## Isolasi dan Uji Aktivitas Antifungi Actinomycetes Hutan Pinus Gunung Bunder Bogor Jawa Barat terhadap Colletotrichum capsici
Olvi Dwi Ferina, Reni Nurjasmi, dan Suryani
Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Respati Indonesia Jakarta Email: olvidwiferina.odf@gmail.com

## Abstrak
Colletotrichum  capsici merupakan  fungi  penyebab  penyakit  antraknosa  pada  tanaman  cabai. Serangan  fungi  ini  berdampak  pada  menurunnya  produksi  dan  nilai  jual  cabai.  Pada  umumnya pengendalian  penyakit  tersebut  mengandalkan  fungisida  sintetik  yang  berdampak  negatif  terhadap lingkungan  dan  manusia.  Oleh  karena  itu,  perlu  alternatif  fungisida  yang  ramah  lingkungan  seperti pemanfaatan  mikrobia  agens  hayati  Actinomycetes.  Bakteri  ini  banyak  ditemukan  di  dalam  habitat tanah  yang  kaya  kandungan  bahan  organik,  salah  satunya  tanah  hutan.  Tujuan  penelitian  untuk mengetahui potensi Actinomycetes asal Hutan Pinus Gunung Bunder Bogor terhadap C. Capsici serta mendapatkan isolat yang menghasilkan daya hambat paling tinggi terhadap fungi patogen tersebut. Media  Actinomycetes  menggunakan Starch  Nitrate Agar  (SNA)  sedangkan  media C.  Capsici menggunakan  Potato  Dextrose  Agar  (PDA).  Tahapan  penelitian  meliputi  isolasi  Actinomycetes ( metode pour plate ), purifikasi ( streak plate ), identifikasi berdasarkan morfologi koloni dan miselium sehingga  diperoleh  isolat-isolat  yang  berbeda.  Aktivitas  daya  hambat  isolat  tersebut  diujikan terhadap C.  Capsici menggunakan  metode  peracunan  medium.  Berdasarkan  hasil  identifikasi, diperoleh 14 isolat Actinomycetes yang memiliki morfologi koloni dan miselium yang berbeda. Hasil uji  aktivitas  antifungi  menunjukkan  abhawa  semua  isolat  mampu  menghambat C.  Capsisi dengan persentase daya hambat tertinggi dihasilkan isolat PnGB10 (85,10%) dan berbeda nyata dengan isolat PnGB8 (62,75%).
Kata Kunci :  Actinomycetes, Antifungi, Colletotrichum capsici , Hutan Pinus

## Abstract
Colletotrichum capsici is a fungus that causes anthracnose disease in chili plants. This fungal attack has an impact on decreasing the production and selling value of chilies. In general, the control of these diseases relies on synthetic fungicides which have a negative impact on the environment and humans.  Therefore,  an  environmentally  friendly  fungicide  alternative  is  needed,  such  as  the  use  of actinomycetes biological agent microbes. These bacteria are commonly found in soil habitats that are rich in organic matter, one of which is forest soil. The aim of the study was to determine the potential of Actinomycetes from Mount Bunder Bogor Pine Forest against C. Capsici and to obtain isolates that produced  the  highest  inhibition  against  these  pathogenic  fungi.  Actinomycetes  media  used  Starch Nitrate  Agar  (SNA)  while  C.  Capsici  media  used  Potato  Dextrose  Agar  (PDA).  The  stages  of  the research  included  isolation  of  Actinomycetes  (pour  plate  method),  purification  (streak  plate), identification  based  on  colony  and  mycelium  morphology  in  order  to  obtain  different  isolates.  The inhibitory activity of these isolates was tested against C. capsici using the medium poisoning method. Based  on  the  identification  results,  14  Actinomycetes  isolates  were  obtained  which  had  different colony and mycelium morphology. The results of the antifungal activity test showed that all isolates were able to inhibit C. Capsisi with the highest percentage of inhibition produced by isolate PnGB10 (85.10%) and was significantly different from isolate PnGB8 (62.75%).
Keywords : Actinomycetes, Antifungi, Colletotrichum capsici, Pine Forest

