# Korespondensi:  Balai  Riset  Perikanan  Budidaya  Air  Tawar  dan Penyuluhan  Perikanan.  Jl.  Sempur  No.1,  Bogor  16129,  Indonesia Tel.:  +62  251  8313200 E-mail:  septian08@yahoo.com
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma

## IDENTIFIKASI  BAKTERI  PATOGEN  DAN  PARASIT  PENYEBAB  PENYAKIT PADA IKAN TOMAN (Channa micropeltes)
Septyan  Andriyanto # ,  Hessy  Novita,  Angela  Mariana  Lusiastuti,  dan  Taukhid
Balai Riset Perikanan Budidaya Air Tawar dan Penyuluhan Perikanan Jl. Sempur  No.1, Bogor,  Jawa  Barat 16129
(Naskah diterima: 30 September 2019; Revisi final: 21 Mei 2020; Disetujui publikasi: 21 Mei 2020)

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jenis patogen dan tingkat virulensi bakteri Aeromonas hydrophila pada ikan toman, Channa micropeltes. Penentuan jenis patogen dilakukan dengan identifikasi bakteri secara kimiawi dan menggunakan PCR. Hasil identifikasi bakteri pada ikan toman dengan uji biokimia mengarah pada Aeromonas hydrophila, Aeromonas salmonicida, Myroides sp., dan Edwardsiella sp. Begitupula hasil uji molekuler menggunakan PCR 16S rRNA seluruh isolat teridentifikasi sebagai bakteri. Spesies parasit yang teridentifikasi menginfeksi ikan toman dari golongan protozoa yaitu Trichodina sp., Vorticella sp., Henneguya sp.,  Oodinium  sp.,  dan  Ichthyophthirius  multifiliis,  parasit  golongan  trematoda  yaitu  Dactylogyrus  sp.  dan golongan  acanthochepala  yaitu  spesies  Acanthochepalus  sp.  Hasil  uji  virulensi  melalui  infeksi  buatan menunjukkan bahwa bakteri Aeromonas hydrophila sangat virulen terhadap ikan toman, Channa micropeltes dengan tingkat kematian mencapai 100% dalam waktu 24 jam.
KATA KUNCI: bakteri; parasit; toman; 16S rRNA; virulensi
ABSTRACT: Identification of pathogenic bacteria and parasites on Snakehead, Channa micropeltes. By: Septyan Andriyanto, Hessy Novita, Angela Mariana Lusiastuti, and Taukhid
The purpose of this study was to identify the pathogenicity and virulence of Aeromonas hydrophila in toman fish. General bacterial identification was carried out using biochemical analyzes and followed by PCR tests. Several pathogenic bacterial were found in the fish samples consisting of Aeromonas hydrophila, Aeromonas salmonicida, Myroides sp., and Edwardsiella sp. The PCR 16S rRNA test confirmed that all of the isolates were all bacteria. Parasites species identified in the samples of toman fish were Trichodina sp., Vorticella sp., Henneguya sp., Oodinium sp., Ichthyophthirius multifiliis, Dactylogyrus sp. and Acanthochepalus sp. The artificial infection treatment showed that toman fish was highly vulnerable to Aeromonas hydrophila, with 100% mortality within 24 hours.
KEYWORDS: bacteria; parasite; toman; 16S rRNA; virulence

## PENDAHULUAN
Penyakit  merupakan  salah  satu  faktor  utama penyebab  kematian  ikan,  terutama  pada  saat  stadia benih. Penyakit juga bisa disebabkan oleh patogen yang terbawa oleh ikan carrier sehingga menginfeksi ikan yang sehat. Patogen yang dapat menyebabkan penyakit ikan  terdiri  atas  virus,  bakteri,  parasit  dan  jamur (Sharma et al., 2012). Channa, atau lebih dikenal sebagai snakeheads,  memiliki  kepala  yang  mencolok  mirip dengan ular, membuat spesies ini sangat berbeda dari yang lain. Channa adalah kelompok ikan air tawar dari keluarga  Channidae  dan  sebanyak  30  spesies
teridentifikasi  di  seluruh  dunia  dan  salah  satunya adalah  ikan  toman  (Ngui  et  al.,  2017).  Ikan  toman (Channa micropeltes) merupakan salah satu jenis ikan air tawar yang digemari baik sebagai ikan hias maupun ikan konsumsi. Ikan toman tergolong ikan karnivora yang belum populer untuk dibudidayakan (Ediwarman et al., 2008).
Ikan  toman  (Channa  micropeltes)  memiliki kandungan albumin yang berguna untuk kesehatan manusia dan penyembuhan luka. Ikan toman memiliki kandungan albumin sebesar 8,26% dalam filtrat dan 3,50 dalam daging dan kandungan Zn sebesar 2,59%. Sumber  albumin  yang  tinggi  bermanfaat  sebagai pengganti  albumin  serum  manusia  (HSA)  yang  saat ini  relatif  mahal.  Secara  keseluruhan  ada  14  asam amino yang didistribusikan di antara anggota keluarga
channidae, di mana setiap spesies snakehead memiliki potensi  dalam  proses  metabolisme  dan  dapat dikembangkan  sebagai  pengobatan  tradisional (Firlianty et al., 2013).
Terbatasnya  informasi  mengenai  penyakit  yang menginfeksi ikan toman dapat menjadi permasalahan dalam pengendalian penyakit kedepannya. Identifikasi merupakan salah satu upaya untuk mengetahui jenis patogen  penyebab  penyakit  yang  diperlukan  untuk penentuan  metode  yang  tepat  dalam  rangka penanggulangan penyakit potensial pada ikan toman. Penelitian bertujuan untuk mengetahui jenis patogen dan tingkat virulensi bakteri Aeromonas hydrophila pada ikan toman, Channa micropeltes.

