## S RIWIJAYA J OURNAL OF M EDICINE

## Mekanisme Antifertilitas Fraksi Biji Pepaya pada Tikus Jantan
Sri Nita 1* , Lusia Hayati 1 , Subandrate 2
1 Bagian Biologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Sriwijaya, Palembang, Indonesia
2 Bagian Biokimia, Fakultas Kedokteran, Universitas Sriwijaya, Palembang, Indonesia E-mail: srinita1970@gmail.com

## ABSTRAK
Biji pepaya dapat bersifat sebagai antifertilitas. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui senyawa dan mekanisme antifertilitas  fraksi  biji pepaya  pada  tikus  jantan  dari  berat  vesikula  seminalis  dan  prostat  serta  jumlah  spermatosit primer dan spermatid. Jenis penelitian eksperimental secara in vivo dengan rancangan acak lengkap. Hewan uji adalah tikus jantan ( Rattus norvegicus L.) galur Sprague Dawley usia 60 hari dengan berat badan 200-210 g. Dosis pemberian 100mg/kg  bb  selama  24  hari.  Senyawa  yang  dikandung  oleh  fraksi  didapat  melalui  uji  fitokimia.  Hasil  penelitian memperlihatkan senyawa yang ditemukan pada fraksi nHeksan adalah steroid, terpenoid, saponin, flavonoid. Fraksi etil asetat  terdapat  senyawa  steroid,  terpenoid  dan  flavonoid.  Fraksi  etanol  air  mengandung  senyawa  terpenoid  dan flavonoid. Berat vesikula seminalis dan prostat meningkat dibandingkan kontrol. Rerata jumlah spermatosit primer dan spermatid  menurun  secara  nyata  pada  semua  fraksi  namun  penurunan  terendah  pada  fraksi  nHeksan.    Dapat disimpulkan mekanisme antifertilitas fraksi biji papaya adalah melalui penurunan rerata jumlah spermatosit primer dan spermatid.
Kata kunci: Fraksi biji papaya, spermatosit primer, spermatid

## Abstract
Mechanism of the antifertility fraction of papaya seeds on male rats. Papaya seeds can have an antifertility effect. This study was conducted to determine the compound and mechanism of antifertility of papaya seed fraction in male rats from the weight of seminal vesicles and prostate and the number of primary spermatocytes and spermatids. This type of experimental research was in vivo with a completely randomized design. The test animals were male rats ( Rattus norvegicus L.) Sprague Dawley strain aged 60 days with a body weight of 200-210 g. Dosage of 100 mg / kg for 24 days. Compounds  contained  by  fractions  were  obtained  through  phytochemical  tests.  The  results  showed  that  the compounds found in the nHexan fraction were steroids, terpenoids, saponins, flavonoids. Ethyl acetate fractions include steroid compounds, terpenoids and flavonoids. The ethanol fraction of water contains terpenoids and flavonoids. The weight  of  the  seminal  vesicles  and  prostate  increased  compared  to  the  controls.  The  mean  number  of  primary spermatocytes  and  spermatids  decreased  significantly  in  all  fractions  but  the  lowest  decrease  was  in  the  nHexan fraction. It can be concluded that the antifertility mechanism of papaya seed fraction is through a decrease in the average number of primary spermatocytes and spermatids.
Keywords: papaya seed fraction, primary spermatocytes, spermatids

## 1. Pendahuluan
Penggunaan  alat  kontrasepsi  masih dominan  oleh  perempuan. 1 Penggunaan kontrasepsi  pria  saat  ini  hanya  kondom  dan vasektomi. Salah satu kekhawatiran para pria setelah  melakukan  vasektomi  ialah  mereka merasakan  kehilangan  kejantanannya  dan pria takut terjadi impotensi karena vasektomi sehingga  pria  enggan  menjalani  vasektomi. 2 Hal ini membuat para pakar berusaha untuk mencari  cara  yang  aman  untuk  para  pria, tetapi tidak akan membuat para pria merasa dihilangkan  kejantanannya.  Salah  satu  cara adalah  beralih  ke  tanaman  yang  dapat menghambat spermatogenesis.
