## UJI CEMARAN BAKTERI COLIFORM PADA MINUMAN AIR TEBU
Submitted : 14 November 2016 Edited : 18 November 2016
Accepted : 30 November 2016
Yullia Sukawaty 1 , Muhammad Kamil 1 , Eko Kusumawati 2
1 Akademi Farmasi Samarinda
2 Program Studi Biologi FMIPA Universitas Mulawarman Samarinda Email : sukawatyyullia@gmail.com

## ABSTRACT
Sugarcane  juice  beverage  is  a  beverage  that  is  found  along  the  village  Sempaja  and Pelita  roads.  Contamination  in  processed  beverages  derived  from  sugarcane  juice  and equipment  used  allow  for  contamination  by  coliform  bacteria.  The  purpose  of  this  study  to investigate the contamination of coliform bacteria in water beverage sugar circulating in the village  Sempaja  and  Pelita.  Tests  using  the  Most  Probable  Number  (MPN)  includes  test estimators  using  lactose  broth  as  the  presumptive  medium  and  Brillian  Green Lactose  Bile Broth  as  the  confirmad  medium.  The  results  showed  that  eight  samples  tested  positive  for coliform  contaminated  with  a  high  of  2800x10 1 MPN  /  mL  (sample  H)  and the  lowest  value 170x10 1 MPN/mL (sample D). The results obtained show that the sugarcane juice drinks that supply  does  not  meet  the  standards  of  Rule  Head  POM  HK.00.06.1.52.4011  No.  2009  with standard quality requirements of 2x10 1 colonies/mL.
Keywords : sugarcane juice, coliform, Most Probable Number (MPN)

## PENDAHULUAN
Minuman air tebu adalah salah satu minuman yang mudah ditemukan di tempat-tempat keramaian. Air tebu yang dijual di pasar maupun di pinggir jalan dengan menggunakan gerobak lengkap dengan mesin khusus pemeras air tebu disajikan dalam gelas atau pun dalam kantong -kantong plastik secara umum. Air tebu yang rasanya manis apalagi dicampur dengan es akan menambah rasa nikmat dalam mengkonsumsinya, terutama oleh masyarakat menengah ke bawah baik wanita mau pun laki -laki mulai dari anak-anak, remaja hingga dewasa. Dalam hal sanitasi dan higienisasi kemungkinan belum menjadi prioritas utama oleh
pedagang
minuman air tebu ( 1 ) .
Ditinjau  dari  etiologi  atau  penyebab  KLB Keracunan Pangan tahun 2011, disimpulkan bahwa KLB Keracunan Pangan disebabkan oleh  mikroba  confirm  sebanyak  5  (3,91%) kejadian,  mikroba  suspect  (dugaan) sebanyak 33  (25,78%)  kejadian,  kimia confirm sebanyak 1 (0,78%) kejadian, kimia suspect sebanyak 18 (14,06%) kejadian, dan 71  (55,47%)  kejadian  tidak  diketahui penyebabnya (2) . Penyebabnya karena  tidak diperhatikan  kebersihan  perorangan  dan lingkungan dalam proses pengolahan makanan dan minuman. Penyakit yang tertular  melalui makanan dan minuman disebabkan oleh bakteri pathogen salah satunya disebabkan bakteri coliform yang
dapat menyebabkan berbagai  macam
penyakit (3) .
Pengolahan dengan bahan baku yang tidak higienis seperti pembuatan pada minumannya serta pelayanan yang dijajakan secara langsung di pinggirjalan memungkinkan adanya pencemaran
mikroba. Kondisi ini  yang demikian memungkinkan dapat tercemarnya bakteri coliform pada minuman yang diolah.
