## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN PENETAPAN KADAR FENOL TOTAL DARI MIKROALGA LAUT Chlorella vulgaris
Dewi Kurnia 1* , Erna Rosliana 1 , Dadang Juanda 1 , Zeily Nurochman 2
1 Prodi Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Bhakti Kencana
2 KK Biokimia Departemen Kimia, FMIPA Institut Teknologi Bandung
* email: dewi.kurnia@bku.ac.id
Received 03 March 2020
Accepted 19 May2020

## Abstrak
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menangkal radikal bebas, beberapa penelitian membuktikan  mikroalga  memiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan  yang  mampu  menangkal radikal bebas. Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas antioksidan dan penetapan kadar  fenol  total  dari  mikroalga Chlorella  vulgaris .  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode maserasi  bertingkat  menggunakan  pelarut  n-heksana,  etil  asetat,  dan  etanol  96%.  Uji aktivitas  antioksidan  dengan  peredaman  DPPH  ( 2,2-diphenyl-1-picrylhldrazyl )  dan penetapan  kadar  fenol  total  menggunakan  pereaksi  Folin-Ciolcalteau.  Hasil  uji  aktivitas antioksidan  menunjukan  bahwa  mikroalga Chlorella  vulgaris memiliki  aktivitas antioksidan  dengan  nilai  IC 50 untuk  n-heksana,  etil  asetat,  etanol  dan  vitamin  C  sebagai pembanding  berturut-turut  sebesar  18,896;  11,979;  20,437  dan  7,895  µg/ml.  Hasil penetapan kadar fenol total ekstrak n-heksana, etil asetat, dan etanol berturut-turut sebesar 1,388;  1,184;  1,184  mg/GAE  ( gallic  acid  equivalence )  per  100  mg  ekstrak.  Ekstrak  etil asetat memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC 50 11,979 µg/ml dan kadar fenol total yang tertinggi pada ekstrak n-heksana sebesar 1,388 mg/GAE ( gallic acid equivalence )  per  100  mg  ekstrak.  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  baik  ekstrak  n- heksan; etil asetat dan etanol memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat namun ekstrak etil  asetat  dari  mikroalga Chlorella  vulgaris lebih  potensial  untuk  digunakan  sebagai alternatif sumber senyawa antioksidan.
Katakunci : antioksidan, Chlorella vulgaris, DPPH, fenol total.

## Abstract
Antioxidants  are  compounds  that  can  counteract  free  radicals,  several  researches  have shown  that  microalgae  have  antioxidant  activities  that  can  counteract  free  radicals.  This research  aims  to  examine  the  antioxidant  activity  and  determination  of  total  phenolic compound from Chlorella vulgaris microalgae. Extraction was carried out using multilevel maceration method using solvents n-hexane, ethyl acetate, and ethanol 96 %. Activity test by  reducing  DPPH  ( 2,2-diphenyl-1-picrylhldrazyl )  method  and  determination  of  total phenol levels using Folin ciolcateau reagent. The results of antioxidant activity test showed that Chlorella vulgaris microalgae antioxidant activity with IC 50 values for n-hexane, ethyl acetate, ethanol, and vitamin C as successive comparisons ratio of 18,896, 11,979; 20,437; and  7,895  µg/ml.  The  results  of  the  research  were  total  phenol  levels  of  n-hexane,  ethyl acetate  and  ethanol  extracts  respectively  1,388;  1,184;  1,184  mg/GAE  ( gallic  acid equivalence ) per 100 mg extarct. Ethyl acetate has very strong antioxidant acitivity with an IC 50 value of 11,979 µg/ml and the highest total phenol levels from n-hexane amounted of 1,388 mg/GAE ( gallic acid equivalence ) per 100 mg extract. The results showed that both n-hexane extract; ethyl acetate and ethanol have very strong antioxidant activity but ethyl
acetate  extract  from  microalgae  Chlorella  vulgaris  is  more  potential  to  be  used  as  an alternative source of antioxidant compounds.
Keywords : antioxidant, Chlorella vulgaris, DPPH, total phenolic compound.

