Uji  Aktivitas  Krim Anti-Aging Ekstrak  Etanol  Daun  Bayam Merah  ( Amaranthus  tricolor L.)  pada  Kulit  Punggung  Kelinci

## New Zealand yang dipapar Sinar UV-A
Testing The Activity of The Anti-Aging Cream of Red Spinach Leaf Ethanol Extract (Amaranthus tricolor L.) on The Skin of The Back of The New Zealand Rabbit Exposed to UV-A Rays
Ananda Rezky Putri 1* , Suhartinah 2 , Meta Kartika Untari 3*
1,2,3 Jurusan S1 Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi, Kota Surakrta, Indonesia. * E-mail: meta.kartika@yahoo.com
Received:  17  Desember 2022 in revised form: 18 Januari 2023 Accepted: 30 Januari 2023
Available Online: 1 Februari 2023

## ABSTRACT
The  strongest  cause  of  premature  aging  is  sunlight (photoaging),  especially  UV  A  rays.  Anti-aging  creams containing  antioxidant  compounds  can  be  used  in  the treatment of aging on the skin of the face. Red spinach leaves (Amaranthus tricolor L.) are a natural source of antioxidants that  have  very  strong  potential  as  an  anti-aging.  Objectives: This study aims to determine the activity of red spinach leaf extract  cream  as  an  anti-aging  using  New  Zealand  rabbits exposed to UV-A rays. The skin of the rabbit's back is smeared with cream F1, F2, F3, F4, F5 for 30 days. Parameter observation using a skin analyzer is carried out before, after induction, and after  cream  smearing.  Parameters  include  percent  collagen, elasticity, and moisture. The results of the study were analyzed statistically  using  one  way  anova.  All  test  creams  pass  the physical quality test requirements, but the creams that pass the stability test are F1, F2, F4. The primary irritation test F1, F2, F4 is  not  irritating  whereas  F3  is  very  little  irritating.  Test  the ocular irritation of all creams is not irritating. The test results of anti-aging activity show that F2 provides the most effective anti-aging effect because the percent increase in parameters is the greatest.
Keywords :
Red spinach leaf extract; Anti-aging activity; Cream; Skin analyzer

## Corresponding Author:
Meta Kartika Untari Jurusan S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi
Kota Surakrta, Indonesia. E-mail: meta.kartika@yahoo.com
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6 th Style): Putri, AR., Suhartinah., Untari, Mk. (2023). Uji Aktivitas Krim Anti-Aging Ekstrak Etanol Daun Bayam Merah (Amaranthus  tricolor  L.)  pada  Kulit  Punggung  Kelinci  New  Zealand  yang  dipapar  Sinar  UV-A. Indonesian Journal of Pharmaceutical  (e-Journal), 3 (1), 1-15.
Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal) 2023; 3 (1): 1 – 15 ISSN : 2775- 3670 (electronic) Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/ijpe/index DOI: 10.37311/ijpe.v3i1.18809
Putri et al., 2023; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 3(1): 1-15

## ABSTRAK
Penyebab terkuat penuaan dini adalah sinar matahari ( photoaging ) terutama sinar UV A. Krim anti-aging  yang  mengandung  senyawa  antioksidan  dapat  digunakan  dalam  perawatan penuaan  pada  kulit  wajah.  Daun  bayam  merah  ( Amaranthus  tricolor L.)  merupakan  sumber antioksidan  alami  yang  memiliki  potensial  sangat  kuat  sebagai  anti-aging.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  krim  ekstrak  daun  bayam  merah  sebagai  anti-aging menggunakan  kelinci New  Zealand yang  dipapar  sinar  UV-A.  Ekstrak  daun  bayam  merah diformulasikan  menjadi  sediaan  krim  kemudian  diuji  mutu  fisik.  Aktivitas  anti-aging  diuji pada kelinci sebanyak 5 ekor. Punggung kelinci dibebaskan dari bulu, dan diinduksi sinar UV- A. Kulit punggung kelinci diolesi krim F1, F2, F3, F4, F5 selama 30 hari. Pengamatan parameter menggunakan  skin  analyzer  dilakukan  sebelum,  sesudah  induksi,  dan  setelah  pengolesan krim.  Parameter  meliputi  persen  kolagen,  elastisitas,  dan  kelembaban.  Hasil  penelitian dianalisis  statistik  menggunakan one  way  anova. Semua  krim  uji  lolos  syarat  uji  mutu  fisik, namun  krim  yang  lolos  uji  stabilitas  adalah  F1,  F2,  F4.  Uji  iritasi  primer  F1,  F2,  F4  tidak mengiritasi  sedangkan  F3  sangat  sedikit  mengiritasi.  Uji  iritasi  okuler  semua  krim  tidak mengiritasi.  Hasil  pengujian  aktivitas  anti-aging  menunjukkan  bahwa  F2  memberikan  efek anti-aging paling efektif karena peningkatan persen parameter paling besar.
Kata Kunci: Ekstrak daun bayam merah; Aktivitas anti-aging; Krim; Skin analyzer .

## 1. Pendahuluan
Penuaan  adalah  proses  kompleks  yang  ditandai  dengan  penurunan  progresif dalam fungsi fisiologi, diikuti oleh disfungsi, dan akhirnya kematian [1]. Penuaan dapat dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor,  seperti  genetik  (intrinsik)  dan  penuaan  akibat pengaruh lingkungan (ekstrinsik). Faktor ekstrinsik yang terkuat adalah sinar matahari (photoaging) terutama sinar UV-A. Sinar UV-A dapat memicu timbulnya kerutan 10 kali lebih kuat dari UV-B [2].
Sinar  UV-A  mampu  menembus  jauh  ke  dalam  dermis  menyebabkan peningkatan  senyawa  ROS  (Reactive  Oxygen  Species).  Senyawa  ini  dapat  merusak kolagen  dan  elastin  yang  dapat  menyebabkan  kulit  mengendur  sehingga  keriput muncul lebih dini [3]. Kulit manusia yang sehat memiliki sistem perlindungan alami terhadap paparan sinar ultraviolet dengan pengeluaran keringat, pembentukan melanin pada  epidermis,  dan  penebalan  stratum  korneum.  Kelemahan  dari  perlindungan tersebut  adalah  tidak  dapat  bekerja  dengan  maksimal  jika  terpapar  sinar  ultraviolet secara terus-menerus.
Kosmetik yang dapat digunakan dalam perawatan penuaan pada kulit wajah adalah  krim  anti-aging  yang  mengandung  senyawa  antioksidan.  Antioksidan digunakan  sebagai  anti  penuaan  karena  keterlibatan  senyawa  radikal  bebas  dalam proses  penuaan  kulit.  Antioksidan  mampu  melawan  radikal  bebas  dengan menyumbangkan elektron pada molekul radikal sehingga dapat menjadi molekul yang lebih stabil dan menghentikan reaksi berantai [4].
Salah satu tanaman yang mengandung antioksidan alami dan berpotensial kuat untuk mencegah penuaan yaitu daun bayam merah. Daun bayam merah mengandung alkaloid,  tanin  dan  flavonoid  berupa  antosianin.  Hasil  penelitian  Syaifuddin  (2015) membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  bayam  merah  pada  konsentrasi  1% mempunyai potensial antioksidan sangat kuat karena menghasilkan nilai IC50 sebesar 4.32 ppm [5]. Senyawa yang dapat dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat apabila nilai  IC50  ≤50  ppm  dan  jika  semakin  kecil  nilainya  maka  semakin besar  aktivitas antioksidan [6].
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut,  peneliti  berminat  memformulasikan ekstrak daun bayam merah dalam sediaan krim yang kemudian diujikan ke hewan uji kelinci,  dimana  pada  penelitian  sebelumnya  hanya  meneliti  mengenai  kadar antioksidannya  saja.  Tujuan  penelitian  juga  untuk  mengetahui  apakah  krim    tidak mengiritasi dan dapat memberikan efek anti-aging pada kulit punggung kelinci dengan parameter persen kolagen, kelembaban, dan elastisitas yang diukur menggunakan Skin Analyzer.

