(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 22-27
Uji Toksisitas Ekstrak Daun Pare Momordica charantia Linn Terhadap Larva Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test
Febrilia Mangirang 1* , Wilmar Maarisit 1 , Jeane Mongi 1 , Yessie K. Lengkey 2 , Selvana Tulandi 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
2 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
* Penulis Korespondensi; mangirangfebrilia@gmail.com Diterima: 19 Maret 2019; Disetujui : 25 Maret 2019

## ABSTRAK
Pare Momordica charantia merupakan tanaman berbuah pahit yang dapat hidup di daerah beriklim tropis, termasuk  di  kawasan  Asia.  Tanaman  isi  mengandung  beberapa  senyawa  metabolit  sekunder  antara  lain, flavanoid,  alkaloid,  saponin,  triterpenoid,  steroid  dan  glikosida.  Daun  pare  dapat  digunakan  sebagai  obat penurun  panas,  mengeluarkan cacing kremi,  dan  dapat  menyembuhkan  batuk.  Tujuan  penilitian ini  adalah untuk mengetahui nilai toksisitas ekstrak daun pare pada larva udang. Penelitian ini merupakan eksperimental dengan pendekatan post test only control group design. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode Brine Shrimp Lethality Test. Ekstrak dibuat dengan cara maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 70%. Sehingga diperoleh ekstrak kental sebanyak 77 gram dengan presentase rendemen 25,66%. Uji toksisitas dilakukan dengan menggunakan larva udang artemia salina leach yang berumur 36-48 jam. Efek toksik ekstrak diidentifikasi dengan persentase kematian larva udang menggunakan analisis probit untuk mengetahui nilai LC 50 . Suatu ekstrak dikatakan toksik apabila nilai LC 50 < 1000 ppm. Hasil penelitian menunjukan ekstrak daun pare (Momordica Charantia) bersifat toksik dengan nilai LC 50 sebesar 200,2 ppm. Kata kunci : Daun Pare, Momordica charantia,, Toksisitas, Ekstrak

## ABSTRACT
Pare  Momordica charantia)  is a  bitter fruit  plant that can live in tropical  climates,  including  in  the Asian region.  Fill  plants  contain  several  secondary  metabolites,  among  others,  flavanoids,  alkaloids,  saponins, triterpenoids, steroids and glycosides. Bitter Pare leaves can be used as a febrifuge, remove pinworms, and can cure coughs. The purpose of this study was to determine the toxicity value of leaf pare extract on shrimp larvae. This research is an experimental with post test only control group design approach. The method used in this study is the Brine Shrimp Lethality Test method. The extract was made by maceration using 70% ethanol. So as to obtain a thick extract of 77 grams with a percentage of yield of 25.66%. Toxicity tests were carried out using artemia salina leach shrimp larvae aged 36-48 hours. The toxic effects of extracts were identified by the percentage of shrimp larvae deaths using probit analysis to determine the LC 50 value. An extract is said to be toxic if the LC 50 value <1000 ppm. The results showed that pare (Momordica Charantia) leaf extract was toxic with an LC 50 value of 200.2 ppm. Keyword : Pare leaves, Momordica charantia, Toxicity, Extract

