## Keragaman genetik Anggrek Grammatophyllum scriptum asal biji dari hasil Kultur In Vitro berdasarkan penanda RAPD
Zarima Wibawati, Amelia Sarungallo, Barahima Abbas*
Program Pascasarjana dan Fakultas Pertanian Universitas Papua Jl. Gunung Salju Amban Manokwari
*Email: barahimabas@gmail.com
ABSTRAK: Propagation  through  tissue  culture  by  using  orchid  seed  as  explants  will produce a lot of orchid plants. This study aims to measure the genetic character of orchid plantlets that were regenerated from seeds which have been resulted from in vitro culture. The  genetic  character  of  the  original  orchid  plants  produced  from  in  vitro  culture  was determined  using  Random  Amplified  Polymorphic  DNA  (RAPD)  molecular  markers. The results showed that the primers used in the RAPD analysis showed a polymorphic band pattern of 14 DNA bands, with sizes between 500 bp - 8000 bp. The genetic distance of Grammatophyllum scriptum orchids that was regenerated from seeds is between 0.229 and 0.649.  The progenis produced from in vitro culture were clustered into seven groups at a dissimilarity coefficient of 45%.
Keywords : Orchid  seed, Grammatophyllum  scriptum ,  genetic  diversity,  invitro culture, plantlet

## PENDAHULUAN
Anggrek  merupakan  salah  satu tanaman  hortikultura  yang  banyak diminati  karena  keindahan  bunganya. Anggrek termasuk dalam famili Orchidaceae .  Famili  ini  merupakan famili bunga-bungaan yang paling besar dan  banyak  digunakan  sebagai  bunga potong.  Di  Indonesia  banyak  jenis tumbuhan yang termasuk dalam tumbuhan epifit. Tumbuhan epifit adalah tumbuhan  yang  hidupnya  menempel pada  tumbuhan  inang,  salah  satunya adalah  anggrek.  Spesies  anggrek  yang ada  di  Indonesia  mempunyai  potensi yang dapat dipakai sebagai induk silang dan unggul (Sandra, 2003).
Indonesia memiliki keragaman spesies  anggrek  yang  banyak  yaitu sekitar  5000  spesies  yang  tersebar  di hutan-hutan Indonesia. Kelestarian keanekaragaman anggrek mulai terancam akibat banyaknya penebangan- penebangan liar yang tidak bertanggung jawab  dan  menyebabkan  beberapa spesies  anggrek  terancam  punah,  salah satunya yaitu anggrek Grammatophyllum scriptum. Untuk menghindari  adanya  kepunahan  harus dilakukan  pelestarian.  Salah  satu  cara untuk melestarikan yaitu dengan melakukan  perbanyakan  (Lestari et  al .,
2013).
Grammatophyllum merupakan  salah satu  jenis  tanaman  anggrek  yang memiliki beberapa jenis yaitu Grammatophyllum scriptum, Grammatophyllum speciosum dan Grammatophyllum stapeliaeflorum ,
yang  paling  terkenal  adalah  anggrek
Grammatophyllum  scriptum .  Anggrek ini  paling  terkenal  di  daerah  Papua  dan Maluku  dengan sebutan  anggrek macan (Shalifah, 2011).
Anggrek Grammatophyllum scriptum memiliki  potensi  yang  besar  dalam bidang bisnis. Potensi produksi anggrek ini  lebih  tinggi  jika  di  bandingkan dengan  tanaman  hias  lainnya.  Produksi anggrek  pada  tahun  2015  sebesar 21.514.789 tangkai dan pada tahun 2016 produksi  tanaman  anggrek  mengalami penurunan  yaitu  sebesar  19.978.078 tangkai (BPS, 2016).
