## UJI ANTIMIKROBA EKSTRAK BUAH SALAK (Salacca edulis) TERHADAP BAKTERI
Escherichia coli
Antimicrobial Activity of fruit of Salacca edulis Extracts Against Escherichia coli
Cut Intan Evtia Nurina, Samingan, dan Iswadi Program Studi Pendidikan Biologi FKIP Unsyiah Banda Aceh Jl. Tgk. Hasan Krueng Kalee, Darussalam Banda Aceh e-mail: cutintanevtia@fkip.unsyiah.ac.id

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  berbagai  konsentrasi  ekstrak  buah  salak  terhadap pertumbuhan  bakteri E.  coli.  Isolat  bakteri E.  coli yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  diperoleh  dari Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Syiah  Kuala.  Buah  salak (Salacca  edulis) varietas salak pondoh super yang berusia tiga bulan setelah perbungaan diperoleh dari perkebunan salak di Sabang. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah eksperimen laboratorium jenis kuantitatif menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang  dibagi  dalam  7  kelompok,  yaitu  5  kelompok perlakuan (ekstrak etanol buah salak terhadap bakteri E. coli) dan 2 kelompok kontrol yaitu menggunakan aquades (kontrol  negatif) dan  streptomisin (kontrol  positif).  Analisis  data  dilakukan  menggunakan ANOVA (analyses of variance) kemudian dilanjutkan dengan uji Jarak Nyata Terdekat Duncan (JNTD) pada taraf kepercayaan 0,05%, dan terdapat perbedaan yang nyata antar perlakuan. Hasil uji antimikroba menunjukkan  ekstrak  buah  salak  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli. Hasil uji  fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak buah salak mengandung berbagai senyawa aktif seperti tanin, flavonoid, dan alkaloid.  Zona  hambat  tertinggi  diperoleh  pada  konsentrasi  100%,  yaitu  rata-rata diameter  18,783  mm. Tetapi zona hambat yang terbentuk pada kontrol positif lebih lebar, yaitu rata-rata diameter 31,367 mm.

## Kata kunci: antimikroba, Salacca edulis, Escherichia coli

## Abstract
The aim of the study is to determine the effect of various concentrations of Salacca edulis extracts on the growth  of E.  coli. Isolates of  bacteria used  in  this  study  were  obtained  from  the  Laboratory  of Microbiology, Faculty  of  Medicine of  Syiah  Kuala  University. The  fruit  with  superior  salak  pondoh variety was collected from plant with three month after flowering cultivated in Sabang.The method was quantitative laboratory experiment with completely randomized design (CRD) consisting of 7  groups, 5 treatment  groups (ethanol  extracts  of Salacca  edulis against E.  coli)  and  2  control  groups which  were distilled  water (negative  control) and  streptomycin (positive  control). The  data  was  analysed using ANOVA  (analysis  of  variance) followed followed  by  Duncan's  Range  Test Nearby  Real  (JNTD)  at  the level of 0.05%, and there were significant differences among treatments. The results of antimicrobial test showed the extracts has inhibited the  growth  of E.  coli.  The  phytochemical  test showed  that Salacca edulis extracts  contained various  active  compounds  such  as  tannins,  flavonoids,  and  alkaloids.  The highest inhibition zone was obtained at concentration of 100% with the average diameter was 18,783 mm. However, the inhibition zone in positive control was greater with the average diameter was 31,367 mm.

