## Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  dan  Fraksi  Kulit  Batang  Ketapang  Laut (Terminalia Catappa L.) menggunakan Metode BSLT
(Acute Toxicity Test of Extract and Fractions Terminalia Catappa L.  Stem Skin with BSLT Method)
Ari Sartinah 1 *, Yamin 1 , Nurhasanah 1 , Muhammad Arba 1 , Nur Illiyyin Akib 1 , Andi Nafisah Tendri Adjeng 1
1 Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma, Jl. HEA Mokodompit Kendari 93232
E-mail: sartinahari@gmail.com

## Abstract
Acute toxicity is the ability of chemical (drug / drug ingredient) to cause damage to organisms in  relatively  short  time.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  potential  for  acute toxicity  of  methanol  extract,  ethyl  acetate  and  water  fractions  of  sea  ketapang  stem  skin (Terminalia catappa L.). Acute toxicity testing was performed using the BSLT (Brine Shrimp Lethality  Test)  method  and  program  analysis  to  determine  the  LC 50 values  of  extracts  and fractions. The results of the acute toxicity test showed the LC 50 values of methanol extract, ethyl acetate and water fractions of the plant stem skin consecutively were 247,997 ppm; 400,666 ppm and 618,046 ppm. This shows that the methanol extract of sea ketapang stems (Terminalia catappa L.) is the most toxic compared to the ethyl acetate and the water fraction.
Keywords: Extract, Fraction, Terminalia catappa L., BSLT, Artemia salina Leach

## Abstrak
Toksisitas  akut  merupakan kemampuan suatu  bahan kimia (obat/bahan obat)  dalam menimbulkan kerusakan  pada suatu organisme dalam waktu yang relatif singkat. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi ketoksikan akut dari ekstrak metanol, fraksi etil asetat dan fraksi air kulit batang ketapang laut ( Terminalia catappa L.) . Pengujian toksisitas akut dilakukan dengan menggunakan metode BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ) dan menggunakan analisis program  untuk mengetahui nilai  LC 50 dari ekstrak dan fraksi. Hasil uji toksisitas akut  menunjukan nilai  LC 50 dari ekstrak metanol, fraksi  etil  asetat dan fraksi  air kulit  batang ketapang laut ( Terminalia catappa  L. )  berturut-turut 247,997  ppm;  400,666  ppm  dan  618,046  ppm.  Hal  ini  menunjukan  bahwa  ekstrak  metanol  batang  ketapang  laut ( Terminalia catappa L.) bersifat paling toksik dibandingkan fraksi etil asetat dan fraksi air.
Kata kunci: Ekstrak, Fraksi, Terminalia catappa L. , BSLT, Artemia salina Leach
1. Pendahuluan
Ketapang laut ( Terminalia catappa L .) merupakan  salah  satu  tumbuhan  obat  yang  banyak tumbuh  di  Indonesia  dan  telah  digunakan  secara tradisional untuk mengobati penyakit kardiovaskuler, kulit, liver, pernafasan, perut,  gonorrhoea, antijamur, dan insomnia [1]. Khasiat tanaman ketapang ini tidak lepas dari senyawa yang terkandung di dalam tanaman ketapang itu sendiri. Ketapang diketahui mengandung
senyawa  obat  seperti  flavonoid,  triterpenoid,  tanin, alkaloid,  steroid  dan  asam  lemak.  Jika  dilihat  dari kandungan  senyawa  pada  kulit  batang  ketapang,  ada kemungkinan  senyawa-senyawa  tersebut  mempunyai aktivitas toksik [2]. Ketoksikan suatu obat/bahan obat perlu  dilakukan  sebagai  uji  pendahuluan  dalam mengamati aktifitas farmaklogis untuk dilanjutkan uji farmakologi  lainnya  dan  sebagai  informasi  tentang keamanannya  [3,  4].  Oleh  sebab  itu,  perlu  dilakukan
Article Info:
Received: 12 March 2020 Accepted: 12 April 2020
DOI:
10.33772/pharmauho.v6i 1.11430
penelitian  uji  toksisitas  akut  dengan  menggunakan metode BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ) Brine  Shirmp  Lethality  Test (BSLT)  merupakan uji  pendahuluan  yang  mengarah  pada  uji  aktivitas toksik  senyawa  metabolit  sekunder  menggunakan larva udang Artemia salina Leach sebagai hewan uji. Aktivitas toksik diketahui dari jumlah kematian larva A. salina Leach karena pengaruh ekstrak atau senyawa bahan  alam  pada  konsentrasi  yang  diberikan  [5,  6]. Tingkat toksisitas suatu ekstrak berdasarkan Lc 50, yaitu kategori  sangat  tinggi    ( highly  toxic )  apabila  mampu membunuh 50 % larva pada konsentrasi 0-100µg /ml, sedang  ( medium  toxic )  pada  konsentrasi  100-500  µg /ml,  rendah  ( low  toxic )  pada  konsentrasi  500-1000 µg/ml dan tidak toksik (non toxic) pada konsentrasi > 1000 µg/ml [7].
Penelitian  tentang  tanaman  ketapang  laut ( Terminalia catappa  L.) khususnya  untuk  penelitian tentang  kulit  batang  ketapang  laut  masih  sangatlah terbatas. Oleh karena itu perlu dilakukan uji toksisitas akut ekstrak metanol dan fraksi kulit batang ketapang laut terhadap Artemia salina L . dengan metode Brine Shrimp  Lethaly  Test (BSLT)  yang  dapat  menjadi informasi  awal  dalam  pengembangan  alternatif  obat herbal.

