DOI 10.33323/indigenous.v6i3.518
Volume 6(3) 2023 (115-125)
PROFIL DARAH DAN STRUKTUR MIKROANATOMI INSANG BELUT SAWAH ( Monopterus albus Zuiew) SETELAH PAPARAN HERBISIDA PARAQUAT DIKLORIDA ( BLOOD PROFILE AND MICROANATOMIC STRUCTURE OF THE GILLS OF POWDER EEL ( Monopterus albus Zuiew) AFTER EXPOSURE TO THE HERBICIDE PARAQUAT DICHLORIDE )
Wulandari Maulaningrum 1 , Diah Wulandari Rousdy 1 , Ari Hepi Yanti 1
Program Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tanjungpura, Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak, Indonesia email: wulandari30088@gmail.com

## Abstrak
Herbisida paraquat diklorida sulit terdegradasi secara biologis dan banyak digunakan di lahan pertanian yang merupakan habitat belut sawah. Efek toksik herbisida paraquat diklorida dalam suatu lingkungan dapat dilihat dari  perubahan  nilai  hematologi  suatu  hewan,  salah  satunya  belut  sawah.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  nilai  hematologi  dan  struktur  mikroanatomi  insang  belut  sawah  setelah  paparan  herbisida paraquat diklorida. Penelitian ini menggunakan metode Rancangan Acak Kelompok dengan 4 ulangan dan 5 perlakuan, yaitu kontrol, 1,5 ppm, 2,76 ppm, 4,14 ppm dan 5,52 ppm. Paparan herbisida paraquat diklorida dengan  konsentrasi  2,76  ppm,  4,14  ppm  dan  5,52  ppm  menunjukkan  adanya  penurunan  yang  nyata dibandingkan kontrol pada total eritrosit, total leukosit, kadar hemoglobin, nilai hematokrit, MCV, MCH, dan jumlah  limfosit.  Jumlah  monosit  dan  neutrofil  juga  mengalami  perubahan  berupa  peningkatan  yang  nyata dibandingkan kontrol. Penurunan tertinggi pada total leukosit sebesar 45% dan pada leukosit diferensial terjadi kenaikan tertinggi pada jumlah neutrofil sebesar 176%. Paparan paraquat diklorida menyebabkan hipertrofi, hemoragi, dan fusi filamen insang belut sawah.
Kata kunci : hematologi, insang, Monopterus albus , dan paraquat diklorida

## Abstract
The paraquat dichloride herbicide is difficult to degrade biologically, and it is widely used in agricultural land, which is the habitat of rice field eels. The toxic effect of the paraquat dichloride herbicide in an environment can be seen from changes in the hematological values of an animals, one of which is the rice  field eel. The aim of this research is to determine the hematological value and microanatomical structure of rice field eel gills after  exposure  to  paraquat  dichloride  herbicide.  This  study  used  a  randomized  block  design  with  four replications and five treatments: control, 1,5 ppm, 2,76 ppm, 4,14 ppm and 5,52 ppm. Exposure to paraquat dichloride herbicide at concentrations of 1,5 ppm, 2,76 ppm, 4,14 ppm, and 5,52 ppm  a noticeable decrease over  control  of  total  erythrocytes,  total  leukocytes,  hemoglobin  levels,  hematocrit  values,  MCV,  MCH,  and lymphocyte counts. The number of monocytes and neutrophils has also undergone noticeable improvements over  control.  The  highest  decrease  in  total  leukocytes  was  45%  and  in  differential  leukocytes  the  highest increase  was  in  the  number  of  neutrophils  by  176%.  Exposure  to  paraquat  dichloride  herbicides  causes hypertrophy, hemorrhages, and fusion of rice eel gill filaments.

## Keywords: gill, hematology, Monopterus albus, paraquat dichloride

## PENDAHULUAN
Belut sawah (Monopterus albus Zuiew) merupakan salah satu jenis ikan air tawar yang banyak digemari oleh masyarakat karena mudah ditemukan dan memiliki kandungan gizi yang cukup tinggi terutama kandungan proteinnya. Selain  itu, belut juga termasuk komoditi  yang bernilai ekonomis. Belut hidup di perairan tawar seperti sungai, danau, rawa-rawa dan sawah. Lahan pertanian sebagai habitat belut sawah tidak lepas dari penggunaan herbisida yang merupakan upaya pengendalian gulma  atau  tumbuhan  pengganggu.  Herbisida  merupakan  bahan  kimia  beracun  yang  apabila digunakan  secara  berlebihan  akan  berbahaya.  Herbisida  dengan  bahan  aktif  paraquat  diklorida merupakan herbisida yang banyak digunakan di lahan pertanian. Senyawa paraquat diklorida sulit terdegradasi  secara  biologis  dan  stabil  pada  suhu,  tekanan  dan  pH  normal.  Hal  ini  dapat mengakibatkan  residu  herbisida  paraquat  terakumulasi  dalam  tanah,  produk-produk  pertanian,
pencemaran pada lingkungan pertanian dan perairan, penurunan produktivitas hasil pertanian serta keracunan pada manusia dan hewan (Arfi, 2015).
Efek toksik polutan kimia dalam suatu lingkungan dapat diuji dengan menggunakan hewan yang terpapar  oleh  bahan  toksikan  tersebut,  salah  satunya  dengan  melihat  hematologinya.  Nilai hematologi  normal  dan  perubahannya  sebagai  respon  terhadap  suatu  penyakit  merupakan  data penting untuk manajemen kesehatan hewan (Lander et al . 2003). Penelitian  yang dilakukan oleh Hashemi et al . (2017) pada ikan binni ( Mesopotamichthys sharpeyi) menunjukkan terjadi penurunan secara  signifikan  pada  eritrosit,  leukosit,  konsentrasi  hemoglobin,  persen  hematokrit  dan  indeks darah  seperti  MCV  ( Means  Corpuscular  Volume ),  MCH  ( Means  Corpuscular  Haemoglobin )  dan MCHC  ( Means  Corpuscular  Haemoglobin  Concentration )  setelah  paparan  paraquat  diklorida selama 96 jam. Masuknya herbisida ke dalam tubuh belut dapat melalui alat pernapasan (insang), permukaan tubuh (penetrasi kulit) dan melalui rantai makanan, sehingga efek toksikan juga dapat dilihat  dari  gambaran  histologi  insang  ikan.  Hal  ini  karena  insang  merupakan  organ  yang berhubungan  langsung  dengan  bahan  toksik  di  perairan  (Ummah,  2015).  Ladipo et  al .  (2011) menyatakan  paparan  paraquat  diklorida  terhadap  ikan  lele  dumbo  ( Clarias  gariepinus ) menyebabkan  perubahan  histopatologi  pada  organ  insang  berupa  luka,  nekrosis,  pigmentasi, peradangan  dan  pertumbuhan  sel  tidak  terkendali. Berdasarkan  latar  belakang  tersebut,  maka tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui profil hematologi darah dan struktur mikroanatomi insang belut sawah ( M. albus ) setelah paparan herbisida paraquat diklorida.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Januari  hingga  September  2022  dan  dilakukan  di Laboratorium  Zoologi  dan  Laboratorium  Biologi,  Jurusan  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tanjungpura, Pontianak. Alat yang digunakan pada penelitian  ini adalah  akuarium,  hemositometer,  pipet  Thoma,  tabung  Sahli,  mikroskop  cahaya,  mikrosentrifus, mikrokapiler,  mikrotube,  pisau  bedah,  cawan  petri,  oven, hot  plate ,  mikrotom, staining  jar ,  kaca objek, kaca penutup, termometer, pH meter, pipet tetes, spuit, alat tulis lengkap, batang pengaduk, erlenmeyer, kertas label, kertas saring, tally counter , timbangan analitik dan tisu.
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah akuades, alkohol (30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 96% dan 100%), antikoagulan Titriplek III, asam asetat, Buffer Neutral Formalin (BNF) 10%, canada  balsam ,  formaldehida,  giemsa,  HCl  0,1  N,  Hematoxylin-Eosin  (HE),  Herbisida Gramoxone  276  SL  (Paraquat  Diklorida  276  g/l),  Parmetil  violet,  minyak  cengkeh, kalium  fosfat (KH 2 PO 4 ), natrium klorida (NaCl),  natrium fosfat (Na ₂ HPO 4 ), natrium sulfat (Na ₂ SO 4 ), parafin dan xilol.

