## Aktivitas Antibakteri Fraksi-Fraksi Daun Bidara (Ziziphus mauritiana)
Antibacterial Activity of Bidara Leaf Fractions (Ziziphus mauritiana)
Haeria 1 , Nursyamsi Dhuha 1 , Risnawati Habra 2
1 Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar, Jl H.M. Yasin Limpo No.36 Kecamatan Sombaopu Kabupaten Gowa, Sulawesi Selatan
2 Mahasiswa Prodi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar, Jl H.M. Yasin Limpo No.36 Kecamatan Sombaopu Kabupaten Gowa, Sulawesi Selatan
Kontak : haeria.doloking@uin-alauddin.ac.id

## ABSTRAK
Telah dilakukan penelitian mengenai aktivitas antibakteri fraksi-fraksi daun Bidara (Ziziphus Mauritiana) terhadap  bakteri Staphilococus  aureus dan Eschericia  coli. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  aktivitas antibakteri  dari fraksi daun bidara, fraksi yang paling aktif sebagai antibakteri serta golongan senyawa dalam fraksi yang memiliki aktivitas antibakteri . Sampel diekstraksi  dengan  methanol  dan dipartisi  dengan pelarut  etil  asetat Fraksinasi  daun  Bidara  menggunakan  metode  Kromatografi  Cair  Vakum  dalam  berbagai  perbandingan  eluen. Fraksinasi  ini  menghasilkan  5  gabungan fraksi  A,  B,  C,  D  dan  E.  Ekstrak  dan Fraksi  diuji  aktivitasnya  sebagai antibakteri. Ekstrak metanol membentuk zona hambat bening yang diamati di sekitar paper disk yaitu 8,93 mm - 9,5 mm.  Fraksi-fraksi  daun  Bidara  memiliki  aktivitas  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dengan  zona  hambat  yaitu  12,4  mm  –  14,1  mm  pada  konsentrasi  3000  ppm.  Fraksi  B memberikan aktivitas antibakteri yang terbaik, sehingga diuji lanjutan dengan KLT-bioautografi dan identifikasi golongan  senyawa.  Hasil  identifikasi  golongan  senyawa,  aktif  antibakteri  dari  fraksi  daun  bidara  menunjukkan adanya senyawa steroid, senyawa organik, dan flavonoid.
Kata kunci: Daun Bidara, Metode KCV (Kromatografi Cair Vakum), Staphylococus aureus, Escherichia coli.

## ABSTRACT
Research on the antibacterial activity of Bidara leaf (Ziziphus mauritiana) fractions on bacteria has been carried out. The aims of the research is to determine the activity of Bidara leaf fraction in inhibiting the growth of Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli,  and  the  most  active  fraction  as  an  antibacterial.  Samples  were extracted  with  methanol.  Fractionation  of  Bidara  leaves  using  the  Vacuum  Liquid  Chromatography  method. Extracts and fractions were tested as antibacterial. Methanol extract  formed a clear inhibitory zone which was observed around the paper disk with inhibiting zone 8,93 mm – 9,5 mm. The fractions of Bidara leaves have the activity of inhibiting the growth of Staphylococcus aureus and Escherichia coli with inhibition zones 12,4 mm – 14,1 mm at concentration 3000 ppm. Fraction B was tested further on TLC-bioautography and identification. The antibacterial activity was also shown by Fraction B. The results of identification of the compound group, the bidara leaf fraction shows that the group of compounds that act as antibacterial agents are steroids, organic compounds, and flavonoids.
Keywords:  Bidara  Leaves,  KCV  Method  (Vacuum  Liquid  Chromatography),  Staphilococus  aureus,  Escherichia coli.

