## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i2.3678

## Profil Noda Ekstrak Kloroform : Metanol (2:1) dan Aktivitas  Bslt Kulit Batang Nyirih (Xylocarpus Granatum)
Sumardi 1 , Nilsya Febrika Zebua 1 , Vriezka Mierza 2 , Reihan Maurani Arafah 1* , Qhairunnisa 1 , Riska Amalia 1
1 Fakultas Farmasi, Program Studi Farmasi, Universitas Tjut Nyak Dhien
2 Fakultas Ilmu Kesehatan, Program Studi Farmasi, Universita Singaperbangsa Email: mauranireihan@gmail.com
Abstrak − Tumbuhan nyirih ( Xylocarpus granatum ) tumbuh di sepanjang pinggiran laut, dan lingkungan lainnya yang asin. Senyawa kimia  yang  terkandung  dalam  kulit  Batang  nyirih  ( Xylocarpus  granatum ) diantaranya  alkaloid,  triterpenoid,  steroid,  saponin,  dan flavonoid. Kandungan senyawa lipid yang tidak tersabunkan  dikulit batang nyirih ( Xylocarpus granatum) belum banyak dilakukan penelitian diantaranya toksisitas terhadap sel. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui profil noda pada ekstrak kulit batang nyirih ( Xylocarpus  granatum )  dan  mengetahui  toksisitas  pada  ekstrak  Kulit  Batang  nyirih  ( Xylocarpus  granatum ).  Metode  penelitian  ini adalah  eksperimental  yang  meliputi  pembuatan  ekstrak  kulit  batang  nyirih  ( Xylocarpus  granatum ) menggunakan  metode  maserasi dengan  pelarut  kloroform:metanol  (2:1).  Profil  noda  ekstrak  Kulit  Batang  Nyirih  ( Xylocarpus  granatum )  di  karakterisasi  dengan Kromatografi  Lapis  Tipis  dengan  eluen  n-Heksana:Etil  Asetat  (7:3).  Ekstrak  kulit  batang  Nyirih  ( Xylocarpus  granatum )  diuji toksisitasnya  dengan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Simplisia kulit  batang  Nyirih  ( Xylocarpus granatum ) 630  gram menghasilkan  ekstrak  kental  90  gram  dengan  persentase  rendemen  14,28%.  Hasil  uji  kromatografi  lapis  tipis  didapati  profil  noda menghasilkan secara visual terdapat 3 noda, sinar UV 254 nm terdapat 5 noda, dan secara sinar UV 366 nm terdapat 4 noda. Nilai LC50 dari ekstrak koroform:metanol kulit batang nyirih ( Xylocarpus granatum ) dengan menggunakan  analisis probit adalah 130,7 µg/ml sehingga di klasifikasikan sebagai toksik dan berpotensi dikembangkan sebagai sitotoksik.
Kata Kunci: Nyirih, Kromatografi Lapis Tipis, Brine Shrimp Lethality Test , Profil Noda, Uji Toksisitas
Abstract − Nyirih plants (Xylocarpus granatum) grows along the edge of the sea, and in other salty environments. Chemical compounds contained in the bark of the betel nut (Xylocarpus granatum) include alkaloids, triterpenoids, steroids, saponins, and flavonoids. The content of lipid compounds in the bark of betel nut (Xylocarpus granatum) has not been widely studied, including toxicity to cells. This study aims to determine the profile of stains on the bark extract of nyirih (Xylocarpus granatum) and to determine the toxicity of the bark extract of nyirih (Xylocarpus granatum). This research method is experimental which includes the manufacture of betel nut bark extract (Xylocarpus granatum) using maceration method with Chloroform:Methanol (2:1) solvent. The stain profile of Nyirih Stem Bark (Xylocarpus granatum) extract was characterized by Thin Layer Chromatography with n-Hexana:Ethyl Acetate as eluent (7:3). Nyirih Bark Extract (Xylocarpus granatum) was tested for toxicity by the Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method. Nyirih Stem Bark Simplisia (Xylocarpus granatum) 630 grams yielded 90 grams thick extract with a yield percentage of 14,28%. The results of the thin layer chromatography test showed that the stain profile visually produced 3 spots, UV 254 nm light had 5 spots, and UV 366 nm light had 4 spots. The LC50 value of coroform:methanol extract of betel nut bark (Xylocarpus granatum) using probit analysis  was 130,7 µg/ml so it was classified as toxic and has the potential to be developed as cytotoxic.
Keywords : Xylocarpus granatum, Thin Layer Chromatography, Brine Shrimp Lethality Test, Stain Profil, Toxicity Test

