## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
EDISI 14 VOLUME (1) 2022 p- ISSN : 1979-150X ; e- ISSN: 2621-2919

## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
EDISI 14 VOLUME (1) 2022 p - ISSN : 1979-150X ; e- ISSN: 2621-2919 Website : https://ejurnal.biges.ac.id/index.php/kesehatan/ Email : lppmbiges@gmail.com
UJI EFEKTIVITAS EKSTRAK METANOL BUAH PARE ( MOMORDICA CHARANTIA L.) TERHADAP PERTUMBUHAN ASPERGILLUS NIGER
Muhammad Ilham Gandi 1 , Ika Dyah Kurniati 2 , Mega Pandu Arfiyanti 3
1,2,3 Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Semarang muhammadilhamg.unimus@gmail.com

## ABSTRACT
Aspergillus niger is a species of fungus from the genus Aspergillus which is reported  to  be  the  main  cause  of  otomycosis.  Bitter  gourd  (Momordica charantia  L.)  contains  several  compounds,  namely  phenols,  flavonoids, triterpenoids,  steroids,  saponins,  and  alkaloids  that  have  potential  as antifungals.  This  study  aims  to  determine  the  content  of  phytochemical compounds  present  in  the  methanol  extract  of  bitter  melon  and  to  test  the effectiveness  of  the  methanol  extract  of  bitter  melon  on  the  growth  of Aspergillus  niger  through  the  MIC  test.  This  study  used  an  in  vitro laboratory  experimental  research  design  with  a  post-test-only  control group design method. The MIC test used the multilevel serial microdilution method which was observed visually. The extract concentrations used were 8000 µg/ml,  4000  µg/ml,  2000 µg/ml,  1000 µg/ml, 500  µg/ml,  250 µg/ml, 125 µg/ml, and 62.5 µg/ml. The fruit samples of this study was bitter gourd obtained  from  bitter  gourd  farmers  in  Bandungan  District,  Semarang Regency, and pure culture of Aspergillus niger FNCC 6018. Data analysis used  descriptive  analysis.  The  results  of  the  phytochemical  screening showed  positive  saponins,  flavonoids,  and  phenolic  compounds,  and  the MIC  value  was  not  found.  It  was  concluded  that  the  methanol  extract  of bitter melon was not effective in inhibiting the growth of Aspergillus niger.

## PENDAHULUAN
Aspergillus  niger adalah  spesies  jamur dari genus Aspergillus yang dilaporkan menjadi penyebab  utama  penyakit  otomikosis . (Edward &  Irfandy,  2012) , (Ali  et  al.,  2018) Aspergillus niger juga  sering  menyebabkan  penyakit pernapasan  pada  manusia  yaitu Chronic Pulmonary  Aspergillosis (CPA).  Penyakit aspergilosis  masih  menjadi  masalah  penting kesehatan dengan jumlah penderita diperkirakan 3 juta orang di seluruh dunia. CPA memiliki  angka  mortalitas  jangka  pendek sebesar  20-33%  dan  meningkat  menjadi  50% untuk  jangka  waktu  5  tahun  pada  masa pengobatan.(Hayes & Novak-Frazer, 2016)
Aspergillus  niger juga  diketahui  menjadi penyebab  utama  ketiga  dari  aspergilosis  paru
invasif.(Van Der Linden et al., 2011) Penelitian di  sebagian  rumah  sakit  di  DKI  Jakarta melaporkan  angka  kejadian  aspergilosis  paru invasif  di  ruang  ICU  sebesar  7,7%.(Rozaliyani A,  Jusuf  A,  Priyanti  ZS,  Burhan  E,  Handayani D,  Widowati  H,  2019)  Beberapa  penelitian terbaru  melaporkan  bahwa Invasive  Pulmonary Aspergillosis (IPA) banyak  ditemukan  pada pasien Covid-19 dengan derajat berat. Covid-19 Associated  Invasive  Pulmonary  Aspergillosis (CAPA)  juga  dilaporkan  memiliki  angka prevalensi  dan  mortalitas  yang  tinggi  pada pasien  Covid-19  dengan  derajat  berat.(Lahmer et al., 2021) , (Fekkar et al., 2021)
Salah  satu  cara  yang  dipilih  sebagai alternatif  dari  obat-obatan  kimia  adalah  obat dari  bahan  alam.  Obat  berbahan  alam  dipilih

