## UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA JAMUR LAUT YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS Aaptos aaptos
Anro Christo Kacombo 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Henki Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 9511

## ABSTRACT
Marine organisms such as sponge often live in association with marine fungi which can produce antimicrobial  compounds.  This  study  aims  to  determine  the  antimicrobial  activity  of  fungal  isolates, associated  with  spone  Aaptos  aaptos.  obtained  from  the  Bay  of  Manado  against  the  growth  of Staphylococcus aureus, Escherchia coli dan Candida albicans. The samples obtained were the extracted by  using  acetone  and  ethyl  acetate.  Testing  antimicrobial  activity  using  agar  diffusion  method.  The parameters measured are the diameter of the inhibitory activity formed aound the paper disc. The results showed that extract from fungi associated with Aaptos aaptos sponge had moderate antimicrobial activity against S. aureus, E.coli, and strong activity against C.albicans.
Keywords  : Antimicrobial,  Sponge,  Aaptos  aaptos,  Staphylococcus  aureus,  Escherihia  coli,  Candida Albicans.

## ABSTRAK
Organisme  laut  seperti  spons  seringkali  hidup  berasosiasi  dengan  jamur  laut  yang  dapat menghasilkan senyawa antimikroba. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antimikroba dari isolat jamur yang berasosiasi dengan spons Aaptos aaptos sp. yang diperoleh dari Teluk Manado terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli dan jamur Candida  albicans .  Sampel diperoleh  kemudian  diekstraksi  menggunakan  pelarut  aseton  dan  etil  asetat.  Pengujian  aktivitas antimikroba  menggunakan  metode  difusi  agar.  Parameter  yang  diukur    adalah  besarnya  diameter  daya hambat  yang  terbentuk  di  sekitar  kertas  cakram.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak  dari  jamur  yang berasosiasi  dengan  spons Aaptos  aatpos memiliki  aktivitas  antimikroba  terhadap S.  aureus dan E.coli dikategorikan sedang dan aktivitas antimikroba C. albicans dikategorikan kuat.
Kata kunci : Antimikroba, Aaptos aaptos , Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans .

## PENDAHULUAN
Laut  menutupi  71%  dari  permukaan bumi,  oleh  sebab  itu  sangat  banyak  potensi yang  bisa  diambil  dari  laut  seperti  sumber makanan, zat warna, kosmetik  bahkan obat- obatan.  Pemanfaatan  organisme  laut  banyak digunakan  sebagai  sumber  senyawa  obat baru.  Hal  ini  disebabkan  oleh  kemampuan organisme  laut  seperti  tumbuhan  dan invertebrata laut dalam memproduksi senyawa kimia yang mempunyai keanekaragaman  hayati  yang  tinggi  dengan
struktur  kimia  yang  khas  (Sayed et  al ., 2001).
Spons  termasuk  filum  Porifera, merupakan  hewan  multiseluler  dengan fungsi jaringan dan organ yang masih sangat sederhana.  Hewan  ini  mempunyai  banyak pori-pori  dan  saluran-saluran  pada  seluruh bagian tubuhnya. Untuk memperoleh makanan,  hewan  ini  aktif  menghisap  dan menyaring  air  melalui  seluruh  permukaan tubuhnya.  Hewan  ini  hidup  menetap  pada suatu  habitat  pasir  batu-batuan  atau  pada karang  di  dalam  air  laut  (Amir  dan Budiyanto, 1996). Aaptos aaptos merupakan salah  jenis  spons  yang  banyak  hidup  di perairan  Indonesia.  Spesies  ini  memiliki metabolit sekunder yang dapat dimanfaatkan dalam bidang kesehatan, antara lain alkaloid, homarine dan aaptamine (Miller, et al ., 1998 ; Soest dan Brackman, 1999).
