Potensi Scopoletin sebagai Agonis Reseptor Transferin 2 untuk Pengembangan Terapi Anemia Defisiensi Besi
Asti Swari Paramanindita 1 , Dono Indarto 2 , Balgis 3
1. Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret ,Surakarta 2. Bagian Fisiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret, Surakarta 3. Bagian Ilmu Kesehatan Masyarakat, Universitas Sebelas Maret, Surakarta
Korespondensi : donoIND323@gmail.com

## ABSTRAK
Pendahuluan: Anemia Defisiensi Besi (ADB) dapat disebabkan oleh ketidakseimbangan antara asupan dan kehilangan besi dalam sirkulasi. Peningkatan sekresi hepsidin berperan penting  dalam  etiologi  ADB.  Ekspresi  protein  hepsidin  dapat  terjadi  melalui  tiga  jalur, salah  satunya  melalui  peningkatan  interaksi  antara  holo  Transferin  (holo-Tf)  dengan Reseptor  Transferin  2  (RTf-2).  Hingga  saat  ini  belum  ada senyawa  eksogen  yang dapat mengaktifkan  RTf-2.  Tanaman  herbal  Indonesia  banyak  dimanfaatkan  sebagai  tanaman obat  tetapi  belum  ada  yang  digunakan  untuk  terapi  ADB.  Tujuan  penelitian  ini  adalah untuk  mengeksplorasi  senyawa  fitokimia  dalam  tanaman  herbal  Indonesia  yang  dapat berperan sebagai agonis RTf-2.
Metode: Penelitian  ini  adalah  penelitian  bioinformatika  dengan  metode  molecular docking.  Piranti  lunak  SWISS-MODEL  digunakan  untuk  pemodelan  RTf-2  karena struktur  protein  RTf-2  belum  diketahui.  Standar  holo-Tf  didapatkan  dari  laman  Protein Data  Bank  dengan  kode  akses  PDB  ID  1SUV.  Sampel  penelitian  adalah  senyawa fitokimia  yang memenuhi kriteria (1) terdaftar dalam  basis data  HerbalDB  (2)  memiliki struktur tiga dimensi pada laman PubChem (3) memenuhi kriteria Lipinski’s Rule of Five. Piranti  lunak  AutoDock  Vina  1.1.2  digunakan  untuk  menganalisis  energi  ikatan  dengan satuan kkal/mol. Interaksi ikatan antara sampel dengan RTf-2 divisualisasi menggunakan piranti lunak Chimera 1.10rc dan atau Pymol 1.7.
Hasil: Skor  docking  dari  interaksi  modifikasi  holo-Tf  dengan  RTf-2  adalah  -6,4±0,1 kkal/mol  pada  Arg466  dan  -3,4±0,1  kkal/mol  pada  Arg689.  Hasil  visualisasi  standar menunjukkan Tf  tidak hanya  berinteraksi  dengan  kedua residu  tersebut  tetapi  juga  pada Asp642  dan  Ile682.  Scopoletin  memiliki  skor  docking  sebesar  -7,1±0,1  kkal/mol  pada Arg466 dan -5,4±0,1 kkal/mol pada Arg689. Scopoletin dapat berinteraksi dengan RTf-2 pada residu Arg466, Arg689, dan Leu630.
Kesimpulan: Scopoletin  kemungkinan  besar  bersifat  sebagai  agonis  RTf-2  secara komputasi.  Uji  in  vitro  sebaiknya  dilakukan  untuk  membuktikan  efek  agonis  scopoletin pada RTf-2.
Kata Kunci: Anemia Defisiensi Besi, Fitokimia, Scopoletin, Molecular Docking, RTf-2

## ABSTRACT
Introduction : Iron Deficiency Anemia (IDA) is caused by imbalance between iron intake and iron loss in blood circulation. Increased hepcidin level plays an important role in the etiology of IDA. Normally, expression of hepcidin protein is controlled by three different pathways,  one of them is interaction between holo Transferin (Holo-Tf) and Transferrin Receptor 2 (TfR-2). Recently, Indonesian herbal plants have widely  been used as herbal medicine but there is no active compound that can  activate TfR-2  for IDA therapy. The aim of this study was to explore phytochemicals derived from Indonesian herbal plants to interact with TfR-2.
