Copyright (c) 2023 Jurnal Ilmiah Manuntung
Sari YW, Susilowati. PENGARUH VARIASI WAKTU PANEN TERHADAP KADAR FLAVONOID TOTAL DAUN KUMIS KUCING (Orthosiphon aristatus (Blume) Miq.). 2023, Vol 9(2): 191-198.
PENGARUH VARIASI WAKTU PANEN TERHADAP KADAR FLAVONOID TOTAL DAUN KUMIS KUCING ( Orthosiphon aristatus
(Blume) Miq.) Submitted : 16 Mei 2023 Edited : 23 Desember 2023
Accepted : 30 Desember 2023
Yulia Widya Sari, Susilowati
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional Jl. Solo-Baki, Kwarasan, Sukoharjo, Jawa Tengah, Indonesia Email : Susilowati@stikesnas.ac.id

## ABSTRAK
Waktu panen berkaitan erat dengan pembentukan kandungan senyawa aktif yang optimal pada bagian tanaman yang dipanen. Perbedaan waktu panen diketahui dapat mempengaruhi kualitas dan kuantitas rendemen yang dihasilkan oleh tanaman obat. Flavonoid diketahui merupakan metabolit aktif dalam kumis kucing yang bertanggung jawab terhadap berbagai aktivitas farmakologinya. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan waktu panen yang terbaik dalam penanganan panen daun kumis kucing agar mendapatkan mutu bahan yang optimal. Tanaman dipanen pada pagi hari (pukul 06.00-07.00 WIB), siang hari (pukul 12.00-13.00 WIB) dan sore hari (pukul 17.00- 18.00 WIB). Daun yang dipetik selanjutnya disortasi, dicuci dan dikeringkan menggunakan oven pengering untuk selanjutnya masing-masing simplisia diekstraksi. Ekstraksi menggunakan teknik maserasi dengan pelarut etanol 96%. Hasil simplisia dan ekstrak yang diperoleh dianalisis terhadap organoleptis,  rendemen,  susut  pengeringan  dan  analisis  senyawa  flavonoid  secara  kualitatif  dan kuantitatif. Identifikasi kualitatif flavonoid menggunakan reagen NaOH encer, Wilstater Cyanidin, dan AlCl 3 , sedangkan pada kuantifikasi kadar flavonoid total diukur menggunakan spektrofotometri UV-Vis yang dihitung sebagai kuersetin ( QE / Quercetin Equivalent ). Variasi waktu panen tidak berpengaruh terhadap organoleptis simplisia dan ekstrak daun kumis kucing yang dihasilkan. Susut pengeringan simplisia yang dihasilkan memenuhi persyaratan dalam Farmakope Herbal Indonesia Edisi II (kurang dari 10% b/b). Rendemen simplisia (23,8% b/b) dan ekstrak (11,3%b/b) tertinggi dihasilkan pada waktu panen siang hari diikuti dengan hasil panen sore hari dan pagi hari. Secara kualitatif tiap ekstrak positif mengandung flavonoid, sedangkan kadar flavonoid totalnya menunjukkan  perbedaan  yang  siginifikan  (sig  0,028).  Flavonoid  total  tertinggi  (4,423 +0,029 mg QE /g ekstrak) dihasilkan dari waktu panen sore hari dan kadar flavonoid terendah (4,331 +0,026 mg QE /g ekstrak) dihasilkan dari panen pagi hari. Hasil penelitian ini dapat digunakan sebagai rujukan menuju optimalisasi kualitas dan kuantitas tanaman obat kumis kucing dengan pemilihan waktu panen tanaman yang terbaik.