Jamur  merupakan  mikroorganisme eukariota,  memiliki  dinding  sel  yang sebagian  besar  tersusun  atas  berbagai polisakarida  dan  kitin,  simbiosis  mikroba dengan  spons  dapat  berlangsung  dalam sitoplasma  sel  tubuh  spons,  di  sisi  dalam tubuh  spons  dan  di  bagian  luar  tubuh  spons (Harti,  2015).  Berdasarkan  basis  ekologi,
jamur  yang  hidup  di  laut  dikelompokkan menjadi  dua  yaitu  jamur  laut  obligat  dan jamur  laut  fakultatif.  Jamur  laut  obligat tumbuh dan berkembang biak di habitat laut, sedangkan  jamur  laut  fakultatif  berasal  dari daratan atau air tawar yang mampu hidup di lingkungan  laut.  Selanjutnya  dinyatakan jamur  berasosiasi  dengan  substrat  dan berbagai  organisme  laut  seperti  spons, karang,  tunikata,  alga,  lamun,  moluska  dan mangrove  (Kohlmeyer  and  Kohlmeyer 1979).
Beberapa  penelitian yang  telah dilakukan  terkait  aktivitas  antimikroba jamur  endofit  pada  spons  diantaranya senyawa xestodekalakton dari jamur Penicillium cf. montanense M.  yang berasosiasi  dengan  spons Xestospongia exigua dilaporkan memiliki aktivitas antimikroba (Edrada et al ., 2002). Penelitian lain menyatakan roquefortin C,
leucinostatins  dan  equisetin  dari  jamur Penicillium sp ., Paecilomyces sp ., Fusarium sp .  yang  berasosiasi  dengan  spons Tethya aurantium memiliki  aktivitas  antimikroba (Wiese et al ., 2011).

## METODE PENELITIAN Bentuk Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan menggunakan metode
eksperimental laboratorium yang menguji aktivitas antimikroba  mikroorganisme  yang  diisolasi dari spons Aaptos aaptos.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan pada  bulan  Maret  samapai  bulan  Juni  2018 di  Laboratorium  Farmakognosi,  Fitokimia dan  Laboratorium  Mikrobiologi  Program
Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Alat Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  masker,  sarung  tangan, gunting,    snorkel,  fins,kantong  plastik, kamera,  wadah  kaca,  pisau,  Erlenmeyer, corong, rotary evaporator , timbangan digital, gelas ukur, gelas kimia, cawan petri, corong  pisah,  autoklaf,  pinset,  spatula, pembakar  spritus, magnetic  stirrer ,  pipet tetes,  mikro tub,  batang  pengaduk, Laminar air  flow ,  rak  tabung  reaksi,  tabung  reaksi, lemari  pendingin,  inkubator,  cakram  ( paper disc ),  mikropipet,  jangka  sorong,  vial, jarum ose, jas lab, mesin vacuum pump .
Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu spons Aaptos aaptos , bakteri uji
Staphylococcus aureus ATCC 25923,
Escherichia  coli ATCC  25922,  Jamur  Uji Candida  Albicans ATCC  1231 , etanol, aquadest,  etil  acetat,  aseton, Nutrient  Agar ,
Potato Dextors Agar , Glukosa, Polypeptone, MgSO 4 .7H 2 O, Yeast  Extract ,  KH 2 PO 4, Sukrosa, Starch , Malt Extract , Ebios , larutan H 2 SO 4 1%,  larutan  BaCl 2 1,75%,  larutan NaCl  0,9%  kloramfenikol paperdisc ,  label, spidol  permanen,  tissue, aluminium  foil, kertas saring, dan kapas.

