Uji Kualitatif dan Kuantitatif Isolat Bakteri Lipolitik dari Limbah Cair Pabrik Pengolahan Ikan Kecamatan Muncar, Banyuwangi
Niken Candra Bestari 1) , Suharjono 2)
1), 2) Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya, Malang Email : 1) ncbestari@gmail.com & 2) calistus@ub.ac.id

## ABSTRAK
Banyaknya  industri  pengolahan  ikan  di  Muncar,  Banyuwangi,  menghasilkan  limbah  cair  yang mengandung  minyak  ikan.  Bakteri  lipolitik  yang  hidup  dalam  limbah  cair  tersebut  dapat  menghidrolisis lipid  menjadi  asam  lemak  dan  gliserol  dengan  memproduksi  lipase.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mendapatkan isolat bakteri lipolitik yang unggul dari limbah cair pabrik ikan. Isolasi bakteri menggunakan media  mineral  sederhana,  uji  kualitatif  enzim  berdasarkan  diameter  zona  bening  menggunakan  substrat minyak  zaitun  5  %  ditambah  metil  merah  0,01  %.  Data  diameter  zona  bening  pada  hari  ke-7  inkubasi dianalisis  menggunakan  One-Way  ANOVA  dengan  taraf  signifikansi  95%.  Aktivitas  lipase  dari  4  isolat dengan  diameter  zona  bening  tertinggi  diuji  secara  kuantitatif  dengan  metode  titrimetri  menggunakan NaOH 0,03 N. Diameter zona bening isolat 1me, 3ma, 3mb, dan 3mc secara berurutan adalah 4,08±0,21 mm; 3,94±0,03 mm; 3,99±3,15 mm; dan 4,02±0,15  mm. Aktivitas lipase optimum isolat 1me,  3ma,  3mb, dan 3mc secara  berurutan  sebesar  3,52  U/ml  (jam  ke-24);  3,98  U/ml  (jam  ke-30);    3,74  U/ml  (jam  ke-34),  dan  4,05 U/ml (jam ke-34).
Kata kunci : aktivitas lipase, bakteri, diameter zona bening, titrimetri.

## ABSTRACT
The fish processing industry in Muncar, Banyuwangi, produced wastewater containing fish oil. Lipolytic bacteria  that  live  in  the  wastewater  could  hydrolyze  lipids  into  fatty  acids  and  glycerol  by  way  of  produced lipase. This study was aimed to obtain excellent lipolytic bacterial isolates from fish mill wastewater. Isolation of bacteria using a simple mineral media, enzyme qualitative test based clear zone diameter using olive oil 5% as  substrate  plus  0,01%  methyl  red.  Data  of  diameter  clear  zone  on  the  7th  day  of incubation  were  analyzed using One-Way ANOVA with a significance level of 95%. Lipase activity of 4 isolates with the highest diameter clear zone were tested quantitatively by titrimetric method using 0.03 N NaOH. Diameter clear zone of isolates 1me,  3ma,  3mb,  and  3mc  respectively  was  4,08±0.21  mm;  3,94±0.03  mm;  3,99±3.15  mm;  and  4.02±0.15  mm. Optimum lipase activity of isolates 1me, 3ma, 3mb, and 3mc respectively was 3,52 U/ml (24 hours); 3,98 U/ml (20 hours); 3,74 U/ml (34 hours); and 4,05 U/ml (34 hours).
Key words:, bacteria, diameter clear zone, lipase activity titrimetric.

