Versi Online:
Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan)
http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446

## PENGARUH SIRUP GULA CAIR HASIL HIDROLISIS ENZIMATIS DARI SAGU
( Metroxylon sp.) SEBAGAI MEDIA FERMENTASI TERHADAP KADAR SEFALOSPORIN C
Effect of Glucose Syrup Results Enzymatic Hydrolysis of Sago (Metroxylon sp.) as Media Fermentation Against Cephalosporins C.
Soraya, Sahri Yanti*, Mikhratunnisa *Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Teknologi Sumbawa *email: sahri.yanti@uts.ac.id .

## Diterima 2 Maret 2019 / Disetujui 22 Mei 2019

## ABSTRACT
Liquid  sugar  syrup  which  made  by  sago's  starch  material  can  be  use  as  fermentation  media  for sefalosporin. The hydrolisis is a one way to obtain a liquid sugar syrup itself. The enzymatically hydrolisis divided into two process, they are Liquification and sacharification. The research purpose to understanding the way of hydrolisis  sago's  starch  by  enzymatically.  Next,  glucose  quality  result.  Then  the  influence  of  the  syrup  by enzymatically hydrolisis as fermentation media toward quality of sefalosporin. The sample of this research was taken from PT. Selat Panjang, Riau. In Liquification process, the result showed that the maximum glucose quality was obtained about 3874 ppm from concentration of starch and enzym (60g/L: 300µL) meanwhile, the minimum glucose  quality  was  obtained  about  3501ppm  from  concentration  of  starch  and  enzym  (40g/L:  200µL).  Next, sacharification  process  (lasting  24-48  hours)  maximum  glucose  quality  was  obtained  about  12070  ppm  with duration 48hours of hydrolisa. The addition liquid syrup of hydrolisis with five levels concentration, there are 1.5; 2.0; 2.5; 3.0, and 3.5% affected sefalosporin quality. The maximum quality of sefalosporin about 3709 ppm by concentration  lyquid  syrup  GS  3.0%  and  minimum  quality  about  2044  ppm  by  concentration  lyquid  syrup  Gs 1.5%. Meanwhile, by the positive control (glucose monohidrat) with similar treatment, the sefalosporin's quality was about 2170 ppm.
Key words: Sago, Sago Starch, Enzymatic Hydrolysis, Fermentation, Cephalosporins C.

## ABSTRAK
Sirup gula cair dari pati sagu dapat digunakan sebagai media fermentasi sefalosporin. Sirup gula cair dapat  dengan cara  dihidrolisis. Hidrolisis  pati  sagu  secara  enzimatis  meliputi  proses likuifikasi  dan  sakarifikasi. Penelitian bertujuan mengetahui cara  hidrolisis pati  sagu secara  enzimatis dan kadar glukosa  yang dihasilkan, serta pengaruh sirup gula cair hasil hidrolisis enzimatis sebagai media fermentasi terhadap kadar Sefalosporin C. Sampel pati sagu diperoleh dari PT Selat Panjang, Riau. Hasil analisis menunjukkan bahwa pada tahap likuifikasi (2  jam)  diperoleh  kadar  glukosa  maksimum  sebesar  3874  ppm  dari  konsentrasi  pati  sagu  dan  enzim (60g/L:300µL). Sedangkan kadar glukosa minimum diperoleh sebesar 3501 ppm dari konsentrasi pati sagu dan enzim  (40g/L:200µL).  Pada  tahap  sakarifikasi  (24-48  jam)  kadar  glukosa  maksimum  diperoleh  sebesar  12070 ppm  dengan  waktu  hidrolisa  48  jam.  Dalam  penambahan  sirup  gula  cair  hasil  hidrolisis  dengan  lima  level konsentrasi  sirupgula cair  1,5; 2,0; 2,5; 3,0 dan 3,5%  mempengaruhi kadar Sefalosporin  C.  Kadar maksimum Sefalosporin  C  dihasilkan  sebesar  3709  ppmdari  konsentrasi  sirup  gula  cair  GS  3,0%  dan  kadar  minimum diperoleh sebesar 2044 ppm dari konsentrasi sirup gula cair GS 1,5%. Sedangkan pada kontrol positif (glukosa monohidrat) dengan perlakuan yang sama diperoleh kadar Sefalosporin C sebesar 2170 ppm.
Kata kunci: Sagu, Pati Sagu, Hidrolisis enzimatis, Fermentasi,Sefalosporin C.

