Research Article

## UNPAD

## Hepatoprotective Activity of Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Leaf Extract in Diabetes Mellitus Rats
Joni Tandi 1 , Didit Ondja 1 , Wika A. Putri 1 , Maryani 1 , Tien W. Handayani 1 , Yuliet Susanto 2 , Wayan Wirawan 3 , Erick Budiawan 3 1Program Studi S1 Farmasi, STIFA Pelita Mas Palu, Indonesia 2Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Jurusan Farmasi, Universitas Tadulako, Palu, Indonesia
3Program Studi D3 Farmasi, STIFA Pelita Mas Palu, Indonesia
Submitted 17 October 2023; Revised 21 December 2023; Accepted 22 December 2023; Published 30 December 2023 *Corresponding author: jonitandi757@yahoo.com
Abstract Binahong  ( Anredera cordifolia (Ten.)  Steenis)  is  efficacious  in  treating  diabetes,  heart  disease, and  high  blood  pressure. This  study  aims  to  determine  secondary  metabolite  levels  using  UV-Vis spectrophotometry and evaluate antioxidant activity which has a positive effect in repairing liver damage caused by streptozotocin. The methods in this research were UV-Vis and DPPH spectrophotometry, the Kruskal-Wallis advanced test, and the Mann-Whitney test on the livers of diabetes mellitus rats. The results of qualitative analysis of binahong leaf extract contain Alkaloids, Flavonoids, Saponins, and Tannins. In the quantitative test, the total flavonoid content was 0.2433% w/w, saponin 0.1631% w/w, tannin 0.2512% w/w, and alkaloid 0.0350% w/w, and the antioxidant activity of the ethanol extract of binahong leaves was obtained The IC50 value of 61.9 ppm is included in the strong antioxidant category. In histopathology, the test animals were induced with streptozotocin and given treatment, except for normal controls, negative control Na-CMC 0.5%, positive control metformin, the test group was given extract at doses of 25, 50, and 100 mg/kg BW. Binahong leaf extract has hepatoprotective activity at a dose of 25 mg/kg BW, which is a level that is effective in repairing damage to rat liver cells with an average damage value of 1.4.
Keywords: antioxidant , Binahong leaves, DPPH, IC50, Liver Histopathology, secondary metabolites.
Aktivitas Hepatoprotektif Ekstrak Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) pada Tikus Diabetes Mellitus
Abstrak Binahong  ( Anredera cordifolia (Ten.)  Steenis)  berkhasiat  mengatasi  diabetes,  penyakit  jantung, dan  tekanan  darah  tinggi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  kadar  metabolit  sekunder menggunakan spektrofotometri UV-Vis dan mengevaluasi aktivitas antioksidan yang berefek positif dalam memperbaiki kerusakan hati yang disebabkan oleh streptozotocin. Metode dalam penelitian ini adalah spektrofotometri UV-Vis dan DPPH, uji lanjut Kruskal-Wallis dan uji Mann Whitney terhadap hepar tikus diabetes melitus. Hasil analisis kualitatif ekstrak daun binahong  mengandung Alkaloid, Flavonoid, Saponin dan Tanin. Pada Uji kuantitatif diperoleh kadar total flavonoid adalah 0,2433% b/b, saponin 0,1631% b/b, tanin 0,2512% b/b dan alkaloid 0,0350% b/b dan aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun binahong diperoleh nilai IC50 sebesar 61,9 ppm termasuk kategori antioksidan kuat. Pada histopatologi hewan uji diinduksi dengan streptozotocin dan diberikan perlakuan terkecuali kontrol normal, kontrol negatif Na-CMC 0,5%, kontrol positif metformin, kelompok uji yang diberikan ekstrak dengan dosis 25, 50 dan 100 mg/kg BB. Ekstrak daun binahong memiliki aktivitas hepatoprotektor dosis 25 mg/kg BB ialah kadar yang efektif  memperbaiki kerusakan sel hati tikus dengan rata-rata kerusakan senilai 1,4.
