1) Peneliti (Researcher) ; Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia, Jl. PB. Sudirman No. 90, Jember. 2) Dosen ( Lecture ); Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada, Bulaksumur, Yogyakarta.
Pelita Perkebunan 2007, 23(3),  159 — 175

## Hubungan Karakteristik Jaringan Kulit Buah Beberapa Klon
Kakao ( Theobroma cacao L.) Dengan Sifat Ketahanan Terhadap

## Hama Penggerek Buah Kakao
Relationship Between Pod Characteristics of Some Cocoa Clones ( T. cacao L.) and Their Resistance Response to Cocoa Pod Borer
Agung Wahyu Susilo 1) , Woerjono Mangoendidjojo 2) , dan Witjaksono 2)

## Ringkasan
Studi karakteristik sifat ketahanan hama PBK ( Conopomorpha cramerella ) dilakukan terhadap jaringan kulit buah kakao, tempat aktivitas peletakan telur dan pergerakan larva. Karakterisasi dilakukan terhadap empat klon yang berbeda respons ketahanannya terhadap PBK, yaitu klon tahan (KW 514 dan ARDACIAR 10), moderat tahan (KW 411), dan rentan (RCC 72). Buah sampel dikategorikan atas buah muda dan buah tua yang diambil dari tanaman koleksi di KP Kaliwining, Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia. Karakterisasi berdasarkan keragaan anatomi jaringan trikoma, granula tanin, dan lignifikasi jaringan sklerotik dilakukan dengan metoda mikrokimia di laboratorium Mikroteknik Tumbuhan Universitas Gadjah Mada Yogyakara. Hasil karakterisasi menunjukkan bahwa sampel buah muda klon tahan dan moderat tahan memiliki tingkat kepadatan jaringan trikoma lebih tinggi dibandingkan klon rentan. Granula tanin lebih banyak ditemukan pada buah muda dengan variasi yang menunjukkan keterkaitan dengan ketahanan PBK. Jumlah granula tanin klon tahan dan moderat tahan lebih tinggi dibandingkan klon rentan, baik yang ditemukan di bagian alur maupun di puncak permukaan kulit buah. Granula tanin ternyata lebih banyak terdistribusi pada jaringan di bagian puncak daripada di bagian alur. Perbedaan karakteristik antara klon tahan dan moderat tahan ternyata terletak pada tingkat lignifikasi jaringan sklerotik. Jaringan sklerotik klon tahan menunjukkan tingkat lignifikasi yang lebih intensif dan lebih kompak dibandingkan klon moderat tahan dan klon rentan. Demikian pula diketahui bahwa ketebalan jaringan sklerotik di bagian alur klon tahan lebih tinggi dibandingkan klon moderat tahan dan klon rentan. Jaringan sklerotik sampel buah muda klon moderat tahan belum menunjukkan proses lignifikasi yang intensif sehingga umur berpengaruh terhadap proses lignifikasi jaringan sklerotik.

## Susilo, Mangoendidjojo, dan Witjaksono

## Summary
Characteristic study on CPB resistance had been carried out by cha- racterizing mesocarp layer of cocoa pod where egg laying and larva penetra- tion are carried out. For this study, 4 clones were selected which performed different response to CPB, namely resistant clones of KW 514 and ARDACIAR 10, moderately resistant clone of KW 411 and the susceptible clone of RCC 72. Pod samples were classified as young and mature were detached from co- coa collection at the experimental station of Kaliwining, Indonesian Coffee and Cocoa Research Institute in Jember. Characterization was conducted based on microchemical method at the Microtechnique Laboratory of Gadjah Mada University to identify trichome appearance at upper layer of pod, distributed granules of tannin through mesocarp and lignification of the sclerotic. It was characterized that the trichome density performing  resistant in which the re- sistant and moderately resistant clones had more number of trichome density than of the susceptible one. The distributed granules of tannin at young pod showed significant difference among those clones that indicate resistant cha- racteristics. The number of distributed granules of tannin was higher of those the resistant and moderatly resistant clones than of the susceptible clones that were formed both at furrow and at ridge of pod. However, the granules of tan- nin were distributed more at ridge than at furrow where furrow were preferred by CPB for egg laying. The characteristic differences between the resistant and moderately resistant clones were identified based on the intensity of lignifica- tion at sclerotic tissue. The lignified tissue of the resistant clones perform more intensive and more compact than of the moderately resistant clones. Tissue of young pod of the moderately resistant and susceptible clones was not yet lig- nified. Thickness of lignified tissue at the furrow of resistant clone was higher than of the moderately resistant and susceptible clones.
Key words : Theobroma cocoa L., cocoa pod borer, resistant, mesocarp, sclerotic, trichome, tannin.

