Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## KOMPONEN METABOLIT SEKUNDER DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN
Spirulina fusiformis YANG DIKULTUR PADA MEDIA CAMPURAN
(PUPUK R1, UREA DAN KATALIS)
SECONDARY METABOLITE COMPONENTS AND ANTIOXIDANT ACTIVITIES OF Spirulina fusiformis CULTURED IN MIXED MEDIA (FERTILIZER R1, UREA AND CATALYST)
Nabila Ukhty
Jurusan Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Teuku Umar, Aceh Barat Korespondensi : nabilaukhty@utu.ac.id

## abstract
Spirulina fusiformis is one of  blue algae which can produce phycocyanin pigments.  In this study used a  mixed  media  consists of  fertilizer R1, urea and catalyst as a medium for  microalgae  growth.  This  study  aims  to  determine  the  growth  rate,  secondary metabolite component and antioxidant activity of S. fusiformis which was cultivated in a mixture  media cnsists  of  fetilizer  R1, urea and catalysts. S. fusiformis was cultured for 21  days.  Based  on  the  results  of  the  study,  it  is  known  that S.  fusiformis culture experienced five stages of growth. The logarithmic phase occurs on the 3rd day until the 10th  day,  the  stationary  phase  occurs  on  the  10th  day  to  the  15th  day,  and  the  death phase occurs on the 20th day. S. fusiformis biomass harvested on the 12th day contained alkaloids,  flavonoids,  saponins  and  steroids.  The  biomass  antioxidant  activity  of  S. fusiformis harvested on the 12th day had IC50 tilapia of 1937.41 ppm.
Keywords: DPPH, Growth Rate, Secondary Metabolite, Spirulina fusiformis

## I. Pendahuluan
Mikroalga  merupakan  salah  satu  komoditas  perikanan  yang  memiliki  potensi besar untuk dijadikan sumber pangan karena selain mudah dikembangkan juga memiliki kandungan  nutrisi  yang  tinggi  terutama  kandungan  proteinnya.  Salah  satu  jenis mikroalga  yang  saat  ini  menjadi  perhatian  dalam  bidang  pangan  dan  nutraseutikal adalah Spirulina . Mikroalga ini  mampu menghasilkan pigmen fikosianin berwarna biru yang  berpotensi  digunakan  sebagai  pewarna  alami  Sebagai  pewarna  alami,  pigmen fikosianin  juga berpotensi  menjadi pewarna untuk produk kosmetika  yang bernilai  jual tinggi.  Contoh  produk  yang  telah  mereka  kembangkan  adalah lispstick dan eyeliners (Spolaore et al. 2006).
Fikosianin,  seperti  pigmen  alami  pada  umumnya,  dapat  mengalami  kerusakan akibat suhu tinggi. Larutan fikosianin mengalami pemudaran warna sebesar 30% setelah penyimpanan 5 hari dan menjadi bening setelah 15 hari pada suhu 35 oC (Mishra et al. 2008). Selain itu, fikosianin bertindak sebagai antioksidan atau penangkal radikal bebas.
Antioksidan adalah suatu senyawa yang dapat menunda atau mencegah oksidasi lemak  atau  molekul  lain  dengan  cara  menghambat  terjadinya  proses  inisiasi  atau propagasi  reaksi  rantai  oksidatif.  Antioksidan  saat  ini  banyak  dimanfaatkan  dalam bidang  pangan.  Antioksidan  yang  paling  umum  digunakan  saat  ini  pada  bahan  pangan adalah  antioksidan  sintetik,  seperti butylated  hydroxytoluene (BHT), butylated
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
hydroxyanisole (BHA), propil  galat (PG)  dan tertbutyl  hydroquinone (TBHQ). Penggunaan  antioksidan  sintetik  dapat  beresiko  terhadap  kesehatan  karena  memiliki aktivitas  di  dalam  tubuh  yang  dapat  menyebabkan  timbulnya  penyakit  karsinogenetik (Lahucky et  al .  2010).  Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan  pencarian  metabolit  sekunder yang  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  diekstrak  dari  biomassa  kering Spirulina fusiformis .  Hal  ini  diharapkan  dapat  memberikan  informasi  serta  perkembangan  ilmu pengetahuan tentang kandungan senyawa aktif yang terdapat pada Spirulina fusiformis .

