## Identifikasi Ibuprofen, Ketoprofen dan Diklofenak Menggunakan Test Strip Berbasis Reagen Spesifik yang Diimobilisasi pada Membran Nata De Coco
Identification of Ibuprofen, Ketoprofen and Diclofenac by Using Test Strip Based on Imobilized Spesific Reagent on Nata De Coco Membrane
Karisma Wulan Ningtyas, Zulfikar *) , Bambang Piluharto Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Jember *) Email: Ahmad63.zulfikar@gmail.com

## ABSTRACT
Identification of ibuprofen, ketoprofen and diclofenac can be done by using simple method, it is called test strips. Test strip is made by immobilized  specific reagents  with entrapment technical on membrane matrix, which the used    membrane  nata  de  coco.  Immobilization  reagents  with  entrapment  techniques  aimed  to  trap  reagent molecules in the space between the supporting material.The success of this imobilization can be seen from membran changing color after additional reagent and there is no leeching after additional sample on membrane. The used reagent for this identification is methyl red for ibuprofen and ketorpofen, copper acetate for ibuprofen, potassium iodide for ketorofen and mandelin for diclofenac. From the testing result can be seen that potassium iodide is the most specific reagent compare with the other three other reagents. By using test strip arranged with the strip made by this imobilization, test srtrip can be used to differentiate the three other standard samples.
Keywords : entrapment, nata de coco membrane, reagent spesific, test strip

## PENDAHULUAN
Non  Steroidal  Anti-Inflamantory  Drugs (NSAID) atau sering disebut dengan analgetik- antipiretika merupakan obat yang bekerja pada perifer dan sentral sistem saraf pusat. Obat ini digunakan  mengurangi  rasa  sakit  yang  ringan sampai moderat (analgesik), untuk menurunkan suhu  badan  pada  keadaan  panas  badan  yang tinggi  (antipiretik)  dan  sebagai  anti  radang untuk  pengobatan  rematik  (antiradang  atau antiinflamasi) (Siswandono  & Soekardjo, 1998).  Beberapa  obat  yang  tergolong  dalam NSAID  dan  memiliki  aktifitas  analgesik, antipiretik, antiinflamasi  adalah  Ibuprofen, ketoprofen dan diklofenak.
Ibuprofen    merupakan  suatu  zat  berupa serbuk  putih  yang  agak  larut  dalam  air  (<1 mg/mL) dan segera larut dalam pelarut organik seperti  etanol,  metanol  aseton  dan  kloroform, serta sukar larut dalam etil asetat (Ditjen POM, 1995).  Ibuprofen  memiliki  rumus  molekul C 13 H 18 O 2 dengan  berat  molekul  206,28  dan memiliki titik leleh 75°C serta pKa sebesar 5,2 (Remington, 2005) Ketoprofen    memiliki  rumus  molekul C 16 H 14 O 3 dengan  berat  molekul  254,28  dan titik leleh 95°C, berwarna putih, tidak berbau, berbentuk kristal dan termasuk dalam bubuk
yang  tidak  mudah  menguap  dan  sedikit  larut dalam  air  tapi  mudah  larut  dalam  alkohol, kloroform, aseton atau eter (Remington, 2005). Natrium diklofenak atau 2-[(2,6- dichlorophenil)amino] memiliki rumus molekul  C 14 H 10 Cl 2 NNaO 2 dengan  berat molekul 318,13. Ciri fisiknya adalah berwarna putih,  memiliki  titik  lebur  284°C,  pKa  4. Natrium diklofenak larut dalam air dan pelarut organik lainnya seperti metanol dan etanol tapi tidak  larut  dalam  eter (Remington, 2005). Struktur dari ketiga obat ini dapat dilihat pada Gambar 1.
Analisis  ibuprofen,  ketoprofen  dan diklofenak  dapat  menggunakan  spektrometri UV-Vis,  untuk ibuprofen  pelarut  yang digunakan  untuk  identifikasi  adalah  NaOH 0,1N  dan    didapatkan  λ max =  264  nm  dan  273 nm (Siswandono  &  B.  Soekardjo, 1998) Analisis  ketoprofen  menggunakan  pelarut metanol  P  75%,  dan  didapatkan  λ max =  258 (Siswandono  &  B.  Soekardjo, 1998), sedangkan  diklofenak  yang  menggunakan pelarut metanol P 75%, dan didapatkan λ max = 264  nm (Siswandono  &  B.  Soekardjo, 1998). Identikasi  ketiga  obat,  selain  menggunakan spektrometri UV-Vis, juga dapat menggunakan metode yang lebih sederhana, yaitu test strip .
