## PEMISAHAN DAN IDENTIFIKASI EKSTRAK KASAR SESKUITERPEN
DAUN BUNGA MATAHARI ( Helianyhus annuus L.) DENGAN

## KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

## Roihatul Muti’ah, Elok Kamilah Hayati, Yani Triastutik
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
The  purpose  of  this  research  wasto  separate  and  identify  the  leaf  crude  extracts  esquiterpene  of  Sun flower ( Helianthus annuus L.) using thin layer chromatography.
Sun  flower  leaf  maceration  method  performed  with  the  solvent  methanol.  Then  performed  liquid extraction  with  ethyl  acetate  and  n-hexane  solvent.  Ethyl  acetate  extract  fraction  and  n-hexane  extract  fraction furth  erphyto  chemical  test.  After  being  test  edphyto  chemical  with  reagents,  both  extracts  was  followed  by sesquiterpene content identification using thin layer chromatography (TLC)  analytic.
Phytochemical  test  result  from  ethyl  acetate  extract  fraction  was  positive  terpenoid,  sesquiterpene  and triterpene,  while  n-hexane  extractfraction  positive  terpenoid,  sesquiterpene  andsteroid.  All  egedsesquiterpene with  eluentdichloromethane:  ethyl  acetate  (4,8:0,2)  is  shown  with  apurplestain.  In  the  ethyl  acetate  extract fraction  all  egedsesquiterpene  having  Rf  values  of  0.89;  0.94,  and  0.96.  While  n-hexane  extract  fraction,  the resulting eluental legedsesquiterpene Rf 0.49; 0.8,and 0.99.
Key word: Helianthus annuus L., sesquiterpene, phytochemicaltest, TLC

## I. PENDAHULUAN
Malaria  merupakan  suatu  penyakit yang  disebabkan  oleh  parasit Plasmodium yang ditularkan ke manusia melalui gigitan nyamuk yang terinfeksi tersebut . Plasmodium  falciparum dan Plasmodium vivax merupakan  jenis  malaria  yang  paling sering  dijumpai,  namun  yang  paling mematikan  adalah Plasmodium  falciparum (WHO, 2006).
Berbagai upaya telah dilakukan untuk mengurangi  permasalahan    tersebut,  salah satunya dengan pemberian obat antimalaria. Salah  satu  tumbuhan  yang  digunakan masyarakat sebagai obat antimalaria adalah daun  Bunga  Matahari  (Wijayakusuma, 2000).
Penelitian yang dilakukan oleh Triastutik (2013) melaporkan bahwa ekstrak  kasar  seskuiterpen  fraksi  etil  asetat dan  fraksi  n-heksana  memiliki  potensi sebagai  antimalaria.  Dosis  terbaik  untuk ekstrak  fraksi  etil  asetat  adalah  0,4  mg/g BB  dengan  rata-rata  persen  penghambatan pada hari ke-4 sebesar 72,78 %. Sedangkan untuk  ekstrak  fraksi  n-heksana  dosis terbaiknya  adalah  0,004  mg/g  BB  dengan rata-rata  persen  penghambatan  pada  hari
ke-4  pasca  terapi  sebesar  71,51  %. Kandungan  senyawa  yang  ada  pada  kedua ekstrak ditunjukkan dengan adanya hasil uji reagen  yang  menunjukkan  bahwa  ekstrak fraksi  etil  asetat  dan  ekstrak  fraksi  n- heksana positif seskuiterpen.
Penelitian  yang  dilakukan  Bayyinah (2012) diketahui bahwa ekstrak diklorometan daun Bunga Matahari ( Helianthus  annuus L.)  memiliki  tingkat aktivitas  antimalaria  terhadap  hewan  uji dengan  persen  penghambatan  pada  hari keempat  sebesar  100  %  untuk  dosis  0,05 mg/g  BB,  0,5  mg/g  BB  dan  dosis  5  mg/g BB.  Hasil  pemisahan  ekstrak  diklorometan daun  Bunga  Matahari  dari  KLTP  yang diidentifikasi  menggunakan  UV-Vis  dan FTIR menunjukkan bahwa ekstrak diklorometan  mengandung  senyawa  steroid dan seskuiterpen lakton.
Berdasarkan beberapa penelitian tersebut,  maka  dilakukan  identifikasi  dan pemisahan kandungan senyawa aktif seskuiterpen  menggunakan    kromatografi lapis  tipis  analitik  dengan  berbagai  macam variasi eluen.

