Murgayanti ∙ A.A. Putri ∙ A. Nuraini

## Multiplikasi tunas tanaman temu putih pada berbagai jenis karbohidrat dan sitokinin secara in vitro
Sari. Permasalahan  utama  dari  perbanyakan  tanaman  temu  putih  ( Curcuma  zedoaria )  secara konvensional  adalah  penggunaan  bahan  tanam  berupa  rimpang  yang  memiliki  masa  dormansi  2-3 bulan. Perbanyakan in vitro menjadi alternatif untuk membuat perbanyakan temu putih secara cepat dan  dalam  jumlah  banyak,  namun  masih  belum  banyak  penelitian  rekayasa  media in  vitro berupa penambahan  karbohidrat  dan  sitokinin  dalam  media.  Percobaan  ini  bertujuan  untuk  mengetahui respon pertumbuhan dan multiplikasi eksplan C. zedoria terhadap 3 jenis karbohidrat, yaitu sukrosa, glukosa dan amilum dengan konsentrasi 2% dan 4% yang dikombinasikan dengan 2 jenis sitokinin, yaitu Benzyl Amino Purine (BAP) 2 ppm dan Thidiazuron (TDZ) 1,5 ppm. Percobaan ini menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  dengan  36  unit  percobaan  dan  dengan  waktu  pengamatan  selama  12 Minggu Setelah Tanam (MST). Hasil percobaan menunjukkan kombinasi sukrosa dan glukosa dengan sitokinin  BAP  dan  TDZ  memberikan  pengaruh  terhadap  poliferasi  tunas  baru,  perkembangan  dan pertumbuhan  planlet  tanaman C.  zedoria .  Penggunaan  amilum  pada  setiap  perlakuan  menyebabkan kematian fisiologis lebih cepat. Penggunaan TDZ pada setiap perlakuan memberikan hasil yang lebih baik terhadap jumlah tunas baru. Perlakuan dengan media sukrosa 4% + TDZ 1,5 ppm memberikan hasil yang paling tinggi dengan rata-rata jumlah tunas sebanyak 4,67 tunas baru. Perlakuan dengan media sukrosa 2% + BAP 2 ppm memberikan hasil yang paling signifikan pada tinggi tunas dengan rata-rata tinggi tunas sebesar 16,97 cm dan rata-rata jumlah daun sebanyak 8,67 buah.
Kata kunci: Amilum ∙ Glukosa ∙ Karbohidrat ∙ Multiplikasi ∙ Tunas
In vitro shoot multiplication of Curcuma zedoria (Christm.) Roscoe on various types of carbohydrates and cytokinins
Abstract. The main problem with conventional propagation of Curcuma zedoaria is the use of planting material in form of rhizomes which have a dormancy period of 2-3 months. In vitro propagation is an alternative to make the propagation of Curcuma zedoaria quickly and in large quantities, but there are still  not  many  researches  study  the  formulation  of  in  vitro  media  such  as  the  addition  of carbohydrates  and  cytokinins. This  experiment  aims  to  determine  the  response  of  growth  and multiplication of explants of C. zedoria to 3 types of carbohydrates, i.e., sucrose, glucose and amylum with  concentration  of  2%  and  4%  combined  with  2  types  of  cytokinins,  i.e.,  2  ppm  Benzyl  Amino Purine (BAP) and 1.5 ppm Thidiazuron (TDZ). This experiment used a completely randomized design with  36  experimental  units  and  an  observation  time  of  12  weeks  after  planting  (MST).    The  results showed that the combination of sucrose and glucose with cytokinins in form of BAP and TDZ affected the  proliferation  of  new  shoots,  the  development  and  growth  of C.  zedoria plantlets.  The  use  of amylum in each treatment caused physiological death more quickly occured. The use of TDZ in each treatment gave better result on the number of new shoots. Treatment with 4% sucrose + 1.5 ppm TDZ showed the highest yield on the number of shoots, as many as 4.67 new shoots. Treatment with 2% sucrose  +  2  ppm  BAP  showed  the  most  significant  results  on  shoot  height  with  an  average  shoot height of 16.97 cm and an average number of leaves of 8.67 leaves.
