Uji Potensi Antijerawat Secara In Vitro dan Ex Vivo dari Ekstrak Etanol Herba Alfalfa ( Medicago sativa L.)
(Potention Test of Antiacne by In Vitro and Ex Vivo from Ethanol Extract of Alfalfa Herbs ( Medicago sativa L.))

## ERIKA  INDAH  SAFITRI *,  RISHA  FILLAH  FITHRIA ,  EKO  WAHYU  SAPUTRO ,  DANANG YOGO WIJAYA
Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim, Semarang, Jawa Tengah 50232
Diterima 7 Januari 2021, Disetujui 19 Oktober 2021
Vol. 19, No. 2 JURNAL ILMU KEFARMASIAN  INDONESIA, Oktober 2021,  hlm. 254-261 ISSN 1693-1831, E-ISSN 2614-6495
Abstract: Propionibacterium  acnes is  one  of  the  bacteria  that  causes  acne.  Acne  problems  can be  controlled  with  herbal  plants,  namely  alfalfa  herbs.  The  content  of  ﬂ avonoids  in  alfalfa  herb is  eﬃ cacious  as  an  antiacne.  This  study  aimed  to  determine  the  total  ﬂ avonoid  content  and  to  test the  potency  of  alfalfa  herb  ethanol  extract  (AHEE)  as  an  antiacne in  vitro and ex  vivo induced  by Propionibacterium acnes . Determination of total ﬂ avonoid levels using the spectrophotometer method with quercetin comparison. Test of alfalfa herbs ethanol extract by in vitro using disk diﬀ usion method in concentration series 40%, 50%, 60%, 70%, and 80%. Meanwhile, test of extract by ex vivo using rabbits induced Propionibacterium acnes bacteria intradermally in 3 optimal concentration from in vitro test (50%, 60%, dan 70%). The parameter of test in the form of zone inhibition and percentage reduction in erythema diameter. Ethanol extract of alfalfa herbs contains total ﬂ avonoids of 2,323 mgQE/g. All ethanol extract of alfalfa herbs test concentrations had antibacterial activity against P. acnes with an average diameter of the respective iradic inhibitory area 14,60 mm; 14,89 mm; 15,56 mm; 16,52 mm; and 18,59 mm. The average percentage reduction in erythema diameter by ex vivo on ethanol extract of alfalfa herbs (50%, 60%, and 70%) were 48.70%, 48.26%, and 54.09%, respectively.
Keywords : ethanol extract of alfalfa herbs, ﬂ avonoid, antiacne, in vitro , ex vivo .
Abstrak: Bakteri Propionibacterium  acnes merupakan  salah  satu  bakteri  penyebab  jerawat. Permasalahan  jerawat  dapat  dikendalikan  dengan  tanaman  herbal  yaitu  herba  alfalfa.  Kandungan ﬂ avonoid dalam herba alfalfa berkhasiat sebagai antijerawat. Penelitian ini bertujuan untuk menetapkan kadar ﬂ avonoid total serta pengujian potensi ekstrak etanol herba alfalfa (EEHA) sebagai antijerawat secara in vitro dan ex vivo yang diinduksi bakteri Propionibacterium acnes . Penetapan kadar ﬂ avonoid total menggunakan metode spektrofotometer dengan pembanding kuersetin. Pengujian ekstrak etanol herba alfalfa secara in vitro menggunakan metode difusi cakram pada seri konsentrasi 40%, 50%, 60%, 70%, dan 80%. Sementara itu, pengujian ekstrak secara ex vivo menggunakan kelinci yang diinduksi bakteri Propionibacterium acnes secara intradermal pada 3 konsentrasi optimal dari uji in vitro (50%, 60%,  dan70%).  Parameter  pengujian  ini  berupa  diameter  daerah  hambat  dan  penurunan  diameter eritema.  Ekstrak  etanol  herba  alfalfa  mengandung  ﬂ avonoid  total  sebesar  2,323  mgQE/g.  Seluruh konsentrasi ekstrak etanol herba alfalfa memiliki aktivitas antibakteri terhadap P. acnes dengan rata rata diameter daerah hambat iradikal masing masing 14,60 mm; 14,89 mm; 15,56 mm; 16,52 mm; dan 18,59 mm. Persentase rata-rata  penurunan  diameter  eritema secara ex vivo pada ekstrak etanol herba alfalfa (50%, 60% dan 70%) secara berturut-turut sebesar 48,70%; 48,26% dan 54,09%.
Kata kunci: Ekstrak etanol herba alfalfa, ﬂ avonoid, antijerawat, in vitro , ex vivo .
