## ISSN: 0215-7950
*Alamat penulis korespondensi: Pendidikan Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa. Jalan Raya Ciwaru No.25 Kota Serang, Banten 42117. Surel: nani.maryani@untirta.ac.id

## Volume 19, Nomor 4, Juli 2023
Halaman 133–144 DOI: 10.14692/jfi.19.4.133–144
Deteksi Penyakit Layu Fusarium pada Pisang-Pisang Lokal di Pandeglang

## Detection of Fusarium wilt on Local Bananas in Pandeglang
Nani Maryani 1,2 * , Elmira Rayhan Oktaria Harahap 1 , Rida Oktorida Khastini 1,2 , Fajarudin Ahmad 3 1 Universitas Sultan Ageng Tirtayasa, Banten 42117
2 PUI-PT Inovasi Pangan Lokal Untirta, Banten 42118 3 Badan Riset dan Inovasi Nasional, Cibinong 16911

## ABSTRAK
Pandemi layu fusarium pisang atau Panama disease, yang disebabkan oleh tropical race 4 (TR4), menjadi ancaman budi daya pisang baik industri maupun skala kecil. Di Indonesia, layu fusarium menyerang varietas ekspor pisang Cavendish dan varietas lokal populer seperti Pisang Raja, Kepok, dan Barangan. Meskipun demikian, TR4 masih belum banyak diketahui keberadaannya pada pisang-pisang lokal di berbagai wilayah Indonesia. Penelitian ini bertujuan mendeteksi TR4 pada pisang-pisang lokal Pandeglang, yang merupakan wilayah terbesar penghasil pisang di Provinsi Banten. Survey dilakukan di sembilan lokasi yang tersebar di lima kecamatan: Banjar, Cadasari, Jiput, Labuan, dan Menes. Total 13 aksesi pisang lokal menunjukkan gejala internal dan eksternal layu fusarium. Sampel pseudostem bergejala ditumbuhkan pada medium agar-agar dekstrosa kentang. Kultur spora tunggal digunakan untuk  identifikasi  dan  isolasi  DNA.  Berdasarkan  karakter  mikroskopisnya,  27  galur Fusarium yang terdiri atas 3 komplek species berhasil diidentifikasi yaitu F. cugenangense, F. foetens dan F. oxysporum ( Fusarium oxysporum species complex; FOSC), F. equiseti dan F. incarnatum ( Fusarium incarnatum- equiseti species complex) dan F. solani ( Fusarium solani species complex atau Neocosmospora ). Deteksi molekuler duplex PCR menggunakan primer translation elongation factor-1 α ( Tef-1α ) dan primer specific  TR4,  memberikan  hasil  positif  hanya  pada  galur-galur  yang  merupakan  TR4,  anggota  dari FOSC. Penelitian ini memperkaya pengetahuan keberadan TR4 pada daerah yang belum teridentifikasi dan potensi ancaman TR4 yang menyerang pisang-pisang lokal di Pandeglang. Analisis molekuler lebih lanjut menggunakan sikuen gen penanda atau whole genome sequencing dapat memberikan pengetahuan akan diversitas genetik Fusarium asal Pandeglang sehingga metode penanganan yang tepat dapat dilakukan.
Kata kunci: Banten , diversitas, Musa , panama disease, tropical race 4

## ABSTRACT
Fusarium wilt of bananas or Panama disease, caused by Tropical Race4 (TR4), threatens the global banana industry. In Indonesia, the disease devastated Cavendish, an export variety, and many local bananas, such as Pisang Raja, Kepok, and Barangan. Nonetheless, TR4 incidence is unknown in many parts of Indonesia. This study aimed to detect TR4 in local bananas from Pandeglang, the most banana-produced area in Banten Province. A survey was conducted in nine Kecamatan i.e., Banjar, Cadasari, Jiput, Labuan, and Menes. In total, 13 banana accessions showed symptoms of fusarium wilt. Symptomatic pseudostem samples were plated on potato dextrose agar. The monosporic culture was

## PENDAHULUAN
Penyakit tanaman merupakan faktor pembatas produksi pangan yang dapat mengancam ketahanan pangan dan merubah tatanan sosial ekonomi suatu bangsa. Panama disease atau penyakit layu fusarium pisang (akhir 1960-an) tercatat dalam sejarah telah menyebabkan kebangkrutan ekonomi dan ketidakstabilan politik negara-negara pengekspor pisang di Amerika Latin (Ploetz 2015). Cavendish, varietas pisang yang tahan, akhirnya dapat menyelamatkan industri pisang dunia saat itu. Namun di akhir 1990-an galur baru Fusarium spp., terkenal dengan sebutan tropical race 4 (TR4), mampu menyerang Cavendish (Su et al. 1986).  Tidak hanya menjadi ancaman bagi industri pisang, TR4 juga mengkhawatirkan ribuan petani pisang skala kecil di Asia dan Afrika (Ploetz et al. 2015; Drenth dan Kema 2021). Di Indonesia, ratusan hektar perkebunan Cavendish di Lampung terserang TR4. Varietas lokal seperti pisang Ambon ( M. acuminata var. Ambon), Raja Buluh, Pisang Tanduk ( Musa sp. var. Tanduk), Uli ( M. acuminata var. Ketan), Kepok ( Musa sp. var. Kepok), dan Barangan juga sangat rentan terhadap TR4 (Hermanto et al. 2011).
