## Current Biochemistry

## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 Homepage: http://biokimia.ipb.ac.id E-mail: current.biochemistry@gmail.com
Volume 5 (3): 11 - 20, 2018

## Antioxidant Activity,  Inhibition α-Glucosidase of Ethanol Extract of
Strychnos nitida G. Don and Identification of Active Compounds
(Aktivitas Antioksidan, Inhibisi α-Glukosidase dari ekstrak etanol Batang Kayu Ular
( Strychnos nitida G.Don) dan Identifikasi Senyawa Aktif)
Stefani Dhale Rale 1* , Hasim 1 , Syamsul Falah 1
1 Department of Biochemistry, Bogor Agricultural University, Bogor, 16680, Indonesia
Received : 22 October 2018 ; Accepted: 15 November 2018
*Corresponding author: Stefani Dhale Rale; Sekolah Pascasarjana IPB Program Studi Biokimia Jalan Agatis Gedung Fakultas Peternakan IPB, 16680. 082282554554. fanirale25@gmail.com

## ABSTRACT
This study aims to find the treatment of diabetes using natural materials by exploring plants in the province of East Nusa Tenggara. his research was conducted out by extracting the Strychnos nitida G.Don stem using a method of maceration by ethanol 70%. Ethanol extract was then frac - tionated using n-hexane and ethyl acetate. Simplicia from maceration and fractionation results were then tested for antioxidant activity, α-glucosidase inhibition activity and identification of active com - pounds. The results showed that ethyl acetate fraction had the lowest IC 50 value of  86.83 µg / ml. Results of the α-glucosidase activity test showed that ethyl acetate fraction and n-heksan fraction at 900 ppm had the highest percentage of inhibition of 34.23% and 33.89%. Identification using LCMS/ MS method showed that ethyl acetate fraction consist of Benzenemethamine, N, N-dioctyl- as an anti - oxidant compound and compound 24-methyl-5-cholestone-hexol as an antidiabetic compound. From the results of this study, we concluded that the extract of kayu ular Strychnos nitida G.Don stem has inhibition activity toward α-glucosidase enzyme.
Keywords : antioxidant activity, diabetes, α-glucosidase inhibition, Strychnos nitida G.Don extract
Rale et al. - Antioksidan, Inhibisi α-Glukosidase Ekstrak Etanol Strychnos nitida G.Don.

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk menemukan pengobatan  penyakit diabetes menggunakan bah - an alam dengan mengeksplorasi tanaman yang terdapat di provinsi Nusa Tenggara Timur. Penelitian ini dilakukan dengan mengekstrasi batang Kayu Ular (Strychnos nitida G.Don) dengan metode yai - tu maserasi menggunakan etanol 70%. Ekstrak etanol kemudian difraksinasi menggunakan pelarut n-heksan dan etil asetat. Simplisia hasil dari maserasi dan fraksinasi kemudian diuji aktivitas an - tioksidan, aktivitas inhibisi α-glukosidase dan didentifikasi senyawa aktifnya. Berdasarkan penguji - an aktivitas antioksidan diperoleh fraksi etil asetat memiliki nilai IC 50 paling rendah yaitu sebesar 86.83 µg/ml. Hasil pengujian inhibisi α-glukosidase fraksi etil asetat dan n-heksan pada kosentrasi 900 ppm memiliki persen penghambatan berturut-turut sebesar 33.39% dan 34.23%. Hasil analisis menggunakaan LC-MS/MS menunjukkan bahwa fraksi etil asetat mengan- dung senyawa Benzen - emethamine, N,N-dioctyl- sebagai senyawa antioksidan dan senyawa 24-methyl-5-cholestone-hex - ol sebagai senyawa antidiabetes. Berdasarkan hasil pengujian, dapat disimpulkan bahwa ekstrak batang kayu ular (Strychnos nitida G.Don) memiliki aktivitas inhibisi terhadap enzim α-glukosidase.
Kata kunci : aktivitas antioksidan, inhibisi α-glukosidase, ekstrak batang kayu ular Strychnos nitida G.Don, diabetes

## 1. PENDAHULUAN
Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan salah  satu  penyakit  tidak  menular  yang  pal - ing umum terjadi di seluruh dunia. DM adalah penyakit yang ditandai dengan tingginya kadar glukosa  darah  (hiperglikemia)  karena  resisten insulin atau tidak terproduksinya insulin (Gold - enberg  dan  Punthake  2013).  Berdasarkan  data dari  International  Diabetes  Federation  (IDF), secara global menunjukkan bahwa penderita di - abetes mellitus pada tahun 2011 telah mencapai 366 juta orang dan  pada tahun 2030 diperkiraan akan meningkat menjadi 552 juta orang. Indo - nesia termasuk sebagai salah satu negara den - gan prevalensi DM tinggi pada urutan ketujuh setelah  Cina,  India,  USA,  Brazil,  Rusia  dan Meksiko (IDF  2013).
