Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2 Desember 2021 Hal 34 - 41 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v8i2.31335
This is an open access article under the CC BY-SA license (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/)

## Analisis Kualitatif Rhodamin B dalam Terasi di Pasar Kota Sumbawa Besar Menggunakan
Metode Kromatografi Lapis Tipis

## Qualitative Analysis of Rhodamine B in Shrimp Paste at Sumbawa Besar City Markets Using Thin Layer Chromatography
Abby Rahmat Kamaruzzaman, Asri Darmawati,* Djoko Agus Purwanto
Departemen Ilmu Kefarmasian, Fakultas Farmasi Universitas Airlangga, Gedung Nanizar Zaman Joenoes, Kampus C Unair, Jl. Mulyorejo, Surabaya 60115, Indonesia
* Corresponding author, email e-mail: asri-d@ff.unair.ac.id
Article History
Received: 12 July 2021; Received in Revision: 5 August 2021; Accepted: 9 August 2021

## ABSTRAK
Terasi biasa diberi pewarna merah agar lebih menarik. Tahun 2013, pernah ditemukan Rhodamin B dalam produk terasi yang beredar di pasar kabupaten Sumbawa Barat. Rhodamin B adalah pewarna merah yang dilarang digunakan untuk  makanan.  Diantara  berbagai  produk  terasi  yang  dijual  di  Sumbawa,  terasi  khas  asli  Sumbawa  yaitu  terasi Empang, perlu dijaga keamanannya agar dapat lebih dipromosikan. Tujuan penelitian ini adalah membuktikan bahwa terasi  yang  dijual  pasar  kota  Sumbawa  Besar  tidak  mengandung  Rhodamin  B.  Metode  yang  digunakan  untuk identifikasi Rhodamin B adalah kromatografi lapis tipis (KLT). Penelitian ini menggunakan silika gel 60 F 254 sebagai fase diam dan fase gerak terpilih yaitu N-butanol:etil asetat:amonia 25% (10:4:5). Sampel adalah produk terasi yang dijual  di  Pasar  Kota  Sumbawa  Besar,  periode  sampling  bulan  Februari  dan  Maret  2021.  Preparasi  sampel  terasi dengan cara diekstraksi menggunakan etanol dan volume ekstrak yang ditotolkan pada lempeng KLT adalah 2 µl. Parameter  validasi  metode  yang  diuji  adalah  spesifisitas/selektifitas  dan  batas  deteksi  (LOD).  Hasil  penelitian menunjukkan metode ini spesifik untuk Rhodamine B yaitu Rf 0,69, profil spektra yang sama antara baku dan sampel yang diadisi Rhodamin B. Resolusi (Rs) antara noda Rhodamin B dengan noda terdekat lain dalam sampel adalah >1,5.  Panjang  gelombang  serapan  maksimum  Rhodamin  B  adalah  544  nm.  Nilai  LOD  sebesar  4,14  ng.  Hasil identifikasi terhadap 10 sampel yang terdiri dari 3 sampel terdaftar di BPOM dan 7 sampel tidak terdaftar di BPOM tidak terdeteksi adanya Rhodamin B. Kesimpulan dari penelitian ini adalah semua sampel terasi yang dijual di pasar kota Sumbawa Besar tidak terdeteksi mengandung Rhodamin B.
Kata kunci : Rhodamin B, TLC, Terasi Empang, food safety, bahan berbahaya

## ABSTRACT
The shrimp paste is usually coloured with red to make it more attractive.  In 2013, Rhodamin B was found in the shrimp paste that was sampled from West Sumbawa district market. Rhodamin B is not permitted for food. Among the various shrimp paste marketed in Sumbawa, the original Sumbawa shrimp paste, namely Terasi Empang, need to be kept safe so that it can be further promoted. The aim of this study was to prove the shrimp paste that marketed in Sumbawa Besar city market did not contain Rhodamine B. The method for Rhodamin B identification was thin layer chromatography  (TLC).  The  silica  gel  60  F 254 was  used  as  stationary  phase  and  a  mixture  of  N-butanol:ethyl acetate:ammonia 25% (10:4:5) as selected mobile phase.The samples were shrimp paste marketed in Sumbawa Besar city markets. Sampling periode were in February and March 2021. The shrimp paste sample was extracted twice using ethanol. The 2 µl of the sample solution were spotted on the TLC plate. The validation parameters tested were specificity/selectivity and limit of detection (LOD). The results obtained that this method was specific for Rhodamin B,  namely  Rf  of  0,69,  identic  spectral  profiles  between  the  Rhodamin  B  standard  and  the  sample  added  with Rhodamin B. Resolution (Rs) between Rhodamin B spot and the other closest spot in sample was >1.5. The maximum absorbance of Rhodamine B was at the wavelength of 544 nm. Meanwhile, the LOD value was 4,14 ng. The results of the identification of 10 samples consisting of 3 samples registered at BPOM and 7 samples not registered at BPOM showed that Rhodamin B was undetected in all samples. This study concluded that all shrimp paste that were marketed in Sumbawa Besar city markets were no Rhodamin B detected.
Keywords: Rhodamin B, TLC, shrimp paste, food safety, illicid additive

