E-ISSN:
2548-1398 Published by: Ridwan Institute
Syntax Literate: Jurnal Ilmiah Indonesia p–ISSN: 2541-0849 e-ISSN: 2548-1398 Vol. 7, No. 8, Agustus 2022

## EFEKTIVITAS ANTIMIKROBA BAKTERI PROBIOTIK DARI USUS ITIK
PEDAGING Anas domesticus TERHADAP PERTUMBUHAN Vibrio spp.
Ade Irma , Wahdaniar , Miladiarsi Fakultas Teknologi Kesehatan, Universitas Megarezky, Makassar, Indonesia Email: adeirmabio93@gmail.com, niarwahdaniar03@gmail.com, miladiarsi.bio09@gmail.com

## Abstrak
Telah  dilakukan  penelitian  “Efektivitas  Antimikroba  Bakteri  Probiotik  dari  Usus Itik  Pedaging Anas  domesticus terhadap Pertumbuhan Vibrio  spp. ” . Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan bakteri probiotik dari usus itik pedaging Anas  domesticus berdasarkan  perbedaan  lama  inkubasi  kultur  probiotik  terhadap pertumbuhan Vibrio  spp .  Kemampuan  dari  isolat  H terhadap  pertumbuhan Vibrio spp .  dapat  diketahui  dengan  melakukan  uji  daya  hambat.  Berdasarkan  uji  daya hambat  yang  telah  dilakukan menunjukkan  bahwa  isolat  H  memiliki  kemampuan dalam  membunuh  atau  bersifat  bakteriosidal  terhadap  pertumbuhan Vibrio  spp dengan  membentuk  zona  bening  disekitar  blank  disk.  Indikasi  ini  membuktikan bahwa isolat H mampu menghasilkan senyawa metabolit selama pertumbuhannya. Lama  inkubasi  kultur  isolat  H  berpengaruh  terhadap  senyawa  metabolit  yang dihasilkan.  Produksi  optimum  senyawa  metabolit  berada  pada  kondisi  kultur  48 jam  yang  ditunjukkan  dengan  adanya  penambahan  zona  bening  disekitar blank disk . Isolat H juga memiliki kemampuan yang tinggi terhadap pertumbuhan Vibrio harveyi dibandingkan dengan V . parahaemolyticus dan V. cholera .
Kata Kunci : Antimikroba, Inkubasi Probiotik, Vibrio spp .

## Abstract
A research on the “Efectivenessof the Antimicrobe of the Probiotic Bacteria from the  Intestine  of  the  Broiler  Duck  Anas  domesticus  on the  Growth  of  Vibrio  spp”. This  research  aimed  to  investigate  the  capacity  of  the  probiotic  bacteria  of  the intestine of the broiler duck Anas domesticus based on the difference of the culture probiotic incubation period in inhibiting the growth of the  Vibrio spp. The ability of H isolate in inhibiting the growth of Vibrio spp. can be known by doing a test on the  inhibiting  power.  The  test  of  the  inhibiting  power  which  had  been  done indicated that H isolate
had the capacity to kill or to act as a bactericidal against the growth of Vibrio spp. by forming a clear zone around the blank disk. This indication roved that H isolate could  produce  a  metabolic  compound  during  its  growing  process.  During  the culture  H  isolate  influenced  the  resulted  metabolic  compound.  The  optimum production  of  the  metabolic  compound  in  the  culture  condition  of  48  hours  was shown  by  additional  clear  zone  around  the  blank  disc.  The  H  isolate  also  had higher  capacity  toward  the  growth  of  Vbrio  harveyi  compared  to  Vibrio parahaemolyticus, and Vibrio cholera.
Keywords: Antimicrobe, Probiotic Incubation, Vibrio spp.

