Jurnal Pro-Life, Volume 10 Nomor 1, Maret 2023
Isolasi dan Uji Patogen Bakteri Asam Laktat (BAL) dari Usus Ayam Kampung yang Dipelihara Secara Intensif Di Kefamenanu
Welsiliana 1* , Charles Venirius Lisnahan 2 , Lukas Pardosi 1
1 Program Studi Biologi, Universitas Timor
2 Program Studi Peternakan, Universitas Timor * Corresponding author : welsiliana@unimor.ac.id

## Article History
Received    :   09 January 2023 Approved   :   06 February 2023 Published   :  31 March 2023

## Keywords
LAB , native chicken intestine, pathogenic bacteria.

## ABSTRACT
This study aimed to isolate LAB from the intestines of native chickens and  to  test  the  ability  of  LAB  activity  against  pathogenic  bacteria. Bacterial isolation was carried out by taking chicken intestines, then diluting up  to  10 2 .  The  results  of  the dilution  were  taken 1  ml  to be inoculated  into  MRSA  media  using  the  pour  plate  technique,  streak plate technique was used to obtain pure cultures and then incubated at  37˚C  for  24  hours.  LAB  culture  testing  for  pathogenic  bacteria was  carried  out  using  MHA  media  containing  Escherichia  coli cultures,  then  incubation  for  120  hours  at  37˚C.  Observation parameters  included  colony  shape,  colony  color,  number  of  LAB colonies,  the  diameter  of  the  clear  zone  and  LAB  colonies.  The results showed that the bacteria isolated from the intestines of native chickens  were  LAB  which  had  around  colony  shape  and  were yellowish-white  (beige)-milky  white.  The  number  of  LAB  colonies obtained  was  3.7  x  10 5 CFU/ml  with  the  best  inhibitory  ability  of pathogenic  bacteria  found  in  USA  3  isolates  (1.85  cm  clear  zone; 0.90 cm colony size) after incubation for 120 hours .

## PENDAHULUAN
Bakteri asam laktat (BAL)
merupakan anggota mikroba yang populasinya  ditemukan  di  dalam  usus ayam, tanaman, dan kotoran yang memainkan  peran  penting  dalam  menjaga keseimbangan  ekologis  antara  berbagai spesies mikroorganisme (Messaoudi et al .,
2011). Peranan BAL sampai saat  ini masih terus dikembangkan karena memiliki manfaat  yang  begitu  banyak,  misalnya  di industri  fermentasi  makanan,  produk– produk  fermentasi  susu  sampai  pada penggunaan  BAL  untuk  pakan  (Chim– anage et  al .,  2008;  Bintsis  2018;  Colombo

## Prolife

## Jurnal Pendidikan Biologi, Biologi, dan Ilmu Serumpun
https://ejournal.uki.ac.id/index.php/prolife
© 2023 Universitas Kristen Indonesia Under the license CC BY-SA 4.0
et al ., 2018). Selain itu, mikroorganisme ini dapat  meningkatkan  pencernaan  laktosa, merangsang  sistem  kekebalan  tubuh  dan mengobati penyakit diare, diabetes, menurunkan kolestrol dan lain–lain (Ashraf & Shah, 2014; Mathur et al ., 2020).
Secara alamiah BAL berada di dalam usus  unggas,  akan  tetapi  keberadaanya relatif  tidak  stabil  karena  dipengaruhi  oleh kondisi  lingkungan  dan  pakan.  Madigan et al .,  (2009)  menjelaskan  bahwa  kelompok bakteri  asam  laktat  merupakan  mikroflora normal  dalam  saluran  pencernaan  ayam terutama  yang  hidup  dalam  usus  halus  dan usus  besar.  BAL  di  dalam  usus  dapat menghasilkan  berbagai  senyawa  seperti asam  organik,  diasetil,  hidrogen  peroksida,
dan  bakteriosin  atau  protein  bakterisida selama fermentasi laktat (Musikasang et al .,
2009).  Kemampuan  BAL  menghasilkan senyawa–senyawa  tersebut,  menjadikan mikroorganisme  ini  dimanfaatkan  sebagai probiotik.  Kinerja  mikroba  probiotika umumnya  mengeluarkan  senyawa  toksin yang  dapat  mereduksi  atau  menghambat perkembangan  mikroba–mikroba  patogen dalam  organ  pencernaan  termasuk  pada saluran pencernaan ayam Kampung.