Proses  spermatogenesis  terjadi  dalam tubulus  seminiferus  testis,  proses  ini  dalam keadaan  normal  dapat  terjadi  setiap  saat. Kualitas  spermatozoa  dapat  dilihat  dari berbagai  faktor  antara  lain:  morfologi (abnormalitas  sperma),  motilitas  (gerak cepat)  dan  kuantitas  spermatozoa  atau jumlah spermatozoa. 3
Spermatogenesis  dapat  terjadi  melalui beberapa tahap pembelahan. Tahap awalnya spermatogonia  akan  mengalami  perubahan menjadi  spermatosit  primer,  kemudian menjadi  spermatosit  sekunder  dan  menjadi spermatid.    Sebelum  spermatid  menjadi spermatozoa  ada  fase  yang  dilewati spermatid yang disebut fase spermiogenesis. Fase  ini  terdiri  dari  pembentukan  akrosom dan  flagella  bertujuan  untuk  membentuk morfologi  normal  spermatozoa  yang  terdiri dari  kepala,  leher  dan  ekor  yang  normal. 4 Jumlah  sperma  yang  dihasilkan  testis  tidak cukup  untuk  mendiagnosis  fertil  atau infertilnya  seseorang.  Karena  ada  kalanya jumlah  spermatozoa  yang  normal  tetapi  bila memiliki  morfologi  dan  kecepatan  yang kurang  baik  akan  menyebabkan  infertil. Sebaiknya  dengan  jumlah  spermatozoa  yang sedikit tapi memiliki morfologi dan kecepatan normal maka masih bisa fertil. 5,6
Jumlah  spermatozoa  yang  dihasilkan sangat tergantung pada proses langsung yang terjadi selama proses spermatogenesis dalam tubulus  semineferus.  Bila  spermatogenesis berlangsung  normal  maka  akan  dihasilkan jumlah  spermatozoa  yang  normal  juga. sebaliknya jika selama proses spermatogenesis  terjadi  gangguan,  maka perkembangan  sel  spermatogonium  akan mempengaruhi  jumlah  spermatozoa  yang terbentuk.  Hal  ini  sangat  tergantung  pada besarnya  gangguan  yang  terjadi  selama proses spermatogenesis. 7
Biji  pepaya  berkhasiat  sebagai  obat cacing  gelang,  diare,  obat  masuk  angin, gangguan  pencernaan,  penyakit  kulit,  dan antibakteri. 8 Pada  tanaman  biji  pepaya terdapat kandungan zat kimia yaitu golongan fenol,  triferpenoid,  flavanoid,  alkaloid  dan saponin. Dengan adanya kandungan senyawa aktif  tersebut  biji  pepaya  memiliki  sifat antifertilitas dan dapat digunakan sebagai alat kontrasepsi  pada  pria. 9 Beberapa  penelitian juga  membuktikan  bahwa  biji  pepaya mempunyai  efek  antifertilitas. 10 Penelitian mengenai pemberian ekstrak metanol, fraksi n-heksan  dan  fraksi  metanol  biji  pepaya ( Carica papaya L) dengan dosis 100mg/KgBB berpengaruh  terhadap  penurunan  berat organ  reproduksi. 11 Bobot  testis  yang  lebih rendah  dari  kontrol  negatif  disebabkan terganggunya  oleh  pertumbuhan  dan perkembangan  sel-sel  spermatogenik  dalam organ  reproduksi  jantan.  Pemberian  ekstrak metanol,  fraksi  n-heksan  dan  fraksi  metanol biji  pepaya  mengakibatkan  terhambat  dan berkurangnya  perkembangan  sel  Leydig. Pemberian  ekstrak  biji  pepaya  dapat menyebabkan  infertil  dengan  berkurangnya jumlah sperma dan motilitas yang menurun. 12 Pemberian  ekstrak  biji  pepaya  ( Carica papaya L)  terhadap  kualitas  spermatozoa tikus  Wistar  terjadi  penurunan  kualitas spermatozoa  dalam  aspek  morfologi,  yaitu ditemukannya  abnormalitas  primer  diduga
karena  adanya  gangguan  spermatogenesis yaitu  saat  pembentukan  spermatozoa  dari spermatid, sedangkan abnormalitas sekunder diduga  terjadinya  gangguan  pada  saat maturasi spermatozoa di epididimis. 13
Biji  pepaya  mengandung  protein, beberapa  enzim  seperti  papain,  karpasemin, myrosin, alkaloid, caricain, oleanolic glycoside, carpain dan glukosinolat. Senyawa- senyawa  tersebut  terlarut  dalam  pelarut dengan tingkat kepolaran yang berbeda-beda sehingga  masing-masing  fraksi  menunjukkan aktivitas  antifertilitas  dengan  kekuatan  yang berbeda. Senyawa-senyawa tersebut mempunyai  mekanisme  dalam  memberikan efek  antifertilitas.  Pepaya  juga  mempunyai alkaloid karpain yang berpengaruh menurunkan  jumlah  spermatozoa  dan motilitas. 14 Penelitian  bertujuan  untuk mengetahui kandungan senyawa dalam fraksi dan mekanisme antifertilitas fraksi biji papaya pada tikus jantan.
