INIASI TUNAS SECARA KULTUR JARINGAN PADA STEVIA ( Stevia rebaudiana Bertoni) DENGAN KOSENTRASI INDOLE BUTYRIC ACID (IBA) AND BENZYL AMINO PURINE (BAP) YANG BERBEDA
( In Vitro Shoot Initiation Of Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni ) with Different Concentration of Indole Butyric Acid (IBA) and Benzyl Amino Purine (BAP ))
Anisa Hadiyana 1 , Mohamad Ana Syabana 2 , Susiyanti 2
1 Alumni Jurusan Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Sultan Ageng Tirtayasa
2 Staf Pengajar Jurusan Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Sultan Ageng Tirtayasa Jl. Raya Jakarta Km 4, Pakupatan Serang Banten Telp. 0254-280706, Fax. 0254-280706, e-mail: anasyabana@untirta.ac.id

## ABSTRAK
This  research aims  to  know the initiation of bud  stevia ( Stevia rebaudiana Bertoni) in several  concentrations  of  Indole  Butyric  Acid  (IBA)  and  Benzyl  Amino  purine  (BAP) are  in  in  vitro.  This  research  was  conducted  from  August  to  October  2014  in engineering  laboratory,  Faculty  of  agriculture,  University  of  Sultan  Ageng  Tirtayasa, Serang, Banten. This study used a Random group of Design with two factors. The first factor  was  the  concentration  of  IBA  3  adequate  for  the  applicable  Io  (0  mg/l),  I1  (0.5 mg/l), I2 (1 mg/l) and the second factor is the concentration of BAP with 3 levels, apply B0  (0  mg/l),  B1  (0.5  mg/l),  B2  (1  mg/l).  So,  there  are  a  total  of  9  combination treatments  repeated  3  times  so  that  there  are  27  units  of  the  experiment.  The  results showed  that  treatment  without  IBA  and  BAP  (I0B0)  gave  the  best  result  in  parameter first appearance of shoots (4 days after planting) and shoot length (0,85 cm). While, the treatment I2B2 (1 mg/l IBA and BAP) gave the best result in parameter leaves number (22 leaves).
Keywords: initiation, stevia, growing regulatory substances, in vitro
PENDAHULUAN Tanaman Stevia merupakan tanaman herbaceous dari Family
Asteraceae . Tanaman ini  memiliki susunan  daun  altenate  dan  termasuk tanaman herbaceous (Singh et al, 2005). Stevia  telah  digunakan  US  sebagai pemanis alami selama beberapa tahun di banyak  negara  seperti  Amerika  Selatan dan  Jepang.  Stevia  sebagai  pemanis berasal  dari  daun Stevia  rebaudiana Bertoni,  yang merupakan tanaman herba yang  berasal  dari  Paraguay.  Daun  stevia adalah  pemanis  alami  yang  bebas  kalori dan mampu menghasilkan rasa manis 70
-  400  kali  lebih  manis  dari  gula  tebu (Raini dan Ismawati, 2011). Daun Stevia rebaudiana adalah sumber dari glikosida diterpene, seperti
steviolbioside, rubsoside,  rebaudioside  A,  B,  C,  D,  E dan  F,  dulcoside  dan  stevioside  (Starratt et  al., 2002).  Karena  stevia  dikenal  luas sebagai pengganti gula dan pemanis, hal ini  diperlukan  untuk  mengembangkan tanaman stevia. Stevia dapat
dikembangkan dengan perbanyakan generatif  dan  vegetatif.  Perbanyakan generatif  dari  stevia  dapat  dilakukan melalui  benih  sedangkan  perbanyakan vegetatif  stevia  dapat  dilakukan  melalui
tunas,  stek  batang  dan  kultur  jaringan (Sari, 2013).
Penyediaan  benih  konvensional melalui benih memiliki tingkat keberhasilan rendah, sedangkan
perbanyakan  dengan  stek  batang  dan pucuk akan menghasilkan tanaman  yang tidak identik pada kualitas tanaman yang diharapkan.  Perbanyakan  melalui  kultur jaringan lebih cepat,  menghasilkan lebih banyak  bibit,  dan  dan  identik  sehingga didapatkan kualitas tanaman yang diharapakan (Staba, 2000).
