p-ISSN 2527-6751
Struktur Hepar dan Rasio Bobot Hepar Terhadap Bobot Tubuh Mencit  ( Mus Musculus L.) Jantan Setelah Pemberian Ekstrak Etanol Daun Mimba ( Azadirachta Indica A.Juss)
Liver Structure and Ratio of Liver Weight to The Body Weight of  Male Mice ( Mus musculus L.) After Giving Ethanol Extract of  Neem Leaves ( Azadirachta indica A.Juss)
Ratih Nur Fitriani 1 *, Agung Janika Sitasiwi 2 , Sri Isdadiyanto 2
1 Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro
2 Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro *Email : fitrianiratih08@gmail.com
Diterima 27 Juni 2019 / Disetujui 5 Februari 2020

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui struktur hepar dan rasio bobot hepar terhadap bobot tubuh mencit ( Mus musculus L) jantan setelah pemberian ekstrak etanol daun mimba ( Azadirachta indica A.Juss). Penelitian ini menggunakan 2 kelompok perlakuan yaitu Kontrol (akuades) dan Perlakuan (mimba). Perlakuan diberikan secara  oral  selama  21  hari.  Hepar  ditimbang  dan  dibuat  preparat  menggunakan  metode  parafin  dengan pewarnaan Hematoksilin Eosin. Pengukuran diameter hepatosit dilakukan dalam 4 bidang pandang. Bobot hepar dan bobot tubuh digunakan untuk menghitung nilai HSI. Data dianalisis dengan uji t. Hasil analisis menunjukan adanya  pengaruh  nyata  terhadap  diameter  hepatosit  tetapi  menunjukan  pengaruh  tidak  nyata  terhadap  bobot tubuh, bobot hepar dan nilai Hepatosomatik indek (HSI). Hal ini dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak etanol  daun  mimba  ( Azadirachta  indica )  sebagai  obat  tradisional  dengan  dosis  14  mg/KgBB  tidak mempengaruhi struktur hepar dan rasio bobot hepar terhadap bobot tubuh mencit ( Mus musculus ) jantan.
Kata kunci : daun mimba, hepar, diameter hepatosit dan HSI

## ABSTRACT
The  aim  of  this  study was to determine the liver structure and the ratio of liver weight to the body weight of male mice ( Mus musculus L) after the administration of ethanolic of neem leaves ( Azadirachta indica A.Juss) extract. This study using 2 treated groups, namely control (aquadest) and treated group (neem). Treatment was given orally 21 days. The liver weighed and contiuned by histologically prepared with paraffin method, using HE staining. Measurement of hepatocyte diameter were carried out in every 4 fields of the organs. The liver weight and body weight were used to calculate HSI value. Data was analyzed by t test. The results showed a significant effect on the hepatocyte diameter but showed no significant effect on body weight, liver weight and Hepatosomatic index  value  (HSI).  It  could  be  concluded  that treated  with  the  ethanolic  neem  leaves  extract during 22 days was safe to the male mice liver structure. It can be concluded that the administration of ethanolic of neem leaves ( Azadirachta indica A.Juss) extract as traditional medicine with dose of 14 mg/KgBW did not effect the liver structure and the ratio of liver weight to the body weight of male mice ( Mus musculus L).

## Keywords : neem leaves, liver, hepatocyte diameter and HIS

## PENDAHULUAN
Mimba  merupakan  tanaman  yang  banyak ditemukan  di  Indonesia. Tanaman  mimba  di    Bali jumlahnya    diperkirakan    kurang    lebih    500.000 pohon  (Odoh  dan  Bratte  2015).  Daun    mimba ( Azadirachta    indica A.    Juss)    memiliki    efek antiinflamasi, antibakterial, antifungal dan
antioksidan.  Daunnya  mengandung  beberapa komponen    hasil    produksi    metabolit    sekunder seperti    flavonoid,    saponin,    tanin,  azadirachtin, salanin,  meliantriol,  nimbin  dan  nimbidin  yang diduga    sangat    bermanfaat,  baik  dalam  bidang pertanian  (pestisida  dan  pupuk),  maupun  farmasi (kosmetik  dan  obat-obatan)  (Pandey et  al., 2014). Beberapa  senyawa  yang  bersifat  toksik  adalah
azadirachtin,  nimbin,  nimbidin,  dan  salannin (Suryawanshi, 2011). Hepar merupakan salah satu organ  dalam  tubuh  yang  berfungsi  sebagai  alat detoksifikasi sehingga hepar sangat rentan terhadap zat-zat  yang  bersifat  toksik.  Kupradinun et  al. (2012)  menyatakan  bahwa  efek  samping  nimba diduga dapat menyebabkan kerusakan struktur hati dan ginjal. Sitasiwi et al. (2018) telah membuktikan bahwa ekstrak ethanol daun Mimba menyebabkan peningkatan  bobot  hepar.  Ghimeray et  al. (2009) menyatakan  bahwa ekstrak  daun  mimba  pada  200 g/kg berat badan dapat menyebabkan pengurangan berat  badan  hewan  disertai  dengan  gejala  seperti kelemahan,  anoreksia  dan  cacat  histopatologis. Omotayo et  al. (2012)  telah  membuktikan  bahwa ekstrak  etanol  kulit  kayu  tanaman  mimba menyebabkan meningkatnya rasio berat tubuh dan berat hepar tikus.
