## Jurnal Teknik Kimia USU
ISSN : 2337-4888
Homepage : https://talenta.usu.ac.id/jtk
ISSN : 2337- 4888 JURNAL TEKNIK KIMIA - USU Departemen Teknik Kimia Fakultas Teknik Universitas Sumatera Utara

## Bakteri Indigen Pendegradasi Hidrokarbon Minyak Bumi di Kabupaten Siak Provinsi Riau
Indigenous Bacteria for Degrading Petroleum Hydrocarbons in Siak Regency Riau Province
Riryn Novianty * , Saryono, Amir Awaluddin, Nova Wahyu Pratiwi Program Studi S1 Kimia FMIPA, Universitas Riau Kampus Bina Widya Km 12,5 Simpang Baru Pekanbaru 28293 Indonesia
* Email : rirynnovianty@lecturer.unri.ac.id

## Abstrak
Proses  produksi,  pengilangan  dan  transportasi  minyak  bumi  dapat  menyebabkan  polutan  yang berbahaya  bagi  lingkungan  serta  makhluk  hidup  yang  berada  di  sekitarnya.  Mikroorganisme  indigen dapat  menjadi  solusi  dalam  menguraikan  hidrokarbon  yang  sulit  didegradasi.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengisolasi  bakteri  indigen  dari  tanah  yang  terkontaminasi  zat  polutan  dan  menguji efektifitasnya  dalam  mendegradasi    hidrokarbon.  Penelitian  ini  diawali  dengan  pengambilan  sampel tanah di Badan Operasi Bersama PT Siak Bumi Pusako-Pertamina Hulu Kabupaten Siak Provinsi Riau dengan  metoda purposive  sampling .  Langkah  selanjutnya  adalah  isolasi  bakteri  indigen,  menguji parameter  pH, Optical  density (OD)  dan  kadar  CO 2 selama  16  hari  masa  inkubasi  dan  menentukan persentase  biodegradasi  tertinggi.  Hasil  menunjukkan  bahwa Pseudomonas sp.  dengan  kode  BTM2 (Bakteri  Tanah  Minyak  2)  memiliki  persentase  terbesar  (52,20%)  setelah  16  hari  inkubasi  dibawah kondisi optimum dalam mendegradasi total hidrokarbon minyak bumi. Pseudomonas sp. BTM2 adalah isolat yang paling efektif dalam mendegradasi hidrokarbon .
Kata Kunci : biodegradasi, hidrokarbon, Pseudomonas sp

## Abstract
The process of producing, refining and transporting petroleum can cause pollutants that are harmful to the environment and the living things that surround them. Indigenous microorganisms can be a solution to degrade hydrocarbons that are difficult to degrade. This study aims to isolate the indigenous bacteria from  pollutant-contaminated  soil  and  test  its  effectiveness  in  degrading  hydrocarbons.  The  research began with soil sampling at the Joint Operating Agency of PT Siak Bumi Pusako-Pertamina Hulu Siak Regency, Riau Province with a purposive sampling method. The next step is the isolation of indigenous bacteria, testing the parameters of pH, Optical density (OD) and CO 2 levels during the 16 incubation periods  and  determining  the  highest  percentage  of  biodegradation.  The  results  showed  that Pseudomonas sp. with a code BTM2 (Bakteri Tanah Minyak 2)  had the largest percentage (52.20%) after 16 days of incubation under optimum conditions to degrade the total hydrocarbon of petroleum. Pseudomonas sp. BTM2 is the most effective isolate to degrade hydrocarbons.
Keywords : biodegradation, hydrocarbon, Pseudomonas sp

## Pendahuluan
Minyak bumi merupakan pilar utama  bagi kehidupan manusia yang memiliki dampak penting bagi  lingkungan.  Negara  produsen  minyak  bumi terbesar  di  dunia  adalah  Amerika  Serikat,  Arab Saudi,  Rusia,  Kanada,  dan  China.  Produsen minyak  bumi  peringkat  ke-24  adalah  Indonesia dengan  produksi    sebanyak  824.000  barrel  per hari  [1].  Provinsi  Riau  termasuk daerah  penghasil minyak bumi terbesar di Indonesia.