## II. Metode Penelitian

## 2.1 Bahan dan Alat
Bahan utama yang digunakan yaitu Spirulina fusiformis yang diperoleh dari  LIPI Cibinong.  Bahan  yang  digunakan  untuk  kultivasi  mikroalga  antara  lain  air  laut,  air tawar,  pupuk  R1,  urea,  dan  katalis.  Bahan  untuk pengujian  aktivitas  antioksidan,  yaitu metanol  dan  kristal  1,1 -difenil- 2 -pikrilhidrazil (DPPH).  Bahan-bahan  yang  dibutuhkan untuk uji fitokimia meliputi pereaksi Wagner, pereaksi Meyer, pereaksi Dragendroff (uji alkaloid), kloroform, anhidra asetat, asam sulfat pekat (uji steroid), serbuk magnesium, amil  alkohol  (uji  flavonoid),  air  panas,  larutan  HCl  2  N (uji  saponin)  dan  etanol  70%, larutan FeCl 3 5% (uji fenol hidrokuinon).
Alat-alat  yang  digunakan  untuk  kultivasi  antara  lain,  Erlenmeyer,  akuarium, pipet  volumetrik,  pipet  tetes,  autoclave,  spektropotometer,  selang  aerasi  dan  aerator. Alat-alat  yang  digunakan  untuk  pengujian  fitokimia  dan  aktivitas  antioksidan  antara lain, gelas ukur, tabung reaksi, piper mikro, pipet volumetrik, vortex, timbangan digital, spatula, incubator dan spektrofotometer UV-VIS Hitachi U-2800.

## 2.2 Tahapan Penelitian
Penelitian  dilakukan  dalam  beberapa  tahapan  yaitu,  tahap  pertama  kultivasi mikroalga,  tahap  kedua  pemanenan  mikroalga  dan  tahap  terakhir  yaitu  analisis biomassakering  yang  meliputi  fitokimia,  fikosianin,  aktivitas  antioksidan  dan kandungan protein. Berikut tahapan pengamatan dapat dilihat pada Gambar 1 berikut.

## Inokulum
Spirulina fusiformis
Kultivasi Spirulina fusiformis
Pupuk R1+urea+katalis (21 hari) Pemanenan Penyaringan dengan sentrifugasi dan pengeringan menggunakan oven Laju Pertumbuhan
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## Gambar 1 Diagram alir proses

## 2.1.1 Kultivasi dan Pemanenan Spirulina fusiformis
Kultivasi Spirulina  Fusiformis bertujuan  untuk  memperoleh  biomasa Spirulina dalam  bobot basah.  Pada penelitian  ini, Spirulina fusiformis dikultur selama 21 hari (3 minggu).  Tahapan  pada  kultivasi Spirulina  Fusiformis adalah  kultur  bibit Spirulina sebanyak 200  ml,  media kultur  yang digunakan  R1, urea dan katalis. Setelah 7  hari di scale up ke volume 1 L dan 2  L dengan perbandingan air dan bibit 4:1 dan penambahan pupuk sebanyak 1 ml/L. Pemanenan Spirulina pada tahap ini dilakukan selama 14 hari dan  dilakukan  pengukuran Optical  Density (OD)  untuk  melihat  laju  pertumbuhan Spirulina .  Setelah  14  hari,  kultur  mikroalga  di scale  up kembali  ke  volume  8  L  dan dikultur  selama  1  minggu.  Setelah  itu  dilakukan  pemanenan  dengan  metode penyaringan sentrifugasi dan diperoleh biomassa Spirulina dalam bobot basah pada fase stasioner.  Setelah  itu  Biomassa  dikeringkan  dengan  menggunakan  oven  untuk mendapatkan biomassa kering.

