Marine, Environment, and Fisheries
p-ISSN:
http://ejurnal.polnep.ac.id/index.php/manfish
Volume 1 Nomor 1 - Maret 2020 DOI:

## APLIKASI FUNGI RIZOSFER SEBAGAI PUPUK HAYATI PADA BIBIT KELAPA SAWIT DENGAN MEMANFAATKAN LIMBAH TANDAN KOSONG KELAPA SAWIT SEBAGAI MEDIA PERTUMBUHAN
Galih Setyo Adiguna 1 , I Nyoman P. Aryantha 2
1 Program Studi Pengolahan Hasil Perikanan, Jurusan Ilmu Kelautan dan Perikanan, Politeknik Negeri Pontianak
2 Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati, Institut Teknologi Bandung
Email: galihsetyo89@gmail.com

## ABSTRAK
Tandan kosong kelapa sawit memiliki komposisi kimia berupa selulosa 45,95 %, hemiselulosa 22,84 %, lignin 16,49 %, minyak 2,41 %, dan abu 1,23 %. Selama ini pemanfaatan limbah tandan kosong kelapa  sawit  sangat  terbatas  yaitu  sebagai  sumber  kalium  setelah  proses  pembakaran.  Proses pembakaran  tandan  kosong  kelapa  sawit  (TKKS)  dapat  menimbulkan  polusi  udara  karena menghasilkan  abu  terbang  (fly  ash).  Untuk  mengurangi  pencemaran  lingkungan  perlu  dilakukan penanganan TKKS, contohnya diolah menjadi pupuk hayati. Secara alami limbah TKKS mengalami dekomposisi.  Namun,  dekomposisi  ini  memerlukan  waktu  yang  sangat  lama.  Proses  ini  dapat dipercepat menggunakan mikroorganisme fungi untuk mendegradasi selulosa dan lignin yang ada dalam TKKS. Perlunya pengelolaan tanda kosong sawit yang ramah lingkungan mendorong peneliti untuk  melakukan  penelitian  ini  dengan  tujuan  umum  :  mengembangkan  pupuk  hayati  padat menggunakan  fungi  rhizosfir  dan  limbah  TKKS  sebagai  bahan  baku.  Metode  pada  penelitian  ini adalah menggunakan metode eksperimental. Fungi rhizosfir yang dipilih sebagai agen pupuk hayati adalah  yang  memiliki  kemampuan  mendegradasi  selulosa,  melarutkan  fosfat,  bersifat  antagonist terhadap  Ganoderma  boinense.  Dipilih  3  isolat  fungi  rhizosfir  dengan  kinerja  terbaik  memenuhi kriteria  di  atas.  Isolat  L1  adalah  yang  mempunyai  kemampuan  mendegradasi  selulosa  tertinggi dengan  indeks  selulase  =  2,92.  Sementara  itu,  isolat  E1  adalah  fungi  yang  memiliki  kemampuan dalam melarutkan fosfat. Sedangkan isolat E2 memiliki kemampuan tertinggi dalam menghambat pertumbuhan  G.  boninense.  Ketiga  isolat  tersebut  dijadikan  agen  pupuk  hayati  untuk  diujikan  ke anakan tanaman kelapa sawit secara tunggal dan kombinasi. Hasil penelitian diperoleh Pertumbuhan tinggi tananam terbaik pada perlakuan penambahan Fungi kode E2 (T3) dengan tinggi 19,87 ± 1,61 cm, Berdasarkan hasil analisis DNA ITS, isolat E1 teridentifikasi sebagai Talaromyces pinophilus (100 %), E2 sebagai Trichoderma viride (100 %) dan L1 sebagai Acremonium cellulolyticus (100 %).
Kata kunci: Tandan kosong kelapa sawit, Pupuk Hayati, Rhizosfir

