Jurnal Pharmascience, Vol. 06 , No.01, Februari 2019, hal: 10 - 17 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience

## Research Article

## Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Kulit Jeruk
Siam Banjar ( Citrus reticulata ) Terhadap
Pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa
* Dwi Rizki Febrianti , Yugo Susanto, Rakhmadhan Niah, Siti Latifah
Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin Email : dwirizkyfeby@gmail.com

## ABSTRAK
Jeruk siam yang berkembang di Kalimantan Selatan telah dikukuhkan menjadi varietas  unggul  nasional  dengan  nama  jeruk  siam  Banjar.  Kulit  jeruk  belum dimanfaatkan secara optimal hanya dibuang sebagai limbah. Kulit jeruk mengandung beberapa  senyawa  salah  satunya  mengandung  senyawa  aktif  minyak  atsiri.  Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui adanya aktivitas antibakteri minyak atsiri kulit jeruk  siam  Banjar  ( Citrus reticulata )  terhadap  pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa . metode penarikan minyak atsiri kulit jeruk siam Banjar menggunakan metode destilasi air.  Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  difusi  cakram terhadap  bakteri Pseudomonas  aeruginosa. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa minyak  atsiri  kulit  jeruk  siam  Banjar  diperoleh  sebanyak  10  mL  (0,58%),  berwarna kuning, aroma khas jeruk, bentuk cair, rasa getir dan tidak ada noda transparan. Hasil penelitian  uji  aktivitas  menunjukkan  minyak  atsiri  kulit  jeruk  siam  Banjar  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa .  Pada  volume  50  µL,  75 µL, dan 100 µL minyak atsiri kontrol positif (ciprofloxacin) sedangkan kontrol negatif ( aqua pro injection ). diameter zona bening disekitar cakam  dengan rata-rata diameter zona hambat yang dihasilkan beturut-turut 3,55 mm, 4,54 mm, 5,14 mm, 22,38 mm, dan 0 mm.
Kata  kunci:  Kulit  jeruk  siam  Banjar  ( Citrus  reticulata ),  Minyak  atsiri, Pseudomonas aeruginosa.

## ABSTRACT
Jeruk  siam  that  develop  in  South  Kalimantan  have  been  confirmed  as  national superior  varieties  by  the  name  of  jeruk  siam  banjars.  Citrus  skin  has  not  been  used optimally only as  waste. Orange peel  contains several  compounds, one of which  contains active  compounds  of  essential  oils.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the antibacterial  activity  of  essential  oils  of  jerk  siam  banjars  skin  (Citrus  reticulata)  to  the growth of Pseudomonas aeruginosa. method of withdrawal of jeruk siam banjars essential oil  using  a  water  distillation  method.  Antibacterial  activity  test  was  carried  out  using  the disc diffusion method against the bacterium Pseudomonas aeruginosa. The results showed
that  10  mL  (0.58%)  of  essential  oil  from  the  jeruk  siam  banjars,  yellow,  orange  aroma, liquid  form, bitter taste, and no transparent stains. The results of the activity test showed that the essential oil of the skin of the jeruk siam banjars could inhibit the growth of the bacterium  Pseudomonas  aeruginosa.  At  the  volume  of  50  µL,  75  µL,  and  100  µL  of essential oil control positive (ciprofloxacin) while the negative control (aqua pro injection). the  diameter  of  the  clear  zone  around  the  paper  disk  with  the  average  diameter  of  the inhibition  zone  produced  was  3.55  mm,  4.54  mm,  5.14  mm,  22.38  mm  and  0  mm respectively.
Keywords: jeruk siam banjar (Citrus reticulata), essential oil, Pseudomonas aeruginosa.

