## Jurnal Kesehatan Lingkungan Indonesia

## Identifikasi Escherichia coli Potong Hewan Unggas
Thufeil Yunindika 1,3* , Hadri Latif Susanti 3
1 Sekolah Pasca Sarjana Program Studi Kesehatan Masyarakat Veteriner Bogor, Jawa Barat 16680, Indonesia
2 Divisi Kesehatan Masyarakat Veteriner dan Epidemiologi dan Kesehatan Masyarakat Veteriner, Hewan, Institut Pertanian Bogor, Jawa Barat
3 Balai Pengujian Mutu dan Sertifikasi Produk Hewan, Jl. Pemuda No.29A Bogor *Corresponding author: thufeilyunindika@apps.ipb.ac.id
Info Artikel:Diterima 15 Juli 2021 ; Direvisi Tersedia online : 8 Februari 2022 ; Diterbitkan secara teratur : Februari 2022
Cara sitasi (Vancouver): Yunindika T, Latif H, Pisestyani H, Wahyudi A, Ahmad H, Susanti O. Identifikasi Escherichia coli Penghasil ESBL dari Efluen Rumah Potong Hewan Unggas di Kota Bogor, Jawa Barat. Jurnal Kesehat Indonesia [Online]. 2022 Feb;21(1):43-49. https://doi.org/10.14710/jkli.21.1.43

## ABSTRAK
Latar belakang: Escherichia coli merupakan bakteri enterik komensal yang mudah resistan terhadap antibiotik karena memiliki kemampuan bawaan dalam menghasilkam enzim resistansi antibiotik, Spectrum  Beta  Lactamase (ESBL).  Bakteri cemaran  efluen  dari  rumah  potong  hewan  unggas  (RPH penelitian ini adalah untuk mengisolasi, mengidentifikasi, dan mengukur jumlah bakteri dari RPH-U/TPA di Kota Bogor.
Metode: Disain  penelitian  yang  digunakan  adalah  penelitian  eksploratif  dengan  metode  pengambilan  sampel secara purposive sampling . Sampel yang diambil pemotongan  lebih  dari  1000  ekor/hari.  Metode  yang  digunakan  adalah  ESBL laboratorium Balai Pengujian Mutu dan Sertifikasi Produk Hewan berupa gambar dan tabel.
Hasil: Escherichia coli penghasil ESBL teridentifikasi dari semua 12 sampel yang berasal dari di  Kota Bogor dengan  persentase E.coli rata-rata 17,76%. Simpulan : Escherichia  coli penghasil  ESBL  ditemukan Bakteri tersebut berisiko mencemari lingkungan melalui efluen terhadap masyarakat yang berada di sepanjang aliran
Kata kunci: Escherichia coli ; ESBL;

## ABSTRACT
Title:  Identification  of    ESBL  Producing  Escherichia  coli Java Background: Escherichia coli is a commensal enteric bacteria that is easily resistant to antibiotics because it has  an  innate  ability  to  produce  antibiotic  resistance  enzymes,  one  of  which  is  Extended  Spectrum  Beta Lactamase (ESBL). These bacteria could be
© 2022 The Author. JKLI, ISSN: 1412-4939 – e-ISSN: 2502-7085.

## Jurnal Kesehatan Lingkungan Indonesia
21 (1), 2022, 43 – 49
DOI : 10.14710/ jkli.21.1.43-49

## Escherichia coli Penghasil ESBL dari Efluen Rumah Potong Hewan Unggas di Kota Bogor, Jawa Barat
Hadri Latif 2 , Herwin Pisestyani 2 , Ading Wahyudi 3 , Hasniah Ahmad
Kesehatan Masyarakat Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan
Divisi Kesehatan Masyarakat Veteriner dan Epidemiologi dan Kesehatan Masyarakat Veteriner, Fakultas Kedokteran
Jawa Barat 16680, Indonesia
Balai Pengujian Mutu dan Sertifikasi Produk Hewan, Jl. Pemuda No.29A Bogor 16610, Indonesia *Corresponding author: thufeilyunindika@apps.ipb.ac.id / 085883269230
2021 ; Direvisi 16 Agustus 2021 ; Disetujui 11 Januari 2022 ; Diterbitkan secara teratur : Februari 2022
Yunindika T, Latif H, Pisestyani H, Wahyudi A, Ahmad H, Susanti O. Identifikasi Escherichia coli Penghasil ESBL dari Efluen Rumah Potong Hewan Unggas di Kota Bogor, Jawa Barat. Jurnal Kesehat 49. https://doi.org/10.14710/jkli.21.1.43-49.
merupakan bakteri enterik komensal yang mudah resistan terhadap antibiotik karena memiliki kemampuan bawaan dalam menghasilkam enzim resistansi antibiotik, salah satunya (ESBL).  Bakteri  ini  dapat  ditularkan  melalui  lingkungan,  salah  satunya  melalui cemaran  efluen  dari  rumah  potong  hewan  unggas  (RPH-U)  dan  Tempat  Pemotongan  Ayam  (TPA) untuk mengisolasi, mengidentifikasi, dan mengukur jumlah bakteri E. coli
Disain  penelitian  yang  digunakan  adalah  penelitian  eksploratif  dengan  metode  pengambilan  sampel Sampel yang diambil berjumlah 12 dari tiga RPH-U/TPA yang memiliki kapasitas pemotongan  lebih  dari  1000  ekor/hari.  Metode  yang  digunakan  adalah  ESBL Ec  Tricycle laboratorium Balai Pengujian Mutu dan Sertifikasi Produk Hewan. Data dibahas secara deskriptif

