PENENTUAN TOTAL FENOLIK DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PADA BIJI DAN KULIT BUAH PINANG YAKI ( Areca vestiaria Giseke )
Jefriyanto Ismail 1) , Max R.J. Runtuwene 1) , Feti Fatimah 1)
1) Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi, Manado Jl. Kampus Unsrat Manado, 95115 e-mail : Jh3fry_j3j3@yahoo.co.id ; max_runtuwene@yahoo.com ; Fetysanusi@yahoo.com

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  untuk  menentukan  kandungan  total  fenolik  dan  menguji aktivitas antioksidan pada biji dan kulit buah pinang yaki. Ekstrak biji dan kulit buah pinang yaki diperoleh  dengan  maserasi  tanpa  sokletasi  dan  maserasi  setelah  sokletasi.  Total  fenolik  diuji dengan  metode  Folin-Ciocalteu  dan  uji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH.  Hasil penelitian yang diperoleh, kandungan total fenolik Maserasi Biji Setelah Sokletasi, Maserasi Kulit Setelah  Sokletasi  berturut-turut  memiliki  nilai  sebagai  berikut  :  85,92  mg/kg,  3,16  mg/kg. sedangkan aktivitas antioksidan Maserasi Biji Setelah Sokletasi, Maserasi Kulit Setelah Sokletasi berturut-turut memiliki nilai sebagai berikut : 88,16%, 54,11%.
Kata kunci : Antioksidan, Areca vestiaria Giseke , DPPH, Total Fenolik
TOTAL PHENOLIC COMPOUNDS AND ANTIOXIDANT ACTIVITY OF THE SEED AND SKIN OF PINANG YAKI ( Areca vestiaria Giseke ) FRUITS

## ABSTRACT
This  research  has  been  conducted  to  measure  the  total  phenolic  compounds  and  the antioxidant activity  of the seed and skin  of pinang  yaki fruits. The samples  of the seed and skin were  prepared  separetely  by  maceration  and  soxhlet  extraction  followed  by  maceration.  Folin- Ciocalteu  method  was  used  to  measure  the  total  phenolic  compounds  of  while  DPPH  ( 1,1- diphenyl-2-pikrilhidrazil) method was used to measure the antioxidant activity. The total phenolic compounds  of the seed by soxhlet  extraction  followed by  maceration, skin by soxhlet  extraction followed by maceration and were 85,92 mg/kg, 3,16 mg/kg respectively. The antioxidant activity of the seed by soxhlet extraction followed by maceration, skin by soxhlet extraction followed by maceration and were 88,16%, 54,11% respectively.
Keywords : Antioksidant, Areca vestiaria Giseke, DPPH, Total Phenolic Compounds

## PENDAHULUAN
Banyak produk makanan dan minuman yang berlabel antioksidan  beredar dipasaran. Produk-produk  tersebut  dijual  dengan  harga yang  cukup  mahal.  Banyak  orang  tidak menyadari bahwa di alam terdapat antioksidan  yang  melimpah.  Sarastani et  al . (2002)  menyatakan,  banyak  bahan  pangan yang  dapat  menjadi  sumber  antioksidan alami,  misalnya  rempah-rempah,  teh,  coklat, dedaunan,  biji-bijian,  sayur-sayuran,  enzim dan  protein.  Sumber  antioksidan  alami didominasi  oleh  tumbuhan  dan  umumnya
mengandung  senyawa  fenolik  yang  tersebar di seluruh bagian tumbuhan.
Pinang  yaki  merupakan  salah  satu tanaman  hias.  Di  Sulawesi  Utara  tanaman tersebut  selain  tumbuh  di  kawasan  Taman Nasional  Bogani  Nani  Wartabone,  pinang yaki ( Areca vestiaria Giseke ) juga tumbuh di cagar  alam  gunung  Ambang  kabupaten Bolaang  Mongondow,  cagar  alam  gunung Tangkoko  dua  saudara,  di  lereng  gunung Soputan  dan  gunung  Mahawu  kabupaten Minahasa.  Tanaman  pinang  yaki  tersebut oleh  masyarakat  di  Bolaang  Mongondow yang  tinggal  dikawasan  Taman  Nasional Bogani  Nani  Wartabone  digunakan  sebagai
obat untuk penyakit diabetes dan juga dipakai sebagai obat kontrasepsi (Simbala, 2007).
Buah pinang yaki mengandung
senyawa-senyawa  metabolit  sekunder  seperti alkaloid,  flavonoid,  triterpenoid,  steroid,  dan tanin yang memiliki efek sebagai antifertilisasi (Simbala, 2007). Tujuan penelitia adalah menentukan total fenolik dan menguji  aktivitas  penangkal  radikal  bebas ekstrak etanol pada biji dan kulit buah pinang yaki ( Areca vestiaria Giseke ).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah biji  dan  kulit  buah  pinang  yaki  yang  diambil dari  gunung  Mahawu  (Tomohon,  Sulawesi Utara),  petroleum  eter,  etanol,  akuades, natrium  karbonat  (Na 2 CO 3 ),  reagen  Folin- Ciocalteu, DPPH ( 1,1 diphenyl-2- pikrilhidrazil). Alat-alat  yang  digunakan adalah alat-alat gelas laboratorium, pengaduk magnetik, oven, vortex, water bath , timbangan analitik, evaporator yang dimodifikasi, spektrofotometer UV-Vis Milton Roy 501.

