## ALCHEMY : JOURNAL OF CHEMISTRY

## Artikel Penelitian
Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak n-Heksana, Etil Asetat, Metanol Daun dan Akar Bakau Merah ( Rhyzophora stylosa ) dengan Metode DPPH
Ahmad Hanapi, A. Ghanaim Fasya*, Abdan Syakuro
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, Indonesia, 65144
INFO ARTIKEL ABSTRAK

## Riwayat Artikel
Diterima 15 Mei 2019 Direvisi 10 Juni 2019 Tersedia online 30 Agustus 2019
* Email penulis korespondensi:
fasya.organik@kim.uin-malang.ac.id
Red  mangrove  ( Rhizophora  stylosa )  is  one  of  the  mangrove  species  which  is abundance  in  the  coast  of  Java.  The  mangrove  contains  a  lot  of  active compounds  that  is  potent  as  antioxidant.  The  objective  of  this  study  was  to determine antioxidant activity of n-hexane, ethyl acetate, and methanol extract of red  mangrove  leaves  and  roots  using  DPPH  (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) method. Active compound extraction of red mangrove is conducted by gradual maceration. According to phytochemical analysis, crude root extract showed the presence  of  flavonoids,  tannins,  and  steroids/triterpenoids,  while  crude  leave extract  showed  the  presence  of  alkaloids,  flavonoids,  tannins,  saponins,  and steroids/triterpenoids. EC 50 value of methanol extract from red mangrove leaves and roots was 5.01 and 2.55 ppm, respectively, whilst of ethyl acetate extracts from  red  mangrove  leaves  and  roots  was  89.94  and  8.51  ppm,  respectively. Crude  extract  n-hexane  has  antioxidant  activity  33.14  ppm  (EC 50 ).  Roots  and leaves extracts have high activity of antioxidant.
Keywords: Antioxidant, red mangrove, DPPH method
Bakau merah ( Rhizophora stylosa ) merupakan salah satu spesies bakau yang keberadaannya sangat melimpah di pesisir pantai Pulau Jawa dan mengandung banyak  senyawa  aktif  yang  berpotensi  sebagai  antioksidan.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui aktifitas antioksidan  ekstrak n-heksana, etil-asetat, metanol  pada  akar  dan  daun  bakau  merah  menggunakan  metode  DPPH. Ekstraksi senyawa aktif pada akar dan daun dilakukan dengan metode maserasi bertingkat  menggunakan  n-heksana,  etil  asetat  dan  metanol.  Ekstrak  kasar dilakukan uji fitokimia dan aktivitas antioksidannya menggunakan metode DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ).  Hasil  pengujian  fitokimia  dari  ekstrak  kasar  akar menunjukkan  adanya  senyawa  flavonoid,  tanin,  dan  steroid/triterpenoid, sedangkan  ekstrak  kasar  daun  menunjukkan  adanya alkaloid,  flavonoid,  tanin, saponin,  dan  steroid/triterpenoid.  Nilai  EC 50 ( Efficient  Concentration )  ekstrak metanol  daun  dan  akar  berturut-turut  sebesar  5,01  dan  2,55  ppm,  sedangkan ekstrak  etil-asetat  daun  dan  akar  berturut-turut  sebesar  89,94  dan  8,51  ppm. Adapun  ekstrak  n-heksana  daun  menghasilkan  nilai  EC 50 sebesar  33,14  ppm. Ekstrak akar dan daun bakau merah memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi.
Kata kunci: Antioksidan, bakau merah, metode DPPH