## Pendahuluan
Mikroalga  adalah  tumbuhan  tingkat rendah  yang  tidak  memiliki  akar  batang dan  daun.  Mikroalga  adalah  produsen alami  dari  ekosistem  perairan  yang  dapat menghasilkan  metabolit  yang  sangat bermanfaat, sehingga keberadaanya sebagai  organisme  hidup  yang  berukuran mikroskopis  sudah  mulai  banyak  dikaji (Damianus,  2011).  Mikroalga  termasuk mikroorganisme fotosintetik yang memiliki kemampuan menggunakan sinar matahari  dan  karbon    dioksida  untuk reproduksi sel-sel tubuhnya dan menghasilkan biomassa serta menghasilkan  sekitar  50%  oksigen  yang ada  di  atmosfer  (Abdurrachman  et  al., 2013). Keragaman
mikroalga menjadikannya  sebagai  sumber  yang potensial  untuk  menghasilkan  berbagai produk  kimia  dengan  aplikasi  dalam industri  nutrisi,  kosmetik,  farmasi,  dan obat-obatan (Wang H et al., 2010).
Ekstrak dari mikroalga laut merupakan sumber protein, vitamin, dan mineral yang kaya.  Salah  satu  contoh  mikroalga  yaitu Chlorella  vulgaris.  Ekstrak  dari  Chlorella vulgaris  mengandung  berbagai  senyawa aktif biologis termasuk faktor pertumbuhan, zat antiinflamasi dan penyembuhan  luka,  antioksidan,  dan senyawa emolien (Kim S et al, 2008).
Diantara  berbagai  kelas  antioksidan yang terjadi secara alami, senyawa fenolik seperti  fenol  sederhana,  asam  fenolik (turunan  dari  asam  benzoat  dan  asam sinamat), kumarin, flavonoid, dan lainnya, yang telah diketahui (Wang H et al., 2010). Ekstrak Chlorella vulgaris strain terisolasi asli  yang  diperoleh  dari  ekstraksi  karbon dioksida superkritik menunjukkan aktivitas  antioksidan  yang  signifikan  dan menyajikan hambatan ganda untuk pertumbuhan  sel  kanker  paeru-paru  dan kemampuan  migrasi,  yang  merupakan
indeks metastasis kanker (Ibrahim, K et al., 2015).  Uji  aktivitas  antioksidan  dari Chlorella  vulgaris telah  beberapa  kali dilakukan,  namun  belum  diketahui  kadar total  senyawa  fenol  yang  terkandung didalamnya.  Senyawa  golongan  fenol diketahui  merupakan  golongan  senyawa yang  memberikan  aktivitas  antioksidan. Oleh  karena  itu,  pada  penelitian  ini dilakukan uji aktivitas antioksidan ekstrak mikroalga Chlorella vulgaris pada beberapa  jenis  pelarut  serta  penetapan kadar total fenol yang terkadung.

## Metode Penelitian

## Alat dan bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  antara  lain  seperangkat  alat  gelas laboratorium, botol kaca kapasitas 1 L, set pipa  kaca  bentuk  L,  selang  plastik,  pipet mikro ukuran ukuran 10-100 μL dan 100- 1.000  μL,  lampu  neon, haemacytometer, mikroskop , timer, neraca  analitik,  mortar dan  stemper,  autoklaf,  spektrofotometer UV-Vis  (Shimadzu  1800),  sentrifuga (Beckmann J2-HS) dan freeze dryer .
Mikroalga  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  kultur  murni Chlorella  vulgaris yang  diperoleh  dari Laboratorium  Biokimia,  Program  Studi Kimia,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam,  Institut  Teknologi Bandung.  Bahan-bahan  yang  digunakan antara  lain  medium  Walne,  vitamin  B kompleks,  aquadest,  klorin,  Na 2 S 2 O 3 ,  n- heksana,  etil  asetat,  etanol,  metanol, DPPH,  asam  galat,    Folin  ciocalteu, Na 2 CO 3 .

## Pengumpulan Biomassa
Kultivasi mikroalga Chlorella vulgaris dilakukan  pada  medium Walne dengan volume  total  kultur  900  mL,  inokulum kultur  mikroalga  10%  (v/v)  dari  volume total  kultur,  dan  medium  0,1%  (v/v).
salinitas  medium  air  laut  diatur  pada konsentrasi  25  ppt,  aerasi  24  jam,  suhu ruang  (±  25-27°  C),  fotoperiode  12:12 (gelap:terang)  dengan  intensitas  cahaya ±10,000  lux.  Kepadatan  sel  inokulum kultur  sebesar  1  x  10 6 sel/mL,  diukur dengan  menggunakan haemocytometer di bawah mikroskop.
Pemanenan  biomassa  basah  dilakukan pada  hari  ke-8  menggunakan  sentrifuga. Biomassa  mikroalga  dari  mediumnya menggunakan  setrifuga  Beckman  J2-HS dengan  kecepatan  4000  rpm  selama  20 menit  pada  suhu  0 o C  (Kurnia,  2019).
Biomassa yang diperoleh dicuci menggunakan aquades untuk
menghilangkan  garamnya.    Selanjutnya biomassa basah dikeringkan menggunakan Freeze  dry untuk  memperoleh  biomassa kering  yang  akan  digunakan  pada  proses ekstraksi.

