ISSN: 1410-8917 e-ISSN: 2597-9914
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (4) (2019): 105 – 111

## Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi
Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Potensi Senyawa Antibakteri dari Ekstrak Akar Manis ( Glycyrrhiza glabra L) terhadap Bacillus cereus
Sogandi a,* , Wan Syurya Tri Darma a , Raudatul Jannah a
a Fakultas Farmasi, Universitas 17 Agustus 1945 Jakarta, Jalan Sunter Permai, Sunter, Jakarta Utara 14356, Indonesia
* Corresponding author: sogandi@uta45jakarta.ac.id
https://doi.org/10.14710/jksa.22.4.105-111
Art ic le   Info

## Ab s t rac t
Article history:
Received: 18 February 2019
Revised: 7 May 2019 Accepted: 13 May 2019 Online: 31 July 2019
Keywords: Antibacterial; Bacillus cereus ; bioactive; Glycyrrhiza glabra L; sweet root
Title: Potential  of  Antibacterial  Compounds  from  Sweet  Root  Extract  ( Glycyrrhiza glabra L) on Bacillus cereus
The  high  number  of  poisoning food  and  diarrheal  diseases  caused  by Bacillus cereus bacteria has been treated with chemical drugs and traditionally herbal plants. One of the commonly used herbal plants is sweet root (Glycyrrhiza glabra L.). This study aims to extract and fractionate sweet root plants, determine the antibacterial activity and identify the types of bioactive compounds as antibacterial compounds. The extraction process uses a maceration technique and fractionation using buthanol, ethyl acetate, and hexan solvents. Antibacterial activity was carry out by the diffusion method and identification  of  bioactive  compounds  by  GCMS  analysis.  This  study  showed  that greatest  antibacterial  activity  was  found  in  ethyl  acetate  fraction  with  a  strong category and MIC value of 12,5%. This study for  the first time also revealed that the types  of  bioactive  compounds  from  sweet  root  plants (Glycyrrhiza  glabra  L.) as antibacterial compounds are n-Hexadecanoic as a fatty acid group and 4H-Pyran 4- one 2.3 dihydro-3, 5-dihydroxy-6 methyl from the flavonoid group.

## Ab s t rak
Kata Kunci: Akar manis; Antibakteri; Bacillus cereus ; Bioaktif; Glycyrrhiza glabra L.
Tingginya angka keracunan makanan dan penyakit diare yang disebabkan oleh bakteri Bacillus  cereus selama  ini  ditangani  dengan  obat  kimia  dan  secara  tradisional menggunakan  tanaman  herbal.  Salah  satu  tanaman  herbal  yang  biasa  digunakan adalah  tanaman  akar  manis (Glycyrrhiza  glabra  L.) .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengekstraksi dan melakukan fraksinasi tanaman akar manis, mengetahui aktivitas antibakteri  ekstrak  akar  manis,  serta  mengidentifikasi  jenis  senyawa  bioaktif  yang diduga berperan sebagai senyawa antibakteri. Proses ekstraksi menggunakan teknik maserasi kemudian difraksinasi bertingkat menggunakan pelarut butanol, etil asetat, dan heksan. Aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi agar dan identifikasi senyawa  bioaktif  dilakukan  dengan  analisis  GCMS.  Hasil  penelitian  menunjukkan aktivitas  antibakteri  terbesar  terdapat  pada  fraksi  etil  asetat  dengan  kategori  yang kuat  dan  memiliki  nilai  KHM  12,5%.  Penelitian  ini  juga  untuk  pertama  kalinya mengungkapkan jenis senyawa bioaktif dari  tanaman akar manis (Glycyrrhiza glabra L.) yang berperan sebagai senyawa antibakteri adalah adalah n-Hexadecanoic acid yang merupakan  golongan  asam  lemak  dan 4H-Pyran  4-one  2,3  dihydro-3,5-dihydroxy-6 methyl dari golongan flavonoid.