## penghasil ESBL teridentifikasi dari semua 12 sampel yang berasal dari
E.coli penghasil  ESBL  terendah  10,45% dan  terbesar  yaitu  39,52%  dengan penghasil  ESBL  ditemukan  pada  efluen  dari  ketiga  RPH-U/TPA  di  Kota  Bogor berisiko mencemari lingkungan melalui efluen dan dapat menjadi ancaman kesehatan terutama terhadap masyarakat yang berada di sepanjang aliran sungai. Langkah mitigasi dan pencegahan
ESBL; Resistansi antibiotik; RPH-U
Identification  of    ESBL  Producing  Escherichia  coli    from  Poultry  Abattoir  Effluent  in  Bogor,  West
Escherichia coli is a commensal enteric bacteria that is easily resistant to antibiotics because it has  an  innate  ability  to  produce  antibiotic  resistance  enzymes,  one  of  which  is  Extended  Spectrum  Beta Lactamase (ESBL). These bacteria could been transmitted through the environment from poultry abattoir (RPH
7085.

## ari Efluen Rumah
Hasniah Ahmad 3 , Oli

## Hewan, Institut Pertanian

## Fakultas Kedokteran
, Indonesia Yunindika T, Latif H, Pisestyani H, Wahyudi A, Ahmad H, Susanti O. Identifikasi Escherichia coli Penghasil ESBL dari Efluen Rumah Potong Hewan Unggas di Kota Bogor, Jawa Barat. Jurnal Kesehatan Lingkungan
merupakan bakteri enterik komensal yang mudah resistan terhadap antibiotik salah satunya Extended gan,  salah  satunya  melalui Tempat  Pemotongan  Ayam  (TPA).  Tujuan E. coli penghasil ESBL
Disain  penelitian  yang  digunakan  adalah  penelitian  eksploratif  dengan  metode  pengambilan  sampel U/TPA yang memiliki kapasitas Tricycle dan dilakukan  di deskriptif dan disajikan
penghasil ESBL teridentifikasi dari semua 12 sampel yang berasal dari tiga RPH-U/TPA
% dan  terbesar  yaitu  39,52%  dengan
U/TPA  di  Kota  Bogor. ancaman kesehatan terutama angkah mitigasi dan pencegahan perlu dilakukan.
from  Poultry  Abattoir  Effluent  in  Bogor,  West
Escherichia coli is a commensal enteric bacteria that is easily resistant to antibiotics because it has  an  innate  ability  to  produce  antibiotic  resistance  enzymes,  one  of  which  is  Extended  Spectrum  Beta en transmitted through the environment from poultry abattoir (RPH-
U) and chicken slaughterhouses (TPA) effluent contamination. The purpose of this study was to isolate, identify, and enumerate the number of ESBL-producing E. coli bacteria from RPH-U/TPA in Bogor City Method: The research design used is exploratory research with purposive sampling method. 12 samples were taken from 3 RPH-U/TPA which have a slaughtering capacity of more than 1000 head/day. The method used is the ESBL Ec Tricycle and is carried out in the Center for Quality Testing and Certification of Animal Products laboratory. Data discussed descriptively and presented in the form of pictures and tables.
Result: Escherichia coli producing ESBL was identified from all 12 samples from 3 RPH-U/TPA in Bogor City with  the  smallest  ESBL-producing  E.coli  percentage  of  10.45%  and  the  largest  39.52%  with  an  average  of 17.76%.
Conclusion : Escherichia coli producing ESBL was found in the effluent of the three RPH-U/TPA in Bogor City. These  bacteria  are  at  risk  of  contaminating  the  environment  through  effluents  and  can  pose  a  health  threat, especially to people living along the river. Mitigation and prevention measures need to be taken.
Keywords : Escherichia coli ; Antibiotic Resistance ; Poultry Abattoir
PENDAHULUAN
Fenomena resistansi antibiotik akibat penyalahgunaan antibiotik yang berlebihan di industri peternakan  telah  menjadi  permasalahan  global. 1,2 Beberapa  laporan  menyebutkan  bahwa  bakteri  yang bersifat resistan, baik yang patogen maupun komensal dapat ditularkan melalui konsumsi pangan asal hewan dan  cemaran  lingkungan.  Implikasi  terhadap kesehatan  masyarakat  adalah  terjadinya  peningkatan angka  kematian,  angka  kesakitan,  dan  peningkatan biaya  pengobatan  akibat  kegagalan  pengobatan. O’Neil  (2014)  menyebutkan  setiap  tahunnya  ada sekitar  700.000  orang  meninggal  akibat  resistansi antibiotik. 2
Escherichia  coli merupakan  salah  satu  bakteri famili Enterobacteriaceae yang  termasuk  dalam kategori  kritis  dari  12  daftar  famili  patogen  prioritas yang  mudah  resistan  terhadap  antibiotik  dan berbahaya  terhadap  kesehatan  manusia. 3 E.  coli merupakan  bakteri  yang  memiliki  kemampuan bawaan  dalam  menghasilkam  enzim  resistansi antibiotik  yang  dikode  oleh  gen  resistansi  antibiotik ( Antimicrobial  Resistance  Gen /ARG)  dan  dapat menularkan  resistansi  ke  bakteri  lain  baik  dengan spesies  yang  sama  atau  berbeda  secara  horizontal melalui Mobile  Genetic  Element (MGE)  maupun vertikal melalui pembelahan diri. 3,4 E. coli dipilih sebagai bakteri target utama dalam penelitian  ini,  karena  dapat  dijadikan  sebagai  bakteri indikator  untuk  memantau  tren  dalam  pola  resistansi antibiotik  ( Antimicrobial  Resistance /  AMR). E.  coli merupakan bakteri enterik komensal dan bakteri gram negatif  yang  umum  pada  manusia  dan  hewan, sehingga  dapat  diisolasi  dan  dikultur  dengan  mudah. E.  coli dianggap  sebagai  indikator  yang  baik  pada penggunaan antibiotik atau Antimicrobial Use (AMU) pada hewan ternak. 5 Menurut  Uemura et  al. (2017),  ARG  dapat ditransmisikan  dari  bakteri  yang  hidup  di  dalam efluen  rumah  potong  hewan  ke  lingkungan  dan akhirnya  ke  manusia  melalui  rantai  makanan  yang tercemar. 6 Efluen  dalam  penelitian  ini  merupakan limbah  hasil  aktivitas  pemotongan. E.  coli yang resistan  terhadap  antibiotik  dapat  menjadi  sumber
infeksi  yang  sulit  diobati  pada  manusia  dan  hewan. Penggunaan  antibiotik  yang  tidak  rasional  di peternakan  unggas  menyebabkan  kerugian  dan memiliki  peranan  penting  dalam  terjadinya  resistansi antibiotik  terhadap  bakteri  pencemar  tersebut. 1 Oleh karena  itu,  penting  untuk  mengetahui  sejauh  mana pencemaran  lingkungan  melalui  efluen  dapat berdampak  bagi  kesehatan  masyarakat.    Tujuan penelitian ini adalah untuk mengisolasi, mengidentifikasi,  dan  mengukur  jumlah  bakteri E. coli penghasil ESBL dari RPH-U/TPA di Kota Bogor.

