## ANTIOXIDANT ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT WHITE GALANGAL STEM (Alpinia galanga) WITH ABTS METHOD

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL BATANG LENGKUAS PUTIH (Alpinia galanga) DENGAN METODE ABTS
Maria Immaculata Tangkau 1)* , Fatimawali 2) , Elly Juliana Suoth 3)
1) Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi *mariatangkau11@gmail.com

## ABSTRACT
Galangal is commonly used as traditional medicine. This study aims to determine the phytochemical content and  antioxidant  activity  of  the  ethanol  extract  of  galangal  (Alpinia  galanga)  stems.  Galangal  stems  were extracted  using  maceration  method  with  95%  ethanol  solvent.  The  phytochemical  screening  carried  out included  qualitative  tests  on  flavonoids,  triterpenoids,  saponins,  polyphenols  using  the  color  test  method. Antioxidant  activity  test  using  the  ABTS  method  (2,2-Azinobis(3-ethylbenzothiazoline)-6-sulfonic  acid)  and vitamin C as a comparison, absorption was measured using a UV-Vis spectrophotometer at a wavelength of 750 nm. Phytochemical screening results on the ethanol extract of galangal (Alpinia galanga) stems showed positive  results  for  flavonoids,  triterpenoids  and  polyphenols,  while  saponins  showed  negative  results. Antioxidant  activity  was  analyzed  using  the  regression  line  equation  y  =  3.293x  +  40.606,  obtained  IC₅₀ 1.675 ppm and comparator vitamin C obtained IC₅₀ 2.0405 ppm. The results showed that ethanol extract of galangal stem (Alpinia galanga) and vitamin C comparator both had very strong antioxidant activity.
Key words: Antioxidant, ABTS, Alpinia galanga.

## ABSTRAK
Lengkuas  biasa  digunakan  sebagai  obat  tradisional.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan fitokimia  dan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  dari  batang  lengkuas (Alpinia galanga). Batang  lengkuas diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  95%.  Skrining  fitokimia  yang  dilakukan meliputi  uji  flavonoid,  triterpenoid,  saponin,  polifenol  secara  kualitatif  dengan  metode  uji  warna.  Uji aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  ABTS  (2,2-Azinobis(3-ethylbenzothiazoline)-6-sulfonic  acid) dan  vitamin  C  sebagai  pembanding,  serapan  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang  750  nm.  Hasil  Skrining  fitokimia  pada  ekstrak  etanol  batang  lengkuas (Alpinia  galanga) menunjukkan  hasil  positif  terhadap  flavonoid,  triterpenoid  dan  polifenol,  sementara  saponin  menunjukkan hasil  negatif.  Aktivitas  antioksidan  dianalisis  menggunakan  persamaan  garis  regresi  y  =  3,293x  +  40.606, diperoleh  IC₅₀  1,675  ppm  dan  pembanding  vitamin  C  diperoleh  IC₅₀  2,0405  ppm.  Dari  hasil  tersebut diketahui  ekstrak  etanol  batang  lengkuas (Alpinia  galanga) dan  pembanding  vitamin  C menunjukkan keduanya memiliki aktivitas antioksidan yang termasuk dalam kategori sangat kuat.
Kata kunci : Antioksidan, ABTS, Alpinia galanga .

## PENDAHULUAN
Antioksidan  merupakan  salah  satu  senyawa yang dapat menginaktifkan radikal bebas, molekul tidak  stabil  yang  dihasilkan  oleh  berbagai  jenis proses  kimia  normal  tubuh  atau  oleh  radiasi  sinar ultra  violet  (UV),  asap  rokok  dan  pengaruh lingkungan  lainnya (Fitriana,  2015).  Sumber- sumber  antioksidan  yaitu  antioksidan  sintetik  dan antioksidan alami. Antioksidan sintetik mempunyai efektivitas tinggi, namun belum tentu aman  bagi  kesehatan.  Antioksidan  alami  tidak terkontaminasi  dengan  zat  kimia,  sehingga  aman untuk dikembangkan (Hasanah M, 2016).
Antioksidan alami merupakan jenis
antioksidan  yang  berasal  dari  tumbuhan  dan hewan. Secara alami, tumbuhan yang mengandung  antioksidan  tersebar  pada  berbagai bagian  tumbuhan  seperti  akar,  batang,  kulit, ranting,  daun,  buah,  bunga  dan  biji  (Hutapea, 2005).
Salah  satu  tanaman  tradisional  yang  tumbuh di  Indonesia  dan  bisa  dimanfaatkan  untuk pengobatan  adalah  lengkuas  ( Alpinia  galanga). Biasanya  lengkuas  digunakan  oleh  masyarakat sebagai  bahan  bumbu  dapur  sehari-hari  sebagai penyedap  masakan  karena  aromanya  yang  khas. Kegunaan  lain  dari  lengkuas  adalah  sebagai  obat tradisional berkhasiat menetralkan racun (antitoksik), penurun panas (antipiretik), menghilangkan  rasa  sakit  (analgesik),  pencegah kanker,  antioksidan,  anti  tumor,  anti  radang (Magfira, 2018).
Menurut  studi  Sen  dan  Chakraborty  (2011), menjelaskan  bahwa  produk  pangan  nabati umumnya  seperti  bagian  tumbuhan  pada  akar, batang dan daun memiliki kandungan antioksidan yang  lebih  tinggi  dibandingkan  produk  pangan hewani.
Berdasarkan  Puspitasari et  al., 2018  metode ABTS  merupakan  metode  pengujian  untuk mengukur  jumlah  radikal  yang  dapat  ditangkal oleh  antioksidan  yang  dikenal  dengan  kapasitas antioksidan.  Prinsip  pengujian  dengan  metode  ini adalah  mengukur  daya  peredaman  antioksidan terhadap  radikal  bebas  ABTS  (Puspitasari et  al., 2018).
Pada  penelitian  Theodorus et  al. (2019) mereka  menggunakan  ekstrak  etanol  rimpang lengkuas  sebagai  sumber  antioksidan  berupa flavonoid dan melatonin dalam melihat pengaruhnya  terhadap  gambaran  hispatologi  otak mencit.  Studi  Mardhiyyah et  al. (2021)  juga menunjukkan  hasil  skrining  fitokimia  perasan rimpang  lengkuas  putih  mengandung  alkaloid,
flavonoid,  tanin,  fenolik,  triterpenoid.  Hal  ini membuktikan  bahwa  lengkuas  putih  mengandung senyawa  yang  berpotensi  sebagai  antioksidan (Mardhiyyah et al. , 2021). Dari penelitian tersebut menunjukkan  bahwa  belum  ada  informasi  lebih lanjut  mengenai  ekstrak  dari  batang  lengkuas sehingga  penelitian  ini  berusaha  mengakomodasi data  mengenai  antioksidan  yang  terdapat  dalam batang  lengkuas  putih  menggunakan  metode ABTS  ( 2,2  Azinobis(3-ethylbenzothiazoline)-6- sulfonic acid).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Mei sampai  September  2022 di  Laboratorium  Farmasi Lanjut Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi.
Bentuk Penelitian Bentuk dari penelitian ini adalah observasional  laboratorium  yang  akan  menguji tentang aktivitas antioksidan ekstrak etanol batang lengkuas  putih (Alpinia  galanga) dengan  metode ABTS.