## 1. Pendahuluan
Indonesia memiliki ekosistem bakau ( mangrove forest) yang luas yaitu ± 2,5 juta ha melebihi Brazil (±1,3 juta ha), Nigeria  (±  1,1  juta  ha)  dan  Australia  (±  0,97  juta  ha) [1] . Jenis  bakau  yang  banyak  ditemukan  antara  lain  api-api ( Avicennia sp.),  bakau  ( Rhyzophora sp.),  tancang  ( Bruguiera sp.)  dan  bogem/pedada  ( Sonneratia sp.)  [2].  Tanaman bakau yang telah lama dimanfaatkan dan dibudidayakan adalah bakau merah ( Rhyzophora stylosa ). Hal ini dikarenakan banyak kandungan metabolit sekunder yang bermanfaat didalamnya yang berpotensi sebagai obat. Senyawa metabolit sekunder yang ada pada bakau merah adalah asam karboksilat alifatik, asam lemak, flavoglycans , hidrokarbon, garam- garam anorganik, inositol, dan steroid [3].
Penelitian Vadlapudi dan Naidu [4] menunjukkan bahwa daun bakau api-api putih yang merupakan kerabat dekat bakau merah memiliki aktivitas antioksidan. Priyanto [5] juga mengemukakan ekstrak metanol bakau kurap ( Rhizophora mucronata Lamck.) berpotensi sebagai antioksidan alami dengan nilai IC 50 sebesar 0,72 ppm dan mengandung senyawa aktif berupa flavonoid, tanin, fenol, hidrokuinon, dan saponin. Pada penelitian ini, ekstraksi senyawa aktif bakau merah dilakukan dengan maserasi bertingkat menggunakan tiga pelarut yaitu n-heksana, etil asetat, dan metanol. Hutabarat [6] menjelaskan bahwa rendemen ekstrak buah bakau merah dengan pelarut n-heksana, etil asetat, metanol berturut-turut sebesar 3,45; 0,36 dan 0,13 %.
Bakau merah adalah salah satu jenis bakau yang menyerap air tetapi mampu mencegah masuknya garam melalui saringan  yang  terdapat  pada  akar.  Menurut  Basyuni  dkk.  [7], senyawa  triterpenoid  memainkan peranan  penting  untuk melindungi bakau merah dari pengaruh garam. Selain itu, daun bakau merah yang menjadi tempat terjadinya fotosintesis juga mengandung banyak metabolit sekunder. Hal ini dikuatkan oleh pernyataan  Hardiningtyas dkk. [8] bahwa kerabat dekat Rhyzophora yaitu  bakau  api-api  putih  mengandung  steroid/triterpenoid  pada  daunnya.  Adanya  kandungan steroid/terpenoid pada bakau merah ini yang mendasari untuk dilakukan pengujian antioksidan.
Antioksidan didefinisikan sebagai suatu substansi yang dapat menunda, mencegah atau menghilangkan kerusakan oksidatif  pada  molekul  target.  Molyneux  [9]  mengemukakan  bahwa  metode  uji  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) merupakan salah satu metode yang paling banyak digunakan untuk memperkirakan efisiensi kinerja dari substansi yang berperan  sebagai  antioksidan.  Antioksidan  berdasarkan sumbernya  terdiri  dari  dua  golongan  yaitu  antioksidan  sintetik dan antioksidan alami yang merupakan hasil isolasi bahan alam [10].
Hutabarat [6] menyatakan ekstrak kasar etil asetat buah bakau merah memiliki IC 50 sebesar 79,71 ppm dan ekstrak metanol  kulit  batang Sonneratia  alba (kerabat  dekat Rhyzoporaceae )  memiliki  IC 50 sebesar  12,2  ppm.  Nilai  aktivitas ekstrak metanol tersebut lebih tinggi dibandingkan asam askorbat (kontrol positif) dengan IC 50 sebesar 17,64 ppm. Pada penelitian ini dilakukan uji aktivitas antioksidan ekstrak akar dan daun bakau merah menggunakan pelarut n-heksana, etil asetat dan metanol dengan metode DPPH.

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1. Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah akar dan daun bakau merah ( Rhyzophora stylosa ) yand diambil dari Kawasan Ekowisata Bakau Surabaya. Bahan kimia yang digunakan diantaranya n-heksana 98% (Merck), etil asetat p.a. (Merck),  metanol  99,9%  (Merck),  etanol  96%  (Merck),  BHT  (butil  hidroksil  toluena)  dan  DPPH  (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil) (Merck).

## 2.2. Uji Taksonomi
Identifikasi sampel bakau merah dilakukan secara kualitatif dengan menggunakan kajian pustaka di  Laboratorium Fisiologi tumbuhan Jurusan Biologi Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang.

## 2.3. Preparasi Sampel
Akar  dan  daun  bakau  merah  sebanyak  5  kilogram  dibersihkan,  diiris  kecil-kecil,  dan  dikeringkan  dengan freeze dryer selama 24 jam. Sampel yang sudah kering dihaluskan hingga didapatkan serbuk akar dan daun bakau merah [11].

