## UJI AKTIVITAS IMUNOMODULATOR FERMENTASI TEH ROSELA JAMUR KOMBUCHA TERHADAP PROLIFERASI SEL LIMFOSIT MENCIT GALUR BALB/C SECARA IN VITRO
Maria Ulfah 1) , Dinar Putri Octaviani 1) , Ediati Sasmito 2)
1) Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
2) Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta

## INTISARI
Baru-baru  ini,  beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa  fermentasi  teh  rosela  jamur kombucha  (FTRJK)  memiliki  efek  imunomodulator.  Hal  ini  dimungkinkan  karena  adanya kandungan  flavonoid  dan  asam    organik.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui aktivitas  imunomodulator  FTRJK  terhadap  proliferasi  sel  limfosit  mencit  galur  Balb/C  secara in vitro dan  mengetahui  dosis  dan  lama  waktu  fermentasi  yang  menghasilkan  aktivitas imunomodulator tertinggi.
Jamur kombucha difermentasi selama 5, 10 dan 15 hari dengan menggunakan seduhan teh rosela, gula dan air. Konsentrasi FTRJK yang digunakan adalah 6,25; 12,5; 25; 50 dan 100 µg/mL diujikan terhadap proliferasi sel limfosit menggunakan MTT Assay . Hasil pembacaan OD ( Optical Density ) dianalisis secara statistik dengan uji nonparametrik Friedman yang dilanjutkan dengan uji Mann-whitney .
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  FTRJK  mempunyai  aktivitas  imunostimulator terhadap proliferasi sel  limfosit  pada konsentrasi  6,25; 12,5 dan 25 µg/mL fermentasi  hari ke-10 dan  aktivitas  imunostimulator  tertinggi    ditunjukkan  oleh  konsentrasi  25  µg/mL  dan  fermentasi hari ke-10.
Kata kunci: imunomodulator, optical density , teh rosela jamur kombucha.

## ABSTRACT
Recently,  some  research  showed  that  there  is  an  immunomodulator  effect  in  the fermentation of  Rosella kombucha  mushroom  tea and  it can  be caused  by  flavonoid and organic acid.  The  purpose  of  this  research  was  to  show  the  activity  of  immunomodulator  Rosella kombucha  mushroom tea to against the proliferation of lymphocyte cells of Balb/C mice in vitro and to show the dose and length of fermentation that induces highest immunomodulator activity.
Kombucha  mushroom  was  fermented  for  5  days,  10  days  and  also  15  days  with  boiled Rosella tea, water and sugar. The yield of fermentation in the concentration of 6,25; 12,5; 25; 50 and 100 µg/mL were tested on lymphocyte cells proliferation by the MTT Assay. The OD (Optical Density)  data  obtained  was  statistically  analyzed  by  nonparametric  Friedman  test  and continuoused by Mann-Whitney test.
The result of this research showed that the fermentation of Rosella kombucha mushroom tea  has  an  immunostimulatory  activity  on  lymphocyte  cells  proliferation  with  the  concentration 6,25; 12,5 and 25 µg/mL in the 10 days and the highest immunostimulatory activity  showed by the concentration 25 µg/mL and 10 days of fermentation time. Key words: immunomodulatory, optical density , Rosella kombucha mushroom tea.

## PENDAHULUAN
Bakteri  patogen  yang  masuk  ke dalam  tubuh  dapat  menembus  pertahanan non  spesifik.  Tubuh  mengatasinya  dengan menggunakan  mekanisme  sistem  imun spesifik yang lebih mampu dalam mengenali mikroorganisme patogen. Sistem pertahanan tubuh  kedua  yang  berperan  adalah  sel
limfosit (Andrian & Sallusto, 2007; Hasdianah  dkk.,  2014).  Pencegahan  perlu dilakukan  untuk  mengantisipasi  adanya infeksi  dengan  menggunakan  bahan  alam sebagai  imunomodulator. Salah  satu  bahan alam  yang  diduga  sebagai  imunomodulator adalah minuman fermentasi teh rosela jamur kombucha (FTRJK).