Ayam  Kampung  merupakan  ayam lokal  yang  terus  dikembangkan  melalui produksi  daging  dan  telur.  Akan  tetapi,
kemampuan  produktivitas  ayam  Kampung belum  optimal  karena  kualitas  pakan  yang masih  tergolong  rendah  (Permana et  al .,
2014).  Lisnahan et  al .,  (2018)  juga menyatakan  bahwa  reproduktivitas  dan produktivitas ayam Kampung sangat ditentukan  oleh  komposisi  pakan.  Kendala tersebut dapat diatasi dengan meningkatkan sistem  pemeliharaan  ayam  secara  intensif melalui pemberian pakan yang memperhatikan keseimbangan antara makro  dan  mikro  nutrien,  sehingga  dengan bertambahnya  asupan  nutrien  dari  pakan dapat  mempengaruhi  pertumbuhan  ayam Kampung.  Selain  itu,  dengan  pemberian pakan  yang  berkualitas  diharapkan  dapat meningkatkan kekebalan tubuh ayam terhadap penyakit melalui aktivitas mikroba probiotik (Ahmad, 2006).

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  usus ayam Kampung, media de Man Rogose and Sharpe  Agar (MRSA),  media Nutrient Broth (NB),  media Muller  Hilton  Agar (MHA), cotton  bud  swab steril,  HCl, aquades, alkohol 70%, kertas label dan tisu. Alat  yang  digunakan  yaitu  cawan  petri, tabung  reaksi,  erlenmeyer,  jarum  ose, bunsen,  pipet  mikro  1000  µL,  gelas  ukur, gunting,  pinset,  timbangan  analitik,  oven, autoclave , hotplate dan laminar air flow .

## Isolasi Bakteri BAL
Ayam Kampung yang telah dipelihara secara  intensif  diambil  sebagai  sampel, kemudian dilakukan pembedahan.
Selanjutnya  diambil  bagian  usus  untuk dilakukan  isolasi  bakteri  di  laboratorium.
Teknik isolasi bakteri yang digunakan yaitu metode  tuang  atau  sebar  ( pour  plate ), metode  ini  adalah  tahapan  awal  untuk menumbuhkan  BAL  di  media  MRSA (Amin et al ., 2018).
Isolasi BAL dilakukan dengan mengambil  usus  yang  telah  dipotong ukuran  1  cm,  kemudian  secara  aseptik disuspensikan  ke  dalam  larutan  fisiologis (HCl).  Selanjutnya  untuk  mendapatkan koloni bakteri yang terpisah, maka dilakukan  pengenceran  10 0 ,  10 1 dan  10 2 .
Hasil pengenceran selanjutnya diambil 1 ml kemudian  diinokulasikan  ke  dalam  media MRSA  dengan  teknik  pour  plate  dan diinkubasi  37˚C  selama  48  jam.  Koloni yang  tumbuh  diambil  1  ose  untuk diinokulasikan  kembali  ke  media  MRSA dengan teknik gores ( streak plate ), kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37˚C selama  24  jam  sehingga  didapatkan  biakan murni  (Chotiah  &  Damayanti,  2018;  Putri
& Kusdiyantini, 2018; Shazali et al ., 2019).

## Perhitungan Koloni Bakteri BAL
Total  koloni  bakteri  dihitung  dengan metode  cawan  agar  (Sari et  al .,  2013).
Sebanyak 1 gr usus ayam diinokulasikan ke dalam  100  ml  NB,  kemudian  dinkubasi selama 24 jam. Dilakukan pengenceran 10 0 ,
10 1 , 10 2 , 10 3 , 10 4 , 10 5 , 10 6 , 10 7 , selanjutnya disuspensikan  ke  dalam  media  MRSA  dan diinkubasi  selama  24  jam.  Koloni  BAL
yang  tumbuh  di  media  MRSA  dihitung dalam  satuan Colony  Formil  Units  per milliliter (CFU/ml).  Koloni  bakteri  yang tumbuh  dari  pengenceran  diambil  antara 30–300  koloni.  Parameter  pengamatan meliputi  bentuk  koloni,  warna  koloni  dan jumlah koloni BAL.