Methods: The study  was a  bioinformatics study  with a molecular docking method. The SWISS-MODEL  software  was  used  to  make  TfR-2  protein  modeling  because  the molecular  structure  of  TfR-2  remains  unknown.  Holo-Tf  was  used  as  a  standard ligand and  obtained  from  Protein  Data  Bank  with  PDB  ID  1SUV.  All  Indonesian phytochemicals which (1) registered at HerbalDB (2) had a three-dimensional molecular structure  at  PubChem  (3)  met  Lipinski’s  Rule  of  Five  criteria  were  used  in  this  study. AutoDock  Vina  1.1.2  was  used  to  analyze  the  binding  affinity  which  was  in  kcal/mol. Phytochemical-TfR-2 binding complexes were visualized by using Chimera 1.10rc and or Pymol 1.7.
Result: The docking scores of holo-Tf modification with TfR-2 were -6,4±0,1 kcal/mol at Arg466 and -3,4±0,1 kcal/mol at Arg689 respectively. Interaction of modification holo-Tf and  TfR-2  was  observed  not  only  at  Arg466  and  Arg689  but  also  with  Asp642  and Ile682.  Docking  scores  of  scopoletin  were  -7,1±0,1  kcal/mol  at  Arg466  and  -5,4±0,1 kcal/mol at Arg689. Scopoletin could interact with TfR-2 at Arg466, Arg689, and Leu630 residues.
Conclusions: Computationally, scopoletin is a potential TfR-2 agonist. In future studies, in vitro assay will be used to evaluate the agonist effect of scopoletin in TfR-2.
Keywords: Iron  Deficiency  Anemia,  Phytochemical,  Scopoletin,  Molecular  Docking, TfR-2

## PENDAHULUAN
ADB merupakan salah satu gangguan anemia karena ketidakseimbangan  antara  asupan  dan kehilangan besi
dalam tubuh 1 . Suplementasi  besi  oral  merupakan  terapi lini  pertama  pada  pasien  ADB  karena terapi  ini  murah, aman, dan  efektif dalam meningkatkan besi dalam tubuh 2 . Walaupun secara umum suplementasi besi oral  efektif  untuk  mengatasi  ADB, beberapa  pasien  ADB  tidak  menunjukkan respon  terhadap  terapi  tersebut 1 . Salah satu penyebab yang telah diketahui adalah akibat peningkatan hormon hepsidin.
Semakin  tinggi  level  hepsidin dalam  tubuh  maka  akan  menghambat proses  absorbsi  besi  usus,  menghambat
pelepasan  besi  daur  ulang  dari  makrofag limpa,  dan  menghambat  proses  pelepasan cadangan besi dari hepar 3 . Peningkatan ini dapat  disebabkan  oleh  mutasi  enzim matriptase  2  (MT2)  yang  bekerja  pada jalur Bone Morphogenetic Protein (BMP) serta  gangguan  pada  jalur  IL-  6  dan Reseptor  Transferin  2  (RTf-2) 4 .  Jalur  IL- 6  distimulasi  oleh  adanya  inflamasi maupun  infeksi  sedangkan  stimulasi  jalur RTf- 2 belum banyak diketahui penyebabnya 5 . Hal ini dikarenakan struktur dan penelitian dari protein RTf- 2 belum  banyak  dilakukan  sehingga  peran pasti RTf- 2 dalam menyebabkan tingginya  kadar  hepsidin  dalam  kasus anemia masih belum diketahui.
Senyawa  aktivator  jalur  RTf-2 hingga  saat  ini  masih  belum  diketahui,
kecuali  holo-Tf.  Belum  ada  penelitian yang  menerangkan  pemicu  keluarnya hepsidin  melalui  jalur  ini  sehingga pengembangan  obat  untuk  menghambat reseptor  ini  masih  dalam  batas  degradasi mRNA.  Bila  agonis  sudah  ditemukan maka  dapat  dikembangkan  untuk  terapi pasien ADB yang tidak responsif besi oral akibat gangguan hepsidin jalur RTf-2.