Kata kunci : Orthosiphon aristatus, waktu Panen, flavonoid total

## ABSTRACT
Harvest time influences the formation of optimal active compound content in the areal parts in plant. It is known that differences in harvest time can affect the quality and quantity of traditional plant. Flavonoids are known to be active metabolites in Orthosiphon aristatus with a wide range of  bioactivity.  This  research  aims  to  determine  the  best  harvest  time  for  Orthosiphon  aristatus leaves in order to obtain optimal simplicia quality. Plants were harvested in in the morning (06.00- 07.00 WIB), in the afternoon (12.00-13.00 WIB) and in the evening (17.00-18.00 WIB). The picked leaves are then sorted, washed and dried using a drying oven before each simplicia is extracted. Extraction  uses  a  maceration  technique  with  96%  ethanol  solvent.  The  simplicia  and  extracts obtained were analyzed for organoleptic, yield, drying loss and qualitative and quantitative analysis of total flavonoid compounds. Qualitative identification of flavonoids used dilute NaOH, Wilstater Cyanidin, and AlCl 3 reagents, while for quantification total flavonoid levels were measured using UV-Vis spectrophotometry as Quercetin Equivalent. The difference in harvest time did not affect the organoleptic properties of leaves. The drying loss of simplicia meets the requirements in the Indonesian Herbal Pharmacopoeia Edition II (less than 10% w/w). The highest yield of simplicia (23.8% w/w) and extract (11.3% w/w) was produced during the harvest time of 12.00-13.00 WIB, followed by harvesting at 17.00-18.00 and 06.00-07.00 WIB. All extracts contain flavonoids, while the total flavonoid content in each extract showed significant differences. The highest total flavonoid content (4.423+0.029 mgQE/g extract) was related at the harvest time of 17.00-18.00 WIB and the lowest value (4.331+ 0.026 mgQE/g extract) was recorded at the harvest time of 06.00-07.00 WIB. Our findings in Orthosiphon aristatus, may pave the route towards the optimization of quality and quantity by selecting the best harvesting time of the plants.
Keywords : Orthosipon aristatus, harvesting time, total flavonoids
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.9 No.2, Hal. 191-198, 2023

## PENDAHULUAN
Orthosiphon aristatus (Blume) Miq., atau dikenal sebagai “ Java Tea ” adalah tanaman obat yang termasuk dalam family Lamiacea , sebagian besar tumbuh di Asia Tenggara. Tumbuhan ini bisa dikenali dari bunganya yang berwarna putih dan ungu dengan benang sari panjang yang menonjol, mirip kumis kucing yang menjadi ciri khas dari ta naman ini. Oleh sebab itu, tanaman ini juga di kenal sebagai tanaman kumis kucing (1) . Kumis kucing ( Orthosiphon aristatus (Bl) Miq) umumnya digunakan di Asia Tenggara dan Cina untuk pengobatan penyakit ginjal. Selain itu, dari beberapa penelitian telah membuktikan bahwa ekstrak kumis kucing ( Orthosiphon aristatus (Bl)
Miq) menunjukkan aktivitas antioksidan yang kuat. Senyawa yang berfungsi sebagai antioksidan salah satunya adalah flavonoid (2) .
Salah satu faktor yang dapat mempengaruhi kandungan senyawa aktif dalam tanaman obat adalah waktu panen. Waktu panen berkaitan erat dengan pembentukan kandungan senyawa aktif yang optimal pada bagian tanaman yang dipanen. Perbedaan waktu panen yang dilakukan pada pagi, siang atau sore hari akan mempengaruhi kualitas dan kuantitas rendemen yang dihasilkan oleh suatu tanaman. Variasi waktu panen menunjukkan dapat mempengaruhi rendemen dan komposisi minyak atsiri dalam herba Sage ( Salvia  officinalis ) (3) . Panen herba Sage pada pagi hari memberikan perolehan senyawa utama Kamfor yang tertinggi dibandingkan panen siang dan sore hari. Hasil lain menunjukkan waktu panen sore hari merupakan waktu panen terbaik untuk daun sirih merah yang menghasilkan kadar alkaloid (0,98 mg/gram) dan flavonoid total (8,50 mg/gram) tertinggi dibandingkan waktu panen pagi dan siang hari (4) . Selain itu, kadar gula pada jagung biji manis memberikan kadar optimum pada panen sore (14,82%) (5) . Hal ini menunjukkan bahwa setiap tanaman memiliki waktu panen yang paling tepat untuk memberikan kandungan senyawa aktif yang paling optimal. Sejauh ini, belum terdapat penelitian terkait waktu panen terhadap kandungan senyawa bioaktif dalam kumis kucing, sehingga dilakukan penelitian untuk melihat pengaruh dari perbedaan waktu panen daun kumis kucing terhadap mutu simplisia termasuk kadar flavonoid totalnya.

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan Dalam penelitian ini menggunakan alat sebagai berikut neraca analitik ( Ohaus PA214 sensitivitas 0,0001 g), kuvet ( Hellma Analytic type No. 100. 600 QG Light  path  lotum ),
Spektrofotometri UV-Vis ( Shimadzu UV -1280 No.A120654), Water bath dan Alat-alat gelas ( Memmert ).
Dalam penelitian ini bahan yang dipakai yakni daun kumis kucing dari Karanganyar Jawa Tengah, Kuersetin ( Sigma Aldrich ), Aquadest,
AlCl 3 ( Merck ), Kalium Asetat ( Merck ), HCl pekat, NaOH, Serbuk Mg, Etanol 96%.

