## JKP

## JURNAL KESEHATAN PRIMA
http://jkp.poltekkes-mataram.ac.id/index.php/home/index
p-ISSN: 1978-1334 (Print); e-ISSN: 2460-8661 ( Online)

## Uji Teknik Difusi  Menggunakan Kertas Saring Media Tampung Antibiotik dengan
Escherichia Coli Sebagai Bakteri Uji
Ari Khusuma  , Yuriska Safitri, Annisa Yuniarni, Kurnia Rizki Jurusan Analis Kesehatan, Poltekkes Kemenkes Mataram, Indonesia  khusumaari@gmail.com, Tlp: +81273148122

## Genesis  Naskah:
Diterima 1 Juli 2019; Disetujui 8 Agustus 2019; Di Publikasi 9 Agustus 2019

## Abstrak
Uji sensitivitas antibiotik  merupakan tes  yang digunakan  untuk  menguji kepekaan suatu bakteri terhadap suatu antibiotik.    Uji  sensitivitas  bertujuan  untuk  mengetahui  efektifitas  dari  suatu  antibiotik.    Uji  sensitivitas  dapat dilakukan  dengan  beberapa  cara  yaitu:  difusi  cakram diffusion  test ),  pengenceran  atau  dilusi  ( dilusi  test ), antimicrobial gradient dan short automated instrumen system. Uji sensitivitas dengan  metode difusi agar plate dapat  dilakukan  dengan  cara Kirby  Bauer dengan  teknik disc  diffusion (cakram  disk)  atau  teknik  sumuran. Rancangan  penelitian  ini  adalah  penelitian eksperiment denga n melihat  uji  difusi  menggunakan  kertas  saring sebagai media tampung antibiotik dengan menggunakan E.coli sebagai bakteri uji. Data yang diperlukan adalah diameter zona hambat yang terbentuk pada media MHA saat melakukan uji sensitivitas metode difusi sumuran dan    teknik  kertas  saring  sebagai  media  tampung  antibiotik.  Hasil  penelitian  ini  menunjukan  bahwa  rerata diamater zona hambat antibiotik ciprofloxacin terhadap bakteri E.coli dengan menggunakan metode difusi teknik sumuran  adalah  62  mm  menunjukan  hasil  sensitif,  rerata  diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  dengan menggunakan  inovasi  uji  difusi  menggunakan  kertas  saring  sebagai  media  tampung  antibiotik  ciprofloxacin adalah 39  mm    menunjukan  hasil sensitif. Rerata diameter zona  hambat  yang terbentuk  pada inovasi uji difusi menggunakan  kertas  saring  sebagai  media tampung antibiotik lebih  kecil dibandingkan dengan rerata diameter zona  hambat  menggunakan  metode  difusi  teknik  sumuran.  Rata-rata  diameter    zona  hambat  antibiotik  dengan menggunakan  kertas  saring  sebagai  media  tampung    adalah  39  mm.  Perbedaan  diameter  zona  hambat menggunakan teknik  sumuran dengan teknik kertas saring sebagai media tampung antibiotik adalah 62 mm dan 39 mm.
Kata Kunci : Uji Teknik Difusi;  Kertas Saring; Escherichia Coli ; Bakteri Uji

## Diffusion Techniques Test

## Using Medium Antibiotic Film Paper With Escherichia Coli As  Bacteria Test

## Abstract
The antibiotic sensitivity test is a used to test the sensitivity of a bacterium to an antibiotic. The sensitivity test aims to determine the effectiveness of an antibiotic. Sensitivity tests can do in several ways, namely: diffusion test),  dilution  or  dilution  (dilution  test),  antimicrobial  gradient,  and  short  automated  instrument  system. Sensitivity test with diffusion method  so that the plate can be done by Kirby Bauer method with disc diffusion (disc disk) technique or sump technique. The design of this study  was experimental research by looking at the diffusion test using filter paper as an antibiotic storage medium using E. coli as a test bacterium. The data needed is the diameter of the inhibitory zone formed on the MHA media when conducting sensitivity tests of the good diffusion  method  and  filter  paper  technique  as  an  antibiotic  storage  medium.  The  results  of  this  study  indicate that the average diameters of the ciprofloxacin antibiotic inhibitory zone against E. coli bacteria using the well diffusion technique is 62 mm showing sensitive results,   the average diameter of the inhibitory zone formed by using  diffusion  test  innovations  using  filter  paper  as  ciprofloxacin  antibiotic  storage  medium  is  39  mm  shows sensitive results. The average diameter of the inhibitory zone formed on the innovation of the diffusion test using
filter paper as an antibiotic storage medium is smaller than the average diameter of the inhibition zone using the good diffusion technique. The average diameter of the antibiotic inhibitory zone using filter paper as a storage medium  is  39  mm.  The  difference  in  diameter  of  the  inhibition  zone  using  a  good  technique  with  filter  paper technique as a medium for antibiotic storage was 62 mm and 39 mm.
Keywords: Diffusion Techiniques; Test;  Film Paper; Escherichia Coli; Bakteria Test