## 1. Pendahuluan
Makanan  merupakan  kebutuhan  dasar  bagi kehidupan  manusia.  Kasus  keracunan  makanan  dan penyakit  infeksi  disebabkan  makanan  cenderung
meningkat.  Hasil  laporan  WHO  pada  tahun  2004  diare telah  menyerang  4  miliar  penduduk  di  dunia  dan membunuh  sekitar  2,2  juta  jiwa,  angka  tersebut meningkat  hingga  mencapai  61%  di  tahun  2009.  Hasil laporan  BPOM  mengenai  kejadian  luar  biasa  (KLB)
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (4) (2019): 105 – 111
keracunan  pangan  di  Indonesia  tahun  2007  sampai dengan  2011  menemukan  bakteri Bacillus  cereus menempati  urutan  kedua  setelah Stapylococus  aureus sebagai  bakteri  patogen  penyebab  kejadian  luar  biasa (KLB) di Indonesia [1].
Keracunan  makanan  merupakan  penyakit  yang disebabkan  oleh  mengkonsumsi  makanan  yang terkontaminasi  oleh  bakteri. Sekitar 80%  penyakit  yang tertular  melalui  makanan  disebabkan  oleh  bakteri pathogen  [2].  Beberapa  jenis  bakteri  yang  sering menimbulkan penyakit antara lain: Staphylococcus aureus, Bacillus  cereus,  Clostridum  perferingens,  Escherichia  coli, Vibrio  cholera,  Shigella  sp,  Salmonella  sp,  Clostridium difficile, Compylobacter jejuni, Yersinia entrolitica, Klebsiella pnemontae, dan Vibrio haemolyticus [3]. Salah satu akibat dari  keracunan  makanan  yaitu  diare.  Diare  merupakan suatu gejala klinis dari gangguan pencernaan (usus) yang ditandai  dengan  bertambahnya  frekuensi  defekasi  lebih dari biasanya yang berulang-ulang yang disertai adanya perubahan bentuk dan konsistensi feses menjadi lembek atau cair [3].
Basillus  cereus (B.  cereus) merupakan  bakteri  gram positif, berbentuk basil atau kotak berantai panjang yang dapat dijumpai dalam makanan seperti daging, saus, dan beberapa makanan lain. B cereus adalah organisme yang dapat  hidup  di  tanah  yang  umumnya  mencemari makanan terutama beras. Saat beras dalam jumLah besar dimasak  dan  dibiarkan  dingin  perlahan,  spora  dari B. cereus berkecambah,  dan  sel  vegetatif  menghasilkan racun selama pertumbuhan sporulasi [4].
Penggunaan  obat  tradisional  bahan  alam  dalam bentuk  ekstrak  menjadi  alternatif  pilihan  masyarakat selain  dari  pengobatan  menggunakan  bahan  kimia. Penyakit  yang  disebabkan oleh  bakteri  dapat disembuhkan  dengan  menggunakan  tanaman  yang memiliki  khasiat  antibakteri  seperti  akar  manis (Glycyrrhiza  glabra  L.). Akar  manis (Glycyrrhiza  glabra  L) mengandung  flavonoid  liquirtin,  asam  glisirinat, isoliquirtin,  asparagin  2%,  gula  15%,  amilum,  protein, dan  glisiramarin  [5].  Selain  sebagai  antibiotik  dan antibakteri dari akar manis juga memiliki potensi sebagai pengawet  makanan,  sehingga  keracunan  makanan  bisa dicegah.
Tanaman  akar  manis (Glycyrrhiza  glabra  L.) telah diketahui memiliki banyak khasiat, diantaranya memiliki aktivitas  antidepresan  [6],  antikanker  [7],  dan antioksidan  [8].  Penelitian  mengenai  ekstrak  dari tanaman  akar  manis  telah  banyak  dilakukan,  namun penelitian  tentang  identifikasi  jenis  senyawa  aktif  dari hasil fraksinasi ekstrak akar manis (Glycyrrhiza glabra L.) sebagai penghambat pertumbuhan bakteri Basillus cereus belum  diketahui.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengekstraksi  dan  melakukan  fraksinasi  ekstrak tanaman  Akar  manis,  mengetahui  aktivitas  antibakteri terhadap pertumbuhan Basillus cereus, dan mengidentifikasi  jenis  senyawa  bioaktifnya  sebagai antibakteri.

## 2. Metode Penelitian

## 2.1. Ekstraksi Sampel
Simplisia  akar  manis  diperoleh  dari  BALITRO  dan determinasi  dilakukan  di  LIPI.  Simplisia  kering  disortir dan  dipilih  sampel  akar  manis  yang  bebas  dari  jamur maupun  karakteristik  yang  kurang  baik  kemudian simplisia  dicuci  bersih.  Simplisia  yang  telah  bersih dikeringkan  dan  dirajang  membentuk  potongan  kecil, kemudian  dihaluskan  membentuk  serbuk  [9].  Simplisia akar  manis  yang  telah  berbentuk  serbuk  sebanyak  2  kg dimaserasi  menggunakan  pelarut  etanol  dengan perbandingan  1:5,  simplisia  dikocok  setiap  2  jam  dan dibiarkan  selama  24  jam.  Filtrat  dan  ampas  kemudian dipisahkan  dan  dievaporator.  Hasil  pemisahan  dengan pelarut dilanjutkan dengan pemekatan dan penguapan di waterbath hingga  ekstrak  yang  diperoleh  menjadi  lebih kental [10].

