## Pendahuluan
Udang  vannamei  memiliki  kelebihan d i a n t a r a n y a   p e r t u m b u h a n n y a   c e p a t ,   d a p a t dibudidayakan  dengan  kepadatan  yang  tinggi  dan harga  pasar  cukup  tinggi  (Nur'aini  dkk.,  2007). Ekawati  (2008)  menyatakan  berdasarkan  data pemerintah kapasitas produksi udang jenis vannamei dalam  negeri  mencapai  270  ton  per  tahun.  Dalam budidaya  sering  timbul  berbagai  kendala  yang  salah satunya adalah adanya serangan penyakit.
Udang  sangat  rentan  terhadap  serangan penyakit  yang  disebabkan  oleh  parasit,  jamur, protozoa, bakteri dan virus (Astuti, 2009). Sekitar 40% dari  produksi  udang  hilang  akibat  infeksi  penyakit, terutama  penyakit  yang  disebabkan  oleh  serangan virus.  Salah  satu  jenis  virus  yang  menyerang  udang vannamei yaitu Whitespot Baculovirus (WSBV) atau lebih  dikenal  dengan  nama white  spot  syndrome (WSS)  (Wittevelldt,  2006).  Udang  yang  telah terinfeksi  WSBV  akan  menunjukkan  kematian  yang
tinggi  dan  rata-rata  kematian  sampai  100%  dalam jangka waktu 3-10 hari (Liu et al. , 2009).
Penanganan penyakit yang disebabkan oleh virus yang menyerang udang belum banyak dilakukan. Strategi  pencegahan  dan  kontrol  terhadap  serangan WSBV adalah dengan meningkatkan kekebalan tubuh t e r h a d a p   p e n y a k i t ,   s a l a h   s a t u n y a   d e n g a n menggunakan vaksin (Namikoshi et al. , 2003). Udang tidak  mempunyai  respon  imun  spesifik  dengan immunoglobulin,  tetapi  akhir-akhir  ini  dilaporkan adanya quasi-immune  response pada Penaeus japonicus . Penelitian yang dilakukan oleh Namikoshi et  al. (2003)  terdapat  proteksi  dari  infeksi  WSBV terhadap Penaeus  japonicus yang  telah  di  vaksin dengan  WSSV  yang  telah  dimatikan  ( inactivated WSBV).  Pada  penelitian  ini  menggunakan Lithopenaeus vannamei yang di vaksinasi dengan sel virus  WSBV  yang  dimatikan  dengan  formalin  atau disebut Whole  Cell  Killed  Virus (WCKV)  untuk mengetahui adanya respon terhadap infeksi WSBV.
PENGARUH PEMBERIAN VAKSIN WHOLE CELL KILLED VIRUS TERHADAP SINTASAN UDANG VANNAMEI ( Lithopenaeus vannamei ) YANG DIINFEKSI WHITESPOT BACULOVIRUS (WSBV)
THE INFLUENCE OF WHITESPOT BACULOVIRUS (WSBV) INFECTION IN Lithopenaeus vannamei BY GIVING WHOLE CELL KILLED VIRUS VACCINE ON SURVIVAL RATE.
Hari Suprapto, Angga Bahtera Siswanto dan Boedi Setya Rahardja
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Shrimp are susceptible to a wide variety of pathogens, one of each   were viruses. Whitespot Baculovirus (WSBV) is one of virus attack in vannamei. Shrimp had been infected by WSBV will showed high mortality. One of Strategies for prophylaxis and control of WSBV is enhancement of disease resistant by using vaccines. Recently, quasi-immune response have been reported by which Penaeus japonicus surviving from WSBV infections possess a resistance against challenge WSBV (Venegas et al. , 2000). This study was used Lithopenaeus vannamei that been vaccination with inactived-formaline WSBV virus cell or it called Whole Cell Killed Virus (WCKV) to know its responses to WSBV. The aim of this study was to know the effect Whole Cell Killed Virus vaccine to survival rate vannamei shrimp ( Lithopenaeus vannamei ) infected by Whitespot Baculovirus (WSBV). This study used descriptive study. The efficacy of vaccines made of inactivated WSSV with different dose. The dose are P1 (dose 0,01µg/ml each shrimp), P2 (dose 0,02 µg/ml each shrimp), P3 (dose 0,03 µg/ml each shrimp) dan P4 (non-vaccine (kontrol) injected by PBS). Primary parameter was survival rate (%). Secondary parameter was water quality which of  temperature, pH, salinity and dissolved oxygen. The result showed that survival rate of L. Vannamei with different dose of WCKV vaccines was increases.
Key words : Lithopenaeus vannamei, vacination, WCKV