## PENDAHULUAN
Penggunaan  obat  tradisional  saat  ini semakin  diminati  karena  obat  tradisional merupakan  obat  dari  alam  yang  digunakan secara  turun  temurun  sehingga  takaran,  cara,
khasiat  dan  penggunaannya  telah  diketahui (Dewoto, 2007). Salah satu tanaman yang biasa di  manfaatkan  untuk  pengobatan  adalah  daun pare Momordica  charantia Linn.  Secara tradisional  tanaman  ini  biasa  dimanfaatkan untuk mengatasi beberapa keluhan atau
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 22-27
penyakit.  Daun  pare M.  charantia dapat digunakan  sebagai  obat  penurun  panas,  daun pare  dapat  digunakan  untuk  menyembuhkan mencret  pada  bayi,  membersihkan  darah  bagi wanita  yang  baru  melahirkan,  mengeluarkan cacing  kremi,  dan  dapat  menyembuhkan  batuk (Sudaroso,  2002).  Selain  itu  daun  pare  juga biasanya  dikonsumsi  sebagai  sayur-sayuran  di daerah Minahasa.
Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan oleh  peneliti  yaitu  berupa  skrining  fitokimia, diketahui  bahwa  tanaman  pare M.  charantia mengandung  beberapa  senyawa  metabolit sekunder  antara  lain  flavanoid,  alkaloid, saponin,  triterpenoid,  steroid,  glikosida  (Silvy, 2012).  Pemakaian  dalam  jumlah  tertentu  dapat menyebabkan  toksisitas,  maka  perlu  dilakukan skrining awal kesesuaian hanya nilai toksisitasnya.  Dalam  mempelajari  toksisitas yang  paling  awal  dilakukan  adalah  dengan menggunakan  kematian  dari  hewan  percobaan sebagai  suatu  respon  dari  pengaruh  suatu senyawa yang diuji.
Uji  toksisitas  larva  udang  merupakan salah satu pengujian toksisitas yang cepat, aman, praktis dan ekonomis untuk skrining, fraksinasi, dan penentuan bioaktivitas senyawa bahan alam. National  Cancer  Institute  United  State  of America (NCI USA) telah menemukan
hubungan  yang  signifikan  antara  pengujian toksisitas  terhadap  nauplius  udang Bhrine Shrimp Lethality Test dengan penghambatan sel tumor  manusia  secara  invitro  (Aras,  2013). Berdasarkan latar belakang tersebut, maka perlu dilakukan  penelitian  tentang  toksisitas  dari ekstrak etanol daun pare terhadap larva A. salina menggunakan metode BSLT.

## METODE PENELITIAN

## Tempat dan Waktu Penelitian
Tempat  dan  waktu  penelitian  ini dilaksanakan  di  Laboratorium  terpadu  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas  Kristen  Indonesia  Tomohon  dan Laboratorium Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam
Ratulangi Manado. Waktu pelaksanaan penelitian telah dilakukan pada bulan Desember 2018 sampai Januari 2019.

## Alat dan Bahan

## Alat
Alat  yang  digunakan  selama  penelitian adalah  gelas  kimia, Erlenmeyer ,  mikropipet, rotary  evaporator ,  batang  pengaduk,  kertas saring,  aluminium  foil,  timbangan  analitik, toples kaca, aerator, lampu pijar.

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  adalah  sampel  daun  pare  yang diperoleh  dari  Desa Tondangow  kec,  Tomohon selatan, larva udang A. salina, aquades, tisu dan etanol.

## Jenis Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  eksperimental dengan pendekatan post test-only control group design  di  Laboratorium  FMIPA  UKIT  dengan perlakuan  pemberian  ekstrak  etanol  daun  pare M.  charantia terhadap  larva A.  salina dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).

## Prosedur Penelitian

## Ekstraksi
Sampel daun pare segar sebanyak 1,5 kg dibersihkan dengan air mengalir dan dikeringkan diangin-anginkan kemudian sampel  yang sudah kering  digunting  dan  diblender  sampai  menjadi serbuk.  Serbuk  kering  daun  pare  500  gr dimaserai  dengan  etanol  70%  Larutan  yang didapatkan  ditampung  pada  gelas  erlenmeyer. Residu/filtrat dimaserasi kembali dengan pelarut yang  sama,  cara  ini  dilakukan  2-  3  kali  hingga bening. Selanjutnya larutan yang  diperoleh dari hasil  maserasi  dicampur  menjadi  satu  dan dievaporasi.  Untuk  memisahkan  ekstrak  dan pelarut, setelah itu ekstrak dikeringkan menggunakan hot plate sampai diperoleh ekstrak kering (Ginting, 2015).
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 22-27

## Uji Toksisitas Mengngunakan Metode BSLT
Sampel  yang  digunakan  untuk  uji toksisitas  adalah  ekstrak  etanol  daun  pare. Masing-masing  pengujian  dibuat  dua  kali pengulangan

## Penyiapan Hewan Uji
Penyiapan larva udang dilakukan dengan  mengambil  telur  Artemia  Salina ditimbang  sebanyak  100 mg.  Penetasan dilakukan dengan cara merendam telur tersebut dalam  air  laut  sebanyak  500  mL  dan  diberi penerangan serta diaeras (Soetjipto, 2014).