## Ekstraksi dan Karakterisasi Ekstrak
Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi  bertingkat  menggunakan  pelarut n-heksana, etil asetat dan etanol. Sebanyak 20 gram biomassa kering ditambahkan 100 ml  n-heksana  lalu  disonikasi  selama  10 menit  kemudian  diaduk  menggunakan orbital  shaker  selama  24  jam,  maserat dipisahkan dari  endapan. Proses  ekstraksi dilakukan dengan 3x pengulangan. Ekstrak yang  terkumpul  kemudian  diuapkan sehingga diperoleh ekstrak kental (Kurnia, 2019).
Proses yang sama diulangi pada residu untuk  pelarut  etil  asetat dan etanol secara berturut-turut. Ekstrak kental dikarakterisasi menggunakan metode kromatografi lapis tipis (KLT) dengan fasa diam  silika  gel  F 254 dan  fasa  gerak  n- heksana - etil asetat (7:3 v/v); n-heksana - etil asetat (5:5 v/v) dan etil asetat – etanol - air (9:0,5:0,5 v/v). Hasil pemisahan pada KLT  kemudian  disemprot  menggunakan berbagai  larutan  penampak  bercak  yaitu H 2 SO 4 ,  FeCl 3 1%,  pereaksi  Dragendorf dan sitroborat.
Uji Aktivitas Antioksidan

## a. Pembuatan larutan DPPH
Larutan  induk  DPPH  dibuat  dengan menimbang sebanyak 5 mg dengan neraca analitik,  dilarutkan  dalam  metanol  p.a  50 ml sebagai larutan induk, kemudian dibuat seri konsentrasi 20, 30, 40, 50, 60, 80 dan 100 µg/ml. Larutan digunakan untuk kurva kalibrasi dengan cara pengukuran serapan pada panjang gelombang 515 nm menggunakan spektrofotometer sinar tampak.

## b. Pembuatan larutan ekstrak mikroalga C.vulgaris
Sebanyak  50  mg  dari  masing-masing ekstrak  kental  dilarutkan  dalam  50  mL metanol  p.a  sebagai  larutan  induk. Selanjutnya diencerkan sehingga diperoleh larutan  seri  konsentrasi  5,  10,  15,  30,  25, 30 dan 35 µg/ml.

## c. Pembuatan larutan vitamin C
Sebanyak 5 mg vitamin C standar (asam askorbat) dilarutkan ke dalam metanol p.a 50  ml  kemudian  dibuat  larutan  seri konsentrasi 2, 4, 6, 8, 10, 12 dan 14 µg/ml.
d. Uji kualitatif antioksidan
Uji kualitatif dilakukan dengan menggunakan  metode  KLT.  Ektrak  yang telah dipisahkan pada plat KLT menggunakan beberapa fase gerak selanjutnya disemprot menggunakan larutan  DPPH  0,2  %  dalam  metanol.
Bercak yang memiliki aktivitas antioksidan  memberikan  warna  kuning dengan latar belakang ungu.
e. Uji peredaman DPPH
Larutan seri ekstrak mikroalga ditambahkan  larutan  DPPH  60  µg/ml dengan  perbandingan  1:1  (v/v).  Hal  yang sama dilakukan pula pada larutan vitamin C sebagai standar pembanding. Campuran sampel  dan  DPPH  diinkubasi  pada  suhu ruang  selama  30  menit  dalam  kondisi gelap. Aktivitas peredaman DPPH dilakukan  dengan  mengukur  serapan campuran  menggunakan  spektrofotometri
sinar tampak pada panjang gelombang 515 nm.
Data absorbansinya yang diperoleh dari tiap  konsentrasi  masing-masing  ekstrak dihitung  nilai  persen  (%)  aktivitas antioksidannya (Arindah, 2010).
Uji aktivitas antioksidan
I % Hambatan = (Ao) – (AS)
(Ao) × 100%
Dimana :
I = Persen penurunan absorban DPPH Ao = Absorban larutan DPPH AS  =  Absorban  larutan  sampel  setelah ditambahkan DPPH