Pengobatan  diabetes  dilakukan  untuk mengurangi morbiditas dan mortalitas penderita diabetes. Obat yang digunakan dalam penanga - nan diabetes mellitus antara lain obat yang dapat
meningkatkan  sekresi  insulin  seperti  sulfonil - urea    dan  sensiter  insulin  seperti  obat-obatan golongan biguanida dan tiazolidindion dimana obat ini bekerja menghambat katabolisme kar - bohidrat  diantaranya  sebagai  inhibitor  α-glu - kosidase.  Salah  satu  inhibitor  α-glukosidase adalah  obat  akarbose  dan  miglitol    (KEMEN- KES  2005).  Pemberian  obat-obat  ini  secara terus  menerus  dapat  menimbulkan  efek  samp - ing  seperti  kembung,  diare    dan  kejang  perut (Lee et al. 2007). Oleh karena itu penting untuk mengembangkan penelitian mengenai inhibitor α-glukosidase dari bahan alam agar dapat mem - inimalisir efek samping akibat penggunaan obat sintetik tersebut (Sudha et al. 2011).
Enzim α-glukosidase merupakan enzim hidrolase yang berperan  dalam  proses  pemeca - han karbohidrat menjadi glukosa yang kemudi - an akan  diserap tubuh sehingga akan mening - katkan  kadar  glukosa  darah  (Gao et al. 2008; Bosenberg 2008). Inhibisi α-glukosidase dapat
Curr. Biochem. 2018. 5 (3): 11 - 20
menunda  penyerapan  glukosa  sehingga  dapat menekan  kadar  glukosa  postprandial  (Ping et al. 2010; Lee et al. 2014). Beberapa penelitian sebelumnya menyatakan bahwa tanaman dapat digunakan  sebagai  penghambat  α-glukosidase. Indonesia  sebagai  negara  maritim  dan  negara hujan tropis kaya akan keanekaragaman haya - ti.  Hingga  tahun  2001  Laboratorium  Konser - vasi Tumbuhan, Fakultas Kehutanan IPB telah mendata  dari  berbagai  literatur  bahwa  sekitar 2039 spesies tumbuhan obat berasal dari hutan Indonesia (Zuhud 2015). Terdapat 17 jenis tana - man yang dapat digunakan sebagai antidiabetes (Zuhud  dan  Siswoyo 2001, Zuhud 2015). Salah satu mekanisme antidiabetes dengan mengham - bat  enzim  α-glukosidase.  Salah  satu  tanaman yang  berpotensi  sebagai  antidiabetes  adalah kayu ular ( Strychnos nitida G. Don).
Genus Strychnos terdiri  dari  190  je - nis  dan  tersebar  di    daerah  tropis  dan  subtro - pis. Strychnos nitida G.  Don  digunakan  oleh masyarakat di provinsi Yunnan, China sebagai obat  tradisional.  Masyarakat  NTT  juga  meng - gunakan  batang  kayu  ular  ( Stychnos nitida G. Don) sebagai obat tradisional seperti antidiabe - tes,  antihiperglikemia,  malaria  dan  hipertensi. Penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Li et al (2018), melaporkan bahwa hasil isolasi dari ranting Strychnos nitida G.Don diperoleh enam alkaloid diantaranya (±) Stritidas (1-3) dan tiga alkaloid  indol  monoterpenoid  seperti  (S)-me - thoxytubotaiwine,19(R)-methoxytubotaiwine dan  ervatamine  B.  Fraksinasi  cair  Strychnos nitida berhasil mengisolasi tiga senyawa indol baru diantaranya 22-deoxystrictosamide, 22-de - oxystrictosamide  Nb-oxide,  dan  vincosamide 20-O-b-D-xylopyranoside-11-O-b-D-glucopy - ranoside (Wang et al . 2016).
Berdasarkan  penelitian  tersebut  belum
ada penelitian tentang aktivitas antioksidan dan inhibisi  α-glukosidase  oleh  batang  kayu  ular (Strychnos  nitida  G.  Don).  Oleh  Karena  itu perlu  dilakukan  penelitian  mengenai  aktivitas antioksidan, aktivitas penghambatan α-glukosi - dase  dan  senyawa  yang  berperan  sebagai    an - tioksidan dan penghambat α-glukosidase.

