## JURNAL BIOSILAMPARI: JURNAL BIOLOGI
IDENTIFIKASI FENOMENA SELF-INCOMPATIBILITY PADA Hibiscus rosa- sinensis L.
Dias Idha Pramesti* UIN Sunan Kalijaga, Jl. Laksda Adisucipto, Papringan, Caturtunggal, Daerah Istimewa Yogyakarta, 55281, Indonesia *Corresponding author, e-mail: dias.pramesti@uin-suka.ac.id

## A B S T R A C T
Hybridization is one way to produce Hibiscus rosa-sinensis L. which have various shape and colour of flowers. However, this is hampered by the possibility of self-incompatibility in Hibiscus  rosa-sinensis L.  To  identify  self-incompatibility  in Hibiscus  rosa-sinensis L.  the simplest  methods  are  used  by  observing  the  morphology  and  anatomy  of  fruit development, followed by a descriptive analysis of the data that has been obtained. The analysis results on crossing artificial pollination to 103 flowers of single pink Hibiscus rosa- sinensis L. show that the fruits survive until day 7 after pollination. Furthermore, the data show that there is no fruit, seed, and embryo development. Indeed the fruit turns yellow and finally shed. But the self artificial pollination shows that 35 seeds develop from 96 pollinations.  The  longer  seed,  which  13  days  after  pollination,  grew  up.  The  globular embryo could find on 3 DAP (day after pollination) fruit set, and the 9 DAP fruit set shows the  development  of  heart  shape.  The  result  suggests  that  the  phenomenon  of  self- incompatibility on Hibiscus rosa sinensis L. predicts as postzygotic self-incompatibility .
Keywords: Embryo, Fruit, Hibiscus rosa-sinensis L., Self-incompatibility

## PENDAHULUAN
Hibiscus rosa-sinensis L. merupakan salah satu tanaman yang mudah dijumpai di  lingkungan  sekitar,  memiliki  warna  bunga  menarik  dan  masa  pembungaan  terus menerus  sepanjang  tahun.  Sejak  zaman  dahulu  masyarakat  mengenalnya  sebagai tanaman  hias  atau  tanaman  pagar.  Tanaman  yang  dikenal  dengan  nama  kembang sepatu ini memiliki beberapa manfaat lain. Upadhyay & Upadhyay (2011),  Missoum (2018) dan Mak et al. (2013) menyebutkan bahwa Hibiscus rosa-sinensis L. memiliki manfaat  secara  farmakologi  diantaranya  sebagai  antioksidan,  menorrhagia, konstraseptif dan laksatif. Selain itu bunga tumbuhan ini juga dapat digunakan sebagai pewarna bahan makanan maupun pewarna alami yang stabil pada kain katun dengan warna ungu,biru serta hijau dan aman terhadap kulit (Vankar & Shukla, 2011).