## Keywords: antimicrobial, Salacca edulis, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Manusia  memiliki  aktivitas,  gaya hidup, dan  pola  makan  yang  berbeda  serta  kontak langsung  dengan  lingkungan.  Akibat  berbagai aktivitas  tersebut  manusia  dapat  terinfeksi  oleh bakteri.  Salah  satu  penyakit  yang  disebabkan  oleh
bakteri  adalah  diare.  Menurut  Adisasmito  (2007), diare menjadi masalah kesehatan dunia terutama di negara  berkembang. Besarnya  masalah  tersebut terlihat  dari  tingginya  angka  kesakitan  dan kematian akibat diare. Menurut Kemenkes (2012), diare  menduduki  peringkat  pertama  penyakit
terbanyak  pada  pasien  rawat  inap  di  Indonesia tahun  2010  yaitu  sebanyak  96.278  kasus  dengan angka kematian sebesar 1,92%.
Escherichia  coli merupakan  salah  satu bakteri  yang  ditemukan  hidup  secara  alamiah  di dalam saluran usus manusia, dan umum digunakan sebagai  organisme  indikator  pencemaran  air dan makanan  oleh  feses  (Kayser,  2005). E. coli yang bersifat  patogen  dan  paling  sering  menyebabkan infeksi  pada  saluran  pencernaan  manusia  adalah jenis  enteropatogenik  (EPEC),  enterotoksigenik (ETEC),  enteroinvasif  (EIEC),  enterohemoragik (EHEC),  dan  enteroagregatif  (EAEC)  (Radji, 2011). Pengobatan  infeksi E.  coli menggunakan obat-obatan  kimia  kurang  baik  bagi  tubuh  dan mempunyai efek beracun terhadap ginjal (Kusuma, 2010). Sehingga diperlukan terapi atau obat-obatan alternatif.
Masyarakat  Indonesia  memiliki  kearifan lokal  dalam  mengatasi  diare,  yaitu  dengan mengkonsumsi  buah  salak. Tetapi  masyarakat hanya  sebatas  mengkonsumsi  tanpa  mengetahui bahwa buah salak mengandung senyawa aktif yang mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli. Penelitian  mengenai  salak  sebagai  obat  diabetes telah  dilakukan  oleh  Sahputra  pada  tahun  2008 tentang  potensi  ekstrak  kulit  dan  buah  salak sebagai antidiabetes. Selanjutya penelitian mengenai buah salak sebagai penghambat peroksidasi  lipid  sel  khamir candida sp.  y390 dilakukan  oleh  Falahuddin  pada  tahun  2008. Tetapi  belum  terdapat  data  ilmiah  salak  sebagai antidiare,  maka  penelitian  salak  sebagai  antidiare perlu  dilakukan. Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui pengaruh berbagai konsentrasi ekstrak buah  salak  terhadap  pertumbuhan  bakteri E.  coli, dan untuk mengetahui pengaruh berbagai konsentrasi  ekstrak  buah  salak  terhadap  zona hambat yang terbentuk.

## METODE

## Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Biologi  dan  Laboratorium  Kimia  FKIP  Unsyiah Darussalam,  Banda  Aceh sejak  Oktober  sampai dengan November 2013.

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang  digunakan  adalah peralatan gelas  (Pyrex),  inkubator (Memmert), laminar  air flow  (Air  Clean  4000  workstation),  timbangan analitik (Radwag), lampu spiritus, ose, micro pipet (Bellstone), juicer  (Miyako),  autoklaf  (LD2X-50 KAS), hot  plate  stirrer (Favorit), refrigerator
(Toshiba), rotary evaporator
(Buchi), spektrofotometer (Thermo
Scientific), oven (Bellstone),  dan  jangka  sorong  ketelitian 0,05. Bahan yang digunakan adalah Buah salak (Salacca edulis)  varietas  salak  pondoh  super  berusia  tiga bulan  setelah  perbungaan  yang  diperoleh  dari perkebunan  salak  di  Sabang,  isolat  bakteri E.  coli diperoleh dari laboratorium  Mikrobiologi Fakultas Kedokteran  Unsyiah,  kertas  saring,  kertas  cakram diameter  5  mm  (OXOID),  streptomisin,  etanol 70%,  alkohol,  aquades,  media nutrien  agar (NA), NaCl  0.9%,  kloroform,  amoniak,  H 2 SO 4 ,  pereaksi Dragendorf,  pereaksi  Mayer,  pereaksi  Wagner, FeCl 3 1%, metanol 30%, NaOH 10%, etanol 30%, dan asam sulfat anhidrat.

## Jenis dan Rancangan Penelitian
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah eksperimen laboratorium jenis kuantitatif, menggunakan Rancangan Acak Lengkap  (RAL)  yang  dibagi  dalam  7  kelompok perlakuan,  yaitu  5  kelompok  perlakuan  ekstrak etanol  salak  terhadap  bakteri E.  coli dan  2 kelompok  kontrol. Pengulangan  yang  dilakukan untuk  setiap  perlakuan  pada  penelitian  ini  adalah sebanyak  3  kali,  berdasarkan  hasil  perhitungan menggunakan  rumus  jumlah  ulangan.  Perlakuan P0 merupakan  aquades  sebagai  kontrol  negatif . Perlakuan  P1  adalah ekstrak  etanol  buah  salak 20%, P2 adalah ekstrak etanol buah salak 40%, P3 adalah  ekstrak  etanol  buah  salak  60%,  P4  adalah ekstrak  etanol  buah  salak  80%,  dan  P5  adalah ekstrak  etanol  buah  salak  100%.  Perlakuan  P6 merupakan  streptomisin  10%  sebagai  kontrol positif.

