## UJI KETAHANAN TIGA VARIETAS TOMAT (SOLANUM
LYCOPERSICUM L. ) TERHADAP SERANGAN CMV
(CUCUMBER MOSAIC VIRUS) DENGAN METODE DAS-ELISA
Lia Agturani Tudaryati 1 , Febi Nurilmala 1 dan Krisna Dwiharniati 2
1 FMIPA Univeritas Nusa Bangsa, 2 Akademi Kimia Analis
1 Jl. K. H. Sholeh Iskandar, Cimanggu, Tanah Sareal-Bogor 1616 1e-mail : nusabangsa@unb.ac.id

## ABSTRACT
Endurance Test Three Tomato Variety (Solanum lycopersicum L.) Against Attacks CMV (Cucumber Mosaic Virus) DAS-ELISA Method
Tomato plantation intensification can be done by controlling nuisance organism plant causes disease in tomato, such as CMV. CMV can be transmitted mechanically, and therefore testing of tomato varieties resistance to CMV can be performed with CMV isolates infect mechanically to healthy tomato plants (variety Marta F1, San Marino,  and  Viccario).  CMV  isolates  derived  from  two  sources,  namely  a  positive  tomato  plants  attacked  by CMV (plant sap) and the positive control CMV AGDIA producers commonly used as a positive control test DAS- ELISA (Double Antibody Sandwich-Enzyme Linked immunosorbent assay). This study aims to test three varieties of  tomato  resistance  against  CMV  attacks.  Research  conducted  in  the  screen  house  and  laboratory  virology Central  Agricultural  Quarantine  Standards  Test.  Identification  of  CMV  infection  was  done  by  observing  the incubation  period,  symptoms  appeared,  and  continued  with  DAS-ELISA  test.  Structured  treatment  completely randomized  design  (CRD)  with  6  replications.  Data  processed  with  fingerprint  analysis  and  continued  with various  multiple  Duncan  test  at  5%  level  test.  The  results  showed  the  disease  symptoms  appeared  only  on  the varieties  of  San  Marino  from  CMV  infected  plant  sap.  Symptoms  caused  a  reduction  of  leaf  rolling  and  leaf lamina  8-10  day  incubation  period  and  symptoms  of  stunted  stems  with  14-28  day  incubation  period,  the  San Marino  CMV  causes  the  reduction  of  plant  height  by  33%.  Sensitivity  of  tomato  varieties  against  CMV  San Marino sap from plants was quantitatively evidenced by positive results on the DAS-ELISA test. Meanwhile, F1 and Marta varieties resistant to Viccario CMV infection sap from plants and the positive control CMV AGDIA producers.
Keywords : Tomato (Solanum Lycopersicum l.), Cucumber Mosaic Virus, DAS-ELISA method

## ABSTRAK
Intensifikasi  perkebunan  tomat  dapat  dilakukan  dengan  mengendalikan  organisme  pengganggu tanaman (OPT) penyebab penyakit pada tomat, seperti CMV. CMV dapat ditularkan secara mekanis, oleh karena itu  pengujian  ketahanan  varietas  tomat  terhadap  CMV  dapat  dilakukan  dengan  menularkan  isolat  CMV  secara mekanik  kepada  tanaman  tomat  sehat  (varietas  Marta  F1,  San  Marino,  dan Viccario).  Isolat  CMV  berasal  dari dua sumber, yaitu tanaman tomat yang positif terserang CMV (sap tanaman) dan kontrol positif CMV produsen AGDIA  yang  biasa  digunakan  sebagai  kontrol  positif  pengujian  DAS-ELISA (Double  Antibody  Sandwich- Enzyme  Linked  Immunosorbent  assay). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  ketahanan  tiga  varietas  tomat terhadap  serangan  CMV . Penelitian  dilaksanakan  di screen  house dan  laboratorium  virologi  Balai  Besar  Uji Standar Karantina Pertanian pada bulan Januari sampai April 2008. Identifikasi hasil penularan CMV dilakukan dengan  mengamati  periode  inkubasi,  gejala  yang  muncul,  dan  dilanjutkan  dengan  pengujian  DAS-ELISA. Perlakuan disusun dengan rancangan acak lengkap (RAL) dengan 6 ulangan. Data diolah dengan analisis sidik ragam  dan  dilanjutkan  dengan  uji  berganda  Duncan  pada  taraf  uji  5%. Hasil  penelitian  menunjukkan  gejala penyakit hanya muncul pada varietas San Marino yang ditulari CMV asal sap tanaman. Gejala yang ditimbulkan berupa  daun  menggulung  dan  reduksi  lamina  daun  dengan  masa  inkubasi  8-10  hari,  serta  gejala  batang  kerdil dengan  masa  inkubasi  14-28  hari,  CMV  pada  San  Marino  menyebabkan  reduksi  tinggi  tanaman  sebesar  33%. Kesensitifan  tomat  varietas  San  Marino  terhadap  CMV  asal  sap  tanaman  secara  kuantitatif  dibuktikan  dengan hasil  yang  positif  pada  pengujian  DAS-ELISA.  Sedangkan,  varietas  Marta  F1  dan  Viccario  tahan  terhadap penularan CMV asal sap tanaman maupun kontrol positif CMV produsen AGDIA.
Kata kunci : Tomat (Solanum lycopersicum L. ) , Cucumber Mosaic Virus, metode DAS-ELISA