## PENDAHULUAN
Dalam beberapa tahun terakhir, mikroorganisme  patogen  telah  berkembang menjadi resisten dalam merespon penggunaan obat  obat  antimikroba  yang  biasa  digunakan dalam  pengobatan  penyakit  infeksi.  Kondisi
ini  mengakibatkan  timbulnya  efek  samping dan  resistensi  yang  tidak  diinginkan  dari antibiotik tertentu
(Sivasankari &
Sankaravadivoo, 2015). Situasi ini mendorong para  ilmuwan  untuk  mencari  senyawa antimikroba  baru  dari  berbagai  sumber
termasuk dari tanaman obat. Penapisan ekstrak tanaman  dan  produk  tanaman  untuk  aktivitas antimikroba telah menunjukkan bahwa tanaman  merupakan  sumber  potensial  agen anti-infeksi  baru  (Elumalai,  Ramachandran, Thirumalai,  &  Vinothkumar,  2011;  Kumar,
Jhadwal,  Lal,  &  Singh,  2012;  Peixoto  et  al., 2011; Valentin Bhimba et al., 2010)
Antimikroba tanaman menawarkan senyawa  baru  yang  berpotensi  karena  dapat menggantikan  antibiotik  sintetis  dan  obat- obatan  (Kothari,  Shah,  Gupta,  Punjabi,  & Ranka,  2010).  Senyawa  fitokimia  yang dihasilkan tanaman memiliki agen terapi yang penting, yang diwakili oleh berbagai senyawa seperti alkaloid, glukosida, flavanoid, musilago,  enzim,  dan  lain  lain.  Bahkan sekarang,  obat-obatan  dari  tanaman  tingkat tinggi  terus  menempati  ceruk  penting  dalam kedokteran modern (Sivasankari &
Sankaravadivoo, 2015).
Meskipun,  ratusan  spesies  tanaman  telah diuji  untuk  aktivitas  antimikroba,  sebagian besar belum dievaluasi secara memadai. Salah satu tanaman obat tersebut adalah Bidara atau nama  latin Ziziphus  mauritiana Lam.,  family
Rhamnaceae yang  umumnya  dikenal  sebagai bidara dan ditemukan hampir di semua bagian negara.  Najafi,  2013  telah  melakukan penelitian  mengenai  skrining  fitokimia  dan aktivitas antimikroba dari ekstrak daun Bidara. Penelitian ini melaporkan bahwa daun Bidara mengandung berbagai jenis metabolit sekunder  seperti  glikosida,  tanin,  fenol,  dan saponin.  Ekstrak  metanol  Daun  Bidara
menunjukkan aktivitas yang signifikan terhadap Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli (Najafi, 2013).
Pengujian aktivitas antibakteri dari ekstrak kulit  batang  Bidara , telah  dilakukan  oleh Sammera  dan  Mandakini  pada  tahun  2014. Hasilnya menunjukkan bahwa ekstrak methanol kulit batang Bidara memiliki potensi sebagai  sumber  obat  antibakteri  (Sameera  & Mandakini, 2015). Pada tahun 2016, Abdallah et  al juga  telah  menyelidiki  aktivitas antioksidan  dan  antibakteri  dari  ekstrak methanol  dari  daun  Bidara dan  melaporkan bahwa  beberapa  konstituen  fitokimia  bioaktif seperti  saponin,  tanin,  alkaloid,  senyawa fenolik,  terpenoid  dan  flavonoid  terkandung dalam  daun  Bidara.  Ekstrak    metanol  daun Bidara  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang signifikan  terhadap Bacillus  cereus ATCC 10876 dan Proteus vulgaris (isolat multi drug resistance );  dan  derajat  aktivitas  yang bervariasi terhadap strain bakteri  lain (Mohamed  Abdallah,  Ramadan  Elsharkawy,
& Ed-dra, 2016).
Penelitian kali ini bertujuan untuk melakukan uji aktivitas antibakteri dari fraksi- fraksi  Ziziphus  mautiriana  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .
Pengujian  dilakukan  dengan  metode  KLT bioautografi sehingga golongan senyawa yang memberikan aktivitas penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri uji dapat diketahui.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Sampel yang digunakan adalah daun bidara
(Ziziphus mauritiana ). Daun bidara diperoleh dari  Desa  Bontokassi  kabupaten  Pangkep,
Sulawesi Selatan.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini, yaitu  bejana  maserasi,  cawan  petri, chamber , laminar air flow (LAF), rotary evaporator dan seperangkat  alat  kromatografi  cair  vakum. Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini, yaitu  air  suling, dimetil  sulfoksida ,  serbuk silika gel GF 254, kultur bakteri
Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli,
medium  NA  ( nutrient  agar ), paper  disk ,
metanol, n-heksan, etil asetat, reagen aluminium  klorida  (AlCl 3 )  5%,  reagen  asam sulfat  (H 2 SO 4 )  10%,  reagen  besi  (III)  klorida (FeCl 3 ), reagen Dragendorf, reagen
Lieberman-Bouchard,  dan  lempeng  silika  gel aluminium.

