## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN UJI TOKSISITAS FRAKSI NON POLAR GAL MANJAKANI (Quercus infectoria)
Antibacterial and Toxicity Activity from Non Polar Fraction of Gal Manjakani (Quercus infectoria)
Iin Asparinda, Tita Juwitaningsih *
Laboratorium Kimia, Jurusan Kimia, Fakultas Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Medan, Jl. Willem Iskandar Psr V, Medan Estate 1589, Indonesia.
*E-mail: juwitaningsih@gmail.com 2018

## Abstrak
Gal  manjakani  (Quercus  infectoria)  merupakan  salah  satu  tanaman  obat yang paling populer di Asia. Tumbuhan ini banyak ditemukan di Turki, Syiria, Persia,  Siprus,  dan  Yunani.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui senyawa-senyawa  yang  terkandung  dalam  fraksi  non  polar    dan menentukan  aktivitas  antibakteri  serta  toksistas  dari  fraksi  tersebut.  Gal manjakani  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  dengan  aseton  lalu difraksinasi  dengan  n-Heksan,  etil  asetat  dan  metanol.  Fraksi  non  polar dianalisis dengan menggunakan Gas Chromatography- Mass Spectroscopy (GCMS).  Uji  aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode  difusi  cakram  dan mikrodilusi berdasarkan metode standar CLSI terhadap bakteri Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia  coli.  Uji  toksistas  yang  dilakukan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Hasil identifikasi GC-MS  menunjukkan  bahwa  fraksi  non  polar  gal  manjakani  mengandung 27 senyawa, dengan senyawa utamanya yaitu asam cis-vaccenic = 35,19%, asam n-heksadekanoat = 16,66%, asam 1-heptadekanakarboksilat = 5,03%, asam  dodekanoat  =  4,73%,  bis  (2-etilheksil)  ftalat  =  4,35%,  asam heksadekanoat, metil ester = 2,14% dan asam tetradekanoat = 1,31%. Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan aktivitas  dengan  zona hambat  6,26  ± 0,6  mm  terhadap  bakteri  S.aureus  dan  8,23  ±  0,21  mm  terhadap  bakteri E.coli,  dengan  persentase  efektivitas  terhadap  bakteri  S.aureus  sebesar 15,34 % dan terhadap E. coli sebesar 44,24 %. Nilai KHM dan KBM bakteri S.aureus adalah >5000 (µg/mL) dan >5000 (µg/mL) dan E.coli adalah 312,5 (µg/mL)  dan  >5000  (µg/mL).  Hasil  uji  toksisitas  menunjukkan  bahwa  fraksi non  polar  gal  manjakani  bersifat  toksik  dengan  nilai  LC 50 sebesar  2,1527 ppm.
Kata kunci: Antibakteri, Gal manjakani, Quercus infectori, Toksisitas

## Artikel Penelitian

## Abstract
Gal  manjakani  (Quercus  infectoria)  is  one  of  the  most  popular  medicinal plants  in  Asia.  This  plant  is  found  in  Turkey,  Syria,  Persia,  Cyprus,  and Greece. This study aims to determine the compounds contained in the non- polar  fraction  and  to  determine  the  antibacterial  activity  and  toxicity  of  the fraction. Gal  Manjakani was  extracted  by  maceration  method with  acetone then  fractionated  with  n-hexane,  ethyl  acetate  and  methanol.  Non-polar fractions  were  analyzed  using  Gas  Chromatography-Mass  Spectroscopy (GCMS). The antibacterial activity test used disc diffusion and microdilution methods  based  on  the  CLSI  standard  method  against  Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria. Toxicity test was conducted using the Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT)  method.  The  GC-MS  identification results  showed  that  the  non-polar  fraction  of  gal  manjakani  contained  27 compounds, with the main compounds being cis-vaccenic acid = 35,19%, n- hexadecanoic  acid  =  16,66%,  1-heptadecanecarboxylic  acid  =  5,03%, dodecanoic  acid  =  4.73%,  bis  (2-ethylhexyl)  phthalate  =  4,35%, hexadecanoic acid, methyl ester = 2,14% and tetradecanoic acid = 1,31%. The results of the antibacterial activity test showed activity with an inhibition zone  of  6.26  ±  0.6  mm  against  S.aureus  bacteria  and  8.23  ±  0.21  mm against E.coli bacteria, with a percentage of effectiveness against S.aureus bacteria  of  15.34%  and  for  E.  coli  44.24%.  The  MIC  and  MBC  values  of S.aureus  bacteria  were>  5000  (µg  /  mL)  and>  5000  (µg  /  mL)  and  E.  coli was  312.5  (µg  /  mL)  and>  5000  (µg  /  mL).  The  results  of  the  toxicity  test showed that the non-polar fraction of gal Manjakani was toxic with an LC50 value of 2.1527 ppm.