## Preparasi Sampel
Buah  pinang  yaki  dibersihkan  dari pengotor lalu  dipisahkan antara biji  dan  kulit buah.  Untuk  biji  pinang  yaki  ditumbuk sampai  kecil-kecil  kemudian  dikeringkan  4 hari  kemudian    dihancurkan  (diblender). Setelah  halus,  biji  pinang  yaki  dikeringkan  3 hari lalu diayak menggunakan ayakan ukuran 65  mesh,  sehingga  menghasilkan  serbuk  biji pinang  yaki.  Untuk  kulit  buah  pinang  yaki dipotong  kecil-kecil  lalu  dikeringkan  5  hari kemudian dihancurkan (diblender). Kemudian  dikeringkan  selama  2  hari  lalu diayak  menggunakan  ayakan  ukuran  65 mesh,  sehingga  menghasilkan  serbuk  kulit buah pinang yaki.
Ekstraksi Sampel Maserasi Tanpa Sokletasi
Serbuk biji  dan  kulit buah pinang  yaki masing-masing  dimaserasi  dengan  etanol 96%  selama  24  jam.  Sampel  disaring  dan filtrat  yang  diperoleh  ditampung  sedangkan residu  diekstraksi  lagi.  Larutan  dievaporasi kemudian  dikeringkan  dalam  oven  dengan
suhu  40 o C  sampai  kering  hingga  diperoleh ekstrak pekat biji dan kulit buah pinang yaki.

## Maserasi Setelah Sokletasi
Serbuk biji  dan  kulit buah pinang  yaki masing-masing  disokletasi  dengan  pelarut petroleum  eter selama 2  jam. Residu  diambil dan  dikering-anginkan  sampai  kering  lalu dimaserasi  dengan  etanol  96%  selama  24 jam.  Sampel  disaring  dan  filtrat  yang diperoleh ditampung sedangkan residu diekstraksi  lagi.  Larutan  tersebut  dievaporasi kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu 40 o C  hingga  diperoleh  ekstrak  pekat  biji  dan kulit buah pinang yaki.

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Penentuan  kandungan  total  fenolik menurut  (Singleton  and  Rossi,  1965)  yang telah  dimodifikasi.  Masing-masing  sebanyak 0,1  mL  ekstrak  biji  dan  kulit  buah  pinang yaki 200 μg/mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi,  ditambahkan  0,1  Larutan  Folin- Ciocalteu  reagen  50%  kemudian  divortex selama 1 menit. Larutan tersebut ditambahkan 2  mL Larutan  natrium  karbonat (Na 2 CO 3 ) 2%. Campuran ini  disimpan  dalam ruangan  gelap  selama  30  menit.  Absorbansi larutan ekstrak dibaca pada panjang gelombang  750  nm  dengan  spektrofotometer UV-Vis.  Hasilnya  dinyatakan  sebagai  mg asam galat/Kg ekstrak.
Penentuan  Aktivitas  Penangkap  Radikal Bebas DPPH
Penentuan aktivitas penangkapan radikal  bebas  DPPH  menurut  (Bondet, et  al. 1997)  yang  telah  dimodifikasi.  0,5  mL ekstrak  biji  dan  kulit  buah  pinang  yaki  200 μg/mL  masing-masing  dituangkan  kedalam tabung  reaksi  dan  ditambahkan  2  mL  larutan DPPH  0,2  mM.  Larutan  blanko  dibuat dengan  cara  larutan  DPPH  0,2  mM  dipipet sebanyak  2  ml  kemudian  dimasukkan kedalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan dengan etanol 0,5 mL.
Absorbansi  DPPH  diukur  dengan spektrofotometer UV-Vis  pada  panjang gelombang 517 nm, setelah diinkubasi dalam ruang  tanpa  cahaya  selama  30  menit. Kemampuan  antioksidan  diukur  sebagai penurunan  serapan  larutan  DPPH  akibat adanya  penambahan  sampel.  Nilai  serapan larutan DPPH sebelum dan sesudah
penambahan ekstrak tersebut dihitung sebagai  persen  aktivitas  antioksidan  dengan rumus sebagai berikut:
% Aktivitas antioksidan = % 100 1 x kontrol A sampel A       

