Vol 16 No 1 Tahun 2023
Potensi Betanin Pada Analisis Logam Pb Dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis

## Prina Puspa Kania, Perdina Nursidika
Teknologi Laboratorium Medis D4, Fakutas Ilmu dan Teknologi Kesehatan, UNJANI, Indonesia 1,2
1 prinapuspakania@gmail.com / 081573554XXX

## Abstrak
Latar  Belakang: Aplikasi  zat  warna  alam yang  terdapat di dalam sayur  atau  buah-buahan dalam analisis logam dapat digunakan dengan tujuan mengurangi perncemaran terhadap lingkungan. Betanin merupakan salah satu zat warna yang diketahui berpotensi sebagai zat pengompleks di dalam analisis logam dengan metode spektrofotometri UV-Vis. Potensi betanin sebagai zat pengompleks disebabkan karena  keberadaan  logam  dapat  mempengaruhi  kestabilan  warna  betanin  dan  menyebabkan  efek batokromik atau hipokromik. Tujuan: Penelitian ini bertujuan sebagai studi pendahuluan penggunaan betanin  sebagai  senyawa  pengompleks  dalam  analisis  logam  Pb  menggunakan  metode Spektrofotometri  Uv-Vis.. Metode: Penelitian  ini  dilakukan  dengan  mereaksikan  antara  larutan Betanin  dengan  larutan  Standar  Pb,  kemudian  kompleks  yang  terbentuk  diukur  serapannya menggunakan  Spektrofotometri  Uv-Vis  pada  Panjang  gelombang  maksimumnya. Hasil: Hasil penelitian  diperoleh bahwa  dengan  berbagai variasi konsentrasi  larutan  standar  Pb,  absorbansi dari kompleks  Betanin-Pb  sesuai  dengan  Hukum  Lambert-Beer  dan  diperoleh  persamaan  garis  Y  =  - 0,0066x  + 0,5388 dengan  R 2 = 0,9991. Kesimpulan: Berdasarkan  hasil penelitian  yang diperoleh, diketahui  bahwa  Betanin  dapat  digunakan  sebagai  alternatif  sebagai  senyawa  pengompleks  pada analisis logam Pb dengan metode Spektrofotometri UV-Vis.

## A Potential of Bethanin in Pb Metal Analysis Using UV-Vis Spectrophotometric Method

## Abstract
Background :  Betanin  is  one  of  the  natural  pigment  found  in  some  fruits  and  vegetables.  Natural pigment such as betanin are known to form complexes with metals. This reaction for the formation of Betanine-Metal complexes can be used as an alternative in metal analysis, especially Pb using the Uv- Vis  Spectrophotometry  method.  Natural  pigments  as  complexing  agents  is  expected  to  reduce  the impact of pollution on the environment. Purpose : This study aims as a preliminary study of the use of betanin as a complexing compound in the analysis of Pb metal using the Uv-Vis Spectrophotometry method. Method : This research was conducted by reacting the Betanin solution with the solution. Pb standard, then the formed complex was measured its absorption using UV-Vis Spectrophotometry at its  maximum  wavelength .  Results :  The  results  showed  that  with  various  concentrations  of  the  Pb standard solution, the absorbance of the Betanin-Pb complex was in accordance with Lambert-Beer's law and the line equation Y = -0.0066x + 0.5388 with R2 = 0.9991. Conclusion : Based on the results of the research, it is known that Betanin can be used as an alternative as a complexing compound in the analysis of Pb metal using the UV-Vis Spectrophotometry method.
