Validasi Metode Analisis Formalin dan Aplikasinya Pada Ikan Asin Validation of Formalin Analysis Method and I t’s Application in Salted Fish Dedy Suseno 1a
1 Halal Research Center Universitas YARSI , Jl. Letjend Soeprapto Kav.13 No. 1 Cempaka Putih, Jakarta Pusat, DKI Jakarta 10510 a Korespondensi: Dedy Suseno, E-mail: dedy.suseno@yarsi.ac.id
(Diterima oleh Dewan Redaksi : 05 – 03 – 2021 ) (Dipublikasikan oleh Dewan redaksi : 30 – 10 – 2021)

## ABSTRACT
Method validation aims to ensure that the method used is correct so it will produce accurate data.  Based  on  the  regulation  of  the  Health  Minister  of  the  Republic  Indonesia  No.  033  of 2012,  formaldehyde  is  a  prohibited  substance  as  a  food  additive.  The  existence  of  this regulation  does  not  make  salted  fish  free  from  formaldehyde  because  there  are  still producers  who  add  formaldehyde  to  the  manufacturing  process. The  validation  process  of the formaldehyde analysis method using Nash reagents and chromatropic acid is done using samples of bakang salted fish, teri cue, teri medan, and rebon that have MUI halal logo. This method is used to analyze the formaldehyde content in salted fish samples that don’t have MUI  halal  logo.  The  research  aims  to  validate  the  method  analysis  of  formaldehyde  by spectrophotometry  using  chromatropic  acid  reagents  and  Nash  and  analyze  the  content  of formaldehyde in salted fish that do n’t have the MUI halal logo sold on traditional markets A and B. The result shows that R 2 , LoD, and the largest recovery value in chromatropic acid and Nash  reagents  are  0.9985,  0.0926  ppm,  54.21%  and  0.9999,  0.0247  ppm,  42.72%.  The biggest formaldehyde concentration in salted fish sold at markets A and B are 0.4671 ppm and 0.815 ppm.
Keywords : Nash, chromatropic acid, halal logo

## ABSTRAK
Validasi  metode  bertujuan  untuk  memastikan  bahwa  metode  yang  digunakan  sudah  tepat sehingga akan menghasilkan data yang akurat. Berdasarkan peraturan menteri kesehatan RI No.  033  tahun  2012,  formalin  merupakan  zat  yang  dilarang  sebagai  bahan  tambahan makanan. Adanya peraturan ini tidak menjadikan ikan asin bebas dari formalin karena masih ada  oknum  produsen  yang  menambahkan  formalin  pada  proses  pembuatannya.  Proses validasi  metode  analisis  formalin  menggunakan  pereaksi  Nash  dan  asam  kromatofat dilakukan  dengan  menggunakan  sampel  ikan  asin  bakang,  teri  cue,  teri  medan  dan  rebon yang  memiliki  logo  halal  MUI.  Metode  ini  selanjutnya  digunakan  untuk  menganalisis kandungan formalin dalam sampel ikan asin yang tidak memiliki logo halal MUI. Penelitian bertujuan  memvalidasi  metode  analisis  formalin  secara  spektrofotometri  menggunakan pereaksi asam kromatofat dan Nash serta menganalisis kandungan formalin pada ikan asin yang  tidak  memiliki  logo  halal  MUI  yang  di  jual  pada  pasar  tradisional  A  dan  B.  Hasil penelitian menunjukkan nilai R 2 , LoD, dan recovery terbesar pada perekasi asam kromatofat dan  Nash  berturut-turut  yaitu  0,9985,  0,0926  ppm,  54,21%  dan  0,9999,  0,0247  ppm, 42,72%.  Konsentrasi  formalin  terbesar  pada  ikan  asin  yang  dijual  di  pasar  A  dan  B  yaitu 0,4671 ppm dan 0,815 ppm.
Kata kunci : Nash, asam kromatofat, logo halal
Suseno, Dedy. 2021. Validasi Metode Analisis Formalin dan Aplikasinya Pada Ikan Asin. Jurnal Agroindustri Halal 7(2): 173 – 182.

## PENDAHULUAN
Validasi  merupakan  aksi  konfirmasi bahwa  metode  analisis  yang  digunakan sesuai  dengan  tujuan  yang  diinginkan. Menurut United  States  Pharmacopeia (USP), validasi  dilakukan  untuk  menjamin  bahwa metode  analisis  adalah  akurat,  spesifik, reprodusibel dan  tahan  pada  kisaran  analit yang  akan  dianalisis  (Rohman  2019). Menurut  ISO  17025:2005,  suatu  metode analisis  perlu  divalidasi  jika  (1)  metode tersebut  tidak  baku,  (2)  metode  yang dikembangkan  oleh  laboratorium,  (3) metode  standar  yang  digunakan  di  luar ruang  lingkupnya,  (4)  perubahan  sekecil apapun  dari  metode  standar,  (5)  gabungan dua  atau  lebih  metode  standar,  dan  (6) gabungan  antara  metode  standar  dan metode bukan standar.
Proses  validasi  suatu  metode  menjadi penting  sebelum  melakukan  suatu  analisis karena  dengan  melakukannya  diharapkan menghasilkan  data  yang  baik  dan  akurat. Menurut United  States  Pharmacopeia (USP) setidaknya  ada  8  parameter  yang  harus dievaluasi untuk melakukan validasi metode analisis.  Delapan  parameter  tersebut  yaitu presisi,  akurasi,  batas  deteksi,  batas kuantifikasi,  spesifisitas,  linearitas  dan rentang, kekasaran dan ketahanan (Rohman 2019). Persyaratan nilai parameter – parameter  tersebut  dapat  dibuktikan berdasarkan  percobaan  yang  dilakukan dalam laboratorium.
