## BIOAKTIVITAS EKSTRAK MAKROALGA
Sargassum sp. DAN Gracilaria sp. TERHADAP KOROSI MIKROBIAL T. Ferrooxidans
Isriyanti Affifah 1 , Fida Madayanti Warganegara 2 , Bunbun Bundjali 3 Rahmat F Septiyanto 4 , Irah Namirah 1 , Rifdah Hanifah 5
1 Jurusan Pendidikan Kimia, FKIP, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa, Serang, Indonesia
2 Laboratorium Biokimia, Program Studi Kimia, Institut Teknologi Bandung, Bandung, Indonesia
3 Laboratorium Kimia Fisika dan Material, Program Studi Kimia, Institut Teknologi Bandung, Bandung, Indonesia
4 Jurusan Pendidikan Fisika, FKIP, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa, Serang, Indonesia 5 Jurusan Biologi, FPMIPA, Universitas Pendidikan Indoneia, Bandung, Indonesia
E-mail: isriyanti@untirta.ac.id
Diterima: 14 Juli 2019. Disetujui: 25 Juli 2019. Dipublikasikan: 30 Juli 2019 DOI: 10.30870/educhemia.v4i2.6047
Abstract: Microbial corrosion is corrosion caused by microbial growth. This type of corrosion can affect and accelerate the process of corrosion due to the presence of microbes. Underwater pipes are one material that is often overgrown with bacteria that cause corrosion. Corrosion due to microbial activity can cause leaks underwater pipes that can pollute the environment and other marine biota. These microbes grow and settle on the pipe for a long time and cause pipe solidification. One microbe that can cause microbial corrosion is an aerobic bacterium that plays an active role in the microbial corrosion process, namely the bacterium Thiobacillus. This  type  of  bacteria  is  capable  of  producing  corrosive  acidic  environmental  conditions resulting from the oxidation of sulfur to sulfuric acid. In this study determined the corrosion inhibition  rate  and  optimum  macroalgae  dose  used  to  obtain  optimal  inhibition  results. Methanol extract of Gracilaria sp. and Sargassum sp. were able to inhibit the growth of T. ferooxidans at doses of 300µL and 400µL in 10 ml of media. LC50 value of Sargassum sp. Extract. is 483 µL while for Gracilaria sp . is 461 µL in 25 ml of media.
Keywords : bioactivity; microbial corrosion; macroalgae; T. ferooxidans
Abstrak: Korosi mikrobial  merupakan  korosi  yang  disebabkan  oleh  adanya  pertumbuhan mikroba.  Korosi  jenis  ini  dapat  mempengaruhi  dan  mempercepat  proses  terjadinya  korosi karena adanya mikroba. Pipa bawah laut merupakan salah satu material yang sering ditumbuhi bakteri penyebab korosi. Korosi akibat aktivitas mikroba dapat menyebabkan kebocoran pipa bawah laut yang dapat mencemari lingkungan dan biota laut lainnya. Mikroba tersebut tumbuh dan menetap pada pipa selama beberapa lama dan menyebabkan perkaratan pipa. Salah satu mikroba yang dapat menyebabkan korosi microbial adalah bakteri aerob yang berperan aktif dalam  proses  microbial  korosi  yaitu  bakteri  Thiobacillus.  Bakteri  jenis  ini  mampu menghasilkan kondisi lingkungan asam yang bersifat korosif hasil dari oksidasi sulfur menjadi asam sulfat. Pada penelitian ini ditentukan laju inhibisi korosi dan dosis optimum makroalga yang digunakan untuk mendapatkan hasil inhibisi yang optimal. Ekstrak metanol Gracilaria
sp. dan Sargassum sp. mampu menginhibisi pertumbuhan T. ferooxidans pada dosis 300µL dan 400µL dalam 10 ml media. Nilai LC 50 ekstrak Sargassum sp. adalah 483 µL sedangkan untuk ekstrak Gracilaria sp. adalah 461 µL dalam 25 ml media.
