# Korespondensi:  Balai  Besar  Penelitian  dan  Pengembangan Bioteknologi  dan  Sumberdaya  Genetik  Pertanian Jl.  Tentara  Pelajar  No.  3A,  Bogor  16111,  Indonesia. Tel.:  +  62  251  8337975 E-mail:  media.nugraha@kkp.go.id
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma

## PERBANYAKAN TANAMAN HIAS AIR Bacopa australis SECARA IN VITRO PADA  BERBAGAI  FORMULASI  HORMON  MEDIA  PERTUMBUHAN
Rossa Yunita *)# , Endang  Gati  Lestari *) , Mastur *) , dan  Media Fitri  Isma Nugraha **)
*) Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian Jl. Tentara Pelajar  No.  3A, Bogor 16111
**) Balai Riset Budidaya Ikan Hias Jl. Perikanan No. 13, Pancoran Mas, Depok 16436
(Naskah diterima: 22 Februari 2018; Revisi final: 10 September 2018; Disetujui publikasi: 11 September 2018)

## ABSTRAK
Suksesnya pembentukan indukan (mother plant) tanaman hias air Bacopa australis pada penelitian sebelumnya, mendorong  perbanyakan  tanaman  dengan  menggunakan  teknik  kultur  in  vitro  secara  massal  untuk menghasilkan bibit Bacopa australis dalam jumlah yang banyak dan relatif lebih cepat. Tujuan penelitian adalah  mendapatkan  formulasi  media  yang  tepat  untuk  induksi  tunas,  multiplikasi  tunas,  dan  induksi perakaran yang cepat secara in vitro dari Bacopa australis. Penelitian ini terdiri atas tiga tahapan kegiatan, yaitu induksi tunas, multiplikasi tunas, dan induksi akar. Hasil penelitian menunjukkan formulasi media yang terbaik induksi tunas Bacopa australis secara in vitro adalah MS + BA 0,3 mg/L. Formulasi media yang optimal untuk multiplikasi tunas adalah MS + BA 0,5 mg/L + Thidiazuron 0,1 mg/L dan induksi perakaran adalah MS + IBA 0,5 mg/L.
KATA KUNCI: Bacopa australis; benzil adenin; indole butyric acid; perbanyakan tanaman; thidiazuron ABSTRACT: In vitro propagation of ornamental aquatic plants Bacopa australis in various growth hormon medium. By: Rossa Yunita, Endang Gati Lestari, Mastur, and Media Fitri Isma Nugraha
The successful establishment of mother plant Bacopa australis in the previously related research opens an opportunity to produce relatively fast and in large quantities Bacopa australis seeds using in vitro mass culture techniques. The objective of the study was to determine suitable formulated media for shoot induction, shoot multiplication, and root induction of Bacopa australis. This study consisted of three research stages, namely shoot induction, shoot multiplication, and root induction. The results showed that the best formulated media for in vitro Bacopa australis shoot induction was  MS  +  BA  0.3  mg/L.  The  optimal  formulated  media  for  shoot  multiplication  was  MS  +  BA  0.5  mg/L  + Thidiazuron 0.1 mg/L and for root induction was MS + IBA 0.5 mg/L.
KEYWORDS: Bacopa australis; benzil adenin; indole butyric acid; plant propagation; thidiazuron

## PENDAHULUAN
Sejak era 1980 tanaman hias air sudah dikenal di Indonesia untuk kalangan terbatas. Budidaya komoditas ini  mulai  popular  sekitar  tahun  2000  akan  tetapi teknologi  budidayanya  masih  secara  konvensional. Pada tahun 2004 Indonesia mampu melakukan ekspor tanaman  hias  air  ke-28  negara,  akan  tetapi  karena tingginya permintaan dan beragam jenis tanaman hias, sehingga tidak mampu memenuhi pasar luar negeri,
mengakibatkan terjadimya penurunan terhadap nilai ekspor komoditas ini (Bank Indonesia, 2008).
Bacopa australis merupakan jenis  gulma air yang banyak diminati oleh konsumen baik di dalam maupun luar  negeri.  Bacopa  australis  awalnya  ditemukan  di Brasil  Selatan.  Bacopa  australis  mudah  tumbuh  di akuarium dan pada kondisi tertentu dapat merayap di bagian dasar akuarium membentuk bantalan hijau yang elegan dan dekoratif.
