Rekayasa , 2022; 15(2): 151-156 ISSN: 0216-9495 (Print) ISSN: 2502-5325 (Online)

## Uji Toksisitas Ekstrak Daun Sirih (Piper betle) Terhadap Benih Ikan Kakap Putih
(Lates calcarifer)
Leni Mardiana 1 , Nunik Cokrowati 1* , Alis Mukhlis 1 , 1 Prodi Budidaya Perairan Jurusan Perikanan dan Ilmu Kelautan Fakultas Pertanian Universitas Mataram Jl. Majapahit No 62 Selaparang Kota Mataram 83115 Nusa Tenggara Barat
* nunik.cokrowati@unram.ac.id DOI: https://doi.org/10.21107/rekayasa.v15i2.10137

## ABSTRACT
White snapper (Lates calcarifer) is a type of seawater fish that is in great demand by the public. This study aims to determine the 48-hour LC50 value and the effect of using betel leaf extract on the health status of white snapper. This research was conducted in July 2020 which took place at the Sekotong Coastal Aquaculture Development Center (BPBPP), West Lombok Regency, West Nusa Tenggara. This research was conducted using experimental methods. This study used 5 treatments and three replications, to obtain 15 experimental units with doses of 0 ppm, 80 ppm, 90 ppm, 100 ppm and 200 ppm. Data analysis was performed using a linear regression test, namely probit analysis by testing the mortality of tested animals and calculated through statistical data using Microsoft Excel. The higher the betel leaf extract concentration, the higher the number of white snapper  seed  deaths.  This  happens  because  the  betel  leaf  extract  contains  active  antimicrobial  compounds,  but  at  high concentrations, it can poison the white snapper seeds. For further research, it is recommended to test the toxicity of betel leaf extract on the mortality of white snapper with variations in water quality.
Key words : marine aquaculture, white snapper, active compounds, mortality, water quality

## PENDAHULUAN
Ikan  Kakap  Putih  (Lates  calcarifer)  merupakan jenis ikan air laut yang banyak diminati masyarakat. Ikan  Kakap  Putih  mempunyai  daging  yang  halus dan  bernilai  jual  tinggi  yaitu  Rp.60.000- Rp.70.000/Kg. Baik didalam negeri maupun ekspor, permintaan  pasar  maupun  ekspor  untuk  ikan  ini cukup  tinggi  yaitu  98,86  ton/tahun.  Pesatnya perkembangan budidaya kakap putih lebih banyak disebabkan  oleh  akses  pasar  ekspor  yang  cukup luas, seperti Thailand, Eropa, Malaysia, dan Amerika (Hikmayani, 2013).
Faktor  atau  kendala  yang  dapat  menghambat keberhasilan  di  dalam  budidaya  ikan  laut  adalah penyakit  dan  parasit.  Pada  awalnya,  antibiotik sering  digunakan  dalam  pengendalian  penyakit pada  ikan.  Namun  hal  tersebut  mengakibatkan dampak negatif, yaitu menyebabkan bakteri bakteri di lingkungan menjadi resisten terhadap antibiotik. Selain  itu,  antibiotik  dapat  menimbulkan  residu pada  ikan  dan  akan  membahayakan  kesehatan
konsumen  apabila  dikonsumsi  (Alifuddin,  2002). Oleh
karena
itu dibutuhkan alternatif penanggulangan  penyakit  yang  efektif  dan  tidak menimbulkan  efek  negatif  bagi  petani  dan konsumen, serta ramah lingkungan (Wahjuningrum ,2010).