## PENDAHULUAN
Penggunaan pupuk buatan anorganik di Indonesia sangat dominan untuk meningkatkan hasil pertanian secara nyata dan
cepat.  Penggunaan  pupuk  anorganik  secara terus-menerus dan berlebihan, tidak diimbangi dengan penggunaan pupuk organik menyebabkan  tanah  menjadi  keras  dan
produktivitasnya  menurun  (Supadma,  2006). Pemupukan  dengan  pupuk  anorganik  secara terus-menerus  akan  menurunkan  tingkat kesuburan  tanah,  misalnya  unsur  K  dalam pupuk anorganik merupakan salah satu unsur hara yang mudah tercuci, sehingga tanah akan kekurangan  unsur  K  yang  dapat  menurunkan kesuburan  tanah  (Mujiyati  dan  Supriyadi, 2009).  Pengurangan  penggunaan  pupuk anorganik dan beralih ke pupuk organik pada pertanian  banyak  membawa  manfaat  untuk memperbaiki  sifat  biokimia  tanah.  Aplikasi bahan  organik  yang  diperkaya  dengan mikroba  penyubur  perkaran  meningkatkan aktivitas  respirasi  dan  enzimatik  tanah (Antonius dan Agustiyana, 2011).
Produksi  pupuk  hayati  di  Indonesia umumnya  menggunakan  bahan  pembawa anorganik berupa pasir, mineral lempung atau zeolit (Prematuri dan Faiqoh, 1999). Di dalam upaya menciptakan biaya produksi yang lebih ekonomis  dan  ramah  lingkungan,  maka dirasakan  perlu  untuk  dicarikan  alternatif bahan  pembawa  lain  seperti  bahan  organik yang merupakan sumber daya potensial  yang jumlahnya melimpah.
Kelapa  sawit  (Elaeis  guineensis  Jacq) merupakan  salah  satu  komoditas  perkebunan yang mempunyai peranan penting di Indonesia.  Luas  perkebunan  kelapa  sawit  di Indonesia pada tahun 2011 mencapai 8.992.824 ha dan produksi tandan buah segar (TBS)  sebanyak  36.809.252  ton  per  tahun (ditjenbun,  2012).  Setiap  pengolahan  1  ton tandan  buah  segar  (TBS)  akan  dihasilkan tandan kosong kelapa sawit (TKKS) sebanyak 22-23%  atau  sebanyak  220-230  kg.  Sebuah pabrik  dengan  kapasitas  pengolahan  100 ton/jam  dengan  waktu  operasi  selama  1  jam, dapat  menghasilkan  sebanyak  22-23  ton TKKS  (Rahmadi dkk., 2014). Jumlah limbah TKKS  yang  sangat  berlimpah  akan  menjadi masalah  jika  tidak  dimanfaatkan  dan  diolah lebih  lanjut.    Pengelolaan  dan  pemanfaatan
limbah  tandan  kosong  kelapa  sawit  masih belum  dilakukan  secara  optimal.  Selama  ini pemanfaatannya sangat terbatas yaitu dibakar dalam  incinerator.  Abu  dari  pembakaran dimanfaatkan untuk pembuatan pupuk kalium karena  mengandung  30%  K2O.  Proses pembakaran  tandan  kosong  kelapa  sawit dalam incinerator tersebut dapat menimbulkan polusi udara karena menghasilkan abu terbang (fly  ash)  (Rahmadi  dkk.,  2014).  Untuk mengurangi  pencemaran  lingkungan  perlu dilakukan  penanganan  TKKS,  contohnya diolah  menjadi  pupuk  hayati.  TKKS  dalam pembuatan  pupuk  hayati  digunakan  sebagai bahan pembawa. Bahan pembawa harus dapat memberikan lingkungan hidup yang baik bagi mikroba  atau  campuran  berbagai  mikroba selama produksi, transportasi, dan penyimpanan  sebelum  inokulan  tersebut digunakan.  TKKS  dapat  dijadikan  sebagai bahan pembawa dikarenakan memiliki kapasitas menahan air yang tinggi (Kresnawaty  dkk.,  2010).  Pembuatan  pupuk hayati  harus  mempertimbangkan  media pembawa yang dikomposisikan. Media pembawa  harus  mengandung  komponen penting  yang  mendukung  daya  viabilitas  dan pertumbuhan  mikroba  yang  diinokulasi  ke dalamnya  (Ambak  dan  Melling,  2000). Komposisi  kimia  TKKS  sebagian  besar berupa  selulosa,  hemiselulosa  dan  lignin. Bahan-bahan  organik  tersebut  diperlukan mikroba  selama  proses  pertumbuhan  dan perkembangannya.  Pengaruh  bahan  organik terhadap  perkembangan  fungi  sangatlah berpengaruh,  karena  bahan  organik  dapat sebagai nutrisi bagi fungi. Fungsi fungi dalam tanah  adalah  untuk  menguraikan  bahan organik  dan  membentuk  bongkahan  tanah. Beberapa  spesies  tertentu  dari  Alternaria, Aspergillus, Cladosporium, Dematrium, Glicoladium,  Helminthoporium,  Humicola, dan  Metarhizium  menghasilkan  bahan  yang mirip humus dalam tanah (Rao, 1994).
Fungi  rhizosfir  merupakan  salah  satu kelompok  mikroba  yang  telah  dilaporkan dapat menginduksi ketahanan tanaman terhadap  berbagai  penyakit,  baik  penyakit terbawa tanah maupun penyakit terbawa udara (Hyakumachi  dan  Kubota,  2003).  Fungi  ini membantu  pertumbuhan  tanaman  melalui berbagai  mekanisme,  seperti  peningkatan penyerapan  nutrisi,  sebagai  kontrol  biologi terhadap serangan patogen, dan juga menghasilkan  hormon  pertumbuhan  bagi tanaman. (Chanway, 1997). Berdasarkan hasil penelitian  yang  ada  sampai  sekarang,  fungi Rhizosfir berpotensi memfasilitasi penyediaan berbagai  unsur  hara  bagi  tanaman  terutama phospat. Perbaikan pertumbuhan dan kenaikan hasil berbagai tanaman salah satunya berkaitan  dengan  ketersediaan  unsur  phospat bagi  tanaman.  Di  samping  sebagai  fasilitator penyerapan  hara,  fungi  Rhizosfir  juga berpotensi sebagai agen hayati (Simanungkalit,  2001).  Menurut  Keputusan Menteri Pertanian Nomor : 411/Kpts/TP.120/6/1995  Tentang  Pemasukan
Agen  Hayati  Ke  Dalam  Wilayah  Negara Republik  Indonesia,  pengertian  agen  hayati adalah setiap organisme yang meliputi spesies, sub  spesies,  varietas,  semua  jenis  serangga, nematoda, protozoa, cendawan (fungi), bakteri,  virus,  mikoplasma  serta  organisme lainnya dalam semua tahap perkembangannya yang  dapat  digunakan  untuk  keperluan pengendalian  hama  dan  penyakit  atau organisme  pengganggu,  proses  produksi, pengolahan  hasil  pertanian  dan  berbagai keperluan lainnya
Dari penjelasan diatas Penggunaan fungi Rhizosfir  untuk mendegradasi selulosa, melarutkan fosfat dan sebagai agen hayati bagi tanaman, dapat dijadikan alternatif pengelolaan  TKKS  yang  selama  ini  belum tertangani  dengan  baik.  Penggunaan  formula TKKS dan fungi rhizosfir sebagai bahan baku pupuk  hayati  berpotensi  mengurangi  dampak
negatif  pupuk  anorganik,  meningkatkan serapan  unsur  hara  tanaman  serta  dapat mengendalikan serangan patogen pada tanaman.  Berdasarkan  hal-hal  tersebut,  perlu dilakukan sebuah pengkajian tentang formulasi  pupuk  hayati  padat  dari  fungi rhizosfir dan tandan kosong kelapa sawit
Tujuan umum dari penelitian ini adalah untuk  mengembangkan  pupuk  hayati  dengan menggunakan  fungi  rhizosfir  dan  limbah TKKS sebagai bahan baku

## METODE PENELITIAN
Materi yang digunakan pada penelitian ini mencakup  agen  fungi,  bahan  baku  pupuk hayati  dan  tanaman  uji.  Sampel  tanah  untuk mengisolasi fungi agen pupuk hayati, diambil dari tanah di sekitar perakaran tanaman kelapa sawit  PT.  Astra  Agro  Lestari.  Kultur Ganoderma boninense diperoleh dari Laboratorium  Mikologi,  Pusat  Penelitian Biosains  dan    Bioteknologi  (PPBB),  Institut Teknologi  Bandung.  Tanaman  uji  yaitu  bibit tanaman  Kelapa  Sawit  diperoleh  dari  PT. Astra Agro Lestari.
Bahan  laboratorium  yang  digunakan dalam  penelitian  adalah  media  Pikovskaya, Urea, media CMC (Carboxymethyl Cellulose),  media  PDA  (Potato  Dextrose Agar),  larutan  iodin,  asam  sulfat  (H2SO4), natrium klorida (NaCl), aquades, alcohol.