Ikan  asin  merupakan  salah  satu  hasil olahan  ikan  laut  yang  digemari  oleh masyarakat.  Pembuatan  ikan  asin  dilakukan dengan menambahkan garam pada ikan laut. Hal  ini  menjadi  salah  satu  cara  pengawetan alami  agar  ikan  tidak  cepat  rusak  karena aktivitas mikroba. Dalam proses pembuatan ikan asin, ternyata ada oknum produsen ikan asin  yang  juga  menambahkan  formalin.  Hal ini  dimaksudkan  agar  ikan  asin  yang dihasilkan  menjadi  lebih  awet  sehingga mengurangi  biaya  operasional.  Formalin merupakan  senyawa  kimia  formaldehida yang  berbentuk  cair  dengan  konsentrasi 37%. Salah satu fungsi formalin yang banyak digunakan yaitu sebagai pengawet mayat.
Berdasarkan peraturan menteri kesehatan  (Permenkes  RI  No.  033  tahun 2012),  formalin  merupakan  zat  yang dilarang  sebagai  bahan  tambahan  makanan karena  formalin  dapat  berdampak  buruk bagi  kesehatan.  Lima  FL et  al. (2015) melaporkan  bahwa  dampak  formaldehida pada  konsentrasi  1%,  5%,  dan  10%  dalam waktu  singkat  memacu  kerusakan  oksidatif dan  peradangan  di  otot  diafragma  dan trakea,  serta  menyebabkan  metaplasia, ulserasi  dan  peningkatan  lendir  pada  tikus. Namun  dari  beberapa  penelitian  dilaporkan masih  saja  ditemukan  kandungan  formalin dalam ikan asin (Niswah et al. 2016; Sikkana et  al. 2018;  Dwinanda  2020).  Hal  ini menyebabkan  diperlukannya  suatu  metode yang  mampu  mendeteksi  dan  menganalisis formalin  dalam  sampel  ikan  asin  dengan tepat dan akurat. Selain itu sejauh ini belum banyak  dilaporkan  data  validasi  suatu metode  analisis  formalin  menggunakan sampel  berupa  ikan  asin.  Oleh  sebab  itu,  ke dua  hal  tersebut  menjadi  dasar  pemikiran pada penelitian kali ini.
Di  dalam  surat  Al-maidah  ayat  168, sesungguhnya  ALLAH Subhanahu  Wa  Ta’ala memerintahkan kita sebagai seorang muslim untuk  mengonsumsi  makanan  yang  halal dan thayib. Kata thayib sendiri mengandung arti  makanan  yang  tidak  kotor  dari  segi zatnya,  tidak  rusak,  tidak  kedaluarsa  atau tercampur  najis.  Jika  ikan  asin  yang  akan dikonsumsi  mengandung  formalin  sudah tentu  makanan  ini  menjadi  tidak  thayib. Suatu  produk  yang  pada  kemasannya memiliki logo halal Majelis Ulama Indonesia (MUI)  maka  dapat  dipastikan  produk tersebut  halal  dan  thayib.  Penelitian  ini bertujuan untuk melakukan validasi metode analisis formalin dalam ikan asin menggunakan pereaksi asam kromatofat dan Nash serta menganalisis kandungan formalin pada ikan asin yang tidak memiliki logo halal MUI.

## MATERI DAN METODE

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan yaitu sonikator, spektrofotometer UV-Vis, alat-alat gelas, pipet mikro, dan penangas air.
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu ammonium  asetat  (Merck),  asetil  aseton (Merck),  asam  asetat  glacial  (Merck), formaldehyde  37%  (Merck),  H 2 SO 4 pekat (Merck),  asam kromatofat,  sampel  ikan  asin (ikan rebon, teri medan, pakang dan teri cue) yang di beli di pasar tradisional A dan B kota Bogor  dan  tak  memiliki  logo  halal  MUI, sampel  ikan  asin  (ikan  rebon,  teri  medan, pakang  dan  teri  cue)  yang  memiliki  logo halal MUI dan akuades.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  secara  garis  besar dilakukan  dengan  beberapa  tahapan  yaitu ekstraksi  formalin  pada  sampel  ikan  asin (Suryadi et  al. 2010),  analisis  formalin menggunakan  perekasi  asam  kromatofat (Farid 2014) dengan modifikasi, dan analisis formalin  menggunakan  perekasi  Nash. Sebelum  melakukan  analisis  kuantitatif formalin  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  maka  perlu  ditentukan  terlebih dahulu  panjang  gelombang  maksimum  dan pembuatan kurva standar formalin.
Penentuan panjang gelombang maksimum Penentuan Panjang
gelombang maksimum  standar  formalin  menggunakan pereaksi asam kromatofat dilakukan dengan memipet  sebanyak  2  mL  standar  formalin 0,05  ppm  ke  dalam  tabung  reaksi.  Larutan ini lalu ditambahkan asam kromatofat 0,4% sebanyak 0,2 mL dan 3 mL asam sulfat pekat. Tabung  reaksi  ini  di  vortex  lalu  dipanaskan selama  15  -  20  menit  pada  suhu  100 0 C. Setelah  dingin,  ukur  serapannya  hingga didapatkan panjang gelombang maksimum.