## 2.2. Fraksinasi Ekstrak
Ekstrak  akar  manis  difraksinasi  secara  berturut- turut menggunakan pelarut air, n-hexan, etil asetat dan n-butanol. Diawali dengan fraksi hexan : air dimasukkan kedalam corong pisah hingga diperoleh fraksi hexan dan fraksi  air.  Fraksi  hexan  dipisahkan,  kemudian  fraksi  air difraksinasi  kembali  menggunakan  etil  asetat  sehingga diperoleh fraksi etil asetat dan fraksi air, fraksi etil asetat dipisahkan  dan  fraksi  air  difraksinasi  kembali menggunakan  butanol,  diperoleh  fraksi  butanol  dan fraksi  air.  Masing-masing  hasil  fraksi  dilakukan  proses pemekatan  dengan  menggunakan water  bath kemudian semua fraksi dibuat dalam konsentrasi 1 g/mL untuk uji aktivitas antibakteri [11].

## 2.3. Uji Bebas Etanol
Identifikasi  dilakukan  dengan  cara  ekstrak dilarutkan dengan H 2 SO 4 dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan  asam  asetat  dan  ditutup  dengan  kapas, dipanaskan  sampai  mendidih  selanjutnya  diidentifikasi bau  ester  pada  kapas,  jika  ekstrak  tidak  mengandung etanol maka tidak tercium bau ester [12].

## 2.4. Skrining Metabolit Sekunder

## 2.4.1. Identifikasi flavonoid
Sebanyak  1  mL  sampel  ditambahkan  lempeng magnesium  dan  1  mL  larutan  HCL  pekat,  5  mL  larutan amil alkohol, dikocok dengan kuat, dan dibiarkan hingga memisah.  Jika  warna  merah  naik  ke  atas  menunjukkan mengandung flavonoid [13].

## 2.4.2. Identifikasi alkaloid
Sebanyak  1  mL  sampel  ditambahkan  dengan  5  mL asam  klorida  10%,  lalu  ditambahkan  ammonium hidroksida  dan  klorofom,  kemudian  dikocok.  Lapisan kloroform  yang  berada  dibagian  bawah  diambil  lalu diuapkan  hingga  kering.  Residu  ditambahkan  2  mL  HCl 2%, kemudian ditambahkan dengan pereaksi Mayer dan Bouchardad.  Penambahan  pereaksi  Mayer  akan memberikan  endapan  warna  putih  dan  penambahan pereaksi  Bouchardad  akan  memberikan  endapan berwarna  coklat  yang  menunjukkan  mengandung alkaloid [13].
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (4) (2019): 105 – 111

## 2.4.3. Identifikasi saponin
Larutan  sisa  hasil  percobaan  identifikasi  senyawa golongan  flavonoid,  dikocok  secara  vertikal  selama  10 detik,  kemudian  dibiarkan  selama  10  menit.  Apabila terbentuk  busa  dan  tidak  hilang,  maka  menunjukkan adanya senyawa golongan saponin [13].

## 2.4.4. Identifikasi tannin dan fenolik
Sampel  ditambahkan  dengan  3  tetes  larutan  FeCl 3 lalu diamati perubahan warna. Jika terbentuk warna biru kehijauan  maka  positif  tannin.  Jika  terjadi  warna  hijau, ungu  atau  biru  sampai  hitam  menunjukkan  adanya fenolik [13].

## 2.4.5. Identifikasi triterpenoid
Sebanyak  2  mL  sampel  diuapkan  sampai  kering. Residu yang diperoleh dilarutkan dalam 0,5 mL klorofom lalu  ditambahkan  dengan  0,5  mL  asam  asetat. Selanjutnya,  campuran  ini  ditetesi  dengan  2  mL  asam sulfat pekat melalui dinding tabung. Terbentuknya cincin warna  kecoklatan  atau  violet  menunjukkan  adanya triterpenoid [13].

