## PENGARUH PENGGUNAAN VITAMIN E DALAM PENGENCER SUSU SKIM PADA SPERMA BEKU TERHADAP PERSENTASE MOTILITAS DAN PERSENTASE SPERMATOZOA HIDUP DOMBA PRIANGAN
The Effect of Vitamine E Utilization in Skimmed Milk Dilution of Frozen Sperm Against Priangan Sheep’s Motility and Lived Spermatozoa Presentation
Sri Teguh Waluyo*
Balai Besar Pelatihan Kesehatan Hewan Cinagara Bogor *Korespondensi Penulis: E-mail sriteguhwaluyo1956@gmail.com
Diterima: Februari 2018
Disetujui terbit: April 2018

## ABSTRACT
The  objective  of this  research  is  to  know  the  optimal concentration  level  of  vitamine E  in  the skimmed  milk  dilution  against  P riangan  sheep’s  motility  and  lived  spermatozoa  presentation.  The research  was  done  in  the  Laboratory  of  Artificial  Insemination  Institution,  Lembang,  Bandung,  from November  2017  up  to  January  2018.    In  the  experiment,  spermatozoa  from  five  of  Priangan  sheep collected  by  artificial  vagina  and  diluted  with  skimmed  milk,  each  dilution  added  by  different  dose  of 10, 20, 30, 40 μg vitamine E and without vitamine E per mililiter for control.  The experimental method used  was  Completely  Randomized  Design  continued  by  Duncan  multiple  rank  test  5%  significant. Observed  variable  was  motility  and  lived  spermatozoa  presentation  measured  after  dilution  and equilibration,  and  after  thawing  with  include  percentage  of  motility,  lived.  The  result  of  experiment showed  that  percentage  of  motility  and  lived  spermatozoa  after  dilution  were  not  significantly  after treatment (P>0.05), after equilibration and thawing resulted the highest percentage of motility and lived in the treatment of E 30 (72.00 and 54.00 %), and (82.20 and 67.60%) significantly different compared to the other treatment (P<0.05).
Key words: vitamine E, sperm, skimmed milk dilution

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  tingkat  konsentrasi  vitamin  E  yang  optimal  pada pengencer susu skim terhadap persentase motilitas dan persentase spermatozoa hidup pada sperma beku  Domba  Priangan.    Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium  Balai  Inseminasi  Buatan,  Lembang, Bandung dari bulan November 2017 sampai bulan Januari  2018.  Pada percobaan, spermatozoa dari lima  ekor  Domba  Priangan  ditampung  dengan  vagina  buatan  dan  diencerkan  dengan  susu  skim, masing-masing pengencer diberi vitamin E dengan dosis yang berbeda, yaitu tanpa vitamin E sebagai kontrol, 10, 20, 30 dan 40  g vitamin E per mililiter. Metode eksperimental menggunakan rancangan dasar Rancangan Acak Lengkap, yang dilanjutkan uji jarak berganda Duncan taraf nyata 5%.  Peubah yang diamati adalah kualitas spermatozoa yang diukur setelah pengenceran, setelah ekuilibrasi, serta setelah  pencairan  kembali  yang  meliputi  persentase  motilitas,  persentase  hidup  spermatozoa.  Hasil percobaan  menunjukkan  bahwa  persentase  motilitas  dan  persentase  spermatozoa  hidup  pasca pengenceran    tidak  berbeda  nyata  antar  perlakuan  (P>0,05).  Pada  pasca  ekuilibrasi  dan  pasca pencairan  kembali  yang  menghasilkan  persentase  motilitas  dan  persentase  hidup  tertinggi  pada perlakuan  E 30 (72,00  dan  54,00  %)  dan  (82,20  dan  67,60  %)  berbeda  nyata  dibandingkan  dengan perlakuan yang lain (P<0,05).