2. Metode Penelitian Jenis penelitian
Penelitian  yang  dilakukan  merupakan penelitian  eksperimen  menggunakan  hewan coba  tikus  Putih  Jantan  ( Rattus  norvegicus ). Rancangan  penelitian  yang  digunakan  untuk pengelompokan  dan  pemberian  perlakuan terhadap  hewan  uji  adalah  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL),  yaitu  rancangan  dengan beberapa  perlakuan  dan  disusun  secara random untuk seluruh unit percobaan dengan teknik  post  test  only.  Kelompok  perlakuan dalam eksperimen ini adalah kelompok tikus yang diberikan ekstrak dan fraksi biji papaya ( Carica papaya L) dan kelompok kontrol diberi larutan CMC 1% secara oral.

## Objek Penelitian
Hewan  uji  yang  dilakukan  dalam penelitian  ini  adalah  Tikus  Jantan  ( Rattus norvegicus ). Sebanyak 28 ekor yang berumur
60  hari.  Hewan  ini  diperoleh  dari  Fakultas Perternakan IPB.

## Persiapan Bahan Uji
Simplisia  biji  pepaya  ( Carica  papaya L) sebanyak  1,5  kg  diekstraksi  dengan  cara maserasi.  Simplisia  biji  pepaya  lalu  lakukan maserasi dengan pelarut metanol sebanyak 1 Liter selama 2x24 jam didalam alat ekstraktor kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring. Setelah itu dilakukan proses evaporasi yaitu  larutan  yang  telah  didiamkan dimasukkan  dalam  labu,  labu  evaporasi dipasang pada evaporator dan water bath diisi dengan  air  sampai  penuh  kemudian dipanaskan  diatur  hingga  suhu  70 ℃ dan dibiarkan  sampai  larutan  etanol  memisah dengan zat aktif yang sudah ada dalam labu setelah  itu  dilanjutkan  menggunakan penangas air. Ekstrak biji pepaya yang didapat kemudian dimasukkan kedalam gelas kaca.
Proses Fraksinasi Fraksinasi  dilakukan  untuk  menarik macam-macam  senyawa  yang  terkandung dalam  ekstrak  biji  pepaya  sesuai  dengan kepolarannya,  pelarut  n-heksan  akan melarutkan  senyawa  nonpolar,  pelarut  etil asetat  akan  melarutkan  senyawa  polar  dan pelarut  etanol  air  akan  melarutkan  senyawa polar.
Proses  fraksinasi  dilakukan  dengan metode  FCC  (Fraksi  cair-cair)  yakni  ekstrak aktif dimasukkan kedalam labu pisah dengan menggunakan  pelarut-pelarut  yang  sesuai menjadi  3  fraksi  yaitu  fraksi  n-heksan,  fraksi etil asetat, dan fraksi etanol air. Dari ekstrak biji  pepaya  yang  diperoleh  dalam  tahap ekstraksi  metanol  ditambahkan  dengan perbandingan  1:1  yaitu  sebanyak  150  ml aquades  dan  ekstrak  150ml.  Selanjutnya ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak  1  L secara  bertahap,  setiap  kali  dimasukkan sebanyak  250  ml  n-heksan  dengan  4  kali pengulanagn (4x250ml)
Fraksi  metanol  dan  n-heksan  dipisahkan dengan labu pisah sehingga diperoleh fraksi n- heksan lalu diuapkan pada rotary evaporator lalu di hair dryer sampai mengental sehingga didapatkan  fraksi  berbentuk  pasta.  Fraksi metanol air dilanjutkan dengan penambahan pelarut  etil  asetat  sebanyak  1  L  secara bertahap,  setiap  kali  dimasukkan  sebanyak 250  etil  asetat  dengan  4  kali  pengulangan (4x250ml) kemudian dipisahkan dengan labu pisah sehingga diperoleh fraksi etil asetat dan fraksi  metanol  setelah  itu  dilakukan penguapan pada rotary evaporator lalu di hair dryer sampai mengental sehingga didapatkan fraksi berbentuk pasta.
