## Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Bidara (Ziziphus spina-christi L.) berdasarkan Gambaran Morfologi dan Histologi Hati Mencit

## Acute Toxicity of Bidara Leaf (Ziziphus spina-christi L.) Ethanol Extract based on Morphological and Histological Images of Mice Liver
Nur Syamsi Dhuha 1* , Haeria 1 , Hardyanti Eka Putri 2
¹Jurusan Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Alauddin Makassar Jalan HM Yasin Limpo No. 36 Sungguminasa Kabupaten Gowa
2 Mahasiswa Prodi Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Alauddin Makassar Jalan HM Yasin Limpo No. 36 Sungguminasa Kabupaten Gowa
Kontak*: nursyamsi.dhuha@uin-alauddin.ac.id

## ABSTRAK
Daun  bidara  ( Ziziphus  spina-christi L.)  digunakan  sebagai  obat  tradisional.  Daun  Bidara  memiliki  khasiat antioksidan,  antiinflamasi,  antimikroba,  antifungi  dan  mencegah  timbulnya  tumor.  Penggunaan  daun  bidara berkhasiat berdasarkan bukti empiris, tetapi belum diteliti keamanannya. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui batas  toksisitas  ekstrak  etanol  daun  bidara  berdasarkan  gambaran  morfologi  dan  histologi  hati  mencit.  Prosedur dimulai dengan ekstraksi simplisia daun bidara secara maserasi menggunakan pelarut etanol 70%. Mencit sebanyak 15 ekor yang dibagi menjadi lima kelompok. Kelompok I (kontrol) yang hanya diberi Na-CMC 1%. Kelompok II, III,  IV,  dan  V  adalah  kelompok  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  etanol  daun  bidara  dengan  dosis  berturut-turut  60, 200,  600,  dan  2000  mg/kgBb.  Pemberian  ekstrak  dilakukan  per  oral  selama  14  hari  kemudian  pada  hari  ke-15, toksisitas diamati. Toksisitas diamati dari preparat histologi hati mencit berdasarkan nilai kerusakan parenkimatosa, hidropik  dan  nekrosis.  Ekstrak  etanol  daun  bidara  memberi  pengaruh  pada  gambaran  morfologi  yaitu  pada  warna dan berat basah hati mencit serta adanya kerusakan histopatologi. Batas toksisitas diamati pada dosis 600 mg/kgBB.
Kata kunci: Daun bidara, toksisitas, morfologi, histologi.

## Abstract
Bidara  leaf  (Ziziphus  spina-christi  L.)  have  been  used  as  traditional  medicine.  Bidara  leaves  have antioxidant, anti-inflammatory, antimicrobial, antifungal properties and prevent tumors activities. The use of bidara leaves is based on empirical evidence, but its safety has not been investigated. This aims of this study is to determine the  toxicity  limit  of  bidara  leaf  ethanol  extract  based  on  morphological  and  histological  characterisctics  of  mice liver. The procedure begins with bidara leaf simplicia extraction by maceration method  with 70% ethanol solvent. Fifteen mice were divided into five groups. First group (control) were only given Na-CMC 1%. Groups II, III, IV, and V are the treatment groups that were given ethanol extracts of bidara leaves, respectively  doses, 60, 200, 600, and  2000  mg/kgBW.  The  extract  was  administered  orally  for  14  days.  Then  on  15th  day,  the  toxicity  observed. Toxicity was observed from mice liver histology based on parenchymatosa, hydropic and necrotic damage values. The ethanol extract of bidara leaves gives an effect on the morphological character, namely the color and weight of the wet liver of mice and the histopathological damage. Toxicity limits were observed at doses of 600 mg/kgBW.
Keywords: Bidara leaf, toxicity, morphology, histology.

