PENGARUH PEMBERIAN JUS KECAMBAH KACANG HIJAU ( Vigna radiata (L.) R. Wilczek)TERHADAP KUALITAS SPERMATOZOA DAN SPERMATOGENESIS MENCIT JANTAN GALUR SWISS
Yance Anas 1) , Nur Chakim 2) , Suharjono 3)
1) Bagian Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
2) Program S-1Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
3) Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang

## INTISARI
Khasiat  kecambah  kacang  hijau  sebagai  peningkat  kesuburan  alami  pada  pria  masih  belum banyak  diteliti  dan  dipublikasikan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengetahui  pengaruh  pemberian  jus kecambah kacang hijau terhadap kualitas spermatozoa dan spermatogenesis mencit jantan Galur Swiss. Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  dengan  rancangan  randomized  matched  two-group post  test  only  design .  Sebanyak  30  ekor  mencit  jantan  dibagi  menjadi  5  kelompok  yang  terdiri  dari kelompok  kontrol  (CMC  25  mL/kgBB/hari);  kelompok  d-α-tocopherol  556  IU/kgBB/hari;  dan  tiga kelompok jus kecambah kacang hijau (33, 66 dan 132) mg/kgBB/hari.  Sediaan uji diberikan tiap hari secara  per  oral  selama  20  hari.  Pada  hari  ke-21,  semua  mencit  dibunuh,  testis  dan  epididimis dipisahkan  untuk  pengukuran  kualitas  (jumlah,  motilitas  dan  morfologi)  spermatozoa  dan spermatogenesis.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pemberian  jus  kecambah  kacang  hijau  33,  66 dan 132 mg/KgBB/ hari selama 20 hari tidak terbukti mampu meningkatkan kesuburan mencit jantan galur  Swiss.  Skor  spermatogenesis,  jumlah  spermatozoa  dan  morfologi  spermatozoa  normal  mencit jantan  galur  Swiss  yang  mendapatkan  perlakuan  dengan  jus  kecambah  kacang  hijau  tidak  berbeda bermakna dengan kelompok kontrol (p>0,05). Sebaliknya, pemberian jus kecambah kacang hijau justru dapat menurunkan motilitas progresif spermatozoa mencit jantan galur Swiss (p<0,05).
Kata kunci:   Jus kecambah kacang hijau ( Vigna radiata (L.) R.Wilczek), kualitas spermatozoa; spermatogenesis.

## ABSTRACT
Efficacy of mung bean sprouts as natural fertility enhancer for men was not widely investigated and published. The objective of this study is to investigate the effect of mung bean sprout’s juice on male Swiss mice spermatozoa quality and spermatogenesis. An  experimental  study  performed  with randomized  matched  two-group  post  test  only  design  approach.  Thirtymale  mice  were  dividedinto fivegroups randomly, which consist of a control group (CMC25mL/kg BW/day); d-α-tocopherol group (556 IU/kg BW/day) and three mung beans sproutjuice groups (33, 66 and 132) mg/kg BW/day. Mice treated  every  dayfor  20days  orally.  Micewere  sacrificed;  testis  and  epididymis  were  collected  and examined.  The  spermatozoa  quality  (count,  progressive  motility  and  normal  morphology)  and spermatogenesis observed.  The results showedthatmung bean sproutsjuice  treatment (33, 66 and 132) mg/Kg  BW/day for 20 days  did not enhance male Swiss strain  mice fertility.  Spermatogenesis score, count and normal morphology spermatozoa that receive treatment with mung bean sprout juice was not significantly  different  to  the  control  group  (p>0.05).  Conversely;  mung  bean  sprouts  juice  treatment lead to decrease male Swiss strain mice spermatozoa progressive motility (p<0,05).
Keywords:   Mung  bean  sprouts  ( Vigna  radiata (L.)  R.Wilczek)  juice,  spermatozoa  quality, spermatogenesis.