## Ekstraksi Sampel
Ekstraksi sampel dilakukan dengan menggunakan  pelarut  metanol.  Sampel  daun bidara    yang  telah  kering  diserbukkan  dan diekstraksi  dengan  menggunakan  metode maserasi. Sampel dimasukkan ke dalam wadah maserasi.  Wadah  maserasi  ditutup  dan disimpan  selama  1  x  24  jam  di  tempat  yang terlindung dari sinar matahari langsung sambil sesekali diaduk. Selanjutnya disaring,
dipisahkan  antara  ampas  dan  filtrat.  Filtrat metanol yang diperoleh kemudian dikumpulkan dan diuapkan cairan penyarinya
dengan rotary  evaporator sampai  diperoleh ekstrak metanol kental. Selanjutnya dilakukan uji aktivitas antibakteri dari ekstrak methanol.

## Partisi Padat Cair
Ekstrak metanol kental ditimbang sebanyak 18  g  kemudian  dilarutkan  dengan  etil  asetat 100  ml  sedikit  demi  sedikit,  digerus  dalam lumping  lalu  disentrifugasi  pada  kecepatan 3000 rpm selama 5 menit sehingga didapatkan ekstrak  metanol  larut  etil  asetat.  Ekstrak metanol  larut  etil  asetat  dipisahkan.  Ampas dipartisi  kembali  sampai  larutan  berwarna bening.

## Skrining Pelarut (Penentuan eluen)
Pencarian  eluen  profil  KLT  ekstrak  hasil partisi  yang  larut  etil  asetat  dari  ekstrak metanol  daun  bidara  menggunakan  eluen heksan : etil asetat masing-masing perbandingan  15:1;  10:1;  5:1;  1:1.  Kemudian diamati penampakan noda dibawah lampu UV 254  nm  dan  366  nm  serta  penampakan  noda pada  H 2 SO 4 dengan  cara  disemprotkan  asam sulfat 10% pada lempeng kemudian dipanaskan dalam oven hingga noda terbentuk. Dari keempat perbandingan ini yang menunjukkan  penampakan  noda  yang  baik yaitu pada perbandingan 5:1.

## Fraksinasi
Fraksinasi dilakukan dengan metode KCV (Kromatografi  Cair  Vakum)  yang  telah dikembangkan  oleh  Targel  et  al  (1979)  dan dimodifikasi seperlunya. Serbuk silika
ditimbang sebanyak 20 g. Ekstrak daun bidara yang larut etil asetat juga ditimbang sebanyak 3 g. Digerus ekstrak dengan 1/4 bagian silika, dan  sisa  silika  dimasukkan  ke  dalam  kolom kaca  sambil  dimampatkan.  ekstrak  dan  silika dimasukkan  ke  dalam  kolom  kaca  dan dimampatkan  dilapisi  dengan  kertas  saring pada  bagian  atas,  kemudian  dihubungkan dengan pompa vakum. Setelah itu ditambahkan pelarut atau eluen sebanyak 120 ml  dengan  perbandingan  tertentu,  lalu ditampung dalam mangkuk, kemudian diuapkan.  Hasil  fraksinasi  kemudian  dielusi pada  lempeng  KLT  dan  diamati  dibawah lampu UV 254 nm dan 366 nm dan didapatkan fraksi  terbaik.  Fraksi-fraksi  yang  memiliki noda yang sama atau hampir sama digabungkan.  Dari  perlakuan  ini  diperoleh gabungan fraksi sebanyak 5 yaitu Fraksi A, B,
C,  D,  dan  E.  Selanjutnya  gabungan  fraksi  ini digunakan dalam pengujian aktivitas antiakteri.