## Pendahuluan
Perkembangan  teknologi  dalam  kegiatan  budidaya  perikanan  saat  ini  sudah mulai  banyak  dimanfaatkan  mikroba  oleh  para  petambak  yang  ternyata  dapat  secara langsung  meningkatkan  produksi  tambak.  Keberhasilan  budidaya  perikanan diantaranya  ditentukan  oleh  faktor  kualitas  air  dan  populasi  patogen.  Kualitas  air terutama kadar bahan organik yang melebihi ambang batas merupakan salah satu faktor penyebab penurunan produksi budidaya perikanan di Indonesia.
Demikian  halnya  pada  budidaya  udang,  adanya  serangan  bakteri  yang menyebabkan kematian benih/larva udang. Bakteri Vibrio menyerang larva udang yaitu pada  saat  udang  dalam  keadaan  stress  dan  lemah,  oleh  karena  itu  sering  dikatakan bahwa  bakteri Vibrio termasuk  oportunistik  patogen.  Dengan  adanya  kemunculan berbagai  jenis  penyakit  di  perairan  yang  disebabkan  oleh  bakteri Vibrio  sp. telah berdampak  terhadap  penurunan  hasil  produksi  budidaya  perikanan.  Akibat  infeksi mikroorganisme  patogen  tersebut,  banyak  organisme  perairan  yang  dibudidayakan mengalami  kematian  massal  sehingga  menimbulkan  kerugian  ekonomi  yang  cukup tinggi  (Shortt,  1999).  Penyakit  vibriosis yang  disebabkan  oleh  bakteri  genus Vibrio telah lama menjadi masalah utama bagi pelaku industri budidaya udang khususnya pada larva/benih udang. Penyakit  vibriosis tersebut telah menyebabkan kerugian besar serta kehancuran pada berbagai budidaya udang (Roza dan Zafran, 1998).
Bakteri Vibrio merupakan  bakteri  akuatik  yang  dapat  ditemukan  di  sungai, muara  sungai,  kolam,  dan  laut.  Penyakit  vibriosis  tahun  1991  telah  menyerang  larva udang  di  Indonesia  dan  mengakibatkan  penurunan  produksi  larva  hingga  70%  yang menyebabkan  kerugian  mencapai  US$  85  juta.  Berbagai  metode  dilakukan  untuk pencegahan  dan  penanggulangan  penyakit  vibriosis.  Salah  satu  cara  dengan menggunakan antibiotik dan makanan yang berkualitas. Namun residu antibiotik serta makanan  yang  digunakan  mampu  bertahan  dalam  lingkungan  perairan  setelah digunakan  beberapa  bulan  dan  berpotensi  sebagai  pencemar  (Lee et  al. , 2005),  dapat mempengaruhi  komunitas  mikroba  di  lingkungan  sekitarnya,  kualitas  produk  udang, dan mengawali terjadinya resistensi bakteri terhadap antibiotik sehingga menyebabkan penurunan  efisiensi  antibiotik  dalam  mengatasi  infeksi  pada  hewan  maupun  manusia. Individu  yang  bersifat  resisten  terhadap  antibiotik  diasosiasikan  dengan  penggunaan antibiotik (Parker, 1974).
Salah satu alternatif dalam upaya pengendalian penyakit Vibrio yang aman dan ramah  lingkungan  adalah  pemberian  probiotik.  Bakteri  probiotik  bersifat  non  patogen dan memiliki kemampuan menghambat dan
membunuh  bakteri  patogen,  serta  menghambat  komunikasi  antar  sel-sel  bakteri sehingga tidak terjadi korum sensing yang
dapat  menyebabkan  timbulnya  sifat  patogen  (Senok,  2009),  dapat  berfungsi  sebagai bakteri pengurai dan penetralisir kualitas air, serta memungkinkan sebagai makanan di dalam perairan.
Salah satu jenis ternak yang memiliki Bakteri Asam Laktat (BAL) pada ususnya adalah  itik Anas  domesticus sehingga  tingkat  kesehatan  itik  tergolong  baik.  Itik Anas domesticus mampu  mempertahankan  produksi  telur  lebih  lama  dibandingkan  ayam, tingkat  kematiannya  kecil,  tahan  terhadap  penyakit,  dan  pada  penggunaan  kualitas pakan yang rendah itik masih dapat berproduksi. Komoditas unggulan dari itik adalah daging  dan  telur.  Menurut  Verschuere et  al .  (2000),  probiotik  mampu  memberikan keuntungan  bagi  inang  dengan  memodifikasi  komunitas  mikroba  atau  berasosiasi dengan inang, memperbaiki nilai nutrisi dan pemanfaatan pakan, meningkatkan respon inang terhadap penyakit, dan memperbaiki kualitas lingkungan. Berdasarkan pengertian tersebut  maka  probiotik  tidak  hanya  berfungsi  sebagai  agen  biokontrol  untuk mengurangi  serangan  penyakit  atau  bioremediasi  untuk  memperbaiki  kualitas lingkungan, melainkan dapat pula meningkatkan nilai nutrisi pakan dan laju penyerapan nutrient (Saxelin, 1997).
Dari  beberapa  penelitian  sebelummnya  yang  telah  dilakukan  oleh  Dwyana, (2005), telah banyak diperoleh isolat probiotik yang berpotensi sebagai imunostimulan dan  penghasil  antimikroba.  Isolat  probiotik  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu berasal dari usus itik pedaging Anas domesticus . Hasil penelitian yang telah dilakukan oleh  Anastiawan  (2013),  bahwa  isolat  probiotik  dari  usus  itik  pedaging Anas domesticus menunjukkan  karakteristik  bakteri  probiotik  yang  memiliki  kemampuan untuk menghasilkan senyawa yang mampu untuk membunuh bakteri patogen.
Beberapa  penelitian  yang  telah  dilakukan  menunjukkan  bahwa  probiotik mampu  menghasilkan  antimikroba  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri patogen. Salah satu bakteri patogen yang menyerang udang para petambak yaitu Vibrio sp. Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian mengenai efektivitas antimikroba bakteri probiotik dari usus itik pedaging Anas domesticus terhadap pertumbuhan Vibrio spp.

