DOI: 10.24198/jit.v18i1.17684 Unpad Press                                                                                                            Available online at http://jurnal.unpad.ac.id/jurnalilmuternak
Kualitas semen segar sapi Bali ( Bos javanicus ) pada kelompok umur yang berbeda
S. Prastowo 1a , P. Dharmawan, T. Nugroho, A. Bachtiar 2 , Lutojo 1 , A. Pramono 1
1 Program Studi Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Jawa Tengah
2 Balai Besar Inseminasi Buatan Singosari, Malang. Jawa Timur a email: prastowo@staff.uns.ac.id

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kualitas semen segar sapi Bali pada kelompok umur yang berbeda.  Sampel  yang  digunakan  berupa  semen  segar yang  ditampung  menggunakan  vagina  buatan dari 8 ekor pejantan sapi Bali, terbagi menjadi 2 kelompok umur yaitu 4 dan 7 tahun, di Balai Besar Inseminasi  Buatan  (BBIB)  Singosari  Malang,  Jawa  Timur.  Periode  penelitian  dilakukan  pada  bulan September  –  November  2016.  Parameter  yang  diamati  meliputi  volume  (ml),  pH,  konsentrasi (x10 6 /ml),  motilitas  (%),  persentase  spermatozoa  hidup  (L/D;  %),  abnormalitas  primer  (%)  dan abnormalitas sekunder (%). Untuk mengetahui perbedaan antar 2 kelompok umur, data kualitas semen dibandingkan menggunakan t-test . Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada kelompok umur 4 dan 7 tahun masing-masing diperoleh volume 4,55±0,91 ml dan 5,18±1,58 ml, pH 6,51±0,06 dan 6,52±0,01, konsentrasi 962,30±390,50 × 10 6 /ml dan 1079,00±90,56 × 10 6 /ml, L/D 71,88±2,58% dan 72,02±1,35%, motilitas  68±3,11%  dan  66,04±6,30%,  abnormalitas  primer  1,054±0,20%  dan  0,93±0,14%  serta abnormalitas sekunder 3,54±0,48% dan 4,24±0,31%. Pada penelitian ini, umur pejantan berpengaruh secara  nyata  (P<0,05)  pada  volume  dan  abnormalitas  sekunder.  Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa pada kelompok pejantan sapi Bali umur 7 tahun menghasilkan volume semen dan abnormalitas sekunder lebih tinggi dibandingkan umur 4 tahun. Kata kunci: sapi Bali, pengaruh umur, kualitas semen segar

## Age Effect on Bali Cattle (Bos Javanicus) Fresh Semen Quality

## Abstract
This  study  aims  to  know  the  effect  of bull  age  on  fresh  semen  quality in  Bali  cattle.  For  that,  fresh semen samples were collected using artificial vagina from eight Bali cattle bulls which were divided into two groups age 4 and 7 years old.  Bali cattle bulls were reared in Artificial Insemination Centre Singosari,  Malang,  East  Java,  Indonesia  and  this  study  was  conducted  from  September  until November 2016. Semen qualities were evaluated on volume (ml), pH, sperm concentration ( × 10 6 /mL), sperm motility (%), sperm life (%), sperm primary abnormality (%) and secondary abnormality (%) followed with group comparison using t-test. Results shows that bulls at 4 and 7 years old have semen qualities  at  volume  4.55±0.91  ml  and  5.18±1.58  ml,  pH  6.51±0.06  and  6.52±0.01,  sperm concentration  962.30±390.50 × 10 6 /ml  and  1079±90.56 × 10 6 /ml,  sperm  motility  68.00±3.11%  and 66.04±6.30%,  sperm  life  71.88±2.58%  and  72.02±1.35%,  sperm  primary  abnormality  1.05±0.20% and 0.93±0.14% and sperm secondary abnormality 3.54±0.48% and 4.24±0.31% respectively. In this study,  bulls  age  was  significantly  affected  to  volume  and  sperm  secondary  abnormality  (P<0.05) parameters.  It  is  concluded  that  Bali  cattle  at  7  years  old  produce  more  semen  volume  and  more number of sperm with secondary abnormality compared with bulls at 4 years old.
