BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 3 Nomor 4 (2021): 235-242 E-ISSN: 2714-8564
Aktivitas Amilolitik Bakteri Sedimen Mangrove Pantai Logending, Ayah, Kebumen pada Suhu dan pH Berbeda
Alfiani Rahmawati, Oedjijono, Dini Ryandini *
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman Jalan dr. Suparno 63 Purwokerto 53122 Korespondensi, e-mail: dini.ryandini@unsoed.ac.id
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 23/07/2021
Disetujui  : 14/06/2022

## Abstract
Mangrove sediment is a source of various microorganisms that degrade leaf litter or parts of mangrove plants, including amylolytic bacteria. Bacteria isolated from the mangrove sediments of the Logending beach have not yet known their amylolytic ability. Optimum amylase activity can be influenced by temperature and pH. This study aims to determine the ability of mangrove sediment bacterial isolates to produce amylase enzymes, to determine the pH and temperature for optimum amylase activity, and to identify amylase-producing bacteria. The research was conducted by survey method. The research stages included screening for amylolytic bacteria, preparation of growth curves, amylase production, optimizing amylolytic activity at various temperatures (35ºC; 36ºC; 37ºC; 38ºC) and pHs (4.5; 5; 5.5; 6)  and  characterization  of  amylolytic  isolates.  The  parameters  measured  were  amylolytic  index, amylase  activity  quantitatively,  total  number  of  bacteria,  and  identity  of  amylolytic  bacteria  from mangrove  sediments.  Data  analysis  was  done  descriptively.  The  results  showed  that  the  highest amylolytic  index  were  shown  by  isolate  LG113  with  an  amylolytic  index  value  of  9.86  from  10 amylolytic isolates  from  mangrove sediments.  The optimum temperature  for  amylase activity  was 37ºC, which was 2.13 U/mL and the optimum pH was 6, which was 2.14 U/mL. The total number of amylolytic bacterial cells at the end of the production period was 1.94.10 13 cfu/mL. The amylolytic isolate LG113 belongs to  Bacillus genera.
Key words : Amylase, Amylolytic Bacteria, Mangrove Sediment, pH, Temperature

## Abstrak
Sedimen  mangrove  merupakan  sumber  berbagai  mikroorganisme  pendegradasi  serasah  daun atau  bagian  tumbuhan  mangrove,  di  antaranya  bakteri  amilolitik.  Bakteri  yang  diisolasi  dari sedimen  mangrove  pantai  Logending  belum  diketahui  kemampuan  amilolitiknya.  Aktivitas amilase optimum dapat dipengaruhi oleh suhu dan pH. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan isolat bakteri sedimen mangrove dalam menghasilkan enzim amilase, mengetahui pH dan suhu optimum aktivitas amilase yang dihasilkan, dan mengidentifikasi bakteri penghasil amilase. Penelitian dilakukan dengan metode survei. Tahap penelitian meliputi, skrining bakteri amilolitik, pembuatan kurva tumbuh, produksi amilase, optimasi aktivitas amilolitik pada variasi suhu  (35ºC;  36ºC;  37ºC;  38ºC)  dan  pH    (4,5;  5;  5,5;  6)  serta  karakterisasi  isolat  amilolitik. Parameter yang diukur yaitu indeks amilolitik, unit aktivitas enzim amilase, jumlah total bakteri, dan identitas bakteri amilolitik asal sedimen mangrove. Analisis data dilakukan secara deskriptif. Hasil pengukuran indeks amilolitik tertinggi ditunjukkan oleh isolat LG113 dengan nilai indeks amilolitik 9,86 dari 10 isolat amilolitik asal sedimen mangrove. Suhu optimum aktivitas amilase adalah 37ºC yaitu sebesar 2,13 U/mL dan pH optimum adalah 6 yaitu sebesar 2,14 U/mL. Jumlah total  sel bakteri  amilolitik  pada  akhir  masa  produksi  adalah 1,94.10 13 cfu/mL.  Identitas  isolat bakteri amilolitik LG113 termasuk anggota genus Bacillus.
Kata Kunci: Amilase, Bakteri Amilolitik, pH, Sedimen Mangrove, Suhu.

## PENDAHULUAN
Lingkungan  pantai  Logending,  Kebumen, merupakan area wisata pantai Selatan dan merupakan muara  sungai  Bodo  dan  dibatasi  daratan  bukit berhutan.  Area  muara  dan  sebagian  pantai  wisata ditumbuhi  oleh  mangrove,  terutama Rhizophora sp. dan Nypa sp., serta sebagian lingkungan  merupakan area  penanaman  mangrove.  Kawasan  mangrove merupakan  ekosistem  unik  dan  ekstrim  karena ekosistem  berada  pada  daerah  peralihan  antara
daratan dan lautan, dipengaruhi oleh pasang surut air laut, terjadi percampuran antara air tawar dan air laut, akumulasi  berbagai  mineral  dan  memiliki  aktivitas mikroorganisme yang tinggi. Organisme lingkungan mangrove, baik makroorganisme maupun mikroorganisme  bersifat  toleran  terhadap  kondisi lingkungan yang ekstrim, seperti kondisi tanah tidak stabil,  kadar  garam  tinggi  dan  konsentrasi  karbon tinggi (Nurfajriyah et al ., 2017). Sedimen mangrove merupakan  tempat  pelapukan  serasah  daun  dan bagian  tumbuhan  mangrove  yang  mengandung
amilum,  karenanya  bakteri  sedimen  mangrove mampu  mendegradasi  amilum  dan  mengubahnya menjadi  molekul  gula  sederhana  yang  selanjutnya dimanfaatkan  oleh  organisme  yang  hidup  pada lingkungan  mangrove  sebagai  sumber  nutrisi (Silitonga et  al .,  2019).  Diversitas  mikroba predominan  pada  ekosistem  mangrove  memiliki kemampuan  yang  beragam  dan  potensiil  untuk dikembangkan  dalam  produksi/industri  enzim  dan industri  lainnya    (Sahoo  &  Dhal,  2009).  Kondisi alami  lingkungan  dan  aktivitas  masyarakat  dapat berpengaruh  terhadap  diversitas,  mikroorganisme. Penelitian mikrobiologi di sedimen mangrove pantai Logending  belum  banyak  dilaporkan,  terutama tentang bakteri amilolitik yang berperan mendegradasi  komponen  amilum  yang  bersumber pada  serasah  daun  mangrove  atau  bagian  tanaman mangrove.