## PENDAHULUAN
Sagu  merupakan  tanaman  tropis  Asia Tenggara,  yang  jika  dibandingkan  dengan tanaman penghasil karbohidrat lain, kandungan  patinya  relatif  tinggi.  Sagu  tidak memerlukan penanaman kembali karena tunas
dapat  tumbuh  secara  terus-menerus.  Sagu juga mampu bertahan hidup pada lingkungan ekstrim  seperti  tanah  berawa.  Potensi  pati sagu  tertinggi  mencapai  25  ton  pati kering/ha/tahun.  Jumlah  produksi  pati  sagu tiga hingga empat kali lebih tinggi dari beras, jagung,  atau  gandum  dan  sekitar  tujuh  belas
Versi Online:
Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan)
http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
kali lebih tinggi dibandingkan dengan singkong (Karim et al.,  2008).  Singkatnya, saat  kondisi lingkungan
dan ekonomi
yang memprihatinkan,  sagu  adalah  tanaman  yang unggul untuk pertanian berkelanjutan.
Batang sagu dapat diolah menjadi pati sagu.Namun  penggunaan  pati  alami (native) secara  langsung  menyebabkan  beberapa permasalahan  yaitu  retrogradasi 1 ,  sineresis 2 , kestabilan  rendah,  dan  rendahnya  ketahanan pasta  terhadap  pH  dan  suhu.Oleh  karena itu, perlu  dilakukan  modifikasi  pati  baik  secara fisik,  kimia,  dan  enzimatik.Pemanfaatan  pati sebagai produk farmasi dan media fermentasi dilakukan  melalui  biokonversi  salah  satunya hidrolisis (Azmi et al., 2017).
Metode  hidrolisis  dapat  diaplikasikan dalam  produksi  sirup  glukosa  atau  sirup  gula cair.  Triyono  (2008)  mengemukakan  bahwa, bahan  baku  pembuatan  sirup  glukosa  adalah pati.  Pati  sagu  memiliki  kandungan  amilosa 27% dan 73% amilopektin.
Gambar 1. Struktur amilosa 3 dan amilopektin 4
Amilopektin yang tinggi membuat pati sagu  dapat  dihidrolisis  secara  kimiawi  dan enzimatis. Enzim aktif dalam media berbentuk
1 Retrogradasi: kristalisasi kembalimatriks pati yang telah tergelatinisasi akibat suhu.
2 Sineresis: keluarnya cairan dari gel pati yang dipotong/disimpan lama
3 Amilosa: polimer dari glukosa, terbentuk dari ikatan 1-4 glikosidik yang tidak bercabang
4 Amilopektin: polimer dari glukosa, terbentuk dari ikatan 1-4 glikosidik dan 1-6 glikosidik yang bercabang
gel  (Misset  dan  Bhat,  2013).  Menurut  Tester dan  Karkalas  (2016)  sebagian  besar  hidrolisis asam  telah  diganti  dengan  enzimatis menggunakan enzim α-amilase dan glukoamilase  yang  mampu  memberikan  95% lebih banyak yield glukosa.
Secara enzimatis telah banyak dilakukan  hidrolisis,  dan  memberikan  hasil yang  baik  diantaranya  oleh  Rofiq et  al., (2013),  hidrolisis  pati  sagu  menggunakan enzim α-amilase dan
dekstrozyme menghasilkan gula pereduksi tertinggi berturut-turut  sebesar  7%  (b/v)  dan  17,1% (b/v).  Hidrolisis  enzimatis  dalam  pembuatan sirup gula cair terjadi melalui dua tahap yaitu likuifikasi  dan  sakarifikasi.  Pada  tahap likuifikasi,  enzim  α-amilase  memecah  molekul pati  dalam  rantai  pada  ikatan  1,4  glikosidik menjadi  molekul  yang  lebih  kecil  meliputi glukosa,  maltosa,  dekstrin  dan  oligosakarida yang  ditandai  dengan  rendahnya  viskositas larutan. Sedangkan tahap sakarifikasi memecah  ikatan  α-1,6  glikosidik  secara  acak pada dekstrin menjadi glukosa.
Sirup  gula  cair  dapat  digunakan sebagai  media  fermentasi  produksi  antibiotik Sefalosporin.  Sefalosporin  adalah  antibiotik golongan β-laktam  yang  dihasilkan  oleh kapang Acremonium  chrysogenum. Efektivitas Sefalosporin terhadap bakteri gram positif dan negatif lebih unggul jika dibandingkan dengan antibiotik golongan β-laktam lainnya (Penisilin)
(Ruiz et  al.,  2010)  .Untuk  menghasilkan Sefalosporin dalam jumlah maksimum, kapang Acremonium  chrysogenum  membutuhkan nutrisi  yang  sangat  komplek  diantaranya karbon, nitrogen, dan beberapa macam asam amino  (Srivastava ,  2006).  Prabandari  dkk
(2017) menjelaskan bahwa glukosa menempati  posisi  kedua,  terbaik  setelah molases dengan produksi Sefalosporin C 3696 mg/L,  meningkat  sebesar  1,48  kali  dan maksimal hanya menghasilkan 2487 mg/L. Melihat  besarnya  peluang  untuk memanfaatkan  pati  sagu,  perlu  dilakukan penelitian  pengaruh  sirup  gula  cair  hasil hidrolisis enzimatis dari sagu ( Metroxylon sp.) sebagai  media  fermentasi  terhadap  kadar Sefalosporin  C.  Tujuannya  antara  lain mengetahui  cara  hidrolisis  pati  sagu  menjadi
O OH H H H H O CH 2 OH O O H H H O H H OH H CH 2 OH O O H H H H OH H CH 2 O H H H O H H OH H CH O CH CH 2 OH H CH CH O OH Amilopektin O H H H OH H OH H O O H H H OH H OH H O O OH H H H OH H OH H CH 2 OH CH 2 OH CH 2 OH OH amilosa
Versi Online:
Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan)
http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
sirup gula cair secara enzimatis, kadar glukosa yang dihasilkan,serta pengaruh sirup gula cair sebagai
media fermentasi terhadap kadar Sefalosporin C.

## BAHAN DAN METODE

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  antara  lain:  beaker glass, spatula, microwave, shaker water bath, stirrer, hot plate, thermometer, HPLC, tabung vial,  tabung  eppendorf  dan  tatakan,  mikro pipet,  tip  200  µL  dan  1  mL,  botol  schott, timbangan analitik, piring timbang, labu takar, cawan  petri,  vortex,  lemari  es,  sentrifus, corong,  dan  pengaduk.  Alat  yang  digunakan dalam  pembuatan  media  untuk  fermentasi Sefalosporin  C  antara  lain:  piring  timbang, timbangan  analitik,  mikro  pipet,  tip,  glass bead,  pH  meter,  erlenmeyer,  tutup  sumbat, autoklaf,  pipet  pasteur,  stirrer,  tabung  reaksi, syringe  0,20  µm,  jarum  suntik,  hot  plate, ampul, laminar air flow, pipet ukur, bulb, glass beaker,  spatula,  cawan  petri,  inkubator, shaker,  mikroskop,  tabung  evendorf,  tabung sentrifus,  jarum  ose,  api  bunsen,  dan sentrifus.
Bahan  yang  digunakan  ialah  pati  sagu produksi  PT.  Selat  panjang  Riau-Indonesia ,enzim  liquozyme  supra  4.5x  novozymes, enzim extenda peak 1,5x novozymes, kalsium klorida  (CaCl 2 ),  natrium  azida,  air  suling, sabouroud maltose agar, bacteriogical peptone, malt extract, agar bacteriogical, CSL lokal (Corn Step Liquor), sukrosa,paraffin cair, DL-Metionin,  ammonium  asetat,  soybean  oil, sirup  gula  cair  sagu  hasil  hidrolisis,  corn starch, KH 2 PO 4 , urea, maltodextrin, magnesium sulfat, CaCO 3 , trace element stok, air  RO  (reverse  osmosis)  dan  glukosa monohidrat.
Produksi Sefalosporin  C  dari  sirup  gula cair hasil hidrolisis pati sagu Tahap kultivasi kapang
Media  MMP 1 (Maltose  Malt  Peptone)
digunakan menumbuhkan kapang A. chrysogenum.  Isolat  murni  A.  chrysogenum ialah  kultur  koleksi  Balai  Bioteknologi  BPPT diregenerasikan  dan  ditumbuhkan  selama  7 hingga  14  hari  dalam  inkubator  suhu  28°C.
Keberhasilan ditunjukkan dengan terbentuknya  koloni  berwarna  kuning  muda dengan diameter sekitar 1-2 mm (Onions dan Brady,  1987).  Seluruh  bahan  ditimbang, sabouroud  maltose  agar  19,20  g/mL, bacteriogical peptone 0,15 g/mL, malt extract 6,96  g/mL,  agar  bacteriogical  2,83g/mL  dan air  RO  300  mL.  Selanjutnya,  semua  bahan dimasukkan  dalam  gelas  beaker  dan tambahkan  air  RO  sebanyak  300  mL, kemudian  dihomogenkan.  setelah  mencapai pH  7  ditambahkan  NaOH.  Selanjutnya, tambahkan  agar  bacteriogical  dilarutkan menggunakan  microwave  dan  sterilisasi  pada suhu 121ºC selama 25 menit. Isolat kapang A. Chrysogenum ditumbuhkan dengan mengambil  1  mL  larutan  fisiologis  dan distribusikan  ke  dalam  ampul  kemudian dikocok. Selanjutnya sebanyak 0,1 mL disebar pada dmedia agar miring (slant) dalam cawan petri. Lalu, inkubasi pada suhu 28ºC selama 7- 14 hari.

