## PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK BUAH NAGA MERAH

## (Hylocereus polyrhizus) TERHADAP GAMBARAN SPERMATOGENESIS TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus) GALUR WISTAR YANG DIINDUKSI PAKAN TINGGI LEMAK
Yara Cantika 1 , Cut Fauziah 2 , Yuni Setyaningsih 3
1,2,3 Fakultas Kedokteran Universitas Pembangunan Nasional Veteran Jakarta, Indonesia E-mail: yaracantika95@gmail.com

## ABSTRAK
Spermatogenesis dipengaruhi oleh stres oksidatif yang dihasilkan dari peningkatan adipokin pro-inflamasi karena pola makan tinggi lemak. Namun, kerusakan sel-sel spermatogenesis diharapkan dapat dicegah dengan alternatif alami  yaitu  buah  naga  merah  (Hylocereus  polyrhizus).  Penelitian  bertujuan  untuk  menganalisa  pengaruh pemberian ekstrak Hylocereus polyrhizus terhadap sel-sel  spermatogenesis  yang  diinduksi pakan tinggi  lemak. Penelitian berupa true-experiment. 30 ekor tikus dibagi ke dalam 5 kelompok. Kelompok 1 sampai 4 diberikan perlakuan selama 52 hari dan kelompok 5 selama 104 hari.  Kelompok  1 kontrol  negatif (K1) diberikan pakan standar,  kelompok  2  Kontrol  positif  (K2)  diberikan  telur  puyuh  10ml/kgBB,  kelompok  3  Perlakuan  1  (P1) diberikan  telur  puyuh  10ml/kgBB  dan  simvastatin  0,72mg/hari,  kelompok  4  Perlakuan  2  (P2)  diberikan  telur puyuh 10ml/kgBB dan ekstrak Hylocereus polyrhizus dosis 60mg/hari selama 52 hari, dan kelompok 5 Perlakuan 3  (P3)  diberikan  telur  puyuh  10ml/kgBB  dan  ekstrak  Hylocereus  polyrhizus  dosis  60mg/hari  selama  104  hari. Analisis  data  menggunakan  uji  One  Way  ANOVA  dilanjutkan  uji  (P-value=0,05)  pada  perlakuan  52  hari. Kelompok  P1  dan  P2  memperlihatkan  perbaikan  dan  peningkatan  spermatosit  dan  spermatid  bermakna (p.000<0,05) dibandingkan kelompok K2. Kelompok P2 memiliki rata-rata sel spermatosit dan spermatid lebih tinggi dibandingkan kelompok P1 (p.000<0,05). Kelompok P2 52 hari sebanding dengan kelompok P3 104 hari (p.469>0,05)  pada  sel  spermatid.  Ekstrak  Hylocereus  polyrhizus  selain  memiliki  mekanisme  kerja  seperti simvastatin  juga  memiliki  kandungan  antioksidan  dan  perlakuan  jangka  panjang  tidak  memberikan  pengaruh buruk  terhadap  sel  spermatogenesis.  Kesimpulannya,  ekstrak  Hylocereus  polyrhizus  dosis  60mg/hari  dapat memperbaiki dan meningkatkan sel-sel spermatogenesis yang diinduksi pakan tinggi lemak.
Kata Kunci : Hylocereus polyrhizus, pakan tinggi lemak, spermatogenesis, kolesterol, simvastatin

## ABSTRACT
Spermatogenesis can be affected by oxidative stress produced by the increasing of pro-inflammatory adipokines because of high fat diet.The spermatogenesis cells damaged can be prevented with natural substance such as red pitaya  (Hylocereus  polyrhizus).  This  study  aims  to  analyze  effect  of  Hylocereus  polyrhizus  extract  on  rat’s spermatogenesis cells number that induced by high fat diet. This study had used true-experiment design. 30 rats were divided into 5 groups. Groups 1 to 4 had done treatment for 52 days and group 5 treatment for 104 days. Group 1 Negative control (K1) administered with standard diet, group 2 Positive control (K2)  had administered quail egg 10ml/KgBW, group 3 Experiment 1 (P1) had administered quail egg polyrhyzus  10ml/Kg BW and with simvastatin 0,72mg/day, group 4 Experiment 2 (P2) had administered quail egg 10ml/KgBW and wth Hylocereus polyrhizus extract 60mg/day in 52 days, and group 5 Experiment 3 (P3) had administered quail egg 10ml/KgBW and with Hylocereus polyrhizus extract 60mg/day in 104 days. Data were analyzed by One Way ANOVA and continued with Post Hoc Tukey’s HSD (P-Value=0,05) for 52 day groups. Group P1 and P2 showed repairing effect  and  increasing  spermatocytes  and  spermatids  (p.000<0,05)  compared  to  group  K2.  Group  P2  had  more spermatids and spermatocytes than group P1 (p.000<0,05). Group P2 52 days’ spermatid cells equalled to group P3  104  days  (p.469>0,05).  Hylocereus  polyrhizus  extract  not  only  had  mechanism  like  simvastatin  but  also contained antioxidant, and a long-term treatment had not proven bad effect to spermatogenesis cells.  Conclusion. Hylocereus polyrhizus extract 60mg/day can repair and increase spermatogenesis cells induced with high fat diet.
Keywords : Hylocereus polyrhizus, high fat diet, spermatogenesis, cholesterol, simvastatin

