UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK METANOL Selaginella delicatula DAN Diplazium dilatatum TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
Stery B. Oroh 1) , Febby E.F. Kandou 1) , Johanis Pelealu 1) , Dingse Pandiangan 1)
1) PS Biologi FMIPA Universitas Sam Ratulangi Manado e-mail : stery_oroh@yahoo.com ; febbyefkandou@yahoo.com; johanispelealu564@yahoo.com dingsepan@yahoo.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  daya  hambat  ekstrak  metanol Selaginella  delicatula dan Diplazium dilatatum terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli . Pengujian daya hambat ekstrak terhadap bakteri menggunakan metode Kirby-Bauer, yaitu metode difusi  dengan  cakram  kertas.  Ekstrak S.  delicatula menghambat  pertumbuhan S.  aureus pada konsentrasi ekstrak 30%, 60% dan 90% dengan diameter zona hambat berturut-turut 0.00 mm, 6.70 mm dan 7.80 mm; serta menghambat pertumbuhan E. coli dengan diameter zona hambat berturut- turut 0.00 mm, 8.40 mm dan 13.00 mm. Ekstrak D. dilatatum menghambat pertumbuhan S. aureus pada konsentrasi ekstrak 30%, 60% dan 90% dengan diameter zona hambat berturut-turut 0.00 mm, 0.00  mm  dan  6.70  mm;  serta  menghambat  pertumbuhan E.  coli dengan  diameter  zona  hambat berturut-turut 0.00 mm, 0.00 mm dan 8.00 mm. Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh, dapat disimpulkan bahwa ekstrak S. delicatula dan D. dilatatum tergolong dalam kategori kuat dan sedang serta  memiliki  potensi  sebagai  bahan  dasar  antibakteri,  karena  kedua  ekstrak  menunjukkan  daya hambatnya.
Kata  kunci  :  tumbuhan  paku, Selaginella  delicatula , Diplazium  dilatatum ,  Antibakteri, Staphylococcus aureus, Escherichia coli
INHIBITION TEST OF METHANOL EXTRACT OF Selaginella delicatula AND Diplazium dilatatum AGAINST BACTERIA Staphylococcus aureus AND Escherichiacoli

## ABSTRACT
This study aimed to test the inhibition of methanol extract of Selaginella delicatula and Diplazium dilatatum on the growth of Staphylococcus aureus and Escherichia coli . Testing inhibition of the extracts to bacterial using the Kirby-Bauer method, is the paper disk diffusion method. S. delicatula extract inhibited the growth of S. aureus at concentrations of extract 30%, 60% and 90% inhibition zone diameter respectively 0.00 mm, 6.70 mm and 7.80 mm; and inhibit the growth of E. coli with inhibition  zone  diameter  respectively  0.00  mm,  8.40  mm  and  13.00  mm. D.  dilatatum extract inhibited the growth of S. aureus at concentrations of extract 30%, 60% and 90% inhibition zone diameter  respectively  0.00  mm,  0.00  mm  and  6.70  mm;  and  inhibit  the  growth  of E.  coli with inhibition  zone  diameter  respectively  0.00  mm,  0.00  mm  and  8.00  mm.  Based  on  the  results obtained,  it  can  be  concluded  that  the  extract  of S.  delicatula and D.  dilatatum classified  in  the category  of  medium  and  strong  and  has  potential  as  a  base  material  for  both  extracts  showed antibacterial inhibitory power.
Keywords:  ferns, Selaginella  delicatula , Diplazium  dilatatum ,  Antibacterial, Staphylococcus aureus, Escherichia coli.

## PENDAHULUAN
Tumbuhan  yang  berpotensi  sebagai antibakteri  umumnya  memiliki  metabolit sekunder seperti senyawa golongan flavonoid,
yaitu  jenis  flavon,  flavonol  dan  flavanonon (Bylka et  al .,  2004),  tanin,  alkaloid  dan saponin  (Abdillah,  2006).  Flavonoid  adalah kelompok fenol yang mempunyai
kecenderungan  untuk  menghambat  aktivitas enzim mikroba (Nikham dan Basjir, 2012) dan tanin dapat menggumpalkan protein (Abdillah, 2006). Tumbuhan paku yang telah diketahui  kandungan  metabolit  sekundernya dan diantaranya merupakan metabolit sekunder  yang  berpotensi  sebagai  antibakteri adalah Selaginella delicatula dan Diplazium dilatatum .