## BAHAN DAN METODE

## Ikan Uji
Sampel  ikan  untuk  identifikasi  patogen  dan  uji virulensi  menggunakan  ikan  toman  (Channa micropeltes)  hasil  tangkapan  dari  perairan  umum  di daerah Kalimantan Tengah. Sebanyak 30 ekor sampel ikan toman dengan ukuran panjang 7,91 ± 0,47 cm dan bobot 3,21 ± 0,53 g digunakan untuk identifikasi bakteri  dan  parasit,  sedangkan  untuk  uji  virulensi menggunakan ikan toman dengan panjang 14,59 ± 0,69  cm  dan  bobot  16,24  ±  2,58  g.  Ikan  toman diaklimatisasi kemudian dipelihara di dalam bak fiber volume 1.000 L selama 30 hari.

## Sampling
Selama penelitian dilakukan pengambilan sampel secara  selektif  terhadap  individu  ikan  yang menunjukkan gejala klinis spesifik untuk diidentifikasi patogen  yang  menginfeksi.  Pengamatan  terhadap mortalitas ikan uji dilakukan setiap hari selama periode uji  virulensi.

## Identifikasi  Bakteri
Organ yang digunakan untuk isolasi bakteri yaitu: hati, limpa, otak, otot, usus dan ginjal. Organ tersebut diambil dari setiap sampel ikan, selanjutnya dilakukan isolasi bakteri dari setiap organ tersebut pada media TSA dan BHIA. Isolasi dilakukan dalam keadaan aseptis dan steril, kemudian diinkubasi selama 24-48 jam pada suhu 28°C. Pengamatan morfologi koloni bakteri yang dimurnikan  dan  tumbuh  pada  media  biakan  secara makroskopis. Tahapan selanjutnya pengujian biokimia bakteri yang terdiri atas pewarnaan gram, motilitas, oksidase,    katalase,  oksidatif  fermentatif  (O/F),  uji media selektif, dan pengujian menggunakan KIT API 20 E.
Konfirmasi  molekuler  hasil  pengujian  bakteri dilanjutkan  menggunakan  metode  Polymerase  Chain
Reaction  (PCR).  DNA  isolat  bakteri  terpilih  diisolasi dengan metode perebusan. Koloni tunggal dimasukkan ke dalam tabung mikro berisi akuades steril sebanyak 500  L  dan  dipanaskan  pada  suhu  98°C  selama  10 menit.  Setelah  diperoleh  supernatan  yang  berisi suspensi  bakteri,  kemudian  dipanaskan  dan disentrifugasi dengan kecepatan 10.000 rpm selama 10  menit.  Supernatan  yang  diperoleh  kemudian diambil sebanyak 300  L untuk diukur kosentrasi dan kemurniannya menggunakan nanodrop (Suwanto et al., 2000).  DNA  hasil  ekstraksi  kemudian  diamplifikasi dengan  penambahan  larutan  mastermix  dengan komposisi: mastermix 12,5  L; aquades 8,5  L; dan primer  F/R  2  L  dan  DNA  bakteri  2  L.  Amplifikasi menggunakan  mesin  thermocycler  dengan  program 95°C  selama  2  menit,  95°C  selama  1  menit,  55°C selama 1 menit, 72°C selama 1 menit, 72°C selama 5 menit. Primer yang digunakan adalah primer univer- sal untuk domain bakteria berupa Forward primer 63f (5’-  CAGGCCTAACACATGCAAGTA-3’)  dan  reverse primer  1387r  (GGGCGGWTGGTACA AGGC-3’) (Marchesi  et  al.,  1998).  Hasil  amplifikasi  kemudian dielektroforesis  dan  pembacaan  hasil  PCR  dengan menggunakan geldoc.

## Identifikasi  Parasit
Pemeriksaan parasit yang menginfeksi ikan toman dilakukan tiap minggu dengan mengecek bagian atau organ  tubuh  seperti  mucus,  sirip,  dan  insang. Pemeriksaan  ektoparasit  mengikuti  prosedur pengujian di Laboratorium Kesehatan Ikan, Balai Riset Perikanan Budidaya Air Tawar dan Penyuluhan Perikanan (BRPBATPP).  Pemeriksaan  endoparasit  pada  organ bagian  dalam  dilakukan  dengan  melakukan pembedahan  untuk  mengamati  parasit  yang menginfeksi  saluran  pencernaan  khususnya  usus. Pemeriksaan  parasit  dilakukan  secara  mikrokopis dengan  menggunakan  metode  preparat  ulas  (smear method). Usus yang telah dikeluarkan dipotong secara vertikal,  kemudian  isi  usus  ikan  dikeluarkan menggunakan  ujung  gunting.  Selanjutnya  usus diletakkan di atas kaca preparat dan kemudian diamati secara makroskopis dan mikroskopis (Maulana et al., 2017).  Pengamatan  ektoparasit  dilakukan  di  bawah mikroskop cahaya pada perbesaran 4x, 10x, 20x, dan 40x.

