## PENGUJIAN BEBERAPA BAKTERI PENGHAMBAT PERTUMBUHAN Xanthomonas oryzae pv. oryzae PADA TANAMAN PADI
Test of Some Bacteria Inhibiting The Growth of Xanthomonas oryzae pv. oryzae in Rice Plants
Zuraidah
Jurusan Pendidikan Biologi Fakultas Tarbiyah, IAIN Ar-Raniry, Banda Aceh e-mail: idamyrza@yahoo.com

## Abstrak
Penyakit hawar daun bakteri (HDB) yang disebabkan oleh bakteri patogen tanaman Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo)  dapat  menyebabkan  kematian  pada  tanaman  padi.  Pengendalian  bakteri  patogen  pada tanaman  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan  agen  biokontrol.  Tujuan  dari  penelitian  ini  ialah  untuk mempelajari  kemampuan  penghambatan  delapan  isolat  bakteri  terhadap  bakteri  patogen Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo)  yang  merupakan  penyebab  penyakit  HDB  pada  tanaman  padi  di  rumah  kaca. Isolat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  terdiri  atas: Pseudomonas  aeruginosa C32a  dan  C32b, P. fluorescens ATCC 13525 Pf, Serratia marcescens E31, Bacillus sp. I.5, B. cereus I.21 dan II.14, dan B. firmus E65. Metode yang digunakan dalam penelitian terdiri atas uji hipersensitivitas, uji bakteri antagonis terhadap  Xoo,  dan  aplikasi in  vivo agen  biokontrol  di  rumah  kaca.  Uji  hipersensitivitas  pada  tanaman tembakau    menggunakan  inokulum  C32a  dan  C32b  menunjukkan  daun  sedikit  menguning  tetapi  tidak menyebabkan nekrosis. Injeksi menggunakan inokulum Xoo menunjukkan nekrosis pada daun tembakau. Uji  antagonis  secara in  vitro menunjukkan  isolat  C32a,  C32b,  Pf,  I.21,  dan  I.5  memiliki  aktivitas penghambatan  terhadap  Xoo,  sedangkan  isolat  lainnya  tidak  menunjukkan  aktivitas  penghambatan. Hasilnya menunjukkan  bahwa  penggunaan  isolat  C32a  mampu  menekan  panjang  lesio  HDB  lebih  baik dari  pada  kontrol  pembanding  kimia  dengan  tembaga  sulfat.  Pengukuran  pertumbuhan  tanaman  padi diukur berdasarkan dari tinggi tanaman, jumlah anakan,  jumlah malai, dan bobot gabah.
Kata kunci: padi, biokontrol, Xanthomonas oryzae pv. oryzae, hawar daun bakteri

## Abstract
Bacterial  leaf  blight  (BLB)  disease  caused  by  plant  pathogenic  bacteria Xanthomonas  oryzae pv. oryzae (Xoo)  could  lead  to  death  of  rice  plants.  Control  of  plant  pathogenic  bacteria  can  be  performed  using biological control agents. The aim of this research was to study the inhibitory ability of eight isolates of biocontrol bacteria against Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) under greenhouse conditions. Isolates of biological  agents  used  in  the  study  were  obtained  from  IPB  Culture  Collection  (IPBCC),  Department  of Biology, IPB and microbial gene bank collection of Indonesian Center for Agriculture Biotechnology and Genetic  Resources  (BB Biogen),  consisting  of Pseudomonas  aeruginosa C32a  and  C32b, P. fluorescens ATCC 13525 Pf , Serratia marcescens E31, Bacillus sp. I.5, B. cereus I.21 and II.14, and B. firmus E65 isolates. The methods used in the research i.e. hypersensitivity test, antagonistic test of biocontrol bacteria to Xoo, and in vivo application of biological agents in the greenhouse condition. Hypersensitivity test on tobacco plants using C32a and C32b inoculums showed characteristics of slightly leaf yellowing but did not cause necrosis. Injection using Xoo inoculum showed necrosis on tobacco leaves. Antagonist isolates i.e. C32a, C32b, Pf, I.21, and I.5 showed inhibitory activity against Xoo, whereas others isolates did not show inhibitory activity. In greenhouse experiments IR 64 rice plants were sprayed with biological control agents (10 7 cfu/ml) at 7 days, 14 days, 28 days, and 42 days after planting. The results showed that C32a isolate could suppress better the lesion length of BLB than that of chemical control (copper sulphate). Keywords: Rice, biocontrol, Xanthomonas oryzae pv. oryzae, bacterial leaf blight

## PENDAHULUAN
Hawar Daun Bakteri (HDB) disebabkan oleh Xanthomonas  oryzae pv. oryzae (Xoo)  merupakan
salah  satu  penyakit  yang  secara  ekonomis  dapat menurunkan  kuantitas  serta  kualitas  produksi tanaman  padi  (Goto,  1998).  Penyakit  ini  tersebar hampir  di  seluruh  daerah  pertanaman  padi  di
Indonesia  baik  di  dataran  rendah  maupun  dataran tinggi  baik  pada  musim kemarau  maupun  musim hujan.  Penyakit  ini  pada  musim  hujan  biasanya berkembang  lebih  pesat  dibandingkan  musim kemarau. Kerugian  hasil  yang  disebabkan  oleh HDB  dapat  mencapai  60%.  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa bila tingkat keparahan sebesar 20%  sebulan sebelum  panen,  penyakit  ini  sudah mulai menurunkan hasil (Deptan, 2011).
