e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume III No 2 Februari 2015 ISSN: 2302-3600
PENGARUH JINTAN HITAM ( Nigella sativa ) TERHADAP HISTOPATOLOGI   ORGAN KAKAP PUTIH ( Lates calcarifer ) YANG TERINFEKSI VIRAL NERVOUS NECROSIS SECARA BUATAN
Ely Novisa * , Tarsim † dan Esti Harpeni †‡

## ABSTRAK
Infeksi Viral Nervous Necrosis (VNN) pada kakap putih ( Lates calcarifer ) dapat menyebabkan  kerusakan  saraf  sentral  sehingga  menimbulkan  kematian  massal sampai  100%  dalam  waktu  singkat.  Salah  satu  penanganan  terhadap  penyakit tersebut  dengan  meningkatkan  sistem  imun  kakap  putih.  Jintan  hitam  ( Nigella sativa )  merupakan  tanaman  yang  dapat  dijadikan  bahan  imunostimulan. Imunostimulan  dapat  meningatkan  kekebalan  natural  dan  adaptif  pada  ikan sehingga  dapat  dijadikan  alternatif  cara  dalam  upaya  perlindungan  terhadap serangan  penyakit.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh  jintan hitam terhadap histopatologis organ kakap putih yang diuji tantang VNN. Kakap putih  dimasukkan  ke  dalam  4  bak  pemeliharaan  dengan  4  perlakuan  dosis  jintan hitam. Perlakuan A merupakan perlakuan dengan penambahan jintan hitam 0 g/kg pakan,  perlakuan  B  penambahan  jintan  hitam  25  g/kg  pakan,  perlakuan  C penambahan jintan hitam 50 g/kg pakan dan perlakuan D penambahan jintan hitam 75g/kg pakan. Perlakuan diterapkan selama 44 hari, pada hari ke-37 dilakukan uji tantang  dengan  menyuntikkan  isolat  VNN  ke  tubuh  kakap  putih  secara intra peritoneal dengan  dosis  0,1  ml/ekor.  Hasil  analisis  preparat  histopatologis  organ otak  dan  mata  kakap  putih  perlakuan  A  ditemukan  kerusakan  patologis  berupa inclusion body , hipertropi, vakuola dan nekrosis. Sedangkan pada perlakuan B, C dan  D  tidak  ditemukan  kerusakan  patologis.  Hasil  tersebut  membuktikan  bahwa dengan  penambahan  jintan  hitam  dapat  mencegah  kerusakan  patologis  akibat infeksi  VNN.  Perlakuan  B  merupakan  dosis  jintan  hitam  yang  optimal  untuk mencegah kerusakan jaringan akibat infeksi VNN. Penambahan jintan hitam dalam pakan  dapat  meningkatkan  imunitas  kakap  putih  sehingga  dapat  mencegah terjadinya kerusakan jaringan akibat infeksi VNN.
Kata kunci : VNN, kakap putih, jintan hitam, imunostimulan, histopatologi
* Mahasiswa Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Pertanian  Universitas Lampung
† Dosen Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Lampung
‡ email: edypeni@yahoo.com
Pendahuluan Viral Nervous Necrosis (VNN) merupakan virus yang sering menginfeksi kerapu macan ( Epinephelus  fuscogutatus )  dan  kakap putih  ( Lates  calcarifer )  (Chi et  al. , 1997).  Infeksi  VNN  pada  kakap  putih dapat  menyebabkan  kematian  atau kerusakan  saraf  sentral  sehingga  ikan sulit untuk merespon berbagai rangsangan  dan  tubuh  mengalami ketidakseimbangan dalam hal pergerakan (Amelia dan Slamet, 2012). Kematian  pada  sistem  budidaya  akan berdampak pada kerugian bagi pembudidaya karena mengalami penurunan  hasil  produksi  (Roza  dkk., 2010). Upaya pencegahan infeksi VNN menggunakan vaksinasi  menjadi  upaya yang cukup banyak dilakukan. Namun, penggunaan vaksinasi mempunyai kelemahan karena hanya meningkatkan ketahanan  humoral  dan  hanya  dapat mengatasi  patogen  tertentu  (spesifik)
(Roza dkk., 2010). Cara untuk
pencegahan  penyakit  yaitu  dengan pemberian  imunostimulan  (Ridlo  dan Rini,  2009).  Imunostimulan  tidak meninggalkan  residu  dan  aman  untuk lingkungan  (Marentek  dan  Manoppo, 2013).  Jintan  hitam  ( Nigella  sativa ) adalah  tanaman  yang  dapat  dijadikan sebagai  bahan  imunostimulan  (Dorucu et al. , 2009; Shewita et al. , 2011). Jintan hitam telah diuji pada manusia (Najwi et al. ,  2008;  Sangi et  al. ,  2008)  dan  juga hewan  (Sater,  2009).  Jintan  hitam memiliki  kemampuan  antivirus  (Zaher et  al., 2008);  antifungi  (Suthar,  2010), antibakteri  (Hosseinzadeh et  al. ,  2007; Hannan et  al. ,  2008;  Dorucu et  al. , 2009),  anti  hipertensi  (Tasawar et  al. , 2011),  dan  antiparasit  (Ayaz et  al. , 2007).    Ekstrak  jintan  hitam  juga terbukti  mampu  meningkatkan  sistem
imun non-spesifik dan spesifik (BPOM, 2013).  Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui  pengaruh  jintan  hitam terhadap  imunitas  kakap  putih  yang terinfeksi  VNN  secara  buatan  melalui uji histopatologi.