Penggunaan  bahan  alami  dapat  menjadi alternatif  yang  baik  untuk  menggantikan  peran antibiotik.  Bahan  alami  yang  potensial  sebagai pengganti antibiotik yaitu ekstrak daun sirih (Piper betle)  (Ferdinandus,  2019).  Menurut  Rahim  (2016), perendaman  benih  ikan  nila  yang  terinfeksi Trichodina  sp  menggunakan  larutan  daun  sirih dengan  dosis  berbeda  berpengaruh  sangat  nyata terhadap  sintasan  benih  ikan  nila.  Dosis  larutan daun sirih (Piper betle) terbaik untuk mengendalikan penyerangan  Trichodina  sp  yaitu  pada  dosis  4 gram/liter dengan sintasan benih ikan nila terbaik yang dihasilkan sebesar 66,67%. Selain itu, ekstrak daun sirih terbukti memiliki aktivitas antifungi, hal

## REKAYASA
Journal of Science and Technology https://journal.trunojoyo.ac.id/rekayasa
Article History: Received: August, 8 th 2021;  Accepted: July, 17 th 2022 Rekayasa ISSN: 2502-5325 has been Accredited by Ristekdikti (Arjuna)  Decree:  No.  23/E/KPT/2019  August  8th,  2019 effective until 2023
Cite this as: Mardiana, L., Cokrowati, L., Septianasari  & Mukhlis, A. (2022). Uji Toksisitas Daun Sirih (Piper betle) terhadap Benih Ikan Kakap Putih (Lates calcalifer). Rekayasa 15 (2). 151-156 pp. doi: https://doi.org/10.21107/rekayasa.v15i2.10137 © 2022 Mardiana
ini dapat dilihat dari penelitian yag telah dilakukan oleh  Kusdarwati  (2013)  bahwa  ekstrak  daun  sirih (Piper  betle  L)  mempunyai  aktivitas  dalam menghambat  dan  membunuh  pertumbuhan Saprolenia sp secara in vitro.
Daun  sirih  (Piper  betle)  secara  umum  telah dikenal masyarakat sebagai bahan obat tradisional. Seperti  halnya  dengan  antibiotika,  daun  sirih  juga mempunyai daya antibakteri. Kemampuan tersebut karena  adanya  berbagai  zat  yang  terkandung  di dalamnya.  Menurut  Warsito  (2015),  daun  sirih mengandung  4,2  %  minyak  atsiri  yang  sebagian besar  terdiri  dari  Chavicol  paraallyphenol  turunan dari
Chavica
betel. Isomer Euganol allypyrocatechine,  Cineol  methil  euganol  dan Caryophyllen, kavikol, kavibekol, estragol, terpinen. Daun sirih mengandung kavikol dan kavibetol yang merupakan  turunan  dari  fenol  yang  mempunyai daya  antibakteri  lima  kali  lipat  dari  fenol  biasa terhadap  Staphylococcus  aureus.  Adapun  tujuan dilakukan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui nilai  LC 50 48  jam  dan  pengaruh  yang  ditimbulkan oleh penggunaan ekstrak daun sirih terhadap status kesehatan ikan kakap putih.

## METODE PENELITIAN Bahan Penelitian dan Rancangan Percobaan
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juli 2020 bertempat  di  Balai  Pengembangan  Budidaya Perikanan  Pantai  (BPBPP)  Sekotong,  Kabupaten Lombok Barat, Nusa Tenggara Barat. Penelitian ini dilakukan dengan metode eksperimental menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  5  perlakuan  dan  3  kali  ulangan,  sehingga diperoleh 15 unit percobaan. Ikan kakap putih yang digunakan  yaitu  ikan  yang  berasal  dari  hasil budidaya  Balai  Budidaya  Laut  (BBL)  Sekotong dengan  jumlah  ikan  sebanyak  120  ekor  dengan ukuran 3-5 cm. Setiap wadah berisi 10 ekor benih. a. P1  :  Kontrol  (tanpa  penambahan  ekstrak  daun sirih)
b. P2  :  Penambahan  ekstrak  daun  sirih  dengan dosis 80 ppm
c. P3  :    Penambahan  ekstrak  daun  sirih  dengan dosis 90 ppm
d. P4  :  penambahan  ekstrak  daun  sirih  dengan dosis 100 ppm
e. P5  :  penambahan  ekstrak  daun  sirih  dengan dosis 200 ppm.
Konsentrasi  perlakuan  dari  pertama  sampai perlakuan  kelima  secara  berurut  yaitu  0  ppm,  80 ppm, 90 ppm, 100 ppm, dan 200 ppm. Ekstrak daun
sirih berbagai konsentrasi tersebut dimasukkan ke dalam masing-masing wadah yang telah disiapkan sebelumnya.