Daya  tarik Hibiscus  rosa-sinensis L.  khususnya  dalam  hal  keanekaragaman struktur  bunga yang meliputi warna, bentuk dan ukuran menyebabkan adanya upaya untuk  menjadikan  tanaman  tersebut  lebih  bervariasi  diantaranya  melalui  proses hibridisasi atau persilangan (Pascual et al., 2017; Abirami, 2018; Mauhay et al., 2020). Analisis  keanekaragaman  atau  polimorfisme  tingkat  genetik  menunjukkan  bahwa variasi  bunga Hibiscus  rosa-sinensis L.  cukup  tinggi  (Mercuri  et  al.,  2010). Pengembangan hibridisasi ini dapat ditemukan di beberapa negara antara lain Filipina, Malaysia, Australia dan Hawaii. Para  pengembang hibridisasi Hibiscus rosa-sinensis L. dari  berbagai  negara  bahkan  bergabung  dalam  organisasi International  Hibiscus
Society . Hibridisasi Hibiscus  rosa-sinensis L.  di  Indonesia  belum  banyak  dilakukan, sehingga proses perbanyakan  yang umumnya dilakukan adalah melalui stek  batang dan  teknik  sambung.  Proses  ini  akan  menghasilkan  tanaman  baru  yang  memiliki kesamaan  sifat  dengan  induknya  (Rawat  &  Das,  2020).  Berdasarkan  fakta  tersebut diperlukan  inovasi  dalam  perbanyakan Hibiscus  rosa-sinensis L.  yang  dapat menghasilkan tanaman baru dengan morfologi beragam. Hasil pengamatan terhadap pola reproduksi generatif dan struktur yang terlibat pada Hibiscus rosa-sinensis L. di lingkungan sekitar Universitas islam Negeri (UIN) Sunan Kalijaga menunjukkan bahwa 90% polen tanaman tersebut bersifat fertil dan terjadi perkembangan buah beberapa hari setelah mengalami polinasi buatan. Akan tetapi buah tersebut hanya berkembang sekitar 5 hari sejak mahkota bunga luruh untuk selanjutnya gugur.
Perbanyakan Hibiscus rosa-sinensis L. di India yang memiliki iklim hampir sama di Indonesia juga masih jarang menggunakan biji. Achamma & P.M. Radhamany (2008) berasumsi bahwa penyebab sulitnya produksi biji pada Hibiscus rosa-sinensis L. adalah sterilitas alat reproduksi jantan maupun betina spesies tersebut serta terjadinya self- incompatibility (ketidakcocokan seksual). Self-incompatibility merupakan  ketidakmampuan  suatu  tanaman  berbiji hermafrodit yang fertil untuk menghasilkan zigot setelah mengalami polinasi sendiri ( self  pollination ).  Bentuk self-incompatibility tersebut  diantaranya  dijumpai  pada Brassicaceae dan Solanaceae (Takayama & Isogai, 2005). Pada Brassicaceae fenomena ini  berupa  penolakan  polen  pada  permukaan  stigma  sehingga  tidak  terjadi pembentukan pollen  tube sebagai  struktur  penting  dalam  proses.  Sedangkan  pada Solanaceae pengaruh dari self-incompatibility berupa kegagalan pollen tube mencapai ovulum.  Meskipun  demikian  fenomena self-incompatibility ini  dapat  dimanfaatkan dalam  bidang  pemuliaan  tanaman  khususnya  untuk  menghasilkan  kultivar  atau varietas baru melalui proses hibridasi (Qasim, 2013).
Berdasarkan fenomena Hibiscus rosa-sinensis L. di atas maka perlu dilakukan analisis  secara  seksama  tentang  fenomena self-incompatibility pada Hibiscus  rosa- sinensis L. Hal ini dimaksudkan sebagai upaya meningkatkan kualitas atau daya tawar tanaman  yang  sebenarnya  berpeluang  besar  menjadi  tanaman  hias  unggulan  ini melalui  mekanisme  hibridisasi.  Potensi  keragaman  genetik  hasil  hibridisasi  cukup besar dalam menghasilkan tanaman dengan berbagai karakter baru (J. M. Van Tuyl & Lim, 2003).

## METODE
Polinasi Buatan pada Hibiscus rosa-sinensis L.
Identifikasi fenomena self-incompatibility pada Hibiscus rosa-sinensis L.   dalam penelitian  ini  dilakukan  berdasarkan  pengamatan  karakter  morfologi  dan  anatomi bunga maupun buah serta biji yang terbentuk sebagaimana dilakukan oleh Millner et al. (2015) pada genus  Retrepia.    Obyek pengamatan  adalah bunga H.rosa-sinensis L. single pink dari 8 tanaman yang tumbuh di lingkungan  kampus UIN Sunan Kalijaga. Polinasi  buatan  dilakukan  pada  pagi  hari  dengan  memberikan  perlakuan  berupa pengambilan  polen Hibiscus  rosa-sinensis L.  dengan  tusuk  gigi  selanjutnya menempelkannya  pada  stigma  dengan  metode cross  pollination dan self  pollination. Hasil  dari  polinasi  yang  dilakukan  dengan  mengamati  dan  mencatat  perkembangan yang terjadi.