## Uji  Virulensi  Bakteri
Pengujian  virulensi  bakteri  dilakukan  melalui infeksi  buatan  pada  sampel  ikan  toman.  Persiapan suspensi bakteri patogen Aeromonas hydrophila dikultur pada media TSA dan diinkubasi pada suhu 25°C selama 24  jam.  Suspensi  bakteri  dibuat  melalui  metode pengenceran dengan kepadatan 10 6 CFU mL -1 dalam garam fisiologis steril (0,85% NaCl). Sebanyak 15 ekor
ikan uji disuntik dengan 0,1 mL suspensi bakteri secara intramuscular dan pengamatan dilakukan setiap hari selama 7 hari periode percobaan terhadap gejala klinis dan mortalitas. Tingkat virulensi diperoleh berdasarkan tingkat kematian ikan uji dan konfirmasi patogenitas melalui  reisolasi  patogen  target  dari  sampel  ikan toman yang diuji.

## Analisis  Data
Data  jenis  bakteri,  parasit,  gejala  klinis  serta mortalitas dianalisis secara deskriptif.

## HASIL DAN BAHASAN

## Identifikasi  Bakteri
Pengambilan sampel ikan toman dilakukan dengan melihat  gejala  klinis  seperti  pergerakannya  pasif, terdapat luka di permukaan tubuh ikan, nafsu makan menurun, dan mucus berlebih pada permukaan tubuh. Sebanyak 11 ekor sampel ikan toman diisolasi hati, limpa, otak, otot, usus, dan ginjal. Setelah dilakukan pengamatan  morfologi  terhadap  isolat-isolat  yang diperoleh, sebanyak 10 isolat bakteri diklasifikasikan berdasarkan  bentuk  dan  warna  koloni  yang  sama. Setiap  isolat  dilakukan  pengujian  biokimia  dan  uji lanjut menggunakan media spesifik Rhimler Shotts (RS) dan  media  Triple  Sugar  Iron  Agar  (TSIA)  hingga diperoleh  lima  isolat  yang  memiliki  karakter  dan tingkat  keragaman  yang  berbeda.  Seluruh  isolat merupakan kelompok bakteri gram negatif, berbentuk batang  (rod),  bersifat  motil  dan  nonmotil  untuk selanjutnya dikarakterisasi menggunakan KIT API 20 E  (Tabel  1).  Hasil  identifikasi  terhadap  lima  isolat bakteri melalui pengamatan morfologi dan pengujian biokimia  mengarah  pada  empat  jenis  bakteri  yaitu Aeromonas hydrophila, Aeromonas salmonicida, Myroides sp., dan Edwardsiella sp.
Uji  biokimia  menunjukkan  isolat  1  bersifat oksidase positif, katalase positif, gram negatif, positif O/F,  motil,  positif  RS  dan  mampu  memfermentasi glukosa,  sukrosa,  dan  laktosa.  Hasil  uji  lanjutan menggunakan  KIT  API  20E  teridentifikasi  sebagai bakteri  Aeromonas  hydrophila.  Isonhood  &  Drake (2002)  melaporkan  bahwa  Aeromonas  hydrophila bersifat  gram  negatif,  oksidasi  positif  dan  katalase positif.  Bakteri  ini  juga  mampu  memfermentasikan beberapa gula seperti glukosa, fruktosa, maltose dan trehalosa. Hasil fermentasi dapat berupa senyawa asam atau  senyawa asam  dengan gas.  Pada nutrient  agar, setelah 24 jam dapat diamati koloni bakteri dengan diameter 1-3 mm yang berbentuk cembung, halus dan terang.  Begitupula  pernyataan  Wahjuningrum  et  al. (2013)  bahwa  morfologi  koloni  dari  Aeromonas
hydrophila yaitu berwarna krem, elevasi cembung, dan tepiannya  halus,  sedangkan  morfologi  selnya berbentuk batang dan bersifat gram negatif.
Infeksi  Aeromonas  hydrophila  menyebabkan penyakit  bakterial  yang  bersifat  akut  biasa  disebut “Penyakit Merah” yang menginfeksi semua umur dan jenis  ikan  air  tawar  bahkan  dapat  mengakibatkan kematian  mencapai  100%  (Kamelia  &  Laila,  2009; Taukhid et al., 2015). Hasil penelitian Dhanaraj et al. (2008) dan Samayanpaulraj et al. (2020) melaporkan bahwa penyakit bakterial yang ditemukan pada Channa striatus umumnya disebabkan oleh infeksi bakteri gram negatif  seperti  Aeromonas  hydrophila,  Aeromonas salmonicida  dan  Aeromonas  sp.  dengan  organ  target yaitu hati, insang, usus, dan otot.
Gejala  klinis  ikan  yang  terserang  Aeromonas hydrophila  antara  lain  adanya  luka  kemerahan  pada tubuh,  kerusakan  dan  pembusukan  di  sirip  (luka kemerahan pada sirip dubur, sirip  punggung, geripis pada sirip punggung, dan sirip ekor), mata menonjol, insang  berwarna  keputihan,  dan  perut  berisi  cairan (Pramudita et al., 2013). Selama proses infeksi, bakteri Aeromonas  hydrophila  menghasilkan  enzim  yang mendegradasi  lapisan  chitin  ikan  yang  terinfeksi, sehingga bakteri dapat dengan mudah masuk ke dalam tubuh ikan. Aeromonas hydrophila juga mengeluarkan enzim seperti lesitinase yang masuk ke aliran darah dan langsung mengalir ke ginjal untuk berkembang biak (Kusdarwati et al., 2017).
Uji biokimia yang dilanjutkan dengan uji API 20 E terhadap isolat 2 dan 3 berhasil teridentifikasi sebagai Aeromonas salmonicida. Hasil uji biokimia dari kedua isolat ini menunjukkan bahwa isolat bersifat positif oksidase, positif katalase, positif O/F, non-motil, dan positif RS. Sesuai dengan Prayogo et al. (2011) yang menyatakan bahwa Aeromonas salmonicida merupakan bakteri  bersifat  gram  negatif,  sel  berbentuk  batang pendek,  berukuran  1-2  m,  non-motil,  anaerob fakultatif, tidak menghasilkan spora dan kapsul.
Bakteri Aeromonas salmonicida diidentifikasi sebagai agen penyebab  penyakit Septicaemia. Penyakit  Septi- caemia biasanya menyebabkan tingkat kematian yang tinggi  pada  ikan.  Insang,  sisik,  dan  luka  cenderung menjadi  rute  masuk  utama  untuk  Aeromonas salmonicida. Bakteri juga bisa masuk melalui sirip dan dapat melintasi lapisan gastrointestinal. Dalam jaringan yang tidak rusak, bakteri bisa melewati lapisan dengan rute transeluler atau paraseluler. Adanya infeksi dapat didiagnosis  melalui  identifikasi  morfologis  dan fisiologis (Arbaèiauskienë et al., 2012).
