Vol. 07 No. 2, Agustus 2016, Hal 115-124 ISSN: 2086-8227

## UJI PATOGENISITAS PATOGEN HAWAR DAUN PADA TANAMAN KAYU AFRIKA ( Maesopsis eminii
Engl.) DI

## PERSEMAIAN PERMANEN BPDAS BOGOR
Pathogenic Assay of Leaf Blight Pathogen on Maesopsis eminii Engl. in Permanent Nursery BPDAS Bogor
Muhammad Alam Firmansyah dan Muhammad Hario Alfarisi

## Departemen Silvikultur Fakultas Kehutanan IPB

## ABSTRACT
Maesopsis  eminii (Engl.)  is  a  fast-growing  tree  species  which  are  now  begin  to  be  exploited.  This  research  was aimed to identify types of pathogens, disease incidence and severity of leaf blight disease in Maesopsis eminii seedlings. Methods  include  field  observations,  isolation  of  symptomatic  leaf  blight  and  subsequent  testing  of  Koch's  postulates. Results of field observations indicating that the incidence of the disease is at 99.44%, while the severity of the disease by 8.85%. When isolation of symptomaticleaf blight was found 8 kinds of isolate that have different colors. The isolates were found in plants are then inoculated on Maesopsis eminii, and almost all isolates can causing the symptoms of leaf blight. The  result  of  Koch's  postulates  inoculated  leaf,  found  two  types  of  isolates  were  identical  to  the  initial  isolation. Pathogenicity  test  results  showing  isolates  with  1.1  code  has  the  highest  percentage  value  of  disease  incidence  and severity than the other isolates. The identification results show the isolates with 1.1 code is a type of fungus characterized by having sectional hyphae and contained conidia, this fungus belongs to a class of Deuteromycetes.
Key words:  Fungus, Koch's postulates, leaf blight, Maesopsis eminii Engl., severity of  disease

## PENDAHULUAN
Tanaman budidaya adalah tanaman yang mempunyai  kriteria  cepat  tumbuh  dan  bermanfaat  bagi masyarakat. Salah  satunya adalah  kayu  afrika ( Maesopsis  eminii Engl.)  yang  merupakan  jenis tanaman  kehutanan  dari  kelas  biji  berkeping  dua  dan famili Rhamnaceae .
Tanaman  kayu  afrika  tumbuh  tersebar  alami  di daerah  Jawa  Barat  dan  banyak  dimanfaatkan  untuk konstruksi  ringan,  peti  kemas,  kotak  kayu  dan  bahan plywood (Zulhanif  2000;  Dephut  2002).  Selain  itu, tanaman  ini  sangat  cocok  dikembangkan  untuk pembangunan  hutan  tanaman  karena  tanaman  kayu afrika  termasuk  dalam  jenis  tanaman fast  growing spesies (FGS).
Telah  ditemukan  penyakit  daun  pada  tanaman  kayu afrika  di  persemaian  permanen  BPDAS  Bogor  pada tahun  2014  dengan  gejala  hawar  yang  dapat menyebabkan  vigoritas  tanaman  terganggu.  Penyakit tersebut  mengganggu  pertumbuhan  tanaman  karena dapat  mengganggu  proses  fotosintesis  dan  pada serangan  lanjut  menyebabkan  tanaman  mati.  Tanaman yang akan ditanam di area terbuka sebagai pengisi hutan tanaman industri harus memiliki vigoritas tanaman yang baik  dan  bebas  dari  penyakit.  Tanaman  yang  terserang penyakit sebelum ditanam di lapangan akan menyebabkan  tanaman  tersebut  mati  atau  terjadi gangguan  dalam  pertumbuhannya  sehingga  merugikan proses pembangunan hutan tanaman industri.
Pengendalian  penyakit  hawar  pada  tanaman  kayu afrika  yang  efektif  dan  efisien  perlu  dilakukan  dan
dikembangkan untuk mengurangi resiko kerugian secara ekologis dan ekonomi. Langkah awal dalam pengendalian  yang  efektif  adalah  identifikasi  penyebab penyakit  hawar  dan  pengujian  Postulat  Koch  untuk membuktikan penyebab primer penyakit tersebut.

## Perumusan Masalah
Penyakit  hawar  daun  pada  tanaman  kayu  afrika  di persemaian  merupakan  kendala  yang  harus  segera ditangani  dengan  cara  pengendalian  yang  efektif. Identifikasi penyakit hawar daun dan pengujian Postulat Koch  untuk  membuktikan  penyebab  penyakit  hawar daun  merupakan  langkah  awal  yang  penting  untuk menentukan alternatif cara pengendalian penyakit hawar daun pada tanaman kayu afrika di persemaian.

## Tujuan Penelitian
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  tingkat kejadian  penyakit,  tingkat  keparahan  penyakit  dan penyebab  penyakit  hawar  daun  pada  tanaman  kayu afrika  di  persemaian  permanen  BPDAS  Citarum- Ciliwung Bogor.

## METODE PENELITIAN

## Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  di  persemaian  permanen BPDAS  (Balai  Pengelola  Daerah  Aliran  Sungai) Citarum-Ciliwung  dan  di  Laboratorium  Penyakit Departemen  Silvikultur  Fakultas  Kehutanan  Institut
Pertanian  Bogor.  Waktu  pelaksanaan  penelitian  dari bulan Juli 2014 sampai dengan November 2014.

## Kondisi Umum
Persemaian  permanen  adalah  persemaian  yang dibuat  menetap  pada  suatu    lokasi    dengan    organisasi yang  mapan  dan  personil  pelaksana  yang  tetap  dan terpilih,  memiliki  kelengkapan  sarana  dan  prasarana dengan  menggunakan  teknologi    modern    dalam produksi    bibit    yang    memungkinkan    pelaksanaan pekerjaan  dilakukan  secara  efektif  dan  efisien. Curah hujan di  wilayah  Dramaga  berkisar  antara 3 000 – 3 500  mm/tahun.  Suhu  dan  kelembaban  (RH)  rata-rata sebesar  29 o C  dan  67%,  sedangkan  suhu  dan kelembaban pada bulan awal Oktober hingga pertengahan  Oktober  tahun  2014  di  daerah  persemaian permanen
BPDAS
Citarum-Ciliwung Bogor menunjukkan  kisaran  sebesar  28.57 o C.  Suhu  terendah rata-rata  sebesar  23.35 o C,  sedangkan  suhu  tertinggi sebesar  33.21 o C.  Kelembaban  rata-rata  selama  2 minggu pada awal Oktober hingga pertengahan Oktober sebesar  67%.  Rata-rata  kelembaban  tertinggi  sebesar 86.78% sedangkan terendah sebesar 42.42% (Departemen Kehutanan, 2010)
Lokasi  Persemaian  permanen  terletak  di Kampus IPB    Dramaga    pada    koordinat    06°33,    247‘    lintang selatan dan 106°43, 640’ bujur timur. Lokasi ini terletak di  antara  dua  Daerah  Aliran  Sungai  (DAS),  yaitu  di DAS Cisadane dan DAS Ciliwung.