## Research Article
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Juni 2021 Hal 34 - 40 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v8i2.31335
Sumbawa  merupakan  salah  satu  Kabupaten  di  Provinsi Nusa  Tenggara  Barat,  dengan  Sumbawa  Besar  sebagai ibukota  Kabupaten  (Iskandar et  al .,  2018).  Sumbawa memiliki  beragam  makanan  tradisional  daerah  dengan bumbu  rempah-rempah    khas  (Nurlelah,  2017).  Dalam memperkaya  rasa  pada  masakan,  terdapat  beberapa penyedap  yang  digunakan,  salah  satunya  bahan  penyedap tradisional yaitu terasi. Terasi umumnya terbuat dari bahan udang kecil atau ikan (Amir & Mahdi, 2017).
Jenis  terasi  khas  dari  Sumbawa  adalah  terasi  Empang. Empang merupakan nama kecamatan di wilayah Sumbawa penghasil terasi Empang, terutama Desa Labuhan Bontang (Asmara, 2020). Terasi biasanya digunakan sebagai bahan tambahan dalam sambal dan berbagai masakan tradisional. Terasi  mempunyai  ciri  khas  yaitu  aroma  yang  tajam. Namun,  warna  asli  dari  terasi  kurang  disukai  oleh konsumen. Sehingga untuk meningkatkan minat konsumen sering kali ditambah dengan pewarna sintetis agar menarik (Permatasari et al ., 2018).
Dalam  kaitan  pengawasan  pangan,  pada  tahun  2013 BBPOM  di  Mataram  melakukan  pengawasan  pangan  di pasar kabupaten Sumbawa Barat dan didapatkan 4 sampel terasi  mengandung  zat  pewarna  berbahaya  Rhodamin  B (BBPOM  Mataram,  2013).    Pada  laporan  tahunan  2018, dari  1046  sampel  yang  diambil  dari  seluruh  wilayah pengawasan  BBPOM  Mataram,  ditemukan  15  sampel masih  mengandung  bahan  berbahaya,  salah  satunya  1 sampel  terasi  yang  mengandung  Rhodamin  B  (BBPOM Mataram,  2019).  Pada  laporan  tahunan  2019,  dari  1094 sampel pangan terdapat 1 sampel yang masih mengandung Rhodamin B. Namun, sampel tersebut bukan berupa terasi melainkan  kerupuk (BBPOM Mataram, 2020).
Rhodamin  B  merupakan  zat  pewarna  yang  dinyatakan sebagai  bahan  berbahaya  menurut  Peraturan  Menteri Kesehatan Republik Indonesia No.239/Men.Kes/Per/ V/85 tentang Zat Warna Tertentu yang dinyatakan sebagai Bahan Berbahaya.  Rhodamin  B  sebenarnya  zat  pewarna  untuk kertas  dan  tekstil,  namun  sering  digunakan  dalam memberikan  warna  yang  mencolok  pada  bahan  makanan seperti  terasi  (Surati,  2015).  Struktur  Rhodamin  B merupakan  hidrokarbon  aromatik  polisiklik  (PAH)  yang bersifat  karsinogenik  dan  juga  toksik  (Satiyarti,  2021), (Gambar 1).