Keyword: Antibacterial, Gal manjakani, Quercus infectori, Toxicity

## PENDAHULUAN
Manjakani  (Quercus  infectoria)  termasuk  salah  satu  tanaman  dalam  famili Fagaceae  yang  banyak  tumbuh  di  Indonesia.  Orang  Arab,  Persia,  India, Malaysia  serta  Cina  telah  menggunakannya  secara  tradisional  untuk pengobatan  pasca  persalinan  dan  keputihan  (Lim,  2012).  Selain  itu  dapat pula digunakan untuk mengembalikan elastisitas uterus dan mengencangkan otot  vagina  (Basri,  2012).  Di  negara-negara  Asia,  manjakani  telah digunakan  selama  berabad-abad  sebagai  obat  tradisional  untuk  mengobati penyakit  radang  (Kaur,  et  al.,  2004).  Penggunaan  ekstrak  air  panas manjakani sebagai antiseptik mulut dapat mengontrol peradangan amandel, sedangkan  aplikasi  langsung  ke  kulit  yang  mengalami  pembengkakan  atau peradangan (Chopra, et al., 1956). Selain itu, gal manjakani juga digunakan untuk mengobati diare (Khare dalam Basri,  2012) dan proses penyembuhan luka (Himalaya, 2017).
Gal manjakani dilaporkan menunjukkan efek anti-inflamasi, antibakteri, dan antijamur (Rina, 2011). Hasil kajian fitokimia ekstrak etanol gal manjakani yang  berasal  dari  Malaysia  mengandung  tanin  (50-70%),  asam  galat  dan asam  elagat  (Rina,  2011).  Sedangkan  ekstrak  etanol  gal  manjakani  yang berasal dari Aceh mengandung alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, polifenol dan  triterpenoid  (Yanti,  et  al.,  2016).  Belum  ada  publikasi  yang berhubungan dengan fraksi non polar dari gal manjakani sehingga artikel ini
akan  mengkaji  fraksi  non  polar  gal  manjakani  dan  menguji  aktivitas antibakteri serta uji toksistas.

## BAHAN DAN METODE
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Gal  Manjakani  yang diperoleh  dari Toko Obat Herbal Sempurna Sambu,  Medan. Bahan-bahan kimia  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Aseton  (Teknis),  n- Heksan (Teknis), mueller hinton agar (Oxoid, United Kingdom), aquadest steril  (Generik,  Indonesia),  dimetil  sulfoksida  (Sigma-Aldrich,  Amerika Serikat),  blank  discs  (Oxoid,  United  Kingdom),  chloramphenicol  disc (Oxoid,  United  Kingdom),  muller  –  hinton  broth  (Himedia,  India),  kertas cakram  (Oxoid,  United  Kingdom),  bakteri  Escherichia  coli  ATTC  25922 dan Staphylococcus aureus ATTC 25923 dari Laboratorium Mikrobiologi Universitas  Sumatera  Utara  (USU)  dan  Larva  Artemia  salina  Leach (Golden West Artemia, Indonesia).
Ekstraksi dan identifikasi metabolit sekunder
Serbuk gal manjakani sebanyak 1 kg dimaserasi dengan aseton 8 L selama 2x24 jam. Kemudian disaring dengan Corong Buchner (Monotaro) lalu di pekatkan  dengan  rotary  evaporator  (Heidolph)  dan  diperoleh  ekstrak aseton  gal  manjakani  sebanyak  581  gram.    333,4  gram  ekstrak  aseton  gal manjakani  difraksinasi  dengan  pelarut  n-heksan  sebanyak  700  mL  dan dimaserasi  selama  2x24  jam.  Fraksi  yang  diperoleh  dipekatkan  dengan rotary  evaporator  hingga  diperoleh  fraksi  non  polar  gal  manjakani sebanyak  0,8  gram.  Identifikasi  fraksi  non  polar  gal  manjakani menggunakan Gas Chromatography- Mass Spectroscopy (GCMS) 7890B.
Uji aktivitas antibakteri
a. Pembuatan Media dan Sterilisasi
Media  pertumbuhan  bakteri  dibuat  menggunakan  media  MHA  yang ditimbang  sebanyak  38  g  dan  dicampur  dalam  1  L  aquades,  sedangkan untuk  MHB  dilarutkan  sebanyak  21  g  dalam  1  L  aquades  dan  semua peralatan yang digunakan untuk uji antibakteri distrerilisasi dalam autoklaf (Tomy ES-315) 121°C selama 15 menit (Pelczar dalam Kamila, 2019).
b. Penyiapan Sampel
Larutan uji (sampel) ditimbang 100 mg dan dilarutkan dalam 1000  g/mL DMSO  100%  dan  diambil  100  g/mL  diencerkan  dalam  900 g/mL aquabidest  sehingga  diperoleh  larutan  1%    dalam  10%  DMSO (Juwitangingsih, et al., 2020).