Keanekaragaman  hayati  Indonesia mendorong pengembangan  herbal  sebagai obat  dalam  menanggulangi berbagai penyakit  termasuk  ADB 6 .  Fitokimia  dari berbagai tanaman obat di Indonesia dapat dimanfaatkan  untuk  mengetahui  senyawa apakah  yang  dapat  mengaktifkan  RTf-2 dan membantu melepaskan sekresi hepsidin.
Proyek  pengembangan  obat  baru umumnya  membutuhkan  waktu  lama  dan biaya  besar 7 .  Salah  satu  cara  mengatasi kendala  tersebut  adalah  dengan virtual screening (VS). VS atau penapisan virtual adalah salah satu strategi dalam mendesain molekul obat baru
menggunakan  kimia  komputasi  dimana salah  satu  metode  yang  digunakan  adalah dengan molecular  docking . Molecular docking dapat memprediksi senyawa yang memiliki  aktivitas  biologis  dan  dapat digunakan  untuk  menuntun  penemuan senyawa  obat  secara  komputasional 8 . Piranti  lunak molecular  docking telah banyak digunakan untuk mencari interaksi antara  ligan  dengan  reseptor.  Salah  satu piranti  lunak  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah AutoDock Vina . Penelitian  ini  merupakan  tahap awal  untuk  pengembangan  obat  ADB. Penelitian  bertujuan  mencari  senyawa aktivator  jalur  RTf-2  selain  holo-Tf sehingga dapat digunakan untuk
pengembangan terapi ADB terkait gangguan hepsidin.

## SUBJEK DAN METODE
Penelitian berupa penelitian observasional bioinformatika dengan menggunakan  metode molecular  docking yang dilaksanakan di Laboratorium Fisiologi FK UNS. Penelitian ini menggunakan  struktur  tiga  dimensi  dari sampel senyawa fitokimia, senyawa standar  holo-Tf,  dan  protein  RTf-2. Sampel penelitian merupakan struktur tiga dimensi  dari  fitokimia  tanaman  herbal Indonesia  yang  terdaftar  pada  basis  data HerbalDB , memiliki  struktur tiga dimensi pada  laman PubChem ,  dan  memenuhi kriteria Lipinski’s  Rule  of  Five yaitu:  1) berat  molekul  <500g/mol;  2)  koefisien logaritmik  untuk  perbandingan  oktanol dan  air  pada  senyawa  (Log  P)  <5;  3) ikatan  hidrogen  donor  <5;  4)  ikatan hidrogen akseptor <10 9 . Hardware yang  digunakan  adalah HP  1000  Notebook  PC  dengan processor
Intel® Core TM i3-3110M CPU @2.40GHz  (4CPUs)  dan  sistem  operasi
Windows 7 Ultimate Edition. Piranti lunak yang  digunakan  adalah AutoDock  Vina 1.1.2 dalam piranti lunak PyRx , AutoDock Tools , SWISS-MODEL,  Chimera  1.10rc, dan Pymol 1.7.
Struktur protein RTf-2  hingga saat ini belum tersedia. Oleh karena itu, proses homology modeling RTf-2 perlu dilakukan untuk mendapatkan struktur tiga dimensinya. Molekul protein RTf-2
manusia  diunduh  dalam  format  FASTA melalui  laman http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ protein/AAI42631.1 . FASTA RTf-2 tersebut kemudian  dibentuk  pemodelan  struktur tiga  dimensi  dari  protein  terdekat  dengan
sequence  identity tertinggi  melalui SWISS- MODEL ( www.swissmodel.expasy.org) . Setelah diperoleh struktur tiga
dimensinya,  model  RTf-2  dilakukan optimasi  dengan  menghilangkan  molekul air  dan  menambahkan  atom  hidrogen polar  dengan AutoDock  Tools. Proses molecular  docking dilakukan  terhadap senyawa  holo-Tf  dan  422  senyawa fitokimia. Proses molecular docking
dilakukan  pada  dua  posisi grid  box agar proses docking terbatas  di  daerah  sekitar tempat  ikatan  Tf  di  RTF-2 . Grid  box ditentukan  menggunakan AutoDock  Tools yang  difokuskan  pada  tempat  ikatan  Tf terhadap  RTf-2,  yaitu  Arg466  dan Arg689.(10) Dua grid box tersebut adalah X  center =  ±  105,5405  ; Y  center = ±  -2,3084 ;  Z  center =  ±  -16,6709 (Arg466)  dan X  center =  ±  129,600 ;
Y  center =  ±  9,523; Z  center =  ±  -17,871
(Arg689).
