## UJI TOKSISITAS EMPAT DAUN TANAMAN OBAT DENGAN METODE
BST (BRINE SHRIMP TEST)

## TOXICITY TEST ON FOUR PLANT LEAVES MEDICINE WITH BST (BRINE SHRIMP TEST) METHOD
Dewy Resty Basuki, Fita Sari
Info Artikel Abstrak Latar  belakang: Uji Brine  Shrimp  Test (BST) merupakan  metode  awal  yang digunakan  untuk  melihat  adanya  toksisitas.  Metode  ini  juga  dapat  digunakan untuk  skrining  aktivitas  farmakologi  dari  ekstrak  tanaman  obat.  Daun  adalah bagian  dari  tanaman  obat  yang  banyak  digunakan. Tujuan: Mengetahui toksisitas  empat  daun  tanaman  obat  yang  telah  diketahui  aktivitas farmakologinya. Metode: Uji  toksisitas  ekstrak  etanol  empat  daun  tanaman obat  dengan  metode Brine  Shrimp  Test (BST) . Jumlah  sampel  total  untuk penelitian EEDGC 300 ekor larva Artemia salina Leach. Tiap kelompok terdiri dari  sepuluh  ekor  larva  dengan  lima  replikasi  dengan  konsentrasi  ekstrak EEDGC  0,  60,  120,  180,  240,  dan  300  ppm.  Kekasaran  permukaan  diukur dengan Surface Roughness Tester dan hasilnya diuji statistik dengan One  Way Anova . Hasil: Ekstrak  daun  gelombang  cinta,  EEDM,  EEDTA,  dan  EEDT memiliki  efek  toksik  terhadap  larva Artemia  salina Leach  dengan  harga  LC 50 berturut-turut adalah 216,5; 10,7; 249 ; dan 208,6 ppm. Simpulan  dan saran: EEDGC,  EEDM,  EEDTA,  dan  EEDT  berpotensi  toksik  terhadap Artemia salina Leach. Penelitian selanjutnya diharapkan dapat membandingkan dengan minuman  bersoda  karena  dapat  menyebabkan  abrasi  dan  menurunkan kekerasan permukaan.

## Sejarah Artikel:
Diterima: 7 Maret 2017 Disetujui: 1 Juni 2017
Dipublikasikan: 16 Juni 2017
Kata Kunci:
Uji toksisitas, Obat Tinggalkan, metode
BST
Keywords :
Toxicity test, Leave Medicine, BST method

## Abstract
Background: Brine Shrimp Test (BST) was the original method used to seeing toxicity.  This  method  could  was  used  for  screening  pharmacological  activity. Most of the medicine plant part used was the leaves. Objective: Known toxicity of four leaves medicine plants that have been known pharmacological activity. Methods: The toxicity test four type leaves ethanol extracts of medicinal plants by the method of Brine Shrimp Test (BST). The number of samples for research EEDGC total of 300 larvae of Artemia salina Leach. Each group consisted of ten  larvae  with  five  replication  and  each  group  with  concentrations  of  0,  60, 120,  180,  240,  and  300  ppm.  Measured  surface  roughness  surface  roughness tester and the results do one way ANOVA statistical test. Results: EEDGC have toxic  effects  on  the  larvae  Artemia  salina  with  LC50  216,5  ppm,  EEDM  toxic effect against with 10,7 ppm, to EEDTA have toxic effects with LC50 249 ppm, and  to  EEDT  has  an  effect  on  Artemia  salina  Leach. Conclusions  and suggestion: EEDGC,  EEDM,  EEDTA,  and  EEDT  potentially  toxic.  Future research is expected to compare with soft drinks because it can cause abrasion and reduce surface hardness.
Dewy Resty Basuki | Uji Toksisitas Empat Jenis Daun Tanaman Obat ….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 1 Tahun 2017

## PENDAHULUAN
Kekayaan  alam  Indonesia  sangat beragam,  baik  tanaman  maupun  hewan. Tembelekan merupakan tanaman tegak dengan  ketinggian  0,5-4,0  meter.  Daun tembelekan  mengandung  zat  aktif  seperti flavonoid,  saponin,  alkaloid,  tanin,  dan minyak atsiri. Daun tembelekan memiliki rasa yang  pahit,  dingin,  serta  beracun  tetapi memiliki khasiat menurunkan panas,
menghilangkan nyeri, dan gatal 1 . Hasil penelitian Hidayati 2
menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun tembelekan  memiliki  kandungan  saponin  dan flavonoid  yang  berfungsi  sebagai  anti inflamasi pada tikus putih ( Rattus norvegicus Berkenhout,  1769)  dengan  dosis  720  mg/kg BB.  Ekstrak  daun  majapahit  memiliki kandungan  senyawa  biaktif  seperti  polifenol dan  saponin 3 .  Hasil  uji  kandungan  daging buah majapahit menunjukkan adanya senyawa alkaloid, tanin, dan flavonoid 4 . Daun dan  akar  tanaman  gelombang  cinta  juga memiliki  kandungan  senyawa  aktif  berupa saponin, flavonoid dan tanin, sedangkan daun tanjung  mengandung  senyawa  aktif  alkaloid, tanin, dan saponin 5 .