Penentuan Panjang gelombang maksimum  standar  formalin  menggunakan pereaksi  Nash  dilakukan  dengan  memipet sebanyak  2  mL  standar  formalin  0,05  ppm ke  dalam  tabung  reaksi.  Tambahkan sebanyak  3  mL  pereaksi  Nash  kedalam tabung reaksi tersebut kemudian di vorteks. Setelah  tercampur,  larutan  ini  dipanaskan selama 30  menit pada suhu 40±2 0 C. Setelah dingin,  pengukuran  panjang  gelombang maksimum dapat dilakukan.

## Pembuatan kurva standar formalin
Pembuatan  kurva  standar  formalin menggunakan  pereaksi  asam  kromatofat yang  pertama  dilakukan  adalah  membuat konsentrasi formalin 0, 0,05, 0,1, 0,5, 0,75, 1, 1,5,  dan  2  ppm.  Pipet  sebanyak  2  mL  dari masing-masing  konsentrasi  formalin  lalu tambahkan asam kromatofat 0,4% sebanyak 0,2 mL dan 3 mL asam sulfat pekat ke dalam masing-masing tabung reaksi. Tabung reaksi ini  lalu  dipanaskan  selama  15  -  20  menit pada suhu 100 0 C. Setelah selesai dipanaskan, diamkan larutan selama 10 menit pada suhu ruang  lalu  semua  tabung  siap  diukur serapannya  pada  panjang  gelombang maksimum. Perlakuan dilakukan sebanyak 7 kali ulangan.
Pembuatan  kurva  standar  formalin menggunakan  pereaksi  Nash  yang  pertama dilakukan  adalah  membuat  konsentrasi formalin  0,  0,05,  0,1,  0,5,  0,75,  1,  1,5  dan  2 ppm.  Sebanyak  2  mL  dari  masing-masing konsentrasi formalin dipipet lalu di cukupkan volumenya
dengan menggunakan pereaksi Nash sampai 5 mL ke dalam  tabung  reaksi.  Setiap  tabung  reaksi lalu dipanaskan selama 30 menit pada suhu 40±2°C kemudian  dibiarkan  dingin  pada suhu ruang selama 10 menit. Setelah dingin, semua  tabung  siap  diukur  serapannya  pada panjang  gelombang  maksimum.  Perlakuan dilakukan sebanyak 7 kali ulangan.

## Ekstraksi formalin dalam sampel
Formalin  dalam  sampel  diekstraksi dengan  cara  mencampurkan  5  gram  sampel ikan asin yang tidak memiliki logo halal MUI dengan 50 mL aquades. Panaskan campuran ini  pada  suhu  40 0 C  selama  60  menit. Pengadukan  dilakukan  selama  1  menit dengan  jeda  waktu  5  menit.  Setelah  dingin sampel  lalu  disaring  dan  ditera  sampai  100 mL  dengan  aquades.  Larutan  ini  siap  untuk dianalisis  kadar  formalin  menggunakan perekasi asam kromatofat dan Nash. Sebagai blanko, sampel ikan asin yang tidak memiliki logo  halal  MUI  diganti  dengan  sampel  ikan asin yang memiliki logo halal MUI.
Uji kadar formalin dalam sampel
Analisis formalin menggunakan pereaksi asam kromatofat dilakukan dengan
mengambil  sebanyak  2  mL  larutan  sampel lalu  ditambahkan  0,2  mL  asam  kromatofat dan  3  mL  H 2 SO 4 pekat.  Larutan  ini  lalu  di vortex  agar  homogen  dan  didiamkan beberapa  menit  sampai  dingin.  Setelah dingin, larutan ditempatkan dalam penangas air  bersuhu  100 0 C  selama  15  sampai  20 menit. Setelah selesai dipanaskan, dinginkan larutan  selama  10  menit  pada  suhu  ruang kemudian  ukur  serapannya.  Perlakuan dilakukan  sebanyak  3  kali  ulangan  pada masing-masing sampel.
Analisis formalin menggunakan pereaksi Nash dilakukan dengan mengambil sebanyak  2  mL  larutan  sampel  lalu ditambahkan pereaksi Nash sebanyak 3 mL. Larutan ini kemudian dipanaskan selama 30 menit  pada  suhu  40±2°C .  Setelah  selesai dipanaskan,  dinginkan  larutan  selama  10 menit  pada  suhu  ruang  kemudian  ukur serapannya. Perlakuan dilakukan sebanyak 3 kali ulangan pada masing-masing sampel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penentuan
panjang gelombang maksimum Panjang  gelombang  maksimum  perlu ditentukan terlebih dahulu sebelum melakukan validasi metode analisis formalin secara  spektrofotometri.  Penentuan  dan analisis kadar formalin harus dilakukan pada panjang gelombang maksimum  dikarenakan (1)  serapan  maksimum  didapatkan  pada panjang  gelombang  maksimum  dimana perubahan  serapan  karena  konsentrasi  juga maksimum sehingga menghasilkan kepekaan  dan  keakuratan  yang  lebih  tinggi, (2)  kurva  kalibrasi  yang  linier  diperoleh pada panjang gelombang maksimum  karena data  serapannya  yang  relatif  konstan, (3) kesalahan  pembacaan  panjang  gelombang dapat  diabaikan  karena  bentuk  serapan umumnya landai (Suryadi et al. 2010).
