Pengaruh Pemberian Vitamin E Terhadap Kadar Hemoglobin Maternal Tikus Rattus norvegicus Bunting yang Dipapar Asap Rokok Subakut
Agnestia Naning Dian Lovita*, Indriati Dwi Rahayu**, Bambang Prijadi***

## ABSTRAK
Paparan  asap  rokok  pada  kehamilan  berpengaruh  terhadap  penurunan  kadar  hemoglobin  akibat  proses stres oksidatif yang dapat berakibat buruk pada kehamilan dan janin. Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan bahwa vitamin E dapat mempengaruhi kadar hemoglobin tikus bunting yang dipapar asap rokok subakut. Studi eksperimental  menggunakan  r andomized  post  test  only  control  group  design dilakukan  terhadap  tikus Rattus norvegicus bunting  yang  dibagi  dalam  lima  kelompok:  kontrol  negatif,  kontrol  positif,  dosis  vitamin  E  100 mg/kgBB/hari, 200 mg/kgBB/hari dan 400 mg/kgBB/hari (n = 4). Pemberian vitamin E dimulai sejak hari pertama kebuntingan sedangkan pemaparan asap rokok dimulai pada hari ke–6 kebuntingan. Variabel yang diukur dalam penelitian ini adalah kadar hemoglobin darah maternal tikus bunting yang dibedah pada hari ke–20. Penelitian ini menunjukkan bahwa ada perbedaan yang bermakna antara kontrol negatif dan kontrol positif (p = 0,004), serta kontrol  positif  dan  dosis  400  mg/kgBB/hari  (p  =  0,013),  sedangkan  antar  kelompok  lain  tidak  menunjukkan adanya  perbedaan  yang  bermakna.  Namun  menurut  uji d  type  effect  size, pemberian  dosis  100  dan  200 mg/kgBB/hari  memiliki  efek  yang  besar  terhadap  perubahan  kadar  hemoglobin.  Penelitian  ini  menyimpulkan bahwa pemaparan asap rokok subakut mengakibatkan kenaikan kadar hemoglobin tikus bunting dan pemberian vitamin E menurunkan kadar hemoglobin tikus bunting.
Kata kunci: Asap rokok subakut, Bunting, Hemoglobin, Vitamin E.
Effect of Vitamin E on Maternal Hemoglobin Levels Pregnant Rats ( Rattus norvegicus) exposed to Subacute Cigarette Smoke

## ABSTRACT
Exposure  to  cigarette  smoke  during  pregnancy  is  associated  with  lower  hemoglobin  levels  due  to  the oxidative stress that affects the pregnancy and the fetus. This research aimed to prove that vitamin E can affect hemoglobin levels of pregnant rat exposed to subacute cigarette smoke. Experimental studies using randomized post test only control group design conducted on pregnant rats (Rattus norvegicus) were divided into five groups: negative control, positive control, the dose of vitamin E 100 mg/kg/day, 200 mg/kg/day and 400 mg/kg/day (n = 4).  Giving  vitamin  E  start  from  the  first  day  of  pregnancy  and  cigarette  smoke  exposure  start  on  6 th day  of pregnancy.  The  variables  measured  in  this  study  was  the  maternal  blood  hemoglobin  levels  of  pregnant  rats were dissected on 20 th day. The results showed that there were significant differences between the negative and positive control (p = 0.004), as well as the positive control and dose 400 mg/kg/day (p = 0.013), whereas the other groups showed no significant difference. But according to d type size effect, giving 100 and 200 mg/kg/day doses  had  a  large  effect  to  change  hemoglobin  levels.  The  conclusion  of  this  study  was  subacute  cigarette smoke exposure resulted in increase hemoglobin levels of pregnant rats, and vitamin E decrease hemoglobin levels in pregnant rats.
Keywords: Hemoglobin, Pregnancy, Subacute cigarette smoke, Vitamin E
* Program Studi Kebidanan, FKUB
**  Lab Anatomi Histologi, FKUB
***  Lab Biokimia, FKUB

## PENDAHULUAN
Pada tahun 2007, prevalensi perempuan  yang  terpapar  asap  rokok  di lingkungan  rumah  lebih  tinggi  (54,5  %) daripada  laki-laki  (26  %).  Dari  54,5  % perempuan tersebut, tidak menutup kemungkinan  ada  perempuan  hamil  di antaranya.  Wanita  hamil  yang  terus  menerus terpapar  asap  rokok  dapat  mengalami  efek negatif  yang  hampir  sama  tingkatannya dengan wanita hamil perokok aktif. 1 Racun utama dalam rokok adalah nikotin, tar  dan  karbon  monoksida  (CO).  Nikotin memiliki  efek  adiktif  dan  psikoaktif.  Tar merupakan  zat  karsinogenik  yang  dapat menyebabkan kanker pada saluran nafas dan paru-paru. 2 Karbon monoksida  dihasilkan  dari sisa  pembakaran  yang  tidak  sempurna. Sebanyak 85 % asap rokok yang berasal dari ujung rokok yang terbakar dapat dihirup bebas oleh orang disekitarnya ( side stream cigarette smoke). 3
Asap  rokok  mengandung  banyak senyawa  oksidan  yang  dapat  meningkatkan produksi  radikal  bebas.  Adanya  peningkatan ROS  akibat  paparan  asap  rokok  diimbangi dengan  sistem  pertahanan  antioksidan.  Akan tetapi pada saat level ROS meningkat melebihi sistem pertahanan antioksidan, terjadilah stres oksidatif.