## 2. Metode
2.1 Pembuatan Ekstrak dan Fraksi

## 2.1.1 Penyiapan Sampel
Sampel kulit batang ketapang laut ( Terminalia catappa  L. )  diperoleh  dari  Kota  Raha,  Sulawesi Tenggara.  Kulit  batang  segar  disortasi  basah, selanjutnya  dilakukan  pengupasan  kulit  bagian  luar dan  bilas  dengan  air  bersih  mengalir[8].  Sampel kemudian  dirajang  dan  dikeringkan  dengan  cara dijemur dibawah sinar matahari. Selanjutnya, sampel yang  telah  kering  disortasi  kering  dan  dihaluskan menggunakan  blender  hingga  diperoleh  serbuk simplisia kering selanjutnya siap diekstraksi[9].

## 2.1.2 Pembuatan Ekstrak Metanol
Serbuk  simplisia  kulit  batang  ketapang  laut ( Terminalia  catappa  L .)  yang  ditimbang  sebanyak 700  gram  kemudian  dimasukkan  dalam  wadah  dan diekstraksi secara maserasi selama 3 x 24 jam dengan menggunakan pelarut metanol sambil sesekali diaduk, kemudian disaring. Filtrat yang diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan dengan ratory evaporator sampai diperoleh ekstrak kental [10].

## 2.1.3 Skrinning fitokimia
Sebanyak  1  gram  ekstrak  dan  fraksi  kulit batang  ketapang  laut  dan  dilarutkan  dalam  10  mL pelarut masing-masing ektrak. Tahap
pengindetifikasian  dari  senyawa  senyawa  metabolit sekunder  mengunakan  metode  tabung  yang  terdiri atas:

## Uji alkaloid
Sebanyak  1  mL  sampel  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  kemudian  ditetesi  dengan  pereaksi dragendorff  sebanyak  2-3  tetes.  Adanya  senyawa alkaloid  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  endapan merah bata. Jika menggunakan perekasi meyer, maka sebanyak 1 mL sampel ditambahkan 1 – 3 mL pereaksi tersebut, endapan putih menunjukkan adanya senyawa alkaloid [11].

## Uji flavonoid
Ekstrak metanol, fraksi etil asetat, dan fraksi air kulit batang ketapang laut dimasukan kedalam tabung reaksi  sebanyak  1mL,  dimasukan  0,1  g  serbuk magnesium  dan  ditambahkan  HCl  2  mL  pekat. Terbentuk  larutan  berwarna  merah  menunjukan adanya flavonoid [12].

## Terpenoid
Ekstrak metanol, fraksi etil asetat dan fraksi air kulit  batang  ketapang  laut  dimasukkan  kedalam tabung  reaksi  sebanyak  1  mL,  dan  ditambahkan  0,5 mL  asam  asetat  anhidrat  dan  asam  sulfat  pekat sebanyak  2  mL.  Keberadaan  terpenoid  ditandai dengan terbentuknya warna cokelat [13].

