Jurnal Pharmascience, Vol. 10, No.2, Oktober 2023, hal: 320-328 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article
Optimasi Pelarut dalam Proses Ekstraksi Daun Teh- Tehan (Acalypha Siamensis) dengan Menggunakan Metode Simplex Lattice Design (SLD)
Rollando Rollando*, Muhammad Hilmi Afthoni, Benedictus Karel
Program Studi Farmasi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Ma Chung, Malang, Jawa Timur, Indonesia Email: ro.llando@machung.ac.id

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengoptimalkan  komposisi  pelarut  dalam  proses ekstraksi daun Acalypha siamensis guna mendapatkan  hasil yang maksimal dalam hal rendemen  total,  kadar  flavonoid,  dan  aktivitas  antioksidan.  Daun  A.  siamensis,  yang mengandung  flavonoid,  tanin,  saponin,  dan  alkaloid,  dievaluasi  untuk  aktivitas antibakteri  dan  antioksidan.  Dalam  penelitian  ini,  metanol,  aseton,  dan  akuades digunakan sebagai pelarut. Metode Simplex Lattice Design dengan aplikasi Design Expert 12  Trial  Version  digunakan  untuk  menentukan  perbandingan  komposisi  pelarut  yang tepat. Hasil penelitian menunjukkan bahwa menggunakan pelarut metanol:aseton:akuades  (0:0,5:0,5)  menghasilkan  rendemen  ekstrak  terbesar,  yaitu 24,97%.  Pengukuran  kadar  flavonoid  total  menunjukkan  bahwa  penggunaan  pelarut metanol:aseton:akuades  (1:0:0)  menghasilkan  kadar  flavonoid  total  tertinggi,  yaitu 453,27  miligram  kuersetin  ekivalen  per  gram  ekstrak.  Selanjutnya,  hasil  uji  aktivitas antioksidan menunjukkan bahwa pelarut metanol:aseton:akuades (0:1:0) menghasilkan aktivitas  antioksidan  paling  tinggi,  yaitu  81,22  ppm.  Analisis  menggunakan  Simplex Lattice  Design  menunjukkan  bahwa  komposisi  pelarut  yang  optimal  dalam  proses ekstraksi  daun  A.  siamensis  adalah  metanol:aseton:akuades  (0:69,28:30,72).  Dalam kondisi ini, diperoleh hasil total flavonoid sebesar 296,64 miligram kuersetin ekivalen per gram ekstrak, rendemen sebesar 20,00%, dan aktivitas antioksidan sebesar 91,79 ppm.
Kata Kunci: Optimasi, Simplex Lattice Design, Rendemen, Flavonoid Total, Antioksidan

## ABSTRACT
The objective of this study was to optimize the solvent composition for the extraction of Acalypha siamensis leaves to achieve maximum yield, flavonoid content, and antioxidant activity.  A.  siamensis  leaves,  which  contain  flavonoids,  tannins,  saponins,  and  alkaloids, were evaluated for their antibacterial and antioxidant properties.  Methanol, acetone, and water were used as solvents. The Simplex Lattice Design method with Design Expert 12 Trial
Version  was  employed  to  determine  the  appropriate  solvent  ratios.  The  findings demonstrated that the highest extract yield (24.97%) was obtained using a solvent mixture of methanol:acetone:water (0:0.5:0.5). The measurement of total flavonoid content revealed the  highest  level  (453.27  mg of  quercetin  equivalents  per  gram  of  extract)  with  a  solvent composition  of  methanol:acetone:water  (1:0:0).  Moreover,  the  antioxidant  activity  test indicated  the  highest  activity  (81.22  ppm)  when  using  a  solvent  composition  of methanol:acetone:water (0:1:0). The analysis using Simplex Lattice Design determined the optimal  solvent  composition  for  A.  siamensis  leaf  extraction  as  methanol:acetone:water (0:69.28:30.72), resulting in a total flavonoid content of 296.64 mg of quercetin equivalents per gram of extract, a yield of 20.00%, and an antioxidant activity of 91.79 ppm.
Keywords: Optimization, Simplex Lattice Design, Yield, Total Flavonoids, Antioxidants

## I. PENDAHULUAN
Tanaman A.  siamensis merupakan tanaman  bercabang  banyak  termasuk semak  besar  (Saethang et  al .,  2022).
Tanaman A. siamensis juga memiliki kadar fenolik  dengan  nilai  11.1097  mg  GAE/g dan memiliki kadar flavonoid dengan nilai
4.3015 mg kuersetin/g (Rohmatika, 2019).
Flavonoid,  fenol,  tanin  dan  alkaloid merupakan  senyawa  metabolit  sekunder yang mempunyai aktivitas sebagai antioksidan  (Garcia  and  Blesso,  2021).
Penggunaan  aktivitas  antioksidan  dari senyawa  bioaktif  lebih  baik  secara  alami, seperti  dari  bahan  makanan  maupun tumbuhan obat (Arifin et al ., 2021).
Penggunaan senyawa dalam tanaman obat  khususnya  aktivitas  antioksidan memiliki  efek  samping  yang  lebih  sedikit daripada antioksidan dari obat-obat sintetik (Rodrigues et  al .,  2016).  Antioksidan adalah  suatu  senyawa  dimana  tubuh memerlukannya untuk menetralisir adanya senyawa radikal bebas yang dibentuk oleh
tubuh dan dapat juga mencegah kerusakan pada  sel  normal  dan  sel  protein  lainnya yang disebabkan oleh radikal bebas (Hanifa et al ., 2015; Chen et al ., 2019).
Penelitian  kali  ini  melihat  pelarut ekstraksi  yang  paling  optimal  yang berpengaruh  terhadap  jumlah  rendemen ekstrak,  kadar,  dan  tingkat  aktivitas senyawa  aktif  khususnya  untuk  aktivitas antioksidannya menggunakan metode
Simplex  Lattice  Design (Monton et  al .,
2021; Monton et al ., 2021).
Optimasi  pelarut  ekstraksi  sangat penting  dilakukan  untuk  memperoleh komposisi pelarut yang tepat yang digunakan  untuk  hasil  yang  baik  pada senyawa tumbuhan teh-tehan merah khususnya senyawa flavonoid. Pelarut yang akan digunakan pada penelitian ini adalah akuades,  metanol,  dan  aseton.  Dengan komposisi  pelarut  yang  tepat  diharapkan dapat memberikan hasil rendemen, kandungan  flavonoid  total,  dan  tingkat aktivitas antioksidan yang optimal
(Duangjit et  al .,  2014;  Garcia  and  Blesso,
2021).

## II. METODE

## A. Penentuan Komposisi Pelarut
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental dengan bahan yang digunakan adalah daun A. siamensis dengan pelarut  yang  digunakan  adalah  metanol, aseton, dan akuades. Penelitian ini melihat jumlah rendemen total, flavonoid total, dan aktivitas antioksidan. Pada aktivitas antioksidan  sendiri  menggunakan  metode DPPH (Ionita, 2021).
Rancangan penelitian ini
menggunakan software  Design  Expert  12
Trial  Version dengan Simplex  Lattice
Design dengan melakukan percobaan pada tiga pelarut dengan komposisi pelarut yang berbeda  sesuai  dengan  Tabel  I.  Variabel bebas pada penelitian  kali  ini  adalah  jenis pelarut ekstraksi, perbandingan atau konsentrasi pelarut ekstraksi, dan konsentrasi  sampel  pada  uji  aktivitas antioksidan  dengan  metode  DPPH  (La et al ., 2021; Isildak et al ., 2022).
Variabel  tergantung  pada  penelitian ini adalah jumlah rendemen (%), flavonoid total (mg kuersetin ekivalen/gram ekstrak), dan  aktivitas  antioksidan  (ppm).  Variabel kontrol  pada  penelitian  ini  adalah  asal tanaman, volume pelarut ekstraksi, metode ekstraksi, dan uji aktivitas antioksidan.
Tabel I. Komposisi Pelarut Ekstraksi Komposisi Metanol Aseton Akuades 1 1 0 0 2 0 1 0 3 0,33 0,33 0,33 4 0 0 1 5 0 1 0 6 0,5 0 0,5 7 0,5 0,5 0 8 0,67 0,167 0,167 9 0 0,5 0,5 10 0,167 0,167 0,67 11 0 0 1 12 0,5 0,5 0 13 0,167 0,67 0,167 14 1 0 0

## B. Ekstraksi dengan Ultrasonik
Tanaman A.  siamensis yang  sudah
diblender  dan  sudah  menjadi  serbuk ditimbang  sebanyak  10  gram,  kemudian
dimasukkan  ke  dalam  wadah  dengan perbandingan pelarut yang sudah ditentukan  menurut  Tabel  I,  kemudian diekstraksi  dengan  menggunakan  metode
sonikasi  dengan  pelarut  metanol,  aseton,
dan akuades.
C. Penentuan Kandungan Flavonoid
Total Kandungan flavonoid total
berdasarkan  metode  kolorimetri  yang dimodifikasi,  sebanyak  20  mg  sampel ditimbang dan dilarutkan ke dalam 10 mL metanol  sehingga  diperoleh  konsentrasi 2000  ppm.  Diambil  sebanyak  0,5  mL, sampel uji, kemudian ditambahkan dengan
0,1  ml  AlCl 3 10%,  0,1  mL  C 2 H 3 NaO 2
(natrium asetat) 1M, dan 2,8 mL akuades.
Setelah  itu  diinkubasi  selama  30  menit.
Kemudian diukur menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang 428 nm (Ismail et al ., 2017).

## D. Uji  Aktivitas  Antioksidan  dengan metode DPPH
Uji  antioksidan  dilakukan  dengan menimbang  sebanyak  5  mg  ekstrak  dan dilarutkan dengan metanol dalam labu ukur 10 mL hingga mencapai tanda kalibrasi dan didapatkan  500  ppm.  Kemudian  diambil larutan sampel dan dibuat dengan beberapa seri  konsentrasi  masing-masing  10ppm;
50ppm;  100ppm;  150ppm;  200  ppm.
Campuran  dihomogenkan  dan  didiamkan selama 30 menit ditempat yang gelap pada suhu 37℃. Kemudian dibaca di spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang 517 nm (Wirasti, 2019).

## E. Analisis Data
Pada  rendemen  ekstrak  dihitung berdasarkan  perbandingan  bobot  ekstrak yang  sudah  dihasilkan  dengan  bobot simplisia  dan  dikalikan  100%.  Berikut rumus  yang  digunakan  untuk  menghitung hasil total rendemen:
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 (%) = 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 (𝑚𝑔) 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 (𝑚𝑔) 𝑥100%
Perhitungan untuk mengukur kandungan flavonoid total dapat
menggunakan rumus sebagai berikut:
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑓𝑙𝑎𝑣𝑜𝑛𝑜𝑖𝑑 % = 𝐶 𝑋 𝑉 𝑋 𝐹𝑃 𝐺 𝑥100%
Keterangan :
C=  Kesetaraan  kuersetin  (mg/L)  V= Volume ekstrak yang digunakan (mL) Fp= Faktor pengenceran g= Berat sampel yang digunakan (mg).
Setelah  didapatkan  data  kuantitatif kadar  flavonoid  total  yang  diperoleh  dari perhitungan kemudian dianalisis menggunakan  ANOVA  yang  bertujuan untuk membandingkan pengaruh
komposisi pelarut ekstraksi terhadap kandungan flavonoid total, dengan berdasarkan  pada  respon  kadar  flavonoid yang diperoleh dari masing-masing
komposisi  pelarut.  Selain  dari  ANOVA data  kandungan  flavonoid  total  dapat dianalisis  dengan  metode Simplex  Lattice
Design untuk menghitung koefisien a, b, c,
ab,  ac,  bc,  dan  abc.  Sehingga  didapatkan persamaan:
Y= a(X1) + b(X2) + c(X3) + ab(X1) (X2) + ac(X1) (X3) + bc(X2) (X3) + abc(X1) (X2)
(X3) Parameter yang uji aktivitas antioksidan digunakan untuk menunjukkan hasil  dari  pengujian  aktivitas  antioksidan menggunakan  DPPH  dengan  melihat  nilai IC 50 ( Inhibitory Concentration ) atau sering disebut  dengan  IC 50 ,  merupakan  suatu konsentrasi pada antioksidan yang menyebabkan hilangnya 50% pada aktivitas  DPPH  sendiri.  Pada  menentukan nilai  IC 50 dibutuhkan  data  persen  inhibisi dari  pengujian  yang  akan  dilakukan (Ghosal  dan  Mandal,  2012).  Pada  % inhibisi bisa dihitung menggunakan rumus:
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 = 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 − 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 𝑥100%

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pelarut  ekstraksi  memiliki  peran yang  sangat  besar  dalam  mengambil senyawa  yang  terdapat  dalam  simplisia. Pelarut akan berinteraksi dengan metabolit sekunder  didalam  sel  tanaman  dan  akan menarik senyawa tersebut dengan mekanisme  difusi.  Interaksi  yang  terjadi dapat  berupa  interaksi  dengan  kepolaran sejenis.  Semakin  kuat  interaksi,  maka jumlah  ekstrak  yang  dihasilkan  akan semakin besar (S et al ., 2022).
Ekstrak  yang  sudah  mengering diambil  lalu  ditimbang  dan  dilanjutkan dengan perhitungan rendemen dari masing-
masing  replikasi  ekstrak.  Kemudian  hasil rendemen ekstrak dihitung melalui persamaan yang sudah ditetapkan,
berdasarkan  hasil  perhitungan  diperoleh hasil  bahwa  pada  komposisi  9  jika  dirata- rata  dari  3  replikasi  didapatkan  jumlah rendemen  sebesar  24,97%  dimana  jumlah tersebut  adalah  jumlah  rendemen  yang terbesar dari rata-rata komposisi yang lain.
Dengan komposisi metanol: aseton:akuades  masing-masing  0:0,5:0,5. Perhitungan kadar flavonoid total didahului dengan  pembuatan  kurva  regresi  linier. Persamaan regresi linier adalah y=0,0075x- 0,032  dengan  nilai  R  sebesar  0,9856. Berdasarkan  hasil  perhitungan  rata-rata paling besar pada komposisi metanol:aseton:akuades 1:0:0 yaitu 453,27 miligram  kuersetin  ekivalen  per  gram ekstrak.  Sedangkan  yang  paling  rendah terdapat  pada  komposisi  1  replikasi  1 dengan  nilai  92,64  miligram  kuersetin ekivalen per gram ekstrak dengan perbandingan pelarut metanol:
aseton:akuades masing-masing 0:0:1. Pada uji aktivitas antioksidan dilihat berdasarkan perhitungan IC 50 pada Tabel II.
Perhitungan  IC 50 didapatkan  hasil yang  paling  besar  pada  komposisi  11 replikasi kedua. Pada komposisi 11 jika di rata-rata  dari  ketiga  replikasi  didapatkan nilai  256,61  ppm  dengan  perbandingan pelarut  metanol:aseton:akuades  masing- masing 0:0:1, sedangkan hasil yang paling
kecil  pada  perhitungan  IC 50 terdapat  pada komposisi  2  jika  di  rata-rata  dari  ketiga replikasi  dengan  hasil  81,22  ppm  dengan perbandingan  pelarut  metanol  :  aseton  : akuades  masing-masing  0:1:0.  Sehingga didapatkan dalam perhitungan IC 50 semakin
besar  nilai  IC 50 dalam  suatu  sampel  maka semakin sedikit aktivitas antioksidan yang terdapat  dalam  suatu  senyawa,  sebaliknya semakin kecil nilai IC 50 maka semakin baik aktivitas  antioksidan  yang  terdapat  dalam suatu senyawa (Penkov et al ., 2018).
Tabel II. Variabel bebas dan variabel terikat pada SLD untuk menentukan perbandingan komposisi pelarut yang optimal Variabel Percobaan Batasan Variabel Bebas Komposisi Rendah Komposisi Tinggi Target Akuades 0 100% In range Metanol 0 100% In range Aseton 0 100% In range Variabel Terikat Batas Atas Batas Bawah Target Rendemen 6,66% 24,98% Maximu m Flavonoid Total 92,64 mg/g 453,27mg/g Maximum Aktivitas Antioksidan 81,23 ppm 256,61 ppm Minimize Hasil  optimasi  pelarut  terhadap
jumlah  rendemen,  kandungan  flavonoid total, dan aktivitas antioksidan perbandingan  komposisi  pelarut  yang optimal  dapat  diketahui  dengan  cara optimasi pelarut terhadap tiga respon hasil yaitu jumlah rendemen (%), kadar flavonoid total (milligram kuersetin ekivalen  per  gram  ekstrak),  dan  aktivitas antioksidan  (IC 50 )  menggunakan  metode
Simplex Lattice Design dengan 3 faktor dan
3  level  menggunakan  aplikasi Design
Expert  12  Trial  Version (Duangjit  and
Kraisit, 2018). Semua data hasil percobaan dimasukkan kedalam aplikasi yaitu
meliputi  perhitungan  dari  tiga  respon dengan  tiga  jenis  pelarut  yang  digunakan yaitu metanol, aseton, dan akuades dengan perbandingan yang telah ditentukan sesuai Tabel  I.  Pada  optimasi  pelarut  terdapat variabel bebas dan variabel terikat dengan adanya  batasan  -  batasan  yang  digunakan untuk  melakukan  optimasi  pelarut  dapat dilihat dari Tabel II.
Berdasarkan  analisis  dari  aplikasi
Design  Expert  12  Trial  Version diperoleh nilai desirability dengan jumlah rendemen, kadar  flavonoid  total,  dan  aktivitas antioksidan digabungkan dengan menggunakan  metode overlay sehingga
didapatkan overlay plot dari perbandingan komposisi pelarut optimum pada Gambar 1.
Nilai desirability yang paling tinggi adalah satu (Monton et al ., 2020). Jika nilai
desirability yang  didapatkan  mendekati angka satu maka  perbandingan komposisi pelarut semakin optimal (Das et al ., 2016).
Berdasarkan hasil analisa optimasi,
didapatkan nilai desirability untuk perbandingan  komposisi  pelarut  yang optimum  terhadap  aktivitas  antioksidan yaitu  0,73  dapat  dilihat  pada  Gambar  2.
Pada contour  plot  desirability didapatkan nilai  X1,  X2,  dan  X3  masing-masing 0;0,6928;0,3072.
Gambar  1.  Overlay  Plot  Desirability
komposisi perbandingan optimum aktivitas antioksidan. Superimposed merupakan
penjabaran dari nilai desirability , di dalam
contour  plot menampilkan  nilai  dari
masing-masing  variabel  bebas  dan  terikat dari desirability (Singh  and  Saini,  2016).
Dalam contour plot tidak  terdapat  zona
kuning  dan  sedikit  kemungkinan  ada komposisi  pelarut  optimum  yang  dapat diperoleh dan memenuhi syarat yang telah ditetapkan, terdapat pada titik antara pelarut aseton  dan  metanol.  Berdasarkan  titik daerah optimum, maka diperoleh perbandingan  komposisi  pelarut  yang optimum terhadap jumlah rendemen, kadar flavonoid  total,  dan  aktivitas  antioksidan dapat dilihat pada Tabel III.
Gambar 2. Superimposed dari contour plot respon jumlah rendemen, kadar flavonoid  total,  dan  aktivitas
antioksidan
Tabel III. Komposisi perbandingan pelarut optimum dari Superimposed Pelarut Perbandingan Metanol 0% Aseton 69,28% Akuades 30,72%

## IV. KESIMPULAN
Analisis menggunakan Simplex
Lattice  Design menunjukkan  komposisi
perbandingan pelarut dalam proses ekstraksi  daun A.  siamensis memberikan
hasil  optimal  terhadap  jumlah  rendemen, kadar  flavonoid  total,  dan  aktivitas antioksidan  pada  metanol:aseton:akuades masing-masing  0:  69,28:  30,72  dengan hasil  total  flavonoid  296,64  miligram kuersetin ekivalen per gram ekstrak, jumlah rendemen 20,00%, dan aktivitas antioksidan 91,79 ppm.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Seluruh penulis menyatakan bahwa tidak  ada  konflik  kepentingan  dalam penelitian ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih kepada Universitas Ma
Chung  yang  sudah  memberikan  fasilitas agar penelitian ini dapat berlangsung.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifin,  H.A.,  Hashiguchi,  T.,  Nagahama, K., Hashiguchi, M., Muguerza, M., Sakakibara, Y., Tanaka, H., Akashi,
R.,  (2021).  Varietal  differences  in flavonoid and antioxidant activity in Japanese soybean accessions.
Biosci.  Biotechnol.  Biochem.  85,
916–922. https://doi.org/10.1093/bbb/zbaa10
4
Chen,  F.,  Huang,  G.,  Yang,  Z.,  Hou,  Y.,
(2019).  Antioxidant  activity  of
Momordica charantia
polysaccharide  and  its  derivatives. Int.  J.  Biol.  Macromol.  138,  673– 680. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2 019.07.129 Das, S.K., Khanam, J., Nanda, A., (2016). Optimization of preparation method for ketoprofen-loaded microspheres
consisting  polymeric  blends  using simplex  lattice  mixture  design.
Mater.  Sci.  Eng.  C  Mater.  Biol. Appl. 69, 598–608. https://doi.org/10.1016/j.msec.2016 .07.010 Duangjit, S., Kraisit, P., (2018).
Optimization  of  orodispersible and conventional  tablets  using  simplex lattice  design:  Relationship  among excipients  and  banana  extract. Carbohydr.  Polym.  193,  89–98. https://doi.org/10.1016/j.carbpol.20 18.03.087
Duangjit,  S.,  Mehr,  L.M.,  Kumpugdee- Vollrath,  M.,  Ngawhirunpat,  T., (2014).  Role  of  simplex  lattice statistical design in the formulation and optimization of microemulsions for  transdermal  delivery.  Biol.
Pharm. Bull. 37, 1948–1957.
https://doi.org/10.1248/bpb.b14- 00549 Garcia, C., Blesso, C.N., (2021). Antioxidant properties of anthocyanins  and  their  mechanism of  action  in  atherosclerosis.  Free
Radic.  Biol.  Med.  172,  152–166. https://doi.org/10.1016/j.freeradbio
med.2021.05.040
Ghosal,  M.,  &  Mandal,  P.  (2012).
Phytochemical Screening And
Antioxidant  Activities  Of  Two Selected  ‘Bihi’  Fruits  Used  As Vegetables  In  Darjeeling  Himalaya. 4(2).
Hanifa,  R.  A.,  Lukman,  Y.,  &  Syafnir,  L.
(2015).  Uji  Aktivitas  Antioksidan Serta  Penetapan  Kadar  Flavonoid Total Dari Ekstrak Dan Fraksi Daun Paitan (Tithonia Diversifolia
(Hamsley)  A.  Gray).  Prosiding Penelitian  Spesia  Unisba,  164–170.
[Unduh 25 Juli 2016]
Ionita, P., (2021). The Chemistry of DPPH·
Free Radical and Congeners. Int. J. Mol. Sci. 22, 1545. https://doi.org/10.3390/ijms220415 45
Isildak, Ö., Yildiz, I., Genc, N.,  (2022). A new potentiometric PVC membrane sensor  for  the  determination  of DPPH  radical  scavenging  activity of plant extracts. Food Chem. 373, 131420. https://doi.org/10.1016/j.foodchem. 2021.131420 Ismail, M., Owis, A., & Hetta,  M. (2017). Total  Phenolics  And  Flavonoids Conten,  Antioxidant  Activity  And Gc  /  Ms  Analyses  Of  Euphorbia Grandialata. June
La,  J.,  Kim,  M.-J.,  Lee,  J.,  (2021). Evaluation of solvent effects on the DPPH reactivity for determining the antioxidant  activity  in  oil  matrix.
Food Sci. Biotechnol. 30, 367–375. https://doi.org/10.1007/s10068- 020-00874-9 Monton,  C.,  Chuanchom,  P.,  Popanit,  P., Settharaksa,  S.,  Pathompak,  P.,
(2021).  Simplex  lattice  design  for optimization  of  the  mass  ratio  of
Curcuma longa L., Curcuma zedoaria  (Christm.)  Roscoe  and
Curcuma  aromatica  Salisb.  to maximize  curcuminoids  content and  antioxidant  activity.  Acta Pharm. Zagreb Croat. 71, 445–457. https://doi.org/10.2478/acph-2021- 0025
Monton,  C.,  Wunnakup,  T.,  Suksaeree,  J., Charoenchai,  L.,  Chankana,  N.,
(2020). Investigation of the
Interaction  of  Herbal  Ingredients Contained in Triphala Recipe Using Simplex  Lattice  Design:  Chemical Analysis Point of View. Int. J. Food Sci. 2020, 5104624. https://doi.org/10.1155/2020/51046 24
Penkov,  D.,  Andonova,  V.,  Delev,  D.,
Kostadinov,  I.,  Kassarova,  M.,
(2018). Antioxidant Activity of Dry Birch  (Betula  Pendula)  Leaves Extract.  Folia  Med.  (Plovdiv)  60, 571–579.
https://doi.org/10.2478/folmed- 2018-0035 Rohmatika, A. (2019). Aktivitas Antifungi Ekstrak  Etanol  70  %  Daun  Teh-
Tehan ( Acalypha Siamensis ) Terhadap Candida Albicans Antifungal Activity  70  %  Ethanol Extract Of Teh-Tehan Leaf ( Acalypha  Siamensis )  To Candida Albicans Arini Rohmatika Supervisior :  Oktavina  Kartika. Akademia Farmasi Putra Indonesia
Malang.
Rodrigues,  T.,  Reker,  D.,  Schneider,  P.,
Schneider, G., (2016). Counting on natural  products  for  drug  design. Nat. Chem. 8, 531–541. https://doi.org/10.1038/nchem.247 9 S, J.K.,  B,  S., E, B.T.,  Chithiraikannu, R., K,  G.,  (2022).  Optimization  of extraction parameters and stabilization  of  anthocyanin  from onion  peel.  Crit.  Rev.  Food  Sci. Nutr. 62, 2560–2567.
https://doi.org/10.1080/10408398.2
020.1856772 Saethang, T., Somparn, P., Payungporn, S.,
Sriswasdi, S., Yee, K.T., Hodge, K.,
Knepper,  M.A.,  Chanhome,  L., Khow, O., Chaiyabutr, N., Sitprija, V., Pisitkun, T., (2022).
Identification  of  Daboia  siamensis venome  using  integrated  multi- omics  data.  Sci.  Rep.  12,  13140. https://doi.org/10.1038/s41598- 022-17300-1
Singh,  I.,  Saini,  V.,  (2016).  Formulation and optimization of floating matrix tablets  of  clarithromycin  using simplex  lattice  design.  Pak.  J. Pharm. Sci. 29, 511–519.
Wirasti.  (2019).  Penetapan  Kadar  Fenolik Total,  Flavonoid  Total,  Dan  Uji Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun Benalu Petai (Scurrula Atropurpurea Dans.)  Beserta  Penapisan  Fitokimia Wirasti. Journal  Of  Pharmaceutical And Medicinal Sciences , 4 (1), 1–5.