## PENDAHULUAN
Infertilitas  (ketidaksuburan)  merupakan salah  satu  masalah  serius  yang  dihadapi  oleh sebagian masyarakat. Pada umumnya, kegagalan pasangan suami istri untuk memperoleh  keturunan  disebabkan  karena infertilitas  pada  pria  (Miyamoto, et.al., 2012). Di  Indonesia,  diperkirakan  sekitar  20%  pria
mengalami  gangguan  infertilitas.  Menurut Stuart  dan  Howard  (1995),  penyebab  pasti infertilitas  pada  pria  masih  belum  banyak diketahui. Oleh karena itu, rencanapengobatan yang  rasional  untuk  memperbaiki  patologi infertilitas  pada  pria  masih  sulit  untuk dikembangkan.  Organisasi  Kesehatan  Dunia WHO  pada  tahun  2010  mengatakan  bahwa
pada  beberapa  banyak  kasus  yang  terjadi, penyebab  infertilitas  pada  pria  diakibatkan oleh  keadaan  azoospermia  non-obstruktif. Keadaan  ini  merupakan  sedikitnya  volume sperma  yang  diproduksi  dan  terjadinya penurunan sekresi Folicle Stimulating Hormone (FSH) (Kobayashi, et.al ., 2012).
Di Indonesia, terdapat beberapa tumbuhan  dan  sayuran  yang  diyakini  oleh masyarakat  sebagai  peningkat  kesuburan alami.    Salah  satu  sayuran  yang  telah digunakan oleh masyarakat untuk meningkatkan kesuburan pria adalah kecambah  kacang  hijau  (tauge).  Masyarakat mengkonsumsi  kecambah  kacang  hijau  ini dalam  bentuk  sayuran  (mentah/dimasak)  atau dibuat dalam bentuk jus.
Telah lama diketahui, kecambah kacang hijau  kaya  akan  kandungan  vitamin  E,  C  dan selenium yang
merupakan senyawa antioksidan  alami.  Kombinasi  vitamin  E,  C
dan  selenium  tersebut  dapat  melindungi berbagai  sel  di  dalam  tubuh  sel  dari  oksidasi radikal bebas, termasuk sel sperma.
Berdasarkan  sifat  vitamin  E  yang merupakan  vitamin  larut  lemak  dan  konsumsi kecambah  kacang hijau  dalam  bentuk  sayuran ataupun  jus  segar,  sangat  sulit  untuk dipercayai  bahwa  mengkonsumsi  kecambah kacang  hijau  dalam  bentuk  segar  akan  dapat berkhasiat  meningkatkan  kesuburan  pria. Sejauh  ini,  khasiat  kecambah  kacang  hijau dalam  meningkatkan  kesuburan  masih  belum banyak  diteliti  dan  dipublikasikan.  Penelitian ini  mencoba  untuk  membuktikan  khasiat kecambah  kacang  hijau  sebagai  sayuran peningkat kesuburan pria melalui uji pra-klinik dengan  mengunakan  hewan  percobaan  yang diberikan jus kecambah kacang hijau. Penelitian  bertujuan  untuk  melihat  pengaruh jus  kecambah    kacang  hijau  ( Vigna  radiata
(L.)R.  Wilczek)  terhadap  dua  parameter kesuburan, yaitu kualitas spermatozoa (jumlah, motilitas dan morfologi spermatozoa) dan  spermatogenesis pada  mencit  jantan  galur Swiss.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental dengan rancangan post test only control  group  design yang  menggunakan hewan coba sebagai subjek penelitian. Tempat penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Fakultas
Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang.

## Bahan Penelitian
Hewan  percobaan  yang  digunakan adalah  mencit  jantan  Galur  Swiss  yang diperoleh  dari  Laboratorium  Jurusan  Biologi FMIPA, Universitas Negeri Semarang. Kriteria  inklusi  mencit  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  galur  Swiss,  umur  ±  2 bulan,  berat  badan  20-30  gram;  dan  kriteria eksklusi: tidak terdapat abnormalitas fisik pada mencit  dan  mencit  mati  selama  percobaan karena kesalahan perlakuan. Kecambah kacang  hijau  diperoleh  dengan  cara  di budidayakan sendiri. Bahan lain yang digunakan  adalah  d-α-tocopherol  (Dalfarol ® ) dari  Daria-varia,  larutan  CMC  1%,  klorofrom 99,0  %  (Brataco),  NaCL  fisiologis  (Otsuka), reagen  giemsa,  dan  larutan  etanol  70%, formalin 10%, etanol bertingkat, xilol, parafin, albumin meyer dan haematoxylin-eosin (HE).

## Alat yang digunakan
Polibek,  nampan,  alat  semprot  air, blender (philips) ,  timbangan  elektrik (cook master) , botol plastik, jarum oral, seperangkat alat  gelas,  seperangkat  alat  bedah,  kamar hitung haemocytometer (Neubauer), objek glass , deck  glass,  hand  counter, laptop,  vial, alat  potong  mikrotom  (Shandon  finesse  325), objek  glass dan    mikroskop  trinokuler  (N-400 M).

## Jalan  Penelitian

## Pembuatan  Media  Tanam  dan  Budidaya Kecambah Kacang Hijau
Sebanyak tiga gram benih kacang hijau direndam  selama  satu  malam  dan  selanjutnya benih kacang hijau disebar pada media tanam. Penyiraman  dilakukan  sebanyak  tiga  kali sehari (pagi, siang dan sore hari). Media tanam diletakkan pada tempat terlindung dari cahaya. Kecambah  yang  berumur  dua  hari  dengan panjang sekitar 4-5 cm dipanen dan digunakan dalam penelitian.

## Pembuatan Jus Kecambah Kacang Hijau
Pembuatan  jus  kecambah  kacang  hijau dilakukan  setiap  hari.  Jus  kecambah  kacang hijau  dibuat  dalam  tiga  stok  konsentrasi  yaitu (2,0;  4,0  dan  8,0)  mg/mL.  Untuk  membuat konsentrasi  2,0  mg/mL,  sebanyak  1,0  gram kecambah kacang hijau ditambah 500,0 mL air dan  diblender,  kemudian  dipindahkan  ke dalam wadah plastik untuk langsung
digunakan  dalam  penelitian.  Jus  kecambah kacang  hijau  stok  4,0  dan  8,0  mg/mL  dibuat dengan  cara  yang  sama  dengan  larutan  stok 2,0 mg/mL.

