AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN ANTIMIKROBA EKSTRAK MELINJO ( Gnetum gnemon L.)

## ANTIOXIDANT AND ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF MELINJO EXTRACT (Gnetum gnemon L.)
Chandra Dewi 1) , Rohula Utami 2) , Nur Her Riyadi P 2)
1) Alumni Jurusan Teknologi Hasil Pertanian Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret
2) Jurusan Teknologi Hasil Pertanian Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret

## ABSTRACT
This research aimed to find out the influence of water solvent extraction  temperature (30°C, 45°C, 60°C) on total phenol, antioxidant activity, and antimicrobial activity of parts of melinjo plant (leaf, seed, epicarp). The results  showed that the total phenol, antioxidant activity, and antimicrobial activity in seed, leaf, pulp seed of melinjo plant increased along with increasing extraction temperature. Treatment of 60°C extraction temperature resulted the  total  phenols,  antioxidant,  and  antimicrobial  activity  in  seed, leaf,  and  epicarp  were  the  highest. Based on the treatments,  was known that at 30, 45,  and 60°C, the  highest on total phenols and antimicrobial activity contained in the seed of melinjo while the leaf of melinjo resulted the highest antioxidant activity.
Keywords: Antimicrobial, Antioxidant activity, Extraction temperature, Melinjo, Total phenols

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  suhu  ekstraksi  pelarut  air  (30°C,  45°C,  60°C) terhadap  total  fenol,  aktivitas  antioksidan,  dan  aktivitas  antimikroba  dari  bagian  tanaman  melinjo  (daun,  biji, kulit). Hasil  penelitian menunjukkan bahwa total fenol, aktivitas antioksidan,  dan antimikroba pada biji, daun, dan kulit  biji  tanaman melinjo semakin meningkat seiring dengan peningkatan  suhu  ekstraksi. Perlakuan suhu ekstraksi 60 o C memberikan hasil total fenol, aktivitas antioksidan, dan antimikroba pada biji, daun, dan kulit biji tanaman melinjo paling tinggi. Dari semua perlakuan, diketahui bahwa pada suhu 30, 45, dan 60 o C, total fenol dan aktivitas antimikroba tertinggi terdapat pada biji melinjo sedangkan daun menghasilkan aktivitas antioksidan yang paling tinggi.
Kata kunci : Aktivitas antioksidan, Antimikroba, Melinjo, Pelarut air, Suhu ekstraksi, Total fenol

## PENDAHULUAN
Melinjo ( Gnetum gnemon L.)
merupakan  salah  satu  komoditas  lokal  yang mempunyai  beberapa  manfaat.  Melinjo banyak  dibudidayakan  di  Indonesia,  tetapi pemanfaatannya  sangat  kurang,  hanya terbatas  sebagai  sayur  dan  bahan  baku pembuatan  emping.  Menurut  Pudjiatmoko (2007), aktivitas  antioksidan dari  kandungan fenolik  pada  melinjo  setara  dengan antioksidan sintetik Butylated Hydroxytolune (BHT).
Menurut  Siswoyo  (2004), biji  melinjo mengandung 9   11% protein, 16,4% lemak, 58%  pati,  dan  komponen  minor  seperti fenolik/flavonoid. Siswoyo 1 (2007) juga telah mempelajari  potensi  aktivitas  antioksidan dan  total  senyawa  fenol  dari  beberapa jaringan  berbeda  seperti  akar,  batang,  daun, biji, dan pulp biji pada tanaman melinjo yang diekstrak  menggunakan  etanol.  Berdasarkan hasil  penelitiannya,  jumlah  total  fenol bervariasi  dari  5,97  sampai  9,91  mg  gallic acid equivalent (GAE) g -1 sampel.
Kandungan  flavonoid  ekstrak  melinjo berkisar  antara  0,85    3,14  mg  quercetin equivalent  (QE)  g -1 sampel.  Aktivitas penangkapan radikal bebas tertinggi terdapat pada  akar  yaitu  37,27  mg  vitamin  C equivalent antioxidant capacity (VCEAC) g 1 sampel  sedangkan  yang  terendah  yaitu  pulp biji  32,48  mg  VCEAC  g 1 sampel. Begitu pula Kato et al. (2009) membuktikan manfaat stilbenoid  dari  biji  melinjo  kering  yang diekstrak  dengan  pelarut  etanol.  Peneliti tersebut telah mengisolasi senyawa stilbenoid baru  yaitu  gnetin  L  yang  menunjukkan adanya  aktivitas  antioksidan.  Selain  itu, Siswoyo 2 (2007) juga menemukan fungsi lain melinjo  sebagai  antimikroba  alami.  Oleh karena  itu,  protein  melinjo  juga  dapat digunakan sebagai pengawet alami makanan. Peptida  Gg-AMP  yang  diisolasi  dari  biji melinjo  mempunyai  aktivitas  antibakteri terhadap jenis bakteri Gram positif dan Gram negatif.
