## DEGRADASI KOMPONEN SELULOSA, HEMISELULOSA, DAN PATI TEPUNG KULIT UBI KAYU MENJADI GULA REDUKSI OLEH Aspergillus niger ,
Trichoderma viride , DAN Acremonium sp. IMI 383068
Degradation of Cellulose, Hemicellulose, and Starch Component in Cassava Peels Flour into Reducing Sugar by Aspergillus niger, Trichoderma viride, and Acremonium sp. IMI 383068
Jay Jayus 1) * , Ahmad Nafi’ 1) , Anis Shabrina Hanifa 1)
1) Jurusan Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Jember Jalan Kalimantan 37, Kampus Tegal Boto Jember 68121
* Korespondensi Penulis: jayus.ftp@unej.ac.id

## ABSTRACT
As  the  solid  waste  produced  from  cassava  processing  industry  such  as  tapioca  factory  or  its derivatives, the cassava peel is potential to be use as a source of reducing sugar through hydrolysis process, since the  peels contains  a high amount of  starch and lignocellulose components. The more environmentally friendly enzymatic hydrolysis using several microorganisms will be introduced in this study as an alternative to avoid the unsafe acid hydrolysis. However, the hydrolysis process using a single  microorganism  is  not  efficient  since  the  hydrolytic  enzyme  produced  is  limited  to  a  single enzyme, while the component in the cassava peels to be hydrolyzed is diverse which include cellulose, lignin,  hemicellulose  and  starch.  Therefore,  it  is  necessary  to  optimize  the  hydrolysis  process  by combining  several  microorganisms  (A.  niger,  T.  viride  and  Acremonium  sp.  IMI  383068)  which produced  different  specificity  of  hydrolytic  enzyme  depending  on  the  substrate  available  in  the cassava peels. The aims of this research were to determine the effect of single and mixed culture on the amount of reducing sugar released during the simultaneous cultivation. The result showed that the use  of  simultaneous  mixed  cultures  during  hydrolysis  process  was  able  to  produce  higher  reducing sugar  compare  to  that  of  single  culture.  The  hydrolysis  of  cassava  flour  using  a  single  strain  of  A. niger, T.  viride and Acremonium sp. IMI 383068 respectively produced 4.86 g/L, 4.02 g/L, and 1.68 g/L  of  reducing  sugar,  while  the  hydrolysis  of  it  using  simultaneous  mixed  cultures  of  A.  niger,  T. viride, and Acremonium sp. IMI 383068 produced 7.23 g/L of reducing sugar.
Keywords : cassava peels, hydrolysis, reducing sugar

## PENDAHULUAN
Sebagai  salah  satu  negara  penghasil biomassa yang cukup melimpah, Indonesia banyak  menghasilkan  produk  samping hasil  pertanian  seperti  kulit  ubi  kayu, limbah  padat yang  dihasilkan  oleh agroindustri  pengolahan  seperti  pada industri  tapioka,  pengolahan  keripik,  dan turunannya. Menurut Artiyanti dan Soedjono (2011) kulit ubi kayu mengandung  43,63%  selulosa,  36,58% hemiselulosa,  7,65%  lignin,  dan  10,38% pati.  Kandungan  selulosa,  hemiselulosa, dan  pati  yang  cukup  tinggi  pada  kulit  ubi kayu  berpotensi  untuk  dijadikan  sumber gula  reduksi  melalui  proses  hidrolisis. Pada  proses  hidrolisis,  rantai  panjang
polisakarida  akan  dipecah  menjadi  rantai pendek atau karbohidrat sederhana melalui reaksi  kimia  menggunakan  air  (Zamora, 2005).  Limbah  biomassa  kulit  ubi  kayu yang  mengandung  polisakarida  berupa selulosa,  hemiselulosa,  dan  pati  akan dipecah  menjadi  karbohidrat  yang  lebih sederhana seperti gula reduksi.