## Bahan
Bahan yang digunakan adalah daun bibit kayu afrika yang  sakit  sebagai  bahan  sumber pembuatan  inokulum, bibit  kayu  afrika  yang  sehat  berumur  3  bulan,  isolat patogen,  karborundum,  media  PDA  ( Potato  Dextrose Agar ), PDB ( Potato Dextrose Broth ), air steril, aquadest, alkohol  70%,  NaOCl  1%,  HCL,  spiritus,  kapas, cotton bud , plastic wrap dan kertas label.

## Alat
Alat  yang digunakan adalah laminar air flow , oven, autoclave ,  kamera  foto,  plastik,  alat  penyiram, mikroskop, Erlenmeyer ,  cawan  Petri,  tabung  reaksi, lampu bunsen ,  bor  gabus  ( Cork  borer ),  gelas  objek, gelas  penutup,  sudip,  pinset,  alat  tulis  dan  alat  hitung serta software pengolah data SAS.

## Metode Kerja
Pengambilan  Bagian  Daun  yang  Terkena  Hawar Daun
Tanaman  kayu  afrika  yang  memperlihatkan  gejala hawar  daun  diambil  secara  acak  dari  persemaian permanen BPDAS Citarum-Ciliwung. Selanjutnya, daun yang  menunjukkan  gejala  penyakit  hawar  dibawa  ke laboratorium  sebagai  bahan  untuk  tahapan  penelitian berikutnya.

## Isolasi cendawan dari jaringan tanaman sakit
Jaringan  daun  yang  memperlihatkan    gejala  hawar dipotong ±0.5 cm yang meliputi jaringan daun sakit dan
jaringan  daun  sehat.  Potongan  jaringan  daun  kemudian disterilisasi  permukaan  dengan  cara  direndam  dalam larutan NaOCl 1% selama ± 2 menit, lalu dicuci dengan air  steril  sebanyak  3  kali.  Selanjutnya  potongan  daun dikeringkan  di  atas  kertas  saring  steril  di  dalam  cawan Petri,  lalu  ditanam  pada  media  tumbuh  PDA.  Potongan jaringan    tanaman    pada    media    PDA  diinkubasi selama    ±    6    hari  pada  suhu  ruang  ±  28  ºC.  Koloni miselium  yang  tumbuh  dari  potongan  jaringan kemudian  dimurnikan  dan  diperbanyak  pada  media PDA.  Isolat  cendawan  selanjutnya  digunakan  sebagai bahan untuk identifikasi penyebab primer dan pengujian Postulat Koch (Akrofi dan Amoah 2009).

## Uji Postulat Koch
Uji  postulat  Koch  bertujuan  untuk  membuktikan bahwa isolat  yang diperoleh  merupakan agen penyebab dari  gejala  penyakit  yang  diamati.  Kegiatan  ini  terdiri atas  inokulasi  isolat  pada  tanaman  contoh,  reisolasi jaringan  tanaman  yang  memperlihatkan  gejala,  dan identifikasi isolat hasil reisolasi.
Tanaman  contoh  yang  digunakan  merupakan  bibit kayu  afrika  umur  ±  4  bulan  dari  penyapihan.  Setiap isolat  cendawan  diinokulasikan  terhadap  8  bibit  kayu afrika  dan  diberi  2  perlakuan,  yaitu  dilukai  dan  tidak dilukai,  pelukaan  menggunakan  serbuk  karborundum. Inokulasi  dilakukan  pada  sore  hari  menggunakan metode  oles  dengan  cara  mengoles  isolat  yang  ditanam pada  media  PDB  dengan  menggunakan  kuas  ke  daun (Ahmad et al., 2012).
Penyiapan  sumber  inokulum  pengolesan  cendawan dilakukan  berdasarkan  dari  metode  Ismail et  al. (2012) dengan  modifikasi  menggunakan  media  PDB.  Sumber inokulum  diperoleh  dari  isolat  di  media  PDB  ( Potato Dextrose  Broth )  berumur  10  hari  yang  telah  ditanam biakan  isolat  media  PDA  dengan cork  borer (Ø  7  mm) berumur 5 hari. Setelah itu koloni isolat cendawan yang telah  berumur  10  hari  di  media  PDB  tersebut  diaduk menggunakan  blender  agar  tercampur  rata.  Kemudian dioles  dengan  kuas  ke  seluruh  permukaan  daun. Perlakuan  pelukaan  menggunakan  bubuk  karborundum yang  dioles  dengan cotton  bud, setelah  itu  diamati selama ± 30 hari atau sampai muncul gejala.
Reisolasi  cendawan  dilakukan  dari  daun  yang menunjukkan  gejala  hawar  setelah  dilakukan  inokulasi buatan.  Hasil  reisolasi  kemudian  diidentifikasi  dan dibandingkan  dengan  isolat  yang  digunakan  untuk inokulasi  buatan.  Apabila  isolat  cendawan  yang diinokulasikan  menghasilkan  gejala  hawar  daun  dan teridentifikasi  sebagai  cendawan  yang  identik  dengan gejala hawar daun, maka cendawan tersebut merupakan penyebab dari penyakit hawar daun.