## Pengujian  Aktivitas  BAL  Terhadap

## Bakteri Patogen
Media  MHA  dituang  ke  dalam  6 cawan  petri  dan  dibiarkan  hingga  media padat.  Biakan  bakteri  patogen  ( E.  coli ) diambil  menggunakan cotton  bud  swab steril,  kemudian  digores  ke  media  MHA sampai  memenuhi  seluruh  permukaan media.  Selanjutnya  diambil  1  ose  biakan BAL,  kemudian  ditotol  diatas  permukaan media  MHA  yang  permukaannya  terdapat E.coli ,  diinkubasi  selama  120  jam  pada suhu  37˚C.  Diameter  zona  bening  yang terbentuk dan koloni bakteri diukur dengan menggunakan penggaris atau mistar (Sumual et al ., 2019).

## Analisis Data
Data  hasil  penelitian  yang  diperoleh dianalisis  secara  deskriptif  yaitu  dengan menvisualisasikan data menggunakan grafik, tabel dan gambar. Besarnya kamampuan  aktifitas  BAL  menghambat bakteri patogen dilakukan dengan mengukur diameter zona bening dan koloni.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada umumnya ayam Kampung yang dipelihara  terdiri  atas  tiga  cara  yaitu, tradisional atau ekstensif, semi-intensif dan intensif.  Pemeliharaan  secara  ekstensif membutuhkan  pekarangan  luas  agar  ayam Kampung dapat mencari makan sendiri atau dibiarkan  hidup  bebas  secara  alami, berkembang  biak  (mengerami  telur)  dan saat  petang  bertengger  di  atas  pohon (Henuk  &  Bakti,  2018).  Sistem  semi- intensif  merupakan  model  pemeliharaan dengan membuat kandang terbuka,
pemberian pakan dan minum  secara teratur tetapi pemberian vaksin ataupun obat bukan hal  yang  rutin  dilakukan  (Muladno,  2008).
Selanjutnya  sistem  pemeliharaan  secara intensif  merupakan  pemeliharaan  yang dilakukan secara profesional dengan membuat kandang khusus atau tertutup dan sangat memperhatikan kebersihan kandang, kualitas  sanitasi,  keseimbangan  nutrisi pakan  serta  pemberian  vaksin  dan  obat- obatan (Suprayogi et al ., 2018; Ismoyowati & Setianto, 2021).
Ayam  Kampung  yang  dipelihara  di pekarangan  cenderung  memiliki  adaptasi yang lebih tinggi terhadap tekanan lingkungan  misalnya  penyakit  menular berbeda  dengan  ayam  yang  dipelihara secara  intensif  untuk  memeliharanya  agar terhindar  dari  penyakit  maka  biasanya diberikan  tambahan  antimikroba  dalam pakan  dan  air  (Hedman et  al .,  2020).
Walaupun  pemeliharaan  secara  ekstensif memberikan  keuntungan  dari  segi  biaya pemeliharaan yang lebih murah tetapi tidak memberikan keuntungan dari segi produksi. Berbeda  dengan  ayam  Kampung  yang dipelihara  secara  intensif  pertumbuhannya lebih  tinggi  dengan  masa  pemeliharaan relatif  lebih  singkat  (Suprayogi et  al .,
2018),  produksi  telur  lebih  meningkat, kematian  anak  ayam  (teknik  pisah  induk) lebih  rendah  dan  bobot  ayam  bertambah (Wati, 2007).
Isolasi bakteri yang dilakukan melalui beberapa  tahapan  yaitu  menginokulasikan usus  ayam  ke  dalam  larutan  fisiologis, pengenceran  sampai  10 7 dan  penanaman suspensi  bakteri  ke  media  MRSA  sampai didapatkan  biakan  bakteri  murni.  Tujuan dilakukannya  isolasi  mikroba  yaitu  untuk mendapatkan  kultur  murni  mikroba  yang diinginkan  tanpa  kontaminasi  mikroba lainnya  (Sumarsih et al .,  2012).  Kultur murni mikroba didapatkan sampai terbentuknya koloni tunggal atau tumbuhnya  secara  terpisah  (Putri  & Kusdiyantini,  2018).  Pemurnian  kultur didapatkan  apabila  dilakukan  inokulasi  ke media  secara  berulang  atau  digunakan media  spesifik  yang  dapat  menumbuhkan mikroba  target.  Media  MRSA  merupakan media  spesifik  yang  memiliki  senyawa khusus  dan  biasanya  tidak  ditemukan dimedia  kultur  lainnya  sehingga  dapat menumbuhkan  BAL  (de  Mesquita et al .,
2017).  Oleh  karena  itu  penelitian  ini
digunakan media MRSA
untuk mendapatkan  bakteri  target  (BAL)  sampai pada pembuatan kultur stok.
