## ANTIOXIDANT ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT SPONGE Stylissa carteri FROM THE MANTEHAGE ISLAND NORTH MINAHASA
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SPONS Stylissa carteri DARI PULAU MENTEHAGE MINAHASA UTARA
Redford Denny 1) , Adithya Yudistira 1) , Deby A. Mpila 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *fardendenny01@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges are one of the animals from the phylum porifera and are marine invertebrates that live in  coral  reef  ecosystems.  Sponges  are  multi-cellular  marine  biota  whose  tissue  and  organ functions  are  very  simple.  Sponge  Stylissa  carteri  can  produce  secondary  metabolites  from metabolic  processes  in  the  cells  that  exist  in  the  body.  This  study  aims  to  determine  the antioxidant  activity  of  the  ethanolic  extract  of  sponge  Stylissa  carteri  from  Mantehage  Island, North Minahasa. Sponge Stylissa carteri was extracted by maceration method using ethanol as solvent.  The  antioxidant  activity  test  was  carried  out  using  the  DPPH  method  (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl),  which  was  measured  by  means  of  a  UV-Vis  spectrophotometer.  The  results  of the  study  showed  that  the  ethanolic  extract  of  the  sponge  Stylissa  carteri  performed  the antioxidant  activity  at  each  concentration,  at  a  concentration  of  0,5  mg/L  (77,7  %),  at  a concentration  0,6  mg/L  (86,13  %)  and  the  highest  was  at  a  concentration  of  0.7  mg/L  with  an inhibition value of 90.03%.
Keywords : Antioxidant, DPPH, Stylissa carteri, Mantehage

## ABSTRAK
Spons  ialah  salah  satu  spesies  dari  filum  porifera  juga  merupakan  invertebrata  laut  yang  hidup pada ekosistem terumbu karang. Spons merupakan biota laut multi sel yang fungsi jaringan dan organnya  sangat  sederhana.  Spons Stylissa  carteri dapat  menghasilkan  metabolit  sekunder  dari proses  metabolisme  dalam  sel  yang  ada  pada  tubuhnya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol spons Stylissa carteri dari pulau Mantehage, Minahasa Utara. Spons Stylissa carteri diekstrak dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  DPPH ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil )  yang  diukur  dengan  alat  spektrofotometer  UV-Vis.  Hasil  dari  penelitian menunjukan bahwa ekstrak etanol spons Stylissa carteri memiliki aktivitas antioksidan disetiap konsentrasi,  Pada  konsentrasi  0,5  mg/L  (77,7  %),  konsentrasi  0,6  mg/L  (86,13  %)  dan  yang tertinggi pada konsentrasi 0,7 mg/L dengan nilai inhibisi 90,03%.
Kata Kunci : Antioksidan, DPPH, Stylissa carteri, Mantehage

