## PENETAPAN KONDISI OPTIMUM PENGUJIAN KADAR
PARASETAMOL DAN KAFEIN DENGAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI
Nofita 1 , Risna Dayanti 1 , Tutik 1 , Supardi 1

## ABSTRACT
Analgesic and antipyretic drugs circulating in the community generally contain a  mixture  of  paracetamol  and  caffeine.  This  study  aims  to  determine  the optimum  conditions  of  parasemol  and  caffeine.  Methods  for  analyzing  the optimum  conditions  of  paracetamol  and  caffeine  with  HPLC.  Measurements are  made  with  various  parameters,  such  as  the  comparison  of  the  mobile phase,  flow  rate,  wavelength,  retention  time,  number  of  plates,  capacity factors,  selectivity  factors,  coefficient  of  variation  and  symmetry.  At  a  flow rate  of  1.0  mL  /  minute  with  a  concentration  of  10%  shows  that  all  the parameters  used  in  the  test  of  the  suitability  of  this  system  obtained  good results. The results of the study were found to have succeeded in streamlining the testing time from ± 15 minutes to ± 6 minutes with a flow rate of 1.0 mL / minute at a concentration of 10%. The selected method has been tested for suitability of the system with the results of meeting all criteria for the system suitability test parameters.
Keywords: paracetamol, caffeine, HPLC, system suitability

## ABSTRAK
Obat  analgetik  dan  antipiretik  yang  beredar  dimasyarakat  umumnya mengandung  campuran  parasetamol  dan  kafein.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  penetapkan  kondisi  optimum  dari  bahan  parasemol  dan kafein.  Metode  untuk  melakukan  analisis  kondisi  optimum  dari  parasetamol dan  kafein  dengan  KCKT.  Pengukuran  dilakukan  dengan  berbagai  variasi parameter,  seperti  perbandingan  fase  gerak,  laju  alir,  panjang  gelombang, waktu retensi, jumlah lempeng, faktor kapasitas, faktor selektivitas, koefesien variasi dan kesimetrisan. Pada laju alir 1,0 mL/menit dengan konsentrasi 10 %  menunjukkan  bahwa  seluruh  parameter  yang  digunakan  dalam  uji kesesuain sistem ini diperoleh hasil yang baik. Hasil penelitian diketahui telah berhasil mengefisienkan waktu pengujian dari ± 15 menit menjadi ±6 menit dengan laju alir 1,0 mL/menit pada konsentrasi 10 %. Metode terpilih telah di uji  kesesuaian  sistem  dengan  hasil  memenuhi  seluruh  kriterian  untuk parameter uji kesesuaian sistem.
Kata kunci : parasetamol, kafein,  KCKT, Kesesuain sistem