Hasil  uji  biokimia  isolat  4  menunjukkan  bahwa isolat bersifat positif oksidase, positif katalase, negatif
O/F, motil, dan positif RS serta mampu memfermentasi glukosa. Sesuai dengan laporan Jacobs & Chenia (2009) dan Chenia (2015) bahwa bakteri Myroides sp. bersifat aerobik  dengan  warna  koloni  kuning,  termasuk golongan bakteri gram negatif, berbentuk batang dan non-fermentatif.
Bakteri  dari  genus  Myroides  spesiesnya  banyak ditemukan di berbagai lingkungan darat dan perairan. Genus Myroides juga dikenal sebagai agen penyebab berbagai  infeksi.  Myroides  terbagi  menjadi  dua spesies  yang  relevan  yaitu  Myroides  odoratus  dan Myroides odoratimimus. Sebagian besar strain Myroides
Tabel 1. Karakterisasi bakteri menggunakan API 20 E Table 1. Bacterial characterization using API 20 E
+ : Positif (positive) – : Negatif  (negative)
Isolat 1 (isolates 1)
: Aeromonas  hydrophila
Isolat 2&3 (isolates 2&3) : Aeromonas  salmonicida Isolat 4 (isolates 4) : Myroides sp.
Isolat 5 (isolates 5)
: Edwardsiella  sp.
1 2 3 4 5 Morfologi koloni (Colony morphology ) - Warna (Color ) Krem (Cream ) Krem (Cream ) Krem (Cream ) Krem (Cream ) Krem (Cream ) - Bentuk (Shape ) Sirkular Circular Sirkular Circular Sirkular Circular Sirkular Circular Sirkular Circular - Elevasi (Elevation ) Cembung Convex Cembung Convex Cembung Convex Cembung Convex Cembung Convex Pewarnaan gram (Gram staining ) Gram negatif Gram negatif Gram negatif Gram negatif Gram negatif Bentuk sel (Shaped cell  ) Batang (Rod ) Batang (Rod ) Batang (Rod ) Batang (Rod ) Batang (Rod ) Oksidase (Oxidase ) + + + + – Katalase (Catalase ) + + + + + Oxidative–Fermentattive O/F +/+ +/+ +/+ –/– +/+ Motilitas (Motility ) Motil Motil Motil Non–motil Motil R–S Medium + – + + – TSIA -  Fermentasi Glukosa – – + + – -  Fermentasi Laktosa/Sukrosa + – – – – -  H 2 S – + – – – -  Gas + – – – – Uji API 20 E (API 20 E Test ) 2–nitrophenyl–ßDgalactopyranoside + – – – + L–arginine + + – – + L–lysine + – – – + L–ornithine – + – – + trisodium citrate – – – – – sodium thiosulfate – + – – – Urea – – – – – L–tryptophane + – – – + L–tryptophane + – – – + sodium pyruvate + – – – + Gelatin + + – – + D–glucose + – – – + D–mannitol + – – – + Inositol – – – – – D–sorbitol – – – – – L–rhamnose – – – – – D–sucrose + + – – + D–melibiose – – – – – Amygdalin – – – – + L–arabinose + – – – + Karakteristik (Characteristics ) Isolat (Isolates )
odoratimimus telah diisolasi dari spesimen klinis dan mempunyai  kemampuan  untuk  mengembangkan resistensi  terhadap  antibiotik  dan  patogen oportunistik.  Lebih  lanjut,  Myroides  sp.  juga  telah dilaporkan  terdapat  di  lingkungan  akuatik,  usus serangga dan air laut. Sebelumnya, Myroides odoratus juga  sudah  pernah  diisolasi  dari  ikan  nila.  Namun, tidak  ada  satu  laporan  isolasi  serta  studi eksperimental pada infeksi Myroides odoratimimus dan patogenisitasnya pada spesies ikan (Ravindran et al., 2015).
Hasil  uji  biokimia  dari  isolat  5  teridentifikasi sebagai  Edwardsiella  sp.  ditunjukkan  dengan  isolat yang bersifat negatif oksidase, positif katalase, positif O/F,  motil,  dan  negatif  RS  serta  tidak  bisa memfermentasi  karbohidrat.  Sesuai  laporan  Park  et al.  (2012)  bahwa  Edwardsiella  merupakan  bakteri anaerob fakultatif dan termasuk bakteri gram negatif. Morfologi  bakteri  berupa  batang  pendek  dengan panjang 2-3 ìm, diameter 1 ìm dan bersifat motil.
Edwardsiella menyebabkan penyakit yang dikenal dengan nama Edwardsillosis atau Emphysematous Putre- factive  Disease  (EPD).  Ikan  yang  terserang  tidak menunjukkan  gejala  klinis  yang  spesifik,  hanya anoreksia  yang  bersifat  umum. Gejala klinis lainnya yaitu pendarahan pada kulit, kehilangan warna tubuh, dan terjadi luka yang merata pada seluruh permukaan tubuh (Ratnawati et al., 2013). Bakteri Edwardsiella sp. menghasilkan  hemolisin  yang  mampu  memecah  sel darah merah, sehingga sel darah keluar dari pembuluh dan menimbulkan warna kemerahan pada permukaan kulit.  Kerusakan  makroskopis  lain  yaitu  berupa depigmentasi  kulit  yang  disebabkan  oleh  serangan bakteri  pada  bagian  epidermis  kulit  ikan  yang didalamnya  terdapat  sel  pigmen  chromatophore  dan kolagen  yang  dapat  memperkuat  struktur  kulit. Perkembangan selanjutnya menyerang hingga bagian epidermis dan otot yang menyebabkan kulit kehilangan pigmen  warna  (Meidiza  et  al.,  2017).  Sebagaimana penelitian Chen et al. (2014) berhasil mengidentifikasi bakteri Edwardsiella tarda pada ikan toman hibrid hasil persilangan antara  Channa  maculata  dengan  Channa argus menggunakan uji biokimia dan molekuler.
Konfirmasi  lanjut  dilakukan  melalui  uji  PCR menggunakan 16S rRNA terhadap 5 isolat bakteri. Hasil uji molekuler menunjukkan munculnya band dengan ukuran 1300 bp pada seluruh isolat bakteri (Gambar 1). Gen 16Sr RNA merupakan daerah yang lestari dan jarang mengalami mutasi sehingga lebih bersifat stabil. Sekuen gen 16S rRNA dapat ditemukan hampir pada seluruh  jenis  bakteri  dan  merupakan  daerah  lestari sehingga dapat digunakan sebagai sumber informasi bakteri (Janda & Abott, 2007).

