EISSN: 2407 - 7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr
Sitotoksisitas Dan Genotoksisitas Ekstrak N-Heksana dan Etanol Daun Api-Api (Avicennia marina (Forks.) Vierh) dengan Indikator Indeks Mitosis dan Aberasi Kromosom Akar Bawang (Allium cepa Linn.)
Sri Rejeki Rahayuningsih 1 *, Tri Mayanti 2 , Fidela Histiya Gunawan 1
1 Program Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Padjadjaran
2 Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Padjadjaran Jl. Ir. Soekarno KM 21 Jatinangor, Sumedang, Jawa Barat 45363 Indonesia *Corresponding author, e-mail: sri.rejeki@unpad.ac.id
ABSTRAK:  Avicennia  marina merupakan  tumbuhan  mangrove  memiliki  senyawa  metabolit sekunder yang dapat dimanfaatkan oleh masyarakan sebagai obat herbal. Pengujian sitotoksisitas dan genotoksisitas perlu dilakukan untuk mengetahui toksisitas A. marina . Penelitian ini bertujuan untuk menguji sitotoksisitas dan genotoksisitas ekstrak n- heksana dan etanol mangrove A. marina . Penelitian dilakukan menggunakan metode eksperimental Rancangan Acak Lengkap (RAL), faktor tunggal  dengan  empat  taraf  konsentrasi  yaitu:  125,  250,  500  dan  1000  ppm  dan  kontrol  negatif larutan  aquades  serta  kontrol  positif  larutan  EMS,  dengan  4  kali  pengulangan.  Parameter  yang diamati  adalah:  indeks  mitosis,  pertumbuhan  akar  bawang  dan  aberasi  kromosom.  Hasil pengamatan  dianalisis  dengan  ANAVA  Ft (α.05),  dan  dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  Ft  (α.05). Ekstrak n -heksana daun A. marina bersifat sitotoksik dan genotoksik terhadap akar bawang pada konsentrasi 500 dan 1000 ppm, dengan konsentrasi 1000 ppm memberikan efek sub-letal. Ekstrak etanol daun A. marina bersifat sitotoksik dan genotoksik terhadap akar bawang, pada konsentrasi 500  dan  1000  ppm  dan  memberikan  efek  sub-letal.  Aberasi  kromosom  yang  didapatkan  adalah break , bridge , double  bridge , c-mitosis, delayed anaphase , diagonal  anaphase , disoriented , giant cell , laggard , loss, mikronukleus, multipolar anaphase , polyploidy pada anaphase, ring , star , sticky , vagrant , lesion , dan double lesion.
Kata Kunci : A. marina, genotoksisitas, sitotoksisitas, abrasi kromosom
Cytotoxicity dan Genotoxicity of N-Hexane dan Ethanol Extract of Api-Api (Avicennia marina (Forks.) Vierh) Leaf Extract with Mitotic Index dan Chromosomal Aberration Index Indicators of Onion Root (Allium cepa Linn.)
ABSTRACT:  Avicennia  marina  is  a  mangrove  plant  that  has  secondary  metabolites  that  can  be used by the community as herbal medicine. Cytotoxicity dan genotoxicity tests need to be carried out  to  determine  the  toxicity  of  A.  marina.  This  study  aimed  to  examine  the  cytotoxicity  dan genotoxicity  of  n-hexane  dan  ethanol  extracts  of  mangrove A. marina.  The  study  was conducted using  an  experimental  Completely  Rdanomized  Design  (CRD)  method,  single  factor  with  four concentration  levels,  namely:  125,  250,  500  dan  1000  ppm  dan  negative  control  is  aquadest solution  dan  positive  control  is  EMS  solution,  with  4  times.  Parameters  observed  were:  mitotic index,  onion  root  growth  dan  chromosomal  aberrations.  The  results  of  the  observations  were analyzed by ANOVA Ft (α.05), dan continued with Duncan's Ft(α.05) test. The n-hexane extract of A.  marina  leaves  was  cytotoxic  dan  genotoxic  to  onion  roots  at  concentrations  of  500  dan  1000 ppm, with concentrations of 1000 ppm giving sublethal effects. The ethanolic extract of the leaves of A. marina was cytotoxic dan genotoxic in onion roots, at concentrations of 500  dan 1000 ppm dan gave a sublethal effect. Chromosomal aberrations obtained were break, bridge, double bridge, c-mitosis,  anaphase  delay,  diagonal  anaphase,  disorientation,  giant  cell,  laggard,  loss, micronucleus, multipolar anaphase, polyploidy at anaphase, ring, star, sticky, vagrant, lesion, dan double lesion.