Tahap  akhir  proses  fraksinasi  diperoleh tiga fraksi yaitu n-heksan, etil asetat, metanol dalam  bentuk  pasta.  Lalu  dilakukan penimbangan  fraksi  dengan  cara  timbanglah botol yang kosong sebelum diisi fraksi, selisih berat botol sebelum dan sesudah diberi fraksi adalah  berat  fraksi  yang  didapatkan.  Ketiga tahap  fraksi  yang  diperoleh  dilakukan penentuan senyawa yang dikandung masing- masing.  Setelahnya  masing-masing  fraksi diujikan dengan tikus jantan.

## Pelaksanaan Penelitian
Pada  hari  ke  25  setelah  perlakuan  tikus dikorbankan  dengan  cara  memasukkan  tikus kedalam  wadah  bertutup  yang  telah  diberi kapas  yang  mengandung  klorofom  selama  5 menit  hingga  kehilangan  kesadarannya.  Jika sudah kehilangan kesadran tikus dikeluarkan dan  dilakukan  pembedahan  dibagian  bawah abdomen  untuk  diambil  testis,  vesikula seminalis dan prostat.
Penghitungan  jumlah  spermatosit  primer dan spermatid Penghitungan  spermatosit  primer  dan spermatid  dapat  dilakukan  terhadap  seluruh tubuli  seminiferi  yang  ada  dalam  1  preparat testis  yang  dapat  diamati  dan  dihitung  atau dengan  mengambil  5  tubuli  yang  berada  di
bagian  tengah  penampang  testis.  Hasil penghitungan baik jumlah spermatosit primer dan  spermatid  dibagi  dengan  jumlah  tubuli yang  diamati.  Sehingga  untuk  satu  preparat testis diambil rata-ratanya.

## 3. Hasil Penelitian
Kelompok  senyawa  dalam  fraksi  biji pepaya  ( Carica  papaya L.)  dilakukan  uji fitokimia, ini dilakukan sebagai screening awal dalam  mengetahui  kandungan  metabolit sekunder  pada  sampel.  Dilakukan  6  uji  yaitu alkaloid,  steroid,  terpenoid,  tanin,  saponin dan  flavonoid  dari  masing-masing  fraksi. Prosedur fitokimia ini dikerjakan berdasarkan referensi  Depkes. 15 Berdasarkan  hasil  uji fitokimia  menggunakan  fraksi  biji  pepaya ( Carica  papaya L.)  didapatkan  hasil  yang ditampilkan pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji skrining fitokimia fraksi biji pepaya ( Carica papaya L.)
No  Senyawa
Metabolik Fraksi N- Heksan Fraksi Etil Asetat Fraksi Etanol Air 1. Alkaloid - - - 2. Steroid + + - 3. Terpenoid + + + 4. Tanin - _ - 5. Saponin + _ - 6. Flavonoid + + +
Pemberian  fraksi  biji  pepaya  ( Carica papaya L.) pada tikus putih jantan selama 24 hari  menunjukan  peningkatan  secara  tidak signifikan  rata-rata  berat  vesikula  seminalis dan prostat yang dapat dilihat pada tabel 2.
Berat  vesikula  seminalis  dan  prostat terlihat menurun namun tidak signifikan pada fraksi nHeksan biji pepaya sedangkan pada etil asetat meningkat secara signifikan dibandingkan kontrol dan nHeksan.