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut  maka dilakukan penelitian ini. Tujuan dari penelitian ini adalah  untuk  mengetahui  struktur  histologi  hepar dan rasio bobot hepar terhadap bobot tubuh mencit ( Mus musculus L) jantan setelah pemberian ekstrak etanol  daun  mimba  ( Azadirachta  indica A.Juss). Penelitian ini juga dilakukan pengukuran terhadap diameter hepatosit mencit jantan untuk mengetahui apakah  terjadi  pembengkakan  pada  sel  hepar. Pembengkakan  sel  merupakan  salah  satu  indikasi adanya  kerusakan  yang  bersifat  reversibel.  Selain itu  juga  dilakukan  pengamatan  terhadap  struktur morfologi hepar.

## METODE PENELITIAN
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu 10 set kandang mencit, botol minum mencit, neraca Ohaus ,  Hygrometer,  kompor  listrik, erlenmeyer, gelas beaker, jarum gavage, box plastik bertutup,  1  set  alat  bedah,  timbangan  analitik, seperangkat  alat  pembuatan  preparat  awetan (mikrotom  rotary,  pisau  mikrotom  rotary,  gelas benda,  gelas  penutup),  dan  fotomikrograf.  Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu 30 ekor mencit  jantan,  ektrak  etanol  daun  mimba  yang berbentuk  serbuk,  air,  pakan  ayam  komersial  (hi- provite  594),  larutan  BNF  10%,  larutan  Nacl 0,95%, kloroform dan seperangkat bahan pembuatan  preparat  (larutan  BNF  10%,  alkohol,
toluol, xylol, parafin, canada balsem dan perwarna hematoksilin dan eosin). Penelitian ini menggunakan  desain  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  dengan  2  kelompok  perlakuan  yaitu kelompok  kontrol  (akuades)  dan  kelompok perlakuan (mimba). Sebelum dilakukan perlakuan, mencit  di  aklimasi  terlebih  dahulu  selama  12  hari untuk  penyesuaian  hewan  uji  dengan  lingkungan penelitian  dan  perlakuan  oleh  peneliti.  Pembuatan larutan  ekstrak  etanol  daun  mimba  yaitu  dengan melarutkan  serbuk  kering  daun  mimba  sebanyak 1,68 gram dengan aquades bersuhu 80 o C sebanyak 39,8  ml.  Larutan  mimba  dan  kontrol  diberikan sebanyak 0,2 ml pada setiap mencit selama 21 hari. Perlakuan kontrol dan mimba dilakukan secara oral menggunakan  jarum  gavage  dengan  frekuensi sehari satu kali.