## Identifikasi  Parasit
Pemeriksaan parasit yang menginfeksi ikan toman meliputi  ektoparasit  dan  endoparasit.  Sebanyak  27 sampel ikan toman diperiksa untuk mengetahui jenis parasit  yang  menginfeksi.  Hasil  inventarisasi  dan indentifikasi  parasit  pada  setiap  sampel  ikan  uji memperlihatkan nilai prevalensi yang berbeda. Spesies ikan  uji,  jenis  parasit,  prevalensi,  dan  organ  yang terinfeksi  ditunjukkan  pada  Tabel  2.  Tujuh  spesies parasit  protozoa  yang  menginfeksi  ikan  toman  dan berhasil teridentifikasi yaitu Trichodina sp.,  Vorticella sp., Henneguya sp., Oodinium sp., dan Ichthyophthirius multifiliis, satu spesies trematoda Dactylogyrus sp. dan satu spesies acanthochepala yaitu Acanthochepalus sp.
Prevalensi  parasit  yang  menginfeksi  ikan  toman berkisar antara 3,70% sampai 66,67%. Prevalensi parasit Trichodina sp. tertinggi dibanding jenis parasit lainnya dan  terendah  Oodinium  sp.  dan  Dactylogyrus  sp. Prevalensi  parasit  yang  menginfeksi  ikan  toman tertinggi  hingga  terendah antara  lain  Trichodina  sp., Ichthyophthirius multifiliis, Vorticella sp., Acanthochepalus sp., Henneguya sp., Oodinium sp., dan Dactylogyrus sp. Analisis  dilakukan  untuk  mengetahui  organ  yang menjadi  target  infeksi  dengan  melihat  dominansi parasit pada organ ikan yang paling sering ditemukan parasit.  Hasil  inventarisasi  dan  identifikasi menunjukkan  bahwa  organ  dan  jenis  parasit  yang menginfeksi  ikan  toman  meliputi  insang  (Trichodina sp.,  Ichthyophthirius  multifiliis,  dan  Dactylogyrus  sp.); sirip (Trichodina sp., Vorticella sp., Henneguya sp., dan Ichthyophthirius multifiliis); mucus (Trichodina sp., Vorti- cella sp., Oodinium sp., dan Ichthyophthirius multifiliis); dan usus (Henneguya sp. dan Acanthochepalus sp.).
Berdasarkan  pengujian  diketahui  parasit  yang menginfeksi  ikan toman  berasal  dari golongan  pro- tozoa,  trematoda,  dan  acanthochepala.  Parasit Trichodina  sp.  dari  golongan  protozoa  memiliki prevalensi  tertinggi  dibanding  jenis  parasit  lainnya. Miah  et  al.  (2013)  dalam  penelitiannya  berhasil mengidentifikasi  parasit  yang  menginfeksi  Channa punctatus  berasal  dari  golongan  protozoa, platyhelminthes,  nematoda,  acanthocephala, arthropoda,  gastrotrics,  dan  rotifer.  Spesies  parasit dari  golongan  protozoa  di  antaranya  Trichodina  sp., Chilodonella sp., Ichthyobodo sp., dan Actinophrys sp.; golongan  Platyhelminthes  yaitu  Dactylogyrus  sp., Gyrodactylus sp., Metacercariae hemiuridae, Allocreadium sp., Macrolecithus sp., dan Apophallus sp.; sedangkan parasit  golongan  acanthocephalan  di  antaranya Pallisentis sp., Leptorhynchoides sp., dan Acanthocephalus sp. Chowdhury & Hossain (2015) melaporkan bahwa Acanthocephalus  sp. dan  Pallisentis  sp.  hidup  sebagai endoparasit dan umumnya ditemukan dalam saluran
pencernaan  ikan  karnivora  yang  bersifat  predator seperti toman. Menurut Singkoh (2012), menyebutkan bahwa Trichodina sp., Dactylogyrus sp., dan Gyrodactylus sp. lebih banyak ditemukan dikarenakan parasit-parasit tersebut lebih menyukai bagian eksternal tubuh ikan (ektoparasit)  dibandingkan  bagian  internal (endoparasit). Sementara Handayani et al. (2014) bahwa Trichodina sp. memiliki siklus hidup yang langsung dan dapat melakukan reproduksi secara seksual maupun aseksual  sehingga  menyebabkan  kemudahan  dalam penyebarannya.

