## Pemberian Ekstrak Air Panas Spirulina platensis
melalui Perendaman Terhadap Total leukosit, Indeks fagositosis dan konsentrasi TNF-α Osphronemous gouramy
Myrna Budi Resmawati * 1 , Woro Hastuti Satyantini 2 , Hari Suprapto 3 1,2 Universitas Airlangga; Mulyorejo, telp/fax of institution/affiliation
3 Prodi S2 Bioteknologi Perikanan dan kelautan, Pascasarjana Unair, Surabaya. e-mail: * 1 myrnabudi@ymail.com

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh  imunostimulan ekstrak air panas Spirulina (Spirulina platensis)  pada ikan gurame Osphronemous gouramy. Pada penelitian ini ekstrak air panas Spirulina  diuji  apakah  dapat  meningkatkan  mekanisme  non-  spesifik  melalui  parameter total  leukosit,  indeks  fagositosis  dan  konsentrasi  TNF-α  pada  hari  ke  3,  5,  7dan  14  setelah perendaman ekstrak  air  panas Spirulina    dengan  dosis  15  ppm,  30  ppm,  60  ppm  dan  tanpa imunostimulan (kontrol) selama 3 jam. Hasil penelitian menunjukkan ekstrak air panas Spirulina dapat  meningkatkan  total  leukosit  dan  indeks  fagositosis  pada  darah  dan  konsentrasi  TNF-α pada  serum  darah.  Data  dianalisis  menggunakan Analisis  Varian  dilanjutkan  dengan  Duncan. Pada hasil menunjukkan  ekstrak air panas Spirulina  dapat meningkatkan total leukosit, indeks dan  konsentrasi  TNF-α (P<0.05).  Ekstrak  air  panas Spirulina  dengan  dosis  30  ppm  dapat meningkatkan total leukosit dan indeks fagositosis pada hari keempat belas dan konsentrasi TNF- α  pada  hari  ke  tujuh  dbandingkan  kontrol. Ekstrak  air  panas Spirulina  dapat  memberikan pengaruh pada imun non-spesifik ikan gurame.
Kata kunci: Osphronemus gouramy, ekstrak air panas, Spirulina platensis

## ABSTRACT
Immunostimulant effects of the Hot Water Extract Spirulina (Spirulina platensis) were studied in Osphronemous gouramy . For this purpose, fish were immersion in Hot Water Extract Spirulina and the parameters of non-specific defence mechanisms, including WBC, index phagocytosis and TNF-α  concentration  were  performed  at  3,  5,  7  and  14  days  after  Hot  Water  Extract  Spirulina administration. The  treatment  was  bathing  of  hot  water  extract  of  S.  platensis  with  doses  of  15 ppm, 30 ppm, 60 ppm and without immunostimulant (control) in 3 hours The results showed that Hot  Water  Extract  Spirulina  enhanced  responses  of WBC  and  index  phagocytosis  in  blood  and TNF-α  concentration  in  blood  serum. Data  were  analyzed  by  Analysis  of  Variance  followed  by Duncan’s Multiple  Range  Test  (DMRT).  The  results  showed  that Hot  Water  Extract  Spirulina could  increase WBC,  index  phagocytosis  and  TNF-α  concentration (P<0.05)  of  gouramy  fish. The addition of hot water extract of S. platensis at 30 ppm gave WBC an index phagocytosis on days 14 and TNF-α concentration on days 7 higher than control. Hot Water Extract Spirulina has immunostimulatory effects on the innate immune system of gouramy fish .
Keywords:  Osphronemus gouramy, hot water extract, Spirulina platensis

## 1. PENDAHULUAN
Gurame  merupakan  salah  satu  ikan konsumsi  air  tawar  yang  populer  dan  banyak dibudidayakan  di  Indonesia.  Ikan  gurame berasal  dari  genus Osphronemus .  Salah  satu penyakit yang banyak  menyebabkan kematian ikan  gurame  adalah Motile  Aeromonas septisemia (MAS)  yang  disebabkan  oleh bakteri Aeromonashydrophila .  Kematiannya dapat mencapai waktu singkat yaitu 80-100 % dalam  1-2  minggu  (Kamiso  dan  Triyanto, 1993). Pengendalian penyakit yang disebabkan oleh A.hydrophila biasanya dilakukan dengan pemberian antibiotika seperti  chloramphenicol,  terramicyn  atau oxytetracyclin  dengan  dosis  sebanyak  5-7 gram/kg pakan namun penggunaan antibiotika saat  ini  dilarang  sebab  dapat  menimbulkan resistensi bakteri A.hydrophila terhadap antibiotik tertentu.
