## PERBANDINGAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL
DAUN SIRSAK ( Annona muricata L. ) BERDASARKAN TEMPAT

## TUMBUH DENGAN METODE PEREDAMAN DPPH
Aminah 1) , St. Maryam, Muzakkir Baits, Ummi Kalsum
1) Aminah.aminah@umi.ac.id
Antioxidant  activity  assay  has  been  conducted  in  order  to  determine  the  comparison  of  the  antioxidant activity contained in the ethanol extract of the soursop leaves (Annona muricata L.) from Makassar, north Mamuju and Jeneponto. The amount of antioxidant activity obtained by testing against free radical DPPH (1,1-Diphenyl-2- picryl  Hydrazyl)  at  concentrations  of  10,  20,  30,  40  dan  50  ppm  with  96%  ethanol.  The  testing  was  done  with  the addition of 1 mL of the test solution with 4 mL DPPH 35 ppm. The absorbance of free radical activity was measured by UV-Vis spectrophotometer at the wavelength 515 nm and the IC50 value was calculated based on the absorbance data. The calculations showed that the soursop leaves from Makassar, North Mamuju, and Jeneponto had the  IC50 value of 1.380 µg/mL, 1.512, and 1.420 respectively. The results showed that the samples came from Makassar had a higher antioxidant activity.
Keyword : Antioxidant, ethanol extract of soursop leaves ( Annona muricata L . ), DPPH, UV-Vis spectrophotometry.

## I. PENDAHULUAN
Penyakit  merupakan  suatu  kondisi  dimana terdapat  keadaan  tubuh  yang  abnormal.  Akhir-akhir ini masyarakat banyak melirik pengobatan tradisional dengan  menggunakan  bahan  baku  tanaman  herbal sebagai alternatif untuk mencegah maupun menanggulangi  berbagai  keluhan  penyakit  yang terjadi.  Salah  satu  contoh  tanaman  trandisional  yang digunakan  untuk  mengobati  penyakit  adalah  daun sirsak ( Annona muricata L.) (Haryati, 2005). Daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  berasal dari  Amerika  tengah  dan  daerah  Karibia.  Sirsak memerlukan  suhu  tropis  yang  hangat  dan  lembab untuk  dapat  tumbuh  dengan  baik.  Sirsak  juga  dapat tumbuh  didataran  rendah  tropis  hingga  ketinggian 1000 m, kandungan fitiokimia dalam sirsak diketahui memiliki  sifat  antikanker  yang  selektif.  Senyawa acetogenin  dilaporkan  dapat  membunuh  sel  kanker dengan  cara  menghambat  produksi  ATP  sel  kanker tersebut  (Zuhud  evrizal,  2011).  Selain  kandungan acetogenin  yang  bersifat  antikanker,  juga  terdapat kandungan  senyawa  fenolik  alam  yang  potensial sebagai  antioksidan  dan  mempunyai  bioaktivitas sebagai obat (Suharyadi, 2014).
Antioksidan  adalah  senyawa  yang  bertugas untuk  menetralisir  peningkatan  radikal  bebas, melindungi sel dari efek toksik  yang dihasilkan serta berkontribusi  dalam  pencegahan  penyakit-penyakit. Selama  ini  antioksidan  sintetik  sering  digunakan karena dapat  menetralkan radikal bebas namun dapat menimbulkan efek toksik. Hal tersebut membuat para peneliti  semakin  berminat  meneliti  antioksidan  alami terutama  yang  berasal  dari  tanaman  karena  lebih aman  daripada  antioksidan  sintetik  dan  mempunyai manfaat luas dibidang pengawetan pangan, kesehatan,
kosmetik  dan  pencegahan  penyakit  yang  disebabkan oleh radikal bebas (Sidik, 1997).
Jenis  tanaman  sirsak  mudah  dibudidayakan pada semua jenis lahan, baik itu dilahan perkebunan, daerah  tanggul  dipinggiran  bantaran  sungai,  daerah pematang sawah, daerah hutan-hutan ringan, maupun dibudidayakan  dihalaman  rumah.  Jenis  tanah  yang cocok bagi pertumbuhan dan perkembangan tanaman sirsak  adalah  jenis  tanah  merah,  lempung  berpasir, dan  tanah  liat  cokelat  dengan  kandungan  humus  dan berstektur tanah gembur. Kecukupan air dibawah akar tanaman  ini  penting  diperhatikan,  meskipun  tanaman ini  tidak  begitu  sulit  memperoleh  air  yang  sudah dicadangkan dalam tumbuhan ini sendiri. Pada musim kering  atau  kemarau,  tanaman  ini  praktis  mampu bertahan hidup (Radi, 2002).
Daerah  Mamuju  Utara  merupakan  daerah hutan-hutan  ringan  Berdasarkan  data  geologi  di daerah  ini  dapat  digolongkan  beberapa  jenis  tanah salah  satunya  adalah  tanah  alluvial  atau  tanah endapan merupakan tanah yang terbentuk dari lumpur dan  pasir  halus  biasanya  terjadi  pada  daerah-daerah dataran  rendah,  tanah  ini  dapat  digunakan  sebagai lahan  pertanian  dan  sawah.  Keadaan  iklim  di kabupaten  Mamuju  Utara  tidak  memiliki  perbedaan dengan  daerah  lain  di  Indonesia  yang  hanya  dikenal memiliki  dua  musim  yaitu  musim  kemarau  dan penghujanan.  Daerah  Makassar  memiliki  jenis  tanah batuan  sehingga  perkembangan  ditentukan  oleh tingkat  pelapukan  batuan  pada  kawasan  tersebut. Kualitas  tanah  mempunyai  pengaruh  besar  terhadap intensitas  penggunaan  lahannya,  kawasan-kawasan yang  mempunyai  perkembangan  lapisan  tanah  yang masih  tipis biasa digunakan  untuk  kegiatan budidaya tanaman.  Wilayah  Makassar  terdiri  dari  laut,  dataran
rendah dan tinggi sehingga perlu dibuatkan perioritas penggunaan  lahan  yang  sesuai  dengan  tingkat perkembangan  pemanfaatannya.  Daerah  ini  termasuk daerah  yang  beriklim  sedang/tropis.  Sedangkan Daerah  Jeneponto  merupakan  daerah  pesisir  pantai, tingkat  kelerengan  datar  sampai  curam.  Tanah didaerah ini dibedakan atas dua yaitu tanah erosi dan tidak  erosi,  keadaan  iklim  yaitu  identik  dengan keadaan  iklim  wilayah  lain  yang  ada  di  pulau Sulawesi secara keseluruhan, (Pokja AMPK, 2011)