Bakteri  amilolitik  merupakan  bakteri  yang mampu  menghidrolisis  amilum  atau  pati,  karena dapat  menghasilkan  enzim  amilase  (Kresnawaty et al .,  2019).  Bakteri  amilolitik  yang  kontak  langsung dengan  substrat  amilum  akan  memutuskan  ikatan glikosida  pada  senyawa  polimer  amilum  menjadi monomer  yang  lebih  sederhana  seperti  maltosa, dekstrin,  dan  glukosa  (Nurfajriyah et  al .,  2017). Produksi  dan  aktivitas  enzim  amilase  oleh  bakteri dipengaruhi oleh beberapa faktor di antaranya suhu, pH,  waktu,  jenis  bakteri,  jenis  dan  konsentrasi substrat (Arun & Sivashanmugam., 2017; Istia’nah et al .,  2020).  Amilase  bermanfaat  dalam  industri makanan, tekstil, kertas, dan detergen (de Souza & de Oliveira e Magalhães , 2010).
Isolat bakteri LG8, LG13, LG20, LG21, LG37, LG45,  LG50,  LG85,  LG108  dan  LG113  telah diisolasi  dari  sedimen  mangrove  pantai  Logending (Pramono et  al .,  2021)  dan  belum  diketahui kemampuan amilolitiknya. Tujuan dari penelitian ini yaitu mengetahui kemampuan isolat bakteri sedimen mangrove  pantai  Logending  dalam  menghasilkan enzim  amilase,  mengetahui  suhu  dan  pH  optimum aktivitas  amilase,  dan  mengetahui  identitas  isolat bakteri  amilolitik  asal  sedimen  mangrove  pantai Logending.

## MATERI DAN METODE
Penelitian dilakukan dengan metode survei dan dilaksanakan  dari  bulan  Februari-Mei  2021.  Bahan penelitian  terdiri  atas  10  isolat  bakteri  asal  sedimen mangrove  pantai  Logending  koleksi  Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Biologi  Unsoed,  media Nutrient  Agar (NA,  Oxoid), Nutrient  Broth (NB, Oxoid),  , Tryptone  Soya  Broth (TSB,  Oxoid  )+1% pati, Starch Agar (Soluble starch-Merck 10g/L, beef extract  3g/L,  agar  12g/L,  akuades  1L),  larutan  pati, larutan  NaCl  fisiologis,  alkohol  69%,  buffer  sitrat fosfat, lugol`s  iodin ,  reagen  asam  dinitrosalisilat (DNS),  etanol  96%,  NaOH.  Alat  yang  digunakan
adalah autoklaf, Laminar Air Flow (LAF), timbangan analitik, shacker  incubator , hotplate  sitrrer ,  oven, mesin  sentrifugasi,  spektrofotometer,  mikroskop cahaya,  refrigerator, waterbath ,  pembakar  spirtus, microtube, dan alat gelas yang lazim digunakan kerja mikrobiologi.
Skrining bakteri amilolitik (Istia’nah et al. (2020) Isolat  bakteri  diinokulasikan  secara spot inoculation pada  medium  SA.  Kultur  diinkubasi selama  48  jam  pada  suhu  ruang  (±28 ℃ ).  Biakan ditetesi reagen iodin dan zona bening yang terbentuk di  sekitar  koloni  diukur  dengan  menggunakan penggaris.  Indeks  amilolitik  ditentukan  dengan rumus:

## Indeks Amilolitik (IA): DZB−DKB DKB
Keterangan:
DZB  : Rata-rata diameter zona bening (mm) DKB  : Rata-rata diameter koloni bakteri (mm)
Pembuatan kurva standar dan kurva pertumbuhan (Istia’nah et al ., 2020)
Pengukuran  fase  pertumbuhan  diawali  dengan membuat kurva standar bakteri dengan menginokulasikan  sebanyak  1  mL  inokulum  ke dalam  100  mL  medium  TSB,  kemudian  diinkubasi pada shaker  incubator 150  rpm  pada  suhu  30 o C selama 24 jam. Kultur bakteri dibuat seri pengenceran sampai dengan tingkat pengenceran suspensi 10 -1 -10 - 6 menggunakan  larutan  NaCl  fisiologis  0,85%. Masing-masing tingkat pengenceran suspensi diukur absorbansi pada λ 600 nm dan penghitungan dengan metode total  plate  count (TPC)  pada  medium  NA yang  diinkubasi  selama  24    jam  pada  suhu  ruang. Hubungan  antara  nilai  absorbansi  dan  hasil  TPC adalah kurva standar dan dihitung persamaan regresi yang  terbentuk,  selanjutnya  digunakan  sebagai pedoman  untuk  penghitungan  jumlah  bakteri  pada pengamatan  kurva  pertumbuhan.  Penghitungan jumlah  koloni  yang tumbuh pada metode TPC yang memenuhi  persyaratan  yakni  25-250  koloni  dengan rumus:
Jumlah bakteri (CFU/mL) = Ʃ x 1 p x 1 pp
Keterangan: Ʃ : Jumlah koloni pada cawan P : volume pengenceran SP  : volume inokulum
Pembuatan  kurva  tumbuh,  sebanyak  15  mL kultur  bakteri  diinokulasikan  ke  dalam  150  mL medium TSB. Kultur diinkubasi selama 24  jam pada suhu  ruang.  Sebanyak    3  mL  dari  hasil  propagasi dimasukkan  ke  dalam  kuvet  untuk  diukur  nilai Optical  Density (OD)  setiap  2  jam  selama  24  jam
pada  λ  600  nm.  Blanko  pada  pembuatan  kurva standard  dan  kurva  tumbuh  menggunakan  medium TSB.  Hasil  pengukuran  absorbansi  dikonversi menjadi cfu/mL menggunakan persamaan yang telah diperoleh  sebelumnya.  Plotting  cfu/mL  (sumbu  y) dan waktu  (sumbu x) menghasilkan kurva pertumbuhan  bakteri.  Kultur  pada  fase  logaritmik digunakan untuk pengujian selanjutnya.