Puspitowati  (2012)  menyatakan bahwa  fraksi  air  dari  ekstrak  etanol  kelopak bunga rosela mempunyai aktivitas imunostimulator  terhadap  proliferasi  sel limfosit  pada  konsentrasi  400  µg/mL,  yang kemungkinan  disebabkan  oleh  senyawa fenol dan  flavonoid.  Menurut Kustyawati  & Sulastri  (2008)  kultur  kombucha  dapat tumbuh  dalam  larutan  teh  rosela  dan melakukan aktivitas  fermentasi sampai pada hari 15.
Pemberian  teh  kombucha  dapat memberikan  efek  kenaikan  titer  antibodi IgM  dan  IgG  pada  mencit  setelah  di imunisasi dengan vaksin hepatitis A  (Ulfah, 2005;  Astrakusuma,  2005).  Bo  Qing  dkk., (2008)  menyatakan  bahwa  teh  hitam  jamur kombucha salah satunya dapat meningkatkan  aktivitas  IL-1  yang  dapat meningkatkan aktivitas limfosit T, proliferasi dan diferensiasi dan mempromosikan ekspresi gen dalam berbagai  molekul  kekebalan  tubuh.  Ulfah dan Arifin (2013) telah melakukan penelitian  tentang  aktivitas  imunomodulator fermentasi teh hijau jamur kombucha secara in  vitro menggunakan  metode  MTT assay . Hasil penelitian menyatakan bahwa fermentasi  teh  hijau  jamur  kombucha tersebut mempunyai aktifitas tertinggi sebagai imunostimulator terhadap proliferasi limfosit  mencit  yaitu  dengan  dosis  100 µg/mL.  Hari  terbaik  fermentasi  dalam meningkatkan proliferasi limfosit  yaitu pada hari ke- 5 sampai hari ke-10.
Sejauh  ini  belum  pernah  dilakukan penelitian mengenai uji aktivitas imunomodulator fermentasi teh rosela jamur kombucha  terhadap  proliferasi  sel  limfosit secara in  vitro ,  sehingga  perlu  dilakukan penelitian ini dengan harapan dapat menambah  bukti  secara  ilmiah  dan  dapat digunakan  sebagai  imunomodulator  untuk terapi  pendamping  pada  penyakit  infeksi yang  dapat  menurunkan  respon  imun  serta manfaat sebagai produk yang dapat meningkatkan sistem imun.

## METODE PENELITIAN
1. Bahan dan Alat
Bahan  uji  yang  digunakan adalah  bibit  jamur  kombucha  yang diperoleh dari pembibitan jamur kombucha  di  Lalung,  Karanganyar, Jawa Tengah. Bahan untuk fermentasi: gula  pasir  merek  “X”,    kelopak  bunga rosela  kering  merek  “X”  dan  aquades. Bahan  untuk  isolasi  sel  limfosit: organ limpa  dari  mencit  jantan  galur  Balb/C berumur  8  minggu  (LPPT,  UGM), etanol 70% (Merck), Medium Rosewell Park  Memorial  Institude (RPMI)  1640 (Gibco),  RPMI  1640  media  komplit berisi  FBS  ( Fetal  Bovine  Serum )  10% (v/v)  (Caisson)  dan  PBS  ( Phosfat Buffer Saline ) (Gibco). Bahan untuk uji proliferasi sel  limfosit:  vaksin hepatitis B  (Engerix), PHA (phytohemaglutinin, Gibco),  MTT  ( 3-(4,5-dimethylthiazol- 2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide , Sigma), stopper 10%  SDS  ( sodium dodecyl sulphate, Merck), HCl (Merck)
0.01 N, penicillin-streptomicin (Gibco) dan fungizon/amphoterisin B (Gibco). Alat-alat  yang digunakan dalam penelitian adalah Alat untuk pembuatan  serbuk:  blender  (Maspion), timbangan  elektrik  (Ohaus). Alat pembuatan  fermentasi teh rosela  jamur kombucha:  toples gelas, kompor listrik dan  termometer. Alat  untuk  isolasi  sel limfosit: alat-alat bedah steril (Smicss), tabung  mikropipet  (Gibco), eppendorf tube (Extragen),  sentrifugasi  (Sorvall), pipet pastur (Brand), petri dish steril 50 mm  (Costar),  spuit  injeksi  10  mL (Terumo),  tabung  sentrifugasi  15  mL (Nunc), vortex (Bio-Rad)  dan laminar air flow (Nuaire). Alat untuk menghitung jumlah sel: hemocytometer (Neubaeur), inverted microscope
(Olympus). Alat  untuk  uji  proliferasi limfosit:  inkubator  CO 2 5%  (Heraeus), mikroplate  96  (Costar), microplate reader (Bio-Rad),  mikropipet (Gibson) eppendorf  tube (Extragen), vortex (Brandstead), laminar air flow (Nuaire), yellow  tip (Brand), blue  tip (Brand),  timbangan  elektrik  (Mettler Toledo) dan ELISA reader (Bio-Rad) .