Arini  dan  Kinho  (2012)  melaporkan bahwa genus Diplazium dan Selaginella telah dimanfaatkan oleh masyarakat sebagai tumbuhan    obat. Diplazium  accendens digunakan  sebagai  obat  pasca  persalinan  dan Selaginella sp. sebagai obat pasca persalinan, obat penambah darah dan obat nyeri pada ulu hati. Selaginella dan Diplazium merupakan tumbuhan terestrial yang biasanya  tumbuh di tebing di daerah pegunungan (1100-1300 dpl).
Genus Selaginella pada  umumnya  memiliki senyawa  steroid,  triterpen,  tanin  dan  katekin (Irudayaraj et  al .,  2010).  Jenis Selaginella plana , S.  willdenovii dan S.  mayeri memiliki senyawa  tanin,  saponin  dan  flavonoid (Sopyati,  2009).  Genus Diplazium memiliki senyawa flavonoid, saponin, tanin dan steroid (Osabor et al ., 2010).
Pemanfaatan Selaginella delicatula dan Diplazium dilatatum yang tumbuh di Indonesia sebagai antibakteri belum dilaporkan.  Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan pengujian  daya  hambat S. delicatula dan D. dilatatum yang tumbuh di Indonesia khususnya di daerah Sulawesi Utara terhadap pertumbuhan  bakteri  penyebab  penyakit. Bakteri penyebab penyakit diantaranya adalah Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli . Penyakit yang disebabkan oleh S. aureus dan E. coli, yaitu abses, gingivitis, infeksi saluran pencernaan,  infeksi  kulit,  sinusitis,  diare, sepsis  dan  meningitis.  Penyakit  tersebut merupakan  penyakit  yang  sering  dialami kebanyakan  masyarakat,  sehingga  perlu dilakukan  pengujian  untuk  menghambat  atau membunuh bakteri tersebut. Hal ini dilakukan sebagai usaha pengembangan tumbuhan yang berkhasiat obat dan usaha menemukan sumber antibakteri  baru  yang  berasal  dari  alam. Penemuan  sumber  antibakteri  baru  yang berasal  dari  bahan  alam  dapat  membantu mengatasi masalah resistensi bakteri khususnya bakteri patogen.

## METODE PENELITIAN
Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian dilaksanakan di
Laboratorium  Mikrobiologi  dan  Ekologi FMIPA  UNSRAT  Manado  dan  pengambilan sampel di  Desa  Ampreng  Kecamatan Langowan  Barat.  Penelitian  dilaksanakan bulan September-Oktober 2014.

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan, yaitu timbangan  digital,  alat  gelas, hot  plate , laminar  air  flow autoklaf,  jarum  inokulasi lurus, lampu Bunsen, mortar dan pestle, lemari pendingin,  inkubator,  evaporator,  blender, kertas  saring,  pinset,  cakram  kertas  dengan diameter 5 mm, jangka sorong dan kamera.
Bahan-bahan  yang  digunakan,  yaitu daun Selaginella  delicatula dan Diplazium dilatatum , biakan murni bakteri
Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli , medium Nutrient  Agar (NA),  medium Nutrient  Broth (NB),  akuades,  metanol,  zat antibiotik (Ampicillin) dan lisol (antiseptik).

