Jurnal SainHealth Vol. 1 No. 2 Edisi September 2017
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586

## POTENSI EKSTRAK Jatropha multifida TERHADAP EKSPRESI VEGF APHTHOUS ULCER Rat norvegicus
Ch. Destri 1) , I Ketut Sudiana 2) , Jusak Nugraha 3)
1) Dosen Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Maarif Hasyim Latif, Sidoarjo
2) Guru Besar Fakultas Kedokteran, Universitas Airlangga
3) Guru Besar Fakultas Kedokteran, Universitas Airlangga
Email : destridali@yahoo.com

## ABSTRACT
Aphthous  ulcer  is  the  most  common  oral  mucosal  disease  occurring  in  up  to  25%  of  the  world's human  population.  In  general,  therapy  is  more  directed  to  pain  control  and  hope  of  faster  healing. Increased use of the drug with the original content on the grounds more free toxic effects, easy to obtain and  affordable  prices  cause  the  use  of  plants  as  ingredients  of  medicine  to  be  an  alternative  choice. Jatropha multifida known as betadin plant is a plant with bioactive ingredients flavonoids, diterpenoid, tannins and saponins have been widely used as medicinal plants.Research on aphthous ulcer in mouth mucosal of Rat norvegicus was made by using heated burnisher and using 54 Rat norvegicus rats divided into five groups were normal group, K0 (CMC-Na3%), P1 (2.5% JM); P2 (5% JM) and P3 (JM 10%). Giving a topical extract of J.multifida done 2 times a day then sacrificed on day 3 and day  5. VEGF expression  in  aphthous  ulcer  in  the  mouth  tissue  by  immunohistochemical  staining.  The  result  of statistical  analysis  on  VEGF  expression  showed  significant  difference  (p  <0,05)  at  concentration  of J.multifida 10% extract where the wound healing process in mouse mucosa was better.
Keywords: Aphthous ulcer, Vascular endothelial growth factor, Jatropha multifida

## PENDAHULUAN
Sariawan merupakan kondisi peradangan pada  mukosa  mulut  yang  ditandai  rasa  sakit dengan satu atau beberapa ulkus (S.S. Natah et al.,  2004).  Berdasarkan  studi  penelitian terakhir,  perkembangan  sariawan  dimediasi secara genetik sehingga mampu mempengaruhi  peran  penting  dari  imunitas innate dan acquired . Berbagai faktor pencetus terjadinya  modifikasi  respon  imun  antara  lain trauma  mekanik,  alergi  makanan,  defisiensi vitamin  dan  mikroelement,  gangguan  hormon dan gastrointestinal, beberapa infeksi virus dan bakteri  serta  stress  (Zuzanna  Slebioda,  2013). Faktor risiko yang paling umum adalah trauma. Hal  ini  dapat  disebabkan  oleh  bibir  atau  pipi yang tergigit, abrasi dari makanan keras, proses menyikat  gigi  atau  peralatan  gigi.  Makanan penyebab  abrasi  memungkinkan  masuknya
bakteri atau alergen (Ronald G. Shasy, 2000). Faktor  trauma  paling  banyak  menimbulkan pembentukan  ulcer  pada  satu  individu, menimbulkan  kematian  transepithelial  yang bersifat apoptosis masiv dan mendadak diikuti timbulnya secondary necrosis yang mengarah pada pelepasan danger signal yang berasal dari sel epitel yang kemudian diikuti pengelupasan lapisan  sel  epitel  mati  dan  terbentuklah  ulcer (Al Samadi, 2015). Proses penyembuhan luka pada  jaringan  lunak  di  dalam  rongga  mulut mempunyai prinsip yang sama dengan bagian tubuh  lain  misalnya  kulit.  Penyembuhan  luka selalu  diawali  dari  proses  pembekuan  darah yang  secara  inisial  bertujuan  untuk  menutup luka (Hannu larjava, 2012). Penyembuhan luka merupakan  suatu  rangkaian  proses  dengan dinamika  begitu  tinggi  dan  tepat  terdiri  dari tahapan  yang  saling  mengikuti  diawali  dari
Jurnal SainHealth Vol. 1 No. 2 Edisi September 2017
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
tahap inflamasi, proliferasi sel, deposisi matrik hingga fase remodeling . Semua fase perbaikan termasuk  fase  inflamasi,  re-epitelisasi  dan pembentukan  granulasi  jaringan  merupakan bagian yang dipengaruhi secara kompleks oleh growth factor dan sitokin yang secara langsung mengarah  ke  area  luka  (Sule  Coskun  et  al ., 2007). Pada kaskade penyembuhan luka secara normal  selalu  diawali  dengan  proses  yang berlangsung secara tertib dari proses hemostasis dan deposisi fibrin yang kemudian mengarah pada kaskade sel-sel inflamasi yang dikarakterkan oleh neutrophyl /netrofil, macrofage /makrofag  dan lymphosit /limfosit pada  area  luka.  Proses  ini  kemudian  diikuti dengan  penarikan  dan  proliferasi  fibroblast dilanjutkan dengan penumpukan dan remodeling  oleh  kolagen  hingga  terjadi pematangan bekas luka (Robert F. Diegelmann,  2004). Vascular  Endothelial Growth  Factor (VEGF)  juga  dikenal  sebagai vascular permeability factor yang aktifitasnya berpotensi dalam meningkatkan vasopermiabel yang  memungkinkan  perembesan  protein seperti  fibrinogen  dan  fibronektin  yang merupakan  bentuk  essensial  dari  provisional matrik.