Upaya  pencarian  substrat  untuk produksi  etanol  terus  dilakukan,  selain penggunaan  limbah  yang  mengandung gula  sederhana  seperti  molasses  (Jayus et al .,  2016; Noorvita et  al. ,  2016),  banyak penelitian yang mengarah pada pemanfaatan  limbah  biomassa  menjadi gula  reduksi  sebagai  substrat  pembuatan bioetanol  melalui  proses  hidrolisis,  baik
hidrolisis asam maupun hidrolisis enzimatik. Menurut Taherzadeh dan Karimi (2007), hidrolisis enzimatik memiliki
beberapa keuntungan dibandingkan  dengan  hidrolisis  kimiawi, antara  lain  tidak  terjadi  degradasi  gula hasil  hidrolisis,  kondisi  proses  yang  lebih lunak (suhu rendah, pH netral), berpotensi memberikan  hasil  yang  tinggi,  dan  biaya pemeliharaan  yang  relatif  rendah  karena tidak  ada  bahan  yang  korosif.  Hidrolisis secara enzimatik dapat dilakukan menggunakan  enzim atau mikroorganisme yang  dapat  menghidrolisis  polisakarida menjadi  monomer  sederhana  seperti  gula reduksi.  Jenis  mikroorganisme  yang  dapat digunakan dalam proses hidrolisis enzimatik  dari  limbah  biomassa  menjadi gula reduksi adalah kapang. Faiqoh (2016) melaporkan  bahwa  penggunaan  kapang A. niger dan T.  viride secara  bersamaan dalam menghidrolisis substrat tepung kulit ubi  kayu  dapat  meningkatkan  kadar  gula reduksi.  Penggunaan  kultur  campuran A. niger dan T.  viride secara  bersamaan  juga mampu  menghasilkan  gula  reduksi  lebih tinggi sebagai substrat pembuatan bioetanol dari tepung kulit ubi kayu (Jayus et al ., 2017). Acremonium sp. IMI 383068 diduga dapat dijadikan sebagai pendegradasi tepung kulit ubi kayu karena kemampuannya memproduksi enzim (1,6)- ß-glukanase (Jayus et al. , 2001) dan (1,3)- ß-glukanase (Jayus et al. , 2004).
Kendala  yang dihadapi dalam proses hidrolisis enzimatik menggunakan bantuan mikroorganisme adalah kemampuan mikroorganisme yang masih rendah dalam mendegradasi komponen selulosa, hemiselulosa,  dan  pati  sehingga  proses hidrolisisnya tidak efisien. Oleh karena itu perlu  adanya  kajian  mengenai  pengaruh kombinasi  penggunaan  kultur  campuran pada  proses  hidrolisis untuk  mengetahui apakah  penggunaan  kultur  tunggal  dan kultur  campuran  berpengaruh  terhadap gula reduksi yang dihasilkan.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat penelitian yang digunakan yaitu shaking incubator (WIS-20R-Berlin), inkubator  (Scientific  Series  2000-Jerman), laminar  air  flow (Crumair  Model  9005 FL-Espana),  autoklav  (SA  300VL-Japan), refrigerated  macrocentrifuge (Model-2-16 kl-Jerman),  spektrofotometer  (Genesys  10 UV  VIS-China), colony  counter (Funke Gerber-UK),  oven  (Memmert-Jerman), Blender  (National),  ayakan  Tyler  100 mesh,  digital  pH  meter,  dan glasswere penelitian.  Bahan  baku  dalam  penelitian yaitu  kulit  ubi  kayu  yang  diperoleh  dari UKM  pengolahan  keripik  singkong  di Desa Baratan-Jember, NaOCl (CV. LUMADA  bitha  SUKSES), mineral  salt solution (merck), yeast  extract (merck), asam  sitrat  (merck),  NaOH  (merck), Malt Extrat  Agar (merck),  NaCl  (merck),  dietil eter  (merck),  alkohol  (one  med),  HCl (merck), reagen dinitrosalisilic acid (DNS)  (himedia),  fenol  (merck),  H 2 SO 4
(merck).  Kultur  mikrorganisme  yang digunakan  adalah  kapang A.  niger,  T. viride yang  diperoleh  dari  Laboratorium Mikrobiologi  Pangan  dan  Hasil  Pertanian Fakultas Teknologi Pertanian, dan Acremonium sp.  IMI  383068  yang diperoleh  dari  Laboratorium Center  for Development Advanced Science and Technology (CDAST) Universitas Jember.

