Pemanfaatan Nata de Coco sebagai Media Gel Elektroforesis Pada Zat Warna Remazol : Pengaruh pH, Waktu dan Aplikasi Pemisahan Gelatin
Lutfi Andre Yahya, Ita Ulfin, Fredy Kurniawan Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail : itau@chem.its.ac.id
Abstrak — Nata  de  coco  telah  digunakan  sebagai pengganti  media  gel  elektroforesis  pada  sampel  pewarna remazol.  Pada penelitian ini, diamati pengaruh pH larutan buffer, waktu elektroforesis dan aplikasi pemisahan gelatin menggunakan  elektroforesis  dengan  media  nata  de  coco. Nata de coco yang berumur 4 hari memiliki ketebalan yang sesuai yaitu 0,454 cm dan waktu inkubasi yang tidak terlalu lama  sehingga  umur  tersebut  digunakan  dalam  penelitian ini.  Hasil  resolusi  elektroforesis  terbaik  didapatkan  pada pengggunaan  buffer  fosfat  yang  terbuat  dari  garam– garamnya. Pada pengaruh pH dinyatakan dengan kekuatan ion,  dimana  semakin  besar  kekuatan  ion  larutan,  maka semakin  jauh  jarak  migrasi  remazol.  Lama  waktu elektroforesis  mempengaruhi  jarak  migrasi  remazol Kondisi  optimum  elektroforesis  gel  menggunakan  nata yang  didapat,  digunakan  untuk  uji  pemisahan  gelatin menggunakan  pewarna  remazol  turquoise  dan  didapatkan dua pita pemisahan dengan jarak pita masing-masing 2 cm dan 3,6 cm.
Kata Kunci — Nata de coco; Gel Elektroforesis; Remazol; Buffer fosfat; Gelatin.

## I. PENDAHULUAN
lektroforesis merupakan teknik pemisahan komponen  atau  molekul  bermuatan  berdasarkan perbedaan tingkat  migrasinya  dalam  aliran  medan listrik yang  diberikan  [12].  Perbedaan  tingkat  migrasi disebabkan  oleh  perbedaan  ukuran  dan  berat  molekul serta  muatan  listrik  yang  dimiliki  oleh  molekul  yang akan dipisahkan [5].
Metode  elektroforesis  terbagi  atas  beberapa  jenis berdasarkan  media  yang  digunakan  yaitu  elektroforesis kertas,  gel  elektroforesis  dan  elektroforesis  kapiler. Metode  elektroforesis  yang  sering  digunakan  adalah  gel elektroforesis.  Gel  elektroforesis  banyak  digunakan untuk  penentuan  suatu  protein  maupun  asam  amino  [7]. Gel  elektroforesis  menggunakan  matrik/gel  yang berfungsi untuk meminimalisir konveksi, sebagai tempat bergeraknya  molekul  dan  sebagai  penyaring  ukuran molekul  [5].  Keuntungan  dari  metode  gel  elektroforesis adalah  harga  yang  relatif  murah  dan  dalam  satu  kali analisis  bisa  digunakan  untuk  beberapa  sampel tergantung dari ukuran lebar gel yang digunakan.
Media  gel  yang  telah  digunakan  pada  penelitian sebelumnya memiliki kelemahan yaitu harga yang relatif mahal, karena diperlukannya sintesis untuk mendapatkannya seperti agarosa yang dibuat dari ekstrak alga  [13],  dan  memiliki  sifat  beracun  seperti  akrilamida
[8].  Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan  terobosan  baru pembuatan  media  untuk  pengembangan  metode  gel elektroforesis ini.
Media  baru  yang  diusulkan  sebagai  gel  elektroforesis adalah nata de coco. Nata de coco merupakan bioselulosa yang  mengandung  air  sekitar  98%  dengan  tekstur  agak kenyal,  padat  dan  kokoh,  bewarna  putih  dan  transparan terbentuk  dari  aktifitas  organisme  bakteri Acetobacter xylinum [10]. Nata de coco dibuat dari limbah air kelapa , sehingga  penggunaan  media  ini  cukup  murah.  Nata  de coco juga tidak berbahaya bagi kesehatan karena nata de coco biasanya digunakan sebagai makanan [11] . Gel  elektroforesis  memerlukan  larutan  elektrolit  yang berfungsi  sebagai  penghantar  arus  listrik  dalam elektroforesis.  Larutan  elektrolit  yang  biasa  digunakan adalah  buffer/penyangga.  Pada  penelitian  ini  digunakan larutan  buffer  yang  digunakan  adalah  buffer  fosfat. Buffer  fosfat  sudah  sering  digunakan  dan  pertama  kali digunakan  oleh  Jorgenson  dan  Lukacs  yang  mengawali penggunaan  buffer  phosphate  di  tahun  1981[6].  Salah satu  keunggulan  buffer  fosfat  adalah  area  kerja  buffer fosfat  sangat  lebar  yaitu  dari  asam  sampai  basa.  Hal  ini dikarenakan asam fosfat adalah trivalen dengan nilai pKa masing-masing  2,12;  7,47;  dan  12,36  yang  bisa mempertahankan penyanggaan pH [3].
Jenis  pewarna  yang  sudah  digunakan  bermacam- macam, diantaranya adalah Ethidium bromide[9], Amido Black  B,  Sudan  Black  B,  Remazol  [4],  Coomassie Brilliant  Blue  [1]  dan  pada  penelitian  kali  ini  akan digunakan  pewarna  remazol  karena  remazol  mudah didapatkan  dan  harga  yang  terjangkau.  Griffith memperkenalkan  penggunaan reactive  dye anionic pertama  kali  pada  tahun  1972  menggunakan  remazol sebagai  pewarna  dalam  pemisahan  protein  pada Poliakrilamid  Gel  Elektroforesis  (PAGE)  [4].  Remazol merupakan  pewarna  reaktif  kelompok  ethilsulfonil  yang memiliki muatan negatif. Jenis – jenis remazol beragam, dimana setiap jenis memiliki struktur, muatan dan warna yang berbeda-beda.
Lima  jenis  remazol  (Remazol  Red  RB,  Remazol Yellow  FG,  Remazol  Brilliant  Blue  R,  Remazol Turquoise Blue G dan Remazol Violet 5R) yang berbeda digunakan  dalam  penelitian  ini  untuk  mempelajari penggunaan  nata  de  coco  sebagai  media  dalam  gel elektroforesis  serta  untuk  mempelajari  karakteristik migrasi  dari  remazol.  Remazol  sebagai  pewarna  akan diujikan  sebagai  pewarnaan  diawal  ( prestaining )  pada
E
gelatin  yang  merupakan  protein  turunan  dari  kolagen yang  terdiri  atas  susunan  asam  amino  dalam  gel elektroforesis menggunakan media nata de coco.

