## SINTESIS SENYAWA 4’-HIDROKSI-4-METOKSIKALKON DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI TERHADAP BAKTERI KONTAMINAN PRODUK DARAH
Wiwit Sepvianti,* Serafica Btari Christiyani Kusumaningrum
Prodi D-3 Teknologi Bank Darah, STIKes Guna Bangsa Yogyakarta, Indonesia. *Penulis Korespondensi: wiwit.sepvianti@gunabangsa.ac.id

## ABSTRAK
Peran  penting  produk  darah    dalam  dunia  kesehatan  tidak  terlepas  dari  risiko  kontaminasi bakteri  yang  dapat  diperoleh  dari  proses  pengambilan  dan pengolahan darah.  Berbagai  spesies bakteri  Gram  positif  dan  negatif  diketahui  menjadi  bakteri  kontaminan  pada  produk  darah thrombocyte  concentrate,  packed  red  cell ,  dan whole  blood .  Oleh  karena  itu,  penting  untuk ditemukan senyawa antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri kontaminan pada produk  darah.  Senyawa  kalkon  memiliki  gugus  keton α,  β tak  jenuh  yang  berperan  sebagai antibakteri  karena  dapat  merusak  dinding  sel  bakteri.  Adanya  gugus  hidroksil  juga  berperan aktif  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Pada  penelitian  ini  dilakukan  sintesis  senyawa 4’-hidroksi-4-metoksikalkon melalui reaksi kondensasi Claisen-Schmidt. Karakterisasi senyawa kalkon  tersebut  dilakukan  dengan  uji  spektra  spektroskopi  massa  menggunakan gas chromatography-mass  spectroscopy (GC-MS)  dan  identifikasi  gugus  fungsi  menggunakan fourier  transform  infrared (FTIR).  Bakteri  kontaminan  dari  produk  darah  yang  digunakan adalah isolat Acinetobacter, Escherichia coli, Bacillus sp dan Staphylococcus aureus . Selain itu digunakan juga bakteri Staphylococcus aureus dari American Type Culture Collection (ATCC) sebagai  pembanding.  Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  metode  zona  hambat.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa senyawa 4’-hidroksi-4-metoksikalkon berhasil disintesis dengan produk  reaksi  berupa  kristal  berwarna  kuning  dengan  rendemen  72,80%,  kemurnian  relatif 100% dengan m/z 254. Aktivitas antibakteri senyawa kalkon pada variasi konsentrasi 6,25 ppm; 12,5  ppm  dan  25  ppm  terhadap  bakteri  Gram  positif  maupun  Gram  negatif  masih  tergolong lemah karena persentase kemampuan penghambatan yang dicapai di bawah 50%.
Kata Kunci: Bakteri kontaminan, Produk darah, Senyawa kalkon.

## ABSTRACT
Despite  of  the  blood  products  are  crucial  for  health,  it  cannot  be  separated  from  the  risks  of bacterial  contamination.  The  bacterial  contamination  obtained  from  collecting  and  processing blood  processing.  Various  species  of  positive  and  negative  Gram  bacteria  are  known  to  be bacterial contaminants in blood products such as thrombocyte concentrate, packed red cell, dan whole blood. Therefore, it is essential to find an antibacterial compound that could inhibited the growth of bacterial contaminant in blood products. Chalcone compounds are known to become one of antibacterial since they have an unsaturated-ketone-group which acts as an antibacterial because it can damage the bacterial cell wall. The presence of hydroxyl group has important role for  inhibiting  bacterial  contaminant  growth  as  well.  In  this  research,  4’-hydroxy-4- methoxychalcone  was  synthesized  through  the  Claisen-Schmidt  condensation  reaction.
The  characterization  of  the  chalcone  compounds  was  carried  out  by  mass  spectroscopy  using gas chromatography-mass spectroscopy (GC-MS) and identification of functional groups using Fourier transform infrared (FTIR). Bacterial contaminants from blood products that were used: Acinetobacter,  Escherichia  coli,  Bacillus  sp,  and  Staphylococcus  aureus.  In  addition, Staphylococcus  aureus  from  the  American  Type  Culture  Collection  (ATCC)  was  used  as comparing  isolates.  The  antibacterial  activity  was  analyzed  by  inhibition  area  method.  The results  showed  that  4’-hydroxy-4-methoxychalcone  successfully  synthesized  with  the  reaction product  in  yellow  crystal  formation  with  yield  of  72,80%,  relative  purity  100%,  and  m/z  254. Antibacterial activity of chalcone compounds at various concentrations of 6.25 ppm; 12.5 ppm and 25 ppm against Gram-positive and Gram-negative bacteria are still relatively weak because the percentage of inhibition ability achieved is below 50%.
