## BIOSENSOR DENGAN AMOBILISASI ENZIM TERMOSTABIL ISOLAT BANYUWEDANG UNTUK DETEKSI TRIGLISERIDA DALAM SERUM DARAH
I Nyoman Tika 1 , I.Gusti Ayu Triagustiana 2 , I.D.Raka Rasana 3
1 Jurusan Pendidikan Kimia, FMIPA, Universitas Pendidikan Ganesha, Singaraja, Indonesia
2,3 Jurusan PGSD, FIP, Universitas Pendidikan Ganesha, Singaraja, Indonesia
Email :nyoman.tika.@pasca.undiksha.ac.id

## Abstrak
Tujuan penelitian tahun pertama adalah (1)  Untuk mengetahui hasil pembentukan silikon  berpori  yang  cocok  untuk  amobilisasi  lipase  termostabil,  (2)  Untuk mengetahui  sensitivitas  metode  fabrikasi  terhadap  pembentukan  EISCAPs  mini sensor,  (3)  Untuk  mengetahui  daya  stabilitas  enzim  lipase  amobil  terhadap penggunaan  ulang  dalam  sistem  EISCAPs  pada  larutan  gliserida  standar.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  efisiensi  amobilisasi  multi  enzim  pada  silikon berpori sebesar 89%, sedangkan aktivitasnya sebesar 73%. pH dan suhu optimum enzim  amobil    berturut-turut    7,0  dan  40°C  selain  itu  didapatkan  hasil  (1)  rentang kerja  biosensor  didapatkan  pada  pH  6,5  hingga  7,5  dan  rentang  suhu  adalah  30- 40 o C . (2) Modifikasi elektroda enzimdengan matrik silikon berpori dapat  digunakan dalam  sistem  biosensor  pada  alat  DO  meter  untuk  mendeteksi  gliserida.  (3) Konsentrasi  enzim  lipase  termostabil  Banyuwedang  jenuh  pada  20  Unit/mL, sedangkan Gliserol Kinase jenuh pada  konsentrasi 2 unit/mL dan Gliserol 3 posfat oksidase  pada  konsentrasi  enzim  4  unit/mL.  (3)  Konsentrasi  enzim  optimum  dan kejenuhan  permukaan  silikon  berpori  yang  stabil    dapat  digunakan  sebagai parameter  keberhasilan  respon  biosensor.  (4)  Konsentrasi  DG  terukur  pada rentang  antara  0-25  µM  dalam  buffer  posfat  menunjukkan    garis  lurus.    Oleh karena  itu,  sistem  biosensor  disposable    dengan  amobilisasi    gabungan  enzim dengan silikon berpori dapat digunakan untuk mengukur DG dalam serum darah.

## Abstract
The aims of research are the first year (1) To know the results of the formation of porous  silicon  that  is  suitable  for  thermostable  lipase  immobilization,  (2)  To determine  the  sensitivity  of  the  method  of  fabrication  of  the  sensor  mini  EISCAPs formation, (3) is to determine the stability of lipase immobilized on the re-use in the system  EISCAPs  on  standard  glycerides  solution.  The  results  showed  that  the efficiency  of  multi-enzyme  immobilization  on  porous  silicon  by  89%,  while  its activity  by  73%.  The  optimum  pH  and  temperature  of  immobilized  enzyme respectively 7.0 and 40 ° C than that obtained results (1) the working range of the biosensor  obtained  at  pH  6.5  to  7.5  and  the  temperature  range  is  30-40oC.  (2) Modification  of  the  enzyme  electrode  with  a  porous  silicon  matrix  can  be  used  in biosensor system on the DO meter tool to detect glycerides. (3) The concentration of  thermostable  lipase  Bishopscourt  saturated  at  20  units  /  mL,  whereas  Glycerol
Kinase  saturated  at  a  concentration  of  2  units  /  mL  and  glycerol  3-phosphate oxidase  in  enzyme  concentration  of  4  units  /  mL.  (3)  The  optimum  enzyme concentration  and  saturation  stable  porous  silicon  surface  can  be  used  as parameters  of  the  success  of  the  biosensor  response.  (4)  DG  concentration measured in the range between 0-25 lm in phosphate buffer showed a straight line. Therefore, disposable biosensor system with immobilization of enzymes combined with porous silicon can be used to measure the DG in the blood serum.