## PENDAHULUAN
Kabupaten  Banyuwangi  memiliki  potensi kelautan  yang  tinggi,  salah  satunya  di Kecamatan  Muncar  yang  menjadi  sentral pengolahan  ikan.  Terdapat  setidaknya  67 industri  pengolahan  ikan  skala  besar  dan menengah, dengan total kapasitas produksinyan 1.209 ton perhari, sedangkan kapasitas produksi dari 40 industri pengolahan ikan skala kecil/rumah tangga, rata-rata produksi perharinya adalah 203,4 ton [15]. Limbah yang dibuang  oleh  pabrik  hasil  samping  pengolahan ikan  terdiri  dari,  nitrat  (NO3),  fosfat  (PO4), sulfida (H2S), ammonia (NH3-N), klorin bebas [14]  dan  yang  paling  banyak  adalah  senyawa lipid  dari  minyak  ikan  [15].  Lingkungan  yang telah  lama  tercemar  serta  kolam  pengolahan limbah dimungkinkan terdapat bakteri
pendegradasi  lipid  tersebut  yang  alamiah, bersaing maupun membentuk konsorsium dengan mikroba lainnya [1].
Aktivitas  mikroba  dalam  mendegradasi lipid  dalam  limbah  cair  pabrik  ikan  terkait dengan  kemampuan  mikroba  tersebut  dalam menghasilkan  enzim  lipase  disebut  dengan lipolitik.  Lipase  (Triasilgliserol  lipase)  adalah soluble  enzyme  menghidrolisis  triasilgliserol untuk  membebaskan  asam  lemak  bebas  dan gliserol.
Lipase  memiliki  pengaplikasian  yang  besar di  bidang  bioteknologi.  Lipase  bakteri  dipakai secara  ektensif  pada  industri  pengolahan makanan  dan  susu  untuk  menghidrolisis  lemak susu,  pematangan  keju,  peningkatan  rasa sintetik,  dan  proses  lipolisis  dalam  pembuatan keju  dan  krim  [3].  Lipase  juga  dipakai  dalam
industri  deterjen  sebagai  bahan  aditif  pada bubuk  pembersih  [5],  dalam  industri  tekstil untuk  meningkatkan  kemampuan  absorbansi produk  [16],  dalam  sintesis  senyawa  atau polimer biodegradable [12] dan reaksi diferensiasi  transesterifikasi  [6].  Enzim  ini digunakan  sebagai  katalis  untuk  memproduksi produk-produk  kosmetik  [3],  pada  industri kertas, sintesis biodiesel [13], industri pengolahan  kulit  sintesis,  dan  industri  farmasi [8].
Lipase  telah  diisolasi  dan  dimurnikan  dari kapang,  khamir,  bakteri,  tumbuhan,  dan  hewan [10],  dari  sumber  isolasi  tersebut,  lipase  yang berasal  dari  bakteri  lebih  bernilai  secara ekonomis  dan  lebih  stabil  [18].  Mikroba penghasil  lipase  dapat  ditemukan  pada  habitat yang mendukung seperti limbah industri, pabrik pengolahan minyak, dan tanah yang terkontaminasi  minyak  [9],  seperti  lingkungan daerah  pembuangan  limbar  cair  pabrik  ikan  di Muncar. Oleh  karena  itu,  pengujian  aktivitas lipase  bakteri  yang  berasal  dari  limbah  cair tersebut  perlu  dilakukan  untuk  mengetahui sejauh mana potensi lipolitiknya agar mendapatkan isolat unggul yang dapat diaplikasikan  dalam  remediasi  maupun  dalam bidang bioteknologi.

## METODE PENELITIAN
Sampling, isolasi, dan karakterisasi.
Sampel  diambil  di  PT  Multi  Agro,  PT  Maya Muncar,  dan  PT  Sari  Laut.  Sampel  limbah  cair diisolasi  menggunakan  serial  dilusi  10 -1 –  10 -7 . Komposisi  media  isolasi  (g/l)  NaNO 3 7  g; K 2 HPO 4 2  g;  KCl  0,1  g;    MgSO 4 .7H 2 O  0,5  g; CaCl 2 0,025  g;  FeSO 4 .7H 2 O  0,025  g;  dan ekstrak  khamir  1  g.  Media  tersebut  ditambah dengan  komponen  trace  element  (g/l)  H 3 BO 3 0,26  g;  Na 2 MoO 4 .2H 2 O  0,06  g;  CuSO 4 .5H 2 O 0,50  g;    ZnSO 4 .5H 2 O  0,70  g,  MnSO 4 .H2O  0,50 g; sebanyak 0,5 ml untuk setiap liter media (0,05
%)  dan  minyak  zaitun  steril  sebanyak  10  %.
Bakteri  diinkubasi  suhu  37°  C  selama  24-48 jam.  Setelahnya,  koloni  bakteri  dikarakterisasi berdasarkan ciri optik. Isolat bakteri dimurnikan pada  media  miring  berisi  Trypticase  Soy  Agar (TSA) dengan tambahan Tween-80.

