## PENDAHULUAN
Di  Indonesia,  prevalensi  diare  merupakan  masalah kesehatan  masyarakat  dengan  kasus  yang  tinggi, berdasarkan  data  Kemenkes  RI  prevalensi  diare  pada tahun  2018  sebanyak  37,88%  atau  sekitar  1.516.438 kasus  pada  balita.  Prevalensi  tersebut  mengalami kenaikan  pada  tahun  2019  menjadi  40%  atau  sekitar 1.591.944 kasus pada balita (Ditjen P2P, Kemenkes RI, 2020).  Diare  disebabkan  oleh  sejumlah  organisme
bakteri,  virus  dan  parasit,  yang  sebagian  besar disebarkan oleh air yang tercemar feses. Rotavirus dan Escherichia  coli  adalah  dua  agen  etiologi  paling  umum dari  penyebab  diare  sedang  hingga  berat  di  negara- negara berpenghasilan rendah (Utami, 2019).
Menurut  Febriani  (2013)  pengobatan  yang  dilakukan terhadap  penyebab  diare  yaitu  digunakan  antibiotik. Antibiotik  yang  efektif  dan  aman  telah  berkembang begitu  pesat  sehingga  dapat  mengurangi  mortalitas

## Gambaran Hasil Uji Sensitivitas Antibiotik Terhadap Bakteri Escherichia coli
dengan Metode DISC dan Sumuran
Description of Antibiotic Sensitivity Test Results on Escherichia coli Bacteria Using DISC and Well Methods
Windya Nazmatur Rahmah 1*
Al Hidayani 2 Fitria Hariati Ramdhani 3
Ahmad Fatkhur Rozi 4
Universitas Muhammadiyah Palangka Raya, Kota Palangka Raya, Kalimantan Tengah, Indonesia
*email: windy.nazmatur@gmail.com

## Abstrak
Pemeriksaan  resistensi  antibiotik  terhadap  bakteri  memiliki  banyak  metode  dan teknik  yang  berbeda,  yaitu  metode  difusi  sumuran,  metode  difusi  cakram  disc, metode  difusi  silinder,  metode  dilusi,  dan  metode  difusi  dilusi.  Banyaknya  metode pemeriksaan  uji  daya  hambat  bakteri  yang  ada  membuat  orang  menjadi  banyak pertimbangan dalam melakukan hal tersebut. Tujuan dalam penelitain ini adalah untuk mengetahui gambaran hasil uji sensitivitas antibiotik terhadap bakteri Escherichia coli dengan  metode  disc  dan  sumuran.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode  difusi cakram  disc  dan  metode  difusi  sumuran.  Hasil  pengukuran  rata-rata  zona  hambat antibiotik  terhapat bakteri  Escherichia coli  didapatkan zona  hambat  metode  difusi sumuran  31.71  mm  dan  metode  difusi  cakram  disc  31,39  mm.  Rata-rata  hasil pengukuran metode difusi sumuran lebih besar 0,32 mm dari metode difusi cakram disc dan hasil pengukuran zona hambat metode difusi sumuran dan difusi cakram disc adalah Susceptible atau efektivitas antibiotik kuat.

## Kata Kunci:

## Escherichia coli
Uji sensitivitas Metode cakram disc Metode sumuran
Keywords :
Escherichia coli Sensitivity test Disc method Well method