Keywords: A. marina, genotoxicity, cytotoxicity, chromosomal abrasion
Journal of Marine Research Vol 11, No.3 Agustus 2022, pp. 337 - 346

## PENDAHULUAN
Mangrove  memiliki  banyak  senyawa  metabolit  sekunder  yang  dapat  berperan  sebagai antibakteri,  antigenotoksik,  antijamur,  antivirus,  dan  lain-lain  (Mathew et  al .,  2016). Avicennia marina termasuk  ke  dalam  mangrove  yang  sering  dijumpai  dan  sering  digunakan  sebagai tanaman  obat  bagi  masyarakat  pesisir.  Menurut  Behbahani et  al. (2012)  ekstrak  etanol,  metanol dan  gliserin A.marina juga  dapat  dijadikan  sebagai  antimikroba  terhadap Penicillium  digitatum karena berbagai macam kandungan metabolit sekundernya seperti alkaloid dan flavonoid. Zhao et al . (2009), melaporkan bahwa A.marina juga mengandung senyawa flavon, terpenoid, Betulin, dan β-  sitosterol. A.marina dapat  digunakan  sebagai  obat  penyakit  kulit,  rematik,  bisul,  dan  cacar (Huang et al. 2016). A. marina banyak dimanfaatkan sebagai tanaman obat karena memiliki kandungan metabolit sekunder  tetapi  belum  diketahui  tingkat  sitotoksik  dan  genotoksik A.marina terhadap  sel  dan kromosom.  Hal  ini  perlu  diketahui  karena  menurut  ( Silva et  al ., 2011)  tumbuhan  yang  dapat digunakan  sebagai  tanaman  obat  dapat  berpotensi  toksik,  karsinogenik  atau  teratogenik. Berdasarkan  alasan  tersebut  maka  perlu  dilakukan  uji  genotoksisitas  dan  sitotoksisitas A.marina terhadap  akar  bawang  dengan  indikator  indeks  mitosis  dan  aberasi  kromosom  dengan menggunakan metode Allium assay .

## MATERI DAN METODE
Pengambilan  sampel  daun  mangrove  dilakukan  di  Taman  Wisata  Alam  Mangrove  Angke Kapuk, Jakarta Utara. Ekstraksi sampel mangrove dan analisis fitokimia dilakukan di Laboratorium Kimia Organik FMIPA UNPAD dan uji sitotoksisitas serta genotoksisitas dilakukan di Laboratorium Biologi Sel dan Molekuler, Biologi FMIPA UNPAD.
Pengambilan  sampel  daun A.  marina yang  digunakan  adalah  daun  muda  yang  berada dibawah  plumulae  dan  diambil  sebanyak  kurang  lebih  3  kg.  Daun  dibersihkan  lalu  ditiriskan, kemudian dikeringkan menggunakan oven dengan suhu 50°C selama 2 hingga 3 hari.
Proses ekstraksi dilakukan dengan mencuci daun dengan air keran hingga bersih, kemudian dikeringkan  menggunakan  oven  pada  suhu  50ºC  selama  2-3  hari  hingga  kering.  Ekstraksi dilakukan  dengan  menggunakan  metode  maserasi  berturut-turut  dengan  pelarut n -heksana (nonpolar)  dan  etanol  (polar)  dengan  perbandingan  1:8  selama  24  hingga  48  jam.  Setelah perendaman  dengan  menggunakan  pelarut,  ekstrak  disaring  n  kertas  saring  Whatman  nomor  1 dan  dipekatkan  dengan  menggunakan rotary  flash  evaporator (Chan et  al .,  2017).  Hasil  ekstrak disimpan di dalam desikator (Ananthakrishnan et al. , 2013) Uji Fitokimia ekstrak n - heksana dan etanol dilakukan beberapa uji metabolit sekunder  yaitu alkaloid, fenolik, flavonoid, steroid, saponin, tannin dan triterpenoid (Harborne, 1996). Pembuatan berbagai  konsentrasi  ekstrak n- heksana  dan  etanol  menggunakan  larutan  air  aquades  dan  CMC sebagai pelarut. Konsentrasi yang digunakan adalah 125 ppm, 250 ppm, 500 ppm, dan 1000 ppm. Penumbuhan  Akar  Bawang  menggunakan  bawang  yang  homogen.  Bagian  pangkal  bawang disayat  untuk  merangsang  pertumbuhan  akar  dan  akar A.  cepa ditumbuhkan  terlebih  dahulu dengan  aquades  selama  24-48  jam  hingga  akar  berukuran  0.5-1  cm  untuk  mempercepat pertumbuhan  akar  (Soodan et  al ., 2012).  Bawang  yang  sudah  ditanam  pada  masing-masing perlakuan disimpan di laboratorium  Biologi sel molekular, Biologi Universitas Padjadjaran selama satu minggu.