## METODE PENELITIAN
Sampling, isolasi, dan karakterisasi.
Sampel  diambil  di  PT  Multi  Agro,  PT  Maya Muncar,  dan  PT  Sari  Laut.  Sampel  limbah  cair diisolasi  menggunakan  serial  dilusi  10 -1 –  10 -7 . Komposisi  media  isolasi  (g/l)  NaNO 3 7  g; K 2 HPO 4 2  g;  KCl  0,1  g;    MgSO 4 .7H 2 O  0,5  g; CaCl 2 0,025  g;  FeSO 4 .7H 2 O  0,025  g;  dan ekstrak  khamir  1  g.  Media  tersebut  ditambah dengan  komponen  trace  element  (g/l)  H 3 BO 3
0,26  g;  Na 2 MoO 4 .2H 2 O  0,06  g;  CuSO 4 .5H 2 O 0,50  g;    ZnSO 4 .5H 2 O  0,70  g;  dan  MnSO 4 .H 2 O 0,50 g; sebanyak 0,5 ml untuk setiap liter media (0,05  %)  dan  minyak  zaitun  steril  sebanyak  10 %. Bakteri diinkubasi suhu 37° C selama 24-48 jam.  Setelahnya,  koloni  bakteri  dikarakterisasi berdasarkan ciri optik. Isolat bakteri dimurnikan pada  media  miring  berisi  Trypticase  Soy  Agar (TSA) dengan tambahan Tween-80.
Uji  kualitatif  zona  bening.  Bakteri  hasil pemurnian diambil 1 ose dan dibiakkan selama 24  jam  di  5  ml  media  cair  dengan  komposisi NaCl  1  %,  ekstrak  khamir  1  %,    pepton  2  %, Tween-80  1  %,  dan  minyak  zaitun  steril  2  %. Kertas  cakram  berdiameter  ±5  mm  dicelupkan ke media cair selama 10-15 menit kemudian di letakkan  media  padat  cawan  petri  dengan komposisi  (perliter)  pepton  10  g,  NaCl  5  g, CaCl.2H 2 O 0,1 g, Agar 20 g, Tween-80 2,5 %, dan  minyak  zaitun  steril  5  %.  Media  ditambah dengan  metil  merah  0,01 %.  Cawan  diinkubasi selama 7  x 24 jam dan pada hari ke-7 dihitung diameter zona beningnya dengan cara membagi diameter  melintang  total  zona  bening  dengan diameter koloni bakteri.
Uji  kuantitatif  aktivitas  lipase.  Media yang  digunakan  sama  dengan  media  cair  uji kualitatif.  Uji  aktivitas  lipase  ini  dilakukan bersama dengan pembuatan kurva pertumbuhan bakteri.  Setiap  sampling,  4  ml  kultur  diambil dan disentrifugasi 8000 rpm, 10 menit, suhu 4° C.  Supernatan  disaring  dan  didapatkan  ekstrak kasar  enzim.  Ekstrak  kasar  enzim  1  ml ditambah  1  ml  minyak  zaitun  steril,  dan  2  ml buffer fosfat pH 7 kemudian diikubasi suhu 40° C,  90  menit.  Setelah  diinkubasi,  ditambah larutan  aseton  :  etanol  (1:1)  5  ml  dan  diberi  2 tetes  indikator  phenolphthalein  (pp)  kemudian ditritasi  dengan  NaOH  0,03  N  hingga  mulai berubah  warna  menjadi  merah  muda  pucat. Aktivitas  lipase  dapat  dihitung  dengan  cara sebagai berikut (1) [17].
Aktivitas  lipase  (U/ml)  =((A-B)x  N  NaOH  x 1000)/(VE x 90)……(1).
Keterangan :
A  = Volume (ml) NaOH untuk titrasi sampel.
B  = Volume (ml) NaOH untuk titrasi blanko.