Nugraha  et  al.  (2017)  telah  melakukan pembentukan tanaman indukan aseptik (mother plant) untuk  tanaman  air  Bacopa  australis  secara  in-vitro. Mother  plant  yang  sudah  terbentuk  ini  akan diperbanyak secara massal; oleh karena itu, perlu dicari
suatu  formulasi  zat  pengatur  tumbuh  yang  dapat menghasilkan bibit yang seragam, cepat dalam jumlah besar.
Teknologi yang dapat digunakan untuk penyediaan bibit dalam jumlah besar dan waktu relatif lebih singkat adalah teknik kultur in vitro. Teknologi yang sama telah berhasil untuk perbanyakan Artemisia annua (Yunita & Lestari,  2008)  Baccopa  monnieri  (Dharishini  et  al., 2014), Rauwolfia serpentina L. (Yunita & Lestari, 2011).
Perbanyakan tanaman secara in vitro melalui jalur organogenesis  mampu menghasilkan  bibit  tanaman yang  seragam  baik  dari  segi  morfologi  maupun genetik  (Yunita  et  al.,  2012).  Teknologi  ini  mampu menghasilkan bibit  dalam jumlah yang relatif besar pada areal yang tidak begitu luas dan tidak dibatasi oleh  faktor  iklim.  Modifikasi  media  tanam  pada beberapa unsur, teknik ini dapat menghasilkan bibit yang bebas patogen (jamur, virus, bakteri).
Keberhasilan  teknologi  kultur  jaringan, dipengaruhi oleh sejumlah faktor yang kompleks, di antaranya adalah nutrisi dan senyawa organik berupa zat  pengatur  tumbuh.  Kandungan  hara  makro  dan mikro  sangat  dibutuhkan  untuk  terjadinya  proses morfogenesis. Perbanyakan melalui jalur organogen- esis,  pada  tahap  pembentukan  tunas  penambahan sitokinin  tanpa  auksin  akan  memacu  penggandaan tunas  karena  penambahan  sitokinin  mampu menghilangkan  dormansi  tunas  apikal  (Zulkarnain, 2011; Hartati et al., 2014).
Benzil  adenin  (BA)  merupakan  salah  satu  jenis sitokinin yang umum digunakan untuk induksi tunas karena mampu  menginduksi terjadinya  pembelahan sel, pembentukan organ seperti pucuk (Hartati et al., 2014). Thidiazuron merupakan senyawa difenil urea yang  memiliki  sifat  hampir  sama  dengan  sitokinin. Thidiazuron  dapat  menginduksi  multiplikasi  tunas lebih  cepat  daripada  sitokinin  jenis  lain  (Khawar  et al.,  2003).  Guo  et  al.,  (2011)  menjelaskan  bahwa thidiazuron berperan menstimulasi produksi sitokinin endogen  sel.  Pada  pengunaannya  umumnya dikombinasikan  dengan  BA  untuk  meningkatkan multiplikasi  tunas.  Auksin  Indole  Butyric  Acid  (IBA) merupakan hormon potensial yang banyak direspons oleh berbagai tanaman untuk indusi akar (Santos et al., 2003) karena IBA mampu menstimulasi munculnya tunas akar.
Suksesnya pembentukan mother plant Bacopa aus- tralis oleh Nugraha et al. (2017) maka  penelitian ini dirasa  perlu  dilanjutkan  dengan  tujuan  untuk mendapatkan  formulasi  zat  pengatur  tumbuh  yang
tepat  untuk  induksi  tunas,  multiplikasi  tunas,  dan induksi perakaran secara in vitro dari Bacopa australis.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilakukan pada bulan Januari hingga Juni 2017 di laboratorium Biologi Sel dan Jaringan, Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya  Genetik  Pertanian  (BB-Biogen),  Bogor. Bahan tanaman yang digunakan adalah biakan aseptik dari mother plant (induk tanaman dalam in vitro) Bacopa australis  (L.)  Koleksi  hasil  kerja  sama  Balai  Riset Budidaya Ikan Hias dan BB-Biogen. Biakan in vitro Bacopa australis  (L.)  disubkultur  pada  media  dasar  MS (Murashige & Skoog, 1962). Media MS dibuat sesuai dosis formula dari Murashige & Skoog (1962), yang diperkaya  dengan  zat  pengatur  tumbuh  sesuai perlakuan  yang  diberikan  dan  dilengkapi  dengan sukrosa  3%  (w/v),  serta  dibuat  padat  dengan menambahkan  agar  0,2%  (phytagel/Gelrate). Kemasaman media dibuat 5,8 dengan menambahkan 1N NaOH atau 1N HCl. Media kultur dimasukkan dalam wadah botol kaca dan di-autoclave pada suhu 121°C selama  15  menit.  Setelah  di-autoclave  media  kultur diletakkan pada ruang kultur pada suhu 25°C hingga masa  tanam  dilakukan.  Setelah  tiga  hari  eksplan  di tanaman dengan ukuran 1 cm kemudian disimpan di luar  penyimpanan  dengan  intensitas  penyinaran sebesar 1.000-2.000 lux selama 16 jam/hari. Setelah biakan  berumur  dua  bulan,  setinggi  ±  5  cm  dan menghasilkan  daun  yang  memiliki  ukuran  yang memadai  sebagai  eksplan.  Eksplan  yang  digunakan adalah batang yang memiliki dua mata tunas dengan panjang ± 0,7 cm.
