## Amplifikasi Enhancer Gen Renin C-5312T pada Pasien Hipertensi di Rumah Sakit Dr. Saiful Anwar Malang
Aditya Kurniawan 1)* , Widodo 2)
1) Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya
Aditya Kurniawan: ditya.mail@gmail.com

## ABSTRAK
Hipertensi,  keadaan tekanan darah sistole lebih dari 140  mmHg dan tekanan diastole lebih dari 90 mmHg,  merupakan  salah  satu  masalah  kesehatan  utama  yang  terjadi  di  Indonesia.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengamplifikasi enhancer gen renin pasien hipertensi di Rumah Sakit Dr. Saiful Anwar Malang  yang  di  dalamnya  terdapat  SNP  C-5312T.  Pengambilan  DNA  dari  sel  darah  putih  pasien hipertensi  menggunakan  kit  Purelink ® Genomic  DNA  Kits  –  Invitrogen.  Selanjutnya  DNA  yang  sudah diekstraksi  dilakukan  PCR  (Polymerase  Chain  Reaction).  Selanjutnya  dilakukan  PCR  dengan  primer yang  digunakan  adalah  primer  forward  5’-GTAGTGCCATTTTTAGGAAC-3’  dan  primer  reverse  yaitu 5’-AACACCAAAGCAGGCTTAA-3’.  Produk  PCR  diuji  secara  kualitatif  pada  gel  agarosa  1,5%.  Hasil PCR  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  amplifikasi  enhancer  gen  renin  memiliki  panjang  pasangan basa sebesar 254 bp.

## Kata Kunci: Hipertensi, PCR, Renin

## ABSTRACT
Hypertension, systolic blood pressure of circumstances more than 140 mmHg and diastolic pressure over 90  mmHg, is a major health problem in Indonesia. The objectives of this research is to amplify the renin gene enhancer in hypertensive patients at Dr. Saiful Anwar hospital which. DNA taken from white blood  cells  of  patients  with  hypertension  using  a  kit  Purelink®  Genomic  DNA  Kits  -  Invitrogen. Furthermore, DNA has been extracted conducted PCR (Polymerase Chain Reaction). The PCR forward primer  5'-GTAGTGCCATTTTTAGGAAC-3'  and  reverse  primer  5'-AACACCAAAGCAGGCTTAA-3'. PCR products were qualitatively tested on a 1.5% agarose gel. The results obtained showed that the PCR amplification of the renin gene enhancer has a length of 254 bp.

## Keywords : Hypertension, PCR, Renin

## PENDAHULUAN
Tekanan  darah  dipengaruhi  oleh  beberapa sistem,  salah  satunya  Renin  Angiotensin  System (RAS). Ketidakseimbangan RAS dapat menyebabkan  vasokonstriksi  pembuluh  darah yang  berakibat  pada  terjadinya  hipertensi  [1]. Peningkatan  enzim  renin  yang  mengubah angiotensinogen menjadi angiotensin I berhubungan  dengan  terjadi  hipertensi  [2]. Angiotensin I akan berubah menjadi angiotensin II dengan bantuan ACE (Angiotensin Converting Enzyme).  Angiotensin  II  akan  diterima  oleh Angiotensin  2  Reseptor  1  (AT 1 ),  reseptor  inilah yang  berfungsi  dalam  vasokonstriksi  pembuluh darah [3].
Penyebab peningkatan enzim renin dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  salah  satunya peningkatan  ekspresi  gen  renin  karena  adanya polimorfisme  pada  titik  C-5312T  [4].  Single
Nucleotide  Polymorphism  (SNP)  pada  enhancer C-5312T  dapat  meningkatkan  ekspresi  enzim renin.  Pada  individu  yang  memiliki  alel  T memiliki  kadar  plasma  renin  yang  lebih  tinggi dibandingkan individu yang tidak memiliki alelle T  [5].  Selain  itu  terdapat  variasi  respon  obat hipertensi Angiotensin I Reseptor Blocker (ARB) pada  beberapa  pasien.  Seseorang  dengan  varian T pada titik SNP C-5312T memiliki respon yang buruk  pada  obat  ini  [6],  sedangkan  pada seseorang dengan varian C memiliki respon yang baik. Sehingga pasien hipertensi dengan varian C pada  SNP  C-5312  lebih  mudah  disembuhkan menggunakan obat jenis ARB [7].
Hingga  saat  ini,  masih  belum  ada  data  di Indonesia  mengenai  amplifikasi  gen  enhancer gen renin ini.