## PENDAHULUAN
Obat  adalah  suatu  zat  yang digunakan
untuk diagnosa, pengobatan, melunakkan, penyembuhan  atau  pencegahan
penyakit  pada  manusia  atau  pada hewan.Jenis-jenis
obat yang
digunakan untuk
penyembuhan penyakit pada manusia digolongkan pada  jenis  analgetik,  antipiretik,
antibiotik,  antihistamin,  dan  lain- lain (Kriswanto, 2013).
Di  negara  tropik  termasuk Indonesia
umumnya banyak digunakan  obat  analgetik  dan antipiretik  disamping  jenis  obat lainnya.  Jenis  obat  tersebut  banyak ragam dan bentuk dengan berbagai nama  dagang  dan  beredar  secara luas di pasar bebas, apotek,  rumah
sakit dan pusat kesehatan masyarakat. Diantara obat analgetik danantipiretik yang beredar  dimasyarakat  umumnya mengandung campuran
parasetamol  dan  kafein  (Kriswanto,
2013). Parasetamol adalah obat analgetis dan antipiretis tetapi tidak antiradang. Pada umumnya dianggap sebagai zat antinyeri yang paling aman, juga
untuk swamedikasi  (pengobatan  sendiri). Efek  samping  jarang  terjadi,  antara lain  reaksi  hipersensitivitas  dan kelainan  darah  (Tjay  dan  Rahardja, 2002).  Selain  parasetamol  zat tambahan  untuk  obat  sakit  kepala adalah kafein.
Kafein  atau  1,3,7- trimetil xantin, berbentuk  anhidrat  atau hidrat yang mengandung 1 molekul air.  Mengandung  tidak  kurang  dari 98,5%  dan  tidak  lebih  dari  101,0% C 6 H 10 N 4 O 2 ,  dihitung  terhadap  zat anhidrat.  Kafein  merupakan  serbuk putih  atau  bntuk  jarum  mengkilap
putih  yang  biasanya  menggumpal, tidak  berbau,berasa  pahit.  Kafein larut  dalam  air,  etanol,  kloroform, sukar  larut  dalam  eter.  Kafein memiliki  titik  lebur  antara  235 o C dan  237,5 o C.  Metode  yang  dapat digunakan untuk menganalisis kombinasi  parasetamol  dan  kafein yaitu  kromatografi  cair  kinerja tinggi (Depkes RI, 1995).
Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) adalah
teknik pemisahan fisiksuatu campuran zat- zat kimia (analit) yang berdasarkan pada  perbedaan  distribusi    masing- masing  komponen  campuran  yang terpisah  pada  fase  diam    dibawah pengaruh  fase  gerak.  Fase  gerak dapat  berupa  gas  atau  zat  cair  dan fasediam dapat berupa zat cair atau zat  padat.  Keunggulan  metode  ini dibanding metode pemisahan lainnya  terletak  pada  ketepatan analisis  dan  kepekaan  yang  tinggi serta  cocok  untuk  memisahkan senyawa-senyawa  yang  tidak  tahan pada  pemanasan.  ( Susanti  dan Dachriyanus , 2017).
Peneliian  sebelumnya  oleh Pratiwi  (2011)  mengenai  optimasi kondisi  pengujian  kromatografi  cair kinerja tinggi pada penetapan kadar bahan  aktif  obat  sakit  kepala. Penelitian  ini    menggunakan  2 variabel  bebas,  yaitu  konsentrasi fase  gerak  asetonitril  10;  15;  dan 20%,sedangkan  laju  alirnya  yaitu
0,5;  1,0;  dan  1,5  mL/menit. Kondisi  optimum  diperoleh  pada konsentrasi asetonitril 15% dan laju alir 1,0 mL/menit .
Penelitian lain oleh Damayanti dkk  (2003),  mengenai  penetapan secara
simultan campuran
parasetamol dan ibu profen dengan kromatografi  cair  kinerja  tinggi. Penelitian ini menggunakan perbandingan  fase  gerak  dapar fosfat  :  asetonitril  yaitu  25:75; 25:75;  30:70;  untuk laju alir yaitu 0,5;  0,75;1  mL/menit.    Kondisi optimum diperoleh pada konsentrasi  25  :75  dengan  laju  alir 0,5 mL/menit dengan waktu retensi parasetamol 4,89 menit.
Berdasarkan  uraian  tersebut, maka penulis tertarik
untuk melakukan  analisiskondisi  optimum dari parasetamol dan kafein dengan KCKT. Pengukuran dilakukan dengan  berbagai  variasi  parameter, seperti  perbandingan  fase  gerak, laju alir, panjang gelombang, waktu retensi,  jumlah  lempeng,  faktor kapasitas, faktor selektivitas, koefesien  variasi  dan  kesimetrisan dengan  tujuan  menetapkan  kondisi optimum untuk meningkatkan efisien waktu pengujian.

## METODOLOGI PENELITIAN Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian  dilakukan  pada
bulan
Juni 2018. Penelitian
dilakukan  di  UPT  Laboratorium Terpadu dan Sentra Inovasi Teknologi (LTSIT) Universitas Lampung
Bahan Dan Alat Bahan
Baku Parasetamol  500  mg,
Baku  Kafein,  Asetonitril gradien grade LC , Air distilasi.

## Alat
Peralatan  yang  digunakan selama  penelitian  adalah  KCKT digunakan untuk parameter ketangguhan.  HPLC  Shimadzu  LC- 20  AD,  injektor  sampel,  kolom persuit  agilentC 18 (  125  x  4mm,  5 µm),  Neraca  analitik  (KERN  ABJ- 120-4NM), Filter  holder ,  membran filter  ( millipore )  0.2  µm,13  mm,
Ultrasonic, labu  takar  Iwaki,  pipet volumetrik, Peralatan kaca lainnya.

## Populasi dan Sampel
Sampel yang digunakan pada  penelitian  ini  adalah  tablet sakit  kepala  dengan  merk  X  yang didapat  dari  apotek  Rosa  di  Bandar Lampung.