## Saponin
Ekstrak metanol, fraksi etil asetat dan fraksi air kulit  batang  ketapang  laut  dimasukkan  kedalam tabung reaksi sebanyak 1 mL, ditambahkan dengan 2 mL  air  panas  kemudian  didinginkan,  dikocok  kuat selama 10 detik. Terbentuk buih yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit [12].

## Tanin
Ekstrak  metanol, fraksietil asetat dan fraksi air kulit  batang  ketapang laut  dimasukkan dalam tabung reaksi  sebanyak  1  mL,  ditambahkan  dengan  1  mL larutan Fe (III) klorida 1%. Jika terbentuk warna biru tua, biru kehitaman atau hitam kehijuan menunjukkan adanya senyawa tanin [13].

## 2.1.4 Fraksinasi
Sebanyak  15  gram  ekstrak  metanol  batang ketapang  laut  ( Terminalia catappa)  dilarutkan  dalam 300  mL  air  steril.  Selanjutnya  100  mL  ekstrak  yang telah  dilarutkan  dimasukkan  kedalam  corong  pisah, kemudian    100  mL  pelarut n -heksan  ditambahkan kedalam  corong  pisah  untuk  dilakukan  pemisahan secara  partisi  dengan  perbandingan  1:1  ekstrak  dan pelarut.  Corong  pisah  tersebut  kemudian  dikocok
dengan  kuat  hingga  tercampur  dan  didiamkan beberapa  menit  hingga  memisah  menjadi  dua  fraksi yaitu  fraksi  metanol  dan  fraksi n- heksan.  Fraksi n- heksan  kemudian  dikeluarkan  dari  corong  pisah sedangkan  100  mL  fraksi  metanol  dipartisi  kembali dengan 200 mL pelarut n -heksan dengan perbandingan  yang  berbeda  yaitu  perbandingan  1:2 fraksi  metanol  dan  pelarut n -heksan.    Setelah diperoleh  fraksi  metanol  dan  fraksi n- heksan,  maka dilanjutkan  dengan  menggunakan  pelarut  etil  asetat. Selanjutnya,  fraksi  metanol  dipartisi  kembali  dengan pelarut  etil  asetat  masing-masing  sebanyak  100  mL dengan  perbandingan  1:1  fraksi  metanol  dan  pelarut etil  asetat  menggunakan  corong  pisah.  Corong  pisah dikocok  kemudian  didiamkan  hingga  terbentuk  dua lapisan  fraksi  yaitu  fraksi  metanol  dan  fraksi  etil asetat. Fraksi etil asetat dikeluarkan sedangkan fraksi metanol  dipartisi  kembali  menggunakan  pelarut  etil asetat  dengan  perbandingan  yang  berbeda  yaitu perbandingan  1:2  (fraksi  metanol  sebanyak  100  mL dan pelarut etil asetat sebanyak 200 mL). Selanjutnya ekstrak  dan    fraksi  ini  masing-masing  diuapkan menggunakan vacum  rotary  evaporator hingga didapatkan ekstrak dan fraksi kental [14].

## 2.2 Uji Toksisitas Metode BSLT
2.2.1 Penetasan Larva udang  Artemia  salina Leach
Penetasan telur A. salina dilakukan dengan cara merendam  50  mg  telur A.  salina dalam  wadah  yang berisi air laut di bawah cahaya lampu 40 Watt. Telur A.  salina menetas  menjadi  larava  setelah  24  jam. Larva A. salina yang baik digunakan untuk uji BSLT yaitu yang berumur 48 jam sebab jika lebih dari 48 jam dikhawatirkan  kematian A.  salina bukan  disebabkan toksisitas  melainkan  oleh  terbatasnya  persediaan makanan [15].

## 2.2.2 Penyiapan Sampel Uji
Masing-masing  dibuat  larutan  stok  2000  ppm ekstrak  metanol,  fraksi  etil  asetat  dan fraksi  air  kulit batang ketapang laut dengan cara melarutkan 0,2 gram ekstrak  dalam  air  laut  hingga  mencapai  volume  100 mL. Blanko dibuat dengan cara diambil 2,5 ml DMSO kemudian ditambahkan air laut 2,5 ml  Uji Toksisitas Metode BSLT.
Sebanyak 10 larva udang dalam 2,5 ml air laut dimasukan  kedalam  vial  uji,  kemudian  ditambahkan 2,5  ml  larutan  sampel.  Untuk  setiap  konsentrasi dilakukan 3 kali pengulangan. Sebagai kontrol pelarut dilakukan  dengan  2,5  ml  larutan  blanko  kemudian ditambahkan  air  laut  2,5  ml  [16].  Pengujiannya dilakukan  dengan  menggunakan  konsentrasi  dengan 10 variasi konsentrasi yaitu 10 ppm, 25 ppm, 50 ppm
,  100  ppm,  125  ppm,  250  ppm,  500  ppm,  750  ppm, 1000 ppm, 2000 ppm.