Keywords: Bali cattle, age effect, fresh semen quality

## Pendahuluan
Sapi Bali merupakan sapi lokal Indonesia dengan  keunggulan  cocok  pada  lingkungan tropis sehingga dapat berkembang biak dengan baik  dan  mempunyai  kualitas  karkas  yang tinggi  (Prastowo,  Widi,  &  Widyas,  2017). Upaya  yang  dilakukan  untuk  menunjang
keunggulan  sapi  Bali  tersebut  adalah  dengan meningkatkan  kualitas  genetik  pada  aspek produktivitas  (Widyas,  Nugroho,  &  Prastowo, 2017),  salah  satunya  adalah  menggunakan teknologi reproduksi untuk penyebaran genetik dari pejantan yang terseleksi (Ax et al., 2016). Salah  satu  teknologi  reproduksi  yang  telah
berhasil  dan  banyak  digunakan  untuk penyebaran genetik pejantan adalah Inseminasi Buatan  (IB).  Inseminasi  Buatan  merupakan teknologi  reproduksi  yang  meliputi  koleksi atau  penampungan  semen,  proses  dan pengolahan semen dan menempatkannya pada organ  reproduksi  betina  (Toelihere,  1993a). Dijelaskan  lebih  lanjut  bahwa,  tingkat keberhasilan IB sangat dipengaruhi oleh empat faktor  yang  saling  berhubungan  yaitu  kualitas semen, pemilihan sapi betina akseptor, akurasi deteksi  birahi  dan  keterampilan  inseminator (Susilawati, 2013).
Umur  merupakan  salah  satu  faktor  yang memengaruhi  produksi  dan  kualitas  semen yang dihasilkan seekor pejantan (Bhakat et al., 2011).  Seiring  dengan  bertambahnya  umur, pejantan  akan  menghasilkan  semen  dengan volume  yang  cenderung  meningkat  (Dewi, Ondho,  &  Kurnianto,  2012;  Wahyuningsih, Saleh, & Sugiyatno, 2013), motilitas menurun dan  meningkatnya  jumlah  spermatozoa  yang abnormal  (Brito  et  al.,  2002).  Kualitas  semen dari seekor pejantan berhubungan erat dengan fertilitas  (Mishra,  Palai,  Sarangi,  Prusty,  & Maharana,  2013;  Morrell  et  al.,  2017)  dan memiliki  arti  ekonomis  yang  tinggi  pada program produksi ternak (Han & Peñagaricano, 2016).
Berdasarkan  hal  tersebut,  penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  umur sapi  Bali  terhadap  kualitas  semen  segar sebagai  salah  satu  cara  untuk  mengevaluasi tingkat fertilitas pejantan. Selain itu, informasi kualitas semen segar yang diperoleh juga dapat digunakan  sebagai  dasar  untuk  menentukan umur atau lama pemeliharaan pejantan sebagai sumber semen.

## Materi dan Metode Materi penelitian
Materi  yang  digunakan  adalah  semen segar  yang  ditampung  dari  8  ekor  sapi  Bali berumur 4 dan 7 tahun (masing-masing 4 ekor) yang  dipelihara  oleh  Balai  Besar  Inseminasi Buatan (BBIB) Singosari Malang Jawa Timur pada  periode  September  –  November  2016. Rata-rata  bobot  badan  sapi  Bali  pada  umur  4 dan  7  tahun  adalah  656,75±32,69  Kg  dan 615,5±72,59  Kg  dengan  lingkar  skrotum 27,5±1,64  cm  dan  27,93±0,74  cm.  Sapi-sapi tersebut  dipelihara  dalam  kandang  individu dengan  perawatan  rutin  kandang  dibersihkan, dimandikan  dan  diberi  pakan  berupa  hijauan,
silase dan konsentrat sebanyak dua kali sehari sesuai  dengan  kebutuhan  nutrisi.  Suplemen nutrisi  dalam  bentuk  mineral  blok  dan  air minum juga diberikan secara ad libitum.

## Metode penelitian Penampungan semen
Semen  ditampung  sebanyak  dua  kali dalam  satu  minggu  menggunakan  vagina buatan  dan  pada  setiap  penampungan  diambil sebanyak  satu  ejakulasi  (ejakulat  pertama). Tata  cara  standar  pada  pembersihan  tempat penampungan,  preputium  dan  membiarkan pejantan  melakukan false  mounting (3–5  kali) dilakukan  pada  semua  pejantan  sebelum ditampung.  Tujuan  dari  perlakuan false mounting adalah  untuk  memaksimalkan stimulasi  sexual  sehingga  menghasilkan produksi  semen  yang  maksimal  (Schenk, 2018).