Layu fusarium pisang disebabkan oleh sekelompok cendawan dari genus Fusarium . Tanaman yang terserang akan terlihat layu, daun berwarna kuning, dan bagian dalam batang semu (pseudostem) menunjukkan diskolorasi berwarna cokelat kemerahan (Nelson et al. 1981; Ploetz 2015; Maryani 2018).
Pisang yang terserang layu fusarium menjadi tidak produktif menghasilkan buah dan lama kelamaan mati. Anakan pisang yang induknya terserang juga terinfeksi, sehingga tanaman tidak mampu menghasilkan anakan yang dapat ditanam kembali. Fusarium spp. merupakan cendawan tular tanah ( soilborne ) yang mudah menyebar melalui tanah, air, alat pertanian yang terkontaminasi, dan tanaman yang terinfeksi (Salacinas et al. 2022). Hingga saat ini, penyakit layu fusarium telah menyebar luas di kepulauan Indonesia (Maryani et al. 2019) dengan diversitas yang sangat tinggi (O’Donneal 1998; Maryani 2018). Eksplorasi dan kajian mendalam layu fusarium yang menyerang di wilayah yang belum diteliti menjadi sangat penting untuk memperkaya pengetahuan akan diversitas dan patogenisitas Fusarium. Koleksi Fusarium yang beragam juga sangat berguna untuk menguji sumber genetik resisten pada plasma nutfah pisang Indonesia. Penelitian ini bertujuan mendeteksi penyakit layu fusarium pada pisang-pisang lokal di Kabupaten Pandeglang, provinsi Banten. Selain itu, deteksi molekuler juga dilakukan untuk mengidentifikasi  TR4  yang  merupakan  ras paling berbahaya pada Fusarium penyebab penyakit layu pada pisang.

## BAHAN DAN METODE
Koleksi Sampel penyakit layu fusarium diambil di sembilan lokasi di Kecamatan  Banjar, Cadasari, Jiput, Labuan, dan Menes (Gambar 1).
derived from isolation and used for morphological identification and DNA extraction. Based on the morphological characteristics of Fusarium , 27 strains members of 3 species complexes were identified, i.e., F. cugenangense, F. foetens dan F. oxysporum ( Fusarium oxysporum species complex; FOSC), F. equiseti dan F. incarnatum ( Fusarium incarnatum-equiseti species complex) dan F. solani ( Fusarium solani species complex, currently named as Neocosmospora ). Molecular detection of TR4 was done using duplex PCR of translation elongation factor-1α ( Tef-1α ) and TR4 primer specific, giving positive results only on TR4 strains, members of FOSC. This study enhances our knowledge of the spreading of TR4 in an unidentified area in Indonesia. Many of the local bananas in Pandeglang is susceptible to TR4, thus threaten banana cultivation in this area. Further study on the molecular analysis using more genes will give insight into the expanding genetic diversity of Fusarium causing wilt in Banana in the Indonesian collection.
Key words: Banten, diversity, Musa , panama disease, tropical race 4
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Lokasi ini merupakan penghasil utama pisang di Kabupaten Pandeglang, Provinsi Banten (Dinas Hortikultura Kabupaten Pandeglang 2019). Spesimen diambil dari batang semu pisang yang menunjukkan gejala eksternal: daun menguning dari bagian daun yang lebih tua, layu, dan terbelahnya batang semu, dan gejala internal: diskolorasi batang semu berwarna kecokelatan. Batang semu pada bagian garis vaskuler kecokelatan dipotong dengan ukuran 2 × 8 cm . Potongan batang disimpan pada kertas saring dan dimasukan dalam amplop  untuk dikeringkan dalam kotak berisi silica gel di laboratorium. Koordinat lokasi dan parameter lingkungan seperti pH tanah, intensitas cahaya, dan vegetasi di sekitar area pengambilan sampel dicatat. Identifikasi tanaman inang menggunakan ciri- ciri morfologi pisang mengacu pada Valmayor (1999), Poerba et al. (2018) dan Dewi (2022).
Isolasi Fusarium
Sampel batang semu yang telah kering dipotong dengan ukuran 2 × 3 cm, ditanam pada medium agar-agar dekstrosa kentang (ADK) dengan antibiotik, dan diinkubasi pada suhu ruang. Setelah 2 hari, koloni yang tumbuh menyerupai Fusarium kemudian dipindahkan ke medium ADK baru. Kultur spora tunggal dibuat dengan menggoreskan konidium pada medium water agar (WA) sehingga konidium-konidium terpisah pada medium. Setelah 24 jam inkubasi, perkecambahan konidium pada medium WA diamati di bawah mikroskop stereo dengan perbesaran 50×. Individu konidium yang sedang berkecambah kemudian di transfer ke medium ADK sebagai kultur murni. Kultur murni disimpan pada medium ADK suhu ruang sebagai stok jangka pendek dan larutan gliserol 20% (v/v) pada suhu -80 ℃ sebagai simpanan jangka panjang.