Komponen polifenol yang sekarang ini sedang  dikembangkan  ialah  kandungan
resveratrol dari melinjo.
Berdasarkan penelitian
Mori (2008), kandungan resveratrol  berupa  bio-flavonoid  yang terkandung pada ginkgo biloba, juga terdapat di  melinjo,  karena  melinjo  termasuk tumbuhan  berbiji  terbuka  (Gymnospermae), begitu  pula  dengan  tanaman  ginkgo  biloba yang  ada  di  Jepang.  Bahkan  hasil  dari penelitian  tersebut  menyebutkan  bahwa kandungan  resveratrol  yang  dikandung  oleh melinjo  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan ginkgo biloba. Aktivitas antioksidan senyawa flavonoid  dalam  melinjo  setara  dengan aktivitas  antioksidan  vitamin  C  (Noegraha, 2010). Sedangkan Hisada et al. (2005)  yang meneliti  tiga  jenis  stilbenoid  yang  diisolasi dari  50%  ekstrak  etanol  dan  metanol, menemukan  bahwa  melinjo  kaya  akan komponen polifenol yang disebut resveratrol. Resveratrol  melinjo  memiliki  aktivitas antibakteri  dan  antioksidan,  berperan  baik sebagai pengawet makanan, menghambat off flavor dan meningkatkan citarasa. Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi total  senyawa  fenol,  aktivitas  antioksidan, dan  antimikroba  adalah  proses  ekstraksi. Proses  ekstraksi  juga  dipengaruhi  oleh  jenis pelarut,  suhu  ekstraksi,  dan  waktu  ekstraksi. Berdasarkan penelitian Ballard et al. (2008), ekstraksi  dengan  pelarut  air  menunjukkan bahwa total senyawa fenol meningkat dengan adanya  kenaikan  suhu.  Total  senyawa  fenol dari  ekstrak  kulit  kacang  tanah  meningkat sekitar  20,2%,  mulai  dari  suhu  30°C  (63,1 mg/g)  sampai  60 o C  (79,1  mg/g)  dengan waktu  ekstraksi  10  menit.  Total  senyawa fenol  tertinggi  (81  mg/g)  terjadi  pada  suhu 50,4  °C  dan  waktu  ekstraksi  10,1  menit. Sementara  jika  dilihat  dari  hasil oxygen radical  absorbance  capacity (ORAC), kondisi  ekstraksi  yang  optimal  terjadi  pada suhu  60°C  selama  24,9  menit.  Berdasarkan penelitian  Chew et  al. (2011),  ekstraksi Centella  asiatica dengan  variasi  suhu ekstraksi, mulai dari 25 sampai 65°C (25, 35, 45, 55, dan 65°C)  menunjukkan  bahwa total fenolik  meningkat  secara  linier  seiring dengan peningkatan suhu ekstraksi sedangkan  kapasitas  antioksidan  ekstrak  C. asiatica mulai menurun pada perlakuan suhu ekstraksi di atas 45°C.
Oleh  karena  itu  dalam  penelitian  ini, melinjo  diekstrak  menggunakan  pelarut  air dengan variasi suhu 30, 45, dan 60°C selama 20  menit.  Dalam  penelitian  ini  akan dilakukan  pengujian  untuk  mengetahui pengaruh variasi suhu terhadap total senyawa fenol,  aktivitas  antioksidan  ekstrak  melinjo ( Gnetum  gnemon L.)  serta  aktivitas antimikroba  terhadap  bakteri  pembusuk. Bagian melinjo yang akan diekstrak meliputi biji,  daun,  dan  kulit  biji.  Pengujian  aktivitas antioksidan  menggunakan  metode  DPPH. Selain  itu,  juga  dilakukan  pengukuran  total senyawa  fenol  dengan  metode  Folin- Ciocalteu. Sedangkan bakteri pembusuk yang digunakan untuk pengujian aktivitas antimikroba  dalam  penelitian  ini  yaitu Pseudomonas  fluorescens  dan  Pseudomonas putida .  Bakteri  tersebut  merupakan  bakteri pembusuk  yang  dominan  dalam  komoditas ikan/daging.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  melinjo  yang  diperoleh dari  Ngasem,  Colomadu.  Bagian  dari tanaman melinjo yang digunakan yaitu daun, biji,  dan  kulit  biji.  Sedangkan  untuk  proses ekstraksi  melinjo,  pelarut  yang  digunakan adalah aquades. Bahan-bahan yang digunakan  untuk  analisis  antara  lain  folin Ciocalteu  (MERCK),  Na 2 CO 3 (MERCK), fenol murni (MERCK), Diphenyl picrylhydrazyl (DPPH)  (SIGMA),  metanol p.a, Pseudomonas  fluorescens FNCC  0071, Pseudomonas  putida FNCC  0070,  dan Nutrient  Agar (NA)  (OXOID).  Kedua  jenis bakteri  pembusuk  diperoleh  dari  koleksi Food  Nutrition  and  Culture  Collection (FNCC) PSPG UGM, Yogyakarta.