## PENDAHULUAN
Tanaman  tomat  merupakan  salah satu  komoditas  hortikultura  yang  sangat potensial  untuk  dikembangkan,  karena mempunyai  nilai  ekonomis  cukup  tinggi dan  potensi  ekspornya  juga  sangat  besar. Selain  itu,  tomat  adalah  salah  satu  jenis sayuran  yang  banyak  digemari  orang karena  rasanya  yang  enak  dan  segar  serta sebagai sumber vitamin.
Usaha  peningkatan  produksi  dan mutu  hasil  produksi  untuk  memenuhi kebutuhan nasional dan ekspor menghadapi  beberapa  kendala.  Kurangnya bibit  unggul  bermutu  tinggi,  besarnya biaya produksi seperti penggunaan pestisida  dan  pupuk  yang  berlebihan,  dan gangguan organisme pengganggu tumbuhan (OPT) merupakan sebagian dari kendala  –  kendala  dalam  usaha  tersebut.
Kendala  biologis  yang  diakibatkan  oleh serangan virus pada tomat masih merupakan  penyebab  utama  kegagalan atau rendahnya panen yang didapat petani. Virus  sangat  sulit  dikendalikan,  karena virus  hidup  sebagai  parasit  obligat  di dalam  sel  tanaman,  sehingga  usaha  untuk mematikan  virus  hanya  bisa  dilakukan dengan  mematikan  sel  atau  jaringan tanaman inangnya.
CMV (Cucumber  Mosaic  Virus) pertama  kali  dilaporkan  pada  tahun  1916 sebagai  salah  satu  penyebab  penyakit tanaman  (Doolitle,  1996).  Sampai  saat  ini belum  ada  pestisida  yang  efektif  untuk mengendalikan virus atau serangga vektornya,  satu  –  satunya  cara  adalah penggunaan kultivar tomat yang
tahan/resisten terhadap virus. CMV  bersifat terbawa benih (seedborn) ,  dapat  ditularkan  dari  induk  ke keturunannya,  secara  mekanik,  maupun melalui  serangga  vektor  seperti  kutu  daun Myzus persicae (CABI, 2006). Gejala yang ditimbulkan  CMV  berbeda  –  beda  pada setiap  tanaman  inang  yang  diserang.  Pada tomat, biasanya timbul gejala mosaik pada daun,  penggulungan  daun,  reduksi  lamina daun,  dan  tanaman  menjadi  kerdil (stunt) (Chupp, et al., 1960).
Beberapa  varietas  tomat  yang dianggap tahan serangan CMV oleh petani
tomat,  telah  melalui  uji  ketahanan  benih terhadap  CMV  yang  dilakukan  oleh perusahaan  –  perusahaan  produsen  benih tersebut.  Dari  beberapa  varietas  tomat tersebut,  dipilih  tiga  varietas  tomat,  yaitu Marta F1, Vicarrio, dan San Marino, untuk diuji  kembali  ketahanannya  terhadap serangan CMV dan mengetahui kebenaran hasil  uji  ketahanan  benih  yang  dilakukan oleh produsen benih-benih tersebut.
Metode  penularan  virus  secara mekanik  dapat  digunakan  untuk  menguji sensitifitas benih terhadap serangan CMV. Varietas  yang  sensitif  terhadap  serangan virus  ini akan  menunjukkan  gejala  tertular CMV.  Beberapa  metode  pengujian  telah dilakukan untuk menguji keberadaan CMV pada  tanaman,  salah  satunya  adalah metode  DAS-ELISA (Double  Antibody Sandwich - Enzyme Linked Immunosorbent Assays) .  Metode  ini  digunakan  karena proses  pengujiannya  yang  mudah,  relatif murah bila dibandingkan dengan biomolekuler (PCR), dan memiliki sensitifitas  yang  cukup  tinggi  sampai dengan konsentrasi virus 1 – 10 ng/ml.