Keywords: Amylum ∙ Glucose ∙ Carbohydrates ∙ Multiplication ∙ Shoots
Diterima : 7 Mei 2021, Disetujui : 8 Desember 2021, Dipublikasikan : 15 Desember 2021 DOI: 10.24198/kultivasi.v20i3.33296
Murgayanti 1 ∙ A.A. Putri 2 ∙ A. Nuraini 1
1 Departemen Budidaya Pertanian, Fakultas Pertanian UNPAD, Jalan Raya Bandung Sumedang Km. 21 Sumedang 45363
2 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian UNPAD, Jalan Raya Bandung Sumedang Km. 21 Sumedang 45363 Korespondensi: murgayanti@unpad.ac.id

## Pendahuluan
Temu  putih  ( Curcuma  zedoaria )  merupakan golongan  tanaman herbaceous dari  famili Zingiberaceae yang  kaya  akan  metabolit sekunder,  khususnya  senyawa curcumin yang diketahui  sebagai  obat  dari  salah  satu  penyakit paling  berbahaya  di  dunia,  yaitu  kanker  rahim (Jena et  al., 2020).  Khasiat  temu  putih  di  bidang medis  tentu  berdampak  pada  tingginya permintaan  akan  ketersediaan  tanaman  temu putih  dari industri farmasi.  Menurut  Salim dan Munadi  (2017),  kebutuhan  rimpang  temu  putih untuk  industri  obat  saja  mencapai  3.000 ton/tahun.
Menurut  data  Badan  Pusat  Statistik  (2017) luas panen tanaman temu putih dari tahun 2016- 2017  mengalami  penurunan  sebesar  5,45%. Perbanyakan  tanaman  temu  putih  ( C.  zedoria ) umumnya  diperbanyak  secara  vegetatif  melalui penanaman  rimpang  induk  dan  rimpang cabang.  Hal  ini  menjadi  kendala  dalam  upaya pemenuhan  permintaan  ketersediaan  temu putih sebab rimpang merupakan modifikasi dari batang  tanaman  yang  diketahui  memiliki  masa dormansi  yang  cukup  lama  sekitar  2  sampai  3 bulan  (Trisnawan et  al. ,  2017).  Hal  tersebut menyebabkan  sulit  dan  lamanya  memperoleh bahan tanam yang seragam.
Perbanyakan  secara  mikro  melalui  metode kultur  jaringan  ( in  vitro )  saat  ini  menjadi alternatif  yang  paling  dipilih  dalam  usaha pemenuhan  kebutuhan  ketersediaan  tanaman yang  sehat  dan  seragam.  Hal  ini  karena keunggulannya  dalam  memanfaatkan  sifat totipotensi  sel  tanaman  untuk  membentuk individu baru, sehingga dari bahan tanam yang terbatas  dapat  diperoleh  banyak  tanaman  baru dengan waktu yang relatif cepat (Hapsoro et al. , 2018). Pemanfaatan teknik kultur jaringan dalam perbanyakan tanaman temu putih dirasa sangat tepat mengingat tanaman temu-temuan termasuk  ke  dalam  tanaman  obat  golongan kedua  (Jena et  al., 2020),  yaitu  tanaman  obat yang masih memungkinkan untuk dikembangkan  areal  budidayanya  dan  saat  ini memerlukan  arah  penelitian  yang  bertujuan untuk  memperoleh  varietas  unggul  dan teknologi  budidaya  yang  dapat  meningkatkan produksi dan bahan aktif.
Prinsip  dari  perbanyakan  secara in  vitro adalah  kesesuaian  antara  kondisi  eksplan, lingkungan tumbuh, dan media tanam (Hapsoro et  al., 2018).  Media  tanam  pada  perbanyakan in
vitro tanaman  famili Zingiberaceae umumnya menggunakan  komposisi  Murashige  and  Skoog yang  mana  setiap  zat  penyusunnya  tentu memiliki  fungsi dan  peran  yang  penting dalam menunjang  pertumbuhan  dan  perkembangan tanaman.  Karbohidrat  adalah  salah  satu  dari nutrisi  yang  besar  peranannya,  hal  ini disebabkan  karbohidrat  merupakan  sumber karbon yang berperan dalam penyediaan energi bagi  tanaman  untuk  tumbuh  dan  berkembang (Kherasani et al., 2017). Penambahan karbohidrat yang  umumnya  berupa  gula  ke  dalam  media kultur  jaringan  berfungsi  sebagai  pengganti karbon  yang  biasanya  diperoleh  dari  atmosfer pada penanaman secara in vivo. Sukrosa adalah sumber  karbohidrat  yang  paling  sering digunakan  dalam  kultur  jaringan.  Penggunaan glukosa  dan  fruktosa  juga  seringkali  dilakukan sebagai  substitusi  dari  sukrosa  (Wahyurini, 2010).  Beberapa  penelitian  dikatakan  bahwa glukosa  memiliki  tingkat  keefektifan  yang hampir  sama  dengan  sukrosa.  Penggunaan sumber  karbohidrat  lainnya,  seperti  laktosa, galaktosa,  rafinosa,  maltosa  dan  pati  dianggap kurang memberikan respons yang baik terhadap perbanyakan  dan  pertumbuhan  tanaman  secara in vitro (Kherasani et al. , 2017) .