255  SAFITRI ET AL.

## Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia

## PENDAHULUAN
BAKTERI Propionibacterium  acnes ( P.acnes ) merupakan  bakteri  Gram  positif  anaerob  yang dapat  menyebabkan  terjadinya  jerawat  melalui proses  inﬂ amasi (1) .  Bakteri  tersebut  mengeluarkan enzim  hidrolitik  yang  menyebabkan  kerusakan folikel polisebasea dan menghasilkan enzim lipase, hialuronidase,  protease,  lesitinase,  dan  neurimidase yang  memegang  peranan  penting  pada  proses peradangan jaringan yang memicu terjadinya jerawat (2) . Jerawat  dapat  diterapi  dengan  menggunakan antibiotik,  asam  azelat  dan  retinoid,  namun  obat- obat ini memiliki efek samping dalam penggunaannya sebagai  antijerawat  antara  lain  resistensi antibiotik,  iritasi,  kerusakan  organ  dan  terjadinya imunohipersensitivitas (3) . Upaya dalam meminimalkan efek  samping  tersebut  dengan  mengembangkan alternatif  pengobatan  antijerawat  menggunakan herbal. Salah satu tanaman yang berpotensi sebagai antijerawat adalah herba alfalfa ( Medicago sativa L.) (4) . Herba alfalfa merupakan tanaman yang berasal dari famili  Fabaceae  atau  kacang-kacangan  yang  telah terbukti sebagai antiinﬂ amasi dan antibakteri (4) . Herba alfalfa mengandung senyawa alkaloid, isoﬂ avonoid, saponin,  kumarin,  steroid,  karbohidrat  dan  pektin metilesterase. Kandungan utama dari ekstrak etanol daun  dan  batang  alfalfa  adalah  ﬂ avonoid.  Ekstrak etanol  herba  alfalfa  mengandung  ﬂ avonoid  dengan kadar total 8,13 %, alkaloid dengan kadar 48,86 ppm dan kumarin dengan kadar 229,83 ppm (5) . Flavonoid dari golongan ﬂ avonol, ﬂ avon dan isoﬂ avon potensial sebagai antiinﬂ amasi yang mampu menghambat asam arakhidonat yang akan memproduksi prostaglandin (6) serta  antibakteri  dengan  merusak  dinding  sel, menonaktifkan kerja enzim, dan merusak membran sel (7) . Ekstrak  etanol  herba  alfalfa  ( Medicago  sativa  L. ) mengandung  flavonoid  dan  memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus , Streptococcus  pyogenes , Proteus  mirabilis , Bacillus  cereus , Escherichia  coli , Pseudomonas aeruginosa , Salmonella  thypi dan Klebsiella pneumonia dengan  metode  difusi  agar  sumuran. Ekstrak  etanol  herba  alfalfa  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif atau Gram negatif (8) . Aktivitas  antijerawat  secara ex  vivo pada  herba alfalfa  belum  pernah  dilaporkan,  tetapi  pada salah  satu  penelitian  aktivitas  krim  antijerawat kayu  secang  secara ex  vivo terhadap P.  acnes pada  kelinci  telah  dilakukan (9) .  Oleh  karena itu,  maka  dilakukan  penelitian  ekstrak  etanol herba  alfalfa  terhadap  bakteri P.acnes secara in vitro dan ex  vivo serta  kandungan  flavonoidnya.

## BAHAN DAN METODE
BAHAN. Herba  alfalfa  ( Medicago  sativa L.) diperoleh  dari  Desa  Tlatar,  Kabupaten  Boyolali, Jawa Tengah. Bahan lain diantaranya pelarut etanol 70%  (Barataco,  teknis),  etanol  96%  (Brataco, teknis), etanol p.a (Merck), serbuk Mg, larutan HCl pekat,  serbuk  kuersetin  (Sigma), AlCl3  (Merck), CH3COOK (Merck), bakteri P. acnes, kertas cakram klindamisin (2 µg/disk), dimetilsulfoksida (Merck), larutan  NaCl  0,9%,  media  Mueller  Hinton Agar (MHA) (Merck), larutan standar Mc. Farland I (108 CFU/ml), Brain Heart Infusion (BHI), akuades steril.

