## UJI BIOLARVASIDA EKSTRAK METANOL DAUN JERUK NIPIS
( Citrus aurantifolia ) TERHADAP LARVA NYAMUK Aedes aegypti L.
Siska Musiam*, Maya Armianti, Aditya Maulana Perdana Putra
Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin Email: siska@akfar-isfibjm.ac.id

## ABSTRAK
Nyamuk Aedes  aegypti L.  adalah  vektor  penularan  penyakit  Demam  Berdarah Dengue (DBD).  Pengendalian  vektor  nyamuk Aedes  aegypti L.  dengan menggunakan larvasida dilakukan sebagai upaya penanggulangan penyakit DBD. Pada penelitian ini dilakukan pengujian aktivitas dari ekstrak metanol daun jeruk nipis  ( Citrus  aurantifolia )  sebagai  biolavasida  nyamuk Aedes  aegypti L. Konsentrasi ekstrak metanol daun jeruk nipis ( Citrus aurantifolia ) yang digunakan dalam penelitian ini adalah 0,1%; 0,2%; 0,3%; dan 0,4%. Temephos 1% digunakan sebagai  kontrol  positif  dan  air  keran  sebagai  kontrol  negatif.  Setiap  perlakuan menggunakan 20 larva Aedes aegypti L. Instar III dan direplikasi sebanyak empat kali.  Hasil  analisis SPSS menyatakan  bahwa  ada  pengaruh  konsentrasi  terhadap jumlah kematian larva uji, dimana pada konsentrasi 0,3%, 0,4% dan kontrol positif Temephos  1%  tidak  menunjukkan  perbedaan  jumlah  kematian  larva  uji  yang bermakna. Nilai LC 50 yang didapatkan berada pada interval 0,089% sampai 0,123% dengan estimasi konsentrasi 0,108%.
Kata kunci: Aedes aegypti L.,  Demam  Berdarah Dengue (DBD),  daun  jeruk nipis, Citrus aurantifolia , biolarvasida

## ABSTRACT
Aedes  aegypti L.  mosquito    is  a  vector  of  Dengue  Hemorrhagic  Fever  (DBD) transmission. The control of Aedes aegypti L. mosquito vector by using larvasida is done as an effort to overcome DBD. In this research, the activity test of methanol extract  of  lime  leaves  ( Citrus  aurantifolia )  has  been  done  as Aedes  aegypti L. mosquito  biolarvacide.  The  concentration  of  lime  leaf  extract  methanol  ( Citrus aurantifolia ) used in this research were 0,1%, 0,2%; 0,3%; and 0,4%. Temephos 1%  was  used  as  a  positive  control  and  tap  water  as  a  negative  control.  Each treatment used 20 larvae of Aedes aegypti L. Instar III and replicated four times.
The result of SPSS analysis stated that there is influence of concentration on death number  of  test  larvae,  where  at  concentration  0,3%,  0,4%  and  positive  control Temephos 1% did not show the meaningful differences of death larva test number. The obtained LC 50 values are at intervals of 0,089% to 0,123% with an estimated concentration of 0.108%.
Keywords: Aedes  aegypti L.,  Dengue  Hemorrhagic  Fever  (DBD),  lime  leaves, Citrus aurantifolia , biolarvacide

## PENDAHULUAN
Demam  Berdarah Dengue (DBD) adalah penyakit yang
dihasilkan  oleh  penularan  vektor nyamuk atau Musquito-borne disease terbesar  di  dunia  (Van, dkk. , 2013).
Infeksi  virus dengue ini  ditularkan
melalui gigitan nyamuk Aedes aegypti sebagai  vektor  utama  dan Aedes albopictus sebagai  vektor  potensial (Candra, 2010). Indonesia menduduki peringkat  kedua  dengan  kasus  DBD
terbesar  di  dunia  setelah  Brazil berdasarkan  data World  Health Organization (WHO)  pada  tahun 2009. WHO merekomendasikan pengendalian  pertumbuhan  vektor dengan menggunakan larvasida sebagai salah satu upaya penanggulangan  penyebaran  penyakit DBD (WHO, 2009). Larvasida  adalah  golongan insektisida sintetik yang mengendalikan  pertumbuhan  vektor penyakit secara kimiawi. Bahan yang populer  digunakan  sebagai  larvasida saat ini adalah bubuk abate (Temephos).  Cara  ini  dinilai  lebih efektif dan hasilnya cepat terlihat bila dibandingkan  dengan  pengendalian biologis. Namun penggunaan insektisida mempunyai dampak negatif,  antara  lain  pencemaran lingkungan, kematian predator, resistensi  serangga  sasaran,  bahkan dapat  meracuni  manusia  (Susanna, dkk., 2003).