## I. PENDAHULUAN
Jeruk siam ( Citrus reticulata ) merupakan  jenis  jeruk  yang  berkembang pesat  dalam  sepuluh  tahun  terakhir  ini (Qomariah  R. et  al ,  2016).  Jeruk  siam mempunyai  kesesuaian  agroekologi  yang cukup luas, termasuk cocok dibudidayakan di  lahan  rawa  pasang  surut,  Jeruk  siam yang  berkembang  di  Kalimantan  Selatan telah  dikukuhkan  menjadi  varietas  unggul nasional  dengan  nama  jeruk  siam  Banjar (Departemen Pertanian, 2013).  Kulit jeruk mengandung  senyawa  aktif  minyak  atsiri dalam  kadar  yang  tinggi  (Astarini et  al . 2010).
Senyawa  yang  terkandung  dalam minyak  atsiri  jeruk  (Citrus  oil)  seperti  α- pinene,  β-pinene,  mirsena,  oktanal,  β- terpinena,  limonen,  osimena,  linannon, sitronellal,  sabinen,  dan  1-sikloheksil-2- buten-1-ol  wungsintaweekul et  al (2010, cit  Febrianti  D.R.,  2012),  bermanfaat dalam bidang kesehatan yaitu menghambat pertumbuhan  sel  kanker,  antioksidan, antiaging,  menghindarkan  dari  radikal bebas  dan  antibakteri  (Sawamura et  al ,
2010).  Hasil  dari  penelitian  sebelumnya Soumaya  B.,  (2011)  meyatakan  bahwa senyawa  utama  minyak  atsiri  kulit  jeruk siam Banjar adalah limonen (92,4%), yang dapat menghambat atau membunuh pertumbuhan  bakteri  yang  berdampak pada penyakit-penyakit infeksi bakteri..

## II. METODE

## A. Destilasi  Minyak  Atsiri  Kulit  Jeruk Siam Banjar
Kulit  jeruk  yang  sudah  dikupas kemudian  dirajang,  kemudian  diamkan (diperam)  pada  kondisi  suhu  ruang  dalam waktu  1  hari.  ditambahkan  air  hingga sampel  terendam.  Kemudian  dipanaskan sampai  mendidih  sampai  uap  air  naik. Destilasi berlangsung pada suhu 80-100˚C selama  7-8  jam.  Hasil  destilasi  minyak atsiri  dipisahkan  menggunakan  corong pisah  untuk  memisahkan  air  dengan minyak  yang  masih  tercampur.  disimpan dalam  botol  coklat  tertutup  rapat  dan terlindung  dari  cahaya  di  tutup  dengan alumunium  foil  serta  menyimpannya  pada suhu kamar.

## B. Sterilisasi alat
Alat  yang  mempunyai  mulut  ditutup dengan  kapas  yang  dilapisi  aluminium foil.n Bungkus menggunakan kertas sampul  coklat.  Menggunakan  oven  60- 180ᵒC
C. Pembuatan media Nutrien agar 2,4  gram  Nutrien  Agar  ditambah  120 ml Aquades, panaskan hingga larut dan ph mencapai  6,8.  sterilkan  dengan  autoklaf suhu 121'c selama 15 menit.
D. Pembuatan Standar Mc. Farland 9,95 ml H2SO4 1% ditambah 0,05 ml
BaCl2  1%  dicampur  dan  homogenkan. kekeruhan  suspensi  bakteri  uji  samakan kekeruhan  suspensi  standar    Mc.  Farland 0,5