## Isolasi Fungi Rhizosfir
Sampel tanah diambil disekitar perakaran tanaman kelapa sawit dengan jarak 10 cm dan 20  cm  dari  akar  dari  beberapa  lokasi perkebunan  PT  Astra  Agro  Lestari  di Kalimantan Tengah. Isolasi dilakukan dengan metode pengenceran dan plating. Sebanyak 10 g  sampel  tanah  dilarutkan  di  dalam  100  ml Aquades  steril  sehingga  didapat  suspensi tanah. Suspensi diguncang dengan menggunakan alat orbital shaker selama 2 jam dengan kecepatan 150 rpm. Suspensi kemudian  diencerkan  segera  secara  seri
dengan  cara  mencampurkan  1  ml  suspensi tanah  dengan  9  Aquades  steril  dalam  tabung reaksi sehingga didapat pengenceran      10 -2 .
Pengenceran  terus  dilakukan  hingga  tingkat pengenceran  10 -3 .  Hasil  pengenceran  10 -3 diambil  1  ml  kemudian  dibiakkan  dalam media PDA dengan masing-masing 3 ulangan. Hasil  biakan  diamati  selama  4  hari  setelah pencawanan (HSP). Setiap koloni fungi yang tumbuh dicatat dan dikelompokkan berdasarkan  bentuk  dan  warna  koloni kemudian dimurnikan pada media PDA.
Uji Kemampuan Fungi dalam Mendegradasi Selulosa Isolat fungi yang diuji secara semikuantitatif  didapat  dari  stok  yang  telah diremajakan  sebelum  diuji  aktivitasnya. Skrining  fungi  selulolitik  secara  semi kuantitatif  dilakukan  menggunakan  metode tanam  ke  dalam  media  CMC  plate  dan diinkubasi  selama  6  hari.  Pengujian  aktivitas selulolitik dilakukan dengan metode Iodin dan dilakukan  secara  duplo.  Pertumbuhan  fungi diamati dan diseleksi yang mampu menguraikan  CMC.  Fungi  yang  mempunyai kemampuan mendegradasi selulosa diindikasikan  dengan  terbentuknya  zona bening  di  sekitar  koloni  setelah  diuji  dengan Iodin dan dibiarkan selama 3-5 menit. Indeks aktivitas selulase dapat ditentukan dengan cara mengukur  rasio  diameter  zona  bening terhadap diameter koloni (Kasana dkk., 2008).

## Uji Potensi Fungi dalam Melarutkan Fosfat

## Seleksi  Fungi  dalam  Melarutkan  Fosfat Secara Kualitatif
Aktivitas  fungi  pelarut  fosfat  ditentukan berdasarkan pembentukan zona bening sekitar koloni  pada  media  Pikovskaya  (Rao,  1983). Media  yang  digunakan  adalah    Pikovskaya
dengan  komposisi  10  g/l  glukosa,  5  g/l Ca 3 PO 4 , 0,5 g/l (NH 4 ) 2 SO 4 , 0,2 g/l KCl, 0,1 g/l MgSO 4 .7H 2 O,  0,01  g/l  MnSO 4 .H 2 O,  0,5    g/l yeast  ekstrak,  dan  0,01  g/l  FeCl 3 .6H 2 O  pada pH  7,0.  Pengukuran  yang  dilakukan  berupa rasio zona bening (holozone) dengan membandingkan  diameter  zona  bening  dan diameter  koloni  setelah  dinkubasi  selama  2 minggu pada temperatur ruangan. Isolat hasil seleksi  uji  tahap  selanjutnya  yaitu  penentuan fosfat terlarut.

## Penetuan Konsentrasi Fosfat Terlarut
Isolat terpilih dipindahkan dalam 250 ml media Pikovkaya cair dan digoyang selama 7 hari.  Sebanyak  3  ml  supernatant  sampel  dan control  diambil,  lalu  ditambahkan  0,5  ml reagen  campuran  dan  diamkan  selama  15 menit.  Kemudian  serapan  diukur  pada absorbansi  880  nm.  Prosedur  yang  sama dilakukan untuk larutan standar dan blanko. Uji  Antagonisme  Fungi  terhadap  G. boninense.
Pengujian dilakukan secara biakan ganda (dual culture) dengan menumbuhkan masing- masing  isolat  fungi  dan  fungi G.  boninense pada  cawan  petri  yang  berisi  media  PDA secara  berhadapan  dengan  jarak  3  cm. Persentase hambatan agen hayati terhadap G. boninense diukur  pada  hari  ke  4  setelah inokulasi dengan menggunakan rumus:
Keterangan:
P = persentase hambatan r1  =  jari-jari  koloni  patogen  yang menjauhi koloni agen hayati
r2  =  jari-jari  koloni  patogen  yang mendekati koloni agen hayati
(Dharmaputra, 1999).

## Pembuatan Pupuk Organik Hayati
Inokulum yang berasal dari kultur media PDA  diinokulasikan  ke  substrat  padat menggunakan teknik Solid State Fermentation
(SSF)  dengan  komposisi:  Tandan  kosong kelapa  sawit,  NPK  1%  dari  Tandan  kosong kelapa  sawit.  Fungi  diinkubasi  pada  suhu ruang  selama  2  minggu.  Semua  medium  dan proses inokulasi berada dalam kondisi steril.