Proses molecular docking menggunakan  piranti  lunak AutoDock Vina 1.1.2 .  Hasil molecular  docking senyawa  holo-Tf  pada  RTf-2  dijadikan standar  untuk  hasil docking senyawa fitokimia.  Struktur  tiga  dimensi  Tf diperoleh  dari  komplek  Tf-RTf-1  (PDB ID  1SUV)  yang  diunduh  melalui Protein Data  Bank ( www.rcsb.org ).  Komplek  Tf- RTf-1  kemudian  dipisahkan melalui piranti lunak AutoDock Tools . Molekul Tf adalah  molekul  berukuran  besar  sehingga untuk melakukan proses molecular
docking antara Tf dan RTf-2
menggunakan  program AutoDock  Vina perlu  dilakukan  modifikasi  molekul  Tf. Modifikasi  berupa  pemotongan  asam amino  Tf  yang  memiliki  interaksi  dengan RTf-2  sesuai  penelitian  Yamamura  dan
Sakajiri 10 ,  yaitu  pada  Glu56  dan  Glu328. Pemotongan  residu  menggunakan piranti lunak AutoDock Tools . Proses pemotongan  mempertimbangkan  bentuk tiga  dimensi  dari  hasil  potongan.  Peneliti melakukan  pemotongan  Tf  menjadi  dua bagian,  yaitu  pada  Tf  Arg50-  Glu56 (bagian  I)  serta  Tf  Lys144-Lys148  dan Glu328 (bagian II).
Potongan  Tf  tersebut  kemudian dilakukan  validasi molecular  docking pada  tempat  ikatannya  di  RTf-2.  Glu56 (bagian  I)  di docking -kan  pada  Arg466 dan  Glu328  (bagian  II)  di docking -kan pada  Arg689.  Proses molecular  docking dilakukan  sebanyak  tiga  kali  untuk mengambil skor docking rata- rata dengan rmsd  ( root  mean square deviation )  < 2  Å agar skor dan konformasi yang digunakan dianggap  valid  serta  tidak  memiliki perbedaan  yang  bermakna 8 .  Skor docking yang  diperoleh  dijadikan  standar  untuk menentukan aktivitas senyawa fitokimia.
Proses molecular docking senyawa fitokimia akan menghasilkan skor docking dan konformasi ikatan. Senyawa fitokimia dianggap  sebagai  agonis  RTf-2  bila memiliki  skor docking ≤  skor docking potongan  Tf  di  Arg466  dan  Arg689  serta memiliki  interaksi  ikatan  pada  kedua tempat  ikatan  tersebut.  Interaksi  ikatan dapat dilihat dengan visualisasi
menggunakan Chimera 1.10rc atau Pymol 1.7. Analisis molecular docking
dilakukan  dengan  membandingkan skor docking berupa  energi  ikatan  (kkal/mol) dan  interaksi  ikatan  antara  hasil docking standar dengan senyawa fitokimia.

## HASIL
Pemodelan  struktur  tiga  dimensi RTf-2  menghasilkan  model  yang  memilki sequence identity sebesar 48,19%. Protein cetakan (protein t emplate ) yang digunakan adalah  komplek  protein  Tf-  RTf-1 manusia (PDB ID 3S9L).
Validasi molecular docking potongan  Tf  dengan  RTf-2  dilakukan masing-  masing  sebanyak  tiga  kali  pada dua tempat ikatan. Hasil validasi potongan Tf  dengan  RTf-2  memiliki  skor docking rerata  sebesar  -6,4±0,1  kkal/mol  (Glu56- Arg466)  dan  -3,4±0,1  kkal/mol  (Glu328- Arg689) dengan rmsd 0,0  (Tabel 1). Hasil docking potongan  Tf  kemudian  dilakukan visualisasi  untuk  melihat  interaksi  ikatan yang  terbentuk.  Pada  Gambar  1  terlihat potongan  Tf  membentuk  interaksi  ikatan pada  Glu56  (Tf)  dengan  Arg466  (RTf-2) serta  pada  Glu328  (Tf)  dengan  Asp642, Ile682, Arg689 (RTf-2).
