## PENETAPAN KADAR  FLAVONOID TOTAL EKSTRAK DAUN PARE METODE KOMPLEKS KOLORIMETRI DENGAN PENGUKURAN ABSORBANSI SECARA SPEKTROFOTOMETRI
Agung Nur Cahyanta aku.cahyanta@gmail.com Jurusan Farmasi STIKES BHAMADA Slawi Jl. Cut Nyak Dien, Desa Kalisapu (0283)3317706

## Abstrak
Secara  empiris  daun  pare  ( Momordicacharantia )  sangat  berpotensi  untuk  dijadikan  sediaan  obat tradisional.  Untuk  itu  perlu  dikembangkan  metode  standardisasi  sediaan  obat  tradisional,  salah  satunya adalah  dengan  penetapan  kadar  salah  satu  kandungan  senyawa  aktif  dalam  daun  pare.  Penelitian sebelumnya  menyebutkan    bahwa  daun  pare  memiliki  kandungan  senyawa  flavonoid  sehingga  dapat dilakukan  penentuan  kadar  flavonoid  total  ekstrak  etanol  daun  pare  secara  kolorimetri  komplementer dengan  aluminium  klorida  untuk  menentukan  golongan  flavon  dan  flavonol.    Dari  hasil  penelitian diperoleh kandungan flavonoid total dalam daun pare sebesar 8,30% b/b.
Kata Kunci : Pare, Flavonoid
1. Pendahuluan Keanekaragaman hayati tumbuhan tropis Indonesia merupakan sumber
kekayaan yang  potensial. Indonesia dikenal sebagai Negara pemilik hutan tropis terbesar di  dunia,  menempati  urutan  ke-3  setelah Brazil  dan  Zaire. 1 Secara  empiris  daun  pare digunakan sebagai penyubur rambut. 2 Di India,  seluruh  bagian  tanaman  pare  dipakai sebagai  obat,  mulai  dari  akar,  daun,  buah, dan bijinya. Akarnya dipakai untuk mengobati  penyakit  mata;  daunnya  untuk memperlancar  buang  air  besar,  kulit terbakar,  obat  cacing,  memperbanyak  air susu  ibu,  menambah  nafsu  makan  dan sebagai  obat  luar  untuk  menyuburkan rambut. 3 Flavonoid  yang  terdapat  dalam daun  pare  diduga  mempunyai  aktivitas sebagai  bakterisid  dan  antivirus  yang  dapat menekan  pertumbuhan  bakteri  dan  virus sehingga  dapat  mempercepat  pertumbuhan rambut  dan  mencegah  kerontokan. 4 Untuk itu  perlu  dikembangkan  metode  yang  dapat digunakan untuk standarisasi simplisia salah satunya  dengan  penetapan  kadar  salah  satu kandungan senyawa. Dari penelitian sebelumnya  diketahui  bahwa  daun  pare ( Momordicacharantia) memiliki  kandungan senyawa flavonoid. Penentuan jumlah flavonoid  total  ekstrak  etanol  daun  daun Pare adalah secara
kolorimetri komplementer  alumunium  klorida  untuk
menentukan golongan flavon dan flavonol.
2. Metode Penelitian
 Bahan
Bahankimiayang digunakanantaralainetanol96%,  Aluminium klorida,  Standart Kuersetin, Natrium Nitrit, Natrium Hidroksida.
 Alat Thermostat Water bath HH-6, rotary evaporator Heidolph, moisture  analyzer halogen Shimadzu  MOC63u,  UV  Mini  - 1240 spektrofotometer Shimadzu, oven drying Getra.
 Pembuatan Simplisia
Daun  pare  yang  sudah  dideterminasi  di diperoleh  dari  daerah  Surodadi  kabupaten Tegal  disortasi  dari  bahan-bahan  pengotor. Dilakukan  pencucian  dengan  air  mengalir hingga  bersih  ditiriskan  kemudian  dirajang dan dikeringkan dengan menggunakan oven drying  pada  suhu  kurang  dari  60 0 C  selama 8  jam.    Simplisia  kemudian  digiling  dan diayak  dengan  pengayak  mesh  60  menjadi serbuk  dengan  ukuran  yang  homogen  dan disimpan  pada  wadah  yang  kering  tertutup rapat  dalam  ruangan  yang  terlindung  dari cahaya matahari.
 Ekstraksi
Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  pare,  cairan penyari  digunakan  etanol  96%.  Maserasi dengan  merendamserbuk  simplisia  200gram
dalam  2    literetanol  96%,  kemudiandikocok selama  6  jam  menggunakan shaker dan didiamkan  selama  18  jam.  Maserat  disaring menggunakan  penyaring  vakum  kemudian dipisahkan dari ampasnya.
Ampas dimaserasi  ulang  dan  disaring  kembali sebanyak  2kali  dengan  cara  yang  sama. Semua  maserat  dikumpulkan  dipekatkan dengan rotary evaporator suhu 50 0 C dengan kecepatan  50  rpm,  selanjutnya  ekstrak  cair diuapkan dengan waterbath pada suhu  50 0 C, sampai  terbentuk  ekstrak  kental  yang  tidak bisa dituang.