## Penyiapan Larutan
Untuk  pembuatan  larutan  stok,  ekstrak ditimbang sebanyak 200 mg kemudian dilarutkan  sampai  100  mL  dengan  air  garam, kemudian  dari  larutan  stok  2000  ppm  dibuat pengeceran 300, 200, 100, 50 dan 25 ppm.

## Uji Toksisitas
Pengujian dilakukan dengan mengambil 10 ekor hewan uji menggunakan mikro pipet lalu dimasukan  kedalam  media  uji  dengan  5 konsentrasi  larutan  uji.  Kemudian  didiamkan selama  24  jam  dan  diamati,  masing-masing dibuat  ulangan  sebanyak  3  kali.  Jumlah  larva yang mati diamati dengan kaca pembesar. Untuk mendapatkan % kematian hewan uji maka dapat menggunakan persamaan (Baud, dkk, 2014).
% 𝐾𝑒𝑚𝑎𝑡𝑖𝑎𝑛 = jumlah rata − rata hewan yang mati jumlah rata − rata hewan percobaan 100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Preparasi Sampel
Sampel  diambil  dari  Tomohon  Selatan Desa  Tondangow.  Daun  Pare  dipilih  dan dipisahkan dari yang masih dapat digunakan dan didapat  sebanyak  1,5  kg  lalu  dibersihkan  dan dikering  anginkan  didalam  ruangan  pada  suhu 250C  tanpa  bantuan  sinar  matahari  selama  2 minggu. Tujuan dari pengeringan tanpa bantuan sinar matahari langsung adalah agar kandungan
senyawa  yang  terdapat  didalam  sampel  tidak mengalami kerusakan. Setelah kering sampel di potong  kecil-kecil  lalu  di  blender  sampai menjadi serbuk.
Gambar 1. (a) Pengeringan Hari ke-1
(b) Pengeringan Hari ke-14 dirajang Serbuk  kering  daun  pare  yang  didapat sebanyak 300 gram, lalu diukur kadar air dengan cara sebagai berikut:
𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑎𝑖𝑟 (%) = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑠𝑒𝑔𝑎𝑟 − 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑘𝑒𝑟𝑖𝑛𝑔
berat sampel segar 𝑥 100% 𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑎𝑖𝑟 (%) = 3000 𝑔𝑟𝑎𝑚−300 𝑔𝑟𝑎𝑚 3000 gram 𝑥 100% = 2,99 %
Jadi, kadar air sampel sebanyak 2,99

## Hasil Ekstraksi Daun Pare
Proses  ekstraksi  menggunakan  metode maserasi.  Metode  maserasi  merupakan  cara ekstraksi  yang  mudah  dilakukan  dan  dalam tahapannya  tidak  dilakukan  proses  pemanasan sehingga  menghindari  kerusakan  dari  zat  aktif yang  dikandung  oleh  simplisia  (Agoes,  2007). Metode  ini  merupakan  metode  ekstraksi
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 22-27
menggunakan pelarut, pada penelitian ini pelarut yang  digunakan  adalah  etanol  70%.  Hal  ini dikarenakan  etanol  mempunyai  titik  didih  yang rendah  dan  cenderung  aman,  tidak  beracun  dan tidak  berbahaya.  Pada  konsentrasi  70%  etanol sangat efektif dalam menghasilkan jumlah bahan aktif  yang  optimal,  dimana  bahan  penggangu hanya  skala  kecil  yang  turut  kedalam  cairan pengekstraksi (Azis, dkk, 2014).
Proses  maserasi  dilakukan  dengan merendam 300gram simplisia daun pare dengan etanol  70%  selama  3  x  24  jam  kemudian difiltrasi  dengan  menggunakan  kertas  saring. Filtrat  yang  diperoleh  dipekatkan  dengan menggunakan rotary  evaporator dengan  suhu 40°C  hingga  diperoleh  ekstrak  kental  sebanyak 77  gram.  Rendemen  ekstrak  total  dihitung dengan rumus sebagai berikut:
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 = 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 (𝑔𝑟) berat sampel (gr) 𝑥 100 %
hasil  nilai  rendemen  ekstrak  etanol  daun  pare dapat dilihat pada Table 2.2