## Tahap vegetatif
Merupakan  tahap  peremajaan  atau perbanyakan  kapang A.  Chrysogenum.  Tahap awal  pembuatan  media  vegetatif  dilakukan dengan  mencampur  semua  bahan  vegetatif, lalu  menambahkan  air  RO  hingga  200  mL. Ukur  pH  awal  dan  pH  akhir  hingga  mencapai pH  7  dengan  menambahkan  NaOH  atau  HCl. Dimasukkan  masing-masing  30  mL  ke  dalam Erlenmeyer. ditambahakan 3 buah glass bead dan  soybean  oil  0,6  mL.  Sterilisasi  121ºC selama  25  menit.  Setelah  itu  tambahkan  1,5 mL  DL-Metionin  masing-masing  30  mL  ke dalam  media.  Tahap  kedua  yaitu  inokulasi kapang A.chrysogenum  ke  dalam  media vegetatif.  Sebanyak  6  mL  air  fisiologis, dimasukkan  ke  dalam  tabung  kultur  agar miring dan disuspensikan, selanjutnya diinkubasi  dalam orbital  shaker  pada  suhu 28°C  dengan  kecepatan  220  rpm  selama  72 jam  (3  hari).  Tahap  ketiga  yaitu  perhitungan spora menggunakan haemocyitometer 5 . Sebanyak 1 mL suspense kapang A.chryogenum  dimasukkan  ke  dalam  tabung berisi  9  mL  air  fisiologis,  kemudian  divorteks.
5 Haemocyitometer: alat penghitung jumlah sel spora
Versi Online:
Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan)
http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
Selanjutnya  larutan  diambil  dan  diteteskan  di atas alat haemositometer. Dilakukan pengamatan  spora 6 dibawah  mikroskop perbesaran  500x.  Perhitungan  spora  sebagai berikut:

## Jumlah spora (CFU/mL)
=  N x 104 x 2.5 x 1
𝑓𝑎𝑘𝑡𝑜𝑟 𝑝𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟𝑎𝑛
Ket: N= Jumlah sel yang ditemukan

## Tahap fermentasi
Media  fermetasi  akan  digunakan  oleh kapang A.chrysogenum  untuk  menghasilkan Sefalosporin  C.  Jenis  fermentasi  yang digunakan  yaitu  fermentasi  kultur  terendam (Sub  merged  culture).  Pada  penelitian  ini tahap pertama yang dilakukan ialah pembuatan media fermentasi dengan penambahan  sirup  gula  cair  sagu  dan penambahan  glukosa  monohidrat  untuk kontrol  positif.  Tahap  awal  ditimbang  semua bahan untuk media fermentasi, tambahkan air hingga  500  mL,  ditambahkan  sirup  gula  cair dengan  beberapa  level  konsentrasi  1,5%, 2,0%,  2,5%,  3,0%  dan  3,5%.  Cek  pH  awal dan  atur  pH  menjadi  6.  Masukkan  30  mL media  ke  masing-masing  erlenmeyer  serta  3 buah  glass  bead.  Selanjutnya,  sterilisasi dengan  autoklaf  suhu  121  ºC  selama  25 menit.  terakhir  ditambahkan  DL-Metionin sebanyak  1,5  mL  ke  dalam  media  secara aseptis.  Pembuatan  media  fermentasi  untuk kontrol  positif  (glukosa  monohidrat)  sama halnya  dengan  pembuatan  media  fermentasi sebelumnya.
Selanjutnya  proses  inokulasi 7 kapang dari  media  vegetatif  ke  media  fermentasi. Inokulum  hasil  inkubasi  pada  media  vegetatif diinokulasi  sebanyak  3  mL  ke  dalam  media fermentasi.  Setelah  itu,  media  fermentasi diinkubasi  pada  inkubator  kocok  dengan kecepatan 220 rpm pada suhu 25ºC selama 5 hari.
6 Spora: kumpulan sel yang dapat dibiakkan
7 Inokolasi: menumbuhkan mikroba dalam media untuk melihat variasi jenis mikroba

## Panen  ekstrak  kasar  dan  analisis  kadar sefalosporin
Panen dilakukan dengan cara sentrifugasi kaldu  media  fermentasi  sebanyak  10  mL, kecepatan  3000  rpm  selama  20  menit,suhu 4°C. Supernatan diambil sebagai ekstrak kasar dan  disentrifugasi  kembali  pada  suhu  4°C kecepatan  15000  rpm  selama  15  menit. Supernatan  dianalisis  menggunakan  HPLC untuk  melihat  kadar Sefalosporin  C.Panjang gelombang 254 nm dan kolom C-18 (4.6 x 150 mm).