## Pendahuluan
Uji  sensitivitas  antibiotik  merupakan  tes  yang digunakan  untuk  menguji  kepekaan  suatu  bakteri terhadap  suatu  antibiotik.    Uji  sensitivitas  bertujuan untuk  mengetahui  efektifitas  dari  suatu  antibiotik (Wahyutomo,  2009).    Hasil  sensitivitas  suatu  bakteri terhadap  antibiotik  ditentukan  oleh  diameter  zona hambat  yang  terbentuk,  semakin  besar  diameter  zona hambat  yang  terbentuk  maka  pertumbuhannya semakin terhambat sehingga dibutuhkan standar acuan untuk  menentukan  apakah  bakteri  tersebut  resisten atau  sensitive  terhadap  suatu  antibiotik.    Beberapa faktor yang dapat mempengarui diameter zona hambat diantaranya  adalah  waktu  peresapan  bakteri  dalam media agar, konsentrasi antibiotik (Soemarno, 2000). Uji  sensitivitas  bakteri  terhadap  suatu  antibiotik dapat  dilakukan  dengan  beberapa  cara  yaitu:  difusi cakram ( diffusion test ), pengenceran atau dilusi ( dilusi test ), antimicrobial  gradient  dan  short  automated instrumen  system. Uji  sensitivitas  dengan  cara  difusi merupakan cara yang paling banyak digunakan karena teknis pemeriksaan lebih mudah dilakukan.
Uji  sensitivitas  dengan  metode  difusi  agar  plate dapat  dilakukan  dengan    cara Kirby  Bauer dengan teknik disc  diffusion (cakram  disk)  atau  bisa  juga menggunakan  teknik  sumuran.    Teknik  kerja  dari metode Kirby  Bauer cukup  sederhana  dimana  teknik disc diffusion akan lebih mudah dikerjakan dibandingakan dengan teknik sumuran, akan tetapi uji sensitivitas  menggunakan  teknik disc  diffusion memiliki  harga  disk  antibiotik  yang  relatif  mahal sehingga tidak selalu tersedia ketika dibutuhkan untuk praktikum,  sehingga  teknik  sumuran  menjadi  lebih efisien untuk digunakan.
Uji  sensitivitas  dengan  teknik  sumuran  dilakukan dengan cara membuat suatu lubang atau sumuran pada
media agar plate sehingga antibiotik dapat dimasukkan, akan tetapi pada saat pembuatan sumuran memiliki  beberapa  kesulitan  seperti  terdapatnya  sisa- sisa  agar  pada  suatu  media  yang  digunakan  untuk membuat sumuran, selain itu juga besar kemungkinan media  agar  retak  atau  pecah  disekitar  lokasi  sumuran sehingga  dapat  mengganggu  proses  peresapan antibiotik  kedalam  media  yang  akan  mempengaruhi terbentuknya diameter zona bening saat melakukan uji sensitivitas,  sehingga  diperlukan  teknik  yang  cukup baik  untuk  mendapatkan  sumuran  utuh  yang  tidak mengganggu  kerja  dari  uji  sensitifitas  antibiotik terhadap suatu bakteri.

## Metode
Rancangan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah penelitian eksperiment yaitu penelitian yang bertujuan  untuk  mengetahui  suatu  gejala  atau pengaruh  yang  timbul  sebagai  akibat  dari  adanya perlakuan  tertentu  (Notoatmodjo,  2010).    Dalam penelitian  ini  ingin  diketahui  hasil  inovasi  uji  difusi menggunakan  kertas  saring  sebagai  media  tampung antibiotik dengan menggunakan E.coli sebagai bakteri uji.
Unit  eksperimen  dalam  penelitian  ini  adalah sisa bolongan kertas saring yang disterilkan menggunakan  metode  tyndalisasi  lalu  ditempelkan pada  permukaan  media  MHA (Muller  Hinton  Agar ) dan diteteskan dengan antibiotik.
Data yang di kumpulkan berupa: diameter zona hambat  yang  terbentuk  pada  media  MHA  saat melakukan  uji  sensitivitas  metode  difusi  sumuran. Diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  pada  media MHA  saat  melakukan  uji  sensitivitas  dengan  teknik kertas saring sebagai media tampung antibiotik.
Data  dari  hasil  hitung  diameter  zona  hambat pada  masing-masing  perlakuan  yaitu  uji  difusi
menggunakan  teknik  sumuran  dengan  uji  difusi menggunakan  inovasi  kertas  saring  sebagai  media tampung  diukur  dengan  analisis  statistik independent sample T-test dengan tingkat kepercayaan 95% (0,05).