Stres  oksidatif  memainkan  peran  penting dalam  patofisiologi  berbagai  penyakit.  Stres oksidatif  yang  muncul  akibat  paparan  asap rokok  mengakibatkan  turunnya circulating antioxidant micronutrient concentration. 4 Pada penelitian  yang  lain  disebutkan  bahwa paparan  asap  rokok  selama  kehamilan menurunkan  konsentrasi  vitamin  E  akibat meningkatnya  penggunaan  antioksidan  untuk menetralkan radikal bebas. 5 Tubuh
memerlukan  adanya  peningkatan  asupan bahan  antioksidan  yang  adekuat    dari  luar tubuh  agar  tidak  terjadi  kerusakan  sel  yang lebih lanjut akibat proses stres oksidatif. 5,6
Stres oksidatif yang terjadi pada sel darah merah mengakibatkan kadar eritropoietin turun dan mengganggu sintesis hemoglobin. 7 Selain itu  stres  oksidatif  juga  mengakibatkan integritas  sel  darah  merah  menjadi  lemah sehingga  sel  darah  merah  menjadi  sangat sensitif  dan  mudah  lisis. 8 Penelitian  lain menyatakan bahwa merokok selama
kehamilan  berhubungan  dengan  penurunan kadar  hemoglobin. 9 Rendahnya  kadar hemoglobin  berakibat  buruk  pada  kehamilan dan  janin,  seperti  abortus,  persalinan prematuritas, berat badan lahir rendah, mudah terjadi  infeksi,  perdarahan  antepartum, ketuban pecah dini (KPD), dan lain lain. 10 Kadar  hemoglobin  dapat  ditingkatkan dengan  pemberian  vitamin  E. 12 Bahan makanan sumber vitamin E mudah didapatkan dan  sangat  melimpah  di  alam.  Bahan makanan yang mengandung vitamin E antara lain  :  bayam,  kubis,  alpukat,  brokoli,  kiwi, kacang  almond,  minyak  gandum,  minyak jagung, minyak kedelai dan minyak biji bunga matahari.
Dengan  pemberian  vitamin  E  diharapkan meningkatkan  kadar  hemoglobin  pada  hewan coba sehingga mencegah munculnya dampak negatif pada kehamilan.

## BAHAN DAN METODE

## Desain Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian ekperimental  murni  dengan  rancangan penelitian randomized  post  test  only  control grup  design. Subjek  terdiri  dari  20  ekor  tikus bunting dibagi menjadi 5 kelompok perlakuan, yaitu  K(-)  (tidak  dipapar  asap  rokok  subakut dan tidak diberi vitamin E), K(+) (dipapar asap rokok subakut dan tidak  diberi vitamin E),  D1 (dipapar  asap  rokok  subakut  +  vitamin  E 100mg/kgBB/hari),  D2  (dipapar  asap  rokok subakut  +  vitamin  E  200mg/kgBB/hari),  D3 (dipapar  asap  rokok  subakut  +  vitamin  E 400mg/kgBB/hari).  Pemberian  vitamin  E dilakukan  mulai  hari  ke-1  kehamilan  sampai hari ke-19 kehamilan. Pemaparan asap rokok dilakukan  mulai  hari  ke-6  kehamilan  sampai hari ke-19 kehamilan. Setelah itu tikus dibedah pada hari ke-20 lalu diambil sampel darah dari jantung  untuk  dilakukan  pengukuran  kadar hemoglobin maternal.
Prosedur Inseminasi Tikus Inseminasi
dilakukan dengan
mencampurkan  hewan  jantan  dan  betina dengan perbandingan 1:4 atau 1:1 pada pukul 16.00 WIB dan dipisahkan lagi besok paginya pukul  05.00  WIB.  Jika  keesokan  harinya ditemukan vaginal plaque , maka hari tersebut dihitung sebagai hari pertama kebuntingan.

