PENGEMBANGAN METODE PENENTUAN KANDUNGAN RHODAMINE B DALAM KERUPUK BERWARNA MERAH MENGGUNAKAN REAGEN Zn(CNS) 2

## DAN PENCITRAAN DIGITAL
Izzah Riastiti Chairunnisaa 1 , I Komang Suwita 1 , Sandry Kesuma 1
1 Politeknik Kesehatan Kemenkes Malang, Jl. Besar Ijen No.77C, Oro-oro Dowo, Kec. Klojen, Kota Malang, Jawa Timur 65119 e-mail: sandrykesuma1207@gmail.com

## ABSTRAK
Sudah  35  tahun  pelarangan  penggunaan  pewarna  tekstil  rodhamine  B  sebagai  pewarna makanan,  namun  hingga  saat  ini  masih  ditemukan  penyalahgunaannya.  Penentuan kandungan rhodamine B dalam kerupuk berwarna merah secara kolorimetri menggunakan reagen  Zn(CNS) 2 dan  aplikasi  imageJ  telah  dilakukan  dalam  penelitian  ini.  Metode  ini menunjukkan bahwa analisis rhodamine B dapat dilakukan dengan menggunakan peralatan sederhana. Kurva standar yang  dibuat dengan  konsentrasi 1 sampai 14 ppm  menunjukkan adanya  hubungan  yang  baik  antara  konsentrasi  dan  absorbansi  dengan nilai  R 2 =  0,9985. Sampel  kerupuk  A,  B  dan  C  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  diperoleh  dari Pasar Ranggeh  Gondangwetan  Kabupaten  Pasuruan.  Sampel  A  dan  C  positif  mengandung rhodamin  B  dengan  kadar 0,8296  ppm  dan  sampel  C  adalah  0,8203  ppm,  sedangkan sampel  C  negatif.  Penentuan  nilai  akurasi  dan  presisi  dilakukan  dengan  metode  adisi standar  pada  sampel  A  dan  C.  Akurasi  yang  dinyatakan  dalam  %recovery  menunjukkan hasil  yang  baik  dengan  nilai  rata-rata 98,98%  dan  95,74%.  Presisi  dalam  kategori keterulangan juga menunjukkan hasil yang baik dengan nilai RSD sampel A dan C adalah sebesar 0,7884% dan 0,7066%.
Kata kunci: Rhodamine B, Zn(CNS) 2 , ImageJ, Kerupuk

## ABSTRACT
It has been 35 years since the prohibition of rodhamine B textile dyes to be used as a food coloring agent, but its abuse is still being found. Colorimetric determination of rhodamine B content in red crackers using Zn(CNS) 2 reagent  and imageJ application was carried out in  this  study.  This  method  shows  that  rhodamine  B  analysis  can  be  done  using  simple equipment.  Standard  curves  made  with  concentrations  of  1  to14  ppm  showed  a  good relationship  between  concentration  and  absorbance  with  a  value  of  R 2 =  0.9985.  The cracker  samples  A,  B  and  C  used  in  this  study  were  obtained  from  Pasar  Ranggeh Gondangwetan, Pasuruan. Samples A and C were positive for rhodamine B with a level of 0.8296  ppm  and  sample  C  was  0.8203  ppm,  while  sample  C  was  negative.  The  accuracy expressed in% recovery shows good results with an average value of 98.98% and 95.74%. The precision in the repeatability category also shows good results with the RSD values of samples A and C of 0.7884% and 0.7066%.
Keywords: Rhodamine B, Zn(CNS) 2 , ImageJ, Kerupuk

## PENDAHULUAN
Bahan  Tambahan  Pangan  (BTP)  adalah  bahan  yang  ditambahkan  ke  dalam pangan  untuk  mempengaruhi  sifat  atau  bentuk  pangan.  Menurut  Peraturan  Menteri Kesehatan  Republik  Indonesia  No.033/MenKes/2012,  BTP  yang  digunakan  dalam
pangan  harus  memenuhi  beberapa  persyaratan  antara  lain  :  tidak  dimaksudkan  untuk dikonsumsi  secara  langsung,  tidak  mempunyai  nilai  gizi,  dan  tidak  termasuk  dalam kategori  cemaran.  Berdasarkan  peraturan  tersebut  BTP  dibagi  menjadi  25  golongan, dimana salah satunya adalah pewarna. Pewarna makanan merupakan salah satu golongan BTP yang digunakan dengan tujuan untuk  memberi kesan menarik, menyeragamkan dan menstabilkan warna makanan, serta menutupi perubahan warna akibat proses pengolahan dan penyimpanan (Winarno, 2004). Secara rinci, jenis dan penggunaan pewarna makanan diatur dalam Peraturan BPOM No 11 Tahun 2019 tentang BTP.