## Tabel 1. Rendemen Ekstrak Daun Pare.
Sampel Berat ekstrak Berat sampel % rendamen Momordica charantia Linn 77 gram 300 gram 25,66%

## Penetasan Artemia salina Leach
Penetasan artemia ini  menggunakan wadah  plastik  (Gambar  2).  air  laut  yang digunakan  berasal  dari  perairan  Manado  yang diambil  ±  10  meter  dari  tepi  pantai,  hal  ini dikarenakan  air  laut  yang  di  tepi  pantai  telah tercemar oleh polutan karena adanya kegiatan di sepanjang garis pantai, dan dapat pula tercemar secara  tidak  langsung,  salah  satunya  melalui aliran sungai. Kemudian air laut yang didapatkan dituangkan  langsung  ke  dalam  wadah  dengan ketinggian di atas sekat bagian bawah.
Gambar 2. Penetasan telur Artemia salina Leach (Dokumentasi pribadi, 2019)
Penelitian ini digunakan larva yang telah berumur  36–48  jam,  hal  ini  dikarenakan  larva artemia ini dapat bertahan hidup selama 48 jam tanpa diberi makanan. Larva yang baru menetas berwarna  kemerah-merahan  karena  masih mengandung makanan cadangan. Setelah 24 jam menetas, cadangan makanan larva habis. Hal ini disebabkan karena setelah berumur 24 jam larva akan memasuki fase instar I dimana pada tahap ini  larva  belum  bisa  makan  karena  mulut  dan saluran  pencernaannya  belum  terbentuk  secara sempurna.
Lalu  setelah  memasuki  fase  instar  I  akan bermetamorfosis menjadi instar II, dimana instar II sudah memiliki mulut dan system pencernaannya  telah  sempurna.  Ekstrak  yang ada  di  lingkungan  larva  masuk  ke  dalam  tubuh larva  dan  menyebabkan  kematian  larva.  Lalu pada saat larva menjadi instar III atau lebih dari 48  jam,  tubuhnya  akan  bermetamorfosis  lebih lanjut dan  meningkatkan ketahanan tubuh  larva (Mudjiman,  2004).  Mekanisme  kematian  pada larva  diduga  karena  adanya  senyawa-senyawa yang  terpapar  pada  larva  melalui  kulit,  saluran pencernaan (oral), kemudian terabsorbsi menuju sistem  sistemik  sehingga  menimbulkan  efek toksik  pada  organisme  (Wirasuta  dan  Niruri, 2006).  Berdasarkan  kriteria  standar  larva dikatakan  mati  apabila  larva  tidak  bergerak selama  10  detik  observasi.  Observasi  kematian larva  dilakukan  setelah  24  jam  pemberian ekstrak
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 22-27

