## PENDAHULUAN
Salah satu upaya dalam perbaikan  produktivitas  ternak  sapi dapat  dilakukan  dengan  metode Inseminasi Buatan (IB). Keberhasilan Inseminasi Buatan (IB) dapat dicapai melalui semen pejantan, sehingga ketersediaan semen  yang  dibutuhkan  setiap  saat dalam keadaan yang masih baik serta masih  layak  untik  inseminasi  dapat dilakukan  dengan  cara  pengawetan semen  yaitu  dengan  melakukan pengenceran semen.
Pengenceran  semen  dilakukan untuk  mengurangi  kepadatan  dan menjaga kelangsungan hidup spermatozoa. Bahan pengencer tersebut mengandung zat-zat makanan  sebagai  sumber  energi  dan tidak bersifat racun bagi spermatozoa, dapat melindungi sepermatozoa  dari  kejut  dingin (cold shock) ,  menghambat  pertumbuhan
1 Dosen Fakultas Peternakan Universitas Jambi
mikroba serta bersifat sebagai penyangga (Djanuar, 1985).
Tris  merupakan  larutan  yang mengandung asam sitrat dan fruktosa yang  berperan  sebagai  penyangga (buffer),  untuk  mencegah  perubahan pH  akibat  asam  laktat  dari  hasil metabolisme spermatozoa serta mempertahankan  tekanan  osmotik dan  keseimbangan  elektrolit,  sumber energi  dan  melindungi  spermatozoa dari kejut dingin (cold shock). Selain itu  tris  mempunyai  kemampuan dalam memberikan motilitas spermatozoa yang lebih tinggi, karena tris lebih banyak mengandung zat-zat makanan antara lain fruktosa, asam  sitrat  yang  dapat  dipanaskan sebagai  buffer  dan  meningkatkan aktifitas  spermatozoa  (Facroerrozi, 1997).
Manfaat  dari  kuning  telur terletak  pada  lipoprotein  dan  lesitin yang terkandung didalamnya (Kampsehmidt dkk, 1953; Bleckshaw,  1954 dalam Torlihere

## EFEK PENGGUNAAN SUSU SKIM DENGAN PENGENCER TRIS KUNING TELUR TERHADAP DAYA TAHAN HIDUP SPERMATOZOA SAPI
Fachroerrozi Hoesni 1

## Abstract
This  research  was  carried  out  in  the  laboratory  of  regional  technical services  Unit  (UNIT)  Petyernakan  Agency  of Jambi  province,  began  on  24  April 2016 until May 22, 2016
This research aims to know the effect of the use of skim milk with diluent tris egg  yolk  endurance  against  live  spermatozoa.  The  research  method  used alphabets experiment, using Random Design Group (RAK)  and 5 (five) treatment and 5 (five) groups. Asthe group is ejakulat. As for the moderate i.e. P0 = 100% + skim milk without diluent tris yolk, P1 = 95% skim milk + tris egg yolks 5%, P2 = 90% skim milk + tris egg yolks 10%, P3 = 85% skim milk + tris egg yolk 15%, P4 = skim milk 80% + 20% yolk tris.
The results showed that the granting of skim milk with egg yolk tris diluent on P3 treatment gives a very real influence (P < 0.01) in maintaining the rate of decrease inendurance live bovine spermatozoa.
Results of the study it was concluded that the awarding of the diluent skim milk  until  level  15%  gives  the  best  result,  so  was  able  to  suppress  the  rate  of decrease  in  endurance  live  bovine  spermatozoa  are  stored  for  2  days  at  a temperature of 5 ℃ .
Keywords: skim milk, egg yolks, endurance live spermatozoa bovine
1985) yang bekerja mempertahankan dan  melindungi  integritas  selubung lipoprotein  dari  sel  spermatozoa (Bleckshaw  dan  Salisbury,  1957 dalam Torlihere  1985).  Kuning  telur juga  mengandung  glukosa,  yang lebih  suka  diprgunakan  oleh  sel-sel sperma  sapi  untuk  metabolismenya dari  pada  fruktosayang  terdapat dalam  semen  (Van  Tienhoven dkk , 1952 dalam Torlihere 1985). Kuning telur mengandung asam-asam amino, karbohidrat,  vitamin  dan  mineral untuk  kebutuhan  hidup  spermatozoa. Selain  itu  dalam  kuning  telur terdapat  senyawa  anti  kejut  yang berperan  melindungi  spermatozoa dari kkejut dingin. Kuning telur juga mengandung  glukosa,  bermacam- macam  protein,  vitamin  yang  larut dalam air dan lemak serta viskositasnya yang dapat menguntungkan  bagi  spermatozoa (Djanuar, 1985). Sebagaimana  diketahui  susu skim  mengandung  zat  nutrisi  yang dapat dimanfaatkan oleh spermatozoa  sebagai  sumber  energi selain itu susu skim juga mengandung  zat  lipoprotein  dan lesitin  sehingga  bisa  digunakan dalam pengencer semen untuk melindungi spermatozoa dari pengaruh  kejut  dingin (cold  shock)
dan air susu juga mengandung enzim yang  hancur  pada  waktu  pemanasan dimana  pemanasan  air  susu  diatas 80 ℃ akan  melepaskan  gugusan sulfhydril  (-SH)  yang  berfungsi sebagai  zat  reduktif  yang  mengatur metabolisme oksidatif sperma.