## 2.2.3 Perhitungan
Pengamatan dilakukan setelah 24 jam dengan menghitung jumlah larva udang yang masih hidup dan yang sudah mati. Pengukuran mortalitas larva A. salina Leach[17]:
Mortalitas (%) =
𝐴𝑘𝑢𝑚𝑢𝑙𝑎𝑠𝑖 𝑚𝑎𝑡𝑖
𝐴𝑘𝑢𝑚𝑢𝑙𝑎𝑠𝑖 𝑚𝑎𝑡𝑖+𝐴𝑘𝑢𝑚𝑢𝑙𝑎𝑠𝑖 𝐻𝑖𝑑𝑢𝑝 𝑥 100 %

## 2.2.4 Analisis Data
Analisis  probit  antara  konsentrasi  uji  dan jumlah  kematian  larva  diuji  dengan  menggunakan Minitab ver.17.2.1 dapat  menujukkan  nilai  LC 50 dari masing-masing sampel [18].

## 3. Hasil dan Pembahasan
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk  memberikan gambaran tentang golongan senyawa yang terkandung dalam sampel kulit batang ketapang laut yang sedang diteliti  secara  kualitatif.  Senyawa-senyawa  tersebut dapat  diidentifikasi  dengan  pereaksi-pereaksi  yang mampu  memberikan  ciri  khas  dari  setiap  golongan dari  metabolit  sekunder.  Identifikasi  senyawa  yang dilakukan  terhadap  ekstrak  dan  fraksi  kulit  batang ketapamg  laut  diantaranya  alkaloid,  flavonoid, tanin, saponin, dan terpenoid [19].
Tabel 1 .  Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  metanol dan  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  kulit batang ketapang laut
Senyawa Fitokimia Sampel Ekstrak metanol Fraksi etil asetat Fraksi air Alkaloid + + + Flavonoid + + + Tanin + + + Saponin - - - Terpenoid + + +
Kandungan  senyawa  metabolit  skunder  yang terdapat dalam Ekstrak methanol, fraksi etil asetat, dan fraksi  air  adalah  sama  yaitu  mengandung  alkaloid, flavonoid,  tanin,  dan  terpenoid.  Ekstrak  dan  kedua fraksi  kulit  batang  ketapang  laut    tersebut  tidak mengandung saponin
Uji  toksisitas  akut  merupakan  suatu  pengujian untuk  mendeteksi  efek  toksik  suatu  obat/bahan  obat yang  terjadi  dalam  waktu  singkat  setelah  pemberian bahan  uji  dalam  waktu  24  jam.    Suatu  ekstrak  dan fraksi dikatakan toksik berdasarkan metode BSLT jika
nilai LC 50 < 500 ppm. LC 50 atau Lethal Concentration 50% menyatakan besarnya kadar sample yang mampu menyebabkan kematian populasi 50%. Semakin kecil nilai  LC 50 maka  semakin  besar  ketoksikannya.  [20]. Berikut  adalah  nilai  LC 50 ekstrak  dan  fraksi  kulit batang ketapang laut ( Terminalia catappa L .) ( Tabel 2 .) .
Pada  penelitian  ini  dilakukan  uij  toksisitas  akut pada ekstrak methanol, fraksi etil asetat dan fraksi air. Masing-masing  bahan  uji  memilki  nilai  LC 50 yang berbeda. Berikut adalah nilai  LC 50 ekstrak methanol, fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  kulit  batang  ketapang laut ( Terminalia catappa L. ).
Tabel. 2 Nilai LC 50 Ekstrak dan Fraksi Kulit Batang Ketapang Laut ( Terminalia catappa L .) No Sampel LC 50 (ppm) 1 Ekstrak metanol 247,997 2 Fraksi etil asetat 400,666 3 Frasi Air 618,046
