## Pengaruh Sterilisasi Media dan Dosis Inokulum terhadap Pembentukan Ektomikoriza dan Pertumbuhan Shorea selanica Blume.
Effect of Media Sterilization and Inoculum Dosage on Ectomycorrhizae Formation and Shorea selanica Blume. Growth
Sri Wilarso Budi *
Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan IPB
* Corresponding author: e-mail: wilarso62@yahoo.com

## ABSTRACT
The objectives of this research were to examine the effects of soil media sterilization and the dosage of mycorrhizal inoculum on mycorrhizal development and function and plant growth. Shorea selanica  seedlings were inoculated with different ectomycorrhizal soil inoculum dosage and grown in non-sterile and sterile  soil. Ectomycorrhizal soil inoculum were collected from under Shorea pinanga tress in Silviculture laboratory.  Soils used were infertile acid soils collected from field sites in Jasinga, Bogor.  Mycorrhizal inoculation improved the growth of S. selanica seedlings more than on sterile soil medium. The uninoculated seedlings exhibited stunted growth typical of P deficiency both in sterile and unsterile soil. Height at 16 weeks was significantly taller in non-sterile than in sterile soil. A significant interaction effect of inoculation and soil sterilization on height, diameter, shoots and roots biomass at harvest was observed.  Mycorrhizal inoculum dosage had a varied effect on mycorrhizal formation.  Root colonization  was significantly greater in non- sterile soil than in sterile soil in all inoculum dosage.
Key words: Ectomycorrhizas inoculum, nutrient absorption, soil sterilization, Shorea selanica

## PENDAHULUAN
Asosiasi Ektomikoriza (ECM) merupakan salah satu elemen yang sangat penting dari ekosistem hutan. Melalui jaringan hifa di dalam tanah, ektomikoriza mampu mengambil nutrisi dan air yang sudah tidak terjangkau oleh akar tanaman. Hasil penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa mikoriza mampu meningkatkan pertumbuhan dan produktivitas tanaman (Duponnois et al . 2005), meningkatkan serapan hara N dan P (Gossous and Mohammad 2009, Rotor and Delima 2010) dan meningkatkan ketahanan tanaman dari stress air (Oyun et al. 2010) dan serangan patogen akar (Bachtiar et al . 2010 ).
Ektomikoriza banyak dijumpai di alam berasosiasi dengan berbagai pohon tropis diantaranya dari keluarga Dipterocarpaceae, Eucalyptus dan Pinus (Smith dan Reid, 2007).  Namun demikian keberadaan ektomikoriza dapat menurun maupun hilang bersamaan dengan hilangnya pohon inangnya akibat kebakaran hutan dan land clearing .
Berbagai metode telah dikembangkan untuk menularkan kembali ektomikoriza pada tanaman. Lu et al . (1998) menggunakan inokulum spora dan Brundrett et al . (2005) menggunakan inokulum spora dan miselium pada tanaman Eucalytus.  Sedangkan Riniarti (2002) menggunakan inokulum tablet dan tanah 10%
pada tanaman Shorea mecystopterix , Shorea pinanga dan Shorea seminis.
Setiap bentuk inokulum mempunyai kelemahan dan kelebihannya masing-masing. Kelebihan penggunaan inokulum spora, miselium dan tablet adalah lebih ptraktis, namun ketersediannya sangat terbatas sedangkan penggunaan inokulum tanah ketersediannya tidak terbatas namun belum diketahui dosis yang terbaik, oleh karena itu perlu dilakukan penelitian pengaruh dosis inokulum tanah terhadap pembentukan ektomikoriza.
Pembentukan dan perkembangan ektomikoriza dipengaruhi oleh berbagai faktor di antaranya adalah bakteri dan jenis mikroorganisme tanah lainnya. Penelitian Garbaye et al . (1994) menunjukkan bahwa perkembangan ektomikoriza dipengaruhi secara positif oleh bakteri fluorescent pseudomonas.  Perkembangan berbagai jenis ektomikoriza juga dirangsang dengan adanya streptomycetes (Becker et al . 1999).  Oleh karena sterlisasi media tanam dalam praktik pembibitan di persemaian sering dilakukan dan berpeluang mematikan berbagai mikroorganisme tanah, maka perlu dilakukan penelitian pengaruh sterilisasi media terhadap perkembangan mikoriza dan tanaman.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui dosis inokulum tanah dan sterilisasi media semai terhadap pembentukan mikoriza dan pertumbuhan Shorea selanica di persemaian.