Alat  yang  digunakan  dalam  proses ekstraksi melinjo antara lain alat sentrifugasi (sentrifus),  hotplate,  termometer,  stirer,  dan blender. Sedangkan alat-alat yang digunakan untuk  analisis  antara  lain  spektrofotometer UV-Vis  mini-1240  (Shimadzu),  vortex, autoklaf,  laminar,  dan  inkubator  (WTC Binder).

## Ekstraksi Melinjo
Bagian  dari  tanaman  melinjo  yang digunakan antara lain melinjo yang sudah tua (kulit  berwarna  merah)  dan  daun  melinjo yang  masih  muda.  Setiap  bagian  melinjo yang  digunakan  dicuci  sampai  bersih.  Pada sampel  biji  melinjo  terlebih  dahulu  dikupas sebelum  dihancurkan.  Pengupasan  tersebut dimaksudkan untuk memisahkan bagian kulit dan  biji  melinjo.  Pengecilan  ukuran dilakukan  menggunakan  blender  dan  mortar dimaksudkan supaya partikel-partikel sampel lebih homogen.
Proses ekstraksi dilakukan dengan cara pemanasan  yaitu  merendam  sampel  disertai pengadukan  menggunakan  stirer  dengan kecepatan  150  rpm  yang  diletakkan  di  atas hotplate.  Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan perbandingan  bahan dan pelarut 1 : 20 (b/v) dan 3 variasi suhu ekstraksi yaitu 30, 45, dan 60 0 C.  Setelah  mencapai  ketiga  variasi  suhu tersebut  kemudian  suhu  dipertahankan selama  20  menit.  Pelarut  yang  digunakan dalam  proses  ekstraksi  melinjo  ini  adalah aquades.  Metode  ekstraksi  ini  merupakan metode  ekstraksi  berdasarkan  penelitian Ballard et al. (2008).
Setelah dilakukan pemanasan, campuran  pelarut  dan  sampel  didinginkan terlebih  dahulu  sampai  suhu  ruang. Penyaringan  digunakan  untuk  memisahkan antara  ampas  (endapan)  dan  filtrat.  Proses penyaringan  pada  ekstrak  melinjo  dilakukan dengan  menggunakan  kain  saring.  Proses penyaringan  dilakukan  sekali,  hal  ini bertujuan supaya tidak terlalu banyak ampas yang  terikut  saat  dilakukan  sentrifugasi. Ekstrak  melinjo  yang  diperoleh  dari  hasil penyaringan,  kemudian  disentrifugasi  pada 5000  rpm  selama  30  menit.  Tahap sentrifugasi ini menurut penelitian Ballard et al. (2008).

## Pengujian  Total  Fenol  dan  Aktivitas Antioksidan
Sampel  ekstrak  melinjo  dilakukan pengujian  total  fenol  meggunakan  metode Folin-Ciocalteu  (Senter et  al. ,  1989)  dan aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH (Subagio and Morita, 2001).

## Pengujian aktivitas antimikroba
Pengujian aktivitas antimikroba dilakukan  terhadap  dua  jenis  bakteri pembusuk  yaitu Pseudomonas  fluorescens FNCC 0071 dan Pseudomonas putida FNCC 0070  sebanyak  10 6 CFU.  Metode  yang digunakan untuk pengujian aktivitas antimikroba  adalah  metode well  diffusion dengan  diameter  sumur  5  mm..  Ekstrak  dari daun,  biji,  dan  kulit  melinjo  dimasukkan  ke dalam masing-masing sumur tersebut sebanyak  50  µL.  Setelah  itu  cawan  petri diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  24  jam. Setelah  masa  inkubasi,  akan  muncul  zona penghambatan. Kemudian dilakukan pengukuran  diameter  zona  penghambatan (Kim  and  Rajagopal,  2001;  Allaf et  al. , 2009). Diameter zona penghambatan dihitung  sebesar  diameter  zona  bening  yang terbentuk (termasuk diameter sumuran).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Total Fenol Ekstrak Melinjo Tabel  1 . Total  Fenol  Ekstrak  Melinjo (mg/ml) Suhu Ekstraksi Sampel Biji Daun Kulit Suhu 30 o C  0,318 a B 0,187 a A 0,173 a A Suhu 45 o C  0,355 b B 0,230 b A 0,226 b A Suhu 60 o C  0,389 c B 0,272 c A 0,271 c A Keterangan : * Superscript yang  sama  pada  kolom  yang  sama menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  pada  taraf
0,05
*Subscript yang  sama  pada  baris  yang  sama menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  pada  taraf 0,05
Berdasarkan  uji  total  fenol  ekstrak melinjo  baik  biji,  daun,  maupun  kulit,  dapat diketahui bahwa total fenol terendah terdapat pada  perlakuan  suhu  ekstraksi  30 o C,  diikuti perlakuan  suhu  ekstraksi  45 o C,  dan  total fenol tertinggi pada perlakuan suhu ekstraksi 60 o C  ( Tabel  1 ).  Jadi,  semakin  tinggi  suhu ekstraksi  maka  kadar  total  fenol  ekstrak melinjo yang dihasilkan akan semakin tinggi. Hasil  tersebut  selaras  dengan  penelitian Ballard et  al. (2008),  ekstraksi  kulit  kacang tanah dengan pelarut air menunjukkan bahwa total  senyawa  fenol  meningkat  dengan