c. Pembuatan Suspensi Inkulum
Inokulum  yang  disiapkan  berdasarkan  metode  pertumbuhan  dimana  3-5 koloni  bakteri  yang  terisolasi  dengan  jenis  morfologi  yang  sama  dari lempeng  kultur  agar  menggunakan  cotton  bud,  kemudian  ditransfer  ke dalam  tabung  yang  mengandung  4-5  mL  NaCl  0.9  %.  Selanjutnya kekeruhan  disesuaikan  dengan  kekeruhan  Standar  0,5  Mc.Farland (Juwitangingsih, et al., 2020).
d. Uji Metode Difusi Cakram Kertas
Uji  difusi  cakram  kertas  diawali  dengan  memasukkan  100  µL  inokulum keatas  media  agar,  kemudian  diratakan  menggunakan  spreader  dan
diletakkan cakram kertas dengan jarak 24 mm. Cakram kertas ditekan kuat pada  permukaan  agar  sehingga  dapat  dipastikan  cakram  kontak  langsung dengan  inokulum  plat  agar.  Selanjutnya  diatas  setiap  cakram  kertas diteteskan 20µL larutan uji. Setelah 18 jam inkubasi, setiap plat diperiksa. Munculnya zona hambat pertumbuhan bakteri diukur menggunakan jangka sorong  (Sigmat,  Skemat  150  mm),  sehingga  diperoleh  diameter  zona hambat  pertumbuhan  bakteri.  Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah cakram  antibiotik  kloramfenikol  30µg  sedangkan  DMSO  sebagai  pelarut (Natheer, et al., 2012).
e. Penentuan KHM dan KBM
Penentuan  KHM  dilakukan  dengan  cara  memasukkan  media  cair  MHB yang sudah disuspensi dengan bakteri dimasukkan ke dalam setiap lubang Microplate  sebanyak  100µL.  Kolom  pertama  dan  kedua  dari  Microplate masing-masing  diisi  dengan  100  µL  media  cair  (Kontrol  negatif), sedangkan  untuk  kolom  kedua  diisi  dengan  100  µL  media  cair  yang tersuspensi bakteri (Kontrol positif). Larutan uji 1000 µg/mL dimulai dari kolom  dua  belas  dengan  memindahkan  100  µL  larutan  dari  lubang  dua belas ke lubang sebelas, dari lubang sebelas diambil lagi sebanyak 100 µL dan  dimasukkan  ke  lubang  sepuluh,  hal  yang  sama  dilakukan  sampai kelubang tiga. Jumlah larutan dalam masing-masing lubang adalah 100 µL. Microplate  selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam  (CLSI, 2012).  Penentuan  KBM  dilakukan  dengan  inokulasi  semua  larutan  uji, dengan  cara  mengambil  sebanyak  10  µL  dari  setiap  lubang  dari  plat microplate,  kemudian  ditumbuhkan  diatas  media  agar  MHA  pada  suhu 37 o C selama 24 jam (CLSI, 2012).

## Uji Toksisitas
Larutan uji dengan konsentrasi 1000, 500, 100 dan 10 ppm dimasukkan 10 ekor  larva  udang  yang  telah  berumur  24  jam  yang  sudah  bersisi  air  laut. Setiap konsentrasi dilakukan 3 kali pengulangan dan dibandingkan dengan kontrol.  Jumlah  larva  yang  mati  dihitung  setelah  24  jam  (Sangi,  et  al., 2012)  sehingga  diperoleh  nilai  LC 50 menggunakan  analisis  probit  dari persamaan regresi linear y=a+bx.

## HASIL
Analisis Gas Chromatography- Mass Spectroscopy
Hasil  kromatogram  GCMS  diperoleh  27  senyawa  yang  teridentifikasi seperti yang ditunjukkan pada kromatogram Gambar 1.
Gambar 1. Kromatogram Fraksi Non Polar Gal Manjakani Hasil GCMS
Senyawa utama gal manjakani adalah asam cis-vaccenic (35.19%), asam n- heksadekanoat  (16.66%),  asam  karboksilat  1-heptadekan  (5.03%),  asam dodekanoat (4.73%), bis (2-etilheksil) ftalat (4.35%), asam heksadekanoat, metil  ester  (2.14%)  dan  asam  tetradecanoic  (1.31%)  dengan  struktur sebagai berikut:
O OH O OH Asam cis-vaccenic Asam n-heksadekanoat O OH O OH Asam 1-heptadekanakarboksilat Asam dodekanoat O O O O O O Bis (2-etilheksil) ftalat Asam heksadekanoat, metil ester O OH

## Asam tetradekanoat
Gambar 2. Struktur Metabolit Sekunder Fraksi Nonpolar
Asam cis-Vaccenic disebut juga asam lemak trans. Kandungan  Asam cis- Vaccenic  pada Quercus  leucotrichophora  yang  satu  genus  dengan Q.infectoria  berasal  dari  daerah  Himalaya mengandung  =  13,10%  pada ekstrak  kulit dan = 0,50% pada ekstrak daun (Semwal , et  al., 2018). Dari data  tersebut  kandungan  asam  cis-Vaccenic  gal  manjakani  dari  Sumatera Utara menunjukkan hasil yang lebih besar.