## Uji Patogenisitas
Uji patogenisitas dilakukan terhadap isolat cendawan  yang  mampu  menghasilkan  gejala  identik dengan  gejala  alami  penyakit  hawar  daun.  Tahapan  ini dilakukan  dengan  metode  yang  sama  dengan  tahapan postulat  Koch.  Tanaman  contohnya  berumur  ±  4  bulan penyapihan. Tanaman yang telah diinokulasi selanjutnya  diinkubasi  di  bawah  paranet  dengan menggunakan  rancangan  percobaan  acak  lengkap dengan satu faktor, yaitu macam isolat cendawan.
Tabel 1  Perlakuan pengujian terhadap bibit kayu afrika
Kode Perlakuan A1 Penempelan sumber inokulum 1.1 pada daun bibit kayu afrika dengan disertai pelukaan A2 Penempelan sumber inokulum 1.2 pada daun bibit kayu afrika dengan disertai pelukaan A3 Penempelan sumber inokulum 2.1 pada daun bibit kayu afrika dengan disertai pelukaan A4 Penempelan sumber inokulum 3.1 pada daun bibit kayu afrika dengan disertai pelukaan A5 Penempelan sumber inokulum 3.3 pada daun bibit kayu afrika dengan disertai pelukaan A6 Penempelan sumber inokulum 4.3 pada daun bibit kayu afrika dengan disertai pelukaan A7 Penempelan sumber inokulum 5.1 pada daun bibit kayu afrika dengan disertai pelukaan A8 Penempelan sumber inokulum 5.2 pada daun bibit kayu afrika dengan disertai pelukaan A9 Penempelan sumber inokulum kosong pada daun bibit kayu afrika dengan disertai pelukaan B1 Penempelan sumber inokulum 1.1 pada daun bibit kayu afrika tanpa disertai pelukaan B2 Penempelan sumber inokulum 1.2 pada daun bibit kayu afrika tanpa disertai pelukaan B3 Penempelan sumber inokulum 2.1 pada daun bibit kayu afrika tanpa disertai pelukaan B4 Penempelan sumber inokulum 3.1 pada daun bibit kayu afrika tanpa disertai pelukaan B5 Penempelan sumber inokulum 3.3 pada daun bibit kayu afrika tanpa disertai pelukaan B6 Penempelan sumber inokulum 4.1 pada daun bibit kayu afrika tanpa disertai pelukaan B7 Penempelan sumber inokulum 5.1 pada daun bibit kayu afrika tanpa disertai pelukaan B8 Penempelan sumber inokulum 5.2 pada daun bibit kayu afrika tanpa disertai pelukaan B9 Penempelan sumber inokulum kosong pada daun bibit kayu afrika tanpa disertai pelukaan
Gambar 1 Rancangan  petak  utama  (yaitu  A  :  Dilukai;  B.  Tanpa  dilukai)  pada  pelaksanaan  pengujian  dengan rancangan acak lengkap
Parameter  yang  diamati  dari  kegiatan  ini  adalah kejadian  penyakit  dan  keparahan  penyakit.  Kejadian penyakit  ditentukan  dengan  menggunakan  rumus (Agrios 1988):
P  a b   100
Keterangan : KP  : persentase kejadian penyakit hawar daun a : jumlah tanaman yang menunjukkan gejala penyakit hawar daun
b : jumlah tanaman yang diamati
Keparahan  penyakit  ditentukan  dengan  meng- gunakan  skoring  dari  0-5  (Tabel  2).  Rumus  (Towsend 1963  dalam  Kadeni  1990)  yang  digunakan  sebagai berikut :
P ∑ n   v 100
Keterangan : P  : persentase keparahan penyakit
N  :  jumlah  daun  yang  terkena  hawar  daun  setiap kategori
v  :  nilai  numerik  dari  setiap  kategori  serangan  hawar daun
N  :  jumlah daun yang diamati
Z  :  nilai numerik dari kategori serangan tertinggi Tabel 2  Katagori  tingkat  infeksi  (UnstenhÖfer  1976) yang telah dimodifikasi Kode Tingkat Kerusakan / Gejala serangan (%) Tingkat Ketahanan Inang Terhadap Penyakit 0 0 Imun (Kebal) / Sangat Tahan (ST) 1 1-5 Tahan (T) 2 6-15 Agak Tahan (Toleran) (AT) 3 16-50 Agak Rentan (Toleran) (AR) 4 50-75 Rentan (R) 5 ≥75 Sangat Rentan (SR)
Identifikasi
Identifikasi cendawan dilakukan berdasarkan karakter morfologi secara makroskopis dan mikroskopis, yaitu  meliputi  warna  dan  bentuk  konidia.  Identifikasi dilakukan  dengan  bantuan  buku  panduan  identifikasi fungi imperfekti menurut Barnett dan Hunter (1999).

## Analisis Data
Analisis  statistik  untuk  penelitian  ini  menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Menurut Stell (1980), model yang digunakan adalah sebagai berikut :
ijk i
ik j ij ijk
Keterangan :
Y ijk :   Intensitas  serangan  pada  ulangan  ke-k  yang memperoleh  taraf  ke-i    dari    faktor  inokulasi dan taraf ke-j dari faktor pelukaan
µ :   Nilai  rata-rata  intensitas  serangan  yang  se- sungguhnya
i :   Pengaruh  utama  dari  taraf  ke-i  faktor inokulasi
ik :   Pengaruh  galat  yang  muncul  pada  taraf  ke-i dari faktor inokulasi dalam ulangan ke-k
j :   Pengaruh  utama  dari  taraf  ke-j  faktor pelukaan
ij :   Pengaruh  interaksi  taraf  ke-i  faktor  inokulasi dan taraf ke-j faktor pelukaan
ijk :   Pengaruh  galat  pada  ulangan  ke-k  yang memperoleh  taraf  ke-i  faktor  inokulasi  dan taraf  ke-j  faktor  pelukaan  yang  telah dimodifikasi

