ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 19 (3) (2016) : 87 – 93
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Identifikasi Kandungan Kimia dan Uji Aktivitas Antimikroba Kulit Durian ( Durio zibethinus Murr. )
Eka Vany Anggraeni a , Khairul Anam a*
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: k_anam@undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o A b s t r a c t
Keywords: Durio zibethinus Murr. , active fraction, isolate, fenolic acid, ferulic acid Extraction,  fractionation,  antimicrobial  activity  test  by  agar  diffusion  method  and identification of chemical content of active fraction of durian skin ( Durio zibethinus Murr .) Have  been  performed.  From  the  maceration  of  durian  skin  ( Durio  zibethinus  Murr ) conducted using 96% ethanol solvent, it was obtained the durian ethanol extract durian skin. Then followed by fractionation with n-hexane solvent, chloroform, ethyl acetate, and methanol to obtain the respective fractions of n-hexane, chloroform, ethyl acetate, and methanol. From the extract and fraction of durian skin, then the antimicrobial activity was tested, until the most active fraction was fraction of ethyl acetate. The identification of chemical content in the active fraction of durian ethyl acetate skin was carried out by the preparative thin layer chromatography method. While the purity test of isolates was analyzed using Thin Layer Chromatography method and obtained isolate E.2.2.2. Isolate in  the  form  of  white  powder  and  characterization  using  UV-Vis  spectrophotometer showed maximum wavelength of 205 nm, 236 nm, and 270-300 nm. Analysis with FTIR spectrophotometer  showed  the  presence  of  O-H,  =  C-H  aromatic,  C  =  C  aromatic, aromatic substitution, C = O carboxylic acid, C = C alkenes and C-O ether. While Thin Layer Chromatography  Analysis  with  comparator  of  phenolic  acid  standard  compound,  it  is suspected that isolate E.2.2.2 is ferulic acid.

## A b s t r a k
Kata Kunci: Durio zibethinus
Murr. , Fraksi aktif, isolat, asam fenolat, asam ferulat Ekstraksi,  fraksinasi,  uji  aktivitas  antimikroba  dengan  metode  difusi  agar  serta identifikasi  kandungan  kimia dari  fraksi  aktif  dari  kulit  durian  ( Durio  zibethinus  Murr .) telah  dilakukan. Dari maserasi  dari  kulit  durian  ( Durio  zibethinus  Murr )  yang dilakukan menggunakan  pelarut  etanol  96%,  diperoleh  ekstrak  etanol  kulit  durian.  Kemudian dilanjutkan  dengan  fraksinasi  dengan  pelarut  n-heksana,  kloroform,  etil  asetat,  dan metanol sehingga diperoleh masing-masing fraksi n-heksana, kloroform, etil asetat, dan metanol.  Dari  ekstrak  dan  fraksi  kulit  durian,  kemudian  dilakukan  uji  aktivitas antimikroba,  hingga  diperoleh  fraksi  teraktif  adalah  fraksi  etil  asetat.  Identifikasi kandungan  kimia  dalam  fraksi  aktif  etil  asetat  kulit  durian  dilakukan  dengan  metode Kromatografi  Lapis  Tipis  preparatif.  Sedangkan  uji  kemurnian  isolat    dianalisis menggunakan  metode  Kromatografi  Lapis  Tipis  dan  didapatkan  isolat  E.2.2.2.  Isolat berbentuk  serbuk  putih  dan  karakterisasi  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis menunjukkan panjang gelombang maksimum 205 nm, 236 nm, dan 270-300 nm. Analisis dengan  spektofotometer  FTIR  menunjukkan  adanya  gugus  O-H,  =C-H  aromatik,  C=C aromatik, substitusi aromatik, C=O asam karboksilat, C=C alkena dan C-O eter. Sedangkan Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis  dengan  pembanding  senyawa  standar  asam  fenolat, diduga bahwa isolat E.2.2.2 adalah asam ferulat.