Panjang  gelombang  maksimum  pada reaksi  formalin  dengan  asam  kromatofat pada  penelitian  ini  yaitu  pada  571  nm.  Hal ini sedikit berbeda dengan hasil Ichiya’uddin (2014),  Farid  (2014)  dan  Fagnani et  al. (2003)  yang  melaporkan  hasil  serapan
maksimumnya  di  569  nm,  562  nm  dan  575 nm. Sedangkan panjang gelombang maksimum  pada  reaksi  formalin  dengan pereaksi Nash pada penelitian ini yaitu pada 412,5  nm.  Suryadi et  al. (2010)  dan  (Nash (1953)  dalam  Suryadi et  al. 2010) melaporkan  panjang  serapan  maksimum pada  reaksi  formalin  dengan  pereaksi  Nash yaitu 409,5 nm dan 412 nm.

## Validasi metode analisis formalin
Validasi metode dilakukan bila metode yang  digunakan  dalam  suatu  pengujian merupakan metode baru namun jika metode yang  digunakan  sudah  umum  seperti  pada AOAC maka hanya diperlukan verifikasi saja. Metode  kuantitatif  untuk  pengujian  validasi mengandung  beberapa  parameter  yang ditentukan  yaitu:  selektivitas,  batas  deteksi atau Limit  of  Detection (LoD),  presisi, linearitas,  akurasi, recovery atau  perolehan kembali,  ketidakpastian  pengukuran,  dan stabilitas  (Riyanto  2014).  Menurut  USP ( United  States  Pharmacopeia )  validasi metode  meliputi  8  parameter  yaitu  presisi, akurasi,  batas  deteksi,  batas  kuantitasi  atau Limit  of  Quantification (LoQ),  Spesifisitas, linearitas dan rentang, kekasaran, ketahanan (Rohman 2019).
Nilai  LoD  menunjukkan  konsentrasi analit  terkecil  dalam  sampel  yang  masih dapat dideteksi meskipun tidak selalu dapat dikuantifikasi, sedangkan nilai LoQ menunjukkan  konsentrasi  analit  terendah dalam sampel yang dapat ditentukan dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima pada kondisi operasional metode yang digunakan (Rohman 2019) . Hasil penelitian pada Tabel 1  menunjukkan  nilai  LoD  pada  penentuan kadar formalin menggunakan pereaksi asam kromatofat  dan  Nash  sebesar  0,0926  ppm dan  0,0247  ppm.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  alat  spektrofotometer  UV-Vis  masih dapat  membaca  atau mengukur  konsentrasi formalin  menggunakan  pereaksi  asam kromatofat  sebesar  0,0926  ppm  dan menggunakan pereaksi Nash sebesar 0,0247 ppm.
Berdasarkan hasil penelitian didapatkan  nilai LoQ pada  penentuan  kadar formalin  menggunakan  pereaksi  asam
kromatofat  dan  Nash  berturut-turut  yaitu 0,3088  ppm  dan  0,0822  ppm.  Hal  ini menyatakan bahwa untuk memperoleh hasil yang  mempunyai  akurasi  lebih  baik disarankan  untuk  melakukan  pengukuran konsentrasi  formalin  diatas  0,3088  ppm untuk pereaksi asam kromatofat dan 0,0822 ppm  untuk  pereaksi  Nash.  Hal  ini disebabkan  karena  pengukuran  dibawah nilai  LoQ  dapat  menghasilkan  data  yang tidak akurat.
Berdasarkan perbandingan dua metode  untuk  analisis  formalin,  metode pereaksi  Nash  lebih  baik  bila  dibandingkan dengan  pereaksi  asam  kromatofat,  karena pada perekasi Nash mampu bereaksi dengan formalin  dan  terbaca  oleh  spektrofotometer pada  konsentrasi  yang  lebih  kecil  dari pereaksi asam kromatofat.
Penelitian Suryadi et al. (2010) bahkan melaporkan nilai LoD dan LoQ pada analisis
formalin  menggunakan  pereaksi  Nash  lebih kecil  dari  penelitian  kali  ini  yaitu  0,0102 ppm  dan  0,0341  ppm.  Perbedaan  nilai sensitifitas  alat  spektrofotometer  UV-Vis yang digunakan dapat menyebabkan perbedaan nilai LoD dan LoQ tersebut.
Linearitas  mengandung  arti  bahwa metode  yang  digunakan  menghasilkan  data yang berbanding lurus antara respon dengan konsentrasi  analit. Ketelitian  pengerjaan analisis suatu metode juga dapat digambarkan  dengan  linearitas.  Teliti  atau tidaknya  pengerjaan  suatu  analisis  dapat ditunjukkan oleh nilai koefisien determinasi lebih  besar  dari  0,997  pada  kurva  standar (Riyanto
2014). Hasil penelitian menunjukkan bahwa nilai koefisien determinasi  pada  metode  asam  kromatofat maupun  Nash  nilainya  sudah  diatas  0,997.
Tabel 1. Perbandingan Nilai R 2 , LoD dan LoQ No Hasil Pereaksi asam kromatofat Nash 1 Persamaan garis y = 0,2104x + 0,0101 y = 0,1493x – 0,0009 2 R 2 0,9985 0,9999 3 LoD (ppm) 0,0926 0,0247 4 LoQ (ppm) 0,3088 0,0822 Presisi  adalah  ukuran  kedekatan  hasil analisis diperoleh dari serangkaian pengukuran ulangan dari ukuran yang sama. Presisi diukur sebagai simpangan baku atau simpangan  baku  relatif  (koefisien  variasi). Presisi dapat dinyatakan sebagai keterulangan  atau  ketertiruan  (Ryanto 2014). Presisi suatu metode akan memenuhi syarat,  salah  satunya  jika  nilai  simpangan baku  relative  (%RSD)  yang  diperoleh  dari percobaan lebih kecil dari CV Horwitz.