## E. Pembuatan Suspensi Bakteri
Sebanyak 1 ose biakan murni ditambah  2  ml  NaCl  0,9%.  bandingkan dengan kekeruhan standar 0,5 Mc. Farland (biakan  cair  yang  kekeruhannya  setara dengan  0,5  Mc.  Farland  mempunyai populasi 1,5 × 108 CFU/ml ) F. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Dengan Metode Cakram Kirby-bauer
disebarkan
biakan bakteri
Pseudomonas  aeruginosa    pada  lempeng agar  Na.  kemudian  diletakkan  diatas  nya cakram kertas yang telah direndam selama ±  2  jam  dengan  minyak  atsiri  kulit  jeruk siam Banjar menggunakan volume 50 μL,
75 μL, 100 μL Kontrol postif (ciprofloxacin)  dan  kontrol  negatif  ( Aqua
Pro  Injection ).  Menginkubasikan  media pada  suhu  37˚-  42˚C  selama  24-48  jam. diMengukur  diameter  zona  hambat  yang terbentuk disekitar cakram dengan menggunakan jangka sorong.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Destilasi  (penyulingan)  adalah  cara pemisahan  zat  cair  dari  campurannya berdasarkan  perbedaan  titik  didih  atau kemampuan  zat  untuk  menguap  (K.B.A. Walangare,  2013).  Prinsip  destilasi  adalah uap  dari  air  digunakan  untuk  mengakat minyak  atsiri  dari  dalam  jaringan  kulit jeruk  dan  kemudian  didinginkan  dengan air  mengalir  pada  kondensor  (Faisal  A., 2013).  Tujuan  destilasi  yaitu  untuk memurnikan  zat  cair  pada  titik  didihnya dan  memisahkan  minyak  atsiri  dari  kulit jeruk  siam  Banjar.  Pemilihan  metode destilasi  untuk  menghasilkan  kualitas minyak astiri dan yield limonen didapatkan  yang  paling  besar  adalah dengan metode destilasi, karena metode ini dapat  membawa  sebagian  besar  limonen yang terdapat dalam kulit jeruk (Kurniawan A., 2008).
Pada  proses  destilasi  akan  terjadi peristiwa  hidrodifusi  yang  mengakibatkan lisis dinding sel tanaman sehingga minyak yang terkandung didalamnya akan terdorong  keluar  (Abdjul  dkk,  2012). Lisisnya pada dinding kulit jeruk diakibatkan  karena  adanya  kontak  air
mendidih  yang  dihasilkan  dari  pemanasan pada alat destilasi dengan kulit jeruk yang sebelumnya  telah  dipreparasi,  selanjutnya uap  air  akan  membawa  partikel-partikel minyak  yang  terkandung  didalam  kulit jeruk ikut menguap bersamaan dengan uap air (Alfianur, 2017).
Minyak  atsiri  yang  dihasilkan  masih belum  murni  (bercampur  dengan  air) setelah  dipisahkan  dengan  menggunakan corong  pisah  didapatkan  hasil  destilat (minyak  atsiri).  Berat  jenis  minyak  atsiri lebih kecil dari air sehingga terbentuk dua fase, minyak diatas dan air dibawah untuk itu  alat  yang  tepat  untuk  pemisahan minyak  atsiri dan  air  adalah corong pisah. Prinsip  kerja  corong  pisah  yaitu  untuk memisahkan  zat/senyawa  tertentu  dalam sampel berdasarkan kelarutan dalam pelarut  tertentu  yang  memiliki  perbedaan fase.  Campuran  dua  fase  dimasukkan kedalam corong pisah kemudian didiamkan agar pemisahan antara dua fase berlangsung,  penyumbatan  dan  keran corongdibuka  dan  dua  fase  larutan  ini dipisahkan  dengan  mengontrol  keran corong.