## 2.5. Pembuatan Media
Media Nutrient broth (NB) dibuat dengan menimbang 4,16  g  NB  (Himedia)  bubuk  kemudian  dilarutkan  dalam aquadest  320  mL  dan  disterilkan  dengan  autoklaf  pada suhu  121°C  selama  15  menit,  media  didinginkan  hingga suhu  45°C,  kemudian  dituang  pada  tabung  reaksi  steril masing-masing  5  mL.  Media Nutrient  agar (NA)  dibuat dengan  menimbang  3,93  g  NA  bubuk  (Himedia), dilarutkan  dengan  aquadest  140  mL  dan  disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit, media didinginkan hingga suhu 60°C, kemudian dituangkan ke dalam  cawan  petri  steril  masing-masing  20  mL  dan dibiarkan mengeras pada suhu ruang [14].
2.6. Pembuatan Standar Mc. Farland
Larutan standard Mc Farland yang digunakan adalah standard 0.5 yang dibuat dengan mencampurkan larutan BaCl 2 1%  dengan  H 2 SO 4 1%.  Sebanyak  0,05  mL  larutan BaCl 2 1% dicampurkan dengan 9,95 mL larutan H 2 SO 4 1% dan dikocok sampai homogen. Kekeruhan larutan diukur pada panjang gelombang 620 nm dengan menggunakan aquadest  sebagai  blanko.  Nilai  absorban  larutan Mc Farland 0,5 di kisaran 0,08 sampai dengan 0,13. Larutan baku Mc  Farland 0,5  ini  ekuivalen  dengan  suspensi  sel bakteri dengan konsentrasi 1,5x10 8 CFU/mL [15].

## 2.7. Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)
KHM ditentukan sebagai konsentrasi terendah yang dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dari  fraksi butanol,  etil  asetat,  heksan,  dan  fraksi  air  akar  manis. Konsentrasi  sampel  yang  digunakan  adalah  50%,  25%, 12,5%,  6,25%,  dan  3,125%.  Pengujian  KHM  dilakukan dalam tabung reaksi berisi 5 mL media NB. Tabung reaksi kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam. Tabung  reaksi  hasil  perlakuan  dibandingkan  dengan tabung  reaksi  kontrol  yang  hanya  berisi  media  NB, konsentrasi sampel dalam tabung reaksi yang kejernihan warnanya paling mendekati dengan tabung reaksi kontrol ditetapkan sebagai nilai KHM [16].

## 2.8. Aktivitas Antibakteri
Kertas  cakram  uji  yang  telah  steril  dicelupkan  ke dalam  fraksi  akar  manis  dengan  konsentrasi  1  g/mL. Aquadest  sebagai  kontrol  negatif  dan  antibiotik tetrasiklin  30  mcg  sebagai  kontrol  positif  dibiarkan selama  30  menit.  Bakteri Bacillus  cereus yang  sudah diremajakan  sehari  sebelumnya  diambil  3  mL  dan diencerkan  dengan  5  mL  larutan  NaCl  0,9%.  Suspensi diambil  3  mL  dan  dicampurkan  dengan  media  NA sebanyak  17  mL  dan  dituangkan  ke  cawan  petri, didiamkan  selama  15  menit,  kemudian  masing-masing kertas  cakram  ditempelkan  pada  permukaan  media  NA, cawan petri diinkubasi pada suhu 37°C untuk selanjutnya dilihat dan diukur zona hambat yang terbentuk selama 24 jam pengamatan [14].

## 2.9. Analisis GCMS
Senyawa  bioaktif  dari  fraksi  akar  manis  yang memiliki  aktivitas  antibakteri  tertinggi  dianalisis menggunakan GCMS (Agilent Technologies 7890) untuk mengidentifikasi  jenis  metabolit  sekunder  yang  diduga bertanggung  jawab  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Bacillus cereus. Jenis kolom yang digunakan adalah HP Ultra 2. Capilarry Coloumn (30 m × 0.20 mm LD, 0.11 µm film  thickness ).  Dengan  temperatur  kolom  250°C,  gas pembawa yang digunakan adalah helium dengan laju alir 30  cm/detik,  rasio  1/30,  temperatur  sumber  ion  230°C, dan suhu ion permukaan adalah 280 °C.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Penelitian ini diawali dengan melakukan determinasi sampel yang digunakan di LIPI Bogor untuk memastikan spesies sampel yang akan digunakan adalah benar  dari  tanaman  akar  manis.  Berdasarkan  hasil determinasi  diketahui  bahwa  tanaman  yang  menjadi sampel  dalam  penelitian  ini  adalah Glycyrrhiza  glara L yang termasuk dalam suku Leguminose .