## MATERI DAN METODE Disain Penelitian
Disain  penelitian  yang  digunakan  adalah penelitian  eksploratif,  yaitu  penelitian  awal  untuk memperoleh  gambaran  awal  keberadaan E.  coli penghasil  ESBL  dari  efluen  RPH-U/TPA.  Metode pengambilan  sampel  dilakukan  secara purposive sampling dengan  memilih  sampel  dari  RPH-U/TPA yang  memiliki  kapasitas  pemotongan  yang  besar (>1000  ekor/hari)  berdasarkan  informasi  dari  Dinas Ketahanan Pangan dan Pertanian (DKPP) Kota Bogor. Sampel  diambil  dan  dilakukan  pengulangan  satu minggu  sekali  selama  empat  minggu  dari  tiga  RPH- U/TPA  sehingga  didapat  total  12  sampel.  Rincian dapat dilihat pada Tabel 1.

## Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan antara lain sampel efluen, agar Tryptone  Bile  X-glucuronide (TBX),  agar MacConkey (MCA), Phosphate  Buffered  Salin e (PBS),  Nutrient  Agar,  reagen Kovacs ,  agar Sulfite Indole  Motility (SIM), Mueller  Hinton  Agar (MHA), kertas cakram antibiotik, antibiotik Cefotaxim (CTX), kontrol  negatif  ESBL E.  coli ATCC  25922,  kontrol positif ESBL E. coli NCSU 10455, dan kontrol positif ESBL non E. coli Klebsiela pneumoni ATCC 700603. Peralatan  yang  digunakan  antara  lain cooling box ,  termometer,  pompa  vacum,  kertas  filter  steril 0,45  µm,  mikropipet,  botol durant ,  tabung  reaksi, cawan petri, pipet, inkubator, dan ose steril.

## Pengambilan Sampel Efluen
Pengambilan  sampel  efluen  dilakukan  secara aseptis  menggunakan  sarung  tangan  serta  alat pengambil sampel dan botol penampung sampel yang sudah  disucihamakan  berdasarkan  SNI  6989.57 tentang  metoda  pengambilan  contoh  air  permukaan dan ISO 19458:2006 tentang  sampling untuk analisis mikrobiologis  dalam  rangka  uji  kualitas  air. Pengambilan  contoh  efluen  dilakukan  dua  kali  saat kegiatan  pemotongan,  yaitu  saat  proses  pemotongan berlangsung dan saat selesai pemotongan dari saluran
Tabel 1 Sampel efluen yang diambil
No.  Nama RPH-U/TPA Pengambilan s 1 RPH-U A 2 RPH-U B 3 Sentra TPA C

