## PRAKONSENTRASI DAN ANALISIS ION KADMIUM BERBASIS FLOW INJECTION ANALYSIS
Uswatun Hasanah 1 , Rusnadi 2 , M. dan Bachri Amran 3
1 Program Studi Kimia, FMIPA Universitas Pakuan.
2,3 Program Studi Kimia, FMIPA Institut Teknologi Bandung
E-mail : uswatunhasanah1719@gmail.com

## ABSTRACT
CD-imprinted polymers (Cd-IPs) have been synthesized and retensinya properties have been studied for the pre concentration and analysis of cadmium concentration at the level of µ g L- 1berbasis technique of flow injection analysis (FIA). This procedure is based on the retention of ions Cd (II) on Cd-IPs are synthesized. Retention cadmium ions can elution quantitatively with  a  solution  of  nitric  acid  directly  onto  the  nebulizer  system  for  atomic  absorption spectrometer.  The  retention  capacity  of  the  Cd-IPs  acquired  for  20.10  mg  g-1pada  pH optimum  and  shows  a  quick  retention  kinetics.  Analytical  parameters  such  as  retention capacity,  the  volume  of  the  sample,  the  concentration  and  volume  of  eluen  have  been evaluated  to  obtain  a  good  analytical  performance.  The  system  being  developed  makes  it possible  to  analyze  15  samples  per  hour,  with  a  limit  of  detection  of  the  8  µ  g  L-1.  For  the concentration  of  50  μg  L-1  has  obtained  precision  values  expressed  as  percent  relative standard deviation of 1.6 (n = 5). A method of analysis that was developed has been used for the  determination  of  cadmium  in  river  water  samples  Cidurian,  West  Java,  Indonesia  with satisfactory results.

## Key words:  consentration, analyzing miniscule, cadmium, FIA

## PENDAHULUAN
Logam kadmium dapat  berasal dari sumber  alamiah  atau  akibat  kegiatan manusia  (antropogenik).  Proses  alam seperti  pelapukan  batuan  dan  aktivitas vulkanik  memberikan  kontribusi  yang besar  ke  lingkungan.  Apabila  proses  alam tersebut tidak mengalami perubahan siklus, jarang  yang  sampai  pada  tingkat  toksik. Kegiatan-kegiatan  manusia  yang  dapat menyebabkan  masuknya  logam  kadmium ke lingkungan antara lain adalah pertambangan, peleburan logam dan kegiatan industri lainnya. Kadmium merupakan  salah  satu  logam  berat  yang diketahui memiliki efek toksik yang tinggi, dapat masuk ke dalam sistem metabolisme makhluk  hidup  dan  terakumulasi  dalam tubuh (Almeida, J. A. et al ., 2009; Flora, S. J. S.,2009; Patrick, L., 2003].
Selama bertahun-tahun flame atomic  absorption  spectrometer (FAAS) telah menjadi alat analisis yang layak untuk penentuan  logam  dalam  berbagai  matriks karena  berbagai  aplikasi  yang  luas, kesederhanaan  dalam  operasi  dan  biaya analisis  yang  rendah  [Welz,  B.,  Sperling, M.,  Martin,  R.,  1999].  Namun,  karena konsentrasi kadmium dalam sampel lingkungan  umumnya  berada  dalam  batas bawah  kuantifikasi,  maka  analisis  tidak dapat  dilakukan  secara  langsung  tanpa melalui  tahap  prakonsentrasi.  Tandem spektrometer  serapan  atom  dengan  teknik analisis  injeksi  alir  (FI-FAAS)  untuk prakonsentrasi  dan  analisis  ion  logam merupakan  alternatif  yang  menarik  untuk menggantikan teknik klasik seperti ekstraksi fase padat (SPE) [Fang, Z., 1995]. Pencarian  sorben  selektif  dan  aplikasinya untuk  pemisahan  ion  kadmium  dan
prakonsentrasi  masih  menarik  banyak perhatian  [Pyrzyńska,  K.,  and  Szeląg,  H., 2001].  Salah  satu  jenis  material  yang paling  menjanjikan  sebagai  sorben  adalah metal  ion  imprinted  polimers (MIIPs). Aplikasi  analitis  dari  MIIPs  telah  ditinjau oleh  Rao  et  al  (2004).  Sintesis  resin pengkhelat  menggunakan  PAF  sebagai material  pendukung  telah  dilakukan  oleh beberapa  peneliti.  Sid  Kalal  dan  sejawat [Sid  Kalal,  H., et  al. 2012]    telah mensintesis resin pengkhelat untuk mendeteksi  ion  logam  Platinum  serta mempelajari  sifat-sifat  adsorpsinya.  Resin ini  juga  telah  digunakan  untuk  pemisahan dan  prakonsentrasi  ion  logam  berat  dari berbagai  media  dengan  teknik  pemisahan lainnya  [Panahi  A.H., et  al .,  2012].  Pada penelitian  ini,  Cd- imprinted polymers (Cd- IPs)  disintesis  dari  monomer  anilin  dan formaldehid  serta  tambahan  anilin  sebagai pemanjang  rantai.Cd-IPs  yang  disintesis ini,  diintegrasi  dengan  FIA  sebagai  suatu sistem prakonsentrasi.