## Keterangan:
A kontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel A sampel = Absorbansi sampel

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Rendemen
Rendemen yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Rendemen ekstrak biji dan kulit buah pinang yaki
No Metode Ekstraksi Rendemen (%) 1 Maserasi  Biji  Setelah Sokletasi  (MBSS) 22,39 2 Maserasi  Kulit  Setelah Sokletasi  (MKSS) 7,61
Ket: Maserasi menggunakan pelarut Etanol 96% ; Sokletasi menggunakan pelarut Petroleum eter
Kulit  buah  memiliki  rendemen  paling sedikit.  Hal  tersebut  disebabkan  kurangnya komponen  polar  yang  terdapat  dalam  kulit buah  pinang  yaki.  Kelarutan  komponen- komponen  tersebut  sacara  kualitatif  dapat dilihat pada Tabel 2. Selain  dipengaruhi oleh komponen-komponen  dalam  sampel,  ukuran sampel  juga  merupakan  salah  satu  faktor yang mempengaruhi hasil rendemen.
Menurut  Sembiring et  al. (2006),  semakin halus  bahan  yang  digunakan  semakin  tinggi rendemen yang dihasilkan. Perbesaran luasan permukaan  bertujuan  untuk  mempercepat pelarutan,  mempercepat  reaksi  kimia,  dan mempertinggi kemampuan penyerapan (Bernasconi et  al. dalam  Muhiedin,  2008). Data  hasil  warna  ekstrak  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Tabel 2. Warna ekstrak biji dan kulit buah pinang yaki
No Nama Sampel Sokletasi dengan P.E. Maserasi dengan Etanol 1 Biji buah pinang yaki Kuning Coklat kemerahan 2 Kulit  buah pinang yaki Merah Coklat kekuningan
Data  Tabel  2  menunjukkan  adanya perbedaan  warna  ekstrak  pada  biji  dan  kulit buah  pinang  yaki  sesuai  dengan  komponen sampel yang larut dalam pelarut. Penggunaan pelarut  yang  berbeda  tingkat  kepolaran mempengaruhi jenis senyawa yang terekstrak (Soeksmanto et  al., 2007).  Petroleum  eter adalah pelarut yang digunakan untuk mengekstrak  komponen  yang  terdapat  dalam biji  dan  kulit  buah  pinang  yaki.  Pelarut tersebut  merupakan  pelarut  non  polar  dapat digunakan untuk memudahkan proses ekstraksi  komponen  non  polar  (Widyawati et  al. ,  2010).  Komponen  yang  diduga berkontribusi  terhadap  ekstrak  non  polar adalah  klorofil,  minyak  atsiri  dan  lemak (Suryanto et al., 2008). Pada biji pinang yaki setelah disokletasi  terlihat  adanya  perubahan  warna pelarut  dari  bening  menjadi  kuning.  Hal tersebut menunjukkan adanya komponen non polar  yang  terekstrak  oleh  pelarut.  Lisa (2011)  menyatakan,  salah  satu  komponen yang  dapat  terekstrak  oleh  petroleum  eter pada biji pinang yaki adalah metil heksadekanoat.  Senyawa  tersebut  memiliki nama lain asam palmitat. Menurut Laksmono dan  Wuryaningsih  (2003),  pembawa  warna kuning  pada  minyak  kemiri  adalah  asam stearat dan asam palmitat.
Pada  kulit  buah  pinang  yaki  setelah disokletasi  terlihat  adanya  perubahan  warna pelarut  dari  bening  menjadi  merah.  Hal tersebut menunjukkan adanya komponen non polar yang terekstrak oleh pelarut dan  diduga sebagai senyawa karotenoid. Menurut Susilowati (2008), karotenoid biasanya terdapat  pada  buah-buahan  yang  berwarna merah.  Kumalaningsih  dalam  Susilowati (2008)  mengatakan,  karotenoid  larut  dalam lemak,  minyak  makan  pada  suhu  kamar  dan pelarut organik, tetapi tidak larut dalam air.

