## _______________________________________________________________

## Efek  Ekstrak  Etanol  70%  Daun  Kemangi  Ocimum  americanum  L.) Terhadap Perbaikan Sel Spermatogenik Tikus Sprague-Dawley Jantan

## Azrifitria, Eka Putri*
Program Studi Profesi Apoteker, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta, Indonesia Jl. Kertamukti, Cireundeu, Kec. Ciputat Tim., Kota Tangerang Selatan, Banten 15412

## *Corresponding author:  eka.putri@uinjkt.ac.id
Received: 29 Agustus  2022; Accepted:12 February  2023.
Abstract: Kemangi  is  a  strong  aromatic  herb  with  aphrodisiac  activity.  The  content  of  secondary  metabolites  that  are antioxidants in kemangi are thought to be able to overcome fertility disorders due to the work of free radicals.  The aim of this study was to screen for phytochemicals and to analyze the activity of 70% ethanol extract of kemangi leaves ( Ocimum americanum L.)  on  the  repair  of  spermatogenic  cells  in  male  sprague-dawley  rats  exposed  to  lead.  The  results  of phytochemical screening showed that the basil leaf extract was positive for alkaloids, flavonoids, tannins, and saponins. The results  of  administration  of  70%  ethanol  extract  of  kemangi  leaves  at  a  dose  of  50  mg/KgBW,  100  mg/KgBW,  and  200 mg/KgBW in rats that had been induced by lead acetate increased the diameter of the seminiferous tubules, the number of pachytene cells, and  round spermatid cells compared to the negative control but not significantly different (p > 0.05). The highest increase in all parameters of the spermatogenic cell repair test was given the kemangi leaves extract at a dose of 200 mg/KgBW.
Keywords: Fertility, kemangi, Ocimum americanum , phytochemical screening, spermatogenic
Abstrak : Kemangi merupakan herba aromatik kuat dengan aktivitas afrodisiak. Kandungan metabolit sekunder yang bersifat antioksidan  dalam kemangi diduga  mampu  mengatasi  gangguan  fertilitas  akibat  kerja  radikal  bebas.    Tujuan penelitian  ini adalah  melakukan  penapisan  fitokimia  dan  analisis  aktivitas  ekstrak  etanol  70%  daun  kemangi  ( Ocimum  americanum L.) terhadap  perbaikan  sel  spermatogenik  tikus  sprague-dawley  jantan  yang  diberi  paparan  timbal.  Hasil  penapisan  fitokimia menunjukkan  ekstrak  daun kemangi  positif  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  tannin,  dan  saponin. Hasil  pemberian  ekstrak etanol 70%  daun kemangi  dengan  dosis  50  mg/KgBB, 100  mg/KgBB, dan 200  mg/KgBB  pada tikus yang  telah diinduksi timbal  asetat    meningkatkan  diameter  tubulus  seminiferous,  jumlah  sel  pakiten,  dan  sel  round  spermatid  dibandingkan dengan  kontrol  negatif    namun  belum  berbeda  bermakna  (p  >  0.05).  Peningkatan  semua  parameter  uji  perbaikan  sel spermatogenik tertinggi pada pemberian ekstrak daun kemangi dengan dosis 200 mg/KgBB.
Kata kunci: Fertilitas, kemangi, Ocimum americanum , penapisan fitokimia, spermatogenik
DOI: 10.15408/pbsj.v5i1.27787