## II. METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Penelitian
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah seperangkat alat gelas, rotary  evaporator ,  neraca  analitik,  kertas saring,  plat  KLT  silika  gel  60  F 254 ,  bejana pengembang,  lampu  UV,  pipa  kapiler, penyaring buchner, dan shake.
Bahan  yang  digunakan  meliputi  daun Bunga  Matahari,metanol,  etil  asetat,  n- heksana,  petroleum  eter,  asam  asetat anhidrat,  asam  sulfat  (H 2 SO 4 )  pekat, kloroform, benzena, aseton, pereaksi vanilin-asam sulfat,iodium, aquades.

## PROSEDUR PENELITIAN Preparasi Sampel
Seluruh  bagian  dari  daun  Bunga Matahari  dicuci  dengan  air,  kemudian dipotong  kecil-kecil,  sampel  dikeringkan dengan  oven  pada  suhu  27-37 o C  selama  5 hari  (Hernani  dan  Nurdjanah,  2009). Setelah  itu,  diblender  sampai  berbentuk serbuk.
Ekstraksi Golongan Senyawa Seskuiterpen dari Daun Bunga Matahari Serbuk daun Bunga Matahari
ditimbang sebanyak 150 gr, untuk mengoptimalkan  proses  ekstraksi,  sampel diekstrak  dalam  dua  tempat  dan  masing- masing  jumlah  sampel  adalah  75  gr. Kemudian masing-masing sampel dimaserasi  menggunakan  300  mL  pelarut metanol  selama  24  jam  dengan  bantuan pengocokan  selama  3  jam  menggunakan shaker . Kemudian disaring dan ampas yang diperoleh  dari  masing-masing  sampel direndam  kembali  dengan  300  mL  pelarut metanol  hingga  diperoleh  filtrat  yang berwarna lebih bening.Ekstrak yang diperoleh  kemudian  digabungkan  dan dipekatkan dengan rotary evaporator sampai diperoleh ekstrak pekat metanol dan ditimbang.Ekstrak
pekat metanol selanjutnya  dipartisi  dengan  menggunakan pelarut etil asetat dan pelarut n-heksana.

## Uji Fitokimia Uji Terpenoid
Ekstrak  diambil  sedikit  kemudian ditambahkan  2  mL  kloroform.  Selanjutnya ditambahkan  3  mL  asam  sulfat  secara perlahan hingga terbentuk lapisan berwarna. Warna merah kecoklatan menunjukkan  positif  terpenoid  (Trease  and Evans, 2002).

## Uji Seskuiterpen
Uji  seskuiterpen  dilakukan  dengan melarutkan  ekstrak  dalam  petroleum  eter, kemudian  diuapkan  hingga  kering,  dan ekstrak  pekat  yang  dihasilkan  ditambah dengan  pereaksi  vanillin  10  %  dalam  asam sulfat.  Hasilnya  adalah  larutan  yang menghasilkan  warna-warna  (Farnsworth, 1966).

## Uji Triterpen/Steroid
Ekstrak  diambil  5  mg,  dilarutkan dalam  0,5  mL  kloroform  lalu  ditambahkan 0,5 mL asam asetat anhidrida dan 0,5-1 mL asam sulfat pekat melalui dinding tabung.Jika  terbentuk  warna  biru  sampai hijau, menunjukkan adanya steroid, sedangkan jika hasil  yang diperoleh berupa cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan dua pelarut menunjukkan adanya  triterpen  (Auterhoff  and  Kovar, 1987).

## Kromatografi Lapis Tipis Analitik
Pada
identifikasi dengan
KLTdigunakan  plat  silika  gel  60  F 254 yang sudah  diaktifkan  dengan  pemanasan  dalam oven  pada  suhu  100 ○ C  selama  30  menit. Masing-masing  plat  tersebut  dipotong dengan ukuran 1 cm x 10 cm. Ekstrak fraksi etil  asetat  dan  ekstrak  fraksi  n-heksana ditotolkan sebanyak 0,04 gr yang dilarutkan dalam  3  mL  pelarutnya  masing-masing pada  jarak  ±  1  cm  dari  tepi  bawah  plat dengan  pipa  kapiler.  Noda/bercak  hasil pemisahan  kemudian  diamati  di  bawah sinar UV pada panjang  gelombang 254 nm dan  366  nm.Beberapa  variasi  eluen  yang digunakan  untuk  identifikasi  kandungan senyawa  seskuiterpen  pada  ekstrak  fraksi
etil  asetat  dan  ekstrak  fraksi  n-heksana ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel  1.  Jenis-jenis  fase  gerak  dan pendeteksi untuk metabolit sekunder seskuiterpen pada uji KLT Fase Gerak Pendeteksi Hasil Warna Noda Aseton:n-heksana (3:10)
Larutan iodium Bercak coklat Kloroform:petroleum eter (4:1) Benzena:aseton (4:1) Benzena:metanol (9:1) Benzena:petroleum eter (2:3) Petroleum eter:kloroform:etil asetat (2:2:1) Diklorometana: etil asetat (4,8:0,2) Pereaksi vanilin-asam sulfat Ungu Etil asetat: n- heksana (3:97) n-heksana:etil asetat (4:1) Kloroform 100 % Kloroform:metanol (9:1) Penyemprot asam sulfat Hijau, coklat, kuning, atau biru

