Jurnal Farmasi, Sains, dan Kesehatan ISSN 2442-9791
Potensi Ekstrak Daun dan Batang Katola ( Arcangelisia flava L. Merr)
Sebagai Antimikroba
Yamin * , Hasnawati
Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu Kendari 93232

## Abstrak
Infeksi merupakan salah satu penyebab penyakit dan kematian yang sering terjadi di negara berkembang seperti Indonesia.Infeksi dapat disebabkan oleh mikroba patogen. Pengobatan infeksi menggunakan antimikroba yang tidak tepat menimbulkan resistensi, untuk mengatasi masalah ini memerlukan solusi dengan memanfaatkan tanaman yang memiliki potensi kuat sebagai antimikroba. Salah satu tanaman  yang digunakan secara empiris sebagai antimikroba adalah katola ( Arcangelisia flava L. Merr). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi antimikroba daun dan batang katola terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus  subtilis ATCC  6233, Escherichia  coli ATCC  35218, Salmonella  typhi YCTC, Shigella dysenteriae dan jamur Candida albicans ATCC 10231, mengetahui kadar hambat minimum (KHM) dan kadar bunuh minimum (KBM) terhadap bakteri dan jamur, mengetahui  kandungan  senyawa  kimia  yang  terkandung  pada  daun  dan  batang  katola,  sera  mengetahui  golongan  senyawa  aktif sebagai antibakteri. Metode yang digunakan meliputi difusi agar untuk uji aktivitas antimikroba, KHM serta KBM. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak metanol katola memiliki potensi sebagai antimikroba terhadap B. subtilis ATCC 6233, E. coli ATCC 35218, S.  typhi YCTC, S.  dysenteriae dan C.  albicans ATCC  10231.  Nilai  KHM  ekstrak  batang  terhadap  seluruh  bakteri  pada konsentrasi 1000 ppm dan nilai KBM pada konsentrasi 1500 ppm. Hasil uji skrining fitokimia pada batang dan daun menunjukkan hasil positif terhadap alkaloid, terpenoid, saponin, flavonoid dan tanin.
Kata kunci: infeksi, katola, Arcangelisia flava, antimikroba

## 1. Pendahuluan
Infeksi adalah keadaan masuknya mikroorganisme ke  dalam  tubuh,  kemudian  berkembang  biak  dan menimbulkan  penyakit.  Mikroba  dapat  menyebabkan infeksi secara  lokal  maupun sistemik [1].  Infeksi dapat disebabkan  oleh  mikroba  patogen  yang  memproduksi enterotoksin  seperti Staphylococcus  aureus , Bacillus subtilis , Escherichia  coli , Salmonella  typhi , Shigella dysenteriae dan Candida albicans .
Pengobatan  penyakit  infeksi  sering  menggunakan antimikroba.Antimikroba  adalah  obat  yang  digunakan untuk  memberantas  infeksi  mikroba  pada  manusia. Penggunaan  antimikroba  secara  tidak  tepat  dapat menimbulkan resistensi. Hal ini menyebabkan pengobatan  terhadap  penyakit  infeksi  yang  disebabkan oleh mikroba patogen menjadi lebih lama [2]. Salah satu solusi  untuk  mengatasi  penyakit  infeksi  adalah  dengan memanfaatkan tanaman untuk pengobatan.
Salah satu solusi untuk mengatasi penyakit infeksi adalah dengan memanfaatkan tanaman untuk
* KBK Farmasi Sains, Fakultas Farmasi UHO Email: yamin_taeri75@ymail.com
pengobatan. Salah satu tanaman yang dimanfaatkan oleh masyarakat  sebagai  obat  tradisional  adalah  tanaman katola (Arcangelisia flava L. Merr). Katola (A. flava L. Merr) memiliki senyawa aktif yang dapat dimanfaatkan sebagai  antibakteri  diantaranya  adalah  alkaloid  [3]. Penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh  adalah  Senyawa terpenoid  yang  terkandung  dalam  katola  berupa golongan  diterpen  antara  lain  fibraleusin,  fibraurin  [4]. Selain  itu,  katola  (A.  flava  L.  Merr)  juga  mengandung saponin,  flavonoid  dan  tanin  walaupun  jumlahnya sedikit [5].
Berdasarkan latar belakang tersebut, pada penelitian  ini  akan  dilakukan  uji  aktivitas  terhadap penghambatan  bakteri S.  aureus ATCC  25923, B. subtilis ATCC  6233, E.  coli ATCC  35218, S.  typhi YCTC, S.  dysenteriae dan  jamur C.  albicans ATCC 10231.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui potensi  ekstrak  metanol  (batang  dan  daun) katola ( A. flava )  sebagai  antimikroba  dengan  metode  difusi  agar,
dengan melalui penentuan konsentrasi hambat minimum (KHM) dan konsentrasi bunuh minimum (KBM).  Selain itu,  golongan  senyawa  yang  mempunyai  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri  yang  memiliki  potensi paling kuat pada ekstrak metanol daun dan batang katola akan diidentifkasi dengan metode bioautografi.

