Analisis Kandungan Saponin (143-152)
ANALISIS KANDUNGAN SAPONIN PADA DAUN DAN TANGKAI DAUN Carica pubescens Lenne & K. Koch

## Eko Budi Minarno
Jurusan Biologi Fakultas Saintek
Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang Jl. Gajayana No.50, Malang, Indonesia Email; budi_minarno@yahoo.com

## ABSTRACT
Carica  pubescens  Lenne  &  K.  Koch  is  a  tropical  species  that  adapt  to  the  plateau environment and low temperatures. In East Java, the plant is found in Cangar and Bromo region.  Morphological,  chemical  content,  and  analysis  of  protein  banding  pattern  on  C. pubescens has been done, but more on the analysis of active compounds for pharmaceutical raw  materials  and  its  accumulation  in  the  body  of  the  plant  has  not  been  widely  studied. Saponins on C. pubescens potential as a raw material of natural medicine in the treatment of Diabetes Mellitus (DM). This study aims to determine the content of saponin in leaf and petiole  of  C.  pubescens  in  terms  of  absorbance  values.  Saponins  were  analyzed  by qualitative form the foam test, color test, Thin Layer Chromatography (TLC) analytical and preparative. Quantitative test in the form of UV-Vis spectrophotometry results preparative TLC.  This  research  was  done  at  the  Laboratory  of  Department  of  Biology  and  Chemistry UIN  Maulana  Malik  Ibrahim  Malang.  The  results  showed  that  the  leaf  and  petiole  of  C. pubescens positive for the saponins with the formation of stable foam for 60 seconds at 1.5 cm  -  1.7  cm.  The  third  positive  samples  containing  saponins  triterpene  the  ring  test produces  a  brownish  color.  Isolation  saponin  by  TLC  shows  the  best  ratio  of  eluent chloroform:  methanol:  water  (14:  6:  1)  compounds  can  be  separated  perfectly.  Saponin absorbance  values  obtained  three  samples  as  follows:  petiole  samples  from  the  region Cangar amounted to 0.852, leaf samples from the region Cangar amounted to 0.686, and leaf samples from Bromo region amounted to 0,629. The highest saponins found in organs petiole.  Thus  the  petiole  of  C.  pubescens  has  the  potential  to  be  used  as  a  source  of triterpene saponins which can be developed into a commercial herbal medicines.
Keywords : Carica pubescens Lenne & K. Koch, Saponin Accumulation,
Spectrophotometer, TLC

## PENDAHULUAN
Carica  pubescens Lenne  &  K.  Koch merupakan  salah  satu  tanaman  khas  dataran tinggi.  Di  Indonesia,  tanaman  ini  biasa  dikenal dengan  sebutan  “karika”,  dapat  dijumpai  di kawasan  Bromo  dan  Cangar  Jawa  Timur,  serta Dataran  Tinggi  Dieng,  Wonosobo-Banjarnegara Jawa  Tengah. Carica  pubescens merupakan anggota  familia  Caricaceae,  sehingga  memiliki kelompok  Genus  yang  sama  dengan Carica papaya dan  memiliki  kemiripan  yang  tinggi secara
morfologi.
Keberadaan rambut ( pubescens )  pada  bagian  abaksial  dan  tangkai daun  menjadi  penciri  utama  selain  morfologi bunga,  buah  dan  percabangan  pada  batang  jika dibandingkan dengan morfologi Carica papaya .
Selain  itu,  berkebalikan  dengan Carica  papaya , Carica  pubescens tumbuh  subur  pada  tempat dengan  ketinggian  1.400-2400  meter  di  atas permukaan  laut  (dpl),  temperatur  rendah,  dan
curah  hujan  tinggi.  Berikut  morfologi C. pubescens ditunjukkan pada Gambar 1.
(sumber: foto dokumentasi pribadi) Gambar 1. Morfologi Carica pubescens
Allah  SWT  telah  menciptakan  tumbuh- tumbuhan  yang  baik  sehingga  dapat  diambil manfaatnya  oleh  manusia  sebagaimana  tertulis dalam Al-Qur’an sebagai berikut:
                                                                              
                               
 
Artinya:  “7.  dan  Apakah  mereka  tidak memperhatikan
bumi, berapakah banyaknya  Kami  tumbuhkan  di  bumi  itu pelbagai  macam  tumbuh-tumbuhan  yang baik?  8.  Sesungguhnya  pada  yang demikian  itu  benar-benar  terdapat  suatu tanda  kekuasaan  Allah.  dan  kebanyakan mereka tidak beriman. 9. dan Sesungguhnya Tuhanmu benar-benar Dialah  yang  Maha  Perkasa  lagi  Maha Penyayang .” (QS. Asy-Syu’araa: 7-9)
Studi  mengenai  tanaman  obat  dan potensinya  untuk  kesehatan  dewasa  ini  banyak dikembangkan.  Karakter  morfologi,  kapasitas antioksidan  dan  analisis  pola  pita  protein terhadap C.  pubescens telah  dilakukan  (Laily, 2011),  akan  tetapi  lebih  lanjut  mengenai pemanfaatan  senyawa  aktif  untuk  bahan  baku obat  dan  konservasinya  belum  banyak  diteliti. Buah  tanaman  ini  telah  diteliti  kandungannya sebagai  sumber  flavanoid  (Minarno,  2014) sedangkan  bijinya  telah  diteliti  sebagai  sumber saponin (Supono, 2014). Flavanoid erat kaitannya dengan aktivitas antioksidan sedangkan  saponin  merupakan  senyawa  dalam bentuk  glikosida,  keduanya  tersebar  luas  pada tumbuhan.