Atas  dasar  tersebut,  penulis melakukan  penelitian  ini  untuk mengetahui “  Efek  Penggunaan Susu Skim Dengan Pengencer Tris Kuning  Telur  Terhadap  Daya Tahan Hidup Spermatozoa Sapi ”.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui daya tahan hidup spermatozoa sapi pada suhu
penyimpanan  5 ℃ dalam  pengencer tris  kuning  telur  dengan  pemberian susu skim.
Hasil  penelitian  ini  diharapkan dapat  memberikan  informasi  tentang efek  penggunaan  susu  skim  dengan pengencer  tris  kuning  telur  terhadap daya  tahan  spermatozoa  sapi  yang berguna  bagi  program  Inseminasi Buatan pada ternak sapi.

## TINJAUAN PUSTAKA
Keadaan Umum Semen Ternak Sapi
Semen  adalah  sekresi  organ kelamin  jantan  yang  secara  normal diejakulasikan kedalam kelamin betina  sewaktu  kopulasi  atau  dapat ditampung  dengan  berbagai  cara untuk  keperluan  Inseminasi  Buatan (Partodihardjo, 1992). Suhartodjo (1980)
menambahkan  bahwa  semen  yang diejakulasikan terdiri atas dua bagian yaitu  spermatozoa  yang  dihasilkan oleh  tubuli  seminiferi  atau  epithel kecambah di dalam testis dan plasma simen  dihasilkan  oleh  epididymis dan  kelenjar  kelamin  pelengkap yakni  vesica  seminalis,  prostat  dan cowpar.
Sel  spermatozoa  terdiri  dari dua  bagian  yaitu  bagian  kepala  dan bagian ekor yang diselaputi membran spermatozoa,  dimana  bagian  kepala berperan  dalam  melakukan  penetrasi sel  telur  guna  memasukkan  materi genetik,  sedangkan  bagian  ekor mengandung  perangkat  metabolisme untuk  menghasilkan  energi  dan merupakan perangkat alat pergerakan spermatozoa (Salamon and Maxwell, 1987).  Plasma  semen  merupakan media pergerakan spermatozoa didalam  saluran  kelamin  betina, selain itu juga sebagai makanan bagi spermatozoa (Partodihadjo, 1992).
Djanuar  (1985),  menyatakan bahwa  semen  mengandung  unsur- unsur organik dan anorganik, dimana unsur  organik  semen  terdiri  dari
karbohidrat,  asam  askorbat,  asam laktat,  asam  amino,  asam  asetat, senyawa  yang  mengandung  fospat, vitamin dan enzim.
Plasma  semen  berfungsi  untuk pergerakan spermatozoa dalam saluran reproduksi jantan dan betina, cairan  ini  menyediakan  makanan, larutan  penyangga  dan  mengandung zat  yang  mengandung  kontraksi vagina dan uterus untuk meningkatkan pergerakan spermatozoa  dalam  saluran  kelamin betina  (Perry,  1960 dalam Djanuar, 1985). Gelembung-gelembung spermatozoa  yang  berenergi  dalam arah yang sama merupakan suatu ciri khas  semen sapi yang belum diencerkan  bila  dilihat  dibawah mikroskop (Toelihere, 1985). Faktor-faktor yang mempengaruhi kualitas dan kuantitas lingkungan semen antara lain genetik,  libido,  penyakit,  makanan (Djanuar, 1985). Selain itu perlakuan dan  transportasi  juga  mempengaruhi kualitas  dan  kuantitas  semen  (Seit, 1954).
Presentase Hidup Spermatozoa Untuk  memperoleh  daya  tahan hidup  spermatozoa  yang  maksimal pada  suhu  5 ℃ ,  yaitu  dengan  cara melindungi  semen  yang  tampung kemudian  segera  diencerkan  dan langsung didinginkan secara
bertahap  dimana  suhu  penyimpanan semen  cair  yang  optimal  adalah  5 ℃
(Salisbury  dan  Van  Demark,  1985
dalam Toelihere, 1985).
Faktor-faktor yang dapat menyebabkan  viabilitas  spermatozoa adalah  kepadatan  dalam  medium pengencaran,  karena  metabolisme berkaitan erat dengan jumlah spermatozoa  hidup,  semakin  tinggi kosentrasi spermatozoa hidup semakin banyak pula sisa metabolisme,  jika  tidak  dinetralisir oleh  larutan  penyangga  yang  ada didalam medium akan memyebabkan
kekacauan dan kematian bagi spermatozoa (Djanuar, 1985).
