## EFEK OPSONISASI SERUM TERHADAP AKTIVITAS FAGOSITOSIS SEL MAKROFAG YANG TERPAPAR AGREGAT BAKTERI ACTINOMYCETEMCOMITANS SETELAH PEMBERIAN MINYAK ATSIRI TEMU PUTIH
(EFFECT OF SERUM OPSONIZATION ON THE ACTIVITY OF MACROPHAGE CELL PHAGOCYTOSIS EXPOSED TO ACTINOMYCETEMCOMITANS AFTER ADMINISTRATION OF CURCUMA ZEDORIA VOLATILLE OIL)

## Juni Handajani
Bagian Biologi Mulut Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Gadjah Mada Jl. Denta Sekip Utara Yogyakarta 55281 E-mail: junihandajani@yahoo.com

## Abstract
Macrophage  is  a  phagocytic  mononuclear  cell  that  plays  an  important  role  in  innate  and  adaptive  immune  response. Polysaccharide extract of Curcuma zedoaria could increase the phagocytic activity in vitro . The aim of this study was to investigate the effect of serum opsonisation on the macrophage phagocytic activity after the administration of Curcuma zedoaria Rosc. volatile oil. The subjects were 10 male Wistar rats, which divided into two groups (treatment and control), each group consisted of 5 rats. In the treatment group, 30,6 μl/ml Curcuma zedoaria volatile oil was administrated orally for 14 days and the control group used aquabidest. In the 7 th day, 100 µl A. actinomycetemcomitans in CMC 2% were applied on the anterior gingival mandible for 7 days. In the 15 th day, rats were anesthetized then blood was collected from plexus retroorbitalis to make serum. Latex beads were incubated in the serum for 1 hour. Phagocytosis assay of peritoneal macrophages cells was performed using opsonized latex beads. Staining used Giemsa 20% then phagocytic activity was determined by counting index and percentage of phagocytic under light microscope. Data was analyzed using t-test. The result showed that it was a significant difference (p< 0.05) between serum opsonisation on the macrophage phagocytic activity  after  the  administration  of Curcuma  zedoaria volatile  oil.  In  conclusion,  serum  opsonisation  can  increase  the macrophage phagocytic activity after the administration of Curcuma zedoaria volatile oil.
Key words : volatile oil, Curcuma zedoaria Rosc, macrophage, phagocytic activity

## Abstrak
Makrofag sebagai sel fagosit mononuklear berperan dalam respons  imun innate dan adaptif. Ekstrak polisakarida temu putih ( Curcuma zedoaria Rosc.) secara in vitro diketahui dapat meningkatkan aktivitas fagositosis. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek opsonisasi serum terhadap aktivitas fagositosis sel makrofag yang telah diinduksi minyak atsiri temu putih. Subjek penelitian adalah 10 ekor tikus Wistar jantan yang dibagi menjadi 2 kelompok (perlakuan dan kontrol), masing-masing kelompok terdiri atas 5 ekor. Kelompok perlakuan diberi minum minyak atsiri temu putih dosis 30,6 μl/ml dan kelompok kontrol diberi akuabides selama 14 hari pada hari ke-7. Gingiva anterior rahang bawah tikus diolesi A. actinomycetemcomitans sebanyak 100 µl dalam CMC 2% setelah pemberian  minum. Pada hari ke-15, tikus pada masing-masing kelompok dianestesi lalu diambil darahnya dari plexus retroorbitalis untuk pembuatan serum. Latex beads diinkubasi  dalam  serum tikus selama  1  jam. Uji  fagositosis  makrofag peritoneal dilakukan terhadap latex beads teropsonisasi. Pewarnaan menggunakan Giemsa 20% lalu dilakukan pengamatan aktivitas fagositosis dengan menghitung indeks  dan  prosentase  fagositosis  di  bawah  mikroskop  cahaya. Data  dianalisis  menggunakan  uji  t.  Hasil  penelitian menunjukkan terdapat perbedaan bermakna efek opsonisasi serum terhadap aktivitas fagositosis sel makrofag yang telah diinduksi  minyak  atsiri  temu  putih  (p<  0,05).  Sebagai  kesimpulan,  opsonisasi  serum  mampu  meningkatkan  aktivitas fagositosis sel makrofag yang telah diinduksi minyak atsiri temu putih.