Bahaya adanya bakteri coliform pada makanan dan minuman dapat
menyebabkan gejala  diare,  demam,  mual muntah dan gangguan pencernaan lainnya (4) . Pada  minuman air  tebu dapat tercemar  melalui pengolahan bahan baku yang  tidak      higienis      seperti tahap pencucian      dan penyimpanan maupun melalui lingkungan yang tidak bersih seperti debu jalanan. Kelurahan Sempaja dan Kelurahan Pelita adalah daerah yang banyak terdapat penjual minuman air tebu yang di jajakan  di  pinggir  jalan.  Tujuan  penelitian ini untuk mengetahui ada atau tidak adanya cemaran bakteri Coliform pada minuman air tebu yang beredar di Kelurahan Sempaja dan Kelurahan Pelita dan  mengetahui cemaran Coliform yang terdapat pada minuman air tebu sesuai  dengan standar uji cemaran mikroba Peraturan Kepala Badan POM Nomor HK.00.06.1.52.4011 tahun 2009.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif. Objek penelitian yang akan digunakan adalah minuman air tebu yang dijual pedagang   di Kelurahan Sempaja Kecamatan Samarinda Utara dan Kelurahan Pelita Kecamatan Samarinda Ilir. Teknik sampling yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah Sampel Purposive Sampling . Pemilihan sampel  berdasarkan dengan penjual minuman air tebu terbanyak untuk mewakili tiap  bagian minuman air  tebu yang beredar  di kota Samarinda    Kelurahan Sempaja    dan
Kelurahan Pelita  dengan jumlah 8 sampel yang kemungkinan tercemar oleh golongan    bakteri coliform dengan melakukan pengujian yaitu uji penduga menggunakan  media LB ( Laktosa  Broth) yang bertujuan sebagai pendeteksi awal keberadaan bakteri, uji penegas  dengan menggunakan media BGLBB ( Brillian Green Lactose Bile Broth) yang  bertujuan sebagai pendeteksi keberadaan bakteri golongan coliform dengan berbagai tingkat pengenceran. Bahan Penelitian Medium Lactosa Broth (LB), Medium Brillian  Green Lactosa  Bile Broth (BGLBB), Natrium Chlorida (NaCl) 0,9 %, Aquades, Alkohol 70%, 8 sampel minuman air tebu.
Alat Penelitian Tabung durham, autoclave , hotplate , inkubator, lampu  spiritus, magnetic stirrer , timbangan analitik, laminar air flow (LAF) , vortex .

## Cara Kerja Penelitian Sterilisasi Alat
Bahan kaca dan logam (tabung reaksi, tabung  Durham, erlenmeyer,  mikropipet 1 mL  dan Cawan petri) dibungkus dengan kertas dan kapas, lalu dimasukkan ke dalam autoclave kemudian disterilkan dengan suhu 121˚C selama  30  menit  dengan tekanan 1 atm.
Pembuatan Media Pembuatan Media LB ( Lactose Broth ) Ditimbang LB sebanyak 10,4 g, diukur aquadestilata sebanyak 800 mL, dimasukkan LB yang  telah ditimbang  ke dalam Erlenmeyer kemudian  dimasukkan aquadestilata sebanyak 800 mL, dimasukkan magnetic stirrer ke dalam erlenmeyer dihomogenkan di atas hot plate , dimasukkan tabung  durham ke dalam 160
tabung  reaksi secara terbalik, dimasukkan larutan LB  ke  dalam 160 tabung reaksi dengan menggunakan pipet volume, setiap tabung reaksi berisi 5 mL larutan LB, tutup setiap tabung reaksi dengan  kertas aluminium, diikat tabung  reaksi menjadi satu ikatan, disterilkan  menggunakan autoclave selama ± 15 menit.
Pembuatan Media BGLBB ( Briliant Green Lactose Bile Broth ) Ditimbang BGLBB sebanyak 32 g,
diukur aquadestilata sebanyak  800 mL,
dimasukkan BGLBB yang telah ditimbang ke dalam erlenmeyer  lalu  dimasukkan aquadestilata sebanyak 800 mL, dimasukkan magnetic  stirrer ke      dalam erlenmeyer   lalu dihomogenkan di atas hot plate ,  dimasukkan tabung durham ke dalam 160 tabung  reaksi secara terbalik, dimasukkan larutan BGLBB ke dalam 160 tabung  reaksi sebanyak 5 mL  untuk setiap tabung, tutup setiap tabung reaksi dengan kertas aluminium,  disterilkan menggunakan autoclave selama ± 15 menit.
