ANTILEUKEMIC ACTIVITY OF METHANOL EXTRACT  FROM STEM OF Baccaurea macrocarpa, Syzygium jambos, Bouea macrophylla Griff.,  AND

## Diospyros discolor Willd
Antoni Pardede 1* , Rr. Ariessanty A.K Wardhani 1 , Emilda Frasisca 1
1 Program studi Pendidikan Kimia, FKIP, Universitas Islam Kalimantan,
Jl. Adhiyaksa No. 2, Kayu Tangi Banjarmasin, Indonesia 70123
Email: *antonipardede@uniska-bjm.ac.id
Diterima: 15 Juni 2020. Disetujui: 20 Juli 2020. Dipublikasikan: 30 Juli 2020 DOI: 10.30870/educhemia.v5i2.8320
Abstract: A secondary metabolite is a compound produced by plants that are needed for its survival.  Those  compounds  are  used  as  attractant,  repellant,  and  protectant.  The  three  of them,  such  as  color,  taste,  aroma,  and  thorns  of  the  plants.  These  secondary  metabolite compounds are important to be revealed. It aims to find new natural resources that are safer, more effective, and efficient in aiding the health sector, such as anticancer, antibacterial, and hepatoprotective  and  antioxidant  properties.  The  research  trends  of  natural  products chemistry  sourced  from  plants  that  are  widely  developing  are  extraction  and  biological activity, such as anticancer. In this research, the extraction of 1 kg sample was done by using maceration method and produced methanol extract of kapul (Baccaurea macrocarpa) 3.1%, jambu  mawar  (Syzygium  jambos)  2.4%,  ramania  (Bouea  macrophylla  Griff)  9%  and mentega  (Diospyros  discolor  Willd)  2.7%,  and  the  result  of  antileukemic  activity  of methanol  extract  sample  (the  survived  HL-60  cell  percentage)  sequentially  were  22.6%, 12.7%,  44.1%  and  37.3%  with  the  concentration  of  100  µg/mL.  Jambu  mawar  (Syzygium jambos) exhibited the highest antileukemic activity with the survived cell percentage (HL-60 cells) of 12.7% among the methanol extract of samples tested..
Keywords: Methanol extract; Baccaurea macrocarpa; Syzygium jambos; Bouea macropylla Griff; Diospyros discolor Willd
Abstrak: Metabolit sekunder merupakan senyawa yang dihasilkan oleh tumbuh-tumbuhan yang  berfungsi  untuk  menjaga  kelangsungan  hidupnya.  Senyawa  -  senyawa  tersebut diantaranya  berperan  sebagai  alat  pemikat,  alat  penolak  dan  alat  pelindung.  Ketiga  alat tersebut seperti warna, rasa, aroma dan duri yang dimiliki oleh tumbuhan. Senyawa-senyawa metabolit  sekunder  ini  sangatlah  penting  untuk  diungkapkan.  Hal  ini  bertujuan  untuk mencari  sumber  bahan  alami  baru  yang  lebih  aman,  efektif,  dan  efisien  dalam  membantu bidang  kesehatan  seperti  anti-kanker,  antibakteri,  pelindung  hati  dan  antioksidan.  Tren penelitian kimia bahan alam yang bersumber dari tumbuh-tumbuhan terus berkembang luas seperti pembuatan ekstrak dan uji bioaktivitas tertentu, seperti antikanker. Pada penelitian ini telah dilakukan ekstraksi terhadap 1 kg sampel dengan metode maserasi dan menghasilkan ekstrak  metanol  batang  kapul  ( Baccaurea  macrocarpa )  3,1%,  jambu  mawar  ( Syzygium jambos )  2,4%,  ramania  ( Bouea  macrophylla Griff)  9%  dan  mentega  ( Diospyros  discolor
Willd) 2,7% serta secara berurutan hasil uji aktivitas anti leukemia ekstrak metanol sampel (persentase sel HL-60 yang bertahan hidup) yaitu 22,6%, 12,7%, 44,1% dan 37,3% dengan konsentrasi  100  µg/mL.  Jambu  mawar  ( Syzygium  jambos )  menunjukkan  aktivitas  anti leukemia tertinggi dengan persentase sel (HL-60 cells) yang bertahan hidup sebesar 12,7% diantara ekstrak metanol sampel yang diuji.