## 2.4. Uji Kadar Air
Sampel akar dan daun bakau merah sebanyak 5 gram dimasukkan dalam cawan porselen yang sudah diketahui berat  konstannya,  kemudian  dioven  pada  suhu  100-105°C  dan  didinginkan  dalam  desikator.  Perlakuan  ini  diulangi sampai berat konstan. Kadar air pada akar dan daun bakau merah ditentukan menggunakan Persamaan (1) [12].
Kadar air = x 100% B - C B - A
(1)
Dimana  A  adalah  bobot  cawan kosong,  B  adalah  bobot  sampel  dan  cawan sebelum  dikeringkan, dan  C  adalah  bobot sampel dan cawan yang telah dikeringkan.

## 2.5. Ekstraksi Maserasi
Sampel  akar  dan  daun  bakau  merah  sebanyak  50  gram  diekstraksi  secara  maserasi  bertingkat  menggunakan pelarut  n-heksana  selama  24  jam  disertai  pengocokan  dan  penyaringan.  Perbandingan  antara  sampel  dan  pelarut berbeda  untuk  setiap  sampel,  yakni  1:10  untuk sampel  akar  dan  1:5  untuk  sampel  daun.  Ampas yang  telah  diperoleh selanjutnya  dimaserasi  dengan  menggunakan  pelarut  etil  asetat  dengan  perlakuan  yang  sama.  Ampas  hasil  ekstraksi dengan etil asetat dimaserasi kembali menggunakan metanol. Ketiga filtrat yang diperoleh hasil penyaringan dipekatkan menggunakan rotary evaporator [6] . Ekstrak pekat yang diperoleh ditentukan nilai rendemennya dengan Persamaan (2).
Rendemen (%) = x 100%

## 2.5. Uji Fitokimia
Uji kandungan senyawa aktif dilakukan dengan uji fitokimia. Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya komponen-komponen bioaktif yang terdapat pada ekstrak kasar akar dan daun bakau merah. Uji fitokimia dilakukan pada senyawa alkaloid, steroid/triterpenoid, flavonoid, saponin dan tanin [13].

## 2.6. Uji Aktivitas Antioksidan
Pengujian aktivitas antioksidan diawali dengan menentukan panjang gelombang maksimum. Larutan DPPH 0,1 mM sebanyak  6 mL  didiamkan selama  ±  10 menit.  Larutan kemudian  ditentukan  panjang  gelombang maksimumnya.  Nilai panjang gelombang ini akan digunakan untuk tahap selanjutnya [14].
Pengukuran aktivitas antioksidan pada semua ekstrak dilakukan dengan variasi konsentrasi 5, 10, 15, 20, 25, 30 ppm, terkecuali pada ekstrak etil asetat daun. Variasi konsentrasi ekstrak etil asetat daun adalah 1, 10, 50, 100, dan 200 ppm. Sampel sebanyak 6,75 mL dari masing-masing konsentrasi dan ditambahkan 2,25 mL DPPH 0,1 mM. Kemudian, sampel diinkubasi pada suhu 37ºC selama 30 menit untuk selanjutnya diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum. BHT digunakan sebagai kontrol positif pada penelitian ini.
Kapasitas antioksidan ditentukan menggunakan nilai EC 50 ( Efficient Concentration ). Nilai ini menyatakan besarnya konsentrasi  larutan sampel  yang  dibutuhkan  untuk  mereduksi  radikal  bebas  DPPH  sebesar  50%.  Nilai  EC 50 diperoleh dengan menghubungkan antara konsentrasi sampel dan aktivitas antioksidan menggunakan program GraphPad Prism 6 [9, 15, 16].

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Identifikasi Sampel
Hasil identifikasi sampel menunjukkan bahwa sampel termasuk dalam golongan keluarga Rhyzoporaceae dengan spesies Rhyzophora stylosa Griff dan nama lokal bakau merah.

## 3.2. Uji Kadar Air
Kadar air bakau merah pada akar dan daun basah berturut-turut sebesar 33,81 dan 45,87%, sedangkan kadar air pada akar dan daun kering berturut-turut sebesar 9,45% dan 4,27%. Nurmillah [17] mengungkapkan kadar air maksimum untuk memenuhi syarat maserasi yaitu <10%. Sampel akar memiliki kadar air yang tinggi karena pada habitat tumbuhnya akar terendam oleh air laut sehingga banyak menyerap air daripada daun yang tumbuhnya di atas permukaan air laut.