## Kandungan  Total  Fenol  Ekstrak  Biji  dan Kulit Buah Pinang Yaki
Data hasil  kandungan total  fenol  dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Diagram kandungan total fenol pada biji dan kulit buah pinang yaki
Berdasarkan  Gambar  1  dapat  dilihat bahwa  kandungan  total  fenol  tertinggi terdapat  pada  biji.  Hal  tersebut  sebanding dengan  aktivitas  antioksidannya  yang  dapat dilihat  pada  Gambar  2.  Kulit  buah  hanya memberikan  hasil  yang  minim.  Hasil  yang diperoleh berbanding terbalik dengan aktivitas  antioksidannya.  Hal  tersebut  diduga disebabkan  kulit  buah  mengandung  senyawa yang  berpotensi  sebagai  antioksidan  selain senyawa  fenolik.  Salah  satu  senyawa  yang mempunyai  aktivitas  antioksidan  selain senyawa  fenolik  adalah  senyawa  karotenoid (Ndhlala et al., 2010). Perbandingan kandungan total fenol dan aktivitas antioksidan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Perbandingan kandungan total fenol dan aktivitas antioksidan
N o Jenis sampel Kandungan Total Fenol (mg/kg) Aktivitas antioksidan (%) 1 MBSS 85,92 88,16 2 MKSS 3,16 54,11
Wei-Min et  al. (2009)  mengatakan, flavonoid  adalah  komponen  utama  total fenolik  dari  bunga,  sekam  dan  biji  pinang ( Areca  catechu L).  Dalam  studi  Zhang et  al.
(2010),  senyawa  fenilpropanoid  baru  dan  10 senyawa  fenolik  yang  dikenal  diisolasi  dari ekstrak  etil  asetat  buah  pinang  ( Areca catechu) kecuali  katekin  yang  diisolasi  dari genus  Areca.  Semua  senyawa  tersebut menunjukkan tingkat aktivitas antioksidan.
Pada  saat  direaksikan  antara  reagen Folin-Ciocalteu dengan senyawa fenolik akan terjadi  perubahan  warna  dari  kuning  menjadi biru. Intensitas warna biru ditentukan dengan
banyaknya  kandungan  fenol  dalam  larutan sampel.  Semakin  besar  konsentrasi  senyawa fenolik  dalam  sampel  semakin  pekat  warna biru  yang  terlihat.  Menurut  Singleton  dan Rossi  (1965),  Warna  biru  yang  teramati berbanding  lurus  dengan  konsentrasi  ion fenolat  yang  terbentuk,  semakin  besar konsentrasi  senyawa  fenolik  maka  semakin banyak  ion  fenolat  yang  terbentuk  sehingga warna  biru  yang  dihasilkan  semakin  pekat. Fenolat  hanya  terdapat  pada  larutan  basa, tetapi pereaksi Folin-Ciocalteu dan
produknya  tidak  stabil  pada  kondisi  basa.
Nely (2007) mangatakan, penambahan Na 2 CO 3 pada  uji  fenolik  bertujuan  untuk membentuk  suasana  basa  agar  terjadi  reaksi reduksi  Folin-Ciocalteu  oleh  gugus  hidroksil dari fenolik di dalam sampel.

## Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Biji  dan Kulit Buah Pinang Yaki
Hasil  presentase  aktivitas  penangkal radikal bebas dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 2. Diagram aktivitas antioksidan pada biji dan kulit buah pinang yaki
Berdasarkan  Gambar  2  dapat  dilihat bahwa  biji  buah  pinang  yaki  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  lebih  tinggi.  Hasil ini sesuai dengan biji pinang ( Areca catechu ) juga dilaporkan memiliki aktivitas
antioksidan  tertinggi  dibandingkan  sekam dan bunga (Wei-Min et al., 2009).