Tabel 2.  Rata-Rata berat vesikula seminalis dan prostat tikus putih jantan setelah pemberian fraksi biji pepaya selama 24 hari. Kelompok Fraksi N Berat Vesikula Seminalis dan Prostat (g) X + SEM CMC 6 1,76 ± 0,11a N.Heksan 6 1,71 ± 0,09 a Etil Asetat 6 2,03 ± 0,08 b Etanol Air 6 1,86 ± 0,03 ab
Keterangan: Angka-angka yang diikuti huruf kecil yang sama tidak berbeda nyata pada uji lanjut LSD ( p <0,05)
Pemberian  fraksi  biji  pepaya  ( Carica papaya L.) pada tikus putih jantan selama 24 hari  menunjukan  adanya  perubahan  rerata jumlah spermatosit primer yang dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Rerata jumlah spermatosit primer tikus putih jantan setelah pemberian fraksi biji pepaya selama
24 hari. Kelompok Fraksi N Jumlah Spermatosit Primer X + SEM CMC 6 56,86 ± 1,37  a N.Heksan 6 39,48 ± 1,99  c Etil Asetat 6 43,58 ± 2,21 bc Etanol Air 6 46,29 ± 2,65  b
Keterangan: Angka-angka yang diikuti huruf kecil yang sama tidak berbeda nyata pada uji lanjut LSD ( p <0,05)
Jumlah  spermatosit  primer  per  tubulus seminiferous  pada  kelompok  perlakuan signifikan  lebih  rendah  dibandingkan kelompok kontrol. Fraksi N Heksan signifikan lebih  rendah  dari  fraksi  etanol  air  setelah dilakukan uji lanjut.
Pemberian  fraksi  biji  pepaya  ( Carica papaya L.) pada tikus putih jantan selama 24 hari  menunjukan  adanya  perubahan  rerata jumlah sermatid yang dapat dilihat pada tabel 4.
Rerata  jumlah  spermatid  per  tubulus seminiferous  juga  signifikan  lebih  rendah dibandingkan  control.  Kelompok  fraksi  N
Heksan  rerata  jumlah  spermatidnya  lebih rendah  dari  kelompok  fraksi  etanol  air berdasarkan uji lanjut Games-Howell.
Tabel 4. Rerata jumlah spermatid tikus putih jantan setelah pemberian fraksi biji pepaya selama 24 hari
Kelompok Fraksi N Jumlah Spermatid X + SEM P value CMC 6 180,55  ± 11,79   a 0,00 N.Heksan 6 79,57  ± 5,56     c Etil Asetat 6 92,58  ±  7,38  bc Etanol Air 6 124,33  ± 11,82   b
Keterangan: Angka-angka yang diikuti huruf kecil yang sama tidak berbeda nyata pada uji lanjut Games-Howell ( p <0,05)

## 4. Pembahasan
Spermatogenesis  dan  fertilitas  pria tergantung  pada  kehadiran  testosterone  di dalam testis. Jika testosterone atau reseptor androgen  tidak  ada  proses  spermatogenesis tidak  sampai  ke  tahap  meosis.  Dalam penelitian  ini  terjadi  penurunan  jumlah spermatosit  primer  dan  spermatid  (tabel  3 dan  4).  Testosterone  yang  dihasilkan  sel Leydig  berdifusi  menuju  sel  target  yaitu  sel Sertoli  yang  ada  di  tubulus  seminiferous. Molekul sinyal berupa testosterone pada sel Sertoli  secara  langsung  mengubah  ekspresi gen  (classical  pathway)  atau  testosterone mengaktifkan protein kinase yang meregulasi proses yang dibutuhkan dalam spermatogenesis  (non-clasical  pathway).