## 2. METODOLOGI
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biokimia,  FMIPA  IPB,  Laboratorium  dan  Pu - sat Studi Biofarmaka IPB dan Puslabfor Mabes Polri. Penelitian ini dilaksanakan dari bulan Ok - tober 2017 sampai bulan Juni 2018.

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah  batang  kayu  ular  ( Strychnos nitida G.  Don)  yang  diperoleh  dari  Kabupaten  Belu, NTT, etanol 70% , etil asetat teknis, n-Heksana teksnis,  asam  askorbat,  2,2-diphenyl-1-picryl - hydrazyl  (DPPH),  enzim  α-glukosidase  yang berasal dari rekombinan Bacillus stearothermo- philus (Sigma G3651-250UN, Jerman), substrat p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida (pNPG) (Sig - ma  Aldrich,  USA)    Na 2 CO 3 ,  DMSO  (dimetil sulfoksida) dan akarbose.
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  pene - litian ini adalah hammer mill, neraca  analitik, mikropipet (10-1000 μL), desikator, oven, rota - ry evaporator, corong pisah, mikroplat 96-sumu - ran dan ELISA reader. dan LC-MS/MS (Qmicro QAA 842).
Ekstraksi Sampel Batang Kayu Ular ( Strych- nos nitida G.Don) (Kim et al. 2008)
Batang  kayu  ular  ( Strychnos nitida G. Don)  pertama  kali  dipotong-potong  menjadi bagian yang lebih kecil kemudian dikeringkan
dengan  udara  tanpa  terkena  cahaya  matahari langsung selama 6 hari. Sampel kering kemudi - an dihaluskan menggunakan hamer mill. Ukuran simplisia  yang  digunakan  berukuran  60  mesh. Simplisia sebanyak 50 gram diekstraksi dengan 500 mL etanol 70% kemudian dikocok menggu - nakan shaker selama 24 jam dengan kecepatan 150 rpm. Simplisia kemudian disaring dan filtrat di uapkan menggunakan rotary evaporator.
Fraksinasi  Ekstrak  Batang  Kayu  Ular ( Strychnos nitida G.Don) (Kim et al. 2008) Ekstrak  etanol  kemudian  difraksinasi menggunakan  metode  fraksinasi  cair-cair.  Se - banyak  2  gram  ekstrak  etanol  dilarutkan  den - gan 100 mL akuades pada suhu 50 o C. Larutan tersebut kemudian dimasukkan ke dalam corong pisah lalu difraksinasi dengan penambahan 100 mL  n-heksan  sehingga  diperoleh  fraksi  n-hek - san  dan  akuades.  Fraksi  akuades  difraksinasi kembali menggunakan etil asetat. Fraksi n-hek - san,etil  asetat  dan  akuades  yang  diperoleh  di - uapkan menggunakan rotary vacum evaporator pada suhu 50 o C.
Uji Aktivitas Antioksidan (Salazar et al. 2009) Metode  uji aktivitas antioksidan dilaku - kan  dengan  menggunakan  metode  2,2-diphe - nyl-1-picrylhydrazyl  (DPPH).  Metode  tersebut didasarkan  pada  kemampuan  sampel  yang  di - gunakan dalam mereduksi radikal bebas stabil DPPH.  Masing-masing 10 mg sampel (ekstrak etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat,  air) dan asam askorbat sebagai kontrol positif ditim - bang,  kemudian  ditambahkan  etanol  absolut dengan perbandingan 1:1000. Sebanyak 2.5 mg DPPH dilarutkan dengan 50 mL etanol. Seban - yak 100 µL etanol absolut dimasukkan ke dalam microwell  plate  yang  telah  disiapkan.  Sampel
Rale et al. - Antioksidan, Inhibisi α-Glukosidase Ekstrak Etanol Strychnos nitida G.Don.