## Pengujian pada Tanaman Uji
Formula  TKKS  dan  Isolat  fungi  terpilih diuji  keefektifannya  terhadap  pertumbuhan bibit  kelapa  sawit  umur  3  bulan.  Pengujian dilakukan  di  rumah  kaca  di  Pusat  Penelitian Biosains  dan  Bioteknologi  ITB.  Rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak  Kelompok  (RAK)  dengan  perlakuan sebagai berikut :
1. T 1 =Tanah  +  Tandan  kosong  kelapa sawit + isolat  terpilih pendegradasi lignin
2. T 2 =  Tanah  +  Tandan  kosong  kelapa sawit + isolat terpilih pelarut fosfat
3. T 3 =  Tanah  +  Tandan  kosong  kelapa sawit .  + isolat  terpilih Aktifitas antagonis
4. T 4 =  Tanah  +  Tandan  kosong  kelapa sawit .  + isolat  terpilih pendegradasi lignin  +  pelarut  fosfat  +  aktifitas antagonis
5. K- = Kontrol (Tanah 100%)
6. K+ = Kontrol Positif (Tanah + Pupuk Hayati merk X*)
Keterangan :
Komposisi  media  tanam  per  polybag  :
Tanah  2  kg  +  Formulasi  TKKS  dan  Isolat Terpilih 25 gr
*Komposisi  dan  manfaat  pupuk  hayati merk X (Lampiran 1)
Masing-masing  perlakuan  dirancang  3 ulangan,  Pengamatan  dilakukan  setiap  dua minggu selama 56 hari setelah tanam. Peubah yang  diamati  adalah  tinggi  tanaman  dan jumlah  daun.  Analisis  data  dilakukan  dengan menggunakan  analisis  General  linear  model (GLM) Repeated measures dan analisis ragam (Anova)  pada  taraf    kepercayaan  95  persen (P<0,05).  Jika  hasil  analisis  ragam  berbeda
nyata,  dilanjutkan  dengan  uji  lanjut  DMRT (Duncan  Multiple  Range  Test)    pada  taraf kepercayaan 95% dan 99%.

## Analisis Kimia Tanah
Tanah sebelum digunakan untuk penelitian  dan  tanah  hasil  evaluasi  pupuk hayati diuji pH dan kandungan fosfat tersedia dengan menggunakan metode Olsen (Lampiran 2) dengan bantuan analis Laborotorium Bioteknologi
Lingkungan ICBB, Bogor.

## Identifikasi Molekuler Isolat Fungi
Isolat tunggal fungi terpilih ditumbuhkan di  cawan Petri. Proses PCR dan isolasi  DNA genom fungi dilakukan di Macrogen. Amplifikasi  PCR  pada  ITS  menggunakan primer ITS1 (5´- TCC GTA GGT GAA CCT TGC  GG  -  3´))  dan primer ITS4  (5´-  TCC TCC  GCT  TAT  TGA  TAT  GC  -  3´).  Data hasil sekuensing selanjutnya di trimming dan di assembling menggunakan  BioEdit.  Data sekuens yang telah di assembling selanjutnya di  BLAST  dengan  data  genom  yang  telah didaftarkan  di  DDBJ (Data  Bank  of  Japan)
atau NCBI (National Center for Biotechnology
Information) untuk  menentukan  takson  yang memiliki homology/similarity terbesar  dan terdekat  secara  molekuler.  Penentuan  strain fungi  hasil  Blast  nukleotida  berpatokan  pada nilai  keidentikan  dan query  cover yang mendekati  100  %.  Strain  fungi  yang  terpilih kemudian ditentukan kekerabatan terdekatnya melalui pohon filogenetik dengan menggunakan program MEGA 7.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  isolasi  fungi  pada Rhizosfir  tanaman  kelapa  sawit  diperoleh  35 isolat  yang  selanjutnya  dilakukan  seleksi berdasarkan kemampuan dalam mendegradasi selulosa,  melarutkan  fosfat  dan  antagonisme terhadap G. Boninense.
Menurut Zak dkk.(2003) keanekaragaman mikroba tanah akan
meningkat  dengan  beragamnya  tumbuhan  di ekosistem tersebut. Selain
itu, keanekaragaman  mikroba  tanah  juga  lebih dipengaruhi oleh banyaknya senyawa organik yang  dihasilkan  oleh  tanaman  tersebut.  Hasil eksplorasi  fungi  tanah  yang  dilakukan Puangsombat dkk. (2010) di 5 tipe lahan yang berbeda  juga  didapatkan  bahwa  indeks keanekaragaman  fungi  di  lahan  nanas  lebih tinggi  daripada  di  hutan  sekunder.  Menurut Shi  dkk.  (2013)  keanekaragaman  fungi  tanah pada  berbagai  tipe  hutan  dipengaruhi  oleh suhu,  garis  lintang  dan  keanekaragaman tumbuhan.  Keanekaragaman  fungi  tertinggi didapatkan
dari hutan
dengan keanekaragaman  tumbuhan  terendah  atau  di hutan iklim sedang.
Seleksi Fungi Uji Kemampuan Fungi dalam