Kata Kunci: Antioksidan , Daun Binahong, DPPH , Histopatologi hati , IC50,  metabolit sekunder.

## 1.  Pendahuluan
Diabetes  melitus  (DM)  merupakan sebuah  gangguan  metabolisme  yang  terjadi akibat  gangguan  dalam  produksi  dan fungsi  insulin,  yang  dapat  dikenali  dengan peningkatan  kadar  glukosa  darah.  Insulin yang telah berkurang jumlahnya dan bekerja menyebabkan glukosa di gunakan oleh sel dan akan  meningkatkan  pengeluaran  glukagon, keadaan  ini  disebabkan  oleh  aktiktivtas radikal bebas dalam tubuh meningkat secara terus- menerus1.
Dalam  pengolahan  karbohidrat  oleh tubuh, hati memiliki beberapa peran penting, seperti  menyimpan  glukosa,  mengonversi galaktosa  dan  fruktosa  menjadi  glukosa, melakukan  biosintesis  gula  heksosa,  dan menghasilkan  berbagai  senyawa  kimia esensial  melalui  proses  metabolisme karbohidrat. Asam lemak di dalam hati juga dapat  menginduksi  pembentukan  radikal bebas  yang  menyebabkan  peroksidasi  lipid. Proses  peroksidasi  lipid  ini  berkontribusi pada  pelepasan Malondialdehyde (MDA) dan 4-hydroxynoneal dengan  peran  yang signifikan.  Dalam  kondisi  kerusakan  hati, Kenaikan aktivitas Serum Glutamic Pyruvate Transminase (SGPT)  dan Serum Glutamic Oxaloacetic Transminase (SGOT)  dapat terjadi.  Ini  terjadi  karena  sel-sel  hati  yang menghadapi nekrosis akan melepaskan enzim transaminase  yang  biasanya  terlokalisasi di hati ke dalam sirkulasi darah. Akibatnya, pada pemeriksaan biokimia serum, kita akan melihat  peningkatan  yang  signifikan  dalam kadar SGPT dan SGOT2.
Antioksidan merupakan senyawa yang sanggup  memperlambat  proses  terjadinya reaksi kimia dari radikal bebas dan berperan penting  untuk  melindungi  sel-sel  tubuh. Antioksidan beroperasi dengan menstabilkan radikal  bebas,  sehingga  mampu  menghalau potensial  kerusakan  yang  disebabkan  oleh radikal  bebas  serta  terhalangnya  reaksi berantai3.
Tanaman  binahong  merupakan  salah satu tumbuhan herbal yang digunakan sebagai bahan baku sediaan pada pembuatan obat yang tidak merugikan bagi tubuh. Secara  empiris binahong  sanggup  menyembuhkan  berbagai
jenis penyakit. Dalam penggunaannya sebagai penurun kadar glukosa, daun binahong lebih efektif dibandingkan dengan batang dan akar, karena  dapat  diambil  dalam  jumlah  yang lebih besar tanpa memengaruhi pertumbuhan tanaman.  Tumbuhan  binahong  mengandung senyawa  flavonoid,  saponin,  triterpenoid, steroid,  dan  alkaloid.  Binahong  memiliki aktiitas antioksidan  karena mengandung total fenol yang cukup tinggi4.
Paparan diatas mendorong peneliti agar melakukan penelitian terkait penetapan kadar metabolit  sekunder  daun  binahong  sebagai antioksidan terhadap histopatolofi hepar tikus putih jantan oleh hiperkolesterolemia.

## 2.  Metode
2.1.  Alat Ayakan mesh 40 (ABM  sieve analys), batang pengaduk (Pyrex), blender (Cosmos), cawan porselin (Handenwanger), corong kaca (Pyrex), Erlenmeyer (Pyrex),  gelas  kimia (Duran), gelas ukur (Iwaki), gunting (Joyko), labu  ukur  (Pyrex), mortir dan stemper (Onemed),  penangas  air  (Memmert),  pipet tetes (Onemed), pipet mikro (Nesco dragon), Rotary vacum evaporator (heidoph), tabung reaksi (Duran), timbangan analitik (vernier), spektrofotometer Uv-Vis (Thermo scientific), wadah (Canister TP5).
