BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 6, Nomor 1 (2024): 53-58 E-ISSN: 2714-8564

## Pengaruh PH dan Suhu terhadap Aktivitas Enzim Protease Isolat LG-37 Asal Sedimen Mangrove Pantai Logending Kebumen
Dhea Nur Khomala Sari, Dyah Fitri Kusharyati * , Dini Ryandini
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, Jalan dr. Soeparno 63 Purwokerto 53122 *Corresponding Author , Email: dyah.kusharyati@unsoed.ac.id
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 12/08/2023 Disetujui  : 20/03/2024

## Abstract
Protease  enzyme  is  enzyme that function  to hydrolyze protein  into peptides  and  amino  acids. Each  enzyme  has  different  optimal  conditions  or  activities.  Enzyme  activity  is  influenced  by various factors including pH and temperature. This research aimed to determine the effect of pH, temperature  and  their  combination  on  protease  activity  of  LG-37  bacterium  isolated  from Logending  Beach  mangrove  sediment.  The  research  method  was  carried  out  experimentally using  a  factorial  Completely  Randomized  Design  (CRD)  with  two  factors.  Each  factors  was repeated three times. The first factor was variations in pH 4, 5, and 6, while the second factor was  variations  in  temperature  45,  50,  and  55 o C.  The  results  showed  that pH  and temperature affected  the  protease  enzyme  activity  of  LG-37  isolate  from  Logending  Beach  mangrove sediment. The highest protease activity was obtained in the combination treatment of pH 6 and temperature of 50 o C with a protease activity unit value of 1.067 U / mL Key  words: Enzyme  Activity,  LG-37  Isolate,  Mangrove  Sediment,  Optimization,  Proteolitic Bacteria

## Abstrak
Enzim protease merupakan enzim yang berfungsi menghidrolisis protein menjadi peptida dan asam amino.  Setiap  enzim  memiliki  kondisi  atau  aktivitas  optimal  berbeda-beda.  Aktivitas  enzim dipengaruhi oleh berbagai faktor diantaranya adalah pH dan suhu. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pH, suhu, dan kombinasi keduanya terhadap aktivitas enzim protease dari isolat  LG-37  asal  sedimen  mangrove  Pantai  Logending.  Metode  penelitian  dilakukan  secara eksperimental  menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  pola  faktorial  dengan  dua  faktor. Masing-masing faktor tersebut dilakukan pengulangan tiga kali. Faktor pertama yakni variasi pH 4,  5,  dan  6,  sedangkan  faktor  kedua  yakni  variasi  suhu  45,  50,  dan  55 o C.  Hasil  penelitian menujukkan bahwa pH dan suhu berpengaruh terhadap aktivitas enzim protease isolat LG-37 asal sedimen  mangrove  Pantai  Logending.  Aktivitas  protease  tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan kombinasi pH 6 dan suhu 50 o C dengan nilai unit aktivitas protease sebesar 1,067 U/mL. Kata kunci: Aktivitas Enzim, Bakteri Proteolitik, Isolat LG-37, Optimasi, Sedimen Mangrove