## Pengambilan Sampel
Sampel  spons  diambil  dari  perairan Teluk  Manado  menggunakan  alat  bantu (Scuba  Diving). Sampel  difoto  dengan kamera  bawah  laut  dan  diambil  lalu dimasukkan  ke  dalam  ziper  bag  dan disimpan  dalam  cooling  box  berisi  es  batu untuk dibawa ke Laboratorim Farmakognosi dan  Fitokimia  Program  Studi  Farmasi Univeristas Sam Ratulangi

## Isolasi  dan  Purifikasi  Jamur  yang Berasosiasi dengan Spons
Isolasi  jamur  dilakukan  dengan  cara sampel dibersihkan dengan aquades kemudian dipotong kecil-kecil menggunakan  gunting  dan  pinset  yang kemudian dimasukkan ke dalam media PDA yang  telah  disiapkan.  Sampel  di  ambil  2 bagian, yaitu bagian luar dan dalam. Sampel ditanam di atas media PDA dengan tiga titik pusat  yang  berbentuk  segitiga.  Cawan  petri yang  berisi  sampel  ditutup  dan  direkatkan menggunakan parafilm, lalu diberi label Aap (bagian  luar  sampel)  dan  Aap  2  (bagian dalam  sampel)  kemudian  diinkubasi  pada suhu  ruangan  selama  7x24  jam.  Setelah didapatkan isolat jamur, dilakukan pemurnian dengan cara isolat jamur diinokulasikan ke media PDA yang baru dan direkatkan menggunakan parafilm, kemudian  diinkubasi    pada  suhu  ruangan selama 14x24
jam. Selanjutnya diidentifikasi  morfologi  secara  makroskopik untuk menghasilkan isolat jamur murni.

## Fermentasi
Fermentasi  dilakukan  dengan  cara biakan  jamur  murni  yang  telah  diperoleh diinokulasikan  ke  dalam  labu  erlenmeyer yang  berisi  (2  gram  glukosa,  0,5  gram polypeptone,  0,05  gram  MgSO 4 .7H 2 O,  0,2 gram  yeast  extract,  0,1  gram  KH 2 PO 4 dan 0,1  gram  agar,  dalam  100  mL  aquades). Labu tersebut kemudian diaduk menggunkan  alat  shaker  pada  suhu  27ºC dengan kecepatan 120 rpm selama 3x24 jam untuk  memperoleh  bibit  kultur.  Setelah didapatkan bibit kultur, kemudian dipindahkan  sebanyak  3  ml  ke  media produksi yang berisi ( 4,5 gram sukrosa, 4,5 gram  strach,  1,5  gram  ekstrak  malt,  0,45
Ebios,  0,75  gram  KH 2 PO 4 dan  0,075 MgSO 4. 7H 2 O dalam 150 mL aquades). Labu tersebut kemudian diaduk menggunakan alat shaker  pada  suhu  27ºC  dengan  kecepatan 120 rpm selama 7x24 jam.

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Setelah  proses  fermentasi,  dilakukan ekstraksi  dengan  menggunakan  200  mL aseton. Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan  shaker  pada  suhu  ruangan dengan  kecepatan  150  rpm  selama  5  menit. Kemudian  dipisahkan  antara  fase  air  dan aseton  menggunakan  mesin  vacuum  pump  , sehingga  didapatkan  ekstrak  kental.  Setelah didapatkan ekstrak kental dari hasil evaporasi  dimasukkan  ke  dalam  corong pisah  dan  ditambahkan  pelarut  etil  asetat sebanyak 170 mL setelah itu dikocok dalam corong  pisah  sampai  homogen.  Dibiarkan sampai  terbentuk  dua  lapisan,  setelah  itu masing-masing  lapisan  ditampung  pada wadah yang berbeda. Lapisan H 2 O kemudian  difraksinasi  lagi  mengggunakan pelarut etil asetat sebanyak 200  mL. Hal  ini dilakukan  sebanyak  tiga  kali,  selanjutnya fraksi  etil  asetat  dikumpulkan  kemudian pelarut diuapkan menggunakan rotary evaporator  sampai  diperoleh  ekstrak  kasar yang  akan  digunakan  untuk  uji  aktivitas antimikroba.

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  (disc diffusion  Kirby  and  Bauer),  aktivitas penghambatannya diuji
terhadap
Staphylococcus aureus ATCC 25923
(bakteri  Gram  Positif), Eschrichia  coli ATCC  25922  (bakteri  Gram  Negatif),
Candida albicans ATCC 1231 (jamur), yang digunakan sebagai mikroorganisme uji. Pada
pengujian  aktivitas  antimikroba  ini,  cakram (paper  disc)  yang  digunakan  berukuran  6 mm. Suspensi mikroba kemudian diinokulasikan ke dalam media dan dihomogenkan. Kemudian  media  yang telah diinokulasi  mikroba  dituangkan  ke  dalam cawan  petri  dan  tunggu  sampai  media memadat. Masing-masing cawan petri diberi label dan nomor sampel yang sesuai. Sampel yang  telah  ditentukkan  konsentrasinya (250µ/50µl)  ditotolkan  pada  masing-masing cakram  dengan  menggunakan  mikropipet. Letakkan kertas cakram yang telah ditotolkan sampel uji dengan pinset kedalam cawan  petri  lalu  diinkubasi  selama  1  x  24 jam (Ortez, 2005).