## Metode Penelitian

## Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Erlemeyer (Pyrex), tabung reaksi  (Pyrex),  gelas  ukur  (Pyrex),  gelas  kimia  (Pyrex),  corong  (Pyrex),  cawan  petri, sendok tanduk, rak tabung, ose, botol vial, bunsen, batang pengaduk, pipet tetes, spoit, korek  api,  oven  (Heraues),  otoklaf  (All  American),  timbangan  digital,  inkubator (Memmmert),  enkas,  vortex,  jangka  sorong,  hot  plate  (Cole  Parmer  Instrumen Company), shaker (Health Shaker Rotator), spektrofotometer UV (Spectonic 20 Milton Roy Company) dan Laminary Air Flow (LAF).

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  isolat  bakteri probiotik, isolat bakteri Vibrio harveyi, Vibrio parahemolyticus , Vibrio cholera , media Thiosulfate  Citrate  Bilesalt  Sucrose  agar (TCBS-agar),  media Nutrient  Agar (NA),
deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA), deMann Rogosa Sharpe Broth (MRSB), tisu, blank disk , kapas, cling wrap , kertas label, aluminium foil , spritus, dan akuades steril. Sterilisasi Alat
Alat  yang  terbuat  dari  gelas  atau  kaca  disterilkan  dengan  menggunakan  oven dengan  suhu  180 o C  selama  2  jam.  Sedangkan  alat-alat  yang  terbuat  dari  logam misalnya  ose  dicuci  dengan  alkohol  70%  kemudian  dipijarkan  di  atas  api  bunsen sampai  membara.  Sterilisasi  medium  dengan  menggunakan  uap  panas  bertekanan dengan menggunakan otoklaf pada suhu 121 o C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.

## Pembuatan Medium

## Media Thiosulfate Citrate Bilesalt Sucrose agar (TCBS-Agar)
Sebanyak 8,8 gr media TCBS-Agar dilarutkan ke dalam 100 mL aquades. Tutup mulut  erlenmeyer  dengan  alumunium  foil  hingga  rapat  dan  selanjutnya  dipanaskan menggunakan hot plate hingga larut. Digunakan pula stirel agar proses homogen lebih cepat.

## Media Nutrien Agar (NA)
Medium  NA  ditimbang  sebanyak  2,3  g  kemudian  dilarutkan  dalam  100  mL akuades  kemudian  dipanaskan  hingga  semua  bahan  larut.  Selanjutnya  disterilkan menggunakan otoklaf pada suhu 121 o C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.

## Media deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA)
Sebanyak 5,2 gr MRS Broth dan 3 gr agar dilarutkan ke dalam 100 mL aquades, selanjutnya  dipanaskan  hingga  larut.  Dalam  proses  pemanasan  tersebut  ditambahkan pula kalsium karbonat (CaCO 3 ) secukupnya. Media kemudian disterilkan menggunakan otoklaf selama 15 menit pada suhu 121 0 C, tekanan 2 atm.