yang diuji, ditambahkan sebanyak 100 µL den - gan variasi konsentrasi 12.5; 25; 50; 100; 150; 200 (ppm) dan 100 µL asam askorbat sebagai kontrol positif dengan variasi konsentrasi 0.31; 0.62; 1.25; 2.5; 5; 10 (ppm). Sampel dan kon - trol positif ditambahkan dengan 100 µL larutan DPPH. Campuran dihomogenkan menggunakan vorteks dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 30  menit  dalam  kondisi  gelap.  Serapan  yang dihasilkan  diukur  dengan  spektrofotometer UV-Visible  pada  panjang  gelombang  517  nm. Aktivitas persen hambat radikal bebas dihitung dengan persamaan sebagai berikut:
Nilai konsentrasi penghambatan aktivitas radi - kal bebas sebanyak 50% (IC 50 ) dihitung dengan menggunakan persamaan regresi. Nilai IC 50 di- peroleh dengan memasukkan y = 50 serta nilai A dan B yang telah diketahui. Nilai x sebagai IC50 dapat dihitung dengan persamaan:
y = A + B Ln (x)
Uji Aktivitas Inhibisi α-glukosidase (Sugiwa- ti et al. 2009) Uji  aktivitas inhibisi  α-glukosidase menggunakan kontrol positif yakni akarbose dan sampel  (ekstrak etanol, fraksi etil asetat, fraksi n-heksan  dan  air)  dengan  variasi  konsentrasi 150, 300, 450, 600, 750, 900 ppm. Pereaksi yang digunakan antara lain : p-nitrofenil-α-D-glukop - iranosida (pNPG) 10 mM sebagai substrat, en - zim α-glukosidase 0.04 U/mL, dan Na 2 CO 3 200 mM. Sampel  sebanyak 10 mg dilarutkan dalam 1 mL DMSO (dimetil sulfoksida) sebagai stok sampel. Stok sampel diencerkan dengan variasi konsentrasi 150, 300, 450, 600, 750, 900 ppm. 10 µL sampel yang telah diencerkan dimasuk -
Curr. Biochem. 2018. 5 (3): 11 - 20
kan ke dalam sumur microplate reader dan di- tambahkan dengan 50 µL buffer fosfat pH 7. Se - lanjutnya sebanyak 25 µL substrat pNPG dan 25 µL  enzim α-glukosidase ditambahkan ke dalam sumur microplate reader . Campuran diinkubasi pada suhu 37 o C selama 30 menit. Reaksi dihen - tikan dengan panambahan 100 µL Na 2 CO 3 . Ha - sil di ukur dengan dengan ELISA reader  pada panjang  gelombang  410  nm. Akitivitas  persen inhibisi  dihitung  dengan  persamaan  sebagai berikut:
Identifikasi Senyawa Menggunakan LC-MS/ MS (Rahmania et al. 2017)
Sebanyak  5µL  larutan  sampel  dengan konsentrasi 1000 μg/mL dimasukkan ke dalam instrumen LC-MS/MS dengan laju alir 0.2 mL/ menit. Fase gerak yang digunakan adalah cam - puran  asetonitril  dan  air,  sedangkan  fase  diam yang digunakan adalah kolom C18. Waktu anal - isis dilakukan selama 23 menit pada temperatur pemisahan 50 o C. Reagen Volume (µL)
Blanko Kontrol Blanko Sampel Kontrol Sampel Pelarut 10 10 - - Sampel - - 10 10 Bufer 50 50 50 50 Substrat (pNPG) 25 25 25 25 Enzim 25 - 25 - Buffer - 25 - 25 Inkubasi 37ºC 30 menit Na 2 CO 3 100 100 100 100
Tabel 1. Sistem reaksi inhibisi α-glukosidase

## Teknik Analisis Data
Data hasil penelitian dievalusi dan dia - nalisis  secara  statistik  dengan  metode  rancan - gan  acak  lengkap  (RAL)  satu  faktorial  yaitu one-way ANOVA  menggunakan  perangkat  lu - nak Mini tab 16. Selanjutnya dilakukan uji beda nyata  Tukey  pada  taraf  nyata  95%.  Nilai  P  ˂ 0.05  menunjukkan  data  berbeda  nyata  secara signifikan.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 2 menunjukkan hasil ektraksi sim - plisia batang kayu ular ( Strychnos nitida G. Don) memiliki nilai rendemen ekstrak 6.47%.  Nilai rendemen ekstrak dari hasil partisi cair-cair ek - strak etanol 70% yaitu fraksi  n-heksan, fraksi etil asetat dan air berturut- turut  0.30%, 0.69% dan 0.59%. Berdasarkan hasil rendemen partisi cair-cair tersebut menunjukkan bahwa fraksi etil asetat memiliki nilai rendemen ekstrak terting - gi. Hal ini diduga kandungan fitokimia  dalam ekstrak etanol batang ( Strychnos nitida G. Don) bersifat  semipolar  sehingga  mudah  terekstrak oleh pelarut etil asetat yang bersifat semipolar.