Hasil  penelitian  menunjukkan,  isolat bakteri yang diperoleh memiliki penampakan  secara  makroskopis  yaitu koloni  berbentuk  bulat  dan  berwarna  putih kekuningan (krem)-putih susu ( Gambar 1 ).
Bentuk koloni BAL telah banyak dilaporkan  oleh  peneliti  bahwa  morfologi koloninya  bulat,  berwarna  putih  hingga kekuningan  dan  memiliki  tepian  halus berwarna  bening  (Chandra et al .,  2007;
Nurbaiti et al ., 2016; Kurnia et al ., 2020).
Gambar 1
menunjukkan
pertumbuhan koloni BAL setelah dilakukan inkubasi  selama  24  jam,  dihasilkan  jumlah koloni  yang  berbeda  setiap  pengenceran.
Diperoleh cawan petri ke-1 yaitu
pengenceran  10 0 memiliki  koloni  BAL sejumlah  801,  cawan  petri  ke-2  (10 1 ), cawan  petri  ke-3  (10 2 ),  cawan  petri  ke-4 (10 3 ),  cawan  petri  ke-5  (10 4 ),  cawan  petri ke-6  (10 5 ),  cawan  petri  ke-7  (10 6 ),  cawan petri  ke-8  (10 7 )  secara  berturut–turut diperoleh  sejumlah  693,  483,  132,  61,  29, 16 dan 13  koloni. Perhitungan total  bakteri diambil  antara  30-300  koloni,  sehingga yang berada kisaran jumlah koloni tersebut terdapat  pada  pengenceran  10 3 dan  10 4 .
Hasil  akhir  perhitungan  total  koloni  BAL yang  diisolasi  dari  usus  ayam  Kampung diperoleh  3,7  x  10 5 CFU/ml  ( Tabel  1 ).
Hasil penelitian ini sejalan dengan penelitian  yang  dilakukan  Widodo et al .,
(2015)  bahwa  jumlah  koloni  BAL  yang disiolasi  dari  usus  halus  ayam  broiler sejumlah
3,0 x 10 5 CFU/ml.
Gambar 1 . Koloni bakteri asam laktat pada media MRSA: a) pengenceran 10 0 , b) pengenceran 10 1 , c) pengenceran  10 2 ,  d)  pengenceran  10 3 ,  e)  pengenceran  10 4 ,  f)  pengenceran  10 5 ,  g) pengenceran 10 6 dan h) pengenceran 10 7 . a b c g G h h f d e
Trisna dan Wahud (2012)
menyatakan  bahwa  bakteri  yang  berasal dari  saluran  pencernaan  ayam  merupakan jenis bakteri asam laktat. Namun, keberadaan BAL di dalam saluran pencernaan  seringkali  tidak  seimbang diakibatkan  pengaruh  faktor  eksternal
(lingkungan) misalnya temperatur, kelembapan,  pemberian  probiotik  dan perubahan  pakan,  selain  itu  dipengaruhi juga  kondisi  internal  misalnya  umur  ayam dan respon imunitas (Barrow, 1992; Astuti, 2015).
Tabel 1 . Jumlah koloni BAL dari sampel usus ayam
Sampel Jumlah koloni pada pengenceran CFU/ml 10 2 10 3 10 4 10 5 Usus ayam Kampung TBUD 132 61 TSUD 3,7 x 10 5
Ket:
TBUD : Terlalu Banyak Untuk Dihitung (>300 CFU/ml) TSUD : Terlalu Sedikit Untuk Dihitung (<30 CFU/ml)
Kultur biakan murni BAL diperoleh 6 isolat yaitu USA 2, USA 3, USA 4, USA 5, USA  6  dan  USR  1.  Isolat  yang  diperoleh kemudian  digunakan  untuk  pengujian  daya hambat terhadap bakteri patogen. Pengujian daya  hambat  terhadap  bakteri  patogen dilakukan  untuk  melihat  efektivitas  BAL dalam  mempertahankan  mikroflora  normal
usus  (Fuller,  1992).  Bakteri  patogen  yang digunakan pada penelitian ini yaitu E . coli .
