## Identifikasi dan Analisis Similaritas Bacillus thuringiensis Isolat Lokal Jawa Timur yang Berpotensi Mengendalikan Pertumbuhan Larva Aedes aegypti
Sela Ayu Rohmanita 1)* , Tri Ardyati 1) , Zulfaidah Penata Gama 2) , Nobukazu Nakagoshi 2)
1) Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya, Malang
2) Graduate School for International Development and Cooperation (IDEC), Hiroshima University, Japan
Alamat korespondensi: selaayurohmanita@gmail.com

## ABSTRAK
Jawa Timur merupakan daerah yang memiliki kasus demam berdarah tertinggi di Indonesia. Salah satu agen  hayati  pengendali  vektor  virus  demam  berdarah  adalah  Bacillus  thuringiensis,  namun  penelitian terkait  B.  thuringiensis  isolat  lokal  asal  Jawa  Timur  belum  banyak  diungkap.  Penelitian  ini  bertujuan untuk mendapatkan B. thuringiensis isolat lokal Jawa Timur yang berpotensi mengendalikan larva Aedes. aegypti  serta  mengetahui  karakter  dan  similaritas  fenotip  antar  isolat  tersebut  dengan  B.  thuringiensis acuan  (Bti.HD567).  Tahapan  penelitian  meliputi  isolasi  B.  thuringiensis  dari  sedimen  dan  air  dengan menggunakan  media  selektif  B.  thuringiensis,  karakterisasi  fenotip  berdasarkan  morfologi  koloni  dan morfologi  sel  (pewarnaan  Gram  dan  endospora),  serta  uji  toksisitas  dari  masing-masing  isolat  B. thuringiensis terhadap larva A. aegypti. Data hasil uji toksisitas selanjutnya diseleksi untuk mendapatkan isolat-isolat  yang  berpotensi  tinggi  dalam  mengendalikan  larva  A.  aegypti  yang  kemudian  dianalisis menggunakan  analisis  ragam  (ANOVA).  Isolat  yang  berpotensi  tinggi  dalam  mengendalikan  larva  A. aegypti diidentifikasi dengan API 50 CHB, kemudian dibuat dendogram dengan menggunakan CLAD97. Isolat-isolat  yang  memiliki  potensi  tinggi  dalam  membunuh  larva  A.  aegypti  yaitu  Mdn1.Tk2,  SK.T, Pb2.T,  W.Swh.S.K2,  K.K1.S.K2,  dan  Jmbr1.T.  Berdasarkan  dendogram  terdapat  tiga  kelompok  yaitu kelompok 1 (Mdn1.Tk2, K.K1.S.K2), 2 (SK.T, Pb2.T dan W.Swh.S.K2) dan 3 (Jmbr1.T).Isolat Mdn1.Tk2 dan K.K1.S.K2 identik dengan Bti.HD567 (100 %), sedangkan SK.T, Pb2.T, dan W.Swh.S.K2 merupakan Genus Bacillus (98,3 %). Isolat Jmbr1.T tidak termasuk Genus Bacillus.
Kata Kunci: Aedes aegypti, analisis similaritas, Bacillus thuringiensis, isolat lokal Jawa Timur.