## Evaluasi kualitas semen
Kualitas  semen  segar  dievaluasi  pada parameter  volume  (ml),  pH,  konsentrasi ( × 10 6 /ml), motilitas (%), persentase spermatozoa  hidup  (L/D;  %),  abnormalitas primer  (%)  dan  abnormalitas  sekunder  (%). Volume  diamati  langsung  pada  tabung penampung semen sesaat setelah penampungan  dengan  satuan  mililiter  (ml), sementara  pH  diamati  dengan  meneteskan semen pada pH indikator.
Perhitungan  konsentrasi  spermatozoa dilakukan  dengan  cara  mencampur  sampel semen sebanyak 0,035 ml dengan larutan NaCl fisiologis  0,9%  sebanyak  3,5  ml.  Larutan tersebut selanjutnya dihomogenkan selama 5 - 7 detik, kemudian dipindahkan ke dalam cuvet untuk  diukur  konsentrasinya  menggunakan spektrofotometer.  Satuan  konsentrasi  dalam penelitian  ini  adalah  10 6 sel  spermatozoa  per mililiter ( × 10 6 /ml).
Motilitas  spermatozoa  ditentukan  dengan meneteskan  sampel  semen  pada slide  glass kemudian  ditutup  menggunakan cover  glass dan selanjutnya diamati menggunakan mikroskop (perbesaran 400x). Motilitas dinilai secara  subjektif  dengan  melihat  banyaknya spermatozoa  yang  bergerak  lurus  kedepan ( progresif ) . Adapun standar penilaian motilitas berada  para  kisaran  0  -  100%  (Toelihere, 1993b).
Persentase  spermatozoa  hidup  ( Life/Dead rasio;  L/D)  dilakukan  dengan  metode
pewarnaan  dan  preparat  ulas.  Sebanyak  2 µ l sampel  semen  segar  dicampur  dengan  10 µ l eosin - nigrosin kemudian  dibuat  preparat  ulas, dikeringkan dan selanjutnya diamati menggunakan  mikroskop  (perbesaran  400x). Spermatozoa  mati  akan  menyerap  warna merah  pada  bagian  kepala  (Hafez  &  Hafez, 2000).  Jumlah  spermatozoa  yang  diamati minimal sebanyak 200, selanjutnya prosentase spermatozoa  hidup  dapat  dihitung.  Preparat ulas  yang  sama  juga  digunakan  untuk pemeriksaan  spermatozoa  yang  memiliki abnormalitas primer dan sekunder.
Abnormalitas  primer  diamati  pada  bagian kepala,  sedangkan  abnormalitas  sekunder diamati  pada  bagian  ekor  (Shukla,  2011). Jumlah  spermatozoa  yang  diamati  minimal sebanyak  200  dan  selanjutnya  persentase abnormalitas dapat dihitung.

## Analisis data
Data kualitas semen segar antar kelompok umur dibandingkan
secara
statistik menggunakan t-test dengan bantuan aplikasi R (R Core Team, 2016) pada α = 5%. Perbedaan antar  kelompok  umur  pada  masing-masing parameter  kualitas  semen  dikategorikan  nyata apabila nilai P<0,05.

## Hasil dan Pembahasan Data kualitas semen segar sapi Bali
Hasil  evaluasi  kualitas  semen  segar selama penampungan dari 8 ekor pejantan sapi Bali  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Pengamatan kualitas  semen  secara  langsung  setelah penampungan  diperoleh  volume  dan  pH berkisar  dari  0,40  –  4,83  ml  dan  6,20  –  6,51. Beberapa  penelitian  sebelumnya  melaporkan bahwa  volume  dan  pH  semen  segar  sapi  Bali adalah  3,07-3,18  ml  dan  7  (Haryani,  Latief, Sonjaya,  &  Yusuf,  2016),  5,5  ml  dan  6 (Savitri,  Suharyati,  &  Siswanto,  2014),  5  ml dan  6  (Soi,  2016).    Dapat  dijelaskan  bahwa volume  semen  dipengaruhi  oleh  genetik,
lingkungan  (Mathevon,  Buhr,  &  Dekkers, 1998)  dan  juga  metode  penampungan  semen (León,  Porras,  Galina,  &  Navarro-Fierro, 1991).  pH  merupakan  cerminan  metabolisme spermatozoa,  nilainya  dipengaruhi  oleh metode  koleksi  semen  (León  et  al.,  1991), selain  itu  pH  juga  berhubungan  erat  dengan gerak  kinetik  spermatozoa  dan  fertilitasnya (Contri et al., 2013).
