## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology

## PENDAHULUAN
Keakuratan  pemeriksaan  hematologi  dipengaruhi  oleh preanalitik  dimana  saat  sampel  diambil  ,  penanganan, penyimpanan (waktu pengiriman) sampel dan pemilihan antikoagulan  akan  mempengaruhi  perhitungan  dan pemeriksaanukuran  sel  pada  alat  hematologi  otomatis
(Tendulkar et.al,
2015;A.M Diks,et.al.2019).
Penganalisis hematologi otomatis (hematology analyzer,  HA)  adalah  alat  pemeriksaan  hematologi rutin  yang  banyak  digunakan  pada  berbagai  pelayanan laboratorium  klinik  (Rahmanitarini,  Hernaningsih  and Indrasari, 2019). Sysmex XP-300 adalah HA 3-part diff
Perbedaan Hasil Pemeriksaan Hematologi yang segera dilakukan pemeriksaan dan yang ditunda  pada suhu ruangan dan refrigerator menggunakan Sysmex XP-300
The difference between the hematology examination that was immediately carried out and which was delayed at room temperature and recommended using a sysmex xp-300
Nathalya Dwi Kartika Sari 1*
Gilang Nugraha 2
Brina Thursina Dibiasi 3
Mirshall Abiedama Prayoga 4
*1 Universitas Nahdlatul Ulama, Surabaya, Indonesia
2 Universitas Nahdlatul Ulama, Surabaya, Indonesia
3 Universitas Nahdlatul Ulama, Surabaya, Indonesia
4 Universitas Nahdlatul Ulama,
Surabaya, Indonesia
* dr.nathalya@unusa.ac.id

## Abstrak
Penganalisis  hematologi  otomatis  (hematology  analyzer,  HA)  adalah  alat pemeriksaan  hematologi  rutin  yang  banyak  digunakan  pada  berbagai  pelayanan laboratorium klinik . Sysmex XP-300 adalah HA 3-part diff     yang merupakan HA  paling  sederhana,  pemeriksaan  jumlah  sel  dilakukan  dengan    metode impedansi yang hanya didasarkan pada ukuran sel .Pemeriksaan Complete Blood Count  (CBC)  merupakan  pemeriksaan  yang  sering  diminta  oleh  klinisi.  Hasil pemeriksaan Complete Blood Count dipengaruhi suhu penyimpanan dan waktu inkubasi.  Tujuan  dari  penelitian  ini  menentukan  perbedaan  hasil  pemeriksaan hematologi pada sampel darah EDTA yang  segera dilakukan pemeriksaan dan ditunda  pada  suhu  ruang  dan  refrigerator  menggunakan  HA  Sysmex  XP-300. Diharapkan  dari  penelitian  ini  dapat  dikembangkan  suatu  metode  validasi  hasil pemeriksaan untuk memperkecil kesalahan dalam pemeriksaan di laboratorium klinik. Metode penelitian eksperimental laboratorik dengan rancangan penelitian pre-eksperimental  melalui  pendekatan  one  group  pretest-posttest  design dengan sampel sebanyak 15  laboran, dan dilakukan uji analisis dengan ANOVA. Hasil penelitian ini didapatkan  WBC, RBC, HGB,HCT, MCV,MCH dan MCHC perbedaan  hasil  pada  suhu  ruang  2,  24,  48  dan  72  jam  dibandingkan  suhu refrigerator,hanya  parameter  PLT  saja  yang  tidak  menunjukkan  perbedaan bermakna  saat  dilakukan  pemeriksaan  segera  dengan  yang  ditunda  di  dalam refrigerator.  Morfologi  eritrosit  dipengaruhi  oleh  suhu  dan  penyimpanan sebaiknya hapusan darah tepi dilakukan pemeriksaan sesegera mungkin.
Kata Kunci : Hematologi; Waktu; Suhu; Morfologi Eritrosit. Kata Kunci: Hematologi; Waktu; Suhu; Morfologi Eritrosit
Keywords : Maximal 5 keyword

## Abstract
Automatic  hematology  analyzer  (hematology  analyzer,  ha)  is  a  routine  hematology examination  tool  that  is  used  extensively  in  clinical  laboratory  services.  Sysmex  xp- 300  is  the  HA  3-part  diff  that  is  the  simplest  ha,  impedance  examination  of  the number of cells based solely on cell sizes. The complete blood count's examination was affected by the storage temperature and incubation times. The objective of this study  determined  the  difference  between  hematology  and  edta's  immediate examination  of  blood  samples  and  was  delayed  at  room  temperature  and temperature  using  a  ha  ssmex  xp-300.  It  is  hoped  that,  this  research  could  be developed  with  a  method  of  validation  of  checks  to  minimize  errors  in  clinical laboratories.  Experimental  experimental  research  methods  with  a  preexperimental research design through the one group preafflicted posttest design with a sample of as many as 15 laboratories, and we conducted an analysis with anova. The results of this  study  have  WBC,  RBC,  HGB,HCT,  MCV,MCH  and  MCHC  different  results  at room  temperature  2,  24,  48  and  72  hours  compared  to  temperature  fluctuations, the  PLT  parameters  alone show  no  significant  difference  when  it  comes  to  prompt examinations with delays in the application. Morphology of erythrocyte is influenced by temperature and storage should be hypotensive.
yang  merupakan  HA  paling  sederhana,  pemeriksaan jumlah  sel  dilakukan  dengan  metode  impedansi  yang hanya didasarkan pada ukuran sel (Keohane, Smith and Walenga,  2016).  Sehingga  kemampuan  untuk mengidentifikasi morfologi sel masih terbatas dan perlu dilakukan pemeriksaan apusan darah tepi (Rahmanitarini, Hernaningsih and Indrasari, 2019). International Council for Standardization in Haematology  (ICSH)  merekomendasikan  pemeriksaan apusan  darah  tepi  tidak  melebihi  dari  1  jam,  karena terjadi  perubahan  morofologi  sel  darah  30  menit setelah  pengambilan  darah  pada  suhu  ruang  (Vives- Corrons et al., 2014; Zini, 2014). Perubahan morfologi sel  akan  mempengaruhi  kemampuan  HA  dalam melakukan  analisis,  sehingga  dapat  mempengaruhi keakuratan  pemeriksaan  (Zini,  2014;  Jain  et  al.,  2018; Tang  et  al.,  2019).  Permasalahannya  adalah  bagaimana stabilitas  pemeriksaan  hematologi  pada  sampel  darah EDTA  yang  ditunda  pada  suhu  ruangan  dan refrigerator  menggunakan  Sysmex  XP-300.Penundaan pemeriksaan  umumnya  terjadi  karena  pemeriksaan yang tidak dapat dilakukan segera atau bisa di sebabkan karena  penyimpanan.  Alasan  penundaan  dapat disebabkan  karena  lokasi  sampling  yang  jauh  atau petugas laboratorium yang sibuk (Tang et al., 2019). Sedangkan penyimpanan dilakukan untuk antisipasi jika diminta  pemeriksaan  ulang  atau  barang  bukti  jika terjadi  komplain  (Rahmania,  Kuntjoro  and  Suroto, 2019).