Pengamatan struktur anatomi biji Hibiscus rosa-sinensis L. Pengamatan  struktur  dan  perkembangan  buah Hibiscus  rosa-sinensis L. dilakukan melalui pengamatan morfologi serta anatomi. Buah yang terbentuk melalui polinasi  buatan  diambil  dengan  variasi  waktu  perkembangan  dengan  satuan  hari setelah  panen  (HSP).  Pengamatan  morfologi  dilakukan  secara  langsung  di  lapangan sedangkan  pengamatan  anatomi  dilakukan  dengan  mikroskop  berdasarkan  seri preparat  perkembangan  yang  dibuat  di  Laboratorium  Terpadu  UIN  Sunan  Kalijaga. Pembuatan preparat seri ovarium dan biji menggunakan modifikasi metode Kardi & Budipramana (1992) dengan pewarnaan Fast Green dan Safranin 1%. Preparat yang telah dihasilkan selanjutnya diamati dengan menggunakan mikroskop cahaya  Nikon YS100 yang terhubung kamera optilab Advance. Dari preparat berbagai ukuran buah Hibiscus  rosa-sinensis L.  tersebut  selanjutnya  diambil  beberapa  seri  preparat  yang menunjukkan  rangkaian  struktur  serta  perkembangan  buah  dan  biji Hibiscus  rosa sinensis L., termasuk embrio yang terbentuk.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Polinasi Buatan pada Hibiscus rosa-sinensis L.
Polinasi  buatan Hibiscus  rosa-sinensis L.  dilakukan  dengan  metode self pollination pada 96 bunga dan cross pollination dalam spesies bunga yang sama pada 103  bunga.  Polinasi  dinyatakan  kompatibel  dan  berlanjut  dengan  fertilisasi  sebab setelah bunga gugur tidak terjadi perubahan warna menguning pada  ovarium. Hasil yang diperoleh dari proses tersebut adalah  terbentuknya buah dengan karakteristik sebagaimana  disebutkan  oleh  (Upadhyay  &  Upadhyay,  2011).  Buah Hibiscus  rosa- sinensis L.  mulai terbentuk pada hari kedua setelah proses polinasi namun baru dapat diamati dengan jelas strukturnya pada hari ke tiga setelah polinasi dilakukan.
Secara  morfologis  perkembangan  buah Hibiscus  rosa-sinensis L.  dimulai  dari proses  yang  umumnya  terjadi  sebagaimana  bunga  tanpa  polinasi,  yaitu  gugurnya corolla  tanpa  disertai  luruhnya  ovarium.  Hal  ini  menyebabkan  sulitnya  identifikasi keberhasilan polinasi apabila hanya didasarkan pada pengamatan buah pada hari ke- 2 setelah polinasi, karena buah tersebut masih sama struktur dan ukurannya dengan ovarium pada bunga yang tidak mengalami polinasi. Proses layu dan luruhnya corolla tersebut terkait dengan  peningkatan etilen pada saat bunga mulai mengalami absisi (Valdoz  et  al.,  2017)  serta  distribusi  beberapa  mineral  dalam  sel,  antara  lain  gula tereduksi,  P,  Mg,  K,  Ca  untuk  digunakan  dalam  perkembangan  proses  reproduksi (Trivellini et al., 2011).