Kata kunci : bioaktivitas; makroalga; korosi microbial; T. ferooxidans

## PENDAHULUAN
Korosi  microbial  merupakan  korosi
yang disebabkan oleh adanya pertumbuhan mikroba. Aktivitas
mikroorganisme  mungkin  menyebabkan korosi  lubang  ( piting  corrosion) dan menyebabkan  kerugian  ekonomi  yang serius bagi industri dalam beberapa tahun terakhir (Soe et al., 2011). Korosi jenis ini dapat  mempengaruhi  dan  mempercepat proses  terjadinya  korosi  karena  adanya aktivitas mikroba. Mikroorganisme penyebab korosi ini berperan aktif dalam proses  korosi  melalui  reaksi  katoda- anoda, pembentukan biofilm, dan menghasilkan  metabolit  sekunder  yang korosif (Chinedu, 2018).
Setelah mikroorganisme menyerap ke permukaan material,  zat  polimer  ekstraseluler  (EPS) yang  disekresikan  oleh  bakteri,  seperti polisakarida ekstraseluler, akan membuat bakteri  dan  ikatan  metabolitnya  menyatu dengan substrat, dan kemudian
membentuk semacam biofilm yang rumit pada permukaan logam. Biofilm heterogen  dan  film  produk  korosi  dapat mengubah  karakteristik  elektrokimia permukaan  material,  bersama  dengan metabolisme bakteri, pembentukan biofilm dapat menyebabkan korosi serius,
yang  dapat  menurunkan  masa  pakai material  dan  peralatan,  dan  bahkan membawa  kerusakan  maksimal  pada material (Soe et al., 2011).
Pipa bawah laut merupakan salah satu material  yang  sering  ditumbuhi  bakteri penyebab  korosi.  Korosi  akibat  aktivitas mikroba  dapat  menyebabkan  kebocoran pipa  bawah  laut  yang  dapat  mencemari lingkungan  dan  biota  laut  lainnya. Mikroba  tersebut  tumbuh  dan  menetap pada  pipa  selama  beberapa  lama  dan menyebabkan perkaratan pipa. Salah satu mikroba yang dapat menyebabkan korosi microbial  adalah  bakteri  pereduksi  sulfat (Gu  et  al.,  2015).  Bakteri  yang  tumbuh subur dalam tanah dan air yang kaya akan zat organic ini berkembang pada kondisi anaerob dengan kisaran pH 2-9. Mikroba Pereduksi  Sulfat  ini  akan  menghasilkan gas  H2S  dan  air  yang  akan  bereaksi dengan  besi  membentuk  FeS  dan Fe(OH) 2 .  Selain  bakteri  pereduksi  sulfat, terdapat pula bakteri aerob yang berperan aktif dalam proses microbial korosi yaitu bakteri Thiobacillus. Spesies Thiobacillus ferrooxidans adalah  bakteri  gram  negatif dengan  morfologi    berbentuk  basil  dan memiliki  flagellum  polar  (Ruiz  et  al., 2014). Thiobacillus  ferrooxidans adalah
jenis strain industri yang umum digunakan dalam industri, yang awalnya dipisahkan dari  air  limbah  asam  di  tambang  oleh Colmer  dan  Hinkle  pada  tahun  1947. Bakteri  jenis  ini  mampu  menghasilkan kondisi  lingkungan  asam  yang  bersifat korosif hasil dari oksidasi sulfur menjadi asam sulfat (Soe et al., 2011).
Penelitian sebelumnya telah dilakukan studi mengenai senyawa antibakteri yang berasal dari logam berat, booster biocide dan  inhibitor  anorganik  untuk  mencegah korosi  microbial  tersebut.  Namun, antibakteri  tersebut  memiliki  toksisitas yang  tinggi  dan  tidak  ramah  lingkungan (Bazes et al., 2009).