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental laboratorik  dengan  rancangan  penelitian  pre- eksperimental  melalui  pendekatan  one  group  pretest- posttest  design.  Penelitan  menggunakan  spesimen darah  manusia  yang  kemudian  dibagi  menjadi  kedalam dua  kelompok  yaitu  suhu  ruang  dan  sudu  dingin. Observasi  sebelum  perlakukan  merupakan  kontrol, dan  perlakukan  dilakukan  setelah  penundaan pemeriksaan selama 2, 24, 48 dan 72 jam.
Penelitian  dilakukan  di  laboratorium  hematologi, fakultas  kesehatan,  Universitas  Nahdlatul  Ulama Surabaya.  Populasi  penelitian  ini  yaitu  responden  laki- laki  atau  perempuan  sehat  dan  sakit  dengan  sampel penelitian  merupakan  responden  di  lingkungan Universitas  Nahdlatul  Ulama  Surabaya.  Pengambilan sampel  dilakukan  secara  acak  dengan  besar  sampel minimum dihitung menggunakan persamaan Federer : ( 𝑡 − 1)( 𝑟 − 1) > 15 (5 − 1)( 𝑟 − 1) > 15
(15 + 4)
𝑟 = 4,75 ~ 5
Jumlah perlakukan pada penelitian ini sebanyak 10 kali. Ulangan  minimum  yang  harus  dilakukan  pada  masing- masing  kelompok  yaitu  5  untuk  memenuhi  jumlah minimum  uji  statistik  maka  masing-masing  kelompok 15  ulangan.  Sehingga  jumlah  ulangan  untuk  seluruh kelompok  yaitu  150  ulangan  dengan  sampel  yang diambil cukup 15 sampel penelitian.
Pengumpulan  data  dilakukan  dengan  pengambilan sampel  darah  vena  kedalam  tabung  EDTA  sebanyak  5 cc.  Spesimen  darah  yang  didapat  dengan  segera dilakukan  pemeriksaan  hematologi  menggunakan  alat hematology  analyzer  Sysmex  XP-300  (Sysmex  Corp., Japan), hasil pemeriksaan ini merupakan kontrol dalam penelitian.  Kemudian  darah  dalam  tabung  di  bagi kedalam  10  alukuot  masing-masing  berisi  500  µL. Sebanyak 5 tabung alukuot berisi darah disimpan pada suhu  ruang  dan  5  tabung  lainnya  pada  suhu refrigerator. Setelah 2, 24, 48 dan 72 jam diambil satu tabung  pendorf  untuk  dilakukan  analisis  menggunakan HA.
Data  analisis  yang  digunakan  meliputi  hemoglobin (Hgb),  hematokrit  (Hct),  jumlah  eritrosit  (red  blood cell,  RBC),  jumlah  trombosit  (platelet,  PLT),  jumlah leukosit  (white  blood  cell,  WBC),  MCV  (mean corpuscular  volume),  MCH  (mean  corpuscular hemoglobin) dan MCHC. Data yang diperoleh disajikan dalam  betuk  tabulasi  dan  grafik  untuk  mempermudah
analisis.  Selanjutnya  data  dianalisis  dengan  mean, standar deviasi (SD) dan persentase (%).
Uji hipotesis dilakukan menggunakan Repeated  Measures  ANOVA  jika  data  tidak terdistibusi  normal  dan  homogen  maka  dilakukan  uji non-parametrik  menggunakan  ANOVA  Friedman. Hasil  uji  dinyatakan  secara  bermakna  terdapat perbedaan jika nilai-p < α dengan signifikansi two-tailed dan α =  0,05.  Analisis  dilakukan  menggunakan  SPSS versi 21 (IBM, United States).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## HASIL

## Profil Sampel Penelitian
Penelitian  tentang  perbedaan  pemeriksaan  hematologi darah  EDTA  dilakukan  pada  15  orang  laboran  unusa dan dilakukan sebanyak 6 kali selama rentang waktu 0 jam,  2  jam,  24  jam,  48  jam  dsn  72  jam.  Profil  sampel penelitian adalah sebagai berikut:
Table I. Profil Sampel Penelitian
Profil F(%) Jenis Kelamin Laki-Laki 4 (26.7) Perempuan 11 (73.3) Usia < 30 tahun 11 (73.3) ≥ 30 tahun 4 (26.7)
Sumber: Data diolah (2021) Sampel  penelitian  menurut  jenis  kelamin  adalah  4 orang  (26,7%)  laki-laki  dan  11  orang  (73,3%) perempuan.  Semantara  itu,  untuk  profil  usia  sampel diketahui  lebih  banyak  yang  berusia  kurang  dari  30 tahun  yaitu  11  orang  (73,3%)  dan  hanya  4  orang (26,7%) yang berusia lebih dari 30 tahun.

