## Pendahuluan
Toxoplasma  gondii merupakan  protozoa penyebab  penyakit  toksoplasma  yang  dapat menginfeksi  seluruh  sel  yang  berinti,  termasuk leukosit  dan  makrofag.  Penyebaran  toksoplasma salah satunya dapat melalui transfusi darah dalam bentuk tropozoit yang mampu bereplikasi dengan cepat  di  seluruh  sel  host  yang  memiliki  inti  sel.
Infeksi toksoplasma dapat menjadi salah satu efek samping dalam transfusi [1].
Reaksi transfusi dan resiko penularan penyakit melalui  darah  merupakan  tantangan  dalam mentransfusikan darah kepada resipien. Pemerintah  mengatur  keamanan  darah  melalui Permenkes  No  91  tahun  2015  yaitu,  darah  yang didistribusikan  adalah  darah  yang  telah  lolos  uji saring  terhadap  penyakit  Infeksi  Menular  Lewat Transfusi  Darah  (IMLTD),  pemeriksaan  tersebut meliputi,  HIV,  Hepatitis  B,  Hepatitis  C,  Sifilis  dan pengujian  malaria  khusus  pada  daerah  endemis [2].
Whole  blood merupakan  produk  darah  yang digunakan  dalam  kondisi  tertentu  seperti pendarahan  akut  atau  masif  yang  mengindikasi hilangnya volume darah dalam jumlah yang besar.

## Screening of Toxoplasmosis in Whole Blood at PMI Sleman Yogyakarta

## Skrining Toxoplasmosis pada Whole Blood Di PMI Sleman Yogyakarta
Meyta Wulandari, Ikrimah Nafilata, Ridha Tania Safitri, Rio Satria, Reni Putriani, Ulfa Agustin

## Intisari
Toksoplasma memiliki potensi menular melalui komponen darah terutama whole blood karena tidak termasuk dalam parameter penyakit yang harus diuji saring menurut Peraturan Menteri Kesehatan No 91 Tahun 2015. Toxoplasma gondii protozoa penyebab penyakit toksoplasma yang menginfeksi seluruh sel yang berinti, termasuk leukosit dan makrofag. Resiko transfusi whole blood atau darah lengkap yang mengandung leukosit terhadap penularan penyakit toxoplasma tidak dapat diabaikan. Toxoplasmosis pada  individu  yang  memiliki  imunitas  rendah  ( immunocompromised )  seperti  penderita  HIV  dapat menyebabkan infeksi oportunistik pada sistem saraf. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui infeksi toksoplasmosis  dan  prevalensi Toxoplasma  gondii pada  darah  donor  di  UTD  Yogyakarta.  Subjek penelitian ini adalah darah donor dari pendonor perempuan dengan golongan darah A, B, AB dan O yang berjumlah  20  kantong  darah.  Penelitian  ini  menggunakan  metode  ELISA  yang  mengukur  absorbansi reaksi antigen dan antibodi IgM anti- Toxoplasma pada serum darah donor. Hasil uji ELISA menunjukkan pada 20 sampel darah donor ditemukan 1 kantong darah atau 5%  positif IgM anti- Toxoplasma pada golongan darah O dengan nilai A/C.O adalah 1,77 dan 19 kantong darah atau 95% sampel negatif IgM anti- Toxoplasma pada golongan darah A, B dan AB dengan nilai A/C.O kurang dari 1. Sampel darah donor dinilai reaktif ketika nilai A/C.O lebih dari atau sama dengan 1. Disimpulkan bahwa terdapat toxoplasma pada darah donor di UTD Yogyakarta dengan prevalensi sebesar 5%.
Kata kunci: Infeksi, Darah Donor, Anti-Toxoplasma, Seropositif, IgM

## Afiliasi Penulis
Prodi D3 Teknologi Transfusi Darah STIKes Guna Bangsa Yogyakarta
Korespondensi kepada
M. Wulandari meytawulan15@gmail.com
Whole  blood memiliki  komponen  produk  darah lengkap termasuk leukosit yang menjadikan whole blood memiliki  resiko  transfusi  yang  tinggi dibandingkan  komponen  darah  lainnya.  leukosit merupakan  sel  yang  memiliki  inti  yang  dapat ditumpangi  oleh  agen  penyebab  penyakit  yang dapat  menular  lewat  transfusi  darah  [3]. Toksoplasmosis pada orang yang memiliki imunitas yang  rendah  ( immunocompromised )  seperti penderita  HIV  dapat  menyebabkan  ensefalitis toksoplasmosis  karena  terjadi  infeksi  oportunistik pada sistem saraf [4].

## Metode
Jenis  penelitian  menggunakan  observasional deskriptif dengan desain cross sectional.

## Sampel
Sampel terdiri dari 20 darah donor dengan jenis kelamin  perempuan,  usia  17-65  tahun  dan golongan darah A, B, AB dan O yang diambil  secara acak,  masing-masing  5  sampel.  Semua  sampel disimpan di -4 ℃ di Laboratorium Teknik Transfusi Darah, STIKES Guna Bangsa.

## Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini untuk pembacaan nilai absorbansi yang terbentuk karena adanya interaksi antigen dan antibodi adalah ELISA Reader  serta  alat  pendukung  lainnya  yaitu mikropipet, sentrifuse dan inkubator.

## Bahan
Reagen  yang  digunakan  untuk  mendeteksi antibodi Toxoplasma  gondii adalah  Autobio Diagnostics  Toxo  IgM  ELISA  Kit  yang  terdiri  dari microassay plate, sample diluent, positive control, negative  control,  Ezyme  conjugate,  substrate  A, substrate  B,  wash  solution  concentrate  dan  stop solution.

## Prosedur penelitian

## Persiapan Sampel
Sampel  darah  donor  dicuplik  dan  dimasukkan ke  dalam  microtube  1.5  ml,  untuk  selanjutnya disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 2 menit agar serum dan platelet terpisah.

## Deteksi T.gondii dengan ELISA
Pemeriksaan  sampel  darah  menggunakan  Kit Toxo  IgM  ELISA.  IgM  Anti-Toxoplasma  mulai
diproduksi  oleh  tubuh  penderita  pada  minggu pertama  setelah  infeksi  dan  mencapai  puncaknya setelah 1-2 bulan, kemudian menurun lagi setelah 4  bulan.  Namun  sekitar  50%  penderita  yang terinfeksi Toxoplasma  gondii ,  IgM  masih  dapat dideteksi  sampai  satu  tahun  pasca  infeksi  primer. Titer  IgM  yang  tinggi  menunjukkan  bahwa seseorang  sedang  terinfeksi Toxoplasma  gondii sedangkan  titer  IgG  yang  tinggi  menunjukkan bahwa  seseorang  pernah  terinfeksi Toxoplasma gondii [5,6].
Reagen  yang  akan  digunakan  dipersiapkan terlebih  dahulu  pada  suhu  ruang  (21 ℃ -25 ℃ ). Semua  sampel  dan  kontrol  yang  akan  digunakan harus  divorteks  sebelum  digunakan. Wash  buffer (20x) sebanyak 50mL dilarutkan dengan 1L distilled water  untuk pencucian.  Microplate  yang  memiliki coating  antigen dipersiapkan  sejumlah  sampel yang  akan  diuji,  serta  untuk  kontrol  (satu  kontrol negatif, dua kontrol positif) dan blanko. Serum dan diluent dihomogenkan, kemudian diinkubasi pada suhu 21 ℃ -25 ℃ selama 25 menit. Setelah inkubasi microplate  dicuci  dengan wash buffer sebanyak 5 kali.
HRP  konjugat  selanjutnya  ditambahkan  ke masing-masing  sumuran,  termasuk  sumuran  yang berisi blanko dan diinkubasi pada suhu 21 ℃ -25 ℃ selama  25  menit.  Selanjutnya  mengulangi pencucian  denga n  wash  buffer sebanyak  5  kali. Chromogen  ditambahkan  sebanyak  100µL  pada semua  sumuran.  Microplate  diinkubasi selama  10 menit  sebelum  ditambahkan  stop  solution.  Pada saat  penambahan  stop  solution  ke  dalam microplate,  sampel  yang  positif  terinfeksi  akan menunjukkan perubahan warna.

## Pembacaan absorbansi dengan ELISA Reader
Pembacaan  absorbansi  dalma  waktu  30  menit dengan  panjang  gelombang  450nm.  Hasil absorbansi harus dihitung dengan mengurangi nilai blanko.

