## Arwana Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan
Peningkatan  respon  imun  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio )  dengan  pemberian ekstrak daun mahang sirap ( Macaranga involucrate ) [Improved  immune  response  of  common  carp  ( Cyprinus  carpio )  by administration of mahang sirap ( Macaranga involucrate ) Leaf Extract]
Edi Ilimu 1* , Saparuddin 2
1 Program  Studi  Pendidikan  Kimia  Universitas  Sembilanbelas  November  Kolaka.  Jl.  Pemuda  No.  339  Kabupaten Kolaka, Provinsi Sulawesi Tenggara, Indonesia.
2 Program  Studi  Pendidikan  Biologi  Universitas  Sembilanbelas  November  Kolaka.  Jl.  Pemuda  No.  339  Kabupaten Kolaka. Provinsi Sulawesi Tenggara, Indonesia.
ABSTRACT ú This study aims to test the effectiveness of Macaranga involucrata leaf extract as an immune response in carp to increase the number of leukocytes and phagocytic activity. M. involucrata extract was injected intramuscularly into carp. The method used is Completely Randomized Design (CRD). This study was conducted with five treatments, each of which was repeated three times. The treatments were P1 = 1% (v/v), P2 = 4% (v/v), P3 = 8% (v/v), P4 = 12% (v/v) and P5 (negative control). The results showed that M. involucrata extract could respond to an increase in the number of leukocytes and an increase in phagocytic activity. Responses to an increase in the number of leukocytes (12.27 x 108 cells/mL) and phagocytic activity (45.41%) were found in P4 treatment. Based on this study it was concluded that M. involucrata extract showed an increase in the immune response of carp.
Key words ú Cypriot Carpio, immunity, phagocytosis activity, leukocyte count
ABSTRAK ú Penelitian ini bertujuan untuk menguji efektivitas ekstrak daun Macaranga involucrata sebagai respon imun pada ikan mas untuk meningkatkan jumlah leukosit dan aktivitas fagositik. Ekstrak M. involucrata disuntikkan secara intramuskuler ke ikan mas. Metode yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL). Penelitian ini dilakukan dengan lima perlakuan, tiga kali ulangan. Perlakuan P1 = 1% (v/v), P2 = 4% (v/v), P3 = 8% (v/v), P4 = 12% (v/v) dan P5 (kontrol negatif). Penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak M. involucrata dapat merespon peningkatan jumlah leukosit dan peningkatan aktivitas fagositik. Respon terhadap peningkatan jumlah leukosit (12,27 x 10 8 sel/mL) dan aktivitas fagositik (45,41%) ditemukan pada perlakuan P4. Berdasarkan penelitian ini disimpulkan bahwa ekstrak M. involucrata menunjukkan peningkatan respon imun ikan mas.
Kata kunci ú Cyprus carpio, kekebalan tubuh, aktivitas fagositosis, jumlah leukosit
Received ú 22 Maret 2023, Accepted ú 7 April 2023, Published ú 2 Mei 2023. *Koresponden ú Edi Ilimu, Program Studi Pendidikan Kimia Universitas Sembilanbelas November Kolaka. Jl. Pemuda No. 339 Kabupaten Kolaka, Provinsi Sulawesi Tenggara, Indonesia. Email: ediilimu@gmail.com Kutipan ú Ilimu, E., Saparuddin, S. (2023). Peningkatan respon imun ikan mas ( Cyprinus carpio) dengan pemberian ekstrak daun mahang sirap ( Macaranga involucrate). Arwana: Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan, 5(1), 51-56. p-ISSN (Media Cetak) ú 2657-0254 e-ISSN (Media Online) ú 2797-3530
© 2023 Oleh authors. Arwana: Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan . Artikel ini bersifat open access yang  didistribusikan  di  bawah  syarat  dan  ketentuan Creative  Commons  Attribution-ShareAlike  4.0  International License .

