Journal Syifa Sciences and Clinical Research Volume 3 Nomor 2, September  2021
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187

## Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Daun Ekor Kucing

## ( Acalypha hispida Burm.f.) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Hadi Kurniawan 1* , Meri Ropiqa 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura, Jalan Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak, Kalimantan Barat, Indonesia
2 Program Studi Teknologi Laboratorium Medis, Politeknik ‘Aisyiyah Pontianak, Jalan Ampera, Pontianak Kalimantan Barat, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: hadi.kurniawan@pharm.untan.ac.id

## ABSTRAK
Daun Ekor Kucing ( Acalypha hispida Burm.f.) merupakan jenis tanaman hias yang telah dikenal masyarakat  Indonesia  untuk  pengobatan,  namun  belum  ada  penelitian  untuk  meneliti toksisitas akut daun ekor kucing. Tanaman ini mengandung senyawa alkaloid dan flavonoid. Tujuan dari penelitian ini  adalah untuk mengetahui  potensi ketoksikan akut ekstrak etanol daun ekor kucing ( A. hispida Burm.f.) terhadap larva Artemia salina Leach dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) yang ditunjukkan dengan nilai LC 50 . Penelitian eksperimental ini menggunakan 300 ekor larva udang ( Artemia salina Leach) yang dibagi menjadi 5 kelompok kontrol negatif dan 5 kelompok seri konsentrasi ekstrak. Masing-masing kelompok terdiri dari 10  ekor  larva  dengan  replikasi  3  kali  untuk  tiap  kelompok  perlakuan.  Kelima  kelompok perlakuan diberi suspensi sediaan uji ekstrak etanol daun ekor kucing dengan konsentrasi 100 ppm,  250  ppm,  500  ppm,  750  ppm,  dan  1.000  ppm.  Data  kematian Artemia  salina Leach dianalisis  dengan  analisis  probit  untuk  mengetahui  nilai  LC 50 .  Hasil  penelitian  ini menunjukkan harga LC 50 dari ekstrak etanol daun ekor kucing adalah 220,005 ppm. Ekstrak etanol daun ekor kucing memiliki potensi toksisitas akut terhadap larva Artemia salina Leach menurut metode BSLT yang ditunjukkan dengan harga LC 50 < 1.000 ppm.
Kata Kunci: Uji toksisitas akut, Acalypha hispida Burm.f., BSLT, Artemia salina Leach
Diterima: 17-08-2021 Disetujui: 30-08-2021 Online: 30-08-2021

## ABSTRACT
Acalypha hispida Burm.f. is a flowering shrub commonly planted as decorative aimed. In Indonesia, it is well used as medication due to its medicinal beneficiary. The medicinal activity of A. hispida was known  related  to  alkaloids  and  flavonoid  contents.  However,  the  toxicity  of  that  activity  is  obscure. Objectives:  This  research  is  aimed  to  revealed  the  acute  toxicity  properties  of  ethanolic  extract  of  A. hispida leaves. Material and Methods: Test was carried out on Artemia salina larvae by Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Toxicity properties was showed as LC 50 value. This experimental research was conducted  to  300  larvae  which  divided  into  5  groups  of  negative  control  and  5  groups  treatment  of extract  dilution  series.  Each  group  was  consisted  of  10  larvae.  All  treatments  were  conducted  in  3 replications. Those five dilution series exposed were 100 ppm; 250 ppm; 500 ppm; 750 ppm; and 1.000 ppm respectively. Lethal number of the larva was counted and analyzed by probit analysis to determine the LC 50 value. Results: The obtained LC 50 value of ethanolic extract of A. hispida leaves was 220,005 ppm. Conclusions: As the value less than 1.000 ppm, this result indicated the ethanolic extract has the acute toxicity on Artemia salina Leach larvae by BSLT bioassay method
Copyright © 2021 Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
The acute toxicity, Acalypha hispida Burm.f., BSLT, Artemia salina Leach
Received: 2021-08-17 Accepted: 2021-08-30 Online: 2021-08-30

## 1. Pendahuluan
Dewasa  ini,  walaupun  obat-obat  modern  telah  mendominasi  pelayanan  kesehatan formal, penggunaan obat tradisional tetap mendapat tempat yang penting bahkan terus berkembang. Obat tradisional tidak dapat dipisahkan dari kehidupan kita karena sudah lekat dengan budaya bangsa dan digunakan oleh segenap lapisan masyarakat. Sesuai standar  mutu  dari  WHO,  obat  tradisional  harus  memenuhi  beberapa  persyaratan meliputi  kualitas,  keamanan,  dan  khasiat  [1].  Penggunaan  bahan  alam  sebagai  obat tradisional  di  masyarakat  dijamin  keamanannya  oleh  pemerintah  dengan Permenkes No.760/Menkes/Per/IX/1992,  tentang  obat  tradisional  dan  fitofarmaka  [2].  Sebelum menjadi suatu sediaan fitofarmaka, setiap bahan alam harus melewati beberapa tahapan meliputi  uji  farmakologi  eksperimental,  uji  toksisitas,  uji  klinis,  uji  kualitas  dan pengujian lainnya sesuai persyaratan demi keamanan pengguna [3].