Gambar  1.  Struktur ibuprofen, ketoprofen  dan  Na diklofenak Test  strip merupakan  suatu  alat  analisis sederhana  yang  mudah  digunakan  untuk mendeteksi  sampel  berdasarkan  prinsip color spot  test .  Cara  penggunaannya  adalah  dengan meneteskan  sampel  pada  membran  atau mencelupkan membran pada sampel. Pengidentifikasian  ditunjukkan  oleh  adanya perubahan  warna  yang  terjadi  akibat  reagen yang  diimobilisasi  pada  membran  bereaksi secara spesifik dengan sampel. Pada  penelitian  ini  membran  yang digunakan adalah nata de coco pemilihan nata sebagai matriks dikarenakan proses pembuatannya  yang  mudah,  murah,  memiliki kemurnian  yang  tinggi,  derajat  kristalinitas yang  tinggi,  berkerapatan  antara  300-900 kg.m 3 , bersifat elastis, kekuatan tarik tinggi dan biodegradasi (Kristyonowich.  &  Bielecki, 2001).  Sedangkan  reagen  spesifik  yang digunakan adalah metil merah untuk ibuprofen dan  ketoprofen, reagen  tembaga  asetat  untuk ibuprofen (Trinchero  A,  et al.  2004), reagen Kalium  Iodida  untuk  ketoprofen, reagen mandelin diklofenak (Clark, 2010).
Proses  imobilisasi  reagen  pada  membran nata de coco menggunakan teknik entrapment . Entrapment atau pemerangkapan adalah teknik imobilisasi  yang  bertujuan  memerangkap molekul reagen di dalam ruang antara material pendukung.  Dalam  teknik  ini  reagen dicampurkan dengan sebuah larutan monomer, yang  kemudian  mengalami  polimerisasi  untuk membentuk membran baik berupa gel maupun lapisan  tipis  film,  sehingga  reagen  dapat terperangkap  di  dalamnya (Kuswandi, 2008). Pembentukan  gel  akan  terjadi  baik  dengan perubahan suhu atau dengan penambahan suatu zat  kimia  mengiinduksi  gel (Smith, 1990). Namun    kelemahan  utama  dari  teknik  ini adalah  hilangnya  reagen  secara  terus  menerus melalui pori (Smith, J.E. 1990).

## METODE
ALAT PENELITIAN DAN BAHAN gelas  kimia,  pipet  tetes,  pipet  mohr,  labu  ukur, spatula,  pengaduk,  plat tetes, ball  pipet , spektrofotometri  reflektan  vernier,  pompa  vakum- corong  Buchner,  neraca  analitis  OHAUS  AP310-0, kamera digital 14,1 mp sony, blender , nata de coco hasil  produksi  SMK  Negeri  1  Sukorambi,  etanol, NaOH 2%, Indikator pp, ammonium vanadat, asam sulfat,  tembaga  (II)  asetat,  asam  asetat  glasial, kalium  iodida,  metil  merah,  sampel  standart (ibuprofen, ketoprofen, diklofenak)
Prosedur Penelitian a. Pembuatan reagen Reagen  metil  merah  dibuat  dengan  cara melarutkan 0,0125 g metil merah dalam 200 mL aquades. Reagen  Kalium  Iodida  dibuat  dengan cara 249 g kalium iodida dilarutkan dengan 100 mL  aquades.  Reagen tembaga  (II) asetat  dibuat dengan cara dilarutkan 8,25 g tembaga (II) asetat dan  5  mL  asam  asetat  glasial    dalam  aquades kemudian diencerkan hingga volume larutan 500 mL.  Reagen  mandelin  dibuat  dengan  cara melarutkan  1  g  amonium  metavanadat (NH 4 VO 3 )  dalam  100  mL  asam  sulfat  (H 2 SO 4 ) 5M. b. Pembuatan sampel standar Obat  ibuprofen,  ketoprofen  dan  diklofenak, dilarutkan  dengan  pelarut  etanol,  sehingga konsentrasi sampel standar menjadi 5 mg/mL.
c. Uji kelayakan reagen Reagen  diteteskan  pada  plat  tetes,  kemudian ditambahkan  dengan  sampel  standar dan dilihat perubahan warnanya
d. Pemurnian nata de coco
Nata de coco dicuci dengan air mengalir selama 24  jam,  kemudian  direndam  menggunakan larutan NaOH 2% selama kurang lebih satu hari pada  suhu  kamar.  Selanjutnya  dicuci  kembali dengan  aquades  sampai  pH  netral.  Dipotong kecil dan diblender sampai halus.