## a.  Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  metode  Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK)  dengan 5  perlakuan, yaitu perlakuan I (kontrol) tanpa pemberian paraquat diklorida, perlakuan II paraquat diklorida 1,5 ppm,  perlakuan  III  paraquat  diklorida  2,76  ppm,  perlakuan  IV  paraquat  diklorida  4,14  ppm  dan perlakuan V paraquat diklorida 5,52 ppm. Setiap perlakuan terdiri dari 4 ulangan, masing-masing ulangan terdiri dari 3 individu belut sawah dan pengujian dilakukan selama 96 jam.

## b.  Sampel Belut Sawah ( M. albus )
Sampel belut sawah ( M. albus ) diperoleh dari pencari belut di lahan pertanian sawah Pontianak dengan panjang tubuh 29,5-57,5 cm. Belut sawah kemudian diaklimasi selama 1 minggu di dalam akuarium dengan ukuran ±30x25,5x19,5 cm, volume air 10 liter dengan suhu normal 26 - 32°C, pH normal air tawar 5,0 – 7,0 (Yusriadi et al ., 2017). Selama aklimasi belut sawah diberi pakan alami berupa jangkrik. Sebelum diberi perlakuan, belut sawah dipuasakan selama 1 hari.
c.  Prosedur Pembuatan Larutan Natt- Herrick’s
Larutan  Natt- Herrick’s  digunakan  untuk  perhitungan  eritrosit  dan  leukosit.  Bahan  –  bahan pembuatannya adalah natrium klorida (NaCl) 3,88 g, natrium sulfat (Na ₂ SO 4 ) 2,50 g, natrium fosfat (Na ₂ HPO 4 )  1,74  g,  kalium  fosfat  (KH ₂ PO 4 )  0,25  g,  formaldehida  7,50  mL  dan  metil  violet  0,10  g

## Indigenous Biologi
Jurnal pendidikan dan Sains Biologi 6(3) 2023
ditambahkan ke dalam akuades 1000 mL lalu diaduk. Larutan ini didiamkan semalaman dan disaring sebelum digunakan (Thrall et al ., 2022).

## d.  Pengambilan Sampel Darah
Pembiusan  belut  sawah  ( M.  albus ) menggunakan minyak  cengkeh  dengan volume  1 ml/L  air. Sampel darah diambil sebanyak 1 mL menggunakan spuit pada bagian intravena diventral anus. Darah ditampung dalam mikrotube yang telah diisi antikoagulan Titriplek III dengan berat ±1 mg. Selanjutnya mikrotube diberi label sebagai tanda.

## e.  Perhitungan Jumlah Eritrosit
Penghitungan  jumlah  total  eritrosit  dilakukan  dengan  menggunakan  hemositometer.  Darah diencerkan  dalam  pipet  Thoma  kemudian  dihitung  dalam  hemositometer  dan  diamati  di  bawah mikroskop  dengan  perbesaran  10x40  lalu  dihitung  dengan  menggunakan tally  counter .  Jumlah eritrosit dihitung dengan rumus berikut (Aditama, 2012) :
Jumlah eritrosit (sel/μL) = jumlah eritrosit x 4000 x 200
80
Means Corpuscular Volume (MCV) untuk mengetahui ukuran sel eritosit pada sampel darah yang diambil saat pemeriksaan dihitung dengan rumus berikut (Greer et al ., 2019) : MCV (fL) = Hematokrit (%) x 10 Eritrosit (10 6 /μL)

## f.  Perhitungan Jumlah Leukosit
Leukosit  diferensial  dibuat  dengan  metode  preparat  apus  menggunakan  pewarna  Giemsa. Pengamatan  dilakukan  di  bawah  mikroskop  cahaya  dengan  menghitung  jenis –  jenis  leukosit sebanyak  100  sel.  Penghitungan  jumlah  total  leukosit  dilakukan  dengan  hemositometer,  darah diencerkan  dalam  pipet  Thoma  kemudian  dihitung  dalam  hemositometer  dan  diamati  di  bawah mikroskop  cahaya  dengan  perbesaran  10x40  lalu  dihitung  dengan tally  counter .  Jumlah  leukosit dihitung dengan rumus berikut (Rousdy & Linda, 2018) :
Jumlah leukosit (sel/μL) = jumlah leukosit x 160 x 200
64