## Peremajaan Bakteri Uji
Bakteri  uji  digunakan  dalam  penelitian  ini meliputi Escherchia  coli dan Staphylococcus aureus. Mikroba  berasal  dari  kultur  koleksi
Laboratorium Mikrobiologi Universitas Islam Negeri  Alauddin  Makassar  yang  diremajakan dalam medium Nutrient Agar (NA) miring dan diinkubasi selama 3 x 24 jam pada suhu 37 ° C.

## Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Fraksi-

## Fraksi
Uji  aktivitas  dilakukan  dengan  metode Kirby-Bauer  yang  dimodifikasi  (Hudzicki,
2012). Sebanyak  20  μl  mikroba  uji ditambahkan  10  ml  medium  NA.  Campuran dibuat  dalam  botol  coklat  lalu  dituangkan  ke dalam  cawan  petri  secara  aseptis  dengan digoyang-goyangkan agar merata dan dibiarkan memadat. Larutan sampel gabungan fraksi  diteteskan  diatas paper  disk dengan konsentrasi 3000 ppm. Paper disk dimasukkan ke  dalam  cawan  petri,  di  atas  permukaan media NA. Cawan petri diinkubasi selama 1 x 24  jam  pada  suhu  37 o C.  Aktivitas  ditentukan berdasarkan  diameter  zona  bening  disekitar paper  disk, diukur  dengan  menggunakan jangka  sorong.  Gabungan  Fraksi  yang menunjukkan zona hambat terbesar merupakan  fraksi  teraktif  yaitu  Fraksi  B  dan digunakan dalam uji KLT bioautografi
Pengujian KLT Bioautografi dan

## Identifikasi Senyawa
Pengujian  KLT  bioautografi  merujuk kepada metode Goodall and Levi (1964) dalam Choma, 2014  (Choma  &  Grzelak,  2014).
Sebanyak 20 μl bakteri uji ditambahkan 10 mL medium nutrient  agar .  Campuran  dibuat dalam botol cokelat lalu dituangkan ke dalam cawan  petri  secara  aseptis  dengan  digoyang- goyangkan  agar  merata  dan  dibiarkan memadat.  Lempeng  KLT  dari  Fraksi  B diletakkan  di  atas  permukaan  medium  yang memadat. Setelah 30 menit lempeng (kromatogram) diangkat dan dikeluarkan dari medium  yang  akan  selanjutnya  diinkubasi selama  1  x  24  jam  pada  suhu  37°C.  pada lempeng  KLT  yang  lain  disemprot  dengan
pereaksi  golongan  yaitu  Lieberman  Burchard (steroid), H 2 SO 4 (senyawa organik) dan AlCl 3
(Flavonoid)  untuk  identifikasi  golongan senyawa.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi Daun bidara
Ekstraksi  daun  bidara  sebanyak  800  g dilakukan dengan metode maserasi menggunakan  cairan  penyari  metanol  dan diperoleh ekstrak metanol kering sebanyak 18 g  sebagaimana  ditunjukkan  pada  lampiran tabel  1.  Hasil  skrining  aktivitas  antibakteri ekstrak  daun  bidara  dengan  menggunakan ekstrak methanol pada konsentrasi 3000 ppm, menunjukkan  zona  hambat  dengan  diameter 8,93  mm  untuk Staphylococcus  aureus (SA)
dan  9,5  mm  untuk  bakteri Escherichia  coli
(ES). Hasilnya dapat dilihat pada tabel 2.