## Prosedur  Penelitian  (Pratiwi,
2011)
Metode penelitian ini dilakukan untuk memodifikasi metode  pengujian  KCKT  pada penetapan kadar
parasetamol.
Parameter  kondisi  KCKT  sebelum modifikasi  diberikan  pada  Tabel
1.Modifikasi dilakukan
terhadap komposisi  fase  gerak  dan  laju  alir, sedangkan  parameter  yang  lainnya dibuat tetap.
Tabel 1.
Parameter kondisi KCKT sebelum modifikasi Parameter Sebelum Optimasi Kolom Pesrsuit  agilent  C 18 (125 x 4mm, 5 µm) Detektor PDA  ( Photo  diode array ), 270 nm Laju alir 1.0 mL/menit Loop injektor 20 µL Pelarut dan fase gerak Asetonitril : Air (10 : 90)

## Rancangan Percobaan
Metode    untuk  menentukan kondisi  optimum  penetapan  kadar parasetamol  dan  kafein  dengan  2 faktor sebagai perubah bebas, yaitu konsentrasi  fase  gerak  (%v/v)  dan laju  alir  (mL/menit).  Respons  yang diamati adalah waktu retensi
(menit)  dan  resolusi.  Percobaan dirancang  dalam  bentuk  RKP  dan level terkode disajikan pada Tabel 2 dan 3.
Tabel 2. Perlakuan terkode penetapan kadar parasetamol dan kafein Perlakuan Perlakuan terkode Fase gerak (%) asetonitril 10 15 20 Laju alir (mL/menit) 0,5 1,0  1,5
Tabel 3. Rancangan komposit pusat (RKP) dengan 2 perubahan Laju alir Konsentrasi asetonitril 0,5 10 % 15 % 20 % 1,0 10 % 15 % 20 % 1,5 10 % 15 % 20 % Metode  tersebut  digunakan untuk
mengamati
pengaruh konsentrasi  fase  gerak  dan  laju  alir terhadap waktu retensi dan resolusi dari  2  zat  aktif,  yaitu  parasetamol dan kafein.

## Pembuatan Fase Gerak standar
Mencampurkan pelarut asetonitril:air  (sesuai  nisbah  yang diinginkan,  yaitu  asetonitril  10,  15, dan  20%).  Konsentrasi  10  % dipipet  5  mL  asetonitril  tambahkan aquadest  50  mL.  Konsentrasi  15  % dipipet
7,5 mL asetonitril tambahkan aquadest 50 mL.
Konsentrasi  20  %  dipipet  10  mL asetonitril  tambahkan  aquadest  50 mL

## Pembuatan larutan standar
Pembuatan standar, sebanyak 500 mg standar parasetamol  dan  30mg  kafein ditimbang saksama, dilarutkan
dalam fase gerak dengan komposisi terpilih  hingga  50  mL  (A).  Labu takar  10  mL  disiapkan  kemudian dipipet 1,0
mL, larutan
A dimasukkan ke dalam labu tersebut dan  ditera  dengan  pelarut.  Dipipet 1,0 mL lagi ke dalam labu takar 10 mL,  diperoleh  larutan  parasetamol 100  ppm  dan  kafein  6  ppm. Campuran
dihomogenkan
dan
disaring dengan Filter holder , membran  filter  ( millipore )  0.2 µm,13 mm.

## Pembuatan Fase Gerak sampel
Mencampurkan pelarut asetonitril:air  (sesuai  nisbah  yang diinginkan,  yaitu  asetonitril  10,  15, dan  20%).  Konsentrasi  10  % dipipet 10 mL asetonitril tambahkan aquadest 100 mL, Konsentrasi 15 % dipipet 15 mL asetonitril tambahkan aquadest 100 mL, Konsentrasi 20 % dipipet 20 mL asetonitril tambahkan aquadest 100 mL

## Pembuatan larutan sampel
Sebanyak  20  buah  tablet ditimbang dan ditentukan nilai rata- rata  bobotnya  kemudian  digerus hingga halus dan tercampur homogen. Ditimbang setara bobot 1 tablet  (digunakan  bobot  rata-rata 20 tablet) kemudian dimasukkan ke dalam  labu  takar  100  mL  dan dilarutkan dengan fase gerak komposisi  terpilih  (larutan  B).
Larutan  B  dilakukan  pengenceran 50  kali.  Campuran  dihomogenkan dan  disaring  dengan Filter  holder ,membran  filter  ( millipore )  0.2 µm,13 mm.