## Pembuatan  Suspensi  d  α  tocopherol  (556 IU/mL)
Dosis  d-α-tocopherol  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah 556 IU/kgBB/hari. Sebanyak  dua  kapsul  Dalfarol ® (200  IU) diambil  dengan  menggunakan  jarum  suntik sampai  isi  dalam  kapsul  habis,  selanjutnya, ditampung  dalam beker  glass kemudian
campur  dengan  larutan  CMC  1,0%  sedikit demi  sedikit  sambil  diaduk-aduk  sampai volume 15,0 mL. Pembuatan Larutan CMC 1,0%
Sediaan  CMC  1,0%  digunakan  sebagai larutan  pensuspensi  dan  sebagai  bahan  uji pada kelompok  kontrol  negatif.  Larutan  CMC 1,0%  dibuat dengan  menimbang  sebanyak 1,0 gram  serbuk  CMC  dan  dilarutkan  dalam akuades  (dengan  bantuan  pemanasan  dan pengadukan)  sedikit  demi  sedikit  sampai volume 100,0 mL.

## Perlakuan Hewan Uji
Mencit  dikelompokkan  secara  acak menjadi  5  kelompok  perlakuan.  Sebelum perlakuan,  mencit  diadaptasikan  terlebih dahulu  dalam  suasana  laboratorium  selama satu  minggu.  Pemberian  pakan  dilakukan  tiga kali  setiap  hari    (pagi,  siang  dan  sore)  hari menggunakan  pakan  standar  BR2  dan  minum ad. libitum . Tiga peringkat dosis jus kecambah kacang  hijau  (33,  66  dan  132)  mg/kgBB/hari; d-α  –  tokoferol  556  IU/kgBB/hari  dan  CMC 1,0%  25,0 L.Kg/BB/hari diberikan secara oral satu  kali  sehari  selama  20  hari.  Pemejanan sediaan  uji  dilakukan  pada  pagi  hari  sekitar pukul 09.00 WIB.

## Pengambilan Testis dan Epididimis
Pada  hari  ke  21,  mencit  dikorbankan dengan  cara  disklokasi  tulang  belakang. Bagian  bawah  perut  mencit  dibasahi  dengan kapas  alkohol  70%,  dan  selanjutnya  dipotong melintang hingga terlihat epididimis dan testis. Selanjutnya, satu buah organ testis dimasukkan  ke    dalam  larutan  formalin  10% untuk keperluan pemeriksaan
spermatogenesis.  Epididimis  diurut/diplirit menggunakan  pinset  untuk  mengeluarkan spermatozoa  sehingga  tersuspensi  ke  dalam larutan  NaCl  0,9%.  Pengamatan  mikroskopis terhadap  kualitas  sperma  dilakukan    dalam jangka  waktu  yang  tidak  melebihi  dari  60 menit  (WHO,  2010).  Pemeriksaan  kualitas sperma  yang  dilakukan  meliputi  jumlah, motilitas dan morfologi sperma

## Pemeriksaan  Jumlah Sperma
Sebanyak  10  µL    sampel  sperma, diteteskan di sisi kamar hitung Neubauer yang sudah  ditutup  dengan  kaca  penutup,  dan dibiarkan  selama  5  menit  (agar  sel-sel
spermatozoa  mengendap)  untuk  memudahkan perhitungan. Jumlah  sperma diamati di bawah mikroskop trinokuler dengan perbesaran 400x. Hasil  perhitungan  jumlah  sperma  kemudian dimasukkan  ke  dalam  rumus  berdasarkan sesuai  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Suparni (2009), persamaan 1.
Jumlah sperma  =   ÷ 2 x10 5 sperma/mL……(1)
N = jumlah sperma yang dihitung pada 25 kotak

## Pengamatan Motilitas Sperma
Satu  tetes  sampel  sperma  diteteskan  ke atas objek glass kemudian ditutup dengan deg glass .  Pengamatan  motilitas  dilakukan  di bawah mikroskop trinokuler dengan perbesaran  200x. Pengamatan dilakukan sedikitnya  pada  lima  lapang  pandang.  Setiap satu lapang pandang direkam selama 20 detik, kemudian  dilakukan  pengklasifikasi  motilitas sperma  yang  meliputi  : motilitas  progesif (sperma  bergerak  cepat  dan  lurus), non- progesif (sperma  bergerak  ditempat)  dan immotil (sperma tidak bergerak/mati). Perhitungan  %  motilitas  sperma  progresif, non-progresif  dan  immotil  di  lakukan  sesuai dengan persamaan 2-4.
% sperma progresif : a/n x 100%  ...…(2)
% sperma non-progrsif : b/n x 100%...(3)
% sperma Immotil : c/n x 100%..........(4)
a  = Jumlah sperma dengan motilitas progresif
b  = Jumlah sperma dengan motilitas non- progresif c   = Jumlah sperma dengan motilitas immotil n = Jumlah sperma pada lima lapang   pandang