## PENDAHULUAN
Ikan  Mas  ( Cyprus  carpio)  merupakan  ikan  yang mudah  berkembang  biak  dan  pertumbuhannya sangat cepat. Hal ini menjadi alasan utama ikan mas banyak  dibudidayakan  oleh  para  petani  budidaya ikan  air  tawar  dan  permintaan  konsumsi  ikan  mas selalu meningkat pada beberapa tahun terakhir serta harga jualnya lebih mahal dibandingkan dengan ikan air  tawar  lainnya  seperti  ikan  nila,  dan  ikan  lele jumbo.  Selain  itu,  ikan  mas  juga  dapat  beradaptasi terhadap  lingkungan  yang  terbatas  dan  tahan terhadap  penyakit  ( Ramadhan  &  Sari,  2018 ).  Para
petani  budidaya  ikan  air  tawar  selalu  melakukan inovasi metode budidaya untuk meningkatkan hasil produksinya,  yaitu  melakukan  budidaya  secara intensif  maupun  secara  semi  intensif  ( Pasaribu  & Longdong, 2019 ).
Metode  budidaya  secara  insentif  maupun  semi insentif merupakan metode yang sangat baik untuk dikembangkan  sehingga  dapat  meningkatkan  hasil produksi  ikan  mas.  Namun,  jika  pengelolaannya dilakukan  dengan  tidak  baik,  justru  dapat mengakibatkan  persoalan  baru  yaitu  tingginya pencemaran  air  budidaya  yang  menyebabkan
Ilimu dan Saparuddin (2023)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 5(1), 51-56
http://www.journal.umuslim.ac.id/index.php/jipsbp
peningkatan  pertumbuhan  mikroorganisme  seperti bakteri,  parasif  fungi,  dan  virus  yang  dapat menimbulkan  penyakit  ikan.  Timbulnya  penyakit ikan  budidaya  disebabkan  oleh  faktor  intern  dan ekstern  yang  kompleks  antara  budidaya  ikan  mas dan kualitas lingkungan ( Raman, 2017 ).
Timbulnya penyakit pada budidaya ikan mas dapat mempengaruhi  hasil  produksi  bagi  para  petani budidaya  yang  memicu  penurunan  produksi. Beberapa  cara  yang  dilakukan  untuk  mengatasi munculnya  penyakit  dalam  budidaya  yaitu pemberian antibiotik, vaksinasi, dan imunostimulan ( Manoppo,  2015 ).  Namun,  penanganan  penyakit dengan  cara  memberikan  vaksin  dan  antibiotik menyebabkan residu dan resistensinya mikroorganisme pathogen pada lingkungan budidaya ( Manopo & Magdalena, 2016 ).
Pemberian  imunostimulan  yang  bersumber  dari bahan  alami  merupakan  solusi  yang  tepat  untuk mengatasi  penyakit  ikan  serta  ramah  lingkungan ( Saparuddin et  al.,  2020 ).  Daun  Mahang  Sirap ( Macarangan  involucrate)  merupakan  sumber imonostimulan.
Ekstrak
Daun
Macarangan involucrate  (M.  involucrate)  mengandung  senyawa tannin,  flavonoid,  terpenoid,  dan  lignin  ( Ilimu  & Syah,  2019 ).  Selain  itu,  daun M.  involucrata mengandung dua Prenylflavonoid sebagai komponen utama  pada  tanaman  jantan  dan  betina  yaitu nymphaenol-B  dan  isonymhaenol-B  ( Kumazawa et al., 2014 ).
Turunan  senyawa  flavonoid  seperti  senyawa  morin, quercetin, rutin, dan hesperidin diuji secara in vitro, dapat memberikan respon positif dalam menghambat siklus  replikasi  virus  baik  siklus  adsorbsi  maupun siklus  penetrasi  ( Cui et  al.,  2022 ).  Sedangkan senyawa  tannin  yang  diujikan  secara in  vitro memberikan  respon  positif  terhadap  penghambatan perkembangan virus herpes simpleks (HSV) dan HIV ( Ganda et  al.,  2018 ).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa turunan dari senyawa flavonoid dan senyawa tannin yang ada pada ekstrak daun M. involucrate bersifat anti pathogen, fungi, bakteri dan virus yang diujikan secara in  vitro.  Pengujian  secara  in  vivo  belum banyak diujikan pada budidaya ikan mas.
Berdasarkan  latar  belakang  diatas,  maka  ekstrak daun Macaranga  involucrate  perlu  diuji  cobakan secara  in  vivo  sebagai  penambah  imun  ikan  mas secara non spesifik.