Sistem FIA
digunakan  untuk  sistem  prakonsentrasi sekaligus pengukuran analit secara langsung  menggunakan  FAAS  sebagai detektor  selektif  unsur.  Sistem  yang terintegrasi ini memiliki beberapa keuntungan  seperti  waktu  analisis  yang lebih  cepat,  konsumsi  sampel  yang  lebih sedikit,  dan  presisi  yang  lebih  baik dibandingkan  dengan  metode  FAAS  yang biasa dilakukan. Optimasi dilakukan dengan  memvariasikan  kondisi  laju  alir, konsentrasi  eluen  dan  volumen  eluen  dan parameter kinerja analitik.

## BAHAN DAN METODE Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  antara  lain  peralatan  gelas standar  laboratorium  kimia, hot  plate , pengaduk magnetik, termometer,
thermocouple ,  neraca  analitik, shaker ( incubated  shaker SI-600R),  oven,  serta saringan mesh 60 dan 80 mesh . Konsentrasi ion logam ditentukan dengan menggunakan
spektrometer serapan atom GBC-Avanta  . Parameter  pengukuran  seperti  panjang gelombang, lebar celah dan laju asetilen/udara  mengikuti  yang  disarankan oleh  pabrikan.  Semua  pengukuran  pH dilakukan  dengan  pH  meter  digital  Orion  model  470.  Keberadaan  gugus  fungsi  dari MIIPs yang disintesis diidentifikasi menggunakan  spektrometer  infra  merah bertransformasi Fourier (FTIR)
Shimadzu  -SpectraOne,  serta  SEM-EDX untuk  analisis  morfologi  permukaan  dan identifikasi komposisi unsur yang terkandung  dalam  MIIPs.  Diagram  sistem prakonsentrasi on-line diilustrasikan  pada Gambar 1.
Gambar 1 . Diagram sistem prakonsentrasi on - line untuk  prakonsentrasi dan      analisis    ion    kadmium (S: sample ;  E: eluent ;  P: peristaltic  pump ;  MC:  IIPAF minicolumn ; V: eight-port valve ;C: Chamber dan FAAS: flame atomic absorption spectro meter )  )[Amran,  M.  B., et  al. , 2011].
200  mg  IIPAFmenjadi  material  pengisi Mini-kolom  yang terbuat dari bahan PTFE dengan panjang 3,5 cm dan diameter dalam 4  mm.  Modul  prakonsentrasi  dihubungkan secara langsung ke sistem nebulisasi FAAS menggunakan  pipa  kapiler  PTFE  dengan bantuan peristaltic  pump )  (Amran,  M.  B., et  al. ,  2011).  Air  ultra  murni  dari  sistem pemurnian  Easypure  RF  (Barnstead  , Dubuque, USA) digunakan untuk penyiapan  larutan  kerja  Cd(II)  pada konsentrasi  g  L -1 yang  dibuat  secara harian dengan mengencerkan larutan induk
1000  g  L -1 .Polimer  dibuat  dari  monomer anilin  dan  formaldehid,  serta  penambahan anilin lebih lanjut sebagai pemanjang rantai dan  kadmium  asetat  sebagai  ion template ,
sehingga terbentuk
Ion Imprinted
Poly(Aniline-Formaldehyde)/ IIPAF.  Pada sintesis  ini  tidak  diperlukan  ligan  untuk mengkomplekskan  ion  logam  (Panahi A.H., et al ., 2012).