Kata kunci : minyak atsiri , temu putih, makrofag, aktivitas fagositosis Edisi Cetak Dentika Dental Journal, Juli 2013 (ISSN: 1693-671X)

## PENDAHULUAN
Makrofag  berasal  dari  sel  punca  ( stem  cell )  sum- sum tulang kemudian berkembang menjadi monosit yang  selanjutnya  dilepaskan  dalam  sirkulasi  darah. Monosit menyusun sekitar 3-7% dari total sel darah putih yang beredar di sirkulasi. Dalam waktu sekitar 2 hari atau lebih, monosit akan emigrasi ke jaringan selanjutnya disebut sebagai makrofag. Sel makrofag tersebut akan menetap di jaringan (histiosit). Makro- fag  diketahui  lebih  aktif  dalam  melakukan  fagosi- tosis  dibandingkan  monosit  dan  lebih  banyak  me- miliki granula dengan kandungan ezim hidrolitik. 1
Monosit  dari  darah  bermigrasi  ke  hampir  setiap organ dalam tubuh  untuk selanjutnya  tumbuh men- jadi makrofag tetap. Makrofag sebagai sistem fago- sit  mononuklear  yang  tersebar  di  seluruh  jaringan ikat, basement membran  pembuluh  darah,  sinusoid hati,  limpa,  paru-paru,  sumsum  tulang  dan  kelenjar getah bening. 2
Fagositosis  merupakan  proses  penelanan  partikel seperti bakteri, parasit sel host yang mati atau debris sel  oleh  sel  fagositik.  Proses  fagositosis  meliputi  6 tahapan  yaitu delivery sel  fagositik  ke  tempat  ter- jadinya  infeksi,  perlekatan  sel  fagosit  ke  target  (sa- saran), penelanan partikel target, pembentukan fago- lisosom,  pembunuhan  intraseluler  dan  intraseluler digesti. 2 Sel fagositosis terdiri atas neutrofil (leukosit polimorfonuklear), eosinofil, monosit dan makrofag (leukosit  mononuklear). 3 Makrofag  memiliki  umur lebih  panjang  dibandingkan  neutrofil.  Neutrofil  di- ketahui  berperan  dalam  fagositosis  tahap  infeksi akut sedangkan makrofag terutama pada infeksi kro- nis. Makrofag juga memiliki fungsi sebagai Antigen Presenting  Cell (APC)  kepada  limfosit.  Proses  ini diperlukan  untuk  inisiasi  respons  imun  adaptif host . 3,4
Proses delivery sel  fagositik  ke  tempat  terjadinya infeksi  melalui  2  tahap  yaitu  diapedesis  dan  kemo- taksis. Aktivitas fagositosis diinisiasi oleh perlekatan partikel ke permukaan membran plasma sel fagosit. Tahap  ini  biasanya  melibatkan  beberepa  reseptor permukaan pada membran sel fagosit. Tiga reseptor utama  pada  sel  fagosit  akan  mengenali  bagian  Fc molekul  antibodi  IgG  yaitu  IgG  monomerik, antigen-crosslinked IgGs  dan  faktor  komplemen C3b.  Reseptor  lain  dapat  berikatan  dengan  fibro- nektin  dan  oligosakarida  terminasimannose.  Pada keadaan  infeksi  tertentu,  bakteri  atau  virus  dapat dilapisi  substansi  (seperti  IgG,  C3b,  fibronektin atau  mannose).  Mikroba  yang  dilapisi  substansi tersebut  disebut  mikroba  teropsosnisasi.  Substansi seperti  IgG  (terutama  IgG 1 dan  IgG 3 )  atau  komple- men  C3b  yang  melapisi  permukaan  mikroba  di- sebut   faktor  opsonin. Opsonin   memberikan  ligan