Salah  satu  solusi  untuk  menghindari dampak  negatif  dari  penggunaan  antibiotik adalah  dengan  penggunaan  immunostimulan. Immunostimulan  merupakan  senyawa  kimia, obat atau bahan lain yang mampu meningkatkan  mekanisme  respons    imun spesifik  dan non spesifik  ikan  (Anderson, 1992).    Pemberian  immunostimulan  secara luas dilakukan dengan maksud untuk mengaktifkan  sistem  imun non spesifik  sel seperti  makrofag  pada  vertebrata  dan  hemosit pada  avertebrata  (Dugger and Jory,  1999). Salah satu bahan alami yang dapat dipergunakan  untuk  imunostimulan  adalah S. platensis (Simanjuntak,  2002). Spirulina platensis memiliki kandungan lipopolisakarida (LPS) (Tornabene
et al. , 1985).
Lipopolisakarida adalah komponen dinding sel S.  platensis yang  dapat  berfungsi  sebagai imunostimulan.  Masuknya  imunostimulan  ke dalam  tubuh  ikan  dapat  meningkatkan  kinerja sel  limfosit  untuk  membelah  menjasi  limfosit T  dan  B.  limfosit  T  akan  memproduksi interferon  sehingga  kemampuan  makrofag meningkat  dan  proses  memfagosit  antigen akan  meningkat.    Menurut  Boajiang  (1994), kandungan  Lipolisakarida  (LPS)  pada S. platensis dapat  memperbaiki  fungsi  imunitas seluler non spesifik  dan  fungsi  humoral
spesifik.  LPS  merupakan bagian dari dinding sel S.  platensis yang  berfungsi  pada  respon kekebalan tubuh.  LPS dapat mengiduksi Tool Like  Receptor  4 (TLR4)  yang  berada  pada permukaan  sel  sehingga  sel  leukosit  yaitu neutrofil,  monosit  dan  makrofag  dapat mengenali dan mengikat LPS dan mengaktifkan interleukin IL-1, IL-6 dan TNF- α  yang  kemudian  akan  mengaktifkan  sel-sel lain yang terlibat dalam mekanisme pertahanan inang (Gallay et al ., 1993).
Sistem  kekebalan  tubuh  ikan  terbagi  atas sistem  kekebalan  spesifik  dan  non  spesifik. Pertahanan non spesifik merupakan pertahanan  tubuh  terdepan  terhapat  serangan antigen  yang  masuk  kedalam  tubuh  ikan sehingga  dapat  memberikan  respon  langsung terhadap antigen sedangkan sistem pertahanan spesifik  membutuhkan  waktu  untuk  mengenal antigen sebelum memberikan  responnya (Baratawidjaja, 2006). Ikan memiliki beberapa tipe  leukosit  yang  terlibat  dalam  pertahanan seluler  ikan  yaitu  monosit,  neutrofil  dan limfosit.    Monosit  dan  neutrofil  berfungsi sebagai  sel  fagosit  yang  menangkap  antigen dan mempresentasikan kepada sel penyaji atau APC (Antigen  Presenting  Cell). Proses  ini disebut  sebagai  fagositosis  yang  efektif mencegah  timbulnya  infeksi.  Sel  fagosit  akan berinteraksi  dengan  komplemen  dan  sistem imun  spesifik  (Baratawidjaja,  2006).  Limfosit terdiri dari 2 tipe yaitu limfosit T dan limfosit B.    Limfosit  T  akan  memproduksi  interferon dan  meningkatkan  kemampuan  makrofag sehingga  dapat  memfagosit  antigen  yang masuk  kedalam  tubuh  ikan.  Limfosit  B  akan memproduksi  antibodi  yang  akan  bersirkulasi pada  darah.    Antibodi  yang  terbentuk  akan menempel pada antigen asing dan mengkodenya  supaya  dapat  dihancurkan  oleh sistem imun (Raa et al. , 1992).