Kadar testosterone yang diproduksi di dalam testis manusia lebih tinggi (340-2000nM) jika dibandingkan  dengan  serum  (8,7-35  nM). Spermatogenesis tidak diproses jika tidak ada kadar  yang  tinggi  dari  testosterone  (>70  nM pada tikus). Reseptor androgen terdapat pada sel  Leydig,  peritubular  dan  sel  Sertoli.  Sel Sertoli  adalah  target  mayor  sinyaling testosterone. Testosterone dibutuhkan untuk melanjutkan  ke  proses  meiosis  dan menyelesaikannya serta pelepasan spermatid matang 16,17
Withdrawal  testosterone  atau  knockout reseptor  androgen  pada  sel  sertoli menyebabkan  pertama,  blood  testis  barrier tidak  terintegritas  sehingga  sel-sel  germinal post meiotic membentuk lingkungan terspesial  yang  terpisah,  dapat  diserang autoimun  dan  bahan  sitotoksik.  Kedua, blockade  konversi  dari  round  spermatid  ke elongated spermatid karena kerusakan adhesi sel  yang  menyebabkan  round  spermatid premature  terlepas  dari  sel  sertoli. Spermatozoa mature tidak dapat lepas dari sel Sertoli dan difagosit oleh sel Sertoli. 16 Berat  vesikula  seminalis  dan  prostat terlihat menurun namun tidak signifikan pada fraksi nHeksan biji pepaya sedangkan pada etil asetat meningkat secara signifikan dibandingkan  kontrol  dan  nHeksan  mungkin disebabkan  oleh  kandungan  senyawa  yang ditemukan pada fraksi N Heksan yaitu steroid, terpenoid,  saponin  dan  flavonoid.  Fraksi  N Heksan ditemukan saponin sedangkan 2 fraksi yang lain tidak (tabel 1).
Saponin  dapat  berupa  steroid  dan triterpenoid  glikosida.  Efek  biologis  saponin meliputi mengganggu permeabilitas membrane,  imunostimulan,  antikarsinogenik dan  antifertilitas.  Saponin  mempunyai kemampuan  membentuk  pori-pori  pada membrane.  Steroid  saponin  secara  langsung menghambat    gen  yang  bertanggungjawab terhadap steroidogenesis. Saponin juga dapat berikatan  dengan  reseptor  steroid  karena kesamaan  struktur  kimia  saponin  dengan hormone steroid. Saponin reseptor complexe dapat  translokasi  ke  dalam  nucleus  dan mempengaruhi  pola  transkripsi.  Ginsenoside Rg3 memperlihatkan aktivitas penghambatan tergantung  dosis  pada  ekspresi  dari  gen marker  yang  mengkode  reseptor  androgen dan 5α-reductase (enzim yang mengkonversi testosteron  menjadi  bentuk  yang  lebih  aktif dihirotestosteron). 18 Sehingga dapat
dinyatakan saponin-reseptor steroid kompleks  menyebabkan  reseptor  androgen
tidak terbentuk. Hal ini juga menjelaskan hasil dari  adanya  penurunan  organ  vesikula seminalis  dan  prostat  walaupun  tidak signifikan  (fraksi  nHeksan)  yang  merupakan organ  testosterone  dependent  pada  tikus jantan.  Gangguan  pada  reseptor  androgen menyebabkan  testosterone  tidak  dapat berfungsi sebagaimana seharusnya.

## 5. Kesimpulan
Antifertilitas fraksi biji pepaya pada tikus jantan melalui mekanisme penurunan rerata jumlah spermatosit primer dan spermatid dan senyawa yang ditemukan pada fraksi nHeksan adalah steroid, terpenoid, saponin, flavonoid. Fraksi  etil  asetat  terdapat  senyawa  steroid, terpenoid  dan  flavonoid.  Fraksi  etanol  air mengandung  senyawa  terpenoid  dan flavonoid.

## Daftar Pustaka
1. BKKBN. 2014. Peningkatan Partisipasi Pria dalam ber-KB dan Kesehatan Reproduksi. BKKBN. Jakarta
2. Ernawati,  S.  2016.  Faktor  yang mempengaruhi Keluarga Berencana (KB) pria  dengan  partisipasi  pria  dalam keluarga  berencana.  JNKI.  Vol.  4,  No.2. Tahun 2016, 109-116. DOI: http//dx.doi.org/10.21927/jnki.2016.4(2) .109-116.