## g.  Penentuan Kadar Hemoglobin
Penentuan  kadar  hemoglobin  dengan  menggunakan  metode  Sahli.  Larutan  HCl  0,1  N dimasukkan ke dalam tabung Sahli hingga pada skala 10, lalu ditambahkan darah yang akan diuji sebanyak 20 mL, diaduk menggunakan batang pengaduk sampai homogen. Selama pengadukan lakukan  penambahan  akuades  sedikit  demi  sedikit.  Setelah  homogen,  warna  darah  disamakan dengan  warna  larutan  standar.  Kadar  hemoglobin  (g/dL)  dari  sampel  darah  adalah  angka  yang ditunjukkan pada dinding tabung oleh permukaan cairan dalam tabung.
Means Corpuscular Haemoglobin Concentration (MCHC) untuk menghitung konsentrasi rata-rata hemoglobin pada setiap sel darah merah dengan rumus berikut (Greer et al ., 2019) : MCHC  (g/dL) = Hemoglobin (g/dL) x 100 Hematokrit (%)
Means  Corpuscular  Haemoglobin (MCH)  untuk  menghitung  jumlah  atau  berat  rata-rata hemoglobin pada setiap sel darah merah dalam tubuh, dihitung dengan rumus berikut (Greer et al ., 2019) :
MCH (pg) = Hemoglobin (g/dL) x 10 Eritrosit (10 6 /μL)

## h.  Penentuan Nilai Hematokrit
Sampel darah diambil dengan menggunakan tabung mikrokapiler hematokrit, ujung mikrokapiler disumbat  dengan  plastisin.  Selanjutnya  masukkan  tabung  kapiler  ke  dalam  mikrosentrifus  dan disentrifuse dengan kecepatan 10.000 rpm selama lima menit. Nilai hematokrit dibaca dengan skala ukur hematokrit dalam satuan persen, dengan rumus sebagai berikut (Suwarto et al ., 2016) : Nilai hematokrit (%) = Volume sel darah × 100% Volume darah

## i.  Pembuatan Preparat Insang
Belut  sawah  yang  telah  dibius,  dibedah  dan  diambil  insang  bagian  kanan.  Preparat  histologi insang  dibuat  dengan  metode  paraffin,  tahapan  fiksasi  menggunakan  asam  asetat  dan Buffer Neutral Formalin (BNF) 10% dan tahap dehidrasi menggunakan alkohol konsentrasi bertingkat 50- 100% serta penjernihan menggunakan xilol. Kemudian infiltrasi dan penanaman dalam parafin. Blok preparat  diiris  menggunakan  mikrotom  putar  dengan  ketebalan  6- 8  μm.  Pita  sayatan  kemudian diwarnai  dengan  metode  Hematoxylin-Eosin  (HE).  Irisan  preparat  ditutup  menggunakan  canada balsam dan gelas penutup. Preparat insang diamati di bawah mikroskop cahaya dengan perbesaran 40,  100  dan  400  kali  sesuai  dengan  kejelasan  objek.  Setiap  insang  dibuat  preparat  sayatan sebanyak 2 object glass per perlakuan dan setiap object glass terdapat lima sayatan insang.

## j.  Parameter Kualitas Air
Parameter  kualitas  air  yang  diukur  saat  paparan  meliputi  suhu  dengan  menggunakan termometer, pH air dengan menggunakan pH meter dan DO (oksigen terlarut) menggunakan DO meter.

## k.  Analisis Data
Parameter  yang  diamati  pada  penelitian  ini  berupa  nilai  hematologi  dan  mikroanatomi  insang belut sawah sebelum dan sesudah paparan. Parameter yang dianalisis yaitu nilai hematologi belut sawah  meliputi  jumlah  eritrosit  dan  leukosit  total,  leukosit  diferensial,  kadar  hemoglobin,  nilai hematocrit, MCV, MCH dan MCHC. Parameter histologi insang dianalisis secara deskriptif seperti fusi lamela, hiperplasia dan hipertrofi. Analisis data menggunakan Anova satu arah dan dilanjutkan dengan uji lanjut Duncan untuk parameter darah. Uji statistik dilakukan pada derajat kepercayaan 95% dan signifikansi α 0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## a.  Nilai Hematologi Belut Sawah ( M. albus )
Belut sawah ( M. albus ) yang terpapar herbisida paraquat diklorida menunjukan perbedaan nilai hematologi sebelum dan setelah paparan. Hasil rerata total eritrosit dan MCV setelah paparan terjadi penurunan yang signifikan pada konsentrasi 5,52 ppm dibandingkan dengan kontrol (0 ppm). Rerata total leukosit terjadi penurunan yang signifikan pada konsentrasi 2,76 ppm, 4,14 ppm dan 5,52 ppm. Kadar  hemoglobin  juga  terjadi  penurunan  yang  signifikan  pada  konsentrasi  4,14  ppm  dan  5,52. Kadar hematokrit terjadi penurunan yang signifikan pada konsentrasi 1,5 ppm, 2,76 ppm, 4,14 ppm dan 5,52 dibandingkan dengan kontrol (0 ppm). Parameter MCH dan MCHC tidak terjadi penurunan yang signifikan pada semua konsentrasi. Nilai hematologi terendah terdapat pada konsentrasi 5,52 ppm paraquat diklorida (Tabel 1).
Selisih nilai hematologi belut sawah sebelum dan setelah paparan herbisida paraquat diklorida ditunjukkan pada Gambar 1. Angka negatif menunjukkan adanya penurunan nilai hematologi dan angka positif menunjukkan adanya peningkatan nilai hematologi. Penurunan tertinggi terjadi pada total  leukosit  dengan  konsentrasi  5,52  ppm  sebesar  45%  dan  peningkatan  tertinggi  pada  MCHC dengan konsentrasi 2,76 ppm sebesar 5%.
Tabel 1. Hasil Pengukuran Hematologi Belut Sawah ( M. albus ) pada Paparan Herbisida Paraquat
Diklorida Hematologi Perlakuan 0 ppm 1,5 ppm 2,76 ppm 4,14 ppm 5,52 ppm Total Eritrosit (×10 6 /µL) Sebelum 2,41±0,09 a 2,39±0,07 a 2,40±0,10 a 2,37±0,08 a 2,31±0,08 a Setelah 2,42±0,09 b 2,37±0,08 b 2,36±0,10 b 2,28±0,11 ab 2,21±0,08 a Total Leukosit (×10 5 /µL) Sebelum 0,76±0,08 a 0,78±0,02 a 0,77±0,05 a 0,78±0,07 a 0,76±0,04 a Setelah 0,76±0,07 c 0,70±0,02 c 0,55±0,12 b 0,43±0,05 a 0,42±0,05 a Kadar Hemoglobin (g/dL) Sebelum 11,72±0,27 a 11,83±0,17 a 11,89±0,22 a 11,98±0,08 a 11,83±0,15 a Setelah 11,78±0,25 c 11,65±0,16 c 11,48±0,14 c 10,90±0,32 b 10,55±0,52 a Sebelum 51,42±1,34 ab 50,75±1,10 ab 52,50±3,14 b 52,08±2,54 ab 48,00±0,98 a