## Materi dan Metode Penelitian
Persiapan udang uji Udang  vannamei  ( Lithopenaeus  vannamei ) yang digunakan   berumur 2 bulan dengan berat tubuh berkisar  antara  20-25  gram  sebanyak    80  ekor  yang kondisinya  sehat  dan  tidak  ada  indikasi  infeksi penyakit  baik  secara  pengamatan  visual  maupun keterangan dari tempat asal.

## Media pemeliharaan
Akuarium yang akan digunakan sebanyak 4 buah berukuran 40x 25x 25 cm  yang telah disterilisasi. Menggunakan   air payau dengan salinitas 31 ppt dari pengenceran  air  laut  33  ppt  kemudian  diencerkan menggunakan rumus pengenceran M1.V1=M2.V2.

## Pembuatan Vaksin WCKV
Pembuatan Vaksin Whole  Cell  Killed  Virus berdasarkan Suprapto dan Rahardja (2003) terdiri dari 3  langkah.  Adapun  langkah-langkah  pembuatannya sebagai berikut:
Pertama sampel udang yang terinfeksi WSBV ( White Spot Baculovirus ) dikumpulkan   berasal dari tambak udang  di  daerah  Jawa  Timur.  Udang  yang  terinfeksi virus  WSBV  dengan  berat  10  gram  digerus  dan ditambahkan  PBS  hingga  cair.  Hasilnya  dimasukkan ke  dalam  tabung  appendof,  kemudian  disentrifus dengan  kecepatan  1000  rpm  selama  10  menit.  Hasil sentrifus  yang  berupa  supernatan  ditambahkan  PEG ( Poly  Ethylene  Glyco l)  sebanyak  2  ml.  Kemudian dilakukan  sentrifus  lagi  dengan  kecepatan  3800  rpm selama 30 detik. Hasil sentrifus yang berupa endapan dan ditambahkan STE Buffer diforteks sampai kedua bahan  menjadi  larut.  Setelah  itu  dilakukan  sentrifus dengan  kecepatan  4000  rpm  selama  10  menit. Endapannya  dipindah  ke  tabung  sentrifus  ultra kemudian  disentrifus  dengan  ultra  sentrifus  yang berkecepatan  18500  G  selama  150  menit.  Hasil endapan  yang  telah  disentifus  tersebut  langsung disimpan pada freezer dengan suhu -4ºC.
Langkah  kedua  pembuatan  sukrose  gradien 50 % dengan cara 1 gram sukrose gradien dalam 2 ml air, pembuatan sukrose gradien 35 % dengan cara 0,7 gram sukrose gradien dalam 2 ml air dan pembuatan sukrose gradien 20 % dengan cara 0,4 gram sukrose gradien dalam 2 ml air.
Langkah  ketiga  adalah  ketiga  bahan  pada langkah kedua, masing-masing diambil sebanyak 1 ml dan dimasukkan dalam tabung sentrifuse dengan hati- hati agar tidak tercampur dan secara berurutan mulai dari dasar tabung sentrifuse yaitu sukrose gradien 50 %,  35  %,  20  %.  Kemudian  pada  bagian  paling  atas
ditambahkan bahan yang sudah dibuat pada langkah 1 dengan  diambil  endapannya  dan  ditambahkan  STE Buffer  diforteks  sampai  kedua  bahan  menjadi  larut. Selanjutnya  dilakukan  sentrifuse  dengan  kecepatan 80.000 G selama 90 menit. Kemudian hasil sentrifuse akan  tampak  terpisah  antara  bagian  atas,  tengah  dan bawah tabung sentrifuse, dimana pada bagian atas dan bawah  tampak  bening  sedangkan  bagian  tengah tampak  buram.  Bagian  tengah  yang  tampak  buram diambil  dengan  menggunakan  jarum  suntik  dan dipindahkan ke tabung yang berbeda. Hasil yang sudah diambil, kemudian disentrifuse 150.000 G selama 60 menit  dengan  suhu  4ºC.  Hasil  sentrifuse  tersebut diambil  bagian  endapannya  dan  ditambahkan  STE buffer.  Selanjutnya  disentrifus  dengan  kecepatan 43.000 G selama 30 menit.