Asam n-heksadekanoat disebut juga sebagai asam palmitat. Asam palmitat termasuk  asam  lemak  jenuh  yang  memiliki  aktivitas  sebagai  antimikroba, antivirus,  antiprotozoa,  antifungal  dan  antibakteri  (Rahmaningsih  dan Andriani, 2017).  Berdasarkan  hasil  penelitian El-Agbar,  et  al.,  (2018) gal manjakani  yang  berasal  dari  daerah  Jordan  mengandung  asam  palmitat = 15,99%.  Sementara  itu,  gal  manjakani  yang  berasal  dari  daerah  Turki mengandung  asam  palmitat  =  18,29%  ( Kaplan,  et  al.,  2019 ) .  Bila dibandingkan  dengan kedua daerah tersebut kandungan asam palmitat gal manjakani  yang  tumbuh  didaerah  Sumatera  Utara  lebih  besar  dari  daerah Jordan dan lebih kecil dari daerah Turki.
Asam  1-heptadekanakarboksilat  merupakan  sinonim  dari  asam  stearat termasuk  asam  lemak  jenuh  yang  memiliki  aktivitas  sebagai  antimikroba (Abubakar  dan  Majinda,  2016).  Berdasarkan  penelitian El-Agbar,  et  al., (2018)  gal  manjakani  yang  berasal  dari  daerah  Jordan  mengandung  asam stearate = 2,27%.  Sementara  itu,  gal  manjakani  yang  berasal  dari  daerah India  mengandung  asam  stearate  =  26,52%  (Nair,  et  al.,  2020).  Hasil penelitian Kaplan, et al., (2019 ) d engan menggunakan gal manjakani yang berasal  dari  Turki mengandung  asam  stearat  =  3,08%.  Dari  data  tersebut kadungan asam  stearat  gal  manjakani  yang  berasal  dari  daerah  Sumatera Utara lebih besar dari daerah Jordan dan Turki. Sementara itu daerah India lebih besar kandungannya.
Asam  dodekanoat  disebut  juga  sebagai  asam  laurat.  Asam  Laurat merupakan  asam  lemak  jenuh  berantai  sedang  yang  memiliki  aktivitas sebagai  antivirus,  antiprotozoa  dan  antibakteri  (Su’i,  et  al.,  2015). Berdasarkan penelitian Semwal, et al., (2018) gal manjakani yang berasal dari daerah Himalaya, India mengandung asam laurat = 0,07%. Kandungan asam laurat yang berasal dari Sumatera Utara lebih besar dari pada daerah Himalaya, India.
Asam heksadekanoat, metil ester disebut juga sebagai metil palmitat. Metil palmitat termasuk metil ester asam lemak yang memiliki aktivitas sebagai antifungal  dan  antibakteri  (Chandrasekaran,  et  al.,  2011).  Berdasarkan penelitian Semwal,  et  al.,  (2018)  gal  manjakani  yang  berasal  dari  daerah Himalaya,  India  mengandung  metil  palmitat  =  0,2%.  Dari  data  terlihat kandungan  metil  palmitat  yang  berasal  dari  Sumatera  Utara  lebih  besar dari pada daerah Himalaya, India.
Asam  tetradekanoat  disebut  juga  sebagai  asam  miristat  termasuk  asam lemak  jenuh  yang  memiliki  aktivitas  sebagai  larvasida  dan  penolak terhadap  serangga  (nyamuk)  (Abubakar  dan  Majinda,  2016).  Berdasarkan penelitian El-Agbar, et al., (2018) gal manjakani yang berasal dari daerah Jordan mengandung asam  miristat = 0,10%. Sementara itu, gal manjakani yang berasal dari daerah India mengandung asam miristat = 22,69% (Nair, et  al.,  2020). Bila  dibandingkan  kedua  daearah  kandungan  asam  miristat gal  manjakani  yang  berasal  dari  dearah  Sumatera  utara  lebih  besar  dari daerah  Jordan  dan  lebih  kecil  dari  daerah  India. Dari  perbandingan komponen  utama  dari  berbagai  daerah  menunjukkan  kandungan  yang bervariasi  hal  ini  dikarenakan  kandungan  metabolit  sekunder  dipengaruhi oleh  lingkungan  tempat  tumbuhan  tersebut  tumbuh. Komponen  lainRnya dengan Score (Lib) diatas  90,76 terangkum dalam Tabel 1.