## Hasil Uji Toksisitas Metode BSLT
Uji toksisitas dilakukan dengan menggunakan  metode  BSLT.  Pada  proses  ini terlebih dahulu dibuat larutan stok pada ekstrak etanol daun pare (Momordica charantia) dengan cara  ekstrak  ditimbang  sebanyak  200  mg  lalu diencerkan dengan air laut sampai 100 mL. Lalu dibuat pengenceran dengan konsentrasi akhir 25 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, dan 300 ppm. Pada  uji  ini  digunakan  kontrol  dengan konsentrasi 0 ppm, tanpa dilakukan penambahan ekstrak.  Hal  ini  dilakukan  untuk  mengetahui pengaruh  air  laut  maupun  faktor  lain  terhadap kematian  larva.  Sehingga  dapat  dipastikan bahwa  kematian  larva  hanyalah  akibat  dari penambahan ekstrak yang dilakukan. Kemudian dilakukan  pengamatan  1  x  24  jam  terhadap kematian larva A. salina. pada setiap wadah uji dalam  berbagai  konsentrasi  perlakuan  ekstrak daun pare M. charantia .
Kematian  larva A.  salina secara keseluruhan  ditunjukkan  pada  Tabel  3.  Dari tabel  tersebut  dapat  diketahui  bahwa  berbagai konsentrasi  ekstrak  daun  pare  Momordica charantia  pada  percobaan  ini  memperlihatkan pengaruh yang berbeda terhadap kematian larva Artemia  salina  Leach.  Hasil  penelitian  dapat dilihat pada Tabel. 2
% 𝐾𝑒𝑚𝑎𝑡𝑖𝑎𝑛 = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑙𝑎𝑟𝑣𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑚𝑎𝑡𝑖
Jumlah larva total 𝑥 100 %
Tabel  2.  Data  persentase  kematian  larva Artemia  salina  Leach  dari  ekstrak  etanol
Daun Pare (Momordica charantia Linn)
Ulangan Konsentrasi (ppm) 25 ppm 50 ppm 100 ppm 200 ppm 300 ppm 1 2 3 3 3 2 3 4 3 3
4 5 6 7 8 10 10 10 Jumlah total 8 10 12 21 30 % kematian 26,66% 33,33 % 40% 70% 100%
Berdasarkan  Tabel  di  atas  dapat disimpulkan bahwa jumlah kematian larva pada konsentrasi  25  ppm  adalah  26,66%  sedangkan
pada konsentrasi 50 ppm adalah 33,33%, hal ini menunjukkan  peningkatan  kematian  larva  pada kosentrasi  25  ke  50  ppm  sebesar  6,67%. Konsentrasi 100 ppm, total kematian larva yaitu 40% terjadi peningkatan dari kosentrasi 50 ppm ke 100 ppm sebesar 6,67%. Pada konsentrasi 100 ppm  angka  kematian  sebesar  40%  terjadi peningkatan dari kosentrasi 100 ppm ke 200 ppm sebesar  30%.  Konsentrasi  200  ppm,  total kematian  larva  yaitu  70%  terjadi  peningkatan dari  kosentrasi  200  ppm  ke  300  ppm  sebesar 30%.  Berdasarkan  hasil  yang  telah  didapatkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin  tinggi  pula  tingkat  kematian  larva (Meyer et al ., 1982). Hubungan antara toksisitas dan antikanker yaitu dimana toksisitas merupakan kemampuan suatu zat atau senyawa dalam  menghasilkan  racun  atau  membunuh suatu organisme hidup.