## PENDAHULUAN
Indonesia  sebagai  negara  yang  sangat kaya  dengan  sumber  daya  alam  yang  melimpah dengan  luas  lautannya  terdiri  dari  5,8  juta  km² atau  sekitar  70%  dari  luas  total  wilayah Indonesia.  Wilayah  lautan  Indonesia  memiliki berbagai  macam  spesies  organisme  laut  baik tumbuhan maupun hewan. Salah satu invertebrata  yang  jumlahnya  sangat  banyak  di lautan  Indonesia  ialah  spons.  Spons  laut memiliki  potensi  bioaktif  yang  sangat  besar. Selama  50  tahun  terakhir  telah  banyak kandungan bioaktif yang ditemukan. Kandungan bioaktif tersebut dikelompokan kedalam kelompok  yang  besar  seperti  antiflammantory, antitumor,  antivirus,  antimalaria,  antibiotik (Rasyid, 2009).
Antioksidan merupakan senyawa penting  dalam  menjaga  kesehatan  tubuh  karena berfungsi sebagai penangkap radikal bebas yang banyak  terbentuk  dalam  tubuh.  Secara  biologis, pengertian  antioksidan  adalah  senyawa  yang mampu  menangkal  atau  meredam  dampak negatif  oksidan  dalam  tubuh  (Winarsi,  2007). Keseimbangan  oksidan  dan  antioksidan  sangat penting  karena  berkaitan  dengan  berfungsinya sistem imunitas tubuh. Dalam pengertian kimia, senyawa  antioksidan  adalah  senyawa  pemberi elektron  ( electron  donors )  (Hernani  dan  Mono, 2006).
Radikal  bebas  adalah  suatu  atom  atau molekul  yang  sangat  reaktif  dengan  elektron yang  tidak  memiliki  pasangan.  Radikal  bebas mencari  reaksi - reaksi  agar  dapat  memperoleh kembali  elektron  pasangannya.  Selain  itu, radikal  bebas  dapat  mengalami  tubrukan  kaya energi  dengan  molekul  lain,  yang  merusak ikatan  didalam  molekul,  sehingga  radikal  bebas dapat merusak membran sel atau DNA sel yang rentan (Corwin, 2009).
Metode  uji  antioksidan  yang  digunakan pada  penelitian  ini  adalah  metode  peredaman radikal bebas DPPH ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil ).  Metode  ini  memerlukan  sedikit sampel, sederhana, mudah, cepat dan peka untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan dari senyawa bahan  alam  (Hanani,  Mun’im  dan  Sekarini, 2005).  Berdasarkan  uraian  latar  belakang tersebut,  peneliti  menganggap  bahwa  penelitian tentang  “Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak
Etanol  Spons Stylissa  carteri Dari  Pulau Mantehage Minahasa Utara” perlu dilakukan.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan Desember  2020  sampai  Februari  2021  di Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program  Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam  Ratulangi dan Laboratorium Hama dan Penyakit Tumbuhan  Fakultas  Pertanian  Universitas  Sam Ratulangi

## Bentuk Penelitian
Bentuk  dari  penelitian  ini  adalah eksperimental  laboratorium  yang  akan  menguji aktivitas  antioksidan  dengan  menggunakan metode  DPPH  ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil )  dari ekstrak  spons Stylissa  carteri yang  diperoleh dari perairan Kepulauan Mantehage.

## Alat dan Bahan
Alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu scuba  diving ,  kamera, gunting,  pisau,  wadah  botol,  kertas  saring , ziplok,  sarung  tangan,  telenan,  spatula,  alat- alat  gelas  (Iwaki  ST  Pyrex  ®),  timbangan digital (AE Adam®), mikropipet, spektrofotometer  UV-Vis, aluminium  foil, Vortex (Mixer Hwashin), evaporator.

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu etanol  95%,  DPPH (1,1  difenil-2-pikrilhidrazil), spons  Stylissa  carteri  dan  serbuk  vitamin  C  p.a sebagai pembanding.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel  ini  diambil  di  perairan  pulau Mantehage, Minahasa Utara menggunakan alat bantu  scuba  diving.  Sebelum  diambil  sampel di  foto  menggunakan  kamera  bawah  laut. Setelah  diambil,  dimasukan  dalam  kantong plastik  jepit  yang  sudah  disiapkan  dan disimpan  dalam  kotak  pendingin  lalu  dibawa ke  Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program
Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Preparasi Sampel
Sampel  spons Stylissa  carteri yang sudah  di  ambil  dicuci  kembali  dan  dipotong- potong  kecil  lalu  dimasukan  kedalam  wadah botol,  sampel  yang  di  dalam  botol  diisi  dengan etanol 95% sebanyak 200 mL .

## Ekstraksi
Sampel  spons Stylissa  carteri sebanyak 200  g  dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  95% sebanyak  200  mL  dengan  3  kali  pengulangan selama 24 jam. Sampel kemudian disaring untuk mendapatkan filtrat. Hasil yang didapat kemudian  diuapkan  menggunakan  evaporator yang  akan  menghasilkan  ekstrak  kering/kasar dari sampel Spons Stylissa carteri .

## Pembuatan Larutan Stok 100 mL
Sebanyak 100 mg ekstrak spons Stylissa carteri dilarutkan  dalam  100  mL  etanol  95%. Dengan masing-masing konsentrasi 0,5, 0,6 dan 0,7 mg/L, dihitung dengan menggunakan rumus pengenceran, yaitu:
𝑽 𝟏 𝑴 𝟏 = 𝑽 𝟐 𝑴 𝟐
Pada masing-masing hasil yang didapatkan dari hasil V 1 dipipet dan ditambahkan etanol 95% hingga mencapai tanda batas (10 mL), kemudian dipindahkan ke dalam tabung  reaksi dan  ditutup dengan  menggunakan aluminium foil untuk  digunakan  pada  perlakuan selanjutnya.