## 1. Pendahuluan
Tanaman durian ( Durio zibethinus Murr. ) merupakan salah  satu  jenis  buah-buahan  yang  produksinya melimpah.  Bagian  buah  durian  yang  dapat  dimakan (presentase  bobot  daging  buah)  tergolong  rendah (20,52%). Sisanya 79,48% merupakan bagian yang tidak termanfaatkan  untuk  dikonsumsi,  seperti  kulit  dan  biji durian [1]. Kulit durian merupakan limbah rumah tangga yang  dibuang  sebagai  sampah  dan  tidak  memiliki  nilai ekonomi. Sesungguhnya, kulit durian memiliki manfaat yang belum banyak ditelaah yaitu air rendamannya dapat menghilangkan  aroma  durian  pada  tangan  dan  mulut setelah  mengkonsumsi  buah  ini. Sampai  saat  ini belum pernah  dilaporkan  apakah  air  rendamannya  memiliki sifat  antimikroba  atau  dalam  aplikasinya  sebagai sanitizer .
Penelitian  sebelumnya,  diketahui  bahwa  gel polisakarida  ekstrak  kulit  durian  mempunyai  aktivitas antimikroba  terhadap Escherichia  coli,  Staphylococcus aureus, Candida albicans, dan Staphylococcus cereviseae [2]. Ekstrak  metanol  buah  dan  kulit  durian  mempunyai aktivitas  antibakteri  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus ,  kemudian  Sivananthan  dan Elamaran [3] melaporkan bahwa ekstrak kloroform kulit durian  mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus , namun belum diketahui kandungan  kimia  kulit  durian  yang dapat menghambat aktivitas  mikroba.  Oleh  karena  itu,  pada  penelitian  ini dilakukan identifikasi kandungan kimia kulit durian yang dapat menghambat aktivitas antimikroba yaitu terhadap bakteri  ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli )  dan jamur Candida albicans .

## 2. Metode Penelitian

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  kulit Durio zibethinus  Murr. ,  etanol  96%  teknis,  aquades,  asam klorida,  anhidrida  asam  asetat,  asam  sulfat,  pereaksi Meyer,  pereaksi  Dragendorff,  pereaksi  Liebermann- Burchard, serbuk Mg, amil alkohol, eter, amonia, larutan feri  klorida,  etanol  p.a  dan  teknis, n -heksana  p.a  dan teknis, kloroform p.a dan teknis, etil asetat p.a dan teknis metanol  p.a  dan  teknis,  silika  gel  60  GF 254 ,  KLT aluminium  20x20  cm,  KLT  preparatif  (5x20  cm  dan 20x20 cm), kertas saring, bakteri Escherichia coli, bakteri Staphylococcus aureus, jamur Candida albicans, media NA (Nutrien  Agar),  media  PDA  (Potato  Dextrose  Agar), larutan NaCl 0,9  %,  kertas  cakram,  tetrasiklin, ketokonazol, DMSO. Sedangkan alat-alat yang digunakan  adalah  alat  gelas  standar  penelitian,  mortar porselin,  pipet  mikro,  cawan  porselin,  chamber  KLT, botol vial, rotary evaporator , neraca analitis, erlenmeyer, kurs  porselin,  vakum,  kolom,  tabung  reaksi,  cawan penguap,  jarum  ose,  inkubator,  autoklaf,  spreader, cawan petri, spektrofotometer UV dan spektrofotometer FTIR.

## Preparasi sampel
Kulit durian diperoleh pada bulan Oktober 2014 dari daerah  Gunung  Pati  Semarang  Jawa  Tengah.  Preparasi
sampel  dilakukan  dengan  pengambilan  kulit  durian bagian  dalam,  dicuci,  dikeringkan,  dipotong  dengan ukuran  yang  lebih  kecil  dan  dihaluskan  sehingga diperoleh serbuk kulit durian 2,01 kg.

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan metode  maserasi.  Kulit Durio  zibethinus dimaserasi dengan  pelarut  etanol  sampai  bening  dengan penggantian  pelarut  selama  24  jam.  Filtrat  yang diperoleh  dipekatkan  dengan  menggunakan  rotary evaporator  sehingga  didapatkan  ekstrak  kental  etanol. Ekstrak  kental  etanol  yang  diperoleh  kemudian dilakukan  fraksinasi  berturut-turut  dengan  pelarut  n- heksana,  kloroform,  etil  asetat,  dan  metanol  dengan menggunakan  kromatografi  cair  vakum  dengan  fase diam  silika  gel.  Filtrat  yang  diperoleh  dari  masing- masing  pelarut  kemudian  dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator  sehingga  didapatkan fraksi  kental n- heksana, kloroform, etil asetat, dan metanol.