## Rancangan Percobaan Penelitian
Rancangan  percobaan  pertama  yang digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL).  Konsentrasi  pati  sagu  dan  volume enzim  yang  terdiri  dari  3  level  yaitu (40g/L:200µL, 50g/L:250µL, dan 60g/L:300µL).  Percobaan  ini  dilakukan  pada tahap  likuifikasi  (2  jam)  dan  sakarifikasi  (24 jam  dan  48  jam)  sehingga  menghasilkan  6 unit percobaan seperti pada Tabel 1.

## Tabel 1. Rancangan percobaan
Ulangan Konsentrasi pati sagu dan volume enzim 40g/L:200µL  50g/L:250µL  60g/L:300µL 1 Y 11 Y 21 Y 31 2 Y 12 Y 22 Y 32
Rancangan  percobaan  yang  digunakan pada  penelitian  pengaruh  variasi  sirup  gula cair  sagu  hasil  hidrolisis  terhadap  kadar Sefalosporin Cadalah Rancangan Acak Lengkap  (RAL).  Faktor  yang  digunakan  yaitu konsentrasi  sirup  gula  cair  sagu  yang  terdiri dari  5  level  yaitu  (1,5;  2,0;  2,5;  3,0  dan 3,5%).  Percobaan  dilakukan  masing-masing sebanyak 5 kali ulangan, sehingga menghasilkan 25 unit percobaan.
Tabel 2. Parameter perlakuan penelitian Ulangan Konsentrasi sirup gula cair GS- 1,5% GS- 2,0% GS- 2,5% GS- 3,0% GS- 3,5% 1 Y 11 Y 21 Y 31 Y 41 Y 51 2 Y 12 Y 22 Y 3 Y 42 Y 52 3 Y 13 Y 23 Y 33 Y 43 Y 53 4 Y 14 Y 24 Y 34 Y 44 Y 54 5 Y 15 Y 25 Y 35 Y 45 Y 55
Keterangan : GS : Gula Sagu
Versi Online:
Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan)
http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
Dengan penetapan rancangan
didasarkan  pada  asumsi  bahwa  semua  faktor yang  bukan  perlakuan  dibuat  dan  dianggap seragam,  dengan  model  matematika  sebagai berikut :
Keterangan: Yij: Nilai pngamatan pada perlakuan ke-i dan ulangan ke- j;  Ʈi:  Nilai  tengah  umum; 𝜀 ijk:  Galat  percobaan  pada perlakuan ke-i dan ulangan ke-j; i ∶ Perlakuan; j: Ulangan

