Pertumbuhan Kalus Eksplan Rimpang Jahe Merah ( Zingiber officinale Rosc.) pada Berbagai Konsentrasi Sukrosa Secara In Vitro
The Growth Callus of  Red Ginger (Zingiber officinale Rosc.) Explant on Different Sucrose Concentration In Vitro
Ilma Kherasani 1 , Erma Prihastanti 2 *, Sri Haryanti 2
1 Program Studi Biologi, Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro
2 Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH, Tembalang, Semarang
*Email : eprihast@yahoo.co.id
Diterima 10 Agustus 2016/Disetujui 17 Februari 2017

## ABSTRAK
Sukrosa  adalah  disakarida  yang  merupakan  produk  fotosintesis  tidak  langsung.  Penelitian  ini  dilakukan dengan metode in vitro dengan cara inisiasi kalus untuk menginduksi kalus dari eksplan mata tunas rimpang jahe  merah    ( Zingiber  officinale Rosc).  Konsentrasi  senyawa  osmotik  dari  medium  menjadi  faktor  penting untuk  pertumbuhan  kalus.  Selain  sebagai  sumber  karbon  dan  sumber  energi,  sukrosa  yang  terserap mempengaruhi  tekanan  osmotik  sehingga  berperan  dalam  pemanjangan  sel.  Penelitian  ini  dilaksanakan dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan satu faktor yaitu variasi konsentrasi sukrosa. Konsentrasi sukrosa sebagai perlakuan adalah 20 g/l (S1); 30 g/l (S2); 40 g/l (S3); dan 50 g/l (S4), masing- masing  5  ulangan.  Peningkatan  berat  basah  kalus tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan  konsentrasi  sukrosa  30 g/l.  Sedangkan  berat  kering  kalus  tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan  konsentrasi  sukrosa  50  g/l,  semakin banyak  jumlah  sukrosa  dalam  media  maka  semakin  besar  berat  kalus.  Namun  berdasarkan  uji  statistik ANOVA,  pemberian  variasi  konsentrasi  pada  pertumbuhan  kalus  menunjukkan  tidak  berbeda  nyata.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa warna kalus yang diamati dari konsentrasi yang berbeda menunjukkan warna putih kekuningan dan dengan tekstur remah.
Kata kunci : Zingiber officinale Rosc, pertumbuhan, kalus, sukrosa

## ABSTRACT
Sucrose  is  a  disaccharide  which  is  a  product  of  indirect  photosynthesis.  Sucrose  serves  as  forming  the  cell components and energy sources.This research was conducted by in vitro method  of callus initiation to induce callus  from  the  explant  buds  rhizome  of  Zingiber  officinale  Rosc.  Osmotic  compound  concentration  of  the medium  is  an  important  factor  for  the  growth  of  callus.  Aside  from  being  a  source  of  carbon  and  energy sources,  absorbed  sucrose  affecting  the  osmotic  pressure  that  play  a  role  in  cell  elongation.  This  study  was conducted  using  a  completely  randomized  design  (CRD)  with  one factor  varying  concentrations  of  sucrose. Sucrose concentration as the treatment is 20 g / l (S1); 30 g / l (S2); 40 g / l (S3); and 50 g / l (S4), each 5 replicates. The highest increase in callus fresh weight was obtained at treatment concentrations of sucrose 30 g /  l.  While  the  dry  weight  obtained  at  the  highest  callus  treatment  of  sucrose  concentration  of  50  g  /  l, increasing  of  sucrose  number  in  the  media  is  equivalent  with  callus  weight.  However,  based  on  ANOVA statistical  test,    various  concentrations  on  the  callus  growth  showed  no  significant  difference.  The  results showed  that  the  callus  observed  color  from  different  concentrations  showed  a  yellowish  white  color  and crumb texture.
Keywords : Zingiber officinale Rosc, growth, callus, sucrose

## PENDAHULUAN
Jahe  merah  ( Zingiber  officinale Rosc.) merupakan  salah  satu  komoditas  ekspor  penting dan  bahan  baku  obat  tradisional  serta  fitofarmaka yang banyak digunakan dalam industri obat herbal di  Indonesia.  Komoditas  ini  juga  berperan  cukup berarti  dalam  penyerapan  tenaga  kerja  dan penerimaan devisa negara.