## JURNAL SILVIKULTUR TROPIKA Vol. 03 No. 02 Agustus 2012, Hal. 76 – 80 ISSN: 2086-8227

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  dilakukan di Rumah Kaca Laboratorium Silvikultur, Fakultas Kehutanan IPB pada bulan Maret 2010 sampai Juni 2010.  Rancangan penelitian ini adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan pola faktorial 2 faktor. Faktor pertama adalah Media Tanam M0= Tanah tidak disterilkan dan M1= Tanah disterilkan. Faktor kedua adalah dosis inokulum tanah dengan 4 taraf perlakuan: D0 =  0%; D1 = 10%; D2 = 20% dan D3 = 30% (v/v). Media tanah diperoleh dari daerah Jasinga, Bogor yang ditumbuhi oleh vegetasi alang- alang.  Tanah lapisan atas setebal lebih kurang 20 cm dikumpulkan, dikeringanginkan dan disaring dengan saringan 2 mm.  Sebagian tanah disterilkan dengan menggunakan autoklave pada suhu 120 oC tekanan 1 atm selama 2 jam.  Media yang digunakan mempunyai sifat- sifat: pH 4.5; N total 0.24; P tersedia 8.6 ppm; C- organik 2.64; KTK 23.38.  Inokulum tanah yang mengandung miselia dan akar ektomikoriza dikumpulkan dari bawah pohon Shorea pinanga di Persemaian Laboratorium Silvikultur, diayak dengan ayakan 2 mm, kemudian langsung dicampur dengan media tanam dengan dosis sesuai perlakuan.
Biji Shorea selanica berasal dari Kebun Percobaan Haurbentes, dikecambahkan di bak kecambah dengan menggunakan media pasir steril. Kecambah S. selanica yang berdaun 2  dipindahkan ke dalam polybag ukuran 15 x 20 cm yang berisi media sesuai perlakuan. Tanaman ditumbuhkan selama 16 minggu di rumah kaca dan disiram bila diperlukan. Semua perlakuan terdiri dari 5 ulangan.
Pertambahan tinggi, diameter tanaman, % kolonisasi mikoriza, biomass pucuk dan akar serta serapan N, P dan K, diukur enam belas minggu setelah tanam. Semua data dianalisis menggunakan software aplikasi MINITAB. Untuk menentukan perbedaan  dilakukan analisa lanjutan dengan DMRT pada taraf  95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Inokulasi S. selanica dengan inokulum tanah yang mengandung akar dan miselia ektomikoriza secara nyata meningkatkan pertumbuhan tinggi, diamater, berat kering pucuk dan berat kering akar  baik pada media tanah yang disterilkan maupun yang tidak disterilkan pada umur 16 minggu setelah tanam ( Table 1 ).
Tabel 1  Pengaruh sterilisasi media dan dosis inokulum terhadap pertumbuhan S. selanica di Rumah Kaca 16 minggu setelah tanam
Media Dosis inokulum  % (v/v) Tinggi (cm) Diameter (mm) Berat Kering Pucuk (g) Berat Kering Akar (g) Tidak disterilkan 0 9.5d 5.6a 2.77bc 1.05d 10 25.8a 6a 6.10a 3.51a 20 21.6b 5.8a 4.94b 2.20b 30 21.4b 5.2a 3.39bc 1.50c Disterilkan 0 6.1e 3.0b 1.0d 0.40e 10 7.1e 3.4b 1.48d 0.75e 20 13cd 5.4a 3.92b 1.75bc 30 14.4c 5a 2.91c 1.45c Signifikansi Media ** ** ** ** Dosis inokulum ** ** * * Interaksi ** ** ** *
Ket: Nilai yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%
Hal ini menunjukkan bahwa telah terjadi penularan fungi ektomikoriza dari tanah ke akar S. selanica , serta telah berfungsinya ektomikoriza dalam meningkatkan pertumbuhan tanaman. Penelitian Riniarti (2002) menunjukkan bahwa inokulasi inokulum tanah dengan dosis 10% pada bibit Shorea mecystopterix , Shorea pinanga dan Shorea seminis dapat meningkatkan pertumbuhan tinggi berturut-turut sebesar 15%, 17,64% dan 1,4 % pada media tidak tanah steril.  Pada penelitian ini, pemberian dosis 10%, 20% dan 30%  meningkatkan pertumbuhan tinggi S. selanica sebesar berturut-turut 177,8%, 133% dan 134% dan semakin besar dosis yang diberikan peningkatan pertumbuhannya semakin menurun pada media tanah yang tidak steril.  Sedangkan pada media tanah yang disterilkan peningkatan pertumbuhan tinggi S. selanica yang diberi dosis 10%, 20% dan 30%  lebih kecil dibanding pada media tanah yang tidak disterilkan berturut-turut 16,7%; 116,7% dan
134% serta meningkat dengan meningkatnya dosis inokulum yang diberikan. Hal ini disebabkan karena adanya peran penting mikroflora yang dapat membantu perkembangan ektomikoriza. Sterilisasi media tanah dengan autoclave dapat mematikan mikroflora dan mikrofauna yang ada di dalamnya.  Beberapa studi telah menunjukkan bahwa bakteri dan mikroflora tanah mempunyai peranan penting dalam proses simbiosis dan perkembangan mikoriza (Tatiana et al . 2010). Pengaruh mikroflora terhadap perkembangan ektomikoriza dapat bersifat positif, netral maupun negatif (Varese et al . 1996).