Ovarium Hibiscus  rosa-sinensis L. single pink memiliki 5 lokus dengan jumlah keseluruhan ovulum diperkirakan berjumlah 70 (Rostina et al., 2021). Ovarium yang berkembang membentuk buah berwarna hijau cerah dengan ukuran yang bertambah sesuai  waktu  perkembangannya.  Pada  penelitian  ini  buah  pada  hari  ke-3  setelah polinasi  menunjukkan  adanya  alur  ruang  buah,  mengalami  penggembungan  serta penebalan  kulit  buah  (Gambar  1).  Perkembangan  buah  terjadi  bersamaan  dengan penambahan luas ruang ovulum dan ukuran biji.
Buah Hibiscus  rosa  sinensis L.  merupakan  buah  sejati  kering  beruang  5. Meskipun  perhiasan  bunga  termasuk  stilus  dan  stigma  luruh  pada  hari  kedua pembungaan, kaliks serta epikaliks turut berkembang seiring bertambahnya ukuran buah. Hal ini sebagaimana masing-masing  fungsi kaliks  yang berperan dalam proses perlindungan buah, epikaliks yang juga membantu dispersi biji pada genus Hibiscus maupun famili Malvacea secara umum (Naskar & Mandal, 2014).
Polinasi merupakan proses awal dalam aktivitas reproduksi tumbuhan. Proses
ini  tidak  akan  menghasilkan  buah  apabila  tidak  diikuti  oleh  fertilisasi  antara  gamet jantan  dan  betina.  Lersten  (2004)  menguraikan  bahwa    polinasi  merupakan  proses yang  cukup  kompleks  karena  pada  tahap  tersebut  polen  akan  berinteraksi  dan mengalami  berbagai  reaksi  kimiawi  dengan  substansi  pada  stigma  dimulai  dengan adhesi.  Tahapan  tersebut  diikuti  dengan  terjadinya  penyerapan  air  dari  lingkungan sekitar pollen, pembentukan inisal pollen tube dan dilanjutkkan tahap pemanjangan. Pada tahap ini terbentuklah pollen tube yang akan mengantarkan sel gamet jantan pada gemat  betina  sehingga  terjadilah  fertilisasi  diikuti  dengan    perkembangan  ovulum serta  ovarium. Di dalam ovarium, khususnya pada setiap ovulum fungsional, terjadi perkembangan  biji  yang  meliputi  perkembangan  embrio  dan  endosperm  sebagai cadangan makanan bagi embrio yang sedang berkembang.
Gambar  1 . Perkembangan  Ovarium Hibiscus  rosa-sinensis L.  pada  0  sampai  13  Hari  Setelah  Terjadi Polinasi  Buatan  dengan  Sumber  Polen  dari  Bunga  yang  Sama.  Bagian  Kaliks  Telah Dihilangkan, Menyisakan Epikaliks sehingga Ovarium atau Buah Terlihat Jelas.
Menurut  Simpson  (2006)  buah  Hibiscus  termasuk  dalam  kelompok  buah loculicidal,  septicidal,  memiliki  biji  exalbuminous  atau  endospermous  dengan endosperm  mengandung  lipid  atau  karbohidrat.  Warna  buah  berada  dalam  kisaran hijau sampai coklat ketika sudah masak, disertai biji yang berwarna coklat kehitaman dengan  kulit  biji  bertekstur  kasar.  Perkembangan  buah    sejak  fase  inisiasi  bunga sampai dengan kulit buah mengering dan biji siap terdispersi umumnya memerlukan waktu 61 hari (Annahwi et al., 2017).
