(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 74-79
Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Leilem ( Clerodendrum minahassae ) Pada Tikus Putih (Rattus norvegicus) Yang Diinduksi Formalin
Mita Sindy Tumiir 1 , Gideon A. R. Tiwow 1* , Ferdy A. Karauwan 2 , Reky R. Palandi 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia
2 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia
* Penulis Korespondensi, email: gideontiwow@yahoo.com Diterima: 13 Agustus 2021; Disetujui : 4 Oktober 2021

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui aktivitas antiinflamasi dari daun Leilem ( Clerodendrum minahassae ) pada Tikus Putih ( Rattus Norvegicus ), sehingga Masyarakat dapat memanfaatkan daun Leilem sebagai obat tradisional untuk mengatasi inflamasi .
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  Eksperimental  dengan  menggunakan  tikus  putih  sebanyak  15 ekor.  Metode  pengujian  antiinflamasi  yang  digunakan  adalah  uji  edema  pada  telapak  kaki  tikus dengan  induksi  formalin.    Hewan  uji  dikelompokan  menjadi  5  kelompok  perlakuan  yang  berbeda yaitu  cataflam  (kalium  diklofenak)  sebagai  kontrol  positif,  aquadest  sebagai  kontrol  negatif,  dan ekstrak etanol daun Leilem dengan dosis 75 mg/kg BB, 150 mg/kg BB, 300 mg/kg BB.  Hewan uji diamati dan diukur tebal edemanya selama 6 jam.
Hasil  penelitian  menunjukan  %  reduksi  radang  pada  jam  ke-1  sampai  jam  ke-6  kelompok  kontrol positif cataflam sebesar 13,9%, 41,4%, 53,4%, 61%, 73,8% dan 92,4%, ekstrak etanol daun Leilem dosis 75 mg/kg BB sebesar 2,5%, 11,3%, 5,3%, 2,8%, 1,7%  dan 1,7%,  dosis 150 mg/kg BB sebesar 12,2%, 36,3%, 39,5%, 40,3%, 44,8% dan 65,3%,  dan dosis 300 mg/kg BB sebesar 44,9%, 50,3%, 50,6%,  51,1%,  63,6%  dan  68,7%.    Ekstrak  etanol  daun  Leilem  memiliki  aktivitas  sebagai antiinflamasi.

## Kata kunci : Antiinflamasi, Clerodendrom minahassae, Rattus norvegicus

## ABSTRACT
This  research  aims  to  know  the  anti-inflammatory  activity  of  Leilem  leaves  (Clerodendrum minahassae) in White Rats (Rattus Norvegicus), so that people can use Leilem leaves as a traditional medicine to overcome inflammation.
This research is Experimental research using white rats as many as 15 heads. The anti-inflammatory testing method used is the edema test on the soles of the feet of mice with formalin induction. The test animals were grouped into 5 different treatment groups namely cataflam (potassium diclofenac) as a positive control, aquadest as a negative control, and Leilem leaf ethanol extract at a dose of 75 mg / kg BB, 150 mg / kg BB, 300 mg / kg BB.  Test animals were observed and measured the thickness of their edema for 6 hours.
The results showed % reduction in inflammation in the 1st to 6th hour of the cataflam positive control group by 13.9%, 41.4%, 53.4%, 61%, 73.8% and 92.4%, Leilem leaf ethanol extract doses of 75 mg / kg BB by 2.5%, 11.3%, 5.3%, 2.8%, 1.7% and 1.7%, doses of 150 mg / kg BB by 12.2%, 36.3%, 39.5%, 40.3%, 44.8% and 65.3%, and doses of 300 mg / kg BB by 44.9%,  50.3%, 50.6%, 51.1%, 63.6% and 68.7%.  Leilem leaf ethanol extract has activity as an anti-inflammatory.
Keywords : Anti-inflammatory, Clerodendrom minahassae, Rattus norvegicus .