Terdapat  2  jenis  pewarna  makanan  yang  bisa  digunakan  sebagai  BTP  yakni pewarna  alami  dan  sintetis.  Beberapa  pewarna  sintetis  dilarang  penggunaannya  dalam makanan  dan  farmasi.  Salah  satu  pewarna  sintetis  tersebut  adalah  rhodamine  B. Berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan RI Nomor 239/MenKes/Per/V/85, Rhodamine B termasuk dalam golongan zat warna tertentu yang dinyatakan sebagai bahan berbahaya. Berbagai  penelitian  dan  uji  telah  membuktikan  bahwa  penggunaan  rhodamine  B  pada makanan  dapat  menyebabkan  kerusakan  pada  organ  hati,  kanker  dan  iritasi  saluran pencernaan  bagi  orang  yang  mengkonsumsinya  dalam  jangka  panjang.  Kerusakan  pada jaringan  hati  ditandai  dengan  terjadinya  piknotik  dan  hiperkromatik  dari  nukleus, degenerasi  lemak  dan  sitolisis  dari  sitoplasma,  batas  antar  sel  tidak  jelas,  susunan  sel tidak  teratur  dan  sinusoid  tidak  utuh.  Paparan  rhodamine  B  dalam  jumlah  besar  dapat mengakibatkan  keracunan  akut  serta  iritasi  saluran  pernafasan,  kulit  dan  mata  (Yuliarti, 2007) (Yamlean, 2011).
Meskipun sudah sejak lama pelarangan penggunaan rhodamine B pada makanan, akan tetapi masih sering ditemukan produk makanan yang mengandung pewarna tersebut. Hal  ini  disebabkan  karena  zat  pewarna  tersebut  mudah  didapatkan,  murah,  memberikan warna yang menarik, serta membuat makanan lebih tahan lama.
Penelitian  yang  dilakukan  di  kota  Manado,  Banjarmasin  dan  Yogyakarta  pada tahun  2013-2016  menunjukkan  bahwa  masih  ditemukan  penggunaan  rhodamine  B  pada sampel  kerupuk  yang  beredar  dipasar  (Dawile  dkk,  2013)  (Kumalasari,  2015)  (Rahayu dan  Mahmuda,  2016).  Selaras  dengan  hal  tersebut,  penelitian  yang  dilakukan  Badan Pengawas  Obat  dan  Makanan  (BPOM)  pada tahun  2016-2019  di  beberapa  wilayah  juga menemukan  sejumlah  makanan  yang  mengandung  rhodamine  B  seperti  arum  manis, kerupuk, rengginang, kue bolu, kue apem, cenil, manisan dan putu mayang yang beredar dipasar.  (BBPOM  Jatim,  2016)  (BPOM,  2017)  (BOPM  Kep  Bangka  Belitung,  2018) (BPOM DIY, 2019) (BPOM Benyumas, 2019). Kerupuk  merupakan salah satu makanan yang sering ditemukan mengandung rhodamine B. Kerupuk adalah makanan kering yang
terbuat  dari  tepung  tapioka  atau  tepung  sagu  dengan  atau  tanpa  penambahan  bahan tambahan  makanan  lainnya yang  dibutuhkan. Oleh  karena itu pada penelitian ini sampel yang  digunakan  adalah  kerupuk  yang  memiliki  warna  merah  muda  cerah  yang  diduga mengandung pewarna rhodamine B.