## Instrumen Penelitian
Instrumen  penelitian  yang  digunakan  terdiri dari  Alat-alat  berupa  penangas  air,  seperangkat alat-alat  gelas,  pipet  tetes,  pipet  ukur,  labu  ukur, batang  pengaduk,  kertas  saring,  corong  kaca, oven, cawan porselen, aluminium foil, tisu, kuvet, spektrofotometer  UV-Vis.  Bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  ekstrak  batang lengkuas, ABTS (2,2- Azinobis(3-
ethylbenzothiazoline)-6-sulfonic  acid),  kalium persulfat  (K2S2O8),  vitamin  C,  etanol,  aquadest, etanol  95%,  serbuk  magnesium,  asam  klorida pekat, FeCl3, NaOH, Kloroform, H2SO4.

## Pengambilan Sampel dan Preparasi Sampel
Lengkuas diambil dari kota Bitung kecamatan Madidir.  Bagian  lengkuas  yang  diambil  berada  di bagian  pangkal  batang  yang  berada  di  dekat rimpangnya  (batang  berwarna  putih)  sampai dengan  bagian  batang  yang  berada  dibagian tengah (batang berwarna hijau terang). Pengambilan batang lengkuas dilakukan langsung dengan  cara  dipotong  bagian  batangnya.  Batang lengkuas dikeringkan di ruangan terbuka kemudian  dilanjutkan  dalam  oven  dengan  suhu 38 o C yang  berfungsi  untuk  mengeringkan  sisa  air
yang  terkandung  didalamnya  lalu  dihaluskan sampai diperoleh serbuk 100 gram.

## Ekstraksi Lengkuas (Alpinia galanga)
Pembuatan  ekstrak  etanol  batang  lengkuas dilakukan  dengan  cara  maserasi.  Sebanyak  100 gram  serbuk  batang  lengkuas (Alpinia  galanga) dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  95%  sebanyak 1000  mL  (1:10).  Maserasi  dilakukan  3  x  24  jam dengan  pengadukan  beberapa  kali  dan  disaring. Residu  dari  penyaringan  maserasi  dimaserasi kembali  atau  remaserasi  dengan  menggunakan etanol  95%  sebanyak  1000  mL  (1:10)  selama  1 x 24  jam  dan  disaring.  Filtrat  yang  diperoleh dikumpulkan menjadi satu dan dipekatkan dengan oven pada  suhu  50ºC  dan  diuapkan  dengan waterbath  hingga  diperoleh  ekstrak  kental. Kemudian  ekstrak  kental  batang  lengkuas  di hitung  %  Rendemen  ekstrak.  Ekstrak  kental batang  lengkuas  yang  telah  dihasilkan  disimpan dalam wadah tertutup agar mengurangi fotodegradasi  senyawa  fitokimia  akibat  paparan cahaya.