## ABSTRACT
East  Java  is  an  area  having  the  highest  case  of  dengue  fever  in  Indonesia. One  of  the  biological  control agent vector of dengue virus is Bacillus thuringiensis. However, local isolates of B. thuringiensis from East Java has not been explored. The objective of study was to obtain B. thuringiensis local isolates from East Java potentially control A. aegypti larvae and to study the characters of those isolate and their phenotypic similarities among the isolates obtained with B. thuringiensis reference (Bti.HD567). This research contain some step: isolation of B. thuringiensis from sediment and water using selective media for B. thuringiensis, phenotypic  characterization  based  on  colony  morphology  and  cell  morphology  (Gram  staining  and endospore), and toxicity assay of each isolate of B. thuringiensis against A. aegypti larvae. Toxicity assay data then be selected to obtain high potency of isolate in controlling A. aegypti larvae and analyzed using analysis  of  variance  (ANOVA).  Isolates  having  high  potency  to  control  A.  aegypti  larvae  were  identified with the API 50 CHB and then dendogram was constructed using CLAD97. Isolates with high potency to kill  A. aegypti larvae were Mdn1.Tk2, SK.T, Pb2.T, W.Swh.S.K2, K.K1.S.K2, and Jmbr1.T. Based on the dendogram resulted three groups of Bacillus: group 1 (Mdn1.Tk2, K.K1.S.K2), group 2 (SK.T, Pb2.T and W.Swh.S.K2)  and  group  3  (Jmbr1.T).  Mdn1.Tk2  and  K.K1.S.K2  isolates  100  %  identic  to  Bacillus thuringiensis (Bti.HD567), isolates SK.T, Pb2.T, and W.Swh.S.K2 were in the Genus of Bacillus (98.3%). However Jmbr1.T isolate excluded from Genus of Bacillus.
Keyword: Aedes aegypti, similarity analysis, Bacillus thuringiensis, local isolates of East Java.

## PENDAHULUAN
Penyakit  demam  berdarah  dengue  atau Dengue  Haemorrhagic  Fever  (DHF)  merupakan
salah satu penyakit menular yang sampai saat ini masih  menjadi masalah kesehatan masyarakat di Indonesia.  Penyakit  DBD  disebabkan  oleh  virus dengue  yang  ditularkan  oleh  nyamuk  Aedes
aegypti.  [1].  Aedes  aegypti  merupakan  jenis nyamuk yang mempunyai distribusi kosmotropikal  dan  pola  penyebaran  paling  luas di Indonesia serta sebagai vektor utama penyakit DBD. [2]. Berdasarkan data Kemenkes RI (2012) Propinsi  Jawa  Timur  merupakan  daerah  dengan jumlah  kasus  DBD  tertinggi  di  Indonesia  yaitu 3.152  kasus.  Adanya  masalah  tersebut,  maka perlu adanya suatu tindakan dalam pengendalian vektor dengue.
Pengendalian  vektor  virus  dengue  dapat dilakukan  secara  kimiawi  dengan  penggunaan insektisida,  namun  penggunaan  bahan  kimia secara berlebihan dapat membunuh musuh alami dan organisme lain yang bukan sasaran, sehingga perlu adanya suatu perubahan strategi yang lebih mengutamakan  keamanan  lingkungan  [3].  Salah satu cara yang dapat dilakukan untuk memberantas  nyamuk  serta  bersifat  aman  bagi lingkungan  adalah dengan menggunakan musuh alami A. aegypti, yaitu Bacillus thuringiensis [4]. Bacillus  thuringiensis  diketahui  efektif  dalam mengendalikan  pertumbuhan  A.  aegypti  dan bersifat  spesifik,  artinya  aman  bagi  manusia  dan organisme bukan sasaran [3].
Penelitian  tentang toksisitas Bacillus thuringiensis  telah  banyak  dilakukan.  Hasil  dari beberapa penelitian menunjukkan bahwa terdapat karakter  fenotip  yang  berbeda  pada  setiap  isolat B.  thuringiensis  yang  ditemukan.  Penelitian  ini dilakukan untuk mendapatkan isolat B. thuringiensis  isolat  lokal  Jawa  Timur  yang berpotensi  tinggi  dalam  membunuh  larva  A. aegypti,  dan  mengetahui  similaritas  fenotip diantara  isolat-isolat  B.  thuringiensis  yang didapatkan,  serta  membandingkan  isolat  B. thuringiensis  yang  didapatkan  dengan  B. thuringiensis acuan.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan bulan Juni 2012 sampai  dengan  Mei  2013.  Pengambilan  sampel dilaksanakan  di  beberapa  lokasi  di  Jawa  Timur yang  terkena  wabah  DBD  berdasarkan  data Dinkes  (2012).  Analisis  sampel  dilaksanakan  di Laboratorium  Mikrobiologi  dan  pemeliharaan larva  A.  aegypti  dilaksanakan  di  Laboratorium Ekologi  dan  Diversitas  Hewan,  Jurusan  Biologi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya, Malang.