## 2.  Metode
Metode penelitian dilakukan secara eksperimental di laboratorium Universitas Setia  Budi  selama  kurang  lebih  65  hari.  Penelitian  eksperimental  dilakukan  dengan memberikan perlakuan terhadap kelompok eksperimen dengan kondisi-kondisi yang dapat dikontrol.

## Bahan
Daun  bayam  merah  (Amaranthus  tricolor  L.),  etanol  96%,  propilen  glikol, dinatrium edetat, TEA, vaselin, setil alkohol, asam stearat, gliseril monostearat, nipagin, nipasol,  serbuk  magnesium,  asam  asetat,  amil  alkohol,  asam  klorida  2%,  pereaksi dragendorff,  pereaksi  mayer,  besi  (III)  klorida,  dan  garam  krimatin,  dan  hewan  uji kelinci New Zealand.

## Determinasi bayam merah
Determinasi  tanaman  dilakukan  di  Balai  Besar  Penelitian  dan  Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional (B2P2TOOT) Tawangmangu, Karanganyar, Jawa Tengah.

## Pembuatan serbuk daun bayam merah
Simplisia  daun  bayam  merah  diperoleh  dari  petani  di  Tawangmangu, Karanganyar, Jawa Tengah. Simplisia daun bayam merah sebanyak 5 kg dibersihkan dari kotoran yang melekat dengan air mengalir. Simplisia dikeringkan dibawah sinar matahari dengan ditutup kain hitam.  Simplisia daun bayam merah yang sudah kering kemudian diserbuk dengan mesin penggiling berupa blender. Serbuk kemudian diayak dengan ayakan mesh no.40 sampai serbuk terayak habis. Hasil serbuk disimpan dalam wadah kering dan tertutup rapat.

## Penetapan susut pengeringan serbuk daun bayam merah
Penetapan  dilakukan  dengan  cara  menimbang  2  gram  serbuk  daun  bayam merah, kemudian dimasukkan ke alat moisture balance pada suhu 105 o C selama 5 menit, replikasi 3 kali hingga menghasilkan bobot yang konstan. Nilai kadar susut pengeringan dinyatakan dalam satuan persen[7].

## Pembuatan ekstrak daun bayam merah
Maserasi serbuk daun bayam merah sebanyak 300 gram dengan cara direndam dengan 3000 ml penyari etanol 96% dalam botol kaca gelap selama 1 hari. Pada 6 jam pertama  dilakukan  pengadukan  sesekali  dan  kemudian  didiamkan  selama  18  jam. Setelah 24 jam, hasil maserasi disaring dengan kain flannel steril dan diperas ampasnya hingga diperoleh filtrat. Residu dimaserasi dengan cara yang sama menggunakan etanol 96%  sebanyak  1500  ml.  Semua  filtrat  kemudian  dilakukan  pemekatan  dengan rotary
evaporator sampai  didapat  ekstrak  kental.  Dihitung  rendemen  dari  persentase  bobot (b/b)  antara  rendemen  dengan  bobot  serbuk  simplisia  yang  digunakan  dengan penimbangan [7].

## Penetapan organoleptis
Penetapan  organoleptis  ekstrak  daun  bayam  merah  dilakukan  dengan mengamati bentuk, warna, dan bau dari ekstrak daun bayam merah.

## Penetapan susut pengeringan ekstrak
Penetapan  susut  pengeringan  ekstrak  daun  bayam  merah  dilakukan  dengan menimbang 2 gram ekstrak daun bayam merah, kemudian dimasukkan ke alat Moisture balance pada suhu 105˚C selama 30 menit, direplikasi sebanyak 3 kali ditandai dengan hasil bobot yang konstan. Nilai susut pengeringan dinyatakan dalam persen [7].

## Identifikasi kandungan kimia ekstrak

## Identifikasi flavonoid
Sampel  dilarutkan  dengan  air  panas  sebanyak  100  ml,  kemudian  dididihkan selama  30  menit.  Filtrat  dipipet  sebanyak  5  ml  dan  ditambahkan  serbuk  Mg,  2  ml alkohol:asam asetat (1:1) dan reagen amil alkohol, semua campuran dikocok kuat-kuat. Reaksi positif jika terjadi warna merah/kuning/jingga pada lapisan amil alkohol [8].

## Identifikasi alkaloid
Sebanyak  2  ml  ekstrak  diuapkan  diatas  cawan  penguap.  Residu  dilarutkan dengan 5 ml HCl 2N. Larutan yang diperoleh dibagi menjadi ke dalam 4 tabung reaksi. Tabung pertama ditambah 3 tetes HCl  2N, tabung lainnya ditambah 3 tetes pereaksi dragrendroff,  3  tetes  pereaksi  mayer,  dan  3  tetes  pereaksi  wagner.  Hasil  positif  jika larutan  menjadi  bewarna  oranye  pada  tabung  kedua,  terdapat  endapan  putih  pada tabung ketiga, dan warna merah bata pada tabung keempat [8].