2. Jalannya penelitian Pembuatan  Fermentasi  Teh  Rosela Jamur Kombucha Sebanyak 8  gram  serbuk  kelopak bunga rosela kering dan 100 gram gula pasir dimasukkan ke dalam 1000 ml air mendidih dan diaduk hingga bercampur  sempurna.  Teh  dibiarkan mengembang  selama  15  menit  hingga suhu  turun  menjadi  45-50ºC.  Air seduhan  disaring  sehingga  diperoleh 1000  mL  dan  dimasukkan  ke  dalam toples  gelas  dengan  permukaan  yang luas  dan  suhu  ditunggu  sampai  suhu 27ºC.  Satu  lapis  jamur  kombucha dimasukan  dalam  toples  dan  ditutup dengan  kain  kasa  bersih  kemudian diikat  dengan  karet  gelang.  Air seduhan yang sudah bercampur dengan jamur  kombucha  disimpan  dalam  suhu ruang selama 5 hari, 10 hari dan 15 hari (sesuai dengan perlakuan). Setelah hari yang  ditentukan  filtrat  yang  diperoleh digunakan untuk penelitian.

## Uji Aktivitas Imunomodulator
a. Pembuatan Larutan Uji dan Kontrol Positif
Larutan  uji  dibuat  dari filtrat hasil FTRJK selama 5 hari,
10  hari  dan  15  hari.  dengan beberapa  seri  konsentrasi  yaitu 6,25; 12,5; 25; 50 dan 100 µg/mL. Phytohemaglutinin (PHA) sebagai kontrol  positif  dibuat  dari  stok induk  1  mg/mL  yang  dilarutkan dalam  larutan  buffer  phosphat, kemudian  dibuat  pengenceran sehingga konsentrasi 10 µg/mL. b. Isolasi Sel Limfosit Isolasi sel limfosit diperoleh dari organ limpa mencit galur  Balb/C  yang  dilakukan secara aseptis. Mencit dikorbankan dengan eter, dibaringkan  terlentang,  seluruh permukaan perut dan papan bedah dibasahi  dengan  menggunakan etanol  70%.  Kulit  mencit  bagian abdomen dibuat irisan kecil dengan  menggunakan  gunting, dirobek  ke  arah  dada  dan  paha dibantu  dengan menggunakan pinset.  Organ  limpa  diangkat dari selubung peritoneumnya dan
diletakkan dalam petri dish berdiameter 50 mm yang berisi 10 mL  medium  RPMI.  Media  RPMI dipompakan  ke  dalam  limpa sehingga  limfosit  ikut  keluar bersama  media.  Suspensi  sel dimasukkan dalam tabung sentrifugasi 10 mL dan disentrifus pada  1200  rpm  4 o C  selama  5
menit. Pellet yang didapat disuspensikan  dalam  5  mL  buffer tris  ammonium  klorida  untuk melisiskan  eritrosit.  Sel  dicampur hingga  homogen  dan  didiamkan pada suhu ruang  selama 15  menit atau  sampai  warnanya  berubah menjadi  agak  kekuningan.  Sel  di tambahkan  RPMI  ad  10  mL, disentrifugasi pada 1200 rpm 4 o C selama  5  menit,    supernatan dibuang.  Pelet yang  didapat dicuci  2  kali  dengan  RPMI.  Sel dihitung  dengan  hemositometer. Selanjutnya  sel  limfosit  siap  utuk dikultur dalam  incubator  CO 2 5%
pada suhu 37 o C dan diuji aktivitasnya (Hay dan Westwood,
2002).
