Volume 4, Nomor 1, Juni 2021 e-ISSN : 2598-7453 DOI: https://doi.org/10.31539/bioedusains.v4i1.2171
HISTOPATOLOGI TESTIS PADA TIKUS PUTIH ( Rattus norvegicus )

## YANG DIBERIKAN MINYAK JELANTAH DAN INFUSA
TEH HITAM ( Camellia sinensis )
Gina Fendiati Putri 1 , Liya Agustin Umar 2 , Elvira Yunita 3
Universitas Bengkulu 1,2,3 elvirayunita@unib.ac.id 3

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  menganalisis  efek  pemberian  infusa  teh  hitam  ( Camellia sinensis ) pada  gambaran histopatologi testis pada tikus putih ( Rattus norvegicus ) yang  telah  diinduksi  dengan  minyak  jelantah.  Desain  penelitian  ini  yaitu eksperimental post  test  only  control  group  design .  Subjek  penelitian menggunakan  24  ekor  tikus  yang  dibagi  menjadi  6  kelompok  dengan  6  minggu perlakuan.  Penilaian  keadaan  testis  dilakukan  menggunakan  kriteria Johnsen Score . Hasil penelitian ini menunjukkan terdapat perbedaan skor kerusakan testis antar kelompok perlakuan. Hasil analisis skor histopatologi tersebut menunjukkan bahwa  kelompok  yang  hanya  diberikan  minyak  jelantah  memiliki  tingkat kerusakan yang lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok yang hanya diberikan teh hitam. Adapun pada kelompok yang diberikan minyak jelantah dan teh hitam satu  jam  kemudian  memiliki  pengaruh  dalam  pencegahan  kerusakan  testis  tikus dengan nilai signifikansi p yaitu 0,018 dan 0,018. Simpulan, pemberian infusa teh hitam  dosis  0,50  gr/200  gram  BB  dan  0,75  gr/200  gram  BB  mampu  mencegah kerusakan akibat  induksi minyak dengan 12x pemanasan pada testis tikus Rattus norvegicus.
Kata Kunci : Camellia sinensis , Histopatologi, Minyak Jelantah, Testis Tikus

## ABSTRACT
This study aimed to analyze the effect of infusion of black tea (Camellia sinensis) on  the  histopathological  features  of  the  testes  in  white  rats  (Rattus  norvegicus) that  had  been  induced  with  used  cooking  oil.  The  design  of  this  research  is  an experimental  post-test  only  control  group  design.  The  research  subjects  used  24 rats which were divided into six groups with six weeks of treatment. The testicular condition was assessed using the Johnsen Score criteria. The results of this study indicate that there are differences in testicular damage scores between treatment groups. The results of the histopathological score analysis showed that the group that was given only used cooking oil had a higher level of damage than the group that was only given black tea. The group that was given cooking oil and black tea one  hour  later  affected  testicular  damage  in  rats  with  p  significance  values  of 0.018 and 0.018. In conclusion, giving black tea infusion at a dose of 0.50 g/200 gram  BW  and  0.75  gr/200  gram  BW  was  able  to  prevent  damage  due  to  oil induction with 12x heating in the testes of Rattus norvegicus rats.
Keywords : Camellia sinensis, Histopathology, Cooking Oil, Rat Testes