Berbagai usaha penanggulangan penyakit ini telah  banyak  dilakukan,  antara  lain  dengan menggunakan  bahan  kimia  sintetik  seperti  asam benzoat dan nitrit, ataupun aplikasi pestisida berbahan  dasar  senyawa  antibiotik  (Asman,  1996). Penggunaan  senyawa  kimia  sebagai  pupuk  dan pestisida  serta  antibiotik  dalam  penanganan penyakit  tanaman  dapat  menyebabkan  resistensi terhadap bakteri, menimbulkan residu, dan pencemaran lingkungan.
Alternatif biokontrol seperti aplikasi mikrob pengendali  hayati  menghasilkan  zat  antimikrob tanpa  mencemari  lingkungan.  Bakteri  mampu menghasilkan  senyawa  metabolit  yang  memiliki efek bakterisidal atau bakteriostatik untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen.  Genus bakteri  yang  umum  digunakan  dan  menghasilkan zat antimikrob berupa bakteriosin ialah Bacillus sp. (Bizani dan Brandelli, 2002; He et al., 2005). Agen biokontrol  yang  sudah  digunakan  antara  lain Pseudomonas  flourescens dan Bacillus  subtilis. Formulasi  campuran  kedua  bakteri  tersebut  telah diaplikasikan untuk mengendalikan penyakit pustul bakteri kedelai yang disebabkan oleh Xanthomonas campestris pv. glycines (Dirmawati, 2005).
Sejumlah spesies bakteri dari genus Bacillus dan Pseudomonas yang tergolong plant  growth promoting  rhizobacteria (PGPR)  selain  memacu pertumbuhan  tanaman  juga  dapat  meningkatkan ketahanan  terhadap  penyakit  karena  memproduksi antibiotik (Wahyudi et al., 2009), dapat memproduksi  asam  sianida,  siderofor  (Santhini et al.,  2005),  enzim  ekstraseluler  yaitu  kitinase, selulase,  dan  protease  yang  melisis  sel  patogen (Jaiganesh et  al.,  2007;  Mubarik et  al.,  2010). Suryadi et  al., (2011)  melaporkan  beberapa  isolat bakteri  memiliki  potensi  menekan  penyakit  blas atau hawar pelepah (sheath blight) pada aplikasi di rumah  kaca,  seperti B.  cereus I.21, B.  firmus E65, B.  cereus II.14, B.  cereus C29d, Bacillus sp.  I.5, dan Serratia  marcescens E31  menunjukkan kecenderungan  lebih  baik  menekan  blas  dari  pada fungisida  Delsene  yang  mengandung  bahan  aktif mancozeb. Tujuan penelitian ini untuk mempelajari kemampuan  penghambatan  delapan  isolat  bakteri
terhadap  bakteri  patogen Xanthomonas  oryzae pv. oryzae yang  merupakan  penyebab  penyakit  HDB pada  tanaman  padi  di  rumah  kaca.  Informasi  yang didapatkan  dari  penelitian  ini  diharapkan  dapat mendukung  pemanfaatan  lebih  lanjut  bakteri biokontrol  yang  efektif  untuk  mengendalikan pertumbuhan Xanthomonas  oryzae pv. oryzae pada tanaman padi di lapangan.

## METODE
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini ialah: padi IR64, tanaman tembakau, isolat  bakteri Pseudomonas  aeruginosa C32a  dan C32b, Serratia  marcescens E31, B.  firmus E65, dan isolat patogen Xanthomonas oryzae pv. oryzae Xoo  dari  koleksi bank  gen  mikrob  BB  Biogen. Isolat  bakteri P.  fluorescens ATCC 13525  Pf, Bacillus sp. I.5, dan Bacillus cereus I.21 dan II.14 dari  koleksi  IPB Culture  Collection (IPBCC) Departemen Biologi, FMIPA, IPB.