## METODE
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Herba Alfalfa. Herba  alfalfa  dipanen,  disortasi  basah,  dan  dicuci dengan  air  mengalir.  Herba  alfalfa  kemudian dikeringkan  dengan  lemari  pengering  pada  suhu 40 C. Bahan yang sudah kering kemudian disortasi kering dan dicek kadar airnya menggunakan moisture balance . Persyaratan kadar air pada simplisia yaitu < 10%.  Herba  alfalfa  yang  memenuhi  syarat  kadar air kemudian diserbuk dan diayak dengan ayakan 40 mesh. Serbuk simplisia sebanyak 850 gram dimaserasi dengan  etanol  70%  dengan  perbandingan  antara simplisia dan pelarut sebesar 1:10. Proses ekstraksi terbagi menjadi 2 yaitu proses maserasi dengan 75% dari total pelarut selama 3 hari dan remaserasi dengan 25% dari total pelarut selama 2 hari. Kedua proses tersebut sambil dilakukan pengadukan 2 kali sehari selama 15  menit  tiap kali pengadukan. Filtrat hasil maserasi dan remaserasi dicampurkan dan dienapkan selama 24 jam. Filtrat diuapkan dengan penguap vakum putar pada suhu 55 C hingga diperoleh ekstrak kental. Ekstrak  disimpan  dalam  botol  gelap  dan  disimpan dalam desikator yang dilengkapi silika gel yang sudah diaktifkan sebelum digunakan untuk uji selanjutnya (10) . Identiﬁ kasi Senyawa Flavonoid. Ekstrak etanol herba alfalfa ditimbang 50 mg dilarutkan dengan etanol 70%  sebanyak  1  ml  dan  diaduk  hingga  homogen. Ekstrak  diuapkan  dan  ditambahkan  etanol  96% sebanyak 1 mL. larutan ekstrak ditambahkan serbuk Mg sebanyak 100 mg, lalu diberikan 3 tetes larutan HCl pekat. Perubahan warna kuning, orange, merah atau biru menunjukkan adanya senyawa golongan ﬂ avonoid (11) . Penetapan  Kadar  Flavonoid. Penetapan kadar  flavonoid  ekstrak  etanol  herba  alfalfa diawali  dengan  melakukan  penentuan  panjang gelombang  maksimal, operating  time ,  dan  kurva baku dengan pembanding kuersetin. Seri konsentrasi kuersetin yang digunakan untuk penentuan kurva baku yaitu (2, 4, 6, 8, 10, 12) ppm. Ekstrak etanol herba
Vol 19, 2021
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia   256
diamati dan diukur hari ke-1 dan hari ke-15. Tanda- tanda  kesembuhan  pada  kelinci  berupa  kulit  yang tidak  kemerahan,  tidak  mengalami  pembengkakan dan  beberapa  pada  jerawat  kelinci  tidak  terdapat nanah. Penurunan diameter eritema dihitung dengan rumus  yaitu,  diameter  eritema  hari  ke-1  setelah induksi dikurangi diameter eritema hari ke-15 setelah perlakuan.  Penurunan  diameter  eritema  dibuat dalam  bentuk  persen  setiap  kelompok  perlakuan.
Analisis  Data. Data  berupa  diameter  daya hambat  dan  penurunan  diameter  eritema  dianalisis secara  statistik  menggunakan  uji  Anova  satu jalan  dilanjutkan  uji Post  Hoc  Tukey dengan taraf  kepercayaan  95% (13) .  Sementara  itu,  kadar flavonoid  total  dianalisis  dengan  memplotkan nilai  absorbansi  pada  persamaan  regresi  linier kemudian kadar ﬂ avonoid dihitung dengan rumus (14) :
Keterangan :
C : konsentrasi ﬂ avonoid (ppm) V : volume sampel (ml) Fp: faktor pengenceran m : berat ekstrak (g)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  Etanol  Herba  Alfalfa. Tanaman yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  benar tanaman  alfalfa  ( Medicago  sativa L.)  sesuai  hasil determinasi  yang  dicocokkan  dengan  kunci-kunci determinan (15) . Simplisia herba alfalfa yang diperoleh sebanyak 0,855 kg dari 2,535 kg herba alfalfa segar dengan  rendemen  33,73%.  Kadar  air  herba  alfalfa sebesar 6,7% sehingga dapat dikatakan kadar airnya memenuhi syarat untuk dilanjutkan tahap maserasi. Ekstrak  etanol  herba  alfalfa  yang  diperoleh  setelah dikentalkan sebanyak 135,5 gram dengan rendemen sebesar  15,94%.  Hasil  rendemen  tersebut  tidak jauh  berbeda  dengan  penelitian  Susilowati  yang menghasilkan  rendemen  13,04%.  Ekstrak  etanol herba alfalfa memiliki tekstur yang kental, berwarna hijau kehitaman dan berbau khas. Tampilan ekstrak etanol  herba  alfalfa  dapat  dilihat  pada  Gambar  1.
alfalfa  ditimbang  sebanyak  125  mg  dan  dilarutkan dengan  etanol  p.a  secukupnya  dengan magnetic stirrer dengan  kecepatan  300  rpm  hingga  terlarut sempurna.  Larutan  ekstrak dimasukkan  dalam  labu takar  ad  etanol  p.a  50  ml.  Larutan  ekstrak  diambil 1000 μL ditambahkan AlCl  10 % sebanyak 200 μL dan  CH COOK 1 M sebanyak 200 μL. Absorbansi dibaca pada spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum yaitu 429,5 nm dan operating time yang telah diperoleh yaitu 25 menit. Penetapan kadar  flavonoid  dilakukan  replikasi  3  kali (12) . Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol Herba Alfalfa  (EEHA)  Secara In  Vitro. Media MHA  dituang  ke  dalam  cawan  petri  hingga  media memadat,  kemudian  suspensi  bakteri  sebanyak  50 µL  dituangkan  di  permukaan  media  dan  diratakan menggunakan spiner . Kontrol negatif (DMSO 50%) dan  seluruh  konsentrasi  larutan  uji  EEHA  40%, 50%,  60%,  70%,  dan  80%  diteteskan  10  µL  pada masing-masing kertas cakram yang telah ditempelkan pada  permukaan  media  dan  didiamkan  10  menit agar larutan uji menyebar secara merata pada kertas cakram.  Kontrol  positif  (cakram  klindamisin  2  µg/ disk)  ditempelkan  pada  permukaan  media  yang sudah  diberi  suspensi  bakteri  kemudian  diinkubasi pada  suhu  37ºC  selama  24  jam.  Setelah  24  jam, DDH  yang  terbentuk  ditandai  dengan  zona  jernih di  sekitar kertas cakram  baik  yang telah  diteteskan larutan uji EEHA, kontrol positif dan kontrol negatif. Zona  jernih  tersebut  diukur  menggunakan  jangka sorong dan ditentukan dalam satuan milimeter (mm).