## Pengamatan Morfologi Sperma
Satu  tetes  sampel  sperma  dan  giemsa dibuat  dalam  bentuk  hapusan  pada  obyek glass, kemudian dikering
anginkan. Selanjutnya,  sediaan  hapusan  ditetesi  dengan etanol  70%  dan  dibiarkan  selama  15  menit hingga kering. Pengamatan dilakukan terhadap
100  sperma  dibawah  mikroskop  trinokuler dengan pembesaran 400x. Selanjutnya,
dilakukan perhitungan persentase antara sperma  normal  dengan  abnormal  sesuai penelitian yang dilakukan oleh  Suparni(2009). Penentuan  bentuk  morfologi  sperma  normal dan  abnormal    dilakukan  berdasarkan  hasil penelitian Anggrahini (2009).

## Pemeriksaan Spermatogenesis
Testis  yang  telah  diambil  difiksasi dengan  menggunakan  larutan  formalin  10% dengan  cara  merendam  testis  dalam  vial  yang
berisi larutan formalin 10,0% (Zulham, 2009). Testis  direndam  minimal  selama  24  jam, kemudian  dicuci  dengan  air  dan  dilanjutkan dengan  melakukan  dehidrasi  menggunakan pelarut  etanol  bertingkat.  Tahap  selanjutnya adalah  mengeluarkan  cairan  pembening  dari testis  dan  diganti  dengan  parafin.  Pengecoran testis dilakukan dengan membuat blok parafin agar  mudah  dipotong  dengan    mikorotrom.
Hasil potongan
tersebut kemudian dipindahkan  ke  penangas  air  dengan  suhu 60 o C  dan  diletakkan  di  atas objek  glass yang telah  diolesi  albumin  meyer.  Proses  analisa preparat  jaringan  organ  testis  dilakukan dengan  cara  mewarnai  hasil  irisan  dengan Heatoksilin-Eosin  (HE)  dan  diamati  di  bawah mikroskop trinokuler. Hematoxylin akan mewarnai  inti  sel  sedangkan  eosin  mewarnai sitoplasma (Zulham, 2009). Penilaian spermatogenesis dilakukan berdasarkan penilaian  skor spermatogenesis yang mengacu pada skor spermatogenesis Johnson HASIL PENELITIAN Pengaruh Pemberian Jus Kecambah Kacang  Hijau  Terhadap  Jumlah  Sperma Mencit  Jantan Galur Swiss Parameter  kecambah  kacang  hijau dalam  mempengaruhi  jumlah  sperma  pada penelitian  ini  adalah  apabila  jumlah  sperma mencit pada kelompok perlakuan jus kecambah kacang hijau lebih tinggi atau lebih rendah dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif. Gambar sebaran sperma dalam perhitungan  jumlah  sperma  menggunakan kamar  hitung Neubeur dapat  di  lihat  pada gambar  1.  Perbandingan  rata-rata  jumlah sperma  antar  kelompok  perlakuan  tersaji pada gambar 2. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa perlakuan  jus  kecambah  kacang  hijau  pada mencit selama 20 hari tidak mampu meningkatkan  jumlah  sperma  mencit.  Jumlah sperma  mencit  yang  telah  mendapatkan perlakuan  dengan  jus  kecambah  kacang  hijau 33 – 132 mg/KgBB/hari selama 20 hari adalah sebanyak 2,22 – 3,27 juta/mL. Jumlah sperma tersebut  tidak  berbeda  bermakna  dengan jumlah  sperma  mencit  yang  mendapatkan perlakuan  dengan  kontrol  CMC  1,0%  25 mL/KgBB/hari  (p>0,05).  Sebaliknya,  jumlah sperma  mencit  yang  mendapatkan  perlakuan dengan  d-α-tokoferol    556  IU/KgBB/hari adalah  sebanyak  10,53  juta/mL,  lebih  tinggi secara  signifikan  dari  kelompok  kontrol (p<0,05).
Gambar 1.  Sebaran jumlah  pada kamar hitung Neubeur
Gambar 2.  Perbandingan rata-rata jumlah sperma mencit setelah mendapat perlakuan dengan jus kecambah kacang hijau selama 20 hari. Jumlah sperma merupakan nilai rata-rata ± SEM (n=5). Hasil uji Mann-Witney dengan taraf kepercayaan 95%, tidak menunjukkan perbedaan yang bermakna antar kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol negatif (CMC) (p>0,05).
Pengaruh Pemberian Jus Kecambah Kacang  Hijau  Terhadap  Motilitas  Sperma Mencit  Jantan Galur Swiss
Motilitas  sperma  digunakan  untuk menilai  tingkat  keaktifan  pergerakan  sperma. Dalam  penelitian  ini,  motilitas  sperma diklasifikasikan  menjadi  tiga  yaitu:  motilitas progresif,  motilitas  non  progresif  serta immotil.  Motilitas  progresif  ditandai  dengan spermatozoa bergerak aktif, baik linier atau di lingkaran  besar.  Sperma  memiliki  motilitas non-progresif  jika  bergerak  dengan  jalur  yang abnormal,  misalnya  berenang  di  lingkaran kecil,  atau  hanya  mengerakkan  flagellar  yang dapat  diamati.  Sperma  yang  immotil  ditandai dengan tidak adanya gerakan.Hasil
perbandingan  motilitas  sperma (progresif,
non-  progresif dan immotil) mencit  jantan galur  swiss  setelah  perlakuan  selama  20  hari tersaji pada tabel I.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa % sperma dengan motilitas progresif pada mencit yang  mendapatkan  perlakuan  dengan  jus kecambah kacang hijau (33 –  132) mg/KgBB/hari selama 20 hari berkisar (0,00 – 13,30)  %.  Persentase  jumlah  sperma  dengan motilitas  progresif  ini  jauh  lebih  kecil  bila dibandingkan dengan mencit kelompok kontrol  (52,15%)  dan  d-α-tokoferol  556 IU/KgBB/hari (80,90%) (p<0,05). Oleh karena itu,  penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa pemberian  jus  kecambah  kacang  hijau  selama 20  hari  dapat  menurunkan  motilitas  sperma progresifmencit jantan galur Swiss .
Tabel I.  Perbandingan rata-rata persentase motilitas sperma mencit setelah mendapatkan perlakuan dengan jus kecambah kacang hijau (33, 66, dan 132) mg/kgBB/hari selama 20 hari. Motilitas sperma merupakan nilai rata-rata (%) (n=5). *Hasil uji Man-Whitney menunjukkan perbedaan yang bermakna dengan kelompok kontrol negatif
(CMC) (P<0,05). Pengaruh Pemberian Jus Kecambah Kacang  Hijau  terhadap  Morfologi  sperma mencit  jantan Galur Swiss Dalam penelitian ini, parameter
kecambah  kacang  hijau  dalam  mempengaruhi morfologi  sperma  adalah  apabila  morfologi
sperma  normal  pada  mencit  kelompok perlakuan  jus  kecambah  kacang  hijau  lebih tinggi  atau  lebih  rendah  bila  dibandingkan dengan  kelompok  kontrol  negatif  (CMC).
Gambar  morfologi  sperma  normal  dan abnormal  pada  mencit  jantan  galur  swiss
setelah  perlakuan  selama  20  hari  dalam penelitian  ini  dapat  dilihat  pada  gambar  3.
Hasil  perbandingan  persentase  morfologi sperma  normal  dan  abnormal    pada  mencit jantan galur Swiss  tersaji pada gambar 4.