## PENDAHULUAN
Strategi mendapatkan materi genetik sifat ketahanan PBK ditempuh melalui eksplorasi dan seleksi genotipe tahan di daerah endemik serangan. Dalam hal ini dilakukan melalui pemanfaatan peluang adanya genotipe-genotipe hasil proses rekombinasi persilangan antartetua klonal. Metode eksplorasi telah berhasil digunakan untuk mendapatkan klon-klon tahan penyakit vascular-streak dieback (VSD, Oncobasi-
dium theobromae ) di Papua New Guinea melalui seleksi individu pada populasi pertanaman Trinitario yang terinfeksi VSD secara alami (Tan, 1992). Eksplorasi genotipe tahan PBK telah dilakukan di berbagai daerah endemik serangan PBK di Indonesia dan telah diperoleh beberapa klon harapan tahan PBK (Susilo et al ., 2004 & ACIAR, 2006). Klon-klon tahan hasil eksplorasi tersebut selanjutnya dimanfaatkan sebagai materi genetik dalam pemuliaan ketahanan PBK.
Hubungan karakteristik jaringan kulit buah beberapa klon kakao dengan sifat ketahanan hama penggerek buah kakao
Proses identifikasi genotipe tahan PBK dilakukan berdasarkan proporsi buah terserang dan biji lengket akibat PBK. Identifikasi berdasarkan kriteria tersebut memerlukan waktu lama karena evaluasi respons ketahanan tanaman perlu dilakukan selama beberapa periode pembuahan guna memastikan bahwa tanaman tidak terhindar dari infestasi PBK ( escape ). Keefektifan seleksi berdasarkan kriteria tersebut masih rendah sebab dilaporkan bahwa di antara 20 genotipe hasil eksplorasi yang diduga tahan PBK, hanya terseleksi satu genotipe tahan atau keefektifan seleksi mencapai 5% (ACIAR, 2006). Meskipun demikian, hingga kini belum diketahui kriteria lain yang dapat digunakan untuk seleksi genotipe tahan PBK hingga seleksi dapat dilakukan secara efektif dan efisien.
Karakteristik sifat ketahanan PBK perlu diketahui guna menentukan berbagai alternatif kriteria seleksi. Susilo et al . (2004) melaporkan bahwa proporsi biji lengket akibat PBK berkorelasi positif dengan jumlah lubang masuk larva yang ditemukan pada lapisan mesokarp buah. Berdasarkan jejak larva di dalam buah maka dapat dilakukan identifikasi karakteristik sifat-sifat buah yang berperan dalam penghambatan pergerakan larva di dalam lapisan mesokarp buah. Azhar & Lim (1987) melaporkan terdapat hubungan berbanding terbalik antara tingkat kekerasan lapisan sklerotik buah dengan tingkat kematian larva instar satu sehingga kekerasan lapisan sklerotik buah dianggap sebagai faktor penghambat perkembangan larva. Namun di sisi lain, Susilo et al . (2004) melaporkan bahwa respons ketahanan PBK tidak terkait dengan tingkat kekerasan jaringan sklerotik sebab klon yang lapisan
sklerotiknya keras juga rentan terhadap serangan PBK. Susilo (2005) kemudian melaporkan hasil karakterisasi jaringan sklerotik buah berdasarkan lignifikasi jaringan, dan diketahui terdapat hubungan antara nisbah lubang keluar larva terhadap lubang masuk larva dengan banyaknya bagian jaringan yang tidak terlignifikasi ( channel ). Dalam hal ini diketahui bahwa lignifikasi tersebut berperan dalam penghambatan pergerakan larva keluar dari dalam buah. Namun demikian belum diketahui apakah lignifikasi tersebut juga berpengaruh terhadap pergerakan larva masuk ke dalam buah, dan pengaruhnya bersifat fisik atau kimiawi.
Perbedaan karakteristik permukaan kulit buah juga dilaporkan berpengaruh terhadap kesukaan peletakan telur serangga PBK. Azhar et al . (2000) & Flood et al . (2004) menyebutkan bahwa buah-buah yang permukaan kulitnya kasar lebih disukai oleh serangga PBK untuk bertelur. Lim et al . (1982) melaporkan bahwa telur PBK lebih banyak ditemukan di bagian alur buah ( fur- row ) dibandingkan di bagian puncak buah ( ridge ), dimana kedalaman alur sebagai cerminan tingkat kekasaran permukaan kulit buah. Menurut Teh et al . (2006), telur PBK yang diletakkan pada buah yang permukaannya kasar akan lebih terlindung dari limpasan air hujan. Namun demikian hasil evaluasi di lapangan diketahui tidak ada perbedaan respons ketahanan antara klon-klon dengan permukaan kulit buah kasar dan klon-klon dengan permukaan kulit buah halus. Diketahui bahwa pada klon dengan permukaan kulit buah kasar ditemukan lebih banyak lubang masuk larva dibandingkan pada klon dengan permukaan kulit buah halus

## Susilo, Mangoendidjojo, dan Witjaksono
(Sulistyowati et al ., 2002; Susilo et al ., 2004;
& ACIAR, 2006). Tingkat kekasaran permukaan kulit buah diduga hanya berperan mengurangi tingkat kesukaan peletakan telur PBK namun seberapa besar tingkat kerusakan buah akibat PBK masih ditentukan oleh faktor-faktor ketahanan yang lain.
Meskipun demikian hasil karakterisasi tersebut belum dapat menyimpulkan karakteristik buah yang dapat dijadikan sebagai penanda ketahanan PBK. Karak- terisasi masih perlu difokuskan pada karakteristik lapisan kulit buah yang berperan penting dalam proses peletakan telur dan pergerakan larva masuk ke dalam buah. Keberhasilan proses peletakan telur dan pergerakan larva mencapai jaringan plasenta biji untuk makan tergantung seberapa besar hambatan yang terjadi pada lapisan kulit buah. Dalam hal ini jaringan mesokarp dan sklerotik buah yang berperan penting dalam mekanisme ketahanan tersebut. Tulisan ini melaporkan hasil karakterisasi jaringan- jaringan pada lapisan kulit buah yang
meliputi lapisan permukaan kulit buah, jaringan mesokarp dan jaringan sklerotik berdasarkan keragaan anatomi jaringan secara mikroskopis pada beberapa klon yang telah diketahui karakteristik respons ketahanannya terhadap PBK. Karakterisasi dilakukan berdasarkan keberadaan jaringan trikoma pada permukaan kulit buah, granula tanin yang terdistribusi pada jaringan mesokarp buah dan lignifikasi jaringan sklerotik. Hasil karakterisasi kemudian dibahas berdasarkan keterkaitannya dengan karakteristik respons ketahanan PBK.