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hidrolisis Pati Sagu Secara Enzimatis
Hidrolisis  pati  sagu  secara  enzimatis dilakukan  dengan  dua  tahap  yaitu  likuifikasi dan  sakarifikasi.  Likuifikasi  merupakan  proses pencairan  gel  pati  untuk  memperoleh viskositas  yang  lebih  rendah  dengan  cara menghidrolisis  pati  menjadi  molekul-molekul sederhana. Sedangkan sakarifikasi merupakan proses  pemecahan  pati  menjadi  gula  reduksi. Proses  pendidihan  dengan  air  RO  bertujuan untuk meratakan panas ke seluruh bagian air sehingga  mempermudah  dan  mempercepat berlangsungnya  proses  hidrolisis.  Sementara penambahan CaCl 2 bertujuan untuk mempercepat  reaksi  enzim  α-amilase  yang sebagian besar merupakan kelompok metaloenzim.  Senyawa  atau  ion  yang  dapat meningkatkan  kecepatan  reaksi  enzimatis. Kofaktor  tersebut  dapat  berupa  ion-ion anorganik seperti Zn, Fe, Ca, Mn, Cu, Mg atau dapat  pula sebagai  molekul  organik  kompleks yang disebut koenzim.
Pada  penelitian  ini  pH  berada  pada kisaran  5,0  yang  berarti  pH  telah  mencapai range  optimum.  Sesuai  dengan  pendapat Nurkhotimah  (2017)  di  luar  pH  optimum kenaikan  pH  (basa)  atau  penurunan  pH (asam)  menyebabkan  penurunan  aktivitas enzim  dengan  cepat  dan  bahkan  kehilangan aktivitas  katalitiknya.  Hal  ini  terjadi  karena struktur  tiga  dimensi  enzim  mulai  berubah, sehingga  substrat  (pati  sagu)  tidak  dapat berikatan  dengan  sisi  aktif  enzim  akibatnya proses katalitik tidak dapat berlangsung secara sempurna.  Secara  visual  terjadi  perubahan substrat  yang  semula  berbentuk  gel,  berubah menjadi  encer  setelahpenambahan  enzim  ɑ-
amilase.  Kelarutan  yang  tinggi  menunjukkan bahwa  pati  akan  mudah  larut  dan  terbawa bersama air (Musatto, et al., 2008).
Gambar 1. (a) Gelatinisasi (b) likuifikasi (c) sakarifikasi
Sakarifikasi dimulai dengan memanaskan waterbath  hingga  suhu  60ºC,  karena  enzim AMG  (amiglukosidase)  extenda  peak  1.5X bekerja  pada  suhu  optimum  60-63°C  dengan pH  optimum  4,5-6,5.  Selama  sakarifikasi sampel ditutup untuk menghindari penguapan. Secara visual terlihat bahwa pati sagu tahapan sakarifikasi  terlihat  jernih,  lebih  encer  dan terjadi pengurangan volume. Pengamatan pati sagu  sebelum  dan  setelah  hidrolisis  terlihat dalam  Gambar  1.  Untuk  menghentikan  reaksi enzimatis,  larutan  dipanaskan  pada  suhu  98- 105 ℃ selama 10 menit.
Analisis Glukosa Hasil Hidrolisis Enzimatis Pegujian  glukosa  melbatkan  proses sentrifugasi dan diuji dengan HPLC.
Sentrifugasi  adalah  proses  pemisahan  larutan bedasarkan  berat  partikel,  partikel  yang densitasnya lebih tinggi daripada pelarut akan turun  (sedimentasi)  dan  partikel  yang  lebih ringan  akan  mengapung  ke  atas  (Gopala, 2016).  Hasil  HPLC  dapat  dilihat  pada Gambar 2. Dengan EP (Konsentrasi Enzim dan Pati)
Gambar 2.  Rata-rata  kadar  glukosa  hasil hidrolisis 3501 9182 8632 3744 10078 10176 3874 11906 12070 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 2 24 48 ka da r gl uko sa ( ppm ) waktu hidrolisa (jam) EP (40g/L;200µl) EP (50g/L:250µl) EP(60g/L:300µL)
Y ij = µ + Ʈ i + ε ij
Versi Online:
Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan)
http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
Dalam Gambar 2 terlihat bahwa kadar glukosa meningkat
seiring dengan meningkatnya  konsentrasi  substrat  dan volume  enzim.  Pada  tahap  likuifikasi  dengan waktu  hidrolisa  2  jam  kadar  glukosa maksimum  diperoleh  sebesar  3874  ppm  atau 3,87  g/L  dari  konsentrasi  pati  sagu  dan volume  enzim  (60g/L:300µL).  Sedangkan kadar minimum diperoleh dari konsentrasi pati sagu  dan  volume  enzim  (40g/L:200µL) sebesar  3501  ppm.  Hal  ini  sesuai  dengan pendapat  Budiyanto et  al.  (2016)  yang menyatakan tingginya konsentrasi enzim akan berpengaruh  terhadap  kecepatan  reaksinya. Lebih  lanjut  lagi  konsentrasi  substrat  sedikit, kecepatan  kerja  enzim  menjadi  rendah. Sebaliknya  jika  konsentrasi  substrat  banyak, kerja enzim menjadi cepat dan pada keadaan substrat  berlebih,  kerja  enzim  tidak  sampai menurun  tetapi  konstan.  Enzim  α-amilase menghidrolisis  substrat  terdiri  dari  dua tahap.Tahap  pertama  degradasi  amilosa menjadi  maltosa  dan  maltotriosa  yang  terjadi secara acak. Degradasi ini terjadi sangat cepat dan  diikuti  dengan  menurunnya  viskositas dengan cepat. Tahap kedua terjadi pembentukan  glukosa  dan  maltosa  sebagai hasil  akhir  dan  tidak  acak.  Sedangkan  pada molekul  amilopektin  kerja  α-amilase  akan menghasikan glukosa, maltosa, oligosakarida 8 .
Pada  tahap  sakarifikasi,  penambahan enzim  AMG  (amiglukosidase)  extenda  peak 1.5X  sebesar  75µL  dilakukan  setelah  proses likuifikasi.  Sebelum  memasuki  tahap  tersebut, suhu  dalam  shaker  waterbath  dikondisikan hingga  suhu  60ºC.  Pada  Gambar  1  terlihat bahwa  setelah  penambahan  AMG  kadar glukosa  maksimum  diperoleh  sebesar  12070 ppm  dari  konsentrasi  pati  sagu  dan  volume enzim (60g/L:300µL) dalam waktu 48 jam. Hal ini membuktikan semakin lama waktu hidrolisa maka konsentrasi kadar glukosa juga semakin meningkat.  Sebagaimana  pendapat  Heryanto (1992) yang menyatakan semakin lama enzim
8 glukosa (monosakarida), maltose (disakarida), dekstrin (oligosakarida)
bekerja pada suhu optimal (enzim termofilik), maka  reaksi  enzim  berlangsung  lebih  cepat.
Setiap peningkatan suhu 1°C dapat meningkatkan  rata-rata  reaksi  lebih  10% hingga  mecapai  suhu  optimal,  setelah  itu enzim  menjadi  tidak  aktif.  Pada  tahap sakarifikasi  dekstrin  hasil  likuifikasi  akan dihidrolisis  lebih  lanjut  oleh  enzim  tunggal glukoamilase  maupun debranching  enzyme untuk dikonversi menjadi glukosa.
Pengaruh Sirup Gula Cair Hasil Hidrolisis Enzimatis  dari  Sagu  (Metroxylon  Sp.)
Sebagai Bahan Media Fermentasi Terhadap Kadar Sefalosporin C. Sebelum melakukan
penambahan hidrolisat  pati  sagu,  perlu  pengamatan morfologi kapang A. chrysogenum. Hal ini agar produk yang dihasilkan dalam jumlah optimum (Duan et  al.,  2011).  Pengamatan  morfologi juga dilakukan agar dapat melihat pembentukan fragmen hifa 9 yang membengkak  serta  kepadatan  arthospora selama  inkubasi  lima  hari.  Pertumbuhan kapang A.  chrysogenum  dapat  dilihat  melalui bentuk  morfologinya  seperti  terlihat  pada Gambar 3.
Gambar 3. Pengamatan morfologi (a) pra vegetatif dan (b) vegetative
Berdasarkan pengamatan morfologi dengan perbesaran 100x dan 400x terlihat pada tahap vegetatif,  kapang  yang  ditumbuhkan  pada media dengan penambahan sirup gula cair pati sagu (pravegetatif danvegetatif) menunjukkan misellium  menyebar  dengan  banyak  cabang,
9 Hifa: benang halus hasil perkecambahan spora
(C 6 H 10 O 5 )n nH 2 O (C 12 H 22 O 11 )n C 6 H 12 O 6 (C 6 H 10 O 5 )m a -amilase glukosa maltosa dekstrin air pati (amilopektin) + + + C 6 H 10 O 5 dekstrin H 2 O air
glukoamilase (C 6 H 12 O 6 )n glukosa +
Versi Online:
Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan)
http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
selain itu misellium juga cenderung lebih besar dan membengkak atau disebut arthospora. Hal ini  mengindikasikan  bahwa  inoculum  siap digunakan untuk fermentasi. Cao et al.,(2013) juga  memperjelas  bahwa  antibiotik  yang termasuk  metabolit  sekunder  dihasilkan  pada fase  stasioner,  pada  fase  tersebut  antibiotik dihasilkan dengan jumlah tertinggi.
Pertumbuhan  kapang  pada  fase  stasioner ditandai  dengan  perubahan  morfologi  hifa kapang  menjadi  bentuk  arthospora.  Hal  ini menjadi  acuan  bahwa  dengan  seiring pembengkakan  yang  terjadi  pada  hifa menandakan  hasil  metabolit  sekunder  yaitu antibiotik Sefalosporin  semakin  tinggi.  Untuk mengetahui  pertumbuhan  dan  perkembangan koloni  perlu  dilakukan  perhitungan,  agar diketahui  penyebaran  bakteri  yang  ada  pada bahan  salah  satunya  dengan  perhitungan haemocytometer.  Seperti  yang  dikemukakan oleh  Volk  (1993)  penentuan  jumlah  angka mikroorganisme  sangat  penting  dilakukan untuk  menetapkan  keamanan  suatu  sediaan farmasi  dan  makanan.  Metode  tersebut menghitung jumlah sel, massa sel, atau isi sel yang  sesuai  dengan  jumlah  sel.  Adapun  hasil perhitungan  jumlah  sel  dengan  faktor pengenceran  10 -1 diperoleh  jumlah  sel sebanyak 4,2 x 10 7 CFU/mL.