ekstrinsik untuk reseptor spesifik pada membran sel fagosit  yang  secara  drastis  akan  meningkatkan  ke- cepatan  perlekatan  ( adherence )  dan  ingesti  partikel patogen.  Bakteri  teropsonisasi  dapat  dibersihkan dari  aliran  darah  oleh  sel  fagosit  tetapi  banyak  tipe bakteri nonopsonisasi tidak dapat dibersihkan. 4
Ada  tiga  jenis  utama  opsonin  yaitu  antibodi  IgG (IgG 1 dan  IgG 3 ),  fragmen  dari  C3b  dan  lektin. Masing-masing  dapat  bertindak  sebagai  jembatan antara  partikel  dan  sel  fagositik.  Protein  fase  akut (seperti C reactive protein /CRP) dapat mengikat ke permukaan  mikroorganisme  dan  memiliki  struktur yang mirip dengan C1, mengaktifkan jalur komple- men  klasik,  hal  ini  menunjukkan  opsonisasi  oleh komplemen.  Molekul  yang  berikatan  dengan  IgG (Fc  gamma  reseptor  atau  FcγR)  dan  berikatan dengan  karbohidrat  (lektin)  akan  selalu  mensti- mulasi  ingesti  segera  yang  diikuti  dengan  interaksi ligan-reseptor.  Sebaliknya,  reseptor  fragmen-C3 tidak aktif dan memerlukan sinyal lebih lanjut dalam bentuk  fibronektin  atau  protein  fase  akut  sebelum aktivasi,  namun  C3b  pada  permukaan  bakteri  atau jamur dapat mengikat CR3 dan memicu fagositosis oleh  karena  adanya  interaksi  antara  polisakarida pada  permukaan  mikroba  dan  sisi lektin-like pada CR3. 4,5
Temu  putih  banyak  digunakan  sebagai  jamu  di Indonesia, antara lain sebagai bahan utama jamu se- sudah  melahirkan,  juga  sebagai  stomatakum,  kar- minativum,  tonikum,  penawar  gigitan  ular,  peng- obatan  luka  dan  ulser.  Rimpang  dan  minyak  atsiri temu  putih  mengandung  sejumlah  senyawa  seskui- terpen  termasuk  kurkumin  dan  derivat-derivatnya. Minyak  atsiri  rimpang  temu  putih  berupa  cairan kental  kuning  emas  mengandung  1)  monoterpen hidrokarbon  (a-pinen,  D-kamfen),  monoterpen  al- kohol  (D-borneol),  monoterpen  keton  (D-kamfor), monoterpenoksida  dan  sineol,  dan  2)  seskuiterpen golongan: bisabolan, eleman, germakran, eudesman, guaian  dan  spirolakton. 6 Kandungan  minyak  atsiri pada Curcuma zedoaria juga dilaporkan berupa 1,8 cineol  (18.5%),  cymene  (18.42%),  α-phellan-drene (14.9%). 6,7
Komponen  ekstraksi  metanolik  temu  putih  yang berefek sebagai anti inflamasi terhadap telinga tikus adalah furanodiene dan furano-dienone . 7 Fraksi polisakarida  temu  putih  dosis  1  mg/ml  diketahui dapat  meningkatkan  aktivitas  fagostosis  sel  makro- fag peritoneal RAW 264.7. 8 Daya antimikroba eks- trak  temu  putih  pernah  diteliti  oleh  Bugno  pada dosis 100 mg/ml, 250 mg/ml, 500 mg/ml dan 1000 mg/ml  terhadap Streptococcus  mutans,  Enterococ- cus faecalis, Staphylococcus  aureus and Candida albicans . 9
Aggregatibacter actinomycetemcomitans sebelum
nya  dikenal  dengan Actinobacillus  actionmycetem- comitans (Aa)  merupakan  bakteri  Gram-negatif fakultatif  non-motil  berbentuk  batang.  Bakteri  ini komensal  di  rongga  mulut  tetapi  sering  ditemukan pada  plak  gigi,  poket  periodontal  maupun  sulkus gingiva.  Adanya  bakteri  ini  sering  dikaitkan  pada berbagai  infeksi  pada  manusia  seperti endocarditis, brain  abcesses dan  penyakit  periodontal.  Bakteri dan  produknya  dapat  menstimulasi  keadaan  infla- masi.  Keadaan  inflamasi  jaringan  mukosa  rongga mulut  akibat  infeksi  bakteri  akan  menginisiasi  sel- sel  pertahanan  rongga  mulut  untuk  bekerja  mem- fagosit bakteri patogen. 10