Bobot tubuh mencit ditimbang setiap 7 hari sekali  untuk  mengetahui  perubahan  bobot  mencit. Isolasi sampel dilakukan setelah 21 hari perlakuan yaitu  pada  hari  ke  22,  sebelum  dilakukan pembedahan bobot tubuh mencit ditimbang terlebih dahulu menggunakan neraca Ohaus. Mencit dibius menggunakan  kloroform  lalu  dibedah  dengan menyayat  bagian abdominal bawah  sampai thoracal. Organ  hepar  diambil  dan  ditimbang terlebih  dahulu  sebelum  diisolasi  kedalam  tabung sampel  yang  berisi  larutan  fiksatif  BNF  10%. Pembuatan  preparat  histologi  sel  hepar  dilakukan dengan metode parafin dan pewarnaan Hematoksilin  Eosin  (HE).  Pengamatan  struktur histologi  dan  pengukuran  diameter  hepatosit dilakukan dibawah fotomikograf dengan perbesaran  200x  dan  400x.  Rasio  bobot  hepar terhadap  bobot  tubuh  mencit  dilakukan  dengan membagi  bobot  hepar  dengan  bobot  tubuh kemudian  dikalikan  100.  Wahyuningtyas  dkk. (2018)  menyatakan  bahwa  pengukuran  diameter hepatosit dilakukan di bawah fotomikrograf dengan perbesaran 400x dengan cara membagi penampang menjadi tegak lurus berdasarkan garis horizontal (x) dan garis vertikal (y) apabila penampang hepatosit berbentuk  bulat.  Penampang  hepatosit  berbentuk oval  maka  pengukuran  diameter  hepatosit  dengan cara  membagi  penampang  hepatosit  secara  tegak lurus  berdasarkan  jarak  terdekat  (y)  dan  jarak terjauh (x). Data yang diperoleh dari penelitian ini
dianalisis menggunakan uji t dengan program SPSS versi 17 dengan taraf kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  mengenai  bobot  tubuh, bobot  hepar,  nilai  HSI  dan  diameter  hepatosit mencit  ( Mus  musculus )  jantan  setelah  pemberian ekstrak etanol daun mimba disajikan dalam Tabel 1. Berdasarkan uji t pada Tabel (1) pemberian ekstrak etanol  daun  mimba  memberikan  pengaruh  nyata (p<0,05) terhadap diameter hepatosit mencit ( Mus musculus )  jantan,  tetapi  memberikan  pengaruh tidak nyata terhadap bobot tubuh, bobot hepar dan nilai HSI (Hepatosomatic index). Pemberian larutan ekstrak  etanol  daun  mimba  dengan  dosis 14mg/KgBB  yang  diberikan  selama  21  hari  tidak mempengaruhi  bobot  tubuh  mencit  jantan.  Hasil penelitian  ini  dapat    diartikan  bahwa  pemberian
ekstrak  etanol  daun  mimba  tidak  menyebabkan pertambahan  maupun penurunan bobot tubuh yang signifikan.  Rerata  bobot  tubuh  mencit  kelompok kontrol dan kelompok perlakuan tidak jauh berbeda yaitu 35,79 gram dan 36,63 gram. Penelitian yang dilakukan  oleh  Ashafa et  al. (2012)  menjelaskan bahwa  pemberian    ekstrak    etanol    kulit    batang mimba    pada  dosis  50-100  mg/kgBB  belum  dapat memengaruhi    bobot    tubuh    tikus  jantan  bila dibandingkan  kelompok  kontrol.  Hasil  penelitian Hasana  dkk.  (2019)  juga  menjelaskan  bahwa pemberian ekstrak etanol daun mimba pada semua perlakuan  dengan  dosis  8,4  mg/kgBB,  11,2 mg/kgBB  dan  14  mg/kgBB  tidak  mempengaruhi bobot tubuh mencit betina. Hasil penelitian tersebut sama  dengan  penelitian  ini  sehingga  dapat  diduga bahwa efek pemberian ekstrak etanol daun mimba tidak terpengaruh oleh jenis kelamin.
Tabel 1. Rerata bobot, tubuh, bobot hepar, nilai HSI dan diameter hepatosit mencit jantan setelah pemberian ekstrak etanol daun mimba.
Keterangan:  Data disajikan berupa rataan ( 𝑋 ) ± standar deviasi (SD). Rerata yang diikuti superskrip yang sama pada baris yang sama menunjukan pengaruh tidak nyata (p<0,05) dengan uji t pada taraf kepercayaan 95%. K : kelompok kontrol, P: kelompok perlakuan.
Hasil uji t terhadap bobot hepar menunjukkan  pengaruh  tidak  nyata  (p>0,05). Rerata  bobot  hepar  pada  kelompok  kontrol  yaitu 1,75  gram  sedangkan  pada  kelompok  perlakuan yaitu  1,85  gram.  Rogers  dan  Renee    (2012) menyatakan    bahwa    berat    hepar  mencit  berkisar antara  1,5-2  gram.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa bobot  hepar  mencit  pada  penelitian  ini  masih tergolong normal. Hasana dkk. (2019) menyatakan bahwa  paparan    ekstrak    etanol    daun    mimba terhadap  bobot  hepar  mencit betina menunjukkan hasil yang berbeda tidak bermakna. Harbison et al. (2015) menyatakan hepar  merupakan organ target toksisitas,  paparan  zat  toksik  dalam  tubuh  dapat
menaikkan    ataupun  menurunkan  bobot  hepar. Penelitian  ini  tidak  terjadi  kenaikan  maupun penurunan bobot hepar, hal tersebut diduga karena kandungan  senyawa  dalam    ekstrak    etanol    daun mimba  dapat  dimetabolisme  dan    didetoksifikasi dalam organ hepar.
