## ANALISIS KERAGAMAN KETAHANAN GENETIK PROGENI F1 HASIL PERSILANGAN BPM 1 X RRIM 600 TERHADAP ISOLAT Corynespora cassiicola
Genetic Resistance Diversity Analysis of BPM 1 x RRIM 600 F1 Progenies to Corynespora cassiicola Isolates
Fetrina OKTAVIA
Pusat Penelitian Karet Jalan Raya Palembang – Pangkalan Balai KM 29 Sembawa, Banyuasin 30953, Sumatera Selatan Email : fetrina_oktavia@yahoo.com
Diterima : 13 Juli 2020 / Disetujui : 21 Desember 2020

## Abstract
Attack  Corynespora  leaf  fall  (CLF) disease  is  one  of  the  main  problems  in  the rubber  cultivation.  Various  efforts  to  control have  been  done,  one  of  them  is  using  the superior resistant rubber clones as a planting material.  The  research  aim  to  identify  the resistance  level  of  30  F1  progeny  that  have prospective  as  a  new  superior  clones  that obtained from crossing of BPM 1 x RRIM 600 to CLF disease. The study was conducted using a  completely  randomized  design  with  three replications.  The  resistance  level  is determined  based  on  leaf  wilting  intensity due to sensitivity of leaves to toxin filtrate of four C. cassiicola isolates that caused loss of liquid  in  leaf.    The  results  showed  that  leaf wilting  intensity  of  each  progeny  was significantly different to each of C. cassiicola isolates.  There  was  an  interaction  between the  genotype  of  progeny  with  the  types  of isolates used in the testing. CC-GT 1 isolate had  the  highest  virulence  level  among  4 isolates  that  used  in  the  test.  Isolates classified  as  haplotype  1  (CC-GT  1  and  CC- IRR  104)  had  higher  virulence  level  than haplotype 2 (CC-RRIM 600 and CC-IRR112). Resistance level   of F1 progenies to PGDC is very diverse whereas 4, 14, 7 and 5 progenies were classified as a very resistant, resistant, susceptible  and  very  susceptible  to  CLD disease, respectively. The progenies that have high resistance have a chance to   become a superior clones in the future.
Keywords:  Cassiicolin;  CLF  disease; haplotype; Hevea brasiliensis; progeny

## Abstrak
Serangan  penyakit  gugur  daun Corynespora (PGDC)  masih  menjadi  salah satu  permasalahan  utama  dalam  budidaya t a n a m a n   k a r e t .   B e r b a g a i   u p a y a pengendalian  sudah  dilakukan  salah satunya  adalah  dengan  penggunaan  klon- klon  karet  unggul  yang  resisten  sebagai bahan  tanam.  Penelitian  bertujuan  untuk mengidentifikasi  tingkat  ketahanan  30 progeni F1 calon klon-klon unggul baru yang merupakan hasil persilangan BPM 1 x RRIM 600  terhadap  PGDC.  Penelitian  dilakukan menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap dengan  tiga  ulangan.  Tingkat  resistensi ditentukan berdasarkan intensitas kelayuan daun  akibat  sensitivitas  daun  tanaman terhadap  filtrat  toksin  empat  isolat C. cassiicola yang  mengakibatkan  terjadinya kehilangan  cairan  pada  daun.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  intensitas kelayuan daun setiap progeni berbeda nyata terhadap setiap isolat C. cassiicola . Terdapat interaksi  antara  genotipe  progeni  dengan jenis  isolat  yang  digunakan  dalam pengujian. Isolat CC-GT 1 memiliki tingkat virulensi yang paling tinggi diantara 4 isolat yang  digunakan  dalam  pengujian.  Isolat yang tergolong haplotipe 1 (CC-GT 1 dan CC- IRR  104)  memiliki  tingkat  virulensi  yang lebih  tinggi  dari  haplotipe  2  (CC-RRIM  600 dan  CC-IRR112).  Ketahanan  progeni  F1 terhadap  PGDC  sangat  beragam  dimana  4 progeni tergolong sangat tahan, 14 progeni tahan,  7  progeni  rentan  dan  5  progeni tergolong  sangat  rentan  terhadap  PGDC. Progeni yang memiliki ketahanan yang tinggi berpeluang  menjadi  klon-klon  unggul  di masa yang akan datang.
Jurnal Penelitian Karet, 2020, 38 (1) : 17 - 26 Indonesian  J.  Nat. Rubb. Res. 2020, 38 (1) : 1 7- 26 https://doi.org/10.22302/ppk.jpk.v38i1.696
Kata  kunci  : Cassiicolin ;  haplotipe; Hevea brasiliensis ; PGDC; progeni

## PENDAHULUAN
Penyakit  Gugur  Daun Corynespora (PGDC)  yang  disebabkan  oleh Corynespora cassiicola merupakan  salah  satu  penyakit penting  pada  tanaman  karet  di  Indonesia dan  negara-negara  penghasil  karet  alam lainnya  di  Asia  dan  Afrika.  PGDC  pertama kali  muncul  di  Indonesia  sekitar  tahun 1980,  yang  menyerang  klon-klon  hasil pertukaran  Internasional  seperti  KRS  21, RRIC 103  dan  RRIM  725  yang  berasal  dari Thailand,  Sri  Lanka  dan  Malaysia.  Dalam perkembangannya,  penyakit  ini  mulai menyerang  klon-klon  lain  dimana  jumlah klon yang terserang dan intensitas penyakit yang  diakibatkannya  semakin  meningkat dari  tahun  ke  tahun.  Beberapa  klon  yang sebelumnya  diketahui  tahan  dilaporkan menjadi  terserang  berat  seperti  klon  GT  1 dan RRIM 600.