## II. URAIAN PENELITIAN

## Alat dan Bahan

## 1) Alat
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  terbagi menjadi  empat  bagian  yaitu  (1)  Peralatan  pembuatan Nata  de  Coco,  (2)  Peralatan  Elektroforesis  yang  terdiri atas:  chamber  untuk  elektroforesis, power  supply ,  kabel penghubung,  penjepit  buaya.  (3)  Peralatan  untuk pembuatan  Larutan,  (4)  Peralatan  Pengukuran  yang terdiri atas: multimeter, jangka sorong, penggaris dan pH meter.

## 2) Bahan
Bahan  –  bahan  yang  diperlukan  dalam  penelitian  ini adalah air kelapa, gula, asam cuka, urea, aquadest, H 3 PO 4
(Merck, 99,8%), NaH 2 PO 4 (Merck, 99,8%), Na 2 HPO 4 (Merck,  99,8%),  Na 3 PO 4 12H 2 O  (Merck, 99,8%),  NaOH  (Merck,  99,8%),  KOH  (Merck,  99,8%), HCl (Merck, 99,8%). Remazol Red RB, Remazol Yellow FG, Remazol Brilliant Blue  R, Remazol Turqouise Blue G,  Remazol  Violet  5R,  didapat  dari  rumah  batik  di Paciran  Lamongan,  gelatin  sapi,  gelatin  kapsul,  gelatin komersial SAP.

## Prosedur Kerja
1) Pembuatan media elektroforesis dari nata de coco
Pembuatan Nata de coco diawali dengan memanaskan 1L air kelapa hingga mendidih, kemudian 100 gram gula dan  4  gram  urea  ditambahkan  ke  dalam  air  kelapa  dan dipanaskan  kembali  hingga  mendidih.  Campuran didinginkan  hingga  suhu  kamar  (± 30°C)  dan keasamaanya  diatur  hingga  pH  4  dengan  menambahkan asam cuka. Starter bakteri Acebacter Xylinum ditambahkan sebanyak 10% volume campuran pada suhu ruang  ( ± 30°C).  Campuran  dituang  ke  beberapa  cetakan dan didiamkan di ruang isolasi selama 1 – 9 hari. Nata de coco  yang  sudah  dipanen,  dibilas  dengan  air  untuk dibersihkan  dari  sisa  campuran  air  kelapa.  Pencucian dilanjutkan  menggunakan  air  panas.  Nata  de  coco kemudian  direndam  dengan  air  selama  3  hari. Selanjutnya  nata  de  coco  yang  sudah  dipreparasi  diberi lubang sebagai tempat masuknya sampel.