Penelitian  ini  menggunakan  dosis  30,6  μl/ml,  hal ini  sesuai  hasil  penelitian  Naz  dkk. 11 yang  me- nyatakan  daya  antimikroba  temu  putih  terhadap Bacillus  subtilis,  Bacillus  macerans,  Bacillus  lic- heniformis and Azotobacter pada  konsentrasi  ber- kisar  4-28  mg/ml in  vitro .  Dosis  minyak  atsiri  28 mg/ml  atau  setara  dengan  30,6  μl/ml.  Permasalah- annya  adalah  efek  opsonisasi  serum  terhadap  akti- vitas  fagositosis  sel  makrofag  terpapar A.  action- mycetemcomitans setelah  pemberian  minyak  atsiri temu  putih    belum  diketahui  sehingga  diharapkan hasil penelitian  ini dapat memberi informasi  ilmiah mengenai  efek  opsonisasi  serum  terhadap  aktivitas fagositosis   sel  makrofag setelah pemberian minum minyak atsiri temu putih.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  termasuk  penelitian  eksperimental murni  yang  dilakukan  di  Laboratorium  Penelitian dan Pengujian  Terpadu  (LPPT)  Universitas Gadjah Mada  (UGM).  Prosedur  penelitian  telah  men- dapat persetujuan dari  Tim Etik Penelitian Fakultas Kedokteran  Gigi  Universitas  Gadjah  Mada Yogyakarta (No. 301/ KKEP/ FKGUGM/EC/ 2012 tanggal 3 Agustus 2012).
Determinasi tanaman temu putih ( Curcuma zedoa- ria (Berg.)  Roscoe)  dilakukan  di  Bagian  Biologi Farmasi  Fakultas  Farmasi  UGM  (No.  BF/  189/ Ident/Det/VI/2012)  tanggal  25  Juni  2012.  Prosedur destilasi minyak atsiri temu putih dilakukan di LPPT UGM.  Rimpang  temu  putih  seberat  2833  gram menghasilkan 3 ml minyak atsiri konsentrasi 100%. Tikus Wistar jenis kelamin jantan usia 3 bulan se- banyak 10 ekor dibagi menjadi 2 kelompok masing- masing  kelompok  terdiri  atas  5  ekor.  Tikus  kelom- pok  perlakuan  diberi  minum  minyak  atsiri  temu putih  dosis  30,6 μl/ml  dan pada kelompok kontrol, tikus  hanya  diberi  minum  akuabides.  Masing- masing  tikus  diberi  minum  sesuai  kelompoknya setiap  hari  sebanyak  1  ml  selama  14  hari.  Gingi- va  anterior  rahang  bawah  tikus  diolesi A.
actinomycetem-comitans sebanyak  100  µl  dalam CMC 2% pada hari ke-7 setelah pemberian minum minyak  atsiri  temu  putih  dan  akuabides.  Pe- ngolesan bakteri tersebut dilakukan selama 7 hari. Pada  hari  ke-15,  tikus  Wistar  dianestesi  meng- gunakan  Ketamin  hidroklorida  10%  (Ketamil ® ) dengan  dosis  100  mg/kg  berat  badan  secara  intra- muscular.  Pengambilan  darah  dari  plexus  retroor- bitali menggunakan tabung mikrohematokrit. Darah diambil  sebanyak  ± 2  ml  lalu ditampung dalam ta- bung  sentrifugasi  yang  telah  diberi  antikoagulan Ethylene  Di-methyle  Tetraacetic  Acid (EDTA) dengan  dosis  1-2  mg/ml  darah.  Serum  diperoleh dengan cara sampel darah kelompok perlakuan dan kontrol  didiamkan  sampai  menjendal  (±60  menit) lalu  disentrifugasi  dengan  kecepatan  1300  rpm  se- lama 15 menit.