## Pemaparan Asap Rokok
Pemaparan  asap  rokok  menggunakan
alat smoking pump (standar pemaparan asap rokok FKUB). Tikus ditimbang berat badannya dengan  neraca ohaus sebelum  dipapar  asap rokok,  tempat  pemaparan  dibersihkan  dari kotoran  dan  sisa  asap.  Nikotin  yang  melekat pada smoking  pump dibersihkan  terlebih dahulu,  power  dan self  voltage diperiksa, rokok  dipasang  pada  pipa  sampai  batas merah,  3  ekor  tikus  dimasukkan  ke  dalam kotak  dan  segera  ditutup,  karena  pada smoking  pump hanya  tersedia  tiga  ruangan, setiap  pemaparan  asap  rokok  dilakukan dengan menjalankan pompa selama 7,5 menit untuk  1  batang  rokok,  kemudian  alat dimatikan,  tutup  dibuka  dan  selanjutnya  tikus segera  dipindahkan  ke  kandang  semula. Setiap  pemaparan  berikutnya  kotak  selalu dibersihkan  dahulu  dari  sisa  asap  rokok perlakuan sebelumnya. Pompa tetap dijalankan  tanpa  rokok  untuk  mengeluarkan sisa  asap,  tahap-tahap  di  atas  diulangi  untuk kelompok tikus berikutnya.
Penghitungan  Kadar  Hemoglobin  Induk Tikus Penghitungan kadar hemoglobin dilakukan  di  laboratorium  Fisiologi  Fakultas Kedokteran  Universitas  Brawijaya  dengan menggunakan  alat automated  hematology analyzer ( Macros  60 ). Volume  darah  yang dibutuhkan  sebesar  3  ml  yang  dimasukkan dalam tabung EDTA.

## Analisis Data
Hasil  pengukuran  kadar  hemoglobin maternal  tikus  bunting  dianalisis  secara statistik dengan menggunakan program SPSS
12.00 for Windows dengan tingkat signifikansi 0,05 (p < 0,05). Data dianalisis menggunakan uji one-way ANOVA , uji post hoc Tukey-HSD, uji korelasi Pearson , dan uji regresi.

## HASIL

## Kadar Hemoglobin
Pada  akhir  penelitian  jumlah  tikus  pada masing – masing kelompok tidak sama karena ada tikus yang dinyatakan tidak bunting. Kadar hemoglobin  paling  tinggi  terdapat  pada  pada kelompok  kontrol  positif.  Sedangkan  kadar hemoglobin  paling  rendah  terdapat  pada kelompok  kontrol  negatif  dan  kelompok perlakuan  dosis  400  mg/kgBB/hari  (Gambar 1).

## Uji one-way ANOVA
Dari  hasil  pengujian  diperoleh  nilai  p =  0,005.  Berdasarkan  hal  tersebut  maka hipothesis  Null  ditolak  sehingga  dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan kadar hemoglobin  maternal  tikus  bunting  diantara lima kelompok yang berbeda.
Uji post hoc Tukey-HSD
Metode post  hoc yang  digunakan  adalah Tukey-HSD.  Berdasarkan  hasil  pengujian statistik  diketahui  bahwa  kelompok  K(-) memiliki  perbedaan  yang  bermakna  dengan kelompok  K(+).  Namun  kelompok  K(-)  tidak memiliki  perbedaan  yang  bermakna  dengan kelompok  D1,  D2,  dan  D3  (p  =  0,092;  p  = 0,363; p = 0,895) (Gambar 2). Kelompok K(+) dan  D3  mempunyai  perbedaan  yang bermakna, sedangkan kelompok K(+) dengan D1  dan  D2  tidak  memiliki  perbedaan  yang bermakna (p = 0,286; p = 0,113) (Gambar 1). Dapat  diketahui  pula  bahwa  rerata  kadar hemoglobin kelompok K(+) memiliki kecenderungan  menurun  bila  dibandingkan dengan semua kelompok dosis perlakuan, dan nampak  kecenderungan  meningkat  antara rerata  kadar  hemoglobin  kelompok  kontrol negatif  dengan  semua  kelompok  dosis perlakuan (Gambar 1).

## Gambar 1. Rerata kadar hemoglobin tikus bunting (g/dl)
Uji d Type Effect Size Effect  size merupakan  ukuran mengenai  besarnya  efek  suatu  variabel  pada variabel  lain,  besarnya  perbedaan  maupun hubungan,  yang  bebas  dari  pengaruh besarnya  sampel  [14]. d  type  effect  size dihitung  berdasarkan  besarnya  perbedaan rerata  dua  kelompok  dibagi  standar  deviasi kelompok  kontrol  [15].  Uji d  type  effect  size menunjukkan ada pengaruh yang besar antara pemberian  vitamin  E  terhadap  perubahan
kadar  hemoglobin  pada  ketiga  dosis perlakuan.  Hasil  analisisnya  menunjukkan adanya  kenaikan effect  size dari  mulai  dosis 100,  200,  sampai  400  mg/kgBB/hari.  Dosis dengan  e ffect  size tertinggi  adalah  dosis  400 mg/kgBB/hari  (ES  =  2,342857)  yang  berarti dosis  ini  memiliki  efek  paling  besar  dalam mempengaruhi  perubahan  hemoglobin  akibat pemberian vitamin E (Gambar 2).
