## SIFAT HIPOGLIKEMIK DAN HIPOKOLESTEROLEMIK PROTEIN KEDELAI PADA TIKUS MODEL TOLERANSI GLUKOSA TERGANGGU (TGT) INDUKSI ALLOKSAN 1)

## [Hypoglycemic and Hypocholesterolemic Activities of Soy Protein on Impared Glucose
Intolerant Rats Induced by Alloxan]
Masun Lasimo 2 ) , Zuheid Noor 3) , dan Y. Marsono 3)
1) Makalah dipresentasikan pada Seminar Nasional PATPI, Semarang  9-10 Oktober 2001
2) Pascasarjana Ilmu dan Teknologi Pangan UGM - Yogyakarta
3) Fakultas Teknologi Pertanian UGM - Yogyakarta

## ABSTRACT
Previous studies indicated that soy protein had hypoglycemic and hypocholesterolemic activity in induced diabetic rats. However when combined  with  different  sources  of  carbohydrate,    the  effects  were  not  known  yet.  The  purpose  of  this  research  was  to  evaluate  the hypogylcemic  and hypocholesterolemic properties of soy protein combined with cornstarch or wheat flour, on four groups of impaired glucose tolerance (IGT) alloxan induced male Wistar rats models. During the first two weeks, rats were given high fat and cholesterol diet to induce hypercholesterolemic. On the third week, rats were injected with alloxan 60 mg/kg body weight to induce hyperglycemia, and in the following three weeks each group was given one of the following, casein+cornstach (CC), soy protein+cornstarch (SC), casein+wheat flour (CW), or soy protein +wheat flour (SW). The glucose and lipid concentrations of blood of individual rat were measured before and, 1 st , 7 th , 14 th , and 21th day after the injection of alloxan.
The results showed that the soy protein diets have hypoglycemic and hypocholestrolemic activity as compared to casein diets. The different source of carbohydrate diet affected hypocholesterolemic property of soy protein, but did not affect hypoglycemic property. It seems that the SC diet decreases glucose concentration more than the SW diet (17,45% and 7,04% from baseline, respectively). The SC diet  had more  ability  to  decrease  total  and  LDL  cholesterol  (9,52%  and  21,  89%  from  baseline,  respectively),  while  the  SW  diet  had  more  ability  to decrease triglycerides (24,64% from baseline).
Key  words : Soy protein, hypoglycemic, hypocholesterolemic, impaired glucose tolerance (IGT)  and alloxan induced

## PENDAHULUAN
Diabetes mellitus (DM) adalah kondisi abnormalitas metabolisme  energi  (karbohidrat,  lemak  dan  protein)  yang disebabkan  oleh  defisiensi  insulin  baik  absolut  maupun relatif  (Cataldo  et  al.,  1989).  Ada  dua  hal  mendasar  yang terjadi  pada  DM,  yaitu  kegagalan  sekresi  insulin  atau resistensi  insulin.  Keduanya  menyebabkan  kondisi hiperglikemia,  yaitu  konsentrasi  glukosa  darah  melebihi kisaran  normal  60-120  mg/dl.  Dikategorikan  sebagai toleransi glukosa terganggu  (TGT) jika konsentrasi glukosa darah  2  jam postprandial antara  120-180  mg/dL,  dan sebagai  DM  jika  lebih  dari  180  mg/dL  (Keen  dan  Alberti, 1997).
Terapi  primer  DM  yang  lazim  adalah  terapi  diet. Umumnya terapi diet didasarkan pada kaidah 3-J, yaitu: 1) Jumlah kalori terukur  sesuai dengan status gizi diabetis, 2) Jenis  diet  terpilih,  lazimnya  memiliki  efek  menurunkan glukosa  darah  (hipoglikemik)  atau  berpotensi  mencegah komplikasi  misalnya  bersifat  hipokolesterolemik,  dan  3) Jadwal  penyajian  terprogram  untuk  menghindari  beban glukosa postprandial yang  tak  terkontrol,  yang  dapat membahayakan  diabetisi  (Askandar-Tjokroprawiro,  1996). Ingredient  diet  yang  memiliki  sifat  hipoglikemik  dan
hipokolesterolemik tentunya menjadi alternatif pilihan yang baik bagi para diabetisi.