Keywords: biosensors, diglycerides, the enzyme lipase, porous silicon

## PENDAHULUAN
Penentuan gliserida dalam serum darah secara cepat dan murah  terus diupaya. Hal  ini  didasarkan  pada  karakteristik digliserida  yang  berbeda  dengan  jenis lipid yang ain. Digliserida (DG) merupakan lipid sederhana, yang mengandung  molekul  gliserol    dan  dua asam  lemak  denganikatan  ester.Dari aspek  ukuran  molekul  DG  merupakan lipida  yang  paling  kecil,  sehingga berfungsi sebagai
senyawa antara (intermediet) dalam  metabolisme. DG  juga  sebagai  komponen  utama membrane  yang  berfungsi  sebagai pembawa  pesan  kedua (secondary messenger) (Wang et  al .,  1999).Pesan sekunder  ini  mengantarkan  stimulus ekstraseluler  dengan  aktivasi  reseptor dan  membutuhkan  respon  intraseluler seperti  pada  inti  sel,  sistoskleton,  otot dan  peralatan  kontraktil.  Studi  awal aliran sinyal ini menghasilkan penampilan  linear  seri  tahap  sederhana dimana  suatu  stimulus  luar  bersifat spesifik  dan  melibatkan  aktivasi  enzim posfolipasehasil  hidrolisis    membrane posfolipid    dan    menghasilkan  pesan sekunder.
Pesan sekunder ini
merupakan fungsi dari DG yang memacu    aktivitas    enzim  proteinkinase C,  suatu  enzim  yang  mengendalikan aktivitas  defferensiasi  sel(Ebeling  J.G, 2005),  profilerasi  (Hajri  T.,  Abumrad
N.A, 2002).  Menghambat pembentukan sel  tumor  (Belgacem et  al .,  2007),  dan respon  yang  lain    dalam  berbagai  jenis sel mamalia.
Hasil observasi beberapa peneliti menemukan  bahwa    sinyal  sel  dapat memberikan  efek  kesehatan  dengan melibatkan DG. Meningkatnya
konsentrasi  DG    dalam  darah  dapat mereduksi    trigliserida  (TG).  Akibat tekanan  terhadapkonsentrasi  TG  dalam aliran  darah  dapat  menurunkan  resiko penyakit    diabetes  tipe  2.Selain  itu, penambahan  DG  dalam  darah  dapat mengakibatkan modifikasi glikosilat hemoglobin  (Glikosilat  Hb).  Perubahan Glikosilat  Hb    membantu  mencegah akumulasi  lemak  dalam  tubuh  (Murase et  al .,  2001;  Taguchi et  al .,  2000), kondisi  ini  menunjukkan  konsumsi  DG secara  rutin  dapat    menjaga  kesehatan (Soni  M.G et  al .,  2001).DG  juga  dapat membantu mengurangi diabetic postprandial  lipid (Takase et  al .,  2005). DG  telah  digunakan  sebagai  diet mengganti  TG    untuk  mengendalikan diabetes  (Tada et  al .,  2005),untuk mencegah arterioklerosis,  dan penyakit lainnya (Takase et al ., 2005; Tada et al. , 2005).  Pemberian  DG  dalam  diet makanan    dapatmengurangi  keracunan dan  karsiogenitas.    Dalam  hewan percobaan  (Chengelis  C.P.,  2006)    dan pada manusia (Yasunaga et al., 2004).
Metode  analitik  telah  dilakukan dengan  menggunakan  HPLC  (Moh  M.H et  al., 2001)  dan  menggunakan  HPLC yang dikopel dengan perak kromatografi (Ag-HPLC)  (Fliszar  K.A., et  al ,  2006). Pemisahan  mono  dan  digliserida  juga telah dilakukan dengan HPLC-gel kromatografi  (Tietz  R.,  Hartel  R,  2000). Penggunaan  teknologi  tick  film  dengan sensor  (Photinon&  Wang  S.H.2006), Cara  terakhir  menggunakan  pasta  yang mengandung katalis logam yang mengandung  pasta  karbon,  alat  ini
sudah  diproduksi  secara  pabrikasi, namun  kondisi  tinta  belum  optimal  bila dikaitkan  layar  printing.  Modifikasi  perlu dilakukan  untuk  menggunakan  enzim- enzim  termostabil,  salah  satu  yang dimodifikasi adalah lipase,  yang berasal dari Bacillus BYW2,  merupakan  isolate bakteri  termofilik  dari  sumber  air  panas Banyuwedang  Grokgak  Buleleng  Bali (Tika  &  Ngadiran,  2006  :  Tika et.al., 2007).    Deteksi  gliserida  menggunakan reaksi  gabungan  enzim,  dengan  reaksi seperti gambar 1
Digliserida  +  H 2 O      Lipase 3 Asam Lemak  + Gliserol Gliserol  +  ATP         ) 2 (Mg GK
Gliserol-3-Fosfat  +  ADP Gliserol-3-Fosfat  + O 2     GPO
DHAP  + H 2 O 2
Gambar 1. Reaksi-Reaksi  yang terjadi pada Elektrode Eksperimen
Lipase (E.C.3.1.1.34) yang digunakan  untuk  menghidrolisis  DG menjadi  asam  lemak    dan  gliserol.
