## AQUASAINS
(Jurnal Ilmu Perikanan dan Sumberdaya Perairan)

## ASSAY OF Acinetobacter AS COMPETITOR TO VIBRIOSIS
LUMINESCENCE BACTERIA IN PACIFIC PACIFIC WHITE
SHRIMP( Litopenaeus vannamei )
Assovaria 1 · Esti Harpeni 1 · Asep Saefulloh 2
Ringkasan Pacific white shrimpculture is having problems caused by bacteria infe- ction. The cause of bacteria infection is V. harveyi, it can decrease seed production. Pathogenicity of vibriosis can decrease wi- th inhibition by other types of bacteria. The aim of the research was to get competitor V.harveyi isolates through identification and challenge test in vitro and in vivo. The re- sult of screening of bacterial isolates were obtained from cultivation supplement pro- ducts to produced 4 pure isolates with di- fferent morphologically colonies and cells. There was one potential isolate could inhi- bits V. harveyi by inhibition test in vitro. Biochemical test from three different labo- ratories were identified that Acinetobacter sp. as competitor to V. harveyi and it was not pathogenic to Pacific white shrimp. Cha- llenge test Acinetobactersp. against V. ha- rveyi on Pacific white shrimp larvae was conducted through three treatments, witho- ut given V.harveyi and Acinetobacter sp. As controls; treatment with given bacteria V.harveyi and treatment with given V. ha- rveyi and Acinetobacter sp. The challenge test results showed that treatment with gi- ven of V.harveyi and Acinetobacter sp. may decreased V. harveyi density of 6.3 x 106
1 ) Department of Aquaculture Faculty of Agri- culture University of Lampung Jl. Prof. Soe- mantriBrodjonegoro No. 1 Gedong Meneng, Ban- dar Lampung 35145 2 ) Marine Research Cen- ter of PT. CentralPertiwi Bahari E-mail: edype- ni@yahoo.com
CFU/mL to 7.5 x 103 CFU/mL which co- uld suspected to decrease pathogenicity of competition number of colonies.
Keywords Pacific white shrimp, lumine- sence bacteria, vibriosis, Acinetobacter , competition
Received: 24 Februari 2015
Accepted: 17 Mei 2015

## PENDAHULUAN

## Kegiatan budidaya udang vannamei
( Litopenaeus vannamei ) menghada- pi kendala berupa infeksi penyakit bakterial terutama pada tahap pe- meliharaan larva di panti benih. Sa- lah satunya adalah penyakit bakte- rial yang disebabkan oleh V. harveyi yang infeksinya dicirikan dengan tu- buh udang berpendar di malam hari dan mengakibatkan kematian udang sampai >80 % dari populasi (Suken- da et al., 2009, 2007). V. harveyi meng- infeksi larva udang pada saat udang berganti kulit atau pengaruh kuali- tas air yang buruk (Nasi et al., 2011) karena sistem imun udang belum ter-
Assovaria et al
bentuk untuk menahan toksin yang dikeluarkan oleh patogen.
Pencegahan penyakit bakterial pa- da udang vannamei dapat dilakukan meningkatkan imunitas dengan pe- nambahan bahan nutrien tertentu pa- da pakan, immunostimulan, dan pem- berian suplemen. Suplemen ini me- rupakan cairan yang mengandung ber- bagai bakteri. Studi kasus mengenai identifikasi dan pemanfaatan bakte- ri yang hidup pada suplemen masih belum banyak dilakukan. Suplemen ini ditengarai memiliki potensi seba- gai probiotik, sehingga penelitian ini perlu dilakukan untuk membuktikan potensi tersebut. Isolat tersebut di- harapkan dapat diaplikasikan dalam budidaya udang vannamei terutama pada tahap pembenihan yang sangat rentan terinfeksi penyakit.

## MATERI DAN METODE
Penelitian dilaksanakan pada Mei sampai Oktober 2014, di Marine Re- search Center (MRC) PT. Centra- lPertiwi Bahari (CPB), di Suak Si- domulyo Kabupaten Lampung Selat- an. Tahapan yang dilakukan pada pe- nelitian ini adalah penapisan, iden- tifikasi bakteri penghambat V. ha- rveyi dengan morfologi - biokimia, uji patogenisitas bakteri pengham- bat V. harveyi dan uji tantang bak- teri penghambat V. harveyi pada la- rva udang vannamei dengan indika- tor kepadatan bakteri dan tingkat ke- langsungan hidup (%).