Protein  kedelai,  dilaporkan  Iritani  et  al  (1997)  dan Zuheid-Noor et al., (2000) hasil induksi alloksan. Kajian lain membuktikan  bahwa  protein  kedelai  juga    bersifat hipokolesterolemik  baik  pada  model  binatang  diabetik (Anthony et al., 1996a, 1996b; Hurley et al., 1995; Iritani et al., 1996), manusia dengan hiper-kolesterolemia  (Bakhit et al.,  1994;  Baum  et  al.,  1995;  Potter  et  al.,  1993),  dan manusia  normokolesterolemia/  sehat  (Carrol  dan Kurowska, 1995; Lichtenstein, 1998).
Berdasarkan  beberapa  hasil  kajian  diatas,  cukup beralasan  jika  protein  kedelai  kemudian  dipilih  menjadi salah satu jenis diet DM. Tetapi studi tentang hipoglikemik dan hipokolesterolemik protein kedelai jika dikompositasikan  dengan  sumber  karbohidrat  diet  yang berbeda,  dan  pada  model  toleransi  glukosa  terganggu (TGT)  belum  pernah  ada.  Kajian  semacam  ini  sangat diperlukan  untuk  memantapkan  dugaan  bahwa  protein kedelai  mungkin  memiliki  efek  terapetik  bagi  pasien  TGT, yang  diyakini  sebagai  stadium  awal  DM.  Penelitian  ini dimaksudkan  untuk  mengevaluasi  pemunculan  sifat hipoglikemik  dan  hipokolestrolemik  protein  kedelai  jika
dikompositasikan  dengan  pati  jagung  atau  tepung  terigu, pada tikus Wistar model TGT induksi alloksan.

## METODOLOGI
Penelitian dilaksanakan mulai Agustus 2000 sampai Juni 2001, dijalankan dengan 3 tahapan yaitu;

## 1. Pembuatan Konsentrat Protein Kedelai
Pembuatan  konsentrat  protein  dilaksanakan  di Laboratorium  Rekayasa  Pangan  Pusat  Antar  Universitas
(PAU) Pangan dan Gizi di Laboratorium Bioteknologi PAU Bioteknologi  UGM  Yogyakarta.  Pembuatan  konsentrat didasarkan  pada  pola  kelarutan  protein,  dan  dijalankan dengan  metode  ekstrasi-presipitasi  mengikuti  prosedur Zuheid-Noor  et  al.,  (2000),  (Gambar  1).  Kedelai  yang digunakan ialah varietas Mallabar, didapat dari balai benih Wonocatur Yogyakarta.
Kedelai
Penambahan air                                                 Tepung kedelai
(10: 1 v/b)
Penambahan larutan NaOH dalam air (1: 1b/v)
Residu
Supernatan Penambahan larutan HCL 25%
Residu Supernatan
TEPUNG KONSENTRAT PROTEIN
Gambar 1. Pembuatan konsentrat protein kedelai dengan metode ekstraksi-presipitasi prosedur Zuheid-Noor et al (2000)
Penepungan lolos 60 mesh Ekstraksi alkalik pada pH 9,0 suhu 50 C selama 60 menit Ekstraksi asidik pada ph 4,0 suhu 60 C selama 30 menit Senstrifugasi 4000 rpm Selama 15 menit
Pengeringan pada suhu 50 C selama 10-12 jam
Penepungan lolos 60 mesh

