## Pengaruh Merokok terhadap Frekuensi Pembentukan Mikronukleus pada Mukosa Mulut
Husein Ahmad*, Restadiamawati**
Latar belakang : Merokok dapat menyebabkan kerusakan genetik pada  mukosa  rongga  mulut  dan  meningkatkan  resiko  kanker mulut. Mikronukleus merupakan salah satu penanda kerusakan genetik, pengukuran frekuensi mikronukleus pada mukosa mulut dapat menjadi salah satu usaha untuk mendeteksi sejauh mana efek  genotoksik  merokok.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui pengaruh merokok terhadap frekuensi pembentukan mikronukleus pada mukosa mulut penggunanya.
Metode : Penelitian belah lintang yang membandingkan jumlah mikronukleus  pada  perokok  ( n =32)  dan  bukan  perokok  ( n =30), serta korelasi antara lama paparan dan frekuensi batang rokok per hari terhadap frekuensi mikronukleus perokok. Preparat diambil dari hapusan mukosa bukal dan dicat dengan metode modifikasi reaksi Feulgen-Rossenbeck .  Mikronukleus  dihitung  per  1000  sel tiap preparat.
Hasil  : Hasil  penelitian  tidak  didapatkan  perbedaan  bermakna jumlah  mikronukleus  kelompok  perokok  dan  kelompok  kontrol ( p =0,70)  dengan  rata-rata  jumlah  mikronukleus  5,28  pada kelompok  perokok  dan  4,3  pada  kelompok  kontrol.  Frekuensi mikronukleus  pada  kelompok  perokok  tidak  dipengaruhi  oleh lama merokok ( p =0,304) maupun frekuensi batang rokok per hari ( p =0,117).  Pada  kedua  kelompok  ditemukan  korelasi  bermakna antara usia dan frekuensi mikronukleus ( p =0,042) . Simpulan : Tidak terdapat pengaruh merokok terhadap frekuensi pembentukan  mikronukleus  pada  mukosa  mulut  kelompok perokok.
Kata kunci : Merokok, mikronukleus,mukosa mulut
*Mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang **Staf pengajar Bagian Ilmu Gigi dan Mulut Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang

## Abstrak
Background  : Smoking  causes  genetic  damage  in  oral  cavity mucose and increase the risk of oral cancer. Because micronucleus is  a  marker  of  genetic  damage,  measuring  its  frequency  might detect the genotoxic effects of smoking. The aim of this study was to measure the effect of smoking on frequency of micronucleus in oral mucosa .
Methods : Micronucleus frequencies of smoker ( n =35) and non- smoker groups ( n =35) were compared from mucosal swab of oral mucosa.  A  modification  of  Feulgen-Rossenbeck  staining  has performed.  Micronuclei  were  measured  per  1000  cells. Correlation between exposure time and frequency of smoking per day on micronucleus frequency was further investigated in smoker group.
Results : Mean frequencies of micronucleus in smoking and non- smoking  group  were  5.28  and  4.3,  respectively.  There  was  no significant  difference  of  micronucleus  count  from  smoking  and non-smoking  group  ( p =0.70).  Neither  exposure  time  nor frequency of smoking per day was an independent predictor of micronucleus  ( p =0.304  and  0.117).  Age  was  the  only  predictor showing  a  significant  correlation  in  micronucleus  frequency ( p =0.042) Conclusion : From these results, there is no relationship between smoking and the frequency of micronucleus in oral mucosa.
Keywords : Smoking, micronucleus, oral mucosa