Berbagai kecelakaan di laut yang menyebabkan  tumpahan  minyak  masif  pernah terjadi  di  Showa  Maru  Selat  Malaka  (1975), Exxon  Valdez di Alasca (1989),  Amoco  Cadiz  di Selat Inggris (1978) dan blow up di sumur minyak Macondo  milik  British  Petroleum  (BP)  di  Teluk Meksiko  (2010).  Kasus  Minyak  Montara  yang terjadi di Laut Timor juga berakibat pada wilayah perairan  Indonesia  khususnya  di  wilayah  Provinsi Nusa  Tenggara  Timur.  Hanya  saja,  PTTEP Australasia,  berdasarkan  partnership  research dengan  beberapa  perguruan  tinggi  di  Australia, menyatakan  bahwa  dampak  dari  Kasus  Minyak Montara  tidak  menimbulkan  dampak  negatif  ke wilayah perairan Indonesia [2].
Bioremediasi merupakan teknik yang aman untuk  mengatasi  permasalahan  polutan  minyak bumi. Penggunaan mikroba menjadi pilihan karena hidrokarbon  dapat  dimanfaatkan  sebagai  sumber karbon  untuk  menghasilkan  energi  [3]. Mikroba yang dapat digunakan salah satunya yakni mikroba indigen  yang  merupakan  biota  lokal  berasal  dari lingkungan yang tercemar. Studi tentang biodegradasi  hidrokarbon  memanfaatkan  bakteri indigen  telah  banyak  dilakukan  salah  satunya  di India menggunakan Pseudomonas aeruginosa [4].
Bakteri indigen memiliki kemampuan mendegradasi senyawa hidrokarbon untuk keperluan  metabolismenya  dan  sudah  teradaptasi dengan  berbagai  faktor  lingkungan  di  habitat asalnya.  Enzim  yang  diproduksi  oleh  bakteri tersebut  akan  mengkatalisa  penguraian  substrat menjadi produk yang lebih sederhana [5].
Permasalahan  di  sekitar  Badan  Operasi Bersama  PT  Siak  Bumi  Pusako-Pertamina  Hulu Kabupaten  Siak  Provinsi  Riau  diharapkan  dapat diatasi  dengan  menggunakan  bakteri  indigen  dari tanah  tercemar  yang  berada  di  wilayah  tersebut. Hasil  biodegradasi  senyawa  toksik  naftalena menggunakan  bakteri  indigen Pseudomonas sp telah diperoleh dengan persentase sebesar 37,69% [6].  Potensi  jamur Aspergillus sp  dalam mendegradasi  hidrokarbon    dan  senyawa  toksik naftalena    juga  telah diperoleh  dengan  persentase
masing-masing  sebesar  61,00  %  [7]  dan  55,13% [8].

## Teori
Minyak  bumi  mengandung  campuran kompleks  hidrokarbon  padat,  cair  dan  gas  yang merupakan  hasil  akhir  penguraian  bahan-bahan hewani  dan  nabati  yang  telah  terpendam  dalam kerak  bumi  dalam  waktu  lama  karna  adanya tekanan dan panas, residu organik  ini berkonversi menjadi  minyak  bumi.  Kemudian  minyak  bumi berpindah  ke  atas  menuju  permukaan  bumi  atau terperangkap  dalam  reservoir  [9].  Minyak  bumi merupakan campuran komplek sejumlah hidrokarbon  dan  sedikit  non-hidrokarbon  seperti nitrogen  dan  belerang  [10].  Minyak  bumi  yang dihasilkan  di  Indonesia  bervariasi  jenisnya  dari ringan  encer  yang  berwarna  kecoklatan  dan mengandung  bagian-bagian  ringan  yang  mudah disuling sampai pada jenis kental yang merupakan substansi  setengah  padat  berwarna  kehitaman dengan sedikit mengandung bagian ringan [11].