Saponin  membentuk  busa  yang  mantap jika  dikocok  (Harbrone,  1987),  merupakan golongan  senyawa  alam  yang  rumit,  yang mempunyai  massa  dan  molekul  besar,  dengan kegunaan  luas  (Burger, et.al .,  1998).  Struktur saponin  menyebabkan  saponin  bersifat  seperti sabun  atau  detergen  sehingga  saponin  disebut sebagai  surfaktan  alami  (nama  saponin  diambil dari  sifat  utama  ini  yaitu  “sapo”  dalam  bahasa Latin  yang  berarti  sabun)  (Calabria,  2008; Hawley  and  Hawley,  2004).  Contoh  struktur saponin seperti ditunjukkan pada Gambar 2.
(sumber: http://isdha93.blogspot.com/2012/11/saponin.html ) Gambar 2. Contoh struktur saponin
Saponin termasuk senyawa fitokimia yang dapat  menghambat  peningkatan  kadar  glukosa darah  dengan  cara  menghambat  penyerapan glukosa  di  usus  halus  dan  menghambat pengosongan  lambung.  Dengan  melambatnya pengosongan  lambung,  maka  absorpsi  makanan akan  semakin  lama  dan  kadar  glukosa  darah akan  mengalami  perbaikan  (Bruneton,  1999; Matsuda, et  al .,  1999;  Mahendra  dan  Fauzi, 2005).  Dengan  demikian,  saponin  pada C. pubescens berpotensi  sebagai  herba  bahan  obat Diabetes Melitus.
Diabetes  Mellitus  (DM)  adalah  penyakit kelainan  metabolik  yang  dikarakteristikkan dengan  hiperglikemia  kronis  serta  kelainan metabolisme  karbohidrat,  lemak  dan  protein diakibatkan  oleh  kelainan  sekresi  insulin,  kerja insulin  maupun  keduanya  (WHO,  2006). Hiperglikemia kronis pada diabetes melitus akan disertai  dengan  kerusakan,  gangguan  fungsi beberapa  organ  tubuh  khususnya  mata,  ginjal, saraf,  jantung  dan  pembuluh  darah.  Walaupun pada  diabetes  melitus  ditemukan  gangguan metabolisme semua sumber makanan tubuh kita, kelainan  metabolisme  yang  paling  utama  ialah kelainan metabolisme karbohidarat. Oleh karena itu  diagnosis  DM  selalu  berdasarkan  tingginya kadar  glukosa  dalam  plasma  darah  (Adam, 2006).
Informasi mengenai organ tempat akumulasi  saponin  pada  tanaman C.  pubescens diperlukan  dalam  rangka  pemanfaatan  tanaman tersebut  sebagai  sumber  saponin . Diperlukan pengetahuan  tentang kandungan  saponin  pada daun  maupun  tangkai  daun  sebagai  herba berpotensi  obat  pada  kasus  DM. Besarnya  nilai absorbansi  saponin  pada  spektrofotometri  UV- Vis  dapat  digunakan  sebagai  rujukan  untuk mengetahui  perbandingan  kandungan  saponin pada organ tanaman. Dengan demikian penelitian ini perlu untuk dilakukan.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kandungan saponin pada daun dan tangkai daun
Analisis Kandungan Saponin (143-152)
C.  pubescens .  Hasil  penelitian  ini  diharapkan dapat  memberikan  informasi  tentang  potensi senyawa  saponin  yang  terkandung  dalam berbagai  organ  tubuh  tumbuhan C.  pubescens yang  tumbuh  di  Indonesia  sebagai  bahan  baku obat DM. Pengetahuan tersebut dapat membantu masyarakat dan peneliti untuk memperoleh obat DM sekaligus mengkonservasi tanaman tersebut.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian observasional  dimana  objeknya  adalah C. pubescens yang  tidak  diberi  perlakuan  apapun tetapi dilakukan pemeriksaan kandungan saponin secara kualitatif dan kuantitatif sehingga data penelitian disajikan secara deskriptif.
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Agustus sampai  dengan  November  2015.  Kegiatan pengambilan sampel Carica pubescens dilakukan  di  kawasan  Cangar  Batu  dan  Bromo, Jawa  Timur.  Analisis  secara  kualitatif  maupun kuantitatif  dilakukan  di  Laboratorium  Fisiologi Tumbuhan  Jurusan  Biologi  dan  Laboratorium Kimia  Organik  Jurusan  Kimia  Fakultas  Saintek UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.
Alat-alat yang diperlukan untuk pengambilan sampel di lapangan serta analisis di laboratorium adalah: kamera dan kantong plastik oven, toples ekstraksi, pengaduk, pisau, saringan 60 mesh, rotary vacuum evaporator , hair dryer , spektrofotometer  UV-VIS,  tabung  reaksi,  gelas beker,  gelas  ukur,  pipet  mikro,  neraca  analitik, pipa kapiler, plat KLT, chamber KLT dan lampu UV.