Uji Aktivitas Antijerawat  Ekstrak  Etanol Herba Alfalfa  (EEHA) Secara Ex  Vivo. Kelinci sebanyak lima ekor diinduksi dengan suspensi bakteri P.acnes pada 5 titik lokasi pada punggung yang telah dicukur  dengan  luas  masing-masing  (3  x  3)  cm2. Suspensi bakteri P. acnes diinduksikan dengan jalan disuntikkan  secara  intradermal  sebanyak  0,2  mL. Hewan uji didiamkan selama 24 jam sampai timbul jerawat. Setelah jerawat muncul, kemudian dilakukan pengolesan pada masing-masing area pada punggung kelinci dengan larutan klindamisin 2%, DMSO 50%, serta EEHA 50%, 60%, dan 70% sebanyak 1 mL setiap hari (2 kali pengolesan yaitu pagi dan malam) selama 15 hari. Parameter yang diamati adalah area inﬂ amasi dan  kemerahan  pada  area  uji.  Diameter  eritema
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
257  SAFITRI ET AL.
Gambar 1. Tampilan ekstrak etanol herba alfalfa
Gambar 2. Hasil uji kandungan senyawa ﬂ avonoid dengan uji  Shinoda:  EEHA  +  etanol  96%  (a);  EEHA  + etanol 96% + serbuk Mg + HCl pekat (b)
Penetapan Kadar Flavonoid. Prinsip penetapan kadar  ﬂ avonoid  ini  adalah  terjadinya  pembentukan kompleks  antara  aluminium  klorida  dengan  gugus keton pada atom C4 dan gugus hidroksi pada atom C3  atau  C5  yang  berdampingan  dari  golongan ﬂ avon  dan  ﬂ avonol.  Kuersetin  digunakan  sebagai pembanding  karena  kuersetin  merupakan  ﬂ avonoid yang  mempunyai  gugus  keton  pada  atom  C4  dan gugus hidroksi pada atom C3 atau C5 (19) .
Penetapan  kadar  ﬂ avonoid  total  dalam  ekstrak etanol  herba  alfalfa  dilakukan  pada  panjang gelombang  429,5 nm dengan operating time selama 25  menit.  Kadar  flavonoid  total  dalam  ekstrak etanol herba alfalfa sebanyak   2,323±0,264 mgQE/ gram. Kadar tersebut dapat dikatakan sedikit untuk suatu  golongan  senyawa  aktif.  Hasil  penelitian ini    sesuai  dengan  hasil  uji  kandungan  senyawa kimia  pada  herba  alfalfa  mengandung  flavonoid, fitoestrogen,  kumarin  dan  glikosida  jantung. Senyawa  flavonoid  yang  ada  dalam  ekstrak etanol  herba  alfalfa  merupakan  senyawa  yang diketahui  memiliki  banyak  aktivitas  biologis seperti  antibakteri  dan  antiinflamasi (20) .  Hasil pengujian  kadar  flavonoid  secara  kuantitatif  ini dapat dikembangkan lebih lanjut untuk membuktikan potensi  ekstrak  etanol  herba  alfalfa  sebagai  dasar penelitian antijerawat secara in vitro maupun ex vivo . Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol Herba  Alfalfa  (EEHA) Secara In  Vitro. Uji aktivitas antibakteri secara in vitro menggunakan 2 kontrol yaitu cakram klindamisin 2 µg/disk sebagai kontrol  positif  dan  DMSO  50%  sebagai  kontrol negatif. Kontrol positif digunakan untuk memastikan validitas  proses  uji  aktivitas  antibakteri,  sedangkan kontrol  negatif  digunakan  pada  uji  aktivitas  untuk memastikan bahwa pelarut bahan uji tidak memiliki aktivitas  antibakteri,  sehingga  dapat  dipastikan bahwa DDH yang terbentuk dari larutan uji karena senyawa yang terkandung dalam EEHA, bukan berasal dari  pelarut  yang  digunakan.    Pelarut  DMSO  juga merupakan pelarut yang dapat melarutkan senyawa polar  maupun  non  polar  dengan  baik  dan  tidak mempunyai  aktivitas  antibakteri  pada  uji  difusi (21) .