Selain  membandingkan  nilai  %RSD dengan  nilai  CV  Horwitz,  presisi  dapat  pula dilihat  dari  nilai  %RSD  berdasarkan konsentrasi  analit  yang  dianalisis  (standar baku)  dengan  nilai  %RSD yang  didapat  dari hasil  penelitian  ( Ryanto  2014). Semakin kecil konsentrasi analit yang diuji maka nilai %RSD  nya  pun  semakin  besar  dan  begitu pula  sebaliknya.  Hal  ini  dapat  dicontohkan
bila konsentrasi analit yang diukur ≤ 0,10% maka %RSD nya ≤ 20% dan bila konsentrasi analit yang diukur ≥ 10% maka %RSD nya ≤ 2%.  Pada  penelitian  ini  presisi  dilakukan dengan membandingkan nilai %RSD dengan CV Horwitz.
Data Tabel 2 menunjukkan bahwa pada pereaksi Nash semua nilai %RSD lebih kecil dari  nilai  CV  Horwitz.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  pengukuran  konsentrasi  formalin pada rentang 0,05 ppm sampai 2 ppm sudah presisi dan akurat. Berbeda dengan pereaksi asam  kromatofat,  nilai  %RSD  lebih  besar dari  CV  Horwitz  pada  analisis  konsentrasi formalin  0,05  ppm  dan  0,1  ppm.  Hal  ini menunjukkan bahwa pengukuran konsentrasi  formalin  pada  konsentrasi  0,05 ppm  dan  0,1  ppm  tidak  presisi.  Hal  ini  bisa dijelaskan  karena  berdasarkan  perhitungan nilai  LoQ  nya  yaitu 0,3088  ppm,  sehingga
pengukuran  konsentrasi  formalin  di  bawah  nilai  LoQ  nya  akan  tidak  presisi  dan  akurat.
Tabel 2 Perbandingan Nilai %RSD dan CV Horwitz Konsentrasi formalin (ppm) Pereaksi Asam Kromatofat Pereaksi Nash % RSD CV Horwitz % RSD CV Horwitz 0,05 30,24 18,60 15,31 16,60 0,10 20,24 15,89 11,10 14,96 0,50 7,96 11,81 8,37 11,95 0,75 7,44 11,13 6,82 11,20 1,00 9,75 10,66 7,03 10,72 1,50 4,47 10,11 6,17 10,08 2,00 6,99 9,67 5,43 9,66 Akurasi adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil analis dengan  kadar  analit  yang  sebenarnya. Akurasi dinyatakan sebagai persen perolehan  kembali  ( recovery )  analit  yang ditambahkan.  Tiga  pendekatan  yang  biasa digunakan  ketika  melakukan  uji  akurasi yaitu  (1)  menggunakan  SRM  ( Standard Reference  Material ),  (2)  melakukan  spiking terhadap placebo dan (3) melakukan metode penambahan  standar  (Rohman  2019).  Pada penelitian  ini,  akurasi  dilakukan  dengan pendekatan  spiking  terhadap  placebo. Placebo  yang  digunakan  yaitu  sampel  ikan asin yang telah memiliki logo halal MUI. Nilai perolehan  kembali  dilakukan  dengan menambahkan  konsentrasi  formalin  hingga 2 ppm ke dalam sampel ikan asin yang telah memiliki logo halal MUI.
Tabel 3. Perbandingan Nilai Perolehan Kembali Sampel Nilai Perolehan Kembali (%) Asam Kromatofat Nash Ikan pakang 7,38 42,72 Teri medan 54,21 40,38 Rebon 21,74 36,25 Teri cue 22,98 40,71
Data pada Tabel 3 menunjukkan bahwa nilai  perolehan  kembali  paling  besar  yaitu 54,21% pada pereaksi asam kromatofat dan 42,72% pada pereaksi Nash. Hal ini tentunya jauh dari kata baik jika dibandingkan dengan keberterimaan  nilai  perolehan  kembali  dari
yang disarankan. Rohman (2019) menyatakan  bahwa  kisaran  perolehan kembali  untuk  konsentrasi  analit  yang diukur  sebesar  1  ppm  yaitu  80  sampai 110%.  Rendahnya  nilai  perolehan  kembali yang  didapatkan  dapat  disebabkan  karena kurang  optimalnya  metode  yang  digunakan dalam  mengekstrak  formalin  dalam  sampel. Salah  satu  hal  yang  mempengaruhi  nilai peroleh  kembali  (%)  yaitu  jenis  matriks sampel.  Sebagai  perbandingan,  dengan menggunakan  metode  yang  sama  penelitian Suryadi et  al. (2010)  melaporkan  bahwa nilai  perolehan  kembali  analisis  formalin menggunakan  pereaksi  Nash  pada  ikan  dan udang  segar  berkisar  84,40%  sampai 102,29%.