Keberhasilan inisiasi eksplan ditentukan  oleh  zat  pengatur  tumbuh (ZPT)  yang  diberikan  pada  media. Umumnya,  ZPT  sering  digunakan  untuk kultur  jaringan  adalah  orang  jenis auxins,  Sitokinin  dan  giberellin  (Abbas, 2011).  Beberapa  jenis  auxins  dapat dikombinasikan dengan kelompok sitokinin  dan  giberellin  (Ahmed et  al ., 2002). Fungsi auksin dan sitokinin untuk pembelahan sel, pemanjangan sel, diferensiasi  sel  dan  pembentukan  organ (Zulkarnain, 2011).
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui  inisiasi  pucuk  stevia ( Stevia  rebaudiana Bertoni)  dalam beberapa  konsentrasi  Indole  Butyric Acid  (IBA)  dan  Benzil  Amino  Purina (BAP) secara in vitro .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilakukan  dari Agustus-Oktober  2014  di  Laboratorium Bioteknologi  jurusan  Agroekoteknologi, Fakultas  Pertanian,  Universitas  Sultan Ageng Tirtayasa, Serang, Banten.
Peralatan  yang  digunakan  untuk melakukan  penelitian  adalah  Laminar Air  Flow  Cabinet  (LAFC), autoclave , gelas  beaker,  spatula,  erlenmeyer,  pipet, lulus silinder, petridish, hotplate magnetic  stirrer, analytical  balances , kompor gas, tabung gas, dan refrigerator.
Bahan-bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  eksplan sebagai bahan yang berasal dari tanaman stevia  klon  BPP  72  (Perkebunan  Pusat Penelitian Bioteknologi di Bogor, Indonesia), media Murashige dan Skoog (MS), gula, aquadest steril, alkohol 70%, deterjen,  metanol,  agar-agar,  kertas lakmus, tween 60,  aluminium  foil,  Zat Pengatur  Tumbuh  Indole  Butyric  Acid (IBA) dan Benzil Amino Purin (BAP). Rancangan percobaan yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah
Rancangan  Acak  Kelompok  (RAL) dengan  dua  faktor.  Faktor  pertama adalah  pada  konsentrasi  IBA  dengan  3 perlakuan,  yaitu  I0  (0  mg/L),  I1  (0,5 mg/L)  dan  I2  (1  mg/L).  Faktor  kedua adalah  konsentrasi  BAP  dengan  3 tingkat,  yaitu  B0  (0  mg/L),  B1  (0,5 mg/L) dan B2 (1 mg/L). Jadi, ada total 9 kombinasi perlakuan yang diulang 3 kali dan  total  satuan  percobaan  adalah  27 percobaan.
Eksplan  disterilkan  dengan  cara dicuci  dengan  air  mengalir.  Eksplan direndam  dalam  larutan  deterjen  selama 7 minutes, kemudian dibersihkan dengan air mengalir. Eksplan dibawa ke laminar untuk proses sterilisasi. Eksplan direndam  dalam  alkohol  70%  selama  2 menit, kemudian dibilas dengan aquadest.  Setelah  itu,  eksplan  yang direndam  ditetesi  2  tetes  tween  60  per 100  ml  aquadest  selama  6-7  menit, kemudian dibilas dengan aquadest.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Awal muncul tunas
Awal  muncul  tunas  merupakan indikator  awal  pertumbuhan  eksplan. Tunas  yang  baru  lahir,  muda  batang, atau  tanaman  baru  yang  tumbuh  dari setiap  bagian  dari  tanaman  yang  ada (Rahardja dan Wahyu, 2003).
