Menara Perkebunan 2012 80(1), 8-16

## Perangkat serologi untuk deteksi dini infeksi
Ganoderma sp. pada kelapa sawit
Serological device kit for early detection of Ganoderma sp. infection in oil palm
SUHARYANTO 1)*) , Deden Dewantara ERIS 1) , Haryo Tejo PRAKOSO 1) , AH SARAGIH 2) &  TW DARMONO 1)
1) Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia, Jl. Taman Kencana No. 1 Bogor 16151, Indonesia
2) PT Perkebunan Nusantara IV, Jl. Let.Jen Suprapto No.2, Medan, Indonesia
Diterima 12 Maret 2012/Disetujui 10 Mei 2012

## Abstract
Basal stem rot caused by Ganoderma sp. is the most destructive  disease  in  oil  palm  that  difficult  to  control because  its  early  symptom  could  not  be  detected  easily. Serological  technique  that  could  detect  early Ganoderma sp. infection in quick, simple, and cheap manner should be developed  as  one  component  for  integrated  disease management.  A  diagnostic  device  based  on  dot  immuno- binding assay (DIBA) for early detection of Ganoderma sp. infection  in  oil  palm  had  been  observed  at  laboratory, greenhouse  and  field  experiment.  Study  result  revealed that  serological  technique  could  detect  antigen  protein extract  of Ganoderma mycelium  as  much  as  138  µg/mL. Basal stem of young seedling that artificially be inoculated by  the  pathogen  could  also  be  clearly  detected.  At  field experiment, Ganoderma sp. infection in oil palm plantation was  marked  with  colour  marking  based  on  its  infection stadium  level  to  the  palm  oil.  The  colours  are  green, yellow,  red,  black,  and  white  stating  that  the  plant  are healthy,  mild  infection,  heavy  infection,  very  heavy infection,  and  dead,  respectively.  Field  experiment  result showed that serological device kit gave strong reaction to antigen extracted from root and stem at red marking plant. The  antigen  extracted  from  healthy  plant  (green  marking plant)  was  the  weak  one  indicating  that  the  plant  is starting  to  be  infected  although  the  symptoms  are  not  yet visually observed.
[ Keywords: Elais guinensis , Ganoderma sp., basal- stem disease, serological technique ].

## Abstrak
Busuk  pangkal  batang  (BPB)  yang  disebabkan  oleh Ganoderma sp.    merupakan  penyakit  paling  penting  yang sulit  ditanggulangi  pada  tanaman  kelapa  sawit  karena gejala  dini  serangan  sulit  diketahui.  Teknik  serologi  yang mampu  mendeteksi  dini  infeksi Ganoderma sp.    secara cepat,  sederhana  dan  murah  perlu  dikembangkan  sebagai salah  satu  komponen  dalam  pengelolaan  penyakit  secara terpadu.  Teknik  serologi  dalam  bentuk  perangkat diagnostik berbasis dot immunobinding assay (DIBA) telah dirakit untuk mendeteksi infeksi Ganoderma sp. pada skala laboratorium,  rumah  kaca,  dan  lapang.  Hasil  pengujian menunjukkan  bahwa  perangkat  diagnostik  tersebut    dapat mendeteksi  ekstrak  protein  dari miselium Ganoderma sp.
sebesar 138 µg/mL.  Keberadaan patogen pada bibit kelapa sawit  yang  diinfeksi  buatan  dapat  dideteksi  secara  jelas dengan perangkat serologi tersebut. Deteksi tingkat infeksi Ganoderma sp.  pada  kebun  kelapa  sawit  TM  (skala lapang)  dilakukan  dengan  mengambil  sampel  berdasarkan stadium  infeksi  (sehat,  ringan,  berat,  sangat  berat,  mati) yang diberi kriteria warna hijau, kuning, merah, hitam, dan putih. Hasil uji di kebun kelapa sawit menunjukkan bahwa teknik serologi ini memberikan reaksi paling kuat terhadap antigen  yang  diekstraksi  dari  akar  dan  batang  tanaman kriteria merah. Sedangkan reaksi paling lemah ditunjukkan oleh  antigen  yang  diekstraksi  dari  tanaman  kelapa  sawit kode hijau yang mengindikasikan bahwa tanaman tanaman kelapa  sawit  di  lapangan  tersebut  mulai  terserang walaupun gejala penyakit belum terlihat secara visual.
[Kata  kunci : Elais  guinensis , Ganoderma sp.  penyakit- busuk pangkal, teknik serologi]