## Gambar 1. Struktur dan warna Rhodamin B
Bahaya  yang  ditimbulkan  akibat  konsumsi  jangka  lama bahan yang mengandung Rhodamin B berupa radang kulit,
alergi, dan gangguan fungsi hati. Selain itu, ada juga gejala akut  yang  diberikan  oleh  Rhodamin  B  diantaranya  iritasi saluran  nafas  saat  terhirup,  iritasi  pada  kulit  saat  terkena kulit;  iritasi  mata,  mata  kemerahan,  dan  bengkak  pada kelopak  mata  jika  terkena  mata;  dan  juga  dapat mengakibatkan    keracunan  dan  kencing  berwarna  merah jika tertelan (Surati, 2015).
Analisis  Rhadomin  B  dalam  beberapa  matriks  sampel dapat  dilakukan  dengan  metode  kromatografi  lapis  tipis (KLT) dan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) (Badan Pengawas Obat dan Makanan, 2011). Dalam penelitian ini digunakan metode KLT dikarenakan metode ini sederhana, dapat memisahkan analit dengan sempurna, kepekaan yang tinggi,  waktu  yang  digunakan  cepat,  dan  membutuhkan sedikit  sampel  (Ananda et  al .,  2014).  Prinsip  pemisahan analit  berdasarkan  perbedaan  migrasi  atau  perbedaan tingkat afinitas masing-masing komponen dalam fase diam dan  fase  gerak.  Pelaksanaan  analisis  menggunakan  KLT diawali dengan penotolan cuplikan sampel pada fase diam (lempeng  KLT)  sebagai  zona  awal.  Kemudian  lempeng KLT dieluasi  dengan fase gerak tertentu. Selanjutnya fase gerak  akan  mengembang  sehingga  membawa  dan memisahkan komponen-komponen dalam fase diam untuk bermigrasi  sesuai  kecepatan  dan  tingkat  afinitas  masing- masing  komponen  pada  fase  diam  (Wulandari,  2011). Dalam  penelitian  ini,  standar  yang  digunakan  adalah Rhodamin B dengan sampel berupa terasi yang di sampling dari pasar-pasar wilayah Kota Sumbawa Besar.

## Metode Penelitian

## Populasi dan Sampel
Populasi  pada  penelitian  ini  adalah  terasi  yang  dijual  di pasar-pasar di  Kota Sumbawa yaitu Pasar Seketeng, Pasar Brang Bara, Pasar Brang Biji.
Sampel diambil dari terasi  yang dipasarkan di  pasar-pasar di  Kota Sumbawa Besar, nama dagang sampel teregistrasi di  BPOM atau tidak teregistrasi. Disampling  pada tanggal 13 dan 15 Februari 2021 sejumlah 10 sampel terasi yakni 3 sampel yang teregistrasi di BPOM dan 7 sampel yang tidak teregistrasi  di  BPOM.  Ketujuh  sampel  yang  tidak teregistrasi di BPOM disampling lagi di tempat yang sama pada  tanggal  6  Maret  2021.  Sampel-sampel  di  simpan dengan  pengering silika  gel  food  grade di  dalam  wadah tertutup sebelum di analisis di Lab.

## Bahan
Sampel  terasi,  1  contoh  terasi  positip  Rhodamin  B  dari sampel  PENGMAS  FF  Unair  2020,  Rhodamin  B  pro analisis  (Merck),  etanol  for  analysis  (Emsure),  metanol ACS (Fulltime), etil asetat ACS (Fulltime), ammonia 25% for  analysis  (Emsure),  N-butanol  ACS  (Fulltime),  dan  air suling.

## Alat dan Instrumen
Densitometer  (Shimadzu  Dual-wavelength  Chromato Scanner CS-930), Lampu UV (CAMAG), timbangan mikro (Mettler  Toledo  d  =  0,001  mg),  timbangan  (OHAUS Adventurer  d  =  0,001  g),  Ultrasonik  cleaner  (Branson
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Juni 2021 Hal 34 - 40 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v8i2.31335
3510), mikro pipet (d = 1,0 µL), Lempeng KLT silika gel 60 F254, bejana kromatografi 12 cm x 12 cm, pipa kapiler 2  µl,  dan  alat-alat  gelas  yang  umum  digunakan  di laboratorium kimia analisis.

## Pembuatan Larutan Baku Rhodamin B (200 ppm)
Menimbang  baku  Rhodamin  B  secara  teliti  10  mg, kemudian  dilarutkan  di  dalam  labu  ukur  50  ml  dengan metanol hingga batas tanda.