Nilai  HSI  merupakan  rasio  bobot  hepar terhadap bobot tubuh mencit. Hasil uji statistik nilai HSI  dari  penelitian  ini  menunjukkan    pengaruh tidak  nyata  (p>0,05).  Nilai  HSI  kelompok  kontrol yaitu 4,85% sedangkan untuk kelompok perlakuan yaitu  5,06%.  Hasana  dkk.  (2019)  menyatakan bahwa paparan  ekstrak  etanol  daun  mimba hingga dosis  14  mg/kg BB selama 21 hari menunjukkan
Variabel
Perlakuan
K 𝑋 ± 𝑆𝐷 P 𝑋 ± 𝑆𝐷 Bobot Tubuh (gram) 35,79 a ± 3,28 36,63 a ± 3,47 Bobot Hepar (µm) 1,75 a ± 0,25 1,85 a ± 0,22 Nilai HSI (%) 4,85 a ± 0,49 5,06 a ± 0,37 Diameter Hepatosit (µm ) 27,05 a ± 2,45 33,71 b ± 5,05
hasil  berbeda  tidak  bermakna  terhadap    nilai  HSI mencit  betina.  Hasil  penelitian  tersebut  sama dengan penelitian ini sehingga dapat diduga bahwa efek  paparan  ekstrak  etanol  daun  mimba  terhadap nilai HSI juga tidak bergantung pada jenis kelamin.
Hasil  uji  t  terhadap  diameter  hepatosit menunjukkan  adanya  pengaruh  nyata    (p<0,05). Data hasil pengamatan juga menunjukkan diameter hepatosit  yang  diberi  paparan  ekstrak  etanol  daun mimba memiliki ukuran yang lebih besar daripada kontrol  yaitu  berkisar  27,05  µm  dan  33,71  µm untuk  kelompok  perlakuan.  Ukuran    diameter hepatosit  pada  kelompok  perlakuan  lebih  besar daripada  kelompok  kontrol  diduga  merupakan suatu  indikasi  pembengkakan  sel.  Hasil  penelitian Hasana  dkk.  (2019)  diameter  hepatosit  normal mencit  betina  baik  kontrol  maupun  perlakuan mimba  berkisar  antara  10-20  µm.  Penelitian  ini tidak  ada  penurunan  atau  kenaikan  bobot  tubuh maupun  bobot  organ  hepar.  Hal  ini  sama  dengan penelitian yang dilakukan oleh Wahyuningtyas dkk.
(2018)  bahwa  peningkatan  diameter  hepatosit diduga bukan  merupakan  suatu  tanda kerusakan permanen  hepatosit.  Adanya  kerusakan  permanen hepatosit seharusnya diikuti  oleh  penurunan  atau kenaikan    bobot  tubuh  dan  bobot  organ  yang signifikan terhadap suatu individu.
Pengamatan  morfologi  yang  dilakukan pada organ hepar kelompok kontrol dan perlakuan menunjukan tidak ada perbedaan. Hepar kelompok kontrol  dan  perlakuan  sama-sama  memiliki  warna merah kecoklatan yang dapat dilihat pada Gambar 1.  Pengamatan  struktur  histologi  sel  hepar  yang dilakukan dibawah  mikroskop menunjukkan adanya  perbedaan  ukuran  sel  hepatosit  antara kelompok  kontrol  dan  kelompok  perlakuan.  Sel hepatosit  pada  kelompok  perlakuan  memiliki ukuran  yang  lebih  besar  daripada  kelompok kontrol.  Inti  sel  dan  sitoplasma  terlihat  lebih menggembung daripada kelompok kontrol, sitoplasma juga tampak lebih lebar.
Gambar 1. Morfologi Hepar Mencit Kelompok Kontrol dan Perlakuan.
Dewi  dan  Saraswati  (2009)  menyatakan bahwa  gangguan    pengaturan    cairan  dalam  sel mengakibatkan  adanya  influks  air  ke  dalam  sel, akibatnya  sebagian  organela  seperti  retikulum endoplasma,    mitokondria    berubah  menjadi kantong-kantong    yang    berisi    air,  sehingga  pada pengamatan  dibawah  mikroskop  terlihat    sel membesar    dengan    gambaran  vakuola    pada sitoplasma sel. Mekanisme terjadinya pembengkakan  sel  yaitu  dalam  cairan  tubuh terdapat  berbagai  macam  elektrolit,  baik  yang berada di luar sel maupun  berada  di  dalam  sel.