Pengamatan dan Pengukuran Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24 jam  setelah  masa  inkubasi.  Zona  bening merupakan  petunjuk  kepekaan  mikroba terhadap bahan antimikroba yang digunakan sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan lebar  diameter  zona  hambat  (Vandepite, 2005).  Diameter  zona  hambat  diukur kemudian  dikategorikan  kekuatan  daya antimikrobanya  berdasarkan  penggolongan Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Sampel Aaptos  aaptos yang  telah  diambil dari perairan Teluk Manado, Sulawesi Utara langsung  dibawa  ke  laboratorium  Fitokimia dan  Laboratorium  Farmakognosi  Program studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam
Ratulangi. Selanjutnya determenasi di
Program  Studi  Ilmu  Kelautan  Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan agar
mengetahui  sampel  yang  diambil  adalah sampel  yang  sesuai  yaitu  spons Aaptos aaptos
Isolasi dan Purifkasi Jamur yang Berasosiasi dengan Spons Sampel yang telah disiapkan kemudian dibersihkan dengan aquades untuk menghilangkan kotoran dan mikroorganisme epifit,   sehingga  koloni  yang  tumbuh  pada media  isolasi  merupakan  koloni  simbion (Arnold et  al .,  2000).  Kemudian  dilakukan proses  isolasi  selama  7x24  jam  untuk menumbuhkan mikroba di luar dari lingkungan  alaminya.  Kemudian  diamati perbedaan  karakteristik  secara  makroskopik didapatkan isolat jamur yang tumbuh terlihat seperti  benang  hitam  dengan  campuran sedikit  benang  berwarna  putih,  kemudian isolat jamur yang  didapatkan  dipilih berdasarkan  koloni  yang  paling  besar, kemudian  dipindahkan  lagi  menggunakan jarum  ose  ke  media  PDA  yang  baru  selama 14x24  jam  pada  suhu  ruangan,  sehingga didapatkan isolat murni.
Pemisahan mikroorganisme  dari  lingkungannya  ini bertujuan untuk memperoleh biakan mikroba  yang  sudah  tidak  bercampur  lagi dengan  mikroba  lainnya  dan  ini  disebut dengan isolat murni (Ginandjar, 2006).

## Fermentasi
Fermentasi  dalam  penelitian  ini dilakukan dengan cara kultur cair, digunakan  metode  kultur  cair  karena  jenis dan konsentrasi komponen-komponen
medium  dapat  diatur  sesuai  yang  di inginkan,  dapat  memberikan  kondisi  yang optimum untuk pertumbuhan mikroorganisme  (Rahman,  1992).  Kultur cair  dilakukan  sebanyak  2x  dengan  periode waktu  yang  berbeda,  yang  pertama  selama
3x24  diaduk  menggunakan  shaker  dengan kecepatan  150  rpm  pada  suhu  27°C  jam untuk  memperoleh  media  bibit  dengan, setelah didapatkan media bibit lalu dipindahkan ke media produksi selama 7x24 jam  pada  alat  shaker  dengan  kecepatan  150 rpm  pada  suhu  27°C.  Penggunaan  alat shaker dalam proses fermentasi ini bertujuan untuk  menyesuaikan  dengan  lingkungan hidup  tempat  sampel  berada  juga  untuk terjadinya  proses  agitasi  yaitu  proses pengadukan  untuk  menghasilkan  campuran yang  homogen,  menaikan  nutrsi,  menjaga mikroba  tetap  tersuspensi,  dan  transfer panas.  Transfer  panas  di  butuhkan  untuk menjaga  agar  suhu  tetap  konsisten  selama proses fermentasi berlangsung.