Rendahnya  variabilitas  genetik  plasma nutfah  jahe,    menyebabkan  peluang  untuk memperoleh  sumber  gen  ketahanan  terhadap penyakit layu bakteri oleh Pseudomonas solonacearum semakin  kecil.  Pengujian  pada  tiga tipe  jahe,  menunjukkan  bahwa  jahe  gajah  paling peka  terhadap  penyakit  layu  bakteri,  sedangkan jahe  merah  paling  toleran  (Hadad et  al .,  1989).
Penurunan  produksi  disebabkan  oleh  turunnya produksi  di  sentra  pengembangan  jahe  utama (Jawa Barat) akibat serangan organisme pengganggu  tanaman  (OPT)  dan  budidaya  yang kurang  optimal  (BPS,  2004).  Salah  satu  upaya yang  dapat  dilakukan  untuk  mengatasi  masalah penyakit  tular  benih,  adalah  menyediakan  benih sehat  bebas  penyakit  melalui  kultur  jaringan  ( In vitro ).
Konsentrasi  senyawa  osmotik  dari  medium menjadi  faktor  penting  untuk  pertumbuhan  kalus. Umumnya produksi kalus meningkat pada medium yang  tekanan  osmotiknya  tinggi  (Percy et  al ., 2000). Tekanan  osmotik  tersebut  dapat  ditentukan oleh  sukrosa,  yang  juga  berfungsi  sebagai  sumber karbon  (Van  Creij et  al .,  1999).  Pendewasaan embrio dapat diperoleh dengan cara mengkulturkan  massa  pro-  embriogenk  pada konsentrasi  sukrosa  20  g/l-  50  g/l.  Sukrosa  yang dihidrolisis  oleh  enzim  invertase  menjadi  glukosa dan  fruktosa,  akan  menjadi  substrat  yang diperlukan  untuk  pertumbuhan  (Merkle et  al ., 1990).
Penelitian regenerasi melalui tahapan pembentukkan  kalus  telah  dilaporkan  dalam beberapa  penelitian  terdahulu,  salah  satunya  yaitu pengaruh  variasi  konsentrasi  sukrosa  terhadap pertumbuhan  dan  induksi  embriogenesis  somatik kultur  kalus  tapak  dara,  memberikan  pengaruh yang  signifikan  terhadap  berat  kering  kalus,  yaitu
pada  konsentrasi  sukrosa  40  g/l  sebesar  0,037  g yang  berbeda  nyata  dengan  semua  perlakuan. Peningkatan  berat  kering  kalus  seiring  dengan peningkatan  konsentrasi  sukrosa  yaitu  0-  40  g/l (Herwinaldo,  2009).  Serta  Gati  dan  Mariska (1988) mendapatkan bahwa eksplan yang ditanam pada  media  yang  diperkaya  dengan  BAP membentuk  kalus  kompak,  media  terbaik  yang mengandung  10  mg/l  BAP  dan  0,1  mg/l  NAA. Tujuan penelitian ini adalah Mengetahui pengaruh konsentrasi  sukrosa  yang  berbeda  terhadap pertumbuhan  kalus  eksplan  mata  tunas  rimpang jahe  merah Zingiber  officinale Rosc.  Mengetahui konsentrasi sukrosa yang optimal untuk pertumbuhan  kalus  eksplan  mata  tunas  rimpang Zingiber officinale Rosc.

## METODE PENELITIAN
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini dikelompokkan  dalam  tiga  kelompok  sesuai dengan jenis dan cara penggunaannya.
a. Media Tanam Media dasar yang digunakan adalah Murashige  &  Skoog  (MS).  Bahan  yang dibutuhkan  untuk  membuat  media  MS.  Jenis media  tanam  berupa  gel  padat,  menggunakan agar-  agar  khusus  yang  tidak  berwarna  dan bersifat netral.
b. Bahan Sterilisasi
Bahan  yang  digunakan  untuk  mensterilkan peralatan  adalah  alkohol  70%,  aquades, spiritus (api), korek api, dan tisu.
c. Eksplan Tanaman Bahan  tanaman  yang  digunakan  sebagai eksplan  adalah  mata  tunas  rimpang Zingiber officinale Rosc.  dalam  media  MS  dengan karakteristik  rimpang  segar  (tidak  ada  bercak kecoklatan),  memiliki  2  mata  tunas  dalam setiap  rimpang.  Rimpang  diambil  dari perkebunan Tani Sejahtera desa Tanjungkalang Kec. Ngronggot, Kab. Nganjuk,  Jawa  Timur.  Bagian  tanaman  yang digunakan adalah mata tunas.