PGDC  dapat  menyerang  tanaman karet  pada  berbagai  tahap  pertumbuhan dan perkembangan daun baik di pembibitan maupun tanaman produksi. Meskipun saat ini  PGDC  tidak  seberbahaya  SALB  ( South American  Leaf  Blight )  yang  menyerang hampir semua perkebunan karet di daerah asal  tanaman  karet  di  Amerika  Selatan maupun penyakit gugur daun Pestalotiopsis yang outbreak menyerang perkebunan karet di  Indonesia  mulai  tahun  2016,  namun a p a b i l a   t i d a k   d i a t a s i   P G D C   d a p a t mengakibat kerusakan parah pada tanaman karet  yang  mengakibatkan  kerugian ekonomi mencapai 60%   (Situmorang et al ., 2007).  Hingga  saat  ini  PGDC  masih merupakan salah satu penyakit utama yang menyerang  perkebunan  karet  di  India (Manju et al ., 2015) dan Malaysia (Mazlan et al ., 2019) dan negara-negara penghasil karet lainnya  termasuk  Indonesia.  Meskipun outbreak penyakit gugur daun Pestalotiopsis terjadi  di  Indonesia  pada  tahun  2018, pengamatan  di  lapangan  menunjukkan bahwa  intensitas  serangan  PGDC  masih terlihat tinggi.
Secara umum perkembangan PGDC d i k e n d a l i k a n   d e n g a n   m e n g g u n a k a n pestisida  kimia.  Selain  mahal  dan  bersifat racun  terhadap  lingkungan,  cara  tersebut
juga  tidak  efektif  diaplikasikan  pada tanaman  produksi  yang  memiliki  pohon dengan  ketinggian  lebih  dari  empat  meter. Untuk  mengatasi  hal  tersebut  berbagai upaya sudah dilakukan diantaranya adalah penggunaan  pestisida  nabati  baik  yang berasal  dari  tanaman  yang  menghasilkan metabolit sekunder yang memiliki aktivitas antimikroba  seperti Ageratum  conyzoides dan Centrosema  pubescent ( Ogbebor  & Adekunle,  2005)  maupun  dari  cendawan (Evueh et al ., 2011) dan bakteri (Minh et al ., 2014;  Giau  &  Buock,  2017)  yang  bersifat antagonis.  Pengaturan  pola  penanaman klon  dimana  dalam  suatu  areal  ditanam berbagai  jenis  klon  merupakan  alternatif lain pencegahan PGDC yang sudah banyak diterapkan  pada  perkebunan-perkebunan besar  ( Situmorang et  al .,  2007).  Namun sejauh  ini  semua  metode  tersebut  masih belum  efektif  dalam  menanggulangi permasalahan  PGDC.  Salah  satu  alternatif yang  dianggap  paling  efektif  dan  ekonomis untuk menanggulangi PGDC saat ini adalah penggunaan  klon-klon  yang  memiliki  sifat ketahanan  yang  tinggi  dan  stabil  sebagai bahan  tanam  karet.  Untuk  mendapatkan klon-klon karet unggul baru sebagai sumber bahan  tanam,  seleksi  ketahanan  terhadap berbagai  penyakit  utama  harus  dilakukan sebagai salah satu SOP pemilihan klon-klon anjuran.
Kerugian  ekonomi  akibat  serangan PGDC  dapat  menjadi  lebih  serius  dengan ditemukannya adanya berbagai ras isolat C. cassiicola yang  berbeda  (Atan et  al .,  2011). Tingkat  keparahan  yang  diakibatkan  oleh setiap ras akan berbeda. Hal ini ditemukan pada  isolat C.  cassiicola yang  menyerang perkebunan  karet  di  Malaysia,  dimana terdapat dua ras isolat C. cassiicola berbeda. Ras  1  ditemukan  menginfeksi  klon-klon lama  seperti  RRIM  600  sedangkan  ras  2 menyerang  klon-klon  baru  seperti  RRIM 2000  (Ismail  &  Jeyanayagi,  1999).  Dengan ditemukannya  perubahan  ketahanan  klon- klon  yang  sebelumnya  tahan  menjadi r e n t a n ,   m a k a   d i k h a w a t i r k a n   a k a n munculnya ras baru pada isolat tersebut di Malaysia  (Nghia et  al. ,  2010;  Atan et  al ., 2011).  Berdasarkan  analisis  jejaring ( network  analysis )  menggunakan  metode Reduced  Median  gen  ITS-rDNA  isolat C. cassiicola asal  berbagai  klon  karet  di Indonesia  terlihat  bahwa  terdapat  lima haplotipe  isolat C.  cassiicola asal  tanaman
Oktavia
karet  Indonesia,  dimana  frekuensi  isolat terbanyak ditemukan pada haplotipe 1 dan isolat-isolat  tersebut  secara  umum menyerang  klon-klon  baru  seri  IRR ( Indonesian Rubber Research ) (Oktavia et al., 2017).  Haplotipe  tersebut  menunjukkan kelompok  ras  isolat  (Nghia et  al .,  2010), sehingga setidaknya terdapat lima kelompok ras isolat C. cassiicola yang ada di Indonesia.
Berdasarkan  informasi  tersebut perlu  dilakukan  seleksi  ketahanan  calon klon-klon  karet  unggul  baru  hasil persilangan  menggunakan  berbagai kelompok  ras  isolat.  Pada  penelitian  ini dilakukan pengujian ketahanan progeni F1 hasil persilangan BPM 1 dengan RRIM 600 menggunakan  tiga  isolat C.  cassiicola yang tergolong  kelompok  ras  1  dan  2  yang merupakan kelompok ras terbesar dari isolat C.  cassiicola asal  tanaman  karet  di Indonesia.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  dilakukan  terhadap sampel daun 30 progeni F1 hasil persilangan klon  karet  BPM  1  dengan  RRIM  600  yang ditumbuhkan  di  dalam polybag di  rumah kaca. BPM 1 merupakan klon unggul hasil pemuliaan  di  Indonesia  yang  memiliki produksi tinggi dan ketahanan yang sangat baik  terhadap  penyakit  gugur  daun. Sedangkan  RRIM  600  merupakan  klon introduksi  dari  Malaysia  yang  memiliki produksi  tinggi  namun  rentan  terhadap penyakit gugur daun terutama di Indonesia. Kedua  klon  tersebut  merupakan  klon populer  yang  digunakan  dalam  program pemuliaan tanaman karet di Indonesia.