## Pendahuluan
Penyakit  busuk  pangkal  batang  (BPB)  kelapa sawit  yang  disebabkan  oleh Ganoderma sp. merupakan  penyakit  yang  paling  merusak  baik  pada tanaman  belum  menghasilkan  (TBM)  maupun tanaman  menghasilkan  (TM)  di  Indonesia  (Susanto et  al. ,  2005).  Penyakit  BPB  telah  menyebabkan kerugian  ekonomi  yang  sangat  besar  (Purnamasari et  al., 2012)  sehingga  berpotensi  melumpuhkan agribisnis  kelapa  sawit.  Tingkat  serangan  terus meningkat pada  tanaman generasi  kedua  atau  ketiga hingga  mencapai  40%.  Penyakit  BPB  saat  ini  juga mulai  menyerang  tanaman  generasi  pertama  pada daerah pengembangan baru kelapa sawit di Sulawesi dan Papua.
Tanaman  kelapa  sawit  pada  umumnya  peka terhadap Ganoderma sp.  upaya  untuk  memperoleh bahan  tanaman  yang  tahan Ganoderma sp. terkendala  lamanya  siklus  seleksi  dan  sempitnya keragaman  genetik  yang  tersedia  (Breton et  al., 2010).  Di  samping  itu,  hasil  analisis  menggunakan RAPD  Purnamasari et  al .  (2012)  menggunakan Internal  Transcribed  Spacer (ITS)  DNA  ribosom menunjukkan bahwa keragaman genetik Ganoderma sp. tinggi.
*) Penulis korespondensi: suharyanto_biotek@yahoo.com
Perangkat serologi untuk  deteksi dini  infeksi Ganoderma sp ............(Suharyanto et al.)
Pengendalian  penyakit  BPB  kelapa  sawit  masih menghadapi  kendala  (Sapak et  al., 2008)  karena gejala dini serangan patogen sulit diketahui. Pada saat gejala  serangan  mulai  terlihat,  umumnya  tanaman sulit diselamatkan (Nur-Ain-Izati & Abdullah, 2008). Oleh  karena  itu  tersedianya  teknologi  yang  dapat mendeteksi  serangan  dini Ganoderma sp.  sangat diperlukan.
Infeksi Ganoderma sp.  pada  kelapa  sawit diawali  dengan  kolonisasi  hifa  intra  seluler  yang tumbuh  cepat  dan  lebat  pada  jaringan  korteks kemudian  diikuti  produksi  metabolit  sekunder  dan enzim-enzim  ligninolitik  (Abdullah et  al., 2010). Keberadaan  metabolit  sekunder  dan  enzim-enzim ligninolitik  tersebut  kemungkinan  dapat  dideteksi dengan  teknik  serologi.  Teknik  serologi  memiliki beberapa keunggulan dibanding dengan pelacak DNA antara  lain  lebih  cepat,  sederhana  dan  mudah diaplikasikan  di  lapang  untuk  pemeriksaan  sampel dalam  jumlah  banyak  dengan  biaya  relatif  murah (Utomo & Niepold, 2000). Teknik serologi diketahui dapat  digunakan  untuk  mendeteksi  penyakit  BPB kelapa sawit di lapang. Tersedianya perangkat deteksi tersebut  bermanfaat  untuk  monitoring  serangan  dan melengkapi manajemen pengendalian penyakit Ganoderma sp.  secara  terpadu  dengan  konsep penyehatan  lahan  melalui  kombinasi  perlakuan biologi,  kimia,  fisik  serta  mekanis.  Teknik  serologi perlu  dirakit  dalam  bentuk  perangkat  diagnostik sederhana  dan  dikemas  sedemikian  rupa  sehingga lebih  mudah  dibawa  dan  diaplikasikan  di  lapang. Penelitian  bertujuan  mengetahui  keefektifan  teknik deteksi  dini  berbasis dot  immunobinding  assay (DIBA)  untuk  mendeteksi Ganoderma sp.  di laboratorium  dan  lapangan  pada  sampel  tanaman sakit hasil infeksi buatan maupun infeksi alami.

