## Juni 2017

## UJI TOTAL KANDUNGAN FLAVONOID DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAUN
KEMBANG BULAN ( Thitonia diversifolia (Hemsley) A. Gray)
Lia Anggresani 1 , Yuliawati 2 , Eliza Desriyanti 3 1,2,3 Program Studi Farmasi, STIKES Harapan Ibu, Jambi, Indonesia anggresani@yahoo.com

## Abstrak
Latar  Belakang :  Flavonoid merupakan  senyawa  yang berpotensi  sebagai  antioksidan dimana antioksidan  merupakan  senyawa  yang  dapat  meredam  radikal  bebas.  Tumbuhan  Daun Kembang Bulan ( Tithonia diversifolia (Hemsley) A. Gray) adalah suatu tumbuhan yang memiliki kandungan  senyawa  flavonoid.  Tujuan  untuk  mengetahui  kadar  flavonoid  dan  aktivitas antioksidan pada ekstrak daun kembang bulan.
Metode: Penentuan  kadar  flavonoid  total  dinyatakan  sebagai  ekivalen  dari  kuersetin  (µg/ml) dengan metode Spektrofotometer UV-Vis dan uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH. Hasil: Hasil penelitian didapat bahwa kadar flavonoid total pada ekstrak daun kembang bulan adalah  0,00592667%  dan  pengujian  aktivitas  antioksidan  memberikan  nilai  IC 50 sebesar 145,67µg/ml.
Kesimpulan: Ekstrak daun kembang bulan memiliki aktivitas antioksidan yang sedang dimana nilai IC 50 berada pada range 101-250.
Kata Kunci : Flavonoid, Antioksidan, Tithonia diversifolia

## Abstract
Background  : Flavonoid  is  a  compound  that  have  the  potency  as  an  antioxidant  which  can reduce free radicals. Kembang bulan leaves ( Tithonia diversifolia (Hemsley) A. Gray) is a plant that  contains  flavonoid.  This  research  is  to  know  the  total  flavonoid  content  and  antioxidant activity of the extract kembang bulan leaves.
Method  : Determination  of  total  flavonoid  content  using  a  UV-Vis  spectrophotometer  and antioxidant acyivity using DPPH method.
Results : total flavonoid  content from the extracts kembang bulan leaves  is 0,00529667% and antioxidant activity give an IC 50 value is 145,67 µg/ml Conclusion : The extracts of kembang bulan leaves have a medium activity as antioxidant. Key words : Flavonoid, Antioxidant, Tithonia diversifolia

## PENDAHULUAN
Indonesia kaya akan tumbuhan yang dapat  dimanfaatkan  sebagai  tanaman  obat salah  satunya  adalah  tanaman  Kembang Bulan. Kembang bulan ( Tithonia diversifolia (Hemsley)  A.Gray)  merupakan  spesies tumbuhan  yang  termasuk  dalam  family Asteraceae.  Tumbuhan  ini  secara  empirik telah  lama  digunakan  oleh  masyarakat  di Asia  Selatan,  Amerika  Tengah  dan  Afrika digunakan untuk mengobati beberapamacam penyakit(1).
Tanaman kembang bulan berkhasiat sebagai obat diabetes, malaria dan penyakit infeksi  lainnya(2).  Kandungan  kimia  dari daun,  kulit  batang  dan  akar  tumbuhan kembang  bulan  mengandung  saponin, polifenol dan flavonoid.
Flavonoid merupakan senyawa polifenol  yang  mengandung  15  atom karbondalam  inti  dasarnya  yang  tersusun dalam  konfigurasi  C6-C3-C6,  yaitu  dua cincin  aromatik  yang  dihubungkan  oleh satuan  tiga  karbon  yang  dapat  atau  tak

## Juni 2017
dapat membentuk cincin ketiga(3). Kedudukan  gugus  hidroksi  fenol  bebas pada inti flavonoid dapat ditentukan dengan menambahkan  pereaksi  geser  ke  dalam larutan cuplikan dan mengamati pergeseran puncak  serapan  yang  terjadi.  Sejumlah tanamanobat  yang  mengandung  flavonoid telah dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan, antibakteri, antivirus, antiradang, antialergi dan antikanker(4).
Antioksidan  merupakan  zat  yang dapat  menetralkan  radikal  bebas.  Radikal bebas adalah senyawa kimia yang mempunyai  satu  atau  lebih  elektron  yang tidak  berpasangan,  senyawa  ini  harus mencari electron lain sebagai pasangan (5). Pada  penelitian  ini  digunakan  metode DPPH untuk mengukur aktivitas antioksidan. Metode  DPPH  dipilih  karena merupakan  metode  yang  cepat,  sederhana dan murah (6).