## Kata kunci : Vitamin E, sperma, pengencer susu skim

## PENDAHULUAN
Inseminasi  buatan  (IB)  merupakan salah  satu  metode  untuk  memperbaiki mutu  genetik.    IB  pada  domba  di Indonesia  belum  banyak  dilakukan  dan belum  begitu  berhasil  dibanding  pada
ternak  sapi  (Tomaszewska et  al., 1993).
Hal  ini  dipengaruhi  oleh  tingkat  konsepsi yang  rendah,  jika  dibandingkan  dengan sistem  kawin  alam.    IB  domba  biasanya dideposisikan  pada  mulut  serviks,  dan harus melewati serviks sebelum mencapai uterus (Tomaszewska et al. 1991).
Kendala inilah yang kemungkinan menyebabkan
IB pada domba mendapatkan  angka  konsepsi  yang  lebih rendah daripada kawin alam.
Proses  pembekuan  dan  pencairan kembali  sperma  domba  menyebabkan kerusakan  ultrastruktur,  biokimia  dan fungsi yang nyata pada sebagian spermatozoa.   Perubahan  ini disertai  oleh penurunan  motilitas,  gangguan  transpor dan  penurunan  daya  tahan  spermatozoa di  dalam  saluran  reproduksi  betina,  dan mengurangi fertilitas setelah diinseminasikan  pada  serviks  (Salamon dan Maxwell, 1995).
Salah  satu  penyebab  kerusakan pada spermatozoa selama proses kriopreservasi  sampai  pencairan  kembali adalah  peroksidasi  lipid.    Komponen terpenting  membran  sel  adalah  fosfolipid, glikolipid,  dan  kolesterol.    Dua  komponen pertama  mengandung  asam  lemak  tak jenuh ganda yang sangat rentan terhadap oksidasi  yang  menyebabkan  terjadinya radikal  bebas,  terutama  radikal  hidroksil (OH + ).    Radikal  hidroksil  ini  dapat menimbulkan reaksi berantai yang dikenal dengan  nama  peroksidasi  lipid  (Wijaya, 1996).  Jones et  al .  (1979)  menyatakan bahwa  membran  plasma  spermatozoa kaya akan asam lemak tak jenuh sehingga rentan  terhadap  kerusakan  peroksidasi. Kerentanan spermatozoa terhadap peroksidasi  lipid  meningkat  disebabkan oleh  cekaman  dingin  (Pursel,  1979). Proses  peroksidasi  mengubah  struktur spermatozoa,  menyebabkan  kehilangan motilitas,  dan  menurunkan  daya  hidup, perubahan  metabolisme  yang  cepat  dan pelepasan  komponen  intraseluler  (Jones dan  Mann,  1977).    Keadaan  ini  dapat dicegah  dengan  menambah  vitamin  E  ke dalam  pengencer  sperma.    Vitamin  E merupakan  salah  satu  komponen  yang
diketahui sebagai larutan yang kompatibel, terakumulasi  sebagai  respon  terhadap stres dalam berbagai sel hidup.  Vitamin E juga  melindungi  sel  dari  kerusakan  akibat tekanan osmotik, kerusakan panas karena denaturasi enzim dan pembekuan
(Sanchez et  al., 1996).    Oleh  karena  itu, penambahan vitamin E dalam
pengenceran  sperma  diharapkan  dapat meningkatkan kualitas spermatozoa setelah  pengenceran,  ekuilibrasi  dan pencairan kembali.

## METODE
Penelitian  ini  dilakukan  di  Balai Inseminasi  Buatan,  Lembang,  Bandung, dengan  menggunakan  materi  lima  domba Priangan  berumur  2  -  3  tahun  dengan rataan  bobot  badan  38,1  ±    1,24  kg. Rancangan  percobaan  yang  digunakan adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  perlakuan  empat  kadar  vitamin  E dan  satu  tanpa  vitamin  E  sebagai  kontrol (E 0, E 10 ,  E 20 ,  E 30 ,  E 40 )  dengan  lima ulangan.    Peubah  yang  diamati  adalah kualitas  sperma  yang  diukur  setelah pengenceran,  ekuilibrasi,  serta  pencairan kembali yang meliputi persentase motilitas,  hidup.    Data  yang  diperoleh kemudian  dianalisis  melalui  sidik  ragam yang  dilanjutkan  dengan  uji  berganda Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik sperma segar
Dilakukan  evaluasi  sperma  segar secara  makroskopis  meliputi  volume, warna,  konsisitensi,  dan  pH,  sedangkan mikroskopis  meliputi  gerakan  massa, konsentrasi,  motilitas,  sperma  hidup,  dan abnormalitas. Secara makrokopis maupun mikroskopis sperma domba yang digunakan dengan kualitas baik, sehingga dapat diproses lebih lanjut.
Tabel 1.  Sifat fisik sperma segar domba priangan.
Parameter Ukuran Volume (ml) 1,07 ± 0,15 Warna Krem Konsistensi Kental Derajat Keasaman (pH) 6,81 ± 0,01 Gerakan Massa +++ Konsentrasi (juta spermatozoa/ml sperma) 2890 ± 257,06 Motilitas, (%) 82 ± 2,45 Spermatozoa hidup, (%) 89,4 ± 0,80 Abnormalitas, (%) 8 ± 1,09