## Penyiapan Sampel dan Pembuatan Ekstrak
Tumbuhan  paku Selaginella delicatula dan Diplazium  dilatatum diambil  di  Desa Ampreng  Kecamatan  Langowan  Barat  dan diidentifikasi menggunakan buku dari Piggott &  Piggott  (1988)  dan  buku  de  Winter  & Amoroso  (2003)  serta  dari  artikel  ilmiah. Selanjutnya, daun tumbuhan paku dibersihkan, dikeringanginkan sampai beratnya  konstan,  ditimbang  sebanyak  50 gram, kemudian dipotong kecil dan dihaluskan. Sampel tumbuhan paku yang telah halus direndam dengan metanol selama 3x24 jam,  setelah  itu  ekstrak  disaring  sehingga diperoleh  filtrat.  Filtrat  yang  diperoleh dievaporasi dengan evaporator sampai diperoleh  ekstrak  pekat.  Ekstrak  pekat diuapkan  kembali  dengan  meletakkannya  di wadah  terbuka  sehinggga  diperoleh  ekstrak kering.  Ekstrak  kering  yang  diperoleh dilarutkan dengan akuades sampai konsentrasinya  menjadi  30%,  60%  dan  90%. Larutan  antibiotik,  yaitu  Ampicillin  dibuat dengan  cara  10  mg  Ampicillin  dilarutkan dalam 10 ml akuades.
Pembuatan  Medium  Tumbuh Bakteri  dan Pembiakan Bakteri
Medium Nutrient  Broth (NB)  1,3  g dilarutkan dalam 100 ml akuades dan medium Nutrient Agar (NA) 6 g dilarutkan dalam 300 ml  akuades,  kemudian  dipanaskan  hingga larut. Medium NB yang telah larut dimasukkan  ke  tabung  reaksi  masing-masing sebanyak  5  ml  dan  Medium  NA  dimasukkan ke  tabung  reaksi  dan  cawan  petri  masing- masing  sebanyak  5  ml  dan  15  ml,  kemudian disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 120 0 C selama 15 menit. Tabung reaksi berisi medium NA  sebanyak  5  ml  dibiarkan  mengeras  pada posisi  kemiringan  15 0 setelah  sterilisasi medium  NB  dan  NA  selesai.  Biakan  murni Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli diinokulasi secara aseptik dalam tabung reaksi berisi  medium  miring  NA  steril  masing- masing  tiga  buah  tabung  reaksi,  kemudian diinkubasikan pada suhu 37 0 C selama 24 jam, setelah  itu  diinokulasi  kembali  dari  medium NA  ke  medium  NB  dan  diinkubasikan  pada suhu 37 0 C selama 24 jam.

## Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  terhadap Bakteri
Metode  pengujian  yang  digunakan adalah  metode  Kirby-Bauer,  yaitu  metode difusi  dengan  cakram  kertas.  Biakan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dituangkan secara aseptik sebanyak 3 ml dari medium NB ke cawan petri steril yang berisi medium NA yang masih cair, kemudian cawan petri  diaduk.  Cakram  kertas  dimasukkan dalam  ekstrak  tumbuhan  paku  dengan konsentrasi  berbeda-beda,  yaitu  30%,  60% dan  90%  dan  juga  dalam  kontrol  positif (Ampicillin)  dan  kontrol  negatif  (aquades) selama  ±1  menit.  Cakram  kertas  yang  sudah direndam  dalam  ekstrak  diletakkan  secara aseptik  di  atas  permukaan  medium  NA  yang telah diinokulasi S. aureus dan E. coli dengan pinset  steril,  kemudian  diinkubasikan  pada suhu 37 0 C selama 1x24 jam. Setelah inkubasi selesai,  zona  bening  di  sekitar  cakram  kertas diamati  dan  diukur  diameternya.  Pengujian daya hambat ekstrak tumbuhan paku terhadap bakteri S.  aureus dan E.  coli dilakukan  tiga kali  ulangan  untuk  setiap  konsentrasi  yang diuji.