## Bahan dan Metode
Kultur Ganoderma sp. dan bahan tanaman
Kultur Ganoderma sp.  yang  digunakan  berasal dari  kebun  Tinjauan  (T),  Bah  Jambi  (B),  Laras  (L), Pulu  Raja  (P),  dan  Dolok  Sinumbah  (D)  PTPN  IV Sumatera  Utara. Ganoderma sp.  dikulturkan  pada medium Potato Dextrose Agar (PDA).  Bibit tanaman kelapa  sawit  DxP  diperoleh  dari  PPKS,  Medan. Sampel  tanaman  kelapa  sawit  dari  lapang  diperoleh dari kebun Laras PTPN IV, Sumatera Utara.
Ekstraksi antigen kultur Ganoderma sp.
Ekstrak  biomassa  miselium Ganoderma sp. diperoleh dengan cara mengkulturkan isolat Ganoderma dalam Potato  Dextrose  Broth (PDB) 50 mL sambil digoyang menggunakan shaker dengan
kecepatan 100 rpm pada suhu ruang (27-30ºC) selama dua minggu.  Miselium  disaring  dengan kertas  saring Whatman 40  kemudian  dicuci  dengan  air  steril. Ekstraksi  protein  dari  biomassa  miselium  dilakukan dengan  menggerus  sampel  menggunakan  mortar sambil  ditambahkan  nitrogen  cair  sedikit  demi sedikit.  Serbuk  halus  miselium  ditambah  dengan bufer  fosfat  pH  7,2  dengan  perbandingan  1:1  (b/v). Homogenat  disentrifugasi  dengan  kecepatan  8.000- 10.000 rpm selama 15 menit dan filtratnya dipisahkan untuk sumber antigen.

## Ekstraksi antigen dari bibit
Infeksi buatan Ganoderma sp. pada bibit kelapa sawit  dilakukan  secara  kontak  langsung  dengan sumber  inokulum.  Penyiapan  sumber  inokulum mengikuti  cara  yang  dilaporkan  Widiastuti et  al. (2011).  Inokulan  ditempelkan  dan  diikat  dengan benang  jahit  pada  bonggol  bibit  kelapa  sawit  umur tiga  bulan  yang  telah  dilukai  3-4  sayatan  tipis sedalam  1-2  mm  (Gambar  1).  Bibit  selanjutnya ditanam  dalam  polybag  20  x  25  cm  dan  dipelihara dalam rumah kaca  selama enam bulan. Akar, pangkal batang dan daun bibit kelapa sawit terinfeksi masing- masing sebanyak 3–5 g digerus menggunakan mortar dan  dihomogenkan  dengan  10  mL  bufer  fosfat  salin (PBS)  pH  7-8.  Homogenat  disentrifugasi  dengan kecepatan  10.000  rpm  selama  15  menit  dan  super- natan  dipisahkan  untuk  sumber  antigen.  Antigen kontrol  diekstraksi  dari  tanaman  kelapa  sawit  yang tidak diinokulasi Ganoderma sp.

## Ekstraksi antigen dari lapang
Stadium  infeksi  dan  kriteria  sampel  tanaman terserang  dari  lapang  ditentukan  berdasarkan  gejala dan  tanda  timbulnya  serangan Ganoderma sp. menurut  Nur-Ain-Izzati  &  Abdullah  (2008)  dan Shamala et al. (2008) (Tabel 1). Tiga sampel tanaman yang  mewakili  setiap  stadium  infeksi  dipilih  secara acak  dan  interval  dari  satu  sampel  ke  sampel  lain adalah dua pohon. Sampel yang diuji terdiri dari daun pupus,  pangkal  batang,  akar,  dan  tanah.    Sampel bagian  pangkal  batang  diambil  pada  ketinggian ±  60  cm  dari  permukaan  tanah  menggunakan  mesin bor  dengan  mata  bor  berukuran  2,5  cm.  Sampel jaringan  tanaman  (1-2  g)  tersebut  dipotong-potong sampai  halus  kemudian  dimasukkan  dalam  tabung yang  berisi  0,5  mL  PBS  dan  digerus  dengan  batang pengaduk  sampai  halus  lalu  tambahkan  kembali 1  mL  PBS,  dikocok  dan  ditegakkan  pada  tatakan gabus  dan  ditunggu  selama  satu  jam  hingga  kotoran padat mengendap.
Gambar 1.  Inokulasi Ganoderma sp. melalui pelukaan pada pangkal batang (A) dan penempelan inokulan Ganoderma sp. pada bagian yang terluka (B).
Figure 1.    Inoculation of Ganoderma sp. by  wounding at the base of the stem (A)  and attachment of inoculant Ganoderma sp. on the injured tissue (B).
Tabel 1.     Stadium infeksi dan kriteria sampel berdasarkan gejala dan tanda timbulnya serangan Ganoderma sp.
Table 1.    Stage of infection  and infection criteria for sampling based on the symptoms and signs off Ganoderma sp. Attack.
Stadium infeksi Stage of infection Kriteria warna Colour criteria Gejala dan tanda/ Symptom and sign 0 H (Hijau/ Green ) Tanaman sehat dengan daun-daun hijau dan segar Healthy plant with fresh  and green leaves 1 K (Kuning/ Yellow ) Gejala penyakit mulai terlihat pada  pangkal batang dengan atau tanpa daun mengalami klorosis Disease symptom can be seen  at the basal stem with or without chlorosis leaves 2 M (Merah/ Red ) Tanaman sudah terlihat sakit, beberapa daun klorosis, tombak tidak membuka. Gejala penyakit  dapat dilihat pada pangkal batang dan tubuh buah dewasa. Infected  plant, symptoms can be seen at basal stem 3 T (Hitam/ Black ) Tanaman tumbang, sisa tunggul dapat ditemukan Collapsed  plant, tuber logs could be found 4 P (Putih/ White ) Tanaman tumbang, sisa tunggul tidak dapat ditemukan
Collapsed  plant, tuber logs  could not be found