Ekor kucing merupakan tanaman asli dari Hindia Barat. Umumnya, ditanaman sebagai tanaman  hias  di  halaman  atau  di  taman-taman.  Ekor  kucing  telah  dikenal  oleh masyarakat  untuk  pengobatan  bercak  putih  di  kulit  (vitiligo),  disentri,  batuk  darah, sariawan, disentri, dan mimisan [4]. Bagian tanaman yang digunakan pada penelitian ini adalah bagian daun ekor kucing. Mengingat pemanfaatan daun ekor kucing yang beragam  tetapi  masih  berdasarkan  pengalaman  secara  turun-temurun,  maka  masih perlu didukung  informasi ilmiah mengenai potensi toksisitas akut.
Penelitian  uji  toksisitas akut  ekstrak  etanol  daun  ekor  kucing  terhadap larva Artemia salina Leach  menggunakan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Metode  BSLT dipilih karena metode ini sering digunakan untuk praskrining terhadap senyawa aktif yang  terkandung  dalam  ekstrak  tumbuhan  karena  sederhana,  cepat,  murah,  mudah, dapat  dipercaya,  dan  hasilnya  representatif  [5].  Uji  toksisitas  dengan  menggunakan BSLT ini dapat ditentukan dari jumlah kematian Artemia salina Leach akibat pengaruh ekstrak atau senyawa bahan alam. Hasil uji dinyatakan sebagai LC 50 .
Berdasarkan latar belakang diatas maka penelitian ini diusulkan dengan tujuan untuk mengetahui  potensi  ketoksikan  akut  ekstrak  etanol  daun  ekor  kucing  terhadap  larva Artemia salina Leach dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) yang ditunjukkan dengan nilai LC 50 .  Uji toksisitas terhadap larva udang Artemia salina Leach atau Brine Shrimp Lethallity Test (BSLT) dapat digunakan sebagai uji pendahuluan pada pengujian bioaktivitas lebih lanjut.
2.  Metode 2.1. Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang diperlukan dalam penelitian ini adalah daun ekor kucing ( Acalypha hispida Burm.f.),  telur  udang Artemia  salina Leach,  etanol  teknis  (E.  Merck ® ),  reagen mayer,  reagen dragendorff (E. Merck ® ), DMSO 1%, akuades dan ragi (Fermipan ® ).
Alat-alat yang digunakan untuk penelitian ini adalah neraca analitik (Precisa XB 4200 C ® ,  alat-alat  gelas  (Pyrex ® ),  pipet  mikro,  rotary  evaporator  (Heidolph ® ),  desikator, vortex (Maxi Mix II Barnstead Thermolyne Type 37600 Mixer ® ), mikroskop (Zeiss Primo Star ® dilengkapi  kamera  dan  program  Axio  Cam),  indikator  pH,  termometer,  lampu pijar/neon 40-60 watt, plat KLT/lempeng silika gel 60 GF254 (E. Merck ® ), chamber, pipa kapiler, alat semprot, dan lampu UV 254 dan 366 nm.

## 2..2 Ekstraksi Daun Ekor Kucing
Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  ekor  kucing  ( Acalypha  hispida Burm.f.).  Ekstraksi dilakukan  dengan  metode  maserasi.  Simplisia  daun  ekor  kucing  dengan  direndam dengan  penyari  etanol  teknis,  kemudian  ditutup  dan  didiamkan  selama  24  jam  dan dilakukan  selama  3  hari,  maserat  ditampung  dan  selanjutnya  maserat  dievaporasi dengan rotary  evaporator hingga  didapatkan  ekstrak  kering  daun  ekor  kucing. Selanjutnya  ekstrak  diuji  sisa  pelarut,  skrining  fitokimia  dengan  uji  tabung  dan dilanjutkan dengan uji pemisahan dengan KLT.

