Mekanisme alih kelamin ikan nila Oreochromis niloticus (Linnaeus, 1758) melalui manipulasi ekspresi gen aromatase
[Sex reversal mechanism in Nile tilapia Oreochromis niloticus (Linnaeus, 1758) by manipulation of aromatase gene expression]
Upmal Deswira 1  , Agus Oman Sudrajat 2 , Dinar Tri Soelistyowati 2
1 Program Studi Ilmu Akuakultur, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor
2 Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan - IPB Jl. Agatis, Kampus IPB, Dramaga, Bogor 16680
Diterima: 3 Maret 2015; Disetujui: 22 Desember 2015

## Abstrak
Alih kelamin merupakan suatu teknik pengalihan kelamin menjadi jantan atau betina. Penelitian ini bertujuan mengeva- luasi  mekanisme  alih  kelamin  ikan  nila  pada  penggunaan  penghambat  aromatase,  madu,  dan  pestisida.  Ikan  nila  fase bintik  mata  direndam  dalam  tiga  larutan  tersebut  dan  diamati  ekspresi  gen  aromatase  dan  nisbah  kelaminnya.  Peren- daman dilakukan selama 24 jam menggunakan  penghambat aromatase ( imidazole ) 20 mg L -1 , madu (Perhutani, bunga kelengkeng) 10 ml L -1 , dan pestisida (Decis: deltametrin 25 g L -1 ) 1 µL L -1 . Kemudian dilakukan analisis ekspresi gen aromatase pada hari ke-1 dan ke-8 setelah perlakuan. Selanjutnya larva dipelihara sampai berumur 75 hari. Tingkat eks- presi gen aromatase tipe ovari perlakuan imidazole , madu, dan pestisida pada hari ke-1 setelah perlakuan lebih rendah dibandingkan kontrol. Pada hari ke-8 tingkat ekspresi gen paling rendah pada perlakuan imidazole sedangkan yang pa- ling tinggi pada perlakuan pestisida. Hasil ini menunjukkan bahwa terjadi proses maskulinisasi  pada perlakuan imida- zole dan feminisasi pada perlakuan pestisida yang diketahui dari persentase jantan berbeda nyata dibandingkan dengan control (p<0,05). Nilai persentase jantan pada perlakuan kontrol, imidazole , madu, dan pestisida secara berurutan yaitu 68,32%, 80,77%, dan 50,45%. Perlakuan madu tidak berbeda nyata dengan kontrol. Disimpulkan bahwa alih kelamin dipengaruhi  oleh  perubahan  ekspresi  gen  aromatase  tipe  ovari,  peningkatan  ekspresi  gen  aromatase  tipe  ovari menyebabkan feminisasi, sebaliknya penurunan ekspresi gen menyebabkan maskulinisasi di perkembangan awal larva ikan nila.
Kata penting: alih kelamin, aromatase tipe ovari, ikan nila, madu, penghambat aromatase, pestisida

## Abstract
Sex reversal is a sex conversion technique to be male or female.  This research  was conducted to evaluate the mecha- nism of sex reversal in tilapia on the use of aromatase inhibitors (AI), honey and pesticide. The eye spot embryo of Nile tilapia was immersed into those solutions and examined the expression of aromatase gene and sex ratio. The sex rever- sal was carried out by immersion of eye spot embryo for 24 hours using 20 mg L -1 AI (imidazole), 10 ml L -1 honey (Per- hutani, longan flower), and 1 µL L -1 pesticide (Decis: deltamethrin 25 g L -1 ). Aromatase gene expression was analyzed on 1 st and 8 th day after treatment. Larvae  were reared until 75 days-old. The level of gene expression of ovarian type aromatase in imidazole, honey, and pesticide treatment on 1 st day after treatment were lower than control. While, on 8 th day the lowest level of gene expression was on imidazole treatment and the highest was on pesticide treatment. The re- sults  indicated  that  masculinization  occurred  in  imidazole  treatment  and  feminization  occurred  in  pesticide  treatment which showed by  male percentage that significantly different from the control (p<0.05). The male percentage of con- trol, imidazole, honey, and pesticide were 68.32%, 80.77%, 70.93% and 50.45%, respectively. Honey treatment was not significantly  different  from  control.  In  conclusion,  sex  reversal  was  influenced  by  modulation  of  gene  expression  of ovarian type aromatase, the increasing of gene expression of ovarian type aromatase caused feminization, and otherwise the decreasing of gene expression caused masculinization in early development stage of nile tilapia.