Keywords: Bacterial contaminants, Blood products, Chalcone.

## PENDAHULUAN
Produk  darah  memegang  peranan penting dalam pelayanan kesehatan baik dalam hal penyembuhan penyakit maupun  pemulihan  kesehatan  (Delaney et  al .,  2016;  Magnang et  al .,  2019).
Peran  vital  produk  darah  dalam  dunia kesehatan  tidak  terlepas  dari  berbagai risiko  baik  yang  terkait  risiko  non- infeksi seperti hemolitik, reaksi transfusi akibat residual leukosit, reaksi antibodi, graftversus-host  disease dan transfusion-related  acute  lung  injury [TRALI]  maupun  risiko  infeksi  seperti infeksi zoonosis dan kontaminasi bakteri  (Bolarinwa et  al .,  2011;  Zein and  Sukrisman,  2020). Kasus  infeksi bakteri  yang  mengkontaminasi  produk darah  masih  menjadi  kasus  yang  serius di  Indonesia  karena  faktor  keterbatasan alat untuk mendeteksi bakteri hampir di semua  unit  donor  darah  (UDD)  yang ada.  Regulasi  pemerintah  tentang  uji
saring infeksi menular melalui transfusi darah  yang secara formal disetujui baru mencakup  infeksi  penyakit  Hepatitis  C (HCV),  Hepatitis  B  (HBV), Human
Imunodeficiency Virus (HIV) dan
Sypilis (Tjiptoprajitno et al ., 2012) .
Kontaminasi  bakteri  dapat  terjadi pada  berbagai  produk  darah  baik  itu thrombocyte  concentrate,  whole  blood maupun packed  red  cells (Bolarinwa et al .,  2011; Delaney et  al .,  2016; Kusumaningrum  and  Sepvianti,  2020; Zein  and  Sukrisman,  2020).  Sumber kontaminasi  dapat  berasal  dari  kulit pendonor,  tangan  petugas  pengambil darah, peralatan medis yang digunakan, proses  pengolahan  produk  darah  yang panjang serta suhu penyimpanan produk  darah.  Terutama  produk  darah Thrombocyte  concentrate yang  harus disimpan  pada  suhu  22-24 0 C  yang memberikan  suasana  kondusif  pada pertumbuhan  bakteri.  Hasil  analisis
bakteri pada sediaan thrombocyte
concentrate menunjukkan  keberadaan bakteri Gram positif berupa Staphylococcus hominis ,
Staphylococcus  aureus,  Staphylococcus epidermidis dan Bacillus  sp serta bakteri Gram negatif berupa Fusobacterium varium, Prophyromonas assaccharoltica,
Sphingomonas paucimobilis dan Propionibacterium acnes (Astuti  and  Maharani,  2014; Kusumaningrum  and  Sepvianti,  2020; Tjiptoprajitno et  al .,  2012) . Adapun hasil analisis bakteri pada sediaan whole blood menunjukkan kontaminasi bakteri Gram negatif Escherichia coli sedangkan  hasil  analisis  bakteri  pada sediaan packed  red  cells menunjukkan keberadaan bakteri Gram negatif
maupun positif Acinetobacter, Escherichia  coli,  Bacillus  sp, dan Staphylococcus  aureus (Bolarinwa et al .,  2011) . Fakta  terkait  kontaminasi bakteri  pada  berbagai  produk  darah  ini menjadi  tantangan  besar  bagi  sistem manajemen  mutu  pelayanan  darah dalam  menegakkan  cara  pembuatan obat  yang  baik  (CPOB)  pada  produk darah.  Berdasarkan  uraian  tersebut dapat  dipahami  bahwa  saat  ini  perlu dilakukan upaya untuk mencegah infeksi  menular  bakteri  pada  sediaan
produk  darah.  Salah  satu  upaya  yang dapat  dilakukan  adalah  menemukan senyawa  kimia  yang  memiliki  aktifitas antibakteri  yang  baik.  Senyawa  kalkon dapat  menjadi  kandidat  senyawa  aktif antibakteri karena telah banyak dilaporkan memiliki aktivitas antibakteri  bahkan  aktif  menghambat pertumbuhan bakteri multiresistant drugs seperti Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli (Kumar et  al .,
2020;  Sepvianti  and  Kusumaningrum,
2021).