Terdapat  empat  isolat C.  cassiicola yang digunakan dalam percobaan yaitu CC- GT 1, CC-IRR 104, CC-RRIM 600 dan CC-IRR 112 yang diisolasi dari klon karet GT 1, IRR 104,  RRIM  600  dan  IRR  112  di  Kebun Percobaan Pusat Penelitian Karet, Sembawa. Isolasi-isolat dilakukan dari daun terinfeksi yang  menunjukkan  gejala  serangan  PGDC. Hasil analisis virulensi pada enam klon karet dengan  berbagai  tingkat  ketahanan menunjukkan  bahwa  keempat  isolat tersebut  merupakan  isolat  yang  tergolong memiliki  virulensi  tinggi  dan  tergolong kepada  haplotipe  1  (CC-GT  1  dan  CC-IRR 104) dan haplotipe 2 (CC-RRIM 600 dan CC- IRR 112) (Oktavia et al ., 2017).
Uji Ketahanan Progeni F1 terhadap Filtrat Toksin Isolat C. cassiicola

## Produksi dan Aplikasi Filtrat Toksin Isolat
U j i   K e t a h a n a n   d i l a k u k a n berdasarkan  aktivitas  filtrat  toksin cassiicolin yang  dihasilkan  oleh  masing- masing  isolat C.  cassiicola. Produksi  filtrat toksin  dilakukan  menggunakan  media Czapek berdasarkan metode yang dijelaskan oleh  Breton et  al .  (2000)  dengan  beberapa modifikasi  terkait  teknis  pelaksanaan. Pengujian dilakukan menggunakan sampel daun  muda  berwarna  cokelat  (tahap pertumbuhan  B2C).  Untuk  mendapatkan kondisi jenuh air, daun diambil dari rumah kaca  dan  direndam  dalam  air  selama  satu malam (16 jam). Selanjutnya 125 mL toksin (5  mg/L)  dimasukan  ke  dalam  baki  yang ditutup  dengan stryofoam yang  dilubangi (diameter  3  cm)  dan  tangkai  daun dimasukan  ke  dalam  lubang  tersebut sampai  terendam  filtrat  toksin.  Gambar  1 menunjukkan  tahapan  perlakuan  filtrat toksin  pada  sampel  daun.  Sebagai  kontrol digunakan air steril sebagai pengganti filtrat toksin  dan  semua  perlakuan  diinkubasi pada temperatur ruang. Setiap perlakuan di ulang sebanyak tiga kali.

## Tingkat  Ketahanan  Progeni  dan  Analisis Data
T i n g k a t   k e t a h a n a n   d i u k u r berdasarkan  estimasi  kehilangan  air  daun akibat  aktifitas  filtrat  toksin  yang  diamati berdasarkan  optimasi  waktu  pengamatan (48  jam)  setelah  perendaman  daun  dalam filtrat  toksin.  Estimasi  kehilangan  air dihitung  sebagai  intensitas  kelayuan  daun (IKD)  seperti  rumus  berikut  (Situmorang, 2002) :
Keterangan ( Remaks ) : IKD =  persentase  kelayuan  daun  ( leaf wilting percentage ) Bb0 =  berat  basah  sebelum  perlakuan toksin  ( wet  weight  before  toxin treatment )
BBT =  berat  basah  setelah  perlakuan toksin  ( dry  weight  before  toxin treatment )
Analisis Keragaman Ketahanan Genetik Progeni F1 Hasil Persilangan BPM 1 X RRIM 600 terhadap Isolat Corynespora cassiicola
Tingkat  ketahanan  masing-masing progeni selanjutnya dikelompokkan menjadi 4  yaitu  sangat  tahan,  tahan,  rentan  dan sangat  rentan  berdasarkan  nilai  standar deviasi (SD) dimana kurang dari nilai rata- rata  -1  SD  digolongkan  sebagai  tanaman sangat  tahan,  -1  SD  sampai  nilai  rata-rata sebagai  tahan,  rata-rata  sampai  +1  SD sebagai rentan dan lebih dari nilai rata-rata +1 SD digolongkan sebagai tanaman sangat rentan.