Penelitian  ini  terdiri  atas  tiga  tahapan  kegiatan yaitu:  (1)  induksi  tunas,  (2)  multiplikasi  tunas,  (3) induksi perakaran.

## Induksi  Tunas
Pada kegiatan  induksi tunas ini,  eksplan dengan ukuran 1 cm, yang digunakan berupa ruas batang dari hasil indukan aseptik. Media yang digunakan adalah media dasar MS yang diperkaya dengan zat pengatur tumbuh (ZPT) yaitu BA. Rancangan acak lengkap (RAL) digunakan dalam penelitian ini dengan perlakuan pada konsentrasi BA yaitu 0,0; 0,3; 0,5; 0,7 mg/L. Masing perlakuan  terdiri  atas  10  ulangan.  Pengamatan dilakukan  setelah  tujuh  hari  setelah  tanaman,  dan pengamatan dilakukan pada seluruh eksplan tanaman yang dikultur. Peubah yang diamati adalah, jumlah tu- nas (banyaknya tunas yang terbentuk) dan jumlah daun yang terbentuk. Data yang diperoleh dianalisis secara
stasistik dan apabila terdapat pengaruh yang nyata dari perlakuan terhadap peubah yang diamati, kemudian dilakukan uji lanjut Duncan pada taraf kepercayaan 95%.

## Multiplikasi  Tunas
Tunas yang telah berukuran 2 cm, yang dihasilkan pada  kegiatan  induksi  tunas  dipindahkan  ke  media multiplikasi. Media untuk multiplikasi adalah media dasar MS yang diperkaya dengan BA dan thidiazuron. Dalam satu botol media multiplikasi tunas terdapat tiga  tanaman.  Rancangan  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah rancangan acak lengkap faktorial. Faktor yang pertama adalah konsentrasi BA yaitu 0,0; 0,5;  1,0;  dan  1,5  mg/L  dan  faktor  yang  kedua  yaitu konsentrasi  thidiazuron  yaitu  0,0;  0,1,  0,3;  dan  0,5 mg/L. Masing-masing perlakuan terdiri atas 10 ulangan. Pengamatan dilakukan pada umur satu minggu setelah tanaman pada seluruh eksplan tanaman. Peubah yang diamati meliputi jumlah tunas dan jumlah daun. Apabila terdapat  pengaruh  yang  nyata  dari  perlakuan  yang dianalisis  secara  statistik  terhadap  peubah  yang diamati, maka dilakukan uji lanjut Duncan pada taraf kepercayaan 95%.

## Induksi  Perakaran
Tunas dari perlakuan multiplikasi tunas yang telah tumbuh ± 5 cm, dipindahkan pada media perakaran, dengan jumlah tiga eksplan per botol kultur. Percobaan induksi akar menggunakan media MS yang diperkaya dengan  auksin  IBA.  Penelitian  ini  menggunakan rancangan acak lengkap dengan perlakuan konsentrasi IBA konsentrasi yaitu 0,0; 0,5; 1,0 mg/L. Masing-masing perlakuan terdiri atas 10 ulangan. Peubah yang diamati adalah jumlah akar dan panjang akar setelah berumur delapan minggu. Data dianalisis secara stasistik dan bila terdapat pengaruh yang nyata dari peubah yang diamati, kemudian dilakukan uji lanjut Duncan pada taraf kepercayaan 95 %.