## Uji Kesesuaian Sistem
Larutan  standar  parasetamol konsentrasi  100  ppm  dan  standar kafein  6  ppm  diinjeksikan  sejumlah 20  µL  melalui  injector  ke  dalam KCKT,  digunakan  kecepatan  alir hasil  optimasi  dan  detektor  PDA diatur  pada  λ  270nm.  Diperoleh kromatogram  untuk  tiap  injeksi yang akan digunakan untuk menentukan  kadar penyuntikan larutan  baku,  yang  dinyatakan dalam  waktu  retensi,  luas  puncak, tinggi  puncak,  faktor  kapasitas, selektivitas, efisien kolom, resolusi.

## Analisis  Data  (Susanti  dan
Dachriyanusus , 2017)
Waktu Retensi
Waktu retensi analit
dikurangi  dengan  waktu  retensi pelarut  pengelusi  atau  pelarut pengelusi  campur  disebut  sebagai waktu  retensi  terkoreksi  yang dinyatakan sebagai tR’.
Rumus  : tR ’ = tR - tM
Waktu retensi yang dinyatakan  dalam  satuan  (menit) memberikan  arti  yang  sangat penting  dalam  analisa  kualitatif dengan KCKT.
Faktor Kapasitas / faktor retensi Faktor kapasitas k’
dinyatakan sebagai berikut:
Rumus : k ' = (tR – to )
To tR – to : waktu retensi to         : waktu retensi fase gerak
Selektivitas (α)
Selektivitas (α) merupakan nilai retensi relatif tiap komponen oleh fase diam. Rumus : α = k2 k1 Sehingga :  α = t2 – to t1 – t

## Efisiensi kolom
Terdapat  dua  cara  yang paling  lazim  digunakan  dalam memngukur efisiensi
kolom kromatografi  yaitu  jumlah  pelat teori (N) dan jarak setara pelat teori (JSPT).

## Jumlah Pelat Teori (N)
Jumlah  pelat  teori  digunakan  untuk mengetahui keefisienan kolom. Rumus : N = 16     tR 2
W tR      : waktu retensi analit W : lebar pada dasar puncak

## Jarak Setara Pelat Teori (JSPT)
Harga  H  berkaitan  dengan  jumlah pelat teori menurut persamaan :
Rumus : JSPT = H = HETP = L N
L : panjang kolom (nm) N : jumlah pelat teori

## Resolusi
Daya  pisah  R  antara  dua  puncak dapat diukur secarakuantitatif sebagai berikut :
Rumus  : R  = (tR2 – tR1) 0,5 (W2 + W1) tR  : waktu retensi komponen W  : lebar alas puncak