Bahan-bahan yang diperlukan antara lain: C.  pubescens (daun  dari  kawasan  Cangar  dan daun  serta  tangkai  daun  dari  kawasan  Bromo) , kertas  saring,  methanol  p.a.,  aquades,  asam klorida  2N,  kloroform,  alkohol  95  %,  asam asetat pekat anhidrat dan asam sulfat pekat.
a. Preparasi Sampel
1) Sampel C.  pubescens diambil  dari kawasan Cangar dan Bromo Jawa Timur
2) Sampel  dibersihkan  dari  kotoran  dan dikering anginkan
3) Ditimbang berat basah sampel
4) Dioven hingga kering kurang lebih selama 5-6 hari suhu 40 o C.
5) Ditimbang berat kering sampel
6) Dihaluskan  dan  diayak  menggunakan ayakan 60 mesh hingga menjadi simplisia serbuk
b. Ekstraksi sampel 1) Maserasi dengan metanol p.a perbandingan 1:5 berat sampel 2) Disaring  simplisia  hingga  didapatkan maserat pertama
3) Remaserasi dengan metanol p.a perbandingan 1:4 berat sampel 4) Disaring  simplisia  hingga  didapatkan maserat kedua
5) Maserat  diuapkan  dengan rotary  vacuum evaporator
6) Ekstrak  diinkubasi  pada  suhu  27  °C hingga menjadi sediaan kental
c. Uji Pendahuluan
Uji kadar saponin secara kualitatif terdiri dari uji busa dan uji warna.
1) Uji busa
a) Ditimbang 0,3 gram ekstrak kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi
b) Ditambahkan 10 ml aquades kemudian dikocok kuat
c) Ditambahkan HCL 2N, diamati terbentuknya busa stabil selama kurang lebih 1 menit 2) Uji warna a) Ditimbang ekstrak 0,3 gram dimasukkan ke dalam tabung reaksi
b) Ditambahkan 10 ml kloroform
c) Dipanaskan di dalam inkubator selama 5 menit sambil dikocok/diaduk
d) Ditambahkan  pereaksi  LB  hingga terbentuk cincin coklat pada permukaan tabung
d. Isolasi Saponin dengan KLT Analitik
1) Aktivasi  plat  KLT  dengan  dioven  selama 1 jam suhu 100 o C
2) Dibuat eluen dengan komposisi Kloroform:Methanol:Air perbandingan
(13:7:2) dan (14:6:1) 3) Eluen dimasukkan dalam chamber sebanyak 10 ml
4) Penjenuhan  eluen  dalam  chamber  selama kurang lebih 1 jam
5) Ekstrak diencerkan 1000 ppm
6) Dipotong  plat  KLT  ukuran  2x10  cm, diberi pembatas 1 cm untuk batas atas dan bawah plat
7) Ekstrak ditotolkan pada plat
menggunakan pipa kapiler
8) Penotolan  dilakukan  sebanyak  5-8  kali, tiap sekali penotolan ditunggu hingga plat kering/ digunakan hair drayer
9) Plat  dimasukkan  dalam  chamber  dan ditunggu hingga plat terslusi sampai tanda batas atas
10) Pembacaan hasil elusi dengan sinar UV 366 nm
e. Isolasi Saponin dengan KLT Preparatif
1) Aktivasi  plat  KLT  dengan  dioven  selama 1 jam suhu 100 ºC
2) Dibuat eluen dengan komposisi Kloroform:Methanol:Air perbandingan (14:6:1) 3) Eluen dimasukkan dalam chamber sebanyak 10 ml
4) Penjenuhan  eluen  dalam  chamber  selama kurang lebih 1 jam
5) Ekstrak diencerkan 1000 ppm
6) Dipotong  plat  KLT  ukuran  5x10  cm, diberi pembatas 1 cm untuk batas atas dan bawah plat
7) Ekstrak ditotolkan pada plat menggunakan pipa kapiler
8) Penotolan  dilakukan  sebanyak  5-8  kali, tiap sekali penotolan ditunggu hingga plat kering/ digunakan hair drayer
9) Plat  dimasukkan  dalam  chamber  dan ditunggu hingga plat terelusi sampai tanda batas atas
10) Pembacaan hasil elusi dengan sinar UV 366 nm
f. Pengukuran Senyawa Saponin dengan Spektrofotometri UV-Vis
Dari  hasil  KLT,  warna  yang  sesuai dikerok.  Hasil  kerokan  dimasukkan  dalam tube kemudian  ditambahkan  methanol  1  ml, selanjutnya  di sentrifuge untuk  memisahkan plat  dengan  supernatan.  Supernatan  yang didapat kemudian diukur absorbansi menggunakan spektro dengan panjang gelombang  209  nm  dengan  memasukkan isolat/supernatan  ke  dalam  kuvet  sebanyak 700 mikroliter.
Analisis data kandungan saponin dilakukan secara kualitatif dengan membandingkan  busa  dan  warna  sedangkan secara kuantitatif dilakukan dengan menentukan nilai  absorbansi  saponin  terbaik  dari  ketiga sampel C.  pubescens hasil  pengukuran  dengan spektrofotometri UV-Vis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Firdous, et al . (2009) membuktikan bahwa saponin  berfungsi  sebagai  antidiabetes.  Setelah dilakukan  pemeriksaan  histopatologi,  diketahui bahwa  saponin  mampu  meregenerasi  pankreas yang  menyebabkan  adanya  peningkatan  jumlah sel  β  pankreas  dan  pulau-pulau  Langerhans sehingga  sekresi  insulin  akan  mengalami peningkatan. Peningkatan sekresi insulin
tersebut  akan  membantu  penurunan  kadar glukosa  darah.  Regenerasi  sel  β  pankreas  itu terjadi  karena  adanya  sel  quiescent  pada pankreas yang memiliki kemampuan beregenerasi.