Perhitungan  konsentrasi  spermatozoa diperoleh  pada  kisaran  294  -  1676,00 × 10 6 /ml, sedangkan  motilitas  berkisar  pada  35  –  75%. Konsentrasi  spermatozoa  dan  volume  semen menentukan  jumlah  total  spermatozoa  yang terkandung  dalam  setiap  ejakulat.  Kedua parameter  tersebut  selanjutnya  menjadi  dasar perhitungan  jumlah  bahan  pengencer  semen yang  harus  ditambahkan  dan  pada  akhirnya menentukan  jumlah  dosis  semen  beku  yang dihasilkan  (Baracaldo,  Barth,  &  Bertrand, 2007).  Terkhusus  pada  parameter  motilitas, BBIB  Singosari  mensyaratkan  minimal  60% untuk  dapat  diproses  lebih  lanjut  menjadi semen beku. Hal demikian menjadi salah satu pertimbangan  karena  pada  proses  pembekuan semen,  motilitas  sperma  akan  mengalami penurunan  kurang  lebih  20  -  30%  pada  sapi Bali  (Hapsari,  Khalifah,  Widyas,  Pramono,  & Prastowo, 2018). Seperti yang dilaporkan pada penelitian-penelitian  sebelumnya,  motilitas memiliki  korelasi  positif  terhadap  fertilitas pejantan  (Januskauskas,  Johannisson,  & Rodriguez-Martinez,  2001;  Morrell  et  al., 2017).
Secara umum diperoleh rata-rata
persentase L/D spermatozoa sebesar 71,95±7,90%.  Semen  segar  dapat  diproses menjadi semen beku apabila  memiliki jumlah spermatozoa    hidup  minimal  70%    (Shukla, 2011), dengan demikian semen sapi Bali yang ditampung  dalam  penelitian  ini  memenuhi persyaratan  tersebut  dan  dapat  diolah  menjadi semen beku.
Tabel 1. Kualitas semen segar sapi Bali selama penampungan (n = 80 ejakulat)
Parameter Minimal Maksimal Rata-rata±SD Volume (ml) 0,40 8,80 4,83±1,40 pH 6,20 6,80 6,51±0,12 Konsentrasi ( × 10 6 /ml) 294,00 1676,00 1020,90±316,80 Motilitas  (%) 35,00 75,00 67,02±6,92 L/D (%) 52,00 95,00 71,95±7,90 Abnormalitas Primer (%) 0,00 2,86 0,99±0,63 Abnormalitas Sekunder (%) 0,85 9,49 3,89±1,43
Persentase spermatozoa yang memiliki abnormalitas  primer  pada  penelitian  ini berkisar  antara  0  –  2,86%,  sedangkan abnormalitas  sekunder  adalah  0,85  –  9,49%. Hasil ini masih berada pada kisaran yang dapat diterima  (<20%)  sehingga  dapat  diproses menjadi  semen  beku  (Toelihere,  1993b). Kualitas semen pada volume, pH, konsentrasi, L/D,  motilitas  dan  abnormalitas  pada  semen segar  dipengaruhi  oleh  banyak  faktor diantaranya  kondisi  masing-masing  individu seperti kualitas organ reproduksi, umur ternak, kondisi  manajemen  peternakan,  jenis  pakan yang  diberikan  dan  bangsa  sapi  yang digunakan (Gordon, 2005). Penjagaan terhadap  faktor  manajemen  pemeliharaan terutama asupan nutrisi menjadi penting dalam menghasilkan  semen  yang  layak  untuk diproses  menjadi  semen  beku.  Selain  itu, manajemen  penampungan  semen  untuk memaksimalkan  spermatoza  yang  dihasilkan dengan  meminimalisir  kerusakan  juga  perlu diperhatikan  dalam  hal  ini,  terlebih  pada pejantan-pejantan  yang  memiliki  kualitas genetik  tinggi  dan  digunakan  sebagai  sumber semen pada balai inseminasi buatan.