Ekstraksi  sel  makrofag  peritoneal  diawali  peng- olesan  seluruh  permukaan  perut  menggunakan  al- kohol  70%,  lalu  dibuat  irisan  kecil  sampai  tampak peritoneum. Medium RPMI  yang mengandung  2% FBS  disuntikkan  sebanyak  10  ml  ke  dalam  rongga peritoneum  menggunakan  jarum  suntik  ukuran  25 gauge dan  spuit  injeksi  ukuran  10  ml,  ditunggu selama 2 menit sambil ditekan secara perlahan. Pe- ngambilan  cairan  peritoneal  dengan  aspirasi  dari rongga  peritoneum  di  daerah  kuadran  kiri  bawah abdomen.  Cairan  peritoneal  diaspirasi  dengan  spuit injeksi  sebanyak  10  ml.  Aspirat  yang  diperoleh  se- lanjutnya ditampung dalam tabung lalu disenrifugasi pada  1.200  rpm,  4°C  selama  10  menit.  Supernatan dibuang lalu pelet ditambahkan 3 ml medium RPMI sebanyak 3 ml.
Viabilitas  sel  ditentukan  menggunakan  larutan trypan blue lalu dihitung jumlah sel dengan hemocy- tometer .  Sel  makrofag  yang viable (hidup)  akan tampak  bening  atau  tidak  berwarna  karena trypan blue tidak dapat memasuki membran sel. Makrofag yang  mati  akan  menyerap  warna  sehingga  tampak berwarna biru. 12
Pelet  diresuspensi  dengan  medium  RPMI  se- hingga  diperoleh  suspensi  makrofag  dengan  ke- padatan sebanyak 2,5 x 10 6 sel/ml. Suspensi sel se- lanjutnya  ditanam  dalam microplate  24 well  yang dasar plate nya  telah  diberi coverslip bulat.  Setiap sumuran diisi suspensi sel sebanyak 200μl (2,5 x 10 5 sel). Microplate selanjutnya  diinkubasi  dalam  in- kubator suhu 37  C 5% CO 2 selama 30 menit lalu di- tambahkan media RPMI sebanyak 1 ml tiap sumur- an,  selanjutnya  inkubasi  lagi  selama  2  jam.  Sel  di- cuci  dengan  RPMI  2  kali  kemudian  ditambahkan medium  RPMI  1  ml  tiap  sumuran  dilanjutkan  in- kubasi lagi selama 24 jam pada suhu 37  C.
Uji  fagositosis  nonspesifik  dilakukan in  vitro dengan menggunakan latex beads berdiameter 3μm.
Latex  beads yang  akan  digunakan  untuk  uji  fago- sitosis  terlebih  dahulu  diopsonisasi  dengan  cara  di- rendam dalam serum tikus dari kelompok perlakuan dan kontrol selama 1 jam. Suspensi makrofag yang telah  dikultur  24  jam,  dicuci  2  kali  dengan  RPMI. Latex  beads diresuspensikan  ke  dalam  PBS  se- hingga  diperoleh  konsentrasi  2,5x10 7 /ml.  Suspensi latex  beads ditambahkan  dalam  tiap  sumuran  se- banyak  200μl  selanjutnya microplate diikubasi  da- lam inkubator 5% CO 2 dengan suhu 37  C selama 60 menit. Pencucian spesimen 3 kali dengan PBS pada kecepatan 250 rpm masing-masing selama 10 menit untuk  menghilangkan  partikel  yang  tidak  difagosit. Fiksasi  menggunakan methanol  absolute sampai kering dilanjutkan pengecatan coverslip mengguna- kan  Giemsa  20%  selama  30  menit  lalu mounting . Pengamatan dan penghitungan indeks fagositosis di- lakukan menurut Macura. 13

## HASIL
Hasil isolasi sel makrofag peritoneal akan tampak bersinar  (Gambar  1)  dan  perhitungan  viabilitas  sel menunjukkan 95%.
