Laman: https://e-journal.upr.ac.id/index.php/JHT
DOI: https://doi.org/10.36873/jht.v18i1.7867 e-ISSN: 2656–9736 p-ISSN: 1693–7643

## Konservasi In Vitro Jenis Tumbuhan Gambut Tumih (Combretocarpus rotundatus (Miq.)
Danser)
(In Vitro Conservation of Peat Plant Types Tumih (Combretocarpus rotundatus (Miq.) Danser)
Istomo 1 *, Edhi Sandra 2 , Vianti 3 , Mufti Abdillah 4
1 Dosen Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan, Institut Pertanian Bogor, Jalan Ulin, Kampus IPB Darmaga
2 Dosen Departemen Konservasi Sumberdaya Hutan dan Ekowisata, Fakultas Kehutanan dan Lingkungan, Institut Pertanian Bogor, Jalan Ulin, Kampus IPB Darmaga
3 Mahasiswa Departemen Konservasi Sumberdaya Hutan dan Ekowisata, Fakultas Kehutanan dan Lingkungan, Institut Pertanian Bogor, Jalan Ulin, Kampus IPB Darmaga
4 Mahasiswa Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan, Institut Pertanian Bogor, Jalan Ulin, Kampus IPB Darmaga * Corresponding Author: istomo19@gmail.com

## Sejarah Artikel

## ABSTRACT
Diterima  : 03 Desember 2022 Direvisi : 10 Februari 2023 Disetujui  : 14 Februari 2023 Tumih (Combretocarpus rotundatus (Miq.) Danser) is one of the local species recommended for disturbed peatland rehabilitation activities.  This  species  can  be  classified  as  a  fast-growing  and tolerant type to dry and open conditions. The aim of this study is to  identify  the  success  of  explant  preparation  techniques  and tumih  explant  sterilization  seen  from  the  survival  rate, contamination  level,  and  browning  level.  The  research  was conducted  at  the  Environmental  Biotechnology  Laboratory, Environmental Research Center (PPLH), IPB. The plant material used  was  tumih  shoots  that  were  sterilized  using  detergent, HgCl2, Clorox, and rinsed with sterile water. The explants were initiated on MS media with the addition of BAP, namely 0 ml/l; 0.5 ml/l; 1 ml/l; and 1.5 ml/l, and TDZ, namely 0 ml/l; 0.05 ml/l; 0.1  ml/l;  and  0.5  ml/l.  This  study  used  16  treatments  with  7 replications.  The  results  showed  that  the  average  survival  rate percentage  of  tumih  explants  reached  22.32%,  fungal contamination was 57.14%, bacterial contamination was 1.79%, and  the  average  browning  percentage  in  the  explants  was 18.75%.  The  preliminary  study  that  has  been  carried  out  is categorized  as  successful,  with  25  explants  still  maintaining green leaves and stems.
Kata Kunci (Keywords): Combretocarpus rotundatus, in vitro conservation, sterilization, rehabilitation
© 2023 Penulis. Di Publikasikan oleh Jurusan Kehutanan Fakultas Pertanian Universitas Palangka Raya Artikel ini memiliki akses terbuka di bawah lisensi:
https://creativecommons.org/licenses/by- nc/4.0/