Pada penelitian ini kolonisasi ektomikoriza menurun dengan meningkatnya dosis inokulum pada akar tanaman yang tumbuh pada media tidak steril, sedangkan pada tanaman yang tumbuh pada media steril, kolonisasi ektomikoriza meningkat dengan meningkatnya dosis inokulum, namun prosentase
kolonisasi ektomikodriza pada akar tanaman yang tumbuh di media tidak steril secara nyata lebih tinggi dari pada tanaman yang tumbuh pada media steril pada semua level dosis inokulum yang diberikan ( Tabel 2 ). Pada tanaman yang tidak diinokulasi tidak ditemukan kolonisasi ektomikoriza baik pada media yang tidak steril maupun pada media yang steril ( Tabel 2 ).
Tabel 2  Pengaruh sterilisasi media tanam dan dosis inokulum terhadap pembentukan ektomikoriza Media Dosis inokulum % (v/v) %  Kolonisasi mikoriza Tidak disterilkan 0 0.0 10 86a 20 81b 30 80b Disterilkan 0 0.0 10 41,6e 20 48,6d 30 56,6c Signifikansi Media ** Dosis inokulum ** Interaksi **
Ket: Nilai yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%
Pada tanah yang tidak steril terdapat berbagai macam bakteri dan mikroflora lain yang dapat merangsang maupun menghambat perkembangan ektomikoriza (Varese et al . 1996) dan jika dalam tanah lebih banyak potensi mikroflora yang bersifat menghambat dari pada yang menstiimulir perkembangan ektomikoriza maka akan menurunkan prosentase kolonisasi.  Sifat penghambatan dan stimulasi dari mikroflora juga tergantung pada ketahanan fungi ektomikoriza terhadap antibiotik yang dihasilkan oleh miktroflora. Hasil  penelitian Keller et al. (2006) menunjukkan bahwa mikroflora Streptomyces sp. AcH 505 menstimulir perkembangan fungi ektomikoriza Amanita muscaria dan Suillus bovinus , tetapi menghambat perkembangan fungi ektomikoriza
Hebeloma cylindrosporum , karena fungi tersebut sangat sensitif terhadap antibiotik yang diproduksi oleh Streptomyces sp. AcH 505. Pada penelitian ini jenis fungi yang membentuk ektomikoriza tidak diketahui dan kemungkinan lebih dari satu jenis dan sensitif terhadap antibiotik, sehingga semakin besar dosis inokulum yang diberikan yang berarti semakin banyak potensi mengandung mikroflora yang menghasilkan antibiotik dan menurunkan kolonisasi akar ektomikoriza. Hal lain yang menyebabkan turunnya kolonisasi ektomikoriza dengan naiknya dosis inokulum adalah semakin banyaknya P tersedia di dalam tanah sejalan dengan lebih banyaknya produksi enzim phosphatase. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa kolonisasi mikoriza  dipengaruhi oleh P tersedia, jika P tersedia cukup tinggi maka kolonisasi akar menurun dan jika P tersedia rendah, maka kolonisasi mikoriza meningkat (Vierheirlig 2004).  Smith and Read (2007) melaporkan bahwa tanaman yang tumbuh pada media dengan ketersediaan P tinggi akan menurunkan permeabilitas membran yang pada gilirannya akan menurunkan jumlah eksudat yang dikeluarkan lewat akar yang pada akhirnya akan menurunkan kolonisasi mikoriza. Penelitian lebih lanjut sangat diperlukan untuk mempelajari populasi mikroflora pada mycorhizozfer.