Eksplan  mata  tunas  ditimbang  untuk mengetahui  ukuran  eksplan,  sehingga  diperoleh eksplan  yang  seragam  untuk  ditanam.  Berat

## Secara In Vitro
eksplan  yang  digunakan  sekitar  0,4  -  0,46  g. Eksplan mata tunas rimpang jahe merah direndam dalam sabun anti bakteri konsentrasi 3tetes/100 ml selama  24  jam    kemudian  Eksplan  mata  tunas direndam  ke  dalam  larutan  anti  jamur  selama  60 menit. Langkah selanjutnya sterilisasi dilakukan di dalam  LAF  dengan  merendam  eksplan  ke  dalam Clorox  10%  selama  20  menit  dan  dibilas  aquades steril.  Kemudian  direndam  lagi  ke  dalam  Clorox 5%  selama  25  menit.  Selanjutnya  eksplan direndam  ke  dalam  larutan  alkohol    96%  selama 30 detik dan dibilas aquades steril secara bertahap dengan waktu perendaman 10 menit, 5 menit dan 3 menit.
Parameter  yang  diamati  yaitu  :  berat  basah kalus,  dan  berat  kering  kalus,  morfologi  kalus (warna  dan  tekstur  kalus).  Untuk  mendapatkan berat  kering  konstan,  kalus  dikeringkan  dalam oven  dengan  suhu  50 0 C  dan  ditimbang  selama  2 hari  sampai  diperoleh  berat  yang  konstan. Sedangkan  berat  basah  kalus  didapatkan  dengan cara  menimbang  langsung  kalus  segar  yang dikeluarkan  dari  botol  menggunakan  timbangan analitik.  Warna  kalus  diamati  secara  visual, sedangkan  tekstur  kalus  diamati  pada  saat  kalus dikeluarkan  dari  botol  kultur  untuk  ditimbang dengan cara menyentuhnya menggunakan pinset.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Berat Basah Kalus
Eksplan  mata  tunas  rimpang Zingiber officinale Rosc.  pada  media  inisisasi  terlihat mengalami  perkembangan  pada  hari  ke-  7  (1 minggu).  Dan  kalus  mulai  terbentuk  pada  minggu ke- 2 setelah penanaman. Hasil analisis berat basah kalus  mata  tunas  rimpang Zingiber  officinale Rosc.  pada  media  Murashige  &  Skoog  (MS) dengan variasi konsentrasi sukrosa yaitu 20- 50 g/l disajikan  pada  Tabel  1.  Uji  ANOVA  pada  taraf signifikansi  95%    menunjukkan  bahwa  pemberian variasi  konsentrasi  sukrosa  tidak  berpengaruh nyata  terhadap  peningkatan  berat  basah  kalus eksplan  mata  tunas  rimpang Zingiber  officinale Rosc.
Tabel 1 menunjukkan bahwa secara
keseluruhan media perlakuan mampu meningkatkan  berat  basah  kalus.  Media  dengan
konsentrasi  sukrosa  40  g/l  (S3)  menghasilkan pertumbuhan kalus tertinggi. Rata- rata peningkatan  berat  basah  kalus  pada  media  ini sebesar  0,65  g/l.  Namun,  berat  basah  mengalami penurunan pada konsentrasi sukrosa 50 g/l dengan rata-  rata  berat  basah  kalus  sebesar  0,492  g/l. Medium  MS  yang  mengandung  sukrosa  40  g/l menghasilkan  rata-  rata  berat  basah  tertinggi, meskipun  perbedaan  yang  terjadi  tidak  signifikan Sukrosa  dengan  konsentrasi  lebih  tinggi  dari komposisi normal medium MS justru menunjukkan penurunan berat basah kalus. Hal ini disebabkan  konsentrasi  medium  menjadi  lebih pekat  dan  menghambat  penyerapan  air  maupun garam  mineral  yang  ada.  Peristiwa  penghambatan penyerapan  air  tersebut  lebih  tampak  pada penambahan  sukrosa  50  g/l.  Namun  demikian menurut  Maretzki  (1984)  respon  pertumbuhan  sel terhadap  penambahan  karbohidrat  setiap  spesies berbeda.