## TUJUAN PENELITIAN
Penelitian  ini  bertujuan  untuk menguji varietas tomat yang tahan terhadap  serangan  virus  CMV,  agar didapatkan  informasi  tentang  varietas tomat  yang  bermutu  baik  dan  tahan terhadap CMV.

## BAHAN DAN ALAT

## Bahan
Bahan  –  bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  diantaranya  adalah isolat CMV (didapatkan dari tanaman yang positif  terserang  CMV),  kontrol  positif CMV  (AGDIA),  tanaman  tomat  varietas Marta  F1,  Viccario,  dan  San  Marino, antisera  CMV  (AGDIA), coating  buffer , general  extract  buffer , enzyme  conjugate buffer , substrate  buffer , PBST  (Phosphate Buffer  Saline-Tween)  buffer ,  tablet para- Nitrophenylphosphate /pNPP (Agdia), pupuk  kandang,  tanah  steril,  karborundum (BDH  Chem),  larutan  dapar  fosfat  pH  7
0,01  M  (Merck),  kertas  towel,  dan cotton buds.

## Alat
Alat  –  alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  mortar,  pistel,  pipet mikro  (Eppendorf)  (ukuran  2–20  μL,  50– 100    μL,  1000  μL,  dan  5  mL),  tip  pipet (Axygen)  (ukuran  2–20  μL,  50–100    μL, 1000  μL,  dan  5  mL),  tabung  mikro (Axygen)  (ukuran  1,5  mL),  microplate (Nunc),  pHmeter  (Cyberscan),  neraca digital (AND), inkubator (Ratek), medicool (Sanyo), immunowasher (BioRad), ELISA reader (Elx800), polybag , kotak perkecambahan, dan alat-alat gelas laboratorium.

## METODE PENELITIAN
Metode  penelitian  yang  dilakukan adalah  metode  eksperimen  sebenarnya.
Pengolahan  data  dilakukan  menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Perlakuan  terdiri  dari  3  (tiga)  varietas tomat  yang  ditulari  CMV  dan  kontrol berupa  tanaman  tomat  sehat,  ulangan dilakukan  sebanyak  6  (enam)  kali.  Isolat CMV  berasal  dari  dua  sumber,  yaitu  dari tanaman  tomat  yang  terserang  CMV (didapatkan  dari  lapangan)  dan  kontrol positif  CMV  merk  AGDIA.  Masing- masing  isolat  CMV  ini  ditularkan  pada tanaman tomat yang berbeda.

## Pelaksanaan Penelitian

## Persiapan Media Tanam
Media tanam terdiri dari campuran tanah  steril  dan  pupuk  kandang  (1:1), selanjutnya  media  tanam  dimasukkan  ke dalam beberapa polybag.

## Pembibitan dan Pemeliharaan Tomat
Benih  tomat  direndam  dalam larutan  NaOCl  0,5%  selama  10  menit untuk menghilangkan patogen yang terdapat  di  permukaan  benih.  Selanjutnya, benih disemaikan di dalam kotak pengecambahan. Benih yang telah
berkecambah dipindahkan ke dalam polybag  yang  telah  berisi  media  tanam. Persemaian dilakukan di dalam rumah kasa dan  dilakukan  penyiraman  setiap  hari, benih dipelihara sampai berumur ± 10 hari.

## Penularan CMV
Tanaman tomat sehat hasil pembibitan  yang  telah  berumur  10  hari diinokulasi dengan CMV. Inokulasi
dilakukan pada sore hari, dengan mengoleskan  isolat  virus  CMV  dari  sap tanaman  terinfeksi  CMV  dan  dari  kontrol positif  CMV  (AGDIA)  pada  daun  tomat sehat  yang  telah  ditaburi  karborundum. Tanaman  yang  digunakan  sebagai  kontrol hanya  diinokulasi  dengan  larutan  dapar fosfat pH 7,0 0,01 M.
Sap  tanaman  untuk  inokulasi disiapkan  dengan  cara  menggerus  daun tanaman  sakit  dalam  0,01  M  buffer  fosfat pH  7,0  dengan  perbandingan  1  :  5. Tanaman  tomat  yang  telah  diinokulasi dibiarkan  selama  beberapa  hari  sampai menunjukkan gejala.
Hasil  inokulasi  diamati  dengan memperhatikan  periode  inkubasi  (waktu inokulasi  sampai  waktu  pertama  kali timbul  gejala),  karakteristik  gejala  pada tanaman,  dan  tinggi  tanaman.  Kemudian dilakukan  pengujian  serologi  dengan metode DAS-ELISA.