## Virulensi  Bakteri
Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  bakteri Aeromonas hydrophila sangat virulen pada ikan toman dengan tingkat kematian ikan uji 100% dalam waktu 24 jam. Gejala klinis yang muncul berupa perubahan tingkah laku, ikan menjadi lemah, tidak aktif, dan tidak responsif. Luka pada pangkal sirip punggung, pangkal
sirip ekor, dan tutup insang yang diikuti kematian ikan. Kematian  mulai  terjadi  pada  hari  pertama  setelah penyuntikan,  hal  tersebut  dikarenakan  kepadatan bakteri  yang  tinggi,  dengan  tanda-tanda  luka  pada bagian perut dekat sirip badan dan sirip ekor. Huys et al.  (2002)  menyatakan  bahwa  ikan  yang  terifeksi Aeromonas hydrophila mengakibatkan pertahanan tubuh ikan toman melemah. Perlindungan tubuh dari infeksi bakteri, ikan akan mengeluarkan lendir terus-menerus sehingga  mengakibatkan  metabolisme  tubuh meningkat  dan  pemakaian  energi  lebih  banyak. Keadaan tersebut mempermudah bakteri untuk masuk dan menginfeksi dengan mengeluarkan toksin melalui tempat  terbuka  seperti  insang,  ekor,  atau  sirip. Sementara  menurut  Del  Coral  et  al.  (1990)  bahwa Aeromonas  hydrophila  termasuk  dalam  kelompok bakteri patogen dengan virulensi yang tinggi. Tingkat virulensi  bakteri  tersebut  ditentukan  oleh kemampuan bakteri menghasilkan enzim dan toksin
Gambar 1. Visualisasi hasil amplifikasi gen 16S rRNA. M: DNA marker, (+) Kontrol Positif, (-) Kontrol Negatif, 1: Isolat 1, 2: Isolat 2, 3: Isolat 3, 4: Isolat
4, dan 5: Isolat 5. Figure 1. Gene amplification visualization results of 16S rRNA. M: DNA marker 100 bp, (+) Positive control, (-) Negative control, 1: Isolate 1, 2: Isolate 2, 3: Isolate 3, 4: Isolate 4, and 5: Isolate 5.
M      (+)       (-)        1        2         3        4        5 1300 bp
Tabel 2. Spesies dan prevalensi parasit yang menginfeksi ikan toman, Channa micropeltes Table 2. Species and prevalence of parasites infecting the snakehead Channa micropeltes
Insang (Gill ) Sirip (Fin ) Mucus Usus (Intestine ) Otot (Muscle )
Protozoa (Protozoan ): Trichodina  sp. 66.67 + + + Vorticella  sp. 11.11 + + Henneguya  sp. 11.11 + + Oodinium  sp. 3.70 + Ichthyophthirius multifiliis 25.93 + + + Trematoda (Trematode ): Dactylogyrus  sp. 3.70 + Acanthochepala Acanthochepalan : Acanthochepalus  sp. 14.81 + + Spesies ikan Fish species Parasit Parasites Prevalensi Prevalence  (%) Toman Channa Organ yang Terinfeksi (Infected organ )
tertentu yang berperan dalam proses invasi dan infeksi. Sebagai  faktor-faktor  virulensi,  kitinase,  lesitinase, dan  hemolisin  yang  dihasilkan  oleh  Aeromonas hydrophila bekerja dengan mendegradasi jaringan dan menimbulkan luka serta pendarahan pada ikan inang. Begitupula Yuasa et al. (2003) melaporkan bahwa ikan yang terinfeksi oleh bakteri Aeromonas hydrophila pada umumnya mengalami pendarahan yang meluas pada permukaan kulit (haemorrhagic septicemia), yang diikuti dengan timbulnya luka terbuka (ulcer) pada permukaan tubuh atau hingga ke dalam jaringan. Selain itu, pada beberapa jenis ikan lain sering ditemukan tanda klinis seperti  sirip  punggung  dan  sirip  ekor  rontok,  serta pembengkakan pada perut dan berisi cairan (dropsy), yang diikuti dengan kematian.