Penelitian sebelumnya telah banyak melaporkan bahwa bakteri E . coli merupakan  golongan  bakteri  gram  negatif yang  sifatnya  lebih  sensitif  terhadap aktivitas senyawa BAL (Datta et al ., 2019).
Gambar 2 . Uji patogen BAL yang menunjukkan terbentuknya zona bening: a) isolat USA 2, b) isolat USA 3, c) isolat USA 4, d) isolat USA 5, e) isolat USA 6 dan f) isolat USR 1.
c f b d e a
Kemampuan  isolat  BAL  memiliki daya  hambat  terhadap  bakteri  patogen berbeda-beda,  isolat USA  2  setelah inkubasi  selama  24  jam-120  jam  tidak terbentuk  zona  bening  dan  BAL  yang  ada pada  media  menjadi  kering.  Isolat  USA  3 memiliki  kemampuan  daya  hambat  yang paling baik, terlihat pada Gambar 2 bahwa isolat  USA  3  memiliki  zona  bening  yang paling luas. Isolat USA 4 dan isolat USR 1 tidak  berbeda  dengan  isolat  USA  2  yaitu tidak  terbentuk  zona  bening  dan  inokulum BAL tidak tumbuh, sedangkan media MHA yang  terdapat  isolat  USA  5  dan  USA  6 terbentuk zona bening disekeliling koloni.
Saluran  pencernaan  sangat  rentan dipengaruhi  oleh  bakteri  patogen,  sehingga keberadaannya dapat ditekan dengan mempertahankan  jumlah  BAL  (Widodo et al , 2015). Penelitian dilakukan pengujian
aktivitas  BAL  sebagai  antimikroba  dalam melawan  bakteri  yang  sifatnya  patogen (Sari et al. ,  2013).  Proses  inkubasi dilakukan  selama  24,  48,  72,  96  dan  120 jam  untuk  melihat  kemampuan  aktivitas BAL  terhadap  bakteri  patogen.  Hasil pengujian  aktivitas  BAL  menunjukkan terbentuknya zona bening setelah dilakukan inkubasi selama 24 jam, isolat USA 3, USA 5  dan  USA  6  ( Gambar  3 ).  Tidak  semua isolat  menunjukkan  kemampuan  yang sama,  seperti  isolat  USA  2,  USA  4  dan USR  1  tidak  terbentuknya  zona  bening sampai  inkubasi  120  jam.  Zona  bening yang  terbentuk  merupakan  kalsium  laktat yang  diproduksi  oleh  BAL.  Terbentuknya zona bening berbeda-beda tiap isolat karena tergantung  dari  aktivitas  bakteri  dalam memanfaatkan nutrien media dan konsentrasi  bakteriosin  yang  terbentuk
(Ramadhon et al ., 2012).
Gambar 3 . Grafik daya hambat dan ukuran koloni BAL yang terbentuk setelah inkubasi 24, 48, 72, 96 dan  120  jam:  a)  isolat  USA  2,  USA  4,  USR  1;  b)  isolat  USA  3;  c)  isolat  USA  5  dan  d) isolat USA 6.
a b c d d
Pertumbuhan koloni BAL juga mempengaruhi  terbentuknya  zona  bening, dapat  dilihat  pada Gambar  3 .  Semakin meningkat pertumbuhan koloni, maka zona bening  yang  terbentuk  akan  semakin  luas. Koloni  USA  3  ( Gambar  3b )  memiliki ukuran  isolat  yang  paling  besar  yaitu  0,90 cm  setelah  120  jam  inkubasi,  selanjutnya isolat  USA  5  yaitu  0,35  cm  ( Gambar  3c ) dan isolat USA 6 ukuran koloninya 0,25 cm
( Gambar 3d ). Berbeda  dengan isolat  USA
2,  USA  4  dan  USR  1  yaitu  bakteri  BAL yang diinokulasikan tidak tumbuh di media MHA ( Gambar 3a ).
Aktivitas  BAL  yang  mengeluarkan senyawa bakteriosin terhadap bakteri patogen,  dipengaruhi  juga  struktur  dinding sel  bakteri  patogen  yang  digunakan.
Golongan  bakteri  gram  negatif  memiliki struktur  lapisan  peptidoglikan  yang  lebih tipis  dan  memiliki  lipid  yang  lebih  banyak dibandingkan golongan bakteri gram positif. Kandungan lipid yang lebih banyak ini  akan  menyebabkan  bakteri  patogen lebih sensitif terhadap bakteriosin sehingga BAL  dengan  mudah  masuk  ke  dalam  sel bakteri  patogen  (Prescott et  al .,  2002;
Rahmah et al ., 2017).