## Media deMann Rogosa Sharpe Broth (MRSB)
Sebanyak  5,2  gr  media  MRSB  dilarutkan  ke  dalam  100  mL  aquades, selanjutnya dipanaskan hingga larut. Media kemudian disterilkan menggunakan otoklaf selama 15 menit pada suhu 121 0 C, tekanan 2 atm.
Pengambilan Sampel Penelitian Sampel Vibrio spp.
Sampel penelitian berupa bakteri patogen yakni Vibrio spp. diperoleh dari stok kampus  yakni  Fakultas  Kelautan,  Universitas  Hasanuddin,  Makassar  dan  dari  Dinas Kelautan  dan  Perikanan,  Barru.  Dua  sampel  yang  digunakan  tersebut  diantaranya Vibrio  harveyi dan Vibrio  parahemolyticus yang  berasal  dari  Laboratorium Bioteknologi,  Dinas  Kelautan  dan  Perikanan  Barru.  Sedangkan Vibrio  cholera yang merupakan stok dari Fakultas Kelautan, Universitas Hasanuddin.

## Sampel Probiotik
Sampel  bakteri  probiotik  yang  digunakan  berasal  dari  koleksi  kultur Laboratorium  Mikrobiologi,  Universitas  Hasanuddin,  Makassar  yang  telah  diuji keefektifannya  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen  (Anastiawan,  2013). Berdasarkan hasil isolasi dan karakterisasi diperoleh salah satu jenis isolat yang diberi nama isolat H.
Tahap Peremajann Bakteri

## Peremajaan Bakteri Vibrio spp.
Stok sampel bakteri Vibrio spp . selanjutnya dilakukan peremajaan dengan cara ditumbuhkan  ulang  pada  cawan  petri  yang  berisi  media  selektif  TCBS-agar.  Koloni terpisah  yang  didapat  dari  media  TCBS-agar  sebelumnya  diambil  sebanyak  satu  ose bulat dan digores pada media TCBS-agar yang baru, kemudian diinkubasi di inkubator pada suhu 37ºC selama 24. Koloni terpisah yang didapat dari media TCBS-agar setelah diinkubasi, kemudian diambil sebanyak satu ose bulat dan digores pada media Nutrien Agar (NA) miring, kemudian diinkubasi di inkubator pada suhu 37ºC selama 24.

## Peremajaan Bakteri Probiotik
Stok bakteri probiotik dari Laboratorium Mikrobiologi, Universitas Hasanuddin yang  akan  digunakan  diremajakan  dengan  menggores  ulang  pada  media  MRSA, dimana media tersebut merupakan media pertumbuhan untuk bakteri probiotik. Koloni terpisah diambil dengan menggunakan ose bulat dan digores pada media MRSA yang baru, kemudian diinkubasi di inkubator pada suhu 37ºC selama 24 jam.

## Tahap Prakultur Bakteri Probiotik
Prakultur bakteri probiotik dilakukan dengan mengambil satu  ose bulat bakteri probiotik  yang  telah  diremajakan  pada  medium Man  Ragosa  Sharpe  Agar (MRSA) miring, selanjutnya dimasukkan ke dalam medium Man Ragosa Sharpe Broth (MRSB) sebanyak  50  mL,  kemudian  diinkubasi  sambil  shaker  dengan  kecepatan  150  rpm selama 2 x 24 jam.

## Tahap Kultur Bakteri Probiotik
Kultur bakteri probiotik dilakukan dengan mengambil 1 mL hasil prakultur pada medium Man  Ragosa  Sharpe  Broth (MRSB)  dengan  menggunakan  pipet,  kemudian dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer  yang  berisi  100  mL  MRSB  yang  baru.  Selanjutnya diinkubasi selama 1-4 x 24 jam pada shaker dengan kecepatan 150 rpm. Tiap inkubasi 1 x 24 jam diambil untuk dilakukan uji daya hambat.
Uji Daya Hambat terhadap Bakteri Vibrio spp.
Langkah awal dilakukan dengan menghitung nilai optical density (OD) bakteri Vibrio spp . di spektrofotometer UV pada panjang gelombang 580 nm. Uji daya hambat dilakukan  dengan  mengambil  2  mL  hasil  kultur  probiotik  pada  medium Man  Ragosa Sharpe Broth (MRSB) yang telah diinkubasi selama 1 x 24 jam dengan menggunakan pipet,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  botol  vial  yang  berisi blank  disk .  Kemudian blank disk pada botol vial tersebut direndam selama 10 menit. Selanjutnya 5 mL NaCl fisiologis  ditambahkan  ke  dalam  isolat Vibrio spp. yang  telah  diremajakan  pada medium NA miring yang kemudian divortex agar koloni  bakteri yang menempel pada permukaan medium dapat larut. Sebanyak 1 mL isolat Vibrio spp. diinokulasikan pada medium NA yang berisi 50 mL dengan metode tuang dan dibiarkan memadat. Setelah medium  NA  memadat, blank  disk steril  yang  telah  direndam  dalam  isolat  probiotik diletakkan  pada  permukaan  medium.  Selanjutnya  diinkubasi  di  inkubator  pada  suhu 37 0 C  selama  1-2  x  24  jam.  Diameter  zona  bening  yang  terbentuk  diukur  dengan menggunakan  jangka  sorong.  Hal  yang  sama  dilakukan  dengan  uji  daya  hambat
terhadap kondisi kultur isolat H yang berbeda yaitu 48 jam, 72 jam dan 96 jam (setiap interval 1 x 24 jam).