Aktivitas Antibakteri
Pada  artikel  ini  DMSO  10%  yang  digunakan  sebagai  pelarut  uji  tidak menghasilkan  zona  bening,  hal  ini  berarti  bahwa  pelarut  DMSO  idak memiliki  aktivitas  antibakteri.  Hasil  uji  daya  hambat  fraksi  non  polar  gal manjakani  terhadap  S.aureus  dan  E.coli  yaitu  6,26  ±  0,6  mm  dan  18,6  ± 0,21 mm. Menurut Davis dan Stout, (1971) Aktivitas antibakteri diameter zona  hambat  dapat  dikatakan  lemah  jika  lebih  kecil  atau  sama  dengan  5 mm, dikatakan sedang jika zona hambat 5-10 mm, dikatakan kuat jika zona hambat  10-19  mm  dan  dikatakan  sangat  kuat  jika  zona  hambatnya  lebih besar  atau  sama  dengan  20  mm.  Dengan  demikian  dapat  disimpulkan kemampuan  menghambat  fraksi  non  polar  gal  manjakani  dikategorikan “Sedang” untuk bakteri S.aureus dan E.coli. Ada perbedaan hasil uji daya hambat  pada  ekstrak  heksan  Q.  infectoria  hasil  penelitian  Satirapathkul dan Leela (2011) dengan sampel dari daerah Thailand yaitu sebesar 11,3 ±
0,8  terhadap  S.aureus  dan  10,0  ±  0,7  mm  terhadap  E.coli.  Hasil  yang diperoleh berbeda dikarenakan gal manjakani yang digunakan berasal dari daerah  yang  berbeda  sehingga  metabolit  sekunder  yang  terkandung  juga berbeda. Hasil KHM dan KBM fraksi non polar gal manjakani terangkum pada Tabel 2.
Tabel 1. Komponen Fraksi Non Polar Gal Manjakani Hasil Analisa GCMS Waktu Retensi (Menit) Nama Skor 8.056 Asam dodekanoat * 97.09 9.534 Asam tetradekanoat * 99.46 9.756 1-Dekanol, 2 heksil- 93.24 10.679 Asam heksadekanoat, metil ester * 98.77 10.808 Asam palmitoleat 96.59 10.975 Asam n-heksadekanoat * 98.86 11.603 Asam heptadekanoat 93.89 11.935 Asam 6-Oktadekanoat, metil ester, (Z) - 94.43 12.102 Metil stearate 97.71 12.36 Asam cis-Vaccenic * 92.93 12.471 Asam 1-heptadekanakarboksilat * 97.39 13.746 Tricosana 95.04 14.558 Asam arakidat 90.76 15.094 Asam heksanadioat, bis (2-etilheksil) Ester 95.04 16.683 Heneicosana 94.77 17.809 Bis (2-etilheksil) ftalat * 99.37 18.825 Heneicosana 92.86 21.633 Heptacosana 93.92 Catatan *: Komponen Utama Tabel 2. Hasil KHM dan KBM Fraksi Non Polar Gal Manjakani No Nilai Uji Bakteri yang Digunakan S. aureus E.coli KHM (µg/mL) KBM (µg/mL) KHM (µg/mL) KBM (µg/mL) 1 Kloramfenikol 1,5625 5000 7,8125 5000 2 Fraksi Non Polar Gal Manjakani >5000 >5000 31,25 >5000
KHM  fraksi  non  polar  gal  manjakani  memperlihatakan  aktivitas pengambatan  terhadap  bakteri  E.coli  lebih  besar  dibandingkan  dengan S.aureus. Sesuai pada karakteristik yang dikemukakan oleh Dzoyem, et al., (2012)  Aktivitas  suatu  ektrak  dikategorikan  kuat  ketika  nilai  KHM  nya dibawah  100  µg/mL,  sedang  jika  nilai  KHM  berkisar  antara 100<KHM<625µg/mL dan lemah  bila nilai KHMnya >625  µg/mL.  Maka dapat  dikatakan  bahwa  sampel  gal  manjakani  dapat  dikategorikan  sedang dalam mengahamabt bakteri E.coli dan rendah dalam menghambat bakteri S.aureus.  untuk  membunuh  kedua  bakteri  diperlukan  konsentrasi  yang lebih besar dari 5000 µg/mL.
Berdasarkan  senyawa  komponen  fraksi  non  polar  gal  manjakani  terdapat asam  lemak  jenuh  dan  tak  jenuh  yang  memiliki  atom  karbon  lebih  dari sepuluh  sehingga  dapat  menyebabkan  protoplas  bakteri  mengalami  lisis dengan  cara  mengubah  permeabilitas  membaran  sitoplasma  yang menyebabkan  keluarnya  bahan  makan  dari  dalam  sel.  Kerusakan  pada membaran ini akan mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan bakteri atau kematian pada bakteri patogen yang diujikan (Agustini dan Sri, 2007).