Gambar 2. Hasil uji d type effect size kadar hemoglobin antara kelompok kontrol positif dengan kelompok perlakuan lain
Walaupun  menurut  uji  statistik  tidak menunjukkan adanya pengaruh yang
bermakna  pada kelompok  dosis 100 dan  200 mg/kgBB/hari,  hasil  uji d  type  effect  size mengintrepretasikan  bahwa  kelompok  dosis 100 dan 200 mg/kgBB/hari memiliki efek yang besar  tehadap  perubahan  kadar  hemoglobin (ES  dosis  100  mg/kgBB/hari  =  1.285714,  ES dosis  200  mg/kgBB/hari  =  1.714286).  Nilai positif  dalam effect yang  diberikan,  semakin besar  pula  pengaruhnya  dalam  menurunkan hemoglobin darah tikus bunting.

## PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh  pemberian  vitamin  E  terhadap perubahan  kadar  hemoglobin  tikus  bunting yang  dipapar  asap  rokok  subakut.  Selama proses  inseminasi,  keberhasilan  kebuntingan tikus  kelompok  kontrol  positif  tergolong rendah.  Dari  8  ekor  tikus  yang  dimasukkan dalam  kelompok  kontrol  positif,  hanya  3  ekor tikus  yang  dinyatakan  bunting  dan  darahnya
dapat  diambil  sebagai  sampel  penelitian (Gambar 1).
Tingginya tingkat kegagalan kebuntingan tikus  kelompok  kontrol  positif  diduga  akibat kegagalan  implantasi  pada  tikus  yang  dipicu oleh  paparan  asap  rokok.  Pemaparan  asap rokok  dapat  menurunkan  keberhasilan implantasi. Salah satu kandungan asap rokok yang  menyebabkan  kegagalan  implantasi adalah  nikotin.
16 Nikotin  yang  masuk  dalam darah  baik  secara  langsung  maupun  tidak langsung akan menghambat proses pembelahan sel, kegagalan implantasi embrio akibat  kerusakan  uterus  dan  rusaknya  sel akibat  pemberian  senyawa  kimia  yang  ada dalam rokok. Kegagalan ini dapat terjadi pada awal  proses  implantasi,  dimana  zigot  yang telah  dibuahi  tidak  dapat  mencapai  uterus. Pada  24  jam  setelah  pembuahan,  terjadi pembelahan sel pertama. Menjelang hari ke–2 pembuahan  embrio  sudah  berbentuk  morula 16  sel,  hari  ke–3  embrio  masuk  ke  uterus, dilanjutkan  pembentukan  blastula.  Blastula berubah  menjadi  blastomer,  blastomer  akan berimplantasi  pada  hari  ke-4  dan  berakhir pada  hari  ke–6  kebuntingan.  Apabila  dalam tahap ini terjadi gangguan maka mengakibatkan  terjadinya  resiko  yang  sangat besar pada proses perkembangan selanjutnya.
20
Hasil  pengukuran  kadar  hemoglobin maternal  tikus  bunting  menunjukkan  bahwa rerata  kadar  hemoglobin  kelompok  kontrol positif lebih tinggi daripada kontrol negatif dan pada uji p ost hoc diketahui adanya perbedaan yang bermakna pada kelompok kontrol negatif dengan kontrol positif (p = 0,004).
Asap  rokok  mengandung  berbagai komponen kimia yang merugikan tubuh, salah satunya  adalah  karbon  monoksida.  Karbon monoksida merupakan produk dari pembakaran  tidak  sempurna  materi  organik rokok.  Karbon  monoksida  yang  terhirup  dan masuk  kedalam  alveoli  paru–paru  berikatan dengan hemoglobin membentuk karboksihemoglobin  (COHb).  Keberadaan karbon  monoksida  menghalangi  hemoglobin berikatan  dengan  oksigen  untuk  menyuplai
jaringan  tubuh  dan  otak.  Hal  ini  dapat menurunkan kapasitas pengangkutan oksigen yang diperlukan sel tubuh. 17
Afinitas ikatan Hb-CO 200 sampai 250 kali lebih kuat dibandingkan afinitas ikatan Hb–O 2 . Hal  ini  berarti  apabila  terdapat  CO  dalam tubuh  walaupun  dengan  kadar  yang  kecil, dapat secara drastis menurunkan kemampuan hemoglobin  untuk  mengangkut  oksigen. Bahkan  dalam  tubuh  seorang  perokok  berat, 20  % oxygen  active  site pada  hemoglobin terhalang  oleh  CO  sehingga  oksigen  tidak dapat terangkut. Akibat menurunnya kapasitas hemoglobin dalam mengangkut oksigen, tubuh mengalami hipoksia. 17
Hipoksia  jaringan  yang  terjadi  karena paparan  asap  rokok  menginduksi  produksi enzim heme  oxygenase  enzymes (HOE). Enzim ini mempengaruhi pembentukan karbon monoksida  dalam  tubuh  melalui  proses katabolisme  heme. 18 Keadaan  ini  semakin memberikan kontribusi buruk dengan meningkatkan  kadar  CO  dalam  tubuh  selain dari paparan asap rokok.
