## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology Technology

## PERBANDINGAN PENGUKURAN KADAR VITAMIN C MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS PADA PANJANG GELOMBANG UV DAN VISIBLE

## Comparison of Measurement The Vitamin C Level using UV-Vis Spetrophotometry at Uv and Visible
Wavelength
1 *Khoirul Ngibad, 2 Dheasy Herawati
1,2 Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Maarif Hasyim Latif, Jl. Raya Ngelom Megare No.30, Ngelom, Taman, Kabupaten Sidoarjo, Indonesia
*e-mail : khoirul_ngibad@dosen.umaha.ac.id

## ABSTRAK
Vitamin C merupakan sumber antioksidan yang mempunyai fungsi utama untuk menghambat terjadinya suatu reaksi oksidasi dan menghambat suatu radikal bebas. Sumber vitamin C dapat ditemui dalam makanan dan minuman. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  perbandingan  pengukuran  kadar  vitamin  C  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang UV dan Visible . Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode spektrofotometri UV-Vis. Pengukuran kadar vitamin C pada panjang gelombang UV 266 nm dan panjang gelombang Visible 494 nm dengan rentang kurva kalibrasi 0,3  sampai  0,8  mg/L.  Validasi  metode  pengukuran  yang  dipelajari  meliputi:  linearitas,  batas  deteksi,  batas  kuantisasi,  dan ketelitian. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa dalam  pengukuran  kadar  vitamin  C  pada  panjang  gelombang  UV menghasilkan linearitas konsentrasi 0,2 – 0,8 mg/L, batas deteksi 0,05 mg/L, batas kuantisasi 0,17 mg/L dan tingkat ketelitian dengan RSD sebesar 0,2015. Di sisi lain, dalam pengukuran kadar vitamin C pada panjang gelombang Visible menghasilkan linearitas    konsentrasi 0,3 – 0,8 mg/L, batas deteksi 0,05 mg/L, batas kuantisasi 0,18 mg/L dan tingkat ketelitian dengan RSD sebesar  1,0489.  Dengan  demikian,  pengukuran  kadar  vitamin  C  pada  sampel  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  lebih diutamakan diukur pada panjang gelombang UV.
Kata kunci : vitamin C, spektrofotometri UV-Vis, panjang gelombang UV, panjang gelombang Visible

## ABSTRACT
Vitamin C is a source of antioxidants which has a main function to inhibit the occurrence of an oxidation reaction and inhibit a  free  radical.  The  source  of  vitamin  C  can  be  found  in  food  and  beverage.  The  aim  of  this  study  is  to  compare  the measurement of vitamin C levels using a UV-Vis spectrophotometer at UV and Visible wavelength. The method used in this study was the UV-Vis spectrophotometry method. The measurement of vitamin C levels at UV wavelength 266 nm and Visible wavelength  494  nm  with  a  calibration  curve  range  0.3  to  0.8  mg/L.  Validation  of  the  methods  studied  included:  linearity, detection  limits,  quantization  limits,  and  precision.  The  results  showed  that  the  measurement  of  vitamin  C  levels  at  UV wavelengths resulted in linearity of concentrations of 0.2 - 0.8 mg / L, limit of detection of 0.05 mg/L, limit of quantization of 0.17 mg/L and level of precision with RSD to 0.2015. On the other hand, the measurement of vitamin C levels in the Visible wavelength produced linearity from concentrations of 0.3 to 0.8 mg/L, detection limit of 0.05 mg/L, quantization limit of 0.18 mg/L  and  the  level  of  precision  with  RSD  of  1.0489.  Thus,  determination  of  vitamin  C  levels  in  samples  using  a  UV-Vis spectrophotometer was preferred to be measured at UV wavelengths.
Keyword : vitamin C, UV-Vis spectrophotometry, UV wavelength, Visible wavelength

## PENDAHULUAN
Vitamin C atau asam askorbat dengan struktur kimia  C 6 H 8 O 6 dikenal  sebagai  sumber  antioksidan terbesar  yang  terdapat  dalam  bahan  makanan  dan minuman.  Antioksidan  tersebut  dapat  bertindak sebagai inaktivator reaksi oksidasi  dan radikal  bebas (Mulyani,  2018).  Kebutuhan  akan  vitamin  C  bisa
didapatkan  dari  buah-buahan  seperti  jeruk,  pepaya, mangga,  anggur,  semangka,  dan  lain-lain.  Semakin besar  kadar  vitamin  C  dalam  suatu  buah-buhan semakin  besar  kemampuannya  sebagai  inaktivator reaksi oksidasi.

## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology Technology
Penentuan  vitamin  C  yang  terkandung  di  dalam sampel  makanan  dan  minuman  kemasan  bisa
ditentukan menggunakan metode titrimetri (Rahmawati, et  al .,2016;  Siti, et  al .,  2016)  dan spektrofotometer  UV-Vis  (Buhari,  2010;  Arny, et al.,2016; Karinda et al., 2013 ). Metode spektrofotometer  UV-Vis  mempunyai  kelebihan daripada  metode    titrasi,  yaitu  memiki  batas  deteksi yang  rendah  serta  memiliki  tingkat  akurasi  dan presisi  yang  tinggi.  Oleh  karena  itu,  metode spektrofotometer  UV-Vis  banyak  digunakan  dalam penentuan  kadar  vitamin  C  dalam  sampel  makanan dan minuman.
Spektrofotometer UV-Vis memiliki panjang gelombang  UV  200  –  400  nm  dan  panjang gelombang Visible 400  –  700  nm.  Pemilihan  kedua panjang  gelombang  tersebut  didasarkan  pada keterbacaan  absorbansi  suatu  analit  (Pratama et  al ., 2018).  Kadar  vitamin  C  dapat  diukur  pada  panjang gelombang  UV  266  nm  (Mulyani,  2018)  dan  pada panjang  gelombang Visible 494  nm  (Tahir, et al .,2018).  Penentuan  kadar  vitamin  C  pada  panjang gelombang Visible didasarkan  pada  terbentuknya warna  komplementer  yang  dapat  dilihat  secara  kasat mata  oleh  manusia  sehingga  analit  perlu  direaksikan dengan  suatu  reagen  seperti  ammonium  molibdat. Dengan  demikian,  penelitian  ini  mempelajari perbandingan pengukuran kadar vitamin C menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang  gelombang  UV  dan Visible menggunakan reagan ammonium molibdat.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  antara  lain:  asam askorbat  p.a,  ammonium  molibdat  5%,  asam  oksalat 0,4%, dan akuades.

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  antara  lain:  labu  ukur, Spektrofotometer  UV-Vis,  kertas  saring,  timbangan analitik, blender, batang pengaduk, erlenmeyer, gelas kimia, pipet volume, pipet ukur, tabung reaksi, kuvet UV, dan kuvet visible .

## Prosedur
Pembuatan  larutan  stok  asam  askorbat  1000 mg/L
Sebanyak  25  mg  asam  askorbat  standar  ditimbang dengan teliti dan dimasukkan ke dalam labu ukur 25
mL  dilarutkan  dengan  asam  oksalat  0,4%  hingga  25 mL.

## Pembuatan kurva kalibrasi
Dalam  penelitian  ini,  dipelajari  perbandingan pengukuran  kadar  vitamin  C  pada  panjang gelombang  UV  dan  panjang  gelombang Visible . Larutan  asam  askorbat  10  mg/L  dipipet  sebanyak  7 kali  yaitu  0,2;  0,3;  0,4;  0,5;  0,6;  0,7  dan  0,8  mL. Masing-masing  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10 mL.  Kemudian  ditambahkan  H 2 SO 4 5%  sebanyak  4 mL  dan  dicukupkan  volumenya  dengan  ammonium molibdat 5% sampai batas tanda lalu dihomogenkan. Dari  prosedur  ini,  akan  diperoleh  diperoleh konsentrasi 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7 dan 0,8 mg/L. Kemudian dilakukan proses inkubasi selama 0,5 jam. Diukur  serapannya  dengan  spektrofotometri  UV-Vis pada  panjang  gelombang  494  nm  dan  dibuat  kurva persamaan  regresi  linear y  =  ax  +  b  dan  nilai koefisien korelasi yang menunjukkan linearitas kurva baku  tersebut .  Dalam  penelitian  ini,  juga  dipelajari pengukuran  kadar  vitamin  C  pada  panjang gelombang  UV  dengan  perlakuan  sama  dengan  di atas  tetapi  larutan  standar  vitamin  C  tidak  ditambah reagen  dan    tidak  dilakukan  inkubasi  dengan pengukuran  absorbansi  dilakukan  pada  panjang gelombang 266 nm.
Penentuan  batas  deteksi  (LoD)  dan  batas kuantitas (LoQ)
Batas  deteksi  dan  batas  kuantitas  dapat  dihitung secara  statistika  melalui  persamaan  garis  linear  dari kurva baku. Simpangan baku atau standar dari blanko (Sy/x)  ditentukan  dengan  cara  mengukur  absorbansi blanko sebanyak 20 kali ulangan.