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Gejala  Penyakit  Hawar  Daun  pada  Tanaman  Kayu Afrika
Berdasarkan  hasil  pengamatan  gejala  penyakit  di lokasi  persemaian,  penyakit  hawar  daun  pada  bibit tanaman kayu afrika menunjukkan gejala  nekrosis pada bagian  permukaan  daun.  Gejala  nekrosis  yang berkembang  pada  bagian  daun  menyebabkan  daun berubah  warna  menjadi  coklat  kemudian  berbintik  dan menyebar  dengan  cepat  sehingga  menyebabkan  daun menjadi kering dan rontok.
Gejala  suatu  penyakit  merupakan  informasi  penting untuk mengetahui keadaan kesehatan tanaman. Menurut Martoredjo  (1984),  gejala  adalah  perubahan  yang ditunjukkan  oleh  tanaman  itu  sendiri  sebagai  reaksi terhadap  patogen.  Sedangkan  Widyastuti et  al. (2005) menjelaskan  gejala  penyakit  pada  tanaman  merupakan bentuk  penyimpangan  baik  morfologi  atau  fisiologi sebagai  respon  dari  adanya  gangguan  patogen.  Respon tanaman  terhadap  penyakit  berbeda-beda,  bergantung pada  jenis  tanaman  inang  dan  patogen  penyebab penyakit.  Apabila  terjadi  kematian  seluruh  atau sebagian  anggota  tumbuhan  secara  cepat,  penyakit  ini disebut penyakit hawar (Rahayu 1999).
Berdasarkan hasil pengamatan di lapangan persentase  kejadian  penyakit  bibit  kayu  afrika  di
persemaian  BPDAS  Citarum-Ciliwung  Bogor  sebesar 99.44%.  Nilai  ini  menunjukkan  penyakit  hawar  daun pada  bibit  tanaman  kayu  afrika  sangat  luas  dan  hampir di seluruh tanaman. Sementara nilai keparahan penyakit hawar  daunnya  sebesar  8.85%.  Penyebaran  dari penyakit  ini  sangat  cepat  diakibatkan  bibit  kayu  afrika yang  masih  muda  sehingga  rentan  terserang  penyakit sementara keparahan penyakit saat pengamatan menunjukkan  nilai  yang  tidak  terlalu  besar  karena jumlah  bibit  dengan  katagori  parah  dan  katagori  ringan sangatlah berbeda, katagori ringan berjumlah 2 785 bibit sedangkan  katagori  berat  berjumlah  122  bibit.  Hal  ini disebabkan  penerapan  perlakuan  fungisida  terhadap semai.
Goodman et  al. (1967)  menyatakan  bahwa cendawan  patogen  dapat  melakukan  penetrasi  pada jaringan  tanaman  dengan  tiga  cara,  yaitu  secara langsung  melalui  permukaan  inang  yang  utuh,  melalui lubang alami atau  melalui luka. Cendawan lebih  umum melakukan  penetrasi  pada  permukaan  jaringan  inang melalui  lubang  alami  seperti  stomata,  lentisel,  nektar, himatoda  atau  melalui  luka.  Tabel  4  menunjukkan bahwa saat pengujian inokulasi  pada uji Postulat Koch, gejala  serangan  hawar  daun  terlihat  pada  bibit  diberi perlakuan inokulasi dengan atau tanpa pelukaan. Hal ini menunjukkan  bahwa  patogen  penyebab  hawar  daun kayu  afrika  menginfeksi  inang  melalui  lubang  alami maupun pelukaan.
Setelah  patogen  masuk  ke  dalam  jaringan  tanaman, akan terjadi interaksi antara tanaman inang dan patogen yang  disebut  infeksi.  Di  dalam  jaringan  tanaman, patogen  terus  berkembang  yang  disebut  dengan  invasi. Selanjutnya  hal  ini  yang  akan  menimbulkan  gejala berupa bercak pada daun.
Bila  daun  pada  suatu  tanaman  terus  menerus mengalami penyakit hawar daun ini dalam jangka waktu yang  lama,  maka  dapat  menimbulkan  intensitas serangan  yang  tinggi  dan  menyebabkan  kematian. Selama  masih  ada  daun  yang  sehat,  baik  itu  berupa pucuk  ataupun  daun  yang  tua,  maka  bibit  dapat melangsungkan  hidupnya,  dengan  syarat  daun  yang sakit  sudah  rontok  seluruhnya  dan  faktor  lingkungan sekitar tidak mendukung untuk perkembangan penyakit.
Pada awal pengamatan hingga satu minggu pertama, perkembangan  penyakit  hawar  daun  cukup  cepat.  Hal ini  terlihat  dari  jumlah  daun  yang  terserang  cukup banyak. Perkembangan penyakit hawar daun mengalami penurunan  pada  minggu  berikutnya  yang  diduga disebabkan  adanya  peningkatan  ketahanan  tanaman seiring bertambahnya umur tanaman.
Perkembangan  suatu  penyakit  didukung  oleh  tiga faktor,  yaitu  inang  yang  rentan,  patogen  yang  virulen dan  lingkungan  yang  mendukung.  Bibit  kayu  afrika sebagai  inang  dapat  dikatakan  rentan  terhadap  hawar daun  yang  disebabkan  oleh  patogen.  Menurut    Tainter (1996)  ada  beberapa  faktor  yang  memungkinkan penyakit dapat berkembang dan menyebar dengan baik, yaitu  adanya  tanaman  inang  (tanaman  hutan)  yang rentan  dalam  jumlah  cukup,  adanya  patogen  yang virulen,  kondisi  lingkungan  yang  sesuai  untuk perkembangan penyakit tersebut dan manusia yang ikut mendukung  timbul  atau  tidaknya  suatu  penyakit.
Goodman et  al. (1967)  menjelaskanbahwa  senyawa metabolit  yang  dihasilkan  tanaman  inang  dapat dilumpuhkan  dan  dinonaktifkan  oleh  patogen.  Patogen
terbukti  memiliki  daya  virulensi  yang  tinggi  yaitu keberhasilan  untuk  menyebabkan  suatu  penyakit  pada inang.
Gambar 2  Gejala penyakit hawar daun pada tanaman kayu afrika
Gambar 3  Berbagai macam cendawan hasil isolasi
Gambar 4  Hasil inokulasi isolat: (A) Isolat 1.1, (B) Isolat 1.2, (C) Isolat 3.3, (D)   Isolat 5.2, (E) Kontrol
A B C D
E
Gambar 5  Intensitas penyakit: (A) persentase kejadian penyakit, (B) persentase keparahan penyakit
Gambar 6 Hasil reisolasi daun yang terkena gejela hawar daun pada beberapa isolat : (A) Isolat dengan kode 1.1, (B) Isolat dengan kode 3.1. (C) Reisolasi isolat dengan kode 1.1, (D) Reisolasi isolat dengan kode 3.1
Gambar 7  Persentase intensitas penyakit 81.25% 31.58% 62.16% 0% 23.13% 11.25% 19.38% 0% 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% 1.1 1.2 3.1 K inte ns it a s peny a k it Jenis isolat Kejadian penyakit Keparahan penyakit
(A) (B)
A B C D
Gambar 8 Pengamatan  makroskopis  dan  mikroskopis  pada  isolat  dengan  kode  1.1  yang  memperlihatkan  gejala hawar daun : (A) isolat 1.1 pada pengamatan makroskopis, (B) konidia isolat dengan kode 1.1
Tabel 3  Karakteristik Makroskopis Isolat Cendawan.
Kode isolat Warna 1.1 Hitam 1.2 Putih kehitaman 2.1 Hitam agak putih 3.1 Putih transparan 3.3 Putih pekat 4.3 Putih agak gelap 5.2 Putih kecokelatan 5.3 Coklat transparan dengan    corak titik menyebar
Penularan  penyakit  terjadi  apabila  adanya  sentuhan jaringan  tanaman  yang  sakit  dengan  jaringan  tanaman yang  sehat.  Dalam  hal  ini  sesuai  dengan  kondisi Persemaian BPDAS Citarum-Ciliwung, yakni bibit kayu afrika saling berdekatan dan saling menyentuh sehingga dapat menyebabkan penyebaran penyakit yang luas.