## Pengaruh umur pejantan terhadap kualitas semen segar
Hasil  analisis  menunjukkan  bahwa  umur pejantan  memberi  pengaruh  yang  signifikan (P<0,05)  terhadap  volume  semen  (Tabel  2). Rata-rata volume semen segar pada kelompok pejantan  berumur  7  tahun  lebih  tinggi dibandingkan dengan umur 4 tahun. Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa volume semen yang  dihasilkan  akan  bertambah  seiring dengan  umur  pejantan  (Brito  et  al.,  2002). Pertambahan  umur  berkorelasi  positif  dengan ukuran  testis  (Perumal,  2014),  terutama  pada lingkar  skrotum  dan  kapasitas  produksi spermatozoa  harian  (Pant  et  al.,  2003). Dilaporkan pula pada sapi Bali, volume semen berkorelasi positif dengan lingkar skrotum dan konsentrasi spermatozoa dengan nilai koefisien  korelasinya  (r)  sebesar  masing- masing  0,63  dan  0,60  (Saputra,  Ihsan,  & Isnaini, 2017). Dalam penelitian ini didapatkan konsentrasi spermatozoa pada kelompok umur 7  tahun  lebih  tinggi  dibandingkan  umur  4 tahun,  meskipun  secara  statistik tidak  berbeda nyata  (P>0,05;  Tabel  2).  Dijelaskan  lebih lanjut bahwa peningkatan umur
mengakibatkan  pertambahan  jumlah  tubuli seminiferi testis, sehingga jumlah spermatozoa yang  diproduksi  juga  meningkat.  Hal  ini terkonfirmasi  pada  nilai  lingkar  skrotum  sapi Bali yang digunakan dalam penelitian ini yaitu rata-rata  ukuran  lingkar  skrotum  sapi  Bali yang  berumur  7  tahun  (27,93±0,74  cm)  lebih besar  dibandingkan  umur  4  tahun  (27,5±1,64 cm).
Nilai  pH  semen  antar  kelompok  umur dalam  penelitian  ini  tidak  berbeda  nyata (P>0,05). Rata-rata nilai pH pada umur 4 dan 7 tahun  sebesar  6,51±0,06  dan  6,52±0,01,  nilai tersebut  berada  pada  kisaran  normal  sesuai dengan  standar  BBIB  Singosari.  Penelitian sebelumnya  melaporkan  bahwa  pada  sapi Jawa,  umur  tidak  memengaruhi  pH  semen (Dewi  et  al.,  2012).  pH  semen  lebih  banyak ditentukan  oleh  kondisi  dan  komposisi  pakan yang  memengaruhi  sekresi  seminal  plasma dari kelenjar-kelenjar aksesoris organ reproduksi  jantan.  Seperti  diketahui  bahwa seminal  plasma  terdiri  dari  karbohidrat  dan ion-ion  lain  yang  mendukung  kehidupan spermatozoa  (Hafez  &  Hafez,  2000).  pH semen  perlu  diperhatikan  karena  dapat digunakan  sebagai  indikator  metabolisme semen,    pH  yang  tinggi  atau  rendah  dapat mengakibatkan penurunan motilitas spermatozoa  yang  berakibat  pada  fertilitasnya (Contri et al., 2013; Zhou et al., 2015). Akibat tidak  berbedanya  nilai  pH  semen  antar kelompok  umur,    maka  motilitas  spermatozoa yang  diperoleh  juga  tidak  berbeda  nyata (P>0,05)  dalam  penelitian  ini.  Selanjutnya dapat dikatakan bahwa sapi Bali yang berumur 4  dan  7  tahun  mensekresikan  komponen seminal  plasma  yang  hampir  sama  dan  tidak mengakibatkan perbedaan metabolisme semen yang memegaruhi motilitas spermatozoa. Persentase  L/D  spermatozoa  pada  sapi Bali  kelompok  umur  4  dan  7  tahun  tidak berbeda  nyata  (P>0,05).  Hal  yang  sama  juga diperoleh pada nilai abnormalitas primer antar kelompok  umur  tidak  berbeda,  akan  tetapi pada  abnormalitas  sekunder  berbeda  nyata (P<0,05).  Penelitian  sebelumnya  melaporkan bahwa  L/D  tidak  dipengaruhi  oleh  umur pejantan  (Melita,  Adam,  &  Mulyadi,  2014; Ramsiyati,  Sriyana,  &  Sudarmadi,  2004), diperkirakan  L/D  lebih  banyak  dipengaruhi oleh  faktor  penanganan  semen  pasca penampungan.
Tabel 2. Hasil pemeriksaan kualitas semen segar sapi Bali pada kelompok umur yang berbeda.