Gambar 1  Lokasi survey dan titik pengambilan sampel layu fusarium pisang di Kabupaten Pandeglang, Provinsi Banten. Kecamatan Cadasari (1, Kp. Waas; 2, dan 3, Kel. Cigadung dan 4, Kp. Nyoreang); Kecamatan Menes (5, Kp. Cimalati; 6, Kp. Cipancur; dan 7, Kp. Pasir Waru); Kecamatan Banjar (8 dan 9, Kp. Gunung Putri). (peta dimodifikasi dari Google Map https:// www.google.com/maps).
Identifikasi Morfologi Fusarium Induksi sporodokium dilakukan dengan cara menumbuhkan galur Fusarium pada medium carnation leaf agar (CLA), inkubasi suhu ruang, dan paparan cahaya lampu. Pembentukan formasi klamidospora menggunakan medium synthetic low nutrient agar (SNA) dan diinkubasi pada suhu ruang dalam  gelap.  Sedangkan  identifikasi  warna koloni dan pembentukan mikrokonidium pada medium ADK. Karakter morfologi mikroskopis Fusarium diamati menggunakan mikroskop dengan perbesaran 1000× .  Identifikasi morfologi mengacu pada deskripsi Fusarium oleh Leslie dan Summerell (2006), Maryani et al. (2019a), dan nomenklatur data Fusarium pada database (www.fusarium.org).
Isolasi DNA dan PCR Kultur stok ditumbuhkan pada medium ADK dan diinkubasi pada suhu ruang selama 4 hari. Miselium dipanen menggunakan jarum öse ujung lancip dan ditransfer ke tabung eppi 2 mL, dikering bekukan dengan menyimpannya pada suhu -80 ℃  semalam. DNA diisolasi menggunakan phire plant direct PCR Kit (ThermoFisher) dengan protokol pabrikan yang dianjurkan. Deteksi TR4, menggunakan duplex PCR dengan empat pasang primer, yaitu primer gen translation elongation factor-1 α ( Tef- 1α ); EF1 (5’-ATGGGTAAGGA(A/G) GACAAGAC-3’), EF2 (5’-GGA(G/A) G TA C C A G T ( G / C ) AT C AT G T T- 3 ’ ) (O’Donnell et al. 1998)  dan  primer  spesifik TR4; TR4-F (5’-CACGTTTAAGGTGCCA TGAGAG-3’) dan  TR4-R (5’-CGCACGCCA GGACTGCCTCGTGA-3’) yang meng- amplifikasi area IGS (Dita et al. 2010). PCR master mix dan DNA direaksikan dengan kondisi mesin PCR: Pre-denaturasi 98 ℃, 300 detik, denaturasi 98 ℃,  5  detik, penempelan 60 ℃,  5  detik,  pemanjangan
72 ℃,  60  detik,  dan  pemanjangan  terakhir
72 ℃, 60 detik. Amplikon PCR divisualisasi- kan secara elektroforesis pada gel agarosa 1.5% (100 mL TAE buffer, 1.5 g agarosa, dan 2 µL EtBr) selama 45 menit. Hasil elektroforesis dibaca menggunakan gel doc transilluminator .
Kontrol positif TR4 menggunakan typed strain TR4, Indo8 (INaCC F822), F. odoratissimum , dan kontrol negatif menggunakan typed strain Ras1 Indo19 (InaCCF833), F. grosmichelii (Maryani et al. 2018).

## HASIL
Varietas Pisang Lokal Pandeglang Rentan Layu Fusarium Penyakit layu fusarium pada pisang dapat diidentifikasi  di  semua  lokasi  eksplorasi. Penyakit ini tersebar di sembilan daerah di Kabupaten Pandeglang, yaitu empat lokasi di Kecamatan Cadasari, tiga lokasi di Kecamatan Menes, dan dua lokasi di Kecamatan Banjar (Tabel 1). Total 13 aksesi pisang lokal diidentifikasi  memiliki  gejala  eksternal  dan internal layu fusarium. Sebaran penyakit layu fusarium pada pisang lokal paling banyak ditemukan di Kecamatan Cadasari yaitu, Pisang Kepok, P. Ketan, P. Tanduk, P. Ambon, dan P. Batu (Tabel 1). Pisang Ambon ditemukan terserang penyakit di semua lokasi sampling. Pisang Batu yang umumnya lebih tahan menunjukkan gejala penyakit layu fusarium di Desa Cadasari. Pisang Sepet yang merupakan varietas lokal khas Pandeglang ditemukan terserang dengan gejala eksternal dan internal layu fusarium.