Keywords: sex reversal, ovarian type aromatase, nile tilapia, honey, aromatase inhibitor, pesticide

## Pendahuluan
Ikan  nila  merupakan  ikan  konsumsi  yang cepat matang gonad, mudah memijah dan memi- liki perbedaan pertumbuhan antara jantan dan be-
tina.  Menurut  Lind et  al . (2015)  ikan  nila  jantan memiliki  laju  pertumbuhan  lebih  cepat  diban- dingkan dengan ikan betina. Budi daya monoseks jantan  pada  ikan  nila  menghasilkan  ikan  dengan
 Penulis korespondensi
Surel: upmaldeswira16@gmail.com
ukuran  lebih  besar  dan  seragam  dibandingkan budi  daya  campuran  (jantan  dan  betina)  (Sayed & Moneeb 2015), sehingga budi daya  monoseks jantan lebih  menguntungkan. Salah satu cara un- tuk  mendapatkan  populasi  monoseks  yaitu  de- ngan  melakukan  pengalihan  kelamin  menjadi jantan atau betina. Teknik alih kelamin yang dite- rapkan  di  Indonesia  ada  dua  yaitu  maskulinisasi untuk  menghasilkan  jantan  dan  feminisasi  untuk menghasilkan betina (Zairin 2003). Alih kelamin dilakukan sebelum dan atau pada fase diferensia- si kelamin, sehingga perkembangan kelamin bisa diarahkan sesuai dengan tujuan.
Banyak  penelitian  yang  telah  dilakukan untuk memperoleh populasi monoseks jantan pa- da  ikan  nila  dengan  berbagai  bahan,  dosis,  dan metode pemberian yang berbeda. Pemberian hor- mon steroid 17α-metiltestosteron (MT) dan peng- hambat  aromatase melalui  pakan  (Kwon et  al . 2000;  Liana 2007; Kaban 2010; Ariyanto 2010), perendaman (Nurlaela 2002; Sudrajat et al . 2007;
Artanto  2010),  madu  melalui  pakan  (Syaifuddin 2004)  atau  perendaman  (Heriyati et  al .  2015).
Penggunaan  17α-MT  sudah  dilarang,  sedangkan perlakuan  madu  dan  penghambat  aromatase  me- rupakan  metode  yang  aman  dan  diperbolehkan penggunaannya.  Menurut  Beardmore et  al . (2001),  teknik  perendaman  merupakan  teknik yang sukses diterapkan dalam alih kelamin kare- na lebih efisien daripada pemberian oral (pakan), terutama pada embrio atau tahap pascatetas.
Penghambat aromatase bekerja mengham- bat  sintesis  esterogen  dengan  menghalangi  akti- vitas  aromatase,  sehingga  sintesis  estrogen  men- jadi  berkurang  (Miller et  al .  2008).  Madu  kaya akan  flavonoid chrysin yang  menjadi  pengham- bat  aktivitas  enzim  aromatase  (Gambelunghe et al. 2003).  Kalium  dalam  madu  juga  diduga  ber- fungsi  sebagai  pengarah  diferensiasi  kelamin ikan melalui perubahan peredaran testosteron dan
pengendalian  aktivitas  androgen  (Capelo et  al . 1993).
Alih  kelamin  dapat  terjadi  secara  alami akibat  adanya  pencemaran  perairan  yang  dise- babkan  oleh  kontaminasi  limbah,  seperti  limbah pertanian berupa pestisida. Beberapa hasil peneli- tian  menunjukkan  proses  feminisasi  pada  ikan yang  terkontaminasi  pestisida.  Bahan  ini  mem- perkuat efek estrogenik dengan mengganggu po- ros  reproduksi  di  beberapa  tempat  sehingga  me- nyebabkan peningkatan kadar 17β estradiol (E2) plasma  dan  penurunan  konsentrasi  testosteron plasma  (T)  (Tian et  al. 2012).  Deltamethrin  me- rupakan  pestisida  kelas  kimia  piretroid  yang mampu  menurunkan  kadar  testosteron  plasma. Tikus  jantan  yang  diberi  deltametrin  selama  65 hari  dengan  dosis  1  atau  2  mg  kg -1 mengalami penurunan kadar testosteron plasma (NPIC 2010) sehingga ikan yang terpapar jenis pestisida ini di- duga akan mengalami gangguan dalam proses di- ferensiasi kelaminnya yang mengarah pada femi- nisasi.
