PREDIKSI INTERAKSI MOLEKULER CAPE DENGAN IL-2, CD25, IL-10, CTLA-4, IDO,

## TGFβ, and CCL2 DENGAN SOFTWARE DOCKING MOLEKULER

## Zauhani Kusnul *
* Akademi Keperawatan Pamenang
Correspondence Author: zauhani.kusnul@gmail.com
Info Artikel :

## ABSTRAK
Sejarah Artikel : Menerima  10-12- 2018 Revisi         09-01-2018 Diterima     21-01-2019 Online        03-02-2019
Key words: Molecular docking,
propolis, CAPE, target molecule The  use  of  herbal  medicine  as  a  nutritious  ingredient  to  treat  various diseases is still mostly done traditionally based on hereditary information. The  development  of  technology  supports  the  exploration  of  natural materials  as  a  nutritious  material  with  various  scientific  evidences.  The development  of  computational  and  bioinfrmatic  technology  simulates interactions  between  various  active  compounds  and  target  molecules virtually  commonly  known  as  molecular  docking,  a  virtual  screening based  on  structure  used  to  predict  the  interaction  of  three-dimensional structures  of  small  molecules  (compounds)  with  the  target  molecular structure. Propolis is a substance produced by bees from resins collected from  plants  and  combined  with  wax  and  secretions  from  bee  salivary glands  which  are  rich  in  various  enzymes.  In  the  world  of  medicine, propolis has been used since time immemorial and until now it has been known  that  propolis  can  be  a  natural  medicine  with  anti-bacterial,  anti- tumor,  antioxidant  and  immunomodulatory  abilities.  Molecular  docking between  one  of  the  active  compounds  in  propolis,  namely  caffeic  acid phenethyl ester (CAPE) with various target molecules such as IL-2, CD25, IL10, TGFβ, CTLA-4, CCL21, and IDO using the DockingServer software provides  information  that  CAPE  has  inhibitory  activity  against  IL-2, CD25, IL-10, CTLA-4, IDO, TGFβ, and CCL2 so that it has the potential to be further developed as a candidate for immunomodulatory therapy.

## INTISARI
Kata Kunci : Docking molekuler, propolis, CAPE,
molekul target
Penggunaan  jamu  sebagai  bahan  berkhasiat  untuk  mengobati  berbagai penyakit  masih  banyak  dilakukan  secara  tradisional  berdasarkan informasi  turun  temurun.  Perkembangan  teknologi  menunjang  upaya eksplorasi  bahan  alam  sebagai  bahan  berkhasiat  dengan  berbagai pembuktian ilmiah. Perkembangan teknologi komputasi dan bioinfrmatika membuat  simulasi  interaksi  antara  berbagai  senyawa  aktif  dan  molekul target secara virtual yang biasa dikenal dengan istilah docking molekuler, merupakan  screening  virtual  berdasaarkan  struktur    yang  digunakan untuk memprediksi interaksi struktur tiga dimensi molekul kecil (senyawa) dengan  struktur  molekul  target.  Propolis  merupakan  substansi  yang dihasilkan  oleh  lebah  dari  resin  yang  dikumpulkan  dari  tanaman  dan dikombinasikan  dengan  wax  dan  sekresi  dari  kelenjar  ludah  lebah  yang kaya  akan  kandungan  berbagai  enzim.    Dalam  dunia  pengobatan, propolis  sudah  digunakan  sejak  dahulu  kala  dan  hingga  kini  telah diketahui  propolis  bisa  menjadi  obat  alami  dengan  kemampuan  anti bakteri, anti tumor, antioksidan, dan imunomodulator. Docking molekuler antara  salah  satu  senyawa  aktif  dalam  propolis  yaitu    caffeic  acid phenethyl  ester  (CAPE)  dengan  berbagai  molekul    target  seperti  IL-2,
CD25,  IL10,  TGFβ,  CTLA-4,  CCL21,  dan  IDO  dengan  menggunakan piranti  lunak  DockingServer  memberikan  informasi  bahwa  CAPE memiliki  aktifitas  inhibisi  terhadap  IL-2,  CD25,  IL-10,  CTLA-4,  IDO, TGFβ,  dan  CCL2  sehingga  berpotensi  untuk  dikembangkan  lebih  lanjut sebagai kandidat terapi imuomodulator terhadap kanker.