Parameter Umur (tahun) Minimal Maksimal Rata-rata±SD Nilai P Volume (ml) 4 2,80 7,20 4,48±0,91 0,03 7 2,80 8,80 5,18±1,58 pH 4 6,40 6,80 6,51±0,06 0,92 7 6,20 6,80 6,52±0,01 Konsentrasi ( × 10 6 /ml) 4 394,00 1676 962,27±390,50 0,08 7 647,00 1452 1079,45±90,56 Motilitas (%) 4 35,00 75,00 68,00±3,11 0,20 7 40,00 75,00 66,04±6,30 L/D (%) 4 54,00 95,00 71,87±2,58 0,93 7 52,00 92,00 72,02±1,35 Abnormalitas primer (%) 4 0,00 2,86 1,05±0,20 0,39 7 0,00 2,19 0,93±0,14 Abnormalitas sekunder (%) 4 0,85 6,85 3,54±0,48 0,02 7 1,45 9,49 4,24±0,31 P<0,05: berbeda nyata Hal demikian didukung oleh hasil perhitungan abnormalitas  sekunder  yang  berbeda  nyata (P<0,05). Berdasarkan penyebabnya, abnormalitas primer merupakan kelainan pada kepala  spermatozoa  yang  terjadi  ketika  masih berada  di  dalam  tubuli  seminiferi  sementara abnormalitas sekunder ditandai dengan kelainan  pada  ekor  spermatozoa  yang  terjadi setelah proses spermatogenesis hingga ejakulasi dan saat proses penanganan (Hafez & Hafez, 2000). Ditambahkan bahwa abnormalitas  primer  ditandai  dengan  adanya kelainan  pada  ekor  seperti  ekor  melengkung, melingkar  dan  patah  (Susilawati,  2013). Perbedaan nilai abnormalitas sekunder tersebut dimungkinkan  karena  perbedaan  penanganan pasca  penampungan  sebelum  masuk  tahap evaluasi  kualitas  semen,  akan  tetapi  hal  ini perlu  dievaluasi  dan  dibuktikan  lebih  lanjut. Nilai  abnormalitas  primer  maupun  sekunder pada kedua kelompok umur pada penelitian ini diperoleh <20% sehingga masih layak diproses lebih  lanjut  menjadi  semen  beku  (Toelihere, 1993b).

## Kesimpulan
Umur  pejantan  sapi  Bali  pada  penelitian ini  memengaruhi  kualitas  semen  pada parameter  volume  dan  abnormalitas  sekunder. Kelompok  pejantan  dengan  umur  7  tahun menghasilkan volume semen dan abnormalitas sekunder  lebih  tinggi  dibandingkan  umur  4 tahun.  Selanjutnya,  umur  tidak  berpengaruh
pada  pH,  konsentrasi,  motilitas,  L/D  dan abnormalitas primer.

## Ucapan terimakasih
Penelitian  ini  merupakan  bagian  dari penelitian  Hibah  Manajemen  Riset  Group (MRG)
Reproduksi,
Pemuliaan dan Biostatistika  Ternak  dengan  judul  ”Pengaruh Musim  pada  Karakteristik  Ejakulat  dan Ketahanan  Pasca  Pembekuan  Semen  Sapi Bali”  yang  dibiayai  dana  PNBP  Universitas Sebelas Maret, tahun anggaran 2017.