Biodegradasi merupakan suatu proses yang penting bagi rehabilitasi lingkungan yang tercemar minyak  bumi  ataupun  produk-produknya,  dengan memanfaatkan  aktivitas  mikroorganisme  untuk menguraikan  pencemar  tersebut  menjadi  bentuk yang  lebih  sederhana,  tidak  berbahaya  dan memberikan  nilai  tambah  bagi  lingkungan  [12]. Biodegradasi  dapat  dilakukan  dengan  dua pendekatan, pertama dengan memanfaatkan mikroorganisme alamiah setempat untuk merombak  polutan  dengan  cara  memperbaiki kondisi pertumbuhan mikroorganisme yang bersangkutan.  Pendekatan  kedua  merupakan inokulasi ke daerah terkontaminasi, menggunakan inokulum mikroorganisme perombak polutan yang telah diisolasi dan dibiakkan di laboratorium [13].
Mikroorganisme  yang  banyak  hidup  dan berperan  di  lingkungan  hidrokarbon  minyak  bumi sebagian besar adalah bakteri. Bakteri yang sesuai harus  mempunyai  kemampuan  fisiologi  dan metabolik  untuk  mendegradasi  bahan  pencemar [14]. Bakteri mampu beradaptasi pada lingkungan hidrokarbon melalui beberapa cara, yaitu:
1. Pembentukan  bagian  hidrofobik  pada  dinding sel sehingga meningkatkan afinitas sel terhadap hidrokarbon.
2. Dihasilkannya  surfaktan  ektraselular  yang dapat meningkatkan kelarutan hidrokarbon.
3. Modifikasi  intraselular  membran  sitoplasmik yang dapat mengurangi  toksisitas  hidrokarbon terhadap bakteri.
Mekanisme degradasi hidrokarbon alifatik (n-alkana) secara  aerob  dan  anaerob  dapat  dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1.  Mekanisme biodegradasi n-alkana
Metodologi Penelitian

## Persiapan sampel
Sampel  diperoleh  dari tanah  Badan  Operasi Bersama  PT  Siak  Bumi  Pusako-Pertamina  Hulu Kabupaten  Siak  Provinsi  Riau  dengan  metoda purposive  sampling .  Media  NA  ( Nutrient  Agar ) digunakan untuk kultivasi bakteri.
Kemampuan bakteri sebagai agen biodegradator crude  oil ditentukan  dengan menggunakan  Medium Bushnell  Haas yang mengandung crude oil 5% (v/v) [15]. Bushnell  Haas tanpa  penambahan crude  oil dipersiapkan sebagai kontrol. Kemampuan biodegradasi  bakteri  terhadap crude  oil diukur dengan  parameter  pH, Optical  density (OD)  dan kadar CO 2 terlarut.

## Analisis Minyak Terdegradasi
Analisis  secara  gravimetri  dilakukan  untuk menentukan    kadar minyak  terdegradasi.  HCl  1% ditambahkan untuk menghentikan aktivitas bakteri setelah  16  hari  inkubasi.  Proses  ekstraksi dilakukan  menggunakan  pelarut  n-heksan  10%. Campuran  kemudian  dikocok  pada  corong  pisah selama 30 menit, lalu didiamkan sampai n-heksana terpisah.  Lapisan  air  dibuang,  lapisan  n-heksan ditampung  dalam  labu  rotary  evaporator  50  ml yang  sudah  diketahui  bobotnya.  Kelembaban dihilangkan  dengan  penambahan  natrium  sulfat pada  ekstrak  minyak  lalu  diuapkan  pada  suhu 60 o C sampai n-heksan habis. Berat lapisan minyak yang  tertinggal  ditimbang  dan  dihitung  kadarnya. Rumus persentase biodegradasi minyak adalah :
Keterangan:
%B = Persen Biodegradasi, BM 0 = Berat Minyak Awal (g) BMn = Berat Minyak Akhir (g)

## Hasil dan Pembahasan
Diperoleh  enam  isolat  dari  hasil  isolasi dengan  kode  BTM1,  BTM2,  BTM3,  BTM4, BTM5  dan  BTM  6  (  BTM  =  Bakteri  Tanah Minyak).  Pertumbuhan  isolat  bakteri  dalam medium Bushnel Haas dapat dilihat pada Gambar 2.  Karakteristik  morfologi  hasil  identifikasi makroskopis  dan  mikroskopis  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
(a) (b)
Gambar 2.  Pertumbuhan isolat bakteri (a) pada Bushnell Haas kontrol tanpa crude oil (b) BTM1 pada Bushnell Haas dengan crude  oil
Pada Bushnell  Haas kontrol    tampak bahwa crude    oil masih  menutupi  seluruh permukaan medium sedangkan pada isolat BTM1 sudah  banyak  berkurang  yang  menandakan crude    oil sudah  terdegradasi.  Hasil  identifikasi menunjukkan  bahwa  umumnya  isolat  merupakan bakteri  Gram  negatif. Parameter  pH  selama degradasi dapat dilihat pada Gambar 3.