Toksikologi  merupakan  ilmu  yang mempelajari  tentang  racun  pada  mahkluk hidup.  Potensi  toksisitas  terbagi  menjadi beberapa ukuran, salah satunya Letal Concentration (LC). Letal  Concentration merupakan kematian yang timbul akibat suatu senyawa  yang  dihasilkan  oleh  sekelompok hewan  uji  setelah  diberikan treatment . Brine Shrimp  Lethality Test (BST)  merupakan metode  uji  toksisitas  yang  digunakan  untuk mengetahui kandungan senyawa bioaktif yang yang berpotensi sebagai antikanker 6 . Berdasarkan uraian tersebut
dilakukanlah    penelitian  ini  yang  bertujuan untuk  mengetahui  toksisitas  daun  tanaman tanjung,  tembelekan,  gelombang  cinta,  dan
majapahit  dengan  metode Brine  Shrimp Lethality Test (BST).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan rancangan eksperimen sungguhan ( true experimental ). Pengujian dengan daun tanjung  dibagi  menjadi  tujuh  kelompok  yaitu kelompok kontrol, ektrak etanol daun tanjung (EEDTA)  dengan  dosis  50,  100,  200,  300, 400  dan  500  ppm.  Pengujian  dengan menggunakan daun tembelekan dibagi menjadi enam kelompok yaitu kontrol negatif, ekstrak  etanol  daun  tembelekan  (EEDT) dengan dosis 50, 100, 200, 300 dan 500 ppm. Penelitian  pada  daun  gelombang  cinta (EEDGC)  dibagi  menjadi  enam  kelompok yaitu EEDGC dengan konsentrasi 0, 60, 120, 180, 240, dan 300  ppm, sedangkan treatment dengan  daun  majapahit  dibagi  menjadi delapan  kelompok  yaitu  kelompok  kontrol negatif, EEDM dengan dosis 5, 10, 20, 40, 80, 160, dan 320 ppm.

## Pembuatan Ekstrak
Daun  tanaman  tanjung,  gelombang cinta,  tembelekan,  dan  majapahit  diserbuk hingga halus kemudian diayak. Sebanyak 750 ml  etanol  70%  ditambahkan  ke  dalam  300 gram serbuk daun. Proses maserasi dilakukan selama  5x24  jam  dan  sesekali  diaduk.  Filtrat ditampung,  kemudian  residu  diremaserasi dengan  etanol  70%  sebanyak  250  ml  (5x24 jam). Filtrat dipekatkan dengan menggunakan waterbath hingga didapatkan ekstrak kental.

## Karakterisasi Simplisia
Karakterisasi  simplisia mencakup pemeriksaan organoleptik, mikroskopik, susut pengeringan, kadar air, kadar abu total, kadar abu  larut  air,  kadar  abu  tidak  larut  asam, kadar sari yang larut dalam air, dan kadar sari yang  larut  dalam  etanol 7 .  Skrining  fitokimia dan KLT (Kromatografi Lapis Tipis)
Dewy Resty Basuki | Uji Toksisitas Empat Jenis Daun Tanaman Obat ….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 1 Tahun 2017
dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan senyawa yang ada pada ekstrak.

## Uji Fitokimia
1) Flavonoid
Sampel  dilarutkan  dalam  etanol absolut dan dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian  ditambahkan  2  tetes  HCl  pekat. Sampel tersebut dihangatkan di atas penangas selama  15  menit,  selanjutnya  dilakukan pengamatan. Perubahan warna sampel menjadi  merah  kuat atau  violet  menunjukkan adanya kandungan flavonoid 8 .
2) Saponin
Sebanyak  1mg  sampel  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan  1ml aquadest .  Kocok  dan  didiamkan.  Buih  yang terbentuk  dan  tidak  hilang  selama  30  menit menunjukkan adanya kandungan saponin 8 .
