Penentuan Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol, Etil Asetat dan Heksana Tanaman Ruku-Ruku ( Ocimum tenuiflorum L.) denganMetode DPPH
Anton Restu Prihadi 1*) , Ahmad Dzaky Mualim 2 , dan Ikhwan Affandy 2
1) Program Studi Penjaminan Mutu Industri Pangan, Politeknik AKA Bogor
2) Program Studi Analisis Kimia, Politeknik AKA Bogor Jl. Pangeran Sogiri No.283, Tanah Baru, Bogor Utara, Kota Bogor, Jawa Barat 16154
*) Email: antonrestu@gmail.com (Received : 7 November 2021; Accepted: 31 Desember 2021; Published: 31 Desember 2021)

## Abstrak
Tanaman  ruku-ruku  ( Ocimumtenuiflorum L.)  adalah  tanaman  herbal  yang  telah  banyak  digunakan masyarakat  untuk  pengobatan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  antioksidan  dari  seluruh senyawa  kimia  pada  tanaman  ruku-ruku  yang  bersifat  polar,  semipolar  dan  nonpolar.  Potensi  antioksidan tersebut diketahui dengan menguji aktivitas dari ekstrak metanol, etilasetat dan heksana dari tanaman ruku-ruku. Simplisia  daun  dan  batang  ruku-ruku  pertama-tama  diekstrak  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut metanol,  selanjutnya  simplisia  yang  sama  diekstrak  menggunakan  pelarut  etilasetat  dan  terakhir  oleh  pelarut heksana.  Aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  metanol,  etilasetat  dan  heksana  ditentukan  menggunakan  metode DPPH.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak  etilasetat  memberikan  aktivitas  antioksidan  yang  lebih  baik dibandingkan  dengan  ekstrak  methanol  dan  heksana.  Aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  etilasetat  diperoleh dengan nilai IC 50 1503.58µg/mL. Berdasarkan nilai IC 50 ekstrak etilasetat tanaman ruku-ruku memiliki aktivitas antioksidan yang lemah.

## Kata kunci: ruku-ruku; ekstraksi maserasi; aktivitas antioksidan

## Abstract
Basil  plant  (OcimumtenuiflorumL.)  is  a  herb  that  are  widely  used  as  medicine.  This  study  aims  to determine the antioxidant  potential of all polar, semipolar and nonpolar compounds by testing the antioxidant activity of metanol, ethyl acetate and hexane extracts of basil plant. Basil leaves and stems were macerated with metanol,  ethyl  acetate  and  hexane.  The  antioxidant  activity  ofmetanol,  etil  acetate  dan  hexane  extracts  were carried  out  using  the  DPPH  method.  The  results  showed  that  the  ethyl  acetate  extract  provided  better antioxidant activity than the metanol and hexane extracts. Antioxidant activity of the ethyl acetate extract  was obtained with an IC 50 value of 1503.58µg/mL. Based on the IC 50 value, the ethyl acetate extract of basil planthas weak antioxidant activity.
Keywords : basil; extraction maseration; antioxidant activity