1000 = Konversi ke mmol ke µmol.
90  = Waktu inkubasi.
VE = Volume total campuran ekstrak kasar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji kualitatif lipolitik. Ditemukan 17 isolat bakteri  dari  hasil  isolasi  dan  diuji  berdasarkan diameter zona bening. Pengamatan selama 7 hari inibertujuan untuk mengetahui perubahan aktivitas  masing-masing  isolat.  Isolat  yang memiliki diameter zona bening yang tinggi pada hari  pertama  belum  tentu  memiliki  diameter
zona bening yang tinggi pula pada hari terakhir. Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan  pengukuran diameter  zona  bening  selama  7  hari  berturut turut.  Dari  17  isolat,  ditemukan  4  isolat  bakteri yang berdiameter zona bening dengan perbedaan signifikan  tertinggi  (p<0,05)  (gambar  1).  Isolat dengan diameter tertinggi yaitu 1me, 3ma dan 3mc dengan diameter zona bening berturut turut  sebesar  4,08±0,21  mm;  3,94±0,03  mm; 3,99±3,15 mm; dan 3mc 4,02±0,15 mm penghasil  lipase  yang  baik  dapat  dilih kekuatan  pembentukan  zona  bening  dan diameter  zona  bening  yang  dihasilkan  pada media uji (gambar 2).
Gambar 1. Uji kualitatif diameter zona bening mas isolat pada hari ketujuh
Gambar 2. Zona bening aktivitas bakteri lipolitik ketujuh.
(a) 1me, (b) 3ma, (c) 3mb, dan (d) 3mc Keterangan :
(1) Zona bening, (2), Kertas cakram, (3) Lebar koloni bakteri
Uji  kuantitatif  aktivitas  lipase.  Ekstrak  kasar lipase  diproduksi  secara  ekstraselular  dan  diukur dengan  metode  titrimetri.  Ekstrak  kasar  diperoleh dari  hasil  pemisahan  sel  bakteri  dengan  metode sentrifugasi  pada  kecepatan  8000  rpm  selama  10 menit pada suhu 4° C untuk menghindari denaturasi protein [11].
zona bening yang tinggi pula pada hari terakhir. Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan  pengukuran diameter  zona  bening  selama  7  hari  berturut- 4  isolat  bakteri diameter zona bening dengan perbedaan (gambar  1).  Isolat dengan diameter tertinggi yaitu 1me, 3ma, 2mb, dan 3mc dengan diameter zona bening berturut- 3,94±0,03  mm;
3,99±3,15 mm; dan 3mc 4,02±0,15 mm. Bakteri penghasil  lipase  yang  baik  dapat  dilihat  dari kekuatan  pembentukan  zona  bening  dan
lkan  pada
Gambar 1. Uji kualitatif diameter zona bening masing-masing
Zona bening aktivitas bakteri lipolitik pada hari
Zona bening, (2), Kertas cakram, (3) Lebar koloni bakteri
Ekstrak  kasar lipase  diproduksi  secara  ekstraselular  dan  diukur .  Ekstrak  kasar  diperoleh dari  hasil  pemisahan  sel  bakteri  dengan  metode sentrifugasi  pada  kecepatan  8000  rpm  selama  10 menit pada suhu 4° C untuk menghindari denaturasi