🖂 Alamat korespondensi: Fakultas Ilmu dan Teknologi Kesehatan, UNJANI
ISSN 2597-7520
Email: prinapuspakania@gmail.com

## Info Artikel
Sejarah Artikel:
Diterima 18 November 2021
Disetujui 31 Feb 2022 Di Publikasi 01 Mei 2023
Keywords: Betanin, Analisis Pb, Spektrofotometri Uv-Vis
DOI https://doi.org/10.32763/juke. v16i1.453

## Pendahuluan
Metode  baku  dalam  analisis  logam  dapat dilakukan dengan metode Spektrofotometri Serapan  Atom  (SSA),  Spektrofotometri  Emisi Atom/Flouresence  spectrofotometry  (AES/AFS); inductively  coupled  plasma  mass  spectrometry (ICP-MS); dan inductively coupled plasma optical emission  spectrometry  (ICP-OES) (Helaluddin  et al.,  2016)  seringkali  tidak  dapat  dilakukan  di beberapa universitas atau sekolah tinggi kesehatan terkait dengan fasilitas instrumentasi yang tersedia. Alternatif metode lain yang dapat digunakan adalah dengan  metode  spektrofotometri  uv-vis  dengan penambahan ditizon sehingga membentuk kompleks berwarna (Kustiawan, 2016). Disisi lain saat  ini  sedang  digaungkan  kembali green chemistry sehingga  perlu  dicari  bahan  alam  yang ramah  lingkungan  yang  dapat  digunakan  dalam metode analisis tersebut.
Salah  satu  prinsip  dalam  penerapan Green Chemistry (Kimia hijau) adalah dengan mengurangi bahaya yang melekat melalui pemilihan  bahan  kimia  yang  relatif  lebih  aman sehingga mengurangi  resiko  terhadap  pencemaran lingkungan (Lewandowski, 2014).
Metode  analisis  logam  menggunakan spektrofotometri UV-Vis sebelumnya menggunakan ditizon sebagai senyawa
pengompleks dengan menggunakan pelarut kloroform,  sehingga  lebih  berbahaya  terhadap lingkungan bila dibandingkan dengan penggunaan senyawa betanin yang dapat larut di dalam air.
Penelitian analisis logam
dengan menggunakan zat warna alam sebagai pengompleks  telah  dilakukan  pada  analisis  logam yang terdapat di dalam ikan dengan menggunakan sianidin yang diperoleh dari buah Gmelina arborea sebagai senyawa bahan alam pembentuk kompleks (Ike  et  al.,  2019)  dan  analisis  berbagai  logam  Pb, Hg, Cd, As, dan Ni dengan sianidin (Okoye et al., 2013). Alternatif  zat  warna  alam  lain  yang berpotensi  untuk  digunakan  dalam  analisis  logam menggunakan  spektrofotometri  uv-vis  sebagai pembentuk  khelat  atau  kompleks  adalah  betanin yang  dikenal  juga  dengan  betasianin  (Carle  & Schweiggert, 2016).
Betanin  adalah  pewarna  makanan  merah tertua  dan  paling  melimpah  yang  telah  digunakan di pasar, dicatat sebagai E-162 di Uni Eropa dan di Amerika Serikat dikenal sebagai 73,40 dalam bab dua  puluh  satu  dari  Code  of  Federal  Regulation (CFR)  dari Food  and  Drug  Earth  Administration . Betanin paling sering digunakan untuk pewarna es krim  dan  minuman  bubuk  (Canyon  Hydro  et  al., 2013).
Stabilitas  warna  senyawa  betanin  sebagai pewarna  alami  pada  makanan  banyak  diteliti berkaitan dengan hal-hal yang dapat menyebabkan degradasi  warna  tersebut.  Salah  satu  penyebab adanya  degradasi  warna  adalah  keberadan  kation logam. Penelitian yang dilakukan oleh Wybraniec menyatakan bahwa warna betanin dapat didegradasi oleh keberadaan kation logam. Secara
khusus,  ion  logam  berat  paling  berdampak  pada stabilitas pewarna betanin dan biasanya menyebabkan perubahan warna  (Wybraniec et al., 2013).  Degradasi  warna  oleh  logam  inilah  yang dapat digunakan sebagai pertimbangan penggunaan senyawa betanin dalam analisis logam menggunakan spektrofotometer uv-visibel.