## Karakteristik sperma setelah diproses

## Persentase motilitas dan hidup
Tabel  2.  Rataan  persentase  motilitas  dan  spermatozoa  hidup  sesuai  perlakuan  dan  tahap pengolahan sperma Perlakuan Tahap Pengolahan Pengenceran Ekuilibrasi Pencairan kembali Persentase motilitas E 0 =   tanpa vit E E 10 =   10  g vit E E 20 =   20  g vit E E 30 =   30  g vit E E 40 =   40  g vit E Persentase hidup E 0 =   tanpa vit E E 10 =   10  g vit E E 20 =   20  g vit E E 30 =   30  g vit E E 40 =   40  g vit E
79,00 ± 2,24 a
79,00 ± 2,24 a 81,00 ± 2,24 a 82,00 ± 2,74 a 81,00 ± 2,24 a 84,20 ± 1,48 a 85,80 ± 1,30 a 86,80 ± 2,28 a 87,60 ± 1,14 a 86,20 ± 1,79 a 61,00 ± 2,24 a
65,00 ± 3,54 b 66,00 ± 2,24 b 72,00 ± 2,74 c 67,00 ± 2,74 b 76,40 ± 1,14 a 78,00 ± 2,00 ab 79,40 ± 1,14 b 82,20 ± 1,79 c 79,00 ± 1,22 b 41,00 ± 4,18 a
43,00 ± 4,47 ab 46,00 ± 2,24 b 54,00 ± 5,48 c
47,00 ± 2,74 b 56,00 ± 2,45 a
58,20 ± 2,68 a 61,20 ± 2,17 b 67,60 ± 1,52 c
63,20 ± 2,59 b
Keterangan: a,  b,  c,  superskrip  yang  berbeda  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  ada perbedaan pada P<0,05
Tabel  di  atas  menunjukkan  bahwa pada  tahap  pengenceran,  tidak  ada pengaruh  yang  nyata  pada  penambahan vitamin  E  terhadap  persentase  motilitas spermatozoa,  dan  kelima  perlakuan  sama baiknya  dalam  mempertahankan  motilitas spermatozoa.    Pada  pasca  ekuilibrasi, rataan  persentase  motilitas  pada E 30 (72,00) lebih tinggi daripada E 0, E 10 , E 20 , E 40 (61,00,  65,00,  66,00  dan  67,00)  berbeda nyata  (P<0,05),  tetapi  antara  E 10 ,  E 20 ,  E 40 berbeda  tidak  nyata  (P>0,05),  adapun perlakuan  pengencer  ditambah  vitamin  E lebih  tinggi  dan  berbeda  nyata  daripada tanpa  vitamin  E  atau  kontrol  (P<0,05). Pada  pasca  pencairan  kembali,  rataan
persentase motilitas pada  E 30 (54,00) lebih tinggi daripada E 0, E 10 , E 20 , dan E 40 (41,00, 43,00,  46,00  dan  47,00)  berbeda  nyata (P<0,05),  sedangkan  E 0 dengan  E 10 berbeda  tidak  nyata  (P>0,05).  Begitu  juga antara  E 10 ,  E 20 ,  dan  E 40 berbeda  tidak nyata (P>0,05) (Tabel 2.).
Untuk mengetahui persentase hidup,  pada  tahap pengenceran,  tidak  ada pengaruh  yang  nyata  pada  penambahan vitamin  E  terhadap  persentase  hidup spermatozoa.    Pada  pasca  ekuilibrasi, rataan  persentase  motilitas  pada E 30
(80,20) lebih tinggi daripada E 0, E 10 , E 20 , E 40 (76,40,  78,00,  79,40  dan  79,00)  berbeda nyata  (P<0,05),  tetapi  antara  E 10 ,  E 20 ,  dan
E 40 berbeda tidak nyata (P>0,05), sedangkan  E 0 dengan  E 10 berbeda  tidak nyata  (P>0,05).    Begitu  juga  antara  E 10 , E 20 ,  dan  E 40 berbeda tidak nyata  (P>0,05).
Pada  pasca  pencairan  kembali,  rataan persentase  hidup  pada  E 30 (67,60)  lebih tinggi daripada E 0, E 10 , E 20 , dan E 40 (56,00, 58,20,  61,20  dan  63,20)  berbeda  nyata (P<0,05),  sedangkan  E 0 dengan  E 10 berbeda tidak nyata (P>0,05).  Begitu juga antara  E 20 ,  dan  E 40 berbeda  tidak  nyata (P>0,05) (Tabel 2.).
Menurut  Paradisi et  al. (1985)  yang disitir oleh Windsor et al. (1993) kehilangan aldenilat siklase sebagai akibat peroksidasi lipid mencegah sintesis camp yang mempunyai  peran  penting  dalam  motilitas spermatozoa. Hal ini  didukung oleh pendapat  John  dan  Stewart  (1979)  yang mengemukakan bahwa terjadinya perubahan  struktur  pada  spermatozoa yang  diakibatkan  oleh  cekaman  dingin menyebabkan  spermatozoa  hidup  sangat rendah.  Adanya  vitamin  E  yang  dapat melindungi  spermatozoa  dari  cekaman dingin pada pengencer susu skim menyebabkan integritas membran sel tetap terjaga.  Dengan  terjaganya  intergritas membran  sel,  proses  metabolisme  akan tetap  berjalan  dengan  baik  sehingga menunjang  motilitas  dan  daya  hidup spermatozoa.  Vitamin  E  bersama  gliserol dan  kuning  telur  akan  meningkatkan motilitas  spermatozoa  domba  setelah thawing, namun vitamin E hanya berpengaruh  pada  motilitas  spermatozoa (Sanchez et  al .,  1996).  Pada  konsentrasi vitamin  E  27  mM,  bersama  gliserol  dan kuning telur mampu meningkatkan motilitas spermatozoa. Namun pemberian vitamin E konsentrasi  sangat  tinggi  (81mM)  akan menggangu motilitas dan meracuni spermatozoa  domba.    Vitamin  E  bersama gliserol dan kuning telur akan meningkatkan motilitas spermatozoa domba  setelah  thawing,  namun  vitamin  E
hanya berpengaruh pada motilitas spermatozoa (Sanchez et al ., 1996).