Galur Fusarium spp. Total 27 galur Fusarium spp. diisolasi dari 13 aksesi pisang lokal Pandeglang. Fusarium diidentifikasi dengan karakter utamanya, yaitu adanya makrokonidium berbentuk bulan sabit/ perahu yang bersekat, dan mikrokonidium yang membentuk formasi false head . Selain itu, warna koloni yang berwarna terang pada ADK, formasi sporodokium, dan klamidospora pada medium CLA dan SNA juga menjadi ciri utama cendawan Fusarium (Gambar 2). Berdasarkan karakter utama Fusarium yang disebutkan diatas, 6 spesies Fusarium yang merupakan anggota dari 3 komplek species Fusarium diidentifikasi F. cugenangense, F. foetens, F. oxysporum ( Fusarium oxysporum species complex, FOSC), F. equiseti, F. incarnatum ( Fusarium incarnatum-equiseti
Tabel 1  Sebaran lokasi dan data varietas pisang lokal Pandeglang yang rentan terhadap penyakit layu fusarium, Nomor Aksesi Varietas Pisang Lokasi GPS Nama Lokal Nama Ilmiah Genom Long. Lat. Alt. (m) Pd-1 Pisang Kepok Musa sp. var. Kepok ABB Kp. Waas, Kec. Cadasari 106.119 -6.259 240 Pd-2 Pisang Ketan Musa acuminata var. Ketan AA Kp. Waas, Kec. Cadasari 106.119 -6.259 240 Pd-3 Pisang Ketan Musa acuminata var. Ketan AA Kel. Cigadung, Cadasari 106.121 -6.274 243 Pd-4 Pisang Tanduk Musa sp. var. Tanduk AAB Kel. Cigadung, Cadasari 106.121 -6.274 243 Pd-5 Pisang Ambon M. acuminata var  Ambon AAA Kel. Cigadung, Cadasari 106.121 -6.274 243 Pd-6 Pisang Tanduk Musa sp. var. Tanduk AAB Kel. Cigadung, Cadasari 106.120 -6.271 243 Pd-7 Pisang Batu M. balbisiana BB Kp. Nyoreang, Kec. Cadasari 106.132 -6.267 250 Pd-8 Pisang Ketan M. acuminata var. Ketan AA Kp. Cimalati, Kec. Menes 105.937 -6.397 72 Pd-9 Pisang Ambon M. acuminata var.  Ambon AAA Kp. Cipancur, Kec. Menes 105.934 -6.392 35 Pd-10 Pisang Apu M. acuminata x M. balbisiana ABB Kp. Pasir Waru, Kec. Menes 105.925 -6.389 75 Pd-11 Pisang Sepet Musa sp. var. Sepet Kp. Gunung Putri, Kec. Banjar 106.095 -6.360 107 Pd-12 Pisang Apu M. acuminata x M. balbisiana ABB Kp. Gunung Putri, Kec. Banjar 106.095 -6.360 107 Pd-13 Pisang Kepok Siem/ Cau Gejloh M. acuminata x M. balbisiana ABB Kp. Gunung Putri, Kec. Banjar 106.098 -6.361 120
species complex, FIESC) dan F. solani ( Fusarium solani species complex, FSSC) (Tabel 2).

## Deteksi Molekuler Layu Fusarium
Semua  galur  yang  diidentifikasi  sebagai Fusarium diekstraksi DNAnya untuk deteksi PCR TR4. Kualitas dan kuantitas DNA yang diperoleh sangat bagus meskipun teknik isolasi DNA yang digunakan ialah langsung dari koloni tanpa melalui tahapan-tahapan ekstraksi seperti yang biasa dilakukan pada isolasi DNA cendawan. Galur Fusarium — yang merupakan TR4—menghasilkan dua
pita PCR dengan ukuran ~650 pb ( Tef-1α ) dan ~ 460 pb (area spesifik TR4) (Gambar 3). Semua galur Fusarium menghasilkan pita Tef-1α . Galur TR4  merupakan anggota dari FOSC, yaitu 2 galur F. foetens yang diisolasi dari pisang Ambon dan Ketan, dan 5 galur Fusarium oxysporum yang diisolasi dari Pisang Kepok, Apu, Tanduk, dan Ketan (Tabel 1).

## PEMBAHASAN
Indonesia merupakan penghasil pisang ke-7 terbesar di dunia, 80% produksinya dihasilkan dari petani skala kecil dan
Gambar 2 Fusarium oxysporum NMC 151-TR4. a-b, Kultur pada medium agar-agar dekstrosa kentang setelah 7 hari inokulasi (tampak atas dan bawah); c, Sporodokia pada medium CLA; d-e, Makrokonidium; f, Mikrokonidium; g, False head ; h, Polifialid; I, Percabangan konidiofor; j-k, Klamidospora tunggal; l, Klamidospora berkembang dari makrokonidium. Semua gambar mikroskopik menggunakan skala = 10 μm .