Penelitian yang dilakukan oleh Rizkiawati (2012) menyimpulkan adanya hubungan yang signifikan  antara  kebiasaan  merokok  dengan peningkatan  kadar  hemoglobin  darah. 19
Peningkatan  kadar  hemoglobin  ini  terjadi akibat  hipoksia  jaringan  yang  merangsang peningkatan produksi hormon eritropoietin dan menimbulkan eritropoiesis. Peningkatan produksi eritropoietin dalam hal ini merupakan proses yang  tepat  sebagai kompensasi  untuk memperkecil  hipoksia  jaringan. 2 Terdapat hubungan  antara  kehamilan,  paparan  asap rokok,  perubahan  hemoglobin  dan  pemberian vitamin  E  (Gambar  3). Selama  kehamilan tubuh  mengalami  stres  oksidatif.  Aktivasi leukosit dalam kehamilan normal menghasilkan respon inflamasi yang berhubungan dengan produksi SO anion pada kehamilan  trimester  pertama.  Stres  oksidatif dianggap  sebagai  kejadian  normal  pada trimester  kedua.  Hal  ini  didukung  dengan meningkatnya  produksi  lipid  peroksidase  oleh mitokondria,  radikal  bebas,  dan  vitamin  E dalam plasenta selama proses gestasi. 21
Gambar 3. Skema hubungan antara kehamilan, paparan asap rokok, hemoglobin, dan pemberian vitamin  E
Ada  peningkatan  aktivitas  glutation peroksidase yang signifikan selama kehamilan dibandingkan  dengan  tikus  betina  nulipara usia  normal.  Peningkatan  ini  terjadi  akibat adanya  peningkatan  metabolisme  oksidatif pada  hewan  yang  hamil.  Kenaikan  aktivitas glutation  peroksidase  merupakan  bentuk reaksi adaptasi tubuh terhadap stres oksidatif yang terjadi selama kehamilan. 22 Telah banyak diketahui  bahwa  glutation  peroksidase merupakan  salah  satu  antioksidan  endogen tubuh  bersama  dengan  SOD  dan  katalase. Antioksidan  endogen  juga  berperan  sebagai biomarker  stres  oksidatif  dalam  tubuh. 23
Dalam  keadaan  stres  oksidatif,  level peroksidasi  lemak  yang  diukur  dengan  kadar MDA semakin meningkat, sedangkan pemberian  vitamin  E  pada  keadaan  ini menurunkan  aktivitas  SOD,  katalase,  dan glutation peroksidase secara signifikan. 12
Terdapat  3  komponen  dalam  asap  rokok yang  mempengaruhi  hewan  coba,  yaitu nikotin,  tar  dan  karbon  monoksida.  Nikotin berperan  sebagai  zat  yang  mengakibatkan gangguan  implantasi  embrio  tikus  sehingga terjadi kegagalan implantasi. 16
Asap  rokok  mengandung  berbagai  zat kimia  beracun  dan  zat–zat  pro  oksidan  yang dapat  menghasilkan  ROS.  Fase  gas  pada asap rokok berisi racun dan radikal bebas. Tar yang  larut  air  dapat  membentuk  ROS  seperti SO (superoxide) anion,  H 2 O 2 dan  radikal hidroksil.  Keberadaan  ROS  yang  berlebih
dalam tubuh dapat merusak struktur dasar sel dan  DNA.