## Uji Kandungan Kimia Ekstrak
a. Uji senyawa flavonoid
Sebanyak  2  mg  ekstrak  kental  dilarutkan dalam 1 ml etanol, kemudian ditambahkan 0,1 gram  serbuk  magnesium  P  dan  10  tetes  asam klorida  pekat.  Jika  terjadi  warna  merah  jingga sampai  merah  ungu  menunjukkan  adanya flavonoid. Jika warna kuning jingga menunjukkan  adanya  senyawa  flavon,  kalkon dan auron.
b. Uji senyawa polifenol
Ekstrak  lengkuas (Alpinia  galanga) yang telah  diencerkan  dengan  aquadest  dimasukkan kedalam  tabung  reaksi,  tambahkan  beberapa tetes  larutan  FeCl3.  Jika  terjadi  perubahan warna  menjadi  warna  hijau-biru,  hitam-hijau, atau  biru-hitam  menunjukkan  adanya  senyawa polifenol.
c. Uji senyawa Saponin Sampel  sebanyak  2  ml  ditambahkan  2  ml NaOH,  kemudian  dididihkan.  Filtrat  dikocok dan didiamkan selama 15 menit. Terbentuknya busa yang stabil berarti positif terdapat saponin
d. Uji Senyawa Triterpenoid Ekstrak sebanyak 0,5 g dimasukkan dalam tabung reaksi dan ditambahkan 1 ml kloroform dan  disaring.  Filtrat  ditambahkan  beberapa tetes  asam  sulfat  dan  dikocok.  Terbentuknya
warna  kuning  emas  mengindikasikan  positif terpenoid.
e. Uji  Aktivitas  Antioksidan  lengkuas (Alpinia galanga)
1) Pembuatan Larutan Stok Ekstrak Lengkuas Larutan stok 1000 ppm disiapkan dengan cara ditimbang seksama 50 mg ekstrak kental lengkuas dan dilarutkan dengan etanol sambil dihomogenkan,  volume  akhir  dicukupkan  dengan etanol sampai 50 ml dalam labu ukur.
2) Pembuatan Larutan Stok Vitamin C Murni Larutan  1000  ppm  disiapkan  dengan  cara menimbang  seksama  10  mg  vitamin C  murni  dan dilarutkan  dengan  etanol  p.a,  volume  akhir dicukupkan hingga 10 ml labu ukur.
3) Pembuatan Larutan Stok ABTS 7 mM
Larutan a : ditimbang seksama 0,385 g ABTS, dilarutkan  dalam  100  ml  aquadest.  Larutan  b  : ditimbang  seksama  0,066  g  K2S2O8,  dilarutkan dalam  100  ml  aquadest.  Larutan  a  dan  larutan  b dicampur  dalam  ruang  gelap  dan  volumenya dicukupkan  dengan  etanol.  p.a  sampai  25  ml. kemudian diinkubasi selama 12-16 jam.
4) Penentuan Operating Time (OT)
Larutan  ABTS  dipipet  sebanyak  0,1  ml  lalu ditambahkan  1  ml  vitamin  C  pada  konsentrasi  4 ppm  ke  dalam  labu  ukur  5,0  ml,  kemudian  amati absorbansinya  pada  panjang  gelombang  750  nm dengan  interval  waktu  1  menit  hingga  diperoleh absorbansi yang stabil.
5) Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Larutan  ABTS  dipipet  sebanyak  0,1  ml  lalu ditambahkan ke dalam vitamin C 4 ppm ke dalam labu  ukur  5,0  ml.  Serapan  diukur  dengan spektrofotometer  UV-Vis  yang  telah  diatur panjang  gelombangnya  dari  700-750  nm  hingga diperoleh panjang gelombang maksimum
6) Pengukuran  Aktivitas  Pengikatan  Radikal bebas ABTS dengan C murni.
Ditimbang  vitamin  C  p.a  sebanyak  10  mg kemudian  dilarutkan  dengan  etanol  10  ml, diperoleh  larutan  stok  dengan  konsentrasi  1000 ppm. Dari larutan stok masing-masing dipipet 1,6 mL, 2 mL, 2,4 mL, 2,8 mL, dan 3,2 mL kemudian ditambahkan  etanol  hingga  10  mL  sehingga diperoleh  masing-masing  konsentrasi  8  ppm,  10 ppm, 12 ppm, 14 ppm, dan 16 ppm. Pada masing- masing konsentrasi dipipet 0,1 mL dan dimasukan ke  dalam  tabung  reaksi  kemudian  ditambahkan  2 mL  larutan  ABTS  dan  4  mL  etanol.  Setelah  itu dibiarkan  selama  30  menit  pada  suhu  kamar. Masing-masing larutan tersebut diukur serapannya
pada  panjang  gelombang  750  nm,  dilakukan sebanyak 3 replikasi.
7) Pengukuran  Aktivitas  Pengikatan  Radikal bebas ABTS dengan sampel ekstrak kental. Lengkuas  Sebanyak  10  mg  ekstrak  Batang lengkuas  dilarutkan  dengan  etanol  dalam  labu takar  10  mL  sampai  batas,  diperoleh  larutan  stok dengan  konsentrasi  1000  ppm.  Dibuat  dengan masing-  masing  konsentrasi  8  ppm,  10  ppm,  12 ppm,  14  ppm,  dan  16  ppm,  dihitung  dengan menggunakan rumus pengenceran:
M₁.V₁ = M₂.V₂
Pada  masing-masing  konsentrasi  dipipet sebanyak  0,1  ml  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi dan ditambahkan 2 mL larutan ABTS dan 4 mL  etanol  sehingga  larutan  menjadi  6,1  mL kemudian  dibiarkan  selama  30  menit  pada  suhu kamar.  Masing-masing  larutan  tersebut  diukur serapannya  pada  panjang  gelombang  750  nm, dilakukan sebanyak 3 replikasi.