Tabel 1. Skor docking potongan Tf pada RTf-2
Interaksi Tf- RTf-2 Skor docking (kkal/mol) Skor docking rerata (kkal/mol)± Standar Deviasi (SD) Glu56- Arg466 -6,3 -6,4 ±0,1 -6,4 -6,4 Glu 328- Arg689 -3,5 -3,4±0,1 -3,4 -3,4
Selanjutnya  dilakukan molecular docking ke-422  senyawa  fitokimia  pada dua daerah tempat ikatan Tf, yaitu Arg466 dan  Arg689.  Proses molecular  docking diulang sebanyak tiga kali untuk
mengambil nilai rerata. Dari hasil docking didapatkan scopoletin memiliki  skor docking rerata  sebesar  -7,1±0,1  pada
Arg466  dan  -5,4±0,1  pada  Arg689 (Tabel  2).  Hasil molecular  docking scopoletin pada daerah Arg466
memperlihatkan  adanya  interaksi  ikatan hidrogen  di  Arg466,  Leu630  sedangkan pada  daerah  Arg689  memperlihatkan adanya  interaksi  ikatan  hidrogen  di Arg689 (Gambar 1).
Tabel 2. Skor docking scopoletin
pada RTf-2 Kode PubChem Interaksi fitokimia- RTf-2 Skor docking Skor docking rerata (kkal/mol) ± SD 5280460 Scopoletin - Arg466 -7,1 -7,1±0,1 -7,0 -7,1 Scopoletin - Arg689
-5,3
-5,4±0,1 -5,4 -5,5

## PEMBAHASAN
Struktur protein RTf-2 hingga saat ini belum diketahui. Peneliti menggunakan model RTf-2 yang dibentuk dari kompleks Tf-RTf-1 manusia  untuk melakukan proses molecular  docking .  Model  RTf-2
yang  didapat  memiliki sequence  identity sebesar  48,19%.  Model  yang  dihasilkan dianggap  dapat  mewakili  struktur  tiga dimensi  dari  RTf-2  karena  memenuhi kriteria rule  of  thumb dari homology modeling ,  yaitu sequence protein  target yang  memiliki  residu  melebihi  100 dianggap  identik  dengan  struktur  protein template bila  memiliki sequence  identity minimal sebesar 25% 11 .
Gambar 1. Visualisasi hasil molecular docking potongan Tf dan scopoletin pada RTf-2.
(a)  Visualisasi  posisi  potongan  Tf  pada  RTf-2  dengan Chimera  1.10rc. Posisi            potongan  Tf ditunjukkan dengan lingkaran biru; (b) Visualisasi posisi scopoletin pada RTf-2 dengan Chimera 1.10rc. Posisi scopoletin ditunjukkan dengan lingkaran biru; (c)Interaksi ikatan antara Glu56(Tf)- Arg466(RTf-2)  yang  ditunjukkan  oleh  lingkaran  merah;  (d)Interaksi  ikatan  antara  Glu328(Tf)- Arg689(RTf-2)  yang  ditunjukkan  oleh  lingkaran  merah;  (e)Interaksi  ikatan  antara scopoletin - Arg466(RTf-2)  yang  ditunjukkan  lingkaran  merah;  (f)Interaksi  ikatan  antara scopoletin - Arg689(RTf-2)  yang  ditunjukkan  lingkaran  merah. Hijau:  atom  Karbon  (C),  merah:  atom Oksigen  (O),  putih:  atom  Hidrogen  (H),  biru:  atom  Nitrogen  (N),  garis  putus-putus  kuning: interaksi antaratom.