Uji Toksisitas
Uji toksisitas dilakukan dengan metode BSLT. Metode ini dapat digunakan sebagai  uji  pendahuluan  yang  cepat,  mudah,  hasilnya  dapat  diulang  dan tidak  membutuhkan  biaya  yang  mahal  untuk  mengatahui  adanya bioaktivitas  dari  suatu  sampel  (Zuraida,  2018).  Hasil  uji  menunjukkan konsentrasi  ekstak  dalam  media  dapat  membunuh  larva  Artemia  salina berturut-turut  dengan  konsentrasi  1000,  500,  100  dan  10  ppm.  Jumlah kematian  larva  Artemia  salina  setiap  tabung  reaksi  dalam  berbagai konsentrasi pada fraksi non polar gal manjakani ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel 3. Pengaruh Berbagai Konsentrasi Fraksi Non Polar Gal Manjakani Terhadap

## Larva Artemia Salina
Perlakuan ke Angka kematian artemia Salina Leach Konsentrasi (ppm) 10 100 500 1000 1 2 10 10 10 2 9 10 10 10 3 8 10 10 10 Total Kematian 19 30 30 30 Rata-rata 6,3 10 10 10 % Kematian 63 100 100 100
Dari  tabel  tersebut  dapat  diketahui  bahwa  variasi  konsentrasi  fraksi  non polar  gal  manjakani  pada  penelitian  ini  memperlihatkan  pengaruh  yang berbeda terhadap kematian larva Artemia salina. Total kematian diperoleh dengan  menjumlahkan  larva  yang  mati  pada  setiap  kosentrasi.  Respon kematian lebih cepat terjadi pada konsentrasi 1000, 500 dan 100 ppm. Hal ini  menunjukkan  bahwa  nIlai  LC 50 berbanding  terbalik  dengan  tingkat toksisitas suatu bahan Gambar 3.
Gambar 3. Nilai LC 50 Berbagai Konsentrasi Fraksi Non Polar Gal Manjakani Terhadap Artemia Salina
y = 0.9949x + 4.6686 R² = 0.7777 0 5 10 0 1 2 3 4 Nilai Pro bit Log Konsentrasi TOKSISITAS Nilai Probit Linear (Nilai Probit)
Dari grafik tersebut dapat diketahui bahwa semakin besar nilai LC 50 maka tingkat  toksisitas  suatu  bahan  semakin  rendah  dan  sebaliknya.  Bila konsentrasi besar zat yang diuji hanya menyebabkan sedikit kematian atau tidak  menyebabkan  kematian,  hal  tersebut  dapat  menggambarkan  bahwa zat yang diuji tidak bersifat toksik (Bintang, 2018). Dari persamaan regrasi linear y = 0,99x + 4,6686 dengan R 2 = 0,7777. Hasil analisis menunjukkan harga  LC 50 fraksi  non  polar  gal  manjakani  adalah  2,1527  ppm  dengan  % kematian larva pada konsentrasi 1000, 500 dan 100 ppm= 100% dan nilai probit  =  7,33%.  Sementara  itu,  %  kematian  larva  pada  konsentrasi  10 ppm=  63%  dan  nilai  probit  =  5,33%.  Berdasarkan  tingkat  toksisitas  dari suatu  ekstrak  dapat  dikategorikan  sangat  toksik  apabila  LC 50 berkisar  0- 250 g/mL,  250-500  g/mL:  toksik,  500-750  g/mL:  sedang,  750-1000 g/mL:  tidak toksik  (Meyer, et al.,1982).  Berdasarkan hal tersebut maka pada  fraksi  non  polar  gal  manjakani  bersifat  toksik  terhadap  larva  udang karena memiliki nilai LC 50 < 1000 ppm.

## SIMPULAN
Fraksi  non polar gal  manjakani  (Q.infectoria) diperoleh 27  senyawa yang dengan  komponen  utama  fraksi  non  polar  gal  manjakani  yaitu  asam  cis vaccenic = 35,19%, asam n-heksadekanoat = 16,66%, asam 1-heptadekana karboksilat = 5,03%, asam  dodekanoat = 4,73%, bis (2-etilheksil) ftalat = 4,35%, asam heksadekanoat, metil ester = 2,14% dan asam tetradekanoat = 1,31%. Antibakteri fraksi non polar gal manjakani (Q.infectoria) terhadap bakteri S.aureus dan E.coli dengan zona hambat 6,26 ± 0,6 dan 8,23 ± 0,21 mm.  Nilai  KHM  dan  KBM  bakteri  S.aureus  adalah  >5000  (µg/mL)  dan >5000 (µg/mL) dan E.coli adalah 312,5 (µg/mL) dan >5000 (µg/mL). Uji toksisitas  menunjukkan  fraksi  non  polar  gal  manjakani  dengan  nilai  LC 50 sebesar 2,1527 ppm.