Tabel  1.  Pengaruh  Indole  Butyric  Acid  (IBA)  dan  Benzil  Amino  Purina  (BAP)  pada awal muncul tunas pada stevia
IBA BAP Rata-rata B0 (0 mg/l) B1 (0,5 mg/l) B2 (1 mg/l) I0 (0 mg/l) 4a 22,33b 5,33a 10,56 I1 (0,5 mg/l) 8a 7a 5,67a 6,89 I2 (1 mg/l) 6,67a 13,33ab 9,67a 9,89 Rata-rata 6,22 14,22 6,89 Keterangan:    Angka-angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama  pada  kolom  dan  baris yang  sama  menunjukkan  tidak  berbeda  signifikan  menurut  uji  DMRT α
0,05
Tabel di atas menunjukkan bahwa  media  tanpa  IBA  dan  BAP menunjukkan  waktu  tercepat  munculnya tunas 4 hari setelah tanam, dan perlakuan 0  mg/L  IBA  dan  0,5  mg/L  BAP menunjukkan  waktu  terlama  munculnya tunas  dengan  20,33  hari  setelah  tanam. Keadaan  ini  mengindikasikan  bahwa hormon  dalam  stevia  dapat  merangsang terbentuknya tunas.

## Jumlah tunas
Peningkatan  jumlah  tunas  adalah salah  satu  parameter  yang  dapat  diukur secara kuantitatif dan merupakan
indikator  keberhasilan  kultur  jaringan. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa konsentrasi IBA yang tinggi menghasilkan jumlah tunas yang rendah. Penurunan  jumlah  tunas  ini  ditampilkan dalam  media  yang  diberikan  1  mg/L
IBA,  yaitu  3,78  tunas.  Di  sisi  lain,  BAP dengan konsentrasi yang tinggi meningkatkan  jumlah  tunas.  Hassanen (2013) melaporkan bahwa dengan meningkatkan  konsentrasi  BAP,  jumlah tunas  juga  akan  meningkat  secara  nyata pada jumlah tunas  dari 7,7 sampai    43,9 tunas per eksplan karena aplikasi BAP.
Gambar 1. Pengaruh Indole Butyric Acid (IBA) dan Benzil Amino Purina (BAP) pada jumlah tunas  pada stevia

## Jumlah daun
Jumlah daun pada eksplan adalah salah  satu  indikator  pertumbuhan  tunas yang baik. Media dengan IBA atau BAP dalam  konsentrasi  tinggi  menunjukkan jumlah daun lebih tinggi daripada media dengan  konsentrasi  IBA  dan  BAP  yang rendah.  Perlakuan  I2  (1  mg/L  IBA)  dan B2  (1  mg/L  BAP)  menunjukkan  jumlah daun  tertinggi  (22  helai).  Wetherel
(1982)  menyatakan  bahwa  pemberian auksin  dan  sitokinin  dapat  mendukung terbentuknya  daun.  Sitokinin  dan  auksin dalam konsentrasi tinggi dapat meningkatkan kemampuan jaringan tanaman  untuk  mensintesis  hormon alami yang dapat merangsang pertumbuhan  dan  perkembangan  tunas, dan terbentuknya daun.
Gambar 2. Pengaruh Indole Butyric Acid (IBA) dan Benzil Amino Purina (BAP) pada jumlah daun  pada stevia

## Panjang tunas
Pertumbuhan panjang tunas terjadi  karena  ada  pembelahan  dan pemanjangan sel dalam jaringan meristem.  Pertumbuhan  panjang  tunas pada Stevia rebaudiana Bertoni  dapat terjadi tanpa menggunakan  Zat Pengatur
Tumbuh  eksogen,  perlakuan  terbaik adalah  I0B0  (tanpa  IBA  dan  BAP).  Hal ini  diduga  terjadi  karena  auksin  atau
sitokinin dalam eksplan, mampu merangsang  panjang  tunas.  Panjang tunas terpendek ditunjukkan pada perlakuan  0,5  mg/L  IBA  dan  0  mg/L BAP.  Itu  diduga  terjadi  karena  auksin pada media dapat menghalangi pertumbuhan  tunas.  Zulkarnain  (2011) menjelaskan  bahwa  pemberian  sitokinin pada media kultur jaringan penting untuk mendukung perkembangan dan
pertumbuhan tanaman.
