## EFEK HIPOGYKEMIA PEMBERIAN EKSTRAK DAUN JOHAR PADA TIKUS
(MUS MUSCULUS) YANG DI INDUKSI DENGAN STREPTOZOTOSIN
Hypoglycemic Effect of Johar’s Leaf Extract (Cassia siamea Lamk) In Mice (Mus musculus) That Induced by Streptozotosin

## Dyah Ika Krisnawati

## ABSTRACT
This  thesis  examines  whether there johar leaf extracts  hypoglycemic  effect  in  mice made diabetic by induction streptozotosin. This type of research in this thesis is the experimental research, the design used was Pretest and Posttest Control Group Design. By using Federer formula, the number of samples are 24 mice were divided into 4 treatment groups: the 1 st group  as the control group was given CMC-na 0.5 %, the 2 nd group  was given a dose of 0.5 g/kgBW of  johar extract / kg, the 3 rd Group was given johar extract 1 g / kgBW, and the  4 th group  were  given  a  dose  of  2  g  johar  extract  /  kgBW.  Examination  of  the  blood glucose  test  was  done  using  NESCO  TEST.  The  results  of  post-treatment  blood  sugar outline obtained an increase in blood sugar in group 1 and group 2, while in group 3 and group 4 showed a decrease in blood sugar levels. Normality test results obtained p values> 0.05 is 1165, so it could be said to be normally distributed data. Homogeneity test results obtained p values> 0.05 is 0.106, so the data can be said to be homogeneous. Observations of blood glucose levels in all groups get  p value> 0.05 that is 0.708 so it can be said from the  time  of  reduction  in  blood  sugar  levels  are  not  significant,  while  the  value  obtained from the group of p <0.05 is 0.020, Its can be significant. The conclusion of this study of johar  leaf  extract  is  not  so  useful  when  given  to  the  type  of  insulin-dependent  diabetes mellitus.
Keywords: johar leaf extract, mice, blood sugar levels, and streptozotosin

## PENDAHULUAN
Salah satu jenis penyakit yang saat ini sedang menjadi masalah yang cukup rumit di  dunia  kesehatan  dan  merupakan gangguan  endokrin  yang  paling  banyak dijumpai  adalah diabetes  mellitus (DM) (Sheerwood,  2001).  Salah  satu  gambaran DM yang paling menonjol adalah peningkatan  kadar  glukosa  darah  atau hiperglikemia  yang  disebabkan  oleh  efek insulin  yang tidak  adekuat.  Insulin  adalah hormon  yang  dapat  menurunkan  kadar glukosa darah, (Sheerwood, 2001).
Pada  sebagian  besar  kasus  DM disebabkan  oleh  berkurangnya  sekresi insulin  oleh  sel-sel  beta  Langerhans. Faktor  herediter  biasanya  memainkan peranan  besar  dalam  menentukan  pada siapa  DM  akan  berkembang  dan  pada
siapa DM tidak akan berkembang (Guyton,  2006).  DM  dapat  menimbulkan berbagai  komplikasi  kronik  pada  mata, ginjal, saraf dan pembuluh darah serta lesi pada membran basalis dalam pemeriksaan dengan  mikroskop  elektron  (Mansjoer, 2007).
Saat  ini  penanggulangan  kejadian hiperglikemi  dapat  dilakukan  baik  secara konvensional, tradisional maupun komplementer.  Seiring  dengan  semakin kompleksnya masalah yang terjadi seputar DM dan beberapa keunggulan penggunaan  obat  herbal,  dalam  hal  ini adalah terapi tradisional. Masyarakat masa kini mulai melirik penggunaan obat herbal sebagai  sarana  penanggulangan  terhadap melonjaknya kadar glukosa darah, dimana salah  satu  obat  herbal yang  bisa
menanggulangi  hiperglikemi  adalah  daun johar. Johar mengandung flavonoid, suatu senyawa yang disinyalir
dapat menurunkan  kadar  gula  darah  (Dahroji, 2009).  Flavonoid  merupakan  senyawa kimia  yang  bekerja  sebagai  antioksidan, memiliki hubungan sinergis dengan vitamin  C  (meningkatkan  efektivitas vitamin  C),  antiinflamasi,  menghambat pertumbuhan tumor, dan mencegah keropos  tulang  (IPB,2012).  Flavonoid yang terkandung dalam daun johar adalah jenis  Quercetin,  disamping  terdapat  juga zat aktif lainnya yaitu Alkaloid, Tanin dan Barokol.
Pada  akhir  era  1970  an,  Soewandi, berhasil  memperkaya  manfaat  tanaman herbal  daun  johar  dengan  secara  ilmiah membuktikan  rebusan  daun  johar  bisa menyembuhkan penyakit DM atau kencing  manis.  Purno  (1991)  telah melakukan  penelitian  efek  hipoglikemik air  rebusan  daun  Johar,  pada  tikus  putih jantan,  dibandingkan  dengan  tolbutamid. Dari  hasil  penelitian  tersebut,  ternyata  air rebusan daun johar dosis 2,5, 5,0, dan 10,0 g/KgBB mampu menurunkan kadar glukosa  darah  terhadap  kontrol  negatif, pada  kelompok  tikus  normal  yang  diberi beban  glukosa.  Pada  kelompok  tikus normal  yang  tidak  diberi  beban  glukosa, air rebusan daun Johar dosis 10,0 g/KgBB mampu menurunkan  kadar glukosa darah sebesar  15.06%  terhadap  kontrol  negatif (iptek.net,2005).
Streptozotosin (STZ) merupakan bahan diabetogenik yang banyak digunakan dalam penelitian selain aloksan. STZ merupakan agen antimicrobial yang juga digunakan sebagai  agen  alkilasi  kemoterapi.  Pada tahun  1963,  Rakieten  et  al.  menyebutkan bahwa  STZ  bersifat  diabetigenik  yang ditandai  dengan  sindroma  insulinopenia yang  disebut  dengan  diabetes  STZ,  yang disebabkan  oleh  nekrose  spesifik  sel  beta pancreas dan STZ merupakan bahan kimia pilihan  untuk  induksi  hewan  coba  pada penelitian  tentang  DM  dengan  kerusakan pankreas (Lenzen, 2007).