Senyawa kalkon memiliki gugus keton α,  β tak  jenuh  atau  disebut  juga gugus  etilen  keto  (-CO-CH=CH-)  yang berperan  sebagai  antibakteri.  Dimana gugus ini dapat bereaksi dengan protein transmembran  (porin)  pada  membran luar  dinding  sel  bakteri,  membentuk ikatan  polimer  yang  sangat  kuat sehingga  menyebabkan  rusaknya  porin. Rusaknya  porin  yang  merupakan  pintu keluar masuknya senyawa akan mengurangi  permeabilitas  membran  sel bakteri  yang  akan  mengakibatkan  sel bakteri akan kekurangan nutrisi, sehingga pertumbuhan bakteri terhambat  atau  mati  (Garcia et  al ., 2020).  Selain  itu,  aktivitas  antibakteri senyawa  kalkon  juga  tergantung  pada jenis substituen yang terikat pada kedua
cincin aromatiknya (Dan and Dai, 2020;
Kumar et  al .,  2020;  Sepvianti  and Kusumaningrum, 2019). Beberapa penelitian  melaporkan  bahwa  senyawa kalkon yang tersubstitusi gugus hidroksi pada  ring  A  (C2  dan  C4)  serta tersubtitusi  gugus  metoksi  pada  ring  B (C2 dan C3) aktif menghambat
pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli;
Staphylococcus  aureus dan Bacillus cereus pada konsentrasi 62,5ppm sedangkan aktivitas penghambatan pada bakteri Bacillus subtilis dan Escherichia carotovora berada  pada  konsentrasi 125  ppm  (Dan  and  Dai,  2020).  Pada penelitian ini dilakukan sintesis senyawa  kalkon  yang  mengikat  gugus hidroksi di ring A dan gugus metoksi di ring  B  (Gambar  1).  Uji  aktivitas antibakteri  dilakukan  dengan  metode difusi  cakram  terhadap  isolat  bakteri kontaminan pada produk darah. Adapun diketahui bahwa penelitian yang berfokus pada pengujian  aktivitas antibakteri  senyawa  kalkon  terhadap isolat  bakteri  kontaminan  produk  darah belum  banyak  dilakukan  dan  secara khusus  aktivitas  antibakteri  senyawa kalkon  tersubtitusi  gugus  hidroksi  dan metoksi pada posisi para terhadap isolat bakteri kontaminan produk darah belum dilaporkan.
Gambar 1. Struktur Senyawa 4’- hidroksi-4-metoksikalkon.

## METODE PENELITIAN

## Alat
Alat gelas, timbangan,
mikropipet, kertas saring, kertas cakram,  pH  meter  universal,  stirer, hotplate,  inkubator  dan  autoklaf.  Alat identifikasi struktur senyawa:
spektrofotometer fourier transform infrared (FTIR) dan gas
chromatography-mass spectroscopy (GC-MS).

## Bahan
4-hidroksiasetofenon, 4-
metoksibenzaldehida, natrium
hidroksida,  asam  klorida  2  M,  etanol P.A,  akuades,  kertas  indikator  pH universal,  media  nutrient  agar,  alkohol 70%, Brain-Heart  Infusion (BHI), kloramfenikol  10%,  dimetil  sulfoksida (DMSO),  isolat  bakteri  kontaminan produk darah:
Acinetobacter,
Escherichia coli, Bacillus sp,
Staphylococcus aureus, dan bakteri dari

## American  Type  Culture  Collection
(ATCC)  yaitu Staphylococcus  aureus ATCC sebagai bakteri pembanding.
Prosedur Kerja Sintesis Senyawa 4’-hidroksi-4- metoksikalkon Sintesis  dilakukan  melalui  reaksi kondensasi  Claisen-Schmidt.  Senyawa 4-metoksibenzaldehida
(2 mmol)
dilarutkan  dalam  5  mL  kemudian ditambahkan  tetes  demi  tetes  larutan NaOH  50%,  campuran  ini  diaduk selama 5 menit. Selanjutnya
ditambahkan 4-hidroksiasetofenon yang terlebih dahulu telah dilarutkan dalam 5 mL  etanol.  Campuran  diaduk  dalam suhu  kamar  selama  24  jam,  reaksi dimonitoring menggunakan kromatografi  lapis  tipis.  Setelah  reaksi selesai,  campuran  ditambahkan  dengan es  akuades  dan  diberikan  tetes  demi tetes  larutan  HCl  2  M  hingga  terbentuk endapan.  Produk  reaksi  dikarakterisasi menggunakan  spektrofotometer  FTIR dan  GC-MS.  Sintesis  senyawa  kalkon ini  merujuk  pada  prosedur  yang dilakukan oleh (Garcia et al ., 2020)

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan  metode  difusi  kertas  cakram. Dimana  pada  media  agar  bakteri  yang telah memadat diletakkan kertas cakram berdiameter 3 mm yang telah
dicelupkan  ke  dalam  larutan  senyawa kalkon.