## METODE PENELITIAN
Populasi Penelitian. Penelitian ini dilaksanakan  pada  bulan  April  2013  –  April 2014.  Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium Biologi  Molekuler,  Jurusan  Biologi,  Universitas Brawijaya, Malang.
Seluruh prosedur pengambilan darah dan pengujian yang dilakukan pada penelitian ini sudah disetujui oleh Komisi  Etik  dari  RSSA.  Populasi  dalam penelitian  ini  adalah  pasien  hipertensi  primer dengan  terapi  ARB  yang  datang  ke  Poliklinik Jantung  RSSA.  Tekanan  darah  sistole  pada pasien  hipertensi  harus  di  atas  140  mmHg  dan tekanan  darah  diastole  harus  di  atas  90  mmHg. Pasien  hipertensi  juga  tidak  memiliki  penyakit yang  lain  seperti  stroke  dan  diabetes  melitus. Teknik sampling yang digunakan adalah random sampling.  Jumlah  subyek  hipertensi  pada penelitian ini adalah 21 subyek.
Amplifikasi Daerah Promotor gen BK2R. DNA  didapatkan  melalui  proses  ekstraksi menggunakan  Purelink ® Genomic  DNA  Kits  - Invitrogen. Primer untuk amplifikasi polymerase chain  reaction  (PCR)  adalah  sebagai  berikut Forward  5’-CGTAGTGCCATTTTTAGGAAC- 3’ dan primer reverse yaitu 5’- AACACCAAAGCAGGCTTAA-3’  [8].  Total volume  reaksi  adalah  20  µL  terdiri  atas  7  µL ddH 2 O,  10  µL  PCR  mix  (Kapa2G  Robust HotStart ReadyMix), primer forward sebanyak 1 µl  dan  primer  reverse  sebanyak  1  µl,  masing  – masing konsentrasinya adalah 20 pmol, dan 1 µL DNA murni. Kondisi siklus PCR sebagai berikut pre  denaturasi  95 0 C  selama  3  menit,  denaturasi 95 0 C selama 15 detik, annealing 64 0 C selama 20 detik,  extension  72 0 C  selama  1  menit,  dan  post extension 72 0 C selama 10 menit, untuk 35 siklus [9].

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi  DNA.  Penelitian  ini  menggunakan 21  subjek  penelitian  pasien  hipertensi.  Hasil isolasi  DNA  dari  darah  kemudian  dilakukan elektroforesis  menggunakan  agarosa  1%.  DNA ke-21 pasien telah terisolasi dengan ditunjukkannya  pita  pada  agarose.  Hasil  isolasi DNA  berada  pada  bagian  atas  marker,  karena memiliki  jumlah  50.000.000  hingga  hingga 300.000.000 pasangan basa [10].
Amplifikasi  Enhancer  Gen  Renin  C- 5312T.  Primer  enhancer  gen  renin  telah mengamplifikasi  dengan  tepat  enhancer  gen Renin  C-5312T.  Hasil  yang  didapatkan  dari  uji kualitatif  menggunakan  agarose  1,5%  band memiliki  panjang  basa  antara  200  bp  hingga 300bp.Hasil  ini  juga  sesuai  dengan  BLAST, primer ini mengamplifikasi 254 bp.
Gambar 1. Hasil isolasi DNA dengan total 21 subjek penelitian
300 bp 200 bp

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dari  21 subyek  penelitian,  didapatkan  bahwa  gen enhancer  C-5312T  telah  teramplifikasi  dengan baik.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini didukung oleh Tim Kardiovaskular dan Hipertensi Universitas Brawijaya dan didanai oleh Bantuan Operasional Perguruan Tinggi Negeri, Universitas Brawijaya, Malang.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Brewster,  U.C  &  Mark  A  Perazella.  2004.
Cardiorenal Effects of the Renin- Angiotensin-Aldosterone  System.  Turner White Communications. Vol 40:11-20.
[2]  Mifetika,  L  ,  Jayarani  F.P,  Muladefi  C, Mohammad S.R, & Nashi W. 2013. Genetic Variant  of  C-5312T  Can  Change  Binding Pattern  of  Sp1  to  Renin  Enhancer  that  are Very  Likely  to  Affect  Renin  Gene
Expression.  Bioinformation.  9(20):  1010-
1012
[3]  Baradero,  M  ,  Mary  W.D  &  Yakobus  S. 2008.  Klien  Gangguan  Kardiovaskular  seri asuhan keperawatan. EGC. Jakarta
[4]  Moore,  N,  Patrick  D,  John  K,  Milos  S, Ronan  M,  Conroy  A.T,  Eoin  O,  Alice  V.S. 2007.  Renin  Gene  Polymorphisms  and Haplotypes,  Blood  Pressure  and  Responses to  Renin-Angiotensin  System  Inhibition.
Hypertension. 2007;50:340-347
[5]  Fuchs, S , Josette P, Stephane G, Flavie M, Xavier  J,  Pierre  C  &  Florence  P.  2002. Functionalitiy  of  Two  New  Polymorphisms in the Human Renin Gene Enhancer Region. Journal of Hipertension. 20:2391-2398
[6]  Vangjeli, C, Niamh C, Ursula Q, Patrick D, Orna  T,  Clara  H,  Eoin  O,  Alice  V.S.  2010. Confirmation  That  the  Renin  Gene  Distal Enhancer  Polymorphism  REN-5312C/T  Is Associated  With  Increased  Blood  Pressure.
Circ Cardiovasc Genetics. 3:53-59. [7]  Santos,  P.C.J.L,  Jose  E.K,  Alexandre  C.P. 2012. Renin–Angiotensin System, Hypertension, and Chronic Kidney Disease: Pharmacogenetic Implications. J Pharmacol Sci. 120, 77 – 88.
[8]  Konoshita, T , Norihiro K, Sebastien F dkk. 2009.  Genetic  Variant  of  the  Renin- Angiotensin System and Diabetes Influences  Blood  pressure  response  to angiotensin  receptor  blockers.  Diabetes care. 32:8.
[9]  Kapabiosystems.  2014.  Kapa  2G  Robust
HotStart ReadyMix PCR Kit. www.kapabiosystems.com.  Diakses  tanggal 22 Juni 2014 [10] National Human Genome Research Institute. 2010. The Human Genome Project Completion. http://www.genome.gov/11006943  Diakses 20 Juni 2014
Gambar 2. Hasil PCR dengan total 21 subjek penelitian 300 bp 200 bp
254 bp