Volume larutan ekstrak yang dimasukkan sesuai dengan  volume  air  yang  dikeluarkan,  sehingga volume air tetap 10 L. Air pada wadah diaduk secara perlahan  bertujuan  agar  seluruh  larutan  ekstrak bercampur.  Parameter  kualitas  air  yang  diukur meliputi  pH,  salinitas,  oksigen  terlarut,  dan  suhu. Pengukuran  kualitas  air  dilakukan  setelah pemberian ekstrak daun sirih pada masing-masing wadah pemeliharaan.

## Ekstraksi Daun Sirih dan Uji Fitokimia
Pembuatan  ekstrak  daun  sirih  dimulai  dengan memilih daun yang tidak rusak, tidak ada ulatnya, tidak  berbecak  kuning.  Kemudian  dikeringkan sampai  benar-benar  kering,  setelah  itu  di  oven untuk memastikan daun benar-benar kering selama 2-3  jam  (Wahyuni,  2015).  Kemudian  dihaluskan dengan menggunakan blender dan diayak sampai menjadi  serbuk  dan  siap  digunakan.  Pembuatan ekstrak  daun  sirih  dilakukan  dengan  metode maserasi  menggunakan  etanol  96%  sebagai pelarut.  Serbuk  daun  sirih  selanjutnya  direndam menggunakan etanol 96% selama 3 x 24 jam hingga homogen.  Maserasi  bubuk  daun  sirih  disaring menggunakan kertas whatman No. 42. Filtrat yang diperoleh  kemudian  diuapkan  dengan  Rotary vacuum  evaporator  pada  suhu  ±  40°C  dengan kecepatan 120 rpm (Sumiati, 2014).
Uji  fitokimia  pada  ekstrak  daun  sirih  dilakukan menggunakan metode kualitatif dengan menambahkan  suatu  pereaksi  masing-masing senyawa yang akan diuji dengan melihat perubahan warna dan bentuk suatu cairan yang diujikan. Hal ini dilakukan  sesuai  dengan  penelitian  Kumalasari (2020).  Adapun  senyawa  yang  diujikan  antara  lain uji flavonoid, uji alkaloid, uji steroid, uji saponin, uji tanin dan uji fenolik.

## Analisis Data
Parameter yang diuji dalam penelitian ini adalah tingkat  toksisitas  ekstrak  daun  sirih  terhadap  ikan kakap  putih.  Uji  toksisitas  dilakukan  untuk mendapatkan data mortalitas dari konsentrasi yang diberikan.  Data  mortalitas  kemudian  akan digunakan  untuk  menentukan  LC 50 (Lethal Concentration 50%) dari ekstrak daun sirih terhadap ikan  kakap  putih.    Proses  analisis  data  yang digunakan  untuk  menentukan  nilai  LC 50 adalah Analisis Probit (Metode Hubbert). Analisis tersebut
merupakan  hubungan  nilai  logaritma  konsentrasi bahan  toksik  uji  dan  nilai  probit  dari  persentase mortalitas hewan uji yang merupakan fungsi linier Y = a + bx. Nilai LC50 diperoleh dari anti  log  m, di mana m adalah logaritma konsentrasi bahan toksik pada Y = 5, yaitu nilai Probit 50% hewan uji maka persamaan  regresi  menjadi  sebagai  berikut  :
𝑚 = 5 − a 𝑏
dengan  nilai  a  dan  b  diperoleh  berdasarkan persamaan sebagai berikut:
𝑏 = ∑XY− 1 n (∑X∑Y) ∑X 2 − 1 n (∑X) 2 a = 1 𝑛 ( ∑Y − b∑X )
Keterangan:
Y : Nilai Probit Mortalitas X : Logaritma konsentrasi bahan uji a : Konstanta b : Slope/kemiringan m : Nilai X pada Y = 5
n : Jumlah hewan uji per akuarium

## HASIL DAN PEMBAHASAN Mortalitas Ikan Kakap putih
Hasil  uji  toksisitas  ekstrak  daun  sirih  terhadap mortalitas ikan kakap putih disajikan pada Tabel 1. Pengamatan mortalitas ikan dilakukan selama 2 hari (48 jam) pada jam ke 0, 2, 4, 18, 24 dan 48 setelah ikan  ditebar.  Berdasarkan  pengamatan  tersebut diketahui  bahwa  selama  penelitian  hewan  uji memperlihatkan  bahwa  tidak  ada  perubahan tingkah  laku  pada  semua  perlakuan  hingga  pada menit  ke  4.  Namun  demikian  perubahan  tingkah laku seperti pergerakan beberapa ikan sudah tidak lincah dan bergerak di dasar air mulai diperlihatkan oleh hewan uji pada perlakuan 3 dan 4.