## 2.3 Pembuatan Air Laut Buatan (ALB)
Air laut buatan disiapkan dengan melarutkan 15 gram NaCl dalam 1 liter aquades.

## 2.4. Penetasan Telur Artemia salina Leach
Telur udang ditetaskan 2 hari sebelum dilakukan uji. Disiapkan bejana untuk penetasan telur  udang.  Wadah  yang  digunakan  dibagi  menjadi  dua  bagian,  bagian  gelap  dan terang kemudian ditambahkan air laut buatan. Satu ruang dalam bejana tersebut diberi penerangan  dengan  cahaya  lampu  pijar/neon  40-60  watt  untuk  menghangatkan, sedangkan di ruang sebelahnya diberi air laut buatan tanpa penyinaran ditutup dengan aluminium foil. Telur yang telah dicuci ditempatkan/direndam pada bagian gelap dari wadah berisi air laut buatan sekitar 300 mL. Telur udang yang terendam air laut buatan dibiarkan selama 2 x 24 jam sampai menetas menjadi benur (nauplius).

## 2.5. Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Vial  disediakan  untuk  tiap  kelompok  sesuai  peringkat  konsentrasi  dengan  masing- masing disediakan 5 vial dan direplikasi sebanyak 3 kali. Ekstrak yang akan diuji dibuat dalam konsentrasi 100, 250, 500, 750, 1.000 ppm dalam air laut buatan serta kelompok kontrol negatif dengan konsentrasi 0 ppm yaitu hanya pelarutnya tanpa penambahan ekstrak.  Vial  yang  berisi  larutan  uji  dikeringkan  sampai  semua  pelarutnya  menguap selama beberapa hari pada suhu kamar dalam desikator sehingga tidak berbau pelarut dan dapat ditunjukkan dengan proses pengeringan menghasilkan penimbangan yang konstan. Kemudian ditambahkan DMSO 1% 1-3 tetes (50-150 µL) termasuk vial kontrol untuk melarutkan sampel. Selanjutnya vial yang telah diisi sampel kemudian ditambah air  laut  buatan  1  mL  dan  divortex  sekitar  30  menit,  kemudian  10  ekor  larva  udang Artemia salina Leach yang berumur 48 jam dimasukan dalam vial. Satu tetes ragi (0,6 mg/mL) dimasukkan ke dalam setiap vial sebagai makanan Artemia , lalu ditambahkan air  laut  buatan  sampai  tanda  batas  volume  5  mL.  Kriteria  standar  untuk  menilai kematian larva udang adalah bila larva udang tidak menunjukkan pergerakan selama beberapa  detik  observasi.  Cara  manual  yaitu  dengan  mengamati  larva  di  dalam  vial
dengan  bantuan  lup,  kemudian  diamati  dalam  kaca  arloji  dengan  bantuan  cahaya. Jumlah nauplii  yang mati  dihitung dengan mengurangkan jumlah total nauplii  pada tiap konsentrasi dengan jumlah nauplii yang masih hidup. Sedangkan cara mikroskopik adalah dilakukan pengamatan di bawah mikroskop.

## 2.6. Analisis Toksisitas
Efek  toksik  diperoleh  dari  pengamatan  dengan  menghitung  %  kematian  (mortalitas) larva Artemia  salina Leach  pada  tiap  konsentrasi  dalam  24  jam.  Persen  kematian diperoleh dari hasil perkalian rasio dengan 100%, yaitu larva yang mati dibagi jumlah larva  awal  dikali  100%  untuk  tiap  replikasi.  Lalu  dibandingkan  dengan  kontrol  dan dilakukan analisis hasil dengan analisis probit sehingga diperoleh harga LC 50 .