Pembuatan  preparat  dengan  menggunakan  metode  squash  yaitu  jaringan  yang  telah dimaserasi  dengan  jalan  hidrolisis  dan  dipulas,  kemudian  ditekan  dengan  hati-hati  hingga terbentuk lapisan tipis dan sel-sel merata (Jones dan Geoffrey, 1991). Akar bawang pada masing- masing  perlakuan  yang  telah  tumbuh  diambil  sebanyak  3  buah  dan  dipotong  sepanjang  0.5  cm dari ujung akar. Pemotongan akar dilakukan pada jam 08.00-10.00 WIB karena pengamatan fase mitosis  lebih mudah  diamati  saat  pemotongan  akar  pada  pagi  hari dibandingkan  siang  atau  sore hari  (Abidin,  2014),  Kemudian  akar  dimasukkan  ke  dalam  larutan  Mc  Clintock  untuk  difiksasi selama 24 jam. Ujung akar yang telah difiksasi kemudian dihidrolisis dalam larutan HCl 1N selama
15  menit  kemudian  dibilas  dengan  akuades  sebanyak  3  kali.  Kemudian  akar  direndam  dalam pewarna aceto carmine selama 2.5 jam. Selanjutnya akar dipotong berukuran 1mm lalu di- squash dengan  menggunakan cover  glass dan  diatas object  glass hingga  hancur  dan  sel-sel  akar menyebar.
Preparat  kemudian  diamati  di  bawah  mikroskop  dan  dihitung  persentase  mitosis. Penghitungan  persentase  mitosis  dilakukan  dengan  menghitung  sel-sel  dalam  sampel  preparat 1.000  buah  sel  dengan  perbesaran  mikroskop  400  x.  penghitungan  indeks  mitosis  Menurut Kusumaningrum et al. (2012).
Aberasi kromosom dilakukan dengan mengamati 100 sel yang mengalami aberasi dengan mikroskop  cahaya  dengan  perbesaran  400x.  Dihitung  jumlah  sel  yang  mengalami  kerusakan kromosom pada fase tertentu saat mitosis dan frekuensi aberasi kromosom (%). Frekuensi aberasi kromosom dihitung setiap 100 sel yang diamati dengan menggunakan rumus menurut Imaniar dan Pharmawati (2014).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji fitokimia yang diperoleh pada ekstrak n - hexana adalah senyawa golongan Alkaloid, Steroid dan Triterpenoid sedangan pada extrak Etanol adalah senyawa saponin dan steroid, dapat dilihat pada Tabel 1. Berdasarkan hasil uji fitokimia dapat ditentukan senyawa metabolit sekunder yang dapat mempengaruhi sitotoksisitas dan genotoksisitas ekstrak. Hasil uji sitotoksisitas ekstrak n-hexana  dan  extrak  etanol  daun A.  marina terhadap A.  cepa dapat  diketahui dengan  indikator indeks mitosis dan penambahan panjang akar yang dapat dilihat pada Tabel 2 dan 3.
Penurunan  indeks  mitosis  yang  terjadi  pada  ekstrak n -heksana  dan  etanol  bersifat  tegak lurus atau dose dependent terhadap peningkatan konsentrasi ekstrak. Indeks mitosis pada
Tabel 1. Hasil analisis Fitokimia extrak n-hexana dan Etanol daun A. marina
Golongan senyawa Hasil uji n- heksana Etanol Alkaloid + - Fenolik - - Flavonoid - - Saponin - + Steroid + + Tannin - - Triterpenoid + -
Tabel 2. Indeks mitosis ekstrak n - heksana dan etanol daun A. marina
Keterangan : P=Profase, M=Metafase, A= Anafase, T= Telofase
Perlakuan Total Sel Indeks Mitosis Total Sel Membelah Rata-rata Penurunan P M A T IM±SE (%) (%) KN 4000 1408 359 318 245 2330 58,17±2,32 100 125 ppm 4000 858 336 264 114 1572 39,3±2,32 67 250 ppm 4000 874 352 163 95 1484 37,1±2,32 63 500 ppm 4000 808 165 132 75 1180 29,5±2,32 51 1000 ppm 4000 747 87 91 63 988 24,7±2,32 42 KP 4000 227 81 83 20 411 10,27±2,32 26
Journal of Marine Research Vol 11, No.3 Agustus 2022, pp. 337 - 346
konsentrasi 1000 ppm dari ekstrak n- heksana memiliki nilai yang lebih tinggi dibadingkan dengan ekstrak  menggunakan  pelarut  etanol.  Hal  ini  dapat  dikarenakan  perbedaan  kandungan  metabolit sekunder pada tiap ekstrak. Pada ekstrak etanol terdapat metabolit sekunder saponin yang dapat meningkatkan  aktivitas  sitotoksik  (Podolak et  al., 2010)  begitu  juga  dengan  metabolit  sekunder seperti terpenoid pada golongan diterpenoid (Shin et al., 2018). Aktivitas sitotoksik ini dapat terjadi karena  kemampuan  saponin  yang  dapat  menstimulasi  apoptosis.  Menurut  Huang et  al .  (2016), ekstrak  EtOAc  dar A.  marina dapat  menurunkan  indeks  mitosis  sel  kanker  karena  mengandung metabolit sekunder alkaloid, triterpenoid, flavonoid, dan tannin.