## Mendegradasi selulosa
Secara umum aktivitas  selulolitik isolat fungi ditunjukkan dengan kemampuan tumbuh pada media carboxyl methyl cellulose (CMC) yang  mengandung  selulosa  sebagai  satu- satunya
sumber
karbon untuk pertumbuhannya  dan  terbentuknya  zona bening di sekitar koloni selama inkubasi 6 hari (Gambar IV. 1). Daerah bening menunjukkan adanya  aktivitas  hidrolitik  oleh  enzim ektraseluler  selulase  yang  diekskresikan  oleh isolat fungi. Produk hidrolisis tersebut berupa gula sederhana monosakarida dan tidak terjadi ikatan  kompleks  dengan  iodin  (Kasana  dkk., 2008)
Gambar 1. Visualisasi Zona Bening pada media CMC
Berdasarkan  indeks  aktivitas  enzim
didapatkan bahwa sebanyak 8 isolat
mempunyai kemampuan mendegradasi selulosa  dengan kisaran diameter zona bening 1,00-7,30  (Tabel  IV.  2).  Perbedaan  indeks aktivitas  selulolitik  tersebut  diduga  karena selulase  diekskresikan  oleh  masing-masing isolat  fungi  yang  berbeda  potensinya  untuk menguraikan substrat dalam media pertumbuhan  (Sudiana  dkk.,  2001).  Semakin besar  indeks  selulase  pada  isolat  maka semakin  besar  aktivitas  selulolitik  yang dihasilkan (Apun dkk., 2000). Isolat L1 dipilih karena  diduga  merupakan  isolat  potensial yang  memiliki  indeks  selulolitik  tinggi dibanding  isolat-isolat  lainnya  dengan  nilai 2,92.
Uji  Potensi  Fungi  dalam  Melarutkan Fosfat.
Seleksi Kualitatif Fungi dalam Melarutkan Fosfat.
Seleksi  kualitatif  fungi  pelarut  fosfat menghasilkan 6 isolat murni yaitu E1, A1, N1, L1,  F2  dan  I2.  Terbentuknya  zona  bening  di sekitar koloni menjelaskan kemampuan fungi dalam melarutkan P
Media  Pikovskaya  mengandung  yeast, dekstrosa,  kalsium  fosfat,  ammonium  sulfat, potassium  klorida,  magnesium  sulfat,  dan mangan  sulfat  serta  penambahan  agar. Terbentuknya zona bening dikarenakan ikatan kalsium-fosfat  terurai  di  media  Pikovskaya. Ikatan  kalsium-fosfat  terurai  karena  adanya proses pelarutan yang dilakukan asam organik yang dihasilkan oleh fungi tersebut.
Uji  Kuantitatif  Fungi  dalam  melarutkan fosfat.

## Gambar 2. Hasil Uji Kuantitatif Isolat Fungi
dalam Melarutkan Fosfat
Hasil  uji  kuantitatif  dari  fungi  pelarut fosfat (Gambar IV. 3) memperlihatkan bahwa isolate  E1    memiliki  kemampuan  tinggi
50,014 31,355 38,065 26,977 35,254 41,068 0 20 40 60 E1 F2 N1 I2 L1 A3 ko n se n tras i f os fat terlaru t (p p m ) Kode Isolat Terbentuk zona bening
melarutkan  fosfat  dengan  konsentrasi  fosfat terlarut   yaitu 50.014 ppm,  disusul  kemudian A1  =  41.068  ppm,  N1=  38.065  ppm,  L1= 35.254 ppm, F2 = 31.355 dan I2= 26.97 ppm.
Berdasarkan Gambar IV. 3, semua isolat fungi memiliki kemampuan dalam melarukan fosfat  dengan  kemampuan  bervariasi.  Hal  ini disebabkan  karena  setiap  mikroba  pelarut fosfat  menghasilkan  jenis  dan  jumlah  asam organik  yang  berbeda.  Menurut  Jumadi  dkk (2015)  asam  asam  organik  yang  dihasilkan mikroorganisme berbeda kualitas dan kuantitasnya dalam membebaskan fosfat. Hal ini juga sejalan dengan penelitian Yasser dkk., (2014) fungi pelarut fosfat (Phosfat Solubisation  Fungi/PSF)  dapat  diisolasi  dari Rhizosfir.
Uji  antagonisme  Fungi  terhadap  G. Boninense.
Isolat fungi dari risosfer tanaman Kelapa Sawit  sebanyak  35  isolat  telah  diuji  daya antagonisnya  terhadap  G.  boninense  Dengan motede  penanaman  berpasangan  di  dalam cawan petri dengan media PDA. Berdasarkan hasil  seleksi  diperoleh  hasil  sebagai  berikut (Tabel 1).

## Gambar 3. Zona Penghambatan pada Biakan Ganda
luas  koloni  fungi  pada  kultur  ganda mengindikasikan adanya mekanisme kompetisi terhadap ruang dan makanan. Besar kecilnya luas koloni agen hayati menunjukan kemampuannya  untuk  berkompetisi  dengan patogen,  semakin  luas  pertambahan  koloni agen hayati berarti semakin besar kemampuannya  untuk  berkompetisi  dengan patogen.  Hal  ini  ditunjukkan  oleh  isolat  E2, B2, R, O, B1, Q1, L1, R1, I3  koloninya lebih besar  dibanding  G.  boninense  (Gambar  4)
pada  masa  inkubasi  yang  sama  yaitu  5  hari sesudah inokulasi
Tabel  1.Tipe  Interaksi  dan  Persentase  Hambatan antara G. boninense dan Agen Hayati Pada Kultur
Ganda Kultur ganda Tipe interaksi Persentase Hambatan (%) Ganoderma sp. X E 2
Ganoderma sp. X B 2 Ganoderma sp. X R Ganoderma sp. X O Ganoderma sp. X B 1 Ganoderma sp. X Q 1 Ganoderma sp. X L 1 Ganoderma sp. X R 1 Ganoderma sp. X I 3
A A A A
A A A A A 100 100 100
100 100 100 100 100 100 Ganoderma sp. X A 3
Ganoderma sp. X N 1 Ganoderma sp. X L 2 Ganoderma sp. X F 3
B B B B 60,86 36 56,52 52,17
Sedangkan  isolat  A3,  N1,  L2  dan  F3 tidak mempunyai kemampuan kompetisi atau sangat kecil sekali kemampuannya berkompetisi  terhadap  ruang/makanan  akan tetapi  diduga  mampu  menghasilkan  senyawa antibiosis yang menjadi pembatas pertumbuhan G. Boninense. Hal ini ditunjukkan adanya zona bening antara koloni G. boninense dan isolat agen hayati (Gambar
3).
Terbentuknya zona penghambatan antar organisme  pada  media  padat  merupakan indikasi  bekerjanya  mekanisme  antibiosis. Bekerjanya  mekanisme  antibiosis  dikuatkan oleh  tertekannya  pertumbuhan  fungi  patogen pada media padat.
Berdasarkan  persentase    hambatan  dan kecepatan  tumbuh  isolat  dilipilih  isolat  E2 untuk  digunakan  dalam  uji  selanjutnya. Dimana  isolate  E2  mempunyai  persentase hambatan  sebesar  100  %  dan  dalam  waktu  3 hari  sudah  mampu  tumbuh  memenuhi  cawan petri.
Zona Penghambatan
Gambar 4. Kultur Ganda G. boninense dan Agen Hayati dengan Tipe Interaksi A Pada Media PDA
Umur 5 Hari Sesudah Inokulasi. Pengujian pada tanaman uji Perbedaan Formulasi Pupuk Hayati