## Pengamatan Gejala pada Tanaman
Pengamatan  ini  dilakukan  untuk mengetahui  gejala-gejala  yang  muncul pada  tanaman  tomat  sebagai  reaksi terhadap  serangan  CMV  yang  telah ditularkan.  Bagian  –  bagian  yang  diamati adalah warna dan bentuk daun, serta tinggi dan bentuk batang.

## Pengamatan Tinggi Tanaman
Parameter  ini  dilakukan  dengan menggunakan  penggaris,  tinggi  tanaman diukur  dari  mulai  pangkal  batang  hingga puncak  tertinggi  tanaman.  Pengukuran dilakukan  setiap  minggu  setelah  inokulasi sampai  tanaman  menunjukkan  gejala tertular  CMV.  Pengukuran  tinggi  tanaman
ini  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh serangan  CMV  terhadap  kondisi  fisik tanaman, karena salah satu gejala penyakit ini  adalah  terjadinya  kekerdilan  pada tanaman yang terserang.

## Pengujian Serologi
Ketiga varietas tomat yang
diinfeksi oleh virus, diuji dengan menggunakan  metode  DAS-ELISA  untuk mengetahui dan memastikan adanya infeksi  CMV  yang  terjadi  di  dalam  sel tanaman  tersebut.  Pengamatan  gejala  saja tidak  cukup  untuk  memastikan  bahwa suatu  tanaman  positif  terserang  CMV, karena  gejala  penyakit  yang  ditimbulkan oleh  patogen  virus  hampir  sama  antara virus  yang  satu  dengan  yang  lainnya, sehingga diperlukan uji lanjutan seperti uji DAS-ELISA.
Cara  kerja  DAS-ELISA  adalah  sebagai berikut :
1. Lubang microplate diisi  dengan  100 uL antibodi CMV yang telah
dilarutkan dalam coating buffer dengan perbandingan 1 : 200. Microplate ditutup  dengan  plastik penutup  supaya  suasana  di  dalam lubang tetap lembab, kemudian diinkubasi  pada  suhu  27 o C  selama  4 jam.
2. Microplate kemudian  dicuci  dengan PBST  buffer sebanyak  4-8  kali.
Kemudian  dikeringkan  dengan  cara dibalik  dan  ditepuk  –  tepukan  pada permukaan  yang  telah  dialasi  kertas towel,  dilakukan  hingga  tidak  ada  lagi gelembung udara menempel di dinding lubang microplate . 3. Lubang microplate diisi  dengan  sap tanaman yang telah digerus menggunakan general  extract  buffer dengan perbandingan 1 : 10 (berat/volume),  masing  –  masing lubang  sebanyak  100  uL.    Kontrol positif dan kontrol negatif dilarutkan di dalam general extract buffer , kemudian dimasukkan ke dalam
lubang microplate , masing-masing sebanyak  100  uL. Microplate ditutup,
kemudian  diinkubasi  pada  suhu    4  ºC selama 1 malam.
4. Microplate dicuci seperti pada tahap 2.
5. Enzim  dilarutkan  di  dalam enzyme conjugate  buffer dengan perbandingan 1 : 200, pembuatan konjugat dilakukan 10  menit  sebelum  waktu  inkubasi berakhir. Microplate diisi dengan 100 uL  larutan  enzim. Microplate ditutup, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  ruang selama 2 jam.
6. Microplate dicuci seperti pada tahap 2.
7. Disiapkan  larutan  substrat  dengan melarutkan  pNPP  tablet  kedalam substrate  buffer kira-  kira  5  menit sebelum  waktu  inkubasi  berakhir dengan perbandingan 1 : 5. Microplate diisi dengan 100 uL larutan
pNPP. Microplate ditutup,  kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 30- 60  menit,  di  dalam  kotak  gelap.
Setelah proses inkubasi selesai, lubang microplate diisi dengan 50 µL NaOH 3 M untuk menghentikan reaksi perubahan  warna  dari  tidak  berwarna menjadi kuning. 8. Pembacaan hasil dilakukan menggunakan ELISA  reader dengan panjang gelombang 405 nm.