Tabel 2  Daftar Fusarium spp. yang berhasil diisolasi, kode galur, nama spesies, inang, dan respons terhadap set primer spesifik TR4 Nama Spesies Kompleks spesies Kode galur Karakter utama spesies Inang Pita PCR Tef-1 α TR4 F. cugenangense Fusarium oxysporum species complex (FOSC) NMC-199 Makrokonidium bentuk sabit kelengkungan sisi dorsal lebih melengkung dibandingkan sisi ventral, 3-septa; mikrokonidium oval, tak bersepta - 1 septa; konidiofor monofialid; klamidospora tunggal, berantai Pisang Tanduk + - F. equiseti Fusarium incarnatum equiseti species complex (FIESC) NMC-143 Makrokonidium bentuk sabit kelengkungan dorsiventral, 5-7 septa; mikrokonidium absen; konidiofor bercabang, monofialid;  klamidospora  tunggal,  berpasangan  dan berantai Pisang Kepok + - NMC-161 Pisang Sepet + - F. foetens F. oxysporum species complex (FOSC) NMC-152 Makrokonidium bentuk ramping, lurus, seperti jarum, 3-5 septa; m ikrokonidium bentuk oval, tak bersepta;  konidiofor  bercabang,  monofialid,  polifialid; klamidospora tunggal, berpasangan, dan berantai Pisang Ketan + - NMC-154 + + NMC-147 Pisang Ambon + + F. oxysporum F. oxysporum species complex (FOSC) NMC-136 Makrokonidium bentuk sabit kelengkungan sisi dorsal lebih melengkung dibandingkan dengan sisi ventral, 3-4 septa; mikrokonidium, bentuk oval, reniform, tak bersepta-  2  septa;  konidiofor  bercabang  monofialid; klamidospora tunggal, berpasangan, dan berantai Pisang Kepok + - NMC-137 + - NMC-144 + + NMC-150 Pisang  Ketan + + NMC-151 Pisang  Ketan + + NMC-153 + - NMC-158 Pisang  Ambon + - NMC-198 Pisang Tanduk + + NMC-1101 Pisang  Batu + - NMC-1102 + - NMC-1103 Pisang  Apu + + NMC-1104 + - NMC-1105 + - NMC-1106 + - NMC-1107 Pisang  Kepok Pisang  Siem + -
Nama Spesies Kompleks spesies Kode galur Karakter utama spesies Inang Pita PCR Tef-1 α TR4 F. incarnatum F. incarnatum equiseti species complex (FIESC) NMC-149 Makrokonidium bentuk sabit kelengkungan sisi dorsal lebih melengkung dibandingkan dengan sisi ventral, 3-5 septa; mikrokonidium bentuk oval, reniform, obovoid,  0-2  septa;  konidiofor  monofialid,  polifialid; klamidospora tunggal, berpasangan, dan berantai Pisang  Ketan + - NMC-139 + - NMC-164 Pisang  Apu + - F. solani Fusarium solani species complex (FSSC) NMC-140 Makrokonidium bentuk sabit kelengkungan sisi dorsal lebih melengkung dibandingkan sisi ventral, 3 septa; mikrokonidia bentuk oval, napiform, 0-2 septa;  konidiofor  monofialid;  klamidospora  tunggal, berpasangan, dan berantai Pisang  Ketan + - NMC-141 Pisang  Ketan + - NMC-146 Pisang Tanduk + - ...... lanjutan Tabel 2  Daftar Fusarium spp. yang berhasil diisolasi, kode galur, nama spesies, inang, dan respons terhadap set primer spesifik TR4
Jurnal Fitopatologi Indonesia
rumahan (www.fao.org). Fusarium menyerang pisang-pisang lokal populer Pandeglang, yang juga rentan ditemukan di daerah lain di Indonesia. Varietas lokal populer seperti Pisang Kepok, Ambon, Tanduk dilaporkan rentan layu fusarium di Sumatra, Kalimantan, Jawa, dan Sulawesi (Hermanto et al. 2011; Maryani et al. 2019). Peneliti menemukan varietas Sepet merupakan khas Pandeglang dan belum ditemui selama eksplorasi di wilayah lain. Pisang Ketan yang rentan penyakit di Pandeglang adalah sinonim Pisang Uli di Bogor atau “Oli” di Sukabumi. Nama lokal pisang bisa berbeda dari satu daerah dengan daerah lain. Sebaliknya, nama varietas yang sama bisa mengacu pada dua varietas yang berbeda di daerah lain. Kompleksitas ini juga bisa terjadi di negara yang berbeda (Valmayor 2000). Karakter morfologi dan genetik  menjadi  standar  acuan  identifikasi tanaman pisang (Ruas et al. 2017). Pisang umumnya ditanam masyarakat Kabupaten Pandeglang sebagai tanaman pekarangan, tanaman sela atau perkebunan skala kecil dan menengah dengan komposisi varietas yang beragam. Pada lokasi juga ditemukan tanaman penutup berupa umbi- umbian, paku-pakuan, dan rumput-rumputan. Hasil produksi pisang umumnya dikonsumsi dan sebagian lainnya dijual sebagai sumber
pendapatan sampingan masyarakat. Petani sadar akan ancaman penyakit layu fusarium, namun belum ada tindakan pencegahan, penanggulangan, dan karantina yang baik saat insiden penyakit terjadi di kebunnya. Praktik yang dilakukan saat ada tanaman yang terserang dan mati hanyalah menebang tanaman induk, sedangkan anakan dibiarkan tumbuh yang pada akhirnya akan mati. Saat varietas yang sama terserang penyakit terus menerus, petani mengganti varietas rentan dengan varietas lain yang diketahui lebih tahan. Metode pengendalian yang paling efektif untuk mengatasi patogen tular tanah seperti Fusarium spp. ialah menggunakan tanaman resisten. Pengendalian layu fusarium pada pisang saat ini terbatas pada penggunaan lahan perkebunan yang belum terkontaminasi, penggunaan bibit tanaman bebas patogen dari kultur jaringan, dan strategi karantina yang ketat pada kebun atau wilayah yang diketahui telah termanifestasi Fusarium spp. (Ordonez et al . 2019; Kema et al. 2021). Namun, ketersediaan tanaman resisten sepertinya belum ada dalam waktu dekat (Dale et al. 2017; Ahmad et al. 2020). Metode pengendalian tersebut umumnya dilakukan oleh perkebunan komersial besar, tetapi tidak bagi petani pisang skala kecil yang menanam pisang di halaman belakang rumahnya. Tersedianya
Gambar 3  Amplifikasi galur Fusarium menggunakan primer Tef-1α dan primer spesifik TR4 dan membandingkannya dengan kontrol positif (TR4 Indo8) serta kontrol negatif (Ras1 Indo19). Penanda DNA ialah DNA ladder 1000 pb (M).