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  rotary evaporator,  timbangan  analitik,  plat  tetes, spatel, Erlenmeyer, tabung reaksi, seperangkat  alat  spektrofotometer  UV-Vis, kertas  saring,  gelas  kimia,  vial,  aluminium foil,  batang  pengaduk,  corong,  pipet  tetes, pipet volume, kertas sarang dan labu ukur.
Bahan yang digunakan adalah daun kembang  bulan, methanol  p.a,  etanol  70%, AlCl 3 , DPPH, Vitamin C, FeCl 3 , HCl, serbuk Mg,  aquadest  dan  kuersetin  sebagai  baku pembanding.

## Prosedur Kerja

## 1.  Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah  daun  kembang  bulan  yang diambil  dari  daerah  Kerinci  Provinsi Jambi

## 2.  Pembuatan  Ekstrak  Daun  Kembang Bulan
Daun  Kembang  bulan  dikeringanginkan sampai kering ± 7 hari pada suhu kamar terlindung  dari  cahaya  dan  dirajang kemudian  dimaserasi  dengan  etanol 70%  selama  3  hari  sambil  sesekali
diaduk kemudian disaring sari etanolnya,  dipisahkan  dari  ampas, ulangi  proses  maserasi  kembali  sampai 3x  pengulangan.  Selanjutnya  dilakukan pemekatan dengan menggunakan vacuum  rotary  evaporator  dengan  suhu 50-60 o C sampai diperoleh ekstrak kental daun kembang bulan.
3.  Pembuatan Larutan Induk Kuersetin
Larutan induk dibuat dengan
menimbang 10 mg kuersetin, dicukupkan  dengan  etanol  sampai  25 ml,  sehingga  konsentrasi  larutan  induk 400  µg/mL.  Dari  larutan  induk  dipipet sebanyak  0,65  mL  diencerkan  dengan etanol,  add  sampai  10  mL,  sehingga konsentrasinya  26  μg/mL.  Larutan tersebut  diambil  sebanyak  2  mL  lalu ditambahkan  2 mL AlCl 3 2%  yang  telah dilarutkan  dalam  etanol.  Kemudian  di kocok  dan  didiamkan  selama  30 menit.Larutan tersebut diukur serapannya  dengan  spektrofotometer UV-Vis  pada  panjang  gelombang  200- 800 nm.
4.  Pembuatan  Kurva  Kalibrasi  Larutan Standar Kuersetin
Pembuatan  kurva  kalibrasi  dengan kuersetin sebagai pembanding. Pembuatan  kurva  kalibrasi  dengan variasi konsentrasi 8, 10, 12, 14 dan 16 µg/mL.  Ambil  2  mL  dari  masing-masing konsentrasi  ditambahkan  dengan  2  mL AlCl3  2%  yang  telah  dilarutkan  dengan etanol  lalu  kocok  dan  diamkan  selama 30  menit.  Diukur  serapannya  dengan sprektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang yang telah didapatkan sebelumnya.
5.  Penentuan  Kadar  Flavanoid  Total Ekstrak Kembang Bulan
Ekstrak  kental  yang  diperoleh  dari ekstraksi  dilarutkan  dalam  aquadest. Lalu  diambil  2  mL  dari  ekstrak tambahkan  2  mL  AlCl 3 2%  yang  telah dilarutkan  dengan  etanol,  lalu  dikocok dan  didiamkan  selama  30  menit. Absorbansi diukur pada panjang gelombang yang telah didapatkan sebelumnya.Perhitungan  rata-rata  tiga
kali  pengukuran.  Kadar  flavonoid  total dinyatakan sebagai ekuivalen dari
kuersetin (µg/mL). 6.  Penentuan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
a.  Pembuatan Reagen DPPH
DPPH  (1,1  diphenil-2-pikrihidrazil) ditimbang  sebanyak  10  mg  dan dilarutkan  dengan  methanol  add hingga  100  mL  sehingga  diperoleh konsentrasi larutan DPPH 100 (µg/mL).
b.  Penentuan  Panjang  Gelombang

