Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan

## STUDI IN VITRO: EFEK ANTIPLASMODIAL EKSTRAK ETANOL
TERIPANG KELING (Holothuria atra) TERHADAP Plasmodium falciparum (STUDY IN VITRO: ANTIPLASMODIAL EFFECT OF SEA CUCUMBER ETHANOL EXTRACT (Holothuria atra) AGAINST Plasmodium falciparum)
Rizka Indah Ramadina 1 , Prawesty Diah Utami 2 , Djatiwidodo Edi Pratiknya 3
1 Program Studi Kedokteran Fakultas Kedokteran Universitas Hang Tuah, Surabaya, Jawa Timur, Indonesia
2 Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Hang Tuah, Surabaya, Jawa Timur, Indonesia
3 Fakultas Kedokteran Universitas Hang Tuah, Surabaya, Jawa Timur, Indonesia
Email korespondensi: prawesty.diah@hangtuah.ac.id

## ABSTRAK
Malaria merupakan penyakit menular yang disebabkan oleh parasit apicomplexa darah yaitu Plasmodium  sp. khususnya Plasmodium  falciparum yang  dibawa  oleh  nyamuk Anopheles . Teripang keling ( Holothuria atra ) merupakan invertebrata yang mengandung komponen aktif seperti  saponin,  terpenoid,  flavonoid  dan  alkaloid  yang  memiliki  efektivitas  sebagai antiplasmodium.    Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menganalisis  efektivitas antiplasmodial dari ekstrak etanol teripang keling ( Holothuria atra ) terhadap perkembangan P.falciparum melalui studi in vitro.  Dalam studi in vitro penelitian ini menggunakan sampel kultur P.falciparum strain 3D7 dan ekstrak etanol H.atra . Media kultur akan terbagi menjadi 3  kelompok  yakni  kontrol  negatif,  kontrol  positif  serta  dengan  penambahan  ekstrak  etanol H.atra .  Ketiga  kelompok  tersebut  akan  diinkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  37 o C  lalu dilakukan pemeriksaan  kadar parasitemia dan inhibitory rate menggunakan mikroskop cahaya serta  pengukuran  IC 50 menggunakan  analisis  probit  melalui  program  SPSS  versi  23.  Hasil penelitian  memperlihatkan  adanya  efek  antiplasmodial  dalam  menghambat  perkembangan P.falciparum .  Semakin  besar  dosis  yang  diberikan  maka  efek  hambatannya  juga  semakin besar. Nilai IC 50 ekstrak etanol H.atra adalah 1,54 µg/ml. Penggunaan ekstrak teripang keling ( Holothuria  atra )  memiliki  efek  antiplasmodial  yang  mampu  menekan  perkembangan P.falciparum dan  nilai  IC 50 ekstrak  etanol  mempunyai  aktivitas  yang  tinggi  sebagai antiplasmodial.
Kata Kunci : antiplasmodial, Holothuria atra , in vitro, malaria, Plasmodium falciparum

## ABSTRACT
Malaria  is  an  infection  is  caused  by  the  blood  apicomplexan  parasite,  Plasmodium  sp.  in particular,  is  Plasmodium  falciparum  which  is  carried  by  the  Anopheles  mosquito.  Sea
DOI:
DOI
ARTIKEL PENELITIAN
cucumber  (Holothuria  atra)  is  an  invertebrate  that  contains  active  components  such  as saponins, terpenoids, flavonoids, and alkaloids which are good as antiplasmodial. This study to  determine  the  antiplasmodial  effect  of  the  sea  cucumber  (Holothuria  atra)  extract  with ethanol as a solvent on the development of P.falciparum through in vitro study. In this in vitro study,  culture  samples  of  P.falciparum  strain  3D7  and  H.atra  extract  were  given  ethanol solvent. The culture media will be divided into three control groups, namely negative control, positive control, and ethanol solvent H.atra extract. The three control groups will be incubated for 48 hours at 37 o C and then examined for levels of parasitemia and inhibitory rates using a light microscope and IC 50 measurements using probit analysis through the SPSS version 23 program.  This  study  showed  an  antiplasmodial  effect  in  inhibiting  the  development  of  P. falciparum. The larger the dose is given, the greater the inhibitory effect. The IC 50 value of H.atra  ethanol  extract  was  1.54  g/ml.  The  result  showed  use  black  sea  cucumber  extract (Holothuria  atra)  has  an  antiplasmodial  effect  that  can  suppress  the  development  of P.falciparum and IC 50 ethanol extract has a high antiplasmodial activity
Keywords: Antiplasmodial, Holothuria atra, In vitro, Malaria, Plasmodium falciparum