Ekstrak etanol herba alfalfa menghasilkan daya hambat yang  bersifat  iradikal  pada P.  acnes .  Zona  hambat iradikal  hanya  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri saja, tidak sampai membunuh bakteri tersebut. Zona  iradikal  ditandai  dengan  daerah  yang  tidak terlalu  jernih  di  sekitar  kertas  cakram  larutan  uji karena masih ada bakteri yang dapat tumbuh pada zona tersebut. Sementara itu, zona hambat dari klindamisin menunjukkan  zona  radikal  yang  jernih  disekitar cakramnya. Tampilan  hasil  uji  aktivitas  antibakteri EEHA terhadap P.acnes dapat dilihat pada Gambar 3.
Identifikasi  Senyawa  Flavonoid. Ekstrak diidentiﬁ kasi senyawa ﬂ avonoidnya menggunakan uji Shinoda karena penggunaan reaksi HCl pada uji ini dapat mendeteksi secara spesiﬁ k melalui pembentukan kompleks  tahan  asam  dengan  gugus  hidroksi  (C3 atau  C6)  dan  keton  serta  pembentukan  kompleks tidak  tahan  asam  dengan  gugus  orto-dihidroksil (16). Ekstrak  etanol  herba  alfalfa  menunjukkan  hasil positif ﬂ avonoid dengan menghasilkan warna merah kecoklatan  (Gambar  2).  Flavonoid  merupakan senyawa  yang  mengandung  dua  cincin  aromatik dengan  gugus  hidroksi  lebih  dari  satu.  Serbuk  Mg dan  HCl  pekat  akan  mereduksi  inti  benzopiron dari  ﬂ avonoid  sehingga  terbentuk  garam  ﬂ avilum berwarna  merah  jingga (17) .  Penambahan  HCl pada  uji  senyawa  ﬂ avonoid  dapat  menghidrolisis O-glikosil  yang  akan  menghidrolisis  flavonoid menjadi aglikonnya. Glikosil akan tergantikan oleh H+  dari  asam  karena  sifatnya  yang  elektroﬁ lik (18) .
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia  258

## Vol 19, 2021
Gambar 3. Tampilan hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol herba alfalfa terhadap Propionibacterium acnes Keterangan : zona iradikal;              zona radikal
Aktivitas  antibakteri  suatu  zat  dipengaruhi oleh  faktor-faktor  diantaranya  konsentrasi ekstrak,  kandungan  senyawa  metabolit,  daya difusi  ekstrak  dan  jenis  bakteri  yang  dihambat. Berdasarkan  hasil  pengukuran  DDH  yang  tertera pada  Tabel  I  menunjukkan  bahwa  seluruh  seri konsentrasi  ekstrak  etanol  herba  alfalfa  memiliki nilai DDH yang berbeda secara signiﬁ kan terhadap kontrol  negatif  (p<0,05)  artinya  EEHA  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap P.acnes secara in vitro , sedangkan EEHA seluruh konsentrasi terdapat perbedaan  yang  signiﬁ kan  terhadap  kontrol  positif (p<0,05)  artinya  kontrol  positif  memiliki  aktivitas
antibakteri  yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan EEHA secara in vitro .  Sementara itu, ekstrak etanol herba  alfalfa  konsentrasi  40%  memiliki  aktivitas antibakteri  yang  berbeda  secara  signiﬁ kan  dengan konsentrasi  lain  (60,  70,  80)%  (p<0,05),  tetapi sebanding aktivitas antibakterinya dengan konsentrasi 50%  (p>0,05). Aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol herba  alfalfa  konsentrasi  50%  berbeda  secara signiﬁ kan dengan konsentrasi (60, 70, 80)% (p<0,05).