## Identifikasi,  Isolasi,  dan  Enumerasi penghasil ESBL
Sampel  dicairkan  dan  diaduk  menggunakan vortex  sampai  homogen.  Semua  sampel  dan  kontrol dibuat  pengenceran  seri  sampai  10 menggunakan larutan PBS steril dengan perbandingan 1:9 kemudian diambil 3 ml untuk difilter dengan 0,45 µm  membran  filter  steril.  Membran  filter  tersebut dipindahkan  ke  cawan  petri  berisi  agar  TBX  untuk perhitungan  koloni  terduga E.  coli CTX  untuk E.  coli terduga  penghasil  ESBL.  Cawan petri  kemudian  diinkubasi  dengan  suhu  36  ±  1  ºC selama 18 – 24 jam. Setelah inkubasi, koloni pada tiap cawan  dihitung dan dicatat.  Cawan  yang  mempunyai koloni ≤100 CFU/ml dilanjutkan ke tahap selanju 10  koloni  masing-masing  dipilih  dari  agar  TBX TBX-CTX,  dipindahkan  dan  diambil  menggunakan ose  lalu  diinokulasikan  ke  agar  MCA  untuk terduga E.  coli dan  koloni  terduga ESBL  ke  agar  MCA-CTX,  kemudian  diinkubasi dengan  suhu  36  ±  1  ºC  selama  18 dari  hasil  inkubasi  MCA  yang  positif dipindahkan  ke  agar  NA  dan  diinkubasi memperbanyak koloni dengan suhu 36 ± 1 ºC selama 18  –  24  jam.  Koloni  dari  agar  NA  dipindahkan  dan diinkubasi  pada  suhu  dan  waktu  yang  sama  ke  agar SIM  sebelum  uji  biokimia  indol E.coli .  Uji  biokimia  indol  dilakukan  dengan meneteskan  reagen Kovacs sebanyak  1  ml SIM.  Hasil  dikatakan  positif  apabila  terbentuk merah . Konfirmasi E.  coli penghasil  ESBL  dengan metode  uji Double  Disk  Diffusion M100. 9 Pengujian dilakukan pada koloni dengan hasil positif  pada  uji  biokimia  indol.  K dan diinkubasi terbih dahulu ke agar NA dengan suhu 36 ± 1 ºC selama 18 – 24 jam. Kemudian dilanjutkan dengan pembuatan suspensi dengan  kekeruhan  setara 0,5  McFarland  dari  koloni  pada  agar Larutan suspensi tersebut
diambil
dengan
Thufeil Y., Hadri L., Herwin P., Ading W., Hasniah A., Oli S. /Jurnal Kesehatan Lingkungan Indonesia 21(1), 2022
© 2022 The Author. JKLI, ISSN: 1412-4939 – e-ISSN: 2502-7085.
Pengambilan  sampel  efluen  dilakukan  secara aseptis  menggunakan  sarung  tangan  serta  alat pengambil sampel dan botol penampung sampel yang sudah  disucihamakan  berdasarkan  SNI  6989.57-2008 pengambilan  contoh  air  permukaan tentang  sampling untuk analisis s  dalam  rangka  uji  kualitas  air. 7,8 Pengambilan  contoh  efluen  dilakukan  dua  kali  saat kegiatan  pemotongan,  yaitu  saat  proses  pemotongan berlangsung dan saat selesai pemotongan dari saluran
pembuangan  limbah  cair  RPH masing-masing sampel sebanyak 500 ml. Setiap RPH U  dilakukan  pengambilan  sampel  dengan  rentang waktu 1 minggu.
Sampel ditransportasikan menggunakan cool box yang telah dilengkapi ice pack dan termometer. Suhu dalam  perjalanan  diatur  4-8 Sampel  dihomogenkan  dan  dipindahkan  250  ml  ke kantong steril secara aseptis kemudian dimasukkan ke dalam  freezer  dengan  suhu  -20  °C  untuk  disimpan sebelum diuji lebih lanjut.
Tabel 1 Sampel efluen yang diambil Pengambilan sampel Interval pengambilan Keterangan 4 kali 1 kali perminggu 4 kali 1 kali perminggu 4 kali 1 kali perminggu dari 4 TPA Pooling numerasi E.  coli
Sampel  dicairkan  dan  diaduk  menggunakan vortex  sampai  homogen.  Semua  sampel  dan  kontrol dibuat  pengenceran  seri  sampai  10 -5 secara  duplo menggunakan larutan PBS steril dengan perbandingan 1:9 kemudian diambil 3 ml untuk difilter dengan 0,45 µm  membran  filter  steril.  Membran  filter  tersebut dipindahkan  ke  cawan  petri  berisi  agar  TBX  untuk E.  coli dan  agar  TBX- terduga  penghasil  ESBL.  Cawan petri  kemudian  diinkubasi  dengan  suhu  36  ±  1  ºC 24 jam. Setelah inkubasi, koloni pada tiap cawan  dihitung dan dicatat.  Cawan  yang  mempunyai
≤100 CFU/ml dilanjutkan ke tahap selanjutnya. dari  agar  TBX  dan
,  dipindahkan  dan  diambil  menggunakan diinokulasikan  ke  agar  MCA  untuk  koloni terduga E.  coli penghasil CTX,  kemudian  diinkubasi 36  ±  1  ºC  selama  18  –  24  jam.  Koloni yang  positif  terduga E.coli dan  diinkubasi  untuk dengan suhu 36 ± 1 ºC selama Koloni  dari  agar  NA  dipindahkan  dan diinkubasi  pada  suhu  dan  waktu  yang  sama  ke  agar untuk  konfirmasi
.  Uji  biokimia  indol  dilakukan  dengan sebanyak  1  ml  pada  agar pabila  terbentuk  ring
penghasil  ESBL  dengan berdasarkan  CLSI dilakukan pada koloni dengan hasil Koloni  diremajakan agar NA dengan suhu 24 jam. Kemudian dilanjutkan dengan pembuatan suspensi dengan  kekeruhan  setara koloni  pada  agar  NA  tersebut. Larutan suspensi tersebut diambil dengan
menggunakan cotton  swab steril  dan  diratakan media MHA dan kertas cakram antibiotik (Cefotaxim 30 µg, Cefotaxim Clavulamat Acid 30 µg, Ceftazidim 30  µg  dan  Ceftazidim-Clavulamat  Acid  30  µg) diletakkan  di  atas  agar  MHA  secara  berseberangan dan  diinkubasi  pada  suhu  35  ±  2  ºC  selama  24  jam Hal yang sama juga dilakukan pada kontrol positif coli NCSU  10455,  kontrol  negatif  ESBL ATCC 25922, dan kontrol positif ESBL Klebsiella  pneumonia ATCC  70063.  Hasil  dikatakan positif  ESBL  apabila  zona  hambat  antara  Cefotaxim dan Cefotaxim Clavulamat Acid Ceftazidim-Clavulamat Acid lebih besar dari 5 mm. Penghintungan  konsentrasi penghasil ESBL dengan satuan C sesuai  metode    ESBL Ec  Tricycle digunakan sebagai berikut:
Konsentrasi E. coli
Konsentrasi E. coli penghasil ESBL
Persentase E. coli penghasil ESBL