## BAHAN DAN METODE
Bahan percobaan adalah buah kakao asal klon-klon yang telah diketahui karakteristik respons ketahanannya terhadap serangan PBK. Ada 4 jenis klon kakao yang diguna- kan untuk percobaan dengan karakteristik seperti tercantum pada Tabel 1. Klon-klon tersebut dipilih berdasarkan klasifikasi
KW 514 2.10 2.3 (86.90)* 0.04 Susilo et al . (2004) Tahan (Resistant) Nisbah rendah ( low ratio ) ARDACIAR 10 14.75 11.6 (79.83) 0.10 ACIAR (2006) Tahan (Resistant) Nisbah rendah (low ratio ) KW 411  (Moderat tahan) 24.55 2.79 (60.11) 0.49 ACIAR (2006) Moderately resistant Nisbah tinggi ( high ratio ) RCC 72 61.55 10.47 (69.49) 0.20 ACIAR (2006) Rentan (Susceptible) Nisbah sedang (moderate ratio ) Tabel 1. Karakteristik respons ketahanan PBK klon-klon kakao untuk percobaan
Table 1. The CPB-response characteristics of cocoa clones for this study
Klon Clone Biji lengket,% Unextractable beans Jumlah lubang masuk larva No. of entry hole larvae Nisbah lubang keluar/ lubang masuk larva Ratio of exit hole/ entry hole larvae Pustaka Reference
Keterangan ( Notes ) : *) angka dalam kurung adalah proporsi (%) lubang masuk larva yang mencapai sklerotik ( numbers in the brackets are the percentage of entry hole larvae through sclerotic layer ).
Hubungan karakteristik jaringan kulit buah beberapa klon kakao dengan sifat ketahanan hama penggerek buah kakao
ketahanannya, yaitu klon tahan (KW 514 dan ARDACIAR 10), moderat tahan (KW 411) dan rentan (RCC 72).
Klon-klon untuk percobaan tersebut ditanam dalam bentuk koleksi kerja ( working collection ) di Kebun Percobaan  Kaliwining Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indone- sia pada ketinggian 45 m dpl., tipe iklim C. Sampel buah percobaan diklasifikasikan atas jenis buah masak fisiologis ( mature ) dan buah muda (panjang 10—15 cm) untuk mengetahui kondisi perbedaan umur buah terhadap keragaan karakteristik sifat-sifat buah yang diamati. Buah sampel dipetik dari tiga tanaman berbeda sebagai ulangan dan masing-masing tanaman diambil satu buah. Buah sampel dalam keadaan segar selanjut- nya dikirim ke Laboratorium Mikroteknik Tumbuhan, Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta untuk tahapan proses analisa karakteristik anatomi jaringan berdasarkan metode mikrokimia (Johansen, 1940). Karakterisasi dilakukan berdasarkan keberadaan jaringan trikoma, granula tanin dan lignifikasi jaringan sklerotik. Masing- masing buah sampel diambil tiga titik jaringan untuk pengamatan.
Analisis karakteristik buah tersebut dilakukan secara mikroskopik dengan bantuan gambar irisan melintang jaringan mesokarp buah yang dibuat dengan bantuan alat mikrotom ( sliding microtome ) pada ketebalan 20—40 μ m. Untuk analisis granula tannin, jaringan dimasukan ke dalam larutan uji berupa campuran ferro sulfat 2 g, for- malin 10 ml dan akuades 90 ml. Jaringan direndam dalam larutan uji tersebut selama 24—48 jam. Setelah itu jaringan diletakkan pada media gelas benda dan ditetesi gliserin
lalu ditutup dengan gelas penutup yang pada sisi-sisinya dilekatkan dengan cat kutu. Proses selanjutnya adalah pemotretan di bawah mikroskop binokuler pada perbesaran 2,5 x 10 kali. Sampel jaringan untuk pengataman tersebut diambil tepat di bawah lapisan epidermis yang masing-masing diambil di bagian alur ( furrow ) dan puncak ( ridge ) buah. Melalui bantuan gambar ukuran 2,7 x 4 mm dilakukan penghitungan jumlah granula tanin yang terdistribusi pada jaringan mesokarp buah. Guna mengetahui gambaran kuantitatif granula tanin tersebut maka dilakukan pengukuran diameter granula tanin (mm). Preparat untuk pengamatan granula tanin ini juga digunakan untuk pengamatan keragaan jaringan trikoma.
Perlakuan kimiawi untuk pengamatan lignin berbeda dengan pengamatan tanin. Jaringan yang telah diiris dengan mikrotom kemudian direndam dalam alkohol 70% dan dilakukan pengecatan dengan cara merendam- kan pada larutan berupa campuran 2 g phlo- roglucin dan 100 ml alkohol 95%. Setelah itu jaringan direndam dengan 25% HCl selama 5 menit untuk proses pencucian, kemudian diletakan dalam gelas benda dan ditetesi dengan gliserin sebelum ditutup dengan gelas penutup. Pengamatan lignifikasi jaringan dilakukan melalui bantuan gambar yang dipotret dibawah mikroskop pada perbesaran 4 x 10 kali. Jaringan sklerotik buah yang sudah mengalami lignifikasi akan ber-warna merah. Berdasarkan lignifikasi jaringan kemudian dilakukan pengamatan tingkat lignifikasi dan kekompakan jaringan pada bagian alur dan puncak. Data tingkat lignifikasi dan kekompakan jaringan sklerotik ini bersifat kualitatif dan akan dilakukan analisis deskriptif dengan memperhatikan

## Susilo, Mangoendidjojo, dan Witjaksono
keterulangan antarsampel pengamatan. Selain itu dilakukan pengukuran ketebalan lapisan sklerotik dan penghitungan jumlah celah atau jaringan yang tidak terlignifikasi ( channel ). Pengukuran ketebalan lapisan sklerotik dan jumlah channel dilakukan pada sampel buah kategori masak fisiologis menggunakan penggaris yang diskala ulang.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil karakterisasi menunjukkan terdapat perbedaan nyata keragaan kepadatan jaringan trikoma, jumlah granula tanin dan lignifikasi lapisan sklerotik buah antarklon yang diuji. Keragaan sifat-sifat tersebut juga berbeda berdasarkan kategori umur buah. Hal ini menunjukkan bahwa sifat-sifat tersebut memiliki keterkaitan dengan ketahanan PBK dan ekspresinya dipengaruhi oleh kondisi perkembangan umur buah. Jaringan trikoma dilaporkan berperan dalam mengatur mekanisme ketahanan antixenosis hama penggerek polong ( Callosobruchus chinensis ) pada tanaman kacang gude ( Cajanus cajan L.) (Nahdy et al ., 1999), namun juga terungkap fenomena lain bahwa jaringan trikoma justru berfungsi sebagai tempat pijakan hama Helicoverpa zea selama bertelur pada tanaman kedelai (Panda & Daugherty, 1978 cit . Panda & Khush, 1995). Tanin merupakan kelompok senyawa fenolik yang dihasilkan tanaman dan bersifat toksik terhadap organisme hidup (Brown, 2004), sedangkan lignifikasi jaringan sklerotik buah kakao berhubungan dengan proses pergerakan larva di dalam buah (Susilo, 2006). Keberadaan sifat-sifat tersebut pada lapisan kulit buah kakao sebagai penunjuk adanya karakteristik sifat
buah yang berperan dalam mekanisme ketahanan PBK.