## Sintesis Cd-IPs
Sintesis resin polyaniline formal dehyde (PAF)  merupakan  tahap  pertama dari penelitian ini. Resin PAF dibentuk dari monomer  anilin  dan  formaldehid  yang berkopolimerisasi  membentuk  suatu  rantai lurus.  Resin  PAF  disintesis  dengan mencampurkan  5  mL  formaldehid  (37%) dengan 9,3 g anilin yang telahditambahkan3 mL HCl (37%), sampai dihasilkan cairan berwarna kuning, kemudian  dilakukan  proses  refluks  pada suhu  100 o c  selama  2  jam.  Suhu  sistem kemudian diturunkan hingga 60 o C, dinetralkan  dengan  penambahan  4  mL NaOH  30%,  kemudian  dicuci  dengan  air hangat  tiga  kali.  Didapatkan  resin  PAF berupa suatu cairan kental berwarna coklat tua (Liu G., Freund M.S., 1997).
Sebanyak  0,5  g  resin  PAF  dilarutkan dalam  HCl  1  M,  kemudian  20  mL  larutan Cd(II)  ditambahkan  tetes  demi  tetes  (100 mg L -1 ). 0,5 mL anilin ditambahkan lagi ke dalam  larutan  dengan  pengadukan  kuat. Sejumlah  FeSO 4 dan  3  mL  H 2 O 2 ditambahkan.  Setelah  6  jam  diperoleh polimer berwarna hitam berbentuk powder . Polimer  yang  diperoleh  disimpan  dalam penangas  es  (0 o C)  selama  2  jam  (Liu  dan Freund, 1997). Polimer disaring dan dicuci dengan  HCl  sampai  larutan  berwarna bening. Polimer yang terbentuk selanjutnya disebut ion-imprinted poly (aniline- formaldehyde) /IIPAF, yang kemudian dicuci  dengan  HNO 3 0,5  M  ( leaching ) yang  selanjutnya  akan  disebut  Cd-IPAF. Sebagai  kontrol,  dilakukan  juga  sintesis Non-imprinted poly(aniline- formaldehyde) /NIPAF  dengan  prosedur
sintesis  yang  sama  akan  tetapi  tidak ditambahkan larutan Cd(II) sebagai cetakan (Panahi  A.H., et  al .,  2012).  Resin  PAF, IIPAF  dan  Cd-IPAF  yang  diperoleh selanjutnya dikarakterisasi.
Sistem prakonsentrasi on-line Sistem alir dioperasikan dengan berbasis
volume.
Larutan sampeldiinjeksikan  ke  dalam valve FIA melalui loop dengan  volume  1  mL, mengalir ke dalam mini-kolom yang berisi Cd-IPAF,  dengan  laju  alir  2  mL  menit -1 . Dengan  memutar valve 8  jalur,  larutan HNO 3 0,5  M  akan  mengalir  melalui loop dengan volume 1 mL ke dalam mini-kolom dan  mengelusi  kadmium  yang  teretensi menuju  sistem  nebulisasi  dari  FAAS. Sinyal kuantitatif yang dihasilkan selanjutnya  dibaca  sebagai  tinggi  puncak dengan  menggunakan  kombinasi  peralatan konverter  analog-digital  dan  perangkat lunak PowerChrom  ( Amran, et al ., 2011).