## Penapisan Fitokimia
Untuk  mengetahui  golongan  kimia  dari  ekstrak etanol  dan  fraksi-fraksi  kulit  durian,  dilakukan  uji penapisan fitokimia yang meliputi uji saponin, uji tanin, uji alkaloid, uji flavonoid, uji streoid/triterpenoid, dan uji kuinon [4].

## Uji Saponin
Sebanyak 2,5 gram sampel dididihkan dalam 50 mL aquades  selama  5  menit,  kemudian  disaring  dalam keadaan  panas.  Selanjutnya  5  mL  larutan  tersebut dikocok  kuat-kuat  secara  vertikal  selama  10  detik. Setelah kurang lebih 10 menit, hasilnya ditetesi dengan asam klorida 2 N.

## Uji Tanin
Sebanyak  5  gram  sampel  dididihkan  dalam  5  mL aquades  selama  5  menit,  kemudian  didinginkan  dan disaring.  Filtrat  yang  diperoleh  dibagi  3,  fitrat  pertama ditambahkan  FeCl 3 1%.  Filtrat  kedua  diberi  larutan gelatin,  kemudian  dibubuhi  pereaksi  Steasny  untuk membuktikan  keberadaan  tanin  katekat.  Endapan disaring,  filtratnya  dibubuhi  natrium  asetat  hingga jenuh,  kemudian  ditetesi  larutan  FeCl 3 1%  untuk menunjukkan keberadaan tanin galat.

## Uji Alkaloid
Sebanyak  2,5  gram  sampel  dilembabkan  dengan  5 mL  amonia  25%,  lalu  digerus  dalam  kurs  porselen. Setelah  itu,  hasil  gerusan  dituangi  20  mL  kloroform digerus  kuat-kuat  dan  disaring.  Untuk  pemeriksaan alkaloid, 10 mL larutan organik diekstraksi 2 kali dengan HCl  (1:10).  Sebanyak  5  mL  larutan  masing-masing dituangkan  ke  dalam  2  tabung  reaksi.  Keberadaan alkaloid diuji dengan pereaksi Dragendroff dan Mayer.

## Uji Flavonoid
Sebanyak 2,5 gram sampel dididihkan dalam 50 mL aquades  selama  5  menit,  kemudian  disaring  dalam keadaan panas, 5 mL filtrat ditambah dengan serbuk Mg,
1  mL  HCl  dan  2  mL  amil  alkohol,  dikocok  kuat  dan dibiarkan.

## Uji Steroid/Triterpenoid.
Sebanyak 2,5 gram sampel dimaserasi dengan 20 mL eter selama 2 jam, kemudian disaring. Selanjutnya 5 mL filtrat  yang  diperoleh  diuapkan  dalam  cawan  penguap sampai  kering.  Ke  dalam  residu  ditambahkan  2  tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat.

## Uji Kuinon
Sebanyak  1  gram  sampel  dididihkan  dalam  10  mL aquades  selama  5  menit,  kemudian  didingingkan  dan disaring, 5 mL filtrat ditambahkan NaOH 1 N.

## Uji Aktivitas Antimikroba
Uji aktivitas antimikroba dilakukan terhadap ekstrak dan  fraksi  kulit  durian.  Metode  yang  digunakan  yaitu metode difusi cakram [5]. Bakteri uji digunakan bakteri ( Escherichia  coli dan  Staphylococcus  aureus)  sedangkan jamur uji digunakan jamur Candida albicans . Larutan uji digunakan  ekstrak  dan  fraksi-fraksi  kulit  durian menggunakan konsentrasi 1%.

## Pembuatan Media
Nutrien  Agar  (NA).  Sebanyak  2,5  gram  medium disuspensikan  ke  dalam  100  mL  aquades.  Medium dipanaskan  sampai  mendidih  agar  tercampur  dengan sempurna. Kemudian didiamkan dan disterilkan di dalam autoklaf  selama  15  menit  pada  suhu  121 0 C  dengan tekanan 1-2 atm [5].

## Media Potato Dextrose Liquid (PDA)
Sebanyak  3  gram  medium  disuspensikan  ke  dalam 100 mL aquades. Medium dipanaskan sampai mendidih agar tercampur dengan sempurna. Kemudian didiamkan dan disterilkan di dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 0 C dengan tekanan 1-2 atm [5].