## Tahapan Penelitian

## Pembuatan tepung kulit ubi kayu
Kulit  ubi  kayu  segar  yang  diperoleh dari UKM pengolahan keripik singkong di Desa  Baratan-Jember  dibersihkan  kulit terluarnya  yang  berwarna  coklat  dan dilakukan  pencucian  hingga  bersih.  Kulit ubi  kayu  yang  telah  bersih  kemudian dilakukan pengeringan menggunakan sinar matahari selama ± 2 hari. Selanjutnya kulit ubi  kayu  yang  telah  kering  dilakukan pengecilan  ukuran  menggunakan  blender dan  dilakukan  pengayakan  menggunakan ayakan dengan ukuran 100 mesh .

## Delignifikasi tepung kulit ubi kayu
Delignifikasi dilakukan secara kimia dengan  menggunakan  larutan  NaOCl berdasarkan  metode  Assadam  (2014) dengan merendam 1000 g tepung kulit ubi kayu  dalam  10  L  larutan  NaOCl  1% selama  5  jam  pada  suhu  28 o C.  Setelah  itu dilakukan  pengendapan  untuk  diambil padatannya.  Endapan  yang  terbentuk dicuci menggunakan aquades hingga netral (pH  7).  Tepung  kulit  ubi  kayu  yang  telah didelignifikasi  kemudian  dianalisis  kadar air, kadar pati, dan kadar lignoselulosanya.

## Proses hidrolisis
Kulit ubi kayu terdelignifikasi sebanyak 2% (w/v) ditambah nutrisi untuk mengkondisikan  mikroorganisme  tumbuh optimal  yaitu berupa 0.3 g/L yeast  extract dan  50  mL/L mineral  salts  solution ,  dan dilakukan  pengaturan  pH  5,  kemudian disterilisasi  pada  121 o C  selama  15  menit. Setelah itu media didinginkan dan diinokulasi  dengan  kultur  tunggal  kapang A.  niger, T.  viride dan Acremonium sp. IMI 383068 dan kultur campuran dari ke 3 kapang  tersebut  sebanyak  10%  (v/v). Setelah  itu  diinkubasi  dalam shaking incubator pada suhu 30 o C dengan kecepatan  150  rpm  selama  60  jam  dan dilakukan  pengamatan  populasi  mikroba dan  kadar  gula  reduksi  secara  periodik setiap 12 jam sekali.

## Metode Analisis
Parameter  pengamatan  dilakukan pada  dua  bagian,  yaitu  pada  tepung  kulit ubi  kayu  dan  hidrolisat  kulit  ubi  kayu.
Parameter  pengamatan  pada  bahan  baku tepung  kulit  ubi  kayu  meliputi  kadar  air (Sudarmadji et  al .,  1997),  kadar  pati (Sudarmadji et  al .,  1997),  dan  kadar lignoselulosa  (Datta,  1981).  Selanjutnya, pengamatan  populasi  mikroba  (Ristiati, 2000)  pada  suspensi  hasil  hidrolisis. Suspensi yang dihasilkan kemudian dipisahkan menggunakan refrigerated macrocentrifuge untuk  diambil  filtratnya dan  dilakukan  analisis  kadar  total  gula terlarut  (Dubois et  al .,  1956),  dan  gula reduksi  (Miller,  1959).    Perhitungan efisiensi hidrolisis (Thalagala e t al ., 2009) dilakukan  pada  semua  hidrolisat  yang dihasilkan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Komposisi  Kimia  Tepung  Kulit  Ubi Kayu
Bahan  baku  utama  tepung  kulit  ubi kayu  yang  akan  dihidrolisis  sebelumnya diberi perlakuan delignifikasi untuk mengurangi kandungan lignin.