## Preparasi Sampel
Dinimbang  +  0,6  g  terasi,  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi. Dilakukan ekstraksi sebanyak 2 kali masing-masing dengan 2 ml etanol, disaring dengan kertas Whatman no 40. Filtrat digunakan sebagai larutan uji. Pada preparasi sampel yang  diadisi  dengan  baku  Rhodamin  B  filtrat  hasil penyaringan  ekstrak  sampel  diadisi  dengan  1  ml  larutan baku Rhodamin B 200 ppm

## Optimasi Fase Gerak
Dilakukan  optimasi  untuk  mendapatkan  fase  gerak  yang dapat memisahkan Rhodamin B dari komponen lain dalam sampel terasi.
Fase gerak yang diuji dalam penelitian ini adalah: Fase gerak A, yaitu:  etil asetat: metanol: campuran ammonia air = 15:3:3 (BPOM,2011). Fase gerak B, yaitu N-butanol : etil asetat: ammonia 25% 10: 4 :5  (Mamay & Gunawan, 2018). Fase gerak C, yaitu etanol : ammonia 25% 19 : 1 (Serlahwaty & Ningsih, 2012).

## Validasi Metode

## Spesifisitas
Larutan sampel dan larutan baku yang sudah diadisi dengan Rhodamin B ditotolkan masing-masing 2 µl pada Lempeng KLT silika gel 60 F254. Lempeng kemudian dielusi dengan ketiga macam fase gerak terpilih. Kemudian dibandingkan nilai  Rf noda dan warna noda. Secara visual  Rhodamin B berwarna  pink  cerah,  tetapi  di  bawah  sinar  UV  berpendar warna  kuning.  Dianalisis  profil  spektrogram  baku Rhodamin B dengan sampel yang diadisi Rhodamin B.

## Limit of detection (LOD)
Nilai  LOD  ditentukan  dengan  menggunakan  kurva  baku dari enam konsentrasi baku Rhodamin B, 1 ppm, 2 ppm, 4, ppm, 6 ppm, 10 ppm, dan 20 ppm. Masing-masing larutan ditotolkan  dan  dieluasi.  Area  noda  diukur  dengan densitometer.  Nilai  LOD  didapat  berdasarkan  persamaan regresi, dengan rumus berikut (USP,2018): 𝑄 = 𝑘 𝑥 𝑆𝑏 𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒
Keterangan:
Q : LOD
K       : untuk LOD nilainya 3
Sb      : simpangan baku
Slope :  y = a + bx

## Identifikasi Rhodamin B dalam Terasi
Larutan hasil preparasi sampel dan larutan baku Rhodamin B  ditotolkan  pada  lempeng  KLT  masing-masing  2  µL.
Lempeng dicelupkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhkan  dengan  fase  gerak  terpilih.  Identifikasi dilakukan  dengan  membandingkan  noda  sampel  dengan noda  baku  Rhodamin  B  meliputi  Rf,  warna  noda  secara visual,  warna  noda  ketika  disinari  UV  254,  dan  profil spektra dari baku dan sampel Rhodamin B.

## Hasil dan Pembahasan

## Optimasi Fase Gerak
Untuk  ekstraksi  Rhodamin  B  dalam  sampel  terasi digunakan etanol. Etanol juga digunakan untuk mengekstraksi Rhodamin B dalam sampel makanan seperti sosis daging, burger daging dan tomat. Rhodamin B sangat mudah  larut  dalam  etanol.  Perbedaan  pelarut  yang digunakan  untuk  melarutkan  baku  Rhodamin  B  yaitu metanol  dengan  pelarut  untuk  ekstraksi  sampel,  yaitu etanol,  tidak  mempengaruhi  hasil  eluasi.  Kedua  pelarut mudah  melarutkan  Rhodamin  B.  Selain  itu,  pengeringan pelarut  setelah  cuplikan  ditotolkan  pada  lempeng  KLT berguna  untuk  menguapkan  pelarut  analit  sehingga  tidak mengganggu hasil elusi.
Gambar 2. Hasil eluasi ekstrak etanol sampel nomor 1 dengan fase gerak B dengan penampak noda UV 254
Tabel 1. Hasil Optimasi Fase Gerak
Fase gerak Sampel Rf Rhodamin B Rf noda terdekat Rs A Sampel 1 0,48 0,49 1,05 Sampel 5f 0,44 0,48 1,17 B Sampel 1 0,77 0,51 3,32 Sampel 5f 0,69 0,43 2,95 C Sampel 1 0,72 0,67 1,28 Sampel 5f 0,68 0,67 1,06
Hasil optimasi fase gerak dapat dilihat pada Tabel 1.  Fase gerak B, yaitu N-butanol : etil asetat : amonia 25%, (10:4:5) merupakan fase gerak terpilih. Fase gerak B menghasilkan pemisahan  noda  sampel  yang  paling  baik.  Nilai  Rs  yang
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Juni 2021 Hal 34 - 40 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v8i2.31335
dihasilkan  lebih  baik  dari  fase  gerak  lain.  Noda  hasil pemisahan Rhodamin B dengan komponen-komponen lain pada sampel disajikan pada Gambar 2.