## PENDAHULUAN
Mangrove  adalah  ekosistem  yang  berperan penting  dalam  melindungi  pantai  dari  pengikisan tanah  oleh  air  laut.  Mangrove  juga  merupakan tempat hidup dari berbagai hewan seperti kepiting, ikan,  kerang,  udang,  dan  sebagainya.  Bakteri sedimen  mangrove  memainkan  peran  penting dalam  melakukan  biodegradasi  terhadap  senyawa yang  masih  bersifat  kompleks  di  ekosistem mangrove  menjadi  senyawa  yang  lebih  sederhana (Hastuti et al ., 2017).
Kandungan bahan organik yang terdapat pada sedimen  kawasan  mangrove  cukup  tinggi.  Hal  ini disebabkan  sedimen  yang  mengandung  banyak mineral bercampur dengan serasah daun mangrove (Yahya et al ., 2014). Tanaman mangrove memiliki kandungan  protein  yang  dapat  didegradasi  oleh bakteri  proteolitik.  Bangkai  hewan  air  yang memiliki  kandungan  protein banyak  terdapat  pada kawasan  sedimentasi  mangrove.  Protein  tersebut kemudian didegradasi oleh bakteri proteolitik yang pada  akhirnya  dapat  meningkatkan  nutrisi  dalam tanah mangrove. Bakteri secara enzimatik
menguraikan serasah melalui peran aktif dari enzim ekstraseluler, salah satunya enzim protease (Hastuti et al ., 2017).
Enzim  protease  merupakan  enzim  yang berfungsi  menghidrolisis  protein  menjadi  peptida dan  asam  amino  (Rezakhani et  al .,  2014).  Enzim protease dari mikroorganisme lebih menguntungkan secara ekonomi karena mikroorganisme memiliki pertumbuhan yang cepat, mudah  ditingkatkan  hasilnya  melalui  rekayasa genetika  dan  pengaturan  kondisi  pertumbuhan, dapat  menghasilkan  enzim  dalam  kondisi  ekstrim, serta mampu tumbuh pada substrat murah (Singh et al .,  2016).  Aktivitas  protease  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor  lingkungan  diantaranya  yakni  pH dan suhu (Sumardi et al ., 2019).
Isolat  bakteri  LG-37  merupakan  koleksi Laboratorium Mikrobiologi yang diketahui bersifat proteolitik dan diisolasi dari lingkungan mangrove pantai  Logending  Kebumen.  Penelitian  tentang optimasi pH dan suhu dari aktivitas enzim protease isolat  LG-37  telah  dilakukan..  Akan  tetapi  belum diketahui  aktivitasnya  pada  variasi  pH  dan  suhu.
Tujuan  penelitian  ini  yaitu  mengetahui  pH,  suhu, serta kombinasi pH dan suhu yang optimal aktivitas enzim  protease  isolat  LG-37  asal  sedimen mangrove Pantai Logending.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Biologi  dan  Laboratorium Riset  Terpadu  Universitas  Jenderal  Soedirman. Penelitian  dilaksanakan  dari  Januari  hingga  Mei 2021.
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  isolat  bakteri  LG-37  (koleksi Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Biologi Unsoed),  media Nutrient  Agar (NA), Skim  Milk Agar (SMA), Nutrient  Broth (NB),  kasein,  0,1  M TCA ( Thrichloroacetic Acid ), Na 2 CO 3 , NaCl 0,9 %,
reagen tetramethyl-p-phenylenediamine dihidrochloride ,  pereaksi Folin  Ciocalteu ,  tirosin , buffer , HCL, dan NaOH.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu Laminar  Air  Flow ,  timbangan  analitik, hotplate sitrrer , shaker incubator , oven, mesin sentrifugasi, spektrofotometer, autoklaf, mikroskop, refrigerator, waterbath ,  microtube,  pembakar  spirtus,  dan  alat gelas yang lazim digunakan untuk kerja mikrobiologi.
Penelitian  dilakukan  secara  eksperimental menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) pola faktorial dengan dua faktor. Faktor pertama adalah pH 4, 5, dan 6, sedangkan faktor kedua adalah suhu 45, 50, dan 55 o C. Total perlakuan yaitu 9 (3 x 3) dan diulang sebanyak tiga kali sehingga terdapat 27 unit percobaan.