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1 Penyiapan Sampel dan Identifikasi Tanaman
Sampel  diambil  di  Kabupaten  Muna,  Sulawesi Tenggara.  Pengambilan  pada  sore  hari  jam  17.00. Sampel  yang  diambil  adalah  batang  dan  daun  tanaman katola ,  kemudian  diidentifikasi  berdasarkan  kunci determinasi  di  Laboratorium  Pendidikan  Biologi  FKIP Universitas  Halu  Oleo.  Sampel  kulit  batang  dan  daun katola  dipotong-potong  lalu  dibersihkan  dengan  air mengalir,  dirajang  kemudian  dikeringkan  dengan  cara dijemur  di  bawah  sinar  matahari  dan  ditutupi  dengan menggunakan kain hitam sampai kering. Setelah kering dihaluskan  hingga  diperoleh  serbuk  sampel  atau simplisia.

## 2.2 Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  metanol.  Proses  maserasi  selama tiga  hari  dengan  penggantian  pelarut  bertujuan  untuk memaksimalkan  proses  ekstraksi  senyawa  kimia  yang terkandung  dalam  sampel  [6].  Dalam  proses  maserasi diperlukan  pengadukan  berkala  hal  ini  bertujuan  untuk menghindari memadatnya serbuk sehingga pelarut sulit menembus  bahan  dan  kesulitan  mengambil  senyawa- senyawa aktif. Filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakan rotary  vacuum  evaporator hingga diperoleh  ekstrak  kental  dan  dikeringkan  dalam waterbath hingga diperoleh ekstrak yang kering.

## 2.3 Uji Aktivitas Antimikroba

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  kaca  berskala  yang  digunakan, Nutrient Agar (NA), Potato  Dextrosa  Agar (PDA)  dan  kertas cakram  berdiameter  0,6  mm  disterilisasi  di  dalam autoclave selama 15 menit pada suhu 121 o C dan tekanan 1 atm, sedangkan alat  tanpa skala diserilisasi dalam oven bersuhu 120 o C [7].

## Pembuatan dan Sterilisasi Media Antimikroba
Sebanyak 1 g serbuk nutrient agar (NA) dilarutkan dalam  akuades  sebanyak  50  mL.  Media  untuk pertumbuhan  jamur  digunakan potato  dextrose  agar (PDA). Media PDA sebanyak 0,6 g dilarutkan dalam 15 ml  aquades  dalam  Erlenmeyer . Kemudian  media
dipanaskan  hingga  larut,  lalu  disterilkan  dengan autoclave pada suhu 121 0 C selama 15 menit [8].

## Persiapan Kultur Mikroba
Bakteri  uji  yang  digunakan  diremajakan  dengan cara  memindahkan  ±1  ose  bakteri  yang  ditanam  pada media  NA,  kemudian  dimasukan  dalam  tabung  reaksi dan diinkubasi selama 1×24 jam pada suhu 37ºC. Jamur uji  yang  digunakan  adalah C.  albicans ,  yang diremajakan  pada  media  PDA,  kemudian  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  dan  diinkubasi  selama  3×24  jam pada suhu 37 o C [7].

## Pembuatan Suspensi Mikroba
Diambil ±1 ose dari hasil peremajaan biakan murni mikroba uji dimasukkan dalam tabung reaksi yang berisi 5  mL  NaCl  fisiologis  0,9%.  Kemudian  di  vorteks  agar homogen,  dan  dibandingkan  dengan  standar Mc Farland .  Kekeruhan  bakteri  dan  jamur  diukur  hingga sesuai  dengan  standar  0,5 Mc  Farland menggunakan spektrofotometer 20D pada λ 625 nm [7].