## Jaringan Trikoma
Jaringan trikoma ditemukan pada epi- dermis kulit buah kakao. Sampel jaringan untuk pengamatan jaringan trikoma diambil di bagian alur buah tempat telur PBK dilaporkan lebih banyak ditemukan (Lim et al ., 1982). Ukuran panjang trikoma tersebut berkisar 0,01—0,05 mm dengan ketebalan yang tampak kurang beraturan bila dilihat mulai dari pangkal bawah hingga atas (Gambar 1). Ukuran tersebut masih jauh lebih kecil dibandingkkan ukuran panjang telur 0,46 ± 0,01 mm (Lim et al ., 1982). Jaringan trikoma tersebut lebih banyak ditemukan pada buah muda dibandingkan pada buah tua (Gambar 2) dan keragaannya menunjukkan keterkaitan dengan ketahanan PBK. Hal ini diketahui berdasarkan keragaan kepadatan jaringan trikoma pada klon- klon tahan, KW 514 (3,19±1,56) dan ARDACIAR 10 (4,84±0,25), serta klon moderat tahan KW 411 (5,93±1,4) yang lebih tinggi dibandingkan klon rentan RCC 72 (1,95± 1,05). Hasil pengamatan juga menunjukkan terdapat variasi yang tinggi nilai kepadatan jaringan trikoma antarsampel buah pengamatan pada kategori buah muda dibandingkan pada buah tua (nilai standar deviasi). Berdasarkan keragaan ini maka dapat diduga bahwa keberadaan jaringan trikoma terkait dengan perkem- bangan anatomi buah kakao. Tingkat kepadatan jaringan trikoma pada saat buah muda akan berperan penting dalam ketahanan PBK sebab proses infestasi PBK dimulai sejak buah masih muda.
Hubungan karakteristik jaringan kulit buah beberapa klon kakao dengan sifat ketahanan hama penggerek buah kakao
Jaringan trikoma yang ditemukan pada permukaan kulit buah kakao tersebut diduga berperan dalam menghambat proses peletakan telur dan daya tetas telur ( hatchability ). Nahdy et al . (1999) melaporkan bahwa tingkat kepadatan jaringan trikoma merupakan salah satu penanda ketahanan hama penggerek polong ( C. chinensis ) pada tanaman kacang gude ( C. cajan L.). Dilaporkan bahwa tingkat kepadatan jaringan trikoma pada tanaman tersebut mempengaruhi cara peletakan telur yang dapat menentukan daya tetas telur. Pada tanaman dengan tingkat kepadatan jaringan trikoma tinggi ditemukan lebih sedikit jumlah telur dan jumlah larva yang berhasil menggerek polong. Hasil karakterisasi jaringan trikoma pada tanaman kakao tersebut terdapat kecenderungan bahwa klon dengan jumlah lubang masuk larva
sedikit memiliki tingkat kepadatan jaringan trikoma relatif tinggi. Namun demikian meskipun antara klon tahan ARDACIAR 10 dan klon rentan RCC 72 ditemukan lubang masuk larva dalam jumlah relatif sama namun tingkat kepadatan jaringan trikoma yang ditemukan pada klon ARDACIAR 10 lebih tinggi. Dalam hal ini belum diketahui aspek lain fungsi jaringan trikoma yang berperan dalam mekanisme antixenosis ketahanan PBK.

## Granula Tanin
Karakterisasi senyawa tanin dilakukan berdasarkan keragaan granula tanin pada anatomi jaringan mesokarp buah guna mengetahui visualisasi distribusi granula tanin dalam jaringan tersebut. Senyawa tanin yang
Gambar 1. Keragaan jaringan trikoma pada permukaan kulit buah kakao.
Figure 1. The appearance of trichome at upper layer of cocoa mesocarp.
Perbesaran 4 x 10 Magnified by 4 x 10 Perbesaran 10 x 10 Magnified by 10 x 10

## Trichome
Susilo, Mangoendidjojo, dan Witjaksono
teridentifikasi dalam jaringan mesokarp buah kakao berbentuk granula (Gambar 3) semacam kantung yang mewadahi senyawa tanin tersebut. Brown (2004) menyebutkan bahwa senyawa tanin di dalam tanaman terdapat di dalam vakuola atau permukaan lilin. Dalam hal ini pengamatan jumlah granula tanin yang terdistribusi dalam jaringan mesokarp buah lebih penting dilakukan untuk mengetahui seberapa luas cakupan distribusi granula tanin tersebut di dalam jaringan mesokarp yang dapat meng- gambarkan tingkat penghambatan bagi larva PBK. Pemilahan obyek pengamatan di bagian alur dan puncak buah untuk
mengetahui distribusi granula tanin di kedua posisi buah tersebut berdasarkan per- timbangan bahwa tingkat kesukaan hama PBK dalam hal peletakan telur di kedua posisi buah tersebut berbeda.
Hasil pengamatan menunjukkan bahwa jumlah granula tanin yang terdistribusi dalam jaringan mesokarp buah tampak berbeda berdasarkan jenis klon, umur buah dan posisi jaringan di bagian buah (Gambar 4). Granula tanin yang ditemukan pada buah muda tampak lebih banyak dibandingkan pada buah tua dan variasi keragaannya men- cerminkan respons ketahanan klon-klon yang diuji. Evaluasi keragaan jenis klon dilakukan
Gambar 2. Kepadatan jaringan trikoma pada permukaan kulit buah klon-klon kakao dengan respons ketahanan PBK yang berbeda (bar menunjukkan standar deviasi rerata).
Figure 2. Differences of trichome density at upper layer of mesocarp tissue of cocoa clones with different response to CPB (error bars represent standard deviation of the means).
KW 411 RCC 72 KW 514 ARDACIAR
KLON ( COCOA CLONE ) Tua (mature) Muda (young) Klon (Clone) 8.00 7.00 6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0,00 Kepadatan jaringan trikoma, per mm Density of trichoma, per mm KW 411 RCC 72 KW 514 ARDACIAR 10 Tua ( Mature )             Muda ( Young )
Hubungan karakteristik jaringan kulit buah beberapa klon kakao dengan sifat ketahanan hama penggerek buah kakao
berdasarkan data sampel buah muda. Dalam hal ini keberadaan senyawa tanin pada buah muda lebih diperlukan dalam mekanisme ketahanan PBK sebab proses infestasi PBK terjadi saat buah masih muda (umur >3 bulan) (Azhar et al ., 2000) dan jarang ditemukan infestasi terjadi pada buah masak atau pun buah yang masih terlalu muda (Day, 1986). Hasil pengamatan menunjukkan bahwa jumlah granula tanin yang ditemukan pada buah muda klon tahan lebih tinggi dibandingkan pada klon rentan (Gambar 4). Peubah diameter granula tanin tampak tidak menunjukkan adanya keterkaitan dengan
ketahanan PBK sebab tidak ada perbedaan keragaan diameter granula tanin antara klon tahan dan klon rentan. Hasil ini menunjukkan bahwa tingkat pemerataan distribusi granula tanin di dalam jaringan mesokarp lebih diperlukan dalam ketahanan PBK di- bandingkan ukuran kuantitatif senyawa tersebut. Semakin merata sebaran granula tanin dalam jaringan mesokarp buah maka akan semakin besar peluang terjadinya kontak antara larva dan granula tanin. Senyawa tanin di dalam jaringan tanaman akan bersifat aktif setelah terjadi proses kerusakan atau pun kematian sel tanaman (Brown, 2004)
Gambar 3. Perbedaan keragaan granula tanin yang terdistribusi pada lapisan mesokarp buah muda beberapa klon kakao dengan respons ketahanan PBK yang berbeda (Perbesaran 4 x 10).
Figure 3. Visual differences of the distributed granules of tannin through the mesocarp of young pod of cocoa clones with different response to CPB (Magnified by 4 x 10 ). Granula tanin KW 411 RCC  72 KW 514 ARDACIAR  10