Keseimbangan ion Na+ dan K+ di dalam dan diluar sel  harus  terjaga  untuk    menjaga  kestabilan lingkungan  internal  sel.  Sel  harus  mengeluarkan energi    metabolik    untuk    memompa    ion    Na+ keluar dari sel. Jika terjadi kerusakan sel, maka sel tidak  mampu  memompa  ion  Na+  keluar  dari  sel, akibatnya  yaitu  terjadinya  influks  air  kedalam sel karena  terjadi  osmosis  yang  berakibat  pada perubahan    struktur    sel    yang    berupa pembengkakan sel. Hal ini yang  menyebabkan sel hepatosit  pada  kelompok  perlakuan  memiliki  inti sel  lebih  besar  dan  sitoplasma  juga  terlihat  lebih
lebar daripada kelompok kontrol. Hasil pengamatan struktur  mikroskopis  sel  hepar  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
Maulida  dkk.  (2013)  menyatakan  bahwa perubahan    struktur    sel    hepar    dapat    bersifat reversibel  dan  irreversibel.  Dewi  dan  Saraswati (2009)  menyatakan  bahwa  perubahan struktur sel yang  berupa  pembengkakan  sel  disebut sebagai perubahan    degeneratif.  Perubahan  struktur  sel
degeneratif  merupakan  perubahan  yang  bersifat reversibel  dimana  sel  dapat  kembali  ke  struktur normal.  Mekanisme  tersebut  diduga  terjadi  pada penelitian  ini  sehingga  bobot  hepar  dan  nilai  HSI setelah  diuji  statistik  menujukkan  hasil  tidak berbeda    nyata,  selain  itu  pengamatan  secara mikroskopis ditemukan adanya kerusakan sel hepar seperti  degenerasi  parenkimatosa  dan  degenerasi hidropik yang dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Struktur mikroskopis sel hepar mencit ( Mus musculus ) jantan. Pewarnaan HE dengan perbesaran 200x (A&B) dan 400x (C&D). Keterangan : (A) dan (C) kelompok kontrol, (B) dan (D) kelompok perlakuan, (H) hepatosit, (S) sinusoid, (VS) vena sentralis, dan (DH) diameter hepatosit.
Wahyuningtyas  dkk.  (2018)  menyatakan bahwa  kerusakan    hepatosit    ditandai    dengan adanya    degenerasi    sel.    Tamad    dkk.  (2011) menyatakan  bahwa  degenerasi  merupakan cedera karena    toksik    dan    dapat    menyebabkan pembengkakan  atau  edema  hepatosit. Degenerasi sel    dapat    berupa    degenerasi  parenkimatosa, hidropik  dan  melemak.  Utomo  dkk.    (2012)
menyatakan    bahwa    degenerasi  parenkimatosa merupakan    degenerasi    paling  ringan    yang ditandai    dengan    adanya    pembengkakan    dan kekeruhan    sitoplasma.  Degenerasi  ini  bersifat reversibel  karena  hanya  terjadi  pada    mitokondria dan  retikulum  endoplasma  akibat  gangguan oksidasi.  Sel  tidak  dapat    mengeliminasi    air sehingga    tertimbun    di    dalam    sel    dan    sel
mengalami    pembengkakan.  Degenerasi  hidropik merupakan    derajat   kerusakan    yang  lebih   berat, tampak  vakuola  yang  terisi  air dalam  sitoplasma yang    tidak  mengandung  lemak    atau    glikogen. Degenerasi  tersebut bersifat  reversibel  meskipun tidak    menutup  kemungkinan  bisa  menjadi irreversibel apabila penyebab cederanya menetap.Wahyuningtyas  dkk.  (2018)  menyatakan bahwa  akumulasi  cairan  di  dalam    sel    karena degenerasi    hidropik    disebabkan  oleh  adanya akumulasi  cairan  akibat  kegagalan  sel  dalam mempertahankan homeostasis, dalam penelitian ini degenerasi tersebut tidak ditemukan.