## Sampel
Rendemen (%) Ekstrak etanol 70% 6.47 Fraksi n-Heksana 0.30 Fraksi etil asetat 0.65 Air 0.59
Tabel 2. Rendemen ekstrak dan fraksi Strychnos nitida G. Don  dengan beberapa pelarut
Penentuan aktivitas antioksidan dilaku - kan dengan metode 2,2-diphenyl-1-picrylhydra - zyl (DPPH). Prinsip  kerja DPPH adalah proses reduksi  senyawa  radikal  bebas  oleh  senyawa antioksidan yang ditandai dengan memudarnya warna  violet  (Kedare et al. 2011).  Pemudaran warna  mengakibatkan  penurunan  nilai  absor - bansi, sehingga semakin rendah nilai absorbansi maka semakin tinggi aktivitas antioksidan (Da - mayanthi et al . 2011). Uji antioksidan ini meng - gunakan  kontrol  positif  asam  askorat.  Asam askorbat  dengan  variasi  konsentrasi  (0.3125; 0.625; 1.25; 2.5; 5; 10; 20) ppm memiliki persen - tase penghambatan berturut-turut sebesar (2.85;
6.02; 12.36; 26.15; 51.05; 85.41; 91.75)%.
Data yang disajikan pada Tabel 3 menun - jukkan bahwa persentase penghambatan ektrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan air pada konsentrasi 200 ppm berturut-turut sebesar
Rale et al. - Antioksidan, Inhibisi α-Glukosidase Ekstrak Etanol Strychnos nitida G.Don.
Konsentrasi (ppm) Ekstrak etanol (%) Fraksi n-heksan (%) Fraksi etil asetat (%) Air (%) 12.5 10.11 3.62 14.44 9.61 25 15.4 6.13 25.07 15.92 50 28.89 7.56 40.63 27.11 100 48.79 9.14 61.26 43.05 150 71.25 11.67 78.73 56.14 200 77.04 13.4 86.03 69.23
Tabel 3. Persentase penghambatan DPPH ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan air
Sampel
Inhibition Concentration (IC 50 )( µg/ml) Asam askorbat 5.54± 0.8 d Ekstrak etanol 70% 111.09±0.6 b Fraksi n-heksan ˃200 Fraksi etil asetat 86.83±0.59 c Air 131.59±2.72 a
Keterangan: huruf (a,b,c,d) pada tabel menunjukkan hasil yang berbeda nyata  (P ˂ 0.05)
Tabel 4 Nilai IC 50 ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan air
77.04%,  13.40%,  86.03%,  69.23%.  Persentase penghambatan fraksi n-heksan kurang dari 50% sehingga  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang sangat rendah. IC 50 digunakan sebagai parame - ter pengukuran akvititas antioksidan. Nilai IC 50 ( inhibitor concentration 50%)  adalah besarnya konsentrasi sampel yang dibutuhkan untuk mer - eduksi radikal bebas DPPH  sebesar 50% (Ka - trin et al. 2015).  Semakin  kecil  nilai  IC 50 , ak- tivitas antioksidannya semakin tinggi. Aktivitas antioksidan suatu senyawa  dapat digolongkan berdasarkan nilai IC 50 yang diperoleh. Nilai IC 50 ekstrak  di  bawah  50  ppm  maka  aktivitas  an - tioksidannya  sangat  kuat,  nilai  IC 50 antara  50- 100 ppm berarti aktivitas antioksidannya kuat, nilai IC 50 antara 100-150 ppm berarti aktivitas antioksidannya  sedang,  nilai  IC 50 antara  150- 200 ppm berarti aktivitas antioksidannya lemah dan jika nilai IC 50 berada diatas 200 ppm maka
Curr. Biochem. 2018. 5 (3): 11 - 20
maka  aktivitas  antioksidannya  sangat  lemah (Molyneux 2004).
Hasil uji Tukey (P˂0.05) menunjukkan bahwa  semua  sampel  termasuk  asam  askorbat sebagai kontrol positif memiliki aktivitas yang berbeda  nyata  dalam  mereduksi  DPPH.  Ber - dasarkan  nilai  IC 50 (Tabel  4),  fraksi  etil  asetat tergolong  memiliki  aktivitas  antioksidan  kuat dan fraksi n-heksan tergolong memiliki aktivi - tas antioksidan yang sangat lemah. Sarmento et al. (2015) melaporkan bahwa fraksi etil asetat
Strychnos lucida mengandung  senyawa  feno - lik dan triterpenoid sehingga memiliki aktivitas antioksidan  yang  tinggi  dengan  nilai  sebesar 73.07 µg/ml dan fraksi n-heksan Strychnos luci-
da tidak memiliki aktivitas antioksidan. Sadono
(2011) juga melaporkan bahwa kayu Strychnos
ligustrina memiliki aktivita antioksidan paling tinggi dengan nilai IC 50 sebesar 148 µg/ml.