## Tabel 1 . Morfologi koloni isolat
Gambar  3.  Parameter  pH  selama  degradasi hidrokarbon
Kenaikan  pH  di  hari  ke-8  inkubasi  terjadi pada isolat BTM1, BTM5 dan BTM6.  Unsur non hidrokarbon seperti oksigen,  sulfur,  nitrogen,  dan logam-logam  juga  terkandung  dalam  minyak bumi. Nitrogen dapat terurai membentuk ammonium  karbonat  kemudian  menjadi  amoniak, karbon  dioksida dan air. pH media  akan  naik  jika amoniak  bereaksi  dengan  air  menjadi  amonium hidroksida. Reaksi kimia pada substrat hidrokarbon    oleh  enzim  mono  oksigenase  akan menyebabkan  penurunan  pH  selama  proses inkubasi  dan  pH  optimum  berada  di  sekitar  6-8 saat terjadinya proses biodegradasi [16].
Pengukuran  nilai Optical  Density (OD) menggunakan  spektrofotometer  dilakukan  untuk menentukan jumlah sel bakteri (Gambar 4).   Pada awal  proses  degradasi  terjadi  kenaikan  OD  yang menunjukkan bakteri berada dalam fase eksponensial. Biomassa sel akan mencapai jumlah maksimum pada fase stasioner. Selanjutnya jumlah nutrien  akan  berkurang  akibat  kompetisi  bakteri untuk mendapatkan nutrisi sehingga menyebabkan beberapa sel mati dan yang lainnya tetap tumbuh . Dalam  proses  biodegradasi  hidrokarbon,  bakteri akan lebih  mudah  menguraikan  fraksi  sederhana
berupa  hidrokarbon  alifatik  dibandingkan  dengan senyawa  Polisiklik  Aromatik  Hidrokarbon  (PAH) yang lebih kompleks [17].
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 0 8 16 O p ti cal D e n s it y Waktu Inkubasi (hari)
BTM 1 BTM 2 BTM 3 BTM 4 BTM 5 BTM 6 Gambar  4 . Parameter  OD  selama  degradasi hidrokarbon
Produk CO 2 yang merupakan hasil biodegradasi  substrat  hidrokarbon  dapat  dilihat pada Gambar 5. Metabolisme di dalam sel  bakteri menghasilkan  energi  yang  sejalan  dengan  produk sampingnya  berupa  CO 2 .  Terjadinya  penurunan jumlah CO 2 disebabkan oleh metabolit toksik yang dihasilkan selama proses biodegradasi [4] .