## Gambar 3. Kurva pertumbuhan dan aktivitas lipase isolat 1me
Aktivitas  lipase  diukur  seiring  dengan pertumbuhan  sel  bakteri  yang  bertujuan  untuk mengetahui hubungan aktivitas lipolitik saat fase fase  tertentu  pada  pertumbuhan  bakteri  dan memiliki  satuan  Unit  per  ml  (U/ml).  Satu  unit lipase (U) didefinisikan sebagai jumlah kebutuhan  lipase  per  menit  untuk  membebaskan 1  µmol  asam  lemak  dari  minyak  zaitun  sebagai substrat  (Shu  dkk.,  2009).  Isolat  1me  dan memiliki  konstanta  rerata  laju  pertumbuhan sebesar  0,28  generasi/jam  serta  waktu  generasi logaritmik selama 3,7 jam(Gambar itu, aktivitas lipasenya mulai meningkat pada jam ke-3 sampai mencapai tingkat optimum pada jam ke-24  dengan  densitas  bakteri  sebanyak  4,08  x 107  sel/ml  dengan  nilai  aktivitas  lipase  sebesar 3,52 U/ml.

## Gambar 4. Kurva pertumbuhan dan 3ma
Isolat  3ma  memiliki  konstanta  rerata  laju pertumbuhan  sebesar  0,07  generasi/jam  dengan waktu  generasi  logaritmik  selama  13,3  jam (Gambar  4).  Isolat  3ma  memiliki  aktivitas  lipase optimum  pada  jam  ke-30  inkubasi  dengan densitas  bakteri  sebanyak  4,25  x  107  sel/ml  dan nilai aktivitas lipase sebesar 3,98 U/ml.
Isolat  3mb  memiliki rerata  laju  pertumbuhan sebesar  0,19  generasi/jam  dan  waktu  generasi logaritmik selama 5,4 jam  (Gambar 5) lipase  pada  isolat  3mb  mengalami  kenaikan setelah  jam  ke-6  setelahnya  terus  meningkat  dan mengalami nilai optimum pada jam ke inkubasi  densitas  bakteri  sebanyak  4,34  x  10 sel/ml  dan  nilai  aktivitas  lipase  sebesar  3,74 U/ml.

## Kurva pertumbuhan dan aktivitas lipase isolat 1me
lipase  diukur  seiring  dengan pertumbuhan  sel  bakteri  yang  bertujuan  untuk mengetahui hubungan aktivitas lipolitik saat fase- fase  tertentu  pada  pertumbuhan  bakteri  dan memiliki  satuan  Unit  per  ml  (U/ml).  Satu  unit lipase (U) didefinisikan sebagai jumlah butuhan  lipase  per  menit  untuk  membebaskan
1  µmol  asam  lemak  dari  minyak  zaitun  sebagai substrat  (Shu  dkk.,  2009).  Isolat  1me  dan memiliki  konstanta  rerata  laju  pertumbuhan sebesar  0,28  generasi/jam  serta  waktu  generasi logaritmik selama 3,7 jam(Gambar 3). Sementara itu, aktivitas lipasenya mulai meningkat pada jam 3 sampai mencapai tingkat optimum pada jam 24  dengan  densitas  bakteri  sebanyak  4,08  x
107  sel/ml  dengan  nilai  aktivitas  lipase  sebesar Kurva pertumbuhan dan aktivitas lipase isolat
konstanta  rerata  laju pertumbuhan  sebesar  0,07  generasi/jam  dengan waktu  generasi  logaritmik  selama  13,3  jam
).  Isolat  3ma  memiliki  aktivitas  lipase 30  inkubasi  dengan ebanyak  4,25  x  107  sel/ml  dan
nilai aktivitas lipase sebesar 3,98 U/ml.
memiliki  rerata  laju  pertumbuhan sebesar  0,19  generasi/jam  dan  waktu  generasi
(Gambar 5). Aktivitas
lipase  pada  isolat  3mb  mengalami  kenaikan
6  setelahnya  terus  meningkat  dan mengalami nilai optimum pada jam ke-34 dengan inkubasi  densitas  bakteri  sebanyak  4,34  x  10 7 sel/ml  dan  nilai  aktivitas  lipase  sebesar  3,74
Gambar 5. Kurva pertumbuhan dan aktivitas lipase 3mb
Isolat 3mc memiliki rerata laju pertumbuhan sebesar  0,26  generasi/jam  serta  waktu  generasi logaritmik  selama  4  jam  (Gambar  9) lipase  isolat  3mc  juga  mengalami  kenaikan seiring  dengan  fase  pertumbuhan  bakteri.  Sama dengan  isolat  3mb,  aktivitas  lipase  optimum isolat  3mc  juga  terjadi  pada  waktu  inkubasi  jam ke-34  dengan  densitas  bakteri  sebanyak  4,73  x 10 7 sel/ml dan aktivitas lipase sebesar 4,05 U/ml. Isolat 3mc menunjukkan aktivitas lipase optimum yang paling tinggi dibandingkan isolat lainnya.