## Abstract
The examination of antibiotic resistance against bacteria has many different methods and techniques,  namely  the  well-diffusion  method,  disc-diffusion  method,  cylindrical  diffusion method,  dilution  method,  and  dilution-diffusion  method.  There  are  many  methods  of examining the inhibition of bacteria that exist, making people take many considerations in doing this. The purpose of this research is to describe the results of the antibiotic sensitivity test  against  Escherichia  coli  bacteria  using  the  disc  and  well  method.  This  research  was conducted using the disc diffusion  method and the well diffusion method. The results of measuring  the  average  inhibition  zone  of  antibiotics  against  Escherichia  coli  bacteria obtained the inhibition zone of the well diffusion method of 31.71 mm and the disc diffusion method of 31.39 mm. The average measurement results of the well-diffusion method were 0.32  mm  larger  than  the  disc-diffusion  method  and  the  results  of  the  inhibition  zone measurements  of  the  well-diffusion  and  disc-diffusion  methods  were  Susceptible  or  the effectiveness of strong antibiotics.
© 2024 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v10i2.7495
akibat  penyakit  infeksi  secara  drastis.  Keberhasilan tersebut terganggu dengan banyaknya bakteri yang kebal terhadap  antibiotika,  hal  ini  disebabkan  adanya penggunaan  obat  yang  tidak  rasional,  penggunaan antibiotika yang tidak sesuai ketentuan, baik itu berupa penggunaan yang tidak tuntas maupun penggunaan tanpa dasar  pemeriksaan  yang  jelas,  yang  mana  pemeriksaan yang  mendukung  untuk  penegakan  diagnosa  tersebut adalah uji sensitivitas antibiotik.
Aktivitas  antibakteri  dapat  dipelajari  menggunakan beberapa  metode,  yaitu  metode  dilusi,  metode  difusi agar,  dan  metode  difusi  dilusi.  Metode  difusi  adalah metode  yang  sering  digunakan  untuk  analisis  aktivitas antibakteri.  Ada  3  cara  dari  metode  difusi  yang  dapat dilakukan yaitu metode sumuran, metode cakram, dan metode silinder (Nurhayati et al., 2020). Kedua metode tersebut memiliki kekurangan dan kelebihan. Kelebihan dari  metode  dilusi  adalah  dapat  menentukan  tingkat resistensi  secara  kuantitaif  dan  kekurangan  metode dilusi  adalah  memerlukan  pengerjaan  yang  rumit sedangkan  kelebihan  metode  difusi  adalah  pengerjaan yang sederhana dan tidak memerlukan waktu yang lama (Irvana, 2016).
Pengujian aktivitas antibakteri dengan metode sumuran dapat  menghasilkan  area  atau  zona  hambat  yang  lebih luas (Sri et al., 2017). Hasil penelitian Ari et al. (2019) yang  mempelajari  teknik  difusi  sumuran  dan  cakram untuk  mengevaluasi  sensitivitas  antibiotik  terhadap  E. coli mendapatkan hasil bahwa dengan metode sumuran diperoleh  zona  bening  antibiotik  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  metode  cakram.  Zona  hambat atau aktivitas antibakteri terhadap S. aureus lebih tinggi dibandingkan  dengan  E.  coli  disebabkan  karena  pada umumnya  bakteri  gram  negatif  mempunyai  resistensi yang  lebih  baik  terhadap  senyawa  antibakteri  karena memiliki struktur dinding sel yang lebih kompleks.
Berdasarkan latar belakang diatas peneliti tertarik untuk melakukan  penelitian  tentang  “Gambaran  Hasil  Uji
Sensitivitas Antibiotik Terhadap Bakteri Escherichia coli dengan Metode Disc dan Metode Sumuran”.

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Cawan petri, beaker glass, timbangan analitik, autoclave, oven,  hot  plate,  inkubator,  jangka  sorong,  tabung elenmeyer,  pelobang  media,  gelas  ukur,  batang  ose, batang  pengaduk,  pinset,  bunsen,  media  Agar  MHA, antibiotik  Ciprofloxacin,  Cakram  Disc  antibiotik Ciprofloxacin, alumunium foil, aquadest, spirtus, isolat bakteri E. coli.

## Prosedur kerja
Pembuatan konsentrasi antibiotik dan penanaman antibiotik metode sumuran
1. Disiapkan  antibiotik Ciprofloxacin yang  digunakan untuk penelitian
2. Dihaluskan antibiotik dengan alu steril
3. Dilakukan  pengenceran  dengan  konsentrasi antibiotik 5 µg
4. Diberi lobang pada media MHA yang sudah ditanam oleh bakteri E. coli
5. Dimasukkan  antibiotik  pada  media  MHA  dengan metode sumuran
6. Diinkubasi selama 24 jam di inkubaor suhu 37°C
7. Dibaca  diameter  hasil  zona  bening  pada  media MHA dengan alat jangka sorong
8. Dicatat semua hasil pemeriksaan
9. Semua kegiatan harus aseptic
Prosedur menggunakan metode cakram disc
1. Ditentukan cakram disc antibiotik Ciprofloxacin
2. Ditanam disc pada  media  yang  sudah  diinokulasi atau ditanam bakteri E. coli
3. Diberikan label nama pengulangan antiobiotik
4. Diinkubasi selama 24 jam suhu 37°C
5. Dibaca  diameter  hasil  zona  bening  pada  media MHA dengan alat jangka sorong
6. Dicatat semua hasil pemeriksaan
7. Semua kegiatan harus aseptik (Nurhayati, 2020) Interpretasi hasil Tabel I. Karakteristik Diameter Standar Sensitifitas  Antibiotik  ( Clinical  and Laboratory Standards Institute , 2012) Jenis Antibiotik Dosis Cakram Karakteristik (mm) Susceptible Intermediate Resistant Ciprofloxacin 5 µg ≥21 16-20 ≤15