## 1. Pendahuluan

## 1.1. Latar Belakang
Lahan  gambut  tropis  dunia  meliputi areal seluas 40 juta hektar dan 50% diantaranya terdapat di Indonesia (Maltby & Immirizi 1993 dalam Murdiyarso et al. 2004) Tingginya laju kerusakan lahan gambut di Indonesia (150.000 ha  per  tahun)  menyebabkan  berkurang  atau hilangnya  fungsi  ekologis  maupun  sosial ekonomi  lahan  gambut.  Kerusakan  lahan gambut  tersebut  disebabkan  oleh  kegiatan penebangan,  kebakaran,  pertambangan  dan
konversi  lahan  sehingga  perlu  adanya  usaha rehabilitasi yang sesuai (Sugandhy 1997 dalam Istomo 2002). Menurut Wibisono et al . (2005), dalam  rangka  upaya  rehabilitasi  hutan  rawa gambut,  jenis  tanaman  yang  dikembangkan sebaiknya  merupakan  jenis  lokal  dengan pertimbangan  bahwa  jenis  lokal  tersebut memenuhi aspek ekologis yang sesuai dengan kondisi lokasi penanaman.
Tumih ( Combretocarpus  rotundatus (Miq.) Danser) merupakan jenis tanaman lokal yang  tumbuh  sangat  baik  dan  cocok  untuk dikembangkan  sebagai  tanaman  prioritas
dalam  upaya  rehabilitasi  hutan  rawa  gambut (Istomo et  al. 2007).  Salah  satu  upaya memperbanyak  jenis  ini  yaitu  melalui  teknik kultur jaringan. Pengembangan kultur jaringan tanaman  berkayu  masih  menemui  banyak kesulitan  disebabkan  sterilisasi  eksplan  yang sulit karena tanaman induk hidup di lapangan, memiliki kecepatan multiplikasi atau replikasi sangat  rendah  dan  keluarnya  senyawa  fenolik sehingga  eksplan  menjadi  berwarna  cokelat dan akhirnya tidak dapat tumbuh (Hendaryono &  Wijayani  1994).  Teknik  kultur  jaringan tumih  yang  dilakukan  saat  ini  merupakan penelitian  awal.  Oleh  karena  itu,  penelitian kultur  jaringan  tumih  yang  dilakukan  dengan mengkaji  perbanyakan  tumih  melalui  teknik kultur jaringan menjadi hal yang penting.

## 1.2. Tujuan Penelitian
Penelitian
ini bertujuan mengidentifikasi  keberhasilan  dari  Teknik penyiapan  eksplan  dan  sterilisasi  eksplan Tumih  dilihat  dari  peluang  hidup,  tingkat kontaminasi dan tingkat pencokelatan (browning) .

## 2. Metode Penelitian

## 2.1. Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Bioteknologi  Lingkungan  Pusat  Penelitian Lingkungan  Hidup,  Institut  Pertanian  Bogor (PPLH IPB). Penelitian ini berlangsung mulai dari  bulan  Maret  2011  sampai  bulan  Agustus 2011.

## 2.2. Objek, Alat dan Bahan Penelitian
Alat-alat yang digunakan dalam persiapan  bibit  yaitu polybag ,  kertas  koran, kardus,  gunting  stek,  paranet  dan  plastik. Dalam  pembuatan  media,  alat-alat  yang digunakan  yaitu  gelas  piala,  gelas  ukur  biasa, pipet  volumetrik,  neraca  analitik,  pH  meter, panci,  pengaduk,  autoklaf,  karet  gelang  dan plastik.  Sedangkan  alat-alat  yang  digunakan dalam kegiatan sterilisasi dan penanaman yaitu spatula,  cawan  petri,  skalpel,  pisau,  pinset, lampu  bunsen, laminar  air  flow  cabinet , stopwatch , aluminium  foil ,  plastik wrap dan
handsprayer ; serta alat tulis dan kamera digital untuk kegiatan pengamatan.
Bahan  yang  digunakan  dalam  persiapan bibit  yaitu  kompos,  pasir,  sekam  padi,  serbuk gergaji dan cocopeat . Dalam kegiatan sterilisasi  dan  penanaman,  bahan-bahan  yang digunakan yaitu fungisida, bakterisida, hormon tunas, Hyponex hijau,  alkohol  70%,  deterjen, air  steril,  HgCl 2 , Clorox ,  antiseptik  (betadine) dan  eksplan  tumih  bagian  pucuk,  sedangkan dalam  pembuatan  media,  bahan-bahan  yang diperlukan  yaitu  larutan  stok  media  MS ( Murashige dan Skoog ), agar-agar, gula pasir, air steril, antibiotik ppm, BAP ( 6-benzyl amino purine ) dan TDZ ( Thiadiazuron ).
2.3. Prosedur Penelitian
2.3.1. Persiapan Bibit Tumih Anakan tumih diambil dengan menggunakan  metode  puteran  dan  cabutan. Lokasi  pengambilan  anakan  tumih  yaitu Kelurahan  Kereng  Bangkirai,  Kecamatan Sabangau,  Propinsi  Kalimantan  Tengah. Kriteria  pengambilan  anakan  tumih  yaitu anakan yang memiliki tinggi 10 cm hingga 50 cm,  pucuk  yang  masih  menguncup,  anakan yang  belum  memiliki  kayu  dan  memiliki pertumbuhan  yang  baik.  Anakan  tumih kemudian  dipindahkan  ke  media  tanam  yang telah  disediakan  sebelumnya  di  Rumah  Kaca Ekologi  Hutan,  Fakultas  Kehutanan  IPB. Anakan yang telah dipindahkan diberi sungkup UV  dan  paranet  65%  yang  bertujuan  untuk menjaga  suhu,  kelembapan  dan  intensitas cahaya.