## Profil Pemeriksaan Darah EDTA
Hasil pemeriksaan darah EDTA menggunakan Sysmex XP-300 di dalam ruangan pada 15 orang sampel diketahui bahwa parameter HGB, HCT, MCH, 281
MCV,
PLT. cenderung mengalami peningkatan  nilai  seiring  dengan  lamanya  waktu pengamatan.  Sementara  itu,  untuk  hasil  pemeriksaan darah  EDTA  yang  cenderung  mengalami  penurunan nilai adalah parameter WBC, RBC, MCHC.
Sedangkan  untuk  hasil  pemeriksaan  darah EDTA  menggunakan  Sysmex  XP-300  di  dalam refrigerator  pada  15  orang  sampel  diketahui  bahwa parameter RBC, HGB, HCT, MCH dan PLT cenderung mengalami  peningkatan  nilai  seiring  dengan  lamanya waktu  pengamatan.  Sementara  itu,  untuk  hasil pemeriksaan  darah  EDTA  yang  cenderung  mengalami penurunan  nilai  adalah  parameter  WBC,  MCVdan MCHC.  Hasil  pemeriksaan  selanjutnya  secara  umum gambaran hasil pemeriksaan darah EDTA menggunakan Sysmex  XP-300  yang  dilakukan  di  dalam  ruang cenderung lebih tinggi dibandingkan dengan pemeriksaan  daengan  metode  sama  di  dalam refrigerator,  sebagaimana  tercantum  di  Tabel  2  dan Tabel 3.
1 NB :Tabel dan grafik tertera dalam lampiran

## Uji Asumsi Normalitas
Sesuai  dengan  tujuan  dan  rumusan  masalah yang  ada,  maka  uji  statistik  yang  dipergunakan  adalah Repeated  Measures  ANOVA untuk  sampel  berpasangan pada  banyak  kelompok.  Analisis  dengan Repeated Measures  ANOVA memiliki  syarat  bahwa  sebaran  dari nilai residual model harus menyebar mengikuti sebaran normal. Berikut adalah hasil dari pengujian sebaran nilai residual Repeated Measures ANOVA :
2 NB : Tabel tertera dalam lampiran
Berdasarkan  hasil  uji  normalitas  data pemeriksaan EDTA  dalam ruang dengan Shapiro Wilks diketahui  bahwa  terdapat  5  parameter  pemeriksaan yang  memiliki  sebaran  data  residual  normal  pada  tiap pengamatannya yaitu WBC, RBC, HGB, HCT dan PLT dimana semua nilai p-value uji Shapiro Wilks lebih besar dari  ketetapan  0,05.  Kelima  parameter  yang  memiliki sebaran  nilai  residual  model  normal  dapat  dilanjutkan
dengan  metode Repeated  Measures  ANOVA serta  uji post hoc Least Significance Difference (LSD).
Sementara  itu,  untuk  parameter  lainnya  yaitu MCV, MCH dan MCHC yang diukur dalam ruang dan tidak  memiliki  sebaran  data  normal  untuk  setiap  hasil pengamatan  akan  diuji  dengan  metode Friedman  Test serta dilanjutkan dengan uji Wilcoxon Sign Rank Test.
Pada  data  nilai  residual  model Repeated Measures  ANOVA yang  menggunakan  data  pengukuran dalam  Refrigerator  juga  dilakukan  uji  sebaran normalitas  sebagaimana  tercantum  pada  Tabel  5 sebagai berikut:
3 NB : Tabel tertera dalam lampiran
Hasil  uji  normalitas  data  pemeriksaan  EDTA dalam  refrigerator  dengan Shapiro  Wilks diketahui bahwa  terdapat  5  parameter  pemeriksaan  yang memiliki  sebaran  data  residual  normal  pada  tiap pengamatannya yaitu WBC, RBC, HGB, HCT dan PLT dimana semua nilai p-value uji Shapiro Wilks lebih besar dari  ketetapan  0,05.  Kelima  parameter  yang  memiliki sebaran  nilai  residual  model  normal  dapat  dilanjutkan dengan  metode Repeated  Measures  ANOVA serta  uji post hoc Least Significance Difference (LSD).
Sementara  itu,  untuk  parameter  lainnya  yaitu MCV, MCHdan MCHC yang diukur dalam refrigerator dan  tidak  memiliki  sebaran  data  normal  untuk  setiap hasil  pengamatan  akan  diuji  dengan  metode Friedman Test serta  dilanjutkan  dengan  uji Wilcoxon  Sign  Rank Test.
Repeated  Measures  ANOVA,  LSD,  Friedman dan

## Wilcoxon Sign Rank Test
Uji perbedaan hasil pemeriksaan darah EDTA yang  dilakukan segera dan yang ditunda selama 2 jam, 24 jam, 48 jam dan 72 jam dengan Repeated Measures ANOVA pada  data  yang  memiliki  sebaran  nilai  residual normal  dilakukan  dengan  metode Greenhouse-Geisser karena  asumsi  kesamaan  ragam Mauchly's  Test  of Sphericity pada  parameter  dihasilkan  nilai  p-value  yang lebih  kecil  dari  0,05.  Hasil  dari  pengujian Repeated Measures,  LSD,  Friedman  Test dan Wilcoxon  Sign  Rank
Test pada pemeriksaan data dalam ruang selengkapnya ditampilkan pada Tabel 6 dan 7 sebagai berikut:

## Sumber: Data diolah (2021)
Tabel  VI.  Repeated  Measure  dan  LDS  Data Ruang
Parameter Waktu (Jam) Mean p value Greenhouse Geisser p value LSD WBC 0 7.433 0.036 2 7.420 0.744 24 7.387 0.235 48 7.353 0.082 72 7.100 0.046 RBC 0 4.757 0.647 - 2 4.727 - 24 4.719 - 48 4.731 - 72 4.737 - HGB 0 13.567 0.127 - 2 13.540 - 24 13.500 - 48 13.633 - 72 13.673 - HCT 0 39.040 0.000 2 38.987 0.349 24 40.100 0.000 48 42.073 0.000 72 43.460 0.000 PLT 0 373.333 0.030 2 365.867 0.107 24 377.600 0.233 48 376.667 0.497 72 373.000 0.961
Sumber : Data diolah (2021)
Hasil uji parameter pemeriksaan darah EDTA di dalam  ruang  yang  memiliki  sebaran  normal  dengan Repeated  Measure  ANOVA diketahui  pada  nilai  WBC, HCT  dan  PLT  diperoleh  p-value Greenhouse  Geisser sebesar 0,036; 0,000; 0,030;  yang lebih kecil dari 0,05. Mengacu  pada  hasil  tersebut,  maka  hasil  pemeriksaan WBC,  HCT  dan  PLT  di  dalam  ruangan  memakai
Nathalya Dwi K. S., Gilang N., Brina T.D., Mirshall Abiedama P., 2022. The difference between the hematology examination that was immediately carried out and which was delayed at room temperature and recommended using a sysmex xp-300
Sysmex  XP-300  menunjukkan  perbedaan  bermakna apabila dilakukan pemeriksaan segera dan ditunda.
Pada  uji  lanjut  LSD  untuk  nilai  WBC  diketahui perbedaan  bermakna  hanya  terjadi  pada  pemeriksaan yang  dilakukan  segera  dengan  yang  ditunda  selama  72 jam,  dimana    terjadi  penurunan  nilai  WBC  setelah dilakukan  pengukuran  selama  72  jam  tersebut. Sementara  itu,  dengan  pemeriksaan  yang  ditunda selama  2,  24  dan  48  jam  disimpulkan  tidak menunjukkan perbedaan bermakna.
Uji lanjut LSD untuk nilai HCT diketahui bahwa perbedaan  bermakna  terjadi  pada  pemeriksaan  yang dilakukan  segera  dengan  yang  ditunda  selama  24,  48 dan  72  jam,  dimana  dengan  adanya  penundaan  terjadi peningkatan  nilai  HCT  dibandingkan  dengan  hasil pemeriksaan segera.
Sementara itu, untuk uji LSD nilai PLT diketahui perbedaan  bermakna  hanya  terjadi  pada  pemeriksaan yang  dilakukan  segera  dan  tidak  menunjukkan perbedaan  dengan  pemeriksaan  yang  ditunda  dengan rentang waktu yang lebih lama.
Tabel  VII.  Friedman  dan  Wilcoxon  Sign  Rank Test Data Ruang
Parameter
Waktu (Jam) Median p value Friedman p value Wilcoxon MCV 0 84.0 0.000 2 84.6 0.007 24 87.1 0.001 48 90.9 0.001 72 92.8 0.001 MCH 0 29.7 0.022 2 29.8 0.035 24 29.6 0.309 48 29.9 0.004 72 29.5 0.333 MCHC 0 35.3 0.000 2 35.3 0.752 24 33.9 0.001 48 32.7 0.001 72 31.6 0.001

## Sumber: Data diolah (2021)
Tabel  7  di  atas  menunjukkan  bahwa  uji  beda pemeriksaan  darah  EDTA  dalam  ruang  pada  nilai-nilai MCV,  MCH  dan  MCHC  yang  tidak  memiliki  sebaran normal  diperoleh  nilai  p-value  uji Kruskal  Wallis yang lebih  kecil  dari  0,05.  Berdasarkan  atas  hasil  tersebut dapat dikemukakan bahwa terjadi perbedaan bermakna pada  pemeriksaan  MCV,  MCH  dan  MCHC  yang dilakukan segera dengan yang ditunda.
Hasil  lainnya  dari  uji  lanjut  dengan  metode Wilcoxon Sign Rant Test diketahui bahwa sebagian besar hasil  pemeriksaan  MCV,  MCH  dan  MCHC  yang dilakukan  segera  masing-masing  berbeda  bermakna dengan  pemeriksaan  yang  ditunda  selama  2  jam,  24 jam, 48 jam serta 72 jam.
Hasil  uji  lain  pada  Tabel  6  dan  7  juga menyimpulkan bahwa parameter RBC dan HGB  tidak menunjukkan  perbedaan  bermakan  saat  dilakukan pemeriksaan segera dengan yang ditunda.
Tabel  VIII.  Repeated  Measure  dan  LDS  Data Refrigerator
Parameter Waktu (Jam) Mean p value Greenhouse Geisser p value LSD WBC 0 7.340 0.001 2 7.287 0.357 24 7.240 0.016 48 7.360 0.695 72 7.107 0.012 RBC 0 4.777 0.012 2 4.727 0.001 24 4.736 0.005 48 4.751 0.036 72 4.860 0.092 HGB 0 13.580 0.001 2 13.533 0.089 24 13.547 0.238 48 13.693 0.000 72 13.880 0.006 HCT 0 39.220 0.021 2 38.707 0.000 24 38.627 0.000 48 38.760 0.000 72 40.213 0.122 PLT 0 362.200 0.053
2 364.733 - 24 372.600 - 48 376.933 - 72 377.267 - Sumber: Data diolah (2021)
Uji  beda  parameter  pemeriksaan  darah  EDTA di  dalam  refrigerator  yang  memiliki  sebaran  normal dengan Repeated  Measure  ANOVA diketahui  pada  nilai WBC,  RBC,  HGB  dan  HCTdiperoleh  p-value Greenhouse  Geisser yang  lebih  kecil  dari  0,05  dan selanjutnya  disimpulkan  terjadi  perbedaan  bermakna pemeriksaan  parameter-parameter  tersebut  yang dilakukan  segera  dengan  yang  ditunda  di  dalam refrigerator memakai Sysmex XP-300.
Pada  uji  lanjut  LSD  untuk  nilai  RBC  dan  HCT diketahui  perbedaan  bermakna  sebagian  besar  terjadi pada  pemeriksaan  yang  dilakukan  segera  dengan  yang ditunda  selama  2  jam,  24  jam,  48  jam  serta  72  jam. Sementara  pada  parameter  WBC,  HGB,  serta  MDX perbedaan  bermakna  terjadi  pada  beberapa  rentang pengamatan saja.
Pada  uji  lanjut  LSD  nilai  WBC  diketahui perbedaan  bermakna  terjadi  pada  pemeriksaan  yang dilakukan  segera  dengan  yang  ditunda  selama  24  dan 72  jam.  Untuk  nilai  HGB  diketahui  perbedaan bermakna  terjadi  pada  pemeriksaan  segera  dengan yang ditunda selama 48 dan 72 jam.
Tabel  IX.  Friedman  dan  Wilcoxon  Sign  Rank Test Data Refrigerator
Parameter Waktu (Jam) Median p value Friedman p value Wilcoxon MCV 0 84.1 0.000 2 83.9 0.009 24 83.4 0.001 48 83.9 0.001 72 84.4 0.900 MCH 0 29.6 0.000 2 29.6 0.023 24 29.7 0.054 48 29.9 0.001 72 29.4 0.284
MCHC 0 35.2 0.000 2 35.4 0.003 24 35.5 0.015 48 35.8 0.001 72 34.4 0.977 Sumber: Data diolah (2021)
Pada  Tabel  9  di  atas  menunjukkan  bahwa  uji  beda pemeriksaan  darah  EDTA  dalam  ruang  pada  nilai-nilai MCV,  MCH  dan  MCHC  yang  tidak  memiliki  sebaran normal  semuanya  diperoleh  nilai  p-value  uji Kruskal Wallis yang lebih kecil dari 0,05. Berdasarkan atas hasil tersebut  dapat  dikemukakan  bahwa  terjadi  perbedaan bermakna  pada  pemeriksaan  parameter-parameter tersebut yang dilakukan segera dengan yang ditunda.
Selanjutnya dari hasil lainnya dari uji Wilcoxon Sign Rant Test diketahui bahwa pada parameter MCV, MCH dan MCHC  yang dilakukan  segera  sebagian  besar menunjukkan  perbedaan  yang  bermakna  dengan pemeriksaan yang ditunda selama 2 jam, 24 jam, 48 jam serta 72 jam.
Hasil  uji  lain  pada  Tabel  8  dan  9  juga disimpulkan  bahwa  hanya  parameter  PLT  saja  yang tidak menunjukkan perbedaan bermakna saat dilakukan pemeriksaan  segera  dengan  yang  ditunda  di  dalam refrigerator.
Morfologi  eritrosit  melalui  pemeriksaan hapusan  darah  didapatkan  perubahan  morfologi  pada 24 jam suhu ruang didapatkan krenasi dan sferosit sel dibandingkan  pada  suhu  refrigerator  pada  gambar dibawah ini
Segera 2 jam suhu refrigerator 2 jam suhu ruang 24 jam suhu 24 jam suhu ruang 48 jam  suhu
refrigerator refrigerator 48 jam suhu ruang 72 jam suhu refrigerator 72 jam suhu ruang