Salah  satu  logam  yang  sangat  beracun  dan berdampak  pada  kesehatan  adalah  logam  timbal (Pb).  Peningkatan  konsentrasi  Pb  di  dalam  darah dapat  mempengaruhi  perilaku,  kerja  kognitif, pertumbuhan  pasca  kelahiran,  menunda  pubertas dan mengurangi pendengaran pada bayi dan anak- anak.  Pada  orang  dewasa  dapat  menyebabkan masalah kardiovaskular, sistem syaraf pusat, ginjal, dan kesuburan (Kumar et al., 2020).
Penelitian yang dilakukan oleh Izabela dan Grzgors menyatakan bahwa beberapa kation logam dapat  mempengaruhi  stabilitas  warna  betanin (Sadowska-Bartosz  &  Bartosz,  2021).  Penelitian lain  yang  mengkaji  efek  kation  logam  Pb  pada stabilitas  betanin  telah  dilakukan  oleh  Wybraniec (Wybraniec  et  al.,  2013).  Berdasarkan  latar belakang  tersebut,  penelitian  ini  dilakukan  untuk mencari  metode  alternatif  untuk  analisis  logam, khususnya logam Pb dengan menggunakan betanin sebagai  zat  pembentuk  kompleks  yang  dapat digunakan  di  Laboratorium  Universitas  ataupun Sekolah  Tinggi  Ilmu  Kesehatan  sehingga  dapat menunjang pembelajaran khususnya bidang toksikologi klinik.

## Metode
Penelitian ini dilakukan menggunakan pendekatan kuantitatif dengan metode eksperimen. Data  diperoleh  dengan  cara  melakukan eksperimen  di  laboratorium  kimia.  Tahap  awal dilakukan  pembuatan  larutan  betanin  5  mM  dan larutan  stok  standar  Pb  dengan  konsentrasi  1000 ppm.
Tahap  selanjutnya  adalah  dengan  mengukur panjang  gelombang  maksimum  senyawa  Betanin dan  kompleks  Betanin-Pb  pada  spektrofotometri Uv-vis.
Pembentukkan kompleks Betanin-Pb dilakukan  dengan  mencampurkan  larutan  Betanin 5mM  dan  larutan  standar  Pb  dengan  beberapa konsentrasi Pb, yaitu 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4 ppm, dan  5  ppm. Masing-masing  kompleks  Betanin-Pb kemudian  diukur  serapannya  pada  panjang gelombang maksimumnya.

## Hasil dan Pembahasan
Hasil pengukuran panjang gelombang maksimum  senyawa  Betanin  dan  Kompleks betanin Pb dapat dilihat pada Grafik 1.1 dan Grafik 1.2 di bawah ini.
Gambar 1: Hasil Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum Senyawa Betanin
Gambar 2 : Hasil Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum Kompleks Betanin-Pb
Gambar 3 : Hasil Analisis Kompleks Betanin-Pb dengan
Variasi  konsentrasi Pb Analisis logam umumnya dilakukan menggunakan instrumen modern seperti
Spektrofotometer  Serapan  Atom  (SSA),  namun kenyataan  yang  terjadi  di  lapangan,  terutama  di lembaga pendidikan banyak yang belum memiliki instrumen tersebut.
Keterbatasan  atas  fasilitas  yang  ada hendaknya  tidak  membuat  proses  pembelajaran terhambat, karena itu perlu dicari metode alternatif yang dapat digunakan untuk menganalisis logam.