## 1. PENDAHULUAN
Secara praktis dalam keseharian kehidupan masyarakat Indonesia, pemanfaatan bahan alam untuk  tujuan  terapi  sudah  sangat  lazim  digunakan.  Dalam  kajian  ilmiah  keilmuan,  khasiat/efek yang  dihasilkan  suatu  bahan  alam  dapat  ditelusuri  dan  dibuktikan  sehingga  dapat  menjelaskan berbagai hal terkait mekanisme suatu bahan alam hingga menimbulkan efek terapi, dosis optimal, juga  kemungkinan  efek  samping  yangbditimbulkan.  Hingga  kini  masih  banyak  mekanisme  efek terapi dari bahan alam  yang belum dapat diungkap dengan jelas. Dengan perkembangan tehnologi saat ini telah banyak dikembangkan piranti lunak yang mengintegrasikan berbagai bidang keilmuan seperti  kimia,  biologi,  tehnologi  komputasi  dan  bioinfrmatika  untuk  membuat  simulasi  interaksi antara berbagai senyawa aktif dan molekul target secara virtual yang biasa dikenal dengan istilah docking  molekuler  (Heo et  al. ,  2014).  Docking  molekuler  merupakan  screening  virtual berdasaarkan  struktur  ( structure-based  virtual  screening /SBVS)  yang  digunakan  untuk memprediksi  interaksi  struktur  tiga  dimensi  molekul  kecil  (senyawa)  dengan  struktur  molekul target (Mahajan, Gill dan Arora, 2014).
Aplikasi  docking  molekuler  memberi  manfat  penting  bagi  bidang  ilmu  farmasi  dan kedokteran,  terutama  dalam  pengembangan  obat  baru.  Dengan  docking  molekuler  dapat diperkirakan  nilai  energi  ikatan  ( free  energy  of  binding )  terkecil  yang  menggambarkan  tingkat kecocokan  ligan  dengan  senyawa  target.  Hasil  dari  docking  molekuler  dapat  menjadi  informasi yang  membantu  penelitian  laboratorium  menjadi  lebih  efisien  (Mahajan,  Gill  dan  Arora, 2014)(Mahajan,  et  al.,  2014).  Namun  sebagai  sebuah  metode,  docking  molekuler juga  msih  terus dikembangkan.
Beberapa  informasi  dari  hasil  proses  docking  diantaranya, free  energy  of  binding yang artinya adalah jumlah/besar energi yang dibutuhkan ligan untuk berikatan dengan reseptor;  makin kecil  nilai free  energy  of  binding menunjukkan  prediksi  potensi  aktifitas  ligan/substrat  makin tinggi; inhibition  conce ntration  artinya  konsentrasi  ligan/substrat  yang  dibutuhkan  untuk menghambat  reseptor,  makin  kecil  nilai inhibition  concentration menunjukkan  prediksi  potensi aktifitas  substrat  makin  tinggi,  bila  suatu  proses  docking  tidak  memberikan  hasil  nilai inhibition concentration maka  kemungkinan  senyawa  tersebut  bersifat  agonis  terhadap  target;  total intermolecular  energy artinya  total  energi  yang  dibutuhkan  dalam  proses  interaksi  ligan  reseptor, makin  kecil  nilai  total intermolecular  energy menunjukkan  prediksi  kemungkinan  kecocokan interaksi  ligan  dengan  reseptor  makin  tinggi;  interaction  surface  artinya  luas  permukaan penempelan ligan dan reseptor, makin luas permukaan penempelan menunjukkan potensi interaksi ligan reseptor makin baik .