c. Uji  Proliferasi  Sel  Limfosit dengan Metode MTT Assay
Sebanyak  100  µL  sel limfosit (kepadatan 1.5 x10 6 /mL) masing-masing  didistribusikan  ke dalam  sumuran  mikroplat  96- wells dan  ditambahkan  vaksin hepatitis B sebanyak 10 µL/sumuran dan diinkubasi selama  24  jam  dalam  incubator dengan  aliran  5%  CO 2 pada  suhu 37 o C.  Selanjutnya  ditambahkan 100 µL teh rosela jamur kombucha  pada  masing-masing kelompok konsentrasi (6,25; 12,5;
25;  50  dan  100  µg/mL)  untuk perlakuan  fermentasi  hari  ke-5, hari  ke-10  dan  hari  ke-15.
Masing-masing konsentrasi
direplikasi sebanyak 4 kali. Kontrol  positif  yang  digunakan yaitu PHA (10 µg/mL).
Kelompok  kontrol  dan  perlakuan diinkubasi lagi selama 48 jam dan ditambahkan  larutan  10  µL  MTT 5 mg/mL. Selanjutnya  diinkubasi lagi  4  jam  pada  suhu  37 o C.  Sel
yang  hidup  akan  bereaksi  dengan MTT  membentuk  warna  ungu.
Reaksi  dengan  MTT  dihentikan dengan menambah reagen stopper yaitu  larutan  SDS  10% dalam asam klorida 0,01N sebanyak  100  µL  pada  tiap sumuran  dan  didiamkan  sampai 24 jam. Selanjutnya diukur absorbansinya dengan ELISA reader pada λ 550 nm (Mosmann,
1983).
3. Analisis Data Nilai Optical  Density (OD)  hasil pembacaan  menggunakan  ELISA reader dianalisis dengan menggunakan  perhitungan  statistik nonparametrik Friedman yang dilanjutkan  dengan  uji Mann-
Whitney pada program SPSS 16 for windows . HASIL DAN PEMBAHASAN A. Pembuatan Fermentasi Teh Rosela Jamur Kombucha
(FTRJK)
Larutan  hasil  FTRJK  secara makroskopis  berwarna  merah  serta berbau  asam  dan  diperoleh  1  L  untuk setiap  perlakuan.  Gula  digunakan sebagai sumber karbon bagi kombucha. Penambahan  gula  sebanyak  100  gram dikarenakan  bahwa  pemberian  gula 10%  pada  teh  rosela  jamur  kombucha merupakan  kadar  gula  optimum  bagi pertumbuhannya  (Nainggolan,  2009).
Lama proses fermentasi yang digunakan dalam penelitian ini
dilakukan  selama  5,  10  dan  15  hari. Menurut  Kustyawati  &  Sulastri  (2008)
kultur  kombucha  dapat  tumbuh  dalam larutan  teh  rosela  dan  melakukan aktivitas  fermentasi  sampai  pada  hari 15.  Tujuan  fermentasi  dilakukan  pada hari ke-5, 10 dan 15 untuk membandingkan aktivitas imunomodulator  dari  3  filtrat  dengan waktu fermentasi berbeda dalam meningkatkan  aktivitas  proliferasi  sel limfosit mencit Balb/C.