e. Imobilisasi reagen pada membran Imobilisasi  dilakukan  dengan  cara entrapment . Nata  de  coco  hasil  pemurnian  diambil  5  g  dan ditambahkan  reagen.  Diaduk  hingga  homogen, selanjutnya  dicetak  dengan  corong  buchner sampai dihasilkan membran.
f. Uji kualitatif sampel standart menggunakan test strip. Membran  dengan  komosisi  optimum  digunakan untuk  identifikasi  sampel.  Eksperimen  diawali dengan  mengambil  sampel  standart  (ibuprofen, ketoprofen  dan  diklofenak)  0,05  mL  kemudian diteteskan pada test strip . Selanjutnya dilakukan pencatatan data.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
UJI  KELAYAKAN  REAGEN ( COLOR SPOT TEST )
Uji  kelayakan  reagen  merupakan  langkah pertama  yang  harus  dilakukan  untuk mendapatkan  reagen  yang  layak  diimobilisasi pada nata de coco. Hasil uji kelayakan reagen didapatkan  dari  hasil  perubahan  warna  yang kasat  mata  dari  reaksi  antara  sampel  dengan reagen. Sampel yang digunaka untuk penelitian ini  adalah  ibuprofen,  ketoprofen,  dan diklofenak  yang  dilarutkan  dalam  pelarut etanol.  Sampel  standar  dibuat    dengan konsentrasi  5  mg/  mL  kemudian  diteteskan pada reagen dan dilihat perubahan warna yang terjadi.  Perubahan  warna  dari  reagen  setelah ditambahkan dengan sampel dapat dilihat pada Gambar.2
Gambar 2. Hasil Uji Kelayakan Reagen
Dari  gambar  pada  reagen  metil  merah terlihat  perubahan  warna  dari  kuning  menjadi merah  pada  sampel  ibuprofen  dan  ketoprofen. Warna  merah  dari  kedua  sampel  ini    pun berbeda,  warna  merah  ketoprofen  lebih  pekat dibandingkan  dengan  ibuprofen. Sedangkan pada diklofenak tidak terjadi perubahan warna. Perubahan  warna  pada  ketiga  sampel  standar ini  pengaruhi  oleh  pH  sampel  standar.  Metil merah  memiliki  range  pH  4,2 – 6,2 (Underwood & Day, 1999), pada kondisi awal metil merah berada pada warna kuning, namun dengan  semakin  naiknya  pH  sampel  terjadi penambahan H+ pada struktur metil merah dan mengakibatkan  adanya  delokalisasi  muatan. Adanya delokalisasi inilah yang mengakibatkan  metil  merah    berubah  semakin merah  dengan  naiknya    pH.  Sehingga  dapat dikatakan  pH  ketoprofen  lebih  asam dibandingkan  dengan  ibuprofen,  sedangkan diklofenak tidak masuk dalam range pH.
Reagen  tembaga  asetat  dari  Gambar.  2, terlihat hanya dapat mendeteksi ibuprofen, bila dilihat  dari  perubahan  warnanya.  Pada  saat sampel  diteteskan  pada  reagen,  warnanya berubah  menjadi  lebih  pekat.  Hal  ini dikarenakann  kemampuan  dari  reagen  yang membentuk  kompleks  berwarna  biru  pekat dengan gugus karboksilat dari ibuprofen (Tita, et al .  2013), seperti pada Gambar 3. Reagen kalium iodida spesifik untuk sampel ketoprofen,  sampel  ketoprofen  hal  ini  dapat dilihat  pada  Gambar  2,  saat  sampel  standar ditambahkan  pada  reagen  kalium  iodida  (KI) terlihat  hanya  pada  sampel  ketoprofen    yang berubah warna menjadi kuning. Warna kuning ini  terbentuk    karena  adanya  I 2 pada  akhir reaksi.  Ketoprofen  bereaksi  dengan  KI membentuk  HI.  HI  inilah  yang  kemudian teroksidasi  menjadi  I 2 (kuning).    Sedangkan reagen  mandelin dapat  mendeteksi diklofenak, hal  ini  dapat  dilihat  dari  perubahan  warna reagen  yang  semula  kuning  setelah penambahan  diklofenak  berubah  warna menjadi  coklat.  Perubahan  warna  ini  terjadi karena  adanya  reaksi  reduksi    vanadium  dari VO 2 + menjdi V 2 + .