## BAHAN DAN METODE

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilakukan  Bulan  Mei  2022  hingga  Juli 2022 di UPT Laboratorium IPA Terpadu Universitas Sembilanbelas November Kolaka.

## Metode Penelitian
Penelitian ini dilakukan dengan 5 perlakukan, terdiri dari    1  perlakuan  kontrol  negatif  (tanpa  pemberian larutan  dan  ekstrak)  dan  4  perlakuan  penambahan ekstrak M. involucrata, masing-masing perlakuan 3 ulangan.  Digunakan  metode  Rancangan  Acak Lengkap (RAL). Penelitian ini tidak dilakukan pretes terlebih dahulu terhadap sampel, tetapi menggunakan Posttest-Only Control Desain.
Pembuatan  Ekstraks  Etanol  Daun Macaranga involucrata
Pembuatan  ekstrak  daun M.  Involucrata  diawali dengan mengeringkan daun M. involucrata di bawah sinar  matahari  sampai  warnanya  menjadi  hitam. Setelah  itu,  daun  dihaluskan  dengan  blender  dan direndam  dalam  larutan  etanol  80%  dengan menggunakan  metode  maserasi.  Kemudian,  larutan tersebut  disaring  menggunakan  kertas  saring sebanyak  tiga  kali  untuk  memisahkan  ampas  dari filtrat  yang  larut  dalam  larutan  etanol.  Untuk mendapatkan  ekstrak  M.  involucrata,  larutan tersebut  diuapkan  menggunakan  rotary  evaporator dengan tekanan 175 mbar, suhu 60 o C, dan kecepatan putaran 80 rpm. ( Octarina et al., 2018 ).

## Metode Perlakuan dan Pemeliharaan Ikan Mas
Hasil  ekstrak  daun M.  involucrata      yang  sudah dicairkan  diinjeksikan  pada  ikan  mas  dengan  cara intra  muscular  ( Satyantini et  al.,  2016 ).  Setiap perlakuan diinjeksikan sesuai dengan dosis masing- masing.  Perlakuan  P1  (Kontrol  positif)  (larutan fisiologis)  sebanyak  0,1  mL/ekor.  Perlakuan  P2 disuntikkan  dengan  ekstrak  daun M.  involucrata dengan dosis 4% (v/v), Perlakuan P3 dengan dosis 8% (v/v),  Perlakuan  P4  dengan  dosis  12%  (v/v)  dan Perlakuan  P5  (tanpa  perlakuan)  ( Octarina et  al., 2018 ).  Setiap  perlakukan  dilakukan  tiga  kali ulangan, setiap ulangan berisi 8 ekor ikan mas yang dipelihara pada akuarium. Ukuran akuarium setiap ulangan  (30cm × 25cm × 25cm)  sebanyak  15  buah. Ikan  dipelihara  selama  14  hari  dengan  pemberian pakan komersil pada pagi dan sore hari.
Ilimu dan Saparuddin (2023)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 5(1), 51-56
http://www.journal.umuslim.ac.id/index.php/jipsbp