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Setelah  dilakukan  penelitian  mengenai  hasil  uji sensitivitas  antibiotik Ciprofloxacin terhadap  bakteri E. coli pada media MHA dengan menggunakan metode disc dan  metode  sumuran  kemudian  diinkubasi  pada  suhu 37°C selama 24 jam di peroleh hasil seperti pada Tabel 2.
Tabel II . Hasil pengukuran zona hambat antibakteri terhadap bakteri E. coli No Metode Rata-rata zona hambat (mm) Standar Deviasi 1 Kontrol Negatif 0 0 2 Difusi Cakram Disc 31,39 0,799 3 Difusi Sumuran 31,71 1,001
Data  dari  tabel  2,  hasil  pengukuran  diameter  zona hambat  antibiotik Ciprofloxacin dengan  menggunakan metode  difusi  cakram disc menunjukkan  rata-rata diameter  ukuran  zona  31,39  mm,  sedangkan  dengan menggunakan  metode  sumuran  rata-rata  hasil pengukuran diameter zona hambat 31,71 mm. Standar deviasi yang didapat dari metode difusi cakram disc dan metode difusi sumuran tidak kurang dari setengah hasil rata-rata.
Gambar I .   Zona  Hambat  Antibiotik  (a)  metode difusi  sumuran  dengan  diameter  31,71 mm;  (b)  metode  difusi  cakram  disc dengan  diameter  31,39  mm;  dan  (c) control negatif
Pada penelitian ini pengujian aktivitas antibakteri dalam menghambat bakteri E. coli menggunakan metode difusi kertas cakram ( dics ) antibiotik Ciprofloxacin dan sumuran dengan  konsertrasi  antibiotik  5  µg  dimasukkan  dalam lubang  sumuran  sebanyak  40uL  dilakukan  pengulangan sebanyak  tiga  kali  (triplo)  pada  setiap  media  untuk membandingkan  kedua  metode  dengan  hasil pengukuran aktivitas antibakteri Ciprofloxacin.
Kontrol  negatif  yang  digunakan  adalah  aquades  seteril yang  dimasukkan  dalam  metode  difusi  sumuran sebanyak 40 µL sesuai dengan banyaknya antibiotik yang dimasukkan dalam metode difusi sumuran, hal ini sesuai dengan pernyataan Wahyuni, (2020) untuk pembanding pada pengujian ini digunakan aquadest sebagai kontrol negatif  karena  tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri  juga digunakan untuk melarutkan sampel uji.
Media  yang  digunakan  sebagai  tempat  pertumbuhan bakteri pada uji sensitivitas ini ialah media Brain  Heart Infusion (BHI), media Eosin Methyleme  Blue (EMB), dan Muller  Hinton  Agar (MHA).  Media-media  tersebut  juga disterilisasi  menggunakan  autoklaf  dengan  suhu  121˚C selama  15-20  menit.  Dengan  tujuan  untuk  mencegah kontaminan bakteri. Pada penelitian ini, bakteri dikultur pada media BHI yang berfungsi sebagai media penyubur kemudian bakteri diisolasi pada media EMB. Penggunaan EMB  dalam  penelitian  ini  dikarenakan  media  tersebut merupakan media selektif bagi pertumbuhaan E. coli.
Pada penelitian ini menggunakan suspensi bakteri E. coli dengan membandingkan standar McFarland 0,5%, setiap cawan berisi volume media MHA 60 ml dan diinokulasi dengan suspensi bakteri E. coli sebanyak 0,4 ml secara aseptik,  setiap  cawan  di  lakukan  3  pengulangan  yaitu, metode  difusi  cakram  disc  antibiotik Ciprofloxacin, metode  difusi  sumuran  dengan  suspensi  antibiotik Ciprofloxacin 5µg, dan kontrol negatif sebanyak 9 cawan.
Berdasarkan  tabel  2  metode  difusi  cakram  disc menunjukkan  rata-rata  diameter  zona  hambat  31,39 mm  dan  rata-rata  hasil  pengukuran  zona  hambat metode  difusi  sumuran  31,71  mm,  dari  rata-rata  hasil pengukuran tersebut metode difusi sumuran 0,32 mm lebih besar hasil pengukurannya terhadap metode difusi cakram disc , hasil tersebut menunjukkan motode difusi sumuran  lebih  besar  rata-rata  diameter  hasil pengukurannya terhadap metode difusi cakram disc . Hal ini  sejalan  dengan  penelitian  Sri et  al .  (2017)  yang menyatakan  bahwa  pengujian  aktivitas  antibakteri dengan metode sumuran dapat menghasilkan area atau zona hambat yang lebih luas.
Hasil tersebut didukung pula dengan hasil penelitian Ari et al. (2019) yang mempelajari teknik difusi sumuran dan cakram  untuk  mengevaluasi  sensitivitas  antibiotik terhadap E.  coli mendapatkan  hasil  bahwa  dengan metode sumuran diperoleh zona bening antibiotik yang lebih tinggi dibandingkan dengan metode cakram.