## Daftar Pustaka
Ax,  R.  L.,  Dally,  M.  R.,  Didion,  B.  A.,  Lenz, R.  W.,  Love,  C.  C.,  Varner,  D.  D.,  … Bellin, M. E. (2016). Artificial Insemination.  In Reproduction  in  Farm Animals (pp. 376–389). http://doi.org/10.1002/9781119265306.c h26 Baracaldo, M. I., Barth, A. D., & Bertrand, W. (2007). International Veterinary Information Service, Ithaca NY (www.ivis.org),  Last  updated:  30-Jan. IVIS  Reviews  in  Veterinary  Medicine IVIS Ed , 1–11. Retrieved from www.ivis.org
Bhakat,  M.,  Mohanty,  T.  K.,  Raina,  V.  S., Gupta,  A.  K.,  Khan,  H.  M.,  Mahapatra, R. K., & Sarkar, M. (2011). Effect of age and  season  on  semen  quality  parameters
in Sahiwal bulls. Tropical Animal Health and  Production , 43 (6),  1161–1168. http://doi.org/10.1007/s11250-011-9817- 1
Brito,  L.  F.  C.,  Silva,  A.  E.  D.  F.,  Rodrigues, L. H., Vieira, F. V, Deragon, L. A. G., & Kastelic,  J.  P.  (2002).  Effects  of environmental  factors,  age  and  genotype on  sperm  production  and  semen  quality in Bos indicus and Bos taurus AI bulls in Brazil. Animal  Reproduction  Science ,
70 (3–4), 181–90. Retrieved from http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11 943488
Contri,  A.,  Gloria,  A.,  Robbe,  D.,  Valorz,  C., Wegher,  L.,  &  Carluccio,  A.  (2013). Kinematic  study  on  the  effect  of  pH  on bull sperm function. Animal
Reproduction  Science , 136 (4),  252–259. http://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2012. 11.008
Dewi,  A.  S.,  Ondho,  Y.  S.,  &  Kurnianto,  E. (2012).  Kualitas  semen  berdasarkan umur  pada  sapi  jantan  jawa. Animal Agriculture Journal , 1 (2), 126–133. Gordon,  I.  (2005). Reproductive  Technologies in Farm Animals . CABI Publishing. Hafez, E., & Hafez, B. (2000). Reproductin in farm  animals (7th  ed.).  Mayland: Lippincott Williams & Wilkins. Han,  Y.,  &  Peñagaricano,  F.  (2016). Unravelling  the  genomic  architecture  of bull  fertility  in  Holstein  cattle. BMC
Genetics , 17 (1), 1–11. http://doi.org/10.1186/s12863-016-0454-
6
Hapsari,  R.  D.,  Khalifah,  Y.,  Widyas,  N.,
Pramono, A., & Prastowo, S. (2018). Age effect on post freezing sperm viability of
Bali  cattle  (Bos  javanicus). IOP Conference Series: Earth and Environmental  Science , 142 (1),  012007. http://doi.org/10.1088/1755- 1315/142/1/012007
Haryani, R., Latief, A., Sonjaya, H., & Yusuf, M.  (2016).  Characteristic  of  Bali  Bulls Sperms  Assessed  Using  Computerized Assisted  Semen  Analysis  (  CASA  ). International  Journal  of  Sciences:  Basic and Applied Research , 4531 , 161–168.
Januskauskas,  A.,  Johannisson,  A.,  &
Rodriguez-Martinez, H. (2001).
Assessment  of  sperm  quality  through fluorometry and sperm chromatin
structure assay in relation to field fertility of  frozen-thawed  semen  from  Swedish AI  bulls. Theriogenology , 55 (4),  947–
961. http://doi.org/10.1016/S0093-
691X(01)00456-3
León,  H.,  Porras,  A.  A.,  Galina,  C.  S.,  & Navarro-Fierro,  R.  (1991).  Effect  of  the collection method on semen characteristics  of  Zebu  and  European type cattle in the tropics. Theriogenology , 36 (3),
349–355.
http://doi.org/10.1016/0093- 691X(91)90463-N Mathevon, M., Buhr, M. M., & Dekkers, J. C. (1998). Environmental, management, and genetic factors affecting semen production  in  Holstein  bulls. Journal  of Dairy  Science , 81 (12),  3321–3330. http://doi.org/10.3168/jds.S0022-
0302(98)75898-9
Melita,  D.,  Adam,  &  Mulyadi,  D.  (2014). Pengaruh  umur  pejantan  dan  frekuensi ejakulasi  terhadap  kualitas  spermatozoa sapi  aceh. Jurnal  Medika  Veterinaria , 8 ,
15–19.