## Parameter Pengamatan
Parameter  yang  diamati  pada  penelitian  ini  adalah jumlah  leukosit  dan  aktivitas  fagositik  ikan  mas. Ikan  nila  dikeluarkan  darahnya  pada  hari  ke-0 (sebelum penyuntikan), hari ke-1, hari ke-4, hari ke- 7,  dan  hari  ke-14  setelah  penyuntikan.  Darah  ikan mas  diambil  dengan  spuit  (1  mL  spuit)  yang  telah ditambahkan  larutan  antikoagulan.  Pengambilan sampel  darah  melalui  intra  vena  ikan  mas, selanjutnya  disimpan  pada  tabung  hampa  udara ( Satyantini et  al.,  2016 ).  Alat haemocytometer digunakan untuk mengukur jumlah sel darah putih. Prosedur kerja alat ini adalah darah dihisap hingga sampai  skala  0,5,  kemudian  ditambahkan  larutan Turk’s  sampai  skala  11,  pipet  diayunkan  selama  5 menit  dengan  arah  huruf  8.  Diteteskan  pada hemocytometer    dan  diamati  dibawah  mikroskop dengan  perbesara  400  ( Effendi  &  Widiastuti,  2014 ). Sedangkan,  untuk  mengukur  aktivitas  fagositosis yaitu  menggunakan  ragi  0,05  g  dan  ditambahkan gula pasir 0,1 g untuk mengaktifkan mikroorganisme.  Selanjutnya,  ditambahkan  air hangat  (70 o C)  25  mL  ( Lengka et  al.,  2013 ).  Darah dimasukkan  ke  dalam microtube,  sebanyak  50 µ L, ragi ditambahkan sebanyak 50 ìL yang sudah aktif. Dihomogenkan  dan  diinkubasi  pada  suhu  ruang. Dibuatkan sediaan ulasan kering di udara ( Lusiastuti & Hardi, 2010 ). Selanjutnya, difiksasi dengan larutan etanol  dan  dikeringkan  selama  5  menit.  Direndam selama 15 menit dengan larutan giemsa, dicuci dan dikeringkan, selanjutnya menghitung sel fagosit dari 100 sel yang diamati.

## Analisis Data
Hasil  pengamatan  dapat  dianalisis  dengan  metode ANOVA.  Jika  jumlah  sel  darah  putih  dan  aktivitas fagositosis hasil sidik ragamnya berbeda nyata, maka dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  dengan  taraf kepercayaan 95%.

## HASIL

## Jumlah Sel Darah Putih Ikan Mas
Berdasarkan hasil pengamatan dari jumlah sel darah putih  ikan  mas  setelah  diberikan  semua  perlakuan yaitu  perlakukan  P1,  P2,  P3,  P4,  dan  P5  (kontrol negatif), mulai hari ke-0, hari ke-1, hari ke-4, hari ke- 7 dan hari ke-14 (Gambar 1). Jumlah leukosit setelah penyuntikan  ekstrak  daun M.  involucrata  dapat merespon positif peningkatan jumlah sel darah putih. Perlakuan  P1  dan  P5  sebagai  perlakuan  control,
relatif  stabil  terhadap  jumlah  sel  darah  putihnya. Selama  14  hari  pengamatan,  jumlah  sel  darah putihnya masih dalam keadaan norma, rata-rata 5,1 × 10 8 sel mL -1 . Pada Perlakuan P2, P3 dan P4 sebagai perlakuan  pemberian  ekstrak  daun M.  involucrate menunjukkan  pengaruh  positif  terhadap  pening- katan jumlah sel darah putih, mulai dari hari ke-1, ke-4,  ke-7  dan  ke-14.  Perlakuan  P4  menunjukkan pengaruh  yang  sangat  tinggi  diantara  perlakuan yang  lain  terhadap  peningkatan  jumlah  sel  darah putih.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pemberian ekstrak  daun M.  involucrata  dapat  berpengaruh positif terhadap peningkatan sel darah putih.