## Isolasi Cendawan
Sebanyak 8 isolat cendawan dapat diisolasi dari bibit tanaman kayu afrika yang menunjukkan gejala penyakit hawar  daun  yang  berbeda-beda.  Hal  ini  disebabkan karena  fungi  sebagai  patogen  menunjukkan  keragaman yang  hebat  dalam  bentuk  dan  warna,  fungsi  dan  asal mula hidupnya (Bilgrami 1976).

## Postulat Koch
Inokulasi  dilakukan  dengan  metode  oles.  Nekrosis ada yang berawal dari tulang tanaman kemudian merata pada  Gejala  yang  muncul  setelah  tanaman  kayu  afrika diinokulasi berupa nekrosis pada daun yang bagian daun yang  belum  terkena  sehingga  bagian  yang  terinfeksi akan terlihat berwarna kecoklatan dan kehitaman.
Isolat  yang  mampu  menghasilkan  gejala  pada tanaman  kayu  afrika  yang  diinokulasi  adalah  isolat dengan  kode  1.1,  1.2,  3.1,  3.3  dan  5.2  secara  umum dapat  menghasilkan  gejala  pada  daun  yang  dilukai  dan yang  tidak.  Akan  tetapi  hanya  2  isolat  yang  mampu menyebabkan  gejala  hawar  daun  yaitu  isolat  dengan kode  1.1  dan  3.1.  Sedangkan  isolat  yang  lain  kurang menunjukkan gejala pada tanaman yang tidak dilukai.
Tabel 4  Hasil  inokulasi  tanaman  kayu  afrika  bergejala
hawar daun Kode isolat Perlakuan Dilukai Tidak dilukai 1.1 √ √ 1.2 √ - 2.1 - - 3.1 √ √ 3.3 √ - 4.3 - - 5.2 √ - 5.3 - - K - -
Pada Tabel 4 di atas terdapat 8 jenis isolat yang diuji postulat  Koch  pada  tanaman  kayu  afrika.  Berdasarkan hasil  inokulasi  pada  rangkaian  postulat  Koch  dapat diketahui  bahwa  terdapat  6  isolat  yang  diuji  bersifat patogenik terhadap bibit kayu afrika.
Kegiatan  postulat  Koch  merupakan  rangkaian kegiatan  yang  dilakukan  untuk  membuktikan  faktor penyebab suatu penyakit tanaman. Suatu mikroba dapat dikatakan sebagai agen penyebab primer suatu penyakit apabila  memenuhi  kaidah  Postulat  Koch  sebagai berikut  :  Patogen  membentuk  asosiasi  yang  tetap dengan penyakit. Patogen  dapat  diisolasi  dari  jaringan sakit    dan    dapat    ditumbuhkan    pada  media  buatan, Kultur  murni  hasil  isolasi  dapat  diinokulasikan  pada tanaman    sehat    dan    menghasilkan  gejala  yang  sama seperti penyakit sebelumnya. Patogen  dapat  direisolasi dari  tanaman  sakit  dan  memiliki  karakter  yang sama dengan patogen sebelumnya (Agrios 2005).
Berdasarkan  hasil  inokulasi  pada  rangkaian  postulat Koch dapat diketahui bahwa sebagian besar isolat yang diuji  bersifat  patogenik  terhadap  bibit  kayu  afrika. Meskipun demikian, tidak semua isolat dapat menghasilkan  gejala  yang  identik  pada  perlakuan  bibit yang  dilukai  dengan  karborundum  maupun  yang  tidak dilukai.
Inokulasi  isolat  cendawan  1.1  pada  bagian  daun menimbulkan  nekrosis  yang  menyebar  merata  pada daun  yang  diinokulasi  dengan  perlakuan  daun  yang telah  dilukai  maupun  yang  tidak  dilukai.  Nekrosis
A B Konidia Hifa
berawal  dari  bintik  kemudian  pada  hari  ke-5  menyebar luas  pada  bagian  daun,  terlihat  peningkatan  persentase yang  cukup  cepat  pada  hari  ke-5  (Gambar  5).  Nekrosis mengalami  perubahan  dari  coklat  hingga  kemerah merahan  dan  gelap  kemudian  daun  menjadi  berwarna hitam,  layu  dan  kering.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa cendawan  dapat  memasuki  jaringan  inang  melalui  luka atau penetrasi langsung. Isolat cendawan 1.1 menimbulkan  gejala  yang  identik  dengan  penyakit hawar daun pada tanaman kayu afrika.
Inokulasi  isolat  cendawan  1.2  pada  bagian  daun dengan  cara  dioles  menimbulkan  nekrosis  akan  tetapi tidak  terlalu  parah,  karena  nekrosis  tidak  berkembang, hanya  menyebabkan  warna  kehitaman  pada  sekitar tulang  daun.  Isolat  ini  hanya  menimbulkan  gejala nekrosis pada perlakuan tanaman yang dilukai saja. Hal ini  menunjukkan  bahwa  cendawan  dapat  memasuki jaringan  inang  melalui  luka  saja.  Isolat  cendawan  1.2 dapat menimbulkan gejala yang identik dengan penyakit hawar daun.
Inokulasi  isolat  cendawan  2.1  tidak  menimbulkan gejala  nekrosis  pada  daun  baik  yang  dilukai  maupun tidak  dilukai.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  isolat cendawan  ini  tidak  dapat  memasuki  jaringan  inang sehingga  cendawan  tidak  dapat  menimbulkan  gejala yang identik dengan penyakit hawar daun.
Inokulasi isolat cendawan 3.1 pada daun menimbulkan gejala nekrosis setelah masa inkubasi  2-3 hari.  Nekrosis  kurang  berkembang  ke  seluruh  daun. Bagian  daun  yang  mengalami  nekrosis  selanjutnya mengalami perubahan warna dari coklat hingga menjadi gelap.  Isolat  membentuk  nekrosis  pada  tanaman  yang dilukai maupun tidak dilukai, akan tetapi pada tanaman yang  tidak  dilukai,  penyebaran  gejala  nekrosisnya sangat  rendah.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  cendawan dapat  memasuki  jaringan  inang  melalui  luka  atau penetrasi  langsung.  Isolat  cendawan  3.1  dapat menimbulkan  gejala  yang  identik  dengan  penyakit hawar daun.
Inokulasi isolat cendawan 3.3 pada daun menimbulkan  gejala  nekrosis  hanya  pada  daun  yang dilukai saja. Gejala nekrosis hanya terbatas pada bagian daun  yang  dilukai.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa cendawan hanya dapat memasuki jaringan inang melalui luka  saja.  Isolat  cendawan  3.3  dapat  menimbulkan gejala yang identik dengan penyakit hawar daun.
Inokulasi  isolat  cendawan  4.3  tidak  menunjukkan gejala  hawar  daun,  dikarenakan  isolat  tersebut  diduga tidak  bersifat  patogenik.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa cendawan tidak dapat memasuki jaringan inang melalui luka atau penetrasi langsung.  Isolat cendawan 4.3 tidak dapat menimbulkan gejala yang identik dengan penyakit hawar daun.
Isolat  cendawan  5.2  menimbulkan  gejala  nekrosis pada daun Kayu  Afrika.  Gejala nekrosis hanya terbatas pada  beberapa  titik  yang  terkena  hifa  dari  hasil  olesan dan  tidak  menyebar.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa cendawan hanya dapat memasuki jaringan inang melalui luka  saja.  Isolat  cendawan  5.2  dapat  menimbulkan gejala yang identik dengan penyakit hawar daun.
Daun  Kayu  Afrika  yang  diinokulasi  dengan  cara diolesi  isolat  cendawan  5.3  tidak  menunjukkan  gejala Hawar.  Diduga  isolat  tersebut  bersifat  non-patogenik. Isolat  cendawan  5.3  tidak  dapat  menimbulkan  gejala yang identik dengan penyakit hawar daun.
Inokulasi dari inokulum tanpa isolat tidak menimbulkan  gejala  nekrosis  pada  daun  yang  dilukai maupun  tidak  dilukai.  Dikarenakan  tidak  adanya  isolat sehingga  tidak  akan  menyebabkan  gejala  penyakit hawar daun.
Hasil  reisolasi  dari  bagian  tanaman  yang  bergejala kemudian diperoleh cendawan hasil dari inokulasi pada tiap  tanaman  tesebut  yakni  tanaman  dengan  kode  1 muncul  cendawan  yang  identik  dengan  hasil  reisolasi isolat  kode  1.1,  begitu  juga  dengan  tanaman  kode  4 yang  identik  dengan  inokulasi  kode  isolat  3.1 (Gambar 6).
Cendawan  yang  telah  diinokulasi  pada  tanaman kayu afrika dan menimbulkan gejala hawar daun, dapat direisolasi dari tanaman kayu afrika yang menunjukkan gejala.  Pada  Gambar  diatas  hasil  dari  reisolasi  dari tanaman yang daunnya bergejala hawar daun pada kode tanaman  1,  hasil  isolatnya  berwarna  hitam  gelap  sesuai dengan  ciri-ciri  isolat  1.1  pada  Gambar  6C,  sedangkan pada  tanaman  dengan  kode  4  yang  telah  direisolasi sesuai  dengan  ciri  isolat  saat  proses  inokulasi  yakni berwarna  putih  transparan.  Berdasarkan  postulat  Koch, cendawan  yang  diduga  sebagai  penyebab  penyakit hawar  daun  pada  tanaman  kayu  afrika  adalah  isolat dengan kode 1.1 dan 3.1.