Anggrek  mempunyai  peran  penting dalam  bidang  pertanian,  yaitu  nilai ekonomi yang tinggi  serta warna bunga yang  menarik  dan  bentuknya  unik, sehingga mempunyai daya tarik sendiri. Widiastoety et  al .,  (2010)  menyatakan bahwa  anggrek  banyak  diminati  oleh konsumen  dari  dalam  negeri  maupun dari  luar  negeri,  karena  keunikan karakter  yang  khas  dapat  menjadikan anggrek  dalam  rangkaian  bunga  potong yang  tidak  dapat  digantikan  oleh  bunga lain. Daya tahan  kesegaran bunga yang dimiliki  anggrek  termasuk  dalam  daya tahan  yang  begitu  lama  jika  di bandingkan dengan bunga potong lainnya  seperti  mawar,  anyelir  dan gladiol. Banyak konsumen yang tertarik pada anggrek  karena  anggrek  ini  sangat mudah  beradaptasi  di  dataran  rendah, perawatannya tidak terlalu sulit walaupun  anggrek  tumbuh  dengan lambat,  dan  mudah  berbunga  jika dibandingkan  dengan  jenis  tanaman lainnya. Jika tanaman anggrek Grammatophyllum scriptum
sudah berbunga  maka  keindahan  dari  anggrek ini  sudah  dapat  dinikmati  oleh  banyak konsumen  (Suradinata et  al., 2016). Keistimewaan
anggrek
Grammatophyllum scriptum yaitu
mempunyai  warna  dasar  hijau  dengan totol  –  totol  coklat  yang  mirip  seperti
warna macan dan memiliki habitus yang tegap dan kuat (Markal et al., 2015). Menurut Isda et al ., (2014), pengembangbiakan anggrek secara alami  menggunakan  biji  sangat  sulit karena  biji  anggrek  tidak  memiliki endosperm  sebagai  cadangan  energi untuk pertumbuhan embry.
Perbanyakan
Grammatopyhllum scriptum dengan  menggunakan  biji dapat  dilakukan  dengan  menggunakan teknik kultur jaringan sehingga tanaman yang  dihasilkan  lebih  banyak  dalam waktu  yang  singkat  dan  bisa  bebas  dari penyakit.
Biji anggrek bersifat mikroskopis dan tidak memiliki endosperm  dapat  diperbanyak  melalui kultur in vitro dengan tingkat keberhasilan  yang  tinggi.  Biji  yang  di kulturkan  secara in  vitro dengan sendirinya merupakan sumber keragaman  genetik  karena  merupakan hasil  persilangan  yang  terjadi  secara alami. Pengukuran tingkat variasi bibit yang berasal dari biji dapat diukur berdasarkan  penanda  morfologi  dan molekuler.  Teknik  molekuler  memiliki tingkat  akurasi  yang  jauh  lebih  tinggi jika  di  bandingkan  dengan  teknik konvesional (Anggereini, 2008).

## METODE PENELITIAN

## Bahan Tanaman dan Ekstraksi DNA
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  planlet  anggrek Grammatophyllum  scriptum asal  biji yang  telah  ditumbuhkan  melalui  kultur in  vitro.  Ekstraksi  DNA  dilakukan dengan  menggunakan Genomic  DNA mini  kit  (plant) GENEID.  Metode  yang isolasi DNA sesuai dengan metode yang digunakan  oleh  Abbas  (2017).  DNA genom  diekstraksi  dari  planlet  daun anggrek  dengan  cara  digerus  hingga daun anggrek menjadi halus. Bubuk hasil
gerusan di pindahkan ke dalam tube 1,5 ml  sebanyak  25  mg.  Campurkan  GPX1 buffer sebanyak 400 μ l dan 5 μ l RNAse yang  ditambahkan  ke  dalam  tube menggunakan vortex dan spiner.