## PENDAHULUAN
Inflamasi  adalah  reaksi  terhadap  benda asing yang masuk tubuh, invasi mikroorganisme, trauma fisik, bahan kimia yang berbahaya, faktor fisik,  dan  alergi  [2].    Inflamasi  merupakan
respon  normal  terhadap  cedera.  Inflamasi ditandai dengan nyeri, kemerah-merahan, bengkak, panas, dan hilangnya fungsi [8].
Inflamasi  dapat  terjadi  pada  siapa  saja baik  orang  tua,  anak  muda  maupun  anak  kecil.
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 74-79
Sekalipun berperan dalam proses penyembuhan jaringan  yang  rusak,  inflamasi  tidak  diinginkan karena  dapat  mengganggu  aktivitas  sehari-hari dan menyebabkan rasa kurang nyaman. Keadaan seperti  inilah  yang  mendorong  penderita  untuk segera mengatasi inflamasi.
Salah  satu  cara  yang  sering  dilakukan untuk  mengatasi  inflamasi  yaitu  dengan pemberian  obat  antiinflamasi  sintetik.    Obat antiinflamasi  sintetik  yang  banyak  digunakan untuk  mengatasi  inflamasi  adalah  golongan kortikosteroid  dan  antiinflamasi  non  steroid (AINS).  Penggunaan obat antiinflamasi sintetik dalam  jangka  panjang  memiliki  efek  samping seperti  mengiritasi  lambung, moon  face , menekan  imunitas  dan  menyebabkan  tulang keropos [8].  Oleh karena itu, untuk menghindari efek  samping  dari  obat  antiinflamasi  sintetik tersebut,  maka  banyak  Masyarakat  memilih menggunakan  obat  tradisional  dibandingkan dengan obat sintetik. Menurut Permenkes RI No. 246/Menkes/Per/V/1990, obat tradisional adalah bahan  atau  ramuan  bahan  yang  berupa  bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan galenik atau campuran dan bahan-bahan tersebut yang  secara  tradisional  telah  digunakan  untuk pengobatan berdasarkan pengalaman.
Tanaman Leilem merupakan salah satu spesies  dalam  genus Clerodendrum .    Tanaman ini  merupakan  tanaman  endemik  di  Sulawesi Utara.    Bagian  tanaman  Leilem  yang  biasa digunakan  adalah  daun.    Secara  tradisional Masyarakat  Minahasa  memanfaatkan  daun Leilem  sebagai  obat  sakit  perut  dan  obat cacingan.  Kandungan kimia daun Leilem antara lain  alkaloid,  flavonoid,  steroid,  saponin,  dan terpenoid [6][13].
Penelitian-penelitian sebelumnya melaporkan bahwa Genus Clerodendrum memiliki  aktivitas  antiinflamasi  diantaranya Clerodendrum phlomidis, Clerodendrum
serratum, Clerodendrum siphonanthus,
Clerodendrum  trichotomum, Clerodendrum chinense, Clerodendrum fragans, Clerodendrum colebrookianum, Clerodendrum petasites, Clerodendrum philippinum, Clerodendrum viscosum, Clerodendrum inerme, Clerodendrum infortunatum Linn ,
Clerodendrum quadriloculare [1][3][4][9][11].    Penelitian sebelumnya  dari  Kalavathi  dan  Sagayagiri (2014)  tentang Phytochemical  Screening  and Antiinflammatory  Activity  of Clerodendrum inerme melaporkan  bahwa Clerodendrum
inerme memiliki  aktivitas anti-inflamasi  karena adanya senyawa flavonoid.
Hal inilah yang mendorong dilakukannya  penelitian  untuk  mengetahui aktivitas  antiinflamasi  dari  daun  Leilem ( Clerodendrum  minahassae )  pada  Tikus  Putih ( Rattus norvegicus ) yang diinduksi formalin.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  daun  Leilem ( Clerodendrum  minahassae ),  etanol  70%, formalin/  formaldehid  37%,  cataflam  50  mg, aquades.
Alat  yang  digunakan  neraca  analitik, pisau, blender, toples, ayakan, batang pengaduk, erlenmeyer,  gelas  beaker,  gelas  ukur,  corong, kertas  saring,  pipet  tetes,  mortar  dan  stamper, rotary  evaporator,  syringe,  spuit  injeksi,  spuit oral, jangka sorong digital, stopwatch.

## Jenis Penelitian dan Metode Penelitian
Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimental dengan  menggunakan tikus putih sebanyak  15  ekor.  Hewan  uji  dibagi  menjadi  5 kelompok  perlakuan  yang  terdiri  dari  3  ekor sesuai  berat  badan  yang  mendekati.    Adapun kelompok perlakuan sebagai berikut:
a. Kelompok  1  :  Kontrol  Positif  Cataflam 6,3 mg/kg BB
b. Kelompok  2  :  Kontrol  Negatif  aquades secara ad libitum
c. Kelompok 3 : Ekstrak etanol daun Leilem dosis 75 mg/kg BB
d. Kelompok 4 : Ekstrak etanol daun Leilem dosis 150 mg/kg BB
e. Kelompok 5 : Ekstrak etanol daun Leilem dosis 300 mg/kg BB

