhadap
Kualitas  Sperma  Domba  Pasca Pembekuan
Universitas Padjajaran. Bandung. Ismadi,  M.  1993.  Biokimia  I.  Edisi Keempat. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.
Steel,  R.G.D.  dan  J.H.  Torrie.  1981.
Prinsip  dan  Prosedur  Statistik Suatu  Pendekatan  Geometrik.
Gramedia. Jakarta.
Sukardjo.  1984.  Kimia  Anorganik. Rineka Cipta. Jakarta.
Toelihere,  M.R.  1980.  Fisiologi Reproduksi  Ternak.  Penerbit Angkasa. Bandung.
Umiyasih,  U.N.K.  Wardani  dan  D.B. Wijono.  1993.  Kualitas  Semen Calon  Pejantan  Sapi  Madura Terpilih.  Prosiding  Pertemuan Pembahasan  Hasil  Penelitian Seleksi  Sapi  Madura  Guna Meningkatkan
Mutu Sapi Madura  Sub  Balai  Penelitian Ternak Grati. Proyek Pembangunan Penelitian
Pertanian  Nasional,  Malang. Hal 25 – 34.