Bahan aktif yang terkandung dalam madu, penghambat  aromatase,  dan  pestisida  (deltame- trin), diduga berpengaruh dalam proses alih kela- min dengan  memengaruhi ekspresi gen aromata- se tipe ovari. Penelitian ini bertujuan mengevalu- asi mekanisme alih kelamin ikan nila pada peng- gunaan  penghambat  aromatase  (PA),  madu,  dan pestisida  (deltametrin)  melalui  perendaman  em- brio  ikan  nila  fase  bintik  mata  berdasarkan  eks- presi gen aromatase dan nisbah kelamin.

## Bahan dan metode
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Juli sampai  September  2014,  bertempat  di  Laborato- rium  Produksi  Departemen  Budidaya  Perairan, Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan,  Institut Pertanian Bogor.
Embrio  fase  bintik  mata  yang  digunakan untuk percobaan seks reversal diperoleh dari ha- sil pemijahan induk betina dan induk jantan ikan nila nirwana berukuran 300-400g dengan perban- dingan 1:1. Induk dipijahkan  secara alami di da- lam  akuarium  berukuran  100  cm  x  50  cm  x  60 cm. Selama pemeliharaan, induk diberi pakan de- ngan kadar protein 35% secara at satiation setiap pagi dan sore hari. Embrio fase bintik mata dipa- nen  setelah  tiga  hari  pascafertilisasi.  Bahan  dan dosis  yang digunakan untuk  perlakuan alih kela- min  adalah  PA  ( imidazole )  20  mg  L -1 (Nurlaela
2002),  madu  (Perhutani,  bunga  kelengkeng)  10 ml L -1 (Heriyati et al . 2015), dan pestisida (Decis: bahan aktif  deltametrin 25 g L -1 ) 1 µL L -1 (Tian et al. 2012).
Percobaan  alih  kelamin  dilakukan  melalui perendaman  embrio  fase  bintik  mata  mengguna- kan bahan berupa imidazole , madu, dan pestisida.
Setiap perlakuan diulang tiga kali. Embrio diren- dam  dalam  larutan  perlakuan  sesuai  dengan  do- sisnya  selama  24  jam  dengan  kepadatan  seba- nyak  80  ekor  per  ulangan.  Perendaman  dilakuan pada akuarium berukuran 20 x 20 x 20 cm 3 (vo- lume air 1,5 L), kemudian dipelihara dalam aku- arium pemeliharaan sampai hari ke-14. Selanjut- nya larva berumur 14 hari dipindahkan ke dalam akuarium  pemeliharan  berukuran  80  x  40  x  40 cm 3 dengan  volume  air  50  L,  kemudian  volume air  ditingkatkan  sampai  75  L  ketika  larva  sudah berumur  45  hari.  Untuk  menjaga  kualitas  air setiap  akuarium  dilengkapi  dengan  filter  dan heater  akuarium  (28 o C),  serta  dilakukan  peng- gantian air sebanyak 75% setiap dua hari.
Pakan  pertama  berupa  cacing  sutra  mulai diberikan ketika larva berumur 2 hari. Pemberian pakan ini dilakukan secara ad libitum . Pada umur 25 hari, larva diberi pakan komersial dengan ka- dar  protein  38%  yang  diberikan  secara at  satia- tion dengan frekuensi tiga kali sehari.
Ekspresi gen aromatase dianalisis pada ha- ri ke-1 dan ke-8 setelah perlakuan. Jaringan yang dianalisis  pada  larva  ialah  bagian  tengah  badan sampai  kepala.  Analisis  ekspresi  gen  dilakukan di laboratorium Reproduksi dan Genetika Organ- isme Akuatik, Departemen BDP, FPIK IPB.
Ekspresi  gen  aromatase  dianalisis  meng- gunakan  metode  RT-PCR.  Sampel  jaringan  di- ambil  pada  waktu  hari  pertama  dan  kedelapan pascaperlakuan. Setiap ulangan diambil sebanyak dua  ekor  untuk  dilakukan  ekstraksi  RNA.  RNA total  diekstraksi  menggunakan  mini  kit  total RNA  khusus  untuk  jaringan.  Konsentrasi  RNA total  hasil  ekstraksi  diukur  menggunakan NanoDrop  2000  Spectrophotometer.  Sintesis cDNA  dari  RNA  total  dilakukan  menggunakan kit Ready-To-Go  You-Prime  First  Strand  Beads ,
FSRMB,  (GE  Healthcare)  dengan  prosedur  se- suai dengan panduan.