Pembuatan NaCl 0,9% Ditimbang NaCl 0,9% sebanyak 0,648 g, diukur aquadestilata sebanyak 72 mL, dimasukkan NaCl 0,9% yang telah ditimbang ke dalam  erlenmeyer,  kemudian dimasukkan aquadestilata sebanyak 72 mL, dimasukkan magnetic stirer ke dalam erlenmeyer lalu  dihomogenkan  di atas hot plate , dimasukkan NaCl ke dalam 16 tabung reaksi menggunakan pipet  volume, setiap tabung sebanyak 4,5 mL, ditutup setiap tabung reaksi dengan  menggunakan kertas aluminium, disterilkan menggunakan
autoclave selama ± 15 menit. Pengujian Sampel dengan Metode MPN Uji Pendugaan Disterilkan tangan dengan cara
disemprotkan dengan alkohol 70%, dikocok sampel minuman air tebu sampai homogen,
diambil sampel dengan mikropipet sebanyak 5 mL  dimasukkan ke dalam tabung reaksi seri 10 yang  berisi  media LB sebanyak  5 mL (mulut  tabung  reaksi  sudah dipanaskan sebelumnya), diulang sebanyak 5 kali. Diambil sampel minuman air tebu sebanyak 0,5 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi seri 1 yang berisi media LB sebanyak 5 mL, dilakukan perlakuan yang sama sebanyak 5 kali pada tabung reaksi seri 1. Diambil sampel minuman air tebu sebanyak 0,5 mL, dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi NaCl 0,9 % sebanyak 4,5 mL lalu di vortex ,  diambil NaCl yang  sudah di vortex sebanyak 0,5 mL, dimasukkan ke dalam tabung reaksi pengenceran 10 -1 yang berisi LB sebanyak 5 mL. Diambil NaCl pada seri 10 -1 sebanyak 0,5 mL, dimasukkan ke dalam  tabung reaksi yang berisi NaCl 0,9 % kedua lalu di vortex , diambil NaCl 0,9  % sebanyak 0,5 mL pada tabung reaksi kedua yang sudah di vortex ,  dimasukkan ke dalam tabung reaksi pengenceran 10 -2 yang  berisi LB sebanyak 5 mL. Diinkubasikan semua tabung pada suhu 37˚C selama 24  jam, tabung positif pada uji ini ditandai dengan adanya gas yang terbentuk di dalam tabung durham disertai  dengan warna media yang berubah keruh.
Uji Penegas Disterilkan tangan dengan cara disemprotkan dengan alkohol 70%, difiksasi jarum ose sampai pijar,  dicelupkan jarum ose ke dalam media LB  seri  10,  ditutup kembali tabung reaksi dengan kertas aluminium. Dicelupkan  jarum ose yang sudah dicelupkan ke dalam media LB ke dalam media BGLBB seri 10, dilakukan perlakuan yang sama sebanyak 5 kali untuk tabung seri 10.
Difiksasi jarum ose sampai pijar,
dicelupkan jarum ose ke dalam media LB seri 1, ditutup kembali tabung reaksi dengan kertas aluminium
Dicelupkan jarum ose yang  sudah dicelupkan ke dalam media LB dalam media BGLBB seri 1, ditutup  kembali tabung reaksi dengan kertas aluminium, dilakukan perlakuan yang  sama sebanyak 5 kali pada masing-masing tabung seri 1.
Difiksasi jarum ose sampai pijar, dicelupkan jarum ose ke dalam media seri 10 -1 , ditutup kembali tabung reaksi dengan kertas aluminium,  dicelupkan jarum ose yang sudah dicelupkan ke dalam media LB dalam media BGLBB seri pengenceran 10 -1 , dilakukan perlakuan yang sama sebanyak 5 kali pada masing-masing tabung reaksi seri pengenceran 10 -1 .
Difiksasi jarum ose sampai pijar, dicelupkan jarum ose ke dalam media LB seri pengenceran 10 -2 , ditutup kembali tabung reaksi dengan  kertas aluminium , dicelupkan jarum ose yang sudah dicelupkan ke dalam media LB dalam media BGLBB  seri pengenceran 10 -2 , dilakukan perlakuan yang sama sebanyak 5 kali untuk masing-masing tabung reaksi. Di inkubasikan semua tabung pada    suhu 37˚C selama    24 jam (dalam  keadaan terikat per seri lalu diikat menjadi satu), tabung  positif pada uji ini  ditandai dengan adanya gas yang terbentuk di dalam tabung durham disertai  dengan  warna media yang berubah keruh.