## 2.3.2. Karantina Tanaman
Karantina dilakukan untuk mensterilisasi tanaman  dari  kontaminan  berupa  jamur  atau bakteri yang berasal dari alam. Proses karantina yang  dilakukan  yaitu  dengan  menyemprot hormon tunas 10 ml/l atau Hyponex hijau 2 g/l pada  pagi  hari.  Pada  sore  hari  disemprot fungisida  (Antracol)  1  g/l  +  bakterisida (Agrept) 1 g/l.
2.3.3. Sterilisasi
Proses sterilisasi  dalam  kegiatan  kultur jaringan terdiri dari sterilisasi lingkungan kerja, sterilisasi  alat  dan  medium  kultur,  serta sterilisasi eksplan.   Sterilisasi lingkungan kerja untuk  kultur in  vitro terdiri  dari  lingkungan umum (ruang transfer secara keseluruhan) dan lingkungan  khusus  (lingkungan  di  dalam laminar  air  flow  cabinet ).    Proses  sterilisasi eksplan  di  luar  LAF  diawali  dengan pengambilan  anakan  tumih  yang  telah dikarantina  (pucuk  yang  masih  menguncup) dengan  panjang  1-2  cm.  selanjutnya  dicuci bersih  dan  diusap  dengan  kapas  basah  untuk menghilangkan    kotoran  yang  menempel. Pencucian eksplan dilanjutkan dengan deterjen sebanyak  sepertiga  sendok  spatula  selama  10 menit dan kembali dicuci bersih serta di akhiri dengan  pembilasan  menggunakan  air  steril sebanyak dua kali masing–masing 5 menit.
Proses sterilisasi lanjut di dalam laminar air  flow  cabinet yaitu  pencucian  eksplan menggunakan  air  steril  sebanyak  satu  kali selama 5 menit. Setelah itu, eksplan direndam menggunakan larutan HgCl 2 (0,1 gram/100 ml) 20% selama 7 menit. Selanjutnya, perendaman eksplan  dilakukan  menggunakan Clorox 5% selama 3 menit, kemudian perendaman eksplan dengan larutan betadine 10 tetes/100 ml selama 5 menit. Eksplan yang telah direndam dengan betadine  dibilas  menggunakan  air  steril sebanyak  tiga  kali  masing-masing  selama  5 menit

## 2.3.4. Penanaman
Peletakan eksplan dilakukan dengan dua cara  yaitu  cawan  petri  yang  berukuran  kecil untuk  mengurangi  air  yang  menempel  pada eksplan sedangkan cawan petri berukuran besar bertujuan  untuk  memotong  eksplan  yang berukuran  1-2  cm.  Pemotongan  eksplan dilakukan  pada  bagian  eksplan  yang  luka  dan terkena  bahan  sterilan.  Potongan  eksplan kemudian  ditanam  pada  media  kultur.  Botol kultur yang telah ditanam eksplan ditutup rapat menggunakan aluminium  foil dan  plastik kemudian  diikat  dengan  karet  dan  dilapisi dengan  plastik wrap .  Setelah  tahap  inisiasi,
botol  kultur  yang  telah  berisi  eksplan diletakkan  di  ruang  kultur  yang  suhu  dan cahaya telah diatur.

## 2.3.5. Pengamatan
Pengamatan  hasil  inisiasi  dilakukan selama  4  minggu  setelah  tanam  (MST),  tiap satu  minggu  sekali  dengan  parameter  yang diamatai  antara  lain:  presentase  rata-rata eksplan  yang  hidup,  eksplan  yang  mengalami kontaminasi,  dan  eksplan  yang  mengalami pencokelatan (browning).
Tabel  1.  Interaksi  Faktor  Zat  Pengatur  Tumbuh  dan Konsentrasinya ZPT dan Konsentrasinya B0 B1 B2 B3 A0 A0B0  A0B1  A0B2 A0B3 A1 A1B0  A1B1  A1B2 A1B3 A2 A2B0  A2B1  A2B2 A2B3 A3 A3B0  A3B1  A3B2 A3B3 Keterangan: A0 = BAP konsentrasi 0 ml/l A1 = BAP konsentrasi 0,5 ml/l A2 = BAP konsentrasi 1 ml/l
A3 = BAP konsentrasi 1,5 ml/l B0 = TDZ konsentrasi 0 ml/l B1 = TDZ konsentrasi 0,05 ml/l B2 = TDZ konsentrasi 0,1 ml/l B3 = TDZ konsentrasi 0,5 ml/l