## Penetapan Kadar Fenol Total
Penetapan  kadar  fenol  total  dilakukan dengan  menggunakan  pereaksi  Folin Ciocalteu. Sebanyak 0,5 ml ekstrak sampel ditambahkan 5 ml Folin-Ciocalteu (sebelumnya  diencerkan  dengan  aquadest 1:10),  inkubasi  5  menit  kemudian ditambahkan  4  ml  Na 2 CO 3 1  M  dan diinkubasi selama 15 menit. Standar yang digunakan adalah asam galat. Ekstrak dan standar  diukur  pada  panjang  gelombang 765  nm.  Kadar  fenol  total  dihitung  dari kurva  kalibrasi  asam  galat.    Total  fenol dinyatakan  sebagai  mg gallic  acid equivalence per  100  mg  ekstrak  (mg GAE/100  mg  ekstrak)  (Ghasemi  et  al, 2009).

## Hasil dan Pembahasan
Kultivasi
dilakukan untuk mengumpulkan biomassa sebanyak- banyaknya.  Kondisi  kultivasi  yang  akan dilakukan  yaitu  pada  suhu  ruang  (±  25- 27°C),  fotoperiode  12:12  (gelap:terang) dengan  intensitas  cahaya  10,000  lux  dan aerasi selama 24 jam. Kondisi pertumbuhan  tersebut  merupakan  kondisi pertumbuhan  optimum  yang  digunakan untuk kultivasi Chlorella vulgaris
(Brataningtyas, 2011). Sebelum dikultivasi  kultur  dilakukan  peremajaan agar  kultur  yang  diperoleh  masih  dalam kondisi  yang  baik.  Waktu  panen  yang optimum  yaitu  pada  hari  ke-8  (Kurnia,
2019).  Sel  mikroalga Chlorella  vulgaris berbentuk  bulat,  hidup  soliter,  berwarna hijau  karena  terdapat  pigmen  yang dominan  yaitu  klorofil  seperti  pada Gambar 1.
Gambar 1 . Mikroalga Chlorella vulgaris dibawah mikroskop
Biomassa  basah  yang  diperoleh  dari kultivasi  selanjutnya  dikeringkan  dengan cara Freeze  Dry  u ntuk  menghilangkan kandungan  air  dalam  mikroalga  sehingga diperoleh  biomassa  kering.  Pengeringan juga  berfungsi  agar  adanya  air  tidak mengganggu proses ekstraksi serta sampel biomassa  mikroalga  dapat  bertahan  lama dan tidak ditumbuhi oleh jamur.
Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan metode maserasi bertingkat menggunakan pelarut dengan berbagai tingkat kepolaran (n-heksana;  etil  asetat;  etanol).  Maserasi merupakan  proses  ekstraksi  cara  dingin yang  dilakukan    dengan  cara    merendam serbuk  simplisia  dalam  cairan  penyari. Cairan  penyari  akan menembus dinding sel dan masuk rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif akan larut dan  karena  adanya  perbedaan  konsentrasi antara larutan dan zat aktif di dalam sel dan diluar  sel  maka  larutan  didesak  keluar (Lukman, 2016). Metode maserasi  dipilih karena  pada Chlorella  vulgaris terdapat senyawa  yang  mudah  teroksidasi  dan mudah  rusak  oleh  proses  pemanasan. Sedangkan  maserasi  dilakukan  secara bertingkat dengan beberapa pelarut bertujuan  agar  ekstrak  yang  diperoleh lebih banyak. Data hasil rendemen ekstrak dapat dilihat pada Tabel 1.