Primer yang digunakan untuk mengampli- fikasi  gen  aromatase  tipe  ovari  sekuen  gen  aro- matase  tipe  ovari  ikan  mujair  dengan  no  akses: AF135850 (Heriyati et al . 2015). Primer tersebut adalah  tiArm1-F:5’ATGGATCTGATCTCTGC TTGT-3’ dan tiArm1-R:5’- CAAACCAAACAGAAAGAAGG-3’. Hasil PCR  diseparasi  menggunakan  elektroforesis  de- ngan  gel agarosa 2%. DNA divisualisasi dengan pewarna  etidium  bromida  menggunakan  cahaya ultraviolet.  Tingkat  ekspresi  gen  diperoleh  de- ngan  membandingkan  total  pixel  gen  aromatase tipe  ovari  dengan  β-actin  menggunakan  piranti lunak UN-SCAN-IT gel 6.1.
Identifikasi  jenis  kelamin  dilakukan  de- ngan  menganalisis  gonad  ikan  nila  setelah  beru- mur 75 hari dengan menggunakan metode aseto- karmin.  Metode  analisis  asetokarmin  mengikuti metode Guerrero & Shelton (1974).
Nilai  laju  pertumbuhan  harian  (LPH)  di- peroleh  berdasarkan  hasil  sampling  bobot  larva
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 T IA R M1 /Β -A K T IN PERLAKUAN A Hari Ke-1 M    Kontrol imidazole Madu Pestisida Hari Ke-8 Kontrol imidazole Madu Pestisida

## 300 bp
200 bp B
ikan nila. Penimbangan bobot dimulai ketika lar- va berumur 14 hari. Pada akhir pemeliharaan di- lakukan perhitungan tingkat kelangsungan hidup (TKH) dan persentase kelamin jantan.
Data  persentase  kelamin  jantan,  laju  per- tumbuhan  harian  (LPH)  dan  tingkat  kelangsung- an  hidup  (TKH)  dianalisis  sidik  ragam  menggu- nakan SPSS 16. dengan tingkat kepercayaan 95% dan  uji  lanjut  dengan  uji  Duncan . Tingkat  eks- presi gen aromatase secara deskriptif.

## Hasil
Hasil  elektroforesis  dan  tingkat  ekspresi gen aromatase kontrol, imidazole , madu, dan pes- tisida  yang  diperoleh  dengan  menggunakan  UN- SCAN-IT gel 6.1 tersaji pada Gambar 1. Gambar ini  menunjukkan  tingkat  ekspresi  gen  aromatase tipe  ovari  satu  dan  delapan  hari  setelah  perlaku-
an. Tingkat ekspresi gen aromatase tipe ovari se- telah  diberi  perlakuan  perendaman  24  jam  de- ngan imidazole , madu, dan pestisida lebih rendah dibandingkan  kontrol.  Pada  hari  kedelapan  sete- lah  perlakuan  terlihat  perbedaan  tingkat  ekspresi gen antar perlakuan. Tingkat ekspresi gen paling rendah pada perlakuan imidazole sedangkan yang paling tinggi pada perlakuan pestisida.
Data  hasil  penelitian  berupa  persentase kelamin  jantan,  laju  pertumbuhan  harian  (LPH), dan  Tingkat  Kelangsungan  Hidup  (TKH)  disaji- kan pada Tabel 1. Persentase kelamin jantan ter- tinggi  pada  perlakuan imidazole sebesar  80,77% dan terendah pada perlakuan  pestisida (50,45%). Kedua perlakuan ini berbeda nyata dibandingkan kontrol (p<0,05), sedangkan perlakuan madu de- ngan  persentase  kelamin  jantan  sebesar  70,93% tidak berbeda nyata.
Gambar  1.  Ekspresi  gen  aromatase  tipe  ovari  (A)  dan  β-aktin  (B)  pada  satu  hari  dan  delapan  hari  setelah perlakuan;  M=marker  DNA;  tanda  panah    menunjukkan  target  gen;  tingkat  ekspresi  gen aromatase tipe ovari dibandingkan dengan β-actin menggunakan UN-SCAN-IT gel 6.1 (C).
C
Tabel 1. Persentase kelamin jantan, Laju Pertumbuhan Harian (LPH), Tingkat Kelangsungan Hidup (TKH) ikan nila hasil perlakuan AI, madu, dan pestisida
Perlakuan Jantan (%) LPH (%) TKH (%) Kontrol 68,32±2,79 b 8,98±0,13 68,06±8,83 imidazole 80,77±2,52 a 9,10±0,13 69,29±6,97 Madu 70,93±1,24 b 8,81±0,23 65,42±3,82 Pestisida 50,45±5,81 c 8,81±0,35 66,67±7,11
Keterangan: Huruf tika atas yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (p<0,05). Nilai yang tertera merupakan nilai rata-rata dan simpangan baku.