## REFERENSI
Abubakar,  M. N.,  &   Majinda,  R.  R.,  2016.  GC-MS analysis and  preliminary  antimicrobial activity  of  Albizia  adianthifolia  (Schumach)  and  Pterocarpus  angolensis (DC). Medicines, 3(1): 3. doi:10.1155/2012/632796 Agustini,  K.,  &  Sri,  N.W., 2007.  Uji  aktivitas  senyawa  antibakteri  dari  mikroalga Porphyridium cruentum. Biodiversitas, 8: 48-53.
Basri, D. F., Tan, L. S., Shafiei, Z., & Zin, N. M., 2012. In vitro antibacterial activity of galls
of Quercus infectoria olivier against oral pathogens. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. doi:10.3390/medicines3010003 . Bintang M., 2018, Biokimia: Teknik Penelitian, Edisi ke 2., Erlangga, Jakarta, 316.
Chandrasekaran,  M.,  Senthilkumar,  A.,  &  Venkatesalu,  V.,  2011.  Antibacterial  and antifungal  efficacy  of  fatty  acid  methyl  esters  from  the  leaves  of  Sesuvium Portulacastrum L. European Review for Medical and Pharmacological
Sciences, 15(7): 775. doi:10.1590/s1517-83822007000400028
Chopra,  R.  N.,  Nayar,  S.  I., & Chopra,  I.C.,  1956.  Glossary  of  Indian  medicinal  plant., Council of Scientific and Industrial Research India 208. doi:10.1086/402350
CLSI,  2012.  Methods  for  dilution  antimicrobical  susceptibility  tests  for  bacteria  that  grow aerobically. Approved Standart- Ninth Edition., 32 (2): M07-A9.
doi:10.1128/aac.44.6.1694-1696.2000
Davis, W. W., & Stout, T. R., 1971. Disc plate method of  microbiological antibiotic assay. Applied Microbiology, 22(4): 666–670. doi:10.1128/aem.22.4.666-670.1971. Dzoyem,  J.,  N.,  Kuete,  A.,  Kuete,  V.,  Tala,  M.,  Wabo,  H.,  Guru,  S., & Tan,  N.-H.,  2012. Cytotoxicity and antimicrobial activity of the methanol extract and compounds from Polygonum  limbatum.  Planta  Medica,  78(08):  787–792. doi:10.1055/s-0031- 1298431
El-Agbar,  Z.  A., Naik, R.  R.,  &  Shakya, A.  K.,  2018. Fatty  acids  analysis  and  antioxidant activity  of  fixed  oil  of  quercus  infectoria  grown  in  Jordan.  Oriental  Journal  of Chemistry, 34(3):1368-1374. doi:10.13005/ojc/340324 Himalaya,  D.,  2017.  Pengaruh  pemberian  ekstrak  biji  manjakani  (Quercus  Infectoria  Dall) terhadap  bakteri  Vaginosis  dan  Candida  penyebab  keputihan  (Leukorrhea). Journal of Midwifery, 5(1): 8-44. doi:10.37676/jm.v5i1.570 Juwitaningsih,  T.,  Jahro,  I.  S.,  Dumariris,  I.,  Hermawati,  E.,  &  Rukayadi,  Y.,  2020. Phytochemical,  antibacterial,  antioxidant  and  anticancer  activity  study  of Melastoma candidum leaf acetone extract. Actualites Permanentes En Microbiologie Clinique, 2(2): 13-20. doi:10.31788/rjc.2020.1325614 Kamila, L. N., 2019, Isolasi senyawa metabolit sekunder dari tumbuhan secang (Caesalpinia sappan  L)  serta  uji  aktivitas  antibakteri,  Skripsi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Medan, Medan. Tidak Dipublikasikan.