Peremajaan Mikrob. Isolat bakteri Pseudomonas  aeruginosa C32a  dan  C32b  dan P. fluorescens Pf  diperbanyak  dengan  memindahkan kultur  pada  medium  agar- agar  King’S  B  dan diinkubasi  pada  suhu  ruang  selama  24-48  jam. Isolat tersebut diremajakan dan diperiksa kemurniannya dengan menggunakan metode kuadran.  Biakan  yang  telah  murni  ditumbuhkan pada  medium  agar- agar  miring  King’S  B  dan disimpan dalam lemari pendingin pada suhu 20 0 C. Hal  yang  sama  juga  dilakukan  pada  isolat  bakteri Xanthomonas  oryzae pv. oryzae (Xoo)  yang diperbanyak  pada  medium  WA  serta  isolat  bakteri Serratia marcescens E31, Bacillus sp. I.5, Bacillus cereus I.21  dan  II.14,  dan B.  firmus E65  yang masing-masing  diperbanyak  dengan  memindahkan kultur pada medium NA.
Uji Reaksi Hipersensitif Isolat Uji serta Isolat  Patogen Xanthomonas  oryzae pv.  oryzae terhadap  Tanaman  Tembakau. Uji  reaksi hipersensitif  dilakukan  pada  daun  tembakau (Nicotiana  tobacum)  (Zhu et  al., 2000).  Masing- masing  isolat  C32a,  C32b,  dan  Pf  diperbanyak pada  medium  King’S  B  cair.  Xoo diperbanyak pada  medium  WA    cair,    serta    E31,    I.5,    I.21, II.14,  dan  E65 diperbanyak pada medium NA cair diinkubasi selama  24  jam  pada rotary  shaker hingga  populasinya  mencapai  10 7 cfu/ml.  Masing- masing  inokulum  diinjeksi  sebanyak  1  ml menggunakan syringe steril  berukuran  1  ml  tanpa jarum  pada  bagian  belakang  helaian  daun tembakau  yang  sehat.  Sebagai  kontrol  negatif digunakan  akuades  steril.  Daun  tembakau  diberi
label  sesuai  isolat  yang  diinjeksi.  Respon  tanaman diamati dalam jangka waktu 24-48 jam. Pengamatan  pada  daun  tembakau  terjadi  nekrosis atau  tidak.  Isolat-isolat  yang  tidak  menimbulkan respon  hipersensitif  kemudian  dipilih  untuk  diuji daya hambatnya terhadap Xoo.
Seleksi  Isolat  Uji  yang  Berpotensi
Menghambat Pertumbuhan
Xanthomonas oryzae pv. Oryzae. Uji  ini  menggunakan  metode double layer (Lisboa et  al., 2006).  Uji  daya hambat  bakteri-bakteri  uji  terhadap  Xoo secara in vitro dilakukan  untuk  menyeleksi  isolat  yang berpotensi  sebagai  agen  biokontrol.  Sebanyak  800 μL  (10 7 cfu/ml)  kultur  cair  bakteri  patogen diinokulasi  ke  dalam  80  ml  WA  semipadat  lalu dituang pada permukaan cawan WA padat masing- masing sebanyak 10 ml. Setelah permukaan media WA double layer memadat, potongan kertas saring Whatman No.2  (diameter  0,7  cm)  yang  telah direndam  dalam  larutan  yang  mengandung  bakteri yang berumur 24 jam, kertas cakram dikeringanginkan  kemudian  diletakkan  di  tengah cawan petri yang berisi biakan bakteri Xoo. Biakan diinkubasi  selama  24  jam  kemudian  diamati  zona hambat  di  sekeliling  cakram.  Perlakuan  kontrol terdiri  atas,  kontrol  negatif  dengan  akuades  steril dan kontrol pembanding kimia (bakterisida Nordox 56  WP  mengandung  bahan  aktif  CuSO 4 50%). Setiap perlakuan dilakukan tiga ulangan. Diameter zona  hambat  yang  terbentuk  kemudian  diamati setelah  inkubasi  24  jam  pada  suhu  ruang. Indeks aktivitas antimikrob dihitung dengan cara (Patra et al., 2009).
Uji In Vivo Aplikasi Isolat Uji terhadap Xanthomonas  oryzae pv.  oryzae pada  Tanaman Padi di Rumah Kaca.
Bibit  padi IR64 yang  akan  disemai dipersiapkan  terlebih  dahulu dengan  cara dicuci dengan alkohol  95%  selama  kurang  lebih  1  menit kemudian dicuci dengan akuades steril selama tiga menit sebanyak  tiga  kali. Kemudian  dipilih  benih yang  tenggelam.  Setelah  dicuci, benih dibungkus dengan kain kasa dan diletakkan  di  bawah  aliran air  kran  hingga  berkecambah  selama lebih  kurang empat  hari, kemudian  ditanam  di bak  plastik berukuran 15х30 cm 2 berisi tanah steril lembab  5 Kg yang telah dicampur pupuk NPK (1:1:1). Benih padi berumur 18 hari dipindahkan ke dalam pot-pot berdiameter  30  cm,  dan  setiap  pot  ditanam  3 rumpun padi.