Pengambilan  sampel.  Sampel  tanah diambil  pada  kedalaman  0-10  cm  dari  sedimen
tanah. Masing-masing sampel tersebut dimasukkan ke dalam kantong plastik. Sedangkan  sampel  air  diambil  dari  permukaan air dan dimasukkan ke dalam botol kultur. [5].
Isolasi bakteri. Sampel tanah ditimbang sebanyak  25  g  (berat  basah),  sedangkan  sampel air  sebanyak  25  ml.  Setiap  sampel  dimasukkan ke  dalam  225  ml  larutan  NaCl  0,85  %. Dipanaskan  pada  suhu  80 o C  selama  15  menit. Dilakukan  seri  pengenceran  10 -1 sampai  10 -6 dengan  menggunakan  larutan  NaCl  0,85  %. Suspensi dari masing-masing pengenceran diambil sebanyak 0,1 ml kemudian diinokulasikan ke dalam cawan petri yang berisi media selektif B. thuringiensis (3 g glukosa, 2 g (NH 4 ) 2 SO 4 , 2 g yeast extract, 0,5 g K 2 HPO 4 .3H 2 O,  0,2  g  MgSO4.7H 2 O,  0,08  g CaCl 2 .2H 2 O,  0,05  g  MnSO 4 .4H 2 O,  15  g  Agar dalam  1000  ml  akuades)  secara  pour  plate. Diinkubasi  selama  ±  72  jam  pada  suhu  30 o C. Setiap  isolat  yang  tumbuh  dimurnikan  dengan metode  streak  plate  secara  kuadran.  Setiap jenis koloni  (single  colony)  diambil  sebanyak  satu oose  kemudian  diinokulasikan  ke  dalam  media selektif  B.thuringiensis  dan  diinkubasi  selama  ± 48-72  jam  pada  suhu  30 o C.  Isolat  disimpan dalam media NA miring pada suhu 4 o C. [6,7, 8,].
Pengamatan morfologi. Morfologi yang diamati  meliputi  koloni  tunggal  dan  sel.  Koloni tunggal yang diamati meliputi warna, permukaan,  struktur  dalam,  dan  struktur  tepi koloni,  sedangkan  pengamatan  morfologi  sel dilakukan  dengan  cara  pewarnaan  Gram  dan endospora (metode Schaeffer-Fulton).
Pemeliharaan larva nyamuk A. Aegypti. Larva A. aegypti yang digunakan untuk uji  toksisitas  merupakan  keturunan  F2,  yang sebelumnya telah diaklimatisasi pada lingkungan baru  (laboratorium).  Telur  yang  diperoleh  dari Dinas  Kesehatan  Provinsi  Surabaya  ditetaskan dalam  bak  plastik    yang  telah  diisi  dengan  air sumur  sebanyak  ¾  tinggi  bak.  Selama  proses penetasan dilakukan pengamatan dan penyinaran dengan  lampu  listrik  (40  watt).  Larva  diberi pakan  dog  feed.  Pupa  dimasukkan  ke  dalam Barraub  box  hingga  menjadi  nyamuk  dewasa dan menghasilkan telur (F2). [9].
Uji toksisitas B. thuringiensis terhadap larva A. aegypti. Isolat diinokulasikan dalam 50 ml  NB.  Inokulum  diinkubasi  dalam  suhu  30 o C, 120  rpm  selama  72 jam  dan  dilakukan  sampling
pada inkubasi 24,  48, dan 72 jam masing-masing sampling tersebut diambil sebanyak  5  ml  dan  dimasukkan  pada masing cawan petri yang berisi air sumur 45 ml. Kemudian masing-masing cawan petri ditambahkan  sebanyak  20  ekor  larva  nyamuk aegypti  instar  III.  Larva  diberi  makanan  yaitu dogfeed,  sedangkan  kontrol  digunakan  20  larva nyamuk  A.  aegypti  instar  III  tanpa  ditambahkan suspensi  B.  thurigiensis.  Pengamatan  dilakukan dengan menghitung jumlah kematian larva dalam 24, 48, dan 72 jam. [9].
