Antibacterial Activity Test of African Leaf Extract Against Staphylococcus aureus  and Pseudomonas aeruginosa Bacteria Growth .

## Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Afrika Terhadap Pertumbuhan Bakteri
Staphylococcus aureus Dan Pseudomonas aeruginosa
Trifosa Permata Dewani Sarijowan 1)*, Widdhi Bodhi 2)* , Julianri Sari Lebang 3)*
1) Program Studi Farmasi, FMIPA UNSRAT, Manado 95115

## trifosapermata@gmail.com

## ABSTRACT
African  leaves  (Vernonia  amygdalina)  are  known  to  be  one  part  of  a  plant  that  has  antibacterial activity  that  has  the potential  to be  developed  as a  traditional  medicine.  This  study  aims to  determine  the antibacterial activity, the effect of increasing extracts and the most effective concentration on the inhibitory power of bacterial growth. Extraction is carried out by maceration using 96% ethanol solvent. The results of measuring the diameter of the inhibitory zone concentration of 5% (7.0 mm), 10% (9.2 mm), 20% (11.5 mm), 40% (13.8 mm), 80% (15.7 mm) in S. aureus bacteria, concentration of 5% (8.1 mm), 10% (9.1 mm), 20% (11.6 mm), 40% (13.1 mm), 80% (15.1 mm) in P. aeruginosa bacteria has provided activity inhibiting the growth of test bacteria. Antibacterial effect is best seen at a concentration of 80%. The results were analyzed using One Way ANOVA and continued with the Duncan test. Research shows that the higher the concentration of the extract, the greater the diameter of the bacterial growth inhibition zone.
Keywords : Disk diffusion method, Vernonia amygdalina, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus.

## ABSTRAK
Daun  afrika  ( Vernonia  amygdalina) diketahui  merupakan  salah  satu  bagian  dari  tanaman  yang memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  berpotensi  untuk  dikembangkan  sebagai  obat  tradisional.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri, pengaruh peningkatan ekstrak serta konsentrasi yang paling efektif terhadap daya hambat pertumbuhan bakteri. Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Hasil pengukuran diameter zona hambat konsentrasi 5% (7,0 mm), 10% (9,2 mm), 20% (11,5 mm), 40% (13,8 mm), 80% (15,7 mm) pada bakteri S. aureus , konsetrasi 5% (8,1 mm), 10% (9,1 mm), 20%  (11,6  mm),  40%  (13,1  mm),  80%  (15,1  mm)  pada  bakteri P.  aeruginosa telah  memberikan  aktivitas menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji.  Efek  antibakteri  paling  baik  terlihat  pada  konsentrasi  80%.  Hasil dianalisa  menggunakan One  Way ANOVA  dan  dilanjutkan  dengan  uji  Duncan.  Penelitian  menunjukan semakin tinggi konsentrasi ekstrak, semakin besar diameter zona hambat pertumbuhan bakteri.
Kata kunci : Difusi cakram, Vernonia amygdalina, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus.