## Tabel 1. Rendemen ekstrak
Pelarut Bobot (gram) % ekstrak (b/b) N-heksana 1 5 Etil asetat 2 10 Etanol 2 10 Ekstrak  mikroalga  dengan  berbagai pelarut  dikarakterisasi  dengan  metode
KLT untuk mengetahui kandungan golongan  senyawa  pada  ekstrak  tersebut. Fasa  diam  yang  digunakan  adalah  silika gel  F 254 dan  fasa  gerak  n-heksana  –  etil asetat  (7:3  v/v);  n-heksana  –  etil  asetat (5:%  v/v)  dan  etil  asetat-etanol-air (9:0,5:0,5 v/v). Penggunaan tiga pengembang  dengan  tingkat  kepolaran yang berbeda bertujuan untuk melihat pola kromatogram senyawa dari ekstrak.
Bercak  hasil  pemisahan  dengan  KLT
disemprot menggunakan beberapa
pereaksi penampak bercak. Penyemprotan dengan  H 2 SO 4 pekat  digunakan  sebagai penampak bercak universal sehingga dapat melihat seluruh komponen senyawa dalam ekstrak. Penyemprotan dengan FeCl 3 10% akan menghasilkan warna biru kehitaman untuk  menunjukan  adanya  gugus  fenolik. Bercak kehitaman tersebut muncul karena adanya reaksi antara gugus hidroksil pada fenol  dengan  Fe. Sitroborat  digunakan untuk  melihat  adanya  golongan  senyawa flavonoid ditunjukkan dengan hasil positif yaitu  adanya  bercak  berwarna  kuning kehijauan saat dilihat di bawah sinar lampu UV 365 nm. Penampak bercak Dragendorff  digunakan  untuk  mendeteksi adanya  senyawa  alkaloid  ditandai  dengan bercak berwarna coklat kehitaman (Harbone,  1998).  Hasil  karakterisasi masing-masing  ekstrak  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
A B C Gambar  2. A .  Pola  Kromatogram  menggunakan  fase  gerak  n-heksan  -  etil  asetat  (7:3), B .  Pola  Kromatogram  menggunakan  fase  gerak  n-heksan  -  etil  asetat  (5:5), C .  Pola Kromatogram menggunakan fase gerak etil asetat - etanol - aquadest (9:0,5:0,5). (a) Visual; (b) Penampak bercak H 2 SO 4 ; (c) sinar UV  254 nm; (d) sinar UV  365 nm; (e) Penampak
(a) (b) (c) (d) (e) (f)            (g)             (h) 1   2  3 1   2  3 1  2  3 1  2  3 1  2  3 1  2   3 1   2  3 1  2  3 1   2  3 1  2  3 1  2  3
1  2  3 1  2  3 1   2  3 1  2  3 1  2  3
1   2  3 1   2  3 1   2  3 1   2  3
1   2  3 1   2  3 1   2  3 1   2  3
bercak  FeCl 3 1%;  (f)  Penampak  bercak  Dragendorf;  (g)  Penampak  bercak  Sitroborat  di bawah sinar UV  365 nm; (h) Penampak bercak DPPH 0,2% dalam metanol. Keterangan:  1   = fraksi n-heksana 2   = fraksi etil asetat 3   = fraksi etanol
= positif  fenol
= positif alkaloid
= positif flavonoid
= positif Antioksidan
Hasil  pemisahan  menggunakan  plat KLT  juga  dapat  digunakan  untuk  uji kualitatif  aktivitas  atioksidan  dengan peredaman  DPPH.  Penampak  bercak DPPH  0,2%  dalam  metanol  digunakan sebagai analisis kualitatif untuk menentukan  golongan  senyawa  yang diduga  aktif  antioksidan  dengan  ditandai bercak  warna  kuning  dengan  latar belakang  warna  ungu.  Terbentuknya bercak  warna  kuning  disebabkan  karena adanya senyawa aktif antioksidan didalam sampel  yang  dapat  mendonorkan  atom hidrogen  dalam  ekstrak  sehingga  dapat menyebabkan  molekul  DPPH  teroksidasi yang diikuti dengan menghilangnya warna ungu  dalam  larutan.  Hasil  uji  kualitatif antioksidan  dengan  KLT  menunjukan ketiga  ekstrak  memiliki  respon  positif terhadap penyemprotan DPPH 0,2% yang dapat dilihat pada Gambar 2.
Potensi antioksidan diuji secara kuantitatif dengan menggunakan spektrofotometri  sinar  tampak  terhadap ekstrak  menggunakan  metode  peredaman DPPH  sebagai  radikal  bebas.  Metode  ini dipilih  karena  prosedurnya  yang  cukup
mudah,  peka,  hanya  memerlukan  sedikit sampel dan tidak memerlukan waktu yang lama.  Prinsip  dari  metode  ini  adalah adanya  donasi  atom  (H + )  dari  substansi yang  diujikan  kepada  radikal  DPPH menjadi  senyawa  non  radikal  yang  akan ditujukan  dengan  adanya  perubahan warna. Penangkapan radikal bebas menyebabkan elektron menjadi berpasangan yang kemudian menyebabkan penghilangan  warna  yang  sebanding dengan  jumlah  elektron  yang  diambil (Sunarni et al., 2007).
Sebelum dilakukan pengukuran, sampel  yang  telah  ditambahkan  DPPH, diinkubasi  terlebih  dahulu  selama  30 menit. Pada saat inilah terjadi pendonoran proton  yang  berasal  dari  ekstrak  sampel yang  memiliki aktivitas  antioksidan sehingga mengakibatkan terjadinya perubahan  warna  dari  yang  semula  ungu menjadi  kuning  pucat  dan  kemudian diukur  pada  panjang  gelombang  serapan maksimum DPPH. Semakin pekat perubahan  warna  kuning  yang  terjadi semakin kuat pula aktivitas antioksidannya. Tabel 2. Aktivitas antioksidan ekstrak mikroalga Chlorella vulgaris Konsentrasi (µg/ml) % Inhibisi ekstrak n-heksana etil asetat etanol Vit C 5 39,629 44,444 44,444 33,167 10 42,469 51,111 46,172 34,161 15 44,938 52,716 46,419 40,124 20 50,617 53,950 50,246 50,559 25 55,185 54,814 51,111 58,633 30 60,740 58,271 54,074 62,732 35 62,839 59,876 56,296 73,167 IC 50 18,896 11,979 20,437 7,895
Berdasarkan hasil uji aktivitas antioksidan  sampel  ekstrak  mikroalga Chlorella  vulgaris menggunakan  metode DPPH menunjukan bahwa ekstrak Chlorella  vulgaris dengan  ketiga  pelarut yang  memiliki  kepolaran  berbeda  yaitu non polar, semi polar, dan polar memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Penetapan  kadar  fenol  total  bertujuan untuk  mengetahui  jumlah  fenol  yang terdapat  dalam Chlorella  vulgaris .  Uji kandungan fenol total dianalisis menggunakan  reagen  Folin  Ciolcateu, pereaksi  ini  merupakan  larutan  kompleks ion  polimerik  yang  dibentuk  dari  asam fosfomolibdat dan asam heteropolifosfotungstat yang dapat mengukur  semua  senyawa  fenol  dalam sampel  uji.  Folin  ciolcalteu  berwarna kuning  dan  akan  berubah  menjadi  warna biru.  Semakin  tua  intensitas  warna  biru menandakan  semakin  tinggi  kandungan total  fenol  dalam  ekstrak  (Sahidi  dan Nazck, 1995).
Fenolat  hanya  terdapat  pada  larutan basa,  sehingga  dilakukan  penambahan Na 2 CO 3 yang bertujuan untuk membentuk suasana  basa  agar  terjadi  reaksi  reduksi Folin  ciolcalteu  oleh  gugus  hidroksil  dari fenolik di dalam sampel (Nely, 2007).
Adapun  kurva  kalibrasi  standar  asam galat diukur pada panjang gelombang 765 nm  dengan diperoleh nilai  y = 0,0076x + 0,0649  dan  r²  =  0,9952  sesuai  dengan Gambar 3.
Gambar  3. Kurva  kalibrasi  standar  asam galat pada  765 nm.
Tabel 3. Kadar Fenol Total
Ekstrak Chlorella vulgaris Kadar Fenol Total (mg GAE/100 mg sampel) N-heksana 1,388 Etil asetat 1,184 Etanol 1,184
Dari  hasil  tabel  diatas  disimpulkan bahwa  yang  memiliki  persentase  kadar paling  tinggi  terdapat  pada  ekstrak  n- heksana  dengan  persentase  1,388  mg GAE/100 mg ekstrak. Hal ini menunjukan bahwa  kandungan  fenol  yang  terdapat pada  ekstrak  n-heksana  paling  banyak dibandingkan  ekstrak  etil  asetat  dan ekstrak etanol.