## Uji Patogenisitas
Cendawan  yang  digunakan  dalam  uji  patogenisitas adalah  cendawan  dengan  kode  1.1,  1.2  dan  3.1.  Ketiga isolat  tersebut  mampu  menimbulkan  gejala  nekrosis pada  daun.  Masa  inkubasi  sampai  timbul  gejala  adalah 1-3 hari. Gejala berkembang  relatif cukup cepat hingga pada  inkubasi  hari  ke-5  daun  tanaman  mulai  terlihat bercak  nekrotik  kemudian  gejala  berkembang  hingga menyebabkan ada beberapa daun  tanaman  yang hampir setengah  permukaan  daun  berubah  warna  kecoklatan kemudian daun tersebut gugur.
Kejadian  penyakit  yang  ditimbulkan  kedua  isolat tersebut  cukup  beragam.  Persentase  kejadian  penyakit paling  tinggi  dihasilkan  oleh  isolat  dengan  kode  A1 sebesar 81.25% kemudian diikuti isolat dengan kode A4 sebesar  62.16%  dan  yang  terakhir  yang  paling  rendah yaitu isolat dengan kode A2 sebesar 31.58% (Gambar 7) hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa  perlakuan isolat  berpengaruh  nyata  terhadap  persentase  kejadian penyakit pada tanaman Kayu  afrika (lampiran 1).  Hasil uji  lanjut  Duncan  menunjukkan  bahwa  isolat  A1 berbeda nyata dengan isolat A2 dan A4 dan kontrol.
Persentase keparahan penyakit paling tinggi dihasilkan  oleh  isolat  A1  sebesar  23.13%,  kemudian diikuti isolat A4 sebesar 19.38% dan yang paling rendah isolat  A2  sebesar  11.25% . Semua  jenis  isolat  tidak menyebabkan  kematian  pada  tanaman  dan  tidak menyebabkan  kerontokan  pada  seluruh  daun,  hanya menyebabkan  beberapa  daun  saja  yang  mengalami gejala  nekrosis  hingga  menyebabkan  daun  tersebut rontok.  Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa inokulasi  berpengaruh  nyata  terhadap  tanaman  kayu afrika.  Berdasarkan  lanjutan  uji  Duncan,  isolat  A1
berbeda  nyata  dengan  isolat  1.2,  3.1 dan  kontrol.  Isolat dengan kode  1.1, 1.2 dan  3.1  yang diinokulasikan pada bibit  kayu  afrika  dapat  berkembang  dengan  cepat  di dalam jaringan tanaman. Cendawan ini dapat menyebabkan  daun  bergejala  nekrotik  dan  perubahan warna daun menjadi kecoklatan.
Inokulasi  merupakan  tahap  awal  dari  suatu  siklus penyakit.  Tahap  ini  selanjutnya  akan  diikuti  tahap penetrasi,  infeksi  dan  diseminasi.  Inokulasi  merupakan proses awal dari suatu patogen untuk melakukan kontak dengan  inang.  Proses  sebelum  hubungan  patogen  inang berkembang  lebih  lanjut,  beberapa  tahapan  pengenalan harus terjadi selama tahap awal asosiasi (Hoch 1991).
Apabila  kondisi  lingkungan  mendukung,  patogen selanjutnya  akan  memenetrasi  ke  jaringan  inang. Setelah patogen berhasil masuk ke dalam jaringan inang, maka  patogen  akan  melakukan  infeksi  terhadap  inang dengan  cara  hidup  dan  berkembang.  Selama  proses tersebut,  patogen  dapat  mensekresikan  toksin  atau memproduksi  enzim  untuk  merusak  jaringan  inang sehingga dapat mengambil zat makanan dari inang. Saat munculnya  gejala  pada  tanaman  inang  sebagai  respon dari  infeksi  patogen  maka  proses  infeksi  dinyatakan berhasil.  Waktu  yang  dibutuhkan  patogen  mulai  dari tahap  inokulasi  hingga  munculnya  gejala,  panjang  atau pendeknya  masa  tersebut  bergantung  pada  kondisi lingkungan dan interaksi antara inang-patogen. Menurut Agrios (2005) apabila inokulum bertemu dan bersentuhan  dengan  permukaan  inang,  maka  patogen akan  melalui  siklus  berikutnya.  Proses  bertemunya patogen dengan inang dapat melalui udara dan air.
Cendawan isolat dengan kode 1.1, 1.2 dan 3.1 dapat memasuki  jaringan  tanaman  kayu  afrika  melalui  luka atau  penetrasi  langsung.  Hal  ini  sudah  terbukti  pada tahap postulat Koch. Perkembangan penyakit tumbuhan bergantung  pada  interaksi  antara  tiga  komponen,  yaitu tanaman  inang,  patogen  dan  lingkungan.  Komponen tersebut dapat  mempengaruhi perkembangan  keparahan penyakit  pada  tanaman  inang  apabila  terjadi  perubahan dari komponen-komponen tersebut. Inokulasi tiga isolat dalam  studi  ini  menghasilkan  persentase  keparahan penyakit  yang  berbeda-beda.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  isolat  tersebut  mempunyai  kemampuan  yang berbeda  dalam  menyebabkan  penyakit  hawar  daun, dengan  asumsi  kondisi  lingkungan  dan  tanaman inangnya homogen.
Berdasarkan  hasil  uji  Duncan  (Lampiran1)  pada keparahan penyakit diketahui bahwa isolat  A1, berbeda nyata  dengan  isolat  A2,  A3  dan  kontrol,  dan  nilai  A1 lebih tinggi dari pada isolat lainnya dikarenakan tingkat keparahan  yang  dihasilkan  isolat  A1  lebih  virulen  dari pada isolat lainnya.
Perbedaan tingkat virulen suatu isolat diduga karena faktor  genetik,  lingkungan  ataupun  faktor  tanaman inangnya.  Faktor  genetik  dapat  mempengaruhi  tingkat virulensi  cendawan  patogen  dikarenakan  ada  interaksi antara  patogen  dan  inangnya  sehingga  perbedaan genetik  dari  patogen  dapat  mempengaruhi  perbedaan tingkat  virulensi  tiap  patogen.  Menurut  Agrios  (2005), patogen  tumbuhan  memiliki  beberapa  golongan  gen yang  penting  untuk  dapat  menyebabkan  peningkatan penyakit  terhadap  1  atau  beberapa  tumbuhan  inang. Selain  itu  tanaman  inang  yang  rentan  juga  dapat mempengaruhi tingkat keparahan panyakitnya dikarenakan  pada  saat  pemilihan  tanaman  untuk
dilakukan  inokulasi  tanaman  sudah  terkena  penyakit terlebih  dahulu  dan  menyebabkan  tanaman  inang tersebut  lebih  rentan  terkena  penyakit  kemudian didukung  oleh  faktor  lingkungan  yang  optimal  dan sesuai  dengan  kondisi  hidup  cendawan  patogen sehingga  mengakibatkan  patogen  dapat  berkembang dengan baik.