Klindamisin  merupakan  zat  antibakteri  murni sehingga  sudah  terbukti  sangat  berpotensi  dalam membunuh  bakteri P.acnes yang  ditunjukkan terbentuknya  zona  radikal  di  sekitar  cakram klindamisin, sedangkan EEHA berupa ekstrak kasar yang  masih  mengandung  bahan  organik  lain  selain senyawa aktif antibakteri. Bahan organik lain yang diduga  masih  terdapat  dalam  ekstrak  etanol  herba alfalfa  yaitu  resin  yang  merupakan  zat  pengotor sehingga  dapat  mengganggu  senyawa  aktif  dalam ekstrak dalam menghasilkan aktivitas antibakteri (22) . P.acnes merupakan  bakteri  gram  positif  yang memiliki  struktur  dinding  sel  dengan  lebih  banyak peptidoglikan,  sedikit  lipid  (1-4  %)  dan  dinding sel  mengandung  polisakarida  (asam  teikoat). Asam teikoat  merupakan  polimer  yang  larut  dalam  air, yang  berfungsi  sebagai  transport  ion  positif  untuk keluar  atau  masuk.  Sifat  larut  air  tersebut  yang menunjukkan bahwa dinding sel bakteri gram positif bersifat  lebih  polar  sehingga  lebih  sukar  ditembus oleh  senyawa  antibakteri  yang  bersifat  non  polar. Flavonoid  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap
Perlakuan Rata-rata DDH ± SD (mm) Tipe zona EEHA 40% 14,60±0,261 Iradikal EEHA 50% 14,89±0,236 Iradikal EEHA 60% b 15,56±0,300 Iradikal EEHA 70% b 16,52±0,368 Iradikal EEHA 80% b 18,59±0,311 Iradikal DMSO 50% a - - Klindamisin 2µg/disk 20,54±0,420 Radikal
Tabel 1. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol herba alfalfa terhadap Propionibacterium acnes secara in vitro Menggunakan Metode Difusi Cakram
Keterangan : EEHA = ekstrak etanol herba alfalfa (-)   = Tidak ada diameter daerah hambat (a) = p < 0,05, berbeda signiﬁ kan terhadap seluruh seri konsentrasi EEHA dan kontrol positif
(b) = p < 0,05, berbeda signiﬁ kan terhadap EEHA konsentrasi 40% dan 50%
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
259  SAFITRI ET AL.
Propionibacterium  acnes dari  gugus  alkohol  pada ﬂ avonoid yang bereaksi dengan dinding sel bakteri yang  terdiri  atas  lipid  dan  asam  amino  sehingga dinding sel rusak dan senyawa tersebut masuk ke inti sel bakteri. Inti sel bakteri akan lisis dan mati karena DNA pada inti sel kontak dengan senyawa ini dengan adanya perbedaan kepolaran pada gugus alkohol dan lipid penyusun DNA pada senyawa ﬂ avonoid terjadi reaksi  kerusakan  pada  struktur  lipid  dari  DNA (23) . Uji Aktivitas Antijerawat  Ekstrak  Etanol Herba  Alfalfa  (EEHA)  Secara Ex  Vivo .
Uji aktivitas antijerawat secara ex vivo diawali dengan injeksi  suspensi  bakteri  P.acnes  secara  intradermal sebanyak  0,2  ml.  Kulit  kelinci  mengalami  udem dan inﬂ amasi sesaat setelah injeksi suspensi bakteri.
Inﬂ amasi  yang  terjadi  setelah  induksi  diakibatkan karena  suspensi  bakteri P.  acnes menghasilkan enzim lipase yang menjadi mediator untuk merubah trigliserida menjadi asam lemak bebas. Asam lemak bebas menjadi media yang baik untuk pertumbuhan bakteri  sehingga  jumlah  bakteri  akan  bertambah dan  menyebabkan  inﬂ amasi  jaringan (24) .  Kulit  yang mengalami  inﬂ amasi  akibat  adanya  infeksi  bakteri akan  memicu  timbulnya  jerawat  setelah  24  jam pemberian  induksi  bakteri  tersebut. Tampilan  kulit kelinci  pada  proses  induksi  bakteri P.acnes dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4. Tampilan uji aktivitas antijerawat secara ex vivo (a) Permukaan kulit kelinci normal (sebelum diinduksi), (b) Udem dan kemerahan sesaat setelah diinduksi suspensi P. acnes , (c) timbulnya jerawat setelah 24 jam diinduksi suspensi bakteri P.acnes (0,2 ml)
Berdasarkan anatomi dan ﬁ siologi, kulit normal mengalami  pergantian  kulit  berkisar  antara  14- 21  hari  sehingga  pengujian  antijerawat  secara ex vivo dilakukan  15  hari  untuk  memperoleh  hasil yang  optimal (25) .  Kulit  yang  mengalami  proses penyembuhan  jerawat  dapat  dilihat  dengan  tanda tidak kemerahan, tidak mengalami pembengkakan dan beberapa pada jerawat kelinci tidak terdapat nanah.
Persentase rata-rata penurunan diameter eritema pada EEHA (50%, 60%  dan 70%) secara berturut- turut sebesar 48,70%; 48,26% dan 54,09%. Potensi antijerawat  ekstrak  etanol  herba  alfalfa  pada konsentrasi  50%,  60%  dan  70%  berbeda  tidak signifikan  jika  dibandingkan  antar  konsentrasi
(p>0,05)  artinya  potensi  EEHA  pada  konsentrasi rendah  sebanding  dengan  konsentrasi  yang  lebih tinggi  (Gambar  5).  Ekstrak  etanol  herba  alfalfa belum optimal dalam mengurangi eritema pada kulit kelinci yang mengalami jerawat. Hal tersebut dapat dikarenakan  konsentrasi  flavonoid  dalam  ekstrak terlalu kecil sehingga potensinya sebagai antijerawat tidak optimal. Herba alfalfa yang diekstraksi dengan etanol  70%  diduga  lebih  banyak  flavonoid  yang bersifat lebih polar dibandingkan non polar. Sementara itu,  susunan  kulit  yang  terdiri  atas  lapisan  lemak, dimungkinkan akan lebih sulit ditembus oleh senyawa yang memiliki sifat polar, salah satunyanya ﬂ avonoid yang terkandung dalam ekstrak etanol herba alfalfa.