Pemberian  Zat  Pengatur  Tumbuh  (ZPT) juga  termasuk  ke  dalam  kunci  kesuksesan  dari perbanyakan  tanaman  secara in  vitro ,  sebab hormon tumbuh yang dihasilkan tanaman tidak sebesar pada budidaya secara in vivo (Almeida et al., 2020) . Zat  pengatur  tumbuh  golongan sitokinin umumnya digunakan pada multiplikasi  tunas  tanaman  temu  putih (C. zedoria) karena berperan  dalam proses pembelahan  sel  dan  pertumbuhan  tunas.  Jenis sitokinin  sintetik  yang  umumnya  digunakan adalah 6-Benzyl amino purine (BAP) yang berasal dari golongan purin dan Thidiazuron (TDZ) yang berasal dari golongan urea. Kedua jenis sitokinin ini  tentu  memiliki  karakteristik  yang  berbeda (Grzegorczyk et  al .,  2016).  Menurut  Aulia et  al. (2020), BAP merupakan salah satu zat pengatur tumbuh  golongan  sitokinin  yang  biasa digunakan  untuk  induksi  kalus,  tetapi  penting juga untuk proses induksi tunas dan kecambah. Keunggulan  dari  BAP  yang  sering  kali membuatnya  dipilih  sebagai  ZPT  dalam  kultur in  vitro adalah  sifatnya  yang  stabil,  mudah diperoleh,  dapat  disterilisasi,  lebih  efektif dibanding kinetin dan memiliki harga jual yang relatif murah. Menurut Dinani et al. (2018), TDZ (Thidiazuron) adalah  zat  pengatur  tumbuh
golongan  sitokinin  yang  keberadaannya  dapat mempengaruhi kinerja hormon sitokinin lainnya, baik hormon sitokinin endogen ataupun eksogen.  Zat  pengatur  tumbuh  TDZ  memiliki kemampuan  lebih  baik  dalam  menginduksi tunas dibanding sitokinin lainnya.
Menurut  Yulizar et  al. (2014)  hubungan antara  jenis  karbohidrat  dengan  jenis  sitokinin terhadap  pertumbuhan  eksplan  temu  putih secara in  vitro adalah  sinergis.  Karbohidrat merupakan  sumber  karbon  yang  memiliki peranan  penting  dalam  penyediaan  energi  bagi sel,  sehingga  dengan  adanya  karbohidrat  dan sitokinin  yang  tepat  maka  pembelahan  sel, pembesaran  sel,  dan  diferensiasi  sel  dapat berlangsung  dengan  baik.  Anisuzzaman  (2008) menyebutkan bahwa umumnya penelitian pada multiplikasi in  vitro berfokus  pada  penggunaan ZPT,  sehingga  penelitian  mengenai  sumber karbon  pada  multiplikasi in  vitro masih  jarang dilakukan.  Hal  ini  yang  mendorong  untuk melakukan  penelitian  mengenai  keefektifan hubungan  antara  jenis  sumber  karbon  dengan jenis sitokinin terhadap jumlah tunas temu putih (C. zedoria) secara in vitro .