## Indigenous Biologi
Jurnal pendidikan dan Sains Biologi 6(3) 2023
Keterangan: Nilai yang diikuti oleh huruf superscript yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan hasil yang berbeda nyata pada taraf ɑ=0,05.
Gambar 1. Persentase Selisih Nilai Hematologi Belut Sawah ( M. albus )

## b.  Nilai Leukosit Diferensial Belut Sawah ( M. albus )
Paparan  herbisida  paraquat  diklorida  pada  belut  sawah  ( M.  albus )  juga  memengaruhi  jumlah leukosit diferensial. Jumlah limfosit dan neutrofil mengalami peningkatan secara signifikan setelah paparan paraquat  diklorida dengan konsentrasi 2,76 ppm, 4,14 ppm dan 5,52 ppm dibandingkan dengan kontrol (0 ppm) (Tabel 2). Selisih nilai leukosit diferensial belut sawah sebelum dan setelah paparan  herbisida  paraquat  diklorida  ditunjukkan  pada  Gambar  2.  Grafik  negatif  menunjukkan adanya penurunan dan grafik positif menunjukkan adanya peningkatan. Paparan herbisida paraquat diklorida  menyebabkan  penurunan  pada  limfosit  dan  eosinofil  serta  peningkatan  pada  monosit, neutrofil, dan basofil. Penurunan tertinggi terjadi pada eosinofil dengan konsentrasi 1,5 ppm sebesar 33% dan peningkatan tertinggi pada neutrofil dengan konsentrasi 5,52 ppm sebesar 176%.
Tabel 2. Hasil Pengukuran Leukosit Diferensial Belut Sawah ( M. albus ) pada Paparan Herbisida
Paraquat Diklorida Jenis Leukosit (%) Perlakuan 0 ppm 1,5 ppm 2,76 ppm 4,14 ppm 5,52 ppm Limfosit Sebelum  79,08±2,7 a 79,42±1,32 a 77,58±2,99 a 77,92±2,48 a 78,00±1,7 a Setelah 78,83±2,59 c 76,83±1,73 c 72,67±3,50 b 70,00±2,74 ab 66,50±0,88 a Monosit Sebelum  17,00±0,72 a 15,58±2,54 a 16,58±3,2 a 14,67±1,74 a 16,17±2,7 a Setelah 16,67±1,90 a 16,75±2,32 a 18,00±4,45 a 16,50±2,04 a 19,92±2,47 a Neutrofil Sebelum  3,67±0,9 a 3,5±3,29 a 4,83±1,55 a 6,08±1,26 a 4,58±1,34 a Setelah 3,42±0,50 c 5,08±2,99 c 8,33±1,86 b 12,08±0,88 a 12,83±1,40 a Eosinofil Sebelum  0,67±0,54 a 1,00±0,27 a 0,75±0,69 a 1,08±0,57 a 0,83±0,58 a Setelah 0,75±0,42 a 0,67±0,27 a 0,58±0,32 a 1,08±0,32 a 0,75±0,32 a Basofil Sebelum  0,33±0,27 a 0,67±0,27 a 0,25±0,32 a 0,25±0,32 a 0,42±0,42 a
0% 0% 1% 1% 0% 0% 0% -1% -10% -2% -3% -2% 0%
2%
-2% -29% -3% -7% -6% -2%
5%
-4% -45% -9% -10% -7% -5%
2%
-4% -45% -11% -12% -7% -7% 1% -50% -40% -30% -20% -10% 0% 10% S el is ih ( % ) 0 ppm 1,5 ppm 2,76 ppm 4,14 ppm 5,52 ppm Nilai Hematokrit (%) Setelah 51,83±1,29 c 49,08±1,66 b 47,83±2,20 b 46,67±3,62 b 42,42±3,71 a MCV (10 -5 /fL) Sebelum 21,33±0,34 a 21,28±0,95 a 21,55±1,27 a 21,97±1,4 a 20,79±0,53 a Setelah 21,42±0,57 b 20,80±1,12 ab 20,36±1,4 ab 20,54±2,08 ab 19,24±0,34 a MCH (10 -5 /pg) Sebelum 4,86±0,21 a 4,96±0,14 a 4,98±0,26 a 5,06±0,16 a 5,13±0,24 a Setelah 4,87±0,22 a 4,93±0,11 a 4,89±0,23 a 4,80±0,32 a 4,78±0,20 a MCHC (g/dL) Sebelum 22,81±0,68 a 23,38±0,78 a 23,07±0,4 a 23,11±1,21 a 24,69±0,71 a Setelah 22,74±0,42 a 23,87±1,18 a 24,11±1,39 a 23,62±2,40 a 24,98±0,53 a
Setelah 0,58±0,32 a 0,67±0,27 a 0,42±0,32 a 0,33±0,27 a 0,33±0,27 a
Keterangan: Nilai yang diikuti oleh huruf superscript yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan hasil yang berbeda nyata pada taraf ɑ=0,05.
Gambar 2 . Persentase Selisih Nilai Leukosit Diferensial Belut Sawah ( M. albus )