Pada  penelitian  Tayag et  al. (2010) pemberian  ekstrak  air  panas S.  platensis terhadap Litopenaeus vannamei dapat meningkatkan Aktifitas Phenoloxidase, respiratory  burst  (RB),  aktifitas  superoxide dismutase (SOD), aktifitas glutathione peroxidise  dan  meningkatkan Survival  rate dengan uji tantang dengan Vibrio alginotycus . Pada penelitian lain yaitu penelitian Watanuki
et al. (2006) pemberian S. platensis secara oral pada  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio) dapat meningkatkan
aktivitas fagositosis, meningkatkan ekspresi
TNF-α dan menurunkan  total  bakteri A.hydrophila pada organ  ginjal  dan  liver  pada  dosis  10  mg/ikan. Berdasarkan latar belakang permasalahan yang telah dipaparkan di atas, maka perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui pengaruh penambahan  ekstrak S.  platensis terhadap respon  imun  ikan  gurame  dengan  beberapa parameter  yang  mempengaruhi  sistem  imun yaitu  total  leukosit,  indeks  fagositosis  dan konsentrasi TNF-α.

## 2. METODE PENELITIAN

## 2.1 Persiapan air dan wadah
Air  diisikan  pada  bak  tandon  air kemudian  disterilkan  menggunakan  larutan klorin  20  ppm  diaerasi  selama  24  jam kemudian ditambah Natrium thiosulfat 10 ppm hingga  bau  klorin  hilang.  Akuarium  sebanyak 12  buah  dengan  ukuran  30x40x30  cm  yang dilengkapi  dengan  aerator,  selang  dan  batu aerasi.  Sebelum  digunakan  akuarium  tersebut disuci hamakan dengan larutan chlorin selama 24  jam,  kemudian  diisi  air  steril  dengan ketinggian  air  25  cm,  dan  diaerasi  selama  24 jam.

## 2.2 Adaptasi Ikan Uji
Ikan  gurame  ukuran  7,5-8,5  cm  yang berasal  dari  kelompok  tani  Tulungagung terlebih  dahulu  diadaptasikan  selama  14  hari, kemudian  ikan  di  ambil  secara  acak  dan dimasukkan  ke  dalam  wadah  penelitian (akuarium),  setiap  akuarium  di  isi  12  ekor ikan. Selama  adaptasi  ikan  diberi  pakan  yang sama dengan tempat pemeliharaan sebelumnya yaitu  kangkung  yang  dicuci  bersih  dan  pakan komersil dengan kadar protein. Pakan diberikan  dengan  frekuensi  pemberian  2  kali sehari (pagi dan sore).
2.3 Pembuatan ekstrak S. platensis Tepung S.  platensis diperoleh  dari Balai  Besar  Perikanan  Budidaya  Air  Payau (BBPBAP) Jepara. Metode ekstraksi menggunakan  air  panas S.  platensis adalah disusun  berdasarkan  metode  yang  dijelaskan
Tayag et  al., 2010.  Pembuatan  ekstrak  20  gr tepung S. platensis ditambahkan ke 100 ml air deionisasi,  didihkan  dan  diaduk  selama  1  jam dengan  suhu  90 o C.  Kemudian  disentrifuge pada  suhu  4 o C  dengan  kecepatan  2500  rpm selama  15  menit  untuk  memisahkan  endapan dan  supernatan,  supernatan  diambil  dan disimpan  pada  botol  kaca.  Hasil  supernatan dikeringkan  dengan  proses freeze  drying dan didapatkan bobot kering sejumlah 3,382 gr.
2.4  Perendaman  ikan  gurame  dengan ekstrak air panas S. platensis
Ikan yang digunakan dalam penelitian ini adalah ikan Gurame dengan ukuran 7,5-8,5 cm  yang  dipelihara  dalam  akuarium.  Masing- masing  akuarium  diisi  dengan  12  ekor  ikan. Ikan  diadaptasikan  pada  akuarium  dan  diberi pakan  selama  14  hari.  Pada  hari  ke  15 dilakukan perendaman dalam ekstrak dengan 3 perlakuan dosis yaitu 15 ppm, 30 ppm, 60 ppm dan air steril selama 3 jam.