## B. Uji Aktivitas Imunomodulator FTRJK
Pengujian  aktivitas  imunomodulator sampel  uji  terhadap  proliferasi  sel  limfosit dilakukan  dengan  menggunakan  metode MTT Assay .  Prinsip  uji  MTT  yaitu berdasarkan pada perubahan garam tetrazolium  [3-(4,5- dimetiltiazol -2-yl)-2,5- difeniltetrazolium  bromide ]  (MTT)  yang berwarna  kuning  menjadi  formazan  dalam mitokondria yang aktif pada sel hidup yang berwarna  ungu.  MTT  dipecah  melalui reaksi  reduksi  menjadi  garam  formazan oleh  enzim  suksinat  dehidrogenase  yang terdapat  di  dalam  mitokondria  sel  hidup. Garam formazan yang terbentuk di kuantifikasi  dengan  ELISA reader pada panjang gelombang 550  nm. Jumlah kristal formazan  yang  terbentuk  berbanding  lurus dengan  jumlah  sel  yang  hidup.  Semakin tinggi  absorbansi  yang  dihasilkan  maka semakin  tinggi  pula  jumlah  sel  hidup  yang terdapat di dalam kultur tersebut (Mosmann,  1983).  Nilai  OD  hasil  dari ELISA reader pada  panjang  gelombang 550  nm  terhadap  proliferasi  sel  limfosit mencit  galur  Balb/C  berdasarkan  lama waktu  fermentasi  dapat  dilihat  pada Gambar 1.
Gambar  1. Nilai  OD  Hasil  dari  ELISA reader pada  Panjang  Gelombang  550  nm  terhadap Proliferasi Sel Limfosit Mencit Galur Balb/C Berdasarkan Lama Waktu Fermentasi
Berdasarkan  data  pada  Gambar  1, kelompok  FTRJK  pada  konsentrasi  6,25; 12,5  dan  25  µg/mL  menunjukkan  nilai  OD yang  meningkat  pada  hari  fermentasi  ke-5 sampai  hari  ke-10,  kemudian  nilai  OD menurun  pada  hari  ke-15.  Kelompok  uji konsentrasi 50 dan 100 µg/mL menunjukkan penurunan nilai OD pada hari fermentasi ke- 10 sampai hari ke-15. Konsentrasi 25 µg/mL memiliki  aktivitas  proliferasi  yang  paling tinggi  diikuti  oleh  konsentrasi  12,5  µg/mL. Jumlah  rata-rata  sel  limfosit  terendah terdapat  pada  konsentrasi  100  µg/mL, sedangkan  lama  waktu  fermentasi  terbaik adalah hari ke-10.
Hasil OD  yang diperoleh dianalisis secara statistik menggunakan software SPSS 16.  Data  uji  melibatkan  dua  faktor  yaitu variabel  konsentrasi  dan  variabel  lama waktu fermentasi. Berdasarkan uji
normalitas  dan  homogenitas  kelompok perlakuan dan lama fermentasi menunjukkan data  tidak  terdistribusi  normal  dan  tidak homogen.  Selanjutnya  data  diuji  non parametrik.  Pertama  kali  uji  menggunakan Friedman untuk  mengetahui  perbedaan antara  seluruh  kelompok  perlakuan  atau lama  fermentasi  dan  dilanjutkan  dengan  uji Mann-whitney .  Hasil  perhitungan  uji Mann Whitney nilai OD FTRJK hari ke-5 disajikan dalam  grafik  mean  ±  SD  nilai  OD  sel limfosit  mencit  fermentasi  hari  ke-5  pada Gambar 2.
Gambar 2. Grafik Mean ± SD Nilai OD Sel Limfosit Mencit Fermentasi Hari Ke-5.
Hasil  analisa  menunjukkan  bahwa FTRJK  hari  ke-5  pada  seluruh  kelompok perlakuan  tidak  berbeda  bermakna  secara signifikan  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol  negatif  (limfosit  dengan  vaksin). Hal ini menunjukkan bahwa pada hari ke-5 konsentrasi  6,25  sampai  100  µg/mL  tidak memiliki  aktivitas  proliferasi  sel  limfosit. Fermentasi  hari  ke-5  tidak  memiliki aktivitas proliferasi sel limfosit dimungkinkan  pada  saat  awal  fermentasi, kandungan  asam  asetat  cenderung  sedikit. Bakteri penghasil asam asetat belum terlalu banyak berperan. Hasil perhitungan uji Mann
Whitney nilai  OD  FTRJK  hari  ke-10 disajikan dalam grafik mean ± SD nilai OD sel  limfosit  mencit  fermentasi  hari  ke-10 pada Gambar 3.