3) Alkaloid Sampel  ditambah  dengan  HCl  2M dan  dipanaskan  di  atas  penangas  sambil diaduk, kemudian didinginkan hingga mencapai suhu kamar. NaCl serbuk ditambahkan  pada  sampel  kemudian  diaduk dan  disaring.  Filtrat  yang  didapat  ditambah dengan  HCl  2M  hingga  volume  tertentu. Filtrat dibagi dalam 2 tabung reaksi. Tabung I ditambah  reagen  Wagner  dan  tabung  II sebagai blanko. Terbentuknya endapan menunjukkan  adanya  kandungan  alkaloid. Pereaksi  Wagner  dibuat  dengan  2  gram  KI dan  1,27  gram  Iodium,  kemudian  dilarutkan ke dalam aquadest sampai volume 100 mL 8 .
4) Tanin Ekstrak dididihkan dengan 20 mL air lalu disaring, kemudian ditambahkan beberapa  tetes  Feriklorida  1%.  Terbentuknya warna  coklat  kehijauan  atau  biru  kehitaman menunjukkan  adanya  kandungan  senyawa tanin 8 .
Pembuatan Larutan Baku
Ekstrak  daun  tembelekan  ditimbang sebanyak 100 mg, kemudian ditambahkan air laut  hingga  mencapai  volume  100  mL sehingga diperoleh
larutan dengan
konsentrasi  1000  ppm.  Larutan  tersebut kemudian  dimasukkan  ke  dalam  botol  vial sebanyak 10 mL dengan konsentrasi  50, 100, 200, 300, 500, dan 0 ppm (kontrol negatif).

## Persiapan Hewan Uji
Telur Artemia salina Leach
dimasukkan ke dalam akuarium berisi air laut yang  dilengkapi  dengan  penerangan  cahaya lampu dan aerator. Telur akan menetas dalam waktu 24-48 jam yang disebut dengan nauplii dan  siap  untuk  digunakan  sebagai  target  uji toksisitas.

## Pelaksanaan Uji Toksisitas
Pelaksanaan  uji  toksisitas  dilakukan dengan  memasukkan  10  ekor  larva  udang Artemia  salina Leach  berumur  48  jam  ke dalam  vial  yang  tiap  vial  berisi  ekstrak  daun tanjung  dibagi  menjadi  tujuh  kelompok  yaitu kontrol, ekstrak etanol daun tanjung
(EEDTA)  dengan  konsentrasi  50,  100,  200,
300,  400  dan  500  ppm.  Pengujian  dengan menggunakan daun tembelekan dibagi menjadi enam kelompok yaitu kontrol negatif, ekstrak  etanol  daun  tembelekan  (EEDT) dengan konsentrasi 50, 100, 200, 300 dan 500 ppm.  Penelitian  pada  daun  gelombang  cinta (EEDGC)  dibagi  menjadi  enam  kelompok yaitu EEDGC dengan konsentrasi 0, 60, 120, 180, 240, dan 300 ppm, sedangkan treatment dengan  daun  majapahit  dibagi  menjadi delapan  kelompok  yaitu  kelompok  kontrol negatif, EEDM dengan konsentrasi 5, 10, 20, 40,  80,  160,  dan  320  ppm.  Kontrol  negatif dibuat  tanpa  penambahan  sampel  ekstrak yaitu  hanya  terdiri  dari  air  laut  dan  larva udang.  Tiap  kelompok  perlakuan  dilakukan replikasi  sebanyak  lima  kali.  Vial  diletakkan di bawah penerangan cahaya lampu kemudian dihitung  jumlah  larva  udang Artemia  salina
Dewy Resty Basuki | Uji Toksisitas Empat Jenis Daun Tanaman Obat ….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 1 Tahun 2017
Leach  yang  mati  setelah  24  jam  dengan  alat bantu  kaca  pembesar.  Kriteria  standar  untuk menilai  kematian  larva  udang Artemia  salina Leach  adalah  apabila  larva  udang  tidak menunjukkan pergerakan selama 10 detik saat dilakukan observasi 9 .
Analisis Data Uji statistik berdasarkan uji parametrik, dilakukan dengan cara menentukan nilai LC50 dari EEDT, EEDGC, EEDM  dan  EEDTA  terhadap  larva Artemia salina. Hasil  yang  diperoleh    dicari  regresi liniernya. Kemudian dikorelasikan dengan uji Pearson pada SPSS20, dilanjutkan dengan uji Kolmogrov Smirnov.

## HASIL PENELITIAN
Tabel 1. Pengujian pada Artemia salina Leach Ʃ Larva Sebelum Pengujian EEDM EEDTA EEDT EEDGC Replikasi 1 10 10 10 10 Replikasi 2 10 10 10 10 Replikasi 3 10 10 10 10 Replikasi 4 10 10 10 10 Replikasi 5 10 10 10 10 Ʃ Larva yang mati - - - - Rata-rata ± SD - - - - Persentase Kematian - - - - Keterangan :  Ekstrak  Etanol  Daun  Majapahit  (EEDM),  Ekstrak  Etanol  Daun  Tanjung (EEDTA),  Ekstrak  Etanol  Daun  Tembelekan  (EEDT),  Ekstrak  Etanol  Daun Gelombang Cinta (EEDGC).