Maulida  dkk.  (2013)  menyatakan  bahwa degenerasi yang berlangsung secara terus menerus akan  menyebabkan  kerusakan  sel  yang  ditandai dengan kematian sel secara permanen yang  disebut nekrosis. Andreas  dkk. (2015) menyatakan bahwa hepatosit  yang  mengalami  degenerasi    lemak tampak  sebagai  sel  yang memiliki  vakuola  kecil (mikrovesikular)    disitoplasma    pada    tahap    awal
dan  akan  berkembang  menjadi  vakuola  yang berukuran lebih besar  (makrovesikular)  sehingga menekan    nukleus    ke    tepi.    Amalia    (2009) menyatakan  bahwa nekrosis  adalah  kematian sel atau  jaringan  pada  makluk  hidup  terlihat pada perubahan  mikroanatominya. Inti  sel menjadi lebih padat  (piknotik)  dan  dapat  hancur  bersegmen- segmen  (karioreksis)  kemudian  sel  menjadi esinofilik.  Penelitian  ini  tidak  ditemukan  adanya kerusakan yang berupa nekrosis.
Mimba ( Azadirachta  indica A  Juss) merupakan  bahan  alam  yang  kaya manfaat. Daun mimba memiliki kandungan senyawa azadirichtin, flavonoid,    tritepenoid  dan  saponin  (Auta  dan Hasan,  2016).  Senyawa  aktif  dari  daun  mimba adalah  flavonoid, fenolik, triterpenoid, dan tannin (Whary, 2015). Inaya et al. (2015)  menambahkan bahwa    senyawa  flavonoid  dapat  mendenaturasi protein pada membran  sel,  sehingga  membran  sel tersebut    terganggu    permeabilitasnya    dan menyebabkan kebocoran
sel.
Gambar  3.  Struktur  mikroskopis  sel  binukleat  hepar  mencit  (Mus  musculus)  jantan.  Pewarnaan  HE  dengan perbesaran 400x. Keterangan : (A) kontrol,(B) perlakuan, (H) hepatosit, (IS) inti sel, (S) sinusoid dan (SB) sel binukleat
Senyawa    aktif    yang    terisolasi    dalam ekstrak    etanol    daun    mimba    antara    lain karbohidrat,    glikosida,    protein,    senyawa  fenol, tanin,    flavonoid    dan    saponin    (Singh  and Chauhan,  2014).  Senyawa  nimbidin daun  mimba berperan  sebagai  agen hipoglikemik  (Pankaj et al., 2011),  diduga dapat  menurunkan  ketersediaan
energi  dalam    tubuh    hewan    uji    yang    dapat berpengaruh  pada  nilai  HSI.  Tanin    merupakan metabolit  sekunder yang memiliki efek anti mitotik dan bersifat sitotoksik  pada  sel  yang  mengalami pembelahan    cepat    (Setyowati et    al., 2015). Hasana dkk. (2019) menyatakan bahwa kandungan senyawa    tanin    pada    daun  mimba  dengan  dosis
14mg/kg BB diduga  belum  dapat  mempengaruhi proses    regenerasi    sel    sehingga    tidak mempengaruhi  bobot  badan,  bobot  hepar dan nilai HSI.
Jika  hepar terus menerus  terpapar  obat  dan zat  kimia dalam jangka panjang maka  sel-sel  pada hepar  dapat  mengalami perubahan terutama pada sel hepatosit seperti degenerasi lemak dan nekrosis yang dapat menurunkan kemampuan regenerasi sel sehingga  menyebabkan  kerusakan  permanen sampai kematian sel (Anggraeny et al., 2014). Hal tersebut  tidak  ditemukan  pada  penelitian  ini. Menurut  Pramesti  dkk  (2017)  sel-sel    hepar  dapat memperbaiki    dirinya    secara    fisiologis  dan menggantikannya  dengan  sel  baru  ketika  terjadi suatu kerusakan  yang  sifatnya  reversibel, dalam penelitian    ini    kemungkinan    terjadi    proses regenerasi    sel  hati  dengan  baik  yang  dibuktikan dengan  banyak  ditemukannya  sel  binukleat  yang dapat dilihat pada Gambar 3.
Berdasarkan hasil penelitian yang didapatkan,  diameter  hepatosit  pada  kelompok perlakuan  yang  diberi  ekstrak  etanol  daun  mimba dengan dosis 14mg/KgBB selama 21 hari memiliki ukuran  lebih  besar  dari  kelompok  kontrol.  Hal ini dapat  diartikan  bahwa  terdapat  pengaruh  yang signifikan tetapi masih aman. Hasil uji statistik pada bobot  tubuh,  bobot  hepar  dan  nilai  HSI  juga menunjukkan  pengaruh  tidak  nyata,  selain  itu pengamatan  yang  dilakukan  secara  mikroskopis juga tidak ditemukan adanya kerusakan sel seperti degenerasi  hidropik,  degenerasi  melemak  dan nekrosis.  Hal  tersebut  diduga  adanya  daya regenerasi  hepar  yang  dibuktikan  dengan  banyak ditemukannya sel binukleat.