Hasil  minyak  atsiri  dari  kulit  jeruk siam  Banjar  ( Citrus  reticulata )  yang  telah diperam  dengan  metode  destilasi  air  pada suhu  80-100˚C  selama  7-8  jam  dihasilkan minyak  atsiri  dari  1,8  kg  kulit  jeruk sebanyak 10 mL dengan randemen sebesar (0,58%).  Pemeriksaan  uji  organoleptik
dilakukan  dengan  menggunakan  indera manusia. Hasil uji organoleptik menunjukkan  bahwa  minyak  atsiri  kulit jeruk  siam  Banjar,  bau  khas  jeruk,  bentuk cair,  rasa  getir,  tekstur  licin  dan  tidak  ada noda, yang dilakukan dengan cara meneteskan  satu  tetes  minyak  atsiri  pada kertas  saring,  bila  dibiarkan  maka  minyak atsiri  pada  kertas  saring  akan  menguap dengan  sempurna  tanpa  meninggalkan noda trasparan.
Pengujian  daya  hambat  minyak  atsiri kulit  jeruk  siam  Banjar  ( Citrus  reticulata ) menggunakan metode difusi cakram karena  bakteri  Pseudomonas  aeruginosa yang bersifat aerob obligat serta pengujian tidak  perlu  memerlukan  peralatan  khusus dan  tidak  memerlukan  tenaga  yang  terlalu banyak  dibandingkan  dengan  metode- metode  lain  (Oktovia,  2017).  Metode  ini merupakan metode yang dilakukan dengan cara merendam zat yang akan diuji dengan papper disk kemudian diletakkan dipermukaan media yang sudah disebarkan dengan  bakteri  lalu  diinkubasi  selama  24 jam.  Penilaiannya  berdasarkan    zona hambat yang terdapat daerah bening maka minyak  atsiri  kulit  jeruk  siam  Banjar ( Citrus  reticulata )  memiliki  kemampuan untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri (kumar, 2013).
Penelitian ini dilakukan untuk menguji aktivitas antibakteri  minyak  atsiri kulit  jeruk  siam  Banjar  ( Citrus  reticulata )
dengan cara mengambil biakan Pseudomonas aeruginosa dengan ose steril dan  diencerkan  menggunakan  NaCl  0,9% karena  NaCl  mempunyai  tekanan  osmotik yang  tinggi,  NaCl  dapat  mengurangi kelarutan oksigen, sehingga mikroba aerob dapat  dicegah    pertumbuhannya,  sampai ekuivalen dengan standar kekeruhan Mc.Farland 0.5 sebagai peyetaraan volume mikroba,  Mc.Farland  dimaksudkan  untuk menggantikan perhitungan bakteri satu per satu  dan  untuk  memperkirakan  kepadatan
sel  yang  akan  digunakan  pada  prosedur pengujian antimikroba (Haris dkk, 2013).
Bakteri  diinkubasi  pada  suhu  ±  37˚ karena pada suhu inilah bakteri mengalami fase  pertumbuhan  pada  fase  stasioner dimana  pada  fase  ini  laju  pertumbuhan bakteri  sama  dengan  laju  kematiannya, sehingga  jumlah  bakteri  keseluruhan  akan tetap  (Niah  R.,  2018).  Inkubasi  selama  24 jam agar spora yang masih ada pada bahan tersebut  tumbuh  menjadi  sel-sel  vegetatif. Adapun hasil pengukuran diameter