2.2.  Bahan Aquadest (PT.  Tirta  Fresindo  Jaya), Asam klorida 2 N (PT. Brataco), Asam klorida pekat  (PT.  Indoaji  Pratama), Bromocresol green (BCG) (PT. Brataco), Etanol 96% (PT. Indoaji Pratama), Etanol p.a (pro analis) (PT. Indoaji Pratama), HCl 2 N (PT. Anugrah Putra Kencana),  serbuk  simplisia  daun  binahong (Anredera  cordifolia  Steenis),  Dragendorff (PT.  Indoaji  Pratama),  DPPH  (PT.  Indoaji Pratama),  Kuersertin  (PT.  Brataco),  NaCl 10% (PT. Indoaji Pratama), FeCl3 (PT. Indoaji Pratama), Handscoen (PT.  Mersi  Farma), Masker (PT.  Mersi  Farma),  magnesium  P (powder)  (PT.  Brataco),  Kapas  (PT.  Mersi Farma), Alumunium foil (PT. Mersi Farma), Tisu (PT. Mersi Farma).
2.3.  Prosedur

## 2.3.1. Skrining Fitokimia Ektrak Etanol  Daun
Binahong Uji  Fitokimia  digunakan  untuk mengidentifikasi metabolit sekunder menurut kategori  dan  merupakan  langkah  awal menentukan  kelompok  senyawa  kimia  yang memiliki  aktivitas  biologis  dalam  suatu tanaman. Uji ini mencakup deteksi golongan senyawa seperti alkaloid, flavonoid, saponin, dan  tanin  secara  kualitatif  melalui  reaksi warna atau pengendapan6.
2.3.2. Analisis secara kuantitatif Uji kuantitatif dimaksudkan agar kadar total  metabolit  sekunder  di  dalam  simplisia atau  ekstrak  diketahui.  Uji  ini  merupakan suatu  analisis  kuantitatif  pada  tanaman  atau bagian  tanaman.  Pengujian  ini  meliputi  uji kadar  total  flavonoid,  alkaloid,  saponin  dan tanin5.
2.3.3. Uji Aktivitas Antioksidan Larutan  DPPH  0,004%  b/v  dibuat dengan  cara  lakukan  penimbangan  DPPH 0,004 mg lalu masukan kedalam erlenmeyer kemudian  dilarutkan  pada  pelarut  etanol p.a, lalu dimasukan pada labu ukur 100 mL, volumenya  di  cukupkan  sampai  pada  tanda batas6.
2.3.4. Pembuatan Preparat Organ Hati Pembuatan  preparat  dilakukan  dengan cara:  fiksasi,  setelah  organ  dicuci  dengan larutan NaCI 0,9% lalu difiksasi dengan larutan Buffered Nautral Formalin 10% minimal 1x24 jam. Dehidrasi, organ direndam dalam larutan etanol bertingkat 70%-100% masing-masing selaman  1  jam.  Penjernihan,  dilakukan dengan merendam dalam larutan xylol I dan II selama 1 jam. Penanaman, organ dimasukkan dalam  blok  parafin  dan  dibiarkan  mengeras dalam inkubator suhu 58 o -60 o C. Pemotongan, hati  dipotong  5-6  micron,  hasil  potongan diambil  dengan  objek glass .  Pewarnaan, dengan  hematoxilin  eosin  kurang  lebih  30 detik selanjutnya dicuci dengan air mengalir. Mounting, preparat ditetesi entelan kemudian ditutup  dengan cover glass .  Selanjutnya adalah pembacaan dibawah mikroskop untuk melihat perubahan morfologi dari organ yang
diperiksa.  Pemeriksaan  dilakukan  dengan mengunakan mikroskop olympus Cx-23.