## 1. PENDAHULUAN
Indonesia terkenal dengan kekayaan alam yang memiliki berbagai jenis tumbuhan yang berkhasiat sebagai obat (Bahriul, 2014). Ekosistem mangrove merupakan salah satu ekosistem pesisir yang memiliki fungsi ekologis dan ekonomis. Fungsi ekologis hutan mangrove antara lain pelindung garis pantai, mencegah intrusi air laut, habitat (tempat tinggal), tempat asuhan  dan  pembesaran  (nursery  ground),  serta  tempat  pemijahan  (spawning  ground)  bagi  berbagai  biota  perairan. Sedangkan fungsi ekonominya, antara lain penghasil keperluan rumah tangga, penghasil keperluan industri dan penghasil bibit serta sebagai bahan baku obat-obatan (Suryono, 2013).
Salah  satu  tanaman  yang  bisa  digunakan  oleh  masyarakat  sebagai  obat  adalah Xylocarpus  granatum (Sapitri, 2018). Kulit batang dan buah Xylocarpus granatum digunakan sebagai obat tradisional yaitu dapat memulihkan stamina ibu  melahirkan,  sakit  perut,  dan  liver  badak  (Abubakar,  dkk.,  2019).Tumbuhan Xylocarpus  granatum ini  tumbuh sepanjang pingiran sungai pasang surut, pingir daratan dari mangrove dan lingkungan air laut yang asin (Riduan, 2018). Kandungan  kimia  yang  terdapat  pada  tumbuhan Xylocarpus  granatum termasuk diantaranya  alkaloid,  triterpenoid, steroid, saponin, flavonoid (Gazali et al., 2014).
Profil  noda  analisis  KLT  pada  ekstrak  kloroform:metanol  (2:1)  kulit  batang  nyirih  ( Xylocarpus  granatum ), dilakukan dengan menggunakan kromatografi lapis tipis. Kromatografi lapis tipis adalah salah satu metode pemisahan kromatografi yang fleksibel dan banyak digunakan. Metode analisis kromatografi lapis tipis (KLT) bagian dari teknik analisis rutin pada laboratorium analisis dan pengembangan produk karena memiliki beberapa keuntungan. Keuntungan utama metode analisis kromatografi lais tipis dibandingkan metode analisis kromatografi cair kinerja tinggi adalah analisis beberapa  sampel  dapat  dilakukan  secara  stimulan  dengan  menggunakan  fase  gerak  alam  jumlah  kecil  sehingga  lebih hemat waktu  dan biaya analisis serta lebih ramah lingkungan. Teknik pemisahannya sederhana dengan peralatan yang minimal (Lestyo, W., 2016).
Sebagai  uji  awal  untuk  mengetahui  sifat  toksisitas  ekstrak  kloroform  :  metanol  (2:1)  kulit  batang  nyirih ( Xylocarpus granatum ), dilakukan uji toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). BSLT adalah suatu metode  uji  toksisitas  akut  yang  sederhana,  mudah  pengerjaannya,  cepat  mendapatkan  hasil,  dan  mudah  dalam

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i2.3678
pelaksanaannya.  Selain  itu,  BSLT  merupakan  suatu biossay-guided  fractionation yang  dapat  digunakan  untuk penelusuran senyawa bioaktif yang bersifat toksik dari suatu bahan alam (Nurul khafidz, 2014).
Metode  BSLT  menggunakan  larva  udang Artemia  salina Leach  sebagai  hewan  uji  coba. Artemia salina Leach merupakan  organisme  yang  mempunyai  kepekaan  cukup  tinggi  terhadap  toksik.  Uji  toksisitas  dengan  menggunakan metode BSLT dimaksudkan untuk menentukan potensial    suatu    senyawa    sebagai racun   dengan   mengetahui   tingkat toksisitas  dari  suatu  ekstrak,  seperti ekstrak  mangrove (Marina, 2018).
LC50 didefinisikan sebagai dosis atau konsentrasi yang diberikan sekali (tunggal) atau beberapa kali dalam 24 jam dari  suatu  zat yang secara statistik diharapkan dapat  mematikan 50% hewan coba Parameter ini sering  digunakan jika suatu organisme dipaparkan terhadap konsentrasi bahan tertentu dalam air atau udara. Uji toksisitas akut seringkali disebut sebagai uji jangka pendek. Uji ini terdiri atas beberapa tes, yaitu uji dosis respon untuk mencari LC50 dan kemungkinan berbagai  kerusakan  organ,  uji  iritasi  mata  dan  kulit,  serta  skrining  pertama  terhadap  mutagenesitas  (Soemirat,  2017). Berdasarkan uraian diatas maka penulis melakukan penelitian profil noda ekstrak kloroform : metanol (2:1) dan aktivitas bioassay brine shrimp lethality test kulit batang nyirih ( Xylocarpus granatum ).