VEGF  juga  berperan  sebagai  mitogen potent  dari  sel  endotel  yang  menginduksi migrasi  dan  pertunasan  sel  endotel  dalam pembentukan  pembuluh  darah  baru  melalui pengaturan  beberapa  reseptor  integrin  sel endotel    (Ricardo  Jose  de  Mendoca,  2012). Peran VEGF dalam penyembuhan luka adalah sebagai  stimulator  terjadinya  angiogenesis. Angiogenesis  pada  proses  penyembuhan  luka melibatkan berbagai
tahapan
yaitu
vasodilatasi,  degradasi basement  membrane , migrasi sel endotel dan proliferasi sel endotel. Diikuti dengan terjadinya pembentukan pembuluh  kapiler,  anastomosis  pertunasan parallel  capillary dan  diakhiri  pembentukan basement membrane baru. Fitur essensial dari perbaikan luka secara normal adalah terbentuknya  jaringan  granulasi.  Komponen vaskular yang mempengaruhi tergantung pada
proses  angiogenesis.  Pembentukan  pembuluh darah  baru  terlihat  paling  awal  3  hari  setelah luka.  Pertumbuhan  pembuluh  darah  kapiler pada luka berfungsi untuk menyalurkan nutrisi dan  berbagai  mediator  penyembuhan  serta membrane metabolite. Inhibisi terhadap angiogenesis akan melemahkan proses penyembuhan luka (Phillip Bao et al., 2009).
Perkembangan resistensi antibiotik mikrobial  menjadi  alasan  pencarian  global untuk  antimikroba  dengan  kemurnian  alami seperti  pada  tanaman  asli. Jatropha  multifida Linn merupakan tumbuhan tahunan berbentuk semak  dengan  tinggi  2-3  meter.  Jatropha berasal  dari  bahasa  Yunani  “ jatros ”  yang berarti  dokter  dan  “ trophe ”  berarti  makanan.
Tumbuhan  ini  banyak  ditemukan  di  daerah tropis  sepanjang  Indo-Malayan,  Amerika bagian  tropis,  Afrika  bagian  tropis  serta beberapa  daerah  sub-tropis  seperti  Afrika Utara, Madagaskar dan Mauritius. Afrika, Asia dan Amerika Latin telah menggunakan spesies jatropha  sebagai  tumbuhan  obat  tradisional. Studi  fitokimia  dari  berbagai  spesies  Jatropha mengungkapkan  adanya  kandungan  alkaloid, cardiac-glycoside, flobatannis, flavonoid, tannin,  dan  saponin.  Extraksi  bagian  daun Jatropha  multifida L.  dengan  etil  asetat didapatkan  dua  C-glycosyl  flavone  dengan struktur dibedakan atas Vitexin dan Isovitexin (Beatrize  C.K.  Hirota  et  al.,  2012).  Berbagai bagian  tanaman  Jatropha  seperti  minyak  dari biji,  getah,  daun,  kulit  pohon  dan  akar  dapat bermanfaat  untuk  menyembuhkan  penyakit kulit  seperti  eksim,  gatal,  bisul,  sariawan  dan luka bengkak (Carla W. Sabandar et al ., 2012)

## METODOLOGI PENELITIAN
Jenis penelitian adalah penelitian eksperimental murni laboratorium ( True Eksperimental )  dengan  rancangan  penelitian Post  Test  Only  Control  Group  Design. Perlakuan  dalam  empat  konsentrasi  ekstrak Jatropha multifida yang berbeda diberikan pada empat  kelompok  tikus  dengan  masing-masing kelompok  6  kali  ulangan  pada  dua  kelompok
Jurnal SainHealth Vol. 1 No. 2 Edisi September 2017
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