.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakterisasi gugus fungsi MIIPs
Beberapa  puncak  yang  penting  dan membuktikan bahwa polimer telah terbentuk  adalah  adanya  perubahan  dari sinyal  doublet  pada  spektrum  IR  anilin pada bilangan gelombang sekitar 3350 cm - 1 dan 3421 cm -1 , yang menunjukkan adanya ikatan  -NH 2 bebas  (primer).  Sedangkan pada  spektrum  IR  resin  PAF,  sinyal doublet  sudah  tidak  muncul  dan  hanya terdapat sinyal singlet. Hal ini mengindikasikan bahwa telah terjadi perubahan pada ikatan N-H primer menjadi N-H  sekunder  pada  gugus  anilin.  Adanya N-H  sekunder  mengindikasikan  telah terbentuknya  rantai  cabang  pada  rantai utama.  Sedangkan  puncak  pada  3448  cm -1 menunjukkan  masih  terdapatnya  N-H primer,  dan  tidak  semua  gugus  –NH 2 membentuk   rantai cabang. Pada  gugus N- H  primer  terbentuk  2  puncak  karena adanya strech simetris dan asimetris. Selain itu,  muncul  sebuah  sinyal  baru  pada
bilangan  gelombang  yang  lebih  kecil  dari amina  yang  timbul  akibat overtone N-H. Puncak  pada  2902  cm -1 menunjukkan ikatan C-H  yang t erbentuk  pada  rantai Tabel 1. Spektrum IR
utama  resin  PAF.  Sementara  ikatan  C-N muncul  pada  puncak  1176  cm -1 .Terdapat perubahan  dan  pergeseran  pada  hasil spektrum  Cd-IPAF  (sebelum leaching ) dengan Cd-IPAF (setelah leaching ). Perubahan  ini  cukup  signifikan  untuk menunjukkan  bahwa  ion  Cd(II)  telah terlepas  dari  material  fungsional  yang disintesis.
Puncak
pertama yang mengalami  pergeseran  yaitu  pada  daerah 3406 cm -1 .
Puncak  ini  merupakan  puncak untuk  ikatan  –NH,  jika  melihat  struktur IIPAF,  Cd  berikatan  dengan  atom  N  dari cincin  aromatik  dan  setelah  Cd  dilepaskan dengan larutan asam nitrat, puncak untuk – NH  pada  cincin  aromatik  ini  bergeser  ke bilangan  gelombang  yang  lebih  besar. Puncak  3406  cm -1 pada  Cd-IPAF  yang tidak mengandung Cd, menjadi lebih tajam dan intensitasnya menurun, karena atom N sudah tidak mengikat Cd lagi. Pada tabel 1 di  atas,  merupakan  rangkuman  spektrum IR.
Kapasitas retensi MIIPs Metoda batch telah  digunakan untuk  mempelajari  kapasitas  retensi  dari MIIPs.  0,0500  g  Cd-IPAF  dan  NIPAF direndam  selama  75  menit  dalam  20  mL larutan  Cd(II)  pada  pH  5,  dengan  variasi konsentrasi  larutan  Cd(II)  5-250  mg  L -1 , kemudian campuran ini disaring lalu filtrat yang  diperoleh  diukur  absorbansinya
dengan menggunakan FAAS.Cd-IPAF yang  disintesis  memiliki  kapasitas  retensi optimum  sebesar  20,01  mgg -1 ,  sedangkan NIPAF memiliki kapasitas retensi optimum sebesar  16,01  mg  g -1 seperti  terlihat  pada Gambar  2  yang  merupakan  plot  antara kapasitas  teretensi  Cd  (II)  terhadap konsentrasi awal larutan standar Cd (II).
Gambar  2 .Pengaruh  konsentrasi  Cd(II) terhadap kapasitas retensi

## Konsentrasi dan volume eluen
Untuk mengoptimasi kondisi eluen, larutan  standar  yang  mengandung  ion Cd(II)  0,25  mg  L -1 diinjeksikan  ke  dalam valve FIA  melalui  loop  dengan  volume  1 mL,  mengalir  ke  dalam  mini-kolom  yang berisi  Cd-IPAF,  dengan  laju  alir  2  mL menit -1 .  Dengan  memutar valve 8  jalur, larutan  HNO 3 sebesar  0,1  M  atau  lebih. Kenaikan  konsentrasi  asam  nitrat  melebihi 0,1M,  tidak  memberikan  perbedaan  hasil
0 5 10 15 20 25 0 100 200 300 Kapa si tas R et ens i, m g g -1 Konsentrasi Cd(II) , µg L -1 IIPAF NIPAF
Sampel
Vibrasi (Bilangan Gelombang cm -1 ) -NH 2 -NH -CH- C=C Aromatik -C-N-- -CH 2 Anilin 3354 3429 - 2904 - 1174 PAF - 3358 2902 1514 1311 1176 NIPAF - 3369 2922 1510 1344 1176 IIPAF - 3406 2920 1508 1344 1176 Cd-IPAF(sebelum leaching) - 3406 2920 1508 1344 1176 Cd-IPAF(setelah leaching) - 3446 2922 1508 1382 1176
elusi yang signifikan yang ditandai dengan tinggi  puncak  yang  tidak  berubah.  Jumlah volume  asam  nitrat  yang  digunakan  juga telah  dievaluasi.  Sejumla  h0,5mL  eluen telah  cukup  untuk  mengelusi  secara kuantitatif  ion  Cd(II)  yang  teretensi. Volume eluen yang lebih kecil memberikan  tinggi  puncak  yang  semakin kecil  pula  yang  menunjukkan  tidak sempurnanya  proses  elusi.  Volume  eluen yang lebih besar dari0,5mL tidak memberikan  tinggi  puncak  yang  lebih besar, halini menunjukkan bahwa volumen eluen  sebesa  r0,5mL  merupakan  volumen eluen yang optimal untuk mengelusi secara kuantitatif ion Cd(II) teretensi.