## 3.1. Ekstraksi dan Fraksinasi Sampel
Ekstrak  etanol  dibuat  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  etanol  96%  dengan  direndam selama 1x24 jam. Metode maserasi dipilih karena mudah dilakukan  dan  tidak  memerlukan  pemanasan  dalam prosesnya,  sehingga  senyawa  yang  akan  ditarik  tidak mudah  terdegradasi.  Rendemen  ekstrak  yang  didapat 135,3  g  dari  simplisia  seberat  2  kg.  Untuk  mengetahui jumLah  senyawa  yang  hilang  setelah  pemanasan dilakukan pengujian susut pengeringan yang didapatkan sebesar 8,96%, hal ini sudah sesuai dengan standar susut pengeringan  yaitu  harus  kurang  dari  10%.  Pengujian kadar air untuk mengetahui kandungan air dalam ekstrak setelah  proses  pengentalan  diketahui  sebesar  5,26%, angka ini memenuhi persyaratan kadar air ekstrak suatu sampel, yaitu kurang dari 10% [1, 17].
Fraksinasi  menggunakan  pelarut  organik  yang memiliki kepolaran yang berbeda, yaitu air, butanol, etil asetat  dan  heksan.  Prinsip  fraksinasi  cair-cair  adalah pemisahan  senyawa  berdasarkan  tingkat  kepolarannya dengan  prinsip  “ Like  dissolve like ”, artinya  pelarut  akan melarutkan  senyawa  yang  tingkat  kepolarannya  sama dengan pelarut tersebut. Pelarut butanol dan air memiliki
sifat  pelarut  yang  polar  sehingga  senyawa  yang  bersifat polar  akan  tertarik  pada  pelarut  butanol  dan  air.  Fraksi heksan untuk menarik senyawa yang bersifat non-polar, dan  pelarut  etil  asetat  akan  menarik  senyawa  yang bersifat  semi  polar  [18].  Berdasarkan  hasil  fraksinasi (Tabel  1)  diketahui  rendemen  tertinggi  terdapat  pada pelarut  polar  yaitu  fraksi  air  sebanyak  41,4%  dan  fraksi butanol  33,1%,  diikuti  dengan  pelarut  semipolar  pada fraksi  etil  asetat  29,0%  dan  fraksi  nonpolar  heksan 16,5%.  Hal  ini  menunjukkan  ekstrak  etanol  akar  manis lebih banyak mengandung senyawa polar.
Tabel 1. Hasil fraksinasi sampel akar manis Fraksi Berat (g) Rendemen (%) Fraksi butanol 40 33,1 Fraksi eti asetat 35 29,0 Fraksi heksan 20 16,5 Fraksi air 50 41,4

## 3.2. Kandungan Metabolit Sekunder
Hasil  organoleptik  menunjukkan  bahwa  sifat  dari ekstrak  etanol  akar  manis  memiliki  bentuk  ekstrak kental, warna coklat kehitaman, aroma seperti cengkeh, rasanya  manis  dan  lengket.  Hasil  skrining  pada  fraksi akar  manis  memberikan  hasil  positif  dengan  hasil  yang berbeda  pada  setiap  fraksi  yaitu  fraksi  butanol mengandung, flavonoid, tannin, alkaloid, glikosida, dan triterpenoid.  Fraksi  etil  asetat  mengandung  alkaloid, flavonoid,  saponin,  tanin,  glikosida,  triterpenoid,  dan fenol.  Fraksi  heksan  mengandung  alkaloid,  glikosida, triterpenoid, dan fenol. Fraksi air mengandung alkaloid, flavonoid,  saponin,  tannin,  glkosida,  asam  lemak triterpenoid,  dan  fenol.  Hasil  identifikasi  kandungan metabolit  sekunder  sampel  akar  manis  dari  berbagai fraksi dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Kandungan metabolit sekunder akar manis
Metabolit sekunder Fraksi Butanol  Etil asetat  Heksan Air Alkaloid + + + + Saponin - + - + Tanin + + - + Fenol + + + + Flavonoid + + + + Triterpenoid + + + + Steroid - - - - Glikosida + + + +
Keterangan :  (+)  memberikan  reaksi  positif,  (-) memberikan reaksi negatif

## 3.3. Penentuan Nilai KHM
Pengujian  konsentrasi  hambat  minimum  dari sampel akar manis hasil fraksinasi menggunakan pelarut butanol,  etil  asetat,  heksan  dan  air  dilakukan  pada konsentrasi  3,125;  6,25;  12,5;  25;  dan  50%  (Tabel  3) terlihat fraksi butanol dan etil asetat memiliki nilai KHM yang paling rendah, yaitu pada konsentrasi sampel 12,5% sudah  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Bacillus cereus. Pelarut  heksan  memiliki  nilai  KHM  sebesar  25%
dan  fraksi  air  50%.  Hasil  penelitian  ini  berbeda  dengan yang dilakukan oleh Gupta et al., (2013) yaitu ekstrak baru mulai  menunjukan  sensitivitasnya  ketika  konsentrasi sampel 50% [19]. Perbedaan nilai KHM ini kemungkinan disebabkan  oleh  kandungan  senyawa  antibakteri  yang berbeda  disetiap  pelarut  [20]  dan  juga  dipengaruhi tempat  tumbuh  tanaman  serta  jenis  pelarut  yang digunakan saat proses ekstraksi [21].
Tabel 3. Penetuan KHM sampel akar manis
Konsentrasi sampel (%) Fraksi Butanol  Etil asetat  Heksan Air 3,125 + + + + 6,25 + + + + 12,5 - - + + 25 - - - + 50 - - - -
Keterangan : (+) terdapat pertumbuhan bakteri (-)  tidak terdapat pertumbuhan bakteri