## PENDAHULUAN
Tanaman  ruku-ruku  telah  dibudidayakan sejak lama, namun umumnya tumbuh secara liar di alam.  Tanaman  ruku  ruku  umumnya  ditanam  di kebun, halaman maupun pinggiran jalan.
(Sastrapradja et al., 1977;Sulistiarini, 1999).
Tanaman  ruku-ruku  ini  mempunyai  ciri khas  bau  yang  harum  pada  daunnya,  sehingga seringkali  digunakan sebagai  bumbu  dalam masakan.  Aroma  dari  tanaman  ruku  ruku  dapat mengurangi  aroma  anyir  alami  pada  daging  ikan yang  dimasak.  Daun  ruku-ruku  telah  digunakan sebagai ekspektoran, diaforetik, antikanker, antihelmintik,  analgesik  dan  tonik.  Daun  kering dapat  digunakan  untuk  menangani  infeksi  saluran pernafasan,  sedangkan juice daun  segar  dapat
digunakan untuk mengatasi bronchitis dan penyakit kulit.  Minyak  atsiri  ruku-ruku  telah  dilaporkan memiliki  aktivitas  antifungal  melawan Aspergillus niger , Rhizopus stolinifera dan Penicillium digitatum (Geeta et al.,2001). Tanaman  ruku-ruku  memiliki  banyak khasiat  obat  seperti  antidiabetes,  antioksidan, antimikroba, antinociceptive,  antifertility ,  anti- inflamasi, antikanker, anthelmintik, dan kardioprotektif (Pattanayak, 2010).Selain itu, tanaman  ini  juga  memiliki  sifat  antiseptik, antispasmodik,  antibakteri  dan  pengusir  serangga (Gupta, 1998). Menurut sistem pengobatan Ayurveda,  ruku-ruku  dianggap  sebagai  adaptogen yang  membantu  menjaga  keseimbangan  antara aktivitas metabolisme yang berbeda dan membantu
dalam pengendalian stres digunakan untuk mengobati beberapa penyakit, seperti masuk angin, sakit  kepala,  gangguan  perut,  radang,  penyakit jantung, keracunan dan malaria serta ketidaknyamanan psiko-fisik, asma dan konjungtivitis(Simon,  1999).  Sejumlah  senyawa bioaktif  dengan  sifat  antioksidan  yang  sangat  baik telah  dilaporkan  dari  daun  ruku-ruku  (Nakatani, 1997).
Hikmawanti,  dkk  pada  tahun  2019  telah melaporkan  aktivitas  antioksidan  dari  komponen senyawa atsiri (non polar) dari tanaman ruku-ruku. Zat  aktif  antioksidan  pada  tanaman  ruku- rukuberpotensiuntuk  menghambat  penyakit  kronis yang  disebabkan  oleh  senyawa-senyawa  oksidator kuat  pada  tubuh  manusia.  Akan  tetapi,  aktivitas antioksidan  dari  seluruh  metabolit  sekunderyang bersifat  polar,  semipolar  dan  nonpolar  pada tanaman  ruku-ruku  belum  tuntas  dipelajari.  Oboh, dkk  pada  tahun  2008  melaporkan  bahwa  aktivitas antioksidan  senyawa  polar  pada  tanaman  berdaun
hijau  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  lebih tinggi dibandingkan senyawa non polar.Oleh karena itu,  tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  potensi  antioksidan  dari  seluruh komponen  yang  bersifat  polar,  semipolar  dan nonpolar  pada  tanaman  ruku-ruku  yang  tumbuh  di provinsi Sumatera Barat.

## BAHAN DAN METODE Alat dan bahan
Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini adalah peralatan gelas laboratorium, spektrofotometer  UV-Vis,  oven, blower udara, blender/crusher , saringan 18 mesh, neraca analitik, heater ,  corong  pisah,  kertas  saring  Wheatman  no 42, pengaduk strirer, botol vialdan evaporator . Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  daun  dan  batang  tanaman ruku-ruku, akuades, pereaksi 1-1-difenil-2- pikrihidrazil  (DPPH),  metanol,  etil  asetat,  heksana dan akuades.

## PersiapanSampel
Daun  dan  batang  tanaman  ruku-ruku diperoleh dari daerah Solok, Sumatera Barat. Daun dan  batang  tanaman  ruku-ruku  dicuci  dengan menggunakan  air  bersih  untuk  menghilangkan kotoran  yang  menempel  di  permukaan  kulit  kopi sebanyak  2  (kali)  dan  dikeringkan  dengan menggunakan oven yang dilengkapi dengan blower udara  pada  suhu  50 o C  sampai  kering.  Kulit  kopi yang  sudah  dikeringkan  dihancurkan  dengan menggunakan blender/crusher sampai  diperoleh ukuran partikel lolos saringan 18 mesh atau sekitar 1 mm.

## Proses Ekstraksi
Sebanyak50  gram  daun  dan  batang  kering tanaman ruku-ruku direndam dalam 1 liter heksana selama 3 x 24 jam,kemudian disaring menggunakan kertas  saring  Whatman  no  42.  Residu  hasil penyaringan  kemudian  dikeringkan  dan  direndam dalam  pelarut  etil  asetat  selama  3  x  24 jam,kemudian  disaring  menggunakan  kertas  saring Whatman  no  42.    Residu  hasil  penyaringan kemudian  dikeringkan  dan  direndam  dalam  pelarut metanol  selama  3  x  24  jam,  kemudian  disaring menggunakan kertas saring Whatman no 42. Filtrat kemudian  dievaporasi  hingga  seluruh  pelarut menguap. Ekstrak kering selanjutnya ditimbang dan disimpan untuk analisis lebih lanjut.