Tabel  1.  Rata-  rata  Berat  Basah  Kalus Zingiber officinale Rosc. pada media MS dengan variasi konsentrasi sukrosa. Konsentrasi sukrosa Berat kalus (g) S1 (20 g/l) 0,404 S2 (30 g/l) 0,484 S3 (40 g/l) 0,650 S4 (50 g/l) 0,492
Penurunan  berat  basah  kalus  yang  terjadi pada  konsentrasi  sukrosa  50  g/l  (S4)  diduga disebabkan  adanya  cekaman  kekeringan  pada medium  sehingga  menghambat  pertumbuhan kalus. Menurut Kramer (1983) cekaman kekeringan akan menghambat pertumbuhan. Cekaman kekeringan akan menyebabkan turunnya potensial  air  dan  tekanan  turgor  sehingga perluasan  dan  pembelahan  sel  juga  terhambat. Cekaman  kekeringan  juga  mengganggu  berbagai proses metabolik dan bisa berujung pada kematian.
Kalus  yang  mengalami  cekaman  akan mengalami gangguan metabolisme. Matheka et al ., (2008) menambahkan bahwa penurunan pertumbuhan  kalus  diduga  disebabkan  oleh penurunan volume sitoplasma dan vakuola sebagai akibat  keluarnya  air  dari  sitoplasma  yang disebabkan  oleh  penurunan  potensial  air  di  sel.
Penurunan  potensial  air  di  sel  mengakibatkan penyerapan air dan mineral dari media terhambat.
Cekaman  kekeringan  juga  mengganggu metabolisme  nitrogen.  Hal  ini  tentunya  juga berdampak  langsung  pada  pertumbuhan  kalus. Secara umum cekaman kekeringan akan menghidrolisis  protein  dan  mengakumulasikan berbagai  asam  amino.  Selain  itu  cekaman kekeringan juga akan menghambat sintesis protein dari asam amino dengan menghambat kerja enzim yang  berperan  dalam  sintesis  protein  (Kramer, 1983).
Pada tabel 1 juga menunjukkan bahwa pada konsentrasi  sukrosa  40  g/l  (S3)  menunjukkan kenaikan berat basah kalus yang paling tinggi dari perlakuan  lainnya.  Hal  ini  diduga  disebabkan karena kalus mampu beradaptasi terhadap cekaman yang diterimanya. Menurut Manfield dan Atkinson (1990) respon tanaman terhadap stres air sangat  ditentukan  oleh  tingkat  stres  yang  dialami dan  fase  pertumbuhan  tanamann  saat  mengalami cekaman.

## Berat Kering Kalus
Hasil  uji  ANOVA  pada  taraf  signifikansi 95%    menunjukkan  bahwa  pemberian  variasi konsentrasi  sukrosa  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  peningkatan  berat  kering  kalus  eksplan mata  tunas  rimpang Zingiber  officinale Rosc. Hasil  analisis  berat  kering  kalus  mata  tunas rimpang Zingiber  officinale Rosc.  pada  media Murashige  &  Skoog  (MS)  dengan  variasi konsentrasi sukrosa yaitu 20- 50 g/l disajikan pada Tabel 2.
Pemberian  sukrosa  50  g/l  (S4)  mampu menghasilkan  berat  kering  kalus  tertinggi  yaitu sebesar  0,272  g/l.  Berat  kering  kalus  mengalami peningkatan seiring dengan peningkatan konsentrasi  sukrosa  dalam  media.  Hal  ini disebabkan semakin banyak sukrosa, maka sumber karbon dan energi yang diperoleh oleh sel eksplan semakin  banyak  sehingga  pembelahan  sel, pembesaran sel, serta diferensiasi sel akan semakin baik.  Didalam  tubuh  tumbuhan  sukrosa  akan terhidrolisis  menjadi  glukosa  dan  fruktosa. Glukosa akan diproses melalui glikolisis dan siklus krebs hingga menghasilkan energi berupa ATP dan
NADH,  sedangkan  fruktosa  berperan  sebagai antioksidan  dalam  menjaga  stabilisasi  membran (Strum,  1999).  Sukrosa  yang  ditambahkan  dalam media  akan  berfungsi  sebagai  bahan  baku  dalam proses  respirasi  oleh  sel-  sel  eksplan  untuk  dapat melakukan aktivitas sel (Wirahadikusumah, 1985). ATP  yang  dihasilkan  dalam  glikolisis  akan digunakan untuk berbagai proses yang membutuhkan  energi,  karena  ATP  merupakan molekul  penyimpan  energi.  Sedangkan  NADH nantinya  akan  menjalani  proses  transfer  elektron untuk menghasilkan ATP.