## Pembahasan
Aktivitas  aromatase  berkorelasi  dengan tingkat  ekspresi  aromatase  mRNA  (Chang et  al . 1997).  Ekspresi  gen  aromatase  satu  hari  setelah perendaman  menunjukkan  level  ekspresi  gen yang  lebih  rendah  dibandingkan  kontrol.  Bahan aktif  yang  terkandung  dalam imidazole ,  madu, dan  pestisida  mempengaruhi  jumlah  mRNA  gen aromatase tipe ovari. Pada hari kedelapan setelah perendaman,  perlakuan imidazole mampu  menu- runkan  tingkat  ekspresi  gen  aromatase,  sebalik- nya  perlakuan  pestisida  meningkatkan  ekspresi gen  aromatase.  Pada  ikan Japanese  flounder ( Paralichthys olivaceus ) jantan terjadi penekanan ekspresi gen aromatase selama proses diferensia- si  kelamin,  sebaliknya  terjadi  peningkatan  pada kelompok betina (Kitano et al . 1999). Peningkat- an tingkat ekspresi gen aromatase juga terjadi pa- da  ikan  zebra  ( Danio  rerio )  yang  terpapar  pesti- sida  (monokrotopos  40%)  (Zhang et  al .  2013).
Tingginya  ekspresi  gen  aromatase  pada  perlaku- an  pestisida  mampu  memacu  peningkatan  bisin- tesis  estrogen,  sehingga  kadar  estrogen  mening- kat  dan  mengarahkan  terjadinya  proses  femini- sasi.
Menurut Kwon et al. (2001), tingkat eks- presi gen aromatase tipe ovari pada ikan nila be- tina  terus  meningkat  pada  11  sampai  31  dpf,  se- dangkan pada ikan jantan mengalami penurunan, sehingga terjadi perbedaan yang signifikan antara
kedua  jenis  kelamin.  Hal  ini  memperlihatkan bahwa  aromatase  tipe  ovari  memainkan  peran penting  dalam  menjaga  atau  mempercepat  dife- rensiasi  ovarium  setelah  diferensiasi  seks  awal. Perbedaan  ekspresi  gen  aromatase  di  daerah  go- nad  diduga  menjadi  faktor  dalam  memulai  dife- rensiasi  seksual.  Hasil  penelitian  Kwon et  al.
(2000)  menyebutkan  larva  nila  diberi  pakan  de- ngan  penghambat  aromatase  pada  minggu  perta- ma  (11-17  dpf)  atau  direndam  dalam  larutan yang mengandung penghambat aromatase selama 3  jam  pada  13  dpf  menyebabkan  peningkatan persentase  jantan  secara  signifikan.  Oleh  karena itu  gen  aromatase  tipe  ovari  memainkan  peran penting  dalam  diferensiasi  seks  pada  ikan  nila. Peran penting ini dicapai dengan penurunan eks- presi  pada  jantan  dan  peningkatan  ekspresi  pada betina  (Kwon et  al. 2001,  Wang  &  Orban  2007, Blazquez et al. 2008, Injiri et al. 2008). Estrogen mungkin  tidak  hanya  diperlukan  untuk  memicu diferensiasi  ovarium,  tetapi  juga  diperlukan  un- tuk  mempertahankan  diferensiasi  ovarium  ini,  di mana  terjadi  penurunan  tajam  tingkat  transkrip gen  ini  pada  hewan  yang  menjalani  diferensiasi testis  (Kitano et  al .  1999,  Wang  &  Orban  2007,
Jørgensen et al . 2008).
Tingkat ekspresi gen aromatase tipe ovari (Gambar 1) berkorelasi dengan persentase jantan yang diperoleh pada akhir pemeliharaan.  Persen- tase kelamin jantan tertinggi pada perlakuan imi-
dazole sebesar  80,77%  dan  terendah  pada  perla- kuan  pestisida  (50,45%)  yang  berbeda  nyata  di- bandingkan  kontrol  (p<0,05).  Hasil  ini  menun- jukkan  bahwa  perlakuan imidazole ,  madu,  dan pestisida  menyebabkan  terjadinya  alih  kelamin pada  ikan  nila  yang  mengakibatkan  proses  mas- kulinisasi  pada  ikan  yang  diberi  perlakuan imi- dazole serta  proses  feminisasi  pada  perlakuan pestisida.  Penambahan  bahan-bahan  tertentu seperti  hormon  dan  bahan  kimia  lain  dalam  me- dia pemeliharaan ikan  selama  periode labil kela- min  dapat  memengaruhi  proses  diferensiasi  ke- lamin  (Devlin  &  Nagahama  2002).  Penghambat aromatase  mampu  menghambat sintesis estrogen (Brodie et  al .  1999)  dan  meningkatkan  nisbah androgen  estrogen  (Kwon et  al .  2000),  sehingga terjadi  peningkatan  persentase  kelamin  jantan (Tabel 1).