## Analisis Data
Data  dianalisis  secara  deskriptif berupa  gambar  dan  tabel  identifikasi  dan  enumerasi konsentrasi E .coli dan E. coli persentase E. coli penghasil ESBL pada sampel dari tiga RPH-U/TPA.
/Jurnal Kesehatan Lingkungan Indonesia 21(1), 2022  45
7085.
pembuangan  limbah  cair  RPH-U/TPA  dengan sebanyak 500 ml. Setiap RPH- ngambilan  sampel  dengan  rentang
Sampel ditransportasikan menggunakan cool box yang telah dilengkapi ice pack dan termometer. Suhu °C.  Di  laboratorium, n  dipindahkan  250  ml  ke steril secara aseptis kemudian dimasukkan ke 20  °C  untuk  disimpan
Keterangan - - Pooling menjadi 1 sampel
steril  dan  diratakan  pada media MHA dan kertas cakram antibiotik (Cefotaxim 30 µg, Cefotaxim Clavulamat Acid 30 µg, Ceftazidim Clavulamat  Acid  30  µg) diletakkan  di  atas  agar  MHA  secara  berseberangan dan  diinkubasi  pada  suhu  35  ±  2  ºC  selama  24  jam. ng sama juga dilakukan pada kontrol positif E. NCSU  10455,  kontrol  negatif  ESBL E.  coli ATCC 25922, dan kontrol positif ESBL non E. Coli , ATCC  70063.  Hasil  dikatakan positif  ESBL  apabila  zona  hambat  antara  Cefotaxim dan Cefotaxim Clavulamat Acid atau Ceftazidim dan lebih besar dari 5 mm.
Penghintungan  konsentrasi E.coli dan E.coli penghasil ESBL dengan satuan CFU/100ml dilakukan Ec  Tricycle . 10 Rumus  yang
penghasil ESBL
penghasil ESBL dari total E.coli
Data  dianalisis  secara  deskriptif  dan  disajikan berupa  gambar  dan  tabel  identifikasi  dan  enumerasi E. coli penghasil ESBL, serta penghasil ESBL pada sampel efluen

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi  dan  Identifikasi Escherichia ESBL
Hasil  penelitian  menunjukkan  semua  sampel teridentifikasi E.  coli penghasil  ESBL  (Tabel  2). Persentase  pada  Tabel  2  merupakan  hasil  konfirmasi uji  biokimia  indol  dan double  disk  diffusion koloni terpilih dari agar TBX. Sampel deng terduga E.  coli pada  agar  TBX  ditunjukkan  dengan ciri  koloni  bulat  dan  berwarna  biru  kehijauan (Gambar  1A).  Warna  ini  terjadi  karena  pelepasan
Gambar 1. Koloni terduga E.coli penghasil ESBL pada media TBX (A), media MCA (B), koloni non MCA (C), hasil uji Indol positif, terbentuk cincin merah dan negatif, tidak terbentuk cincin merah (D), koloni penghasil ESBL, (
Tabel 2. Hasil uji konfirmasi identifikasi
No. RPH-U/TPA 1 A01 2 A02 3 A03 4 A04 5 B01 6 B02 7 B03 8 B04 9 C01 10 C02 11 C03 12 C04
Thufeil Y., Hadri L., Herwin P., Ading W., Hasniah A., Oli S. /Jurnal Kesehatan Lingkungan Indonesia 21(1), 2022
© 2022 The Author. JKLI, ISSN: 1412-4939 – e-ISSN: 2502-7085.
scherichia  coli penghasil
Hasil  penelitian  menunjukkan  semua  sampel penghasil  ESBL  (Tabel  2). Persentase  pada  Tabel  2  merupakan  hasil  konfirmasi double  disk  diffusion dari  10 koloni terpilih dari agar TBX. Sampel dengan koloni pada  agar  TBX  ditunjukkan  dengan ciri  koloni  bulat  dan  berwarna  biru  kehijauan (Gambar  1A).  Warna  ini  terjadi  karena  pelepasan
gugus  kromofor  oleh  koloni  terduga ESBL. 11
Koloni E. coli yang tumbuh pada MCA memiliki ciri koloni koloni besar, mucoid, dan berwarna merah muda (Gambar 1B), sedangkan jika negatif berwarna kekuningan  (Gambar  1C).  MCA  dipakai  untuk purifikasi  koloni  terduga E.  coli MCA menghambat pertumbuhan bak dengan  kandungan  crystal  violet  dan  garam  empedu serta  dapat  membedakan  bakteri  gram  negatif  yang dapat memfermentasi laktosa atau tidak.
penghasil ESBL pada media TBX (A), media MCA (B), koloni non MCA (C), hasil uji Indol positif, terbentuk cincin merah dan negatif, tidak terbentuk cincin merah (D), koloni penghasil ESBL, (E) koloni bukan penghasil ESBL
Tabel 2. Hasil uji konfirmasi identifikasi E. coli dan E .coli penghasil ESBL.
Konfirmasi E. coli (Indol), n=10 Konfirmasi E. coli ( Double Disk Diffusion 8(80%) 8(80%) 6(60%) 9(90%) 8(80%) 7(70%) 5(50%) 8(80%) 5(50%) 7(70%) 7(70%) 7(70%) 7(70%) 9(90%) 7(70%) 8(80%) 7(70%) 6(60%) 8(80%) 10(100%) 8(80%) 10(100%) 9(90%) 7(70%)
/Jurnal Kesehatan Lingkungan Indonesia 21(1), 2022
7085.
gugus  kromofor  oleh  koloni  terduga E.coli penghasil yang tumbuh pada MCA memiliki ciri koloni koloni besar, mucoid, dan berwarna merah muda (Gambar 1B), sedangkan jika negatif berwarna kekuningan  (Gambar  1C).  MCA  dipakai  untuk E.  coli pada  media  TBX. MCA menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif dengan  kandungan  crystal  violet  dan  garam  empedu serta  dapat  membedakan  bakteri  gram  negatif  yang emfermentasi laktosa atau tidak. 12
penghasil ESBL pada media TBX (A), media MCA (B), koloni non E.coli pada MCA (C), hasil uji Indol positif, terbentuk cincin merah dan negatif, tidak terbentuk cincin merah (D),
E. coli ESBL
Double Disk Diffusion ), n=10
8(80%) 9(90%) 7(70%) 8(80%) 7(70%) 7(70%) 9(90%) 8(80%) 6(60%) 10(100%) 10(100%) 7(70%)