Tabel  2.    Rata-  rata  berat  kering  kalus Zingiber officinale Rosc.  pada  media  MS  dengan variasi   konsentrasi sukrosa Konsentrasi sukrosa Berat kalus (g) S1 (20 g/l) 0,224 S2 (30 g/l) 0,242 S3 (40 g/l) 0,258 S4 (50 g/l) 0,272

## Warna  dan  Tekstur  Kalus  pada  Media Perlakuan
Media Inisiasi merupakan media MS dengan konsentrasi  sukrosa  yang  berbeda.  Pengamatan dilakukan  4  hari  sekali  selama  satu  bulan.  Setelah satu  bulan,  diamati  dan  dibuat  data  pada  warna maupun  tekstur  kalus  yang  terbentuk.  Data  warna maupun  tekstur  kalus  disajikan  dalam  tabel  3, sementara morfologi kalus disajikan pada tabel 4.
Morfologi kalus eksplan mata tunas rimpang jahe  merah  yang  dihasilkan  pada  tiap  konsentrasi sukrosa  menunjukkan  tekstur  dan  warna  yang sama.  Kondisi  kalus  yang  dihasilkan  mempunyai tekstur  remah  (Tabel  3)  dan  berwarna  putih kekuningan (Tabel 4). Kalus dengan tekstur remah menunjukkan  bahwa  untuk  inisiasi  kalus  mata tunas  rimpang  jahe  merah  pada  konsentrasi sukrosa 20- 50 g/l sudah mampu untuk membentuk tekstur  kalus  yang  remah.  Kalus  yang  remah memiliki  ciri-  ciri  dengan  tekstur  yang  mudah dipisahkan. Terbentuknya  kalus  berstruktur  remah dipicu  oleh  adanya  hormon  auksin  endogen  yang diproduksi secara internal oleh eksplan yang telah timbul  membentuk  kalus  tersebut.  Terbentuknya kalus  yang  remah  ini  juga  dipengaruhi  oleh

## Secara In Vitro
penambahan  sitokinin  (BAP)  dalam  media. Menurut  Syahid et  al .,  (2010),  adanya  sitokinin dapat  meningkatkan  pembelahan  sel  membentuk kalus.  Jadi,  terbentuknya  kalus  yang  remah merupakan  hasil  aktivitas  pembelahan  sel  yang meningkat. Terbentuknya kalus disebabkan adanya rangsang  luka.  Rangsang  tersebut  menyebabkan kesetimbangan  pada  dinding  sel  berubah  arah, sebagian  protoplas  mengalir  ke  luar  sehingga
mulai  terbentuk  kalus.  Kalus  terbentuk  pada bagian eksplan yang terluka (potongan). Pemberian  konsentrasi  sukrosa  membuat  kalus yang  terbentuk  merata  pada  semua  permukaan eksplan. Hal ini diduga karena pada media dengan penambahan  sukrosa,  sumber  karbon  dan  energi didapatkan lebih banyak sehingga proses pembelahan  sel-  sel  eksplan  dan  pembentukkan kalus maksimal
Tabel 3. Warna dan tekstur kalus Zingiber officinale Rosc. pada media perlakuan
S1 S2 S3 S4 Warna PK (1) PK (1) PK (1) PK (1) PK (2) PK (2) PK (2) PK (2) PK (3) PK (3) PK (3) PK (3) PK (4) PK (4) PK (4) PK (4) PK (5) PK (5) PK (5) PK (5) Tekstur Remah (1) Remah (1) Remah (1) Remah (1) Remah (2) Remah (2) Remah (2) Remah (2) Remah (3) Remah (3) Remah (3) Remah (3) Remah (4) Remah (4) Remah (4) Remah (4) Remah (5) Remah (5) Remah (5) Remah (5)
Keterangan : PK : Putih Kekuningan
Tabel 4. Deskripsi Morfologi Kalus
Terbentuknya  kalus  disebabkan  adanya rangsang  luka.  Rangsang  tersebut  menyebabkan kesetimbangan  pada  dinding  sel  berubah  arah, sebagian  protoplas  mengalir  ke  luar  sehingga mulai  terbentuk  kalus.  Kalus  terbentuk  pada bagian eksplan yang terluka (potongan). Pemberian  konsentrasi  sukrosa  membuat  kalus yang  terbentuk  merata  pada  semua  permukaan eksplan. Hal ini diduga karena pada media dengan penambahan  sukrosa,  sumber  karbon  dan  energi didapatkan lebih banyak sehingga proses pembelahan  sel-  sel  eksplan  dan  pembentukkan kalus maksimal.