Senyawa
4’-hidroksi-4-
metoksikalkontelah  dilarutkan  dalam DMSO  dengan  variasi  konsentrasi  6,25 ppm;  12,5  ppm  dan  25  ppm.  Adapun pelarut  DMSO  juga  berfungsi  sebagain kontrol  negatif  sedangkan  kontrol positif menggunakan kloramfenikol 10%.  Pengamatan  zona  hambat  bakteri dilakukan setelah 18 jam masa inkubasi. Diameter  zona  hambat  yang  terbentuk diukur  secara  manual  dengan  jangka sorong.  Dimana  yang  diukur  sebagai zona  hambat  senyawa  adalah  selisih diameter  zona  bening  dengan  diameter cakram  sebesar  3  mm.  Diameter  zona hambat  yang  terbentuk  diukur  secara manual dengan jangka sorong. Aktivitas penghambatan senyawa kalkon terhadap bakteri  dinyatakan  dengan  kekuatan penghambatan yang yang merujuk pada rumus  di  bawah  ini  (Ikhtiarudin et  al ., 2020):
Diameter zona hambat sampel
Kemampuan penghambatan (%) =
x 100%
Diameter zona hambat positif  kontrol
Hasil aktivitas antibakteri yang
diperoleh dari rumus tersebut kemudian digolongkan  menjadi  tiga  kategori yaitu:  kuat  (persentase  kemampuan penghambatan  70 %), sedang (persentase  kemampuan  penghambatan berada  dalam  kisaran  50-70%)  dan lemah
(persentase kemampuan penghambatan <50%).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sintesis  senyawa  4’-hidroksi-4- metoksikalkon dilakukan melalui reaksi kondensasi  menggunakan  prekrusor  4- metoksibenzaldehida  yang  direaksikan dengan 4-hidroksiasetofenon menggunakan  katalis  basa  NaOH  50%. Reaksi  berlangsung  pada  suhu  kamar selama  24  jam.  Produk  reaksi  berupa kristal berwarna kuning dengan rendemen sebesar 72,80 %.
Karakterisasi  struktur  senyawa  hasil sintesis  dilakukan  dengan  FTIR  dan GC-MS.
Hasil  analisis  FTIR  (Gambar  2) menunjukkan  adanya  serapan  vibrasi
rentangan  gugus  hidroksi  (-OH)  pada senyawa  hasil  sintesis  dengan  bilangan gelombang  3394  cm -1 .  Serapan  gugus hidroksi  tersebut  didukung  dengan munculnya  serapan  vibrasi –C-O- fenolik  pada  bilangan  gelombang  1141 cm -1 . Kedua serapan tersebut memperkuat  indikasi  keberadaan  gugus OH  pada  senyawa  hasil  reaksi.  Selain memiliki  gugus  OH  senyawa  hasil reaksi  juga  memiliki  gugus  metoksi yang  diperkuat  dengan  munculnya serapan  gugus  metoksi  pada  bilangan gelombang  1026  cm -1 yang  merupakan serapan vibrasi rentangan –C-O-C- eter. Adapun  serapan  khas  senyawa  kalkon yaitu  serapan  –C=C-  aromatik  muncul pada bilangan gelombang 1512 cm -1 dan serapan gugus karbonil C=O keton yang terkonjugasi dengan cincin aromatis dan olefin terdeteksi pada bilangan gelombang  1612  cm -1 .  Kisaran  khas  - C=C- aromatik senyawa kalkon muncul antara  bilangan  gelombang  1560-1588 cm -1 (Dan and Dai, 2020).
Gambar 2. Spektra FTIR Senyawa 4’-hidroksi-4-metoksikalkon.