## Identifikasi  Cendawan  Penyebab  Penyakit  Hawar Daun
Hasil pengamatan secara makroskopis dan mikroskopis  terhadap  isolat  penyebab  penyakit  hawar daun  yang  diperoleh  dari  bibit  kayu  afrika  yang  sakit menunjukkan  bahwa  patogen  adalah  berupa  cendawan atau fungi. Fungi ini merupakan jamur parasit fakultatif atau  jamur  saprofit  fakultatif,  karena  dapat  hidup  baik pada  bahan  organik  yang  sudah  mati  maupun  pada tanaman yang masih hidup (Natawiria et al. 1988). Berdasarkan pengamatan secara makroskopis terhadap  biakan  murni  isolat  pada  media  PDA,  pada hari  pertama  setelah  tanam  terlihat  berupa  koloni serabut benang tipis, berwarna hitam gelap (Gambar 8). Koloni  serabut  benang  tipis  yang  dimaksud  merupakan kumpulan  miselia.  Menurut  Webster et  al. (2010) Cendawan jenis ini termasuk dalam kelas Deuteromycetes karena  ditemukannya  konidia  yakni alat  reproduksi  fungi  secara  aseksual. Deuteromycetes juga  dapat  disebut  dengan imperfect  fungi (Deacon 2006).  Hari  ke-3  mulai  terlihat  gumpalan  yang  teratur berwarna  hitam  dan  terlihat  serabut  benang  tipisnya. Selanjutnya  pada  hari  ke-5,  gumpalan  tersebut membentuk seperti gundukan dan berwarna hitam gelap kemudian  pada  hari  ke-7  cendawan  sudah  memenuhi cawan  petri.  Secara  mikroskopis,  fungi  ini  memiliki ciri-ciri  antara  lain  hifa  yang  bersekat  berwarna kecoklatan,  terdapat  bentuk  konidia  yang  berbentuk bulat berwarna hitam. Cendawan ini sering muncul pada saat  isolasi  awal  pada  beberapa  daun  tanaman  yang mengalami  gejala  hawar  daun.  Hal  ini  terjadi  karena cendawan  tersebut  dapat  menyebar  dengan  luas  pada tanaman inang yaitu tanaman kayu afrika sesuai dengan pengamatan uji postulat Koch.
Laju pertumbuhan miselia isolat A1 dengan kode 1.1 setelah ditanam pada media PDA dengan menggunakan inokulum  berdiameter  8  mm  (Tabel  5).  Pertumbuhan isolat  dapat  memenuhi  cawan  petri  pada  hari  ke  6. Berdasarkan  data  laju  pertumbuhan  isolat  diatas  dapat disimpulkan bahwa isolat tersebut laju pertumbuhannya cukup  cepat  dikarenakan  pada  hari  ke-3  setelah  isolat ditanam, miselia isolat dapat tumbuh memenuhi hampir dari setengah cawan petri.
Tabel 5  Laju pertumbuhan isolat kode 1.1
No Hari setelah tanam Rata-rata diameter (cm) 1 1 1.47 2 3 2.60 3 6 4.56