Gambar 3.   Pengaruh Indole Butyric Acid (IBA) dan Benzil Amino Purina (BAP) pada panjang  tunas  pada stevia

## SIMPULAN
Perlakuan  tanpa  IBA  dan  BAP  (I0B0) menunjukkan hasil terbaik pada
parameter  munculnya  tunas  awal  dan panjang  tunas.  Sedangkan,  perlakuan I2B2 (1 mg/L IBA dan BAP) memberikan hasil terbaik pada
parameter jumlah daun.

## SARAN
Kombinasi  perlakuan  IBA  dan  BAP tidak  boleh  digunakan.  Penelitian  lebih lanjut  perlu  metode  sterilisasi  yang sesuai  pada Stevia  rebaudiana Bertoni untuk meminimalkan kontaminasi.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas,  B.  2011.  Prinsip  Dasar  Teknik Kultur Jaringan. Alfabeta, Bandung. Ahmed,  E.  E.,  GY.D.  Bisztray  and  I. Velich.  2002.  Plant  regeneration from seedling explants of common bean ( Phaseolus vulgaris L . ).  Proceedings  of  the 7th Hungarian Congress on Plant Physiology. Szent Istvan University of Budapest. Budapest, Hungary. 115 - 123.
Hassanen,  S.  A.  and  Khalil,  R.  M.  A.
2013.  Biotechnological  Studies for Improving of Stevia ( Stevia
rebaudiana Bertoni)  in  vitro  Plantlets. Middle-East Journal of Scientific
Research 14 (1): 93-1006. Prihatmani,  D  dan  N.  A.  Mattjik,  2004. Penggunaan Zat Pengatur Tumbuh NAA ( Naphtalene Acetic  Acid )  dan  BAP  ( 6-  Benzil Amino  Purine )  serta  Air  Kelapa untuk Menginduksi Organogenesis Tanaman Anthurium ( Anthurium andraeanum Linden  ex  Andre). Bul. Agron. 32(1): 20-25.) Rahardja,  P.  C.,  dan  Wahyu,  W.  2003. Aneka Cara Memperbanyak Tanaman.  Agromedia  Pustaka, Jakarta. Raini, M. dan Isnawati, A. 2011. Kajian: Khasiat  dan  Keamanan  Stevia Sebagai Pemanis Pengganti Gula. Media Litbang Kesehatan Volume  21  Nomor  4  Tahun 2011: 145-156. Raini, M. dan Isnawati, A. 2011. Kajian: Khasiat  dan  Keamanan  Stevia Sebagai Pemanis Pengganti Gula. Media Litbang Kesehatan Volume  21  Nomor  4  Tahun 2011: 145-156.
Salisbury,  F.B.,  dan  Ross,  C.W.  1995. Fisiologi  Tumbuhan  Jilid  2.  ITB Press, Bandung.
Sari, D.I. 2014. Empat Teknik
Perbanyakan  Stevia.  Surabaya:
BBPPTP. Singh, S. D. and Rao, G. P. 2005. Stevia: The  herbal  sugar  of  the  21st century. Sugar Technol. 7:17-24. Staba, E. 2000. Plant Tissue Culture as a Source  of  Biochemical.  Florida: CRC  Press.  Sekaran  T,  Giridhar P,  Ravishankar  GA  (2007). Production  of  steviosides  in ex vitro and in  vitro grown Stevia rebaudiana Bertoni.  J.  Sci.  Food Agric. 87:420-424. Starratt,  A.  N.,  C.  W.  Kirbyb,  R.  Pocsa
and J. E. Brandle. 2002. Rebaudioside  F,  a  diterpene glycoside from Stevia rebaudiana . Phytochemistry 59:367. Wetherell, D.F. 1982. Pengantar Propagasi  Tanaman  secara In
Vitro .  IKIP  Semarang  Press,
Semarang.
Zulkarnain. 2011. Kultur Jaringan
Tanaman. Bumi Aksara, Jakarta.