Campuran tersebut di inkubasi pada suhu 60 ℃ selama  10  menit.  Saat  inkubasi dilakukan,  elution  buffer  dipanaskan menggunakan heat  block .  GP2  buffer sebanyak 100 μ l ditambahkan ke dalam campuran dan kemudian dihomogenkan dengan menggunakan vortex, kemudian diinkubasikan ke dalam freezer selama 3 menit.  Campuran  tersebut  dipindahkan ke  dalam  kolom  filter  yang  dipasang dalam tube 2 ml, kemudian disentrifuges dengan  kecepatan  5000  rpm  selama  1 menit. Supernatant pada  tube  2  ml dipindahkan  dengan  hati-hati  ke  dalam tube  1,5  ml  yang  baru.  Volume lysate pada  GP3  buffer  1,5  kali  di  tambahkan dan  divortex  selama  5  detik.  Campuran 700 μ l dipindahkan ke dalam kolom GD yang  telah  diletakkan  pada  tube  2  ml, kemudian disentrifuges dengan kecepatan  15000  rpm  selama  2  menit. Cairan  yang  keluar  dari  tube  di  buang dan sisa campuran dimasukkan ke dalam kolom  GD,  kemudian  disentrifuge  pada kecepatan  15000  rpm  selama  2  menit. Cairan yang keluar di buang dan kolom GD  yang  digunakan  diletakkan  pada tube 2 ml. W1 buffer 400 μ l ditambahkan pada  saat  kolom  dicuci  dan  kemudian disentrifuge  dengan  kecepatan  15000 rpm selama 30 detik. Buffer pencuci 600 μ l ditambahkan pada kolom yang dicuci setelah filtrate dibuang, dan disentrifuge pada 15000 rpm selama 30 detik. Kolom GD  di  keringkan  dengan  menggunakan disentrifuge  selama  3  menit  pada kecepatan 15000 rpm dan filtrat dibuang. Pindahkan kolom GD yang telah kering pada tube 1,5 ml dan Elution Buffer 100 μ l  ditambahkan,  kemudian  biarkan
selama  4  menit  hingga  Elution  Buffer terserap  oleh  matriks.  Sentrifuge  pada kecepatan  15000  rpm  selama  30  detik untuk mendapatkan DNA yang murni.

## Uji Kualitas DNA
Uji  kualitas  dan  kuantitas  DNA dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer Nanodrop 2000 dengan  mengukur  kualitas  DNA  pada panjang  gelombang  λ260  nm  dan panjang gelombang λ280 nm.
SB  buffer  1x  dan  agarose  sebagai media penyangga dapat digunakan pada pengujian DNA. Agarose dibuat dengan cara menimbang agarose sebanyak 0,45 gram  kemudian  tambahkan  45  ml  SB buffer.  Campuran  tersebut  dipanaskan hingga  jernih  dan  tuangkan  ke  dalam cetakan  gel  elektroforesis  dengan  sisir yang telah diletakkan didalamnya.
Masukkan gel yang sudah dipanaskan ke  dalam  tangki  elektroforesis,  dan tambahkan  SB  buffer  hingga  gel terendam  seluruhnya.  Sisir  yang  telah membentuk  sumur-sumur,  diisi  dengan loading dye yang telah dicampur ekstrak DNA.  Setiap  4 μ l  diambil  dari  ekstrak DNA dan dicampur dengan loading dye sebanyak 1 μ l. Bagian tepi gel dari sisir diisi  dengan  marker  1  kb DNA  ladder sebanyak
4 μ l. Tutup tangki elektroforesis  dan  diatur  menggunakan tegangan  110  V  selama  25  menit. Rendam  gel  ke  dalam  etidium  bromide selama 15 menit, kemudian bilas dengan air  dan  divisualisasi  menggunakan  UV transiluminator.