## PENDAHULUAN
Salah satu masalah penting yang sering dihadapi  dalam  budidaya  tanaman  adalah serangan  organisme  pengganggu  tanaman yang  berdampak  pada  penurunan  produksi, baik  secara  kualitas  maupun  kuantitas.  Salah satu  penyebab penyakit  tanaman  adalah oleh C.  capsici yang  menyebabkan  penyakit Antraknosa pada cabai. Penyakit  Antraknosa  merupakan  penyakit yang  sering  ditemukan.  Penyakit  ini  dapat menyerang  tanaman  sebelum  atau  setelah panen  yang  menyebabkan  turunnya  produksi serta mengurangi keindahan tanaman. Kondisi ini akan menurunkan nilai jual hingga 75% [1]. Fungi C.  capsici dapat  menyerang  tanaman dengan  cara  menginfeksi  berbagai  organ tanaman  terutama  buah  dengan  gejala  awal yaitu  munculnya  lekukan  berwarna  hitam berupa  bintik-bintik  kecil  yang  menyebabkan pengkerutan  pada  buah,  sehingga  buah membusuk dan jatuh dari pohon [2].
Indonesia  memiliki  keanekaragaman sumber  daya  alam  yang  tinggi,  sehingga sangat potensial dilakukan eksplorasi mikroba penghasil  senyawa  bioaktif  atau  agens  hayati yang bermanfaat untuk menanggulangi patogen.  Actinomycetes  merupakan  contoh agens hayati yang dapat dimanfaatkan  dalam siklus nutrisi, produksi metabolit sekunder dan percepatan  pertumbuhan  tanaman  yang  bisa terjadi secara langsung dengan cara menghasilkan  fitohormon,  melarutkan  fosfat
serta  meningkatkan  penyerapan  nutrisi. Perannya  dalam  memacu  pertumbuhan tanaman  dapat  terjadi  secara  langsung  yakni dengan    cara  menghasilkan  fitohormon, melarutkan fosfat, dan meningkatkan penyerapan  nutrisi  sedangkan  secara  tidak langsung  yaitu  melalui  pengendalian  patogen [3].
Pengujian  kelompok  Actinomycetes sebagai  pengendali  patogen  telah  dilakukan terhadap  benih,  bibbit,  dan  media  tanam seperti Streptomyces sp  yang  berdasarkan pengujian memiliki kemampuan menghambat patogen tanaman pangan Ralstonia solanacearum [4].  Actinomycetes  ditemukan sangat banyak pada habitat tanah yang subur dengan kelembaban 0,67-0,89% yang merupakan  kelembaban  pada  ekosistem hutan  [5].  Banyak  penelitian  telah  berhasil mengisolasi  Actinomycetes  asal  tanah  hutan yang  memiliki  kemampuan  menghambat patogen  tanaman  antara  lain  keberhasilan mengisolasi  12  isolat  Actinomycetes  dari Hutan  Gunung  Bunder  Bogor,  11  diantaranya memiliki  persentase  daya  hambat  terhadap Curvularia  sp    ≥  50% [6].  Penelitian  lain  juga telah berhasil mengisolasi 43 isolat Actinomycetes  dari  tanah  hutan  yaitu  Hutan Wanagama  I  Yogyakarta  yang  memiliki kemampuan  menghambat F.  Oxysporum
(95,30%)  dan A.  flavus (83,70%).  Bahkan sebanyak  37,2%  mampu  menghambat C.
Albicans yang  merupakan  patogen  pada
manusia [7]. Tujuan penelitian untuk
mengetahui potensi Actinomycetes asal Hutan Pinus  Gunung  Bunder  Bogor  terhadap C. Capsici serta  mendapatkan  isolat  yang menghasilkan  daya  hambat  paling  tinggi terhadap fungi patogen tersebut.

## METODE PENELITIAN Tempat dan Waktu
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium Hama  Penyakit  Tanaman  dan  Agens  Hayati Pusat  Pengembangan  Benih  dan  Proteksi Tanaman  Dinas  Ketahanan  Pangan  Kelautan dan Pertanian Provinsi DKI Jakarta.

## Bahan dan Alat
Bahan  penelitian  meliputi  tanah  Hutan Pinus  Gunung  Bunder  Bogor,  isolat C.  capsici , Starch  Nitrate  Agar (SNA), bacteriological agar , Potato  Dextrose  Agar (PDA) , nistatin, dan  alkohol  70%.  Alat  penelitian  terdiri  dari laminar  air  flow, sentrifugator, shaker, hotplate , autoclave ,  timbangan  digital,  dan mikroskop objective.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel  tanah  diambil  dari  Hutan  Pinus
Gunung  Bunder  Bogor  Jawa  Barat  yaitu  pada daerah rhizosfer pohon pinus sebanyak 5 titik
dengan kedalaman 30 cm. Tanah dihomogenkan  sebagai  sampel  penelitian selanjutnya  dikeringanginkan  lalu  dihaluskan dan  disaring.  Tanah  yang  sudah  halus  akan digunakan pada tahapan selanjutnya.

## Isolasi Actinomycetes
Isolasi Actinomycetes dilakukan dengan metode pour  plate .  Larutan  NaCl  0,85% disteril  kemudian  dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer  sebanyak  90  ml.  Sebanyak  10 gram  sampel  tanah  dilarutkan  dalam  larutan NaCl  tersebut  kemudian  digoyang  selama  30 menit  menggunakan shaker lalu  didiamkan pada  suhu  70 o C  selama  1  jam.  Campuran tanah  dan  NaCl  disaring  pada  kertas  saring steril,  larutan  ditampung  pada  erlenmayer baru sebagai serial pengenceran 10 ־ 1 . Larutan NaCl  0,85%  dituang  ke  dalam  3  buah  tabung reaksi  masing-masing  9  ml  sebagai  serial pengenceran  10 ־ 2 ,  10 -3 dan  10 ־ 4 .  Sebanyak  1 ml  larutan  dimasukkan  ke  dalam  3  buah cawan  petri  steril  lalu  ditambahkan  5  ml medium  SNA  yang  sudah  diberi  nistatin. Campuran dihomogenkan dengan menggoyang cawan petri secara perlahan lalu diinkubasi  pada  suhu  25 o C  sampai  koloni Actinomycetes  tumbuh.  Koloni  yang  tumbuh dipurifikasi  menggunakan  metode streak plate , sehingga  didapatkan  koloni  tunggal kemudian  ditumbuhkan  kembali  pada  media agar miring [6].