## 1. Uji In Vivo Pada Model TGT.
Konsentrat  protein  yang  dihasilkan  dari  tahap pertama  kemudian  diuji-cobakan  pada  tikus  model  TGT induksi alloksan, dilaksanakan di Unit Pemeliharaan Hewan Percobaan (UPHP) UGM Yogyakarta. Penelitian dijalankan terhadap  36  tikus  wistar  jantan  umur  15  minggu.  Pada  2 minggu  pertama  semua  tikus  diberi  diet  Tinggi Lemak+Kolesterol
(TLTK)
untuk menginduksi hiperkolesterolemia.  Selanjutnya  tikus  diinjeksi  alloksan dosis 60 mg/kg  BB via  intravena ekor, untuk menginduksi kondisi toleransi glukosa terganggu (TGT). Kemudian tikus dibagi 4 kelompok @ 9 ekor) dan masing-masing kelompok diberi satu dari empat diet percobaan yang  berbeda yaitu; kasein+pati jagung (CC), protein kedelai+pati jagung (SC), kasein  +  tepung  terigu  (CW),  atau  protein  kedelai+tepung terigu  (SW)  selama  3  minggu.  Diet  distandarisasi berdasarkan rekomendasi AIN 1993 (Tabel 1).
Total-dan  HDL  kolesterol  dianalisa  dengan  metode enzymatik-photometrik kholesterol oksidase dan peroksidase,  dengan  menggunakan  kits  Cholesterol  FS DiaSys  Jerman.  Trigliserida  dianalisa  dengan  metode Enymatik-kolorimetrik gliserol-3-phosphat-oksidase, dengan  menggunakan  kits  Triglycerides  FS  DiaSys Jerman.  LDL  kolesterol  ditentukan  sebagai difference (Kaplan  dan  Szabo,  1983)  dengan  persamaan  sebagai berikut :
LDL Kolesterol (mg/dL) = Total kolesterol – HDL kolesterol-1/5 Trigliserida

## Analisa Data
Data  ditampilkan  sebagai  rata-rata,  diolah  dengan ANOVA  satu  arah  atau  dua  arah.  Signifikansi  data ditentukan  pada P<0,05 atau P<0,01, dan  jika  terdapat perbedaan  ditentukan  dengan  Duncan’s  Multiple  Range Test.
Tabel 1. Komposisi diet percobaan berdasarkan rekomendasi AIN 1993 Komponen Diet TLTK Diet CC Diet SC Diet CW Diet SW …………………………………………………………………………………………………… Kasein 140,0 140,0 0 75,0 0 Protein Kedelai 1 0 0 230 0 119,0 Pati jagung 2 538,2 623,2 573,2 0 0 Tepung terigu 3 0 0 0 649,2 672,7 Minyak kedelai 120,0 40,0 0 34,0 11,5 Sukrosa 100,00 100,0 100,0 100,0 100,0 CMC 50,0 50,0 50,0 50,0 50,0 Kolesterol 5,0 0 0 0 0 Mineral Mix AIN 93 35,0 35,0 35,0 35,0 35,0 Vitamin Mix AIN 93 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 L-sistin 1,8 1,8 1,8 1,8 1,8 JUMLAH 1000,0 1000,0 1000,0 1000,0 1000,0
1 Protein yang digunakan ialah Tepung konsentrat Protein varietas Mallabar, mengandung 51,98% protein; 19,09% karbohidrat; 18,97% lemak dan 5,76% air
2 Pati jagung yang digunakan mengandung 0,71% protein; 85,65% karbohidrat; 0,38% lemak dan 13,26% air
3 Tepung terigu yang digunakan mengandung 9,2% protein; 7,8% karbohidrat; 1,3% lemak dan 12% air Diet CC : diet percobaan berbasis kasein dan pati jagung Diet SC : diet percobaan berbasis konsentrat protein kedelai dan pati jagung Diet CW : diet percobaan berbasis kasein  dan tepung terigu Diet SW  : diet percobaan berbasis konsentrat protein kedelai dan tepung terigu Semua diet perlakuan adalah isokalori dan isonitrogen