## Validasi Metode

## Spesifisitas/selektifitas
Spesifisitas metode didapatkan berdasarkan nilai  Rf noda, warna  noda  secara  visual  (berwarna  pink  cerah),  warna noda  di  bawah  sinar  UV  (berpendar  warna  kuning),  dan profil spektrogram antara baku Rhodamin B dengan sampel yang diadisi Rhodamin B. Pada penelitian ini sampel nomor 5f yang diadisi baku Rhodamin B dan dibandingkan dengan baku Rhodamin B. Noda dengan nilai  Rf 0,69 sama-sama dimiliki keduanya. Noda ersebut sama-sama berwarna pink cerah  saat  dilihat  secara  visual,  dan  berpendar  berwarna kuning saat disinari sinar UV 254 (Tabel 1, Gambar2 )
Selanjutnya noda baku Rhodamin B dengan sampel 5f, yang diadisi  Rhodamin  B,  dipindai  dengan  densitometer  pada daerah  visibel.  Pengukuran  langsung  pada  daerah  visibel dikarenakan  larutan  Rhodamin  B  merupakan  larutan berwarna  dan  noda  Rhodamin  B  pada  lempeng  dapat terlihat  langsung  berwarna  pink  cerah.  Profil  spektra keduanya  terlihat  sama  seperti  pada  Gambar  3  dan didapatkan  panjang  gelombang  maksimum  Rhodamin  B 544  nm.  Panjang  gelombang  ini  sama  dengan  panjang gelombang maksimum Rhodamin B Pustaka, yaitu 544 nm (Kumalasari, 2017).

## Gambar 3 . Profil spektra UV Rhodamin B

## Batas Deteksi (LOD)
Nilai  LOD  didefinisikan  sebagai  jumlah  terkecil  analit dalam  sampel  yang  dapat  terdeteksi  oleh  suatu  metode. Metode  KLT  ini  mampu mendeteksi  adanya  Rhodamin  B tidak kurang dari 4,14 ng dari sampel yang ditotolkan pada lempeng KLT, atau 2,07 ppm untuk volume penotolan 2 µl. Hasil penentuan LOD dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil uji Batas Deteksi Parameter Replikat 1 Replikat 2 Persamaan garis regresi y = 310,5 x +   3730 y = 337,7 x + 2113 Koefisien korelasi ( R) 0,998 0,996 Sb 326,7 576,59 LOD 3,16 ng 5,12 ng Rerata LOD = 4,14 ng