## Pengolahan Data
Rancangan percobaan yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Data yang  diperoleh  kemudian  diolah  dengan analisis sidik ragam (ANSIRA)/analysis of variance (ANOVA) dan dilanjutkan dengan uji berganda Duncan pada taraf uji 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Periode Inkubasi dan Gejala CMV
Ketiga  varietas  yang  diinokulasi menunjukkan  hasil  yang  berbeda  –  beda (Tabel  1).  Gejala  penyakit  hanya  muncul pada  satu  varietas  tanaman  tomat  yang diuji,  yaitu  varietas  San  Marino.  Varietas Marta F1 dan Viccario tidak menunjukkan gejala  tertular  CMV  pada  semua  bagian tanaman,  baik  daun  dan  batang.  Pada
varietas  San  Marino,  gejala  muncul  pada tanaman  yang  diinokulasi  dengan  isolat yang  berasal  dari  sap  tanaman  positif CMV,  daun  pertama  dan  kedua  tidak menunjukkan  gejala,  tetapi  daun  ketiga mulai  menunjukkan  gejala  tertular  CMV. Tanaman  yang  ditulari  dengan  isolat  yang berasal  dari  kontrol  positif  CMV  AGDIA tidak menunjukkan gejala terserang CMV.
Menurut  Agrios  (1997),  adanya daun-daun  yang  tidak  menunjukkan  gejala pada  tanaman  yang  telah  terinfeksi disebabkan  karena  konsentrasi  virus  yang rendah  pada  daun  –  daun  tersebut,  atau bahkan  daun  –  daun  tersebut  tidak mengandung  virus.  Virus  banyak  terdapat pada  daun  –  daun  yang  masih  muda, karena  daun  –  daun  muda  masih  banyak menyimpan energi yang cukup bagi proses infeksi dan replikasi virus.
Gejala  pada  varietas  San  Marino muncul  pertama  kali  pada  daun  ketiga yang  baru  muncul  (daun  muda).  Awalnya, lamina  daun  mengalami  reduksi  warna menjadi  agak  menguning,  warna  tulang daun  menjadi  terlihat  lebih  tua  daripada helaian  daunnya  (Gambar  1),  lalu  tepi  – tepi daun melengkung dan mulai
menggulung keatas atau kebawah (Gambar 2). Periode  inkubasi  dan  gejala  yang ditimbulkan  CMV  pada  varietas  San Marino beragam, tidak semua gejala akibat serangan  CMV  terdapat  pada  tanaman tersebut.  Menurut  Hull  (2002),  munculnya gejala  sangat  dipengaruhi oleh  konsentrasi virus, faktor lingkungan (intensitas cahaya, suhu,  dan  kelembaban  udara),  dan  faktor dari  dalam  tanaman  itu  sendiri.  Gallitelli (1998)  menyebutkan  bahwa  CMV  yang menyerang  sistem  vaskuler  dari  tanaman yang  terinfeksi  tidak  dapat  menahan tekanan pengaruh fisiologis yang disebabkan  oleh  kelembaban  tanah  yang tidak konstan.
Keadaan  suhu  rumah  kasa  selama periode  inkubasi  berkisar  antara  28,5  - 35,5 o C. Keadaan suhu tersebut mendukung bagi  infeksi,  replikasi,  dan  penyebaran virus  di  dalam  tanaman.  Lucas  (1975) menyebutkan  bahwa  infeksi  virus  akan terhambat pada suhu 38 – 40 o C, dan gejala akan menghilang bila suhu di bawah 10 o C.
Isolat  yang  berasal  dari  kontrol positif  CMV  AGDIA  tidak  menulari semua  varietas  tomat  yang  diuji.  Kontrol tersebut  merupakan  isolat  CMV  yang berasal dari tanaman yang positif terserang CMV,  tetapi  ekstrak  tanaman  tersebut sudah  mengalami  proses  pengkristalan oleh  produsennya  (AGDIA).  Seperti  yang disebutkan  dalam  Francki et  al. (1979), CMV  relatif  kurang  stabil  dalam  ekstrak tanaman  (sap),  serta  tidak  dapat  bertahan pada  suhu  diatas  70 o C  selama  10  menit. Dalam  Siregar  (2005)  disebutkan  titik inaktivasi  CMV  adalah  50  –  55 o C, ketahanan  sap  2  –  3  hari,  dan  pada  5 o C virulensi  CMV  dapat  bertahan  5  –  6  hari. CMV di dalam ekstrak tersebut tidak rusak karena masih dapat menunjukkan perubahan warna jika diuji dengan metode DAS-ELISA,  tetapi  tingkat  virulensinya menjadi sangat rendah, sehingga tidak bisa menulari  tanaman  lain.  Kontrol  positif CMV AGDIA ini biasa digunakan sebagai kontrol  positif  dalam  pengujian  DAS- ELISA.