Hingga  saat  ini  telah  dilakukan  kajian  terhadap  berbagai  jenis  bahan  alam  terkait potensinya  sebagai  agen  imunoterapi,  salah  satunya  yang  dilaporkan  memiliki  aktifitas  sebagai imunomoduator  adalah  propolis. Propolis  merupakan  substansi  yang  dihasilkan  oleh  lebah  dari resin  yang  dikumpulkan  dari  tanaman  dan  dikombinasikan  dengan  wax  dan  sekresi  dari  kelenjar ludah  lebah  yang  kaya  akan  kandungan  berbagai  enzim  (Sawaya,  Barbosa  da  Silva  Cunha  dan Marcucci,  2011).  Propolis  digunakan  lebah  untuk  melapisi  dinding  sarang  untuk  melindungi  dari masuknya  binatang  penyerang  dari  luar,  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dan  jamur, memperkuat dinding sel juga menjaga lingkungan aseptik dalam sarang (Salatino et al. , 2005).
Dalam  dunia  pengobatan,  propolis  sudah  digunakan  sejak  dahulu  kala  dan  hingga  kini telah diketahui propolis bisa menjadi obat alami dengan kemampuan anti bakteri  (Hasson, 2014), anti tumor (Borges et al. , 2011; Khacha-ananda et al. , 2013), antioksidan (Padmavathi et al. , 2006), dan imunomodulator (Sforcin, Kaneno dan Funari, 2011; Kusnul et al. , 2017).
Penelitian  ini  mengeksplorasi  interaksi  molekul    antara  salah  satu  senyawa  aktif  dalam propolis yaitu caffeic acid phenethyl ester (CAPE) dengan berbagai molekul  target seperti IL-2, CD25,  IL10,  TGFβ,  CTLA-4,  CCL21,  dan  IDO  dengan  menggunakan  piranti  lunak DockingServer. Pemilihan molekul target tersebut berdasarkan peran dan keterkaitanya dengan sel Treg. Adapun sekilas tentang molekul target adalah sebagai berikut;
- IL-2 merupakan faktor penting dalam pembentukan dan aktifitas supresi sel Treg dan karena sel  Treg  tidak  memproduksi  IL-2  sendiri  maka  sel  Treg  bergantung  pada  produksi  dan ekspresi IL-2 oleh sel T responder (sel T non sel Treg di lingkup sekitar sel Treg) (Rosa et al. , 2004).
- CD25/IL2R  diekspresikan  secara  konstitutif  pada  kadar  yang  tinggi  oleh  sel  Treg (CD4+CD25+ FoxP3+), hal ini memudahkan sel Treg untuk mendapatkan IL-2 yang penting untuk fungsi supresinya (Feinerman et al. , 2010).
- CTLA-4  (CD152)  merupakan    molekul  ko-stimulator  yang  diekspresikan  secara  konstitutif oleh  sel  Treg  (CD25+).  CTLA-4  menghambat  sel  T  efektor  dengan    berikatan  dengan CD80/86 (B7) yang diekspresikan APC  (Tran et al. , 2010). Interaksi/ikatan CTLA-4 dan B7 menunjang  kemampuan  sel  Treg  untuk  memacu  sel  dendritik  memproduksi  indolamin  2,3- dioxgenase (IDO) sehingga terjadi akumulasi IDO pada area tumor dan menggganggu respon imun anti tumor (Roy et al. , 2013).
- IDO diekspresikan oleh sel dendritik yang imatur (Roy et al. , 2013), juga oleh sel tumor (Curti et  al. ,  2007).    IDO  merupakan  enzim    intraseluler  yang  bekerja  mendegradasi  tryptophan, serotonin,  dan  melatonin.  Tryptophan  merupakan  asam  amino  esensial  yang  penting  dalam proliferasi  sel,  deplesi  tryptophan  menyebabkan  hambatan  pada  aktifitas  sel  T.  Tryptophan yang  terdegradasi  menghasilkan  kynurenin  yang  juga  dapat  menginduksi  apoptosis  sel  T melalui mekanisme radikal bebas (Chen dan Guillemin, 2010).