## Tahapan Penelitian
Penyiapan Simplisia Sampel daun kumis kucing diperoleh dari Karanganyar, Jawa Tengah. Tanaman tersebut  diidentifikasi  dan  determinasi  di  Unit Pelaksana Fungsional (UPF) Hortus Medicus Tawangmangu. Panen dilakukan di (pukul 06.00- 07.00 WIB (pagi hari), pukul 12.00-13.00 WIB (siang hari), serta pukul 17.00- 18.00 WIB (sore hari).
Daun kumis kucing yang diperoleh disortasi basah, lalu cuci menggunakan air yang mengalir kemudian keringkan menggunakan oven dengan suhu 50 ◦ C. Daun yang mengering dihaluskan menggunakan ayakan mesh no. 60.
Uji Organoleptis, Makroskopis dan Susut Pengeringan
Uji organoleptis pada penelitian ini di lakukan dengan cara mengamati warna, bentuk, dan bau dari simplisia daun kumis kucing. Selanjutnya dilakukan uji makroskopis untuk mengetahui ciri-ciri simplisia tersebut kemudian dibandingkan dengan literatur umum. Selain itu, ditetapkan persen susut pengeringan menggunakan Moisture Balance (6) .
Pembuatan Ekstrak Simplisia daun kumis kucing ditimbang 100 gram masing-masing variasi waktu panen dan dimasukkan ke bejana maserator kemudian di tambah etanol 96% (1:7,5). Selanjutnya dilakukan maserasi  selama  3x24  jam  dan  dilakukan pengadukan berulang, kemudian hasil dari maserasi di saring. Sisa hasil maserasi dilarutkan dalam  250  ml  etanol  96%  selama  2x24  jam, saring hasil maserasi, kemudian diuapkan pada rotary evaporator selanjutnya pekatkan dalam waterbath dengan  suhu  50 ℃ sampai diperoleh ekstrak kental (7) .
Analisis Kualitatif Flavonoid (8, 9)
Uji Wilstater Larutan sampel dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan serbuk Mg dan HCl pekat. Dinyatakan postitif apabila larutan berubah menjadi warna merah atau jingga.

## Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan
p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.9 No.2, Hal. 191-198, 2023
Uji Pereaksi NaOH encer
Ambil larutan sampel, selanjutnya ditambahkan  reagen  NaOH  encer.  Dinyatakan positif apabila larutan berubah menjadi warna kuning.
Uji Reagen AlCl 3 Ambil larutan sampel, tambahkan reagen AlCl 3 . Dinyatakan positif apabila larutan berubah menjadi warna kuning.
Analisa Kuantitatif Flavonoid Total Kadar flavonoid total dalam ekstrak daun kumis total ditetapkan menggunakan pengomplek AlCl 3 dan reagen CH 3 COOK (10)
1. Pembuatan kurva a. Baku Induk Kuersetin 1000 ppm Baku kuersetin di timbang sebanyak 10 mg lalu di larutkan dengan etanol 96% pada labu takar 10mL hingga tanda batas (diperoleh larutan induk 1000 ppm). b. Baku kerja kuersetin 100 ppm Pipet sebanyak 1 ml baku induk 1000 ppm, selanjutnya diencerkan hingga 10 mL menggunakan etanol 96% untuk memperoleh konsentrasi 100 ppm. 2.  Pembuatan Seri Konsentrasi Baku Kuresetin Baku induk 100 ppm di pipet 0,4mL, 0,6mL, 0,8mL, 1mL, dan 1,2mL, kemudian dilarutkan hingga 10 mL menggunakan etanol 96% sehingga diperoleh seri konsentrasi 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm, dan 12 ppm. 3.  Penentuan Panjang Gelombang Maksimum 0,5  mL  larutan  baku  kuersetin  10 ppm dimasukkan dalam labu ukur 5 mL dan  di  tambah  1,5  mL  etanol  96%,  0,1
mL AlCl 3 10%, 0,1 mL CH 3 COOK 1M dan 2,8 mL aquadest dan di kocok hingga homogen dan di diamkan selama 30 menit. Pengukuran absorbansi di lakukan pada  panjang  gelombang  250-500  nm. Dari hasil pengukuran diperoleh panjang gelombang maksimum 426nm.