Dalam  pembuatan  media  fermentasi, sumber  karbon  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  ialah  sirup  gula  cair  sagu  hasil hidrolisis  dengan  beberapa  level  konsentrasi yaitu  (1,5%,  2,0%,  2,5%,  3,0%  dan  3,5%) dan  konsentrasi  glukosa  monohidrat  (kontrol) dengan  level  yang  sama.  Glukosa  merupakan senyawa  monosakarida  yang  umumnya bersifat  mudah  dimetabolisme  oleh  mikroba dibanding  gula  lainnya,  sehingga  disebut sebagai  substrat  primer.  Senyawa  ini merupakan  sumber  karbon  dan  energi  utama sebagian  besar  mikroba  serta  menjadi  titik awal  sebagian  besar  lintasan  metabolisme mikroba.
Inokulasi  kapang A.  chrysogenum, fermentasi curah ( batch) menggunakan sistem curah  yakni  sistem  fermentasi  tertutup  dan tidak  dilakukan  penambahan  substrat  saat fermentasi berjalan. Menurut Stanbury (2008) keuntungan  dari  metode batch  yaitu
produktivitas  tinggi,  waktu  fermentasi  cepat dan  efek  toksik  direduksi  pada  komponen media.  Dalam  proses  fermentasi,  aerasi  dan agitasi  merupakan  komponen  yang  penting untuk  mengatur  kandungan  oksigen  terlarut dalam  media  fermetasi  aerob  agar  bahan media  dan  oksigen  dapat  terdistribusi  secara merata.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Hwang  (2011)  untuk  mengatur  kandungan oksigen  terlarut  dalam  media  fermetasi aerob diperlukan alat penunjang aerator dan agitator karena  dapat  mengatur  kandungan  oksigen terlarut  sehingga  dapat  terdistribusi  lebih merata dan fermentasi menjadi optimal. Media untuk  perkembangbiakan  bakteri  harus  steril sebelum  digunakan  oleh  karena  itu  media fermentasi  sebelum  diinokulasikan  disterilisasi terlebih  dahulu  pada  autoklaf  suhu  121ºC selama  25  menit.  Begitu  pula  saat  proses inokulasi, perlu dilakukan secara aseptis untuk menghindari pencemaran udara yang mengandung banyak mikroorganisme.
Perbedaan  perlakuan  media  mempengaruhi Sefalosporin C yang dihasilkan oleh kapang A. chrysogenum,  sehingga  perlu  dilakukan pengujian  kadar Sefalosporin  C.  Metode pengujian  kadar Sefalosporin  C  menurut  Lu (2006)  yang  akurat  yaitu  dengan  metode HPLC.Rata-rata kadar Sefalosporin C dari sirup gula  cair  sagu  hasil  hidrolisis  enzimatis  dapat dilihat pada Gambar 4.
Berdasarkan Gambar 4 terlihat bahwa kadar Sefalosporin C maksimum diperoleh dari konsentrasi  sirup  gula  cair  sagu  GS  3,0% sebesar  3709  ppm.  Sedangkan  kadar minimum  diperoleh  dari  konsentrasi  GS  1,5% dengan kadar Sefalosporin C 2044 ppm. Tinggi dan rendahnya penambahan konsentrasi sirup gula cair mempengaruhi pertumbuhan kapang A. Chrysogenum. Sirup tersebut dimanfaatkan sebagai nutrient (sumber karbon).
Sebagaimana  pendapat  Srivastava  (2006) bahwa  dalam  menghasilkan Sefalosporin dalam  jumlah  maksimum  dibutuhkan  sumber karbon, nitrogen, dan beberapa macam asam amino di dalam media kultivasi. Namun jumlah glukosa  yang  berlebih  ternyata  kurang  tepat dalam  menghasilkan Sefaloporin.  Cao  et  al.,
(2013)  jumlah  glukosa  yang  berlebih  akan mendorong  pertumbuhan  yang  cepat,  namun
Versi Online:
Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan)
http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
kurang tepat jika digunakan dalam menghasilkan Sefalosporin,  yang  dihasilkan bukan  pada  fase  pertumbuhan  melainkan pada  fase  stasioner.  Dan  apabila  sirup  gula cair  sagu  GS  3,0%  dibandingkan  dengan kontrol  positif  (glukosa  monohidrat)  dengan konsentrasi yang sama menghasilkan Sefalosporin
C sebesar 3505 ppm.
Perbandingan dengan kontrol positif dilakukan untuk melihat jumlah rerata kadar Sefalosporin C  dengan  penambahan  sirup  gula  cair  hasil hidrolisis  enzimatis  hampir  sama  atau  tidak dengan  penambahan  glukosa  monohidrat (glukosa  murni).  Glukosa  monohidrat  yang merupakan  glukosa  murni  secara  langsung digunakan  sebagai  bahan  dalam  aktivitas metabolisme.Sedangkan  sirup  gula  cair  sagu yang  berasal  dari  pati  (karbohidrat  kompleks) tidak  hanya  memiliki  kandungan  glukosa  saja tetapi  juga  kandungan  gula  lainnya.  Hal  ini menyebabkan  kapang  masih  memiliki  sumber karbon  lainnya  untuk  dipakai  sebagai  media pertumbuhan  jika  glukosa  telah  habis digunakan.  Hal  ini  akan  mengakibatkan  sel tidak  terfokus  pada  pertumbuhannya  karena harus  memecah  gula  kompleks  lainnya menjadi senyawa yang lebih sederhana untuk dapat digunakan, sehingga ketika pertumbuhan  sel  terhambat  maka  sel  akan memasuki  fase  stasioner  saat  metabolit sekunder dihasilkan.
Gambar 4.  Analisis rata-rata kadar Sefalosporin C dari sirup gula cair sagu Berdasarkan kurva pertumbuhan kapang A.  chrysogenum  diketahui  produksi Sefalosporin C secara maksimum berada pada fase stasioner, oleh karena itu di dalam media ditambahkan senyawa yang dapat mempercepat  fase  pertumbuhan  yaitu  DL-
metionin.  DL-metionin  berfungsi  sebagai penginduksi  hifa  untuk  lebih  besar  sehingga fase  pertumbuhan  lebih  cepat.  Selain  itu, Kapang A.  chrysogenum  dalam  proses pembentukan hifa membutuhkan asupan nitrat untuk dapat tumbuh membesar dan menghasilkan Sefalosporin  C  dalam  jumlah optimum. Nitrat mempengaruhi
pembengkakan  hifa  sehingga  mempercepat kapang A.  chrysogenum  memasuki  fase stasioner  ketika Sefalosporin  C  optimum dihasilkan.  Sebagai  antibiotik, Sefalosporin dihasilkan  oleh  kapang  pada  akhir  fase pertumbuhannya  dengan  mengkatalis  enzim Sefalosporin  C  sintetase  (asetil  transferase), yang melibatkan transfer satu gugus asetil dari koenzim asetil  A  ke  gugus  hidroksimetil  atom C-3 pada deasetil sefalosporin C (Schmitt et al.
2004).  Enzim  yang  berperan  dalam  proses pembentukan Sefalosporin.  Menurut  Ruiz (2010)  enzim  yang  telah  dibentuk,  pada  fase akhir  pertumbuhan  kapang  akan  digunakan untuk mengkatalis Sefalosporin.
Parameter  pendukung  lain yang  perlu di  lakukan  untuk  mendukung  keabsahan pengaruh  sirup  gula  cair  terhadap  kadar Sefalosporin C GS 3,0% ialah pengukuran PMV (Packed  Mycelia  Volume),  pH,  gula  total  dan glukosa akhir. Dalam pengukuran PMV, jumlah sel  (biomassa)  dari  konsentrasi  GS  3,0% memiliki  rata-rata  PMV  sebesar  23,4%.  Hal tersebut  disebabkan  karena  sel  kapang  telah memasuki  fase  stasioner  dan  atau  fase kematian,  akibat  nutrisi  yang  terdapat  pada media telah berkurang dan mulai habis karena digunakan  oleh  sel  sebagai  nutrisi  dalam pertumbuhannya.Pada saat substrat mendekati  habis  dan  terjadi  penumpukan produk-produk  penghambat  maka  terjadi penurunan  laju  pertumbuhan.Pada  fase stasioner  konsentrasi  biomassa  mencapai maksimum.Setelah  fase  tersebut  terjadi  fase kematian
Dalam  pengukuran  pH  didapatkan  pH rata-rata  5,90  yang  umumnya  semakin  aktif mikroorganisme melakukan fermentasi semakin  tinggi  produk  yang  dihasilkan  baik produk  utama  maupun  produk  sampingan. Asam-asam  yang  dihasilkan  sebagai  produk sampingan  inilah  yang  membuat  pH  larutan
2044 3709 3505 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 GS 1,5% GS 2,0% GS 2,5% GS 3,0% GS 3,5% KP1,5%KP2,0%KP2,5%KP3,0%KP3,5% Sef al os por in C (ppm ) GS : Gula sagu  KP : Kontrol  positif
Versi Online:
Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan)
http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
semakin  rendah.  Dalam  pengukuran  kadar glukosa akhir didapatkan sebesar 9,74 g/L dari kadar  gula  total  46,8  g/L.  awal  fermentasi mikroorganisme  akan  memecah  sumber karbon  gula  sederhana  seperti  glukosa, setelah  glukosa  habis  selanjutnya  mikroba akan  memecah  substrat  yang  kompleks  yaitu pati  dalam  aktivitas  metabolisme  sel mikroba.Untuk  mengetahui  adanya  pengaruh penambahan  sirup  gula  cair  pati  sagu  hasil hidrolisis  terhadap  kadar Sefalosporin  C  yang dihasilkan,  perlunya  dilakukan  uji  analisa ragam  (ANOVA).  Adapun  hasil  uji  analisa ragam (ANOVA) dapat dilihat pada tabel
Tabel 3.  Uji ANOVA penambahan sirup gula cair sagu terhadap kadar
Sefalosporin C. Sumber Jumlah Kuadrat Db Kuadrat Tengah F hitung p- value Perlakuan  7138298.183  4 1784574.546  88.325 .000 Error 303070.367 15 20204.691 Total 7441368.550  19
Berdasarkan  Tabel  3  nilai  P-value  (0.00) lebih kecil dari nilai 𝜶 (0,05). Dengan demikian dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat  pengaruh penambahan  sirup  gula  cair  sagu  terhadap kadar Sefalosporin C. Selanjutnya, dilakukan uji lanjut  Duncan  untuk  melihat  perbedaan  rata- rata  penambahan  sirup  gula  cair  sagu terhadap kadar Sefalosporin C yang dihasilkan dari tahap fermentasi. Hasil uji lanjut Duncan perbedaan  rata-rata  sirup  gula  cair  sagu terhadap  kadar Sefalosporin  C  yaitu  pada sampel konsentrasi pati sagu 1,5%, 2,0%