- CCL21 diekspresikan beberapa jenis tumor/kanker, diantaranya; kanker lambung (Zhou et al. , 2013), kanker primer dan metastasis sel kanker squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN)  (Wang et  al. ,  2004)  dan  kanker  serviks  (Kodama et  al. ,  2007).  CCL21  dapat menginduksi    AICD  (activation  induced  cell  death)  sel  T  CD4  melalui  peningkatan  ekspresi FasL, caspase 8 dan caspase 9 (Yasuda et al. , 2006).
- TGFβ    berperan  penting  dalam  mekanisme  escape  dari  immunosurveillance,  juga  dalam proses diferensiasi dan konversi sel aTreg  (Peghini et al. , 2012). TGFβ bekerja menghambat aktivitas CTL, sel T CD4+, Makrofag, sel dendritik, dan sel NK.  TGFβ menghambat aktivitas CTL dengan menghambat ekspresi gen sitotoksik (perforin, GzmA, GzmB, IFNγ, dan FasL) pada tingkat mRNA pada sel T CD8+ (Thomas dan Massagué, 2005).
- IL-10  merupakan  sitokin  imunosupresif  yang  yang  disintesis  sel  Treg.  IL-10  mempengaruhi beberapa  mekanisme  yang  berkaitan  dengan  aktivasi  sistem  imun,  diantaranya  menghambat fungsi  sel  dendritik  dengan  menekan  produksi  sitokin  inflamasi,  menghambat  MHC  II,  dan ekspresi  molekul  ko-stimulator.  dimana  IL-10  mempengaruhi  imunitas  bawaan  dan  adaptif untuk  menurunkan  respon  imun  terhadap  antigen,    kadar  IL-10  juga  didapatkan  meningkat terutama pada HSIL (Dardalon et al. , 2010).

## 2. METODE PENELITIAN
Salah  satu  piranti  lunak melocular  docking adalah  DockingServer  yang  dapat  diakses secara  online  melalui  laman  www.dockingserver.com.  Aplikasi  DockingServer  dapat digunakan untuk analisis ligan tunggal serta untuk docking tingkat  tinggi dari beberapa ligan untuk menargetkan suatu protein. DockingServer mengintegrasikan sejumlah perangkat lunak komputasi  kimia  yang  secara  khusus  ditujukan  untuk  dapat  menghitung  parameter  interaksi antar  molekul  dengan  benar  sehingga  penggunaan  DockingServer  memungkinkan  pengguna untuk melakukan perhitungan docking yang sangat efisien.
Langkah  pertama  dalam  melakukan  proses  docking  adalah  mendownload  file  struktur ligan  dan  molekul  target  yang  hendak  kita  uji  di  website http://pdb.org atau http://www.ncbi.nlm.nih.gov , dan disimpan dalam bentuk file pdb. Selanjutnya proses docking dilakukan  secara  online  dengan  membuka  website  DockingServer  dengan  alamat http://www.dockingserver.com/web,  dan  lakukan  registrasi.  File  molekul  ligan  maupun
protein  target  dimasukkan  satu  persatu,  selanjutnya  klik  start  docking.  Proses  ini membutuhkan  waktu  yang  bervariasi,  dari  hitungan  menit  hingga  berhari-hari.  Bila  proses yang  dijalankan  selesai  akan  ada  notifikasi.  Setelah  output  keluar  dapat  dilakukan  analisis untuk menginterpretasikan hasil docking.