## 1. PENDAHULUAN
Ocimum  americanum Linn . adalah  salah  satu tanaman herba  aromatik kuat. Di Indonesia herba ini dikenal  dengan  sebutan  kemangi  dan  merupakan salah  satu  tanaman  obat.  Herba  ini  umumnya digunakan sebagai sayuran dan pemberi aroma dalam masakan.  Berdasarkan world  flora  online ,  telah dilaporkan    66  spesies Ocimum sp.  dan  hanya beberapa  spesies  yang  sudah  digunakan  sebagai nutrasetikal,  kulinari  dan  kosmetik    yaitu; O. basilicum Linnaeus  (L.), O.  gratissimum L., O. tenuiflorum L., O.  canum Sims, O.  americanum L.
dan O.    Kilimandscharicum  Gu¨rke ( World  Flora Online  Data .  2017).  Kemangi  digunakan  untuk mengatasi  masalah  bau  mulut,  bau  badan,  masalah kulit,  antibakteri,  dan  memberikan  efek  kesegaran pada  tubuh  (Willianti  2022).  Kemangi  secara tradisional  juga  dimanfaatkan  sebagai  tanaman afrodisiak  (meningkatkan  libido).  Potensi  afrodisiak pada  tanaman  ditunjukkan  dengan  terjadinya  jumlah sel-sel  spermatogenik,  sehingga  dapat  meningkatkan fertilitas pada pria (Louis et al . 2019).
Kemangi  mempunyai  kandungan  metabolit  primer

## Pharmaceutical and Biomedical Sciences Journal
Volume 5(1), 2023, 1-8
beragam  berupa  alkaloid,  flavonoid,  tannin,  sterol, dan  minyak  menguap.  Penelitian  sebelumnya melaporkan  kemangi  mengandung  minyak  esensial berupa  asam  sinamat,  eugenol,  kamfer,  fenkon, limonen,  kavikol,  metil  kavikol,  α-terpineol,  dan linalool  (Matasyoh et  al .  2006).  Penelitian  yang dilakukan  Giri,  (2019)  melaporkan O.  americanum memiliki  kandungan  1,8  sineol  yang  lebih  tinggi dibandingkan spesies Ocimum lainnya.
Kandungan  senyawa  kimia  dalam  kemangi  ini mempunyai  aktifitas  farmakologi  sebagai  anestesi, analgetik, antiinflmanasi, antibakteri, dan antioksidan yang dapat meredam kerja radikal bebas (Giri 2019). Radikal  bebas  dapat  menyebabkan  terganggunya proses  spermatogenesis  di  dalam  testis  sehingga menurunkan  kadar  sekresi  hormone  testosterone, sehingga  kemangi  dapat  mengatasi gangguan fertilitas (Ernawati, 2016 dalam Vinnata et al . 2018).
Penelitian  sebelumnya    melaporkan  aktivitas  ekstrak etanol O. americanum dapat meningkatkan spermatogenesis dengan parameter konsentrasi spermatozoa, morfologi, diameter tubulus seminiferous,  berat  testis,  tebal  epitel  epididimis, motilitas,  dan  viabilitas  spermatozoa  (Hutasuhut 2014; Murod 2014; Anzila et al . 2017; Vinnata et al . 2018; Louis et al . 2019). Namun belum ada penelitian efikasi  ekstrak  etanol  70%  daun  kemangi  terhadap perbaikan  sel    germinal  yang  diinduksi  dengan senyawa  timbal.
Berdasarkan  uraian  diatas  perlu  dilakukan  penelitian lebih  lanjut  bagaimana  pengaruh  pemberian  ekstrak etanol  70%  daun  kemangi  ( O.  americanum L.) terhadap  sel  spermatogenik  tikus Sprague-Dawley jantan  yang  diberi  paparan  timbal.    Parameter perbaikan  sel  spermatogenik    meliputi  penghitungan diameter tubulus seminiferus, jumlah sel spermatogenik yaitu; sel pakiten dan round spermatid
pada tahapan (stage) VII-VIII. Pengamatan dilakukan dibawah mikroskop optik.

## 2. BAHAN DAN METODE

## 2.1 Alat dan Bahan Penelitian
Bahan  uji  berupa  ekstrak  etanol  70%  daun  kemangi yang  diperoleh  dari  Laboratorium  penelitian  1 program studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta.
Hewan  uji  adalah  tikus  putih  jantan  strain  Sprague- Dawley  sehat,  fertile,  dan  berumur  4  –  4,5  bulan dengan berat badan 300 – 350 g.
Bahan  kimia  alkohol  90%,  timbel  asetat,  NaCMC, Alat  yang  digunakan  seperangkat  alat  bedah, mikroskop, seperangkat mikrofoto.