Gliserol yang dihasilkan dengan
bantuan  ATP  kemudian  dipecah  oleh enzim    gliserol  kinase  (E.C.2.7.1  30,)
menjadi gliserol-3-fosfat dan ADP, selanjutnya  gliserol  3-fosfat  dan  O 2 dengan  kerja  enzim  gliserol-3-fosfat oksidase (E.C. 11.3.21) diinkubasi pada suhu  45°C  selama  1  jam.    diubah menjadi dehidroksiaseton fosfat (DHAP) dan H 2 O 2 berkurangnya kelarutan oksigen  dalam  sistem  reaksi  diukur sebagai parameter penting dalam biosensor.  Titik  kritis  menggunakan rangkaian  enzim  sebagai  elektroda enzim  terletak  pada    matrik  yang digunakan  untuk  pengamobil  enzim (Tika, & Selamat, 2008). Sistem biosensor multi enzim memenuhi
hambatan  relatif  tinggi  pada  matrik,,
sehingga  kurang  efisien.  Langkah  yang dikembangkan  adalah  merancang  alat deteksi biosensor yakni dengan menggunakan  sistem  amobilisasi  enzim dengan silikon berpori.
Silikon  efektif    untukbiosensor
(Guan,  2011).  Dalam  system  biosensor silikonsebagai    pengamobilenzim  lipase larutanberperan sebagai elektroda- enzim.  Selama  ini  biosensor  dengan matrik silikon berpori menggunakanenzim lipase dari Pseudomonas cepacia (Vemulachedu et al .,  2008),  kendalanya  tidak  tahan panas.  Penggunaan    enzim  termostabil untuk rangkaian biosensor telah dilakukan    dengan  substrat  trigliserida /gliserida  menunjukkan  rentang  kerja biosensor  didapatkan  pada  pH  6,5 hingga 7,5 dan rentang suhu adalah 30- 40 o C . (Tika et  al., 2014).  Melihat pentingnya kandungan digliserida dalam
diet dan  serum darah, maka penentuan digliserida  seara  cepat  dan  murah  terus diupayakan.
Selain  itu  silikon  berpori  dapat juga  lebih  spesifik  untuk  menentukan analisis  digliserida  dalam  serum  darah dengan rentang kerja biosensor didapatkan pada pH 6,5 hingga 7,5 dan rentang  suhu  adalah  30-40 o C.  Oleh karena  itu  kajian  terhadap  sinergisme untuk  analisis  kolesterol  dalam  serum darah  dengan  menggabungkan  enzim kolesterol  oksidase    dalam  matrik nanopartikel  silikon  berpori  perlu  dikaji lebih  jauh.  Kelemahan  ini  hendak diatasi  dengan    lipase    dari  Isolat Banyuwedang (Bacillus BYW2)  yang mampu  menghasilkan  lipase  berdaya tahan tinggi pada suhu tinggi (termostabil).  Lipase  termostabil  BYW2 ini  dapat  bertahan  pada  suasana  asam, berbeda  dengan  lipase  dari  kelas Bacillus yang  pernah  ditemukan  (Tika dkk,  2011)  Atas  dasar  itu  penelitian untuk efektivitas amobil enzim kolesterol oksidase  pada  matrik  nano  silikon berpori,  serta  mengetahui  karakteristik kolesterol  oksidase  amobil  dari  aspek suhu,  pH,  dan  penggunaan  berulang (reusable) perlu dikaji.
Makalah  inibertujuan    untuk mengetahui kondisi optimum reproduksibilitas sistem biosensor disposable  seperti    pH    terhadap konsumsi  oksigen  pada  pengukuran digliserida    dan  respon  optimum  serta hubungan  linear  antara  konsentrasi digliserida  dengan  konsentrasi  oksigen (mg/mL)yang  terbentuk  oleh  rangkaian lipase termostabil yang dikaitkan dengan  silikon    berpori  dalam  sistem biosensor  yang  dikaitkan  dengan  alat DO meter.