## c.  Struktur Mikroanatomi Insang Belut Sawah ( M. albus )
Insang belut sawah tidak terlalu menonjol dan memiliki filamen tumpul seperti tunas kecil yang hanya  ada  pada  pasangan  kedua  insang  serta  tidak  memiliki  lamela  insang.  Hasil  pengamatan mikroanatomi  insang  belut  sawah  setelah  paparan  herbisida  paraquat  diklorida  ditemukan mengalami  kerusakan  yang  ditandai  adanya  perubahan  struktur.  Kerusakan  insang  pada konsentrasi 1,5 ppm dan 2,76 ppm berupa hipertrofi, pada konsentrasi 4,14 ppm kerusakan insang berupa hipertrofi dan hemoragi, sedangkan kerusakan insang pada konsentrasi 5,52 ppm berupa hipertrofi, fusi filamen dan hemoragi.
0% -2% -7% 12% 76% -3% 8% 45% -33% 0% -6% 9% 72% -23% 68% -10% 12% 99% 0% 32% -15% 22% 176% -10% 19% -50% 0% 50% 100% 150% 200% S el is ih ( % ) 0 ppm 1,5 ppm 2,76 ppm 4,14 ppm 5,52 ppm
a H b b H Fl

## Indigenous Biologi
Jurnal pendidikan dan Sains Biologi 6(3) 2023
Gambar 3 . Mikroanatomi Insang Belut Sawah ( M. albus ) yang Terpapar Paraquat Diklorida pada Berbagai Perlakuan (a. 0 ppm, b. 1,5  ppm, c. 2,76 ppm, d. 4,14 ppm, e. 5,52 ppm). Kerusakan yang Terjadi Berupa (F) Fusi Filamen, (H) Hipetrofi dan (Hm) Hemoragi; Filamen Insang (Fl) (Pewarnaan HE, Perbesaran 400X)

## d.  Hasil Pengukuran Parameter Kualitas air
Parameter  lingkungan  yang  diukur  berupa  suhu  air,  pH  air  dan  DO  (oksigen  terlarut).  Hasil pengukuran suhu air terendah pada 25,9 °C dan tertinggi pada 28,8 °C. Nilai pH terendah adalah 6 dan  tertinggi  adalah  7.  Nilai  DO  terendah  pada  4,7  ppm  dan  tertinggi  pada  6,6  ppm.  Parameter kualitas air ini masih dalam rentang baku mutu (Tabel 3).
Tabel 3. Hasil Pengukuran Parameter Kualitas Air Parameter P1 P2 P3 P4 P5 Baku mutu Suhu (°C) 26,3-28,8 26,2-28,8 25,9-28 26-28 25,9-28 25-32 pH 6-7 6-7 6-7 6-7 6-7 6-7 DO (ppm) 4,7-6,4 4,9-6,5 4,7-6,6 4,7-6,5 5,2-6,5 >3 Sumber baku mutu (Siregar et al ., 2021)