Kematian hewan uji tercepat mulai terlihat pada perlakuan  4  dan  meningkat  jumlahnya  dengan pertambahan waktu percobaan. Pada menit ke 18 sampai  menit  ke  48  ditemukan  ikan  mati  secara berturut-turut disemua perlakuan. Persentase total mortalitas  benih  ikan  kakap  putih  yang  tidak diberikan  ekstrak  daun  sirih  (kontrol)  adalah  3%, pada  konsentrasi  80  ppm,  90  ppm,  100  ppm  dan 200 ppm masing-masing memiliki persentase total kematian sebesar 10%, 17%, 53% dan 97%. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun sirih, maka jumlah kematian  benih  ikan  kakap  putih  pun  semakin banyak.  Hal  ini  terjadi  karena  ekstrak  daun  sirih mengandung  senyawa  aktif  antimikroba  yaitu
flavonoid,  alkaloid,  steroid/terpenoid,  tannin  dan fenolik.  Namun  jika  pada  konsentrasi  yang  tinggi dapat  meracuni  benih  ikan  kakap  putih.  Menurut Warsito,  senyawa  alkaloid  dan  fenolik  dapat menyebabkan  kematian  pada  ikan  dan  daun  sirih mengandung  senyawa  tersebut.  Hal  ini  diperkuat oleh pernyataan  Dewilda (2012) yang menyatakan bahwa  fenol  merupakan  senyawa  yang  dapat menimbulkan  bau  tidak  sedap,  bersifat  racun  dan korosif  terhadap  kulit  (iritasi),  menyebabkan gangguan  kesehatan  manusia  dan  kematian  pada organisme  yang  terdapat  pada  air  dengan  nilai konsentrasi  tertentu.  Cania  (2013)  menyatakan senyawa lain yang terkandung dalam ekstrak daun sirih yaitu alkalod, alkaloid berupa garam sehingga mampu  mendegradasi  membran  sel  untuk  masuk ke  dalam  dan  merusak  sel.  Hal  ini  dapat mengakibatkan  terjadinya  perubahan  warna  pada tubuh larva menjadi lebih transparan dan gerakan tubuh  larva  yang  melambat  bila  dirangsang sentuhan serta selalu membengkokkan badan. Tabel 1. Mortalitas Kakap Putih
Kon sent rasi (pp m) Ulanga n Jumlah Mortalitas Ikan (Ekor) Persentase Mortalitas (%) 4 jam 18 jam 24 Jam 48 jam
0 A 0 0 0 0 0 B 0 0 0 0 0 C 0 0 1 0 10 80 A 0 1 0 1 20 B 0 1 0 0 10 C 0 0 0 0 0 90 A 0 0 1 0 10 B 0 2 1 0 30 C 0 1 0 0 10
100 A 0 1 2 2 50 B 0 2 1 4 70 C 0 1 1 2 40
200 A 0 3 4 3
100
B 2 2 3 3 100 C 0 2 3 4 90

## Analisis Probit
Hasil  analisa  probit  sebagaimana  grafik  pada Gambar  1.  Berdasarkan  grafik  analisa  probit  dan perhitungan nilai LC 50 didapatkan persamaan linier Y = 1,081x + 2,806 dengan nilai x sebesar 2,02 dan nilai  R 2 sebesar  0,4604.  Sehingga  diketahui  bahwa nilai  konsentrasi  ekstrak  daun  sirih  yang  dapat membunuh 50% hewan uji adalah antilog 2,02 yaitu 107,01  ppm  dengan  nilai  korelasi  sebesar  0,4604. Maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun sirih
bersifat toksik karena ekstrak daun sirih mempunyai nilai LC 50 < 1000 ppm yakni 107,01. Hal ini diperkuat oleh pernyataan Rizqillah (2013) yang menyatakan bahwa  ekstrak dikatakan bersifat toksik jika  harga LC 50 < 1000 ppm, sedangkan untuk senyawa murni jika LC 50 < 200 ppm berpotensi sebagai anti kanker. Sedangkan  menurut  Tyas  (2016)  nilai  LC 50 yang berkisar  antara  10-100  ppm  maka  daya  racun tersebut  digolongkan  dalam  daya  racun  yang sedang,  sehingga  dalam  penelitian  ini  dapat dikatakan bahwa toksisitas pada ekstrak daun sirih termasuk dalam kategori racun yang sedang.