Tef-1α =  ~650 pb TR4 =  ~460 pb Ras1
beragam varietas pisang lokal popular membuat petani hanya mengganti varietas rentan dengan yang tahan tanpa adanya upaya karantina lahan yang terkontaminasi. Praktik ini memungkinkan evolusi tanaman inang dan patogennya (ko-evolusi) yang menyebabkan keragaman genetik sangat tinggi pada patogen (O’Donnell et al. 1998; Maryani et al. 2019a). Fusarium yang diisolasi dari sampel bergejala menunjukkan diversitas yang cukup tinggi. Namun, hanya galur dari kelompok FOSC yang terdeteksi sebagai TR4. Berdasarkan interaksi Fusarium dengan pisang, Fusarium dikelompokkan sebagai Ras1, Ras2, dan Tropical Race4 (TR4). Ras1 virulen terhadap jenis pisang Gros Michel (syn. Ambon Kuning), Ras2 virulen terhadap Bluggoe (syn. Pisang Kepok), dan TR4 virulen terhadap Cavendish termasuk varietas pisang yang diserang Ras1 dan Ras2 (Stover 1962; Su et al. 1986; Maryani 2018). Semua Ras Fusarium yang dapat menginfeksi pisang merupakan anggota dari FOSC (Ordonez et al. 2015; Maryani et al . 2019a). Sampai saat ini, masih terjadi perbedaan pendapat tentang batasan spesies dalam Fusarium , namun bukti molekuler dan analisis whole genome sequencing menunjukkan bahwa TR4 merupakan klonal spesies yang dinamakan Fusarium odoratissimum yang berasal dari Indonesia (Ordonez et al. 2015; Maryani et al. 2019a; Garcia-bastidas et al. 2019; Westerhoven et al. 2023). Selain itu, galur Fusarium yang terdeteksi sebagai TR4 juga memiliki ciri mengeluarkan aroma yang khas (Maryani et al. 2019). Fusarium merupakan cendawan asal tanah yang melimpah diversitasnya dan hidup kosmopolitan. Fusarium incarnatum, F. equiseti dan F. solani ( Neocosmospora ) yang tidak menyebabkan penyakit pada pisang dilaporkan diisolasi dari pseudostem bergejala (Maryani et al. 2019b; Lombard et al. 2019; Crous et al. 2021). Asosiasi yang terjadi antara Fusarium non patogen dengan tanaman dapat  berupa  saprotrof,  endofit  atau  sebagai secondary invaders (Leslie dan summerell 2006). Selain itu, komunitas tanaman yang beragam ditemukan di lokasi pisang bergejala
merupakan tanaman tropis yang cocok sebagai inang pada banyak spesies Fusarium (Ploetz 2006; Zakaria 2023). Deteksi TR4 telah dikembangkan menggunakan  marka  molekuler  spesifik untuk tujuan praktis dan cepat (Dita et al . 2010). Metode ini sangat bermanfaat untuk deteksi TR4 di kebun-kebun pisang sehingga manajemen penyakit dan karantina dapat dilakukan secara sigap (Ordonez et al. 2019; Salacinas et al . 2021). Deteksi molekuler TR4 menunjukkan bahwa pisang-pisang lokal Pandeglang rentan penyakit layu fusarium. TR4 merupakan ancaman bagi keberlanjutan budi daya pisang lokal yang banyak dilakukan masyarakat baik skala kecil maupun rumahan. Kesadaran masyarakat akan pentingnya manajemen penyakit layu fusarium di kebunnya menjadi kunci utama penanggulangan TR4 dan persebarannya di daerah yang masih steril. Penyakit layu fusarium dapat didetekesi pada pisang-pisang lokal Pandeglang. TR4 yang merupakan jenis paling virulen pada banyak varietas ekspor dan lokal merupakan ancaman nyata bagi keberlanjutan budi daya pisang di Pandeglang, kabupaten penghasil pisang terbesar di provinsi Banten. Penelitian ini memperkaya pengetahuan terkait ke- ragaman Fusarium penyebab layu pisang di Indonesia khususnya Pandeglang. Analisis molekuler lebih lanjut menggunakan sikuens DNA  marka  spesifik  tingkat  species  seperti Tef-1 α , RPB1 ( RNA polymerase II largest subunit ) dan RPB2 ( RNA polymerase II second largest subunit ) (Maryani et al. 2019; Crous et al. 2021) dapat memberikan pengetahuan akan keragaman genetik Fusarium asal Pandeglang. Uji patogenisitas menggunakan pisang Ambon Kuning dan Kepok dapat memberikan pengetahuan adanya Ras1 dan Ras2 (Ploetz 2015).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini merupakan bagian dari Banana Research Project di Untirta “ Exploring local bananas and its associated Fusarium in Banten, Indonesia ”. Penulis mengucapkan terima kasih kepada GHJ Kema, Laboratorium
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Maryani et al.
