Vol 21, No. 1, November 2023 pp. 62-66 https://jurnal.kimia.fmipa.unmul.ac.id/index.php/JKM P-ISSN 1693-5616 E-ISSN 2476-9258

## Anti-Inflammatory Effect Of Extract And Fractions Of Gaharu (Aquilaria malaccensis Lamk.) Leaves
Nur Hidayah a , Ritbey Ruga a , Chairul Saleh a *
a Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mulawarman, Indonesia * Corresponding Author: chairulsaleh3103@gmail.com

## ABSTRACT
Anti-inflammatory activity test of extract and fraction of gaharu leaf (Aquilaria malaccensis Lamk.) against protein denaturation inhibition in vitro has been carried  out.  This  study  aims  to  determine  the  percent  inhibition  of  protein denaturation  and  the  strength  of  anti-inflammatory  activity  of  the concentrated  methanol  extract,  ethyl  acetate  fraction,  and  methanol-water fraction of gaharu leaves (Aquilaria malaccensis Lamk.). BSA (Bovine serum albumin) is used as the protein to be heated. . Diclofenac sodium was used as positive control and the negative control used the appropriate solvent. Based on  phytochemical  screening  test,  methanol  extracts  are  known  to  contain secondary  metabolites  including  flavonoids,  triterpenoids,  steroids  and phenolics.  The  n-hexane  fraction  contains  triterpenoid  and  steroid compounds.  The  ethyl  acetate  fraction  contains  flavonoid,  triterpenoid, steroid and phenolic compounds while the methanol-water fraction contains flavonoid,  triterpenoid  and  phenolic  compounds.  The  results  of  the  anti- inflammatory activity test of crude extract methanol and ethyl acetate fraction showed  moderate  antiinflammatory  potential  with  IC 50 values  of  181.58, 168.87  ppm  respectively,  the  methanol-water  fraction  has  strong  anti- inflammatory potential with IC 50 value of 60.84 ppm.
This is an open-access article under the CC – BY-SA license.
Article History Received 2023-06-16 Revised 2023-10-21 Accepted 2023-11-02

## Keywords
Myrmecodia pendens- merr & perry Rubiaceae
Antioxidant Toxicities
HPLC TLC

## 1. Pendahuluan
Indonesia  merupakan  negara  yang  memiliki  berbagai  jenis  spesies  tumbuhan  yang mempunyai  efek penyembuhan sehingga  dapat  digunakan dalam pengobatan  berbagai jenis penyakit dibandingkan dengan obat sintetik yang sebagian besar memiliki efek samping yang cukup berbahaya [1]. Jenis tanaman yang dibudidayakan untuk keperluan obat-obatan salah satunya tanaman gaharu.
Gaharu merupakan tanaman yang memiliki resin berbau khas dan tersebar cukup luas di Indonesia sehingga mudah  untuk  ditemui selain itu  gaharu  telah  dibuktikan secara  klinis  di bidang  kesehatan  memiliki  manfaat  sebagai  obat  antiasmatik,  mengurangi  nyeri  sendi  dan tulang, membantu mengurangi sakit maag dan gangguan lainnya [2].
Daun  gaharu  jenis Aquilaria  malaccensis Lamk.  mempunyai  aktivitas  anti  inflamasi  pada senyawa metabolit sekunder golongan flavonoid glikosida. Selain itu, berdasarkan penelitian dari  senyawa  metabolit  sekunder  golongan  fenolik  dan  tanin  diketahui  memiliki  aktivitas antiinflamasi yang baik [3,4].
Berdasarkan uraian di atas, perlu dilakukan penelitian terhadap aktivitas antiinflamasi pada ekstrak  pekat  metanol,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  matanol-air  daun  gaharu  secara in
vitro terhadap  penghambat  denaturasi  protein  menggunakan  spektrofotometer ultraviolet- visible (UV-Vis).  Terdapat  dua  tahap  dalam  penelitian  yaitu  proses  ekstraksi  dan  fraksinasi menggunakan  pelarut  organik  agar  memperoleh  ekstrak  kasar  dan  fraksi-fraksi  dari  daun gaharu, pada tahap kedua silakukan uji aktivitas antiinflamasi pada ekstrak dan fraksi daun gaharu.