## METODE Alat dan Bahan
Semua  bahan  yang  digunakan memiliki  tingkat  proanalisis  dan  tingkat biologik,  kecuali  bila  disebutkan  khusus dalam  teks.  NH 4 Cl,  Tris  (Hidroksimetil)- amino  metan  dan  HCl  (Asam  klorida)
DTT, EDTA, EGTA, PSMF ( phenylmethylsulfonyl fluoride),
pepstatin  dan  leupeptin  (Sigma,  USA). Natrium  pirofosfat  (Sigma,  USA),  TCA (Sigma,  USA),  etanol  70%.Uji  protein menggunakan kit reagen Bio-rad). Isolat lipase  dari Bacillus BYW2  (Isolat  Air panas  Banyuwedang)  yang  memiliki suhu  optimum  70˚C.EGTA  (Sigma)  dan digliserida,,  enzim    gliserol  kinase  (GK) dan  enzim  gliserol-3-fosfat  oksidase (GPO) dan silikon berpori.

## Aktifasi silikon berpori Penentuan Silikon Berpori (PSi)
Struktur  pori  dibentuk  dengan menggunakan  “  electrochemical  etching process” untuk silikon, yaitu menggunakan  larutan  elektrolit  HF    dan IPA  dengan  perbandingan  1:1  Untuk membuat  PSi    yang  didasari  alat    mini- EISCAP  ((Vemulachedu et  al .,  2008). PSi  dibentuk  dengan  berbagai  tahap sesuai dengan protokol fabrikasi setelah dihilangkan  lapisan    SiO 2 ..  Selanjutnya dilakukan  dengan  “ Electrochemical Etching” yang  dilakukan  selama  10 menit.  Setelah  terbentuk  PSi    sampel dikeringkan dengan etanol dan pentana. warna  orange  akan  muncul  bila  disinari dengan sinar UV.

## Amobilisasi Lipase
Silikon berpori  dicuci dengan air dan  diaktivasi  dengan  glutaraldehida 2,5%.  Setelah  membran  diaktivasi, kelebihan  glutaraldehida  didekantasi, lalu  membran  dicuci  dengan  buffer
Natrium  fosfat  0,1  M  (pH  7,0),  sampai air cucian pH 7,0. Sebanyak 1 mL enzim lipase termostabil Banyuwedang ditambahkan untuk
mengaktivasi membran dan disimpan pada suhu 4 ⁰ C. Enzim yang tidak terikat didekantasi dan diuji  untuk  menentukan  kadar  protein sesuai  prosedur  yang  dikembangkan oleh  Voysey  dan  Wilton  (1994)  dan Lowry  (1951).  Membran  dicuci  3-4  kali dengan  menambahkan  bufer  (Na-fosfat 0,1  M;  pH  7)  sampai  tidak  ada  aktivitas yang terdeteksi pada air cucian.

## Karakterisasi enzim amobil
Untuk karakterisasi amobil menggunakan metode yang dikembangkan  oleh  (Bhambi et  al., 2006),.. yaitu  dibuat substrat digliserida dalam berbagai pH kemudian ditentukan aktivitasnya,  yaitu  6,0;  6,25;  6,5;  6,75; 7,0;  7,25;  7,50;  7,75;  8,0;  8,25;  8,5; 8,75; 9,0. Setelah diketahui pH optimum kerja  enzim  amobil  dilakukan  pengujian pada    masing-masing  enzim  yang diamobil.

## Penyiapan Elektroda
Setelah enzim diamobil, dilanjutkan dengan karakterisasi elektroda  enzim.Silikon-enzim  dicampur dengan gel kemudian ditempelkan pada salah  satu  elektroda  dari  DO  meter. Elektroda  enzim  disimpan  dalam  buffer reaksi  0,1  M    Natrium  Fosfat    (pH  7,0) pada  suhu  4˚C  bila  tidak  digunakan. Penggunaan  kembali  elektroda,  melalui proses pencucian terlebih dahulu elektroda dengan air destilasi pada suhu kamar  dan  dilanjutkan  dengan    bufer reaksi,  selanjutnya    dikeringkan  dengan tisu. Konstruksi dan Pengujian Biosensor Elektroda enzim yang telah dihubungkan  denga  alat  VoltameteDO meter siap digunakan. Dipepet sebanyak  1,8  mL  Na-Fosfat  (0,1  M  pH 7)  kedalam  gelas  kimia.  Ditambahkan 0,1 mL campuran digliserida ditambahkan  ke  dalam  buffer  reaksi. Kelarutan hidrolisis gliserida dapat dideteksi dengan mencelupkan elektroda enzim.