## Bahan dan Metode
Penelitian ini dilaksanakan pada Agustus-Oktober  2013  di  Balai  Besar Pengembangan Budidaya Laut (BBPBL)  Lampung.  Sampel ikan  yang positif  terinfeksi  VNN  diperoleh  dari Laboratorium  Kesehatan  Ikan  dan
Lingkungan  Balai  Budidaya  Air  Payau (BBAP)  Situbondo.  Ikan  tersebut dihomogenkan  dengan  buffer  ekstrak menggunakan mortar. Homegenat yang dihasilkan  difilter  menggunakan  filter Millipore  0,45  μm.  Kemudian  filtrate disimpan dalam freezer -40 o C. Penelitian terdiri dari 4 perlakuan yaitu: A: tanpa penambahan jintan hitam B: penambahan jintan hitam 25g/kg pakan
C: penambahan jintan hitam 50 g/kg
pakan D: penambahan jintan hitam 75 g/kg pakan Kakap putih (ukuran 10 cm) dipelihara dalam bak pemeliharaan dengan kepadatan  15  ekor/bak  selama  45  hari dengan pemberian pakan selama 2 kali sehari.  Pakan  diberikan  secara ad libitum. Pada  hari  ke-37  dilakukan  uji tantang  VNN  dengan  dosis  pemberian 0,1 ml/ikan. Isolat VNN diinjeksikan ke ikan  uji  secara intra  peritoneal.
Pencampuran jintan hitam dalam pakan ditambahkan putih telur untuk
meningkatkan  daya  rekat.  Setelah infeksi,  kakap  putih  tetap  dipelihara selama 7 hari.  Ikan  yang menunjukkan gejala klinis terinfeksi VNN dinekropsi diambil  organ  mata  dan  otaknya.  Ikan yang  telah  dinekropsi  selanjutnya  diuji
menggunakan  metode  uji  histopatologi dengan  pewarnaan  hemaktosilin  dan eosin  dan  diamati  dibawah  mikroskop perbesaran 400 kali.
Hasil dan Pembahasan Hasil pemeriksaan preparat histopatologi  organ  otak  kakap  putih ditemukan kerusakan berupa hipertropi, vakuola, inclusion  body dan  nekrosis
(Gambar 1). Preparat histopatologi yang ditemukan  kerusakan  adalah  preparat histopatologi  ikan  perlakuan  A.  Pada perlakuan  lainnya  tidak  ditemukan kerusakan.  Kerusakan  organ  otak  yang ditemukan  pada  perlakuan  A  berupa hipertropi 100%, vakuola 100%, inclusion  body 33,34%  dan  nekrosis 100% (Tabel 1).
Gambar  1.  Preparat  histopatologi  otak  kakap  putih  ( Lates  calcarifer ).  Preparat organ otak yang diinjeksi VNN perlakuan A (kiri), preparat organ otak normal  (kanan).  A  ( inclusion  body );  B  (nekrosis);  C  (vakuola);  D
(hipertropi). Perbesaran mikroskop 400X. Pewarnaan HE.
Gambar  2.  Preparat  histopatologi  mata  kakap  putih  ( Lates  calcarifer ).  Preparat organ  mata  yang  diinjeksi  VNN  (kiri),  preparat  organ  mata normal/tanpa  diinjeksi  VNN  (kanan).  A  (hipertropi);  B  (nekrosis);  C (vakuola). Perbesaran mikroskop 400X. Pewarnaan HE.
Tabel 1. Prevalensi infeksi VNN pada otak kakap putih ( Lates calcarifer ). Perlakuan Hipertropi Vakuola Inclusion body Nekrosis A (n=3) 3 (100%) 3 (100%) 1 (33%) 3 (100%) B (n=3) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) C (n=3) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) D (n=3) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) Hasil pemeriksaan preparat histopatologi  organ  mata  kakap  putih ditemukan kerusakan berupa hipertropi, vakuola dan nekrosis (Gambar  2).  Jenis  kerusakan  organ tersebut hanya ditemukan pada
perlakuan  A.  Pada  perlakuan  lainnya tidak  ditemukan  kerusakan  organ.