## 2. METODOLOGI PENELITIAN

## 2.1. Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat-alat gelas laboratorium ( pyrex ® ), aquarium, cawan penguap ( pyrex ® ), lampu pijar (philips ® ), kaca pembesar ( joyko ® ), lemari pengering, lumpang dan stamper, pipa kapiler, timbangan digital ( digipounds ® ), timbangan kilogram ( kenmaster ® ), wadah plastik, water bath ( E-Secientific Labs ® ).  Bahan kimia yang digunakan di penelitian ini adalah akuades, etil asetat ( Merck ® ), kloroform ( Merck ® ), metanol ( Merck ® ), n-heksana ( Merck ® ), twen80 ( Merck ® ), silika gel 60 F254 ( Merck ® ), span80 ( Merck ® ), Bahan uji kulit batang nyirih ( Xylocarpus granatum ), dan Artemia salina Leach , paracetamol 500 mg ( Merck ® ).

## 2.2. Ekstraksi kulit batang nyirih dengan Kloroform : Metanol (2:1)
Sebanyak 630 g serbuk kulit batang nyirih ( Xylocarpus granatum ) dimaserasi dengan cara memasukkan serbuk simplisia (630g) kedalam sebuah bejana, tuangkan 700  ml  metanol dan  1,4 L kloroform lalu ditutup. Biarkan selama 3 x24 jam terlindung dari cahaya sesekali diaduk, disaring, diperas cuci ampas dengan cairan penyari, sehingga diperoleh filtrat 830 ml selanjutnya di uapkan sampai diperoleh ekstrak kental (Handayani, dkk., 2014).
2.3. Kromatografi lapis tipis pada ekstrak Kloroform : Metanol (2:1) kulit batang nyirih (Xylocarpus granatum)
Pengujian ( Xylocarpus granatum ) dengan menggunakan fase diam silika gel 1 cm x 10 cm dengan fase gerak berupa n- heksana:etil asetat (7:3) dengan total volume 2 ml campuran, dengan mencampur larutan n-heksana sebanyak 1,4 ml dan larutan etil asetat sebanyak 0,6 ml, kedalam chamber dimasukkan fase gerak dan kertas saring yang telah dipotong persegi panjang, lalu ditutup  dan dibiarkan sampai jenuh,  ekstrak cortex ditotolkan dengan pipet mikrokapiler pada Plat KLT dengan  jarak  1  cm  dari  bagian  bawah  plat  dan jarak  antar  noda  1  cm  bagian  atas  lalu  biarkan  hingga  kering.  Setelah chamber  jenuh  plat  KLT  dimasukkan  kedalam  chamber/wadah  kaca  tertutup  dan  diamati,  pelarut  dibiarkan  berambat sampai batas atas. Setelah mencapai jarak batas atas plat KLT dikeluarkan dan dikeringkan. Lalu dilihat dibawah sinar ultraviolet  245  nm,  dan  sinar  ultraviolet  366  nm,  hitung  nilai  faktor  retensi  disetiap  noda  yang  ada  pada  plat  silika gel.kromatografi lapis tipis  dilakukan pada ekstrak kloroform : metanol, ekstrak kulit batang nyirih.

## 2.4 Uji toksisitas

## 2.4.1 Penyiapan larva Artemia salina Leach
Wadah kaca berbentuk kotak, disiapkan untuk penetasan telur udang. Wadah dibagi menjadi dua sisi, yaitu sisi terang dan sisi gelap. Air laut sebanyak 1.200 ml dengan pH 7,3, dimasukkan kedalam wadah kaca. Kemudian salah satu sisi tersebut  diberi  penerangan  dengan  cahaya  lampu  pijar  untuk  menghangatkan  suhu  dalam  wadah  penetasan  dan merangsang proses penetasan. Untuk penerangan, lampu dinyalakan selama 24 jam agar telur menetas. Sisi yang gelap di tutup dengan aluminium foil dan lakban agar tidak terkena cahaya lampu diisi dengan 100 mg serbuk Artemia salina Leach, ph yang diperoleh 7,8 lalu didiamkan selama 1x24 jam, amati perubahan yang terjadi selama 1x24 jam.
Setelah 24 jam, telur akan menetas menjadi larva dan akan bergerak menuju sisi terang. Setelah 24 jam kemudian. Larva yang digunakan untuk hewan uji pada metode BSLT adalah larva yang sudah berumur 48 jam, aktif bergerak dan bersifat fototropik.