Tabel 2 . Pengujain pada Artemia salina Leach Kontrol EEDM EEDTA EEDT EEDGC Replikasi 1 0 0 0 0 Replikasi 2 0 0 0 0 Replikasi 3 0 0 0 0 Replikasi 4 0 0 0 0 Replikasi 5 0 0 0 0 Ʃ Larva yang mati - - - - Rata-rata ± SD - - - - Persentase Kematian - - - -
Tabel 3. Pengaruh Berbagai Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Tanjung terhadap Larva
Artemia salina Leach Konsentrasi Ekstrak (ppm) EEDTA 50 100 200 300 400 500 Replikasi 1 2 2 4 5 7 8 Replikasi 2 1 3 5 5 6 9 Replikasi 3 2 4 5 5 7 8 Replikasi 4 2 3 4 6 8 9 Replikasi 5 2 4 4 6 8 10 Ʃ Larva yang mati 9 16 22 27 36 44 Rata-rata ± SD 1,8 ± 0,44  3,2 ± 0,83  4,4 ± 0,54  5,4 ± 0,54  7,2 ± 0,83  8,8 ±
Dewy Resty Basuki | Uji Toksisitas Empat Jenis Daun Tanaman Obat …..

## Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 1 Tahun 2017
0,83 Persentase Kematian 18 32 44 54 72 88
Tabel 4. Pengaruh Berbagai Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Tembelekan terhadap Larva Artemia salina Leach Konsentrasi Ekstrak (ppm) EEDT 50 100 200 300 500 Replikasi 1 2 3 6 7 10 Replikasi 2 1 3 5 6 9 Replikasi 3 1 3 5 7 10 Replikasi 4 2 4 6 8 10 Replikasi 5 3 3 4 7 9 Ʃ Larva yang mati 9 16 26 35 48 Rata-rata ± SD 1,8 ± 0,44 3,2 ± 0,83 4,4 ± 0,54 5,4 ± 0,54 7,2 ± 0,83 Persentase Kematian 18 32 44 54 72
Tabel 5. Pengaruh Berbagai Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Majapahit terhadap Larva
Artemia salina Leach Nama Konsentrasi ekstrak (ppm) Total larva sebelum pengujian Total larva mati (masing-masing replikasi 10 larva) Rep 1 Rep 2 Rep 3 Kontrol 0 30 0 0 0 EEDM 5 30 4 4 4 10 30 5 5 5 20 30 6 6 6 40 30 7 7 7 80 30 8 8 8 160 30 9 9 9 320 30 10 10 10
Tabel 6. Pengaruh Berbagai Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Gelombang Cinta terhadap Larva Artemia salina Leach Replikasi Kontrol (-) Jumlah kematian larva tiap konsentrasi (ppm) Volume akhir media (ml) 60 120 180 240 300 5 1 0 1 2 3 5 7 5 2 0 2 2 4 6 7 5 3 0 2 3 4 6 7 5 4 0 2 3 4 6 7 5 5 0 2 2 4 6 7 5 Total kematian 0 9 12 19 29 35 Rata-rata kematian 0 1,8 2,4 3,8 5,8 7 Persentase kematian 0 18 24 38 58 70 PEMBAHASAN Metode  ekstraksi  yang  dipilih  dalam penelitian  ini  adalah  maserasi.  Hal  tersebut
Dewy Resty Basuki | Uji Toksisitas Empat Jenis Daun Tanaman Obat ….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 1 Tahun 2017
dikarenakan  pelaksanaanya  yang  sederhana dan untuk menghindari kemungkinan terjadinya penguraian zat aktif yang terkandung  dalam  sampel  oleh  pengaruh suhu,  karena  metode  ini  tidak  menggunakan proses  pemanasan.    Pelarut  yang  digunakan adalah  etanol  70%.  Pelarut  ini  dipilih  karena etanol 70% sangat efektif untuk mengekstraksi  bahan  aktif  dengan  hasil  yang optimal dengan kontaminasi minimal dari zat lain  dalam  cairan  pengekstraksi.  Ekstrak kental  menghasilkan  rendemen  sebanyak 12,162%.  Kriteria  ekstrak  kental  yang  baik adalah  apabila  ekstrak  tersebut  memiliki kandungan  air  maksimal  sebanyak  30% 10 . Pemeriksaan simplisia dilakukan untuk  mengetahui  spesifikasi  simplisia  yang diteliti.