Kaplan, M., Kokten, K., Bengu, A. S., Kardes, Y. M., Das, A., & Sekerci, A. D., 2019. Fatty acid composition of different Quercus Species. Chemistry of Natural Compounds, 55(2): 313-315. doi:10.1007/s10600-019-02675-x
Kaur, G., Hamid, H., Ali, A., Alam, M. S., & Athar, M., 2004. Antiinflammatory evaluation of alcoholic extract of galls of Quercus Infectoria. Journal of
Ethnopharmacology, 90(2-3): 285-292. doi:10.1016/j.jep.2003.10.00 Lim,  T.  K.,  2012,  Edible  Medicinal  and  Non-Medicinal  Plants Volume  4,  Fruits.,  Springer Science, New York, 16-26, doi:10.1007/978-94-007-4053-2 Meyer, B., Ferrigni, N., Putnam, J., Jacobsen, L., Nichols, D., & McLaughlin, J., 1982. Brine shrimp: A convenient general bioassay for active plant constituents, Planta Medica, 45(05):31–34. doi:10.1055/s-2007-971236 Nair,  A.,  Balasaravanan,  T.,  Jadhav,  S.,  Mohan,  V.,  &  Kumar,  C.,  2020.  Harnessing  the antibacterial  activity  of  Quercus  infectoria  and  Phyllanthus  Emblica  against antibiotic-resistant  Salmonella  typhi  and  Salmonella  enteritidis  of  poultry origin. Veterinary World, 13(7):1388. doi:10.14202/vetworld.2020.1388-1396 Rahmaningsih,  S., & Andriani,  R.,  2017.  Aktivitas  biologis  ekstrak  daun  majapahit (Crescentia Cujete) dan potensinya sebagai antibakteri Vibrio harveyi secara insilico, Prosiding SNasPPM,1(1): 80-87. doi:10.1088/1757-899x/874/1/012002 Rina, R., Rafiquzzaman, M., & Hasmah, A., 2011. Spectrophotometric determination of total phenol and flavonoid content in manjakani (Quercus infectoria) extracts. Health and the Environment Journal, 2 (1): 9-13.
Sangi, M. S., Momuat, L. I., & Kumaunang, M., 2012. Uji toksisitas dan skrining fitokimia tepung  gabah  pelepah  aren  (Arenga  pinnata). Jurnal  Ilmiah  Sains, 12(2):  127-134. doi:10.35799/jis.12.2.2012.716
Satirapathkul, C., &  Leela, T., 2011. Growth inhibition of  pathogenic bacteria by extract of Quercus  Infectoria  Galls. Int.  J.  Biosci.  Biochem.  Bioinform., 1:  26-31. doi:10.7763/ijbbb.2011.v
Semwal, P., Painuli, S., Badoni, H., & Bacheti, R. K., 2018. Screening of phytoconstituents and antibacterial activity of leaves and bark of Quercus leucotrichophora A. Camus from  Uttarakhand  Himalaya.  Clinical  Phytoscience,  4(1):  30. doi:10.1186/s40816- 018-0090-y Su’i,  M., Sumaryati,  E.,  Prasetyo, R., & Eric,  D. P.,  2015. Anti  bacteria activities of  lauric acid  from  coconut  endosperm  (Hydolysed  using  lipase  endogeneus).  Advances  in Environmental Biology, 9(23):45-49. doi:10.22146/agritech.12859 Yanti,  N.,  2016,  Uji  aktivitas  antifungi  ekstrak  etanol  gal  manjakani  (Quercus  infectoria) terhadap Candida albicans. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Pendidikan Biologi, 1(1).
Zuraida, Z., 2018. Analisis toksisitas beberapa tumbuhan hutan dengan metode Brine Shrimp Lethality  Test  (BSLT). Jurnal  Penelitian  Hasil  Hutan,  36(3):  239-246. doi:10.20886/jphh.2018.36.3.239-246

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terimakasih kami sampaikan kepada pihak-pihak yang terkait dalam membantu selesainya penulisan artikel ini. Penulisan artikel ini tidak  mendapat  konflik  kepentingan  dan  sumber  dana  dari  pihak manapun.

## KONTRIBUSI PENULIS
IA  berperan  dalam  mengumpulkan  data  dan  membuat  naskah.  TJ berperan  dalam  membuat  konsep  dan  rancangan.  Semua  penulis berkontribusi  dalam  merancang  penelitian,  interprestasi  data  dan revisi akhir penulisan.
Akses  Terbuka  Artikel  ini  dilisensikan  di  bawah Creative  Commons  Lisensi  Internasional  Attribution  4.0,  yang memungkinkan  penggunaan,  berbagi,  adaptasi,  distribusi,  dan reproduksi  dalam  media  atau  format  apa  pun,  selama  Anda memberikan kredit yang sesuai kepada penulis asli dan sumbernya, memberikan tautan ke lisensi Creative Commons, dan menerangkan jika  perubahan  telah  dilakukan.  Gambar  atau  materi  pihak  ketiga lainnya dalam artikel ini termasuk dalam lisensi Creative Commons artikel,  kecuali  dinyatakan  sebaliknya  dalam  batas  kredit  untuk materi  tersebut.  Jika  materi  tidak  termasuk  dalam  lisensi  Creative Commons  artikel  dan  penggunaan  yang  Anda  maksudkan  tidak diizinkan  oleh  peraturan  perundang-undangan  atau  melebihi penggunaan yang diizinkan, Anda harus mendapatkan izin langsung dari pemegang hak cipta. Untuk melihat salinan lisensi ini, kunjungi https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/deed.id .
.
© The Author(s) 2020