## Perangkat serologi
Perangkat serologi yang digunakan dalam pene- litian  ini  dikembangkan  berdasarkan  prinsip  DIBA menggunakan  antibodi  IgY  anti Ganoderma sp. (Suharyanto  &  Darmono  2001;  Widiastuti et  al., 2011).  Perangkat  teknik  serologi  ini  terdiri  dari delapan  macam  kemasan  dalam  satu  kit  berupa  1) larutan fosfat bufer salin pH 7,0 dan Tween 20 (PBS- T)  untuk  ekstraksi  sampel,  2)  larutan  bufer  Tris EDTA  NaCl-Tween  kasein  (TEN-TC)  sebagai larutan  penutup  ( blocking  buffer ),  3)  antibodi  anti Ganoderma sp. dalam bentuk kering beku, 4) PBS-T untuk  larutan  pencuci  dan  5)  antibodi  konjugat  anti chicken-peroksidase  dalam  bentuk  kering  beku,  6) tablet  diaminobenzidin  (DAB)  15  mg  dan  pelarut yang  mengandung  H 2 O 2 serta  7)  20  potong  kertas nitro selulosa ukuran 3 x  5 cm. Perangkat diagnostik ini  dilengkapi  dengan  20  buah  tabung  kecil  dan tatakan  tabung,  kotak  pencuci,  batang  kaca  untuk penumbuk  dan  pipet  tetes.  Bahan-bahan  tersebut
dikemas dalam kotak ukuran 20 x 20 x 20 cm. Cara penggunaan  perangkat  teknik  serologi  tersebut mengikuti    Suharyanto et  al .  (2011)  yang  meliputi tahapan  peresapan  sampel  pada  kertas  nitroselulosa, penambahan  bufer  penutup  ( blocking  buffer )  dan reaksi  dengan  antibodi  IgY anti Ganoderma sp.  dan konjugat antibodi antichicken -peroksidase. Konfigurasi  antigen  dengan  antibodi  dan  konjugat antichicken akan  bereaksi  dengan  substrat  enzim peroksidase  (H 2 O 2 )  yang  dengan  DAB  akan membentuk  bercak  berwarna  cokelat.  Intensitas bercak yang terbentuk dalam deteksi ini mengindikasikan  tingkat  infeksi Ganoderma sp. Deteksi  dini Ganoderma dengan  teknik  serologi  di laboratorium,  semi lapang, dan  lapang  dapat  dilaku- kan  secara  visual  berdasarkan  intensitas  bercak tersebut.  Bercak  DIBA  yang  didapat  kemudian dipindai  dan  diamati  secara  semi  kuantitatif  dengan bantuan perangkat lunak Adobe Photoshop versi CS3 tahun 2007. Angka red , green, dan blue (RGB) yang
A
B
Perangkat serologi untuk  deteksi dini  infeksi Ganoderma sp ............(Suharyanto et al .)
terbaca  menggambarkan  tingkat  infeksi.  Makin rendah total angka RGB maka warna bercak cokelat makin  kuat  sehingga  tingkat  infeksi Ganoderma sp juga makin kuat.