## Pengamatan Tinggi Tanaman
Dari  ketiga  varietas  yang  diuji, hanya varietas San Marino yang diinokulasi  dengan  isolat  tanaman  positif CMV  yang  menunjukkan  gejala  kerdil
(Gambar 3 dan Gambar 4). Tinggi tanaman sampai  umur  7  –  12  hari  setelah inokulasi masih  menunjukkan  tinggi  yang  normal (sama  dengan  tanaman  kontrol),  tetapi pada  umur  14  hari  batang  tanaman  mulai menunjukkan  gejala  kerdil,  karena  laju tinggi  tanaman  yang  terinfeksi  berbeda jauh  dengan  laju  tinggi  tanaman  kontrol (Gambar 5).
Dari  gambar  3,  dapat  dilihat  laju pertumbuhan  tomat  varietas  San  Marino yang  ditulari  dengan  isolat  virus  yang berasal  dari  sap  tanaman  jauh  berbeda dengan  laju  pertumbuhan  tanaman  yang ditulari  dengan  isolat  virus  asal  kontrol positif  AGDIA  dan  tanaman  kontrol. Perbedaan laju pertumbuhan ini disebabkan  karena  adanya  patogen  virus yang  di  dalam  sel  tanaman  tersebut.  Pada penelitian  ini  CMV  dapat  menyebabkan penurunan/reduksi  tinggi  tanaman  pada
varietas  San  Marino  sebesar  33%  jika dibandingkan  dengan  tinggi  tanaman  yang dapat  dicapai  oleh  tanaman  kontrol (tanaman  sehat).  Menurut  Siregar  (2005), infeksi CMV dapat menyebabkan kekerdilan tanaman hingga 29 - 56,6%. CMV  dapat  menghambat  proses fotosintesis  dan  pertumbuhan  tanaman,
karena  virus  menurunkan  kadar  hormon
pertumbuhan  dan  dapat  pula  merangsang sintesis  zat-zat  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  tanaman  (Agrios,  1997). Menurut  Hull  (2002),  menurunnya  laju fotosintesis  pada  tanaman  yang  terinfeksi virus disebabkan karena terjadinya penurunan  jumlah  dan  efisiensi  klorofil, serta luas permukaan daun.
Tabel  1.    Periode  Inkubasi  dan  Jenis  Gejala  CMV  pada  Ketiga  Varietas  Tomat  setelah Inokulasi virus.
Varietas Asal Isolat Periode Inkubasi (hari) Gejala Marta F1 Sap tanaman 1-28 Tidak menunjukkan gejala Sap AGDIA 1-28 Tidak menunjukkan gejala Kontrol 1-28 Tidak menunjukkan gejala Viccario Sap tanaman 1-28 Tidak menunjukkan gejala Sap AGDIA 1-28 Tidak menunjukkan gejala Kontrol 1-28 Tidak menunjukkan gejala San Marino Sap tanaman 8-10 Daun menggulung Reduksi lamina daun 14-28 Batang kerdil Sap AGDIA 1-28 Tidak menunjukkan gejala Kontrol 1-28 Tidak menunjukkan gejala
Gambar 1. Gejala Menguning pada Lamina Varietas San Marino Gambar 2. Gejala Menggulung pada Daun Varietas San Marino
Gambar  3.        Grafik  Laju Pertumbuhan Tomat Varietas  San Marino,  Mulai  Saat  Inokulasi sampai Umur 4 minggu setelah inokulasi.
Gambar  4.      Grafik  Laju  Pertumbuhan  Tomat  Varietas  Marta  F1,  Mulai  Saat  Inokulasi sampai Umur 4 minggu.
Gambar 5.     Grafik  Laju  Pertumbuhan  Tomat  Varietas  Viccario,  Mulai  Saat  Inokulasi sampai Umur 4 minggu.
M 5 20 25 35 40 Inokulasi Minggu I Minggu II Minggu III Minggu IV Waktu (minggu) Ting g i Tan a man ( c m) Marta F1 Isolat virus asal sap tanaman Marta F1 Isolat virus asal kontrol + AGDIA Marta F1 Tanaman kontrol 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Inokulasi Minggu I Minggu II Minggu III Minggu IV Waktu (minggu) T in g g i T a n a m a n ( c m ) Viccario Isolat virus asal sap tanaman Viccario Isolat virus asal kontrol + AGDIA Viccario Tanaman kontrol
Sinaga (2003) menyebutkan beberapa patogen dapat merusak kloroplasma dan mengurangi klorofil yang dibutuhkan  dalam  proses  fotosintesis, bahkan  dapat  menghambat  pembentukan klorofil  sehingga  menimbulkan  klorosis.
Tanaman yang kekurangan hasil fotosintesis  akan  menjadi  kerdil  dan mengalami  klorosis.  Selain  itu  menurut
Hull  (2002),  laju  dan  efisiensi  fotosintesis yang rendah dapat berakibat pada berkurangnya  jumlah  karbohidrat  yang digunakan  untuk  perkembangan  akar, batang, dan daun. Tanaman yang terinfeksi oleh  virus  juga  mengalami  peningkatan respirasi
Varietas  Marta  F1  dan  Viccario  tidak menunjukkan  laju  pertumbuhan  yang berbeda  antara  tanaman  yang  ditulari dengan  isolat  CMV  asal  sap  tanaman, isolat  CMV  asal  kontrol  positif  AGDIA, dan  tanaman  kontrol  (Gambar  6  dan Gambar 7). Sifat resisten terhadap serangan  CMV  yang  ada  pada  varietas Marta  F1  telah  diakui  oleh  pemerintah, khususnya  Departemen  Pertanian  yang mengeluarkan  surat  keputusan  Menteri Pertanian  No.  256/Kpts/TP.240/2/2002 tentang  kualitas  benih  tomat  Marta  F1 yang dianggap unggul.
Gambar 6. Varietas San Marino yang mengalami kerdil pada umur yang sama. Gambar 7. Perbandingan San Marino sehat dan kekerdilan ( stu n t ).
Gambar 8. Grafik Absorbansi DAS-ELISA terhadap Tiga Varietas Tomat yang diuji.