Pada media tumbuh yang disterilkan, kolonisasi ektomikoriza meningkat dengan meningkatnya dosis inokulum yang diberikan ( Tabel 2 ).  Hal ini dikarenakan semakin besar dosis inokulum yang diberikan semakin besar pula potensi propagul ektomikoriza yang dapat langsung kontak dengan akar S. leprosula , sementara tidak ada potensi mikroflora dari media yang dapat merangsang perkembangan ektomikoriza, sehingga produksi enzim phospatase tidak berlebih dan ketersediaan P di dalam tanah masih dalam ambang yang tidak menurunkan kolonisasi mikoriza.
Dengan berkembangnya kolonisasi akar ektomikoriza, maka kemampuan penyerapan hara akan semakin baik. Interaksi antara inokulasi mikoriza dengan sterilisasi media secara nyata meningkatkan serapan hara N, P dan K oleh daun S. selanica dibandingkan dengan tanaman kontrol ( Tabel 3 ).

## Tabel 3  Serapan Hara N, P, K
Media Dosis inokulum  % (v/v) N P K Tidak disterilkan 0 33.67e 1.93e 20.36b 10 107.19a 4.98a 42.27a 20 77.0b 4.39b 38.55a 30 66.38c 4.14b 24.06b Disterilkan 0 30.35e 1.50e 18.25b 10 39.79d 2.29d 15.77d 20 66.56c 3.88c 23.75b 30 40.36d 2.48d 18.70c
Ket:  Nilai yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%
Inokulasi ektomikoriza meningkatkan serapan hara N, P dan K baik pada media yang tidak steril maupun yang steril.  Peningkatan hara N, P dan K pada tanaman yang diinokulasi ektomikoriza lebih besar pada tanaman yang tumbuh di tanah tidak steril dibanding dengan
tanaman yang tumbuh pada media yang steril ( Tabel 3 ). Secara umum media tanah yang digunakan di penelitian ini adalah tanah asam dengan  pH 4.5; N total 0.24; P tersedia 8.6 ppm; P tidak tersedia 206.6 ppm; C-organik 2.64; dan  KTK 23.38.  Dengan kondisi tanah yang
demikian, maka akar tanaman tidak mampu mengambil unsur P tidak tersedia yang jumlahnya cukup banyak. Salah satu mekanisme penyerapan hara oleh ektomikoriza adalah kemampuannya menghasilkan enzim phosphatase yang dapat membantu mengubah P tidak tersedia menjadi P tersedia bagi tanaman. Phosporous adalah salah satu unsur esensial untuk pertumbuhan  dan perkembangan tanaman (Shtark et al. 2010) yang berfungsi untuk membentu perkembangan akar dan penyerapan hara secara aktif dari dalam tanah. Nitrogen merupakan komponen dari asam amino, propirin serta berbagai senyawa lain di dalam tanaman yang berfungsi dalam proses pembelahan sel (Kozlowski dan Palardy, 1997), sedangkan Kalium sangat penting dalam mengatur membuka dan menutupnya stomata yang menjaga proses keluar masuknya CO 2 dan air untuk proses fotosintesis. Dengan meningkatnya serapan N, P dan K pada tanaman yang bermikoriza maka pertumbuhan tanaman lebih sehat dan lebih cepat.

## KESIMPULAN
Pertumbuhan tinggi, diameter dan biomassa S. selanica yang ditanam pada media tidak steril dan diinokulasi inokulum ektomikoriza lebih baik dari pada tanaman yang ditanam pada media yang disterilkan, demikian juga tanaman yang tidak diinokulasi tumbuh lebih baik pada media yang tidak disterilkan. Pertumbuhan S. selanica yang paling baik adalah pada tanaman yang tumbuh di media tidak steril dan diinokulasi dengan inokulum dengan dosis 10%, peningkatan pertumbuhan tinggi dan diameter masing- masing sebesar 171,5% dan 7,14% dibandingkan dengan tanaman yang tidak diinokulasi.  Media tanah yang tidak disterilkan dapat merangsang perkembangan ektomikoriza dengan dosis yang tepat yaitu 10%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis menyampaikan terima kasih kepada Tatang yang telah membantu dalam penyiapan media dan penyiraman tanaman selama proses penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Bakhtiar Y,  Yahya S, Sumaryono W, Sinaga MS, Budi SW, & Tajudin T.  2010. Isolation and Identification of Mycorrhizosphere Bacteria and Their Antagonistic Effects Towards Ganoderma boniense in vitro. Journal of Microbiology Indonesia  4 (2): 96-102.