## Penentuan Aktifitas Antioksidan Pembuatan Larutan DPPH30 µg/mL
Ditimbang 5 mg DPPH (BM 394,33). Lalu dilarutkan  dengan  metanol  p.a  hingga  50  mL, kemudian  ditempatkan  dalam  labu  ukur  yang dilapisi dengan aluminiumfoil. Ditambahkan pelarutnya  hingga  tanda  batas  kemudian  dikocok hingga  homogen  dan  diperoleh  larutan  DPPH
dengan konsentrasi 100 µg/mL. Kemudian diencerkan  dengan  cara  dipipet  15  mL  larutan DPPH  konsentrasi  100  µg/mL  dimasukkan  dalam labu  ukur  50  mL.  Ditambahkan  pelarutnya  hingga tanda batas kemudian dikocok hingga homogen dan diperoleh  larutan  DPPH  dengan  konsentrasi  30 µg/mL.
Pembuatan Larutan Blanko dan

## OptimasiPanjang Gelombang DPPH
Dipipet  2  mL  larutan  DPPH  (30  µg/mL) ke  dalam  tabung  reaksi.  Lalu  tambahkan  metanol p.a  sebanyak  2  mL  dan  dihomogenkan,  dan  vial ditutup dengan aluminium foil. Kemudian diinkubasi  dalam  ruangan  gelap  selama  30  menit. Tentukan  spectrum  serapannya  menggunakan spektrofotometer UV-Visible pada panjang gelombang  400-800  nm  dan  tentuk  an  panjang gelombang maksimumnya.
Pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol,  Etil  Asetat  dan  Heksana  Tanaman Ruku-ruku
Ditimbang  ekstrak  sebanyak  125  mg dalam  labu  ukur,  kemudian  dilarutkan  dengan metanol p.a dan ditepatkan volume 50 mL sehingga didapatkan  konsentrasi  2500  µg/mL.  Selanjutnya diukur  serapan  dengan  spektrofotometer  UV- Visible pada panjang gelombang maksimum DPPH.

## Penentuan Nilai IC 50
Dilakukan  pengenceran  pada  ekstrak etilasetat  dengan  konsentrasi  2500  µg/mL  yang sudah  dibuat  sebelumnya  dengan  penambahan metanol  p.a.  hingga  diperoleh  sampel  dengan konsentrasi  1000  µg/mL,  1250  µg/mL,  1500 µg/mL,  1750  µg/mL,  dan  2000  µg/mL.  Untuk menentukan  aktivitas  antioksidan  masing-masing konsentrasi  dipipet  sebanyak  2  mL  larutan  sampel dengan  pipet  mikro  dan  dimasukkan  ke  dalam  vial
lalu vial ditutup dengan  Aluminium  foil, kemudian ditambahkan  2  mL  larutan  DPPH  30  µg/mL. Campuran dihomogenkan dan diinkubasi selama 30 menit  di  tempat  gelap.  Selanjutnya  diukur  serapan dengan  spektrofotometer  UV-Visible  pada  panjang gelombang maksimum DPPH. Aktivitas antioksidan  sampel  ditentukan  oleh  besarnya hambatan serapan radikal DPPH.
Hasil perhitungan dari aktivitas antioksidan dimasukkan kedalam persamaan garis y = a + bx dengan konsentrasi (µg/mL) sebagai absis (sumbu x) dan nilai % aktivitas antioksidan sebagai ordinatnya  (sumbu  y).  Nilai  IC50  dari  perhitungan pada  saat  %  aktivitas  antioksidan  sebesar  50%. Analisis  data  menggunakan  perhitungan  persentasi inhibisi dan IC 50 dengan persamaan regresi. Rumus perhitungan persen inhibisi:

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak    heksana,  etil  asetat  dan  metanol dari  tanaman  ruku-ruku  selanjutnya  diuji  aktivitas antioksidannya  menggunakan  metode  DPPH  (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl). Metode DPPH merupakan  metode  yang  sederhana  mudah,  cepat, dan  peka  serta  hanya  memerlukan  sedikit  sampel untuk pengujian aktivitas antioksidan dari  senyawa bahan alam. DPPH adalah radikal bebas, stabil pada suhu kamar dengan bentuk serbuk violet kehitaman dan  cepat  teroksidasi  oleh  suhu  dan  udara.  Metode DPPH  pengujiannya  menggunakan  reaksi  kimia dimana  senyawa  antioksidan  akan  bereaksi  dengan DPPH  melalui  mekanisme  donasi  atom  hidrogen dan  menimbulkan  perubahan  warna  dari  ungu menjadi kuning.
Pada  pengukuran  aktivitas  antioksidan menggunakan larutan DPPH dengan konsentrasi 30 µg/mL  didapat  panjang  gelombang  maksimum DPPH pada 512 nm.Penentuan panjang gelombang serapan  maksimum  dilakukan  karena  panjang gelombang  serapan  maksimum  dapat  mengalami perubahan.  Hal  ini  disebabkan  perbedaan  kondisi percobaan  yang  dilakukan.  Perubahan  tersebut dapat berupa perbedaan instrumen, waktu pengukuran,  pelarut,  iklim,  maupun  individu  yang melakukan.
Uji  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode  ini  berdasarkan  hilangnya  warna  ungu akibat  tereduksinya  DPPH  oleh  antioksidan. Intensitas  warna  ungu  yang  hilang  inilah  yang diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis. Kemampuan  antioksidan  ekstrak  ruku-ruku  dapat diamati  dari  berkurangnya  intensitas  warna  ungu dari  larutan  DPPH  saat  direaksikan.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  terjadi  reaksi  antara  molekul DPPH dengan atom hidrogen yang dilepaskan oleh molekul  senyawa  sampel  sehingga  terbentuk senyawa  1,1-difenil-2-pikrilhidrazil  yang  berwarna kuning.
Semakin  besar  konsentrasi  bahan  uji, warna  kuning  yang  dihasilkan  semakin  kuat. Pengurangan  intensitas  warna  ungu  dari  larutan DPPH  secara  kuantitatif  dapat  dihitung  dari berkurangnya absorbansi larutan tersebut.
Semakin  besar  konsentrasi  larutan  uji maka  absorbansi  yang  dihasilkan  semakin  kecil, yang  berarti  kemampuan  larutan  uji  dalam meredam  radikal  DPPH  semakin  besar.  Ektrak  etil asetat  menunjukkan  nilai  absorbansi  terendah sebesar 0.3001, kemudian metanol dengan absorbansi  sebesar  0.3083  dan  heksana  sebesar 0.3305.  Hal  ini  menunjukan  ekstrak  etil  asetat  dari tanaman  ruku-ruku  memiliki  aktivitas  antioksidan yang  sedikit  lebih  tinggi  dibandingkan  ekstrak  dari metanol  dan  heksana.Hasil  pengujian  dapat  dilihat pada tabel 1.
Tabel  1.  Hasil  Pengukuran  Absorbansi  Ekstrak Heksana,  Etil  Asetat  dan  Metanol  Tanaman  Ruku- ruku
Perhitungan nilai IC50 untuk ekstrak ruku- ruku selanjutnya menggunakan data dari ekstrak etil asetat.  Hal  ini  disebabkan  data  uji  antioksidan ekstrak  etil  asetat  memberikan  hasil  absorbansi yang  sama  besarnya  dengan  ekstrak  metanol  dan heksana,  yaitu  0,3.Nilai  IC 50 yang  dimiliki  oleh ekstrak etilasetat ruku-ruku adalah 1503.58  µg/mL. Perhitungan  nilai  IC 50 ekstrak  etilasetat  ruku-ruku tersebut  mengacu  pada  data  hubungan  %  inhibisi dan  konsentrasi  esktrak  tanaman  ruku-ruku  pada Gambar 1.
Gambar  1.  Kurva  hubungan  %  inhibisi  dengan konsentrasi  ekstrak  etil  asetat  tanamanruku-ruku
deret standar Abs Nm zero -0.0177 512 0.5 0.0525 512 0.15 0.1842 512 0.25 0.3328 512 0.35 0.4588 512 0.5 0.6703 512 metanol 0.3083 512 etil asetat 0.3001 512 heksana 0.3305 512