## Gambar 6. Kurva pertumbuhan dan aktivitas lipase isolat 3mc
Aktivitas  lipase  tertinggi  pada  isolat  1me, 3ma, dan 3mc terjadi pada waktu berbeda, namun masih dalam kisaran fase akhir eksponensial atau logaritmik,  kecuali  isolat  3mb  yang  memiliki aktivitas  tertinggi  pada  fase  stasioner  awal (Gambar 5). Jika melihat kurva fase pertumbuhan dan kurva aktivitas lipase, dapat dikatakan bahwa isolat  bakteri  menunjukkan  aktivitas  lipase dengan  mengikuti  pola  pertumbuhan  bakteri. Oleh  karena  itu,  aktivitas  lipase  pada  masing masing isolat diduga sebagai bagian dari aktivitas metabolit  primer  isolat  bakteri.  Hal  ini  didukung oleh  pernyataan  Koch  dkk.  (2003),  bahwa aktivitas  metabolit  primer  berjalan  seiring  fase pertumbuhan  mikroba,  mengalami  kenaikan optimal pada akhir fase logaritmik atau awal fase stasioner,  dan  dapat  mengalami  penurunan seiring  aktivitas  mikroba  yang  menurun  dan berkurangnya nutrisi sebagai substrat.

## aktivitas lipase isolat
Isolat 3mc memiliki rerata laju pertumbuhan serta  waktu  generasi (Gambar  9).  Aktivitas lipase  isolat  3mc  juga  mengalami  kenaikan seiring  dengan  fase  pertumbuhan  bakteri.  Sama
ipase  optimum isolat  3mc  juga  terjadi  pada  waktu  inkubasi  jam 34  dengan  densitas  bakteri  sebanyak  4,73  x sel/ml dan aktivitas lipase sebesar 4,05 U/ml. Isolat 3mc menunjukkan aktivitas lipase optimum yang paling tinggi dibandingkan isolat lainnya.

## aktivitas lipase
Aktivitas  lipase  tertinggi  pada  isolat  1me, 3ma, dan 3mc terjadi pada waktu berbeda, namun masih dalam kisaran fase akhir eksponensial atau logaritmik,  kecuali  isolat  3mb  yang  memiliki tertinggi  pada  fase  stasioner  awal Jika melihat kurva fase pertumbuhan dan kurva aktivitas lipase, dapat dikatakan bahwa isolat  bakteri  menunjukkan  aktivitas  lipase dengan  mengikuti  pola  pertumbuhan  bakteri. lipase  pada  masing-
masing isolat diduga sebagai bagian dari aktivitas metabolit  primer  isolat  bakteri.  Hal  ini  didukung oleh  pernyataan  Koch  dkk.  (2003),  bahwa aktivitas  metabolit  primer  berjalan  seiring  fase pertumbuhan  mikroba,  mengalami  kenaikan l pada akhir fase logaritmik atau awal fase stasioner,  dan  dapat  mengalami  penurunan seiring  aktivitas  mikroba  yang  menurun  dan
Haba  dkk.,  (2000)  mendapatkan
Staphylococcus aureus CECT 9 yang ditumbuhkan  dalam  media  mengandung  substrat minyak  zaitun  bekas  pakai  sebanyak  2  % memiliki aktivitas lipase paling tinggi sebesar 0,7
U/ml  setelah  72  jam  inkubasi.  Haba  dkk.  (2009) juga  menguji  aktivitas  lipase  menggunakan substrat  minyak  bunga  matahari  bekas  pakai sebanyak 2 % pada Staphylococcus aureus 9 menghasilkan akivitas sebesar 2,4 U/ml setelah inkubasi  selama  144  jam.  Contoh  substrat  lain adalah  [2]  minyak  hati  ikan  cod  dan  min castor masing-masing 2,5 % pada bakteri Staphylococcus epidermidis menghasilkan  aktivitas  lipase  optimum  sebesar 14,8 U/ml dan 13,7 U/ml setelah 48 jam inkubasi pada suhu 30° C.
Aktivitas  lipase  sangat  dipengaruhi  oleh jenis  mikroba,  substrat,  konsentrasi,  suhu,  serta waktu  inkubasi  yang  berhubungan  dengan  fase pertumbuhan  mikroba.  Oleh  karena itu, aktivitas  lipase  pada  penelitian  ini  tidak  bisa dijadikan  tolak  ukur  tetap  karena  aktivitas  lipase pada  masing-masing  isolat  dapat  berbeda pada  setiap  fase  dan  pada  setiap  waktu Konsentrasi  dan  jenis  substrat  juga  berpengaruh pada  besarnya  aktivitas  lipase.  Oleh  itu,  perlu dilakukan  penelitian  lanjutan  mengenai  optimasi aktivitas lipase dari berbagai parameter tersebut.

