p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA FLAVONOID FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK DAUN AFRIKA ( Vernonia amygdalina Del.)
Ni Ketut Esati*, I Putu Eka Budiarta, Kadek Duwi Cahyadi, Gusti Ayu Dewi Lestari
Sekolah Tinggi Farmasi Mahaganesha
*Email: esati0110@gmail.com
Artikel diterima: 26 Agustus 2021; Disetujui: 28 September 2021 DOI: https://doi.org/10.36387/jiis.v6i2.741

## ABSTRAK
Daun  afrika  ( Vernonia  amygdalina Del.)  dilaporkan  memiliki  aktivitas sebagai antimalaria, antibakteri, antikanker, antioksidan, dan lainnya. Hal ini erat kaitannya dengan kandungan metabolit sekunder didalamnya yaitu flavonoid. Jadi tujuan dari penelitian ini yaitu mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa flavonoid yang terkandung dalam daun afrika yang dipetik langsung di daerah Tabanan, Bali, dengan tahapan penelitiannya meliputi: maserasi daun afrika dengan pelarut etanol 96%; fraksinasi ekstrak sehingga diperoleh fraksi etil asetat; pemisahan, isolasi, dan pemurnian  senyawa  flavonoid  pada  fraksi  etil  asetat;  serta  identifikasi  senyawa flavonoid  menggunakan  metode  spektrofotometri Ultra  Violet-Visible (UV-Vis) dan Infrared (IR).
Dari  hasil  penelitian  ini  didapatkan  rendemen  ekstrak  etanol  sebanyak 3,693%.  Dalam  ekstrak  etanol  daun  afrika  mengandung  alkaloid,  flavonoid, senyawa  fenol,  steroid,  dan  saponin.  Hasil  fraksinasi  diperoleh  fraksi  n-heksana sebanyak 2,57 gram, fraksi etil asetat 0,53 gram, dan fraksi air sebanyak 3,02 gram. Fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  daun  afrika  ini  teridentifikasi  mengandung flavonoid golongan flavon dan flavonol, yang ditunjukkan adanya gugus O-H, C- H alifatik, C=O, C=C aromatik, C-O alkohol, dan C-H aromatik.
Kata  kunci :  Daun  afrika  Bali,  flavonoid,  ekstrak  etanol,  fraksi  etil  asetat, spektrofotometri

## ABSTRACT
African leaves (Vernonia amygdalina Del.) are reported to have activity as anti-malarial,  antibacterial,  anticancer,  antioxidant,  and  others.  This  is  closely related to the secondary metabolite compounds, one of them is flavonoids. So that the purpose of this study, to isolated and identified the flavonoid compounds from african  leaves.  The  plants  were  picked  directly  in  the  Tabanan  area,  Bali,  with the stages of this study were maceration of african leaves with ethanol 96%; after that,  the  isolation  and  purification  of  flavonoids  in  ethyl  acetate  fraction  from extract of african leaves are doing. Then the isolate of flavonoid compounds are identified using Ultra Violet-Visible (UV-Vis) and Infrared (IR) spectrophotometer methods.
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
From  the  results  of  this  study,  the  yield  of  ethanol  extract  was  3.693%. African  leaf  ethanol  extract  contains  alkaloids,  flavonoids,  phenolic  compounds, steroids, and saponins. The results of the fractionation obtained n-hexane fraction as much as 2.57 grams, ethyl acetate fraction 0.53 grams, and water fraction was 3.02  grams.  In  ethyl  acetate  fraction  ethanol  extract  of  african  leaf  contained flavonoids of the flavone and flavonol groups, showed the presence of -OH groups, aliphatic C-H, C=O, aromatic C=C, C-O alcohol, and aromatic C-H.