## Prosedur Analisis
Hasil  yang  diperoleh  dari  pengujian  daya  hambat  diambil  secara  deskriptip dengan membandingkan antara lama kultur dengan zona bening yang terbentuk sebagai antimikroba terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio spp. dengan metode ranking.

## Hasil Dan Pembahasan Bakteri Probiotik
Bakteri probiotik yang digunakan dalam penelitian ini merupakan bakteri asam laktat  (BAL)  yang  telah  dikarakterisasi  dan  diisolasi  oleh  Anastiawan  (2013)  yang berasal  dari  saluran  pencernaan  itik  pedaging Anas  domesticus .  Berdasarkan  hasil isolasi  dan  karakterisasi  diperoleh  salah  satu  jenis  isolat  yang  diberi  nama  isolat  H. Isolat  ini  memilki  karakteristik  yaitu  memiliki  bentuk  morfologi  bulat  ( coccus )  dan termasuk bakteri gram
positif.  Savadago et  al. (2006)  menjelaskan  bahwa  bakteri  asam  laktat  terdiri dari  sekelompok  bakteri  gram  positif,  tidak  membentuk  spora  serta  berbentuk  batang dan  bulat  yang  bersifat  non  motil.  Salah  satu  syarat  digunakan  probiotik  ini  karena dapat tahan pada kondisi asam (pH rendah). Hal tersebut ditegaskan pula oleh Guera et al. (2006), kemampuan isolat BAL untuk hidup pada pH yang sangat asam berpotensi sebagai probiotik yang memberikan efe baik bagi kesehatan.

## Gambar 1 : Isolat H pada medium Man Ragosa Sharpe Agar (MRSA)

## Bakteri Uji
Bakteri uji yang digunakan dalam penelitian ini berasal dari genus Vibrio yang merupakan bakteri patogen. Medium TCBS adalah medium selektif untuk pertumbuhan bakteri Vibrio . Medium TCBS akan membuat koloni dari Vibrio cholera tampak khas, karena  komposisi  dari  TCBS  akan  menghambat  pertubuhan  bakteri  lainnya .  Vibrio cholera ini tumbuh baik pada agar Thiosulfate-citrate-bilesalt-sucrosa (TCBSA), yang
menghasilkan  koloni  berwarna  kuning. V.  cholera menfermentasi  sukrosa  yang  ada pada medium ini dan menghasilkan asam, yang akan mengubah warna indikator timol biru dan brom timol biru menjadi warna kuning. Vibrio parahaemolyticus sangat jarang memfermentasi sukrosa sehingga warna koloni nampak berwarna hijau (Fardiaz, 1992). Sedangkan V.  harveyi tumbuh  pada  medium  selektif Thiosulfate-Citrate-Bilesalt- Sucrosa (TCBSA)  menunjukkan  warna  hijau  berpendar,  hal  tersebut karena  adanya enzim luciferase yang dapat berpendar bila diamati di ruang gelap. Lavilla-Pitogo et al. (1990)  menjelaskan  bahwa,  pendaran  ( luminescence )  ini  terjadi  karena  bakteri  ini mempunyai enzim lusiferase yang dapat mengkatalis reaksi yang memancarkan cahaya dengan menggunakan substrat berupa senyawa aldehid yang disebut lusiferin
Gambar 2: Pertumbuhan Vibrio pada medium TCBS Agar
A. Vibrio cholera , B. Vibrio parahaemolyticus , dan C. Vibrio harveyi