Mikroflora  di  dalam  usus  ayam sangat berperan penting dalam menghasilkan enzim yang membantu proses  pencernaan.  Kemampuan  enzim  ini
dapat  memecah  serat  kasar  yang  yang sangat sulit dicerna dalam saluran pencernaan  unggas. Hal yang  sama dilaporkan  oleh  Yeh et al .,  (2018) menyatakan bahwa mikroflora dapat mengubah  senyawa  menjadi  komponen yang  lebih  efektif  seperti  senyawa  yang mengandung nitrogen, asam amino, peptida atau asam lemak selama proses fermentasi.

## SIMPULAN
Berdasarkan pembahasan diatas, maka  dapat  disimpulkan  bahwa  isolasi BAL  dari  sampel  usus  ayam  Kampung diperoleh  BAL  yang  memiliki  bentuk koloni bulat dan berwarna putih kekuningan  (kream)–putih  susu,  jumlah koloni  3,7  x  10 5 CFU/ml  dan  memiliki kemampuan daya hambat bakteri patogen.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  I.  (2006).  Effect  of  probiotics  on broilers  performance. International
Journal of
Poultry  Science ,  5,
593-597. Amin,  H.,  Saida.,  Suriyanti.,  Suherah., Mahir,  S.,  &  Gani.  (2018).  Isolasi Dan Karakterisasi Bakteri Probiotik Pendegradasi Senyawa Organik  Dari  Saluran  Pencernaan Ayam   Kampung ( Gallus domesticus ). Jurnal AGrotekMAS , 75-
81.
Ashraf,  R.,  &  Shah,  N.  P.  (2014).  Immune system  stimulation  by  probiotic microorganisms. Crit Rev Food Sci Nutr , 54(7), 938-956.
Astuti.  (2015).  Pemanfaatan  Probiotik
Bakteri  Asam  Laktat  dari  Saluran Pencernaan Ikan Terhadap Pertumbuhan  dan  Kadar  Kolesterol Daging Ayam Broiler. Jurnal Penelitian Saintek ,  20(2),  157- 165. Barrow,  P.  A.  (1992). Probiotic  for chickens  in  Probiotics  The  Scientific Basis , Edited by Roy   Fuller .
London: Chapman and Hall.
Bintsis,  T.  (2018).  Lactic  acid  bacteria:
their applications  in  foods. J Bacteriol Mycol , 6(2),   89-94. Chandra,  J.  I.,  Zahiruddin,  W.,  &  Desniar. (2007).  Isolasi  dan  Karakterisasi Bakteri Asam   Laktat  dari  Produk Bekasam  Ikan  Bandeng  ( Chanos chanos ). Buletin  Teknologi  Hasil Perikanan , 10(2), 14-24.
Chim-anage, P., Hirunvong, V., Sirirote, P.,
Malaphan, W., Yongsmith, B., Isariyodom, S.,  Tirawattanawanich,
C.,  Chitanont,  W.,  &  Talsook,  P. (2008). Effect of Feed Supplementation  of  Lactic  Acid Bacteria  on  Microbial  Changes  in Broiler Intestine. Kasetsart J .
( Nat. Sci .), 42, 269-276.
Chotiah,  S.,  &  Damayanti,  R.  (2018).
Karakterisasi  Bakteri  Asam  Laktat
Kandidat Probiotik
untuk
Mengatasi  Salmonelosis  pada  Ayam Pedaging. Bul. Plasma Nutfah , 24(2), 89-96.
Colombo, M.,  Castilho, N. P. A., Todorov, S. D., &  Nero, L. A. (2018). Beneficial properties   of  lactic  acid bacteria  naturally  present  in  dairy production. BMC  Microbiology ,  18,
219.
Datta,  F.  U.,  Daki,  A.  N.,  Benu,  I.,  Detha, A. I. R.,  Foeh,  N.  D.  F.  K.,  &
Ndaong, N. A.   (2019).  Uji  Aktivitas Antimikroba  Bakteri  Asam  Laktat Cairan Rumen Terhadap Pertumbuhan Salmonella  enteritidis ,
Bacillus  cereus , Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus Menggunakan
Metode Difusi sumur Agar. Prosiding
Seminar  Nasional VII Fakultas Kedokteran  Hewan  Universitas  Nusa Cendana , 66-85.