## Hasil Penelitian dan Pembahasan
Uji sensitivitas antibiotik merupakan tes yang digunakan  untuk  menguji  kepekaan  suatu  bakteri terhadap antibiotik. Uji kepekaan/sensitivitas bertujuan untuk mengetahui daya kerja/efektivitas dari suatu antibiotik dalam membunuh bakteri
(Wahyutomo,2009).  Penelitian  tentang  inovasi  uji difusi  teknik  sumuran  menggunakan  kertas  saring sebagai  media  tampung  antibiotik  e.coli  sebagai bakteri uji telah dilakukan di laboratorium mikrobiologi  poltekkes  kemenkes.  Penelitian  ini dilakukan  dengan  melakukan  pengulangan  atau replikasi  sebanyak  16  kali  pada  setiap  perlakuan. Kertas  saring  yang  digunakan  adalah  kertas  saring WHATMAN  Kelas  2 dengan  menggunakan  14 tumpukan  sehingga  kertas  saring  yang  telah  dibuat dapat  menampung  antibiotik  sebanyak  75  µl.
Tabel 1 Data replikasi dan diameter zona hambat antibiotik ciprofloxacin terhadap bakteri E.coli
Replikasi Perlakuan T1 T2 1 62 41 2 65 39 3 63 29 4 62 40 5 60 41 6 63 41 7 62 40 8 62 39 9 64 30 10 60 41 11 62 40 12 64 40 13 64 37 14 61 40 15 60 39 16 63 39 Total diameter zona hambat (mm) 997 616 Rata-rata diameter zona hambat (mm) 62 39 Uji  normalitas  dalam  penelitian  ini menggunkan uji Shapiro-wilk pada tingkat kepercayaan 95% (α 0,05). Tabel hasil uji Shapiro- wilk menunjukkan data diameter zona hambat pada hasil uji sensitivitas teknik sumuran adalah 0,236 > 0,05  dan  diameter  zona  hambat  pada  hasil  uji sensitivitas  teknik  kertas  saring  adalah  0,000  <
0,005.  Salah  salah  satu  dari  hasil  uji  shapiro-wilk tersebut  tidak  signifikan  sehingga  diartikan  data tersebut tidak berdistribusi normal.
Hasil uji Levene - Test menunjukkan data hasil uji  sensitivitas  antibiotik  ciprofloxacin  terhadap bakteri  E.coli  menggunakan  teknik  sumuran  dan teknik  kertas  saring  sebagai  media  tampung antibiotik    adalah  0,095  >  0,05  yang  menunjukan
bahwa  data  tersebut  homogen.  Dari  hasil  uji normalitas dan homogenitas menunjukan salah satu dari data tersebut tidak normal sehingga dilanjutkan dengan menggunakan uji mann-whitney test.
Dari nilai uji Mann-whitney nilai statistik uji Z  yang  kecil  yaitu  -4.856  dan  nilai  sig.(2-tailed) adalah  0,000  <  0,005.  Sehingga  hasil  uji  yang didapatkan  adalah  signifikan  secara  statistik, dengan  demikian  uji  sensitivitas  menggunakan kertas  saring  sebagai  media  tampung  dapat digunakan.
Tabel  tersebut  menunjukan  bahwa  rerata diamater  zona  hambat  antibiotik  ciprofloxacin terhadap  bakteri E.coli dengan  menggunakan metode  difusi  teknik  sumuran  adalah  62  mm menunjukan  hasil  sensitif,  rerata  diameter  zona hambat  yang  terbentuk  dengan  menggunakan inovasi  uji  difusi  menggunakan  kertas  saring sebagai  media  tampung  antibiotik  ciprofloxacin adalah 39 mm  menunjukan hasil sensitif.
Kedua  teknik  uji  tersebut  menunjukan hasil sensitif namun memiliki angka rerata diameter zona hambat yang berbeda,  dimana rerata diameter zona hambat yang terbentuk pada inovasi uji difusi menggunakan kertas saring sebagai media tampung antibiotik  lebih  kecil  dibandingkan  dengan  rerata diameter  zona  hambat  menggunakan  metode  difusi teknik  sumuran.  Perbedaan  tersebut  disebabkan karena tumpukan  kertas saring  yang terlalu banyak sehingga  antibiotik  yang  terserap  ke  permukaan media  MHA  tidak  maksimal,  hal  tersebut  dapat mempengaruhi  ukuran  diameter  zona  hambat  yang terbentuk.  Selain  jumlah  tumpukan  kertas  saring, daya  hambat  suatu  antimikroba  dalam  uji sensitifitas  secara  in  vitro  dipengaruhi  oleh beberapa faktor yaitu: populasi  bakteri, konsentrasi antimikroba,  komposisi  media  kultur,  waktu inkubasi dan temperatur (Greenwood et al, 2003).
Faktor  faktor  tersebut  secara  keseluruhan dapat dikontrol saat prosedur pengujian berlangsung.  Konsentrasi  mikroba  dapat  dikontrol dengan  pemakaian  inokulum  standar  dari  suspensi bakteri  yang  secara  kualitatif  sama  dengan kekeruhan  warna  larutan  standar  Mc  Farland  yaitu putih keruh (Febrika, 2012).