## PENDAHULUAN
Tanaman  Bidara  memiliki  kandungan fenolat  dan  flavonoid  yang  kaya  akan manfaat.  Senyawa  fenolat  adalah  senyawa
yang  mempunyai  sebuah  cincin  aromatik dengan  satu  atau  lebih  gugus  hidroksi, senyawa  yang  berasal  dari  tumbuhan  yang memiliki  ciri  sama,  yaitu  cincin  aromatik
yang  mengandung  satu  atau  lebih  gugus hidroksil  (Harbone,  1987).  Tanaman  bidara, yang kaya akan kandungan senyawa golongan fenolat,  berkhasiat  antara  lain  sebagai antioksidan, antiinflamasi, antimikroba, antifungi  dan  mencegah  timbulnya  tumor (Prior,  2003).  Bidara  berkhasiat  untuk melindungi sel DNA manusia yang disebabkan  oleh  kerusakan  dari  radiasi actinic , (Abdel-Galil & El-Jissly, 1991).
Meski  telah  banyak  penelitian  tentang kandungan  kimia  daun  bidara,  penggunaan daun  bidara  secara  klinis  masih  berdasarkan bukti empiris saja sehingga masih dibutuhkan penetapan  khasiat  farmakologi  dan  uji toksisitas  ekstraknya.  Penelitian  mengenai toksisitas  perlu  dilakukan  untuk  melindungi masyarakat dari efek yang mungkin merugikan.  Sebagai  langkah  awal  untuk mengetahui  potensi  toksik  suatu  zat,  maka dilakukan  uji  toksisitas  (Astri,  Sitorus,  Sigit, &  Sujatno,  2012).  Uji  toksisitas  akut  adalah tata  cara  tertentu  yang  dirancang  untuk menentukan  dosis  letal  median  suatu  zat  dan kemungkinan  mekanisme  kerja  dan  target organ  (Priyanto,  2010).  Secara  sederhana toksisitas dapat diartikan sebagai kemampuan suatu senyawa yang dapat menimbulkan efek berbahaya  atau  penyimpangan  mekanisme biologi  pada  suatu  organisme  (Agus  & Rasmaya, 2006).
Efek toksik obat-obatan dapat diamati dari morfologi  dan  histologi  hati,  dikarenakan perannya  yang  sentral  dalam  metabolisme semua  obat  dan  bahan-bahan  asing  yang
masuk  dalam  tubuh.  Hati  akan  mengubah struktur obat yang lipofilik menjadi hidrofilik sehingga  mudah  dikeluarkan  dari  tubuh melalui  urin  atau  empedu  (Dewoto,  2007). Hati  menjadi  organ  sasaran  karena  beberapa hal, seperti bagian besar zat toksik memasuki tubuh  melalui  sistem  gastrointestinal,  dan diserap, toksikan dibawa oleh vena porta hati ke  hati.  Hati  mempunyai  banyak  tempat pengikatan. Kadar enzim yang memetabolisme  dalam  hati  juga  tinggi (terutama  sitokrom  P-450)  ini  yang  membuat besar  toksikan  menjadi  kurang  toksik  dan mudah  larut  dalam  air,  dan  karenanya  lebih mudah  diekskresikan.  Tetapi  beberapa  kasus, efek  toksik  dapat  menginduksi  lesi  yang bersifat  sentrilobuler  yang  dikaitkan  dengan kadar  sitokrom  P-450  yang  lebih  tinggi (Priyanto, 2010).
Berdasarkan  uraian  tersebut,  maka  perlu diteliti toksisitas akut dari ekstrak etanol daun bidara  dengan  menggunakan  mencit  sebagai hewan  coba.  Setelah  pemberian  ekstrak, diperlukan  pengamatan  lebih  lanjut  terhadap morfolog  dan  histologi  organ  hati.  Dari penelitian  ini  diharapkan  dapat  diperoleh batas  aman  penggunaan  ekstrak  bidara  agar tidak terjadi efek toksik.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  gunting  anatomis,  kandang  hewan coba, kanula mencit, kompor listrik (akebonno ® ),  meja  lilin,  mikroskop  (Nikon
Eclipse E100), neraca analitik (Kern®), pisau bedah, rotary evaporator (Heidolph ® ), sendok tanduk,  timbangan,  toples,  dan  wadah (mangkok). Bahan yang digunakan adalah air suling,  daun  bidara  ( Ziziphus  spina-christi L.), larutan etanol 70%, larutan Na CMC 1%, mencit  ( Mus  musculus )  jantan  dan  pewarna hematoksilin-eosin.

## Ekstraksi Sampel
Simplisia  daun  bidara  sebanyak  500  g dimaserasi dengan pelarut etanol 70% selama 2  x  24  jam.  Simplisia  yang  telah  dimaserasi disaring  hingga  diperoleh  filtrat.  Filtrat tersebut kemudian diuapkan dengan menggunakan alat rotary evaporator sehingga  dihasilkan  ekstrak  kering  daun bidara.