Menurut  Boumaza et  al. (2016)  penurunan  indeks  mitosis  dibawah  50%  memberikan  efek sub-letal pada organisme uji, dan penurunan indeks mitosis dibawah 22% menyebabkan efek letal. Pada  perlakuan  dengan  ekstrak n -heksana  didapatkan  pada  konsentrasi  125,  250  dan  500  ppm tidak memberikan  efek  sub-letal maupun  letal  karena penurunan  indeks mitosis  dari  kontrol  tidak berada  dibawah  50%,  yaitu  67%,  63%  dan  51%  Sedangkan  pada  konsentrasi  1000  ppm memberikan  efek  sub-letal  karena  memiliki  penurunan  indeks  mitosis  dibawah  50%  dari  kontrol yaitu 42%. Pada perlakuan dengan ekstrak etanol didapatkan pada konsentrasi 125 dan 250 ppm tidak memberikan  efek  sub-letal maupun  letal  karena penurunan  indeks mitosis  dari  kontrol  tidak berada  dibawah  50%  tetapi  66%  dan  54%.  Sedangkan  pada  konsentrasi  500  dan  1000  ppm memberikan  efek  sub-letal  karena  memiliki  penurunan  indeks  mitosis  dibawah  50%  dari  kontrol yaitu 41% dan 36%.
Setelah didapatkan indeks mitosis maka dilanjutkan uji sitotoksisitas terhadap penambahan panjang  akar  karena  menurut Aşkin  Çelik  dan  Aslantürk,  (2010)  menyatakan  penurunan  indeks mitosis  (sitotoksik)  berhubungan  secara  paralel  dengan  penurunan  pertumbuhan  panjang  akar, dan didapatkan hasil pada ekstrak n- heksana dan etanol yang dapat dilihat pada Tabel 5 dan 6.
Tabel 3. Indeks mitosis ekstrak etanol daun A. marina
Perlakuan Total Sel Indeks Mitosis Total Sel Membelah Rata-rata Penurunan P M A T IM±SE (%) (%) KN 4000 1408 359 318 245 2330 58,17±2,10 100 125 ppm 4000 909 274 223 136 1542 38,55±1,92 66 250 ppm 4000 737 237 177 109 1260 31,5±1,92 54 500 ppm 4000 594 159 143 69 965 24,1±1,92 41 1000 ppm 4000 507 180 125 48 860 21,5±1,92 36 KP 4000 227 81 83 20 411 10,27±1,92 26
Tabel 5. Penambahan panjang akar ekstrak n - heksana daun A. marina
Perlakuan Rata-rata panjang akar ± SE (cm) Pertumbuhan akar terhadap kontrol Penurunan/penambahan pertumbuhan KN 3,475±0,64 100 100 125 ppm 5,175±0,45 148 48 250 ppm 2,4±0,45 69 -31 500 ppm 2,25±0,45 64,7 -35,3 1000 ppm 2,25±0,45 64,7 -35,3 KP 0,237±0,45 6,82 -93,18

## Tabel 6. Penambahan panjang akar ekstrak etanol daun A. marina
Perlakuan Rata-rata panjang akar ± SE (cm) Pertumbuhan akar terhadap kontrol Penurunan/penambahan pertumbuhan Kontrol Negatif 3,475 ± 0,30 100 100 125 ppm 1,6 ± 0,30 46 -53,9 250 ppm 1,375 ± 0,30 39,5 -60,4 500 ppm 0,7 ± 0,30 20,1 -79,8 1000 ppm 1,025 ± 0,30 29,5 -70,5 Kontrol Positif 0,237 ± 0,30 6,82 -93,18
Tabel 7. Uji Duncan penambahan panjang akar ekstrak n- heksana dan etanol Perlakuan N n - heksana etanol KN 4 3,475a 3,475a 125 ppm 4 5,175b 1,6b 250 ppm 4 2,4a 1,375b 500 ppm 4 2,25a 0,7b 1000 ppm 4 2,25a 1,025b KP 4 0,237c 0,237c
Dari  hasil  data  tersebut  dianalisis  menggunakan  Analisis  Variansi.  Nilai  F  hitung  yang didapatkan lebih besar dibandingkan tabel pada kedua ekstrak yaitu 12,62 > 2,77 untuk ekstrak n - heksana  dan  11,35>  2,77  untuk  ekstrak  etanol.  Kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  berjarak  ganda Duncan untuk mengetahui konsentrasi mana yang memberikan pengaruh nyata terhadap control, hasil uji dapat dilihat pada tabel 7.