## Uji Daya Hambat
Kemampuan  isolat  probiotik  H  terhadap  pertumbuhan  bakteri  patogen  dapat dilihat  dari  hasil  uji  daya  hambat.    Uji  daya  hambat  ini  dilakukan  pada lama inkubasi kultur  isolat  H  yang  berbeda  terhadap  pertumbuhan Vibrio  harveyi , Vibrio parahaemolyticus ,  dan Vibrio  cholera .  Lama  inkubasi  kultur  isolat  H  yaitu  24  jam sampai 96 jam dilakukan uji daya hambat terhadap ketiga jenis Vibrio tersebut. Tujuan dilakukannya  uji  daya  hambat  pada  lama  inkubasi  kultur  isolat  H  yang  berbeda  yaitu untuk  mengetahui  kemampuan  optimum  dari  bakteri  probiotik  dalam  menghambat pertumbuhan dari Vibrio spp . Selanjutnya  dilakukan pengamatan selama 1-2 x 24 jam setelah  uji  daya  hambat,  untuk  mengetahui  apakah  isolat  H  yang  diuji  bersifat bakteriostatik  atau  bakteriosidal  terhadap  pertumbuhan Vibrio  spp .  Penentuan efektivitas  dari  antimikroba  dilakukan  dengan  mengamati  zona  bening  yang terbentuk disekitar blank disk yang telah direndam oleh kultur probiotik.
Hasil uji daya hambat kultur isolat H pada lama inkubasi yang berbeda terhadap pertumbuhan Vibrio spp. dapat dilihat pada grafik (gambar 4, 5 dan 6) berikut.
A B C
Gambar 3. Grafik Rata-Rata Diameter Zona Bening Isolat H terhadap Vibrio harveyi selama Inkubasi 1-2 x 24 jam pada Suhu 37 0 C
Gambar 4. Grafik Rata-Rata Diameter Zona Bening Isolat H terhadap Vibrio parahaemolyticus selama Inkubasi 1-2 x 24 jam pada Suhu 37 0 C
Gambar 5. Grafik Rata-Rata Diameter Zona Bening Isolat H terhadap Vibrio cholera selama Inkubasi 1-2 x 24 jam pada Suhu 37 0 C
Berdasarkan  grafik  diatas  menunjukkan  bahwa  lama  inkubasi  mempengaruhi kemampuan  isolat  H  terhadap  pertumbuhan Vibrio  spp .  Untuk Vibrio  harveyi ,  lama kultur  24  jam  menghasilkan  diameter  zona  bening  sebesar  15,7  mm  dan  mengalami penambahan  pada  kondisi  kultur  48  jam  dengan  hasil  pengukuran  16,0  mm.  Namun
pada  lama  kultur  72  jam,  zona  bening  yang  terbentuk  13,5  mm.  Berkurangnya  zona bening  yang  terbentuk  berkaitan  dengan  pertumbuhan  dari  mikroba  tersebut,  semakin lama  inkubasi  kultur  isolat  H  maka  pertumbuhan  mikroba  semakin  sedikit  sehingga kemampuan untuk menghasilkan senyawa  metabolit semakin berkurang. Terlihat pada lama  kultur  96  jam,  adanya  penurunan  kemampuan  dari  isolat  H  untuk  menghambat pertumbuhan Vibrio  harveyi dengan  terbentuknya  diameter  zona  bening  sebesar  12,2 mm. Demikian pula yang terjadi pada V . parahaemolyticus dan V. cholera pada kondisi kultur 48 jam dihasilkan diameter zona bening yang tertinggi.  Dalam hal ini produksi optimum  dalam  menghasilkan  senyawa  metabolit  yaitu  pada  lama  lama  inkubasi probiotik  48  jam.  Hal  ini  juga  sesuai  dengan  penelitian  Ibrahim  (2009)  yang menyatakan  bahwa,  pada  lama  inkubasi  probiotik  48  jam  jumlah  bakteri  asam  laktat (BAL)  bertambah  karena  bakteri  pembentuk  asam  tumbuh  dengan  baik  tanpa  ada saingan,  saat  itu  juga  bakteri  patogen  tidak  dapat  hidup  karena  tidak  tahan  asam  dan bakteri asam laktat dapat mempengaruhi pertumbuhan bakteri patogen.