## Gambar 1. Jumlah Sel Darah Putih ikan mas pada berbagai perlakuan

## Aktifitas Fagositosis Ikan Mas
Berdasarkan  hasil  pengamatan  selama  14  hari pengamatan dari aktivitas fagositosis (%) pada ikan mas (Gambar 2).
Gambar 2. Aktifitas Fagositosis (%) Ikan Mas
Pengamatan  pada  hari  ke-0  menunjukkan  bahwa aktivitas  fagositik  ikan  mas  masih  dalam  keadaan normal.  Pengamatan  perlakuan  P4  pada  hari  ke-1 menunjukkan  respon  positif  terhadap  aktivitas fagositik  yang  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  P1, perlakuan  P2  dan  perlakuan  P5,  tetapi  tidak  pada perlakuan  P3  (P<0,05).  Pengamatan  perlakuan  P4 pada  hari  ke-4  menunjukkan  aktivitas  fagositik
0 5 10 15 20 0 1 4 7 14 Pengamatan Hari ke Ju m la h Le uko si t ( x10 8 se l m L- 1 P1 P2 P3 P4 P5 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 1 4 7 14 Hari Pengamatan Akt ifi ta s Fa go si to si s (% ) P1 P2 P3 P4 P5
Ilimu dan Saparuddin (2023)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 5(1), 51-56
http://www.journal.umuslim.ac.id/index.php/jipsbp
tertinggi.  Pada  hari  ke  7  dan  14  aktivitas  fagositik semua  perlakuan  menurun,  namun  perlakuan  P4 masih paling tinggi dibandingkan perlakuan lainnya. Terdapat perbedaan bermakna antara perlakuan P4 hari  ke-7  dengan  P1,  P2,  dan  P5,  namun  tidak terdapat  perbedaan  bermakna  pada  P3  (P<0,05). Perlakuan P4 pada hari ke-14 berbeda Nyata dengan P1 dan P5, tetapi tidak berbeda Nyata dengan P2 dan P3 (P < 0,05).

## Kelangsungan Hidup Ikan Mas
Selama penelitian berlangsung, kelangsungan hidup ikan  mas  dinyatakan  dalam  (%)  selama  14  hari pemeliharaan (Gambar 3)

## Gambar 3. Kelangsungan Hidup Ikan Mas
Survival  rate  ikan  mas  menunjukkan  bahwa  rata- rata  71%.  Ikan  yang  banyak  mati  terjadi  diawal penelitian pada semua perlakuan, karena ikan masih menyesuaikan dengan lingkungan barunya. Namun, kelangsungan  hidup  ikan  mas  ini,  masih  dianggap normal, karena kelangsungan hidup ikan mas berada di atas 50%.

## Kualitas Air
Berdasarkan  pengamatan  parameter  Kualitas  Air selama periode penelitian (Tabel 1).
Tabel 1: Kualitas air ikan mas pada setiap perlakuan
Perlakuan Parameter ( Parameter) treatment Suhu Temperatur ( o C) pH DO (mg L -1 ) P1 25-30 6,9 – 7,5 6,1 – 6, 4 P2 26-30 6,9 – 7,6 5,5 – 6,2 P3 26-29 7,0 – 7,4 5,7 – 6,2 P4 26-29 6,9 – 7,5 5,6 – 6,0 P5 26-29 6,9 – 7,5 5,7 – 6,1 SNI 25-30 6,5 – 8,5 >50
Parameter lingkungan berada dalam keadaan normal selama  penelitian.  Semua  parameter  lingkungan yaitu Suhu, pH dan DO memenuhi Standar Nasional Indonesia (SNI) kualitas lingkungan ikan mas.