adanya  kenaikan  suhu.  Total  senyawa  fenol dari  ekstrak  kulit  kacang  tanah  meningkat sekitar  20,2%,  mulai  dari  suhu  30°C  (63,1 mg/g)  sampai  60 o C  (79,1  mg/g)  dengan waktu  ekstraksi  10  menit.  Begitu  pula  pada penelitian  Chew et  al. (2011)  menunjukkan bahwa  komponen  fenolik  ekstrak Centella asiatica mengalami peningkatan  secara  linier seiring dengan meningkatnya suhu ekstraksi, mencapai  nilai  maksimal  pada  suhu  65 o C. Al-Farsi  and  Chang  (2007)  melaporkan bahwa  peningkatan  suhu  dapat menaikkan ekstraksi fenol dengan meningkatnya koefisien  difusi  dan  kelarutan  komponen fenolik  dalam  pelarut  ekstraksi.  Menurut Kato  and  Hosoda  (2008),  penggunaan  suhu lebih  tinggi  dari  30 o C  lebih  sesuai,  oleh karena  itu  suatu  proses  perendaman (pencelupan)  bahan  selama  ekstraksi  dalam suatu pelarut dapat menggunakan suhu antara 30 o C dan 60 o C. Pada Tabel  1 dapat  dilihat  pula kandungan  total  fenol  tiap  perlakuan  suhu ekstraksi  yang  sama  untuk  mengetahui bagian  melinjo  dengan  total  fenol  tertinggi. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pada perlakuan  suhu  ekstraksi  30 o C,  ekstrak  biji mempunyai  total  fenol  tertinggi  sebesar 0,318 mg/ml, kemudian diikuti daun dengan total  fenol  sebesar  0,187  mg/ml,  dan  total fenol  terendah  terdapat  pada  kulit  melinjo sebesar  0,173  mg/ml.  Pada  suhu  45 o C,  total fenol  terendah  terdapat  pada  kulit  melinjo sebesar 0,226  mg/ml, kemudian diikuti daun melinjo  dengan  total  fenol  sebesar  0,230 mg/ml, dan biji melinjo memiliki kandungan total  fenol  tertinggi  sebesar  0,355  mg/ml. Pada  suhu  60 o C  total  fenol  terendah  sampai tertinggi ekstrak melinjo secara berturut-turut yaitu  terdapat  pada  kulit  sebesar  0,271 mg/ml,  daun  sebesar  0,272  mg/ml,  dan  biji sebesar 0,389  mg/ml. Sedangkan  jika dilihat dari hasil uji DMRT pada tingkat signifikansi 0,05,  dapat  diketahui  bahwa  total  fenol pada  sampel  biji  menunjukkan  beda  nyata dengan total fenol daun maupun kulit melinjo pada  perlakuan  suhu  ekstraksi  30,  45  dan 60 o C. Jadi, dari data tersebut dapat diketahui bahwa  biji  dengan  perlakuan  suhu  ekstraksi 60 o C  mempunyai  total  fenol  yang  tertinggi dibandingkan yang lain.

## Aktivitas Antioksidan Ekstrak Melinjo
Tabel  2 . Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Melinjo (% DPPH/10µL) Suhu Ekstraksi Sampel Biji Daun Kulit Suhu 30 o C 3,36 a B 4,76 a C 2,47 a A Suhu 45 o C 3,77 b B 5,50 b C 3,06 b A Suhu 60 o C 4,26 c B 5,97 c C 3,51 c A Keterangan : * Superscript yang  sama  pada  kolom  yang  sama menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  pada  taraf 0,05 *Subscript yang  sama  pada  baris  yang  sama menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  pada  taraf 0,05
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa aktivitas  antioksidan  ekstrak  melinjo  baik biji,  daun,  maupun  kulit  terendah  terdapat pada  perlakuan  suhu  ekstraksi  30 o C,  diikuti perlakuan  suhu ekstraksi 45 o C, dan aktivitas antioksidan  tertinggi  pada  perlakuan  suhu ekstraksi  60 o C.  Sedangkan  jika  dilihat  dari 0,05, aktivitas  antioksidan  antara  perlakuan  suhu ekstraksi satu dengan  lainnya saling  berbeda nyata. Begitu pula pada penelitian Ballard et al. (2008),  hasil oxygen  radical  absorbance capacity (ORAC)  meningkat  dengan  adanya kenaikan suhu ekstraksi dan kondisi ekstraksi yang optimal terjadi pada suhu 60°C  selama 24,9  menit.  Peningkatan  suhu  dapat meningkatkan  kelarutan  komponen  fenolik dalam  pelarut  ekstraksi.  Komponen  fenolik tersebut  berperan sebagai  antioksidan sehingga  saat  terjadi  peningkatan  total  fenol maka  aktivitas  antioksidan  juga  semakin tinggi.