Degradasi  paling  cepat  dan  lengkap  dari sebagian  besar  polutan  organik  disebabkan  oleh kondisi aerobic [18].  Serangan  intraseluler  awal polutan  organik  adalah  proses  oksidatif  dan aktivasi serta penggabungan oksigen adalah reaksi kuci  enzimatik  yang  dikatalisis  oleh  oksigenase dan peroksidase. Jalur degradasi perifer mengubah polutan  organik  selangkah  demi  selangkah  ke  zat antara  dari  metabolisme  perantara  tengah,
Kode Isolat Morfologi Koloni Bentuk Tepian Elevasi Koloni Warna Koloni Bentuk Pewarnaan Gram BTM1 Licin Cembung Kuning Koma Positif BTM2 Licin Datar Krem Batang Negatif BTM3 Licin Datar Krem Batang Positif BTM4 Bergerigi Datar Krem Batang Negatif BTM5 Licin Cembung Oren Bulat Negatif BTM6 Licin Cembung Putih Batang Negatif
misalnya,  siklus  asam  tricarboxylic.  Biosintesis biomassa  sel  terjadi  dari  metabolit  prekursor pusat, misalnya, asetil-KoA, suksinat  dan  piruvat. Gula  yang  dibutuhkan  untuk  berbagai  biosintesis dan pertumbuhan  disintesis  oleh  gluconeogenesis. Mikroorganisme  yang  terlibat  dalam  degradasi minyak  didistribusikan  secara  luas  di  alam  dan telah  diisolasi  dari  tanah  dan  air  dengan potensinya  mendegradasi  minyak  [19].  Mikroba yang  mampu  memanfaatkan  minyak  dan  produk minyak  sebagai  satu-satunya  sumber  karbon  dan energi  terjadi  di  udara,  air,  dan  tanah  [20]. Diperkirakan  bahwa  dalam  satu  gram  tanah  yang tidak  tercemar,  hanya  ada  100  hingga  1.000  sel mikroorganisme penghancur hidrokarbon, sedangkan, dalam  satu  gram  tanah  yang  tercemar oleh  minyak,  jumlahnya  meningkat  menjadi  1  × 10 6 hingga 5 × 10 7 sel, terutama jika polusi terjadi berulang  kali  untuk  waktu  yang  lama  [21]. Karakteristik taksonomi dari isolat ini mengidentifikasi  mereka  sebagai Bacillus sp., Staphylococcus sp., Micrococcus sp., Pseudomonas sp., Psychrobacter sp.,  dan
Alcaligens faecalis [22]. 0 1000 2000 3000 4000 0 8 16 CO 2 (m g /L) Waktu Inkubasi (hari)
BTM 1 BTM 2 BTM 3 BTM 4 BTM 5 BTM 6
Gambar  5.  Parameter  CO 2 selama  degradasi hidrokarbon .
Tingkat  biodegradasi  minyak  mentah  di dalam tanah sangat cepat dan mungkin disebabkan oleh  mikroorganisme  di  dalam  tanah  yang memiliki  efisiensi  dalam  memanfaatkan  sisa minyak mentah sebagai sumber karbon dan energi [23].  Minyak  mentah  mengandung  hidrokarbon dan tidak tahan terhadap serangan mikroorganisme.
Mikroorganisme
yang
memanfaatkan  hidrokarbon  yang  diisolasi  dari tanah  adalah  spesies Bacillus,  Lactobacter,
Arthrobacter, Pseudomonas, Micrococcus, Zoopage, dan Articulosporium.  Bacillu s  sp. mendominasi,  terutama  di  tanah  yang  tercemar minyak  mentah.  Ini  mungkin  karena  kemampuan
organisme  ini  untuk  menghasilkan  spora,  yang dapat  melindungi  mereka  dari  efek  toksik hidrokarbon [24].
Mikroorganisme dianggap sebagai biodegradator yang efisien karena kelimpahannya, keanekaragaman spesies yang luas, dan fleksibilitas  katabolik  dan  anaboliknya,  serta kemampuannya untuk  beradaptasi  dengan  kondisi lingkungan  yang  merugikan.  Melalui  aktivitas metabolisme  mikroorganisme  ini,  polutan  organik dapat diubah menjadi air, CO 2 dan biomassa [25]. Degradasi lengkap senyawa ke komponen mineral, di  mana  karbon  organik  senyawa  dikonversi menjadi CO 2 melalui respirasi, disebut mineralisasi. Ketika kondisi aerobik dipertahankan,  evolusi  CO 2 dapat  digunakan sebagai  ukuran  aktivitas  metabolisme  mikroba dengan akurasi yang masuk akal  [26]. Studi  yang melibatkan  pengukuran  laju  mineralisasi  dapat memberikan informasi penting tentang biodegradabilitas senyawa limbah industri, termasuk  residu  minyak.  Dalam  penelitian  ini perubahan  pH,  CO 2 dan  pertumbuhan  sel  secara tidak  langsung  mengindikasikan  degradasi  petrol. Persentase biodegradasi hidrokarbon dapat  dilihat pada Gambar 6.