## 2.1.2 Uji fitokimia (Harborne 1987)
Pengujian  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui  ada  tidaknya  komponen- komponen  bioaktif  yang  terdapat  pada  biomassa Spirulina  fusiformis yang  memiliki aktivittas antioksidan yang terbaik. Uji fitokimia meliputi uji alkaloid, triterpenoid/steroid, saponim dan  flavonoid  dan  fenol hidrokuinon. Biomassa Spirulina fusiformis yang  digunakan  untuk  pengujian  fitokimia  adalah  biomassa  yang  dipanen pada fase stasioner, atau pada usia panen 12 hari.

## 2.1.3 Uji aktivitas antioksidan dengan Metode DPPH (Salazar-Aranda et al.  2009)
Biomassa kering Spirulina fusiformis yang dipanen pada fase stasioner (12 hari) direndam  atau dimaserasi dalam  pelarut metanol  (polar) dengan konsentrasi 1000 ppm selama 24 jam. Selanjutnya dilakukan pengenceran ke dalam konsentrasi 800, 600, 400 dan  200  ppm.    Larutan  DPPH  yang  akan  digunakan,  dibuat  dengan  melarutkan  kristal DPPH dalam pelarut etanol dengan konsentrasi 1 mM.
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  berdasarkan  kemampuan  sampel  yang digunakan  dalam  mereduksi  radikal  bebas  stabil  DPPH.  Selanjutnya  0,0079  g  DPPH
Biomassa kering Spirulina
fusiformis (Fase stasioner) Uji Fitokimia Uji Aktivitas Antioksidan
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
diencerkan  dengan  20  ml  etanol.  Setelah  itu,  dilakukan  pengisian  ekstrak  dengan beberapa  konsentrasi  dan  penambahan  larutan  DPPH  dengan  perbandingan  larutan DPPH dan sampel adalah 1:  9. Campuran dihomogenkan dan diinkubasi pada suhu 37 o C  selama    30  menit.  Serapan  yang  dihasilkan  diukur  dengan  spektrofotometer UV- Visible pada panjang gelombang 517 nm.
Persentase penghambatan aktivitas radikal bebas diperoleh dari nilai absorbansi sampel.  Persamaan  regresi  diperoleh  dari  hubungan  antara  konsentrasi  sampel  dan presentase  pengahambatan  aktivitas  radikal  bebas.  Nilai  konsentrasi  penghambatan aktivitas radikal  bebas  sebanyak 50% (IC 50 ) dihitung dengan  menggunakan persamaan regresi  liniea. Nilai IC 50 diperoleh dengan  memasukkan Y=50 serta nilai  a  dan  b  yang telah diketahui. Nilai x sebagai IC 50 dapat dihitung dengan persamaan : y = a + b (x)
Keterangan :  y = persen inhibisi
a = slope b = intercept
x = konsentrasi sampel (mg/L)