Jika  akar  mengalami  penurunan  pertumbuhan  akar  lebih  dari  45%  menunjukkan  adanya senyawa yang bersifat toksik dan mengalami efek subletal terhadap tumbuhan (Mustafa dan Suna, 2008).  Pada  perlakuan  dengan  ekstrak n -heksana  didapatkan  tidak  ada  perlakuan  yang mengalami penurunan pertumbuhan akar diatas 45%  dari kontrol, hal ini menunjukkan perlakuan dengan ekstrak n -heksana tidak berpengaruh terhadap panjang akar. Tetapi pada konsentrasi 125 ppm didapatkan hasil dari perlakuan lebih tinggi dari kontrol, hal ini menunjukkan ekstrak dengan konsentrasi 125 ppm dapat berpengaruh terhadap kontrol negatif.
Senyawa  kimia  yang  dapat  bersifat  sebagai  mutagen  ini  dapat  menginduksi  dengan beberapa  cara. Pertama,  mutagen  secara  langsung  mempengaruhi  DNA  dan  menimbulkan aberasi  kromosom.  Kedua,  mutagen  mengganggu  sintesis  DNA  dan  protein  sehingga menyebabkan terbentuk pergerakan kromosom abnormal yang menyebabkan aberasi kromosom. Ketiga,  kandungan  dalam  mutagen  dapat  mencegah  perbaikan  kromosom  yang  tidak  normal (Imaniar dan Pharmawati , 2014).
Setelah  uji  sitotoksisitas  maka  dilanjutkan  uji  genotoksisitas  ekstrak  terhadap A.  cepa dengan  melihat  aberasi  kromosom  yang  terjadi  pada  tiap  perlakuan  sebagai  berikut:  (1) Break dapat  disebabkan  oleh  molekul  DNA  yang  bertugas  untuk  kontinuitas  linier  sehingga  dapat menyebabkan  kromosom  patah,  selain  itu  dapat  juga  dikarenakan  terjadi  kesalahan  saat perbaikan DNA (Soodan et al , 2014). Terjadinya kromosom patah biasanya dikarenakan masuknya mutagen ke dalam sel saat fase S atau G2 (Firbas dan Amon, 2014). (2) Bridge dan double bridge disebabkan oleh adanya kromosom yang mengalami patah di bagian telomernya sehingga terjadi
Gambar  1. Fase  mitosis:  a.  profase  normal;  b.  metafase  normal;  c.  anafase  normal;  d.  telofase normal;  v.  interfase. Aberasi  kromosom  saat  mitosis:  e.  break;  f. bridge ;  f.1 double  bridge ;  g. C- mitosis ; h. delayed anaphase ; i. diagonal anaphase ; j. disoriented ; k. giant cell ;  l. laggard ; m. loss ; n. mikronukleus ;  o. multipolar  anaphase ;  p. polyploidy pada  anafase;  q. ring ;  r. star ;  s. sticky ;  t. vagrant; u. lesion ; u.1. double lesion
a b c d t p e f g h i j f.1 k l m n o q r s
u
u.1 v
Journal of Marine Research Vol 11, No.3 Agustus 2022, pp. 337 - 346
penggabungan  yang  membentuk  kromosom  dengan2  sentromer.  Sehingga  saat  anafase  kedua sentromer tertarik kearah yang berbeda membentuk jembatan (Daphedar dan Tarikere, 2018). (3) C-mitosis adalah  aberasi  kromosom  dimana  mutagen  mengganggu  ikatan  disulfida  pada  saat polimerisasi mikrotubul yang membuat kromosom menjadi tersebar (Soodan et al., 2014; Renjana et al., 2013). (4) Delayed anaphase terjadi saat 2 grup kromosom pada saat anafase berdekatan pada  bidang  ekuator.  (5) Disoriented merupakan  aberasi  yang  disebabkan  oleh  pemutusan benang  spindel  pada  saat  metafase,  terjadinya  pemutusan  dapat  dikarenakan  perubahan  pada gen yang mengontrol mekanisme benang-benang spindel (Ananthakrishnan et al. , 2013). (6) Giant cell merupakan  sel  dengan  ukuran  lebih  besar  dan  dapat  berukuran  hingga  3  kali  lipat dibandingkan  sel  normal,  salah  satu  tanda  terjadinya  abnormalitas  klastogenik  (Vazhangat  dan Thoppil, 2016). (7) Laggard disebabkan oleh inaktivasi benang spindel yang terjadi saat anafase sehingga  kromosom  tidak  menempel  pada  benang  spndel  dan  tidak  bergerak  ke  arah  kutub manapun  (Renjana et  al .,  2013;  Vazhangat  dan  Thoppil,  2016).  (8) Loss disebabkan  oleh kesalahan  pada  benang  spindel  atau  karena  adanya  perubahan  viskositas  sitoplasma  sel  yang nantinya akan menginduksi terbentuknya mikronukleus (Daphedar dan Tarikere, 2018).
Tabel 8. Aberasi kromosom ekstrak n- heksana dan etanol Jenis Aberasi Jumlah Aberasi n-heksana etanol 125 250 500 1000 125 250 5000 1000 Break 1 0 1 4 1 2 0 1 1 1 Bridge 0 1 0 3 2 1 3 2 1 8 C-Mitosis 2 2 3 6 7 5 1 2 3 13 Delayed Anaphased 1 0 0 2 0 0 0 0 0 0 Double Bridge 3 1 1 0 3 0 0 0 0 3 Disoriented 0 24 28 21 47 0 0 1 2 42 Double Lesion 0 0 0 0 0 30 34 45 49 5 Giant cell 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2 Laggard 0 0 0 1 1 0 0 0 3 3 Lesion 13 33 47 53 58 49 57 58 66 49 Loss 0 1 1 5 2 1 1 1 1 6 Mikronukleus 0 0 0 0 1 0 0 1 0 1 Multipolar 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 Polyploid 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 Ring 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 Star 0 1 0 2 2 2 4 1 2 6 Sticky 3 4 2 4 12 3 3 5 8 13 Vagrant 3 2 3 9 7 3 1 4 4 19 Total 26 71 86 112 145 98 105 122 145 171 Frekuensi 6,5 17,75 21,5 28 36,3 24,5 26,25 30,5 36,5 42,75
(9) Mikronukleus merupakan  aberasi  yang  disebabkan  oleh  pembagian  kromosom  yang  tidak seimbang saat anafase, kegagalan ini akan meninggalkan kromosom yang akan berkembang memiliki struktur menyerupai nukleus yang berukuran lebih kecil (Imaniar dan Pharmawati, 2014 ).
(10) Multipolar aberasi  ini  dapat  terjadi  dikarenakan  jumlah  sentromer  yang  berlebih,  multipolar dan  ketidakteraturan  penggabungan  spindel  (Ananthakrishnan et  al. ,  2013).  (11) Poliploid merupakan aberasi yang disebabkan oleh terganggunya mekanisme benang spindel (Renjana et al .,  2013).  (12) Ring merupakan  aberasi  dimana  tejadi  penggabungan  kromosom  yang  memiliki bagian  ujung  telomernya  hilang  atau  patah  sehingga  membentuk  kromosom  berbentuk  cincin (Firbas dan Amon, 2014). (13) Star merupakan abnormalitas pada spindel dimana mutagen akan mengganggu  fungsi  mikrotubul  dengan  menganggu  bagian  tubulin  pada  spindel  (Prasath  dan Surya, 2013). (14) Sticky terjadi karena bertambahnya jumlah kontraksi dan kondensasi kromosom atau  dapat  juga  karena  depolimerisasi  DNA  dan  pemutusan  sebagian  nukleoprotein  (Vazhangat dan John,  2016).  (15) Vagrant merupakan  aberasi  kromosom  yang  disebabkan  oleh  distribusi kromosom saat berpasangan tidak adil, hal ini dapat terjadi karena adanya nondisjungsi kromatid saat anafase (Yuet et al., 2012). (16) Lesion terjadi saat fase interfase (G1 dan G0) sebelum DNA dan  materi  kromosom  berduplikasi  saat  periode  sintesis  DNA,  hal  ini  akan  menyebabkan kerusakan  kromosom  atau  terjadinya  apoptosis  sel  pada  tahap  mitosis  selanjutnya  (Firbas  dan Amon, 2014).Secara lengkap hasil aberasi kromosom dapat dilihat pada Gambar 1.