Gambar 1. Sel  makrofag  peritoneal  tikus  Wistar  tampak bening terang dalam  medium RPMI (lingkar- an)
Aktivitas fagositosis sel makrofag telah dipapar A. actinomycetemcomitans setelah  pemberian  minyak atsiri (perlakuan) dan akuades (kontrol) ditampilkan pada Gambar 2.
Hasil pengamatan pada Gambar 2  tampak bahwa aktivitas  fagositosis  meningkat  drastis  setelah  pem- berian  minum  temu  putih.  Hal  ini  dapat  diamati pada kelompok perlakuan tampak satu sel makrofag mampu memfagosit sampai sekitar 35 partikel latex beads (Gambar  2)  sedangkan  kelompok  kontrol hanya  sekitar  12  partikel.  Hasil  perhitungan  indeks fagositosis ditampilkan dalam Gambar 3.
Gambar 2. Aktivitas  fagositosis  makrofag  terhadap latex beads teropsonisasi setelah pemberian minyak atsiri  temu  putih  (perlakuan)  dan  akuades (kontrol).  Tampak  sel  makrofag  kelompok perlakuan  (A)  mampu  melakukan  aktivitas fagositosis latex  beads lebih  tinggi  dibanding kontrol (B)
Gambar 3. Rerata  dan  standar  deviasi  indeks  fagositosis makrofag  terhadap latex  beads teropsonisasi serum yang telah diinduksi minyak atsiri temu putih (perlakuan) dan akuades (kontrol)
Hasil  perhitungan  normalitas  data  menggunakan Shapiro-Wilk menunjukkan  p>  0,05  atau  dapat  di- artikan  data  terdistribusi  normal.  Hasil  uji-t  diper- oleh hasil p= 0,00, sehingga dapat diinterpretasikan bahwa  terdapat  perbedaan  bermakna  induksi  mi- nyak atsiri  temu putih terhadap aktivitas fagositosis makrofag  dibandingkan  kontrol.  Hasil  perhitungan persentase fagositosis (PF) yaitu 126,86 %. Hasil ini dapat  diartikan  bahwa  induksi  minyak  atsiri  temu putih akan meningkatkan 1 kali aktivitas fagositosis makrofag terhadap latex beads teropsonisasi.

## PEMBAHASAN
Makrofag  berperan  penting  dalam  semua  fase pertahanan  inang  ( host) baik  respons  imun  alami ( innate )  maupun  adaptif  pada  kasus  infeksi.  Ketika agensia  patogen  melewati  barier  epitel,  makrofag akan mulai proses fagositosis dengan penelanan dan digesti  dengan  bantuan  enzim  lysosomal  pada  sito- plasma.  Pada  penelitian  ini  dapat  diketahui  bahwa paparan bakteri A. actinomycetemcomitans pada gi- ngiva  tikus  mampu  mengaktivasi  makrofag  untuk melakukan fagositosis, meskipun efek aktivasi bak-
A B
teri  tersebut  dapat  dikatakan  kecil.  Hal  ini  dapat diketahui  dari  rerata  indeks  fagositosis  kelompok kontrol  lebih  rendah  dari  kelompok  perlakuan (Gambar 3).