Karakteristik  tepung  kulit  ubi  kayu  yang digunakan  pada  penelitian  ini  sebagai substrat  hidrolisis  untuk  menghasilkan gula reduksi ditunjukkan pada Tabel 1 . Tepung kulit ubi kayu yang digunakan sebagai substrat hidrolisis untuk menghasilkan gula reduksi memiliki kadar air  sebesar  10,88%  (b/b)  ( Tabel  1 ). Menurut  Loebis  (2008)  kadar  air  bahan baku dijaga agar tidak meningkat sehingga tidak  terjadi  penurunan  porositas  dan  laju difusi  oksigen  yang  dapat  meyebabkan perpindahan panas dan massa berlangsung
Tabel 1 . Komposisi kimia tepung kulit ubi kayu Komponen Perlakuan (%) Tepung kulit ubi kayu tanpa delignifikasi Tepung kulit ubi kayu setelah delignifikasi Kadar air 12,09 ± 0,15 10,88 ± 0,14 Kadar pati 20,92 ± 0,57 11,55 ± 0,66 Kadar lignin 8,47 ± 0,15 3,04 ± 0,12 Kadar selulosa 32,15 ± 0,57 51,19 ± 0,63 Kadar hemiselulosa 19,15 ±0,83 16,93 ± 0,60
Degradasi Komposisi Selulosa, Hemiselulosa dan Pati.... Jurnal Agroteknologi Vol. 13 No. 01 (2019)
kurang  baik.  Kondisi  tersebut  akan mempengaruhi  pertumbuhan  miselium kapang  dan  aktivitas  enzim.  Sebelum digunakan  untuk  hidrolisis,  tepung  kulit ubi  kayu  terlebih  dahulu  diberi  perlakuan pretreatment berupa delignifikasi menggunakan  larutan  NaOCl  dengan konsentrasi  1%.  Delignifikasi  diperlukan untuk mengurangi kadar lignin, menurunkan  tingkat  kristalin  selulosa  dan meningkatkan porositas material (Sanchzes  dan  Cardona,  2008;  Hsu et  al ., 2010).
Delignifikasi  tepung  kulit  ubi  kayu menunjukkan  telah  terjadi  penurunan kadar  hemiselulosa  dari  19,15%  menjadi 16,93%,  kadar  lignin  dari  8,47%  menjadi 3,04%,  dan  penurunan  kadar  pati  dari 20,19% menjadi 11,55%. Hilangnya hemiselulosa, lignin, dan pati mengakibatkan  persentase  selulosa  tepung kulit  ubi  kayu  meningkat  dari  32,15% menjadi 51,19% ( Tabel 1 ). Dari hasil yang diperoleh  menunjukkan  bahwa  adanya proses  delignifikasi  dapat  mengurangi kadar  lignin,  kadar  hemiselulosa,  dan kadar  pati  sehingga  meningkatkan  kadar selulosa.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh Assadam (2014) melaporkan bahwa struktur  serat  selulosa  pada  kulit  kopi kering  lebih  berpori  setelah  delignifikasi menggunakan larutan NaOCl 1%.
Ruriani et al . (2012) juga mengindikasikan bahwa delignifikasi menggunakan  NaOCl  1%  selama  5  jam mampu mengubah struktur selulosa menjadi  lebih  amorf.  Selain  menurunkan kadar  lignin  dan  pati,  proses  delignifikasi juga mampu munurunkan kadar hemiselulosa  pada  tepung  kulit  ubi  kayu. Menurut  Ibrahim  (1998)  hemiselulosa mempunyai  rantai  polimer  yang  pendek dan tak berbentuk sehingga sebagian besar dapat larut dalam air.