## HASIL DAN BAHASAN

## Induksi  Tunas
Secara  umum  eksplan  Bacopa  australis  mampu menghasilkan tunas akan tetapi jumlah yang dihasilkan bervariasi. Hasil analisis ANOVA menunjukkan bahawa perlakuan konsentrasi BA memberikan pengaruh yang berbeda nyata terhadap jumlah tunas maupun jumlah daun. Beberapa hasil penelitian menunjukkan umumnya tanaman  Bacopa  sp.  diperbanyak  secara  in  vitro menggunakan  batang  yang  memiliki  mata  tunas sebagai eksplan (Vijayakumar et al., 2010; Pandiyan & Selvaraj, 2012; Kapil & Sharma, 2014).
Pemberian BA hingga 0,3 mg/L mampu menginduksi terbentuknya  tunas  paling banyak  dan  memberikan
pengaruh yang berbeda nyata daripada perlakuan 0,0; 0,5; 0,7 mg/L (Gambar 1 dan 2). Selain jumlah tunas yang lebih banyak, perlakuan BA 0,3 mg/L menghasilkan rataan jumlah daun yang lebih banyak, serta berbeda nyata dari perlakuan lainnya. Hal yang sama ditunjukan dari  hasil  penelitian  induksi  tunas  Artemisia  annua; menunjukan bahwa media terbaik untuk menginduksi tunas adalah media yang mengandung BA (Yunita & Lestari,  2008).  Perlakuaan  BA  0,3  mg/L  juga menghasilkan jumlah daun yang mempunyai mata tu- nas pada ketiak daun yang lebih banyak dari perlakuan lainnya. Dalam perbanyakan tanaman secara in vitro hal ini sangat penting karena mata tunas yang berada pada ketiak daun dapat dimanfaatkan sebagai sumber eksplan baru.
Eksplan  yang  dikultur  pada  media  tanpa  BA menghasilkan jumlah rataan tunas yang paling rendah yaitu 1,1 dengan jumlah rataan daun 9,2 (Gambar 1). Eksplan  yang  dikulturkan  pada  media  yang mengandung BA hingga konsentrasi tertentu mampu meningkatkan  terbentuknya  tunas  dan  daun.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian sitokinin terutama BA pada media sangat penting dalam induksi tunas secara in vitro pada berbagai jenis tanaman di antaranya  Bacopa  monnieri  (L.)  (Pandiyan  &  Selvara, 2012;  Kapil  &  Sharma,  2014),  Withania  somnifera (Chandran et al., 2007), Sarcostemma brevistigm (Tho- mas & Shankar, 2009).
Pada Gambar 1 juga dapat diamati bahwa pemberian BA  lebih  besar  dari  0,5  mg/L  akan  menurunkan kemampuan eksplan membentuk tunas, di mana pada konsentrasi  0,5  mg/L  jumlah  rata-rata  tunas  yang terbentuk adalah 1,4 dengan jumlah rata-rata daun 9,4. Pada perlakuan BA 0,7 mg/L terjadi penurunan jumlah rata-rata tunas dan daun. Konsentrasi BA yang relatif tinggi  pada  media  kultur  akan  menghambat pembentukan  tunas  dan  daun  pada  eksplan  Bacopa australis. Pemberian BA pada konsentrasi relatif tinggi akan menghambat pembentukan organ pada kultur. Aplikasi  sitokinin  pada  konsentrasi  tinggi  dapat mengganggu  penyerapan  unsur  hara,  serta menghambat pertumbuhan eksplan (Karyanti, 2017). Respons    zat  pengatur  tumbuh  yang  terekspresi tergantung pada kemampuan eksplan dalam menyerap dan menggunakan zat pengatur tumbuh endogen yang ada dan ZPT eksogen yang diserap dari media tumbuh (Tuhuteru et al., 2012).

## Multiplikasi  Tunas
Pada  penelitian  multiplikasi  tunas,  eksplan  yang digunakan berasal  dari kegiatan  induksi tunas  yang berasal dari perlakuan terbaik. Tunas yang disubkultur berukuran  ±  1  cm  dan  memiliki  dua  nodus  (buku batang). Hasil analisis ANOVA menunjukkan interaksi
dari BA dan thidiazuron memberikan pengaruh yang nyata terhadap jumlah tunas maupun jumlah daun.