Pada  umumnya  spermatozoa sangat  aktif  tahan  lama  pada  pH sekitar  7.0  (Toelihere,  1985).  Daya tahan  hidup  spermatozoa  dapat dipertahankan  dengan  menambah bahan  pengencer  (Melrouse,  1976). Menurut  Seit  (1954),  bahwa  faktor utama  yang  menentukan  daya  tahan hidup  spermatozoa  adalah  suhu penyimpanan  dan  laju  penurunan suhu.
Motilitas Spermatozoa Salah satu pengujian spermatozoa  yang  jelas  dan  mudah adalah  motilitas.  Motilitas  diamati berdasarkan  persentase  spermatozoa yang mati dan kualitas pergerakannya, walaupun spermatozoa tidak memerlukan kemmpuan  dari  tempat  deposisi semen  ketempat  fertilitas  namun motilitas  diperlukan  pada  bagian tertentu misalnya pada saat melewati mukosa uterus (Hunter, 1992).
Motilitas  diamati  berdasarkan presentase  spermatozoa  yang  mati dan kualitas pergerakannya, walaupun spermatozoa tidak memerlukan  kemampuan  bergerak dari tempat deposisi semen ketempat fertilisasi, namun
motilitas diperlukan  pada  bagian  tertentu misalnya pada saat melewati mukosa uterus (Hunter, 1995).
Djanuar  (1985),  menyatakan untuk  memperoleh  daya  tahan  hidup spermatozoa  yang  maksimal  pada suhu 5 ℃ yaitu dengan cara melindungi  semen  yang  ditampung kemudian  segera  diencerkan  dan langsung didinginkan secara
bertahap,  suhu  penyimpanan  semen cair yang optimal adalah 5 ℃ . Persentase motilitas spermatozoa  yang  ditunjukkan  oleh persentase pergerakan individu
kurang  dari  40  %  menunjukkan bahwa  kualitas  semen  kurang  baik.
Bila  motilitas  spermatozoa  berkisar 50  –  80  %  dengan  gerakan  motil progresif dinyatakan fertil (Umiyasih dkk,  1993).  Seekor  dapat  dinyatakan fertil bila menghasilkan spermatozoa dengan persentase berkisar antara 60 – 90 % (Toelihere, 1985).
Pengenceran dan Pengawetan
Semen
Tujuan  pengenceran  semen disamping untuk memperbanyak volume  juga  untuk  pengawetan semen dan untuk melindungi spermatozoa selama pengawetan
(Seit,  1954 dalam Toelihere,  1994). Syarat-syarat  bahan  pengencer  yaitu murah dan mudah didapat, mengandung unsur-unsur yang hampir sama sifat fisik dan kimianya dengan semen, tetapi mempertahankan dan tidak membatasi daya fertilisasi spermatozoa serta mampu memberikan  kemungkinan  penilaian spermatozoa  setelah  pengenceran (Toelihere, 1994). Hafez (1993), menyatakan bahwa  tinggi  rendahnya  tingkat pengenceran  semen  tergantung  pada volume  semen,  konsentrasi  semen, persentase hidup spermatozoa, motilitas  spermatozoa  dan  keperluan dosis spermatozoa untuk IB. Kepasatan spermatozoa didalam  suatu  medium  pengencer akan  menentukan  terhadap  daya tahan  hidupnya,  hal  ini  karena metabolisme  berkaitan  erat  dengan jumlah  spermatozoa  hidup,  semakin tinggi konsentrasi spermatozoa, semakin  banyak  pula  sisa  hasil metabolisme.  Jika  tidak  dinetralisir oleh  larutan  penyangga  yang  ada dalam medium, maka akan menyebabkan keracunan dan kematian spermatozoa (Hunter,
1992). Menurut Djanuar (1985) bahwa
suhu  penyimpanan  semen  cair  yang optimum  adalah  sekitar  5 ℃ atau
rendah tergantung dari tingkat kecepatan  pendinginan.  Toelihere (1994) menyatakan bahwa kerusakan spermatozoa  karena  kejut  dingin dapat dikurangi apabila semen dicampur  bahan  pelindung  atau pengencer setelah didinginkan menjadi 5 ℃ . Antibiotik adalah bahan kimia yang dihasilkan oleh mikroorganisme dan mempunyai kemampuan menghambat perkembangan biakan dan membunuh  mikroorganisme  lainnya (Hagan,  1991).  Menurut  Melrouse (1976),  kombinasi  antara  pennecillin streptomycin dalam larutan pengencer akan menghambat pertumbuhan kuman pada suhu 5 ℃