Beberapa  contoh  saponin  pada  tanaman antara  lain  diosgenin  dan  botogenin  dari  genus Dioscorea. Hekogenin, manogenin dan gitogenin dari spesies Agave. Sarsapogenin dan smilagenin  dari  genus  Smilax.  Sarmentogenin dari  genus  Strophantus.  Sitosterol  dari  minyak tanaman.  Famili  Liliaceae,  Amaryllidaceae  dan Dioscoreaceae mengandung sapogenin. Demikian juga pada Apocynaceae (Sirait, 2007). Maka  pada  penelitian  ini  diselidiki  kandungan saponin  pada  Genus  Caricaceae,  yakni C. pubescens pada  dua  organ  tanaman  dan  dua tempat tumbuh yang berbeda di Indonesia.
a. Penyiapan  Ekstrak Carica  pubescens Lenne & K. Koch
Pengambilan  sampel buah dari  dua tempat,  yakni  di  Jawa  Timur  meliputi  kawasan Cangar  dan  Bromo.  Diperoleh  sampel  dari kawasan  Cangar  dengan  berat  basah  daun sebesar  1117  gram  dan  tangkai  daun  dengan berat  basah  sebesar  1291  gram,  sedangkan sampel  dari  kawasan  Bromo  yaitu  daun  dengan berat  basah  sebesar  1000  gram.  Studi  literatur telah  dilakukan  untuk  mendapatkan  metode ekstraksi,  uji  kualitatif  dan  kuantitatif  sampel daun maupun tangkai daun C. pubescens . Proses  pengeringan  sampel  buah Carica pubescens Lenne  &  K.  Koch  dilakukan  dengan menggunakan oven dengan suhu 40 o C selama ± 5-6  hari  supaya  zat  yang  diinginkan  terlindung dari kemungkinan terjadinya kerusakan. Sampel yang  telah  dikeringkan  selanjutnya  dihaluskan dengan  saringan  60  Mesh  dan  ditimbang  untuk mengetahui  berat  kering  dalam  bentuk  serbuk. Sampel  dari  kawasan  Cangar  mempunyai  berat kering daun sebesar 220 gram dan tangkai daun dengan berat kering sebesar 50 gram, sedangkan sampel  dari  kawasan  Bromo  yaitu  daun mempunyai  berat  kering  sebesar  450  gram. Ekstrak diperoleh dengan mengekstraksi senyawa  aktif  dari  simplisia  menggunakan pelarut  methanol pro  analys .  Metode  yang diterapkan pada ekstraksi daun dan tangkai daun Carica  pubescens Lenne  &  K.  Koch  adalah metode  maserasi.  Maserasi  buah  dilakukan dengan  proses  pengekstrakan  simplisia  pada temperatur  ruangan  (26  ºC  sampai  dengan  28 ºC),  sehingga  zat-zat  yang  terkandung  di  dalam simplisia  relatif  aman.  Maserasi  dilakukan
Analisis Kandungan Saponin (143-152)
dengan menggunakan perbandingan berat sampel:pelarut = 1:5 selama 24 jam. Selanjutnya remaserasi  dilakukan  dengan  menggunakan perbandingan berat sampel:pelarut = 1:4 selama 24  jam.  Selanjutnya  ekstrak  dipekatkan  dengan rotary  vacuum  evaporator dan  diinkubasi  pada suhu 27 °C hingga menjadi sediaan kental. Dari proses  ekstraksi,  diperoleh  sediaan  kental  dari kawasan  Cangar  sebesar  11  gram  ekstrak  daun dan  7,5  gram  ekstrak  tangkai  daun,  sedangkan dari  kawasan  Bromo  diperoleh  16  gram  ekstrak daun.
b. Uji  Pendahuluan  Kandungan  Saponin Ekstrak Carica  pubescens Lenne  &  K.

## Koch
Uji  pendahuluan  untuk  mengetahui  kadar saponin  secara  kualitatif  dilakukan  dengan metode  yang  dideskripsikan  oleh  Suharto dkk (2012).  Uji  ini  dilakukan  untuk  memastikan secara  kualitatif  adanya  senyawa  saponin  yang terkandung  dalam  daun  dan  tangkai  daun C. pubescens sampel  dari  kawasan  Cangar  dan daun sampel dari kawasan Bromo.
1. Uji Busa
Saponin  bila  dikocok  akan  membuih. Kemampuan  menurunkan  tegangan  permukaan ini  disebabkan  molekul  saponin  terdiri  dari hidrofor  dan  hidrofil.  Bagian  hidrofob  adalah aglikonnya,  bagian  hidrofil  adalah  glikonnya. Rasanya pahit atau getir. Sebagian besar saponin bereaksi  netral  (larut  dalam  air),  beberapa  ada yang  bereaksi  asam  (sukar  larut  dalam  air), sebagian  kecil  ada  yang  bereaksi  basa.  Aglikon saponin  disebut  sapogenin.  Sapogenin  sukar larut  dalam  air.  Saponin  dapat  berupa  senyawa yang mempunyai satu rantai gula atau dua rantai gula  yang  sebagian  besar  bercabang  (Sirait, 2007).