## Prosedur Penelitian Ekstraksi Buah Salak
Buah salak yang digunakan pada penelitian ini  tidak  dikeringkan  terlebih  dahulu,  hal  ini mengacu  pada  kebiasaan  yang  dilakukan  oleh masyarakat yaitu mengkonsumsi buah salak dalam keadaan  segar.  Sebanyak 700  gram  buah  salak dikupas  dan  dibersihkan  kulitnya  serta  dipotong kecil-kecil, lalu ditimbang masing-masing sebanyak  350  gram  dan  dipindahkan  ke  dalam gelas kimia. Selanjutnya dihaluskan dan dimaserasi  selama  1x24  jam  di  dalam  200  mL larutan  etanol  70% dan ditutup  rapat  (Sahputra, 2008).  Kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring hingga menjadi filtrat, lalu diuapkan dengan rotary  evaporator hingga  diperoleh  ekstrak  kental dan digunakan untuk uji fitokimia serta menghambat pertumbuhan dari bakteri E. coli.
Analisis Fitokimia Analisis fitokimia dilakukan secara kualitatif  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa aktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak  buah  salak. Senyawa  yang  dianalisis  adalah  saponin,  alkaloid, tanin,  flavonoid,  fenolik  hidrokuinon,  steroid,  dan triterpenoid (Sahputra, 2008).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Escherichia coli
Pembuatan suspensi bakteri E. coli berdasarkan  Meilisa  (2009).  Isolat  bakteri E.  coli diremajakan  pada  media  NA  miring  selama  1x24 jam  pada  suhu  37  °C.  Selanjutnya  diambil  1  ose dan disuspensikan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi  NaCl  0,9%  sebanyak  10  mL.  Kemudian dihitung absorbansi menggunakan spektrofotometer  dengan  panjang  gelombang  625 nm  hingga  diperoleh  absorbansi  0,08-0,10.  Nilai absorbansi tersebut setara dengan standar kekeruhan Mc Farland 0,5 pada konsentrasi bakteri 10 8 CFU/mL  (colony  forming  unit).  Selanjutnya dipipet  larutan  tersebut  sebanyak  0,1  mL  lalu dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  10  mL  dan ditambahkan  NaCl  0,9%  sampai  garis  tanda, sehingga  diperoleh konsentrasi  bakteri  10 6 CFU/ml.

## Uji Antibakterial
Uji  antibakterial  berdasarkan  Widiana (2011).  Suspensi  bakteri  yang  telah  sama  dengan standar  kekeruhan  dengan  Mc  Farland  0,5 diinokulasi  pada  medium  NA  menggunakan metode  cawan  sebar.  Kertas  cakram  masing- masing direndam ke dalam cawan Petri yang berisi ekstrak  buah  salak,  streptomisin,  dan  aquades sehingga membasahi seluruh kertas cakram. Kertas cakram  yang  telah  direndam  diletakkan  diatas permukaan  medium  NA  yang  telah  diinokulasi bakteri E.  coli dan  diinkubasi selama  1x24  jam pada  suhu  37  °C.  Kemudian  diamati  zona  bening yang terbentuk untuk mengetahui daya hambat dari ekstrak  buah  salak,  dan  diukur  rata-rata  diameter zona hambat menggunakan jangka sorong.

## Parameter Penelitian
Parameter  yang diukur dalam penelitian ini adalah diameter zona hambat (mm) yang terbentuk di sekeliling kertas cakram.

## Analisis Data
Data  luas  zona  hambat  ekstrak  buah  salak terhadap  bakteri E.  coli dianalisis  menggunakan Anova  (analyses  of  variance)  satu  arah. Jika  nilai F  hitung >  F  tabel maka antar  perlakuan  terdapat perbedaan yang nyata dan hipotesis alternatif (Ha) diterima.  Sebaliknya  jika  nilai  F  hitung < F  tabel maka antar  perlakuan  tidak  terdapat  perbedaan yang  nyata  dan  hipotesis  alternatif  (Ha)  ditolak. Kemudian  dilakukan  uji lanjut  untuk  melihat perbedaan  antar  tiap  perlakuan  berdasarkan  nilai koefisien  keragaman  (KK)  yang  diperoleh.  Uji lanjut  yang  digunakan  adalah  Uji  Jarak  Nyata Terdekat  Duncan  (JNTD)  pada  taraf  kepercayaan 0,05% dengan rumus sebagai berikut:
JNTD α = P α (p.v) . S Ῡ
Keterangan : JNTD α :Jarak nyata terdekat pada taraf 5% P α (p.v) :Nilai  baku  P  pada  taraf  5%  jumlah perlakuan dan derajat bebas galat
S Ῡ : Galat baku rerata