## Hasil dan Pembahasan
Pengujian perangkat teknik serologi skala laboratorium
Hasil penelitian menunjukkan bahwa perangkat serologi  mampu  mendeteksi  material  antigenik Ganoderma sp.  yang  diekstraksi  dari  miselium dengan  kadar  protein  123,13  -  207,5  μg/mL  (Tabel 2).  Hal  tersebut  dapat  dilihat  dari  adanya  spot  atau bercak  berwarna  cokelat  pada  kertas  uji  yang  cukup kuat  (Gambar  2)  yang  terjadi  karena  dalam  ekstrak miselium  mengandung  komponen-komponen  anti- genik  yang  bereaksi  secara  spesifik  dengan  antibodi IgY anti Ganoderma sp.
Pengujian  perangkat  teknik  serologi  skala  rumah kaca pada bibit
Pelukaan  jaringan  dan  penempelan  substrat kayu  karet  merupakan  cara  yang  efektif  untuk menginokulasi Ganoderma sp.  pada  bibit  kelapa sawit.  Berdasarkan  pengamatan  visual  bibit  kelapa sawit  yang  telah  terinfeksi  pertumbuhannya  terlihat terhambat,  daun  terlihat  memucat  atau  mengalami klorosis  (Gambar  3),  akar  menjadi  nekrosis  dan membusuk  (Gambar  4).  Terjadinya  pembusukan  ini diduga  karena  peran  enizim-enzim  ligninolitik  yang dihasilkan Ganoderma sp.  Miselium  muda  men- sekresi enzim-enzim aktif pendegradasi lignoselulosa seperti  lakase,  Mn-peroksidase,  lignin  peroksidase, hemiselulase dan selulase (Paterson, 2007). Sebalik- nya  bibit  kelapa  sawit  yang  tidak  diinokulasi Ganoderma sp.  mempunyai  akar  yang  sehat  dan tidak nekrotik (Gambar 4).
Tabel 2.   Deteksi ekstrak kultur miselium Ganoderma sp. dengan perangkat serologi.
Table 2.   Detection of Ganoderma sp. mycelium extract using serological device.
Isolat Ganoderma sp.
Ganoderma sp . isolates Kadar protein ekstrak iselium Protein contents in mycelium extract (µg/mL) Bercak DIBA hasil deteksi Detection of DIBA spot Ganoderma sp. T 137,50 +++ Ganoderma sp. B 207,50 +++ Ganoderma sp. L 123,13 +++ Ganoderma sp. P 130,00 ++ Ganoderma sp. 6 136,88 +++
Keterangan: *Hasil deteksi berdasarkan pengamatan kualitatif  +  s/d ++++ (tipis s/d sangat kuat)  dari cokelat pucat hingga cokelat tua   (Gambar 2).
Note: * Detection results based on qualitative observations from + to ++++ ( pale brown to dark brown (Figure 2).
Gambar  2.  Deteksi  ekstrak  miselium  kelima  isolat Ganoderma sp.  dengan  perangkat  serologi  (A-E  kiri)  dan  dengan antibodi kontrol (A-E kanan).
Figure 2.  Detection of  five of Ganoderma sp.  mycelium extract with serological device (A-E left), and control antibody (A-E Right).
A C D 11 E B
Gambar 4.  Bagian akar bibit kelapa sawit yang mengalami nekrotik ringan (A), nekrotik sedang (B), nekrotik berat/busuk (C) (ditunjukkan dengan tanda panah) akibat infeksi Ganoderma sp.
Figure 4.   Mild necrotic root (A), moderate necrotic root (B), severe necrotic root of seedling caused by Ganoderma sp. infection (arrow).
Hasil  deteksi  dengan  perangkat  serologi  me- nunjukkan  spot  yang  kuat  pada  bibit  sawit  yang diinokulasi  dengan Ganoderma sp.  (Gambar  5). Sebaliknya  pada  bibit  sehat  tidak  ditemukan  spot (Gambar 6).  Gambar 5 juga memperlihatkan bahwa deteksi  paling  kuat  terjadi  pada  pangkal  batang dibandingkan pada bagian akar dan daun.
Berdasarkan  pengamatan  semi  kuantitatif  uji teknik  serologi  pada  Tabel  4,  angka  RGB  pangkal batang  yang merupakan  titik  infeksi  pada  umumnya lebih  rendah  daripada  angka  RGB  pada  akar  dan daun  kelapa  sawit.  Angka  RGB  pada  akar  bibit kelapa  sawit  yang  diinokulasi  seharusnya  lebih rendah  dari  pada  angka  RGB  akar    kelapa  sawit sehat.  Namun,  hasil  yang  diperoleh  adalah  sebalik- nya.  Penyebab  dari  ketidaksesuaian  ini  belum diketahui  secara  pasti.  Namun  demikian  hasil pengamatan  menunjukkan  bahwa  kondisi  akar  yang diinokulasi  telah  busuk  menyebabkan  sampel  rusak sehingga  teknik  serologi  tidak  bisa  mendeteksi dengan baik.