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode difusi  agar  menggunakan  kertas  cakram  dan  teknik apusan  ( surface  plate ).  Metode  ini  dilakukan  dengan cara  menggoreskan  suspensi  bakteri  secara  merata menggunakan cutton  bath ke  dalam  10  mL  media nutrient agar yang telah dipadatkan dalam cawan petri steril. Kertas cakram steril dengan diameter 0,6 mm yang telah  diteteskan  20  μl  ekstrak  [1].  Kontrol  negatif (pelarut)  dan  kontrol  positif  (kloramfenikol  untuk  uji antibakteri) diletakkan pada permukaan media kemudian dimasukkan ke inkubator untuk diinkubasi selama 1×24 pada suhu 37°C [9].

## Uji Aktivitas Antijamur
Uji aktivitas antijamur menggunakan metode difusi agar. Metode ini dilakukan dengan cara  menuangkan 1 mL  suspensi  jamur  ke  dalam  10  mL  PDA  yang  telah dipadatkan dalam cawan petri steril. Kemudian ekstrak sebanyak  20  μL  diteteskan  pada  kertas  cakram  steril, ketokonazol sebagai kontrol positif dan pelarut sebagai kontrol  negatif.Setelah  itu  dimasukkan  ke  inkubator untuk diinkubasi selama 3×24 pada suhu 37°C [9].

## 2.4 Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM)
Penentuan  KHM  dan  KBM  dilakukan  dengan metode  difusi  agar  dan  seri  konsentrasi  800  ppm.  900 ppm,1000 ppm, 1100 ppm, 1200 ppm, 1300 ppm, 1400 ppm,  1500  ppm.  Hasil  KHM  adalah  zona  bening  yang terbentuk selama 1×24.Hasil KBM dengan melihat zona
Yamin dan Hasnawati: Potensi Ekstrak Daun dan Batang Katola (Arcangelisia flava L. Merr) Sebagai Antimikroba
bening yang terbentuk selama 3×24 jam pada suhu 37ºC [9].
2.5 Identifikasi  Senyawa  Metabolit  Sekunder  Pada Batang dan Daun Katola

## Uji Alkaloid
Ekstrak  tanaman katola sebanyak  0,5  mg ditambahkan  0,5  mL  HCl  2%.  Campuran  dimasukkan pada  tabung  dan  ditambahkan  2-3  tetes  reagen Dragendrof. Terbentuknya endapan jingga pada tabung menunjukkan adanya alkaloid [10].

## Uji Terpenoid
Sebanyak  5  mg  ekstrak  dengan  2  mL  kloroform kemudian  ditambahkan  3  mL  asam  sulfat  pekat. Terbentuknya warna coklat kemerahan pada permukaan dalam larutan, menunjukkan adanya terpenoid [10].

## Uji Saponin
Sebanyak  2  g  ekstrak  dilarutkan  dengan  20  mL akuades.  Campuran  didihkan  menggunakan  penangas air,  kemudian  disaring.  Sebanyak  10  mL  filtrat dicampurkan dengan 5 mL akuades lalu dikocok hingga terbentuk busa stabil selama 10 menit [10].

## Uji Flavonoid
Sebanyak  1  mL  diuapkan  hingga  kering, dibasahkan sisanya dengan aseton, ditambahkan sedikit serbuk halus asam borat dan serbuk halus asam oksalat, dipanaskan di atas penangas air dan hindari pemanasan berlebihan.  Eter  ditambahkan  10  mL  pada  campuran yang  kemudian  diamati  di  bawah  sinar  UV 366 , berfluoresensi  kuning  intensif  menunjukkan  adanya flavonoid ([10].

## Uji Tanin
Ekstrak ditambah larutan FeCl 3 0,5 M. Terbentuknya  warna  hijau  kehitaman  atau  biru  tinta, kemudian  setelah  ditambahkan  larutan  H 2 SO 4 pekat, terbentuk  endapan  coklat  menunjukkan  adanya  tanin [10].

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1 Determinasi Tanaman
Determinasi terhadap tumbuhan yang akan diteliti dilakukan untuk mengetahui bahwa tumbuhan yang akan diteliti  benar-benar  tanaman katola (A.  flava  L.  Merr), sehingga  dapat  dicegah  terjadinya  kesalahan  dalam pengumpulan  bahan.  Berdasarkan  hasil  determinasi yang  dilakukan  di  Laboratorium  Biologi  FKIP Universitas  Halu  Oleo,  maka  menunujukkan  bahwa
tanaman yang dijadikan sampel penelitian adalah katola karena sesuai dengan kunci determinasi tanaman katola dengan    ciri  tanaman  berupa  terna,  memanjat,  batang mengandung  air,  bulat,  membelit,  kasar,  berwarna cokelat kehitaman, dalam batang berwarna kuning cerah dan  rasanya  pahit.  Bentuk  daun  bundar  telur  yang meruncing  di  bagian  ujung,  dengan  permukaan  daun hijau.  Perbungaan  malai,  terdapat  pada  batang  tua  atau di  ketiak  daun,  warna  bunga  kuning  pucat,  buah berbentuk bulat, berusuk 3, dengan permukaan berbulu berwarna hijau.