Pencampuran  yang  efisien  dalam  agitasi  ini sangat penting untuk transfer oksigen dalam fermentasi,  karena  mikroorganisme  dapat mengambil  oksigen  hanya  dari  fase  cair (Ginandjar, 2006).

## Ektraksi dan Fraksinasi
Setelah  proses  fermentasi  selesai, dilakukan ekstraksi dengan metode maserasi dalam  penelitian  ini  digunakan  shaker dengan aseton 200 mL  selama 5 menit pada suhu  ruangan.  Maserasi  adalah  proses pengekstrakan simplisia menggunakan pelarut  dengan  beberapa  kali  pengocokkan atau  pengadukan  pada  suhu  ruangan (Depkes  RI,  2000).  Maserasi  akan  lebih efektif  jika  dilakukan  proses  pengadukan secara  berkala  karena  keadaan  diam  selama maserasi menyebabkan turunnya perpindahan  bahan  aktif.  Melalui  usaha  ini diperoleh  suatu  keseimbangan  konsentrasi bahan  ekstraktif  yang  lebih  cepat  masuk  ke dalam  cairan  pengekstrak  (Voight,1995). Keunggulan  metode  maserasi  ini  adalah
maserasi  merupakan  cara  ekstraksi  yang paling sederhana dan paling banyak digunakan,  peralatannya  mudah  ditemukan dan pengerjaannya sederhana (Agoes, 2007). Kemudian  sampel  disaring  menggunakan mesin  vacuum  pump  sampai  mendapatkan ektrak kental.
Setelah  didapatkan  ekstrak  kental kemudian difraksinasi dengan menggunakan etil  asetat.  Fraksinasi  dilakukan  secara bertingkat berdasarkan tingkat kepolarannya yaitu  dari  non  polar,  semi  polar,  dan  polar. Senyawa yang memiliki sifat non polar akan larut  dalam  pelarut  non  polar,  yang  semi polar  akan  larut  dalam  pelarut  semi  polar, dan  yang  bersifat  polar  akan  larut  kedalam pelarut polar (Harborne 1987). Fraksinasi ini umumnya  dilakukan  dengan  menggunakan metode  corong  pisah  atau  kromatografi kolom. Ektrak kental ini dipartisi menggunakan  corong  pisah  dengan  pelarut etil  asetat.  Ektrak  kental  (170  mL)  yang telah  ada  kemudian  dicampur  dengan  etil asetat  (170  mL)  kemudian  di  kocok,  hal  ini bertujuan  agar  kandungan  kimia  yang terkandung  dalam  sampel  secara  selektif dapat  ditarik  oleh  pelarut  yang  digunakan. Setelah  dikocok,  didiamkan  beberapa  menit sampai  terbentuk  dua  lapisan,  lapisan  atas merupakan  fraksi  etil  asetat  dan  lapisan bawah  merupakan  fraksi  air,  pelarut  yang memiliki  massa  jenis  lebih  tinggi  akan berada  dilapisan  bawah,  dan  yang  memiliki massa  jenis  lebih  kecil  akan  berada  di lapisan  atas,  selanjutnya  fraksi  yang  sudah ada  ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda dan perlakuan yang sama dilakukan sebanyak  tiga  kali.  Kemudian  fraksi  air  ini dievaporasi  pada  suhu  40°C  sehingga
diperoleh  Ekstrak  kasar  yang  akan  dipakai untuk pengujian aktivitas antimikroba.

## Pengamatan dan Pengukuran
Pengujian aktivitas antimikroba ekstrak  dari  jamur  yang  berasosiasi  dengan spons Aaptos  aaptos di  uji  pada  pada  pada Staphylococcus  aureus ATCC  25923  untuk mewakili  bakteri  golongan  Gram  positif, Eschrichia coli ATCC 25922 untuk mewakili bakteri golongan Gram negatif dan Candida  albicans ATCC  1231  mewakili golongan jamur. Penggunaan mikroba uji ini bertujuan  untuk  mengetahui  bahwa  apakah ekstrak  kasar  dari  spons Aaptos aaptos memiliki aktivitas sebagai antimikroba serta apakah  mempunyai  spektrum  luas  yaitu dapat membunuh bakteri gram positif, gram negatif  atau  mempunyai  spektrum  sempit yaitu hanya dapat membunuh salah satu dari bakteri  gram  positif,  gram  negatif  serta dapat membunuh jamur.