## Identifikasi tanin
Sebanyak 3 ml larutan ekstrak uji dibagi menjadi 3 bagian yaitu tabung A, B, dan C. Tabung A sebagai blanko, tabung B ditambahkan 10% FeCl3, tabung C ditambahkan gelatin.  Hasil  positif  tanin  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna  hitam  kehijauan atau biru tua pada tabung B dan terbentuk endapan putih kekuningan pada tabung C [8].
Tabel 1. Rancangan formula krim anti-aging ekstrak daun bayam merah Bahan F1 (%) F2 (%) F3 (%) F4 (%) Ekstrak * 0,5 1,0 2,0 - Propilen glikol 7,0 7,0 7,0 7,0 Dinatrium Edetat 0,005 0,005 0,005 0,005 TEA 1,0 1,0 1,0 1,0 Vaselin 5,0 5,0 5,0 5,0 Setil alkohol 3,0 3,0 3,0 3,0 Asam stearate 3,0 3,0 3,0 3,0 Gliseril monostearat 0,1 0,1 0,1 0,1 Nipagin 0,1 0,1 0,1 0,1 Nipasol 0,1 0,1 0,1 0,1 Aquadest ad 100 g 100 g 100 g 100g

## Pembuatan sediaan krim
Menimbang  masing-masing  bahan  kemudian  dikelompokkan  menjadi  dua berdasarkan  fasenya.  Fase  minyak  meliputi  vaselin,  setil  alkohol,  asam  stearat,  dan gliseril  monostearat.  Fase  air  yang  terdiri  dari  aquadest,  propilen  glikol,  dinatrium edetat, trietanol amin (TEA). Fase minyak dileburkan pada suhu ≤70˚C di atas waterbath , setelah  leleh  ditambahkan  nipasol.  Nipagin  dilarutkan  dalam  aqua  panas  kemudian dimasukkan dalam fase air. Fase air diaduk dalam beaker glass hingga tercampur dan dimasukkan  kedalam  mortir  panas  70- 75˚C.  Fase  minyak  dimasukkan  perlahan, kemudian  diaduk  hingga  basis  krim  terbentuk.  Penambahan  sedikit  demi  sedikit ekstrak etanol bayam merah.

## Pengujian sifat fisik krim.

## Uji organoleptis
Pengamatan bentuk, warna dan bau yang dilihat secara visual. Kualifikasi krim yang harus dipenuhi adalah konsistensi lembut, warna sediaan homogen, dan baunya tidak tengik [9]

## Uji homogenitas
Pengujian dilakukan dengan cara krim  dioleskan dalam jumlah tertentu pada sekeping kaca yang sesuai, sediaan harus menunjukkan susunan yang homogen dan tidak ada butiran kasar  [10].

## Uji viskositas
Uji  viskositas  krim  dilakukan  dengan  alat  viskometer  brookfield. Prinsip  dari viskometer  Brookfield  adalah  mengukur  torsi  yang  diperlukan  oleh  spindel  yang direndam dalam fluida untuk memutar. Standar uji viskositas krim menurut SNI 16- 4339-1996 adalah memenuhi kisaran 2000-50.000 cP [11].

## Uji pH krim
Pengujian  dilakukan  dengan  mencelupkan  pH  meter  kedalam  sediaan  krim ekstrak  daun  bayam  merah.  Krim  ditambahkan  aquadest  dan  dilarutkan  dengan perbandingan 1:9. Standar uji pH menurut SNI 16-4399-1996 yaitu berkisar pH 4,5-6,5 [11].

## Uji daya lekat krim
Krim sebanyak 0,25 g diletakkan pada krimas objek dan ditekan selama 5 menit dengan pemberat seberat 1 kg. Krimas objek diletakkan pada alat tes dan pemberat 80 g dipasang pada alat tes. Waktu krim terlepas dari krimas obyek dihitung menggunakan stopwatch. Pengujian ini direplikasi sebanyak 3 kali untuk tiap formula [12].  Menurut SNI 1996, daya lekat yang baik adalah lebih dari 1 detik [11].

## Uji daya sebar krim
Krim sebanyak 0,5 g diletakkan di tengah kaca bulat, dan ditimpa dengan kaca lain  yang  telah  ditimbang  beratnya.  Krim  didiamkan  tanpa  beban  selama  1  menit kemudian  diameter  sebar  krim  diukur.  Pemberat  50  g  diletakkan  di  atas  kaca  dan didiamkan 1 menit lalu diukur diameter sebar kembali. Setiap 1 menit diberi pemberat seberat  50  g  hingga  total  keseluruhan  pemberat  150  g  sehingga  diperoleh  rata-rata
diameter yang cukup untuk menentukan pengaruh beban terhadap perubahan diameter sebar krim [12]. Standar uji daya sebar menurut SNI 1996 adalah dalam batas interval 5- 7 cm [11].

## Uji daya proteksi
Kertas  saring  pertama  (10×30  cm)  dibasahi  dengan  larutan  fenoftalein  untuk indikator  kemudian  dikeringkan  dan  diolesi  dengan  sediaan  krim  satu  lapis.  Kertas saring kedua dibuat suatu areal (2,5 ×2,5 cm) dengan paraffin solid yang dilelehkan. Kertas tersebut ditempelkan pada kertas saring pertama kemudian  diteteskan KOH 0,1 N. Terbentuknya warna merah pada kertas tersebut diamati  dari sebalik kertas pada waktu 15; 30; 45; 60 detik; 3 dan 6 menit.

## Uji tipe krim
Sejumlah sediaan diberi 1 tetes metilen blue dan sudan III. Diamati hasilnya jika tersebar  homogen  dengan  metilen  blue  maka  tipe  sediaan  krim  adalah  tipe  minyak dalam  air,  dan  sebaliknya.  Pengujian  daya  hantar  listrik  apabila  sediaan  dapat menghantarkan  arus  listrik  maka  sediaan  tipe  minyak  dalam  air,  dan  sebaliknya. Pengujian  pengenceran  dengan  melarutkan  sediaan  dengan  aquadest  dan  minyak. Apabila  krim  terlarut  homogen  dalam  aquades  maka  krim  merupakan  tipe  minyak dalam air, dan sebaliknya [13].

## Uji stabilitas krim
Metode Cycling Test dilakukan sebanyak 6 siklus. Satu siklus dari uji stabilitas sediaan krim yang dimaksud adalah penyimpanan pada suhu 4˚C selama 24 jam lalu dikeluar kan  dan  dibiarkan  pada  suhu  ±40˚C  selama  24  jam.  Kondisi  fisik  krim dibandingkan  selama  pengamatan  dengan  sediaan  sebelumnya  [14].  Parameter  yang diamati meliputi organoleptis, pH, dan viskositas dari hari ke-0 dan hari ke-12.