## Kesimpulan
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  dengan metode  peredaman  radikal  bebas  DPPH menunjukan  bahwa  ekstrak  mikroalga Chlorella  vulgaris memiliki  aktivitas antioksidan  dengan  nilai  IC 50 untuk  n- heksana,  etil  asetat,  etanol  dan  vitamin  C sebagai  standar  berturut-turut  sebesar 18,896,  11,979,  20,437  dan  7,895  µg/ml. Hasil  penetapan  kadar  fenol  total  ekstrak n-heksana, etil asetat, dan etanol berturut- turut sebesar 1,388, 1,184, 1,184 mg/GAE ( gallic  acid  equivalence )  per  100  mg ekstrak.  Ekstrak  etil  asetat  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  sangat  kuat dengan nilai IC 50 11,979 µg/ml dan kadar fenol  total  1,388  mg/GAE  ( gallic  acid equivalence )  per  100  mg  ekstrak.  Hasil penelitian menunjukan bahwa ekstrak etil asetat  dari  mikroalga Chlorella  vulgaris berpotensi  sebagai  alternatif  sumber antioksidan.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  penulis  ucapkan kepada
Lembaga Penelitian dan Pengabdian  pada  Masyarakat  (LPPM) Universitas Bhakti Kencana atas pendanaan  penelitian  ini  melalui  Hibah Riset Dasar (Nomor: 001/01.LPPM/UBK/III/2020).
y = 0,0076x + 0,0649 r² = 0,9952 0 0,2 0,4 0,6 0,8 0 20 40 60 80 A b so rb an 7 6 5 n m Konsentrasi (µg/ml) Asam Galat