Pengujian  ini  menggunakan  metode difusi  agar  dengan  cara  kertas  cakram  yang berisi  senyawa  antimikroba  diletakkan  pada media  pada  yang  telah  diinokulasi  bakteri dan  jamur.  Senyawa  antimikroba  akan berdifusi  ke  dalam  media  padat  yang diinokulasikan  bakteri  dan  jamur  sehingga menghambat pertumbuhan bakteri dan jamur yang  ditandai  dengan  terbentuknya  daerah jernih di sekeliling kertas cakram (Brooks et al., 2005).  Metode ini  menjadi  metode yang dipilih  dalam  uji  aktivitas  karena  memiliki keuntungan yaitu prosedurnya yang sederhana  (mudah  dan  praktis)  untuk dilakukan  dan  dapat  digunakan  untuk melihat  sensitivitas  berbagai  jenis  mikroba terhadap  antimikroba  pada  konsentrasi tertentu (Mawaddah, 2008; Akhyar, 2010).
Hasil  yang  di  dapatkan  yaitu  adanya zona  hambat  disekeliling  cakram  yang berukuran  6  mm  ( paper  disc) yang  ditandai dengan  area  bening,  hal  ini  menunjukan adanya  kepekaan  mikroba  terhadap  ekstrak dari  spons Aaptos  aaptos serta  antibiotik kloramfenikol  yang  digunakan  sebagai kontrol positif. Pengamatan dilakukan setelah  inkubasi  pada  suhu  37°C  selama
1x24  jam  dengan  pengulangan  sebanyak  3 kali  pada  masing  bakteri  dan  jamur, pengulangan dilakukan untuk lebih mengakuratkan hasil yang akan diperoleh.
Diameter zona hambat diukur secara horizontal dan vertikal menggunakan jangka sorong. Rata-rata hasil pengukuran diameter zona hambat disajikan pada Tabel 1.
Tabel  1. Hasil  pengukuran  rata-rata  diameter  zona  hambat  antimikroba  ekstrak  jamur  yang berasosiasi dengan spons Aaptos aaptos terhadap bakteri S. aureus ATCC 25923, E. coli ATCC 25922 dan jamur C. albicans ATCC 1231. Perlakuan Rata-rata Diameter Total (mm) SA EC CA E1 9 6 17,6 E2 8,5 7,3 15,8 Kontrol Positif 11,11 10,3 18,6 Kontrol Negatif 0 0 0 Keterangan:
SA : Staphylococcus aureus EC : Escherichia coli CA : Candida albicans Tabel 2. Standar Kekuatan Daya Antimikroba Menurut Davis dan Stout (1971).
Diameter Zona Bening (mm) Kategori >20 Sangat Kuat 10-20 Kuat 5-10 Sedang <5 Lemah
Berdasarkan  kriteria  tersebut  maka  hasil pengukuran  rata-rata  (tabel  1),  dapat  dilihat untuk  E1  zona  hambat  yang  terbentuk  pada S.  aureus sebesar  9  mm  termasuk  dalam kategori  sedang,  pada E.  coli sebesar  6  mm termasuk kategori sedang, hal ini menunjukkan  bahwa  sampel Aaptos  aaptos E1 (bagian luar) lebih peka terhadap bakteri positif dibandingkan gram negatif sedangkan  untuk  E2  zona  hambat  yang
terbentuk  pada S.  aureus sebesar  8,5  mm termasuk  kategori  sedang  dan  pada E.coli sebesar  7,3  mm  termasuk  pada  kategori sedang,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  sampel Aatptos aaptos E2 (bagian dalam) lebih peka terhadap  bakteri  gram  positif.  Berdasarkan hasil  pengamatan  pada  kedua  ekstrak  spons dapat  disimpulkan  bahwa  kedua  sampel  ini sama-sama  zona  hambat  yang  lebih  besar terhadap bakteri gram positif yaitu S.aureus .