Banyaknya efek negatif akibat  larvasida  sintetik  mendorong perkembangan  penelitian  larvasida sebagai pemberantasan nyamuk sumber  penyakit  ke  arah  yang  lebih alami, salah satunya dengan menggunakan biolarvasida yang aman bagi  tubuh  manusia,  mudah  didapat serta  ramah  lingkungan.  Biolarvasida yang aman yaitu dengan menggunakan  bahan  alami  dari tumbuhan. Hal ini dikarenakan bahan yang  terbuat  dari  bahan  alami  akan mudah terurai ( biodegradable) di alam sehingga tidak mencemari lingkungan (Murdani, 2014).
Salah  satu  tanaman  yang memiliki  efek  larvasida  adalah tanaman jeruk nipis ( Citrus
aurantifolia ).  Jeruk  nipis  banyak ditanam  di  perkebunan  masyarakat Kalimantan  Selatan.  Tanaman  ini memiliki nilai ekonomis tinggi karena mengandung  vitamin,  sedangkan
daunnya  hanya  dibiarkan  begitu  saja tanpa  dimanfaatkan.  Daun  jeruk mengandung metabolit sekunder seperti  minyak  atsiri,  flavonoid,
saponin  dan  steroid. Senyawa- senyawa  ini  bekerja  sebagai  racun pada larva nyamuk baik sebagai racun kontak maupun racun perut (Adrianto,
2014). Prijadi  dkk., (2014)  telah melakukan penelitian tentang efektivitas  ekstrak  daun  jeruk  nipis dalam  menghambat  pertumbuhan larva Aedes spp dengan menggunakan
pelarut  etanol  membuktikan  bahwa ekstrak  daun  jeruk  nipis  dapat menghambat pertumbuhan larva
Aedes spp .  Penelitian  lain  dilakukan oleh  Ekawati  dkk.,  (2017)  tentang pemanfaatan  kulit  buah  jeruk  nipis sebagai  larvasida Aedes  aegypti membuktikan bahwa kulit buah jeruk nipis  berkhasiat  sebagai  larvasida. Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji aktivitas  ekstrak  metanol  daun  jeruk nipis  ( Citrus  aurantifolia )  sebagai biolarvasida nyamuk Aedes aegypti L.

## METODE PENELITIAN
Jenis penelitian yang digunakan adalah penelitian eksperimental  laboratorium  dengan
rancangan  penelitian  rancangan  acak lengkap. Bahan-bahan yang digunakan adalah larva Aedes aegypti L. Instar III, daun jeruk nipis, metanol, akuades,  Abate  (Temephos  1%), FeCl 3 ,  logam  Mg,  HCl  pekat,  H 2 SO 4 pekat,  pereaksi Lieberman-Burchard , dan  kalium  kromat.  Alat  yang digunakan  adalah  blender,  neraca analitik, rotary evaporator , waterbath , corong Buchner ,  dan  alat-alat  gelas lainnya.
Sebanyak  1  kg  serbuk  daun jeruk  nipis  dimaserasi  dengan  2  L metanol selama 1 x 24 jam, kemudian disaring menggunakan corong
Buchner dan  ampasnya  diremaserasi sebanyak  2x.  Filtrat  dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu  50ºC  dan  dipekatkan  dengan waterbath pada  suhu  yang  sama hingga  didapatkan  ekstrak  kental. Sebanyak  1  ml  ekstrak  diuji keberadaan  metanolnya  dengan  2  ml kalium kromat dan 5 tetes asam sulfat pekat.
Jika ekstrak positif mengandung metanol maka dilakukan proses  penguuapan  lagi  sampai didapatkan  hasil  yang  negatif  (tidak terjadi  perubahan  warna  dari  jingga menjadi hijau) (Kumalasari, 2011).
