## ANALISIS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK
N-HEKSANA DAN ETILASETAT KULIT  ALPUKAT (Persea ameicana Mill) MENGGUNAKAN METODE DPPH
Putri Rahmi 1* ,Salfauqi Nurman 1,2
1 Program studi Farmasi Universitas Ubudiyah Indonesia, Banda aceh
2 Program studi Teknologi industri Pertanian,Usm,Banda aceh *Email:Rama74248@gmail.com,tlpn:085361126180 ABSTRAK
Antioksidan berperan aktif dalam mengurangi kelebihan radikal bebas yang pada umum nya bekerja sebagai  penangkap  radikal  bebas  dan  mencegah  terjadinya  reaksi  berantai.  Antioksidan  dapat bersumber dari tanaman seperti alpukat. Tujuan dalam penelitian ini adalah mengetahui antioksidan dari ekstrak n-heksan dan ekstrak etilasetat kulit alpukat menggunakan metode DPPH ( 2,2-Difenil- 1-pikrilhidrazil ).  Proses  ekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  n-heksan  dan etilasetat. Identifikasi senyawa aktif ekstrak senyawa kulit alpukat menggunakan uji fitikimia dan uji aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH dengan variasi konsentrasi ekstrak 25, 50, 100 ppm. Absorbansi aktivitas antioksidan diukur menggunakan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 517nm. Rendemen ekstrak n-heksan kulit alpukat 6,66% dan rendemen ekstrak etilasetat yaitu  8,33%.  Hasil  identifikasi  fitokimia  ekstrak  n-heksan  kulit  alpukat  memiliki  senyawa  aktif saponin, fenolik/tanin, terpenoid sedangkan ekstrak etilasetat manggandung senyawa aktif alkaloid, flavanoid  dan  fenolik.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  n-heksan  kulit  alpukat  sangat  lemah  dengan nilai  IC 50 1058,181  ppm  sedangkan  ekstrak  etilasetat  kulit  alpukat  memiliki  aktivitas  antioksidan sedang dengan nilai IC 50 123,72 ppm. Berdasarkan penelitian ini dapat di simpulkan bahwa ekstrak etilasetat memiliki aktivitas antioksidan  lebih besar di bandingkan ekstrak n-heksan.
Kata kunci: Kulit alpukat ,n-heksan, etilasetat, antioksidan, DPPH

## ABSTRACT
Antioxidants play an active role in reducing excess free radicals that generally work as a free radical catcher radicals and prevent the occurrence of chain reactions. Antioxidants can  be sourced from plants such as avocados. The purpose of this research was to know the antioxidant of n-hexan extract and        the        avocado etilacetate extract        using        DPPH        method          ( 2,2-Diphenyl-1- picrylhydrazil ). The extractionprocess uses a  maceration  method with  n-hexane and ethylacetate solvents. Identification  of  active  compound  of  avocado  leaf  extract  using  phytochemical  test  and antioxidant  activity  test  using  DPPH  method  with  pariasi  extract  concentration  25,  50,  100 ppm.  Absorbance  of  antioxidant  activity  was  measured  using  UV-Vis  spectrophotometry  at 1.517nm  wavelength.  The  yield  content  of  avocado  leafextract  was  6.66%  and  the  yield  of ethylacetate  extract  was  8.33%.  the  results  of  phytochemical  identification  of  n-hexan  saponin extract, phenolic /  tannin, terpenoid while ethylacetate extract manggandung active compound of alkaloid,  flavanoid  and  phenolic  activity  of  antioxidant  n-  hexan  extract  of  avocado  skin  is  very weak  with  the  value  of  IC 50 1058,181  ppm  while  avocado  ethylacetate  leaf  extract  have  activity medium antioxidant with IC value 50 123,72 ppm. Based on this research, it can be concluded that ethylacetate extract is greater than n-hexane extract.