Ekstrak kental C. pubescens sebanyak 0,3 gram  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi.  Dalam uji  busa  digunakan  aquades  sebagai  pelarut  dan asam klorida 2 N sebagai pereaksinya.
Pada  ekstrak  daun  yang  diperoleh  dari kawasan  Cangar,  setelah  ditambahkan  10  ml aquades  dan  dikocok  kuat  kemudian  dilakukan penambahan  asam  klorida  2  N,  terbentuk  busa yang  tidak  hilang  dengan  ketinggian  1,5  cm selama  kurang  lebih  60  detik.  Hasil  uji  busa pada  sampel  ekstrak  daun  dari  kawasan  Cangar seperti terlihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Hasil uji busa pada sampel ekstrak daun dari kawasan Cangar
Pada ekstrak tangkai daun yang diperoleh dari  kawasan  Cangar,  setelah  ditambahkan  10 ml  aquades  dan  dikocok  kuat  kemudian dilakukan  penambahan  asam  klorida  2  N, terbentuk  busa  yang  tidak  hilang  dengan ketinggian 1,7 cm selama kurang lebih 60 detik. Hasil uji busa pada sampel ekstrak tangkai daun dari  kawasan  Cangar  seperti  terlihat  pada Gambar 4.
Gambar 4. Hasil uji busa pada sampel ekstrak tangkai daun dari kawasan Cangar
Pada  ekstrak  daun  yang  diperoleh  dari kawasan  Bromo,  setelah  ditambahkan  10  ml aquades  dan  dikocok  kuat  kemudian  dilakukan penambahan  asam  klorida  2  N,  terbentuk  busa yang  tidak  hilang  dengan  ketinggian  1,5  cm selama  kurang  lebih  60  detik.  Hasil  uji  busa pada  sampel  ekstrak  tangkai  daun  dari  kawasan Cangar seperti terlihat pada Gambar 5.
Gambar 5. Hasil uji busa pada sampel ekstrak daun dari kawasan Bromo
Busa yang terbentuk dikarenakan senyawa  saponin  memiliki  sifat  fisika  yaitu mudah  larut  dalam  air  dan  akan  menimbulkan busa  ketika  dikocok.  Menurut  Robinson  (1995) senyawa  yang  memiliki  gugus  polar  dan nonpolar bersifat aktif permukaan sehingga saat dikocok  dengan  air,  saponin  dapat  membentuk misel.  Pada  struktur  misel,  gugus  polar menghadap ke luar sedangkan gugus nonpolarnya  menghadap  ke  dalam.  Keadaan inilah yang tampak seperti busa.
2. Uji Warna
Uji warna yang dilakukan terhadap ketiga sampel menunjukkan hasil yang positif. Pada uji warna ini dapat pula diketahui golongan saponin yang terdapat pada ekstrak. Menurut Steinegger and  Hansel (1992)  dalam  Sirait (2007), saponin dibagi menjadi 2 golongan:
a. Saponin  sterol,  bila  terhidrolisis  akan membentuk senyawa sterol
b. Saponin  triterpen,  bila  terhidrolisis  akan membentuk senyawa triterpen
Tschsche, Wollf, dan Gerlach dalam Sirait (2007)  menyatakan  bahwa  saponin  dibagi menjadi 3 golongan:
a. Saponin spirostanol
Disebut  juga  saponin  netral.  Contoh sarsasapogenin
b. Saponin triterpena Disebut  juga  saponin  asam.  Contoh:  asam oleanolat
c. Saponin sterol Disebut  juga  saponin  basa,  dibagi  menjadi dua tipe, yaitu:
1)  Tipe  demisin  atau  solanin,  contoh: solanidin, solatubin.
2)  Tipe tomatin, contoh tomatidin.
Saponin yang terdapat pada tumbuhan merupakan prekursor kortison maupun steroid.
Hasil uji warna pada sampel ekstrak daun C. pubescens dari kawasan
Cangar
memperlihatkan  hasil  positif  saponin.  Warna cincin kecoklatan merupakan indikasi keberadaan  saponin  triterpen,  sebagaimana terlihat pada Gambar 6.
Gambar 6. Hasil uji warna pada sampel ekstrak daun dari kawasan Cangar
Berikutnya,  hasil  uji  warna  pada  sampel ekstrak tangkai daun C. pubescens dari kawasan Cangar  juga  memperlihatkan  hasil  positif saponin.  Warna  cincin  kecoklatan  merupakan indikasi keberadaan saponin triterpen, sebagaimana terlihat pada Gambar 7.
Gambar 7. Hasil uji warna pada sampel ekstrak tangkai daun dari kawasan Cangar
Demikian  juga,  hasil  uji  warna  pada sampel daun C. pubescens dari kawasan Bromo dengan  warna  akhir  ekstrak  menyerupai  sampel daun C.  pubescens dari  kawasan  Cangar  juga memperlihatkan  hasil  positif  saponin.  Warna cincin kecoklatan merupakan indikasi keberadaan  saponin  triterpen,  sebagaimana terlihat pada Gambar 8.