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Preparasi Sampel
Daun Bunga Matahari kering dihaluskan  sampai  menjadi  serbuk.Sampel yang  telah  kering  dengan  warna  hijau kecoklatan. Sampel
diserbukkan dimaksudkan untuk memperluas permukaan dari  bahan  sehingga  proses  ekstraksi  akan lebih  mudah  dan  senyawa  yang  terekstrak lebih maksimal.
Ekstraksi Golongan Senyawa
Seskuiterpen dari Daun Bunga Matahari Ekstraksi  maserasi  dilakukan  dengan mengambil sampel sebanyak 150 gram dan diekstraksi  dengan  metanol  2400  mL. Selama  proses  perendaman  dilakukan pengadukan  dengan  bantuan shaker selama
3  jam.  Pengadukan  dilakukan  dengan tujuan  agar  terjadi  banyak  kontak  antara pelarut  dengan  sampel  sehingga  akan mempercepat  proses ekstraksi.  Perendaman dihentikan  ketika  filtrat  telah  berubah menjadi pucat.Pucatnya filtrat dapat dianggap  bahwa  semua  senyawa  yang berbobot  molekul  rendah  telah  terekstrak (Harborne,  1987).  Sampel  yang  telah terekstrak  selanjutnya  disaring  dengan bantuan corong buchner untuk memisahkan antara  filtrat  dengan  residu.  Filtrat  yang telah selanjutnya dipekatkan dengan bantuan rotary evaporator vaccum . Rendemen  ekstrak  pekat  metanol  yang diperoleh sebesar 16,3401 %.
Ekstrak  pekat  metanol  selajutnya dipartisi  dengan  etil  asetat.Ekstrak  pekat metanol dilarutkan dengan metanol-air (1:9) yang  kemudian  dipartisi  dengan  etil asetat.Fraksi atas yang diperoleh
merupakan ekstrak yang larut etil asetat dan fraksi  bawah merupakan ekstrak  yang larut dalam metanol-air.  Penentuan fraksi bawah dan  fraksi  atas  dilihat  dari  nilai  berat  jenis pelarut,  untuk  berat  jenis  metanol  adalah 0,7915  ,  1  untuk  berat  jenis  air  dan  0,902 untuk  berat  jenis  etil  asetat.  Partisi selanjutnya  yaitu  ekstrak  pekat  metanol yang  dilarutkan  dengan  metanol  dan kemudian dipartisi dengan n-heksana.Fraksi atas  merupakan  ekstrak  yang  larut  n- heksana  dan  fraksi  bawah  merupakan ekstrak  yang  larut  metanol.  Hasil  dari partisi  tersebut  dipekatkan  dengan rotary evaporator sehingga  didapatkan  rendemen ekstrak  etil  asetat  sebesar  51,138  %  dan ekstrak n-heksana sebesar 14,6426 %.

## Uji Fitokimia
Uji fitokimia merupakan suatu tahapan  pengamatan  secara  kualitatif  untuk mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder suatu  sampel.Pada  penelitian  ini  hanya dilakukan  uji  terpenoid,  seskuiterpen,  dan triterpen/steroid.Hasil  uji  fitokimia  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel  2.  Hasil  identifikasi  golongan senyawa ekstrak daun Bunga Matahari
Uji Etil asetat n-heksana Terpenoid + + Seskuiterpen ++ +++ Triterpen ++ - Steroid - +++ Keterangan: +++ = Kandungan senyawa lebih banyak (warna sangat pekat) ++ =  Mengandung  senyawa  (warna cukup pekat) + = Mengandung senyawa (berwarna) - = Tidak terkandung senyawa
Identifikasi  Kandungan  Senyawa  Aktif dengan Kromatografi Lapis Tipis