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Hawar  daun  merupakan  penyakit  penting  pada pembibitan kayu afrika di Persemaian BPDAS Citarum- Ciliwung  Bogor,  dengan  luas  serangan  99.44%  dan tingkat  keparahan  sebesar  8.85%.  Penyakit  hawar  daun di  pembibitan  kayu  afrika  disebabkan  cendawan Curvularia sp.  kelas Deuteromycetes dengan  hasil identifikasi isolat cendawan kode 1.1 karena ditemukan konidia dan hifa bersekat.

## Saran
Identifikasi  patogen  dengan  DNA/RNA  jenis  perlu dilakukan  agar  diketahui  spesies  patogen  yang menyerang  hawar  daun  untuk  informasi  yang  lebih lengkap.  Pengamatan  tentang  mekanisme  pertahanan pada  tanaman  kayu  afrika  perlu  dilakukan  agar  dapat mengetahui  apakah  tanaman  tersebut  tahan  atau  tidak terhadap  serangan  patogen.  Hal  ini  akan  memberikan informasi  pada  masyarakat  mengenai  pemilihan  jenis tanaman  yang  tahan  terhadap  serangan  cendawan patogen.

## DAFTAR PUSTAKA
Agrios. 2005. Plant Pathology . 5 th ed. New York (US): Elsevier Academic Press.
Agrios GN. 1988. Plant pathology. 3 rd ed. Departement of Plant Pathology. University of Florida Gainesville Barnet  HL,  Hunter  BB.  1999. Ilustrated  genera  of Imperpect  fungi 3 rd Edition.  Minesota  (US):  Burges Publishing Company.
Bilgrami,  KS,  HC  Dube.  1976.  A  Textbook  of  Modern Plant Pathology. PVT LTD. New Delhi.
Deacon  JW.  2006. Fungal  Biology .  Edinburgh  (UK): Blackwell Publishing.
Departemen Kehutanan. 2010.  Statistik   Pembangunan Balai  Pengelolaan  DAS  Citarum-Ciliwung  Tahun 2009.  Direktorat  Jenderal  Rehabilitasi  Lahan  Dan Perhutanan Sosial Balai Pengelolaan DAS Citarum – Ciliwung.  Bogor.
Departemen  Kehutanan.  2002. Informasi  Umum Kehutanan  2002. Departemen  Kehutanan  Republik Indonesia. Jakarta.
Garry TC, Harvey CH, editor. The Fungal   Spore  and Disease Infitation in Plants and Animals. New York (US): Plenum Pr. Hlm 25-46.
Goodman  RN,  Z.  Kiraly,  M  Zaitlin.  1967. The Biochemistry  and  Physiology  of  inflectious  Plant Diseases. D. Van Nostrand. New Jersey.
Hadi S. 1989. Ekofisiologi Fungi. Patologi   Hutan  dan Perkembangan  di  Indonesia.  Fakultas  Kehutanan Intitut Pertanian Bogor. Hal 35-38.
Ismail  AM,  Cirvilleri  G,  Polizzi  G,  Crous  PW.  2012.
Lasiodiplodia species  associated  with  dieback disease  of  mango  ( Mangifera  indica )  in  Egypt.
Australasian  Plant  Pathol [internet].  [diunduh  2014 Nov 1]. Tersedia pada: http://www.plantmanagementnetwork.org.
Webster J, Roland W. Introduction to Fungi. Cambridge (UK). Cambridge University Press.
Kadeni  A.  1990.  Studi  kasus  derajat  kerusakan  pada sengon  ( Falcataria  moluccana  (miq)  Barneby  & Grimes ) dan kerugiannya karena serangan Xystrocera festiva di kecamatan Cibeureum Kabupaten  Tasikmalaya  [Skripsi].  Bogor  (ID): Institut Pertanian Bogor.
Martoredjo  T.  1984. Ilmu  Penyakit  Lepas  Panen . Jakarta (ID). Galia Indonesia.
Natawiria, D. 1988. Teknis Pengenalan Penyakit Hutan Tanaman  Industri.  Informasi  Teknis  No.  4,  1989. Pusat Penelitian dan Pengembangan Hutan Bogor.
Rahayu, S. 1999. Penyakit Tanaman Hutan di Indonesia. Yogyakarta (ID). Kanisius.
Stell  RGD,  Torrie  HJ.  1980.  Prinsip  dan  Prosedur Statistika. Jakarta (ID). Gramedia.
Tainter  FH,  Baker  FA.  1996. Principles  of    forest pathology . Canada (CA): John Wiley and Sons, Inc. Unterstenh  Öfer  G.  1976.  The  Basic  Principles  of Crop  Protection  Field  Trials,  Pflanzenschutz- Nachrichten.  Vol  ke-29.  Bayer.  Leverkusen.  Hal 153-169.
Widyastuti  SM,  Sumardi,  Harjono.  2005.  Patologi Hutan.  Yogyakarta    (ID):  Gadjah  Mada  University Press.
Yunasfi.  2007.  Permasalahan  Hama,  Penyakit  dan Gulma  dalam  Pembangunan  Hutan  Tanaman Industri  dan  Usaha  Pengendaliannya.  Departemen Kehutanan  Fakultas  Pertanian  Universitas  Sumatera Utara Medan.
Zulhanif.  2000.  Pertumbuhan  Awal  Uji  Eksotik Khaya antoteca, Ptrigota  alata, dan Maesopsis  eminii. Di Kebun  Benih  Rumpin  Bogor.  Fakultas  Kehutanan, Institut pertanian Bogor. Bogor (ID): IPB press.