2.3.5. Penentuan Presentase Perendaman Aktivitas penangkal radikal bebas dapat di hitung dengan     rumus sebagai berikut7 :
% inhibisi DPPH =
2.3.6. Analisis Data Data  hasil  pengamatan  mikrokopis yang  menghasilkan  data  skoring  gambaran histopatologi  hati  tikus  putih  jantan (Rattus  norvegicus)  rujukan  Lab.  Gema Bandung Health and Scientific yang diamati menggunakan  mikrokopis  Olympus  Cx-23, kemudian  dilakukan  uji  distribusi  normal dengan tujuan agar mengetahui data sampel terdistribusi  homogen.  Jika  data  terditribusi normal dan homogen maka diteruskan dengan analisis statistik one way anova . Apabila ada perbedaan  data  yang  didapati  tidak  normal atau tidak homogen, maka dianalisis dengan statistik  non  parametric  uji Kruskall Wallis dan  dilanjutkan  dengan  uji Mann Whitney guna mengetahui lebih jelas perbedaan yang signifikan  antar  kelompok  uji.  Pengolahan data dilakukan dengan software SPSS 25 10 .
2.3.7. Penentuan Nilai IC50 IC50  adalah  nilai  yang  menunjukkan konsentrasi  sampel  uji  yang  diperlukan untuk  menghambat  atau  mereduksi  suatu proses  oksidasi  senilai  50%.  Nilai  ini  dapat dihitung dengan membuat kurva linear yang menghubungkan konsentrasi larutan uji (pada sumbu x) dengan persentase peredaman (pada sumbu  y)  menggunakan  persamaan  y  =  a  + bx8.
3.  Hasil dan Pembahasan Penelitian ini memakai bahan uji daun binahong yang berasal dari gunung Mungker, desa  Pamona,  Kec  Pamona  Puselemba, Provinsi  Sulawesi  Tengah.  Awalnya  sudah diidentifikasi  dipelaksana  teknis  sumber daya  hayati  sulawesi.  Identifikasi  yang dihasilkan  membuktikan  betul  yang  dipakai
ialah tanaman daun binahong. Percobaan ini bermaksud agar mengetahui adanya senyawa, persentase  senyawa  dan  nilai  IC50  keaktifan antioksidan dalam sari etanol daun binahong. Analisis  secara  kualitatif  untuk mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder di  dalam  simplisia  atau  ekstrak.  Uji  ini merupakan  suatu  analisis  secara  kualitatif kandungan kimia tanaman. Hasil uji analisis kualitatif terlihat pada tabel 1 .
Pengujian  ekstrak  dilakukan  secara kualitatif  yang  bertujuan  untuk  mengetahui kandungan  metabolit  sekunder  dari  daun binahong. Dari pengujian tersebut diperoleh hasil ektrak etanol daun binahong ( Anredera cordifolia Steenis )  mengandung  metabolit sekunder berupa alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin.
Tujuan  dari  analisis  kuantitatif  adalah untuk  menentukan  jumlah  total  metabolit sekunder dalam bahan tanaman mentah atau ekstrak    yang  terlihat  pada  tabel  2.  Uji  ini merupakan  suatu  analisis  kuantitatif  pada tanaman atau bagian tanaman.
Dari  hasil  analisis  kuantitatif  pada sampel  masing-masing  metabolit  sekunder diperoleh  hasil  rerata  kadar  total  alkaloid =  0,0350%  b/b,    kadar  total  flavonoid  0,= 2433%  b/b,  kadar  total  saponin  =  0,1631% b/b,  kadar total tanin  = 0,2512% b/b. Pengujian  aktivitas  antioksidan  pada ekstrak  etanol  daun  binahong  ( Anredera cordifolia Steenis ) bertujuan untuk mengetahui nilai  IC50  untuk  aktivitas  antioksidan  pada
ekstrak  etanol  daun  binahong  memakai metode 1-1-Diphenyl-2-Picrylhidrazil (DPPH)9.  Hasil  pengujian  antioksidan  yang dapat dilihat pada tabel 3.
Pada  pembanding  kuersetin  diperoleh nilai rata-rata standar deviasi 34,59 ppm dan tergolong antioksidan sangat kuat. Sedangkan pada ekstrak etanol daun binahong diperoleh nilai rata-rata standar  deviasi 61,99 ppm yang tergolong dalam antioksidan kuat9.