## 3. HASIL DAN ANALISA
Hasil prediksi interaksi molekuler antara CAPE dengan berbagai molekul  target seperti IL-2, CD25, IL10, TGFβ, CTLA-4, CCL21, dan IDO dengan menggunakan piranti lunak DockingServer memberikan beberapa informasi dari hasil proses docking diantaranya, free energy of binding yang artinya adalah jumlah/besar energi yang dibutuhkan ligan untuk berikatan dengan reseptor;  makin kecil  nilai free  energy  of  binding menunjukkan  prediksi  potensi  aktifitas  ligan/substrat  makin tinggi; inhibition  concentration artinya  konsentrasi  ligan/substrat  yang  dibutuhkan  untuk menghambat  reseptor,  makin  kecil  nilai inhibition  concentration menunjukkan  prediksi  potensi aktifitas  substrat  makin  tinggi,  bila  suatu  proses  docking  tidak  memberikan  hasil  nilai inhibition concentration maka  kemungkinan  senyawa  tersebut  bersifat  agonis  terhadap  target; total intermolecular  energy artinya  total  energi  yang  dibutuhkan  dalam  proses  interaksi  ligan  reseptor, makin  kecil  nilai total  intermolecular  energy menunjukkan  prediksi  kemungkinan  kecocokan interaksi  ligan  dengan  reseptor  makin  tinggi; interaction  surface artinya  luas  permukaan penempelan ligan dan reseptor, makin luas permukaan penempelan menunjukkan potensi interaksi ligan reseptor makin baik.

## 3.1 CAPE (Caffeic acid  phenethyl ester)
Caffeic  acid    phenethyl  ester  atau  juga  dikenal  dengan  nama  Phenethyl  caffeate;  CAPE atau Capeee merupakan salah satu senyawa aktif dalam propolis yang banyak diteliti dalam dunia pengobatan  karena  kemampuan  antioksidan  (Akyol et  al. ,  2014;  Ozkan et  al. ,  2014),  anti  kanker (Ulasli et  al. ,  2013;  Chiang et  al. ,  2014;  Tseng et  al. ,  2014),  juga  sebagai  imunomodulator (Ansorge,  Reinhold  dan  Lendeckel,  2003).  CAPE  memiliki  rumus  kimia C 17 H 16 O 4 ,  berat  molekul 284.30654 g/mol, dan dapat larut dalam air (PubChem, NCBI).
Gb. 1  Struktur kimia CAPE
3.2 Prediksi model interaksi antara CAPE dengan molekul target IL-2, CD25, IL-10, CTLA- 4, IDO, TGFβ, dan CCL21 menggunakan software docking server Hasil  prediksi  interaksi  antara  CAPE  dengan  berbagai  molekul  target  menggunakan software docking server adalah sebagai berikut:
CAPE-IL-2 CAPE-CD25 CAPE-CTLA-4 CAPE-IL10
CAPE - TGF β
CAPE-IDO

## CAPE-CCL21
Gb. 2. Output molekuler docking antara CAPE dengan IL-2, CD25, IL-10, CTLA-4, IDO, TGF β , dan CCL21 dengan menggunakan software DockingServer
Tabel  1 . Tabulasi molekuler docking CAPE dengan IL-2, CD25, IL-10, CTLA-4, IDO, TGF β , dan CCL21 dengan menggunakan software DockingServer. Nama ligand Molekul Target Est.Free Energi of Binding (kcal/mol) Est.Inhibition Constant Total Intermolec.Energi (kcal/mol) Interact.surface CAPE IL-2 -0,36 547,43mM -2,58 446,754 CD25 3,60 - 0,62 475,267 IL-10 -4,12 949,96 μ M -5,22 501,967 TGF β -4,32 684,78 μ M -5,69 502,613 CTLA-4 -3,46 2,90 mM -5,00 580,248 IDO -5,14 171,86 μ M -6,54 624,251 CCL21 -3,57 2,41mM -5,44 537.981
Hasil docking CAPE  dengan  berbagai  molekul  diatas  menunjukkan  bahwa free  binding energi terkecil  terjadi  antara  CAPE  dengan  IDO  (-5,14),  selanjutnya  TGFβ  dan  IL-10  masing- masing -4,32 dan -4,12. Konstanta inhibisi masing-masing  171,86, 684,78 dan 949,96 untuk IDO, TGFβ dan IL-10. Sedang pada CD25 tidak muncul konstanta inhibisi artinya kemungkinan CAPE bersifat agonis pada molekul tersebut.