## II. METODE PENELITIAN

## A. Alat dan bahan
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  batang pengaduk,  cawan  porselin,  gelas  kimia  ( Pyrex ),  labu tentukur,  mikropipet  ( Memmert ),  pipet  volume,  pipet tetes,  rak  tabung,  sendok  tanduk,  spektrofotometer UV-Vis  ( Apel ® PD  302UV ),  rotavapor  ( Ika ® RV  10 basic ), tabung reaksi, timbangan analitik ( Caratseries ), dan vortex.
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  antara  lain,  Ekstrak  daun  sairsak ( Annona  muricata L.),  etanol  96%,  DPPH  ( 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl ),  kertas  saring,  kuersetin, aluminium foil, tissue dan aquades.

## B. Prosedur penelitian
1. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Pengambilan  sampel  daun  sirsak  ( Annona muricata L . )  dilakukan  pada  pagi  hari  di  Mamuju Utara  kota  Pasangkayu,  Makassar  dan  Jeneponto dengan cara mengambil daun yang masih segar secara manual,  kemudian  dibersihkan  dari  kotoran-kotoran yang  menempel  dengan  menggunakan  air  yang mengalir  dan  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan tanpa sinar matahari kurang lebih 1 minggu. Sampel  yang  telah  dikeringkan  dipotong  kecil-kecil dan diserbukkan dengan cara diblender.

## 2. Proses Ekstraksi Sampel.
Simplisia  daun  sirsak  ( Annona  muricata L.) yang telah diserbukkan ditimbang sebanyak 50 gram, kemudian  dimaserasi  menggunakan  pelarut  etanol 96% pada suhu ruang selama 3 x 24 jam. Setelah itu, dimasukkan  kedalam  wadah  yang  tertutup  rapat  dan terlindung  dari  sinar  matahari  sambil  di  aduk.  Hasil maserasi disaring, kemudian remaserasi hingga cairan berwarna  bening  kehijauan,  lalu  di  rotavapor.  Hasil ekstrak  encer  diuapkan  hingga  menjadi  ekstrak kental.

## 3. Pembuatan larutan dan pengukuran
Pengujian  antiradikal  bebas  pada  ekstrak daun sirsak ( Annona muricata L.) ekstrak etanol 96% merujuk pada prosedur Raden Nabillah (2012).