Hasil penelitian menunjukkan aktivitas fagositosis meningkat drastis setelah pemberian minum minyak atsiri  temu  putih  selama  14  hari.  Aktivitas  fago- sitosis juga semakin meningkat setelah sel makrofag diopsonisasi dengan serum dari tikus kelompok per- lakuan  (Gambar  2).  Peningkatan  aktivitas  fagosito- sis ini diduga pemberian minum minyak atsiri temu efektif  untuk  meningkatkan  produksi  protein  larut ( solubel )  yang  mampu  untuk  aktivitas  makrofag seperti  TNF-α. Tumour Necrosis  Factor -α merupa- kan sitokin pleiotropik yang terlibat dalam berbagai proses  biologis  tubuh  seperti  reaksi  imun  dan inflamasi.  Khususnya  TNF-α  beraksi  dengan  cara mengaktivasi  makrofag  untuk  proses  penelanan mikroorganisme  dengan  memacu pathway respi- ratory burst-dependent dan NO- dependent killing . 14 Hasil  ini  didukung  oleh  hasil  penelitian in  vitro maupun in vivo bahwa kandungan ekstrak kasar dan fraksi  polisakarida  temu  putih  mampu  meningkat- kan  produksi  TNF-α  dan  NO  pada  sel  makrofag peritoneal RAW 264,7. Protein  larut  seperti  TNF-α dan NO juga diketahui sebagai molekul kunci yang berefek  pada  aktivasi  makrofag  untuk  berinteraksi dengan  sel  imun  yang  lain,  sehingga  temu  putih memiliki potensi sebagai bahan imunomodulator. 8
Aktivitas  fagositosis  yang  meningkat  drastis  ter- lihat setelah opsonisasi serum dari tikus yang diberi minum  minyak  atsiri  temu  putih.  Hal  ini  mungkin disebabkan minyak atsiri temu putih berefek secara in  vivo sehingga  serum  yang  dihasilkan  oleh  tikus kelompok perlakuan telah mengandung protein larut untuk  aktivasi  makrofag  secara autocrine maupun paracrine .  Adanya  paparan  bakteri A. actionmyce- temcomitans diduga sebagai stimulator bagi makro- fag  untuk  mensekresikan  sitokin  yang  berfungsi meningkatkan aktivitas bagi makrofag sendiri ( auto- crine) maupun meningkatkan aktivitas sel lain di se- keliling makrofag ( paracrine ). 1,3,15
Aktivitas fagositosis makrofag  meningkat  setelah perendaman latex beads dengan serum kemungkin- an  ada  beberapa  mekanisme.  Pertama  pada latex beads telah  terbentuknya  selubung serum  comple- ment protein . Protein tersebut dikenal dengan opso- nin  sebagai  penanda  bakteri  atau  benda  asing  bagi makrofag untuk difagositosis. 15 Molekul protein ter- sebut  akan  melakukan  opsonisasi  dengan  menem- pel  pada  permukaan  makrofag  melalui  mekanisme pengenalan oleh reseptor khusus serum complement protein yang  terdapat  pada  membran  plasma  sel makrofag.  Reseptor  tersebut  adalah  CR1  untuk komponen C4b dan C3b serta CR3 dan CR4 untuk
komponen  C3bi.  Selanjutnya latex  beads akan mengalami  internalisasi  langsung  ke  dalam  makro- fag,  tanpa  melalui  pembentukan  pseudopodia,  se- hingga proses fagositosis menjadi lebih cepat. 16 Di- ketahui  bahwa  makrofag  memiliki  reseptor  untuk C3b  untuk  berikatan  dengan  partikel  yang  di- lapisi  komplemen  ( complementcoated ).  Reseptor lain  yaitu  adanya  molekul  opsonin  yang  mengikat IgG  (Fc  gamma receptors /FcγR)  kemudian  ikatan karbohidrat  ( lectins )  tersebut  akan  selalu  aktif  dan menstimulasi  ingesti  segera  ( immediate )  yang  di- ikuti  interaksi ligandreceptor . 15,16 Hal  ini  juga  da- pat  diketahui  dari  banyaknya latex  beads yang  di- fagosit  pada  kelompok  perlakuan.  Efek  opsoni- sasi dari serum yang telah diaktivasi dengan minyak atsiri  temu  putih  juga  dapat  diketahui  jumlah  ma- krofag  yang  melakukan  fagositosis  pada  kelom- pok  perlakuan.  Hasil  berbeda  tampak  pada  ke- lompok  kontrol  terlihat  hanya  sedikit  makrofag yang  melakukan  fagositosis  maupun  jumlah latex beads yang  difagosit  (Gambar  2).  Dapat  disimpul- kan bahwa opsonisasi serum mampu meningkatkan aktivitas  fagositosis  sel  makrofag  yang  telah  di- induksi minyak atsiri temu putih.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis menyampaikan terimakasih kepada Fakultas Kedokteran  gigi  Universitas  Gadjah  Mada  yang telah  membiayai  penelitian  ini  melalui  Dana Masyarakat  tahun  2012.  Ucapan  terimakasih  juga disampaikan kepada Siti Fatimah, Ristini Asih, dan Antinah  Latif  yang  telah  membantu  persiapan  pe- nelitian.