## 3.  Hasil dan Pembahasan
3.1.  Ekstraksi Daun Ekor Kucing
Daun ekor kucing ( Acalypha hispida Burm.f.) yang digunakan berbetuk simplisia kering. Simplisia  yang  telah  kering  ini  berwarna  hijau  dan  dihaluskan  sehingga  diperoleh serbuk  daun  ekor  kucing  dengan  tujuan  untuk  mempermudah  proses  ekstraksi. Simplisia  daun  ekor  kucing  ini  selanjutnya  dianalisis  kadar  airnya  dengan  cara mengeringkan  simplisia  dalam  oven  pada  suhu  105  ºC  selama  5  jam  untuk menghilangkan  kadar  airnya,  simplisia  disimpan  dalam  desikator  sekitar  10  menit, kemudian  ditimbang  dan  dilakukan  perlakuan  yang  sama  sampai  diperoleh  berat konstan.  Tercapainya  berat  yang  konstan  menunjukkan  air  yang  terdapat  dalam tanaman telah teruapkan secara maksimal. Kadar air yang dikandung simplisia daun ekor kucing yaitu 7,39 % sehingga simplisia daun ekor kucing pada proses penyimpanan terhindar dari kerusakan akibat degradasi oleh mikroorganisme maupun penguraian oleh enzim dapat diminimalkan. Kadar air ditetapkan untuk menjaga kualitas simplisia. Menurut  Voight  [6],  bahwa  kadar  air  dalam  ekstrak  tidak  boleh  lebih  dari  10%.  Bila kadar air yang terkandung dalam suatu bahan/sampel organik kurang dari 10% maka pertumbuhan  mikroba  dan  jamur  dapat  dikurangi.  Selain  itu,  kadar  air  yang  lebih sedikit memudahkan cairan pengekstrak masuk ke dalam sel dan menarik zat aktif daun ekor kucing yang terkandung secara sempurna. Simplisia yang telah dihilangkan kadar airnya cenderung mudah menyerap air sehingga simplisia daun ekor kucing yang telah kering ini disimpan dalam tempat yang kedap udara.
Simplisia  diekstraksi  dengan  metode  maserasi.  Didapatkan  hasil  ekstrak  pekat berwarna  kecoklatan,  berkonsistensi  kering,  dan  berasa  sepat  sebanyak  100,62  g (rendemen  20,124  %).  Penentuan  organoleptik  ini  termasuk  salah  satu  parameter spesifik  yang  ditentukan  dengan  menggunakan  panca  indera  dan  bertujuan  untuk pengenalan awal secara sederhana dan subjektif. Setelah didapatkan ekstrak dilakukan penetapan standar mutu dan kandungan kimia ekstrak. Standardisasi ini dimaksudkan agar dapat menjamin bahwa produk ekstrak mempunyai nilai parameter tertentu yang konstan.  Pengujian  yang  penting  dilakukan  adalah  uji  sisa  pelarut  yang  terkandung dalam ekstrak etanol daun ekor kucing dengan cara susut pengeringan. Uji ini dilakukan untuk mengetahui jenis ekstrak dan memberikan batasan maksimal tentang besarnya pelarut yang hilang pada proses pengeringan. Kadar pelarut yang tersisa yaitu 4,97 % sehingga  ekstrak  etanol  daun  ekor  kucing  yang  digunakan  termasuk  ekstrak  kering
karena sisa pelarut < 5% [6]. Ekstrak kering ( Extractum siccum ) merupakan sediaan yang memiliki konsistensi kering dan mudah digosokkan.
Ekstrak  kering  daun  ekor  kucing  selanjutnya  diuji  dengan  skrining  fitokimia menggunakan uji tabung dan uji identifikasi fitokimia dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT).  Skrining  fitokimia  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa metabolit  sekunder  berdasarkan  perubahan  warna  atau  terbentuknya  endapan  yang dihasilkan  sebagai  akibat  penambahan  reagen  tertentu.  Pada  penelitian  ini pengujiannya  dilakukan  dengan  cara  mengambil  sampel  secukupnya  dari  ekstrak etanol pada tabung reaksi, lalu ditambahkan reagen sesuai dengan senyawa yang akan diidentifikasi .