Pada pengujian histopatologi hepar tikus putih jantan yang telah mendapatkan izin dari Komisi Etik Hewan dari Medical and Health Research Ethics Committee Universitas Tadulako  dengan  Nomor  6/92/UN  28.1.30/ KL/2022  memperlihatkan  bahwa  terdapat perbedaan  yang  sangat  besar  pada  skoring histopatologi  hati  dari  setiap  kelompok perlakuan  dimana  huruf  yang  berbeda menunjukkan perbedaan signifikan dan huruf yang  sama  menunjukkan  perbedaaan  yang tidak  signifikan  sebagaimana  yang  nampak pada gambar 1 dan 2.
Hasil  uji  non-parametrik  dengan Uji Kruskal-Wallis, uji  ini  dilakukan  guna memeriksa apakah ada perbedaan yang sangat besar di setiap kelompok perlakuan. Ini bisa dibuktikan dengan melihat nilai kepentingan p = 0,000, yaitu (p < 0,05), dan itu berarti ada perbedaan  pada  setiap  kelompok.  juga,  uji Mann-Whitney dilakukan untuk menentukan kontras  di  setiap  kelompok  perlakuan. Konsekuensi  skoring  uji  lanjutan Mann- Whitney persepsi kerusakan sel hati pada tikus
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong
Tabel 3. Hasil  Uji  Antioksidan  Pembanding Kuersetin dan Ekstrak Daun Binahong
Senyawa Hasil Alkaloid + Flavonoid + Saponin + Tanin +
Parameter Uji Hasil (%b/b) Alkaloid 0,0350 % Flavonoid 0,2433 % Saponin 0,1631 % Tanin 0,2512% Sampel Uji IC 50 ppm Jenis Antioksidan Kuersetin 34,59 Sangat Kuat Ekstrak Daun Binahong 61,99 Kuat
Tabel 2. Hasil  Penetapan  Kadar  Total  Ekstrak Etanol Daun Binahong
Gambar 1. Skoring  Tingkat  Kerusakan  Pada Tikus Diabetes Melitus
putih jantan pada gambar 1 memperlihatkan bahwa  terdapat  perbedaan  yang  sangat besar  pada  skoring  histopatologis  hati  dari setiap  kelompok  perlakuan,  yaitu  kelompok perlakuan yang diberikan 25 mg/kg BB ekstrak daun binahong (dosis 1), 50 mg/kg BB (dosis 2) dan 100 mg/kg BB (dosis 3) pada dasarnya unik  (p<0.05)  dengan  kelompok  control normal  yang  menandakan  bahwa  tingkat perbaikannya  belum  mencapai  optimal.  Hal ini karena variasi dosis pada daun binahong mempunyai aktivitas yang sangat kecil dalam meregenerasi  kerusakan  pada  hepar  tikus putih jantan. Pada kelompok perlakuan dosis 2 dan 3 pada dasarnya tak sama dengan control negatif yang menyatakan bahwa dosis 2 dan 3 pada dasarnya sama merugikannya dengan control  negatif.  Dosis  2  mempunyai  skor  = 3,  skor  ini lebih tinggi dari skor  pada dosis 1  dan  dosis  3.  Hal  ini  karena  penghitungan skor mengingat area degenerasi dan sel yang lebih  kabur  variasinya.  Sedangkan  pada dosis 1 berbeda tak signifikan dengan control negatif.  Pada  dosis  1  mempunyai  skor  = 1,4  ,  skor  ini  paling  rendah  diantara  dosis 2  dan  dosis  3.  Skor  kerusakan  sel  hati  ini belum  menunjukkan  pembusukan  sehingga kerusakan hati termasuk kategori ringan dan menyebabkan  senyawa  tersebut  tak  tumpah ke  sel  dan  tetap  tinggi  di  hati.  Jadi  dosis  1 mempunyai  peran  yang  sangat  besar  dalam memulihkan  kerusakan  sel  hati  pada  tikus putih jantan.