## Keywords:
Momordica charantia,
Methanolic Extract, Aspergillus  niger, Microdilution

## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
EDISI 14 VOLUME (1) 2022 p- ISSN : 1979-150X ; e- ISSN: 2621-2919
karena  memiliki  efek  samping  yang  relatif kecil.(Sumayyah  &  Salsabila,  2017)  Salah  satu obat  bahan  alam  yang  bisa  digunakan  untuk terapi antijamur adalah tumbuhan pare ( Momordica  charantia L. ).  Beberapa  penelitian sebelumnya  melaporkan  bahwa  buah  pare memiliki  kandungan  beberapa  senyawa  yaitu fenol,  flavonoid, cucurbitan-type triterpenoid, iridoid  lakton,  dan  protein  α-momorcharin. Ekstrak  kloroform,  ekstrak  heksan,  dan  ekstrak etil  asetat  buah  pare  dilaporkan  memiliki aktivitas  untuk  menghambat  pertumbuhan jamur Aspergillus niger dengan nilai Konsentrasi  Hambat  minimal  (KHM)  sebesar 100µg/mL dengan metode
mikrodilusi.(Villarreal-La  Torre  et  al.,  2020) Akan  tetapi,  penelitian  mengenai  penentuan KHM  ekstrak  etanol  dan  metanol  buah  pare terhadap Aspergillus niger menggunakan metode mikrodilusi belum pernah dilaporkan.
Pelarut  yang  digunakan  pada  saat ekstraksi  memiliki  peran  penting  terhadap rendemen  ekstraksi,  kandungan  komponen kimia, dan aktivitas biologi yang diuji. Metanol diketahui  memiliki  daya  ekstraksi  polifenol dengan berat molekul rendah yang lebih  efisien dibandingkan dengan pelarut lain seperti aseton dan etanol.(Do et al., 2014) Metanol diidentifikasi  sebagai  pelarut  yang  paling efektif untuk ekstraksi karena mampu menghasilkan rendemen ekstraksi, dan kandungan fenolik yang tinggi. Oleh karena itu, metanol direkomendasikan sebagai pelarut yang optimal untuk memperoleh hasil ekstrak dengan kandungan  fitokimia  dan  antioksidan  yang tinggi.(Truong et al., 2019)
Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi  senyawa  fitokimia  yang  dapat dihasilkan  dari  ekstrak metanol buah pare yang memiliki  aktivitas  antijamur  serta  menganalisis efektivitas  ekstrak  metanol  buah  pare  dalam menghambat  pertumbuhan  jamur Aspergillus niger dengan uji Konsentrasi Hambat Minimum (KHM).

## METODE
Jenis Penelitian Penelitian
ini merupakan penelitian eksperimental  laboratorium  secara in  vitro dengan  metode post-test-only  control  group design.
Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  STIFAR  Kota Semarang  dan  Fakultas  Kedokteran  Unimus. Penelitian  ini  dilaksanakan pada bulan Januari – Maret 2022.
Populasi dan Sampel. Populasi penelitian adalah kultur murni
Aspergillus niger FNCC 6018 yang dihomogenkan dan disuspensikan dengan kekeruhan setara 0,4 – 5 x 10 4 CFU/mL.(Rex et al.,  2010)  Buah  pare  yang  yang  digunakan diperoleh  dari  petani  pare  di  Kecamatan Bandungan, Kabupaten Semarang.

## Pengumpulan Data
Data  dalam  penelitian  ini  diperoleh  dari hasil  uji  eksperimental  meliputi  uji  kualitatif fitokimia dan uji Konsentrasi Hambat Minimum  (KHM)  dengan  metode  mikrodilusi serial  bertingkat  menggunakan microplate  96- well yang diamati secara visual.

## Pembuatan Ekstrak Metanol Buah Pare
Buah  pare  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  buah  pare  yang  matang dan  tidak  busuk  sebanyak  5  kilogram.  Buah pare  dicuci  dengan  air  mengalir,  dibersihkan dari biji-bijinya, kemudian dipotong kecil-kecil. Buah pare kemudian dikeringkan di dalam oven dengan  suhu  50°C  selama  24  jam.  Potongan buah  pare  kering  kemudian  dihaluskan  dengan blender  hingga  menjadi  serbuk  simplisia. Serbuk  simplisia  kemudian  dimaserasi  dengan 1000  ml  metanol  96%  selama  3x24  jam. Metanol  96%  diperoleh  dengan  melarutkan sejumlah  960  ml  metanol  100%  dengan  40  ml akuades.
Selama proses ekstraksi, tabung maserasi  disimpan  di  tempat  yang  terlindung dari cahaya matahari dan dilakukan pengadukan berulang  sebanyak  3  kali  setiap  24  jam.  Hasil maserasi  kemudian  disaring  menggunakan corong Buchner atau  kain  kasa  untuk  diambil filtratnya.  Filtrat  kemudian  diuapkan  dengan menggunakan rotary evaporator pada temperatur  40-60°C  hingga  tersisa  ekstrak kental.(Yeo et al., 2014)

## Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Metanol  Buah Pare
Uji Fenolik
Uji  fenolik  dilakukan  dengan  metode Tes  Ferri  Klorida.  Ekstrak  metanol  buah  pare sebanyak  3  tetes  di  tambah  dengan  3-4  tetes

## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
garam  besi  klorida.  Warna  hijau  hingga  biru kehitaman  merupakan  tanda  adanya  kandungan fenolik  di  dalam  larutan  ekstrak.(Rivai  et  al., 2019)
Uji Alkaloid Uji alkaloid dilakukan dengan menggunakan  reagen  Dragendroff.  Ekstrak metanol  buah  pare  sebanyak  2  ml  dimasukkan ke  dalam dua tabung reaksi yang berbeda. Tiap tabung  reaksi  berisi  ekstrak  tersebut  lalu  diberi reagen  Dragendroff  sebanyak  lima  tetes. Terbentuknya  sedimen  atau  endapan  berwarna jingga  menunjukkan  adanya  senyawa  alkaloid di  dalam  larutan  ekstrak.(Ergina  et  al.,  2014) Uji  alkaloid  juga  dapat  dilakukan  dengan memakai  reagen  Mayer.  Ekstrak  metanol  buah pare  sebanyak  2  ml  dimasukkan  ke  dalam  dua tabung  reaksi  yang  berbeda.  Kemudian  tiap tabung  reaksi  yang  berisi  ekstrak  tersebut ditambah  dengan  tiga  tetes  asam  klorida  pekat dan  lima  tetes  reagen  Mayer.  Terbentuknya endapan  berwarna  keputihan  menandakan bahwa ekstrak mengandung senyawa Alkaloid.(Ergina et al., 2014)
Uji Saponin Uji saponin dilakukan dengan menggunakan metode Froth. Ekstrak dimasukkan  ke dalam tabung reaksi sejumlah 2 ml.  Sampel  kemudian  ditambahkan  dengan aquades  sebanyak  10 ml dan dikocok menggunakan  vortex  selama  kurang  lebih  30 detik.  Bila  terdapat  busa  yang  menetap  selama sekitar  30  detik  maka  pengujian  menunjukkan hasil positif saponin di dalam ekstrak.(Marliana et al., 2005)
Uji Flavonoid Uji flavonoid dilakukan dengan metode Uji Ferri Klorida. Ekstrak sebanyak 0,2 ml  kemudian  ditambah  dengan  FeCl 3 10%  dan dikocok. Terbentuknya endapan berwara cokelat  kayu  menunjukkan  adanya  flavonoid dalam ekstrak.(Singh et al., 2012)
Uji Terpenoid
Sejumlah  2  ml  ekstrak  metanol  buah pare  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi. Sampel  kemudian  ditambah  dengan  tiga  tetes HCl  pekat  dan  satu  tetes  H 2 SO 4 pekat. Terbentuknya  larutan  berwarna  merah  hingga keunguan menunjukkan  adanya  terpenoid dalam ekstrak.(Ergina et al., 2014)
Uji Steroid
Uji  steroid  dilakukan  dengan  memasukkan 2  ml  ekstrak  ke  dalam  tabung  reaksi.  Sampel ekstrak kemudian ditambah tiga tetes HCl pekat serta  satu  tetes  H 2 SO 4 pekat.  Terbentuknya warna kehijauan pada larutan sampel menunjukkan  adanya  kandungan  steroid  di dalam ekstrak.(Ergina et al., 2014)
Pembuatan Suspensi Aspergillus niger FNCC 6018
Larutan  0.5  Mc  Farland  dibuat  dengan menambahkan  H 2 SO 4 1%  sejumlah  9,95  mL dengan  BaCl 2 1%  sejumlah  0,05  mL  di  dalam tabung reaksi.(Cavalieri et al., 2005) Pembuatan  suspensi  jamur Aspergillus  niger FNCC  6018  dilakukan  dengan  mengambil  satu koloni  murni  kemudian  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  berisi  media Saburoud  Dextrose Broth (SDB).  Koloni  tersebut  kemudian dihomogenkan  dengan  vortex  dan  disesuaikan dengan  standar  0.5  Mc  Farland  (1,5  x  10 8 CFU/mL).  Suspensi Aspergillus  niger FNCC 6018  kemudian  disesuaikan  kekeruhannya dengan standar 0.5 Mc Farland secara visual.
Suspensi Aspergillus niger FNCC 6018 kemudian  diambil  sebanyak  100  µL  dengan mikropipet  steril  ke  tabung  reaksi  kedua  yang berisi Saburoud Dextrose Broth (SDB) sebanyak  900   µL  dan  dihomogenkan  sehingga didapatkan  suspensi  dengan  kekeruhan  1,5  x 10 6 CFU/ml.  Suspensi Aspergillus  niger FNCC 6018  pada  tabung  reaksi  kedua  diambil sejumlah  100  µL  dengan  mikropipet  ke  tabung reaksi  ketiga  yang  berisi Saburoud  Dextrose Broth (SDB) sebanyak 900 µL dan dihomogenkan  sehingga  didapatkan  suspensi dengan kekeruhan 1,5 x 10 4 CFU/ml. (Petrikkou  et  al.,  2001) , (Goughenour  et  al., 2015)
Uji  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) dengan Metode Mikrodilusi Serial Bertingkat Uji  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) dilakukan dengan menggunakan metode mikrodilusi  serial  bertingkat.  Uji  ini  dilakukan pada  satu  buah microplate  96-well steril.  Uji KHM  dilakukan  dengan  menyiapkan  sampel perlakuan  ekstrak  dengan  konsentrasi  8000 µg/mL,  4000  µg/mL,  2000  µg/mL,  1000 µg/mL,  500  µg/mL,  250  µg/mL,  125  µg/mL, 62,5  µg/mL.  Kelompok  kontrol  positif  obat

## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
EDISI 14 VOLUME (1) 2022 p- ISSN : 1979-150X ; e- ISSN: 2621-2919
menggunakan ketokonazol murni dengan konsentrasi  16  µg/mL,  8  µg/mL,  4  µg/mL,  2 µg/mL,  dan  1  µg/mL.  Setiap  sampel  kemudian dilakukan  pengulangan  sebanyak  empat  kali. Prosedur  ini  dilakukan  dengan  prosedur  aseptis di dalam laminar air flow (LAF) .

## Pengolahan dan Analisis Data
Data skrining fitokimia diperoleh  dengan mengamati secara visual perubahan yang terjadi pada ekstrak setelah dilakukan uji tiap senyawa fitokimia.  Data  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM)  ekstrak  metanol  buah  pare  terhadap jamur Aspergillus  niger FNCC  6018  diperoleh dengan mengamati ada atau tidaknya pertumbuhan Aspergillus  niger FNCC  6018 pada sumuran microplate .