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Seluruh alat yang akan digunakan dicuci bersih dan dikeringkan.  Tabung reaksi,  gelas  ukur  dan  erlenmeyer ditutup mulutnya dengan kapas. Cawan petri dibungkus dengan  kertas.  Kemudian  disterilkan  dengan  autoklaf pada  suhu 121 0 C  selama  15 menit. Pinset  dan  jarum ose disterilkan dengan cara memijarkan pada api bunsen [5].

## Penyiapan Bakteri Uji
Bakteri uji Escherichia coli dan Staphylococcus aureus diinokulasi  dalam  media  pertumbuhan  NA  dan diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  24  jam.  Kemudian bakteri dibuat suspensi ke dalam larutan NaCl dan diukur kekeruhannya dengan spektrofotometer pada λ =580 nm dan  transmitannya  ditepatkan  pada  T=25%  dengan larutan NaCl sebagai blanko.

## Penyiapan Jamur Uji
Jamur uji Candida albicans diinokulasi dalam media pertumbuhan PDA dan diinkubasi pada suhu 24 0 C selama 48  jam.  Kemudian  jamur  dibuat  suspensi  ke  dalam larutan  NaCl  dan  diukur  kekeruhannya  dengan spektrofotometer  pada λ =530  nm  dan  transmitannya
ditepatkan  pada  T=25%  dengan  larutan  NaCl  sebagai blanko.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri ini dilakukan dengan menggunakan  metode  difusi  agar.  Sebanyak  1,5  mL bakteri  dicampur  dengan  15  mL  Nutrien  Agar  pada petridish.  Setelah  menjadi  padat,  kertas  cakram diletakkan  di  atas  media  kemudian  ditetesi  larutan  uji sebanyak 10 µL. Prainkubasi selama 30 menit pada suhu kamar  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 37 0 C. Setelah 24 jam diukur zona bening yang berada di sekitar cakram sebagai diameter hambatnya. Pembanding yang digunakan tetrasiklin sebagai kontrol positif dan pelarut DMSO sebagai kontrol negatif.

## Uji Aktivitas Antijamur
Pengujian  antijamur  ini  dilakukan  dengan menggunakan metode difusi agar. Sebanyak 50 µL jamur dicampur  dengan  10  mL  NA  pada  petridish.  Setelah menjadi  padat,  kertas  cakram  diletakkan  di  atas  media kemudian  ditetesi  dengan  larutan  uji  sebanyak  10  µL. Prainkubasi selama 30 menit pada suhu kamar kemudian diinkubasi selama 48 jam pada suhu 24 0 C. Setelah 48 jam diukur  zona  bening  yang  berada  di  sekitar  cakram sebagai  diameter  hambatnya.  Pembanding  yang digunakan  ketokonazol  sebagai  kontrol  positif  dan pelarut DMSO sebagai kontrol negatif.

## Pemisahan Senyawa Fraksi Aktif
Fraksi  aktif  yang  didapatkan  dari  uji  aktivitas antimikroba dilakukan telaah kandungan senyawa kimia. Pemisahan  fraksi  aktif  dilakukan  dengan  kromatografi lapis  tipis  dengan  eluen  yang  tepat  kemudian menggunakan  KLT  preparatif dan dikerok.  Noda  utama akan  dilakukan  identifikasi  menggunakan  penampak bercak  Dragendroff  (alkaloid),  Lieberman-Burchard (steroid/  triterpenoid),  FeCl 3 (tanin)  dan  NH 3 (asam fenolat).

## Uji Kemurnian Isolat
Isolat  yang  didapat  pada  KLT  preparatif  kemudian dilakukan  uji  kemurnian  menggunakan  kromatografi lapis tipis dengan berbagai eluen.

## Karakterisasi Isolat Murni
Isolat murni akan dilakukan karakterisasi menggunakan UV-Vis dan FTIR.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Preparasi Sampel
Kulit durian bagian dalam diambil dari bagian luar, kemudian dibersihkan dan dicuci, kemudian dikeringkan pada  suhu  kamar.  Pemotongan  menjadi  ukuran  lebih kecil  dikarenakan  untuk  memperluas  permukaan sehingga membantu pelarut untuk mengekstraksi secara maksimal  senyawa-senyawa  yang  terdapat  dalam  kulit durian.  Pengeringan  tidak  di  bawah  matahari  langsung dikarenakan dapat mempengaruhi kandungan senyawa- senyawa dalam kulit durian.

## Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan  metode maserasi. Kulit durian dimaserasi dengan pelarut etanol sampai  bening  dengan  penggantian  pelarut  selama  24 jam. Etanol yang dibutuhkan untuk maserasi sebanyak 21 liter.  Filtrat  yang  diperoleh  dipekatkan  dengan menggunakan rotary  evaporator hingga  didapatkan ekstrak kental etanol kulit durian. Ekstrak yang diperoleh sebesar  187,89  gram  sehingga  rendemen  9,392%. Ekstrak  etanol  yang  diperoleh  kemudian  dilakukan fraksinasi  berturut-turut  dengan  pelarut  n-heksana, kloroform, etil asetat, dan metanol dengan menggunakan  kromatografi  cair  vakum  dengan  fase diam silika gel GF 254 . Filtrat yang diperoleh dari masing- masing  pelarut  kemudian  dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator sehingga  didapatkan  fraksi  kental  n- heksana, kloroform, etil asetat, dan metanol.

## Penapisan Fitokimia
Pendekatan  secara  penapisan  fitokimia  meliputi analisis kualitatif kandungan dalam tumbuhan terutama kandungan  metabolit  sekunder  yang  merupakan senyawa bioaktif seperti alkaloid, flavonoid, triterpenoid, saponin, tanin dan kuinon [6].
Hasil dari penapisan fitokimia menunjukkan bahwa serbuk  kulit  durian  mengandung  saponin,  flavonoid, tanin,  kuinon,  dan  steroid/triterpenoid  sedangkan ekstrak  etanol  kulit  durian  mengandung  saponin, flavonoid,  tanin,  kuinon,  steroid/triterpenoid,  dan alkaloid.  Hasil  penapisan  fitokimia  ditunjukkan  pada tabel 1.

## Tabel 1: Hasil Penapisan Fitokimia Serbuk dan Ekstrak Etanol Kulit Durian
Hasil  penapisan fitokimia  menunjukkan  hasil  yang sama seperti kandungan ekstrak etanol kulit kapuk yaitu mengandung  flavonoid,  tanin,  alkaloid,  steroid,  dan triterpenoid  dimana  kapuk  memiliki  family  yang  sama dengan durian yaitu family Bombacaceae [7].

## Uji Aktivitas Antimikroba
Uji aktivitas antimikroba ekstrak etanol dan fraksi- fraksinya  menggunakan  metode  difusi  agar,  daerah bening  di  sekeliling  cakram  menandakan  tidak  adanya bakteri  yang  tumbuh  menunjukkan  bahwa  sampel mempunyai  aktivitas  menghambat  pertumbuhan mikroba  dengan  konsentrasi  1%  pada  masing-masing sampel.  Uji  aktivitas  antimikroba  dilakukan  terhadap bakteri gram positif Staphylococcus aureus , gram negatif Escherichia  coli ,  dan  jamur Candida  albicans .  Hasil  uji aktivitas antimikroba ditunjukkan pada tabel 2, 3 dan 4
Tabel 2: Diameter hambat ekstrak dan fraksi kulit Durio zibethinus terhadap Bakteri Staphylococcus aureus
Tabel 3: Diameter hambat ekstrak dan fraksi kulit Durio zibethinus terhadap Bakteri Escherichia coli
Tabel 4. Diameter hambat ekstrak dan fraksi kulit Durio zibethinus terhadap Jamur Candida albicans
Pada tabel 2, 3 dan 4 menunjukkan hasil uji aktivitas antimikroba  sampel  kulit Durio  zibethinus pada konsentrasi  1%,  fraksi  paling  aktif  ditunjukkan  pada fraksi  etil  asetat  yang  mempunyai  diameter  hambat paling  besar  daripada  fraksi  yang  lain  dalam  uji penghambatan  bakteri  ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli )  dan  jamur Candida  albicans. Perbedaan kemampuan  daya  hambat  dikarenakan  perbedaan pelarut  dengan  perbedaan  kandungan  senyawa  kimia. Setelah  diketahui  fraksi  paling  aktif  yaitu  fraksi  etil asetat  kulit  durian  maka  selanjutnya  dilakukan identifikasi kandungan senyawa di dalam fraksi tersebut.