Uji  biokimia.  Isolat  yang tinggi dalam mengendalikan larva dilakukan  uji  biokimia.  Uji  biokimia penelitian ini menggunakan API 50 CHB biokoimia tambahan (VP dan katalase)
Klasifikasi berdasarkan nilai similaritas  sifat-sifat  fenotip karakteristik  fenotip  dengan  tanda  plus  (+)  dan tanda  minus  (-),  dikompilasi  menggunakan Microsoft  Excel.  Data  yang  memiliki  nilai  (+) diubah menjadi 1 dan nilai (-) menjadi 0 (secara numerik).  Data  yang  telah  diubah  tersebut kemudian  diolah  menggunakan  CLAD97  untuk mengkonstruksikan dendogram yang mencerminkan  klasifikasi  OTU  (Operational Taxonomical  Unit)  berdasarkan  nilai  indeks similaritas (Sjk). [10]. Algoritma yang digunakan yaitu  UPGMA  (Unweight  Pair  Group  Method with Averages). Karakter fenotip dalam  analisis  ini  minimal  50  karakter  dan maksimal 200 karakter. [11].

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  isolasi  bakteri  dari  sampel  sedimen dan  air  dari  beberapa  kota  di  Jawa  Timur  yang terkena  wabah  demam  berdarah  diperoleh isolat.  Isolat-isolat  tersebut  memiliki  kemiripan fenotip  dengan  B.  thuringiensis morfologi koloni dan sel.
Isolat  bakteri  yang  berpotensi  t dalam  mengendalikan  pertumbuhan aegypti.  Berdasarkan  hasil  uji  toksisitas  yang dilakukan, didapatkan dua isolat Jmbr1.T  dan  empat  isolat  dari  hasil  penelitian Tripisila  (2013)  dan  Pratiwi  (2013)  yaitu Mdn1.Tk2,  SK.T,  W.Swh.S.K2,  dan  K.K1.S.K2 yang  berpotensi  tinggi  dalam  me larva  Aedes  aegypti  (lebih  dari  50  %
urnal Biotropika | Vol. 1 No. 5 | 2013
48, dan 72 jam. Inokulum dari masing sampling tersebut diambil 5  ml  dan  dimasukkan  pada  masing- cawan petri yang berisi air sumur 45 ml. masing cawan petri ditambahkan  sebanyak  20  ekor  larva  nyamuk  A.
II.  Larva  diberi  makanan  yaitu ,  sedangkan  kontrol  digunakan  20  larva instar  III  tanpa  ditambahkan
Pengamatan  dilakukan dengan menghitung jumlah kematian larva dalam Isolat  yang  bepotensi larva Aedes aegypti ji  biokimia  pada menggunakan API 50 CHB dan uji biokoimia tambahan (VP dan katalase). Klasifikasi
berdasarkan nilai otip.  Data  hasil karakteristik  fenotip  dengan  tanda  plus  (+)  dan ),  dikompilasi  menggunakan Microsoft  Excel.  Data  yang  memiliki  nilai  (+) ) menjadi 0 (secara numerik).  Data  yang  telah  diubah  tersebut
lah  menggunakan  CLAD97  untuk mengkonstruksikan dendogram yang mencerminkan  klasifikasi  OTU  (Operational Taxonomical  Unit)  berdasarkan  nilai  indeks
Algoritma yang digunakan
Unweight  Pair  Group  Method fenotip yang digunakan
50  karakter  dan

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  isolasi  bakteri  dari  sampel  sedimen kota  di  Jawa  Timur  yang terkena  wabah  demam  berdarah  diperoleh  16
memiliki  kemiripan
thuringiensis  berdasarkan
bakteri  yang  berpotensi  tinggi ertumbuhan  larva  A.