## HASIL
Ekstraksi metanol buah pare ( Momordica charantia i L. ) dengan metode maserasiiimenghasilkan ekstrak kental
berwarna  cokelat  kehitaman  sejumlah  27,45 gram.  Ekstrak  metanol  buah  pare  tersebut memiliki  rendemen  ekstrak  sebanyak  0,549  %. Uji  kualitatif  fitokimia  menunjukkan  hasil bahwa  ekstrak  metanol  buahipare  memberikan hasil  yang  positif  pada  ujiisaponin,  flavonoid, dan  fenolik,  tetapi  menunjukkan  hasil  yang negatif pada uji steroid, terpenoid, dan i alkaloid.
Gambar 1. Hasil Uji Saponin
Gambar 2. Hasil Uji Flavonoid Gambar 3. Hasil Uji Terpenoid Gambar 4. Hasil Uji Fenolik Gambar 5. Hasil Uji Steroid
Gambar 6. Hasil Uji Alkaloid
Hasil  uji  skrining  fitokimia  dapat  dilihat pada tabel dibawah ini:
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Metanol Buah Pare
Golongan Senyawa Hasil Skrining Fitokimia Saponini +

## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
EDISI 14 VOLUME (1) 2022
p- ISSN : 1979-150X ; e- ISSN: 2621-2919 Flavonoidi + Steroidi - Fenoliki + Terpenoidi - Alkaloidi -
Hasil  uji  KHM  menunjukkan  ekstrak metanol  buah  pare  pada  semua  konsentrasi masih  terdapat  pertumbuhan  jamur Aspergillus niger FNCC  6018  yang  sempurna  seperti  pada kontrol negatif. Pertumbuhan jamur Aspergillus niger FNCC  6018  ditunjukkan  dengan  adanya
hifa  berwarna  putih  pada  sumuran microplate 96-well . Hasil uji pada kelompok kontrol positif ketokonazol  tidak  ditemukan  adanya  hifa Aspergillus  niger FNCC  6018  pada  seluruh sumuran  perlakuan.  Hasil  uji  KHM  dapat dilihat pada tabel dibawah ini:
Tabel 2. Hasil Uji KHM Ekstrak Metanol Buah Pare
Konsentrasi Ekstrak Buah Pare (µg/ml) Pertumbuhan Aspergillus niger I II III IV 8000 + + + + 4000 + + + + 2000 + + + + 1000 + + + + 500 + + + + 250 + + + + 125 + + + + 62,5 + + + +
Tabel 3. Hasil Uji Kelompok Kontrol Positif Ketokonazol
Konsentrasi Ekstrak Buah Pare (µg/ml) Pertumbuhan Aspergillus niger I II III IV 16 - - - - 8 - - - - 4 - - - - 2 - - - - 1 - - - -

## PEMBAHASAN
Ekstrak metanol buah pare ( Momordica charantia  L. )  dalam  pengujian  kualitatif fitokimia ditemukan memiliki kandungan senyawa  saponin,  flavonoid,  dan  fenolik.  Hasil ini  membuktikan  bahwa  hasil  uji  kualitatif fitokimia  pada  penelitian  ini  memiliki  hasil yang sama sebagaimana penelitian
sebelumnya.(Villarreal-La Torre et al., 2020) , (Saeed  et  al.,  2018)  Senyawa  steroid, terpenoid,  dan  alkaloid  tidak  ditemukan  pada uji  kualitatif  fitokimia  pada  penelitian  ini. Perbedaan kandungan senyawa fitokimia tersebut dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor
seperti  genetik,  geografis,  serta  faktor-faktor abiotik  seperti  kelembapan,  angin,  dan  metode ekstraksi yang dipakai.(Kweka et al., 2011)
Perbedaan polaritas pelarut ekstrak juga dapat  menentukan  perbedaan  pada  jenis, komposisi,  serta  aktivitas  antioksidan  dari senyawa  fitokimia.(Sri  Widyawati  et  al.,  2014) Pelarut metanol dan akuades diketahui memiliki sifat  polar.  Pelarut  yang  memiliki  sifat  polar hanya  dapat  mengikat  senyawa  fitokimia  yang juga  bersifat  polar,  sedangkan  pelarut  yang bersifat non-polar hanya akan berikatan dengan senyawa yang juga bersifat non- polar.(Mahasuari  et  al.,  2020)  Pelarut  yang

## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
bersifat semi-polar juga dapat berikatan dengan senyawa  semi-polar  hingga  non-polar.  Pelarut etil  asetat  diketahui  memiliki  sifat  semi  polar, sedangkan  pelarut  heksan  diketahui  bersifat non-polar.(Ariel  et  al.,  2021)  Pelarut  lain  yang diketahui  memiliki sifat non-polar yaitu aseton, petroleum,  eter,  etanol,  dan  benzene.(Snehlata et al., 2018)
Senyawa-senyawa fitokimia yang diketahui memiliki sifat polar diantaranya yaitu fenolik,  asam  amino,  terpenoid,  glikosida, flavonoid, antosianin, saponin, tannin, xantosilin,  totarol,  quasinoid,  lakton,  fenon, flavon,  dan  polifenol.(Sri  Widyawati  et  al., 2014) Senyawa-senyawa fitokimia yang bersifat  non-polar  diantaranya  yaitu  lignin, lipid, alkaloid, aglikon, steroid, dan terpenoid.(Sri Widyawati et al., 2014) Perbedaan  polaritas  antara  pelarut  ekstrak dengan  senyawa  fitokimia  ini  diduga  menjadi faktor tidak ditemukannya alkaloid, steroid, dan terpenoid pada penelitian ini.
Hasil  uji  KHM  menunjukkan  bahwa ekstrak metanol buah pare ( Momordica charantia L)  tidak  ditemukan  adanya  daya hambat  terhadap Aspergillus  niger. Hal  ini terjadi  karena  ditemukan  adanya  pertumbuhan hifa Aspergillus  niger pada  semua  sumuran perlakuan  ekstrak.  Jumlah  hifa  yang  tumbuh pada setiap sumuran perlakuan ekstrak berbeda- beda.  Faktor-faktor  yang  dapat  mempengaruhi efektivitas  zat  antimikroba  diantaranya  yaitu status mikroba (kerentanan, resistensi, toleransi, persistensi,  dan  biofilm),  ukuran  inokulum, konsentrasi  antimikroba,  serta  faktor  inang.(Li et  al.,  2017)  Hasil  uji  kelompok  kontrol  positif ketokonazol  didapatkan  hasil  pada  konsentrasi 1  µg/mL.  Penelitian  lain  menyebutkan  bahwa MIC 50 ketokonazol  terhadap Aspergillus  niger dengan  metode  mikrodilusi  yaitu  2  µg/mL, sedangkan  MIC 90 yaitu  4  µg/mL.(Tokarzewski et al., 2012)