## Faktor Simetri
Faktor simetri atau tailing factor yaitu  terjadinya  pengekoran  pada kromatoggram  sehingga  bentuk kromatogram
menjadi tidak simetris. Rumus : Tf = bc ac
bc : selisih antara waktu retensi dan waktu yang menunjukkan akhir puncak ac  :  selisih  antara  waktu  yang menunjukkan  akhir  puncak  dan awal puncak.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penetapan  kondisi  optimum pengujian  kadar  parasetamol  dan kafein  dengan  kromatografi  cair kinerja  tinggi  dilakukan  dengan mengubah  konsentrasi  fase  gerak dan  laju  alir  untuk  menentukan kondisi  optimum  dan  efisien  waktu
pengujian. Modifikasi dalam
penelitian  ini  menggunakan  fase diam  dalam  kolom  ialah    persuit agilent C18 yang bersifat non polar, sehingga  yang  digunakan  fase gerak  yang  bersifat  polar  ialah asetonitril : air (10:90).
Parasetamol  yang  sifatnya  lebih
polar  akan  terelusi  lebih  dulu sehingga  memiliki  waktu  retensi yang  lebih  singkat  dibandingkan dengan kafein. Pemilihan fase gerak ini  didasari  dari  sifat  sampel  yang bersifat  polar.  Laju  alir  ialah  1.0 mL/menit serta menggunakan
detektor PDA 270 nm. Tabel 4. Rancangan Komposit Pusat dan Respon Percobaan Laju alir konsentrasi asetonotril Waktu retensi P1 Waktu retensi K1 Resolusi Waktu retensi p2 Waktu retensi K2 Resolusi 0,5 10% 6,007 11,051 3,555 5,766 10,546 3,463 15% 5,671 10,351 3,506 5,671 10,337 3,496 20% 5,734 10,508 3,571 5,802 10,547 3,200 1,0 10% 3,523 6,416 2,300 3,444 6,579 2,330 15% 3,372 6,610 2,057 3,398 6,234 2,520 20% 3,425 6,356 2,909 3,406 6,445 1,971 1,5 10% 2,210 4,058 1,374 2,180 3,912 1,288 15% 2,169 3,907 1,273 2,177 3,907 1,258 20% 2,158 3,900 1,320 2,168 3,920 1,153
Keterangan :
P1
: Standar parasetamol
K1
: Standar kafein
P2 : Sampel parasetamol K2 : Sampel kafein
Perubahan  konsentrasi  fase gerak  dan  laju  alir  berpengaruh terhadap  perubahan  waktu  retansi parasetamol  dan  kafein  serta resolusi  dapat  dilihat  pada  tabel 4.1.  Laju  alir  1,5  mL/menit,  waktu retensi  yang  diperoleh  semakin singkat  tapi  resolusinya  justru semakin kecil,sedangkan di laju alir 0,5  mL/menit,  waktu  retensi  yang diperoleh semakin lama tapi
resolusinya  justru  semakin  besar. Menurut  Andrade  (2008),  laju  alir yang lebih tinggi dari 1,0 mL/menit dapat menyebabkan tekanan dalam  kolom  meningkat  sehingga mempercepat  kerusakan  kolom.
Oleh karena itu, dilakukan pemilihan  komposisi  lain  yang masih  mendekati  kondisi  optimum yaitu  pada  laju  alir  1,0  dan  1,5 mL/menit.
Gambar 1. kurva waktu retensi standar pada laju alir 1,0 mL/menit
Gambar 2. Kurva waktu retensi sampel pada laju alir 1,0 mL/menit
Laju alir mempengaruhi
kecepatan  fase  gerak  melewati
kolom. Semakin cepat laju
alir,waktu  retensi  akan  semakin pendek.  Laju  alir  0,5  mL/menit memiliki  waktu  retensi  lebih  lama (2  kali)  dari  waktu  retensi  pada laju  alir  1,0  mL/menit.  Jika  dilihat dari  resolusinya  laju  alir  0,5 mL/menit  dan  1,0  mL/menit  dapat dikatan memiliki resolusi yang baik (>1,5)  dan  tidak  berbeda  jauh. Oleh  karena  itu,  laju  alir  1,0 mL/menit
dapat dikatakan
merupakan  laju  alir  yang  lebih tepat untuk digunakan. Pengukuran kondisi optimum dengan melakukan berbagai parameter seperti
perbandingan  fase  gerak,  laju  alir, panjang gelombang, waktu retensi, jumlah  lempeng,  faktor  kapasitas, faktor selektivitas, koefisien variasi dan kesimetrisan. (Tabel 4.2 )
Tabel 5. Uji Kesesuaian Sistem Laju alir Konse nttrasi   tR  (menit) R K’ α N JSPT TF 1,0
10 %
P1 : 3,523 K1 : 6,416 2,133 5,573 11,885 1,964 57,354 373,551 2,179 0,335 0,838 0,683 P2 : 3,444 K2 : 6,579 2,000 5,046 10,093 2,070 172,459 420,519 0,725 0,297 0,819 0,751 15  % P1 : 3,372 K1 : 6,610 2,057 2,520 5,573 11,885 2,133 57,354 373,551 2,179 0,335 0,838 0,683 P2 : 3,398 K2 : 6,234 5,046 10,093 2,000 172,459 420,519 0,725 0,297 0,819 0,751 20 % P1 : 3,425 K1 : 6,356 P2 : 3,406 K2 : 6,445 2.909 1,971 5,450 10,970 5,588 11,466 2,013 2,052 209,286 566,689 55,790 418,624 0,597 0,221 2,241 0,299 0,820 0,661 0,881 0,643
0 2 4 6 8 0% 10% 20% 30% W akt u R e te n si Konsentrasi Asetonitril tR P2 tR K2 0 2 4 6 8 0% 10% 20% 30% W akt u R e te n si Konsentrasi Asetonitril tR P1 tR K1
Keterangan :
P1 : Standar parasetamol tF : Faktor simetri K1 : Standar kafein N : jumlah pelat teori P2 : Sampel parasetamol JSPT  : jarak setara pelat teori K2 : Sampel kafein R : Resolusi tR : Waktu retensi K’ : Faktor kapasitas/ faktor retensi α : Selektivitas Resolusi pada