## Kinerja Analitik
Pengujian  keboleh  ulangan  metoda yang dikembangkan telah dievaluasi menggunakan  kondisi  optimum  yang diperoleh.  Presisi  dihitung  menggunakan hasil dari lima pengukuran larutan estándar kadmium  50  g  L -1 ,  seperti  diillustrasikan oleh  fiagram  penentuan  keboleh  ulangan pengukuran  pada  Gambar  3.  Hasil  yang diperoleh  menunjukkan  bahwa  koefisien variansi  (%KV)  dari  kelima  pengukuran tersebut  adalah  sebesar  1,6  %  yang mengindikasikan  presisi  yang  baik  dari metoda yang dikembangkan.
Gambar 3 . Diagram penentuan keboleh- ulangan pengukuran
Metoda prakonsentrasi on-line yang
dikembangkan  ini,    memungkinkan  untuk penentuan ion Cd(II) pada range
konsentrasi  antara  50  -250  gL -1 .  Kurva kalibrasi  yang  diperoleh  memberikan persamaan garis  y=0.0005x  - 0.0074 (R² = 0.9974).  Dengan  metoda analisis langsung pada FAAS tanpa melalui tahapan prakonsentrasi,   diperoleh kelinieran kurva kalibrasi  antara  0,5  hingga  2,5  mg  L -1 dengan persamaan  y = 4E-05x + 0.001 (R² =  0.9993).  Dengan  demikian,  faktor prakonsentrasi dihitung sebagai perbandingan  slope  kedua  kurva  kalibrasi, yaitu  sebesar  11  kali  untuk  volume  injeksi sampel  1  mL.  Limit  deteksi  dari  metoda yang  dikembangkan  adalah  8  gL -1 ,  jika dinyatakan  sebagai  konsentrasi  kadmium yang  mampu  memberikan  tinggi  puncak sebesar  3  kali  simpangan  baku  tinggi puncak  larutan  blanko  (S/N=3).  Limit deteksi  ini  masih  dapat  diperkecil  jika jumlah  volume  sampel  yang  diinjeksikan diperbesar.  Untuk mengetahui akurasi dari metoda,    sejumlah  tertentu  larutan  standar Cd(II)  telah  ditambahkan  ke  dalam  50  mL sampel air sungai dan selanjutnya dilakukan  prakonsentrasi  dan  analisis. Hasil  pengukuran  menunjukkan  adanya kesesuaian antara jumlah yang ditambahkan  dengan  jumlah  analit  hasil pengukuran  seperti  terlihat  pada  Tabel  2. Nilai  perolehan  kembali  yang  dihitung untuk  sampel  yang  ditambahkan  larutan standar  lebih  besar  dari  95%.  Hasil  ini mengkonfirmasi  bahwa  prosedur  analisis yang    disarankan  mampu    memberikan hasil  yang    tidak  dipengaruhi  oleh  matrik sampel.