## 2.4.2 Pembuatan konsentrasi ekstrak dan paracetamol yang diuji
Dalam  pembuatan  konsentrasi  ekstrak  yang  efektif  untuk  membunuh  larva Artemia  salina Leach,  dilakukan  orientasi dengan konsentrasi ekstrak sebesar 1%, 0,5%, 0,25%, 0,125%, 0,0625%, 0,03125%, dan konsentrasi paracetamol sebesar 5%, 2%, 1%.  Bersihkan lumpang dan stamper, Masukkan tween80  sebanyak 0,5 g kedalam lumpang + etanol 5 tetes gerus homogen, Masukkan span80 sebanyak 1g kedalam lumpang gerus homogen, kemudian campurkan ekstrak ke dalam fase emulsi gerus sampai homogen, tambahkan sedikit demisedikit air laut sampai terbentuk emulsi, selanjut nya emulsi dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml larutan dengan konsentrasi 1%, konsentrasi ini yang digunakan sebagai larutan

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i2.3678
induk,  Kemudian  membuat  larutan  ekstrak  uji  dengan  konsentrasi  0,5%,  0,25%,0,125%,  0,0625,  0,0312%  dengan menggunakan rumus pengenceran :
V1M1  = V2M2 (1)
Keterangan : V1 = Volume awal M1 = Konsentrasi awal V2 = Volume akhir.
M2 = Konsentrasi akhir
Bersihkan  lumpang  dan  stamper,  Masukkan  tween80  sebanyak  0,5  g  kedalam  lumpang  +  etanol 5  tetes  gerus homogen, Masukkan span80 sebanyak 1g kedalam lumpang gerus homogen, kemudian campurkan serbuk paracetamol kedalam fase emulsi  gerus sampai homogen, tambahkan sedikit-demisedikit  air laut sampai terbentuk emulsi, selanjut nya emulsi dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml larutan dengan konsentrasi 5%, konsentrasi ini yang digunakan sebagai  larutan induk, Kemudian membuat  larutan ekstrak uji dengan konsentrasi  Dan larutan paracetamol  uji dengan konsentrasi 2%, 1% dengan menggunakan rumus pengenceran :
V1M1  = V2M2 (2)
Keterangan :
V1 = Volume awal
M1 = Konsentrasi awal V2 = Volume akhir M2 = Konsentrasi akhir
Pada  uji  BSLT  tiap  konsentrasi  dilakukan  sebanyak  3  kali  pengulangan  pada  blanko  dan  paracetamol  dengan konsentrasi  parasetamol  yaitu  1%,  2%  dan  5%.  Sedangkan  pada  ekstrak  kulit  batang  nyirih (Xylacorpus  granatum) dilakukan sebanyak 6 kali pengulangaan pada masing-masing konsentrasi yaitu  1%, 0,5%, 0.25%, 0,125%, 0,0625% dan 0,03125%.Sebagian larva Artemia salina Leach berumur 48 jam dan masih bergerak aktif dipindahkan ke cawan petri. Pada masing-masing wadah, dimasukkan 10 larva udang menggunakan pipet tetes dan dicampur 1 ml air laut dengan pH 7,3.
Setelah itu, pada tiap wadah dimasukkan sebanyak 5 ml masing-masing konsentasi kecuali pada kontrol negatif, emulsi tanpa ekstrak, dan paracetamol. Sehingga volume dalam 1 wadah menjadi 6 ml yaitu 5 ml formulasi ekstrak dan 1 ml air laut. Wadah dibiarkan di udara terbuka selama 24 jam. Dan dihitung jumlah larva yang masih hidup pada masing- masing wadah pada 1 jam sekali. Kriteria untuk mengukur kematian larva udang yaitu apabila larva Artemia salina Leach tidak ada menunjukkan pergerakan.
Perhitungan secara manual yaitu dengam mengamati larva di dalam wadah dengan bantuan lup, kemudian diamati dengan bantuan cahaya. Jumlah larva yang mati dihitung dengan mengurangkan jumlah total larva pada tiap konsentrasi dengan jumlah yang masih hidup.