## Penetapan LC 50
Hasil analisis probit menggunakan SPSS menunjukan nilai LC 50 dari ekstrak etanol daun pare  sebesar  200,2  ppm.  Berdasarkan  hasil analisis  diketahui  bahwa  ekstrak  etanol  daun Pare M. charantia memiliki toksisitas pada larva Artemia salina Leach sehingga dapat dikembangkan pada penelitian lebih lanjut yaitu berupa  isolasi  senyawa  untuk  mengetahui senyawa  apa  yang  berpotensi  sebagai  kandidat anti kanker sehingga dapat dikembangkan untuk penemuan  obat  anti  kanker.  Hubungan  antara toksisitas dan anti kanker yaitu dimana toksisitas merupakan kemampuan suatu zat atau senyawa dalam  menghasilkan  racun  atau  membunuh suatu  organisme  hidup.  Sedangkan  kanker menurut National  Cancer  Institute (2009), adalah suatu istilah untuk penyakit di mana sel- sel membelah secara abnormal tanpa kontrol dan dapat  menyerang  jaringan  sekitarnya. Sehingga dibutuhkan efek toksik dari suatu senyawa yang akan digunakan untuk membunuh atau menghambat pertumbuhan sel-sel yang membelah secara abnormal.
Suatu  ekstrak  dikatakan  toksik  jika harga  LC 50 dibawah  1000  ppm.  Jika  hasil  uji
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 22-27
BSLT menunjukan suatu ekstrak bersifat toksik maka  dapat  dikembangkan  ke  penelitian  lebih lanjut  untuk  mengisolasi  senyawa  sitotoksik tumbuhan  sebagai  usaha  pengembangan  obat alternatif anti kanker.

## KESIMPULAN
Berdasakan  hasil  penelitian  dan  hasil analisis probit dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun  pare  M.  charantia  dapat  memberikan  efek toksik  terhadap  Larva  udang  menggunakan metode  BSLT  dengan  nilai  LC 50 sebesar  200,2 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes,  G.  (2007).  Teknologi  Bahan  Alam. Bandung: Penerbit ITB Press Aras,Tri.  R.  (2013).  Uji  Toksisitas  Ekstrak Teripang  Holothuria  scabra  Terhadap Artemia  salina.  [Skripsi]  Fakultas  Ilmu
Kelautan  Dan  Perikanan.  Universitas
Hasanuddin. Makassar. hal 9
Azis  Tamzil,  Febrizky  Sendry,  Mario  D.  Aris.
(2014).  Pengaruh  Jenis  Pelarut  Terhadap
Persen  Yield  alkaloid  Dari  Daun  Salam India (Murraya Koenigii). Teknik Kimia. 2
(20): 1-6
Baud, G.S., Sangi, M.S., Koleangan, Harry. S.J.
(2014). Analisis Senyawa Metabolit Sekunder Dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Batang Tanaman Patah Tulang (Euphorbia
tirucalli  L.)  Dengan  Metode  Brine  Shrimp
Lethality Test (BSLT). Jurnal Ilmiah Sains. 14 (2): 106-111 Dewoto  H.R.  (2007).  Pengembangan  Obat Tradisional Indonesia menjadi Fitofarmaka.
Majalah Kedokteran Indonesia Vol 57 (7) :
205-11
Ginting, I P.C., (2015), formasi sediaan  masker gel  dari  ekstrak  etanolik  daun  pepaya.
Skripsi Universitas sumatera utama, medan
Meyer  BN,  Ferrign  NR,  Putman  JE, jacobsen  LB,  Michols  DE,  Laughlin  JL, (1982).
Brine  Shirmp: A  convenient  General  Bioassay for  active  plant  contituent .  Planta  Medica.
45: 31-34.
Mudjiman,  A.  (2004).  Makanan  Ikan.  Edisi Revisi Penebar Swadaya. Jakarta. hal 192.
Priyanto.  (2009).  Toksikologi:  Mekanisme,
Terapi Antidotum dan Penilaian Resiko. Depok: Lembaga Studidan Konsultasi Farmakologi. hal 55-152. Silvy  A.  (2012).  Apsorbsi,  Emulsifikasi  dan
Antibakteri  Estrakdaun  Pare  ( Momordica charuntia .) Bogor: Fakultas FMIPA, Institut Pertanian Bogor
Sudarsono D.G., Subagus W. (2002) Tumbuhan Obat  II.  Hasil  Penelitian,  Sifat-  Sifat  dan Penggunaan.  Yogyakarta:  Penerbit  PSOT UGM.
Wirasuta,  I  Made,  A.  G,  dan  Niruri,  R.  (2006).
Buku  Ajar  Toksikologi  Umum.  Jurusan Farmasi. Universitas Udayana. hal 124.