Beberapa teknik kromatografi telah dikembangkan untuk penentuan rhodamine B dalam  makanan.  Penelitian  Chiang  (2012)  telah  berhasil  menentukan  rhodamine  B  dan rhodamine  6G  dalam  sampel  cair  dengan  ekstraksi  fasa  padat  dan  KCKT  yang digabungkan  dengan  detektor  fluoresensi.  Selanjutnya  Tatebe  (2014)  juga  telah  berhasil mengembangkan  metode  penentuan  rhodamin  B,  pararosaniline,  dan  auramin  secara simultan  yang  terdapat  dalam  makanan  olahan  dengan  menggunakan  KCKT.  Analisis rhodamine  B  dengan  menggunakan  KCKT  merupakan  teknik  yang  baik  dengan  tingkat akurasi  yang  tinggi,  akan  tetapi  metode  ini  membutuhkan  peralatan  yang  mahal.  Oleh karena  itu  perlu  dikembangkan  metode  penentuan  rhodamine  dalam  makanan  dengan menggunakan  peralatan  yang  lebih  murah  dan  sederhana.  Tujuan  dari  penelitian  ini adalah  untuk  menganalisis  kandungan  rhodamine  B  secara  murah  dan  sederhana  pada sampel  kerupuk  berwarna  merah  dengan  menggunakan  metode  kolorimetri  secara pencitraan digital dengan aplikasi imageJ dan reagen Zn(CNS) 2 .

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  gelas  beaker,  labu  takar, kaca arloji, batang pengaduk, spatula, timbangan analitik, pipet tetes, pipet volume, pipet ukur, bola hisap, tabung reaksi, rak tabung reaksi, botol vial, microplate 96 well , kamera, scanner , komputer atau laptop dengan aplikasi ImageJ .
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  adalah  rhodamin  B,  ZnCl 2 ,  KSCN, aquades, asam asetat 98 %, dan baku rhodamin B. Bahan yang digunakan berderajat pro analisis dan sampel kerupuk yang diduga mengandung rhodamin B.

## Prosedur Penelitian
Larutan Zn(CNS) 2 dibuat dengan  mencampurkan 1 mL larutan ZnCl 2 2 M dan 2 mL larutan KCNS 2 M  dalam labu ukur 10 mL (Prabowo, 2012),
ZnCl 2 + KCNS → Zn(CNS) 2 + KCl
Pembuatan  Deret  Intensitas  Warna  Kompleks  Zn-tiosianat-Rhodamin  B  dalam bentuk larutan
Larutan  standar  rhodamine  B  dengan  konsentrasi  1,  2,  3,  4,  5,  6,  10,  14  ppm dibuat dengan menambahkan 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 10; 14 mL larurtan rhodamine B 100  ppm  ke  dalam  8  labu  ukur  10  mL  yang  telah  diisi  dengan  larutan  Zn(CNS) 2 . Selanjutnya  tiap-tiap  labu  ukur  ditambahkan  dengan  aquadest  hingga  tanda  batas. Kemudian  tiap-tiap  larutan  dimasukkan  ke  dalam microplate dan  dilakukan  proses scanning dengan  menggunakan scanner . Hasil scanning yang  berupa  gambar  digital, dianalisis  menggunakan  program ImageJ  Version  1.48 dan  dihasilkan  data  intensitas cahaya komponen warna RGB untuk setiap larutan.
Data  intensitas  tersebut  dikonversi  menjadi  absorbansi  dengan  menggunakan persamaan  Lambert-Beer  :  A  =  log ,  di  mana I =  intensitas  cahaya  warna  aktual sampel  hasil  pencitraan  (Intensitas  cahaya  komponen  warna RGB )  dan I 0 =  intensitas cahaya warna larutan blanko (Rusmawan dkk, 2011).