## PENDAHULUAN
Perkembangan pengobatan
telah mengarah  kembali  ke  alam  karena  obat tradisional telah terbukti lebih aman dan ada beberapa obat tradisional yang tidak menimbulkan  efek  samping  seperti  pada obat-obat  kimia.  Selain  hal  itu,  terjadi peningkatan  keinginan  masyarakat  untuk menggunakan bahan alam, ditanggapi dengan banyak produk-produk topikal berbahan aktif tanaman untuk perawatan kesehatan, kosmetik,  luka  dan  pencegahan  penyakit (Yovita, et al. , 2010).
Penyakit infeksi merupakan jenis penyakit  yang  paling  banyak  diderita  oleh penduduk  negara  berkembang,  termasuk Indonesia  (Radji,  2011).  Penyakit  ini merupakan  penyakit  yang  infektivtas  atau agennya memiliki kemampuan untuk masuk, bertahan,  dan  berkembang  biak  di  dalam tubuh  (Timmreck,  2005). Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa adalah jenis bakteri patogen yang dapat menimbulkan infeksi dan kelainan pada kulit
Beberapa tanaman di Indonesia memiliki khasiat  sebagai  obat  tradisional  yang  dapat digunakan  untuk  mengobati  penyakit,  yang salah  satunya  yaitu  daun  afrika  ( Vernonia amygdalina). Daun Afrika telah dikenal oleh masyarakat  Nigeria  Selatan  sebagai  obat tradisional (Okeke dkk., 2015). Dan
digunakan untuk mengobati berbagai macam penyakit seperti: demam, antibakteri, inflamasi,  malaria,  diare,  disentri,  hepatitis, batuk, antimikroba, antioksidan, mengurangi kolesterol,  antihipertensi,  untuk  pengobatan kanker,  dan  pengobatan  diabetes  (Swandiny dkk., 2017).
Bioaktivitas dari V. amygdalina : memberikan  efek  sebagai  antifungi  pada ekstrak  air  daun  Afrika,  antiparasit  pada ekstrak metanol daun Afrika dan menghambat  aktivitas  dari Trichomonas vaginalis ,  ekstrak  etanol  daun  Afrika berpotensi  sebagai  anti  malaria  terhadap
Plasmodium falciparum setelah dilakukan pengujian secara  in  vitro.  Ekstrak  akar V.  amygdalina berpotensi  menghambat P.  falciparum dengan  nilai IC50  μg/mL,  sebagai  antihelmitik,  ekstrak  etanol buah V.  amygdalina berpotensi  sebagai  antivirus pada  virus  polio,  ektrak  etanol  daun  Afrika  dengan konsentrasi  25-100  μg/mL  dapat  memberikan aktivitas  sebagai  anti  inflamasi,  berpotensi  sebagai antidiabetes  dengan  dosis  pemberian  500  mg/kg dapat  mengurangi  konsentrasi  glukosa  darah  (Yeap et al ., 2010)
Pada  penelitian  Oboh  dan  Masodjie  (2009) menunjukkan  ekstrak  air  daun  Afrika  ( Vernonia amygdalina) dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan zona  hambat  0,8  cm.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosa, serta mengetahui konsentrasi paling efektif dan pengaruh peningkatan konsentrasi ekstrak etanol daun Afrika terhadap daya hambat pertumbuhan bakteri.

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan November  2021  –  Februari  2022  di  Laboratorium Mikrobiologi,  Program  Studi  Farmasi  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi Manado.
Alat-alat yang digunakan ialah :
timbangan analitik, batang pengaduk, blender, kertas saring, peralatan maserasi, aluminium foil , erlenmeyer,  tabung  reaksi,  gelas  ukur,  mikropipet, ayakan  mesh  65,  pipet  tetes,  neraca  analitik,  gelas beaker, lumpang dan alu, oven, autoklaf, laminair air flow,  pinset, cawan  petri,  tisu,  spidol,  lemari  es, kertas saring, kertas cakram, toples.
Bahan-bahan yang digunakan ialah :
simplisia  daun  Afrika (Vernonia  amygdalina), natrium  agar (NA),  etanol  96%,  biakan  murni
Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosa, aquades, Ciprofoxacin 500mg, CMC.

## Persiapan Sampel
Daun  Afrika  dibersihkan  dengan  air  yang mengalir kemudian dikeringkan dengan cara diangin-anginkan.  Setelah  sampel  kering dihaluskan dengan cara diblender dan diayak dengan  ayakan  mes  65  hingga  diperoleh serbuk yang halus, lalu ditimbang beratnya.

## Ekstraksi
Sebanyak  200  gram  serbuk  dimasukan kedalam wadah dan dimaserasi dengan etanol 96% sebanyak 1000mL (simplisia : pelarut = 1 : 5) sampai terendam, lalu disimpan selama 5  hari  sambil  sesekali  diaduk  dan  ditutup menggunakan aluminium foil. Setelah dimaserasi  selama  5  hari,  larutan  tersebut disaring menggunakan kertas saring sehingga menghasilkan fitrat I dan residu. Residu yang ada,  ditambahkan  lagi  dengan  etanol  96% sebanyak  600mL  selama  2  hari  sambil sesekali  diaduk.  Setelah  2  hari  sampel disaring menggunakan kertas saring sehingga menghasilkan  fitrat  2  dan  residu  2.  Fitrat  1 dan  2  dicampur  menjadi  1  kemudian diuapkan dengan menggunakan drying oven .
Ekstrak  yang  diperoleh  ditimbang  bobotnya dan dihitung presentase rendemen.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini disterilkan  terlebih  dahulu  menggunakan metode sterilisasi basah dengan menggunakan  autoklaf.  Peralatan  yang disterilkan  dengan  sterilisasi  basah  yaitu gelas  ukur,  Erlenmeyer,  Cawan  petri  dan pipet  tetes.  Proses  sterilisasi  ini  dilakukan pada  suhu  121ºC  selama  30  menit  di  bawah tekanan 15 N/m 2 .