4. Penentuan Operating Time
0,5  mL  larutan  baku  kuersetin  10
ppm, dan di masukkan kedalam labu ukur 5 mL lalu di tambah 1,5 mL etanol 96%, 0,1 mL AlCl 3 10%, 0,1 mL CH 3 COOK
1M dan 2,8 mL aquadest kemudian kocok hingga homogen. Dilakukan pembacaan absorbansi tiap menit pada menit ke 0-40  untuk  mendapatkan Operating time . Absorbansi diukur pada panjang gelombang maksimum yaitu 426 nm. 5. Penentuan Kurva Kalibrasi 0,5mL tiap seri konsentrasi larutan baku ditambahkan 1,5 mL etanol 96%, 0,1
mL AlCl 3 10%, 0,1 mL CH 3 COOK 1M dan 2,8 mL aquadest, kocok sampai semua reagen tercampur homogen. Selanjutnya larutan di inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar dan absorbansi dibaca pada panjang gelombang maksimum 426 nm. 6.  Linieritas Kurva Kalibrasi Seri konsentrasi dan absorbansi larutan baku kuersetin selanjutnya digunakan untuk menetapkan persamaan regresi  linear  dan  koefisien  korelasi (r) dimana seri konsentrasi sebagai x dan absorbansinya sebagai y sehingga diperoleh persamaan 1. y = a + bx …………… (1) 7.  Penetapan Kadar Flavonoid Total Ditimbang 10 mg ekstrak daun kumis kucing, lalu larutkan dalam etanol 96% hingga 10 mL. Ambil 0,5 mL ekstrak daun  kumis  kucing,  tambahkan  1,5  mL etanol 96 %, 0,1 mL AlCl 3 10%, 0,l mL
CH3COOK  1M  dan  2,8  mL  aquadest. Kemudian di diamkan selama 30 menit, perolehan absorbansi yaitu dengan memakai spektrofotometri uv-visibel pada panjang gelombang maksimum 426 nm.

## Analisis Data
1.  Analisis Perhitungan Kadar Flavonoid Persamaan regresi linier yang diperoleh dari baku kuersetin selanjutnya digunakan untuk menghitung kadar flavonoid  dalam  ekstrak.  Absorbansi sampel di masukan sebagai y dan diperoleh kadar  flavonoid  total  sebagai  x  (dalam satuan ppm). Flavonoid total dinyatakan sebagai Quercetine Equivalent (QE ).
Selanjutnya dilakukan konversi satuan ppm ke mg QE / g ekstrak dengan rumus pada persamaan 2.
2.  Analisis Statistik Untuk melihat ada tidaknya signifikansi  perbedaan  kadar  flavonoid total dalam ekstrak daun kumis kucing dari masing-masing waktu panen digunakan uji
One Way Anova . Perolehan kadar flavonoid total sebagai variabel terikat dan perbedaan waktu panen sebagai variabel faktor. Pengujian diawali dengan uji Normality test dan Homogeneity  test  of  Variances untuk memastikan bahwa normalitas dan
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.9 No.2, Hal. 191-198, 2023
homogenitas dari data yang akan di uji. Setelah data menunjukkan normal dan homogen, dilanjutkan dengan analisis post hoc dimana apabila diperoleh nilai sig. <
0,05 artinya terdapat perbedaan signifikan, dan apabila nilai sig. > 0,05 menunjukkan tidak terdapat perbedaan signifikan antara kadar flavonoid total di ekstrak daun kumis kucing dari waktu panen yang berbeda.
HASIL DAN PEMBAHASAN Teknik pasca panen yang dilakukan terhadap daun kumis kucing dengan variasi waktu panen menjadi variabel terkontrol agar tidak mempengaruhi analisa hasil yang diperoleh. Sortasi basah dan pencucian yang dilakukan untuk membersihkan bahan dari kotoran atau bahan asing yang tidak diinginkan. Selanjutnya pengeringan  bahan  pada  suhu  50°C  ditujukan untuk mengurangi kadar air pada daun kumis kucing agar menghentikan adanya reaksi enzimatik yang mengakibatkan pembusukan.
Simplisia hasil pengeringan diserbuk dan diayak dengan tujuan untuk meningkatkan kontak luas permukaan bahan dengan pelarut saat ekstraksi sehingga proses penarikan senyawa berlangsung dengan optimal (11) . Penelitian ini menggunakan teknik ekstraksi maserasi atau dikenal dengan ekstraksi perendaman dimana merupakan metode ekstraksi yang tidak menggunakan pemanasan. Metode ini dipilih dengan tujuan untuk mencegah kerusakan
senyawa kimia yang tidak tahan terhadap pemanasan  seperti  flavonoid.  Temperatur berpengaruh  terhadap  stabilitas  flavonoid  dan bioaktivitasnya terutama sebagai antioksidan. Struktur  flavonoid  seperti  rutin,  kuersetin  dan luteolin bersifat sensitif terhadap suhu dan lama pemanasan, dimana strukturnya dapat terdegradasi serta kadarnya menurun pada suhu di atas 70 o C (12) . Pada penelitian ini menggunakan pelarut etanol 96% karena merupakan salah satu pelarut yang mampu melarutkan flavonoid karena kesesuaian polaritas yang dimiliki (13) .