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan dapat disimpulkan bahwa:
1. Proses hidrolisis pati sagu secara enzimatis meliputi proses likuifikasi, dan sakarifikasi. Proses  likuifikasi  menggunakan  beberapa konsentrasi  pati  sagu  sebesar  60  g/L dengan  konsentrasi  enzim  Liquozyme Supra  300  µL  pada  suhu  95-105°C,  pH 5,0-5,5  dengan  waktu  hidrolisa  2  jam. Sedangkan  sakarifikasi  menggunakan konsentrasi enzim 75 µL pada suhu 60°C,
pH 4,0-4,5 dengan waktu 48 jam. Setelah itu kadar glukosa dinalisis dengan HPLC
2. Hasil  pengujian  kadar  glukosa  secara enzimatis  pada  tahap  likuifikasi  optimum waktu hidrolisa 2 jam, kadar glukosa 3874 ppm  dari  konsentrasi  pati  sagu  dan volume  enzim  (60g/L:300µL).  Sedangkan kadar  minimum  diperoleh  sebesar  3501 ppm  dari  konsentrasi  pati  sagu  dan volume  enzim  (40g/L:200µL).  Pada  tahap sakarifikasi  kadar  glukosa  maksimum sebesar  12070  ppm  pada  waktu  hidrolisa 48 jam.
3. Kadar  maksimum Sefalosporin  C  diperoleh dari  penambahan  sirup  gula  cair sagu  GS 3,0%  sebesar  3709  ppm  dan  kadar minimum diperoleh sebesar 2044 ppm dari konsentrasi  GS  1,5%.  Kontrol  positif (glukosa  monohidrat)  dengan  perlakuan sama  (GS  3,0%)  diperoleh  kadar SefalosporinCsebesar 3505 ppm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimaksih  atas bentuan  semua  pihak  khususnya  Dosen Pembimbing,  Pihak  Dekanat  Fateta  UTS  dan Laboran  di  BPPT.  Tidak  lupa  disampaikan salalam  hormat  pada  orang  tua  serta  salam kompak  untuk  kawan-kawan  THP  angkatan 2014.