(a) (b) (c) (d) (e) (f)
Proses molecular docking antara potongan Tf  dengan  model  RTf-2  menghasilkan dua skor docking rerata , yaitu pada Glu56- Arg466  sebesar  -6,4±0,1  kkal/mol  dan pada  Glu328-Arg689  sebesar  -3,4±0,1 kkal/mol.  Kemudian  hasil  visualisasi memperlihatkan  adanya  interaksi  antara Glu56 dengan Arg466 dan Glu328 dengan Arg689,  Asp642,  Ile682  (Gambar  1). Interaksi ikatan antar asam amino dipengaruhi  oleh  sifat  dari  asam  amino terkait.  Interaksi  ikatan  yang  terbentuk antara  Glu56  dengan  Arg466  dan  Glu328 dengan  Arg689  adalah  interaksi  ikatan ionik  karena  sifat  asam  amino  Glutamat bermuatan  negatif sedangkan asam  amino Arginin bermuatan positif sehingga terdapat  gaya  tarik  menarik  diantara keduanya 12 . Ikatan ionik terbentuk melalui transfer  satu  atau  lebih  elektron  valensi dari  satu  atom  ke  atom  lainnya  untuk membentuk ikatan kimia yang stabil 12, 13 .
Hasil molecular docking scopoletin terhadap  RTf-2  mendapatkan hasil  skor docking yang  lebih  rendah daripada  potongan  Tf,  yaitu  -7,1±0,1 kkal/mol  pada  Arg466  dan  -5.4±0,1 kkal/mol  pada  Arg689.    Semakin  rendah skor docking maka  tingkat  kestabilan antara  ligan  dan  reseptor  semakin  baik sehingga akan terbentuk ikatan yang lebih kuat 14 . Semakin negatif hasil skor docking maka  energi  yang  dibutuhkan  oleh scopoletin untuk  membentuk  ikatan dengan RTf-2 juga lebih kecil dibandingkan  energi  yang  dibutuhkan  Tf untuk berikatan dengan RTf-2. Hasil visualisasi
scopoletin
menunjukkan terbentuknya
ikatan hidrogen  pada  Arg466,  Leu630  dan Arg689    (Gambar  1).  Ikatan  hidrogen merupakan  salah  satu  gaya  tarik  menarik
antarmolekul.  Ikatan  hidrogen  terbentuk antara  atom  yang  bersifat  elektronegatif (atom yang cenderung menerima elektron) dengan  atom  hidrogen  yang  terikat  pada atom lain yang juga bersifat elektronegatif 13 . Jenis  interaksi  senyawa scopoletin dengan  residu  RTf-2  yang  diperoleh  dari hasil molecular  docking berbeda  dengan jenis  interaksi  pada  potongan  Tf  yang dijadikan  standar.  Perbedaan  jenis  ikatan antara  Tf  dengan  senyawa  fitokimia  pada Arg466  dan  Arg689  disebabkan  oleh senyawa  standar  yang  digunakan  adalah protein,  yaitu  Tf.  Pada  interaksi  protein- protein,  interaksi  yang  terjadi  merupakan interaksi  antara  residu  dengan  residu. Interaksi  yang  terbentuk  pada  senyawa standar  adalah  antara  residu  Glutamat yang  bermuatan  negatif  dengan  Arginin yang  bermuatan  positif  sehingga  terjadi perbedaan  muatan  dan  terbentuk  ikatan ionik 12 .  Sedangkan  pada  interaksi  ligan- protein, interaksi yang terbentuk merupakan  interaksi  antarmolekul  yang berdekatan,  yaitu  antara  atom  dari  residu protein dengan atom dari ligan 12,13 .  Interaksi  yang  terjadi  pada  ligan- protein memperhatikan atom yang terlibat dimana  pada  visualisasi  hasil docking scopoletin memperlihatkan  keterlibatan atom  hidrogen  (Gambar  1).  Ikatan hidrogen yang  terbentuk  merupakan ikatan  antarmolekul  yang  lemah  sehingga senyawa  fitokimia  diprediksi  memiliki interaksi yang reversibel dengan RTf-2 12 . Penggunaan kriteria Lipinski’s Rule of Five bertujuan untuk mendapatkan senyawa  aktif  yang  mudah  diabsorbsi tubuh 9 .  Penapisan  kandidat  senyawa  obat menggunakan  kriteria  ini  diharapkan  bisa memperoleh  senyawa  yang  memiliki
bioavailabilitas  tinggi  di  dalam  tubuh manusia. Aturan Lipinski
dapat menentukan  karakter  hidrofobik  atau hidrofilik  suatu  senyawa  untuk  berdifusi secara  pasif  melewati  membran  sel 15 . Scopoletin memiliki  berat mokeul  sebesar 192, 16812 g/mol; nilai Log P sebesar 1,5; satu  donor  ikatan  hidrogen  dan  empat akseptor  ikatan  hidrogen.  Karakterstik scopoletin yang memenuhi aturan Lipinski menunjukkan scopoletin dapat  dengan mudah  menembus  membran  sel  saluran cerna dan masuk ke dalam sirkulasi tubuh manusia.