## KESIMPULAN
Hasil  dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan bahwa  pemberian  ekstrak  etanol  daun  mimba ( Azadirachta  indica )  sebagai  obat  tradisional dengan  dosis  14  mg/KgBB  tidak  mempengaruhi struktur hepar dan rasio bobot hepar terhadap bobot tubuh mencit ( Mus musculus ) jantan.
UCAPAN TERIMAKASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  Fakultas  Sains dan  Matematika  Universitas  Diponegoro melalui No.1754I/UN7.5.8/PG/2018    Sumber  dana  selain APBN  Fakultas  Sains  dan  Matematika  UNDIP tahun 2018.

## DAFTAR PUSTAKA
Amalia,  N.  2009.  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak Valerian  ( Valeriana  officinalis ) terhadap Hepar    Mencit    BALB/C. Karya    Tulis Ilmiah .    Semarang:  Fakultas    Kedokteran,
Universitas Diponegoro Semarang.
Andreas,  H.,  H.F.  Trianto,  M.I.  Ilmiawan.  2015. Gambaran  Histologis  Regenerasi  Hati Pasca  Penghentian  Pajanan Monosodium Glutamat    pada    Tikus  Wistar. Jurnal Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura, 3(1):29-36.
Anggraeny,    E.,  Tjdanrakirana    dan  Nur  Ducha. 2014.  Pengaruh  Pemberian  Filtrat  Tauge Kacang    Hijau  terhadap  Histologi  Hepar Mencit  Yang  Terpapar  MSG. Jurnal Lenterabio , 3(3): 186-191.
Ashafa    AOT,    LO    Orekoya,    and    MT  Yakubu. 2012.  Toxicity  profile  of ethanolic  extract of Azadirachta indica Stem Bark in  male wistar    rats. Asian    Pacific    Journal    of Tropical Biomedicine, 2(10): 811-817.
Auta,  T.  and  A.  T.  Hassan.    2016.  Reproductive toxicity  of  aqueous  wood-ash  extract  of Azadirachta indica (neem) on male albino mice. Annals of  Biological Researc , 1(2) : 108-113.
Dewi,  U.K.,  dan  T.R.  Saraswati.  2009.  Efek rebusan daun  tapak  dara  pada  dosis  dan frekuensi    yang    berbeda    terhadap kerusakan  dan  akumulasi  glikogen pada hepar    mencit    ( Mus    musculus ). Jurnal Bioma , 1(11):1-5.
Ghimeray, A. K., C. W. Jin, B. K. Ghimire, and D. H.  Cho.  2009.  Antioxidant  activity  and quantitative estimation of azadirachtin and nimbin  in Azadirachta  Indica A.  Juss grown  in  foothills  of  Nepal. African Journal of Biotechnology, 8 (13).
Harbison,  RD,  MM  Bourgeois,  and  GT  Johnson.
2015.    Hamilton    &    Hardy’s  Industrial Toxicology.    New    Jersey:  John  Wiley  & Sons Inc.
Hasana,  A.N.,  A.J.  Sitasiwi  dan  S.  Isdadiyanto. 2019. Hepatosomatik Indeks Dan Diameter Hepatosit Mencit ( Mus musculus L.) Betina Setelah  Paparan  Ekstrak  Etanol  Daun Mimba  ( Azadirachta  indica Juss.). Jurnal Pro-life. 1(6).
Inaya,  A.  F.  N.,  Kismiyati,  dan  S.  Subekti.  2015. Pengaruh    perasan    biji    pepaya  ( Carica papaya )  terhadap  kerusakan  telur Argulus japonicus. Jurnal  Ilmiah Perikanan  dan Kelautan , 7(2):  159-164.
Kupradinun,  P.,  A.  Tepsuwan,  N.  Tanthasri,  N. Meesiripan,  S.  Tunsakul,  W.  Tompat,  Y. Jarratwisautpom,    and  W.  R.    Kusamran. 2012.    Toxicity    Testing    of    Flowers    of Neem    Tree (Azadirachta indica A. Juss). Thai J. Vet. Med, 40(1): 47-55.