## Pengukuran Sampel secara Kolorimetri menggunakan Pencitraan Digital
Sebanyak  2  gram  sampel  kerupuk  yang  telah  dihaluskan  dimasukkan  ke  dalam gelas  beaker  100  mL  lalu  ditambahkan  2  mL  asam  asetat  encer  dan  30  mL  akuades. Selanjutnya  dipanaskan  pada  suhu  sedang  sambil  diaduk  hingga  larut  sempurna. Kemudian  larutan  tersebut  dipindahkan  ke  dalam  labu  ukur  100  mL  lalu  ditambahkan larutan  Zn(CNS) 2 .  Adanya  rhodamine  B  ditunjukkan  dengan  terjadinya  perbubahan warna  larutan  dari  merah  menjadi  ungu.  Selanjutnya  larutan  yang  dihasilkan  tersebut masing-masing  dimasukkan  ke  dalam microplate diletakkan  pada scanner kemudian dilakukan  proses scanning . Hasil scanning yang  berupa  gambar  digital,  dianalisis menggunakan  program ImageJ  Version  1.48 dan  dihasilkan  data  intensitas  cahaya komponen  warna RGB untuk  setiap  larutan.  Data  intensitas  tersebut  dikonversi  menjadi absorbansi  dengan  menggunakan  persamaan  Lambert-Beer  (Rusmawan  dkk,  2011). Sedangkan  untuk  menghitung  kadar  Rhodamin  B  dalam  sampel  dihitung  dengan menggunakan kurva kalibrasi dengan persamaan regresi : y = bx ± a yang diperoleh dari kurva standar (Yamlean, 2011).

## Penentuan Nilai Akurasi
Penentuan  nilai  akurasi  dapat  dilakukan  menggunakan  metode  adisi  atau penambahan  baku.  Metode  adisi  dapat  dilakukan  dengan  menambahkan  sejumlah  analit dengan  konsentrasi  tertentu  pada  sampel  yang  diperiksa,  lalu  dianalisis  dengan  metode
tersebut.  Persen  perolehan  kembali  ditentukan  dengan  menentukan  berapa  persen  analit yang ditambahkan tadi dapat ditemukan.

## Penentuan Nilai Presisi
Presisi  dapat  dibagi  dalam  dua  kategori  yaitu  keterulangan  ( repeatability )  dan ketertiruan ( reproducibility ). Repeatability adalah nilai presisi yang diperoleh jika seluruh pengukuran  dihasilkan  oleh  satu  orang  analis  dalam  satu  periode  tertentu,  menggunakan contoh  yang  sama,  pereaksi  dan  peralatan  yang  sama  dalam  laboratorium  yang  sama. Keterulangan  diukur  dengan  menghitung Relative  Standard  Deviation (RSD)  atau simpangan baku relatif dari beberapa ulangan contoh yang dilakukan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Deret Intensitas Warna Kompleks Zn-tiosianat-Rhodamin B dalam Bentuk Larutan
Perubahan  warna  larutan  yang  dihasilkan  pembentukan  kompleks  Zn-tiosianat- rhodamin  B  menjadi  dasar  pembuatan  deret  intensitas  warna.  Reaksi  antara  Zn(CNS) 2 dengan  deret  larutan  standar  rhodamine  B  pada  berbagai  variasi  konsentrasi menghasilkan  tingkatan  warna  yang  berbeda.  Hasil  scanning  tingkatan  warna  deret larutan standar yang dituang pada microplate ditunjukkan pada gambar 1
Gambar 1 Hasil scanning deret intensitas warna larutan kompleks Zn-Tiosianat- Rhodamin B (0,1,2,3,4,5,6,10 dan 14 ppm)
Tabel 1 Hasil pengukuran intensitas dan absorbansi standar
Kons. (ppm) Intensitas Warna Absorbansi Red Green Blue Red Green Blue 0 143,488  144,887  143,588 0 0 0 1 127,946  114,446  121,446  0,049 0,102 0,073 2 132,468  110,175  131,232  0,035 0,119 0,039 3 129,151 105,08 128,223  0,046 0,139 0,049 4 132,192  101,621  139,104  0,035 0,154 0,014 5 121,519 97,276 124,435  0,072 0,173 0,062 6 114,931 94,397 122,746  0,096 0,186 0,068
10 116,303 81,753 122,013  0,091 0,248 0,071 14 110,53 71,292 121,22 0,113 0,308 0,073
Hasil  berupa  gambar  digital  seperti  yang  ditunjukkan  pada  Gambar  1  selanjutnya  di analisis intensitas warnanya menggunakan software Image J 1.48 . Data intensitas tersebut dikonversi  menjadi  absorbansi  dengan  menggunakan  persamaan  Lambert  –  Beer  :  A  = log ,  di  mana I =  intensitas  cahaya  warna  aktual  sampel  hasil  pencitraan  (Intensitas cahaya  komponen  warna RGB )  dan I 0 =  intensitas  cahaya  warna  larutan  blanko (Rusmawan  dkk,  2011).  Berikut  hasil  yang  didapatkan  dari  analisis  intensitas menggunakan software Image J 1.48 disaijkan dalam Tabel 1.