Dalam pengobatan terhadap kanker, CAPE dilaporkan memiliki aktifitas sitotoksik terhadap berbagai  sel  kanker  diantaranya  pada  cell  line  kanker  paru  A549,  6  μg/ml  CAPE  menghambat pertumbuhan  sebesar  60%  dan  menurunkan  jumlah  sel  yang  hidup  sebesar  46%  setelah  inkubasi selama 48 jam (Chen et al. , 2004).  CAPE juga menginduksi apoptosis dan cell cycle arrest pada sel  model  kanker  serviks  ME180,  CaSki,  SiHa  dan  HeLa    (Hsu et  al. ,  2013).    Pada  sel  model
kanker payudara MCF-7 (ER+) dan MDAMB-231 (ER−/PR−/Her2-) ekstrak propolis menghambat deasetilasi  histon  dan  menunjukkan  hasil  lebih  poten  dalam  bentuk  ekstrak  propolis  lengkap dibanding  dengan  CAPE  (Omene,  Wu  dan  Frenkel,  2012).  Pada  sel  glioma  CAPE  menginduksi apoptosis dengan mengaktifkan p38 MAPK yang selanjutnya membentuk komplek dengan p53 dan memicu  pelepasan  cytocrome  C  (Tseng et  al. ,  2014).  CAPE  juga  merupakan  inhibitor  NFκB dimana  aktifitas  NFκB    yang  terkendali  merupakan  faktor  penting  dalam  proliferasi  sel  normal namun aktivasi  NFκB secara konstitutiv pada sel kanker menyebabkan peningkatan kemampuan pertumbuhan pada berbagai jenis sel kanker sel kanker (Bentires-alj et al. , 2003).

## 4. KESIMPULAN
Secara virtual dengan menggunakan metode docking molekuler disimpulkan bahwa CAPE memiliki aktifitas inhibisi terhadap IL-2, CD25, IL-10, CTLA-4, IDO, TGFβ, dan CCL2 sehingga berpotensi  untuk  dikembangkan  lebih  lanjut  sebagai  kandidat  terapi  imuomodulator  terhadap kanker.

## DAFTAR PUSTAKA
Akyol, S. et al. (2014) “Caffeic Acid Phenethyl Ester as a Protective Agent against Nephrotoxicity and / or Oxidative Kidney Damage : A Detailed Systematic Review,” The Scientific  World Journal .
Ansorge, S., Reinhold, D. dan Lendeckel, U. (2003) “Propolis and Some of its Constituents Down- Regulate  DNA  Synthesis  and  Inflammatory  Cytokine  Production  but  Induce  TGF-  1 Production of,” Z. Naturforchforsch .
Bentires-alj, M. et al. (2003) “NF- j B transcription factor induces drug resistance through MDR1 expression in cancer cells,” hal. 90–97. doi: 10.1038/sj.onc.1206056.
Borges,  K.  S. et  al. (2011)  “Antiproliferative  effects  of  Tubi-bee  propolis  in  glioblastoma  cell lines,” 314, hal. 310–314.
Chen,  M. et  al. (2004)  “Cell  Killing  and  Radiosensitization  by  Caffeic  Acid  Phenethyl  Ester  ( CAPE ) in Lung Cancer Cells,” 45(2), hal. 253–260.
Chen, Y. dan Guillemin, G. J. (2010) “Kynurenine Pathway Metabolites in Humans : Disease and Healthy States,” 61(02).
Chiang,  E.  I. et  al. (2014)  “Caffeic  Acid  Derivatives  Inhibit  the  Growth  of  Colon  Cancer : Involvement  of  the  PI3-K  /  Akt  and  AMPK  Signaling  Pathways,”  9(6).  doi: 10.1371/journal.pone.0099631.