## Analisis Data
Diameter  zona  daya  hambat  ekstrak tumbuhan  paku  disajikan  dalam  tabel  dan gambar.  Efektivitas  antibakteri  konsentrasi ekstrak  tumbuhan  paku  terhadap  antibiotik dihitung  berdasarkan  persamaan  (Tangapo, 2005), yaitu:
E = (D/Da) x 100% Keterangan: E: efektivitas antibakteri (%)
D: diameter zona hambat ekstrak tumbuhan paku (mm) Da: diameter zona hambat antibiotik (mm)

## HASIL DAN PEMBAHASAN Daya Hambat Ekstrak
Daya  hambat  ekstrak  yang  diuji ditunjukkan  dengan  adanya  zona  bening  di sekitar cakram kertas. Zona bening di sekitar cakram  kertas  merupakan  daerah  difusi ekstrak  yang  mempengaruhi  pertumbuhan bakteri. Besar diameter dari zona hambat yang terbentuk  dapat menunjukkan  kekuatan antibakteri  dari  ekstrak  yang  digunakan. Penggolongan kekuatan antibakteri Davis dan Stout (1971) mempermudah dalam menggolongkan  kemampuan  dari  diameter yang  diperoleh.  Ekstrak  dengan  diameter hambatan  lebih  dari  20  mm  termasuk  dalam kategori  sangat  kuat,  diameter  hambatan berkisar  dari  10-20  mm  termasuk  dalam kategori kuat, diameter hambatan berkisar dari 5-10 mm termasuk dalam kategori sedang dan diameter  hambatan  kurang  dari  5  mm termasuk dalam kategori lemah.

## Ekstrak Selaginella delicatula
Hasil  pengujian  daya  hambat  ekstrak Selaginella delicatula pada  konsentrasi  60% dan  90%  terbentuk  zona  bening  di  sekitar cakram  kertas  pada  bakteri S.  aureus dan E. coli (Gambar  2  dan  3),  sedangkan  pada konsentrasi 30% tidak terbentuk zona bening (Gambar 1).
Tabel 1. Rataan diameter zona hambat ekstrak Selaginella delicatula terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak S. delicatula pada  konsentrasi  rendah  belum mampu mengganggu metabolisme bakteri  uji sehingga masih terdapat pertumbuhan bakteri di  sekitar  cakram  kertas.  Diameter  zona hambat  ekstrak S.  delicatula semakin meningkat  bersamaan  dengan  meningkatnya konsentrasi  ekstrak  (Tabel  1).  Hal  ini disebabkan  oleh  kadar  senyawa  aktif  yang menghambat atau membunuh bakteri meningkat  seiring  dengan  meningkatnya konsentrasi  ekstrak.  Daya  hambat  ekstrak Selaginella delicatula terhadap bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 60% dan  90%  memiliki  kekuatan  antibakteri  yang termasuk  kategori  sedang.  Hasil  berbeda diperoleh  dari  daya  hambat  yang  dihasilkan oleh  ekstrak S. delicatula terhadap  bakteri Escherichia  coli pada  konsentrasi  60%  dan
90%.  Ekstrak S.  delicatula pada  konsentrasi
60%  termasuk  kategori  sedang  dalam menghambat  bakteri E.  coli ,  sedangkan  pada konsentrasi  90%  termasuk  kategori  kuat.  Hal ini  menandakan  bahwa  ekstrak  ini  sudah memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri  mulai dari  konsentrasi  sedang  sampai  tinggi.
Menurut  Irudayaraj et  al .  (2010), Selaginella mengandung flavonoid yang merupakan salah satu  metabolit  sekunder  yang  berpotensi sebagai  antibakteri.  Hal  ini  yang  menjadi faktor adanya aktivitas antibakteri dari ekstrak S. delicatula .
Zona hambat yang dihasilkan ekstrak ini lebih  besar  pada  bakteri E.  coli dibandingkan S.  aureus (Tabel  1).  Menurut Davidson et  al .  (2005),  senyawa  antibakteri yang  berupa  asam-asam  organik  memiliki daya hambat yang lebih besar terhadap bakteri Gram  negatif.  Genus Selaginella memiliki asam organik (Gui et al ., 2009).