## 2.5 Pengambilan Darah Ikan
Pada  hari  3,  5,  7  dan  14  setelah perendaman,  ikan  diambil  darahnya.  Masing- masing  akuarium  diambil  darah  dari  dua  ekor ikan.  Sebelum  sampling  darah  ikan  dibius dengan menggunakan minyak cengkeh dengan dosis  1  ml/  8  liter  air  (Hastuti,  2007 ). Ikan dimasukkan  dalam  larutan  minyak  cengkeh sampai  pingsan.  Pengambilan  darah  melalui vena kaudal yang berada di pangkal ekor ikan menggunakan spuit ukuran 1 ml. Sebelumnya, jarum  suntik  dan  tabung  ependorf  dibilas dengan  larutan  EDTA  10%  untuk  mencegah pembekuan  darah.  Darah  disimpan  dalam mikrotube  ukuran  1‚5  ml.  Sample  diambil untuk pengujian total leukosit, indeks fagositosis dan glukosa darah.
Pengambilan darah untuk uji aglutinasi  dan  konsentrasi  TNF-α  dilakukan tanpa  antikoagulan  untuk  dipanen  serumnya. Sample  darah  dibiarkan  pada  suhu  ruang hingga  terpisah  antara  serum  dan  sel  darah merah  kemudian  disimpan  24  jam  pada  suhu 5 o C  kemudian  disentifuge  dengan  kecepatan 5000  rpm  selama  5  menit,  kemudian  serum dipanen dan disimpan pada suhu -20 o C hingga akan  digunakan  untuk  analisa  (Misra et  al.,
2006).  Selanjutnya  ikan  yang  telah  diambil
darahnya  dikembalikan  kedalam  wadah  yang berisi  air  bersih  dengan  aerasi  hingga  ikan pulih kesadarannya.
2.6 Parameter uji 2.6.1 Total Leukosit
Penghitungan  jumlah  leukosit  yaitu darah  dihisap  dengan  pipet  yang  berisi  bulir pengaduk  warna  putih  sampai  skala  0,5 kemudian ditambahkan dengan larutan Turk’s sampai  skala  11.  Darah  dalam  pipet  diaduk dengan cara menggoyangkan pipet membentuk  angka  delapan  selama  3-5  menit hingga  tercampur  dengan  cata.  Dua  tetes pertama  larutan  darah  dibuang  dan  tetes selanjutnya  di  teteskan  pada  haemocytometer yang  telah  diletakkan  cover  glass  diatasnya. Jumlah leukosit dihitung dengan cara mengkonversikan  dengan  jumlah  sel  total kotak  besar  dan  volume  kotak  sehingga didapat  jumlah  sel  darah  putih  per  mm 3 (Blaxhall dan Daisley, 1973)

## 2.6.2 Indeks Fagositosis
Penghitungan  nilai  indeks  fagositosis dilakukan  menurut  Anderson and Siwicki (1993).  Sebanyak  50μl  darah  dimasukkan  ke dalam  mikrotiter plate ,  ditambahkan  50μl suspensi Aeromonas dalam  PBS  (10 8 sel/ml). Campuran  darah  dan  bakteri  dihomogenkan dan  diinkubasi  dalam  suhu  ruang  selama  20 menit.  Sebanyak  5  μl  campuran  darah  dan bakteri  diambil  untuk  dibuat  sediaan  ulas darah. Pembuatan preparat ulas darah dilakukan menurut Svobodova and Vyukusova (1991).  Preparat  ulas  darah  yang  telah  dibuat selanjutnya  diamati  dengan  menggunakan mikroskop perbesaran
1000x. Indeks fagositosis dihitung berdasarkan jumlah bakteri  yang  difagosit  dibagi  100  sel  fagosit yang terfagosit (Misra et al., 2006).