Alat yang digunakan pada studi ini antara lain cawan petri, sprea- der, jarum ose, bunsen, mikro pipet, tip, paper disk, eppendorf, autoklaf, oven, inkubator, laminar air flow , ta- bung reaksi, beaker glass, vortex, hot plate stirer, timbangan digital, alu- munium foil, masker, sarung tangan, selang aerasi, batu aerasi, bak fiber, baskom, pipet plastik, mikro pipet, wadah kultur artemia 1,5 liter, ge- las ukur 100 mL. Bahan yang digu- nakan pada studi ini antara lain su- plemen udang media Luria Bertani Agar, media Tryptone Soy Broth Oxo- id , alkohol 70% dan 96%, Isolat Vi- brio harveyi , KOH 3%, H 2 O 2 3%, Triple Sugar Iron Agar (TSIA) Oxo- id, Simmon’s citrate BBLTM, larut- an garam fisiologis 0,85%, larva udang vannamei PL 1, isolat Acinetobacter sp., Artemia sp., pakan CP 01, algae ( Chaetoceros sp.) dan media Thio- sulfate Citrate Bile Sucrose (TCBS).
Sampel suplemen diisolasi pada me- dia LBA dengan menggunakan pe- ngenceran 100, 10 − 1 ,dan 10 − 2 . Seba- nyak 100 µl sampel suplemen dari tiap pengenceran disebar pada me- dia LBA lalu diinkubasi selama 24 jam. Setelah diinkubasi koloni bak- teri diamati morfologi awalnya meli- puti bentuk, warna, dan tepi. Bak- teri dengan morfologi yang berbeda kemudian diisolasi dan dimurnikan. Masing – masing sebanyak 1 ose iso- late bakteri dan isolat V. harveyi di- suspensikan kedalam 500µl NaCI 0,85% steril di dalam tabung eppendorf . Se-
lanjutnya sebanyak 50 µl suspensi V.
harveyi disebar pada media LBA dan dibiarkan sampai kering.Paper dis- kd engan diameter 5 mm diletakk- an di atas media LBA yang telah di- tebarkan V. harveyi dan kemudian sebanyak 5µl suspense isolate bak- teri suplemen diteteskan ke atas pa- per disk tersebut. Setelah diinkubasi pada suhu ruang selama 24 jam, zo- na hambat yang terbentuk diamati dan diukur diameternya (Widanarni et al., 2008).
Identifikasi bakteri dilakukan se- cara konvensional melalui pengamat- an morfologi dan uji biokimia meli- puti uji Gram dengan KOH 3%, uji Katalase, uji Oksidatif Fermentatif, uji Methyl Red (MR), uji Simmon’s Citrate , uji TSIA, dan uji Motilitas. Identifikasi dilakukan berdasarkan acu- an metode Bergey’s Manual of Sis- temic Bacteriology (Holtj and Kri- eg, 1984).Penilaian berdasarkan ke- cocokan yang paling tinggi atau men- dekati 100%. Uji perbandingan iden- tifikasi isolat dilakukan dengan meng- irimkan sampel ke Balai Veteriner Lam- pung dan Stasiun Karantina Ikan Pe- ngendalian Mutu dan Keamanan Ha- sil Perikanan Kelas 1 Lampung.