## Susu Skim
Penggunaan  air  susu  skim berfungsi  sebagai  bahan  pelindung sperma  dari  pengaruh  kejut  dingin sekaligus  sebagai  bahan  makanan bagi spermatozoa (Perry, 1960 dalam Toelihere,  1994).  Pengencer  susu skim  yang  tidak  dipanaskan  terlebih dahulu  menyebabkan  spermatozoa mati  dalam  waktu  1  sampai  2  hari tetapi  jika  susu  tersebut  dipanaskan terlebih  dahulu  selama  beberapa menit sebelum dipakai akan memyebabkan  spermatozoa  hidup (Salisbury  dan  Van  Demark,  1985). Dalam  air  susu  mentah  mengandung bahan yang bersifat racun dan enzim yang  dapat  mematikan  spermatozoa (Perry, 1960 dalam Toelihere, 1994). Larutan  susu  skim  9  %  yang dipanaskan dengan temperatur tinggi sebagai bahan pengencer yang diencerkan dengan aquadestilata akan memiliki fertilitas tinggi
(Melrouse, 1979). Susu skim
merupakan  bahan  pengencer  yang banyak  digunakan  karena  dapat melindungi  spermatozoa  dari  kejut dingin dengan daya pelindung berupa lipoprotein  dan  lesitin  yang  bekerja pada selubung lipoprotein sel sperma, disamping itu susu skim juga
mengandung  glukosa,  bermacam- macam  protein  vitamin  yang  larut dalam  lemak  yang  menguntungkan bagi  sel  spermatozoa  (Salisbury  dan Van Demark, 1985).
Tris Kuning Telur Tris  mempunyai  kemampuan dalam memberikan motilitas spermatozoa yang lebih tinggi, karena tris lebih banyak mengandung zat-zat makanan antara lain fruktosa, asam  sitrat  yang  dapat  berperan sebagai  buffer  dan  meningkatkan aktifitas  spermatozoa  (Fachroerozi, 1997).
Pengencer  tris  selain  berfungsi sebagai  penyangga  untuk  mencegah perubahan  pH,  juga  berfungsi  untuk mempertahankan  tekanan  osmotik dan  kesiambangan  elektrolit  dan sumber energi (Hafez, 1993).
Kuning  telur  merupakan  bahan pengencer yang banyak dipergunakan karena dapat melindungi  spermatozoa  dari  kejut dingin, dengan daya pelindung berupa  lipoprotein  san  lesitin  yang bekerja pada selubung lipoprotein sel spermatozoa, disamping itu bahan ini juga mengandung glukosa, bermacam-bermacam protein, vitamin yang larut dalam lemak serta viskositasnya  yang  menguntungkan bagi  sel  spermatozoa  (Djanuar, 1985). Fachroerrozi (1997), menyatakan bahwa motilitas spermatozoa meningkat sejalan dengan  meningkatnya  pemakaian kadar  kuning  telur,  pemakaian  kadar kuning  telur  yang  menghasilkan motilitas tertinggi yaitu 22,5%.
Daya Tahan Hidup Spermatozoa Ketahanan  hidup  spermatozoa
adalah kemampuan spermatozoa untuk  tetap  aktif  bergerak  setelah inkubasi  pada  suhu  kamar  atau setelah  disimpan  pada  suhu  rendah (djanuar, 1985).
Faktor-faktor yang dapat
menurunkan daya tahan hidup spermatozoa adaah kepadatan spermatozoa dalam medium pengencer, karena metabolisme berkaitan erat dengan jumlah spermatozoa  hidup.  Semakin  tinggi konsentrasi spermatozoa hidup, semakin banyak pula sisa metabolisme  jika  tidak  dinetralisir oleh  larutan  penyangga  yang  ada didalam  medium  akan  menyebabkan keracunan dan kematian bagi spermatozoa  (Perry,  1960 dalam djanuar, 1985). Faktor-faktor yang dapat menyebabkan  dayan  tahan  hidup spermatozoa berkurang setelah disadap yaitu cahaya matahari langsung,  kejut  dingin (cold  shock) , kontaminasi  dengan  mikroba,  zat kimia  yang  bersifat  racun,  panas yang  berlebihan  dan  goncangan sewaktu membawa semen (Toelihere,  1994).  Melrouse  (1976) menyatakan bahwa daya tahan hidup spermatozoa  dapat  dipertahankan dengan menambah pengencer. Selanjutnya Seit (1954) menyattakan bahwa  faktor  utama  yang  sangat menentukan daya tahan hidup spermatozoa  untuk  mencapai  suhu penyimpanan  adalah  laju  penurunan suhu.

## METODE PENELITIAN
Tempat dan Waktu
Penelitian  ini  dilaksanakan  di Laboratorium Unit Pelayanan Teknis Daerah  (UPTD)  Dinas  Perntenakan Provinsi  Jambi,  mulai  tanggal  24 April  2016  sampai  dengan  22  Mei 2016.