## Abstract
Effect of Smoking on The Frequency of Micronuclei in Oral Mucosa

## Original Article
Med Hosp 2014; vol 2 (2) : 84-87

## Medica Hospitalia

## PENDAHULUAN
Asap  rokok  merupakan  klastogen  yang  dapat 1 menyebabkan  rusaknya  kromosom.   Asap  rokok mengandung  berbagai  senyawa  genotoksik  seperti polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) yang berasal dari
tar,  acrolein,  nitrosamine ,  dan benzopyrene .  Perokok  akan menghisap  dan  mengeluarkan  asap  rokok  sepanjang jalur pernapasan, sehingga asap rokok beserta senyawa genotoksik yang terkandung di dalamnya akan terlibat kontak  langsung  dengan  epitel  saluran  napas  seperti mukosa rongga mulut, hidung, nasofaring hingga paru
dan  menjadikan  kebiasaan  merokok  sebagai  salah  satu faktor  resiko  kanker  saluran  pernafasan  dan  kanker 2 mulut.  Salah satu deteksi dini dari kanker mulut adalah ditemukannya  mikronukleus  pada  sel  epitel  mukosa 3 mulut.
Pembentukan  mikronukleus  diawali  dengan 4 terpaparnya  jaringan  tubuh  dengan  bahan  mutagen. Mikronukleus  adalah  bangunan  kecil  di  luar  inti  yang terdapat dalam sitoplasma yang berasal dari kromosom atau  pecahannya  yang  tidak  bermigrasi  secara  normal pada fase anafase.
B e r d a s a r k a n   h u b u n g a n n y a   d e n g a n penyimpangan  kromosom,  pemeriksaan  mikronukleus telah  digunakan  sejak  tahun  1937  sebagai  indikator paparan genotoksik radiasi oleh Brenneke dan Mather. Hubungan  antara  terbentuknya  mikronukleus  dan kerusakan genom dapat digunakan sebagai dasar bahwa pemeriksaan  mikronukleus  cukup  efektif  sebagai biomarker yang  relevan  terhadap  karsinogenesis  kanker 5 mulut .
Kanker  mulut  termasuk  dalam  8  besar  kanker penyebab kematian di seluruh dunia. Sekitar 5 juta kasus baru kanker mulut dan faring ditemukan setiap tahun,
6 dimana  75%  ditemukan  di  negara  berkembang.   Di Indonesia  Frekuensi  relatif  diperkirakan  1,5–5%  dari 7 seluruh  kanker.   Angka  ini  meningkat  seiring  dengan meningkatnya  kebiasaan  masyarakat  yang  berpotensi menyebabkan  kanker,  seperti  merokok.  Dari  177.926 responden di Indonesia yang terdiri dari 86.493 pria dan 91.433  wanita,  ditemukan  28,2%  merupakan  perokok
7 aktif setiap hari, 37,3% berusia 25–34 tahun.  Prevalensi jumlah  perokok  muda  yang  tinggi  di  Indonesia  serta angka  kejadian  kanker  mulut  yang  cukup  tinggi  pula menunjukkan bahwa hubungan antara keduanya perlu diteliti.
Pada perokok berat (≥30 batang/hari) ditemukan 8 peningkatan signifikan terhadap kerusakan genotoksik. Penelitian  Oliveira  LU  dkk  (2012)  tidak  menemukan adanya  hubungan  merokok  dan  konsumsi  alkohol
9 dengan  peningkatan  pembentukan  mikronukleus.   Di Indonesia,  penelitian  hubungan  pembentukan mikronukleus dengan agen genotoksik lain seperti emisi kendaraan  bermotor  yang  mengandung  timbal  (Pb) sudah  pernah  dilakukan  dan  menunjukkan  perbedaan 10 signifikan  antara  yang  terpapar  dan  tidak  terpapar.
Penelitian  tentang  hubungan  pembentukan mikronukleus dengan kebiasaan merokok belum pernah dilakukan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengetahui seberapa  besar  pengaruh  kebiasaan  merokok  terhadap pembentukan mikronukleus pada mukosa mulut.