## METODE Rancangan penelitian
Adapun rancangan penelitian yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah pretest and posttest control group design .

## Sampel
Besaran sampel ditentukan dengan rumus  Federer  (Hanafiah,  1997  ) sebagai berikut :
( t – 1 ) ( r – 1 ) ≥ 15 (4 – 1 ) ( r – 1 ) ≥ 15
r ≥ 6 Ket : t : Jumlah kelompok r : jumlah replikasi Jumlah  replikasi  per  kelompok  adalah  6, sehingga  jumlah  hewan  coba  6  ekor  x  4 kelompok = 24 ekor.
Cara  pembuatan  sediaan dan  dosis daun johar
Daun  johar  dikeringkan  dengan diangin-anginkan. Simplisia kering digiling  halus    hingga  diperoleh  serbuk. Dilakukan pembuatan ekstrak dengan cara maserasi  dengan  alkohol  sebagai  pelarut. Ekstrak yang diperoleh dikeringkan dengan waterbath hingga diperoleh ekstrak kental
Berdasarkan  penelitian  Purno (1991) air rebusan daun  Johar dosis 2,5, 5,0, dan 10,0  g  /  kg  BB mampu  menurunkan kadar  glukosa  darah  terhadap  kontrol negatif. Pada kelompok tikus normal yang tidak  diberi  beban  glukosa  ,  air  rebusan daun  Johar  dosis  10,0  g  /  kg  BB  mampu menurunkan  kadar  glukosa  darah  sebesar 15,06% terhadap kontrol negatif.
Pada  ekstraksi  simplisia  kering  akan menghasilkan  ekstrak  sebanyak  10%  dari berat  simplisia  kering.  Maka  pada penelitian  ini  akan  dilakukan  penelitian dengan ekstrak 0,5, 1 dan  2 gram/Kg BB dengan  volume  pemberian  1ml/100  gram BB.
Cara membuat sediaan ekstrak daun johar yang dibutuhkan :
Diekstrak 0,5 ; 1 ; 2 gram/KgBB
Rencana  pemberian  sediaan  1  ml/100 gram BB
0,5 gram   ;   1 gram   ;   2 gram KgBB          KgBB        KgBB
0,5 gram   ;   1 gram   ;     2 gram 1000gBB     1000gBB    1000gBB 0,05 gram ;  0,1 gram ;  0,2 gram 100 gram   100 gram    100 gram
Jika 100 gram = 1 ml
1. Membuat  sediaan  2  gram/KgBB  ( sebagai larutan induk )
0,2  gram         =      20 gram ml                       100ml
Cara  membuat  sediaan:  timbang  20 gram  ekstrak  daun  johar  tambahkan larutan  CMC-Na  0,5%  sampai  mencapai volume 100 ml
2. Membuat sediaan 1 g/KgBB
Sediaan induk diambil 50 ml ditambahkan  CMC-Na  0,5  %  sampai dengan 100 ml.
3. Membuat Sediaan 0,5 g/KgBB Sediaan  dosis  1  g/KgBB  diambil  50 ml  ditambahkan  CMC-Na  0,5  % sampai dengan 100 ml.
Pembuatan  sediaan  dan  penghitungan dosis STZ
Diperkirakan  berat  badan  mencit 25 gram dengan dosis STZ 150mg/KgBB, keperluan STZ per mencit : 150     x 25gram  = 3,75 mg / mencit 1000
Kebutuhan STZ untuk 30 mencit = 3,75 x 28 = 112,5 mg Kebutuhan  dapar  sitrat  4,5  %  adalah  1,5 ml per 10 tikus = 0,15 ml/mencit Jadi  pembuatan  larutannya  adalah  112,5 mg STZ dilarutkan ke dalam 4,5 ml Dapar sitrat 4,5%.
Kebutuhan  larutan  STZ  masing  –  masing mencit  didasarkan  pada  berat  badan masing – masing mencit.