## Gambar 1. Perubahan Morfologi Eritrosit

## PEMBAHASAN
Pada penelitian ini penyimpanan mempengaruhi parameter  pada  hematologi  baik  dari  suhu penyimpanan  dan  waktu  pemeriksaan  setelah pengambilan  darah.  Komite  Internasional  Standarisasi Hematologi merekomendasikan maksimum penyimpanan untuk hematologic darah lengkap dengan menggunakan  alat  penganalisa  otomatis  stabil  pada suhu  4 0 C  dengan  waktu  penyimpanan  24  jam  sampai 72  jam.  Penelitian  ini  mengungkapkan  bahwa  WBC, RBC,  HGB,HCT,  MCV,MCH  dan  MCHC  pada  suhu refrigerator  konstan,  berbeda  dengan  penyimpanan pada  suhu  ruang  mempengaruhi  WBC,  HCT, MCV,MCH  dan  MCHC,  sedangkan  RBC  dan  HGB tidak  terpengaruh.  Parameter  PLT  tidak  menunjukkan perbedaan  bermakna  saat  dilakukan  pemeriksaan segera  dengan  yang  ditunda  di  dalam  suhu  ruang  dan refrigerator.  Parameter  hematologi  PLT  stabil  pada suhu  4 0 C  selama  72  jam  selain  parameter  HGB  stabil diikuti  WBC  (Tendulkar  2015).    Sesuai  dengan penelitian  Sevda  Unalli  Ozmen  dan  Yesim  Ozarda 2021, parameter RBC, HGB dan MCH stabil selama 48 jam  dalam  penyimpana  suhu  4 0 C,  10 0 C,  dan  23 0 C  . Parameter HCT dan HGB meningkat sedangkan WBC menurun pada 48 jam penyimpanan 23 0 C.
Didapatkan perubahan WBC pada penyimpanan lebih  dari  8  jam  suhu  ruang,    semakin  lama penyimpanan akan mempengaruhi morfologi WBC dan tidak  dapat  diidentifikasi  dikarenakan  perubahan lobulisasi,  sitoplasma  ireguler  dan  vakoulisasi (Rahmanitarini, Hernaningsih and Indrasari, 2019).
Parameter  MCV  stabil  pada  suhu  refrigerator tetapi  terjadi  peningkatan  MCV  pada  suhu  ruang
dikarenakan ada pembengkakan dari RBC (Gunawardena dkk,2017). Peningkatan MCV pada suhu ruang  ini  akan  mempengaruhi  morfologi  eritrosit berupa sel krenasi ( Ramya D, Vijayambika J and Eswari V, 2020).
Hasil  penelitian  ini  sesuai  dengan  penelitian sebelumnya  yang  menggunakan  alat  otomatis  Sysmex XN, Briggs dkk  menemukan bahwa parameter WBC, hitung  jenis  WBC  dan  PLT-F  tidak  ada  perbedaan bermakna sampel yang disimpan pada suhu ruang atau suhu  refrigerator  4 0 C  lebih  dari  72  jam,  begitupula penelitian  Tanaka  dkk  parameter  PLT  stabil  pada  48 jam baik pada suhu ruang maupun suhu 4 0 C.
Perubahan  parameter  WBC,  HCT,  MCV,MCH ,MCHC,  HGB  dan  RBC    terjadi  pada  penyimpanan suhu  ruang  37 0 C  menyebabkan  perubahan  pada parameter  hematologi  yang  diteliti,  merupakan  bagian terpenting  pada  negara  dengan  lingkungan  suhu  tinggi sehingga penggunaan pendingin dapat mempertahankan sampel (Daves M dkk,2015)
Suhu  dan    waktu  penyimpanan  selain mempengaruhi stabilitas juga mempengaruhi morfologi eritrosit.  Hasil  penelitian  ini  didapatkan    perubahan morfologi  eritrosit  pada  24  jam  waktu  penyimpanan, didapatkan krenasi  dan sferosit sel eritrosit pada suhu ruangan  dibandingkan  dengan  suhu  refrigerator.  Hasil penelitian  ini  sesuai  dengan  penelitian  sebelumnya, terjadi  perubahan  morfologi  eritrosit,  sferosit  terjadi pada  penyimpanan  16  jam  suhu  ruang  dan  ditemukan 24 jam pada suhu refrigerator, ini berhubungan dengan penuaan  sel  yang  dipengaruhi  waktu  paruh  dan kapasitas  fungsi  sel  serta  kematian  sel,  kekakuan membrane dan hilangnya lipid membrane (Rahmanitarini, Hernaningsih and Indrasari, 2019).
Perubahan morfologi eritrosit dimulai dengan peningkatan  ukuran  sel  yaitu  terbentuk  krenasi  dan sferosit.  Terjadi  perubahan  morfologi  eritrosit dipengaruhi  oleh  EDTA  yang  menyebabkan  kerusakan irreversible  struktur,  biokimia  dan  fungsional  darah
dan  trombosit  dan  sel  -sel  lain,  EDTA  akan menimbulkan  perubahan  bentuk  eritrosit  krenasi, spikuladan echinocytes atau burr sel selain itu dapat juga menimbulkan  artefak  pada  sel  darah  merah  yang dilakukan  penyimpanan  pada  suhu  ruang  lebih  dari  5 jam,  begitupula  pada  hari  kedua  terjadi  pembesaran pada  sel  darah  merah  karena  perubahan  degeneratif dimana  air  masuk  kedalam  sel  (Rodak  et  al.2016). Antikoagulan  EDTA  yang  disimpan  pada  suhu  4-8 0 C selama  72  jam  selain  menimbulkan  perubahan morfologi  eritrosit,  terjadi  meningkatkan  fragilitas osmotik (Bafour S, Quao E and Kyeremeh R, 2013).
Penyimpanan  sampel  darah  pada  suhu refrigerator  4 0 C  selama  7  hari  didapatkan  tahanan hyperosmolar  dan  dimulai  tahanan  hipoosmolar  pada hari pertama, kondisi ini  akan mempengaruhi fragilitas osmotic yang akan mempengaruhi morfologi eritrosit ( volume  dan  integritas  membran  eritrosit  karena metabolisme  anaerob  yang  terus  menerus).  Oleh karena  itu  penyimpanan  darah  pada  suhu  refrigerator 4 0 C  selama  lebih  dari  2  hari  akan  mempengaruhi  tes fragilitas  osmotih  darah  terutama  eritrosit  (Gian  Luca Salvagno et al 2020)