## PENDAHULUAN
Malaria  merupakan  salah  satu vector  borne  disease yang  disebabkan parasit Plasmodium  Sp. khususnya  adalah Plasmodium  falciparum dan  dibawa  oleh nyamuk Anopheles. Diketahui  terdapat  1,5 juta  kasus  dan  7,6  juta  kematian  akibat malaria  di  seluruh  dunia,  pada  akhir  tahun 2019. 1 Terdapat  lima  spesies Plasmodium sp.  yang  menginfeksi  dan  menyebabkan penyakit pada manusia meliputi P.falciparum, P.malariae, P.ovale, P.vivax, dan  spesies P.knowlesi yang  awalnya menginfeksi  monyet  berekor  panjang ternyata juga terbukti mampu menyebakan penyakit  pada  manusia.  Di  antara  kelima spesies Plasmodium sp. yang paling banyak menyebabkan  kasus  malaria  di  Indonesia adalah  malaria  tropika  yang  disebabkan P.falciparum dan  malaria  tertiana  yang disebabkan P.vivax . Malaria karena P.ovale
lebih jarang dan pernah dilaporkan kejadian infeksinya  di  wilayah  Indonesia  Timur yaitu  Papua  dan  Nusa  Tenggara  Timur. 2,3
Infeksi  yang  disebabkan P.falciparum menyebabkan komplikasi yang paling berat dan  mematikan  antara  lain  anemia  berat, malaria  serebral,  distress  pernafasan, hipoglikemi, metabolik asidosis, kerusakan organ, disfungsi makrofag spesifik, functional  hyposplenism dan  wanita  hamil yang terinfeksi malaria akan menyebabkan anemia  maternal  dan  melahirkan  bayi dengan berat bayi yang rendah. 4
WHO ( World Health Organization ) menetapkan terapi artemisinin-based combination (ACT) sebagai regimen stndar untuk infeksi malaria P.falciparum .
Namun, beberapa laporan kasus membuktikan  bahwa  terjadi  kegagalan terapi  ACT  yang  disebabkan  adanya
resistensi terhadap regimen tersebut . 5 Salah satu  biota  laut  yang  belum  banyak dieksplorasi  mengenai  khasiat  antimalaria nya  adalah Holothuria  atra (Teripang keling). H.atra merupakan invertebrata dan memiliki  kulit  yang  berduri  terdapat senyawa  aktif  seperti  flavonoid, terpenoid, saponin,  dan  alkaloid  yang  bermanfaat sebagai antimalaria. 6,7 Pelarut etanol dapat berfungsi  sebagai  bahan  pelarut  dalam proses ekstrak karena sifat etanol yang polar sehingga  dapat  melarutkan  senyawa  polar misalnya  alkaloid,  flavonoid,  tannin,  dan saponin 8
Ulasan serta fenomena yang dipaparkan  pada  paragraf  sebelumnya, menjadi  landasan  bagi  peneliti  untuk melakukan penelitian eksperimental melalui studi in vitro untuk mengetahui ada atau  tidaknya  efek  inhibisi  dari  kadar P.falciparum dengan  pemberian  ekstrak etanol teripang keling ( Holothuria atra ).

## BAHAN DAN METODE
Desain  dan  metode  studi  yang digunakan  adalah  penelitian  eksperimental melalui studi in vitro dengan ” Post test Only Kontrol  Group  Design” .    Penelitian  ini akan terbagi menjadi 3 kelompok :
1. Kelompok pertama/K1: 10 media kultur P.falciparum tanpa  pemberian  ekstrak
H.atra dan obat antimalaria
2. Kelompok  kedua/K2:  10  media  kultur P.falciparum dengan  pemberian  obat antimalaria
3. Kelompok  ketiga/K3:  10  media  kultur P.falciparum dengan pemberian ekstrak etanol H.atra
Sampel  yang  digunakan  media kultur P.falciparum yang  diperoleh  dari ITD  ( Tropical  Disease  Center) Fakultas Kedokteran  Universitas  Airlangga  serta Teripang  keling H.atra diperoleh  dari  laut pulau Madura kecamatan Sapeken kabupaten  Sumenep.  Penelitian  ini  akan dilakukan di ITD FK Universitas Airlangga untuk  kegiatan  kultur P.falciparum dan pemberian ekstrak H.atra , FKH Universitas Airlangga  untuk  kegiatan  ekstraksi H.atra dan Lab MIPA Institut Teknologi Sepuluh Nopember untuk proses uji taksonomi.
Penelitian  ini  terbagi  menjadi  3 tahap  yaitu  preparasi  dan  ekstraksi, pembiakan P.falciparum serta  pengujian aktivitas malaria in vitro dengan pengamatan pada kadar parasitemia, inhibitory rate dan IC 50 .