## 2.4. Analisis Data
Perhitungan meliputi persentase peluang hidup, kontaminasi oleh jamur dan bakteri serta pencokelatan  pada  eksplan  menggunakan rumus sebagai berikut:
% PH = ∑ 𝐸𝑃𝐻 𝑁 × 100%
% K   = ∑ 𝐸𝐾 𝑁 × 100%
% P    = ∑ 𝐸𝑃 𝑁 × 100
Keterangan : N = Jumlah total eksplan tiap perlakuan PH = Peluang Hidup K = Kontaminasi
∑EPH = Eksplan memiliki peluang hidup ∑EK  = Jumlah eksplan terkontaminasi ∑EP  = Jumlah eksplan pencoklatan

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Peluang Hidup Eksplan Tumih
Jumlah  eksplan  tumih  yang  ditanam sebanyak 112 eksplan yang telah diinisiasi pada media  kultur  dan  diamati  selama  4  minggu setelah  tanam  (MST).  Hasil  pengamatan eksplan  tumih  dapat  dilihat  lebih  jelas  pada Tabel  2.  jumlah  eksplan  yang  masih  bertahan hidup berjumlah 25 eksplan tumih dengan ciri- ciri  daun  dan  batang  yang  masih  berwarna hijau,  sedangkan  21  eksplan  mengalami pencokelatan dengan  ciri-ciri  eksplan  tumih berwarna  cokelat  dan  66  eksplan  mengalami kontaminasi akibat serangan jamur dan bakteri.
Jumlah  eksplan  yang  terkontaminasi lebih tinggi dibandingkan eksplan yang masih bertahan  hidup,  yang  disebabkan  pada  saat inisiasi, eksplan yang ditanam masih membawa kontaminan  berupa  jamur  dan  bakteri. Kontaminasi juga dapat dipengaruhi oleh bibit tumih  yang  diambil  berasal  dari  alam  dan kondisi  tempat  tumbuh  yang  berair.  Hal  ini sesuai  dengan  pendapat  Semangun  (1989), yang  menyatakan  bahwa  pengambilan  bahan tanaman pada musim hujan terjadi peningkatan kelembaban  tanah  dan  kelebihan  air  yang cenderung  mendukung  pertumbuhan  jamur
maupun  bakteri  secara  cepat  pada  lingkungan tumbuh tempat pengambilan tanaman.
Data  dari  Tabel  3  menunjukkan  bahwa persentase  peluang  hidup  yang  tinggi  pada perlakuan  A3B1.  Hal  ini  dipengaruhi  oleh penggunaan  TDZ  pada  konsentrasi  yang rendah  (0,05  ml/l)  dengan  BAP  pada konsentrasi yang tinggi (1,5 ml/l). Konsentrasi yang optimal pada media TDZ dan BAP dapat mempengaruhi  peluang  hidup  eksplan  tumih. Pada media TDZ dan BAP juga memiliki kadar asam  yang  sesuai  yaitu  pH  5-6,  hal  ini  juga dipengaruhi  karena  tumih  berasal  dari  tanah yang memiliki kadar pH rendah. Hal ini sesuai dengan  pendapat  Hendaryono  dan  Wijayani (1994) bahwa sel-sel tanaman yang dikembangkan  dengan  teknik  kultur    jaringan memiliki toleransi pH optimal yaitu antara 5-6.
Kondisi eksplan tumih yang masih tetap bertahan  dan  memiliki  peluang  hidup  selama empat  minggu  ditandai  dengan  pucuk  masih berwarna  hijau,  mata  tunas  mengalami pertumbuhan  serta  kondisi  eksplan  dan  media yang  tidak  terserang  oleh  jamur  dan  bakteri. Hal ini dapat dilihat pada Gambar 1.