## Hasil & Pembahasan
Pengujian ELISA Toxoplasma gondii pada tabel 1  menunjukkan  5%  dari  20  sampel  darah  donor positif  IgM anti-Toxoplasma  pada  golongan  darah O dengan  nilai perbandingan absorbansi dan nilai cut  off  (A/C.O)  adalah  1,77  dan  19  (95%)  sampel
darah  donor  negatif  IgM  anti-Toxoplasma  pada golongan  darah  A,  B  dan  AB  dengan  nilai  A/C.O kurang  dari  1.  Sampel  darah  donor  dinilai  reaktif ketika nilai A/C.O lebih dari atau sama dengan 1.
Antigen  yang  telah  melapisi  microplate  akan berikatan  dengan  antibodi  yang  terdapat  pada sampel.  Enzim  konjugat  yang  ditambahkan  akan bereaksi dengan  ikatan  antigen  dan  antibodi  oleh reaksi  imunologi.  Selama  proses  ini  terdapat pencucian yang berfungsi menghilangkan antibodi dan  sisa  enzim  konjugat  yang  tidak  ikut  bereaksi. Substrat  A  dan  substrat  B  ditambahkan  dan dikatalis dengan komplek antigen-antibodi sehingga  menghasilkan  reaksi  kromogenik.  Reaksi kromogenik  dengan  terjadnya  perubahan  warna yang  dihasilkan  diukur  sebagai  nilai  absorbansi. Intensitas warna yang terbentuk sebanding dengan jumlah anti-Toksoplasma IgM yang terdapat dalam sampel.  Kehadiran  IgM  pada  darah  donor  tanpa adanya  IgG  menandakan  bahwa  pendonor  atau individu  sedang  terinfeksi  toksoplasma,  maka harus menyembuhkan penyakit ini untuk kemudian dapat mendonorkan kembali darahnya [7].
Darah yang didistribusikan kepada pasien atau resipien  adalah  darah  yang  telah  lolos  uji  saring terhadap  infeksi  menular  lewat  transfusi  darah sesuai dengan peraturan Menteri Kesehatan No 91 tahun 2015. Namun dengan ditemukannya sampel positif  IgM  anti-Toxoplasma  pada  darah  donor, menunjukkan bahwa diperlukan pengujian tambahan  dengan  parameter  Anti-  Toksoplasma. Pemeriksaan toksoplasmosis dapat dijadikan upaya preventif  penularan Toxoplasma  gondii melalui transfusi  darah,  khususnya  pada  penggunaan whole  blood yang  harus  dibatasi  atau  dikurangi terhadap  penerima  darah  donor  dengan  kondisi tertentu  dan  menggantinya  dengan  produk  darah leucoreduce untuk  mencegah  penularan  infeksi oportunistik  toksoplasmosis. Toxoplasma  gondii dianggap sebagai mikroorganisme yang berbahaya bagi  pasien  imunosupresif  terutama  pada penderita  HIV,  penderita  kanker  dan  pasien penerima transplantasi organ [8,9]. Pada penderita HIV,  toksoplasmosis  dapat  menyebabkan  infeksi pada sistem saraf salah satunya adalah ensefalitis toksoplasmosis.

## Kesimpulan
Toxoplasma gondii ditemukan dalam pengujian pada  darah  donor  golongan  darah  O  dengan persentase prevalensi sebesar 5%.

## Apresiasi
Penulis mengucapkan terimakasih atas bantuan dan dukungan oleh Kopertis Wilayah V Yogyakarta, PMI  Kabupaten  Sleman,  DIY,  dan  Program  Studi Teknologi  Transfusi  Darah  STIKes  Guna  Bangsa Yogyakarta.

## Bibliografi
1. Karimi G, Gharehbaghian A, Fallah Tafti M, Vafaiyan., 2013,  Emerging  Infectious  Threats  to  the  Blood Supply: Seroepidemiological Studies in Iran-a Review, Transfus Med Hemother,  40 (3):210-17.
2. Menkes  RI,  2014,  Peraturan  Menteri  Kesehatan  RI Nomor 83 Tahun 2014 tentang Unit Transfusi Darah, Bank  Darah  Rumah  Sakit,  Dan  Jejaring  Pelayanan Transfusi Darah.
3. Blood Components, 2019, Whole Blood. https://www.redcrossblood.org/donate-blood/how-to- donate/types-of-blood-donations/blood- components.html, diakses tanggal: 8 Maret 2019.
4. Silaban  D,  Kiking  R,  dan  Rusli  D,  2008,  Ensefalitis Toksoplasmosis  pada  Penderita  HIV-AIDS,  Majalah Kedokteran Nusantara Volume 4: No. 2
5. Handojo, I, 2004, Imunoasai Terapan pada Beberapa Penyakit  Infeksi, Surabaya,  Airlangga  University Press.
6. Soedarto,  2011, Buku  Ajar  Parasitologi  Kedokteran, Jakarta, CV. Agung Seto.
7. Sari,  Bernadeta  R.  Y.  dan  Adang  M.G,  2014, Prevalensi  Seropositif  IgM/IgG  Toksoplasma  pada Wanita  Pranikah  dan  Tinjauan  Faktor  Risiko Kepemilikan Kucing. Mutiara Medika Vol.14: 1-17.
Tabel 1 | Aturan dasar stabilitas suspensi koloid berdasarkan nilai potensial.
Gol. Darah Jumlah Darah Donor Anti-Toxo IgM Negatif (%) Positif (%) A 5 100 0 B 5 100 0 AB 5 100 0 O 5 80 20
8. Siransy,  Liliane.  Sery.  R.D.,  Serge.  P.  D.G., Antoinette. L., Koffi.N., Patricia. A.K., Richard.Y. and Herve.M,  2016,  Immunity  Status  of  Blood  Donors Regarding  Toxoplasma  gondii  Infection  in  a  Low-
Income District of Abidjan, Cote d’Ivoire, West Africa.
Journal of Immunology Research . Vol 2016.
9. Izadi,  M.  Nematollah,  J.  J.,  Abbas  M.P.,  Javid.  S., Babak. R., Hamid.R.M., Hossein. Z. and Abulfazl. K, 2013,  Detection  of Toxoplasma  gondii from  Clinical Specimen  of  Patients  Receving  Renal  Transplant Using ELISA and PCR, Nephro Urol Mon 5(5):983-7.