## Kesimpulan
Rata-rata  diameter    zona  hambat  antibiotik dengan    menggunakan  kertas  saring  sebagai  media tampung    adalah  39  mm.  Perbedaan  diameter  zona hambat  menggunakan  teknik    sumuran  dengan teknik  kertas  saring  sebagai  media  tampung antibiotik adalah 62 mm dan 39 mm.
.

## Daftar Pustaka
Adila  R,  Nurmiati,  Agustien  A.  2013.  Uji Antimikroba Curcuma spp. Terhadap Pertumbuhan Candida albicans, Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia coli.Jurnal Biologi Universitas Andalas.
Asriadi,  2012. Uji  Sensitivitas  Beberapa  Antibiotik Terhadap  Bakteri  Penyebab  Infeksi  Saluran Pernafasan  Atas  (ISPA)  di  RSUD  Syech Yusuf  di  Kab.Gowa. [SKRIPSI],  UIN Alauddin Makassar.
Bari,  S.B.,  Mahajan,  B.M.,  dan  Surana,  S.J.  2008. Resistance  to  Antibiotic:  A  Challenge  In Chemotherapy. Indian Journal of
Pharmaceutical  Education  and  Research 2008 .
Brooks,  G.  F.,  Janet,  S.B.,  Stephen,  A.M.  2005.
Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiology ). Penerjemah: Eddi Mudihardi, dkk. Jakarta: Salemba Medika.
Djide,  M.N.,  dan  Sartini.  2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi  Farmasi. Makassar:  Lembaga Penerbit UNHAS.
Guillemot,  Didier.  Antibiotic  use  in  humans  and bacterial  resistance.  Current  Opinion  in Microbiology. 1999; 2:494–498.
Jawetz,  E.,  Melnick,  J.  L.,  and  Adelberg,  E.  A. 2000. Mikrobiologi  Kedokteran, Buku  1  &
Buku  2,  Bagian  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran.  Universitas Airlangga,  Jakarta: Salemba Medika.
Jawetz et al . 2001. Mikrobiologi Kedokteran, Buku I, Edisi I, Alih bahasa: Bagian Mikrobiologi. FKU Unair Jakarta: Salemba Medika.
Juliantina  FR.  2008.  Manfaat  sirih  merah  ( piper crocatum ) sebagai agen antibakterial terhadap  bakteri  gram  positif  dan  gram negatif.  JKKI  –  Jurnal  Kedokteran  dan Kesehatan Indonesia.
Lullmann  H,  Mohr  K,  Ziegler  A,  Bieger  D.  2000. Color  Atlas  of  Pharmacology.2 nd .ed.  New York : Thieme.
Marliana,  Herci.  (2008).  Optimasi  Pereaksi (Schryver)  Menjadi  Kertas  Indikator.  Untuk
Identifikasi
Formalin Dalam Sampel
Makanan  [SKRIPSI],  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas
Indonesia, Depok
Norajit K, Laohakunjit N, Kerdchoechuen O. 2007. Antibacterial  Effect  of  Five  Zingiberaceae Essential Oils. Molecules.
Pratiwi,  Silvia  T.  2008. Mikrobiologi  Farmasi . Jakarta  :  ErlanggaPERMENKES  RI,  2011, Pedoman  Umum  Penggunaan  Antibiotik , Jakarta: Kementrian Kesehatan RI.
Sacher,  R.A.,  McPherson,  R.A.  2004. Tinjauan Klinis  Hasil  Pemeriksaan  Laboratorium . Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Setiabudy,  R.,  Gunawan,  S.  G.,  Nafrialdi  dan
Elysabeth. 2009. Antimikroba . In:
Departemen  Farmakologi  dan  Terapeutik
Fakultas  Kedokteran  Universitas  Indonesia, 5  th  ed.  Farmakologi  dan  Terapi.  Jakarta: Balai Penerbit FK UI.
Soemarno,  2000. Teknik  Dasar  Pemeliharaan Mikroba . Jakarta: Intan Prawira
Staf  Pengajar  Bagian  Farmakologi  Fakultas Kedokteran  Universitas  Indonesia.  2008. Farmakologi  dan  Terapi  Edisi  5 .  Jakarta: Balai Penerbit FKUI.