## 3.2 Ekstraksi
Ekstraksi dilakukan bertujuan  untuk  mendapatkan kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat pada  didalam  tanaman.  Simplisia  kering  diekstraksi dengan  cara  maserasi  menggunakan  pelarut  metanol selama  3x24  jam,  perendaman  sampel  selama  tiga  hari bertujuan  untuk  memaksimalkan  proses  maserasi. Dalam  waktu ini diharapkan  senyawa  yang terkandung dalam tanaman telah tertarik sempurna. Pada penelitian ini  proses  ekstraksi  maserasi  menggunakan  pelarut metanol didasarkan pada kemampuan pelarut ini dalam menarik  senyawa-senyawa  yang  terkandung  dalam sampel  tanaman  baik  yang  bersifat  polar  maupun nonpolar.  Hasil  perendaman  dipekatkan  dengan menguapkan  pelarut  menggunakan rotary  evaporator . Ekstrak  kental  batang  yang  diperoleh  adalah  sebanyak 5,37 g dengan nilai rendemen 1,07%, sedangkan ekstrak kental  daun  yang  diperoleh  adalah  sebanyak  45,34  g dengan nilai rendemen 9,06%.

## 3.3 Aktivitas Antimikroba dengan Metode Difusi Agar
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  metanol katola menunjukkan  bahwa  ekstrak  batang katola memiliki  potensi  sebagai  antimikroba  terhadap  bakteri B.  subtilis ATCC  6233, E.  coli ATCC  35218, S.  typhi YCTC, S.  dysenteriae , C.  albicans ATCC  10231, sedangkan terhadap bakteri S. aureus ATCC 25923 tidak menunjukkan  aktivitas  antibakteri  (Tabel  1).  Hasil tersebut menunjukkan bahwa ekstrak metanol katola ( A. flava L.  Merr)    mampu  menghambat  bakteri  bersifat Gram  negatif  dan  Gram  positif,  namun  kemampuan menghambat  pada  Gram  negatif  lebih  kuat  karena memiliki  potensi  sedang  dibandingkan  dengan  Gram positif  yang  memiliki  potensi  lemah.  Hal  ini  mungkin disebabkan  oleh  senyawa  yang  terkandung  dalam ekstrak katola sangat  sukar  menembus  peptidoglikan pada bakteri Gram positif karena struktur dinding selnya terdiri  dari  peptidoglikan  yang  sangat  tebal  sedangkan pada  bakteri  Gram  negatif  terdapat  peptidoglikan  yang tipis sehingga mampu ditembus oleh ekstrak katola .
Yamin dan Hasnawati: Potensi Ekstrak Daun dan Batang Katola (Arcangelisia flava L. Merr) Sebagai Antimikroba

## 3.4 Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM)
Penentuan  nilai  KHM  dan  KBM  menggunakan metode  difusi  agar.  KHM  adalah  konsentrasi  terkecil yang masih dapat menghambat pertumbuhan mikroba uji sedangkan KBM  merupakan konsentrasi tertinggi  yang mana  mampu  membunuh  pertumbuhan  mikroba uji.Parameter uji KHM adalah 1×24 jam terbentuk zona jernih,  tetapi  setelah  dibiarkan  selama  3×24  jam  maka pada zona jernih koloni bakteri kembali tumbuh, hal ini menunjukkan  pada  konsentrasi  tersebut  hanya  mampu menghambat  bakteri  tidak  membunuh  bakteri  tersebut, sedangkan  parameter  uji  KBM  adalah  3×24 jam  masih terbentuk  zona  hambat  yang  menunjukkan  pada konsentrasi  tersebut  mampu  membunuh  bakteri.Nilai KHM  ekstrak katola terhadap  pertumbuhan  mikroba adalah pada konsentrasi 1000 ppm sedangkan nilai KBM adalah pada konsentrasi 1500 ppm.