Keywords : African  leaves  from  Bali,  flavonoids,  ethanol  extract,  ethyl  acetate fraction, spectrophotometry

## PENDAHULUAN
Tanaman  obat  adalah  segala
jenis tumbuhan yang diketahui mempunyai khasiat baik dalam membantu memelihara kesehatan maupun  pengobatan  suatu  penyakit (Harmida  dan  Yuni,  2011).  Tanaman obat  sangat  bermanfaat  dalam  dunia farmasi  khususnya  sebagai  sumber bahan baku obat tradisional. Penggunaan obat tradisional di Indonesia semakin berkembang dikarenakan  banyaknya  temuan  obat herbal terbaru yang dapat menyembuhkan  penyakit  (Utami  dan Puspaningtyas,  2013).  Salah  satu tanaman  yang  menarik  untuk  diteliti adalah daun afrika ( Vernonia
amygdalina Del.)  yang  diduga  sangat
potensial untuk dikembangkan menjadi bahan baku obat tradisional.
Secara umum daun  afrika
( Vernonia amygdalina Del.) merupakan  salah  satu  famili  dari
Asteraceae .  Daun  afrika  memiliki banyak  manfaat  dalam  pengobatan tradisional  dilihat  dari  penelitian sebelumnya,  daun  afrika  ini memiliki efek  maupun  aktivitas  seperti  efek antiparasit, antimalaria, antihelmentik, antivirus,  antikanker,  antikoagulan dan  antithrombik,  analgesik  dan antipiretik, antiinflamasi, antioksidan, antidiabetik,  dan  antioksidan  (Yeap, dkk.  2010).  Aktivitas  biologis  suatu ekstrak  tanaman  yang  sangat  erat kaitannya  dengan  senyawa  metabolit sekunder  yang  dikandungnya.  Salah satu metabolit sekunder yang memiliki peranan  besar  terhadap  khasiat  dari daun  afrika  adalah  flavonoid  (Jack, 2012).
Beberapa penelitian telah dilakukan  terkait  daun  afrika,  seperti yang dilakukan oleh Sukmawati, dkk. (2017)  melalukan  skrining  fitokimia terhadap kandungan metabolit sekunderdari  ekstrak  daun  afrika  asal
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Ternate;  Mashunah,  dkk.
(2020) mengisolasi  senyawa  steroid  dari ekstrak  n-heksana  daun  afrika;  serta Kharimah, dkk.
(2016) mengidentifikasi keberadaan senyawa flavonoid  secara  kromatografi  dalam daun afrika (berasal dari tanaman Jawa Barat) yang diekstraksi secara refluks (ekstraksi secara panas).
Diketahui bahwa kualitas senyawa  aktif  yang  terkandung  di dalam tanaman obat akan dipengaruhi oleh kondisi lahan, iklim, dan keadaan di  lingkungan  tempat  hidup  tanaman tersebut  (Katno  dan  Pramono,  2008).
Hal ini dipertegas juga oleh Sholekah (2017),  bahwa  metabolit  sekunder terbentuk dari metabolit primer melalui  berbagai  jalur  metabolisme yang dipengaruhi oleh beberapa faktor lingkungan.  Faktor  tersebut  seperti cahaya,  suhu,  pH,  ketinggian  tempat, dan temperatur yang akan berpengaruh terhadap  kandungan  fitokimianya. Kandungan fitokimia seperti flavonoid dan  beta  karoten  dari  suatu  tanaman tentunya  juga  akan  berbeda  pada setiap wilayah dipengaruhi oleh faktor lingkungan tersebut.
Berdasarkan uraian diatas, peneliti  melakukan  penelitian  lebih
lanjut  tentang  kandungan  flavonoid daun  afrika  asal  Bali.  Penelitian dilakukan dengan mengekstraksi daun afrika dengan metode maserasi (ekstraksi dingin) menggunakan pelarut  etanol  96%,  yang  selanjutnya pada  penelitian  ini  tidak  hanya melakukan identifikasi secara kromatografi,  tetapi  juga  mengisolasi kandungan  flavonoidnya  dalam  isolat fraski etil asetat, dan mengidentifikasi lebih lanjut dengan metode spektrofotometri Ultra  Violet-Visible (UV-Vis) dan Infrared (IR).