Pemberian  thidiazuron  tanpa  kombinasi  zat pengatur  tumbuh  lain  mampu  meningkatkan kemampuan tunas untuk bermultiplikasi. Penghitungan jumlah tunas dilakukan setiap satu minggu sekali pada seluruh eksplan yang dikultur. Peningkatan konsentrasi thidiazuron  hingga  0,1  mg/L  mampu  meningkatkan jumlah tunas hingga rata-rata 3,5 tunas (Tabel 1) dan jumlah  daun  36  (Tabel  2;  Gambar  3A).  Peningkatan
thidiazuron  menjadi  0,3  mg/L  dan  pada  0,5  mg/L cenderung  akan  menurunkan  kemampuan  eksplan membentuk tunas dan daun walaupun tidak berbeda nyata dengan perlakuan thidiazuron 0,1 mg/L. Keadaan yang sama juga terjadi pada beberapa jenis tanaman di antaranya Plumbago zeylanica, Rauwolfia serpentina L.,  di  mana  pemberian  thidiazuron  yang  seimbang mampu menginduksi multiplikasi tunas. Hal ini karena thidiazuron memiliki kemampuan untuk menginduksi terjadinya  proses  pembelahan  sel  (Yunita  &  Lestari, 2011; Syahid & Kristina, 2008).
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf sama pada baris dan kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%, uji jarak berganda Duncan Remarks:
Values  followed  by  the  same  letter  in  the  same  row and  column  are  not significantly  different  at  the  5%  level,  according  to  Duncan’s  multiple-range test
Gambar 2. Induksi  tunas  pada  media  MS  (A);  induksi  tunas  pada  media  MS  +  BA 0,3 mg/L (B).
Figure 2. Shoot induction on MS medium (A); on MS + BA 0.3 mg/L (B).
Gambar 1. Pengaruh konsentrasi BA terhadap jumlah tunas dan jumlah daun pada eksplan Bacopa australis.
Figure 1.
Effect of BA concentration on shoot number and number of leaves on explant Bacopa australis.
1.1 b
2.2 a 1.4 a 1.1 b 9.2 b 12.2 a 9.4 b 6.6 c 0 2 4 6 8 10 12 14 16 BA-0 BA-0.3 BA-0.5 BA-0.7 Jumlah tunas (Number of shoots) Jumlah daun (Number of leaves) Jumlah tunas (Number of shoots) Jumlah daun (Number of leaves) A B
Tabel 1. Pengaruh kombinasi BA dan thidiazuron terhadap rata-rata jumlah tunas eksplan Bacopa australis
Table 1. The influence of combination of BA and thidiazuron on the average number of shoot of explant Bacopa australis
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf sama pada baris dan kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%, uji jarak berganda Duncan
Remarks: Values  followed  by  the  same  letter  in the  same  row  and  column  are  not  significantly different  at  the  5%  level,  according  to  Duncan’s  multiple-range  test

## Tabel 2. Pengaruh kombinasi BA dan thidiazuron terhadap rata-rata jumlah daun eksplan Bacopa australis
Table 2. The influence of combination of BA and thidiazuron on the average number of leaves of explant Bacopa australis
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf sama pada baris dan kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%, uji jarak berganda Duncan
Remarks: Values  followed  by  the  same  letter  in the  same  row  and  column  are  not  significantly different  at  the  5%  level,  according  to  Duncan’s  multiple-range  test 0 0.1 0.3 0.5 0 1.3 ± 0.48 e 3.5 ± 0.84 e 2.7 ± 0.94 e 2.2 ± 1.14 e 0.5 11.2 ± 0.9 d 32.4 ± 4.91 a 20.9 ± 8.94 c 10.4 ± 1.84 d 1.0 4.0 ± 0.82 c 24.3 ± 7.95 b 12.2 ±  2.53 d 1.1 ± 0.56 e 1.5 3.5 ± 1.14 e 21.8 ± 7.55 bc 9.8 ±  2.20 d 1.0 ± 0.67 e Konsentrasi thidiazuron Thidiazuron concentration  (mg/L) Konsentrasi BA BA concentration (mg/L) 0