Berdasarkan  tabel  di  atas  terlihat  bahwa  ekstrak metanol  memiliki  nilai  sebesar  LC 50 sebesar  247,997 ppm,  sementara  fraksi  etil  asetat  memilki  nilai  LC 50 sebesar  400,666  ppm  dan  fraksi  air  sebesar 618,046 ppm dan. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak metanol dan  fraksi  etil  asetat  bersifat  tosik  nilai  LC 50 <  500 ppm.
Gambar  1. Diagram  Nilai  LC 50 Ekstrak  dan  Fraksi Kulit Batang Ketapang Laut  ( Terminalia catappa L .)
Dari  grafik  di  atas menunjukkan bahwa ekstrak metanol  memiliki  nilai  LC 50 paling  rendah  (247,997 ppm)  dibandingkan  fraksi  etil  asetat  (400,666  ppm) dan fraksi air (618,046 ppm). Hal menunjukan bahwa
ekstrak  metanol  lebih  toksik  dibandingkan  fraksi- fraksi lainnya yaitu fraksi etil asetat dan fraksi air. Hal ini  disebabkan  karena  pada  ekstrak  metanol  lebih banyak  terkandung  senyawa  yang  bersifat  polar, semipolar  dan  non  polar.  Senyawa-senyawa  tersebut bekerja secara sinergis sehingga memliki kemampuan toksisitas  yang  paling  tinggi  dibandingkan  dengan fraksi  yang  sudah  dipisahkan  senyawa-senyawanya berdasarkan tingkat kepolarnnya. Diperkirakan perbedaan  jenis  dan  kadar  metabolit  sekunder  yang terekstraksi  tersebut  sebanding  dengan  toksisitasnya [21].
Kandungan fenol, flavonoid, alkaloid, tanin dan terpenoid dalam kulit batang ketapang laut ( Terminalia  catappa  L. )  dapat  memiliki  aktivitas biologi.  Secara  umum  senyawa  fenolik  pada konsentrasi  tinggi  bertindak  sebagai  toksin  bagi plasma dengan merusak sistem dinding sel, sedangkan pada konsentrasi rendah dapat menghambat multiplikasi enzim in vitro [22]. Keberadaan senyawa metabolit sekunder dalam tanaman dapat dimanfaatkan sebagai agen biolarvasida dan antikanker [23]. Ekstrak metanol dan fraksi etil asetat kulit  batang  ketapang  laut  mempunyai  potensi toksisitas.  Hal  tersebut  berkaitan  dengan  senyawa yang  terdapat  dalam  kulit  batang  ketapang  laut  yaitu alkaloid, terpenoid, tannin dan flavonoid, dimana pada kadar  tertentu  memiliki  potensi  toksisitas  serta  dapat menyebabkan  kematian  larva  [24].  Cara  kerja senyawa-senyawa  tersebut  adalah  dapat  bertindak sebagai  racun  perut  ( stomach  poisoning) yang mengganggu  alat  penceraan  larva  dan  menghambat reseptor  perasa  pada  mulut  larva.  Akibatnya  larva gagal  mendapatkan  stimulus  rasa  sehingga  tidak mampu  mengenali  makanannya  yang  kemudian menyebabkan kematian larva Artemia Salina L [25] .

## 4. Kesimpulan
Ekstrak  metanol  kulit  batang  ketapang  laut (terminalia  catappa  L.)  memiliki  tingkat  toksisitas yang  paling  tinggi  dibandingkan  dalam  bentuk fraksinya (fraksi etil asetat dan fraksi air) dengan nilai LC50 sebesar 247,997  ppm.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  kepada  Fakultas  Farmasi Universitas  Halu  Oleo  atas  dukungan  dan  bantuan dalam pelaksanaan penelitian ini.