Keywords : Avocado skin, n-hexane, ethylacetate, antioxidant, DPPH
apabila terjadi di  dalam  tubuh akan dapat menimbulkan  kerusakan-kerusakan  yang
I. PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  suatu molekul  yang  memiliki  elektron  tidak berpasangan dalam orbital terluarnya sehingga sangat reaktif. Radikal ini cenderung mengadakan reaksi  berantai  yang berlanjut dan terus menerus. Tubuh manusia memiliki sistem pertahanan endogen terhadap  serangan  radikal  bebas  terutama terjadi  melalui  peristiwa  metabolisme  sel normal  dan  peradangan  (Wahdaningsih, 2011). Jumlah radikal bebas dapat mengalami  peningkatan  yang  diakibatkan
Journal of Healtcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
faktor  stres,  radiasi,  asap  rokok  dan  polusi lingkungan  menyebabkan  sistem  pertahanan tubuh  yang  ada  tidak  memadai,  sehingga senyawa  radikal  tersebut  akan  merusak  sel dan  menyebabkan  berbagai  penyakit  seperti liver, kanker, dan kondisi yang berhubungan dengan  umur  seperti  alzheimer  (Hernani, 2006).
Antioksidan  berperan  aktif  dalam menanggulangi kelebihan radikal bebas yang pada  umumnya  bekerja  sebagai  penangkap radikal bebas dan mencegah terjadinya reaksi berantai. Berdasarkan sumbernya, antioksidan  dibagi  menjadi  dua  yaitu antioksidan  alami  dan  antioksidan  sintetik. Antioksidan  alami  yang  berasal  dari  dalam tubuh  seperti  enzim  superoksida  dismutase, glutation dan katalase, sedangkan antioksidan alami  yang  berasal  dari  luar  tubuh  seperti vitamin C, vitamin E, β-karoten, xantofil dan flavonoid  (Nugraheni,  2007).  Antioksidan sintetik seperti  butil  hidroksil anisol (BHA), butil  hidroksilbtoluen  (BHT),  propil  galat (PG)  dan  tert-butil  hidrokuinon  (TBHQ) penggunaannya  selain  memberikan  efek manfaat,  ternyata  dalam  jangka  waktu  lama dan  pemberian  yang  terus  menerus  dapat menimbulkan efek samping yang berbahaya, salah  satunya  yaitu  dapat  meningkatkan terjadinya  karsinogenesis  (Amarowiez,dkk 2000).  Oleh  karena  itu  diperlukan  sumber antioksidan alami yang mudah diperoleh dan ketersediaannya  di  alam  dalam  jumlah  yang melimpah  juga  mempunyai  efek  samping yang  rendah  dibanding  antioksidan  sintetik (Nugraheni,  2007).  Salah  satu  sumber antioksidan  yang  berasal  dari  alam  adalah kulit alpukat ( Persea americana Mill) (Vinha dkk, 2013).
Kandungan  ekstrak  kulit  alpukat memiliki  kandungan  karotein,  fenolik,  dan flavonoid yang lebih tinggi dari pada daging buahnya. Senyawa fenolik yang ditemukan di dalam  kulit  alpukat  menunjukkan  adanya aktivitas  antioksidan  secara  in  vitro  hasil antioksidan  yang  di  peroleh  aktivitas antioksidan  (43%)  dari  yang  diperoleh  dari kulit  (35%)  dan  daging  buah  (23%)  (vinha, 2013).  Malanggi, et  al (2012)  Pernah melakukan  penelitian  penentuan  kandungan tanin dan uji aktivitas antioksidan esktrak biji buah alpukat dengan metode folin ciocalteau, sedangkan  antioksidan  di  ukur  dengan metode  DPPH  (2-difenil-1,1-pikrilhidrazil)
hasil  yang  diperoleh  menunjukan  total  tanin biji 117mg/kg dan hasil antioksidan (92,970%).

## II. METODE PENELITIAN
1. Bahan
Bahan utama yang digunakan adalah kulit  alpukat  yang  di  peroleh  dari pasar  tradisonal  aceh,  n-heksan, etilasetat,  metanol  p.a,  DPPH, reagen  Liberman-Bourchard  (asam asetat  glasial-  H 2 SO 4 (P)),  reagen Mayer (kalium tetra iodo merkurat), reagen Dragendorf (Bi(NO 3 ) 3 )  dan reagen Wagner (I2  dalam  KI), akuades,  fraksi  metanol,  HCL, etanol 80%.