## Identifikasi  Morfologi  Actinomycetes  dan Miselium
Identifikasi  morfologi  sel  dan  miselium Actinomycetes  dilakukan  dengan  metode culture  slide .  Koloni  Actinomycetes  diamati  di bawah  mikroskop  dengan  pembesaran  100X. Semua miselium Actinomycetes yang memiliki
morfologi berbeda digunakan untuk pengujian daya hambat terhadap C. capsici .

## Uji Daya Hambat Terhadap Patogen
Metode
peracunan medium merupakan  metode  yang  digunakan  dalam pengujian  daya  hambat  Actinomycetes  pada media PDA.
Masing-masing isolat Actinomycetes  diambil  sebanyak  1  ose kemudian diinokulasi ke dalam 10 ml medium SNA cair dan digoyang dengan kecepatan 120 rpm selama 14 hari.  Sebanyak  10 ml medium SNA  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  lalu diendapkan menggunakan sentrifugator kecepatan  12.000  rpm  selama  15  menit. Supernatan  yang  dihasilkan  dipindahkan  ke dalam  tabung  reaksi  kemudian  didiamkan pada suhu 65 o C selama 30 menit. Selanjutnya, supernatan  diinkubasi  pada  suhu  ruang selama    60  menit  kemudian  diinkubasi kembali  pada  suhu  65 o C  selama  30  menit.
Sebanyak  1  ml  supernatan  dicampurkan  ke dalam  10  ml  medium  PDA  kemudian  dituang ke  dalam  cawan  petri.  Fungi C.  Capsisi diinokulasi  pada  media  PDA  lalu  didiamkan pada  suhu  28 o C  selama  7  hari,  kemudian dilakukan pengukuran daya hambat Actinomycete s .

## Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksplorasi yang dilakukan mengisolasi Actinomycetes dari tanah Hutan Pinus Gunung Bunder  Bogor  Jawa  Barat.  Pengujian  daya
hambat  isolat  Actinomycetes  terhadap C.
capsici menggunakan Rancangan Acak Lengkap. Jumlah isolat yang diujikan sebanyak 18  isolat  diulang  sebanyak  2  kali,  sehingga diperoleh 36 unit percobaan.

## Variabel Pengamatan
Variabel  penelitian  yang  diamati adalah  morfologi  Actinomycetes  dan  daya hambat  Actinomycetes  terhadap  patogen C. capsici. Daya hambat Actinomycetes terhadap C. Capsisi dihitung menggunakan rumus:
Keterangan :
DK :  diameter  koloni C.  capsici
pada kontrol
DP
:  diameter  koloni C.  capsici pada perlakuan