## Penentun DG  dalam media
DG, ATP, lipoprotein lipase (22U mL −1 ), GK (1U mL −1 )  ditambahkan  600 μL    tabung    centrifuge  dengan    300  μL buffer    phosphate  buffer,    1:1    larutan serum-buffe  dikocok  sampai  homogeny selanjutnya  diinkubasi  pada  45  °C selama  1  jam.  Larutan  buffer  serum dengan  perbandingan    1:1  sebagai medium control, bovine serum dilarutkan    dengan  volume  yang  sama dengan    PBS    untuk  mendeteksi  DG. Periode  inkubasi  dibutuhkan  untuk reaksi  enzim  yang    lengkap  dengan larutan  DG.  Setalah  inkuasi,  diteteskan larutan testing solution (6 μL) ditempatkan pada permukaan biosensor menggunakan pipet,
kemudian  tiga  elektroda    dan  dilakukan pengukuran dengan alat DO meter.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Enzim  (lipase,  GK  dan  GPO) diko-amobilisasi  dengan  silikon  berpori pada  berbagai  konsentrasi,  aktivitas elektroda  menunjukkan  bahwa  pada konsentrasi  2µg/mL    memiliki  aktivitas 1,2  g/mL,  konsentrasi  2  µg/mL  memiliki aktivitas  1,4  µg/mL,  dan  konsentrasi optimum ditunjukkan pada konsentrasi 4 µg/mL  yaitu  sebesar  5,1  g/mL,  dan peningkatan  konsentrasi  menjadi  5
µg/mL  kadar  oksigen  yang  terukur sebesar  4,3  g/mL.  Artinya  terjadi penurunan  kemampuan  enzim  terikat pada silikon berpori.Kondisi ini menunjukkan  bahwa  kenaikan  jumlah enzim  yang  terikat  pada  matrik  silikon berpori  tidak  seklaigus  meningkatkan konsentrasi  oksigen  terukur.  Matrik silikon  berpori  yang  mengikat  enzim lipase  termostabil    itu  telah  mengalami kondisi  jenuh    dan  berpengaruh  pada kerja  enzim.  Penelitian  ini  paralel dengan  penelitian  Song et  al .  (2010), yaitu  kejenuhan  terjadi  pada  matrik pengikat  enzim  sehingga  menyebabkan konformasi yang padat. Kondisi ini akan mengganggu aktivitas  gabungan enzim sehingga  aktivitas  berantai  gabungang enzim  menjadi    menurun  (Cui  L. et  al ., 2010).
Selanjutnya    pada  konsentrasi optimum kinerja biosensor, dilakukan uji reprodusibilitas dari  prototype biosensor dengan silikon berpori. Dilakukan pengukuran  terhaap  berbagai  jenis elektroda.Pada  masing-masing  tabung diisi  dengan  5  uM  Digliserida.  Hasil pengukuran  diperoleh    kekuatan  arus sebesar 0,0421µA. Kondisi ini menandakan bahwa biosesnsor prototype dengan silikon berpori
bersifat  stabil  (gambar  2),  penelitian  ini sejalan dengan penelitian Shu Yi Hsu et al .,  (  2010),  bedanya  adalah  prototype ini  menggunakan  lipase  termostabil Isolat lokal (Banyuwedang), prototype ini relative  tahan  terhadap  perubahan panas yang diakibatkan oleh lingkungan.
Gambar 2. Reprodusibilitas biosensor disposable dengan silikon berpori
Pengaruh pH terhadap biosensor dengan  matrik  silikon  berpori    optimum terjadi  pada  pH  7,75,  data  secara lengkap  dapat  dilihat  pada  gambar  3. Kondisi  ini  menunjukkan  bahwa  lipase termostabil  yang  diamobilisasi  dengan silikon  berpori  menunjukkan  aktivitas yang  relative  sama  dengan  lipase  yang
diamobil  dengan  PVC,  Artinya,  silikon berpori  dapat  meningkatkan  kinerja enzim  lipase    bebas  dari  pH  7,0, berubah menjadi  pH 7,75. Lebih jauh ini menunjukkan  bahwa  beberapa  aktif  site yang  optimum  dibawah  pH    rata-rata enzim terlindungi oleh permukaan matrik. A ru s (u A ) Elektroda yang berbeda
Gambar 3. Pengaruh pH terhadapat respon biosensor
Pengaruh efek amobilisasi enzim lipase  termstabil  isolate  Banyuwedang ditunjukkan  pada  konsentrasi  enzim  20 unit/mL.Konsentrasi enzim lipase banyuwedang  lebih  tinggi  dari  20 unit/mL  itu  relative  telah  mengalami kejenuhan.Artinya  dengan  penambahan enzim  berapapun  tidak  mempengaruhi kinerja biosensor.