## Pembuatan Kontrol Positif Dan Kontrol Negatif
Pembuatan Kontrol Negatif
Kontrol  negatif  dibuat  dari  CMC  1%  dengan  cara  : sebanyak  1gram  serbuk  CMC  didispersikan  dalam 100 mL aquades steril dengan cara dimasukan 50 mL aquades  dikocok  sampai  larutan  membentuk  seperti gel, lalu ditambahkan lagi aqudes hingga 100 mL.

## Pembuatan kontrol positif
Kontrol  positif  dibuat  dengan  menggunakan Ciprofloxacin 500mg,  dengan  cara  digerus.. kemudian serbuk disuspensikan dalam 100mL CMC.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan stok dibuat dengan cara ditimbang 16 gram ekstrak  etanol  daun  afrika  kemudian  dilarutkan dalam  larutan  CMC  1%  hingga  volume  20  mL. Selanjutnya  dibuat  larutan  uji  dalam  berbagai konsentrasi sebagai berikut :
1) Larutan uji 5% dibuat dengan cara dipipet 0,625 mL  larutan  stok  kemudian  ditambahkan  larutan CMC hingga 10 mL.
2) Larutan uji 10% dibuat dengan cara dipipet 1,25 mL  larutan  stok  kemudian  ditambahkan  larutan CMC hingga 10 mL.
3) Larutan  uji  20% dibuat  dengan  cara  dipipet  2,5 mL  larutan  stok  kemudian  ditambahkan  larutan CMC hingga 10 mL.
4) Larutan uji 40% dibuat dengan cara dipipet 5 mL larutan  stok  kemudian  ditambahkan  larutan CMC hingga 10 mL.

## Pembuatan Media Agar Miring
Sebanyak  0,46  gram  nutrient  agar  (NA)  dilarutkan dalam  20  ml  aquades  (23g/1000  ml)  menggunakan Erlenmeyer.  Kemudian  dihomogenkan  dengan stirrer di atas waterbath sampai mendidih. Sebanyak 5 ml dituangkan masing-masing pada 2 tabung reaksi dan  ditutup  dengan aluminium  foil. Media  tersebut disterilkan  dalam  autoklaf  pada  suhu  121 o C  selama 15  menit,  dan  dibiarkan  pada  suhu  ruangan  selama kurang lebih 30 menit sampai media memadat pada kemiringan 30 o . Media agar miring digunakan untuk inokulasi.

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## Inokulasi  Bakteri  pada  Media  Agar

## Miring
Bakteri  uji  diambil  dengan  jarum  ose  steril, lalu  ditanamkan  pada  media  agar  miring dengan cara menggores. Selanjutnya diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  37°C selama  24  jam.  Perlakuan  yang  sama dilakukan pada setiap jenis bakteri uji.

## Pembuatan suspensi uji
Bakteri  uji  yang  telah  diinokulasi  dengan kawat steril diambil kemudian disuspensikan ke  dalam  tabung  yang  berisi  2  ml  larutan NaCl 0,9% dihomogenkan.

## Pembuatan Media Pengujian
Sebanyak  8,4  gram Nutrient  Agar (NA) dilarutkan dalam 300 mL aquades menggunakan erlenmeyer. Kemudian
dihomogenkan dengan menggunakan hotplate dan  didinginkan  sampai  45 o C sampai  50 o C.  Sebanyak  150mL  dituangkan masing-masing  pada  2  erlenmeyer  dan ditutup  dengan aluminium  foil .  Media tersebut disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit. Lapisan dasar dibuat dengan  menuangkan  masing-masing  50  mL NA dari media dasar ke dalam 6 cawan petri, lalu  dibiarkan  sampai  memadat.  Setelah memadat,  pada  permukaan  lapisan  dasar diletakkan 7 kertas cakram.