## Terhadap Tinggi Tanaman Kelapa Sawit
Hasil  rerata  perbedaan  jenis  media tanam  terhadap  tinggi  tanaman  Kelapa  Sawit ditunjukan pada Tabel 2 dan Gambar 5.
Tabel 2 . Hasil Rerata Perbedaan Jenis Fungi terhadap Tinggi Kelapa Sawit.
Pada    Tabel  IV.  4  menunjukkan pertambahan tinggi tananam terbaik diperoleh pada  perlakuan  penambahan  Fungi  kode  E2 (T3) dengan tinggi pada saat awal pengamatan 16.33  ±  3.09,  di  akhir  pengamatan  diperoleh tinggi  19,87  ±  1,61  cm,  Untuk  melihat pertambahan  tinggi  tanaman  Kelapa  Sawit pada  masing-masing  perlakuan  dapat  dilihat pada Gambar IV. 6. Hasil uji analisis General linear  model  (GLM)  Repeated  measures menunjukan perbedaan perlakuan jenis formulasi pupuk hayati tidak memberikan  pengaruh  nyata  (p  ≥  0,05) terhadap pertumbuhan tanaman kelapa sawit.
Gambar 5. Pertambahan Tinggi Tanaman Kelapa Sawit pada Berbagai Macam Perlakuan.
Pada perlakuan T3 menghasilkan pertumbuhan  tinggi  tanaman  paling  optimal dibandingkan dengan perlakuan lainya. Hal ini diduga berdasarkan hasil identifikasi molekuler isolate E2 memiliki takson terdekat dengan  Trichoderma  viride.  Beberapa  hasil penelitian diketahui bahwa agen hayati seperti Trichoderma  sp.  mampu  memproduksi  asam organik,  seperti  glicinic,  citric  atau  asam fumaric,  yang  menurunkan  pH  tanah,  dan solubilisas  ifospat,  mikronutrient  dan  kation mineral seperti besi, mangan, dan magnesium, yang bermanfaat untuk metabolisme tanaman (Saba  dkk.,  2012),  serta  metabolit  yang meningkatkan pertumbuhan tanaman (Carvajal,  2009).    Kemampuan  inilah  yang diduga  mengakibatkan  pertumbuhan  tinggi tanaman  pada  perlakukan  T3  lebih  optimal dibanding perlakuan lainnya.
Beberapa  hasil  penelitian  diketahui bahwa  agens  hayati  seperti  Trichoderma  sp. juga  dapat  berfungsi  sebagai  dekomposer. fungi Trichoderma berperan sebagai dekomposer dalam proses pengomposan untuk mengurai  bahan  organik  (Soesanto,  2004). Trichoderma  sp.  sebagai  decomposer  diduga membantu mendegradasi bahan organik yang ada  di  dalam  TKKS    sehingga  lebih tersedianya  hara  bagi  pertumbuhan  tanaman. TKKS  terdekomposisi  dapat  memperbaiki struktur  tanah  dengan  cara  meningkatkan Kapasitas Tukar Kation (KTK) sehingga unsur hara  yang  diserap  oleh  tanaman  bisa maksimal.  Selain  itu  TKKS  terdekomposisi juga  dapat  meningkatkan  daya  serap  tanah terhadap  air  dan  zat  hara  sehingga  zat  hara dalam tanah tidak terbawa air (Samekto, 2006 dalam Afif, 2011).
2,37 d 2,03 d1,93 c 3,03 d 3,53 b3,4 a 0 1 2 3 4 5 K- K+ T1 T2 T3 T4 De lta p ertu m b u h an Tin ggi (c m) Kode Perlakuan
Perlakuan Jumlah Daun Tanaman Kelapa Sawit. 0 HST 14 HST 28 HST 42 HST 56 HST ------------------- helai ---------------- K- 4.67 5.00 4.67 4.78 4.67 K+ 3.00 3.00 5.00 3.67 5.00 T1 4.33 4.67 4.67 4.56 5.33 T2 4. 00   4. 00   4. 00   4. 00   4.33 T3 3.67 3.67 4.33 3.89 4.00 T4 4.33 5.00 5.00 4.78 5.00
Perbedaan Formulasi Pupuk Hayati
terhadap  jumlah  daun  tanaman  kelapa sawit
Hasil  rerata  perbedaan  jenis  media tanam  terhadap  jumlah  daun  tanaman  kelapa sawit ditunjukan pada Tabel 3 dan Gambar 6.
Tabel  3 .  Hasil  Rerata  Perbedaan  Jenis Fungi terhadap Tinggi Kelapa Sawit.
Perlakuan  penambahan  Pupuk  Organik Merk  X  menunjukkan  pertumbuhan  jumlah daun  terbaik  dengan  5  ±  1  helai,  sedangkan jumlah  daun  terendah  pada  perlakuan  tanah 100% (Kontrol) yaitu 4,67 ± 1,15 helai. Untuk melihat  Pertambahan  jumlah  daun  tanaman kelapa  sawit  pada  masing-masing  perlakuan dapat  dilihat  pada  Gambar  IV.8.  Hasil  uji analisis General linear model (GLM) Repeated  measures  menunjukan  perbedaan perlakuan  jenis  formulasi  pupuk  hayati  tidak memberikan  pengaruh  nyata  (p  ≥  0,05) terhadap pertumbuhan tanaman kelapa sawit.
Pertumbuhan jumlah daun paling optimal pada perlakuan K+ dengan penambahan daun sebanyak 2 helai. Sementara  itu  hasil  terbaik  untuk  perlakuan formulasi  pupuk  hayati  diperoleh  pada perlakuan  penambahan  fungi  kode  L1  (T1) dengan penambahan jumlah daun sebanyak 1 helai. Hal ini diduga berdasarkan hasil seleksi, isolat  L1  memiliki  kemampuan  dalam mendegradasi selulosa, melarutkan fosfat dan antagonisme dengan Ganoderma sp. Kemampuan  isolat  L1  dalam  mendegradasi selulosa akan berpengaruh terhadap turunnya kadar  karbon  dan  kadar  nitrogen  akan meningkat  sehingga C/N rasio  menjadi  kecil. Semakin  kecil  nisbah  C/N  menunjukkan
bahwa  bahan  organik  sudah  terdekomposisi dalam  TKKS.  Selain  itu  isolat  L1  juga mempunyai  kemapuan  dalam  melarutkan fosfat.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian Sembiring (2012) pemberian mikoriza pelarut fosfat  berpengaruh  terhadap  serapan  P tanaman inang.  Unsur nitrogen dan phosphor merupakan unsut hara makro yang dibutuhkan tanaman,  dimana  unsur  tesebut  berfungsi merangsang  pertumbuhan  vegetatif  seperti daun,  merangsang  pembelahan  sel  tanaman dan memperbesar jaringan sel. Unsur N dan P tersebutlah  yang  membantu  tanaman  kelapa sawit  melakukan  pembelahan  sel  yang meningkatkan pertumbuhan setiap minggunya (Afif, 2011).
Gambar 6. Grafik Pertumbuhan Jumlah Helai Daun Tanaman Kelapa Sawit pada Berbagai

