Abstrak —Sebuah  studi  baru  mencatat  temuan  yang mengkhawatirkan.  Sekitar  100  juta  ekor  ikan  hiu  mati  setiap tahunnya.  Berbagai  eksploitasi  telah  dilakukan  untuk keperluan  manusia,  salah  satunya  dengan  memperdagangkan minyak  hati  ikan  hiu,  yang  disebut squalene . Squalene kini menjadi  salah  satu  bahan  mahal  untuk  pembuatan  kosmetik dan  pelembap,  serta  kerap  dijual  dalam  bentuk  pil  sebagai suplemen dan mampu mengobati berbagai penyakit. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mempelajari  indentifikasi  kandungan squalene (senyawa  non  polar)  dari  minyak  nyamplung ( Calophyllum inophyllum ).  Identifikasi  dilakukan  melalui  hasil ekstraksi multi  stage 8  kali  dilanjutkan  dengan  metode stirred batch-wise .  Ekstraksi  dilakukan  sebagai  alternatif  saponifikasi. Metode stirred batch-wise dilakukan pada suhu -6 ° C sebanyak 5 batch dan dicampur menjadi satu sampel. Setelah sampel diuji dengan  TLC  dan  GC-MS,  komponen squalene dapat teridentifikasi dan ter-recovery 100% dengan kadar 1,71 %.
Kata  Kunci —Ekstraksi,  nyamplung,  squalene, stirred  batch- wise.

## I. PENDAHULUAN
qualene adalah  senyawa  hidrokarbon  yang  mempunyai aplikasi  didalam  pembuatan  kosmetik  dan  biosintesa kolesterol  [1]. Squalene kini  menjadi  salah  satu  bahan mahal untuk pembuatan kosmetik dan pelembap, serta kerap dijual  dalam  bentuk  pil  sebagai  suplemen  dan  mampu mengobati  berbagai  penyakit. Squalene dapat  diproduksi oleh  tubuh  manusia,  hanya  jumlahnya  sangat  sedikit  dan produksi Squalene akan  semakin  berkurang  jumlahnya seiring  dengan  bertambahnya  usia  dan  kondisi  kesehatan yang  tidak  selalu  sehat,  sehingga  manusia  perlu  tambahan dari  luar  atau  dari  makanan.  Sebenarnya  senyawa Squalene mudah ditemukan karena senyawa ini dihasilkan oleh semua makhluk hidup hanya kadarnya relatif sedikit, salah satunya adalah Nyamplung.
Bagian-bagian dari tanaman nyamplung ternyata memiliki  khasiat  terhadap  kesehatan  antara  lain  getah  yang diekstrak  dari  tanaman  nyamplung  berfungsi  untuk mengobati luka,  kulit kayu berfungsi sebagai antiseptic dan disinfektan,  akar  berfungsi  untuk  mengobati  luka  dan aplikasi  untuk  penyakit  serangan  jantung,  daun  yang direndam  di  air  dan  menghasilkan  warna  kebitu-biruan  dan bau  alami  dapat  mengobati  penyakit  radang  mata,  minyak dari  biji  nyamplung  dapat  digunakan  sebagai  antirematik, pembuatan sabun, mengobati luka bakar pada kulit [2].
Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengidentifikasi  kandungan squalenene dari  minyak  nyamplung  menggunakan  metode ekstraksi pelarut multi stage 8 kali untuk memperoleh fraksi lemak  non-polar  ( Non  Polar  Lipid  fraction ,  NPLF),  dan dilanjutkan  dengan  metode stirred  batch-wise untuk
memperoleh squalene dari NPLF [3]. Identifikasi kandungan dari minyak ditentukan dengan analisa TLC dan GC-MS.

## II. METODOLOGI PENELITIAN
2.1 Bahan yang digunakan
Minyak  nyamplung  diperoleh  dari  Koperasi  Tani  Jarak Lestari,  yang  berada  di  Jawa  Tengah.  Bahan-bahan  kimia seperti hexane, methanol, ethanol, Petroleum Eter, dibeli dari PT. Bratachem; Thin-layer chromatography (TLC) aluminum plate (20 x 20cm x 250 µm), akuades, dan iodine diperoleh  dari  laboratorium  Teknologi  Biokimia  ITS; silica gel 70-230 mesh dibeli dari Merck. Karakterisitik dari silica gel adalah sebagai berikut : ukuran pertikel 60-200 µm, pori- pori  60  Å,  pH  7,  kandungan  air  6%,  dan  luas  permukaan spesifik 500 m 2 /g. Komponen standar meliputi squalene dan TG diperoleh dari Laboratorium Teknologi Biokimia ITS.
2.2 Prosedur Penelitian
2.2.1  Ekstraksi  fraksi  lemak  non-polar  ( Non  Polar  Lipid fraction , NPLF) dari Crude oil.
Metode ini dilakukan sebagai alternatif metode saponifikasi.  Metode  ini  telah  dilakukan  pada  penelitian sebelumnya yaitu metode ekstraksi pelarut multi stage 8 kali seperti  yang  telah  dijelaskan  pada  skripsi  Della  et  al  pada tahun 2013 [3].
2.2.2  Pemisahan  dan  Pemurnian Squalene Menggunakan Stirred batch-wise.
Metode stirred batch-wise menggunakan prinsip adsorpsi- desorpsi. Pemisahan  dilakukan  pada  suhu  -6°C  seperti  yang dijelaskan pada skripsi Teguh et al pada tahun 2014 [4]. 2.3 Identifikasi Produk
Kandungan squalene dianalisa  menggunakan  TLC plate (20  x  20cm  x  250  µm).  Analisa  menggunakan  analisa  GC- MS, dengan GC Agilent 6890N dengan autosampler. Kolom kapiler, HP5 5% fenilmetilsiloksan panjang 30 m x 320  m i.d.,  dengan  ketebalan  lapisan  fase  diam  0,25  m,  detektor menggunakan MS, Agilent 6971 inert mass selective detector (Agilent  Tech.  Palo  Alto,  California,  USA).  Suhu  injector diatur  pada  suhu  250 o C.  Suhu  dinaikkan  2 o C/menit  hingga suhu  100 o C  lalu  dinaikkan  5 o C/menit  hingga  suhu  290 o C, dijaga  pada  suhu  290 o C  selama  10  menit.  Gas  yang digunakan  adalah  Helium,  Alphagaz.  Transfer  line  dengan suhu  280 o C,  MS  Quadrupole  150 o C,  MS  Source  230 o C. Volume  injeksi  sebanyak  1  m,  menggunakan  model  inlet split  1:10  dengan  laju  alir  gas  dalam  kolom  sebesar  1,3 ml/menit.

## Identifikasi kandungan Squalene dari Minyak Nyamplung ( calophyllum inophyllum )
Teguh Saputra, Anggita Claratika, Setiyo Gunawan Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknologi Industri, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail : gunawan@chem-eng.its.ac.id
S

## III. URAIAN PENELITIAN
Gambar 1. Hasil analisa GC-MS fraksi squalene
Gambar 1 merupakan hasil analisa sampel fraksi squalene menggunakan  GC-MS.  Dari  hasil  analisa  GC-MS  diketahui bahwa squalene yang  terkandung  dalam  NPLF  telah terisolasi  semua  (recovery  100%).  Fraksi squalene didapatkan  pada Retention  Time 59,43  menit  dengan %  of total area sebesar 21,796%. Melalui perhitungan didapatkan kadar squalene sebesar 1,71%.
Gambar 2. Spektra MS sampel mengandung squalene dan Squalene standard
Dari  gambar  spektra  MS  di  atas,  ion  molekul  (M + )  410 berasal  dari  C 30 H 50 + .  Fragmen  dengan  m/z  395  berasal  dari lepasnya  CH 3 .  Base  peak  (puncak  dasar)  terdapat  pada  m/z 69  yang  berasal  dari  C 5 H 9 + yang  merupakan  suatu  bentuk isopren  yaitu  unit  penyusun  senyawa  terpen.  Fragmen dengan  m/z  273  berasal  dari  lepasnya  C 10 H 17 dari  ion molekul.  Fragmen  m/z  273  terpecah  menjadi  fragmen dengan  nilai  m/z  137  yang  berasal  dari  lepasnya  C 10 H 16 . Fragmen  m/z  55  berasal  dari  lepasnya  CH 2 dari  fragmen dengan m/z 69. Mekanisme fragmentasi squalene diilustrasikan pada Gambar 3 berikut :

## Gambar 3 Mekanisme fragmentasi Squalene
Dari Gambar 2, fragmentasi isolat ( squalene sampel) sama dengan  standar  yang  ada  diinstrumen  ( Library )  sehingga dapat  disimpulkan  komponen  isolat  sama  dengan squalene standard . Berdasarkan referensi identifikasi dengan resonansi  magnetik  inti  (RMI)  yang  telah  dilakukan  oleh Aniek  tahun  2005,  perbedaan  m/z  pada  fragmentasi  isolat merupakan hasil pergeseran kimia atom H yang berasal dari heksana  [5].  Gambaran  umum  ikatan  tersebut  diilustrasikan seperti gambar 4 :
Gambar 4. Struktur hasil interpretasi pergeseran kimia pada isoprena penyusun squalene
Dari  gambar  tersebut  terlihat  masih  ada  heksana  sebagai bahan  untuk  ekstraksi squalene dari  kolom  pada  waktu pemurnian isolat, sehingga perlu diuapkan  lagi. Fragmentasi tertinggi  adalah  m/z  =  69  yaitu  satu  unit  isoprena  (C 5 H 9 ) dimana molekul squalene terdiri dari 6 unit isoprena.
Gambar 5. Struktur Squalene yang terdiri dari 6 molekul isoprena
Gambar 5 merupakan Struktur Squalene yang terdiri dari 6 molekul  isoprena.  Tanda  merah  merupakan  unit  isoprenil penyusun squalene.

## IV. KESIMPULAN
Dari  hasil  identifikasi  yang  telah  dilakukan,  dapat disimpulkan bahwa komponen squalene dapat teridentifikasi, squalene isolat  sama  dengan squalene  standard . Squalene isolat ter-recovery 100% dengan kadar 1,71 %.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Moreda, W., Perez-Camino, M.C., dan Cert, A. 2001. Gas and Liquid Chromatography  pf  Hydrocarbons  in  Edible  Vegetable  Oils .  J. Chromatogr. A 936 : 159-171.
[2]  A.C. Dweck and T. Meadows, T., “Tamanu ,”  International Journal of Cosmetic Science , No. 24 (2002) 1-8.
[3]  Della. Desy. Gunawan, Setiyo. 2013. Isolasi Senyawa Non Polar Dari Minyak  Nyamplung  (Calophyllum  inophyllum) .  Skripsi  Program Sarjana Teknik Kimia ITS : Surabaya.
[4]  Teguh.  Anggi.  Gunawan,  Setiyo.  2014.  Pemisahan  dan  Pemurnian Squalene dari Minyak Nyamplung (Calophyllum inophyllum). Skripsi Program Sarjana Teknik Kimia ITS : Surabaya . [5]  Setiya  Budiatin,  Aniek.  2005. Eluidasi  Struktur  Isolat  Skualena  dari Ikan  Hiu  Cucut  Botol  (Centrophorus  sp) .  Berk.  Penel.  Hayati  :  11 (67-72).