Produksi  ekstrak  kasar  amilase  (Istia’nah et  al., 2020 dengan modifikasi)
Sebanyak 10% (v/v) inokulum yang berasal dari fase  logaritmik  dengan  kepadatan  sel  4,36.10 10 cfu/mL  diinokulasikan  ke  dalam  100  mL  medium TSB+1%  pati.  Kultur    diinkubasi  dalam shaker incubator pada  suhu  30 o C  selama  48  jam  dengan kecepatan  150  rpm.  Ekstraksi  enzim  amilase dilakukan  dengan  cara,  kultur  yang  telah  diinkubasi disentrifus  pada  suhu  rendah  4 o C  dengan  kecepatan 6720  G  selama  10-15  menit.  Supernatan  yang dihasilkan merupakan ekstrak kasar enzim.
Pembuatan kurva standar glukosa  (Rismawati et al. , 2016; Yasin et al. , 2017) Glukosa  sebanyak  1  mg  dilarutkan  dalam  1  L akuades.  Larutan  glukosa  dibuat  konsentrasi  0,  10, 20,  40,  60,  80  dan  100  ppm.  Masing-masing konsentrasi  glukosa  diambil  sebanyak  1  mL  dan ditambahkan  1  mL  reagen  DNS,  tabung  dipanaskan pada  suhu  100 0 C  selama  5-15  menit  hingga  larutan berwarna  merah-coklat.  Masing-masing  konsentrasi ditambahkan akuades hingga volume 10 mL. Larutan diukur  absorbansi  pada  λ  540  nm  dengan spektrofotometer. Nilai hasil absorbansi dibuat kurva regresi linier.

## Penentuan  Suhu  Optimum  Aktivitas  Enzim (Supriyanti & Heryanto., 2013)
Sebanyak 1 mL supernatan ekstrak kasar enzim dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  kemudian ditambahkan larutan pati sebanyak 1 mL (larutan pati dalam  buffer  sitrat  fosfat  pH  7).  Tabung-tabung selanjutnya  diinkubasi  selama  10  menit  pada waterbath dengan  variasi  suhu  35ºC;  36ºC;  37ºC; 38ºC.  Reaksi  dihentikan  dengan  menambahkan sebanyak 2 mL reagen DNS ditambahkan pada tiap- tiap tabung. Tabung dipanaskan selama 5 menit pada suhu  90 o C,  kemudian  didinginkan  dan  ditambahkan akuades  sebanyak  10  mL.  Masing-masing  larutan diukur  absorbansinya  menggunakan  spektrofoto- meter  pada λ 540 nm.