Berdasarkan  hasil  uji  toksisitas  yang isolat yaitu Pb2.T, dan Jmbr1.T  dan  empat  isolat  dari  hasil  penelitian Tripisila  (2013)  dan  Pratiwi  (2013)  yaitu Mdn1.Tk2,  SK.T,  W.Swh.S.K2,  dan  K.K1.S.K2 alam  mengendalikan lebih  dari  50  %).  Semua
isolat berpotensi tinggi mengendalikan pertumbuhan  larva  A.  aegypti 72  jam,  namun  setiap  isolat  memiliki inkubasi    yang  berbeda-beda menunjukkan  waktu  untuk  memproduksi  toksin pada isolat-isolat tersebut.
Isolat  Sk.T  dapat  membunuh  larva  pada waktu  inkubasi  24  jam  yaitu  sekitar  68  % (Gambar  1).  Isolat  Mdn1.Tk2,  Jmbr1.T,  dan K.K1.S.K2  dapat  membunuh  larva  lebih  dari  50 %  pada  waktu  inkubasi  24  (Gambar  1)  dan  48 jam  (Gambar  2),  namun  isolat  Jmbr1.T  lebih berpotensi  membunuh  larva waktu  inkubasi  24  jam  yaitu  sekitar  76%, sedangkan  Mdn1.Tk2  dan  K.K1.S.K2  lebih berpotensi membunuh larva pada waktu inkubasi 48  jam  yaitu  100  %  (Mdn1.Tk2),  dan  68  % (K.K1.S.K2).  Isolat  Pb2.T  dan  W.Swh.S.K2 memiliki  potensi  membunuh  tertinggi  pada waktu  inkubasi  48  jam  yaitu  66%  (Pb2.T)  dan 51%  (W.Swh.S.K2)  (Gambar  3).
HD567  pada  penelitian  ini membunuh larva paling banyak sekitar 6 % pada waktu inkubasi 24 jam pada pendedahan 48 jam. Berdasarkan penelitian ini, semua isolat mengalami  penurunan  efektivitas  toksisitas  pada waktu inubasi 72 jam.
Gambar 1. Persentase mortalitas larva nyamuk aegypti  oleh  perlakuan  isolat  lokal Jawa  Timur  dan  Bti. waktu inkubasi 24 jam.
Gambar 2. Persentase mortalitas larva nyamuk aegypti  oleh  perlakuan  isolat  lokal Jawa  Timur  dan  Bti. waktu inkubasi 48 jam.
b b b bc a a cd d b b a bc a a 0 20 40 60 80 100 120 24 48 Perlakuan Pendedahan (Jam) M o rt a li ta L a rv a A . a e g y p ti (% )
isolat berpotensi tinggi mengendalikan egypti  pada  pendedahan isolat  memiliki  waktu beda.  Waktu  inkubasi menunjukkan  waktu  untuk  memproduksi  toksin
Isolat  Sk.T  dapat  membunuh  larva  pada 24  jam  yaitu  sekitar  68  % Isolat  Mdn1.Tk2,  Jmbr1.T,  dan K.K1.S.K2  dapat  membunuh  larva  lebih  dari  50 pada  waktu  inkubasi  24  (Gambar  1)  dan  48 jam  (Gambar  2),  namun  isolat  Jmbr1.T  lebih berpotensi  membunuh  larva  A.  aegypti  pada waktu  inkubasi  24  jam  yaitu  sekitar  76%, sedangkan  Mdn1.Tk2  dan  K.K1.S.K2  lebih berpotensi membunuh larva pada waktu inkubasi am  yaitu  100  %  (Mdn1.Tk2),  dan  68  % (K.K1.S.K2).  Isolat  Pb2.T  dan  W.Swh.S.K2 memiliki  potensi  membunuh  tertinggi  pada waktu  inkubasi  48  jam  yaitu  66%  (Pb2.T)  dan 51%  (W.Swh.S.K2)  (Gambar  3).  Isolat  Bti- pada  penelitian  ini  hanya  dapat ng banyak sekitar 6 % pada waktu inkubasi 24 jam pada pendedahan 48 jam. Berdasarkan penelitian ini, semua isolat mengalami  penurunan  efektivitas  toksisitas  pada
. Persentase mortalitas larva nyamuk A. oleh  perlakuan  isolat  lokal Jawa  Timur  dan  Bti.  HD567  pada waktu inkubasi 24 jam. . Persentase mortalitas larva nyamuk A. oleh  perlakuan  isolat  lokal Jawa  Timur  dan  Bti.  HD567  pada waktu inkubasi 48 jam. b bc a d bc bc a 72 Perlakuan Pendedahan (Jam) W.Swh.S.K2 K.K1.S.K2 SK.T Mdn1.Tk2 Jmbr1.T Pb2.T Bti .HD567