## 2.4.3 Pengolahan dan Analisis Data
Pengamatan  dilakukan  dengan  menghitung  persentase  kematian  (mortalitas)  larva Artemia  salina Leach  pada    tiap kosentrasi.  Hasil  perhitungan  konsentrasi  kematian  diperoleh  dari  hasil  perkalian  rasio  dengan  100%  untuk  tiap konsentrasi.  Setelah  itu  dibandingkan  dengan  kontrol  negatif  dan  dilakukan  analisis  sehingga  didapatkan  nilai  LC50. Dengan  menggunakan  metode  analisis  probit  manual,  maka  dapat  diketahui  nilai  probit  dengan  mengkonversi  nilai kematian larva pada tiap konsentrasi ke nilai probit.
Persentase kematian = 𝐣𝐮𝐦𝐥𝐚𝐡 𝐥𝐚𝐫𝐯𝐚 𝐦𝐚𝐭𝐢 𝐣𝐮𝐦𝐥𝐚𝐡 𝐥𝐚𝐫𝐯𝐚 𝐭𝐨𝐭𝐚𝐥 𝐚𝐰𝐚𝐥 x 100 % (1)
Setelah  mendapatkan  persentase  kematian,  nilai  probit  dari  tiap  kelompok  hewan  uji  ditentukan  melalui  tabel probit. Kemudian menentukan lagi nilai log k.nsentrasi dan dibuat grafik dengan persamaan garis lurus hubungan antara nilai probit dengan log konsentrasi dengan rumus y=aX+b. Nilai slope (a) dihitung dengan rumus (Nur zaki, 2015) :
𝚺(𝐗)𝚺 (𝐲)−𝐧𝚺(𝐗𝐘)
(𝚺(𝐗)) 𝟐 −𝐧𝚺(𝐗)²
(1)
Nilai intersep (b) dihitung dengan rumus (Nur zaki, 2015) :
Σ(X)Σ (XY)−Σ(X)²Σ(Y)
(Σ(X)) 2 −nΣ(X)²
(2)

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i2.3678
Metode  analisis  dapat  pula  menggunakan Microsoft  Office  Ecel dengan  membuat  grafik  persamaan  garis  lurus hubungan antra nilai  probit dengan log  konsentrasi. Nilai LC50 dapat  dihitung  dengan persamaan  garis lurus tersebut dengan  memasukkan  nilai  5  (probit  50%  kematian  hewan  uji)  sebagai  y  sehingga  dihasilkan  x  sebagai  nilai  log konsentrasi. Antilog nilai x tersebut merupakan nilai LC50.
Sumber : Mayer, et al., 2015
Tabel 1. Kategori Nilai LC50 Katagori Nilai LC50 µg/ml Sangat toksik < 30 Toksik 30 – 1000 Tidak toksik > 1000

## 2.4.4. Uji toksisitas dengan menggunakan metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test)

## 2.4.4.1.  Penyiapan larva Artemia salina Leach
Wadah kaca berbentuk kotak, disiapkan untuk penetasan telur udang. Wadah dibagi menjadi dua sisi, yaitu sisi terang dan sisi gelap. Air laut sebanyak 1.200 ml dengan pH 7,3, dimasukkan kedalam wadah kaca. Kemudian salah satu sisi tersebut  diberi  penerangan  dengan  cahaya  lampu  pijar  untuk  menghangatkan  suhu  dalam  wadah  penetasan  dan merangsang proses penetasan. Untuk penerangan, lampu dinyalakan selama 24 jam agar telur menetas. Sisi yang gelap di tutup dengan aluminium foil dan lakban agar tidak terkena cahaya lampu diisi dengan 100 mg serbuk Artemia salina Leach, ph yang diperoleh 7,8 lalu didiamkan selama 1x24 jam, amati perubahan yang terjadi selama 1x24 jam. Setelah 24 jam, telur akan menetas menjadi larva dan akan bergerak menuju sisi terang. Setelah 24 jam kemudian. Larva yang digunakan  untuk  hewan  uji  pada  metode  BSLT  adalah  larva  yang  sudah  berumur  48  jam,  aktif  bergerak  dan  bersifat fototropik.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1. Hasil Ekstrak Kloroform : Metanol (2:1) Kulit Batang Nyirih (Xylocarpus granatum)
Hasil  ekstraksi  kulit  batang  nyirih  ( Xylocarpus  granatum )  dengan  pelarut  kloroform:metanol  (2:1)  diperoleh  ekstrak sebesar  90  g.  Ekstraksi  simplisia  dilakukan  dengan  prosedur  maserasi,  metode  maserasi  lebih  mudah  dalam pelaksanaannya  dan  tidak  memerlukan  peralatan  yang  spesifik.  Serbuk  kulit  batang  nyirih  ( Xylocarpus  granatum ) sebanyak 630 g dilakukan maserasi dengan pelarut kloroform:metanol (2:1) selama 3x24 jam sehingga diperoleh ekstrak maserat sejumlah 850 ml, ekstrak maserat diuapkan diatas penangas air maka diperoleh ekstrak kental kulit batang nyirih ( Xylocarpus granatum ) sejumlah 90 gram. Hasil Ekstraksi Kulit Batang Nyirih (Xylocarpus Granatum) dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Ekstraksi Kulit Batang Nyirih ( Xylocarpus granatum )
Nama simplisia                                                                       Berat Ekstrak Kental Xylocarpus granatum 90 gram Nilai rendemen ekstrak kloroform:metanol Berat simplisia : 630 gram erat ekstrak kloroform:metanol : 90 gram Rendemen = berat ekstrak metanol berat simplisia x 100% Rendemen = 90gram 630 gram x 100% Rendemen = 14,28%