## Gambar 3.
Morfologi Sperma mencit dengan perbesaran 400x
Gambar 4. Perbandingan (%) rata-rata morfologi sperma mencit setelah mendapat perlakuan dengan jus kecambah kacang hijau (33, 66, dan 132) mg/kgBB/hari selama 20 hari. Morfologi sperma merupakan nilai rata-rata (%) ± SEM (n=5).
Hasil uji Anova dengan taraf kepercayaan 95% menunjukkan tidak ada perbedaan yang bermakna antara % morfologi sperma normal dengan kelompok kontrol negatif (CMC) (P>0,05).
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa persentase  morfologi  sperma  normal  mencit yang mendapat perlakuan dengan jus kecambah  kacang  hijau  (33,  66  dan  132) mg/KgBB/hari  selama  20  hari  berturut-turut adalah  sebesar  75,07%,  71,00%  dan  72,10%. %  morfologi  sperma  normal  ini  tidak  berbeda bermakna  dengan  mencit  kelompok  kontrol (78,55%) (p>0,05) dan mencit yang
mendapatkan perlakuan dengan d-α-
tocopherol  556  IU/KgBB/hari  (81,92%).  Oleh karena itu, penelitian ini menyimpulkan bahwa perlakuan jus kecambah kacang hijau 33 – 132 mg/KgBB/ selama 20 hari tidak meempengaruhi  morfologi  sperma  mencit jantan galur Swiss. Pengaruh Pemberian Jus Kecambah Kacang  Hijau  terhadap  Spermatogenesis Mencit Jantan Galur Swiss Gambaran penilaian skor spermatogenesis  pada  preparat  jaringan  organ testis  atau  penampang  tubulus  semineferus mencit jantan galur Swiss dalam penelitian ini dapat  dilihat pada  gambar 5.  Dari preparat ini selanjutnya dilakukan perhitungan skor spermatogenesis. Perbandingan hasil penilaian skor    spermatogenesis  pada  preparat  jaringan testis  mencit  dilakukan  berdasarkan  kriteria Johnson dan tersaji pada gambar 6.
Gambar 5.  Penampang tubulus seminiferus mencit jantan yang dipontong melintang untuk penilaian klasifikasi spermatogenesis sesuai skor Johnson. keterangan:  Skor Johsen bernilai 10. Skor Johsen bernilai 9. Skor Johsen bernilai 8. Skor Johsen bernilai 7.  Skor Johsen bernilai 6. Skor Johsen bernilai 5.
Gambar 6.  Perbandingan nilai rata-rata skor spermatogenesis mencit setelah mendapat perlakuan dengan jus kecambah kacang hijau selama 20 hari. Nilai spermatogenesis merupakan nilai rata-rata ± SEM (n=5). Hasil uji Kruskal-Wallis menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan bermakna skor spermatogenesis kelompok yang mendapat perlakuan dengan jus kecambah kacang hijau dengan kelompok kontrol (p> 0,05).
Hasil  penelitian,  menunjukkan  bahwa skor  spermatogenesis  mencit  yang  diberi perlakuan  dengan  d-α-tocopherol  memiliki skor  yang  paling  tinggi  yaitu  sebesar  9,6; sedangkan  skor  spermatogenesis  kelompok kontrol  negatif  (CMC)  adalah  sebesar  8,84 (p>0,05).  Skor  spermatogenesis  mencit  yang diberi perlakuan dengan jus kecambah kacang hijau  (33,  66  dan  132)  mg/kgBB/hari  adalah sebesar 8,80, 8,68 dan 9,4. Skor
spermatogenesis tersebut tidak beebeda
bermakna bila dibandingkan dengan kelompok kontrol  (p>0,05).  Oleh  karena  itu,  pemberian
jus  kecambah  kacang  hijau  33  –  132 mg/KgBB/hari selama 20 hari tidak mempengaruhi  spermatogenesis  mencit  jantan galur Swiss (p>0,05).