## Tabel 2 Data eksplan tumih yang memiliki peluang hidup hingga 4 MST
Ulangan Perlakuan A0B 0 A0 B1 A0 B2 A0 B3 A1 B0 A1 B1 A1 B2 A1 B3 A2 B0 A2 B1 A2 B2 A2 B3 A3 B0 A3 B1 A3 B2 A3 B3 1 - br br - br - br - br br - - - br - - 2 - - - - - - - - v br - - - v br - 3 v - - v - - - - - - - - - br v - 4 v - - - - - br - - - - br - v - - 5 - br br v - br v br v - - - br v - br 6 v v - v v v v v - -
v br - - v - 7 v - - br v - - - - v - br v v - - Total 4 1 - 3 2 1 2 1 2 1 1 - 1 4 2 -
Keterangan : v = bertahan (25 eksplan) br = browning (21 eksplan)
Tabel 3 Presentase peluang hidup eksplan tumih Perlakuan Rata-rata A0 B0 A0 B1 A0 B2 A0 B3 A1 B0 A1 B1 A1 B2 A1 B3 A2 B0 A2 B1 A2 B2 A2 B3 A3 B0 A3 B1 A3 B2 A3 B3 % peluang hidup 57,1 4 14,2 9 - 42,8 6 28,5 7 14,2 9 28,5 7 14,2 9 28,5 7 14,2 9 14,2 9 - 14,2 9 57,1 4 28,5 7 - 22,32

## Gambar 1 kondisi eksplan tumih yang bertahan

## 3.2. Persentase Kontaminasi Eksplan
Persentase kontaminasi rata-rata eksplan setelah  pengamatan  selama  4  MST  mencapai 58,93%  diantaranya    kontaminasi  oleh  jamur sebesar  57,14%  dan  kontaminasi  oleh  bakteri sebesar  1,79%.  Hasil  ini  dapat  dilihat  lebih jelas  pada  Tabel  4.  Data  dari  Tabel  4 menunjukkan  bahwa  tingkat  kontaminasi eksplan paling besar terjadi pada minggu kedua setelah inisiasi. Hal ini disebabkan karena pada minggu  kedua  pertumbuhan  jamur  yang terbawa  oleh  eksplan  memasuki  tahapan puncak dalam proses pertumbuhannya. Hal ini sesuai dengan pendapat Gunawan (2007), yang menyatakan bahwa kontaminasi jamur mencapai  puncaknya  pada  11  hari  setelah inisiasi  sebesar  80%.  Menurut  Darmono (2003),  mikroorganisme  yang  terdapat  dalam ruang  antar  sel  membutuhkan  waktu  untuk keluar  dari  dalam  ruang  antar  sel.  Setelah keluar,  mikroorganisme  akan  menginfeksi semua bagian eksplan.
Tabel  4.  Presentase  kontaminasi  eksplan  tumih  selama 4MST
No, Jenis Media Total Kontaminasi (Eksplan)
% Kontaminasi M1 M2 M3 M4 1 A0B0 1 2 42,86 2 A0B1 1 3 57,14 3 A0B2 4 1 71,43 4 A0B3 2 1 42,86 5 A1B0 3 1 57,14 6 A1B1 1 4 71,43 7 A1B2 3 42,86 8 A1B3 4 1 *) 71,43 9 A2B0 4 57,14 10 A2B1 2 2 57,14 11 A2B2 6 85,71 12 A2B3 4 57,14 13 A3B0 3 1 1 71,43 14 A3B1 1 14,29 15 A3B2 2 1 1 57,14 16 A3B3 4 1 1 *) 85,71 Rata-rata 58,93
Kontaminasi oleh jamur dan bakteri juga dipengaruhi  oleh  masuknya  spora  jamur  dan bakteri ke dalam botol kultur pada saat inisiasi serta  kondisi  eksplan  yang  kurang  steril. Tingkat  kontaminasi  yang  tinggi  disebabkan oleh  jamur  yaitu  sebesar  57,14%.  Sementara itu,  kontaminasi  oleh  bakteri  tidak  terlalu banyak yaitu 1,79%. Hal ini dikarenakan bibit yang  diambil  berasal  dari  lingkungan  yang tergenang  dan  kondisi  pengambilan  pada  saat musim  hujan.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Semangun (1989) menyatakan bahwa pengambilan  bahan  tanaman  yang  dilakukan pada musim hujan memiliki tingkat kontaminasi  yang  lebih  tinggi  dibandingkan pada musim kemarau.
Kontaminasi  oleh  jamur  ditunjukkan dengan munculnya benang-benang putih halus (miselium)  yang  mengumpul  pada  bagian tanaman  dan  media  tanam.  Benang-benang putih halus  ini awalnya  muncul pada eksplan, kemudian terus berkembang menutupi seluruh bagian eksplan dan media hingga menyebabkan  kematian  eksplan  (Gambar  2). Kontaminasi  oleh  bakteri  ditandai  dengan keluarnya  cairan  berwarna  putih  keruh  dari eksplan (Gambar 3).
Gambar  2    Kondisi  eksplan  tumih yang  terkontaminasi jamur.
Gambar  3    Kondisi  eksplan  tumih yang  terkontaminasi bakteri.