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  didapatkan    WBC,  RBC, HGB,HCT,  MCV,MCH  dan  MCHC  terdapat perbedaan hasil pada suhu ruang 2, 24, 48 dan 72 jam dibandingkan  suhu  refrigerator,  hanya  parameter  PLT saja yang tidak menunjukkan perbedaan bermakna saat dilakukan  pemeriksaan  segera  dengan  yang  ditunda  di dalam  refrigerator.  Morfologi  eritrosit  dipengaruhi oleh  suhu  dan  penyimpanan,  sebaiknya  hapusan  darah tepi dilakukan pemeriksaan sesegera mungkin.

## DAFTAR PUSTAKA
A.M  Diks,et  al.(2019)  ‘Impact  of  blood  storage  and sample  handling  on  quality  of  high  dimensional flowcytometric  data  in  multicenter  clinical research’.Journal  of  Immunological  Methods
475; 112616. https://doi.org/101016/j.jim.2019.06.007
Antwi-Baffour S, Quao E, Kyeremeh R(2013). Prolong store of blood in EDTA has an the effect on the morphology and osmotic fragility of erythrocyte. International Journal of Biomedical Science and Engineering; 1(2):20-23. https://doi.org/10.11648/j.ijbse.20130102.11
Briggs, C., Culp, N., Davis, B., d’Onofrio, G., Zini, G.,
&  Machin,  S.  J.  (2014).  ICSH guidelines  for  the evaluation  of  blood  cell  analysers  including those  used  for  differential  leucocyte  and reticulocyte  counting.  International  Journal  of Laboratory  Hematology,  36(6),  613 – 627. https://doi.org/10.1111/ijlh.12201
Daves, M., Zagler, E. M., Cemin, R., Gnech, F., Joos, A., Platzgummer,  S.,  &  Lippi,  G.  (2015).  Sample stability for complete blood cell count using the Sysmex  XN  hematological  analyzer.  Blood
Transfusion, 13(4), 576 – 582. https://doi.org/10.2450/2015.0007-15
Gian  Luca  Salvagno,  Davide  Demonte,  Francesco
Dima, Chiara Bovo, Giuseppe Lippi (2020)’Stability  of  refrigerated  whole  blood samples  for  osmotic  fragility  test’,  Hematol
Transfus Cell Ther;42(2); p 134-138. https://doi.org/10/1016/j/htct.2019.06.001
Gunawardena et al.(2017) ‘Reliability of Parameters of