## Intervensi
Mencit sejumlah 24 ekor diukur kadar glukosa  darah  (pada  ekor)  dengan  cara dibersihkan dengan kapas alkohol, kemudian  digunting  ujung  ekor,  darah yang  keluar  diteteskan  pada strip  Nesco meter ,  kemudian  hasilnya  akan  terbaca pada  alat Nesco  meter ,  ditunggu  selama 30  detik,  dan  memberikan    hasil  analisa berupa  kadar  glukosa  darah  tikus  dalam mg/dl.
Mencit  kemudian  diinjeksi  dengan STZ 150 mg/Kg BB secara intraperitoneal.  Jika  induksi  dilakukan siang,  malam  harinya  mencit  diberi minum Dekstrosa 10% untuk
menghindari hipoglikemi. Setelah 48 jam, mencit  dipuasakan  selama  10  jam,  diukur kadar  glukosa  darah  sebelum  perlakuan, dilakukan  randomisasi  24  ekor  mencit yang  dibagi  menjadi  4  kelompok,  yaitu kelompok  1-4  masing-masing  sebanyak  6 ekor mencit.
K1  s/d  K5  adalah  kelompok  pengamatan, dibagi  menjadi  pengamatan  sebelum perlakuan    (01  s/d  04)  dan  pengamatan setelah perlakuan (O5 s/d O8).
P0 s/d P3 adalah : P0 = kelompok kontrol hanya diberi CMC Na 0,5 %
P1  =  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  daun johar dosis 0,5 g/ KgBB P2  =  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  daun johar dosis 1 g/KgBB
P3  =  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  daun johar dosis 2 g/KgBB (P1,  P2,  P3  masing-masing  diberikan dosis peroral 1 ml/100 gBB ), Setelah diberi perlakuan tiap kelompok  diambil  darahnya  pada  jam  ke- 1,  jam  ke-2,  jam  ke-3  dan  tentukan  kadar glukosa  darahnya  dengan  Nesco  meter. Kemudian data hasil pengamatan sebelum dan sesudah perlakuan dianalisis.

## Analisis Data
Data hasil penelitian dianalisis dengan  menggunakan  program  SPSS  for Windows  XP  yang  meliputi  analisis
statistik sebagai berikut (Zainuddin, 2010)
: 1. Uji statistik deskriptif untuk
menggambarkan  tentang  ringkasan data-data seperti rerata, standar deviasi, varian, modus dan lain-lain.
2. Uji  homogenitas  data  awal  untuk mengetahui apakah data awal homogen atau tidak, digunakan untuk mengetahui  apakah  beberapa  varian populasi  adalah  sama  atau  tidak, dilakukan  sebagai  persyaratan  uji anova.
3. Uji  normalitas  untuk  mengetahui apakah  populasi  data  berdistribusi normal atau tidak
4. Uji Anova  /  One  Way  Anova untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan  rata-rata  untuk  lebih  dari dua kelompok sampel.