## 3.4. Penentuan Aktivitas Antibakteri
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak butanol,  etil  asetat,  heksan  dan  fraksi  air  dengan konsentrasi  1  g/mL  diketahui  bahwa  fraksi  etil  asetat adalah  fraksi  yang  memiliki  aktivitas  penghambatan paling besar terhadap pertumbuhan bakteri Bacillus cereus yang  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  zona  bening berdiameter ±17,11 mm.
Tabel 4. Aktivitas antibakteri sampel Akar Manis Sampel Diameter zona hambat (mm) Kontrol negatif 6,00 ± 0,00 Kontrol positif 21,00 ± 0,00 Fraksi butanol 15.00 ± 0.10 Fraksi etil asetat 17,11 ± 0.21 Fraksi heksan 6,85 ± 0.18 Fraksi air 6,53 ± 0.20
Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas  antibakteri  sampel akar  manis  dari  berbagai  fraksi  pelarut  ini  dapat  dilihat bahwa kontrol positif yang digunakan dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Bacillus  cereus sedangkan  pada  kontrol  negatif  terdapat  pertumbuhan bakteri.  Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas  antibakteri  pada fraksi akar manis didapatkan hasil masing-masing fraksi memiliki  luas  zona  hambat  yang  berbeda-beda.  Ukuran zona  hambat  dapat  menunjukan  sifat  sensitifitas  suatu zat  terhadap  bakteri,  berdasarkan  klasifikasi  aktivitas antibakteri  menurut  Davis  dan  Stout  [22]  fraksi  air  dan heksan tergolong dalam kategori sedang, fraksi etil asetat dan butanol kuat dan kontrol positif yang menggunakan antibiotik tetrasiklin tergolong sangat kuat dengan zona hambat  lebih  dari  20  mm  [22].  Penelitian  ini  sejalan dengan  hasil  penelitian  Rodino dkk. [23]  yang mengungkapkan bahwa ekstrak etanol dari tanaman akar manis  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Bacillus cereus dengan  aktivitas  zona  hambat  15  mm.  Fraksi  etil asetat  memiliki  zona  hambat  terbesar  dibandingkan dengan  fraksi  yang  lainnya,  sehingga  fraksi  etil  asetat
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (4) (2019): 105 – 111 109
akar  manis  dilanjutkan  ketahap  identifikasi  senyawa bioktif menggunakan instrumen GCMS.

## 3.5. Identifikasi Senyawa Bioaktif
Hasil  identifikasi  senyawa  metabolit  sekunder  dari fraksi etil asetat akar manis dengan GCMS menunjukkan golongan utamanya adalah senyawa asam lemak dengan kandungan  terbanyak  adalah  senyawa n-Hexadecanoic acid dengan luas puncak 14,14%. Hasil GCMS ditunjukkan pada Gambar 1 dan tabel 5.
Gambar 1. Spektogram hasil GCMS fraksi etil asetat Akar manis
Tabel 5. Hasil GCMS fraksi etil asetat akar manis RT Nama Senyawa Kandungan (%) 36,012 n-Hexadecanoic acid 14,14 14,595 4H-Pyran 4-one, 2,3 dihydro-3,5-dihydroxy- 6 methyl 13,18 37,108 Oleic acid 11,60 37,756 Hexadeca-2,6,10,14- tetraen-1-ol, 3,7,11,16- tetramethyl (E,E,E) 10,86 3,459 Etil etanoat 8,81 43,611 Stigmasta-3,5-dien 7,17 Senyawa n-hexadecanoic  acid dan oleic  acid merupakan turunan lemak [24] dan n- Hexadecanoic acid adalah asam lemak jenuh yang memiliki formula C 16 H 32 O 2 [25] . Menurut  López-Malo dkk. [26],  konsentrasi  dari asam  lemak  dengan  rantai  yang  panjang  dapat menghambat  mikroorganisme  khususnya  bakteri  gram positif, kapang dan juga khamir. Hal ini didukung dengan penelitian  Darmadji  dan  Izumimoto  [27]  yang mengatakan bahwa mekanisme kerja n- hexadecanoic acid dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan menyerap  nutrisi  yang  ada  pada  bakteri,  menghambat masuknya  air  dan  menghalangi  kerja  enzim  pada beberapa  bakteri.  Senyawa n-  hexadecanoic  acid juga dilaporkan  memiliki  aktivitas  antioksidan  seperti  yang dilaporkan  oleh  Bodoprost  dan  Rosemeyer  [28].  Melaui penelitian  ini  untuk  pertama  kalinya  juga  senyawa 4H- Pyran  4-one,  2,3  dihydro-3,5-dihydroxy-6  methyl dilaporkan  teridentifikasi  dalam  tanaman  akar  manis. 4H-Pyran  4-one,  2,3  dihydro-3,5-dihydroxy-6  methyl termasuk  dalam  golongan  flavonoid  dan  diketahui memiliki aktivitas sebagai antimikrobial dan antiinflamasi [29].
Kandungan  senyawa Oleic  acid dengan  kandungan 11,60%  yang  memiliki  formula  C 18 H 34 O 2 ini  juga  sudah
pernah  dilaporkan  sebelumnya  memiliki  aktivitas sebagai  antibakteri  [30].  Senyawa Stigmastan-3,5-dien telah  dilaporkan  terdapat  pada  tanaman Calamintha nepeta  (L.)  Savi  subsp.  Glandulosa dan  memiliki  aktivitas sebagai  antioksidan  [31].  Senyawa Hexadeca-2,6,10,14- tetraen-1-ol, 3,7,11,16-tetramethyl (E,E,E) dalam fraksi etil asetat  tanaman  akar  manis  ini  juga  pernah  dilaporkan terdapat  pada  tanaman Eugenia  bracteata dengan memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Bacillus Subtilis,  Pseudomonas  aeruginosa,  Escherichia  coli, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis and Micrococcus  luteus,  Salmonella  typhimurium,  Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae dan Proteus vulgaris [32].