## PENDAHULUAN
Minyak goreng merupakan minyak nabati yang sudah dimurnikan dan dapat digunakan sebagai bahan pangan serta membuat makanan menjadi kering, renyah, berwarna keemasan/ kecoklatan, namun jika digunakan secara berulang kali akan membahayakan  kesehatan  (Sekaran  &  Semarang,  2018).  Minyak  goreng  yang digunakan  secara  berulang–ulang  dapat  mengurangi  kualitas  dan  menurunkan nilai  gizi  serta nilai  kalori dari bahan pangan  yang diolah dan penampakan  yang kurang  menarik  serta  menghasilkan  rasa  dan  bau  yang  tidak  enak  (Fanani  & Ningsih,  2019).  Minyak  goreng  yang  digunakan  lebih  dari  dua  kali  atau  tiga  kali tanpa  penambahan  minyak  goreng  yang  baru  disebut  sebagai  minyak  jelantah (Sekaran & Semarang, 2018).
Pemanasan  minyak  goreng  yang  berulang  dapat  menyebabkan  minyak mengalami  reaksi  autooksidasi,  polimerisasi  termal  dan  oksidasi  termal.  Proses oksidasi akan membentuk senyawa peroksida dan hidroperoksida yang merupakan radikal  bebas  (Khor  et  al.,  2019).  Radikal  bebas  memiliki  kemampuan  untuk merusak  jaringan  normal  jika  dalam  jumlah  yang  terlalu  banyak  sehingga mengakibatkan  gangguan  produksi  DNA,  lapisan  lipid  pada  dinding  sel, pembuluh  darah,  produksi  prostaglandin,  kerusakan  sel  dan  mengurangi kemampuan sel untuk beradaptasi terhadap lingkungannya. Salah satu efek radikal bebas  yang  berlebihan  dapat  merusak  sel  dan  DNA  organ  dalam  tubuh  seperti testis (Adwas et al., 2019).
Radikal bebas yang ada didalam tubuh akan menyebabkan sel menjadi stres oksidatif  yang  dapat  mempengaruhi  struktur  dan  isi  sel  seperti  DNA,  membran sel,  mitokondria  sehingga  menyebabkan  hilangnya  fungsi  sel  yang  menginduksi terjadinya  kematian  sel  atau  apoptosis  sel  yang  ada  di  testis  sehingga  dapat mengakibatkan perubahan motilitas, kualitas, volume dan jumlah sperma (Sayiner et  al.,  2019).  Peningkatan  radikal  bebas  di  dalam  tubuh  perlu  diatasi  dengan antioksidan. Saat ini sedang dikembangkan pengobatan tradisional menggunakan teh  hitam (Camelia  sinensis) yang  sudah  terbukti  memiliki  antioksidan  tinggi seperti  katekin  dan  flavanol  dan  dipercaya  dapat  mengatasi  adanya  radikal (Nguyen-Powanda & Robaire, 2020).
Teh  hitam  banyak  mengandung  flavon,  asam  fenolik  dan  depsides, karbohidrat,  alkaloid,  mineral,  vitamin  dan  enzim.  Teh  ini  juga  mengandung flavonoid,  senyawa  yang  dilaporkan  memiliki  sifat  antioksidan  yang  memiliki efek menguntungkan (Bernatoniene & Kopustinskiene, 2018). Polifenol dalam teh hitam  dikenal  sebagai  katekin  dan  mengandung  10–50%  katekin  berupa Epigallocatechin  Gallate (EGCG)  yang  merupakan  sumber  dari  sebagian  besar manfaat positif daun the. Hal ini didukung penelitian (Chang et al., 2020) bahwa kandungan  teh  hitam  tersebut  dapat  memperbaiki  morfologi  spermatozoa  yang rusak  karena  adanya  senyawa  katekin  dan  flavonoid  di  dalam  teh  hitam  yang berperan  sebagai  antiradiasi,  antioksidan,  antikanker,  dan  antimikroba  sehingga dapat  memperbaiki kualitas spermatozoa  yang rusak akibat adanya radikal  bebas yang  diproduksi  lipid  peroksidase  di  dalam Monosodium  Glutamate ( MSG ) (Opuwari & Monsees, 2020).
Penurunan  kualitas  sperma  dapat  terjadi  karena  berbagai  faktor  seperti hormonal,  penghambatan  fungsi  epididimis,  radiasi,  hiperkolesterolemia, merokok,  penggunaan  kortikosteroid  yang  tidak  sesuai  indikasi,  konsumsi alkohol,  adanya  varikokel  dan  obesitas  (Kamiński  et  al.,  2020).  Berdasarkan
uraian  di  atas,  penelitian  mengenai  efek  teh  hitam  terhadap  histopatologi  testis yang  diinduksi  minyak  jelantah  belum  dilaporkan  sehingga  penelitian  ini  perlu dilakukan.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  metode  rancangan  penelitian  eksperimental Completely  Random  Design  (CRD)  dengan  pola  post  test-only  control  group design  dan  menggunakan  hewan  uji  coba  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  jantan galur Sprague dawley. Lokasi penelitian dilakukan di Sarana Belajar Ilmu Hayati (SBIH)  Ruyani  sebagai  tempat  pemeliharaan,  perlakuan  hewan  coba  dan pembuatan  infusa.  Pembuatan  sediaan  histopatologi  akan  dilakukan  di Laboratorium Patologi Anatomi RSUD M. Yunus Bengkulu. Serta Laboratorium Riset  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan  Universitas  Bengkulu  untuk pemeriksaan preparat histopatologi testis tikus.
Teh hitam diperoleh dari pasar yang sudah dalam bentuk serbuk. Kemudian dibersihkan  dengan  air  mengalir.  Setelah  itu,  panaskan  serbuk  daun  teh  hitam sebanyak  10  gram  dan  aquades  sebanyak  100  ml  dalam  dalam  panci  kecil  yang dimasukkan  ke  dalam  panci  besar  berisi  air  dengan  suhu  90 ° C  selama  15  menit. Kemudian  saring  hasil  rebusan  untuk  memisahkan  infusa  dengan  serbuk  teh hitam.  Setelah  itu,  kekurangan  volumenya  ditambahkan  hingga  100  ml  dengan aquades hangat.
Subjek  penelitian  ini  yaitu  sebanyak  24  ekor  sampel  tikus Sprague  dawley jantan  yang  berusia  8-10  minggu  dengan  berat  200-300  gram . Jumlah  sampel yang  digunakan  berdasarkan  perhitungan  rumus Resource  Equation dengan minimal sampel 3 ekor dan maksimal sampel 4 ekor. Pada penelitian ini, peneliti mengambil  jumlah  sampel  3  ekor  kemudian  ditambah  10% dropout menjadi  4 ekor  per  tiap  kelompok.  Sebelum  perlakuan,  hewan  coba  diadaptasikan  di  SBIH Ruyani  selama  1  minggu.  Berat  badan  tikus  pada  tiap  kelompok  dilakukan penimbangan saat adaptasi, sebelum perlakuan dan setelah perlakuan.
Hewan  coba  dibagi  menjadi  6  kelompok  yaitu  kelompok  kontrol  (K0),
kelompok  perlakuan  1  (K1)  yang  diberikan  minyak  jelantah  12x  pemanasan  dan aquades, kelompok perlakuan 2 (K2)  yang diberikan teh hitam dosis 0,50 gr/200 grBB  dan  aquades,  kelompok  perlakuan  3  (K3)  yang  diberikan  teh  hitam  dosis 0,75  gr/200  grBB,  kelompok  perlakuan  4  (K4)  yang  diberikan  minyak  jelantah dan  teh  hitam  dosis  0,50  gr/200  grBB,  dan  kelompok  perlakuan  5  (K5)  yang diberikan minyak jelantah dan teh hitam dosis 0,75 gr/200 grBB. Setiap hewan uji diberikan perlakuan selama 6 minggu kemudian dieuthanasia untuk diambil organ testisnya dan dibuat sediaan histopatologi.
Variabel  bebas  penelitian  yaitu  infusa  teh  hitam  ( Camellia  sinensis) yang diberikan kepada tikus putih ( Rattus norvegicus ) jantan galur Sprague Dawley dan variabel  terikat  berupa  gambaran  histopatologi  testis  tikus  tersebut.  Hasil pengukuran  infusa  teh  hitam  terhadap  gambaran  histopatologi  testis  ditampilkan dalam bentuk tabel. Hasilnya dianalisis dengan uji statistik menggunakan metode Kruskall  Wallis  dan  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji post  hoc  Mann  Whitney untuk melihat hasil yang memiliki perbedaan nyata.

## HASIL PENELITIAN
Setiap  kelompok  hewan  coba  diberi  perlakuan  6  minggu  setelah  masa adaptasi  dan  didapatkan  penurun  berat  badan  hewan  coba  pada  minggu  pertama masa perlakuan (Gambar 1), namun berat badan kembali meningkat pada minggu kedua.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pertumbuhan  tikus  putih  dalam  keadaan normal  karena  berat  badan  akan  mengalami  kenaikan  seiring  dengan bertambahnya umur (Shirani et al., 2017).
Gambar  1.  Rerata  Berat  Badan  Kelompok  K0-K5  Saat  Masa  Adaptasi,

## Sebelum dan Setelah  Perlakuan
Data  berat  badan  sampel  yang  diperoleh  dilakukan  uji  normalitas  dengan menggunakan Shapiro-Wilk. Uji normalitas dilakukan pada data berat badan saat adaptasi,  sebelum  perlakuan,  dan  setelah  perlakuan  dan  diperoleh  nilai p> 0,05 yang menunjukkan data terdistribusi normal. Kemudian untuk melihat perbedaan antar  berat  badan  sampel  dilakukan  uji  t-berpasangan.  Berdasarkan  hasil  uji statistik, diperoleh rerata berat badan sampel pada masa adaptasi adalah  217,66 g ±  10,30  g.  Setelah  melewati  masa  adaptasi  atau  pada  saat  sebelum  diberikan perlakuan  berat  badan  sampel  mengalami  kenaikan  menjadi  226,16  g  ±  7,25  g. Hasil  analisis  uji  t-berpasangan  menunjukkan  nilai p <0,05  yang  artinya  terdapat perbedaan berat badan yang bermakna pada masa adaptasi dan sebelum perlakuan. Rerata  berat  badan  sampel  sebelum  perlakuan  adalah    226,16  g  ±  7,25  g. Sementara  itu  berat  badan  setelah  diberikan  perlakuan  mengalami  kenaikan menjadi  274,00  g  ±  45,13  g.  Hasil  analisis  uji  t-berpasangan  menunjukkan  nilai p <0,05  yang  artinya  terdapat  perbedaan  berat  badan  yang  bermakna  pada  saat sebelum dan setelah perlakuan.
Pembuatan  preparat  testis  dibuat  dengan  menggunakan  teknik  pemotongan transversal.  Hasil  preparat  dinilai  skoring  histopatologi  menggunakan  kriteria Johnsen  score. Hasil  pengamatan  peneliti  dinilai  tingkat  reliabilitas  antar pengamat  peneliti  dan  pengamat  ahli  dengan  uji  kappa.  Hasil  uji  kappa  pada penelitian ini didapatkan nilai 0,421 yang berarti masuk ke kategori cukup ( fair ), sehingga data yang digunakan dalam penelitian ini adalah data peneliti yang akan dimasukkan ke dalam uji normalitas.
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 K0 K1 K2 K3 K4 K5 B o bo t T ik us ( g ra m ) Saat Adaptasi Sebelum Perlakuan Setelah Perlakuan 217,66 g  ± 10,30 226,16 g ± 7,25 274,00 g ± 45,13