Curti, A. et al. (2007) “Modulation of tryptophan catabolism by human leukemic cells results in the conversion of CD25 − into CD25 + T regulatory cells Modulation of tryptophan catabolism by  human  leukemic  cells  results  in  the  conversion  of  CD25  Ϫ  into  CD25  ϩ  T  regulatory cells,” blood , 109, hal. 2871–2877. doi: 10.1182/blood-2006-07-036863. Dardalon, V. et  al. (2010)  “Interleukin  4  Inhibit  TGFb-induced-Foxp3+  T  cells  and  generates, in combination  with  TGFb,  Foxp3-  effector  T  cells  that  produce  interleukins  9  and  10,” Nat Immunol , 9(12), hal. 1347–1355. doi: 10.1038/ni.1677.Interleukin.
Feinerman, O. et al. (2010) “Single-cell quantification of IL-2 response by effector and regulatory T  cells  reveals  critical  plasticity  in immune  response.,” Molecular  systems  biology ,  6,  hal. 437. doi: 10.1038/msb.2010.90.
Hasson,  S.  O.  (2014)  “ANTIBACTERIAL  ACTIVITIES  OF  IRAQI  PROPOLIS  AND  ITS ACTIVE COMPONENTS EXTRACTS ON SOME BACTERIAL ISOLATES ( IN VITRO STUDY ),” World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science , 3(2), hal. 858–875.
Heo,  L. et  al. (2014)  “GalaxySite :  ligand-binding-site  prediction  by  using  molecular  docking,” Nucleic Acids research , 42(April), hal. 210–214. doi: 10.1093/nar/gku321.
Hsu, T. et al. (2013) “Caffeic acid phenethyl ester induces E2F-1-mediated growth inhibition and cell-cycle  arrest  in  human  cervical  cancer  cells,” FEBS  Journal ,  280,  hal.  2581–2593.  doi: 10.1111/febs.12242.
Khacha-ananda,  S. et  al. (2013)  “Antioxidant  and  Anti-cancer  Cell  Proliferation  Activity  of Propolis  Extracts  from  Two  Extraction  Methods,” Asian  Pac  J  Cancer  Prev ,  14(11),  hal. 6991–6995.
Kodama,  J. et  al. (2007)  “Association  of  CXCR4  and  CCR7  chemokine  receptor  expression  and lymph node metastasis in human cervical cancer,” annals of Oncology , 18, hal. 70–76. doi: 10.1093/annonc/mdl342.
Kusnul, Z. et al. (2017) “Immunomodulatory Effect of Propolis Extract on population of IL-10 and TGFb  Exression  in  CD4+CD25+  Regulatory  T  Cells  in  DMBA-induced  Breast  Cancer  in Female Sprague-Dawley Rats,” Turkish Journal of Immunology , 5(3), hal. 69–76. Mahajan,  A.,  Gill,  N.  .  dan  Arora,  R.  (2014)  “A  REVIEW  ON  MOLECULAR  DOCKING,” International Journal of Recent Advances in Pharmaceutical research , 4(April), hal. 64–70. Omene, C. O., Wu, J. dan Frenkel, K. (2012) “Caffeic Acid Phenethyl Ester ( CAPE ) derived from propolis , a honeybee product , inhibits growth of breast cancer stem cells,” hal. 1279–1288. doi: 10.1007/s10637-011-9667-8.
Ozkan,  U. et  al. (2014)  “Effects  of  intralipid  and  caffeic  acid  phenethyl  ester  on  neurotoxicity  , oxidative stress , and acetylcholinesterase activity in acute chlorpyriphos intoxication,” Int J Cin Exp Med , 7(4), hal. 837–846.