## Pemisahan Senyawa dalam Fraksi Aktif
Pemisahan  senyawa  dalam  fraksi  aktif  etil  asetat kulit  durian  menggunakan  teknik  kromatografi  lapis tipis (KLT). Penggunaan KLT disertai dengan penampak bercak  spesifik  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa metabolit  sekunder.  Penampak  bercak  yang  digunakan meliputi  pereaksi  Dragendrof,  FeCl 3 ,  amonia,  dan pereaksi  Liebermann-Burchard.  Hasil  yang  diperoleh dari  penyemprotan  penampak  bercak  bahwa  fraksi  etil asetat  mengandung  senyawa  asam  fenolat,  alkaloid, tanin dan triterpenoid.
Pemisahan  komponen  senyawa  dalam  fraksi  etil asetat  (fraksi  E)  dilakukan  perlakuan  pendahuluan menggunakan KCV dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak etil asetat : n-heksana (7:3). Setelah diperoleh beberapa  fraksi  yaitu  fraksi  E.1,  E.2,  E.3,  E.4  dan  E.5, diambil  fraksi  yang  mempunyai  noda  yang  sama  yang paling  dominan  yaitu  fraksi  E.2  untuk  mempermudah proses  isolasi  senyawa,  isolasi  menggunakan  KLT preparatif  dengan  fase  diam  silika  gel  GF 254 dan  fase gerak etil asetat : n-heksana (6:4). Hasil KLT preparatif ditunjukkan pada gambar 1.
Gambar 1. Profil KLT preparative fraksi E.2 dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak etil asetat : n- heksana (6:4) diamati dalam lampu (a) UV 254 (b) UV 365
Berdasarkan hasil KLT preparatif di atas, terdapat 4 pita pada fraksi E.2 diamati dalam lampu UV 254 dan UV 365 , Rf dan warna pita ditunjukkan pada tabel 5
Tabel 5: Hasil KLT preparatif fraksi E.2 dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak etil asetat : n-heksana (6 : 4)
Hasil  KLT  perparatif  dilakukan  uji  kemurnian terhadap 4 pita pada fraksi E.2 tersebut dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak etil asetat : n-heksana (6:4) diamati dalam lampu UV 365 ditunjukkan pada gambar 2.
Gambar 2. Profil KLT uji kemurnian fraksi E.2 dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak etil asetat : n- heksana (6:4) diamati dalam lampu UV 365 (a) E.2.1 (b)E.2.2 (c) E.2.3 (d) E.2.4
Hasil uji kemurnian fraksi E.2 menunjukkan adanya noda yang dominan yaitu noda dengan warna biru muda diamati dalam UV 254 yang terdapat pada pita E.2.2 tetapi pita  tersebut  belum  murni  sehingga  dilakukan  isolasi menggunakan  KLT  preparatif.  Hasil  KLT  preparatif ditunjukkan pada gambar 3.
Gambar 3. Profil KLT preparatif pita E.2.2 dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak etil asetat : n- heksana (6:4) diamati dalam lampu UV 254 .
Hasil KLT preparatif pada gambar 3, pita yang akan diuji  kemurnian  lebih  lanjut  yaitu  pita  E.2.2.2 dikarenakan  pita  E.2.2.2  menunjukkan  pita  yang dominan dalam fraksi aktif etil asetat.

## Uji Kemurnian Isolat E.2.2.2
Isolat  E.2.2.2  yang  diperoleh  dari  hasil  KLT preparatif dilakukan uji kemurnian dengan menggunakan  KLT  dengan  beberapa  perbandingan eluen. Hasil uji kemurnian ditunjukkan pada gambar 4
Gambar 4. Uji kemurnian isolat E.2.2.2 dengan metode KLT menggunakan berbagai eluen, (a) etil asetat:n- heksana (6:4) Rf 0,76 (b) etil asetat:kloroform (6:4) Rf 0,75 (c) metanol:kloroform (9:1) Rf 0,86
Berdasarkan  hasil  uji  kemurnian  pada  pengamatan lampu  UV 365 menunjukkan  adanya  1  noda  sehingga disimpulkan  bahwa  isolat  E.2.2.2  telah  murni.  Isolat E.2.2.2  dalam  pelarut  etil  asetat  kemudian  diuapkan untuk  menghilangkan  pelarut  kemudian  dihasilkan serbuk  isolat  E.2.2.2  berwarna  putih  yang  selanjutnya dilakukan analisis menggunakan spektrofotometer UV- Vis dan FTIR.