## METODE
Penelitian ini merupakan penelitian belah lintang yang dilakukan  di  kota  Yogyakarta  pada  bulan  Maret–April 2013.  Jumlah  sampel  yang  ditentukan  adalah  29  tiap
k e l o m p o k .   P e n e l i t i   m e m b a n d i n g k a n   j u m l a h mikronukleus pada perokok ( n =32) dan bukan perokok ( n =30), serta korelasi antara lama paparan dan frekuensi batang rokok per hari terhadap frekuensi mikronukleus perokok. Seluruh sampel berjenis kelamin laki-laki dan memiliki rentang usia 20–40 tahun serta memiliki Indeks Massa Tubuh Ideal. Sampel telah merokok jenis kretek selama minimal 3 tahun dengan frekuensi minimal 5 batang per hari. Preparat diambil dari hapusan mukosa bukal  dan  dicat  dengan  metode  modifikasi  reaksi Feulgen–Rossenbeck . Mikronukleus dihitung per 1000 sel tiap  preparat.  Status  kebersihan  mulut  ditentukan dengan  menggunakan  nilai  OHI-s (Simplified  Oral Hygiene Index) dan hanya memasukkan sampel dengan nilai OHI-s cukup yaitu hasil penjumlahan debris indek dan calculus indek sebanyak 1,3–3.
Uji normalitas data menggunakan uji Shapiro-Wilk ( n <50).  Uji t test  dilakukan  untuk  melihat  perbedaan frekuensi  mikronukleus  antara  kelompok  perokok  dan bukan perokok. Uji korelasi dan regresi dilakukan pada kelompok  terpapar.  Uji  tersebut  dilakukan  untuk mengetahui hubungan antara frekuensi merokok, lama merokok, dan usia terhadap pembentukan mikronukleus pada  kelompok  tersebut.  Batas  kemaknaan  atau signifikasi  ditentukan  p≤0,05  dengan  interval kepercayaan 95%.

## HASIL

## Karakteristik dan Distribusi Responden
Didapatkan 70 preparat, terdiri dari 32 preparat perokok dan  30  preparat  bukan  perokok  yang  dianalisis. Sebanyak 8 preparat masuk kriteria drop out karena tidak memenuhi  kriteria  1000  sel.  Uji  normalitas  data dilakukan  dengan  Uji Saphiro-Wilk .  Didapatkan  nilai signifikansi  pada  kelompok  perokok  adalah  0,169  dan pada  kelompok  bukan  perokok  adalah  0,078.  Sehingga dapat disimpulkan bahwa distribusi data adalah normal ( p >0,05).
Rata-rata frekuensi mikronukleus pada kelompok perokok  adalah  5,28  (SD=2,01)  dan  pada  kelompok bukan  perokok  sebanyak  4,3  (SD=2,16).  Hasil  uji t tes independen  didapatkan  nilai  signifikansi  0,70  ( p >0,05) yang berarti tidak terdapat perbedaan bermakna antara rerata  frekuensi  mikronukleus  kelompok  perokok  dan bukan perokok.
Hubungan lama merokok, frekuensi merokok per hari, usia dengan frekuensi pembentukan mikronukleus didapatkan  nilai  korelasi  antara  lama  merokok  dengan frekuensi mikronukleus adalah 0,188 dengan signifikansi 0,304 ( p >0,05). Nilai korelasi frekuensi merokok per hari dengan frekuensi mikronukleus adalah 0,283 ( p =0,117). N i l a i   k o r e l a s i   u s i a   d e n g a n   f r e k u e n s i mikronukleus  adalah  0,259  ( p =0,042).  Hal  ini menunjukkan bahwa lama merokok dan frekuensi rokok per  hari  tidak  berkorelasi  secara  signifikan  terhadap
Perbandingan Efektivitas Ondansetron dan Tramadol Intravena dalam Mencegah Menggigil Pasca Anestesi Umum
frekuensi  pembentukan  mikronukleus.  Usia  memiliki korelasi  yang  signifikan  terhadap  frekuensi pembentukan mikronukleus.
Koefisien R digunakan untuk mengetahui tingkat korelasi  ganda  variabel  usia,  lama  merokok,  dan frekuensi batang rokok per hari secara serentak terhadap variabel frekuensi mikronukleus. Nilai R yang diperoleh adalah 0,662 yang menunjukkan adanya korelasi positif yang  kuat  antara  variabel  usia,  lama  merokok,  dan frekuensi batang rokok per hari secara serentak terhadap variabel frekuensi mikronukleus.
Koefisien  R2  digunakan  untuk  mengetahui prosentase  sumbangan  pengaruh  variabel  usia,  lama merokok,  dan  frekuensi  batang  rokok  per  hari  secara b e r s a m a - s a m a   t e r h a d a p   v a r i a b e l   f r e k u e n s i mikronukleus.  Koefisien  ini  menunjukkan  seberapa besar  prosentase  variasi  variabel  independen  yang digunakan  dalam  model  mampu  menjelaskan  variasi variabel dependen. Berdasarkan tabel 3 diperoleh nilai R2 sebesar 0,439 yang berarti variabel usia, lama merokok, dan frekuensi batang rokok per hari secara bersama-sama memiliki  pengaruh  sebesar  43,9%  terhadap  frekuensi pembentukan mikronukleus.