## Analisis Data
1. Perhitungan % Rendemen Ekstrak Setelah didapatkan ekstrak kental, selanjutnya dapat dihitung rendemen dari ekstrak. Tujuan dari perhitungan rendemen ini adalah untuk mengetahui  presentase  perolehan  hasil  ekstrak sehingga nantinya dapat diketahui jumlah simplisia  yang  dibutuhkan  untuk  membuat sejumlah ekstrak kental tertentu. Untuk perhitungan  %  rendemen  ekstrak  yaitu  sebagai berikut %𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 𝐸𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘
= Bobot Ekstrak Kental Bobot Serbuk × 100%
2. Perhitungan % Inhibisi Parameter  yang  biasa  digunakan  untuk menginterpretasikan  hasil  dari  uji  aktivitas antioksidan  dengan  metode  ABTS  adalah  dengan nilai  IC50,  yaitu  konsentrasi  yang  menyebabkan hilangnya 50% aktivitas ABTS. Untuk menghitung  nilai  IC50  diperlukan  data  persen inhibisi  dari  pengujian  yang  dilakukan.  Persen inhibisi  dapat  dihitung  dengan  menggunakan rumus sebagai berikut.
%𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 = (Abs Blanko − Abs Sampel) Absorbansi Blanko × 100%
3. Perhitungan Nilai IC50
Konsentrasi  sampel  dan  persen  inhibisi  yang diperoleh diplot masing-masing pada sumbu x dan y,  kemudian  didapat  persamaan  regresi  linier  y  = bx  +  a.  Persamaan  tersebut  digunakan  untuk  my- enentukan  nilai  IC50  dari  masing-masing  sampel dinyatakan  dengan  nilai  y  sebesar  50  dan  nilai  x
yang  akan  diperoleh  sebagai  nilai  IC50. Perhitungan  IC50  dapat  dituliskan  dengan  cara mengubah nilai Y = 50. 𝑌 = 𝐵𝑥 + 𝐴 50= 𝐵𝑥 + 𝐴 . 𝑋 = 50 − A B = 𝐼𝐶50

## HASIL DAN PEMBAHASAN Penyiapan Simplisia
Sampel  yang  digunakan  adalah  batang lengkuas.  Batang  lengkuas  diperoleh  dari  Kota Sebelum  dijadikan  simplisia,  bagian  batang lengkuas  yang  dekat  dengan  rimpang  (batang berwarna putih) dan bagian tengah batang (batang berwarna  hijau  terang)  diambil  dan  dipisahkan dari  rimpang  dan  daunnya.  Proses  pencucian sampel  bertujuan  untuk  memisahkan  partikel- partikel  lain  yang  masih  melekat  pada  sampel. Pengeringan  dilakukan  dengan  cara  batang lengkuas  dipotong-potong  terlebih  dahulu  dan dimasukkan  kedalam  oven  dengan  suhu  38 o C selama 3 hari. Proses pengeringan bertujuan untuk menghilangkan kadar air karena dapat mengganggu proses  penarikan  zat  aktif  dan dapat menyebabkan  sampel  mudah  rusak  oleh  adanya pertumbuhan  jamur.  Setelah  dikeringkan,  sampel tersebut  dibuat  menjadi  serbuk.  Penyerbukan simplisia  dimaksudkan  untuk  mempermudah cairan  penyari  bersentuhan  dengan  permukaan serbuk  simplisia  sehingga  zat  aktif  yang  semula berada  dalam  sel  ditarik  oleh  cairan  penyari sehingga  diperoleh  larutan  zat  aktif  dalam  cairan penyari  (Hartanto,  2001).  Pengayakan  bertujuan untuk  memperoleh  serbuk  yang  lebih  halus  dan homogen,  semakin  kecil  ukuran  penyerbukan simplisia  semakin  memperbesar  luas  permukaan simplisia  dan  menghomogenkan  ukuran  partikel serbuk sehingga proses ekstraksi lebih efektif dan efesien (Dirjen POM, 2000).

## Ekstraksi
Proses  ekstraksi  simplisia  batang  lengkuas dilakukan dengan metode maserasi dengan sistem remaserasi  atau  maserasi  berulang.  Metode maserasi  sangat  menguntungkan  dalam  isolasi senyawa  bahan  alam  karena  dengan  perendaman sampel tumbuhan akan terjadi pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan antara di  dalam  dan  di  luar  sel  sehingga  metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut organik dan ekstraksi senyawa akan sempurna  karena  dapat  diatur  lama  perendaman yang dilakukan (Lenny, 2006).
Simplisia  batang  lengkuas  yang  telah  diayak diambil  sebanyak  100  g  dan  dimaserasi  dengan
1000  mL  pelarut  etanol  selama  5  hari  dan diremaserasi  selama  2  hari.  Etanol  merupakan pelarut  universal  yang  memiliki  gugus  polar  (- OH)  dan  gugus  non  polar  (-CH₃)  sehingga  dapat menarik  analit-analit  yang  bersifat  polar  dan  non polar (Watson, 2009).
Tujuan dilakukannya remaserasi adalah untuk menyari  senyawa-senyawa  yang  masih  tertinggal atau  tidak  tersari.  Filtrat  hasil  maserasi  disaring, dikumpulkan  dan  kemudian  pelarutnya  diuapkan sehingga  diperoleh  ekstrak  batang  lengkuas sebanyak 5,2 g.