Analisis  lebih  lanjut  dilakukan
dengan
GC-MS menghasilkan kromatoGram  GC  dengan  satu  puncak, kemurnian  relatif  100%    pada  waku retensi  (tR)  34,038  menit  (Gambar  3). Waktu retensi merupakan ukuran waktu yang  dibutuhkan  zat  terlarut  untuk melewati  kolom  kromatografi,  nilai yang dihasilkan dapat menjadi karakteristik suatu
senyawa.
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan oleh  Endang  Lestari et  al (2018);  dan Sepvianti et  al (2016)  diketahui  bahwa variasi  waktu  retensi  untuk  senyawa kalkon  berada  pada  kisaran  20  –  40 menit.  Variasi ini terjadi karena adanya perbedaan  titik  didih  maupun  tingkat kepolaran dari masing-masing senyawa. Selain  itu  juga  disebabkan  oleh  faktor
alat  yang  digunakan  karena  terdapat variasi bentuk kolom dan ukuran kolom pada  alat  GC-MS  (Pleil and Isaacs, 2016).
Spektrum massa senyawa menunjukkan  ion  molekular  (M + )  yang sesuai  dengan  berat  molekul  dari senyawa 4’-hidroksi-4-metoksikalkon yaitu  sebesar  254  (Gambar  4).  Adapun ion molekular (M + ) diperkirakan mengalami  2  fragmentasi.  Fragmentasi pertama,  M + mengalami  pelepasan radikal C 7 H 7 O dan menghasilkan fragmen m/z 146 sedangkan fragmentasi  kedua,    M + mengalami pelepasan radikal C 8 H 10 O menghasilkan fragmen m/z 134 yang merupakan base peak .  Selanjutnya  terjadi  pelepasan radikal  CH 2 menghasilkan  fragmen  m/z
120.  Spektrum  massa  serta  fragmentasi yang  diperoleh  makin  memperkuat dugaan  bahwa  senyawa  hasil  sintesis
yang  terbentuk  adalah  4’-hidroksi-4- metoksikalkon.
Gambar 3. Kromatogram GC Senyawa 4’-hidroksi-4-metoksikalkon.
Gambar 4. Spektra Massa Senyawa 4’-hidroksi-4-metoksikalkon.
Salah satu faktor yang
mempengaruhi keberhasilan dalam sintesis kalkon adalah proses rekristalisasi  yang  melibatkan  asam. Pembentukan  kembali  endapan/kristal kalkon  menggunakan  larutan  HCl dalam  kondisi  dingin  perlu  dilakukan dengan  hati-hati.  Penambahan  larutan HCl  harus  dilakukan  tetes  demi  tetes sambil  dilakukan  pengandukan  dan pengontrolan  pH  campuran.  Umumnya endapan mulai terbentuk ketika tercapai kadar pH netral kemudian endapan akan
semakin  banyak  ketika  ditambahkan kembali  larutan  HCl  tetes  demi  tetes. Akan  tetapi  yang  perlu  diperhatikan adalah  jangan  sampai  pH  campuran yang  terbentuk  terlalu  asam,  kadar  pH campuran  harus  terjaga  di  atas  2.  Jika pH  campuran  mencapai  1,  maka endapan  yang  sudah  terbentuk  justru akan  berubah  tekstur  menjadi oily .  Hal ini  akan  mempengaruhi  rendemen kalkon  yang  diperoleh,  dimana  ketika terbentuk oily serbuk krital kalkon yang didapatkan  sangat  sedikit,  sehingga
monitoring  kadar  pH  campuran  saat proses rekristalisasi dengan larutan HCl ini sangat dianjurkan. Monitoring kadar pH  campuran  dapat  dilakukan  dengan kertas indikator pH universal.
Senyawa  kalkon  hasil  sintesis kemudian  diuji  aktivitas  antibakterinya menggunakan  metode  difusi  kertas cakram. Pada pengujian ini senyawa 4’- hidroksi-4-metoksikalkon dilarutkan dalam  pelarut  DMSO  dengan  variasi konsentrasi  6,25  ppm;  12,5  ppm;  dan 25,0  ppm.  Selain  berfungsi  sebagai pelarut  DMSO  juga  berperan  sebagai
kontrol  negatif  pada  pengujian  ini, sedangkan kontrol positifnya digunakan larutan  klorafenikol  10%.  Bakteri  uji yang  digunakan  adalah  bakteri  isolat bakteri  kontaminan  Produk  Darah  dan ATCC  yang  terdiri  dari  Gram  positif dan  negatif.  Dimana  yang  termasuk bakteri  Gram  positif  yaitu Bacillus sp.,
Staphylococcus aureus , dan
Staphylococcus  aureus ATCC  serta pada  bakteri  Gram  negatif  yaitu Esherichia  coli dan Acinetobacter . Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  senyawa kalkon disajikan pada Tabel 1 dan 2.