Kerusakan organ mata yang ditemukan pada  perlakuan  A  berupa  hipertropi sebesar  100%,  vakuola  100%  dan nekrosis 100% (Tabel 2).
Tabel 2. Prevalensi infeksi VNN pada mata kakap putih ( Lates calcarifer ).
Perlakuan Hipertropi Vakuola Inclusion body Nekrosis A(n=3) 3 (100%) 3 (100%) 0 (0%) 3 (100%) B (n=3) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) C (n=3) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) D (n=3) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)
Inclusion  body merupakan  ciri  adanya infeksi  virus  pada  organ  target. Inclusion  body merupakan  proses  awal sel mengalami nekrosis dengan ditandai adanya  bintik  hitam  pada  sitoplasma. Inclusion body , vakuola, hipertropi dan nekrosi  merupakan  tahapan  kerusakan organ  sebagai  akibat  infeksi  VNN (Amelia  dan  Slamet,  2012).  Hipertropi yang sering juga disebut pembengkakkan sel merupakan terjadinya pertumbuhan/pembesaran secara berlebihan pada sel.
Pembengkakkan  sel  terjadi  karena muatan elektolit diluar dan di dalam sel dalam keadaan tidak seimbang sehingga menyebabkan  membran  sel  terganggu. Terbentuknya  hipertropi  akan  diiringi dengan  terbentuknya  vakuola  pada sitoplasma. Pada preparat histopatologi, vakuola ditemukan dalam bentuk ruang kosong  dalam  sel.  Vakuola  muncul sebagai  akibat  pembengkakan  sel  yang
mengindikasi terjadi degenerasi sel. Sel hipertropi akan menyebabkan membran sel pecah yang mengeluarkan materi sel sehingga  menyebabkan  kematian  sel (nekrosis).  Kematian  sel-sel  pada preparat  histopatologi  ditandai  dengan bidang kosong pada preparat tersebut. Otak dan mata merupakan organ tempat berkumpulnya  saraf-saraf.  Sel-sel  saraf pada organ otak dan mata menjadi target infeksi  VNN.  Oleh  karena  itu,  organ otak  dan  mata  menjadi  sangat  sensitif terhadap  infeksi  VNN.  Hal  ini  sesuai dengan Chi et al. (1997), infeksi  VNN menyerang  saraf-saraf  otak  sehingga merusak  motorik  ikan.  VNN  yang terbawa  melalui  sirkulasi  darah  akan dengan  cepat  merusakan  sel-sel  saraf. Hasil pemeriksaan
mikroskopis membuktikan  bahwa  ikan  kakap  putih perlakuan A positif terinfeksi VNN dan mengalami kerusakan jaringan terparah dibandingkan perlakuan lainnya.
Perlakuan  A  merupakan  perlakuan tanpa  pemberian  jintan  hitam  pada pakan ikan kakap putih, sedangkan pada pelakuan  B,  C  dan  D  merupakan perlakuan pemberian jintan hitam  pada pakan kakap putih.
Jintan hitam dalam studi ini membuktikan dapat menghambat infeksi VNN pada kakap putih. Hal ini terjadi  karena  jintan  hitam  memiliki kemampuan  meningkatkan  imunitas ikan  kakap  putih  putih.  Hasil  yang diperoleh  sesuai  dengan  penelitian- penelitian  yang  sebelumnya  pernah dilakukan.  Penambahan  jintan  hitam pada  pakan  ikan  mampu  melindungin ikan  dari  infeksi  VNN  (Tarsim  dkk., 2013).  Hal  serupa  ditemukan  bahwa,
ekstrak jintan hitam mampu meningkatkan respon imun pada rainbow  trout  ( Oncorhynchus  mykiss ) (Dorucu et  al. ,  2009).  Bahkan  tidak hanya  pada  ikan,  ekstrak  jintan  hitam juga mampu meningkatkan laju pertumbuhan, sistem imun dan hematologis pada ayam  broiler  ( Gallus domesticus) (Shewita et al. , 2011). Kesimpulan Jintan  hitam  mampu  meningkatkan imunitas ikan sehingga dapat menghambat infeksi VNN. Penambahan jintan hitam 25 g dalam 1 kg  pakan  dapat  mencegah  terjadinya kerusakan jaringan akibat infeksi VNN.

## Daftar Pustaka
Amelia,  N.  dan  Slamet  B.P.  2012. Pengaruh  ekstak  daun  jambu biji  ( Psidium  guajava )  untuk menginaktifasi  Viral  Nervous Necrosis  (VNN)  pada  ikan
kerapu ( Epinephelus fuscoguttatus ).  J.  Aquaculture
Management  and  Technology 1:264-278.