(a) (b) (c)
Gambar 5. Graﬁ k rata-rata penurunan diameter eritema kelinci pada uji antijerawat secara ex vivo (±SE)
Keterangan : * : terdapat perbedaan yang tidak signiﬁ kan dibandingkan dengan kontrol negatif (p>0,05) **: terdapat perbedaan yang signiﬁ kan dibandingkan dengan kontrol negatif (p<0,05)

## SIMPULAN
Ekstrak  etanol  herba  alfalfa  mengandung  senyawa flavonoid  sebesar  2,323±0,264  mgQE/gram dan  memiliki  potensi  sebagai  antijerawat  yang disebabkan  oleh  bakteri Propionibacterium  acnes meskipun  efek  yang  dihasilkan  belum  optimal.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  penulis  sampaikan  kepada  pihak- pihak  yang  terlibat  dalam  penelitian  ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Brzuszkiewicz,  E.,  January,  W., Antje,  W., Andrea, T.,  Jennifer,  H.,  Hans,  B. L.,  Mogens, K., Gerhard, G., Rolf, D., Hans, J. M., Thomas, F.  M.,  dan  Holger,  B.  Comparative  Genomics and  Transcriptomics  of Propionibacterium a c n e s ,   P l o s   O n e ,   2 0 11 ,   6 ( 6 ) : 1 - 1 3 .
2.  Tunnisa,  M.,  Mulqie,  L.,  dan  Hajar,  S.,  20Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Kentang (Solanum tuberosum L.) terhadap Staphylococcus aureus  [skripsi].  Bandung  :  Fakultas  Farmasi Universitas  Islam  Bandung;  2015.  hal.  24
3.  Dewi,  D.  N.  S. Aktivitas Antibakteri  Minyak
Atsiri  Batang  Sereh  (Cymbopogon  citratus) terhadap Propionibacterium  acnes Secara In  vitro [skripsi].  Jawa  Timur:    Fakultas Kedokteran  Universitas  Jember.  2015.  hal.  54 4.  Karimi,  E.,  Oskoueian,  E.,  Oskoueian,  A.,
Omidvar,  V.,  Hendra,  R.,  Nazeran,  H.  Insight Into the Functional and Medicinal Properties of Medicago Sativa (Alfalfa) Leaves Extract. Journal of Medicinal Plants Research. 2013. 7(7):290-297
5.  Susilowati,  S.,  Nuria,  M.C.,  dan  Budiarti., A .   I d e n t i f i k a s i   K a n d u n g a n   S e n y a w a K i m i a   Ek s t ra k   E t a n o l   H e r b a   A l fa l f a ( Medicago  sativa L.),  Jurnal  Ilmu  Farmasi dan  Farmasi  Klinik,  2014,  9  (2):738-741.
6.  Madeswaran, A., Umamaheswari, M., Asokkumar, K.,  Sivashanmugam,  T.,  Subhadradevi,  V., J ag a nn at h,  P.   Di s cov er y  of   P ot en t i al Cyclooxygenase  Inhibitors  Using  in  Silico Docking  Studies.  J.Pharmacol.  2011,  7:21–27. 7.  Osuntokun,  O.T.,  Jemilaiye,  T.A.,  and Akele,
E.O. Antimicrobial  Properties,  Phytochemical Composition, and Phenotypic Resistance Pattern of  Selected  Enterophatogenic  Microorganism in Ageratum  conyzoides  (Goat  Weed)  Leaf Extract, Intl. Res. J. Microbiol. 2018. 7(2):18-28 8.  Doss, A.,  Parivuguna,  V.,  Vijayasanthi,  M., and  Surendran,  S. Antibacterial Evaluation and Phytochemical Analysis of Medicago  sativa L. Against Some Microbial Pathogens, Indian Journal
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
261  SAFITRI ET AL.
of Science and Technology, 2011, 4(5):550-552.
9.  Sa’diah,  S.,  Darusman,  L.K.,  Triwahyuni,  W., dan Batubara, I., Efektivitas Krim Anti Jerawat Kayu  Secang  (Caesalpinia  sappan)  Terhadap Prpionibacterium acnes pada Kulit Kelinci, Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 2013, 11(2):175-181. 10.  Depkes  RI.  Cara  Pembuatan  Simplisia,
J a k a r t a   :   D e p a r t e m e n   K e s e h a t a n R e p u b l i k   I n d o n e s i a ;   1 9 8 5 .   p .   1 1 .