## 2. Analisa Glukosa dan Kolesterol Darah.
Glukosa dan fraksi kolesterol darah dievaluasi pada hari  ke-0  (sesaat  sebelum  penginjeksian  alloksan),  ke-1, ke-7,  ke-14  dan  ke-21  setelah  injeksi  alloksan.  Glukosa ditentukan  dengan  metode  enzymatik  glukosa  oksidase dan  peroksidase  (Kaplan  dan  Szabo,  1983)  dengan menggunakan  glukosa  strip  tes  SureStep®  dan  ditera dengan glukosa meter LifeScan Unistik®.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hipoglikemik Diet  berbasis  protein  kedelai  (SC  dan  SW)  pada studi  ini  memperlihatkan  sifat  hipoglikemik  penurunan konsentrasi  glukosa  darah  berkisar  antara  7,04-17,45% dari baseline setelah 3 minggu  perlakuan. Sebaliknya diet berbasis  kasein  (CC  dan  CW)  tidak  berkecenderungan hipoglikemik  atau  hiperglikemik.  Diet  CC  (kasein  +  pati jagung)  menaikkan  konsentrasi  glukosa  darah  3,23%  dari
baseline , dan diet CW (kasein + tepung terigu) menurunkan sebesar  5,16%  dari baseline ( P>0,01 ),  (Gambar  2). Temuan ini menguatkan kajian sebelumnya bahwa protein kedelai  memiliki  potensi  hipoglikemik  pada  model  diabetik (Zuheid-Noor, 1998; Zuheid-Noor et al., 2000).
Diet  SC  (protein  kedelai+  pati  jagung)  tampak cenderung  lebih  kuat  menyebabkan  penurunan  glukosa darah  daripada  diet  SW  (protein  kedelai+tepung  terigu), berturut-turut 17,45% atau 0,87 mg/dL/hari dan 7,04% atau 0,34%  mg/dL/hari  ( P<0,01 lihat  Gambar  2).  Perbedaan pemunculan ini kemungkinan disebabkan oleh 3 hal yaitu; 1)  Adanya  perbedaan  jumlah  asupan  protein  kedelai,  2) Adanya perbedaan sumber karbohidrat diet, dan 3) Adanya perbedaan tingkat oksidasi pankreas antara kelompok diet SC dan SW. Tampaknya perbedaan  jumlah  lebih dominan daripada sebab lainnya (Masun-Lasimo, 2001). serta  menaikkan  HDL  kolesterol  sebesar  24,33%  dari baseline ( P>0,05 terhadap CC).
Berbeda  dengan  diet  berbasis  kasein,  maka  diet berbasis protein kedelai mengindikasikan sifat hipokolesterolemik.  Pemunculan  hipokolesterolemik  diet protein  kedelai  (SC  dan  SW),  terutama  terjadi  pada  total kolesterol  dan  LDL  kolesterol  ( P<0,01 dan P<0,05 ),  dan berkencenderungan  pada  trigliserida  ( P=0,053 ).  HDL kolesterol tidak cukup terpengaruh, (gambar 3 dan 4).
Jika  dibandingkan  dengan  meta-analisis  (Hasler 1998)  dan  Messina  (1999)  yang  menyimpulkan  bahwa asupan protein kedelai 25-50 g/hari signifikan menurunkan total  kolesterol,  LDL  kolesterol  dan  trigliserida  masing- masing  sebesar  9,3;  12,9;  dan  10,5%,  serta  signifikan menaikkan HDL kolesterol 2,4%, maka pada penelitian  ini diet protein kedelai (SC dan SW) mampu menurunkan total kolesterol,  LDL,  dan  triglisrida  berturut-turut  sampai  9,  52; 5,69-24,64%  dari baseline ,  serta  menaikkan    HDL
Gambar 2. Konsentrasi glukosa  darah [A], dan slope perubahannya selama 3 minggu perlakuan diet pada wistar model TGT induksi alloksan [B]. Perbedaan huruf dibelakang nilai slope menunjukkan perbedaan nilai pada P<0,01 ).