## Enumerasi E.coli penghasil ESBL
Hasil  enumerasi  pada  Tabel  3  merupakan perhitungan  lanjutan  dari  Tabel  2.  Persentase E.  coli penghasil ESBL di RPH-U A berkisar antara 11,89 – 14,88%  dengan  rata-rata  13,74%.  Persentase E.  coli penghasil ESBL di  RPH-U B  berkisar antara 10,45 - 13,82% dengan rataan 12,02% Sedangkan pada sentra TPA  C,  persentase E.coli penghasil  ESBL  berkisar cukup  tinggi  yakni  16,61  -  39,52%  dengan  rataan 27,51%.  Secara  kesuluruhan,  persentase  minimal berada  di  angka  10,45%  dan  maksimal  39,52%  rata- rata 17,76% di kota Bogor.
Hasil  enumerasi  pada  penelitian  ini  memiliki kemiripan  dengan  penelitian  Rahayu et  al. (2020) yang  mendeteksi  keberadaan E. coli penghasil ESBL dari  sampel  efluen  dengan  dengan  persentase  38,7% dari  efluen  TPA  di  Kota  Bogor. 13 Febrianti et  al. (2021) dalam penelitiannya mendeteksi keberadaan E. coli penghasil  ESBL  dengan  persentase  rata-rata 81,7%  dari  efluen  beberapa  RPH-U  di  sekitar Jakarta. 14 Kedua  penelitian  ini  memiliki  persentase yang  berbeda  dengan  penelitian  ini,  namun mengindikasikan bahwa E. coli penghasil ESBL dapat terdeteksi di efluen yang dibuang ke lingkungan.
Tabel 3 Persentase Bakteri E. coli penghasil ESBL dari setiap RPU/TPA dengan beberapa parameter
No. RPH-U/TPA Konsentrasi E. coli CFU/100ml Konsentrasi E. coli ESBL CFU/100ml Persentase E. coli penghasil ESBL Maksimum Minimum Rata-rata 1 A01 12.121.212,12  1.633.633,63 13,48% 14,88% 11,89% 13,74% 2 A02 10.181.818,18  1.500.000,00 14,73% 3 A03 9.454.545,45  1.124.242,42 11,89% 4 A04 863.636,36 128.484,85 14,88% 5 B01 1.951.951,95 203.903,90 10,45% 13,82% 10,45% 12,02% 6 B02 180.780,78 23.543,54 13,02% 7 B03 16.969.696,97  2.345.454,55 13,82% 8 B04 19.090.909,09  2.060.606,06 10,79% 9 C01 1.421.212,12 236.036,04 16,61% 39,52% 16,61% 27,51% 10 C02 252.252,25 99.696,97 39,52% 11 C03 2.210.210,21 453.453,45 20,52% 12 C04 362.162,16 120.909,09 33,39%
Menurut Blaak et al . (2015), persentase keberadaan E. coli penghasil  ESBL  di  berbagai  tempat  bisa bervariasi  berdasarkan  beberapa  faktor,  yakni wilayah/regional tempat pengambilan sampel, tingkat kontaminasi  feses,  waktu  pengambilan  contoh, kecepatan  aliran  efluen,  dan  kondisi  saluran pembuangan. 15 Kalanjati  (2017)  dalam  penelitiannya menemukan  bahwa E.  coli penghasil  ESBL  dapat ditemukan  pada  wadah  karkas  (20%),  wadah  jeroan (10%),  lantai  area  penanganan  karkas  dan  jeroan (25%),  pisau  (15%),  air  di  bak  penampungan  (5%) dan mesin pencabut bulu (25%) dari lingkungan RPH- U. 16 E.  coli penghasil  ESBL  yang  terdeteksi  pada efluen  berisiko  mencemari  lingkungan  melalui penyebaran  resistansi  terjadi  ke  bakteri  lain  baik dengan  spesies  yang  sama  atau  beda  spesies  secara horisontal  maupun  vertikal  melalui mobile  genetic elemen (MGE)  yang  terdiri  dari  plasmid,  transposon, dan  bacteriophage. 4,17 Beberapa  penelitian  lain menunjukkan  bahwa E.  coli penghasil  ESBL  secara tidak  langsung dapat  menular ke hewan dan  manusia melalui higiene dan sanitasi serta rantai makanan yang tercemar. 18–20 E.  coli penghasil  ESBL  yang tercemar  di  lingkungan  dapat  menjadi  faktor  risiko
penyebab penyakit pada  manusia dan  hewan, bahkan bisa  menjadi  zoonosis. 19 Penelitian  Wadepohl  et  al. (2020)  menguatkan  beberapa  penelitian  tersebut dengan  menyebutkan  bahwa  penyebaran E.  coli penghasil ESBL bisa terjadi di antara manusia, ayam baik hidup  maupun bentuk  karkas atau  fesesnya, dan lingkungan yang berada dalam kawasan RPHU/TPA. 21
Mitigasi  dan  pencegahan  pencemaran E.coli penghasil  ESBL  dapat  dilakukan  antara  lain  dengan melakukan  penanganan  limbah,  penerapan  higiene personal,  dan  sanitasi  lingkungan  yang  baik. 21,22 Kebijakan  dari  instansi  terkait,  khususnya  berbagai pemerintah  dapat  membuat  aturan  ketat  pembatasan penggunaan  antibiotik  dan  pengawasan  di  lapangan untuk  mengurangi  penyalahgunaan  pemakaian antibiotik. 23

## SIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan E.  coli penghasil  ESBL  teridentifikasi  pada  seluruh  sampel dengan  persentase E.  coli penghasil  ESBL  terendah 10,45%  dan  tertinggi  yaitu  39,52%  dengan  rata-rata 17,76%. E.  coli penghasil  ESBL  berisiko  mencemari lingkungan  melalui  efluen  dari  RPH-U/TPA.  Bakteri
tersebut  berisiko  mencemari  lingkungan  melalui efluen  dari  RPH-U/TPA  dan  dapat  menjadi  ancaman kesehatan terutama terhadap  masyarakat  yang berada di  sepanjang  aliran  sungai  dan  menggunakan  air sungai  sebagai  sumber  kehidupan  sehari-hari. Langkah  mitigasi  dan  pencegahan  perlu  dilakukan, salah  satunya  dengan  perbaikan  sanitasi  dan  higiene personal  di  RPH-U/TPA.  Penelitian  lebih  lanjut tentang kejadian resistansi antibiotik dapat dikembangkan dengan konsep one health pada ternak dan  masyarakat  di  sepanjang  aliran  sungai  di  Kota Bogor dan wilayah lain di Indonesia.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  kepada  BPPSDMP  Kementerian Pertanian atas beasiswa fasilitas pendidikan formal S2 dan dana penelitian yang diberikan.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Niasono  AB,  Latif  H,  Purnawarman  T.
Resistensi
antibiotik terhadap bakteri Escherichia  coli yang  diisolasi  dari  peternakan ayam  pedaging  di  Kabupaten  Subang,  Jawa Barat. Jurnal Veteriner 2019,20(2):187–95.
2.   O’Neill  J.  Review  on  antibiotic  resisitance. Antimicrobial resistance : tackling a crisis for the health  and  wealth  of  nations  [Internet].  2014 [dikutip 1 Oktober 2020 Oct 1]. Tersedia pada : https://wellcomecollection.org/works/ rdpck35v/items
3.   WHO. WHO publishes list of bacteria for which new  antibiotics  are  urgently  needed  [Internet]. 2017  [dikutip  31  Januari  2020].  Tersedia  pada: https://www.who.int/news/ item/27-02-2017- who-publishes-list-of-bacte  ria-for-which-new- antibiotics-are-urgently-needed
4.   Zhang X, Xiao S, Jiang X, Li Y, Fan Z, Yu Y, et al. Genomic characterization of Escherichia coli LCT-EC001,  an  extremely  multidrug-resistant strain  with  an  amazing  number  of  resistance genes. Gut Pathogens 2019,11(1):1–8. https://doi.org/10.1186/s13099-019-0298-5
5.   Varga  C,  Rajić  A,  McFall  ME,  Reid-Smith  RJ, Deckert  AE,  Pearl  DL,  et  al.  Comparison  of antimicrobial  resistance  in  generic  Escherichia coli and Salmonella spp. cultured from identical fecal  samples  in  finishing  swine.  Canadian Journal of Veterinary Research 2008,72(2 SPEC. ISS.):181–187.
6.   Uemura  M,  Imataki  O,  Uchida  S,  Nakayama- Imaohji  H,  Ohue  Y,  Matsuka  H,  et  al.  Strain specific  transmission  in  an  outbreak  of  ESBL producing  Enterobacteriaceae  in  the  hemato- oncology  care  unit:  a  cohort  study.  BMC Infectious Diseases 2017,17(1):1–8. https://doi.org/10.1186/s12879-016-2144-4
7.   ISO.  ISO  19458 :  2006  Water  quality  – Sampling  for  microbiological.  Geneva  (CH): International  Organization  for  Standardization; 2006.
8.   BSN. SNI 6989.57-2008 Pengambilan contoh air permukaan. Jakarta: Badan Standardisasi Nasional; 2008.
9.   CLSI.  CLSI  M100-ED31:2021  Performance
Standards  for  Antimicrobial  Susceptibility Testing, 31st Edition [Internet]. 2021 [dikutip 31
Januari 2021]. Tersedia pada:
http://em100.edaptivedocs.net/Login.aspxr
10.   WHO.  WHO  integrated  global  surveillance  on ESBL-producing  E.  coli  using  a  “One  Health” approach  [Internet].  2021    [dikutip  31  Januari 2021].  Tersedia  pada::  https://www.who.int/ publications/i/item/who-integrated-global- surveillance-on-esbl-producing-e.-coli-using-a- one-health-approach
11.    Jozić S, Vukić Lušić D, Aljinović A,  Vlakančić W,  Cenov  A,  Vrdoljak Tomaš  A,  et  al.  Is  TBX agar  a  suitable  medium  for  monitoring Escherichia  coli  in  bathing  water  using  the membrane  filtration  method?  Environmental Monitoring  and  Assessment  2019,191(9):558– 69. https://doi.org/10.1007/s10661-019-7733-4 12.  Wanger  A.  Microbiology  and  Molecular Diagnosis in Pathology Chapter 4 : Media for the Clinical Microbiology Laboratory.
In:
Microbiology  and  Molecular  Diagnosis  in Pathology  London  (UK):  Elsevier  Ltd;  2017.
https://doi.org/10.1016/B978-0-12-805351-
5.00004-1
13.  Rahayu  KP,  Andriani  MD,  Wahyudi  A.
Identifikasi Escherichia coli penghasil Extendedspectrum  Β-Lactamase  (ESBL)  pada sampel  limbah  air  dari  proses  pemotongan  di tempat  pemotongan  unggas  Kota  Bogor. Prosiding  Penyakit  Hewan  Rapat  Teknis  dan Pertemuan  Ilmiah  (Ratekpil)  dan  Surveilans Kesehatan Hewan 2020,10(1):367–74.