## Identifikasi Rhodamin B dalam Sampel Terasi
Sampel yang diuji terdiri atas tiga (3) sampel terasi merek berbeda yang teregistrasi  di  BPOM yaitu sampel nomor 1 sampai  nomor  3  dan  tujuh  (7)  sampel  terasi  tanpa  merek yang  tidak  teregistrasi  di  BPOM  yaitu  sampel  nomor  4 sampai sampel nomor 10.
Sampel  yang  tidak  teregistrasi  di  BPOM  masing-masing dibedakan menjadi dua kelompok, yaitu sampel nomor 4f - 10f (periode sampling 13-15 Februari 2021) dan nomor 4m - 10m (periode sampling 6 Maret 2021). Sampling dua kali dalam rentang waktu sebulan ini dilakukan dengan maksud menjamin sampel yang tersampling konsisten komposisinya dalam kurun waktu sebulan terakhir.
Sampel  yang  tidak  teregistrasi  di  BPOM  diduga  mudah diubah  komposisinya  untuk  mengikuti  tren  pasar  yang berubah dalam kurun waktu tersebut, misalnya ditambahkan  pewarna  Rhodamin  B.  Mengingat  terasi tersebut biasanya tidak menggunakan kemasan yang kedap udara untuk menjaga keawetannya dalam waktu yang lama. sehingga diduga pembuatan dan distribusinya sekitar 1 kali sebulan.
Pada  ekstraksi  sampel,  masing-masing  sampel  ditimbang sebanyak  +  800  mg,  lebih  besar  dari  penimbangan  saat proses  ekstraksi  untuk  pemilihan  fase  gerak.  Hal  ini dilakukan  agar  Rhodamin  B  yang  didapatkan  dari  sampel lebih banyak, sehingga peluang untuk terdeteksi lebih besar. Penotolan  masing-masing  sampel  dan  baku  Rhodamin  B dilakukan dengan perlakuan sama yaitu sebanyak 2 µl. Pada  tiap  lempeng  selain  ditotolkan  sampel  dan  baku Rhodamin juga ditotolkan sampel contoh terasi yang positip mengandung  Rhodamin  B  untuk  melihat  ketepatan  dan kemampuan  dari  metode  ini  dalam  mendeteksi  Rhodamin B. Setelah dieluasi noda-noda yang dihasilkan tiap sampel pada  lempeng  diperhatikan  persamaannya  dengan  noda baku  Rhodamin  B.  Adapun  hasil  analisis  sampel  dapat dilihat pada Tabel 3., Tabel 4., dan Tabel 6.
544 nm
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Juni 2021 Hal 34 - 40 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v8i2.31335
Nomor kode Sampel/replikasi Noda dengan R f identik baku Rhodamin B Warna noda visual (pink cerah) Noda pada UV (Berfloresensi) Kromatogram (puncak pada λ maks) 1 Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 2 Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 3 Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT Keterangan: TT = Tidak Terdeteksi Tabel 4. Hasil identifikasi Rhodamin B daam sampel yang tidak teregistrasi di BPOM (sampling bulan Februari 2021)
Nomor kode Sampel/replikasi Noda dengan Rf identik dengan baku Rhodamin B Warna noda visual (pink cerah) Noda pada UV (Berfloresensi) Kromatogram (puncak pada λ maks) 4f Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 5f Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 6f Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 7f Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 8f Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 9f Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 10f Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT Keterangan: TT = Tidak Terdeteksi
Tabel 3, Tabel 4 dan Tabel 5 menunjukkan semua sampel tidak terdeteksi adanya Rhodamin B. Noda khas warna baku Rhodamin B tidak ditemukan pada sampel yang teregistrasi di BPOM (sampel nomor 1-nomor 3). Noda khas Rhodamin B tersebut  juga tidak ditemukan pada sampel tanpa merek yang  tidak  teregistrasi  di  BPOM,  baik  sampel  yang disampling  pada  bulan  Februari  (sampel  nomor  4f-10f) maupun sampel-sampel yang disampling pada bulan Maret (sampel nomor 4m-10m).