## Rancangan Penelitian
Materi
Materi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  semen  sapi Simmental  yang  mempunyai  ciri-ciri bulu berwarna krem agak kecoklatan, bagian  muka  dari  lutut  kebawah  dan ujung  ekor  berwarna  putih,  warna
putih  pada  bagian  muka  bersifat dominan dari satu ekor sapi pejantan sebanyak 5 ejakulat dengan menggunakan  vagina  buatan  yang diambil  setiap  hari  selasa  dan  kamis yang  ada  di  Dinas  Pertenakan Provinsi Jambi.
Alat Alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  diantaranya  vagina buatan,  tabung  penampung  tabung reaksi  berskala  spatula,  gelas  ukur, lemari  pendingin,  pipet  erit  rosit, oven,  termon  es,  mikroskop,  objek glass,  cover  glass,  alumunium  foii, counter,  lampu  spiritus  dan  jarum suntik.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  yaitu susu  skim,  kuning  telur,  larutan  tris sebagai pengencer, asam sitrat, NaCl 3%,  NaCl  9%,  eosin  2%,  antibiotik penicillin dan streptomycin.

## Rancangan Percobaan
Rancangan  percobaan  yang digunakan  adalah  Rancangan  Acak Kelompok (RAK) dengan 5 perlakuan  dan  5  kelompok,  sebagai kelompok adalah ejakulat. Adapun perlakuannya sebagai berikut: P0  =  Susu  skim  100%  +  tanpa pengencer tris kuning telur P1  =  Susu  skim  95%  +  tris  kuning telur 5%
P2  =  Susu  skim  90%  +  tris  kuning telur 10%
P3  =  Susu  skim  85%  +  tris  kuning telur 15%
P4  =  Susu  skim  80%  +  tris  kuning telur 20%
Adapun model matematika Rancangan  Acak  Kelompok  tersebut adalah sebagai berikut :
Yij = + Pi + Kj + ∑ij Yij = Perubahan yang diamati µ = Rata-rata umum Pi = Perlakuan ke – i
Kj = Kelompok ke – j
∑ij  =  Galat  perlakuan  ke-i  dan kelompok ke-j Cara Kerja Persiapan  alat. Alat-alat  yang digunakan  sebelumnya  disetrilisasi terlebih dahulu dengan menggunakan oven bersuhu 160°C selama 1 jam. Pembuatan pengencer larutan tris. Dalam erlenmeyer yang bersih  dan  kerinng.  Pengencer  tris tersebut terdiri dari 3,049 gr tris, 1,25 gr fruktosa, 1,70 gr asam sitrat, yang dilarutkan dalam 100 ml aquadestilita.  Kemudian  dipanaskan dalam  pemanas  air  yang  bersuhu 100°C  selama  5-10  menit  sampai jernih  sambil  dianduk.  Kemuadian larutan  tersebut  didinginkan  sampai mencapai suhu kamar. Pembuatan pengencer kuning  telur. Telur  ayam  ras dibersihkan dengan kapas beralkohol, kemudian pisahkan kuning dengan putih telurnya.
Kuning  telur  diletakkan  pada  kertas saring  yang  diguling-gulingkan  agar putih yang tertinggal terhisap. Kuning telur tusuk dengan pinset/scapel dan dituangkan kedalam gelas ukur dengan corong.
Pembuatan  pengencer  susu skim. Dilakukan dengan menyiapkan susu  skim  10  gr  yang  dimasukkan kegelas ukur  yang diisi aquadestilata sebanyal  100  ml  kemudian  susu dipanaskan  dengan  pemanas  air selama  1  jam  dengan  suhu  92°C. Kemudian  susu  tersebut  didinginkan dengan  aliran  air  dingin  selama  5 menit  dan  tambahkan  antibiotik. Masukkan  pengencer  tris  80  ml  dan kuning  telur  20  ml  kedalaman  gelas ukur dengan perbandingan 4:1 menggunakan corong.
Pemeriksaan  awal. Pada  saat melakukan  penampungan  semen, semen sapi ditampung dengan menggunakan vagina buatan. Setelah semen diperoleh lalu diperiksa secara makroskopis  yaitu  volume,  bau,
warna,  kekentalan,  konsentrasi  dan secara  mikroskopis  meliputi  gerakan massa, persentase hidup spermatozoa dan motilitas spermatozoa.
Pencapuran semen dan pengencer. Semen  yang  diperoleh
ditambahkan kedalam masing- masing tabung yang berisi pengencer sesuai perlakuan.