## Pembahasan
Hasil penelitian ini menunjukkan rata-rata nilai total eritrosit setelah paparan paraquat diklorida mengalami penurunan yang berbeda nyata dengan kontrol (Tabel 1). Penurunan total eritrosit  ini disebabkan oleh peningkatan produksi radikal bebas berupa Reactive Oxygen Species (ROS) oleh paraquat  yang  menyebabkan  peroksidasi  lipid  penyusun  membran  sel  eritrosit.  Peroksidasi  lipid merupakan  patofisiologi  pertama  dari  intoksikasi  paraquat  diklorida.  ROS  dalam  kondisi  normal memiliki peran penting dalam persinyalan sel dan hemostasis serta fungsi pembuluh darah. Produksi
d d H H Hm m Hm c c H H e H e F Hm m Hm
ROS yang berlebih akan menyebabkan stress oksidatif yang dapat menganggu suplai oksigen dan mempercepat  penuaan  eritrosit  (Gwozdzinski et  al .,  2021). Peroksidasi  membran  eritrosit menyebabkan hemolisis sehingga terjadi penurunan kadar hemoglobin dan hematokrit (Tamam et al .,  2012).  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  Edo  (2022),  bahwa  paparan  paraquat  diklorida menyebabkan penurunan total eritrosit dan hemoglobin pada tikus jantan dewasa. Penurunan kadar hemoglobin pada kelompok perlakuan juga dapat disebabkan adanya kerusakan pada insang akibat penyerapan toksikan secara terus menerus. Kerusakan insang akan menghambat proses respirasi sehingga  oksigen  dalam  darah  berkurang.  Menurut  Clark et  al .  (1988),  paraquat  menyebabkan perubahan  struktur  pada  hemoglobin.  Interaksi  ROS  dengan  oksihemoglobin  dapat  membentuk methemoglobin sehingga hemoglobin tidak mampu mengangkut oksigen karena adanya besi (Fe 3+ ). Hal ini menyebabkan tubuh kekurangan oksigen atau yang disebut dengan hipoksia.
MCV mengalami penurunan yang signifikan pada konsentrasi 5,52 ppm dibandingkan dengan kelompok  kontrol  (Tabel  1).  MCV  merupakan  ukuran  atau  volume  rata-rata  eritrosit.  MCH  juga mengalami  penurunan  pada  semua  perlakuan,  tetapi  tidak  signifikan  dibandingkan  dengan kelompok kontrol (Tabel 1). MCH adalah rata-rata hemoglobin dalam satu eritrosit. Indeks eritrosit ini merupakan salah satu tanda terjadinya anemia. Menurut Edo (2022), pengurangan jumlah nilai indeks eritrosit (MCV, MCH dan MCHC) dapat dikaitkan dengan pengaruh toksik paraquat diklorida pada  sistem  hemopoietik.  Nilai  MCHC  tidak  mengalami  penurunan  yang  signifikan  pada  semua perlakuan.  MCHC  merupakan  kadar  hemoglobin  di  dalam  total  eritrosit.  Peningkatan  MCHC menunjukkan  bahwa  kadar  hemoglobin  dalam  eritrosit  meningkat.  Penelitian  toksikopatologi paraquat herbisida per-oral pada tikus betina oleh Lalruatfela et al. (2014), menyatakan bahwa hasil rata-rata MCV, MCH dan MCHC setelah paparan 28 hari tidak mengalami penurunan yang signifikan disebabkan karena waktu paparan yang tidak terlalu lama.
Perubahan profil hematologi belut sawah setelah paparan herbisida paraquat diklorida dengan konsentrasi  yang  berbeda  pada  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  efek  toksik  paraquat memengaruhi sistem hemopoiesis. Paraquat yang ada didalam darah akan diekskresikan melalui ginjal. Paraquat ini juga meningkatkan ROS dan menyebabkan peroksidasi lipid pada mitokondria didalam  ginjal  sehingga  terjadi  disfungsi  mitokondria  yang  mengakibatkan  terjadinya  kerusakan ginjal.  Selain  disfungsi  mitokondria,  ginjal  juga  dapat  rusak  akibat  dari  konsentrasi  toksikan  yang berlebih.  Rusaknya  ginjal  dapat  mengganggu  proses  hemopoiesis  karena  pada  ikan  proses  ini terjadi di kepala ginjal. Lalruatfela et al . (2014), melaporkan adanya perubahan yang signifikan pada total  eritrosit,  hemoglobin  dan  hematokrit  setelah  paparan  paraquat  dan  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  pada  tikus  betina.  Hasil  ini  menunjukkan  kemungkinan  paraquat  untuk menginduksi  anemia  dan  memengaruhi  sistem  hemopoiesis.  Bhardwaj  &  Saxena  (2014) menyatakan  bahwa  pemberian  paraquat  berulang  pada  waktu  tertentu  (7,  14  dan  21  hari) menyebabkan penurunan yang signifikan pada jumlah eritrosit darah serta kadar hemoglobin darah tikus. Hasil ini menunjukkan bahwa paraquat menginduksi anemia sementara pada tikus.
Sama halnya dengan total eritrosit, total leukosit pada belut sawah setelah paparan paraquat diklorida juga mengalami penurunan yang signifikan dibandingkan dengan kontrol (Tabel 1). Analisis total  leukosit  merupakan  salah  satu  indeks  yang  paling  penting  dalam  mendeteksi  adanya keracunan paraquat (Tang et al ., 2018). Penurunan total leukosit dapat terjadi karena efek toksik paraquat  diklorida memengaruhi  proses  leukopoiesis.  Menurut  Hashemi et  al .  (2017),  perubahan kadar  leukosit  setelah  paparan  herbisida  dapat  disebabkan  adanya  gangguan  dalam  proses hematopoiesis dan melemahnya kekebalan pada ikan.
Leukosit terdiri dari beberapa jenis, yaitu limfosit, monosit, neutrofil, eosinofil dan basofil. Semua jenis  leukosit  ini memiliki peran dan fungsi  yang berbeda dalam sistem kekebalan tubuh. Jumlah leukosit  diferensial  menunjukkan  respon  leukosit  dalam  mencegah  adanya  penyakit  dan peradangan (Purnomo et al ., 2015). Jumlah limfosit pada belut sawah mengalami penurunan yang signifikan dibandingkan dengan kontrol (Tabel 2). Hal ini karena limfosit berperan dalam merespon adanya  antigen  dan  stress  dengan  meningkatkan  sirkulasi  antibodi  dalam  sistem  imun.  Jumlah limfosit  dipengaruhi  oleh  cekaman  lingkungan  dan  stress (Purnomo et  al .,  2015).  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  Hashemi et  al. (2017),  bahwa  limfosit  ikan  binni  ( Mesopotamichthys  sharpeyi) mengalami penurunan setelah  paparan herbisida paraquat diklorida dalam waktu tertentu.