## Uji  Konfirmasi  Aktivitas  Protease  secara Kualitatif (Baehaki et al., 2011)
Isolat  LG-37  diinokulasi  sebanyak  1  ose  ke media Skim  Milk  Agar ,  kemudian  diinkubasi  pada suhu  37 o C  selama  24  jam.  Zona  jernih  yang terbentuk  menunjukkan  adanya  aktivitas  bakteri mampu menghidrolisis protein.
Pembuatan Starter Isolat LG-37 (Sumardi et al., 2019)
Isolat LG-37 sebanyak 1 ose diinokulasikan ke dalam  10  mL  media  NB,  kemudian  diinkubasi  di dalam shaker inkubator pada suhu ruang selama 24 jam  dengan  kecepatan  120  rpm.  Setelah  24  jam, suspensi  diambil  sebanyak  1  mL  dan  dimasukkan ke dalam 100 mL media NB.
Pembuatan Kurva Standar dan Kurva Pertumbuhan Bakteri (Rosmania & Yanti, 2020; Sukmawati, 2018)
Starter  isolat  LG-37  yang  berumur  24  jam diambil  3  mL  kemudian  diukur  nilai Optical Density awal menggunakan spektrofotometer pada λ  625  nm.  Kemudian  dilakukan  pengenceran beberapa  kali,  selanjutnya  setiap  pengenceran dilakukan  pengukuran  OD  dan  penanaman  pada medium  NA  dengan  metode  tuang  (pour  plate method).  Inkubasi  dilakukan  pada  suhu  ruang
selama  24  jam.  Penghitungan  jumlah  bakteri dilakukan  dengan  metode Total  Plate  Count pada cawan petri dengan jumlah koloni bakteri 30 – 300 koloni.  Hasil  penghitungan  jumlah  koloni  bakteri dimasukkan ke dalam rumus :
∑ bakteri: 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑟𝑎𝑡𝑎−𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑘𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 𝑃 x 1 𝑃𝑃
Keterangan: ∑ bakteri (CFU/mL)
P   : volume pengenceran PP : volume inokulum (1 mL)
Kurva  standar  bakteri  menghubungkan  nilai  OD pada sumbu x dan jumlah sel (nilai Log jumlah sel) pada  sumbu  y  sehingga  didapatkan  persamaan regresi linier.
Kurva  pertumbuhan  dibuat  dengan  cara starter isolat LG-37 diambil 1 ml setiap 4 jam sekali selama  24  jam.  Kemudian  dilakukan  pengukuran nilai OD menggunakan spektrofotometer. Hasilnya dimasukkan ke dalam persamaan regresi yang telah dihasilkan  dari  kurva  standar,  sehingga  diperoleh data  jumlah  sel.  Kultur  pada  fase  logaritmik digunakan untuk pengujian selanjutnya.
Produksi Enzim Protease dan Pengukuran Berat Kering  Biomassa  Sel  (Zainuddin  et  al.,  2017; Effendi, 2017; Sumardi et al., 2019)
Starter  isolat  LG-37  dengan  umur  8  jam, kepadatan sel 10 8 sel/mL diinokulasikan sebanyak 10  mL  ke  dalam  100  mL  media  NB  yang  telah ditambah 1% kasein. Setelah itu diinkubasi selama 48 jam pada suhu ruang di dalam shaker inkubator dengan kecepatan 120 rpm. Selanjutnya, dilakukan isolasi  enzim  dengan  cara  disentrifugasi  pada kecepatan 6720 G selama 10 menit pada suhu 4 o C. Supernatan  yang  diperoleh  digunakan  untuk pengujian aktivitas protease. Sedangkan natan yang diperoleh digunakan untuk pengukuran berat kering sel akhir.
Natan  ditambah  5  ml  NaCl  0,9  %,  lalu disentrifus pada kecepatan 605 G selama 20 menit. Endapan sel dikeringkan di dalam oven selama 26 jam  pada  suhu  60 o C.  Berat  kering  sel  awal ditentukan  dengan  tahapan  yang  sama  terhadap inokulum awal (10 mL inokulum dengan kepadatan sel 10 8 sel/mL). Berat kering biomassa sel dihitung dengan rumus sebagai berikut:

## 𝑊𝑘 = 𝑊𝑡 − 𝑊0
Keterangan : Wk  =  Berat kering biomassa sel (gram) Wt = Berat sampel dan kertas saring setelah pengeringan
(gram)
W0  =  Berat kertas saring (gram)
Pengaruh  pH  dan  Suhu  terhadap  Aktivitas Protease  secara  Kuantitatif  (Bergmeyer  dan Grassl, 1983; Djajasukma, 1993)
Aktivitas  protease  dilakukan  dengan  terlebih dahulu disiapkan tabung untuk sampel, blanko dan
standar.  Prosedur  pengujian  aktivitas  protease adalah  substrat  kasein  2%  dalam  buffer  (pH  4,  5, dan  6)  dimasukkan  sebanyak  0,5  mL  ke  dalam masing-masing  tabung.  Tabung  sampel,  standar, dan  blanko,  diisi  dengan  masing-masing  0,1  mL enzim, 0,1 mL tirosin (5 mM), dan 0,1 mL akuades. Campuran  reaksi  diinkubasi  pada  perbedaan  suhu 45,  50,  dan  55 o C  selama  10  menit  di  dalam waterbath ,  kemudian  ditambahkan  TCA  sebanyak 0,5  mL  pada  ketiga  tabung,  0,1  mL  enzim  pada tabung  blanko  dan  tabung  standar,  dan  0,1  mL akuades  pada  tabung  sampel.  Larutan  diinkubasi selama  10  menit  pada  suhu  37 o C,  kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 6720 G selama 10 menit  pada  suhu  4 o C.  Selanjutnya  supernatan diambil  0,375  mL  dan  ditambahkan  1,25  mL Na 2 CO 3 0,4  M  serta  0,25  mL  pereaksi  Folin Ciocalteau  dan  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama 20  menit.  Setelah  itu  dilakukan  pengukuran absorbansi  pada  panjang  gelombang  578  nm. Aktivitas  enzim  protease  dihitung  dengan  rumus sebagai berikut:
PU = 𝐴𝑠𝑝−𝐴𝑏𝑙 𝐴𝑠𝑡−𝐴𝑏𝑙 𝑥 1 𝑇
Keterangan:
PU = unit aktivitas protease (unit/mL) Ast = nilai absorbansi standar
Abl = nilai absorbansi blanko Asp = nilai absorbansi sampel T = waktu inkubasi enzim (10 menit)

