## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL BIJI PEPAYA
(Carica papaya L.) TERHADAP BAKTERI Pseudomonas aeruginosa

## DAN Staphylococcus aureus
Gabriella M. J. Torar 1) , Widya Astuty Lolo 1) , Gayatri Citraningtyas 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Some of Indonesian plants perform the efficacy as a traditional medicine, which can be benefitted to treat diseases and one of them was papaya which known to have antibacterial properties. This study aims  to  determine  the  antibacterial  activity  with  different  concentrations  of  ethanol  extract  of  papaya seeds  (Carica  papaya  L.)  against  Pseudomonas  aeruginosa  and  Staphylococcus  aureus.  The  extraction was done by maceration method using 95% of ethanol. Antibacterial activity test was performing using well agar diffusion method (Kirby and Bauer diffusion modified). The results were statistically analyzed using  one-way  ANOVA.  Anova  Data  show  that  extract  with  the  concentrations  of  20%,  40%,  60%  and 80%  had  inhibits  the  growth  of  test  bacteria.  The  results  showed  that  the  antibacterial  activity  of  each series  of  the  concentration  of  ethanol  extract  of  papaya  seeds  (Carica  papaya  L.)  exhibit  antibacterial activity in the middle category of inhibition against Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus.
Keywords : Antibacterial, Papaya, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus.

## ABSTRAK
Beberapa tanaman  di  Indonesia  memiliki  khasiat sebagai  obat tradisional  yang  dapat  digunakan untuk  mengobati  penyakit  yang  salah  satunya  ialah  pepaya  yang  diketahui  memiliki  khasiat  sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri dengan perbedaan konsentrasi ekstrak  etanol  biji  pepaya  ( Carica  papaya L.)  terhadap Pseudomonas  aeruginosa dan Staphylococcus aureus .  Metode  ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  95%.  Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi agar (difusi Kirby dan Bauer yang dimodifikasi) dengan cara sumuran. Hasil uji aktivitas antibakteri dianalisa dengan metode analisa varians satu arah ( one way anova ). Data Anova menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak 20%, 40%, 60% dan 80% telah memberikan aktivitas menghambat pertumbuhan bakteri uji. Hasil pengujian aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa setiap seri konsentrasi ekstrak etanol biji pepaya ( Carica papaya L.) memiliki aktivitas antibakteri dengan kategori daya hambat sedang terhadap Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus .
Kata kunci : Antibakteri, Pepaya, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus.

## PENDAHULUAN
Kesehatan  adalah  keadaan  sejahtera  dari badan, jiwa, dan sosial yang memungkinkan setiap  orang  hidup  produktif  secara  sosial dan  ekonomis,  dimana  saat  ini  tingkat kesehatan  menghadapi  tantangan  yang sangat berat. Hal ini disebabkan oleh tingkat biaya  kesehatan  yang  cenderung  meningkat (Nurwidodo,  2006).  Salah  satu  upaya  untuk mencapai derajat kesehatan masyarakat yang optimal adalah melalui pengobatan tradisional (Zulkifli, 2004).
Beberapa tanaman di Indonesia memiliki khasiat  sebagai  obat  tradisional  yang  dapat digunakan  untuk  mengobati  penyakit,  yang salah satunya ialah pepaya. Pepaya merupakan  buah  yang  banyak  tumbuh  di daerah  tropis  seperti  Indonesia.  Seluruh bagian pepaya mulai dari akar sampai ujung daunnya,  termasuk  bunga,  buah  dan  bijinya memiliki  nilai  medis  yang  tinggi  (Tietze, 2002).
Biji  pepaya  diketahui  mengandung berbagai senyawa seperti tokoferol, terpenoid, flavonoid, alkaloid seperti karpain,  dan  berbagai  enzim  seperti  enzim papain  dan  lisozim.  Kandungan  terpenoid, karpain,  dan  flavonoid  dalam  biji  pepaya telah  diteliti  memiliki  aktivitas  antibakteri yang  dapat  membunuh  bakteri  dengan merusak  integritas  membran  sel  bakteri  itu (Martiasih et al., 2012).
Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh Okoye  (2011),  telah  dilakukan  uji  aktivitas antibakteri dan antijamur dari ekstrak etanol dan  ekstrak  air  biji  pepaya.  Diperoleh  hasil bahwa  biji  pepaya  muda  yang  berwarna putih memiliki aktivitas antibakteri terhadap
S.aureus,  P.aeruginosa , S.typhi,  E.coli dan anti  jamur  terhadap A.niger,  P.notatum, F.solani,  C.albican .  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri ekstrak  etanol  biji  buah  pepaya  ( Carica papaya L.)  pada  konsentrasi  20%,  40%, 60%  dan  80%  terhadap Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus .

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi  Farmasi  dan  Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia  Program  Studi Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi.  Waktu  penelitian  dilaksanakan pada bulan Desember 2015 – Agustus 2016.
Alat-alat yang digunakan ialah : erlenmeyer,  gelas  ukur,  gelas  kimia,  tabung reksi,  rak  tabung,  pipet  tetes,  penangas  air, blender,  ayakan mesh 200,  kaca  arloji, timbangan  analitik,  labu  ekstraksi,  batang pengaduk, stirrer ,  cawan  petri,  rotary evaporator,  jarum  ose,  pinset,  inkubator, laminar  air  flow ,  termometer,  pencadang, autoklaf, mikropipet, mistar berskala, kertas saring  no.1,  kertas  label,  spidol,  aluminium foil dan alat fotografi.
Bahan-bahan  yang  digunakan  ialah  : biji  pepaya  ( Carica  papaya L.)  tua,  biakan bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa ,  aquades  steril, etanol  95%,  tablet  ciprofloxacin  500  mg, Nutrient agar ( Oxoid ), H 2 SO 4 , BaCl 2 .2H 2 O, NaCl 0.9%.

## Persiapan Sampel
Biji  pepaya  yang  telah  dikumpulkan dibersihkan  dari  kulit  arinya,  selanjutnya
dicuci di  bawah air mengalir sampai  bersih, ditiriskan,  lalu  dikeringkan  dengan  cara diangin-anginkan. Sampel yang telah kering diserbukkan  dengan  menggunakan blender, serbuk yang dihasilkan diayak menggunakan ayakan  mesh  200  hingga  diperoleh  serbuk yang halus dan seragam. Hasilnya dimasukkan  ke  dalam  wadah  gelas  tertutup (Gunawan,2004).

## Pembuatan Ekstrak
Pembuatan  ekstrak  dilakukan  dengan cara  maserasi  yaitu  sebanyak  85  gram serbuk simplisia biji buah pepaya dimasukkan  ke  dalam  gelas  beker  lalu direndam dalam pelarut etanol 95% sebanyak  500  ml  kemudian  wadah  ditutup dengan aluminium foil dan dibiarkan selama 4  hari  sambil  sesekali  diaduk,  lalu  disaring dengan kertas saring sehingga menghasilkan filtrat dan residu. Residu yang ada kemudian direndam  lagi  (remaserasi)  dengan  etanol 95%  sebanyak  250  ml,  selanjutnya  wadah ditutup dengan aluminium foil dan dibiarkan selama  2  hari  sambil  sesekali  diaduk. Setelah  2  hari,  sampel  disaring  sehingga menghasilkan filtrat dan residu. Filtrat 1 dan filtrat  2  dicampurkan  menjadi  satu  lalu dievaporasi menggunakan rotary evaporator, lalu  diuapkan  menggunakan  waterbath sehingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Ekstrak kental  yang  telah  dihasilkan  ditimbang  dan disimpan  dalam  wadah  gelas  tertutup sebelum digunakan untuk pengujian.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  disterilkan  terlebih  dahulu dengan  cara  alat-alat  gelas  dan  media disterilkan  dalam  autoklaf  pada  suhu  121 0 C
selama 15 menit sedangkan untuk kawat ose dan  pinset  disterilkan  dengan  cara  dibakar dengan  pembakaran  di  atas  api  langsung (Lay,1994).

## Pembuatan Larutan Kontrol Negatif
Larutan  Kontrol  Negatif  dibuat  dari aquades steril sebanyak 50 ml.

## Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Kontrol  positif  dibuat  dari  sediaan  obat tablet  Ciprofloxacin  500  mg.  Satu  tablet Ciprofloxacin  digerus,  lalu  ditimbang  dan disetarakan  dengan  500  mg.  Kemudian serbuk halus Ciprofloxacin dilarutkan dalam aquades  steril  untuk  memperoleh  larutan Ciprofloxacin 5 μg/50 μl.