## Analisis formalin pada sampel ikan asin
Salah  satu  metode  analisis  formalin secara spektrofotometri yang direkomendasikan  oleh  NIOSH  (National Institute for Occupational Safety and Health) adalah dengan menggunakan pereaksi asam kromatofat (Fagnani et al. 2003). Metode ini memiliki  kelebihan  yaitu  mudah  untuk diterapkan,  namun  ada  resiko  yang  dimiliki yaitu adanya penambahan asam sulfat pekat. Asam  sulfat  ini  berperan  sebagai  oksidator kuat  dalam  reaksi  formalin  dengan  asam kromatofat. Fagnani et al. (2003) menyatakan bahwa penggunaan H 2 SO 4 yang berpotensi  berbahaya  dan  korosif  dapat dihilangkan  dan  digantikan  oleh  campuran HCl dan H 2 O 2 .
Metode  analisis  formalin  secara spektrofotometri  lainnya  yaitu  dengan
menggunakan  pereaksi  Nash.  Kelebihan pereaksi  Nash  yaitu  mampu  mendeteksi formalin  dalam  konsentrasi  yang  kecil  pada sampel.  Suryadi et  al .  (2010)  menyatakan bahwa  pereaksi  Nash  merupakan  pereaksi yang  warna  yang  paling  baik  bila dibandingkan dengan pereaksi asam kromatofat  dan pereaksi  Schryver dalam menganalisis  formalin.  Secara  umum  ada dua  metode  untuk  menganalisis  formalin yaitu metode spektrofotometri dan kromatografi.
Metode spektrofotometri memiliki kelebihan yaitu mudah, murah dan cepat namun kekurangannya yaitu kurangnya ketepatan, kurangnya sensitifitas dan  reaksinya  mudah  dipengaruhi  oleh kompleks matriks sampel (Zang et al. 2017). Sampel  pada  penelitian  ini  dibagi menjadi 2 jenis yaitu sampel  ikan asin yang memiliki dan tidak memiliki logo Halal MUI. Sampel  ikan  asin  yang  telah  memiliki  logo Halal MUI dipastikan tidak akan mengandung  formalin.  Hal  ini  dikarenakan semua  bahan  yang  digunakan  untuk memproduksi  ikan  asin  tersebut  telah dinyatakan halal dan thayyib karena telah di uji  baik  secara  dokumen  maupun  uji laboratorium.  Penggunaan  sampel  ikan  asin yang telah memiliki logo Halal dimaksudkan sebagai blangko. Hal ini dikarenakan sampel tersebut  memberikan  nilai  absorban  walau kecil,  baik  pada  reaksi  menggunakan  asam kromatofat  maupun  pereaksi  Nash.  Hal  ini dikhawatirkan  menjadi  bias  terhadap perhitungan  konsentrasi  formalin  pada sampel  ikan  asin  yang  tidak  memiliki  logo halal.
Pada  uji  formalin  menggunakan pereaksi  asam  kromatofat,  setelah  larutan
ditambahkan  asam  sulfat  pekat  maka  akan terjadi  perubahan  warna  dari  tidak berwarna  menjadi  merah  bata  keunguan. Male (2017) menyatakan bahwa jika sampel mengandung  formalin  maka  larutan  yang dihasilkan  akan  berubah  warna  menjadi merah  keunguan.  Terbentuknya  kompleks warna ungu senyawa 3,4,5,6 –
dibenzoxanthylium dikarenakan terjadi reaksi  antara  asam  kromatofat  dengan formalin  dalam  sampel  (Farid  2014). Sedangkan  pada  uji  formalin  menggunakan pereaksi  Nash , larutan  akan  berubah  dari tidak  berwarna  menjadi  ungu  jika  pada sampel  tersebut  mengandung  formalin.  Hal ini  dikarenakan  telah  terbentuk senyawa kompleks 3,5-diasetil-1,4-dihidrolutidin (DDL) (Suryadi et al . 2010).
Hasil  penelitian  pada  Tabel  4 menunjukkan  bahwa  4  jenis  sampel  yang tidak  memiliki  logo  halal  MUI  terdeteksi mengandung  formalin  dengan  konsentrasi yang  berbeda-beda,  baik  yang  dibeli  pada Pasar A maupun Pasar B. Adanya perbedaan konsentrasi  formalin  pada  setiap  sampel dapat  dimungkinkan  karena  pada  proses pembuatan  ikan  asin,  setiap  oknum produsen  tidak  mempunyai  aturan  baku tentang berapa banyak konsentrasi formalin dan  air  yang  ditambahkan.  Hal  ini  tentunya akan  berpengaruh  terhadap  konsentrasi formalin  pada  produk  ikan  asin  yang dihasilkan.  Laporan  Astro  (2019)  cukup menggambarkan bagaimana proses pembuatan  ikan  asin  yang  ditambahkan formalin.  Namun  yang  perlu  digaris  bawahi yaitu  adanya  kandungan  formalin  dalam pangan  walau  sedikit  saja  maka  akan memberikan  efek  buruk  bagi  kesehatan.