## Analitik
Kromatografi  lapis  tipis  merupakan metode  pemisahan  senyawa  kimia  yang didasarkan  pada  dua  fase  yaitu  fase  gerak yang  berupa  cairan  dan  fase  diam  yang berupa padatan.
Eluen  terbaik  dalam  identifikasi  dan pemisahan  senyawa  seskuiterpen  ekstrak fraksi  etil  asetat  dan  ekstrak  fraksi  n- heksana  adalah  diklorometan:etil  asetat (4,8:0,2)  dengan  pendeteksi  vanilin-asam sulfat.  Pada  ekstrak  fraksi  etil  asetat dihasilkan  6  noda  dengan  3  noda  berwarna ungu yang  diduga sebagai senyawa seskuiterpen  (Rf  0,89;  0,94  dan  0,96)  dan ekstrak  fraksi  n-heksana  dihasilkan  7  noda dengan 3 noda berwarna ungu  yang diduga sebagai  seskuiterpen  (Rf  0,49;  0,8  dan 0,99).Adapun hasil identifikasi KLT analitik ekstrak fraksi etil asetat dan ekstrak fraksi  n-heksana  setelah  disemprot  dengan vanilin-asam  sulfat  dan  dideteksi  dengan UV 366 nm ditunjukkan pada Gambar 1.
Keterangan : a. Hasil  identifikasi  KLT  analitik  untuk ekstrak fraksi etil asetat
b. Hasil  identifikasi  KLT  analitik  untuk ekstrak fraksi n-heksana

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  identifikasi  dengan uji  reagen  diketahui  bahwa  ekstrak  n- heksana  mengandung  golongan  senyawa steroid. Pemisahan dengan
KLT
menggunakan  eluen  n-heksana-etil  asetat (8:2)  menghasilkan  4  noda  dengan  nilai  Rf berturut-turut 0,10; 0,35; 0,61; dan 0,68.

## SARAN
Perlu  dilakukan  pemisahan  lebih murni  dengan  kromatografi  kolom-KLTP dan hasil isolat yang dihasilkan diidentifikasi dengan instrumentasi MS.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Auterhoff,  H.,  and  Kovar,  KA.  1987. Identifikasi Obat . Bandung: ITB.
Bayyinah,  I.  2012.  Identifkasi  dan  Uji Aktivitas Ekstrak Diklorometan Daun Bunga  Matahari( Helianthus  annuus L.)Sebagai  Antimalaria  Secara In Vivo Pada  Mencit  Jantan. Skripsi Tidak  Diterbitkan.  Malang:  Jurusan Kimia  Fakultas  Sains  dan  Teknologi UIN Maliki Malang.
Farnsworth,  N.  R.  1966.  Biological  and
Phytochemical
Screening of Plants. Journal of Pharmaceutical
Sciences  March  1966 .  Volume:  55. Number 3: 243-269.
Harborne,  JB.  1987. Metode  Fitokimia
Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Penerjemah: Kosasih Padmawinata  dan  Iwang  Soediro. Bandung: Penerbit ITB. Hernani  dan  Nurdjanah,  R.  2009. Aspek Pengeringan dalam Mempertahankan Kandungan  Metabolit  Sekunder  pada Tanaman Obat .Perkembangan Teknologi  TRO  21  (2),  ISSN  1829- 6289.  Bogor:  Balai  Besar  Penelitian dan Pengembangan Pascapanen Pertanian. b a
Trease,  GE.  And  Evans,  WC.  2002. Pharmacology,  15 th Ed .  Saunders Publishers. London.
Triastutik,  Y.  2013.  Aktivitas  Antimalaria Ekstrak Kasar Seskuiterpen dari Daun Bunga  Matahari  ( Helianthus  annuus L.)  Terhadap  Mencit  Jantan  ( Mus musculus ). Skripsi Tidak  Diterbitkan.
Malang:  Universitas  Islam  Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang. WHO. 2006.  Guidelines for the Treatment of Malaria. http://www.who.int/malaria/publicati ons/atoz/9789241547925/en/index.ht ml (Diunduh  pada  tanggal  25  Januari 2013).
Wijayakusuma,  MH.  2000. Ensiklopedia Milenium: Tumbuhan Berkhasiat Obat Indonesia Bunga-Bungaan .
Jakarta:  Penerbit  PT.  Prestasi  Insan Indonesia.