Tabel  1. Hasil  Pengamatan  Uji  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Daun  Ekor
Kucing (Acalypha hispida Burm.f.) No Kandungan kimia Pereaksi Hasil Kesimpulan 1 Alkaloid Mayer Dragendorf endapan putih kekuningan endapan jingga- merah bata + + 2 Flavonoid HCl/Mg warna merah ++ Keterangan: ++ : terkandung senyawa lebih banyak/warna pekat/endapan banyak + : terkandung senyawa/warna muda/endapan sedikit
- : tidak terkandung senyawa/tidak terbentuk warna
Sebagaimana yang ditunjukkan pada tabel 1 hasil uji skrining fitokimia ekstrak etanol daun  ekor  kucing  menunjukkan  adanya  senyawa  alkaloid  dan  flavonoid.  Adanya senyawa  alkaloid  dan  flavonoid  dalam  ekstrak  etanol  daun  ekor  kucing  telah  teruji dengan pengujian skrining fitokimia menggunakan reagen uji tabung [8]. Pembuktian kandungan  senyawa-senyawa  tersebut  diperkuat  dengan  adanya  identifikasi menggunakan  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT).  KLT  pada  penelitian  ini  dilakukan untuk mempertegas adanya kandungan senyawa alkaloid dan flavonoid pada ekstrak etanol daun ekor kucing (Acalypha hispida Burm.f.). Hasil KLT dapat ditunjukkan dalam Tabel 2.
Tabel 2. Hasil KLT dengan Fase Diam Silika Gel 60 F 254 Ekstrak Etanol Daun Ekor
Kucing (Acalypha hispida Burm.f.) Kandungan kimia UV 254 UV 366 Semprot Kesimpulan Alkaloid Meredam bercak, bercak biru gelap dengan latar belakang kuning Berfluoresensi / berpendar Dragendorf: Kuning/jingga- Hijau Mengandung Alkaloid Flavonoid Meredam bercak, bercak biru gelap dengan latar belakang kuning Berfluoresensi / berpendar - Mengandung Flavonoid
Hasil  identifikasi  menggunakan  KLT  terhadap  golongan  senyawa  alkaloid  ekstrak etanol daun ekor kucing dengan menggunakan eluen/fase gerak etil asetat-metanol-air (100:13,5:10) dapat ditunjukkan pada gambar 1 berikut.
Hasil Elusi Sebelum UV UV 254 nm UV 366 nm
Gambar  1.  Uji  kandungan golongan senyawa  alkaloid  dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan eluen etil asetat-metanol-air (100:13,5:10) Keterangan:
Positif alkaloid (Meredam bercak, bercak biru gelap dengan latar belakang kuning  di  bawah  UV254  dan  berfluoresensi/berpendar  di  bawah  UV366 nm)
Gambar 1 di atas menunjukkan hasil identifikasi kandungan senyawa aktif pada ekstrak etanol daun ekor kucing menunjukkan adanya senyawa alkaloid. Ekstrak mengandung alkaloid bebas bila dilihat di bawah sinar UV254 meredam bercak, sehingga  terlihat
bercak biru gelap dengan latar belakang kuning pada lempeng KLT di bawah UV254 . Sedangkan pada UV366 nm berflouresensi  hijau/berwarna  coklat/jingga atau merah dengan perekasi Dragendorf [7, 8].
Hasil identifikasi menggunakan KLT golongan senyawa flavonoid ekstrak etanol daun ekor  kucing  dengan  menggunakan  eluen/fase  gerak  kloroform-etil  asetat  (6:4)  dapat ditunjukkan pada gambar 2 berikut.
Hasil Elusi Sebelum UV UV 254 nm UV 366 nm
Gambar  2.  Uji  kandungan  golongan  senyawa  Ffavonoid  dengan Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  dengan  eluen  kloroform-etil asetat (6:4)
Keterangan:
Positif flavonoid (Meredam bercak, bercak biru gelap dengan latar belakang kuning di bawah UV254 dan berfluoresensi/berpendar di bawah UV366 nm)
Gambar 2 di atas menunjukkan hasil identifikasi kandungan senyawa aktif pada ekstrak etanol  daun  ekor  kucing  menunjukkan  adanya  senyawa  flavonoid. Semua  flavonoid menyebabkan pemadaman, sehingga  terlihat bercak biru gelap dengan latar belakang kuning  pada  lempeng  KLT  dibawah  UV254.  Sedangkan  pada  UV366  flavonoid berfluoresensi/berpendar hijau atau biru atau kuning atau biru kehijauan [7, 9, 10, 11]. Hasil  identifikasi  kandungan  senyawa  aktif  pada  ekstrak  etanol  daun  ekor  kucing dengan KLT menunjukkan adanya senyawa alkaloid dan flavonoid.