## Preparasi dan Ekstraksi
Penelitian dimulai dengan pengumpulan dan preparasi sampel. H.atra akan  dipotong  kecil,  dikeringkan,  dan dihaluskan  menggunakan hammer  mills . Ekstraksi dilakukan dengan teknik maserasi dengan  alat  shaker  selama  24  jam  dan disimpan  pada  wadah  kedap  udara  dan
Ramadina, RI : Studi In Vitro: Efek Antiplasmodial Ekstrak Etanol Teripang Keling..
dimasukkan  ke  pendingin.  Pelarut  yang digunakan untuk ekstraksi adalah etanol.

## Pembiakkan Plasmodium falciparum
Proses pembentukan media biakkan akan terbagi menjadi 2 yaitu media lengkap dan  tak  lengkap  yang  akan  dimanfaatkan untuk biakkan P.falciparum secara in vitro dengan  menggunakan  parasit Plasmodium falciparum dengan strain 3D7.
Pengujian  aktivitas  antimalaria  diawali dengan  preparasi  suspensi  sel  parasit dengan  kadar  kadar  parasitemianya  1  % serta hematokritnya 10%. Sebanyak 500 𝜇 l suspensi sel parasit dimasukkan kedalam 15 well yang telah diisi larutan uji.
Sampel ekstrak etanol H.atra dibuat berdasarkan  metode  Trager  and  Jensen (1976).    Konsentrasi  ekstrak H.atra bertingkat  dari  konsentrasi  tertinggi  100 𝜇 g/ml ; 10 𝜇 g/ml ; 1 𝜇 g/ml ; 0,1 𝜇 g/ml ; dan konsentrasi terendahnya 0,01 𝜇 g/ml.
Larutan  ekstrak  akan  dimasukkan  ke microwell bersamaan  dengan  suspensi parasit lalu dimasukkan ke dalam candle jar dan  dilakukan  inkubasi  hingga  48  jam dengan suhu 37 o C. 9

## Uji Aktivitas Antiplasmodim H.atra
Aktivitas antiplasmodium akan
diamati  dan  diukur  dengan  pemeriksaan kadar parasitemia, inhibitory rate serta IC 50.
1. Pemeriksaan kadar parasitemia dilakukan untuk melihat berapa banyak
total eritrosit yang terinfeksi P.falciparum pada  kurang  lebih  5000 eritrosit  yang  diperiksa.  Rumus  untuk pemeriksaan  kadar  parasitemia  sebagai berikut :
2. Kepiawaian  senyawa  yang  akan  diuji dalam menginhibisi perkembangan membandingkan  parasitemia  uji  dan kontrol  negatif.  Rumus inhibitory  rate sebagai berikut.
3. Inhibitory  concentration (IC 50 )  untuk menginhibisi sekitar 50% dari pertumbuhan  parasit  yang  memerlukan konsentrasi obat tertentu. Untuk menghitung IC 50 menggunakan analisis probability unit (probit) dengan menghubungkan  kurva  probit  persen inhibisi  dengan  logaritma  konsentrasi sampel  memakai  persamaan  garis regresi linier.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengukuran Kadar Parasitemia
% Inhibisi = 100% - Parasitemia larutan uji 𝑃𝑎𝑟𝑎𝑠𝑖𝑡𝑒𝑚𝑖𝑎 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓 𝑥 100%
% Parasitemia =
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝐸𝑟𝑖𝑡𝑟𝑜𝑠𝑖𝑡 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑡𝑒𝑟𝑖𝑛𝑓𝑒𝑘𝑠𝑖
5000 𝑥 100%