hari  yang  berbeda.  Selanjutnya  hasil  data ekspresi  VEGF  yang  diperoleh  dilakukan analisa  data  statistik  dengan  mengetahui  data terdistribusi  normal  memakai  uji  Kolomogrof Smirnov test. Distribusi normal yang didapatkan selanjutnya dianalisa menggunakan uji  anova  dan  apabila  terdapat  perbedaan bermakna dilanjutkan dengan uji LSD dan uji t untuk  mengetahui  perbedaan  pengamatan antara kelompok hari ke-3 dan hari ke-5.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Waktu penelitian dikerjakan selama tiga bulan. Lokasi penelitian dilakukan di beberapa tempat yaitu Laboratorium Balai Penelitian dan Konsultasi Industri untuk membuat gel ekstrak daun  Jarak  tintir  ( Jatropha  multifida L),  Unit hewan  coba  laboratorium  Biokimia  FK Universitas Airlangga untuk pemberian
perlakuan  dan  Unit  Mikroskop  Elektron  dan Laboratorium medis terpadu
Fakultas
Kedokteran Universitas Airlangga untuk preparat histokimia dan imunhistokimia.

## Alat dan Bahan Penelitian
Peralatan dan bahan yang dipakai dalam penelitian  ini  antara  lain  bejana  maserasi, peralatan gelas, neraca analitik untuk mengukur berat  ekstraksi  yang  diperlukan,  refrigerator incubator shacker (Lab-line), rotary evaporator dengan pompa vakum, kandang tikus, penggaris, cotton  bud steril  digunakan  untuk mengolesi  ulser/ulkus  dengan  Gel  ekstrak Jatropha  multifida  L, spidol  warna-warni sebagai  penanda  mencit,  gelas  ukur,  gunting bedah,  pinset  berkerat  dan  pinset chirurgis, corong dan mesin penyaring larutan, botol kecil digunakan  untuk  tempat  sediaan  dalam rendaman  larutan  formalin  10%,  evaporator, mikroskop foto digital yang terhubung dengan computer.  Sampel  daun Jatropha  multifida L yang  sudah  dikeringkan,  bahan  pembuatan ekstrak daun Jatropha multifida, satu set bahan dasar sediaan gel (CMC-Na 3% ), satu set bahan untuk sediaan histologis, pewarnaan HE, reagen kit pewarnaan imunhistokimia, Kertas
Whatman,  aluminium  foil,  makanan  tikus, aquades  steril,  Ethanol  96%,  Formalin    10%, Ketamin  untuk anastesi.
ProsedurPembuatan  sediaan  ekstrak  daun Jatrophamultifida L Pembuatan ekstrak dilakukan di laboratorium  Balai  Penelitian  dan  Konsultasi Industri  Surabaya  –  Jawa  Timur  dengan  cara sebagai  berikut  :  Daun Jatropha  multifida L dikeringanginkan  tanpa  terkena  sinar  matahari secara  langsung  selama  6-9  hari.  Daun  yang sudah  kering  dihaluskan  dengan  alat  (sehalus mungkin)  dan  ditimbang  untuk  mengetahui berat  keringnya.  Selanjutnya  daun  hasil pengeringan  direndam  dalam  etanol  96% dibiarkan selama ± 24 jam, setelah itu disaring untuk diambil filtratnya.
Pembuatan gel dengan menggunakan Carboxy Methyl Cellulose-Na (CMC-Na 3%) Dosis  ekstrak  gel  2,5%,  5%  dan  10% dibuat dengan cara mencampur 2,5 gr,5 gr dan 10  gr  ekstrak  daun Jatropha  Multifida  L ke dalam  masing-masing  100gr    bahan  dasar  gel. Setelah itu semua bahan dimasukkan ke dalam wadah tertutup dan diberi label.