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat  larutan  uji  20%,  40%,  60%  dan 80% b/v dengan cara ditimbang 0,2 g; 0,4 g; 0,6 g;  dan 0,8 g  ekstrak etanol biji pepaya kemudian masing-masing ditambahkan dalam aquades hingga volume 1 ml.

## Pembuatan Media
a. Media Agar Miring
Nutrient  agar sebanyak  0,56  g  dilarutkan dalam  20  mL  aquades  (28g/1000mL) menggunakan  erlenmeyer.  Setelah  itu, dihomogenkan dengan stirrer diatas penangas  air  sampai  mendidih.  Sebanyak 5  ml  dituangkan  masing-masing  pada  2 tabung  reaksi  steril  dan  ditutup  dengan aluminium foil. Media tersebut disterilkan dalam  autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama 15  menit,  kemudian  dibiarkan  pada  suhu ruangan  selama  ±  30  menit  sampai  media memadat  pada  kemiringan  ±  30 0 .  Media
agar  miring  digunakan  untuk  inokulasi bakteri.
b.Media Dasar dan Media Pembenihan
Nutrient  agar (NA)  sebanyak  7  g dilarutkan dalam 250 ml aquades (28g/1000ml)  menggunakan  erlenmeyer. Sedangkan  media  pembenihan  dibuat dengan  cara  ditimbang  7  g  dilarutkan dalam  250  ml  aquades  (28g/1000ml) menggunakan  erlenmeyer.  Setelah  itu, masing-masing media dihomogenkan dengan stirer diatas  penangas  air  sampai mendidih. Media-media yang sudah homogen  ini  disterilkan  dalam  autoklaf pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit, kemudian  didinginkan  sampai  suhu  ±  45- 50 0 C. Media dasar dan media pembenihan digunakan dalam pembuatan media pengujian  sebagai  lapisan  dasar  dan lapisan kedua.

## Inokulasi Bakteri pada Media Agar Miring
Bakteri  uji  diambil  dengan  jarum  ose steril,  lalu  ditanamkan  pada  media  agar miring  dengan  cara  menggores.  Selanjutnya diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  37 0 C selama  24  jam.  Perlakuan  yang  sama dilakukan pada setiap jenis bakteri uji.
Pembuatan  Standar  Kekeruhan  Larutan (larutan Mc.Farland )
Diambil  sebanyak  9,5  ml  larutan  H 2 SO 4 1%  lalu  dicampurkan  dengan  0,5  ml BaCl 2. 2H 2 O1,175%  dalam  tabung  reaksi. Selanjutnya larutan dikocok sampai terbentuk  larutan  keruh.  Kekeruhan  ini dipakai  sebagai  standar  kekeruhan  bakteri (Lay, 1994).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  yang  telah  diinokulasi diambil  dengan  kawat  ose  steril  lalu disuspensikan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi  2  ml  larutan  NaCl  0,9%  sehingga diperoleh  kekeruhan  yang  sama  dengan standar  kekeruhan  larutan  Mc.Farland. Perlakuan  yang  sama  dilakukan  pada  setiap jenis bakteri uji (Djide et al., 2008).

## Pembuatan Media Pengujian
Lapisan dasar dibuat dengan menuangkan  masing-masing  65  ml  NA  ke dalam  enam  cawan  petri,lalu  dibiarkan sampai  memadat.  Setelah  memadat,  pada permukaan  lapisan  dasar  diletakkan  6 pencadang baja yang diatur sedemikian rupa jaraknya  agar  daerah  pengamatan  tidak saling  bertumpuh.  Selanjutnya  suspensi bakteri  dicampurkan  ke  dalam  media pembenihan  NA.  Setelah  itu,  dituangkan  75 ml campuran suspensi dan media pembenihan  tersebut  ke  dalam  tiap  cawan petri  yang  diletakkan  pencadang  sebagai lapisan kedua. Selanjutnya, pencadang diangkat  secara  aseptik  dari  cawan  petri, sehingga  akhirnya  terbentuklah  sumur- sumur  yang  akan  digunakan  dalam  uji antibakteri.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Larutan  uji  ekstrak  etanol  biji  pepaya dengan  berbagai  konsentrasi  (  20%,  40%, 60%  dan  80%);  aquades  steril  sebagai kontrol negatif; larutan Ciprofloxacin 5μg/50μl  sebagai  kontrol  positif,  masing- masing diteteskan pada sumur yang berbeda sebanyak  50  μl.  Kemudian  cawan  petri diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  37 0 C selama 1x24 jam.

## Pengamatan dan Pengukuran
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24  jam masa  inkubasi.  Diamati  zona  hambat/zona bening  yang  terbentuk  disekitar  lubang kemudian  diukur  diameter  zona  hambat secara  horizontal  dan  vertikal.  Diameter zona hambat diukur dalam satuan milimeter (mm)  menggunakan  mistar  berskala  dengan cara diameter keseluruhan dikurangi diameter  sumuran  7  mm.  Kemudian diameter zona hambat tersebut dikategorikan kekuatan  daya  antibakterinya  berdasarkan penggolongan Davis dan Stout (1971).

## Analisa Data
Data  hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri ekstrak etanol biji pepaya ( Carica papaya L)
terhadap penghambatan bakteri Pseudomonas aeruginosa dan
Staphylococcus  aureus dianalisa  secara statistik  menggunakan  analisa  varians  satu arah  ( One  Way  Anova )  dengan  program Statistical  Product  Service  Solution dengan taraf kepercayaan 95% atau α=0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Ekstraksi
Serbuk biji pepaya diekstraksi menggunakan metode  maserasi  dengan  menggunakan pelarut  etanol  95%  dan  diperoleh  ekstrak kental sebanyak 4 g.
Tabel  1. Hasil Pengukuran Diameter  Zona Hambat  Ekstrak Etanol  Biji Pepaya  ( Carica papaya L.) terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa.
Perlakuan Diameter Zona Hambat (mm) Rata-rata I II III Kontrol (-) 0,00 0,00 0,00 0,00 Kontrol (+) 17,50 16,50 16,00 17,00 P1 5,00 4,50 4,00 5,00 P2 6,50 6,00 5,50 6,00 P3 6,00 6,50 6,00 6,00 P4 6,00 6,50 6,00 6,00
Tabel  2.  Hasil Pengukuran Diameter  Zona Hambat  Ekstrak Etanol  Biji  Pepaya  ( Carica papaya L.) terhadap bakteri Staphylococcus aureus.

## Pembahasan
Tahap  awal  proses  ekstraksi  ialah sampel  biji  pepaya  dibersihkan  dibawah  air mengalir dengan tujuan untuk
membersihkan sampel dari sisa-sisa pengotor dan melepaskan kulit ari/kotiledon yang melekat pada biji pepaya agar senyawa yang  didapatkan  pada  proses  ekstraksi merupakan senyawa murni yang terkandung dalam  biji  pepaya  dan  bukan  dari  kulit arinya. Kemudian sampel dihaluskan hingga menjadi  simplisia  yang  halus  dan  seragam, karena  semakin  kecil  ukuran  partikel simplisia maka semakin luas pula permukaan  simplisia  tersebut,  sehingga semakin  baik  pula  pelarut  menarik  senyawa aktif yang ada pada sampel (Gunawan,2004).  Sampel  lalu  diekstraksi dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etanol  95%.  Setelah  diekstraksi, sampel  lalu  diuapkan  dengan  tujuan  agar pelarut  yang  digunakan  tidak  tersisa  pada ekstrak  sehingga yang ada  hanyalah senyawa-senyawa  berkhasiat  atau  zat  aktif yang ada pada sampel dalam bentuk ekstrak
kental  yang  akan  digunakan  dalam  proses pengujian antibakteri (Sastrohamidjojo, 2005).
Pengujian antibakteri dilakukan dengan  metode  difusi  agar dengan  media Nutrient Agar (NA) . Sampel yang digunakan ialah  ekstrak  kental  biji  pepaya  yang  dibuat dalam  beberapa  seri  konsentrasi  yaitu  20%, 40%,  60%  dan  80  %,  dengan  tujuan  untuk mengetahui  apakah  ada  perbedaan  ukuran diameter  zona  hambat  yang  akan  terbentuk. Sebagai  kontrol  positif  digunakan  larutan ciprofloxacin 5µg/50µL, antibiotik ciprofloxacin  digunakan  karena  termasuk dalam  antibiotik  golongan  kuinolon  yang berspektrum luas dan tidak resisten terhadap bakteri  uji  yang  digunakan,  sebagai  kontrol negatif digunakan aquades steril (Ganiswarna,1995).
Data  pada  tabel  kekuatan  daya antibakteri  menunjukkan  bahwa  masing- masing  konsentrasi  ekstrak  etanol  biji pepaya  dapat  menghambat  pertumbuhan
Perlakuan Diameter Zona Hambat (mm) Rata-rata I II III Kontrol (-) 0,00 0,00 0,00 0,00 Kontrol (+) 16,00 17,50 17,00 17,00 P1 5,50 6,00 5,50 6,00 P2 5,50 6,50 6,00 6,00 P3 7,00 6,50 6,00 6,00 P4 6,00 7,50 8,00 7,00
bakteri  uji Pseudomonas  aeruginosa dan Staphylococcus  aureus ,  yang  dimana  hasil pengukuran diameter zona hambat menunjukkan angka 5,00 mm, 6,00 mm dan 7,00  mm  yang  tergolong  dalam  kategori sedang  sesuai  dengan  penggolongan  Davis dan Stout (1971).
Pada  proses  pengujian  aktivitas antibakteri  didapatkan  hasil  bahwa  efek antibakteri  yang  terlihat  paling  baik  ada pada  konsentrasi  tertinggi  yaitu  pada konsentrasi  80%,  dimana  pada  konsentrasi ini  luas  zona  hambat  ekstrak  etanol  biji pepaya  terhadap  bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus ialah 7,00 mm. Bahkan pada konsentrasi terendah pun  (20%)  ekstrak  etanol  biji  pepaya  masih dapat  menghambat  pertumbuhan  kedua bakteri.
Perbedaan  luas  zona  hambat  pada setiap seri konsentrasi ekstrak menunjukkan bahwa  masing-masing  konsentrasi  ekstrak memiliki  kemampuan  antibakteri  yang berbeda-beda, hal ini kemungkinan ditimbulkan  oleh  resistensi  dari  bakteri terhadap  substansi  bioaktif  dalam  hal  ini ialah  ekstrak  biji  pepaya,  kadar  substansi aktif  serta  jumlah  inokulum  bakteri  atau kepadatan  bakteri  uji  dalam  media.  Selain itu  adanya  ekstrak  yang  kurang  efektif dalam  menghambat  bakteri  karena  difusi bahan  aktif  pada  media  yang  berlangsung lambat dan rendahnya konsentrasi kandungan  zat  aktif,  sehingga  ekstrak tersebut  tidak  dapat  menghambat  bakteri secara optimal  (Cappucino et al .,1978).
Luas zona hambat ekstrak etanol biji pepaya  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus lebih  besar  dibandingkan  dengan
luas zona hambat pada bakteri Pseudomonas aeruginosa . Hal ini berarti aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  biji  pepaya  lebih peka  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Gram positif ( Staphylococcus aureus )  dibandingkan  dengan  bakteri  Gram negatif  ( Pseudomonas  aeruginosa ).  Hal  ini dikarenakan  adanya  perbedaan  struktur dinding  sel  dari  bakteri  Gram  positif  dan Gram negatif. Bakteri Gram positif mengandung  peptidoglikan  yang  lebih  tebal daripada bakteri
Gram negatif. Peptidoglikan  merupakan  lapisan  pada dinding  sel  bakteri  yang  bersifat  polar sehingga  ekstrak  etanol  biji  pepaya  yang juga  bersifat  polar  lebih  mudah  menembus dinding  sel  bakteri  Gram  positif,  selain  itu bakteri  Gram  negatif  juga  memiliki  dinding sel yang banyak mengandung lipopolisakarida (LPS) yang bersifat nonpolar sehingga ekstrak etanol biji pepaya yang  bersifat  polar  lebih  sulit  menembus dinding  sel  bakteri  Gram  negatif.  Oleh karena  itu  efektivitas  antibakteri  tampak lebih  besar  pada  bakteri  Gram  positif daripada bakteri Gram negatif.
Biji pepaya memiliki aktivitas antibakteri  karena  mengandung  alkaloid (karpain) yang mampu menghambat pertumbuhan  bakteri.  Karpain  merupakan alkaloid  bercincin  laktonat  dengan  7 kelompok  rantai  metilen  sehingga  ampuh untuk menghambat kinerja beberapa mikroorganisme.  Karpain  dapat  mencerna protein  mikroorganisme  dan  mengubahnya menjadi  senyawa  turunan  bernama  pepton. Selain alkaloid biji pepaya juga mengandung  senyawa  lain  yaitu  flavonoid (Jaime,2007).  Berdasarkan  penelitian  yang dilakukan  Maria et  al., 2012,  biji  pepaya
mengandung  senyawa  triterpenoid  aldehida yang  mempunyai  potensi  antibakteri.  Selain itu juga mengandung minyak yang diketahui memiliki  asam-asam  lemak  seperti  asam oleat, asam palmitat, asam linoleat dan asam stearat dalam jumlah yang relatif sedikit.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol  biji  pepaya  (Carica  papaya  L.) memiliki  aktivitas  antibakteri  pada  setiap seri  konsentrasi  ekstrak  yaitu  20%,  40%, 60%  dan  80%  dengan  kekuatan  tergolong sedang  terhadap  bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus .

## SARAN
Perlu dilakukan uji pra-klinis dan uji toksisitas ekstrak etanol biji pepaya (Carica papaya L. ) untuk  mengetahui  dosis  yang tepat dan aman dalam penggunaannya.

## DAFTAR PUSTAKA
Cappucino,  J.G.,  Sherman,  N.  1978.
Microbiology  A  Laboratory  Manual . Rockland  Community  Collage,  New York.
Davis,  W.W.,Stout,T.R.  1971. Disc  Plate Methods  of  Microbiological  Antibiotic Assay.Microbiology. 22(4).Halaman
659-665. Djide, Sartini. 2008. Dasar-dasar Mikrobiologi Farmasi . Lephas,
Makassar.
Ganiswarna,  G.S.1995. Farmakologi  dan Terapi.Edisi  IV. Penerbit  UI,  Jakarta. Halaman 517-518, 571-573, 651-656.
Gunawan, D.,Mulyani,
S. 2004.
Farmakognosi . Swadaya, Jakarta.
Jaime,  A.2007.  Papaya  ( Carica  papaya L.)
Biology  and  Biotechnology, Global Science Book, (online), http://www.globalsciencebook.info [1
7 Januari 2013].
Lay, B.W.1994. Analisis Mikroba di
Laboratorium  Edisi  1 .Raja  Grafindo
Persada, Jakarta.
Martiasih  Maria,  Boy  Rahardjo  Sidharta,  P.
Kianto Atmodjo.2012.Aktivitas Antibakteri Ekstrak Biji Pepaya terhadap Escherichia coli dan Streptococcus pyogenes . Jurnal Ilmiah Mahasiswa Fakultas Teknobiologi Universitas Atma Jaya , Yogyakarta.
Nurwidodo.  2006.  Pencegahan  dan  Promosi Kesehatan  Secara  Tradisonal. Jurnal Humanity . 1(2): 96-105. Okoye, E.I.2011. Preliminary Phytochemical Analysis and Antimicrobial Activity of Seed Of Carica  Papaya , Journal  Of  Basic
Physical Research , Vol.2 No.1, (online), http://www.jbasicphyress-
unizik.org [13 Maret 2012].
Sastrohamidjojo,H.2005. Kimia  Dasar  edisi 2 .UGM Press, Yogyakarta.
Tietze  HW.2002. Terapi  Pepaya  :  Sebuah
Bentuk  Terapi  Makanan  yang  Aman dan Murah . Cetakan Pertama.
PT.Prestasi Pustaka Raya, Jakarta.
Zulkifli. 2004. Pengobatan Tradisional
Sebagai Pengobatan Alternatif harus Dilestarikan. Karya Ilmiah . FKM USU, Medan