## Gambar 3. Persentase mortalitas larva nyamuk A.
aegypti  oleh  perlakuan  isolat  lokal Jawa  Timur  dan  Bti.  HD567  pada waktu inkubasi 72 jam.
Perbedaan  tingkat  efektivitas  antarisolat dapat  disebabkan  oleh  karakteristik  genetik bakteri.  Bakteri  yang  kurang  efektif  dalam membunuh  larva  dimungkinkan  kristal  toksin yang  dihasilkan  kurang  cocok  dengan  reseptor dalam  saluran  pencernaan  larva  A.  aegypti, sehingga  kelarutan  kristal  rendah  dan  kematian larva  juga  rendah.  [12].  Nilai  mortalitas  larva yang  sangat  rendah  pada  isolat  Bti-HD567 (acuan) dapat disebabkan karena adanya penurunan  efektivitas  toksisitas  dari  isolat tersebut.  Penyimpanan  dan  subkultur  dari  isolat tersebut  selama  beberapa  kali  mengakibatkan penurunan potensi dari bakteri tersebut. [7].
Setiap isolat membutuhkan waktu inkubasi yang berbeda-beda dalam mengendalikan pertumbuhan  larva  nyamuk.  Isolat  Jmbr1.T  dan SK.T lebih berpotensi mengendalikan pertumbuhan larva nyamuk pada waktu inkubasi 24  jam,  sedangkan  isolat  Mdn1.Tk2,  Pb2.T, W.Swh.S.K2,  dan  K.K1.S.K2  lebih  berpotensi mengendalikan  pertumbuhan  larva  pada  waktu inkubasi  48  jam.  Isolat  yang  berpotensi  tinggi dalam  mengendalikan  pertumbuhan  larva  A. aegypti pada waktu inkubasi 24 jam dimungkinkan menggunakan β -eksotoksin karena β -eksotoksin  diproduksi  dan  dikeluarkan selama  pertumbuhan  vegetatif,  sedangkan  isolat yang  memiliki  potensi  tinggi  mengendalikan pertumbuhan  larva  A.  aegypti  pada  waktu inkubasi  48  jam  menggunakan δ -endotoksin karena  toksin  tersebut  hanya  diproduksi  pada saat  fase  sporulasi.  Bacillus  thuringiensis  dapat memproduksi  toksin  berupa β -eksotoksin  dan δ - endotoksin.  Beta  eksotoksin  hanya  diproduksi oleh  strain  B.  thuringiensis  yang  memiliki plasmid coding untuk δ -endotoksin. [13].