Metode  alternatif  yang  telah  banyak digunakan  dalam  analisis  logam  yaitu  dengan menggunakan  metode  spektrofotometri  uv-visibel dengan zat pengompleks ditizon (Samuel Echioda,
2021).  Ditizon  merupakan  salah  satu  zat pengompleks yang biasa digunakan dalam analisis logam  (Palupi  et  al.,  2020),  namun  diziton merupakan  senyawa  organik  sintesis  yang  dapat mencemari  lingkungan.  Adanya  isu  penerapan green chemistry yang dijelaskan ke dalam dua belas prinsip  oleh  Anastas  dan  Warner,  salah  satu prinsipnya  adalah  agar  seorang  ahli  kimia  dapat menemukan  alternatif  senyawa  yang  ramah terhadap lingkungan (Tiwari et al., 2021). Dengan demikian,  dirasa  perlu  untuk  mencari  alternatif bahan  alam  yang  bisa  dijadikan  sebagai  bahan pembentuk kompleks dengan logam.
Salah  satu  bahan  alam  yang banyak  terdapat di  dalam  tumbuhan  dan  dapat  dijadikan  sebagai alternatif  pengganti  ditizon  adalah  golongan betalain (Solovchenko et al., 2018).
Betalain  adalah  zat  warna  tumbuhan  yang termasuk  dalam  ordo  Caryophyllales.  Menurut struktur  kimianya,  betalain  dapat  dibagi  menjadi betasianin atau betanin yang berwarna merah violet dan  betasantin  berwarna  kuning,  dengan  warna yang berasal dari ikatan rangkap resonansi struktur betalain (Gengatharan et al., 2015).
Sumber  betalain  yang  dapat  dimakan  antara lain  yang  paling  dikenal  di  Caryophllales  adalah akar  bit  merah  (Beta  vulgaris  L),  daun  bayam (Amarathus  sp),  buah  dari  kaktus  (Opuntia  sp., Eulycnia sp., Hylocereus sp)(Sadowska-Bartosz & Bartosz, 2021).
Salah  satu  jenis  betalain  adalah  betanin (Khan, 2016). Betanin merupakan zat warna alami yang  biasa  digunakan  sebagai  pewarna  makanan, betanin dapat mengalami degradasi dengan adanya logam.
Reaksi  antara  logam  dan  betanin  dapat digunakan sebagai alternatif dalam analisis logam pada  suatu  sampel  sebagai  pengganti  senyawa pengkompleks  logam  yang  berasal  dari  bahan sintetik.
Salah  satu  logam  yang  dapat  berpengaruh terhadap  kesehatan  adalah  logam  timbal  (Pb). Karenanya pada penelitian ini logam Pb  yang akan diuji  interaksinya  dengan  senyawa  bahan  alam betanin.
Analisis logam Pb dengan metode spektrofotometri uv-vis yang telah dilakukan pada penelitian  sebelumnya  menggunakan  ditizon sebagai senyawa pembentuk kompleks (Wardani et al., 2020).
Analisis logam menggunakan pewarna alam telah  dilakukan  oleh  Andrew  dan  Ike  pada  tahun 2019  dalam  menentukan  kadar  logam  Cu,  Zn,  Ca dan  Mg  pada  sampel  ikan  menggunakan  sianidin sebagai  senyawa  pengompleks.  Pada  penelitian tersebut  dilakukan  perbandingan  metode  analisis logam dengan spektrofotometri Uv-Vis menggunakan cianidin sebagai senyawa pengompleks dengan metode AAS. Hasil penelitian diketahui  sianidin  dapat  digunakan  dalam  analisis logam Cu dan Zn sedangkan dalam analisis logam Ca  dan  Mg  memberikan  hasil  i  yang  kurang  baik
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 0 200 400 600 800 Panjang Gelombang (nm) A b so rb an si 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 200 400 600 800 A b so rb an si Panjang Gelombang (nm) y = -0.0066x + 0.5388 R² = 0.9991 0.5 0.505 0.51 0.515 0.52 0.525 0.53 0.535 0 2 4 6 Konsentrasi Pb (ppm ) A b so rb an si
(Ike et al., 2019).
Penelitian  ini  dilakukan  sebagai  studi pendahuluan terhadap senyawa betanin sebagai zat pengompleks  logam.  Apakah  senyawa  betanin dapat digunakan sebagai alternatif zat pengompleks logam yang lebih ramah lingkungan?