## 3.2. Hasil Pemeriksaan Lapis Tipis
Hasil  yang  didapatkan  dari  uji  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  ekstrak  kloroform:metanol  (2:1)  kulit  batang  nyirih ( Xylocarpus  granatum )  fase  diam  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  silika  gel  6  F254 dan  fase  garak  yang digunakan adalah n-heksana dan etil asetat dengan perbandingan (7:3).

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i2.3678
Tabel 3. Hasil Pengujian  Senyawa KLT Menggunakan Fase Gerak n-heksana : etil Asetat
(7:3)Secara Visual Sampel Perbanding an fase gerak Warna Nilai RF Ekstrak Kloroform : Metanol (2:1) ( Xylocarpus granatum ) ( 7:3 ) Hijau Hijau kekuningan Kuning 0,97 0,96 0,93
Tabel 4. Hasil Pengujian  Senyawa KLT Menggunakan Fase Gerak n-heksana : etil Asetat (7:3) SecaraVisual
Sampel Perbandingan fase gerak Warna Nilai RF Ekstrak Kloroform : Metanol (2:1) ( Xylocarpus granatum ) ( 7:3 ) Hijau Hijau kekuningan Kuning 0,97 0,96 0,93
Tabel 5. Hasil Pengujian  Senyawa KLT Menggunakan Fase Gerak n-heksana : etil Asetat (7:3) Secara Sinar UV 366 nm Sampel Perbandingan fase gerak Warna Nilai RF Ekstrak Kloroform : Metanol (2:1) ( Xylocarpus granatum ) ( 7:3 ) Hijau Hijau kekuningan Kuning Biru muda 0,97 0,96 0,93 0,81
Semakin besar nilai Rf dari suatu sampel maka semakin besar pula jarak bergeraknya senyawa tersebut pada plat kromatografi lapis tipis. Saat membandingkan dua sampel yang berbeda di bawah kondisi kromatografi yang sama. Nilai Rf  dapat  dijadikan  bukti  dalam  meng  identifikasi  nilai  Rf  memiliki  nilai  yang  sama  maka  senyawa  tersebut  dapat dinyatakan memiliki karakteristik yang sama atau mirip, sedangkan bila nilai  Rf  nya berbeda, senyawa tersebut  dapat dikatakan  merupakan  senyawa  yang  berbeda.  Nilai  RF  berjangka  antara  0,00-1,00  dan  hanya  dapat  ditentukan  dua desimal. Harga RF dipengaruhi oleh struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan, sifat dari penyerap, jenis eluen dan jumlah cuplikan (fitria, 2015).