Perlakuan Diameter (mm) Diameter rata-rata mm ± SD I II III IV V Volume 50 µL 3,41 3,47 3,78 3,73 3,37 3,55 ± 0,19 Volume 75 µL 4,37 4,3 4,52 4,76 4,75 4,54 ± 0,21 Volume 100 µL 4,95 5,35 4,59 5,37 5,44 5,14 ± 0,34 K (+) Ciprofloxacin 21,22 22,33 23,3 21,88 23,2 22,38 ± 0,88 K (-) Aqua P. Injection - - - - - 0 ± 0
Gambar  1. Hasil  zona  hambat  dari  perlakuan  uji  penelitian,  memperlihatkan  (A)  Replikasi  1,  (B) Replikasi 2, (C) Replikasi 3, (D) Replikasi 4, (E) Replikasi 5. Bagian (1) menunjukan kontrol positif, (2) kontrol negatif, (3) volume 50 µL, (4) volume 75 µL, (5) volume 100 µL.
Tabel I. Hasil diameter zona hambat dalam uji penelitian minyak atsiri kulit jeruk siam Banjar (Citrus reticulata) terhadap pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa
tersebut  adalah  sebagai  berikut.Hasil peneltian  dalam  bentuk  tabel  I.  dapat dilihat adanya perbedaan rata-rata diameter  zona  hambatan  pada  masing- masing  kelompok  perlakuan.  Semakin tinggi volume minyak atsiri yang digunakan,  semakin  besar  diameter  zona hambatan yang terbentuk.
Dilihat  dari  rata-rata  hasil  penelitian pada  tabel  diatas  minyak  atsiri  kulit  jeruk siam  Banjar  volume  50  µL  menghasilkan zona  hambatan  sebesar  3,55  mm,  volume 75  µL  menghasilkan  zona  hambatan sebesar  4,54  mm,  volume  100  µL menghasilkan zona hambatan sebesar 5,14 mm, sedangkan kontol positif menghasilkan  zona  hambatan  sebesar 22,38  mm,  dan  kontol  negatif  tidak menghasilkan zona hambatan.
Dalam  penelitian  ini  kontrol  positif yang  digunakan  adalah  ciprofloxacin  10 µg/mL,  dimana  diameter  zona  hambat yang terbentuk menandakan bahwa tahapan  kerja  yang  dilakukan  telah  benar dan  diameter  zona  hambatan  juga  sangat kuat  yaitu  22,38  mm.  Menurut  penelitian sebelumnya Obidi (2013) sebagai perbandingan dosis dari aktivitas antibakteri  minyak  jeruk  dari  patogen terpilih menggunakan ciprofloxacin sebagai  kontol  positif,  dosis  ciprofloxacin yang  digunakan  adalah  0,005%  memiliki zona  hambat  sebesar  15  mm.  Menurut Aviv Triono (2012), ciprofloxacin
mempunyai aktivitas baik terhadap Pseudomonas  aeruginosa  bekerja  dengan cara  mempengaruhi  enzim  DNA  gyrase pada  bakteri.  Semakin  tinggi  volume minyak  atsiri  kulit  jeruk  siam  Banjar, maka  semakin  besar  pula  zona  hambat yang terbentuk.
Perbedaan  zona  hambat  berbagai volume  ini  disebabkan  selain  faktor volume,  metode  difusi,  jenis  bakteri,  jenis bahan antimikroba juga menentukan kemampuan  menghambat  pertumbuhan kuman, adanya perbedaan jumlah kandungan  senyawa  aktif  pada  masing- masing  volume  seperti  limonen.  Limonen bekerja  dengan  cara  merusak  integritas membran sitoplasma yang berperan sebagai  barrier  permeabilitas  selektif, membawa  transport  aktif  dan  kemudian mengontrol  komposisi  internal  sel,  jika terjadi  kerusakan  pada  fungsi  integritas membrane  sitoplasma,  makromolekul  dan ion  keluar  sel,  kemudian  sel  dirusak sehingga terjadi kematian.