## Macam Perlakuan

## Hasil Analisis kimia tanah
Hasil  analisis  kimia  Tanah  sebelum dilakukan perlakuan disajikan pada Tabel 4. Tabel  4.  Sifat  Kimia  Tanah  Sebelum Perlakuan No Parameter Satuan Hasil
1 pH H 2 O 6.45 KCl 1 N 5.08 2 P 2 O 5 Tersedia ppm 53.66
Hasil analisis kimia Tanah pada umur aplikasi 56 hari disajikan pada Tabel 5.
Dari Tabel 4 dan 5  dapat dilihat bahwa pemberian  berbagai  formulasi  pupuk  hayati memberikan  peningkatan  kandungan  P- Tersedia  di  tanah.  Akan  tetapi  jumlah  P- tersedia pada akhir percobaan masih di bawah kontrol, hal ini diduga karena P yang terikat di
0 2 1 0,33 0,33 0,67 -0,5 0 0,5 1 1,5 2 2,5 K- K+ T1 T2 T3 T4 Ju m lah Dau n (Hel ai) Jenis Perlakuan Perlakuan Tinggi Tanaman Kelapa Sawit 0 HST 14 HST 28 HST 42 HST 56 HST ------------------- cm ---------------- K- 20.80   21.20   21.73   22.27   23.17 K+ 18.67   18.67   19.47   20.10   20.70 T1 17.07   17.60   18.20   18.63   19.00 T2 15.87   17.03   17.57   17.97   18.90 T3 16.33   17.30   18.53   19.47   19.87 T4 22.60   23.80   24.50   25.13   26,00
dalam  tanah  dan  terlarut  akibat  enzim fosfatase  fungi  langsung  tersedia  dan  diserap oleh  tanaman  inang  sehingga  pemberian mikoriza  tidak  berpengaruh  terhadap  P tersedia  tanah  melainkan  terhadap  serapan  P tanaman  inang.  Hal  ini  sejalan  dengan Sulistyono,  dkk  (1999)  yang  menyatakan penurunan  P  tersedia  dalam  tanah  tersebut diduga  karena  mikoriza  telah  meningkatkan penyerapan P untuk metabolisme fungi sendiri dan untuk ditranslokasikan ke tanaman inang. Selain  itu  hasil  pertumbuhan  tanaman  sawit baik  perlakuan  penggunaan  formulasi  pupuk hayati maupun pupuk hayati merk X semua di atas  kontrol-,  hal  ini  menandakan  tanaman dengan  penambahan  formulasi  pupuk  hayati maupun pupuk merk X memiliki kemampuan menyerap unsur hara yang baik dibandingkan tanaman  yang  tidak  mendapatkan  perlakuan (kontrol-).  Menurut  Hanafiah  (2007),  masing masing  jenis  tanaman  mempunyai  kebutuhan dan kemampuan penyerapan unsur hara yang berbeda, hal ini pula yang diduga menyebabkan  perbedaan  konsentrasi  P- Tersedia pada masing-masing perlakuan.
Tabel  5.  Sifat  Kimia  Tanah  Akibat  Pemberian Formulasi Pupuk Hayati
Perlakuan
pH Tanah P 2 O 5
Tersedia
(ppm) H 2 O KCl 1 N K- 6,44 5,09 111,38 K+ 6,67 5,23 104,85 T 1 6,54 5,10 59,97 T 2 6,35 5,12 74,44 T 3 6,55 5,11 92,38 T 4 6,53 5,11 77,99

## Hasil Analisis Molekuler
Identifikasi  isolat  fungi  yang  memiliki kemampuan  dalam  mendegradasi  Selulosa, melarutkan  fosfat  dan  antagonisme  terhadap G.  boninense dilakukan  secara  molekuler berdasarkan  analisis  genetika  secara  parsial pada  lokus Internal  Transcribe  Spacer (ITS) ribosomal DNA fungi dapat dilihat pada Tabel 4.