Dari  data  yang  diperoleh  tidak  terjadi penurunan aktivitas antioksidan pada ekstrak melinjo meskipun antioksidan bersifat rentan terhadap  panas.  Hal  tersebut  dikarenakan kandungan  flavonoid  pada  melinjo  cukup stabil  pada  pemanasan  sampai  suhu  100 o C selama lebih dari 30 menit (Harborne, 1996).
Berdasarkan  hasil  analisis  aktivitas antioksidan  yang  tercantum  dalam Tabel  2 dapat  diketahui  pada  perlakuan  suhu ekstraksi  30 o C,  ekstrak  daun  mempunyai aktivitas antioksidan tertinggi sebesar 4,76 %, kemudian  diikuti  biji  dengan  aktivitas antioksidan  sebesar 3,36% ,  dan  aktivitas
antioksidan  terendah  terdapat  pada  kulit melinjo  sebesar 2,47% .  Pada  suhu  45 o C, aktivitas  antioksidan  terendah  terdapat  pada kulit  melinjo  sebesar 3,06 %,  kemudian diikuti  biji  melinjo  dengan  antioksidan tertinggi  sebesar 3,77 %,  dan  daun  melinjo memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi sebesar 5,50% .  Pada  suhu  60 o C  aktivitas antioksidan terendah sampai tertinggi ekstrak melinjo  secara  berturut-turut  yaitu  terdapat pada kulit sebesar 3,51% , biji  sebesar 4,26% , dan  daun  sebesar 5,97% .  Sedangkan  jika dilihat  dari  hasil  uji  DMRT  pada  tingkat 0,05,  dapat  diketahui  bahwa aktivitas  antioksidan  pada  sampel  biji menunjukkan  beda  nyata  dengan  aktivitas antioksidan pada daun  maupun  kulit  melinjo dengan  perlakuan  suhu  ekstraksi  30,  45  dan 60 o C. Pada tingkat suhu yang sama, aktivitas antioksidan  tertinggi  terdapat  pada  daun melinjo.  Hasil  analisis  aktivitas  antioksidan tertinggi  pada  daun,  diikuti  biji,  dan  kulit melinjo  pada  penelitian  ini  selaras  dengan penelitian Siswoyo 1 (2007) mengenai potensi aktivitas antioksidan dan total senyawa fenol dari  beberapa  jaringan  berbeda  seperti  akar, batang, daun, biji, dan pulp biji pada tanaman melinjo ( Gnetum gnemon L.)  yang diekstrak menggunakan  etanol.  Dalam  penelitian tersebut,  aktivitas  penangkapan  radikal  pada daun  sebesar  36,66  mg  VCEAC/g  lebih tinggi  dibandingkan  pada  biji  sebesar  34,08 mg  VCEAC/g  dan  pulp  biji  32,48  mg VCEAC/g sampel.
Pada tingkat suhu yang sama, aktivitas antioksidan  tertinggi  terdapat  pada  daun melinjo.  Hal  ini  dikarenakan  selain flavonoid,  daun  juga  mengandung  senyawa saponin yang merupakan senyawa nonfenolik. Menurut Hartono (2009),
saponin  merupakan  golongan  senyawa glikosida,  dapat  berupa  saponin  steroid maupun  saponin  triterpenoid.  Selain  itu, menurut Haryoto (1998), kandungan vitamin C  yang  terdapat  pada  daun  melinjo  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  vitamin  C  pada biji  melinjo.  Vitamin  C  yang  terdapat  pada melinjo  dapat  berperan  sebagai  antioksidan. Kandungan  vitamin  C  pada  daun  melinjo sebesar 182  mg/100 g bahan, sedangkan biji melinjo  mengandung  vitamin  C  sebesar  100 mg/100 g bahan.