## a. Pembuatan Larutan DPPH
Larutan  DPPH  100  ppm  dibuat  dengan  cara ditimbang  sebanyak  10  mg  serbuk  DPPH  kemudian dilarutkan  dengan  100  mL  etanol  96%  dalam  labu tentukur.  Konsentrasi  35  ppm  dibuat  dengan  cara memipet  87,5  mL  DPPH  100  ppm,  kemudian dicukupkan volumenya hingga 250 mL.
Pengukuran  panjang  gelombang  maksium d ilakukan  dengan  mengukur  larutan  DPPH  yang telah diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37 o C dan diukur pada panjang gelombang 450-650 nm.
b. Pembuatan  larutan  dan  Pengukuran  daya antioksidan sampel pembanding kuarsetin
Larutan  stok  10  ppm  dibuat  dengan  cara ditimbang  1  mg  kuersetin  kemudian  di  larutkan dengan  etanol  96%  dalam  labu  tentukur  100  ml, setelah itu dibuat beberapa variasi konsentrasi.
Konsentrasi  1,  3,  4,  5,  dan  6  ppm,  dibuat dengan cara masing-masing larutan stok dipipet 1, 3, 4,  5,  dan  6  mL,  lalu  dicukupkan  dengan  etanol  96% sampai volume akhir 10 mL.
Pengujian  dilakukan  dengan  memipet  1  mL larutan  sampel  dari  berbagai  konsentrasi,  kemudian masing-masing  ditambahkan  4  mL  DPPH  35  ppm. Campuran  kemudian  dihomogenkan  dengan  cara divortex  dan  diinkubasi  pada  suhu  37 o C    selama  30 menit lalu serapannya diukur pada panjang gelombang 515 nm.
c. Pembuatan  larutan  dan  Pengukuran  daya antioksidan ekstrak etanol daun sirsak ( Annona muricata L. ) dari tiga Daerah
Larutan  stok  100  ppm  dibuat  dengan  cara menimbang  ekstrak  etanol  daun  sirsak  ( Annona muricata L.)  sebanyak  10  mg  dan  dilarutkan  dengan etanol  96%,  larutan  dihomogenkan  dan  dicukupkan volumenya hingga 100 mL. Selanjutnya, pengenceran dilakukan untuk membuat beberapa variasi konsentrasi.
Ada  lima  variasi  konsentrasi  yaitu  10,  20, 30,  40  dan  50  ppm,  masing-masing  larutan  stok dipipet  1,  2,  3,  4  dan  5  mL  lalu  dicukupkan  dengan etanol 96% sampai volume akhir 10 mL.
Pengujian  dilakukan  dengan  memipet  1  mL larutan  sampel  dari  berbagai  konsentrasi,  kemudian masing-masing    ditambahkan  4  mL  DPPH  35  ppm. Campuran  kemudian  dihomogenkan  dengan  cara divortex  dan  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  30 menit lalu serapannya diukur menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang 515 nm.
d. Analisis Data
Besarnya  presentase  pengikat  radikal  bebas dihitung dengan rumus :
% Pengikatan radikal bebas =
(Abs standar-Abs sampel ) Abs standar ×100 %
Nilai  IC 50 dihitung  dengan  menggunakan persamaan  regresi  linear,  konsentrasi  sampel  sebagai sumbu x dan % inhibisi sebagai sumbu y.
Dari  persamaan  :  y  =  a  +  bx  dapat  dihitung nilai IC 50 dengan menggunakan rumus : IC 50 = (50−b) a Keterangan : y = 50 (Penghambat 50% oksidasi)
x  =  IC 50 (bilangan  yang  menunjukkan konsentrasi  ekstrak  yang  mampu menghambat proses oksidasi  sebesar 50%)
a = slope b = intercept

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
Tabel  1 .  Persen  (%)  rendamen  ekstrak  etanol  daun sirsak ( Annona muricata L.) dari tiga daerah.
Tabel 2. Hasil running panjang gelombang maksimum DPPH 35 ppm
Tabel 3 . Perhitungan % inhibisi kuersetin (Pembanding) Konsentrasi (ppm) Absorbansi (515) % Inhibisi IC 50 (µg/mL) 1 3 4 5 6 0,549 0,440 0,377 0,338 0,285 36,823 49,367 56,616 61,104 67,203 1,414
Tabel 4 . Perhitungan % inhibisi radikal bebas ekstrak etanol daun sirsak ( Annona muricata L . ) yang berasal dari Mamuju Utara Konsentrasi (ppm) Absorbansi (515) % Inhibisi IC 50 (µg/mL) 10 20 30 40 50 0,568 0,528 0,519 0,495 0,475 34,637 39,240 40,276 43,037 45,339 1,512
Tabel 5 . Perhitungan % inhibisi radikal bebas ekstrak etanol daun sirsak ( Annona muricata L.) yang berasal dari Makassar
Konsentrasi (ppm) Absorbansi (515) % Inhibisi IC 50 (µg/mL) 10 20 30 40 50 0,518 0,486 0,460 0,411 0,381 40,391 44,073 47,065 52,704 56,156 1,380
Tabel 6 . Perhitungan % inhibisi radikal bebas ekstrak etanol daun sirsak ( Annona muricata L.) yang berasal dari Jeneponto