## Amplifikasi DNA dengan Mesin PCR
Volume  reaksi  amplifikasi  sebanyak 10 μ l, yang terdiri atas 2 μ l DNA genom, 5 μ l Master  mix .  1 μ l  primer  dan  2 μ l GoTaq  Green  (Promega)  merupakan sampel  dari Master  mix. Primer  RAPD yang digunakan beserta urutan nukleotidanya disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Daftar  Primer  RAPD  yang digunakan dalam penelitian ini Primer Urutan Nukleotida (5'-3') OPE 16 GGT GAC TGT G OPF 02 GAG GAT CCC T OPG 11

## TGC CCG TCG T

## Elektroforesis produk PCR
Menggunakan  gel  agarosa  1%  (b/v) dan  lartan  TAE  buffer  1x.  Agarose  1  g dilarutkan ke dalam 100 ml TAE buffer untuk membuat
gel agarosa. Elektroforesis  dilakukan  pada  tegangan 95  V  selama  2  jam.    Gel  yang mengandung  fragmen  DNA  setelah mengali  pemisahan  direndam  ke  dalam larutan  ethidium  bromide  selama  25 menit dan dibilas dengan air kemudian di visualisasi  dengan  menggunakan  UV transiluminator. Dokumentasi dilakukan dengan menggunakan kamera digital.

## 𝐀𝐧𝐚𝐥𝐢𝐬𝐢𝐬 𝐃𝐚𝐭𝐚
Data  penampakan  karakter  genetik dan  hasil  skoring  pita  DNA  ( bands) dianalisis menggunakan
analisis multivariate  dengan  metode Unweight Pair  Group  Method  with  Arithmatic (UPGMA)  program  NTsys  versi  2.02 (Rohlf, 1998).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Keragaman genetik G. scriptum berdasarkan penanda RAPD
Hasil  uji  kualitas  dan  kuantitas DNA tanaman anggrek G. scriptum yang telah  diisolasi  dengan  menggunakan Genomic  DNA  mini  kit disajikan  pada Tabel  2.  Uji  kualitas  DNA  tanaman anggrek yang paling tinggi
konsentrasinya yaitu sampel P21
sebanyak  327,8  ng/µl,  sedangkan  yang paling  terendah  konsentrasinya  yaitu sebesar 8,3 ng/µl pada sampel P14. DNA berkualitias  memiliki  nilai  antara  1,8
sampai  2,0  pada  rasio    λ260  dan  λ280 (Kundu  2011).  Berdasarkan  pengujian kualtias  DNA  yang  telah  dilakukan menunjukkan  bahwa  nilai  pengukuran UV-transiluminator  antara  1,77  -  2,08 untuk semua sampel DNA. Hal tersebut menunjukkan bahwa DNA hasil ekstraksi dapat dinyatakan murni karena kalau  dibulatkan  nilai  pengukuran  UV- transilluminator sampai pada angka satu decimal,  maka  semua  sampel  ekstrasi DNA berada pada kisaran 1.8-2.0 (Tabel 2).  Kemurnian  DNA  yang  digunakan sebagai template untuk  PCR  sangat dipengaruhi oleh kemurnian DNA yang digunakan (Sembiring et al . 2015). Analisis keragaman genetik
dilakukan  dengan  menggunakan  tiga macam primer yaitu OPE16, OPF02 dan OPG11.  Hasil  amplifikasi  DNA  genom dari  12  bibit  anggrek  menghasilkan  14 pita  polimorfik  dan  5  pita  monomorfik dengan  ukuran  berkisar  500  bp  –  8000 bp. Ketiga primer yang digunakan pada penelitian  ini  menunjukkan  bahwa primer  OPE16,  OPF02  dan  OPG11 menghasilkan  pola  pita  polimorfik. Primer  OPG11  menghasilkan  pola  pita polimorfik  paling  banyak  yaitu  tujuh pola pita DNA. Primer OPE16 merupakan  primer  yang  menghasilkan pola  pita  polimorfik  paling  sedikit sebanyak dua pola pita DNA. Pita DNA monomorfik  tertinggi  dihasilkan  oleh primer  OPF02  yaitu  sebanyak  tiga  pita DNA  (Tabel  3).  Penampilan  pemisahan DNA hasil elektroforesis disajikan pada Gambar 1.  Polimorfisme pita DNA yang dihasilkan pada penelitian ini menggunakan penanda RAPD menghasilkan keragaman genetik antara tanaman  anggrek.  Hasil  penelitian  ini sejalan dengan penelitian Hartati (2015) yang menyatakan bahwa penanda RAPD yang digunakan untuk tanaman anggrek terdapat keragaman genetik.