Ikan  zebra  ( Danio  rerio )  yang  dipelihara dalam  media  mengandung  pestisida    0,1  mg  L -1
(monokrotopos 40% mengakibatkan peningkatan persentase  betina  sebanyak  71%  dibandingkan dengan  kontrol  49%  (Zhang et  al. 2013).  Ikan gupi  ( Poecilia  reticulata )  yang  terpapar  mono- krotopos  (0,1  dan  1  mg  L -1 )  mengalami  pening- katan  kadar  estradiol-17β  secara  signifikan,  se- hingga terjadi sintesis vitelogenin. Selain itu mo- nokrotopos juga mengakibatkan penurunan kadar testosteron  yang  menyebabkan  penghambatan pertumbuhan  testis  dan  penurunan  jumlah  sper- ma (Tian et al. 2012). Pada penelitian ini terjadi peningkatan  persentase  betina  yang  terlihat  dari rendahnya persentase jantan (50,45%) dibanding- kan  dengan  kontrol  (68,32%).  Hal  ini  mengindi- kasikan bahwa ikan yang terpapar pestisida (del- tametrin)  pada  periode  perkembangan  gonad berdampak pada feminisasi.
Persentase  kelamin  jantan  pada  perlakuan madu  (70,93%)  tidak  berbeda  nyata  dibanding- kan kontrol. Demikian juga dengan level ekspresi
gen aromatasenya yang tetap tinggi pada hari ke- 8.  Hal  ini  diduga  akibat  kandungan  K  dan chry- sin madu  yang  digunakan  tidak  mencukupi  jum- lah  optimal  untuk  mengakibatkan  terjadinya  alih kelamin pada ikan nila. Sumber nektar dan lama penyimpanan  diduga  dapat  memengaruhi  kon- sentrasi  bahan  aktif  yang  terkandung  di  dalam madu.  Flavonoid chrysin yang  telah  terbukti menjadi  penghambat  aktivitas  enzim  aromatase (aromatase inhibitor ) (Gambelunghe et al. 2003).
Kalium dalam madu juga diduga berfungsi seba- gai  pengarah  diferensiasi  kelamin  ikan  melalui modulasi  peredaran  testosteron,  dan  pengenda- lian tindakan androgen (Capelo et al . 1993).
Tingkat kelangsungan hidup dan laju per- tumbuhan  harian  setiap  perlakuan  tidak  berbeda nyata  dibandingkan  dengan  kontrol  (Tabel  1). Hal  ini  menandakan  bahwa  bahan-bahan  yang digunakan untuk memicu proses alih kelamin ini tidak  berbahaya  bagi  kelangsungan  hidup  ikan. Selanjutnya,  tidak  adanya  perbedaan  nyata  nilai laju pertumbuhan harian karena ikan belum men- capai  fase  diferensial  pertumbuhan.  Popma  & Masser  (1999)  menyatakan  bahwa  ikan  nila  jan- tan tumbuh dua kali lebih cepat daripada ikan be- tina. Hal ini menunjukkan adanya peluang perbe- daan  laju  pertumbuhan  ikan  hasil  perlakuan  di- banding  ikan  kontrol,  jika  ikan  dipelihara  lebih lanjut (Heriyati 2012).

## Simpulan
Alih  kelamin  dipengaruhi  oleh  perubahan ekspresi  gen  aromatase  tipe  ovari.  Peningkatan ekspresi  gen  aromatase  tipe  ovari  menyebabkan feminisasi,  sebaliknya  penurunan  ekspresi  gen menyebabkan maskulinisasi.

## Daftar Pustaka
Ariyanto D. 2010.  Diferensiasi kelamin dan per- formasi tiga genotipe ikan nila yang diberi bahan  aromatase  inhibitor  hingga  tahap
pembesaran. Tesis .  Sekolah  Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. 67 hlm.