Aktivitas Antimikroba Ekstrak Melinjo Tabel  3. Zona  Penghambatan  Aktivitas Antimikroba Ekstrak Melinjo (mm) Suhu Ekstraksi Sampel Biji Daun Kulit Suhu 30 o C 7,23 a C 5,87 a B 5,45 a A Suhu 45 o C 8,02 b C 6,40 b B 6,02 b A Suhu 60 o C 8,80 c B 6,75 c A 6,35 c A Keterangan : * Superscript yang  sama  pada  kolom  yang  sama menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  pada  taraf 0,05 *Subscript yang  sama  pada  baris  yang  sama menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  pada  taraf 0,05
Berdasarkan  hasil  analisis  antimikroba ekstrak melinjo baik biji, daun, maupun kulit, dapat  diketahui  bahwa  diameter  hambat terendah  terdapat  pada  perlakuan  suhu ekstraksi  30 o C,  diikuti  perlakuan  suhu ekstraksi  45 o C,  dan  diameter  hambat tertinggi pada perlakuan suhu ekstraksi 60 o C. Jadi,  semakin  tinggi  suhu  ekstraksi  maka aktivitas  antimikroba  ekstrak  melinjo  yang dihasilkan  akan  semakin  tinggi.  Hasil tersebut selaras dengan penelitian Arora et al. (2007), mengenai pengujian aktivitas antibakteri  dari  berbagai  tanaman  obat  asal India. Dalam penelitiannya, metode ekstraksi dapat  mempengaruhi  aktivitas  antibakteri pada  ekstrak  tanaman;  ekstrak  dengan perlakuan air panas (hot water) menghasilkan zona  penghambatan  yang  lebih  maksimal dibandingkan  ekstraksi  dengan  perlakuan suhu  ruang  atau  air  mendidih.  Berdasarkan penelitian  tersebut,  ekstrak  biji  melinjo mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa 2  MTCC  741  dan Staphylococcus  aureus MTCC  96  dengan diameter hambat sebesar 10 mm.
Berdasarkan Tabel  3 dapat  diketahui pada  perlakuan  suhu  ekstraksi  30 o C,  ekstrak biji mempunyai zona penghambatan tertinggi sebesar  7,23  mm,  kemudian  diikuti  daun dengan  zona  penghambatan  sebesar  5,87 mm,  dan  zona  penghambatan  terendah terdapat pada kulit melinjo sebesar 5,45 mm. Pada  suhu  45 o C,  zona  penghambatan terendah  terdapat  pada  kulit  melinjo  sebesar 6,02  mm,  kemudian  diikuti  daun  melinjo dengan  zona  penghambatan  sebesar  6,40 mm, biji melinjo memiliki zona
penghambatan  tertinggi  sebesar  8,02  mm. Pada suhu 60 o C zona penghambatan terendah sampai  tertinggi  ekstrak  melinjo  secara berturut-turut  yaitu  terdapat  pada  kulit sebesar 6,35 mm, daun sebesar 6,75 mm, dan biji sebesar 8,80 mm. Sedangkan jika dilihat dari hasil uji DMRT pada tingkat signifikansi 0,05,  dapat  diketahui  bahwa  diameter hambat  pada  sampel  biji  menunjukkan  beda nyata  dengan  diameter  hambat  sampel  daun maupun  kulit  melinjo  pada  perlakuan  suhu ekstraksi  30  dan  45 o C.  Pada  perlakuan  suhu 60 o C,  zona  penghambatan  pada  kulit  dan daun  melinjo  tidak  beda  nyata  sedangkan zona  penghambatan  biji  melinjo  berbeda nyata dengan kulit maupun daun melinjo.