## Diskusi dan Pembahasan
Salah satu sayuran yang telah digunakan  oleh  masyarakat  Indonesia  untuk meningkatkan kesuburan pria adalah kecambah  kacang  hijau  (tauge).  Masyarakat mengkonsumsi  kecambah  kacang  hijau  ini dalam  bentuk  sayuran  (mentah/dimasak)  atau dibuat dalam bentuk jus.
Kecambah  kacang  hijau  diketahui  kaya akan  kandungan  vitamin  E,  C  dan  selenium yang  merupakan  senyawa  antioksidan  alami. Kombinasi senyawa antioksidan tersebut dapat melindungi  berbagai  sel  di  dalam  tubuh  sel dari  oksidasi  radikal  bebas,  termasuk  sel sperma.    (Astawan,  2005).  Pada  penelitian terdahulu,  vitamin  E  telah  dilaporkan  mampu melindungi  spermatozoa  terhadap  kerusakan peroksidatif dan penurunan motilitas (Therond et  al. ,  1996).      Vitamin    E  juga  dapat menetralisir  hidroksil,  peroksida,  dan  radikal hidrogen  peroksida  dan  mencegah  aglutinasi sperma (Agarwal, et.al ., 2005). Vitamin E juga diduga akan mampu mempertahankan fertilitas pria  dengan  cara  melindungi  beberapa  sel penyusun  tubulus  seminiferus  di  dalam  testis dari  kerusakan  akibat  serangan  radikal  bebas yang  terjadi  secara  alami  di  dalam  tubuh (Ardini,  2005).    Regina  dan  Traber  (1999) menyatakan  bahwa  defisiensi  vitamin  E  pada tikus  menyebabkan  degenerasi  epitel  tubuli seminiferi dan menghentikan produksi spermatozoa.  Selain itu, pemberian vitamin E secara oral pada pasien astenospermia dilaporkan  mampu  meningkatkan  motilitas spermatozoa  secara  signifikan  (Suleiman et
al ., 1996).
Kandungan beberapa protein dan vitamin  E  pada  kecambah  kacang  hijau  juga diduga  kuat  dapat  meningkatkan  kualitas sperma  dan  spermatogenesis  pada  mamalia. Penelitian  ini  mencoba  untuk  membuktikan penggunaan  empiris  kecambah  kacang  hijau sebagai  peningkat  kesuburan  alami.  Tiga peringkat  dosis  jus  kecambah  kacang    hijau (33,  66  dan  132)  mg/KgBB/hari  diberikan pada mencit jantan galur Swiss selama 20 hari. Pada  hari  ke-21  setelah  perlakuan  jus kecambah kacang hijau dilakukan pemeriksaan kualitas spermatoa dan spermatogenesis. Kualitas spermatozoa digambarkan  oleh  jumlah,  motilitas  progresif dan morfologi spermatozoa normal; sedangkan spermatogenesis digambarkan oleh skor spermatogenesis berdasarkan pengamatan preparat  jaringan  testis  mencit  jantan  galur Swiss dengan menggunakan skor Johnson. Secara  keseluruhan,  penelitian  ini menyimpulkan
bahwa pemberian jus kecambah  kacang  hijau  33  –  132  mg/KgBB/ hari  selama  20  hari  tidak  terbukti  mampu meningkatkan  kesuburan  mencit  jantan  galur
Swiss. Skor spermatogenesis, jumlah spermatozoa  dan  morfologi  sperma  normal
mencit  jantan  galur  Swiss  yang  mendapatkan perlakuan  dengan  jus  kecambah  kacang  hijau selama 20 hari tidak berbeda bermakna dengan kelompok  kontrol  (p>0,05).  Hal  ini  mungkin disebabkan karena vitamin E yang terkandung di  dalam  jus  kecambah  kacang  hijau    tidak mencukupi untuk berperan sebagai antioksidan dalam melindungi sperma pada saat spermatogenesis. Jumlah vitamin E (tokoferol) yang  terkandung  dalam  kecambah  kacang hijau  sekitar  (7  µg/g)  (Purwono  dan  Hartono, 2005).    