## Perlakuan pada hewan coba tikus putih Rat norvegicus
Tikus  diadaptasikan  dengan  kondisi lingkungan  penelitian  selama  1  minggu, kemudian dibagi menjadi 2 kelompok (kelompok  normal  dan  kelompok  yang  dibuat sariawan),  kemudian  kelompok  yang  dibuat sariawan dibagi menjadi 4 kelompok dan dibagi lagi menjadi 2 kelompok yaitu (kelompok pada hari  ke  3  dan  5),  kecuali  kelompok  kontrol hanya  1  kelompok  (hari  ke  5).  Setiap  mencit ditimbang  dan  dimasukkan  kedalam  kandang berukuran  20  x  15  x  15  cm.  Anastesi  dengan menggunakan  ketamin  hingga  tikus  sudah dalam  keadaan  tenang  dan  hanya  terlihat pernafasan perut, maka perlakuan harus segera dilakukan.  Keadaan  anastesi  terjadi  dalam waktu  5-10  detik.  Kemudian  mukosa  bibir
Jurnal SainHealth Vol. 1 No. 2 Edisi September 2017
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
bawah tikus dilukai dengan burnisher nomor 4 dengan  penampang  ±2mm  yang  dipanaskan selama 1 menit dan disentuhkan selama 1 detik. Pada  umumnya  sariawan  akan  terbentuk  pada hari  ke-2  atau  ke-3..  Pemberian  gel  ekstrak Jatropha multifida L (2,5%, 5%, 10%) dimulai setelah terbentuk ulser pada daerah tersebut 2x sehari.  Aplikasi  gel  ekstrak  menggunakan cotton  bud steril.  Untuk  kelompok  kontrol negatif  menggunakan  bahan  dasar  gel  yang diaplikasikan pada daerah ulser. Pada hari ke-3 dan  ke-5  setelah  perlakuan,  setiap  kelompok termasuk kelompok kontrol negative dikorbankan  dengan  menggunakan  ketamin sebagai  anastesi.  Kemudian  mukosa  bibir bawah  dipotong  sampai  sudut  mulut  tikus mengikuti  bagian  yang  ulser  dan  bagian  yang normal dimasukkan kedalam larutan fiksasi dan selanjutnya tikus yang telah mati dikubur.

## Pemeriksaan pada preparat jaringan
Jaringan mukosa bibir tikus dengan luka sariawan  yang  telah  direndam  dalam  larutan buffer formalin 10% selama 24 jam selanjutnya diproses  dengan  metode  parafin  hingga didapatkan  blok  parafin  dan  dibuat  preparat untuk pewarnaan imunohistokimia.

## Pewarnaan imunohistokimia VEGF
Prosedur  pewarnaan  dengan  memakai antibodi monoklonal anti rat vascular endothelial  growth  factor dilakukan  pada preparat  dengan  terlebih  dahulu  dilakukan deparafinisasi  pada  larutan  xylol  kemudian etanol dengan konsentrasi menurun.
Selanjutnya pemberian
peroksida
3%
digunakan  untuk  menghilangkan  peroksidase endogeneous  kemudian  dicuci  dengan  PBS. Pemberian  trypsin  0,025%  dalam  larutan  PBS dilakukan selama 6 menit pada suhu 37 0 C yang dilanjutkan  dengan  pemberian  primer  antibodi monoklonal  VEGF  selama  30  menit,  dicuci dengan  PBS.  Selanjutnya  pemberian  antibodi sekunder selama 30 menit, dicuci dengan PBS kemudian preparat dimasukkan dalam streptavidin  HRP  selama  30  menit,  cuci
kembali  dengan  PBS,  dimasukkan  kembali  ke dalam substrat kromogen selama 5 menit, cuci dengan PBS kemudian aquadestilata, pemberian Mayer Hematoksilin selama 6 menit dan  terakhir  kembali  dibilas  dengan  air mengalir. Amati hasil pewarnaan dan dilakukan penghitungan sel makrofag yang mengekspresikan  VEGF  dalam  5  lapangan pandang berbeda dengan pembesaran 400x.

## HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL
Data  penelitian  untuk  ekspresi  VEGF berupa hasil perhitungan rerata makrofag yang mengekspresikan  VEGF  dalam  5  lapang pandang  mikroskop  cahaya  pembesaran  400x pada preparat yang memakai tehnik pewarnaan imunhistokimia  dengan  monoklonal  antibodi. Dalam  setiap  lapang  pandang  diklasifikasikan sel P (+) apabila ditemukan inti sel besar dengan sitoplasma  yang  berwarna  kecoklatan/  hitam keunguan dan sel N (-) apabila inti sel besar atau kecil dengan sitoplasma berwarna kebiruan atau jernih.  Data  hasil  penelitian  selanjutnya dianalisis  secara  statistik  deskriptif  untuk memperoleh  gambaran  lebih  lanjut  mengenai distribusi  ,  rerata,  simpangan  baku  dan perbedaan dari tiap variabel penelitian.