## B. Pembahasan
Antioksidan  merupakan  komponen  penting yang terkandung dalam tumbuhan. Antioksidan dapat meredam  dan  merangkal  radikal  bebas  dengan mendonorkan elektronnya dan dapat mencegah reaksi berantai yang ditimbulkan radikal bebas.
Secara biologi pengertian antioksidan adalah senyawa  yang  mampu  menangkal  atau  meredam dampak  negatif  oksidan  dalam  tubuh.  Penelitian  ini menggunakan daun sirsak ( Annona muricata L.) yang diambil  dari  tiga  daerah  yaitu  daerah  Mamuju  Utara, Makassar, dan Jeneponto.
Pengambilan  sampel  daun  sirsak  ( Annona muricata L.)  dilakukan  pada  pagi  hari  di  daerah Mamuju Utara, Makassar, dan Jeneponto dengan cara mengambil  daun  yang  masih  segar  secara  manual, kemudian  dibersihkan  dari  kotoran-kotoran  yang
Sampel Berat Awal (g) Hasil Ekstrak (g) JumLah pelarut etanol (L) Rendamen ekstrak (%) Daun sirsak Mamuju 50 5,364 10 10,728 Daun sirsak Makassar 50 6,115 12 12,23 Daun sirsak Jeneponto 50 5,864 11 11,728 Sampel Panjang gelombang maksimum Absorban DPPH 35 ppm 515 nm 0.869 Konsentrasi (ppm) Absorbansi (515) % Inhibisi IC 50 (µg/mL) 10 20 30 40 50 0,543 0,531 0,510 0,489 0,472 37,514 38,895 41,311 43,728 45,684 1,420
menempel  dengan  menggunakan  air  yang  mengalir dan  dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan  tanpa sinar matahari kurang lebih 1 minggu.
Daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  dari  tiga daerah  tersebut  diekstraksi  menggunakan  metode maserasi.  Metode  ini  dipilih  karena  merupakan metode ekstraksi yang sederhana serta dapat menarik komponen  kimia  yang  terdapat  pada  sampel  tanpa merusak senyawanya. Adapun pelarut yang digunakan  pada  proses  maserasi  yaitu  etanol  96%, digunakan pelarut etanol karena sifatnya yang mampu melarutkan  hampir  semua  zat-zat  baik  yang  bersifat polar,  semipolar  dan  nonpolar  serta  kemampuannya untuk  mengendapkan  protein  dan  menghambat  kerja enzim  sehingga  dapat  terhindar  proses  hidrolisis  dan oksidasi (Rizka Aulia rahma, 2012).
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan metode  DPPH  dipilih  karena  metode  ini  sederhana, mudah,  cepat  dan  peka  serta  sampel  yang  digunakan hanya sedikit. Pengerjaan penelitian ini merujuk pada prosedur (Raden nabilah, 2012). Dimana pengukuran absorbansi  sampel  pada  spektrofotometri  UV-Vis dengan  panjang  gelombang  515  nm  dengan  volume sampel  yang digunakan 1  mL dan DPPH sebanyak 4 mL.  Adapun  konsetrasi  sampel  yang  digunakan adalah  10,  20,  30,  40,  dan  50  ppm  untuk  semua variasi  sampel,  sedangkan  konsentrasi  pembanding adalah,  1,  3,  4,  5  dan  6  ppm.  Dimana  pembanding yang  digunakan  sebagai  kontrol  positif  adalah kuersetin.
Setelah dilakukan pengerjaan dan pengukuran,  dilakukan  perhitungan  persen  (%) inhibisi dan IC 50 antiradikal bebas dari ekstrak etanol daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  persen  inhibisi adalah  kemampuan  suatu  bahan  untuk  menghambat aktivitas  radikal  bebas  yang  berhubungan  dengan konsentarasi suatu sampel, sedangkan IC 50 merupakan  salah  satu  parameter  yang  digunakan untuk  menginterprestasikan  hasil  dari  pengujian DPPH,  semakin  rendah  nilai  IC 50 dari  suatu  sampel maka kemampuan sebagai antioksidan semakin besar.