## Pengujian teknik serologi pada skala lapang
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  teknik serologi  dapat  mendeteksi  infeksi Ganoderma sp. dari  sampel  daun,  akar  dan  batang  tanaman  kelapa sawit  terinfeksi Ganoderma sp.  pada  berbagai kriteria  gejala  serangan  (Gambar  7).    Hasil  deteksi yang  menghasilkan  reaksi  paling  kuat  berturut-turut adalah  sampel  dengan  kode  kriteria  merah  (stadium 2), kuning (stadium 1), hitam (stadium 3), sedangkan yang  paling  lemah  adalah  kode  kriteria  hijau. Walaupun  dengan  sinyal  lemah  deteksi  tanaman dengan   kriteria  kode   hijau  menunjukkan  bahwa kemungkinan  besar  tanaman  tersebut  sebenarnya sudah  mulai  terinfeksi,  tetapi  gejala  visual  belum kelihatan  Hal  ini  kemungkinan  karena  tanaman tersebut  berada  di  kebun  yang  sudah  terserang Ganoderma sp.  dengan  tingkat infestasi  yang  cukup tinggi  10-20%  sehingga  kontak  akar  tanaman  sakit dengan  tanaman  sehat  akan  mudah  terjadi.  Jourdan &  Rey (1997)  melaporkan   bahwa  arsitektur  per-
Gambar 3.  Bibit kelapa sawit tanpa inokulasi Ganoderma sp. (A) dan yang diinokulasi Ganoderma sp. (B).
Figure 3.   Seedling without Ganoderma sp. inoculation (A) and with Ganoderma sp. inoculation (B).
A B A B C
Perangkat serologi untuk  deteksi dini  infeksi Ganoderma sp ............(Suharyanto et al. )
akaran  antar  tanaman kelapa sawit sangat padat dan lebat  sehingga  antar  pohon  saling  bertautan. Demikian  pula  dengan  penyebaran  spora  di  kebun tersebut  yang  potensial  sebagai  sumber  patogen. Hasil deteksi yang kuat pada tanaman dengan kriteria kode  merah  (stadium  2)  dan  kuning  (stadium  1) dapat  dipahami  karena  tanaman  dengan  kriteria tersebut  terserang  cukup  berat  sehingga  miselium patogen  sudah  mengkolonisasi  tanaman  secara  luas, khususnya di pangkal batang.  Bagian tanaman yang memberikan  reaksi paling kuat dan konsisten adalah bagian  pangkal  batang.  Hal  ini  dapat  dipahami karena  pada  pangkal  batang  banyak  mengandung substrat  mudah  tersedia  (gula  dan  pati)  sehingga
konsentrasi  dan  aktivitas  patogen  yang  berada  pada daerah  tersebut  lebih  tinggi.  Pada  stadium  empat (putih), karena tanaman kelapa sawit sudah tumbang dan  tidak  terdapat  sisa  tunggul,  maka  yang  diambil sampelnya adalah tanah. Dari hasil pengujian sampel tanah  tidak  terdapat  reaksi  yang  kuat  antara  antigen dengan  antibodi  data  RGB  pada  Tabel  5  mem- perlihatkan angka pada sampel  pangkal batang kode merah (stadium 2) lebih kecil.  dibandingkan dengan nilai RGB pada kode sampel lainnya. Hal ini diduga karena  daerah  pangkal  batang  merupakan  daerah kolonisasi  dan  perkembangan  hifa  tersier  patogen Ganoderma sp.
Gambar 5.  Deteksi infeksi Ganoderma sp. dengan perangkat serologi pada kelapa sawit yang diinokulasikan secara  buatan menggunakan inokulum Ganoderma sp. dalam kultur kayu karet  (A= akar, B=pangkal batang, D=daun).
Figure 5.    Detection of Ganoderma sp. infection by serological device on oil palm seedling which artificially   inoculated  using  a  rubber  block Ganoderma sp. inoculums (A = root, B =basal stem, D = leaf).
Gambar 6.   Deteksi infeksi dengan teknik serologi dari sampel kelapa sawit yang tidak diinokulasi Ganoderma sp. (Kontrol)  (A= akar, B= pangkal batang, D=daun).
Figure 6.     Detection  of Ganoderma sp. infection  by  serological  device  on  uninoculated oil palm sample (A = root,  B =basal stem, D = leaf).