Gambar 1. Distribusi dan Rerata Ekspresi

## VEGF
Dari  hasil  perhitungan  ekspresi  VEGF yang  ditampilkan  oleh  makrofag  didapatkan bahwa ekspresi VEGF paling tinggi ada di hari
Jurnal SainHealth Vol. 1 No. 2 Edisi September 2017
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
ke-3 pada dosis 10% sedangkan ekspresi VEGF pada  hari  ke-5  didapatkan  paling  tinggi  pada
dosis  5%.  Secara  umum  ekspresi  VEGF  pada hari ke-5 lebih rendah dibandingkan hari ke-3.
Gambar  2.  Gambar  A  adalah  preparat  mukosa  mulut  tikus Rat  norvegicus dengan  ulcer  pembesaran 400x  pewarnaan  imunohistokimia  dari  kelompok  P3  (10%)  hari  ke-3.  Sel  makrofag  yang mengekspresikan VEGF mempunyai ciri khas sel berinti besar dengan sitoplasma berwarna kecoklatan  (tanda  panah  kuning),  sedangkan  bentuk  sel  makrofag  yang  tidak mengekspresikan  VEGF  dikarakteristikkan  sebagai  sel  berinti  besar  dengan  sitoplasma berwarna kebiruan (tanda panah merah). Gambar B adalah preparat mukosa mulut tikus Rat norvegicus dengan  ulcer pembesaran x400 pewarnaan imunohistokimia dari kelompok P3 (10%) hari ke-5.

## Tabel 1 . Hasil uji beda sel makrofag yang mengekpresikan VEGF
Keterangan:   Berbeda huruf superskrip menunjukkan adanya perbedaan bermakna menggunakan uji komparasi berganda LS (nilai p<0,05)
Dari uji beda antara hari ke-3 dan hari ke- 5 diketahui bahwa perlakuan P3 yaitu kelompok yang  diberikan  ekstrak Jatropha  multifida konsentrasi  10%  mempunyai  pengaruh  yang paling  signifikan  terhadap  penurunan  ekspresi VEGF  pada  proses  penyembuhan  Aphthous Ulcer mukosa mulut tikus Rat norvegicus .

## PEMBAHASAN
Vascular  endothelial  growth  factor ( VEGF)  merupakan  faktor  yang  signifikan terhadap  proses  penyembuhan  luka  yang berlangsung  dengan  segera  setelah  terjadi perlukaan. VEGF secara potensial mengurangi
hipoksi  jaringan  dan  defisiensi  metabolisme dengan mempromote/promosikan awal terjadinya  angiogenesis  dan  fungsi  endotel. Aktifitas  maksimal  terjadi  rata-rata  3-7  hari setelah  luka.  Pada  saat  luka  telah  membentuk granulasi  jaringan,  maka  angiogenesis  akan berhenti, pembentukan pembuluh darah berkurang dan sel endotel mengalami apoptosis (J.M  Reinke,  2013).  Dari  uji  beda  secara statistik didapatkan bahwa antara hari ke-3 dan hari  ke-5,  perlakuan  P3  yaitu  kelompok  yang diberikan ekstrak Jatropha multifida konsentrasi  10%  mempunyai  pengaruh  paling signifikan  terhadap  penurunan  ekspresi  VEGF
Kelompok N Hari ke-3 Hari ke-5 P                   (T- Test) Normal 6 5,00 ± 1,64 a 5,00 ± 1,64 a Kontrol(CMCNa3%) 6 1,80 ± 0,40 b 2,70 ± 1,26 bc 0,221 P1 (Jm 2,5%) 6 3,53 ± 1,03 ac 3,16 ± 0,75 bc 0,498 P2 (Jm 5%) 6 4,00 ± 0,93 c 3,53 ± 0,83 b 0,384 P3 (Jm 10%) 6 3,86 ± 1,52 ac 2,10 ± 0,50 c 0,023 Nilai p (Anova) 0,002 0,001 A
B
Jurnal SainHealth Vol. 1 No. 2 Edisi September 2017
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