## KESIMPULAN
Dari  total  17  isolat,  terdapat memiliki  diameter  zona  bening  tertinggi,  yaitu isolat  1me  (4.08±0,21  mm),  3ma  (3,94±0,03  mm) 3mb  (3,99±3,15  mm),  dan  3mc  (4,02±0,15  mm). Isolat  3mc  dinyatakan  sebagai  isolat  terunggul dengan  menghasilkan  aktivitas  lipase  optimum tertinggi  sebesar  4,05  U/ml  pada  jam  ke inkubasi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  mengucapkan  terima  kasih  pada  pihak berwenang  PT  Multi  Agro,  PT  Maya  Muncar,  dan PT Sari Laut. Kami mengucapkan terima kasih atas bantuan dari rekan-rekan Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas  Brawijaya  atas  segala  masukan  dan bantuannya.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Cooper, P.F., D.A. Hobson & Susan Jones. 1990.  Sewage  treatment  by  reed  bed system. J. IWEM 3:11-
[2] Esakkiraj,  P.,  M.  Rajkumarbharathi,  A. Palavesam,  G.Immanuel.  2009.  Lipase production  by  Staphylococcus  epidermidis CMST-Pi 1 isolated from the gut of shrimp
mendapatkan  bakteri CECT 9 yang ditumbuhkan  dalam  media  mengandung  substrat minyak  zaitun  bekas  pakai  sebanyak  2  %
memiliki aktivitas lipase paling tinggi sebesar 0,7 U/ml  setelah  72  jam  inkubasi.  Haba  dkk.  (2009) juga  menguji  aktivitas  lipase  menggunakan ga  matahari  bekas  pakai
Staphylococcus aureus CECT
9 menghasilkan akivitas sebesar 2,4 U/ml setelah inkubasi  selama  144  jam.  Contoh  substrat  lain
minyak  hati  ikan  cod  dan  minyak masing 2,5 %  pada bakteri bakteri taphylococcus epidermidis CMST-Pi 1 menghasilkan  aktivitas  lipase  optimum  sebesar 14,8 U/ml dan 13,7 U/ml setelah 48 jam inkubasi
Aktivitas  lipase  sangat  dipengaruhi  oleh jenis  mikroba,  substrat,  konsentrasi,  suhu,  serta g  berhubungan  dengan  fase Oleh  karena  itu,  besarnya aktivitas  lipase  pada  penelitian  ini  tidak  bisa dijadikan  tolak  ukur  tetap  karena  aktivitas  lipase masing  isolat  dapat  berbeda-beda pada  setiap  fase  dan  pada  setiap  waktu  inkubasi.
Konsentrasi  dan  jenis  substrat  juga  berpengaruh pada  besarnya  aktivitas  lipase.  Oleh  itu,  perlu dilakukan  penelitian  lanjutan  mengenai  optimasi aktivitas lipase dari berbagai parameter tersebut.

## KESIMPULAN
Dari  total  17  isolat,  terdapat  4  isolat  yang memiliki  diameter  zona  bening  tertinggi,  yaitu isolat  1me  (4.08±0,21  mm),  3ma  (3,94±0,03  mm) 15  mm),  dan  3mc  (4,02±0,15  mm). dinyatakan  sebagai  isolat  terunggul ktivitas  lipase  optimum
5  U/ml  pada  jam  ke-34

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  mengucapkan  terima  kasih  pada  pihak berwenang  PT  Multi  Agro,  PT  Maya  Muncar,  dan PT Sari Laut. Kami mengucapkan terima kasih atas rekan  Jurusan Biologi, FMIPA, segala  masukan  dan