Perkembangan buah terjadi beriringan dengan pengembangan biji khususnya struktur  embrio  dan  endosperm  hasil  fertilisasi.  Pada prezygotic  self-incompatibility meskipun  terjadi  polinasi  dan  perkembangan pollen  tube dengan  ritme  lambat, fenomena  tersebut  tidak  menyebabkan  terjadinya  fertilisasi  bahkan  perkembangan embrio dan endosperm. Hal ini disebabkan terjadi penghambatan pertumbuhan pollen tube pada  permukaan  stigma  maupun  di  dalam  jaringan  stilus.  Kondisi  ini  berbeda dengan postzygotic  self-incompatibility ,  yaitu  embrio  gagal  berkembang  normal meskipun  telah  mengalami  diferensiasi  sehingga  ciri  yang  mudah  dijumpai  adalah gugurnya buah daklam fase perkembangan (Ashari, 2002). Pada penelitian ini buah Hibiscus rosa-sinensis L. terbentuk meskipun dengan tingkat keberhasilan rendah, yaitu
31 buah dengan umur   terlama 13  HSP dari  96  kali polinasi buatan self pollination . Sedangkan pada polinasi buatan dengan cross pollination , dari 103 polinasi diperoleh 35 buah yang bertahan sampai dengan 6 HSP dan menyisakan 1 butir buah yang luruh pada umur 7 HSP.
Self-incompatibility pada  Brassicace  menunjukkan  bahwa pollen  tube yang melalui tahap pemanjangan dapat menembus jaringan stilus sehingga pada saat yang sama bakal buah juga mengalami perkembangan. Meskipun pada akhirnya pollen tube akan  rusak  dan  terdegenerasi,  perkembangan  awal  pada  ovarium  mulai  terjadi (Lersten,  2004).  Sedangkan  pada Pseudowintera  axillaris ,  mekanisme self- incompatibility khususnya  tipe postzygotic menghambat  perkembangan  kantung embrio meskipun fertilisasi telah terjadi (Sage & Sampson, 2003).
Ovarium  merupakan  salah  satu  bagian  organ  bunga  yang  masih  bertahan setelah terjadi absisi bunga.  Organ tanaman yang sedang mengalami perkembangan termasuk bunga maupun buah merupakan area sink utama dari translokasi fotosintaat serta menjadi area yang didukung oleh asimilat tersimpan. Pada Hibiscus rosa-sinensis L.  bagian  tangkai  bunga  atau  buah  utamanya  di  sekitar  floem  merupakan  area penyimpanan  cadangan  makanan.  Oleh  karena  itu,  apabila  perkembangan  buah terhambat, translokasi fotosintat terhenti, cadangan makanan masih dapat digunakan sehingga proses absisi terjadi secara lambat (Krabel, 1992).
Gambar 2. Perkembangan embrio Hibiscus rosa sinensis L. A. Perkembangan embrio (em) pada 2 HSP, tampak  2  endosperm  nuklear  (en)  di  sekitarnya,  B.  Perkembangan  embrio  disertai suspensor (s) pada 3 HSP, C. Embrio globuler pada 7 HSP, D Embrio fase globuler menuju fase heart (9 HSP).

## Pada beberapa tumbuhan kecepatan pembentukan embrio maupun endosperm
dapat  saling  mendahului,  bergantian  maupun  tumpang  tindih.  Hal  ini  sebagaimana disebutkan  (Lersten,  2004)  bahwa  waktu  yang  diperlukan  zigot  untuk  membelah pertama kali setelah fertilisasi berkaitan dengan waktu yang diperlukan sel endosperm primer untuk membelah paska terjadinya fertilisasi. Durasi pembelahan zigot maupun endosperm cukup beragam antara spesies satu dengan yang lain. Meskipun demikian umumnya  pembentukan  endosperm  pada  beberapa  spesies  berjalan  lebih  cepat daripada pembentukan embrio.
Embrio Hibiscus rosa-sinensis L. teramati telah memasuki fase globuler pada 3 HSP dan mulai tampak jelas memasuki fase heart pada 9  HSP (Gambar 2). Embrio  fase globuler  merupakan  hasil  perkembangan embryo  proper yang  terus  mengalami pembelahan baik periklinal, antklinal maupun tangensial sehingga terbentuk seperti bola.  Pada  fase  tersebut  suspensor  juga  terus  mengalami  perkembangan  hingga mencapai ukuran maksimal ketika embrio berada pada fase heart untuk menyalurkan metabolit dari endosperm menuju embrio pada tahap awal (Lafon-Placette & Kohler, 2014; Lersten, 2004).