## Pengujian DAS-ELISA Tanaman Tomat
Pengujian  DAS-ELISA  digunakan sebagai  pembuktian  secara  kuantitatif apabila suatu tanaman menunjukkan gejala terserang virus, CMV dapat diuji menggunakan  metode  ini.  Dari  ketiga varietas  yang  diuji,  hanya  varietas  San Marino  yang  ditulari  virus  dari  sap tanaman  yang  menunjukkan  perubahan warna menjadi kuning dan nilai absorbansi yang  sangat  jauh  berbeda  dengan  kontrol (Gambar  11).  Hasil  ini  membuktikan bahwa  gejala  penyakit  yang  muncul  pada varietas  San  Marino  disebabkan  oleh adanya CMV.
Dari  gambar  8,  dapat  dilihat  nilai absorbansi  yang  dihasilkan  oleh  varietas San  Marino  yang  ditulari  CMV  asal  sap tanaman  sangat  berbeda  nilai  absorbansi yang dihasilkan varietas yang lain. Setelah dilakukan  uji  lanjut  Duncan  taraf  5% terhadap  nilai-nilai  absorbansi  tersebut, varietas  San  Marino  yang  ditulari  CMV asal  sap  tanaman  juga  menunjukkan  hasil yang  berbeda  sangat  nyata  dengan  kontrol dan varietas lainnya.
Pengujian  terhadap  varietas  Marta F1  dan  Viccario  tidak  menunjukkan adanya  perubahan  warna  menjadi  kuning. Dapat dilihat dari besarnya nilai absorbansi yang tidak lebih dari dua kali lipat kontrol, bahkan  tidak  jauh  berbeda  dari  nilai absorbansi kontrol. Suatu pengujian dinilai positif  apabila  nilai  absorbansi  contoh sebesar  dua  kali  nilai  absorbansi  kontrol negatif (Dijkstra, 1998).
Tidak  munculnya  gejala  tertular CMV  dan  hasil  uji  DAS-ELISA  yang negatif  terhadap  varietas  Marta  F1  dan Viccario  menunjukkan  adanya  mekanisme ketahanan tanaman  terhadap  patogen  yang menyerangnya.  Menurut  Russel  (1981), ketahanan  terhadap  infeksi  virus  secara sistemik dapat disebabkan karena tanaman menghasilkan  faktor  zat  antivirus  atau antivirus  factor (AVF).  Semakin  tinggi konsentrasi  AVF,  maka  semakin  terbatas penyebaran  virus,  sehingga  mengurangi konsentrasi  virus  di  dalam  tanaman, bahkan virus tidak dapat bertahan di dalam tanaman tersebut.
Mekanisme ketahanan awal tanaman terhadap patogen menurut Sinaga (2003)  diantaranya  adalah  mengurangi pembentukan  nutrisi  yang  berguna  bagi perkembangan patogen, memproduksi senyawa toksik, dan menghambat pembentukan senyawa  esensial yang dibutuhkan  patogen.  Tanaman  juga  dapat membuat  kondisi  yang  kurang  disukai patogen dalam jaringannya, seperti cekaman air, pH terlalu tinggi atau rendah, dan kondisi osmotik yang tidak sesuai.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Cucumber  Mosaic  Virus yang menyerang tanaman tomat dapat
menunjukkan  gejala  dan  periode  inkubasi yang  beragam,  tergantung  ketahanan  dari varietas tomat tersebut. Dari ketiga varietas tomat  (Marta  F1,  Viccario,  dan  San Marino)  yang  diinokulasi  dengan  dua sumber  isolat  (asal  sap  tanaman  dan kontrol  positif  AGDIA),  hanya  varietas San Marino yang diinokulasi dengan isolat CMV  asal  tanaman  yang  menunjukkan gejala penyakit dan positif terinfeksi CMV setelah dilakukan uji DAS-ELISA.
Varietas  Marta  F1  merupakan varietas  yang  dianggap  unggul  dan direkomendasikan oleh Departemen Pertanian berdasarkan SK Menteri Pertanian  No.  256/Kpts/TP.240/2/2002,
dan  tidak  timbulnya  gejala  akibat  infeksi CMV  pada  varietas  ini  menunjukkan bahwa  varietas  Marta  F1  memang  tahan terhadap  infeksi  CMV.  Belum  didapatkan informasi  mengenai  kualitas  benih  tomat varietas  Viccario  yang  dikeluarkan  oleh Departemen Pertanian, tetapi tidak timbulnya  gejala  infeksi  CMV  pada varietas  ini  juga  menunjukkan  bahwa varietas  Viccario  tahan  terhadap  infeksi CMV.