Gambar 4. Efek amobilisasi lipase pada elektroda kerja dalam  bovin serum
Efek amobilisasi silikon berpori terhadap aktivitas gliserol kinase ditemukan bahwa aktivitas optimal pada konsentrasi 2 Unit/mL terhadap konsentrasi  DG.  Aktivitas  meningkat dengan seiring meningkatnya konsentrasi enzim gliserol kinase. Seperti ditampilkan gambar 5
Gambar 5. Efek amobilisasi gliserol kinase pada  matrik silikon berpori
A ru s (u A ) pH A ru s (u A ) Konsentrasi lipase  (unit/mL) A ru s (u A ) Konsentrasi enzim gliserol kinase (unit/mL)
Gambar 6. Efek amobiliasi enzim Gliserol 3-Fosfat oksidase (GPO) pada matrik silikon berpori
Dari grafik terlihat bahwa aktivitas optimum GPO terhadap larutan
DG, adalah pada konsentrasi 6 unit/mL.Hasil sampel yang mengandung DG  yang  diukur  dengan  menggunakan biosensor  dengan  pengamobil  silikon berpori, dapta ditunjukkan pada  gambar 7
Gambar 7.Pengukuran  sampel DG dengan Biosensor  dengan matrik silikon berpori
Seperti  terlihat  dalam  reaksi pada  Gambar  1.  ada  tiga  jenis  enzim yang  digunakan  yaitu  lipase  yang berasal  dari Bacillus BYW2  (Isolat Banyuwedang ) yang berfungsi
mengubah gliserida menjadi asam lemak  dan  gliserol.  Kemudian  gliserol yang  dihasilkan  akan  diubah  menjadi gliserol-3-posfat  dan  ADP  oleh  enzim Gliserol  Kinase  (GK)  dengan  prekursor Mg 2+ dimana  pada  proses  tersebut terlebih dahulu ditambahkan ATP.
Kemudian proses terakhir adalah
pengubahan  gliserol-3-posfat  menjadi DHAP  (Dihidroksi  Aseton  Fosfat)dan H 2 O 2 oleh enzim GPO (Gliserol-3-posfat Oksidase). Reaksi tersebut mengakibatkan berkurangnya konsentrasi  kelarutan  oksigen  yang terukur  pada  elektrode  eksperimen  jika dibandingkan  dengan  elektrode  kontrol. Berkurangnya konsentrasi kelarutan oksigen  disebabkan  karena  oksigen dalam  larutan  berubah  membentuk H 2 O 2 . Jika hasil pengukuran konsentrasi oksigen  terlarut  dari  elektrode  kontrol (elektrode silikon -tanpa enzim) dikurangi  hasil  pengukuran  konsentrasi oksigen terlarut dari elektrode eksperimen  (elektrode-  silikon-enzim) maka akan diperoleh konsentrasi oksigen yang berkurang karena berubah
A ru s (u A ) Konsentrasi Gliserol 3-posfat oksidase (unit/mL) y = 0.0028x + 0.1574 R² = 0.8971 A R US (u A ) Konsentrasi Digliserida (uM)
menjadi H 2 O 2 (konsumsi oksigen) . . Hasil pengukuran  sperti  pada  gambar  7 menunjukkan garis  linear. Hal ini dapat disimpulkan  bahwa  sistem  biosensor disposable dengan
amobilisasi gabungan enzim  dengan silikon berpori dapat  digunakan  untuk  mengukur  DG dalam serum

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  pembahasan  di atas  dapat  disimpulkan  bahwa    rentang kerja biosensor didapatkan pada pH 6,5 hingga 7,5 dan rentang suhu adalah 30- 40 o C . Modifikasi elektroda enzimdengan matrik  silikon  berpori  dapat    digunakan dalam  sistem  biosensor  pada  alat  DO meter untuk mendeteksi gliserida. Konsentrasi  enzim  lipase  termostabil Banyuwedang  jenuh  pada  20  Unit/mL, sedangkan  Gliserol  Kinase  jenuh  pada konsentrasi  2  unit/mL  dan  Gliserol  3 posfat oksidase pada konsentrasi enzim 4  unit/mL.  Konsentrasi  enzim  optimum dan kejenuhan permukaan silikon berpori  yang  stabil    dapat  digunakan sebagai  parameter  keberhasilan  respon biosensor. Konsentrasi DG terukur pada rentang  antara  0-25  µM  dalam  buffer posfat  menunjukkan    garis  lurus.  Oleh karena  itu,  sistem  biosensor  disposable dengan  amobilisasi    gabungan  enzim dengan  silikon  berpori  dapat  digunakan untuk mengukur DG dalam serum.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih dihaturkan setinggi-tingginya  kepada  Ketua  Lemlit Undiksha,  Dekan  MIPA,    Direktur Pascasarjana, Ketua Jurusan Pendidikan  Kimia    Undiksha  atas sarana, dorongan dan arahannya dalam kegiatan  penelitian  ini,  serta  DIKTI  atas Hibah Kompetensi yang diberikan
kepada  penulis  tahun  2014  dengan Surat Perjanjian Pelaksanaan
Penugasan  Program  Penelitian    No.