Kandungan  kimia  yang  terdapat  pada biji  dan  daun  melinjo  yaitu  saponin, flavonoid, dan tanin sedangkan kulit melinjo mengandung saponin dan flavonoid. Flavonoid,  saponin,  dan  tanin  yang terkandung  pada  melinjo  tersebut  dapat berfungsi  sebagai  antibakteri.  Menurut Markham (1988)  flavonoid  merupakan salah satu  golongan  fenol  alam  yang  terbesar. Mekanisme  senyawa  fenol  sebagai  zat antibakteri  adalah  dengan  cara  merusak  dan menembus  dinding  sel,  serta  mengendapkan protein  sel  mikroba.  Komponen  fenol  juga dapat  mendenaturasi  protein  seperti  enzim. Denaturasi protein merupakan suatu keadaan dimana  protein  mengalami  perubahan  atau perusakan  struktur  sekunder,  tersier  dan kuartenernya.  Perusakan  struktur  karena adanya  pemutusan  ikatan  hidrogen  yang menopang struktur sekunder dan tersier suatu protein sehingga menyebabkan sisi hidrofobik  dari  gugus  samping  polipeptida akan  tebuka.  Hal  tersebut  menyebabkan kelarutan protein semakin turun dan akhirnya mengendap.  Senyawa  fenolik  bermolekul besar mampu menginaktifkan enzim esensial di  dalam  sel  mikroba  meskipun  pada konsentrasi  yang  sangat  rendah.  Senyawa fenol mampu memutuskan ikatan peptidoglikan  saat  menerobos  dinding  sel. Ikatan  peptidoglikan  ini  secara  mekanis memberi  kekuatan  pada  sel  bakteri.  Kedua jenis  bakteri  uji  merupakan  bakteri  Gram negatif  dengan  dinding  sel  terdapat peptidoglikan  yang sedikit sekali dan  berada diantara  selaput  luar  dan  selaput  dalam
dinding sel. Dinding sel bakteri Gram negatif mengandung fosfolipid, lipopolisakarida, dan lipoprotein.  Dalam  upaya  mencapai  sasaran, senyawa  antimikroba  dapat  menembus lipopolisakarida  dari  dinding  sel  tersebut. Setelah  menerobos  dinding  sel,  senyawa fenol  akan  menyebabkan  kebocoran  isi  sel dengan  cara  merusak  ikatan  hidrofobik komponen  membran  sel  (seperti  protein  dan fosfolipida)  serta  larutnya  komponen- komponen  yang  berikatan  secara  hidrofobik yang  berakibat  meningkatnya  permeabilitas membran.  Terjadinya  kerusakan  pada membran  sel  mengakibatkan  terhambatnya aktivitas  dan biosintesis  enzim-enzim spesifik  yang  diperlukan  dalam  reaksi metabolisme (Yulianti, 2009).
Tanin  yang  terkandung  dalam  biji  dan daun  melinjo  dapat  berfungsi  sebagai antibakteri.
Menurut Cowan (1999), mekanisme tanin berperan sebagai antibakteri  adalah  dengan  cara  merusak dinding  sel.  Mekanisme  kerusakan  dinding sel  dapat  disebabkan  oleh  adanya  akumulasi komponen  lipofilik  yang  terdapat  pada dinding  sel  atau  membran  sel,  sehingga menyebabkan
perubahan komposisi penyusun dinding sel.
Menurut  Siswoyo 2 (2007)  peptida  Gg- AMP  yang  diisolasi  dari  biji  melinjo diindikasikan  mempunyai  potensi  aktif menghambat  beberapa  jenis  bakteri  gram positif  dan  negatif.  Begitu  pula  Kato et.al (2009) membuktikan  manfaat stilbenoid dari biji  melinjo  kering  yang  diekstrak  dengan pelarut  etanol.  Peneliti  tersebut  telah mengisolasi  stilbenoid  baru  yaitu  gnetin  L. dan  lima  stilbenoid  yang  telah  diketahui, meliputi  gnetin  C,  gnemonosides  A,  C,  D, dan  resveratrol  yang  menunjukkan  adanya aktivitas antioksidan dan antibakteri. Berdasarkan  hasil  analisis  dapat  diketahui bahwa  pada  tiap  perlakuan  suhu  ekstraksi, biji  memiliki  zona  penghambatan  tertinggi dibanding yang lain.

## KESIMPULAN
1. Pengaruh  suhu  ekstraksi  pelarut  air terhadap total fenol, aktivitas antioksidan, dan antimikroba pada biji, daun, dan kulit biji tanaman melinjo yaitu semakin tinggi
suhu ekstraksi ternyata semakin besar pula kadar  fenol,  aktivitas  antioksidan,  dan aktivitas antimikroba yang dihasilkan.
2. Total  fenol,  aktivitas  antioksidan,  dan antimikroba pada biji, daun, dan kulit biji tanaman  melinjo  paling  tinggi  terdapat pada perlakuan suhu ekstraksi 60 o C. 3. Pada  suhu  30,  45,  dan  60 o C,  total  fenol dan aktivitas antimikroba  tertinggi terdapat pada biji melinjo sedangkan daun menghasilkan  aktivitas  antioksidan  yang paling tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Allaf,  M.A.H.,  Al-Rawi  and  A.T.  Al-Mola, 2009. Antimicrobial Activity of Lactic Acid  Bacteria  Isolated  from  Minced Beef  Meat  Against  Some  Pathogenic Bacteria .  Iraqi  Journal  of  Veterinary Sciences, Vol. 23: 115-117.
Al-Farsi,  M.  A.  and  Y.  L.  Chang.  2007. Optimization  of  Phenolics  and Dietary  Fibre  Extraction  from  Date Seeds. Food  Chemistry  108(3):  977- 985.
Arora,  D.  S.  and  G.  J.,  Kaur.  2007.
Antibacterial  Activity of Some Indian
Medicinal  Plants .  Journal  Nat  Med 61:313 317. Ballard, T. . Mallikarjunan and C. Thatcher. 2008. Optimizing The Extraction Of Phenolic  Antioxidants  From  Peanut Skins Response Surface Methodology .