## 2.2 Metode Penelitian
A. Pembuatan Ekstrak Etanol 70% Daun Kemangi
Kemangi  diambil  dalam  keadaan  segar  kemudian ditimbang sebanyak 9 kg kemudian dicuci dengan air mengalir  untuk  menghilangkan  segala  jenis  kotoran yang  melekat.  Setelah  pencucian  selesai,  kemangi dikering-anginkan untuk mengurangi kadar air dan di rajang.  Kemudian  dilakukan  proses  maserasi  selama 72  jam  kemudian  disaring.  Proses  maserasi  ini diulang  hingga  dihasilkan  maserat  yang  didapatkan mendekati  tidak  berwarna.  Maserat  yang  diperoleh dipekatkan dengan vacuum rotary evaporator sampai diperoleh  ekstrak  kental.  Jika  belum  kental,  ekstrak kemudian  di  kering  beku  hingga  dihasilkan  ekstrak yang lebih kental. Nilai  persentase  rendemen ekstrak dihitung  berdasarkan  perbandingan  bobot  ekstrak yang  diperoleh  dengan  bobot  simplisia  kering  yang digunakan.
B. Penapisan  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  70% Daun Kemangi
Penapisan  fitokimia  secara  kualitatif  dilakukan terhadap  keberadaan  senyawa  flavonoid,  alkaloid, tannin,  dan  saponin  berdasarkan  metode  oleh Khoirani et al . (2013).

## a. Flavonoid
Sejumlah  0,5  g  ekstrak  kemangi  ditambahkan  2  mL etanol  70%,  kemudian  dihomogenkan.  Serbuk magnesium  0,5  g  dan  3  tetes  larutan  HCl  pekat ditambahkan ke dalam suspensi ekstrak uji.

## b. Alkaloid
Sejumlah  0,5  g  ekstrak  kemangi  ditambahkan  2  mL etanol  70%,  kemudian dihomogenkan.  Larutan  5  mL HCl 2 N ditambahkan ke dalam suspensi ekstrak uji, kemudian  dipanaskan.  Setelah  didinginkan  dan disaring ditambahkan beberapa tetes reagen Mayer.

## c. Tanin
Sejumlah 3 tetes larutan FeCl3 ditambahkan ke dalam 0,5 g ekstrak kemangi yang sudah disuspensikan ke dalam 5 mL etanol 70%.

## d. Saponin
Sejumlah  20  mL  aquabides  ditambahkan  ke  dalam 0,5  g  ekstrak  kemangi  yang  sudah  disuspensikan dengan  larutan  etanol  70%.  Campuran  kemudian dikocok kuat dan didiamkan selama 10-20 menit.

## C. Ethical Clearance
Persetujuan etik  penelitian  diajukan  ke  Komisi  Etik Penelitian  Kesehatan  Fakultas  Ilmu  Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta .
D. Analisis  Kualitas  Sperma  Tikus  Putih  Jantan Strain Sprague-Dawley
a. Rancangan Penelitian
Penelitian ini bersifat eksperimental dengan rancangan  acak  lengkap  yang  terbagi  dalam  5 kelompok    yang  disajikan  dalam  Tabel  1  sebagai berikut:
Tabel 1. Rancangan penelitian kelompok uji
Kelompok uji Perlakuan K-N (Kontrol normal) Tidak diberikan apa-apa K-TA(Kontrol negatif) Diberikan timbal asetat tanpa ekstrak (K-U1) Ekstrak  50  mg/kgBB/hari  +  timbal asetat 0,7 g/L/ekor (K-U2) Ekstrak  100  mg/kgBB/hari  +  timbal asetat 0,7 g/L/ekor (K-U3) Ekstrak  200  mg/kgBB/hari  +  timbal asetat 0,7 g/L/ekor
Setiap  kelompok  uji  terdiri  dari  5  ekor  tikus  putih jantan  strain Sprague-Dawley .  Tikus  diaklimatisasi, diberi  makan  dan  minum ad  libitum serta  ditimbang berat  badannya.  Hari  pertama  pada  perlakuan  K-U1, K-U2,  dan  K-U3  ekstrak  etanol  70%  daun  kemangi diberikan  secara  oral  menggunakan  sonde  di  jam yang  sama  pada  pagi  hari  dan  satu  jam  kemudian diberikan  timbal  asetat  dengan  dosis  0,7  g/  L/ekor. Pemberian  timbal  asetat  dilakukan  selama  14  hari sesuai dengan metode Yulianto et al . (2013).
Pada hari ke-15 masing-masing kelompok diterminasi dengan kloroform kemudian dibedah dan diambil  testis  dan  kauda  epididimisnya.  Pembuatan preparat  dengan  metoda  blok  parafin  dan  pewarnaan dengan  hematoksisilin  eosin.  Pengamatan  dengan mikroskop  optik dengan perbesaran  10  x  10 pada  10 lapang  pandang.  Data  dianalisis  dengan  Kruskal- Wallis dan dilanjutkan dengan Mann-Whitney.