Tabel 1. Kemampuan Penghambatan  Senyawa 4’-hidroksi-4-metoksikalkon Terhadap Bakteri Uji Gram Positif.

## Konsentrasi
Senyawa Uji (ppm) Bakteri Gram Positif Bacillus sp. Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus ATCC Diameter zona jernih (mm) Kemampuan penghambatan (%) Diameter zona jernih (mm) Kemampuan penghambatan (%) Diameter zona jernih (mm) Kemampuan penghambatan (%) 6,25 0 0 6,3 36,00 6,0 34,09 12,5 0 0 6,9 39,43 6,2 35,22 25,0 0,8 3,63 8,4 48,00 7,8 44,32 Kontrol Positif 17,9 100 17,5 100 17,6 100 Kontrol Negatif 0 0 0 0 0 0
Keterangan:
Kontrol Positif  : Kloramfenikol
Kontrol Negatif : DMSO
Tabel 2. Kemampuan Penghambatan  Senyawa 4’-hidroksi-4-metoksikalkon Terhadap
Bakteri Uji Gram Negatif
Konsentrasi Senyawa Uji (ppm) Bakteri Gram Negatif Escherichia coli Acinetobacter Diameter zona jernih (mm) Kemampuan penghambatan (%) Diameter zona jernih (mm) Kemampuan penghambatan (%) 6,25 0 0 0 0 12,5 0 0 0 0 25,0 0 0 0 0 Kontrol Positif 20,9 100 17,9 100 Kontrol Negatif 0 0 0 0
Keterangan:
Kontrol Positif  : Kloramfenikol Kontrol Negatif : DMSO Hasil  pada  Tabel  1  didapatkan
bahwa senyawa 4’-hidroksi-4-
metoksikalkon  memiliki  kemampuan daya  hambat  yang  sangat  lemah  pada bakteri Bacillus  sp karena  hanya menghasilkan zona hambat 0,8 mm saja dengan kemampuan penghambatan sebesar  3,63%.  Pada  bakteri  Gram positif  lainnya  yaitu Staphylococcus aureus dan Staphylococcus  aureus ATCC  zona  hambat  dan  kemampuan penghambatan  yang  diperoleh  memiliki kemiripan.  Diameter  zona  hambat senyawa  kalkon  uji  terhadap  isolat bakteri kontaminan produk darah Staphylococcus aureus, pada konsentrasi  25  ppm  adalah  8,4  mm dengan  kemampuan  hambat  48,00% sedangkan  pada  bakteri  pembanding yaitu Staphylococcus  aureus ATCC,
senyawa  kalkon  uji  menghasilkan kemampuan  penghambatan  yang  lebih kecil yaitu hanya berkisar pada 44,32% dengan diameter zona jernih sebesar 8,4 mm. Aktivitas antibakteri yang dihasilkan  senyawa  kalkon  terhadap bakteri  Gram  positif  masih  tergolong lemah  karena  persentase  kemampuan penghambatan  berada  di  bawah  50%. Hal ini diduga terjadi akibat konsentrasi senyawa  kalkon  yang  digunakan terlalu kecil  sedangkan  konsentrasi  kontrol positif yang digunakan yaitu klorafenikol  terlalu  besar.  Inilah  titik kekurangan  pada  penelitian  ini,  pada pengujian metode difusi cakram sebaiknya  rentang  konsentrasi  senyawa uji  yang  digunakan  lebih  tinggi  untuk mendapatkan  gambaran  yang  lebih relevan  terkait  aktivitas  senyawa  dalam
menghambat pertumbuhan bakteri. Selaras  dengan  pernyataan  Lentikasari (2017)  konsentrasi  senyawa  uji  yang kecil  lebih  cocok  diterapkan  pada pengujian  aktivitas  antibakteri  metode dilusi  cair  dibandingkan  dengan  dilusi padat.  Walaupun  demikian,  hasil  ini membuka  peluang  penelitian  lebih lanjut.
Aktivitas  berbeda  ditunjukkan senyawa  4’-hidroksi-  4  -metoksikalkon terhadap  bakteri  Gram  negatif.  Data menunjukkan  bahwa  senyawa  kalkon ini tidak memiliki aktivitas penghambatan pada kedua bakteri Gram negatif yang diujikan, baik itu Escherichia coli maupun Acinetobacter .