11.  Depkes  RI.  Materia  Medika  Indonesia, Jakarta  :  Direktorat  Jendral  Pengawasan O b a t   d a n   M a k a n a n ;   1 9 9 5 .   P.   3 3 7 . 12.  Puspitasari,  A.D.,  dan  Wulandari,  R.  L. A kt i vi t as   Ant i o ks i da n   da n   P en et apan Kadar  Flavonoid  Total  Ekstrak  Etil Asetat Daun  Kersen  (Muntingia  calabura).  Jurnal P h a r m a s c i e n c e .   2 0 1 7 .   4 ( 2 ) : 1 67 - 1 7 5 .
13.  Jangnga,  I.D.,  Kabaya,  P.P.,  dan  Kosala,  K.
Uji  Aktivitas  Antibakteri  dan  Analisis Bioautograﬁ   Kromatograﬁ   Lapis Tipis  Ekstrak Etanol  Daun  Srikaya  (Annona  squamosa  L.) terhadap  Enterococcus  faecalis  secara In  Vitro . ODONTO  Dental  Journal.  2018.  5(2):104-105.
14.  Samin,  A.,  Ahmad,  Bialangi,  dan  Salimu. Penentuan Kandungan Fenolik Total dan Aktivitas Antioksidan dari Rambut Jagung (Zea mays L.) yang  Tumbuh  di  Daerah  Gorontalo  [skripsi]. Gorontalo  :  Fakultas  Matematika  dan  IPA Universitas  Negeri  Gorontalo;  2013.  hal.  57 15.  Backer  and  Van  Den  Brink.  Flora  of  Java Volume  I,  II,  III,  Netherland  :  Woilters Noor dhoff,  Gr oni ngen;   1968.  p.  313. 16.  Markham,  K.R.  Cara  Mengidentifikasi F l a v o n o i d ,   B a n d u n g   :   I n s t i t u t e Te knologi   B andung  Pre ss;   1988.  5-6.
17.  Ergina.,  Nuryanti,  S.,  dan  Puspitasari,  I.D., Uji  Kualitas  Senyawa  Metabolit  Sekunder Pada  Daun  Palado  (Agave  angustifolia) Yang  Diekstraksi  Dengan  Pelarut  Air  Dan
Etanol.  J.  Akad.  Kim.  2014.  3(3):169.
18.  Ikalinus,  R.,  Widyastuti,  S.K.,  dan  Setiasih, N.L.E.  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol
Kulit  Batang  Kelor  (Moringa  oleifera). Indonesia  Medicus  Veterinus.  2015.  4(1):76. 19.  A z i z a h ,   D . N . ,   K u m o l o w a t i ,   E . ,   d a n Faramayuda,  F.  Penetapan  Kadar  Flavonoid Metode AlCl3  pada  Ekstrak  Metanol  Kulit Buah  Kakao  (Theobroma  cacao  L.).  Kartika Jurnal  Ilmiah  Farmasi.  2014.  2(2):45-49. 20.  Panche,  A.N.,  Diwan,  A.D.,  and  Chandra,
S.R.  Flavonoids:  an  overview.  Journal o f   N u t r i t i o n a l   S c i e n c e .   2 0 1 6 .   5 : 4 7 . 21.  Brito,  R.  C.,  Silva,  D.G.N.,  Farias,  T.C.,  and Ferreira,  S.  B.  Standarization  of  The  Safety Level of The Use of DMSO in Viability Assays in  Bacterial  Cells.  International  Conference Series on Multidiciplinary Science. 2017. 3:1-6. 22.  Huda,  C.,  Putri,  A.E.,  dan  Sari,  D.W.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Fraksi  dari  Maserat Zibethinus  folium  terhadap  Escherichia coli.  Jurnal  SainHealth.  2019.  3(1):7-12.
23.  Mukti,  D.  Uj i  Efekti vitas   Antibakte ri Ekstrak  Etanol  Buah  Pare  (Momordica charatia  L.)  Terhadap  Streptococcus  mutans Penyebab  Karies  Gigi  [skripsi].  Jawa  Barat :  Universitas  Pakuan  Bogor;  2012.  hal.  26.
24.  Beylot,  C.,   Auffret,  N.,  Poli,  F.,    Claudel, J.-P.,  Leccia,  M.-T.,  Giudice,  P.  Del.,  and Dreno,  B. Propionibacterium  acnes :  an update  on  its  role  in  the  pathogenesis of  acne.  Journal  of  European  Academy  of Dermatology Veneorology. 2013. 28 (3):271-278. 25.  Angraini,  L.,  Rostamailis.,  dan  Minerva,  P.,
Pengaruh  Pemanfaatan  Lulur  Pepaya  (Carica papaya  L.)  Terhadap  Pencerahan  Kulit  Badan, Sumatra  Barat  :  Fakultas  Teknik  Jurusan Kesejahteraan Keluarga Program Studi Pendidikan Tata  Rias  Dan  Kecantikan.  2015.  hal.  7.