Selain itu, air dan etanol merupakan pelarut ekstraksi  yang  direkomendasikan  oleh  BPOM dalam memproduksi ekstrak dikarenakan pelarut yang aman untuk lingkungan. Simplisia dan hasil ekstraksi dari ketiga variasi waktu panen selanjutnya dianalisis dan dievaluasi. Uji pendahuluan merupakan tahap awal yang digunakan untuk mengetahui organoleptis, makroskopi, susut pengeringan dan rendemen yang diperoleh. Hasil uji pendahuluan simplisia dan ekstrak dari ketiga variasi waktu panen daun kumis kucing disajikan dalam tabel 1. Pengamatan organoleptis dan makroskopis bertujuan sebagai uji dilakukan melalui panca indra dengan mengamati bentuk, warna, bau maupun rasa pada sampel.  Parameter  non  spesifik  yang  dipakai pada penelitian ini yaitu uji susut, pengujian susut pengeringan dilakukan untuk memberikan batas maksimum (rentang) jumlah zat yang hilang saat dilakukan proses pengeringan (6).
Tabel 1 .  Hasil  Pengamatan  Organoleptis,  Makroskopis  dan  Susut  Pengeringan  Daun  Kumis Kucing
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.9 No.2, Hal. 191-198, 2023
Hasil susut pengeringan pada seluruh simplisia daun kumis kucing memenuhi parameter nilai susut pengeringan simplisia daun kumis kucing (14) . Nilai susut pengeringan paling besar dihasilkan pada panen sore hari diikuti dengan hasil panen pagi hari dan susut pengeringan terendah pada hasil panen siang hari. Hal tersebut terjadi karena waktu panen mempengaruhi intensitas cahaya matahari yang diterima tanaman terutama bagian daun selama proses fotosintesis berlangsung. Intensitas cahaya matahari saat pagi hari masih rendah, kelembaban udara tinggi, suhu lingkungan rendah, transpirasi tanaman rendah, laju evaporasi rendah,
sehingga tekanan turgor tanaman menjadi tinggi. Hal ini dapat dilihat dari kondisi fisik  daun  segar  dan  hijau,  sedangkan  saat siang hari laju evapotranspirasi tinggi, hal ini dikarenakan intensitas intensitas cahaya matahari yang diterima tanaman tinggi sehingga menyebabkan peningkatan suhu di lingkungan. Hal ini dapat dilihat dari kondisi fisik tanaman yang cepat layu setelah dipetik. Sementara itu, kondisi lingkungan mulai membaik saat sore hari, dimana intensitas cahaya matahari yang diterima tanaman mulai berkurang, Kelembaban udara mulai meningkat, suhu lingkungan mulai menurun, dan laju evapotranspirasi mulai berkurang, dan tekanan turgor tanaman mulai meningkat sehingga mengakibatkan kondisi  fisik  dari  tanaman  mulai  tampak segar dan hijau kembali. Evapotranspirasi merupakan proses hilangnya air dalam tanah tempat tanaman tumbuh. Evapotranspirasi terjadi sebab di pengaruhi oleh beberapa faktor seperti kondisi lahan, jenis tanaman, cuaca, dan letak geografis (15) .
Rendemen diperoleh dari perbandingan antara berat kering produk dengan berat bahan baku (11) . Perhitungan rendemen sangat penting karena menunjukkan jumlah ekstrak yang diperoleh selama proses ekstraksi. Hasil rendemen simplisia dan ekstrak daun kumis kucing tertinggi diperoleh dari hasil panen siang hari diikuti dengan hasil panen di pagi hari terendah pada panen pagi hari. Rendemen ekstrak daun kumis kucing yang dihasilkan menggambarkan besarnya senyawa yang tersari dalam pelarut etanol 96% dalam proses ekstraksi.