Menurut  penelitian  Wybraniec  pada  tahun
2013  untuk  melihat  adanya  efek  kation  logam dalam  stabilitas  betanin  pada  larutan  air  dan organik  menunjukkan  adanya  degradasi  warna akibat pembentukkan kompleks antara betanin dan logam (Wybraniec et al., 2013).
Izabela  menyatakan  bahwa  betanin  dapat membentuk senyawa kompleks dengan logam yang dapat menyebabkan efek batokromik atau hipokromik (Sadowska-Bartosz & Bartosz, 2021).
Tahap  awal  dalam  penelitian  ini  yaitu penetapan  panjang  gelombang  maksimum betanin dan  kompleks  Betanin-Pb  sebagaimana  yang ditunjukkan  pada  Gambar  1  dan  Gambar  2. Berdasarkan  hasil  penelitian  diperoleh  panjang gelombang  maksimum  sesuai  dengan  teori,  yang mana dinyatakan panjang gelombang maksimalnya pada 530 (Nouairi et al., 2021).
Tahap selanjutnya dilakukan reaksi pembentukkan  kompleks  Betanin-Pb  dengan menggunakan  variasi  konsentrasi  Pb  sebesar  1,  2, 3, 4, dan 5 ppm. Kompleks Betanin-Pb selanjutnya diukur  dengan  spektrofotometer  uv-vis  pada panjang gelombang maksimumnya.
Berdasarkan penelitian, nilai absorbansi yang diperoleh menurun dengan peningkatan konsentrasi timbal (Pb). Hal ini sejalan dengan teori yang menyatakan pengaruh adanya logam terhadap stabilitas betanin yang menyatakan bahwa adanya logam dapat mendegradasi warna betanin, sehingga dengan meningkatnya konsentrasi logam Pb, akan menurunkan  absorbansi  kompleks  betanin-Pb secara linear (Wybraniec et al., 2013).
Penelitian  lain  berkaitan  analisis  logam dengan  menggunakan  zat  warna  alam  juga  telah dilakukan  pada  analisis  tembaga  (Cu)  dengan menggunakan zat warna buah bit (Cao et al., 2019). Hasil  analisis  kompleks  Betanin-Pb  dapat dilihat  pada  Gambar  3  yang  menunjukkan hubungan  linear    antara  konsentrasi  Pb  yang ditambahkan  pada  senyawa  betanin  dengan absorbansi  yang  dihasilkan  dengan  pengukuran menggunakan  spektrofotometer  uv-vis.  Hal  ini sesuai dengan hukum Lambert-Beer yang menyatakan  adanya  hubungan  linear  antara konsentrasi  zat  dengan  absorbansi  (Mayerhöfer  et al.,  2019).  Hasil  linear  akan  diperoleh  jika  hasil serapan berada dalam rentang 0,2 – 0,8.
Persamaan garis linear yang diperoleh adalah Y  =  -0.0066x  +  0.5388  dengan  R 2 =  0.9991. Koefisien  korelasi  (R)  menunjukkan  adanya hubungan antara dua variabel, dalam hal ini adalah antara absorbansi yang dinyatakan dengan simbol y dan  konsentrasi  yang  dilambangkan  x  pada persamaan  garis.  Semakin  turun  nilai  absorbansi semakin tinggi kadar logam Pb.
Penggunaan  betanin  sebagai  senyawa pembentuk  kompleks  logam  dapat  dilakukan, namun  perlu  dipertimbangkan  terkait  stabilitas bahan  alam  yang  dipengaruhi  oleh  kondisi lingkungan  seperti  suhu  .dan  pH  (Antigo  et  al., 2018).

## Kesimpulan
Berdasarkan
hasil penelitian, dapat disimpulkan  bahwa  betanin  dapat  digunakan sebagai  alternatif    senyawa  pengkompleks  logam dalam analisis logam dengan metode spektrofotometri uv-vis.