2. Alat Peralatan  yang  digunakan
dalam penelitian ini yaitu blender, erlenmeyer,  gelas  ukur,  labu ukur,  gelas  kimia,  corong  pisah, timbangan  analitik, tabung  reaksi, rak tabung, alat maserasi, perangkat vakum rotary evaporator, oven, Untuk instrument yang digunakan berupa Spektrofotometri  UV-Vis  (Model UV mini-1240) 3. Analisis Fitokimia
a. Uji saponin fraksi yang tidak larut di tambahkan air  lalu  dikocok  kuat  sampai menghasilkan busa stabil (Ramyasree, dkk 2012). b. Uji alkaloid
Pertama  sekali,  diambil  sampel segar  sebanyak  4  gram,  di  tambahkan amoniak.  Lalu  di  tambahkan  HCL  dan kloroform. Ambil  bagian atasnya,  lalu di uji dengan  reagen  Dregendroft,  meyer  dan wagner. Dikatakan positif  alkaloid  jika pada reagen  Dragendroft  menghasilkan  endapan merah  bata,  reagen  wagner  menghasilkan endapan coklat dan reagen mayer menghasilkan  endapan  putih  (Dephour 2009). c. Uji flavanoid
Diambil sampel 10 gram di ekstraksi dengan metanol lalu di pekatkan dan di partisi dengan  heksan.  Diperoleh  dua  fraksi,  fraksi metanol dan fraksi heksan. Fraksi metanol di ekstrak  dengan  20  mL  etanol  80%  dan
Journal of Healtcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
ditambahkan  0,5  gram  serbuk  Mg  HCL. Dikatakan positif flavanoid jika menghasilkan warna merah muda/ung u(Claudia, 201). d. Uji antosianin
Ekstrak  pekat  yang  tersisa  dari identifikasi  antosianin  ditambah  dengan akuades  hingga  konsentrasi  HCl  dalam ekstrak  mencapai  2  M.  Dipanaskan  dalam waterbath dalam  tabung  reaksi  untuk menghidrolisis ikatan glikosida dalam antosianin (Wiwit dkk,2016). e. Uji terpenoid/steroid
Di ambil sampel sebanyak 4 gram, di haluskan dan diekstraksi dengan metanol lalu di saring, filtrat yang di peroleh diupkan dan di  partisi  dengan  heksan.  Di  peroleh  fraksi yang larut dan fraksi yang tidak larut. Reagen LB(liebermann  Burchard)  jika  warnanyay hujai  beararti  positif  steroid  dan  jika warnanya merah, berarti positif terpenoid.
f. Uji Fenolik
Larutan ekstrak metanol kulit alpukat di totolkan pada plat KLT dan dielusi dengan menggunakan pelarut n-butanol, asam asetat, air,  kemudian  di  semprot  dengan  reagen FeCL 3 .  Positif  mengandung  fenol  jika  noda berwarna  haju,merah  ungu,biru,  atau  hitam yang kuat (Harbone, 1987)
4. Uji Aktifitas Antioksidan Dengan Metode DPPH.
1. Pembuatan Larutan DPPH 0,4 mM Serbuk  DPPH  (BM  394,32  g/mol) ditimbang  dengan  teliti  sebanyak  7,9 mg, selanjutnya dilarutkan dengan metanol p.a dalam labu takar 50 mL, segera tutup dengan alumunium foil kemudian  dihomogenkan.  Simpan larutan dalam botol gelap dan selalu dibuat  yang  baru  setiap  akan digunakan. 2. Pembuatan Variasi Larutan Ekstrak Pembuatan variasi konsentrasi ekstrak  n-heksan  dan  etilasetat dibuat  larutan  induk  500  ppm  yaitu dengan  melarutkan  5  mg  total ekstrak kedalam metanol dan dicukupkan 10 mL. Selanjutnya dari larutan  induk  dibuat  lagi  variasi konsentrasi larutan 25 ppm, 50 ppm dan  100  ppm  untuk  diuji  aktifitas antioksidan berturut-turut Tabel 3.3.
Tabel 3.3 Variasi konsentrasi sampel
Konsentr asi ppm Larut an induk yang di ambil Larut an DPPH (mL) Keteran gan 25 50 100 250 µL 500 µL 1000 µL 1 1 1 Volume di cukupkan 5mL metanol

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Uji  fitokimia  merupakan  uji kulitatif  untuk  mengetahui  senyawa  aktif yang  terkandung  dalam  sampel.  Golongan senyawa  metabolit  sekunder  yang  di  uji berupa alkaloid, flavanoid, saponin, fenolik/tanin,  terpenoid.  Hasil  pengujian fitokimia  ekstrak  n-heksan  kulit  alpukat  dan ekstrak  etilasetat  kulit  alpukat  dapat  dilihat pada (Tabel 4.2).