Pada  persilangan Hibiscus  sinosyriacus dan Hibiscus  syriacus perkembangan embrio merupakan tahap kedua dari tiga tahapan perkembangan ovulum  yang terjadi mulai hari ke 5 setelah polinasi (Tapec et  al.,  2021). Pada tahapan tersebut  embrio mulai berkembang sedangkan endosperm berbentuk cair atau endosperm tipe nuklear mengalami proliferasi sejak hari ke 2 setelah polinasi. Demikian pula pada penelitian ini  yang  pada  usia  perkembangan  9  HAP  endosperm  yang  teramati  masih  berupa endosperm tipe nuklear, belum mengalami selulerisasi meskipun embrio menuju fase heart. Dalam waktu 10-12 jam setelah polinasi, endosperm primer pada genus Hibiscus telah dapat diamati (Venkata, 1955). Pada kondisi tersebut sel zigot belum membelah sehingga  perkembangan  di  dalam  kantong  embrio  dimulai  dari  perkembangan endosperm  diikuti  dengan  perkembangan  zigot  membentuk  proembrio  dilanjutkan dengan perkembangan embrio.
Gambar 3. Embrio di dalam biji Hibiscus rosa-sinensis L. 6 HSP dari buah hasil polinasi buatan dengan cross pollination, A. Biji  dengan kantung embrio, endosperm nuklear (en) teridentifikasi dengan  jelas  di  dalam  struktur  tersebut,  B.  Biji  beserta  kantung  embrio  (ke)  yang mengalami penyusutan, meskipun masih terdapat endosperm didalamnya.
Pada polinasi buatan cross pollination Hibiscus rosa-sinensis L. perkembangan embrio  tidak  teramati,  bahkan  setelah  hari  ke  7  setelah  polinasi  buah  yang  telah terbentuk  terdegenerasi  dan  luruh.  Scalone  &  Albach  (2014)  menyebutkan  bahwa kegagalan suatu tanaman untuk membentuk buah serta biji dipengaruhi oleh banyak faktor yang salah satunya adalah tidak berkembangnya bagian terpenting dari suatu
biji  yaitu  embrio.  Organ  yang  tidak  mengalami  perkembangan  akan  memasuki  fase absisi  dimulai  dari  terbentuknya  jaringan  absisi,    pemindahan  unsur mobile yang berasal dari penguraian senyawa yang telah terdegradasi (Taiz & Zeiger, 2006). Secara mekanik  absisi  dipengaruhi  oleh  pemanjangan  sel  terutama  bagian  dinding  sel sehingga  beban  pada  jaringan  absisi  bertambah  karena  berat  dari  organ  serta pengaruh gravitasi (Addicott & Lynch, 1954).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  dapat  ditarik  kesimpulan  bahwa self- incompatibility pada Hibiscus rosa sinensis L. belum sepenuhnya dapat diidentifikasi. Perkembangan embrio teramati sebagaimana pada biji tanaman genus Hibiscus lain, sehingga  fenomena incompatibility yang  terjadi  bukan  tipe prezygotic  self- incompatibility namun diprediksi sebagai postzygotic self-incompatibility .
UCAPAN TERIMA KASIH Penulis mengucapkan terima kasih kepada LPPM UIN Sunan Kalijaga yang telah mensaranai penelitian ini.

## REFERENSI
Abirami, S., & Uma, G. (2018). Cross-Artificial Pollination on Hibiscus rosa-sinensis L.
International Journal of Science and Research , 7 (6), 1878–1886. Achamma, K., & P.M. Radhamany, P. . (2008). Differential Recognition of Self pollen and Sterility  in  Hibiscus  rosa-sinensis  L.  (Malvaceae).  In Advances  in  Pollen  Spore Research, XXV . Today and Tomorrows. Addicott, F. T., & Lynch, R. S. (1954). Physiology of Abscission. Annual Review of Plant Physiology , 6 , 211–238.