Gambar 1. Analisis Probit dan LC 50
Senyawa  flavonoid  dan  tanin  yang  terkandung dalam  ekstrak  daun  sirih.  Turunan  dari  flavonoid yaitu  rotenon,  mempunyai  sifat  larvasida,  seperti yang  disampaikan  oleh  Aulung  (2010),  rotenon merupakan  insektisida  alami  yang  merupakan turunan  flavonoid,  selain  sebagai  insektisida rotenon juga merupakan racun bagi ikan. Rotenon bekerja  sebagai  racun  pernapasan.  Menurut Kaihena (2011) tanin juga dapat menghambat kerja enzim  dan  penghilangan  substrat  (protein).  Tanin dapat  berikatan  dengan  lipid  dan  protein  dan diduga  mengikat  enzim  protease  yang  berperan dalam  mengkatalis  protein  menjadi  asam  amino yang  diperlukan  untuk  pertumbuhan  larva. Terikatnya  enzim  oleh  tanin,  maka  menyebabkan kerja  dari  enzim  tersebut  menjadi  terhambat, sehingga proses metabolisme sel dapat terganggu dan  larva  akan  kekurangan  nutrisi.  Akibatnya pertumbuhan  larva  menjadi  terhambat  dan  jika proses ini berlangsung terus akan berdampak pada kematian larva.

## Kualitas Air
Kualitas  air  merupakan  faktor  pendukung pertumbuhan dan kelulusan hidup benih ikan kakap putih.  Parameter  kualitas  air  media  pemeliharaan
benih  ikan  kakap  putih  selama  pemeliharaan disajikan pada Tabel 2. Parameter kualitas air yang diamati  selama  penelitian  meliputi  suhu,  pH, salinitas,  dan  oksigen  terlarut.  Semua  parameter yang diamati berada pada kisaran yang normal dan sesuai  dengan  kebutuhan  benih  ikan  kakap  putih. Diketahui nilai suhu pada setiap perlakuan berkisar antara  29-31 0 C,  hal  ini  menunjukkan  suhu  yang optimum  untuk  kelangsungan  hidup  benih  ikan kakap putih.
Tabel 2. Kualitas Air Media Pemeliharaan Benih Ikan Kakap Putih
Menurut  Agustono  (2009)  kisaran  suhu  yang diperlukan  untuk  ikan-ikan  budidaya  di  daerah tropis berkisar antara 27 - 32 0 C, karena pada suhu tersebut  beberapa  jenis  ikan  termasuk  ikan  kakap putih  dapat  melakukan  proses  pencernaan makanan dengan baik, sehingga diikuti pertumbuhan  dan  kelangsungan  hidup  yang  baik pula  serta  suhu  air  juga  dapat  mempengaruhi kelarutan  oksigen  di  dalam  perairan  dan berpengaruh  terhadap  proses  kimia  dan  biologi perairan.  Nilai  pH  yang  didapatkan  selama pemeliharaan  benih  ikan  kakap  putih  adalah  7,6 dimana nilai ini menunjukkan nilai pH yang normal untuk pertumbuhan dan kelangsungan hidup benih ikan  kakap  putih.  Nilai  Salinitas  yang  diperoleh adalah  31  ppt,  nilai  salinitas  selama  penelitian  ini masih dalam keadaan normal untuk pertumbuhan dan tingkat kelangsungan hidup benih ikan kakap putih.