## Prosedur Penelitian
a. Pengumpulan  bahan . Daun  Leilem  segar ( Clerodendrum  minahassae )  diperoleh  dari Desa  Raanan  Baru,  Kecamatan  Motoling Barat,  Kabupaten  Minahasa  Selatan.    Daun Leilem  diambil  secara  acak,  diambil  daun yang  tidak  berlubang  dan  tidak  memiliki bercak-bercak.
b. Ekstraksi . Sebanyak 1 kg daun Leilem segar dibersihkan  dari  kotoran,  dicuci  dengan  air mengalir sampai bersih dan dipotong-potong menggunakan  pisau,  kemudian  dikeringkan pada suhu kamar tanpa sinar matahari, setelah kering dihaluskan menggunakan blender lalu
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 74-79
diayak  dengan  ayakan  114  mesh  sehingga menghasilkan  163,94  g  serbuk  kering  daun Leilem. Serbuk kering daun Leilem memiliki kadar  air  16,39%.    Serbuk  kering  daun Leilem  sebanyak  163,94  g  dimaserasi menggunakan pelarut etanol 70% sebanyak 1 liter  selama  24  jam,  kemudian  disaring menggunakan kertas saring. Maserasi dilakukan selama 7 x 24 jam. Hasil maserasi diperoleh  ekstrak  cair  (filtrat)  sebanyak  7 liter.  Filtrat yang diperoleh diuapkan dengan cara  evaporasi  menggunakan rotary  vacuum evaporator sampai  semua  etanol  menguap sehingga diperoleh ekstrak kental etanol daun Leilem  sebanyak  22,18  g.  Ekstrak  kental daun  Leilem  yang  diperoleh  berwarna  hijau pekat dan memiliki bau menyengat. Kemudian  ekstrak  etanol  tersebut  dilakukan uji antiinflamasi.
c. Pembuatan larutan formalin  1%  dengan mengambil  formalin  100%  (formaldehid 37%)  sebanyak  1  ml  kemudian  diencerkan dengan  aquades  didalam  labu  ukur  sampai diperoleh volume 100 ml.  Injeksi subplantar formalin 1% diberikan sejumlah 0,1 ml [12].
d. Pembuatan  larutan  uji  ekstrak  etanol  daun Leilem.    Larutan  uji  ekstrak  etanol  daun Leilem  dibuat  dengan  konsentrasi  5%.  Cara pembuatannya  dengan  mengambil  5  g ekstrak  etanol  daun  Leilem,  kemudian dilarutkan  dengan  aquades  dalam  labu  ukur sampai 100 ml.
e. Pembuatan  larutan  cataflam  sebagai  kontrol positif.    Diambil  1  tablet  cataflam  yang mengandung  50  mg  kalium  diklofenak, kemudian ditimbang. Berat 1 tablet cataflam yaitu 200 mg.  Tablet tersebut digerus dalam mortar, lalu dilarutkan dengan aquades dalam labu ukur sampai 100 ml.
f. Penentuan  kontrol  negatif.    Kontrol  negatif adalah  zat  yang  tidak  memiliki  efek antiinflamasi  sehingga  dapat  digunakan sebagai pembanding terhadap zat yang diuji. Pada  penelitian  ini  digunakan  aquades sebagai  kontrol  negatif  yang  merupakan pelarut ekstrak etanol daun Leilem.
g. Uji  antiinflamasi.    Sebelum  hewan  uji digunakan  dalam  penelitian,  terlebih  dahulu diaklimatisasi dengan lingkungan laboratorium selama ± 2 minggu .
h. Variabel Yang Diamati , Tebal edema telapak kaki tikus putih.
i. Perhitungan Persen Reduksi Radang
% reduksi radang = 𝑎−𝑏 𝑎 x 100%
Keterangan: a  = Selisih rata-rata telapak kaki kelompok kontrol negatif
b  = Selisih rata-rata telapak kaki kelompok uji [10]
j. Analisis  Data secara  deskriptif  dengan menampilkan  grafik,  tabel  dan  diagram dalam penyajian data