(a) (b) Gambar 1. Zona hambat ekstrak S. delicatula terhadap (a) Staphylococcus aureus dan (b)
Escherichia coli pada konsentrasi 30%
(a) (b) Gambar 2. Zona hambat ekstrak S. delicatula terhadap (a) Staphylococcus aureus dan (b) Escherichia coli pada onsentrasi 60%
(a)
(b) Gambar 3. Zona hambat ekstrak S. delicatula terhadap (a) Staphylococcus aureus dan (b) Escherichia coli pada konsentrasi 90%
Ekstrak Diplazium dilatatum
Ekstrak Diplazium  dilatatum hanya menunjukkan  daya  hambatnya  terhadap bakteri S. aureus dan E. coli pada konsentrasi 90%, namun ekstrak ini memiliki daya hambat lebih  besar  terhadap E.  coli dibandingkan S. aureus . Ekstrak D. dilatatum konsentrasi 90%
menghasilkan diameter zona
penghambatannya  sebesar  6.70  mm  terhadap bakteri S.  aureus dan  8.00  mm  terhadap bakteri E. coli (Tabel 2).
Konsentrasi (%) Rataan Diameter Zona Hambat Ekstrak S. delicatula (mm) S. aureus E. coli 30 60 90 0.00 ± 0.00 6.70 ± 0.31 7.80 ± 0.06 0.00 ± 0.00 8.40 ± 0.40 13.00 ± 3.50
Tabel 2. Rataan diameter zona hambat ekstrak Diplazium dilatatum terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli Konsentrasi (%) Rataan Diameter Zona Hambat Ekstrak D. dilatatum (mm) S. aureus E. coli 30 60 90 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 6.70 ± 0.35 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 8.00 ± 0.40 Ekstrak D. dilatatum pada  konsentrasi
30%  dan  60%  tidak  menunjukkan  diameter zona hambatnya terhadap bakteri uji (Gambar
4  dan  5).  Hal  ini  menandakan  bahwa  pada konsentrasi  rendah  dan  sedang  ekstrak D. dilatatum belum mampu mengganggu metabolisme bakteri dan merusak dinding sel bakteri S.  aureus dan E.  coli .  Ekstrak  yang menunjukkan  daya  hambatnya  disebabkan oleh  banyak  sampel  yang  digunakan  setiap konsentrasi.
Daya  hambat  ekstrak D. dilatatum terhadap  bakteri S.  aureus dan E.  coli hanya terdapat  pada  konsentrasi  90%  (Gambar  6). Ekstrak D. dilatatum konsentrasi  90% memiliki kekuatan  antibakteri yang termasuk kategori  sedang  karena  memiliki  diameter zona  hambat  berkisar  5-10  mm.  Hal  ini menandakan  bahwa  pada  konsentrasi  tinggi, yaitu  konsentrasi  90%  ekstrak  ini  sudah memiliki mekanisme kerja sebagai antibakteri dan  sudah  mampu  mengganggu  metabolisme bakteri.  Menurut  Osabor et  al .  (2010),
Diplazium mengandung  flavonoid  yang merupakan salah satu metabolit sekunder yang berpotensi  sebagai  antibakteri.  Hal  ini  yang menjadi  faktor  adanya  aktivitas  antibakteri dari ekstrak D. dilatatum . Zona hambat yang dihasilkan ekstrak ini lebih besar pada bakteri E.  coli dibandingkan S.  aureus .  Pada umumnya,  bakteri  Gram  positif  lebih  mudah dihambat  atau  dibunuh  dibandingkan  bakteri Gram  negatif.  Hal  ini  menandakan  bahwa senyawa  aktif  ekstrak  ini  lebih  aktif  dalam menghambat bakteri Gram negatif.
(a) (b)
Gambar 4. Zona hambat ekstrak D. ilatatum
terhadap (a) Staphylococcus aureus dan (b) Escherichia coli pada konsentrasi 30% (a) (b) Gambar 5. Zona hambat ekstrak D. dilatatum terhadap (a) Staphylococcus aureus dan (b) Escherichia coli pada konsentrasi 60%
(a) (b)
Gambar 6. Zona hambat ekstrak D. dilatatum
terhadap (a) Staphylococcus aureus dan (b) Escherichia coli pada konsentrasi 90%

## Efektivitas Antibakteri
Efektivitas  ekstrak  diperoleh  dengan membandingkan  daya  hambatnya  dengan daya hambat dari kontrol positif, yaitu larutan antibiotik (Ampicillin). Efektivitas antibakteri ekstrak Selaginella delicatula dan Diplazium dilatatum secara keseluruhan masih tergolong kurang efektif. Hal ini terlihat dari persentase yang  kurang  dari  50%  diperoleh  dari  hasil perhitungan dengan persamaan  E = (D/Da) x 100% (Tabel 3).