## Maksimum DPPH
Dipipet  sebanyak  35  mL  larutan DPPH add dengan methanol 100 ml (konsentrasi  35µg/mL).  Setelah  itu biarkan  selama  30  menit  ditempat gelap. Lalu ukur serapannya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 400-800 nm c.  Pemeriksaan Aktivitas

## Antioksidan
Ekstrak sampel ditimbang 10 mg lalu add dengan aquadest hingga 25 mL (konsentrasi  400  µg/mL).  Kemudian buat  seri  konsentrasi  10,  20,  30,  40 dan  50  µg/mL.  Untuk  penentuan aktivitas  antioksidan  masing-masing konsentrasi dipipet sebanyak 0,2 mL larutan  sampel  dan  masukkan  ke dalam vial, kemudian tambahkan 3,8 mL larutan DPPH 35 µg/mL.
Campuran dihomogenkan dan dibiarkan  selama  30  menit  ditempat gelap  dan  terlindung  dari  cahaya,
lalu serapan diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum DPPH  yang  didapat  sebelumnya. Pembanding yang digunakan adalah vitamin  C  dengan  perlakukan  yang sama dengan sampel uji.
Aktivitas antioksidan sampel ditentukan  oleh  besarnya  hambatan serapan radikal DPPH melalui perhitungan persentase inhibisi serapan DPPH dengan
menggunakan rumus :
Keterangan : A1 = Absorban Kontrol A2=  Absorban  Sampel  (DPPH  + sampel)
Aktivitas  antioksidan  dapat  dilihat  dari nilai  IC 50 yaitu  konsentrasi  larutan sampel yang memberikan inhibisi sebesar  50%  terhadap  radikal  DPPH. Nilai  IC 50 diperoleh  dari  persamaan regresi : Y = a + bx Dimana : Y = % inhibisi X = konsentrasi larutan sampel

## HASIL
Hasil ekstraksi daun kembang bulan 33,874g  didapatkan  rendemennya  5,645%. Proses  ekstraksi  sampel  dilakukan  dengan cara maserasi dengan menggunakan pelarut  etanol.  Proses  maserasi  dilakukan karena  tidak  membutuhkan  waktu  yang lama.
Hasil  uji  skrining  flavonoid  dari ekstrak  daun  kembang  bulan  menunjukkan positif adanya flavonoid dengn terbentuknya warna  merah  pada  penambahan  serbuk Mg, etanol dan HCl.
Analisis  kandungan  total  flavonoid dilakukan  untuk  mengetahui  seberapa besar  kandungan  flavonoid  yang  terdapat pada ekstrak daun kembang bulan. Penentuan kandungan total flavonoid dinyatakan sebagai kuersetin mg/mL. Pengukuran panjang gelombang maksimum kuersetin  dengan  pereaksi  geser  AlCl 3 didapatkan  panjang  gelombang  438,5  nm. Setelah  diperoleh  panjang  gelombang  dari kuersetin,  kemudian  dilakukan  pembuatan kurva kalibrasi dengan seri pengenceran (8, 10, 12, 14, dan 16 µg/mL) dan diukur pada panjang  gelombang  maksimum  438,5  nm. Sehingga  didapatkan  hasil  persamaan regresi  yaitu  Y  =  0,036x –  0,037  dan  r  = 0,998 (Tabel 1) (Gambar 1).
Penetapan  kadar  flavonoid  total dilakukan  sebanyak  tiga  kali  pengukuran absorban sampel, dan kandungan flavonoid

## Juni 2017
dinyatakan dengan kesetaraan baku pembanding  kuersetin  dan  didapatkan kandungan  flavonoid  total  pada  daun kembang bulan adalah 0,00592667%.
Tabel  1.  Hasil  Pengukuran  Absorbansi Standar Kuersetin
Konsentrasi (µg/mL) Absorbansi (λ = 438,5 nm) 8 0,25348 10 0,31793 12 0,39793 14 0,47329 16 0,53712