## Tabel 1 Persentase rerata parasitemia tiap kelompok
Pada kelompok 1 persentase parasitemia  pada  kelima  dosis  sama  sebab dalam  kelompok  kontrol  negatif  tidak  ada perlakuan  yang  diberikan  selain  media perkembangan bagi P.falciparum . Kelompok  2  menunjukkan  bahwa  kadar parasitemia tertinggi terjadi pada pemberian dosis  klorokuin  yang  terkecil  yaitu  0.01 𝜇 g/ml, sebaliknya angka kadar parasitemia terendah  (0)  ada  pada  pemberian  dosis klorokuin tertinggi 100 𝜇 g/ml. Kelompok 3 menunjukkan  hasil  yang  sama  dengan kelompok 2 dimana pemberian dosis makin besar  berkaitan  dengan  kadar  parasitemia yang  rendah.  Pada  tabel  diatas  juga menunjukkan  bahwa  kadar  parasitemia kelompok  2  lebih  rendah  dari  kelompok 3 pada  pemberian  dosis  yang  sama.  Namun pada pemberian dosis 100 𝜇 g/ml menunjukkan persamaan kadar parasitemia yaitu  0.  Kelompok  1  terdapat  data  yang homogen  karena  kelompok  1  tidak  diberi perlakuan  atau  sebagai  kontrol  negatif. Kelompok  2  sebagai  kelompok  kontrol positif  menunjukkan  aktivitas  antimalaria yang  sangat  tinggi  hal  ini  disebabkan sampel yang digunakan adalah parasit yang sensitif  dengan  klorokuin  ( P.falciparum
strain  3D7).  Mekanisme  dari  klorokuin yaitu  didalam  eritrosit  yang  terinfeksi terdapat asam amino dan heme bebas yang dimiliki parasit, klorokuin akan mendetoksifikasi dengan merubahnya menjadi kristal tidak larut hemozoin (Fe3+ protoforfirin)  hal  ini  dapat  terjadi  karena degradasi  hemoglobin  inang  oleh  protease parasit  untuk  kebutuhan  vital.  Klorokuin menekan  parasit  tidak  hanya  dengan berikatan  dengan  DNA/RNA,  bisa  juga dengan efek dari basa lemah klorokuin yang strukturnya  seperti  heme.  Klorokuin  basa lemah  akan  menghalangi  pembentukan hemozoin  yang  mengakibatkan  toksisitas heme dan kematian dari parasit P.falciparum. 10
Pada  penelitian  terdahulu  yang dilakukan  oleh  Moelyadi et  al (2020) penelitian  yang  dilakukan  menggunakan studi  in  sillico  menunjukkan H.atra memiliki  komponen  aktif  seperti  katekin dan  pirogalol  yang  mampu  menghambat pertumbuhan P.falciparum dengan  cara berikatan dengan protein pada P.falciparum yang  mengakibatkan  perubahan  morfologi dan perubahan fisiologi pada perkembangan  dari P.falciparum serta
Grup Dosis ( 𝝁 g/ml)) 0,01 0,1 1 10 100 K1 6,73 6,73 6,73 6,73 6,73 K2 3,67 2,79 2,09 1,46 0 K3 6,36 5,44 3,96 2,88 0
menginhibisi  pertumbuhan P.falciparum dalam  tahap  trofozoit  dan  skizont  dengan menginduksi mekanisme stress oksidatif . 11
Inhibitory Rate Tabel 2 Hasil  pengukuran inhibitory rate
Kelompok  1  data  yang  didapatkan persentase  pertumbuhannya  sama  karena sampel  tidak  mendapat  perlakuan  (kontrol negatif). Kelompok 2 pertumbuhan
P.falciparum tertinggi pada dosis ,01 𝜇 g/ml Dari  pengukuran  diatas,  hal  yang dapat  menghalangi  pertumbuhan  yang terjadi pada kelompok 2 dan 3 karena efek inhibisi  pertumbuhan P.falciparum dari aktifitas antimalaria pada komponen ekstrak etanol H.atra yang bekerja melalui berbagai  jalur  serta  mekanisme  klorokuin dalam menekan angka pertumbuhan P.falciparum .  Mekanisme  kerja  ekstrak teripang keling dalam menghambat P.falciparum belum diketahui secara pasti, namun  dalam  studi  lain  telah  dibuktikan jika masing-masing komponen yang
terkandung dalam ekstrak H.atra
mempunyai  aktivitas  antimalaria  melalui
jalur  sebagai  berikut  :  (1)  Alkaloid. Senyawa 16- demethoxycarbonylvoacamine yang  merupakan  turunan  dari  alkaloid memiliki fungsi sebagai antimalaria dengan melawan P.falciparum 3D7. 12 (2)
Flavonoid.  Menginhibisi  transport  nutrisi yang dibutuhkan parasit P.falciparum pada NPP  ( new  permeation  pathway )  serta menghambat  proses  degradasi  hemoglobin P.falciparum. 13 (3)  Saponin.  Glinoside  A menunjukkan aktivitas anti-plasmodial dengan  melawan  strain P.falciparum 3D7(sensitif  klorokuin)  dan  mampu  untuk melubangi  dinding  membran  sel  sehingga dapat  melisiskan  eritrosit. 14 (4)  Terpenoid. Limoene menyebabkan hambatan proliferasi P.falciparum . 15
Inhibitory Concentration 50/ IC 50
Grup Dosis ( 𝝁 g/ml) 0,01 0,1 1 10 K1 0 0 0 0 K2 53,68 69,12 81,40 92,46 K3 6,58 22,72 48,60 67,63