De  Mesquita,  A.  R.  C.,  Costa,  C.  R.  R.,
Frutuoso, J. I.  O.,  Mota,  A., Franchitti, A. A., & Ximenes,  E. A.  (2017).  Activity  of  metabolites produced by new strains of Lactobacillus  in  modified  de  Man, Rogosa  and  Sharpe  (MRS)  medium against   multidrug-resistant  bacteria. African  Journal  of  Microbiology Research , 11(8), 345-355. Fuller,  R.  (1992). Probiotics  the  Scientific Basis .  London:  Chapman  and  Hall. Hedman,  H.  D.,  Vasco,  K.  A.,  & Zhang,  L.  (2020).  A  Review  of Antimicrobial  Resistance  in  Poultry
Farming within Low-Resource Settings. Animals , 10(8), 1-35. Henuk, Y. L., & Bakti, D. (2018). Benefits of  Promoting  Native  Chickens  for Sustainable Rural Poultry Development in Indonesia. TALENTA Conference Series: Agricultural &  Natural  Resources (ANR) , 1, 1-8. Ismoyowati, & Setianto, N. A. (2021). The dynamics of population and
production of   Native
Chicken under  extensive  and  semi-intensive maintenance. IOP  ConferenceSeries: Earth and Environmental Science . Kurnia,  M.,  Amir,  H.,  &  Handayani,  D.
(2020). Isolasi dan Identifikasi
Bakteri Asam Laktat   dari  Makanan Tradisional  Suku  Rejan  di  Provinsi Bengkulu:  “Lemea”. ALOTROP : Jurnal  Pendidikan  dan  Ilmu  Kimia , 4(1), 25-32.
Lisnahan,  C.  V.,  Wihandoyo.,  Zuprizal.,  &
Harimurti, S. (2018). Pengaruh
Suplementasi   Dl-Metionin  Dan  L- Lisin  Hcl  Pada  Pakan  Standar Kafetaria  Terhadap  Berat  Badan, Organ Dalam   Dan Organ
Reproduksi  Ayam  Kampung  Fase Pullet. Jurnal Ilmiah   Peternakan Terpadu , 6(2), 128-133.
Madingan,  M.  T.,  Martinko,  J.  M.,  &
Parker, J. (2009). Biology of Microorganism Edisi 12th . New York: Prentince Hall Internasional. Mathur,  H.,  Beresford,  T.  P.,  &  Cotter,  P. D.  (2020).  Health  Benefits  of  Lactic Acid Bacteria   (LAB)  Fermentates. Nutrients , 12, 1679.
Messaoudi, S., Kergourlay, G., Rossero, A., Ferchichi, M., Prévost, H., Drider, D., Manai,   M.,  &  Dousset,  X.  (2011).
Identification  of  lactobacilli  residing in chicken ceca with
antagonism  against Campylobacter .
International  Microbiology ,  14,  103- 110.
Muladno.  (2008).  Native  chicken  genetic resources  and  production  systems  in Indonesia. GCP/RAS/228/GER
Working Paper No. 6. Rome.
Musikasang. H., Tani, A., H-kittikun, A., &
Maneerat, S. (2009). Probiotic
potential of lactic acid  bacteria
isolated  from chicken gastrointestinal digestive  trac. World  J  Microbiol Biotechnol , 25, 1337–1345.
Nurbaiti,  Rosyidi,  A.,  &  Ali,  M.  (2016). Skrening  Bakteri  Asam  Laktat  yang Diisolasi dari   Usus  Ayam  Broiler sebagai  Kandidat  Probiotik  untuk Unggas. Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi Peternakan Indonesia , 2(1), 144-149. Nurcahyo,  H.,  Yulianti,  E.,  Hasanah,  H., Ariyanti, D. D., & Saputri, P. (2017). Isolasi Bakteri   Kandidat Probiotik Dari  Isi  Usus  Halus  Ayam  Kampung Untuk Meningkatkan   Produktivitas Ayam   Pedaging. Prosiding Seminar Nasional Pendidikan Biologi dan Biologi  Jurusan  Pendidikan Biologi,  Fakultas  MIPA,  Universitas Negeri Yogyakarta . Permana,  P.  A.,  Yunianto,  V.  D.,  & Atmomarsono,  U.  (2014).  Pengaruh Taraf Protein Dan Lisin Ransum Terhadap Performans Produksi Ayam Kampung. Animal Agriculture
Journal , 3(2), 113-120.