## 3.3. Hasil Uji Toksisitas Dengan Metode BSLT
Kulit Batang Nyirih ( Xylocarpus granatum ) yang sudah melalui proses ekstraksi dengan pelarut kloroform:metanol (2:1) siap digunakan dengan uji BSLT. BSLT sebagai uji untuk mengetahui kadar toksisitas ekstrak kloroform:metanol (2:1) Kulit Batang Nyirih ( Xylocarpus granatum ). Uji toksisitas dengan metode BSLT dalam pengerjaan lebih mudah, cepat mendapatkan  hasil,  dan  biaya  yang  murah.  Larutan  ekstrak  kloroform:metanol  (2:1)  Kulit  Batang Nyirih  ( Xylocarpus granatum )  dibuat  menjadi  6  konsentrasi,  yaitu  konsentrasi  1%,  0,5%,  0,25%,  0,125%,  0,0625%,  0,03125%  dan konsentrasi paracetamol yaitu 5%, 2%, 1%, dengan ditambah kontol negatif yang hanya berisi air laut dan larva udang. Kontrol  negaif dilakukan untuk  menggetahui pengaruh air laut maupun faktor lain terhadap kematian larva. Sehingga kematian larva dapat dipastikan karena efek dari ekstrak yang ditambahkan.
Uji BSLT ini dapat dilakukan masing-masing sebanyak 6 kali perlakuan dan dikerjakan 6 kali pengulangan untuk memperoleh keakuratan data dan menggurangi kesalahan dalam penelitian.  Pada uji BSLT memerlukan larva Artemia salina Leach yang diperoleh dengan cara penetasan telur Artemia salina Leach. Penetasan dapat dilakukan dalam wadah kaca yang berbentuk kotak menggunakan media air laut yang terbagi menjadi bagian terang dan bagian gelap. Pada bagian gelap  dimasukkan  telur Artemia  salina Leach.  Selama  proses  penetasan,  larva  akan  berpindah  ke  daerah  yang terang. pada bagian terang diberikan penerangan cahaya lampu sebesar 50 watt dengan suhu berkisar 25-30°C.
Setelah melalui proses penetasan selama 24 jam, telur berubah menjadi larva dengan nama lain nauplii . Pada fase nauplii ini  terjadi  fase  paling  aktif  membelah  secara  mitosis . Larva  yang  digunakan  sebanyak  10  ekor  untuk  setiap perlakuan  konsentrasi  ekstrak  dengan  penambahan  kontrol negaif  dan  penggulangan  sebanyak  6  kali  untuk  masing- masing perlakuan sehingga jumlah larva Artemia salina Leach seluruhnya berjumlah ±510 ekor larva. Perlakuan terhadap hewan uji dilakukan dengan 6 konsentrasi ekstrak yaitu 1 %, 0,5%, 0,25%, 0,125%, 0,0625%, 0,03125%, dan konsentrasi paracetamol yaitu 5%, 2%, 1%,  disertai 1 kontrol negatif yang hanya berisi air laut bersama dengan 10 ekor larva udang. Pengamatan dilakukan 24 jam setelah perlakuan konsentrasi ekstrak. Perhitungan kematian larva dilakukan dengan cara

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i2.3678
mengamati pergerakan larva. Kematian larva dihitung jika tidak ada pergerakan pada larva tersebut. Berikut ini hasil uji toksisitas akut dengan metode BSLT dari ekstrak kloroform:metanol kulit batang nyirih ( Xylocarpus granatum ). Total kematian dihitung dengan menjumlahkan larva yang mati pada setiap konsentrasi. Rata rata kematian larva diperoleh dari total  kematian larva pada tiap konsentrasi  dibagi dengan jumlah total larva awal  pada konsentrasi  yang sama.  Perhitungan  persentase  kematian  larva  pada  setiap  konsentrasi  diperoleh  dengan  cara  rata-rata  kematian  tiap konsentrasi dikali 100%
Tabel 6. Pengaruh berbagai konsentrasi paracetamol, blanko dan air laut terhadap larva Artemmia salina Leach Wadah Angka kematian larva artemia dari 10 larva Blanko Air laut Konsentrasi paracetamol pada wadah % 5%                  2%               1% 1 10 10 10 1 0 2 10 10 10 0 0 3 10 10 10 1 0 TOTAL 30 30 30 1 0 RATA RATA KEMATIAN 1 1 1 0,033 0 % KEMATIAN 100% 100% 100% 0,033% 0,00%
Tabel  7. Pengaruh  Berbagai  Konsentrasi  Ekstrak  Kloroform  :  Metanol  (2:1) Xylocarpus  granatum Terhadap  Larva Artemia salina Leach.
Wadah Angka kematian larva artemia dari 10 larva Konsentrasi Ekstrak pada wadah (%) 1% 0,5% 0,25% 0,125% 0,0625% 0,03125% 1 10 8 5 4 3 2 2 10 9 5 4 4 2 3 9 8 6 4 4 3 4 8 8 5 3 4 2 5 10 8 6 4 5 3 6 10 8 5 4 2 2 Total 57 49 32 23 22 14 Rata – rata kematian 0.95 0.81 0.53 0.38 0.36 0.23 % kematian 95.00% 81.67% 53.33% 38.33% 36.67% 23.33%