## Uji Toksisitas Akut pada Mencit
Hewan  coba  dikelompokkan  menjadi  5 kelompok  dan  masing-masing  kelompok terdiri dari 3 ekor mencit jantan. Kelompok I sebagai  kontrol  negatif,  mencit  diberikan  Na CMC.  Kelompok  II,  III,  IV,  dan  V  diberikan ekstrak  daun  bidara  dengan  dosis  berturut- turut  60,  200,  600,  dan  2000  mg/kg  Bb. Ekstrak  disuspensikan  dengan  Na  CMC  1%, diberikan  secara  peroral  selama  14  hari. Pengamatan pada mencit dilakukan  pada hari ke-15  meliputi  pengamatan  (1)  makroskopik, terhadap morfologi  hati  mencit  seperti  warna dan  penampilan  sering  dapat  menunjukkan sifat  toksisitas  (Dorland,  2002);  dan  (2) mikroskopik,  pada  berbagai  jenis  kelainan histologi, seperti perlemakan, nekrosis,
sirosis,  nodul  hiperplastik,  dan  neoplasia (Frank,  2010).  Pada  hari  ke-15  mencit  di- euthanasia kemudian  diambil  organ  hati mencit untuk diamati secara makroskopik dan mikroskopik.  Jaringan  hati  diamati  secara makroskopik  berdasarkan  warna  dan  tekstur. Jaringan  hati  selanjutnya  diolah  mengikuti metode  baku  histologi  dengan  menggunakan pewarna  hematoksilin  dan  eosin  untuk diamati  karakteristik  mikroskopiknya  dengan mikroskop. Setiap organ hati dibuat menjadi 3 preparat  dari  tiap  kelompok.  Sasaran  yang dibaca  dari  preparat  histologi  hati  mencit adalah nilai kerusakan parenkimatosa, hidropik  dan  nekrosis.  Hasil  penelitian dianalisis  dengan  menggunakan  software SPSS  dengan  uji Analysis  of  Variance ( ANOVA ).

## PEMBAHASAN
Hasil pengamatan makroskopis menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  daun  bidara  secara  akut  berpengaruh
Tabel  1.  Pengamatan morfologi dan
makroskopi hati mencit Kelompok Repli- kasi Pengamatan Warna Tekstur 1 NaCMC 1% 1 Merah Pekat Licin 2 Merah Pekat Licin 3 Merah Pekat Licin 2 Dosis 60 mg/kgBB 1 Merah Licin 2 Merah Licin 3 Merah Pucat Licin 3 Dosis 200 mg/kgBB 1 Merah Pucat Licin 2 Merah Licin 3 Merah Pucat Licin 4 Dosis 600 mg/kgBB 1 Merah Pucat Licin 2 Merah Pucat Licin 3 Merah Pucat Licin 5 Dosis 2000 mg/kgBB 1 Merah Pucat Licin 2 Merah Pucat Licin 3
Merah Pucat Licin
terhadap  gambaran  makroskopis  hati.  Warna hati yang diamati baik pada kelompok kontrol maupun perlakuan berwarna merah kecoklatan atau merah pekat dan merah pucat. Menurut  Dorland  (2002),  hati  yang  normal terlihat  berwarna  merah  pekat,  jika  ditekan terasa agak keras dan licin. Degenerasi ringan pada hati tidak berpengaruh pada penampakan  makroskopisnya  karena  hati mempunyai  kemampuan  regenerasi  yang tinggi.  Kerusakan  jaringan  akibat  zat-zat toksik  memacu  mekanisme  dimana  sel-sel hati  mulai  membelah  dan  terus  berlangsung sampai perbaikan massa jaringan tercapai.
Gambaran  mikroskopik  diamati  dengan skor  perubahan  strukur  histopatologi  sel  hati mencit.  Tabel  2  memperlihatkan  peningkatan kerusakan histologi hati mencit sesuai dengan kenaikan  dosis  ekstrak  daun  bidara  yang diberikan yaitu pada kelompok 2, 3, 4, dan 5, jika  dibandingkan  dengan  kontrol,  walaupun dengan  derajat  kerusakan  yang  berbeda. Perbedaan tersebut kemungkinan dipengaruhi oleh  beberapa  faktor  seperti  kondisi  patologi dan  genetik.  Kondisi  patologi  pada  mencit termasuk  pertahanan  tubuh  terhadap  partikel atau  molekul  asing  yang  masuk  ke  dalam tubuh mencit tersebut. Kondisi-kondisi tersebut memberi pengaruh terhadap
penampakan morfologi maupun histologi hati mencit.
Kerusakan  paling  umum  struktur  histologi hati  mencit  yang  diberi  ekstrak  etanol  daun bidara  adalah  degenerasi  parenkimatosa. Kerusakan inti adalah perubahan yang terjadi pada  sitoplasma  meliputi  perlemakan,  yang ditandai  dengan  adanya  penimbunan  lemak dalam  parenkimatosa  hati,  dapat  berupa bercak  atau  pengecatan  tidak  merata.  Pada pengecatan  inti  terlihat  terdesak  ke  tepi rongga  sel  terlihat  kosong  diakibatkan  butir lemak  yang  larut  pada  saat  pemprosesan. Kerusakan  lain  adalah  degenerasi  hidropik, khususnya  kelompok  dosis  2000  mg/kg  BB. Degenerasi  hidropik  terjadi  karena  adanya gangguan  membran  sel  sehingga  cairan masuk  ke  dalam  sitoplasma,  menimbulkan vakuola-vakuola  kecil  sampai  besar.  Terjadi
Tabel   2.  Pengamatan Histologi dan Mikroskopi Hati Mencit Kelompok Replikasi Rata- rata I II  III 1 (NaCMC 1%) 1 1 1 1 2 (60 mg/kgBB) 2 2 2 2 3 (200 mg/kgBB) 2 1 2 1,7 4 (600 mg/kgBB) 2 2 3 2,3 5 (2000 mg/kgBB) 3 3 3 3 Keterangan 1 : normal 2 : degenerasi parenkimatosa 3 : degenerasi hidropik 4 : nekrosis Kontrol negatif 60 mg/kg BB 200 mg/kg BB 600 mg/kg BB 2000 mg/kg BB Gambar 1. Morfologi hati mencit
akumulasi  cairan  karena  sel  yang  sakit  tidak dapat  menyingkirkan  cairan  yang  masuk. Pemberian ekstrak etanol daun bidara  dengan dosis hingga 2000 mg/kg BB tidak memperlihatkan  adanya  kerusakan  dengan skor  4  yaitu  nekrosis.  Menurut  Manggung (2008),  kondisi  degenerasi  parenkimatosa bersifat reversible yaitu  memungkinkan adanya  regenerasi  sel  yang  baru.  Sedangkan pada  kondisi  degenerasi  hidropik  bersifat irreversible .
Hasil  penelitian  menunjukkan  pemberian ekstrak daun bidara secara akut mempengaruhi  gambaran  makroskopis  hati, yaitu pada warna dan berat basah hati mencit dan  patologi  organ.  Pemberian  ekstrak  daun bidara  memiliki  resiko  toksik  terhadap  hati yaitu perubahan struktur histopatologi sel hati berupa  degenerasi  hidropik  mulai  pada konsentrasi  ekstrak  600  mg/kgBB  dengan
nilai  kerusakan  hati  3.  Nilai  3  digunakan sebagai  batas  sebab  sifat  toksisitas  bersifat irreversible .