## 3.3. Ekstraksi Maserasi
Ekstrak metanol pada akar dan daun memiliki rendemen yang paling tinggi dibandingkan ekstrak n-heksana dan etil asetat ( Tabel  1 ). Hal ini terjadi karena senyawa metabolit sekunder berada dalam bentuk ikatan glikosida yang terikat pada gugus gula sehingga cenderung untuk bersifat polar dan lebih mudah terekstrak dalam pelarut yang bersifat polar pula.

## 3.4. Uji Fitokimia Bakau Merah
Berdasarkan  uji  fitokimia  pada  bakau  merah  diketahui  bahwa  ekstrak  n-heksana  daun  mengandung  senyawa steroid/terpenoid,  sedangkan  ekstrak  n-heksana  akar  tidak  dilakukan  pengujian.  Ekstrak  etil  asetat  baik  pada  akar maupun  daun  masing-masing  mengandung  senyawa  flavonoid  dan  steroid/terpenoid.  Selain  flavonoid  dan
Berat sampel Berat ekstrak
(2)
steroid/terpenoid,  ekstrak  etil  asetat  pada  daun  juga  mengandung  tanin.  Pada  akar,  ekstrak  metanol  mengandung flavonoid  dan  tanin,  sedangkan  pada  daun  ekstrak  metanol  mengandung  semua  metabolit  sekunder  yang  meliputi alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, dan steroid/terpenoid.
Tabel 1 . Rendemen Ekstrak Akar dan Daun Bakau Merah Ekstrak Rendemen (%) Akar Daun n-Heksana 0,52 4,53 Etil asetat 1,02 7,09 Metanol 20,45 18,60 Perbandingan antara sampel dan pelarut untuk sampel akar adalah 1:10, sedangkan untuk sampel daun adalah 1:5.

## 3.5. Uji Aktivitas Antioksidan
Pengujian kemampuan antioksidan ekstrak ditunjukkan dengan nilai EC 50 . Semakin kecil nilai EC 50 maka semakin besar ekstrak bakau merah sebagai antioksidan. Gambar  1 menunjukkan bahwa ekstrak metanol pada akar dan daun menghasilkan EC 50 masing-masing sebesar 2,55 dan 5,01 ppm. Nilai EC 50 ekstrak etil asetat akar dan ekstrak n-heksana daun berturut-turut adalah 8,51 dan 33,14 ppm.
Gambar  1. Aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak  bakau  merah  dan  BHT  yang  ditunjukkan  dengan  nilai  EC 50 .  Panjang gelombang maksimum yang digunakan adalah 514 nm.
Berbeda dengan ekstrak yang lainnya, ekstrak etil asetat pada daun menunjukkan nilai EC 50 yang cukup tinggi yaitu 89,94 ppm.  Pengujian  kapasitas  antioksidan  tidak  dilakukan pada  ekstrak  n-heksana  akar  karena  jumlah  ekstrak  yang diperoleh  sedikit.  Blois  [18]  menyebutkan  suatu  ekstrak  dikatakan  berpotensi  sangat  kuat  sebagai  antioksidan  apabila memiliki EC 50 kurang dari 50 ppm dan berpotensi kuat sebagai antioksidan apabila memiliki EC 50 sebesar 50-100 ppm. Berdasarkan pernyataan tersebut, empat ekstrak bakau merah (ekstrak metanol daun, metanol akar, etil asetat akar dan n-heksana daun) memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak  bakau merah  dibandingkan dengan  BHT  sebagai  kontrol  positif  bertujuan untuk  mengetahui  efektifitas  antioksidan  alami  (ekstrak  bakau  merah)  terhadap  antioksidan  sintetik  (BHT).  Ekstrak metanol pada akar dan daun memiliki nilai EC 50 yang lebih kecil dibandingkan dengan BHT. Ekstrak bakau merah baik akar maupun daun dapat digunakan sebagai antioksidan alternatif dari bahan alam.

## 4. Kesimpulan
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanol  dan  etil  asetat  akar  bakau  merah  ( Rhyzophora  stylosa )  dengan  nilai  EC 50 berturut-turut  sebesar  2,55  dan  8,51  ppm,  sedangkan  ekstrak  metanol,  etil-asetat,  dan  n-heksana  daun  berturut-turut sebesar  5,01;  89,94  dan  33,14  ppm.  Berdasarkan  nilai  EC 50 yang  diperoleh,  ekstrak  bakau  merah  berpotensi  kuat sebagai antioksidan alami.