## Pembuatan Larutan DPPH
Sebanyak  4  mg  DPPH  ditimbang  dan dilarutkan dalam etanol  95% sebanyak 100 mL, diencerkan  menggunakan  rumus  pengenceran dan diuji menggunakan spektrofotometer sampai mendapatkan nilai absorbansiya.

## Pembuatan Larutan Vitamin C
Vitamin  C p.a ditimbang  sebanyak  10 mg  dan  dilarutkan  dalam  etanol  95%  sebanyak 10  mL,  kemudian  buat  larutan  stok  untuk konsentrasi  0,5,  0,6  dan  0,7  mg/L  dengan ditambahkan  entanol  95%  sampai  tanda  batas (10 mL) pada masing masing larutan sebanyak 3 kali pengulangan. Sampel vitamin C p.a di pipet sebanyak  2  mL,  dimasukan  kedalam  tabung reaksi  dengan  masing-masing  konsentrasi  0,5, 0,6 dan 0,7 mg/L dan ditambahkan 2 mL larutan DPPH  kedalam  masing-masing  konsentrasi  dan divortex  selama  5  detik  sebanyak  3  kali pengulangan.  Diuji  pada  spektrofotometer  UV- Vis dengan panjang gelombang 517 nm.
Pengujian  Larutan  Kontrol  DPPH  dan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Larutan kontrol DPPH diuji menggunakan spektrofotometer UV-Vis
dengan  panjang  gelombang  517  nm  sebagai absorbansi  kontrol  dalam  pengujian  ini. Sampel  diinkubasi  selama  30  menit  pada suhu  37ºC.  Berubahnya  warna  ungu  menjadi warna kuning menunjukkan efisiensi penangkal  radikal  bebas.  Diukur  absorbansi pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm setelah diinkubasi  selama  30  menit.  Kemudian diamati  perbandingannya  dengan  vitamin  C p.a  sebagai  standar.  Aktivitas  penangkapan radikal  bebas  (persen  inhibisi)  dihitung sebagai persentase berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan rumus:
% inhibisi = 1 − 𝐚𝐛𝐬𝐨𝐫𝐛𝐚𝐧𝐬𝐢 𝐬𝐚𝐦𝐩𝐞𝐥 𝐚𝐛𝐬𝐨𝐫𝐛𝐚𝐧𝐬𝐢 𝐤𝐨𝐧𝐭𝐫𝐨𝐥 X 100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui  aktivitas  dari  penangkal  radikal bebas, dengan menggunakan Spektrofotometer  UV-Vis.  Hasil  pengujian disajikan pada tabel dibawah ini:
Tabel  1. Hasil  perbandingan  pengujian  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  spons Stylissa carteri dengan Vitamin C p.a
Konsentrasi Ekstrak dan Vitamin C Pengulangan rata-rata I II III 0,5 mg/L Ekstrak 73 % 80,8 % 79,3 % 77,7 % Vitamin C 97 % 97,7 % 98,9 % 97,86 % 0,6 mg/L Ekstrak 87 % 84,6 % 86,8 % 86,13 % Vitamin C 93,1 % 98,6 % 99,6 % 97,16 % 0,7 mg/L Ekstrak 89,9 % 89,8 % 90,4 % 90,03 % Vitamin C 97,7 % 98,9 % 99 % 98,53 % Pembahasan
Pada penelitian ini sampel yang digunakan  yaitu  spons  Stylissa  carteri  yang diambil  dari  Kepulauan  Mantehage.  Sampel dibersihkan  lalu  dipotong  kecil-kecil.  Hal  ini bertujuan  untuk  memperluas  kontak  dan meningkatkan daya interaksinya dengan pelarut, sehingga jumlah ekstrak yang diperoleh optimum. Sampel kemudian di ekstraksi dengan menggunakan metode maserasi dan pelarut yang digunakan  ialah  etanol  95%.  Pelarut  etanol memiliki sifat selektif, tidak beracun dan bersifat universal yang cocok untuk  mengekstrak semua golongan senyawa metabolit sekunder (Kristianti et al.,2008).
Metode  maserasi  dipilih  karena  cara kerja  dan  peralatan  yang  digunakan  sederhana, mudah  diusahakan,  mampu  menarik  senyawa- senyawa yang berkhasiat, dan untuk menghindari  kerusakan  beberapa  senyawa  aktif dari  spons  Stylissa  carteri  (Kristiani,  2014). Setelah  itu  dilakukan  evaporasi,  evaporasi bertujuan  untuk  proses  pengentalan  larutan dengan  cara  mendidihkan  atau  menguapkan pelarut. Setelah dievaporator dihasilkan ekstrak  kental.  Ekstrak  spons  Stylissa  carteri ini  akan  digunakan  dalam  uji  aktivitas antioksidan.