## Saran
Untuk menghindari kerugian akibat  serangan  CMV  pada  perkebunan tomat,  petani  dapat  menggunakan  varietas
Marta F1 dan Viccario yang tahan terhadap infeksi CMV. Pengujian terhadap varietas- varietas  tomat  yang  lain  perlu  dilakukan untuk  mendapatkan  varietas  yang  tahan terhadap infeksi CMV. Pengujian ketahanan  sebaiknya  dilanjutkan  hingga penentuan  persentase  tingkat  penurunan produksi tanaman akibat serangan CMV.

## DAFTAR PUSTAKA
Agrios, GN. 1997. Plant Pathology . Fourth Edition.  Academic  Press;  New York.
CAB  International.  2006. Crop  Protection Compendium,  2006  Edition .  CAB International; Wallingford, UK.
Chupp,  C,  and  A.  F.  Sherf.  1960.
Vegetables  Diseases  and  Their Control . The Ronald Press Company; New York.
Crowther,  JR.  1995. ELISA  Theory  and
Practice .  Methods  in  Molecular
Biology,  Vol.  42.  Humana  Press Inc; New Jersey. Djikstra,  J,  and  C.  P.  de  Jager.  1998. Practical Plant Virology, Protocols  and  Exercises .  Springer Lab  Manual;  Berlin;  Heidelberg;
New York.
Doolittle,  SP.  1996.  A  New  Infectious Mosaic  Disease  of  Cucumber. Phytopathology 6: p.145 – 147.
Francki, RIB, D. W. Mossop, and T. Hatta. 1979.  Cucumber  Mosaic  Virus. CMI/AAB  Descriptions  of  Plant
Viruses , No. 213. Gallitelli,  D.  1998.  Present  Status  of Controlling Cucumber Mosaic Virus. Plant Virus Disease Control ,  38.  Edited  by  A.  Hadidi, et. al., APS Press; USA. Heyne,  K.  1987. Tumbuhan  Berguna
Indonesia .  Jilid  III.  Sarana  Wana Jaya; Jakarta.
Hull,  Roger.  2002. Matthews’  Plant Virology . Fourth Edition. Academic Press; New York. Lucas,  GB.  1975. Disease  of  Tobacco .
Harold E, Parker and Sons Printer;
North Carolina.
Russel, GE. 1981. Plant Breeding for Pest and Disease Resistance . Butterworth; Toronto. Sinaga,  MS.  2003. Dasar-dasar  Ilmu Penyakit Tumbuhan . Penebar Swadaya; Depok.
Siregar,  EBM.  2005. Koleksi,  Pemurnian, dan  Uji  Hayati  Isolat-isolat  CMV Asal  Sumatera  Utara .  Universitas Sumatera Utara. Hal 1–3.
Voyles, BA. 2002. The Biology of Viruses .
Second Edition. McGraw-Hill Higher Education; New York.