kondisi optimum  menunjukkan  pemisahan dua  puncak      parasetamol  dan kafein. Pada laju alir 1,0 mL/menit dengan  konsentrasi  asetonitril  10 %, 15  % dan 20 %  resolusi yang didapat  ideal,  karena  syarat  dari resolusi  ialah  R>1,5  dimana  dua puncak  terpisah  secara  sempurna. Bila pada suatu analisis diperoleh R <1,5  maka  untuk  meningkatkan harga  R  oleh  fase  diam  dapat dilakukan  dengan  menggunakan kolom yang lebih panjang sehingga menambah  jumlah  plat  teoritis (Susanti dan Dachriyanusus , 2017).
Faktor  kapasitas  merupakan ciri  khas  suatu  analit  pada  kondisi tertentu, yaitu pada komposisi fase gerak,  suhu  dan  jenis  kolom (panjang  kolom,  diameter  kolom dan ketebalan lapisan film tertentu. Meskipun suatu
puncak
kromatogram  dapat  diidentifikasi melalui  waktu  retensinya  namum akan  lebih  baik  bila  diidentifikasi dengan menggunakn faktor kapasitas,  karena  harga  waktu retensi  dapat  berubah-ubah  sesuai
dengan panjang kolom dan
kecepatan alir fase geraknya. Faktor kapasitas
dapat memberikan  gambaran  dimana puncak  –  puncak  analit  terelusi secara relatif terhadap puncak fase geraknya (Susanti dan Dachriyanusus , 2017). Laju alir 1,0 mL/menit dengan ketiga konsentrasi
asetonitril  menunjukkan  harga  K’ yang  baik.  Karena  harga  K’  yang baik  berkisar  antara  2  sampai  10. Bila  harga  k’  kecil  berarti  analit ditahan  sedikit  oleh  kolom  dan terelusi  dekat  dengan  puncak  fase gerak, Ini menghasilkan pemisahan yang  kurang  bagus.  Harga  k’  yang besar  (misalnya  20-30  menit) menunjukkan pemisahan yang baik tetapi menyebabkan waktu analisis terlalu lama
(Susanti dan Dachriyanusus , 2017). Selektivitas adalah kemampuan  fase  diam  untuk memisahkan 2 komponen (komponen    1  dan  komponen  2), dimana komponen 2 sangat tertahan dibandingkan komponen 1 ditentukan  oleh  partisi  atau  rasio
relatifnya,  sehingga  tergantung pada faktor kapasitasnya pada fase diam tertentu. Selektivitas
merupakan  nilai  retensi  relatif  tiap komponen  oleh  fase  diam  (Susanti dan Dachriyanusus , 2017). Laju alir 1,0 mL/menit dengan ketiga konsentrasi asetonitril  menunjukkan  nilai  α yang  baik,  karena  lebih  besar  dari 1.  Selektivitas  untuk  pasangan
puncak yang
bersebelahan merupakan  fungsi  jenis  fase  diam yang  digunakan,  fase  gerak  dan suhu  kolom,  dan  harus  dioptimasi terutama  untuk  komponen  yang paling  sukar  terpisak  selama  elusi
(Susanti
dan
Dachriyanusus ,
2017).
Jumlah pelat teori (N) adalah banyaknya distribusi keseimbangan dinamis yang terjadi didalam suatu kolom. Jumlah pelat teori digunakan untuk mengetahui koefisienan  kolom.  Persamaan  ini membandingkan
lebar puncak dengan lamanya komponen berada dalam  kolom,  Jadi  kolom  yang efisien  mencegah  pelebaran  pita dan  atau  menghasilkan  puncak
yang sempit (Susanti dan
Dachriyanusus , 2017).
Proses pemisahan diharapkan untuk  menghasilkan  harga  N  yang sebesar  -besarnya.  Harga  N  paling besar ditunjukkan pada konsentrasi asetonitril  20  %.Efisiensi  kolom
KCKT umumnya meningkat dengan semakin  kecilnya  ukuran  partiket yang  ada  di  dalam  kolom  (Susanti dan Dachriyanusus , 2017).
Jarak  setara  pelat  teori (JSPT)  adalah  panjang  kolom kromatogram (mm) yang diperlukan  sampai  terjadinya  satu kali keseimbangan
distribusi dinamis  molekul  analit  dalam  fase gerak  dan  fase  diam.  Harga  JSPT pada  ketiga  konsentrasi  asetonitril menunjukkan  pada  laju  alir  1,0 mL/menit  dengan  konsentrasi  10 %,karena  untuk  kromatografi  cair berkecepatan  tinggi  mempunyai tinggi  pelat  dalam  rentang  0,01 sampai  1,0  mm  (Susanti  dan Dachriyanusus , 2017).
Faktor  simetri  atau tailing
factor yaitu  terjadinya  pengekoran pada kromatogram sehingga bentuk kromatogram menjadi tidak simetris. Kesimetrisan pada kondisi optimum  pada  laju  alir  1,0 mL/menit  dengan  konsentrasi  10 %. kromatogram yang memberikan  harga  TF=  1  berarti kromatogram  tersebut  benar  – benar  simetris.  Harga  TF    >  1 berarti kromatogram tersebut mengekor  ( tailing ),makin  besar harga TF makin tidak efisien kolom yang  dipakai.  Bila  harga  TF    <  1 berarti  kromatogram  mengandung ( fronting ).  Jadi  harga  TF  dapat digunakan  sebagai  pedoman  untuk
melihat  efisien  kolom  kromatografi (Susanti dan
Dachriyanusus , 2017).
Diamati  dari  hasil  yang diperoleh pada berbagai parameter kondisi optimum, perbedaan konsentrasi asetonitril tidak memberikan perbedaan yang berarti.  Oleh  karena  itu,untuk memberikan kondisi analisis parasetamol  dan  kafein  yang optimum  dipilih  laju  alir  1,0 mL/menit  dengan  konsentrasi  10 %.