## 2) Pembuatan sampel pewarna remazol
Pewarna  remazol  (remazol  red  RB,  remazol  yellow FG,  remazol  brilliant  blue  R,  remazol  turqouise  blue  G, remazol  violet  5R)  masing-masing  dibuat  dengan konsentrasi 1%.
3) Pembuatan  larutan  buffer  pH  2-12  dari  garam fosfat
Larutan  buffer  Fosfat  pH  2-12  dibuat  dari  garam- garamnya  dengan  mencampurkan  beberapa  gram  asam dan  beberapa  gram  basa  penyangga  yaitu  pH  2-4 (H 3 PO 4 +NaH 2 PO 4 ), pH 5-9 ( NaH 2 PO 4 +Na 2 HPO 4 ) dan pH 10 -12 (Na 3 PO 4 + Na 2 HPO 4 ) 4) Metode elektroforesis
Nata  de  coco  digunakan  sebagai  media  gel  dalam metode  elektroforesis.  Kemudian  dibuat  sumuran  pada media  gel  elektroforesis  sebagai  tempat  sampel.  Sample dimasukkan ke dalam lubang Nata de coco menggunakan pipet  sebanyak  0,1  mL.  Nata  de  coco  dimasukkan kedalam chamber elektroforesis dan ditambahkan larutan
buffer dengan ketinggian yang sama dengan tinggi media nata de  coco.  Elektroforesis dijalankan  dengan  tegangan 150  V  selama  15  menit.  Setelah  selesai, power  supply dimatikan  dan  dilakukan  pengambilan  data  berupa  suhu buffer menggunakan termometer, pH buffer menggunakan pH meter dan jarak migrasi menggunakan penggaris.
5) Aplikasi  penggunaan  remazol  sebagai  pewarnaan dalam  pemisahan  gelatin  menggunakan  gel  nata  de coco dalam proses gel elektroforesis
Gelatin  sebanyak  2  mL  dicampurkan  dengan  1mL Remazol  Turqouise  Blue  G  dan  dipanaskan  selama  1 jam. Campuran didinginkan hingga suhu ruang ( ± 30°C). Selanjutnya  gelatin  digunakan  sebagai  sampel  dalam elektroforesis

## III. HASIL DAN DISKUSI

## Pembuatan media elektroforesis dari nata de coco
Lapisan nata de coco yang merupakan serat bioselulosa terbentuk setelah waktu inkubasi selama 3 hari. Semakin lama  waktu  inkubasi,  Semakin  tebal  lapisan  serat bioselulosa  yang  terbentuk.  Pengamatan  ketebalan  nata de  coco  yang  terbentuk  dalam  variasi  hari  ditunjukkan pada Gambar 1. Peningkatan bioselulosa diamati dengan menghitung  berat  padatan  nata  yang  telah  dikeringkan. Data yang diperoleh menunjukkan bahwa kadar air yang terdapat  dalam  nata  de  coco  sebesar  98-99%,  dengan berat  selulosa  yang  terbentuk  ditunjukkan  pada  Gambar 1.
Gambar 1. Hubungan umur nata de coco terhadap ketebalan nata de coco dan berat selulosa.
Gambar 2 . Penampakan membujur nata de coco umur (a) 4 hari dan (b) 7 hari menggunakan mikroskop perbesaran 1000x
Lapisan  tipis  nata  de  coco  disayat  tipis  membujur untuk  diamati  pori-pori  nata  yang  terbentuk,  hasilnya seperti  yang  ditunjukkan  pada  Gambar  2.  Nata  de  coco yang terbentuk dipreparasi dengan mencuci nata de coco menggunakan  air  hingga  bersih  dan  di  cuci  dengan  air panas  untuk  membunuh  bakteri.  Setelah  pencucian, nata de  coco  direndam  dengan  air  selama  3  hari  dengan penggantian air setiap harinya. Hal ini untuk menetralkan pH  nata  de  coco  karena  nata  de  coco  yang  terbentuk memiliki  pH  asam.  Perendeman  dengan  air  bertujuan untuk  menghindari  adanya  ion-ion  lain  yang  akan mempengaruhi proses elektrofore.