Adapun  komposisi  pengencer perlakuan secara rinci adalah sebagai berikut : Tabel 1 . Komposisi Pengencer dari masing-masing Perlakuan Perlakuan Komposisi Tris Kuning Streptomycyin Pennicillin Susu Skim Telur (%) (mg/ 100 ml) (mg/ 100 ml) P0 100 % 0 1 1 P1 95 % 5 1 1 P2 90 % 10 1 1 P3 85 % 15 1 1 P4 80 % 20 1 1 Semen  diencerkan  menurut komposisi  pengencer  yang  telah ditentukan,  kemudian  kelima  tabung perlakuan tadi disimpan dalam
lemari pendingin bersuhu 5°Cselama dua hari. Pemeriksaan  akhir. Setelah dua hari penyimpanan, kelima tabung  di  keluarkan  dan  dibiarkan pada  suhu  kamar  selama  10  menit, kemudian baru dilakukan pemeriksaan  motilitas  spermatozoa dan  persentase  spermatozoa.  Sampai tanda  101,  ini  berarti  pengenceran 200  X.  Larutan  dalam  pipet  tersebut dikocok  secara  hati-hati  dengan menggoyangkan dalam bentuk angka 8  selama  2-3  menit.  Keluarka beberapa  tetes  dan  kocok  lagi  lalu teteskan pada kamar hitung neubauer yang sebelumnya telah ditutup dengan cover glass. Kemudian diamati  dibawah  mikroskop  dengan pembesaran  10  x  40  (Toelihere, 1980). Rumus perhitungan konsentrasi spermatozoa adalah : Konsentrasi  sperma  =  X  x  400/80  x
10 x 200 = X x 0,01 juta/m³
= X x 10 sperma/ml
Ketarangan  X  :  jumlah  sperma  pada lima kamar yang dihitung.
Perhitungan persentase hidup spermatozoa,  penetuan  persentase hidup  spermatozoa  dengan  cara semen  diteteskan  pada  objek  glass, lalu  diteteskan  dengan  larutan  eosin dan diaduk merata kemudian diambil kaca objek lain dan ditarik kebelakang  dengan  kemimiringan 45°  hingga  kaca  objek  tersebut menyentuh  semen.  Setelah  semen melekat  lalu  kaca  objek  tersebut didorong kedepan selanjutnya dipanaska dengan lampu spiritus lalu diamati dengan menggunakan mikroskop  dengan  pembesaran  10  x 40 (Toelihera, 1980).
Persentase hidup= ∑Sperma Hidup x 100%

## ∑Sperma Hidup + ∑Sperma Mati
Motilitas spermatozoa , penentuan  motilitas  awal  dengan cara, yaitu satu tetes semen diteteskan diatas objek glass
tambahkan  1  tetes  NaCl  Fisiologis 0,9%,  kemudian  ditutup  dengan cover  glass  dan  diletakkan  dibawah mikroskop  dengan  pembesaran  10  x
40 kemudian lihat pergerakan sperma yang  berupa  gelombang-gelombang sperma  yang  bergerak  dalam  arah yang sama, dengan penilaian sebagai berikut,  0  =  sperma  tidak  bergerak  ; 1  =  sperma  bergerak  lambat,  gerak progresif 25% ; 2 = sperma bergerak lambat,  berayun,  melingkar  dan bergerak  progresif  25-50%  ;  3  = sperma  progresif  50-70%  sehingga menimbulkan  gerakan  massa  atau
gelombang  ;  4  =  sperma  progresif 70-80%,  gerakan  cepat  dan  gesit, timbul  gelombang  yang  besar  ;  5  = sperma  progresif  ≥  80%  (Toelihere, 1980).
Sementara  untuk  menghitung motilitas akhir setelah diberi perlakuan  dan  disimpan  pada  suhu 5°C  selama  dua  hari  menggunakan rumus dibawah ini.
Motilitas akhir = 200 – ∑ Sperma mati x 100% 200
Perubahan yang diamati Perubahan  yang  diamati  pada penelitian ini adalah presentasi hidup spermatozoa dan motilitas spermatozoa setelah disimpan selama 2 hari pada suhu 5°C.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Keadaan Awal Semen Sapi Gambaran  awal  meng0enai semen sapi Simmental yang digunakan  dalam  penelitian  dapat dilihat dalam tabel 2. Tabel 2. Keadaan Awal Semen Sapi Simmental sebelum pengenceran No Keadaan Awal Semen Rataan 1 Volume Semen (ml) 5.06 ± 0.42 2 Persentase Hidup Spermatozoa (%) 74.68 ± 2.04 3 Motilitas Spermatozoa (%) 72.00 ± 2.73 4 Konsentrasi Spermatozoa (juta/ml) 422.20 ± 64.81 Dari  tabel  2  dapat  dilihat bahwa  hasil  rataan  keadaan  awal semen  memberikan  indikasi  bahwa semen sapi Simmental yang
digunakan  memenuhi  syarat  dalam proses  pengenceran.  Rataan  volume semen  pada  keadaan  awal  sebelum perlakuan  adalah  5.06  ml,  hal  ini sesuai  dengan  pendapat  toelihere (1985)  yang  menyatakan  bahwa semen  sapi  normal  memiliki  volume 5-8  ml  dengan  konsentrasi  sperma antara  300-2500  juta/ml  dan  jumlah
motilitas  spermatozoa  awal  sebesar 65.00  %.  Rantaan  persentase  hidup spermatozoa  pada  keadaan  awal semen  sebesar  74.68  %  dengan rataan  motilitas  spermatozoa  sebesar 72.00  %  ini  berarti  rataan  tersebut dapat dikategorikan baik.