2.6.3 Konsentrasi TNF-α Penentuan  konsentrasi  TNF-α  dengan metode  ELISA  diawali  dengan  pembuatan larutan standart TNF-α  yang terdapat pada kit ELISA.  Konsentrasi  standar  TNF-α  yang dibuat adalah 240 ng/L, 120 ng/L, 60 ng/L, 30 ng/L,  15  ng/L,  7,5  ng/L  pada  tabung  reaksi dibuat sebanyak 2 ulangan, larutan yang telah siap  disimpan  untuk  proses  selanjutnya.  Pada lubang  larutan  standar  masukkan  masing- masing  50µl  standar  dan  50µl  streptavidin
HRP.  Pada  masing-masing  lubang  sampel masukkan  40  µl  sampel  dan  10µl  antibodi TNF-α.  Tutup  mikroplate  dengan  plate membran kemudian goyang hingga tercampur. Inkubasi  pada  37 o C  seama  60  menit.  Siapkan larutan  pencuci  dan  diencerkan  menggunakan aquabides sebanyak 30x. Cuci masing-masing lubang  dengan  larutan  pencuci.  Keringkan selama  30  detik  kemuadian  ulangi  prosedur pencucian  hingga  lima  kali.  Tambahkan  50µl larutan  chromogen  A  pada  masing-masing lubang  dan  diikuti  penambahan  larutan chromogen  B  sebanyak  50µl.  Goyang  hingga homogen. Inkubasi selama 10 menit pada suhu 37 o C.  Tambahkan  larutan  stop  sebanyak  50µl pada masing-masing lubang hingga warna biru berubah  menjadi  warna  kuning.  Absorbansi diukur  pada  panjang  gelombang  450nm. Konsentrasi  TNF-α  dapat  diukur  dengan bantuan  persamaan  regresi  linier  pada  kurva standar.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ikan  gurame  yang  diberi  immunostimulan ekstrak air panas S. platensis yang mengandung polisakarida
mampu menstimulasi  sistem  imun  non  spesifik  ikan gurame  melalui  peningkatan  jumlah  leukosit. H al  ini  dapat  dilihat  pada  perlakun  B  hari  ke lima  terjadi  peningkatan  sampai  hari  ke  14 yaitu 142,333x10 5 sel/mm 3 pada hari  ke  lima dan  meningkat 409,292x10 5 sel/mm 3 pada hari  keempat  belas.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian Selvaraj et  al., (2007) Pemberian lipopolisakarida  sebagai  imunostimulan  pada C.  carpio dapat  meningkatkan  respon  imun nonspesifik  yaitu  dapat  meningkatkan  total leukosit  pada  hari  ke  tiga  sampai  hari  kelima selama penelitian.
Gambar 1. Grafik rata-rata total leukosit selama penelitian
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Peningkatan  total  leukosit  pada  ikan menunjukkan  bahwa  sistem  pertahanan  tubuh ikan  meningkat,  karena  dengan  meningkatnya jumlah  total  leukosit  akan  memberikan perlindungan  ikan  bila  ada  serangan  infeksi patogen. Perubahan jumlah total leukosit dapat dijadikan  indikator  adanya  infeksi  tertentu pada  ikan,  produksi  leukosit  akan  meningkat akibat  respon  adanya  inflamasi  dan  infeksi. Aktivitas fagositik yang dilakukan oleh sel-sel leukosit akan meningkat pada awal infeksi dan mengalami  penurunan  pada  infeksi  kronis (Anderson et  al., 1995).  Sistem  leukosit  dan sel-sel  jaringan  dari  leukosit  bekerja  dengan dua  cara  untuk  mencegah  penyakit  yaitu dengan cara merusak melalui proses fagositosis dan membentuk antibodi. Peningkatan jumlah sel darah putih merupakan  respon  dalam  bentuk  proteksi terhadap  adanya  sel  asing  termasuk  adanya infeksi  bakteri  yang  masuk  ke  tubuh  ikan. Hasil  produksi  leukosit  akan  diarahkan menuju  daerah  terinfeksi  sebagai  pertahanan ikan.  Naiknya  jumlah  leukosit  merupakan indikator  adanya  infeksi  yang  mengakibatkan terjadinya  inflamasi  (Harikrishnan et  al ., 2010).