0.1 0.3 0.5 0 7.3 ± 3.13 g 36.0 ± 7.15 cd 26.4 ± 7.26 de 23.4 ± 3.78 ef 0.5 24.1 ± 2.51 ef 137.6 ± 14.3 a 40.1 ± 17.6 c 29.2 ± 13.37 de 1.0 38.9  ± 8.97 c 49.4 ± 15.7 b 24.0 ± 6.49 ef 16.0 ± 10.33 fg 1.5 35.20 ± 6.91 cd 43.7 ± 16.6 bc 20.1 ± 7.65 ef
14.2 ± 10.86 fg
Konsentrasi BA
BA concentration (mg/L) Konsentrasi thidiazuron
Thidiazuron concentration  (mg/L)
Gambar 3. Tunas yang dimultiplikasi pada media MS + thidiazuron 0,1 mg/L (A); tunas yang dimultiplikasi pada media MS + BA 0,5 + thidiazuron 0,1 mg/L (B). Figure 3. Shoot multiplication in medium of MS + thidiazuron 0.1 mg/L (A); MS + BA 0.5 + thidiazuron 0.1 mg/L (B). B
A
Pemberian zat pengatur tumbuh BA dan thidiazuron secara bersamaan mampu meningkatkan kemampuan tunas untuk bermultiplikasi daripada perlakuan BA atau thidiazuron  secara  tunggal.  Pada  percobaan  ini pemberian BA dan thidiazuron yang optimum adalah pada konsentrasi 0,5 mg/L BA dan 0,1 mg/L thidiazuron di mana rata-rata tunas yang dihasilkan adalah 32,4 tunas  sedangkan  jumlah  daun  adalah  137,6  daun (Gambar 3B) dan memberikan pengaruh yang berbeda nyata dari perlakuan lainnya. Parameter jumlah cukup penting untuk diamati karena dari ketiak daun dapat muncul  tunas  sehingga  dapat  meningkatkan  faktor multiplikasi tunas. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa formulasi media terbaik untuk multiplikasi tu- nas adalah MS + 0,5 mg/L BA + 0,1 mg/L thidiazuron. Pengunaan  thidiazuron  pada  media  kultur  pada konsentrasi  relatif  rendah  lebih  efektif  bila dikombinasi  dengan  BA,  akan  tetapi  apa  bila konsentrasi  BA  dan  thidiazuron  relatif  lebih  tinggi cenderung akan menurunkan kemampuan tunas untuk bermultiplikasi. Hal ini juga terjadi pada tanaman yang memiliki  khasiat  obat  seperti  Kigelia  pinnata, kemampuannya  bermultiplikasi  meningkat  dengan pemberian  thidiazuron  0,5  ìm  dan  bila  konsentrasi terus  ditingkatkan  maka  kemampuan  tunas  untuk bermultiplikasi menjadi menurun (Thomas & Puthur, 2004). Hal ini karena sitokinin eksogen yang diberikan dalam konsentrasi berlebih akan dapat meningkatkan enzim sitokinin oksidase yang berperan memelihara keseimbangan  sitokinin  dalam  sel  tanaman  dengan
mengoksidasi  kelebihan  sitokinin  bila  tidak diperlukan sehingga akan menghambat pertumbuhan organ (Staden et al., 2008).

## Induksi  Perakaran
Memproduksi bibit memerlukan plantlet utuh yang memiliki batang, daun, dan akar; untuk itu, diperlukan formulasi yang tepat untuk induksi perakaran. Hasil yang diperoleh pada penelitian ini menunjukkan bahwa secara  umum  pemberian  IBA  dapat  memicu terbentuknya akar pada kultur in vitro. Hasil analisis ANOVA  menunjukkan  bahwa  perlakuan  IBA memberikan pengaruh yang berbeda nyata terhadap jumlah dan panjang akar. Perlakuan IBA yang terbaik untuk induksi perakaran adalah pada konsentrasi 0,5 mg/L;  di  mana  pada  konsentrasi  tersebut  mampu menghasilkan akar sebanyak 2,9 dan rataan panjang akar 2,92 cm (Gambar 4 dan 5). IBA merupakan salah satu  zat  pengatur  tumbuh  jenis  auksin  yang  umum digunakan  untuk  menginduksi  perakaran  tanaman secara in vitro. Hasil penelitian Bohidar et al. (2008) dengan menggunakan pelakuan IAA (Indole-3-acetic acid),  IBA  dan  NAA  (Naphthaleneacetic  acid)  pada konsentrasi  0,25-1  mg/L  menunjukkan  bahwa  IBA memberikan  respons  tercepat  dalam  menginduksi panjang akar Ruta graveolens.