Uji  aktivitas  penghambatan  α-gluko - sidase    batang  kayu  ular  ( Strychnos nitida G.  Don)  menggunakan  enzim  α-glukosidase. α-glukosidase  adalah  enzim  yang  mengkatal - isis  pemutusan  ikatan  glikosidik  α-1,4  dari molekul pati. Prinsip kerja  pengujian ini ada - lah reaksi hidrolisis yang terjadi pada substrat p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida menghasilkan α-D-glukosa  dan  p-nitrofenol  yang  berwarna kuning. Semakin lemah warna kuning yang di - hasilkan  p-nitrofenol  merupakan  indikator  be - sarnya aktivitas inhibisi α-glukosidase (Sugiwa - ti 2009).
Berdasarkan Gambar 1, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat, air dan akarbose menunjukkan semakin  tinggi  konsentrasi  sampel  yang  digu - nakan  maka  semakin  tinggi  persentase  peng - hambatan  α-glukosidase.  Sedangkan  ekstrak etanol  pada  konsentrasi  150-600  ppm  menun - jukkan  peningkatan  penghambatan  α-glukosi -

## A
Rale et al. - Antioksidan, Inhibisi α-Glukosidase Ekstrak Etanol Strychnos nitida G.Don.
Gambar 1. Persentase penghambatan α-glukosidase ekstrak etanol (A), fraksi n-heksan (B), fraksi Etil asetat (C), air (D) dan Akarbose (E).
dase, namun pada kosentrasi 750 ppm dan 900 ppm  mengalami  penurunan  persentase  peng - hambatan α-glukosidase. Hal ini menunjukkan bahwa  penghambatan  α-glukosidase  ekstrak etanol mencapai batas maksimum pada konsen - trasi  600  ppm  sehingga  pada  kosentrasi  yang lebih  tinggi  mengalami  penurunan  persentase penghambatan.  Akarbose  dengan  konsentra - si tertinggi 10 ppm memikili persentase peng - hambatan  sebesar  93.52%.    Persentase  peng - hambatan  α-glukosidase  ekstrak  etanol,  fraksi n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  air  pada  kon - sentrasi  900  ppm  berturut-turut  adalah  8.61%, 33.89%, 34.23% dan 24.26%.
Gambar 2  Kromatogram fraksi etil asetat Strychnos nitida G. Don dan struktur senyawa pada waktu retensi 12.308 menit
Berdasarkan uji Tukey (p˂0.05) menun - jukkan bahwa pada konsentrasi 900 ppm tidak terdapat beda nyata antara fraksi n-heksan dan etil  esetat.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  tidak ada perbedaan persentase penghambatan α-glu - kosidase  antara  fraksi  n-heksan  dan  fraksi  etil asetat. Penelitian yang dilakukan oleh Poongun - ran et al (2014)  yang  menyatakan  konsentrasi penghambatan  α-glukosidase Strychnos pota- torum pada konsentasi 500 ppm sebesar 10.9% hal  ini  menunjukkan  aktivitas  penghambatan α-glukosidase yang tidak cukup besar. Oyedemi et al. (2013) juga melaporkan bahwa Strychnos henningsii (SH) pada konsentrasi (250, 500 dan 1000 ppm) Persentase penghambatan α-gluko - sidase  berturut-turut  sebesar  14.8%,  35.27%, 58.04%. Hal ini menunjukkan bahwa aktivitas penghambatan    α-glukosidase  oleh Strychnos nitida G.Don rendah  karena untuk setiap sam - pel pada konsentrasi tertinggi 900 ppm persen - tase penghambatan kurang dari 50%.