Hasil  penghitungan  indeks  fagositosis pada  penelitian  ini  menunjukkan  peningkatan setiap hari. Pada penelitian ini perlakuan B (30 ppm)  dapat  meningkatkan  indeks  fagositosis pada  hari  ke  tiga    yaitu  sebesar  32%  dan meningkat  pada  hari  keempat  belas    yaitu 68,667%.
Gambar 2. Grafik rata-rata indeks fagositosis selama penelitian
Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Watanuki et  al., (2006)  yang  memberikan S. platensis secara  oral  dapat  meningkatkan aktivitas  fagositosis  pada  ikan C.  carpio pada
dosis  10  mg/ikan.  Pada  penelitian  Setyowati (2003) pemberian S.  platensis sebagai imunostimulant  yang  diberikan  melalui  pakan dapat  meningkatkan  indeks  fagositosis  ikan Gurame  dengan  dosis  4%  dibandingkan dengan kontrol LPS Vibrio harveyi 0,06 %. Pola  peningkatan  prosentase  indeks fagositik ini merupakan fungsi dari peningkatan  total  leukosit  maupun  presentasi jenis  leukosit  masing-masing  pada  limfosit, monosit  dan  neutrofil  (Amrullah,  2005). Aktivitas  fagositosis  menunjukkan  jumlah total  dari  sel  fagosit  yang  aktif  dibandingkan dengan  jumlah  sel  fagosit  yang  teramati. Proses  fagositosis  menurut  Spector  (1993) terjadi  apabila  terjadi  kontak  antara  partikel dengan  permukaan  sel  fagosit.  Proses  fagosit sendiri  dapat  terjadi  apabila  sel-sel  fagosit berada dalam jarak dekat dengan antigen, atau antigen tersebut harus melekat pada permukaan sel fagosit (Neumann et al., 2001). Sel makrofag dan netrofil juga masih memiliki kemampuan  untuk  melakukan  mekanisme pertahanan non-spesifik melalui proses chemotaksis  dan  pinocytosis.  Sementara  itu Baratawijaya  (1991)  menyebutkan  bahwa penghancuran  kuman  oleh  fagositosis  terjadi dalam  beberapa  tingkat  yaitu  kemotaksis dimana sel sel fagositosis mendekati mikroorganisme, kemudian menangkap,
memakan (fagositosis), membunuh dan mencerna.
Pada  penelitian  ini  konsentrasi  B dengan dosis 30 ppm yang diambil sampelnya pada  hari  ke  tujuh  dapat  meningkatkan konsentrasi  TNF-α  terbaik  yaitu  sebesar 38,851ng/L  hal  ini  sesuai  dengan  penyataan Savan and Sakai  (2004).  Lipopolisakarida (LPS)  dapat  menstimulasi  ekspresi  dari  TNF- α  pada  kepala  ginjal  ikan  carp.  TNF-α merupakan  mediator  utama  pada  respons terhadap  bakteri  gram  negatif  dan  berperan dalam respon imun bawaan. TNF-α diproduksi oleh makrofag, pembentukannya terjadi akibat rangsangan dari bakteri, virus atau sitokin lain misalnya  IL-1,  IL-2  dan  IFN-γ.  TNF-α memiliki  beberapa  fungsi  dalam  sebagai berikut:  mengatur  aktivasi  makrofag  dan respon imun jaringan yaitu dengan merangsang sitokin lain dan berfungsi sebagai regulator  dari  hematopoetik  serta  komitogen
JBP Vol. 18, No. 3, Desember 2016— Myrna Budi Resmawati
untuk  sel  T  dan  sel  B  serta  aktivasi  sel neutrofil  dan  makrofag  (Roitt et  al., 2001). LPS  merupakan  rangsangan  poten  untuk mensekresi  TNF-α.  IFN-γ  yang  diproduksi oleh  sel  T  dan  sel  NK  juga  merangsang makrofag  antara  lain  meningkatkan  sintesis TNF-α. (Pool et al ., 1997).