## KESIMPULAN
Bakteri  yang  teridentifikasi  menginfeksi  ikan toman  yaitu  Aeromonas  hydrophila,  Aeromonas salmonicida, Myroides sp., dan Edwardsiella sp. Spesies parasit  yang  menginfeksi  antara  lain  Trichodina  sp., Vorticella  sp.,  Henneguya  sp.,  Oodinium  sp., Ichthyophthirius  multifiliis,  Dactylogyrus  sp.,  dan Acanthochepalus  sp.  Bakteri  Aeromonas  hydrophila sangat virulen terhadap ikan toman, Channa micropeltes dengan tingkat kematian mencapai 100% dalam waktu 24 jam.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  dibiayai  DIPA  Balai  Riset  Perikanan Budidaya  Air  Tawar  dan  Penyuluhan  Perikanan (BRPBATPP,  Bogor)  tahun  anggaran  2018.  Penulis mengucapkan terima kasih kepada Kepala BRPBATPP, Tim  Peneliti  Kesehatan  Ikan,  Sdri.  Dhea  Safitri,  Sdr. Edy Farid Wadjdy, Ahmad Wahyudi, Setiadi, dan Johan Afandi yang telah membantu selama proses penelitian.

## DAFTAR  ACUAN
Arbaèiauskienë,  V.S.,  Kazlauskienë,  N.,  Vosylienë, M.Z., & Virbickas, T. (2012). Aeromonas salmonicida infected  fish transfer  disease  to  healthy fish  via water. Central European Journal of Biology, 7(5), 878- 885.
Chen,  Y.,  Zhou,  A.,  Chen,  G.,  Chen,  J.,  Zhang,  J.,  & Zhang, H. (2014).  Isolation of Edwardsiella  tarda from cultured hybrid snakehead (Channa maculata f × C. argus m ) and its identification. South China Fisheries Science, 10(5), 1-7.
Chenia,  H.Y.  (2015).  Antimicrobial  activity  of cinnamaldehyde, vanillin and Kigelia Africana fruit extracts against fish-associated Chryseobacterium and Myroides spp. isolates. African Journal of Tradi- tional,  Complementary  and  Alternative  Medicines, 12(3), 55-67.
Chowdhury,  S.Z.  &  Hossain,  M.M.  (2015).  Isolation and  characterization  of  internal  parasites  in snakehead.  International  Journal  of  Fisheries  and Aquatic Studies, 2(4), 17-22.
Del Coral, F., Shotts, E.B., & Brown, J. (1990). Adher- ence haemagglutination and cell surface charac- teristics  of  motil  aeromonads  virulent  for  fish. Journal of Fish Diseases, 13, 255-268.
Dhanaraj, M., Haniffa, M.A.K., Ramakrishnan, C.M., & Singh, S.V.A. (2008). Microbial Flora from the Epi- zootic Ulcerative Syndrome (EUS) Infected Murrel Channa striatus (Bloch, 1797) in Tirunelveli Region. Turkish  Journal  of  Veterinary  and  Animal  Sciences, 32(3), 221-224.
Ediwarman, R., Hernawati, Adianto, W., & Moreau, Y. (2008). Penggunaan maggot sebagai substitusi ikan rucah  dalam  budidaya  ikan  toman  (Channa micropeltes CV.). Jurnal Riset Akuakultur, 3(3), 395- 400.
Firlianty,  E.,  Suprayitno,  H.,  Nursyam,  Hardoko,  & Mustafa,  A.  (2013).  Chemical  composition  and amino  acid  profile  of  Channidae  collected  from Central Kalimantan, Indonesia. IEESE International Journal  of  Science  and  Technology  (IJSTE),  2(4), 25-29.
Handayani,  R.,  Adiputra,  Y.T.,  &  Wardiyanto.  (2014). Identifikasi dan keragaman parasit pada ikan mas koki  (Carrasius  auratus)  dan  ikan  mas  (Cyprinus carpio)  yang  berasal  dari  Lampung  dan  luar Lampung.  Jurnal  Aquasains:  Jurnal  Ilmu  Perikanan dan Sumberdaya Perairan, 2(2), 149-155.
Huys,  G.,  Kampfer,  P.,  Albert,  M.J.,  Kuhn,  I.,  Denys, R., & Swings, J. (2002). Aeromonas hydrophila subsp, dhakensis subps. nov., isolated from children with diarrhoea  in  Bangladesh,  and  extended  descrip- tion  of  Aeromonas  hyrdophila  subsp.  Hydrophila (Chester 1901) Stanier 1943 (Approved list 1980). International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 52, 705-712.
Isonhood, J.H. & Drake, M. (2002). Aeromonas spe- cies in foods. Journal of Food Protection, 65(3), 575- 582.
Jacobs, A. & Chenia, H.Y. (2009). Biofilm-forming ca- pacity,  surface  hydrophobicity  and  aggregation characteristics of Myroides odoratus isolated from South African Oreochromis mossambicus fish. Jour- nal of Applied Microbiology, 107, 1957-1966.
Janda, J.M.  & Abott,  S.L. (2007).  16S rRNA  gene se- quencing for bacterial identification in the diag- nostic laboratory: pluses, perils, and pitfalls. Jour- nal of Clinical Microbiology, 45, 2761-2764.
Kamelia, M.O. & Laila, A.M. (2009). Trials for vaccina- tion  of  tilapia  fish  against  Aeromonas  and
Pseudomonas infections using monovalent, biva- lent and polyvalent vaccines. World Journal of Fish and Marine Sciences, 1(4), 297-304.
Kusdarwati, R., Kismiyati, Sudarno, Kurniawan, H., &