## Menara Perkebunan
2012 80(1), 8-16
Tabel 4.   Pengamatan semi kuantitatif deteksi tingkat infeksi Ganoderma sp. dengan perangkat serologi berdasarkan angka RGB pada skala rumah kaca.
Table 4.   Semi-quantitative observations of Ganoderma sp.  infection rate detection with serological device based on RGB number  in greenhouse scale.
Perlakuan*
Treatments* Angka RGB pada sampel /RGB number on sample
Total RGB Merah/ Red Hijau/ Green Biru/ Blue
Tanaman diinokulasi inoculated plant
Akar/ Root
Pangkal batang/ Basal stem Daun/ Leaf 143 86 94 135 70 109 131 90 104 410 246 307 Tanaman Kontrol/ Control
Akar/ Root
Pangkal batang/ Basal stem Daun/ Leaf 148 146 133 134 131 118 117 112 100 399 389 350
*)  Bibit kelapa sawit diinokulasi dengan inokulum Ganoderma sp. yang dikulturkan pada medium karet berukuran 27cm 3 . Kontrol adalah bibit  kelapa sawit yang tidak diinokulasi Ganoderma sp.
*)  Oil palm seedlings inoculated with the inoculums Ganoderma sp. was cultured  on medium-sized rubber 27 cm3. The controls are the seeds that uninoculated.
Gambar  7.  Hasil deteksi perangkat dari sampel terserang Ganoderma sp. pada stadium/kriteria warna:   (a) 0/hijau   (b) 1/kuning   (c) 2/merah  (d) 3/hitam  (e) 4/putih (Tn= tanah, D= daun, B= batang, A= Akar tanaman sakit).
Figure 7.      Result of Ganoderma sp . detection  using  serological  device at stage/colour criteria: (a) 0/green (b) 1/yellow (c) 2/red (d) 3/black (e) 4/white (Tn = soil, D = leaf, B = stem,
A = infected roots plants).
A B C D E
Perangkat serologi untuk  deteksi dini  infeksi Ganoderma sp. ............(Suharyanto et al. )
Tabel 5. Pengamatan semi kuantitatif deteksi tingkat infeksi Ganoderma sp. dengan perangkat  serologi berdasarkan angka RGB pada skala lapang.
Table 5.  Semi-quantitative observations of Ganoderma sp. infection  rate  detection  with  serological  device  based  on  the number of RGB on the field scale.

## Stadium Infeksi
Stages of infection

## Kriteria tanaman terserang dan jenis sampel
Infected plant criteria and types of sample

## Angka RGB/RGB number
Merah/ Red Hijau /Green Biru /Blue Total RGB 0 Hijau/G reen Daun/ Leaf 150 129 106 385 Pangkal batang/ Basal stem 150 129 106 385 Akar/ Root 150 129 106 385 1 Kuning/ Yellow Daun/ Leaf 131 117 78 326 Pangkal batang/ Basal stem 128 98 87 313 Akar/ Root 115 71 58 244 2 Merah/ Red Daun/ Leaf 168 119 114 401 Pangkal batang/ Basal stem 140 72 63 275 Akar/ Root 116 81 59 256 3 Hitam/ Black Daun/ Leaf 167 144 138 449 Pangkal batang/ Basal stem 126 93 88 307 Akar/ Root 127 81 81 289 4 Putih/ White Tanah/ Soil 197 188 189 574

## Kesimpulan
Perangkat  diagnostik  berbasis  DIBA  mampu untuk  mendeteksi Ganoderma sp.  baik  pada  kultur murni di  laboratorium  maupun tanaman  terinfeksi  di lapangan.  Sampel  terbaik  untuk  deteksi  di  lapangan adalah  bagian  pangkal  batang.  Perangkat  serologi generasi  pertama  ini  masih  perlu dikembangkan  dari segi  kepraktisan  penggunaannya  di  lapang.  Teknik serologi  dalam  bentuk test-trip saat  ini  masih  dikaji. Terdeteksinya  sampel  kriteria  hijau  akan  bermanfaat untuk deteksi dini infeksi di lapangan sebelum gejala visual muncul.