Spesifikasi dilakukan
untuk
mengetahui  kejelasan  bahan  asal  atau lingkungan  dan  proses  pembuatan  simplisia yang  berpengaruh  pada  kandungan  senyawa aktif. Karakterisasi simplisia mencakup pemeriksaan organoleptik, mikroskopik, susut pengeringan, kadar air, kadar abu total, kadar abu  larut  air,  kadar  abu  tidak  larut  asam, kadar sari yang larut dalam air, dan kadar sari yang  larut  dalam  etanol 7 .  Skrining  fitokimia dan  kromatografi  lapis  tipis  dilakukan  untuk mengetahui  kandungan  senyawa  yang  ada pada  ekstrak.  Pemeriksaan  mikroskopik dilakukan  untuk  melihat  komponen  spesifik dari  daun  majapahit  yaitu  sisik  kelenjar  dan stomata  tipe  parasitik.  Susut  pengeringan dilakukan  dengan  tujuan  untuk  memberikan batasan  maksimal  (rentang)  tentang  besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan. Susut pengeringan daun majapahit  sebesar  8,6%.  Uji  kadar  air dilakukan dengan tujuan memberikan batasan minimal  atau  rentang  tentang  besarnya kandungan  air  dalam  bahan.  Kadar  air  daun majapahit adalah 9,61%.
Hasil  pemeriksaan  tersebut  dapat digunakan  sebagai  acuan  dalam  membuat ekstrak  daun  majapahit  yang  baik,  tidak berjamur,  atau  ditumbuhi  mikroorganisme lain.  Uji  kadar  abu  dilakukan  dengan  tujuan memberikan  gambaran  kandungan  mineral pada sampel daun majapahit sampai terbentuknya  ekstrak  dengan  melihat  kadar abu  total,  kadar  abu  tidak  larut  asam,  dan kadar  abu  larut  air  dengan  nilai  masing- masing  adalah  9,69%,  17,84%,  dan  44,93%. Kadar ekstrak yang larut dalam air dan etanol menunjukkan jumlah konstituen yang terekstraksi  oleh  pelarut  dalam  kondisi spesifik.  Hasil  uji  kadar  ekstrak  yang  larut dalam air 3,034% dan etanol 50%; 70%; 96% masing-masing  senilai  0,922%;  3,229%;  dan 2,975%.
Berdasarkan  hasil  uji  fitokimia  yang dilakukan  pada  penelitian  ini  didapatkan bahwa  ekstrak  etanol  daun  tembelekan mempunyai  kandungan  senyawa  flavonoid, saponin,  alkaloid,  dan  tanin,  serta  memiliki potensi  toksisitas  akut.  Hal  tersebut  diduga terkait  dengan  adanya  senyawa  yang  pada kadar tertentu memiliki potensi toksisitas akut serta  dapat  menyebabkan  kematian  larva Artemia  salina Leach.  Mekanisme  kematian larva  berhubungan  dengan  fungsi  senyawa flavonoid  yang  terkandung  dalam  daun tembelekan  yang  dapat  menghambat  daya makan larva ( antifedant) . Cara kerja senyawa tersebut  adalah  dengan  bertindak  sebagai stomach  poisoning atau  racun  perut.  Oleh karena  itu,  bila  senyawa  ini  masuk  ke  dalam tubuh  larva,  maka  akan  mengakibatkan gangguan  sistem  pencernaan.  Selain  itu, senyawa  ini  menghambat  reseptor  perasa pada  daerah  mulut  larva.  Hal  tersebut mengakibatkan  larva  gagal  mendapatkan stimulus  rasa  untuk  mengenali  makanannya sehingga larva mati kelaparan 11 .
Dewy Resty Basuki | Uji Toksisitas Empat Jenis Daun Tanaman Obat ….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 1 Tahun 2017
Berdasarkan penelitian ini didapatkan jumlah  kematian  larva  udang Artemia  salina Leach  pada  setiap  perlakuan  ekstrak  etanol daun  tembelekan  dan  ekstrak  etanol  daun tanjung secara berturut-turut dengan konsentrasi  50  ppm,  100  ppm,  200  ppm,  300 ppm,  dan  500  ppm.  Berdasarkan  data  yang diperoleh  dapat  dihitung  total  kematian dengan  cara  menjumlahkan  larva  yang  mati pada  setiap  konsentrasi.  Rata-rata  kematian larva  diperoleh  dengan  membagi  total kematian  larva  pada  tiap  konsentrasi  dengan jumlah  replikasi  yaitu  lima.  Persentase kematian larva dihitung dari rata-rata kematian  pada  tiap  konsentrasi.  Berdasarkan Tabel  4  menunjukkan  bahwa  berbagai konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  tembelekan berpengaruh  linier  terhadap  kematian  larva Artemia  salina Leach.  Nilai  LC 50 ekstrak etanol  daun  tembelekan  dianalisis  dengan SPSS  dan  didapatkan  persamaan  regresi linear y=14,320x+0,171 dan R 2 =0,982, sehingga  didapatkan  harga  LC 50 ekstrak etanol daun tembelekan sebesar 208,6 ppm.