Gambar 3. Kompleks ibuprofen dengan Cu 2 +

## IMOBILISASI REAGEN
Imobilisasi reagen pada membran nata de coco dilakukan  dengan  teknik entrapment ,  yaitu salah  satu  teknik  imobilisasi  dimana  molekul reagen  terperangkap  pada  lapisan  struktur membran.  Teknik  ini  berhasil  bila  terjadi perubahan warna pada membran sesuai dengan reagen  yang  ditambahkan  dan  tidak  terjadi leeching setelah  penambahan  sampel.  Hasil dari imobilisasi reagen pada membran  nata de coco dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4. Perubahan  warna  membran  setelah proses  entrapment  a)  nata  tanpa  reagen,
b).  Nata  +  metil  merah,  c).  Nata  + tembaga asetat, d) Nata + Kalium Iodida, e). Nata + Mandelin Dari  Gambar  4  terlihat  adanya  perubahan warna  pada  membran  nata  de  coco  yang berwarna  putih,  menjadi  kuning  setelah penambahan  metil  merah,  hijau  muda  pada tembaga  asetat,  tidak  berwarna  setelah penambahan kalium iodida, dan kuning setelah penambahan  mandelin.  Perubahan  warna  pada nata  sesuai  dengan  warna  reagen  inilah  yang membuktikan adanya reagen yang terikat pada membran.  Reagen  yang  sudah  ter- entrapment pada membran (Gambar 5) kemudian diujikan pada  sampel  dan  dilihat  hasilnya,  perubahan warna membran sesuai dengan spot test .  Pada Gambar 5 terlihat membran tembaga asetat (A) setelah  penambahan  sampel  berubah  warna menjadi  biru  (B).  Warna  biru  pada  membran bertahan  lama  dan  tidak  mudah  menghilang ( leeching ).    Adanya  perubahan  warna  sesuai dengan color  spot  test dan  tidak  terjadi leeching inilah yang menandakan keberhasilan dari proses imobilisasi reagen dalam membran.
Gambar 5. Perubahan  warna  membran  tembaga asetat setelah ditetesi sampel (ibuprofen)
Selain  dapat  dilihat  secara  visual keberhasilan imobilisasi reagen pada membran nata  de  coco  ini  dapat  dilihat  dari  hasil pengukuran  intensitas  membran  menggunakan reflaktan.  Salah  satu  contoh  pengukuran  nilai intensitas  membran  dapat  dilihat  pada pengukuran  intensitas  tembaga  asetat  pada
Gambar 6.
Gambar 6. Hasil pengukuran intensitas membran
menggunakan reflaktan
Nilai  intensitas  pada  reflaktan  bergantung pada  warna  membran  dengan  prinsip  gelap- terang.  Bila  suatu  membran  permukaannya warnanya  terang  (berwarna  putih)  maka semakin banyak cahaya yang dipantulkan pada bidang  sehingga  nilai  intensitas  yang  didapat juga semakin besar, hal ini berbanding terbalik bila  membran  berwarna,  adanya  warna  pada permukaan  membran  mengakibatkan  semakin sedikitnya  cahaya  yang  dipantulkan  dan semakin  banyak  cahaya  yang  diserap  oleh permukaan,  akibatnya  nilai  intensitas yang terbaca  semakin  kecil.  Hal  ini  juga  yang membuktikan  nilai  intensitas  dari  reflaktan berbanding  terbalik  dengan  nilai  absorbansi. Perbandingan  antara  nilai  intensitas  reflaktan dengan  absorbansi  dapat  dilihat  pada  Gambar 7.
Gambar 7. Grafik perbandingan  intensitas  dan absorbansi membran metil merah dengan sampel ibuprofen
Pada  Gambar  6  dapat  dilihat,  membran nata  de  coco  tanpa  penambahan  reagen (berwarna  putih),  nilai  intensitasnya  tinggi namun setelah penambahan reagen dan sampel terjadi  penurunan  nilai  intensitas,  hal  ini membuktikan  adanya  penambahan  reagen  dan sampel  standar  mengakibatkan  cahaya  yang mengenai  permukaan  membran  lebih  banyak yang  teradsorpsi  dibandingkan  dengan  yang dipantulkan  sehingga  intensitas  yang  dibaca oleh reflaktan menjadi kecil.
UJI  KUALITATIF  SAMPLE  STANDART MENGGUNAKAN TEST STRIP
Uji kualitatif sampel standar menggunakan test strip dilakukan dengan cara prototype test strip ditetesi dengan sampel  standar, dimana urutan dari  stripnya  adalah      metil  merah,  tembaga asetat, kalium iodida, mandelin (Gambar 8)
Gambar 8. Prototype Test Strip
Hasil  visual  antara  sampel  dengan  prototype test strip dapat dilihat pada Gambar 9
Gambar 9. Hasil reaksi  membran  dengan  sampel standar dan contoh prototype test strip
Gambar  9 terlihat  warna  membran  sama dengan hasil color spot test , dan setelah dibuat prototype ,  terlihatkan  adanya  perbedaan  hasil test  strip pada  ketiga  sampel,  hal  ini membuktikan  bahwa  reagen  metil  merah, tembaga  asetat,  kalium  iodida  dan  mandelin dapat  digunakan  suntuk  membedakan  ketiga sampel  standar,  yaitu  ibuprofen,  ketoprofen dan diklofenak.