## Pewarnaan bakteri
Pewarnaan bakteri dilakukan dengan membersihkan  objek  kaca  menggunakan etanol  96%  lalu  dikeringkan.  Tambahkan aquadest  1  tetes  di  atas  objek  kaca.  Biakan bakteri  diambil  menggunakan  ose  steril (biakan bakteri yang diambil hanya 1 koloni saja),  ratakan.  Fiksasi  dengan  api  bunsen. Setelah  kering,  ditetesi  dengan  pewarna kristal violet tunggu 1 menit lalu bilas dengan
aquadest. Tetesi Lugol dan tunggu 1 menit lalu bilas dengan  aquadest  dan  bilas  dengan  menggunkan etanol  96%  lalu  bilas  lagi  dengan  aquadest.  Tetesi dengan  pewarna  Safranin  dan  tunggu  1  menit  lalu bilas  dengan  aquadest  kemudian  keringkan  dengan tisu.  Lalu  preparate  bakteri  diamati  di  bawah mikroskop dengan perbesaran 100 x 10.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Proses pengujian ini dilakukan dengan menuangkan 50  mL  campuran  suspensi  dan  media  pembenihan tersebut  ke  dalam  tiap  cawan  petri  kemudian digoyang secara perlahan-lahan untuk menyebarkan biakan  bakteri  secara  merata  dan  didiamkan  hingga media memadat. Masing-masing dari cakram kertas setril  dipindahkan  ke  konsentrasi  5%,  10%,  20%, 40%  dan  80%  serta  ke  kontrol  positif  dan  kontrol negatif  direndam  selama  15menit.  Cakram  kertas yang telah direndam dipindahkan dengan pinset steril ke  media  nutrien  agar  yang  berisi Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa secara aseptis.
Diinkubasi  pada  suhu  37ºC  selama  1  x  24  jam. Senyawa  antibakteri  diuji  dengan  melihat  adanya diameter  zona  hambat.  Zona  hambat  terebut berwarna  bening  pada  sekitaran  disk  kertas  saring. Kemudian zona hambat yang sudah terbentuk diukur dengan  menggunakan  penggaris  sehingga  hasilnya biasanya  dalam  satuan  milimeter  (mm).  lalu dilakukan replikasi pengujian 3 kali.

## Analisis Data
Data  hasil  pengujian  aktivitas  ekstrak  etanol  daun afrika  ( Vernonia  amygdalina )  terhadap  diameter zona  hambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas  aeruginosa dianalisa secara  statistik  dengan  menggunakan  metode One Way  ANOVA (analisa  varians  satu  arah)  dengan program  SPSS  versi  25  dengan  taraf  kepercayaan 95% atau α = 0,05. Dikarenakan data yang diuji tidak homogen  maka  dilakukan  uji Kruskal  Wallis dan dilanjutkan dengan uji Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Ekstraksi
Serbuk  daun  afrika  sebanyak  200  gram diekstraksi menggunakan metode maserasi
dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96%  dan diperoleh ekstrak kental sebanyak 24,1 gram dengan presentase rendemen 12,05%.
Tabel  1. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak daun afrika (Vernonia amygdalina), terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa
Diameter zona hambat (mm) Perlakuan Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Rata-rata Kontrol - 0 0 0 0 Kontrol + 25 27,5 26 26,16 5% 9,5 9,5 5,5 8,16 10% 9,5 10 8 9,16 20% 11,5 11,5 12 11,66 40% 12,5 13 14 13,16 80% 15 15,5 15 15,6 Tabel  2 . Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak daun afrika (Vernonia amygdalina), terhadap bakteri Staphylococcus aureus Diameter zona hambat (mm) Perlakuan Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Rata-rata K - 0 0 0 0 K + 27,5 25 27 26,5 5% 9 6 6 7 10% 10 9 8,5 9,16 20% 10,5 14 10,5 11,5 40% 13 15 13 13,66 80% 16 15 16 15,66