Respon  yang  berbeda  dari  dua  golongan bakteri  terhadap  senyawa  antimikroba  ini disebabkan karena adanya perbedaan kepekaan  pada  bakteri  gram  positif  dan bakteri  gram  negatif  terhadap  senyawa antimikroba  yang  terkandung  dalam  ekstrak spons Aaptos  aaptos .  Penelitian  yang  juga dilakukan  oleh  Ismet  (2007),  tentang penapisan  senyawa  bioaktif  spons Aaptos aaptos dan Petrosia  sp. dari  lokasi  yang berbeda  mendapatkan  hasil  terhadap  bakteri E.coli zona  hambat  kurang  dari  3  mm cenderung  rendah,  sementara  untuk  bakteri S.aureus menunjukkan aktivitas yang cenderung  sedang  yaitu  5,5  mm.  Bakteri Gram  positif  cenderung  lebih  sensitif terhadap  komponen  antimikroba.  Hal  ini disebabkan  oleh  struktur  dinding  sel  bakteri Gram  positif  lebih  sederhana  sehingga memudahkan  senyawa  antimikroba  untuk masuk ke dalam sel dan menemukan sasaran untuk  bekerja,  sedangkan  struktur  dinding sel bakteri Gram negatif lebih kompleks dan berlapis  tiga,  yaitu  lapisan  luar  berupa lipoprotein,  lapisan  tengah  yang  berupa peptidoglikan, dan lapisan dalam lipopolisakarida  (Pelczar  &  Chan,  1986).
Bakteri  Gram  Positif seperti Staphylococcus aureus tidak mempunyai lapisan lipopolisakarida sehingga
senyawa antimikroba  yang bersifat hidrofilik maupun hidrofobik  dapat  dengan  mudah  melewati dinding  sel.  Kerusakan  yang  terjadi  pada dinding,  membran,  dan  bagian  internal  sel akan  menyebabkan  bakteri  tidak  dapat menahan  tekanan  osmotik  tinggi  dari  dalam sel sehingga mengakibatkan sel menjadi lisis (CDC,  2008).  Sedangkan  untuk  E1  zona hambat yang terbentuk untuk jamur Candida albicans sebesar  17,6  mm  termasuk  dalam
kategori  kuat  untuk  E2  zona  hambat  yang terbentuk  untuk  jamur Candida  albicans sebesar  15,8  mm  termasuk  dalam  kategori kuat,  hal  ini  menununjukan  bahwa  spons Aaptos aaptos memiliki aktivitas
antimikroba terhadap jamur Candida albicans.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa, jamur  laut  yang  berasosiasi  dengan  spons Aaaptos  aaptos yang  diperoleh  dari  Teluk Manado  memiliki  aktivitas  antimikroba yang  dikategorikan  sedang  terhadap bakteri E.coli dan S.aureus dan  aktivitas antimikroba  yang  kuat  terhadap  jamur Candida albicans .

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes,  G.  2007. Teknologi  Bahan  Alam.
ITB Press, Bandung
Akhyar.  2010. Uji  Daya  Hambat  dan Analisis KLT Bioautografi Ekstrak Akar dan Buah Bakau   (Rhizophora
stylosa Griff.)Terhadap  Vibrio  harveyi [skripsi].
Fakultas Farmasi Universitas
Hasanuddin Makasar, Makassar.
Amir,  I.,  Budiyanto,  A.  1996.  Mengenal Spons  Laut Demospongia Secara  Umum.
Oseana 21(2) : 15-31.
Arnold,  A.  E.,  Maynard,  Z.,  Gilbert,  G.  S., Coley,  P.  D.,  Kursat,  T.  A.  2000.  Are
Tropycal Fungal Endophytes Hyperdiverse. Ecology  Latters . 3(3) :  267- 274
Brooks,  G.  F.,  Brutel,  J.  S.,  Morse,  S.  A. 2005. Jawetz,  Melnick,  Adelberg’s  Medical Microbiology. McGraw-Hill
Medical, New York.