Makroalga atau dalam bahasa Indonesia  sering  disebut  rumput  laut, merupakan  gangang  multiseluler  yang termasuk  divisi  Thallophyta.  Berbeda dengan  tanaman  tingkat  tinggi,  akar, batang  dan  daun  pada  rumput  laut memiliki  fungsi  yang  sama.  Ada  tiga kelompok  rumput  laut  laut  yang  dapat ditemukan di seluruh perairan Indonesia, yaitu rumput laut hijau, merah dan coklat (Kane  et  al.,  2016).  Selama  beberapa dekade,  rumput  laut  hijau  dan  merah, terutama  dari  genus  Kappaphycus  dan Gracillaria,  telah  dibudidayakan  untuk karagenan  dan  agar-agar.  Rumput  laut juga  dibedakan  oleh  polisakarida-nya tetapi juga oleh senyawa aktif yang telah dipelajari  dan  terbukti  memiliki  potensi
yang menjanjikan untuk industri nutraceutical,  farmasi  dan  kosmetikal (Rodrigues et al., 2017). Oleh karena itu, tanaman  laut  ini  telah  menarik  banyak perhatian selama eksplorasi produk alami alternatif. Produk alami yang berasal dari rumput  laut  menawarkan  sumber  daya berkelanjutan  dengan  aplikasi  yang  tak terbatas.  Di  antara  tiga  lainnya,  rumput laut  coklat  dari  kelas  Phaeophyceae adalah salah satu tanaman laut yang belum sepenuhnya dieksplorasi dan dieksploitasi di Indonesia terlepas dari kelimpahan dan potensi mereka yang luar biasa. Sejumlah penelitian  sebelumnya  telah  melaporkan bahwa polisakarida dan senyawa bioaktif dari  rumput  laut  coklat  menunjukkan potensi  yang  menggembirakan  sebagai sumber produk alami dengan antimikroba (Liu  et  al.,  2018)  (Maftuch,  Kurniawati, Adam,  &  Zamzami,  2016),  antioksidan (de  Almeida  et  al.,  2011),  antifouling, antivirus  (Pramesti  dkk.,  2017),  anti- proliferatif,  antiinflamasi  (Yende  et  al., 2014)  dan  banyak  lainnya.  Potensi  ini dapat  diterapkan  lebih  lanjut  dalam makanan,  obat-obatan  dan  kosmetik (Nurjanah dkk., 2017) untuk mengurangi penerapan  produk  kimia  (Torres  et  al.,
2019; de Almeida et al., 2011).
Pada  penelitian  sebelumnya  telah dilakukan  studi  mengenai  senyawa antibakteri  ramah  lingkungan  dalam makroalga ( Sargassum sp. dan Gracilaria
sp. )  yang  diduga  efektif  menginhibisi pertumbuhan  mikroba  pengoksidasi  besi pada  baja  karbon  secara  kualitatif  dan kuantitatif  (Affifah  dkk.,  2016).  Namun pada penelitian tersebut belum ditentukan laju  inhibisi  korosi  dan  dosis  optimum makroalga yang digunakan untuk mendapatkan hasil inhibisi yang optimal. Oleh karena itu, pada penelitian ini akan ditentukan kedua nilai tersebut.

## METODE
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium  Biokimia  Program  Studi
Kimia  Institut  Teknologi  Bandung. Makroalga yang digunakan pada penelitian  ini  adalah Sargassum  sp. dan Gracilaria sp. yang diperoleh dari Pantai Sayang  Heulang  Pameungpeuk,  Garut. Kultur mikroba T. ferooxidans diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi ITB dan merupakan biakan murni.

## Ekstraksi makroalga
Ekstraksi makroalga dilakukan menggunakan  pelarut  kloroform  p.a (Merck) dan metanol p.a (Merck) dengan perbandingan  1:1.  Proses  ini  diawali dengan  maserasi  menggunakan  pelarut metanol.  Proses  ekstraksi  berlangsung selama  4  jam  dengan  menggunakan ekstraktor  Soxhlet.  Penambahan  MgSO4 anhidrat  (Merck)  pada  hasil  ekstraksi dilakukan untuk menarik sisa air yang ada dalam ekstrak lipid makroalga.
Kultivasi Bakteri T. ferrooxidans
Bakteri T. ferrooxidans diperoleh dari koleksi Laboratorium Mikrobiologi SITH ITB dalam bentuk kultur cair. Bakteri ini dikultivasi pada media : K 2 HPO 4 0,04%; MgSO 4 7H 2 O  0,04%;  (NH 4 ) 2 SO 4 0,04%,
FeSO 4 7H 2 O  3,34%,  H 2 SO 4 2M  0,4%
(agar  3%  untuk  media  padat)  dalam pelarut  aquades  dengan  pH  2,5-3  selama tiga hari pada kondisi minim cahaya.