## PEMBAHASAN
Hasil pengamatan pada jumlah leukosit menunjukkan  bahwa  injeksi  ekstrak  daun  Mahang Sirap M.  involucrate  dalam  tubuh  ikan  mas  dapat merespon sistem imun humoral dengan menghasilkan antibodi (IgM) pada hari ke-7. Respon antibodi  merupakan  respon  imun  humoral  ketika dipapar dengan antigen. Pada ikan, respon imunnya terjadi secara seluler, biasa terjadi pada hari  ke 1-5 setelah pemaparan ( Rejeki et al., 2018 ).
Pertahanan humoral non spesifik memiliki sifat yang selalu siap merespon setiap patogen yang menyerang organisme.  Pertahanan  tubuh  non  spesifik  ini  telah ada  berfungsi  sejak  organisme  dilahirkan,  yang merupakan lini pertama dalam menghadapi infeksi.
Hasil  pengamatan  pada  aktivitas  fagositosis menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun M.  involucrata dapat  mempengaruhi  aktivitas  fagositosis  yang meningkat pada ikan mas dari kondisi normal. Hasil Uji Lanjut Duncan pada Perlakuan P4 berbeda Nyata dengan  perlakuan  kontrol  negatif  (P  >  0,05).  Hasil pengamatan aktivitas fagositosis yang meningkat ini dari  kondisi  normal  menunjukkan  bahwa  ikan  mas mengalami  peningkatan  kekebalan  tubuh  ( Octarina et al., 2018 ).
Fagositosis  merupakan  proses  sel  menelan  partikel benda  asing  yang  masuk  dalam  tubuh  hewan.  Sel fagosit  terpenting  adalah  makrofag  dan  leukosit polimorfonuklear  ( Handayani,  2018 ).  Makrofag diproduksi  di  sumsum  tulang  belakang  sebagai sentral  merespon  imunitas.  Sel  makrofag  memiliki kemampuan  fagositosis  mikroorganisme  dengan melibatkan  enzim-enzim  lisosom    ( Susanti  & Yuniastuti, 2012 ). Cara kerja fagositosis yaitu melalui proses saling kontak antar membran dengan partikel, membran sel mengalami invaginasi, sehingga dapat menelan  partikel  asing  yang  terperangkap  dalam sitoplasma  sel  yang  terlapisi  oleh  membran fagolisosom  ( Effendi  &  Widiastuti,  2014 ).  Enzim pencernaan  lisosom  dapat  menghacurkan  atau mendegradasi  sel  mikroba  atau  benda  asing      yang tertelan.
Kelangsungan hidup ikan selama penelitian sebesar 71%,  hal  ini  disebabkan  karena  pemberian  dosis setiap perlakuan tidak terlalu tinggi, sehingga ikan mas dapat beradaptasi dengan dosis yang diberikan. Kelangsungan  hidup  ikan  mas  pada  setiap perlakukan  tidak  berbeda  Nyata  diantara  semua perlakuan  (P  >  0,05).  Pemeliharaan  ikan  mas
Ilimu dan Saparuddin (2023)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 5(1), 51-56
http://www.journal.umuslim.ac.id/index.php/jipsbp
menggunakan  aquarium  yang  selalu  terkontrol kualitas  airnya.  Kualitas  air  dalam  suatu  budidaya ikan,  dapat  menentukan  kesintasan  hidup  ikan, karena  perubahan  setiap  Parameter  Kualitas  Air akan mempengaruhi Parameter yang lain ( Sarjito et al., 2013 ).
Selama  pemeliharaan  parameter  suhu  berada  pada kisaran antara 25-30 o C. Suhu yang berada dibawah atau diatas standar SNI maka akan mempengaruhi perkembangan  dan  pembentukan  kekebalan  tubuh. Selain  itu,  dapat  menyebabkan  ikan  stress  dan kelangsungan hidup ikan akan menurun ( Rawung & Manoppo,  2014 ).  Oksigen  Terlarut  berkisar  antara 5,5-6,4 mg L -1 , hal ini sesuai dengan SNI yang berada pada  >50.  Sedangkan  parameter  pH  selama penelitian berada pada kisaran 6,5- 7,6 hal ini sesuai SNI yang berada pada kisaran antara 6,5-8,5.