pada  proses  penyembuhan  Aphthous  Ulcer mukosa mulut tikus Rat norvegicus , sedangkan hasil  uji  beda  ekspresi  VEGF  antara  hari  ke-3 dan hari ke-5 di kelompok normal menunjukkan tidak  ada  perbedaan.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  ekspresi  VEGF  yang  tanpa  luka  tidak banyak  mengalami  perubahan.  Dari  setiap kelompok perlakuan yaitu kelompok P1 (2,5%), kelompok  P2  (5%)  dan  kelompok  P3  (10%) secara  rerata  menunjukkan  ekspresi  VEGF mengalami  penurunan.  Hal  ini  berarti  dengan adanya  perlakuan  pemberian  ekstrak Jatropha multifida yang mengandung bahan bio aktifitas mampu memicu kesembuhan yang lebih cepat. Dari setiap perlakuan diketahui pula bahwa dari kelompok  P3  (10%)  terdapat  penurunan  yang signifikan  (p<0,05).  Hal  ini  menunjukkan bahwa  pada  konsentrasi  tertinggi  dimana jumlah  penurunan  VEGF  lebih  banyak dibandingkan dengan dua perlakuan yang lain, sehingga  dapat  diketahui  bahwa  konsentrasi ekstrak Jatropha  multifida dengan  konsentrasi 10% mampu mempercepat proses
penyembuhanyang diindikasikan dengan menurunnya  ekspresi  VEGF  yang  secara  teori dikatakan bahwa pada pembentukan pembuluh darah  yang  telah  matang  ditandai  dengan menghilangnya signal VEGF di area luka.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  data  hasil  statistik  dari penelitian ini diperoleh hasil bahwa pemberian ekstrak
Jatropha
multifida dapat mempengaruhi  ekspresi  VEGF  pada  kadar
10%. Pengaruh  ekstrak  jarak  tintir  ( Jatropha multifida )  pada  konsentrasi  10%  berpengaruh lebih  baik  terhadap  ekspresi  VEGF  karena ekspresi  VEGF  yang  tinggi  pada  hari  ke-3 kemudian  berhenti  di  hari  ke-5  menunjukkan telah dimulainya pembentukan pembuluh darah baru  yang  mendukung  proses  penyembuhan lebih baik.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  oleh penulis  kepada  seluruh  pihak  Laboratorium terpadu  Fakultas  Kedokteran  Universitas Airlangga  dan  staf  laboratorium  imunologi Fakultas  Ilmu  Kesehatan  UMAHA  yang  telah banyak membantu dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anabel  Diaz,  Otilia  Pereira-Lopez,  Elisabete Barbosa, Pedro Mesquita, Filipe
Coimbra,  2015. Behaviour  of  The Recurrent    Aphthous  Stomatitis  as  a Dental  Urgency  at  Vedado’s  university Policlinic. Faculty  of  Detal  Medicine, University of Porto – Original Research.
Portugal.
Aceng  Ruyani,  Agus  Sundaryono,  Hery
Haryanto, 2010. Pengembangan
Tumbuhan  Betadine  (Jatropha  multifida Linn.)  Untuk  Meningkatkan  Jumlah Trombosit  pada  Penderita  Penyakit Demam Berdarah Dengue.
FKIP
Universitas Bengkulu. Indonesia
Al Samadi, A. Drozd, A Salem, J. Hietanen, R.
Hayrinen-Imonen, Y.T. Konttinen, 2015. Epithelial  Cell  Apoptosis  in  Recurrent Aphthous  Ulcer.  Journal  of  Dental Research  vol.  94  (7)  928-935. Institiute of  Clinical  Medicine  Biomedicum, Helsinki. Finland.
Anthony  L.  Mescher,  2013. Basic  Histology Text  and  Atlas .  Thirteenth  edition.
McGraw Hill e-book. Indiana
Beatrize C. K. Hirota, Cristina M.S. Miyazaki,
Camila  A.  Mercali,  Maria  C.  Verdan, Milena  Kalegari,  Carlos  Gemin,  Ana L.L.  Lordello,  Marilis  D.  Miguel, Obdulio  G.  Miguel , 2012. C-Glycosyl Flavones and Comparative Study of The Antioxidant,  Hemolytic,  and  Toxic Potential  of  Jatropha  multifida  Leaves and  Bark .  International  journal  of Phytomedicine 4. 01-05. Brazil.