Hal  tersebut  sesuai  dengan  pernyataan  Rayes (2013) bahwa ikan kakap putih dapat dipelihara dan bertahan  hidup  pada  salinitas  perairan  yang  laus, akan  tetapi  biasanya  setelah  menjadi  benih  ikan kakap putih akan berkembang dan tumbuh dengan baik  pada  kisaran  salinitas  30-32  ppt.  Selama pemeliharaan nilai oksigen terlarut yang didapatkan berkisar  antara  5,1-5,3  ppm,  dimana  nilai  oksigen
Parameter Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5 Suhu ( 0 C) 29 29 29-31 29 29 pH 7,6 7,6 7,6 7,6 7,6 Salinitas (ppt) 31 31 31 31 31 DO (ppm) 5,2 5,2-5,3 5,2-5,3 5,2 5,2
terlarut ini dapat dikatakan menunjukkan nilai yang optimum  untuk  pertumbuhan  dan  kelangsungan hidup benih  ikan kakap  putih. Hal tersebut  sesuai dengan  pernyataan  WWF  Indonesia  (2015)  yang menyatakan  bahwa  kisaran  oksigen  terlarut optimum  untuk  pertumbuhan  benih  ikan  kakap putih yaitu lebih dari 4 ppm.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  nilai  LC 50 ekstrak daun sirih yang diberikan pada ikan kakap putih  adalah  107,01  ppm.  Hal  ini  menunjukkan bahwa ekstrak daun sirih bersifat toksik dan karena ekstrak  daun  sirih  mempunyai  nilai  LC 50 <  1000 ppm.  Namun  toksisitas  pada  ekstrak  daun  sirih termasuk dalam kategori racun yang sedang karena masih  berkisar  antara  10-100.  Semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  daun  sirih,  maka  jumlah kematian  benih  ikan  kakap  putih  pun  semakin banyak.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustono, Widiana, P. S., Yudi, C. (2009). Pemberian Pakan  dengan  Energi  yang  Berbeda  Terhadap Pertumbuhan  Ikan  Kerapu  Tikus  (Cromileptes altivelis). Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan.
Vol.1 (2). DOI: http://dx.doi.org/10.20473/jipk.v1i2.116
81
Aulung,  A  &  Christiani,  C.  (2010).  Daya  Larvisida Ekstrak  Daun  Sirih  (Piper  betle  L)  terhadap Mortalitas  Larva  Aedes  aegypti  L.  Majalah
Kedokteran. Vol,27 (1). DOI: http://ejournal.uki.ac.id/index.php/mk/article/vi ew/1676/1321
Alifuddin, M. (2002).  Imunostimulasi Pada Hewan Akuatik.  Jurnal  Akuakultur  Indonesia.  Vol.1  (2) :87-92.DOI::
http://journal.ipb.ac.id/index.php/jai
Cania, E & Endah, S. (2013). Uji Efektivitas Larvasida Ekstrak Daun legundi (Vitex trifolia)      Terhadap Larva Aedes aegypti. Medical journal. Vol.2 (4).
Dewilda,  Y.,  Reri,  A  &  Fano,  F.I.  (2012).  Degradasi Senyawa  Fenol  Oleh  Mikroorganisme  Laut. Jurnal Teknik Lingkungan. Vol.9 (1) :59-73. DOI: http://lingkungan.ft.unand.ac.id/images/fileTL/ Dampak9-1/7-YMD.pdf
Ferdinandus, A. B. (2019). Penggunaan Ekstrak Daun Sirih (Piper betle L.) Untuk Pengobatan Ikan Lele Dumbo  (Clarias  gariepinus)  Yang  Diinfeksi Bakteri Aeromonas hydrophila. Skripsi: Program Studi  Budidaya  Perairan,  Jurusan  Perikanan,
Fakultas Pertanian, Universitas Sriwijaya.Palembang. DOI: https://repository.unsri.ac.id/11957/
Hikmayani, Y.,  Deswati, R.H &  Nasution, Z.  (2013). Evaluasi dan Strategi Peningkatan Keberhasilan Pelaksanaan  Program  Pengembangan  Usaha Mina Pedesaan Perikanan Budidaya (PUMP PB):
Pendekatan Analisis Prospektif. Jurnal Kebijakan Sosek KP. Vol.3 (1):47-65. DOI: http://dx.doi.org/10.15578/jksekp.v3i1.232
Kaihena, M., Vika, L & Maria, N. (2011). Efektivitas Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih  (Piper  betle  L.) Terhadap Mortalitas Larva Nyamuk Anopheles sp dan  Culex.  Jurnal  Kedokteran  dan  Kesehatan Program  Studi  Pendidikan  Dokter  Universitas Pattimura.