## Partisi  Padat  Cair  dan  Skrining  Pelarut

## (Penentuan eluen)
Partisi dilakukan terhadap ekstrak metanol dengan  menggunakan  pelarut  etil  asetat sehingga  diperoleh  ekstrak  metanol  larut  etil asetat.  Kelarutan  senyawa  dalam  satu  fase
pada suhu tertentu tergantung pada kemiripan kepolarannya dengan fase cair, menggunakan prinsip  "like  dissolve  like"  artinya  pelarut polar  akan  melarutkan  senyawa  polar,  dan pelarut  nonpolar  akan  melarutkan  senyawa nonpolar.  Semakin  besar  konstanta  dielektrik suatu  senyawa  maka  kepolarannya  akan semakin  tinggi  (Lubis,  A.  H.,  1994).  Dari partisi  yang  dilakukan,  diketahui  bahwa ekstrak  larut  etil  asetat  sebanyak  10  g, sehingga kandungan senyawa semi polar lebih banyak dibandingkan dengan senyawa polar.
Tahap  selanjutnya  dilakukan  pencarian eluen  profil  KLT  ekstrak  hasil  partisi  yang larut pada pelarut etil asetat yaitu ekstrak  etil asetat pada daun bidara menggunakan eluen n- heksan : etil asetat masing-masing perbandingan 15:1; 10:1; 5:1; 1:1 dari keempat perbandingan  ini  yang  telah  didapatkan  hasil penampakan  noda  yang  baik  yaitu  pada perbandingan  5:1  yaitu    pada  UV  254  nm terlihat  6  noda  yang  nampak  dengan  nilai  Rf adalah  0,09;  0,16;  0,327;  0,45;  0,50;  0,654 sedangkan  pada  UV  366  nm  terlihat  6  noda yang  nampak  dengan  nilai  Rf  adalah  0,09; 0,16; 0,327; 0,45; 0,50; 0,654.