## 3.3. Persentase Pencokelatan Eksplan Tumih
Persentase  pencokelatan  rata-rata  pada eksplan  tumih setelah  pengamatan  selama  4 MST  mencapai  18,75%  seperti  tertera  pada Tabel  8.  Pencokelatan  pada  eksplan  tumih mulai  terlihat  pada  minggu  kedua  setelah inisiasi  yang  terdapat  pada  perlakuan  A2B3, kemudian  setelah  minggu  ketiga  dan  minggu keempat  pencokelatan  terjadi  pada  hampir seluruh perlakuan.
Tabel  8  menunjukkan  perlakuan  A2B3 yaitu  penambahan  BAP  1  ml/l  dan  TDZ  0,5 ml/l,  persentase  rata-rata  pencokelatan  pada eksplan  tumih paling  tinggi  (42,86%). Sedangkan  pada  perlakuan  A0B0  (tanpa penambahan  zat  pengatur  tumbuh)  tidak mengalami  pencokelatan.  Hal  ini  dipengaruhi oleh  konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  yang diberikan.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Mayerni  (2010),  bahwa  peran  zat  pengatur tumbuh eksogen menentukan terjadinya pencokelatan  eksplan,  sehingga  zat  pengatur tumbuh  yang  diberikan  harus  seimbang  dan tepat untuk memperkecil persentase pencokelatan.
Tabel 5. Presentase pencokelatan eksplan tumih selama 4MST)
No. Jenis Media Total Pencokelatan (Eksplan) %
Browning M1 M2 M3 M4
1 A0B0
0,00 2 A0B1 1 1 28,57 3 A0B2 2 28,57 4 A0B3 1 14,29 5 A1B0 1 14,29 6 A1B1 1 14,29 7 A1B2 2 28,57 8 A1B3 1 14,29 9 A2B0 1 14,29 10 A2B1 1 1 28,57 11 A2B2 0,00 12 A2B3 2 1 42,86 13 A3B0 1 14,29 14 A3B1 1 1 28,57 15 A3B2 1 14,29 16 A3B3 1 14,29 Rata-rata 18,75
Pencokelatan  ( browning )  muncul  pada bagian  yang  mengalami  pelukaan  akibat pemotongan. Pencokelatan pada eksplan tumih dapat dilihat lebih jelas pada Gambar 4.
Gambar 4  Kondisi pencokelatan pada eksplan tumih.
Eksplan  yang  mengalami  pencokelatan dipengaruhi  oleh  adanya  senyawa  fenol  pada tumih yang dikeluarkan pada saat bagian pucuk tumih mengalami pelukaan akibat pemotongan. Hal ini sesuai dengan pendapat Sandra (2003) pencokelatan terjadi karena eksplan mengeluarkan  senyawa  fenol  yang  kemudian teroksidasi  sehingga  menghasilkan  senyawa berwarna cokelat yang disebut quinon. Bagian pucuk  tumih  mengalami  pencokelatan  yang relatif  cepat  setelah  dipotong  dari  tanaman induk dan saat pemotongan dalam cawan petri. Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat  Santoso  dan Nursandi  (2003),  pencokelatan  pada  kultur jaringan  terdiri  dari  pencokelatan  secara mekanik  yang  terjadi  karena  proses  pelukaan. Pencokelatan  karena  pelukaan  banyak  terjadi pada kultur tanaman yang banyak mengandung senyawa hidroksiphenol dan tanin.
Jenis tumih dari famili Anisophylleaceae mengandung  senyawa  fenolik  yaitu  tanin (Wiart  2006).  Hal  ini  memungkinkan  terjadi proses pencokelatan pada jenis ini baik secara enzimatis  maupun  secara  mekanis  saat pelukaan  (pemotongan  eksplan  dari  tanaman induk  dan  pemotongan  saat  di  cawan  petri). Kondisi pencokelatan pada eksplan tumih akan menyebabkan  kematian  eksplan.  Hal  ini dikarenakan  eksplan  tidak  dapat  menyerap nutrisi  yang  tersedia  pada  media  secara maksimal  sehingga  secara  perlahan-lahan eksplan akan mengalami kematian. Sukmadjaja dan  Mariska  (2003)  mengemukakan  oksidasi senyawa  fenolik  dapat  menghambat  dan bersifat toksik bagi pertumbuhan eksplan, serta mengakibatkan kematian eksplan.
Upaya  yang  dapat  dilakukan  untuk mengurangi  resiko  pencokelatan pada  eksplan tumih  yaitu  dengan  menghilangkan  senyawa fenol  pada  eksplan  tumih  yang  dilakukan dengan  cara  membilas  eksplan  pada  air mengalir.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Hendaryono  dan  Wijayani  (1994)  bahwa pembilasan eksplan secara terus-menerus pada air yang mengalir dapat mengurangi pencokelatan  pada  eksplan.  Pada  percobaan eksplan  tumih  cara  ini  belum  memberikan pengaruh  yang  nyata  untuk  mengurangi pencokelatan.
Eksplan  tumih  mengalami  pencokelatan yang relatif cepat pada tahap inisiasi, terutama pada bagian yang mengalami pelukaan setelah dipotong  di  cawan  petri.  Oleh  karena  itu, eksplan  yang  ada  sebaiknya  tidak  dipotong secara sekaligus melainkan dibagi menjadi dua bagian pemotongan. Hal ini dapat mengurangi pencokelatan  pada  eksplan  tumih  yang  akan ditanam ke media kultur.
Penelitian  pendahuluan  yang  telah dilakukan dikategorikan berhasil dengan masih bertahannya  daun  dan  batang  yang  berwarna hijau sebanyak 25 eksplan. Untuk mengurangi kontaminan  yang  terdapat  pada  bibit  yang digunakan,  perlu  dilakukan  karantina  yang lebih  intensif  dalam  rumah  kaca  yaitu  dengan memberikan  fungisida  dan  bakterisida  dan eksplan  yang  masih  memiliki  peluang  hidup sebaiknya  dilakukan  subkultur.  Hal  ini  dapat mengurangi  tingkat  kontaminasi  jamur  dan bakteri yang terbawa oleh eksplan