Peningkatan perlakuan konsentrasi IBA menjadi 1 mg/L menurunkan kemampun tunas untuk membentuk akar; di samping itu, akar yang dihasilkan lebih pendek
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf sama berbeda nyata pada taraf 5%, uji jarak berganda Duncan
Remarks: Values  followed  by  the  same  letter  are  not  significantly  different  at  the  5%  level,
according  to  Duncan’s  multiple-range  test Gambar 4. Pengaruh konsentrasi IBA terhadap jumlah dan panjang akar pada eksplan Bacopa australis.
Figure 4. The influence of IBA concentration on the number and length of roots on Bacopa australis explant.
2.5 ab 2.9 a 2.2 b 1.82 b 2.92 a 2.02 b 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 IBA-0 IBA-0.5 IBA-1 Jumlah akar (Number of roots) Panjang akar (Length of roots) Jumlah akar (Number of roots) Panjang akar (Length of roots)
Gambar 5. Akar yang dihasilkan dari media MS + IBA 0,5 mg/L. Figure 5. Root produced from MS + IBA medium 0.5 mg/L.
yaitu rata-rata jumlah akar yang dihasilkan adalah 2,2 akar  dengan  rata-rata  panjang  akar  2,02  cm. Penambahan  auksin  pada  konsentrasi  yang  optimal pada media biakan dapat menginduksi pembentukan akar lebih baik, akan tetapi apabila konsentrasi yang diaplikasikan relatif tinggi cendrung akan menghambat pembentukan  dan  pertumbuhan  akar  tersebut (Srivastava,  2002;  Davies,  2004).  Aplikasi  auksin eksogen dalam konsentrasi tinggi pada media kultur cenderung  menstimulasi  diferensiasi  jaringan pembuluh  dengan    lebih  cepat,  sehingga  akan meningkatkan jumlah dan ukuran jaringan.

## KESIMPULAN

## Formulasi media yang terbaik untuk induksi tunas
Bacopa australis secara in vitro adalah MS + BA 0,3 mg/ L.  Formulasi  media  yang  optimal  untuk  multiplikasi tunas adalah MS + BA 0,5 mg/L + thidiazuron 0,1 mg/ L dan untuk induksi perakaran adalah MS + IBA 0,5 mg/L.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada Program Insentif Riset Inovasi Nasional (Insinas) tahun 2017-2018, Kementerian Riset Teknologi Dan Pendidikan Tinggi yang telah mendanai penelitian ini, melalu program Insinas Kemitraan.

## DAFTAR  ACUAN
Bohidar, S., Thirunavookkasasu, M., & Ro, T.V. (2008). Effect  of  plant  growth  regulators  on  in  vitro micropropagation of “Garden Rue” (Ruta graveolens L.). International Journal of Integrative Biology, IJIB(3), 36-43.
Bank Indonesia. (2008). Pola pembiayaan usaha kecil industri tanaman air. www.bi.go.id.
Chandran,  C.,  Karthikeyan,  K.,  &  Kulothungan,  S. (2007). In vitro propagation of Withania somnifera (L.)  Dunal.  from  shoot  tip  and  nodal  explants.
Journal of Scientific Transactions in Environment and Technovation, 1(1), 15-18.
Davies, P.J. (2004). The plant hormones: Their nature, occurrence,  and  functions.  In  Davies,  P.J.  (Ed.). Plant hormones biosynthesis, signal transduction, ac- tion!.  London:  Kluwer  Academic  Publisher,  p.  1- 35.
Dharishini,  M.P.,  Balasubramanian,  K.,  &  Radha,  A. (2014).  In  Vitro  micropropagation  of  Bacopa monnieri and detection of bacosides from second- ary  callus.  Journal  of  Academia  and  Industrial  Re- search, 3(5), 233-235.
Guo,  B.,  Abbasi,  B.H.,  Zeb,  A.,  Xu,  L.L.,  &  Wei,  Y.H., (2011). Thiadiazuron:  A multi-dimensional  plant growth regulator. Afr. J. Biotechnol., 10, 8984-9000. Hartati,  S.,  Triana,  E.,  Yunus,  A.,  &  Susilowati,  A. (2014).  kajian  sitokinin  benzilaminopurin  (BAP) terhadap  organogenesis  hasil  persilangan Dendrobium  merbelianum  dengan  Dendrobium liniale. El-Vivo, 2(2), 22-33.
http://tropica.com/fr/guide/r%C3%A9ussir-son- aquarium/engrais-et-co2/. Acces 1 Maret 2017.