Metode  uji  aktivitas  antioksidan  yang digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  metode DPPH (1,1-Difenil-2-pikrilhidrazil).  Metode pengujian  ini  merupakan  metode  yang  biasa digunakan  untuk  penetapan  aktivitas  senyawa antioksidan. Menurut Widyastuti (2010), metode
DPPH mudah digunakan, cepat, cukup teliti dan baik digunakan dalam pelarut organik.
Pada uji ini panjang gelombang maksimum  pada  DPPH  adalah  517  nm, pengukuran  absorbansi  pada  larutan  DPPH menggunakan  panjang  gelombang  400  sampai 600  nm  dan  hasil  yang  didapat  pada  absorbansi DPPH adalah 0,850 dan untuk konsentrasi yang digunakan yaitu 0,5, 0,6, dan 0,7 mg/L. Masing- masing  dari  konsentrasi  tersebut  dicampurkan dengan  larutan  DPPH  kemudian  divortex  dan diinkubasi  selama  30  menit  pada  tempat  yang gelap.  Senyawa  antioksidan  akan  bereaksi dengan  DPPH  melalui  mekanisme  donasi  atom hidrogen  dan  menimbulkan  perubahan  warna dari  ungu  menjadi  kuning.  Tingkat  perubahan warna  yang  terjadi  mengindikasikan  potensi senyawa  antioksidan  dalam  kemampuannya mendonorkan  atom  hidrogen  (Mosquera  et  al., 2007).  Setelah  sampel  diinkubasi,  masing- masing  dari  konsentrasi  dilakukan  pengukuran absorbansi dengan menggunakan alat spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm.
Pada  hasil  penelitian  yang  didapatkan (Tabel  1)  menunjukan  nilai  persentase  inhibisi pada  ekstrak  etanol  spons  Stylissa  carteri  yang memiliki  aktivitas  antioksidan  dan  ekstrak tersebut mengalami peningkatan dari konsentrasi 0,5  mg/L  dengan  nilai  rata-rata  77,7%  sampai pada konsentrasi yang 0,7 mg/L dengn nilai rata- rata  90,03%,  ini  menunjukan  bahwa  sampel tersebut memiliki kadar antioksidan yang tinggi. Hal  ini  diperkuat  dengan  pernyataan  dari Molyneux (2004) yang  menyatakan bahwa nilai
standar  kadar  antioksidan  adalah  50%.  Hasil penelitian menunjukan bahwa dengan bertambahnya konsentrasi ekstrak maka absorbansi  semakin  menurun  dan  tingkat inhibisinya akan semakin naik.
Untuk  hasil  pengujiannya  kemudian dibandingkan  dengan  Vitamin  C.  Vitamin  C digunakan  sebagai  pembanding  kontrol  positif karena  berfungsi  sebagai  antioksidan  sekunder yaitu  menangkap  radikal  bebas,  selain  itu vitamin  C  merupakan  senyawa  antioksidan alami  yang  sering  digunakan  sebagai  senyawa pembanding dalam pengujian aktivitas antioksidan,  karena  senyawa  antioksidannya relatif  aman  dan  tidak  menimbulkan  toksisitas (Lung dan Destiani, 2017).
Menurut  Gozcelioglu  dan  Konuklugil (2012)  kadar  yang  terdapat  pada  Stylissa memiliki  potensi  bioaktif  yang  sangat  besar, dimana kandungan bioaktif tersebut dikelompokkan  dalam  kelompok  besar  yaitu antiinflamasi,  antitumor,  antivirus,  antimalaria dan  antibiotik.  Menurut  Tamat  dkk  (2007) antioksidan  penting  untuk  mempertahankan mutu  produk  pangan  serta  kesehatan  dan kecantikan. Pada bidang kesehatan dan kecantikan, antioksidan berfungsi untuk mencegah penyakit kanker dan tumor, penyempitan pembuluh darah, dan penuaan dini.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  maka  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  etanol  spons Stylissa  carteri dari  Pulau Mantehage,  Minahasa  Utara  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  besar  disetiap  konsentrasi. Pada konsentrasi 0,5 mg/L (77,7 %), konsentrasi 0,6 mg/L (86,13 %) dan aktivitas tertinggi pada konsentrasi 0,7 mg/L yaitu (90,3%).