## Pengaruh  pH  buffer  garam  terhadap  hasil elektroforesis
Nilai  pKa  maupun  pH  tidak  konstan  untuk  semua kondisi terutama dalam sistem elektroforesis, dikarenakan  adanya  tegangan  yang  diberikan  tetapi bentuk  fungsi  kekuatan  ion  bisa  mewakili  kondisi tersebut.  Nilai kekuatan  ion  didapatkan  dari  perhitungan konsentrasi  jumlah  ion  yang  terdapat  dalam  buffer tersebut  dengan  satuan  molar  (M).  Nilai  kekuatan  ion tertinggi  terdapat  pada  larutan  buffer  pH  12  dan  nilai kekuatan ion terendah terdapat pada larutan buffer pH 4. Hubungan  antara  nilai  kekuatan  ion,  pH  dan  jarak migrasi  disajikan  pada  Gambar  3  untuk  masing-masing remazol  yang  digunakan.  Davis,  1982  menyatakan bahwa  mobilitas  molekul  tidak  hanya  dipengaruhi  oleh pH dan kekuatan ion tetapi juga dipengaruhi oleh jumlah valensi dan jumlah ion lain yang terdapat didalamnya [2]. Nilai  kekuatan  ion  buffer  mempengaruhi  migrasi  dari remazol  dimana,  semakin  tinggi  kekuatan  ion  larutan buffer  maka  akan  menambah  kecepatan  migrasi  dari molekul remazol.
Gambar 3. Hubungan antara jarak miigrasi remazol pada berbagai pH dengan kekuatan ion
Jarak migrasi remazol pada berbagai pH memiliki nilai yang bervariasi sesuai dengan nilai kekuatan ion dari pH larutan  buffer  yang  digunakan.  Jarak  paling  jauh  pada komposisi  buffer  (NaOH+H 3 PO 4 )  adalah  pada  pH  2, Jarak  migrasi  terjauh  pada  komposisi  (Na 2 HPO 4 + NaH 2 PO 4 )  adalah  pada  pH  7  dan  jarak  migrasi  terjauh pada  komposisi  buffer  Na 2 HPO 4 +  Na 3 PO 4 adalah  pada pH 12. Hasil migrasi remazol pada kondisi asam pada pH 2  memiliki  hasil  pita  yang  meruncing  diujung  dan remazol  tidak  bermigrasi  secara  keseluruhan.  Hasil resolusi  elektroforesis  pada  pH  12  menghasilkan  pita yang melebar dan remazol bermigrasi secara keseluruhan.  Hasil  yang  paling  baik  ketika  digunakan buffer  pada  pH  7  dimana,  sampel  remazol  bergerak keseluruhan seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4.
Gambar 4. Hasil resolusi elektroforesis remazol pada (a) pH 2 (b) pH 7 (c) pH 12 menggunakan sampel (1) remazol red (2) remazol yellow (3) remazol brilliant (4) remazol turquoise (5) remazol violet
Jarak  migrasi  paling  jauh  diantara  berbagai  pH  yang digunakan adalah pada pH 12, tetapi tidak menghasilkan resolusi  yang  baik.  Dengan  demikian,  hasil  yang  paling baik  dari  penggunaan  berbagai  buffer  adalah  ketika digunakan  larutan  buffer  dengan  pH  7  yang  terbuat  dari Na 2 HPO 4 +  NaH 2 PO 4 dengan  nilai  kekuatan  ion  sebesar 0,0461 M.

## Pengaruh  waktu  elektroforesis  terhadap  migrasi remazol
Peningkatan  jarak  migrasi  remazol  dalam  berbagai waktu ditunjukkan pada Gambar 5. Jarak tempuh migrasi remazol  semakin  lama  waktunya  akan  semakin  jauh. Remazol  red  dan  remazol  yellow  bermigrasi  lebih  jauh daripada  remazol  brilliant,violet  dan  turquoise.  Urutan migrasi  remazol  dari  yang  paling  jauh  adalah  remazol red, remazol yellow, remazol violet, remazol turkish dan terakhir remazol brilliant.