Pada Gambar 4. terlihat secara visual bahwa noda dari Baku Rhodamin  B  berwarna  pink  cerah  yang  sesuai  dengan Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan  (2011).  Noda berwarna  pink  cerah  tidak  nampak  pada  semua  sampel. Noda berwara pink cerah ini hanya dimiliki oleh noda baku Rhodamin  B  dan  contoh  terasi  yang  positip  mengandung Rhodamin  B.  Hal  ini  membuktikan  bahwa  metode  yang dilakukan pada penelitian ini dapat  mendeteksi  Rhodamin B dalam sampel terasi.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Juni 2021 Hal 34 - 40 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v8i2.31335
Tabel 5. Hasil identifikasi Rhodamin B dalam sampel yang tidak teregistrasi di BPOM (sampling bulan Maret2021)
Nomor kode Sampel/replikasi Noda dengan Rf identik dengan baku Rhodamin B Warna noda visual (pink cerah) Noda pada UV (Berfloresensi) Kromatogram (Puncak pada λ maks) 4m Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 5m Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 6m Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 7m Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 8m Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 9m Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT 10m Replikasi 1 TT TT TT Replikasi 2 TT TT TT Replikasi 3 TT TT TT Keterangan: TT = Tidak Terdeteksi
Keterangan : S = baku Rhodamin B ; P = contoh terasi positip Rhodamin B,  6f-10f dan 4m = sampel terasi
A = penampakan visual B = dengan penampak noda UV 254 nm
Gambar 4. Hasil eluasi sampel 6f-10f dan 4m, tampak secara visual dan penampak noda UV 254 nm
Kromatogram  hasil analisis sampel 6f-10f tercantum pada Gambar  4.  Warna  pink  (tampak  langsung)  atau berfluoresensi  kuning  (bila  disinari  UV  254  nm)  hanya tampak  pada  baku  Rhodamine  B  dan  contoh  terasi  yang positip  Rhodamin  B.  Rhodamin  B  memiliki  gugus kromofor  yang  mampu  menyerap  sinar  UV  (Longdong  et
al.,  2017).  Gugus  kromofor  dalam  Rhodamin  B  adalah struktur  inti  xanthene  (Carta,  2014).  Profil  kualitatif kromatogram  sampel  dipindai  dengan  densitometer  pada panjang gelombang 544 tercantum pada Gambar 5.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Juni 2021 Hal 34 - 40 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v8i2.31335
Keterangan : S = baku Rhodamin B; P = contoh terasi positip Rhodamin B, 6f-10f dan 4m = sampel
Gambar 5. Profil kromatogram sampel nomor 6f- 10f dan 4m  menggunakan densitometer dan detektor λ 544 nm
Berdasarkan  hasil  identifikasi  Rhodamin  B  dalam  sampel dengan metode ini, seperti yang tercantum dalam Tabel 3., Tabel  4.,  dan  Tabel  5,  berarti  sampel  terasi  di  pasar  Kota Sumbawa Besar yang teregistrasi di BPOM tidak terdeteksi adanya Rhodamin B, begitu juga dengan terasi tanpa merek yang  tidak  teregistrasi  di  BPOM  tidak  terdeteksi mengandung Rhodamin B.
Metode  KLT-densitometri  ini  memiliki  batas  deteksi  4,14 ng.  Berdasarkan  preparasi  sampel,  kadar  sampel  saat penotolan  adalah  800  mg/2  ml  atau  0,8  mg/2  µl.  Berarti metode  ini  tidak  mampu  mendeteksi  Rhodamin  B  dalam sampel bila konsentrasinya < 4,14 ng/8.10 5 ng, atau < 5,17 ppm .