## PENDAHULUAN
Gaya hidup memiliki dampak jangka panjang  terhadap  kesehatan  seseorang. Gaya hidup sehat memiliki lima komponen yaitu perilaku tidak merokok, aktivitas fisik 30 menit setiap hari, berat badan ideal, pola makan  ideal,  dan  konsumsi  alkohol  yang tidak  berlebihan.  Gaya  hidup  yang  tidak sehat dengan pola makan tinggi lemak akan meningkatkan  nilai  kolesterol  darah. 1
Kadar  kolesterol  yang  tinggi  pada  jangka waktu  yang  lama  dapat  mempengaruhi berbagai  sistem  organ,  salah  satu  sistem organ  yang  paling  sering  terkena  dampak adalah kardiovaskular yang akan bermanifestasi  sebagai  angina,  serangan jantung dan stroke iskemik. 2
Indonesia  merupakan  negara  dengan konsumsi saturated  fatty  acids (SFA) tertinggi sebesar 20,9% . 3 Sebanyak 40,7% warga  Indonesia  mengkonsumsi  makanan tinggi  lemak  dengan  angka  mencapai 47,8%  dari  penduduk  DKI  Jakarta.  Hasil riset  juga  menunjukkan  bahwa  prevalensi konsentrasi  kolesterol  total  lebih  dari  200 mg/dL adalah sebesar 35,9% pada populasi penduduk usia ≥ 15 tahun. 4
Peningkatan  kadar  kolesterol  total yang  disebabkan  olah  konsumsi  makanan tinggi  lemak  dapat  mempengaruhi  sel germinativum testis. Sel-sel adiposit menghasilkan adipokin pro-inflamasi yang akan  menghasilkan Reactive  Oxygen Species (ROS), inducible  nitric  oxide synthase (iNOS) , dan Lipid  Peroksidase (LPO). 5,6 Sementara faktor-faktor antioksidan  seperti Superoxide  Dismutase (SOD) , Gluthatione Peroxidase (GPx) , dan Catalase tidak  dapat  menanggulangi jumlah  radikal  bebas sehingga  hal-hal tersebut akan menyebabkan kerusakan sel- sel testis dengan cara merangsang perusakan  DNA,  membran  sel,  dan apoptosis. 7,8 Stres oksidatif yang dihasilkan oleh konsumsi makanan tinggi lemak juga akan menekan kadar testosteron, perubahan rasio  testosteron  dengan  estradiol,  dan penurunan Follicle-Stimulating  hormone (FSH)  sehingga  hormon-hormon  bersifat
protektif terhadap sel germinativum berkurang. 9,10 Hal-hal tersebut akan menyebabkan  penurunan  jumlah  sel-sel spermatogenesis  yang  dapat  dinilai  secara kuantitatif. 11
Jumlah sel-sel spermatogenesis yang menurun akibat peningkatan kadar kolesterol dapat diatasi dengan penggunaan statin  karena dilaporkan  sebelumnya penggunaan  antioksidan  dan  penggunaan obat  golongan  statin  memperlihatkan  sifat proteksi  pada  testis  dan  fungsi  reproduksi pada keadaan tinggi kadar kolesterol darah, bahkan meningkatkan parameter semen dan memperbaiki  disfungsi  endokrin  gonad. 9
Obat  golongan  statin  bekerja  dengan  cara menginhibisi HMG-CoA reduktase sehingga  dapat  menurunkan  kolesterol. 12
Namun,  Sekitar  10%-15%  pasien  dapat mengalami  intoleransi  statin.  Manifestasi dari intoleransi obat ini seperti miopati dan hepatotoksisitas  sehingga  pemakaian  obat harus  dibawah  pengawasan  medis. 13 Maka,  dibutuhkan  alternatif  alami  untuk dikonsumsi  sehari-hari  seperti  tanaman herbal maupun buah-buahan yang diharapkan dapat mengontrol kadar kolesterol dan memiliki efek samping yang lebih rendah. 14
Sebagai  negara  tropis,  Indonesia memiliki potensi budidaya beraneka ragam tanaman.  Salah  satu  hasil  dari  tanaman yang mulai banyak dikonsumsi adalah buah naga  ( Hylocereus  sp .)  karena  diyakini memiliki kandungan kimia yang bermanfaat  bagi  kesehatan. 15 Buah  naga merah ( Hylocereus polyrhizus ) merupakan jenis  buah  naga  yang  sudah  banyak dikonsumsi masyarakat Indonesia. 16
Buah  naga  merah  memiliki total dietary fiber (TDF) cukup tinggi, aktivitas antioksidan  yang  baik  sebesar  67,45  ppm, dan Oxygen  radical  absorbance  capacity (ORAC)  sebesar  7,6  µM  TE/g  puree kandungan ini lebih banyak dari buah tropis lainnya seperti buah naga putih, leci, sawo, mangga,  lengkeng,  dan  sebagainya. 17,18
Buah  naga  merah  juga  mengandung  zat
yang  bekerja  seperti  statin  yaitu  saponin dan triterpenoid. 19
Penelitian  sebelumnya  di  Indonesia pada tikus terbukti bahwa buah naga merah dosis  60mg/hari  dapat  memperbaiki  profil lipid. 14 Buah naga merah dosis 120mg/hari memiliki efektivitas yang sama dengan obat golongan  statin  dosis  10mg/hari  dalam menurunkan  kolesterol. 20 Lalu,  buah  naga merah  dosis  250mg/Kg/hari  dan  500 mg/Kg/hari  terbukti  dapat  meningkatkan proses  spermatogenesis  tikus  selama  tidak mencapai  dosis  letal  1000  mg/Kg/hari, namun hasil ini didapatkan tanpa melakukan  induksi  pakan  tinggi  lemak selama 25 hari. 21
Berdasarkan  uraian  di  atas  maka peneliti tertarik melakukan penelitian untuk menganalisa  pengaruh  pemberian  ekstrak buah  naga  merah  dalam  mencegah penurunan  jumlah  sel-sel  spermatogenesis yang  disebabkan  oleh  konsumsi  makanan tinggi  lemak,  berkaitan  dengan  strategi preventif  terhadap  dampak  konsumsi makanan tinggi lemak. Hal ini sesuai pasal 12  kewajiban  umum  dokter  menurut  kode etik kedokteran 2012 bahwa seorang dokter wajib  memperhatikan  aspek  pelayanan kesehatan meliputi bidang promotif, preventif, kuratif, rehabilitatif, dan paliatif.

## METODE PENELITIAN

## Desain Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  desain penelitian true-experiment dengan rancangan penelitian posttest-only control- group  design .  Desain  ini  mengendalikan efek perancu dari pretest. 22 Populasi secara randomisasi sederhana
( simple randomization ). 23 Dikelompokkan, perlakuan diberikan pada kelompok eksperimen  dan  semua  kelompok  diukur dengan cara posttest. 22
Hasil penelitian dari kelima kelompok didapatkan berupa hasil posttest jumlah parameter spermatogenesis.
Perlakuan selama
satu siklus
spermatogenesis akan dianalisa melalui uji
ANOVA One Way (P value = 0,05). ANOVA One  Way adalah  suatu  uji  statistik  untuk melihat perbedaan rata-rata antar beberapa kelompok hanya dalam satu kali pengukuran.  Asumsi  yang  harus  dipenuhi pada  uji  ini  adalah  jenis  data  yang dihubungkan  numerik  dengan  katagorik, data  terdistribusi  normal,  dan  homogen. 24
Setelah itu dilakukan uji Post Hoc Tukey’s HSD ( Honestly  Significant  difference ) untuk  melihat  kelompok  mana  saja  yang memilik  beda  rata-rata  yang  bermakna. 25
Apabila asumsi tidak terpenuhi maka dapat dilakukan  uji  alternatif  non-parametrik Kruskal-Wallis. 26 Sementara  uji  analisis antara kelompok ekstrak buah naga merah selama 52 hari dengan 104 hari menggunakan T-test  Independent karena hanya  membandingkan  dua  kelompok katagorik.  Apabila  data  tidak  terdistribusi normal  dilakukan  uji  non-parametrik Mann-Whitney U. 27