Jumlah  vitamin  E  pada  kecambah kacang hijau yang sangat sedikit ini kemungkinan  tidak  mampu  melindungi  saat produksi  sperma,  selain  itu,  vitamin  E merupakan  vitamin  yang  tidak  larut  air, sehingga pemberian sediaan kecambah kacang hijau dalam bentuk jus tidak dapat melarutkan vitamin  E  dan  absorpsinya  ke  dalam  sirkulasi sistemik  juga  relatif  sedikit.  Selain  itu, perlakuan  pemberian  jus  kecambah  kacang hijau  dalam  penelitian  ini  hanya  dilakukan selama  20  hari.  Apabila  lama  perlakuan dilakukan lebih dari 20 hari mungkin saja akan mendapatkan  hasil  yang  lebih  akurat.  Hal  ini sangat berhubungan dengan siklus spermatogenesis.  Satu  siklus  spermatogenesis pada mencit membutuhkan waktu antara 40-60 hari (Hafez 1970). Selain siklus spermatogenesis,  umur  hewan  uji  yang mempengaruhi proses spermatogenesis, dimana  pada  usia  tertentu  tingkat  kesuburan hewan  akan  mulai  menurun  secara  perlahan- lahan  disebabkan  karena  perubahan  dan penurunan  fungsi  organ  reproduksi  (Khaidir, 2011).
Penelitian  ini  juga  menyimpulkan bahwa  pemberian  jus  kecambah  kacang  hijau justru  dapat  menurunkan  motilitas  progresif spermatozoa  mencit  jantan  galur  Swiss. Penurunan motilitas sperma mencit kemungkinan  dipengaruhi  oleh  senyawa  lain selain  senyawa  vitamin  E  yang  terkandung  di dalam  kecambah  kacang  hijau.  Senyawa  lain yang  belum  diketahui  ini,  kemungkinan  besar berperan dalam merusak membran sel metokondria, karena plasma membran mitokondria sperma tersusun atas asam lemak tak  jenuh  yang  rentan  terhadap  serangan radikal bebas (O’Connell et al., 2002). Sekitar 50%  asam  lemak  tidak  jenuh  yang  ditemukan dalam  sebuah  sel  spermatozoa  adalah  dekosa- heksaenoat  (DHA).  Asam  lemak  ini  yang bersifat  sangat  rentan  terhadap  oksidasi  dan mudah  mengalami  kerusakan  akibat  reaksi
berantai  antara  radikal  bebas  dengan  asam lemak  tidak  jenuh,  sehingga  meningkatkan peroksidasi  lipida  (Sanocka  dan  Kurpisz, 2004).  Peroksidasi  lipida  dilaporkan  Villegas et.al .,  (2003)  berkorelasi  dengan  penurunan fosforilasi protein pada aksonem dan
berkurangnya ATP intrasel. Menurut Tremellen (2008), terjadinya proses peroksidasi  pada  spermatozoa  akan  diikuti oleh  perubahan  struktur  membran  plasma spermatozoa  sehingga  mengubah  kestabilan dan  fungsi  membran,  serta  menurunkan fluiditas  membran  spermatozoa.  Rusaknya membran  plasma  mitokondria  spermatozoa mengakibatkan  terganggunya  metabolisme  sel spermatozoa, sehingga menyebabkan penurunan  motilitas  spermatozoa.  Penelitian ini belum bisa mengidentifikasi senyawa yang mempengaruhi  penurunan  motilitas  sperma,
sehingga  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut.
Berbeda  dengan  jus  kecambah  kacang hijau,  pemberian  vitamin  E  (d-α-tokoferol) 556  IU/KgBB/  hari  selama  20  hari  ternyata mampu  meningkatkan  jumlah  spermatozoa dan  motilitas  sperma  progresif  (p<0,05). Walaupun  demikian,  pemberian  d-α-tokoferol belum berhasil meningkatkan jumlah morfologi spermatozoa normal dan spermatogenesis  mencit  jantan  galur  Swiss (p>0,05).  Beberapa  penelitian  menyebutkan bahwa  pemberian  vitamin  E  pada  hewan mampu  meningkatkan  jumlah  sperma  secara nyata (Ilyas, 2011).