## Penentuan  pH  Optimum  Aktivitas  Enzim
(Supriyanti & Heryanto, 2013)
Sebanyak 1 mL supernatan ekstrak kasar enzim dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  kemudian ditambahkan  larutan  pati  sebanyak  1  mL(larutan  1 g/100  mL  dilarutkan  buffer  sitrat  posfat)  dengan variasi  pH  4,5;5;5,5;6.  Tabung-tabung  selanjutnya
diinkubasi selama 10  menit pada waterbath dengan suhu  optimum  yang  telah  diperoleh  dari  percobaan sebelumnya. Reaksi dihentikan dengan menambahkan  sebanyak  2  mL  reagen  DNS ditambahkan  pada  tiap  tabung.  Tabung  dipanaskan selama  5  menit  pada  suhu  90 o C,  kemudian didinginkan  dan  ditambahkan  akuades  sebanyak  10 mL.  Masing-masing  larutan  diukur  absorbansinya menggunakan  spektrofotometer  pada  λ  540  nm. Blanko  dibuat  dengan  tahapan  yang  sama  tanpa menambahkan  ekstrak  kasar  enzim  amilase.  Nilai absorbansi yang dihasilkan, kemudian dimasukkan ke dalam  persamaan  pada  kurva  standar  glukosa.  Satu unit  aktivitas  enzim  dihitung  menggunakan  rumus sebagai berikut:
AE = C BMG x t x H
E
Keterangan : AE : Aktivitas Enzim C
: Konsentrasi glukosa (ppm)
BMG  : Berat molekul glukosa (180) T : Waktu inkubasi (10 menit)
H : Volume substrat+enzim E : Volume enzim
Karakterisasi  morfologi  koloni,  sel,  dan  fisiologi bakteri  amilolitik  potensial  (Cappuccino  & Sherman, 2014)
Karakterisasi  isolat  bakteri  amilolitik  potensial dengan kode LG113 asal sedimen mangrove meliputi karakterisasi  morfologi  koloni,  sel  dan  fisiologis. Karakterisasi  morfologi  koloni  bakteri  meliputi bentuk, permukaan, diameter, tepi, elevasi dan warna koloni. Karakterisasi morfologi sel meliputi pengujian  sifat  dinding  sel  atau  pewarnaan  Gram, bentuk  sel,  adanya  endospora  dan  pengujian motilitas. Isolat bersifat Gram positif bila sel tampak berwarna  ungu  pada  pengamatan  mikroskopis,  dan hasil uji positif pada uji endospora dan motilitas bila terdapat  endospora  dan  menunjukkan  pertumbuhan menyebar  dari  garis  inokulasi  karena  sifat  motil. Karakterisasi  fisiologi  meliputi  pengujian  katalase, oksidase,  sitrat,  fermentasi  karbohidrat  (glukosa, laktosa  dan  sukrosa,  maltosa,  dan  manitol)  dan oksidatif fermentatif (O/F), pertumbuhan pada pH 3 dan 9 serta  suhu 4 o C dan 55 o C. Hasil uji positif ketika terbentuk gelembung gas pada uji katalase, terbentuk warna biru marun pada uji oksidase, terbentuk warna kuning pada uji karbohidrase dan uji O/F, terbentuk suspensi sel yang keruh ketika tumbuh pada  pH dan suhu tertentu.

## Analisis data
Data  aktivitas  aamilase  dianalisis  secara deskriptif  dan  hasil  karakterisasi  bakteri  mengacu pada  buku  “ Bergey’s  Manual  of  Systematic Bacteriology Second  Edition (Vos et al., 2009)
Tabel 1. Indeks Amilolitik Isolat Bakteri Sedimen Mangrove Pantai Logending
No Kode Isolat Rata-rata Diameter Zona Bening (mm) Rata-rata Diameter Koloni (mm) Indeks Amilolitik 1 LG 108 2,5 1,35 0,85 2 LG 85 2,6 1,3 1 3 LG 50 3,75 2,75 0,36 4 LG 8 3,75 2,7 0,38 5 LG 37 2,6 1,65 0,57 6 LG 21 3 1,85 0,62 7 LG 113 2,5 0,23 9,86 8 LG 20 2,75 1,85 0,48 9 LG 45 1,7 1 0,7 10 LG 13 1,75 1 0,75

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  uji  amilolitik  terhadap  isolat  LG108, LG85,  LG50,  LG8,  LG37,  LG21,  LG113,  LG20, LG45  dan  LG13  menunjukkan  indeks  amilolitik berkisar  antara  0,36-9,86  (Tabel  1).  Isolat  LG113 menghasilkan  indeks  amilolitik  tertinggi  yaitu  9,86, sehingga  isolat  LG113  digunakan  untuk  tahap pengujian aktivitas enzim pada variasi suhu dan pH. Indeks  amilolitik  yang  tinggi  ditandai  dengan  zona bening  yang  terbentuk  lebih  besar  dibanding  koloni bakteri, karena berkaitan dengan enzim amilase yang disekresikan pada medium (Gambar 1). Zona bening yang  terbentuk  merupakan  hasil  reaksi  dari pemecahan senyawa pati menjadi senyawa sederhana, semakin luas zona bening yang terbentuk, maka aktivitas amilolitiknya semakin tinggi (Zubaidah et al., 2019).
Produksi ekstrak kasar enzim amilase isolat LG 113  menggunakan  inokulum  fase  eksponensial  10 jam dengan jumlah sel 4,36.10 10 cfu/mL. Jumlah sel
bakteri setelah produksi diperoleh 1,94.10 13 cfu/mL. Jumlah  sel  bakteri  pada  awal  inokulasi  dan  akhir masa  produksi  menunjukkan  adanya  penambahan jumlah  sel.  Hal  ini  menandakan  populasi  bakteri mengalami  masa  pertumbuhan  logaritmik.  Sudin et al (2020) menyatakan bahwa pada fase logaritmik sel bakteri yang mampu beradaptasi dengan lingkungan baru  akan  aktif  membelah  sehingga  terjadi peningkatan sel bakteri. Sumber nutrisi pada medium yang  memadai  menyebabkan  aktivitas  metabolisme bakteri  berada  pada  kondisi  optimum  dalam menghasilkan  senyawa  metabolit  primer,  salah satunya enzim. Setelah bakteri masuk ke dalam fase stasioner  jumlah  selnya  konstan  dan/atau  menurun karena kompetisi dalam menggunakan nutrisi.