Tabel 4.2 Data hasil uji fitokimia kulit alpukat
N o Jenis Uji N- heksa n Etil aseta t 1 Alkaloid - + 2 Flavanoid - + 3 Saponin + - 4 Fenolik/tani n + +
5 Terpenoid + -
Dari hasil uji fitokimia yang telah di lakukan  Ekstrak  n-heksan  kulit  alpukat memiliki  senyawa  saponin,  fenolik  dan terpenoid  sedangkan  etilasetat  kulit  alpukat memiliki  senyawa  alkaloid,  flavanoid  dan fenolik.  Dari  hasil  tersebut  terlihat  bahwa ekstrak  n-heksan  memiliki  senyawa  aktif yang  berperan  sebagai  antioksidan  yaitu terpenoid  dan  tanin  sedang  kan  ekstrak etilasetat  memiliki  senyawa  yang  bersifat antioksidan yaitu tanin.
Flavonoid merupakan senyawa polar  karena  mempunyai  sejumlah  gugus
Journal of Healtcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
hidroksil.  Oleh  karena  itu,  umumnya flavonoid  larut  dalam  pelarut  polar  seperti etanol.  Etanol  berfungsi  sebagai  pembebas flavonoid dari bentuk garamnya. Penambahan asam sulfat 2 N berfungsi untuk protonasi  flavonoid  hingga  terbentuk  garam flavonoid. Setelah penambahan bubuk magnesium, hasil positif ditunjukkan dengan perubahan  warna  larutan  menjadi  hitam kemerahan.  Warna  hitam  kemerahan  yang dihasilkan  menandakan  adanya  flavonoid akibat  dari  reduksi  oleh  asam  klorida  pekat dan magnesium (Harborne, 1987).
Pada  hasil  uji  saponin,  masing- masing sampel menunjukan hasil yang positif yakni  memiliki  busa  yang  stabil  selama  10 menit.  Saponin  merupakan  bentuk  glikosida dari  sapogenin  sehingga  akan  bersifat  polar. Saponin  adalah  senyawa  yang  bersifat  aktif permukaan dan dapat menimbulkan busa jika dikocok  dalam  air  (Kristanti  dkk,  2008). Timbulnya busa pada uji saponin menunjukkan adanya glikosida yang mempunyai  kemampuan  untuk  membentuk buih  dalam  air  yang  terhidrolisis  menjadi glukosa dan senyawa lainnya (Marliana dkk,
2005).
2-pikrilhidrazil) .  Metode  DPPH  berperan sebagai  radikal  bebas  akan  bereaksi  dengan antioksidan membentuk DPPH-H dan radikal antioksidan. Antioksidan akan  mendonorkan atom  hidrogennya  kepada  radikal  DPPH untuk  melengkapi  kekurangan  elektron  dan membentuk  radikal  antioksidanyang  lebih stabil (Ginting, dkk, 2107).
Hasil  reaksi  antara  DPPH  dan antioksidan dapat diamati dengan perubahan larutan dari ungu menjadi kuning. Perubahan warna  menunjukan  bahwa  DPPH  telah tereduksi  oleh  proses  donasi  hidrogen  atau elektron  dari  senyawa  antioksidan  sehingga warnanya  berubah dari  violet ke kuning dan DPPH  tidak  memberikan  serapan  pada panjang  gelombang  517  nm  Hasil  dapat dilihat  pada  tabel  4.3  dan  hubungan konsentrasi inhibisi dapat lihat pada Gambar 4.3 dan 4.4.
Tabel 4.3 Hasil uji antioksidan.
Tanin  Tanin  dibagi  menjadi  dua golongan  dan  masing-masing  golongan memberikan  reaksi  warna  yang  berbeda terhadap  FeCl 3 1%.  Golongan  tannin terhidrolisis  akan  menghasilkan  warna  biru kehitaman  dan  tannin  kondensasi  akan menghasilkan  warna  hijau  kehitaman.  Pada saat  penambahannya,  diperkirakan  FeC1 3 bereaksi  dengan  salah  satu  gugus  hidroksil yang  ada  pada  senyawa  tannin.  Hasil  reaksi itulah  yang  akhirnya  menimbulkan  warna. Pereaksi  FeCl 3 digunakan  secara  luas  untuk mengidentifikasi  senyawa  fenol  termasuk tannin.  Oleh  sebab  itu,  diduga  bahwa  hasil positif  juga  dapat  disebabkan  oleh  adanya senyawa fenolik lain dalam sampel (Harborne,  1987).  Menurut  Shahidi  dan Marian (1995) pengujian total fenol bertujuan untuk  menentukan  total  senyawa  fenolik yang  terkandung  di  dalam  sampel,  sehingga diduga  bila  kandungan  senyawa  fenolik  di dalam sampel tinggi maka aktivitas antioksidannya akan tinggi.