## Karakterisasi Isolat E.2.2.2
Isolat  E.2.2.2  dianalisis  terlebih  dahulu  dengan penampak bercak spesifik untuk mengetahui kandungan senyawa  metabolit  sekunder.  Penampak  bercak  yang digunakan  meliputi  pereaksi  Dragendrof,  FeCl 3 ,  uap amonia,  dan  pereaksi  Liebemann-Burchard.  Isolat E.2.2.2 berwarna biru pada UV 365 dan setelah pengamatan dengan  penampak  bercak  uap  amonia  menjadi  warna biru  terang,  diduga  dalam  golongan  senyawa  asam fenolat  yaitu  asam  ferulat  [6].  Hasil  penampak  bercak isolat E.2.2.2 ditunjukkan pada gambar 5.
Gambar 5. Profil KLT isolat E.2.2.2 dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak etil asetat : n-heksana (6:4) diamati dalam lampu UV 365 (a) isolat E.2.2.2 sebelum diuapi amonia (b) isolat E.2.2.2 setelah diuapi
amonia Isolat E.2.2.2 dilakukan analisis dengan spektrofotometer  UV-Vis  untuk  mengetahui  panjang gelombang  maksimum  dari  isolat  E.2.2.2  dapat  dilihat pada gambar 6.
Gambar 6. Spektra UV-Vis isolat E.2.2.2
Berdasarkan  gambar  6,  hasil  spektra  UV-Vis  isolat E.2.2.2  diketahui  pada  panjang  gelombang  205  nm  dan 236 nm menunjukkan transisi π ke π* yang merupakan serapan  kuat  dari  cincin  benzena  dan  270-300  nm menunjukkan  transisi  dari  elektron  n  ke  π*  yang merupakan serapan lemah dari C=O [8].
Isolat E.2.2.2
dilakukan analisis dengan spektrofotometer FTIR untuk mengetahui adanya gugus fungsi.  Hasil  spektrum  dari  FTIR  dapat  dilihat  pada gambar 7 berikut.
Hasil  spektrum  FTIR  isolat  E.2.2.2  menunjukkan serapan  pada  bilangan  gelombang  3446,85  cm -1 merupakan  vibrasi  ulur  OH  diperkuat  dengan  serapan 1398,15 cm -1 yang merupakan OH tekuk. Adanya serapan pada  bilangan gelombang  2925  cm -1 merupakan  vibrasi ulur  CH  alifatik  (asimetri)  dan  bilangan  gelombang 2854,03 cm -1 merupakan serapan vibrasi ulur CH alifatik (simetri) dan 1398,15 cm -1 merupakan vibrasi tekuk CH 3 . Keberadaan gugus asam karboksilat ditunjukkan serapan pada  bilangan  gelombang  1740,74  cm -1 merupakan vibrasi  ulur  C=O  dan  serapan  pada  1114,71  cm -1 yang merupakan C-O asam karboksilat.
Adanya  gugus  aromatik  ditunjukkan  serapan  pada bilangan  gelombang  900  cm -1 merupakan  vibrasi  tekuk keluar  bidang  =C-H,  diperkuat  dengan  serapan  pada 1463,59  cm -1 yang  merupakan  vibrasi  ulur  C=C  dan serapan  pada  835  cm -1 dan  723,3  cm -1 yang  merupakan substitusi  aromatik.  Gugus  alkena  ditunjukkan  serapan pada  bilangan  gelombang  1649,18  cm -1 .  Keberadaan gugus eter ditunjukkan serapan pada panjang gelombang 1177,14 cm -1 yang merupakan C-O eter. Pola serapan FTIR ditunjukkan pada Tabel 6.
Tabel 6: Pola serapan FTIR isolat E.2.2.2
Hasil  analisis  FTIR  isolat  E.2.2.2  menunjukkan adanya  gugus  fungsi  O-H,  C-H  alifatik,  C=O  asam karboksilat, C=C aromatik, substitusi aromatik, dan C-O eter.
Berdasarkan  hasil  KLT  dengan  penampak  bercak, analisis UV-Vis dan analisis FTIR, isolat E.2.2.2 diprediksi merupakan  asam  fenolat  sehingga  dilakukan  analisis KLT  dengan  pembanding  senyawa-senyawa  asam fenolat  standar  yaitu  asam  ferulat,  asam  kafeat,  dan asam galat yang ditunjukkan pada gambar 8.
Gambar 8. Profil KLT isolat E.2.2.2 dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak etil asetat : n-heksana (6:4) diamati dalam lampu UV 365 (a) isolat E.2.2.2 (b) asam ferulat (c) asam kafeat (d) asam galat
Berdasarkan  gambar  8  menunjukkan  bahwa  isolat E.2.2.2  merupakan  golongan  asam  fenolat  yaitu  asam ferulat  karena  isolat  E.2.2.2  mempunyai  Rf  yang  sama dengan asam ferulat standar yaitu 0,76, kemudian untuk
memperkuat bahwa senyawa tersebut merupakan asam ferulat maka dilakukan ko-kromatografi yaitu menambahkan larutan standar pada sampel ditunjukkan pada gambar 9.
Gambar 9. Profil KLT isolat E.2.2.2 dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak etil asetat : n-heksana (6:4) diamati dalam lampu UV 365 (a) isolat E.2.2.2 (b) isolat+asam ferulat (c) asam ferulat
Hasil ko-kromatografi menunjukkan Rf yang sama yaitu  0,76  maka  diprediksi  bahwa  isolat  E.2.2.2 merupakan  asam  ferulat.  Struktur  asam  ferulat ditunjukkan pada gambar 10.