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut tentang  senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam spons Stylissa  carteri dengan  menggunakan metode  pengujian  yang  berbeda,  kemudian dibandingkan hasilnya dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Corwin,  E  J.  2009.  Buku  Saku  Patofisiologi Edisi Ketiga. Penerjemah: Yudha E K, Wahyuningsi  E,  Yulianti  D,  dan Karyuni  P  E.  Jakarta:  Penerbit  Buku Kedokteran EGC.
Gozcelioğlu,  B.,  Konuklugil,  B.,  2012,
Qualitative Detection of Some Secondary  Metabolites  from  Three Turkish  Marine  Sponges, Fabad  J. Pharm. Sci ., 37: 73-78
Hanani,  E,  Mun’im  A,  Sekarini,  R,  dan Wiryowidagdo, S. Uji aktivitas antioksidant  beberapa  spons  laut  dari kepulauan  Seribu .  Jurnal  Bahan  Alam Indonesia. vol  5,  no.1  Jan  2005  (in Press).
Hernani,  dan  Mono,  R.  2006. Tanaman Berkhasiat Antioksidan.
Penebar
Swadaya; p.8,18., Jakarta
Kristanti, A. N., N.S. Aminah., M. Tanjung., B. Kurniadi.      2008.  Buku      Ajar Fitokimia. Unair Press, Surabaya.
Kristiani,  V  2014.  Pengaruh  Konsentrasi  etanol
dan Waktu Maserasi Terhadap Perolehan  Fenolik,  Flavonoid,  dan
Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Rmbut Jagung.  Fakultas  Teknik  universitas Katolik Widya Mandala, Surabaya.
Lung  JKS.,  dan  Destiani  DP.,  2017.  Uji antioksidan  vitamin  A  C  E  dengan metode  DPPH .  Suplemen  Volume 15 (1): 55-62.
Molyneux,  P.  2004.  The  use  of  the  stable  free radikal diphenyl picrylhydrazyl (DPPH)  for  estimating  antioxidant activity. Journal Science of Technology. 26(2): 211-219.
Mosquera,  O.  M.,  Corea, Y.  M.  &  Buitrago,  D. C., Nino J. (2007). Antioxidan Activity of Twenty Five Plants from Colombian Biodiversity, Mem Inst Oswaldo Cruz,
Vol 102 (5), 631-634. Rasyid A. 2009. Senyawa-senyawa Bioaktif dari Spons. Oseana. Hlm 25-32. Schlagel.G.H. 1993. General Microbiologi seventh eition. Cambrige University Press.
Tamat, S. R., Wikanta, T., Maulina, L. S., 2007, Aktivitas  Antioksidan  dan  Toksisitas Senyawa Bioaktif dari Ekstrak Rumput
Laut  Hijau  Ulva  reticulate  Forsskal, Jurnal  ilmu  Kefarmasian  Indonesia ,
5(2): 31-36. Widyastuti,  N.  2010.  Pengukuran  Aktivitas Antioksidan Dengan Metode CUPRAC,  DPPH  dan  FRAP  Serta Kolerasinya Dengan Fenol dan Flavonoid Pada Enam Tanaman.
[Skripsi].  FMIPA  Institut  Pertanian
Bogor, Bogor.
Winarsi,  Hery.  2007.  Antioksidan  Alami  dan Radikal Bebas. Yogyakarta : Kanisius; p. 11, 13, 15, 77-78, 137-138.