Pengaruh  Perlakuan  Terhadap Persentase Hidup Spermatozoa Pengaruh  perlakuan  terhadap persentase  hidup  spermatozoa  dapat dilihat pada tabel 3. Tabel 3. Rataan Persentase Hidup Spermatozoa Sapi Simmental Setelah Penyimpanan 2 Hari Perlakuan Rataan Persentase (%) Keterangan P0 46.18 D P1 57.56 B P2 51.70 C P3 62.48 A P4 41.16 E
Keterangan:  Huruf  besar  yang  tidak  sama  dinyatakan  berbeda  sangat  nyata (P<0.01)
Dari  tabel  3  terlihat  bahwa pemberian pengecer susu skim dengan tris kuning telur sangat nyata mempengaruhi persentase hidup spermatozoa  sapi  yang  disimpan pada  suhu  5°C  (P<0.01).  perlakuan
P3  memberikan  hasil  terbaik  diikuti perilakuan  P1,  P2,  P0  dan  P4. Kondisi  ini  diduga  pada  perlakuan P3  pengencer  susu  skim  dengan  tris kuning  telur  mempunyai  kandungan penyangga  yang  terdapat  dalam pengencer,  yang  dapat  menetralisir hasil  metabolisme  seperti  asam latktat  sehingga  spermatozoa  dapat bertahan  hidup.  Sejalan  dengan (Hafez,  1993),  bahwa  tris  juga berfungsi  sebagai  penyangga  untuk mencegah perubahan pH.
Pada P1, P2, P0 dan P4 diduga
susu  skim  dengan  tris  kuning  telur
dalam  menetralisir  sisa  metabolisme akibat aktifitas spermatozoa meningkat sehingga banyak spermatozoa  yang  mati,  hal  ini sejalan  pernyataan  Djanuar  (1985) terjadinya metabolisme akan mengakibatkan penimbunan sisa metabolisme,  penurunan  pH  dan kehabisan bahan keperluan metabolisme, peningkatan suhu semen akan mengakibatkan kecepatan  metabolisme  dan  aktifitas spermatozoa  sehingga  spermatozoa mati.
Pengaruh  Perlakuan  Terhadap Motilitas Spermatozoa
Pengaruh  perlakuan  terhadap motilitas  spermatozoa  dapat  dilihat pada tabel 4. Tabel 4. Rataan Motilitas Spermatozoa Sapi Simmental Setelah Penyimpana 2 Hari Perlakuan Rataan Persentase (%) Keterangan P0 45.4 D P1 55.6 B P2 50.1 C P3 60.7 A P4 40.8 E Keterangan: Huruf besar yang tidak sama dinyatakan berbeda sangat nyata (P<0.01) Dari  tabel  4  terlihat  bahwa pengaruh  pemberian  pengencer  susu skim  dengan  tris  kuning  telur berbeda sangat nyata (P<0.01)
terhadap motilitas spermatozoa. Perlakuan P3 memberikan persentase motilitas  spermatozoa  yang  lebih baik  dibandingkan  dengan  perlakuan P1,  P2,  P0  dan  P4.  Hal  ini  diduga pada  perlakuan  P3  pemberian  susu skim  dengan  tris  kuning  telur  yang ideal diamana terjadi subtitusi antara zat-zat  nutrisi  yang  terkandung dalam susu skim dan tris kuning telur untuk mempertahankan motilitas
spermatozoa yang disimpan selama 2 hari pada suhu 5°C.