## DAFTAR PUSTAKA
Cooper, P.F., D.A. Hobson & Susan Jones.
Sewage  treatment  by  reed  bed -14.
Esakkiraj,  P.,  M.  Rajkumarbharathi,  A. Palavesam,  G.Immanuel.  2009.  Lipase Staphylococcus  epidermidis Pi 1 isolated from the gut of shrimp
Penaeus indicus. J. Ann Microbiol.; 60:37– 42.
[3] Eugene,  W.S.  1974.  Industrial  application of  microbial  lipases  :  a  review.  J.  Am.  Oil Chem. Soc.;51(2): 12-16.
[4] Falch,  A.  &  E.  Falch.  1991.  Industrial Enzymes Developments In Production And Application. J. Biotechnol Adv.;9: 643-658.
[5] Fuji, T., T. Tatara and M. Minagawa, 1986. Studies  on  Propionibacterium  acnes  lipase in  seborrheic  application  of  lipolytic enzyme  in  detergent  dermatitis  and  other skin  diseases  and  unsei-in.  J.  Am.  Oil Chem. Soc.; 63: 796-799.
[6] Haba, E., O. Bresco, C. Ferrer, A. Marques, M.  Busquets,    A.  Manresa.  2000.  Isolation of  lipase  secreting  bacteria  by  deploying used  frying  oil  as  selective  substrate.  J. Enzyme Microbial. Techno;.26:40-44.
[7] Hasan,  F.,  A.  S.  Aamer,  Hameed  A.  2006. Industrial applications of microbial lipases. J. Enzyme Microbial. Tech.; 39;2: 235-251.
[8] Higaki, S., M. Morohashi, 2003. Studies on Propionibacterium acnes lipase in seborrheic  application  of  lipolytic  enzyme in  detergent  dermatitis  and  other  skin diseases and Unsei-in. industries. J. Am. Oil Chem. Soc., 63: 796-799.
[9] Jaeger,  K.E.,  Ransac  S.,  Dijkstra  B.W., Colson C., van Heuvel M., Misset O. 1994. Bacterial lipases. FEMS Microbiol. Rev. 15 (1994)29–63.
[10] Joseph,  B.,  P.  Ramteke,  G.  Thomas.  2008. Cold  active  microbial  lipases:  Some  hot issues and recent developments. J. Biotechnol. Ad.; 26:457–470.
[11] Kurnia, D.R.D. 2010. Studi Aktivitas Enzim Lipase  dari  Aspergillus  niger  sebagai biokatalis  pada  proses  gliserolisis  untuk menghasilkan monoasilgliserol. Tesis
Program  Pascasarjana  Jurusan  Teknik Kimia Universitas Diponegoro. Semarang.
[12] Linko,  Y.Y.,  M.  Lamsa,  X.  Wu,  E. Uosukainen. 1998. Detection and determination  of  products  by  lipase biocatalyse. J. Biotechnol.; 66(1): 41-50.
[13] Noureddini,  H.,  X.  Gao  &  R.S.  Philkana. 2005.  Immobilized  Pseudomonas  cepacia lipase  for  biodiesel  fuel  production  from soybean oil. J. Bioresour. 269:5771-5779.
[14] Rizqon,  M.  2013.  Pengaruh  Pencemaran
Limbah  Cair  Industri  Pengolahan  Ikan Terhadap Kualitas Air Tanah di Kecamatan Muncar Kabupaten Banyuwangi.  Skripsi  Sarjana  Pendidikan. Program Pendidikan Geografi UM.
Malang.
[15] Setiyono & Satmoko Yudo. 2008. Dampak pencemaran  lingkungan  akibat  limbah industri  pengolahan  ikan  di  Muncar  (studi kasus kawasan industri pengolahan ikan di Muncar, Banyuwangi). JAI (4),1: 23-27..
[16] Sharma,  R.,  Y.  Christi  and  U.C.  Banerjee.
2001. Production, purification,
characterization  and production application of lipases. J. Biotech. Ad.;19:627-662.
[17] Shu, Zhengyu, Lin R., Jiang H., Zhang Y., Wang  M.,  Huang  J.  2009.  A  rapid  and efficient  method  for  directed  screening  of lipase-producing  Burkholderia  cepacia complex  strains  with  organic  solvent tolerance  from  rhizosphere.  J.  Bioscience Bioengineering  (107) 6; 658-661.
[18] Snellman,  E.A.,  E.R.  Sullivan  and  R.R. Colwell,  2002.  Purification  and  properties of the extracellular immobilized Pseudomonas  cepacia  lipase  for  lipase, LipA,  of  acinetobacter  sp.  RAG-1.  J. Bioresour 269: 5771-5779.
[19] Bajpai, P. 1999. Application of enzymes in the  pulp  and  paper  industry.  J.  Biotechnol. Progr; 15: 147-157.