Tabel 4 Nilai Konsentrasi Formalin (ppm) Pada Sampel Ikan Asin
Sampel Pereaksi Asam Kromatofat Pereaksi Nash Pasar A Pasar B Pasar A Pasar B Ikan Bakang Tidak terdeteksi 0,083 Tidak terdeteksi Tidak terdeteksi Teri Medan Tidak terdeteksi 0,156 Tidak terdeteksi 0,815 Rebon 0,467 0,389 Tidak terdeteksi 0,078 Teri cue Tidak terdeteksi 0,182 0,091 0,266 Banyak hasil penelitian yang melaporkan  adanya  kandungan  formalin dalam  ikan  asin.  Penelitian  Niswah et  al. (2016)  menunjukkan  bahwa  ada  ikan  asin
yang  di  jual  di  pasar  KM  5  Palembang mengandung formalin. Sikkana et al. (2018) juga  melaporkan  bahwa  di  pasar  Palu  tidak hanya ikan asin yang ditemukan mengandung formalin namun juga mie, ikan mujair  dan  tahu.  Dwinanda  (2020)  dalam harian  Republika  melaporkan  bahwa sebanyak  2,5  ton  ikan  asin  mengandung formalin  di  Pasuruan,  Jawa  Timur.  Hal  ini membuktikan  bahwa  dari  tahun  ke  tahun masih  saja  ditemukan  produsen  yang menggunakan  formalin  sebagai  pengawet dalam pembuatan ikan asin.
Kurangnya  edukasi  terkait  dampak buruk  formalin  bisa  menjadi  salah  satu penyebab  masih  maraknya  ditemukan formalin  dalam  bahan  pangan.  Peraturan menteri  kesehatan  (Permenkes  RI  No.  033 tahun  2012)  menerangkan  dengan  tegas bahwa  formalin  merupakan  zat  yang dilarang  sebagai  bahan  tambahan  makanan karena  berdampak  buruk  bagi  kesehatan. Selain  itu  bila  ditemukan  oknum  produsen yang dengan sengaja menambahkan formalin  dalam  produk  pangan  maka produsen  tersebut  bisa  dikenai  hukuman pidana  yang  mengacu  pada  pasal  136  huruf b  Undang-Undang  Republik  Indonesia Nomor 18 Tahun 2012 tentang pangan.
Undang-Undang  No  33  tahun  2014 tentang  Jaminan  Produk  Halal  (JPH)  telah diberlakukan  sejak  17  Oktober  2019. Undang – Undang  ini  menyatakan  bahwa semua  produk  yang  masuk,  beredar  dan diperdagangkan di Indonesia harus memiliki sertifikat  halal.  Hal  ini  tentunya  menjadi jaminan  bahwa  semua  produk  yang  akan dikonsumsi  oleh  konsumen  muslim  akan terjamin  kehalalannya.  Selain  berdampak positif  bagi  konsumen,  Undang-Undang  JPH ini  juga  akan  memberikan  dampak  positif bagi  produsen.  Hal  ini  dikarenakan  dengan jumlah  mayoritas  penduduk  Indonesia  yang beragama  islam,  sudah  tentu  jumlah konsumsi  produk  halal  (misalnya  makanan, minuman,  kosmetik  dan  obat-obatan)  akan semakin  meningkat.  Perlunya  sosialisasi yang baik ke konsumen dan produsen terkait Undang-Undang  JPH  ini  perlu  ditingkatkan agar  kesadaran  masyarakat  terhadap
konsumsi  dan  produksi  produk  halal semakin  meningkat.  Jika  proses  sertifikasi produk  halal  sudah  berjalan  dengan  baik tentu  produk  ikan  asin  berformalin  tidak akan pernah kita jumpai lagi.

## Dampak buruk formalin
Secara  umum  formalin  digunakan sebagai desinfektan, bahan pengawet mayat, pembasmi serangga, pembuatan pupuk urea dan masih banyak lagi (BPOM 2015). Zhang (2017) menyatakan bahwa dalam praktik di dunia  pangan,  formalin  dapat  digunakan sebagai  pestisida,  fungisida,  dan  pengawet. Pada  prinsipnya  fungsi  formalin  tidak  ada satu pun yang bisa digunakan dalam industri pangan,  kalaupun  ada  maka  hal  itu  adalah suatu  pelanggaran.  Faktanya  di  Indonesia ada beberapa oknum produsen yang sengaja menggunakan  formalin  sebagai  bahan tambahan  pangan,  contohnya  saja  pada pembuatan ikan asin. Formalin ditambahkan dalam  proses  pembuatan  ikan  asin  agar menghasilkan  produk  ikan  asin  yang  tidak mudah rusak dan membuat warna ikan lebih cerah  sehingga  nampak  seperti  ikan  segar. Astro  (2019)  melaporkan  bahwa  ada produsen  ikan  asin  yang  menggunakan bahan  baku  ikan  yang  sudah  tak  layak konsumsi  dan  untuk  menghilangkan  bau busuk  serta  mencerahkan  warna  ikan tersebut agar terlihat segar maka digunakanlah kaporit dan formalin.
Formalin  bukanlah  bahan  tambahan pangan, oleh sebab itu jika digunakan dalam pangan  pasti  akan  memberikan  efek  buruk bagi  yang  mengonsumsinya.  Dampak formalin  bagi  Kesehatan  dalam  jangka pendek akan menyebabkan mulut, tenggorokan dan perut terasa terbakar, sakit menelan,  mual,  muntah  dan  diare,  sakit perut  hebat,  sakit  kepala,  hipotensi,  kejang, tidak sadar hingga koma. Sedangkan dampak formalin  dalam  jangka  panjang  bisa menyebabkan iritasi pada saluran pernafasan, bahkan diduga bersifat karsinogenik  pada  manusia  (BPOM  2015).