Keberadaan  senyawa  flavonoid  pada masing-masing ekstrak daun kumis kucing dilakukan dengan berbagai pengujian meliputi uji dengan NaOH encer, Wilstater Cyanidin , dan AlCl 3 . Hasil uji kualitatif flavonoid  bisa  di  lihat  dalam  Tabel  2 . Perubahan warna yang terbentuk dari tiap pengujian, diakibatkan adanya reaksi yang terbentuk  antara  flavonoid  dan  masing- masing reagen uji. NaOH merupakan alkali yang dapat menguraikan senyawa golongan flavonoid menjadi molekul asetafenon akibat pemutusan ikatan pada gugus isoprennya. Hal ini ditandai dengan pembentukan warna kuning yang lebih intens. Sedangkan untuk pengujian Wilstater Cyanidin penambahan HCl berperan dalam menghidrolisis flavonoid  menjadi  aglikon  flavonoid  yang tidak terikat gula yang selanjutnya akan membentuk komplek warna dengan Mg. Adapun komplek warna yang terbentuk akibat  reduksi  flavonoid  tersebut  akan memberikan warna merah, kuning atau jingga (16) .
Tabel 2 . Hasil Uji Kualitatif Flavonoid Waktu Panen Pereaksi Warna Keterangan Pagi NaOH encer Mg + HCl pekat AlCl 3 Kuning Orange kemerahan Kuning + + + Siang NaOH encer Mg + HCl pekat AlCl 3 Kuning Orange kemerahan Kuning + + + Sore NaOH encer Mg + HCl pekat AlCl 3 Kuning Merah Kuning + + +
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.9 No.2, Hal. 191-198, 2023
Pengukuran  kandungan  flavonoid  total dalam ekstrak daun kumis kucing dengan variasi waktu panen dilakukan dengan metode Alumunium klorida menggunakan spektrofotometri UV-visibel. Flavonoid total dinyatakan ekivalen terhadap kuersetin dikarenakan kuersetin adalah senyawa golongan flavonol  dimana  pada  Cincin  C  memiliki gugus keto di atom C-4 dan hidroksil di atom C-3. Selain itu, memiliki gugus hidroksil pada C-5  dan  C-7  di  cincin A  serta  serta  memiliki gugus orto hidroksi pada cincin B. Keberadaan gugus tersebut dapat mengakibatkan adanya pembentukan kompleks stabil antara AlCl 3 dengan  gugus  keto  pada  C-4  dan  hidroksi  di C-5 serta membentuk kompleks labil pada orto hidroksi di cincin B. Pembentukan kompleks warna tersebut mengakibatkan terbentuknya warna kuning intens dalam larutan. Penambahan larutan kalium asetat dalam larutan berfungsi untuk menstabilkan reaksi kompleks yang terjadi (10) . Analisis kuantitatif dilakukan pada panjang gelombang maksimum yang menunjukkan absorbansi maksimal dari scaning panjang  panjang  gelombang  250  nm  sd.  500 nm. Hasil penelitian menunjukkan komplek kuersetin-AlCl 3 memiliki panjang gelombang maksimum 426 nm dengan absorbansi 0,6431. Selanjutnya diperoleh operating time (OT) pada menit ke-30 yang menunjukkan absorbansi paling stabil. OT tersebut menunjukkan waktu yang dibutuhkan agar pembentukan komplek kuersetin-AlCl 3 dapat bereaksi optimal. Pembuatan seri konsentrasi larutan baku kuersetin digunakan untuk membuat kurva
baku yang mengikuti hukum Lambert-Beer dimana seri konsentrasi akan berbanding lurus dengan absorbansi yang dihasilkan sehingga menghasilkan hubungan linier. Linieritas ini ditunjukkan pada kurva baku yang berbentuk garis lurus dengan hasil nilai koefisien korelasi (r) mendekati 1. Hasil kurva regresi linier baku kuersetin dapat dilihat pada gambar 1.