## Gambar 1. Kurva Kalibrasi Standar Kuersetin
Adanya  kandungan  flavonoid  pada daun  kembang  bulan  memberikan  potensi aktivitas antioksidan.Semakin
besar
kandungan  flavonoid  pada  suatu  tanaman maka semakin tinggi
aktivitas antioksidannya.Uji aktivitas antioksidan pada  penelitian  ini  dilakukan  dengan metode DPPH.
Pada pengujian aktivitas antioksidan digunakan larutan
DPPH dengan
konsentrasi  35  μg/mL.  Didapatkan  hasil serapan maksimum pada panjang gelombang  515,5  nm  dengan  absorban 0,820.  Panjang  gelombang  ini  digunakan untuk  pengukuran  aktivitas  antioksidan larutan sampel.Larutan sampel diukur dengan seri konsentrasi (10, 20, 30, 40, dan 50 µg/mL) dan vitamin C digunakan sebagai pembanding  kemudian  diukur  absorbansi dan persen inhibisi.
Persen  inhibisi  adalah  kemampuan suatu  sampel  untuk  menghambat  aktivitas
radikal  bebas  yang  berhubungan  dengan konsentrasi  suatu  sampel.  Persen  inhibisi didapatkan  dari  perbedaan  serapan  antara absorbansi  kontrol  negatif  dengan  sampel yang  diukur  dengan  spektrofotometri  UV- Vis.  Dari  hasil  pengukuran  sampel  dengan beberapa  konsentrasi  didapatkan  persen inhibisi (Tabel 2) dan persamaan regresinya Y = 0,247x + 13,93 (Gambar 2).
Tabel  2.  Hasil  Pengukuran  Absorbansi Sampel dan % Inhibisi Sampel
Gambar 2. Kurva %Inhibisi Sampel Kembang Bulan
Dari  hasil  IC 50 memiliki  nilai  kurang dari  150  ppm.  Hal  tersebut  sesuai  dengan penelitian Jun et al yang mengklasifikasikan tingkat  kekuatan  antioksidan  menggunakan metode uji DPPH dapat dilihat pada tabel 3.
Sedangkan  %  inhibisi  pada  Vitamin C  terlihat  pada  tabel  4  dengan  persamaan regresi Y = 0,242x + 32,37. Parameter yang digunakan  untuk  menunjukkan  aktivitas antioksidan  adalah  Inhibition  Concentration
y = 0,0361x - 0,0376 R² = 0,9985 0 0,2 0,4 0,6 0  2  4  6  8  10  12  14  16  18 A b so rb an Konsentrasi (µg/mL) y = 0,2476x + 13,939 R² = 0,9986 0 10 20 30 0 20 40 60 % In h ib isi Konsentrasi (ppm) Konsentrasi (ppm)
X Absorban (Sampel + DPPH) Rata 2 Abs % Inhibisi (Y) IC 50 (ppm) 10 1.  0,6843 2.  0,6835 3.  0,6834 0,684 16,5853 145,67 20 1.  0,66737 2.  0,66669 3.  0,66724 0,667 18,6585 145,67 30 1.  0,64394 2.  0,64458 3.  0,66724 0,645 21,3414 145,67 40 1.  0,62309 2.  0,62299 3.  0,62500 0,624 23,9024 145,67 50 1.  0,60544 2.  0,60390 3.  0,60428 0,604 26,3414 145,67

## Juni 2017
(IC 50 ) dimana semakin kecil nilai IC 50 berarti akktivitas antioksidannya semakin tinggi.
Tabel 3. Tingkat kekuatan antioksidan (7) Intensitas IC 50 Sangat Aktif < 50 ppm Aktif 50-100 ppm Sedang 101-250 ppm Lemah 250-500 ppm
Tabel 4.Hasil Pengukuran Absorbansi Nilai % inhibisi Vitamin C Konsentrasi (ppm) X Absorban (Sampel + DPPH) Rata 2 Abs % Inhibisi (Y) IC 50 (ppm) 10 1.  0,52374 2.  0,53456 3.  0,55324 0,537 34,5121 72,629 20 1.  0,52676 2.  0,50656 3.  0,50517 0,513 37,4390 72,629 30 1.  0,49290 2.  0,49290 3.  0,49565 0,493 39,8780 72,629 40 1.  0,47189 2.  0,47208 3.  0,47917 0,474 42,1951 72,629 50 1.  0,45746 2.  0,45648 3.  0,45715 0,457 44,2682 72,629