3.2.  Uji Toksisitas Ekstrak Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  merupakan  uji  pendahuluan/praskrining  aktivitas biologis  yang  sederhana  untuk  menentukan  toksisitas  suatu  senyawa  atau  ekstrak secara akut menggunakan hewan coba larva udang ( Artemia salina nauplii). Parameter yang  ditunjukkan  untuk  menunjukkan  adanya  aktivitas  biologi  pada  suatu  senyawa pada Artemia  salina Leach  adalah  jumlah  kematian  larva  udang  karena  pengaruh pemberian  senyawa  dengan  dosis  yang  telah  ditentukan.  Salah  satu  organisme  yang sangat  sesuai  sebagai  hewan  uji  untuk  mengetahui  bioaktivitas  senyawa  melalui  uji toksisitas  adalah brine  shrimp (udang  laut)  dari  jenis Artemia  salina Leach.  Uji  ini menggunakan larva udang laut atau nauplii. Beberapa kelebihan dari uji bioaktivitas dengan Brine  Shrimp  Lethallity  Test (BSLT)  menggunakan  larva  udang Artemia  salina Leach  adalah  cepat  waktu  ujinya,  mudah,  tidak  memerlukan  peralatan  khusus, sederhana (tanpa teknik aseptik), murah (tidak perlu serum hewan), jumlah organisme banyak,  memenuhi  kebutuhan  validasi  statistik  dengan  sedikit  sampel,  hasilnya representatif dan dapat dipercaya [5].
Larutan ekstrak etanol daun ekor kucing dibuat dengan konsentrasi 100 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 750 ppm, dan 1.000 ppm serta sebagai kelompok pengontrolnya 0 ppm yaitu hanya berisi pelarutnya tanpa penambahan ekstrak. Larutan kontrol berfungsi untuk menghilangkan  pengaruh  lain  diluar  ekstrak  uji  yang  dapat  menyebabkan  kematian nauplius.  Pada  penelitian  ini  digunakan  300  ekor  larva  uji.  Rata-rata  kematian  larva untuk masing-masing kelompok perlakuan diperoleh dengan menghitung total jumlah kematian setiap kelompok perlakuan sebanyak 3 replikasi dan kemudian membaginya dengan jumlah replikasi.
Tabel 3. Hasil analisis brine shrimp lethality test (BSLT) ekstrak daun ekor kucing
Konsentrasi ekstrak (ppm) Akumulasi kematian Mortalitas (%) LC 50 (ppm) 1.000 26 86,6
220,005 750
25 83,3 500 20 66,6 250 14 46,6 100 10 33,3 Kontrol 0 0
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  peningkatan  konsentrasi  berbanding  lurus  dengan peningkatan  mortalitas  sehingga  daya  bunuh  semakin  tinggi.  Suatu  senyawa dinyatakan mempunyai potensi toksisitas akut jika mempunyai harga LC 50 kurang dari 1.000  μg/ml  (ppm).  LC 50 ( Lethal  Concentration 50)  merupakan  konsentrasi  zat  yang
menyebabkan  terjadinya  kematian  pada  50  %  hewan  percobaan  yaitu  larva Artemia salina Leach. Sebagaimana yang ditunjukkan oleh Tabel 3 pengujian terhadap ekstrak etanol  daun  ekor  kucing  ( Acalypha  hispida Burm.f.)  menunjukkan  harga  LC 50 sebesar 220,005 µg/ml atau ppm, sehingga dapat dikatakan ekstrak etanol daun ekor kucing ( Acalypha hispida Burm.f.) pada percobaan ini memiliki potensi toksisitas akut menurut metode  BSLT  yaitu  pada  perlakuan  dengan  hewan  coba  larva Artemia  salina Leach. Penelitian  Meyer  [5],  melaporkan  bahwa  suatu  ekstrak  menunjukkan  aktivitas ketoksikan dalam BSLT jika ekstrak dapat menyebabkan kematian 50 % hewan uji pada konsentrasi kurang dari 1.000 ppm [5]. Nilai LC 50 dari ekstrak etanol yang lebih kecil dari 1.000 ppm menunjukkan bahwa ekstrak tersebut mempunyai potensi untuk dapat dikembangkan. Hal tersebut berkaitan dengan senyawa yang terdapat dalam daun ekor kucing  yaitu  alkaloid  dan  flavonoid  dimana  pada  kadar  tertentu  memiliki  potensi toksisitas akut serta dapat menyebabkan kematian larva Artemia salina Leach.
Mekanisme kerja kematian larva diperkirakan bahwa senyawa-senyawa yang terdapat pada  ekstrak  daun  ekor  kucing  dapat  menghambat  daya  makan  larva  ( antifedant ) dengan  cara  bertindak  sebagai stomach  poisoning (racun  perut) . Oleh  karena  itu,  bila senyawa-senyawa  ini  masuk  ke  dalam  tubuh  larva  udang,  alat  pencernaannya  akan terganggu [3]. Racun perut menyerang organ utama pencernaan serangga yaitu bagian ventrikulus  [12].  Senyawa  alkaloid  memiliki  karakter  toksin, repellent dan antifeedant pada serangga sehingga mengganggu pertumbuhan dan perkembangan larva. Dalam jumlah sedikit alkaloid hanya bersifat antifeedant dan membunuh larva secara perlahan karena  menurunnya  nafsu  makan  dan  baru  akan  menyebabkan  kematian  dalam beberapa waktu karena kelaparan. Tetapi dalam jumlah besar alkaloid bekerja sebagai racun  kontak  dan  racun  pencernaan  yang  akan  langsung  membunuh  larva  dan menyebabkan  kematian  karena  menyerang  organ  vital  seperti  sistem  syaraf  dan mempengaruhi aktivitas jantung. Senyawa flavonoid memiliki cara kerja sebagai racun pernafasan dan racun metabolisme yang dapat langsung menyebabkan kematian dalam waktu  singkat  [13].  Senyawa  flavonoid  dapat  menghambat  saluran  pencernaan serangga  dan  juga  bersifat  toksik  [14].  Selain  itu,  senyawa  ini  menghambat  reseptor perasa  pada  daerah  mulut  larva.  Hal  ini  mengakibatkan  larva  gagal  mendapatkan stimulus  rasa  sehingga  tidak  mampu  mengenali  makanannya  sehingga  larva  mati kelaparan ([15][16]).
Senyawa yang ada pada ekstrak dapat masuk melalui bagian mulut Artemia salina dan diabsorbsi  masuk  ke  dalam  saluran  pencernaan  melalui  membran  sel,  kemudian dilanjutkan dengan proses distribusi senyawa toksik ke dalam tubuh Artemia salina , dan terjadi  proses  kerusakan  pada  reaksi  metabolisme.  Struktur  anatomi  tubuh Artemia salina pada tahap naupli masih sangat sederhana, yaitu terdiri dari lapisan  kulit, mulut, anthena,  saluran  pencernaan  dan  calon  thoracopoda.  Perubahan  gradien  konsentrasi antara di dalam dan di luar sel yang menyebabkan senyawa toksik mampu menyebar dengan cepat ke tubuh Artemia salina . Efek kerusakan metabolisme yang ditimbulkan
terjadi  secara  cepat  dapat  dideteksi  dalam  waktu  24  jam,  hingga  menyebabkan  50% kematian Artemia salina . Uji toksisitas terhadap larva udang Artemia salina Leach atau Brine  Shrimp  Lethallity  Test (BSLT)  dapat  digunakan  sebagai  uji  pendahuluan  pada penelitian  yang mengarah  pada  uji  sitotoksik  [5].  Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat diketahui potensi tingkat toksisitas ekstrak etanol daun ekor kucing melalui uji toksisitas terhadap  larva  udang Artemia  salina Leach  dengan  metode  BSLT  ini  sehingga  dapat dilakukan pengujian bioaktivitas lebih lanjut.

## 4.  Kesimpulan
Ekstrak etanol daun ekor kucing ( Acalpyha hispida Burm.f.) memiliki potensi toksisitas akut terhadap Artemia salina Leach dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) yang ditunjukkan dengan LC 50 kurang dari 1.000 ppm. LC 50 ekstrak etanol daun ekor kucing ( Acalypha hispida Burm.f.) ialah sebesar 220,005 ppm.

## Referensi
[1]  DepKes  RI.  (2007).  Lampiran  Keputusan  Mentri  Kesehatan  Nomor :381/Menkes/SK/III/2007  mengenai  Kebijakan  Obat  Tradisional  Nasional Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.