21 Sementara  karbon  monoksida memiliki 2 jalur yang berkontribusi menimbulkan  stres  oksidatif.  Jalur  pertama adalah saat CO berikatan dengan hemoglobin akan  membentuk  ikatan  karboksihemoglobin. Ikatan  ini  mengakibatkan  hemoglobin  tidak dapat  mengangkut  oksigen  sehingga  suplai oksigen  dalam  tubuh  tidak  adekuat. Kurangnya  suplai  oksigen  menyebabkan hipoksia  jaringan. 17 Hipoksia  jaringan  memicu produksi  hormon  eritropoietin  yang  berfungsi meningkatkan  eritropoiesis  sebagai  bentuk mekanisme  kompensasi  untuk  menangani hipoksia  dan  memenuhi  kebutuhan  oksigen tubuh. 20
Jalur kedua adalah akibat adanya oksigen dalam  struktur  kimia  karbon  monoksida. Karbon  monoksida  bukan  termasuk  jenis radikal  bebas  namun  senyawa  ini  dapat menginisiasi  proses  biologis  tubuh  untuk menghasilkan radikal bebas. Semua senyawa yang  mengandung  oksigen  dapat  memicu pembentukan  radikal  bebas.  Hal  ini dikarenakan  O 2 bersifat  diradikal  dan merupakan pereaksi (agen) dari radikal bebas. Oksigen  yang  berasal  dari  senyawa  karbon monoksida  juga  dapat  memicu  pembentukan radikal bebas. Misalnya saat oksigen bertemu dengan  L-arginin  dapat  membentuk  radikal bebas  seperti  nitrit  oksida  (NO)  dan  nitrit peroksida (NO 2 ). 21,24
Vitamin  E  adalah  vitamin  larut  lemak dengan  aktivitas  antioksidan  didalamnya. Vitamin  E  memerankan  peran  utama  dalam aktivitas  antioksidan  karena  bereaksi  dengan lemak  radikal  yang  dihasilkan  selama  proses peroksidasi  lemak.  Reaksi  ini  menghasilkan oxidized–tocopheroxyl  radicals yang  dapat diubah  kembali  menjadi  bentuk  reduksi  yang aktif dengan beraksi dengan antioksidan yang lain, seperti  ascorbate, retinol, atau ubiquinol. Inilah  yang  menyebabkan  efek  antioksidan vitamin  E  akan  lebih  optimal  bila dikombinasikan dengan vitamin A atau C.
25 Vitamin E menghambat proses peroksidasi  lemak  pada  PUFA.  Asam  lemak pada  PUFA  berikatan dengan  O 2 membentuk radikal  peroksil  yang  mendapatkan  H + dari asam lemak lain sehingga menciptakan reaksi yang  berkelanjutan.  Vitamin  E  dapat memutuskan  rantai  ikatan  ini  karena kelarutannya dalam lemak dan ekor hidrofobik yang dimilikinya. 26
Dalam penelitian ini vitamin E melindungi melindungi  tubuh  dari  kerusakan  akibat  stres oksidatif dengan mekanisme :
1. Mempengaruhi proses eritropoiesis a.  Sebagai  faktor  esensial  eritropoiesis  yang meningkatkan  sintesis  hemoglobin  dan meningkatkan  jumlah  unit  koloni  prekusor eritrosit (CFU-E).
11 Hal ini sejalan dengan hasil penelitian yang menunjukkan adanya peningkatan  kadar  hemoglobin  akibat pemberian  vitamin  E  pada  kelompok perlakuan bila dibandingkan dengan kelompok kontrol  negatif.  Dengan  pemberian  vitamin  E,
proses eritropoiesis yang didalamnya termasuk sintesis hemoglobin akan meningkat. Peningkatan  ini  sebagai  bentuk  kompensasi tubuh  terhadap  hipoksia  jaringan  akibat paparan  asap  rokok.  Hal  inilah  yang  menjadi penjelasan  adanya  kecenderungan  yang meningkat  antara  rerata  kadar  hemoglobin kelompok  kontrol  negatif  dengan  dosis  100, 200, dan 400 mg/kgBB/hari.
b.  Stabilisasi  proses  metabolisme  eritrosit yang mencegah perkembangan proses stress oksidatif  dan  hipoksia. 27 Dengan  adanya peningkatan sirkulasi antioksidan dalam tubuh, maka  tubuh  mampu  meregulasi  seberapa banyak  tubuh  memerlukan  peningkatan produksi  hemoglobin.  Dalam  penelitian  ini ditunjukkan  dengan  adanya  perbedaan  rerata
kadar hemoglobin pada ketiga dosis kelompok perlakuan  yang  menandakan  mekanisme kompensasi  tubuh  tidak  sama  terkait  ada tidaknya sirkulasi antioksidan c.    Vitamin  E  meningkatkan  kadar  oksihemo- globin  darah. 12 Hal  ini  menandakan  bahwa konsentrasi  oksigen  dalam  tubuh  meningkat sehingga  tubuh  tidak  perlu  lagi  melakukan kompensasi  dengan  meningkatkan  produksi hemoglobin.  Inilah  yang  diduga  menjadi alasan terjadinya penurunan kadar hemoglobin  pada  sampel  darah  setelah pemberian vitamin E dengan berbagai dosis.