## KESIMPULAN
Penetapan  kondisi  optimum pengujian  kadar  parasetamol  dan kafein  dengan  kromatografi  cair kinerja  tinggi  dapat  disimpulkan bahwa :
Telah berhasil mengefisienkan  waktu  pengujian dari ± 15 menit menjadi ±6 menit dengan laju alir 1,0 mL/menit pada konsentrasi  10  %.  Metode  terpilih telah  di  uji  kesesuaian  sistem dengan  hasil  memenuhi  seluruh kriterian  untuk  parameter  uji kesesuaian sistem.

## Saran
Penetapan  kondisi  optimum pengujian  kadar  parasetamol  dan kafein dengan  laju alir 1,0 mL/menit  pada  konsentrasi  10  %
dengan  kromatografi  cair  kinerja tinggi perlu dilakukan uji validasi.

## DAFTAR PUSTAKA
Andrade  A,  Dievart  P,  Dagaut  P. 2009.  Improve  optimization of
polycylic aromatic hydrocarbon  (PAHs)  mixtures resolution  in  reversed  phase high  using  factorial  design and responsse surface methodology.  France:  CNRS- ICARE  IC,  Avenua  de  la
Recherche Scientifique Depkes  RI.  1995. Farmakope Indonesia Edisi IV . Departemen  Kesehatan  RI. Jakarta Damayanti  S.,  Ibrahim  S.,  Firman K.,  Daryono  H.,  Tjahjono. 2003. Simutaneous Determination Of Parasetamol and  Ibuprofen  Mixtures  By High Perfomonce Liquid Chromatography. Indonesian
Journal  Of  Chemistry .  Hayati 3: 9-13 Kriswanto.  2013.  Pengembangan dan  Uji  Validasi  Metode Analisa  Kadar  Parasetamol dan Kafein dengan Kromatografi  Cair  Kinerja Tinggi [ Skripsi ]. Jurusan Pendidikan  Kimia  Fakultas Pendidikan  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Pendidikan Indonesia Pratiwi  EH.  2011.  Optimasi  Kondisi Pengujian  Kromatografi  Cair Kinerja Tinggi Pada Penetapan  Kadar  Bahan  Aktif Obat  Sakit  Kepala  [ Skripsi ]. Institut  Pertanian  Bogor,  Hlm 1-7 Susanti  M.,  Dachriyanus.  2017.
Kromatografi  Cair  Kinerja Tinggi . Penerbit Andalas
University Pess: padang Tjay  HT.,  Rahardja  K.  2007. Obat- Obat  Penting .  Elex  Media Komputindo