Hipokolesterolemik Hasil  studi  memperlihatkan  bahwa  diet  berbasis kasein  (CC  dan  CW)  tidak  berkecenderungan hiperkolesterolemik  atau  hipokolesterolemik.  Diet  CC* (kasein+pati  jagung)  meningkatkan  total  kolesterol,  HDL, dan  trigliserida  masing-masing  sebesar  0,61 ; 4,03;  dan 0,79%  dari baseline ,  serta  menurunkan    LDL  kolesterol 0,47%  dari baseline .  Sedang  diet  CW  (kasein+tepung terigu)  menurunkan  total  kolesterol,  LDL,  dan  trigliserida berturut-turut sebesar 2,64; 6,19; dan 29,48% dari baseline ,
kolesterol  1,94  –  20,09%  baseline.  Jadi  secara  umum sejalan  dengan  meta-analisis  tersebut  diatas  dengan catatan sebagai berikut :
1.      Ditinjau  dari  kemampuannya  menstimulasi  penurunan total  kolesterol,  diet  SW  (protein  kedelai+tepung, terigu) tidak berkecenderungan hipo-atau hiperkolesterolemik,  karena  menyebabkan  kenaikan total  kolesterol  sebesar  1,21%  dari baseline ( P<0,01 terhadap diet kasein+pati jagung/CC), dan jika ditinjau dari kemampuannya menurunkan LDL kolesterol, diet
SW bersifat hipo-kolesterolemik lemah, karena hanya mampu  menurunkan  5,69%  dari baseline (nilai  meta- analisis Hasler, 1998 sebesar 12,9%). Sebaliknya diet SC  (protein  kedelai+pati  jagung)  lebih  nyata menurunkan total dan LDL kolesterol,  masing-masing sebesar  9,52  dan  21,89%  dari baseline (sesuai dengan  meta-analisis  Anderson  et  al.,  1995. P<0,01 dan P<0,05 terhadap SW), lihat Gambar 3 dan 4.
2.      Kemampuan  diet  SC  dalam  menginduksi  penurunan trigliserida  hanya  5,86%  dari baseline ,  yaitu  separoh dari nilai meta-analisis (Hasler, 1998) 10,5%. Sedang diet  SW  mampu  menurunkan  sampai  24,64%.  Hal serupa juga terlihat ketika menginduksi kenaikan HDL kolesterol,  diet  SC  hanya  menginduksi  kenaikan 1,94%  sedang  diet  SW  cukup  mampu  menaikkan sampai 20,09 dari baseline (Gambar 5-6).
Gambar 3. Konsentrasi total kolesterol [A], dan slope perubahannya selama 3 minggu penelitian dengan model TGT [B]. Perbedaan huruf dibelakang nilai slope menunjukkan perbedaan nilai pada p<0,01.
Gambar  4.  Konsentrasi  LDL  kolesterol  [A],  dan  slope  perubahannya  selama  3  minggu  penelitian  dengan  model  TGT  [B]. Perbedaan huruf dibelakang nilai slope menunjukkan perbedaan nilai pada P<0,05.
Gambar 5. Konsentrasi HDL kolesterol [A], dan slope perubahannya selama 3 minggu penelitian dengan model TGT [B], tidak memperlihatkan perbedaan nilai secara statistik (P>0,05).
Gambar 6. Konsentrasi trgilserida [A], dan slope perubahannya selama 3 minggu penelitian dengan model TGT [B], tidak memperlihatkan perbedaan nilai secara statistik (P,0.05)
Dua fenomena diatas mengindikasikan bahwa :
1. Aksi  hipokolesterolemik  diet  SC  (protein  kedelai+pati jagung)  terutama  muncul  melalui  penekanan  level  total- dan LDl kolesterol, dan tidak cukup kuat menekan level trigliserida. Oleh karena itu diet SC sangat sesuai untuk penderita  familial  hiperkolesterolemia  (tipe  II)  yang
memiliki  total-  dan  LDL  kolesterol  sangat  tinggi.  Juga sesuai untuk penderita familial  hiperlipoproteinemia tipe V  yang  memiliki  total  kolesterol  dan  trigliserida  darah yang tinggi (Mayes, 1993; Kaplan dan Szcabo, 1983).
2. Aksi  hipokolesterilemik  diet  SW  (proteinkedelai+tepung terigu)  terutama  muncul  melalui  penekanan  level
trigliserida,  dan  secara  moderat  menekan  level  LDL kolesterol,  tetapi  tidak  cukup  kuat  menekan  level  total kolesterol.  Oleh  karena  itu  sifat  hipokolesterolemik  diet SW sangat sesuai untuk penderita familia hipertrigliserida (tepe IV) dan
familial hiperlipoproteinemia  tipe  V,  yang  umumnya  mengalami kenaikan  pada  fraksi  VLDL,  trigliserida  dan  total kolesterol (Mayes, 1993; Kaplan dan Szabo, 1983).