## Penentuan Laju Inhibisi Korosi Ekstrak Makroalga
Pada  penelitian  pendahuluan  telah dilakukan  uji  kuantitatif  pada  media  cair menggunakan coupon besi  dengan  luas permukaan 3,6 cm 2 . Nilai dosis optimum inhibisi T. ferooxidans ditentukan melalui variasi  konsentrasi  ekstrak  pada  selang waktu  yang  sama.  Laju  inhibisi  korosi dengan variasi hari ditentukan menggunakan  dosis  optimum  yang  telah didapat  sebelumnya  melalui  metode pengurangan berat sampel ( weight loss ).
Perhitungan  Jumlah  Koloni  Bakteri  T. ferrooxidans di Media Padat
Sebanyak  30µL  kultur  cair T. ferrooxidans di  pipet  dan  di sp.read ke dalam  media  padat  dalam  cawan  petri. Media  padat  tersebut  diinkubasi  selama tiga hari pada suhu ruang. Koloni tunggal yang  diperoleh  dipindahkan  melalui metode replica  platting secara  aseptik pada media padat yang telah ditambahkan ekstrak makroalga dengan variasi
konsentrasi.  Perhitungan  jumlah  koloni dilakukan  setelah  inkubasi  selama  tiga hari  dalam  suhu  ruang.  Jumlah  koloni dialurkan terhadap konsentrasi makroalga sehingga didapat nilai Lethal
Concentration 50 (LC 50 ) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Makroalga Sargassum sp. dan Gracillaria sp.
Makroalga  yag  digunakan  pada penelitian  ini  adalah Sargassum  sp. dan Gracilaria  sp .  Kedua  makroalga  ersebut diisolasi  dari  pantai  Sayang  Heulang Pameungpeuk  Garut,  Indonesia.  Hasil ekstraksi soxhlet pada makroalga menggunakan pelarut kloroform: methanol  dengan  perbandingan  1:1 menunjukkan  adanya  dua  fasa  baik  pada Sargassum  sp. maupun Gracilaria  sp (Gambar 1).
A B
Gambar 1. Hasil Ekstraksi Soxhlet (A. Sargassum sp.; B. Gracilaria sp.)
Masing-masing  fasa  dipisahkan  dan sebagian disimpan pada suhu -20°C untuk analisis  lebih  lanjut.  Sebagian  yang  lain didestilasi  pada  titik  didih  pelarut  untuk menghilangkan  pelarutnya.  Titik  didih
methanol,  kloroform,  dan  campuran azeotrop  methanol,  kloroform  berturut- turut adalah 64°C, 62°C, dan 53°C. Hasil destilasi  menunjukkan  adanya  dua  fasa saat diuji kelarutan dalam air, namun batas fasa  yang  terbentuk  tidak  sejelas campuran minyak goreng dan air.

## Uji Kelarutan Ekstrak Makroalga
Masing-masing  fraksi  dari  ekstrak makroalga Sargassum sp. dan Gracilaria sp. ditentukan  bioaktivitasnya  melalui  uji
kualitatif terhadap kemampuan menginhibisi pertumbuhan bakteri Thiobacillus  ferooxidans .  Selanjutnya dilakukan  uji  kelarutan  pada  fraksi  aktif tersebut pada air, metanol, dan kloroform. Hasil  uji  kelarutan  kedua  ekstrak makroalga  tersebut  diberikan  pada Gambar 2.
Ekstrak Sargassum sp.
Ekstrak Gracilaria sp.
Gambar 2. Uji Kelarutan Ekstrak Makroalga (dari kiri ke kanan: metanol, kloroform, air)
Berdasarkan  Gambar  2  dapat  diketahui bahwa fraksi aktif dari ekstrak makroalga Sargassum  sp. dan Gracilaria  sp tidak larut  dalam  kloroform  tetapi  larut  pada metanol  dan  air.  Oleh  karena  itu,  fraksi yang  digunakan  untuk  uji  bioaktivitas lebih  lanjut  adalah  fraksi  metanol  dari ekstrak.