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Ekstrak  biji  dan  kulit  buah  pinang yaki  memiliki  kandungan  total  fenol  82,92 mg/kg dan 3,16 mg/kg dan memiliki aktivitas antioksidan 88,16% dan 54,11% .
0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 MBSS MKSS 85.92 3.16 k a n d u n g an t ot a l fe n ol
(m g/ k g) Sampel 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 MBSS MKSS 88.16 54.11 A k ti v it as A n ti o k si d an ( % ) Jenis sampel

## Saran
Perlu  diidentifikasi  senyawa  bukan fenolik yang memberikan kontribusi terhadap aktivitas antioksidan pada biji  dan  kulit buah pinang yaki.

## DAFTAR PUSTAKA
Bondet,V.,  W.Brand-Williams  and  C.Berset. 1997.  Kinetics  and  Mechanisms  of Antioxidant  Activity  using  the  DPPH• Free  Radical  Method. Lebensm-Wis.u.- Technol 30: 609–615.
Laksono,  J.A.  dan  S.R.Wuryaningsih.  2003. adsorpsi  warna  pada  minyak  kemiri hasil  ekstraksi.  [Kedeputian  Ilmu Pengetahuan Teknik]. LIPI. Bandung.
Muhiedin,F.  2008.  Efisiensi  Proses  Ekstraksi Oleoresin  Lada  Hitam  dengan  Metode Ekstraksi Multi Tahap [skripsi]. Brawijaya. Malang. Ndhlala,A.R., M.Moyo and J.V.Staden. 2010.
Natural  Antioxidants  :  Fascinating  or Mythical  Biomolecules  ?. Molecules 15: 6905-6930.
Nely,F. 2007. Aktivitas Antioksidan Rempah Pasar  dan  Bubuk  Rempah  Pabrik dengan  Metode  Polifenol  dan  Uji
AOM ( Active Oxygen Method ) [skripsi].  Institud  Pertanian  Bogor, Bogor.
Sarastani,D.,  T.Suwarna,  Soekarto,  R.Tien,
R.Muchtadi, D.Fardiaz dan A.Apriyanto. 2002. Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi Ekstrak  Biji  Atung. Teknologi  dan Industri Pangan. 13: 149-156.
Sembiring,B.B., Ma’mun dan E.I.Ginting. 2006.  Pengaruh  Kehalusan  Bahan dan Lama Ekstraksi Terhadap Mutu Ekstrak Temulawak ( Curcuma xanthorriza Roxb). Bul.  Littro 17:
53 – 58.
Simbala,H.E.I.
2007. Keanekaragaman Floristik  dan  Pemanfaatan  Sebagai Tumbuhan Obat di Kawasan Konservasi II  Taman Nasional Bogani Nani  Wartabone  (Kabupaten  Bolaang Mongondow, Sulawesi Utara) [Disertasi].  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor. Singleton,V.L. and J.A Rossi. 1965. Colorimetry  of  Total  Phenolic  with Phosphomolybdic-Phosphotungstic Acid  Reagent. American  Journal Enology and Viticulture . 16: 147. Soeksmanto,A., Y.Hapsari dan P.Simanjuntak . 2007. Kandungan
Antioksidan  pada  Beberapa  Bagian Tanaman  Mahkota  Dewa, Phaleria macrocarpa (Scheff) Boerl. (Thymelaceae). Biodiversita. 8: 92-95.
Suryanto,E.,  F.Wehantou,  S.Raharjo.  2008.
Aktivitas Penstabilan Senyawa Oksigen Reaktif  dari Beberapa Herbal.
Jurnal obat bahan alam. 7: 62-68.
Susilowati.  2008.  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa Karotenoid dari Cabai Merah (Capsicum  annuum  Linn.) [skripsi].
Universitas  Islam  Negeri  Malang, Malang.
Wei-Min,Z.,  L.Bin,  H.Lin  and  Z.Hai-De. 2009. Antioxidant activities of  extracts from  areca  ( Areca  catectu L.)  flower, husk  and  seed . African  Journal  of Biotechnology 8: 3887-3892.
Widyawati,P.S., C.H.Wijaya, P.S.Harjosworo dan    D.Sajuthi.  2010.  Pengaruh Ekstraksi  dan  Fraksinasi  Terhadap
Kemampuan Menangkap Radikal Bebas DPPH (1,1-difenil-2- Pikrilhidrazil) Ekstrak dan Fraksi Daun Beluntas (Pluchea indica Less)
[Seminar  rekayasa  kimia  dan  proses]. Diponegoro, Semarang.