Berdasarkan  hasil  analisis  data  yang dilakukan  secara  statistik  parametrik  dengan metode analisis regresi linier didapatkan  nilai LC 50 ekstrak etanol daun tanjung sebesar 249 ppm, sehingga dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol daun tanjung memiliki potensi toksisitas.
Penelitian  ini  menggunakan  hewan uji  berupa  larva  udang Artemia  salina Leach yang  berumur  48  jam  setelah  penetetasan sesuai dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BST).  Sebelum  diberi  perlakuan,  larva udang Artemia  salina Leach  yang  digunakan dipastikan  sudah  terlepas  dari  cangkangnya dengan  tujuan  agar  pergerakannya  lebih mudah diamati. Kriteria standar untuk menilai kematian  larva  udang Artemia  salina Leach adalah  bila  larva Artemia  salina Leach  tidak menunjukkan  pergerakan  selama  10  detik
pada  saat  observasi 12 .  Kontrol  negatif  dalam penelitian  ini  dibuat  tanpa  menggunakan ekstrak  etanol  daun  tembelekan  dan  hanya terdiri  dari air  laut. Kontrol  negatif  berfungsi untuk menghilangkan pengaruh-pengaruh lain di  luar  ekstrak  yang  menyebabkan  kematian larva  udang,  misalnya  suhu,  dan  pH  air  laut, sehingga  dapat  dibuktikan  bahwa  kematian larva Artemia salina Leach hanya disebabkan oleh bahan uji.
Ekstrak etanol daun tanjung
mempunyai  potensi  toksisitas  seperti  halnya ekstrak  etanol  daun  tembelekan.  Mekanisme alkaloid  pirolizidin  sebagai  senyawa  toksik akan  terjadi  apabila  pirolizidin  masuk  ke dalam tubuh kemudian teroksidasi di mitokondria  menjadi  senyawa  metolit  yang reaktif 6 .  Tanin  pada  umumnya  menghambat aktivitas  enzim  dengan  jalan  membentuk ikatan  kompleks  dengan  protein  pada  enzim substrat  yang  dapat  menyebabkan  gangguan pencernaan dan merusak dinding sel, sehingga  mekanisme  kerja  tanin  sebagai racun  perut.    Saponin  dapat  menurunkan aktivitas  enzim  pencernaan  serta  penyerapan makanan  ( stomach  poisoning ).  Flavonoid merupakan  salah  satu  jenis  senyawa  yang bersifat  racun,  mempunyai  bau  yang  sangat tajam, dan sebagian besar merupakan pigmen berwarna  kuning  yang  dapat  larut  dalam  air maupun  pelarut  organik.  Kegunaan  dari flavonoid  adalah  sebagai  zat  pembunuh serangga melalui sistem pernafasaan, sehingga  mekanisme  kerja  flavonoid  sebagai racun pernafasan 10 .
Berdasarkan penelitian ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun gelombang cinta mempunyai potensi sitotoksik.  Hal  tersebut  berkaitan  dengan kandungan  senyawa  saponin,  flavonoid,  dan tanin  yang  terdapat  pada  daun  gelombang cinta.  Hasil  skrining  fitokimia  menunjukkan adanya kandungan flavonoid turunan senyawa
Dewy Resty Basuki | Uji Toksisitas Empat Jenis Daun Tanaman Obat ….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 1 Tahun 2017
polifenol  yang  dikenal  memiliki  aktivitas antikanker.  Flavonoid  merupakan  pigmen tumbuhan golongan senyawa bahan alam dari senyawa  fenolik.  Di  dalam  tubuh  manusia, flavonoid  bertindak  sebagai  antioksidan  yang sangat  baik  untuk  pencegahan  kanker. Manfaat lain dari flavonoid adalah melindungi  struktur  sel,  memiliki  hubungan sinergis  dengan  vitamin  C  (meningkatkan efektivitas vitamin C), anti inflamasi, mencegah  keropos  tulang,  dan  sebagai antibiotik 13 . Mekanisme kerja antioksidan memiliki dua fungsi. Fungsi pertama merupakan  fungsi  utama  dari  antioksidan yaitu  sebagai  pemberi  atom  hidrogen. Antioksidan  (AH)  yang  mempunyai  fungsi utama tersebut sering disebut  sebagai antioksidan  primer.  Senyawa  ini  dapat menyumbangkan  atom  hidrogen  secara  cepat ke radikal lipida (R*, ROO*) atau mengubah radikal  bebas  menjadi  bentuk  yang  lebih stabil.  Sementara  turunan  radikal  antioksidan (A*)  tersebut  memiliki  keadaan  lebih  stabil dibanding  radikal  lipida  .  Selain  flavonoid, senyawa  lain  yang  terkandung  dalam  daun gelombang  cinta  adalah  saponin  dan  tanin. Cara  kerja  senyawa  tersebut  adalah  dengan bertindak  sebagai  racun  perut  sama  dengan senyawa  yang  terkandung  dalam  daun tembelekan.