## DAFTAR PUSTAKA
Azmi,  A.S.,  M.I.A.  Malek  and  N.I.H.  Puad 2017.  A  review  on  Acid  and  Enzymatic Hidrolyses  of  Sago  Starch. Journal International Food Research 24: 265-273.
Budiyanto, A., M. Pujoyuwono dan N. Richana. 2016.  Optimasi  Proses  Pembuatan  Sirup Glukosa  Skala  Pedesaan. Teknologi  Pasca Panen: 28-35.
Cao, K., H. Altaba & K. Kalama. 2013. Nitrogen Source  Governs  the  Pattern  of  Growth and Prostinamycein Production in Streptomyces  Pristina  Espiralis. Journal Microbiology 1(147): 2447-2459.
Derosya, Vioni. Kasim, Anwar. 2017. Optimasi produksi maltodekstrin berbasis pati sagu menggunakan  a-amilase  dan  metode spray  drying. Jurnal  Teknologi  Pertanian Andalas 21(1).
Versi Online:
Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan)
http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
Duan, S., Y. Guoqiang, Z. Yanli, L. Hongfei, N. Weijia  &  S.  Meina.  2011.  Enhanced Cephalosporin  C  Production  With  a Combinational  Ammonium  Sulfateand DOBased  Soybean  Oil  Feeding. Journal Biochemical Engineering 6(11): 110–123.
Gopala,  J.  2016.  Pengaruh  Kecepatan Sentrifugasi  Terhadap  Hasil  Pemeriksaan Sedimen Urin pada Metode Konvensional. Skripsi.  Fakultas  Ilmu  Keperawatan  dan Kesehatan.  Universitas  Muhammadiyah Malang. Malang.
Hermiati,  E.,  J.i.  Azuma,  D.  Mangunwidjaja, T.C. Sunarti, O. Suparno and B. Prasetya. 2011.  Hydrolysis  Of  Carbohydrates  in Cassava  Pulp  and  Tapioca  Flour  Under Microwave  Irradiation. Indonesia  Journal of Chemistry 11(3): 2457-2469.
Heryanto,  T.E.  2012.  Penentuan  Aktivitas
Amilase  Kasar  Termofil  Bacillus  Subtilis Isolat Gunung Darajat Garut, Jawa Barat. Universitas Pendidikan Indonesia.
Repository: upi.ac.id.
Hwang,  K.  2011.  Aqueous  Two  Phase Extraction  (ATPE):  An  Attractive  and Economically  Viable  Technology  for Downstream  Processing  of  Aspergillus Oryzae Galactosidase. Journal Biochemistry 43: 1293-1299.
Misset,  W.  Wan-Nadiah  and  R.  Bhat.  2013.
Physiochemical  Properties,  Proximate Composition,  and  Cooking  Qualities  of Locally  Grown  and  Imported  Rice Varieties  Marketed  In  Penang,  Malaysia. Journal  International  Food  Research 3(20):1345-1351.
Nurkhotimah.  2017.  Produksi  Sirup  Glukosa dari  Pati  Sagu  Yang  Berasal  dari Beberapa  Wilayah  di  Indonesia .  Skripsi. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Onions,  R.  and  Brady.  1987.  The  Effect  of Heat  Moisture  Treatment  on  The Structure and Physicochemical Properties
of  Normal  Maize,  Waxymaize, Dull  Waxy Maize  and  Amylomaize  V  Starches. Journal Cereal Science 23:153-162.
Prabandari,  E.  E.,  Hidayati,  N.  Dyah.,  Dewi, Diana.,  Islamiati,  D.  Eni.,  K.  Syamsu,. 2017.  Peningkatan  Produksi Sefalosporin C  dari  A.  Chrysogenum  CB2/11/1.10.6 dengan  Optimasi  Media  Menggunakan Metode  Respon  Permukaan. Jurnal Bioteknologi dan Sains 4(1): 548-611.
Ruiz,  B.,  C.  Adan,  &  F.  Angela.  2010. Production  of  Microbial  Secondary Metabolites:  Regulation  by  The  Carbon Source. Journal Microbiology 36:146-167.
Rofiq,  A.A.,  I.A.  El-Thalouth  amd  S.  Tawfik.
2013. Gelatinization of Starch in Aqueous Alkaline Solutions. Journal Starch Starke, 2(47): 338-345.
Schmitt,  E.  K.,  B.  Hoff,  U.  Kuck.  2004. Regulation  of  Sefalosporin  Biosynthesis. Journal  Biochemistry  and  Biotechnology 88: 1-43.
Stanbury,  L.  2008.  Hidrolisis  Serbuk  Empulur Sagu  (Metroxylon  Sagu  Rottb.)  dengan Hidrolisis  Kimiawi .  Jurnal  ISBN  978-979- 1165-74-7.  Lampung:  Seminar  Nasional Sains dan Teknologi II UNILA.
Srivastava,  P.,  P.  Mishra,  &  S.  Kundu.  2006. Process  Strategies  for  Cephalosporin  C Fermentation. Journal  Science  Industrial Research: 599-602.
Tester,  R.F.  and  J.  Karkalas.  1996.  Swelling and Gelatinization of Oat Starches. Journal Cereal Chemistry 1(73): 271-273.
Triyono,  A.  2008.  Karakteristik  Gula  Glukosa dari  Hasil  Hidrolisa  Pati  Ubi  Jalar ( Ipomoea  batatas,  L.)  dalam  Upaya Pemanfaatan Pati Umbi-Umbian. https://media.neliti.com/media/