## 4. Kesimpulan
Penelitian  ini  telah  mengungkapkan  bahwa  ekstrak tanaman  akar  manis  ( Glycyrrhiza  glabra L.)  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  pertumbuhan Bacillus cereus dengan aktivitas tertinggi terdapat pada fraksi etil asetat  yang  tergolong  dalam  kategori  penghambatan kuat.  Hasil  analisis  GCMS  mengungkapkan  bahwa kandungan terbesar tanaman akar manis dalam fraksi etil asetat adalah senyawa n-Hexadecanoic acid dan 4H-Pyran 4-one,  2,3  dihydro-3,5-dihydroxy-6  methyl yang merupakan golongan flavonoid.

## Daftar Pustaka
[1]  Badan Pengawas Obat dan Makanan, Kriteria dan tata laksana  pendaftaran  obat  tradisional,  obat  herbal terstandar  dan  fitofarmaka,  in:  B.P.O.d.  Makanan (Ed.) HK.00.05.41.13, Jakarta, 2005.
[2]  Siti Zulaekah, Pendidikan Gizi Dengan Media Booklet Terhadap Pengetahuan Gizi, KEMAS: Jurnal Kesehatan Masyarakat , 7, 2, (2012) 127-133
http://doi.org/10.15294/kemas.v7i2.2808
[3]  Harold Richardson, Fiona Smaill, Medical microbiology, BMJ ,  317,  7165,  (1998)  1060 https://doi.org/10.1136/bmj.317.7165.1060
[4]  Rullah  Hermanda,  Wahyu  Widayat,  Laode  Rijai, Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Metanol  Akar Tumbuhan Merung ( Coptosapelta tomentosa ) terhadap  Bakteri Escherichia  Coli dan Staphylococcus aureus , in: Mulawarman Pharmaceuticals Conferences, 2016, pp. 322-329.
[5]  Sulistiorini  Indriaty,  Lela  Sulastri,  Uji  Aktivitas Ekstrak Air Akar Manis ( Glycyrrhiza glabra L.) Sebagai Penyubur Rambut Pada Kelinci Jantan, Medical Sains;
Jurnal Ilmiah Kefarmasian , 1, 1, (2016)
http://dx.doi.org/10.1234/ms.v1i1.11 [6]  Dinesh Dhingra, Amandeep Sharma, Antidepressant-like activity of Glycyrrhiza glabra L. in mouse models of immobility tests, Prog Neuropsychopharmacol  Biol  Psychiatry ,  30,  3,  (2006) 449-454 https://doi.org/10.1016/j.pnpbp.2005.11.019
[7]  Giulia  Pastorino,  Laura  Cornara,  Sónia  Soares, Francisca  Rodrigues,  M.  Beatriz  P.P.  Oliveira, Liquorice (Glycyrrhiza glabra): A phytochemical and pharmacological  review, Phytotherapy  Research ,  32, 12, (2018) 2323-2339 https://doi.org/10.1002/ptr.6178
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (4) (2019): 105 – 111
[8]  Faruk Karahan, Cumhur Avsar, Ibrahim Ilker Ozyigit, Ismet  Berber,  Antimicrobial  and  antioxidant activities  of  medicinal  plant  Glycyrrhiza  glabra  var. glandulifera from different habitats, Biotechnology &
Biotechnological  Equipment ,  30,  4,  (2016)  797-804 https://doi.org/10.1080/13102818.2016.1179590
[9]  Departemen Kesehatan RI, Parameter standar umum ekstrak  tumbuhan  obat,  Direktorat  Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta, 2000.
[10] Anjar  Purba  Asmara,  Uji  Fitokimia  Senyawa Metabolit  Sekunder  Dalam  Ekstrak  Metanol  Bunga Turi Merah ( Sesbania grandiflora L. Pers), Al-Kimia , 5,