Aktivitas amilase tertinggi isolat LG113 dicapai pada suhu 37ºC yaitu sebesar 2,13 U/mL (Gambar 2). Hasil  penelitian  ini  sejalan  dengan    penelitian Isti`anah et  al. (2020)  bahwa  aktivitas  amilase tertinggi  yang  dihasilkan  oleh Bacillus  megaterium pada suhu 37ºC yaitu sebesar 1,279 U/mL. Aktivitas
Gambar 1. Aktivitas amilolitik isolat bakteri asal mangrove secara kualitatif pada medium Strach Agar (skala 1:0,3)
Gambar 2. Aktivitas amilase isolat LG113 pada  suhu yang berbeda
Gambar 3. Aktivitas amilase isolat LG113 pada pH yang berbeda
amilase tertinggi yang  dihasilkan oleh Arthrobacter arilaitensi ditunjukkan pada suhu 30ºC yaitu sebesar 2,7  U/mL  (Purnawan et  al ,  2016).  Perbedaan  suhu optimum  aktivitas  amilase  dapat  dipengaruhi  oleh jenis  isolat  bakteri  yang  digunakan  karena setiap bakteri  memiliki  suhu  optimum pertumbuhan  yang berbeda  (Wulandari et  al., 2017).  Aktivitas  enzim meningkat  dengan  meningkatnya  suhu  karena peningkatan  energi  kinetik  yang  menyebabkan adanya  peningkatan  tumbukan  antara  enzim  dan substrat,  sehingga  menghasilkan  katalisis  produk- substrat yang lebih tinggi (Fatoni & Zusfahair, 2012). S uhu  merupakan  salah  satu  faktor  lingkungan  yang mempengaruhi aktivitas enzim. Suhu optimum akan meningkatkan aktivitas enzim dalam proses hidrolisis substrat,  sehingga  meningkatkan  produk  proses hidrolisis  substrat  (Vaikundamoorthy et  al., 2018). Rodriguez et  al. (2006)  menyatakan  bahwa  enzim amilase umumnya tetap aktif pada kisaran suhu 37ºC- 75ºC .
Aktivitas amilase pada variasi pH 4,5; 5; 5,5; 6 menunjukkan aktivitas amilase isolat LG113 tertinggi diperoleh  pada  pH  6  yaitu  sebesar  2,14  U/mL
(Gambar 3). Istia`nah et al (2020), melaporkan bahwa aktivitas  amilase  tertinggi  yang  dihasilkan  oleh Bacillus megaterium pada pH 5 yaitu sebesar 1,241 U/mL.  Wahyuningsih et  al. (2019),  melaporkan bahwa Bacillus amyloliquefaciens memiliki aktivitas amilase  tertinggi  pada  pH  6,5  yaitu  sebesar  1,4467 U/mL.  Purnawan et  al (2016),  melaporkan  bahwa bakteri Arthrobacter  arilaitensi memiliki  aktivitas amilase tertinggi pada pH 7 yaitu sebesar 2,1 U/mL. Istia`nah et al. (2020), menyatakan bahwa pH sangat berpengaruh  terhadap  kinerja  dari  aktivitas  amilase dalam  proses  hidrolisis  pati.  Perubahan  pH  dapat mengubah ionisasi rantai samping asam amino pada sisi  aktif  enzim,  maka  pada  pH  optimum  enzim berada  dalam  konformasi  terbaik.  Kondisi  pH optimum  menghasilkan  aktivitas  amilase  yang tertinggi (Fatoni & Zusfahair, 2012).   Enzim amilase tetap  aktif  dalam  proses  hidrolisis  umumnya  pada kisaran pH 4,0-8,0 (Carvalho et al, 2008). Subagiyo et  al. (2017),  menyatakan  bahwa  bakteri  hidrolitik yang  toleran  terhadap  kondisi  lingkungan  yang ekstrim  akan  menghasilkan  metabolit  primer  seperti enzim yang juga toleran terhadap kondisi lingkungan yang ekstrim.
1,65 1,77 2,13 2,11 0 0,5 1 1,5 2 2,5 35 36 37 38 Ak tivi tas Am il as e (Un it /m L ) Suhu (ºC) 1,36 1,78 1,98 2,14 0 0,5 1 1,5 2 2,5 4,5 5 5,5 6 Ak tivi tas Am il as e (Un it /m L ) pH
Hasil  karakterisasi  bakteri  amilolitik  secara makromorfologi, mikromorfologi, biokimiawi, nutrisional  dan  fisiologis  (Tabel  2)  yang  mengacu pada  Vos et  al. (2009)  menunjukkan  bahwa  isolat LG113  merupakan  anggota  dari  genus  Bacillus. Koloni anggota genus Bacillus berbentuk bulat atau tidak beraturan. Permukaan koloni dapat mengkilap, lembab, bergranula hingga berkerut. Genus Bacillus memiliki  warna  koloni  dari  abu-abu  cream  hingga putih  pucat,  namun  beberapa  spesies  dapat menghasilkan  warna  hitam,  coklat,  oranye,  merah muda atau kuning. Elevasi koloni Bacillus beragam dari  rata  hingga  cembung,  dan  tepi  koloni  beragam dari rata hingga bergelombang.  Bentuk sel  Bacillus batang dengan tipe Gram positif. Spesies dari genus Bacillus memiliki kemampuan membentuk endospora  pada  akhir  fase  eksponensial  sebagai bentuk  pertahanan  hidup  pada  saat  kondisi lingkungan  yang  tidak  menguntungkan.  Sebagian besar  spesies  dari  genus  Bacillus  bersifat  motil. Puspita et al. (2017), melaporkan bahwa makromorfologi  koloni  dari  12  isolat Bacillus sp. memiliki  elevasi  koloni  dari  datar  hingga  cembung dan tepi koloni rata. Koloni berbentuk bulat dengan warna putih. Karakter mikromorfologi dari 12 isolat Bacillus sp.  yang  diamati  memiliki  sel  berbentuk batang  dan  Gram  positif,  memiliki  endospora  dan bersifat motil.