Gambar 8. Hasil uji warna pada sampel ekstrak daun dari kawasan Bromo
Analisis Kandungan Saponin (143-152)
Ketiga ekstrak dengan penambahan kloroform dan pereaksi LB menunjukkan warna yang  berbeda  pada  ekstrak  tangkai  daun  dari kawasan  Cangar,  yakni  berwarna  kehijauan sedangkan  dua  ekstrak  lain  lebih  pekat kecoklatan.  Namun  demikian  hasil  akhir  pada uji  warna  ketiga  sampel  menghasilkan  warna yang  sama,  yaitu  cincin  kecoklatan  pada permukaan  tabung.  Dengan  demikian  diketahui tiga  sampel  tersebut  menunjukkan  adanya saponin triterpen. Berdasarkan penelitian sebelumnya  tentang  senyawa  saponin  yang menyatakan  bahwa  sampel  setelah ditambahkan pereaksi  LB  akan  menghasilkan  cincin  warna coklat-ungu  yang  menunjukkan  adanya  saponin triterpen dan hijau-biru untuk saponin steroid.

## c. Isolasi  Saponin  dengan  Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Analitik
Pemisahan  senyawa  saponin  dari  ekstrak C. pubescens dalam penelitian ini menggunakan metode  KLT  (Kromatografi  Lapis  Tipis).  KLT merupakan metode yang sering digunakan untuk memisahkan komponen-komponen senyawa dalam  suatu  ekstrak.  Perbandingan  eluen  yang baik  diketahui  berdasarkan  uji  coba  di laboratorium. Hasil elusi dengan eluen kloroform:metanol:air  (13:7:2)  senyawa  tidak terpisah  dengan  sempurna,  terjadi  tailing.  Hasil tersebut dapat dilihat pada Gambar 9.
Gambar 9. Senyawa tidak terpisah sempurna dengan eluen kloroform:metanol:air (13:7:2)
Berikutnya  diuji  cobakan  elusi  dengan eluen  kloroform:metanol:air  (14:6:1)  senyawa terpisah  dengan  sempurna.  Dari  hasil  tersebut kemudian  dilakukan  penyinaran  dengan  lampu UV 366 nm.
a b
Gambar 10. Senyawa terpisah sempurna dengan eluen kloroform:metanol:air (14:6:1).
a. tanpa penyinaran lampu UV; b. dengan penyinaran lampu UV 366 nm
d. Isolasi  Saponin  dengan  Kromatografi
Lapis Tipis (KLT) Preparatif
Hasil  dari  KLT  analitik  menunjukkan bahwa  eluen  terbaik  yang  dapat  memisahkan senyawa  pada  ektrak C.pubescens adalah kloroform:metanol:air  (14:6:1).  Oleh  karena  itu eluen  ini  digunakan  untuk  KLT  preparatif. Terdapat beberapa spot warna yang menunjukkan bahwa ekstrak mengandung beberapa senyawa. Hasil KLT sampel daun dari kawasan Cangar dapat dilihat pada Gambar 11.
Gambar 11. Hasil KLT sampel daun dari kawasan Cangar
Pada ketiga sampel dilakukan
penyemprotan  pada  plat  dengan  pereaksi  LB yang dilanjutkan dengan pemanasan menggunakan hair  drayer diperoleh  bercak warna  hijau  kebiruan.  Wagner  dkk.  (1984) menyatakan suatu simplisia dikatakan mengandung saponin apabila dilakukan penyemprotan  dengan  LB  memberikan  noda berwarna  biru,  biru  violet,  kadang  merah  atau kuning  coklat  pada  sinar tampak.  Nilai  Rf  yang diperoleh  0,275-0,375  (Suharto  dkk.,  2012). Hasil  KLT  sampel  tangkai  daun  dari  kawasan Cangar dapat dilihat pada Gambar 12.
Gambar 12. Hasil KLT sampel tangkai daun dari kawasan Cangar
Selanjutnya,  hasil  KLT  sampel  daun  dari kawasan Bromo dapat dilihat pada Gambar 13.
a b
Gambar 13. Hasil KLT sampel daun dari kawasan Bromo; a. tanpa penyinaran lampu UV; b. dengan penyinaran lampu UV 366 nm
Pada sampel ini juga dilakukan pemeriksaan  dengan  penyinaran  menggunakan lampu  UV  366  nm,  tampak  warna  coklat kemerahan, coklat dan hijau untuk memperjelas pengamatan senyawa.
Berikut ini merupakan perbandingan hasil KLT  ketiga  sampel  dengan  perlakuan  yang sama.
a b
c
Gambar 14. Perbandingan hasil KLT ketiga sampel.
a. sampel daun dari kawasan Cangar; b. sampel tangkai daun dari kawasan Cangar; c. sampel daun dari kawasan Bromo

## e. Pengukuran  Senyawa  Saponin  dengan Spektrofotometri UV-Vis
Dari  hasil  Kromatografi  Lapis  Tipis preparatif  kemudian  warna  yang  sesuai  dikerok sebagai  isolat  untuk  diperiksa  besarnya  nilai absorbansi  pada  panjang  gelombang  209  nm dengan  spektrofotometer  UV-Vis.  Diketahui bahwa  nilai  absorbansi  saponin  pada  tangkai daun  dari  kawasan  Cangar  sebesar  0,852;  daun dari  kawasan  Cangar  sebesar  0,686  dan  daun dari  kawasan  Bromo  sebesar  0,629.  Dengan demikian  tangkai  daun  dari  kawasan  Cangar memiliki nilai absorbansi saponin tertinggi.