## Gambar 10. Struktur asam ferulat

## 4. Kesimpulan
Fraksi  paling  aktif  kulit  durian  yang  berpotensi sebagai  antimikroba  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli dan  jamur Candida  albicans yaitu fraksi  etil  asetat.  Analisis  isolat  E.2.2.2  dari  fraksi  etil asetat  kulit  durian  dengan  spektrofotometer  UV-Vis menunjukkan panjang gelombang 205 nm, 236 nm dan 270-300 nm, analisis spektofotometer FTIR menunjukkan  adanya  gugus  O-H,  =C-H  aromatik,  C=C aromatik,  substitusi  aromatik,  C=O  asam  karboksilat, C=C alkena dan C-O eter dan KLT dengan standar asam fenolat  diprediksi  bahwa  isolat  E.2.2.2  merupakan golongan senyawa asam fenolat yaitu asam ferulat.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  Moh Djaeni, AP Aji Prasetyaningrum, Kelayakan biji durian  sebagai  bahan  pangan  alternatif:  Aspek nutrisi dan tekno ekonomi, Riptek , 4, 11, (2010) 37-
45
[2]  Vimolmas Lipipun, Nantawan Nantawanit, Sunanta Pongsamart,  Antimicrobial  activity  (in  vitro)  of polysaccharide  gel  from  durian  fruit-hulls, Songklanakarin J Sci Technol , 24, 1, (2002) 31-38
[3]  Manoharan  Sivananthan,  Manoharan  Elamaran,  In vitro  evaluation  of  antibacterial  activity  of chloroform  extract  Andrographis  paniculata  leaves and  roots,  Duriozibethinus  wood  bark  and Psidiumguajava  leaves  against  selected  bacterial strains, Int J Biomol Biomed , 3, 1, (2013) 12-19
[4]  Norman R. Farnsworth, Biological
and phytochemical  screening  of  plants, Journal  of
Pharmaceutical  Sciences ,  55,  3,  (1966)  225-276 http://dx.doi.org/10.1002/jps.2600550302
[5]  Nur Atikah, Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Herba Kemangi  (Ocimum  americanum  L)  terhadap Staphylococcus  aureus  dan  Candida  albicans, Farmasi UIN Jakarta, Jakarta [6]  Jeffrey Barry Harborne, Metode fitokimia, Padmawinata  K,  S.  I,  Institut  Teknologi  Bandung, Bandung, 1987.
[7]  CA  Anosike,  OB  Ogili,  ON  Nwankwo,  EA  Eze, Phytochemical screening and antimicrobial activity of  the  petroleum  ether,  methanol  and  ethanol extracts  of  Ceiba  pentandra  stem  bark, Journal  of
Medicinal  Plants  Research ,  6,  46,  (2012)  5743-5747
http://dx.doi.org/10.5897/JMPR12.978
[8]  Hardjono Sastrohamidjojo, Spektroskopi, Yogyakarta: Liberty , (1991)