Profil      Hidrolisis  Kultur  Tunggal    dan Kultur    Campuran    Kapang A.    niger , T.  viride ,  dan Acremonium sp.  IMI 383068
Penggunaan  kultur  campuran  dapat meningkatkan  hasil  gula  reduksi  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  penggunaan kultur  tunggal.  Hidrolisis  oleh  kultur kapang A. niger , T. viride , dan Acremonium sp.  IMI  383068  dengan perlakuan  perbedaan  penggunaan  kultur tunggal  dan  kultur  campuran  ditunjukkan pada Gambar 1 . Gambar  1 menunjukkan  bahwa hasil  pengamatan  populasi  kapang  pada  0 jam  rata-rata  sebanyak  1x10 6 CFU/mL menghasilkan    gula      reduksi      sebesar 0,26 g/L.  Populasi maksimum kapang dan gula  reduksi  berada  pada  waktu  hidrolisis 48  jam  pada  semua  perlakuan.  Populasi maksimum  hidrolisis  menggunakan  kultur tuggal A.  niger sebesar  9x10 6 CFU/mL menghasilkan      gula    reduksi    sebesar 4,86 g/L ( Gambar 1a ), hidrolisis menggunakan  kultur  tunggal T.  viride sebesar  10x10 6 CFU/mL  menghasilkan gula reduksi sebesar 4,02 g/L ( Gambar  1b ),  hidrolisis  menggunakan kultur  tunggal Acremonium sp.  IMI
383068 sebesar 4x10 6 CFU/mL
menghasilkan  gula  reduksi  sebesar  1,68 g/L  ( Gambar  1c ),  sedangkan  hidrolisis menggunakan kultur campuran A. niger , T. viride ,  dan Acremonium sp.  IMI  383068 sebesar  16x10 6 CFU/mL  menghasilkan gula reduksi sebesar 7,23 g/L
( Gambar 1d ).
(a) (b) (c) (d)
Gambar  1 .  Perubahan  kadar  gula  reduksi  ( ) dan populasi mikroba ( ) pada kultur
tunggal A.  niger (a), T.  viride (b), Acremonium sp.  IMI  383068  (c),  dan kultur  campuran A.  niger , T.  viride , Acremonium sp. IMI 383068 (d)
Kapang A. niger mampu menghasilkan  enzim  amilolitik  berupa amilase  (Fowler,  1988)  yang  dapat mendegradasi  pati  dan  selulase  (Fowler, 1988)  yang  dapat  mendegradasi  selulosa, serta menghasilkan xylanase (Villena et al. , 2007)  yang  dapat  mendegradasi  xylan (hemiselulosa). Kapang T. viride menghasilkan  selulase  berupa  endo-β-1,4- glukanase,  ekso-β-1,4-glukanase,  dan  β- 1,4-glukosidase  (Crueger  dan  Crueger, 1982) yang dapat mendegradasi komponen selulosa;  dan  menghasilkan  endo-β-1,4- xylanase  (Ujiie et  al .,  1991)  yang  mampu mendegradasi xylan (hemiselulosa).
Kapang Acremonium sp.  IMI  383068 menghasilkan  enzim  β-1,3-glukanase  dan β-1,6-glukanase  (Jayus  et  al.,  2001  & 2004) dan sebagian besar Acremonium sp. dapat menghasilkan enzim selulase (Astutik et  al .,  2007).  Enzim-enzim  inilah yang  bersinergi  menghidrolisis  komponen polisakarida  dalam  tepung  kulit  ubi  kayu. Gambar 1 menunjukkan adanya kecenderungan  kadar  gula  reduksi  yang meningkat  dengan  penggunaan  kultur campuran dari tiga jenis kapang dibandingkan  dengan  penggunaan  kutur tunggal.  Penggunaan  kultur  campuran dalam proses hidrolisis mampu menghasilkan  enzim  yang  lebih  kompleks dibandingkan dengan hidrolisis menggunakan kultur tunggal.