## Bahan dan Metode
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Kultur  Jaringan  Teknologi  Benih,  Fakultas Pertanian  Universitas  Padjadjaran,  dari  bulan Februari  2020  sampai  dengan  Februari  2021. Bahan  utama  yang  digunakan  adalah  tunas rimpang temu putih yang diperoleh dari Kebun Biofarmaka  IPB;  3  jenis  karbohidrat,  yaitu sukrosa,  glukosa  dan  amilum;  serta  sitokinin jenis BAP dan TDZ . Rancangan percobaan yang digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  yang  terdiri  dari  2  faktor  perlakuan. Faktor pertama berupa jenis karbohidrat dengan 6 taraf perlakuan, yaitu sukrosa 2%, sukrosa 4%, glukosa 2%, gulosa 4%, amilum 2%, dan amilum 4%.  Faktor  kedua  berupa  jenis  sitokinin  yang terdiri dari 2 taraf percobaan,  yaitu BAP 2 ppm dan  TDZ  1,5  ppm.  Percobaan  terdiri  dari  12 kombinasi  perlakuan  yang  diulang  sebanyak  3 kali  sehingga  diperoleh  36  unit  percobaan  dan dengan  waktu  pengamatan  selama  12  Minggu Setelah Tanam (MST).
Penelitian dimulai dengan tahap pendahuluan,  berupa  pencucian  rimpang  yang diperoleh  dari  lapang,  pemeraman  di  ruang tertutup,  dan  penyemprotan  larutan  GA3
dengan  interval  waktu  2  kali  sehari  untuk menginduksi  pertumbuhan  tunas.  Tahap sterilisasi  media  dan  ruang  kultur.  Tahap sterilisasi  eksplan  yang  terdiri  dari  2  tahapan, yaitu  strerilisasi  di  luar Laminar  Air  Flow  (LAF) dan  sterilisasi  di dalam Laminar  Air  Flow  (LAF ), kemudian dilanjutkan dengan tahap penanaman dan pemeliharaan.
Parameter  pengamatan  terdiri  dari  1 parameter penunjang, yaitu suhu dan kelembaban  yang  diamati  setiap  minggunya menggunakan  alat Thermohigrometer dan  3 parameter  utama,  yaitu  jumlah  tunas,  tinggi tunas  dan  jumlah  daun  yang  diamati  setelah planlet didestruksi.
Analisis  data  yang  digunakan  dalam penelitian ini menggunakan pendekatan kualitatif  untuk  parameter  suhu  dan  jumlah tunas,  serta  pendekatan  kuantitatif  untuk parameter  tinggi  tunas  dan  jumlah  daun. Analisis  data  kuantitatif  diuji  menggunakan Two  Way  ANOVA  pada  taraf  nyata  5%  dan apabila  ada  perbedaan  yang  signifikan dilakukan  uji  lanjut  dengan  analisis Duncan pada  taraf  yang  sama  untuk  mengetahui pengaruh  dari  setiap  perlakuan  berdasarkan analisis dari software SPSS versi 26.

## Hasil dan Pembahasan
Suhu  dan  Kelembaban. Suhu  dan  kelembaban ruang kultur adalah salah satu f aktor eksternal yang  dapat  memengaruhi  pertumbuhan  dan multiplikasi  planlet  (Basri,  2016). Grafik  suhu pada  Gambar  1  menunjukkan  bahwa  suhu  di ruang  inkubasi  berkisar  antara  20,5-22,7°C dengan  kelembaban  relatif  berkisar  antara  66- 77%.
Gambar 1. Grafik Suhu ( o C) dan Kelembaban (%)

## Ruang Kultur
Data  ini  menunjukkan  kisaran  suhu  dan kelembaban  ruang  kultur  yang  digunakan
20,6 21,5 22,6 21,6 20,5 21,5 20,7 21,5 20,5 20,6 21,5 22,6 71 70 66 77 76 70 74 70 76 71 70 66 Suhu Kelembaban
termasuk  ke  dalam  suhu dan  kelembaban  yang cocok  untuk  perkembangan  dan  pertumbuhan eksplan tanaman C. zedoria karena kisaran suhu ruang inkubasi yang optimal untuk perbanyakan tanaman secara in vitro adalah 20 – 25 o C  dengan  kelembaban  relatif  70 – 90% (Velickovic et al. , 2018).