Kromatogtam  LC-MS/MS  fraksi  etil asetat  batang  kayu  ular  ( Strychnos nitida G. Don)  menunjukkan  terdapat  18  puncak  den - gan  setiap  puncak  dengan  bobot  molekulnya masing-masing (Gambar 2). Berdasarkan hasil interpretasi kromotogram, terdapat 10 senyawa
No Waktu Retensi (Rt) Bobot Molekul (m/z) Senyawa Dugaan Kelimpahan (%) 1 3.127 353.1867 Ethyl 6-amino-5-cyano-4-cyclohexyl-2-phenyl-4H-pyran-3-carboxylate 1.85 2 3.650 395.1986 1-(4-Amino-1,2,5-oxadiazol-3-yl)-N’-[(E)-cyclohexylmethylene]-5-(4-methyl - phenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-carbohydraze 5.49 3 4.055 365.1865 Ethyl 4-[(2,3-dimethylphenyl)amino]-6-ethoxyquinolin-3-carboxylate 3.28 4 5.656 311.1755 4-(3,5-Dimethyl-1H-pyrazol-1-yl)-6-hydrazino-N-(4-methylphenyl)-1,3,5-triazin-2- amine 1.62 5 7.176 308.224 Dihydrocapsaicin 0.31 6 10.902 304.3003 2-Hexyl-3,5-dipentylpyridine 1.82 7 12.294 332.3322 Benzenemethanamine, N,N-dioctyl- 28.03 8 13.532 360.3615 n-benzyloctadecylamin 2.12 9 13.672 637.3077 Cyclo(L-arginylglycyl-L-α-aspartyl-D-Phenylalanyl-N-methyl-L-phenylalanyl) 0.01 10 14.486 353.1867 24-methyl-5-cholestane-hexol 0.32
Tabel 4 Senyawa teridentifikasi dari kromatogram LC-MS/MS fraksi etil asetat
metabolit  yang  terdapat  dalam  fraksi  etil  ase - tat  (Tabel  5).  Berdasarkan  hasil  dari  kromato - gram  senyawa  antidiabetetes  pada  fraksi  etil asetat  adalah  senyawa  yang  muncul  pada waktu  retensi  14.486  dengan  bobot  molekul sebesar  353.1867.  Senyawa  dengan  rumus molekul C 28 H 50 O 6 dengan  kelimpahan  sebe - sar  0.32  adalah  24-methyl-5-cholestane-hexol. Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Sonkanmble et al. (2018), senyawa 5β-Choles - tane-3α,7α,12α,24,25,26-hexol  sebagai  senya - wa  antidiabetes  dengan  menghambat  α-gluko - sidase.
Berdasarkan  hal  tersebut,  dapat  disi - mpulkan  bahwa  fraksi  etil  batang  kayu  ular ( Strychnos nitida G.Don)  memiliki  aktivitas antioksidan  tertinggi  dengan  nilai  IC 50 86.83 ppm. Fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat den - gan konsentrasi tertiggi 900 ppm memiliki pers - en  penghambatan  paling  tinggi    yaitu  sebesar 34.23%  dan  33.89%    namun  tidak  menunjuk - kan aktivitas penghambatan α-glukosidase yang cukup  besar.  Hasil  identifikasi  menunjukkan fraksi etil asetat batang kayu ular ( Strychnos ni- tida G. Don) mengandung 24-methyl-5-choles - tane-hexol yang diduga sebagai senyawa antidi - abetes.

## 4. DAFTAR PUSTAKA
Damayanthi  E,  Kustiyah  L,  Khalid  M,  Farizal  H. 2010.  Aktivitas  antioksidan  bekatul  lebih tinggi daripada jus tomat dan penurunan ak - tivitas  antioksidan  serum  setelah  intervensi minuman  kaya  antioksidan. JGP .5(3):205- 210
Gao  H,  Huang  Y,  Gao  B,  Kawabata  J. 2008. Chebulagic  Acid  Is  a  Potent α-Glucosi - dase Inhibitor. Biosci. Biotechnol. Biochem. 72(2):601-603.
Goldenberg,  R  &  Punthakee, Z.  2013).  Definition,
Classification  and  Diagnosis  Of  Diabetes, Prediabetes  and  Metabolic  Syndrome. Ca- nadian Journal of Diabetes , 37, S8-S11
[IDF]  International  Diabetes  Federation.  2013. IDF  Diabetes  Atlas  Sixth  Edition.  ISBN: 2-930229-85-3
Kartin,  Bendra  A.2015.  Aktivitas  antioksidan  ek - strak,  fraksi  dan  golongan  senyawa  kimia daun Premna oblongata Miq. Pharm Sci Res.
2:1
Kim KY, Nam KA, Kurihara H, Kim SM. 2008. Po - tent  α-glukosidase  inhibitors  purified  from the  red  alga  Grateloupia  elliptica. Phyto- chemistry . 69:2820-2825
Kedare SB, Singh SP. 2011. Genesis and develop - ment of DPPHof antioksidant assay. J Food Sci Technol. 48(4):412-422
[Kemenkes] Kementerian Kesehatan.  2013.  Riset Kesehatan Dasar 2013. Jakarta (ID): BPPK
Kemenkes RI.