## I
Isolat  H  memiliki  kemampuan  membunuh  atau  bersifat  bakteriosidal  terhadap pertumbuhan  dari Vibrio  spp. yang  disebabkan  adanya  senyawa  metabolit  yang dikeluarkan  selama  pertumbuhannya.  Suriawiria  (1983)  menjelaskan  bahwa, terhambatnya  pertumbuhan  mikroba  uji  disebabkan  adanya  metabolit  yang  dihasilkan oleh  bakteri  probiotik.  Bakteri  probiotik  atau  bakteri  asam  laktat  (BAL)  yang merupakan  golongan  mikroorganisme  yang  bermanfaat  bagi  inangnya  dan  mampu menghasilkan  senyawa  metabolit  yang  dapat  membunuh  bakteri  patogen.  Hal  ini ditegaskan pula oleh Yulinery dkk (2009), yang menyatakan bahwa pertumbuhan BAL menghasilkan senyawa atau metabolit seperti asam laktat yang meningkatkan keasaman lingkungan  pertumbuhan  dan  terbentuknya  bakteriosin.  Masuknya  senyawa antimikroba  mengakibatkan  perubahan  permeabilitas  pada  dinding  sel  bakteri.  Hal  ini menyebabkan kebocoran nutrisi dan terganggunya metabolisme sel yang berakibat pada kematian  bakteri  tersebut  (Presscot et  al .,  2003).  Oleh  karena  sifatnya  yang bakteriosida,  menurut  Ray  dan  Daeschel  (1992)  zona  penghambatan  yang  dibentuk bakteriosin berupa zona bening yang jelas, bulat, dan luas.
Vibrio harveyi                       Vibrio parahaemolyticus                       Vibrio cholera
(B)
Gambar 6. Hasil Pengamatan Uji Daya Hambat pada Lama Inkubasi Kultur Isolat H selama 48 jam
(A) Inkubasi 1x24 jam (B) Inkubasi 2x24 jam
Berdasarkan  hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa  bakteri  isolat  H  dapat membunuh  atau  bersifat  bakteriosidal  terhadap  pertumbuhan Vibrio  spp .  Keadaan  ini dapat dilihat berdasarkan pada gambar di atas (Gambar 6.), bahwa lama inkubasi isolat H  mempengaruhi  diameter  zona  bening  yang  dihasilkan.  Hal  ini  ditunjukkan  dari adanya  penambahan  zona  bening  pada  inkubasi  2  x  24  jam  sebesar  0,3  mm  pada kondisi kultur 48 jam dalam menghambat Vibrio harveyi . Terjadi hal yang sama pada Vibrio  parahaemolyticus dan Vibrio  cholera .  Ketiga  jenis  bakteri Vibrio tersebut termasuk bakteri Gram negatif dan adanya perbedaan besar zona bening yang dibentuk pada setiap bakteri disebabkan adanya perbedaan aktivitas hambatan yang dipengaruhi oleh  jenis  dinding  sel  bakteri  yang  dihambat.  Hal  ini  berpengaruh  terhadap  ketahanan suatu  bakteri  patogen  terhadap  zat  antimikroba  karena  perbedaan  struktur  dinding selnya. Prescott et al. (2002), menjelaskan bahwa penghambatan BAL terhadap bakteri patogen  dipengaruhi  oleh  perbedaan  dinding  sel  dan  lapisan  peptidoglikan  yang menyusun dinding sel. Semakin tipis lapisan peptidoglikan yang menyusun dinding sel dan  perbedaan  dinding  sel  bakteri  patogen  maka  bakteri  tersebut  semakin  sensitif terhadap  BAL.  Jabarsyah  (2013)  juga  menyatakan  bahwa  lebar  daerah  hambatan disekitar blank  disk tergantung  pada  daya  serap  terhadap  probiotik  kedalam  agar  dan kepekaan Vibrio terhadap probiotik yang digunakan.
Kemampuan  dari  isolat  H  dapat  menghambat  pertumbuhan  dari Vibrio  spp. Isolat H memiliki kemampuan yang tinggi dalam menghambat pertumbuhan dari Vibrio harveyi dibandingkan dengan V . parahaemolyticus dan V. cholera . Hal ini terlihat dari besarnya diameter zona bening yang terbentuk pada bakteri uji Vibrio harveyi . Keadaan ini membuktikan bahwa Vibrio harveyi memiliki kepekaan yang tinggi terhadap isolat H.
Zona bening Zona bening Zona bening

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,  maka  dapat  disimpulkan bahwa:  1).  Isolat  H  memiliki  kemampuan  membunuh  atau  bersifat  bakteriosidal terhadap pertumbuhan Vibrio harveyi , Vibrio parahaemolyticus dan Vibrio cholera . 2). Lama  inkubasi  yang  berbeda  mempengaruhi  kemampuan  isolat  H.  Pada  inkubasi  48 jam  menunjukkan  diameter  zona  bening  yang  tinggi  dan  mempengaruhi  pertumbuhan dari Vibrio harveyi , Vibrio parahaemolyticus dan Vibrio cholera .