## Daftar Pustaka
1. Nurrani,  L.;  Kinho,  J.;  Tabba,  S.  Active Ingredients and Their Toxicity of Several  Forest Plant  Species  Indigenous  from  North  Sulawesi
0 100.000 200.000 300.000 400.000 500.000 600.000 700.000 Ekstrak metanol Fraksi etil asetat
Frasi Air
Nilai LC 50 Ekstrak dan Fraksi Kulit Batang Ketapang Laut (ppm)
Potential as Efficacious Medicine. J. Penelit. Has. Hutan , 2014 , 32 (2), 123–138.
2. Chasani,  M.;  Fitriaji,  R.  B.;  Purwati.  Fraksinasi Ekstrak Metanol Kulit Batang Ketapang (Terminalia Catappa Linn.) Dan Uji Toksisitasnya  Dengan  Metode  BSLT  (Brine
Shrimp  Lethality  Test)  Moch. Molekul , 2013 , 8 (1), 89–100.
3. Braguini,  W.  L.;  Pires,  N.  V.;  Alves,  B.  B. Phytochemical  Analysis,  Antioxidant  Properties and  Brine  Shrimp  Lethality  of  Unripe  Fruits  of Solanum Viarum. J. Young Pharm. , 2018 , 10 (2), 159–163. https://doi.org/10.5530/jyp.2018.10.36.
4. Hamsidi,  R.;  Wahyuni;  Sani,  A.  Uji  Toksisitas Akut  Ekstrak  Metanol  Daun  Keji  Beling  ( Strobilanthes  Crispus  BI  .),  Batang  Dan  Bunga Jarak  Tintir  (  Jatropha  Multifida  L  .)  Terhadap Larva  Artemia  Salina  Leach  Dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test  (  BSLT  ). Pharmauho , 2014 , 1 (1), 12–15.
5. Meyer, B. N.; Ferrigni, N. R.; Putnam, J. E. Brine Shrimp:  A  Convenient  General  Bioassay  for Active Plant Constituents. Planta Med. , 1982 , 45
(1), 31–34. https://doi.org/10.1055/s-2007- 971236.
6. Baud,  G.  S.;  Sangi,  M.  S.;  Koleangan,  H.  S.  J. Analisis  Senyawa  Metabolit  Sekunder  Dan  Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Batang Tanaman Patah Tulang (Euphorbia Tirucalli  L.) Dengan Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT). J.  Ilm. Sains , 2014 , 14 (2), 106–112.
7. Eav  Susanty  Simaremare.  Skrining  Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Gatal (Laportea Decumana (Roxb) Wedd). Pharmacy , 2014 , 11 (01), 98–107.
8. Obat, B. P.; Indonesia, M. R. Penyiapan Simplisia Untuk Sediaan Herbal ; Jakarta: BPOM RI, 2005.
9. Yamin;  Hasnawati.  Potensi  Ekstrak  Daun  Dan Batang  Katola  (  Arcangelisia  Flava  L  .  Merr  ) Sebagai  Antimikroba. Pharmauho , 2017 , 3 (2),
23–27.
10. Mappasomba,  M.;  Wirasmanto,  B.;  Malaka,  M. H. Penapisan Fitokimia Dan Uji Toksisitas Akut Ekstrak  Metanol  Beberapa  Tanaman  Obat Terhadap  Larva  Udang  Artemia  Salina  Leach. Pharmauho , 2019 , 5 (September), 30–34.
11. Khadijah, K.; Jayali, A. M.; Umar, S.; Sasmita, I. Penentuan Total Fenolik Dan Aktivitas
Antioksidan  Ekstrak  Etanolik  Daun  Samama (Anthocephalus  Macrophylus)  Asal  Ternate, Maluku  Utara. J.  Kim.  Mulawarman , 2017 , 15 (1), 11–18.
12. Simaremare,  E.  S.  Skrining  Fitokimia  Ekstrak Etanol Daun Gatal (Laportea Decumana (Roxb.) Wedd). Pharm. J. Farm. Indones.
(Pharmaceutical J. Indones. , 2014 , 11 (1).
13. Adriyadi,  D.;  Arreneuz,  S.;  Wibowo,  M.  A. Skrining Fitokimia Dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak  Metanol  Kulit  Batang  Lembawang (Mangifera  Sp.). J.  Kim.  Khatulistiwa , 2016 , 5 (2), 1–5.