Kategori  parameter  aktivitas  antioksidan  dari  nilai IC50  ekstrak  tanaman  ruku-ruku  mengacu  pada Winarsih, 2014, yaitu :
Sangat Kuat : IC 50 =  50 µg/mL
Kuat : IC 50 =  50-100 µg/mL Sedang : IC 50 =  101-150 µg/mL Lemah
: IC 50 = 150 µg/mL.
Hal  ini  menunjukkan  hasil  dari  nilai  IC 50 yang didapat  bahwa  aktivitas  ekstrak  etilasetatruku-ruku ( Ocimum  tenuiflorum L.)  adalah  lemah  jika dibandingkan  dengan  kategori  aktivitas  antioksidan tersebut  di  atas.  Oleh  karena  itu  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  metanol,  etil  asetat  dan  heksana  dari tanaman  ruku-ruku,  ketiganya  mempunyai  aktivitas antioksidan  yang lemah.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  diambil  kesimpulan  bahwa  ekstrak etilasetat
dari
tanaman
ruku-ruku
( Ocimumtenuiflorum L.) memiliki aktivitas antioksidan yang setara dengan ekstrak methanol dan heksana.  Ekstrak  etilasetat  tanaman  ruku-ruku mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang  lemah terhadap  radikal  bebas  DPPH  dengan  nilai  IC 50 1503.58 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Dinata,  D.  I.,  Supriadi,  D.,  Djafar.  G.,  Syerliana.,
Wijayanti.  W.,  &  Suherman,  S.  E. (2015).  Effect  of  adding  granul  basil (Ocimum  americanum)  as  antioxidant in fried foods. IJPST 2(1) , 22-32.
Geeta, DM., Vasudevan, R., Kedlaya, S., Deepa & M Ballal M. (2001). Activity of Ocimum sanctum (the traditional Indian medicinal  plant)  against  the  enteric pathogens. Indian J. Med. Sci55 , 434-
438.
Gupta,  A.K.  &Sahi.  (1998).  Seed  germination behaviour  of  Ocimum  under  different environmental  conditions, J.  Med.
Aromat. Plant Sc,. 20, 1045–1047.
Hikmawati, N.P.E.,
Hariyanti,
Nurkamalia&
Nurhidayah  S.    (2019).Chemical
Components  of  Ocimum  basilicum  L.
and  Ocimum  tenuiflorum  L.  Stem Essential Oils and Evaluation of Their Antioxidant  Activities  Using  DPPH Method. Pharmaceutical Sciences and Research (PSR) 6(3) , 149 – 154
Nakatani  N.  (1997). Antioxidants  from  spices  and herbs , In: Natural Antioxidants: Chemistry, Health Effects, and Applications . Illynois: AOAC Press.
Oboh, Ganiyu. (2008)Antioxidant properties of polar and  non-polar  extracts  of  some tropical green leafy vegetables. Journal
of the Science of Food and Agriculture 88(14) , 2486-2492 Pattanayak, P., Behera, P., Das, D., Panda, S. (2010). Ocimum  sanctum  Linn.  A  reservoir plant  for  therapeutic  applications:  an overview. Pharmacogn. Rev , 4, 95. Prakash, P., & Gupta, N. (2005). Therapeutic uses of
Ocimum  sanctum  Linn  (Tulsi)  with  a note on eugenol and its pharmacological  actions: a  short review. Indian J. Physiol.
Pharmacol49 , 125–131.
Sastrapradja  S,  SHA  Lubis,  E  Djajasukma,  H Soetarno  &  I  Lubis.  (1977). Sayur- sayuran . Bogor: LBN-LIPI Simon  JE,  Morales  MR,  Phippen  WB,  Vieira  RF, Hao  Z.  (1999). Basil:  A  source  of aroma  compounds  and  a  popular culinary  and  ornamental  herb . In: Perspectives  on  New  Crops  and  New Uses .  Alexandria:  American  Society for Horticultural Science Press.
Sulistiarini  D.  (1999). Ocimum  gralissimum  L.  In: LPA  Oyen  and  NX  Dung.  Plant Resources of South-East Asia Number 19.  Essential  oil  plants .  Bogor: PROSEA
Upadhyay,  R.,  Nachiappan,  G.,  &  Mishra,  H.  N. (2015).  Ultrasound-assisted  extraction of flavonoids and phenolic compounds from  Ocimum  tenuiflorum  leaves. Food  Science  and  Biotechnology 24(6), 1951-1958.
Winarsih,  H.  (2007). Antioksidan  alami  dan  radikal bebas . Jogjakarta: Kanisius.