Perbedaan  pemunculan  hipokolesterolemik  antara diet  SC  dengan  Sw  kemungkinan  disebabkan  oleh;  1) Adanya  perbedaan  jumlah  asupan  protein  kedelai,  2) Adanya perbedaan sumber karbohidrat diet, dan 3) Adanya perbedaan  konsentrasi  glukosa  darah  dan  slope penurunannya  antara  kelompok  diet  SC  dan  SW  (Masun- Lasimo 2001).

## KESIMPULAN
Pencampuran  protein  kedelai  dengan  pati  jagung atau  tepung  terigu,  tidak  mempengaruhi  kuantitatif pemunculan  sifat  hipoglikemiknya.  Perbedaan  kuantitatif hipoglikemik  protein  kedelai  pada  diet  yang  berbeda, terutama  disebabkan  oleh  perbedaan  dosis  dan  atau jumlah intake semata.
Pemunculan aksi hipokolesterolemik protein kedelai cukup  dipengaruhi  oleh  sumber  karbohidrat  diet. Pencampuran    protein  kedelai  dengan  pati  jagung  efektif menurunkan  konsentrasi  total  dan  lDL  kolesterol,  sedang Pencampuran  dengan  tepung  terigu  berkecenderungan menurunkan trigliserida dan LDL kolesterol.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih penulis sampaikan kepada Bpk. Dr. Ir. Zuheid  Noor,  MSc.  Selaku  Pimpro  Penelitian  Hibah  Tim PascaSarjana  Batch  IV  No.  049HTPP/Des  IV/URGE/1999 Tanggal  9  Maret  1999.  Addendum  1  No.  049/ADD.1/ HTPP/DesIV/URGE/1999 Tanggal 5 April 1999, dan Panitia Bogasari  Nugraha  2000  PT.  Indofood  Sukses  Makmur Bogasari  Flour  Mills  Jakarta,  yang  mendukung  biaya penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anthony, MS., Clarkson, TB., Hughes, CL., Morgan, TM. and  Burke,  GL.  1996a. Soybean  Isoflavones Improve  Cardiovaskular  Risk  Factors  Without Affecting  the  Reproductive  System  of  Peripubertal Rhesus Monkeys. J. Nutr . 126: 45-50.
Anthony,  MS,  Clarkson,  TB.  And  Williams,  JK.  1996b. Effects  of  Soy  Isoflavones  on  Atherosclerosis: Potential  Mechanisms. Procc.  Second  International Symposium  on the  Role  of  Soy  in  Preventing and Treating Chronic Disease . pp 26. Brussels Belgium.
Askandar-Tjokroprawiro.  1996. Diabetes  Mellitus , Klasifikasi, Diagnosis dan Terapi , edisi 3. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta
Bakhit,  RM.,  Klein,  BP.,  Essex-Sorlie,  D.,  Ham,  JO., Erdman, JW. and Potter, SM. 1994. Intake 25 g of Soybean  Protein  With  or  Without  Soybean  Fiber Alters  Plasma  Lipids  in  Men  With  Elevated Cholesterol Concentrations. J. Nutr . 124: 213-222.
Baum, JA., Teng, H., Erdman, JW., Weigel, RM.,  Klein,
BP.,  Persky,  VW.,  Freels,  S.,  Surya,  P.,  Bakhit, RM., Ramos, E., Shay, NF. and Potter, SM. 1998. Long-term  Intake  of  Soy  Protein  Improves  Blood Lipid  Profiles  and  Increses  Mononuclear  Cell  Low-
Densisty-Lipoprotein Messenger RNA in Hypercholetserolemic Postmenopausal Women. Am J Clin Nutr . 68 : 545 – 441.