Prayogi, Y.T. (2017). Isolation  and  identification of    Aeromonas  hydrophila  and  Saprolegnia  sp.  on Catfish  (Clarias  gariepinus)  in  floating  cages  in Bozem  Moro  Krembangan  Surabaya.  IOP  Confer- ence  Series:  Earth  and  Environmental  Science,  55, 1-7.
Maulana, D.M., Muchlisin, Z.A., & Sugito, S. (2017). Intensitas dan prevalensi parasit pada ikan betok (Anabas  testudineus)  dari  perairan  umum  daratan Aceh bagian utara. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Kelautan dan Perikanan Unsyiah, 2(1), 1-11.
Marchesi, J.R., Sato, T., Weightman, A.J., Martin, T.A., Fry, J.C., Hiom, S.J., & Wade, W.G. (1998). Design and  evaluation of  useful  bacterium specific  PCR primer that amplify genes coding for bacterial 16S- rRNA. Applied and Environmental Microbiology, 64, 795-799.
Meidiza, R., Arimbi, & Hastutie, P. (2017). Gambaran patologi hepar ikan lele dumbo (Clarias gariepinus) yang  diinfeksi  bakteri  Edwardsiella  tarda.  Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan, 9(1), 47-56.
Miah,  Md.F.,  Deb,  M.,  Ali,  H.,  Quddus,  M.M.A.,  & Ahmed,  K.  (2013).  Comparative  surveillance  of parasitic  infestation  in  Channa  punctatus (Osteichthys: Channidae) collected from open and closed  water  in  Sylhet,  Bangladesh.  Advances  in Zoology and Botany, 1(1), 17-23.
Ngui, W.S.Y., Hassan, N.H., Ramlan, N., & Zubairi, S.I. (2017).  Malaysia  snakehead  Channa  Striatus  and Micropeltes:  physico-chemical  properties  of  fillet fish oil and water-soluble extract. Chemical Engi- neering Transactions, 56, 61-66.
Park, S.B., Aoki, T., & Jung, T.S. (2012). Pathogenesis of and strategies for preventing Edwardsiella tarda infection in fish. Veterinary Research, 43(67), 1-11.
Pramudita, Sarjito, & Prayitno, S.B. (2013). Identifikasi bakteri agensia penyebab motile aeromonas pada ikan lele dumbo (Clarias gariepinus) yang berasal dari Kecamatan Rowosari, Kabupaten Kendal. Jour- nal of Aquaculture Management and Technology, 2(2), 1-9.
Prayogo,  B.,  Rahardja,  S.,  &  Putri,  R.W.  (2011).  Uji potensi sari buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.)  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Aeromonas salmonicida smithia secara in vitro. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan, 3(2), 165-168.
Ratnawati, A., Purwaningsih, U., & Kurniasih. (2013). Histopatologis dugaan Edwardsiella tarda sebagai penyebab  kematian  ikan  maskoki  (Carassius auratus): Postulat Koch. Jurnal Sain Veteriner, 31(1), 55-65.
Ravindran, C., Varatharajan, G.R., Raju, R., Vasudevan, L.,  &  Anantha,  S.R.  (2015).  Infection  and pathogenecity  of  Myroides  odoratimimus  (NIOCR- 12)  isolated  from  the  gut  of  grey  mullet  (Mugil cephalus (Linnaeus, 1758)). Microbial Pathogenesis, 2(6), 1-24.
Samayanpaulraj,  V.,  Sivaramapillai,  M.,  Palani,  S.N., Govindaraj,  K.,  Velu,  V.,  &  Uthandakalaipandian, R.  (2020).  Identification  and  characterization  of virulent Aeromonas hydrophila Ah17 from infected Channa striata in River Cauvery and in vitro evalu- ation of shrimp chitosan. Food Science and Nutri- tion, 8(2), 1272-1283.
Sharma, M., Shrivastav, A.B., Sahni, Y.P., & Pandey, G. (2012).  Overviews  of the  treatment  and  control of  common  fish  diseases.  International  Research Journal of Pharmacy, 3(7), 123-127.
Singkoh, M.F.O. (2012). Tingkat kesukaan parasit pada ikan mas (Cyprinus carpio) yang dipelihara dalam wadah  jaring  apung  di  Desa  Eris,  Kabupaten Minahasa, Provinsi Sulawesi Utara. Jurnal Bioslogos, 2(2), 63-69.
Suwanto,  A.,  Yogiara,  Sur yanto,  D.,  Tan,  I.,  & Puspitasari, E. (2000).  Selected protocols. Train- ing Course on Advances in Molecular Biology Tech- niques  to  Assess  Microbial  Diversity.  Bogor,  28 pp.
Taukhid, Purwaningsih, U., Sugiani, D., Sumiati, T., & Lusiastuti,  A.M.  (2015).  Efikasi  vaksin  in-aktif bakteri  Aeromonas  hydrophila-AHL0905-2 (hydrovac)  dan  Streptococcus  agalactiae-N14G (streptovac) untuk pencegahan penyakit bakterial pada budidaya ikan air tawar. Jurnal Riset Akuakultur, 10(4), 541-551.
Wahjuningrum, D., Astrini, R., & Setiawati, M., (2013). Pencegahan  infeksi  Aeromonas  hydrophila  pada benih ikan lele Clarias sp. yang berumur 11 hari menggunakan  bawang  putih  Allium  sativum  dan meniran Phyllanthus niruri. Jurnal Akuakultur Indo- nesia, 12(1), 94-104.
Yuasa,  K.N.,  Panigoro,  M.B.,  &  Kholidin.  (2003). Panduan Diagnosa Penyakit Ikan: Teknik Diagnosa Penyakit Ikan Budidaya Air Tawar di Indonesia. Balai Budidaya Air Tawar Jambi & Jakarta. International Cooperation Agency: iv+75 pp.