Selanjutnya data absorbansi pada tiap komponen warna RBG yang terdapat tabel 1 diubah  ke  dalam  bentuk  kurva  kalibrasi,  dimana  kurva  kalibrasi  dibuat  dengan mengalurkan  nilai  absorbansi  terhadap  konsentrasi  seperti  ditunjukkan  pada  gambar  2 (Rusmawan  dkk,  2011).    Garis  berwarna  merah  menunjukkan  data  absorbansi  pada komponen  warna red ,  garis  hijau  menunjukkan  data  pada  komponen  warna green , sedangkan garis biru menunjukkan data absorbansi dari komponen warna blue .
Gambar 2. Kurva Kalibrasi larutan kompleks Zn-Tiosisanat-Rhodamin B untuk komponen warna RGB
Harmita  (2004)  memaparkan  bahwa  kemampuan  metode  analisis  untuk memberikan  respon  yang  proporsional  terhadap  konsentrasi  analit  dapat  dinyatakan dalam  linearitas.  Linearitas  dapat  diketahui  dari  koefisien  korelasi  kurva.  Dari  sebuah kurva kalibrasi akan didapatkan nilai korelasi (R) dan koefisian korelasi atau determinasi (R 2 ). Sulistyaningrum  dkk  (2014)  menyatakan  bahwa  bila  korelasi  (R)  digunakan  untuk mengetahui  hubungan  antara  konsentrasi  dengan  absorbansi,  sementara  koefisien
determinasi  (R 2 )  menunjukkan  kedekatan  garis  regresi  linear  dengan  titik  data sebenarnya.  Berdasarkan  kurva  kalibrasi  pada  gambar  2,  dari  ketiga  nilai  R 2 yang didapatkan  dari  tiga  komponen  warna RGB ditunjukkan  bahwa  nilai  R 2 yang  memenuhi persyaratan  adalah  komponen green dengan  nilai  R 2 =  0,9985  dan  persamaan  y  = 0,0157x  +  0,0903.  Hal  ini  dikarenakan  hanya  komponen  warna green yang  memiliki linieritas paling baik dengan nilai R 2 mendekati angka 1, sedangkan komponen warna red (R 2 = 0,757) dan blue (R 2 = 0,192) tidak. Maka, komponen warna green dapat digunakan untuk mengukur kadar rhodamin B pada sampel menggunakan persamaan y = 0,0157x + 0,0903  dengan  nilai  y  merupakan  absorbansi  dari  komponen green pada  sampel  yang diuji.
Pengukuran Sampel secara Kolorimetri menggunakan Pencitraan Digital
Pengujian  dilakukan  pada  tiga  sampel  kerupuk  yang  diduga  mengandung rhodamin B. Sampel A dan C merupakan jenis kerupuk uyel yang diproduksi di Sidoarjo dan Jember, sampel B merupakan jenis kerupuk bawang yang diproduksi B di Sidoarjo.
Gambar 3. Hasil penarikan warna pada sampel
Penambahan  asam  asetat  dan  pemanasan  yang  dilakukan  pada  sampel  bertujuan untuk  melepaskan  rhodamine  B  dari  matriks  sampel  seperti  ditunjukkan  pada  gambar  3. Larutan  yang  diperoleh  dipindahkan  dalam  ke  dalam  labu  ukur  dan  direaksikan  dengan Zn(CNS) 2 .  Selanjutnya  hasil  reaksi  tersebut  dituang  dalam microplate .  Dari  hasil pengujian  sampel,  dapat  diketahui  bahwa  sampel  A  dan  C  postitif  mengandung rhodamine  B  yang  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna  ungu  muda  setelah penambahan  Zn(CNS) 2 ,  sedangkan  sampel  B  tidak  mengandung  rhodamine  B  yang ditunjukkan dengan tidak adanya perubahan warna larutan.