## b. Analisis Data
Analisis  kuantitatif  dilakukan  dengan  menghitung jumlah  sel  spermatogenik  pada  stage  VII-VIII terhadap  tubulus  seminiferous  yang  meliputi  1) Diameter  tubulus  seminiferous,  2)  Sel  spermatosit pakiten, 3)  Round spermatid

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1 Hasil Ekstraksi Kemangi
Ekstraksi  etanol  70%  daun  kemangi  menghasilkan rendemen  ekstrak  6,20%.  Karakteristik  organoleptis ekstrak  etanol  70%  berupa  ekstrak  kental  berwarna coklat  kehitaman  dengan  bau  khas  aromatis  dan berasa pahit.
3.2  Penapisan  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  70%

## Daun Kemangi
Hasil  penapisan  fitokimia  menunjukkan  ekstrak etanol  70%  daun  kemangi  mengandung  flavonoid, alkaloid, tannin, dan saponin (Tabel 2).
Tabel  2.  Penapisan  fitokimia  ekstrak  etanol  70%  daun
kemangi Golongan Hasil Pengamatan hasil reaksi Flavonoid + Terbentuk  larutan  warna  orange- merah padam Alkaloid + Larutan menjadi keruh dan terbentuk endapan berwarna putih Tanin + Terbentuk  larutan  berwarna  biru kehijauan Saponin + Terbentuk  busa  yang  konsisten (tidak hilang selama 20 menit)
Hasil  penapisan  ini  sejalan  dengan  beberapa penelitian  sebelumnya,  dimana  pada  fraksi  etanol ekstrak herba kemangi didapatkan kandungan  berupa alkaloid,  flavonoid,  tannin  dan  saponin  (Khoirani, 2013;  Vinnata et  al .  2018;  Louis et  al .  2019).
Flavonoid dan tannin adalah senyawa yang diketahui mempunyai  aktivitas  antioksidan  kuat.  Senyawa- senyawa  yang  mempunyai  aktivitas  antioksidan  kuat dapat mengatasi stress oksidatif (OS).
OS  dapat  mempengaruhi  tingkat  kesuburan  pria (Agarwal et al . 2005 di dalam Murod 2014). Kondisi OS  dapat  dipicu  dengan  produksi reactive  oxygen species (ROS)  yang  berlebihan  di  dalam  tubuh sehingga mekanisme pertahanan antioksidan tergannggu yang akan membahayakan spermatozoa.
Hardiningtyas et al . (2014), menduga kerja flavonoid mencegah  terbentuknya  ROS  yang  merupakan metabolit asal oksigen dan dapat memodifikasi fungsi sel sehingga membahayakan kelangsungan hidup sel. Membran  plasma  dan  sitoplasma  spermatozoa sejumlah  besar  terdiri  atas  asam  lemak  tak  jenuh ganda sehingga rentan terhadap lipid peroksidasi.
3.3.Hasil Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus
Parameter pengamatan untuk fertilitas pria antara lain konsentrasi,  motilitas  dan  vitalitas  serta  morfologi spermatozoa  sesuai  kriteria  WHO  (WHO  2014). Siklus spermatogenesis dalam menghasilkan spermatozoa  tergantung  pada  dua  faktor  yaitu intrinsik  (sel  sertoli  dan  sel  germinal),  ekstrinsik (androgen, asam retinoat). Transformasi sel spermatogonium  di  epitel  tubulus  seminiferous  testis dimulai dari membran basalis yakni spermatogonium preleptoteten spermatosit, pakitene spermatosit, round spermatid  dan  elongate  spermatid  serta  spermatozoa yang  menuju  ke  arah  lumen  tubulus  seminiferous (Heffner & Schust 2005). Hasil pengukuran diameter tubulus  seminiferus  tikus  setelah  pemberian  ekstrak etanol 70% daun kemangi ( O. americanum L.) dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3  Hasil pengukuran diameter tubulus seminiferous No Kelompok Rerata diameter tubulus seminiferus (um ± SD ) 1 2 3 4 5 K-N K-TA K-U1 K-U2 K-U3 204,75±7.3 160,23±5,7 164,61±9,5 167,88±10,3 170,67±11,2