Hasil  Pada  pengujian  histopatologi hepar  memperlihatkan  bahwa.  kandungan ekstrak etanol daun Binahong  dosis 25 mg/ kg  BB  adalah  dosis  yang  optimal  dalam meminimalkan  kadar  glukosa  dan  dapat memperbaiki  sel  hati  dengan  rata-rata kerusakan senilai 1,4. Hal ini karena ekstrak
etanol    daun  binahong  mempunyai  aktivitas aktioksidan  yang  kuat  dalam  memperbaiki kerusakan pada hepar tikus putih jantan 10 .
4.  Kesimpulan Penelitian ini menghasilkan ekstrak etanol  daun  binahong  ( Anredera cordifolia Steenis mengandung  senyawa  metabolit sekunder  dengan  kadar  total  masing-masing alkaloid 0,0350% b/b, flavonoid 0,2433% b/b, saponin 0,1631% b/b, dan tanin 0,2512% b/b dengan aktivitas antioksidan bedasarkan nilai IC50sebesar 61,99 tergolong antioksidan kuat. Pada  penelitian  ini  ekstrak  daun  binahong berpengaruh  nyata  terhadap  perbaikan  sel hati;  dosis  25  mg/kg  BB  ialah  kadar  yang efektif dalam memperbaiki kerusakan sel hati tikus dengan rata-rata kerusakan senilai 1,4.

## Referensi
1.  Anggi V, Ningrum TA, Tandi J. Uji efek Antidiabetes Ekstrak Etanol Daun Kenitu Terhadap  Tikus  Putih  Jantang  yang Diinduksi  Sreptozotocin.  Farmakol  J Farm. 2021;16(1):94-106.
2.  Pangestuningsih  M,  Rukminingsih  F. Gambaran  Fungsi  Hati  Pasien  Diabetes Melitus  Tipe  Ii  Di  Salah  Satu  Rumah Sakit  Swasta  Di  Kabupaten  Demak Periode  Oktober-Desember  2020.  J  Ris Kefarmasian  Indones.  2022;4(2):134- 143.
3.  Salsabila SR. UJI  AKTIVITAS ANTIOKSIDAN MENGGUNAKAN METODE DPPH (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl) PADA DAUN BENALU MAHONI  (Dendrophthu  sp)  Skripsi. Published online 2022.
4.  Hakki R. UJI ANTIOKSIDAN INFUSA DAUN BINAHONG ( Anredera cordifolia
Gambar 2. Hasil Pemeriksaan Preparat Histopatologi Hati Pada Tikus Diabetes Melitus
(  Ten  .)  Steenis  )  DENGAN  METODE DPPH  (2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl). Skripsi. Published online 2020.
5.  Puspita  D  niluh.  Uji  Kualitatif  dan Kuantitatif  metabolit  sekunder  ekstrak etanol daun awar-awar. Psychol Appl to Work  An  Introd  to  Ind  Organ  Psychol Tenth  Ed  Paul.  2020;53(9):1689-1699. doi:10.1017/CBO9781107415324.004
6.  Ikhwan. Penetapan Kadar Total Metabolit Sekunder  Dan  Uji Antioksidan  Formula Soy-Yamghurt  Campuran  Sari  Kedelai (Glycine  Max  L)  Dan  Ubi  Banggai (Discorea  Alata  L.).  Published  online 2021.
7.  Rohmawati NUR, Nazilah K. antikanker ekstrak  metanol  buah  kurma  ajwa  ( Phoenix  dactylifera  ).  skripsi.  Published online 2019.
8.  Handayani  TW,  Yusuf  Y,  Tandi  J. Analisis  Kualitatif  dan  Kuantitatif Metabolit  Sekunder  Ekstrak  Biji  Kelor (Moringa oleifera Lam.) dengan Metode
Spektrofotometri  UV-Vis.  KOVALEN J Ris Kim.