3. Cholifah, S., Arsyad, K.M., Basir, S. 2014. Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Pare ( Momordica  charantia L)  terhadap Struktur  Histologi  Testis  dan  Epididimis Tikus jantan ( Rattus norvegicus ) Spraque Dawley. Universitas Sriwijaya
4. de  Kretser,  D.M.,  Loveland,  K.L., Meinhardt,  A.,  Simorangkir,  D.  and Wreford,  N.  1998.  Spermatogenesis. Human  Reproduction  volume  13,  Issue suppl_1:1-8. https://doi.org/10.1093/hhumrep/13.su ppl_1.1
5. Guyton,  AC  &  Hall  JE,  1997. Buku  Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi 9 . Jakarta: EGC
6. Ashdown,  R.R.  and  E.S.E.  Hafez.  1993. Anatomy of Male Reproduction. Itz E.S.E. Hafez  (ed):  Reproduction  in  Farm Animals.  6”  ed.  Lea  &  Febiger. Philadelphia.pp: 3-1
7. Nieschlag, E. & Behre, H.M. (Eds.). 2001. Andrology  Male  Reproductive  Health  & Dysfunction. 2nd edition. Springer
8. Lestari, A.R.A, Cahyo, S.T., Wardaniati, I. &  Herli,  M.A.  2018.  Aktivitas  antibakteri seduhan  biji  papaya  (Carica  Papaya  L) terhadap  Escherichia  coli,  Salmonella thypi  dan  Staphylococcus  aureus.  JOPS- volume  1  edisis  2  Juni  2018. (https://www.resergate.net/publication/ 328576197)
9. Rajab, Z., Muslichah,S., Fajrin, F.A. 2015. Uji  Antifertilitas  fraksi  klorform  biji pepaya  ( Carica  papaya L.)  dengan  fraksi metanol  biji  saga  (Abrus  Precatorius  L.) terhadap  spermatogenesis  tikus  galur wistar.  Jurnal  Pustaka  Kesehatan  Vol.  3 No 2 :272-27
10. Christijanti,  W.  2009.  Penurunan  jumlah dan  motilitas  spermatozoa  setelah pemberian  Ekstrak  biji  pepaya  (Carica papaya L.). Boisaintifika Vol.1, No.1 : 19- 26
11. Sari, P.D., Muslichah, S., Wiratmo. 2014. Pengaruh  Ekstrak  Metanol,  Fraksi  N- Heksan,  dan  Fraksi  Metanol  Biji  Pepaya
( Carica  papaya L.)  terhadap  kadar Testoteron dan Bobot Organ Reproduksi Tikus  Jantan.  Jurnal  Pustaka  Kesehatan. Vol 2 No 3.
12. Pathak  N.,  Mishra  PK.,  Manivannan  B., Lohiya NK. 2003. Sterility due to inhibition of  sperm  motility  by  oral  administration of  benzene  chromatoghrapic  fraction  of thechloroform  extract  of  the  seeds  of Carica  papaya  in  rats. Phytomedicine  7: 325-333
13. Walansendow,  R.,  Rumbajan,  M.J.,
Tendean, Lydia. 2016. Pengaruh pemberian  ekstrak  biji  pepaya  (Carica papaya L.) terhadap kualitas spermatozoa tikus wistar (Rattus norvegicus). Jurnal e- Biomedik (eBm), Volume 4, No 1
14. Prasetyaningrum,  N,  Muslichah,  S., Hidayat,  M.A.  2015.  Pengaruh  ekstrak metanol,  Fraksi  N-  Heksana  dan  Fraksi metanol  biji  pepaya  ( Carica  papaya L.) terhadap Motilitas Spermatozoa Tikus. e-
Jurnal  Pustaka  Kesehatan,  Vol  3.  No  1. Januari 2015. https://jurnal.unej.ac.id/index.php/JPK/a rticle/view/2402
15. DEPKES  RI.  1995.  Farmakope  Indonesia. Edisi IV. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.
16. Walker,  W.H.  2011.  Testosterone signaling  and  the  regulator  of spermatogenesis.  Spermatogenesis  1:2, 116-120.
17. Smith,  L.B.  &  Walker,  W.H.  2014.  The regulation  of  spermatogenesis  by Androgens. Semen  Cell  Dev  Biol 0:2=13. Doi:10.1016/J.Semcdb.2014.02.012
18. Francis, G. Z. Kerem, H.P.S. Makkar & K. Becker.  2002.  The  biological  action  of saponins  in  animal  system:  a  review. British  Journal  of  Nutrition  88:587-605. DOI:10.1079/BJN 20027225