## Pengujian keamanan krim
Uji iritasi krim menggunakan metode Draize dilakukan terhadap 3 ekor kelinci. Kriteria  kelinci  untuk uji  keamanan adalah kelinci albino dewasa  dan dalam kondisi sehat  dengan  berat  badan  ±1,5-2  kg.  Kelinci  dicukur  bulu  punggungnya,  kemudian dibagi menjadi 5 bagian sebesar 6,5 cm. Sediaan sebanyak 0,5 g dioleskan pada bagian punggung kelinci yang telah ditentukan, lalu dibiarkan selama 24  jam dalam kondisi ditutup dengan kassa steril dan perban. Setelah 24 jam, perban dibuka dan dibiarkan selama  1  jam  lalu  diamati.  Setelah  diamati,  bagian  tersebut  ditutup  kembali  dengan plester yang sama, dan dilakukan pengamatan kembali setelah 48 jam dan 72 jam. Untuk setiap keadaan kulit diberi nilai sesuai metode skoring dari Draize.

## Pengujian aktivitas anti-aging krim
Kelinci sebanyak 5 ekor diadaptasi selama satu minggu dalam kandang. Bulu punggung  tiap  kelinci  kemudian  dicukur  dengan  hati-hati.  Kulit  punggung  kelinci selanjutnya  dibagi  menjadi  5  bagian,  masing-masing  bagian  berbentuk  lingkaran dengan diameter 2 cm. Kemudian tiap kelinci diberi 5 perlakuan sebagai berikut: Punggung kelinci bagian I  : dioleskan krim ekstrak daun bayam merah 0,5% Punggung kelinci bagian II  : dioleskan krim ekstrak daun bayam merah 1% Punggung kelinci bagian III  : dioleskan krim ekstrak daun bayam merah 2% Punggung kelinci bagian IV   : dioleskan kontrol negatif (basis krim)
Punggung kelinci bagian V    : dioleskan kontrol positif (krim Himalaya Herbal) Sebelumnya bulu punggung kelinci telah dicukur dan diukur persen kolagen, kelembaban, dan elastisitas. Selanjutnya kulit punggung kelinci diinduksi sinar UV-A. Induksi  dengan  cara  penyinaran  menggunakan Exoterra®  Daylight  Basking  Spot yang mengandung sinar UV-A pada jarak 30 cm dengan dosis 63,69 J.cm -2 /jam selama 6 jam [15]. Hewan uji kelinci yang telah diinduksi photoaging dan diamati parameter anti-aging , selanjutnya diolesi krim sesuai perlakuan tiap kelompok sebanyak 1 kali sehari dalam 30 hari [16]. Krim dioleskan sebanyak 0,5 gram pada setiap perlakuan. Parameter anti- aging meliputi  persen  kolagen,  kelembaban,  dan  elastisitas  yang  diamati  sebelum diinduksi sinar UV A, pada hari ke-0 (sesudah induksi dan sebelum dioles krim), dan pada hari ke-30 (setelah krim dioleskan).

## Analisis data
Data stabilitas krim dianalisis statistik dengan menggunakan Test of Normality untuk  melihat  data  terdistribusi  normal.  Uji  statistik Repeated  Measures  Anova untuk mengetahui  perbedaan  secara  keseluruhan,  dan  perbedaan  tiap  formula  dilihat  dari tabel pairwise comparison . Hasil persen kolagen, elastisitas, dan kelembaban dari masing- masing hewan coba yang diperoleh sebelum, dan sesudah induksi dengan Skin Analyzer dianalisa  menggunakan paired  T-Test. Persen  parameter  yang  sesudah  induksi  dan sesudah dioleskan krim kemudian dilakukan uji paired T-Test , one way anova dan Tukey .

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Determinasi  tanaman  dilakukan  untuk  menghindari  kesalahan  dalam pengumpulan  simplisia  yang  akan  diteliti.  Hasil  determinasi  menunjukkan  bahwa sampel  benar  merupakan  tanaman  bayam  merah  dengan  nama  spesies Amaranthus tricolor L. Hasil rendemen serbuk dihitung dari bobot serbuk halus terhadap bobot daun kering. Daun bayam merah segar seberat 4 kg setelah dikeringkan bobot daun kering sebanyak 755 gram, serbuk kasar sebanyak 413 gram dan serbuk halus sebesar 314 gram sehingga diperoleh rendemen serbuk daun bayam merah sebesar 41,58%.
Ekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96% selama 2 hari. Metode maserasi memiliki keuntungan berupa mudah, sederhana, dan merupakan metode ekstraksi dingin sehingga tidak merusak zat aktif yang terkandung dalam bayam merah. Dari  300 gram serbuk bayam merah didapatkan ekstrak kental sebanyak  63 gram sehingga diperoleh rendemen ekstrak bayam merah sebesar 21%..