Fitopatologi Wageningen University and Research (WUR), Belanda atas kebaikannya untuk deteksi molekuler TR4. Ucapan terima kasih kepada PIU-IsDB UNTIRTA untuk travel grant ONDT yang diberikan kepada N. Maryani.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad F, Maryani N, Poerba YS, de Jong H, Schouten H, Kema GHJ. 2020. Genetic mapping of Fusarium wilt resistance in a wild banana Musa acuminata ssp. malaccensis accession. Theorectical and Applied Genetics. 133:3409–3418. DOI: https://doi.org/10.1007/s00122-020- 03677-y.
Crous PW, Lombard L, Sandoval-Denis M, Seifert KA, Schroers HJ, Chaverri P, Gene J, Guarro J, Hirooka Y, Bensch K, Kema GHJ, Lamprecht SC, Cai L, Rossman AY, Stadler M, Summerbell RC, Taylor JW. 2021. Fusarium: more than a node or a foot-shaped basal cell. Studies in Mycology. 98(4):1–184. DOI: https://doi. org/10.1016/j.simyco.2021.100116. Dale J, James A, Paul JY, Khanna H, Smith M, Peraza-Echeverria S, Garcia-Bastidas F, Kema G, Waterhouse P, Mengersen K,
Harding R. 2017. Transgenic cavendish bananas with resistance to Fusarium wilt tropical race 4. Nature Communication. 8(1):1–8. DOI: https://doi.org/10.1038/ s41467-017-01670-6.
Dewi S. 2022. Diversitas plasma nutfah pisang ( Musa spp.) di Pandeglang (sebagai sumber belajar alternatif berupa ensiklopedia bagi siswa sma pada konsep keanekaragaman hayati). [tesis]. Serang: Universitas Sultan Ageng Tirtayasa.
Drenth A, Kema G. 2021. The vulnerability of bananas to globally emerging disease threats. Phytopathology. 111(12):2146– 2161. DOI: https://doi.org/10.1094/ PHYTO-07-20-0311-RVW.
[FAO] Food and Agriculture Organization of the United Nations. 2019. Countries by Commodity: Top 10 country production of banana. https://www.fao.org/faostat/
en/#rankings/countries_by_commodity. [diakses 16 Maret 2023]. Garcia-Bastidas FA, Vargas-Quintero JC, Ayala-Vasquenz M, Schermer T, Seidl MF, Santos-Paiva M, Noguera AM, Aguilera- Galvez C, Wittenberg A, Hofstede R, Sorensen A, Kema GHJ. 2019. First report of Fusarium wilt tropical race 4 in cavendish bananas caused by Fusarium odoratissimum in Colombia. Plant Disease. 104(3): 994–994. DOI: https:// doi.org/10.1094/PDIS-09-19-1922-PDN.
Hermanto C, Sutanto A, Jumjunidang, Edison HS, Daniells JW, Neill WTO, Sinohin VGO, Molina AB, Tayor P. 2011. Incidence and distribution of Fusarium wilt disease of banana in Indonesia. Acta Horticulturae. 897:313–322. DOI: https://doi. org/10.17660/ActaHortic.2011.897.43.
Kema GHJ, Drenth A, Dita M, Jansen K, Vellema S, Stoorvogel JJ. 2021. Editorial: Fusarium wilt of banana, a recurring threat to global banana production. Frontiers in Plant Science. 11:1–6. DOI: https://doi. org/10.3389/fpls.2020.628888.
Maryani N. 2018. A complex relationship: Banana and Fusarium wilt in Indonesia [tesis]. Belanda: Wageningen University and Research (WUR).
Maryani N, Lombard L, Poerba YS, Subandiyah S, Crous PW, Kema GHJ. 2019a. Phylogeny and genetic diversity of the banana Fusarium wilt pathogen Fusarium oxysporum f. sp. cubense in the Indonesian centre of origin. Studies in Mycology. 92:155–194. DOI: https://doi. org/10.1016/j.simyco.2018.06.003.