## 4. Kesimpulan dan Saran

## 4.1. Kesimpulan
Bagian  dari  anakan  yang  diambil  untuk dikulturkan dalam penelitian ini adalah bagian pucuk.  Ini  disebabkan  jaringan  muda  pada bagian  pucuk  yang  mudah  tumbuh.  Eksplan tumih yang masih bertahan hidup berjumlah 25 eksplan yang memiliki ciri-ciri daun dan batang yang  masih  berwarna  hijau.  Sedangkan  21 eksplan mengalami pencokelatan yang memiliki  ciri-ciri  eksplan  tumih  berwarna cokelat dan 66 eksplan mengalami kontaminasi akibat  serangan  jamur  dan  bakteri.  Persentase
rata-rata  peluang  hidup  pada  eksplan  tumih mencapai  22,32%,  kontaminasi  oleh  jamur sebesar 57,14% dan oleh bakteri sebesar 1,79% serta  persentase  rata-rata  pencokelatan  pada eksplan  yaitu  sebesar  18,75%.  Penelitian pendahuluan yang telah dilakukan dikategorikan berhasil dengan masih bertahannya  daun  dan  batang  yang  berwarna hijau  sebanyak  25  eksplan.  Sementara  itu, untuk  mengurangi  kontaminan  yang  terdapat pada bibit yang digunakan, dilakukan karantina yang  lebih  intensif  dalam  rumah  kaca  yaitu dengan memberikan fungisida dan bakterisida. Hal  ini dapat  mengurangi  tingkat  kontaminasi jamur dan bakteri yang terbawa oleh eksplan.