## Gambar 1. Kurva Regresi Linier Kuersetin Pada Panjang Gelombang 426 nm
Linieritas kurva baku yang dihasilkan antara seri konsentrasi kuersetin dan absorbansinya ditunjukkan dengan nilai r sebesar 0,9944. Berdasarkan gambar 1 diperoleh persamaan  regresi  linear  y  =  0.0327x+0,2573 yang selanjutnya digunakan untuk mengukur kadar  flavonoid  total  pada  masing-masing ekstrak daun kumis kucing (10) . Berdasarkan persamaan regresi tersebut diperoleh kadar flavonoid total dalam ekstrak daun kumis kucing untuk masing-masing variasi waktu panen yang ditunjukkan pada tabel 3. Tabel 3. Kadar Flavonoid Total Ekstrak Daun Kumis Kucing pada variasi waktu panen Waktu panen Absorbansi Kadar (mg QE/g) Rata-rata (mg QE/g) ± SD Pagi 0.3981 4.306 4.331 * 0.026 0.4001 4.367 0.3986 4.321 Siang 0.3986 4.321 4.348 * 0.024 0.3993 4.343 0.4005 4.379 Sore 0.4008 4.388 4.423 * 0.029 0.4019 4.422 0.4031 4.459 Keterangan. * : menunjukkan perbedaan signifikan
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.9 No.2, Hal. 191-198, 2023
Kadar  flavonoid  total  ekstrak  daun kumis kucing yang dipanen pada sore hari menunjukkan kadar tertinggi, diikuti dengan panen siang hari dan kadar terendah diperoleh pada panen pagi hari. Berdasarkan analisis statistik didapatkan nilai signifikan 0,028 (<0,05) yang menunjukkan adanya perbedaan signifikan antara kadar flavonoid total daun kumis kucing pada variasi waktu panen. Hasil penelitian ini sejalan dengan pengaruh waktu panen terhadap kadar flavonoid total dalam tanaman dari famili Asclepiadaceae. Kadar Flavonoid total tertinggi dalam famili tersebut dihasilkan dari waktu panen sore hari dibandingkan panen pada siang dan pagi hari (17) . Perbedaan kandungan senyawa metabolit sekunder dalam tanaman dipengaruhi oleh intensitas cahaya matahari pada masing-masing waktu panen. Intensitas Cahaya matahari akan berpengaruh pada proses fotosintesis karena intensitas Cahaya tersebut menyediakan energi yang dibutuhkan dalam pembentukan metabolit dalam tanaman terutama metabolit primer glukosa. Glukosa adalah metabolit primer yang selanjutnya digunakan untuk biosintesis metabolit sekunder seperti fenolik, flavonoid, dan lainnya. Senyawa  flavonoid  dalam  tanaman  dibentuk melalui jalur biosintesis asam asetat-shikimat oleh prekursor fenilalanin (18,19) . Flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder dalam tanaman yang berperan dalam pertahanan terhadap stress biotik ataupun abiotik. Sinensetin merupakan  senyawa  flavonoid  dalam  daun kumis kucing yang bertanggung jawab terhadap aktivitas farmakologinya. Beberapa aktivitas yang telah dibuktikan meliputi antikanker, antioksidan, antimikroba, antiobesitas dan vasodilatasi pembuluh darah serta efek diuretik sehingga dapat menurunkan tekanan darah pada penderita hipertensi. Selain itu, flavonoid tersebut menunjukkan selektivitas yang tinggi terhadap sel normal sehingga aman ketika digunakan (20) . Hal ini mendasari pemanfaatan daun kumis kucing sangat potensial untuk terus dikembangkan sebagai obat tradisional ataupun kandidat sumber senyawa obat dari alam. Dalam penanganan panen tanaman obat, bukan hanya berorientasi terhadap biomasa/ rendemen simplisia dan ekstrak tanaman namun juga mempertimbangkan kandungan senyawa bioaktif yang optimal. Hasil penelitian ini dapat digunakan sebagai rujukan dalam penyediaan bahan baku sebagai obat tradisional guna mendukung dalam praktik penanganan panen yang baik ( good harvest handling practice ) untuk daun kumis kucing. Waktu panen sore
hari menunjukkan waktu yang paling sesuai dalam pengambilan daun kumis kucing dengan kandungan  flavonoid  tertinggi.  Penelitian  ini membutuhkan penelitian lebih lanjut mengenai komposisi kimia dari variasi waktu panen yang dilakukan.

## SIMPULAN
Waktu panen berpengaruh terhadap susut pengeringan, rendemen dan kadar flavonoid  total  dalam  ekstrak  daun  kumis kucing ( Orthosiphon aristatus (Blume) Miq.) namun tidak mempengaruhi organoleptis dan makroskopi simplisia yang dihasilkan. Waktu panen pada pukul 17.00- 18.00 WIB (Sore hari) merupakan waktu panen terbaik untuk mendapatkan ekstrak etanol daun kumis kucing dengan kadar flavonoid total paling tinggi.
UCAPAN TERIMAKASIH Ucapan terimakasih diberikan kepada Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional dalam memfasilitasi pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Kamalesh S, Suresh J, Pugalendhi L, Sujatha KB, Rajamani K. Standardization of Type of Cuttings and Concentration of Growth Regulators for Rooting of Cuttings in Java Tea ( Orthosiphon stamineus Benth
.), 2021, 10(1):1842–6.