Chew, K. K., Ng, S. Y., Thoo, Y. Y., Khoo, M. Z.,  W. M., Wan  Aida, and C.  W. Ho.  2011.  2011. Effect  of  Ethanol Concentration,  Extraction  Time  and Extraction  Temperature  on  The Recovery of Phenolic Compounds and Antioxidant  Capacity  of Centella Asiatica Extracts. International  Food
Research  Journal  18:  571-578 (2011).
Cowan,  MM.  1999. Plant  Products  as Antimicrobial Agents . Clinical
Microbiology  Reviews    Vol.  12  No. 4:564-582.
Harborne,  J.B.  1996. Metode  Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisa
Tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung.
Hartono, T. 2009. http://www.farmasi.asia/saponin/.
Diakses  pada  Selasa  tanggal  18 Oktober 2011 pukul 11.30 WIB.
Haryoto.  1998. Membuat  Emping  Melinjo . Kanisius. Yogyakarta.
Hisada,  Hiromi, A. Masahiro, K. Eishin, and S.  Fujio.  2005. Antibacterial  and Antioxidative  Constituents  of  Melinjo Seeds  and  Their  Application  to Foods. http://sciencelinks.jp/j- east/article/.  Diakses  pada  Minggu tanggal 20 Februari 2011 pukul 19.45 WIB.
Kato,  E.  and  S.  Hosoda.  2008. Gnetum Extract . www.freepatentsonline.com/search. html. United States Patent Application 20080274218.
Kato,  Eishin,  Y.  Tokunaga,  and  F.  Sakan. 2009. Stilbenoids  Isolated  from  the Seeds of Melinjo (Gnetum gnemon L .) and Their Biological Activity. Journal of  Agricultural  and  Food  Chemistry Vol. 57 No. 6: 2544 2549.
Kim,  Jin-Woo  and  S.N.  Rajagopal,  2001.
Antibacterial Activities of
Lactobacillus  crispatus  ATCC  33820 and  Lactobacillus  gasseri  ATCC
33323 .  The  Journal  of  Microbiology, Vol.39 No.2:146-148.
Markham.  1988. Cara  Mengidentifikasi Flavonoid . Penerbit ITB. Bandung.
Mori,  M.  2008. Relationship  between Lifestyle-related  Diseases  with  The Intake of Indonesian Traditional Fruit Melinjo  Rich  in  Phytoestrogens . Niigata,  Japan.  The  4th  International Niigata  Symposium  on  Diet  and Health Integrative Function of Diet in Anti-aging and Cancer Prevention.
Noegraha,  A.  2010 . Teh  Melinjo  Sebagai Salah  Satu  Usaha  Peningkatan  Nilai Tambah  Sumberdaya  Lokal  Berbasis Agribisnis .
http://web.ipb.ac.id/~agrohort/. Diakses  pada  Rabu  tanggal  25 Agustus 2010 pukul 14.29 WIB.
Pudjiatmoko.  2007. Potensi  melinjo  di Jepang .  http://id.wikipedia.org/wiki/.
Diakses  pada  Rabu  tanggal  26 Oktober 2011 pukul 07.50 WIB.
Senter  ,  S.D.,  J.  A.  Robertson,  and  F.
I.Meredith. 1989. Phenolic Compound  of  The  Mesocarp  of Cresthaven  Peaches  During  Storage and  Ripening .  Journal  Food  Science 54 : 1259-1268.
Siswoyo,  T.  A.  2004 .  Physicochemical Characteristics  of  Melinjo  (Gnetum
gnemon)
Starch-Lipid. http://triagus.blog.unej.ac.id/research- work/ . Diakses pada tanggal 3 Januari 2011 pukul 22.00 WIB.
Siswoyo 1 ,  T.  A.  2007 .  Free  Radical Scavenging  Activity  and  Phenolic Content  of  Melinjo  Tree  (Gnetum gnemon L. ).
http://triagus.blog.unej.ac.id/research- work/ . Diakses pada tanggal 3 Januari
2011 pukul 22.10 WIB.
__________ 2 ,  T.A.  2007 .  Potency  and Development of Functional Components  from  Melinjo  Seed (Gnetum  gnemon)  as  Nutraceutical Food Supplement.
http://triagus.blog.unej.ac.id/research- work/ . Diakses pada tanggal             3 Januari 2011 pukul 22.00 WIB.
Subagio, A and N. Morita. 2001. No Effect of Esterification  with  Fatty  Acid  on Antioxidant  Activity  of  Lutein .  Food Rest.Int. 34:315-320.
Yulianti,  O.N.,  2009.  Kajian  Aktivitas Antioksidan dan Antimikroba Ekstrak Biji,  Kulit  Buah,  Batang,  dan  Daun Tanaman  Jarak  Pagar  (Jatropha curcas L. ). Skripsi  S1  Fakultas Teknologi Pertanian. Institut Pertanian Bogor.