Dari  analisis  statistik  tidak  ada  perbedaan  yang bermakna antara semua  kelompok uji dengan kontrol negatif  (p  >  0.05).  Walaupun  adanya  peningkatan diameter  tubulus  seminiferous  pada  KU1,  KU2  dan
KU3  tetapi  tidak  adanya  perbedaan  bermakna  antara rerata  diameter  tubulus  seminiferous    kelompok  uji dengan  kelompok  yang  diinduksi  Pb.  Hal  ini menunjukkan  belum  efektifnya  dosis  ekstrak  etanol daun kemangi dalam  meningkatkan  diameter  tubulus seminiferous. Belum efektifnya peningkatan diameter ubulus  seminiferous  pada  kelompok  perlakuan  bisa
disebabkan  dosis yang diberikan belum optimum dan kurang lamanya waktu pemberian ekstrak etanol 70% daun kemangi.
Pengamatan mikroskopis tubulus  seminiferus sperma tikus  jantan  masing-masing  perlakuan  dapat  dilihat pada  Gambar  1.  Pada  Gambar  1a  kelompok  kontrol menggambarkan  spermatogenesis  normal  dengan
Gambar 1. Mikroskopis tubulus seminiferus tikus jantan (a) K-N, (b) K-TA, (c) K-U1, (d) K-U2, (e) K-U3
a c b d e
mikroanatomi  tubulus  seminiferus  yang  normal menunjukkan  asosiasi  sel  spermatogenik  tersusun berlapis sesuai dengan tingkat perkembangannya dari membran basalis menuju ke arah lumen tubulus yakni spermatogonia,  spermatosit,  dan  spermatid.  Lumen tampak  terisi  penuh  oleh  spermatozoa.  Semua  sel germinal yaitu : spermatogonium, spermatosit primer (non-pakiten  dan  pakiten)  dan  spermatid  (bulat  dan memanjang)  dalam  epitel  seminiferus.  Selain  itu, tubulus  tersusun  atas  sel-sel  spermatogenik  yang tersusun kompak dan padat.
Pada  Gambar  1b  yang  diinduksi  timbal  terlihat  tidak teratur, komunikasi antar sel terputus, adanya distorsi arsitektur sel-sel dalam tubulus seminiferous sehingga  akan  mempengaruhi  jumlah  sel  pakiten, round  spermatid  dan  spermatozoa.  Berkurangnya diameter  tubulus  seminiferus  mencerminkan  adanya hambatan  spermatogenesis  dan  juga  kemungkinan disebabkan  banyaknya  sel  germinal  yang  mengalami apoptosis.  Dalam  epitel  seminiferus,  apoptosis  dapat terjadi  secara  spontan  atau  sebagai  respons  terhadap faktor  eksogen.  Pada  kelompok  uji  yang  diberikan Ocinum  americanum L.  yaitu  Gambar  1c,1d,  dan terlihat  adanya  perbaikan  sel  spermatogenik  dan arsitektur  tubulus  seminigerus  serta  peningkatan diameter tubulus seminiferous, jumlah sel pakiten dan round  spermatid  dengan  peningkatan  dosis  namun belum  bermakna  (p>0.05).  Kelompok  uji  dosis  200 mg/kgBB  yang  terbaik  jika  dilihat  dari  histologinya terlihat susunan sel yang terstruktur, tidak ada barisan sel yang terputus  seperti pada kelompok normal pada Gambar 1a.