Artanto AW. 2010. Pengaruh pemberian aroma- tase  inhibitor  melalui  perendaman  larva terhadap  keberhasilan  sex  reversal  dan pertumbuhan  ikan  nila  merah Oreochro- mis sp. Skripsi .  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor. 44 hlm.
Beardmore JA, Mair GC, Lewis RI. 2001. Mono- sex  male  production  in  finfish  as  exemp- lified  by  tilapia:  applications,  problems, and  prospects. Aquaculture, 197(1-4): 283-301.
Blázquez M, Gonzalez A, Papadaki M, Mylonas
C, Piferrer F. 2008. Sex related changes in estrogen  receptors  and  aromatase  gene expression  and  enzymatic  activity  during early  development  and  sex  differentiation in  the  European  sea  bass  ( Dicentrarchus labrax ). General  and  Comparative  Endo- crinology, 158(1): 95-101.
Brodie  A.  1991.  Aromatase  and  its  inhibitor-An overview. Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology, 40(1-3): 255-261.
Capelo AS, Asuncion C, Francisco T, Teodomiro
F,  Rafael  P.  1993.  Potassium  regulates plasma testosterone and renal ornithinede- carboxylase  in  mice. Federation  of  Euro- pean Biochemical Societies, 333(1-2): 32- 34.
Chang  XT,  Kobayashi  T,  Kajiura  H,  Nakamura M, Nagahama Y. 1997. Isolation and cha- racterization of the cDNA encoding the ti- lapia  ( Oreochromis  niloticus )  cytochrome P450  aromatase  (P450arom):  changes  in P450arom  mRNA,  protein  and  enzyme activity in ovarian follicles during oogene- sis. Journal  of  Molecular  Endocrinology , 18(1): 57-66.
Devlin  RH,  Nagahama  Y.2002.  Sex  determina- tion  and  sex  differentiation  in  fish:  an overview  of  genetic,  physiological,  and environmental  influence. Aquaculture, 208(3-4): 191-364.
Gambelunghe  C,  Rossi  R,  Sommavilla  M,  Fer- ranti  C,  Rossi  R,  Ciculi  C,  Gizzi  S,  Mi- cheletti  A,  Rufini  S.  2003.  Effects  of chrysin  on  urinary  testosterone  levels  in human  males. Jurnal  of  Medicinal  Food, 6(4): 387-390.
Guerrero  RD,  Shelton  WL.  1974.  An  aceto-car- mine squash technique for sexing juvenile fishes. The  Progressive  Fish-Culturis t, 36(1): 56.
Heriyati E. 2012. Sex reversal ikan nila menggu- nakan madu dan analisis ekspresi gen aro- matase. Tesis .  Sekolah  Pascasarjana  Insti- tut Pertanian Bogor. 37 hlm.
Heriyati  E,  Alimuddin,  Arfah  H,  Sudrajat  AO. 2015. Ekspresi gen aromatase pada penga- rahan diferensiasi kelamin ikan nila Oreo- chromis  niloticus (Linnaeus  1758)  meng- gunakan madu. Jurnal Iktiologi Indonesia , 15(1): 39-50.
Ijiri S, Hiroyo K, Tohru K, De-Shou W, Fumie S, Bindhu P, Masaru N, Y Nagahama. 2008. Sexual  dimorphic  expression  of  genes  in gonads  during  early  differentiation  of  a teleost  fish,  the  Nile  tilapia Oreochromis niloticus . Biology  of  Reproduction, 78(2): 333-341
Jørgensen  A,  Morthorst  JE,  Andersen  O,  Ras- mussen  LJ,  Bjerregaard  P.  2008.  Expres- sion profiles for six zebrafish genes during gonadal  sex  differentiation. Reproductive Biology and Endocrinology, 6: 25.
Kaban IRE. 2010. Pengaruh pemberian  aromata- se inhibitor melalui Pakan buatan terhadap keberhasilan  sex  reversal  Ikan  nila  merah Oreochromis sp. Skripsi .  Fakultas  Peri- kanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor. 35 hlm.
Kitano T, Takamune K, Kobayashi T, Nagahama
Y, Abe SI.1999. Suppression of P450 aro- matase  gene  expression  insex-reversed males  produced  by  rearing  genetically  fe- male  larvae  at  a  high  water  temperature during a period of sex diferentiation in the Japanese  flounder  ( Paralichthys  oliva- ceus ). Journal  of  Molecular  Endocrino- logy, 23(2): 167-176.