Hasil  analisa  menunjukkan  ada perbedaan bermakna pada kelompok
perlakuan FTRJK hari ke-10 pada konsentrasi  6,25;  12,5;  25  dan  100  µg/mL
terhadap  kelompok  kontrol  negatif  (sel limfosit  dengan  vaksin).  Suatu  senyawa dikatakan  sebagai  imunostimulator  jika suatu senyawa tersebut dapat meningkatkan respon  imun  berupa  peningkatan  aktivitas proliferasi  sel  limfosit  akibat  pemberian vaksin.  Hal  ini  dapat  ditunjukkan  pada konsentrasi  6,25;  12,5  dan  25  µg/mL. Perbedaan  bermakna  pada  konsentrasi  100 µg/mL terhadap kontrol negatif menunjukkan bahwa konsentrasi 100 µg/mL  memiliki  nilai  OD  yang  lebih rendah daripada kontrol negatif. Fermentasi hari ke-10 menunjukkan aktivitas imunostimulator  karena  kandungan  asam asetat cenderung meningkat, yang
dimungkinkan  bakteri  penghasil  asam asetat  memainkan  peranannya  selama fermentasi berlangsung. Menurut
Nainggolan  (2009)  proses  pertumbuhan optimal  teh  rosela  jamur  kombucha  yaitu pada hari ke-10.
Hasil perhitungan uji Mann Whitney nilai  OD  FTRJK  hari  ke-15 disajikan dalam grafik mean ± SD nilai OD
sel  limfosit  mencit  fermentasi  hari  ke-15 pada Gambar 4.
Gambar 3. Grafik Mean ± SD Nilai OD Sel Limfosit Mencit Fermentasi Hari Ke-10
Gambar 4. Grafik Mean ± SD Nilai OD Sel Limfosit Mencit Fermentasi Hari Ke-15
Hasil  analisa  menunjukkan  FTRJK hari  ke-15  pada  konsentrasi  6,25;  12,5;  25 dan  50  µg/mL  tidak  berbeda  bermakna secara signifikan terhadap kelompok kontrol  negatif.  Namun  ada  perbedaan bermakna  pada  konsentrasi  100  µg/mL terhadap kontrol negatif. Perbedaan tersebut dikarenakan  nilai  OD pada konsentrasi 100 µg/mL  lebih  rendah  dari  kontrol  negatif. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  FTRJK  pada hari ke-15 tidak memiliki aktivitas
proliferasi  sel  limfosit  pada  konsentrasi 6,25  sampai  100  µg/mL.  Fermentasi  hari ke-15 tidak menunjukkan aktivitas proliferasi  sel  limfosit  dimungkinkan  gula yang  terkandung  dalam  fermentasi  sudah banyak  diubah  menjadi  berbagai  asam  dan teroksidasi  sehingga  sel-sel  pada  jamur aktivitasnya  menjadi  menurun.  Semakin lama  proses  fermentasi  berlangsung  maka
pH pada larutan teh akan semakin menurun, total  asam  yang  dihasilkan  semakin  tinggi (Silaban, 2005).