## Uji Zat Pengganggu
Pengujian  zat  pengganggu merupakan pengujian  yang  digunakan  untuk  menguji kualitas  warna  reagen  pada  membran  dalam test  strip  sehingga  dapat  diketahui  pola perubahan  warna  yang  terjadi  pada test  strip . Pengujian  ini  melihat  kemungkinan  gangguan warna  pada  membran  setelah  penambahan  zat pengganggu.  Jika  ada  perubahan  warna  yang muncul pada test strip mengindikasikan terjadi gangguan pada test strip oleh zat pengganggu.
Pengujian  ini  dilakukan  dengan  cara  sampel (zat penggagu) diteteskan pada test strip sesuai dengan langkah penetesan sampel pada sampel standar, kemudian diamati perubahan warnanya,  pada  membran  nomor  berapa  yang terganggu  dengan  adanya  sampel  ini  (Gambar 8). Zat pengganggu yang diujikan adalah asam mefenamat,  parasetamol,  aspirin,  fenilbutazon dan piroxicam Gambar 10. Hasil uji zat pengganggu
Dari  hasil  pengujian  didapatkan  hasil fenilbutazon  mengganggu  membran  nomor  1 (metil  merah), piroxicam  mengganggu  pada membran  nomor  2  (tembaga  asetat),  asam mefenamat  mengganggu  membran  nomor 1, 2 dan  4  (mandelin),  parasetamol  tidak  menjadi zat  pengganggu,  dan  aspirin  mengganggau membran nomor 1 dan 2

## KESIMPULAN
Imobilisasi  reagen-reagen  spesifik  untuk identifikasi ibuprofen, ketoprofen dan diklofenak  telah  berhasil  dilakukan  pada membran nata de coco. Hasil uji menunjukkan bahwa  kalium  iodida  merupakan  reagen  yang paling  spesifik  dibandingkan  dengan  ketiga reagen yang lainnya dengan menggunakan test strip yang tersusun dari strip yang terbuat dari membran  yang  terimobilasi,  test  strip  dapat digunakan  untuk  membedakan  ketiga  sampel standar.

## DAFTAR PUSTAKA
Siswandono dan B.  Soekardjo. 1998. Kimia Medisinal 2 . Surabaya: Airlangga University Press. Remington. 2005. The Science and Practice of
Pharmacy  21st  Edition .  Washington DC.USA : Lippincott Williams & Wlikins Kristyonowich  A. & Bielecki  S. 2001. Biosynthesis of Bacterial Cellulose and It’s Potential Application  in  The  Different Industry .  Proceeding  of  the  Bio-Forum  II
Conference  Hosted  by  Biotech  Consulting, Lodz. Poland, 10-11 May 2001. Trinchero  A,  Bonora  S, dan Tinti  A,. 2004. Spectroscopic Behavior  of Copper Complexes of Nonsteroidal Anti- inflammatory Drugs .  Jurnal  Biopolymers 2004 May-Jun 5; 74(1-2):120-4.
Clark, Jim. 2010. Colour Test . http://mtnviewfarm.net/drugs-poisons- i006.html. [5 Agustus 2012]..
Kuswandi,  B. 2008. Sensor  Kimia  Teori,
Praktek  dan  Aplikasi .  Jember:  PS  Farmasi Universitas jember.
Smith,  J.E. 1990. Prinsip  Bioteknologi . Terjemahan Usman, F.S. dari Biotechnology  Principles  (1985).  Jakarta  : PT Gramedia.
Underwood,  A.L. dan Day  R.A.  Jr. 1999.
Analisis  Kimia  Kuantitatif .  Jakarta:
Erlangga.
Tita,  Bogdan.,  Bandur,  Geza.,  Dumitrutita.. 2013. Novel Cu(II) Complex  with Non- steroidal Anti-inflammatory Drugs Synthesis, Characterization  and Thermal Investigation of  the Complex  with Ibuprofen .  Romania  :  Univercity  of Medicine  and  Pharmacy  [serial  online]. http://www.revistadechimie.ro/pdf/TITA% 20B.pdf%206%2013.pdf. [ 06 Juni 2013]