## 3.4  Hasil Pengukuran Rerata Jumlah Sel Pakiten
Hasil yang diperoleh menunjukkan pemberian ekstrak ekstrak  etanol  70%  daun  kemangi  ( Ocinum americanum L.)  dengan  peningkatan  dosis  terjadi perbaikan jumlah sel pakiten terhadap perusakan oleh Pb, namun tidak ada perbedaan yang bermakna antara
semua    kelompok  uji  dengan  kontrol  negatif  (p  > 0.05) (Tabel 4).
Tabel 4. Rerata jumlah sel pakiten
No Kelompok Rerata jumlah sel pakiten ±SD 1 2 3 4 5 K-N K-TA K-U1 K-U2 K-U3 75.93  + 5.3 58. 52 +5.7 59.79  + 8.2 63.47 + 9.5 65.61 + 7.2

## 3.5 Hasil Pengukuran  Round Spermatid
Setelah pemberian ekstrak etanol 70% daun kemangi ( O.  americanum L.)    terjadi  peningkatan  jumlah round spermatid namun dosis yang digunakan belum efektif  meningkatkan  jumlah  sel  round  spermatid pada  tahapan  stage  VII-VIII.    Tidak  ada  perbedaan yang  bermakna  antara  semua    kelompok  uji  dengan kontrol negatif (p > 0.05).
Tabel 5. Jumlah round spermatid tikus jantan
No  Kelompok  Rerata jumlah round spermatid±SD 1 2 3 4 5 K-N K-TA K-U1 K-U2 K-U3 175.83  + 4.7 146.48 + 5.7 149.80 + 7.2 153.31 + 6.5 155.83 + 5.4
Hormon  –  hormon  yang  berperan  penting  dalam spermatogenesis  antara  lain  testosteron,  LH,  FSH yang  di  regulasi  oleh  GnRH  melalui  poros hipotalamus -  hipofisis – testis.  Testis menghasilkan homon  testosterone  karena  stimulasi  LH  pada  sel Leydig  sedangkan  FSH  menstimulasi  sel  Sertoli dalam  pembentukan  protein  pengikat  androgen (ABP) yang berperan dalam pengangkutan testosterone  ke  dalam  tubulus  seminiferous  dan
a a
epididimis sehingga mengoptimalkan proses spermatogenesis (Heffner & Schust 2005).
Pada  tikus,  dibutuhkan  12  hari  untuk  menyelesaikan satu siklus yang terdiri dari 14 tahap. Spermatogenesis  tikus  membutuhkan  empat  siklus sampai  akhirnya  membentuk  spermatozoa,  sehingga diperlukan 48 hari untuk menyelesaikan seluruh tahap spermatogenesis (Krinke, 2000).
Pada  penelitian  ini  pengamatan  selama  14  hari dimana  proses  spermatogenesis    belum  optimal sehingga  jumlah  sel  pakiten,  round  spermatid  dan diameter  tubulus  seminiferous    terjadi  peningkatan dan  perbaikan  sel  spermatogenik  namun  belum berbeda  bermakna.  Potensi  untuk  peningkatan perbaikan  sel  dapat  digunakan  dosis  200  mg/kg  BB dengan waktu perlakuan  yang lebih lama.

## 4. KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  etanol  70%  daun  kemangi  ( O. americanum L.)  pada  tikus  jantan  strain Sprague-
Dawley dengan  dosis  50  mg/KgBB,  100  mg/KgBB, dan 200 mg/KgBB yang telah diinduksi timbal asetat meningkatkan  diameter  tubulus  seminiferous,  jumlah sel  pakiten,  dan  sel  round  spermatid  dibandingkan dengan  kontrol  negatif    namun  belum  berbeda bermakna  (p  >  0.05).    Pengamatan  secara  histologi adanya  perbaikan  sel  spermatogenik  dan  arsitektur tubulus  seminigerus  pada  kelompok  yang  diberikan ekstrak  etanol  70%  daun  kemangi  ( O.  americanum L.).  Perlunya  penelitian  untuk  mencari  dosis  efektif dan  lama  pemberian  ekstrak  dalam  perbaikin  sel spermatogenik.