Menurut  Velickovic et  al. (2018),  suhu  di bawah optimal dapat menyebabkan terhambatnya  pertumbuhan  eksplan  sehingga pertumbuhan  menjadi  lebih  lambat,  sedangkan apabila  suhu  ruang  inkubasi  diatas  suhu optimal  akan  menyebabkan  tingginya  laju respirasi  eksplan  yang  juga  dapat  menghambat pertumbuhan  eksplan.  Kelembaban  ruang inkubasi  di  bawah  70%  dapat  berakibat  pada penguapan  media  tanam  yang  cepat  sehingga eksplan  cepat  kehabisan  media,  terjadi kontaminasi dari tetesan air, dan mengeringnya planlet (Basri, 2016; Jasmine, 2017). Kelembaban yang  terlalu  tinggi  salah  satunya  dapat menyebabkan  pertumbuhan  abnormal  seperti vitrifikasi (Velickovic et al. 2018). Jumlah  Tunas. Berdasarkan  data  pada Tabel  1  dapat  dilihat  bahwa  Jumlah  tunas tertinggi  dimiliki  oleh  perlakuan  Sukrosa  4%  + TDZ  1,5  ppm  dengan  rata-rata  jumlah  tunas sebesar 4,67.
Tabel 1. Jumlah Tunas C. zedoria pada Usia 12 MST.
Gula Sitokinin Sukrosa Glukosa Amilum 2% 4 % 2% 4% 2% 4% BAP 2 ppm 2,33 1,3 3 1,33 1,33 0 0
Keterangan HS HS HS HS Mati Mati TDZ 1,5 ppm 4,33 4,6 7 4 4 0 0 Keterangan HS HS HS HS Mati Mati
Keterangan: HS : Hijau Sehat
Perlakuan  dengan  sitokinin  jenis  BAP menunjukkan  penggunaan  media  sukrosa  2%  + BAP  2  ppm  menghasilkan  jumlah  tunas  yang lebih  tinggi  dibanding  perlakuan  dengan  BAP lainnya, yaitu senilai 2,3. Perlakuan dengan BAP lainnya  diperoleh  data  rata-rata  jumlah  tunas yang  seragam,  yaitu  1,3.  Perlakuan  sukrosa  4% dengan  TDZ  1,5  ppm  menghasilkan  jumlah tunas tertinggi dibandingkan perlakuan lainnya.
Sifat  sukrosa  yang  merupakan  golongan disakarida  memiliki  tingkat  kelarutan  yang
tinggi, kemampuan dalam netralitas kelistrikan, kurangnya efek penghambatan terhadap sebagian  besar  proses  biokimia  dan  sifatnya yang  tidak  mudah  terurai  membuat  sukrosa lebih  mudah  digunakan  oleh  planlet  sebagai sumber  karbonnya  (Kherasani et  al .,  2017). Menurut  Antoniazzi et  al. (2016)  TDZ  memiliki sifat paling aktif dan mampu menginduksi tunas in  vitro lebih  besar  dibanding  sitokinin  lainnya pada beberapa jenis tanaman. Dinani et al. (2018) menyebutkan TDZ dapat memacu pertumbuhan tunas  lebih  banyak  karena  TDZ  memiliki struktur  kimia  lebih  stabil.  TDZ  juga  dapat mengaktifkan  dan  mempengaruhi  biosintesis sitokinin endogen tipe purin, yang mengakibatkan  terbentuknya  respon  ganda terhadap  eksplan,  sehingga  jumlah  tunas  baru yang dihasilkan akan lebih banyak dibandingkan  di  dalam  media  yang  diperkaya dengan BAP (Dinani et al., 2018). Perlakuan  dengan  sumber  karbohidrat jenis glukosa yang dikombinasikan dengan TDZ 1.5  ppm  menghasilkan  rata-rata  jumlah  14% lebih rendah dibanding penggunaan karbohidrat jenis sukrosa. Hal ini didukung oleh Salvi et  al .  (2001) yang menyebutkan  bahwa glukosa  adalah  karbohidrat  yang  efektifitasnya hampir  mendekati  sukrosa  dan  paling  efisien pada  multiplikasi  tunas  tanaman C.  longa. Penggunaan karbohidrat amilum tidak menunjukan  pertumbuhan  dan  perkembangan eksplan, yang kemudian mengakibatkan tanaman  mati  pada  usia  5  MST  sehingga  tidak menghasilkan tunas baru.