## Pengujian serbuk dan ekstrak daun bayam merah
Hasil uji organoleptis adalah serbuk daun bayam merah memiliki tekstur yang halus sedikit kasar, bewarna coklat dan ada sedikit warna merah. Ekstrak daun bayam merah  berbentuk  cairan  sangat  kental,  mudah  larut  air,  dan  warna  coklat  sedikit kehijauan. Serbuk dan ekstrak memiliki bau khas yang sama, perbedaanya pada ekstrak bau lebih menyengat.
Hasil persentase rata-rata susut pengeringan serbuk daun bayam merah adalah 8,5%± 0. Rata-rata susut pengeringan ekstrak daun bayam merah adalah 2,47% ± 0,06. Nilai  susut  pengeringan  serbuk  dan  ekstrak  daun  bayam  merah  telah  memenuhi persyaratan karena nilai susut pengeringan yang baik adalah <10%  [17]. Maka dapat diketahui bahwa proses pengeringan simplisia dengan sinar matahari dan pengentalan ekstrak simplisia daun bayam merah dengan rotary evaporator telah optimal.
Tabel 2. Kandungan kimia ekstrak daun bayam merah Kandungan   Reagen Hasil Kesim pulan Pustaka Flavonoid Serbuk Mg, 2 ml alkohol:asam asetat (1:1) dan amil alkohol Warna  merah  di  lapisan amil alkohol. (+) (DepKes, 1995) Alkaloid Dragrendroff Mayer, Wagner. Endapan oranye Endapan putih, Endapan coklat (+) (DepKes, 1995) Tanin 10% FeCl3, Serbuk gelatin. Hitam kehijauan Endapan putih (+) (DepKes, 1995)
Hasil uji mutu fisik dan stabilitas krim
Organoleptis semua krim uji dapat dinyatakan stabil karena tidak mengalami perubahan  warna,  bau,  dan  tekstur  dari  hari  pertama  dibuat  hingga  sesudah  di  uji stabilitas ( cycling test ) selama 6 siklus atau 12 hari.
Tabel 3. Organoleptis krim ekstrak daun bayam merah
Formula Sebelum uji cycling test Sesudah uji cycling test Warna Bau Tekstur Warna Bau Tekstur F1 Hijau muda Vaselin Semi padat Hijau muda Vaselin Semi padat F2 Hijau muda Vaselin Semi padat Hijau muda Vaselin Semi padat F3 Hijau Vaselin Semi padat Hijau Vaselin Semi padat F4 (-) Putih Vaselin Semi padat Putih Vaselin Semi padat
Hasil  pengamatan  terhadap  homogenitas  krim  menunjukkan  bahwa  semua formula  dinyatakan  homogen  dan  stabil  karena  fase  terdispersi  terdistribusi  merata pada fase pendispersi, dan tidak membentuk partikel yang memisah dari awal dibuat hingga sesudah diuji cycling test .
Gambar 1. Sediaan krim ekstrak bayam merah
Keterangan: K (-) : krim kontrol negatif F1     : krim dengan ekstrak daun bayam merah 0,5% F2     : krim dengan ekstrak daun bayam merah 1% F3     : krim dengan ekstrak daun bayam merah 2%
Dari  hasil  uji  homogenitas  menunjukkan  bahwa  penambahan  konsentrasi ekstrak  bayam  merah  yang  terbilang  cukup  kecil  sehingga  tidak  mempengaruhi tercampur homogennya ekstrak dengan basis.
Tabel 4. Homogenitas krim ekstrak daun bayam merah Formula Sebelum uji cycling test Sesudah uji cycling test F1 Homogen Homogen F2 Homogen Homogen F3 Homogen Homogen F4 Homogen Homogen
Nilai pH sediaan krim ekstrak bayam merah telah memenuhi standar. Standar uji pH menurut SNI yaitu berkisar pH 4,5-6,5.  Pada tabel 5 juga menunjukkan semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak bayam merah menyebabkan pH krim semakin tidak stabil karena ekstrak dapat teroksidasi [18]. Kestabilan pH krim F1, F2, F4 mempunyai nilai sig >0,05 yang berarti tidak ada perbedaan yang signifikan atau dapat dikatakan stabil. Krim F3 mempunyai nilai sig 0,014 <0,05 menunjukkan ada perbedaan yang signifikan atau dapat dinyatakan pH tidak stabil.
Tabel 5. Hasil rata-rata pH krim ekstrak daun bayam merah Formula Sebelum uji cycling test Sesudah uji cycling test F1 4,72±0,03 4,65± 0,05 F2 4,85±0,02 4,78± 0,03 F3 5,01±0,01 4,80± 0,03* F4 5,65±0,01 5,54± 0,05
Nilai viskositas krim ekstrak bayam merah dinyatakan telah memenuhi SNI 16- 4339-1996 yaitu sebesar 2.000-50.000 cP [11]. Hasil pengukuran viskositas sediaan krim uji  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  maka  semakin  tinggi viskositas krim. Krim yang kental cenderung lengket dan daya menyebarnya rendah. Viskositas  dari  F1,  F2,  dan  F4  menunjukkan  nilai sig >0,05  yang  berarti  tidak  ada perubahan yang signifikan. Viskositas krim F1, F2, dan F4 dapat dinyatakan memenuhi standar SNI dan stabil. Viskositas dari F3 menunjukkan nilai sig 0,027<0,05 yang berarti terdapat perbedaan signifikan.
Tabel 6. Hasil rata-rata viskositas krim ekstrak daun bayam merah Formula Sebelum uji cycling test (cP) Sesudah uji cycling test (cP) F1 2.253±0,03 2.193± 0,02 F2 2.463±0,02 2.433± 0,02 F3 3.373±0,03 3.300± 0,02* F4 (-) 2.180±0,03 2.283± 0,02
Hasil  pengujian daya sebar krim ekstrak daun bayam merah telah memenuhi standar yaitu sebesar 5-7 cm [11]. Daya sebar krim dapat menentukan daya serap krim di kulit karena semakin besar daya sebar maka semakin tinggi luas permukaan kulit yang menyerap krim. Daya sebar dari F1, F2, dan F4 menunjukkan nilai sig >0,05 yang berarti tidak ada perubahan yang signifikan. Viskositas dari F3 menunjukkan nilai sig <0,05 yang berarti terdapat perbedaan signifikan.
Tabel 7. Hasil rata-rata daya sebar krim ekstrak daun bayam merah
Krim Sebelum uji cycling test (cm) Sesudah uji cycling test (cm) Beban (gram) 0 50 100 150 0 50 100 150 F1 6,03 ±0,26 6,26 ±0,15 6,37 ±0,14 6,83 ±0,18 5,37± 0,46 5,64± 0,44 6,23± 0,38 6,78± 0,31 F2 5,53 ±0,11 5,63 ±0,09 5,86 ±0,21 6,23 ±0,11 5,03± 0,09 5,90± 0,41 6,20± 0,23 6,47± 0,23 F3 4,70 ±0,41 4,94 ±0,39 5,10 ±0,38 5,47 ±0,32 5,01± 0,14 5,25± 0,10 5,68± 0,46 6,13± 0,35 F4 6,60 ±0,22 6,94 ±0,08 7,38 ±0,16 7,63 ±0,10 5,50± 0,33 5,84± 0,27 6,23± 0,40 6,74± 0,47
Berdasarkan tabel hasil daya lekat, semua formula telah sesuai dengan standar SNI yaitu lebih dari 1 detik [11]. Krim F3 memiliki kemampuan melekat yang paling lama  karena viskositasnya  yang  lebih  besar  dari  F1,  F2,  dan  F4. Krim  dengan  waktu melekat  yang  lebih  lama  akan  mengakibatkan  penghantaran  zat  aktif  ke  kulit  lebih efektif  karena  zat  aktif  kontak  dengan  kulit  lebih  lama  [19].  Berdasarkan  hasil  uji Repeated Measures Anova menunjukkan semua krim tidak mengalami penurunan yang signifikan karena nilai sig >0,05.
Tabel 8. Hasil rata-rata daya lekat krim ekstrak daun bayam merah Formula Sebelum uji cycling test (detik) Sesudah uji cycling test (detik) F1 2,46±0,06 2,03±0,19 F2 3,06±0,19 2,88±0,11 F3 3,22±0,08 3,03±0,20 F4 1,71±0,15 1,70±0,11
Dari  tabel  hasil  daya  proteksi  dapat  dinyatakan  semua  formula  memenuhi standar  SNI  yakni  lebih  dari  4  detik.  Berdasarkan  hasil  uji Repeated  Measures  Anova menunjukan F1, F2, dan F4 tidak mengalami perubahan yang signifikan karena nilai sig >0,05.  Formula  3  mengalami  perubahan  karena  nilai sig <0,05.  Formula  krim  bayam merah  memiliki  daya  proteksi  yang  lama  sehingga  dapat  dikatakan  mempunyai kemampuan proteksi yang sangat baik. Semakin lama daya proteksi, semakin lama juga krim dapat melindungi kulit dari pengaruh luar seperti polusi dan sinar matahari.
Tabel 9. Hasil rata-rata daya proteksi krim ekstrak daun bayam merah
Formula Sebelum uji cycling test (detik) Sesudah  uji cycling  test (detik) F1 12,33±2,02 9,87±1,44 F2 21,08±3,21 18,28±0,68 F3 26,50±2,14 19,19±1,27* F4 8,24±1,64 6,17±0,33
Tipe krim diuji dengan melakukan tiga perlakuan, yaitu diberi reagen metilen biru,  penghantaran  arus  listrik,  dan  dilarutkan  dalam  minyak  dan  air.  Krim  minyak dalam air tidak dapat menghantarkan arus listrik, larut dalam sudan III dan minyak. Sedangkan krim air dalam minyak mampu menghantarkan arus listrik, larut homogen dalam metilen biru dan air.