2020;6(3):230-238. doi:10.22487/kovalen.2020.v6.i3.15324 9.  Maesaroh  K,  Kurnia  D,  Al  Anshori  J. Perbandingan  Metode  Uji  Aktivitas Antioksidan  DPPH,  FRAP  dan  FIC Terhadap Asam Askorbat, Asam Galat dan Kuersetin. Chim Nat Acta. 2018;6(2):93. doi:10.24198/cna.v6.n2.19049
10. Surbakti  PAA,  Queljoe  E  De,  Boddhi W.  skrining  fitokimia  dan  uji  toksisitas ekstrak etanol daun binahong (Andredera cordifolia  (Ten.)  Steenis)  DENGAN METODE  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Pharmacon. 2018;7(3):22-31.
11. Tandi  J,  Danthy  R,  Purwaningsih, Kuncoro H. Effect of ethanol extract from purple eggplant skin (Solanum melongena l) on blood glucose levels and pancreatic Β  cells  regeneration  on  white  rats  male hypercholesterolemia-diabetic.  Res  J Pharm  Technol.  2019;12(6):2936-2942. doi:10.5958/0974-360X.2019.00494.3 12. Mutmainnah T, Tadjio YK, Tand J i. Efek Nefroprotektif Ekstrak Daun Gedi Merah Terhadap Kadar Kreatinin / Ureum Tikus Putih  Jantan  Diinduksi  Etilen  Glikol.
Farmakol J Farm. 2018;XV(2):160-167. 13. Tandi  J,  Roem  M,  Yuliet  Y.  Efek Nefroprotektif  Kombinasi  Ekstrak  Daun Gedi Merah dan Daun Kumis Kucing pada Tikus Induksi Etilen Glikol. J Trop Pharm Chem.  2017;4(1):27-34.  doi:10.25026/ jtpc.v4i1.129
14. Tandi  J,  Tobondo  NA,  Yanuarty  R, Dewi  NP,  Handayani  TW.  Antioksidan Ekstrak  Etanol  Daun  Miana  Terhadap Kadar Glukosa Darah Tikus Putih Jantan Terinduksi  Streptozotocin.  2023;9(9):1- 11. doi:10.47065/jharma.v9i9.9999
15. Tandi J, Viani A, Handayani TW, Safitra D, Batara ED, Zalsabila V. The effect of Lime  Leaf  Ethanol  extract  on  Diabetic Nephropathy in Male White Rats. Res J Pharm  Technol.  2023;16(4):1601-1606. doi:10.52711/0974-360X.2023.00262
16. Tandi J, Anggi V, Christin V, et al. Total compounds  of  Secondary  Metabolites Soy-Yamghurt Formula and Nephropathy Effect  in  Male  White  Rats.  J  Kim  Val. 2022;8(2):163-170. doi:10.15408/jkv.
v8i2.22043
17. Widodo  A,  Zubair  MS,  Ibrahim  N,  et al.  phenolic  constituents,  flavonoid constituents,  antioxidant,  and  toxicity of  ethanol  extract  of  root,  stem,  leaf, flower,  fruit,  and  seed  of  Gynandropsis gynandra  (L.)  Briq.  Rasayan  J  Chem. 2022;15(3):2010-2015. doi:10.31788/
RJC.2022.1537006 18. Tandi J, Afriani S, Nadira, et al. potensi antidiabetik  ekstrak  etanol  daun matoa(pometia pinnata) pada tikus putih jantan. J Ilm Manuntung. 2022;8(1):145- 155. doi:10.51352/jim.v8i1.521
19. Anggi  V,  Safitra  D,  Tandi  J,  et  al.  Uji Efek Etanol Daun Jeruk Nipis Terhadap Gambaran  Histopatologi  Ginjal  Tikus Model  Diabetes.  Farmakol  J  Farm. 2022;19(1):101-112.
20. Dewi  NP,  Maroso  AO,  Program  JT, et  al.  Uji  Efek  Ekstrak  Etanol  Kulit Buah  Ketimun  Terhadap  Gambaran Histopatologi  Pankreas  Tikus  Putih Jantan. Farmakol J Farm. 2022;19(1):57- 67.