## III. Hasil dan Pembahasan
3.1 Laju Pertumbuhan Spirulina fusiformis
Pertumbuhan  merupakan  peningkatan  jumlah  sel  dan  komponen  esensial  dalam siklus  hidup. Pertumbuhan  mikroalga  pada  kultur  dapat  ditandai  dengan  bertambah besarnya  ukuran  sel  atau  bertambahnya  jumlah  sel.  Perkembangan  sel  dalam  kultur mikroalga terdiri atas lima fase yaitu fase lag (adaptasi), fase eksponensial (logaritmik), fase penurunan  laju pertumbuhan (deklinasi),  fase stasioner  dan  fase kematian (Carlile et  al . 2001). Fase pertumbuhan setiap organisme  tidak selalu tetap. Perbedaan panjang atau  kemiringan  kurva  pertumbuhan  ditentukan  oleh  kondisi  umum  kultur. Keberagaman  fase  pertumbuhan  menggambarkan  perubahan  kondisi  lingkungan  dan tergantung pada inokulum,  metode kultivasi, konsentrasi  nutrisi,  intensitas cahaya, dan suhu  (Becker  1994).  Kurva  pertumbuhan Spirulina  fusiformis dapat  dilihat  pada Gambar 2.
Gambar 2 Laju Pertumbuhan S.fusiformis yang dikultivasi selama 21 hari
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Penambahan  pupuk  R1,  urea  dan  katalis  menunjukkan  bahwa  pertumbuhannya tidak  stabil.  Pada  hari  ke  0  hingga  ke  3  fase  adaptasi  terjadi  ditandai  dengan peningkatan OD yang tidak terlalu signifikan. Fase eksponensial terjadi pada hari ke 3- 10 yang ditandai dengan peningkatan OD yang cepat. Pada Fase ini terjadi pertumbuhan sel  yang  sangat  tinggi.  Menurut  Vonshak et  al. (2004)  fase  eksponensial  ditandai dengan  mulai  meningkatnya  kepadatan  sel.  Fase  pertumbuhan  mikroalga  kemudian mengalami  fase  antara  pertumbuhan  relatif  dan  kematian  yang  disebut  sebagai  fase stasioner  pada  hari  ke  10-15.  Pada  fase  ini  terjadi  keseimbangan  pertumbuhan  sel dimana  fase kematian sebanding dengan pembelahan sel sehingga kepadatan sel relatif tetap  (Widianingsih et  al. 2008).  Fase  stasioner  terjadi  akibat  keterbatasan  intensitas cahaya yang mampu diserap oleh mikroalga. Jumlah energi cahaya yang mampu diserap melalui  fotosintesis  berkaitan  dengan  konsentrasi  sel  yang  semakin  melimpah  hingga akhir  fase  log.  Setelah  konsentrasi  sel  mencapai  maksimal,  jumlah  biomassa  tetap sampai nutrisi dalam medium dan inhibitor menjadi faktor pembatas.
Pada  hari  ke  15  hingga  hari  ke  19  fase  eksponensial  kembali  terjadi  yang ditandai dengan peningkatan OD, hal ini diduga karena adanya peningkatan nutrisi dari mikroalga yang telah mengalami kematian sehingga dapat dimanfaatkan oleh mikroalga yang  masih  hidup.  Hari  ke  21  mikroalga  mengalami  fase  kematian,  kematian  sel disebabkan  oleh  nutrien  dalam  medium  telah  habis  sedangkan  sel  yang  masih  hidup tidak mampu untuk tumbuh dan hanya dapat bertahan hidup (Carlile et al . 2001).

## 3.2 Kandungan Senyawa Metabolit Sekunder Spirulina fusiformis
Pengujian  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui  ada  tidaknya  senyawa metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada  biomassa Spirulina  fusiformis yang  memiliki aktivittas antioksidan yang terbaik. Uji fitokimia meliputi uji alkaloid, triterpenoid/steroid,  saponim  dan  flavonoid  dan  fenol  hidrokuinon.  Kandungan fitokimia pada Spirulina fusiformis dapat dilihat pada Tabel 1 dibawah ini.
Tabel 1. Senyawa Metabolit Sekunder Spirulina fusiformis Uji Fitokimia Spirulina fusiformis Kultur 12 hari 1. Alkaloid Mayer - Dragendorf + Wagner + 2. steroid + 3. flavonoid + 4. saponin + 5. fenol    hidrokuinon -
Secara  umum,  komponen  fitokimia  yang  terdapat  dalam  mikroalga Spirulina fusiformis yang  diamati  meliputi  alkaloid,  steroid,  flavonoid  dan  saponin.  Metabolit
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
sekunder  ini  merupakan  senyawa  bioaktif    yang  dapat  memberikan  kesehatan  pada tubuh  manusia  (Ramesha  dan  Srinivas  2014).  Fitokimia  mempunyai  peran  penting dalam  penelitian  obat  yang  dihasilkan  dari  tumbuh-tumbuhan. Spirulina  fusiformis memiliki  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder,  antara  lain  alkaloid,  steroid,  dan saponin.
3.3 Aktivitas Antioksidan Spirulina fusiformis dengan Metode

## Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH)
Secara kimia, pengertian senyawa antioksidan adalah senyawa pemberi elektron (reduktan).  Secara  biologis,  pengertian  antioksidan  adalah  senyawa  yang  mampu menangkal  atau  meredam  dampak  negatif  oksidan  dalam  tubuh.  Antioksidan  bekerja dengan  cara  mendonorkan  satu  elektronnya  kepada  senyawa  yang  bersifat  oksidan sehingga  aktivitas  senyawa  oksidan  tersebut  bias  dihambat  (Winarsi  2007).  Ada tidaknya senyawa antioksidan dalam suatu bahan, dapat dideteksi dengan melakukan uji aktivitas  antioksidan.  Penangkapan  radikal  adalah  mekanisme  utama  aktivitas antioksidan  pada  makanan,  dimana  aktivitas  antioksidan  diukur  oleh  penangkapan radikal  sintetik  pada  pelarut  organik  pada  temperatur  kamar.  Pengukuran  aktivitas antioksidan Spirulina  fusiformis menggunakan  metode  uji Diphenylpicrylhydrazyl ( DPPH) (Molyneux 2004; Salazar-Aranda et al . 2009).
Aktivitas  antioksidan  dinyatakan  dengan  persentase  penghambatan  (inhibisi) yang  diperoleh  dari  nilai  absorbansi  blanko  dikurangi  absorbansi  sampel  (Zheng et  al. 2011).  Suatu  senyawa  dikatakan  memiliki  aktivitas  antioksidan  apabila  senyawa tersebut  mampu  mendonorkan  atom  hidrogennya  pada  radikal  bebas  yang  digunakan (DPPH).  Hal  ini  dapat  dilihat  pada  Gambar  3,  dimana  terjadi  perubahan  warna  pada DPPH yang telah ditambahkan sampel.
Gambar 3 Perubahan warna DPPH setelah ditambahkan sampel
Hasil  dari  metode  DPPH  diinterpretasikan  dalam  parameter  IC 50 ( Inhibition Concentration 50 ) .  Nilai  IC 50 dapat  didefinisikan  sebagai  besarnya  konsentrasi  yang dapat  menghambat  aktivitas  radikal  bebas,  yaitu  menghambat  aktivitas  radikal  bebas DPPH sebanyak 50%. Nilai IC 50 yang semakin kecil menunjukkan aktivitas antioksidan pada  bahan  yang  diuji  semakin  besar  (Molyneux  2004).  Nilai  rata-rata  IC 50 Spirulina fusiformis dapat dilihat pada Gambar 4.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Gambar 4.  Nilai rata-rata IC 50 biomassa kering Spirulina fusiformis
Aktivitas  antioksidan  pada  biomassa  kering Spirulina  fusiformis yang  dikultur dengan  pupuk  R1,  katalis  dan  urea  sebesar  1937,41  ppm.  Menurut  Wang et  al .(2007) perbedaan  jenis  spesies,  perbedaan  kondisi  lingkungan  tempat  pembiakan,  pH  media, cahaya  matahari,  kandungan  oksigen  serta  kandungan  nitrogen  akan  mempengaruhi kandungan komponen senyawa yang bertindak sebagai antioksidan. Kumar et al .(2011) melaporkan  bahwa  peningkatan  komponen-komponen  antioksidan  berkolerasi  dengan terjadinya peningkatan  jumlah sel kultur. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak biomassa Spirulina yang digunakan  maka semakin  besar persentase penghambatan radikal  bebas yang dihasilkan yang ditunjukkan dengan kenaikan nilai inhibisi.
Menurut  Blois  (1958) dalam Molyneux  (2004),  suatu  senyawa  dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat apabila nilai IC 50 kurang dari 0,05mg/ml (50 ppm), kuat apabila  nilai IC 50 antara 0,05-0,10 mg/ml (50-100 ppm), sedang apabila  memiliki  nilai IC 50 berkisar  antara  0,10-0,15  mg/ml  (100-150  ppm)  dan  lemah  apabila  nilai  IC 50 berkisar antara 0,15-0,20 mg/ml (150-200 ppm). Berdasarkan klasifikasi diatas, ekstrak biomassa kering Spirulina fusiformis memiliki aktivitas antioksidan  yang sangat lemah atau  bisa  dikatakan  hampir  tidak  memiliki  aktivitas  antioksidan  karena  memiliki  nilai IC 50 diatas  1000  ppm.  Hal  ini  dikarenakan  tidak  dilakukannya  proses  pengoptimalan ekstraksi,  sehingga  dimungkinkan  senyawa  aktif  yang  terdapat  pada  biomassa  kering tidak terekstraksi secara maksimal.