## Populasi dan Sampel
Penelitian  ini  menggunakan  sampel tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  galur wistar ,  jantan,  usia  ±8  minggu,  dan  berat ±200-250 gram.
Dalam penelitian ini tikus akan dibagi ke dalam 5 kelompok yang terdiri dari satu kelompok  kontrol  negatif,  satu  kelompok kontrol positif, dan tiga kelompok eksperimental. Kelompok 1 kontrol negatif (K1) diberikan pakan standar, kelompok 2 kontrol positif (K2) diberikan pakan tinggi lemak,  kelompok  3  perlakuan  1  (P1) diinduksi pakan tinggi lemak lalu diintervensi  dengan  Simvastatin  dosis 0,72mg/KgBB, dan kelompok 4 perlakuan 2  (P2)  diinduksi  pakan  tinggi  lemak  lalu diintervensi  dengan  ekstrak  buah  naga merah  dosis  60mg/hari.  Kelompok  1 sampai 4 dilakukan selama 52 hari atau satu siklus  spermatogenesis.  Kelompok  5 diinduksi pakan tinggi lemak lalu diintervensi  dengan  ekstrak  buah  naga merah  selama  104  hari  atau  dua  siklus spermatogenesis.
Kriteria  inklusi  penelitian  ini  adalah tikus putih ( Rattus norvegicus) jantan galur Wistar ,  dewasa  (usia  8  minggu),  berat badan  200-250  gram,  kondisi  sehat (bergerak aktif dan tidak cacat).

## Pengambilan Sampel
Sampel diambil menggunakan teknik randomisasi sederhana
(simple
randomization)  dengan  cara  penarikan nomor  undian.  Teknik  randomisasi  akan mengurangi  bias  seleksi  dan  perancu dengan terbaginya secara seimbang variabel-variabel yang tidak diteliti. 28

## Prosedur Penelitian
Penelitian eksperimental ini meliputi tahap  persiapan  alat  dan  bahan,  persiapan tikus,  dan  prosedur  pelakuan  pada  tikus mulai  dari  aklimatisasi  sampai  dengan pembedahan  tikus.  Setelah  pembedahan, organ testis dibuat menjadi preparat dengan melakukan pewarnaan selanjutnya diperiksa  secara  mikroskopik  dengan perbesaran  400X  sebanyak  5  lapang pandang  per  preparat,  dalam  satu  lapang pandang  terdapat  satu  tubulus  seminiferus utuh.  Setelah  didapatkan  hasil  data, dilakukan uji statistik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Pada penelitian ini dilakukan induksi pakan  tinggi  lemak  dengan  menggunakan telur  puyuh  dosis  10  ml/KgBB  lalu diberikan  perlakuan  berupa  simvastatin dosis  0,72  mg/hari  dan  Ekstrak  buah  naga merah  dosis  60  mg/hari  dalam  satu  siklus dan  dua  siklus  spermatogenesis.  Berikut hasil  rata-rata  kadar  kolesterol  total  tiap kelompok perlakuan.
Tabel 1. Rata-rata Kadar Kolesterol
Perlakuan Rata-rata Kadar Kolesterol ± SD Kontrol Negatif Kontrol Positif Simvastatin Naga Merah 52 Naga Merah 104 64,83±10,19 101,17±6,34 73,17±9,81 54,17±2,32 71,17±22,59
Berdasarkan  penelitian  sebelumnya yang  menggunakan  pakan  standar  Bravo- 512 nilai rujukan kadar kolesterol puasanya adalah dibawah 89 mg/dl. 29 Dari hasil rata- rata  kadar  kolesterol  penelitian  ini,  pada kelompok kontrol negatif didapatkan angka 64,83±10,19 mg/dl  yang merupakan kadar kolesterol total normal pada penelitian ini. Sementara,  kadar  kolesterol  tertinggi terdapat  pada  kelompok  kontrol  positif memiliki  kadar  kolesterol  total  sebesar 101,17±6,34  mg/dl,  hal  ini  menunjukkan bahwa  induksi  pakan  tinggi  lemak menggunakan  telur  puyuh  dosis  10 ml/kgBB dapat meningkatkan kadar kolesterol total darah.
Kelompok  perlakuan  menggunakan simvastatin  dan  ekstrak  buah  naga  merah didapatkan  hasil  berturut-turut  sebesar 73,17±9,81  mg/dl  dan  54,17±2,32  mg/dl menunjukkan bahwa pemberian simvastatin  dan  ekstrak  buah  naga  merah selama satu siklus spermatogenesis memiliki  kadar  kolesterol  lebih  rendah dibandingkan  dengan  kontrol  positif  yang diinduksi  pakan  tinggi  lemak  dan  tidak diberikan intervensi.
Pemberian  ekstrak  buah  naga  antara satu  siklus  spermatogenesis  dengan  dua siklus  spermatogenesis  didapatkan  hasil berturut-turut  54,17±2,32  mg/dl,  dan 71,17±22,59.  Hasil  ini  memperlihatkan peningkatan kadar kolesterol.
Sesuai  dengan  tujuan  penelitian  ini yaitu  menganalisa  pengaruh  pemberian ekstrak  buah  naga  merah  ( Hylocereus polyrhizus ) terhadap gambaran
spermatogenesis  testis  tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  yang  diinduksi  pakan  tinggi lemak. Berikut disajikan hasil rata-rata sel spermatogenesis tiap kelompok perlakuan.
Tabel 2. Rata-rata Sel Spermatogenesis
Perlakuan Rata-rata Kadar Kolesterol ± SD Spermatogonium Kontrol Negatif Kontrol Positif Simvastatin Naga Merah 52 Naga Merah 104 49,27±5,06 45,83±8,69 46,43±5,23 49,87±4,77 55,77±9,02 Spermatosit Kontrol Negatif Kontrol Positif Simvastatin Naga Merah 52 Naga Merah 104 69,87±6,57 157,47±17,01 66,73±7,15 112,63±9,45 129,07±9,34