## Gambar 5. Pengaruh waktu elektroforesis terhadap jarak migrasi remazol
Ukuran  dan  bentuk  masing  –  masing  remazol diperkirakan  menggunakan  software Chemdraw dan disajikan dalam  Gambar 6. Ukuran  remazol yang paling besar berdasarkan perhitungan panjang ikatan antar atom adalah  remazol  brilliant  blue  R  yang  berukuran  2,8911 nm 3 ,  sedangkan  yang  berukuran  paling  kecil  adalah remazol red RB yang berukuran 1,7774 nm 3 .
Gambar 6. Ukuran dan bentuk remazol Perbedaan  jarak  migrasi  remazol  terhadap  waktu elektroforesis  ini  disebabkan  karena  beberapa  fakor diantaranya  adalah  ukuran  molekul  seperti  yang  telah ditunjukkan  pada  Gambar  6.  Hasil  yang  didapat menunjukkan  bahwa  ukuran  molekul  remazol  red  lebih kecil  sehingga  pergerakan  remazol  lebih  cepat  dari remazol  yang  lain.  Remazol  turquoise  memiliki  muatan
total -4 lebih besar daripada yang lain, tetapi karena berat molekul  yang  besar  990,30  g/mol  dan  ukuran  molekul yang  besar  migrasi  remazol  turquoise  tidak  terlalu  jauh. Remazol  brilliant  blue  memiliki  jarak  migrasi  yang paling  pendek,  hal  ini  dikarenakan  ukuran  molekul remazol  brilliant  blue  R  yang  besar  yaitu  2,8911  nm 3 . Pewarna  remazol  merupakan  pewarna  yang  memiliki berat molekul relatif (Mr) yang tidak terlalu besar, tetapi pewarna remazol memiliki syarat yang cukup digunakan sebagai  pewarna  dalam  elektroforesis  antara  lain berwarna,  memiliki  muatan,  dan  dapat  berikatan  dengan senyawa lain.
Aplikasi  penggunaan  remazol  sebagai  pewarnaan dalam  pemisahan  gelatin  menggunakan  gel  nata  de coco dalam proses gel elektroforesis
Gelatin yang digunakan pada penelitian kali ini adalah gelatin sapi, gelatin kapsul dan gelatin komersial. Gelatin dilarutkan menggunakan air dan dibuat konsentrasi 1200 ppm.  Gelatin  yang  digunakan  tidak  berwarna  dan  tidak memendar  ketika  disinari  sinar  uv.  Oleh  karena  itu, pewarnaan  dilakukan  menggunakan  remazol  turquoise terhadap  gelatin  yang  akan  digunakan  pada  metode  gel elektroforesis. Gelatin dan remazol turquoise dipanaskan pada  suhu  100 ° C  selama  1  jam  selanjutnya  sampel tersebut  dilakukan  elektroforesis  menggunakan  media nata de coco. Hasil pemisahan menggunakan elektroforesis didapatkan hasil seperti pada Gambar 7.
Pewarna  remazol  menghasilkan  pita  tunggal  seperti yang ditunjukkan pada Gambar 7 (No. 1 dan 2). Gelatin yang  diwarnai  dengan  remazol  turquoise  menghasilkan pemisahan  fragmentasi  2  pita  pemisahan.  Jarak  migrasi untuk  pita  paling  jauh  adalah  3,6  cm  dan  jarak  migrasi untuk  pita  paling  pendek  2  cm.  Tidak  ada  perbedaan pemisahan yang terjadi antara gelatin kapsul, gelatin sapi dan  gelatin  yang  dijual  komersial  masing  –  masingnya menghasilkan  pemisahan  dua  pita.  Perbedaan  pita  yang terjadi  antara  remazol  turquoise  tunggal  dengan  gelatin yang  diwarnai  dengan  remazol  turquoise  menunjukkan bahwa  penggunaan  remazol  sebagai  pewarnaan  diawal (prestaining)  bisa  dilakukan.  Dua  pita  pemisahan  tidak diidentifikasi lebih lanjut untuk senyawa hasil pemisahannya.
Gambar 7. Pemisahan gelatin dengan prestaining menggunakan remazol dengan media gel nata de coco.Keterangan gambar : 1-2 Remazol Turquoise Blue-G; 3-4 Gelatin Kapsul; 5-6 Gelatin Sapi; 7-8 Gelatin Komersial.