Kata  kunci: Ekstrak  metanol; Baccaurea  macrocarpa ; Syzygium  jambos ; Bouea macrophylla Griff; Diospyros discolor Willd

## PENDAHULUAN
Banjarmasin  (Kalimantan  Selatan) merupakan  salah  satu  provinsi  yang  ada di  Indonesia  dengan  topografi  sebagian besar lahan rawa. Kondisi ini memungkinkan  banyak  jenis  tumbuh- tumbuhan  endemik  yang  hanya  dimiliki oleh  Kalimantan  selatan.  Beberapa tumbuhan di Banjarmasin telah
dilaporkan memiliki kandungan
metabolit  sekunder  golongan  fenolik, terpenoid  dan  steroid    serta  telah dilaporkan  memiliki  aktivitas  biologi yang beragam, misalnya sebagai antioksidan  antikanker  dan  antidiabetes (Mahargyani,  2019;  Pardede  &  Koketsu, 2017).
Phyllanthaceae, Anacardiaceae,
Myrtaceae  dan  Ebenacea  merupakan famili  tumbuhan  yang  tersebar  luas  di Kalimantan Selatan. Buah dari tumbuhan ini  banyak  dikonsumsi  masyarakat. Kajian literatur kandungan fitokimia dari famili Phyllathaceae dan Anacardiaceaea mengungkapkan  bahwa  tumbuhan  dari famili  ini  banyak  mengandung  senyawa golongan  fenolik  dan  senyawa  aktif
antioksidan  dan  antibakteri  (Ahmed  et al.,  2015;  Gunawan  et  al.,  2016; Madiyawati et al., 2015; Romadanu et al., 2014; Santoni et al., 2015; Sharma et al., 2013).  Selanjutnya  ekstrak  metanol  dan senyawa  metabolit  sekunder  golongan fenolik  seperti  taxifolin,  asam  galat, glukogalin dan metil galat serta golongan steroid  yaitu  sitosterol,  lupeol  dari batang,  kulit  kayu  dan  buah Mangifera casturi ( Anacardiaceae ) telah dilaporkan memiliki  aktivitas  anti  leukemia  yang tinggi  terhadap  sel  kanker  darah,  HL-60 cells  serta  aktivitas  antioksidan  yang tinggi  juga  (Fakhrudin  et  al.,  2015; Pardede & Koketsu, 2017; Sutomo et al., 2013).  Kandungan  senyawa  golongan naftokuinon yaitu habibone, diospyrin, 8- hidroksisodiospyrin telah dilaporkan dari fraksi  diklometana  akar  tumbuhan Dyospyrus  discolor (famili  Ebenaceae) (Ganapaty  et  al.,  2005).  Avikularin  dan juglanin  merupakan  senyawa  golongan flavonoid  yang  menjadi  komponen senyawa  utama  dan  aktif  sebagai fitotoksik  yang  diisolasi  dari  fraksi  etil
asetat  daun  tumbuhan Myrcia  tomentosa (famili Myrtaceae) (Imatomi et al., 2013).
Berdasarkan  penelusuran  literatur, sejauh  ini  belum  ada  laporan  publikasi ilmiah  dari  batang  tumbuhan  kapul ( Baccaurea macrocarpa famili Phyllanthaceae), jambu mawar ( Syzygium jambos, famili  Myrtaceae),  ramania ( Bouea macrophylla Griff famili
Anacardiaceaea ) dan
mentega
( Diospyros discolor willd famili Ebenacea)  sehingga  perlu  dilakukan penelitian  uji  aktivitas  anti  leukemia ekstrak  metanol  dari  tumbuh-tumbuhan tersebut.

## METODE

## Alat dan Bahan
Tumbuhan
kapul ( Baccaurea
macrocarpa ),  jambu  mawar  ( Syzygium jambos ),  ramania  ( Bouea  macrophylla Griff.)  dan  mentega  ( Diospyros  discolor Willd.)  diperoleh  di  sekitaran  rumah/ pekarangan/ kebun masyarakat di
Banjarmasin Kalimantan Selatan. Bagian tumbuhan  yang  diambil  sebagai  sampel
adalah batang sebanyak 1 kg, dikeringanginkan, dan dihaluskan.