Isolat bakteri penghambat diino- kulasi ke media TSB kemudian diin- kubasi pada shaker dengan suhu ru- angan 30– 31 o C selama 16-18 jam. Pengujian dilakukan dengan menam- bahkan suspense isolate bakteri su- plemen berkonsentrasi 10 4 , 10 6 dan 10 8 CFU/mL pada media pemeliha-
raan larva udang. Larva udang dipe- lihara dalam wadah dengan volume 3 liter, yang diisi dengan2 liter air la- ut dengan kepadatan udang vanamei 125 ekor/L dan diberi pakan Cha- etoceros sp., Artemia sp.dan pakan buatan CP 01. Frekuensi pemberian pakan sebanyak 3 kali/hari. Pemeli- haraan larva udang dilakukan sela- ma 7 hari. Pada akhir pemelihara- an kelangsungan hidup larva udang vannamei dihitung dan dibandingk- an dengan kontrol, yakni perlakuan tanpa penambahan isolat bakteri yang mampu menghambat pertumbuhan
V. harveyi (Widanarni et al., 2008). Parameter yang diamati adalah ke- langsungan hidup dan Total Vibrio Count (TVC). Pengamatan dilakuk- an menggunakan media TCBS un- tuk melihat kepadatan bakteri V. ha- rveyi pada pemeliharaan. Kelangsung- an hidup diamati pada akhir perco- baan dan TVC diamati setiap hari.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penapisan isolat bakteri berhasil memperoleh 19 koloni bakteri yang tumbuh pada media Luria Bertani. Setelah pemurnian isolat,4 isolat di- peroleh berdasarkan uji morfologi yang berbeda. Keempat koloni bakteri ha- sil isolasi kemudian diuji daya ham- batnya secara in vitro untuk men- dapatkan isolat bakteri yang mam- pu menghambat pertumbuhan bak- teri V. harveyi .
Terdapat satu isolat bakteri yang mampu menghambat V. harveyi de-
326 Assovaria et al Gambar 1 Hasil uji aktivitas penghambatan V. harveyi oleh Acinetobacter sp
Tabel 1 Hasil uji morfologi dan biokimia bakteri penghambat V. harveyi
Jenis Pengujian Hasil Pengujian
Morfologi Sel - Bentuk Cocus - Gram - Katalase + O/F Fermentatif TSIA Non - reaksi Simmon’s Citrate + Methyl Red - Motilitas -
ngan pembentukan zona hambat di- sekitar paper disk diantara isolat (Gam- bar 1). Penghambatan pertumbuhan bakteri V. harveyi disebabkan oleh senyawa aktif antibakteri yang diha- silkan oleh bakteri penghambat (Su- kenda et al., 2007). Senyawa anti- bakteri dapat dikeluarkan secara per- lahan dan terus-menerus ke lingkung- an sekitar untuk menghindari pesa- ing yang ada di lingkungan tersebut (Abraham, 2004).
Isolat bakteri penghambat diiden- tifikasi secara morfologi dan bioki- miawi (Tabel 1) menunjukkan bah- wa isolat tersebut termasuk dalam genus Acinetobacter . Secara morfo- logi bakteri tersebut berbentuk co-
Gambar 2 Kepadatan V.harveyi yang menurun signifikan dengan penambahan Acinetobacter sp
cus dan tergolong kedalam bakteri Gram negatif, kemudian uji biokimia menunjukkan bahwa bakteri tersebut bersifat fermentatif, motil, serta me- nunjukkan hasil positif pada uji ka- talase. Pengujian biokimia juga dila- kukan pada dua institusi yang kom- peten dan menunjukkan hasil yang sama bahwa isolat bakteri pengham- bat adalah Acinetobacter . Genus Aci- netobacter sp. tergolong kedalam bak- teri Gram negatif yang sebagian be- sar berpotensi sebagai patogen pada udang. Untuk itu dilakukan uji pato- genisitas dengan melihat tingkat ke- langsungan hidup.
Uji patogenisitas menggunakan per- bandingan antara larva udang yang ditambahkan bakteri penghambat dan tanpa bakteri penghambat. Hasil me- nunjukkan penambahan isolat bak- teri penghambat dan tanpa penam- bahan bakteri penghambat tidak me- nyebabkan kematian pada larva udang vannamei. Hasil ini menunjukkan bah- wa isolat bakteri suplemen tersebut tidak berpotensi patogen (Tabel 2).