Koloni  Xoo  yang  telah  diperbanyak  pada medium  agar-agar  miring  selama  24  jam  diambil sebanyak  2  ose  kemudian  ditumbuhkan  dalam medium  WA  cair  selama  48  jam  dan  diukur
kerapatannya  sampai    10 7 cfu/ml.  Hal  yang  sama juga dilakukan pada isolat bakteri C32a, C32b, Pf, E31,  I.5,  I.21,  II.14,  dan  E  65  sesuai  medium pertumbuhannya. Penelitian disusun dalam Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  11 perlakuan  dan  3  ulangan,  total  unit  percobaan adalah 33 satuan percobaan.
Penyemprotan 30 ml filtrat suspensi bakteri dilakukan sebelum inokulasi patogen Xoo (preventif), yaitu umur 7 hari, 14 hari, 28 hari, dan 42 hari setelah tanam. Sebanyak sepuluh daun padi yang  telah  berkembang  penuh  atau  daun  bendera dalam  setiap  rumpun  padi  di  setiap  pot,  masing- masing  diinokulasi  patogen  Xoo  dengan  cara pengguntingan  daun  (leaf  clipping  method)  pada saat  tanaman  mencapai  45  hari  setelah  tanam. Perlakuan  kontrol  pembanding  menggunakan penyemprotan  senyawa  kimia  tembaga  sulfat sebanyak  2  g/L  dan  kontrol  negatif  disemprot dengan  akuades steril,  serta  kontrol  sakit diinokulasi  dengan  Xoo.  Pengamatan  terhadap gejala  penyakit  HDB  dilakukan  pada  setiap  pot dengan  selang  waktu  tiga  hari  selama  sebulan setelah inokulasi melalui pengukuran panjang lesio (lesion  length)  HDB.  Selanjutnya  dilakukan penghitungan area  under  the  disease  progress curve (AUDPC).  Luasan  area  di  bawah  kurva perkembangan  penyakit  ini ditentukan  untuk mengetahui  hubungan  antara  intensitas  penyakit terhadap respon waktu (Shaner dan Finney, 1977).
Penelitian  disusun  dalam  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  dengan  11  perlakuan  dan  3 ulangan.  Data  hasil  percobaan  dianalisis  dengan menggunakan analisis ragam pada taraf kepercayaan  95%  (ANOVA),  jika  menunjukkan pengaruh  nyata  maka  selanjutnya  dilakukan  uji perbandingan  nilai  tengah  dengan  menggunakan Duncan  Multiple  Range  Test  (Uji  jarak  berganda Duncan,  DMRT)  pada  taraf  5% (α=0,05)  dengan menggunakan program SPSS 16.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Peremajaan Mikrob
Pertumbuhan P. aeruginosa C32a dan C32b lebih cepat dibandingkan P. fluorescens Pf. Biakan C32a  dan  C32b  mampu  tumbuh  dalam  waktu  24 jam dan mengubah warna media King’s B menjadi hijau  kekuningan karena  isolat  tersebut  mampu mengeluarkan  berbagai pigmen pyocyanin (biru- hijau), pyoverdine (kuning-hijau),  dan pyorubin (merah-coklat) (King et  al.,  1998).  Bakteri  ini termasuk  Gram  negatif,  aerob,  berbentuk  batang dengan motalitas unipolar. Sedangkan P.
fluorescens tumbuh  berpendar  dalam    waktu  48 jam  pada  medium  agar King’S  B.  Bakteri  ini termasuk  Gram  negatif  dan  berbentuk  batang. Serratia marcescens E31, Bacillus sp. I.5, Bacillus cereus I.21  dan  II.14,  dan B.  firmus E65 ditumbuhkan  pada  media  agar-agar  miring  NA, pertumbuhannya  cepat  dalam  waktu  24  jam  pada suhu  ruang. Serratia  marcescens termasuk  bakteri Gram  negatif,  anaerob  fakultatif. Koloni  isolat B. firmus memiliki  bentuk  tidak  beraturan  dan menyebar  dengan  tepian  berombak  serta  elevasi timbul.  Koloni  isolat Bacillus sp., S.  marcescens, P.  aeruginosa,  dan B.  cereus dicirikan  dengan bentuk  bundar,  tepian  licin  serta  elevasi  cembung. B.  cereus II.14  merupakan  bakteri  Gram  positif penghasil  endospora,  berbentuk  sel  batang, penataan  berantai, bersifat  aerobik  (Tay et  al., 2008). Isolat  patogen Xanthomonas  oryzae pv. oryzae (Xoo)  menunjukkan  pertumbuhan  koloni berwarna  kekuningan  berlendir  dengan  bentuk koloni  bulat,  halus,  mengkilap,  berkapsul,  tidak berspora,  bergerak  dengan  satu  bulu  cambuk (flagellum  monotris),  dan  bersifat  Gram  negatif (Yamasaki et al., 2006).