14. Wahdaningsih,  S.;  Setyowati,  E.  P.;  Wahyuono, S.  Aktivitas  Penangkap  Radikal  Bebas  Dari Batang  Pakis  (  Alsophila  Glauca  J  .  Sm  ). Maj. Obat Tradis. , 2011 , 16 (3), 156–160. 15. Sondakh,  R.  M.;  Posangi,  J.;  Wowor,  P.  M.  Uji Toksisitas Akut Ekstrak Spons Laut
(Callyspongia Aerizusa) Terhadap Larva Artemia Salina  Leach  Dengan  Metode  Brine  Shrimp Lethality  Test. J.  e-Biomedik , 2017 , 5 (2),  0–3. https://doi.org/10.35790/ebm.5.2.2017.18312.
16. Frengki,  R.;  Pertiwi,  D.  Uji  Toksisitas  Ekstrak Etanol  Sarang  Semut  Lokal  Aceh  (Mymercodia Sp.)  Dengan  Metode  BSLT  Terhadap  Larva Udang Artemia Salina Leach. J. Med. Vet. , 2014 , 8 (1), 60–62.
17. Metanol,  E.;  Djamil,  R.;  Anelia,  T.  Penapisan Fitokimia  ,  Uji  BSLT  ,  Dan  Uji  Antioksidan. J.
Ilmu Kefarmasian Indones. , 2009 , 7 (2), 65–71.
18. Masriyono;  Afrianisa,  A.  D.  R.  R.  D.  Uji Toksisitas LC50 Air Limbah Restoran Cepat Saji Terhadap  Biota  Uji  Ikan  Nila  Melalui  Analisa Probabilitas  Menggunakan  Software  Minitab.  In Seminar  Teknologi  Perencanaan,  Perancangan, Lingkungan,  dan  Infrastruktur ;  2019;  pp  459– 464.
19. Adjeng, A. N. T.; Hairah, S.; Herman, S.; Ruslin, R.; Fitrawan, L. O. M.; Sartinah, A.; Ali, N. F. M.; Sabarudin,  S.  Skrining  Fitokimia  Dan  Evaluasi Sediaan  Sabun  Cair  Ekstrak  Etanol  96%  Kulit Buah  Salak  Pondoh  (Salacca  Zalacca  (Gaertn.) Voss.) Sebagai Antioksidan. Pharmauho J. Farm. Sains,  dan  Kesehat. , 2020 , 5 (2),  3–6. https://doi.org/10.33772/pharmauho.v5i2.10170.
20. R.  Hamidi,  M.;  Jovanova,  B.;  Kadifkova Panovska,  T.  Toxicological  Evaluation  of  the Plant  Products  Using  Brine  Shrimp  (Artemia Salina L.) Model. Maced. Pharm. Bull. , 2014 , 60 (01), 9–18.
21. Lisdawati, V.; Wiryowidagdo, S.; Kardono, L. B. S.  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT)  Dari Berbagai Fraksi Ekstrak Daging Buah Dan Kulit Biji  Mahkota  Dewa  (Phaleria  Macrocarpa). Bul.
Penelit. Kesehat. , 2006 , 34 (3), 111–118.
22. Puspitasari, E. Uji Toksisitas Dengan Menggunakan  Metode  Brine  Shrimp  Lethality Test  (Bslt)  Pada  Ekstrak  Mangrove  (Avicennia Marina, Rhizophora Mucronata, Sonneratia Alba Dan  Xylocarpus  Granatum)  Yang  Berasal  Dari Banyuasin,  Sumatera  Selatan. J.  Biol.  Trop. ,
2018 , 18 (1), 91–103.
23. Panggabean, L.; Nurhamidah, N.; Dewi, H. Profil Fitokimia  Dan  Uji  Sitotoksik  Ekstrak  Etanol Tumbuhan
Andaliman (Zanthoxylum Acanthopodium  DC)  Menggunakan  Metode BSLT, Universitas Bengkulu, 2019.
24. Khanna,  V.  G.;  Kannabiran,  K.  Sylvestre  ,  and Eclipta  Prostrata  against  Culex  Qinquifaciatus
Mosquito Larvae. African J. Biotechnol. , 2007 , 6 (3), 307–311.
25. Susanah  Rita,  W.;  Suirta,  I.;  Sabikin,  A.  Isolasi Dan  Identifikasi  Senyawa  Yang  Berpotensi Sebagai  Antitumor  Pada  Daging  Buah  Pare (Momordica  Charantia  L.). J.  Kim. , 2008 , 2 (1),
1–6.
© 2020 by the authors; This article is an open access article distributed under the terms  and conditions  of the Creative Commons Attribution License ( http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ )