Efek  suplementasi β-carotene terhadap  kolesterol  total,  trigliserida  dan malondialdehid pada tikus sprague dawley yang diabet
Devi Ermawati 1 , Banundari Rachmawati 2 , Nyoman Suci W. 2

## ABSTRACT
Backgrounds : diabetes mellitus (DM) is associated with increased total cholesterol and triglyceride, also well characterized by increased malondialdehyde production. β-carotene has antioxidant activity, glycemic and lipid control.
Objective  : to  analyze  the  effect  of  β-carotene  on  total  cholesterol,  triglyceride  and  MDA  on  diabetic  Rattus  norvegicus sprague dawley.
Methods : thirty rats were randomly divided into 5 groups : 1 (STZ), 2 (STZ+β-carotene 1 mg/kg BW), 3 (STZ+β-carotene 10 mg/kg BW), 4 (STZ+β-carotene 20 mg/kg BW), 5 (normal). Streptozotocin induced intraperitoneal 40 mg/kg BW. β-carotene was  given  by  nasogastric  tube  on  alternate  days  within  thirty  days.  Blood  glucose  level  was  measured  by  GOD-PAP,  total cholesterol  by  CHOD-PAP,  triglyceride  by  GPO  and  MDA  by  ELISA  with  TBARS  methods.  Hypothesis  test  used  one  way anova then followed by post hoc bonferroni to analyze the efficient dose effect.
Results : there was a significant difference of total cholesterol (p=0.002) after β-carotene 10 mg/kg BW supplementation on alternate days within 30 days orally. β-carotene 10 mg/kg BW was the most efficient dose to lowering total cholesterol. There were significant differences of triglyceride (p=0.0001) and MDA (p=0.0001) after β-carotene 1, mg/kg BW, 10 mg/kg BW and 20 mg/kg BW supplementation on alternate days within 30 days orally. β-carotene 10 mg/kg BW was the most efficient dose to lowering triglyceride, while 20 mg/kg BW to lowering MDA.
Conclusion : β-carotene 10 mg/kg BW is the most efficient dose to lowering total cholesterol and triglyceride. β-carotene 20 mg/kg BW is the most efficient dose to lowering MDA.
Key words : β-carotene, total cholesterol, triglyceride, malondiadehyde, diabetic

## ABSTRAK
Latar Belakang : diabetes mellitus (DM) berkaitan dengan peningkatan kadar kolesterol total dan trigliserida, serta ditandai dengan peningktan produksi malondialdehyde. β-carotene mempunyai aktifitas antioksidan, kontrol glikemik dan kontrol lipid. Tujuan :  membuktikan  pengaruh  pemberian  β-carotene  terhadap  penurunan  kadar  kolesterol  total,  trigliserida  dan  MDA pada tikus jantan Rattus norvegicus sprague dawley diabetik.
Metode : tiga puluh ekor tikus dibagi acak menjadi 5 kelompok : 1 (stz), 2 (stz+β-carotene 1 mg/kg BB), 3 (stz+β-carotene 10 mg/kg  BB),  4  (stz+β-carotene  20  mg/kg  BB),  5  (normal).  Induksi  streptozotocin  40  mg/kg  BB  intraperitoneal.  β-carotene diberikan  melalui  sonde  dua  hari  sekali  dalam  30  hari.  Pemeriksaan  kadar  glukosa  darah  dengan  metode  GOD-PAP, kolesterol  total  menggunakan  CHOD-PAP,  trigliserida  menggunakan  GPO  dan  MDA  dengan  metode  TBARS.  Uji  hipotesis penurunan  kadar  kolesterol  total,  trigliserida  dan  MDA  setelah  perlakuan  suplementasi  β-carotene  diuji  dengan  one  way anova dan dilanjutkan dengan post hoc bonferroni untuk menganalisa dosis yang paling efektif dan efisien.
Hasil : terdapat perbedaan dengan bermakna pada kadar kolesterol total (p=0,002) setelah pemberian β-carotene 10 mg/kg BB  melalui  sonde  dua  hari  sekali  dalam  30  hari.  Dosis  β-carotene  10  mg/kg  BB  yang  paling  efektif  dan  efisien  untuk menurunkan kadar kolesterol total dibandingkan dosis lainnya. Terdapat perbedaan dengan bermakna pada kadar trigliserida (p=0,0001)  dan  MDA  (p=0,0001).  Dosis  β-carotene  10  mg/kg  BB  yang  paling  efektif  dan  efisien  untuk  menurunkan  kadar trigliserida,  sedangkan  dosis  β-carotene  20  mg/kg  BB  yang  paling  efektif  dan  efisien  untuk  menurunkan  kadar  MDA dibandingkan dosis lainnya.
Simpulan : dosis β-carotene 10 mg/kg BB lebih efektif dan efisien untuk menurunkan kadar kolesterol total dan trigliserida dibandingkan  dosis  lainnya.  Dosis  β-carotene  20  mg/kg  BB  lebih  efektif  dan  efisien  untuk  mrnurunkan  kadar  MDA dibandingkan dosis lainnya.
Kata kunci : β-carotene, kolesterol total, trigliserida, MDA, diabetik

## PENDAHULUAN
Salah  satu  akibat  dari  gangguan  metabolisme  pada
diabetes  mellitus  yaitu  hiperkolesterolemia,  sehingga penderita diabetes mellitus selain memerlukan kontrol glikemik,  juga  memerlukan  kontrol  lipid  darah. 1 Glukosa  yang  berlebihan  akan  merusak  pembuluh darah.  Glukosa  tidak  dapat  diproses  menjadi  energi, sehingga energi diproduksi dari sumber lain yaitu dari lemak  dan  protein.  Akibat  yang  ditimbulkan  dari  hal
1 Program  Studi  D-IV  Gizi  Klinik,  Jurusan  Kesehatan, Politeknik Negeri Jember, Indonesia
2 Bagian Patologi Klinik Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro, Indonesia
tersebut  yaitu  kolesterol  yang  terbentuk  pada  rantai metabolisme lemak dan protein bertambah. Pengaturan  metabolisme  lipid  juga  dipengaruhi  oleh insulin,  dalam  metabolisme  lipoprotein  di  jaringan adiposa. Prevalensi hiperkolesterolemia pada diabetes mellitus yaitu 20-90%. 2
Hiperglikemia
pada diabetes
mellitus menyebabkan kenaikan radikal bebas. Proses autooksidasi pada hiperglikemi memicu pembentukan radikal bebas. Radikal bebas dapat merusak membran sel,  menjadi  lipid  peroksida  atau malondialdehyde (MDA)  dan  dapat  mengakibatkan  kerusakan  sistem membran sel dan kematian sel. 3 β-carotene sebagai  antioksidan  dapat  melindungi sel  β-pankreas  dari cytotoxicity akibat  stres  oksidatif yang  terjadi  pada  diabetes  mellitus. 4 Suplementasi β- carotene 20  mg/kg  berat  badan  pada  tikus  diabetik secara  signifikan  mengurangi  kadar reactive  oxygen species (ROS) dan meningkatkan enzim antioksidan. 5 Profil  lipid  kelompok  yang  diberikan  diet β-carotene 7,2  mg/kg  diet  lebih  rendah  daripada  kelompok control. 6 Pemberian oral β-carotene 10  mg/kg  BB, vitamin  C  10  mg/kg  BB,  vitamin  E  40  mg/kg  berat badan  dapat  meningkatkan  status  antioksidan  dan mengurangi  stres  oksidatif. 7 Hasil  berbagai  penelitian tersebut  menunjukkan  bahwa β-carotene mempunyai aktifitas  antioksidan.  Dosis β-carotene 0,3  mg  i.p secara optimal dapat memperbaiki kerusakan histologi pankreas  dibandingkan  dosis  0,1  mg  i.p  pada  tikus diabetik. 8
Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk membuktikan dosis yang efisien dari pemberian dosis bertingkat β-carotene 1 mg/kg BB, 10 mg/kg BB dan 20  mg/kg  BB  melalui sonde 2  hari  sekali  dalam  30 hari  terhadap  penurunan  kadar  kolesterol  total, trigliserida  dan  MDA  pada  tikus  jantan Rattus norvegicus sprague dawley diabetik.

## METODE DAN BAHAN
Rancangan penelitian yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah randomized  pre  and  post  test controlled  group  design .  Hewan  percobaan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  tikus Rattus norvegicus sprague  dawley jantan  yang  dibagi  secara dalam  5  kelompok.  Kelompok  1  (STZ),  kelompok  2 (STZ + β-carotene 1 mg/kg BB), kelompok 3 (STZ + β-carotene 10  mg/kg  BB),  kelompok  4  (STZ  + β- carotene 20 mg/kg BB), kelompok 5 (normal).
Hewan  coba  dikondisikan  dalam  keadaan  diabetik dengan  cara  diinduksi  STZ intraperitonial dengan dosis  40  mg/kg  berat  badan. 9 Hewan  coba dikategorikan  sudah  dalam  keadaan  diabetik  apabila kadar  glukosa  darah  >  200  mg/dl.  Hewan  coba  tikus jantan Rattus norvegicus sprague dawley berusia 8-12
minggu diperoleh dari LPPT unit 4 Universitas Gajah Mada.
Tikus  dipelihara  dalam  kandang  terpisah  dengan temperatur  25±3 0 C  dan  tingkat  kelembaban  50±5%. Tikus  diberikan  pakan  standart comfeed  ADII dan minum ad  libithum dengan  akses  bebas.  Semua prosedur  pemeliharaan  dan  perlakuan  penelitian disesuaikan dengan etika penelitian hewan coba.
Tikus  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  tidak sedang  mendapatkan  perlakuan  dari  penelitian  lain. Berat badan ditimbang sebagai data dasar selanjutnya dibagi  secara  acak  menjadi  5  kelompok  yaitu kelompok  1  (kelompok  yang  diinduksi  STZ), kelompok  2  (kelompok  yang  diinduksi  STZ  4mg/kg BB  dan  mendapatkan  suplementasi β-carotene 1 mg/kg  BB),  kelompok  3  (kelompok  yang  diinduksi STZ 40 mg/kg BB dan diberi suplementasi β-carotene 10 mg/kg BB), kelompok 4 (kelompok yang diinduksi STZ 40 mg/kg BB dan diberi suplementasi β-carotene 20 mg/kg BB) dan kelompok 5 (kelompok yang tidak diinduksi  STZ  dan  tidak  diberi  suplementasi β- carotene ).
Streptozotocin diberikan  secara  intraperitonial single dose dan pemberian suplementasi β-carotene 1 mg/kg BB, 10 mg/kg BB dan 20 mg/kg BB diberikan secara sonde 2 hari sekali dalam 30 hari. Pengukuran kadar kolesterol total, trigliserida dan MDA  ( pre test ) dilakukan setelah tikus menjadi diabetik. Berat badan ditimbang  setiap  hari.  Pengukuran  kadar  kolesterol total, trigliserida dan MDA  ( post test ) dilakukan pada hari ke-31 setelah perlakuan.

## HASIL
Penurunan  kadar  kolesterol  total,  trigliserida  dan MDA  pada  tikus  jantan Rattus  norvegicus sprague dawley diabetik  setelah  diberi β-carotene dosis bertingkat β-carotene 1 mg/kg BB, 10 mg/kg BB dan 20  mg/kg  BB  melalui sonde 2  hari  sekali  dalam  30 hari adalah sebagai berikut :
Tabel  1.  Rerata  kadar  kolesterol  total  darah  dan perubahannya (mg/dl) Kel Sebelum Perlakuan Setelah Perlakuan Delta p 1 146,1±16,2 149,5±15,7 3,4 0,291 2 146,9±  5,1 139,7±  4,6 -7,2 0,016 3 135,5±  7,5 114,6±  6,3 -20,9 0,006 4 130,1±  9,9 123,6±  6,4 -6,5 0,275 5 84,8±  7,6 83,9±  7,8 -0,9 0,486
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  terdapat  penurunan kadar kolesterol total pada kelompok 2 dan 3.
Tabel 2.   Rerata  kadar  trigliserida  dan  perubahannya (mg/dl) Kel Sebelum perlakuan Setelah perlakuan Delta p 1 111,2±15,2 121,2±12,5 10,0 0,234 2 105,0±  8,3 72,9±10,1 -32,1 0,012 3 105,8±  6,7 63,5±  8,2 -42,3 0,0001 4 114,5±  8,8 69,7±  6,4 -44,8 0,0001 5 63,0±  3,2 61,4±11,2 -1,6 0,753
Tabel  2  menunjukkan  bahwa  terdapat  penurunan kadar trigliserida pada kelompok 2, 3 dan 4.
Tabel 3.  Rerata  kadar  MDA  dan  perubahannya (nmol/ml) Kel Sebelum perlakuan Setelah perlakuan Delta p 1 5,4±0,2 5,6±0,1 0,2 0,133 2 5,4±0,2 4,6±0,1 -0,8 0,009 3 5,2±0,3 4,3±0,6 -0,9 0,028 4 5,1±0,1 3,5±0,7 -1,6 0,003 5 2,7±0,2 2,6±0,1 -0,1 0,160
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  terdapat  penurunan kadar MDA pada kelompok 2, 3 dan 4. Pemberian β- carotene dapat  menurunkan  kadar  kolesterol  total, trigliserida  dan  MDA,  selanjutnya  untuk  menentukan dosis  yang  paling  efisien  dilakukan  uji  lanjutan post hoc (Tabel 4) Hasil uji lanjutan post hoc bonferroni pada Tabel 4 menunjukkan  bahwa  dosis  yang  paling  efisien  untuk menurunkan  kadarkolesterol  total  yaitu  dosis β- carotene 10 mg/kg BB.
Tabel 4. Post hoc bonferroni multiple comparation β- carotene terhadap penurunan kadar kolesterol total antar kelompok Post hoc antar kelompok Rerata penurunan p 1 2 -10,5 0,697 3 -24,2 0,002 4 -9,8 0,764 2 3 -13,6 0,174 4 -0,7 1,000 3 4 -14,3 0,096 p anova : 0,002
Tabel 5. Post  hoc  bonferroni  β-carotene  multiple comparation terhadap  penurunan  kadar trigliserida antar kelompok
Post hoc antar kelompok Rerata penurunan p 1 2 -42,0 0,0001 3 -52,1 0,0001 4 -54,6 0,0001 2 3 -10,0 1,0000 4 -12,5 1,0000 3 4 -2,5 1,0000 p anova : 0,0001
Hasil uji lanjutan post hoc bonferroni pada Tabel 5 menunjukkan  bahwa  dosis  yang  paling  efisien  untuk menurunkan  kadar  trigliserida  yaitu  dosis β-carotene 10 mg/kg BB.
Tabel 6. Post  hoc  bonferroni  β-carotene  multiple comparation terhadap  penurunan  kadar MDA antar kelompok
Post hoc antar kelompok Rerata penurunan p 1 2 -0,98 0,012 3 -1,09 0,003 4 -1,81 0,0001 2 3 -0,10 1,000 4 -0,83 0,033 3 4 -0,72 0,066 p anova
: 0,002
Hasil uji lanjutan post hoc bonferroni pada Tabel 6 menunjukkan  bahwa  dosis  yang  paling  efisien  untuk menurunkan  kadar  MDA  yaitu  dosis β-carotene 20 mg/kg BB.

## PEMBAHASAN
Induksi  STZ  pada  hewan  coba  dapat  mengakibatkan hiperglikemia,  hiperlipemia  dan  peningkatan  lipid peroksidasi. 10 Hiperlipemia  yang  terjadi  setelah injeksi  STZ disebabkan  karena  terjadi  peningkatan absorbsi  lipid  di  usus,  perubahan  peningkatan (abnormal)  aktivitas a-cholesterol  acyltransferase (ACAT)  di  usus  kecil.  Kekurangan  atau  defisiensi insulin mengakibatkan metabolisme asam lemak yang berlebihan.  Peningkatan  kadar  asam  lemak  bebas akan  meningkatkan  sekresi very  low  density lipoprotein (VLDL)  yang  disertai  dengan  trigliserid dan kolesterol. 11
Peningkatan  kadar  glukosa  darah  dan  kolesterol total  pada  kondisi  diabetik  akan  mengakibatkan lipotoxic (lipotoksisitas) yang mengakibatkan
akumulasi  lipid  dalam  sel  beta  sehingga  dapat
memicu  apoptosis  sel  beta. Long  chain  acyl-CoA intraseluler  dapat  mengaktivasi  isoform  PKC  yang dapat  mengakibatkan  fosforilasi serine/threonine pada  molekul insulin  receptor  substrate (IRS)  di dalam  sel  beta,  memicu  degradasi  IRS-2  dan mengakibatkan apoptosis sel beta. 12
Keadaan  hiperglikemia  akan  memicu  terjadinya radikal  bebas  dan  peroksidasi  lipid.  Hal  ini dikarenakan  oleh  radikal  bebas  bereaksi  dengan poliunsaturated  fatty  acid (PUFA),  dimana  PUFA memiliki ikatan rangkap berganda diantara methylene bridges (CH 2 -). 13 Hiperglikemia yang berkepanjangan pada  diabetes  mellitus  akan  memicu  penumpukan radikal  bebas  yang  bersifat  toksik.  Mekanisme terbentuknya  radikal  bebas  yang  diakibat  oleh hiperglikemia  antara  lain  melalui  jalur  AGEs,  poliol, PKC, hexosamine dan ROS. 14
Radikal bebas yang dihasilkan dapat menyebabkan kerusakan  seluruh  membran  biologis  dengan  cara merusak  protein,  lipid,  asam  nukleat,  dan  gliko- konjugat. Peroksidasi lipid merupakan proses oksidasi asam  lipid  tidak  jenuh  berantai  panjang  PUFA  pada membran  sel  yang  menghasilkan  radikal  peroksida, hidroperoksida  dan  produk  aldehida  seperti  MDA. Oleh karena itu kadar MDA dapat digunakan sebagai salah  satu  parameter  mengukur  peroksidasi  lipid  dan kerusakan oksidatif. 7
Pemberian β-carotene dapat  menekan lipid peroxide ,  sehingga lipotoxic dapat  dicegah  dan keadaan  dislipidemia  dapat  dikontrol. 15 Diabetes mellitus berkaitan dengan kelainan metabolisme lipid. Hiperlipemia  pada  diabetes  mellitus  tergantung  pada lamanya  kekurangan  insulin,  resistensi  insulin, obesitas,  diit  dan  penyebab  lain  dari  hiperlipemia. Diabetes mellitus dengan hiperlipemia dan ketidaknormalan  lipoprotein  berasal  dari  interaksi stres oksidatif dan radikal bebas yang mengarah pada peningkatan  peroksidasi  lipid  dalam  plasma,  jaringan dan  membran,  sehingga  menyebabkan  kerusakan jaringan. Peroksidasi lipid secara kronis mengakibatkan penumpukan radikal bebas yang dapat mengakibatkan  etiopatogenesis  dan  komplikasi  pada diabetes mellitus. 16 β-Carotene selain dapat digunakan sebagai kontrol glikemik juga dapat digunakan sebagai kontrol lipid. 6 β-Carotene sebagai  antioksidan  dapat  menghambat oksidasi lipoprotein sehingga komplikasi dan kerusakan sel akibat hiperglikemia dapat dihindari. 17
Insulin dapat mempengaruhi pengaturan metabolisme lipid yaitu pada metabolisme lipoprotein di jaringan adipose. Insulin menghambat lipolisis dan mengaktifkan  lipoprotein  lipase  sehingga  dapat meningkatkan katabolisme lipoprotein kaya trygliceride dalam  menghambat  produksi very  low
density  lipoprotein (VLDL).  Insulin  meningkatkan clearance  low  density lipoprotein (LDL) dengan  cara merangsang aktifitas reseptor Apo B/E (reseptor LDL) dan  meningkatkan  degradasi  LDL.  Insulin  juga berperan  pada  metabolisme high  density  lipoprotein (HDL) dengan cara mengaktifkan lecithin-cholesterol acyltranse (LCAT) dan meningkatkan aktivitas lipase di  hepar.  Insulin  memicu  lipogenesis  dengan  cara meningkatkan transport glukosa ke dalam sel sehingga mengakibatkan  peningkatan  ketersediaan  piruvat untuk sintesis asam lemak dan gliserol. 18 β-carotene mempunyai  efek  glikemik  yang  dapat digunakan  sebagai  kontrol  glikemik  dan  trigliserida. Proses  penyerapan  lemak  terjadi  di  usus  halus  oleh membran sel. Lemak yang diserap di usus halus akan mengalami esterifikasi membentuk kilomikron. Kilomikron  selanjutnya  akan  dilepaskan  ke  dalam sirkulasi  darah  melalui  saluran  limfe.  Metabolisme lipid pada jaringan adiposa meliputi proses lipogenesis  (sintesis  lipid)  pada  jaringan  adiposa, triasilgliserol disuplai dari hati dan usus dalam bentuk lipoprotein, VLDL dan kilomikron. 19
Asam  lemak  dari  lipoprotein  dilepaskan  oleh lipoprotein lipase yang berlokasi pada permukaan sel- sel  endotelial  pembuluh  kapiler  darah.  Asam  lemak kemudian  diubah  menjadi  triasilgliserol.  Oleh  karena itu  dengan  pemberian β-Carotene dapat  membantu memperbaiki  kontrol  glikemik  dan  respon  insulin untuk  menurunkan  kadar  trigliserida  pada  keadaan diabetik. 20 β-Carotene mempunyai  aktifitas  sebagai  anti oksidan  yang  dapat  mengontrol  radikal  bebas  dengan cara menangkap singlet oxygen ( 1 O 2 ) dan mengimbangi  produksi  radikal  peroksida.  Hasil  dari reaksi β-carotene menangkap  radikal  bebas  yaitu oksigen dan triplet exitasi karotenoid. 21 β-carotene dapat meningkatkan status anti oksidan pada  penderita  diabetes  mellitus  tipe-2. β-carotene bersifat antioksidan dan dapat mengimbangi penumpukan radikal bebas pada keadaan hiperglikemia  atau  diabetes  mellitus.  Hiperglikemia dalam jangka panjang akan menyebabkan peningkatan produksi  radikal  bebas  dari  glukosa,  glikosilasi  auto- oksidasi  dan  protein.  Peningkatan  dan  penumpukan radikal  bebas  akan  mengurangi  status  antioksidan endogen,  sehingga  dengan  pemberian β-carotene sebagai  antioksidan  eksogen  dapat  meningkatkan status  antioksidan  dalam  tubuh  untuk  menghambat produksi  radikal  bebas  yang  berlebihan.  Pemberian antioksidan  pada  diabetes  mellitus  juga  mempunyai fungsi agar tidak terjadi komplikasi lebih lanjut. 22 Dosis  10  mg/kg  BB  pada  tikus  dikonversikan  ke dosis  manusia,  setara  dengan  1,6  mg/kg  BB  pada manusia.  Aplikasi  dosis β-carotene pada  manusia
dengan  berat  badan  50  kg  membutuhkan  80  mg β- carotene .  Kebutuhan  80  mg β-carotene bisa didapatkan  dari  kandungan β-carotene pada  1  kg wortel untuk 2 hari sekali.

## SIMPULAN
Dosis β-carotene 10  mg  /  kg  BB  adalah  dosis  yang paling  efisien  untuk  menurunkan  kolesterol  total  dan trigliserida.  Dosis  yang  paling  efisien  untuk menurunkan  kadar  MDA  yaitu  dosis β-carotene 20 mg/kg BB.

## DAFTAR PUSTAKA
1. American  Diabetes  Association  (ADA).  2011. Standart  of  Medical  Care  of  Diabetes  :  Medical Nutrition Therapy
2. Johansen  JS,  Harris  AK,  Rhycly  D.,  Ergul  A. Oxidative  Stress  and  The  Use  of  Antioxidant  in Diabetes  :  Linking  Basic  Science  to  Clinical Practise. Cardiovascular Diabetology 2005;4 (5) : 1-11
3. Hanachi  P,  Rashid  Haidari  M.,  Lattifah  A.L. Investigation  of  Lipid  Profiles  and  Lipid Peroxidation  in  Patients  with  Type  2  Diabetes. European Journal of Scientific Research 2009; 28 (1): 6-12
4. Furusho,  T.,  E.  Kataoka,  T.  Yasuhara,  M.  Wada and  S.  Innami.  Administration  of  Beta-Carotene Suppresses  Lipid  Peroxidation  in  Tissues  and Improves  The  Glucose  Tolerance  Ability  of Streptozotocin-induced Diabetic Rats. Int Journal Vitamin Nature Res 2002; 72: 71-76
5. Thyagaraju  BM,  Shrilata  B,  Muralidhara.  Oral Supplementation  of  β-Carotene  Significantly
Ameliorates  Testicular  Oxidative  Stress  in  The Streptozotocin-Diabetic Rat. International Journal of Fertility and Sterility 2008; 2(2):74-81 6. Seo  JS,  Lee  KS,  Jang  JH,  Quan  Z,  Kyung  MY Yang  M,  Burri  BJ.  The  Effect  of  Dietary Supplementation  of  β-carotene  on  Lipid Metabolism  in  STZ  Induced  Diabetic  Rats. Nutrition Research. 2004; 24: 1011-21
7. Sharma  M,  Katyal  T,  Grewal  G,  Behera  D, Budhiraja  RD.  Effect  of  Antioxidants  such  as β- carotene,  vitamin  C  and  vitamin  E  on  Oxidative Stress, Thermal Hyperalgesia and Cold Allodynia in  STZ  Induced  Diabetic  Rats.  Journal  of Pharmacology. 2009; 6 (2)
8. Attia  A.  Histologi  and  Electrone  Microscopic Studies  of  The  Effect  of  β  Carotene  on  The
Pancreas  of  Streptozotocin  (STZ)  Induced Diabetic  Rats.  Pakistan  Journal  of  Biological Sciences. 2009;12 (4) : 301-14
9. Banundari R. Pengaruh pemberian folat terhadap kadar  homosistein, Nitric  Oxyde dan  status retinopati diabetik (studi ekperimental pada tikus Sprague  Dawley).  Disertasi  Program  Doktor Universitas Diponegoro Semarang.  2012.
10. Dhirgo, A. Hubungan konsentrasi malondialdehida,  glukosa  dan  kolesterol  pada tikus  putih  yang  diinjeksi  dengan streptozotocin .
Journal Sain Veteriner. 2008; Vol.26 No.2
11. Vander  Geer  P,  Wiley  S,  Pawson  T.  Re- enginering The Target Specificity of The Insulin Receptor  by  Modification  of  a  PTB  Domain Binding Site. Oncogene. 1999; 18 (20) : 3071-5 12. Trivedi  NA,  Mazumder,  B.,  Shatt,  JD., Hemavathi,  KG.  Effect  of  Shilajit  on  Blood Glucose  and  Lipid  Profile  in  Alloxan-induced Diabetic Rats. Indian J Pharmacol. 2004; 36(6) : 373-6
13. Muller,  F.L.,  Lustgarten,  M.S.,  Jang  Y., Richardson,  A,  Van  Remmen  H.  Trends  in Oxidative  Agging  Theories.  Free  Radic  Biol Med. 2007; 43: 477-503
14. Romeo  GR,  Lee  J,  Shoelson  SE.  Metabolic Syndrome,  Insulin  Resistance  and  Roles  of Inflammation  :  Mechanisms  and  Therapeutic Targets.  Arterioscler  Thromb  Vasc  Biol.  2012; 32 (8) : 177-83
15. Silva  PS,  Cavallerano  JD,  Sun  JK,  Lloyd  M. Aiello  LM,  Aiello  LP.  Diabetic  Retinopathy: Effect of Medications on Onset and Progression: Agents for Lipid Control. Faculty and Disclosures CME. 2011.
16. Andallu  B,  Kumar  AVV,  Varadacharyulu  N  Ch. Lipid Abnormalities in Streptozotocin-Diabetes : Ameliorates  by  Morus  indica  L.  Cv  Suguna leaves.  Int Journal  Diabetes  Dev  Ctries.  2009;29 (3) : 123-28
17. Ali M, Al Shamma G, Hashim H. Beta Carotene, Glycemic  Control  and  Dyslipidemia  in  Type  2 Diabetes  Mellitus.  Journal  Faculty  Medicine Baghdad. 2006; 48:435-41
18. Verges B. Insulin sensitivity and Lipids. Diabetes Metab. 2001; (27) : 223-7
19. Ahmed  et  al.  BMC  Complementary  and Alternative  Medicine.  Biomedcentral.  2013;  13: 10
20. Guyton AC and  Hall  JE.  Textbook  of  Medical Physiology 11 th ed. Philadelphia-PA-USA. 2006.
21. Stahl  W,  Sies  H.  Antioxidant  Activity  of
Carotenoids.    Molecular  Aspects  of  Medicine
2003; 24 : 345-51
22. Levy  Y,  Zaltberg  H,  Ben-Amots  A,  Kanter  Y,
Aviram  M.  Beta  Carotene  Affects  Antioxidant Status  in  Non-insulin  dependent  diabetes mellitus. Pathophysiology. 1999; 6 : 157-61