## KESIMPULAN
Dapat  disimpulkan  bahwa  perlakuan  P4  terbaik diantara perlakuan yang lain dari jumlah sel darah putih meningkat dengan jumlah (12,27 × 10 8 sel/mL) dan  aktivitas  fagositik  sebesar  (45,41%),  sedangkan kelangsungan hidup ikan mas dari semua perlakuan dalam keadaan normal sebesar 50% lebih.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  mengucapkan  terima  kasih  kepada  semua pihak  yang  terlibat  dalam  penelitian  ini,  terutama Bapak  Anwar  dan  Bapak  Hasbi  yang  telah  berjasa dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Cui,  L.,  Ma,  Z.,  Wang,  D.,  &  Niu,  Y.  (2022).  Ultrasound- assisted  extraction,  optimization,  isolation,  and antioxidant  activity  analysis  of  flavonoids  from Astragalus  membranaceus  stems  and  leaves. Ultrasonics Sonochemistry, 90(October), 106190. doi: 10.1016/j.ultsonch.2022.106190
Effendi, N., & Widiastuti, H. (2014). Identifikasi aktivitas imunoglobulin  M  (Ig.M)  ekstrak  etanolik  daun ceplukaN  (Physalis  Minima  Linn.)  pada  mencit. Jurnal Kesehatan, 7(2), 353–360.
Ganda,  A.  N.  F.,  Andoko,  Setyarini,  P.  H.,  &  Gapsari,  F.
(2018).  The  inhibitive  effect  of  tannin  in  Psidium guajava  leaves  towards  304SS  corrosion  in concentrated  HCl. Matec  Web  of  Conferences,  204. doi: 10.1051/matecconf/201820405018
Handayani, N. (2018). Uji Aktivitas Fagositosis Makrofag Ekstrak  Etanol  Daun  Suji  (Dracaena  angustifolia (Medik.)Roxb.  )  Secara  in  vitro. Jurnal  Farmasi Medica/Pharmacy Medical Journal (PMJ), 1(1), 26– 32. doi: 10.35799/pmj.1.1.2018.19648
Ilimu,  E.,  &  Syah,  Y.  M.  (2019).  Turunan  Senyawa Flavonoid dari Daun Macaranga involucrata (Roxb.) Baill  dari  Buton  Tengah,  Sulawesi  Tenggara.  In Jurnal  Kimia  Valensi  (Vol.  5,  Issue  1). doi: 10.15408/jkv.v5i1.7909 Kumazawa,  S.,  Murase,  M.,  Momose,  N.,  &  Fukumoto,  S.
(2014).  Analysis  of  antioxidant  prenylflavonoids  in different  parts  of  Macaranga  tanarius,  the  plant origin of Okinawan propolis. Asian Pacific Journal of Tropical  Medicine,  7(1),  16–20. doi:  10.1016/S1995- 7645(13)60184-4
Lengka,  K.,  Manoppo,  H.,  &  Kolopita,  M.  E.  F.  (2013). Peningkatan  Respon  Imun  Non  Spesik  Ikan  Mas (Cyprinus  carpio  L)  Melalui  Pemberian  Bawang Putih  (Allium  Sativum). E-Journal  Budidaya Perairan, 1(2), 21–28. doi: 10.35800/bdp.1.2.2013.1912 Lusiastuti, A. M., & Hardi, E. H. (2010). Gambaran darah sebagai  indikator  kesehatan  pada  ikan  air  tawar. Prosiding Seminar Nasional Ikan, 1, 65–69.
Manopo,  H.,  &  Magdalena  E.  P.  Kolopita.  (2016).
Penggunaan ragi roti (. In Bududaya Perairan, 4(3):
37–47.
Manoppo, C. N. P. dan H. (2015). Peningkatan Respon Kebal Non-spesifik  dan  Pertumbuhan  Ikan  Nila. Jurnal Budidaya Perairan, 3(1), 11–18.