Tinggi  Tunas. Data  pada  Tabel  2  dan Gambar  2  menunjukkan  bahwa  perlakuan memberikan  tinggi  tunas  yang  berbeda  nyata, dengan perlakuan sukrosa 2% + BAP 2 ppm dan Glukosa  4%  +  BAP  2  ppm  memberikan  tinggi yang  paling  baik..  Hal  ini  sesuai  dengan pernyatanan dari Rustikawati et al. (2020) bahwa penambahan  sitokinin  jenis  BAP  ke  dalam media  kultur  dapat  menstimulasi  sintesis protein  di  dalam  jaringan  tanaman,  sehingga mampu  mendorong  organogenesis  kultur  tunas in vitro . Penggunaan jenis dan konsentrasi karbohidrat  yang  digunakan  juga  memberi pengaruh  signifikan  terhadap  tinggi  tunas. Penggunaan  karbohidrat  jenis  sukrosa  dengan konsentrasi  2%  dan  glukosa  4%  memiliki panjang tunas yang paling signifikan dibanding perlakuan  lainnya,  yaitu  dengan  rata-rata  nilai tinggi  tunas  sebesar  16,97  pada  perlakuan
sukrosa  2% + BAP 2 ppm dan rata-rata panjang tunas sebesar 16,2 pada perlakuan glukosa 4% + BAP 2 ppm.
Tabel  2.  Tinggi  Tunas C.  zedoaria pada  usia  12
MST.
Gula Sitokinin Sukrosa Glukosa Amilum 2% 4% 2% 4%  2%  4%
BAP 2 ppm 16,97d  9,2a  10,47b  16,2d  na  na TDZ 1,5 ppm  12,77c  10,77b 11,47b  10,8b  na  Na Keterangan:  na  adalah  tidak  dianalisis  karena  tunas mati.  Nilai  rata-rata  yang  diikuti  dengan  huruf  yang sama  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  tidak berbeda  nyata  menurut  uji  jarak  berganda  Duncan pada taraf nyata 5%.
Waryastuti et al. (2017) menyatakan bahwa semakin  banyak  jumlah  tunas  yang  tumbuh dapat  menyebabkan  pertumbuhan  masing- masing tunas terhambat. Hal ini selaras dengan data  pada  Tabel  2  yang  memperlihatkan penggunaan sitokinin jenis TDZ yang menghasilkan jumlah tunas lebih banyak, tetapi memiliki  tinggi  tunas  di  bawah  nilai  perlakuan sukrosa 2%+ BAP 2 ppm dan Glukosa 4% + BAP 2  ppm.  Antoniazzi et  al. (2016)  juga menyebutkan  bahwa  penambahan  TDZ  dapat memacu  produksi  etilen  endogen  yang  dapat menghambat  pemanjangan  batang,  terutama pada tanaman dikotil.
Gambar 2 . Perbedaan Tinggi Tunas dan Jumlah Daun Planlet dari Setiap Perlakuan pada Usia 12 MST.
Jumlah  Daun. Hasil  pada  Tabel  3 menunjukkan  perlakuan  dengan  sitokinin  jenis TDZ  menghasilkan  rata-rata  jumlah  daun  yang lebih  banyak  dibanding  perlakuan  dengan sitokinin  jenis  BAP.  Jumlah  daun  terlihat
berbanding  lurus  dengan  jumlah  tunas  yang dihasilkan.
Tabel 3. Jumlah Daun dari Setiap Perlakuan pada Usia 12 MST.
Gula Sitokinin Sukrosa Glukosa Amilum 2% 4% 2%  4% 2% 4% BAP 2 ppm  8,67f  4,33a  5,67c  6,33d  na na
TDZ 1,5 ppm 6,67d  7,67e  8e 5b na na Keterangan:  na  adalah  tidak  dianalisis  karena  tunas mati.  Nilai  rata-rata  yang  diikuti  dengan  huruf  yang sama  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  tidak berbeda  nyata  menurut  uji  jarak  berganda  Duncan pada taraf nyata 5%.
Hasil  pengamatan  pada  jumlah  daun menunjukkan  bahwa  hampir  semua  kombinasi perlakuan menumbuhkan daun, kecuali perlakuan  dengan  amilum.  Perlakuan  dengan nilai signifikansi tertinggi diperoleh pada media Sukrosa  2%  +  BAP  2  ppm  dan  media  Glukosa 2%  +  TDZ  1,5  ppm,  sedangkan  hasil  terendah ditunjukkan oleh perlakuan media Sukrosa 4% + BAP  2  ppm.  Jumlah  tunas  dan  jumlah  daun pada  eksplan  yang  ditanam  di  dalam  media yang  ditambahkan  TDZ  masih  menunjukkan kecenderungan  untuk  tumbuh  dan  bertambah (data tidak ditampilkan).