## Kesimpulan dan Saran
Sampel  terasi  di  pasar  Kota  Sumbawa  Besar  yang teregistrasi maupun yang tidak teregistrasi di BPOM tidak terdeteksi mengandung Rhodamin B.
Bila metode ini akan digunakan untuk analisis sampel yang diduga mengandung Rhodamine B < 5,17 ppm, maka perlu dilakukan penambahan bobot sampel yang diekstraksi agar filtrat  sampel  lebih  pekat,  atau  pemekatan  filtrat  hasil ekstraksi agar adanya Rhodamine B dapat terdeteksi dengan metode ini

## Daftar Pustaka
Amir,  N.,  dan  Mahdi,  C.  (2017)  Evaluasi  Penggunaan Rhodamin  B  pada  Produk  Terasi  yang  Dipasarkan  Di Kota Makassar , Jurnal IPTEKS PSP , 4 (8), 128–133.
Ananda, R. W., Kristiningrum, N., dan Retnaningtiyas, Y.
(2014) Validasi dan Penetapan Kadar Rhodamin B pada Lipstick  yang  Beredar  Di  Sekitar  Universitas  Jember dengan  Metode  KLT-Densitometri, E-Jurnal  Pustaka Kesehatan , 2 (1), 105–110.
Asmara, G. (2020) Penyuluhan Hukum Tentang Pentingnya Memperoleh  Sertifikat  Halal  dalam  Usaha  Kuliner  di Kabupaten Sumbawa, Jurnal PEPADU, 1 (3), 400–408.
Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan.  (2011)  Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat Dan Makanan Nomor HK 03.1.23.08.11.07331  tahun  2011  tentang    Metode Analisis Kosmetika. Kepala Badan Pengawas Obat Dan Makanan RI, Jakarta
BBPOM  Mataram  (2013) Safari  Ramadan  BBPOM  Di Mataram Di Pulau Sumbawa . Balai Besar Di Mataram. https://www.pom.go.id/new/view/more/berita/4053/Saf ari-Ramadhan-BBPOM-di-Mataram-Di-Pulau- Sumbawa.html. (Diakses pada tanggal 25 November 2020) BBPOM  Mataram  (2019) Laporan  Tahunan  BBPOM  Di Mataram  tahun  2018 .  Balai  Besar  POM  Mataram, Mataram BBPOM  Mataram  (2020) Laporan  Tahunan  Balai  Besar POM  Di  Mataram  tahun  2019 ,  Balai  Besar  POM Mataram, Mataram
Carta,  C.  L.  (2014)  The  Effects  of  Medium  on  the  UV- Induced Photodegradation of Rhodamine B Dye, Tesis, The collage of William and Mary, Virginia.
Iskandar I., Primaputra P., P., Indrajaya, W., Gunawan, A., Margana, W., Minuddin, Zubaidi, S. A., Maraja, A. P. P., Zaputra, N., Purnamasari, A. R., dan Sudirman, M. A.  (2018) Sumber  Daya  Alam  Lingkungan  Hidup Kabupaten Sumbawa Tahun 2018 , Badan Perencanaan Pembangunan,  Penelitian  Dan  Pengembangan  Daerah Kabupaten Sumbawa, Sumbawa Besar
Kumalasari,  E.  (2017)  Identifikasi  dan  Penetapan  Kadar Rhodamin  B  dalam  Kerupuk  Berwarna  Merah  yang Beredar  Di  Pasar  Antasari  Kota  Banjarmasin, Jurnal Ilmiah Manuntung , 1 (1),  85-89.
Longdong, G. M. B., Abidjulu, J., dan Kojong, N. S. (2017) Analisis  Zat  Pewarna  Rhodamin  B  pada  Saos  Bakso Tusuk yang Beredar di Sekitar Kampus Universitas Sam Ratulangi Manado, Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi , 6 (4), 28–34.
Mamay,  dan  Gunawan,  A.  (2018)  Identifikasi  dan Penetapan Kadar Rhodamin B pada Terasi yang Dijual di Pasar Ciawitali Kabupaten Garut, Medika Cendikia , 4

## 4m 10f  9f  P   S   8f  7f  6f
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Juni 2021 Hal 34 - 40 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v8i2.31335
(2), 108–1015.
Menteri  Kesehatan  Republik  Indonesia  (1985) Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia
Nomor :239/Men.Kes/Per/V/85  Tentang  Zat  Warna Tertentu  Yang  Dinyatakan  Sebagai  Bahan Berbahaya , Menteri Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta Nurlelah (2017) Terminologi kuliner khas sumbawa dalam upaya visit sumbawa yang prospektif. The 1st Education and  Language  International  Conferance  Proceedings Center  for  International  Language  Development  of Unissula , pp. 586–595.
Permatasari,  A.  A.,  Sumardianto,  S.,  dan  Rianingsih,  L.
(2018)  Perbedaan  Konsentrasi  Pewarna  Alami  Kulit Buah  Naga  ( Hylocereus  polyrhizus )  terhadap  Warna Terasi  Udang  Rebon  ( Acetes  sp .). Jurnal  Teknologi Hasil Pertanian , 11 (1), 39-52.
Satiyarti,  R.  B.  (2021)  Rhodamine  B  detection  from inexpensive blush on in Bandar Lampung  City. Jurnal
Kartika Kimia , 4 (1), 38–41.
Serlahwaty,  D.,  and  Ningsih,  A.  A.  (2012)  Analysis  of Rhodamin  B  in  Ground  Red  Chili  Using  Thin  Layer Chromatography-Densitometry, Proceeding of
International  Conference  on  Drug  Development  of Natural Resources , 237–244.
Surati  (2015)  Bahaya  Zat  Aditif  Rhodamin  B  pada  Makanan. Jurnal Biology Science & Education , 4 (1), 22–28. United  States  Pharmacopeial  Convention  (2018) United  States Pharmacopeia  41  National  Formulary  36 ,.  (5).  Rockville, United Book Press.
Wulandari,  L.  (2011) Kromatografi  Lapis  Tipis .  Edisi ke-1.  PT. Taman Kampus Presindo, Jember.