Kapil, S.S. &  Sharma, V. (2014). In vitro propagation of Bacopa Monneri: An important medicinal plant. Int. J. Curr. Biotechnol., 2(1), 7-10.
Karyanti.  (2017).  Pengaruh  beberapa  jenis  sitokinin pada  multiplikasi  tunas  anggrek  Vanda  douglas secara in vitro. J. Bioteknol. Biosains Indonesia, 4(1), 36-42.
Khawar, K.M., Sevimay, C.S., & Yuzbasioglu, E. (2003). Adventitious  shoot  regeneration  from  different explant  of  wild  lentil  (Lens  Culinaris  Subsp. Orientalis). University of Ankara, Ankara. Turkey. Murashige, T. & Skoog, F. (1962). A revised for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant, 15, 473-497.
Nugraha,  M.F.I.,  Yunita,  R.,  Lestari,  E.G.,  &  Ardi,  I. (2017). Pembentukan mother plant Bacopa austra-
lis secara in vitro pada berbagai dosis zat pengatur tumbuh dan media aklimatisasi. Media Akuakultur, 12(2), 85-94.
Pandiyan, P. & Selvaraj, T. (2012). In vitro multiplica- tion  of  Bacopa  monnieri  (L.)  Pennell  from  shoot tip and nodal explants. Journal of Agricultural Tech- nology, 8(3), 1099-1108.
Santos,  C.V.,  Brito,  G.,  Pinto,  G.,  Fosiseca,  M.,  & Henrique. (2003). In vitro plantlet regeneration of Olea  eruopaea  spp.  maredenis.  Scientia  Hort.,  97, 83-87.
Srivastava,  L.M.  (2002).  Plant  growth  and  develop- ment,  hormon  and  environment.  London:  Aca- demic Press, 772 pp.
Staden,  J.,  Van,  E.,  Zazimalova,  E.,  &  George,  E.F.
(2008). Plant growth regulator II: Cytokinin, their analogues and antagonists. In George, E.F., Hall, M.A., & de Klerk, G.J. (Eds.). Plant propagation by tissue  culture  Vol.  I.  The  background.  Springer. Dordrecht, p. 205-226.
Syahid,  S.F.  &  Kristina,  N.N.  (2008).  Multiplikasi  tu- nas, aklimatisasi dan analisis mutu simplisia daun encok (Plumbago zeylanica L.)  asal kultur  in  vitro periode panjang. Bul. Littro., XIX(2), 117-128.
Thomas,  T.D.  &  Puthur,  J.T.  (2004).  Thidiazuron  in- duced high frequency shoot organogenesis in cal- lus from Kigelia pinnata L. Bot. Bull. Acad. Sin., 45, 307-313.
Thomas, T.D. & Shankar, S. (2009). Multiple shoot in- duction  and  callus  regeneration  in  Sarcostemma brevistigma Wight & Arnott, a rare medicinal plant. Plant Biotechnologi Report, 3(36), 7-12.
Tuhuteru,  S.,  Hehanussa,  M.L.,  &  Raharjo,  S.H.T. (2012). Pertumbuhan dan perkembangan anggrek Dendrobium  anosmum  pada  media  kultur  in  vitro dengan beberapa konsentrasi air kelapa. Agrologia, 1, 1-12.
Vijayakumar, M., Vijayakumar, R., & Stephen, R. (2010). In vitro propagation of Bacopa monnieri L. - a mul- tipurpose medicinal plant. Indian Journal of Science and Technology, 3(7), 781-786.
Yunita, R. & Lestari, E.G. (2008). Perbanyakan tanaman Artemisia annua secara in vitro. Jurnal Agro Biogen, 4(1), 41-44.
Yunita, R. & Lestari, E.G. (2011). Perbanyakan tanaman pulai pandak (Rauwolfia serpentina L.) dengan teknik kultur jaringan. Jurnal Natur Indonesia, 14(1), 68- 72.
Yunita,  R.,  Mariska,  I.,  &  Tumilisar,  C.  (2012). Perbanyakan  tanaman  jambu  mete  (Anacardium occidentale L.) melalui jalur organogenesis. Jurnal Agro Biogen, 8(3), 113-119.
Zulkarnain.  (2011).  Kultur  jaringan  tanaman,  solusi perbanyakan tanaman budi daya. Jakarta: PT Bumi Aksara, 272 hlm.