Perlakuan  sukosa  4%  +  BAP  2  ppm menunjukkan  hasil  terhadap jumlah daun  yang paling  rendah  dibanding  perlakuan  dengan penambahan  sitokinin  dan  karbohidrat  jenis sukrosa  dan  glukosa  lainnya.    Hal  ini  dapat terjadi  karena  penurunan  potensi  air.  Menurut Kherasani et  al. (2017), tingkat  sukrosa  yang tinggi  dapat  mengurangi  pertumbuhan  tunas, hal  ini  mungkin  terjadi  karena  potensi  air  yang menurun.  Peningkatan  hidrolisis  sukrosa terlibat  dalam  proses  enzimatis  selama penyerapan dan pelepasan molekul glukosa dan fruktosa, selanjutnya ke sitosol yang mana siklus ini  dapat  mengurangi  akumulasi  materi  kering pada tanaman in vitro (Kherasani et al. , 2017).

## Kesimpulan
Interaksi  antara  jenis  karbohidrat  dan  jenis sitokinin beserta dosisinya memberikan pengaruh terhadap variabel pengamatan jumlah tunas, tinggi tunas, dan jumlah daun, khususnya pada  penggunaan  sukrosa  dan  glukosa  sebagai
sumber  karbonnya,  sedangkan  penggunaan amilum  menyebabkan  eksplan  mengalami kematian fisiologis. Penggunaan media TDZ 1.5 ppm  yang  dikombinasikan  dengan  sukrosa  4% memberikan hasil terbaik terhadap jumlah tunas dengan  rata-rat  4,67  tunas  baru.  Penggunaan media BAP 2 ppm yang dikombinasikan dengan sukrosa  2%  memberikan  nilai  yang  siginifikan terhadap Tinggi tunas dan jumlah daun.

## Daftar Pustaka
Almeida, M., R.R. Ersyanti, F.M. Dwivany. 2020. Optimasi dan evaluasi secara fisik kondisi biji  tomat  ( Lycopersicum  esculentum )  yang telah  dibawa  ke  luar  angkasa  dengan kultur Jaringan. J. Sains Kes, 2(4): 438-443. p-ISSN: 2303-0267, e-ISSN: 2407-6082 Anisuzzaman, M., S.A. Sharmin, S.C. Mondal, R.
Sultana,  M.  Khalekuzzaman,  I.  Alam,  and M.F.  Alam.  2008.  In  vitro  microrhizome Induction  in Curcuma  zedoria (Christm.)
Roscoe-a concervation prioritized medicinal  plant.  Journal  of  Biological Science 8 (7): 1216-1220.
Antoniazzi,  D.,  M.P.  de-Souza-Ferrari,  A.B. Nascimento,  F.A.  Silveira,  L.A.S.  Pio,  M. Pasqual,  and  H.M.  Magalhães.  2016. Growth  regulators,  DNA  content  and anatomy in vitro-cultivated Curcuma longa seedlings.  Afric.  J.  Biotech.,  15(32),  1711 – 1725.
Aulia,  M.I.,  Rustikawati,  &  E.  Inoriah.  2020. Respon  temu  putih  dan  temu  mangga dengan  pemberian  BA  dan  2,4-D  secara  in vitro. Gema Agro, 25(2): 92-102.
Basri,  A.H.H.  2016.  Kajian  pemanfaatan  kultur jaringan  dalam  perbanyakan  tanaman bebas virus. Agrica Ekstensia, 10 (1), 64-73. Badan  Pusat  Statistik.  2017.  Statistik  Tanaman Biofarmaka. Badan Pusat Statistik. Jakarta
Dinani,  E.T.,  M.R.  Shukla,  C.E.  Turi,  J.A.
Sullivan, and P.K. Saxena. 2018. Thidiazuron:  Modulator  of  Morphogenesis In  Vitro.  In:  Ahmad  N.,  Faisal  M.  (eds) Thidiazuron: From Urea Derivative to Plant Growth Regulator. Singapore: Springer.
Grzegorczyk-Karolak,  I.,  L.  Kuzma,  and  H.