187/UN48.14/PL/014,  tertanggal 16  Mei
2014.

## DAFTAR PUSTAKA
Belgacem  O.,  Stubiger  G.,  Allmaier  G., Buchacher A., Pock K. Isolation of esterified  fatty  acids  bound  to serum albumin purified from human  plasma  and  characterised by  MALDI  mass  spectrometry. Biologicals. 2007;35:43 –49.
Bhambi,  M.,    Minakshi  and  C.S  Pundir (2006),  Preparation  of  Oxygen Meter Based Biosensor for Determination  of  Triglyceride  in Serum, Sensor &Transducers Magazine (S &T e-Digest), Vol. 67, issue  5  pp.561-567Ebeling  J.G., Vandenbark  G.R.,  Kuhn  L.J., Ganong  B.R.,  Bell  R.M.,  Niedel J.E.  Diacylglycerols  mimic  phorbol diester  induction  of  leukemic  cell differentiation.  Proc.  Natl.  Acad. Sci. USA. 1985;82:815 –819.
Chengelis  C.P.,  Kirkpatrick  J.B.,  Bruner R.H.,  Freshwater  L.,  Morita  O., Tamaki  Y.,  Suzuki  H.  A  24-month dietary  carcinogenicity  study  of DAG  (diacylglycerol)  in  rats.Food Chem. Toxicol. 2006;44:98 –121. Cui L, Yin H, Dong J, Fan H, Liu T, Ju P, Ai  S.,  2010  A  mimic  peroxidase biosensor based on calcined layered double hydroxide for detection of H(2)O(2).Biosens Bioelectron 31. Fliszar  K.A., Wuelfing W.P.,  Li  Z.,  Reed R.A.  Profiling  of  medium  chain glycerides  used  in  pharmaceutical formulation development
by
reversed-phase  HPLC.  J.  Pharm. Biomed. Anal. 2006;40:896 –900.
Hajri  T.,  Abumrad  N.A.  Fatty  acid transport across membranes: relevance to nutrition and metabolic  pathology.  Annu.  Rev. Nutr. 2002;22:383 –415.
Guan  B,  Magenau  A,  Kilian  KA,  Ciampi S, Gaus K, Reece PJ, Gooding JJ.
2011. Mesoporous silicon photonic crystal microparticles: towards single-cell optical biosensors.Faraday Discuss. 2011;149:301-17;  discussion  333- 56 Lowry, N.J. Rosenbrough, A.L Farr,.and R.J. Randall, Protein measurement with the folin phenol reagen t.  J.  Biol.  Chem., 193
(1951), pp. 265-275.
Moh  M.H.,  Tang  T.S.,  Tan  T.H. Simultaneous determination of free fatty acids, partial acylglycerols and tocols in palm oil products  using  high-performance liquid  chromatography.  J.  Food Lipids. 2001;8:179 –190.
Murase  T.,  Mizuno  T.,  Omachi  T., Onizawa K., Komine Y., Kondo H., Hase  T.,  Tokimitsu  I.  Dietary diacylglycerol  suppresses  high  fat and  high  sucrose  diet-induced body fat accumulation in C57BL/6J mice.  J.  Lipid  Res.  2001;42:372 – 378.
Shu-Yi  Hsu,  Brandon  Bartling,  Christina
Wang,  Fuh  Sheng  Shieu,  and
Chung-Chiun  Liu.  2010. Enzimatic Determination  of  Digliseride  Using an  Iridium  Nono  Particle  Based Single Use, Disposable Biosensor, Sensor, 10 5758-5773. Soni  M.G.,  Kimura  H.,  Burdock  G.A. Chronic  study  of  diacylglycerol  oil
in  rats.  Food  Chem.  Toxicol.