Kultivasi Bakteri T. ferrooxidans
Bakteri T.ferrooxidans memperoleh energinya  melalui  oksidasi  Fe 2+ menjadi Fe 3+ . Reaksi yang terjadi sebagai berikut.
Anoda : Fe + 2e - Fe 2+
Katoda : 2H + + 2e - H 2
Reaksi yang dikatalisis T. ferooxidans : 4Fe 2+ + 2e - 4Fe 3+
4H + + O 2 + 4e - 2H 2 O
Fe 3+ + 3H 2 O Fe(OH) 3 + 3H +
Reaksi metabolisme T. ferooxidans :
4ADP + 4ADP 4 ATP 4ADP + O 2 + 4H + 2H 2 O + 4ADP +
4ADP + + H 4ADP + H +
Perubahan warna medium cair dari kuning cerah  menjadi  kuning  karat  merupakan salah satu indikator adanya pertumbuhan T.ferrooxidans (Hazra dkk., 2004).
Bakteri asidofilik obligat ini,
memperoleh  sumber  nitrogen  dari ammonium  sulfat  yang  ditambahkan sebanyak  0,04%  ke  dalam  media  dan sumber energi dari FeSO 4 7H 2 O (Lazaroff 1962). Waktu tumbuh optimalnya adalah 72 jam dengan aerasi yang cukup baik dan
minim  cahaya.  Berikut  adalah  kurva pertumbuhan T.  ferooxidans yang diperoleh  melalui  pengukuran Optical Density 600 nm (Gambar 3).
Gambar 3. Kurva Pertumbuhan T. ferrooxidans

## Penentuan Laju Inhibisi Korosi Ekstrak Makroalga
Untuk mengetahui konsentrasi
optimum  dalam  menginhibisi  laju  korosi yang  disebabkan  oleh  pertumbuhan T. ferooxidans ,  dilakukan  uji  kuantitatif variasi konsentrasi dengan waktu inkubasi tertentu, yaitu selama 7 hari. Laju korosi ditentukan dengan menggunakan persamaan sebagai berikut.
Hasil uji tersebut terlihat pada Gambar 4.
Gambar 4. Uji Kualitatif T. ferrooxidans Hari ke-7
0 0,5 1 1,5 0 5 10 15 Ab so rb an si (n m ) Hari ke- 0 0,001 0,002 0,003 0 500 1000 La ju K or osi (m m py ) Konsentrasi Inhibitor ( µ L dalam 10 ml …
Sargassum Gracilaria
Kurva  pada  Gambar  4  menunjukkan bahwa  konsentrasi  optimum  ekstrak Sargassum sp. dan ekstrak Gracilaria sp. yang memberikan laju korosi paling kecil berada  pada  konsentrasi  400µL  dan 300µL.  Laju  korosi  di  atas  nilainya berbanding  lurus  dengan  pengurangan berat  logam  akibat  korosi.  Pada konsentrasi  kurang  dari  konsentrasi optimum tersebut, kedua ekstrak makroalga  berperan  sebagai pro-oxidant yaitu zat yang menyebabkan (men- triger ) terjadinya  korosi  tersebut.  Begitu  pula pada  konsentrasi  diatas  300  µL ( Gracilaria )  dan  400µL  ( Sargassum ), pengurangan  berat  meningkat  seiring dengan  penambahan  konsentrasi.  Oleh karena  itu,  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak Sargassum  sp. dan  ekstrak Gracilaria  sp. memiliki  aktivitas  anti-
biokorosi pada konsentrasi tertentu. Pada konsentrasi  tertentu  itulah  kedua  ekstrak berperan  sebagai  inhibitor  biokorosi. Dengan  konsentrasi  optimum  tersebut dilakukan uji kuantitatif variasi hari untuk dapat  mengetahui  besarnya  laju  korosi yang ditimbulkan (Gambar 5).