Pengelompokan progeni berdasarkan nilai  intensitas  kelayuan  daun  terhadap setiap  isolat  dilakukan  dengan  metode Euclidean  Hirarchical menggunakan program  DARwin6.  Rancangan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Rancangan  Acak  Lengkap  Faktorial. Untuk melihat  interaksi  antara  genotipe  progeni dengan isolat dilakukan analisis sidik ragam (ANOVA)  dua  faktor  (genotipe*isolat) menggunakan  program  SAS  ( Statistical Analysis  System )  dan  apabila  terdapat perbedaan  nyata  maka  dilanjutkan  dengan uji  DMRT  ( Duncan's  Multiple  Range  Test ) (P<0,05).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tingkat  Ketahanan  Progeni  F1  terhadap Filtrat Toksin Empat Isolat C. cassiicola
Berbagai  penelitian  melaporkan bahwa  efektor  utama  infeksi C.  cassiicola pada tanaman karet adalah fitotoksin yang disebut dengan cassiicolin (de Lamotte et al .,
2007; Breton et al ., 2000; Deon et al ., 2012; Deon et  al .,  2014;  Pujade-Renaud et  al ., 2015; Lopez et al ., 2018; Ribeiro et al ., 2019). Toksin  tersebut  dilepaskan  ke  dalam  sel tanaman  pada  tahap  awal  infeksi  yang menyebar  dengan  cepat  melalui  pembuluh daun  tanaman  yang  mengakibatkan terjadinya kebocoran pada membran plasma sel-sel tanaman. Pada sel tanaman hidup hal ini  akan  memunculkan  gejala  nekrosis akibat  kematian  sel  seperti  sirip  ikan, sedangkan  pada  daun  yang  sudah  dipetik akan  menunjukkan  gejala  kelayuan  daun (Breton et  al .,  2000).  Tran et  al .  (2016) melaporkan  bahwa  terdapat  dua  QTL  yang berkaitan  dengan  respon  sel-sel  tanaman t e r h a d a p   f i l t r a t   t o k s i n c a s s i i c o l i n berdasarkan electrolyte  leackage. Hal  ini berarti  bahwa  pengujian  menggunakan filtrat  toksin cassicolin memberikan  efek yang  sejalan  dengan  penggunaan  toksin murni  dan  pengujian  menggunakan  spora isolat  sehingga  kerentanan  tanaman terhadap  toksin  dapat  menggambarkan kerentanan terhadap isolatnya.
Pengamatan  intensitas  kelayuan daun  (IKD)  yang  dilakukan  terhadap  30 progeni  F1  hasil  persilangan  klon  BPM  1 dengan  RRIM  600  menunjukkan  bahwa setiap  progeni  memiliki  respon  sensitivitas yang  berbeda  nyata  terhadap  filtrat  toksin masing-masing isolat (Gambar 2). Terdapat keragaman  intensitas  kelayuan  daun  yang cukup besar pada progeni F1 yang berkisar 5,2%  sampai  33,4%  yang  ditemukan  pada F1.27  terhadap  toksin  CC-GT  1.  Setiap progeni  memberikan  respon  yang  berbeda terhadap  setiap  isolat  karena  toksin
Gambar  1.  Tahapan  uji  ketahanan  progeni  F1  hasil  persilangan  klon  BPM  1  x  RRIM  600 berdasarkan aktivitas filtrat toksin C. cassiicola. (A) perendaman daun dalam air selama semalam (16 jam0), (B) tangkai daun dimasukan ke dalam toksin selama 48 jam, dan (C) kondisi daun 48 jam setelah perendaman toksin
Figure 1. Stage of resistance test of F1 progenies of BPM 1 x RRIM 600 based on toxin filtrate of C. cassiicola.  (A) soaking the leaf in water for overnight (16 hours), (B) inserted of petiols into toxin for 48 hours, and (C) condition of leaf at 48 hours after the immersion of the toxin
Oktavia
cassiicolin merupakan  toksin  yang  bersifat host spesific toxin (HST) yang memiliki reaksi spesifik terhadap masing-masing inang klon tanaman  yang  diserangnya  (Deon et  al ., 2012).
Pada  Gambar  2  juga  terlihat  bahwa dibandingkan  dengan  kedua  klon  tetua terlihat  bahwa  ketahanan  progeni  F1 terhadap  semua  isolat  lebih  tinggi dibandingkan dengan klon tetua RRIM 600 dan  beragam  terhadap  tetua  klon  BPM  1. Adanya  keragaman  respon  antar  progeni tersebut  menunjukkan  adanya  perbedaan genetik antar progeni akibat proses segregasi kedua  klon  tetua.  Beragamnya  tingkat serangan  penyakit  sangat  tergantung  pada tingkat  variabilitas  genetik,  variabilitas fenotipik  dan  interaksi  antara  keduanya, dimana  suatu  genotipe  tahan  terhadap suatu isolat namun menjadi rentan terhadap isolat lain (Breton et al., 2000; Liberei et al., 2008; Oktavia et al., 2016; Kusdiana et al ., 2 0 1 7 ) .   K e t a h a n a n   t e r h a d a p   P G D C merupakan  ketahanan  yang  bersifat kompleks  yang  diatur  secara  poligenik sehingga  adanya  variasi  pada  tingkat ketahanan  tanaman  diatur  oleh  gen  aditif (Tan  &  Tan,  1996),  dan  kadang  kala  sifat ketahanan  terhadap  PGDC  diatur  secara monogenik oleh gen-gen yang bersifat resesif (Hadi et  al .,  2004).  Fang et  al. (2016) melaporkan bahwa mekanisme pertahanan tanaman  karet  terhadap  PGDC  pada  saat daun muda lebih bersifat kimia yaitu melalui pengaturan  produksi  metabolit  sekunder seperti cyanogenic  glyside (HCN)  atau
senyawa  sianida  yang  ditandai  dengan meningkatnya  ekspresi  gen-gen  penyandi senyawa tersebut pada kondisi daun muda.