## Indigenous Biologi
Jurnal pendidikan dan Sains Biologi 6(3) 2023
Jumlah  monosit  dan  neutrofil  mengalami  peningkatan  setelah  paparan  paraquat  diklorida dibanding dengan kontrol (Gambar 2 dan Tabel 2). Peningkatan jumlah monosit dan neutrofil dapat disebabkan karena adanya kerusakan pada insang belut sawah berupa hipertrofi dan fusi filamen. Hal  ini  karena  monosit  merupakan  prekursor  sistem  fagosit  mononuklear  sehingga  mampu memfagositosis  patogen  dan  merespon  peradangan.  Neutrofil  memiliki  peranan  yang  penting apabila  ada  kerusakan  jaringan  yang  berkaitan  dengan  penyakit  noninfeksi  (Giyartika  &  Keman, 2020).
Jumlah eosinofil dan basofil mengalami penurunan dan peningkatan tetapi tidak berbeda nyata dibanding kontrol setelah paparan paraquat diklorida. Hal ini dapat dikaitkan dengan fungsi dari dua jenis  leukosit  ini.  Eosinofil  berperan  dalam  proses  reaksi  alergi  dan  infeksi  parasit  (Giyartika  & Keman,  2020),  sedangkan  basofil  berperan  dalam  respon  kekebalan  tubuh  berupa  reaksi  alergi (Lokapirnasari & Yulianto, 2014).
Berdasarkan  pengamatan  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini,  insang  belut  sawah  berbeda dengan insang ikan pada umumnya. Belut sawah memiliki filamen tumpul dan tidak memiliki lamela insang. Hal ini dapat dikaitkan dengan habitat belut sawah yang berada pada perairan berlumpur dan belut juga termasuk kelompok ikan air breathing , yaitu ikan yang mampu mengambil oksigen langsung dari udara. Menurut Mech et al. (2015), insang Monopterus cuchia tidak terlalu menonjol, lengkungan  cabang  kedua  memiliki  beberapa  bilah  kecil  seperti  filamen.  Pangkal  filamen  insang menyatu dengan lengkung cabang. Struktur filamen berbentuk seperti tunas kecil yang dilapisi oleh sel  endotel  (Gambar  3).  Permukaan  filamen  ditutupi  oleh  sel  epitel  berlapis  yang  diantaranya terdapat area bantalan mikrovili berbentuk segitiga yang mewakili bagian apikal dari sel klorida.
Stress  oksidatif  akibat  akumulasi  paraquat  diklorida  menyebabkan  produksi  mukus  secara berlebihan  sebagai  perlindungan  alami  agar  toksikan  tidak  lagi  masuk.  Kemudian  akan  terjadi penumpukan  mukus  sehingga  insang  akan  mengalami  pembengkakan  dan  kerusakan.  Selain karena mukus  yang  berlebih,  insang juga  dapat  rusak akibat  dari  sifat  korosif  paraquat diklorida. Kerusakan  pada  insang  merupakan  gejala  sekunder  dari  intoksikasi  paraquat  diklorida.  Paparan herbisida  paraquat  diklorida  dengan  konsentrasi  yang  berbeda  pada  belut  sawah  menyebabkan kerusakan pada struktur mikroanatomi insang berupa fusi filament, hipertrofi dan hemoragi (Gambar 3). Hemoragi ditandai dengan adanya spot berwarna merah pada jaringan akibat dari inflamasi pada insang.    Inflamasi  ini  akan  menyebabkan  pelebaran  endotel  untuk  meningkatkan  volume  darah. Volume darah yang berlebih akan mengakibatkan pembuluh darah rusak atau pecah sehingga darah akan berada diluar pembuluh darah. Hemoragi ini dapat menyebabkan terganggunya suplai darah. Hasil  penelitian  sebelumnya  oleh  Lalruatfela et  al .  (2014),  menemukan  adanya  hemoragi  dan kongesti  pada  hati  tikus  betina  setelah  paparan  paraquat  diklorida.  Insang  mengalami  hipertrofi dengan adanya penebalan dan ditandai dengan penambahan volume sel epitel. Fusi filamen insang dapat  terjadi  akibat  hipertrofi  sel  secara  terus  menerus  sehingga menyebabkan  perlekatan  antar filamen.  Fusi  filamen  ini  dapat  mengurangi  efisiensi  difusi  gas.  Badroo  &  Khanday  (2020), menyatakan paparan paraquat diklorida pada konsentrasi akut menyebabkan perubahan histologi pada  insang  ikan  gabus  ( Channa  punctatus )  berupa  vakuola,  nekrosis,  hipertrofi,  edema  dan infiltrasi  limfosit.  Insang  kontak  langsung  dengan  air  yang  mengandung  toksikan  dan  secara berkelanjutan akan menyebabkan destruksi morfologi epitelium insang. Kerusakan epitelium insang ini  merupakan  respon  adaptif  untuk  mencegah  lebih  banyak  masuknya  toksikan  (Sudrajat et  al ., 2020).
Parameter  lingkungan  yang  diukur  pada  penelitian  ini  berupa  suhu,  pH  dan  oksigen  terlarut (DO).  Suhu  terendah  selama  penelitian  adalah  25ºC  dan  yang  tertinggi  28,8ºC.  Menurut  Kordi (2014), kisaran suhu air yang baik untuk hidup belut sawah adalah 22ºC-32ºC. Parameter pH air yang  terukur  selama  penelitian  adalah  6-7.  Kordi  (2014),  menyatakan  bahwa  belut  sawah  hidup pada perairan dengan pH 6-7. Oksigen terlarut selama penelitian terendah 4,7 ppm dan tertinggi 6,6 ppm. Nilai oksigen terlarut ini masih tergolong baik untuk perikanan karena lebih dari 3 ppm (Siregar et al ., 2021). Berdasarkan baku mutu ini, parameter kualitas air selama penelitian sudah sesuai dan optimal untuk kehidupan belut sawah.
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan,  dapat  disimpulkan  bahwa  paparan  herbisida  paraquat diklorida  dengan  konsentrasi  2,76  ppm,  4,14  ppm,  dan  5,52  ppm  berpengaruh  terhadap  profil hematologi darah belut sawah ( M. albus ) berupa penurunan yang nyata dibandingkan kontrol pada total  eritrosit,  total  leukosit,  kadar  hemoglobin,  nilai  hematokrit,  MCV,  MCH,  dan  jumlah  limfosit. Jumlah  monosit  dan  neutrofil  juga  mengalami  perubahan  berupa  peningkatan  yang  nyata dibandingkan kontrol. Penurunan tertinggi pada total leukosit dengan konsentrasi 4,14 ppm dan 5,52 ppm paraquat diklorida sebesar 45%. Struktur mikroanatomi insang belut sawah ( M. albus ) setelah paparan  paraquat  diklorida  mengalami  kerusakan  berupa  hipertrofi,  fusi  filamen  insang  dan hemoragi.