Berdasarkan  Gambar  5,  diketahui bahwa  ekstrak Sargassum  sp. dan Gracilaria sp. hanya mampu menginhibisi  pertumbuhan  bakteri T. ferooxidans sampai  hari  ketiga.  Hasil yang relatif sama ditunjukkan oleh biocide komersial yang dijadikan sebagai pembanding dalam penelitian ini. Ketiganya  hanya  mampu  menginhibisi korosi sampai hari ketiga. Namun, kurva yang  dihasilkan  oleh biocide komersial lebih  landai  yang  mengindikasikan pengurangan berat yang lebih kecil.
Gambar 5. Laju Korosi (mmpy) T.ferrooxidans + Ekstrak Makroalga
Bioaktivitas  ekstrak Sargassum  sp. dan Gracilaria sp. juga ditentukan melalui perhitungan jumlah koloni dan penentuan
nilai Lethal  Concentration 50 (LC 50 ) nya, yaitu konsentrasi yang mampu menginhibisi  50%  dari  jumlah  koloni
0 10 20 30 40 50 60 0 5 10 15 20 La ju K or osi (m m py ) Hari ke- Sargasuum Gracilaria Biocide
bakteri tersebut. Uji dilakukan pada media padat  dengan  metode replica  plating .
Berikut adalah kurva hasil penentuan nilai LC 50. (Gambar 6).
Gambar 6. Penentuan Nilai LC 50 Ekstrak Makroalga terhadap Pertumbuhan
T.ferrooxidans dalam Media Padat
Dari  kurva  di  atas,  nilai LC 50 ekstrak Sargassum sp. adalah 483 µL sedangkan untuk  ekstrak Gracilaria  sp. adalah  461 µL  dalam  25  ml  media.  Dosis  tersebut
mampu menginhibisi 50% jumlah koloni bakteri T.  ferooxidans pada  pengenceran 10 -10 media.

## KESIMPULAN
Ekstrak  metanol Gracilaria  sp. dan Sargassum  sp. mampu  menginhibisi pertumbuhan T.  ferooxidans pada  dosis 300µL  dan  400µL  dalam  10  ml  media.
Nilai  LC 50 ekstrak Sargassum  sp. adalah 483  µL  sedangkan  untuk  ekstrak Gracilaria sp. adalah 461 µL dalam 25 ml media.

## DAFTAR PUSTAKA
Affifah,  I.,  Warganegara,  F.  M.,  &
Bundjali,  B.  (2016).  Uji  Kualitatif Dan  Kuantitatif  Ekstrak  Bio-Korosi Pada Baja Karbon. EduChemia , 1 (2),
110–123.
Bazes, A., Silkina, A., Douzenel, P., Faÿ,
F.,  Kervarec,  N.,  Morin,  D.,  …
Bourgougnon, N. (2009). Investigation  of  the  antifouling constituents  from  the  brown  alga Sargassum muticum (Yendo) Fensholt. Journal of Applied
0 5E+11 1E+12 1,5E+12 2E+12 2,5E+12 0 100 200 300 400 500 600 700 ju m la h k ol on i konsentrasi ekstrak µL dalam 10 ml gracilaria sargassum
Phycology , 21 (4),
395–403. https://doi.org/10.1007/s10811-008- 9382-9 Chinedu, I. (2018). Journal of Chemical , Biological  and  Physical  Sciences Mechanism  of  Microbial  Corrosion :
A Review . (August 2016).
de  Almeida,  C.  L.  F.,  Falcão,  H.  de  S.,
Lima, G. R. d. M., Montenegro, C. de
A., Lira, N. S., de Athayde-Filho, P.
F.,  …  Batista,  L.  M.  (2011).