## Analisa Data
Data persentase daya hambat Actinomycetes  terhadap C.  capsici dianalisis menggunakan  ragam Analysis  of  Varience
(ANOVA),  apabila F  hitung  ≥  F  tabel  ,  maka perlakuan berbeda nyata terhadap pengamatan kemudian dilanjutkan dengan uji jarak Duncan’s  Multiple  Range  Test (DMRT) pada taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Isolasi Actinomycetes
Isolasi Actinomycetes  pada  hutan pinus di Gunung Bunder Bogor menggunakan media SNA  (Gambar  1).  Media  SNA  merupakan
media selektif untuk menumbuhkan Actinomycetes.  Tahapan  isolas  dilakukan dengan  metode  pengenceran  bertingkat secara pour  plate .  Hasil  isolasi  menunjukan koloni  Actinomycetes  paling  banyak  tumbuh pada  media  SNA  dari  hasil  suspensi  sampel pada  pengenceran                      10 -3 .  Pada pengenceran ini koloni Actinomycetes terlihat jelas  dan  mudah  untuk  dipurifikasi  sehingga memudahkan  untuk  mendapatkan  isolat murni.  Pada  pengenceran  10 -1 dan  10 -2 mikroorganisme  yang  tumbuh  terlalu  banyak dan  rapat  sehingga  sulit  untuk  dipurifikasi sedangkan  pada  pengenceran  10 -4 ,  tidak terdapat  koloni  Actinomycetes.  Pada  hasil isolasi  juga  didapatkan  koloni  Actinomycetes yang  memiliki  kemampuan  berdifusi  pada media  SNA.  Semua  koloni  Actinomycetes tumbuh  setelah  hari  ke-14  dengan  morfologi yang  beragam  kemudian  dilakukan  purifikasi untuk  memperoleh  isolat  murni,  setelah dilakukan  purifikasi  ditemukan  19  isolat Actinomycetes  yang  diduga  dari  jenis  yang berbeda.
Gambar  1.    Hasil  isolasi  Actinomycetes  dari Hutan  Pinus  Gnung  Bunder  pada  media  SNA
(tanda panah menunjukkan koloni Actinomycetes) Pengambilan sampel tanah sangat mempengaruhi  keberadaan  mikroorganisme, sehingga  proses  pengambilan  sampel  harus dilakukan secara aseptis. Kelimpahan populasi Actinomycetes di dalam tanah dapat mencapai  500.000-100.000.000  per  gram tanah  subur.  Untuk  menumbuhkan  koloni Actinomycetes dilakukan pengenceran bertingkat, hal ini dilakukan untuk memisahkan  koloni  Actinomycetes  dengan jamur  atau  bakteri  lain  yang  terdapat  pada sampel  tanah  [8].  Setiap  satu  gram  tanah subur  mengandung  bakteri  (2.500.000), Actinomycetes  (700.000),  fungi  (  400.000), alga  (50.000),  dan  protozoa  (30.000)  [9]. Keanekaragaman mikroorganisme dalam tanah disebabkan kandungan unsur hara yang sangat kompleks [10].
Actinomycetes  diisolasi  menggunakan media yang selektif agar yang diperoleh hanya Actinomycetes.  Salah  satu  media  selektif Actinomyctes  adalah  SNA.  Penggunaan  SNA media akan mengurangi pertumbuhan bakteri selain Actinomycetes  pada saat isolasi. Media perlu  ditambahkan  nistatin  yang  berfungsi untuk  menghambat  pertumbuhan  fungi  pada media  [11].  Suspensi  tanah  juga  perlu dipanaskan  pada  suhu  70 0 c  selama  1  jam untuk  menekan  pertumbuhan  bakteri  lain [12].  Pada  suhu  di  atas  50 0 c  Actinomycetes masih  dapat  tumbuh  namun  lebih  dari  itu
jumlah  Actinomycetes  yang  diperoleh  sudah semakin  sedikit  [13]  karena  Actinomycetes rentan terhadap suhu tinggi [8].
Berdasarkan    hasil  isolasi  pada  media SNA  didapatkan  19  isolat  dengan  morfologi koloni  yang  berbeda.  Populasi  Actinomycetes yang didapatkan cukup rendah jika dibandingkan dengan populasi  Actinomycetes di  dalam  tanah.  Hal  ini  dikarenakan  tanah memiliki unsur hara yang kompleks dibandingkan  dengan  media  buatan  selektif. Isolasi  bakteri  secara  in  vitro  hanya  mampu mengisolasi  0,001-15% dari total bakteri yang ada. Faktor lingkungan juga sangat mempengaruhi dalam memperoleh Actinomycetes  [14].  Pembiakan  murni  harus memperhatikan
cara mendapatkan,
memelihara  serta  mencegah  biakan  murni dari kontaminan dari udara [8].
Koloni  Actinomycetes  pada  isolasi memerlukan waktu untuk tumbuh yang cukup lama  yaitu  setelah  2  minggu  dan  tumbuh melekat  pada  permukaan  serta  didominasi oleh isolat yang memiliki spora seperti serbuk atau  tepung.  Hal  ini  pula  yang  membedakan Actinomycetes  dengan  bakteri  lain.  Dengan ketersediaan  nutrisi,  kelembaban  dan  suhu, maka  spora  Actinomycetes  akan  berkembang menjadi  miselium  dan  koloni.  Permukaan Actinomycetes halus seperti beludru, bertepung,  atau  kasar  keriput.  Koloni Actinomycetes  bervariasi  seperti  krem,  coklat muda, coklat kehitaman, abu-abu, atau merah muda.  Koloni  Actinomycetes  juga  beragam
seperti  bulat  dengan  tepi  rata  atau bergelombang [15].
Actinomycetes  memiliki  waktu  tumbuh yang  lebih  lama  dibandingkan  bakteri  yaitu lebih dari 24 jam [16]. Actinomycetes memiliki ciri  khas  yang  membedakannya  dengan bakteri  yaitu  memiliki  koloni  yang  ditutupi miselium udara serta selubung hidrofobik dari permukaan  koloni  ke  udara  bebas  yang mengelilingi  hifa  [17].  Secara  makroskopik koloni  Actinomycetes  memiliki  kesamaan bentuk yang konsisten, yaitu padat dan sedikit kasar  sehingga  mudah  untuk  dibedakan dengan mikroorganisme lain.
Morfologi Koloni dan Miselium

## Actinomycetes
Berdasarkan  hasil  identifikasi  morfologi koloni Actinomycetes dan miselium, maka dari 19  isolat  Actinomycetes  yang  berhasil dipurifikasi didapatkan 17 isolat Actinomycetes  dengan  morfologi  koloni  dan miselium  berbeda  (Tabel  1).  Berdasarkan bentuk  koloni  kelompok  Actinomycetes  yang berhasil  didapatkan  diduga  didominasi  oleh kelompok Streptomyces hal  ini  nampak  pada permukaan  koloni  yang  terlihat  bertepung. Streptomyces  sp memiliki  ciri  khas  yaitu adanya  memiliki  miselium  udara  bebas  yang menyelimuti  koloni  serta  lapisan  hidrofobik yang  mengelilingi  hifa.  Pembentukan  spora akan menyebabkan perubahan warna tertentu pada hifa [17].
Streptomyces  memiliki  spora  aerial yang  memiliki  struktur  seperti  tepung  yang
dihasilkan  miselium  aerial  ketika  koloni dewasa  [18].  Beberapa  isolat  memiliki  koloni dengan  pola  bintang  atau  guratan.  Selain  itu,
kelompok  ini  menghasilkan  aroma  khas seperti tanah yaitu geosmine [19, 20].
Tabel 1. Hasil Identifikasi Morfologi koloni Actinomycetes dari Hutan Pinus Gunung Bunder Bogor
Kode Warna koloni Miselium Udara Miselium Vegetatif Bentuk Koloni Warna pigmen Terdifusi Keberadaan Spora PnGB1 Krem Krem Krem Bulat - - PnGB2 Putih kekuningan kuning kekuningan kuning lonjong - + PnGB3 Kuning kuning Kuning Bulat - - PnGB4 Putih Putih Putih Bulat Kerut - + PnGB5 Putih kekuningan Putih Kekuningan Kuning Lonjong - + PnGB6 Putih Putih Putih Bulat - + PnGB7 Abu-abu Abu-abu Abu-abu Bulat kerut tepi putih - + PnGB8 Coklat muda Coklat muda Cokelat muda Bulat kerut - + PnGB9 Cokelat tua Coklat tua Cokelat Bulat kerut + - PnGB10 Abu-abu Abu-abu Abu-abu Bulat kerut - + PnGB11 Abu-abu Abu-abu Abu-abu Bulat kerut - - PnGB12 Putih kecokelatan Putih Coklat tua   Lonjong + + PnGB13 Abu-abu Abu-abu Abu-abu Bulat kerut - + PnGB14 Putih kecoklatan Putih Coklat Bulat - + PnGB15 Putih kecoklatan Putih Coklat Bulat - + PnGB16 Coklat keputihan Coklat keputihan Coklat lonjong tepi putih + - PnGB17 Putih Putih Putih Bulat - + Ciri  lain  Actinomycetes  adalah  koloni Streptomyces pada  media  biakan  buatan berukuran 1-10 mm. Pada awalnya,
permukaan  koloni  sedikit  licin  namun  lama- kelamaan  koloni  akan  berubah  seperti bertepung  [21].  Selain  itu,  habitat  yang banyak didominasikan oleh kelompok Streptomyces  adalah  tanah.  Hal  ini  sesuai dengan  tempat  pengambilan  sampel  tanah pada  penelitian  ini  yaitu  tanah  hutan  pinus Gunung Bunder. Sebanyak 70%
mikroorganisme tanah didominasi oleh Streptomyces [22].

## Colour Grouping Actinomycetes
Isolat  Actinomycetes  hasil  identifikasi morfologi  koloni  dan  miselium  kemudian dikelompokkan  ke  dalam Colour  Grouping yang disajikan pada Tabel 2. Berdasarkan hasil colour  grouping,  diperoleh  10  kelompok Actinomycetes.  Isolat  dengan  miselium  udara dan vegetatif berwarna abu-abu paling banyak
ditemukan  yaitu  sebanyak  4  isolat  kemudian diikuti  dengan  warna  miselium  udara  dan vegetatif  berwarrna  putih  sebanyak  3  isolat. Beberapa Actinomycetes menghasilkan metabolit  sekunder  yang  terdifusi  pada media.
Pengelompokkan  isolat  Actinomycetes berdasarkan  warna  miselium udara,  miselium vegetatif  dan  warna  pigmen  yang  terdifusi pada  media  disebut  dengan Colour  grouping Actinomycetes  [23].  Apabila  pigmen  yang
terdapat  dalam  sel  Actinomycetes  mampu mengubah warna media dan menyear di dasar media  maka  disebut  pigmen  dapat  terdifusi [17]. Morfologi Actinomycetes yang terbentuk pada media agar bermanfaat untuk mengidentifikasi  karakteristik  Actinomycetes, tetapi  belum  bisa  sampai  menentukan  genus isolat tersebut [24]. Berdasarkan pada Tabel 2. Didapatkan  10  kelompok  Actinomycetes berdasarkan Colour groping .
Tabel 2. Colour grouping Actinomycetes pada Hutan Pinus Gunung Bunder Bogor
Kelompok Warna Miselium Udara Warna Miselium Vegetatif Warna Pigmen Terdifusi Jumlah Isolat Kode Isolat 1 Krem Krem - 1 PnGB 1 2 Putih kekuningan Putih kekuningan - 2 PnGB 2, PnGB 5 3 Kuning Kuning - 1 PnGB 3 4 Putih Putih - 3 PnGB 4, PnGB 6, PnGB 17 5 Abu-abu Abu-abu - 4 PnGB7, PnGB 10, PnGB 11, PnGb 13 6 Coklat muda Coklat muda - 1 PnGb 8 7 Coklat tua Coklat + 1 PnGB 9 8 Putih Coklat tua + 1 PnGb 12 9 Putih Coklat + 2 PnGB 14, PnGB 15 10 Coklat keputihan Coklat + 1 PnGB 16
Perbedaan  kandungan  pigmen  pada
Actinomycetes akan menyebabkan perbedaan warna  yang  terdifusi  pada  media  SNA. Pembentukan warna ditentukan jenis Actinomycetes [17]. Pengamatan warna dapat dilakukan  menggunakan  mata  namun  akan menghasilkan  persepsi  warna  yang  dapat berbeda. Karakteristik ini pula yang membedakan  Actinomycetes  dengan  bakteri karena  bakteri  tidak  bisa  menghasilkan  difusi
pigmen pada media SNA sehingga menghasilkan warna pada media [23].
Pada  Tabel  2.  menunjukan    warna miselium  udara  yang  lebih  dominan  adalah warna  abu-abu  lalu  di  susul  dengan  warna putih.  Penelitian  lain  telah  melakukan pengelompokan isolat Actinomycetes menjadi 17  kelompok  warna,  53%  miselium  udara isolat berwarna abu-abu [25]. Miselium udara didominasi  warna  putih,  selain  itu  ada  pula abu-abu, putih, coklat, kuning dan krem [26].

## Daya  Hambat  Actinomycetes  terhadap Colletotrichum capsici
Semua isolat yang yang telah diidentifikasi  morfologi  koloni  dan  miselium kemudian  dilakukan  pengujian  daya  hambat terhadap C. capsici seperti yang disajikan pada
Tabel  3.  Berdasarkan  hasil  pengujian,  semua isolat  memiliki  sifat  antagonis  terhadap patogen C.  capsici dengan  persentase  daya hambat  di  atas  50%  dengan  nilai  yang bervariasi  dari  yang  paling  rendah  62,75% (PnGB8) sampai paling besar 85,10% (PnGB10).
Gambar  1.  Isolat  PnGB10.  Keterangan:
morfologi  koloni  (a),  Morfologi miselium (b), Pertumbuhan
C.  capsici yang  diujikan  dengan filtrat cair (c), kontrol (d)
Perbedaan  persentase  daya  hambat Actinomycetes  terhadap  patogen  terjadi karena setiap isolat memiliki daya
antagonisme yang berbeda. Isolat
Actinomycetes yang menghasilkan persentase daya hambat tertinggi adalah PnGB10 sebesar 85,11%. Hasil ini diduga karena isolat tersebut memiliki jumlah, jenis, dan kualitas yang lebih baik  dibandingkan  isolat  lainnya . Semakin banyak  senyawa  anti  jamur  yang  dilepaskan ke  media  maka  daya  hambat  yang  dihasilkan juga semakin besar [17].
Tabel 3. Persentase daya hambat Actinomycetes terhadap C. capsici Isolat Actinomycetes Daya Hambat (%) PnGB0 0,00 a PnGB1 83,35 c PnGB2 68,90 bc PnGB3 72,75 bc PnGB4 80,80 bc PnGB5 79,05 bc (a)
(b) (d) (c)
Keterangan:    Angka  yang  diikuti  dengan    huruf  yang  sama  menunjukan  hasil  tidak  berbeda  nyata berdasarkan Uji Jarak Bergada Duncan taraf 5%.
Kemampuan antagonisme Actinomycetes dipengaruhi ketersediaan
senyawa  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan [27]. Actinomycetes memiliki laju pertumbuhan  yang  lambat  dibandingkan dengan  jenis  bakteri  lainnya  tetapi  daya hambat  terhadap  fungi  diketahui  sangat
besar.  Beberapa  isolat  yang  diuji  antagonis melawan C.  gloeosporioides ,  5  diantaranya memiliki  aktifitas  kitinase.  Aktivitas  ini menunjukkan  bahwa  Actinomycetes  memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan miselium  dan  germinasi  spora  yang  lebih efisien [28].
Gambar  2.    Isolat  PnGB16.  Keterangan: morfologi  koloni  (a),  Morfologi miselium  (b),  Pertumbuhan C. capsici yang diujikan dengan filtrat cair (c), kontrol (d)
PnGB6 82,35 bc PnGB7 68,10 bc PnGB8 62,75 b PnGB9 83,10 c PnGB10 85,10 c PnGB11 81,65 bc PnGB12 75,65 bc PnGB13 67,05 bc PnGB14 83,10 c PnGB15 79,35 bc PnGB16 83,35 c PnGB17 80,80 bc
(a) (b) (c) (d)

## Jurnal Ilmiah Respati
Gambar  3.  Isolat  PnGB1.  Keterangan:  morfologi  koloni  (a),  Morfologi  miselium  (b),  Pertumbuhan C. capsici yang diujikan dengan filtrat cair (c), kontrol) (d)
Actinomycetes  mampu  menghambat fungi  patogen  karena  memiliki  kemampuan kitinolitik. Selain kuantitas antibiotik,
perbedaan  jenis  antibiotik  dan  struktur  kimia juga  dapat  mempengaruhi  mekanisme  dan letak  fungsi  antibiotik  yang  berdampak  pada kemampuannya  menghambat  patogen  [29]. Penelitian lain menemukan 6 isolat Actinomycetes  yang  diisolasi  dari  tanah menunjukkan  aktifitas  penghambatan  yang efektif  terhadap C . Gloeosporioides [30].
Antibiotik  menunjukkan  aktivitas  toksisitas selektif  dan  mungkin  berbeda  pada  setiap organisme [31].

## SIMPULAN
Sebanyak  17  isolat  Actinomycetes  asal Hutan Pinus Gunung Bunder Bogor berpotensi menghambat C.  capsici dengan  persentase daya  hambat  di  atas  60%.  Isolat  PnGB10 menghasilkan persentase daya hambat
tertinggi yaitu 85,10%  diikuti oleh PnGB1  dan PnGB16 dengan nilai yang sama yaitu 83,35%.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]. Semangun,  H.  2004.  Penyakit-penyakit Tanaman Hortikultura di Indonesia . UGM
Press. Yogyakarta. 835 hlm.
[2]. Rusli,  I.,  Mardinus,  dan  Zulpadli.  1997. Penyakit  Antraknosa  pada  Buah  Cabai  Di Sumatera  Barat.  Prosiding  Kongres Nasional  XVI  Perhimpunan  Fitopatologi Indonesia. Palembang.
[3]. Barreto, T.R, Silva, A.C, Soares, and Souza J.T.  2008.  Population  Densties  and Genetic  Diversity  of  Actinomycetes Associated  to  the  Rhizosphere  of Theobromacacao.  Brazilian  Journal  of Microbiology. 7(39):464-470.
[4]. Akhdiya,  A.  dan  Susilowati,  D.N.  2008. Aktivitas  Penghambatan  Bakteriosin  dari Aktinomisetes  terhadap  Bakteri  Patogen
(a) (b) (c) (d)
dan  Patogen  Tular  Makanan.  Penelitian Tanaman Pangan. 27:1.
[5]. Zenova,  G.  M.,  Merzaeval,  O.  V.,
Lapygina,  E.  V.,  Bataloval,  G.  A.,  and Lysak,  L.  V.  2007.  Actinomycetes  in  the Prokaryotic  Complex  ofRizosfer  of  Oat  in a  Soddypodzolic  Soil.  Journal  of  Eurasian Soil Science. 40 (2): 158-162.
[6]. Nurjasmi,R.  dan  Suryani.  2018.  Uji  Daya
Hambat Filtrat Zat Metabolit
Actinomycetes  Asal  Hutan  Pinus  Gunung Bunder  Bogor  terhadap  Pertumbuhan Curvularia  sp .  Secara  In  Vitro.  Jurnal
Ilmiah Respati. 9(2):1-9.
[7]. Nurjasmi,  R.  J.  Widada,  dan  Ngadiman. 2009.  Diversity  of  Actinomycetes  at
Several  Forest  Types  in  Wanagama  I Yogyakarta  and  Their  Potency  as  a Producer  of  Antifungal  Compound. Indonesian  Journal  of  Biotechnology.
14(2):1196-1205.
[8]. Waluyo, L. 2009. Mikrobiologi Lingkungan. Malang, UMM Press.
[9]. Budiyanto, K. 2002. Mikrobiologi Terapan.  Universitas  Muhammadiyah
Malang, Malang.
[10]. Hidayat, N., I. Meitiniarti., S. Setyahadi., U.  Pato., E.  Susanti,  M.C.
Padaga., A. K. Wardani., dan U. Purwandari  .  2018.  Mikrobiologi  Industri Pertanian.  Universitas  Brawijaya  Press.
Malang.
[11]. Riyanti, A.S., Sabdono, A., dan Radjasa, K. 2012.  Deteksi  Gen  NRPS  Aktinomycetes Simbion  Rumput  Laut  dan  Karang  Lunak.
Prosiding Seminar
Nasional.
Pengembangan  Sumber  Daya  Pedesaan dan  Kearifan  Lokal  Berkelajutan  II. Purwokerto, 27-28 Nopember 2012.
[12]. Ambarwati.  2007.  Studi  Actinomycetes yang  Berpotensi  Menghasilkan  Antibiotik dari  Rhizosfer  Tumbuhan  Putri  Malu ( Mimosa pudica L.) dan Kucing-kucingan ( Acalypha  indica L.).  Jurnal  Penenlitian Science dan Teknologi. 8(1): 1-14.
[13]. Haryati, R. S. 2012. Populasi
Actinomycetes  dari  Pasir  Pantai  Krakal Yogyakarta  dengan  Pretreatment  yang Berbeda.  Skripsi.  Fakultas  Keguruan  dan Ilmu  Pendidikan  Biologi,  Universitas Muhammadiyah Surakarta.
[14]. Amann,  R.  I.,  W.  Ludwing,  and  K.  H. Schleifer.
1995. Phylogenetic Identification  and  In  Situ  Detection  of Individual Microbial Cells without Cultivation. Microbiol. Rev, 59 :143-169.
[15]. Miyadoh,  S.,  and  Otoguro,  M.  2004. Workshop  on  isolation  methods  and classification  of  Actinomycetes.  Bogor: Biotechnology Center LIPI.
[16]. Manjula, C., Rajaguru, P. and Muthuselvam,  M.  2009Screening  for Antibiotic  Sensitivity  of  Free  and Immobilized Actinomycetes Isolated from India,  Advances  in  Biological  Research.
3(4):84-88.
[17]. Susilowati,  D.  N.,  Hastuti,  R.  D.  dan Yuniarti, E. 2007. Isolasi dan Karakterisasi
Aktinomisetes Penghasil Antibakteri
Enteropatogen Eschericia  coli K1.  1,
Pseudomonas  pseudomallei 02  05,  dan Listeria monocytogenes 5407. Jurnal Agro Biogen. 3(1):15-23.
[18]. Kawuri,  R.  2016.  Isolasi  dan  Identifikasi
Streptomyces sp . Pada Rhizosfer
Tanaman  Pisang                                          ( Musa paradiasica )  Di  Desa  Pendem  Jembrana Bali. Jurnal Metamorfosa. III (2): 140-148.
[19]. Pelczar,  J.  R.,  M.J.  Chan,  and  N.R.  Krieg. 2003. Microbiology Concepts and Applications. McGraw-Hill
Higher
Education. New York.
[20]. Krismawati,  H.,  L.  Sembiring,  dan  S. Wahyuono. 2015. Streptomyces
Penghasil  Antibiotik  yang  Berasosiasi dengan  Rhizosfer  beberapa  Spesies Mangrove. PLASMA. 1 (2) : 59-70.
[21]. Agrios, N. G. 2005. Plant Pathology- Fifth Edition.  Departemen  of  Plant  Pathology. University  of  Florida.  United  States  of America.
[22]. Rao, N. S. S. 2001. Soil Microbiology. Soil Microorganism  and  Plant  Growth.  (4th ed). Enfield (NH).  Science Publishers, Inc. USA.
[23]. Sembiring, L., Ward A. C. and Goodfellow,
M.  (2000).  Miseliumective  Isolation  and Characterisation  of  Members  of  the
Streptomyces violaceusniger Clade
Associated with the Roots of Paraserianthes  falcataria .  Antonie  van Leeuwenhoek. 78(3-4):353-366.
[24]. Nanjwade,  B.  K.,  Chandrashekhara,  S.,
Goudanavar,  P.  S.,  Shamarez,  A.  M.  dan Manvi,  F.  V.  2010.  Production  of
Antibiotics
from
Soil-Isolated
Actinomycetes  and  Evaluation  of  Their Antimicrobial  Activities,  Tropical  Journal of  Pharmaceutical  Research. 9(4):373- 377.
[25]. Alimuddin,  W,  J.,  Asmara,  W.  dan Mustofa.  2011.  Antifungal  Production  of Strain of Actinomycetes spp Isolated from the Rhizosfer of Cajuputi Plant: Selection and  Detection  of  Exhibiting  Activity Against  Tested  Fungi,  Indonesian  Journal of Biotechnology. 16(1):1-10.
[26]. Kumar,  N.,  Singh,  R.  K.,  K.  S.  Mishra.,  K. Singh.  A.  dan  C.  Pachouri  U.  2010.
Isolation and Screening of Soil Actinomycetes  as  Source  of  Antibiotics Active  Against  Bacteria.  International
Journal of Microbiology Research. 2(2):12-16.
[27]. Soares,  A. C.  F.,  Sousa,  C. S.,  Garrido, M. S.,  Perez,  J.  O.,  dan  Almeida,  N.  S.  2006.
Soil  Streptomyces  with  In  Vitro  Activity Against  The  Yam  Pathogens Curvularia eragrostides and Colletotrichum gloeosporioides .  Brazilian  Journal  of Microbiology. 37: 456-461.
[28]. Cook  ,R.J  dan  K.F  Baker.  1983.  Biological Control of Plant Pathogen. W.A Freman & Co. San Fransisco. 433 hlm.
[29]. Tjay,  T.  H.,  dan  Rahardja,  K.  2002.  Obat- obat  Penting:  Khasiat,  Penggunaan,  dan Efek-Efek  Sampingnya.  Edisi  VI.  PT.  Elex Media Komputindo. Jakarta
[30]. Suwan, N. Boonying, W. dan Nalumpang, S.  2012.  Antifungal  Activity  of  Soil
Actinomycetes to Control Chilli
Antthracnose  Caused  by Colletotrichum gloeosporioides .  Journal  of  Agricultural
Technology. 8(2):725 -737.
[31]. Pathania  R.  dan  Brown  E.  D.  2008.  Small and Lethal: Searching For New
Antibacterial  Compound  with  Novel
Model  Of  Action.  Minireview.  Biochem.
Cell Biol. 86: 111-115.