14.   Febrianti  T,  Nursofiah  S,  Amalia  N,  Febriyana D.  Performa  tryptone  bile  x-glucuronide  (TBX) yang  disuplementasikan  dengan  Cefotaxime sebagai medium selektif untuk skrining ESBL-E .coli  dari  sampel  lingkungan.  Buletin  Penelitian Kesehatan 2021,49(1):1–8. https://doi.org/10.22435/bpk.v49i1.3858
15.  Blaak H, Lynch G, Italiaander R, Hamidjaja RA, Schets  FM,  De  Husman  AMR.  Multidrug- resistant and extended  spectrum beta-lactamase- producing escherichia coli in dutch surface water and  wastewater.  PLoS  ONE  2015,10(6). https://doi.org/10.1371/journal.pone.0127752
16.  Kalanjati  WW.  Keberadaan  Escherichia  coli Penghasil  Extended  Spectrum  B-lactamase  Di Lingkungan  Sentra  Pemotongan  Ayam  Pondok Rumput  Kota  Bogor  [tesis].  Bogor :  Institut Pertanian Bogor; 2017.
17.  Sasongko  H.  Uji  Resistensi  Bakteri  Escherichia Coli  dari  Sungai  Boyong  Kabupaten  Sleman terhadap Antibiotik Amoksisilin. Jurnal Bioedukatika 2014,2(1):25–9. https://doi.org/10.26555/bioedukatika.v2i1.4108
18.  Soraas A, Sundsfjord A, Sandven I, Brunborg C, Jenum PA. Risk factors for community urinary  tract  infections  caused  by  ESBL producing  enterobacteriaceae study  in  a  low  prevalence  country.  PLoS  ONE 2013,8(7):1– 7.https://doi.org/10.1371/journal.pone.0069
19.  Guenther  S,  Ewers  C,  Wieler  LH.  Extended spectrum  beta-lactamases  producing  E.  coli  in wildlife,  yet  another  form  of  environmental pollution? Frontiers in Microbiol https://doi.org/10.3389/fmicb.2011.00246
20.   Franz E, Veenman C, van Hoek AHA., Husman A  de  R,  Blaak  H.  Pathogenic  Escherichia  coli producing  Extended-Spectrum  β isolated  from  surface  water  and  wastewater. Scientific
Reports 2015,5(14372). https://doi.org/10.1038/srep14372 ©2022. This open- Commons Attribution
Thufeil Y., Hadri L., Herwin P., Ading W., Hasniah A., Oli S. /Jurnal Kesehatan Lingkungan Indonesia 21(1), 2022
Soraas A, Sundsfjord A, Sandven I, Brunborg C, Jenum PA. Risk factors for community-acquired urinary  tract  infections  caused  by  ESBL- acteriaceae  -a  case-control study  in  a  low  prevalence  country.  PLoS  ONE
ttps://doi.org/10.1371/journal.pone.0069581 Guenther  S,  Ewers  C,  Wieler  LH.  Extended- lactamases  producing  E.  coli  in wildlife,  yet  another  form  of  environmental pollution? Frontiers in Microbiology 2011,2:246. https://doi.org/10.3389/fmicb.2011.00246 Franz E, Veenman C, van Hoek AHA., Husman A  de  R,  Blaak  H.  Pathogenic  Escherichia  coli Spectrum  β-Lactamases isolated  from  surface  water  and  wastewater.
Scientific Reports 2015,5(14372). https://doi.org/10.1038/srep14372
21.   Wadepohl  K,  Müller  A, Blaha  T,  Meemken  D,  et  al.  Association  of intestinal  colonization  of  ESBL  producing Enterobacteriaceae  in  poultry  slaughterhouse workers  with  occupational  exposure pilot  study.  PLoS  ONE  2020,15(6):1 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0232326 22.   Kardaś-Słoma L, Yazdanpanah Y, Perozziello A, Zahar J-R, Lescure F-X, Cousien A, et al. Hand hygiene improvement or antibiotic restriction to control the household transmission of extended spectrum  β-lactamase-producing  Escherichia coli: a mathematical modelling study. Antimicrobial  Resistance  &  Infection  Control [Internet]  2020,9(1):139– https://doi.org/10.1186/s13756
23.   Humaida  R.  Strategy  to  handle  resistance  of antibiotics. Jurnal Majority 2014,3(7):113
-access article is distributed under the terms and conditions of the Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License.
/Jurnal Kesehatan Lingkungan Indonesia 21(1), 2022  49
Wadepohl  K,  Müller  A,  Seinige  D,  Rohn  K, Blaha  T,  Meemken  D,  et  al.  Association  of intestinal  colonization  of  ESBL  producing Enterobacteriaceae  in  poultry  slaughterhouse workers  with  occupational  exposure-a  german pilot  study.  PLoS  ONE  2020,15(6):1–12. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0232326 danpanah Y, Perozziello A, X, Cousien A, et al. Hand hygiene improvement or antibiotic restriction to control the household transmission of extended-
producing  Escherichia coli: a mathematical modelling study. icrobial  Resistance  &  Infection  Control –47.  Available  from:
https://doi.org/10.1186/s13756-020-00803-9
Humaida  R.  Strategy  to  handle  resistance  of antibiotics. Jurnal Majority 2014,3(7):113–20.
is distributed under the terms and conditions of the Creative