Becker DM Bagley ST & Podila GK. 1999.  Effects of mycorrhizal-associated streptomycetes on growth of Laccaria bicolor, Cenococcum geophilum, and Armillaria species and on gene expression in Laccaria bicolor. Mycologia  91: 33–40.
Brundrett M, Malajczuk N, Gong M,  Xu,  Shirley S,
Bernie D. 2005. Nursery inoculation of Eucalyptus seedlings in Western Australia and Southern China using spores and mycelial inoculum of diverse ectomycorrhizal fungi from different climatic regions. Forest Ecology and Management  209: 193– 205.
Duponnoisa R, Colombeta A, Hienb V & Thioulouse J. 2005. The mycorrhizal fungus Glomus intraradices and rock phosphate amendment influence plant growth and microbial activity in the rhizosphere of Acacia holosericea.  Soil Biology & Biochemistry 37 : 1460–1468.
Garbaye  J. 1994.  Helper bacteria: a new dimension to the mycorrhizal symbiosis. New Phytol 128: 197– 210.
Goussous  SJ & Mohammad MJ.  2009.  Comparative effect of two arbuscular mycorrhizae and N and P Fertilizers on growth and nutrient uptake of onions. International Journal of Agriculture & Biology 11: 463-467.
Keller S, Schneider K & Sussmuth RD. 2006 . Structure elucidation of auxofuran, a metabolite involved in stimulating growth of fly agaric, produced by the mycorrhiza helper bacterium Streptomyces AcH 505. Journal of Antibiotics (Tokyo) 59 : 801–803.
Kozlowski TT, Pollardy SG. 1997. Physiology of Woody Plants . 2 rd ed. Academic Press. London.
Lu  X, Malajczuk N &  Dell B.  1998. Mycorrhiza formation and growth of Eucalyptus globulus seedlings inoculated with spores of various ectomycorrhizal fungi. Mycorrhiza 8: 81–86.
Oyun MB, Adeduntan  SA & Suberu SA. 2010.
Influence of watering regime and mycorrhizae inoculations on the physiology and early growth of Acacia senegal (L.) Wild. African Journal of Plant Science  4(7): 210-216.
Poole EJ, Bending GD,  Whipps JM &  Read DJ. 2001. Bacteria associated with Pinus sylvestris–Lactarius rufus ectomycorrhizas and their effects on mycorrhiza formation in vitro. New Phytol 151: 741–753.
Riniarti M. 2002. Perkembangan kolonisasi ektomikoriza dan pertumbuhan semai Dipterocarpaceae dengan pemberian asam oksalat dan asam humat serta inokulasi ektomikoriza. [disertasi]. SPS. IPB.
Rotor AV &  Delima PC. 2010.  Mycorrhizal association, N fertilization and biocide application on the efficacy of bio-N on Corn ( Zea mays L) growth and productivity.  E-Int. J. Sci. Res. 2(3): 267-290.
Shtark OY,  Borisov  AY,  Zhukov  VA, Provorov  NA
& Tikhonovich I A. 2010.  Intimate Associations of Beneficial Soil Microbes with Host Plants. GR Dixon and EL Tilston (eds.), Soil Microbiology and
Sustainable Crop Production ,  DOI 10.1007/978-90- 481-9479-7_5, c Springer Science+Business Media B.V.  119-196.
Smith,S.E & Reid  DJ.  2007. Mycorrhizal Symbiosis . 3 rd edition. New York, USA: Academic Press.
Tatiana AR, Victor SP & Gabriela FD. 2010. The role of mycooization helper bacteria in the establishment and action of ectomycorrhizae associations. Brazilian Journal of Microbiology  41: 832-840.
Thomson BD, Hardy GEStJ,  Malajczuk N & Grove TS.
1996. The survival and development of inoculant
ectomycorrhizal fungi on roots of outplanted Eucalyptus globulus Labill. Plant Soil 178: 247–253.
Varese GC, Portinaro S, trotta A, Scannerini S, Luppi- Mosca AM & Martinotti MA. 1996. Bacteria associated with Suillus grevillei Sporocarps and Ectomycorrhizae and their effects on in vitro growth of the mycobion. Symbiosis 21: 129-147.
Vierheilig H. 2004. Regulatory mechanisms during the plant – arbuscular mycorrhizal fungus interaction. Can. J. Bot. 82: 1166–1176.