Tabel 2. Hasil uji kualitas DNA tanaman Anggrek Grammatophyllum scriptum
Sample ID Konsentrasi DNA Unit Kualitas DNA ( 260/280) P01 35,1 ng/µl 2,01 P03 27,8 ng/µl 1,94 P04 27,7 ng/µl 1,93 P11 117,6 ng/µl 2,00 P13 84,9 ng/µl 1,98 P14 8,3 ng/µl 2,08 P21 327,8 ng/µl 2,04 P23 90,2 ng/µl 1,92 P24 13,1 ng/µl 1,90 P31 277,6 ng/µl 2,05 P32 162,8 ng/µl 1,99 P33 45,3 ng/µl 1,77
Tabel 3. Pola pita DNA hasil Amplifikasi dari tanaman anggrek G. scriptum hasil kultur in vitro yang teramplifikasi dengan menggunakan primer RAPD Primer Jumlah pita polimorfik Jumlah pita monomorfik Total OPE 16 2 1 3 OPF 02 5 3 8 OPG 11 7 1 8
Gambar 1.  Visualisasi fragmen-fragmen
RAPD yang teramplifikasi dengan menggunakan primer OPE16, OPF02, dan OPG11. Angka 1-12 merupakan sampel tanaman, Marker 1kb ladder (M).
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
OPG11 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 OPE16 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 OPF02

## Tabel . Ukuran pita DNA tanaman anggrek berdasarkan penanda RAPD pada tiga primer 4yang digunakan
Primer Jumlah pola pita Ukuran pola pita (bp) OPE16 3 3000, 2000, 750 OPF02 8 8000, 3500, 3000, 2500, 1800, 1000, 750, 500 OPG11 8 6000, 4200, 3100, 2500, 2000, 1600, 1400, 600 Hasil  skoring  pita  DNA  setelah dielektroforesis yang kemudian
dianalisis  menggunakan  program  Ntsys menghasilkan  ukuran  jarak  genetik antara  0.229  -  0,649  (Tabel  5). Konstruksi  Dendrogram  disajikan  pada Gambar  2.  Nilai  koefisien  disimilaritas antar  sampel  semakin  besar  maka hubungan kekerabatannya semakin jauh, begitu  pula  dengan  sebaliknya  nilai koefisien  disimilaritas  semakin  kecil maka hubungan kekerabatannya
semakin dekat.
Tanaman  anggrak G.  scriptum yang memiliki  koefisien  disimilaritas  paling rendah  yaitu  P21  dengan  P24  dan  P21 dengan P31 dengan ukuran jarak genetik 0,229. Sampel tanaman anggrak G.scriptum yang  memiliki  koefisien disimilaritas  tertinggi  yaitu  antara  P01 dengan  P11,  P01  dengan  P14,  P03 dengan  P13,  P04  dengan  P13,  P04 dengan  P14,  P13  dengan  P14,  dan  P13 dengan P33 dengan ukuran jarak genetik 0,649.