Molyneus P. 2004. The use of stable free radical di - phenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant  activity.  Songklanakarin J.Sci. Technol. 26(2): 211-219
Li W, Tang GH, Chen L, Tang YQ, Zu YK, Liu B, Yin S.2018. New pyridocarbazole alkaloids from Strychnos nitida. Nat Prod Res . 32:13
Lee SK, Hwang YJ, Song JH, Jo JR, Kim MJ, Kim ME, Kim JI. 2007 Inhibitory activity of Eu - onymus  alatus  agais  α-glucosidase  in  vitro and in vivo. J nutr Re Pract. 1(3):184-188
Oyedemi s, Koekemoer T, Bradley G, Venter MVD, Afolayan A.2013.  In  Vitro  anti-hyperglice - mia properties of the aqueous stem bark ex - tract from Strychnos henningii (Gilg). Int J Diabetes Dev Ctries. 33(2):120-127
Patra JK, Kim SH, Hwang H, Choi JW, Baek KH. 2015. Vlatile compounds and antioxidant ca - pacity of the bio-oil obtained by pyrolysis of Japenese red pine (pinus Densiflora Siebold and Zucc.). Molecules. 20
Ping  YX,  Qing  SC,  Ping  Y,  Gang  MR.  2010. Α-Glucosidase    and    α-Amylase  Inhibitory Activity  of  Common  Constituents  from Traditional  Chinese Medicine Used for Di - abetes Melitus. Chinese Journal of Natural Medicines . 8(5):0349-0352.
Poongunran J, Perera HKI, Fernando WIT, Handu - walage CS. 2014. Α-glukosidase Inhibitory activity of some plants with known antidia - betic effects. Health and Hygiene . 157
Sadono A. 2011. Aktivitas antioksidan dan analisis komponen senyawa fenolik dari pohon bida - ra laut (Strychnos ligustrina) [Skripsi]. Bo - gor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Salazar AR, Perez-Lopez LA, Lopez-Arroyo J, Ala - nis-Garza BA, De Torres JL. 2009. Antimi - crobial  and  antioxidant  activities  of  plants from northeast of Mexico. Journal Alterna- tive Medicine 5:1-6.
Sarmento  NdC, Worachartcheewan A,  Pingaew  R, Prachayasittikul  S,  Ruchirawat  S,  Prachay - asittikul V. 2015. Antimicrobial, Antioxidant and Anticancer Activities of Strychnos Lu - cida r. Br. J Tradit Complement Altern Med.
122-127.
Sonkamble  VV,  Wagh  N,  Kamble  LH.  2018.    In - hibition  of  α-amylase  and  α-glucosidase by  (6rs)-22-hydroxy-23,24,25,26,27-pen - tanor-vitamin-d3-6,19-sulfurdiox - ide-adduct,  manoalide  and  5β-choles - tane-3α,7α,12α,24,25,26-hexol isolated from acetone extract of helianthus annuus l.
seeds. Int J Pharm Pharm Sci. 10:39-49
Sudha  P,  Zinjarde  S,  Bhargava  SY  &  Kumar AR.
2011.  Potent  α-amilase  Inhibitory  Activity of Indian  Ayurvedic Medical Plants. BMC Complementary  and  Alternative  Medicine.

## 11(1):5
Sugiwati S, Setiasih S, Afifah E. 2009.Antihypergly - cemic activity of the mahkotadewa [Phaleria macrocarpa (scheff.)Boerl.] leaf extracts as an alpha glucosidase inhibitor. Makara Kes - ehatan 13:74-78.
Wang B, Dai Z, Liu L,Wei X, Zhu PF, Yu HF, Liu YP, Luo XD. 2016. Inddole Glycoside from Aqueouse Fraction of Strychnos nitida. Nad. Prod. Bioprospect 6: 285-290
Zuhud AME.  2015.Potensi  Hutan  Tropikal  Sebgai Penyangga  Bahan  Obat  Alam  Untuk  Kes - ehatan  Bangsa  (http://www.Researchgate. Net/publication/267857735).  Diakses pada tanggal 18 Juli 2017.
Zuhud  dan  Siswoyo.  2001.  Rancangan  Strate - gi  Konservasi  Tumbuhan  Obat  Indonesia. Kerjasama    Pusat  Pengendalian  Kerusakan Keanekaragaman Hayati BAPEDAL dengan Fakultas Kehutanan IPB
Rale et al. - Antioksidan, Inhibisi α-Glukosidase Ekstrak Etanol Strychnos nitida G.Don.