Padmavathi,  R. et  al. (2006)  “Therapeutic  effect  of  paclitaxel  and  propolis  on  lipid  peroxidation and  antioxidant  system  in  7  ,  12  dimethyl  benz  (  a  )  anthracene-induced  breast  cancer  in female Sprague Dawley rats,” Life Science , 78, hal. 2820–2825. doi: 10.1016/j.lfs.2005.11.005. Peghini,  B.  C. et  al. (2012)  “Local  cytokine  profiles  of  patients  with  cervical  intraepithelial  and invasive neoplasia,” Human Immunology , 73(9), hal. 920–926. doi: 10.1016/j.humimm.2012.06.003.
Rosa, M. De et al. (2004) “Interleukin-2 is essential for CD4 + CD25 + regulatory T cell function,” Eur.J.Immunol , 34, hal. 2480–2488. doi: 10.1002/eji.200425274.
Roy,  S. et  al. (2013)  “Neem  leaf  glycoprotein  overcomes  indoleamine  2,3  dioxygenase  mediated tolerance  in  dendritic  cells  by  attenuating  hyperactive  regulatory  T  cells  in  cervical  cancer stage IIIB patients,” Human Immunology , 74(8), hal. 1015–1023. doi: 10.1016/j.humimm.2013.04.022. Salatino, A. et al. (2005) “Origin and Chemical Variation of Brazilian Propolis,” eCAM , 2(1), hal. 33–38. doi: 10.1093/ecam/neh060.
Sawaya, A. C. H. F., Barbosa da Silva Cunha, I. dan Marcucci, M. C. (2011) “Analytical methods applied to diverse types of Brazilian propolis.,” Chemistry Central journal , 5(1), hal. 27. doi: 10.1186/1752-153X-5-27.
Sforcin, J. M., Kaneno, R. dan Funari, S. R. C. (2011) “ABSENCE OF SEASONAL EFFECT ON THE  IMMUNOMODULATORY  ACTION  OF  BRAZILIAN  PROPOLIS  ON  NATURAL KILLER ACTIVITY .,” (8), hal. 1–6. doi: 10.1590/S0104-79302002000100003.
Thomas, D. A. dan Massagué, J. (2005) “TGF- β directly targets cytotoxic T cell functions during tumor  evasion  of  immune  surveillance,”  8(November),  hal.  369–380.  doi: 10.1016/j.ccr.2005.10.012.
Tran, D. Q. et al. (2010) “Analysis of adhesion molecules, target cells and role of interleukin-2 in human FOXP3+ regulatory T cell suppressor function.,” J Immunol , 182(5), hal. 2929–2938. doi: 10.4049/jimmunol.0803827.Analysis.
Tseng,  T. et  al. (2014)  “Activation  of  neutral-sphingomyelinase  ,  MAPKs  ,  and  p75  NTR- mediating  caffeic  acid  phenethyl  ester  –  induced  apoptosis  in  C6  glioma  cells,” Journal  of Biomedical Science , 21(1), hal. 1–11. doi: 10.1186/1423-0127-21-61.
Ulasli, S. S. et al. (2013) “Anticancer Effects of Thymoquinone , Caffeic Acid Phenethyl Ester and Resveratrol  on  A549  Non-small  Cell  Lung  Cancer  Cells  Exposed  to  Benzo  (  a  )  pyrene,”
Asian Pac J Cancer Prev , 14, hal. 6159–6164.
Wang,  J. et  al. (2004)  “Expression  Pattern  of  Chemokine  Receptor  6  (  CCR6  )  and  CCR7  in Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck Identifies a Novel Metastatic Phenotype,” Cancer Res , 6, hal. 1861–1866.
Yasuda, T. et al. (2006) “Chemokines CCL19 and CCL21 promote activation-induced cell death of antigen-responding T cells,” Blood , 109, hal. 449–456. doi: 10.1182/blood-2006-04-018101. Zhou,  S. et  al. (2013)  “CCR7  Expression  and  Intratumoral  FOXP3  +  Regulatory  T  Cells  are Correlated  with  Overall  Survival  and  Lymph  Node  Metastasis  in  Gastric  Cancer,” PLOS one , 8(9), hal. 1–7. doi: 10.1371/journal.pone.0074430.