## Spermatid
Kontrol Negatif Kontrol Positif Simvastatin Naga Merah 52 Naga Merah 104 158,60±17,18 48,03±8,67 165,83±25,04 205,37±33,56 217,77±22,40 Sertoli Kontrol Negatif Kontrol Positif Simvastatin Naga Merah 52 Naga Merah 104 11,37±1,19 10,97±1,86 12,27±1,18 12,30±1,03 12,33±0,98 Tabel 2
secara deskriptif menunjukkan  pada  sel  spermatogonium dan  sel  sertoli  didapatkan  hasil  rata-rata yang  tidak  terlalu  jauh.  Namun,  Pada  sel spermatosit  dan  sel  spermatid  terdapat variasi rata-rata yang sangat berbeda.
Kelompok sel spermatosit memperlihatkan  peningkatan  jumlah  sel terbesar  pada  perlakuan  kontrol  positif dengan  rata-rata  157,47±17,01.  Angka  ini sangat jauh dari rata-rata sel kontrol negatif sebesar 69,87±6,57. Penggunaan Simvastatin  memberikan  kadar  rata-rata yang  mirip  dengan  kontrol  negatif  yaitu 66,73±7,15. Sementara, pemberian ekstrak buah  naga  merah  52  dan  104  hari menggambarkan  peningkatan  jumlah  sel yang  cukup  besar  dengan  rata-rata 112,63±9,45 dan 129,07±9,34.
Hasil  sel  spermatid  menunjukkan bahwa rata-rata sel kontrol positif mengalami  penurunan  dengan  angka 48,03±8,67  dibandingkan  dengan  kontrol negatif  yang  sebesar  158,60±17,18  hal  ini menggambarkan bahwa pakan tinggi lemak menurunkan jumlah sel spermatid.
Sementara  penggunaan  simvastatin  dapat meningkatkan jumlah sel spermatid dengan rata-rata  165,83±25,04  mendekati  angka normal kontrol negatif penelitan. Pemberian ekstrak buah naga merah selama 52 dan 104 hari dapat meningkatkan jumlah sel spermatid berturut-turut sebesar 205,37±33,56 dan 217,77±22,40.

## Pembahasan
Penelitian ini bertujuan untuk menganalisa  pengaruh  pemberian  ekstrak buah  naga  merah  ( Hylocereus  polyrhizus ) terhadap  gambaran  spermatogenesis  testis tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  yang diinduksi pakan tinggi lemak.
Hasil  penelitian  diambil  setelah perlakuan selama 52 hari dan 104 hari. Data yang  diambil  berupa  hasil  pemeriksaan kadar kolesterol dan perhitungan jumlah sel spermatogenesis  tikus  pada tiap  kelompok perlakuan.  Tikus  yang  sudah  mendapat perlakuan  akan  ditimbang,  dipuasakan selama 10 jam, lalu dilakukan pengambilan darah  dan  pembedahan  organ  testis sehingga  dapat  dibuat  menjadi  preparat yang  akan  dihitung  di  bawah  mikroskop cahaya dengan perbesaran 400x. Setiap satu preparat  akan  dilihat  5  lapang  pandang, dalam 1 lapang pandang terdapat 1 tubulus seminiferus  utuh.  Puasa  dilakukan  untuk menghindari  kerancuan  hasil  pemeriksaan karena  konsumsi  makanan  terkahir  tikus. Puasa 10-12 jam berfungsi untuk mengurang  variabilitas  substansi  dalam darah yang akan diperiksa. 30
Perlakuan  ekstrak  buah  naga  merah selama  52  hari  dan  104  hari  dilakukan untuk  membandingkan  pengaruh  ekstrak buah  naga  merah  dalam  jangka  waktu subkronis  dan  kronis  selama  satu  siklus spermatogenesis dan dua siklus spermatogenesis.  Uji  pengaruh  suatu ekstrak  dapat  dibagi  menjadi  4  jangka waktu  yaitu  akut,  subakut,  subkronis,  dan kronis.  Akut  dilakukan  selama  14  hari, subakut hingga 28 hari. 31 Subkronis mulai sampai dengan 90 hari, dan kronis diatas 90 hari. 32

## Pembahasan Kadar Kolesterol
Nilai  signifikansi  uji One  Way ANOVA sebesar .000 (P-value <  0,05) pada kelompok  kolesterol  perlakuan  selama  52 hari.  Hasil  ini  melaporkan  bahwa  terdapat perbedaan  rata-rata  yang  bermakna  antara kelompok perlakuan. Lalu, untuk mengetahui kelompok mana yang memiliki perbedaan bermakna dilakukan uji post hoc Tukey’s HSD .
Tabel 3. Perbandingan Kolesterol Perlakuan Selama 52 Hari Perlakuan Kolesterol Sig. Kontrol Negatif Kontrol Positif 64,83±10,19 101,17±6,34 .000 Kontrol Positif Simvastatin 101,17±6,34 73,17±9,81 .000 Kontrol Positif Buah Naga Merah 101,17±6,34 54,17±2,32 .000 Simvastatin Buah Naga Merah 73,17±9,81 54,17±2,32 .002 Setelah kontrol negatif dibandingkan dengan kontrol positif didapatkan signifikansi  sebesar  .000  (P-value  <  0,05) maka  terdapat  perbedaan  rata-rata  yang bermakna  sebesar  36,33.  Berdasarkan signifikansi yang didapatkan dari olah data maka dapat disimpulkan bahwa pemberian telur puyuh dengan dosis 10mg/hari selama 52  hari  lebih  berpengaruh  terhadap peningkatan kadar kolesterol tikus. Peningkatan  yang  terjadi  dikarenakan tingginya asam lemak jenuh yang terkandung  dalam  kuning  telur  puyuh. Asam  lemak  ini  akan  mengalami  proses metabolisme oksidasi beta dan menghasilkan asetil KoA  yang merupakan prekursor dari kolesterol. 33
Kedua  kelompok  yang  dilakukan Intervensi  dibandingkan  dengan  kontrol positif  memperlihatkan  nilai  signifikansi .000  (P-value  <  0,05),  maka  kedua perlakuan dapat menurunkan kadar kolesterol pada tikus yang diinduksi pakan tinggi lemak.
Simvastatin bekerja dengan menghambat  kerja  enzim  HMG-KoA
Reduktase. 2 sehingga  HMG-KoA  tidak dapat direduksi menjadi mevalonat sehingga  sintesis  kolesterol  tidak  dapat berjalan. 34 Maka  terjadi  penurunan  kadar kolesterol  dengan  perbedaan  rata-rata sebesar  28,00  pada  kelompok  eksperimen simvastatin.
Buah  naga  merah  memiliki  berbagai kandungan  yang  dapat  menurunkan  kadar kolesterol seperti alkaloid, saponin, antioksidan (fenol, flavonoid, asam askorbat,  betasianin),  triterpenoid,  niasin, serat,  dan  asam  lemak  tidak  jenuh, oleh karena  itu  buah  naga  merah  dapat menurunkan  kadar  kolesterol  dengan perbedaan rata-rata 47,00. 19
Saponin  dan  Triterpenoid  bekerja dengan menghambat HMG KoA reduktase. 19,35 Senyawa  fenol,  betasianin, dan  asam  askorbat  menetralkan  radikal bebas dan radikal perioksida sehingga stres oksidatif  menurun. 19 Flavonoid  secara langsung mendonorkan ion hidrogen untuk stabilisasi  radikal  bebas  dan  secara  tidak langsung merangsang ekspresi gen antioksidan. Selain itu flavonoid meningkatkan  ekskresi  getah  empedu sehingga  mengurangi  kadar  kolesterol dalam tubuh. 19,36
Jika  pengaruh  ekstrak  buah  naga merah  dibandingkan  dengan  penggunaan obat  pilihan  golongan  statin  dalam menurunkan kadar kolesterol total, didapatkan  signifikansi  sebesar  .002  (P- value < 0,05), maka pemberian buah naga merah  lebih  bermakna  dalam  menurunkan kadar kolesterol dibandingkan penggunaan simvastatin  hal  ini  bertentangan  dengan hasil penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Sharan 2017 yang menyatakan bahwa potensi  statin  dosis  10mg/hari  selama  28 hari  lebih  kuat  dibandingkan  ekstrak  buah naga merah dengan dosis 120mg/hari dalam menurunkan kadar kolesterol. Hal ini dapat terjadi karena dalam penelitian ini dilakukan  pemberian  ekstrak  lebih  lama yaitu  selama  52  hari  dan  penelitian  ini melakukan induksi pakan tinggi lemak dan intervensi ekstrak buah naga merah secara bersamaan,  sehingga  hanya  dapat  menguji
efektivitas  buah  naga  merah  sebagai strategi  preventif  dalam  menghindari kenaikan kadar kolesterol darah. Buah naga merah  memiliki  kandungan  yang  bekerja seperti  simvastatin  yaitu  Saponin dan Triterpenoid yang dapat mendegradasi dan menghambat  kerja  enzim  HMG  KoA Reduktase  sehingga  dapat  menurunkan kadar kolesterol darah tikus putih. 19,24
Tabel 4. Perbandingan
Kolesterol
Perlakuan  Buah  Naga  Merah  52  hari dengan 104 hari
Perlakuan Kolesterol Sig. 52 Hari 104 Hari 54,17±2,32 71,17±22,59 .015
Kadar  kolesterol  pada  kelompok perlakuan  pemberian  ekstrak  buah  naga merah  selama  52  hari  dan  104  dengan menggunakan uji Mann-Whitney U menunjukkan  angka  signifikansi  .015  (P- value < 0,05). Hal ini menunjukkan adanya penurunan  efektivitas  ekstrak  buah  naga merah  dalam  mengontrol  kadar  kolesterol setelah pemberian selama 104 hari. Dalam penelitian  ini,  tidak  ada  kematian  pada kelompok  tikus  yang  diberikan  ekstrak secara kronis. Penelitian sebelumnya  yang meneliti  tentang  efek  toksik  ekstrak  buah naga merah pada pemberian akut (14 hari) dan subkronis (28 hari) menyatakan bahwa pemberian ekstrak buah naga merah dengan interval dosis 250mg/hari, 500 mg/hari, dan 1000 mg/hari relatif aman diberikan secara per  oral.  Selama  pemberian  dosis  tidak melewati  dosis  letal  yaitu  melebihi  1000 mg/hari. 28 Maka,  pemberian  buah  naga merah  masih  efektif  dalam  mengontrol kadar kolesterol dan tidak bersifat toksik.