## KESIMPULAN
Pemberian  jus  kecambah  kacang  hijau 33 – 132 mg/KgBB/ hari selama 20 hari tidak terbukti  mampu  meningkatkan  kesuburan mencit jantan galur Swiss. Skor
spermatogenesis,  jumlah  spermatozoa  dan morfologi  sperma  normal  mencit  jantan  galur
Swiss yang mendapatkan perlakuan dengan jus kecambah  kacang  hijau  selama  20  hari  tidak berbeda  bermakna  dengan  kelompok  kontrol (p>0,05). Sebaliknya, pemberian jus kecambah kacang  hijau  justru  dapat menurunkan motilitas  progresif  spermatozoa  mencit  jantan galur Swiss (p<0,05).

## DAFTAR PUSTAKA
Agarwal,  A.,  Prabakaran,  A.  and  Said,  T.M., 2005.  Prevention  of  Oxidative  Stress Injury to Sperm, J. Androl , 26 : 654-600.
Anggrahini S. 2009. Pengaruh Lama Pengecambahan terhadap Kandungan α-Tokoferol dan Senyawa Proksimat Kecambah Kacang  Hijau  (Phaseolus  radiatus L.). http://patpijogja.wordpress.com/200 9/08/27/. Diakses tanggal 19 Januari 2012 Ardini, S.D. 2005. Efek Pemberian Kombinasi Vitamin  C  dan  Vitamin  E  terhadap Kadar Nitric Oxide pada Preklampsia. Tesis . Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang. Astawan M. 2005. Kacang Hijau, Antioksidan yang  Membantu  Kesuburan  Pria. http://web.ipb.ac.id/~tpg/de/pubde_ ntrtnhlth_kacanghijau.php.diakses tanggal19 Januari 2012 Hafez  E.S.E.,  1970, Reproduction  and Breeding Techniques for Laboratory Animal . Lea and Febiger, Philadelphia
Ilyas S. , 2011, Pengaruh Pemberian Vitamin E Terhadap  Jumlah,  Morfologi  Dan
Motilitas  Sperma  Serta  Kadar Malondialdehyde  (MDA)  Testis Mencit Jantan Dewasa ( Mus musculus L) yang Mendapat Latihan  Fisik  Maksimal, Skripsi, Universitas Sumatra Utara.
Kobayashi,  H.,  Koichi,  Nagao,  K.  and Nakajima, K., 2012, Focus Issue on
Male  Infertility ,  Adv.  Urol, 01 ,
2012.
Miyamoto, T., Tsujimura, A., Miyaqawa, Y.,
Koh, E., Namiki, M. and Senqoku, K., 2012,
MaleInfertilityandItsCausesinHum an, Adv. Urol , 2012 : 2012.
O’Connell  M.,  McClure,  N.  and  Lewis,  S.E.,
2002. Mitochondrial DNA Deletions and Nuclear DNA
Fragmentation  in  Testicular  and Epididymal  Human  Sperm. Hum. Reprod. 17 (6):1565-1570.
Purwono  dan  Hartono,  R.,  2005, Kacang Hijau ; Penebar Swadaya; Indonesia, Hal. 8 Regina, B.F. and Traber, .G.,1999. Vitamin E: Function  and  Metabolism. Faseb  J . 13 :1145-1155.
Sanocka,  D.  and  Kurpisz,  M.,2004.  Reactive Oxygen  Species  and  Sperm  Cells.
Reprod.  Biol.  Endocrinol . 23 (2)  :
12.
Stuart, S. and Howard, M.D., 1995, Treatment of Male Infertility, N. Eng. J.Med . 332 , 312-317
Suleiman,  S.A.,  Ali,  M.E.,  Zaki,  Z.M.,  El-
Manik,  E.M.  andNasr,  M.A.,  1996. Lipid Peroxidationand Human
Sperm  Motility:  Protective  Role  of
Vitamin E. J. Androl. 17 :530-537.
Suparni, 2009, Pengaruh Pemberian Vitamin C terhadap Jumlah Sperma dan Morfologi  Sperma  Mencit  Jantan
Dewasa  ( Mus  musculus L.)  yang dipaparkan  Monosodium  Glutamat (MSG), Tesis , Sekolah Pascasarjana
Universitas Sumatra Utara.
Therond,  P.,  Auger,  J.,  Legrand,  A.  and
Jouannet, P., 1996. Alpha-
tocopherol  in  Human  Spermatozoa and  Seminal  Plasma  Relationship with  Motility  Antioxidant  Enzymes and Leukocytes. Mol. Hum. Reprod . 2 : 739-744.
Tremellen,  K.  2008.  Oxidative  Stress  and
Male Infertility –  a  Clinical Perspective. Hum. Reprod. Update 14 (3):243-258.
Villegas,  J.,  Kehr,  K.,  Soto,  L.,  Henkel,  R.,
Miska, M. and & Sanchez, R., 2003.
Reactive  Oxygen  Species  Induce Reversible  Capacitation  in  Human
Sspermatozoa. Androlog, 35 :  227-
232. Zulham, 2009, Penuntun Praktikum Histoteknik ,  Departemen  Histologi FKUSU, Medan, Hal. : 2, 5-8, 15.