## Tabel 3 Hasil pengukuran IC 50
Berdasarkan  analisis  Probit  SPSS untuk  IC 50 konsentrasi  ekstrak  teripang yang dibutuhkan untuk menghambat pertumbuhan P.falciparum yang  diberikan ekstrak H.atra pelarut  etanol  adalah  1,54 𝜇 g/ml.  sedangkan  IC 50 klorokuin  yang
dibutuhkan untuk menghambat pertumbuhan adalah 0,04 𝜇 g/ml. Dosis 100 𝜇 g/ml  tidak  dilakukan  pengukuran  oleh karena eritrosit dapat dilakukan pengamatan  serta  penghitungan inhibitory rate .
Ketetapan  WHO  dan  kriteria  dasar dalam  kegiatan  meneliti  obat  antiparasit bahan  ekstrak  dikategorikan  menjadi  4 kelas  IC 50. Dari  keempat  kelas  tersebut terdiri dari: aktivitas tinggi (IC 50 ≤ 5 µg/ml)
; aktivitas yang menjanjikan (5 µg/ml < IC 50
≤ 15 µg/ml); aktivitas sedang (15 µg/ml < IC 50 ≤ 50 µg/ml) ; aktivitas lemah (IC 50 > 50  µg/ml).  Senyawa  murni  diartikan sebagai sangat aktif saat IC 50 ≤ 1 µg/ml 16 .
Berdasarkan kriteria tersebut ekstrak etanol H.atra mempunyai  aktivitas  antimalaria yang tinggi.
Pelarut  etanol  yang  bersifat  polar mempunyai  berbagai  kelebihan  yaitu
menghasilkan  volume  ekstrak  yang  paling banyak dibandingkan pelarut lain. 17 Etanol dapat melarutkan berbagai komponen aktif dalam  suatu  biota,  sehingga  pelarut  ini memang  secara  umum  sering  digunakan untuk pelarut ekstrak dibandingkan pelarut lainnya . Etanol  dapat  melarutkan  senyawa polar  seperti  alkaloid,  flavonoid  dan saponin  serta  senyawa  non-polar  seperti terpenoid sehingga dapat membantu kandungan kimia dari ekstrak H.atra untuk memberikan  hasil  terhadap  mekanismenya masing-masing. 18
Dari  semua  parameter  pengukuran aktivitas  antimalaria  dari  ekstrak H.atra dengan pelarut etanol membuktikan bahwa teripang  ini  memiliki  potensi  yang  besar sebagai kandidat baru terapi antimalaria.
Penelitian yang menggunakan ekstrak H.atra sebagai antimalaria secara in vitro  belum  pernah  dilakukan,  beberapa penelitian  telah  meneliti  ekstrak H.atra dapat  berperan  sebagai  anti-bakteri  serta anti-fungi, sehingga besar kemungkinannya bahwa H.atra dapat  berperan  sebagai antimalaria.  Pada  penelitian  sebelumnya yang diakukan oleh Sukmiwati et al (2020)
Grup Dosis ( 𝝁 g/ml) IC 50 ( 𝝁 g/ml) 0,01 0,1 1 10 100 K2 53,68 69,12 81,40 92,46 - 0,04 K3 6,58 22,72 48,60 67,63 - 1,54
Ramadina, RI : Studi In Vitro: Efek Antiplasmodial Ekstrak Etanol Teripang Keling..
melaporkan  bahwa  dalam  penelitiannya H.atra dapat  memberikan  aktifitas  anti- bakterial  pada Pseudomonas  aureginosa dengan  kandungan  komponen  aktif  seperti saponin yang mampu menghambat pertumbuhan  atau  membunuh  mikroba dengan  cara  bereaksi  dengan  membran sterol dari bakteri serta efek utamanya pada bakteri  adalah  melepaskan  protein  dan enzim dari sel. 19 Penelitian yang dilakukan oleh Parishni dan Revianti (2013)
menunjukkan bahwa penelitiannya
terhadap H.atra menunjukkan aktifitas anti- fungal  terhadap Candida  albicans oleh karena kandungan aktifnya seperti saponin.
Saponin  dari H.atra berinteraksi  terhadap membran sterol dan mengganggu keutuhan dari dinding sel yang akhirnya menyebabkan  kematian  sel. 20 Dari  kedua penelitian tersebut terdapat hasil yang dapat telah  lisis  sehingga  tidak  menghambat pertumbuhan  bakteri  maupun  fungi  karena kandungan aktif dari H.atra yaitu saponin.
Mekanisme  saponin  dari  kedua  penelitian tersebut sama-sama mengarah pada pembentukan  lubang  pada  permukaan  sel dan menyebabkan kematian sel.