## Pembahasan Sel-sel Spermatogenesis
Pada penelitian ini terlihat peningkatan jumlah sel-sel spermatosit dan penurunan  jumlah  sel  spermatid  pada kontrol positif dibandingkan kontrol negatif seperti gambar 20. Perbandingan kelompok kontrol positif dengan kelompok
eksperimen  simvastatin  dan  pemberian ekstrak buah naga merah selama satu siklus spermatogenesis,
memperlihatkan perbaikan  diferensiasi  sel  spermatosit menjadi spermatid
berdasarkan peningkatan  jumlah  sel-sel  spermatid.
Kemampuan  ekstrak  buah  naga  merah dibandingkan pemberian simvastatin terlihat lebih baik ditandai dengan peningkatan  jumlah  sel  spermatosit  dan spermatid yang terlihat pada gambar. Pada pemberian  kronis  selama  dua  kali  siklus spermatogenesis  terlihat  jumlah  sel-sel tidak mengalami penurunan jika dibandingkan  dengan  pemberian  ekstrak buah  naga  merah  selama  satu  siklus spermatogenesis.
Untuk mengetahui kebenarannya  secara  kuantitatif  dilakukan penghitungan jumlah sel-sel
spermatogenesis yang akan diuji menggunakan ANOVA One Way .
Analisa  statistik  jumlah  sel-sel spermatogenesis mendapatkan hasil uji One Way  ANOVA untuk  sel  spermatogonium sebesar  .597  dan  sertoli  .259  (P-value  > 0,05), maka dapat disimpulkan bahwa tidak ada  perbedaan  rata-rata  yang  bermakna pada jenis sel tersebut.
Pakan  tinggi  lemak  dan  pemberian intervensi  tidak  mempengaruhi  jumlah spermatogonium  seperti  yang  ditampilkan dari hasil uji statistik. Sel spermatogonium membelah secara mitosis untuk memperbarui jumlah spermatogonium stem sel, spermagonium proliferatif, dan memproduksi spermatogonium diferensiasi. 37 Pembelahan  Mitosis  hanya menghasilkan  dua  anak  sel  yang  memiliki gen  identik  dengan  sel  sebelumnya. 38 Sehingga jumlah spermatogonium cenderung tidak berubah.
Sel sertoli tidak mendapatkan pengaruh  atas  perlakuan.  Hal  ini  karena nutrisi  tidak  berpengaruh  terhadap  jumlah sertoli pada tubulus seminiferus dibuktikan dengan  penelitian  yang  menginduksi keadaan  defisiensi  nutrisi,  hasilnya  sel sertoli  tidak  mengalami  abnormalitas maupun  terpengaruh  karena  kurangnya vitamin.  Hal  ini  membuktikan  bahwa
resistensi  sel  sertoli  terhadap  keadaan nutrisi  lebih  baik  dibandingkan  sel germinal. 39 Penelitian lainnya menyatakan bahwa  keadaan  nutrisi  mempengaruhi kemampuan  fungsional  sel  sertoli,  namun tidak ada perubahan terhadap jumlah sertoli antara  diet  standar,  diet  tinggi  nutrisi,  dan diet rendah nutrisi. 4
Sel  spermatosit  dan  sel  spermatid dalam uji ANOVA One Way menghasilkan signifikansi sebesar .000 (P-Value < 0,05). Berdasarkan hal tersebut, dapat disimpulkan  bahwa  terdapat  perbedaan rata-rata antara kelompok perlakuan. Untuk melihat kemaknaan dilakukan Uji post hoc Tukey’s HSD .
Tabel  5. Perbandingan  Rata-rata  Sel Spermatosit Perlakuan Selama 52 Hari
Perlakuan Rata-rata Sig. Kontrol Negatif Kontrol Positif 69,87±6,57 157,47±17,01 .000 Kontrol Positif Simvastatin 157,47±17,01 66,73±7,15 .000 Kontrol Positif Buah Naga Merah 157,47±17,01 112,63±9,45 .000 Simvastatin Buah Naga Merah 66,73±7,15 112,63±9,45 .000 Tabel  6. Perbandingan  Rata-rata  Sel