## Susilo, Mangoendidjojo, dan Witjaksono
Gambar 4. Jumlah (atas) dan diameter (bawah) granula tanin yang terdistribusi pada jaringan mesokarp buah klon-klon kakao dengan respons ketahanan PBK yang berbeda (bar menunjukkan standar deviasi rerata).
Figure 4. Number (top) and diameter (below) of granular tannin distributed through mesocarp of cocoa clones with different response to CPB (error bars represent standard deviation of the means).
Tua (mature) Muda (young) Tua (mature) Muda (young) Tua (mature) Muda (young) Tua (mature) Muda (young) KW 411 RCC 72 KW 514 ARDACIAR 10 Alur (furrow) Puncak (ridge)
Tua (mature) Muda (young) Tua (mature) Muda (young) Tua (mature) Muda (young) Tua (mature) Muda (young) KW 411 RCC 72 KW 514 ARDACIAR 10 Alur (furrow) Puncak (ridge) Jumlah granula tanin, per 7,29 mm 2 Number of the distributed tannin granulla, 7.29 mm 2 Tua Mature 0 10 20 30 40 50 60 70 Muda Young Tua
Mature Tua Mature Tua Mature KW 411 RCC 72 KW 514 ARDACIAR 10 Muda Young Muda Young Muda Young Alur ( furrow )             Puncak ( ridge ) Diameter granula tanin, mm Diameter of tannin granulla, mm 0,0 0,10 0,20 0,30 0,40 0,50 0,60 0,70 Tua Mature Muda
Young Tua Mature Tua Mature Tua Mature KW 411 RCC 72 KW 514 ARDACIAR 10 Muda Young Muda Young Muda Young
Alur ( furrow )             Puncak ( ridge ) 0,80
Hubungan karakteristik jaringan kulit buah beberapa klon kakao dengan sifat ketahanan hama penggerek buah kakao
sehingga aktivitas gerekan larva dapat mendorong proses perusakan tersebut.
Hasil pengamatan menunjukkan bahwa granula tanin lebih banyak terdistribusi di daerah bagian puncak buah dibandingkan di bagian alur buah. Fenomena serangga PBK yang lebih menyukai bagian alur buah untuk peletakan telur dibandingkan bagian puncak buah diduga terkait dengan perbedaan jumlah granula tanin yang terdistribusi di kedua posisi buah tersebut. Granula tanin yang lebih sedikit terdistribusi di bagian alur buah menyebabkan faktor penghambat pergerakan larva yang terdapat di bagian alur buah relatif lebih kecil dibandingkan di bagian puncak. Keberadaan granula tanin sebagai faktor penghambat tersebut kemungkinan dapat terdeteksi oleh serangga PBK melalui mekanisme kemoreseptor dalam mendeteksi komponen kimia jaringan yang akan di- gunakan sebagai tempat beraktivitas (Panda & Kush, 1995). Mekanisme kemoreseptor pada buah kakao tersebut diduga melalui bau yang tercium oleh serangga PBK sebelum melakukan aktivitas peletakan telur. Keter- kaitannya dengan keberadaan jaringan trikoma dalam ketahanan PBK masih perlu dikaji lebih lanjut.