Pada tahun
2014, formaldehida dikategorikan  sebagai  zat  karsinogenik  oleh International Agency for Research on Cancer (IARC) (Zhang 2017). Hal ini
menggambarkan bahwa efek jangka panjang terakumulasinya  formalin  dalam  tubuh dapat menyebabkan kanker. Hasil penelitian Elshaer  dan  Mahmoud  (2017)  melaporkan bahwa efek buruk formalin dapat menyebabkan  iritasi  mata,  gangguan  kulit, iritasi  saluran  pernapasan  dan  asma  pada mahasiswa  dan  staff  yang  bekerja  di  ruang mayat. Hal ini tentu menjadi suatu informasi penting  bahwa  formalin  dapat  pula memberikan  efek  buruk  bagi  tubuh  baik kontak secara fisik (kulit) maupun terhirup.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa secara  umum  metode  analisis  formalin menggunakan  pereaksi  Nash  lebih  baik dari metode  yang  menggunakan  pereaksi  asam kromatofat. Hasil validasi metode menggunakan  pereaksi  Nash  menunjukkan nilai  R 2 ,  LoD,  LoQ  dan  recovery  terbesar berturut-turut  yaitu  0,9999,  0,0247  ppm, 0,0822 ppm dan 42,72%. Sedangkan nilai R 2 , LoD,  LoQ  dan  recovery  terbesar  pada perekasi  asam  kromatofat  berturut-turut yaitu  0,9985,  0,0926  ppm,  0,3088  ppm,  dan 54,21%.  Pada  sampel  ikan  asin  yang  tidak memiliki  logo  halal  MUI  diketahui  ada  yang mengandung  formalin  dengan  konsentrasi terbesar  yaitu  0,4671  ppm  dan  0,815  ppm yang dibeli pada pasar A dan pasar B.

## DAFTAR PUSTAKA
Astro J. 2019. https://youtu.be/
WQPAOt1nY7c. (1) Buser: Awas! ikan asin bumbu  Formalin  (1/3)  YouTube.  [26 Februari 2021]
[BPOM]  Badan  Pengawasan  Obat  dan Makanan  Republik  Indonesia.  2015. Pengetahuan Bahan Berbahaya. Direktorat  Pengawasan  Produk  dan Bahan Berbahaya BPOM RI, Jakarta
Dwinanda  R.  2020. https://republika.co.id
/berita/
q6qaf3414/2.5-ton-ikan-asin- berformalin-disita-dari-pasuruan.
[27 Januari 2021).
Elshaer  NSM,  Mahmoud  MAE.  2017.  Toxic effects  of  formalin-treated  cadaver  on
medical  students,  staff  members,  and workers  in  the  Alexandria  Faculty  of Medicine. Alexandria  Journal  of  Medicine . 53: 337-343.
Fagnani  E,  Melios  CB,  Pezza  L,  Pezza  HR. 2003.  Chromotropic  acid  formaldehyde reaction in strongly acidic media. The role of  dissolved  oxygen  and  replacement  of concentrated  sulphuric  acid. Talanta. 60: 171-176.
Farid  M.  2014.  Pengaruh  suhu  dan  lama perendaman  dalam  pelarut  air  terhadap kadar  formalin  ikan  asin  belanak  ( Mugil cephalus ). [ Skripsi ]. Program Sarjana, UIN Maulana Malik Ibrahim, Malang
Ichya’uddin  M.  2014.  Analisis  Kadar Formalin  dan  Uji  Organoleptik  Ikan  Asin Dibeberapa Pasar Tradisional Di Kabupaten  Tuban.  [ Skripsi ].  Program Sarjana,  UIN  Maulana  Malik  Ibrahim, Malang
Lima  FL,  Murta  GL,  Bandeira  ACB,  Nardeli CR,  Lima  WG,  Bezerra  FS.  2015.  Short- term exposure to formaldehyde promotes oxidative damage and inflammation in the trachea  and  diaphragm  muscle  of  adult rats. Annals of Anatomy . 202: 45-51.
Niswah  C,  Pane  ER,  Resanti  M.  2016.  Uji kandungan  formalin  pada  ikan  asin  di pasar  KM  5  Palembang. Jurnal  Bioilmi .  2 (2): 121-128.
Peraturan  Menteri  Kesehatan  Republik Indonesia Nomor 33 tahun 2012 Tentang Bahan Tambahan Pangan, Jakarta
Riyanto. 2014. Validasi dan Verifikasi Metode Uji. Penerbit Deepublish, Yogyakarta.
Rohman  A.  2019. Validasi  dan  Penjaminan Mutu  Metode  Analisis  Kimia .  Gajah  Mada University Press, Yogyakarta
Sikkana R, Sarapun IV, Puspitasari DJ. 2018. Formalin  analysis  of  food  ingredients  in Palu. Al-Kimia . 6(1): 46-51
Suryadi  H,  Kurniadi  M,  Melanie  Y.  2010. Analsis  Formalin  Dalam  Sampel  Ikan  dan Udang  Segar  Dari  Pasar  Muara  Angke. Majalah  Ilmu  Kefarmasian .  VII  (3):  16 – 31.
Undang-Undang  Republik  Indonesia  Nomor 18 Tahun 2012 Tentang Pangan, Jakarta.
Undang-Undang  Republik  Indonesia  Nomor 33  Tahun  2014  Tentang  Jaminan  Produk Halal (JPH), Jakarta
Zang  X,  Shen  X,  Wang  Y,  Cai  Y,  Huang  D. 2017. The Research Progress of Detection Method  of  Formaldehyde  in  Food. Advances  in  Engineering  Research  (AER). 135: 513-517.