## PEMBAHASAN
Di negara Eropa dan Amerika telah dilakukan penelitian hubungan  antara  frekuensi  mikronukleus  dengan 3 paparan  zat  genotoksik  termasuk  asap  rokok.   Gabriel dkk melaporkan adanya peningkatan dua kali lipat pada 11 frekuensi  mikronukleus  individu  perokok,   namun sebagian  besar  peneliti  melaporkan  bahwa  hubungan antara aktivitas merokok tidak menunjukkan hubungan yang  bermakna  terhadap  frekuensi  pembentukan 12,13 mikronukleus. Penelitian  di  negara-negara  maju tersebut dilakukan pada perokok jenis mild / rokok putih yang memiliki kandungan tar dan nikotin lebih rendah daripada  kandungan  tar  dan  nikotin  rokok  kretek  di Indonesia.
Maison  mengemukakan  bahwa  rokok  kretek memiliki  beberapa  kriteria  yang  berpotensi  untuk menimbulkan  efek  toksik  lebih  tinggi  daripada  rokok putih biasa. Di samping kandungan zat anestesi eugenol yang  tidak  terdapat  pada  rokok  putih,  rokok  kretek memiliki  lama  waktu  rata-rata  untuk  dikonsumsi lebih panjang daripada rokok biasa. Hal lain seperti rasa yang lebih mantap dan aroma yang lebih sedap memberikan kecenderungan  untuk  menambah  frekuensi  merokok 14 pada generasi muda.
Variabel  lama  merokok  menunjukkan  berapa lama seseorang sudah secara rutin terpapar asap rokok secara  aktif  dalam  satuan  tahun.  Gama  melaporkan dalam  penelitiannya  di  Yogyakarta  bahwa  terdapat pengaruh yang signifikan antara lama paparan terhadap frekuensi  mikronukleus  pada  mekanik  bengkel  motor 10 yang  terpapar  emisi  gas  buang  kendaraan.   Namun
dalam  penelitian  ini  tidak  ditemukan  hubungan  yang bermakna  antara  frekuensi  mikronukleus  dengan  lama seseorang terpapar senyawa genotoksik rokok  kretek.
Frekuensi batang rokok yang dikonsumsi per hari awalnya  diasumsikan  memberikan  pengaruh  yang cukup  signifikan  terhadap  frekuensi  mikronukleus. Meskipun  berkorelasi  positif  (0,283),  namun  pengaruh yang  diberikan  terhadap  frekuensi  mikronukleus dianggap  tidak  signifikan  ( p =0,117)  sehingga disimpulkan  tidak  ada  pengaruh  bermakna  antara frekuensi  batang  rokok  yang  dikonsumsi  per  hari terhadap frekuensi pembentukan mikronukleus.
Beberapa  variabel  perancu  yang  terdapat  dalam penelitian ini seperti tingkat kebersihan mulut dan usia, telah disetarakan untuk memperkecil kesalahan. Tingkat kebersihan  mulut  mungkin  dapat  mempengaruhi  hasil penelitian  karena  individu  dengan  kebersihan  mulut yang  buruk  akan  berpotensi  mengalami  kerusakan  sel karena  banyaknya  flora  pada  mulutnya  sehingga 10 penyebab kerusakan intisel yang terlihat menjadi rancu. Peneliti  mengukur  tingkat  kebersihan  mulut  dengan kriteria Oral  Hygiene  Index (OHI-s)  dan  hanya memasukkan sampel yang memiliki nilai OHI-s cukup.