## Pembahasan
Pada  penelitian  ini  sampel  yang digunakan  adalah  daun  afrika.  Sampel  yang digunakan  disortasi  kemudian  dicuci  dan dipisahkan  dari  kotoran  atau  bahan  asing. Dari  hasil  sortasi  didapatkan  daun  afrika sebanyak  1,5kg.  Daun  afrika  kemudian  di keringkan  dengan  cara  diangin  –  anginkan sampai kering lalu diblender hingga halus dan diayak  kemudian  didapatkan  hasil  sebanyak 270  gram  simplisia  dan  diambil  200  gram simplisia  untuk  dimaserasi  dengan  1  liter etanol  96%,  dan  diremaserasi  dengan menggunakan  600  mL  etanol  96%.  Setelah itu,  fitrat  diuapkan  dengan  menggunakan drying oven .
Pengujian daya antibakteri merupakan salah satu cara untuk mengukur kemampuan zat antibakteri dalam
menghambat pertumbuhan bakteri secara in vitro (Vandepitte et al ., 2010). Zona hambat adalah zona  bening  yang  terdapat  disekitar  kertas cakram  pada  media  yang  sudah  diinokulasi. Terjadi  pembentukan  zona  bening  ini dikarenakan  adanya  aktifitas  antibakteri terhadap penghambatan pertumbuhan bakteri. Menurut Davis and Stout (1971),
Penggolongan  kekuatan  antibakteri  daerah hambatan yaitu 5 mm atau < 5mm lemah, 5- 10 mm sedang, 10-20 mm kuat dan lebih dari 20 mm sangat kuat.
Berdasarkan hasil pengukuran diameter  zona  hambat  dari  ekstrak  etanol daun  afrika (Vernonia  amygdalina) terhadap bakteri Pseudomonas  aeruginosa, terlihat memiliki  zona  bening  pada  konsentrasi  5%, 10%, masing masing sebesar 8,1 mm dan 9,1 mm  termasuk  kategori  sedang,  konsentrasi 20%,  40%,  80%  sebesar  11,6  mm,13,1  mm dan 15,1 mm termasuk kategori kuat. Hal ini menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  dari  daun afrika,  memiliki  aktivitas  antibakteri  dan
mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa pada  konsentrasi 5%  hingga  80%.  Kemampuan  menghambat dari  ekstrak  etanol  daun  afrika  lebih  kecil dibandingkan  dengan  kontrol  positif  yang digunakan  yaitu  ciprofloxacin  sebesar  26,16 mm termasuk dalam kategori sangat kuat.
Dan  pada  bakteri Staphylococcus aureus terlihat  memiliki  zona  bening  pada konsentrasi 5%, 10%, masing masing sebesar 7,0  mm  dan  9,2  mm  termasuk  kategori sedang, konsentrasi 20%, 40%, 80% sebesar 11,5  mm,  13,8  mm  dan  15,7  mm  termasuk kategori  kuat.  Hal  ini  menunjukan  bahwa ekstrak  etanol  dari  daun Staphylococcus aureus pada  konsentrasi  5%  hingga  80%. Kemampuan menghambat dari ekstrak etanol daun afrika lebih kecil dibandingkan dengan antibiotik yang digunakan yaitu ciprofloxacin sebesar  26,5  mm  termasuk  dalam  kategori sangat kuat.
Peningkatan  konsentrasi  dari  yang terkecil hingga yang terbesar berdampak pada besarnya  diameter  zona  hambat  yang terbentuk, karena semakin meningkat senyawa – senyawa berkhasiat dalam ekstrak yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri.
Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa ekstrak  etanol  daun  afrika  pada  konsentrasi 5%  hingga  80%  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa yang  ditandai dengan terbentuknya zona hambatan disekitar kertas  cakram.  Hal  ini  disebabkan  oleh kandungan  senyawa  pada  ekstrak  yang berperan sebagai antibakteri. Senyawa tersebut  di  antaranya  adalah  flavonoid. Mekanisme kerja flavonoid sebagai antimikroba  dapat  dibagi  menjadi  3  yaitu menghambat sintesis asam nukleat, menghambat  fungsi  membran  sel,  dan menghambat  metabolisme  energi  ( Hendra et al .,2011). Flavonoid  merupakan  senyawa fenol.  Flavonoid  menyebabkan  terjadinya