Campuran  enzim  yang  dihasilkan dari beberapa kapang mampu memperbaiki  kerja  endo-  dan  ekso- glukanase, serta glukosidase menjadi lebih seimbang  untuk  mendegradasi  selulosa (Anwar,  2010).  Demikian  juga  xylanase dapat  mendegradasi  xylan  (hemiselulosa) serta  enzim  amilolitik  berupa  amilase mampu  mendegradasi  pati  sehingga  gula reduksi  yang  dihasilkan  jauh  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  penggunaan  kultur tunggal dalam proses hidrolisis.
0 4 8 12 16 20 0 2 4 6 8 0 12 24 36 48 60 72 P o p u lasi k ap an g 1 0 6 (C F U /m L ) Gu la red u k si (g /L ) Waktu hidrolisis (jam) 0 4 8 12 16 20 0 2 4 6 8 0 12 24 36 48 60 72 P o p u lasi k ap an g 1 0 6 (C FU /m L ) Gu la red u k si (g /L ) Waktu hidrolisis (jam) 0 4 8 12 16 20 0 2 4 6 8 0 12 24 36 48 60 72 P o p u lasi k ap an g 1 0 6 (C FU /m L ) Gu la red u k si (g /L ) Waktu hidrolisis (jam) 0 4 8 12 16 20 0 2 4 6 8 0 12 24 36 48 60 72
P o p u lasi k ap an g 1 0 6 (C FU /m L ) Gu la red u k si (g /L ) Waktu hidrolisis (jam)
Efisiensi  Hidrolisis  oleh Aspergillus niger , Trichoderma
viride , dan Acremonium sp. IMI 353068 Efisiensi  hidrolisis  diperoleh  dengan cara  membagi  total  gula  terlarut  dan  gula reduksi  yang  dihasilkan  selama  proses hidrolisis  dengan  berat  total  selulosa, hemiselulosa, dan pati  yang terkandung di dalam  bahan  tepung  kulit  ubi  kayu. Efisiensi  hidrolisis  ditunjukkan  pada Tabel 2 .
Penggunaan  kultur  tunggal  dan kultur campuran pada proses hidrolisis dari 3  jenis  kapang  memberikan  hasil  efisiensi hidrolisis  yang  berbeda.  Hidrolisis  oleh A. niger , T.  viride ,  dan Acremonium sp.  IMI 383068  selama  48  jam  menghasilkan  gula reduksi  optimum  ( Tabel  2 ).  Efisiensi hidrolisis tertinggi diperoleh dari perlakuan  penggunaan  kultur  campuran dari  3  jenis  kapang  dalam  satu  waktu proses  hidrolisis  yaitu  sebesar  45,39%. Penggunaan  kultur  tunggal A.  niger, T. viride, dan Acremonium sp.  IMI  383068 masing-masing menghasilkan  efisiensi hidrolisis secara berurutan sebesar
30,51%; 25,24%; dan 10,55%. Penggunaan kultur campuran kapang
diduga  mampu  melengkapi    enzim  yang bekerja selama hidrolisis, sehingga komponen selulosa, hemiselulosa, dan pati yang  didegradasi  lebih  banyak,  sedangkan penggunaan  kultur  tunggal  hanya  mampu mendegradasi  beberapa  komponen  karena enzim  yang  dihasilkan  tidak  beragam seperti pada penggunaan kultur campuran, Kenyataan ini sesuai dengan Tabel 2 , yang
menunjukkan  apabila  gula  reduksi  yang dihasilkan tinggi, maka efisiensi hidrolisisnya  juga  tinggi.  Faiqoh  (2016) juga  melaporkan  hal  yang  sama  bahwa efisiensi  hidrolisis  meningkat  seiring dengan  meningkatnya  gula  reduksi  yang dihasilkan.