## HASIL
Pemberian  ekstrak  daun  johar  dengan dosis 0,5 dan 1 g/KgBB tidak menurunkan kadar  glukosa  darah,  tetapi  pada  dosis  2 g/KgBB menurunkan kadar glukosa darah mencit  ( Mus  musculus )  yang  dijadikan
diabetes mellitus dengan induksi streptozotosin.
Tidak terdapat korelasi antara peningkatan dosis  ekstrak  daun  johar  dengan  efek penurunan  glukosa  darah  mencit  ( Mus musculus ) yang dijadikan diabetes mellitus dengan induksi streptozotosin.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdelmoaty,  MA,  Ibrahim  MA,  Ahmed NS  and  Abdelaziz  MA  2010,’
Confirmatory studies
on the
antioxidant and antidiabetic effect of quercetin  in  rats.’ Indian  Journal  of Clinical  Biochemestry ;  25  (2)  188-
192
Adewole SO, Martins  EA C and Ojewole AO  2007,’  Protective  effect  of quercetin  on  the  morphology  of pancreatic
beta-cells of
streptozotocin-treated  diabetic  rats.’ Afr. J. Trad. CAM 4 (1): 64-74
Aguirre  L,  Arias  N,  Macarulla  M  T, Gracia  A  and  Portillo  M    2011,’ Beneficial  effects  of  quercetin  on obesity  and  diabetes.’ The  Open Nutraceuticals Journal, 4, 189-198
Ayyanar,  M  and  Babu,  PS    2012,’ Syzygium  cumini  (L.)  Skeels:  A review of its phytochemical constituents  and  traditional  uses.’ Asian  Pacific  Journal  of  Tropical Biomedicine 240-246.
Brunner  &Suddart,  2001, Buku  ajar keperawatan medikal bedah , Vol. 2, Edisi 8. EGC, Jakarta.
Chatsri D, et all, 2005, ‘Barakol extracted from cassia siamea stimulates chloride secretion in rat colon.’ The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, Mahidol University,  Bangkok,  Thailand, vol. 314, no. 2, PP. 732 – 737.
Colugo    2006,  ‘Musmusculus,  the  house mouse.’ Oragon USA
Evelyn  C.P,  2002, Anatomi  dan  fisiologi untuk paramedis, Gramedia, Jakarta.
Ganong,    2008, Buku  ajar  fisiologi kedokteran, edisi 17, EGC, Jakarta.
Guyton  AC  and  Hall.JE,  2006, Buku  ajar fisiologi  kedokteran ,edisi  11,  EGC,
Jakarta.
Hanafiah,K.A, 1995, Rancangan percobaan  teori  dan  aplikasi ,  Raja Grafindo Persada, Jakarta Utara.
Hariadi,  2009, Beternak  tikus  putih ,
Pustaka Baru Press, Yogyakarta.
Heinrich,2010,
Farmakognosi dan fitoterapi , EGC, Jakarta.
Heyne  K,  1987, Tumbuhan  berguna
Indonesia ,  Jilid  III,  diterjemahkan oleh Badan Litbang Kehutanan, Departemen Kehutanan, Jakarta.
http:// www .iptek.net.id/ind/pd_tanobat/vie w.php?id=295
http://dahroji.wordpress.com/2009/07/14/ diabetes-1/ http://Ipteknet.2008,tanaman obat Indonesia http://www.iptek.net.id .
IPB  2012, ‘Tentang johar.’ Mei 2012
Irwin  et  Barneby    2001,’  Informasi singkat benih senna siamea (Lamk).’
Indonesia  Forest  Seed  Project, No.
11 Maret 2001.
Katzung,  1998, Farmakologi  dasar  dan klinik , edisi VI, EGC, Jakarta.
Lanzen.S    2008,’  The  mechanism  of aloxan-and streptozotocin-induced diabetes.’ Diabetologia  Institute  of Biochemistry,  Hannover  Medical
School Germany , 51:216-226.
Mansjoer, A 2007, Kapita selekta kedokteran , Media Aeskulapius, Jakarta.
Mark,  A    2009,  ‘ABC  don’t  ever  forget glucose.’ British Journal of Hospital
Medicine , Vol. 70 No. 4.
Nugroho,AE    2006,’  Hewan  percobaan diabetes  mellitus  :  patologi  dan
mekanisme
aksi diabetogenik.’ Biodiversitas
Surakarta , Vol. 7, No.4 pp 378-382.
Peter  JF    2001,  ‘Alkaloid  biosynthesis  in plants  :  biochemistry,  cell  biology, molecular  regulation,  and  metabolic engineering
applications.’ Depertement of Biological Sciences, University of  Calgary, Canada , vol.
52, PP. 29-66.
Price  &  Wilson,  2005, Patofisiologi konsep  klinis  proses  –  proses penyakit ,  Vol.2,  Edisi  6,  EGC,
Jakarta.
Rhodes  and  White,  2002,’Molecular insights  into  insulin  action  and secretion.’ European  Journal  of Clinical Investigation ; 3–13.
Sherwood,  2001, Fisiologi  manusia,  dari sel  ke  sistem ,  edisi  pertama,  EGC,
Jakarta.
Syaifoellah,  1999, Buku  ajar  ilmu penyakit  dalam ,  Jilid  1,  EGC,
Jakarta.
Tanit,  P  and  Wandee,  G  2006,  ‘Barakol contents  in  fresh  and  cooked  senna siamea  leaves.’ Departement  of Pharmacognosy, Faculty of Pharmacy, Mahidol University,
Bangkok,  Thailand ,  vol.  37  No.  2,
PP. 388 – 393.
Zainuddin, M, 2000, Metodologi penelitian, Surabaya.