## 4.2. Saran
Perlu  adanya  upaya  subkultur  untuk meningkatkan  persentase  keberhasilan  kultur jaringan  pada  tumih.  Dalam  mengatasi pencokelatan, perlu diadakan penelitian lanjutan  dengan  penambahan  vitamin  C  pada media.  Dalam  memperkaya  penelitian  kultur jaringan  tumih,  perlu  dilakukan  penelitian lanjutan yang mengkaji pertumbuhan, multiplikasi, perakaran serta aklimatisasi hasil kultur jaringan tumih.

## Daftar Pustaka
Darmono  DW.  2003. Menghasilkan  Anggrek Silangan . Jakarta : Penebar Swadaya.
Gunawan I. 2007. Perlakuan Sterilisasi Eksplan Anggrek  Kuping  Gajah  ( Bulbophyllum beccarii Rehb.f)  dalam  Kultur In  Vitro
[skripsi]. Bogor : Departemen
Konservasi  Sumberdaya  Hutan  dan Ekowisata  Fakultas  Kehutanan  Institut Pertanian Bogor.
Hendaryono  DPS,  Wijayani  A.  1994. Teknik Kultur  Jaringan  :  Pengenalan  dan Petunjuk  Perbanyakan  Tanaman  secara Vegetatif-Modern . Yogyakarta : Penerbit Kanisius.
Istomo. 2002. Kandungan Fosfor dan Kalsium serta  Penyebarannya  pada  Tanah  dan Tumbuhan Rawa Gambut, Studi Kasus di Wilayah  Bagian  Kesatuan  Pemangkuan
Hutan  Bagan,  Kabupaten  Rokan  Hilir, Riau  [Disertasi].  Bogor  :  Program Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Istomo,  Hardjanto,  Rahaju  S,  Permana  E, Suryawan SI, Hidayat A, Waluyo. 2007. Kajian Perolehan Karbon sebagai
Dampak Intervensi pada Lokasi Kegiatan
Proyek  CCFPI  Di  Eks-PLG  Blok  A Mentangai,  Kalimantan  Tengah  dan Sekitar  TN.  Berbak,  Jambi.  Bogor  : Laboratorium  Ekologi  Hutan,  Fakultas Kehutanan IPB – Wetlands International Indonesia Programme.
Mayerni  R.  2010.  Inisiasi  dan  Penggandaan Tunas  Rami  ( Boehmeria  nivea (L.)
Gaud) pada Berbagai Konsentrasi Sitokinin melalui Teknik Kultur
Jaringan. http://mediakulturjaringan.blogspot.com /2010/11/inisiasi-dan-penggandaan- tunas-rami.html [1 September 2011].
Murdiyarso D, Rosalina U, Hairiah K, Muslihat L,  Suryadiputra  INN  dan  Jaya  A.  2004.
Petunjuk Lapangan:
Pendugaan
Cadangan  Karbon  pada  Lahan  Gambut.
Proyek  Climate  Change,  Forests  and
Peatlands in Indonesia. Bogor : Wetlands International–Indonesia  Programme  dan Wildlife Habitat Canada.
.
Sandra  E.  2003. Kultur  Jaringan  Anggrek Skala Rumah Tangga . Jakarta : AgroMedia Pustaka.
Santoso U, Nursandi F. 2003. Kultur Jaringan
Tanaman . Malang : Universitas
Muhammadiyah Malang Press.
Semangun H. 1989. Penyakit-penyakit
Tanaman  Hortikultura  di  Indonesia . Yogyakarta : UGM Press.
Sukmadjaja  D,  Mariska  I.  2003.  Perbanyakan Bibit Jati melalui Kultur Jaringan. Bogor
:  Balai  Penelitian  Bioteknologi  dan
Sumberdaya Genetik Pertanian.
Wiart C. 2006. Medicinal Plant of Asia and the
Pasific . http://www.drugs
well.com/winow/+winowPlants%20of%
20Asia%20and%22Pacific/27578429- Medicinal-Plants-of-Asia-and- thePacific.htm#LinkTarget_157390m  [9 September 2011].
Wibisono  ITC,  Siboro  L,  Suryadiputra  INN. 2005.  Panduan  Rehabilitasi  dan  Teknik Silvikultur  di  Lahan  Gambut.  Proyek Climate  Change,  Forest  and  Peatland  in Indonesia. Bogor : Wetlands International Indonesia Programme-
Wildlife Habitat Canada.