## Analisis Data
Metode analisis data yang digunakan adalah metode deskriptif yaitu
mengetahui ada atau  tidaknya bakteri coliform pada sampel minuman air tebu.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Dari hasil pengujian yang  telah dilakukan terhadap 8 sampel minuman air  tebu yang beredar di dua Kelurahan yaitu Kelurahan Sempaja Kecamatan Samarinda  Utara dan Kelurahan Pelita Kecamatan Samarinda Ilir menggunakan Metode MPN (Most Probable
Number )  diperoleh data dari uji penduga dapat  dilihat  pada Tabel  1 dan uji penegas dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 1 . Hasil uji penduga pada sampel minuman air tebu Sampel Uji Penduga (MPN/mL) A 790 x 101 B 490 x 101 C 490 x 101 D 330 x 101 E 1100 x 101 F 2200 x 101 G 1700 x 101 H 2800 x 101
Hasil pada Tabel 1 menunjukkan bahwa 8 sampel minuman air  tebu yang di  uji, ternyata semua positif mengandung cemaran coliform dengan jumlah yang berbeda-beda. Nilai yang paling tinggi terdapat pada sampel H sebesar 2800x10 1 MPN/mL dan yang terendah terdapat pada sampel D yaitu 330x10 1 MPN/mL. Pada uji penduga media yang digunakan adalah Lactose Broth (LB).
Media  ini merupakan media yang mengandung lactose, beef extract, pepton , dan aqua  destillata. Penggunaan LB ( Lactose Broth ) bertujuan untuk menumbuhkan  bakteri  pada  setiap  tabung reaksi. Tahap berikutnya  dilakukan uji penegas dengan penanaman sampel pada  media BGLBB ( Brilliant Green Lactose Bile Broth ). BGLBB merupakan media  selektif yang mengandung garam empedu ( bile salt ) dan hijau brillian. Kedua zat  ini dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif, sehingga hanya bakteri Gram negatif yang memfermentasi laktosa dan
menghasilkan gas yang  dapat  tumbuh, termasuk coliform.
Tabel 2 . Hasil uji penegas  pada sampel minuman air tebu Sampel Uji Penegas (MPN/mL) A 790 x 101 B 220 x 101 C 220 x 101 D 170 x 101 E 1100 x 101 F 2200 x 101 G 1100 x 101 H 2800 x 101 Tabel 2 menunjukkan bahwa dari 8 sampel yang diuji (sampel A, B, C, D, E, F, G dan H)  mengandung cemaran coliform pada semua sampel. Tabel 2 juga  menunjukkan bahwa nilai tertinggi cemaran coliform yaitu pada sampel H sebesar 2800x10 1 MPN/mL dan yang memiliki nilai terendah yaitu sampel D sebesar 170x10 1 MPN/mL. Pada  semua sampel terdapat cemaran bakteri coliform . Jika dibandingkan antara hasil pengujian dengan standar uji cemaran yang telah ditetapkan berdasarkan Peraturan Kepala Badan POM Nomor HK.00.06.1.52.4011 Tahun  2009 tentang Penetapan Batas Maksimum Cemaran Mikroba dan Kimia dalam Makanan, Batas Cemaran Bakteri Coliform 2x10 1 koloni/mL (5) ,  maka semua sampel yang diuji melebihi ambang batas yang telah ditetapkan. Hal ini mengindikasikan bahwa minuman air tebu yang dijajakan di pinggir jalan  dikatakan tidak aman untuk dikonsumsi. Diduga terjadi karena pengolahan  minuman air tebu tersebut masih kurang  higienis sehingga terdapat cemaran  bakteri coliform pada semua sampel yang diuji. Coliform merupakan suatu  kelompok bakteri heterogen, berbentuk batang  dan termasuk Gram negatif. Bakteri ini