## DAFTAR PUSTAKA
Aditama,  NK.  (2012). Pengaruh  Pemberian  Polisakarida  Krestin  dari  Ekstrak  Coriolus  versicolor terhadap  Jumlah  Eritrosit  dan  Kadar  Hemoglobin  pada  Mencit  yang  Terpapar  Timbal. Surabaya: Universitas Airlangga.
Arfi, F. (2015). Degradasi Senyawa Paraquat dalam Pestisida Gramoxone Secara Sonolisis dengan Penambahan ZnO. Lantanida Journal. 3(1):71-81.
Badroo  IA,  Khanday  AH.  (2020).  Toxicological  Impacts  of  Herbicide  Paraquat  Dichloride  on Histological Profile (Gills, Liver, and Kidney) Of Freshwater Fish Channa punctatus (Bloch). Environmental Science and Pollution Research. 27(31):39054 –39067.
Bhardwaj  N,  Saxena  RK.  (2014).  Elimination  of  Young  Erythrocytes  from  Blood  Circulation  and Altered Erythropoietic Patterns during Paraquat Induced Anemic Phase in Mice. PLoS ONE. 9(6):1-11.DOI: 10.1371/journal.pone.0099364
Chang, R. (2005). Kimia Dasar: Konsep Konsep Inti Jilid 2. Jakarta: Erlangga.
Clark MW, Gildersleeve RP, Thaxton JP, Parkhurst CR, Mcree DI. (1988). Hematological Effects of Ethyl  Methanesulfonate,  Paraquat  and  Phenylhydrazine  in  Japanese  Quail. Comparative Biochemistry and Physiology. 89C(1):15-30.
Edo, GI. (2022). Effects of Paraquat Dichloride on Adult Male Wistar Rat. an Approach in the Toxicity of Body Weights and Hematological Tissues. Journal of Analytical Pharmaceutical Research. 11(1):1-7.DOI: 10.15406/japlr.2022.11.00394.
Giyartika F, Keman S. (2020). Perbedaan Peningkatan Leukosit pada Radiografer di Rumah Sakit Islam Jemursari Surabaya. Jurnal Kesehatan Lingkungan. 12(2):97-106.DOI: 10.20473/jkl.v12i2.2020.97-106.
Greer JP, Arber DA, Glader BE, List AF, Means RT, Rodgers GM, et al . (2019). Wintrobe's Clinical Hematology:  Fourteenth  Edition. Philadelphia:  Wolters  Kluwer  Health  Pharma  Solutions (Europe) Ltd.
Gwozdzinski  K,  Pieniazek  A,  Gwozdzinski  L.  (2021).  Reactive  Oxygen  Species  and  Their Involvement in Red Blood Cell Damage in Chronic Kidney Disease. Oxidative Medicine and Cellular Longevity . 1-19.
Hashemi RA, Jaddi Y, Sadeghi MA, Ghiamati S, Motazedi M. (2017). Study of Toxicology Effects of Herbicide  Paraquat  on  Heamatological  Parameters  of Mesopotamichthys  sharpeyi . Open Journal of Marine Science. 7:258-270.DOI: 10.4236/ojms.2017.72018.
Kordi,  MH.  (2014). Budi  Daya  Belut  di  Media  Air  Secara  Organik. Yogyakarta:  Penerbit  Lily Publisher.
Ladipo  MK,  Doherty  FV,  Oyebadejo  S.  (2011).  Acute  Toxicity,  Behavioural  Changes  and Histopathological  Effect  of  Paraquat  Dichloride  on  Tissues of  Catfish  ( Clarias  gariepinus ). International Journal of Biology. 3 (2):67-74.

## Indigenous Biologi
Jurnal pendidikan dan Sains Biologi 6(3) 2023
Lalruatfela PL, Saminathan M, Ingole RS, Dhama K, Joshi MV. (2014). Toxicopathology of Paraquat Herbicide in Female Wistar Rats. Asian Jurnal of Animal and Veterinary Advances. 9(9):523- 542.DOI: 10.3923/ajava.2014.523.542.
Lander M, Harvey J, Gulland F. (2003). Hematology and Serum Chemistry Comparisons Between Free-Ranging  and  Rehabilitated  Harbor  Seal  ( Phoca  vitulina Richardsi)  Pups. Journal  of Wildlife Diseases. 39(3):600-609.
Lokapirnasari  WP,  Yulianto  AB.  (2014).  Gambaran  Sel  Eosinofil,  Monosit,  dan  Basofil  Setelah Pemberian  Spirulina  pada  Ayam  yang  Diinfeksi  Virus  Flu  Burung. Jurnal  Veteriner. 15(4):499-505.
Mech B, Borah J, Rai A. (2015). Structure and Cells in the Gills of the Three Air-Breathing Fishes Clarias  batrachus,  Heteropneustes  fossilis and Monopterus  cuchia .  A  Light  Microscopical Investigation. Indian Journal of Applied Research. 5(8):674-677.
Purnomo D, Sugiharto, Isroli. (2015). Total Leukosit dan Diferensial Leukosit Darah Ayam Broiler Akibat  Penggunaan  Tepung  Onggok  Fermentasi Rhizopus  oryzae pada  Ransum. Jurnal Ilmu-Ilmu Peternakan. 25(3):59-68.
Rousdy DW, Linda R. (2018). Hematologi Perbandingan Hewan Vertebrata: Lele ( Clarias batracus ), Katak ( Rana sp.), Kadal ( Eutropis multifasciata ), Merpati ( Columba livia ) dan Mencit ( Mus musculus ). Bioma. 7(1):1-13.
Siregar AR, Pamukas NA, Putra I. (2021). Pengaruh Padat Tebar Belut Sawah ( Monopterus albus ) yang  Dipelihara  dalam  Media  Lumpur  terhadap  Pertumbuhan  dan  Kelulushidupan. Jurnal Akuakultur Sebatin. 2(1):44-49.
Sudrajat, Astuti D, Mustakim M. (2020). Analisis Histopatologis Insang dan Kandungan Logam Berat Pb, Cd dan Fe pada Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ) yang Dibudidayakan di Kolam Bekas Tambang Kota Samarinda. Dinamika Lingkungan Indonesia. 7(1):36-42.
Suwarto S, Nainggolan L, Sinto R, Effendi B, Ibrahim E, Suryamin M. et al . (2016). Dengue Score: a Proposed Diagnostic Predictor for Pleural Effusion and/or Ascites in Adults with Dengue Infection. BMC Infectious Diseases. 16(322):1-7.
Tamam M, Hadisaputro S, Sutaryo, Setianingsih I, Djokomoeljanto, Soemantri A. (2012). Hubungan antara Stres Oksidatif dengan Kadar Hemoglobin pada Penderita Thalassemia /Hbe. Jurnal Kedokteran Brawijaya. 27(1):38-42.
Tang Y, Hu L, Hong G, Zhong D, Song J, Zhao G, et al . (2018). Diagnostic Value of Complete Blood Count  in  Paraquat  and  Organophosphorus  Poisoning  Patients. Toxicology  and  Industrial Health. XX(X):1-9.DOI: 10.1177/0748233718770896
Thrall MA, Weiser G, Allison RW, Campbell TW. (2022). Veterinary Hematology, Clinical Chemistry, and Cytology 3 rd Edition . Wiley Blackwell.
Ummah,  RI.  (2015). Pengaruh  Kadmium  terhadap  Struktur  Histologi  Insang  Ikan  Lele  (Clarias batrachus) [skripsi] . Surabaya: Universitas Airlangga.