Uji  Reaksi  Hipersensitif  Isolat  Biokontrol  serta Isolat  Patogen Xanthomonas  oryzae pv.  oryzae terhadap Tanaman Tembakau
Pengujian  reaksi  hipersensitif  pada  daun tanaman  tembakau  setelah  48  jam  diinjeksi inokulum  C32a  dan  C32b  menunjukkan  ciri-ciri daun  agak  menguning  tetapi  tidak  menyebabkan nekrosis. Hasil injeksi dengan  inokulum dari isolat biokontrol  yang  lainnya  tidak  menunjukkan perubahan  pada  daun  tembakau  dan  tidak  terjadi nekrosis, artinya bakteri biokontrol tidak patogenik terhadap  tanaman  tembakau  sehingga  tidak menyebabkan jaringan kolaps dan mati.
Injeksi  dengan  menggunakan  inokulum Xoo,  menunjukkan  nekrosis  munculnya  bercak abu-abu  gelap  dan  berubah  menjadi  kecoklatan pada daun tembakau. Reaksi hipersensitif merupakan  proses  kematian  sel  yang  cepat  dan terlokalisasi. Reaksi ini muncul pada tanaman yang terinfeksi saat pengenalan patogen yang merupakan usaha untuk menghambat pertumbuhan patogen.  Induksi  hipersensitif  dan  patogenitas dipengaruhi  oleh  gen hrp yang  umumnya ditemukan  pada  bakteri  Gram  negatif  patogen tanaman,  termasuk  kelompok Xanthomonas sp. (Zhu et al., 2000).
Injeksi  perlakuan  kontrol  dengan  akuades steril  tidak  terjadi  nekrosis.  Semua  bakteri biokontrol  tidak  menimbulkan  respon  hipersensitif
terhadap  tanaman  tembakau  sehingga  dapat dilanjutkan  dengan  pengujian  daya  hambat  isolat- isolat  tersebut  terhadap  Xoo,  dan  aplikasi  pada tanaman padi secara in vivo di rumah kaca.
Seleksi  Isolat  Biokontrol  yang  Berpotensi Menghambat Pertumbuhan Xanthomonas oryzae pv. oryzae Isolat yang berpotensi menghambat pertumbuhan
Xoo ditunjukkan dengan
pembentukan  zona  hambat.  Pertumbuhan  Xoo dapat  dihambat  oleh  isolat C32a,  C32b,  Pf,  I.21, dan I.5. Pada perlakuan kontrol negatif menggunakan  akuades  steril,  Xoo tumbuh  hingga memenuhi  permukaan  cawan  berisi  media  WA. Sedangkan  pada  perlakuan  kontrol  pembanding kimia  dengan  tembaga  sulfat  menunjukkan  zona hambat terhadap pertumbuhan Xoo. Hasil pengujian efektivitas antagonisme bakteri terhadap bakteri patogen Xoo secara
in vitro memperlihatkan adanya penghambatan
pertumbuhan  Xoo  dengan  terbentuknya  zona hambat  (Tabel  1).  Isolat C32a  dan  C32b  dapat menghambat  pertumbuhan  Xoo secara in  vitro yang  berbeda  nyata  terhadap  perlakuan  kontrol pembanding kimia tembaga sulfat.
Biakan P.aeruginosa memproduksi endotoksin dan produk ektraseluler yang mendukung invasi lokal dan penyebaran mikroorganisme. Toksin  dan  produk  ekstraseluler ini  mencakup  protease  ekstraseluler,  sitotoksin, hemolisin,  dan  piosianin  (Arwiyanto et  al., 2007). Berdasarkan  hasil  penelitian  Hassanein et  al., (2009), Pseudomonas sp.  memiliki  kemampuan untuk memproduksi  metabolit  sekunder  yang berbeda-beda seperti siderofor pengkelat besi (Fe), amonia,  dan  sianida. Menurut  Verschuere et  al., (2000)  penghambatan  pertumbuhan  tidak  selalu berkaitan  dengan  produksi  senyawa  antimikrob seperti  antibiotik,  tetapi  juga  karena  adanya senyawa metabolit sekunder atau adanya perubahan pH.