Prescott,  L.  M.,  Horley,  J.  P.,  &  Klein,  D.
A.  (2002). Microbiology 5th  Edition .
Boston: Mc Graw-Hill. Putri,  A.  L.  O.,  &  Kusdiyantini  E.  (2018). Isolasi  dan  identifikasi  bakteri  asam laktat dari pangan fermentasi berbasis ikan (Inasua) yang diperjualbelikan di Maluku- Indonesia, Jurnal Biologi Tropika , 1(2), 6-12. Ramadhon,  Subagiyo,  &  Margino,  S. (2012).  Isolasi  dan  Karakterisasi bakteri Asam Laktat dari Usus Udang  Penghasil  Bakteriosin  sebagai
Agen  Antibakteria  pada  Produk- Produk  Hasil Perikanan.  Jurnal Saintek Perikanan , 8(1), 59-64.
Rahmah,  R.  P.  A.,  Bahar,  M.,  &  Harjono,
Y.  (2017).  Uji  Daya  Hambat  Filtrat Zat Metabolit   Lactobacillus
Plantarum  Terhadap  Pertumbuhan Shigella  Dysenteriae  Secara  In  Vitro. Biogenesis : Jurnal  Ilmiah  Biologi , 5(1), 34-41.
Sari,  M.  L.,  Arfan,  A.,  &  Merint.  (2013).
Isolasi  dan  Karakterisasi  Bakteri Asam Laktat pada Usus Ayam Broiler. Agripet , 13(1), 43-48. Shazali,  N.,  Loh,  T.  C.,  Foo,  H.  L.,  & Samsudin, A.   A. (2019). Gut microflora  and  intestinal  morphology changes  of  broiler  chickens  fed reducing dietary protein supplemented   with lysine,
methionine,  and  threonine  in  tropical environment. Brazilian  Journal  of Animal Science , 1-15.
Sumarsih,  S.,  Sulistiyanto,  B.,  Sutrisno,  C.
I., & Rahayu,  E.  S.  (2012).  Peran Probiotik Bakteri  Asam  Laktat Terhadap Produktivitas Unggas. Jurnal Litbang Provinsi Jawa Tengah , 10(1), 1-9. Sumual, A. M., Fatimawali., & Tallei, T. E. (2019).  Uji  Antibakteri  dari  Bakteri
Asam   Laktat Hasil Fermentasi
Selada  Romain  ( Letuca  sativa var.
longifolia Lam.). Pharmacon ,
8(2), 306-314.
Suprayogi,  W.  P.  S.,  Riptanti,  E.  W.,  &
Widyawati,  S.  D.  (2018).  Budidaya Ayam Kampung Intensif Melalui Program Pengembangan
Usaha  Inovasi  Kampus. Inoteks ,
22(1), 18-27.
Trisna.,  &  Wahud,  N.  (2012).  Identifikasi
Molekuler  dan  Pengaruh  Pemberian Probiotik Bakteri Asam  Laktat
(BAL)  Asal  Dadih  dari  Kabupaten Sijunjung  Terhadap  Kadar  Kolestrol Daging  pada  Itik  Pitalah  Sumber Daya Genetik Sumatra Barat. Artikel. Universitas Andalas. Padang. Wati,  R.  (2007).  Potensi  Peternakan  Ayam
Buras Sebagai Usaha Ekonomi
Masyarakat Pedesaan Di Provinsi
Sumatera  Barat. Jurnal  Peternakan
Indonesia , 12(2), 124-135.
Widodo,  T.  S.,  Sulistiyanto,  S.,  &  Utama,
C.  S.  (2015).  Jumlah  Bakteri  Asam Laktat (BAL)   dalam  Digesta  Usus
Halus dan Sekum Ayam Broiler yang
Diberi   Pakan Ceceran
Pabrik
Pakan  yang  Difermentasi. Agripet , 15(2), 98-103.
Yeh,  R.  H.,  Hsieh,  C.  W.,  &  Chen,  K.  L.
(2018).  Screening  latic  acid  bacteria to manufacture   two-stage  fermented feed  and  pelleting  to  investigate  the feeding  effect  on  broilers. Poultry Science , 97, 236-246.