## 5. UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Fakultas  Ilmu  Kesehatan Universitas  Islam  Negeri  Syarif  Hidayatullah  Jakarta atas  sarana  dan  prasarana  yang  disediakan  sehingga
penelitian ini dapat terlaksana.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
Anzila,  I.,  WM, A.  P.,  Soewondo, A.,  &  Rahayu,  S. 2017.  Pengaruh  ekstrak  etanol  kemangi  ( Ocimum canum Sims.) terhadap struktur histologi testis mencit ( Mus  musculus )  jantan.  Biotropika:  Journal  of Tropical Biology, 5(1), pp. 22-26.
Giri,  P.,  (2019)  ‘Phytochemical  analysis of  Ocimum americanum Linn.  with  special  reference  to  the impact  of  in  vitro  flowering  on  the  production  of aromatic compounds, J. Biol. Chem. Chron, 5(1), pp. 38-42
Hardiningtyas,  S.  D.,  (2014).  Aktivitas  antioksidan dan  efek  hepatoprotektif  daun  bakau  api-api  putih. Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia,  17(1), pp. 80-91
Heffner,  L.J.,  Schust,  D.J.  2005.  At  a  Glance  Sistem Reproduksi. Edisi 2. Jakarta: Erlangga. Hal 26-27.
Hutasuhut,  R.  (2014)  ‘Uji  Aktivitas  Ekstrak  Etanol 70% Herba Kemangi ( Ocimum sanctum L.) terhadap kualitas  sperma  dan  densitas  sel  spermatogenik  tikus sprague-dawley  jantan  secara  in  vivo’.  [Skripsi]. Jakarta: UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Khoirani,  N.,  (2013)  ‘Karakterisasi  simplisia  dan standardisasi ekstrak etanol herba kemangi americanum  L.).  [skripsi].  Jakarta:  Program  studi Farmasi, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Krinke,  G.J.  (2000),  The  Laboratory  Rat.  The Handbook  of  Experimental  Animals,  Academic Press, pp. 3-56
Louis, S.L., et al. (2019) ‘Pengaruh pemberian fraksi daun  kemangi  ( Ocimum  americanum L.)  terhadap berat,  diameter,  tebal  epitel  epididimis,  motilitas  dan viabilitas spermatozoa tikus putih jantan ( Rattusnorvegicus ),  Jurnal  Kesehatan,  10(1),  pp.  25- 33
Matasyoh,  J.C.  (2006)  ‘Volatile  leaf  oil  constituents of Ocimum  americanum L.  occuring  in  Western Kenya’, Bull. Chem. Soc. Ethiop, 20(1), pp. 177-180
Murod,  A.  M.  2014.  ‘Uji  aktivitas  ekstrak  air  herba kemangi ( Ocimum Americanum L.) terhadap kualitas sperma  dan  densitas  sel  spermatogenesis  tikus Sprague-Dawley jantan  secara  in  vivo’.  [Skripsi].
Jakarta:  Program  Studi  Farmasi,  UIN  Syarif Hidatullah Jakarta
Vinnata,  N.N.  (2018)  ‘Pemberian  Fraksi  Daun Kemangi ( Ocimum americanum L.) terhadap spermatozoa  tikus  putih  jantan  ( Rattus  norvegicus )’. Jurnal Kesehatan, 9(3), pp. 366-375.
World  Flora  Online  Data .  2017.  Diakses  11
Novemver 2022
World  Health  Organization. 2014. www.who.int/reproductivehealth/topics/infertility/def initions/en/index.html. 18th Oktober, 2014.
Willianti,  E.  (2022).  Efektivitas  Daun  Kemangi (Ocimum  Sanctum  L.)  dalam  Menurunkan  Halitosis yang  Berhubungan  dengan  Indeks  DMF-T  dan  OHI- S, JIKW, 1 (11), pp. 37-41