## Spermatid Perlakuan Selama 52 Hari
Perlakuan Rata-rata Sig. Kontrol Negatif Kontrol Positif 158,60±17,18 48,03±8,67 .000 Kontrol Positif Simvastatin 48,03±8,67 165,83±25,04 .000 Kontrol Positif Buah Naga Merah 48,03±8,67 205,37±33,56 .000 Simvastatin Buah Naga Merah 165,83±25,04 205,37±33,56 .035
Rata-rata pada kedua jenis sel antara kontrol  negatif  dengan  kontrol  positif memperlihatkan signifikansi .000 (P-value <  0,05)  yang  berarti  perbedaan  rata-rata bermakna secara statistik. Secara kuantitatif hasil memperlihatkan peningkatan jumlah sel spermatosit diikuti dengan menurunnya jumlah spermatid pada kelompok kontrol positif.
Induksi  pakan  tinggi  lemak  yang dilakukan memberikan perubahan
degeneratif yang signifikan pada testis yang berasosiasi dengan spermatogenesis arrest pada  tahapan  spermatosit,  maka  terjadi peningkatan  jumlah  spermatosit  namun diikuti  penurunan  jumlah  spermatid. 40 Hal ini  terjadi  karena  kegagalan  mekanisme sinaps kromosom yang homolog pada saat profase 1 terutama karena dimediasi protein p63. 4141 Stres oksidatif yang diinduksi oleh pakan  tinggi  lemak. 4 akan  merangsang DNA damage  response dan  menghasilkan protein  p53  dan  p63  yang  akan  berikatan dengan DNA binding sites yang menginduksi arrest pada siklus sel . 8,42
Jumlah  spermatid  yang  menurun berhubungan  dengan    tingginya  kadar adipokin  pro-inflamasi  yang  diinduksi pakan  tinggi  lemak.  Adipokin  ini  akan mengeluarkan  leptin,  resistin,  TNF,  IL-6, dan sebagainya. Adipokin tersebut merangsang Reactive  Oxygen  Species (ROS)  dan inducible  nitric  oxide  synthase (iNOS). 5 yang akan menekan ATM Kinase sehingga merangsang mekanisme apoptosis sel. 8
Signifikansi  antar  kelompok  pada kedua  jenis  sel  sebesar  .000  (P-value  < 0,05)  dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat perbedaan rata-rata yang bermakna diantara kelompok  perlakuan  simvastatin  dan  buah naga merah dengan kontrol positif.
Berdasarkan  hasil  perhitungan  rata- rata  dapat  dilihat  pemberian  intervensi simvastatin  dapat  mengembalikan  jumlah spermatosit  mendekati  angka  kontrol negatif  dan  terjadi  memiliki  diferensiasi yang  lebih  baik  dibuktikan  dengan peningkatan jumlah sel spermatid dibandingkan  dengan  kontrol  positif. Simvastatin yang dalam penelitian ini telah berhasil  menurunkan  kadar  kolesterol sebesar  28,00  dengan  cara  menghambat pembentukan  kolesterol. 34 sehingga  tidak terjadi  peningkatan  stres  oksidatif  yang menyebabkan apoptosis.
Pemberian  buah  naga  merah  juga ternyata  memperlihatkan  diferensiasi  sel yang  lebih  baik  dilihat  dari  rata-rata spermatid  yang  meningkat  jauh  diatas kelompok  kontrol,  bahkan  meningkatkan
jumlah  sel  spermatosit  secara  signifikan. Buah  naga  yang  kaya  akan  antioksidan dapat  menekan  stres  oksidatif  yang berlebihan, akibat kelainan metabolik yang diinduksi diet tinggi lemak. 25
Dalam  penelitian  ini  ekstrak  buah naga  merah  dengan  dosis  60mg/hari  lebih efektif dalam menurunkan kadar kolesterol dibanding  simvastatin  bahkan  memiliki potensi yang lebih kuat. Lalu, peneliti ingin membandingkan potensi pengaruhnya pada sel-sel  spermatogenesis.  Menurut  analisis statistik  dengan  membandingkan  rata-rata kelompok perlakuan menggunakan simvastatin  dengan  buah  naga  merah selama satu siklus spermatogenesis, didapatkan sel spermatosit dan sel spermatid  memiliki  perbedaan  rata-rata yang bermakna dengan signifikansi
dibawah 0,05 (P-value < 0,05). Kesimpulannya,  kemampuan  ekstrak  buah naga merah lebih baik daripada penggunaan simvastatin dalam memperbaiki diferensiasi  sel  dan  meningkatkan  jumlah sel  spermatosit  dan  spermatid  yang terganggu  karena  pemberian  pakan  tinggi lemak.
Tabel  7. Perbandingan  rata-rata  Sel Perlakuan  Buah  Naga  Merah  52  hari dengan 104 hari
Perlakuan Rata-rata Sel Sig. Spermatosit 52 Hari 104 Hari 112,63±9,45 129,07±9,34 .013 Spermatid 52 Hari 104 Hari 205,37±33,56 217,77±22,40 .465
Hasil Uji statistik T-test Independent pada  kadar  kolesterol  pemberian  ekstrak buah  naga  merah  selama  104  hari didapatkan penurunan efektivitas dibandingkan dengan pemberian selama 52 hari.  Pemberian  ekstrak  buah  naga  secara kronis memperbaiki diferensiasi dan meningkatkan  jumlah  sel  spermatosit  dan spermatid dengan signifikansi sel spermatosit dibawah .013 (P-Value < 0,05) yang  menandakan  perbedaan  bermakna
dibandingkan  pemberian  subkronis  dan spermatid  sebesar  .469  (P-value  >  0,05) yang menandakan tidak ada perbedaan rata- rata yang bermakna namun memperlihatkan peningkatan sebesar 12,40 secara laboratoris.
Berdasarkan  hal  tersebut  pengaruh pemberian  ekstrak  buah  naga  merah terhadap  jumlah  sel-sel  spermatogenesis secara  kronis  atau  dalam  dua  kali  siklus spermatogenesis  sama  dengan  pemberian selama  satu  siklus  spermatogenesis  dan tidak  menyebabkan  kematian  pada  tikus percobaan, hal ini didukung oleh penelitian sebelumnya  yang  menyatakan  bahwa pemberian ekstrak buah naga merah secara akut  dan  subkronis  relatif  aman  selama tidak melewati dosis letal 1000 mg/hari. 28