Hasil analisa pada kelompok kontrol  positif    menunjukkan  perbedaan pada  kontrol  negatif.  Hal  ini  dapat dikatakan  bahwa  PHA  yang  digunakan sebagai  kontrol  positif  dalam  penelitian  ini merupakan  mitogen  yang  poten  dalam proliferasi  sel  limfosit  sesuai  dengan penelitian  yang  dilakukan  Schoercksnadel dkk., (2011). Hasil uji dari semua kelompok perlakuan  terlihat  bahwa  nilai  OD  antara kelompok kontrol positif dengan konsentrasi  25  µg/mL  FTRJK  hari  ke-10 menunjukkan  hasil  perbedaan  bermakna, artinya    pada  konsentrasi  tersebut  mampu memberikan  efek  imunostimulator  dengan potensi  lebih  besar  daripada  kontrol  positif yang  digunakan.  Namun  kelompok  kontrol
positif  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan bermakna terhadap FTRJK hari ke-10 pada konsentrasi  6,25  dan  12,5  µg/mL.  Hal  ini dapat dikatakan bahwa efek imunostimulator  yang  ditunjukkan  oleh FTRJK  pada  konsentrasi  tersebut  mampu memberikan  efek  imunostimulator  dengan kemampuan setara dengan kontrol positif. Hasil  uji  FTRJK  hari  ke-10  pada konsentrasi 25 µg/mL memberikan perbedaan  bermakna  apabila  dibandingkan dengan  konsentrasi  yang  lainnya  (6,25; 12,5;  50  dan  100  µg/mL).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi  25 µg/mL mampu memberikan efek imunostimulator dengan potensi  yang  lebih besar  daripada  seri  konsentrasi  yang lainnya.  Dalam  penelitian ini sudah didapatkan konsentrasi optimal dari FTRJK yang  memberikan  aktivitas  proliferasi  sel limfosit yaitu pada lama fermentasi hari ke- 10  konsentrasi  25  µg/mL.  Konsentrasi optimal pemberian imunostimulator
ditentukan  dengan  melihat  konsentrasi dimana  sampel  uji  memberikan  aktivitas tertinggi  yaitu  pada  kosentrasi  25  µg/mL, yang kemudian pada pemberian konsentrasi yang  lebih  tinggi  yaitu  konsentasi  50  dan 100  µg/mL  terjadi  penurunan  aktivitas imunostimulator  terhadap  proliferasi  sel limfosit.
Hasil pengujian secara in vitro pada penelitian ini  menunjukkan bahwa jenis teh yang  digunakan  sebagai  media  fermentasi dapat mempengaruhi hasil aktivitas proliferasi  sel  limfosit  pada  konsentrasi dosis  dan  lama  fermentasi.  Mekanisme terjadinya  proliferasi  sel  limfosit  secara umum,  yaitu  ketika terjadi  pengikatan antigen  pada  reseptor  permukaan  sel  T bersama  interlukin  1  (IL-1)  dari  APC ( Antigen Presenting Cell ) dapat mengaktivasi  protein  G  yang  kemudian mengaktivasi enzim fosfolipase C.
Fosfolipase  C  memecah  fosfatidil  inositol bifosfat (PIP 2 ) menjadi diasilgliserol (DAG) dan  trifosfat  inositol  (IP 3 )  pada  membrane plasma.  IP 3 berdifusi  dari  membran  ke sitosol  dan  berikatan  dengan  protein reseptor pada permukaan sitoplasmik calcium-sequestering compartment . Pengikatan  ini  menyebabkan peningkatan konsentrasi  ion  Ca 2+ sitosol. Diasilgliserol dan peningkatan konsentrasi Ca 2+
mengaktivasi  enzim  protein  kinase  C.
Protein kinase C yang teraktivasi memfosforilasi  atau  memindahkan  gugus fosfat  ke  residu  serin  atau  treonin  spesifik pada protein membran sehingga mengaktivasi  pertukaran  Na + ,  H + yang berakibat pada peningkatan pH. Peningkatan pH ini memberikan tanda pada sel  untuk  melakukan  aktivitas  proliferasi. Aktivasi protein kinase C akan menstimulasi  produksi  interleukin-2  (IL-2) yang  mengaktivasi  sel  B  atau  sel  T  untuk berproliferasi (Roitt & Delves, 1997).

## KESIMPULAN
1. Fermentasi  teh  rosela  jamur  kombucha mempunyai  aktivitas  imunostimulator terhadap  proliferasi  sel  limfosit  mencit galur  Balb/C  secara in  vitro pada konsentrasi  6,25;  12,5  dan  25  µg/mL fermentasi hari ke-10.
2. Fermentasi  teh  rosela  jamur  kombucha mempunyai  aktivitas  imunostimulator pada fermentasi hari ke-10.
3. Fermentasi  teh  rosela  jamur  kombucha mempunyai  aktivitas  imunostimulator tertinggi  pada  konsentrasi  25  µg/mL fermentasi hari ke-10.