Skrinning fitokimia dilakukan  untuk  menguji  keberadaan flavonoid, saponin, tanin, dan triterpenoid.  Uji  flavonoid  dilakukan dengan cara mereaksikan 1 ml ekstrak dengan 0,5 ml HCl pekat dan 0,05 mg serbuk  Mg,  jika  terjadi  perubahan warna  larutan  menjadi  kuning  atau merah  maka  positif  flavonoid.  Uji saponin  dilakukan  dengan  cara melarutkan 2 ml ekstrak dengan 10 ml akuades, kemudian dikocok selama 10 detik, jika terbentuk buih setinggi 1 – 10  cm  menunjukkan  adanya  saponin (Lailatul,  dkk.,  2010).  Uji  tanin dilakukan dengan cara mencampurkan
1 ml ekstrak dengan 3 tetes FeCl 3 0,5
M  hingga  larutan  menjadi  hijau kehitaman  (Sulastri,  2009).  Uji triterpenoid  dilakukan  dengan  cara mereaksikan  1  ml  ekstrak  dengan pereaksi Liebermann-Burchard (1 tetes  H 2 SO 4 pekat  dan  3  tetes  CH 3-
COOH anhidrat), jiks terbentuk warna merah,  ungu,  atau  jingga  dan  cincin coklat menunjukkan adanya triterpenoid (Lailatul, dkk., 2010). Pengujian  aktivitas  larvasida dilakukan  dengan  mengacu  pada penelitian  Ekawati,  dkk.  (2017). Sebanyak  6  buah  gelas  plastik  diberi
label  K1,  K2,  K3,  K4,  K+,  dan  K-. Pada gelas K1 sampai K4 diisi dengan ekstrak  metanol  daun  jeruk  nipis sesuai  konsentrasi  yang  sudah diorientasi,  yaitu  0,1%;  0,2%;  0,3%; dan  0,4%  v/v,  dilarutkan  dengan  air keran  hingga  100  ml.  Pada  gelas  K+ dimasukkan  Temephos  sebanyak  10 mg  dalam  100  ml  air  keran  sebagai kontrol  positif,  dan  pada  gelas  K- dimasukkan air keran sebanyak 100 ml sebagai  kontrol  negatif.  Pada  setiap gelas  uji  dimasukkan  20  ekor  larva nyamuk Aedes  aegypty L  Instar  III. Replikasi  dilakukan  4  kali  pada  tiap perlakuan.  Jumlah  larva  yang  mati diamati  selama  24  jam.  Persentase kematian larva dihitung dan nilai LC 50 dihitung  juga  dengan  menggunakan SPSS .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil maserasi dan remaserasi  yang  didapatkan  dari proses  ekstraksi  adalah  sebanyak 2,317  L.  Setelah  melalui  proses penguapan  dengan waterbath pada suhu  50ºC  selama  4-5  hari  diperoleh ekstrak  kental  sebanyak  137,2  gram, sehingga  rendemen  ekstrak  yang didapatkan dari 1 kg serbuk daun jeruk nipis  adalah  13,72%.  Identifikasi
keberadaan  metanol  menunjukkan hasil  yang  negatif.  Keberadaan metanol  sebagai  sisa  pelarut  pada ekstrak  akan  mempengaruhi  kualitas mutu  ekstrak  yang  dihasilkan  karena
sifatnya yang toksik sehingga
kematian larva uji menjadi diragukan apakan  disebabkan  oleh  ekstrak  atau oleh  sisa  pelarut.  Hasil  skrinning fitokimia  dapat  dilihat  pada  Tabel  1 berikut. Tabel 1. Hasil Skrinning Fitokimia Uji Fitokimia  Pereaksi Hasil Kesimpulan Flavonoid Mg + HCl pekat Warna jingga + Saponin Aquades → digojog  Berbuih + Tanin FeCl 3 Hijau kehitaman + Triterpenoid Liebermann- Burchard Warna jingga, cincin coklat +
Hasil pengujian efek biolarvasida ekstrak daun jeruk nipis terhadap larva Aedes aegypti L. Instar III selama 24 jam didapatkan data primer yang disajikan dalam Tabel 2. Waktu kematian larva dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 2. Jumlah Mortalitas Larva Aedes aegypti L. pada Berbagai Konsentrasi selama 24 Jam Perlakuan Konsentrasi (%) Jumlah larva yang mati Rata-rata Replikasi 1 2 3 4 Ekor % ekor % Ekor % ekor % ekor % 0 (Kontrol negatif) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,1 11 55 10 55 10 50 9 50 10 50 0,2 15 80 16 75 15 75 14 70 15 75 0,3 20 100 20 100 20 100 20 100 20 100 0,4 20 100 20 100 20 100 20 100 20 100 Temephos 20 100 20 100 20 100 20 100 20 100