Maryani N, Sandoval-Denis M, Lombard L, Crous PW, Kema GHJ. 2019b. New endemic Fusarium species hitch-hiking with pathogenic Fusarium strains causing panama disease in small-holder banana plots in Indonesia. Persoonia. 43(1):48– 69.  DOI: https://doi.org/10.3767/ persoonia.2019.43.02.
Nelson PE, Toussoun TA, Cook RJ. 1981.
Fusarium : Diseases, Biology and Taxonomy. USA: The Pennsylvania State University Press.
O’Donnell K, Kistler CH, Cigelnik E, Ploetz RC. 1998. Multiple evolutionary origins of the fungus causing panama disease of banana: Concordant evidence from nuclear and mitochondrial gene genealogies. Proceedings of The National Academy of Sciences. 95(5):2044–2049. DOI: https:// doi.org/10.1073/pnas.95.5.2044. Ordonez N, Seidl MF, Waalwijk C, Drenth A, Kilian A, Thomma BPHJ, Ploetz RC, Kema GHJ. 2015. Worse comes to worst: bananas and panama disease—when plant and pathogen clones meet. PLoS Pathogens. 11(11):1–7. DOI: https://doi. org/10.1371/journal.ppat.1005197. Ordonez N, Salacinas M, Mendes O, Seidl MF,
Meijer HJG, Schoen CD, Kema GHJ. 2019. A loop-mediated isothermal amplification assay based on unique markers derived from genotyping by sequencing data for rapid in-planta diagnosis of panama disease caused by tropical race 4 in banana. Plant Pathology. 68:1682–1693. DOI: https:// doi.org/10.1111/ppa.13093.
Ploetz RC 2006. Fusarium-induced diseases of tropical, perennial crops. Phytopathology 96(6): 648–652. DOI: https://doi. org/10.1094/PHYTO-96-0648.
Ploetz RC. 2015. Fusarium wilt of banana. The American Phytopathological Society. 105(12):1512–1521. DOI: https://doi. org/10.1094/PHYTO-04-15-0101-RVW.
Ploetz RC, Kema GHJ, Ma LJ. 2015. Impact of diseases on export and smallholder production of banana. Annual Review of Phytopathology. 53(1):269–288. DOI: https://doi.org/10.1146/annurev- phyto-080614-120305.
Ruas M, Guignon V, Sempere G, Sardos J, Hueber Y, Duvergey H, Andrieu A, Chase R, Jenny C, Hazekamp T, Irish B, Jelali K, Adeka J, Ayala-Silva T, Chao CP, Daniells J,  Dowiya  B,  Effa  effa  B,  Gueco  L, Herradura L, Ibobondji L, Kempenaers E, Kilangi J, Muhangi S, Xuan PN, Paofa J, Pavis C, Thiemele D, Tossou C, Sandoval
J, Sutanto A, Paka GV, Yi G, Houwe IVD, Roux N, Rouard M. 2017. MGIS: Managing banana ( Musa spp.) genetic resources information and high-throughput genotyping data. The Journal of Biological Database and Curation. 1–12. DOI: https:// doi.org/10.1093/database/bax046.
Salacinas M, Meijer HJG, Mamora SH, Corcolon B, Gohari AM, Ghimire B, Kema GHJ. 2022. Efficacy of disinfectants against tropical race 4 causing Fusarium wilt in cavendish bananas. Plant Disease. 106(3):966–974. DOI: https://doi. org/10.1094/PDIS-08-20-1814-RE.
Sandoval-Denis M, Lombard L, Crous PW. 2019. Back to the roots: A reappraisal of Neocosmospora . Persoonia. 43(1):90– 185. DOI: https://doi.org/10.3767/ persoonia.2019.43.04.
Su HJ, Hwang SC, Ko WH. 1986. Fusarial wilt of cavendish bananas in Taiwan. Plant Disease. 70(9):814–818. DOI: https://doi. org/10.1094/PD-70-814.
Valmayor RV, Jamaluddin SH, Silayoi B,
Kusumo S, Danh LD, Pascua OC, Espino RRC. 1999. Banana Cultivar Names and Synonyms in Southeast Asia. Prancis: INIBAP-Montpellier France.
Valmayor RV, Jamaluddin SH, Silayoi B, Kusumo S, Danh LD, Pascua OC, Espino RRC. 2000. Banana Cultivar Names and Synonyms in Southeast Asia. Philippines: INIBAP-Asia and the Pacific Office.
Van Westerhoven AC, Meijer HJG, Houdijk J, Parte EMDL, Matabuana EL, Seidl MF, Kema GHJ. 2023. Dissemination of Fusarium wilt of banana in Mozambique caused by Fusarium odoratissimum tropical race 4. Plant Disease. 107(3): 628–632. DOI: https://doi.org/10.1094/ PDIS-07-22-1576-SC
Zakaria L. 2023. Fusarium species associated with diseases of major tropical fruit crops. Horticulturae. 9(3):1–32. DOI: https://doi. org/10.3390/horticulturae9030322.