Maulida,  A.,  S.  Ilyas  dan  S.  Hutahean.  2013. Pengaruh  Pemberian  Vitamin  C  dan  E Terhadap  Gambaran  Histologi  Hepar
Mencit ( Mus musculus L.) yang Dipajankan Monosodium Glutamat
(MSG). Saintia Biologi, 1(2):15-20.
Odoh, L. I., and L. Bratte. 2015. Effects of varying levels  of  neem  ( Azadirachta  indica )  leaf meal  in  layer  diets  on  the  haematological and serological indices, and faecal bacterial counts of layers. J Nat Sci Res , 5(4): 37-44.
Omotayo,  A.,  T.  Ashafa,  L. O. Orekayo,  M.T. Yakubu.    2012.    Toxicity    profile    of ethanolic  extract  of Azadirachta  indica stem  bark  in  male  Wistar  rats. Asian  Pac Journal Trop Biomed , 2(10): 811-817.
Pandey,  G.,  M.  M.  Verma  and  M.  Singh.  2014.
Evaluation of phytochemical, antibacterial and  free  radical  scavenging  properties  of
Azadirachta  indica (neem)  leaves. Int  J Pharm Pharm Sci , 6 (2) : 444-447.
Pankaj, S., T. Lokeswar, B. Mukesh, and B. Vishnu, 2011.  Review  on  Neem  ( Azadirachta indica ): A thousand problem one solution.
International Research Journal of Pharmacy , 2(12): 97-102.
Pramesti,  N.  K.  T.,  N.  I.  Wiratmini,  dan  N.  P.  A. Astiti. 2017. Struktur Histologi Hati Mencit ( Mus  musculus L.)  Setelah  Pemberian Ekstrak Daun Ekor Naga ( Rhapidhophora pinnata Schott). Jurnal Simbiosis , (2): 43- 46.
Rogers, A.B., and Z.D.  Renee.  2012.  Comparative Anatomy  and  Histology:  A  Mouse and Human Atlas. USA: Elsevier Inc.Hlm. 193- 196.
Setyowati, W. A. E.,  S. R. D.,  Ariani,  Ashadi,  B Mulyani,  dan  A  Hidayat.  2015. Aktivitas antifertilitas  kontrasepsi  dari  kulit    durian (Durio  zibethinus  Murr ) varietas  Petruk. Seminar  Nasional Kimia  dan  Pendidikan Kimia    VII. Program    Studi    Pendidikan Kimia  Jurusan    FMIPA    FKIP    UNS, Surakarta.
Singh,  V  and  D.  Chauhan.    2014.  Phytochemical evaluation    of    aqueous  and    ethanolic extract    of    neem    leaves  ( Azadirachta indica ). Indo    American  Journal    of Pharmaceutical    Research ,  14(12):  5943- 5948.
Sitasiwi, A. J. and S. M. Mardiati . 2018. Effect of ethanolic  Neem  ( Azadirachta  indica )  leaf extract as an herb contraceptive on Hepato- somatic  Index  of  the  male  mice  ( Mus musculus ). Department of Biology, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University , Semarang.
Suryawanshi,  J.  A.  S.,  2011.  Neem-natural contraceptive  for  male  and  female–an overview. IJBB . 11(2):1-6.
Tamad,    F.S.U.,  Z.S.  Hidayat,  dan  H.  Sulistiyo.
2011.  Gambaran  Histopatologi Hepatosit Tikus    Putih    Setelah  Pemberian    Jintan Hitam Dosis 500mg/Kgbb, 1000mg/Kgbb,  dan 1500mg/Kgbb  Selama 21  Hari(Subkronik). Mandala  of  Health , 5(3):1-5.
Utomo,  Y., A.  Hidayat,,  M.  Dafib, dan F.A.  Sasi. 2012.    Studi    Histopatologi    Hati  Mencit ( Mus    musculus L.)    yang  Diinduksi Pemanis    Buatan. Jurnal  MIPA  UNNES , 35(2):122-129.
Wahyuningtyas,  P.,  A.  J.  Sitasiwi,  dan  S.  M. Mardiati.  2018.  Hepatosomatic  Index (HSI)  Dan  Diameter  Hepatosit  Mencit ( Mus Musculus L.) Setelah Paparan Ekstrak Air  Biji  Pepaya  ( Carica  Papaya L.). Departemen  Biologi,  Fakultas  Sains  dan Matematika, Universitas Diponegoro , Semarang.
Whary, M. T., N. Baumgarth, J. G. Fox, and S. W. Barthold.  2015.  Biology  and  Diseases  of Mice  Laboratory. Animan  Medicine ,  43- 149