## Complete Blood Count With Different Storage
Conditions’,  Journal  of  Clinical  Laboratory Analysis 31:pp.1-6. Doi 10.1002/jcla.22042.
Jain, A. et al. (2018) ‘Storage stability of commonly used haematological  parameters  at 33°c’, Biochemia
Medica .  Biochemia  Medica,  Editorial  Office, 28(2 Special Issue). doi: 10.11613/BM.2018.020901.
Keohane, E. M., Smith, L. J. and Walenga, J. M. (2016) Rodaks’s  Hematology:  Clinical Principles  and Application . 5th edn. Missouri: Elsevier.
Rahmania,  Y.  L.,  Kuntjoro,  T.  and  Suroto,  V.  (2019) ‘Proving  the  Accuracy  and  Legal Liability  of Clinical  Laboratory  Examination  Results  Using Automatic Tools’, Jurnal Hukum Kesehatan , 5(2), pp. 358 – 376.
Rahmanitarini, A., Hernaningsih, Y. and Indrasari, Y. N.
(2019)  ‘The  stability  of  sample storage  for complete blood count (CBC) toward the blood cell  morphology’, Bali  Medical Journal ,  8(2),  p. 482. doi: 10.15562/bmj.v8i2.1369.
Ramya  D,  Vijayambika  J  and  Eswari  V,  2 020’Effect  of room temperature and refrigerated storage on automated  hematological  parameters’  Indian Journal of Pathology and Oncology; 7(4) p 625- 630
Rodak BF, Fritsma GA, and Keohane FA. Hematology, Clinical  Principles  and  Application  4th  ed Elsevier Saunder. 2016: 176-180
Sevda Unalli Ozmen, Yesim Ozarda (2021)’ Stability of hematological analytes during 48 hours storage at thre temperatures using Cell-Dyn Hematology analyser, J Med Biochem 40; p 252- 260. DOI : 10.5937/jomb0-27945
Tanaka  Y,  Gondo  K,  et  al.(2014)  Performance evaluation  of  platelet  counting  by  novel fluorescent  dye  steining  in  the  XN-series automated  hematology  analyzers.  J  Clin  Lab Anal ; 28: p 341-8.
Tang,  O. et  al. (2019)  ‘Short -Term  Stability  of Hematologic  Parameters  in  Frozen  Whole Blood’, The journal of applied laboratory medicine . NLM  (Medline),  4(3),  pp.  410 – 414.  doi:
10.1373/jalm.2018.028357.
Tendulkar,  A.,  Jain,  P.,  Gujral,  S.,  Tambe,  M.,  Kenjale, R.,  &  Ganesh,  B.  (2015).  Stability  of  Selected Hematological  Parameters  in  Stored  Blood Samples.  Journal  of  Cell  Science  &  Therapy, 6(5). https://doi.org/10.4172/2157- 7013.1000220
Vives-Corrons,  J.  L. et  al. (2014) ‘Effect of  EDTA- anticoagulated  whole  blood  storage  on  cell morphology  examination:  A  need  for standardization’,
International Journal of Laboratory Hematology . Blackwell Publishing Ltd,
pp. 222 – 226. doi: 10.1111/ijlh.12170.
Zini,  G.  (2014) ‘Stability of  complete  blood  count parameters  with  storage:  Toward  defined specifications for different diagnostic applications’, International  Journal  of  Laboratory Hematology .  Blackwell  Publishing  Ltd,  pp.  111 – 113. doi: 10.1111/ijlh.12181.
1 NB :Tabel dan grafik tertera dalam lampiran
Table II. Hasil Pemeriksaan Darah EDTA Ruang
Parameter Hasil Waktu (Jam) 0 2 24 48 72 WBC Median – (Range) 7.7 – (4.8 s/d 9.7) 7.7 – (4.5 s/d 9.6) 7.7 – (4.7 s/d 9.7) 7.6 – (4.7 s/d 9.4) 7.4 – (4.6 s/d 9.8) Mean ± St. Dev 7.43 ± 1.32 7.42 ± 1.38 7.39 ± 1.30 7.35 ± 1.30 7.10 ± 1.39 RBC Median – (Range) 4.8 – (4.2 s/d 5.5) 4.7 – (4.2 s/d 5.4) 4.7 – (4.2 s/d 5.4) 4.8 – (4.2 s/d 5.4) 4.6 – (4.1 s/d 5.5) Mean ± St. Dev 4.76 ± 0.39 4.73 ± 0.38 4.72 ± 0.37 4.73 ± 0.37 4.74 ± 0.45 HGB Median – (Range) 13.4 – (9.9 s/d 16.8) 13.5 – (9.8 s/d 16.6) 13.5 – (9.8 s/d 16.5) 13.6 – (9.9 s/d 16.6) 13.6 – (9.9 s/d 16.7) Mean ± St. Dev 13.57 ± 1.53 13.54 ± 1.51 13.50 ± 1.51 13.63 ± 1.50 13.67 ± 1.50 HCT Median – (Range) 38.4 – (30.8 s/d 47.0) 38.2 – (30.9 s/d 46.9) 39.2 – (32.3 s/d 47.7) 41.2 – (33.6 s/d 49.6) 43.5 – (34.3 s/d 50.4) Mean ± St. Dev 39.04 ± 3.77 38.99 ± 3.69 40.10 ± 3.61 42.07 ± 3.73 43.46 ± 4.05 MCV Median – (Range) 84.0 – (70.5 s/d 86.4) 84.6 – (71.2 s/d 86.6) 87.1 – (73.6 s/d 88.9) 90.9 – (76.7 s/d 94.3) 92.8 – (78.1 s/d 96.8) Mean ± St. Dev 82.13 ± 4.94 82.53 ± 4.97 85.02 ± 5.00 89.03 ± 5.50 90.77 ± 6.02 MCH Median – (Range) 29.7 – (22.7 s/d 30.9) 29.8 – (22.6 s/d 31.0) 29.6 – (22.3 s/d 30.9) 29.9 – (22.6 s/d 31.1) 29.5 – (22.6 s/d 31.4) Mean ± St. Dev 28.53 ± 2.42 28.67 ± 2.44 28.63 ± 2.45 28.83 ± 2.49 28.72 ± 2.62 MCHC Median – (Range) 35.3 – (32.1 s/d 35.8) 35.3 – (31.7 s/d 35.8) 33.9 – (30.3 s/d 34.7) 32.7 – (29.5 s/d 33.5) 31.6 – (28.9 s/d 33.1) Mean ± St. Dev 34.69 ± 1.13 34.67 ± 1.13 33.61 ± 1.19 32.36 ± 1.08 31.41 ± 1.21 PLT Median – (Range) 358 – (273 s/d 498) 346 – (266 s/d 508) 354 – (268 s/d 517) 359 – (264 s/d 525) 361 – (263 s/d 534) Mean ± St. Dev 373.33 ± 67.36 365.87 ± 68.94 377.60 ± 69.92 376.67 ± 73.09 373.00 ± 72.35 Sumber: Data diolah (2021)
Nathalya Dwi K. S., Gilang N., Brina T.D., Mirshall Abiedama P., 2022. The difference between the hematology examination that was immediately carried out and which was delayed at room temperature and recommended using a sysmex xp-300