Tabel 3. Waktu Kematian Larva pada Tiap Perlakuan Konsentrasi (%) Waktu kematian (jam) Rata- rata (jam) Ulangan 1 2 3 4 0 24 24 24 24 24 0,1 24 24 24 24 24 0,2 24 24 24 24 24 0,3 23 24 24 24 23,75 0,4 18 20 18 21 19,25 Temephos 2 2 2 2 2 Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas larvasida  ekstrak  metanol  daun  jeruk nipis terhadap larva Aedes aegypti L. lebih rendah dibandingkan  Temephos 1%. Berdasarkan hasil penelitian dapat ditarik  kesimpulan  semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  metanol  daun jeruk  nipis  yang  digunakan  maka semakin besar dan semakin cepat pula jumlah  kematian  larva  uji  pada percobaan. Kemampuan larvasida dari ekstrak  daun  jeruk  nipis  dihasilkan dari  kandungan  senyawa  kimia  yang berada  di  dalam  tumbuhan  tersebut, yaitu  flavonoid,  saponin,  tanin,  dan
triterpenoid. Flavonoid merupakan golongan fenol yang dapat menyebabkan  penggumpalan  protein. Denaturasi protein tersebut menyebabkan  permeabilitas  dinding sel dalam saluran pencernaan
menurun. Hal ini akan mengakibatkan transport nutrisi  terganggu    sehingga pertumbuhan  terhambat  dan  akhirnya larva nyamuk akan mati (Wati, 2010).
Tanin merupakan “ phenolic compounds ” yang dapat mempresipitasi protein. Tanin memiliki kemampuan untuk mempresipitasi  protein.  Pada  larva,
hal ini dapat menghambat protein yang diperlukan  larva  untuk  pertumbuhan, sehingga  dapat  menyebabkan  larva mati.  Saponin  dapat  menyebabkan korosi dinding traktus digestivus larva dikarenakan  kemampuan  saponin merusak membran. Selain itu saponin juga  dapat  menganggu  lapisan  lipoid pada  epikutikula  dan  lapisan  protein pada endokutikula sehingga memudahkan  zat  toksik  masuk kedalam  tubuh  larva  (Sastriawan, 2014). Triterpenoid (limonoid) bekerja  menghambat  pergantian  kulit
pada  larva.  Sebagai  racun  perut, limonoid dapat masuk kedalam tubuh larva  nyamuk Aedes  aegypti L., kemudian masuk  ke  pencernaan melalui rendaman konsentrasi ekstrak yang  termakan.  Insektisida  akan masuk ke organ pencernaan yang akan menganggu  metabolisme  tubuh  larva sehingga  mengakibatkan  kekurangan energi  untuk  aktivitas  hidupnya  yang menyebabkan  larva  kejang  dan akhirnya mati (Prijadi, 2014).
Dari  hasil  analisis  probit menggunakan SPSS didapatkan estimasi  besar  konsentrasi  yang mengakibatkan kematian larva sebanyak  50%  adalah  konsentrasi 0,108%  dengan  interval  antara
konsentrasi  0,089% dan 0,123%. Oleh karena  itu,  dapat  ditarik  kesimpulan nilai LC 50 selama 24 jam untuk ekstrak metanol  daun  jeruk  nipis  adalah 0,108%. Nilai LC 50 tersebut termasuk
ke  dalam  kriteria  toksisitas  racun rendah  pada lingkungan perairan. Perbandingan dengan ekstrak tanaman lain yang diuji kemampuannya terhadap Aedes aegypti ,  didapatkan  bahwa  ekstrak daun jeruk nipis
mempunyai kemampuan  efektivitas  yang  lebih
tinggi.  Misalnya  penelitian  yang dilakukan  oleh  Ekawati  (2017) menggunakan ekstrak kulit buah jeruk nipis, didapatkan LC 50 sebesar 3,419% dan  yang  dilakukan  Wati  (2010) menggunakan  air  perasan  kulit  jeruk manis,  didapatkan  nilai  LC 50 sebesar 0,946%.  Perbedaan  nilai  LC 50 diduga diakibatkan oleh perbedaan ketahanan larva  sebagai  bahan  uji.  Selain  itu, faktor-faktor dari tanaman juga dapat berpengaruh  seperti  lokasi  tumbuh asal  tanaman,  periode  pemanenan, kualitas  dan  kuantitas  zat  aktif  yang terkandung  dalam  tanaman,  metode ekstraksi  yang  dilakukan  dan  pelarut yang digunakan.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang dilakukan  dapat  diambil  kesimpulan bahwa  ekstrak  metanol  daun  jeruk nipis  ( Citrus  aurantifolia )  efektif sebagai  biolarvasida  terhadap  larva Aedes  aegypti L.  Konsentrasi  yang dapat  membunuh  sebanyak  50% (LC 50 )  larva Aedes  aegypti L.  berada pada  interval  antara  0,089%  dan 0,123%  dengan  estimasi  konsentrasi
0,108%

## DAFTAR PUSTAKA
Adrianto, H., 2014, Aktivitas Biolarvasida  Ekstrak  Daun Citrus  spp. dan Pandanus amarylifolius Terhadap Stadium  Larva Aedes  aegypti dengan Pendekatan Biosistematika Numerik, Tesis ,  Universitas  Airlangga, Surabaya. Candra,  A.,  2010,  Demam  Berdarah Dengue : Epidemiologi, Patogenesis, dan Faktor Risiko Penularan, Aspirator , 2 (2)  : 110-119.