## Daftar Pustaka
Antigo, J. L. D., Bergamasco, R. de C., & Madrona, G. S. (2018). Effect of ph on the stability of red beet extract (Beta vulgaris l.) microcapsules  produced  by  spray  drying  or freeze  drying.  In Food  Science  and Technology (Vol.  38,  Issue  1,  pp.  72–77). https://doi.org/10.1590/1678-457x.34316
Canyon  Hydro,  Ferreres,  X.  R.,  Font,  A.  R.,
Ibrahim, A., Maximilien, N., Lumbroso, D., Hurford,  A.,  Winpenny,  J.,  Wade,  S., Sataloff,  R.  T.,  Johns,  M.  M.,  Kost,  K.  M., State-of-the-art, T., Motivation, T., Norsuzila Ya’acob1,  Mardina  Abdullah1,  2  and Mahamod Ismail1, 2, Medina, M., Talarico, T. L., Casas, I. A., Chung, T. C., … Masuelli, M. (2013). We are IntechOpen , the world ’ s leading  publisher  of  Open  Access  books Built  by  scientists  ,  for  scientists  TOP  1  %.
Intech , 32 (July), 137–144.
Cao, Y., Liu, Y., Li, F., Guo, S., Shui, Y., Xue, H., &  Wang,  L.  (2019).  Portable  colorimetric detection of copper ion in drinking water via red beet pigment and smartphone. Microchemical Journal , 150 .
https://doi.org/10.1016/j.microc.2019.10417
6
Carle, R., & Schweiggert, R. M. (2016). Handbook on Natural Pigments in Food and Beverages. In Handbook  on  Natural  Pigments  in  Food and
Beverages .
https://doi.org/10.1016/c2014-0-03842-7
Gengatharan,  A.,  Dykes,  G.  A.,  &  Choo,  W.  S. (2015).  Betalains:  Natural  plant  pigments with potential application in functional foods.
LWT , 64 (2), 645–649. https://doi.org/10.1016/J.LWT.2015.06.052
Helaluddin,  A.,  Khalid,  R.  S.,  Alaama,  M.,  & Abbas,  S.  A.  (2016).  Main  Analytical Techniques  Used  for  Elemental  Analysis  in Various  Matrices. Tropical  Journal  of Pharmaceutical  Research , 15 (2),  427–434. https://doi.org/10.4314/tjpr.v15i2.29
Ike,  J.  N.,  Tyopine,  A.  A.,  &  Okoye,  C.  O.  B.
(2019). Application of Cyanidin in Quantitative  Estimation  of  Metals  in  Fish Samples. American  Journal  of  Analytical
Chemistry , 10 (12), 621–628.
https://doi.org/10.4236/ajac.2019.1012043 Khan,  M.  I.  (2016).  Plant  Betalains:  Safety, Antioxidant  Activity,  Clinical  Efficacy,  and Bioavailability. Comprehensive  Reviews  in Food  Science  and  Food  Safety , 15 (2),  316– 330. https://doi.org/10.1111/1541-
4337.12185
Kumar, A., Cabral-Pinto, M. M. S., Chaturvedi, A.
K.,  Shabnam,  A.  A.,  Subrahmanyam,  G., Mondal,  R.,  Gupta,  K.,  Malyan,  S.  K., Kumar,  S.  S.,  Khan,  S.  A.,  &  Yadav,  K.  K. (2020).  Lead  Toxicity:  Health  Hazards, Influence  on  Food  Chain,  and  Sustainable Remediation  Approaches. Int.  J.  Environ.
Res. Public Health , 17 , 2179. https://doi.org/10.3390/ijerph17072179 Kustiawan,  &  P.  (2016).  Dithizon:  Agen Pengkompleks Untuk Analisis Logam
Menggunakan  Spektrofotometer  UV-VIS
Ugi. Farmaka , 15 (3), 200–212.