## SIMPULAN
Adapun  simpulan  yang  dapat  ditarik dari  penelitian  di  atas  adalah  sebagai berikut:
1.  Pengencer susu skim memenuhi persyaratan untuk krioperservasi
sperma domba.
2.  Penambahan  vitamin  E  ke  dalam bahan  pengencer  susu  skim  dapat mempertahankan kualitas spermatozoa  pada  sperma  beku  baik dalam  mempertahankan  persentase motilitas  maupun  jumlah  spermatozoa yang hidup.
3.  Penambahan  vitamin  E  dengan  dosis 30  g per milliliter ke dalam pengencer susu  skim  memberikan  hasil  yang lebih  baik  daripada  dosis  lainnya maupun tanpa vitamin E.

## DAFTAR PUSTAKA
John  RC,  Stewart  DL.  1979. The  effect  of cooling to 50 C and freezing and thawing on the ultrastructure of bull spermatozoa . J. Dairy Sci. 36:733-742.
Jones  RC,  Mann  T.  1977. Toxicity  of exogenous fatty acid pereoxides towards spermatozoa .  J.  Reprod.  Fertil.  50:  255- 260.
Pursel VG. 1979. Effect Of Cold Shock On Boar Sperm Treated With Butylated
Hydroxitoluene .  Biol.  Reprod.  21:319- 325.
Salamon  S,  Maxwell  WMC.  1995a. Frozen Storage  Of  Ram  Semen  I.  Processing, Freezing,  Thawing  And  Fertility  After Cervical  Insemination .  Anim.  Reprod.
Sci. 37:85-249.
Salamon  S,  Maxwell  WMC.  199b. Frozen Storage  Of  Ram  Semen  II.  Causes  Of Low  Fertility  After  Cervical  Insemination And  Method  Of  Improvement .  Anim Reprod. Sci. 38:1-36.
Sanchez-Partida  LG,  Setchel  BP,  Maxwell. WMC. 1996. Effect of compatible solutes and  and  diluents  composition  on  the
post-thaw motility characteristics of spermatozoa  in  ewe  after  cervival,
transcervical,
and intrauterine insemination  sith  frozen-thawed  ram semen .  Journal  of  Andrologi.  Vol  20. 2:280-288.
Tomaszweska  MW,  Sutama  IK,  Putu  IG, Caniago  TD.  1991. Reproduksi  Tingkah Laku  dan  Produksi  Ternak  di  Indonesia.
P.T. Grameda Pustaka Utama. Jakarta.
Tomaszweska MW, Mastika IM, Djajanegara A,
Gardiner S, Wiradarya R. 1993. Reproduksi  Kambing  Dan  Domba  Di
Indonesia .  Sebelas  Maret  University Press.
Wijaya  A.  1996. Radikal  bebas  dan  parameter status  antioksidan .  Forum  diagnosticum No. 1, Laboratorium Klinik Prodia.
Windsor  DP, White IG, Selley M  L,    Swan  MA. 1993. Effect  of  the  lipid  peroxidation product  (E)-4-hydroxy-2-nonenal  on  ram sperm function .  J.  Reprod.  Fert.,  99:359- 366.
Windsor  DP.  1996. Mitochondrial  function  and ram  sperm  fertility .  Reproduction  and
Fertility Development, 3:279-284.