Kumalasari, M. L. F & Funsu, A. (2020). Uji Fitokimia Ekstrak  Etanol  Daun  kemangi  (Ocimum basilicum  L).  Indonesian  Journal  for  Health Sciences. Vol.4 (1) :39-44. DOI: http://journal.umpo.ac.id/index.php/IJHS/article /view/2279/1309
Rayes, R.D., Wayan, S., Nanda D & Apri, I.S. (2012). Pengaruh  Perubahan  Salinitas  Terhadap Pertumbuhan  Dan  Sintasan  Ikan  Kakap  Putih (Lates calcarifer, Bloch). Jurnal Kelautan, 6(1), 47- 56. DOI: https://doi.org/10.21107/jk.v6i1.832
Rizkillah,  N. ( 2013).  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  n- Heksan Daun Garcinia benthami Pierre Terhadap Larva  Artemia  salina  Leach  Dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT).  Skripsi: Program  Studi  pendidikan  Dokter,  Fakultas Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan,  Universitas Islam  Negeri  Syarif  Hidayatullah.  Jakarta. DOI: http://repository.uinjkt.ac.id/dspace/bitstream/ 123456789/26401/1/Nur%20Rizqillah-FKIK.pdf
Sumiati,  E.  (2014).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Kloroform  dan  Ekstrak  Etanol  Biji  Bidara  Laut (Strychnos
ligustrina BI) Terhadap
Staphylococcus  aureus  ATCC  25923  Dan Salmonella thypi. Jurnal Ilmiah Biologi. Vol.2 (1) :1-10. DOI: https://doi.org/10.24252/bio.v2i1.461
Tyas, N. M., Djamar, T. F. L. B & Ridwan, A. (2016). Uji  Toksisitas  Letal  Cr 6+ Terhadap  Ikan  Nila (Oreochromis  niloticus).  Jurnal  Ilmu  Pertanian Indonesia. Vol.21 (2) :128-132. DOI:
10.18343/jipi.21.2.128
Wahjuningrum,  D.,  Solikhah,  E.H.,  Budiardi,  T  & Setiawati,  M.  (2010).  Pengendalian  Infeksi Aeromonas  hydrophila  Pada  Ikan  Lele  Dumbo (Clarias  sp.)  dengan  Campuran  Meniran (Phyllanthus  niruri)    dan  Bawang  Putih  (Allium sativum)  dalam  Pakan.  Jurnal  Akuakultur Indonesia. Vol.9 (2) :93-103.
Wahyuni, D &  Loren, I. (2015). Perbedaan Toksisitas Ekstrak Daun Sirih (Piper betle L.) dengan Ekstrak
Biji  Srikaya  (Annona  squamosa  L.)  Terhadap Larva Nyamuk Aedes aegypti L. Jurnal Saintifika.
Vol.17 (1) :38-48. DOI: http://jurnal.unej.ac.id/index.php/STF
Warsito,  R . (2015).Uji  Toksisitas  Ekstrak  Daun Kamboja  (Plumiera  rubra  L.)  Pada  Ikan  Nila (Oreochromis  niloticus).  Skripsi:  Program  Studi
Manajemen  Sumberdaya  Perairan,  Fakultas Pertanian, Universitas Sumatera Utara. Sumatera.DOI: http://repository.usu.ac.id/handle/123456789/5
0204 .
WWF Indonesia. 2015. Budidaya Ikan Kakap Putih. WWF-Indonesia .Jakarta