Suatu senyawa dinyatakan sebagai antiradikal  bebas  sangat  kuat  apabila  nilai  IC 50 <  10 µg/mL,  kuat  apabila  nilai  IC 50 antara  10-50  µg/mL, sedang  apabila  nilai  IC 50 berkisar  antara  50-100 µg/mL,  lemah  apabila  nilai  IC 50 berkisar  antar  100- 250  µg/mL  dan  dinyatakan  tidak  aktif  apabilla  nilai IC 50 250  µg/mL.  ekstrak  etanol  daun  sirsak  ( Annona muricata L.) memiliki aktivitas antioksidan.
Hasil  yang  diperoleh  pada  pengujian aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun  sirsak ( Annona  muricata L.)  adalah  sampel  yang  berasal dari  Mamuju  Utara  memiliki  nilai  IC 50 1,512  µg/mL merupakan  antioksidan  yang  sangat  kuat,  sampel yang berasal dari Makassar memiliki nilai IC 50 1,380 µg/mL  merupakan  antioksidan  yang  sangat  kuat  dan
sampel  yang  berasal  dari  Jeneponto  memiliki  nilai IC 50 1,420  µg/mL  juga  merupakan  antioksidan  yang sangat  kuat.  Sedangkan  pada  pengukuran  larutan standar  kuersetin  (pembanding)  memiliki  nilai  IC 50 1,414 µg/mL dan merupakan antioksidan yang sangat kuat. Dari hasil pengujian yang telah dilakukan, dapat diketahui  bahwa  aktivitas  antioksidan  pada  sampel daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  yang  berasal  dari daerah  Makassar  memiliki  tingkat  dan  potensi aktivitas  antioksidan  yang  lebih  kuat  dibandingkan dengan kuersetin (pembanding) karena nilai IC 50 yang didapatkan lebih rendah.
Dari  ketiga  daerah,  masing-masing  sampel yang digunakan memiliki tingkat aktivitas antioksidan  yang  berbeda-beda.  Hal  yang  dapat mempengaruhi  kadar  suatu  senyawa  dalam  tanaman diantaranya  adalah  letak  geografis  tanaman,  faktor iklim  yang  meliputi  suhu,  udara  dan  kelembaban, faktor  esensial  seperti  cahaya,  air,  dan  unsur  hara tanah. Serta faktor gangguan hama atau penyakit dan gulma.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan dapat disimpulakan bahwa:
1. Perbandingan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  yang  berasal dari  tiga  daerah  yaitu  daerah  Mamuju  Utara, Makassar dan Jeneponto masing-masing memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
2. Ekstrak  etanol  daun  sirsak  ( Annona  muricata L.) yang  berasal  dari  tiga  daerah  memiliki  potensi aktivitas  antioksidan  yang  berbeda-beda,  sampel yang  berasal  dari  daerah  Mamuju  Utara  memiliki nilai  IC 50 1,512  µg/mL,  Makassar  memiliki  nilai IC 50 1,380  µg/mL  dan  Jeneponto  memiliki  nilai IC 50 1,420 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Haryati,  S.,  2005, Standarisasi  Ekstrak  Tumbuhan Obat Indonesia salah satu Tahapan Penting dalam  Pengembangan  Obat  Asli  Indonesia, info POM.
Pokja  AMPL.,  2011, Buku  Putih  Sanitasi  Daerah . ,
diakses pada 11 Februari 2016, <www://ampl.or.id/50114/overview>.
Putri, N. R. A., 2012, ‘Uji aktivitas antioksidan ektrak etanol  daun  sirsak (Annona  muricata  L.) dengan metode DPPH (1,1-Diphenyl- 2picrylhydrazil)’, Skripsi, S.ked,  Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Islam Negeri, Jakarta
Radi,  J.,  2002, Sirsak  Budaya  dan  Pemanfaatannya, Kunisius, Jakarta, Indonesia.
Rahma,  A.,  2012, Etanol .,  diakses  pada  19 Oktober2015, <http://www.rizkaauliarahma.wordpress.co m>.
Sidik,  1997, Antioksidan  Alami  Asal  Tumbuhan , Seminar  nasional  tumbuhan  obat  Indonesia XII  26-27  juni  1997.,  diakses  pada  19
Oktober 2015, <www.repository.maranatha.edu/2013>.
Suharyadi,  A.,  2014, Pengaruh  Pemberian  Ekstrak Etanol  Daun  Sirsak  Terhadap  Gambaran Histopatologi  Ginjal  Tikus  yang  Diinduksi DMBA , Universitas Lampung, Indonesia.
Zuhud, E., 2011, Bukti Kedahsyatan Sirsak Menupas Kanker, Agromedia, Jakarta Selatan, Indonesia.