Vos et al. (2009)  memaparkan bahwa sebagian besar  anggota  genus  Bacillus  tidak  memiliki kemampuan dalam memproduksi indol. Berdasarkan penggunaan  sitrat  sebagai  satu-satunya  sumber karbon,  tidak  semua genus  Bacillus  dapat menggunaan  sitrat  sebagai  satu-satunya  sumber karbon.  Pengujian  katalase  pada  sebagian  bakteri dari  genus  Bacillus  yang  bukan  termasuk  ke  dalam kelompok bakteri asam laktat (BAL)
menginterpretasikan hasil positif. Pengujian oksidase pada genus Bacillus hasilnya beragam, pada spesies B. subtilis beberapa strain menginterpretasikan hasil positif  dan  sebagian  negatif.  Rahayuningsih et  al.
(2018),  dan  Darmayasa  (2008),  melaporkan  bahwa isolat Bacillus sp.  menunjukkan  uji  indol  negatif. Habibie et  al (2014),  melaporkan  bahwa  pengujian sitrat pada B. lichenformis menginterpretasikan hasil negatif  dan  pada B.  aerius positif.  Ismail et  al.
(2018),  melaporkan  bahwa  uji  katalase  BAL menginterpretasikan  hasil  negatif.  Kelompok  BAL tidak  membutuhkan  O 2 dalam  pertumbuhannya karena kelompok BAL termasuk ke dalam golongan bakteri  anaerob.  Puspita et  al. (2017),  melaporkan bahwa  pengujian  oksidase  pada  isolat Bacillus sp. menginterpretasikan hasil positif.
Flori et al . (2020), melaporkan bahwa pada uji oksidatif-fermentatif, Bacillus spp.  menunjukkan hasil positif pada medium yang diberi dan yang  tidak diberi parafin, hal ini  menunjukkan bahwa Bacillus spp.  bersifat  fakutatif  anaerob.  Anggota  genus Bacillus  bersifat  aerob,  anaerob  dan  fakultatif anaerob dalam kebutuhan oksigen (Vos et al., 2009). Pengujian fermentasi karbohidrat pada Bacillus sp.  LG113  menunjukkan  hasil  positif  pada  glukosa dan  sukrosa,  sedangkan  laktosa  negatif.  Pengujian nutrisional  menunjukkan  isolat  LG113  mampu menggunakan glukosa, sukrosa dan fruktosa, sebagai satu-satunya  sumber  karbon,  sebaliknya  tidak  pada laktosa,  maltosa  dan  manitol.  Sebagian  besar Bacillus sp.  dapat  menggunakan  glukosa,  sukrosa dan  fruktosa  sebagai  satu-satunya  sumber  karbon serta  dapat  memfermentasikan  glukosa  dan  sukrosa (Vos et  al. ,  2009).  Triandini  &  Suryadi  (2018), melaporkan bahwa isolat Bacillus sp. menginterpretasikan  hasil  positif  pada  glukosa  dan sukrosa serta negatif pada laktosa.

## Tabel 2. Hasil karakterisasi bakteri amilolitik isolat LG113
Karakterisasi Hasil Karakterisasi Hasil Makromorfologi: Fermentasi Karbohidrat: Bentuk koloni Bulat Glukosa (A/G) +/+ Permukaan koloni Mengkilap Laktosa (A/G) -/- Ukuran koloni Kecil (3mm) Sukrosa (A/G) +/+ Tepi koloni Rata Nutrisional: Elevasi koloni Timbul/Raised Glukosa + Warna koloni Cream putih Laktosa - Mikromorfologi : Sukrosa + Bentuk sel Batang Fruktosa + Dinding sel Gram + Maltosa - Endospora ada Manitol - Motilitas motil Fisiologis : Biokimiawi : Suhu 4 ºC - Indol - Suhu 55 ºC + Sitrat + pH 3 - Oksidase + pH 9 - Katalase + Oksidatif/Fermentatif +/+
Pengujian  fisiologis  bakteri  amilolitik Bacillus sp. LG113  menunjukkan bahwa isolat tidak tumbuh pada  suhu  4ºC  dan  tumbuh  pada  suhu  55ºC.  Isolat LG113  merupakan  bakteri  neutrofilik  karena  tidak tumbuh  pada  pH  3  dan  9.  Vos et  al. (2009), menjelaskan  bahwa  anggota  genus  Bacillus  tidak dapat  tumbuh  pada  suhu  4ºC  dan  beberapa  strain dapat tumbuh pada suhu 55ºC, meskipun pertumbuhannya  tidak  sebaik  pada  suhu  optimum. Suhu  optimum Bacillus sp.  pada  umumnya  berkisar 28-40ºC. Bacillus sp. tidak dapat tumbuh pada pH 3 dan 9, karena pH optimum Bacillus sp. berkisar pada pH 5,5-8,5. Islamiah et al. (2017), melaporkan bahwa isolat Bacillus sp.  tumbuh  pada  suhu  28-37ºC  dan suhu maksimumnya 40ºC. Bacillus sp. tumbuh rata- rata  pada  pH  6-7.  Behera et  al (2016),  menyatakan bahwa beberapa bakteri asal mangrove, salah satunya yakni anggota genus Bacillus hidup pada rentang pH 5-7 dengan suhu maksimum 40ºC.