2. Mencegah  reaksi  perusakan  oleh  radikal bebas
a.  Mengatur  kadar  antioksidan  dalam  tubuh mendekati  level  normal  sehingga  sel  tubuh selalu  terproteksi  dari  serangan  radikal bebas. 28,29
b. Vitamin E sebagai penangkap radikal bebas dan  berubah  menjadi  tokoferil  radikal  yang dapat direaktivasi lagi. 30
Kadar  hemoglobin  kelompok  tikus  hamil yang  dipapar  asap  rokok  subakut  dan  diberi vitamin  E  dosis  400  mg/kgBB/hari  berbeda secara  bermakna  dengan  kelompok  kontrol positif.  Selain  itu,  rerata  antara  kadar hemoglobin kelompok tikus hamil yang dipapar asap rokok subakut dan diberi vitamin E dosis 3  paling  mendekati  rerata  kadar  hemoglobin kelompok  kontrol  negatif  dimana  tikus  hamil diperlakukan secara normal. Rerata hemoglobin  kelompok  kontrol  negatif  adalah 11,200  g/dl  sedangkan  rerata  hemoglobin kelompok tikus hamil yang dipapar asap rokok subakut  dan  diberi  vitamin  E  dosis  3  adalah 11,560  g/dl.  Menurut  hasil  analisis d  type effect  size, dosis  dengan  e ffect  size tertinggi adalah  dosis  400  mg/kgBB/hari  (ES  = 2,342857) yang berarti dosis ini memiliki efek paling besar dalam mempengaruhi perubahan hemoglobin  akibat  pemberian  pemberian vitamin  E.  Berdasarkan  hal  tersebut  diatas, maka dapat disimpulkan dosis vitamin E yang paling efektif dalam penelitian ini adalah dosis ke–3 yaitu 400 mg/kgBB/hari.

## KESIMPULAN
1. Pemaparan  asap  rokok  subakut  pada tikus  hamil  mempengaruhi  kenaikan kadar hemoglobin.
2. Pemberian  vitamin  E  mempengaruhi penurunan  kadar  hemoglobin  maternal tikus  hamil  yang  dipapar  asap  rokok subakut.
3. Vitamin E telah terbukti mampu berperan sebagai  antioksidan  dalam  proses  stres oksidatif  akibat  paparan  asap  rokok subakut.
4. Dosis optimal vitamin E dalam penelitian ini adalah dosis 400 mg/kgBB/hari.

## SARAN
1. Waktu pemaparan asap rokok sebaiknya dimulai  setelah  selesainya  proses implantasi embrio tikus untuk menghindari kegagalan implantasi. 2. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai pengaruh pemberian vitamin E terhadap  kadar  hemoglobin  maternal tikus  bunting  yang  dipapar  asap  rokok dengan  jumlah  sampel  yang  lebih  besar dan waktu paparan yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Riskesdas. Konsumsi rokok dan prevalensi  merokok.  2007. (online). www.riskesdas.litbang.depkes.go.id . 2. Gondodiputro  S.  Bahaya  Tembakau  dan Bentuk-Bentuk Sediaan Tembakau. Bandung  :  Ilmu  Kesehatan  Masyarakat Fakultas Kedokteran Universitas Padjajaran. 2007. 3. Goel  P,  Radotra  A,  Singh  I,  Aggarwal  A,
Dua D. 2004. Effects of Passive Smoking on  Outcome  in  Pregnancy. J  of Postgraduate Medicine . 50:12–16.
4. Alberg  A.  The  Influence  of  Cigarette Smoking on Circulating Concentrations of Antioxidant  Micronutrients.  (Abstract). Toxicology. 2002.180(2):121–137. 5. Chelchowska M, Laskowska KT, Leibschang  J.  The  Effect  of  Tobacco Smoking During Pregnancy on Concentration  of  Vitamin  E  in  Blood  of Mothers and Their Newborns in Umbilical
Cord Blood. (Abstract). Ginekol Pol . 2006. 77(44):263–268.
6. Hippeli S, Dornisch K, Brink M, Lorenz R, Jeschke  D,  Elstner  EF.  Attenuation  of Blood  Parameters  in  Smokers  and  Non-
Smokers After Intake of A Complex Food Additive.  (Abstract). Z  Naturforsch  C. 2003; 58(1-2): 119–127.
7. Waggiallah  H,  Alzohairy M.  The  Effect  of Oxidative  Stress  Ion  Human  Red  Cells Glutathione  Peroxidase,  Glutathione Reductase  Level  and  Prevalence  0f Anemia  Among  Diabetics. N  Am  J
Med. 2011;3(7):3447.doi:10.4297/najms.2 011.3344. 8. Fibach  E,  Rachmilewitz  E.  The  Role  of Oxidative  Stress  In  Hemolytic  Anemia. (Abstract). Curr Mol Med. 2008;8(7):609–
619 .
9. Subramoney  S,  Gupta  PC.  Anemia  in Pregnant  Woman  Who  Use  Smokeless Tobacco.  (Abstract). Nicotin  Tob  Res. 2008;10(5): 917–920.
10. Manuaba, IBG. Ilmu Kebidanan, Penyakit Kandungan  &  Keluarga  Berencana  untuk Pendidikan Bidan . Jakarta: EGC. 2010. 11. Cherdyntseva  N,  Shishkina  A,  Butorin  I, Murase H, Gervas P, Kagiya TV. Effect of Tocopherol  Monoglucoside  (Tmg)  :  A Water-Soluble  Glycosylated  Derivate  of Vitamin E, on Hematopoietic Recovery In Irradiated  Mice. J  Radiant  Res. 2005;
6:37– 41.