## Karakterisasi Bakteri Proteolitik
Karakterisasi  isolat  bakteri  proteolitik  LG-37 asal  sedimen  mangrove  meliputi  karakterisasi makromorfologi  yaitu  pengamatan  morfologi koloni bakteri, karakterisasi mikromorfologi meliputi pengujian motilitas dan pewarnaan Gram, dan  karakterisasi  biokimiawi  meliputi  pengujian katalase dan oksidase.

## Analisis Data
Data pengaruh pH dan suhu terhadap aktivitas protease  dianalisis  menggunakan Analysis  of Variance (ANOVA)  dan  dilakukan  uji  lanjut dengan Uji Duncan Multiple Range Test (DMRT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Uji  Konfirmasi  Aktivitas  Protease  secara Kualitatif
Hasil  uji  konfirmasi  isolat  bakteri  LG-37 sebagai bakteri proteolitik memperlihatkan pembentukan  zona  jernih  di  sekeliling  koloni sehingga menunjukkan bahwa isolat LG-37 positif menghasilkan  enzim  protease.  Enzim  protease mampu menghidrolisis protein menjadi peptida dan asam  amino.  Kemampuan  hidrolisis  menyebabkan perubahan  warna  pada  medium  SMA  menjadi jernih atau tidak berwarna (Budiharjo et al ., 2017).
Gambar 1. Hasil uji konfirmasi aktivitas protease pada medium Skim Milk Agar (SMA)

## B. Pengaruh  pH  dan  Suhu  terhadap  Aktivitas Enzim Protease LG-37
Produksi  enzim  protease  oleh  isolat  LG-37 dilakukan selama masa inkubasi 48 jam. Golongan mikroorganisme  yang  merupakan  sumber  enzim protease antara lain Bacillus, Lactobacillus, Seratia dll. Bacillus subtillis menghasilkan aktivitas enzim protease  tertinggi  pada  jam  ke  48  yaitu  sebesar 2,163 U/mL (Efendi et al ., 2017). Waktu produksi optimal  enzim  protease  berbanding  lurus  dengan pertumbuhan bakteri (Efendi et al ., 2017). Aktivitas enzim  protease  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor lingkungan  diantaranya  yakni  suhu  dan  pH (Sumardi et al ., 2019). Enzim protease LG-37 diuji aktivitasnya  pada  variasi  pH  dan  suhu  untuk mengetahui  kondisi  optimum  aktivitasnya.  Hasil Analysis  of  Variance (ANOVA)  pengaruh  pH  dan suhu terhadap aktivitas enzim protease isolat LG-37 menunjukkan  perlakuan  variasi  pH  dan  suhu berpengaruh  sangat  nyata  terhadap  aktivitas protease isolat LG-37 (F hitung > F tabel).

## Pengaruh pH
Berdasarkan hasil Anova, maka dilakukan uji lanjut DMRT (0,05). Hasil uji menunjukkan bahwa pH  yang  berbeda  menghasilkan  aktivitas  enzim protease berbeda, dan perlakuan pH 6 menunjukkan hasil  tertinggi  (notasi  c)  dan  perlakuan  pH  4 menunjukkan  hasil  terendah  (notasi  a)  (Tabel  1.). Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pH  yang  berbeda mempengaruhi  aktivitas  enzim  protease  yang dihasilkan oleh isolat LG-37.
Hasil  penelitian  berbeda  dengan  hasil penelitian Sumardi et al . (2019), bahwa pH optimal aktivitas enzim protease isolat Bacillus sp. (UJ132) adalah pH 5. Hasil penelitian yang dilakukan oleh Anggrahini  (2016),  aktivitas  enzim  protease maksimum  yang  dihasilkan  oleh Lactobacillus plantarum sesuai dengan isolat LG-37 yaitu terjadi pada pH 6. Hal tersebut menandakan bahwa setiap bakteri  memiliki  batas  toleransi  terhadap  kondisi lingkungan  tertentu  (Fahruddin et  al .,  2019). Perbedaan    kondisi  optimal  pH  terhadap  aktivitas suatu enzim dapat disebabkan oleh perbedaan strain bakteri yang digunakan (Agustien, 2010).
Tabel  1. Hasil  Uji  DMRT  0,05  Pengaruh  pH  terhadap Aktivitas  Enzim  Protease  Isolat  LG-37  Asal  Sedimen Mangrove Pantai Logending Kebumen
Perlakuan Aktivitas Enzim Protease (Unit/mL) pH 4 0,36967 a pH 5 0,53967 b pH 6 0,69789 c
Aktivitas  suatu  enzim  bergantung  pada kondisi  pH  nya.  Kondisi  pH  yang  optimal  akan meningkatkan  kecepatan  enzim  protease  dalam mengkatalisis  reaksi  hidrolisis  substrat,  sehingga produk  yang  dihasilkan  akan  semakin  banyak (Bahri et  al .,  2012).  Struktur  tiga  dimensi  enzim pada  pH  optimal  merupakan  struktur  yang  paling kondusif dalam berikatan dengan substrat. Aktivitas enzim  secara  progresif  dapat  hilang  hingga  tidak fungsional  apabila  pH  mengalami  perubahan  dari kondisi optimal.

## Pengaruh Suhu
Hasil  uji  DMRT  0,05  menunjukkan  bahwa suhu  yang  berbeda  menghasilkan  aktivitas  enzim protease  tertinggi  pada  perlakuan  suhu  50 o C  yang ditandai dengan notasi (c) dan berbeda sangat nyata dengan  suhu  45 o C  dan  55 o C.  Aktivitas  enzim terendah dihasilkan pada perlakuan suhu 55 o C yang diikuti  dengan  notasi  (a).  Hal  ini  menunjukkan bahwa suhu yang berbeda mempengaruhi aktivitas enzim  protease  yang  dihasilkan  oleh  isolat  LG-37 (Tabel 2.).
Tabel 2. Hasil Uji DMRT 0,05 Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas  Enzim  Protease  Isolat  LG-37  Asal  Sedimen Mangrove Pantai Logending Kebumen
Perlakuan Aktivitas Enzim Protease (Unit/mL) Suhu 55 o C 0,31344 a Suhu 45 o C 0,43078 b Suhu 50 o C 0,86300 c
Hasil penelitian yang diperoleh sesuai dengan penelitian  Sumardi et  al .  (2019),  bahwa  aktivitas enzim protease dari isolat Bacillus sp. (UJ132) yang diisolasi dari Metapenaeus affinis di kawasan hutan mangrove  Desa  Margasari,  optimal  pada  suhu 50°C. Penelitian Anggrahini (2016), menunjukkan bahwa  aktivitas  enzim  protease  tertinggi  yang dihasilkan  oleh Lactobacillus  plantarum terjadi pada suhu 50 o C.
Energi  kinetik  meningkat  akibat  suhu  yang semakin  tinggi.  Hal  tersebut  menyebabkan intensitas  tumbukan  antara  enzim  dan  substrat semakin  bertambah  (Noviyanti  &  Ardiningsih, 2012). Ketika suhu optimal telah tercapai dan reaksi enzimatis mencapai maksimum, maka pembentukan  kompleks  enzim  dengan  substrat
semakin  mudah  sehingga  produk  yang  dihasilkan semakin  banyak.  Kenaikan  suhu  hingga  melewati suhu optimal dapat menyebabkan enzim mengalami denaturasi  sehingga  menghambat  substrat  untuk berikatan dengan isi aktif enzim dan pada akhirnya dapat  menurunkan  aktivitas  enzim  (Noviyanti  & Ardiningsih, 2012).

## Pengaruh Kombinasi pH dan Suhu
Hasil  uji  DMRT  0,05  menunjukkan  bahwa kombinasi  antara  pH  dan  suhu  yang  berbeda menghasilkan  aktivitas  enzim  protease  tertinggi pada  perlakuan  pH  6  dengan  suhu  50 o C  yang ditandai dengan notasi (f) dan berbeda sangat nyata dengan  semua  perlakuan  yang  diuji.  Aktivitas enzim  terendah  dihasilkan  pada  perlakuan  pH  5 dengan  suhu  55 o C  yang  diikuti  dengan  notasi  (a) dan hasil ini berbeda tidak nyata dengan perlakuan pH 4 dengan suhu 45 o C (Gambar 1.)
Pengaruh  kombinasi  pH  dan  suhu  terhadap aktivitas enzim protease isolat LG-37 menghasilkan aktivitas  tertinggi  pada  kombinasi  antara  pH  6 dengan  suhu  50 o C  dengan  nilai  unit  aktivitas sebesar  1,067  U/mL  (Gambar  1).  Aktivitas  enzim protease  yang  dihasilkan  oleh  isolat  LG-37 tergolong  tinggi  jika  dibandingkan  dengan  hasil penelitian  Rahayu  (2014),  yang  menunjukkan bahwa protease yang dihasilkan oleh isolat TM2A- 2  menunjukkan  aktivitas  tertinggi  pada  kondisi suhu 50 o C dan pH 7 dengan nilai aktivitas sebesar 0,0437  U/mL.  Tingginya  aktivitas  enzim  protease yang dihasilkan oleh isolat LG-37 dapat disebabkan oleh  jumlah  sel  bakteri  yang  tinggi.  Berat  kering biomassa  sel  isolat  LG-37  tergolong  tinggi  yaitu sebesar 0,2 g/100 mL pada waktu akhir inkubasi 48 jam.  Biomassa  sel  pada  inokulum  awal  sebelum produksi adalah sebesar 0,1 g/100 mL. Biomassa sel mengalami  peningkatan  pertumbuhan  (0,1  g/100 mL) selama masa inkubasi dan menghasilkan enzim protease.  Biomassa  sel  LG-37  lebih  tinggi  jika dibandingkan  dengan  isolat  36K  yang  diperoleh dari  sedimen  mangrove  Karimunjawa  Jepara (Setyati et al ., 2015), yaitu sebesar 0,058 g/100 mL pada jam ke 8 dan 0,15 g/100 mL pada jam ke 48 dengan kenaikan biomassa yang lebih rendah pula dibandingkan  isolat  LG-37  yaitu  sebesar  0,092 g/100 mL. Menurut Das et al . (2013), tingginya atau rendahnya  nilai  aktivitas  protease  ditentukan  oleh aktivitas metabolisme sel bakteri dalam melakukan sintesis enzim dan pembelahan sel. Semakin banyak jumlah sel bakteri, maka semakin tinggi pula nilai aktivitas  enzim.  Wijanarka et  al .  (2013), menyatakan  bahwa  meningkatnya  aktivitas  enzim disebabkan  karena  nutrisi  yang  diperlukan  sel bakteri  untuk  melakukan  metabolisme  sel  masih tersedia dalam jumlah besar. Aktivitas enzim akan menurun jika nutrisi dalam medium mulai habis.
Gambar 1. Histogram Pengaruh Kombinasi pH dan Suhu terhadap Aktivitas Enzim Protease Isolat LG-37 Asal Sedimen Mangrove Pantai Logending Kebumen.

## C. Karakterisasi Isolat Bakteri Proteolitik LG- 37
Berdasarkan hasil karakterisasi, isolat bakteri LG-37  termasuk  golongan  bakteri  Gram  positif karena  sel  terwarnai  ungu  dengan  sel  berbentuk batang  (basil),  susunan  sel strepto, bersifat  motil, reaksi  oksidase  positif  yang  menunjukkan  bahwa bakteri  mampu  menghasilkan  enzim  sitokrom oksidase  dan  katalase  negatif  yang  menunjukkan bahwa  bakteri  tidak  mampu  menghasilkan  enzim katalase  dan  tidak  dapat  merubah  hidrogen peroksida  menjadi  oksigen  dan  air.  Berdasarkan pengamatan makromorfologi, koloni bakteri LG-37 berwarna  putih  susu,  permukaan  halus,  berbentuk bulat, tepi koloni rata, ukuran koloni sedang, elevasi cembung,  dan  optik  koloni opaque (Tabel  4). Berdasarkan kesamaan  karakteristik tersebut dengan  yang  diamati  berdasarkan  buku  Bergey’s Manual  of  Systematic  Bacteriology,  diduga  isolat LG-37  termasuk  ke  dalam  Genus  Lactobacillus (Vos et al ., 2009).
Tabel 4. Karakterisasi Isolat LG-37
Karakteristik Interpretasi

## Makromorfologi :
Bentuk koloni Permukaan koloni Ukuran koloni Tepi koloni Elevasi koloni Warna koloni Optik koloni Mikromorfologi : Bulat Halus mengkilap Kecil Rata Cembung Putih susu Opaque Bentuk sel Gram Susunan sel Motilitas Biokimiawi : Katalase Oksidase Batang + Strepto + - +

## SIMPULAN
Nilai  pH  optimal  aktivitas  enzim  protease isolat  LG-37  adalah  pH  6.  Suhu  50 o C  merupakan suhu  optimal  dari  aktivitas  enzim  protease  isolat LG-37.  Nilai  pH  dan  suhu  yang  optimal  dari aktivitas  enzim  protease  isolat  LG-37  adalah kombinasi antara pH 6 dan suhu 50 o C.

## Ucapan Terimakasih
Terima  kasih  kepada  projek  penelitian  yang didanai  oleh  BLU  Unsoed  2020  dengan  skema penelitian Riset Peningkatan Kompetensi.

## DAFTAR REFERENSI
Agustien,  A.,  2010. Protease  Bakteri  Termofilik . Bandung: Universitas Padjajaran Press.
Anggrahini, D. N. D., 2016. Produksi, Pemekatan, Dan  Karakterisasi  Enzim  Protease  Dari Lactobacillus  Plantarum  Sk  (5).  Disertasi. Sekolah  Pascasarjana,  Institut  Pertanian Bogor, Bogor.
Baehaki,  A.,  Rinto  &  Budiman,  A.,  2011.  Isolasi dan  Karakterisasi  Protease  dari  Bakteri Tanah  Rawa  Indralaya,  Sumatera  Selatan. Jurnal  Teknologi  dan  Industri  Pangan, 12(1), pp. 40-45.
Bahri,  S.,  Mirzan,  M.  &  Hasan,  M.,  2012.
Karakterisasi Enzim Amilase dari Kecambah  Biji  Jagung  Ketan  ( Zea  mays Ceratina  l.). Natural  Science:  Journal  of Science and Technology , 1(1), pp. 132-143.
Bergmeyer,  H.  U.  &  Grassl,  F.,  1983. Method  of Enzymatic Analysis. Jerman: VCH (Verlagsgesellschaft).
Budiharjo, R., Sarjono, P. R. & Asy’ari, M., 2017. Pengaruh  Konsentrasi  NaCl  Terhadap Aktivitas  Spesifik  Protease  Ekstraseluler dan  Pertumbuhan  Bakteri  Halofilik  Isolat Bittern  Tambak  Garam  Madura. Jurnal
0,186
0,612 0,311 0,557 0,91 0,152 0,549 1,067 0,477 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 45 50 55 A k tiv itas E n zim P ro tease (U/m L ) Suhu o C pH 4 pH 5 pH 6
Kimia  Sains  dan  Aplikasi , 20(3),  pp.142- 145.
Das,  A.,  Paul,  T.,  Halder,  S.  K.,  Maity,  C., Mohapatra, P. K. D., Pati, B. R. & Mondal, K. C., 2013. Study on Regulation of Growth and  Biosynthesis  of  Cellulolytic  Enzymes from  Newly  Isolated  33  Aspergillus fumigatus ABK9. Journal of Microbiology , 62(1), pp. 31- 43.
Djajasukma,  1993. Isolasi  Enzim  Protease  dari Mucor  javanicus. Prosiding  Seminar  Hasil Litbang SDH.
Efendi, Y., Yusra & Efendi, V. O., 2017. Optimasi Potensi  Bakteri Bacillus  subtilis sebagai Sumber  Enzim  Protease. Jurnal  Akuatika Indonesia , 2(1), pp. 87-94.
Fahruddin,  F.,  Haedar,  N.  H.  N.,  Santoso,  S.  &
Wahyuni,  S.,  2019.  Uji  Kemampuan Tumbuh Isolat Bakteri dari Air dan Sedimen
Sungai  Tallo  Terhadap  Logam  Timbal (Pb). Jurnal Ilmu Alam dan Lingkungan , 10(2), pp. 58-64.
Hastuti,  U.  S.,  Nugraheni,  F. S.  A.  &  Al  Asna,  P.
M., 2017. Identifikasi dan Penentuan Indeks Hidrolisis  Protein  pada  Bakteri  Proteolitik dari  Tanah  Mangrove  di  Margomulyo, Balikpapan. Balikpapan, Biology Education Conference: Biology,
Science, Environmental, and Learning. Noviyanti,  T.  &  Ardiningsih,  P.,  2012.  Pengaruh Temperatur  Terhadap  Aktivitas  Enzim Protease dari Daun Sansakng ( Pycnarrhena cauliflora Diels). Jurnal Kimia
Khatulistiwa , 1(1), pp. 31-34.
Rahayu, S., 2014. Isolasi dan Karakterisasi Protease dari  Bakteri  Sumber  Air  Panas  Tamalantik Mamasa  Sulawesi  Barat. Skripsi ,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Hasanuddin, Makassar.
Rezakhani,  N.,  Parivar,  K.,  Khayati,  M.  & Etemadzade,  S.,  2014.  Immobilization  of Protease  in  Biopolymers  (Mixture  of Alginate-Chitosan). Journal of Paramedical Sciences (JPS), 5(4), pp. 108-113.
Rosmania,  R.  &  Yanti,  F.,  2020.  Perhitungan
Jumlah
Bakteri
di Laboratorium Mikrobiologi Menggunakan Pengembangan Metode Spektrofotometri. Jurnal Penelitian Sains , 22(2), pp. 76-86.
Setyati, W. A., Martani, E. & Zainuddin, M., 2015. Kinetika Pertumbuhan dan Aktivitas
Protease Isolat 36k dari Sedimen Ekosistem
Mangrove,
Karimunjawa, Jepara. Indonesian  Journal  of  Marine Sciences  /  Ilmu  Kelautan , 20(3),  pp.  163- 169.
Singh, R., Anshumali, M., Manoj, K. & Praveen, K.
M., 2016. Microbial Proteases in Commercial Applications. Journal of Pharmaceutical,  Chemical,  and  Biological Sciences, 4(3), pp. 365-374.
Sukmawati,  2018.  Total  Microbial  Plates  on  Beef and Beef Offal. Bioscience , 2(1), 22– 28.
Sumardi, Farisi, S., Ekowati, C. N. & Diana, M. S., 2019.  Aktivitas  dan  Karakterisasi  Enzim Protease  Isolat Bacillus sp.  (UJ132)  Secara Kualitatif  dan  Kuantitatif. Jurnal  Riset Akuakultur, 14(3), pp. 193-199.
Vos, P. D., Garrity, G. M., Jones, D., Krieg, N. R.,
Ludwig, W., Rainey, F. A., Schleifer, K. H. & Whitman, W. B., 2009, Bergey’s Manual of  Systematic  Bacteriology.  New  York: Springer Science-Business Media.
Wijanarka,  W.,  Soetarto,  E.  S.,  Dewi,  K.  & Indrianto,  A.,  2013.  Kinetika  Pertumbuhan dan  Produksi  Inulinase  Fusan  F7. Bioma: Berkala Ilmiah Biologi , 15(2), pp. 53-57.
Yahya,  Y.,  Nusyam,  H.,  Risjani,  Y.  &  Soemarno, S.,  2014.  Karakteristik  Bakteri  di  Perairan Mangrove  Pesisir  Kraton  Pasuruan. Ilmu Kelautan, 19(1), pp. 35-42.
Zainuddin, M., Setyati, W, A. & Renta, P. P., 2017.
Zona  Hidrolisis  dan  Pertumbuhan  Bakteri Proteolitik dari Sedimen Ekosistem Mangrov e Rhizophora mucronata Telukawur-Jepara. Jurnal Sumberdaya Perairan . 11(2), pp. 31-35.