## Gambar 3. Kurva Inhibisi Vit C

## PEMBAHASAN
Ekstraksi  sampel  dilakukan  dengan cara  maserasi.  Maserasi  adalah  proses pengekstrakan simplisia dengan
menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur  ruang.  Pelarut  yang  digunakan adalah  etanol  70%.  Etanol  digunakan sebagai pelarut dengan kemampuan
ekstraksi  yang  tinggi  untuk  hampir  semua senyawa bahan alam.
Penentuan kadar flavonoid dilakukan dengan metode spektrofotometeri UV-Vis.  Kedudukan  gugus  hidroksil  fenol bebas  pada  inti  flavonoid  dapat  ditentukan dengan  penambahan  pereaksi  geser  ke dalam larutan.
Pada  penelitian  ini  menggunakan pereaksi  geser  AlCl 3 .Pereaksi  ini  dapat membentuk  kompleks  antara  gugus  keton pada  atom  C-4  dan  juga  dengan  gugus hidroksil  pada  atom  C-3  atau  C-4  yang bertetangga  dari  flavon  dan  flavonol. Dimana  dasar  penentuan  kadar  flavonoid secara  spektrofotometri  adalah  adanya kemampuan  flavonoid  untuk  membentuk kompleks  dengan  AlCl 3 yang  membentuk warna kuning. Berikut reaksi DPPH dengan flavonoid  membentuk  warna  kuning  dan radikal flavonoid (8)
Gambar  4.  Reaksi  DPPH  dengan  flavonoid membentuk warna kuning
Antioksidan  dapat  menghentikan  reaksi radikal bebas. Usaha pencarian antioksidan alami  terus  dilakukan  untuk  menggantikan antioksidan  sintetis  yang  masih  diragukan tingkat keamanannya (9).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan  bahwa  jumlah  kadar  flavonoid total  ekstrak  daun  kembang  bulan  adalah 0,00592667% dan memiliki aktivitas antioksidan  yang  sedang  dengan  IC 50 adalah 145,67 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Wahyuni  M,  Saleh  C,  Kartika  R, Bahan  A.  Uji  Toksisitas  (  Brine Shrimp  Lethality  Test  )  Dan  Uji
y = 0,2427x + 32,378 R² = 0,9958 0 10 20 30 40 50 0 20 40 60 % In h ib isi Konsentrasi (ppm)

## Juni 2017
Aktivitas  Antibakteri  Daun  Kembang Bulan ( Tithonia diversifolia A . Gray ) Terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus  dan  Escherichia  coli.  J  Kim Mulawarman. 2015;12:79 –82.
2. Zirconia,  Aisyah ;  Kurniasih,  Nunung dan  Amalia  V.  Identifikasi  Senyawa Flavonoid Dari Daun Kembang Bulan (Tithonia Diversifolia) Dengan Metode  Pereaksi  Geser.  al  Kim. 2015;2(Juni):9 –17.
3. Markham,  K.H.  1988.  Cara,  2).  MF (Edisi,  I.  PKP  dan,  ITB.  SBP.  No Title.
4. Artanti,  Nina ;  Ma’arifa,  Yelli ;  Hanafi M.  Isolation  and  Identification  of Active  Antioxidant  Compound  from Star  Fruit  (Averrhoa  carambola)
Mistletoe  (Dendrophthoe  pentandra (L.)  Miq.)  Ethanol  Extract.  ISSN 1812-5654; 2006. p. 1659 –63.
5. Hernani. Tanaman Berkhasiat Antioksidan.  Synergy  Media  Books; 2006. 114 p. 6. Prakash  A,  Rigelhof  F,  MIller  E. Antioxidant  Activity.  Eur  Rev  Med Pharmacol Sci. 2011;15(4):376 –8.
7. Jun M, Fu H-Y, Hong J, Wan X, Yang CS, Ho C-T. Comparison of
Antioxidant  Activities  of  Isoflavones from  Kudzu  Root  (Pueraria  lobata Ohwi). J Food Sci. 2003;68(6):2117 – 2122.
8. Dragan  Ami}, a,*  Du{anka  Davidovi}- Ami},  a  Drago  Be{lo    a  and  NT. structure-radical  scavenging  activity relationships  of  flavonoids.  Croat
Chem ACTA. 2002;67(18):2058 –70.
9. Ilkay  Orhan,  Murat  Kartal,  Mahmoud
Abu- Asaker, F. Sezer Şenol, Gülderen  Yilmaz  BŞ.  Free  radical scavenging  properties  and  phenolic characterization of some edible plants.  Food  Chem.  2009;Volume 114(Issue 1) : 276-281.