2001;39:317 –329. Song  W,  Li  DW,  Li  YT,  Li  Y,  Long YT.2010,Disposable biosensor based on graphene oxide conjugated with tyrosinase assembled gold nanoparticles.Biosens  Bioelectron. Dec 30 Tada  N.,  Shoji  K.,  Takeshita  M.,
Watanabe  H.,  Yoshida  H.,  Hase T., Matsuo N., Tokimitsu I. Effects of  diacylglycerol  ingestion  on postprandial hyperlipidemia in diabetes.  Clinica  Chimica  Acta. 2005;353:87 –94. Taguchi  H.,  Watanabe  H.,  Onizawa  K., Nagao T., Gotoh N., Yasukawa T., Tsushima R., Shimasaki H., Itakura  H.  Double-blind  controlled study  on  the  effects  of  dietary diacylglycerol on postprandial serum and chylomicron triacylglycerol responses in healthy  humans.  J.  Amer.  Coll.
Nutr. 2000;19:789 –796.
Takase  H.,  Shoji  K.,  Hase T., Tokimitsu I.  Effect  of  diacylglycerol  on postprandial  lipid  metabolism  in non-diabetic  subjects  with  and without insulin resistance. Atherosclerosis. 2005;180:197 –
204.
Tietz R., Hartel R. Effects of minor lipids on  crystallization  of  milk  fat-cocoa butter blends and bloom formation in  chocolate.  J.  Amer.  Oil  Chem. Soc. 2000;77:763 –771.
Tika.I  N.  dan  Ngadiran  K.  2006.Isolasi dan  Identifikasi  bakteri  termofilik dari  Sumber  Air  Panas  di  provinsi Bali. Proseding seminar Kimia Nasional (SENAKI) VII. ITS, Surabaya
Tika, I N. dan I N.Selamat, 2008.Pembuatan  Elektroda  Enzim Untuk Biosensor dengan Modifikasi Lipase termostabil Isolat Banyuwedang yang diamobil dengan  PVC,  Proseding  Seminar Kimia Nasional, UNS 2008. Tika,  I  N,  W.  Redhana,  N.Pt.  Ristiati, 2007.  Isolasi  ,  Pemurnian  dan Karakterisasi  Lipase  Termostabil dari Bakteri termofilik Yang diisolasi  dari  Sumber  air  Panas Banyuwedang , Keamatan Gerogak  Buleleng  Bali.  Dikti, 2007. Tika,  I  N.,  I  G.A  Tri  Agustiana, I.D.R.Raksana, 2014.Modifikasi Elektroda Enzim Lipase Dari Bacillus Byw2 (Isolat Banyuwedang)  Dengan  Silikon Berpori  Untuk  Biosensor  Pada Penentuan  Gliserida.  Proseding
Seminar Pendidikan Sains, Unesa, 18 Januari 2014.
Photinon  K.,  Wang  S.H.,  Liu  C.C. Development  of  a  dimethyl  ether (DME)  sensor  using  platinum nanoparticles and thick-film printing. Biosens.Bioelectron. 2006;22:501 –505.
Wang J., Wang K., Bartling B., Liu C.C. The detection of alkaline phosphatase using an electrochemical  biosensor  in  a single-step approach.Sensors. 2009;9:8709 –8721. Vemulachedu,  H  Æ  Renny  Edwin Fernandez Æ Enakshi Bhattacharya  Æ  Anjub  Chadha 2008.  Miniaturization  of  EISCAP sensor  for  triglyceride  detection, J Mater  Sci:  Mater  Med, DOI 10.1007/s10856-008-3534-y Voysey, and D.C. Wilton, Rapid, sensitive fluorometric determination of serum triglyceride by measuring lipase liberated fatty acids, Clin.  Chem., 40  (1994),  pp. 14-17. Yasunaga  K.,  Glinsmann  W.H.,  Seo  Y., Katsuragi Y., Kobayashi S., Flickinger B., Kennepohl E., Yasukawa  T.,  Borzelleca  J.F. Safety  aspects  regarding  the consumption  of  high-dose  dietary diacylglycerol  oil  in  men  and women in a double-blind controlled trial in comparison with consumption  of  a  triacylglycerol control  oil.  Food  Chem.  Toxicol. 2004;42:1419 –1429.