Suatu senyawa dinyatakan mempunyai potensi toksisitas menurut
metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BST) jika mempunyai harga LC50 kurang dari atau sama dengan 1000 ppm. Lethal Concentration 50  (LC50)  merupakan  konsentrasi  zat  yang menyebabkan  terjadinya  kematian  sebanyak 50  %  pada  hewan  percobaan  yaitu  larva Artemia  salina Leach. Brine  Shrimp  Letality Test (BST)  merupakan  salah  satu  metode  uji toksisitas  yang  banyak  digunakan  dalam
penelusuran  senyawa  bioaktif  yang  bersifat toksik  dari  bahan  alam.  Metode  ini  dapat digunakan sebagai Bioassay-Guided
Fractionation dari bahan alam karena mudah, cepat,  murah,  dan  cukup  reprodusibel 14 . Pengujian  terhadap  ekstrak  etanol  daun gelombang  cinta  menunjukkan  harga  LC50 sebesar 216,5 ppm sehingga dapat dinyatakan bahwa  ekstrak  etanol  daun  gelombang  cinta memiliki  potensi  akut  pada  perlakuan  hewan coba Artemia  salina Leach  menurut  metode BST.
Hasil  uji  normalitas Kolmogrov- Smirnov terhadap  rata-rata  kematian  larva Artemia  salina Leach  mendapatkan  nilai signifikan  lebih  besar  dari  0,05  yaitu  sebesar 0,995  sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  data terdistribusi  normal.    Hasil  analisis  linier ekstrak etanol daun gelombang cinta menghasilkan persamaan LC50 = 0,023 (x) + 0,02  (R 2 =  0,974).  Berdasarkan  hasil  tersebut dapat dinyatakan bahwa peningkatan konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  gelombang cinta  berpengaruh  terhadap  peningkatan kematian larva Artemia salina Leach (dengan parameter  LC50)  sebesar  97,4%.  Uji  ekstrak etanol daun gelombang cinta dipengaruhi oleh variabel  lainnya,  misalnya  pH,  cahaya,  dan kadar  oksigen  dalam  air  laut  sebesar  2,6%.
Hasil  uji  tersebut  dilanjutkan  dengan uji  kolerasi  Pearson  dan  didapatkan  nilai korelasi  r=0,987.  Hasil  uji  korelasi  Pearson menunjukkan  adanya  hubungan  yang  kuat antara  kenaikan  konsentrasi  ekstrak  etanol daun gelombang cinta terhadap kenaikan rata- rata  kematian  larva Artemia  salina Leach. Ekstrak daun majapahit memiliki harga LC50 sebesar  10,7  ppm  yang  dianalisis  dengan metode  probit.  Hasil  analisis  probit  SPSS  20 menunjukkan  bahwa  kenaikan  konsentrasi ekstrak  etanol  daun  majapahit  sebanding dengan  kenaikan  rata-rata  kematian  larva
Dewy Resty Basuki | Uji Toksisitas Empat Jenis Daun Tanaman Obat ….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 1 Tahun 2017
Artemia  salina Leach.  Berdasarkan  hasil  uji statistik  SPSS  20  dapat  dikatakan  bahwa ekstrak  etanol  daun  majapahit  dan  ekstrak etanol  daun  gelombang  cinta  mempunyai potensi  sitotoksisitas  terhadap  larva Artemia
salina Leach. Mekanisme flavonoid sebagai antikanker  ada  beberapa  teori.  Pertama, melalui mekanisme pengaktifan jalur apoptosis  sel  kanker.  Mekanisme  apoptosis sel pada teori ini  merupakan akibat fragmentasi  DNA.  Fragmentasi  ini  diawali dengan  dilepasnya  rantai  proksimal  DNA oleh  senyawa  oksigen  reaktif  seperti  radikal hidroksil. Kedua, flavonoid sebagai penghambat  proliferasi  tumor/kanker  yang salah  satunya  dengan  menginhibisi  aktivitas protein  kinase  sehingga  menghambat  jalur tranduksi sinyal dari membran sel ke inti sel 8 .