Bioactivities from marine algae of the genus Gracilaria. International
Journal of Molecular Sciences , 12 (7),
4550–4573. https://doi.org/10.3390/ijms1207455
0 Gu,  T.,  Xu,  D.,  Zhang,  P.,  Li,  Y.,  & Lindenberger, A. (2015). Microbiologically Influenced
Corrosion  and  Its  Impact  on  Metals and Other Materials. Microbiology for Minerals,  Metals,  Materials  and  the
Environment ,
383–408. https://doi.org/10.1201/b18124-16 Kane,  S.  N.,  Mishra,  A.,  &  Dutta,  A.  K. (2016). Preface: International
Conference  on  Recent  Trends  in
Physics  (ICRTP  2016). Journal  of Physics:  Conference  Series , 755 (1).
https://doi.org/10.1088/1742- 6596/755/1/011001 Liu, N., Fu, X., Duan, D., Xu, J., Gao, X.,
&  Zhao,  L.  (2018).  Evaluation  of
bioactivity  of  phenolic  compounds from  the  brown  seaweed  of
Sargassum fusiforme and
development of their stable emulsion. Journal of Applied Phycology , 30 (3), 1955–1970.
https://doi.org/10.1007/s10811-017-
1383-0
Maftuch,  Kurniawati,  I.,  Adam,  A.,  &
Zamzami,  I.  (2016).  Antibacterial effect of Gracilaria verrucosa bioactive on fish pathogenic bacteria. Egyptian Journal of Aquatic Research , 42 (4), 405–410. https://doi.org/10.1016/j.ejar.2016.10
.005
Nurjanah,  Mala  Nurilmala,  Effionora
Anwar,  Novi  Luthfiyana,  T.  H.,
Luthfiyana, N., & Hidayat, T. (2017). Identification
of Bioactive
Compounds  of  Seaweed  Sargassum sp. and Eucheuma cottonii Doty as a Raw  Sunscreen  Cream. Proceedings of the Pakistan Academy of Sciences: Pakistan Academy of Sciences B. Life and  Environmental  Sciences , 54 (4), 311–318.
Retrieved from https://www.researchgate.net/profile/
Taufik_Hidayat28/publication/32316 2708_Identification_of_Bioactive_C
ompounds_of_Seaweed_Sargassum_ sp_and_Eucheuma_cottonii_Doty_as _a_Raw_Sunscreen_Cream/links/5a8
385bc45851504fb3a5fae.pdf
Pramesti,  R.,  Setyati,  W.  A.,  Zainuddin,
M., & Puspita, M. (2017). Bioecology of  Sargassum  sp.  and  its  Extract Bioactivity  as  Anti-MDR  Bacteria.
ILMU KELAUTAN: Indonesian
Journal  of  Marine  Sciences , 22 (4),
185.
https://doi.org/10.14710/ik.ijms.22.4.
185-192
Rodrigues, D., Freitas, A. C., Queirós, R., Rocha-Santos, T. A. P., Saraiva, J. A., Gomes,  A.  M.  P.,  &  Duarte,  A.  C.
(2017).  Bioactive  Polysaccharides Extracts from Sargassum muticum by High Hydrostatic Pressure. Journal of
Food  Processing  and  Preservation ,
41 (1), 1–12.
https://doi.org/10.1111/jfpp.12977.
Ruiz,  E.,  Aperador,  W.,  &  Mejia,  A.
(2014).  Effects  of  thiobacillus ferrooxidans  on  corrosion  of  AISI 4140  Steel  in  presence  of  oil biodiesel. International  Journal  of
Electrochemical Science , 9 (11),
5937–5947.
Soe, K., Li, S. M., Liu, J. H., & Yu, M.
(2011).  Corrosion  Behavior  of 10CrNiCu  Steel  Influenced  by Thiobacillus Ferrooxidans. Advanced Materials  Research , 233 – 235 (9), 2633–2639.
https://doi.org/10.4028/www.scientifi c.net/amr.233-235.2633
Torres, P., Santos, J. P., Chow, F., & dos Santos,  D.  Y.  A.  C.  (2019).  A comprehensive  review  of  traditional uses,  bioactivity  potential,  and chemical  diversity  of  the  genus
Gracilaria (Gracilariales, Rhodophyta). Algal Research , 37 (December 2018), 288–306.
https://doi.org/10.1016/j.algal.2018.1 2.009.
Yende,  S.,  Chaugule,  B.,  &  Harle,  U.
(2014).    Therapeutic  potential  and health benefits of Sargassum species . Pharmacognosy  Reviews , 8 (15),  1.
https://doi.org/10.4103/0973- 7847.125514.