## Ketelitian
Uji  ketelitian  dilakukan  pada  konsentrasi  vitamin  C 0,5  mg/L  baik  pengukuran  pada  panjang  gelombang UV  dan  panjang  gelombang Visible .  Pembacaan absorbansi  dilakukan  sebanyak  10  kali  ulangan. Kemudian dihitung nilai RSD.
RSD = sd rata−rata x 100%
Keterangan :
sd = standar deviasi atau simpangan baku
RSD   = relative standar deviation

## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology Technology

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Validasi Metode Pembuatan kurva baku (linearitas)
Dalam  penelitian  ini,  dipelajari  perbandingan pengukuran  kadar  vitamin  C  pada  panjang gelombang UV dan gelombang Visible menggunakan reagen ammonium molibdat. Tabel 1 memperlihatkan hasil  pengukuran  absorbansi  dari  beberapa  larutan standar vitamin C mulai dari konsentrasi 0,2 sampai 0,8  mg/L  pada  panjang  gelombang  UV.  Semakin besar  konsentrasi  larutan  standar  vitamin  C  semakin besar  absorbansi  yang  dihasilkan.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  hubungan  antara  konsentrasi dan  absorbansi  yang  dihasilkan  pada  panjang gelombang  UV  adalah  linear.  Tingkat  linearitas tersebut  dibuktikan  dengan  nilai  R 2 persamaan  garis linear  sebesar  0,9882  (Gambar  1).  Nilai  R 2 yang bagus adalah ketika mendekati nilai 1.
Tabel 1 . Hasil pengukuran absorbansi dalam pembuatan kurva kalibrasi pada Panjang gelombang UV Konsentrasi vitamin C (mg/L) Absorbansi 0,2 0,228 0,3 0,241 0,4 0,254 0,5 0,261 0,7 0,284 0,8 0,304

## Gambar 1 . Kurva kalibrasi standar vitamin C tanpa menggunakan reagen
Di  sisi  lain,  Tabel  2  menunjukkan  hasil pengukuran absorbansi dari beberapa larutan standar vitamin  C  mulai  dari  konsentrasi  0,3  sampai  0,8 mg/L  pada  panjang  gelombang Visible .  Semakin besar  konsentrasi  larutan  standar  vitamin  C  semakin
besar  absorbansi  yang  dihasilkan.  Hal  ini  juga menunjukkan  bahwa  hubungan  antara  konsentrasi dan  absorbansi  yang  dihasilkan  pada  panjang gelombang Visible adalah  linear  dengan  nilai  R 2 persamaan garis linear sebesar 0,8504 (Gambar 2).
Tabel 2 . Hasil pengukuran absorbansi dalam pembuatan kurva kalibrasi pada gelombang Visible
Konsentrasi vitamin C (mg/L) Absorbansi 0,3 0,065 0,4 0,074 0,5 0,075 0,6 0,078 0,7 0,079 0,8 0,081

## Gambar 2 . Kurva kalibrasi standar vitamin C menggunakan reagen ammonium molibdat
Berdasarkan  data  parameter  kinerja  kurva  kalibrasi, yang meliputi: slope , intercept , correlation determination ,  dan correlation  coeffisien yang disajikan dalam Tabel 3 dapat diketahui bahwa slope dari pengukuran panjang gelombang UV adalah lebih besar daripada pengukuran pada panjang gelombang visible .  Semakin  besar slope dari  persamaan  garis linear  semakin  sensitif  kinerja  kurva  kalibrasi tersebut.  Tingkat  sensitifitas  suatu  metode  uji ditunjukkan  terhadap  perubahan  konsentrasi.  Di  sisi lain, linearitas suatu metode uji dapat dilihat dari nilai correlation  determination  (R)  dan  correlation coeffisien  (r) yang  dihasilkan.  Bedasarkan  Tabel  3, dapt dilihat bahwa correlation determination (R) dan correlation  coeffisien  (r) yang  dihasilkan  pada pengukuran  panjang  gelombang  UV  adalah  lebih mendekati nilai 1 daripada pengukuran pada panjang
y = 0,12x + 0,204 R² = 0,9882 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 A b so rb an si Konsentrasi vitamin C (mg/L) y = 0,028x + 0,0599 R² = 0,8504 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 A b so rb an si
Konsentrasi vitamin C (mg/L)

## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology
Technology
gelombang visible . Parameter intercept (a) dari suatu metode  uji  idealnya  adalah  nol  namun  penelitian ini menghasilkan  nilai intercept yang  tidak  nol.  Hal  ini dapat  disebabkan  oleh  adanya  gangguan  ( noise ) ataupun kontaminasi dalam suatu pengukuran.
Tabel 3 . Perbandingan kinerja kurva kalibrasi vitamin C antara pengukuran pada Panjang gelombang UV dan Visible Parameter Panjang gelombang UV Panjang gelombang Visible Slope 0,12 0,028 Correlation Determination (R) 0,9882 0,8504 Correlation coeffisien (r) 0,9940 0,9222 Intercept 0,204 0,0599
Penentuan  batas  deteksi  (LOD)  dan  batas kuantitas (LOQ)
Batas  deteksi  (LOD)  merupakan  jumlah  analit terkecil  dalam  suatu  sampel  yang  masih  dapat dideteksi yang ditunjukkan adanya respon yang lebih signifikan  dibandingkan  dengan  respon  blanko sedangkan  batas  kuantitasi  (LOQ)  adalah  jumlah analit  terkecil  dalam  sampel  yang  masih  dapat memenuhi  kriteria  cermat  dan  seksama  (Harmita, 2012).  Dalam  penelitian  ini,  juga  dilakukan penentuan  batas  deteksi)  dan  batas  kuantisasi  dari metode  spektorfotometer  UV-Vis.  Penentuan  batas deteksi  dan  kuantitasi  dilakukan  dengan  pengukuran rasio S/N. Standar deviasi blanko ditentukan dengan cara  mengukur  absorbansi  blanko  sebanyak  20  kali. Hasil  pengukuran  dan  perhitungan  menunjukkan bahwa  batas  deteksi  dan  batas  kuantitas  yang diperoleh dalam pengukuran pada panjang gelombang UV sebesar 0,05 mg/L dan 0,17 mg/L. Di sisi  lain,  hasil  pengukuran  dan  perhitungan menunjukkan bahwa batas deteksi dan batas kuantitas yang  diperoleh  dalam  pengukuran  pada  panjang gelombang Visible sebesar 0,05 mg/L dan 0,18 mg/L. Apabila  pengukuran  menghasilkan  absorbansi  yang melebihi nilai  LOD  dan  LOQ  tersebut  berarti  masih memberikan kecermatan analisis (Lestari, Sabikis, & Utami, 2016).

## Ketelitian
Dalam penelitian ini, uji ketelitian dilakukan dengan cara  mengukur  absorbansi larutan  standar  vitamin  C 0,5  mg/L  yang  diukur  sebanyak  10x  ulangan  (Tabel 4).  Ketelitian  adalah  salah  satu  parameter  dalam  uji
validasi  metode  analisis  yang  menunjukkan  tingkat keterulangan  data  hasil  pengukuran.  Penentuan ketelitian  didasarkan  pada  hasil  standar  deviasi  (sd) atau  standar  deviasi  relatif.  Nilai  %  RSD  yang diperbolehkan  maksimal  adalah  5  %  (Romsiah, Marista,  &  Fatoni,  2017).  Dalam  penelitian  ini, standar  deviasi  (sd)  yang  dihasilkan  dalam pengukuran  pada  panjang  gelombang  UV  sebesar 0,0005 dengan % RSD sebesar 0,2015 % sedangkan standar  deviasi  yang  dihasilkan  dalam  pengukuran pada  panjang  gelombang Visible sebesar  0,0007 dengan % RSD sebesar 1,0489 %. Dengan demikian, dapat disimpulkan bahwa uji presisi dalam penentuan vitamin  C  baik  menggunakan  pengukuran  pada panjang  gelombang  UV  maupun  pada  panjang gelombang Visible adalah telah memenuhi persyaratan.
Tabel 4. Uji ketelitian dalam pengukuran pada panjang gelombang UV dan panjang gelombang Visible
n Konsentrasi (mg/L) Absorbansi dari hasil pengukuran Panjang gelombang UV Panjang gelombang Visible 1 0,5 0,261 0,075 2 0,5 0,261 0,076 3 0,5 0,262 0,074 4 0,5 0,262 0,075 5 0,5 0,261 0,076 6 0,5 0,262 0,074 7 0,5 0,262 0,075 8 0,5 0,261 0,076 9 0,5 0,262 0,075 10 0,5 0,261 0,076 Rata-rata 0,2615 0,0752 Standar deviation (sd) 0,0005 0,0007 Relative standar deviation (RSD) 0,2015 1,0489

## KESIMPULAN
Validasi  metode  dalam  pengukuran  kadar  vitamin  C pada panjang gelombang UV menghasilkan linearitas dari  konsentrasi  0,2 – 0,8  mg/L  dengan slope 0,12 dan  nilai  R 2 ( Coefficient  of  determination )  0,9882. Batas  deteksi  yang  dihasilkan  dalam  pengukuran kadar vitamin C pada panjang gelombang UV sebesar

## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology Technology
0,05  mg/L,  batas  kuantisasi  sebesar  0,17  mg/L  dan tingkat ketelitian dengan RSD sebesar 0,2015. Di sisi lain,  validasi  metode  dalam  pengukuran  kadar vitamin  C  pada  panjang  gelombang Visible menggunakan reagen ammonium molibdat
menghasilkan  linearitas  dari  konsentrasi  0,3  –  0,8 mg/L dengan slope 0,028 dan nilai R 2 0,8504. Batas deteksi  yang  dihasilkan  dalam  pengukuran  kadar vitamin  C  pada  panjang  gelombang Visible sebesar 0,05  mg/L,  batas  kuantisasi  sebesar  0,18  mg/L  dan tingkat ketelitian dengan RSD sebesar 1,0489.

## DAFTAR PUSTAKA
Arny,  N.,  Putri,  A.  N.,  Andina,  L.  (n.d.).  Analisis Kuantitatif Vitamin C Dalam Injeksi Whitening Menggunakan  Metode  Spektrofotometri  Uv- Vis.
Buhari,  I.  2010.  Analisis  Kadar  Vitamin  C  dalam Produk  Olahan  Buah  Salak  (Salacca  zalacca) secara  Spektrofotometri  UV-Vis.  Universitas
Islam Negeri Alauddin Makassar.
Harmita,  H.  2012.  Petunjuk  pelaksanaan  validasi
smetode
dan Cara Perhitungannya.
Pharmaceutical  Sciences  and  Research  (PSR) , 1 (3): 117 – 135.
Karinda, M., Fatimawali, F., Citraningtyas, G. 2013. Perbandingan Hasil Penetapan Kadar Vitamin C Mangga  Dodol  dengan  Menggunakan  Metode Spektrofotometri  UV-Vis  dan  Iodometri. PHARMACON , 2 (1): 86 – 89.
Lestari,  P.,  Sabikis,  S.,Utami,  P.  I.  2016.  Analisis Natrium  Nitrit  Secara  Spektrofotometri  Visibel Dalam  Daging  Burger  Yang  Beredar  Di Swalayan  Purwokerto. PHARMACY:  Jurnal Farmasi Indonesia (Pharmaceutical Journal of Indonesia) , 8 (3).
Mulyani,  E.  2018.  Perbandingan  Hasil  Penetapan Kadar  Vitamin  C  pada  Buah  Kiwi  (Actinidia deliciousa)  dengan  Menggunakan  Metode Iodimetri  dan  Spektrofotometri  UV-Vis. Pharmauho , 3 (2). Pratama,  M.R.F.,  Suratno,  S.,  &  Mulyani,  E.  2018. Profile of Thin-Layer Chromatography and UV- Vis  Spectrophotometry  of  Akar  Kuning  Stem Extract (Arcangelisia flava). Borneo Journal of Pharmacy . 1(2):72-76. Rahmawati,  F.,  &  Hana,  C.  2016.  PENETAPAN Kadar  Vitamin  C  Pada  Bawang  Putih  (Allium Sativum,  L)  Dengan  Metode  Iodimetri. Cerata Jurnal  Ilmu  Farmasi  (Journal  of  Pharmacy Science) , 4 (1).
Romsiah,  R.,  Marista,  S.  L.,  &  Fatoni,  A.  2017. Validasi  Metode  Dan  Penetapan  Kadar  Nitrit
(No2-)  Pada  Sosis  Sapi  Curah  Dan  Sosis  Sapi Kaleng  Yang  Dijual  Di  Swalayan  Kota Palembang  Secara  Spektrofotometri  Uv-Vis. Scientia-Journal of Pharmacy and Health , 7 (2), 113 – 119.
Siti, N., Agustina, A.,  Nurhaini, R. 2016. Penetapan Kadar  Vitamin  C  Pada  Jerami  Nangka (Artocarpus Heterpophyllus L.). Jurnal Farmasi Sains Dan Praktis , 2 (1): 1 – 5. Tahir,  M.,  Kusuma,  A.  T.,  Ekawati,  E.  2018.
Analysis of Lycopene and Vitamin C Levels of Pomelo  Citrus  Fruit  (Citrus  maxima  (Burm) Merr)  Red  n  White  Varieties  From  South Sulawesi. JCPS (Journal of Current Pharmaceutical Sciences) , 2 (1): 125 – 130.