## 2. Metodologi

## 2.1. Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi labu ukur, corong pisah, corong kaca, evaporator, pipet tetes, pipet volume, tabung reaksi, penangas air, pipet mikro, vortex, gelas kimia, Spektrofotometer UV-Vis Evolution 201 Thermo Scientific, neraca analitik merek Kern..
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi teknis dan pa seperti akuades, metanol,  etil  asetat,  n-heksana,  daun  gaharu  (A.  malaccensis),  natrium  diklofenak,  H2SO4, HCl(p),  FeCl3  1%,  Bovine  Serum  Albumin  (BSA),  Tris  Buffer  Saline  (TBS),  pereaksi Dragendroff,,NaOH, serbuk Mg.

## 2.2. Metode

## Maserasi dan Ekstraksi
Sampel  daun  gaharu  dideterminasi  di  laboratoium  Anatomi    dan  Sistematika  Tumbuhan FMIPA UNMUL dihaluskan kemudian, dimaserasi  selama 3 x 24 jam dengan 5 liter metanol, dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak pekat metanol.

## Fraksinasi
Metode  fraksinasi  yang  digunakan  berdasarkan  perbedaan  kepolaran.  Ekstrak  pekat metanol  disuspensi  dengan  akuades,  lalu  difraksinasi  dengann-heksana.  Pelarut  n-heksana ditambahkan  secara  berulang-ulang  hingga  fraksi  n-heksana  bening  kemudian  dipekatkan dengan rotary evaporator dan didapatkan hasil ekstrak fraksi n-heksana.
Setelah  didapatkan  fraksi  n-heksana,  fraksi  metanol-air  kembali  difraksinasi  dengan  etil asetat secara berulang, kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator dan diperoleh fraksi etil asetat dan fraksi metanol-air, lalu dilakukan uji fitokimia setiap fraksi.

## Uji fitokimia
Uji  flavonoid  menggunakan  metode  Wilstater,  uji  steroid/triterpenoid  menggunakan pereaksi  Liebermann-Burchard,  uji  fenolik  menggunakan  pereaksi  FeCl 3 1%,  uji  alkaloid menggunakan pereaksi Dragendroff, kemudian uji saponin dilakukan dengan mengocok sampel dalam akuades lalu ditambahkan HCl.

## Pengujian Aktivitas Antiinflamasi
a) Pembuatan Larutan BSA dalam TBS
Padatan BSA sebanyak 0,2 gram dilarutkan dengan sedikit akuades.dalam labu takar 100 ml. kemudian ditambahkan  larutan TBS hingga tanda tera [5].
b) Pembuatan kontrol negatif
Sebanyak  50 μL pelarut  etil  asetat/metanol    dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  ml. Kemudian dibahkan larutan BSA 0,2% dalam TBS hingga tanda tera [5].

## c) Pembuatan kontrol positif
Natrium  diklofenak  dimasukkankan  ke  dalam  labu  ukur  sebanyak  25  mg  dan  dilarutkan dengan akuades, diperoleh larutan induk 1000 ppm, lalu diencerkan dengan pelarut yang sesuai dengan variasi konsentrasi sebesar 50; 25; 12,5; 6,25 dan 3,13 ppm [5].
d) Pembuatan larutan uji
Sebanyak 25 mg ekstrak pekat metanol, fraksi metanol-air dan fraksi etil asetat daun gaharu, dilarutkan dengan pelarut yang sesuai dan diperoleh konsentrasi larutan induk1000 ppm, lalu diencerkan dengan variasi konsentrasi sebesar 500; 250; 125; 62,5; 31,125 dan 15,625 ppm [5].
e) Uji aktivitas antiinflamasi
S ebanyak 50 μL diambil kontrol positif dan larutan uji, kemudian ditambahkan BSA 0,2% hingga 10 mL. Setelah itu, diinkubasi pada suhu ruang selama 30 menit, kemudian dipanaskan pada suhu ±72˚C selama 5 menit menggunakan water bath , lalu didinginkan 25 menit pada suhu ruang. Selanjutnya divorteks dan diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 660 nm[5].
f) Analisis Data
Persentase  penghambatan  denaturasi  protein  dikalkukasi  dengan  menggunakan  rumus berikut :
% Inhibisi = Absorbansi kontrol negatif - Absorbansi larutan uji
Absorbansi kontrol negatif x 100 % ()
bila  %  inhibisi  >  20%  maka  sampel  memiliki  aktivitas  antiinflamasi,  kemudian  dibuat persamaan regresi linear antara konsentrasi (X) dengan % inhibisi (Y) untuk mendapatkan nilai IC 50 [6].

## 3. Hasil dan Pembahasan
Hasil skrining fitokimia senyawa metabolit sekunder dari ekstrak dan fraksi daun gaharu ditunjukkan pada Tabel 1 berikut.
Tabel 1. Kandungan metabolit sekunderpada ekstrak dan fraksi daun gaharu ( Aquilaria malaccensis Lamk.) Golongan senyawa Ekstrak pekat metanol Fraksi n- heksana Fraksi etil asetat Fraksi metanol- air Alkaloid - - - - Flavonoid + - + + Triterpenoid + + + + Steroid + + + - Fenolik + - + + Saponin - - - - Keterangan:
(+) Mengandung senyawa metabolit   sekunder (-) Tidak mengandung senyawa metabolit sekunder
Senyawa flavonoid dan fenolik terdapat pada ekstrak pekat metanol, fraksi etil asetat dan fraksi  metanol-air  sehingga  dilanjutkan  untuk  uji  antiinflamasi  sedangkan  fraksi  n-heksana hanya mengandung triterpenoid dan steroid. Menurut Balafif [7] senyawa triterpenoid larut dalam pelarut polar yaitu golongan sikloartenol. Steroid terkandung pada ekstrak pekat, frakasi etil asetat dan metanol air karena bersifat non polar hingga semi polar Golongan fenolik bersifat semi polar sampai polar sehingga dapat tertarik oleh pelarut etil asetat dan methanol.
Berdasarkan  pada  Tabel  3,  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  pekat  metanol memiliki nilai IC 50 181,58 ppm yang mana masuk dalam kategori sedang dalam potensi aktivitas antiinflamasi. Fraksi etil asetat memiliki nilai IC 50 168,87 ppm yang mana masuk dalam kategori sedang dalam potensi aktivitas antiinflamasi. Fraksi metanol-air memiliki nilai IC 50 60,84 ppm yang mana masuk dalam kategori kuat dalam potensi aktivitas antiinflamasi sementara kontrol positif (natrium diklofenak) memiliki nilai IC 50 sebesar 10,16 ppm.
Tabel 2. Hasil uji aktivitas antiinflamasi ekstrak dan fraksi daun gaharu ( Aquilaria malaccensis Lamk) Sampel Uji Konsentrasi (ppm) Absorbansi Rata-rata Inhibisi (%) Regresi Linier IC 50 (ppm) Ekstrak Pekat Metanol Kontrol negatif 0,99 - 500 0,34 65,29 250 0,46 53,24 y = 0,04x + 41,15 125 0,51 48,02 R 2 = 0,99 181,58 62,5 0,55 44,67 31,12 0,56 43,07 15,62 0,59 40,52 Fraksi Etil Asetat Kontrol negatif 0,99 - 500 0,20 79,69 250 0,39 60,15 y = 0,09x + 33,31 125 0,54 45,12 R 2 = 0,98 168,87 62,5 0,59 40,68 31,12 0,63 36,13 15,62 0,67 32,33 Fraksi metanol- air Kontrol negatif 0,99 - 500 0,20 79,88 250 0,37 62,11 y = 0,06x + 45,82 125 0,43 56,49 R 2 = 0,98 60,84 62,5 0,47 52,14 31,12 0,53 46,75 15,62 0,54 45,04 Kontrol positif (Natrium Diklofenak) Kontrol negatif 0,85 - 50 0,10 87,47 y = 0,99x + 39,85 25 0,26 68,65 R 2 = 0,97 12,5 0,38 54,99 10,16 6,25 0,46 45,35 3,13 0,51 39,47
Aktivitas antiinflamasi ekstrak dan fraksi diduga karena pada sampel mengandung senyawa flavonoid dan fenolik. Kontrol positif yaitu natrium diklofenakyang digunakan dalam penelitian ini memiliki aktivitas antiinflamasi yang sangat kuat. Natrium diklorofenak merupakan obat antiinflamasi yang telah diketahui kadarnya dan terbukti memiliki aktivitas antiinflamasi serta memiliki  kemampuan  untuk  berikatan  dengan  residu  triptofan  pada  BSA  sehingga  struktur protein menjadi lebih stabil apabila dipanaskan [8].
Tabel 3. Tingkatan kekuatan aktivitas antiinflamasi No. Konsentrasi IC 50 (ppm) Kategori 1. ˂ 50 Sangat kuat 2. 50-100 Kuat 3. 101-250 Sedang 4. 251-500 Lemah 5. ˃ 500 Tidak aktif
Berdasarkan penelitian Morshed [9] efek antiinflamasi dapat berasal dari senyawa metabolit sekunder  flavonoid,  dan.  Kekuatan  aktivitas  antiinflamasi  juga  bergantung  dari  banyaknya senyawa aktif yang terkandung dalam sampel [10].

## 4. Kesimpulan
Ekstrak  pekat  metanol  dan  fraksi  etil  asetat  daun  gaharu  memiliki  potensi  sebagai antiinflamasi sedang dengan nilai IC 50 masing-masing 181,5811 ppm dan 168,8727 ppm, fraksi metanol-air berpotensi sebagai antiinflamasi kuat dengan nilai IC 50 sebesar 60,8454 ppm.

## References
[1] R. Nurmalina, “ Herbal Legendaris Untuk Kesehatan Anda, ” Elex Media Komputindo; Jakarta, 2012.
[2] Gusmailina, “ Peningkatan Mutu pada Gaharu Kualitas Rendah, ” Jurnal Penelitian Hasil Hutan, vol. 28 no. 3, pp. 291-303, Sep. 2010, doi: 10.20886/jphh.2010.28.3.291-303
[3] A.  Suhardiman  and  J.  Dadang, “ Pengembangan  obat  herbal  fraksi  daun  gaharu  (Aquilaria malaccensis Lamk.) dalam bentuk gel untuk penyembuhan luka bakar, ” Jurnal Sains Dan Teknologi
Farmasi
Indonesia . Vol. VIII, no. 1, 2019. [Online]. Available: http://download.garuda.kemdikbud.go.id/article=3249671
[4] B.  N.  Shah,  A.  K.  Seth,  and  K.  M.  Maheshwari, “A  Review  On  Medical  Plants  As  Source  of  Anti - Inflamattory Agents” . Research Journal of Medicinal Plant, vol. 5, no. 2, pp. 101-111, 2011.
[5] L. A. D. Williams et al ., “ The In Vitro Anti-Denaturation Effects Induced By Natural Products and Non-Steroidal Compounds In Heat Treated (Immunogenic) Bovine Serum Albumin Is Proposed as A Screening Assay for The Detection of Anti-Inflammatory Compounds Without The Us of Animals In The Early Stage of The Drugs Discovery Process, ” West Indian Med J , vol. 57, no. 04, pp. 327-331, 2008.
[6] Y. Farida, D. Rahmat, and A. W. Amanda, “Anti -Inflammation Activity Test of Nanoparticles Ethanol Extract of Temulawak Rhizome ( Curcuma xanthorrhiza Roxb .) with Protein Denaturation Inhibition Method,” Jurnal  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia ,  vol.  16,  no.  2,  pp.  225-230,  Oct.  2018,  doi: 10.35814/jifi.v16i2.569 .
[7] R.  Abd.  R.  Balafif,  Y.  Andayani,  and  E.  R.  Gunawan,  “ Analisis  Senyawa  Triterpenoid  Dari  Hasil Fraksinasi Ekstrak Air Buah Buncis ( Phaseolus vulgaris Linn),” Chemistry Progress , vol. 6, no. 2, Jan. 2013, doi: 10.35799/cp.6.2.2013.3495 .
[8] M. P. Czub, K. B. Handing, B. S. Venkataramany, D. R. Cooper, I. G. Shabalin, and W. Minor, “Albumin - Based transport of nonsteroidal Anti- Inflammatory drugs in mammalian blood plasma,” Journal of Medicinal Chemistry , vol. 63, no. 13, pp. 6847 – 6862, May 2020, doi: 10.1021/acs.jmedchem.0c00225 .
[9] M. A. Morshed, “ Evaluation of Analgesic and Anti-Inflammatory Effect of Terminalia Arjuna Ethanol Extract, ” IJPSR, vol. 2, no. 10, pp. 2577-2585, 2011
[10] Siswanty, P.W., Wibowo, M.A dan harlia. (2017. “ Aktivitas Toksisitas Antioksidan dan Antiinflamasi Secara  In  Vitro  Dari  Ekstrak  metanol  Daun  Manga  Bacang  ( Mangifera  foetida L)”. Jurnal  Kimia Khatulistiwa , vol. 6, no. 1, 42-49, 2017. [Online]. Available: https://jurnal.untan.ac.id/view/18078