## Lignifikasi jaringan sklerotik buah
Jaringan sklerotik buah merupakan salah satu komponen kulit buah di bawah jaringan mesokarp yang berperan dalam proses penghambatan pergerakan larva PBK. Karakterisasi berdasarkan tingkat lignifikasi jaringan untuk memperoleh gambaran seberapa besar tingkat penghambatan yang terjadi pada jaringan tersebut. Keberadaan bagian jaringan yang tidak terlignifikasi
telah dilaporkan terkait dengan proporsi larva yang berhasil keluar dari dalam buah (Susilo, 2005). Berkenaan dengan ketahanan PBK, tingkat lignifikasi jaringan sklerotik buah merupakan faktor penghalang ( barrier ) terakhir bagi proses pergerakan larva menuju jaringan plasenta biji. Proses penghambatan larva pada jaringan tersebut belum diketahui apakah bersifat fisik atau kimiawi.
Hasil karakterisasi menunjukkan bahwa proses lignifikasi jaringan sklerotik terjadi seiring dengan proses perkembangan umur buah. Hal ini diketahui berdasarkan keragaan tingkat lignifikasi jaringan sklerotik pada sampel buah muda yang belum sempurna dibandingkan tingkat lignifikasi pada sampel buah tua. Jaringan sklerotik pada sampel buah muda terlihat kurang kompak dan ditemukan lebih banyak bagian-bagian yang belum terlignifikasi (Gambar 5). Lignifikasi jaringan sklerotik tersebut tampak menunjukkan keterkaitan dengan ketahanan PBK. Klon-klon tahan, ARDACIAR 10 dan klon KW 514, menunjukkan tingkat lignifikasi yang lebih intensif dan jaringan yang lebih kompak dibandingkan klon RCC 72 (rentan) dan klon KW 411 (moderat tahan). Pada sampel buah muda klon rentan dan moderat tahan tampak lignifikasi jaringan belum seintensif yang terjadi pada klon tahan sehingga dapat diketahui bahwa proses lignifikasi pada klon tahan terjadi lebih awal. Dalam hal ini terlihat bahwa perbedaan karakteristik antara klon tahan dan moderat tahan terletak pada tingkat lignifikasi jaringan sklerotik.
Tingkat lignifikasi jaringan sklerotik tersebut tampak terkait dengan nisbah jumlah lubang keluar terhadap jumlah lubang masuk larva. Nilai nisbah tersebut tampak jelas terkait
dengan gradasi tingkat lignifikasi jaringan sklerotik pada klon rentan dan moderat tahan. Klon KW 411 (moderat tahan) dengan nisbah tinggi menunjukkan tingkat lignifikasi jaringan yang lebih rendah dibandingkan klon RCC 72 (rentan) dengan nisbah sedang. Susilo (2005) sebelumnya juga melaporkan fenomena serupa dengan hasil penelitian ini. Nisbah tersebut meng-gambarkan seberapa besar tingkat peng-hambatan terhadap pergerakan larva di dalam buah. Dalam hal ini diketahui bahwa penghambatan tersebut terkait dengan lignifikasi jaringan sklerotik.
Meskipun demikian belum dapat diketahui apakah penghambatan tersebut terjadi saat larva bergerak masuk ke dalam buah atau saat larva akan keluar dari dalam buah. Fenomena penghambatan pergerakan larva keluar dari dalam buah pernah terungkap dengan ditemukan larva instar akhir yang mati sebelum berhasil keluar dari dalam buah pada klon rentan dengan lignifikasi jaringan sklerotik tinggi dan nilai nisbah tersebut rendah (Susilo, komunikasi pribadi). Namun demikian apabila penghambatan tersebut terkait dengan mekanisme ketahanan PBK
AR DA CIAR  10 (tahan, resistant ) T ua  ( mature )
Sangat intensif ( very intensive ) Sangat intensif ( very intensive ) Sangat ( very c M uda  ( young )
K urang intensif ( less intensive ) K urang intensif ( less intensive ) K urang ( less c K W  514 (tahan,
resistant ) T ua  ( mature ) Jaringan terlignifikasi
secara intensif ( the tissue were lignified intensively ) Jaringan terlignifikasi secara intensif ( the tissue were lignified intensively ) K om p sangat ( compa com
M uda  ( young ) Jaringan m ulai terlignifikasi secara intensif ( the tissue start to be lignified intensively ) Jaringan m ulai terlignifikasi secara intensif ( the tissue start to be lignified intensively ) A gak  kom cam
K W  411 (m oderat tahan, m oderate resistant ) T ua  ( mature ) Intensif, sebagian sangat intensif ( intensive and som e others very intensive ) Intensif, sebagian  sangat intensif ( intensive and som e others very intensive ) K om p sangat (compa com
M uda  ( young ) Belum  terlignifikasi,
sebagian terlignifikasi kurang intensif ( tissues were not yet lignified, som e others lignified less intensive ) Belum  terlignifikasi, sebagian terlignifikasi kurang intensif ( tissues w ere not yet lignified,
some others lignified less intensive ) T idak ko terlihat s ( not com still u v
RC C 72 (rentan, susceptible ) T ua  ( mature ) K urang intensif (l ess intensive ) K urang intensif ( less intensive ) K urang ( less c M uda  ( young )
Belum  terlignifikasi, sebagian terlignifikasi kurang intensif ( tissues were not yet lignified, som e others less intensive lignified ) Belum  terlignifikasi, sebagian terlignifikasi kurang intensif ( tissues w ere not yet lignified, som e others less intensive lignified )
T idak ko com
Tabel 2. Diskripsi kualitatif tingkat lignifikasi jaringan sklerotik buah klon-klon kakao dengan respons ketahanan PBK yang berbeda
Table 2. The qualitative description of lignification of sclerotic layer of cocoa clones with different response to CPB
tahan , moderately Tingkat lignifikasi lignification rate Tingkat kekompakan compactenss rate Klon clone Kondisi buah pod development Alur ( furrow) Puncak ( ridge) Alur ( furrow) Puncak ( ridge)
Gambar 5. Perbedaan  tingkat  lignifikasi dan kekompakan jaringan sklerotik buah di bagian alur pada buah muda (kiri) dan buah tua (kanan) beberapa klon kakao dengan respons ketahanan PBK berbeda (perbesaran 4 x 10) .
Figure 5. Differences of lignification and compactness of the lignified tissues at the furrow of young pod (left ) and mature pod (right) of cocoa clones which different response to CPB (magnified by 4 x 10).
ARDACIAR 10 Tahan ( Resistant )
KW 514 Tahan ( Resistant )
KW 411
Moderat tahan ( Moderatly resistant )
RCC 72
Rentan ( Susceptible )