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Aktivitas  antiinflamasi  ditandai  dengan penurunan  edema  telapak  kaki  tikus  putih setelah  diinduksi  formalin  secara  subplantar akibat  pemberian  ekstrak  etanol  daun  Leilem secara  oral  serta  dilihat  dari  persen  reduksi radang dari masing-masing perlakuan.
Pada  penelitian  ini  hewan  uji  dalam perlakuan  memiliki  berat  badan  yang  berbeda- beda. Peningkatan berat menunjukan peningkatan  luas  permukaan  tubuh  yang menyebabkan  penyerapan  senyawa  obat  yang dilakukan  oleh  tubuh  lebih  besar  sehingga membutuhkan obat relatif banyak.   Perhitungan volume pemberian dapat dilihat pada lampiran 2.
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 74-79
Gambar 1. Rata-rata Tebal Edema Telapak Kaki Tikus Putih
Data  rata-rata  tebal  edema  digunakan untuk menghitung selisih tebal telapak kaki pada jam  ke-n  setelah  induksi  formalin  dikurangi dengan  tebal  telapak  kaki  normal.  Selanjutnya
dapat  dilihat  seberapa  besar  penurunan  tebal edema  pada  masing-masing  perlakuan  dari  jam ke-1 sampai jam ke-6. Hasil perhitungan selisih tebal telapak kaki ditunjukan pada tabel 1.
Tabel 1. Selisih Rata-rata Tebal Edema Telapak Kaki Tikus Putih Perlakuan Selisih tebal telapak kaki (mm) Jam 0 1 2 3 4 5 6 (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) Cataflam Kontrol Positif Aquades Kontrol Negatif Dosis 75 mg/kgBB Dosis 150 mg/kgBB Dosis 300 mg/kgBB 1,43 1,93 2,20 2,83 1,40 2,03 2,36 2,30 2,07 1,30 1,5 2,56 2,27 1,63 1,27 1,13 2,43 2,30 1,47 1,20 0,83 2,13 2,07 1,27 1,04 0,46 1,76 1,73 0,97 0,64 0,13 1,73 1,70 0,60 0,54
Data  selisih  rata-rata  tebal  edema telapak  kaki  tikus  putih  pada  jam  ke-1  sampai jam  ke-6  digunakan  dalam  perhitungan  persen
reduksi radang tiap perlakuan. Hasil perhitungan persen reduksi radang ditunjukan pada gambar 2.
0 1 2 3 4 5 6 7
Normal Jam ke-0Jam ke-1Jam ke-2Jam ke-3Jam ke-4Jam ke-5Jam ke-6
Cataflam Kontrol Positif
Aquades Kontrol Negatif
Dosis 75 mg/kgBB Dosis 150 mg/kgBB Dosis 300 mg/kgBB
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 74-79

## Gambar 2. Persen Reduksi Radang
Persen  reduksi  radang  dihitung  untuk melihat  seberapa  besar  aktivitas  antiinflamasi dari  perlakuan.    Hasil  perhitungan  reduksi radang  menunjukan  bahwa  pada  kelompok kontrol  positif  Cataflam  memiliki  aktivitas antiinflamasi,  hal  ini  menunjukan  bahwa  obat antiinflamasi non steroid memang memiliki daya penghambatan  inflamasi.    Pada  ekstrak  etanol daun  Leilem  dosis  75  mg/kg  BB,  dosis  150 mg/kg  BB  dan  dosis  300  mg/kg  BB  terlihat memiliki  aktivitas  sebagai  antiinflamasi  karena memiliki daya penghambatan inflamasi. Hal ini berarti  ekstrak  etanol  daun  Leilem  memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi.
Salah satu parameter penilaian aktivitas antiinflamasi dinilai dari persen reduksi radang. Besarnya  persen  reduksi  radang  menunjukan besarnya  kemampuan  senyawa  dalam  ekstrak untuk menghambat proses inflamasi.
Aktivitas  antiinflamasi  ekstrak  etanol daun  Leilem  diperkirakan  karena  adanya senyawa  golongan  flavonoid.    Flavonoid merupakan  kelompok  zat  polifenol  yang menunjukkan sifat antiinflamasi dan antioksidan.
Mekanisme  kerja  obat  AINS  meliputi reduksi sintesis prostaglandin dengan menghambat enzim COX.  Agar suatu obat dapat menjadi  inhibitor  kompetitif  terhadap  asam arakidonat untuk dapat berikatan dengan  enzim COX,  obat  tersebut  harus  memiliki  lipofilitas yang  tinggi  serta  properti  asam  untuk menyerupai substrat alami dari COX itu sendiri [7].    Cataflam  yang  berisi  kalium  diklofenak yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  sebagai
kontrol  positif  merupakan  golongan  obat  AINS turunan asam asetat yang memiliki fungsionalitas  asam  sehingga  dapat  berikatan dengan  enzim  COX  untuk  menghambat biosintesis prostaglandin.  Flavonoid merupakan senyawa  derivat  fenol,  yang  artinya  juga memiliki  properti  asam.  Flavonoid  dapat menjadi inhibitor enzim COX.