Uji In  Vivo Aplikasi  Bakteri  Biokontrol terhadap Xanthomonas  oryzae pv.  oryzae pada Tanaman Padi di Rumah Kaca
Hasil uji in  vivo gejala  nekrosis  pada  daun padi  yang  telah  diinokulasi  Xoo  mulai  terlihat  2 hari  setelah  inokulasi  (hsi)  dengan  gejala  berupa daun  layu  seperti  tersiram  air  panas  (water soaking)  dan  berkembang  menjadi  gejala  hawar sehingga  daun  berwarna  kekuningan  mulai  3 hsi. Gejala  penyakit  tersebut  memanjang  di  sepanjang tepi  daun  atau  di  seluruh  helaian  daun.  Panjang
lesio  bertambah  sepanjang  waktu  pengamatan hingga 18 hsi. Pengukuran intensitas perkembangan penyakit  HDB  padi  ini  dilanjutkan  dengan penghitungan  AUDPC.  Penyemprotan  dengan suspensi  bakteri  C32a  merupakan  perlakuan
terbaik  dalam  menekan  intensitas  penyakit  HDB dengan  panjang  lesio  terendah  ialah  1,379  cm (Gambar 1) dan nilai AUDPC terendah yaitu 49,10 cm.hari.  Perlakuan  penyemprotan  isolat  C32a berbeda  nyata  terhadap  perlakuan  bakterisida dengan tembaga sulfat.
Tabel 1. Zona hambat dan indeks aktivitas antimikrob isolat-isolat biokontrol terhadap Xoo
Perlakuan Isolat Nilai rata-rata zona hambat (cm) Indeks aktivitas mikrob (%) C32a Pseudomonas aeruginosa 1.3 a 325 C32b Pseudomonas aeruginosa 1.0 ab 250 Pf Pseudomonas fluorescens 0.8 bc 200 E.31 Serratia marcescens 0 e 0 E.65 Bacillus firmus 0 e 0 I.21 Bacillus cereus 0.5 bc 125 II.14 Bacillus cereus 0 e 0 I.5 Bacillus sp. 0.3 c 75 Tembaga sulfat/CuSO 4 (+) - 0.4 c 100 Akuades (-) - 0 e 0
Angka-angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5% (DMRT)
Gambar  1.  Panjang  lesio  HDB  pada  daun  padi  setelah  inokulasi  Xoo.  Keterangan:  Sumbu  X      ialah perlakuan kontrol dan perlakuan isolat, sumbu Y ialah panjang lesio HDB  (cm)
Efisiensi dan kosistensi pengendalian hayati sangat  tergantung  pada  aktivitas,  densitas  dan lokalisasi  agen  biokontrol  pada  bagian  tanaman (Duijff et  al.,  1997).  Kolonisasi  tanaman  secara internal oleh bakteri merupakan aspek penting bagi efeksi  agen  biokontrol,  kemampuan  sel-sel  bakteri memasuki jaringan
tanaman sekaligus
berkompetisi  dengan  bakteri  lain  yang  berasosiasi dengan  tanaman  (Quadt et  al.,  1977).  Lama kolonisasi daun padi oleh bakteri diduga merupakan  salah  satu  aspek  yang  berperan  dalam
menentukan aktivitas antagonis  melindungi daerah stomata  pada  daun  padi. Berdasarkan  hasil pengukuran  tersebut,  mengindikasikan  bahwa perlakuan  preventif  lebih  efektif,  karena  aplikasi bakteri  hayati  yang  bersifat  antagonis  akan  lebih efektif  menekan  pertumbuhan Xoo  pada  saat tanaman  padi  berumur  7,  14,  28,  dan  42  hari setelah  tanam.  Menurut  Utkhede,  (2005)  agen biokontrol umumnya lebih efektif bila diaplikasikan  sebagai  perlakuan  preventif  sebelum penyakit berkembang.
g e b c c e f d c a b 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 Akuades Steril CuSO4 Xoo
II.14 I.5 Pf C32a C32b I.21 E.31
E.65 Panjang lesio 18 hsi
Gambar 2. Intensitas serangan HDB pada tanaman padi berdasarkan nilai AUDPC
Perlakuan  dengan  isolat  C32a  membentuk grafik  linear  serangan  HDB  sampai  18  hsi  dengan nilai  AUDPC  terendah  (Gambar  2). Perlakuan dengan  isolat  Pf  dan  tembaga  sulfat  menunjukkan garis linear yang hampir berhimpit karena memiliki nilai  yang  hampir  sama  yang  menunjukkan  kedua perlakuan  ini  tidak  berbeda  nyata  (Gambar  2). Sedangkan  isolat  E31  menunjukkan  garis  yang tidak  linear  dan  memiliki  nilai  serangan  penyakit yang  lebih  tinggi  dari  pada  kontrol  sakit  dengan Xoo.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  aplikasi  isolat E31  kurang  efektif  untuk  menekan  perkembangan gejala  penyakit  HDB.  Dengan  kata  lain  terjadi perbedaan  perkembangan  gejala  penyakit  lebih banyak  disebabkan  oleh  peningkatan  pertumbuhan tanaman  yang  semakin  meningkat  memasuki periode  generatif  yang  cenderung  lebih  rentan terhadap infeksi patogen.