Ekawati, E.R., Santoso, S.D., Purwanti, Y.R., 2017, Pemanfaatan Kulit Buah Jeruk Nipis  ( Citrus  aurantifolia ) Sebagai Larvasida Aedes aegypti Instar III, Jurnal Biota ,
3 (1): 1-5. Kumalasari,  E.,  Sulistyani,  N.,  2011, Aktivitas  Antifungi  Ekstrak Etanol Batang Binahong ( Anredera  cordifolia (Tenore) Steen.)  Terhadap Candida albicans Serta Skrinning Fitokimia, Jurnal Ilmiah Kefarmasian , 1 (2):51-62. Lailatul, K.L., Kadarohman, A., Eko, R., 2010, Efektivitas Biolarvasida  Ekstrak  Etanol Limbah  Penyulingan  Minyak Akar Wangi ( Vetiveria zizanoides )  Terhadap  Larva
Nyamuk Aedes aegypti, Culex sp., dan Anopheles  sundaicus,
Jurnal  Sains  dan  Teknologi Kimia , 1 (1) : 59-65.
Murdani, R., 2014, Keefektivan Daya Bunuh  Ekstrak  Daun  Jeruk
Nipis  ( Citrus  aurantifolia ) Terhadap  Kematian  Larva Nyamuk Aedes  aegypti Instar
III, Skripsi , Universitas Muhammadiyah, Surakarta.
Prijadi,  D.K.,  Wahongan,  G.J.P.,
Bernadus,  J.B.B.,  2014,  Uji
Efektifitas Ekstrak Daun Jeruk
Nipis  ( Citrus  aurantifolia ) Dalam Menghambat Pertumbuhan Larva Aedes spp, Skripsi , Universitas Sam
Ratulangi, Manado.
Sastriawan, A., 2014, Efektivitas Serai Dapur  ( Cymbopogon  citratus) Sebagai  Larvasida  PadaLava Nyamuk Aedes sp Instar III/IV, Skripsi ,  Universitas  Islam Negeri  Syarif  Hidayatullah, Jakarta.
Sulastri,  T.,  2009,  Anlaisis  Kadar Tanin Ekstrak Air Dan Ekstrak Etanol  Pada  Biji  Pinang  Sirih ( Areca  cathecu L.), Jurnal Chamca, 10 :59-63.
Susanna, D., Rahman, A., Pawenang, E.T.,  2003,  Potensi  Daun Pandan Wangi Untuk Membunuh  Larva  Nyamuk Aedes  aegypti , Jurnal  Ekologi Kesehatan , 2 (2) : 228-231.
Van  D.B.,  Henk,  2013, Regional Framework  for  Surveillance and  Control  of  Invasive Mosquito  Vectors  and  Re- emerging Vector-Borne Disease  2014-2020 ,  WHO press.
Wati,  F.A.,  2010,  Pengaruh  Air Perasan  Kulit  Jeruk  Manis (Citrus  aurantium  sub  spesies sinensis )  Tehadap  Tingkat Kematian Larva Aedes aegypti instar  III  In  Vitro, Skripsi , Universitas  Sebelas  Maret, Surakarta.
WHO, 2009, Dengue : Guidelines for Diagnosis Treatment, Prevention and Control ,
WHO, Geneva.