Gambar 6. Persentase biodegradasi hidrokarbon
Dari  Gambar  6  terdapat  tiga  isolat  unggul BTM2, BTM5 dan BTM6 dengan nilai persentase biodegradasi  berturut-turut  sebesar  52,20%,
39,50% dan 40,59%. Hasil identifikasi menunjukkan  bahwa  isolat  tersebut  memiliki genus Pseudomonas sp.  Hidrokarbon crude  oil dapat  didegradasi  oleh Pseudomonas sp.  selama waktu inkubasi 16 hari di bawah kondisi optimum.

## Kesimpulan
Tiga  parameter  utama  untuk  menentukan potensi bakteri indigen sebagai agen
biodegradator  adalah  pH,  OD  dan  kadar  CO 2 . Pseudomonas sp dengan  kode  isolat BTM2 dengan  persentasi  52,20%  adalah  bakteri  paling unggul jika dibandingkan dengan isolat lainnya.

## Daftar Pustaka
[1]  B. Dudley, “BP Statistical Review of World
Energy  2019,  no.68,” British  Petroleum (bp) . 2017.
[2]  N.  P.  Suci  Meinarni,  “Dampak  Pencemaran Lingkungan Laut Terjadap Indonesia Akibat Tumpahan Minyak Montara di Laut Timor,” J. Komun. Huk. , 2016.
[3]  B.  Gargouri,  F.  Karray,  N.  Mhiri,  F.  Aloui, and S. Sayadi, “Bioremediation of petroleum hydrocarbons-contaminated  soil  by  bacterial consortium  isolated  from  an  industrial wastewater  treatment  plant,” J.  Chem. Technol. Biotechnol. , 2014.
[4]  K.  V.  Darsa  and  A.  J.  Thatheyus, “Biodegradation  of  Petroleum  Compound Using  Pseudomonas  aeruginosa,” OALib , vol. 01, no. 05, pp. 1–9, 2014.
[5]  A.  B.  Al-Hawash et  al. ,  “Principles  of microbial degradation of petroleum hydrocarbons in the environment,” Egypt. J. Aquat. Res. , vol. 44, no. 2, pp. 71–76, 2018.
[6]  R. Novianty, B. Antika, A. Saryono, and N. W.  Pratiwi,  “Potensi  Tiga  Isolat  Bakteri Indigen  dari  Kabupaten  Siak  Provinsi  Riau Dalam Mendegradasi Naftalena.”
[7]  E.  M.  Sari,  R.  Novianty,  A.  Awaluddin,  S. Saryono, and  N.  W.  Pratiwi,  “Effectiveness of Crude Oil Degrading Fungi Isolated From Petroleum  Hydrocarbon  Contaminated  Soil In Siak, Riau,” Acta Biochim. Indones. , vol. 2, no. 1, pp. 15–22, 2019.
[8]  R. Novianty, “Biodegradasi Senyawa Toksik
Naftalena Pencemar Lingkungan Menggunakan  Isolat  Fungi  Indigen  Provinsi Riau,” J.  Ipteks  Terap. ,  vol.  13,  no.  3,  pp. 165–174, 2020.
[9]  U. R. Chaudhuri, Fundamentals of petroleum  and  petrochemical  engineering . Crc Press, 2016.
[10]  A.  Tiehm  and  M.  Stieber,  “Strategies  to Improve  PAH  Bioavailability:  Addition  of Surfactants,  Ozonation  and  Application  of Ultrasound,” in Treatment  of  Contaminated Soil , 2001.