Someya et  al.,  (2005)  melaporkan  bahwa perlakuan  preventif  lebih  efektif,  namun  aplikasi lanjutan  juga  perlu  dilakukan  untuk  memperoleh penekanan  penyakit  yang  dapat  bertahan  lama, namun  keefektifan  agen  biokontrol  di  lapangan sangat  dipengaruhi  oleh  faktor-faktor  lingkungan, baik biotik maupun abiotik.

## SIMPULAN
Isolat Pseudomonas  aeruginosa C32a  dan C32b, P.  fluorescens Pf, Bacillus cereus I.21, dan Bacillus sp.  I.5  memiliki  potensi  yang  baik  dalam menghambat pertumbuhan bakteri patogen tanaman  padi X.  oryzae pv. oryzae secara in  vivo dibandingkan  perlakuan  menggunakan  akuades steril dan tembaga sulfat sebagai bakterisida kimia.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada  Dr.  Nisa Rachmania  Mubarik,  M.Si.  dan  Ir.  Yadi  Suryadi,
M.Sc., Laboratorium Mikrobiologi FMIPA Biologi IPB  dan  Laboratorium  BB  Biogen  Cimanggu Bogor  yang  telah  banyak  membantu  dalam terlaksananya penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Arwiyanto, T., Maryudani, YMS. dan Azizah, NN. 2007.  Sifat-sifat  fenotik Pseudomonas fluorescens, agensia  pengendali  hayati penyakit lincat pada Tembakau
Temanggung. J. Biodiversitas., 8: 147-151. Asman,  A.  1996.  Penyakit  layu  pada  tanaman nilam  dan  cara pengendaliannya.  In: Integrated  Control  on  Main  Disease  of Industrial  Crops.  Prosiding  Pertemuan Ilmiah  Tahunan; Bogor,  13-14  Mar  1996. Bogor:  Research  Institute  for Spice  and Medicinal Crops, pp. 284-290. Bogor.
Bizani, D. dan Brandelli, A. 2002. Characterization of bacteriocin produced by a newly isolated Bacillus sp.  Strain  A. J. Appl. Microbiol., 93: 512-519.
[Deptan]  Departemen  Pertanian, 2011. Penyakit Padi karena Bakteri. htpp://bbpadi.litbang.deptan.go.id/index.php /in/penyakit-padi-karena-bakteri/204-
penyakit-hawar-daun-bakteri-blb-in  diakses pada 20 November 2011.
Dirmawati,  SR.  2005.  Penurunan  intensitas penyakit  pustule  bakteri  kedelai  melalui strategi  cara tanam  tumpangsari  dan penggunaan  agensia  hayati. J. Agrijati., 1: 7-10.
Duijff,  BJ.,  Gianinazzi,  P.  dan  Lemanceau,  P. 1997.  Involvement  of  the  outermembrane lipopolysacharides  in  the  endophytic  root colonization  of  tomato  roots  by  biocontrol
0 2 4 6 8 10 12 14 6 9 12 15 18 In te ns itas se ran gan HD B Waktu Pengamatan (Hari) Nordox Xoo II.14 I.5 Pf C32a C32b I.21 E.31 E.65
Pseudomonas  fluorescens strain  WCS417r.
J. Phyto., 135: 325-334.
Goto,  M.  1998.  Kresek and  pale  yellow  leaf systemic  symptoms  of  bacterial  leaf  blight of  rice  caused  by Xanthomonas  oryzae. PI. Dis. Rep 48: 858-861.
Hassanein,  WA.,  Awny,  NM.,  El-Mougith,  AA. dan  Salah  El-Dien,  SH.  2009. The antagonistic  activities  of  some  metabolites produced  by Pseudomonas  aeruginosa Sha8. J. Appl. Sci. Res., 5: 404-414. He,  L.,  Weiliang,  C.  dan  Yang,  L.  2005.
Production  and  partial  characterization  of bacteriocin  like  peptides  by Bacillus licheniformis ZJU12. J. Microbiol. Res., 161: 321-326.