## IV. Kesimpulan
Spirulina  fusiformis yang  dikultur  selama  21  hari  memiliki  lima  tahapan  fase pertumbuhan,  yaitu  fase  logaritmik  terjadi  pada  hari  ke  3  hingga  hari  ke  10,  fase stasioner terjadi pada hari ke 10 hingga hari ke 15, dan mengalami fase kematian pada hari  ke  20. Spirulina  fusiformis yang  dipanen  pada  fase  stasioner  atau  hari  ke  12 pemanenan  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder,  diantaranya  alkaloid,  flavonoid, saponin  dan  steroid.  Aktivitas  antioksidan  biomassa S.  fusiformis memiliki  nilai  IC 50 sebesar 1937,41 ppm.

## Aktivitas antioksidan S.fusiformis
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## DAFTAR PUSTAKA
Becker  EW.  1994.  Microalgae  Biotechnology  and  Microbiology.  USA  :  Cambridge University Press. 293 hlm.
Carlile  J,  Watkinson  SC,  Gooday  GW.  2001. The  Fungi .  Ed  ke-2.  UK  (GB):  Elsevier Academic Press. 106-110.
Harborne.  1987 .  Metode  Fitokimia. Kosasih  Padmawinata,  penerjemah.  Bandung:
Penerbit ITB.
Kumar  M,  Kulshreshtha  J,  Singh  G.  2011.  Growth  ang  pigment  profile  of Sprulina platensis isolated  from  Rajasthan,  India. Research  Journal  of  Agricultural Sciences , 2(1):83-86
Lahucky  R,  Nuernberg  K,  Kovac  L,  Bucko  O,  Nuemberg  G.  2010.  Assessment of  the antioxidant potential of selected plant extracts In vitro and  in  vivo experiments on pork. Journal of Meat Science 85:779-784.
Mishra SK, Shrivastav A, Mishra S. 2008. Effect of preservatives for food grade C-PC from Spirulina platensis . Process Biochemistry 43:339–345.
Molyneux  P.  2004.  The  use  of  stable  free  radical  diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for estimating antioksidant activity. Journal of Science Technology 26(2):211-219.
Ramesha  A,  Srinivas  C.  2014.  Antimicrobial  activity  and  phytochemical  analysis  of crude  extracts  of  endophytic  fungi  isolated  from Plumeri  acuminate L.  and Plumeria obtusifolia L. European Journal of Experimental Biology . 4(2):35-43.
Salazar-Aranda R, Perez-Lopez LA, Arroyo JL, Alanis-Garza BA, de Torres NW. 2009. Antimicrobial  and  antioxidant  activities  of  plants  from  Northeast  of  Mexico. Journal of Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 41(5):233- 236.
Spolaore  P,  Joanis-Carson  C,  Duran  E,  Isambert  A.  2006.  Comercial  application  of microalgae. Journal of bioscience and bioenginering 101(2):87-96.
Vonshak, A. 1997. Spirulina: growth, physiology and biochemistry . Didalam V. Avigad (Ed). Spirulina platensis (Arthrospira). London : Taylor & Francis
Winarsi H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas . Yogyakarta: Kanisius
Zheng  X,  Liu  B,  Li  L,  Zhu  X.  2011.  Microwave-assited  extraction  and  antioxidant activity  of  total  phenolic  compounds  from  pomegranate  peel. Journal  of Medicinal Plants Research 5(6):1004-1011.