## IV. KESIMPULAN
Pemanfaatan  gel  nata  de  coco  sebagai  media  dalam proses  gel  elektroforesis  telah  dilakukan.  Berdasarkan hasil  pengamatan  dan  data  yang  diperoleh  menunjukkan kesimpulan  bahwa  gel  nata  de  coco  dapat  digunakan sebagai  gel  dalam  proses  gel  elektroforesis  dengan kondisi sebagai berikut:
1. Umur  nata  de  coco  yang  dapat  digunakan  minimal umur 4 hari.
2. Nilai  pH  larutan  buffer  fosfat  tidak  memberikan pengaruh  terhadap  migrasi  remazol,  melainkan  yang mempengaruhi  adalah  kekuatan  ionnya,  dimana semakin  besar  kuat  ion  maka  semakin  jauh  jarak migrasi remazol.
3. Semakin  lama  waktu  elektroforesis,  semakin  jauh jarak migrasi yang ditempuh remazol.
4. Pemisahan  gelatin  menggunakan  pewarnaan  remazol turquoise blue menghasilkan 2 pita pemisahan dengan jarak pemisahan 2cm dan 3,6cm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  menyampaikan  terima  kasih  kepada  Dra.  Ita Ulfin, M.Si selaku dosen pembimbing I, Dr.rer.nat. Fredy Kurniawan,  M.Si  selaku  dosen  pembimbing  II,  Dr. Hendro  Juwono,  M.Si  atas  bimbingannya,  Kalab Mikrobiologi ITS atas bantuan alat elektroforesis,  Kalab Zoologi  dan  Rekayasa  ITSdan  semua  pihak  yang  telah membantu dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Ausubel,  F.  M.,  1992. Short  Protocols  in  Molecular      Biology "Coomassie Blue Staining", New York: Jhon Wiley & Sons,Inc.
[2] Davis, Bernard D., Edwin J. Cohn., 1983. The Influence of Ionic Strength  and  pH  on  Electrophoretic  Mobility.  Boston;  Harvard Press.
[3] Gebauer,  P.,  2000.  Capillary  zone  electrophoresis  in  phosphate buffer  –  known  or  unknown?,  Czech  Republic:  Institute  of Analytical  Chemistry  Academy  of  Sciences  of  the  Czech Republic.
[4] Griffith, I., 1972. Immediate Visualization of  Protein in Dedocyl Sulfate-Polyacrylamide  Gel  by  Prestaining  with  Remazol  Dyes. Analytical Biochemistry, Volume 46, pp. 401-412.
[5] Holde, K. E. v., Johnson, W. C. & Ho, P. S., 2006. Principles of Physycal Biochemistry. 2nd penyunt. USA: Pearson Education,Inc.
[6] Jorgenson,  J.,  1981.  High  Resolution  Chromatoghraphy. Chromatogr, Volume 4, pp. 230.
[7] McKee, T.  & McKee, J. S., 2012. Biochemistry : The Molecular Basis of Life. 5th penyunt. New Yok: Oxford University Press.
[8] Mickelson, R., Eduardo, C. & `n, 2004. Bioanalytical Chemistry.
Hoboken-New Jersey: Jhon Wiley & Sons,Inc.
[9] Sanderson, B. A. et al., 2014. Modification of gel architecture and TBE/TAE buffer composition to minimize heating during agarose gel electrophoresis. Analytical Biochemistry, Volume 454, pp. 44- 52.
[10] Sulistiyana dan Ulfin, I., 2011. Studi Adsorpsi Kation Ca dan Mg (Penyebab  Kesadahan)  Menggunakan  Selulosa  Bakteri  Nata  de coco  dengan  Metode  Batch.  Prosiding  Seminar  Nasional  Waste Management I. ISBN 978-602-95595-4-5, pp. 432-438.
[11] Ulfin, Ita.,Widiastuti, Nurul., Kusumawati, Yuly., Ni'mah, Yatim Lailun., Farahnaz, Rizqa Rif'ati. 2012. Studi Transport Zat Warna MEtilen  Biru,  Gentian  Violet  dan  Congo  Red  Melalui  Membran Nata  de  Coco.  Prosiding  Seminar  Nasional  Kimia  Unesa  2012; ISBN: 978-979-028-550-7.
[12] Voet,  D.,  Voet,  J.  G.  &  Pratt,  C.  W.,  2011. 4th  Edition Biochemistry. 4th penyunt. USA: Jhon Wiley & Sons,Inc.
[13] Westemeier, 2004. Electrophoresis in Practice: A Guide to theory and Practice, New Jersey: Jhon Wiley & Sons Inc.