## 4. KESIMPULAN
Hasil uji kromatografi lapis tipis maka didapati profil noda menghasilkan secara visual terdapat 3 noda, sinar UV 254 nm terdapat 5 noda, dan secara sinar UV 366 nm terdapat 4 noda pada ekstrak kloroform:metanol (2:1) kulit batang nyirih ( Xylocarps  granatum ).  Hasil  perhitungan  nilai  LC50  dari  ekstrak  koroform:metanol  kulit  batang  nyirih  ( Xylocarpus granatum ) dengan menggunakan analisis probit adalah   3,116 ppm diklasifikasikan sebagai sangat toksik

## DAFTAR PUSTAKA
Abubakar, S., Kadir, M. A., Eko S., Akbar, W. N. 2019. Manfaat Mangrove Bagi Peruntukan Sediaan Farmasetika Di Desa Mamuya Kecamatan Galela Timur Kabupaten Halmahera Timur (Tinjauan Etnofarmakologis ). Jurnal Enggano, 4(1): 17. Bahriul, P. U. A. A. E. D. S. 2014. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Salam (Syzyngium polyanthum) Dengan Metode DPPH. Jurnal Akademika Kimia , 3(3), 368–374.
Fitria, R. 2015. Optimasi penggunaan kromatografi lapis tipis (KLT) pada pemisahan senyawa alkaloid daun pulai ( Alstonia scholaris L.). Skripsi . Fakultas Farmasi Universitas Negri Maulana Malik Ibrahim Malang. Halaman 20-28.
Gazali, M., Zamani, N. P., Batubara, I., Pascasarjana, S., Studi, P., Kelautan, I., Perikanan, F., Bogor, P., & Agatis, J. 2014. Potensi limbah kulit buah Nyirih Xylocarpus granatum sebagai inhibito r tirosinase Potency of waste fruit peel of Xylocarpus granatum as a tyrosinase inhibitor. 3(3): 1-3.
Handayani. V., Ahmad, A.R., Sudir, M. 2014. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Bunga Dan Daun Patikala ( Etlingera Elatior (Jack) R.M.sm) Menggunakan Metode Dpph. Jurnal pharm Sci Res . 1(2): 87-88. Hasanah,  Uswatun and Wijayanti,  Ernanin  Dyah. 2019. Toksisitas  Akut  Kombucha  Daun  Tin  (Ficus  carica)  Berdasarkan Nilai Lc50 Terhadap Larva Udang (Artemia salina). Thesis , Malang. Akademi Farmasi Putera Indonesia. Halaman 26. Iswono,  S.,  Eko,  H.  2017.  Buku  panduan  praktikum  mikrobiologi  tumbuhan.  Fakultas  Kesehatan  Program  Studi  Kesehatan Lingkungan. Malang. Wetlands international. Halaman 71.
Kanwar,  A.S.  2007. Brine  Shrimp  (Artemia  salina)  a  Marine  Animal  for  Simple  and  Rapid  Biological  Assays .  Chinese  Clinical Medicine. 2 (4): 35-42 Lestyo W 2011. Kromatografi Lapis Tipis . In Pt. Tanaman Kampus Presindo, jember. Halaman.1-7. Marina , 2018 Mangrove avicennia Di Indonesia. Bogor. Cetakan Ulang Ketiga, Halaman.134-135.

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i2.3678
Nurul khafidz. 2014. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Daun Laban Abang (Aglaia elliptica BLUME) terhadap larva udang (Artemia salina Leach ) dengan metode BSLT. Skripsi. Fakultas kedokteran danilmu kesehatan Universitas Islam Negri  Halaman.2 Nur zaki hanifah 2015. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Daun Sirsak ( Annona muricata L ) terhadap larva artemia salina Leach dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), Skripsi Fakultas kedokteran dan ilmu kesehatan Universitas  Islam Negeri Syarif Hidayatullah.
Puspitasari, E., & Hendri, M. 2018. Uji Toksisitas dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (Bslt). 18(1). Riduan  T,  Yus  Rusila  Noor,  M.  Khazali,  I  N.N.  Suryadiputra.  2018. Panduan  Pengenalan  Mangrove  Indonesia .  Edisi  1.  Bogor: Wetlands international. Halaman 136.
Sapitri, E.W. 2018. Optimasi  Ekstraksi Batang Xylocarpus granatum sebagai antioksidan dan Antiglikasi. Skripsi . Bogor: Departemen Kimia Fakultas Matematika Dan Imu Pengetahuan Alam Institut Pertanian. Halaman 1. Soemirat,  J. 2017. Toksikologi Lingkungan . Yogyakarta:  Gajah  Mada University Press. Halaman 35-41. Suryono, A. 2013. Sukses Usaha Pembibitan Mangrove Sang Penyelamat Laut. Yogyakarta. Penerbit Pustaka Baru Press.