## KESIMPULAN
Hidrolisis menggunakan kultur campuran  dari  3  jenis  kapang A.  niger , T. viride ,  dan Acremonium sp.  IMI  383068 secara simultan mampu menghasilkan gula reduksi  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan penggunaan  kultur  tunggal  dari  ketiganya. Hidrolisis  menggunakan  kultur  tunggal A. niger , T.  viride ,  dan Acremonium sp.  IMI 383068  masing-masing  secara  berurutan menghasilkan  gula  reduksi  sebesar  4,83; 4,02;  dan  1,68  g/L,  sedangkan  hidrolisis menggunakan kultur campuran A. niger , T. viride ,  dan Acremonium sp.  IMI  383068 secara simultan mampu menghasilkan gula reduksi  sebesar  7,23  g/L.  Efisiensi hidrolisis tertinggi diperoleh pada perlakuan  penggunaan  kultur  campuran dari 3 jenis kapang yaitu sebesar 45,39%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  PT. Indofood  Sukses  Makmur,  Tbk.  melalui bantuan  dana  penelitian  tugas  akhir program  Indofood  Riset  Nugraha  tahun 2017/2018.
Tabel 2 . Efisiensi hidrolisis pada pengamatan ke-48 jam Perlakuan Kadar gula reduksi (g/L) Kadar selulosa + hemiselulosa + pati (g) Efisiensi hidrolisis (%) Kultur A. niger 4,86 15,93 30,51 Kultur T. viride 4,02 15,93 25,24 Kultur Acremonium sp. IMI 383068 1,68 15,93 10,55 Kultur campuran A. niger, T. viride, dan Acremonium sp. IMI 383068 7,23 15,93 45,39

## DAFTAR PUSTAKA
Anwar,  N.  2010.  Peningkatan  unjuk  kerja hidrolisis enzimatik jerami padi menggunakan  campuran  selulase  kasar dari Trichoderma ressei dan Aspergillus niger . Makara Sains . 14 (2): 113-116.
Artiyani,  A.,  dan  Soedjono,  E.S.  2011. Bioetanol  dari  limbah  kulit  singkong melalui proses hidrolisis dan fermentasi dengan Saccharomyces cerevisiae . “Prosiding Seminar Nasional Manajemen  Teknologi  XIII”  Institut Teknologi Sepuluh Nopember, Surabaya. Assadam,  A.  2014.  “Delignifikasi  Secara Kimia  Kopi  Robusta  Hasil  Samping Pengolahan Kopi Metode Kering Sebagai  Substrat  Bioetanol”.  Skripsi. Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Jember, Jember.
Astutik, R. P., Kuswytasari, N.D., dan Shovitri, M.  2007.  Uji  Aktivitas  Enzim  Selulase dan  Xylanase  Isolate  Kapang  Tanah Wonorejo,  Surabaya. Paper .  Jurusan Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, ITS, Surabaya.
Crueger, W, dan Crueger, A. 1982. Biotechnology. Madison: Science Tech, Inc., Madison.
Datta,  R.  1981.  Acidogenic  fermentation  of lignocellulose acid yield and convertion of  components . Biotechnology  and Bioengineering , 23: 2167-2170.
Dubois,  M.,  Gilles,  K.A.,  Hamilton,  J.K., Rabers,  P.A.,  dan  Smith,  F.  1956. Colometric method for determination of sugar and related substances. Analytical
Chemistry , 28 (3): 350-356.
Faiqoh, H. 2016. “Efisiensi Hidrolisis Tepung
Kulit Ubi Kayu Menggunakan
Aspergillus  niger dan Trichoderma viride ”.  Skripsi.  Fakultas  Teknologi Pertanian Universitas Jember, Jember.
Fowler, M.W. 1988. “Enzyme Technology” in Biotechnology for Engineers, Biological System  in  Technological  Processes , Edited:  Scragg,  A.  H.,  John  Wiley  & Sons, New York.
Hsu, T.C., Guo, G.L., Chen, W.H., dan Hwang, W.S.  2010.  Effect  of  dilute  acid pretreatment  of  rice  straw  on  structural properties  and  enzymatic  hydrolysis. Bioresource  Technology, 101:  4907- 4913.
Ibrahim,  M.  1998.  Clean  fractination  of biomassa  –  steam  explosion  and extraction.  Faculty  of  The  Virginia
Polytechnic
Institute and State
University.