Ayaz, E., Yilmaz, H. Ozbek, H., Tas, Z. and  Ozlem  Orunc.    2007. Effect  of Nigella  sativa L.  oil on rat-peritoneum macrophage phagocyte activity and capacity. Saudi Med. 28:1654- 1657. Chi, S.C., Lo, C.F., Kou, G.H., Chang, P.S., Peng, S.E. and Chen, S.N. 1997. Mass mortalities association with Viral Nervous Necrosis (VNN) disease in two species of hatchery grouper. J. Fish Disease 20:185-193.
Badan Pengawasan Obat dan Makanan. 2013.  Jintan  hitam  sebagai imunostimulan.  InfoPOM  14 No. 1 Januari – Februari 2013. Dorucu,M., Colak, S.O., Ispir, Altinterim,B.,  and  Celayer,  Y. 2009.    The  effect  of  black cumin seeds, Nigella sativa , on the immune response of rainbow  trout, Oncorhynchus mykiss . Mediterranean Aquaculture Journal 2:27-33.
Hannan, A., Saleem, S., Chaudhary, S. and Muhammad. B. 2008. Anti bacterial  activity  of Nigella sativa against clinical isolate of methicillin resistent Staphylococcus aureus . J. Ayub  Med  Coll  Abbottabad. 20:72-74. Hosseinzadeh,  S.,  Bazzaz,  B.S.  and Haghi, M.M. 2007. Antibacterial  activity  of  total extracts  and  essential  oil  of
Nigella sativa L. seeds in mice. Pharmacolgyonline 2:429-435.
Marentek, G.A. dan Manoppo, H. 2013. Evaluation of the use of garlic ( Allium  sativum )  in  enhancing non  specfic  immune  respone and  growth  of  nile  tilapia ( Oreochromis niloticus ).  J. Budidaya Perairan 1:1-7.
Najwi, A., Haque, M., Naseeruddin, M.
and Khan, R.A. 2008. Effect of Nigella  sativa oil  various clinical and biochemical parameters of metabolic syndrome.  Int  J  Diabetes  &
Metabolism. 16:85-87.
Ridlo,  A.  dan  Rini,  P.  2009.  Aplikasi ekstrak  rumput  laut  sebagai agen  imunostimulan  sistem pertahanan  non  spesifik  pada udang ( Litopennaeus vannamei ).  Ilmu  Kelautan.14: 133-137. Roza, D., Johnny, F. and Zafran. 2010. Pengembangan  vaksin  bakteri untuk  meningkatkan  imunitas ikan kerapu macan ( Epinephelus fuscoguttatus ) terhadap penyakit infeksi. Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur Indonesia, 2010. p. 939-944. Sangi, S., Ahmed, S.P., Channa, M.A., Ashfaq,  M.  and  Mastoi,  S.M. 2008.  A  new  and  novel treatment of opioid dependence  : Nigella  sativa
500  mg.  J  Ayub  Med  Coll Abbottabad. 20:118-124.
Sater,  K.A.A.  2009.  Gastroprotective effects of Nigella sativa oil on the formation of stress gastritis in  hypohtyroidal  rats.  Int  J Physiol Pathophysiol Pharmacol. 1:143-149. Shewita,  R.S.  and  Thaha,  A.E.  2011. Effect of dietary supplementation  of  different levels  of  black  seed  ( Nigella sativa L.) on growth performance,  immunological, hematological and carcass parameters of broiler chicks. J. Word  Academy  of  Science, Engineering  and  Technology. 53:788-794
Suthar,  M.P.,  Patel,  P.N.,  Shah,  T.G. and  Patel,  R.K.  2010.  In  vitro screening  of Nigella  sativa seeds for antifungal activity. J. Pharmaceutical  and  Applied Sciences. 1:86-91.
Tarsim,  Setyawan,  A.,  Harpeni,  E.  and Pratiwi, A.R. 2013. The effication  of  black  cummin ( Nigella sativa ) as immunostimulant to humpback grouper ( Cromileptes altivelis ) againts  VNN  (Viral  Nervous Necrosis)  infection.  Prosiding Seminar  Nasional  Sains  dan Teknologi, Indonesia, 2013. p. 525-532
Tasawar,  Z.,  Siraj,  Z.,  Ahmad,N., Mushtaq H. and Lashari. 2011. The Effect on Nigella sativa on lipid  profile  in  patients  with stable  coronary  artery  disease in Multan, Pakistan. J. Nutrition. 10:162-167.
Zaher, K.S., Ahmad W.M. and Zerizer,
S.N. 2008. Observation on the biological  effects  of  black cumin  seed  ( Nigella  sativa ) and green tea ( Camellia sinensis ). J. Global Veterinary.
2:198-204.