[CDC].  Centers  for  Disease  Control  and Prevention. 2008. Guideline for Disinfection
and Sterilization in Healthcare Facilities.
http:/www.cdc.gov/hicpac/Disinfecti on_Sterilization/4_0efficacyDS.html. [1 Juni 2018].
Davis, W. W., T. R. Stout. 1971. Disc Plate
Method  of  Microbiological  Assay. Journal of Microbiology 22: 659-665.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,
2000. Parameter  Standard  Umum  Ekstrak Tanamn Obat . Direktorat Jenderal
Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
Edrada,  R.  A.,  Heubes,  M.,  Brauers,  G., Wray,  V.,  Berg,  A.,  Grafe,  U., et  al .  2002.
Online  Analysis  of  Xestodecalactones  A-C, Novel  Bioactive  Metabolites  from  the Fungus Penicillium cf. Montanense
and  Their  Subsequent  Isolation  From  the Sponge
Xestospongia exigua . Journal Natural Product . (65) :188-192. Ginandjar, Indrawati dkk. 2006.
Mikrobiologi  Dasar  dan  Terapan .  Jakarta:
Yayasan Obor Indonesia. Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia . Edisi ke-2. ITB. Bandung.
Ismet,  S.M.  2007. Penapisan  Senyawa Bioaktif  spons  Aaptos  aaptos  dan  Petrosia sp. dari Lokasi yang  Berbeda [tesis].  Departemen  Ilmu  Kelautan.  IPB, Bogor.
Harti,  A.S.  2015. Mikrobiologi  Kesehatan . Penerbit Andi, Yogyakarta.
Kohlemeyer J. Kohlemeyer E. 1979. Marine Mycology :  The  Highter  Fungi.  Academic Press   New York.
Mawaddah,  R.  2008. Kajian  Hasil  Riset Potensi  Antimikroba  Alami  dan Aplikasinya dalam  Bahan  Pangan  di  Pusat  Informasi
Teknologi  Pertanian  Fateta  IPB [skripsi].
Fakultas
Teknologi  Pertanian  ITB,
Bogor.
Miller, K., C, Smallwood., C, Strupezewski.
1998. The  Role  of  Phenolic  Compounds  in
The Chemical  Defense  of  Tropical  Reef
Sponges  Against  Fish  Predation .  Tropical Marine Biology,  St  Mary  College  of
Maryland.
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  Testing  in Manual  of  Antimicrobial  Susceptibility Testing . American Society for Microbiology, USA. Pelczar, M.J and Chan, E.C.S. 2005 . Dasar- dasar mikrobiologi . UI Press. Jakarta
Rahman,  A.  1992. Teknologi  Fermentasi . Penerbit Arcan, Jakarta.
Sayed, E. K.,M. Kelly., U. A. K., Kara., M., Hamann, T. 2001. New Manzamine Alkaloids with Potent Activity Against Infectious Diseases. J. Am. Chem. 123, 1804 -1808.
Soest  ,R.W.M.  van.,  Braekman  J.C.  1999. Chemosystematics of Porifera : A Review in Hooper JNA. Proceedings  of  the  5 th International  Sponge  Symposium; Brisbane.
Queensland:   Memoir of Queensland
Museum 44: 569-589.
Vandepite, S. 2005. Prosedur Laboratorium Dasar  untuk  Bakteriologis  Klinis  Edisi  2. Buku   Kedokteran EGC. Jakarta.
Voight,  R.1995. Buku  Pelajaran  Teknologi Farmasi .  Gajah  Mada  University  Press, Yogyakarta.
Wiese,  J.,  Brigit,  O.,  Martina,  B.,  Rolf,  S.,
Johanes, F. I. 2011. Phylogenetic Identification   of  Fungi  Isolated  from  the Marine  Sponge Tethya  aurantium and Identificationof Their  Secondary Metabolites. Marine Drugs . 59 (3) :579-585