Kwon  JY,  Haghpanah  V,  Kogson-Hurtado  LM, Mcandrew  BJ,  Penman  DJ.  2000.  Mascu- linization  of  genetic  female  nile  tilapia ( Oreochromis  niloticus )  by  dietary  ad- ministration  of  an  aromatase  inhibitor  du- ring  sexual  differentiation. Experimental zoology, 287(1): 46-53.
Kwon JY, Mcandrew BJ, Penman DJ. 2001. Clo- ning  of  brain  aromatase  gene  and  expres- sion of brain and ovarian aromatase genes during  sexual  differentiation  in  genetic male  and  female  nile  tilapia Oreochromis niloticus.  Molecular  Reproduction  and Development, 59(4): 359-370.
Lind CE, Safari A, Agyakwah SK, Attipoe FYK., El-Naggar  GO,  Hamzah  A,  Hulata  G,
Ibrahim  NA, Khawa  HL,  Nguyen  NH,
Maluwa  AO,  Zaid  M,  Zake  T  ,  Ponzoni RW.  2015.  Differences  in  sexual  size  di-
morphism  among  farmed  tilapia  species and  strains  undergoing  genetic  improve- ment  for  body  weight. Aquaculture  Re- ports, 1(4): 20-27.
Liana  YP.  2007.  Efektifitas  aromatase  inhibitor yang  diberikan  melalui  pakan  buatan  ter- hadap  sex  reversal  ikan  nila  merah Oreo- chromis sp. Akuatik - Jurnal  Sumberdaya Perairan, 2(1): 1-7.
Miller  WR,  Bartlett,  Brodie  AM,  Brueggemeier RW,  Salle  E,  Lonning  PE,  Lombart  A, Maass N, Maudelonde T, Sasano H, Goss PE. 2008. Aromatase inhibitors: Are  there differences  between  steroidal  and  nonste- roidal  aromatase  inhibitors  and  do  they matter? The Oncologist, 13(8): 829-837.
National  Pesticide  Information  Center    (NPIC). 2010.  Deltamethrin  Technical  Fact  Sheet. Oregon (US): Oregon State University.
Nurlaela. 2002. Pengaruh aromatase inhibitor pa- da  perendaman  embrio  terhadap  nisbah kelamin  ikan  nila  merah  ( Oreochromis sp.). Skripsi .  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor. 51 hlm.
Popma  T,  Masser  M.  1999.  Tilapia  life  history and  biology.  Southern  Regional  Aquacul- ture Center Publication No.283.
Sayed  AEH,  Moneeb  RH.  2015.  Hematological and  biochemical  characters  of  monosex tilapia  (Oreochromis  niloticus  Linnaeus,
1758) cultivated using methyltestosterone.
The  Journal  of  Basic  &  Applied  Zoology,
72 (5): 36-42.
Sudrajat    AO,  Astutik  ID,  Arfan  H.  2007.  Seks reversal  ikan  nila  merah  ( Oreochromis sp.)  melalui  perendaman  larva  menggu- nakan  aromatase  inhibitor. Jurnal  Akua- kultur Indonesia, 6(1): 103-108.
Syaifuddin  A.  2004.  Pengaruh  pemberian  suple- men  madu  pada  pakan  larva  ikan  nila ( Oreochromis  niloticus )  GIFT  terhadap nisbah  jenis  kelaminnya. Skripsi .  Fakultas Perikanan Universitas Brawijaya. 38 hlm.
Tian H, Yun L, Wang W, Wu P, Ru S. 2012. Ex- posure  to  monocrotophos  pesticide  during sexual  development  causes  the  feminiza- tion/demasculinization  of  the  reproduct- ive traits and a reduction in the reproduct- ive success of male guppies ( Poecilia reti- culata ). Toxicology  and  Applied  Pharma- cology, 263(2):163-170.
Wang  XG,  Orban  L.  2007.  Anti-Mullerian  hor- mone  and  11beta-hydroxylase  show  reci- procal  expression  to  that  of  aromatase  in the transforming gonad of zebrafish males. Developmental  Dynamics, 236(5):  1329-
1338.
Zairin M. 2003. Endokrinologi dan perannya ba- gi  masa depan perikanan Indonesia [Orasi Ilmiah]. Institut Pertanian Bogor.
Zhang X, Gao L, Yang K, Tian H, Wang W, Ru S.  2013.  Monocrotophos  pesticide  modu- lates  the  expression  of  sexual  differentia- tion  genes  and  causes  phenotypic  femini- zation in zebrafish ( Danio rerio ). Compar- ative Biochemistry and Physiology Part C, 157(1): 33-40.