Tabel 5. Matriks koefisien disimilaritas dari 12 sampel tanaman anggrek hasil kultur in vitro berdasarkan penanda RAPD
P01 P03 P04 P11 P13 P14 P21 P23
P24 P31 P32 P33
P01 0.000 P03 0,562 0.000
P04 0,562 0,459 0.000
P11 0,649 0,562 0,459 0.000 P13 0,459 0,649 0,649 0,562 0.000 P14 0,649 0,562 0,649 0,562 0,649 0.000 P21 0,562 0,459 0,459 0,324 0,562 0,562 0.000 P23 0,513 0,513 0,607 0,513 0,397 0,607 0,397 0.000 P24 0,607 0,513 0,513 0,397 0,607 0,607 0,229 0,459 0.000 P31 0,607 0,397 0,513 0,397 0,513 0,513 0,229 0,324 0,324 0.000 P32 0,513 0,513 0,607 0,513 0,397 0,513 0,397 0,324 0,459 0,324 0.000 P33 0,562 0,562 0,459 0,459 0,649 0,562 0,459 0,607 0,513 0,513 0,513 0.000
Gambar 2. Kontruksi dendogram dari 12 sampel anggrek G. scriptum hasil kultur in vitro berdasarkan penanda RAPD
Pengelompokkan  tanaman  anggrek berdasarkan penanda RAPD ditampilkan dalam  bentuk  dendogram  (Gambar  2). Tanaman  anggrek  mengelompok  ke dalam  7  kelompok  pada  koefisien disimilaritas  45%. G.  scriptum P01 berada pada kelompok satu, G. scriptum P03  berada  pada  kelompok  dua, G. scriptum P04  berada  pada  kelompok tiga, G.  scriptum P13  berada  pada kelompok empat, G. scriptum P11, P21, P24,  dan  P31  berada  pada  kelompok lima, G.  scriptum P13,  P23,  dan  P32 berada  pada  kelompok  enam,  dan G. scriptum P14  berada  pada  kelompok tujuh.  Pengelompokan  seperti  tersebut juga  dijumpai  pada  tanaman  sagu  yang ditumbuhkan  dari  beiji  menghasilkan keragaman  yang  tinggi  (Riyanto  et  al. 2018). Secara alami bukan saja tanaman anggrek yang mengalami variasi genetik yang  tinggi,  tetapi  juga  tanaman  sagu ditemukan  mengalami  variasi  genetic yang  tinggi  pada  penggunakan  marker RPAD  (Abbas  et  al.  2009;  Abbas  et  al. 2009; Abbas 2018)

## KESIMPULAN
Tiga  primer  yang  digunakan  dalam analisis  RAPD  menunjukkan  pola  pita polimorfis  sebanyak  14  pita  DNA, dengan  ukuran  berkisar  500  bp  –  8000 bp.  Progeni  tanaman  anggrek G. scriptum beragam  dengan  jarak  genetik antara  0.000  -0.649.  Progeni  yang dihasilkan  anggrek G.  scriptum dari kultur in vitro mengelompok membentuk tujuh kelompok pada koefisien dissimilarity 45%.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas, B. ,  Dailami, M. , Listyorini, F. and  Munarti.  2017.  Genetic Variations  and  Relationships  of
Papua’s Endemic Orchids Based on  RAPD  Markers.  Natural Science, 9, 377-385. doi: 10.4236/ns.2017.911035.
Abbas  B.  2018.  Sago  palm  genetic resource  diversity  in  Indonesia. In: Ehara H, Toyoda Y, Johnson D  (eds.).  Sago  Palm:  Multiple Contributions  to  Food  Security
1 2 3 4 5 6 7 45%
and  Sustainable  Livelihoods. Springer, Singapore. DOI: 10.1007/978-981-10-5269-95.
Abbas  B,  Bintoro  MH,  Sudarosono,
Surahman  M,  Ehara  H.  2009.