kerusakan  permeabilitas  dinding  sel  bakteri, mikrosom, dan lisosom sebagai hasil interaksi antara  flavonoid  dengan  DNA  bakteri. Mekanisme kerja flavonoid dalam menghambat  fungsi  membran  sel  adalah dengan  membentuk  senyawa  kompleks dengan  protein  ekstraseluler  dan  terlarut sehingga dapat merusak membran sel bakteri dan  diikuti  dengan  keluarnya  senyawa intraseluler.  Flavonoid  dapat  menghambat metabolisme energi dengan cara menghambat penggunaan oksigen oleh bakteri (Bontjura et al .,  2015).  Flavonoid  menghambat  pada sitokrom C reduktase sehingga pembentukan metabolisme  terhambat.  Energi  dibutuhkan bakteri  untuk  biosintesis  makromolekul (Cushnie et al ., 2005).
Senyawa  lain  yang  diduga  berperan sebagai  antibakteri  adalah  tanin  dan  steroid. Tanin  memiliki  peran  sebagai  antibakteri dengan  cara  mengikat  protein  sehingga pembentukan  dinding  sel  akan  terhambat. Efek  antibakteri  tanin  adalah  melalui  reaksi dengan  membran  sel,  inaktivasi  enzim,  dan inaktivasi  fungsi  materi  genetik.  Mekanisme kerja  tanin  sebagai  antibakteri  adalah menghambat enzim reverse transkriptase dan DNA  topoisomerase  sehingga  sel  bakteri tidak  dapat  terbentuk  (Nuria et  al .,  2009). Tanin  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang berhubungan  dengan  kemampuannya  untuk menginaktifkan adhesin sel mikroba, menginaktifkan  enzim,  dan  mengganggu transport  protein  pada  lapisan  dalam  sel. Tanin juga mempunyai target pada polipeptida dinding sel
sehingga pembentukan  dinding  sel  menjadi  kurang sempurna.  Hal  ini  menyebabkan  sel  bakteri menjadi lisis karena tekanan osmotik maupun fisik  sehingga  sel  bakteri  akan  mati. Kompleksasi dari ion besi dengan tanin dapat menjelaskan toksisitas tanin. Mikroorganisme yang  tumbuh  di  bawah  kondisi  aerobik membutuhkan zat besi untuk berbagai fungsi, termasuk reduksi dari prekursor ribonukleotida  DNA.  Enzim  reverse
transkriptase  dan  DNA  topoisomerase  sel bakteri  tidak  dapat  terbentuk  oleh  kapasitas pengikat  besi  yang  kuat  oleh  tanin. Mekanisme steroid sebagai antibakteri berhubungan  dengan  membran  lipid  dan sensitivitas  terhadap  komponen  steroid  yang menyebabkan  kebocoran  pada  ribosom (Madduluri et  al .,  2013).  Steroid  dapat berinteraksi  dengan  membran  fosfolipid  sel yang  bersifat  permeabel  terhadap  senyawa- senyawa  lipofilik  sehingga  menyebabkan integritas membran menurun serta morfologi membran sel berubah yang menyebabkan sel rapuh dan lisis (Ahmed, 2007).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan maka  dapat  disimpulkan  bahwa  Ekstrak etanol  daun  afrika  ( Vernonia  amydalina ) memiliki aktivitas sebagai antibakteri terhadap Pseudomonas  aeruginosa dan Staphylococcus  aureus .  Konsentrasi  yang paling efektif untuk menghambat pertumbuhan bakteri Pseudomonas
aeruginosa dan Staphylococcus  aureus adalah 80%.