## KESIMPULAN
Penggunaan ekstrak etanol teripang keling  ( Holothuria  atra )  memiliki  efek antiplasmodial  yang  mampu  menekan perkembangan P.falciparum .  Nilai  IC 50 ekstrak etanol mempunyai aktivitas sebagai
antiplasmodial  yang  tinggi.  Berdasarkan kesimpulan diatas dapat dilakukan eksplorasi  lebih  lanjut  mengenai  efek antiplasmodial H.atra menggunakan hewan coba  atau  secara  in  vivo  untuk  melihat efektivitas  antiplasmodialnya,  toksisitas dan  efek  samping  dari  kandungan  ekstrak teripang keling ( Holothuria atra ).

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis  menyatakan  bahwa  tidak didapatkan  adanya  konflik  kepentingan dengan  pihak  lain  dalam  menulis  karya ilmiah.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan kepada  para  profesional  yang  telah membantu  penelitian  dan  penyusunan makalah,  pemberi  dana,  bahan  dan  sarana penelitian, serta sponsor yang terkait.

## DAFTAR PUSTAKA
1. World  Health  Organization .  WHO
World  Malaria  Report  2020.  Malaria report 2020. 2020.
https://www.who.int/publications/i/ite
m/9789240015791
2.   Lewinsca  MY,  Raharjo  M.  and Nurjazuli,  N.  Faktor  Risiko  yang Mempengaruhi  Kejadian  Malaria  Di Indonesia :  Review  Literatur  2016- 2020.  Jurnal  Kesehatan  Lingkungan,
2021;11(1):16–28.
https://doi.org/10.47718/jkl.v11i1.133
9
3.   Moxon  CA,  Gibbins  MP,  McGuinness
D,  Milner  DA,  Marti  M. New  Insights Into  Malaria  Pathogenesis.  Annual Review  of  Pathology:  Mechanisms  of
Disease .
2020;15. https://doi.org/10.1146/annurev- pathmechdis-012419-032640
4.   Cowman  AF,  Healer  J,  Marapana  D, Marsh  K.  Malaria: Biology  and Disease. Cell. 2016;167(3).
https://doi.org/10.1016/j.cell.2016.07.
055
5.   Talapko J, Škrlec I, Alebić T, Jukić M, Včev  A.  Malaria: The  Past  and  The Present.  Microorganisms .  2019;7(6):
1–17.
https://doi.org/10.3390/microorganism s7060179
6.   Dhinakaran  DI,  Lipton  AP. Bioactive
Compounds  From  Holothuria  atra  of
Indian Ocean. Springer Plus . 2014;3(1):1–10.
https://doi.org/10.1186/2193-1801-3-
673
7.   Pangestuti R, Arifin Z. Medicinal and
Health  Benefit  Effects  of  Functional
Sea Cucumbers. Journal of Traditional and Complementary Medicine. 2018;8(3):341–51.
https://doi.org/10.1016/j.jtcme.2017.0 6.007
8.   Qorina F, Arsianti A, Fithrotunnisa Q,
Tejaputri  NA. Phytochemistry  and Antioxidant Activity of Soursop (Annona muricata) Leaves.
International  Journal  of  Applied Pharmaceutics. 2019;11(Special  Issue 6).
http://dx.doi.org/10.22159/ijap.2019.v 11s6.33524
9.   Utami,  PD  and  Yudho  V. High Antiplasmodial  Activity  of  Golden Gamat  (S.hermanni)  Extract  Through In  Vitro  Study.  European  Journal  of Biology and Biotechnology . 2021; 2(5):