2. Ameer  OZ,  Salman  IM,  Ibraheem  ZO. Orthosiphon  stamineus:  Traditional  Uses, Phytochemistry, Pharmacology, and Toxicology, 2012. 3. Hazrati,  et  al.  Effect  of  Harvesting  Time Variations  on  Essential  Oil  Yield  and Composition  of  Sage  (Salvia  officinalis)., Horticulturae, 2022, 8:2
4. Hamsa A, Aulawi T, Solfan B, Husbandry AH. Jurnal Pertanian Tropik Jurnal
Pertanian Tropik, 2020, 7(3):317–25.
5. Surtinah, Lidar S. Pertumbuhan Vegetatif dan  Kadar  Gula  Biji  Jagung  Manis  (Zea mays saccharata, Sturt) di Pekanbaru, 2017,
(2):73–8.
6.  Komala, Meyndra A, Haryoto. Test of Ash Content, Moisture Content and Dry Shrinkage of Ethanol Extracts of Capidada Leaves (Sonneratia alba) and Ketapang (Terminilia cattapa), Journal of Nutraceuticals and Herbal Medicine 2020, (3): 10-14
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.9 No.2, Hal. 191-198, 2023
7.  Salasa, Monica A, Tajuddin A. Kandungan Total Flavonoid dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Kumis Kucing ()rthosiphon stamineus B.)., Media Farmasi 2021, (17): 162-167 8.  Yuda IKA, Anthara MS, Dharmayudha AAGO.  Identifikasi  Golongan  Senyawa Kimia Estrak Etanol Buah Pare ( Momordica charantia ) dan Pengaruhnya Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah
Tikus Putih Jantan ( Rattus novergicus ) yang Diinduksi Aloksan, 2013, 5(2):87–95. 9. Marpaung MP, Wayuni RC. Identifikasi Dan Penetapan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Akar Kuning ( Fibraurea chloroleuca Miers
), 2018, 1(3):3–7.
10.  Shraim AM, Ahmed TA, Rahman MM, Hijji YM. Determination Of Total Flavonoid Content By Aluminum Chloride Assay: A Critical  Evaluation.  Lwt.  2021;150(5):11– 32. 11.  Manoi F. (2018). Pengaruh Kehalusan Bahan Dan Lama Ekstraksi Terhadap Mutu Ekstrak Tempuung (Sonchus arvenis L.). J
Penelit Pertan Terap. 15(2):156-161.
12.  Chaaban H, Ioannou I, Chebil L, Slimane
M,  Gérardin  C,  Paris  C,  et  al.  Effect  of heat processing on thermal stability and antioxidant  activity  of  six  flavonoids.  J Food Process Preserv. 2017;41(5):e13203.
13. De  Luna  Sara  Luisa  Rodrı´guez  ,  Ram´ ırez-Garza  R.E.,  and  Saldı´var,  Sergio  O.
Serna. 2020. Environmentally Friendly
Methods for Flavonoid Extraction from
PlantMaterial:  Impact  of  Their  Operating Conditions on Yield and Antioxidant Properties.  The  Scientific  World  Journal; 1-37 https://doi.org/10.1155/2020/6792069 14. Depkes, RI, 2017, Farmakope Herbal Indonesia Edisi II, Depkes RI, Jakarta. 15. Alldera BG, Yustiana F. Tinjauan Evapotranspirasi Acuan Musim Kemarau Di Kota Bandung, 2022, 54–67.
16.  Hanani, Endang. Analisis Fitokimia. EGC :
Jakarta, 2015.
17.  Najar AA, Khare S, Jain K. Temporal Variation in the Quantitative Estimation of Total Phenolic and Flavonoid Contents of Two Species of Calotropis. Biosc.Biotech. Res.Comm. 2016 ;9(1). 18.  Lallo S, Lewerissa AC, Raf’i, Usmar, Ismail dan Tayyeb R. Pengaruh Ketinggian Tempat Tumbuh terhadap Aktivitas Antioksidan dan Sitotoksik Ekstrak Rimpang Lengukas (Alpina galanga L.). Jurnal Farmasi dan Farmakologi. (2019). 23(3): 118-123. 19.  Martono B, Falah S, Nurlaela E. Aktivitas Antioksidan teh Varietas GMB 7 pada Beberapa Ketinggian Tempat. Jurnal Tanaman Industri dan Penyegar (J. TIDP),
(2016). 3 (1): 56-60. 20. Jie  L  H,  Jantan  I, Yusoff  SD,  Jalil  J,  and Husain K. Sinensetin : An Insight on Its Pharmacological Activities, Mechanisms of Action and Toxicity., Front Pharmacol, 2021, 11: 553404.