## KESIMPULAN
Ekstrak
etanol daun Leilem (Clerodendrum  minahassae) memiliki  aktivitas sebagai  antiinflamasi  pada  tikus  putih  ( Rattus norvegicus ) yang diinduksi formalin.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Al-Snafi, A. E. 2016. Chemical Constituents and Pharmacological Effects of
Clerodendrum inerme- A Review . Sikkim  Manipal  University  Medical Journal. Volume 3, No. 1. ISSN: 2349 – 1604. hal 1.
2. Bratawidjaja,  K.  G.  2006.  Imunologi  Dasar Edisi  Ke  Tujuh.  Balai  Penerbit  FKUI. Jakarta.
3. Chandrashekar, R and S. N. Rao. 2013. Acute Antiinflammatory  Activity  of  Ethanolic Extract  of  Leaves  of  Clerodendrum viscosum  by  Carrageenin  Induced  Paw Oedema Method in Wistar Albino Rats .
International  Journal  of  Research  in. 4(2). hal 224-226.
4. Das,  B,  D.  Pal,  and  A.  Haldar.  2014. A Review  On  Biological  Activities  and
1 3 .9 2 .5 1 2 .2 4 4 .9 4 1 .4 11 .3 36 .3 50 .3 5 3 .4 5 .3 3 9 .5 5 0 .6 61 2 .8 4 0 .3 5 1 .1 7 3. 8 1 .7 4 4 .8 6 3 .6 92 .4 1 .7 6 5 .3 6 8 .7 K O N T R O L  P O S I T I F C A T A F L A M D O S I S  E K S T R A K   7 5 M G / K G  B B D O S I S  E K S T R A K 1 5 0   M G / K G  B B D O S I S  E K S T R A K 3 0 0   M G / K G  B B Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-3 Jam ke-4 Jam ke-5 Jam ke-6
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 74-79
Medicinal  Properties  of  Clerodendrum
Infortunatum Linn . International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science.  Volume  6,  Issue  10.  ISSN-
0975-1491. hal 1. 5. Kalavathi,  R  and  R.  Sagayagiri.  2014.
Phytochemical Screening and Antiinflammatory Activity of Clerotentron inerme L. (Gaertn).
International  Journal  of  Research  in Plant  Science.  2014;  4(4):  92-95.  ISSN 2249-9717. hal 95.
6. Kiroyan,  B.  2015. Isolasi  dan  Identifikasi
Senyawa  Diterpenoid  Dari  Fraksi  n- heksan Pada Daun Leilem (Clerodendrum  minahassae) .  Skripsi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Negeri
Manado. Universitas Negeri Manado.
7. Mehanna,  A.  S.,  2003.  NSAIDs: Chemistry
and Pharmacological Actions. American  Journal  of  Pharmaceutical Education . 67 (2) Article 63. hal 1-7.
8. Priyanto. 2010. Farmakologi Dasar. Lembaga Studi dan Konsultasi Farmakologi  (Leskonfi) .  Depok,  Jawa Barat.
9. Rajbongshi, P. 2014. Clerodendrum Colebrookianum Walp: A
Phytopharmacological  Review .  World Journal  of  Pharmaceutical  Research. Volume  3,  Issue  7.  ISSN  2277  –  7105. hal 305-317.
10. Santoso,  B, R .  Siswosudarmo,  S.  Suryawati,
I.  Dwiprahasto,  H.  A.  H.  Asdie.  1991.
Penapisan Farmakologi, Pengujian Fitokimia dan Pengujian Klinik .
Yayasan  Pengembangan  Obat  Bahan Alam Phyto Medica. Jakarta. 11. Tongol,  K.  A.  J  and  J.  M.  B.  Querequincia.
2015. 15-Lipoxygenase Inhibitory Activity of The Extracts From Clerodendrum Quadriloculare (Blanco) Merr. (Lamiaceae) Leaves . International Journal  of  Scientifict  and  Technology Research  volume  4,  issue  09.  ISSN 2277-8616. hal 1.
12. Vogel,  H.  G.  2007. Drug  Discovery  and
Evaluation:  Pharmacological  Assays, 3rd ed ., Springer-Verlag Berlin Heidelberg. Germany.
13. Wowor,  J.  2015. Isolasi  dan  Identifikasi
Senyawa  Flavonoid  dari  Fraksi  n- heksan pada Daun Leilem (Clerodendrum  minahassae) .  Skripsi Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan  Alam  Universitas  Negeri Manado. Universitas Negeri Manado.