Annahwi, D., Ratnawati, & Budiwati. (2017). Flower and Fruit Development Phenology and Generative Reproduction Success of Hibiscus rosa-sinensis spp. YRU Journal of Science and Technology , 2 (2), 19–29.
Ashari, S. (2002). Pengantar Biologi Reproduksi Tanaman (1st ed.). PT Rineka Cipta. Kardi,  S.,  &  Budipramana,  L.  S.  (1992). Mikroteknik  dan  Pembuatan  Peraga  Biologi . University Press IKIP Surabaya.
Krabel, D. (1992). Influence of Source-Limitations on Fruit Development of Hibiscus rosa-sinensis L. Journal of Plant Physiology , 140 (1), 56–60. https://doi.org/10.1016/S0176-1617(11)81057-6
Lafon-Placette,  C.,  &  Kohler,  C.  (2014).  Embryo  and  Endosperm  ,  Partners  in  Seed Development. Current Opinion in Plant Biology , 17 , 64–69. https://doi.org/10.1016/j.pbi.2013.11.008
Lersten, N.  R. (2004). Flowering Plant  Embryology. In Crop Science (1st ed.,  Vol. 44, Issue 6). Blackwell Publishing. https://doi.org/10.2135/cropsci2004.2284 Mak, Y. W., Chuah, L. O., Ahmad, R., & Bhat, R. (2013). Antioxidant and Antibacterial Activities of Hibiscus ( Hibiscus rosa-sinensis L .) and Cassia ( Senna bicapsularis L  .)  Flower  Extracts. Journal  of  King  Saud  University  -  Science , 25 (4),  275–282. https://doi.org/10.1016/j.jksus.2012.12.003
Mauhay,  D.  J.  A.,  Padilla,  L.  V.,  Jacinto,  F.  C.  A.,  &  Vitug,  E.  Z.  (2020).  Morphological Variation In Pollen Grains Of Philippine Hibiscus Rosa-Sinensis Hybrids Article in. International  Journal  of  Scientific  &  Technology  Research , 9 (3),  10–15. https://www.researchgate.net/publication/344867980
Mercuri,  A.,  Braglia,  L.,  De  Benedetti,  L.,  Ballardini,  M.,  Nicoletti,  F.,  &  Bianchini,  C.
(2010). New Genotypes of Hibiscus × rosa-sinensis through Classical Breeding and Genetic Transformation (J. M. P. de V. van Tuyl (ed.); pp. 201–208). Acta Hort. Millner,  H.  J.,  McCrea,  A.  R.,  &  Baldwin,  T.  C.  (2015).  An  Investigation  of  self- Incompatibility within The genus Restrepia. American Journal of Botany , 102 (3), 487–494. https://doi.org/10.3732/ajb.1400555
Missoum, A. (2018). An Update Review on Hibiscus rosa sinensis Phytochemistry and Medicinal Uses. Journal of Ayurvedic and Herbal Medicine , 4 (3), 135–146.
Naskar,  S.,  &  Mandal,  R.  (2014).  Characterization  of  some  common  members  of  the famili Malvaceae S.S. on The Basis of Morphology of Selective Attributes: Epicalyx, Staminal Tube, Stigmatic Head and Trichome. Indian Journal of Plant Sciences , 4 (3) , 79–86. Pascual,  A.  O.  S.,  Magdalita,  P.  M.,  Medina,  N.  G.,  &  Apacionado,  B.  V.  (2017). Characterization,  Pollen  Behavior  and  Propagation  of  Five  Selected  Hibiscus Hybrids (Hibiscus rosa-sinensis Linn.). Australian Journal of Crop Science , 11 (12). https://doi.org/10.21475/ajcs.17.11.12.pne523
Qasim, W. A. (2013). Mekanisme Self-incompatibility Tipe Gametofitik dan Sporofitik dan  Aplikasinya dalam Pemuliaan Tanaman. Vol  12 (1): 21-27. Jurnal Kultivasi , 12 (1), 21–27.