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Ekstraksi  dan  Analisis  Fitokimia  Buah Salak Ekstraksi 700
gram buah salak menggunakan  etanol  70%  menghasilkan  ekstrak sebanyak 500 mL. Ekstrak ini kemudian diuapkan menggunakan rotary
evaporator untuk menghilangkan kandungan etanol hingga menghasilkan  ekstrak  kental  sebanyak  240  mL. Ekstrak  buah  salak  berwarna  coklat  muda  setelah menjadi  filtrat,  kemudian  berwarna  coklat  pekat setelah  diuapkan. Selanjutnya  ekstrak  yang  telah diuapkan ini digunakan untuk uji fitokimia dan uji antimikroba.  Uji  fitokimia  dilakukan  untuk mengetahui  kandungan  senyawa  aktif  yang terdapat didalam ekstrak buah salak.
Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan  bahwa ekstrak  buah  salak  mengandung  tanin,  flavonoid, dan  alkaloid.  Uji  alkaloid  menunjukkan  hasil positif pada pereaksi Dragendorf dan pada pereaksi Wagner,  dan  menunjukkan  hasil negatif  pada pereaksi  Mayer. Uji  saponin,  fenolik  hidrokuinon, steroid dan triterpenoid tidak ditunjukkan terkandung didalam buah salak (Tabel1).
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Buah Salak
No. Senyawa kimia Hasil Keterangan 1 2 3 Tanin Flavonoid Alkaloid + + + Warna hijau kehitaman Warna merah  Terbentuk warna merah pada pereaksi Dragendorf
4 5 6 7 Saponin Fenolik hidrokuinon Steroid Triterpenoid ‒ ‒ ‒ ‒ 
Tidak terbentuk warna putih pada pereaksi Mayer
 Terbentuk warna coklat pada pereaksi Wagner Tidak terbentuk busa Tidak terbentuk warna merah Tidak terbentuk warna hijau atau biru Tidak terbentuk warna merah atau ungu Keterangan:  (+): menunjukkan reaksi positif, ( ‒): menunjukkan reaksi negati f

## Uji Antimikroba Ekstrak Buah Salak terhadap Bakteri E. coli
Hasil  zona  hambat  yang  terbentuk  pada ulangan  U1,  U2,  dan  U3  dengan  konsentrasi ekstrak  buah  salak  masing-masing  20%,  40%, 60%,  80%,  dan  100%  rata-rata  berdiameter 4,617
mm, 6,917 mm, 9,117 mm, 14,942 mm,  dan 18,783 mm.  Selanjutnya  zona  hambat  yang terbentuk pada streptomisin sebagai kontrol positif rata-rata  berdiameter 31,367 mm,  dan  aquades sebagai  kontrol  negatif  tidak  memperlihatkan adanya zona hambat (Tabel 2).
Tabel 2. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Ekstrak Buah Salak terhadap Bakteri E. coli
Konsentrasi Ekstrak Ulangan Total Rata-rata 1 2 3 KN 0 0 0 0 0 20% 3,700 4,775 5,375 13,850 4,617 40% 6,725 7,600 6,425 20,750 6,917 60% 11,625 6,375 9,350 27,350 9,117 80% 16,250 16,900 11,675 44,825 14,942 100% 18,275 17,725 20,350 56,350 18,783 KP 30,400 31,200 32,500 94,100 31,367 Total 257,225 12,249