## 3.5 Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk  memberi gambaran  tentang  golongan  senyawa  yang  terkandung dalam  ekstrak katola .  Untuk  mengetahui  golongan senyawa  yang  ada  dalam  sampel  maka  ditambahkan pereaksi  untuk  menguji  ada  tidaknya  senyawa  tertentu dalam  sampel.  Hasil  uji  skrining  fitokimia  ekstrak metanol katola disajikan dalam Tabel 2 berikut.
Tabel 2. Hasil  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Metanol  Batang dan Daun Katola Golongan Senyawa Hasil Skrining Fitokimia Batang Daun Alkaloid + + Terpenoid + + Saponin + + Flavonoid + + Tanin + + Ket: + = positif mengandung senyawa metabolit sekunder

## 4. Kesimpulan
Ekstrak  metanol batang dan daun  katola  memiliki potensi  sebagai  antimikroba,  baik  sebagai  antibakteri maupun  sebagai  antijamur  dengan  KHM  dan  KBM masing-masing  sebesar  1000  ppm  dan  1500  ppm. Golongan  senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak methanol  batang  dan  daun  katola  antara  lain  alkaloid, terpenoid, saponin, flavonoid dan tanin.

## Daftar Pustaka
1. Adnyana IK, Sukandar EY, Sigit JI, Fisheri N, Insanu M. Efek  Ekstrak  Daun  Jambu  Biji  Daging  Buah  Putih  dan Jambu  Biji  Daging  Buah  Merah sebagai  Antidiare, Acta Pharmaceutica Indonesia , 2004, XXIX ; 18-20.
2. Wahyono H. Peran Mikrobiologi Klinik Pada Penanganan  Penyakit .  Orasi  Ilmiah  pada  Upacara Penerimaan  Jabatan  Guru    Besar  dalam  Ilmu Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.  Semarang:  Badan  Penerbit  Universitas Diponegoro, 2007. ISBN: 978.979.764.537.1
3. Keawpradub  N,  Dej-adisai  S,  Yuenyongsawad  S. Antioxidant  and  cytotoxic  activities  of  Thai  medicinal plants  named  Khaminkhruea:  Arcangelisia  flava, Coscinium blumeanum and Fibraurea tinctoria. Songklanakarin J. Sci. Technol ., 2005, 27(Suppl. 2) ; 455- 467.
4. Siwon F. A Pharmacognostical Study of Some indonesian Medicine  of  the  family  Menisprmaceae, Disertasi , Leiden: Drukkrij J H Pasmans B.V’s Gravenhage, 1982.
5. Sitepu  D,  Sutikno  P.  Peranan  tanaman  Obat  Dalam pengembangan  Hutan  tanaman  (The  Roles  of  Medicinal Plants  on  Plants  on  Plantation  Forest  Development), Buletin Kehutanan, 2001.
6. Harborne JB. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern
Menganalisa Tumbuhan , diterjemahkan oleh Padmawinata  K  dan  Soediro  I, Edisi  II,  Bandung:  ITB Press, 1996.
7. Rahmah  M,  Utami  R,  Fitri  NR.  Pemeriksaan  Residu Antibiotik  pada  Hati  Kerbau  dan  Ikan  Nila  dengan Metoda Difusi Agar, Jurnal Peternakan , 2010, 7(1) ; 29- 34.
Tabel 1. Hasil Uji Antimikroba Ekstrak Batang dan Daun Katola Ekstrak Zona Hambat (mm) S. aureus ATCC25923 B. subtilis ATCC 6233 E. coli ATCC 35218 S. typhi YCTC S. dysenteriae C. albicans ATCC 10231 Daun (1000 ppm) - - - - - 2,2 Batang (1000 ppm) - 4,5 2,3 5,7 6,2 4,4 Kontrol (+) 4 4 10 15,2 15 15,2 Kontrol (-) - - - - - - Ket:   + = memiliki aktivitas antimikroba
- = tidak memiliki aktivitas antimikroba
Yamin dan Hasnawati: Potensi Ekstrak Daun dan Batang Katola (Arcangelisia flava L. Merr) Sebagai Antimikroba
8. Waluyo L. Teknik Metode Dasar Mikrobiologi . Malang: UMM Press, 2008.
9. Noor  MS, Poeloengan  M,  Yulianti  T.  Analisis  Senyawa Kimia Sekunder dan Uji Daya Antibakteri Ekstrak Daun Tanjung  ( Mimuusops  elengi L)  Terhadap Salmonella
typhi dan Shigella  boydii , Prosiding  Seminar  Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner , 2006.
10. Sangi M, Runtuwene MRJ, Simbala HEI, Makang VMA. Analisis  Fitokimia  Tumbuhan  Obat  di  Kabupaten Minahasa Utara, Chem. Prog., 2008, 1(1) ; 47-53.