## Hasil uji keamanan krim ekstrak daun bayam merah
Standar penilaian iritasi menggunakan tes Draize meliputi uji iritasi primer dan iritasi  okuler.  Tes  Draize  dilakukan  terhadap  hewan  uji  berupa  kelinci  jantan New Zealand untuk memprediksi iritasi mata dan kulit dari produk krim. Hasil pengamatan uji  iritasi  primer  menunjukkan  bahwa  sediaan  krim  ekstrak  bayam  merah  0,5%,  1%, kontrol  negatif,  dan  positif bersifat  tidak  mengiritasi.  Sedangkan untuk krim  ekstrak bayam  merah  konsentrasi  2%  menunjukkan  krim  sangat  sedikit  mengiritasi.  Hasil pengamatan  iritasi  pada  mata  kelinci  menunjukkan  nilai  indeks  iritasi  okuler  semua sediaan adalah nol. Berdasarkan hasil tersebut, dapat dinyatakan semua krim uji aman digunakan karena krim tidak menyebabkan eritema dan edema pada kulit serta tidak menimbulkan  iritasi  pada  bagian  kornea,  iris,  konjungtiva,  dan  kemosis  pada  mata kelinci.

## Hasil uji aktivitas anti-aging krim ekstrak daun bayam merah
Pengujian  aktivitas anti-aging diawali  dengan  melakukan  penyinaran  kulit punggung kelinci dengan sinar UV-A dari lampu Exoterra Daylight Basking Spot selama 2 minggu. Kondisi kulit punggung kelinci yang halus menjadi kering dan keriput akibat disinari UV A. Hal  tersebut menunjukkan bahwa kulit  kelinci mengalami photoaging . Photoaging ditandai oleh pigmentasi tidak merata, kulit kering, kasar, pucat, berkerut serta penurunan kekuatan dan elastisitas [20]. Hasil penurunan persen parameter yang diukur menggunakan alat skin analyzer dapat dilihat pada tabel 10.
Tabel 10. Persen kolagen, kelembaban, dan pelastisitas sebelum dan sesudah induksi sinar UV-A selama 14 hari Krim persen kolagen persen elastisitas persen kelembaban Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah F1 64±1,58* 53±2,65* 53,4±4,22* 39,6±3,21* 17,8±2,86* 4,2±1,79* F2 61±4,69* 50±4,00* 54,6±3,91* 40,4±4,16* 17,4±2,97* 4±1,00* F3 62±2,83* 51,4±3,65* 55,4±4,98* 41,2±3,96* 18±4,85* 4,4±2,19* F4 (-) 64,4±1,14* 53,8±3,03* 55,2±3,90* 41,6±4,93* 18,2±2,28* 4,4±1,67* F5 (+) 62±1,87* 51,6±3,97* 54,8±3,63* 40,4±4,39* 17,8±4,55* 4,2±1,30*
Data persen parameter selanjutnya dilakukan uji statistika berupa paired T test . Hasil  dari paired  T-test menunjukkan  nilai sig <0,05  yang  menunjukkan  terdapat perbedaan  yang  signifikan  dari  setiap  persen  kolagen,  elastisitas,  dan  kelembaban sebelum  dan  sesudah  diinduksi  sinar  UV-A  selama  2  minggu.  Penurunan  persen kolagen terjadi dikarenakan radiasi sinar UV-A dapat membentuk senyawa ROS yang dapat  memicu  aktifnya activator  protein -1  (AP-1).  Protein  tersebut  mentranskripsi penghambatan  terbentuknya  kolagen  dan  meningkatkan  enzim  MMPs  (matrix metalloproteinase) yang dapat mendegradasi kolagen. Peningkatan degradasi kolagen dan penurunan produksi kolagen menyebabkan kulit mengalami tanda-tanda penuaan seperti munculnya garis-garis halus atau keriput [21].
Ketika  kulit  mengalami photoaging ,  elastin  berubah  bentuk  dan  fungsinya menjadi jaringan elastosis. Pada jaringan tersebut, serabut elastin berubah menjadi tebal dan  tidak  teratur.  Jaringan  elastosis  dapat  menimbulkan  manifestasi  klinis  penuaan kulit, yaitu kulit kendur dikarenakan elastisitas menurun [22]. Paparan sinar ultraviolet juga  dapat  menyebabkan  kemampuan  kulit  mempertahankan  kelembaban  menurun,
Putri et al., 2023; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 3(1): 1-15
terjadi peningkatan transepidermal water loss (TEWL) serta penurunan produksi keringat dan  sebum  [23].  Penurunan  faktor-faktor  yang  mempertahankan  kelembaban  kulit tersebut  menyebabkan  kulit  yang  mengalami photoaging menjadi  kering  dan  kasar. Parameter anti-aging sesudah induksi dan setelah pengolesan krim. Parameter persen kolagen, elastisitas, dan kelembaban selanjutnya diamati setelah kulit punggung kelinci dioles  krim  selama  30  hari.  Hasil  pada  tabel  11  menunjukkan  semua  kelompok mengalami  kenaikan  persen  kolagen  setelah  dioles  krim.  Rata-rata  persen  kolagen sesudah pengolesan krim dari F1, F2, F3, dan F5 termasuk dalam range kadar kolagen normal yaitu 65-80%.
Tabel 11. Persen kolagen, kelembaban, dan pelastisitas sesudah induksi UV-A dan sesudah dioles krim selama 30 hari Krim persen kolagen persen elastisitas persen kelembaban Sesudah induksi Sesudah dioles Sesudah induksi Sesudah dioles Sesudah induksi Sesudah dioles F1 53±2,65* 66,2±1,79* 39,6±3,21* 67±2,12* 4,2±1,79* 44±6,02* F2 50±4,00* 69,4±3,65* 40,4±4,16* 69,4±2,70* 4±1,00* 57±6,20* F3 51,4±3,65* 70,6±2,97* 41,2±3,96* 70,4±1,82* 4,4±2,19* 58±6,36* F4 (-) 53,8±3,03* 57,4±3,21* 41,6±4,93* 44,2±3,83* 4,4±1,67* 25,2±6,26 * F5 (+) 51,6±3,97* 74±3,67* 40,4±4,39* 72±1,73* 4,2±1,30* 59±8,86*