Peralatan  yang  digunakan  adalah peralatan gelas yang umum dipakai pada penelitian  kimia  organik  bahan  alam seperti  meserator,  corong  kaca,  batang pengaduk, pipet tetes. Bahan kimia yang
digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu pelarut metanol teknis.

## Ekstraksi
Proses  ekstraksi  diawali  dengan persiapan  sebanyak  1  kg  sampel  kering halus dari kapul ( Baccaurea macrocarpa ),  jambu  mawar  ( Syzygium jambos ),  ramania  ( Bouea  macrophylla griff)  dan  mentega  ( Diospyros  discolor willd).  Sampel  yang  telah  dihaluskan tersebut  selanjutnya  dimasukkan  ke dalam  maserator  dan    ditambahkan pelarut  metanol  hingga  sampel  terendam sempurna.  Sampel  dimaserasi  selama satu  minggu  dan  diaduk  setiap  harinya (Pardede  et  al.,  2019).  Selanjutnya dipisahkan  antara  sampel  dan  larutannya menggunakan  corong  kaca  yang  telah diberi  kertas  saring.  Proses  maserasi sampel  dilakukan  sebanyak  dua  kali. Larutan  selanjutnya  dievaporasi  untuk mendapatkan  ekstrak  kental  dari  setiap sampel tumbuhan yang digunakan.

## Anti Leukemia
Uji  anti  leukemia  menggunakan  cell counting kit (CCK-8 assay): HL-60 cells didapatkan  dari  DS  Pharma  Biomedical Co., Ltd. (Osaka, Japan) dan dikulturkan (RPMI  1640  media)  (Wako  Pure Chemical  Industries,  Ltd.,  Osaka,  Japan) supplemented  dengan    10%    heat- inactivated fetal bovine serum (FBS) dan
1%  antibiotics,  penicillin-streptomycin (Gibco®,  Life  Technologies,  Thermo Fisher  Scientific  Inc.,  MA,  USA).  Cells diatur  pada  kondisi  37°C  di  bawah kelembapan udara 5% CO 2 . Cell counting kit  (CCK-8)  dibeli  dari  Dojindo
Molecular
Technologies,
Inc.
(Kumamoto, Japan). Sel sebanyak  (2,5 × 10 4 cells/mL)  dimasukkan  ke  microplate 96- well .  Setelah  24  jam,  ditambahkan larutan  sampel.  Selanjutnya  diinkubasi selama  48  jam,  ditambahkan  larutan CCK-8  (10  μL).  Tahap  selanjutnya dinkubasi  kembali  selama  4  jam.  Diukur serapan pada panjang gelombang 490 nm menggunakan microplate reader (Pardede  et  al.,  2016;  Pardede  & Koketsu, 2017).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Sebanyak  1  kg  batang  kapul ( Baccaurea  macrocarpa ),  jambu  mawar ( Syzygium  jambos ),  ramania  ( Bouea macrophylla Griff) dan mentega
( Diospyros
discolor Willd.) dikeringanginkan  pada  suhu  kamar dengan  tujuan  untuk  mengurangi  kadar air sampel, selanjutnya sampel dihaluskan,  penghalusan  sampel  tersebut bertujuan  agar  proses  ekstraksi  berjalan dengan  optimal.  Semakin  halus  sampel semakin  besar  luas  permukaan  sampel. Semakin luas permukaan sampel menyebabkan  semakin  besar  kontak pelarut  terhadap  sampel.  Pelarut  mampu menembus  dan  menghancurkan  dinding dan  membran  sel  sampel,  sehingga senyawa  metabolit  sekunder  terekstrak dengan sempurna (Pardede et al., 2019).
Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan teknik maserasi (perendaman) selama satu minggu secara berulang  sebanyak  dua  kali  dalam metanol.  Metanol  merupakan  pelarut paling baik dalam proses maserasi karena metanol  merupakan  pelarut  polar  yang mampu  mengekstrak  semua  kandungan metabolit sekunder pada sampel tumbuhan  (Pardede  et  al.,  2019),  hasil ekstraksi tersaji pada Tabel 1. Tabel 1. Hasil ekstraksi sampel Sampel Berat sampel awal (Kg) Ekstrak metanol (g) Persentase ekstrak (%) Kapul ( Baccaurea macrocarpa ) 1 30,6 3,1 Jambu mawar ( Syzygium jambos ), 1 23,9 2,4 Ramania ( Bouea macrophylla griff) 1 90,3 9,0 Mentega ( Diospyros discolor willd) 1 26,8 2,7 Berdasarkan  tabel  1  persentase  ekstrak metanol terendah ke tertinggi yaitu jambu
mawar ( Syzygium jambos ) 2.4%, mentega ( Diospyros  discolor willd)  2.7%,  kapul
( Baccaurea  macrocarpa )  3.1%,  dan ramania ( Bouea macrophylla griff) 9.0% dengan    masing  -  masing  sampel memiliki berat sampel awal yang sama (1 kg), berdasarkan data tersebut
diasumsikan  bahwa  banyaknya  ekstrak yang  didapatkan  dalam  proses  ekstraksi mengindikasikan bahwa kandungan
(jumlah/kuantitas atau jenis/ragam) senyawa  metabolit  sekunder  pada tumbuhan  tersebut  juga  banyak,  akan tetapi  banyaknya  kandungan  metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak suatu  sampel  tumbuhan  tidak  menjamin bahwa  metabolit  sekunder  dalam  ekstrak tersebut  aktif  terhadap  bioaktivitas tertentu misalnya antikanker. Bioaktivitas anti  kanker  tergantung  pada  struktur senyawa  metabolit  sekunder  (ikatan  dan
gugus fungsi) yang berperan, bertanggung  jawab  dan  aktif  menyerang sel  kanker  (Pardede  &  Koketsu,  2017). Oleh  karena  itu,  setiap  ekstrak  yang didapatkan  perlu  diuji  bioaktivitasnya sebagai anti kanker darah (anti leukemia).

## Anti Leukemia
Ekstrak  metanol  sebanyak  100 µg/mL  dari  masing-masing  batang tumbuhan kapul ( Baccaurea macrocarpa ),  jambu  mawar  ( Syzygium jambos ),  ramania  ( Bouea  macrophylla griff)  dan  mentega  ( Diospyros  discolor willd)  diuji  aktivitas  antileukemianya menggunakan  kit  CCK-8  assay  Human Leukemia  (HL-60  cells).  Hasil  uji aktivitas  anti  Leukemia  sampel  tersaji pada Gambar 1.
Gambar 1. Aktivitas anti leukemia ekstrak metanol tumbuhan kapul, jambu mawar, ramania dan mentega (Means ± SD, n=9)
Hasil  uji  aktivitas  anti  leukemia dengan sel (HL-60) yang bertahan hidup (HL-60  viability)  keempat  sampel  dari yang  terbesar  yaitu  jambu  mawar ( Syzygium jambos ) 12.7%, kapul
( Baccaurea
macrocarpa )
22.6%, mentega  ( Diospyros  discolor Willd)
37.3%  dan  ramania  ( Bouea  macrophylla
Griff) 44.1%.