## Analisis Gambaran Histopatologi Testis Tikus
Hasil  gambaran  skor  histopatologi  testis  tikus  dilakukan  uji  normalitas distribusi  data  dengan Shapiro-Wilk didapatkan  data  skor  histopatologi  tidak terdistribusi  normal  kemudian  dilakukan  transformasi  data  didapatkan  data  skor tetap  tidak  terdistribusi  normal.  Hasil  uji  homogenitas  dengan Levene  Test didapatkan  data  memiliki  varians  yang  tidak  homogen  sehingga  uji parametric dengan  uji one-way ANOVA  tidak  dapat  dilakukan  karena  tidak  memenuhi syarat. Data kemudian diuji dengan uji non parametric yaitu Kruskal-Wallis dan didapatkan  nilai p sebesar  0,001,  artinya  paling  tidak  terdapat  perbedaan bermakna  dari  skor  histopatologi  antar  kelompok.    Perbedaan  skor  histopatologi antar kelompok selanjutnya dilihat pada analisis Post Hoc dengan Mann-Whitney. Gambar  2.  hasil  uji Post  Hoc antara  kelompok  kontrol  (K0)  dengan kelompok  perlakuan  1  (K1)  menunjukkan  berbeda  bermakna  secara  statistik berdasarkan nilai signifikansi p : 0,014 (<0,05) . Hal ini menunjukkan pemberian minyak  jelantah  12x  pemanasan  menyebabkan  kerusakan  pada  gambaran  testis tikus  putih  berdasarkan  rerata  skor  histopatologi . Hasil  analisis  data  pada kelompok  kontrol  (K0)  dengan  kelompok  perlakuan  4  (K4)  dan  kelompok perlakuan 5 (K5) menunjukkan terdapat perbedaan skor kerusakan yang bermakna dengan  nilai p  : 0,011 dan p :  0,040.  Hal  ini    menunjukkan  bahwa  terdapat perbedaan  skor  histopatologi  pada  kelompok  yang  hanya  diberi  aquades  dengan kelompok  yang  diberi  minyak  jelantah  12x  pemanasan  dan  teh  hitam  sebanyak 0,50gr/200  grBB  dan  diberi  minyak  jelantah  12x  pemanasan  dan  teh  hitam sebanyak  0,75gr/200  grBB,  berarti  secara  statistik  teh  hitam  dengan  dosis 0,50gr/200  grBB  dan  0,75gr/200  grBB  pada  tikus  putih  yang  sebelumnya diinduksi minyak jelantah 12x tidak menunjukkan peningkatan skor histopatologi seperti kelompok kontrol.
Gambar 2. Rerata Skor Histopatologi Kelompok K0-K5
Analisis uji Post Hoc dengan uji Kruskal-Wallis pada kelompok perlakuan 1 (K1)  terhadap  kelompok  perlakuan  4  (K4)  dan  kelompok  perlakuan  5  (K5) menunjukkan  nilai  signifikansi p :  0,018 dan p :  0,018 . Ini  menunjukkan  bahwa secara statistik pemberian teh hitam meningkatkan skor histopatologi testis setelah pemberian  minyak  jelantah  12x  pemanasan.  Hal  ini  ditunjukkan  dengan
10 ± 0 8,3 ± 0,25* 9,4 ± 0,01 9,9 ± 0,11 9,5 ± 0,10*# 9,8 ± 0,10*# 0 2 4 6 8 10 12 KO K1 K2 K3 K4 K5 Re ra ta S k o r H isto p a to lo g i Kelompok Perlakuan
peningkatan  skor  histopatologi  pada  kelompok  K4  dan  K5  dibandingkan kelompok K1 yang hanya diberi induksi minyak jelantah 12x pemanasan.
Hasil  uji Post  Hoc pada  kelompok  perlakuan  2  (K2)  terhadap  kelompok perlakuan  4  (K4) didapatkan  nilai p  : 0,186 yang  menunjukkan  tidak  terdapat perbedaan yang bermakna. Hal ini menunjukkan bahwa secara statistik pemberian teh hitam dengan dosis  0,50gr/200 grBB  dapat  meningkatkan skor histopatologi testis  tikus  meskipun  sebelumnya  telah  diinduksi  oleh  minyak  jelantah  dengan 12x  pemanasan.  Demikian  juga  halnya  dengan  uji Post  Hoc pada  kelompok perlakuan 3 (K3) terhadap kelompok perlakuan  5 (K5) didapatkan nilai p: 0,495 yang  menunjukkan  tidak  terdapat  perbedaan  yang  bermakna.  Hal  ini  pun menunjukkan bahwa secara statistik pemberian teh hitam dengan dosis 0,75gr/200 grBB    dapat  meningkatkan  skor  histopatologi  testis  tikus  meskipun  sebelumnya telah diinduksi oleh minyak jelantah dengan 12x pemanasan. Peneliti mengamati gambaran  histopatologi  tubulus  seminiferus  testis  tikus  yang  disesuaikan  dengan johnsen  score berikut  gambaran  histopatologi  dari  masing-masing  kelompok perlakuan:

## Kelompok Kontrol Negatif (K0)
Kelompok  K0  adalah  kelompok  yang  hanya  diberi  pakan  rat  bio  dan aquades. Gambaran histopatologi K0 dapat dilihat pada gambar berikut:
Gambar  3.  Struktur  Histologi  testis  tikus Rattus  norvegicus kelompok  kontrol (K0);  A  dan  B    Skor  10:  spermatogenesis  lengkap,  lumen  tubulus terbuka, sel spermatozoa ≥5. Keterangan: Sg: Spermatogonium, Sc:
Spermatosit, St: Spermatid,  Sz: Spermatozoa, dan Ss: Sel Sertoli
Sg Sz Sc St B St Sg Sz Sc A

## Kelompok Kontrol Positif I (K1)
Kelompok  K1  adalah  kelompok  yang  diberikan  minyak  jelantah  12x pemanasan. Gambaran histopatologi K1 dapat dilihat pada gambar berikut:
Gambar  4.    Struktur  Histopatologi  testis  tikus Rattus  norvegicus kelompok kontrol positif I (K1); (A) Skor 8 sel spermatozoa <5; (B) Skor 7: sel  spermatozoa  0,  sel  spermatid  ≥5.  Keterangan:  Sg:
Spermatogonium, St: Spermatosit, Sd: spermatid, Sz:
spermatozoa, Ss: sel Sertoli