Tabel 3.  Efektivitas  antibakteri  ekstrak
Selaginella delicatula dan Diplazium dilatatum Cakram Konsentr asi (%) Efektivitas (%) S. aureus E. coli Selaginella delicatula Diplazium dilatatum 30 60 90 30 60 90 0.00 19.25 22.41 0.00 0.00 19.25 0.00 17.14 26.53 0.00 0.00 16.33 Berdasarkan  Tabel  3,  terlihat  bahwa ekstrak Selaginella delicatula 90% menunjukkan  efektivitas  antibakteri  tertinggi terhadap Staphylococcus aureus
dan
Escherichia  coli ,  yaitu  22.41%  dan  26.53%. Hal  ini  disebabkan  karena  pada  konsentrasi tersebut jumlah ekstrak yang digunakan lebih banyak  dibandingkan  dengan  perlakuan lainnya dan senyawa aktif yang terdapat pada S.  delicatula lebih  banyak  dibandingkan D. dilatatum .  Ekstrak  yang  tidak  memiliki efektivitas  terhadap  bakteri S.  aureus dan  E. coli adalah S. delicatula 30% dan D. dilatatum 30%, 60%. Hal ini terlihat dari nilai efektivitas yang  paling  kecil  dibandingkan  perlakuan lainnya.  Efektivitas  yang  rendah  disebabkan oleh karena pada konsentrasi  tersebut jumlah ekstrak  yang  digunakan  sedikit  dan  senyawa aktif yang terdapat pada jenis tumbuhan paku tersebut juga sedikit.
Efektivitas yang masih rendah menandakan  bahwa  kadar  senyawa  aktif sebagai antibakteri pada tumbuhan paku yang digunakan  masih  rendah.  Hal  ini  disebabkan karena pada penelitian ini masih menggunakan  ekstrak  kasar.  Penggunaan ekstrak  dengan  senyawa  tunggal  yang  telah diketahui sebagai antibakteri, misalnya Ampicilin akan lebih efektif dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Hal  ini sesuai  dengan  hasil  yang  diperoleh,  yaitu Ampicillin  sebagai  kontrol  positif  memiliki zona  hambat  yang  lebih  besar  dibandingkan ekstrak lima jenis tumbuhan paku, yaitu 34.80 mm terhadap S. aureus dan 49.00 terhadap E. coli .

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa ekstrak Selaginella delicatula pada  konsentrasi  90%  memiliki daya  hambat  yang  tergolong  kuat  dalam
menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli . Ekstrak Diplazium dilatatum pada  konsentrasi  90%  memiliki  daya  hambat yang  tergolong  sedang  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan E. coli .

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut dengan hanya menggunakan senyawa tunggal yang  bermanfaat  sebagai  antibakteri  pada tumbuhan  paku Selaginella delicatula dan
Diplazium dilatatum .  Selain  itu,  perlu dilakukan pengujian daya hambat menggunakan metode dilusi dan pelarut serta jenis bakteri yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdillah  A.  2006.  Aktivitas  Antiproliferasi Ekstrak Air Daun Sisik Naga ( Pyrrosia nummularifolia (Sw.)  Ching)  terhadap Sel Lestari Tumor HeLa secara In Vitro [Skripsi].  Bogor.  Institut  Pertanian Bogor.
Arini  D.I.D.  dan  Kinho  J.  2012.  Keragaman Jenis Tumbuhan Paku (Pteridophyta) Di Cagar Alam Gunung Ambang Sulawesi Utara. Balai  Penelitian  Kehutanan Manado . 2 (1). 17-39.