## Susilo, Mangoendidjojo, dan Witjaksono
maka penghambatan semestinya terjadi saat larva bergerak masuk ke dalam buah.
Sebagaimana tanin, lignin juga ter- masuk kelompok senyawa fenolik yang dihasilkan tanaman melalui jalur sintesis asam shikimat atau juga dikenal jalur fenilpropanoid (Goldwasser et al ., 1999, Brown, 2004). Fungsinya dalam ketahanan tanaman telah dilaporkan pada tanaman gandum ( Triticum aesticum ) melalui mekanisme hipersensitif terhadap infeksi penyakit busuk batang ( Puccinia graminis f. sp. tritici ) (Menden et al ., 2007). Goldwasser et al . (1999) melaporkan bahwa kandungan lignin pada varietas tahan Vicia atropurpurea cv. Popany lebih tinggi
dibandingkan pada varietas rentan Vicia atropurpurea cv. Yovel. Dilaporkan bahwa melalui infeksi buatan parasit Orobanche aegyptiaca di bagian akar varietas tahan V. atropurpurea cv. Popany dapat menginduksi peningkatan kandungan senyawa lignin dan enzim peroksidase sebanyak dua kali lipat, serta senyawa fenolik bebas ( free phenolics ) dan fenolik terikat ( bound phenolics ), masing-masing sebanyak empat kali dan delapan kali lipat. Hasil karakterisasi yang menunjukkan bahwa intensitas lignifikasi jaringan sklerotik yang tinggi pada klon tahan diduga sebagai hasil akumulasi proses lignifikasi yang terjadi dini selama perkembangan buah. Adanya intensitas kandungan lignin yang tinggi sejak buah masih muda akan berperan penting dalam penghambatan pergerakan larva menuju jaringan plasenta biji. Dengan demikian dapat diduga bahwa peran lignifikasi jaringan sklerotik dalam ketahanan PBK lebih bersifat kimiawi.
Guna mengetahui gambaran kuantitatif tingkat lignifikasi dan kekompakan jaringan sklerotik dilakukan pengukuran ketebalan lapisan sklerotik dan jumlah liang atau bagian jaringan yang tidak terlignifikasi ( channel ). Pengukuran hanya dilakukan pada sampel buah tua sebab tingkat lignifikasi jaringan yang belum sempurna pada sampel buah muda mempersulit standarisasi pengamatan. Hasil pengamatan menunjukkan bahwa keragaan ketebalan jaringan sklerotik di bagian alur buah secara nyata terkait dengan perbedaan respons ketahanan PBK klon-klon yang diuji (Gambar 6). Klon-klon tahan, ARDACIAR 10 dan KW 514, masing- masing menunjukkan ketebalan jaringan sklerotik di bagian alur sebesar 1,47± 0,11 mm, dan 1,11±0,15 mm yang lebih tinggi dibandingkan keragaan ketebalan jaringan sklerotik klon rentan RCC 72 dan moderat tahan KW 411, masing-masing sebesar 0,77±0,11 mm dan 0,70±0,26 mm. Berdasarkan nilai standar deviasi tampak bahwa variasi keragaan jumlah liang antarsampel pengamatan sangat tinggi, menun-jukkan bahwa tingkat kekompakan jaringan sklerotik sulit direpresentasikan secara kuantitatif berdasarkan jumlah liang tersebut. Dalam hal ini diketahui bahwa klon KW 411 yang menunjukkan tingkat lignifikasi jaringan terendah, secara relatif menunjukkan jumlah liang yang tertinggi, baik di bagian alur maupun puncak.
Hasil karakterisasi tersebut menunjukkan bahwa di dalam lapisan kulit buah kakao terekspresi beberapa sifat buah yang terkait dengan ketahanan PBK. Sifat-sifat tersebut tampak berperan secara simultan sebab tidak ada satu sifat yang secara dominan menun- jukkan keterkaitan dengan sifat ketahanan
Hubungan karakteristik jaringan kulit buah beberapa klon kakao dengan sifat ketahanan hama penggerek buah kakao
PBK. Hal ini menunjukkan bahwa meka- nisme ketahanan PBK terjadi melalui proses yang relatif kompleks. Ekspresi sifat-sifat ketahanan tersebut tampak dipengaruhi oleh kondisi perkembangan umur buah, dan ekspresinya yang menunjukkan keterkaitan dengan ketahanan PBK terjadi pada sampel buah muda. Ekspresi sifat-sifat tersebut saat kondisi buah masih muda akan berperan penting dalam ketahanan PBK sebab proses infestasi PBK terjadi sejak buah masih muda. Namun demikian masih belum diketahui saat kondisi umur buah yang mencerminkan ekspresi maksimal sifat-sifat ketahanan tersebut. Dalam hal ini masih perlu dikaji pengaruh perkembangan buah terhadap
ekspresi sifat-sifat tersebut terutama selama kurun waktu perkembangan buah karena proses infestasi PBK terjadi (3—5 bulan). Proses identifikasi karakteristik ketahanan PBK harus memperhatikan kondisi perkembangan umur buah.

## KESIMPULAN
1. Hasil karakterisasi lapisan kulit buah kakao teridentifikasi adanya jaringan trikoma pada lapisan permukaan kulit buah, granula tanin yang terdistribusi dalam jaringan mesokarp, dan perbedaan tingkat lignifikasi jaringan sklerotik buah yang keragaannya berbeda antarklon.
Gambar 6. Ketebalan jaringan (mm) dan jumlah liang pada jaringan sklerotik buah klon-klon kakao dengan respons ketahanan PBK yang berbeda (bar menunjukkan standar deviasi rerata).
Figure 6. Sclerotic layer thickness (mm) and number of non-lignified tissue through the layer of cocoa clones which different response to CPB (error bars represent standard deviation of the means).
Alur (furrow) Puncak
(ridge) Alur (furrow) Puncak (ridge) Alur (furrow) Puncak (ridge) Alur (furrow) Puncak (ridge) KW 411 RCC 72
KW 514 ARDACIAR 10 Alur Furrow Puncak
Ridge Alur Furrow Alur furrow Alur Furrow Alur furrow Alur Furrow Alur furrow KW 1 RCC 72 KW  514 ARDACIAR 10
Ketebalan, mm ( thickness, mm ) -0,50 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 Jumlah liang per 4 mm2 ( No. of furrow per 4 mm 2 )