## SARAN
Penelitian  selanjutnya  diharapkan dapat  membandingkan  dengan  minuman bersoda  karena  dapat  menyebabkan  abrasi dan menurunkan kekerasan permukaan.

## REFERENSI
1. Dalimarta, S. 2008. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia .  Jilid  1.  Trubus  Agriwidya. Jakarta. Hal 34.
2. Hidayati,  N.A.,  Shanti  Listyawati,  and Ahmad Dwi Setyawan. 2008. Kandungan Kimia  dan  Uji  Anti  Inflamasi  Ekstrak Etanol Lantana  camara L.  pada  Tikus Putih  ( Rattus  norvegicus L.)  Jantan. Bioteknologi . 5(1) : 10-17.
3. Dewi,  M.K.,  Evie  Ratnasari,  and  Guntur. 2014. Antibacterial Activity of Majapahit ( Crescentia  cujete )  Leaves  Extract  on
Ralstonia solanacearum. LenteraBio . 3(1). 51–57.
4. Ogbuagu,  M.N.  2008.  The  Nutritive  and Anti  Nutritive  Ompositions  Of  Calabash
( Crescentia cujete ) Fruit Pulp. Journal of Animal  and  Veterinary  Advances .  7(9).
1069-1072.
5. Noor,  S.M.,  M.  Asniari  Poeloengan,  and
Titin Yulianti. 2006. Analysis of Secondary  Compounds  and  Testing  of
Antibacterial Activity of Minusops elengi
L.  Extract  on Salmonella  typhi and Shigella boydii . Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veterine. Balai Penelitian  Veteriner .  Fakultas  Farmasi.
ISTN. Jakarta.
6. Sukardiman  and  Ekasari  W.  2006.  Uji Antikanker  dan  Induksi  Apoptosis  Fraksi Kloroform  dari  Daun  Pepaya  ( Carica papaya )  terhadap  Kultur  Sel  Kanker.
Penelitian Kesehatan . 24. Fakultas
Farmasi. Universitas Airlangga. 7. Rivai,  M.  Ayu  Hesti  Wahyuni,  and Humaira  Fadhilah.  2013.  Pembuatan  dan
Karakterisasi  Ekstrak  Kering  Simplisia Jati Belanda ( Guazuma ulmifolia Lamk.). Jurnal  Farmasi  Higea .  5(1).  Sains Farmasi dan Farmakologi.
8. Sangi,  M.,  M.  R.  J.  Runtuwene.,  H.  E. I.Simbala  dan  V.  M.  A.  Makang.  2008. Analisa  Fitokimia  Tumbuhan  Obat  Di Minahasa Utara. Chem. Prog . 1(1):47-53.
9. Stapleton,  F.B.,  Jones,  D.P.,  and  Green, R.S.  2007. Acute  Renal  Failure  In
Neonates  :  Incidence,  Etiology,  and Outcome. Pediatric Research Laboratory .
LeBonheur  Children  Medical  Centre.
University of Tennessee.
10. Sumilih,  S.,  Ambarwati,  and  Dwi  Astuti. 2010.  Efektivitas  Ekstrak  Lempuyang Wangi ( Zingiber aromaticum Val.) dalam Membunuh  Larva Aedes  aegypti . Jurnal Kesehatan .  ISSN  1979-7621.  3(10).  78- 88.
11. Rita,  W.S.,  Suirta,  I.W.,  and  Sabikin,  A. 2008.  Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa
Yang Berpotensi Sebagai Antitumor Pada
Dewy Resty Basuki | Uji Toksisitas Empat Jenis Daun Tanaman Obat ….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 1 Tahun 2017
Daging Buah Pare ( Momordica charantia
L.). Jurnal Kimia . 2(1). 1-6.
12. Carballo,  J.L.,  Hernandez-Inda,  Z.L.,
Perez,  P.,  and  Garcia-Gravaloz,  M.D. 2002. Comparison  Between  Two  Brine
Shrimp  Assays  to  Detect  in  Vitro Cytotoxicity  in  Marine  Natural  Products .
BMC Biotechnology.
13. Hamid,  A.A.,  Aiyelaagbe,  O.O.,  Usman,
L.A., Ameen, O.M., and Lawal, A. 2010.
Antioxidant : Its Medidal and Pharmacological  Application.  African
Journal  of  Pure  and  applied  Chemistry . 4(8). 142-151.
14. Lisdawati,  V.  Wiryowidagdo,  S.,  and Kardono,  L.B.S.  2006. Brine  Shrimp
Lethality  Test (BSLT)  dari  Berbagai Fraksi  Ekstrak  Daging  Buah  dan  Kulit Biji Mahkota Dewa ( Phaleri macrocarpa ). Buletin Penelitian Kesehatan . 34(3). 111-118.