## Daftar Pustaka
1. Abbas  AK,  Lichtman  AH,  Phillai  S.  Cellular  and molecular  immunology.  7 th ed.  Philadelphia:  Else- vier, 2013; 50-55.
2. Samaranayake L. Essential microbiology for dentis- try. 4 rd ed. Hongkong: Elsevier, 2012; 100-15.
3. Janeway  CA  Jr,  Travers  P,  Walport  M.  Immuno- biology: The immune system in health and disease. 7 th ed. New York: Garland Science, 2008; 219-20.
4. Abbas  AK,  Lichtman  AH.  Basic  immunology: Functions and  disorders of the  immune system.  3 rd ed.  Philadelphia:  WB  Saunders  Company,  2010; 35-50.
5. Eales  LJ.  Immunology  for  life  scientist.  2 nd ed. England: Wiley, 2003; 90, 216-24.
6. Sunardi  C,  Dewi  PNL,  Sutedja  L,  Kardono  LBS. Studi  aktivitas  antimikroba  minyak  atsiri  dari rimpang  Kaemperia  rotunda  L.,  Curcuma  zedoaria Rosc.  dan  Curcuma  mangga  Val.  Et  ZIJP.  Dalam: Prosiding  Seminar  Nasional  Tumbuhan  Obat Indonesia XXI . Surabaya: 27-28 Maret 2002.
7. Makanabe  H,  Maru  N,  Kuwabara  A,  Kamo  T, Hirota.  M.  Anti-inflammatory  sesquiterpenes  from Curcuma  zedoaria, <http://findarticles.  com/p/ articles/ mi_qa4091/is_200501/ai_n9474296. 2006> 18 Maret 2008.
8. Carvalho  FR,  Vassão  RC, Nicoletti  MA,  Maria  D, Carvalho  FR.Effect  of Curcuma  zedoaria crude extract  against  tumor  progression  and  immune- modulation.  J  Venom  Anim  Toxins  incl  Trop  Dis. 2010; 16(2): 326-41.
9. Bugno  A,  Nicoletti  MA,  Almodóvar  AAB, Pereira TC,  Auricchio  MT. Antimicrobial efficacy of Cur- cuma    zedoaria extract    as   assessed   by   linear regression compared  with commercial mouthrinses. Braz J Microbiol 2007; 38(3): 427-32.
10. Aberg  CH,  Sjödin  B,  Lakio  L,  Pussinen  PJ, Johansson  A,  Claesson  R.  Presence  of Aggregati- bacter  actinomycetemcomitans in  young  indi- viduals:  a  16-year  clinical  and  microbiological follow-up  study.  J  Clin  Periodontol  2009;  36(10): 815-22 .
11. Naz S, Jabeen S, Iyas S, Manzoor F, Aslam F, Al A. Antibacterial  activity  of Curcuma  Longa varieties against different strains of bacteria . Pak J Bot 2010; 42(1): 455-62.
12. Bio Research. Protocol for performing a trypan blue viability  test  technical  reference  guide  <http:// bio.lonza.com > (24 November 2012).
13. Macura N, Zhang T, Casadevall A. Dependence of macrophage  phagocytic  efficacy  on  antibody concentration. Infect Immun 2007; 75(4): 1904-15.
14. Jang MK, Lee HJ, Kim JS, Ryu JH. A curcuminoid and  two  sesquiterpenoids  from Curcuma  zedoaria as  inhibitors  of  nitric  oxide  synthesis  in  activated macrophages.  Arch  Pharm  Res  2004;  27(12): 1220-5.
15. Pollard TD, Earnshaw  WC.  Lippincott-Schwartz  J. Cell  biology.  2 nd ed.  New  York:    Saunders,
2008: 525.
16. William  EP.  Fundamental  immunology.  6 th ed.
Philadelphia:  Lippincott  Williams  &  Wilkins Publishers, 2003; 552.