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  diucapkan  kepada  PTPN  IV, Medan  yang  telah  mendanai  kegiatan  ini,  serta kepada Ibu Fawzia Novianti, S.P. atas kerjasama dan segala bantuannya dalam kegiatan penelitian.

## Daftar Pustaka
Abdullah  SN,  F  Alizader,  N  Ali,  S  Meon  &  A  Senon (2010).  Molecular  &  biochemical  approach  in Ganoderma research. In : Second  International Seminar  Oil  Palm Disease : Advance in Ganoderma
Research & Management. Indonesian. Yogyakarta, 31 May  2010.    Indonesia,  Oil  Palm  Research  Institute (IOPRI) 4p.
Breton  F,  M  Rahmaningsih,  Z  Lubis,  I  Syahputra, U Setiawaty, A Flori & R Sore (2010). Evaluation of resistance  level  of  oil  palm  progenies  to  basal  rot disease by the use of an early screening test, relation to field observation. In : Second International Seminar Oil  Palm  Disease : Advance  in  Ganoderma  Research &  Management.  Indonesian. Yogyakrata,  31  May 2010. Indonesia, Oil Palm Research Institute (IOPRI) 4p.
Darmono  TW,  Siswanto,  Suharyanto,  ES  Hartani  & H  Sutejo  (1998).  Analisis  molecular  keragaman genetik Ganoderma spp.  yang  berasosiasi  dengan penyakit  busuk  pangkal  batang  kelapa sawit. Dalam: Pros  Seminar    Perhimpunan  Bioteknologi  Pertanian , Surabaya 12-14 Maret 1997.
Jourdan  C  &  H  Rey  (1997).    Modelling  and  simulation  of the  architecture  and  development  of  the  oil  palm ( Elais guinensis Jacq.) root system. Plant & Soil 190, 223 – 246.
Nur-Ain-Izzati  MZ  &  F  Abdullah  (2008).  Disease suppression in Ganoderma -infected oil palm seedlings treated with Trichoderma harzianum . Plant Protect Sci 44 (3), 101-107.
Paterson RRM (2007). Ganoderma disease of oil palm – a white  rot  perspective  necessary  for  integrated control. Crop Protection 26, 1369-1376.
Purnamasari MI, C Prihatna, AW Gunawan &  A Suwanto (2012).  Isolasi  dan  identifikasi  secara  molekuler Ganoderma spp.  yang  berasosiasi  dengan  penyakit busuk  pangkal  batang  di  kelapa  sawit. J  Fitopatol Ind 8(1), 9-1
Sapak  Z,  S  Meon  &  ZM  Ahmad  (2008).  Effect  of endophytic  bacteria  on  growth  and  suppression  of Ganoderma  sp.  infection  in  oil  palm. Internat  J Agric & Biol 10(2), 127-132.
Shamala  S,  D  Chris,  O  Subhan  &  AS  Idris  (2008). Preliminary  studies  on  the  development  of  mono- clonal  antibodies  against  mycelia  of Ganoderma boninense ,  the  causal  pathogen  of  basal  stem  rot disease of palm oil. Malaysian J Microbiol. 2(1), 30- 34.
Suharyanto  &  TW  Darmono  (2001).  Analysis  of  protein profiles on oil palm and coconut tree to Ganoderma sp.  infection. In : Proc  of  the  2 nd Indonesian Biotechnol Conf p . 388 -395.
Susanto  A,  PS  Sudharto  &  RY  Purba (2005).  Enhanching biological  control  of  basal  stem  rot  disease ( Ganoderma  boninense )  in  oil  palm  plantations. Mycophatologia 159 (1), 153-157.
Utomo  CF    &  F  Niepold  (2000).    The  development  of diagnostic tool for in oil palm. In: Flood J, PD Bride
& M Holderness. Ganoderma Diseases of Parennial Crops. CABI Publishing.p 235-247.
Widiastuti  H,  Suharyanto,  F  Novianti,  A  Wulaningtyas  &
Trisning  (2011).  Pengujian  keefektifan  teknik inokulasi Ganoderma sp.  berdasarkan  analisis serologi. J Penelitian Kelapa Sawit 19 (1), 72-82.