## TABEL 1
Frekuensi mikronukleus
Variabel n Perokok 32 Rerata ± SD 5,285 ± 2,01 Bukan perokok 30 4,30 ± 2,16 p 0,070

## TABEL 2
Lama Merokok, Frekuensi Merokok dan Usia dengan Frekuensi Mikronukleus Variabel Lama merokok Lama merokok 1 Frekuensi Mikronukleus 0,188 p 0,304 Frekuensi rokok 1 0,283 0,117 Usia 1 0,259 0,042

## TABEL 3

## Tingkat korelasi ganda
Variabel bebas Koefisien R Frekuensi rokok per hari, usia dan lama merokok 0,662 2 Koefisien R 0,439

## Medica Hospitalia
| Vol. 2, No. 2, Mei 2014
Variabel  jenis  kelamin  dan  usia  juga  memiliki  peran cukup  penting  dalam  memberikan  interpretasi  yang salah  terhadap  jumlah  mikronukleus.  Orta  dan Gunebakan  melaporkan  bahwa  di  atas  usia  50  tahun, individu akan mengalami kerusakan kromosom bifasik dan  akan  mengakibatkan  penurunan  jumlah 1 5 m i k r o n u k l e u s .   M i l o s e v i c - D j o r d j e v i c   d a l a m penelitiannya  terhadap  populasi  di  Yugoslavia melaporkan  bahwa  penurunan  jumlah  mikronukleus 16 terjadi  setelah  usia  40  tahun.   Dalam  penelitian  ini dilakukan  pengambilan  sampel  laki-laki  pada  rentang usia  20–40  tahun.  Penelitian  ini  juga  mendukung beberapa penelitian di atas dengan menunjukkan adanya korelasi  yang  signifikan  antara  usia  dengan  jumlah mikronukleus pada rentang usia 20–40 tahun.
Dari  analisa  regresi  dapat  disimpulkan  bahwa variabel usia, lama merokok, dan frekuensi batang rokok per  hari  memiliki  pengaruh  sebesar  43,9%  terhadap frekuensi pembentukan mikronukleus.
Hasil penelitian ini menguatkan pendapat bahwa aktivitas  merokok  pada  sebagian  besar  individu  di Indonesia tidak secara signifikan berpengaruh terhadap frekuensi pembentukan mikronukleus. Hal ini mungkin disebabkan karena faktor lain seperti faktor keturunan, pola makan dapat berpengaruh terhadap pembentukan mikronukleus pada mukosa mulut.