[11]  A.  Kurniawan,  A.J.  Effendi,  “Biodegradasi Residu  Total  Petroleum  Hidrokarbon  di
Bawah Konsentrasi 1% (W/W) Hasil Proses
Bioremediasi,” J.  Mns.  dan  Lingkung. ,  vol.
21, no. 3, pp. 286–294, 2015.
[12]  Karwati,  “Degradasi  Hidrokarbon  pada Tanah  Tercemari  Minyak  Bumi  dengan Isolat A10 dan D8T,” in Prosiding Biosains , 2009.
[13]  Z.  Fanani,  B.  Yudhono,  and  V.  R. Situmorang,  “Degradasi  Tanah  Lahan
Suboptimal oleh Bacillus mycoides
Indigenous  dan  Kinetika  Reaksinya,” J. Lahan  Suboptimal  J.  Suboptimal  Lands , vol. 3, no. 1, 2014.
[14]  M.  Udiharto  and  P.  Pelatihan,  “Lokakarya Peranan  Bioremediasi  dalam  Pengelolaan Lingkungan,” LIPI, BPPT dan HSF Jerman, Cibinong , pp. 24–39, 1996.
[15]  H.  Al  Nasrawi,  “Biodegradation  of  Crude Oil by Fungi Isolated from Gulf of Mexico,” J. Bioremediation Biodegrad. , 2012.
[16]  C.  S.  Karigar  and  S.  S.  Rao,  “Role  of microbial  enzymes  in  the  bioremediation  of pollutants:  a  review,” Enzyme  Res. ,  vol. 2011, 2011.
[17]  D.  Pérez-Pantoja,  B.  González,  and  D.  H. Pieper,  “Aerobic  degradation  of  aromatic hydrocarbons,” in Handbook of hydrocarbon and lipid microbiology , 2010.
[18]  W.  Fritsche  and  M.  Hofrichter,  “Aerobic degradation by microorganisms,”
Biotechnol. New York John Wiley Sons , vol.
11, pp. 146–164, 2000.
[19]  M. B. Yakubu, “Biodegradation  of  Lagoma crude  oil  using  pig  dung,” African  J. Biotechnol. , 2007.
[20]  M. Magot, “Indigenous microbial communities  in  oil  fields,”  in Petroleum microbiology , American Society of
Microbiology, 2005, pp. 21–34.
[21]  E. Rosenberg and E. Z. Ron, “Bioremediation of petroleum contamination,” Biotechnol.  Res.  Ser. ,  vol. 6, pp. 100–124, 1996.
[22]  M.  Pepi,  A.  Minacci,  F.  Di  Cello,  F.  Baldi, and  R.  Fani,  “Long-term  analysis  of  diesel fuel  consumption  in  a  co-culture  of Acinetobacter venetianus, Pseudomonas putida  and  Alcaligenes  faecalis,” Antonie Van  Leeuwenhoek ,  vol.  83,  no.  1,  pp.  3–9,
2003.
[23]  S. P.  Antai, “Biodegradation of Bonny light crude  oil  by  Bacillus  sp  and  Pseudomonas
sp,” Waste  Manag. ,  vol.  10,  no.  1,  pp.  61– 64, 1990.
[24]  A.  K.  Onifade  and  F.  A.  Abubakar, “Characterization
of
Hydrocarbon-
Degrading  Microorganisms  Isolated  from Crude Oil Contaminated Soil and Remediation ofthe Soil by Enhanced Natural
Attenuation,” 2007.
[25]  C. B. Boshui, Z. Nan, W. Jiang, W. Jiu, and F.  Jianhua,  “Biodegradation  of  petroleum hydrocarbon  by  Pseudomonas  aeruginosa,” China  Petro  Proc  Petrochem  Technol ,  vol. 14, pp. 66–70, 2012.
[26]  G. Genouw, F. De Naeyer, P. Van Meenen, H. de Werf, W. De Nijs, and W. Verstraete, “Degradation of oil sludge by landfarming— a  case-study  at  the  Ghent  harbour,” Biodegradation ,  vol.  5,  no.  1,  pp.  37–46, 1994.