Pada penelitian ini peneliti membandingkan dua metode yang  berbeda  untuk  melihat  hasil  zona  hambat antibakteri  dan  dari  hasil  penelitian  didapatkan  hasil metode  sumuran  lebih  bagus  untuk  diamati.  Hal  ini sejalan  dengan  pernyataan  Saputera et  al. (2019)  uji aktivitas  menggunakan  metode  difusi  lubang  sumuran, dipilihnya  metode  ini  karena  lebih  mudah  diamati diameter  zona  beningnya,  bukan  hanya  dipermukaan tetapi dapat sampai kedalam medianya. Metode ini juga sangat cocok untuk melihat hasil daya antibakteri karena E.  coli bersifat  anaerob  yang  dapat  ditumbuh  diluar
maupun didalam media, sehingga diameter zona hambat nantinya akan jadi lebih maksimal.
Dalam  penelitian  ini,  peneliti  menggunakan  antibiotik Ciprofloxacin dengan  konsentrasi  5  µg  sesuai  dengan kadar  konsentrasi  pada  cakram disc antibiotik Ciprofloxacin . Metode difusi sumuran memiliki diameter sebesar 6 mm, karena diameter tersebut sama dengan diameter  cakram disc sehingga  peneliti  menggunakan ukuran 6 mm, dan volume antibiotik yang dimasukkan dalam  metode  difusi  sumuran  sebanyak  40  µl  diambil dari  larutan  antibiotik  dengan  konsentrasi  5  µg.  Hal tersebut  sesuai  dengan  penelitian  Saudi et.al (2018) antibiotika digunakan yaitu Ciprofloxacin konsentrasi 500 mg  sebesar  31  mm  yang  menunjukkan  bahwa  daya hambat  sangat  kuat.  Sedangkan  untuk  konsentrasi terkecil  125  mg  yang  digunakan  dalam  penelitian Ciprofloxacin memiliki  zona  hambat  sebesar  18  mm. Dengan  demikian,  dapat  disimpulkan  bahwa  zona hambat  yang  terbesar  pada  antibiotika Ciprofloxacin . Meluasnya  penggunaan  antibiotika  yang  tidak  tepat menimbulkan  resistensi  bakteri  terhadap  antibiotika. Untuk  itu,  diperlukan  penggunaan  antibiotika  secara rasional  untuk  mencegah  penyebaran  bakteri  yang resisten terhadap antibiotika.
Pada  penelitian  ini,  peneliti  mendapatkan  hasil pengukuran  rata-rata  zona  hambat  31,4  mm  untuk metode  difusi  cakram disc dan  31,7  untuk  metode sumuran, sesuai dengan interpretasi hasil, jadi hasil yang didapatkan adalah daya hambat sangat kuat ( Susceptible ).
Hal ini sejalan dengan hasil penelitian Saudi et,al (2018) didapatkan diameter zona hambatan yang berbeda dari tiap antibiotika, Ciprofloxacin berkisar antara 7-31 mm, klasifikasi respon hambatan pertumbuhan mikroba yaitu diameter  >20  mm  menunjukkan  daya  hambat  sangat kuat (bakteri sangat rentan), jika diameter zona bening sekitar  10  -  20  mm  menunjukkan  daya  hambat  kuat (bakteri  rentan),  jika  diameter  zona  bening  5–10  mm munjukkan daya hambat cukup/medium (bakteri cukup
resisten)  dan  jika  diameter  zona  bening  <  5  mm menunjukkan daya hambat kurang (bakteri resisten).
Hasil  zona  hambat  pada  waktu  inkubasi  24  jam menunjukkan  hasil  yang  sama  dengan  waktu  inkubasi setelah  48  jam,  hal  tersebut  membuktikan  bahwa kekuatan  antibakteri  hanya  dapat  membunuh  bakteri hingga  sampai  ukuran  tersebut  dan  bakteri  sudah melemah  sehingga  tidak  ada  penerunan  ukuran  zona hambat,  serta  besar  konsertrasi  antimikroba mempengaruhi  ukuran  zona  hambat  yang  di  hasilkan. Hal  ini  sejalan  dengan  pernyataan  Datta et  al. (2019) bahwa  semakin  besar  konsentrasi  antimikroba,  maka semakin  cepat  terjadi  difusi,  sehingga  daya  antibakteri akan  semakin  besar  dan  diameter  zona  hambat  yang dihasilkan semakin luas.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,  maka  dapat disimpulkan  bahwa  rata-rata  hasil  pengukuran  zona hambat metode difusi sumuran 0,32 mm lebih besar dari metode  difusi  cakram disc .  Hasil  pengukuran  zona hambat  metode  difusi  sumuran  dan  difusi  cakram disc adalah Susceptible atau efektivitas antibiotik kuat.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  kepada  Fakultas  Ilmu  Kesehatan  yang menyediakan  fasilitas  yang  dapat  digunakan  seperti laboratorium yang memadai.