Selanjutnya  dilakukan  pengukuran  kadar  rhodamin  B  pada  sampel  A  dan  C menggunakan pencitraan digital. Larutan sampel A dan C yang telah ditambahkan reagen Zn(CNS) 2 masing-masing  dimasukkan  ke  dalam microplate diletakkan  pada scanner kemudian  dilakukan  proses scanning . Hasil  dari scanning yang  dihasilkan  selanjutnya
A B C
diukur  intensitasnya  menggunakan software  ImageJ  1.48 .  Intensitas  warna  hijau  yang didapatkan  dari  pengukuran  tersebut  dikonversikan  menjadi  absorbansi  menggunakan persamaan Lambert-Beer .  Selanjutnya  dilakukan  perhitungan  kadar  rhodamin  pada sampel  A  dan  C  menggunakan  persamaan  regresi  linier  yang  didapatkan  dari  kurva kalibrasi komponen warna green pada gambar 2 yaitu y =  0,0157x + 0,0903 dengan nilai y  merupakan  absorbansi  dari  komponen green pada  sampel  yang  diuji.  Hasil  dari perhitungan kadar rhodamin B pada sampel disajikan pada Tabel 2.

## Tabel 2. Hasil dari pengukuran intensitas dan absorbansi dari sampel A dan C
Sampel  Rep. Intensitas Warna ( Green ) Absorbansi ( Green ) Konsentrasi (ppm) A 1 114,203 0,103352 0,831 2 114,227 0,103261 0,826 3 114,202 0,103356 0,832 Rata-rata 0,8296 C 1 114,220 0,103219 0,875 2 114,238 0,103219 0,823 3 114,287 0,103033 0,811 Rata-rata 0,8203
Berdasarkan  hasil  penentuan  rhodamin  B  menggunakan  pencitraan  digital  secara kolorimetri, menunjukkan bahwa sampel A dan C mengandung rhodamin B dengan rata- rata konsentrasi pada sampel A adalah 0,8296 ppm dan sampel C adalah 0,8203 ppm.
Penentuan  akurasi  pada  metode  ini  menggunakan  metode  adisi  standar,  dimana sampel kerupuk A dan C ditambahkan larutan standar rhodamine B 10 ppm. Berdasarkan hasil  pengukuran  absorbansi  kedua  sampel  tersebut,  diperoleh  persen  perolehan  kembali (% recovery )  sampel  A  dengan  tiga  pengulangan  adalah  99,31%,  98,91%  dan  98,73% dengan rata-rata sebesar 98,98% dan sampel C dengan tiga pengulangan adalah 95,67%, 95,42%,  96,14%  dengan  rata-rata  sebesar  95,74%.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa pengukuran  pada  sampel  A  dan  C  dinyatakan  akurat  karena  memenuhi  syarat  nilai akurasi  dari  % recovery ,  dimana  menurut  Harmita  (2004),    syarat  metode  validasi dikatakan akurasi jika masuk pada rentang 90-107%.
Nilai  presisi  dengan  kategori  keterulangan  ( repeatibility )  ditentukan  dengan menghitung  simpangan  baku  relatif  (RSD)  atau  koefisien  variasi  (CV).  Pengulangan dilakukan sebayak 7 kali dengan  menggunakan satu orang analis dalam periode tertentu. Dari  hasil  pengulangan  tersebut  diperoleh  nilai  RSD  sampel  A  dan  C  adalah  sebesar 0,7884%  dan  0,7066%.  Menurut  Harmita  (2004),  suatu  metode  dikatakan  teliti  apabila memberikan nilai koefisien variasi kurang dari 2%.

## SIMPULAN
Kandungan  rhodamin  B  pada  sampel  kerupuk  diuji  menggunakan  reagen Zn(CNS) 2 ,  dimana  sampel  A  dan  C  yang  berjenis  kerupuk  uyel  positif  mengandung rhodamin  B,  sedangkan  sampel  B  yang  berjenis  kerupuk  bawang  negatif  mengandung rhodamin B. Reagen Zn(CNS) 2 dapat dinyatakan efektif dalam menganalisis rhodamin B pada  sampel  kerupuk  yang  diuji  dengan  ditunjukkannya  nilai  akurasi  dari  pengukuran sampel A sebesar 98,98% dan nilai presisi sebesar 0,7884%. Untuk sampel C dihasilkan nilai akurasi sebesar 95,74% dan nilai presisi sebesar 0,7066%.