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan adalah ekstrak daun afrika, etanol 96% (CALMO  MEDICAL),  kloroform, H 2 SO 4 ,  pereaksi  mayer,  asam  klorida pekat,  amil  alkohol  (EMSURE), NaOH,  FeCl 3 ,  pereaksi  Lieberman buchard, HCl 2M, akuades, etil asetat (BRATACHEM), n-heksana (BRATACHEM),  asam  asetat  glasial
(EMSURE), metanol, n-butanol,
AlCl 3 .
Alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu  peralatan  gelas
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
(IWAKI),  pipa  kapiler,  bejana  elusi KLT (CAMAG), kolom kromatografi, sentrifugator  (IPC),  oven  (memmert), spektrofotometer  UV-Vis  (Thermo
Spektro Genesis 10V-Vis),
spektrofotometer Infrared (IRPrestige- 21  SHIMADZU),  plat  KLT  (Merck TLC Silika gel GF60 F 254 ).

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Simplisia daun afrika kering yang telah  diekstraksi  secara  maserasi dengan  etanol  96%  diperoleh  ekstrak kenal  etanol.  Ekstrak  kental  tersebut selanjutnya difraksinasi dengan pelarut  n-heksana,  etil  asetat,  dan  air. Fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  daun afrika digunakan pada langkah selanjutnya.
Pengujian flavonoid pada fraksi etil asetat  dengan  Kromatografi  Lapis Tipis (KLT)
Fraksi  etil  asetat  yang  diperoleh dari hasil fraksinasi, dianalisis menggunakan  metode  KLT  dengan larutan  pengembang  (eluen)  yaitu  n- butanol-asam asetat glasial-air (BAA) perbandingan  4:1:5.  Plat  hasil  elusi dideteksi di bawah lampu UV 254 nm dan  365  nm  kemudian  dilakukan penampakan bercak menggunakan uap amonia.  Adanya  flavonoid  pada
panjang  gelombang  254  nm  akan terjadi  perubahan  warna  biru  tua  dan panjang  gelombang  365  nm  terlihat fluoresensi  warna  kuning,  biru,  atau hijau (Endang, 2014).
Pemisahan senyawa flavonoid pada fraksi etil asetat secara kromatografi kolom
Sebanyak 0,2g fraksi etil asetat dilarutkan  dengan  sedikit  eluen  (etil asetat). Setelah itu dimasukan kedalam kolom  dengan  perlahan  sambil  kran dibuka  dengan  kecepatan  aliran  kira- kira  1  mL/menit. Proses  elusi dilakukan menggunakan pelarut dengan  kepolaran  yang  semakin meningkat,  yaitu  yaitu  n-heksana 100%  (2  kali),  n-heksana  :  etil  asetat (8:2),  (6:4),  (4:6),  (2:8)  etil  asetat 100%, etil asetat:metanol (1:1), metanol 100% masing-masing sebanyak  25  mL  (sekali).  Eluat  yang diperoleh  ditampung  dan  diuji  secara KLT,  eluat  yang  memiliki  pola  noda dan nilai Rf yang sama, dikumpulkan dalam fraksi yang sama.
Isolasi flavonoid menggunakan kromatografi  lapis  tipis  preparatif (KLTP)
Fraksi  yang  positif  mengandung flavonoid  selanjutnya  dipreparatif.
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Eluen  yang  digunakan  n-butanol  : asam  asetat  glasial  :  air  (4:1:5).  Pita hasil  KLTP  dikerok  dan  dilarutkan dalam  pelarut  metanol,  kemudian disentrifugasi  untuk  mengendapkan silikanya sehingga diperoleh isolat.
Pemastian kemurnian isolat dengan KLT  multi  eluen  dan  pengujian dengan pereaksi kimia
Isolat  yang  diduga  mengandung flavonoid  dielusi  menggunakan  dua macam fase gerak dengan perbandingan  yang  berbeda  dengan kepolaran  tiap  eluen  berbeda  yaitu butanol  :  asam  asetat  glasial  :  air (7:0,5:0,5)  dan  butanol  :  asam  asetat galsial  :  etanol  (6:1:0,5).  Bercak tunggal  yang  dihasilkan  menandakan bahwa isolat yang diperoleh merupakan  senyawa  tunggal  atau murni.  Tahap  selanjutnya  dilakukan pengujian dengan pereaksi kimia yaitu dengan  uji  NaOH  10%  dan  uji wilsttater.
Identifikasi flavonoid menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan IR
Isolat positif flavonoid di analisis dengan  metode  spektrofotometri  UV- Vis  dengan  penambahan  perekasi geser  NaOH  2  M,  HCl,  NaOAc, NaOAc/H 3 BO 3 . Sedangkan pengujian
dengan spektrofotometer IR menggunakan  kalium  bromida  (KBr) yang  digerus  bersama  sampel,  lalu diukur serapannya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi simplisia
Hasil ekstraksi yang diperoleh kemudian  dipekatkan,  dan  diperoleh ektrak  kental  etanol  daun  afrika sebanyak  27,70  gram.  Ekstrak  kental yang diperoleh dihitung persen rendemen ekstrak dan didapatkan hasil seperti pada Tabel 1.
Tabel 1. Persen rendemen ekstrak etanol 96% daun afrika
Sampel Berat Sampel (g) Berat Ekstrak (g) %rendemen (b/b) Ekstrak etanol daun afrika 750 27,70 3,693 Dilihat pada tabel diatas,
didapatkan  hasil  persen  rendemen ekstrak  etanol  daun  afrika  sebesar 3,693%. Nilai rendemen yang diperoleh  dipengaruhi  oleh  waktu ekstraksi. Waktu ekstrasi yang semakin  lama  menyebabkan  semakin lama  kontak  antara  padatan  dengan
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
pelarut  yang  akan  memperbanyak jumlah sel yang pecah dan bahan aktif yang  terlarut,  sehingga  kemungkinan nilai  rendemen  yang  diperoleh  kecil (Wahyuni dan Widjanarko, 2015).
Fraksinasi  dan  kromatografi  lapis tipis (KLT)
Dari  proses  fraksinasi  akan diperoleh  tiga  fraksi  yaitu  fraksi  n- heksana,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi air. Dari ketiga fraksi yang diperoleh, selanjutnya  diuapkan  menggunakan penangas  air  pada  suhu  50ºC  hingga memperoleh  ekstrak  kental.  Hasil ekstrak  kental  yang  diperoleh  dari hasil penguapan yaitu fraksi n-heksana sebanyak  2,57gram,  fraksi  etil  asetat sebanyak  0,53gram,  dan  fraksi  air sebanyak  3,02gram.  Pada  penelitian ini  akan  digunakan  fraksi  etil  asetat untuk tahap selanjutnya yaitu identifikasi senyawa flavonoid dengan metode KLT.
Pengujian  flavonoid  dengan KLT pada penelitian ini menunjukkan hasil yang positif mengandung flavonoid, seperti terlihat pada Gambar 1. Ketiga fraksi mengandung flavonoid  ditandai  dengan  sampel  (b, c,  dan  d)  memiliki  Rf  yang  sama dengan  pembanding  kuersetin,  dan
pada  plat  KLT  setelah  disinari  lampu UV  dengan  panjang  gelombang  365 nm  terlihat  fluoresensi  biru  dan kekuningan,  sesuai  dengan  pustaka (Endang, 2014)
Gambar 1. Hasil pengujian fraksi dengan metode KLT pada lampu UV 254nm dan 365nm
Keterangan : (a) kuersetin, (b) fraksi n-heksana, (c) fraksi etilasetat, (d) fraksi air Pemisahan senyawa flavonoid dengan metode KLT dan pengujian menggunakan pereaksi kimia
Dari  hasil  kromatografi  kolom, diperoleh  eluat  sebanyak  44  vial. Eluat-eluat  tersebut  diuji  secara  KLT yang  memperlihatkan  bercak  yang sama  dikumpulkan  dan  dilanjutkan pada proses isolasi flavonoid menggunakan KLT preparatif (KLTP). Dari hasil  isolasi  didapatkan penampakan pita berwarna merah dan biru  yang  masing-masing  diberi  label sebagai isolat merah dan biru.

## a  b  c  d
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Kedua  isolat  yang  diperoleh dipastikan  kemurnian  menggunakan metode  KLT  multi  eluen.  Pada pengujian ini menghasilkan hanya satu bercak, sehingga isolat dapat dikatakan  murni  secara  KLT,  dapat dilihat pada Tabel 2 dan Tabel 3.
Tabel 2. Hasil uji kemurnian isolat merah dengan metode KLT Fase gerak Penampakan noda lampu Uv Harga R f 254 nm 365 nm Butanol : asam asetat glasial : air (7:0,5:0,5) - Merah Biru 0,875 0,938 Butanol : asam asetat glasial : etanol (6:1:0,5) - Merah Biru 0,875 0,938 Keterangan : (-) tidak terlihat penampakan noda yang jelas Tabel 3. Hasil uji kemurnian isolat biru dengan metode KLT Fase gerak Penampakan noda lampu Uv Harga R f 254 nm 365 nm Butanol : asam asetat glasial : air (7:0,5:0,5) - Biru 0,938 Butanol : asam asetat glasial : etanol (6:1:0,5) - Biru 0,938 Keterangan : (-) tidak terlihat penampakan noda yang jelas
Pengujian  isolat  flavonoid  dengan pereaksi kimia Pada uji NaOH 10%
menunjukan  hasil  positif  pada  kedua
isolat yang ditandai dengan terjadinya perubahan  warna  kuning  kecoklatan diindikasikan  isolate  mengandung senyawa  flavonoid  jenis Flavanon, flavon, flavonol, flavonolol
(Venkataraman, 1962).
Pada uji wilsttater juga menunjukan  hasil  positif  yaitu  pada isolat merah ditandai dengan terjadinya  perubahan  warna  menjadi kuning yang artinya positif mengandung isoflavon dan pada isolat biru  terjadinya  perubahan  warna menjadi  kuning-jingga  yang  artinya positif  mengandung  flavonoid  jenis flavon (Venkataraman, 1962).
Identifikasi flavonoid menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis
Berdasarkan spektrum yang diperoleh  menunjukan  isolat  terletak pada 310,131 (pita I) dan 239,382 (pita II)  untuk  isolat  merah.  Sedangkan isolate  biru  pada  310,61  (pita  I)  dan 259,189 (pita II). Penentuan spektrum menggunakan  penambahan  pereaksi geser disajikan pada Tabel 4.
Pada  isolat  merah,  setelah penambahan pereaksi geser NaOH 2M terjadi  pergeseran  batokromik  pada pita I sebesar 50,809 nm yang artinya terdapat  dugaan  adanya  senyawa
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
flavon dan flavonol, setelah penambahan  pereaksi  geser  NaOAc terjadi  pergeseran  pada  pita  II  yang menunjukkan  pergeseran  ke  panjang gelombang yang lebih kecil
(hipsokromik) sebesar 5,341 nm yang artinya terdapat dugaan adanya senyawa  flavonoid  yaitu  flavon, flavonol,  dan  isoflavon,  dan  setelah penambahan H 3 BO 3 pada isolat merah pada  pita  I  menunjukkan  pergeseran sebesar  32,771  yang  artinya  terdapat dugaan  adanya  senyawa  flavonoid yaitu  flavon,  flavonol,  auron,  dan khalkon.
Tabel 4. Panjang gelombang maks (nm) isolat setelah penambahan
pereaksi geser Panjang gelombang maks (nm) dengan penambahan pereaksi geser Isolat Merah Biru NaOH 2M 241,076  269,131 NaOAc 234,041 - H 3 BO 3 240,239 - NaOAC + H 3 BO 3 - 255,057 Pada isolat biru, setelah penambahan  geser  NaOH  2M  terjadi
pergeseran pada pita I yang menunjukkan pergeseran sebesar
45,884  nm  yang  artinya  terdapat dugaan  adanya  senyawa  flavonoid jenis  flavon  dan  flavonol,  sedangkan
setelah NaOAc + H 3 BO 3
menghasilkan pergeseran hipsokromik pada  pita  II  sebesar  4,162  nm  yang kemungkinan  terjadi  tidak  terdapat senyawa flavonoid.
Identifikasi flavonoid menggunakan metode  spektrofotometri  infrared (IR)
Identifikasi  flavonoid  dengan spektrofotometri  infrared  dilakukan untuk  mengetahui  gugus  fungsi  yang terdapat dalam isolat murni flavonoid. Sebanyak  0,1  gram  kalium  bromida (KBr)  lalu  digerus  sampai  halus  dan diletakan pada sample base dan diukur serapannya.  Hal  ini  bertujuan  untuk melihat  daerah  serapan  pada  standar KBr sehingga setelah diketahui serapan standarnya bisa dibandingkan dengan  serapan  setelah  diisi  sampel. Hasil pengukuran kedua isolat menggunakan spektrofotometri infrared  dapat  dilihat  pada  Gambar  1 dan Gambar 2.
Gambar 1. Spektrum infrared isolat merah
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Gambar 2. Spektrum infrared isolat biru Berdasarkan  analisis  spektrum infrared, menunjukan adanya beberapa  gugus  fungsi.  Hasil  analisis isolat  merah  yaitu  adanya  serapan melebar  pada  3420,90  dan  3499,02 cm -1 dan  pada  isolat  biru  adanya serapan  pada  3031,26;  3297,45;  dan 3497,09  yang  diduga  adalah  serapan dari  gugus  O-H,  kemudian  serapan gugus C-H alifatik yang tajam muncul di  daerah  2871,17  dan  2930,00  pada isolat  merah,  sedangkan  pada  isolat biru  serapan  muncul  pada  daerah 2867,31 dan 2928,07. Hal ini didukung  dari  hasil  penelitian  oleh Akbar  (2010)  bahwa  serapan  pada
bilangan gelombang 2927,36cm -1 menunjukan vibrasi gugus C-H didalam  gugus  C-H  alifatik.  Adanya gugus  karbonil  (C=O)  sebagai  ciri umum  senyawa  golongan  flavonoid Sukadana  (2010)  yang  diindikasikan oleh  adanya  serapan  pada  daerah bilangan gelombang 1616,35. Serapan
gugus  C=C  aromatik  muncul  pada daerah  bilangan  gelombang  1451,5 dan  1526,72  pada  isolat  merah  dan daerah  bilangan  gelombang  1468,86 untuk  isolat  biru,  kemudian  vibrasi gugus  C-O  dalam  senyawa  fenol menghasilkan  pita  kuat  di  daerah 1260-1000 cm -1 dan pada isolat merah serapan  C-O  muncul  pada  daerah bilangan gelombang 1168,91 dan pada isolat  biru  muncul  pada  panjang gelombang 1171,81. Adanya gugus C- H aromatik ditunjukan dengan munculnya serapan isolat merah pada bilangan  gelombang  744,55  dan 847,75  sedangkan  pada  isolat  biru muncul serapan pada bilangan gelombang 696,33 dan 760,95.
Adanya  gugus  fungsi  O-H,  C-H alifatik,  C=C  aromatik  dan  C-O mengindikasikan  isolat  ini  suatu senyawa  flavonoid.  Hal  ini  diperkuat berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh  Akbar  (2010)  sesuai dengan hasil spektrum infrared adanya gugus  fungsi  O-H,  C=O,  C-O,  C=C aromatik,  dan  C-H  alifatik  yang mendukung  bahwa  isolatnya  positif suatu senyawa flavonoid.
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## KESIMPULAN
Fraksi etil asetat ekstrak etanol daun  afrika  ( vernonia  amygdalina Del.) mengandung senyawa flavonoid jenis  flavon  dan  flavonol  yang dipertegas  menggunakan  pengujian flavonoid dengan pereaksi kimia.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  semua pihak  yang  tidak  dapat  disebutkan satu-persatu,  yang  telah  membantu dalam proses penelitian dan penyusunan naskah ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Akbar,  H.  and  Rizki  (2010)  ‘Isolasi
dan  Identifikasi  Golongan Flavonoid  Daun  Dandang Gendis (Clinacanthus nutans) Berpotensi Sebagai Antioksidan’, Departemen Kimia, Fakultas MIPA. Institut Pertanian Bogor. Endang, H. (2014) ‘Analisis Fitokimia’, Penerbit  Buku
Kedokteran. Jakarta : EGC. Harmida,  S.  and  Yuni,  V.  F.  (2011) ‘Studi  Etnofitomedika  di Desa Lawang Agung Kecamatan Mulak Ulu Kabupaten  Lahat  Sumatera
Selatan’, Jurnal  Penelitian Sains , 14(1), pp. 42-46. Jack (2012) ‘Synthesis of Antidiabetic Flavonoids and Their
Derivative’, Medical Research , p. 180. Katno  and  Pramono,  S.  (2008) ‘Tingkat Manfaat dan Keamanan  Tanaman  Obat dan Obat Tradisional’, Fakultas Farmasi Universitas  Gajah  Mada, Yogyakarta , p. 14. Kharimah, ZN, Lukmayani, Y. dan Syafnir, L. 2016. 'Identifikasi
Senyawa Flavonoid pada Ekstrak dan Fraksi Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.)'. Prosiding Farmasi , 2 (2), pp. 703-709 Mashunah, E., Erwin., Sitorus, S. 2020. 'Isolasi dan Identifikasi Steroid dari Ekstrak N- Heksana Daun Afrika (Vernonia amygdalina Del.)'. KOVALEN : Jurnal Riset
Kimia , 18-22.
Sholekah,  F.  F.  (2017)  ‘Perbedaan Ketinggian Tempat Terhadap Kandungan  Flavonoid  dan Beta  Karoten  Buah  Karika (Carica  pubescens)  Daerah Dieng Wonosobo’, Prosiding Seminar  Nasional.  Jurusan Pendidikan Biologi. Fakultas MIPA,  Universitas  Negeri
Yogyakarta. , p. 8. Sukadana,  I.  M.  (2010)  ‘Aktivitas Antibakteri Senyawa Flavonoid  dari  Kulit  Akar Awar-awar  (Ficus  Septica).’, Jurusan Kimia FMIPA Universitas  Udayana ,  4(1), pp. 63–67.
Sukmawati, 2017. 'Potensi Senyawa Flavonoid Daun Afrika Asal Ternate sebagai Antioksidan'.
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Makassar : Fakultas Farmasi
Indonesia . 2 (2). 53-61. Utami,  P.  and  Puspaningtyas,  D.  E. (2013)  ‘The  Miracle  of Herbs’, Jakarta :
PT AgroMedia Pustaka. Wahyuni, D. T. and Widjanarko, S. B. (2015) ‘Pengaruh Jenis Pelarut  dan  Lama  Ekstraksi Terhadap Ekstrak Karotenoid Labu Kuning dengan Metode Gelombang Ultrasonik’, Jurusan Teknologi Hasil Pertanian.  FTP  Universitas Brawijaya.  Malang.  Jurnal
Pangan  dan  Agroindustri , Vol. 3(No. 2), pp. 390-401.
Yeap,  S.  K. et  al. (2010)  ‘Vernonia amygdalina an ethnoveterinary and ethnomedical used green vegetable with multiple bioactivities.’, J.Med.Plant research. ,  4(25),  pp.  2787–
2812.