Gambar 3. Grafik rata-rata konsentrasi TNF- α selama penelitian
Pada  hasil  penelitian  terlihat  bahwa perlakuan  A  dan  B  (pemberian  ekstrak  air panas  15  ppm  dan  30  ppm)  lebih  tinggi dibandingkan dengan perlakuan C (pemberian ekstrak  air  panas  60  ppm).  Ini  menunjukkan bahwa  pemberian  ekstrak  air  panas S. platensis pada  dosis  yang  lebih  tinggi mengakibatkan  terjadinya  penurunan  fungsi sistem  imun  ikan  ( immunosupresi atau    efek balik  negatif)  Pemberian  ekstrak  air  panas S. platensis yang  mengandung  lipopolisakarida pada  penelitian  ini  dapat  meningkatkan  total leukosit,  indeks  fagositosis  dan  TNF-α.  Total leukosit,  indeks  fagositosis  dan  TNF-α  pada ikan  gurame  dapat  memberikan  peningkatan respons  imun  dan  peningkatan  perlindungan terhadap  serangan  infeksi  patogen.    Hal tersebut  sejalan  dengan  hasil  penelitian Selvaraj et  al. (2005)  yang  memberikan Lipopolisakarida  secara  injeksi  sebanyak  100 µg/ml pada C.
Carpio yang dapat menstimulasi penngkatan total leukosit, diferensial leukosit, peningkatan ekspresi IL-β dan  resistensi  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio ) terhadap infeksi A. hydrophilla.
Kondisi  kualitas  air  selama  penelitian masih  mendukung  kelangsungan  hidup  ikan gurame.  Faktor  lingkungan  yang  mendukung kelangsungan  hidup  ikan  gurame  antara  lain suhu air, pH, amoniak dan kandungan oksigen
telarut.  Suhu  air  selama  penelitian  dalam rentang  29-30 o C.  pH  air  selama  penelitian berkisar  antara  7,5-8.  Oksigen  terlarut  selama penelitian  rentang  6-8.  Kandungan  ammonia terlarut sebesar 0,5-0,52 mg/l. SNI menyatakan  ikan  gurame  dapat  hidup  dalam rentang  suhu  sekitar  27-30 o C,  pH  sekitar  7,5- 8,5 dan kandungan oksigen terlarut >3-7.

## 4. KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  air  panas S.  platensis mampu  meningkatkan  total  leukosit  ikan gurame  dengan  dosis  terbaik  yaitu  30  ppm yaitu  sebesar  409,292  x  10 5 sel/mm 3 ,  indeks fagositosis  ikan  gurame  dengan  dosis  terbaik yaitu  30  ppm  yaitu  sebesar  68%  dan meningkatkan konsentrasi TNF-α ikan gurame dengan  dosis  terbaik  yaitu  30  ppm  yaitu sebesar 38,851 ng/L pada hari ke empat belas

## 5. SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan mengenai  kemampuan  ekstrak  air  panas S. platensis dalam  meningkatkan  ketahanan tubuh ikan  gurame  terhadap  seranganpenyakit yaitu dengan melakukan uji tantang menggunakan  bakteri,  virus  maupun  patogen lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  D.P.  dan  Swicki  A.K.  1992. Injection  or  Immersion  Delivery  of Selected  Immunostimulant  to  Trout Demonstrate  Enhancement  of  Non Specific  Devence  Mechabism  and Protective  Immunity  in  Discus  in Asian  Aquaculture  II.  Sharif,  M.J. Fish Health Section Asian Sociaty , p. 413- 426
Anderson, D.P. and A. K. Siwicki. 1993. Basic Hematology  and  Serology  for  Fish Health  Program. Paper  Presented in Second  Symposium  on  Diseases  in Asian  Aquaculture  “Aquatic  Animal Health  and  The  Environment” Phuket Thailand . 25-29 Oct 1993. 17 p.
Baratawidjaja,  K.  G.  2006. Imunologi  Dasar Edisi  Ke  Tujuh .  Jakarta:  Balai Penerbit FKUI.
Blaxhall  PC,  Daisley  KW.  1973.  Routine haematological methods for use with fish blood. J. Fish Biology 5:577-581 Boajiang,  G.  1994.  Study  on  Effect  and
Mechanism  of  Polysaccharida  of Spirulina platensis on Body Immune Function  Improvement. Book  of Abstracts.  Second  Asia  Pacific Conference  on  Algal  Biotechnology . p. 24.