12. Hassan NS, Awad SM. Reverse Effect of Vitamin E on Oxidative Stress, Derivatives and  Conductivity  Change  of  Hemoglobin Induced  by  Exposure  to  Cadmium. Journal  of  Applied  Science  Research . 2007;3(6):437– 443.
13. Tome AR, Feng D, Freitas RM. The Effect of  Alpha-Tocopherol  on  Hippocampal Oxidative  Stress  Prior  to  in  Pilocarpine- Induced  Seizure.  (Abstract). Biomedical and Life Sciences. 2010;35(4):580–587 . 14. Olejnik  S,  Algina  J.  Generalized  Eta  and Omega  Squared  Statistics:  Measures
Effect  Size  for  Some  Common  Research Designs. Psychological
Methods.
2003;8(4):434–447.
15. Kain  ZN,  MacLaren  JP.  Less  Than  .05: What  Does  It  Really  Mean?. Pediatrics. 2007; 119(3):608–610.
16. Samsuria.  Efek  Asap  Rokok  pada  Tikus ( Rattus  norvegicus )  Bunting  Terhadap Tampilan  Fisiologis  Induk  dan  Anaknya Setelah Dilahirkan . Tesis. Bogor : Sekolah
Pasca  Sarjana  Institut  Pertanian  Bogor. 2009. 17. Vukomanovic P, Jokanovic M, Radosavljevic  Z.  The  Effect  of  Tobacco Smoke from Cigarette Exposed to Pulsed Electromagnetic  Field  in  The  Rat. Afr  J Pharm Pharmacol. 2011; 5(6):726–730.
18. Pryor  WA,  Houk  KN,  Foote  CS,  Fukuto JM, Ignarro LJ, Squadrito GL, et al. Free Radical  Biology  :  It’s  A Gas, Man!. Am  J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2006; 291:491–511.
19. Rizkiawati  A.  Faktor  –  Faktor  yang Berhubungan  dengan  Kadar  Hemoglobin (Hb) Dalam Darah pada Tukang Becak di Pasar Mranggen Demak. Jurnal Kesehatan  Masyarakat .  2012;  1(2):663  – 669. 20. Alviventiasari  R.  Pengaruh  Pemberian
Dosis Bertingkat Jus Mengkudu ( Morinda citrifolia L)  Terhadap  Jumlah  Eritrosit Tikus  Galur  Wistar  ( Rattus  norvegicus ) yang Diberi Paparan Asap Rokok. Tugas Akhir.    Semarang:    Fakultas  Kedokteran
Universitas Diponegoro. 2012.
21. Agarwal  A,  Mellado  AA,  Premkumar  BJ, Shaman  A,  Gupta  S.  The  Effects  of Oxidative Stress on Female Reproduction: A  Review. Reproductive  Biology  and Endocrinology. 2012; 10–49.
22. Gallo  G,  Martino  G.  Red  Blood  Cell Glutathione  Peroxide  Activity  in  Female Nulligravid and Pregnant Rats. Reproductive  Biology  and  Endocrology.
2009; 7:7.
23. Sadighara  P.  RBC:  Tool  for  Oxidant Agents Screening Test. Australian Journal of  Basic  and  Applied  Science .  2009;
3(3):2970– 2973.
24. Revianti S. Pengaruh Radikal Bebas pada Rokok  Terhadap  Timbulnya  Kelainan  di Rongga  Mulut. Denta  J  Ked  Gigi  FKG
UHT . 2007; 1(2).
25. Behrman  HR,  Kodaman  PH,  Preston  SL, Gao S. Oxidative Stress and The Ovary. J Soc Gynecol Investig. 2001; 8:40–42.
26. Burton GJ, Jaunlaux E. Oxidative Stress. Best  Pract  Res  Clin  Obstet  Gynaecol.
2010; 25(3):287–299.
27. Ersteniuk  HM.  Effect  of  Selenium  on Metabolic  Processes  in  Erythrocytes
During Cadmium Intoxication. Lik Sprava . 2004; 2:65-7.
28. Valko  M,  Rhodes  CJ,  Moncol  J,  Izakovic M,  Mazur  M.  Free  Radicals,  Metals  and Antioxidants  in  Oxidative  Stress-Induced Cancer. Chem Biol Interact. 2006; 160:1- 40.
29. El-Demerdash  FM,  Yousef  MI,  Kedwany FS,  Baghdadi  HH.  Cadmium-Induced Changes  in  Lipid  Peroxidation,  Blood Hematology, Biochemical Parameters and Semen  Quality  of  Male  Rats:  Protective Role  of  Vitamin  E  and  B-Carotene. Food Chem Toxic. 2004; 42:1563–1571. 30. Valko M, Leibfritz D, Moncol J, Cronin MT, Mazur  M,  Telser  J.  Free  Radicals  and Antioxidants  in  Normal  Physiological Functions  and  Human  Disease. Int.  J Biochem Cell Biol. 2007; 39:44-84