## SARAN
Perlu dilakukan uji KBM (Konsentrasi Bunuh Minimal)  untuk  mengetahui  konsentrasi ekstrak  daun  afrika  yang  dapat  membunuh bakteri  dan  perlu  adanya  penelitian  lanjutan mengenai  aktivitas  antibakteri  daun  afrika terhadap bakteri patogen lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmed,  B.  2007.  Chemistry  of  Natural Products.  New  Delhi:  Department  of Pharmaceutical  Chemistry  Faculty  of Science Jamia Hamdard.
Abdullah,  S.S.,  Djide,  N.,  Natsir,  S.  (2021).
KLT Bioautografi Hasil Partisi Ekstrak Etanol Herba Bandotan ( Ageratum  conyzoides  L. )  Terhadap Shigella  dysentriae . Chem.  Prog.
14(1) .15-17
Mopangga, E., Yamlean, P. V. Y., & Abdullah, S.  S.  (2021).  Formulasi  Sediaan Sabun  Mandi  Padat  Ekstrak  Etanol Daun Gedi ( Abelmoschus manihot L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis . Pharmacon, 10(3) ,
1017–1024.
Legi,  A.P.,  Edy,  H.J.,  Abdullah ,  S.  S.,  (2021), Formulasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri Sediaan  Sabun  Cair Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak  ( Annona Muricata Linn)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus ,    Pharmacon, 10(3) , 1058–1065.
Sahuleka,  A.S.G.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.  S.,
(2021),  Formulasi  Sediaan  Krim Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Eceng Gondok ( Eichhornia crassipes ) Terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus ,  Pharmacon,
10(4) , 1162–1168.
Sinrang,  V.N.S.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.S.,,
(2022),  Formulasi  Sediaan  Obat Kumur  Ekstrak  Etanol  Biji  Pinang ( Areca  catechu  L. ),  Pharmacon, 11(1) , 1342–1349.
Bontjura  S.  2015.  Uji  efek  antibakteri  ekstrak daun leilem (Clerodendrum minahassae      l.)      terhadap      bakteri streptococcus  mutans.  Jurnal  ilmiah
Farmasi-Pharmacon.; 4 (4): 96-101
Cushnie,  T.P.T.  and  Lamb,  A.J.  2011.  Recent advances in understanding the antibacterial  properties  of  flavonoids. International  Journal  ofAntimicrobial Agents, 38(2): 99-
107.
Davis  WW  dan  TR.  Stout.  1971.  Disc  Plate Method  of  Microbiological  Antibiotic Assay.  J.  Applied  Microbiology.  Vol.
22(4): 659-665.
Madduluri,  S.,  Rao,  K.B.,  Sitaram,  B.  2013.  In vitro evaluation of antibacterial activity of  five  indegenous  plants  extract against  five  bacterial  pathogens  of
human. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences . 5(4) :679- 684.
Nuria,  M.,  Faizaitun,  A.C.,  Sumantri.  2009.  Uji aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol daun  jarak  pagar  ( Jatropha  curcas  L ) terhadap bakteri Staphylococcus aureus ATCC  25923,  Escherichia  coli  ATCC 25922,  dan Salmonella  typhi ATCC 1408. Mediagro, 5(2) :26–37.
Okeke  CU,  Ezeabara  CA,  Okoronkwo  OF, Udechukwu  CD,  Uka  CJ,  Bibian  O Aziagba.  2015.  Determination  of nutritional and phytochemical compositions  of  two  variants  of  bitter leaf  ( Vernonia  amygdalina  Del ). J Hum Nutr Food Sci . 3(3): 1065.
Radji,  M.,  2010,  Buku  Ajar  Mikrobiologi Panduan  Mahasiswa  Farmasi  Dan Kedokteran,  Edisi  ke  96.,  Jakarta, Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Swandiny  Greesty,  Kumala  Shirly.  2017. Aktivitas  Antibakteri  menggunakan metode difusi cakram terhadap ekstrak etanol  70%  daun  Afrika  ( Vernonia amygdalina  Del.).  Rakernas  &  PIT 2017 ikatan apoteker Indonesia . 47-50
Timmreck  T.C.  2005.  Epidemiologi  Suatu Pengantar. EGC.
Vandepitte L., Vanhoorne B., Kraberg A., et al. . (2010)  Data  integration  for  European marine  biodiversity  research:  creating a  database  on  benthos and plankton to study  large-  scale  patterns  and  long- term changes. Hydrobiologia ,  644,  1–
13
Yeap  SK.,  Ho  WH.,  Beh  BK.,  Liang  WS., Huynh  Ky,  Yousr  AHN.,  &  Alitheen NB.  2010. Vernonia  amygdalina ,  an ethnoveterinary and ethnomedical used green vegetable with multiple bioactivities. Journal  of  Medicinal Plants Research , 4(25): 2787- 2812.