Ekstrak  metanol  tumbuhan  ramania
( Bouea  macrophylla Griff)  merupakan ekstrak  yang  terbanyak  yang  didapatkan (90,3  g),  berbanding  terbalik  dengan jambu  mawar (Syzygium  jambos) yang hanya  sedikit  menghasilkan  ekstrak metanol (23,9 g). Aktivitas anti leukemia ekstrak  metanol  ramania  menunjukkan sel  kanker  darah  (HL-60  cells)  yang bertahan  hidup  44,1%,  sedangkan  jambu mawar  walaupun  ekstraknya  sedikit tetapi memberikan aktivitas anti leukemia yang  paling  tinggi  dengan  persentase (HL-60  cells)  yang  bertahan  hidup sebesar  12,7%.  Penelusuran  literatur dengan  prosedur  dan  konsentrasi  uji  anti leukemia  yang  sama  menggunakan ekstrak metanol batang Mangifera casturi memberikan  hasil  uji  anti  leukemia dengan  sel  HL-60  yang  bertahan  hidup sebesar  82.3%,  setelah  ekstrak  metanol difraksinasi,  fraksi  etil  asetat  hanya memberikan  hasil  uji  52,3%  sel  HL-60 yang bertahan hidup, serta senyawa asam galat  yang  diisolasi  dari  fraksi  etil  asetat
memberikan    hasil  uji  9.8%  sel  HL-60 yang  bertahan  hidup.  (Pardede  & Koketsu,
2017). Berdasarkan
perbandingan  tersebut  ekstrak  metanol jambu  mawar (Syzygium  jambos) aktif sebagai  anti  leukemia  dengan  sel  HL-60 yang  bertahan  hidup  12,7%  mendekati aktivitas  anti  leukemia  senyawa  murni asam  galat  dengan  sel  HL-60  yang bertahan hidup sebesar 9,8%.
Aktifnya  ekstrak  metanol  batang jambu mawar (Syzygium jambos) dipengaruhi  oleh  kandungan  metabolit sekunder pada ekstrak tersebut.
Penulusuran  literatur  senyawa  metabolit sekunder  jambu  mawar (Syzygium jambos) telah  dilaporkan pada  bagian daun  mengandung  senyawa golongan fenolik  dan  diidentifikasi  sebagai  asam anakardat  (Soetomo  et  al.,  2019).  Asam anakardat telah dilaporkan aktif menyerang  sel  kanker  serviks  (HeLa Cells) (Ola & Tawo, 2008). Berdasarkan literatur  tersebut  dapat  diduga  bahwa pada  bagian  batang  jambu  mawar  juga memiliki  senyawa  metabolit  sekunder golongan fenolik.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil-hasil  yang  didapat pada  penelitian  ini,  aktivitas  anti leukemia ekstrak tumbuhan tidak dipengaruhi oleh jumlah ekstrak metanol yang  didapatkan  dalam  proses  ekstraksi,
tetapi  dipengaruhi  oleh  kandungan senyawa  metabolit  sekunder  yang  aktif terhadap  anti  Leukemia  pada  ekstrak tumbuhan  tersebut.  Jambu  mawar ( Syzygium  jambos )  dengan  persentase
ekstrak  metanol  yang  dihasilkan  2,4% memberikan  aktivitas  anti  leukemia tertinggi    dengan  sel  (HL-60  cells)  yang bertahan hidup sebesar12,7%.

## DAFTAR RUJUKAN
Ahmed,  I.  A.,  Mikail,  M.  A.,  Bin Ibrahim,  M.,  Bin  Hazali,  N.,  Rasad,
M. S. B. A., Ghani, R. A., Wahab, R.
A.,  Arief,  S.  J.,  &  Yahya,  M.  N.  A. (2015).  Antioxidant  activity  and phenolic profile of various morphological  parts  of  underutilised Baccaurea  angulata fruit. Food Chemistry , vol. 172 , hh 778–787.
Fakhrudin,  N.,  Putri,  P.,  Sutomo,  &
Wahyuono, S. (2015). Antiinflamatory activity of methanolic  extract  of Mangifera casturi in  thioglycollate-induced
leukocyte migration on mice.
Tradisional  Medicine  Journal ,  vol.
18 , no. 3, hh 151–156.
Ganapaty,  S.,  Thomas,  P.,  Mallika,  B., Balaji,  S.,  Karagianis,  G.,  & Waterman,  P.  (2005).  Dimeric naphthoquinones  from Diospyros discolor . Centre  for  Phytochemistry and  Pharmacology  Papers ,  vol. 33 , no. 3, hh 313-315.
Gunawan, G., Chikmawati, T., Sobir, S.,
&  Sulistijorini,  S.  (2016).  Review: Fitokimia  genus  Baccaurea  spp.
Bioeksperimen:  Jurnal  Penelitian Biologi , vol. 2 , no. 2, hh 96.