Rawat, S., & Das, K. K. (2020). Stenting: A New Technique for Rapid Multiplication of Plants. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry , 9 (3). www.phytojournal.com
Rostina,  I.,  Kusumawati,  S.  A.,  &  Salamah,  A.  (2021).  Comparative  Morphological Analysis of Ovaries in Hibiscus rosa-sinensis L . Single Pink , Crested Peach and Double  Orange  Flowers. Journal  of  Physics:  Conference  Series , 1725 (012044). https://doi.org/10.1088/1742-6596/1725/1/012044
Sage, T. L., & Sampson, F. B. (2003). Evidence for Ovarian Self-incompatibility as a Cause of  Self-sterility  in  the  Relictual  Woody  Angiosperm,  Pseudowintera  axillaris (Winteraceae).
Annals of Botany ,
91 (2), 807–816. https://doi.org/10.1093/aob/mcg085
Scalone,  R.,  &  Albach,  D.  (2014).  Cytological  Evidence  for  Gametophytic  Self- incompatibility  in  The  Genus  Veronica. Turkish  Journal  of  Botany , 38 ,  197–201. https://doi.org/10.3906/bot-1302-2
Simpson, M. G. (2006). Plant Systematics . Elsevier Academic Press.
Taiz, L., & Zeiger, E. (2006). Plant Physiology (4th ed.). Sinauer Associates, Inc. Takayama, S., & Isogai, A. (2005). Self-incompatibility in  Plants. In Annual Review of Plant Biology (Vol. 56, pp. 467–489). https://doi.org/10.1146/annurev.arplant.56.032604.144249
Tapec, C. A. D., Deepo, D. M., Islam, M., Cho, W. Y., Kim, H. Y., & Lim, K. B. (2021). Embryo Development  of  Woody  and  Parennial  Hibiscus  Species. Scientia  Horticulturae , 275 . https://doi.org/10.1016/j.scienta.2020.109698
Trivellini, A., Ferrante, A., Vernieri, P., & Serra, G. (2011). Effects of  Abscisic  Acid on Ethylene  Biosynthesis  and  Perception  in  Hibiscus  rosa-sinensis  L.  Flower Development. Journal  of  Experimental  Botany , 62 (15),  5437–5452. https://doi.org/10.1093/jxb/err218
Upadhyay, P., & Upadhyay, S. (2011). Hibiscus rosa-sinensis : Pharmacological Review Trandermal  Drug  Delivery  System  View  project  Phytochemicals  View  Project Hibiscus rosa-sinensis : Pharmacological review. International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical Sciences , 2 (4), 1449–1450.

## www.ijrpbsonline.com
Valdoz,  J.  C.,  Absulio,  W.,  Magdalita,  P.,  &  Sotto,  R.  (2017).  Morpho-anatomical Characters and Ethylene Production in Hibiscus rosa- sinensis L . in Relation to Two-Day Floral retention. Philipp Acric Scientist , 100 (2), 168–177.
Van Tuyl, J. M., & Lim, K.-B. (2003). Interspecific Hybridisation and Polyploidisation as Tools in Ornamental. Acta Horticulturae , 613 , 13–22.
Vankar, P. S., & Shukla, D. (2011). Natural Dyeing with Anthocyanins from Hibiscus rosa sinensis  Flowers. Journal  of  Applied  Polymer  Science , January  2018 . https://doi.org/10.1002/app.34415
Venkata,  R.  (1955).  Embryological  Studies  in  Malvaceae  II.  Fertization  and  Seed Development. Proc. Indian Nat. Sci. Acad. , Sec. B 21 , 53–67.