Kepadatan V. harveyi pada ha- ri ke-0 merupakan kepadatan V. ha-
Gambar 3 Tingkat kelangsungan hidup (%) udang vannamei ( L. vannamei ) pada uji tantang yang menunjukkan kenaikan dengan penambahan Acinetobacter sp
rveyi di air pemeliharaan sebelum perlakuan. Kepadatan V. harveyi pa- da air kontrol adalah 1,28 x 10 3 CFU/mL; pada perlakuan A 2,13 x10 3 CFU/mL dan perlakuan B 1,03 x 10 3 CFU/mL. Setelah isolat bakteri suplemen di- tambahkan pada perlakuan B, kepa- datannya meningkat hingga 3 log (Gam- bar 2), sedangkan kepadatan bakteri pada kontrol cenderung tetap. Pada hari ke-2 kepadatan V. harveyi pada semua perlakuan berada pada kisar- an 1,08 x 10 6 – 6,32 x 10 6 CFU/mL. Pada hari selanjutnya kepadatan bak- teri pada perlakuan B cenderung meng- alami penurunan sebanyak 2 log (da- ri 10 5 ke10 3 CFU/mL). Hasil ini me- nunjukkan bahwa penambahan iso- lat bakteri suplemen mampu menu- runkan kepadatan V. harveyi. Penu- runan kepadatan V.harveyi oleh bak- teri suplemen kemungkinan disebabk- an oleh adanya senyawa inhibitor yang dihasilkan bakteri, sehingga dapat me- nurunkan bakteri merugikan (Rengpi- pat, 1998).
Tingkat kelangsungan hidup udang vannamei pada uji tantang diperoleh
Tabel 2 Tingkat kelangsungan hidup udang van- namei pada saat uji patogenisitas
Bakteri Kepadatan Populasi SR (CFU/mL) (ekor) (%) Acinetobacter sp.
104 250 100 106 250 100 108 250 100
Kontrol (tanpa bakteri) 0 250 100
hasil tertinggi pada perlakuan tan- pa penambahan V. harveyi (kontrol) yaitu 90,27%, kemudian untuk per- lakuan penambahan V. harveyi dan Acinetobacter sp.yaitu 82,27% ser- ta untuk perlakuan penambahan V. harveyi saja yaitu 72,13% (Gambar 3). Dengan demikian, isolat Acineto- bacter sp. mampu menghambat per- tumbuhan bakteri V. harveyi sehing- ga meningkatkan kelangsungan hidup pada udang vannamei (Fjellheim et al., 2007).

## SIMPULAN
Acinetobacter sp. mampu mengham- bat pertumbuhan V. harveyi , tidak bersifat patogen dan mampu mening- katkan kelangsungan hidup udang van- namei.
Abraham, T. J. (2004). Antibacteria mari- ne bacterium deter luminous vibriosis in shrimp larvae. Technical report, NAGA.
Fjellheim, A. J., Playfoot, K. J., Skjermo,
J., and Vadstein, O. (2007). Vibrionace- ae dominates the microflora antagonistic towards listonella anguillarum in the in- testine of cultured atlantic cod (gadus morhua l.) larvae. Aquaculture , 269:98–
106.
Holtj, G. and Krieg, N. R. (1984). Bergeys Manual of Systemic Bacteriolgy . Willi- ams and Wilkins, 1 edition.
Nasi, L., Prayitno, S. B., and Sarjito
(2011). Kajian bakteri penyebab vi- briosis pada udang secara biomulekuler.
Master’s thesis, Universitas Diponegoro.
Rengpipat, S. (1998). Effectof probiotic ba-
cterium on black tiger shrimp penaeus
monodon survival and growth. Aquacul- ture , 167:303–313.
Sukenda, Anggoro, Y. T., Wahyuningrum,
D., and Rahman (2007). Penggunaan kitosan untuk pengendalian infeksi v.
harveyi pada udang putih (litopenaeus
vannamei). Jurnal Akuakultur Indone- sia , 6:205–209.
Sukenda, S., Dwinanti, H., and Yuhana,
M. (2009). Keberadaan white spot syn- drome virus (wssv); taura syndrom vi- rus (tsv); n infectious hypodermal hae- matopotic necrosis virus (ihhnv) di tam- bak intensif udang vaname (litopenaeus vannamei) bakauheni, lampung selatan. Master’s thesis, Institut Pertanian Bo- gor.
Widanarni, Sukenda, and Setiawati, M.
(2008). Bakteri probiotik dalam budi- dayaudang : Seleksi, mekanisme, karak- teristik, dan aplikasinya sebagai agen bi- okontrol. Jurnal Ilmu Pertanian Indo-
nesia , 3:80–89.