## REFERENSI
Ari, K., Yuriska, S., Annisa, Y., dan Kurnia, R. 2019. Uji Teknik  Difusi  Menggunakan  Kertas  Saring Media Tampung Antibiotik dengan Escherichia coli sebagai  Bakteri  Uji.  Jurnal  Kesehatan Prima, 13(2):151-155
Febriani,  T.  A.  2013.  Uji  Sensitivitas  Antibiotika Terhadap  Bakteri  Penyebab  Diare  di Puskesmas  Mangasa  Kota  Makassar.  UIN Alaudin Makasar
Datta, F. U., Daki, A. N., Benu, I., Detha, A. I. R., Foeh, N. D., dan Ndaong, N. A. 2019 . Uji aktivitas antimikroba bakteri asam laktat cairan rumen terhadap  pertumbuhan Salmonella  enteritidis,
Bacillus cereus, Escherichia coli dan
Staphylococcus  aureus menggunakan  metode difusi sumur agar. Jurnal Kajian Veteriner , 66-
85.
Kemenkes  RI.  2022. Pencegahan  dan  Pengobatan  pada Penyakit Diare. Pada https://yankes.kemkes.go.id/view_artikel/710 /pencegahan-dan-pengobatan-pada-penyakit diare. (Diakses Pada 10 Maret 2023)
Modul  Praktikum  Bakteriologi  II  Program  Studi  D  III Analis Kesehatan Universitas Muhammdiyah Palangkaraya
Nurhayati, L. S., Yahdiyani, N., & Hidayatulloh, A. 2020. Perbandingan Pengujian Aktivitas Antibakteri Starter  Yogurt  dengan  Metode  Difusi Sumuran dan Metode Difusi Cakram. Jurnal teknologi Hasil Peternakan, 1(2):41-46.
Saputera,  M.  M.  A.,  Marpaung,  T.  W.  A.,  dan Ayuchecaria,  N.  2019.  Konsentrasi  hambat minimum (KHM) kadar ekstrak etanol batang bajakah tampala ( Spatholobus Littoralis Hassk ) terhadap  bakteri Escherichia  coli melalui metode  sumuran. Jurnal  Ilmiah  Manuntung ,
5 (2), 167-173.
Sri, D. H., Sri, D., dan Wildiani, W. 2017. Perbandingan Efek Ekstrak Buah Alpukat (Persea americana mill)  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Pseudomonas aeruginosa dengan Metode Disk dan  Sumuran.  Seminar  Nasional  Publikasi Hasil-Hasil  Penelitian  dan  Pengabdian Masyarakat 2017. Universitas Muhammadiyah Semarang. 348. Utami,  V.  N.  P.  2019.  Hubungan  Riwayat  Inisiasi Menyusui Dini Dengan Kejadian Diare Pada Bayi  Usia  0-12  Bulan  di  RSUD  Wangaya Tahun 2019. Politeknik Kesehatan Kemenkes Denpasar Jurusan Keperawatan.
Wahyuni & Karim S. F. 2020. Uji Aktivitas Antibakteri
Ekstrak  Etanol  Daun  Kacapiring  ( Gardenia jasminoides Ellis) terhadap Bakteri Streptococcus  mutans .  Jurnal  Sains  dan Kesehatan, 2(4): 399-404.