Bodhu  Sashi  Kanth,  Avula  Satya  Kumar,
Digambar Balaji Shinde, Kothapali Hari
Jurnal SainHealth Vol. 1 No. 2 Edisi September 2017
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
Babu,  Tuniki  Venugopal  Raju,  Chityal
Ganesh Kumar, Pombala Sujitha, Biswanath  Das,  2011. New  Bioactive Macrocyclic  Diterpenoid  from  Jatropha multifida .  Journal  Elsevier  Bioorganic and  Medicinal  Chemistry  Letters  21 (2011) 6808-6810. India.
G.  Leoni,  P.A.  Neumann,  R.  Sumagin,  T.L. Dening, A. Nusrat, 2015. Wound Repair : Role of Immune – EpithelialInteraction . Mucosal Immunology. Nature Publishing Group. Review
Hannu  Larjava,  2012. Oral  Wound  Healing  : Cell  Biology  and  Clinical  Management.
Ulcer Healing Book. Vancouver, Canada
Jazwa  Agniezka,  Paulina  Kucharzewska,
Justyna Leja, Anna Zagorska, Aleksandra Sierpniowska, Jacek Stepniewski,  Magdalena  Kozakowska, Hevidar  Taha,  Takahiro  Ochiyo,  Rafal
Derlacz,  Elisa  Vahakangas,  Seppo  Yia
Herttuala, Alicja Jozkowics, Josef Dulak , 2010. Combined  Vascular  Endhotelial Growth Factor-A and Fibroblast Growth Factor 4 Gene Transfer Improves Wound Healing  in  Diabetic  Mice .  Genetic vaccines  and  therapy,  8:6.  BioMed Central. Poland.
Lari  Hakkinen,  Leeni  Koivisto,  Jryki  Heino,
Hannu Larjava, 2015. Cell and Molecular  Biology  of  Wound  Healing.
Laboratory  of  Periodontal  Biology,
Faculty  of  Dentistry,  University  of British Columbia, Vancouver. Canada.
Michael  P.  Seed,  David  A.  Walsh,  2008.
Angiogenesis in Inflammation :
Mechanism and Clinical Correlates. Die
Deutsche  Bibliothek  Basel,  Boston.
Berlin.
Phillip  Bao,  Arber  Kodra,  Marjana  Tomic,
Canic,  Michael  S.  Golinko,  H.  paul Ehrlich, Harold Brem, 2009. The Role of Vascular  Endothelial  Growth  Factor  in Wound  Healing .  J.  Surg  Res.  153  (2)  : 347-358
Rashkit  K.  Devappa,  Harinder  P.S.  Makkar, Klaus Becker, 2010. Jatropha Toxicity- A Review. Journal  of  Toxicology  and Environmental  Health,  Part  B.  Critical Reviews, Germany.
Ricky  Z.  Cui,  Alison  J.  Bruce,  Roy  S.  Roger,
2016. Recurrent  Aphthous  Stomatitis. Clinic in Dermatology. Arizona.
Robert F. Diegelmann, Melissa C. Evans, 2004.
Wound Healing : An Overview of Acute,
Fibrotic and Delayed Healing. Department  of  Biochemistry,  Medical College of Virginia. Virginia Commonwealth  University,  Richmond. Virginia
Sule  Coskun,  Emine  Gulceri  Gulec,  Barbaros Balabanli,  2007. Effect  of  Epidermal Growth  Factor  on  Lipid  Peroxidation and  Nitric  Oxide  level  in  Oral  Mucosal Ulcer Healing. A time course study surg.
Today  (2007)  37;  570-574,  Gazi University, Ankara. Turkey.
Xiao  Wen  Jiang,  Yi  Zhang,  Hao  Zhang,  Kun Lu,  Shou-Kang  Yang,  Guo  Liang  Sun, 2013. Double Blind, Randomized, Controlled Clinical Trial of  The Effect of Diomestite  and  Basic  Fibrobast  Growth Factor  paste  on  Treatment  of  Minor Recurrent  Aphthous  Stomatitis. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol, 2013;  116:570-575.  University  of  South China, Chenzou, Hunan. China.
Zuzanna  Slebioda,  Elzbieta  Szponar,  Anna Kowalska,  2013. Etiopatogenesis  of Reccurent  Aphthous  Stomatits  and  The Role of Immunologic Aspect : Literature Review . Poznan, Poland.