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan,  disimpulkan  bahwa  ekstrak  metanol buah  pare  mengandung  senyawa  saponin, flavonoid,  dan  fenolik  serta  tidak  ditemukan nilai  KHM  ekstrak  metanol  buah  pare  terhadap Aspergillus niger. Peneliti selanjutnya disarankan  untuk  melakukan  ekstraksi  buah pare dengan pelarut ekstrak yang bersifat semi- polar dan non-polar sehingga diperoleh senyawa aktif lain yang bersifat non-polar.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali, K., Hamed, M. A., Hassan, H., Esmail, A., &  Sheneef,  A.  (2018).  Identification  of fungal  pathogens  in  otomycosis  and  their drug sensitivity: Our experience. International Archives of Otorhinolaryngology , 22 , 1–2. https://doi.org/https://dx.doi.org/10.1055
%2Fs-0038-1626702
Ariel,  D.  G.,  Winarsih,  S.,  Putri,  F.  F.,  Erwan, N.  E.,  Putri,  A.  M.,  Cahyono,  A.  W., Mardhiyyah,  K.,  Fitri,  L.  E.,  &  Nugraha, R. Y. B. (2021). Optimation of combination  of  n-hexane  solution  and ethyle  acetate  on  secondary  metabolite compounds profile of Streptomyces hygroscopicus. Jurnal Kedokteran Brawijaya , 31 (3), 186. https://doi.org/10.21776/ub.jkb.2021.031.
03.11
Cavalieri, S. J., Harbeck, R. J., McCarter, Y. S., Ortez, J. H., & D, R. I. (2005). Manual of antimicrobial  susceptibility testing (M.  B. Coyle  (ed.)).  American  Society  for Microbiology.
Do,  Q.  D.,  Angkawijaya,  A.  E.,  Tran-Nguyen, P.  L.,  Huynh,  L.  H.,  Soetaredjo,  F.  E., Ismadji,  S.,  &  Ju,  Y.  H.  (2014).  Effect  of extraction solvent on total phenol content, total  flavonoid  content,  and  antioxidant activity  of  Limnophila  aromatica. Journal of  Food  and  Drug  Analysis , 22 (3),  296–
302.
https://doi.org/10.1016/j.jfda.2013.11.001
Edward, Y., & Irfandy, D. (2012). Otomycosis. Jurnal Kesehatan Andalas , 1 (2), 101–106. Ergina, Nuryanti, S., & Pursitasari, I. D. (2014). Uji  kualitatif  senyawa  metabolit  sekunder pada  daun  palado  yang  diekstrasi  dengan pelarut  air  dan  etanol. Akademika  Kimia ,
3 (3), 165–172.
Fekkar,  A.,  Lampros,  A.,  Mayaux,  J.,  Poignon, C.,  Demeret,  S.,  Constantin,  J.  M., Marcelin,  A.  G.,  Monsel,  A.,  Luyt,  C.  E., &  Blaize,  M.  (2021).  Occurrence  of invasive  pulmonary  fungal  infections  in patients  with  severe  COVID-19  admitted to  the  ICU. American  Journal  of Respiratory  and  Critical  Care  Medicine , 203 (3), 307–317. https://doi.org/10.1164/rccm.202009- 3400OC

## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
EDISI 14 VOLUME (1) 2022 p- ISSN : 1979-150X ; e- ISSN: 2621-2919
Goughenour,  K.  D.,  Balada-Llasat,  J.  M.,  & Rappleye,  C.  A.  (2015).  Quantitative microplate-based growth assay for determination  of  antifungal  susceptibility of histoplasma capsulatum yeasts. Journal of  Clinical  Microbiology , 53 (10),  3286– 3295.  https://doi.org/10.1128/JCM.00795- 15
Hayes,  G.  E.,  &  Novak-Frazer,  L.  (2016). Chronic  pulmonary  aspergillosis:  Where are  we?  And  where  are  we  going?  In Journal  of  Fungi (Vol.  2,  Issue  2).  MDPI AG. https://doi.org/10.3390/jof2020018
Kweka,  E.  J.,  Nyindo,  M.,  Mosha,  F.,  & Silva,
A.  G.  (2011).  Insecticidal  activity  of  the essential  oil  from  fruits  and  seeds  of Schinus terebinthifolia raddi against
african  malaria  vectors. Parasites  and
Vectors , 4 (1), 6–10. https://doi.org/10.1186/1756-3305-4-129
Lahmer,  T.,  Kriescher,  S.,  Herner,  A.,  Rothe,
K.,  Spinner,  C.  D.,  Schneider,  J.,  Mayer, U.,  Neuenhahn,  M.,  Hoffmann,  D., Geisler,  F.,  Heim,  M.,  Schneider,  G., Schmid,  R.  M.,  Huber,  W.,  &  Rasch,  S.
(2021).  Invasive  pulmonary  aspergillosis in  critically  ill  patients  with  severe COVID-19  pneumonia:  Results  from  the prospective AspCOVID-19 study. In PLoS
ONE (Vol. 16, Issue 3 March). https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238
825
Li,  J.,  Xie,  S.,  Ahmed,  S.,  Wang,  F.,  Gu,  Y.,
Zhang,  C.,  Chai,  X.,  Wu,  Y.,  Cai,  J.,  & Cheng,  G.  (2017).  Antimicrobial  activity and resistance: Influencing factors.
Frontiers in Pharmacology , 8 . https://doi.org/https://doi.org/10.3389/fpha r.2017.00364
Mahasuari,  N.  P.  S.,  Paramita,  N.  L.  P.  V.,  & Yadnya Putra, A. . G. R. (2020). Effect of methanol  concentration  as  a  solvent  on total  phenolic  and  flavonoid  content  of beluntas  leaf  extract  (Pulchea  indica  L.). Journal  of  Pharmaceutical  Science  and
Application , 2 (2), 77. https://doi.org/10.24843/jpsa.2020.v02.i02
.p05
Marliana,  S.  D.,  Suryanti,  V.,  &  Suyono. (2005).  Skrining  fitokimia  dan  analisis kromatografi  lapis  tipis  komponen  kimia buah  labu  siam  (Sechium  edule  Jacq  . Swartz .) dalam ekstrak etanol.
Biofarmasi , 3 (1), 26–31.
Petrikkou, E., Rodríguez-Tudela, J. L., Cuenca- Estrella,  M.,  Gómez,  A.,  Molleja,  A.,  &
Mellado, E. (2001). Inoculum standardization for antifungal
susceptibility  testing  of  filamentous  fungi pathogenic  for  humans.  In Journal  of
Clinical  Microbiology (Vol.  39,  Issue  4,
pp.
1345–1347). https://doi.org/10.1128/JCM.39.4.1345-
1347.2001
Rex,  J.  H.,  Alexander,  B.  D.,  Andes,  D., Arthington-Skaggs,  B.,  Brown,  S.  D.,  & Chaturveli,  V.  (2010).  Reference  method for  broth  dilution  antifungal  susceptibility testing  of  filamentous  fungi;  Approved standard  -  Second  Edition. Clinical  and Laboratory Standards Institute , 28 (16), 6. Rivai,  H.,  Sari,  D.  P.,  &  Azizah,  Z.  (2019).
Analisis kualitatif dan kuantitatif kandungan  senyawa  dari  ekstrak  heksan, aseton,  etanol  dan  air  dari  buah  pare (Momordica  charantia  L.) . March ,  1–6. https://doi.org/10.13140/RG.2.2.30013.00 487
Rozaliyani  A,  Jusuf  A,  Priyanti  ZS,  Burhan  E, Handayani  D,  Widowati  H,   et  al.  (2019). Infeksi  jamur  paru  di  Indonesia:  Situasi saat  ini  dan  tantangan  di  masa  depan. Jurnal  Respirologi  Indonesia , 39 ,  210–
213.
https://jurnalrespirologi.org/index.php/jri/ article/download/69/49
Saeed, F., Afzaal, M., Niaz, B., Arshad, M. U., Tufail,  T.,  Hussain,  M.  B.,  &  Javed,  A. (2018). Bitter melon (Momordica charantia):  A  natural  healthy  vegetable. International  Journal  of  Food  Properties , 21 (1), 1270–1290. https://doi.org/10.1080/10942912.2018.14 46023 Singh, R., Kumar, A., Giri, D. D.,
Bhuvaneshwari,  K.,  &  Pandey,  K.  D. (2012). Gas chromatogrphy-mass spectrometry  analysis  and  phytochemical screening  of  methanolic  fruit  extract  of momordica  charantia. Journal  of  Recent Advances in Agriculture , 1 (4), 122–127. Snehlata,  K.,  Sheel,  R.,  &  Kumar,  B.  (2018). Evaluation of phytochemicals in polar and non  polar  solvent  extracts  of  leaves  of Aegle  marmelos  (L.). IOSR  Journal  of Biotechnology  and  Biochemistry  (IOSR-
JBB) , 4 (5), 31–38. https://doi.org/10.9790/264X-0405013138

## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
Sri  Widyawati,  P.,  Budianta,  T.  D.  W.,
Kusuma,  F.  A.,  &  Wijaya,  E.  L.  (2014). Difference of solvent polarity to phytochemical  content  and  antioxidant activity  of  Pluchea  indicia  less  leaves extracts. International Journal of Pharmacognosy and Phytochemical
Research , 6 (4), 850–855.
Sumayyah,  S.,  &  Salsabila,  N.  (2017).  Khasiat obat  tradisional. Majalah  Farmasetika , 2 (5), 2003–2006.
Tokarzewski, S., Ziółkowska, G., & Nowakiewicz,  A.  (2012).  Susceptibility testing of Aspergillus niger strains isolated from  poultry  to  antifungal  drugs  -  A comparative  study  of  the  disk  diffusion, broth  microdilution  (M  38-A)  and  etest methods. Polish  Journal  of  Veterinary
Sciences , 15 (1), 125–133. https://doi.org/10.2478/v10181-011-0123-
7
Truong,  D.  H.,  Nguyen,  D.  H.,  Ta,  N.  T.  A., Bui,  A.  V.,  Do,  T.  H.,  &  Nguyen,  H.  C.
(2019).  Evaluation  of  the  use  of  different solvents  for  phytochemical  constituents, antioxidants, and in vitro anti- inflammatory activities of severinia buxifolia. Journal  of  Food  Quality , 2019 . https://doi.org/10.1155/2019/8178294
Van  Der  Linden,  J.  W.  M.,  Warris,  A.,  &
Verweij, P. E. (2011). Aspergillus species intrinsically  resistant  to  antifungal  agents. Medical Mycology , 49 (SUPPL. 1), 82–89. https://doi.org/10.3109/13693786.2010.49 9916
Villarreal-La  Torre,  V.  E.,  Guarniz,  W.  S., Silva-Correa,  C.,  Cruzado-Razco,  L.,  & Siche,  R.  (2020).  Antimicrobial  activity and  chemical  composition  of  Momordica Charantia:  A  review. Pharmacognosy Journal , 12 (1), 213–222.
https://doi.org/10.5530/pj.2020.12.32
Yeo, Y. L., Chia, Y. Y., Lee, C. H., Sheng Sow,
H., & Sum Yap, W. (2014). Effectiveness of  maceration  periods  with  different extraction solvents on in-vitro antimicrobial  activity  from  fruit  of Momordica  charantia  L. Journal  of Applied  Pharmaceutical  Science , 4 (10), 16–23. https://doi.org/10.7324/japs.2014.401004 Ali, K., Hamed, M. A., Hassan, H., Esmail, A., &  Sheneef,  A.  (2018).  Identification  of fungal  pathogens  in  otomycosis  and  their
drug sensitivity: Our experience. International Archives of Otorhinolaryngology , 22 , 1–2. https://doi.org/https://dx.doi.org/10.1055
%2Fs-0038-1626702
Ariel,  D.  G.,  Winarsih,  S.,  Putri,  F.  F.,  Erwan, N.  E.,  Putri,  A.  M.,  Cahyono,  A.  W., Mardhiyyah,  K.,  Fitri,  L.  E.,  &  Nugraha, R. Y. B. (2021). Optimation of combination  of  n-hexane  solution  and ethyle  acetate  on  secondary  metabolite compounds profile of Streptomyces hygroscopicus. Jurnal Kedokteran Brawijaya , 31 (3), 186. https://doi.org/10.21776/ub.jkb.2021.031.
03.11
Cavalieri, S. J., Harbeck, R. J., McCarter, Y. S., Ortez, J. H., & D, R. I. (2005). Manual of antimicrobial  susceptibility testing (M.  B. Coyle  (ed.)).  American  Society  for Microbiology.
Do,  Q.  D.,  Angkawijaya,  A.  E.,  Tran-Nguyen, P.  L.,  Huynh,  L.  H.,  Soetaredjo,  F.  E., Ismadji,  S.,  &  Ju,  Y.  H.  (2014).  Effect  of extraction solvent on total phenol content, total  flavonoid  content,  and  antioxidant activity  of  Limnophila  aromatica. Journal of  Food  and  Drug  Analysis , 22 (3),  296–
302.
https://doi.org/10.1016/j.jfda.2013.11.001 Edward, Y., & Irfandy, D. (2012). Otomycosis.
Jurnal Kesehatan Andalas , 1 (2), 101–106. Ergina, Nuryanti, S., & Pursitasari, I. D. (2014). Uji  kualitatif  senyawa  metabolit  sekunder pada  daun  palado  yang  diekstrasi  dengan pelarut  air  dan  etanol. Akademika  Kimia ,
3 (3), 165–172.
Fekkar,  A.,  Lampros,  A.,  Mayaux,  J.,  Poignon, C.,  Demeret,  S.,  Constantin,  J.  M., Marcelin,  A.  G.,  Monsel,  A.,  Luyt,  C.  E., &  Blaize,  M.  (2021).  Occurrence  of invasive  pulmonary  fungal  infections  in patients  with  severe  COVID-19  admitted to  the  ICU. American  Journal  of Respiratory  and  Critical  Care  Medicine ,
203 (3), 307–317.
https://doi.org/10.1164/rccm.202009-
3400OC Goughenour,  K.  D.,  Balada-Llasat,  J.  M.,  &
Rappleye,  C.  A.  (2015).  Quantitative microplate-based growth assay for determination  of  antifungal  susceptibility of histoplasma capsulatum yeasts. Journal of  Clinical  Microbiology , 53 (10),  3286–

## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
EDISI 14 VOLUME (1) 2022 p- ISSN : 1979-150X ; e- ISSN: 2621-2919
3295.  https://doi.org/10.1128/JCM.00795- 15
Hayes,  G.  E.,  &  Novak-Frazer,  L.  (2016).
Chronic  pulmonary  aspergillosis:  Where are  we?  And  where  are  we  going?  In Journal  of  Fungi (Vol.  2,  Issue  2).  MDPI AG. https://doi.org/10.3390/jof2020018
Kweka,  E.  J.,  Nyindo,  M.,  Mosha,  F.,  & Silva,
A.  G.  (2011).  Insecticidal  activity  of  the essential  oil  from  fruits  and  seeds  of Schinus terebinthifolia raddi against african  malaria  vectors. Parasites  and Vectors , 4 (1), 6–10. https://doi.org/10.1186/1756-3305-4-129
Lahmer,  T.,  Kriescher,  S.,  Herner,  A.,  Rothe,
K.,  Spinner,  C.  D.,  Schneider,  J.,  Mayer, U.,  Neuenhahn,  M.,  Hoffmann,  D., Geisler,  F.,  Heim,  M.,  Schneider,  G., Schmid,  R.  M.,  Huber,  W.,  &  Rasch,  S. (2021).  Invasive  pulmonary  aspergillosis in  critically  ill  patients  with  severe COVID-19  pneumonia:  Results  from  the prospective AspCOVID-19 study. In PLoS
ONE (Vol. 16, Issue 3 March).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238 825 Petrikkou, E., Rodríguez-Tudela, J. L., Cuenca-
Estrella,  M.,  Gómez,  A.,  Molleja,  A.,  &
Mellado, E. (2001). Inoculum standardization for antifungal
susceptibility  testing  of  filamentous  fungi pathogenic  for  humans.  In Journal  of
Clinical  Microbiology (Vol.  39,  Issue  4, pp.
1345–1347). https://doi.org/10.1128/JCM.39.4.1345-
1347.2001
Rex,  J.  H.,  Alexander,  B.  D.,  Andes,  D.,
Arthington-Skaggs,  B.,  Brown,  S.  D.,  & Chaturveli,  V.  (2010).  Reference  method for  broth  dilution  antifungal  susceptibility testing  of  filamentous  fungi;  Approved standard  -  Second  Edition. Clinical  and Laboratory Standards Institute , 28 (16), 6.
Rivai,  H.,  Sari,  D.  P.,  &  Azizah,  Z.  (2019).
Analisis kualitatif dan kuantitatif kandungan  senyawa  dari  ekstrak  heksan, aseton,  etanol  dan  air  dari  buah  pare (Momordica  charantia  L.) . March ,  1–6. https://doi.org/10.13140/RG.2.2.30013.00 487
Rozaliyani  A,  Jusuf  A,  Priyanti  ZS,  Burhan  E, Handayani  D,  Widowati  H,   et  al.  (2019). Infeksi  jamur  paru  di  Indonesia:  Situasi saat  ini  dan  tantangan  di  masa  depan.
Jurnal  Respirologi  Indonesia , 39 ,  210– 213. https://jurnalrespirologi.org/index.php/jri/ article/download/69/49
Saeed, F., Afzaal, M., Niaz, B., Arshad, M. U., Tufail,  T.,  Hussain,  M.  B.,  &  Javed,  A. (2018). Bitter melon (Momordica charantia):  A  natural  healthy  vegetable.
International  Journal  of  Food  Properties ,
21 (1), 1270–1290. https://doi.org/10.1080/10942912.2018.14 46023 Singh, R., Kumar, A., Giri, D. D.,
Bhuvaneshwari,  K.,  &  Pandey,  K.  D. (2012). Gas chromatogrphy-mass spectrometry  analysis  and  phytochemical screening  of  methanolic  fruit  extract  of momordica  charantia. Journal  of  Recent Advances in Agriculture , 1 (4), 122–127.
Snehlata,  K.,  Sheel,  R.,  &  Kumar,  B.  (2018). Evaluation of phytochemicals in polar and non  polar  solvent  extracts  of  leaves  of Aegle  marmelos  (L.). IOSR  Journal  of Biotechnology  and  Biochemistry  (IOSR-
JBB) , 4 (5), 31–38. https://doi.org/10.9790/264X-0405013138
Sri  Widyawati,  P.,  Budianta,  T.  D.  W., Kusuma,  F.  A.,  &  Wijaya,  E.  L.  (2014). Difference of solvent polarity to phytochemical  content  and  antioxidant activity  of  Pluchea  indicia  less  leaves extracts. International Journal of
Pharmacognosy and Phytochemical Research , 6 (4), 850–855.
Sumayyah,  S.,  &  Salsabila,  N.  (2017).  Khasiat obat  tradisional. Majalah  Farmasetika ,
2 (5), 2003–2006.
Tokarzewski,
S., Ziółkowska, G., & Nowakiewicz,  A.  (2012).  Susceptibility testing of Aspergillus niger strains isolated from  poultry  to  antifungal  drugs  -  A comparative  study  of  the  disk  diffusion, broth  microdilution  (M  38-A)  and  etest methods. Polish  Journal  of  Veterinary Sciences , 15 (1), 125–133. https://doi.org/10.2478/v10181-011-0123-
7
Truong,  D.  H.,  Nguyen,  D.  H.,  Ta,  N.  T.  A., Bui,  A.  V.,  Do,  T.  H.,  &  Nguyen,  H.  C. (2019).  Evaluation  of  the  use  of  different solvents  for  phytochemical  constituents, antioxidants, and in vitro anti- inflammatory activities of severinia buxifolia. Journal  of  Food  Quality , 2019 .

## BINA GENERASI ; JURNAL KESEHATAN
EDISI 14 VOLUME (1) 2022 p- ISSN : 1979-150X ; e- ISSN: 2621-2919
https://doi.org/10.1155/2019/8178294 Van  Der  Linden,  J.  W.  M.,  Warris,  A.,  &
Verweij, P. E. (2011). Aspergillus species intrinsically  resistant  to  antifungal  agents. Medical Mycology , 49 (SUPPL. 1), 82–89.
https://doi.org/10.3109/13693786.2010.49
9916
Villarreal-La  Torre,  V.  E.,  Guarniz,  W.  S., Silva-Correa,  C.,  Cruzado-Razco,  L.,  &
Siche,  R.  (2020).  Antimicrobial  activity and  chemical  composition  of  Momordica
Charantia:  A  review. Pharmacognosy Journal , 12 (1), 213–222. https://doi.org/10.5530/pj.2020.12.32
Yeo, Y. L., Chia, Y. Y., Lee, C. H., Sheng Sow,
H., & Sum Yap, W. (2014). Effectiveness of  maceration  periods  with  different extraction solvents on in-vitro antimicrobial  activity  from  fruit  of Momordica  charantia  L. Journal  of Applied  Pharmaceutical  Science , 4 (10), 16–23. https://doi.org/10.7324/japs.2014.401004