19–23.
https://doi.org/10.24018/ejbio.2021.2.
5.260
10.  Coban C. The Host Targeting Effect of Chloroquine  in  Malaria.  Current Opinion in Immunology . 2020; 66:98– 107.
https://doi.org/10.1016/j.coi.2020.07.0 05
11.  Moelyadi  F,  Utami  PD,  Dikman  IM.
Inhibitory  Effect  of  Active  Substances of  Lollyfish  (Holothuria  atra)  Against the  Development  of  Plasmodium falciparum  Based  on  In  Silico  Study . Ilmu  Kelautan: Indonesian  Journal  of Marine  Sciences .  2020;25(4):135–42.
https://doi.org/10.14710/ik.ijms.25.4.1 35-142
12.  Uzor  PF. Alkaloids  from  Plants  with Antimalarial  Activity:  A  Review  of
Recent Studies. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine. 2020; 1–17. https://doi.org/10.1155/2020/8749083 13.  Widyawaruyanti A, Zaini NC. Mekanisme  dan  Aktivitas  Antimalaria dari Senyawa Flavonoid yang Diisolasi dari Cempedak ( Artocarpus
champeden ). Jbp. 2011;13(2):67–77. 14.  Dinda  B,  Debnath  S,  Mohanta  BC,
Harigaya  Y. Naturally  Occurring
Triterpenoid  Saponins.  Chemistry  and Biodiversity. 2010;7(10):2327–580.
https://doi.org/10.1002/cbdv.20080007 0 15.  Oluba  OM.  Ganoderma Terpenoid Extract Exhibited Anti-plasmodial
Activity  by  a  Mechanism  Involving Reduction  in  Erythrocyte  and  Hepatic Lipids in Plasmodium berghei Infected Mice.  Lipids  in  Health  and  Disease . 2019;18(1):1–9.
https://doi.org/10.1186/s12944-018-
0951-x
16.  Hidayati AR, Widyawaruyanti A, Ilmi H, Tanjung M, Widiandani T, Siswandono, et al. Antimalarial
Activity  of  Flavonoid  Compound Isolated  From  Leaves  of  Artocarpus altilis. Pharmacognosy
Journal .
2020;12(4):835–842. http://dx.doi.org/10.5530/pj.2020.12.1
17.  Sibuea  FSY.  Ekstraksi  Tanin  dari
Kluwak ( Pangium edule R .) Menggunakan  Pelarut  Etanol  dan Aquades  dan  Aplikasinya  sebagai Pewarna Makanan. 2015; 2015: 1–49.
18.  Ergina, Nuryanti S, Pursitasari ID. Uji
Kualitatif Senyawa Metabolit Sekunder  pada  Daun  Palado  yang Diekstrasi  dengan  Pelarut  Air  dan Etanol. Akademika Kimia.
2014;3(3):165–172.
19.  Sukmiwati  M,  Ilza  M,  Putri  AE, Sidauruk SW. Antibacterial Activity of
Sea  Cucumber  (Holothuria  atra) Against Pseudomonas aeruginosa . IOP
Conference Series: Earth and Environmental Science. 2020;
404(012047):1–7.
https://doi.org/10.1088/1755-
1315/404/1/012047
20.  Parisihni  K,  Revianti  S. Antifungal effect  of  Sticophus  hermanii  and Holothuria  atra  Extract  and  Its Cytotoxicity on Gingiva-Derived
Mesenchymal Stem Cell. Dental Journal (Majalah  Kedokteran  Gigi).
2013;46(4):218.
https://doi.org/10.20473/j.djmkg.v46.i 4.p218-223