## Susilo, Mangoendidjojo, dan Witjaksono
Keragaan sifat-sifat tersebut juga dipengaruhi oleh kondisi umur buah. Tingkat kepadatan jaringan trikoma pada sampel buah muda menunjukkan keterkaitan dengan ketahanan PBK sebab tingkat kepadatan jaringan trikoma yang ditemukan pada  klon-klon tahan, KW 514 (3,19±1,56) dan ARDACIAR 10 (4,84±0,25) dan klon moderat tahan, KW 411 (5,93±1,40) lebih tinggi dibandingkan pada klon rentan, RCC 72 (1,95± 1,05).
2. Terdapat perbedaan keragaan jumlah granula tanin yang terdistribusi dalam jaringan mesokarp buah berdasarkan jenis klon, umur buah dan posisi jaringan di bagian buah. Granula tanin lebih banyak ditemukan pada buah muda yang variasi keragaannya menunjukkan keterkaitan dengan ketahanan PBK. Jumlah granula tanin yang ditemukan pada klon tahan (KW 514 dan ARDACIAR 10) dan moderat tahan (KW 411) lebih banyak dibandingkan pada klon rentan (RCC 72), baik yang ditemukan pada jaringan di bagian alur maupun puncak buah. Dalam hal ini granula tanin lebih banyak terdistribusi di bagian puncak daripada di bagian alur buah.
3. Perbedaan karakteristik ketahanan PBK antara klon tahan dan moderat tahan terletak pada tingkat lignifikasi jaringan sklerotik. Klon tahan (ARDACIAR 10 dan KW 514) menunjukkan tingkat lignifikasi yang lebih intensif dan lebih kompak dibandingkan klon moderat tahan (KW 411) dan klon rentan (RCC 72). Pada sampel buah muda, klon moderat tahan belum menunjukkan adanya proses
tingkat lignifikasi yang intensif. Berdasar- kan ketebalan jaringan sklerotik di bagian alur buah diketahui bahwa klon tahan, ARDACIAR 10 (1,47±0,11) dan KW 514 (1,11±0,15) menunjukkan tingkat ketebalan yang lebih tinggi dibandingkan klon moderat tahan KW 411 (0,70±0,26) dan klon rentan, RCC 72 (0,77±0,11).

## DAFTAR PUSTAKA
ACIAR  (2006). Selection for improved qua-lity and resistance of Phytophthora pod rot, cocoa pod borer, and vascular streak dieback in cocoa in Indonesia. Annual Report, ACIAR-PHT/2000/102 (2006).
Azhar, I. & D.H.K. Lim (1987). An investi- gation on the use of host plant resis- tance and crop manipulation in the management of the cocoa pod borer. p. 83—101. In : P.A.C. Ooi (Ed.). Ma nagement of the Cocoa Pod Borer. The Malaysian Cocoa Plant Protection So- ciety, Kuala Lumpur.
Azhar, I. (2000) . Measuring ovipositional pref- erence of the cocoa pod borer , Conopomorpha cramerela (Lepi- doptera: Gracillariidae) to various co- coa clones. Proceedings of Incoped 3 rd International Seminar. Malaysian Cocoa Board. p. 57—59.
Brown, D. (2004). Toxic agents in plants . Ani- mal science Webmaster, 02/18/2004.
Day, R.K. (1986). Population dynamics of co- coa podborer Acrocercops cramerella: Importance of host plant cropping cycle. p. 255—263. In : Pusparajasah, E. & P.S Chew (Eds.). Cocoa and Coco- nuts: Progress and outlook . Incorpo- rated Society of Planters. Kuala Lumpur.
Hubungan karakteristik jaringan kulit buah beberapa klon kakao dengan sifat ketahanan hama penggerek buah kakao
Flood; J. D. Guest; K.A. Holmes; P. Keane, B. Padi & E. Sulistyowati (2004) . Cocoa under attack. p. 33—53. In : J. Flood & R. Murphy (Eds.). Cocoa Futures: A Source Book of Some Important     Is- sues Confronting the Cocoa Industry.
CABI Commodities, Colombia.
Goldwasser, Y.; J. Hershenhorn; D. Plakhine; Y. Kleifeld & B. Rubin (1999). Bio- chemical factors involved in vetch re- sistance to Orobanche aegyptiaca . Physiological and Molecular Plant Pathology , 54, 87—96.
Johansen, D.A. (1940). Plant Microtechnique . McGraw-Hill Book Company, Inc. New York and London.
Lim, G.T.; E.B. Tay; T.C. Pang & K.Y. Pan (1982). The biology of cocoa pod borer Acrocercops cramerella Sneller and its control in Sabah, Malaysia. Proc. Int. Conf. Pl. Prot. in Tropics. Malaysian Pl. Prot. Soc. (MAPPS), Kuala Lumpur. p. 275—287.
Menden, B.; M. Kohlhoff & B.M. Moer- schbacher (2007). Wheat cells accu- mulate a syringyl-rich lignin during the hypersentivie resistance respons. Phy- tochemistry, 68, 513—520.
Nahdy, M.S.; S.N. Silim & R.H. Ellis (1999). Some aspects of pod characteristics predisposing pigeonpea ( Cajanus cajan (L.) Millsp.) to infestation by Callosobruchus chinensis (L.). J. of Stored Products Research , 35, 47—55.
Panda, N. & G.S. Khush (1995). Host Plant Resistance to Insects. 1 st Edt. CAB International, International Rice Re- search Institute, Manila.
Sulistyowati, E.; A.W. Susilo & E. Mufrihati (2002). Laporan hasil eksplorasi klon kakao tahan hama PBK ( Conopomorpha cramerella Snell.) di Kalimantan Timur. Laporan Intern Pusat Pene- litian Kopi dan Kakao Indonesia .
Susilo, A.W.; E. Sulistyowati & E. Mufrihati (2004). Eksplorasi genotipe kakao tahan hama penggerek buah kakao ( Cono- pomorpha cramerella Snell.). Pelita Perkebunan , 20, 1—12.
Susilo, A.W. (2005). Relationship between the characteristics of sclerotic layer of cocoa pods and their resistance to co- coa pod borer. Proc . 4 th Malaysian In- ternational Cocoa Conference. Malay- sian Cocoa Board (MCB), Kuala Lumpur. p. 176—184.
Tan, G.Y. (1992). Cocoa breeding in papua New Guinea and its relevance to pest and disease control. p. 117—128. In : P.J. Keane & C.A.J. Putter (Eds.). Cocoa Pest and Diseases Management in Southeast Asia and Australasia . FAO, Rome.
Teh, C.L.; Joe T-Y Pang & C-T. Ho (2006). Variation of the response of clonal cocoa to attack by cocoa pod borer Conopomorpha cramerella (Lepi- doptera: Gracillariidae) in Sabah. Crop Protection , 25, 712—717.
***********