Imatomi,  M.,  Novaes,  P.,  Matos,  A.  P.,
Gualtieri,  S.  C.  J.,  Molinillo,  J.  M. G.,  Lacret,  R.,  Varela,  R.  M.,  & Macías,  F.  A.  (2013).  Phytotoxic effect  of  bioactive  compounds isolated  from Myrcia  tomentosa (Myrtaceae)  leaves. Biochemical Systematics and Ecology , vol. 46 , hh
29–35.
Madiyawati,  M.,  Penyang,  Fauzi,  F.,  & Triyadi, A. (2015). Karakteristik dan uji fitokimia 5 (lima) jenis tumbuhan buah  eksotik  dari  kabupaten  barito utara  Kalimantan  Tengah. Jurnal Daun , vol. 53 , no. 9, hh 1689–1699.
Mahargyani,  W.  (2019).  Uji  Aktivitas Antidiabetes  Ekstrak  n-Heksan  Kulit Buah  Naga  Merah  ( Hylocereus polyrhyzus ). EduChemia  (Jurnal Kimia Dan Pendidikan) , vol. 4 , no. 1,
hh 13.
Ola,  A.  R.  B.,  &  Tawo,  B.  D.  (2008). Identifikasi  molekular  dan  aktivitas antikanker  alkil  fenol  dari  minyak kulit  biji  jambu  mete  ( Anacardium
occidentale L)  asal  pulau  Timor
Molecular identification and anticancer  activity  of  alkylphenol from cashew nut shell oil
(Anacardium  occidentale) . Majalah Farmasi Indonesia , vol. 19, no. 3, hh
137–144.
Pardede,  A.,  &  Koketsu,  M.  (2017).
Antioxidant and antileukemic
activity  of  chemical  components from  bark  of  Mangifera  casturi.
Comparative Clinical Pathology , vol.
26 , no. 3, hh 499-504.
Pardede, A., Mashita, K., Ninomiya, M., Tanaka,  K.,  &  Koketsu,  M.  (2016). Flavonoid  profile  and  antileukemic activity  of Coreopsis  lanceolata flowers. Bioorganic  and  Medicinal Chemistry Letters , vol. 26 , no. 12, hh
2784-2787.
Pardede,  A.,  Yuliar,  &  Rizaldi.  (2019).
Kimia Bahan Alam Garcinia cymosa : Taksonomi, Fitokimia, Ekstraksi, Fraksinasi dan Isolasi. (1st ed.).  Universitas  Islam  Kalimantan MAB.
Romadanu,  R.,  Hanggita,  S.,  &  Lestari,
S.  (2014).  Pengujian  aktivitas antioksidan  ekstrak  bunga  lotus
( Nelumbo
nucifera ).
Jurnal
FishtecH , vol. 3 , no. 1, hh 1–7.
Santoni, A., Sabariah, & Efdi, M. (2015).
Isolasi dan elusidasi struktur senyawa triterpenoid dari kulit batang ambacang. Jurnal  Riset  Kimia ,  vol.
9 , no. 1, hh 1–8.
Sharma,  R.,  Kishore,  N.,  Hussein,  A.,  &
Lall,  N.  (2013).  Antibacterial  and anti-inflammatory effects of
Syzygium  jambos L.  (Alston)  and isolated compounds on acne vulgaris. BMC Complementary and
Alternative  Medicine ,  vol. 13 ,  no.  1, hh 1.
Soetomo,  S.,  Eviyana,  E.,  Choironi,  N. A.,  Dizzania,  N.,  Fareza,  M.  S.,  & Martinus,  A.  (2019).  Isolasi  dan identifikasi  senyawa  aktif  dari  daun jambu mawar ( Syzygium jambos (L.) Alston. Jurnal  Sains  Dan  Terapan Kimia , vol. 13 , no. 2, hh 59.
Sutomo,  S,  W.,  S,  R.,  &  EP,  S.  (2013).
Isolation  and  identification  of  active compound  of  n-hexane  from  kasturi
(Mangifera casturi Konsterm ) against antioxidant and
immunomodulatory  activity. Journal of Biological Sciences , vol 13 , no. 7, hh 596–604.