Similaritas  fenotip  antara  isolat  B. thuringiensis  yang  didapatkan  dengan  isolat acuan. Hasil uji toksisitas diperoleh enam isolat
yang  memiliki  potensi  dalam  membunuh  larva nyamuk  yaitu  Mdn1.Tk2  (Madiun),  Sk.T (Lamongan), Jmbr1.T (Jember), Pb2.T (Probolinggo)  W.Swh.S.K2,  dan  K.K1.S.K2 (Nganjuk).  Berdasarkan  morfologi  koloni  dan sel, semua isolat tersebut memiliki karakter yang hampir  sama,  sedangkan  hasil  identifikasi dengan  menggunakan  uji  biokimia,  semua  isolat tersebut memiliki karakter fenotip yang berbeda- beda.  Data  karakter  dari  semua  isolat  tersebut dapat digunakan untuk analisis similaritas fenotip (fenetik).
Gambar  4.  Dendogram  yang  menunjukkan hubungan similaritas antarisolat lokal  Jawa  Timur  yang  berpotensi membunuh  larva  nyamuk  A.  aegypti dan Bti.HD567.
Berdasarkan dendogram (Gambar 4)
menunjukkan bahwa persentase similaritas fenotip  isolat  Mdn1.Tk2  dan  K.K1.S.K2  dengan Bti.HD567  sebesar  100  %.  Isolat  SK.T,  Pb2.T dan  W.Swh.S.K2  memiliki  nilai  similaritas sebesar  100%  yang  menunjukkan  bahwa  isolat tersebut satu strain. Ketiga isolat tersebut (SK.T, Pb2.T  dan  W.Swh.S.K2)  memiliki    nilai similaritas  dengan  Bti.HD567  sebesar  98,3  % yang  menunjukkan  bahwa  isolat  tersebut  satu Genus  dengan  Bti.HD567  yaitu  Genus  Bacillus. Isolat Jmbr1.T dengan Bti.HD567 memiliki nilai similaritas  sebesar  74,2  %  yang  menunjukkan bahwa isolat tersebut bukan Genus Bacillus.
Matriks kesamaan (similarity matrix) merupakan  suatu  hal  dimana  bakteri  dengan tingkat  kesamaan  yang  tinggi  dikelompokkan bersama  dalam  fenon  (phenons),  dan  perbedaan (significance)  fenon  tidak  selalu  jelas  terlihat. [14].  Metode  pengklasifikasian  dari  ciri-ciri
ab ab ab ab ab ab ab ab ab ab a b b ab ab b aab 0 10 20 30 40 50 60 70 24 48 72 Perlakuan Pendedahan (Jam) M o rt a li ta L a rv a A . a e g y p ti (% ) W.Swh.S.K2 K.K1.S.K2 SK.T Mdn1.Tk2 Jmbr1.T Pb2.T Bti .HD567
morfologi yang sederhana belum dapat menggambarkan  adanya  hubungan  kekerabatan hingga  tingkat  genus.  Penelitian  ini  hanya menunjukkan adanya tingkat keberagaman karakter fenotip isolat. [15].

## KESIMPULAN
Didapatkan  dua  isolat  lokal  Jawa  Timur yang  berpotensi  tinggi  dalam  mengendalikan larva  nyamuk  A.  aegypti  lebih  dari  50  %  yaitu Jmbr1.T  dan  Pb2.T,  serta  empat  isolat  dari peneliti  lain  dalam  tim  yaitu  Mdn1.Tk2,  SK.T, W.Swh.S.K2,  dan  K.K1.S.K2.  Isolat  Mdn1.Tk2 dan  K.K1.S.K2  merupakan  satu  strain  dengan Bti.HD567  (100  %),  sedangkan  SK.T,  Pb2.T, dan  W.Swh.S.K2  merupakan  Genus  Bacillus (98,3  %).  Isolat  Jmbr1.T  tidak  temasuk  genus Bacillus.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  kepada  Ibu  Zulfaidah  Penata Gama,  S.Si.,  M.Si  yang  telah  membiayai penelitian  ini,  serta  pihak-pihak  yang  telah mendukung terselesainya penulisan ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Becker,  N.  and  J.  Margalit.  1993.  Uses  of Bacillus  thuringiensis  Israelensis  against Mosquitoes and Black Flies. John Wiley and Sons. England.