Jayus, J., McDougall, B.M., and Seviour, R.J. 2001. Purification and properties of a (1 → 6)-ß-glucanase  from Acremonium sp. IMI  383068. Enzyme  and  Microbial Technology , 29: 194-200.
Jayus, J., McDougall, B.M., and Seviour, R.J.
2004. Purification and
characterization  of  the  (1 → 3)-β- glucanases  from Acremonium sp.  IMI 383068. FEMS  Microbiology  Letters , 230: 259-264.
Jayus, J., Nurhayati., Mayzuhroh, A., Arindhani, S., dan Caroenchai, C. 2016. Studies  on  bioethanol  production  of commercial  baker’s  and  alcohol  yeast under  aerated  culture  using  sugarcane molasses  as  the  media. Agriculture  and Agricultural  Science  Procedia ,  9:  493- 499.
Jayus, J., Suwasono, S., dan Wijayanti, I. 2017. Produksi bioetanol secara  SHF dan SSF menggunakan Aspergillus niger , Trichoderma  viride ,  dan new  aule instant  dry  yeast pada  media  kulit  ubi kayu. Jurnal  Agroteknologi ,  11  (01):
61-68.
Loebis, E.H. 2008. “Optimasi  Proses Hidrolisis Kimiawi dan Enzimatis Tandan  Kosong  Kelapa  Sawit  Menjadi Glukosa  untuk  Produksi  Etanol”.  Tesis. Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Miller, G. L. 1959. Use of dinitrosalycilic acid reagent  for  determination  of  reducing sugar. Analysis  Chemical ,  (31):  426- 428.
Noorvita,  I.V.,  Jayus,  J.,  dan  Nurhayati,  N.
2016. Produksi bioetanol oleh
Saccharomyces cerevisiae FNCC 3210 pada media molases dengan kecepatan agitasi dan aerasi yang berbeda. Jurnal Agroteknologi , 10 (02): 184-192.
Ristiati,  N.  P.  2000. Pengantar  Mikrobiologi Umum .  Proyek  Pengembangan  Guru Sekolah  Menengah  IBRD  Loan  No. 3979, Jakarta.
Ruriani, E., Meryandini, A., dan Sunarti, T.C. 2012. Enzymatic hydrolysis of
delignified  corncob  using  combined enzyme. International  Journal  of  Food Nutrition and Public Health , 5: 107-127.
Sanchzes,  O.O.,  dan  Candona,  C.A.  2008.
Review:  Trends  of  biotechnological production of fuel ethanol from different feedstock. Bioresource  Technology ,  99 (13): 5270-5295.
Sudarmadji,  S.,  Haryono,  B.,  dan  Suhardi. 1997. Prosedur  Analisa  Untuk  bahan Makanan dan Pertanian . Liberty, Yogyakarta.
Taherzadeh, M.J., dan Karimi, K. 2007. Acid- Based Hydrolysis Prosesses  for Ethanol from  Lignocellulosic  Materials.  Isfahan
University of Technology:  Departement of Chemical Engineering.
Thalagala, T.A.T.P., Kodama, S., Mishima, T., Isono,  N.,  Furujyo,  A.,  Kawasaki,  Y., dan  Hisamatsu,  M.  2009.  Study  on  a new  preparation  od  D-Glucose  rich fractions  from  various  lignocelluloses through  a  two-step  extraction  with sulphuric  acid. The  Japanese  Society  of Applied Glycoscience , 56: 1-6.
Ujiie, M., Roy, C., dan M. Yaguchi, M. 1991. Low-molecular-weight  xylanase  from Tricoderma viride. Applied and
Environmental  Mycrobiology ,  57  (6): 1860-1862.
Villena,  Grett,  K.,  dan  Correa,  P.W.  2007. Production  of  lignocellulolytic  enzyme by Aspergillus niger biofilms at variable water  activities. Electronic  Journal  of Biotechnology Chile , 10 (1): 124-140.
Zamora,  A.  2005. Carbohydrate  -  Chemical Structure. http://www.scientificpsychic.com/fitness/ carbohydrates. [Diakses tanggal 25 Desember 2016].