Berdasarkan  hasil  frekuensi  aberasi  yang  terjadi  pada  tiap  perlakuan,.  aberasi  kromosom yang paling banyak terjadi adalah lesion dan double lesion. Lesion dapat menginduksi terjadinya apoptosis  maka  aberasi  ini  dapat  diinduksi  dari  metabolit  sekunder  yang  dapat  menginduksi  sel untuk apoptosis seperti alkaloid dan triterpenoid yang terkandung pada kedua ekstrak (Huang et al ., 2016). Freukuensi aberasi dapat dilihat pada tabel 8.

## KESIMPULAN
A.  marina bersifat  sitotoksik  dan  genotoksik  terhadap  akar  bawang  pada  konsentrasi  500 dan 1000 ppm, dengan konsentrasi 1000 ppm memberikan efek sub-letal. Ekstrak etanol daun A. marina bersifat sitotoksik  dan genotoksik terhadap akar bawang, pada konsentrasi 500  dan 1000 ppm  dan  memberikan  efek  sub-letal.  Aberasi  kromosom  yang  didapatkan  adalah break , bridge , double  bridge ,  c-mitosis, delayed  anaphase , diagonal  anaphase , disoriented , giant  cell , laggard , loss, mikronukleus, multipolar  anaphase , polyploidy pada  anaphase, ring , star , sticky , vagrant , lesion ,  dan double  lesion. Berdasarkan  hasil  frekuensi  aberasi  yang  terjadi  pada  tiap  perlakuan, aberasi kromosom yang paling banyak terjadi adalah lesion dan double lesion

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penelitian  ini  dapat  diselesaikan  dengan  baik  dengan  dana  hibah  RISTEK  DIKTI  dan  atas bantuan  dari  berbagai  pihak  dalam  hal  perizinan  maupun  tehnis  pengerjaan  di  lapangan  dan laboratorium

## DAFTAR PUSTAKA
Abidin, A.Z., Budiono, J.D. & Isnawati. 2014. Studi Indeks Mitosis Bawang untuk pembuatan Media Pembelajaran Preparat Mitosis. Jurnal Bioedu. 3(3):571-579.
Ananthakrishnan,  M.,  Kumarasamy,  K.  &  Antony,  A.S.  2013.  Genotoxic  effects  of  furadan  and enodosulphan  on  ( Allium  cepa )  root  tips. Asian  Journal  of  Pharmaceutical  dan  Clinical Research , 6(1):126-31.
Behbahani, A.B., Yazdi, F.T., Shahidib, F. & Mohebbi, M. 2012. Antimicrobial activity of Avicennia marina extracts ethanol, methanol & glycerin against Penicillium digitatum (citrus green mold). Scientific Journal of Microbiology, 1(7):147-151.
Boumaza,  A.,  Lalaoui,  K.,  Khallef,  M.,  Sbayou,  H.,  Talbi,  H.  &  Hilali,  A.  2016.  Assessment  of Cytotoxic  and  Genotoxic  Effects  of  Clodinafop-propargyl  Commercial  Formulation  on Allium cepa L. Journal of Materials dan Environmental Science, 7(4):1245-1251.
Aşkin Çelik, T. & Aslantürk, Ö.S., 2010. Evaluation of cytotoxicity and genotoxicity of Inula viscosa leaf extracts with Allium test. Journal of biomedicine dan biotechnology , ID 189252 : 8 pages. DOI: 10.1155/2010/189252 Daphedar,  A.  & Tarikere,  T.C.,  2018.  Characterization  and  cytotoxic  effect  of  biogenic  silver nanoparticles  on  mitotic  chromosomes  of Drimia  polyantha (Blatt.  &  McCann)  Stearn . Toxicology Reports, 5(2018):910 –918. DOI: 10.1016/j.toxrep.2018.08.018
Firbas,  P.  &  Amon,  T.  2014.  Chromosome  damage  studies  in  the  onion  plant  Allium  cepa  L.
Caryologia:  International  Journal  of  Cytology,  Cytosystematics  dan  Cytogenetics ,  67(1):  25 – 35. DOI: 10.1080/00087114.2014.891696
Huang, C., Lu, C.K., Tu, M.C., Chang, J.H., Chen, Y.J., Tu, Y.H. & Huang, H.C., 2016. Polyphenol- rich  Avicennia  marina  leaf  extracts  induce  apoptosis  in  human  breast  and  liver  cancer  cells and  in  a  nude  mouse  xenograft  model. Oncotarget ,  7(24):35874.  DOI:  10.18632/onco target.8624
Imaniar,  E.F.  &  Pharmawati,  M. 2014.  Kerusakan  Kromosom  Bawang  Merah  ( Allium  cepa L.) Akibat Perendaman Dengan Etidium Bromida. Jurnal Simbiosis, 2(2): 173-183.
Jones, Rickards, R.N. & Keith, G. 1991. Practical Genetics.Open University Press. England. Kusumaningrum,  H.P.,  Lunggani,  A.T.  &  Nurhakim,  M.A.  2012.  Chromosomes  and  mitotic  cell division phase in onion roots after 24 hours acetoorcein soaking time. Berkala Ilmiah Biologi , 14(2):46-48. DOI: 10.14710/bioma.14.2.46-48
Mathew,  A.T.,  Syed,  M.A.,  Anuradha,  V.  &  Yogananth,  N . 2016 . Antigenotoxic  Evaluation  of Rhizhophora  Mucronata  Stilt  Root  Extract  Against  Cyclophosphamide  Induced  Toxicity. International Journal of New Technologies in Science dan Engineering, 3(12): 69-77. Mustafa, Y. & Suna A.E. 2008. Genotoxicity testing of quizalofop-P-ethyl herbicide using the Allium cepa anaphasetelophase  chromosome  aberration  assay. Caryologia:  International  Journal  of Cytology,  Cytosystematics  dan  Cytogenetics 61(1):45-52.  DOI:  10.1080/00087114.2008.105 89608 Yuet P.K., Darah, I., Yusuf, U.K., Yeng, C. & Sasidharan, S. 2012. Genotoxicity of Euphorbia hirta: an Allium cepa assay. Molecules, 17(7):7782-7791. DOI: 10.3390/molecules17077782 Podolak,  I.,  Galanty,  A.  &  Sobolewska,  D. 2010.  Saponins  as  cytotoxic  agents:  a  review. Phytochem Review, 9:425 –474. DOI: 10.1007/s11101-010-9183-z
Prasath, D. & Muthu, S. 2013. Detection of genotoxicity and chromosomal aberrations induced by Furadan  and  Monosodium  glutamate  in Allium  cepa.  South  Asian  Journal  of  Biological Research Science 3(1):11 – 24.
Renjana, P.K., Anjana, S. & Thoppil, J.E. 2013. Evaluation of Genotoxic Effects of Baking Powder and Monosodium Glutamate Using Allium cepa Assay. International Journal of Pharmacy dan Pharmaceutical Sciences, 5(2):311-316.
Shin,  S.A.,  Moon,  S.Y.,  Kim,  W.Y.,  Paek,  S.M.,  Park,  H.H.  &  Lee,  C.S.  2018.  Structure-Based Classification and Anti-Cancer Effects of Plant Metabolites. International Journal of Molecular Sciences, 19(2651):1-33. DOI: 10.3390/ijms19092651
Silva, D.S., Garcia, A.C., Mata, S.S., Oliveira, B.D., Estevam, C.S., Scher, R.  & Pantaleao, S.M., 2011.  Genotoxicity  and  cytotoxicity  of Erythrina  velutina Willd.,  Fabaceae,  on  the  root meristem cells  of Allium  cepa.  Brazillian  Journal  of  Pharmacognosy, 21(1):92-97.  DOI: 10.1590/S0102-695X2011005000024 Soodan, R.K., Katnoria, J.K. & Nagpal, A. 2012. Allium cepa Root Chromosomal Aberration Assay: An Efficient Test System for Evaluating Genotoxicity of Agricultural Soil. International Journal of Science dan Research, 3(8):246-250.
Vazhangat,  P.  &  Thoppil,  J.E.,  2016. Apoptotic  induction  via  membrane/DNA  damage  and metabolic inactivation by synthetic food colorants in Allium cepa root meristem. Turkish journal of Biology, 40:922-933. DOI: 10.3906/biy-1511-26 Zhao,  H.,  Parry,  R.L.,  Ellis,  D.L.,  Griffith,  G.W. & Goodacre,  R.  2006.  The  rapid  differentiation  of Streptomyces isolate using Fourier transform infrared spectroscopy. Vibrational Spectroscopy, 40:213-218. DOI: 10.1016/j.vibspec.2005.09.006