## Tabel 4. Hasil Analisis Molekuler
Isolat Takson terdekat homology E1 Talaromyces pinophilus 100% E2 Trichoderma viride 100% L1 Acremonium cellulolyticus 100%

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan
1.  Berhasil  diperoleh  3  isolat  fungi  yang berpotensi mendegradasi selulosa, melarutkan fosfat, bersifat antagonist terhadap Ganoderma boinense.
2. Ketiga isolat tersebut teridentifikasi sebagai isolat E1 sebagai Talaromyces pinophilus, E2 sebagai  Trichoderma  viride  dan  L1  sebagai Acremonium cellulolyticus.
3.  Pemberian  formulasi  TKKS  dan  isolat  E2 (Trichoderma  viride)  pada  tanaman  uji, menunjukan hasil pertumbuhan tinggi tanaman kelapa sawit terbaik

## DAFTAR PUSTAKA
Afif  AK.  (2011):  Pemanfaatan  Limbah  Padat Proses  Pengolahan  Agar  Pt  Agarindo Bogatama sebagai Media Tanam Hortikultura,  Skripsi,  Fakultas  Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, Bogor, 56.
Apun  K.,  Jong  BC,  dan  Salleh  MA.  (2000): Screening  and  Isolation  of  A  Cellulolytic and  Amylolitic Bacillus from  Sago  Pith Waste, Journal of Gen.Appl. Microbiol, 46, 263 -267.
Carvajal  L,  Orduz  HS,  Bissett  J.  2009.  Growth simulation in beans ( Phaseolus vulgaris L.) by Trichoderma ). www. Sciencedirect.com .
Chanway  CP.  (1997):  Inoculation  of  Tree  Roots with  Plant  Growth  Promoting  Bacteria:  An Emerging  technology  for  reforestation, Forest Science 43: 96-112.
Direktorat  Jenderal  Perkebunan.  (2012):  Statistik
Kelapa Sawit 2009-2011,Departemen
Pertanian.
Hanafiah  KA.  (2007):  Dasar-Dasar    Ilmu  Tanah.
PT Raja Grafindo Persada, Jakarta, 358.
Hyakumachi M. dan Kubota M. (2003): Fungi as plant growth promoter and disease suppressor,  101-  110  dalam:  Fungal Biotechnology  in  Agricultural,  Food  and
Environmental  Application.  Arora  D.  K. (ed) Marcel Dekker.
Kasana,  Salwan,  Dhar,  Dutt  dan  Gulati  (2008):A
Rapid dan Easy Method for the Detection of Microbial  Cellulases  on  Agar  Plates  Using Gram’s Iodine.
Curr Microbiol . 57, 503–507.
Mujiyati  dan  Supriyadi  (2009):  Pengaruh  Pupuk Kandang  Dan  NPK  Terhadap  Populasi Bakteri  Azotobacter  Dan  Azospirillum Dalam  Tanah  Pada  Budidaya  Cabai (Capsicum  Annum).  Nusantara  Bioscience, 1, 59-64.
Puangsombat  P,  Sangwanit  U  dan  Marod  D.
(2010):  Diversity  of  soil  fungi  in  different land use type in Tha Kum-Huai Raeng forest reserve,  Trat  province. Kasetsart  J.  (Nat. Sci.) . 44, 1162-1175.
Rahmadi  R,  Awaluddin  A  dan  Itnawita.  (2014): Pemanfaatan Limbah Padat Tandan Kosong Kelapa  Sawit  Dan  Tanaman  Pakis-Pakisan Untuk  Produksi  Kompos  Menggunakan Aktivator Em-4. JOM FMIPA , 1.
Saba H, Vibhash D, Manisha M, Prashant KS dan Farhan  H.  (2012): Trichoderma promising plant  growth  stimulator  and  biocontrol agent. Mycosphere , 3(4), 524–531.
Shi LL, Mortimer PE, Slik JWF, Zou XM, Xu J, Feng WT  dan  Qiao  L.  (2013):  Variation in forest soil fungal diversity along a latitudinal gradient. Fungal Diversity. doi: 10.1007/s13225-013-0270-5.
Shobah  K.  (2015):  Keanekaragaman  Cendawan Pada Rizosfer Kelapa Sawit Dan Palem Liar,
Skripsi, Fakultas Pertanian, Institut
Pertanian Bogor, Bogor, 50. Antonius S. dan Agustiyana D. (2009) : Pengaruh Pupuk  Organik  Hayati  Yang  Mengandung Mikroba Bermanfaat Terhadap
Pertumbuhan  Dan  Hasil  Panen  Tanaman Semangka  Serta  Sifat  Biokimia  Tanahnya Pada  Percobaan  Lapangan  Di  Malinau- Kalimantan Timur, Berk. Penel. Hayati, 16, 203–206.
Soesanto  L.  (2004):  Ilmu  penyakit  pascapanen:
Sebuah  Pengantar.  Universitas  Jenderal Soedirman,  Purwokerto.  Subana,  M.  dan Sudraja,  S.  (2001):  Dasar-Dasar  Penelitian Ilmiah. Pustaka Setia Bandung, 240.
Sudiana,  Rahayu,  Imaduddin,  dan  Rahmansyah (2001):  Cellulolitic  Bacteria  of  Soil  of Gunung  Halimun  Nasional  Park, Berita Biologi 5, 703-710.
Sulistiyono E, Djoefrie M H B, dan Heningtyas I.
(1999): Pengaruh Inokulasi Fungi Mikoriza Arbuskula  (CMA)  dan  Berbagai  Taraf Pupuk  P  terhadap  Kadar  P  Daun  dan Kualitas  Bibit  Kelapa  Sawit  ( Elaeis guineensis Jacq.) di Pembibitan Pendahuluan. Buletin Agronomi, 7, 7-11.
Supadma  (2006)  :  Kesuburan  Tanah  dan Pemupukan  Tanah  Pertanian.  Pustaka Buana, Bandung.
Yasser  MM,  Massoud  ON  dan  Nasr  SH.  (2014):
Solubilization  of  inorganic  phosphate  by phosphate  solubilizing  fungi  isolated  from Egyptian  soils. Journal  of  Bio.  and  Earth Scie , 4, 83-90.
Zak DR, Holmes WE, White DC, Peacock AD dan Tilman  D.  (2003):  Plant  diversity,  soil microbial  communities,  and  ecosystem function:  are  there  any  links. Ecology , 84,2042-2050.