Sirait (2007) menyatakan bahwa fitokimia menguraikan aspek kimia suatu tanaman. Kajian fitokimia meliputi:
1) Uraian tentang isolasi dan konstitusi senyawa kimia dalam tanaman 2) Perbandingan struktur senyawa kimia tanaman,  berdasarkan  definisi  ini  dilakukan penggolongan senyawa kimia yang ditemukan di alam 3) Perbandingan  komposisi  senyawa  kimia  dari bermacam-macam jenis tanaman atau penelitian  untuk  pengembangan  senyawa kimia dalam tanaman (fitokimia perbandingan)
Fitokimia C.  pubescens dan  Caricaceae secara  umum  belum  banyak  dikaji,  oleh karenanya  perlu  digali  informasi  berkelanjutan. Ditinjau dari proses pembuatan simplisia serbuk, nilai  perbandingan  berat  basah  dibanding  berat kering  serbuk  adalah  sebagai  berikut:  sampel daun dari kawasan Cangar sebesar 5,08; sampel tangkai daun dari kawasan Cangar sebesar 25,82 dan sampel daun dari kawasan Bromo 2,22. Hal ini  menunjukkan  kandungan  air  paling  rendah terdapat pada sampel tangkai daun.
Rendahnya  kandungan  air  dimungkinkan mempengaruhi metabolit sekunder yang terkandung dalam suatu organ tanaman. Sejalan dengan  pendapat  Sirait  (2007),  bahwa  fisik tanaman  sebagian  besar  terdiri  atas  air, kandungan  air  mencapai  lebih  dari  90  %  pada daun,  bunga,  buah  (buah  yang  berair  banyak) dan  bagian  tanaman  yang  berada  di  bawah tanah.  Pada  jaringan  yang  miskin  organ penyimpanan, kandungan airnya menurun hingga  sekitar  50  %  yaitu  pada  kulit  dan  kayu. Jaringan  yang  mengandung  air  paling  sedikit adalah  biji,  umumnya  mengandung  ±  10  %. Senyawa kimia tanaman yang jumlahnya paling banyak  adalah  senyawa  kimia  bermolekul  kecil dengan  penyebaran  terbatas,  yaitu  metabolit
Analisis Kandungan Saponin (143-152)
sekunder,  termasuk  dalam  hal  ini  adalah kandungan saponin.
Dengan  diketahui  adanya  saponin  pada organ  tanaman C.pubescens maka  tanaman  ini berpotensi dijadikan sebagai sumber bahan baku obat  dalam  pengobatan  Diabetes  Mellitus. Badan  Kesehatan  Dunia  (WHO)  menyebutkan bahwa 65 % dari penduduk negara-negara maju telah  menggunakan  pengobatan  tradisional (Depkes  RI,  2008).  WHO  merekomendasikan penggunaan  obat  tradisional,  termasuk  herbal, dalam  pemeliharaan  kesehatan  masyarakat, pencegahan  dan  pengobatan  penyakit,  terutama untuk  penyakit  kronis,  penyakit  degeneratif, serta  kanker.  WHO  juga  mendukung  upaya- upaya  peningkatan  keamanan  dan  khasiat  obat tradisional  (WHO,  2006).  Penggunaan  obat tradisional,  secara  umum  dinilai  relatif  lebih aman daripada penggunaan obat modern, dengan catatan  memenuhi  kaidah  dan  aturan  dalam penggunaannya. Sebab, obat tradisional memiliki efek samping yang relatif lebih sedikit dari  pada  obat  modern  dalam  penggunaan  yang tepat dan rasional (Purwanto, 2014).
Allah SWT adalah Dzat yang menciptakan  segala  penyakit,  namun  Dia  juga yang  menunjukkan  metode  penyembuhannnya. Sebagaimana  yang  disabdakan  oleh  Rasulullah SAW:   “Allah  tidak  menurunkan  penyakit kecuali  Dia  menurunkan  obat  baginya”  (HR. Bukhari).  Rasulullah  SAW  menegaskan  bahwa setiap penyakit ada obatnya dan bisa disembuhkan  atas  izin  Allah  SWT,  kecuali penuaan  dan  kematian.  Sedangkan  ragam  obat sudah  disediakan  (diciptakan)  oleh  Sang  Maha Penyembuh  (Allah  SWT).  Begitu  pula  dengan teori  dan  praktik  pengobatannya,  secara  garis besar maupun detail telah dicontohkan Rasulullah SAW. “Setiap penyakit itu memiliki obat, ketika obat itu mengenai penyakit maka ia sembuh atas izin Allah (HR. Muslim)”.
Ibnu  Qayyim  al-Jauziyah  mengatakan, bahwa  ungkapan  Nabi  “setiap  penyakit  ada obatnya”  memberikan  semangat  dan  kekuatan jiwa  orang  yang  sakit  dan  para  dokter  (tabib) yang  mengobatinya,  mereka  terdorong  untuk mencari  obat  dan  menelitinya.  Sedangkan  bagi si  pasien  ketika  merasa  yakin  bahwa  pasti  ada obat  yang  bisa  menyembuhkan  penyakitnya, maka ia memiliki semangat untuk sembuh. Rasa keputusasaan  menjadi  hilang  karena  harapan terbuka.  Jika  jiwanya  sudah  kuat,  maka semangatpun  meningkat,  maka  stamina  yang mendukung  tubuhnya  juga  meningkat  sehingga mampu  mengatasi  bahkan  mengusir  penyakit.