## Fraksinasi
Fraksinasi  pada  prinsipnya  adalah  proses penarikan senyawa pada partisi larut etil asetat 3 g dengan menggunakan dua macam pelarut
Tabel 1. Hasil ekstraksi daun Bidara
Sampel Berat sampel Berat ekstrak Rendamen % Daun Bidara 800 g 163 g 18
Tabel 2. Hasil pengujian aktivitas antibakteri ekstrak Ekstrak Bakteri Konsentrasi ppm Diameter 1 (mm) Diameter 2 (mm) Diameter 3 (mm) Rata-rata (mm) Metanol SA 3000 8,39 9,2 9,2 8,93 EC 9,3 9,7 9,5 9,5 Ket : EC : Escherichia coli SA : Staphylococcus aureus
yang  tidak  saling  bercampur.  Pelarut  yang umumnya  dipakai  untuk  fraksinasi  adalah  n- heksan,  etil  asetat,  dan  metanol.  Untuk menarik  lemak  dan  senyawa  non  polar digunakan n-heksan, etil asetat untuk menarik senyawa semi polar, sedangkan metanol untuk menarik  senyawa-senyawa  polar.  Dari  proses ini dapat diduga sifat kepolaran dari senyawa
yang akan dipisahkan. Sebagaimana diketahui bahwa  senyawa-senyawa  yang  bersifat  non polar akan larut dalam pelarut yang non polar sedangkan  senyawa-  senyawa  yang  bersifat polar  akan  larut  dalam  pelarut  yang  bersifat polar juga (Mutiasari, IR, 2012).
Pada  penelitian  ini,  fraksinasi  dilakukan dengan  menggunakan  metode  Kromatografi
Tabel 3. Hasil fraksi gabungan
Fraksi gabungan Fraksi Eluen Penampak bercak UV254 nm UV366 nm Rf Warna Rf Warna A 1 H:E 20:1 - - 0,8 kuning 2 H:E 15:1 0,47 0,72 0,76 Kuning Kuning Kuning 0,8 Berfluoresensi biru B 3 H:E 15:1 0,45 0,6 0,72 Berfluorosensi Hitam Berfluorosensi Hitam Berfluorosensi Hitam 0,09 0,74 Berfluorosensi merah muda Berfluorosensi merah muda 4 H:E 10:1 0,45 0,61 0,67 Berfluorosensi Hitam Berfluorosensi Hitam Berfluorosensi Hitam 0,54 Berfluorosensi biru C 5 H:E 10:1 0,45 Berfluorosensi Hitam 0,54 Berfluorosensi biru 6 H:E 5:1 0,34 0,45 Hijau Berfluorosensi Hitam 0,32 Warna merah D 7 H:E 5:1 0,05 0,25 0,32 Hijau Hijau Berfluorosensi Hitam 0,05 0,23 0,34 Berfluorosensi merah Berfluorosensi Hitam Berfluorosensi Hitam 8 H:E 1:1 0,72 0,14 0,2 0,25 0,34 Hijau Kuning Kuning Hitam Hitam 0,072 0,14 0,2 0,25 0,27 Merah Merah Merah Ungu Ungu 9 H:E 1:5 0,72 0,12 0,21 Kuning Kuning Hitam 0,05 0,23 0,4 Biru Biru Biru
E
10 H:E 1:10 - - - - 11 etil asetat 50 ml - - - - 12 metanol 50 ml - - - - 13 E:M 10:1 - - - - 14 E:M 1:1 - - - -
Penampak bercak Lampu UV 254 nm, Lampu UV 366 nm H : Heksan,  E : Etil Asetat,  M : Metanol
cair  vakum  (KCV).  Metode  ini  lebih  banyak digunakan  untuk  fraksinasi  sampel  dalam jumlah besar. Kolom yang digunakan biasanya terbuat dari gelas dengan lapisan berpori pada bagian  bawah.  Ukuran  kolom  bervariasi tergantung  ukurannya.  Kolom  disambungkan dengan  penampung  eluen  yang  dihubungkan dengan  pompa  vakum.  Pompa  vakum  akan menghisap  eluen  dalam  kolom,  sehingga proses  pemisahan  berlangsung  lebih  cepat.
Penggunaan  tekanan  dimaksudkan  agar  laju aliran eluen meningkat sehingga meminimalkan terjadinya proses difusi karena ukuran  silika  gel  yang  biasanya  digunakan pada  lapisan  kromatografi  KLT  sebagai  fasa diam  dalam  kolom  yang  halus  yaitu  200-400 mesh. Kolom yang digunakan berukuran lebih pendek dari pada kolom kromatografi gravitasi dengan  diameter  yang  lebih  besar  (5-10 cm).
Kolom  KCV  dikemas  kering  dalam  keadaan
vakum  agar  diperoleh  kerapatan  kemasan maksimum.  Sampel  partisi  larut  etil  asetat yang  akan  dipisahkan  biasanya  sudah diadsorbsikan  ke  dalam  silika  kasar  terlebih dahulu  agar  pemisahannya  lebih  teratur  dan menghindari  sampel  langsung  menerobos  ke dinding kaca tanpa melewati adsorben terlebih dahulu, yang dapat berakibat gagalnya proses pemisahan.
Pelarut n-heksan dituangkan ke permukaan penyerap yang sebelumnya sudah dimasukkan sampel.  Kolom  dihisap  perlahan-lahan  ke dalam  kemasan  dengan  memvakumkannya. Hasil  pengelompokan  fraksi  dapat  dilihat dalam  tabel  3.  Kolom  dielusi  berturut-turut dengan  eluen  heksan:  etil  asetat  (20:1;  15:1; 10:1;  5:1  da  1:1),  selanjutnya  dengan  eluen heksan : etil asetat (1:10), etil asetat: metanol (10:1; 1:1), serta eluen tunggal etil asetat dan metanol.  Dari  fraksi  ini  diamati  nilai  Rf-nya
Tabel 4. Pengujian Hasil Gabungan fraksi daun bidara
Fraksi Bakteri Konsentrasi ppm Diameter 1 (mm) Diameter 2 (mm) Diameter 3 (mm) Rata-rata A SA 3000 9,1 8,2 8,7 8,6 EC 7,1 6,2 7 6,7 B SA 3000 11,9 13,6 12 12,5 EC 14 15,1 13,4 14,1 C SA 3000 11,8 13,4 12 12,4 EC 14,2 13 13,6 13,6 D SA 3000 11 12 12 11,6 EC 10,9 10,5 11,2 10,8 E SA 3000 9 9,6 11 9,86 EC 11,2 12 11,5 11,56
Tabel 5. Hasil uji KLT-Bioautografi dan identifikasi senyawa fraksi  B daun bidara ( Ziziphus mauritiana ) Mikroba Uji Rf Pereaksi Golongan senyawa Escherichia coli 0,72 0,72 0,72 LB H 2 SO 4 AlCl 3 Steroid Senyawa organik Flavonoid Staphylococcus aureus - - -
dan dilakukan pengelompokan fraksi berdasarkan nilai Rf. Dari pengelompokan ini kemudian diperoleh 5 fraksi, yaitu fraksi A, B,
C, D, dan E.

## Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Fraksi

## Fraksi
Fraksi gabungan yaitu fraksi A, B, C, D dan E  kemudian  dilakukan  pengujian  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Escherchia  coli
(EC) dan Staphylococcus  aureus  (SA) .  Hasil yang diperoleh dapat dilihat pada tabel 4. Dari hasil  ini  diketahui  bahwa  gabungan  Fraksi  B merupakan  fraksi  teraktif  dengan  diameter zona hambat 12,5 mm untuk SA dan 14,1 mm untuk EC. Hal ini menunjukkan bahwa Fraksi B  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  sangat poten/sangat kuat. Menurut Baron, at al, 1994, suatu senyawa dikatakan sangat poten sebagai antimikroba  jika  memiliki  zona  hambat  >  8 mm, poten dengan diameter zona hambat > 6 sampai < 8 mm, dan dikatakan tidak poten jika memiliki  zona  hambat  <  6  mm  (Elgayyar,
2001).

## Hasil uji KLT-Bioautografi dan identifikasi Golongan senyawa
Pengujian  selanjutnya  adalah  Bioautografi dari fraksi B sebagai fraksi yang menunjukkan aktivitas antibakteri yang terbaik.  Tujuan dari KLT bioautografi ini adalah untuk mengetahui golongan senyawa dalam fraksi yang memberikan aktivitas antibakteri. Hasil Identifikasi  golongan  senyawa  dan  nilai  Rf dapat  dilihat  pada  tabel  5.  Hasil  uji  KLT  ini kemudian  diidentifikasi  terhadap  kandungan senyawa  flavonoid,  steroid  dan  senyawa organik.  Hasilnya menunjukkan bahwa fraksi B  mengandung  steroid  dengan  pereaksi  (LB) yang  dibuktikan  dengan  munculnya  warna noda hijau kebiruan. Senyawa organik dengan pereaksi  (H 2 SO 4 ) , yang  dibuktikan  dengan munculnya warna kuning, coklat dan flavonoid ditunjukkan dengan pereaksi (AlCl 3 ) yang  dibuktikan  dengan  munculnya  warna berfluoresensi hijau.

## KESIMPULAN
Fraksi  B  dari  ekstral  larut  etil  asetat menunjukkan  aktivitas  antibakteri  terbaik terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococus aureus, dan Escherichia  coli dengan  zona hambat berturut turut 12,5 mm dan 14,1 mm. Fraksi  B  mengandung  golongan  senyawa steroid, flavonoid dan senyawa organik.