Scopoletin merupakan  senyawa golongan  fenilpropanoid  derivat  kumarin. Beberapa  tanaman  yang  mengandung scopoletin adalah Imperata  cylindrica (alang- alang) , Aglaia edulis, Chrysanthemum  leucanthemum (bunga daisy) ,  Citrus  sinensis (jeruk    manis) , Curcuma  mangga (temu  mangga/kunir putih) ,  Hedyotis  capitellata,  Morinda citrifolia (mengkudu), Schleichera oleosa (kesambi), Urtica dioica (jelatang), Urtica urens . Scopoletin pada  buah  mengkudu memiliki  efek  menurunkan  tekanan  darah dan merelaksasikan otot polos 16 . Penelitian lain menyatakan bahwa scopoletin memiliki  efek  menghambat proliferasi  sel  kanker  prostat  dengan menginduksi  apoptosis 17 . Scopoletin juga memiliki efek antioksidan,
hepatoprotektif,  antiinflamasi,  antialergi, dan antiangiogenesis 18, 19, 20 .
Penelitian  yang  dilakukan  oleh peneliti merupakan jenis penelitian
biokomputasi dengan menggunakan sumber  data  dari database internet. Penelitian  ini  memiliki  keterbatasan. Pertama,  protein  dan  senyawa  standar holo-Tf  yang  digunakan  adalah  hasil
modifikasi sehingga mungkin mempengaruhi  hasil docking. Kedua, piranti  lunak molecular  docking yang digunakan  adalah AutoDock  Vina dimana pada program ini makromolekul (protein/reseptor) dianggap memiliki bentuk rigid /kaku sedangkan ligan berbentuk  fleksibel.  Program  ini  hanya mengizinkan  ligan  untuk  menyesuaikan posisi/berubah konformasi sedangkan protein  tidak.  Hal  ini  tidak  sesuai  dengan keadaan  asli  pada  manusia  dimana  baik protein  dan  ligan  bersifat  fleksibel sehingga  keduanya  dapat  menyesuaikan bentuk  untuk  memperoleh  posisi  yang sesuai.

## KESIMPULAN
Scopoletin memiliki  skor docking yang  lebih  rendah  dibandingkan  standar yang  digunakan . Visualisasi  hasil docking scopoletin memperlihatkan scopoletin mampu  membentuk  ikatan  dengan  kedua tempat ikatan Tf pada RTf-2. Oleh karena itu, scopoletin diprediksi  sebagai  salah satu  agonis  RTf-2  secara molecular docking.
Penelitian  lanjutan  berupa  uji  in vitro sebaiknya dilakukan untuk mengetahui  apakah  terjadi  kompetisi antara holo- Tf dengan senyawa scopoletin pada RTf-2.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  kepada  Yuliana  Heri Suselo,  dr.,  M.Sc.,  Amelya  Augusthina Ayu  Sari,  dr.,  Yoga  Mulia  Pratama, S.Ked,  dan  Linda  Erlina,  S.Farm  yang telah membantu dalam berjalannya penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Bregman DB, Morris D, Koch TA, He A,
Goodnough  LT.  Hepcidin  levels  predict nonresponsiveness to oral iron therapy in patients  with  iron  deficiency  anemia.
AJH 2013; 88(2): 97–101.
2. Johnson-Wimbley  TD,  Graham  DY. Diagnosis  and  management  of  iron deficiency  anemia  i  the  21st  century.
Therap  Adv  Gastroenterol  2011;  4(3):
177–184.
3. Pietrangelo  A.  Review  Hepcidin  in human iron disorders : Therapeutic implications. J Hepatol 2011; 54(1): 173–
181.