Bylka W., M. Szaufer-Hajdrych, I. Matlawska, O. Goslinska. 2004. Antimicrobial  Activity  of  Isocytisoside and  Extracts  of  Aquilegia  vulgaris  L. Letters in Applied Microbiology . 39. 93- 97.
Davidson P.M., J.N. Sofos, A.I. Branen. 2005 . Antimicrobial  in  Food  third  edition . New York. Taylor and Francis Group.
Davis W.W. dan  Stout  T.R. 1971. Disc Plate Method  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Applied Microbiology . 659-665. de  Winter  W.P.  dan  Amoroso  V.B.  2003.
Plant  Resources  of  South-East  Asia no.15(2) Cryptogams : Ferns and Fern Allies .  Bogor.  PROSEA  Foundation Bogor.
Gracelin  D.H.S.,  Britto  A.J.D.,  Kumar P.B.J.R.  2012.  Antibacterial  Screening of  A  Few  Medicinal  Ferns  against Antibiotic  Resistant  Phyto  Pathogen.
International Journal of
Pharmaceutical Sciences and Research . 3 (3). 868-873.
Gui S.T., Kang P.X., Fu S.L., Chen J.W., Tuo Y.L.,  Chang  P.H.,  Jian  S.,  Ying  J.Z., Yuan  J.L.  2009.  Selaginellin  C,  a  new natural pigment from Selaginella pulvinata  Maxim (Hook  et  Grev.).
Journal  of  Asian  Natural  Products Research. 11 (12). 1001-1004. Irudayaraj  V.,  Janaky  M.,  M.  Johnson,  N. Selvan. 2010. Preliminary Phytochemical and Antimicrobial Studies  On  A  Spike-Moss Selaginella inaequalifolia (Hook. & Grev.) Spring.
Asian  Pacific  Journal  Of  Tropical Medicine . 957-960.
Khoiri M. 2009. Aktivitas Anti Tumor Ekstrak
Etanol Selaginella Pada  Sel  Tumor Kelenjar Mamari Mencit ( Mus musculus )  C3H  [Tesis].  Bogor.  Institut Pertanian Bogor.
Nikham dan Basjir T.E. 2012. Uji Bahan Baku Antibakteri  dari  Buah  Mahkota  Dewa ( Phaleria  macrocarpa )  Hasil  Iradiasi
Gamma dan Antibiotik Terhadap
Bakteri  Patogen. Prosiding  Pertemuan Ilmiah Ilmu Pengetahuan dan Teknologi
Bahan . ISSN 1411-2213. 168-174.
Osabor V.N., G.E. Egbung, U.M. Ntuk. 2010. Chemical  Evaluation  of  The  Leaves  of Diplazium  summattii (Nyama  Idim). Research  Journal  Of  Agriculture  And Biological Sciences . 6(6): 1074-1077.
Piggott, A.G. dan Piggott, C.J. 1988. Fern of Malaysia  in  Colour .  Kuala  Lumpur. Tropical Press SDN. BHD. Malaysia.
Sopyati  P.D.  2009.  Pertumbuhan  dan
Kandungan Bahan Bioaktif dari Selaginella plana , S. willdenovii dan S. mayeri Pada Beberapa Tingkat Naungan [Skripsi].  Bogor.  Institut  Pertanian Bogor.
Tangapo  A.M.  2005.  Efektivitas  Antibakteri Ekstrak  Tumbuhan  Daun  Sendok ( Plantago major ) Terhadap Staphylococcus aureus dan
Pseudomonas  aeruginosa [Skripsi]. Manado. Universitas Sam Ratulangi.
Tongco J.V.V., Ronald A.P.V., Remil M. A., Ramon  A.R.  2014.  Nutritional  and Phytochemical  Screening  and  Total Phenolic  and  Flavonoid  Content  Of Diplazium esculentum (Retz.) Sw. from Philippines. Journal  of  Chemical  and Pharmaceutical  Research .  6  (8).  238- 242.