Demikian  juga  bagi  para  dokter,  jika  sudah meyakini  bahwa  setiap  penyakit  pasti  ada obatnya,  ia  pasti  terus  mencari  obat  dari  suatu penyakit  dan  terus  melakukan  penelitian  (Al- Jauziyah,  2013).  Dengan  demikian  tidak terkecuali  pada  penelitian  menggunakan C. pubescens sebagai  sumber  saponin  dapat membuka  wawasan  baru  pengobatan  penyakit Diabetes Mellitus.

## KESIMPULAN
Diperoleh  kesimpulan  bahwa  tangkai daun memiliki nilai absorbansi saponin tertinggi. Tangkai  daun C.  pubescens memiliki  potensi untuk  dimanfaatkan  sebagai  sumber  saponin triterpen yang dapat dikembangkan menjadi obat komersial alami.
.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kami  sampaikan kepada  LPPM  UIN  Maulana  Malik  Ibrahim Malang  yang  telah  mendukung  dan  mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Adam,  John.  M.  F.  2006.  Klasifikasi  dan Kriteria Diagnosis Diabetes Mellitus yang Baru. Cermin Dunia Kedokteran. 127: 37- 40.
Al-Jauziyah, Syekh Ibnu Qayyim. 2013. Rahasia
Pengobatan Nabi SAW. Mitrapress.
Bruneton, J. 1999. Flavonoid. Dalam: Pharmacognosy:  Phytochemistry  medical plants, edisi 2. France: Lavoisier Publishing. p. 310-327.
Burger, I., Burger, B, V. Albrecht, C. F. Spicies, H. S. C. and Sandor. P. 1998. Triterpenoid saponin  From  Bacium  gradivlona  Var. Obovatum  Phytochemistry.  49:  2087- 2089.
Calabria,  L.  M.  2008.  The  Isolation  and Characterization  of  Triterpene  Saponins from  Silphium  and  the  Chemosystematic and Biological Significance of Saponins in The Asteraceae. ProQuest.
Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan Sosial RI.  2008.  Profil  Kesehatan  Indonesia 2007. Jakarta: Departemen Kesehatan RI.
Firdous,  M.,  Koneri,  R.,  Sarvaraidu,  C.  H.  dan Shubhapriya,  K.  H.  2009.  NIDDM

## Eko Budi Minarno
Antidiabetic  Activity  of  Saponins  of Momordica Cymbalaria In Streptozotocin- Nicotinamide  NIDDM  Mice.  Journal  of Clinical  and  Diagnosis  Research  3:  1460-
1465.
Harbrone.  J.  B.  1987.  Metode  Fitokimia: Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis
Tumbuhan. Terbitan Kedua. ITB:
Bandung.
Hawley,  Ts.  and  Hawley,  R.  G.  2004.  Flow Cytometry Protocols. New York: Humana Press, Inc.
Laily,  A.  N.  2011.  Karakterisasi Carica pubescens Lenne & K. Koch Berdasarkan Karakter Morfologi, Kapasitas Antioksidan,  dan  Pola  Pita  Protein  di Dataran  Tinggi  Dieng,  Jawa  Tengah.
Tesis. Surakarta: Pascasarjana UNS.
Mahendra, B. dan Fauzi Rahmat Kusuma. 2005. Kumis kucing pembudidayaan dan
Pemanfaatan  untuk  penghancur  batu ginjal.  Depok:  Penebar  Swadaya.  15:  Hal 6-10.
Matsuda H., Li Y., Yamahara J., Yoshikawa M. 1999.  Inhibition  of  Gastric  Emptying  by Triterpene  Saponin,  Momordin  Ic,  in Mice: Roles of Blood Glucose, Capsaicin- Sensitive  Sensory  Nerves  and  Central
Nervous
System. http://jpnet. aspetjournals.org/cgi/content/full/ 289/2/729.  Diakses  pada  tanggal  25 Desember 2006.
Minarno,  E.  B.  2014.  Skrining  Fitokimia  dan Kandungan  Total  Flavanoid  pada  Buah Carica  pubescens Lenne  &  K.  Koch  di Kawasan  Bromo,  Cangar  dan  Dataran
Tinggi Dieng.
Purwanto, Budhi; editor, Hanifah Fitriani. 2014. Buku  Ajar  Ilmu  Keperawatan  Berbasis Herbal. Yogyakarta: D-Medika.
Robinson,  T.  1995.  Kandungan  Organik Tumbuhan Tinggi. Edisi ke-4 Terjemahan Kosasih  Padmawinata.  Bandung:  ITB Press.
Sirait,  M.  2007.  Penuntun  Fitokimia  dalam Farmasi. Bandung: Penerbit ITB.
Steinegger E. and Hansel R. 1992.
Pharmakognosie.  5.  Aufl.  New  York: Springer Verlag Heidelberg.
Suharto, M. A. P., Edy, H. J., Dumanauw, J. M. 2012.  Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa Saponin  dari  Ekstrak  Methanol  Batang Pisang  Ambon  ( Musa  paradisiaca var. sapientum  L.).  Parmachon  Journal.  I  (2): 82-92.
Supono.  2014.  Potensi  Ekstrak  Biji  Karika ( Carica  pubescens )  Sebagai  Larvasida Nyamuk Aedes  aegypty. El-Vivo . Vol  2, No 1.
Wagner,  G.  J.  1984.  Characterization  of  a cadmium-binding  complex  of  cabbage leaves. Plant Physiol. 76: 797-805.
World  Health  Organisation.  2006.  Diabetes Mellitus: Report of a WHO Study Group. World  Health  Organisation.  Geneva- Switzerland. S5-36.