[2]    KepMenKes  RI.  (1995).  Lampiran  Keputusan  Mentri  Kesehatan  Nomor  761/ Menkes/  SK/  IX/  1992  tentang  Pedoman  Fitofarmaka.  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.
[3]     Jelita, S.F., Gita, W.S., Michelle, F., Ade, Z., & Sandra, M. (2020). Uji Toksisitas Infusa Acalypha  siamensis Dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Farmaka. Volume 18 – 1. doi : 10.24198/jf.v18i1.25926.
[4]     Dalimartha, S. (2007). Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 3. Puspa Swara. Jakarta.
[5]    Meyer, H.N. (1982). Brine Shrimp Lethality Test: Med. Plant Research. Vol.45 No. 3. Amsterdam.
[6]      Voight,  R.  (1995).  Buku  Pelajaran  Teknologi  Farmasi,  (Penerjemah  Soedani,  N.), (Edisi V). UGM Press. Yogyakarta. hal: 553-555, 572-574.
[7]            Arifin,  H.,  Anggraini,  N.,  Handayani,  D.,  dan  Rasyid,  R.  (2006).  Standarisasi Ekstrak Etanol Daun Eugenia Cumini Merr. J. Sains Tek. Far. , , 11 2 : 89, 90.
[8]     Sriwahyuni, I. (2010), Uji Fitokimia Ekstrak Tanaman Anting-Anting (Acalypha Indica
Linn ) dengan  Variasi  Pelarut  dan  Uji  Toksisitas  Menggunakan  Brine  Shrimp
( Artemia salina Leach) , [Skripsi], Malang: Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim, hal: 15-19, 21, 25-34.
[9]    Irianti, T., Puspitasari, A., dan Suryani, E. (2011). Aktivitas Penangkapan Radikal 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil oleh Ekstrak Etanolik Batang Brotowali ( Tinospora crispa (L.) miers) dan Fraksi-Fraksinya. Majalah Obat Tradisional , , 16 3 : 138–144.
[10]  Syamsul,  E.S.  (2012).  Uji  Aktivitas  Antidiabetes,  Antihiperlipidemia,  dan Antiarterosklerosis  Kombinasi  Ekstrak  Terpurifikasi  Herba  Sambiloto
( Andrographis  paniculata (Burm.f.)  Ness.)  dan  Metformin  pada  Tikus  Diabetes Mellitus  Tipe  2  Resistensi  Insulin, Tesis ,    Fakultas  Farmasi  Universitas  Gadjah Mada, Yogyakarta.
[11]        Zuhra , et  al . (2008) ,  Aktivitas  Antioksidan  Senyawa  Flavonoid  dari  Daun  Katuk ( Sauropus androgunus (L) Merr.), Jurnal Biologi Sumatera 3 (1): 7-10.
[12]      Tarumingkeng,  R.  C.  (1992).  Insektisida,  Sifat,  Mekanisme  Kerja  dan  Dampak Penggunaannya. Kanisius. Yogyakarta.
[13]    Gokok,  S.  (2017).  Uji  Toksisitas  Bioinsektisida  Ekstrak  Metanol  Buah  Bintaro ( Cerbera odollam L.) terhadap Mortalitas Ulat Grayak ( Spodoptera litura ) pada Pakan Daun  Tomat.  [Skripsi].  Yogyakarta.  Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan,
Universitas Sanata Dharma.
[14]     Dinata, A. (2008). Ekstrak Kulit Jengkol Atas Jentik DBD. Diakses 8 Agustus 2021. http://artikel.prianganonline.com/index.php?act?act=artikel&aksi=lihat&id=27 4 .
[15]     Rita  W.S.,  et.al. (2008).  Isolasi  &  Identifikasi  Senyawa  Yang  Berpotensi  Sebagai Antitumor Pada Daging Buah Pare ( Momordica charantia L.). Jurusan Kimia FMIPA Universitas Udayana. Bukit Jimbaran. Jurnal Kimia Vol. 2.
[16]      Cahyadi,  R.  (2009).  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Etanol  Buah  Pare  ( Momordica charantia L.)  Terhadap  Larva Artemia  salina Leach  dengan  Metode Brine  Shrimp Lethality  Test (BST).  [Skripsi].  Semarang.  Fakultas  Kedokteran,  Universitas Diponegoro.