Hasil Uji aktivitas antioksidan pada ekstrak  kulit  alpukat  dalam  penelitian  ini dilakukan dengan metode DPPH (1,1-difenil-
N o Sa m pel Abs. Kon trol DP PH Kon sent rasi (pp m) Abs orb ansi rata - rata %i nhi bisi IC 5 0 (p pm )
1 Ek str ak he ks an a kul it alp uk at
0,83 1 25 0,75 0 9,7 4 105 8,1 81 50 0,73 2 11, 91 100 0,72 4 12,
87
2 Ek str ak etil ase tat kul it alp uk at 0,83 1 25 0,80
7 2,8 8 123 ,72 50 0,60 0 27, 79 100 0,52 2 37, 18
Journal of Healtcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
Journal of Healtcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
15 10 5 0 y = 0,0385x + 9,26 R² = 0,8413
0 50 100 150 konsentrasi (ppm) Gambar 4.3 Hubungan konsentrasi dengan
% inhibisi Ekstrak n-heksana Kulit Alpukat.
50 40 y = 0,4188x - 1,815 R² = 0,8142
30 20 10 0 0 50
100 150 konsentrasi (ppm) Gambar  4.4 Hubungan  konsentrasi  dengan
% inhibisi Ekstrak Etil Asetat Kulit Alpukat

## IV. KESIMPULAN
1. Hasil  uji  fitokimia  n-heksan  memiliki senyawa saponin dan terpenoid
sedangkan  etilasetat  memiliki  senyawa alkaloid, fenolik dan flavonoid
2. Ekstrak  n-heksan  kulit  alpukat  memliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 1058,181  ppm  dan  Ekstrak  etilasetat kulit alpukatt memiliki aktivitas
antioksidan dengan nilai IC 50 123,72 ppm.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Amarowiez,  R,  Naczk,  M,  dan Shahidi, T.2000 Antioxidant Activity of Crude
Binawati Ginting, Mustanir, Hira
Helwati, Lydia Septa Desiyana,
Eralisa1, Rohmat Mujahid. 2107 antioxidant activity of n-hexane extract of nutmeg plants from south aceh province.
Dehpour, A.A. Ebrahimzadeh, M.A, Fazel,  N.S,  dan  Mohammad,  N.S, 2009, Farmasi  Universitas  Islam Indonesia, Yogyakarta.
Harborne,  J.B.  1987. Metode Fitokimia , Penerbit ITB : Bandung.
Hernani  dan  Raharjo.  M.  2006. Tanaman  Berkhasiat  Antioksidan, Penebar Swadaya, Jakarta.
Hidayat.W.  2008. Manfaat  Alpukat
(online) (http://www.google.com)
diakses 20 Maret 2015. Farmakope Indonesia. Kumalaningsih,         S,          2006. Antioksidan Alami-Penangkal Radikal Bebas. Molyneux,  P.  2004. The  Use  of  the Stable Free Radical Diphenylpicryl- hidrazyl(DPPH) for Estimating Antioxidant Activity, Songklanakarin  J.  Sci.  Technol.  26 (2). 211-219 Nugraheni,  2007, Perbandingan AktivitasAntioksidan Ekstrak Metanol  dan  Ekstrak  Etanol  Daun Tempuyung  (Sunchus  arvensis  L.) serta PenentuanEC50 dengan Metode DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil), Skripsi,  36- 39,Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi,Semarang Purwaningsih,S. 2102 Aktivitas antioksidan dan komposisi manusia kimia keong merah ilmu kelautan.
Wiwit D, F, Taslim E, Kuniyoshi S, Sri  F, 2016,  Kegiatan  antioksidan Moringa oleifera ekstrak Indones. J.
Chem
Yamlean,  Paulina.V.Y  dan  Widaya A,L.  2016. Aktivitas  Antibakteri Daun  Kembang  Sepatu  (Hibiscus sinensis  L.)  Terhadap  Luka  yang Terinfeksi  Bakteri  Staphylococcus aureus  pada  Kelinci  (Oryctolagus cuniculus). Program  Studi  Farmasi
FMIPA UNSART
% in h ib is i %I n h ib is i
Journal of Healtcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X