Wysokinska.  2016.  In  vitro  cultures  of Scutellaria alpina as a source of pharmacologically  active  metabolites.  Acta Physiol Plant 38:7
Hapsoro, D., T. Inayah, and Yusnita. 2018. Plant regeneration  of  sugarcane  ( Saccharum officinarum L.) Calli in vitro and its response to  gamma  irradiation.  J.  ISSAAS,  24(1):  58- 66. ISSN 0859-3132
Jasmine,  S.  2017.  Pengaruh  Berbagai  Teknik Sterilisasi  dalam  Induksi  Tunas  ( Etlingera elatior Jack)  Asal  Sukabumi  Dengan
Penambahan Sukrosa dan Berbagai Konsentrasi  BAP  [Skripsi].  UIN  Sunan Gunung Djati Bandung.
Jena, S., A. Ray, A. Sahoo, et al . 2020. Rapid plant regeneration in industrially important Curcuma zedoaria revealing genetic and biochemical  fidelity  of the regenerants. J. 3 Biotech 10(17): 1-13.
Kherasani, I., E. Prihatani, dan S. Haryanti. 2017. Pertumbuhan  kalus  eksplan  rimpang  jahe merah  (Zingiber  officinale  Rosc.)  pada berbagai  konsentrasi  sukrosa  secara  in vitro.  Buletin  Natomi  dan  Fisiologi,  2  (1), 43-49.
Rustikawati,  C.  Herison,  E.  Inoriah,  and  V. Dwisari.  2021.  Effect  of  BAP  (6-Benzyl Aminopurine) on In Vitro Shoot Growth of Curcumas. Agritropica:
Journal of Agricultural  Science.  4  (1):  82-92.  DOI: https://doi.org/10.31186/Jagritropica.4.1.8 2-92
Salim,  Z.  dan  E.  Munadi.  2017.  Info  Komoditi Tanaman  Obat.  Badan  Pengkajian  dan Pengembangan  Perdagangan  Kementerian Perdagangan Republik Indonesia. Indonesia.
Salvi, N.D., L. George, and S. Eapen. 2001. Plant regeneration  from  leaf  base  callus  of turmeric and random amplified polymorphic  DNA  analysis  of  regenerated plants. Plants Cell, Tissue and Organ Culture (66):  113-119.Jena,  S.  Ray,  A.  Sahoo,  A.,  et al.  2020.  Rapid  plant  regeneration  in industrially  important  Curcuma  zedoaria revealing  genetic  and  biochemical  fidelity of the regenerants. J. 3 Biotech 10(17): 1-13.
Trisnawan, A.S., A. Sugiyatno, S. Fajrini, dan L.
Setyobudi.  2017.  Pengaruh  pemberian  zat pengatur tumbuh pada pematahan dormansi mata tunas tanaman jeruk (Citrus sp.)  hasil  okulasi.  Jurnal  Produksi Tanaman, 5(5), 742-747.
Velickovic,  K..,  H.A.L.  Leija,  I.  Bloor, et  al. 2018. Low  temperature  exposure  induces browning  of  bone  marrow  stem  cell derived adipocytes in vitro . Sci Rep 8, 4974.
Wahyurini, E. 2010. Pengaruh sukrosa terhadap pertumbuhan  eksplan  tanaman  kedelai hitam  ( Glycine  soja )  secara  in  vitro.
Prosiding Seminar Hasil Penelitian Tanaman  Aneka  Kacang  dan  Umbi. Universitas Pembangunan Nasional “Veteran”  Yogyakarta:  29  Jun  2020.  Hlm. 157-163
Waryastuti,  D.E.,  L.  Setyobudi,  dan  T.
Wardiyati. 2017. Pengaruh tingkat
konsentrasi 2,4-D dan BAP pada media MS terhadap  induksi  kalus  embriogenik temulawak  (Curcuma  xanthorrhiza  Roxb.). Jurnal Produksi Tanaman, 5(1), 140 – 149. Yulizar,  D.R.,  Z.A.  Noli,  &  M.  Idris.  2014. Induksi  tunas  kunyit  putih  ( Curcuma zedoaria Roscoe)  pada  media  MS  dengan penambahan berbagai konsentrasi BAP dan sukrosa secara in vitro. J. Bio. UA 3 (4): 310- 316.