##  Penentuan Flavonoid Total
Penentuan  flavonoid  total  dalam  ekstrak dilakukan  untuk  mengetahui  prosentase kandungan  flavonoid  total  dalam  ekstrak daun Pare menggunakan metode kolorimetri aluminium kloridadengan pengukuran absorbansi secara spektrofotometri . 5  Pembuatan Kurva Standar Kuersetin Kuersetin  10,0  mg  dilarutkan  dalam  labu takar  10  mL  dengan  pelarut  etanol  hingga tanda  (kadar  kuersetin  menjadi  1mg/mL atau  1000µg/mL).    Lalu  larutan  induk 1000µg/mL  diambil  sebanyak  1  mL dilarutkan  dalam  labu  takar  10  mL  dengan pelarut etanol hingga tanda (kadar kuersetin menjadi  100µg/ml).    Dibuat  kurva  baku dari  larutan  induk  100µg/ml  dengan  cara memipet  0,5  ;  1,0  ;  1,5    dan  2,0  mL, dilarutkan  ke  dalam  10  mL  dengan  pelarut etanol  (kadar  larutan  standart  menjadi  5  ; 10 ; 15 ;  dan 20 µg/mL).  Sebanyak 0,5 mL dari  masing-masing  konsentrasi  larutan direaksikan  dengan  2  ml  akuades  dan  0,15 ml  NaNO 2 5  %  kemudian  didiamkan selama  6  menit.    Menambahkan  sebanyak 0,15  mL  AlCl 3 10%  kedalam  larutan, kemudian  didiamkan  kembali  selama  6 menit.    Larutan  direaksikan  dengan  2  mL NaOH  4%,  kemudian  diencerkan  dengan akuades  hingga  volume  total  5  mL  dan didiamkan  15  menit.    Diukur  absorbansi larutan  standart  pada  panjang  gelombang 510  nm  dengan  spektrofotometer  UV-Vis. Kurva  standart  diperoleh  dari  hubungan antara konsentrasi kuersetin (µg/ml) dengan
absorbansi .