## SIMPULAN
Sepuluh  isolat  bakteri  asal  mangrove  (LG108, LG85,  LG50,  LG8,  LG37,  LG21,  LG113,  LG20, LG45  dan  LG13)  menunjukkan  kemampuan amilolitik  dengan  nilai  indeks  amilolitik  berkisar antara 0,36-9,86. Isolat LG113 memiliki kemampuan amilolitik  tertinggi  dengan  nilai  indeks  amilolitik 9,86.  Aktivitas  amilase  isolat  ini  memiliki  suhu optimum pada 37ºC dengan aktivitas amilase sebesar 2,13  U/mL  dan  pH  optimum  adalah  6  dengan aktivitas  amilase  sebesar  2,14  U/mL.  Berdasarkan karakter  morfologi  dan  fisiologi,  isolat  LG113 termasuk ke dalam genus Bacillus.

## Ucapan terima kasih
Terima  kasih  kepada  projek  penelitian  yang didanai oleh Badan Layanan Umum (BLU) Unsoed 2020  dengan  skema  penelitian  Riset  Peningkatan Kompetensi.

## DAFTAR REFERENSI
Arun,  C.  &  Sivashanmugam,  P.,  2017.  Study  on
Optimization  of  Process  Parameters  for Enhancing  the  Multi-Hydrolytic  Enzyme Activity  in  Garbage  Enzyme  Produced  from Preconsumer  Organic  Waste. Bioresource Technology , 226, pp. 200-210.
Behera,  B.C.,  Singdevsachan,  S.K.,  Mishra,  R  R., Sethi, B.K., Dutta, S.K. & Thatoi, H.N., 2016. Phosphate Solubilising Bacteria from Mangrove  Soils  of  Mahanadi  River  Delta, Odisha,  India. World  journal  of  agricultural research , 4(1), pp. 18-23.
Cappuccino, J.G. & Sherman, N. 2014. Microbiology:  A  Laboratory  Manual,  10 th
Edition . England: Pearson Education Press.
Carvalho,  R.V.D.,  Correa,  T.L.R.,  Silva,  J.C.M.D., Mansur, L.R.C.D O. & Martins, M.L.L., 2008. Properties of an Amylase from Thermophilic Bacillus sp. Brazilian Journal of Microbiology , 39(1), pp. 102-107.
Darmayasa  I.B.G.,  2008.  Isolasi  dan  Identifikasi Bakteri  Pendegradasi  Lipid  (Lemak)  pada Beberapa  Tempat  Pembuangan  Limbah  dan Estuari DAM Denpasar. Jurnal Bumi Lestari , 8(2), pp. 122-127.
Fatoni, A. & Zusfahair. 2012. Thermophilic Amylase from Thermus sp.  Isolation  and  Its  Potential Application for Bioethanol Production. Songklanakarin  J.  Sci.  Technol.  34  (5),  pp. 525-531
Flori,  F.,  Mukarlina,  M.  &  Rahmawati,  R.,  2020. Karakterisasi Bacillus spp.  dan Fusarium sp. dari Tanaman Lada ( Piper nigrum L.) di Desa Jaga. Protobiont , 9(1), pp. 50-55.
Habibie, F.M., Wardani, A K.& Nurcholis, M., 2014.
Isolasi dan Identifikasi
Molekuler Mikroorganisme Termofilik Penghasil Xilanase dari Lumpur Panas Lapindo. Jurnal Pangan dan Agroindustri , 2(4), pp. 231-238.
Islamiah, D. N. & Rahmawati, R. L., 2017. Jenis-jenis Bakteri  Rizosfer  Kawasan  Tanah  Mangrove Avicennia  di  Kelurahan  Terusan,  Kecamatan
Mempawah Hilir, Kalimantan Barat. Protobiont , 6(3), pp. 165-172.
Istia'nah,  D.,  Utami,  U.  &  Barizi,  A.,  2020. Karakterisasi  Enzim  Amilase  dari  Bakteri Bacillus  megaterium pada  Variasi  Suhu,  pH dan Konsentrasi Substrat. Jurnal Riset Biologi dan Aplikasinya , 2(1), pp. 11-17.
Kresnawaty,  I.,  Wahyu,  R.  &  Sasongko,  A.,  2019. Aktivitas  Amilase  Bakteri  Amilolitik  Asal Larva Black  Soldier  Fly ( Hermetia  illucens ).
Menara Perkebunan , 87(2), pp. 140-146.
Nurfajriyah,  S.,  Inggraini,  M.  &  Ilsan,  N.A.,  2017.
Skrinning Rhizobakteri Mangrove Rhizosphora sp.  Penghasil  Amilase. Jurnal Mitra Kesehatan , 1(1), pp. 12-17.
Pramono, H., Mariana, A., Ryandini, D., Sudiana, E. 2021.  Diversity  of  Cellulolytic  Bacteria Isolated from Coastal Mangrove Sediment in Logending  Beach,  Kebumen,  Indonesia. Biodiversitas 22(4), pp.1869-1878
Purnawan,  A.,  Capriyanti,  Y.,  Kurniatin,  P.A.  & Rahmani, N., 2016. Optimasi Produksi Enzim Amilase dari Bakteri Laut Jakarta ( Arthrobacter  arilaitensis ). Jurnal  Biologi Indonesia , 11(2), pp. 215-244.
Puspita, F., Ali, M. & Pratama, R., 2017. Isolasi dan Karakterisasi Morfologi dan Fisiologi Bakteri Bacillus sp.  Endofitik  dari  Tanaman  Kelapa Sawit  ( Elaeis  guineensis Jacq.). Jurnal Agroteknologi Tropika , 6(2), pp. 44-49.