[2]. Russel R.C.. 1996. A Colour Photo Atlas of Mosquitoes of Southern Australia.
Departement of Medical Entomology, Westmead  Hospital  and  the  University  of Sydney.
[3]  Bellows,  T.  S.  and  T.  W.  Fisher.  1999. Handbook  of  Biological  Control.  Principles and  Applications  of  Biological  Control . Academic Press. New York.
[4]  Dulmage,  H.  T.,  J.  A.  Corea,  and G.  G. Morales.  1990.  Potential  for  Improved Formulation of Bacillus thuringiensis israelensis through Standarization and
Fermentation  Development  dalam  H.  de Barjac  and  D.  J.  Surtherland  (editor). Bacterial Control of Mosquitos and Blackfleis  :  Biochemistry,  Genetic  and Application of Bacillus thuringiensis israelensis  &  Bacillus  sphaericus.  Rotgers University Press. New Brunswick .
[5]  Yasin,  N.  dan  Purnomo.  2004.  Isolasi

## Bacillus  thuringiensis  dari  Tanah  Hutan
Damar  di  Lampung  dan  uji  Toksisitasnya terhadap  Ulat  Kubis  (Plutella  xylostella  l.). Laporan Hasil Penelitian. Fakultas Pertanian
Universitas Lampung. Bandar Lampung.
[6] Atlas, R. M. 2004. Microbiology: Fundamentals and Applications. 2nd Edition. McMillan Publ. Co. New York.
[7]  Gama,  Z.  P.  dan U.  Marwati.  2005.  Seleksi Strain  Bacillus  thuringiensis  Isolat  Sumenep yang paling Potensial sebagai Agen Pengendali  Larva  Nyamuk  A.  aegypti. Natural 9 (1): 1-5.
[8]  Chatterjee,  S.  N.,  T.  Bhattacharya,  T.  K. Dangar  and G.  Chandra.  2007.  Ecology  and Diversity  of  Bacillus  thuringiensis  in  Soil Environment.  African  J.  Biotechnol.  6  (13): 1587-1591.
[9]  Gama,  Z.  P.  1998.  Potensi  Patogenitas Bacillus thuringiensis var.israelensis serotype  H-14  dan  Bacillus  thuringiensis isolat  Madura  terhadap  Larva  Nyamuk. Laporan  Penelitian  Jurusan  Biologi  FMIPA,
Universitas Brawijaya. Malang.
[10]  Booch,  G.  1994.  Object-Oriented  Analysis and Design with Application. The Benjamin/Cummings  Publishing  company, Inc. California.
[11]  Rahardi,  B.,  E.  L.  Aruminingtyas,  and  W. Firdaus.  2012.  Constructing  Phenetic  and Phylogenetic  Relationship  Using  Clad'97. J.Trop.Life.Science.2(1): 15-20.
[12] Sukmawaty, D. 2005. Seleksi Isolat Bacillus thuringiensis  Isolat  Sumenep  Madura  yang Berpotensi  sebagai  Pengendali  Nyamuk Aedes  aegypti,  Jurusan  Biologi,  Fakultas MIPA,  Universitas  Brawijaya.  Malang. Skripsi.
[13] Levinson, B., K. Kayan, S. Chiu, T. Currier, and  J.  M.  Gonzalez.  1990.  Identification  of β -exotoxin,  and  a  new  exotoxin  in  Bacillus thuringiensis  by  using  high-performance liquid  chromatography.  J.  Bacteriol.  72: 3172-3179.
[14]  Priest,  F  and  B.  Austin.  1993. Modern Bacterial Taxonomy Second Edition. Champman dan Hall: London.
[15]  Head,  G.,  Brown,  C.R.,  Groth,  M.E.,  and Duan,  J.  2001.  Cry1Ab  Protein  Levels  in Phytophagous Insects Feeding on Transgenic Corn:  Implications  for  Secondary  Exposure Risk  Assessment.  Entomol.  Exp.  Appl.,  99: 37–45.