## Skrining Fitokimia
Hasil pengujian dapat dilihat pada Tabel 1. Tabel  1.  Hasil  skrining  fitokimia  batang lengkuas
Senyawa Metabolit Hasil Positif Menurut Pustaka Hasil Penelitian Flavonoid Terbentuk warna jingga kehitaman + Polifenol Terbentuk warna hijau kehitaman + Saponin Terbentuknya busa - Triterpenoid  Terbentuknya cincin berwarna kuning keemasan + Skrining fitokimia bertujuan
untuk mengetahui  kandungan  senyawa  fitokimia  pada ekstrak  etanol  batang  lengkuas  secara  kualitatif. Senyawa  fitokimia  yang  diidentifikasi  meliputi, senyawa flavonoid, senyawa triterpenoid, senyawa polifenol dan senyawa saponin.

## Uji Antioksidan
Pengujian  aktivitas  antioksidan  pada  sampel dilakukan  dengan  metode  ABTS.    Prinsip  dari metode ini adalah mengukur aktivitas antioksidan secara  kuantitatif  yaitu  dengan  pengukuran aktivitas  perendaman  radikal  ABTS  oleh  ekstrak etanol batang lengkuas menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang  750  nm  sehingga  akan  diketahui  nilai aktivitas perendaman radikal bebas yang dinyatakan  dengan  nilai  IC₅₀  (Inhibitory concentration).  Panjang  gelombang  750  nm merupakan panjang gelombang maksimum ABTS.  Panjang  gelombang  maksimum  akan memberikan  serapan  paling  optimal  dari  larutan uji  dan  memberikan  kepekaan  yang  paling  besar, sehingga  diharapkan  dapat  diperoleh  nilai absorbansi yang optimal pada sampel (Rizkayanti et al ., 2017).
Pengujian  aktivitas  antioksidan  pada  sampel menggunakan  lima  konsentrasi,  yaitu  8  ppm,  10 ppm,  12  ppm,  14  ppm  dan  16  ppm,  dimana  pada masing-masing  konsentrasi  dilakukan  tiga  kali pengujian. Sampel yang diuji aktivitas antioksidannya  adalah  ekstrak  etanol  batang lengkuas  dan  vitamin  C  sebagai  pembanding. Vitamin  C  digunakan  karena  berfungsi  sebagai antioksidan  sekunder  yaitu  menangkap  radikal bebas  dan  mencegah  terjadinya  reaksi  berantai. Hal  itu  dikarenakan  vitamin  C  mempunyai  gugus hidroksi  bebas  yang  bertindak  sebagai  penangkal radikal  bebas  dan  jika  mempunyai  gugus polihidroksi akan meningkatkan aktivitas antioksidan (Triyem, 2010).
Sebelum  larutan  sampel  diuji  pada  alat spektrofotometer  UV-Vis,  sampel  diinkubasi terlebih  dahulu  pada  suhu  37⁰C  dengan  cara menutup sampel dengan aluminium foil selama 30 menit.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  diinkubasi pada suhu 37⁰C karena pada suhu ini reaksi antara radikal ABTS dengan senyawa metabolit sekunder berlangsung lebih optimal (Aji, 2014).
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan, pengujian  antioksidan  dilakukan  dengan  cara melihat  warna  sampel  sebelum  dan  sesudah ditambahkan  larutan  ABTS.  Radikal  bebas  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  ABTS. ABTS  adalah  suatu  radikal  bebas  dengan  pusat nitrogen  yang  mempunyai  karakteristik  warna biru-hijau  yang  bila  tereduksi  oleh  antioksidan akan  berubah  menjadi  bentuk  non  radikal  dari bewarna  menjadi  pudar  atau  tidak  berwarna. ABTS sangat sensitive terhadap cahaya, pembentukan ABTS membutuhkan waktu inkubasi  dalam  ruang  gelap  (Setiawan et  al. , 2018).  Uji  peredaman  radikal  bebas  ABTS  ini dilakukan  dengan  metode  uji  perubahan  warna pada  larutan  ABTS  dengan  ekstrak  etanol  batang lengkuas. Hasil uji antioksidan dengan metode uji warna  adalah  positif  mengandung  antioksidan, karena  pada  larutan  uji  terjadi  perubahan  warna dari  biru-hijau  menjadi  pudar.  Hal  ini  sesuai dengan pernyataan  Setiawan et  al., (2018)  bahwa suatu senyawa dikatakan mengandung antioksidan apabila  warna  biru-hijau  berubah  menjadi  pudar. Larutan  ABTS  memiliki  reaksi  yang  cepat  dan sensitive terhadap cahaya sehingga harus dilakukan  dengan  cepat  dan  teliti  (Wulansari, 2018).
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan metode penangkal radikal bebas ABTS menggunakan  instrument  spektrofotometer  UV- Vis.  Metode  ABTS  dipilih  karena  memiliki
tingkat  sensitivitas  yang  tinggi  dan  dapat digunakan  untuk  menganalisa  antioksidan  pada makanan  (Imrawati et  al. ,  2017),  dan  memiliki reaksi  yang  sangat  cepat  (Sami  dan  Rahimah, 2015).  Prinsip  pengujian  aktivitas  antioksidan dengan  metode  ABTS  adalah      penghilangan warna  kation  ABTS  untuk  mengukur  kapasitas antioksidan  yang  langsung  bereaksi  dengan radikal  kation  ABTS  (Setiawan et  al. ,  2018). Sebelum  melakukan  pengukuran  absorbansi  dari masing-masing  seri  konsentrasi  sampel  dilakukan persiapan  konsentrasi  ekstrak  etanol  batang lengkuas agar diperoleh data yang baik, persiapan dilakukan  dengan  cara  melihat  perubahan  warna dari  masing-masing  seri  konsentrasi  dalam meredam  ABTS.  Dalam  hal  ini  harus  terbentuk gradasi  warna  yaitu  perubahan  warna  biru-hijau pada  konsentrasi  terkecil  dan  pada  konsentrasi yang  semakin  besar  akan  semakin  pudar  karena adanya  peredaman  radikal  bebas  ABTS  oleh senyawa  antioksidan.  Reaksi  ABTS  dan  senyawa antioksidan pada gambar 1.
Radikal  bebas  ABTS  diproduksi  dengan  cara oksidasi  kalium  persulfate  sebelum  penambahan antioksidan.  ABTS  merupakan  radikal  dengan pusat  nitrogen  dengan  karakteristik  warna  biru- hijau,  Ketika  tereduksi  oleh  antioksidan  akan menjadi  bentuk  non  radikal  yang  tidak  bewarna (Magfira, 2018).
Pada  pengujian  aktivitas  antioksidan,  larutan ABTS  control  berfungsi  untuk  mengetahui absorbansi  radikal  ABTS  sebelum  direduksi  oleh sampel.  Selisih  antara  absorbansi  ABTS  yang telah direduksi sampel dan absorbansi kontrolmerupakan sisa radikal ABTS yang terbaca
pada  spektrofotometer  UV-Vis.  Semakin  besar selisihnya  maka  semakin  besar  efektivitas antioksidan sampel (Meliendari, 2012).