Tabel 2 .  Nilai perolehan kembali ion
Cd(II) Sampel Konsentrasi ion Cd(II) (μg L -1 ) Perolehan kembali (%) Ditambahkan  Ditemukan Air sungai 0 24,30 ± 8,54 - 50 71,61 ± 8,54 96,40%

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  analisis  yang diperoleh pada penelitian ini, menunjukkan bahwa material fungsional yang dikembangkan  merupakan  material  efektif untuk  prakonsentrasi  ion  Cd(II)  dari sampel  air  sungai.  Sistem  prakonsentrasi on - line berbasis flow  injection  analisis (FIA)  dengan  menggunakan  mini-kolom Cd-IPAF  mampu  memberikan  kinerja analitik  yang  sangat  baik.  Kombinasi sistem  FIA  dengan  FAAS  menggunakan mini-kolom  MIIPs  dapat  menjadi  metoda prakonsentrasi dan analisis renik ion logam yang  menjanjikan  untuk  berbagai  jenis sampel. Teknik prakonsentrasi dan analisis ion Cd(II) yang dikembangkan ini memberikan  kemudahan,  kesensitifan  dan kehandalan yang sangat baik.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  kepada  Prof.  Dr.  M. Bachri  Amran,  DEA  dan  Dr.  Rusnadi, M.Si  sebagai  pembimbing  penelitian  dan Lembaga Pengelola Dana Keuangan
Republik  Indonesia  atas  bantuan  dana penelitian melalui beasiswa magister dalam negeri.

## DAFTAR PUSTAKA
Almeida,  J.  A.,  Barreto,  R.  E.,  Novelli,  L. B.,  Castro,  F.  J.,  and  Moron,  S. E.,“Oxidative  Stress  Biomarkers and  Aggressive  Behavior  in  Fish Exposed  to  Aquatic  Cadmium Contamination”.  Neotrop.Ichtyol., 2009, Vol 7, pp. 103-108.
Amran,  M.  B.,  Panggabean,  A.  S., Sulaeman,  A.  and  Rusnadi,  M,. “Preparation  of  a  Chelating  Resin and  its  Application  as  a  Pre concentration System for
Determination  of  Cadmium  in River  Water  by  Flow  Injection Analysis”, Spring  2011,  Int.  J. Environ. Res., 5(2):531-536, ISSN: 1735-6865 .
B. Welz, M. Sperling, “Atomic Absorption Spectrometry”, 3rd compl. rev. ed.,
Wiley-VCH, Weinheim, 1999. Flora, S. J. S.,“Metal Poisoning: Treatment and Management”. Review
Article.  Al  Ameen,  J.  Med.  Sci , 2009,Vol 2, pp. 4-26.
Liu  G.,  Freund  M.S.,  New  Approach  for the  Controlled  Cross-Linking  of Polyaniline: Synthesis and
Characteization,  1997,  Macromol., 30, p.5660. Panahi, Ahmad., Homayon., Samadi Zadeh., Marjaneh., Tavangari., and Simin.  2012.  Nickel  Adsorption from Enviromental Samples by Ion Imprinted  Aniline-Formaldehyde Polymer . Islamic  Azad  University and Toosi University of Technology.  Tehran  :  Iran.  Vol.
31, No. 3.
Patrick,  L.,  “Toxic  Metals  and  Anti- oxidants.  Part  II  the  Role  of  Anti- oxidant  in  Arsenic  and  Cadmium Toxicity  –  Toxic  Metals  part  II”, 2003, Alternativer Medicine
Review.
Pyrzyńska,  K.  and  Szeląg,  H.,“On-line
Preconcentration system with FAAS  detection  for  determination of  cadmium”,  Anal.Lett.,  2001, 34(12), 2153–2158
Rao, P.T., Daniel, S, Gladis, J.M.,“Tailored Materials  for  Preconcentration  or Separation  of  Metals  by  Ion- Imprinted  Polymers  for  Solid- Phase Extraction (IIPSPE)”, Trends in  Anal.  Chem .,  2004,  23  (1):  29-
35.
Sid  Kalal,  H,  Hoveidi,  H.,  Thagiof,  M., Pakizevand,  N.,  Almasian,  M.  R., and  Firoozzare,  M.  A.,  “Pre- concentration  and  Determination of Platinum (IV) in Water Samples Using Chelating Resin by
Inductively Coupled Plasma Atomic  Emission  Spectroscopy (ICP-AES)”, Int.  J.  Environ.  Res., 6(3):739-750, Summer 2012, ISSN: 1735-6865 .
Z.  Fang,  “Flow  Injection  Atomic  Absorp tion  Spectrometry”,  John  Wiley  &  Sons, Chichester, 1995.