4. Poli M, Asperti M, Ruzzenenti P, Regoni M,  Arosio  P.  Hepcidin  antagonists  for potential  treatments  of  disorders  with hepcidin  excess.  Front  Pharmacol  2014; 5: 1–13. 5. Fleming MD. The regulation  of  hepcidin and  its  effects  on  systemic  and  cellular iron  metabolism.  ASH  2008;  2008(1): 151–158.
6. Hernani. Pengembangan biofarmaka
sebagai  obat  herbal  untuk  kesehatan.  B Pascapanen 2011; 7(1): 20- 29.
7. Menkes  RI  2013.  Lampiran  Peraturan Menteri  Kesehatan  Republik  Indonesia Nomor 87 tahun 2013 tentang Peta Jalan Pengembangan Bahan Baku Obat. Jakarta:  Menteri  Kesehatan  Republik Indonesia.
8. Yanuar A. Penambatan Molekular:
Praktek  dan  Aplikasi  pada  Virtual Screening . Depok:  Fakultas  Farmasi Universitas Indonesia; 2012. 9. Lipinski CA, Lombardo F, Dorminy BW, Feeney PJ. Experimental and computational  approaches  to  estimate solubility  and  permeability  in  drug discovery and  development settings. A dv Drug Delivery Rev 2001; 46(1-3): 3-26. 10. Yamamura T, Sakajiri T. The Computational  Structure  Model  of  The Differic Transferrin- Transferrin Receptor  2  Complex  Involved  in  Body's Iron  Homeostasis  [Online].  2011  [cited 2015 Aug 10]. Diunduh dari;URL:http://www2.kenes.com/apccn/ scientific/Documents/Poster/1152. 11. Bordoli  L. Introduction  to  3D-Structure Visualization  and  Homology  Modeling using the Swiss-Model Workspace [Online].  2009  [cited  2015  Dec  3]. Diunduh dari; URL:http://edu.isb- sib.ch/pluginfile.
php/735/course/section/1235/Introductio n-SMW_partIV-ho.pdf.
12. Yuwono  T.  Biologi  Molekular.  Jakarta: Erlangga; 2008.
13. Hart DJ, Hadad CM, Craine LE, Hart H. Kimia Organik . Jakarta: Erlangga; 2003. 14. Merz KM, Ringe D, Reynolds CH. Drug design: Structure-and ligand-based approaches.  New  York:  Cambridge University Press; 2010.
15. Lipinski  CA.  Lead-  and  drug-like compounds:  the  rule-of-five  revolution. Drug  Discov  Today  Technol  2004;  1(4):
337–341. 16. Hidayat  T,  Wahyuni  ES,  Karyono  SS. Pengaruh ekstrak buah mengkudu ( Morinda citrifolia) terhadap aorta terpisah  marmut  ( Cavia  porcellus) tanpa endotel.  JKB  [serial  online]  2005  [cited 2015 Nov 25] Diunduh dari:URL:http://www.jkb.ub.ac.id/index. php/jkb/article/viewFile/244/234 17. Li  C,  Han  X,  Zhang  H,  Wu  J,  Li  B. Effect of scopoletin on apoptosis and cell cycle  arrest  in  human  prostate  cancer cells  in  vitro.  Trop  J  Pharm  Res  2015 ; 14(4): 611–617.
18. Malik  A,  Kushnoor  A,  Saini  V,  Singhal S,  Kumar  S,  Yadav  YC.  In  vitro antioxidant  properties  of  Scopoletin.  J Chem Pharm Res 2011; 3(3): 659–665.
19. Cheng  AS,  Cheng  YH,  Chang  TL. Scopoletin attenuates allergy by inhibiting  Th2  cytokines  production  in EL-4 T cells. Food Fuct 2012; 3(8): 886– 890. 20. Pan  R,  Gao  X,  Lu  D,  Xu  X,  Xia  Y,  Dai Y. Prevention of FGF-2-induced angiogenesis  by  scopoletin,  a  coumarin compound isolated from Erycibe
obtusifolia  Benth,  and  its  mechanism  of action.  Int  Immunopharmacol  2011; 11(12): 2007–2016.