Mishra, C., Palai, T. K., Sarangi, L. N., Prusty, B.  R.,  &  Maharana,  B.  R.  (2013). Candidate  gene  markers  for  sperm quality  and  fertility  in  bulls. Veterinary World , 6 , 905–910. http://doi.org/10.14202/vetworld.2013.90
5-910
Morrell, J. M., Nongbua, T., Valeanu, S., Lima Verde,  I.,  Lundstedt-Enkel,  K.,  Edman, A.,  &  Johannisson,  A.  (2017).  Sperm quality  variables  as  indicators  of  bull fertility may be breed dependent. Animal Reproduction  Science , 185 ,  42–52. http://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2017. 08.001
Pant,  H.  C.,  Sharma,  R.  K.,  Patel,  S.  H., Shukla, H. R., Mittal, A. K., Kasiraj, R.,
…  Prabhakar,  J.  H.  (2003).  Testicular development  and  its  relationship  to semen  production  in  Murrah  buffalo bulls. Theriogenology , 60 (1),  27–34. http://doi.org/10.1016/S0093- 691X(02)01037-3
Perumal, P. (2014). Scrotal Circumference and Its  Relationship  with  Testicular  Growth, Age, and Body Weight in Tho Tho ( Bos indicus )  Bulls. International  Scholarly
Research Notices , 2014 , 1–6. http://doi.org/10.1155/2014/249537
Prastowo,  S.,  Widi,  T.,  &  Widyas,  N.  (2017).
Preliminary  analysis  on  hybrid  vigor  in Indonesian  indigenous  and  crossbred cattle  population  using  data  from published  studies. IOP  Conference Series: Materials Science and Engineering , 193 (1), 012028.
http://doi.org/10.1088/1757- 899X/193/1/012028
R  Core  Team.  (2016).  R:  A  language  and environment  for  statistical  computing. Vienna,  Austria:  R  Foundation  for Statistical Computing. http://doi.org/10.1007/978-3-540-74686- 7
Ramsiyati,  D.  T.,  Sriyana,  &  Sudarmadi,  B.
(2004).  Evaluasi  kualitas  semen  sapi potong pada berbagai umur di peternakan rakyat. Prosiding  Temu  Teknis  Nasional Tenaga Fungsional Pertanian , 82–87.
Saputra,  D.,  Ihsan,  M.,  &  Isnaini,  N.  (2017).
Korelasi Antara Lingkar Skrotum
Dengan  Volume  Semen,  Konsentrasi Dan Motilitas Spermatozoa Pejantan Sapi Bali. TERNAK  TROPIKA  Journal  of Tropical  Animal  Production , 10 (2),  59– 68.
http://doi.org/10.21776/ub.jtapro.2017.01 8.02.9
Savitri,  F.  K.,  Suharyati,  S.,  &  Siswanto. (2014).  Kualitas  semen  beku  sapi  Bali dengan  penambahan  berbagai  dosis vitamin  C  pada  bahan  pengencer  skim kuning  telur.  Jurnal  Ilmiah  Peternakan Terpadu.
Jurnal Ilmiah Terpadu Peternakan , 2 (3), 30–36.
Schenk,  J.  L.  (2018).  Review:  Principles  of maximizing  bull  semen  production  at genetic  centers. Animal ,  pp.  1–6.
http://doi.org/10.1017/S17517311180004 72
Shukla,  M.  K.  (2011). Applied  Veterinary Andrology and Frozen Semen
Technology .  New  Delhi,  India:  New India Publising Agency.
Soi,  M.  N.  J.  (2016).  Uji  Viabilitas Spermatozoa  Sapi  Bali  Jantan  dengan Menggunakan Larutan Natrium Clorida ( NaCl  )  yang  Berbeda  Level. Journal  of Animal Science (JAS) , 1 (2502), 28–29. Susilawati,  T.  (2013). pedoman  inseminasi buatan pada ternak . Malang: Universitas Brawijaya Press.
Toelihere, M. R. (1993a). Fisiologi
Reproduksi  pada  Ternak .  Bandung: Angkasa.
Toelihere,  M.  R.  (1993b). Inseminasi  Buatan pada Ternak . Bandung: Angkasa. Wahyuningsih, A., Saleh, D. M., & Sugiyatno.
(2013).  Pengaruh  umur  pejantan  dan frekuensi penampungan terhadap volume dan motilitas semen segar sapi simmental di  balai  inseminasi  buatan  lembang. Jurnal  Ilmiah  Peternakan , 1 (3),  947– 953.
Widyas,  N.,  Nugroho,  T.,  &  Prastowo,  S. (2017).  Rooms  for  genetic  improvement in Indonesian Bali cattle population. IOP Conference  Series:  Materials  Science and  Engineering , 193 (1),  012037. http://doi.org/10.1088/1757- 899X/193/1/012037
Zhou, J., Chen, L., Li, J., Li, H., Hong, Z., Xie, M.,  …  Drevet,  J.  R.  (2015).  The  semen pH affects sperm motility and capacitation. PLoS  ONE , 10 (7),  1–15. http://doi.org/10.1371/journal.pone.0132 974