Data  persen  kolagen  selanjutnya  dilakukan  uji  statistika  berupa paired  T  test. Hasil  dari paired  T-test menunjukkan  nilai sig <0,05  yang  menunjukkan  terdapat perbedaan  yang  signifikan  dari  persen  kolagen  sesudah  diinduksi  sinar  UV-A  dan sesudah  dioles  krim  selama  30  hari.  Hasil  uji  one  way  anova  dari  persen  kolagen menunjukkan setiap formula memiliki nilai sig 000<0,05 yang berarti rata-rata kelima krim  berbeda  signifikan.  Selanjutnya  hasil  uji  tukey  menunjukkan  krim  F1  berbeda signifikan dengan semua formula, F2 tidak berbeda signifikan dengan F3. Data tersebut dapat diartikan bahwa peningkatan kolagen F2 dan F3 hampir sama, namun masing- masing  dari  kedua  formula  tersebut  berbeda  signifikan  dengan  kontrol  positif.  Pada tabel terlihat persen kolagen yang paling besar setelah kontrol positif adalah krim F2.
Pada  krim  ekstrak  daun  bayam  merah  mengandung  senyawa  antioksidan berupa  flavonoid,  alkaloid,  dan  tanin.  Alkaloid  dapat  memberikan  efek  antioksidan karena  kemampuan  gugus  hidroksilnya  dalam  mendonorkan  elektron  dan  hidrogen pada radikal bebas sehingga dapat memutus reaksi berantai dari radikal bebas. Tanin mempunyai peranan besar dalam peroksidasi lipid dalam plasma dan jaringan sehingga mampu  meniadakan  stress  oksidatif  [24].  Senyawa-senyawa  dalam  bayam  merah tersebut yang akan menurunkan kadar ROS dan mencegah degradasi kolagen.
Semua  krim  uji  juga  dapat  meningkatkan  persen  elastisitas  kulit  punggung kelinci. Hasil dari paired T-test menunjukkan nilai sig <0,05 yang menunjukkan terdapat perbedaan  yang  signifikan  dari  persen  elastisitas  sesudah  diinduksi  sinar  UV-A  dan sesudah  dioles  krim  selama  30  hari.  Rata-rata  persen  elastisitas  sesudah  induksi memiliki  nilai  dibawah  normal  yang  termasuk  range  elastisitas  kulit  lemah  ( weak ) sebesar 35-50%. Rata-rata persen elastisitas sesudah pengolesan krim dari F1, F2, F3, dan F5 termasuk dalam range better yaitu 65-70%. Hasil uji one way anova persen elastisitas menunjukkan  rata-rata  kelima  formula  berbeda  secara  signifikan  ( sig <0,05). Peningkatan persen elastisitas paling besar setelah F5 adalah F3. Pada uji tukey F1, F2,
F3 memiliki kemampuan peningkatan elastisitas yang tidak berbeda signifikan dengan F5. F4 mempunyai perbedaan yang signifikan terhadap semua formula.
Krim  ekstrak  daun  bayam  merah  dapat  meningkatkan  elastisitas  karena memiliki aktivitas antioksidan. Radikal bebas yang reaktif dapat dihambat oleh senyawa antioksidan sehingga produksi kolagen dan serat elastin meningkat [23]. Kolagen dan serabut  elastin  yang  berada  di  kulit  bagian  lapisan  dermis  akan  mempertahankan elastisitas [22]. Elastisitas kulit merupakan faktor utama untuk mencegah kulit kendur dan mengembalikan kerapatan kulit akibat photoaging . Parameter terakhir yang diamati adalah  persen  kelembaban.  Pada  tabel  10  menunjukkan  semua  krim  uji  dapat meningkatkan  persen  kelembaban  kulit  punggung  kelinci.  Hasil  dari paired  T-test menunjukkan  nilai sig <0,05  yang  menunjukkan  terdapat  perbedaan  yang  signifikan dari persen kelembaban sesudah diinduksi sinar UV-A dan sesudah dioles krim selama 30 hari. Rata-rata persen kelembaban sesudah induksi memiliki nilai dibawah normal yang  termasuk  range ageing sebesar  4-10%.  Rata-rata  persen  kelembaban  sesudah pengolesan krim dari F1, F2, F3, dan F5 termasuk dalam range shiny moist yaitu 35-65%. Kadar air tersebut merupakan tingkatan tertinggi atau yang paling baik.
Hasil uji one way anova dari kelembaban menunjukkan setiap formula memiliki nilai sig 000<0,05 yang berarti rata-rata kelima krim berbeda signifikan. Pada tabel 37 terlihat persen kelembaban yang paling besar setelah krim kontrol positif adalah krim ekstrak  bayam  merah  dengan  konsentrasi  2%.  Pada  uji  tukey  F2,  dan  F3,  memiliki kemampuan peningkatan elastisitas yang tidak berbeda signifikan dengan F5. F1 dan F4 masing-masing mempunyai perbedaan yang signifikan terhadap semua formula. Krim kontrol  negatif  dapat  meningkatkan  kelembaban  dikarenakan  terdapat  kandungan gliserin, vaselin, dan air yang dapat menjaga kelembaban kulit. Gliserin sangat efektif untuk mencegah penguapan air di kulit pada lapisan tanduk (stratum corneum) hingga lapisan  dalam  [5].  Krim  yang  mengandung  ekstrak  bayam  merah  lebih  efektif menambahkan  kelembaban  pada  kulit  kelinci  karena  ekstrak bayam  merah  memiliki sifat higroskopis yang dapat mengikat air sehingga krim mampu melembabkan kulit lebih baik. pH semua krim uji juga mendukung pernyataan tersebut karena telah sesuai dengan  pH  kulit  sehingga  tidak  membuat  kulit  kering  atau  iritasi.  Kulit  kering cenderung lebih mudah mengkerut sehingga keriput dapat muncul lebih cepat. Kulit yang lembab akan menunjang perbaikan kerutan karena lebih elastis dibandingkan kulit kering.