## Gambar 1. Reaksi pembentukan radikal bebas ABTS dengan kalium persulfate dan antioksidan (Magfira, 2018)
Absorbansi  ABTS  kontrol  yang  diperoleh yaitu  0,856.  Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan dengan metode ABTS dapat dilihat pada Tabel 2.

## Tabel 2 Hasil pengujian aktivitas antioksidan dengan metode ABTS
Sampel Konsentrasi (μg/mL) Absorbansi Rata - rata Inhibisi IC50 I II III Ekstrak Etanol 8 0,297 0,286 0,239 0,274 67,09 1,657 10 0,232 0,231 0,215 0,223 73,9 12 0,211 0,209 0,119 0,179 79,08 14 0,119 0,118 0,094 0,110 87,14 16 0,076 0,076 0,076 0,056 93,4 Vitamin C 8 0,436 0,432 0,431 0,433 49,41 2,0405 10 0,286 0,337 0,330 0,317 69,7 12 0,197 0,196 0,196 0,196 77,06 14 0,076 0,076 0,076 0,076 90,85 16 0,079 0,078 0,078 0,078 91,12
Tabel  2.  menunjukkan  bahwa  bertambahnya konsentrasi  sampel  menyebabkan  absorbansi
sampel  semakin  menurun  dan  persen  inhibisi meningkat.  Hal  ini  dikarenakan  terjadinya  proses
stokiometri  reaksi  reduksi  senyawa  radikal  bebas ABTS  oleh  senyawa  yang  memberikan  donor hidrogen  sehingga  ABTS  menjadi  senyawa  yang stabil.  Senyawa  aktif  di  dalam  ekstrak  yang memiliki kemampuan penangkal radikal umumnya  merupakan  pendonor  atom  hidrogen (H),  sehingga  atom  H  tersebut  ditangkap  oleh radikal  ABTS  untuk  berubah  menjadi  bentuk netralnya (Apak et al., 2004).
Nilai IC₅₀ ekstrak batang lengkuas dan vitamin C didapat  dari  hasil  perhitungan  persamaan  regresi linier.  Koefisien  y  pada  persamaan  ini  adalah sebagai  IC₅₀,  sedangkan  koefisien  x  pada persamaan  ini  adalah  konsentrasi  dari  sampel yang  akan  dicari  nilainya,  dimana  nilai  dari  x yang  didapat  merupakan  besarnya  konsentrasi yang  diperlukan  untuk  dapat  meredam  50% aktivitas  radikal  ABTS.  Nilai  IC₅₀  dapat  dihitung dari  persamaan  regresi  linier  yang  sebelumnya telah  diperoleh  dengan  mengganti  y  dengan  50 pada  persamaan  tersebut.  Nilai  IC₅₀  merupakan suatu  bilangan  yang  menunjukkan  konsentrasi sampel  uji  yang  mampu  menghambat  proses oksidasi  sebesar  50%.  Semakin  kecil  nilai  IC₅₀ menunjukkan semakin tinggi aktivitas antioksidan (Zuhra et al., 2008).
Gambar 2. Grafik Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Etanol
Gambar 3. Grafik Aktivitas Antioksidan Vitamin C
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan ekstrak  batang  lengkuas  memiliki  aktivitas antioksidan.  Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan ekstrak etanol batang lengkuas diperoleh nilai IC₅₀ sebesar  1,675  μg/mL  dan  aktivitas  antioksidan vitamin  C  memiliki  nilai  IC₅₀  sebesar  2,0405 μg/mL.  Menurut  Molyneux  (2004),  suatu antioksidan dikatakan sebagai antioksidan dengan aktivitas  sangat  kuat  ketika nilai  IC₅₀  kurang  dari 50  μg/mL  (IC₅₀  <  50  μg/mL),  kuat  (50  μg/mL  < IC₅₀  <  100 μg/mL),  sedang  (100 μg/mL  <  IC₅₀  < 150  μg/mL),  lemah  (150  μg/mL  <  IC₅₀  <  200 μg/mL),  dan  sangat  lemah  (IC₅₀  >  200  μg/mL). Sehingga  dapat  diketahui  bahwa  batang  lengkuas memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat  serta vitamin  C  yang  digunakan  sebagai  pembanding termasuk antioksidan yang sangat kuat.
Menurut  Marliana  (2007)  metabolit  sekunder yang  dapat  berpotensi  sebagai  antioksidan, diantaranya  adalah  flavonoid,  polifenol,  saponin, dan  triterpenoid.  Sehingga  dapat diketahui  bahwa flavonoid,  polifenol  dan  triterpenoid  pada  ekstrak batang lengkuas berpotensi sebagai antioksidan. Senyawa  radikal  turunan  dari  senyawa  amina  ini memiliki  tahap  terminasi  yang  sangat  lama. Beberapa  senyawa  alkaloid  lain  yang  bersifat antioksidan  adalah  quinolon,  kafein  yang  dapat bertindak  sebagai  peredam  radikal  hidroksil  dan melatonin yang berperan penting menjaga sel dari pengaruh  radiasi  dan  toksisitas  obat-obatan (Yuhernita  dan  Juniarti,  2011).  Triterpenoid bertindak  sebagai  antioksidan  karena  memiliki rantai  ikatan  rangkap  terkonjugasi  sehingga elektronnya dapat disumbangkan untuk menstabilkan muatan molekul reaktif (Capelli dan Cisewsky, 2007).