Octarina,  Y.,  Prasetiyono,  E.,  Febrianti,  D.,  &  Robin,  R.
(2018). Efektivitas ekstrak daun ciplukan (Physalis angulata L.) terhadap sistem kekebalan tubuh ikan nila (Oreochromis niloticus). Jurnal  Riset Akuakultur, 13(3), 259. doi: 10.15578/jra.13.3.2018.259-265 Pasaribu,  W.,  &  Longdong,  S.  N.  .  (2019).  Efektivitas Ekstrak  Daun  Pacar  Air  (Impatiens  balsamina  L.) Untuk  Meningkatkan  Respon  Imun  Non  Spesifik Ikan  Nila  (Oreochromis  niloticus). E-Journal Budidaya Perairan, 3(1), 83–92. doi: 10.35800/bdp.3.1.2015.6939 Ramadhan,  R.,  &  Sari,  L.  A.  (2018).  Teknik  pembenihan ikan  mas  (Cyprinus  carpio)  secara  alami  di  unit pelaksana  teknis  pengembangan  budidaya  air. Journal of Aquaculture and Fish Health, 7(3), 124– 132. doi: 10.20473/jafh.v7i3.11261 Raman, R. P. (2017). Applicability, Feasibility and Efficacy of  Phytotherapy  in  Aquatic  Animal  Health Management. American  Journal  of  Plant  Sciences, 08(02), 257–287. doi: 10.4236/ajps.2017.82019 Rawung, M. E., & Manoppo, H. (2014). Penggunaan ragi roti (Saccharomyces  cereviciae)  secara  in  situ  untuk meningkatkan  respon  kebal  non-spesifik  ikan  nila (Oreochromis  niloticus). E-Journal  Budidaya Perairan, 2(2). doi: 10.35800/bdp.2.2.2014.4901 Rejeki,  M.  S.,  Sasanti,  A.  D.,  &  Taqwa,  F.  H.  (2018). Pemanfaatan tepung paci-paci (Leucas lavandulaefolia) untuk mengobati infeksi
Aeromonas  hydrophila  pada  ikan  patin  (Pangasius sp.). Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia, 6(2), 165– 176. doi: 10.36706/jari.v6i2.7160
Saparuddin,  S.,  Yanti,  Y.,  Salim,  S.,  &  Muhammad,  H.
(2020). Hematological response of Tilapia (Oreochromis  niloticus)  in  Laundry  wastewater. Biogenesis:  Jurnal  Ilmiah  Biologi,  8(1),  69–78. doi: 10.24252/bio.v8i1.13137
Sarjito, Prayitno, S. B., & Haditomo, A. H. C. (2013). Buku Pengantar  Parasit  dan  Penyakit  Ikan. Buku Pengantar Parasit Dan Penyakit Ikan, 1–92.
Ilimu dan Saparuddin (2023)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 5(1), 51-56
http://www.journal.umuslim.ac.id/index.php/jipsbp
Satyantini, W., Agustono, A., Arimbi, A., Sabdoningrum, E., Budi,  M.,  &  Asmi,  L.  (2016).  Peningkatan  Respons Imun  Non  Spesifik  Ikan  Gurame  Pascapemberian Ekstrak  Air  Panas  Mikroalga  Spirulina  platensis (enhancement  of  non-specific  immune  response  of osphronemus  gouramy  after  giving  of  hot  water extract  spirulina  platensis).  In Jurnal  Veteriner,
17(I3): 347–354). doi: 10.19087/jveteriner.2016.17.3.347 Susanti,  R.,  &  Yuniastuti,  A.  (2012). Aktivitas  Reactive
Oxygen  Species  Makrofag  Akibat  Stimulasi  Gel Lidah Buaya Pada Infeksi Salmonella Typhimurium. 35(1).