## SIMPULAN
Hasil  penelitian  menyimpulan  bahwa  tidak  terdapat perbedaan yang signifikan pada frekuensi pembentukan mikronukleus  antara  kelompok  perokok  dan  bukan perokok,  kebiasaan  merokok  tidak  memiliki  pengaruh signifikan  terhadap  frekuensi  mikronukleus,  lama merokok dan frekuensi batang rokok yang dikonsumsi per  hari  tidak  menunjukkan  pengaruh  yang  signifikan terhadap  frekuensi  pembentukan  mikronukleus. Disarankan untuk dilakukan penelitian tentang dampak paparan asap rokok pada perokok pasif dan penelitian mengenai  pengaruh  zat-zat  yang  terkandung  dalam setiap  jenis  rokok  dalam  hubungannya  dengan pembentukan mikronukleus.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Lu  FC,  Kacew  S.  Basic  toxicology:  Fundamentals,  Target st Organs, and Risk Assessment. 1  ed. New York. Hemisphere; 1991.
2. Baca CT, Yahne CE. Smoking cessation during substance abuse treatment: What you need to know. Journal of Substance Abuse Treatment.2009;36(2):205–219.
3. Holland  N,  Bolognesi  C,  Bonassi  S,  Zeiger  E,  Fenech  M, Knasmueller S, dkk. The micronucleus assay in human buccal cells  as  a  tool  for  biomonitoring  DNA  damage:  The  HUMN project  perspective  on  current  status  and  knowledge  gaps. Mutation Research/Reviews in Mutation Research.2008;659(1- 2):93–108.
4. Jois  HS,  Kale  AD,  Kumar  M.  Micronucleus  as  Potential Biomarker  of  Oral  Carcinogenesis.  Indian  Journal  of  Dental Advancement.2010;02(02):197–202.
5. Pawitan  JA,  Suryono  IA.  Sensitivity  and  specificity  of  the micronucleus  test  in  hypotonic-swollen  mononuclear leukocytes compared to the micronucleus test in binucleated lymphocytes to assess chromosomal breaks. Anal Quant Cytol Histol.2006;28(3):175–180.
6. Ferlay J, Shin HR, Bray F, Forman D, Mathers C, Parkin DM. Globocan  2008  v2.0,  Cancer  Incidence  and  Mortality Worldwide: IARC CancerBase No. 10 [Internet].2010 [cited on 01/02/2013]; Lyon, France: International Agency for Research on Cancer. Available from: http://globocan.iarc.fr.
7. Riset  Kesehatan  Dasar.  Balai  Penelitian  dan  Pengembangan Kesehatan Kementerian Kesehatan RI. Depkes. (2010).
8. Bonassi  S,  Znaor  A,  Norppa  H,  Hagmar  L.  Chromosomal aberrations  and  risk  of  cancer  in  humans:  an  epidemiologic perspective. Cytogenet Genome Res.2004;104(1-4):376–382.
9. Oliveira  LU,  Lima  CF,  Salgado  MA,  Balducci  I,  Almeida  JD. Comparative study of oral mucosa micronuclei in smokers and alcoholic smokers. Anal Quant Cytol Histol.2012;34(1):9–14.
10. Mahardika PG. Pengaruh paparan emisi kendaraan bermotor terhadap  frekuensi  pembentukan  mikronukleus  di  mukosa rongga  mulut  pada  mekanik  bengkel  motor. Media  Medika Muda.2012.
11. Gabriel  HE,  Crott  JW,  Ghandour  H,  dkk.  Chronic  cigarette smoking  is  associated  with  diminished  folate  status,  altered folate form distribution, and increased genetic damage in the buccal  mucosa  of  healthy  adults.  Am  J  Clin  Nutr 2006;83:835–41.
12. Bagwe AN, Bhisey RA. Occupational exposure to tobacco and resultant genotoxicity. Mutat Res.1993;299(2):103–109.
13. Demarini, DeMarini DM. Genotoxicity of tobacco smoke and t o b a c c o   s m o k e   c o n d e n s a t e :   a   r e v i e w . M u t a t Res.2004;567(2–3):447–474.
14. Maison  JL,  Lee  EM.  Clove  cigarette  smoking  :  biochemical, physiological,  and  subjective  effects. Pharmacol  Biochem Behav.2003;74(3):739–745.
15. Orta  T,  Günebakan  S.  The  effect  of  aging  on  micronuclei frequency  and  proliferation  in  human  peripheral  blood lymphocytes. Indian J Hum Genet 2012;18:95–100.
16. Milosevic-Djordjevic.  Micronuclei  and  ageing  in  a  sample  of Yugoslavian population. Russian J of Gene. 2002;38(2). 201–204