## Kelompok Kontrol Positif II (K2)
Kelompok  K2  adalah  kelompok  yang  diberikan  teh  hitam  dosis  0,50 gr/200grBB. Gambaran histopatologi K2 dapat dilihat pada gambar berikut:
S g S St Sz A B St S S g A S Sg S St Sc
Gambar  5.    Struktur  Histopatologi  testis  tikus Rattus  norvegicus kelompok kontrol  positif    II  (K2)  (A)  Skor  10:  spermatogenesis  lengkap, lumen  tubulus  terbuka,  sel  spermatozoa  ≥5;  (B)  Skor  9:  lumen tertutup,  spermatogenesis  lengkap,  dan  spermatozoa  ≥5;  sel spermatozoa 0, sel spermatid ≥5. Keterangan: Sg: Spermatogonium, St: Spermatosit, Sd: spermatid, Sz:
spermatozoa, Ss: sel Sertoli

## Kelompok Kontrol Positif III (K3)
Kelompok  K3  adalah  kelompok  yang  diberikan  teh  hitam  dosis  0,75 gr/200grBB. Gambaran histopatologi K3 dapat dilihat pada gambar berikut:
Gambar  6.    Struktur  Histopatologi  testis  tikus Rattus  norvegicus kelompok kontrol  positif    III  (K3)  (A)  Skor  10:  spermatogenesis  lengkap, lumen  tubulus  terbuka,  sel  spermatozoa  ≥5;  (B)  Skor  9:  lumen tertutup,  spermatogenesis  lengkap,  dan  spermatozoa  ≥5;  sel spermatozoa 0, sel spermatid ≥5
S z St Sc Sg Ss B A Ss Sz St Sc Sg B St Sz Sc Sg Ss

## Kelompok Perlakuan I (K4)
Kelompok  K4  adalah  kelompok  yang  diberikan  minyak  jelantah  12x pemanasan  yang  selanjutnya  diberikan  infusa  teh  hitam  dosis  0,50  gr/200grBB.. Gambaran histopatologi K3 dapat dilihat pada gambar berikut:
Gambar  7.    Struktur  Histopatologi  testis  tikus Rattus  norvegicus kelompok perlakuan  I  (K4)  (A)  Skor  9:  lumen  tertutup,  spermatogenesis lengkap,  dan  spermatozoa  ≥5;  (B)  Skor  8  sel  spermatozoa  <5; Keterangan: Sg: Spermatogonium, St: Spermatosit, Sd: spermatid, Sz: spermatozoa, Ss: sel Sertoli

## Kelompok Perlakuan II (K5)
Kelompok  K5  adalah  kelompok  yang  diberikan  minyak  jelantah  12x pemanasan  yang selanjutnya diberikan infusa teh hitam dosis 0,75  gr/200 grBB.. Gambaran histopatologi K5 dapat dilihat pada gambar berikut:
B Sg Sc St Sz A St Sz Sc Sg Sg
A Sg S S S S
Gambar  8.    Struktur  Histopatologi  testis  tikus Rattus  norvegicus kelompok perlakuan II (K5)  (A)  Skor 10: spermatogenesis lengkap, lumen tubulus terbuka, sel spermatozoa ≥5; (B) Skor 9: lumen tertutup, spermatogenesis lengkap, dan spermatozoa ≥5; sel spermatozoa 0, sel  spermatid  ≥5.  Keterangan:  Sg:  Spermatogonium,  St: Spermatosit, Sd: spermatid, Sz: spermatozoa, Ss: sel Sertoli

## PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan untuk melihat pengaruh pemberian infusa teh hitam ( Camellia  sinensis )  terhadap  gambaran  histopatologi  testis  tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  yang  diinduksi  minyak  jelantah.  Pemberian  perlakuan  pada  tikus diberikan  selama  6  minggu.  Sebelum  diberi  perlakuan,  hewan  coba  terlebih dahulu  diadaptasi  selama  7  hari.  Hewan  coba  sebanyak  24  ekor  dibagi  dalam  6 kelompok  perlakuan  dengan  masing-masing  kelompok  terdapat  4  ekor  hewan coba.  Kelompok  perlakuan  terdiri  dari  kelompok  kontrol  negatif  (K0)  yang diberikan  aquades  dan  1  jam  kemudian  diberikan  kembali  aquades,  kelompok perlakuan 1 (K1) yang diberikan minyak jelantah 12x penggorengan sebanyak 1,5 ml dan aquades, kelompok perlakuan 2 (K2) yang diberi infusa teh dengan dosis 0,50 gr/200 grBB dan aquades, kelompok perlakuan 3 (K3) yang diberi infusa teh dengan  dosis  0,75  gr/200  grBB  dan  aquades,  kelompok  perlakuan  4  (K4)  dan kelompok  perlakuan  5  (K5)  yang  diberikan  minyak  jelantah  12x  penggorengan sebanyak  1,5  ml  dan  infusa  teh  dengan  masing-masing  dosis  0,50  gr/200  grBB dan  0,75  gr/200  grBB.  Pada  hari  ke-50  setiap  kelompok Rattus  norvegicus di euthanasia kemudian  dilakukan  laparatomi  untuk  diambil  organ  testisnya  dan difiksasi dengan menggunakan formalin buffer 10%.
Testis merupakan organ reproduksi pria dengan fungsi pembentukan sperma dan penghasil hormon testosteron. Testis terdiri dari 900 tubulus seminiferus yang didalamnya  akan  terjadi  proses  spermatogenesis.  Testis  memiliki  vaskularisasi yang  buruk  dengan  tekanan  oksigen  yang  rendah  yang  merupakan  komponen penting  dari  mekanisme  testis  untuk  melindungi  dirinya  dari  kerusakan  akibat radikal bebas (Treuting et al., 2017).
Penggunaan  minyak  goreng  berulang  dengan  suhu  tinggi  akan  membentuk senyawa  peroksida  dan  aldehid  yang  merupakan  sumber  radikal  radikal  bebas bagi  organ  termasuk  testis.  Tingginya  produksi  ROS  dapat  merusak  dari  DNA, lipid,  dan  juga  protein  (Adwas  et  al.,  2019).  Perubahan  pada  DNA  sperma  akan menyebabkan  infertilitas.  Spermatozoa  di  bawah  tekanan  oksigen  tinggi  dan produksi  Hidrogen  Peroksida  (H 2 O 2 )  yang  tinggi  akan  mengurangi  laju  dan motilitas  sperma.  Produksi  ROS  pada  testis  harus  dicegah  secara  terus-menerus
B Sz St Sc Sg Ss
sehingga  konsentrasi  ROS  tetap  cukup  rendah  untuk  memungkinkan  kinerja  sel yang  normal.  Kelebihan  radikal  bebas  dalam  tubuh  dapat  mempengaruhi  proses spermatogenesis  yang terjadi di dalam testis karena pada proses spermatogenesis terjadi  pembelahan  sel  dengan  tingkat  penggunaan  oksigen  yang  tinggi  pada mitokondria  epitel  germinal  dan  rentan  terhadap  stress  oksidatif  (Asadi  et  al., 2017).
Analisis  dari  skor  kerusakan  histopatologi  testis  pada  kelompok  K1  yang diinduksi  minyak  jelantah  dengan  12x  pemanasan  dan  aquades  memiliki perbedaan  bermakna  dengan  kelompok  K0  yang  hanya  diberi  aquades.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  pemberian  minyak  jelantah  12x  pemanasan  menyebabkan kerusakan  histopatologi  testis  tikus.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan oleh  (Ananto  et  al.,  2017)  juga menyatakan bahwa terdapat  kerusakan organ  pada  pemberian  minyak  jelantah  dengan  12x  pemanasan  sebanyak  1,5  ml pada  tikus Rattus  norvegicus. Kerusakan  histopatologi  testis  terjadi  karena Radikal bebas pada penelitian ini didapatkan dari minyak jelantah (Ananto et al., 2017).
Minyak jelantah merupakan minyak yang sudah mengalami pemanasan atau penggorengan berulang kali pada suhu tinggi sehingga mengakibatkan kerusakan pada  minyak.  Kemudian,  proses  ini  mengakibatkan  pecahnya  ikatan  trigliserida pada minyak dan selanjutnya membentuk gliserol dan asam lemak bebas (Sayiner et  al.,  2019).  Asam  lemak  akan  membentuk  asam  lemak  jenuh  dan  asam  lemak trans  serta  radikal  bebas.  Radikal  bebas  yang  cukup  tinggi  dalam  tubuh  dapat merusak  membran  lipid  melalui  peroksidasi  lipid,  merusak  DNA,  dan  protein sehingga  mengakibatkan  gangguan  spermatogenesis  dan  fungsi  sperma  pada organ  testis  (Sayiner  et  al.,  2019). Membran  sel  spermatozoa  kaya  akan Polyunsaturated  Fatty  Acid (PUFA)  yang  berfungsi  menjaga  fluiditas  membran sel  sperma,  namun  hal  ini  juga  membuat  sel  sperma  sangat  rentan  terhadap kerusakan  oksidatif  karena  radikal  bebas  mengambil  elektron  dari  molekul  O 2 pada  membran  sel.  Membran  sel  yang  telah  kehilangan  elektron  akan  dioksidasi dan  dapat  menjadi  lipid  peroksidasi  baru  yang  dapat  menyerang  molekul  lain untuk  menstabilkan  perubahan  yang  terjadi  sehingga  menyebabkan  stress oksidatif (Nguyen-Powanda & Robaire, 2020).