## 4.  Kesimpulan
Mutu fisik krim F1, F2, F3, dan F4 memenuhi syarat organoleptis, homogenitas, viskositas,  pH,  daya  sebar,  daya  lekat,  dan  daya  proteksi.  Krim  F1,  F2,  dan  F4 mempunyai kestabilan yang baik. Sediaan krim ekstrak daun bayam merah memiliki dapat dinyatakan aman digunakan sebagai produk kosmetik. Krim ekstrak daun bayam merah  dapat  disimpulkan  mempunyai  aktivitas anti-aging karena  mampu meningkatkan  secara  signifikan  persen  kolagen,  kelembaban,  dan  elastisitas.  Krim ekstrak daun bayam merah yang paling efektif memberikan efek anti-aging adalah krim dengan konsentrasi 1%.

## Referensi
[1] K. Raj, S. I. Chanu, and S. Sarkar, “Decoding complexity of aging,” Cell Dev Biol , vol. 1, p. e117, 2012.
[2] W.  E.  Cahyono,  “URGENSI  MENJAGA  LAPISAN  OZON  BAGI  PENGHUNI BUMI,” Ber. Dirgant. , vol. 8, no. 2, 2010.
[3] Z. Alatas, “Efek radiasi pengion dan non pengion pada manusia,” Bul. Alara , vol. 5, no. 203, pp. 99 – 112, 2004.
[4]  S. Winarti, “Makanan fungsional,” Yogyak. Graha Ilmu , pp. 137 – 165, 2010.
[5] S.  Syaifuddin,  “Uji  aktivitas  antioksidan  bayam  merah  (alternanthera  amoena voss.) segar dan rebus dengan metode DPPH,” UIN Walisongo , 2015.
[6]  A. V. Badarinath, K. M. Rao, C. M. S. Chetty, S. Ramkanth, T. V. S. Rajan, and K. Gnanaprakash,  “A  review  on  in -vitro  antioxidant  methods:  comparisions, correlations and considerations,” Int. J. PharmTech Res. , vol. 2, no. 2, pp. 1276 – 1285,
2010.
[7]  D. K. R. Indonesia, “Parameter standar umum ekstrak tumbuhan obat,” Jkt. Dep. Kesehat. Repub. Indones. , pp. 9 – 12, 2000.
[8] R.  I.  Depkes,  “Materia  Medika  Indonesia,” Jilid  VI  Jkt.  Dep.  Kesehat.  RI  Hal ,  vol. 319325, 1995.
[9]  N. A. Safitri, O. E. Puspita, and V. Yurina, “Optimasi formula sediaan krim ekstrak stroberi (Fragaria x ananassa) sebagai krim anti penuaan,” Maj. Kesehat. FKUB , vol. 1, no. 4, pp. 235 – 246, 2016.
[10] Z. Azkiya, H. Ariyani, and T. S. Nugraha, “Evaluasi sifat fisik krim ekstrak jahe merah  (Z ingiber  officinale  Rosc.  var.  rubrum)  sebagai  anti  nyeri,” JCPS  J.  Curr. Pharm. Sci. , vol. 1, no. 1, pp. 12 – 18, 2017.
[11] “SNI 2016 -4399-1996 (TABIR SURYA) - Free Download PDF.” https://kupdf.net/download/sni-2016-4399-1996-tabir- surya_5af65742e2b6f52b79ea82cc_pdf (accessed Aug. 31, 2022).
[12] N. Widyaningrum, M. Murrukmihadi, and S. K. Ekawati, “Pengaruh konsentrasi ekstrak etanolik Daun Teh Hijau (Camellia Sinesis L.) dalam sediaan krim terhadap sifat fisik dan aktivitas antibakteri,” Sains Med. J. Kedokt. Dan Kesehat. , vol. 4, no. 2, pp. 147 – 156, 2012.
[13] D. Satria and M. A. Siahaan, “FORMULASI KRIM ANTI â€“AGING DARI BUAH MANGGA MANALAGI:(Mangifera indica L),” J. Farmanesia , vol. 4, no. 1, pp. 12 – 30, 2017.
[14] A.  Guideline,  “ASEAN  guideline  on  stability  study  of  drug  product,” ASEAN Consult. Comm. Stand. Qual. Philiphines , 2005.
[15] E.  D.  Cahyani,  A.  Budiawan,  and  L.  Puradewa,  “Sunscreen  Activity  of  Soursop Seeds Extract,” Str. J. Pharm. , vol. 4, no. 1, pp. 23 – 26, 2022.
[16]  S. Duraivel, A. Shaheda, S. R. Basha, S. E. Pasha, and S. Jilani, “Formulation and evaluation of anti-wrinkle activity of cream and nanoemulsion of moringaoleifera seed oil,” IOSR J. Pharm. Biol. Sci. , vol. 9, no. 4, pp. 58 – 73, 2014.
[17] M. Tahir, D. Wadan, and A. Zada, “Genetic variability of different plant and yield characters in rice,” Sarhad J. Agric. Pak. , 2002.
[18] E.  T.  Young,  N.  Kacherovsky,  and  K.  Van  Riper,  “Snf1  protein  kinase  regulates Adr1 binding to chromatin but not transcription activation,” J. Biol. Chem. , vol. 277, no. 41, pp. 38095 – 38103, 2002.
[19] N. M. Lyons and N. M. O’Brien, “Modulatory effects of an algal extract containing astaxanthin on UVA- irradiated cells in culture,” J. Dermatol. Sci. , vol. 30, no. 1, pp. 73 – 84, 2002.
[20]  Y.  R.  Helfrich,  D.  L.  Sach s,  and  J.  J.  Voorhees,  “Overview  of  skin  aging  and photoaging.,” Dermatol. Nurs. , vol. 20, no. 3, 2008.
[21]  J.  Perayil et  al. ,  “Influence  of  vitamin  D  &  calcium  supplementation  in  the management of periodontitis,” J. Clin. Diagn. Res. JCDR , vol. 9, no. 6, p. ZC35, 2015.
[22] A. Zahruddin and D. D. P. Kulit, “Patofisiologi dan Manifestasi Klinis,” Berk. Ilmu Kesehat. Kulit Dan Kelamin , vol. 30, no. 3, pp. 208 – 215, 2018.
[23]  H. Winarsi, Antioksidan alami dan radikal . Kanisius, 2007.
[24]  L.  P. Widiastini,  I.  G.  A.  M.  Karuniadi,  and  M.  Tangkas,  “Senyawa  antioksidan ekstrak  etanol  daun  kelor  (Moringa  oleifera)  di  Denpasar  Selatan  Bali,” Media Kesehat. Politek. Kesehat. Makassar , vol. 16, no. 1, pp. 135 – 139, 2021.