## Daftar Pustaka
Abdurrachman,  O.,  Mutiara,  M.,  & Buchori,  L.,  2013,  Pengikatan Karbon Dioksida Dengan Mikroalga ( Chlorella vulgaris, Chlamydomonas SP., Spirullina sp. ) Dalam  Upaya  Untuk  Meningkatkan Kemurnian Biogas, Jurnal Teknologi Kimia  dan Industri , 2(4), 212-216.
Brataningtyas,  D.  S.,  2011, Tesis ,  Institut
Teknologi Bandung, Bandung. Damianus,  M,  2011,  Aktivitas  Ekstrak Mikroalga sebagai Inhibitor Helikase Virus Japanese Enchephalitis, Skripsi Tidak Diterbitkan, Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Ghasemi  K,  Ghasemi  Y,  Ebrahimzadeh MA,  2009,  Antioxidant  activity, phenol and flavonoid contents of 13 citrus species peels and tissues, Pak J Pharm Sci , 22(3), 277‐281.
Harborne,  J.  B.,  1998,  Phytochemical Methods  A  Guide  to  Modern Techniques  of  Plant  Analysis, Springer Science & Business Media , London, 67.
Ibrahim, K., Ramli, R., Abd Rashid, A. H.,
& Mohd Yusof, Y. A., 2015,  Antimicrobial  property  of water  and  ethanol  extract  Chlorella vulgaris:  A  value-added  advantage for a new wound dressing material, International Medical Journal , 22 (5), 399-401.
Kim  S, et  al ,  2008,  Prospective  of  the
Cosmeceuticals Derived from
Marine Organisms, Biotechnol
Bioproc Engin , 13, 511-523.
Kurnia,  D.,  Prisdayanti,  N.,  Marliani,  L.,
Idar,  I.  and  Nurochman,  Z.,  2019,
Antiinflammatory  Activity  from Marine Microalgae Chlorella vulgaris  Extract  Used  Human  Red Blood Cells Stability Method (HRBC), Jurnal  Kartika  Kimia ,
2(2), 57-62.
Lukman, A., 2016, Uji Aktivitas
Antibakteri  Ekstrak  Daun  Kemangi (Ocimum  Sanctum  L)  Terhadap Bakteri  Patogen  Dengan  Metode KLT Bioautografi, Doctoral Dissertation , Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
Nely,  Fani,  2007,  Aktivitas  Antioksidan Rempah  Pasar  dan  Bubuk  Rempah Pabrik, Skripsi ,  Institut  Pertanian Bogor.
Shahidi,  F.  dan  Nazck,  M.,  2004, Extraction and Analysis of Phenolics in Food  Review, Journal  of Chromatography A , 1054, 95-111.
Sunarni,  2007,  Flavonoid  antioksidan penangkap  radikal  dari  daun  kepel ( Stelechocarpus  burahol  (Bl.)  Hook f. & Th. ), Majalah Farmasi Indonesia , 18(3), 111-116.
Wang H, et al ., 2010, Identification of anti- lung  cancer  extract  from  Chlorella vulgaris C-C by antioxidant property using  supercritical  carbon  dioxide extraction, Proc Biochem , 45, 1865- 1872.