Hasil  rerata  skor  histopatologi  testis  kelompok  K4  dan  K5  yang dibandingkan  dengan  K1  memiliki  perbedaan  bermakna  yang  menunjukkan pemberian infusa teh hitam dengan dosis 0,50 gr/200 grBB dan 0,75 gr/200 grBB dapat meningkatkan rerata skor histopatologi pada tikus putih yang telah diinduksi minyak  jelantah  dengan  12x  pemanasan.  Hal  tersebut  karena  pada  teh  hitam terdapat  aktivitas Thearubigin yang  dioksidasi  dari  katekin  dan  memiliki  gugus hidroksil yang dapat berfungsi sebagai antiradikal bebas atau antioksidan.
Thearubigin dapat  meningkatkan  antioksidan  alami  yang  terdapat  dalam tubuh  seperti  glutathione-S  transferase  (GST),  glutathione  peroksidase  (GPX), dismutase  superoksida  (SOD)  dan  katalase  (CAT)  yang  disertai  dengan menurunnya tingkat oksidasi lipid dan menghambat aktivitas xantin oksidase yang merupakan enzim pembentukan utama dari radikal bebas (Tong et al., 2019). Hal ini  sejalan  dengan  penelitian  yang  oleh  (Azizi  &  Mehranjani,  2019)  yang menunjukkan  terjadi  peningkatan  jumlah,  motilitas  dan  volume  sperma  dan viabilitas pada tikus  jantan galur Wistar  yang diberikan ekstrak teh hijau. Faktor lainnya  yang juga diamati pada penelitian ini  yaitu  diameter dan volume tubulus
seminiferus  serta  volume  testis  yang  mengalami  penurunan  dibandingkan kelompok kontrol.
Gambaran  histopatologi  kelompok  K4  dan  K5  menunjukkan  terdapat perbedaan  yang  bermakna  dibandingkan  dengan  kelompok  K0.  Hal  tersebut menyatakan  pemberian  infusa  teh  hitam  dosis  0,50  gr/200  dan  dosis  0,75  gr/200 grBB secara statistik belum  mampu membuat  gambaran histopatologi  mendekati normal  meskipun  secara  gambaran  histopatologi  terjadi  peningkatan  skor kerusakan  histopatologi.  Hal  ini  dilihat  dari  gambaran  mikroskopik  tubulus seminiferus  tampak  spermatogenesis  tidak  lengkap  jika  dibandingkan  dengan kelompok kontrol. Hal ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan  (Opuwari & Monsees,  2020)  mengenai  pengaruh  teh  hitam  terhadap  testis  yang  diinduksi radikal  bebas  didapatkan  bahwa  tubulus  seminiferus  berliku-liku,  hilangnya proses  spermatogenesis,  penurunan  jumlah  sel  interstitial  Leydig,  edema, nekrosis,  dan  fibrosis  interstitial  mengalami  perbaikan  setelah  diberikan  2%  dan 5% infusa teh hitam (Opuwari & Monsees, 2020).
Hasil  analisis  skor  histopatologi  K2  terhadap  kelompok  K4  menunjukkan perbedaan  yang  tidak  bermakna.  Sama  halnya  dengan  perbandingan  pada  K3 terhadap  K5  juga  menunjukkan  perbedaan  yang  tidak  bermakna  namun  terjadi peningkatan  skor  rerata  histopatologi  testis  tikus  yang  diinduksi  minyak  jelantah 12x  pemanasan.  Hal  ini  menunjukkan  kadar  senyawa  aktif  didalam  teh  hitam tidak  memiliki  efek  toksisitas  terhadap  organ  testis  tikus  dengan  dosis  yang berbeda. Namun hal  ini  berbeda pada organ  ginjal  dan hepar  yang menunjukkan bahwa  kadar  senyawa  aktif  yang  terdapat  di  dalam  teh  hitam  menunjukkan  efek toksisitas terhadap organ ginjal dan hepar dengan dosis yang berbeda (Opuwari et al., 2020).
Analisis  perbandingan  kelompok  K4  dengan  kelompok  K5  memiliki perbedaan  bermakna  yang  menunjukkan  bahwa  tingkatan  perbaikan  skor histopatologi dengan pemberian infusa teh hitam dosis 0,50 gr/200 grBB berbeda dengan pemberian infusa teh hitam dosis 0,75 gr/200 grBB. Pada rerata skor yang didapat,  terlihat  bahwa  pemberian  infusa  teh  hitam  dosis  0,75  gr/200  grBB memiliki efektifitas  yang lebih baik  dalam mencegah kerusakan testis pada tikus putih yang telah diinduksi minyak jelantah dengan 12x pemanasan dibandingkan dengan  pemberian  infusa  teh  hitam  dosis  0,50  gr/200  grBB.  Hal  ini  sejalan penelitian  yang  dilakukan  oleh  (Panjiasih  Susmiarsih  et  al.,  2018)  yang menyatakan  bahwa  ekstrak  daun  teh  hijau  dapat  memperbaiki  konsentrasi  dan kecepatan spermatozoa pada tikus yang telah dipaparkan dengan asap rokok.