Rata-rata  intensitas  kelayuan  daun progeni  F1  yang  disebabkan  oleh    filtrat toksin  asal  CC-RRIM  600  dan  CC-GT  1 berturut-turut berkisar 12,61% dan 16,33% (Gambar  3).  Berdasarkan  hasil  tersebut terlihat bahwa setiap isolat memiliki tingkat virulensi yang berbeda terhadap progeni F1 yang  dianalisis.  Tingkat  virulensi  tertinggi ditemukan  pada  isolat  yang  diisolasi  dari klon  GT  1  dan  terendah  pada  isolat  yang diisolasi  dari  klon  RRIM  600.  Hasil  yang sama  juga  ditemukan  pada  plasma  nutfah karet  IRRDB  1981,  dimana  tanaman  lebih sensitif terhadap aktivitas filtrat toksin isolat asal  klon  GT  1  dari  pada  isolat  asal  klon RRIM  600  (Oktavia et  al .,  2016)  meskipun berdasarkan analisis tingkat virulensi isolat terhadap enam klon karet diketahui bahwa isolat  asal  klon  RRIM  600  lebih  virulen dibandingkan isolat asal GT 1 (Oktavia et al ., 2017).  Hal  ini  lumrah  ditemukan  dalam interaksi  patogen  dengan  tanaman  karena adanya kesesuaian ekspresi gen-gen virulen pada  patogen  dengan  gen-gen  resistensi pada inang. Selain itu semua isolat diisolasi d a r i   d a u n   t a n a m a n   k a r e t   y a n g menunjukkan  gejala  terserang  PGDC  dan semua  isolat  juga  tergolong  memiliki virulensi  tinggi  sehingga  diduga  mampu menginfeksi  semua  klon  tanaman  karet (Oktavia et al ., 2017). Berdasarkan analisis gen cassiicolin juga diketahui bahwa isolat C. cassiicola asal  klon  RRIM  600  memiliki
Gambar 2. Intensitas Kelayuan Daun 30 progeni F1 hasil persilangan BPM 1 x RRIM 600 terhadap filtrat toksin empat isolat C. cassiicola Figure 2. Leaf Wilting Intensity of 30 F1 progenies from BPM 1 x RRIM 600 to four of toxin filtrate of  C. cassiicola isolates
Analisis Keragaman Ketahanan Genetik Progeni F1 Hasil Persilangan BPM 1 X RRIM 600 terhadap Isolat Corynespora cassiicola
isoform  yang  berbeda  dengan  ketiga  isolat lainnya (Oktavia, 2020).
Gambar 2 juga menunjukkan bahwa isolat  yang  tergolong  haplotipe  1  (CC-GT  1 dan CC-IRR 104) memiliki tingkat virulensi yang lebih tinggi terhadap rata-rata progeni F1  hasil  persilangan  BPM  1  dengan  RRIM 600  dibandingkan  dengan  isolat  yang tergolong haplotipe 2 (CC-RRIM 600 dan CC- IRR  112).  Analisis  pengelompokkan haplotipe berdasarkan sekuen gen ITS-rDNA diketahui  bahwa  52,17%  dari  isolat C. cassiicola asal  berbagai  klon  karet  di Indonesia tergolong kepada haplotipe 1 dan 21,7%  haplotipe  2  (Oktavia et  al .,  2017). Sebagian besar isolat (5 isolat) dari kelompok haplotipe  1  dan  2  isolat  dari  haplotipe  2 merupakan  klon-klon  seri  IRR  yang
tergolong  klon  baru.  Menurut  Nghia et  al ., (2010),  haplotipe  berdasarkan  sekuen  gen ITS-rDNA yang merupakan constitutive gene tersebut menunjukkan kelompok ras isolat C.  cassiicola .  Berdasarkan  analisis  yang dilakukan  pada  isolat C.  cassiicola asal perkebunan  karet  di  Malaysia  diketahui bahwa ras 2 banyak ditemukan menginfeksi klon-klon  seri  RRIM  terbaru  (Atan et  al ., 2011).  Dengan  ditemukannya  perubahan ketahanan  klon-klon  yang  sebelumnya tahan  menjadi  rentan  seperti  yang  terjadi pada klon GT 1, maka dikhawatirkan akan munculnya  ras  baru  pada  isolat C. cassiicola .  Berdasarkan  informasi  tersebut diketahui  bahwa  ada  kemungkinan perubahan  genetik  pada  isolat-isolat  yang t e r g o l o n g   p a d a   h a p l o t i p e   1   y a n g mengakibatkan munculnya ras-ras baru.
Gambar 3. Rata-rata intensitas kelayuan daun progeni F1 hasil persilangan klon karet BPM 1 x RRIM 600 akibat aktivitas filtrat toksin empat isolat C. cassiicola yang berasal dari klon karet GT 1, IRR 104, RRIM 600, dan IRR 112.
Figure 3. Average of leaf wilting intensity of the F1 progenies which was obtained from  crossing of BPM 1 with RRIM 600 rubber clones caused by activity of four toxin filtrate of C. casssiicola isolates isolated from GT 1, IRR 104, RRIM 600 and IRR 112 rubber clone.

## Keterangan (Remaks):
Garis pada masing-masing diagram menunjukkan standard deviasi dan diagram isolat yang memiliki huruf yang sama tidak berbeda nyata berdasarkan Uji Jarak Berganda Duncan 5% ( Line  in  each  of  diagram  show  standard deviation and diagram of isolate have the same letter were not significantly different based on DMRT at 5%)
Gambar  4  menunjukkan  tingkat keragaman sensitivitas progeni F1 terhadap empat filtrat toksin isolat C. cassiicola yang berbeda.  Berdasarkan  metode  Hirarki Eucledean  menggunakan  program  DARwin diketahui  bahwa  ketahanan  progeni terhadap toksin terbagi atas dua kelompok besar  pada  tingkat  perbedaan  68,  dan kelompok  besar  tersebut  terpisah  menjadi berbagai  kelompok  kecil.  Secara  umum progeni  F1  berada  pada  kelompok  besar pertama bergabung dengan klon tetua BPM 1  yang  memiliki  ketahanan  yang  tinggi
terhadap  PGDC.  Progeni  F1.12  dan  F1.23 memiliki  tingkat  ketahanan  yang  paling dekat  terhadap  filtrat  toksin  dan  F1.10 memiliki ketahanan yang paling mendekati klon  tetua  BPM  1.  Hanya  tiga  progeni  F1 yang  masuk  ke  kelompok  besar  kedua dimana  pada  kelompok  tersebut  terdapat tetua  jantan  yaitu  klon  RRIM  600.  Hal  ini berarti bahwa tingkat ketahanan progeni F1 yang dianalisis terhadap PGDC lebih dekat ke tetua BPM 1   yang lebih tahan dibanding tetua RRIM 600.