## Pemberian vaksin WCKV
Kegiatan  yang  dilaksanakan  pada  tahap  ini adalah  memasukkan  udang  vannamei  yang  telah diaklitimatisasi  selama  satu  minggu  pada  akuarium pemeliharaan sebanyak 10 ekor. Setelah itu dilakukan vaksinasi  terhadap  udang  vannamei.  Vaksinasi dilakukan dengan cara suntikan menggunakan spuit 1 ml.  Penelitian  ini  menggunakan  4  perlakuan  yaitu vaksinasi dengan Whole Cell Killed Virus dengan dosis 0,01µg/ml  per  ekor  udang  (P1),  vaksinasi  dengan Whole Cell Killed Virus dengan dosis 0,02 µg/ml per ekor udang (P2), vaksinasi dengan Whole Cell Killed Virus dengan dosis 0,03 µg/ml per ekor udang (P3) dan tanpa vaksinasi (kontrol) diinjeksi dengan PBS (P4). Setelah  satu  minggu  pemberian  vaksin,  dilakukan booster dengan dosis yang sama.

## Uji tantang dengan WSBV
Udang  vannamei  dipelihara  selama  7  hari kemudian diberi perlakuan vaksin Whole Cell Killed Virus .  1  minggu  setelah  udang  vannamei  divaksin, dilakukan  booster  dengan  dosis  yang  sama  dengan perlakuan. Kemudian 1 hari setelah dilakukan booster, diuji  tantang  dengan  diinfeksi  WSBV  melalui  intra muscular.  Dosis  virus  yang  diberikan  adalah  LD  50 yang didapat dari penelitian sebelumnya sebesar 0,03 µg/ml/ekor  udang  (Suprapto  dan  Raharja,  2003). Selanjutnya udang diamati selama 2 minggu setelah uji tantang dan kemudian dilakukan perhitungan jumlah ikan yang masih hidup untuk menghitung sintasan.
Penghitungan Sintasan
Penghitungan sintasan udang vannamei yaitu persentase jumlah udang vannamei yang masih hidup setelah  dilakukan  uji  tantang.  Sintasan  dicantumkan

## Pengaruh Pemberian Vaksin ......
dalam bentuk persentase (%) dihitung satu kali pada saat  akhir  penelitian.  Zonneveld et  al. (2001) merumuskan  sintasan  (%)  sebagai  berikut:
Sintasan = Jumlah udang yang hidup x 100%
Jumlah populasi
Pengamatan  data-data  kualitas  air  sebagai data  penunjang  meliputi  suhu  dengan  menggunakan termometer,  pH  dengan  menggunakan  kertas  pH, salinitas  dengan  menggunakan  refraktometer,  DO
(oksigen terlarut) dengan menggunakan DO test-kit .

## Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan  pengamatan  yang  dilakukan selama  penelitian  tidak  terdapat  kematian  pada Litopenaeus  vannamei  saat  divaksin  dengan Whole Cell Killed Virus (WCKV) dan sebelum dilakukan uji tantang dengan Whitespot Baculovirus (WSBV). Hasil Penelitian dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Pengaruh vaksin Whole Cell Killed Virus terhadap  sintasan  (dalam  %)  udang vannamei ( Lithopenaeus vannamei ) yang diinfeksi Whitespot Baculovirus (WSBV)
H a s i l   p e n g a m a t a n   y a n g   d i l a k u k a n menunjukkan  bahwa  awal  kematian L.  vannamei terjadi pada hari ke 3 dan ke 4 setelah dilakukan uji tantang pada semua perlakuan. Persentase sintasan L. vannamei  setelah  diuji  tantang  dengan  WSBV menunjukkan  bahwa L.  vannamei yang  divaksin mengalami  peningkatan  nilai  sintasan  dibandingkan dengan kontrol. Perlakuan P1 (WCKV 0,01 µg/ml) dan perlakuan  P2  (WCKV  0,02  µg/ml)  memiliki  nilai sintasan yang sama sebesar 50%. Nilai sintasan pada perlakuan  P3  (WCKV  0,03  µg/ml)  adalah  60%  dan perlakuan P4 semua hewan uji mati (nilai sintasan 0%) Hasil pengamatan kualitas air terlihat bahwa kondisi media pemeliharaan masih dalam kisaran ideal untuk pemeliharaan L.  vannamei .  Tabel  2  menunjukkan selama  penelitian  suhu  pemeliharaan L.  vannamei adalah berkisar antara 28 – 31ºC, pH berkisar antara 7 – 7,4, salinitas berkisar antara 30 – 31 ppt dan oksigen terlarut berkisar antara 5 – 6 ppm.
Penggunaan Whole  cell sebagai  vaksin, merupakan salah satu cara yang dapat digunakan untuk mencegah  penyakit  yang  disebabkan  oleh  infeksi patogen  yaitu  bakteri  dan  virus  (Nindarwi,  2006). Namikoshi et  al. (2003)  menyatakan  bahwa  udang tidak  mempunyai  respon  imun  adaptif  dengan imunoglobulin, tetapi saat ini respon quasi imun telah dilaporkan tentang udang kuruma ( Penaeus japonicus ) yang  mampu  bertahan  dari  infeksi  WSSV  karena mempunyai resistensi melawan serangan WSSV.
Berdasarkan  hasil  penelitian  persentase sintasan meningkat menjadi 60% pada perlakuan P3. Pada  perlakuan  P2  dan  P3  nilai  sintasan  sama  yaitu 50%. Hal ini diduga bahwa kandungan hemosit pada udang yang telah divaksin dengan WCKV meningkat, sehingga  muncul  adanya  respon  pertahanan  diri terhadap infeksi virus. Hal ini sesuai dengan penelitian yang  dilakukan  Namikoshi et  al. (2003)  bahwa penggunaan  WSBV  yang  di  inaktifkan  dengan menggunakan  formalin  dapat  meningkatkan kekebalan tubuh udang melawan WSBV. Udang tidak melindungi dari infeksi tetapi melindungi diri terhadap keganasan serangan virus (Johnson et al. , 2008).
Johnson et  al. (2008)  menyatakan, pemberian  virus  yang  diinaktifkan  dengan  formalin sebagai  vaksin  diberikan  melalui  injeksi  secara intramuskular  atau  melalui  pakan  menunjukkan adanya respon imun udang. Hemosit udang memiliki peranan  yang  penting  pada  respon  imun  meliputi mengenali sel asing, fagositosis, melanisasi, sitotoksis dan komunikasi antar sel. Udang yang sehat memiliki jumlah hemosit yang lebih tinggi dibandingkan dengan udang yang terinfeksi virus (Yeh et al. , 2008).
Persentase sintasan yang rendah pada kontrol disebabkan karena rendahnya respon imun pada tubuh L.  vannamei .  Hal  ini  menyebabkan  kurangnya kemampuan untuk merangsang antibodi dalam tubuh, sehingga saat dilakukan uji tantang dengan White Spot Baculovirus (WSBV) mekanisme pertahanan tubuh L. vannamei rendah.  Yeh et  al. (2008)  menyatakan, infeksi  WSSV  dapat  menyebabkan  kematian  hingga 100%.
Boyd (1989) menyatakan bahwa kandungan oksigen terlarut yang aman bagi kehidupan ikan dan udang  adalah  lebih  dari  5  ppm  dan  kisaran  pH  yang normal antara 7 - 9. Kandungan oksigen terlarut selama penelitian pada tahap aklimatisasi dan tahap vaksinasi L.  vannamei adalah  6  ppm.  Pada  tahap  uji  tantang kandungan  oksigen  menurun  menjadi  5  ppm,  hal  ini disebabkan  konsumsi  oksigen  meningkat  sehingga menyebabkan kandungan oksigen menurun. Nindarwi (2006)  menyatakan  bahwa  kandungan  oksigen  yang
0 10 20 30 40 50 60 70 P1 (0,01µg/ml) P2 (0,02 µg/ml) P3 (0,03 µg/ml) P4 (Kontrol) Perlakuan S in ta s a n (d a la m % )
menurun  menyebabkan  kandungan  CO   meningkat 2 sehingga suasana menjadi lebih asam (pH menurun). Berdasarkan hasil pengukuran kandungan oksigen dan pH air selama penelitian pada tahap uji tantang masih dalam batasan aman untuk pemeliharaan L. vannamei .