## KESIMPULAN
Dosis  beresiko  toksik  pada  liver  mencit dari  Ekstrak  Bidara  adalah  600  mg/kg  BB mencit.

## KEPUSTAKAAN
Abdel-Galil,  F.,  &  El-Jissly,  M.  (1991). Phytochemistry 30.
Agus,  W.  M.,  &  Rasmaya,  N.  (2006). Buku Ajar  Toksikologi  Umum. Bali:  Jurusan Farmasi Universitas Udayana.
Astri,  Y.,  Sitorus,  T.,  Sigit,  J.  I.,  &  Sujatno, M.  (2012).  Toksisitas  Akut  per  Oral Ekstrak  Etanol  Daun  Dewa  (Gynura pseudochina (Lour.) DC) terhadap Kondisi Lambung  Tikus  Jantan  dan  Betina  Galur Wistar. Majalah  Kedokteran  Bandung,
44 (1). doi:10.15395/mkb.v44n1.71
Dewoto,  H.  R.  (2007).  Pengembangan  Obat Tradisional Indonesia Menjadi
Fitofarmaka. Majalah kedokteran, 57 . Dorland,  W.  A.  (2002). Kamus  Kedokteran
Dorland (19 ed.). Jakarta: EGC.
Sel Normal (skor 1) Degenerasi parenkimatosa Degenerasi hidropik
Perbesaran 200x Perbesaran 400x
Keterangan: → hitam = vena sentral → biru = inti sel → hijau = sinusoid → kuning = lempeng sel Gambar 2. Kerusakan histologi hati mencit
Frank,  C.  L.  (2010). Toksikologi  Dasar (2 ed.). Jakarta: UI-Press.
Harbone,  J.  (1987). Metode  Fitokimia terbitan ke-2. Bandung: Penerbit ITB. Manggung, R. E. (2008). Pengujian
Toksisitas  Akut  Lethal  Dose  50  (LD50) Ekstrak  Etanol  Buah  Belimbing  Wuluh (AverrhoabilimbiL.)  Pada  Mencit  (Mus musculus  albinus). Fakultas  Kedokteran
Hewan Institut Pertanian Bogor.
Prior, R. L. (2003). Fruit and vegetable in The Prevention of Cellular Oksidative Damage.
American  Journal  of  Clinical  Nutrition,
78 , 570S-578S. doi:10.1093/ajcn/78.3.
570S.
Priyanto. (2010). Farmakologi Dasar. Depok:
Leskonfi  (Lembaga  Studi  dan  Konsultasi Farmakologi).