## Oktavia
Berdasarkan  nilai  standar  deviasi intensitas kelayuan daun terhadap masing- masing filtrat toksin seperti yang tercantum pada Tabel 1, tingkat ketahanan progeni F1 terhadap  PGDC  dapat  dikelompokan menjadi  empat  yaitu  sangat  tahan,  tahan, rentan  dan  sangat  rentan  (Tabel  2). Berdasarkan  rata-rata  intensitas  kelayuan daun terhadap keempat isolat tersebut maka
ditentukan  tingkat  ketahanan  masing- masing progeni F1 terhadap penyakit gugur daun Corynespora dimana  mayoritas progeni F1 yaitu sebesar 47% bersifat tahan, dan  13%  sangat  tahan  terhadap  PGDC (Gambar  4).  Diharapkan  progeni-progeni tersebut  memiliki  karakter  agronomi  yang baik  sehingga  dapat  dipilih  menjadi  klon- klon karet unggul baru.
Gambar 4. Dendogram pengelompokan 30 progeni F1 hasil persilangan BPM 1 x RRIM 600 berdasarkan intensitas kelayuan daun menggunakan metode Hirarki Euclidean.
Figure 4. Clustering dendogram of 30 F1 progenies of BPM 1 x RRIM 600 based on leaf  wilting intensity using of Hirarki Euclidean method
Pengelompokan
Clustering Intensitas kelayuan daun terhadap filtrat toksin Leaf wilting intensity to toxin filtrate (%) CC-GT1 CC-IRR 104 CC-RRIM600 CC-IRR 112 Rata-rata Average Rata rata 16,33 15,79 12,61 15,00 14,91 SD 8,15 7,91 8,10 7,54 7,30 Sangat Tahan 8,18 7,88 4,51 7,46 7,61 Tahan 8,18  - 16,33 7,89  -15,79 4,51  - 12,61 7,47  - 15,00 7,61  - 14,91 Rentan 16,34  - 24,48 15,80  - 23,70 12,62  - 20,7 15,01  - 22,54 14,92  - 22,21 Sangat Rentan 24,48 23,70 20,71 22,55 22,21
Tabel 1. Pengelompokan intensitas kelayuan daun progeni F1 hasil persilangan BPM 1 dengan RRIM 600 berdasarkan nilai rata-rata dan standar deviasi terhadap isolat C. cassiicola Table 1. Clustering of leaf wilting intensity of F1 progenies of BPM 1 x RRIM 600 based on average and standard deviation value to C. cassiicola isolates
Analisis Keragaman Ketahanan Genetik Progeni F1 Hasil Persilangan BPM 1 X RRIM 600 terhadap Isolat Corynespora cassiicola
Tabel 2. Pengelompokan tingkat ketahanan 30 progeni F1 hasil persilangan BPM 1 x RRIM 600 berdasarkan intensitas kelayuan daun akibat aktivitas toksin dua isolat C. cassiicola
Table 2. Resistance level clustering of 30 F1 progenies of BPM 1 x RRIM 600 based on leaf wilting intensity caused toxin activity of two C. cassiicola isolates
No Progeni Progeny Tingkat ketahanan progeni terhadap toksin Resistance level of progenies to toxin Rata-rata tingkat ketahanan progeni terhadap toksin Average of progenies resistance level to toxin CC-GT1 CC-IRR 104 CC-RRIM600 CC-IRR 112 1 BPM1 Sangat tahan Sangat tahan Tahan Sangat tahan Sangat tahan 2 RRIM600 Sangat rentan Sangat rentan Sangat rentan Sangat rentan Sangat rentan 3 F1.1 Sangat tahan Sangat tahan Tahan Sangat tahan Sangat tahan 4 F1.2 Tahan Tahan Tahan Tahan Tahan 5 F1.3 Rentan Tahan Tahan Tahan Tahan 6 F1.4 Tahan Tahan Tahan Tahan Tahan 7 F1.5 Sangat tahan Sangat tahan Tahan Sangat tahan Sangat tahan 8 F1.6 Tahan Tahan Tahan Tahan Tahan 9 F1.7 Sangat tahan Tahan Tahan Tahan Tahan 10 F1.8 Tahan Rentan Rentan Rentan Tahan 11 F1.9 Rentan Sangat Rentan Rentan Sangat Rentan Sangat rentan 12 F1.10 Sangat tahan Sangat tahan Tahan Sangat tahan Sangat tahan 13 F1.11 Sangat tahan Tahan Rentan Tahan Tahan 14 F1.12 Tahan Tahan Tahan Tahan Tahan 15 F1.13 Rentan Sangat Rentan Sangat rentan Rentan Sangat Rentan 16 F1.14 Tahan Tahan Sangat Tahan Tahan Tahan 17 F1.15 Rentan Rentan Rentan Rentan Rentan 18 F1.16 Rentan Rentan Sangat Rentan Rentan Rentan 19 F1.17 Sangat rentan Sangat rentan Sangat rentan Sangat rentan Sangat rentan 20 F1.18 Tahan Tahan Rentan Tahan Tahan 21 F1.19 Rentan Rentan Rentan Rentan Rentan 22 F1.20 Rentan Rentan Tahan Rentan Rentan 23 F1.21 Rentan Rentan Tahan Rentan Rentan 24 F1.22 Rentan Rentan Tahan Rentan Rentan 25 F1.23 Tahan Tahan Tahan Tahan Tahan 26 F1.24 Rentan Rentan Sangat Rentan Rentan Sangat rentan 27 F1.25 Sangat rentan Sangat rentan Rentan Rentan Rentan 28 F1.26 Sangat rentan Sangat rentan Tahan Rentan Sangat rentan 29 F1.27 Sangat tahan Tahan Tahan Sangat tahan Sangat tahan 30 F1.28 Tahan Tahan Tahan Sangat Tahan Tahan 31 F1.29 Rentan Rentan Tahan Tahan Tahan 32 F1.30 Rentan Tahan Rentan Tahan Tahan