## IV. KESIMPULAN
Hasil penelitian uji aktivitas menunjukkan  minyak  atsiri  kulit  jeruk siam Banjar dapat menghambat pertumbuhan bakteri Pseudomonas aeruginosa .  Pada  volume  50  µL,  75  µL, dan  100  µL  minyak  atsiri  kontrol  positif (ciprofloxacin)  sedangkan  kontrol  negatif ( aqua pro injection ). diameter zona bening
disekitar cakam  dengan rata-rata diameter zona hambat  yang dihasilkan beturut-turut 3,55  mm,  4,54  mm,  5,14  mm,  22,38  mm, dan 0 mm

## DAFTAR PUSTAKA
Abdjul  N,  M,  Paputangan  &  S  Doengo,
2012,  Analisis  Komponen    Minyak Atsiri  Pada  Tanaman  Nilam  Hasil Destilasi Uap Air Dengan Menggunakan KG-SM. Alfianur.,  2017,  ‘Identifikasi  Minyak
Atsiri  Kulit  Jeruk  Manis  (Citrus Sinensis  L)  Asal  Solerejo  Dan  Uji
Aktivitas  Antibakteri  Menggunakan Metode  Kertas  Cakram’,  Sikripsi Universitas  Islam  Negeri    Maulana Malik Ibrahim, Malang.
Astarini,  N.  P.  F.,  Burhan  R.Y.  P.,  Zetra,
Y.,  2010,  ‘Minyak  Atsiri  Dari  Kulit
Buah Citrus Grandis, Citrus Aurantium (L.) Dan Citrus Aurantifolia (Rutaceae) Sebagai Senyawa Antibakteri Dan Insektisida’, Skripsi, Fakultas Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan
Alam, Jurusan Kimia, Institut
Teknologi 10 Nopember, Surabaya. Aviv  Triono,  Purwoko  Akhmad  Edy., 2012, ‘Efektifitas Antibiotik Golongan Sefalosporin Dan Kuinolon Terhadap Infeksi Saluran
Kemih’, Jurnal  Mutiara  Medika
Vol. 12 No. 1 : 6-11.
Departemen  Pertanian.,  2013. Peraturan Menteri  Pertanian  Tentang  Sistem Pertanian Organik . Departemen Pertanian, Jakarta.
Faisal  Ade.,  2013,  “Isolasi  Minyak  Atsiri Dari  Daun  Jeruk  Purut”,  Laporan Praktikum Organic Chemistry, Diakses  Pada  2  Agustus  2018, Https://Dekadechemie.Wordpress.Co
m/2013/04/07/Pembuatan-Minyak- Atsiri-Dari-Cytrus-Hystrix/ Febrianti  D.,R.,  Khairina  N.,  Alisa  P.N., 2018, ‘Uji Aktivitas Anti
Mikroorganisme  Ekstrak  Jeringau
(Acorus  Calamus  L.) Terhadap Jamur Candida Albicans Dan
Bakteri Staphylococcus  Aureus’ , Jurnal  Insan  Farmasi  Indonesia , Vol.1 No.1 :  96-103.
Febrianti  Dwi  Rizki.,  2013,  Formulasi Sediaan  Sabun  Mandi  Cair  Minyak Atsiri  Jeruk  Purut (Citrus  Hystrix
Dc.) Dengan Kokamidopropil Betain Sebagai Surfaktan, Skripsi Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Kumar,  K.,  Gousia.,  Anupama,  M.,  & Naveena,  L.,  2013,  A  Review  On Phytochemical  Constituents  And Biological  Assays  Of  Averrhoa
Bilimbi  L.,  International  Journal  Of Pharmacy And Pharmaceutical Science Research. 3 (4), 136-139. Kurniawan  A,  Chandra  K,  Mudjijati., 2008, ‘Ekstraksi Minyak Kulit Jeruk Dengan Metode Distilasi, Pengepresan  Dan  Leaching’, Jurnal Widya Teknik , Surabaya. Vol. 7 No.1
Hal:15-24. Niah  Rakhmadhan  .,  2018,  ‘Uji  Aktivitas Ekstrak Etanol 96% Daun Karamunting (Melastoma Malabathricum L.) Terhadap
Salmonella  Typhi ‘, Jurnal  Insan Farmasi  Indonesia ,  Vol.1  No.1  : 113-121
Oktovia Dewi Hartini., 2017, Uji Aktivitas Bakteri Menggunakan Metode Cakram  Disk  (Kirby-Bauer), Skripsi Politeknik  Kesehatan  Kementrian Kesehatan Banjarmasin, Kotabaru.
Qomariah  R.,  Hasbianto  A.,  Lemayati  S., Hasan  Z.H.,  2016,  ‘Jeruk  Siam
(Citrus Suhuiensis) Produk Unggulan  Di  Lahan  Rawa  Pasang Surut Kalimantan Selatan’,
Prosiding  Seminar  Nasional  Inovasi Teknologi  Pertanian ,  Banjarbaru,
Hal: 987-993.
Sawamura,  M.,  2010,  ‘Citrus  Essential Oils:  Flavor  And  Fragrance’. John Wiley  &  Sons,  In, Publication.  New Jersey
Soumaya B., Rahali Fatma Zohra,
Ourghemmi  Iness,  And  Tounsi Moufida  Sa’idani.,  2012,  ‘Changes Of  Peel  Essential  Oil  Composition Of Four Tunisian Citrus During Fruit Maturation’, The  Scientific  World
Journal . Walangare    K.  B.  A.  Dkk,  2013, “Rancangan  Bangunan  Alat  Konversi  Air Laut  Menjadi  Air  Murni  Dengan  Proses Destilasi Sederhana Menggunakan Pemanasan Elektrik”, Jurnal Teknik Elektro Dan Komputer , Http://Andi94nurfadila.Blogspot.Com/201 5/05/Destilasi-Dengan-Daun-Seledri.Html