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil,  analisa,  dan pembahasan  penelitian  pemberian  ekstrak buah  naga  merah  ( Hylocereus  polyrhizus ) terhadap  gambaran  spermatogenesis  testis tikus putih ( Rattus norvegicus ) galur wistar yang  diinduksi  pakan  tinggi  lemak didapatkan kesimpulan sebagai berikut :
a. Induksi pakan tinggi lemak menggunakan  telur  puyuh  dengan dosis 10ml/kgBB dapat meningkatkan kadar kolesterol secara  signifikan  sebesar  .000  (P- Value  <  0,05)  dengan  perbedaan rata-rata 36,33 mg/dl dibandingkan dengan kontrol negatif.
b. Induksi pakan tinggi lemak
berpengaruh terhadap proses spermatogenesis pada fase spermatosit  dan  spermatid  dengan signifikansi sebesar .000 (P-Value <
0,05). Jumlah spermatosit
meningkat  dengan  perbedaan  rata- rata  sebesar  87,60  diikuti  dengan penurunan jumlah spermatid sebesar 110,57 dibandingkan dengan kontrol negatif.
c. Pemberian ekstrak buah naga merah ( Hylocereus
polyrhizus ) memperbaiki proses
spermatogenesis  secara  signifikan .000 (P-Value < 0,05) dibandingkan dengan  kontrol  positif.  Ekstrak buah  naga  menurunkan  rata-rata spermatosit  sebesar  44,83  dan meningkatkan  rata-rata  spermatid sebesar 157,33.
d. Buah  naga  merah  dengan  dosis 60mg/hari  dibandingkan  dengan pemberian simvastatin dengan dosis
0,75mg/hari memperlihatkan pengaruh  yang  signifikan  secara statistik dengan signifikansi dibawah  0,05  (P-value  <  0,05) dalam memperbaiki sel spermatosit dan sel spermatid dengan perbedaan rata-rata secara berturut-turut sebesar  45,90  dan  39,53.  Maka, buah naga merah memiliki efektivitas lebih baik dibandingkan dengan simvastatin dalam meningkatkan jumlah sel spermatogenesis.
e. Pemberian ekstrak buah naga merah selama dua kali
siklus spermatogenesis memperlihatkan efek yang  setara dengan pemberian selama satu siklus spermatogenesis dan  tidak  menyebabkan  kematian pada  tikus  percobaan.  Terjadi peningkatkan jumlah sel-sel spermatogenesis  secara  bermakna dengan signifikansi .013 (P-Value < 0,05)  pada  sel  spermatosit  dan meningkatkan  rata-rata  spermatid sebesar  12,40  secara  laboratoris namun  peningkatan  rata-rata  sel spermatid  tidak  bermakna  secara statistik  dibandingkan  perlakuan selama satu siklus spermatogenesis.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Opie,  L.  H.  Lifestyle  and  diet. Cardiovasc.  J.  Afr. 25 ,  298–301 (2014).
2. Moda  Arsana  Rulli  Rosandi  Asman Manaf  AAG  Budhiarta  Hikmat
Permana,  P.  &  Sucipta  Dharma Lindarto Soebagijo Adi Bowo Pramono Dante Saksono Harbuwono Alwi  Shahab  Sugiarto  Jazil  Karimi Luthfan Budi
Purnomo Agus Yuwono  Tony  Suhartono,  K.  W. Panduan  Pengelolaan  Dislipidemia di  Indonesia-2015  Penulis  Penerbit PB. PERKENI .
3. Harika, R. K., Eilander, A., Alssema, M., Osendarp, S. J. M. & Zock, P. L. Intake  of  fatty  acids  in  general populations worldwide does not meet dietary  recommendations  to  prevent coronary heart disease:  A systematic review  of  data  from  40  countries.
Ann.  Nutr.  Metab. 63 ,  229–238 (2013).
4. Balitbangkes. Riset Kesehatan Dasar 2013. 2013 5. Ouchi, N., Parker, J. L., Lugus, J. J. &
Walsh, K. Adipokines
in inflammation  and  metabolic  disease. Nat. Rev. Immunol. 11 , 85–97 (2011).
6. Agarwal, A., Virk, G., Ong, C. & du Plessis,  S.  S.  Effect  of  Oxidative Stress on Male Reproduction. World J. Mens. Health 32 , 1 (2014).
7. Aitken,  R.  J.  &  Roman,  S.  D. Antioxidant  systems  and  oxidative stress  in  the  testes. Oxidative medicine  and  cellular  longevity 1 , 15–24 (2008).
8. Bagheri, M., Nair, R. R., Singh, K. K.
& Saini, D. K. ATM-ROS-iNOS axis regulates  nitric  oxide  mediated cellular senescence. Biochim. Biophys. Acta - Mol. Cell Res. 1864 , 177–190 (2017).
9. Jain GC. Hyper-Lipidemia and Male Fertility:  A  Critical  Review  of
Literature. (2015). doi:10.4172/2167- 0250.1000141
10.  Anas,  E.  &  Asterina,  A.  EFEK