Gambar 4. Pesentase pengelompokan tingkat ketahanan progeni F1 hasil persilangan BPM 1 dengan RRIM 600 terhadap PGDC
Figure 4. Percentage of resistance level clustering of F1 progenies BPM 1 and RRIM 600 to CLF disease

## KESIMPULAN
Identifikasi  kerentanan  30  progeni F1  hasil  persilangan  klon  BPM  1  dengan RRIM  600  menunjukkan  bahwa  setiap progeni  memiliki  tingkat  ketahanan  yang berbeda nyata terhadap filtrat toksin empat isolat  C.  cassiicola.  Dari  empat  isolat  yang diuji terlihat bahwa isolat CC-GT 1 memiliki tingkat  virulensi  yang  paling  tinggi  yang mengakibatkan  tingginya  intensitas kelayuan  daun  progeni  F1.  Isolat  yang tergolong haplotipe 1 yaitu CC-GT 1 dan CC- IRR 104 memiliki tingkat virulensi yang lebih tinggi  dari  pada  isolat  yang  tergolong haplotipe  2  yaitu  CC-RRIM  600  dan  CC- IRR112.  Berdasarkan  pengujian  tersebut diketahui  bahwa  13%  progeni  F1  hasil persilangan  BPM  1  dengan  RRIM  600 memiliki  tingkat  ketahanan  yang  sangat tinggi  terhadap  PGDC,  47%  bersifat  tahan serta  23  %  dan  17%  bersifat  rentan  dan sangat rentan terhadap PGDC. Progeni yang memiliki  ketahanan  yang  baik  berpeluang terpilih  menjadi  klon-klon  karet  unggul  di masa mendatang.

## DAFTAR PUSTAKA
Atan, S., Derapi, S., Ismail, L., & Shukor, N.
(2011).  Screening  susceptibility  of Hevea  progenies  from  PB  5/51  x  IAN 873  to  two  races  of  Corynespora cassiicola. Journal of Rubber Research, 14(2), 110-122.
Breton, F., Sanier, C., & d’Auzac, J. (2000). Role of cassiicolin a host-selective toxin in  pathogenicity  of Corynespora cassiicola, causal  agent  of  a  leaf  fall disease  of  Hevea. Journal  of  Rubber Research, 3(2), 115-128.
de  Lamotte,  F.,  Duviau,  M.P.,  Sanier,  C., Thai,  R.,  Poncet,  J.,  Bieysse,  D., Breton,  F.,  &  Pujade-Renaud,  V. ( 2 0 0 7 ) .   P u r i f i c a t i o n   a n d characterization  of  Cassiicollin  toxin produced  by Corynespora  cassiicola causal agent of the leaf fall disease of rubber tree. Journal Chromatography, 849(1-2),  357-362.  https://doi.org/ 10.1016/j.jchromb.2006.10.051
Deon, M., Bourré, Y., Gimenez, S., Berger, A., Bieysse, D., de Lamotte, F., Poncet, J., Roussel,  V.,  Bonnot,  F.,  &  Oliver,  G. ( 2 0 1 2 ) .   C h a r a c t e r i z a t i o n   o f   a cassiicolin-encoding  gene  from Corynespora  cassiicola, pathogen  of rubber tree ( Hevea brasiliensis ). Plant S c i e n c e , 1 8 5 – 1 8 6 ,   2 2 7 - 2 3 7 . https://doi.org/10.1016/j.plantsci.2 011.10.017
Deon, M., Fumanal, B., Gimenez, S., Bieysse, D., Oliveira, R.R., Shuib, S.S., Breton, F., Elumalai, S., Vida, J.B., & Seguin, M.  (2014).  Diversity  of  the  cassiicolin gene  in Corynespora  cassiicola and relation  with  the  pathogenicity  in Hevea  brasiliensis.  Fungal  Biology, 1 1 8 ( 1 ) ,   3 2 - 4 7 .   h t t p s : / / d o i . o r g /10.1016/j.funbio.2013.10.011
Evueh,  A.,  Okhuoya,  J.,  Osemwegie,  O., Attitalla,  I.,  &  Ogbebor,  O.  (2011). Evaluation  of  phylloplane  fungi  as biocontrol  agent  of Corynespora  leaf fall  disease  of  rubber  ( Hevea brasiliensis Muell. Arg. ). World Journal Fungal Plant Biology, 2(1), 1-5.
Fang, Y., Mei, H., Zhou, B., Xiao, X., Yang, M., Huang, Y., Long, X., Hu, S., & Tang, C.  (2016).  De  Novo  transcriptome analysis  reveals  distinct  defense mechanisms  by  young  and  mature leaves  of Hevea  brasiliensis (para rubber  tree). Scientific  Reports, 6, 33151.  https://doi.org/10.1038/ srep33151
Hadi, H., Hartana, A., & Sinaga, M. (2004). Analisis  genetika  pewarisan  sifat ketahanan  tanaman  karet  terhadap penyakit  gugur  daun Corynespora.
Hayati Journal Bioscience, 11(1), 1-5.
Ismail,  H.,  &  Jeyanangi,  I.  (1999). Occurrence  and  identification  of physiological  races  of Corynespora cassiicola of Hevea. Proceedings  of IRRDB Symposium 1999 (p. 263-272). Haikou,  China:  Hainan  Publishing House.
Kusdiana, A.P.J., Syafaah, A., & Oktavia, F.