Genetic  relationship  of  sago palm (Metroxylon sagu Rottb.) in Indonesia  based  on  RAPD markers.  Biodiversitas  10  (4): 168-174. DOI: 10.13057/biodiv/d100402. Abbas  B,  Bintoro  MH,  Sudarosono,
Surahman  M,  Ehara  H.  2009. Hirarki dan Diferensiasi Genetik Tanaman  Sagu  di  Indonesia Berdasarkan  Penanda  RAPD. Zuriat, Vol. 20, No. 1, 8 Januari- Juni 2009
Anggereini, E. 2008. Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD), suatu  metode  analisis  DNA dalam menjelaskan berbagai fenomena biologi. Jurnal Biospecies 1(2): 73-76. BPS.  2016.  Tanaman  Hias  Indonesia. Produksi Anggrek Indonesia 2015-2016. Baroroh,  A.  2016.  Analisis  Kandungan Unsur  Hara  Makro  Pada  Pupuk Kompos  Dari  Serasah  Daun Bambu dan Limbah Padat Pabrik Gula ( Blotong ). [Skripsi] Fakultas MIPA Universitas Sebelas Maret. Hartati,  S.  2015.  Analisis  keragaman genetik tetua dan hasil persilangan anggrek hitam
( Coelogyne  pandurata Lindl.). [Disertasi] Program Doctor Ilmu Pertanian  Universitas  Sebelas
Maret Surakarta.
Isda,  M.  N.  dan  S.  Fatonah.  2014.
Induksi  akar  pada  eksplan  tunas anggrek Grammatophylum scriptum var. Citirum secara in vitro pada  media  ms  dengan penambahan  NAA  dan  BAP. Jurnal Biologi 7(2): 53-57.
Kundu. 2011.  A  simple  ethanol  wash of    the    tissue    homogenates recovers  high  -quality  genomic DNA  from  Corchorus  species characterized  by  highly    acidic and  proteinaceous  mucilages. Electron J Biotechnol.14: 1-7.
Lestari,  E.,  T.  Nurhidayati,  dan  S. Nurfadilah. 2013. Pengaruh konsentrasi ZPT 2,4-D dan BAP terhadap pertumbuhan dan perkembangan  biji Dendrobium laxidlorum J.J  Smith  secara in vitro .  Jurnal  Sains  dan  Seni Pomits 2(1): 2337-3250.
Markal, A., M. N. Isda, dan S. Fatonah. 2015. Perbanyakan anggrek Grammatophylum scriptum (Lindl.)  BL.  melalui  induksi tunas  secara  in  vitro  dengan penambahan  BAP  dan  NAA.
Jurnal FMIPA 2(1): 108-114. Riyanto  R,  Widodo  I,  Abbas  B.  2018.
Morphology, growth and genetic variations of sago palm (Metroxylon sagu)  seedlings derived from seeds. Biodiversitas 19:  682-688. Rohlf, F.J. 1998.  NTSYS-pc Numerical Taxonomy and Multivariate
Analysis  System.  Version  2.02,
Exter Sift Ware, New York
Sandra,  E.  2003.  Kultur  Jaringan
Anggrek  Skala  Rumah  Tangga.
AgroMedia Pustaka. Bogor.
Sembiring,  I.  M.  S.,  L. A.  P.  Putri,  dan H.  Setiado.  2015.  Aplikasi penanda  lima  primer  RAPD ( Random Amplified Polymorphic DNA )  untuk  analisis  keragaman genetik andaliman ( Zanthoxylum acanthopodium DC)  Sumatera Utara.  Jurnal  Agroekoteknologi 4(1): 1748-1755 Shalifah,  H.  A.  B.,  Muskhazli,  Rusea,
dan Nithiyaa.    2011.    Variation in Mycorrhizal   Specificity   for
In Vitro Symbiotic Seed
Germination of Grammatophyllum
speciosum
Blume.  Sains Malaysiana  40(5):
451-455. Suradinata,  Y.  R.,  A.  Nuraini,  dan  A. Sela. 2016. Respon bunga anggrek Dendrobium F1 ( Dendrobium Malaysian  Green) pada berbagai
konsentrasi giberelin. Jurnal Kultivasi 15(1):
1-7. Widiastoety,  D.,  N.  Solvia,  dan  M. Soedarjo. 2010. Potensi  anggrek Dendrobium sp dalam meningkatkan variasi dan
kualitas  anggrek  bunga  potong. Jurnal  Litbang  Pertanian  29(3): 101-106.