Diameter  zona  jernih  sama  sekali  tidak terlihat, sehingga dinyatakan berdiameter  hambat  0  mm.  Selain diduga  karena  konsentrasi  senyawa  uji yang  terlalu  kecil,  dugaan  kuat  lainnya adalah sebab karakteristik bakteri Gram negatif  yang  dikenal  memiliki  struktur dinding  sel  kompleks.  Dinding  sel  ini sulit  diekspansi  oleh  antibiotik  yang mekanisme  kerjanya  merusak  dinding sel.  Selaras  dengan  pernyataan  Rosa et al (2019)  yang  mengungkapkan  fakta bahwa  senyawa  kalkon  cenderung bekerja  dengan  mempengaruhi  dinding sel  bakteri.  Dimana  senyawa  kalkon
yang  tersubtitusi  gugus  hidroksi  dan metoksi akan memiliki sifat hidrofobisitas  yang  sesuai  dengan permukaan  sel  bakteri  Gram  positif seperti Staphylococcus  aureus sehingga tidak mengherankan apabila performanya menghambat pertumbuhan bakteri  Gram  positif  akan  lebih  baik dibandingkan  penghambatannya  pada bakteri Gram negatif. Kiranya hal inilah yang  sesuai  untuk  menggambarkan aktivitas  penghambatan  senyawa  4’- hidroksi-  4  -metoksikalkon  terhadap bakteri  Gram  positif  dan  negatif, walaupun  posisi  gugus  hidroksi  dan metoksinya  berbeda  dengan  kalkon yang disintesis oleh Rosa et al 2019).

## KESIMPULAN
Senyawa 4’-hidroksi-4- metoksikalkon  telah  berhasil  disintesis melalui  reaksi  kondensasi  Claisen- Schmidt.  Produk  reaksi  berupa  kristal berwarna  kuning  dengan  rendemen 72,80%, kemurnian relatif 100% dengan  m/z  254.  Aktivitas  antibakteri senyawa kalkon pada variasi konsentrasi 6,25 ppm; 12,5 ppm dan 25 ppm  terhadap  bakteri  Gram  positif maupun  Gram  negatif  masih  tergolong lemah  karena  persentase  kemampuan
penghambatan  yang  dicapai  di  bawah 50%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kami  haturkan kepada KEMENRISTEK/
BRIN
Republik  Indonesia    atas  bantuan  dana penelitian  yang  telah  diberikan  dengan nomor  Kontrak  3278.23/LL5/PG/2021 dan  STIKES  Guna  Bangsa  Yogyakarta atas dukungan fasilitas Laboratorium.

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti, D., dan Maharani, E.A. Identifikasi Bakteri yang Mengontaminasi Konsentrat Trombosit. Jurnal Ilmu dan Teknologi  Kesehatan .  2014,  2(1): 61-67.
Bolarinwa,  R.A.,  Aboderin,  O.A., Odetoyin, B.W., and Adegunloye, A.B.  Bacterial  Contamination  of Blood  and  Blood  Components  in A  Tertiary  Hospital  Setting  in Nigeria. International  Journal  of Infection Control . 2011, 7(1): 1-6.
Dan, W., an Dai, J. Recent Developments  of  Chalcones  as Potential  Antibacterial  Agents  in Medicinal  Chemistry. European Journal  of  Medicinal  Chemistry . 2020, 187: 1-20.
Delaney,  M.,  Wendel,  S.,  Bercovitz, R.S.,  Cid,  J.,  Cohn,  C.,  Dunbar,
N.M., et al. Transfusion Reactions:  Prevention,  Diagnosis, and Treatment. The Lancet , 2016, 388(10061): 2825-2836
Lestari,  E., Matsjeh,  S.,  dan  Swasono, R.T.  Sintesis  Senyawa  Turunan Khalkon  dan  Flavon  Berbahan
Dasar  Vanilin  dan  Uji  Sitotoksik Terhadap  Sel  Kanker  Serviks (Hela), Sel Kanker Kolon (Widr), dan  Sel  Kanker  Payudara  (T47D) Secara  In  Vitro. BIMIPA .  2018,
25(1): 53-65.
Garcia,  T.R.,  de  Freitas,  T.S.,  dos
Santos,  H.S.,  Bandeira,  P.N., Julião,  M.S.S.,  Rocha,  J.E.,  et  al. Structural, Vibrational and Electrochemical Analysis and Antibiotic  Activity  Study  of Chalcone  (2E)-1-(3ʹ,-methoxy-4ʹ,-
hydroxyphenyl)-3-(3- nitrophenyl)prop-2-en-1-one.
Journal  of  Molecular  Structure .
2020, 1216: 1-10.
Ikhtiarudin,  I.,  Agistia,  N.,  Frimayanti, N.,  Harlianti,  T.,  and  Jasril,  J.
Microwave-assisted  Synthesis  of 1-(4-hydroxyphenyl)-3-(4- methoxyphenyl)prop-2-en-1-one and its Activities as an Antioxidant, Sunscreen, and
Antibacterial. Jurnal  Kimia  Sains dan Aplikasi . 2020, 23(2), 51-60.
Kumar,  K.S.,  Siddaiah,  V.,  Lilakar,
J.D., and Ganesh, A. An Efficient
Continuous-flow  Synthesis  and
Evaluation of Antimicrobial Activity  of  Novel  1,2,3-Triazole- Furan Hybrid Chalcone Derivatives. Chemical Data Collections . 2020, 28: 1-13. Kusumaningrum, S.B.C., dan Sepvianti, W. Identifikasi Bakteri Kontaminan  Pada  Produk  Darah
Thrombocyte  Concentrate. Syifa Medika . 2020, 10(2): 117-123.
Lentikasari,  A.S.  2017.  Perbandingan
Metode  Dilusi  Padat  dan  Cair Pada  Uji  Sensitivitas  Ekstrak
Etanol  Bawang  Putih  ( Allium sativum )
Terhadap
Staphylococcus  aureus .  ( Skripsi ). Universitas Kristen Duta Wacana.
Magnang,  H.,  Padaro,  E.,  Mawussi,  K., Ouenangou, T., Layibo, Y.,
Kuéviakoé,  M.D.I.,  et  al.  Quality
Control  of  Red  Blood  Cell Pockets Produced at Centre
National de Transfusion Sanguine de  Lomé. Pan  African  Medical Journal . 2019, 32: 1-8.
Pleil,  J.  D.,  &  Isaacs,  K.  K.  (2016).
High-resolution Mass Spectrometry: Basic Principles for Using  Exact  Mass  and  Mass Defect  for  Discovery  Analysis  of Organic  Molecules  in  Blood, Breath,  Urine  and  Environmental Media. Journal of Breath Research . 2016, 10(1): 1-10. Rosa,  G.P.,  Seca,  A.M.L.,  Barreto,  M. do  C.,  Silva,  A.M.S.,  and  Pinto, D.C.G.A. Chalcones and Flavanones  Bearing  Hydroxyl and/Or Methoxyl Groups: Synthesis and Biological Assessments. Applied  Sciences . 2019, 9(14): 1-17.
Sepvianti,  W.,  dan  Kusumaningrum,
B.S.C. Synthesis and Antibacterial  Activities  Test  of Chalcone (E)-3-(4- (Dimethylamino)Phenyl)-1- Phenylprop-2-En-1-One  Against Bacteria Contaminant Blood Products. Journal  of  Health . 2021, 8(2): 75-84.
Sepvianti,  W.,  dan  Kusumaningrum,
S.B.C.  Antibacterial  Assay  of  2’- Hydroxy-4’,6’,4- Trimethoxychalcone and 4- Methoxychalcone  Against  Gram Positive  and  Gram  Negative
Bacteria. Jurnal  Riset  Kesehatan . 2019, 8(2), 17-20.
Sepvianti, W., Matsjeh, S., dan Purwono,  B.  2016.  Sintesis  dan Uji Sitotoksisitas Turunan Kalkon terhadap  Sel  Kanker  T47D,  HeLa dan WiDr Secara In Vitro. ( Tesis ). Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta. Tjiptoprajitno,  N.A.,  Aryati,  A.,  dan Sudiana,  I.K.  (2012).  Analisis Produk Darah Thrombocyte Concentrate  di  Palang  Merah
Indonesia  Surabaya. JBP .  2012, 14(3): 145-152.
Zein,  A.F.M.Z.,  dan  Sukrisman,  L.
Proporsi Reaksi Transfusi Akut di Unit Transfusi Rawat Jalan Rumah  Sakit  Rujukan  Tersier  di
Indonesia. Jurnal Penyakit Dalam
Indonesia . 2020, 7(2), 95-99.