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan sebagai berikut:
1. Skrining  Fitokimia  pada  ekstrak  etanol batang lengkuas ( Alpinia galanga ) menunjukan  hasil  positif  terhadap  flavonoid, polifenol, dan triterpenoid sementara saponin menunjukan hasil negatif.
2. Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak etanol  batang  lengkuas  ( Alpinia  galanga )
menggunakan  metode  ABTS  dari  masing- masing  konsentrasi  diperoleh  presentase inhibisi berturut-turut 67,09%, 73,9%,
79,08%,  87,14%  dan  93,4%  sehingga diperoleh  nilai  IC₅₀  1,675  μg/mL.  Ekstrak etanol batang lengkuas (Alpinia galanga) dan pembanding vitamin C menunjukkan
keduanya  memiliki  aktivitas  antioksidan yang  termasuk  dalam  kategori  sangat  kuat. Nilai aktivitas antioksidan lebih kuat terdapat pada Ekstrak etanol batang lengkuas ketimbang  pembanding  vitamin  C  murni yang  memiliki  nilai  IC₅₀  sebesar  2,0405 μg/mL.
.

## SARAN
Dari  hasil  penelitian  ini  perlu  dilakukannya penelitian  lebih  lanjut  mengenai  khasiat  dari batang  lengkuas (Alpinia  galanga) karena memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat  dan berpotensi sebagai bahan obat.