digunakan sebagai indikator adanya polusi yang berasal dari kotoran manusia maupun hewan dan menunjukkan sanitasi yang tidak  baik terhadap air dan  makanan. Bakteri golongan  ini memfermentasikan glukosa, menghasilkan asam dan gas karena  menghasilkan enzim format hidrogenliase yang memecahkan asam format menjadi CO2 dan H2O (6) . Jumlah cemaran coliform pada  sampel minum air tebu yang tinggi terjadi akibat pengolahan tebu meliputi bahan baku berupa batang tebu itu sendiri yang diangkut dari perkebunan sampai dengan ditempat penjualan yang  memungkinkan  terjadinya kontak dengan bakteri, baik pada waktu pemerasan batang  tebu yang  tidak dicuci atau batang  tebu yang dicuci dilakukan dengan air dalam wadah yang  dipakai berulang-ulang. Tebu yang  sudah dikupas diletakkan pada tempat yang  terbuka sehingga memungkinkan meningkatkan potensi untuk terkontaminasi oleh  bakteri coliform . Kemungkinan sumber bakteri yang berasal dari pengelolaan  sewaktu memeras dan mengemas air tebu. Penjual umumnya tidak menggunakan sarung tangan dalam pengelolaan air tebu, namun ada yang menggunakan sarung  tangan dari beberapa penjual tetap sarung  tangan tersebut digunakan untuk  membersihkan sisa tebu dan memegang uang, sehingga
kemungkinan populasi  bakteri meningkat akibat  kontak  tersebut (7) . Faktor  lain yang menyebabkan  terjadinya cemaran  bakteri coliform yaitu  banyak  penjual  minuman air tebu berjualan di pinggir jalan. Kondisi tersebut mengakibatkan minuman air  tebu mudah tercemar oleh debu kendaraan.

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini disimpulkan bahwa sampel minuman air tebu yang beredar  di Kelurahan Sempaja dan Kelurahan Pelita dinyatakan positif tercemar bakteri coliform. Cemaran  bakteri coliform
pada 8 sampel berkisar dari 170x10 1 MPN/mL sampai 2800x10 1 MPN/mL. Minuman air tebu yang beredar  di  Kelurahan  Sempaja  dan Kelurahan  Pelita  tidak  memenuhi  standar Peraturan  Kepala  Badan  POM  Nomor HK.00.06.1.52.4011 tahun 2009.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Bahar,  E.  2005.  Uji  Bakteri  Terhadap Minuman  Segar  Air  Tebu  Yang Beredar Di Pasar Raya Padang. Artikel Penelitian . Fakultas Kedokteran Unand. Padang 2. Lucky S.Slamet. 2012. http://www.pom.go.id/ppid/rar/LAPT AH_2011.pdf  diakses  20  September 2016 3. Ningsih, R. 2014. Penyuluhan Hygiene Sanitasi  Makanan  dan  Minuman,  Serta Kualitas  Makanan  Yang  Dijajakan Pedagang  Di  Lingkungan  SDN  Kota Samarinda. Jurnal Kesehatan Masyrakat . Fakultas Kesehatan Masyarakat,  Universitas  Mulawarman, Samarinda 4. Entjang,    I.    2003 .    Mikrobiologi    dan Parasitologi    untuk    Akademi Keperawatan  dan    Sekolah    Tenaga Kesehatan  yang  Sederajat .  Bandung: Citra Adtya Bakti.
5. Peraturan Kepala Badan Pengawas
Obat Dan Makanan Republik Indonesia Nomor HK.00.06.1.52.4011 Tentang Penetapan Batas Maksimum Cemaran Mikroba Dan Kimia Dalam Makanan http://codexindonesia.bsn.go.id/uploads /download/Regulasi%20Pangan%20BP OM%20No%20HK.00.06.1.52.4011.pd
f diakses 23 September 2016
6. Dinanti, A.M. 2010. Uji Coliform Pada Nata  De  Coco  Kemasan  Tidak
Bermerek  Yang    Beredar    Di    Pasar Segiri,  Pasar  Pagi  dan  Pasar  Sungai Dama  Dengan  Metode  MPN  (Most
Probable  Number). Jurnal  Ilmiah Farmasi . Akademi Farmasi Samarinda. Samarinda
7. Dewi,  O.  D,  Roslaili,  dan  Eliza,  A. 2015. Uji Bakteriologis Pada Minuman Air Tebu Yang Dijual di Pinggir Jalan Khatib  Sulaiman  Kota  Padang .  Jurnal
Kesehatan Andalas . FK UNAND.