Carroll, KK. and Kurowska, EM. 1995. Soy Consumption and  Cholesterol  reduction:  Review  of  Animal  and Human Studies. J. Nutr . 125:549S-597S.
Cataldo,  CB.  Nyenhuis,  JR.  and  Whitney,  EN.  1989. Nutrition and Diet Therapy, Principles an d Practice,
2 nd edition. West Publishing Company. St. Paul.
Hasler,CM.  1998.  Functional  Foods: Their  Role  in Disease  Prevention  and  Health  Promotion. Food Technology . 52 (11): 63-70.
Hurley,  C.,  Galibois,  I.  And  Jacques,  H.  1995. Fasting and  Postprandial  Lipid  and  Glucose  Metablolisms are  Modulated  by  Dietary  Proteins  and Carbohidrates:
Role of Plasma Insulin
Concentrations. J. Nutr Biochem . 6:540 – 546.
Iritani, N., Hosomi, H., Fukuda, H., Teda, K. and Ikeda, H.  1996. Soybean  Protein  Supresses  Hepatic Lipogenic Enzyme Gene Expression in Wistar Fatty Rats. J Nutr . 126: 380-388
Iritani,  N.,  Susimoto,  T.,  Fukuda,  H.,  Komiya,  M.  and Ikeda, H. 1997. Dietary Soybean Protein Increases Insulin  Receptor  Gene  Expression  in  Wistar  Fatty Rats  When  Dietary  Polyunsaturated  Fatty  Acid Level is Low. J. Nutr. 126: 1077 – 1083.
Kaplan,  A.  and  Szabo,  LL.  1983. Clinical  Chemistry, Interpretation and Techniques , 2 nd edition. Lea and Febiger. Philadelphia.
Keen. H. and Alberti, KGMM. 1997. Diebetes Diagnois, In: Alberti,  KGMM.,  Zimmet,  P.  DeFronzo,  RA.  and Keen,  H.  (eds). International  Textbook  of  Diabetes Mellitu s, Vol.  1,  2 nd edition ,  pp.  25-36.  John  Wiley and Sons, Chichester England.
Lichtenstein,  AH.  1998. Soy  Protein,  Isoflavones  and Cardiovascular  Disease  Risk. J  Nutr .  128:  1589- 1592.
Masun-Lasimo. 2001 . Evaluasi
Hipoglikemik, Hipokolesterolemik dan Antioksidatif Protein Kedelai Pada  Tikus  Model  Toleransi  Glukosa  Terganggu (TGT)  Induksi  Alloksan.  Tesis.  Program  Studi  Ilmu dan Teknologi Pangan PPS UGM Yogyakarta
Mayes,  PA.  1993 .  Cholesterol  Synthesis,  Transport  and Excretion, In: Harper’s Biochemistry, 23 rd edition, pp 266-278.  Prentice-Hall  International  Inc.  New Jersey.
Messina,  MJ.  1999. Soyfoods:  Their  Role  in  Disease Prevention  and  Treatment,  In: Soybeans ,
Chemistry , Technology and Utilization (Liu, KS. Ed), pp  442-477.  Aspen  Publisher.  Gaithersburg Maryland.
Potter,SM., Bakhit, RM., Essex-Sorlie,DL., Weingartner,
KE.,  Chapman,  KM.,  Nelso,  RA.,  Prabudhesai, M.,  Savage,  WD.,  Nelson.  Al.,  Winter,  LW.  and Erdman,  JW.  1993. Depression  of  Plasma Choletserol  in  Men  by  Comsumption  of  Baked Products  Containing  Soy  Protein. Am  J  Clin  Nutr.
58: 501-506 Zuheid-Noor. 1998. Penjajagan Kemungkinan Penggunaan  Kedele  Sebagai  Komponen  Makanan Fungsional. Prosiding  Seminar  Nasional  Teknologi Pangan dan Gizi , hal. 378-387.
Zuheid-Noor,  Y-Marsono,  dan  Mary-Astuti.  2000. Sifat Hipoglisemik Komponen Kedele. Prosiding Seminar Nasional  Industri  Pangan  PATPI ,  Vol  II,  hal  166- 174.