## Table III. Hasil Pemeriksaan Darah EDTA Refrigerator
Parameter Hasil Waktu (Jam) 0 2 24 48 72 WBC Median – (Range) 7.6 – (4.8 s/d 9.3) 7.6 – (4.7 s/d 9.5) 7.8 – (4.7 s/d 9.3) 7.8 – (4.7 s/d 9.4) 7.4 – (4.9 s/d 9.0) Mean ± St. Dev 7.34 ± 1.20 7.29 ± 1.27 7.24 ± 1.24 7.36 ± 1.26 7.11 ± 1.27 RBC Median – (Range) 4.8 – (4.3 s/d 5.5) 4.7 – (4.2 s/d 5.4) 4.8 – (4.2 s/d 5.5) 4.8 – (4.3 s/d 5.4) 4.8 – (4.3 s/d 5.6) Mean ± St. Dev 4.78 ± 0.37 4.73 ± 0.37 4.74 ± 0.40 4.75 ± 0.37 4.86 ± 0.46 HGB Median – (Range) 13.5 – (9.8 s/d 16.6) 13.4 – (9.8 s/d 16.6) 13.4 – (9.9 s/d 16.6) 13.5 – (10.0 s/d 16.7) 14.0 – (9.9 s/d 16.6) Mean ± St. Dev 13.58 ± 1.52 13.53 ± 1.52 13.55 ± 1.52 13.69 ± 1.51 13.88 ± 1.61 HCT Median – (Range) 38.2 – (31.4 s/d 46.7) 37.8 – (30.5 s/d 46.1) 37.8 – (30.3 s/d 46.8) 37.7 – (30.5 s/d 46.2) 40.9 – (30.4 s/d 46.6) Mean ± St. Dev 39.22 ± 3.55 38.71 ± 3.55 38.63 ± 3.79 38.76 ± 3.64 40.21 ± 4.56 MCV Median – (Range) 84.1 – (70.6 s/d 86.2) 83.9 – (70.4 s/d 86.3) 83.4 – (70.0 s/d 85.7) 83.9 – (70.0 s/d 85.6) 84.4 – (8.28 s/d 88.3) Mean ± St. Dev 82.15 ± 4.86 81.93 ± 4.96 81.60 ± 4.85 81.63 ± 4.86 77.88 ± 19.95 MCH Median – (Range) 29.6 – (22.0 s/d 30.5) 29.6 – (22.6 s/d 30.9) 29.7 – (22.9 s/d 30.9) 29.9 – (22.9 s/d 30.8) 29.4 – (22.7 s/d 31.1) Mean ± St. Dev 28.44 ± 2.53 28.64 ± 2.49 28.61 ± 2.41 28.83 ± 2.41 28.61 ± 2.57 MCHC Median – (Range) 35.2 – (31.2 s/d 35.7) 35.4 – (32.1 s/d 36.1) 35.5 – (31.3 s/d 36.3) 35.8 – (32.8 s/d 36.5) 34.4 – (32.0 s/d 36.4) Mean ± St. Dev 34.57 ± 1.29 34.89 ± 1.19 34.93 ± 1.43 35.29 ± 1.05 34.52 ± 1.39 PLT Median – (Range) 338 – (245 s/d 521) 347 – (261 s/d 497) 359 – (257 s/d 509) 366 – (269 s/d 515) 362 – (274 s/d 526) Mean ± St. Dev 362.20 ± 78.62 364.73 ± 69.82 372.60 ± 67.90 376.93 ± 68.61 377.27 ± 73.32 Sumber: Data diolah (2021)
290 Grafik 1. Perubahan parameter hematologi ; WBC, RBC, HGB, PLT, HCT, MCV, MCH dan MCHC 6.80 7.00 7.20 7.40 7.60 0 Jam 2 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam WBC Ruang Refrigerator 4.60 4.70 4.80 4.90 0 Jam 2 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam RBC Ruang Refrigerator 13.20 13.40 13.60 13.80 14.00 0 Jam 2 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam HGB Ruang Refrigerator 350.00 360.00 370.00 380.00 0 Jam 2 Jam 24 Jam48 Jam72 Jam PLT Ruang Refrigerator 35.00 40.00 45.00 0 Jam 2 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam HCT Ruang Refrigerator 70.00 80.00 90.00 100.00 0 Jam 2 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam MCV Ruang Refrigerator 28.20 28.40 28.60 28.80 29.00 0 Jam 2 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam MCH Ruang Refrigerator 28.00 30.00 32.00 34.00 36.00 0 Jam 2 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam MCHC Ruang
Refrigerator
Nathalya Dwi K. S., Gilang N., Brina T.D., Mirshall Abiedama P., 2022. The difference between the hematology examination that was immediately carried out and which was delayed at room temperature and recommended using a sysmex xp-300
2 NB : Tabel tertera dalam lampiran

## Table IV. Uji Normalitas Data Ruang
Parameter p value Shapiro Wilks Standardized Residual Keterangan 0 Jam 1 Jam 2 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam WBC 0.346 0.338 0.297 0.310 0.375 0.862 Normalitas terpenuhi RBC 0.560 0.338 0.255 0.291 0.425 0.123 Normalitas terpenuhi HGB 0.367 0.292 0.312 0.392 0.285 0.264 Normalitas terpenuhi HCT 0.824 0.901 0.810 0.858 0.810 0.970 Normalitas terpenuhi MCV 0.001 0.002 0.001 0.001 0.003 0.019 Normalitas tidak terpenuhi MCH 0.005 0.003 0.003 0.001 0.002 0.020 Normalitas tidak terpenuhi MCHC 0.022 0.047 0.004 0.005 0.007 0.229 Normalitas tidak terpenuhi PLT 0.579 0.503 0.409 0.494 0.688 0.474 Normalitas terpenuhi Sumber : Data Diperoleh (2021)
3 NB : Tabel tertera dalam lampiran
Table V. Uji Normalitas Data Refrigerator
Parameter p value Shapiro Wilks Standardized Residual Keterangan 0 Jam  1 Jam  2 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam WBC 0.422 0.366 0.818 0.376 0.316 0.263 Normalitas terpenuhi RBC 0.234 0.107 0.299 0.246 0.289 0.212 Normalitas terpenuhi HGB 0.269 0.323 0.249 0.411 0.291 0.509 Normalitas terpenuhi HCT 0.685 0.622 0.575 0.770 0.638 0.693 Normalitas terpenuhi MCV 0.001 0.000 0.001 0.001 0.001 0.000 Normalitas tidak terpenuhi MCH 0.002 0.004 0.003 0.004 0.001 0.006 Normalitas tidak terpenuhi MCHC 0.007 0.027 0.036 0.007 0.014 0.469 Normalitas tidak terpenuhi PLT 0.601 0.469 0.362 0.967 0.738 0.515 Normalitas terpenuhi
Sumber : Data Diperoleh (2021)