## Kesimpulan
Terjadi peningkatan   sintasan L. vannamei yang  divaksin  WCKV  ( Whole  Cell  Killed  Virus ) hingga 50% dengan dosis 0,01 µg/ml dan 0,02 µg/ml dan mencapai  60% dengan dosis  0,03 µg/ml.

## Daftar Pustaka
Astuti,  S.  M.2009.  Penyakit  Parasiter  pada Udang.http:/www.tambak.org
Azwar,  S.  2004.  Metode  Penelitian.  Pustaka  Pelajar.
Yogyakarta. 145 hal. Boyd, C. E.1989. Water Quality Management and Aeration in Shrimp Farming.  Fisheries  and  Alied  Aquaculture Departemential  Series  No  2.  Alabama Agriculture  Experiment  Station.  Auburn University. USA. 79 hal.
Johnson, K. N., M. C. W. van Hulten and A. C. Barnes.
2008. Vaccination of Shrimps Against Viral Pathogens:Phenomenology  and  Underlying Mechanism. Vaccine 26:4885-4892.
Liu,  H.,  K.  Soderhall  and  P.  Jiravanichpaisal.  2009.
Antiviral Immunity in Crustaceans. Journal Fish and Shellfish Immunology xxx (2009)
1-10.
Namikoshi A., J. L. Wu, T. Yamashita, T. Nishizawa, T. Nishioka, M. Arimoto and K. Muroga. 2003. Vaccinations Trials With Penaeus japonicus to Induce Resistance to White Spot Sindrome Virus. Aquaculture 229 (2004) 25-35.
Nindarwi,  D.  N.  2006.  Studi  Perbandingan Penggunaan  Whole  Cell  dan  Extraceluller Product  dari  Vibrio  alginolyticus  sebagai Vaksin secara Oral Terhadap Sintasan Benih I k a n   K e r a p u   M a c a n   ( E p i n e p h e l u s fuscogutatus ).Skripsi.Fakultas  Perikanan d a n   K e l a u t a n   U n i v e r s i t a s Airlangga.Surabaya 56 hal.
Nur'aini, Y. L., H. Bambang, S. Subyakto, dan T. Gemi.
2007.  Active  Surveilance  of  Infectious Myonecrosis  Virus  (IMNV)  in  Pond- Cultured  White  Shrimp  ( Lithopenaeus vannamei )  in  East  Java  and  Bali.  Jurnal Perikanan UGM. IX (1) : 25-31.
Witteveldt,  J.  2006.  On  the  Vaccination  of  Shrimp Against White Spot Syndrome Virus. Thesis Wageningen University.129pp.
Yeh, S., Y. Chen, S. Hsieh, W. Cheng and C. Liu. 2008. mmune  Response  of  White  Shrimps,  it. Litopenaeus  vannamei, After A  Concurrent Infection With White Spot Syndrome Virus a n d   I n f e c t i o u s   H y p o d e r m a l   a n d Hematopoietic  Necrosis  Virus.  Fish  and Shellfish Immunology, 26 (2009):582-588.
Zonneveld, N., E. A. Huisman and J. H. Boon. 2001. Prinsip-prinsip  Budidaya  Ikan.  Gramedia Pustaka Utama. Jakarta. 317 hal.

## Pengaruh Pemberian Vaksin ......