## DAFTAR PUSTAKA
Badan  Pengawasan  Obat  dan  Makanan  (BPOM)  Republik  Indonwsia.  Laporan Tahunan. https://www.pom.go.id/new/admin/dat/20180710/Laporan%20Tahunan%
20BPOM%202017.pdf . Diakses pada 23 September 2019.
Chiye  Tatebe,  Xining  Zhong,  Takashi  Ohtsuki,  Hiroki  Kubota,  Kyoko  Sato  &  Hiroshi Akiyama.  2014.  A  simple  and  rapid  chromatographic  method  to  determine unauthorized  basic  colorants  (rhodamine  B,  auramine  O,  and  pararosaniline)  in processed foods. Food Sci Nutr . 2014 Sep;2(5):547-56
Harmita.  2004.  Petunjuk  Pelaksanaan  Validasi  Metode  dan  Cara  Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian , Vol. I, No.3. Universitas Indonesia.
Indra  Eko  Prabowo,  Ganden  Supriyanto,  Yanuardi  Raharjo. Sensor  Kimia  Bentuk  Stik Menggunakan  Reagen  Zn(CNS) 2 Untuk  Mendeteks  Rhodamin  B  Dalam  Sampel Makanan .  Departemen  Kimia,  Fakultas  Sains  dan  Teknologi,  Universitas Airlangga
Kumalasari,  Eka.  2015.  Identifikasi  dan  Penetapan  Kadar  Rhodamin  B  Dalam  Kerupuk Berwarna Merah yang Beredar di Pasar Antasari Kota Banjarmasin. Jurnal Ilmiah Manuntung
Nurheti  Yuliarti.  2007. Awas!  Bahaya  di  Balik  Lezatnya  Makanan .  Andi  Offset.
Yogyakarta.
Peraturan  Badan  Pengawas  Obat  Dan  Makanan  Nomor  11  Tahun  2019  Tentang  Bahan Tambahan Pangan
Peraturan Menteri Kesehatan No. 033/MenKes/2012. Bahan Tambahan Pangan.
Peraturan  Menteri  Kesehatan  No.  239/MenKes/Per/V/85.  Zat  Warna  Tertentu  yang Dinyatakan sebagai Bahan Berbahaya.
Rahayu,  Muji  dan  Mahmudah,  I.  Y.  2016.  Identifikasi  Zat  Pewarna  Rhodamin  B  dan Methanyl Yellow yang Dijual Di Pasar Beringharjo, Yogyakarta. Jurnal Teknologi Laboratorium .Vol. 5 No. 2
Rusmawan, C. A. Onggo, D. dan Mulyani, I. 2011. Analisis Kolorimetri  Kadar Besi(III) dalam Sampel Air Sumur dengan Metoda Pencitraan Digital. Prosiding Simposium Nasional Inovasi Pembelajaran dan Sains. Bandung.
Sherly Dawile, Fatimawali Fatimawali, Frenly Wehantouw, F. 2013 Analisis Zat Pewarna Rhodamin B Pada Kerupuk Yang Beredar di Kota Manado. Jurnal Ilmiah Farmasi Vol. 2 No. 3. Universitas Sam Ratulangi.
Tsung‐Ling  Chiang,  Yu‐Chen  Wang,  Wang‐Hsien  Ding.  2012.  Trace  Determination  of Rhodamine  B  and  Rhodamine  6G  Dyes  in  Aqueous  Samples  by  Solid‐phase Extraction  and  High‐performance  Liquid  Chromatography  Coupled  with Fluorescence Detection, J. Chin. Chem. Soc. 2012, 59 , 515-519
Winarno, F. G. 2004. Kimia Pangan dan Gizi . PT Gramedia. Jakarta.
Yamlean,  V.  Y.  Paulina.  2011. Identifikasi  dan  Penetapan  Kadar  Rhodamin  B  pada Jajanan  Kue  Berwarna  Merah  Muda  yang  Beredar  di  Kota  Manado .  Universitas Sam Ratulangi Manado.