Rahayuningsih,  T.,  Isnatin,  U.  &  Parwi,  P.,  2018. Isolasi  dan  Seleksi  Bakteri  sebagai  Agen Bioremediasi Limbah Cair Pabrik Kayu Putih. Jurnal Agri-Tek: Jurnal Penelitian Ilmu-Ilmu Eksakta , 19(2), pp. 96-99.
Rismawati, Y., Bahri, S. & Prismawiryanti, P., 2016. Produksi  Glukosa  dari  Jerami  Padi  ( Oryza sativa ) Menggunakan Jamur Trichoderma sp. KOVALEN: Jurnal Riset Kimia , 2(2), pp. 67- 76.
Rodriguez,  V.B.,  Alameda,  E.J.,  Gallegos,  J.M., Requena,  A.R.  &  Lopez,  A.G.,  2006. Enzymatic Hydrolysis of Soluble Starch with an  α ‐ Amylase  from Bacillus  licheniformis . Biotechnology progress , 22(3), pp. 718-722.
Sahoo, K. & Dhal, N.K. &. 2009. Potential Microbial Diversity  in  Mangrove  Ecosystems:  A Review .  Indian  Journal  of  Geo-Marine Sciences 38(2), pp. 249-256.
Silitonga, L. R., Nursyirwani, N. & Effendi, I., 2019.
Isolation,  Identification  and  Sensitivity  of
Amylolytic Bacteria from Mangrove Ecosystem  Sediment  in  Purnama  Marine Station  Dumai  on  the  Pathogenic  Bacteria. Asian  Journal  of  Aquatic  Sciences ,  2(3),  pp. 257-266.
de Souza, P.M. & de Oliveira e Magalhães, P. 2010. Application  of  Microbial  α-Amylase  in Industry—A  Review.  Brazilian  Journal  of Microbiology, 41, pp. 850-861
Subagiyo, S., Djarod, M.S.R. & Setyati, W.A., 2017.
Potensi Ekosistem Mangrove sebagai Sumber Bakteri untuk Produksi Protease, Amilase dan Selulase. Jurnal  Kelautan  Tropis ,  20(2),  pp.
106-111.
Sudin,  S.,  Sulistijowati,  R.  &  Hermain,  R.M.  2020. Penapisan  dan  Pola  Pertumbuhan  Bakteri Kitinolitik dari Cangkang Rajungan ( Portunus pelagicus ). Jambura Fish Processing Journal , 2(1), pp. 36-45.
Supriyanti,  F.M.T.  &  Heryanto,  T.E.,  2013. Penentuan  Aktivitas  Amilase  Kasar  Termofil Bacillus subtilis Isolat Kawah Gunung Darajat Garut,  Jawa  Barat. Bionatura  Jurnal  Ilmu- ilmu Hayati dan Fisik , 15(2), pp. 107-113.
Triandini,  I.G.A.A.H.  &  Suryadi,  B.F.,  2018.  Uji Aktivitas  dan  Produksi  Antibakteri Bacillus
lentus yang  diisolasi  dari  Sistem  Pencernaan Landak  Laut  dalam  Menghambat  Bakteri Penyebab  Infeksi  pada  Kehamilan. Jurnal Sangkareang Mataram , 4(2), pp. 34-40.
Vaikundamoorthy,  R.,  Rajendran,  R.,  Selvaraju,  A.,
Moorthy, K. & Perumal, S., 2018. Development  of  Thermostable  Amylase Enzyme  from Bacillus  cereus for  Potential Antibiofilm  Activity. Bioorganic  chemistry , 77, pp. 494-506.
Vos, P., Garrity, G., Jones, D., Krieg, N.R., Ludwig, W.,  Rainey,  F.A.  &  Whitman,  W.B.,  2009. Bergey's  manual  of  systematic  bacteriology : Volume  3:  The  Firmicutes . 2 nd Edition. New York: Springer Science & Business Media.
Wahyuningsih, S.S., Mursyanti, E. & Atmodjo, P.K.,
2019.  Pola  Pertumbuhan  dan  Produksi  α- Amilase Bacillus  amyloliquefaciens pada Substrat Pati Jagung dengan Variasi pH Awal Media  dan  Waktu  Inkubasi. Biota:  Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Hayati , 9(2), pp. 84-91.
Wulandhari,  P.S.,  Rachmawati,  D.  &  Susilowati,  T. 2017.  Pengaruh  Kombinasi  Ekstrak  Nanas dalam  Pakan  Buatan  dan  Probiotik  pada Media terhadap Efisiensi Pemanfaatan Pakan dan  Pertumbuhan  Ikan  Tawes  ( Puntius javanicus ). Journal of Aquaculture Management  and  Technology ,  6(4),  pp.  157- 166.
Yasin,  M.N.,  Astuti,  W.  &  Gunawan,  R.,  2017. Screening  Bakteri  Penghasil  Amilase  dari Sedimen  Sumber  Air  Panas  Dondang  Muara Jawa. Jurnal Atomik , 2(2), pp. 213-215.
Zubaidah, A., Prasetyo, D., Handajani, H., Rohmah, S.  P.  &  Puspita,  D.  A.,  2019.  Screening Bakteri  Selulolitik  dan  Amilolitik  pada Rumen Sapi sebagai Kandidat Probiotik Pada Budidaya  Ikan  secara In  Vitro . Jurnal  Riset Akuakultur , 14(4), pp. 261-271