Dugger,  D.M.,  Jory,  D.E.  Bio-modulation  of the  nonspecific  immune  response  in marine  shrimp  with  betaglucan. Aquaculture  Magazine ,  v.  1,  p.  81- 89, 1999.
Gallay,  P.,  Heumann,  D.,  Roy,  D.L.,  Barras,
C. and Glauser,M.P.. 1993. Lipopolysaccharide-binding  protein as a major plasma protein responsible  for  endotoxemic  shock.
Proceedings of the National Academy  of  Sciences  (USA) 90: 9935-9938. Harikrishnan,  R.,  Balasundaramb,  C.,  Heo,
M.S.  2010.  Effect  of  probiotics enriched diet on Paralichthys olivaceus infected with lymphocystis disease  virus  (LCDV). Fish  &
Shellfish Immunology . 29: 868-874.
Hastuti, S. D. 2007 . Evaluation of non-specific defence of Tilapia (Oreochromis sp.) injected with LPS (Lipopolysaccharides) of Aeromonas hydrophilla . Jurusan Perikanan, Fakultas  Peternakan  –  Perikanan,
Universitas Muhammadiyah Malang. Vol.14.No.1.Th.2007 Kamiso H.N dan Triyanto. 1993. Vaksinasi A.
hydrophila untuk  Menanggulangi Penyakit  MAS  pada  Lele  Dumbo. Abstrak. Simposium Perikanan Indonesia I . Jakarta.
Misra,  C.K.  2006.  Growth,  non  spesific immunity  and  disease  resistance  of Labeo  horita against A.  Hydrophila in  biofoc  systems  using  diferent carbon  sources. Fish  and  shellfish immunology vol. 20 305-319.
Neumann  H.  2001.  Control  of  glial  immune function by neurons. PubMed :
;36:191–199.
Roitt.  I,  Brostoff  J,  Male  D.  2001.  Cytokines and cytokines receptors in
Immunology  sixth  edition  Billiere Tindall, Churchill. Livingstone. Mosby WB Saunders , p.119-129. Savan,  R.,  Sakai,  M.  2004.  Presence  of multiple  isoforms  of  TNFalpha  in carp  (Cyprinus  carpio  L):  genomic and expression analysis. Fish Shellfish Immunol . 17, 87–94. Simanjuntak,  S.  B.  I.  2002. Histologi  Organ Limphoid Ikan Patin Jambal (Pangasius  djambal  Bleeker)  yang Diberi  Immunostimulan  Spirulina . Thesis. Program Pascasarjana. Institut  Pertanian  Bogor.  Bogor,  62
p.
Selvaraj.V.,  K.  Sampath  and  V.  Sekar.  2005. Administration of lipopolysaccharide increases  specific  and  non-specific immune  parameters  and  survival  in carp ( Cyprinus carpio ) infected with Aeromonas  hydrophila . Journal  fish and shellfish immunology 176-183. Setyowati,  E.K.  2003. Potensi  Spirulna platensis  sebagai  Immunostimulan pada Ikan Gurame . Thesis. Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Svobodova, Z., Vyukusova, B., 1991.
Diagnostic,  Prevention  and  Therapy of  Fish  Disease  and  Intoxication .
Research  Institute  of  Fish  Culture and Hydrobiology Vodnany Czechoslovaki. Tayag,  C.M.,  Y.C.  Lin.,  C.H.  Liou  and  J.C. Chen.  2010.  Administration  of  the hot-water extract of Spirulina platensis enhanced  the  immune response of white shrimp Litopenaeus vannamei and its resistance against Vibrio alginolyticus. Journal fish and shellfish immunology 764 - 773.
Tornabene.  T.G.,Bourne,  T.F.,  Raziuddin.S., Ben-Amotz.  A.  1985.  Lipid  and lipopolysaccharide  constituents  of cyanobacterium Spirulina  platensis (Cyanophyceae,  Nostocales). Mar. Ecol.prog. ser 22:121:125 Watanuki , , H., K. Ota., A.C. Malina., T. Kato., M.  Sakai.  2006.  Immunostimulant effects of
dietary Spirulina platensis on  carp Cyprinus  carpio. Aquacultur e 157–163