## PEMBERIAN
JUST TOMAT (LYCOPERSICUM  PYRIPORME) TERHADAP SPERMATOGENESIS PADA TIKUS PUTIH (RATTUS NORVERGICUS) JANTAN DEWASA HYPERKHOLESTROLEMIA. Maj. Kedokt. Andalas 35 , 27 (2011).
11.  Musfiroh, M. & Gustari, S.
PENGARUH PEMBERIAN MINYAK JINTAN HITAM (Nigella sativa L.) TERHADAP PENINGKATAN SPERMATOGENESIS TIKUS WISTAR YANG TERPAPAR ASAP
ROKOK. J.  Kedokt.  Hewan  - Indones. J. Vet. Sci. 9 , (2015).
12.  Erwinanto,  A.  S.  &  Kasiman,  J. Nugroho  Eko  Putranto,  Pradana Tedjasukmana,  R.  S.  S.  R.  S. PEDOMAN TATALAKSANA DISLIPIDEMIA. (2013).
13.  Banach, M. et al. Statin intolerance - An  attempt  at  a  unified  definition. Position  paper  from  an  International Lipid  Expert  Panel. Arch.  Med.  Sci.
11 , 1–23 (2015).
14.  Indriasari, I. (Universitas U.
ABSTRAK  EKSTRAK  ETANOL BUAH NAGA MERAH (Hylocereus polyrhizus) MEMPERBAIKI PROFIL  LIPID  TIKUS  (Rattus Norvegicus)WISTAR JANTAN DISLIPIDEMIA  SAMA  EFEKTIF DENGAN
STATIN. Tesis. (Universitas Udayana, 2012).
15.  Handayani,  S.  (Universitas  N.  Y. KANDUNGAN  KIMIA  BEBERAPA TANAMAN  DAN  KULIT  BUAH BERWARNA SERTA MANFAATNYA BAGI KESEHATAN. Dr.
Sri
Handayani - PDF Download Gratis .
(Universitas Negeri Yogyakarta, 2014).
16.  Kristianto.  Buku  Berkebun  Buah Naga - Penebar Swadaya. 2014
17.  Widianingsih, M. AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK
METANOL BUAH NAGA MERAH
(Hylocereus polyrhizus (F.A.C Weber)  Britton  &  Rose)  HASIL MASERASI  DAN  DIPEKATKAN DENGAN KERING ANGIN | Widianingsih | Jurnal Wiyata: Penelitian  Sains  dan  Kesehatan. J. Wiyata 3 , 146–150 (2016).
18.  Mahattanatawee,  K. et  al. Total antioxidant activity and fiber content of  select  Florida-grown  tropical fruits. J.  Agric.  Food  Chem. 54 , 7355–7363 (2006).
19.  Prakoso,  L.  O.,  Yusmaini,  H., Thadeus,  M.  S.  &  Wiyono,  S. Perbedaan  efek  ekstrak  buah  naga merah  (Hylocereus  polyrhizus)  dan ekstrak buah naga putih (Hylocereus undatus)  terhadap  kadar  kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus). (Fakultas  Kedokteran  Universitas Pembangunan Veteran Jakarta, 2017). doi:10.25182/jgp.2017.12.3.195-202 20.  Sharan.  Ekstrak  Etanol  Buah  Naga Merah (Hylocereus Polyrhizus)
Memperbaiki  Profil  Lipid  Tikus (Rattys  Novergicus)  Wistar  Jantan Dislipidemia  sama  Efektif  dengan Statin. Intisari  Sains  Medis 8 ,  102– 109 (2017).
21.  Aziz,  F.  A.  &  Noor,  M.  M.  Ethanol extract of dragon fruit and its effects on sperm quality and histology of the testes in mice. 21 , 126–130 (2010).
22.  Creswell,  J.  . Research  Design : Qualitative, Quantitative, and Mixed Methods  Approaches .  (USA :  Sage Publications, Inc., 2013).
23.  Sastroasmoro,  S  dan  Ismael,  S. Dasar-dasar  Metodologi  Penelitian Klinis , Edisi 4. Sagung Seto, Jakarta
(2011).
Available at: https://www.researchgate.net/publica tion/325265072_Dasar-
dasar_Metodologi_Penelitian_Klinis
. (Accessed: 11th December 2019)
24.  Hastono, S. P. (Universitas I. Analisis Data . (Universitas Indonesia, 2006).
25.  Kim,  H.-Y.    Statistical  notes  for clinical researchers: post-hoc
multiple comparisons . Restor. Dent.
Endod. 40 , 172 (2015).
26.  Singh, N. U., Roy, A. & Tripathi, A. K.  Non  Parametric  Tests:  Hands  on SPSS. (2013).
27.  Dahlan,  M.  S. Statistik  Untuk Kedokteran
Dan Kesehatan : Deskriptif,  Bivariat,  dan  Multivariat Dilengkapi  Aplikasi  Menggunakan SPSS . 2017 (Epidemiologi
Indonesia).
28.  Hor, S. Y. et al. Safety assessment of methanol  extract  of  red  dragon  fruit (Hylocereus  polyrhizus):  Acute  and subchronic  toxicity  studies. Regul. Toxicol.  Pharmacol. 63 ,  106–114 (2012).
29.  Bogor),  A.  (nstitut  P.  PENGARUH
PEMBERIAN KITOSAN TERHADAP KADAR KOLESTEROL  TOTAL TIKUS (Sprague-dawley)  YANG  DIBERI PAKAN  TINGGI  ASAM  LEMAK TRANS AGUSTINA DEPARTEMEN GIZI MASYARAKAT FAKULTAS EKOLOGI  MANUSIA  INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2014.  (Institut  Pertanian  Bogor, 2014).
30.  Istianah,  E.  T.  (Universitas  M.  S. PERBEDAAN KADAR ASAM
URAT  PADA  PASIEN  TIDAK PUASA DENGAN PASIEN PUASA 8,  10  DAN  12  JAM.  (Universitas Muhammadiyah, Semarang, 2016).
31.  Celik,  I.,  Tuluce,  Y.  &  Isik,  I. Evalution  of  toxicity  of  abcisic  acid and  gibberellic  acid  in  rats:  50  days drinking  water  study. J.  Enzyme Inhib.  Med.  Chem. 22 ,  219–226 (2007).
32.  Parasuraman, S. Toxicological screening. J. Pharmacol. Pharmacother. 2 , 74 (2011).
33.  Kusuma,  A.  M.,  Asarina,  Y., Rahmawati, Y. I. & Susanti, S. Efek Ekstrak  Bawang  Dayak  (Eleutherine palmifolia  (L.)Merr)  dan  Ubi  Ungu
(Ipomoea batatas L) terhadap
Penurunan  Kadar  Kolesterol  dan Trigliserida Darah pada Tikus Jantan.
J. Kefarmasian Indones. 6 , (2017).
34.  Murray,  R.  K. et  al. Haper’s Illustrated  Biochemistry  28th  ed. (2009).
35.  Shi,  Y. et  al. The  Regulation  of Alfalfa  Saponin  Extract  on  Key
Genes Involved in Hepatic Cholesterol Metabolism in Hyperlipidemic  Rats. PLoS  One 9 , e88282 (2014).
36.  Elon,  Y.,  J.  P.  Manfaat  Jeruk  Nipis (Citrus  Aurantifolia)  Dan  Olahraga Untuk  Menurunkan  Kolesterol  Total Klien Dewasa. J. Sk. Keperawatan 1 , 148–155 (2015).
37.  Haschek, W. M., Rousseaux, C. G. &
Wallig,  M.  A.  Male  Reproductive System. in Fundamentals of
Toxicologic Pathology 553–597 (Elsevier,  2010).  doi:10.1016/B978-
0-12-370469-6.00018-0
38.  Reece,  J.B.,  Urry,  L.A.,  Cain,  M.L., Wesserman,  S.A.,  Minorscky,  P.V., JAckson, R.  B. Campbell Biology, 9 th Ed . (Pearson Education,Inc, 2011).
39.  Cheah, Y. & Yang,  W.  Functions of essential  nutrition  for  high  quality spermatogenesis. Adv. Biosci. Biotechnol. 02 , 182–197 (2011).
40.  Ashrafi, H. et al. The effect of quince leaf (Cydonia oblonga miller) decoction on testes in hypercholesterolemic  rabbits:  a  pilot study. Afr.  J.  Tradit.  Complement. Altern. Med. 10 , 277–282 (2013).
41.  Jan,  S.  Z. et  al. Distinct  prophase arrest  mechanisms  in  human  male meiosis . (The Company of Biologists
Ltd, 2018). doi:10.1242/dev.160614
42. Dötsch, V., Bernassola, F., Coutandin, D., Candi, E. & Melino, G. p63 and p73, the ancestors of p53. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2 , 1–14 (2010).