## DAFTAR PUSTAKA
Aji  R.M.  2014.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  pada Ekstrak  Daging  Daun  Lidah  Buaya (Aloe vera )  Menggunakan  Metode  DPPH  (1,1- Diphenil -2- Picrylhydrazyl ). [Skripsi].
Jakarta: UIN Syarif Hidayatullah Apak  R,  Kubilai  GI,  Zyrek  M,  Karademir  SE. 2004.  Novel  total  antioxidant  capacity index for dietary poliphenols and vitamin C ang E, using their cupric ion reducing in the presence  neocuproine:  cuprac  method.  J Agric Food Chem. 52(26 ): 7970-7981 Capelli,  B.,  dan  G.  Cisewsky.  2007. Natural Antaxhantin: King of the Carotenoids . Ditjen  POM.  2000. Parameter  Standar  Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan Pertama . Fitriana  W  D,  Fatmawati  S,  Esram.2015  Uji aktivitas  antioksidan  terhadap  DPPH  dan ABTS dari fraksi-fraksi daun kelor ( Moringa  oleifera ). Prosiding  Simposium nasional  Inovasi  dan  Pembelajaran  Sains . 657-660.
Hartanto.  2001.  Pengaruh  Cara  Pencucian  Daun Tempuyung ( Sonchus arvensis L) Terhadap Kadar Flavonoid Total. [Skripsi].
Yogyakarta: Universitas Sanata Dharma. Hasanah  M,  Andriani  N,  Noprizon.  2016.
Perbandingan  aktivitas  antioksidan  ekstrak etanol daun kersen ( Muntingia calabura L.) hasil  ekstraksi  maserasi  dan  refluks. Scientia . 6(2 ); 84-90
Hutapea,  E.  R.  F.,  Siahaan  L.  O.,  Tambun  R. 2005.  Ekstraksi  pigmen  antosianin  dari kulit  rambutan  ( Nephelium  lappaceum ) dengan  pelarut  metanol. Jurnal  Teknik Kimia USU . 3: 34-40.
Imrawati,  Mus,  S.,  Gani,  S.  A.,  &  Bubua,  K.  I. 2017.  Uji Aktivitas  Antioksidan Fraksi  Etil Asetat  Daun  Kersen  ( Muntingia  calabura
L .)  Menggunakan  Metode  ABTS. Journal of Pharmaceutical and Medicinal Sciences : 2(2 ): 59–62. Lenny, S. 2006. Senyawa Flavanoida, Fenilpropanida  dan  Alkaloida .  Medan:
USU Press.
Magfira,  2018.  Analisis  penghambatan  ekstrak etanol  batang  kembang  bulan  ( Tithonia diversifolia )  terhadap  reaksi  oksidasi  dari radikal  bebas  dengan metode  DPPH  ABTS dan  FRAP.  [Skripsi].  Program  Studi Farmasi.  Fakultas  Farmasi;  Universitas Hasanuddin Makassar.
Mardhiyyah  K.,  Ryandini  Y.  I.,  dan  Y.
Hermawan. 2021. Uji Aktivitas Antioksidan dan Skrining Fitokimia
Perasan  Lengkuas  Merah  dan  Lengkuas Putih. Jurnal Jamu Indonesia. 6 (1) : 23-31 Marliana,  E.  2007.  Analisis  Senyawa  Metabolit Sekunder dari Batang Spatholobu errugineus (Zoll  &  Moritzi)  benth  yang berfungsi  sebagai  antioksidan. Jurnal Penelitian MIPA . 1(1) : 23-29.
Meliendari,  M.  2012.  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Daun Gracia  kyda Roxb.  Dengan Metode  DPPH  dan  Identifikasi  Senyawa Kimia Fraksi yang Aktif. [Skripsi]. Jakarta: Universitas Indonesia.
Molyneux,  P.,  2004.  The  use  of  the  stable  free radical  diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for estimating antioxidant activity. Songklanakarin Journal Science Technology . 26(2 ): 211-219.
Puspitasari,  A.D  &  Sumantri.  2018.  Aktivitas Antioksidan  Perasan  Jeruk  Manis  ( Citrus sinensis )  dan  Jeruk  Purut  ( Citrus  hystrix ) menggunakan  Metode  ABTS. Majalah Farmasi dan Farmakologi . 23(2 ):48-51
Rizkayanti,  R.,  Diah,  A.  W.  M.,  dan  Jura,  M.  R. 2017.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Air  dan  Ekstrak  Etanol  Daun  Kelor ( Moringa
Oleifera LAM). Jurnal Akademika Kimia . 6(2) : 125-131.
Sami,  F.J  dan  Sitti,  R.  2015.  Uji  Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Metanol Bunga
Brokoli  ( Brassica  oleracea L .  var. Italica) Dengan  Metode  DPPH  (2,2diphenyl-1- picrylhydrazyl)  dan  Metode  Abts  (2,2 azinobis (3- etilbenzotiazolin)-6-asam sulfonat). Jurnal  Fitofarmaka  Indonesia . 2(2) : 107-110.
Sen,  S.,  Chakraborty  R.  2011.  The  role  of antioxidant in human health. ACS Symposium Series . 1083 : 1-37.
Setiawan,  F.,  Yunita,  O.,  & Kurniawan, A. 2018. Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol
Kayu Secang dan FRAP. Media
Pharmaceutica Indonesia , 2(2): 82–89. Theodorus  E.,  Muhartono,  dan  T.  G.  Putri.  2020.
Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Rimpang  Lengkuas  ( Alpinia  galanga ) Terhadap  Gambaran  Histopatologi  Otak Mencit  ( Mus  Musculus L)  yang  Diinduksi Monosodium  Glutamat.  Jurnal Ilmiah Mahasiswa  Kedokteran  Indonesia.  7  (2) : 14-20. Torar  GMJ,  Lolo  WA  &  Citraningtyas  G.  2017. Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  biji ( Carica  papaya  L. )  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Jurnal Kesehatan . 7 (3): 1-5. Triyem.  2010.  Aktivitas  Antioksidan  dari  Kulit Batang  Manggis  Hutan  ( Garcina  cf. Bancana Miq.). [Tesis]. Depok: Universitas Indonesia. Watson,  D.G.  2009. Analisis  Farmasi  Edisi  ke-2 . Jakarta: EGC. Wulansari,  A.  N.  2018.  Alternatif  Cantigi  Ungu
(vaccinium varingiaefolium)
Sebagai Antioksidan  Alami:  REVIEW. Farmaka . 16(2 ): 419-429.
Yuhernita  dan  Juniarti.  2011.  Analisis  Senyawa Metabolit  Sekunder  Dari  Ekstrak  Metanol Daun  Surian  Yang  Berpotensi  Sebagai Antioksidan. Makara Sains . 15(1) : 48- 52. Zuhra,  C.F.,  Taringan,  J  dan  Sihotang,  H.  2008. Aktivitas  Antioksidan  Senyawa  Flavonoid dari  Daun  Katuk  ( Sauropus  androgumus (L) Merr.). Jurnal Biologi Sumatera . 3  (1): 7-10.