## SIMPULAN
Induksi minyak jelantah 12x pemanasan menyebabkan kerusakan pada testis tikus Rattus  norvegicus. Pemberian  infusa  teh  hitam  dosis  0,50  gr/200  gramBB dan  0,75  gr/200  gramBB  mampu  mencegah  kerusakan  akibat  induksi  minyak dengan 12x pemanasan pada testis tikus Rattus norvegicus. Pemberian infusa teh hitam dosis 0,75 mg/200 gramBB lebih efektif untuk mencegah kerusakan akibat induksi  minyak  dengan  12x  pemanasan  dibandingkan  dengan  pemberian  infusa teh hitam dosis 0,50 mg/200 gramBB.

## DAFTAR PUSTAKA
Ananto,  A.  S.,  Wulan,  A.  J.,  Kedokteran,  F.,  Lampung,  U.,  Anatomi,  B., Kedokteran,  F.,  Lampung,  U.,  Kedokteran,  B.  P.,  Kedokteran,  F.,  & Lampung,  U.  (2017).  Pengaruh  Pemberian  Minyak  Jelantah  terhadap Perbedaan  Rerata  Kerusakan  Gambaran  Histologi  Jaringan  Usus  Halus Tikus Jantan ( Rattus norvegicus ) Galur Sprague dawley . Medula , 7 (5), 187–
193.
http://juke.kedokteran.unila.ac.id/index.php/medula/article/view/2006/pdf Asadi,  N.,  Bahmani,  M.,  Kheradmand,  A.,  &  Rafieian-Kopaei,  M.  (2017).  The Impact  of  Oxidative  Stress  on  Testicular  Function  and  the  Role  of Antioxidants in Improving It: A Review. Journal of Clinical and Diagnostic Research , 11 (5), 1–5. https://doi.org/10.7860/JCDR/2017/23927.9886 Adwas,   A.  A.,  Elsayed,  A.  S.  I.,  Azab,  A.  A.,  &  Quwaydir,  F.  A.  (2019).
Oxidative  Stress  and Antioxidant  Mechanisms  in Human Body. Journal  of Applied Biotechnology & Bioengineering , 6 (1), 43–47. https://doi.org/10.15406/jabb.2019.06.00173
Azizi,  P.,  &  Mehranjani,  M.  S.  (2019).  The  Effect  of  Green  Tea  Extract  on  the Sperm  Parameters  and  Histological  Changes  of  Testis  in  Rats  Exposed  to Para-Nonylphenol. International  Journal  of  Reproductive  BioMedicine , 17 (10), 717–726. https://doi.org/10.18502/ijrm.v17i10.5290
Bernatoniene,  J.,  &  Kopustinskiene,  D.  M.  (2018).  The  Role  of  Catechins  in Cellular  Responses  to  Oxidative  Stress. Molecules , 23 (4),  1–11. https://doi.org/10.3390/molecules23040965
Chang, M. Y., Lin, Y. Y., Chang, Y. C., Huang, W. Y., Lin, W. S., Chen, C. Y., Huang,  S.  L.,  &  Lin,  Y.  S.  (2020).  Effects  of  Infusion  and  Storage  on Antioxidant  Activity  and  Total  Phenolic  Content  of  Black  Tea. Applied Sciences (Switzerland) , 10 (8), 1-10. https://doi.org/10.3390/APP10082685
Fanani, N., & Ningsih,  E. (2019). Analisis Kualitas Minyak Goreng Habis Pakai yang  Digunakan  oleh  Pedagang  Penyetan  di  Daerah  Rungkut  Surabaya Ditinjau  dari  Kadar  Air  dan  Kadar  Asam  Lemak  Bebas  (ALB). Jurnal IPTEK , 22 (2), 59–66. https://doi.org/10.31284/j.iptek.2018.v22i2.436
Kamiński,  P.,  Baszyński,  J.,  Jerzak,  I.,  Kavanagh,  B.  P.,  Nowacka-Chiari,  E., Polanin, M., Szymański, M., Woźniak, A., & Kozera, W. (2020). External and Genetic Conditions Determining Male Infertility. International Journal of Molecular Sciences , 21 (15), 1–27. https://doi.org/10.3390/ijms21155274 Khor, Y. P., Hew, K. S., Abas, F., Lai, O. M., Cheong, L. Z., Nehdi, I. A., Sbihi, H. M., Gewik, M. M., & Tan, C. P. (2019). Oxidation and Polymerization of Triacylglycerols:  In-Depth  Investigations  towards  the  Impact  of  Heating Profiles. Foods , 8 (10), 1–15. https://doi.org/10.3390/foods8100475
Nguyen-Powanda,  P.,  &  Robaire,  B.  (2020).  Oxidative  Stress  and  Reproductive
Function in the Aging Male. Biology , 9 (9), 1–15.
https://doi.org/10.3390/biology9090282
Opuwari,  C.  S.,  &  Monsees,  T.  K.  (2020).  In  Vivo  Effects  of  Black  Tea  on  the Male  Rat  Reproductive  System  and  Functions  of  the  Kidney  and  Liver. Andrologia , 52 (4), 1–10. https://doi.org/10.1111/and.13552
Panjiasih  Susmiarsih,  T.,  Kenconoviyati,  K.,  &  Kuslestari,  K.  (2018).  Potensi Ekstrak  Daun  Teh  Hijau  terhadap  Morfologi  dan  Motilitas  Spermatozoa Tikus  Putih  ( Rattus  norvegicus )  setelah  Paparan  Asap  Rokok. Majalah
Kesehatan Pharmamedika , 10 (1), 1-7. https://doi.org/10.33476/mkp.v10i1.682
Sayiner, S., Gülmez, N., Sabit, Z., & Gülmez, M. (2019). Effects of Deep-Frying Sunflower Oil on Sperm Parameters in a Mouse Model: Do Probiotics Have a Protective Effect? Kafkas Universitesi Veteriner Fakultesi Dergisi , 25 (6), 857–863. https://doi.org/10.9775/kvfd.2019.22063
Sekaran,  K.,  &  Semarang,  G.  (2018).  Pengolahan  Minyak  Goreng  Bekas (Jelantah)  sebagai  Pengganti  Bahan  Bakar  Minyak  Tanah  (Biofuel)  bagi Pedagang  Gorengan  di  Sekitar  FMIPA  UNNES. Rekayasa , 15 (2),  89–95. https://doi.org/10.15294/rekayasa.v15i2.12588
Tong, T., Liu,  Y. J., Kang, J., Zhang, C. M., &  Kang, S. G. (2019). Antioxidant Activity  and  Main  Chemical  Components  of  a  Novel  Fermented  Tea. Molecules , 24 (16), 1–14. https://doi.org/10.3390/molecules24162917
Treuting,  P.  M.,  Dintzis,  S.  M.,  &  Montine,  K.  S.,  2017. Comparative  Anatomy dan Histology: A Mouse, Rat, dan Human Atlas. 2nd edn . USA: Academic Press