## Daftar Pustaka
[1] Y.  R.  Noor,  M.  Khazali,  &  I.  N.  N.  Suryadiputra, Panduan  Pengenalan  Mangrove  di  Indonesia .  Bogor:  Wetlands International Indonesia Programme, 1999.
[2] D.  G.  Bengen, Pedoman Teknis  Pengenalan dan  Pengelolaan Ekosistem  Mangrove Cetakan ke-2 . Bogor:  Pusat Kajian Sumberdaya Pesisir dan Lautan, Institut Pertanian Bogor, 2000.
[3] W.  M.  Bandaranayake,  “Bioactivities,  Bioactive  Compounds  and  Chemical  Constituents  of  Mangrove  Plants,” Wetlands Ecology and Management , vol. 10, pp. 421–452, 2002.
[4] V. Vadlapudi, & K. C. Naidu, “Evaluation of Antioxidant Potential of Selected Mangrove Plants,” Journal of Pharmacy Research , vol. 2, no. 11, pp. 1742-1745, 2009.
[5] R.  A.  Priyanto,  “Aktivitas  Antioksidan  dan  Komponen  Bioaktif  pada  Buah Bakau ( Rhizophora  mucronata Lamk.),” Skripsi, Institut Pertanian Bogor, Bogor, 2012.
[6] R.  H.  Hutabarat,  “Aktivitas  Antihiperglikemik  dan  Antioksidan  Buah  Bakau  Merah  ( Rhizophora  stylosa Griff.),” Skripsi, Institut Pertanian Bogor, Bogor, 2014.
[7] M. Basyuni, S. Baba, Y. Kinjo, & H. Oku, “Salinity Increases the Triterpenoid Content of a Salt Secretor and a Non Secretor Mangrove, Aquatic Botany , vol. 97, no. 1, pp. 17-23, 2012.
[8] S. D. Hardiningtyas, S. Purwaningsih, & E. Handaryani, “Aktivitas Antioksidan dan Efek Hepatoprotektif Daun Bakau Api-Api Putih,” Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , vol. 17, no. 1, 2014.
[9] P.  Molyneux,  “The  Use  of  the  Stable  Free  Radical  Diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for  Estimating  Antioxidant Activity,” Songklanakarin Journal of Science and Technology , vol. 26, no. 2, pp. 211-219, 2003.
[10] D. Rohdiana, “Aktivitas Daya Tangkap Radikal Polifenol dalam Daun Teh”, Majalah Jurnal Indonesia , vol. 12, pp. 53-58, 2001 .
[11] L.  E.  Garcia-Amezquita,  J.  Welti-Chanes,  F.  T.  Vergara-Balderas,  &  D.  Bermúdez-Aguirre,  “Freeze-Drying:  The Basic Process,” Encyclopedia of Food and Health , pp. 104-109, 2016.
[12] AOAC, Official Methods of Analysis . Washington: Association of Official Analytical Chemists, 1995.
[13] J. B. Harbone, Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan . Bandung: Penerbit ITB, 1987.
[14] D. Rahayu & S. D. Hastuti, “Stabilitas Saponin Sebagai Antioksidan Alami Hasil Isolasi Gel Daun Aloe barbadensis Miller pada Variasi Suhu dan Lama Simpan,” Jurnal Farmasi , vol. 1, no. 1, pp. 1-15, 2009.
[15] S. K. Bariyyah, “Uji Aktivitas Antioksidan terhadap DPPH dan Identifikasi Golongan Senyawa Aktif Ekstrak Kasar Mikroalga Chlorella sp.  Hasil  Kultivasi  dalam  Medium  Ekstrak  Tauge,”  Skripsi,  Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2013.
[16] Ernawati,  “Identifikasi  Awal  dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Teripang  Pasir  ( Holothuira  scabra )  Pesisir Pamekasan dengan Metode DPPH,” Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2013.
[17] O. Y. Nurmillah, “Kajian Aktivitas Antioksidan dan Antimikroba Ekstrak Biji, Kulit Buah, Batang dan Daun Tanaman Jarak Pagar ( Jatropha curcas L.),” Skripsi, Institut Pertanian Bogor, Bogor, 2009.
[18] S. M. Blois, “Antioxidant Determination by the Use of Stable Free Radicals,” Nature , vol. 181, pp. 1199-2000, 1958.