##  Absorbansi Ekstrak
Sebanyak    10,0  mg    ekstrak  dilarutkan dalam  labu  takar  10  ml  dengan  pelarut etanol hingga tanda (kadar ekstrak menjadi 1mg/mL  atau  1000µg/mL).    Lalu  larutan induk  1000µg/mL  diambil  sebanyak    0,5 mL  direaksikan  dengan  2  ml  akuades  dan 0,15  ml  NaNO 2 5  %  kemudian  didiamkan selama  6  menit.    Sebanyak  0,15  mL  AlCl 3 10% ditambahkan kedalam larutan, kemudian  didiamkan  kembali  selama  6 menit.    Larutan  direaksikan  dengan  2  mL NaOH  4%,  kemudian  diencerkan  dengan akuades  hingga  volume  5  mL  dan didiamkan  15  menit.    Diukur  absorbansi larutan  pada  panjang  gelombang  510  nm dengan spektrofotometer UV-Vis.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Data morfologi dari daun Pare menunjukkan daun berwarna Hijau, tunggal, bertangkai,  berbentuk  menjari  membulat dengan pangkal bentuk jantung.
Gambar daun Pare’
Gambar 1 . Morfologi daun Pare
Tabel 1 .  Morfologi daun pare Spesifikasi Keterangan Warna Hijau Permukaan Agak kasar, berambut Ukuran rata-rata Panjang 12 cm, lebar 10 cm Ujung daun Menyirip Pangkal daun Seperti jantung Tepi daun Berombak
Susunan tulang daun Bertulang menyirip Jumlah helai daun Tunggal Bentuk Menjari
Ekstrak  etanol  yang  dihasilkan  dari daun Pare adalah ekstrak kental warna hijau pekat  dengan  berat  46,20  gr  dengan rendemen 15,4% .
Tabel 2 . Hasil Uji susut pengeringan Simplisia Daun Pare
Susut pengeringan memberikan batasan besarnya senyawa yang hilang pada saat proses pengeringan, dari hasil pengujian diperoleh  bahwa  nilai  susut  pengeringan untuk  simplisia  daun  pare  sebesar  5,792  % yang  berarti  jumlah  senyawa  yang  hilang pada  saat  proses  pengeringan  sebesar 5,792%.    Pengujian  kadar  air  tidak dilakukan  karena  hasil  susut  pengeringan  < 10  %,  dan  bahan  simplisia  yang  digunakan tidak  mengandung  minyak  atsiri  hal  ini sesuai  dengan  literatur  bahwa  dalam  hal khusus  (jika  bahan  tidak  mengandung minyak  atsiri  dan  sisa  pelarut  organik menguap)  susut  pengeringan identik  dengan kadar  air. 14 Jika  kadar  air  dalam  bahan
masih  tinggi  dapat  mendorong  enzim melakukan
aktifitasnya mengubah kandungan  kimia  yang  ada  dalam  bahan menjadi  produk  lain  yang  mungkin  tidak lagi  memiliki  efek  farmakologi  seperti senyawa  aslinya.  Sesuai  dengan  Peraturan Ka.  BPOM  RI  No.12  Tahun  2014  tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional kadar air untuk  simplisia  yang  dipergunakan  sebagai obat adalah ≤ 10%.
Tabel 3 Konsentrasi dan absorbansi dari Kuersetin
Gambar 1. Kurva Kalibrasi Kuersetin
y = 0.0125x + 0.0056 R² = 0.9977 0 0.1 0.2 0.3 0 10 20 30 A b sor b ansi Konsentrasi µg/mL Simp lisia (g) Botol (g)  (botol+s impli- sia) bobot sebelum penetapa n (g) (botol+s implisi- a) bobot setelah penetapa n (g) Susut penge rin- gan (g) Perse n susut penge ringan (%) 1,0 92 32,338 33,430 33,36 8 0,0 62 5,6 78 1,0 99 32,465 33,561 33,49 8 0,0 63 5,7 32 1,0 39 32,385 33,424 33,36 2 0,0 62 5,9 67 Rata-rata 5,7 92 Konsentr asi (µg/mL) Absorbansi pada 510 nm Rata- rata (%) A1 A2 A3 0 0,00 0 0,00 0 0,00 0 0,000 5,0 0,07 2 0,07 3 0,07 2 0,072 10 0,13 7 0,13 6 0,13 5 0,136 15 0,19 1 0,19 3 0,19 2 0,192 20 0,25 4 0,25 3 0,25 1 0,252
Tabel 4 Absorbansi dan Total Flavonoid Ekstrak Daun Pare Ekstrak Vol. Samp el (µl) Abs orba n Total Flavo nid (%) Rata- rata (%) Daun Pare 500 0,10 3 8,16
8,30 0,10
7 8,50 0,10 4 8,25 Penentuan  konsentrasi  flavonoid dari  ekstak  etanol  daun  pare  dilakukan dengan  kompleks    kolorimetri  AlCl 3 yang mempunyai prinsip pengukuran berdasarkan pembentukan  warna.  Metode  ini  dapat digunakan untuk menentukan jumlah flavonoid  golongan  flavon  dan  flavonol. Prinsip  penetapan  flavonoid  dengan  metode kolorimetri  AlCl3  adalah  terbentuknya kompleks  antara  AlCl 3 dengan  gugus  keto pada  atom  C-4  dan  juga  dengan  gugus hidroksi  pada  atom  C-3  atau  C-4  yang bertetangga  dari  flavon  dan  flavonol.  Pada pembuatan kurva kalibrasi digunakan kuersetin sebagai pembanding dimana kuersetin  merupakan  flavonoid  golongan flavonol  yang  mempunyai  gugus  keto  pada
C-4 dan memiliki gugus hidroksi pada atom
C-3  atau  C-5  yang  bertetangga  dari  flavon dan flavonol. Panjang
gelombang
maksimum yang dihasilkan dari pengukuran kuersetin  adalah  510  nm.  Pada  metode AlCl3 jumlah flavonoid flavon dan flavonol diperoleh 8,30% b/b.

## 4. Kesimpulan
Simplisia daun pare memiliki rendemen terhadap  ekstrak  etanol  sebesar  15,4%, dengan  susut  pengeringan  sebesar  5,792% dan konsentrasi flavonoid total dalam bentuk flavon dan flavonol sebesar 8,30% b/b.

## 5. Daftar Pustaka
[1]. Zuhud, E.A.M. & Haryanto. 1994.
Pelestarian Pemanfaatan
Keanekaragaman Tumbuhan Obat
Hutan Tropika Indonesia, Bogor, IPB – LATIN.
[2]. DalimarthaS.  dan  Soedibyo,  M. Perawatan  Rambut  dengan  Tumbuhan Obat  dan  Diet  Suplemen,  Jakarta,
Swadaya; 1999. h 36-40.
[3]. Subahar  TSS.  Khasiat  dan  Manfaat Pare,  Si  Pahit  Pembasmi  Penyakit. .
Jakarta:  TimLenteraAgromediaPustaka, 2004. h 5-8.
[4]. Achmad,
AS,HakimEH,MakmurL.Flavonoiddan Fitomedika,  Kegunaan  dan  Prospek. Jakarta: Phyto-Medika, 1990, 25-29.
[5]. Chang C, Yang M, Wen H, Chern J; Estimation of total flavonoid content in propolis by two complementary colorimetric  methods.  J.Food  Drug Analaysis, 200210: 178-182 [6]. Departemen KesehatanRepublikIndonesia& Direktorat JenderalPengawasan ObatdanMakanan.Parameter StandarUmum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta: BaktiHusada. 2000. h 21- 27