## BIBLIOGRAFI
Dwyana.  Z.  2005.  Panduan  Penelitian  Bakteri  Asam  Laktat.  Kursus  Singkat Pemanfaatan  BAL  dalam  bidang  Pangan  dan  Kesehatan.  Univ.  Hasanuddin. Makassar 14-24 November 2005.
Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan. PT Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.
Guerra et  al .  2006,  Production  of  Four  Potentially  Probiotic  Lactic  Acid  Bacteria  and their Evaluation as Feed Additives for Weaned Piglets, Animal Feed Science and Technology 134 (2006) 89–107).
Ibrahim,  S.M  2009.  Effect  of  Antimicrobial  Metabolites  Produced  by  Lactic  Acid Bacteria  on  Quality  Aspect  of  Frozen  Tilapia  (Oreochromis  niloticus)  Filets. World  Journal  of  Fish  and  Marine  Scienes .  1  (1):40-45.  Melalui http://www.idosi.org.
Jabarsyah.  A.,  David.  R.,  dan  Arniati.  2013.  Pengaruh  Ekstrak  Daun  Sirih  terhadap Pertumbuhan Vibrio sp .http://repository.borneo.ac.id. Vol.2, No.1
Lavilla-Pitogo, C.R, M.C.L Baticados, E.R Cruz-Lacierda and L.D De La Pena. 1990. Occurrence  of  luminous  bacterial  diseases  of  Penaeus  monodon  larvae  in  the Philiphines. Aquaculture, 91: 1-13.
Lee et  al .  2005.  Genetic  and  Proteomic  Analysis  of  Factors  Affecting  Serum Cholesterol  Reduction  by  Lactobacillus  acidophilus  A4.  Appl.  Environ. Microbiol . 76(14): 4829-4835.
Parker, R.B. 1974. Probiotics, the other half of antibiotic story. Anim. Nutr. Heath . 29 :
4 – 8.
Prescott. L. M., Horley. J. P., and Klein. D.A. 2002.  Microbiology 5th ed. Boston: Mc Graw-Hill.
Prescott, L.M., Harley, J.P., and Klein, D.A. 2003. Microbiology 6th edition. Mc.Graw- Hill. Boston.
Ray,  B.  and  M.  Daeschel.  1992.  Food  Biopreservatives  of  Microbial  Origin.  Boca Raton: CRC Press.
Roza, D., dan I., Zafran. 1998. Pengendalian Vibrio harveyi secara Biologis pada Larva Udang  Windu (Peneaus  monodon) :  Aplikasi  Bakteri  Penghambat. Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia 4 (2): 24 - 30.
Savadago et al . 2006. Bacteriocins and Lactid Acid Bacteria  – A Minireview, African Journal og Biotechnology . Vol. 5 (9). pp. 678 – 683.
Saxelin, M. 1997. Lactobacillus a Human Probiotic Strain with Thorough Clinical Documentation. Food Rev Int . Vol. 13: 293–313.
Senok,  A.C.  2009.  Probiotics  in  the  Arabian  Gulf  Region.  Food  &  Nutrition  Researc. Available  at:  http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC  2651754/pdf/FNR- 53-1842.pdf. Opened: November 29. 2010.
Suriawiria,  U.  1983.  Mikrobiologi  Masa  Depan  Penuh  Kecerahan  Di  Dalam Pembangunan,  Kumpulan  Beberapa  Tulisan  dari  Unus  Suriawiria. Jurusan Biologi ITB . Bandung. Hlm. 67-68.
Shortt,  C.  1999.  Probiotic  Century:  Historical  and  Current  Perspectives  Trends  Food Science Tecnologi. 10: 411-417.
Verschuere et al . 2000. Probiotic Bacteria as Biological Control Agents in Aquaculture. Microbiology and Molecular Biology Review . Dec. 2000: 655-671.
Yulinery T., Petria, I.Y. dan Nurhidayat, N. 2009. Penggunaan Antimikrobia dari Isolat Lactobacillus Terseleksi  sebagai  Bahan  Pengawet  Alami  untuk  Menghambat Pertumbuhan Vibrio sp. dan Staphylococcus aureus pada Fillet Ikan Kakap. Berk. Penel. Hayati. J. 15: 85—92.

## Copyright holder:
Ade Irma, Wahdaniar, Miladiarsi (2022)

## First publication right:
Syntax Literate: Jurnal Ilmiah Indonesia
This article is licensed under: