## PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUN PAKU SISIK NAGA (DRYMOGLOSSUM PILOSELLOIDES L.PRESL) TERHADAP PEROKSIDASI LIPID HATI PADA TIKUS JANTAN GALUR WISTAR YANG DIINDUKSI CCL 4

## Ayu Fauzia Malinda, Fatimawali, Adithya Yudistira
Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
The  aims  of  this  research  was  to  determine  the  effect  of  ethanol  extract    paku  sisik  naga leaves  against  lipid  peroxidation  in  male  wistar  liver  induced  by  CCl 4 .  Method  of  this research used laboratory experiment using 9 white male wistar were divided into 3 treatment groups.  All  groups  were  given  treatment  during  ten  days.  The  first  group  (negative  control) was given distilled water ad libitum, the second group was given ethanol extract of paku sisik naga  leaves  97.02  mg/kg  body  weight  per  oral  and  the  third  group  (positive  control)  was given  Curcuma    45  mg/kg  body  weight  per  oral.  On  the  tenth  day,  after  two  hours  of treatment  all  groups  were  given  CCl 4 1mL/kg  body  weight  intraperitonial,  eighteen  hours after  that  rats  in  all  groups  were  dissected  and  taken  his  liver.  Then  rat  liver  analyzed  by TBARS  method  (Thiobarbiturate  Acid  Reactive  Subtance)  to  measure  the  levels  of  MDA (Malondialdehyde)  which  is  an  indicator  of  lipid  peroxidation  in  the  rat  liver.  Data  were analyzed  by  SPSS  ver.20,  significant  difference  between  treatments  was  tested  by  one-way ANOVA.  The  results  showed  a  significant  difference  with  95%  confidence  level  ( α =  0.05) with  a  mean  value  of  MDA  3,828  µM  negative  control  group,  group  of  ethanol  extract  of paku sisik naga leaf was 2,666 µM and 2,211 µM for positive control group. Ethanol extract of paku sisik naga leaves with dose 97.02 mg/kg body weight can prevent the process of lipid peroxidation in rat liver.
Keywords: Drymoglossum piloselloides L. Presl, CCl 4 , TBARS, lipid peroxidation

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol daun paku sisik naga  terhadap  peroksidasi  lipid  hati  tikus  jantan  galur  wistar  yang  diinduksi  CCl 4 .  Metode yang digunakan merupakan eksperimen laboratorium dengan menggunakan subjek penelitian berupa  tikus  putih  jantan  galur  wistar  berjumlah  9  ekor  yang  dibagi  dalam  3  kelompok perlakuan.  Perlakuan  awalnya  dimulai  selama  sepuluh  hari  berturut-turut  yaitu  kelompok pertama  (kontrol  negatif)  hanya  diberikan  minum  aquades  ad  libitum,  kelompok  kedua diberikan  ekstrak  etanol  daun  paku  sisik  naga  97,02mg/KgBB  peroral  dan  kelompok  ketiga (kontrol positif) diberi Curcuma 45 mg/KgBB peroral. Pada hari ke sepuluh setelah dua jam perlakuan  semua  kelompok  diberikan  CCl 4 1mL/KgBB  secara  intraperitonial,  selanjutnya delapan  belas  jam  setelah  pemberian  CCl 4 semua  kelompok  tikus  dibedah  dan  diambil hatinya. Hati tikus kemudian dianalisis menggunakan metode TBARS (Thiobarbiturate Acid Reactive  Subtance)  untuk  mengukur  kadar  MDA  (Malondialdehid)  yang  merupakan indikator terjadinya proses peroksidasi lipid di hati tikus. Data dianalisis dengan spss ver.20, beda  nyata  antar  perlakuan  diuji  dengan  one  way  ANOVA.  Hasil  analisis  statistika menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  bermakna  dengan  taraf  kepercayaan  95%  ( α =  0,05), dengan nilai rerata kadar MDA kelompok kontrol negatif 3,828µM, kelompok ekstrak etanol daun paku sisik naga 2,666µM dan kelompok kontrol positif 2,211µM. Ekstrak etanol daun paku sisik naga dengan dosis 97,02 mg/KgBB dapat mencegah terjadinya proses peroksidasi lipid di hati tikus.
Kata Kunci : Drymoglossum piloselloides L. Presl, CCl 4, TBARS, peroksidasi lipid

## PENDAHULUAN
Dewasa  ini  masyarakat  perkotaan cenderung  mengkonsumsi  pangan  yang tidak  seimbang  pemenuhan  gizinya,  serta makanan  siap  saji  seringkali  dihidangkan dengan  menggunakan  zat  aditif  pangan yang tidak sesuai aturan (Rohmatussolihat, 2009). Selain faktor gizi, faktor lingkungan  luar  seperti  paparan  asap rokok,  bahan  kimia  toksik,  polusi  udara dan  radiasi    juga  dapat  menjadi  pemicu terjadinya  reaksi peradangan dan penyakit degeneratif (Droge, 2002). Penyakit degeneratif seperti penyakit
kardiovaskular,  hipertensi,  stroke,  sirosis hati, diabetes mellitus, penyakit parkinson, kanker dapat disebabkan karena penyerangan radikal bebas terhadap tubuh. Radikal  bebas  dihasilkan  oleh  tubuh  pada proses metabolisme normal dan merupakan  partikel  kecil  yang  memiliki energi  besar.  Radikal  bebas  sebagai molekul  atau  atom  dengan  elektron  bebas dalam  jumlah  normal  dapat  berfungsi dalam  membunuh  virus  dan  bakteri, namun  dalam  jumlah  sangat  banyak  dan energi  yang  sangat  besar  zat  ini  dapat merusak  jaringan  normal,  mengganggu produksi  DNA,  merusak  dinding  sel khususnya lapisan lipid, serta mempengaruhi pembuluh darah (Halliwell, 1991).
Senyawa  antioksidan  merupakan zat  yang  mengurangi  atau  menghambat kerusakan oksidatif suatu molekul.
Substansi  yang  bersifat  antioksidatif  dapat menangkap  radikal  bebas  sehingga  dapat melindungi dari kerusakan dan peradangan yang  tidak  terkontrol  (Pham-Huy  et  al., 2008). Tumbuhan paku sisik naga
(Drymoglossum piloselloides L.) merupakan  tumbuhan  yang  memiliki aktifitas  antioksidan  (Dalimunthe  dan Anjelisa, 2011).
Secara empiris masyarakat  menggunakan  daun  paku  sisik naga ini untuk mengobati penyakit kanker, gondok,  batuk  darah,  keputihan,  kencing nanah,  reumatik,  sakit  kuning,  sariawan. Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui ada tidaknya pengaruh
pemberian  ekstrak  etanol  daun  paku  sisik naga  terhadap  peroksidasi  lipid    hati  tikus jantan galur wistar yang diinduksi CCl 4 .

## METODOLOGI PENELITIAN
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  daun  paku  sisik  naga yang  diperoleh  di  Kecamatan  Mapanget pada  bulan  Januari  2013.  Bahan  kimia yang  digunakan  adalah  etanol  70%, aquadest,  larutan  CCl 4 ,  larutan  dietil  eter, larutan  asam  trikloroasetat  (TCA)  10% Merck,  larutan  asam    tiobarbiturat  (TBA) 0,02M  Merck,  obat  pembanding  yang digunakan  Curcuma  (Soho ® ).  Hewan  uji yang  akan  digunakan  adalah  Tikus  putih jantan  (Rattus  novergicus  L.)  galur  Wistar serta pakan tikus berupa makanan standar.
Alat yang digunakan yaitu kandang tikus  beserta  kelengkapan  makanan  dan minuman,  sarung  tangan,  neraca  analitik  , water  bath,  sentrifuge  (EBA  Hettich), spektrofotometer (Thermo Scientific
GENESYS  20),  vortex,  seperangkat  alat gelas,  seperangkat  alat  soxhlet,  mortir, ayakan, oven, evaporator, blender (Philips), seperangkat peralatan bedah, hot plate, dispo 1cc (Terumo).
Persiapan Sampel
Tumbuhan
diambil bagian daunnya,  dicuci  bersih,  disortasi  untuk memisahkan  dari  bagian  tumbuhan  yang rusak dan tumbuhan lain. Sampel ditimbang  sebanyak  2700  gram  (berat basah) lalu dirajang. Rajangan dikeringkan dengan  menggunakan  oven  pada  suhu 45 0 C.  Daun  paku  sisik  naga  kering  lalu ditimbang    (berat  kering)  dan  dihitung rendemen  simplisia  kering.  Setelah  itu simplisia  diserbuk  dengan  blender  untuk memperkecil  permukaan  partikel  agar kontak  antara  bahan  dan  larutan  penyari lebih besar, lalu diayak dengan menggunakan ayakan 65 mesh.

## Ekstraksi Sampel
Ekstraksi simplisia daun paku sisik naga  menggunakan  pelarut  etanol  70%. Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  panas yaitu  soxhletasi.  Sebanyak  25  gram simplisia  kering  dimasukkan  dalam  kertas
saring kemudian diletakkan dalam thimble soxhlet. Pelarut  etanol 70% sebanyak 250 mL.  Ekstraksi  dilakukan  sekitar  6-7  jam hingga  cairan  tidak  berwarna.  Ekstrak yang didapat kemudian dipekatkan dengan menggunakan evaporator dan water bath.

## Uji Peroksidasi Lipid Hati
Tikus  putih  jantan  yang  berjumlah
9 ekor dengan umur 2-3 bulan diadaptasikan    terlebih  dahulu  selama  tiga minggu  dengan  diberikan  pakan  standar setiap  hari  secara  ad  libitum.  Pada  hari terakhir  masa  adaptasi  tikus  ditimbang. Setelah masa adaptasi tikus dibagi menjadi 3 kelompok secara random, yaitu kelompok  kontrol  negatif  (-),  kontrol positif  (+),  kelompok  perlakuan  ekstrak etanol  daun  paku  sisik  naga  (EDSN), masing–masing  kelompok  terdiri  dari  3 ekor tikus.
Sesudah  masa  adaptasi  pengujian dilakukan  dari  hari  ke-1  sampai  ke-10 dengan  perlakuan  yaitu  kelompok  kontrol negatif  (-)  diberikan  aquadest  ad  libitum, kelompok  kontrol  positif  (+)  diberikan Curcuma  (Soho ® )  45mg/KgBB,  kelompok perlakuan  ekstrak  diberi  dosis  ekstrak etanol  daun  paku  sisik  naga  97,02 mg/KgBB.
Pada  hari  ke-10  setelah  2  jam pemberian ekstrak semua kelompok diberikan  pemberian  CCl 4 sebesar  1 mL/KgBB  secara  intraperitoneal.  Pada hari  ke-11  setelah  18  jam  pemberian  CCl 4 semua  kelompok  tikus  dianestesi  dengan larutan dietil eter dan dilakukan pembedahan untuk diambil hatinya.
Analisis  Malondialdehid (MDA)
Hati  tikus  diambil  dipotong  kecil- kecil lalu dicampur homogen dan ditimbang  sebanyak  0,5  gram,  setelah  itu ditambahkan  4  mL  asam  trikloroasetat (TCA)  10%  kemudian  di  vortex  selama  1 menit  lalu  disentrifugasi  pada  3500  rpm selama 10 menit. Supernatannya dipisahkan  dan  ditambah  2,5  mL  asam tiobarbiturat  (TBA)  0,02M  lalu  larutan divortex  selama  1  menit  agar  homogen. Larutan homogen kemudian dipanaskan ke dalam  water  bath  suhu  100 0 C  selama  10
menit. Larutan yang berwarna merah muda didinginkan lalu diukur serapannya pada λ 532nm  menggunakan  spektrofotometer. Kadar MDA dihitung menggunakan kurva baku  standar 1,1,3,3,  tetraethoxypropane
(TEP) konsentrasi 60µM kemudian diencerkan  menjadi 0, 3 , 6 , 9 ,
12
(Suyanto, 2006).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penetapan  kadar  MDA  dihitung setelah  membuat  kurva  kalibrasi  TEP dengan menggunakan larutan standar yaitu 1,1,3,3-tetraetoksipropan  (TEP)  sebagai sumber MDA. Data pengukuran
absorbansi konsentrasi larutan TEP standar ditampilkan pada lampiran 1.
Kurva hubungan antara konsentrasi TEP dan absorbansi pada panjang gelombang  532  nm    diperoleh  persamaan garis 0,033 0,011 serta
memberikan  nilai  korelasi  r  (0,999) ditunjukkan  (Lampiran  2).  Hubungan antara  konsentrasi  larutan  TEP  dengan absorbansi ditunjukkan oleh kurva kalibrasi  dengan  nilai  (r)  yang  mendekati 1.
Data  yang  ditampilkan  merupakan nilai  rataan  dari  3  kali  pengulangan. Kemudian,  data  dianalisis  secara  statistika menggunakan  program  SPSS  versi  20.0. Analisis statistika dilakukan untuk mengetahui  apakah  terdapat  perbedaan antar  perlakuan  terhadap  peroksidasi  lipid hati  dan  jumlah  kadar  MDA  yang dihasilkan.
Ekstrak etanol daun paku sisik naga dengan  aktifitas  antioksidannya  dapat mengurangi  kadar  produk  MDA  yang dihasilkan  dari  proses  peroksidasi  lipid yang  dipicu  radikal  bebas.  Pada  penelitian ini  juga  dapat  dilihat  bahwa  efek antioksidan  yang  dihasilkan  oleh  ektrak etanol  daun  paku  sisik  naga  dosis 97,02mg/KgBB dan curcuma 45mg/KgBB adalah  sebanding  punya  efek  yang  sama dalam  mencegah  peroksidasi  lipid  yang ditimbulkan radikal bebas.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun paku sisik naga dosis  97,02mg/KgBB  selama  10 mampu mencegah terjadinya proses peroksidasi  lipid  di  hati  tikus  dengan  total jumlah  produk  MDA  yang  terbentuk adalah  sebesar 2,666µM pada tikus jantan galur Wistar yang diinduksi CCl

## DAFTAR PUSTAKA
Dalimunthe,  A.,  Anjelisa,  P.  2011.
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Sisik Naga (Drymoglossum  piloselloides Presl).  Universitas  Sumatera  Utara.
Sumatera Utara.

## LAMPIRAN
Lampiran 1. Pengukuran absorbansi konsentrasi larutan TEP standar
No 1 2 3 4 5 Lampiran 2. Kurva standar TEP Lampiran 3. Grafik kadar rata 0.0000 0.1000 0.2000 0.3000 0.4000 0.5000 A b so rb a n si p a d a 5 3 2 n m 0 2,000 4,000 K a d a r M D A ( µ M )
Jurnal Ilmiah Farmasi – UNSRAT  Vol. 2 No. 02             Mei 2013 ISSN 2302
kstrak etanol daun paku sisik naga dosis  97,02mg/KgBB  selama  10  hari mampu mencegah terjadinya proses ksidasi  lipid  di  hati  tikus  dengan  total
yang  terbentuk sebesar 2,666µM pada tikus jantan galur Wistar yang diinduksi CCl 4 .
Dalimunthe,  A.,  Anjelisa,  P.  2011.  Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Sisik Naga (Drymoglossum  piloselloides  (L.) .  Universitas  Sumatera  Utara. Droge,  W.  2002.  Free  Radical  In  The Physiological Control Of Cell
Function. Physiol rev
Halliwell,  B.  1991.
Species In Living Systems : Source, Biochemistry,  And  Role  In  Human Disease. Am J Medicine 91 Pham-Huy,  L.A.,  He,  H.,  Pham 2008.  Free  Radical,  Antioxidants  in
Disease  and  Health Journal  of  Biomedical  Science 4 no 2. Rohmatussolihat. 2009. Antioksidan Penyelamat  Sel Manusia. BioTrends

## Pengukuran absorbansi konsentrasi larutan TEP standar
No Konsentrasi µM Absorbansi 532nm 1 0 0.0090 2 3 0.1120 3 6 0.2170 4 9 0.3090 5 12 0.4110 Kurva standar TEP
Grafik kadar rata – rata MDA kelompok perlakuan y = 0.0334x + 0.0114 R² = 0.9996 0 5 10 15 Konsentrasi TEP (µM) 0 2,000 4,000 Kontrol
Negatif Ekstrak Etanol Daun Paku Sisik Naga Kontrol Positif
3,828 2,666
2,211
Perlakuan 2013 ISSN 2302 - 2493
Droge,  W.  2002.  Free  Radical  In  The Physiological Control Of Cell Physiol rev, 82:47-95.
Reactive  Oxygen Species In Living Systems : Source, Biochemistry,  And  Role  In  Human

## Am J Medicine 91
Huy,  L.A.,  He,  H.,  Pham-Huy,  C.
2008.  Free  Radical,  Antioxidants  in
Disease  and  Health.  International
Journal  of  Biomedical  Science,  vol Rohmatussolihat. 2009. Antioksidan Sel  –  Sel  Tubuh BioTrends vol 4.
Filename: 13 Directory: G:\jurnal pharmacon\pharmacon ed 4\terbit Template: C:\Documents and Settings\User\Application Data\Microsoft\Templates\Normal.dotm Title: Subject:
Author:
MyLove99 Keywords: Comments: Creation Date: 5/12/2013 8:02:00 PM Change Number: 12 Last Saved On: 2/13/2013 11:11:00 AM Last Saved By: Guest Farmasi Total Editing Time: 48 Minutes Last Printed On: 5/13/2013 1:16:00 PM As of Last Complete Printing Number of Pages:  4 Number of Words:  1,748 (approx.) Number of Characters:
9,970 (approx.)