Dari  hasil  rataan  masing- masing perlakuan terhadap spermatozoa  dapat  dilihat  bahwa pada perlakuan P1, P2, P4 menunnjukkan kecenderungan motlitas menurun, kondisi ini diduga terjadi perubahan pH meskipn belum berakibat fatal terhadap spermatozoa. Berbagai  bahan  penyanggah  dapat dipakai  untuk  mempertahankan  pH semen, antara lain penyanggah sitrat, tris  yang  dapat  mempertahankan  pH dari  kejut  dingin  (cold  shock) sehingga pH tidak mengalami
penurunan  akibat  asam  laktat  yang berpengaruh terhadap motilitas spermatozoa. Selain itu diduga karena  perlakuan  masih  memiliki cadangan  energi  untuk  bertahan hidup dan melakukan proses metabolisme dengan cara memanfaatkan  glukosa.  Hal  ini sesuai  dengan  Frandson  (1993),  agar dapat melakukan pergerakan, spermatozoa  membutuhkan  energi untuk kelangsungan hidupnya. Pada P0 (kontrol) rataan motilitas spermatozoa terjadi penurunan keadaan ini diduga karena pada  P0  tidak  terdapat  buffer sehingga tidak dapat mempertahankan  pH  semen  netral. Menurut  Toelihere  (1985),  bahwa spermatozoa menghasilkan asam laktat  dalam  jumlah  yang  tinggi  dari metabolisme fruktosa sehingga penting  untuk  memberikan  unsur penyanggah didalam medium.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian pengencer  susu  skim  sampai  taraf 15%  memberikan  hasil  yang  terbaik sehingga  mampu  menekan  laju penurunan daya tahan hidup spermatozoa  sapi  Simmental  yang disimpan  selama  2  hari  pada  suhu
5°C. DAFTAR PUSTAKA Blackshaw,  A.  W.  And  G.  W. Salisbury, 1957, Factors influencing  metabolic  activity of  bull  spermatozoa,  II.  Cold shock  and  its  prevention.  J.
DairySci., 40. 1099.
Djanuar,  1985.  Fisiologi  Reproduksi dan  Iseminasi  Buatan  pada Sapi.  Gadjah  Mada  University Press. Yogyakarta.
Hoesni  F.  1997.  Pengaruh  Kadar Kuning  Telur  Dalam  Berbagai Pengencer  Terhadap  Kualitas
Spermatozoa  Domba  Pasca
Pembekuan.  Program  Pasca
Sarjana. Universitas Padjajaran, Bandung.
Frandson,  R.D.  1993.  Anatomi  dan Fisiologi  ternak  (Anatomi  and Physiology  of  Far  Animals). Terjemahan Srigandono, B dan Praseno,  K.  Gadjah  Mada
Universitas Press. Yogyakarta.
Hafez,  E.S.E  1993.  Semen  Evaluasi,
Dalam.  E.S.E.  Hafez  (ed) Reproduction in farm Animal.Lea and Febiger. Phyladelphia. Hal 405-423. Hagan,  1991.  The  Infetion  of Domestic animal 4 (ed) Bailliere.  Tindal  and  Cox. England. Hunter, RHP. 1992. Fisiologi Ternak Reproduksi Hewan Betina Domestikasi  Terjemahan  Putra DHK.  Penerbit  ITB  Bandung Universitas dan Udayana. Hunter, RHF. 1995. Fisiologi
Tehnologi  Reproduksi  Hewan Betina Domestik. Penerbit ITB
Bandung.
Kampschmidt,  R.  F.,  D.  T.  Mayer and H. A. Herman, 1953; Lipid and  Lipoprotein  Contstituest off  egg  yolk  in  the  resistand and storageof bull spermatozoa,  j.  Dairy  sci.,  36, 733. Melrouse, DR. 1976. Artificial Insemination  in  Cattle.  CAP. England. Partidiharjo,  S.  1992.  Ilmu  Produksi Hewan. Penerbit Mutiara.
Jakarta.
Perry,  E.  J.  1960.  The  Artificial
Insemination  of  farm  Animal.
Rutgers  University  Press.  Nem Browick. New Jersey.
Salamon and Maxwell. 1987. Frozen Stroge  Of  Ram,  Semen  I. Processing  freezing,  Thewing and  Fertility  often  certifical Incemination.  Departement  of Animal  Science.  University Sidney. N. S. W. 2006.
Salisbury.  G.  W.  And  N.  L.  Van Demark 1985. Fisiologi Reproduksi dan  Inseminasi Buatan  Pada  Sapi.  Gadjah Mada Universitas Press. Yogyakarta. Seit.  B.  1954.  Pembuahan  Buatan. Balai Penerbit Indonesia. Jakarta.  Suhartodjo.  190.  Ilmu Inseminasi Buatan. Edisi Pertama.  Fakultas  Kedokteran Hewan.  Universitas  Airlangga. Surabaya. Toelihere,  M.  R.  1980.  Fisiologi Reroduksi ternak. Penerbit
Angkasa Bandung. Toelihere,  M.  R.  1985.  Inseminasi
Buatan  Pada  Ternak.  Penerbit Angkasa Bandung. Umiyasih,  N.  K.,  Whardani,  DB. Wijoyo.  1993.  Kualitas  Semen Calon  Pejantan  Sapi  Madura. Sub  Balai  Penelitan  Ternak. Grati. Malang. Van Tienhoven, A., G. W. Salisbury, N.  L.  Van  Demark  and  R.  G.
Hansen, 1952; The Preferential Utilization by bull Spermatozoa  of  Gluocose  as Compared to fructose. J. Dairy
Sci., 35. 637.