Warna  putih  merupakan  warna  awal  saat kalus  mulai  mengalami  inisiasi.  Warna  kalus menunjukkan  tingkat  perkembangan  kalus  yang terbentuk.  Menurut  Gamborg  (1982)  warna  kalus yang  terbentuk  antara  lain  kuning,  kehijauan,  dan hijau  terang.  Kalus  yang  berwarna  putih  tidak mengandung kloroplas, tetapi mengandung plastid yang  berisi  butir  pati  yang  sedikit  demi  sedikit tumbuh  menjadi  sistem  membran  yang  jelas  yang akhirnya  terbentuklah  proto  klorofil  dengan paparan  cahaya,  sehingga  kalus  menjadi  berwarna kekuningan sampai hijau. Warna terang atau putih dapat mengindikasikan bahwa kondisi kalus masih cukup  baik.  Menurut  Kresnawati  (2006),  warna kalus  dari  suatu  eksplan  dipengaruhi  oleh  zat pengatur  tumbuh.  Warna  kalus  yang  bermacam- macam diakibatkan oleh adanya pigmentasi cahaya dan asal eksplan.

## KESIMPULAN
Peningkatan  konsentrasi  sukrosa  dalam media  MS  cenderung  meningkatkan  pertumbuhan kalus Zingiber  officinale Rosc.  yang  ditunjukkan pada berat basah dan berat kering kalus.

## DAFTAR PUSTAKA
Badan  Pusat  Statistik  (BPS).  2007.  Statistik Perdagangan  Indonesia  :  Impor.  Jilid  ke-1. Jakarta : Biro Pusat Statistik.
BPS.  2003  sampai  2011.  Statistik  Tanaman Biofarmaka. BPS. Jakarta, 76 hlm.
BPS.  2011.  Statistik  Tanaman  Biofarmaka.  BPS.
Jakarta, 76 hlm.
Benson.  L.  1957.   Plant  Classification.D.C  Heath and Co. Boston.
Darnell,  J.,  H.  Lodish  and  H.  Baltimore.  1986.
Molecular Cell Biology.
Scientific American Books, Inc. New York.
Dodds,  J.H.,  dan  L.W.  Robert.  1983.  Experiment in  Plants  Tissue  Culture.  Cambridge
University Press. London.
Dwidjoseputro, D. 1994. Dasar- Dasar Mikrobiologi. Djambatan, Jakarta.
Fakhrai  HK,  Fakhrai  F.  1990.  Hormon  Control  of Growth  and  Development.  Methods  in Molecular  Biology  Plant  Cell  and  Tissue Culture.  Jeffrey  W  Pollard,  John  M  Walker (editor). The Humana Press. New Jersey.
Gati,  E  dan  Mariska,  I.  1988.  Perbanyakan  Cepat Jahe Merah melalui Teknik Kultur Jaringan. Bul. Littro Vol. III No. 1. Hal 35-38.
George,  E.F.,  and  P.D.  Sherrington.  1984.  Plant Propagation  by  Tissue  Culture.  Handbook and  Directory  of  Commercial  Laboratories. Exegenetic Limited. England.
George,  EF.  1993.  Plant  Propagation  by  Tissue Culture, Part I. Exergetics Limited, Edington, Wilts, England. 574p.
Kusnawidjaja,  Kurnia.  1987.  Biokimia.  Forum Perpustakaan  Umum  Indonesia,  BPAD
Jambi.
Lukito,  A.  M.  2007.  Petunjuk  Praktis  Bertanam Jahe. Agromedia Pustaka, Jakarta.
Pierik,  R.I.M.  1987.  In  Vitro  Culture  of  Higher Plants  :  119.  Netherland  :  Martinus  Nijhoff Publisher.
Rostiana,  O  dan  S.F.  Syahid,  2007a.  Pengaruh media dasar MS dan N6 terhadap perkembangan  embrio  somatik  pada  kultur meristem  jahe  (Zingiber  officinale  Rosc.). Berita Biol. 9 (2) (In press).
Stepan- Sarkissian G. 1990. Selection of Media for
Tissue  and  Cell  Culture.  Methods  in
Molecular  Biology  Plant  Cell  and  Tissue Culture.  Jeffrey  W  Pollard,  John  M  Walker
(editor). The Humana Press. New Jersey.
Wattimena,  GA.  1992.  Bioteknologi  Tanaman.
Departemen  P  dan  K.  Dirjen  Pendidikan Tinggi. PAU Bioteknoloogi Bogor.
Wettherel DF. 1982. Pengantar Propagasi Tanaman  secara  In  Vitro.  Terjemahan Koensoemardiyah. Fakultas Farmasi
Universitas Gajah Mada. Yogyakarta.