## Analisis Varian
Hasil  analisis  data  menggunakan  Anova (analyses of variance) untuk diameter zona hambat ekstrak  buah  salak  terhadap  pertumbuhan  bakteri
E.  coli diperoleh  bahwa  nilai  F  hitung >  F  tabel pada  taraf  kepercayaan  0,05%  (120.841  >  2.85) (Tabel 3).
Tabel 3. Analisis Varian Zona Hambat Ekstrak Buah Salak terhadap Pertumbuhan Bakteri E. coli
SK DB JK KT F hitung F tabel (0,05) Perlakuan 6 1985,91 330,984 120,841 * 2,85 Galat 14 38,346 2,739 Total 20 2024,253 333,723
* : Berbeda nyata pada taraf kepercayaan 0,05%
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  hipotesis alternatif  (Ha)  yang  menyatakan  “ Ekstrak buah salak  (Salacca  edulis)  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri E.  coli “  dan  “Semakin  besar konsentrasi  ekstrak  buah  salak  (Salacca  edulis) yang  digunakan  maka  semakin  besar  pula  daya hambat yang dihasilkan“ dapat diterima . Selanjutnya  dilakukan  uji  lanjut  berdasarkan koefisien  keragaman  (KK)  yang  diperoleh,  yaitu Uji  Jarak  Nyata  Terdekat  Duncan  (JNTD)  pada taraf  kepercayaan  0,05%  untuk  menganalisis perbedaan antar perlakuan (Tabel 4).
Tabel  4. Hasil  Uji  Jarak  Nyata  Terdekat  Duncan (JNTD) Zona Hambat Ekstrak Buah Salak terhadap Pertumbuhan Bakteri E. coli Konsentrasi (%) Rata-rata Zona Hambat (mm) P0 (KN) P1 (20%) P2 (40%) P3 (60%) P4 (80%) P5 (100%) P6 (KP) 0 a 4.617 b
6.917 bc 9.117 cd 14.942 e 18.783 f 31.367 g
Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (0,05%)
Berdasarkan hasil Uji Jarak Nyata Terdekat Duncan (JNTD) diketahui bahwa terdapat perbedaan yang  nyata antara  perlakuan P1 dengan perlakuan  P0,  tetapi  tidak  berbeda  nyata  antara perlakuan  P2  dengan  perlakuan  P1.  Perlakuan  P2 berbeda  nyata  dengan  perlakuan  P0,  tetapi  tidak berbeda  nyata  antara  perlakuan  P3  dengan perlakuan  P2.  Perlakuan  P3  berbeda  nyata  dengan perlakuan  P1  dan  perlakuan  P0.  Perlakuan  P4 berbeda  nyata  dengan  perlakuan  P3,  P2,  P1,  dan P0.  Perlakuan  P5  berbeda  nyata dengan  perlakuan P4,  P3,  P2,  P1,  dan  P0.  Perlakuan  P6  berbeda
nyata dengan perlakuan P5, P4, P3, P2, P1, dan P0 (Tabel 4).

## SIMPULAN
Ekstrak  buah  salak  dengan  berbagai konsentrasi memiliki pengaruh dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Tetapi zona hambat  yang  terbentuk  pada  streptomisin  lebih besar,  yaitu  rata-rata  berdiameter  31,367  mm dibandingkan  pada  konsentrasi  ekstrak  buah  salak 100%, yaitu rata-rata berdiameter 18,783 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Adisasmito,  W.  2007.  Faktor  Risiko  Diare  pada Bayi  dan  Balita  di  Indonesia:  Systematic Review  Penelitian  Akademik  Bidang Kesehatan Masyarakat. Makara Kesehatan 1(11): 1-10. Falahuddin,  D.  2008.  Penghambatan  Peroksidasi
Lipid  Sel  Khamir Candida sp.  Y390 Oleh  Ekstrak  Daging  Buah  Salak Bongkok  (Salacca  edulis). Skripsi. FMIPA IPB, Bogor.
Kayser,  F.H.,  Bienz,  K.A.,  Eckert,  J.,  dan Zinkernagel, R.M. 2005.
Medical Microbiology. Thieme,  Stuttgart, New
York. Kemenkes. 2012. Profil  Kesehatan  Indonesia Tahun 2011. Kemenkes RI, Jakarta. Kusuma,  S.A.F.  2010. Escherichia  coli.  Makalah Fakultas  Farmasi  Universitas  Padjajaran,
Bandung.
Meilisa. 2009.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  dan Formulasi  dalam  Sediaan  Kapsul  dari Ekstrak  Etanol  Rimpang  Tumbuhan Temulawak (Curcuma xanthorrhiza, Roxb.) Terhadap Beberapa Bakteri. Skripsi. USU, Medan.
Radji,  M.  2011. Buku  Ajar  Mikrobiologi.  EGC,
Jakarta.
Sahputra,  F.M.  2008.  Potensi  Ekstrak  Kulit  dan
Daging  Buah  Salak  sebagai  Antidiabetes. Skripsi. FMIPA IPB, Bogor.
Widiana,  R.,  Indriati,  G.,  dan  Andika,  I.  2011. Daya  Hambat  Sari  Daun  Sirsak  (Annona muricata L.) terhadap  Pertumbuhan
Bakteri Escherichia  coli. DOSBIO 1(1):
145-154.