Jaiganesh,  V., Eswaran,  A.,  Balabaskar,  P.  dan Kannan,  C.  2007.  Antagonistic  activity  of Serratia  marcescens against Pyricularia oryzae. Not. Bot. Hort. Agrobot. Cluj.,  35: 48-54.
King, EO., Ward, MK. dan Raney, DE. 1998. Two simple  media  for  the  demonstration  of pyocyanin  and  fluorescein. J. Lab. Clin. Med., 44: 301 – 7.
Lisboa,  MP.,  Bonatto,  D.,  Bizani,  D.,  Henriques, JAP. dan Brandelli, A. 2006.
Characterization of a bakteriosin-like substance produced by Bacillus amyloliquefaciens islolated from the
Brazilian  Atlantic  forest. Int. Microbiol.,  9: 111-118.
Mubarik,  NR.,  Mahagiani,  I.,  Putri,  AA.,  Santoso, S. dan Rusmana, I. 2010. Chitinolytic bacteria isolated  from  chili  rhizosphere: chitinase characterization and application as biocontrol for  whitefly  (Bemisia  tabaci  Genn.). Am. J. Agric. Biol. Sci., 5: 430-535. Patra, et al. 2009. Antimicrobial activity of organic solvent  extracts  of  three  marine  macroalgae from  Chilika  Lake,  Orissa,  India. Malay. J. Microbiol., 5: 128-131.
Quadt,  HA.,  Hallman,  J.  dan  Kloepper,  JW.  1997. Bacterial  endophytes  in  cotton:  location  and interaction  with  other  plant  associated bacteria. J. Microbiol., 43: 254-259.
Santhini,  E.,  Pradeepa,  D.,  Angayarkanni,  T.  dan Kamalakannan,  A.  2005.  Identification  of biochemical  markers  for  the  selection  of effective  strains  of Pseudomonas  fluorescens against Phythium spp.  In:  Gnanamanickam, SS.,  Balasubramaniam,  R.  and  Anand, N.(Eds.). Procedings of the Asian Conference
on  Emerging  Trends  in  Plant-Microbes Interactions.  Chennai:  Center  for  295- Advanced  Studies  in  Botany  University  of Madras. pp. 295-303. Chennai. India.
Shaner,  G.  dan  Finney,  RE.  1977.  The  effect  of nitrogen  fertilization  on  the  expression  of slow-mildewing  resistance  in  knox  wheat. J. Phyto., 67: 1051-1056.
Someya,  NK.,  Tsuchiya.  dan  Akutsu,  K.  2005. Negative  interaction  between  antagonistic microbes  phytopathogens  and  epiphytic microbes  in  biological  control  of  plant pathogens. In: Gnanamanickam, SS.,
Balasumbramaniam, R. and Anand, N. (Eds.). Procedings  of  the  Asian  Conference  on Emerging Trends in Plant-Microbes Interactions. Chennai: Univ. Madras Chennai. Pp. 25-29.
Suryadi,  Y.,  Susilowati,  DN.,  Mubarik,  NR.  dan Putri,  KE.  2011.  Antagonistic  activity  of indigenous  Indonesian  bacteria  as  the suppressing  agent  of  rice  fungal  pathogen. J. Int. Environ. Appl. Sci., siap terbit.
Tay, L., Goh, KT. dan Tan, SE. 2008. An outbreak of Bacillus cereus Food Poisoning. Singapore. J. Medic., 23: 214-217.
Utkhede,  R.  2005.  Molecular  approaches  for diagnosis and biological control of diseases of  green  house  crops.  In: Gnanamanickam, SS.,  Balasumbramaniam,  R.  and  Anand,  N. (Eds.). Procedings  of  the  Asian  Conference on  Emerging  Trends  in  Plant-Microbes Interactions. Chennai: Univ. Madras Chennai. pp.11-18. Chennai. India.
Verschuere, L., Geert, R., Patrick, S. dan Willy, V. 2000.  Probiotic  bacteria  as  biological control  agents  in  aquaculture. J. Microbiol. Mol. Biol., 64: 665-671.
Wahyudi,  AT.,  Astuti,  RI.,  Mubarik,  NR.  dan Faulina, SA. 2009. Detection and cloning of a gene involved in zwitermicin a biosynthesis  from  plant  growth  promoting rhizobacterium Bacillus sp.  CR64. J. Biotechnol., 15: 9-14.
Yamasaki,  RAD.,  Murata,  N.  dan  Suwa,  T.  2006.
Studies  on  the  culture  of Xanthomonas oryzae. J. Bacterio., l42: 946-949.
Zhu,  W.,  Magbanua,  MM.  dan  White,  FF.  2000. Identification  of  two  novel hrp-associated genes  in  the hrp gene  cluster  of
Xanthomonas oryzae pv.oryzae. J. Bacteriol., 182: 1844-1853.