## DAFTAR PUSTAKA
Andrian,  U.H.,  &  Sallusto,  F.,  2007,
Lymphocyte activation, Editorial overview, Current Opinion in Immunology , 19 , 247–248. Astrakusuma, A.R., 2005, Pengaruh Pemberian  Teh  Jamur  Kombucha Terhadap Titer Antibodi Imunoglobulin  G  (IgG)  pada  Mencit Setelah Divaksinasi Hepatitis A, Skripsi ,  Universitas  Wahid  Hasyim, Semarang. Bo  Qing,  Meng  Wei,  Wang  Zhiqiang,  Yu Min, & SUN Xu-hong, 2008, Kombucha  regulate  immune  function in  small  experimental  study  in  mice Kombucha  regulate  immune  function of the experimental study,
http://www.aqnovel.com/thread-66482- 1-1.html,  diakses  tanggal  26  April 2014.
Hasdianah,  H.R,  Dewi,  P.,  Peristiowati,  Y.,
& Imam, S., 2014, Imunologi Diagnosis dan Teknik Biologi Molekuler ,  Nuha  Medika,  Yogyakarta,
Hay,  F.C.,  &  Westwood,  O.M.R.,  2002, Practical immunology , Fourth Edition, Blackwell Publishing
Company,  United  Kingdom,  185,
309.
Kustyawati  M.E.,  &  Sulastri  R.,  2007. Pemanfaatan  Hasil  Tanaman  Hias Rosela  Sebagai  Bahan  Minuman . Bandar Lampung: Jurusan Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Pertanian  Universitas  Lampung. http://www.scribd.com/doc/191345 99/Rose-La.  diakses  tanggal  02 Maret
Mosmann,  T.,  1983,  Rapid  Colorimetric
Assay  for  Cellular  Growth  and
Survival; Aplication to Proliferation and Cytotoxicity Assays, Journal of Immunologycal Methods , 65 , 55-63. Nainggolan,  J.,  2009,  Kajian  Pertumbuhan
Bakteri Acetobacter  sp. Dalam Kombucha-Rosela Merah ( Hbiiscus sabdariffa )  Pada  Kadar  Gula  dan Lama  Fermentasi  yang  Berbeda,
Tesis , Program Studi Biologi
Pascasarja,  Universitas  Sumatra Utara, Medan. Puspitowati,  O.H.,  2012,  Uji  Aktivitas Imunostimulator  Fraksi  Air  dari Ekstrak Etanol Kelopak Bunga Rosella (Hibiscus  Sabdariffa  L.) Terhadap  Proliferasi  Sel  Limfosit Mencit  Galur  Swiss  Secara  In  Vitro Beserta Identifikasi Kandungan Kimianya, Skripsi , Universitas Wahid
Hasyim, Semarang. Roitt,  I.M.,  &  Delves,  P.  J.,  1997, Essential Immunology, 10 th edition ,  Blackwell Science Ltd, London, 168-169. Schoercksnadel,  S.,  Sucher,  R.,  Kurz,  K.,
Fucks,  D.,  &  Brandacher,  G.,  2011, Influence of Immunosuppresive Agents  on  Trypthophan  Degradation and  Neopterin  Production  in  Human
Peripheral  Blood Mononuclear Cells, Transplant  Immunology ,  25,  119-
123. Silaban,  M.,  2005,  Pengaruh  Jenis  Teh  dan Lama Fermentasi pada Proses Pembuatan  Teh  Kombucha, Skripsi , Universitas Sumatera Utara, Medan. Ulfah,  M.,  2005,  Pengaruh  Pemberian  Teh
Jamur  Kombucha  Terhadap  Titer
Antibodi  Imunoglobulin  M  (IgM) pada  Mencit  Setelah  Divaksinasi
Hepatitis  A, Skripsi ,  Universitas Wahid Hasyim, Semarang. Ulfah,  M,  &  Arifin,  I.,  2013,  Teh  Jamur Kombucha Sebagai Imunomodulator Terhadap Proliferasi  Sel  Limfosit  Mencit Galur  Balb/C  Secara  In  Vitro, Laporan  Penelitian  Hibah ,  DIKTI, Jakarta.