(2017). Resistensi tanaman karet klon IRR seri 300 terhadap penyakit gugur daun Corynespora.  Jurnal  Penelitian
Karet, 35(2),  115  -  128.  https:// doi.org/10.22302/ppk.jpk.v35i2.374
Analisis Keragaman Ketahanan Genetik Progeni F1 Hasil Persilangan BPM 1 X RRIM 600 terhadap Isolat Corynespora cassiicola
Lopez,,  D.,  Ribeiro,  S.,  Label,  P.,  Fumanal, B., Venisse J.S., Kohler, A., de Oliveira, R.R.,  Labutti,  K.,  Lipzen,  A.,  Lail,  K., Bauer,  D.,  Ohm,  R.A.,  Barry,  K.W., Spatafora,  J.,  Grigoriev,  I.V.,  Martin, F.M.,  &  Pujade-Renaud,  V.  (2018). Genome-wide analysis of Corynespora cassiicola leaf  fall  disease  putative effectors. Front  Microbiology, 9,  276. https://doi.org/10.3389/fmicb.2018. 00276
Manju,  M.J.,  Benagi,  V.I.,  Shankarappa, T.H., Vinod, K.K., & Jacob, C.K. (2015). Major diseases of Hevea brasiliensis in rubber growing regions of South India.
Environment & Ecology, 33(3A), 1299- 1302.
Mazlan,  S.,  Jaafar,  N.M.,  Wahab,  A., Sulaiman, Z., Rajandas, H., & Zulperi, D.  (2019).  Major  diseases  of  rubber ( Hevea  brasiliensis )  in  Malaysia. Pertanika  Journal  of  Scholarly Research Reviews, 5(2), 10-21.
Nghia,  N.,  Kadir,  J.,  Sunderasan,  E., Abdullah,  M.,  Malik,  A.,  &  Napis,  S. (2010).  Intraspecific  variability  of Corynespora  cassiicola inferred  from single nucletide polymorphisms in ITS region  of  ribosomal  DNA. Journal  of Rubber Research, 13(4), 257-264.
Oktavia,  F.  (2020).  Identification  and diversity  analysis  of  cassiicolin encoding  gene  of Corynespora cassiicola isolates from rubber tree in Indonesia. Biodiversitas  Journal  of Biology  Diversity, 21(8),  3499-3507. https://doi.org/10.13057/biodiv/d21 0811
Oktavia,  F.,  Sudarsono.,  Kuswanhadi., Dinarty,  D.,  &  Widodo.  (2017). Pathogenicity and rDNA-ITS sequence analysis of the Corynespora cassiicola isolates  from  rubber  plantations  in Indonesia. Emirates  Journal  of  Food and  Agriculture, 29(11),  872-883. https://doi.org/10.9755/ejfa.2017.v2 9.i11.1497
Oktavia, F., Kuswanhadi., Widodo., Dinarty, D.,  &  Sudarsono.  (2016).  Identifikasi ketahanan plasma nutfah karet IRRDB 1981 terpilih terhadap penyakit gugur daun Corynespora berdasarkan aktivitas  toksin cassiicolin.  Jurnal Penelitian  Karet, 34(1),  35-48. https://doi.org/10.22302/ppk.jpk.v3 4i1.225
Ogbebor,  N.,  &  Adekunle,  A.  (2005). Inhibition of conidial germination and mycelial  growth  of Corynespora cassiicola (Berk  and  Curt)  of  rubber ( Hevea  brasiliensis  muell.  Arg. )  using extracts  of  some  plants. African Journal Biotechnology, 4(9), 996-1000.
Pujade-Renaud,  V.,  Lopez,  D.,  Ribeiro,  S., Minh, T., Deon, M., Clement-Demange, A., Garcia, D., Drevet, P., Label, P., & Morin,  E.  (2015).  The  effectors  of Corynespora  cassiicola virulence  in r u b b e r   t r e e .   P r o c e e d i n g s   o f International  Rubber  Confrence (p.221-224).    Ho  Chi  Minh,  Vietnam: IRRDB & RRIV.
Ribeiro, S., Tran, D.M., Deon, M., Clément- Demange, A., Garcia, D., Soumahoro, M.,  Masson,  A.,  &  Pujade-Renaud,  V. (2019).  Gene  deletion  of Corynespora cassiicola cassiicolin Cas1 suppresses virulence  in  the  rubber  tree.  Fungal Genetic  and  Biololgy,  129,  101-114. https://doi.org/10.1016/j.fgb.2019.0 5.004
Situmorang,  A.,  Sinaga,  M.,  Suseno,  R., Hidayat, S., Siswanto., & Darussamin, A.  (2007).  Sebaran  penyakit  gugur d a u n C o r y n e s p o r a d i   s e n t r a perkebunan  karet  Indonesia. Jurnal Penelitian Karet, 25(1), 76-82.
Situmorang,  A.  (2002).  Sebaran  penyakit gugur  daun,  virulensi  dan  genetika Corynespora  cassiicola asal  sentra p e r k e b u n a n   k a r e t   I n d o n e s i a . [Disertasi].  Bogor:  Institut  Pertanian Bogor.
Tran,  D.M.,  Cle´ment-Demange,  A.,  De´on, M., Garcia, D., Le Guen, V., Cle´ment- Vidal, A., Soumahoro, M., Masson, A., Label, P., Le, M.T., & Pujade-Renaud, V.  (2016).  Genetic  determinism  of sensitivity  to Corynespora  cassiicola exudates  in  rubber  tree  ( Hevea brasiliensis ). PLoS  ONE ,  11(10), e0162807.  https://doi.org/10.1371 /journal.pone.0162807
Tan, A., & Tan, A. (1996). Genetic studies of leaf  diseases  resistance  in Hevea. Journal  of    Rubber  Research, 11(2),
108-114.

## Oktavia