## DAFTAR PUSTAKA
Baron EJ, Peterson LR, Finegold SM. Methods for testing antimicrobial effective-ness. In:
Bailey  and  Scott’s  diagnostic  mi- crobiology, 9th ed. (pp 168-193). St. Louis: Mosby-Year Book, Inc., 1994.
Choma,  I.  M.,  &  Grzelak,  E.  M.  (2014). Bioautography  detection  in  thin-layer chromatography  Bioautography  detection in  thin-layer  chromatography. Journal  of Chromatography A , 1218 (19), 2684–2691. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2010.12.0 69
Elgayyar, M., Draughon, F.A., Golden, D., A, &  Mount,  J.,  R,  2001,  Antimicrobial
Activity of Essential Oils from Plant against Selected  Pathogenic  and  Saprophytic Microorganism, Journal of Food Protection, 64 (7), 1019-1024. Elumalai, E. K., Ramachandran, M.,
Thirumalai, T., & Vinothkumar, P. (2011). Antibacterial  activity  of  various  leaf extracts  of  Merremia  emarginata. Asian Pacific  Journal  of  Tropical  Biomedicine , 1 (5), 406–408. https://doi.org/10.1016/S2221-
1691(11)60089-0
Hudzicki,  J.  (2012).  Kirby-Bauer  Disk Diffusion  Susceptibility  Test  Protocol Author Information. American Society For Microbiology , (December 2009), 1–13.
Kothari, V., Shah, A., Gupta, S., Punjabi, A.,
&  Ranka,  A.  (2010).  Revealing  the antimicrobial potential of plants.
International  Journal  of  Biosciences  and Technology , 3 (1), 1–20.
Kumar, A., Jhadwal, N., Lal, M., & Singh, M.
(2012).  Antibacterial  activity  of  some medicinal plants used against UTI causing pathogens. International  Journal  of  Drug Development and Research , 4 (2), 278–283. Lubis, A. H. 1994. Pemeriksaan Fitokimia dan
Uji  Pendahuluan  Aktivitas  Turbinaria ornata J. Agardh. Sekolah Farmasi. Institut Teknologi  Bandung.  Bandung.  (abstrak tesis).
Mohamed
Abdallah,
E.,
Ramadan
Elsharkawy,  E.,  &  Ed-dra,  A.  (2016).
Biological  activities  of  methanolic  leaf extract  of  Ziziphus  mauritiana. Biosci. Biotech. Res. Comm. , 9 (4), 605–614.
Mutiasari,  IR.  2012.  Identifikasi  Golongan Senyawa  Kimia  Fraksi  Aktif.  Jurnal Fitokimia.
Najafi,  S.  (2013).  Phytochemical  screening and antibacterial activity of leaf Extract of Ziziphus  mauritiana  Lam. International
Research  Journal  of  Applied  and  Basic Sciences .
Peixoto, J. R. O., Silva, G. C., Costa, R. A., de Sousa Fontenelle, J. res L., Vieira, G. H. F., Filho,  A.  A.  F.,  &  Vieira,  R.  H.  S.  dos  F. (2011).  In  vitro  antibacterial  effect  of aqueous  and  ethanolic  Moringa  leaf extracts. Asian Pacific Journal of Tropical
Medicine , 4 (3), 201–204. https://doi.org/10.1016/S1995-
7645(11)60069-2
Sameera,  N.  S.,  &  Mandakini,  B.  P.  (2015). Investigations into the antibacterial activity of  Ziziphus  mauritiana Lam.  and Ziziphus xylopyra  (Retz.)  Willd.  In International Food Research Journal (Vol. 22).
Sivasankari,  M.  .,  &  Sankaravadivoo,  A.
(2015).  Studies  on  Antimicrobial  Activity of  Ziziphus  mauritania. International Journal of Ayurveda and Pharma Research , 3 (7), 52–55.
Targett,  N.  M.,  Kilcoyne,  J.  P.,  &  Green,  B. (1979). Vacuum liquid chromatography: an alternative  to  common  chromatographic methods. The Journal of Organic Chemistry , 44 (26), 4962–4964. https://doi.org/10.1021/jo00394a045
Valentin Bhimba, B., Meenupriya, J., Joel, E.
L.,  Naveena,  D.  E.,  Kumar,  S.,  &
Thangaraj, M. (2010). Antibacterial activity and characterization of secondary metabolites  isolated  from  mangrove  plant Avicennia officinalis. Asian Pacific
Journal  of  Tropical  Medicine , 3 (7),  544–
546. https://doi.org/10.1016/S1995-
7645(10)60131-9