Lewandowski,  T.  A.  (2014).  Green  Chemistry. Encyclopedia  of  Toxicology:  Third  Edition , 798–799. https://doi.org/10.1016/B978-0- 12-386454-3.01020-4
Mayerhöfer, T. G., Pipa, A. V., & Popp, J. (2019).
Beer’s  Law-Why  Integrated  Absorbance Depends  Linearly  on  Concentration.  In ChemPhysChem (Vol.  20,  Issue  21,  pp. 2748–2753).
https://doi.org/10.1002/cphc.201900787
Nouairi, M. E. A., Freha, M., & Bellil, A. (2021).
Study by absorption and emission spectrophotometry  of  the  efficiency  of  the binary  mixture  (Ethanol-Water)  on  the extraction  of  betanin  from  red  beetroot. Spectrochimica Acta - Part A: Molecular and Biomolecular  Spectroscopy , 260 ,  1–12. https://doi.org/10.1016/j.saa.2021.119939 Okoye,  C.  O.  B.,  A,  M.  C.,  N,  R.  E.,  &  J,  N.  I.
(2013). Simultaneous ultraviolet-visible
(UVVIS)  spectrophotometric  quantitative determination of Pb, Hg, Cd, As and Ni ions in  aqueous  solutions  using  cyanidin  as  a chromogenic  reagent. International  Journal of Physical Sciences , 8 (3), 98–102. https://doi.org/10.5897/ijps12.670 Palupi, E. S., Sulistyarti, H., Abdjan, M. I., & Putra,
C.  A.  R.  (2020).  STUDI  AKTIVITAS
DITIZON SEBAGAI PENGOMPLEKS ION
Pb2+ MENGGUNAKAN METODE SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis DAN SEMI EMPIRIS AM1. Jurnal Muara Sains,
Teknologi, Kedokteran Dan Ilmu Kesehatan , 4 (2),
423. https://doi.org/10.24912/jmstkik.v4i2.8647 Sadowska-Bartosz,  I.,  &  Bartosz,  G.  (2021). Biological  Properties  and  Applications  of Betalains. Molecules  2021,  Vol.  26,  Page 2520 , 26 (9), 2520.
https://doi.org/10.3390/MOLECULES26092 520
Samuel  Echioda,  et  al.  (2021). View  of  UV-Vis Spectrophotometric Determination
of Selected  Heavy  Metals  (Pb, Cr,  Cd  and  As) in  Environmental,  Water  and  Biological Samples  with  Synthesized  Glutaraldehyde Phenyl  Hydrazone  as  the  Chromogenic Reagent .  European  Journal  of  Advanced
Chemistry Research. https://doi.org/10.24018/ejchem.2021.2.3.59
S.
Solovchenko, A., Yahia, E. M., & Chen, C. (2018).
Pigments.  In Postharvest  Physiology  and Biochemistry  of  Fruits  and  Vegetables . Elsevier Inc. https://doi.org/10.1016/B978-0- 12-813278-4.00011-7
Tiwari, S., Brahmpurkar, A., & Author, C. (2021).
Green  Chemistry:  A  New  Trend  in  the Chemical  Synthesis  to  Prevent  Our  Earth. Acta  Scientific  Pharmaceutical  Sciences , 5 , 2581–5423.
Wardani,  G.  A.,  Setiawan,  F.,  &  Agustin,  N.
(2020). The  Use  of  Dithizone  for  Lead
Analysis in Blush . 26 , 244–247. https://doi.org/10.2991/ahsr.k.200523.059
Wybraniec,  S.,  Starzak,  K.,  Skopińska,  A.,
Szaleniec,  M.,  Słupski,  J.,  Mitka,  K., Kowalski,  P.,  &  Michałowski,  T.  (2013). Effects  of  metal  cations  on  betanin  stability in  aqueous-organic  solutions. Food  Science and Biotechnology , 22 (2), 353–363.
https://doi.org/10.1007/s10068-013-0088-7