1, (2017) 48-59 https://doi.org/10.24252/al-kimia.v5i1.2856
[11]  Moch. Chasani, Ruli Budi Fitriaji, Purwati, Fraksinasi Ekstrak  Metanol  Kulit  Batang  Ketapang  ( Terminalia catappa  Linn .)  dan  Uji  Toksisitasnya  dengan  Metode BSLT  (Brine  Shrimp  Lethality  Test), Molekul ,  8,  1,
(2013) 89-100
[12] Himanshu  Aggarwal,  Jayashri  Ghosh,  Alka  Rao, Vinod Chhokar, Evaluation of Root and Leaf Extracts of Glycrriza Glabra for Antimicrobial Activity, Journal of  Medical  and  Bioengineering ,  4,  1,  (2015)  81-85
http://doi.org/10.12720/jomb.4.1.81-85
[13] Norman R. Farnsworth, Biological
and Phytochemical  Screening  of  Plants, Journal  of
Pharmaceutical  Sciences ,  55,  3,  (1966)  225-276 https://doi.org/10.1002/jps.2600550302
[14] Sogandi, Apon Zaenal Mustopa, I Made Artika, Bugi Ratno  Budiarto,  Inhibitory  Activity  of  Lactobacillus plantarum U10 Isolated from Tempoyak (Fermented Durian) Made in Indonesia against Salmonella typhi, Microbiology  Indonesia ,  9,  2,  (2015)  73-81 http://doi.org/10.5454/mi.9.2.4
[15] Sogandi,  Frensiska  Anggelia,  Lilih  Riniwasih  K,  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  96%  Daun Rambai  ( Sonneratia  caseolaris ,  (L.)  Engl)  terhadap Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  col , Indonesia Natural  Research  Pharmaceutical  Journal ,  2,  1,  (2017) 73-80
[16] Risa Nursanty, Aktivitas antibakteri ekstrak metanol tanaman Lawsonia  inermis L.  dan  Capsicum frutescens  L.  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC 29213, Bioleuser , 1, 3, (2017) 98-103
[17] Rita  Dwi  Ratnani,  Indah  Hartati,  Yance  Anas,  Devi Endah  P.,  Dita  Desti  D.  Khilyati,  Standardisasi Spesifik  dan  Non  Spesifik  Ekstraksi  Hidrotropi Andrographolid  dari  Sambiloto  (Andrographis paniculata), Seminar Nasional Peluang Herbal Sebagai Alternatif Medicine Tahun 2015 , Semarang, (2015)
[18] Irvina  Nurrachmi,  Bintal  Amin,  Dessy  Yoswaty, Analisis Senyawa Bioaktif Ekstrak Heksan, Etil Asetat dan  Metanol  Rumput  Laut  ( Eucheuma  cottonii )  dari Pantai Pulau Jaga, Karimun Provinsi Kepulauan Riau, Asian Journal of Environment, History and Heritage , 2, 1, (2018) 105-112
[19] Divya  Gupta,  Mukesh  Kumar,  Evaluation  of  in  vitro antimicrobial  potential  and  GC – MS  analysis  of
Camellia sinensis and Terminalia arjuna, Biotechnology Reports , 13, (2017) 19-25 https://doi.org/10.1016/j.btre.2016.11.002
[20] Gebremedhin  Romha,  Birhanu  Admasu,  Tsegaye Hiwot  Gebrekidan,  Hailelule  Aleme,  Gebreyohans Gebru,  Antibacterial  Activities  of  Five  Medicinal
Plants in Ethiopia against Some  Human and Animal Pathogens, Evidence-Based  Complementary  and Alternative Medicine , 2018, (2018) 10 https://doi.org/10.1155/2018/2950758
[21] Imad  Hadi  Hameed,  Hussein  J.  Hussein,  Muhanned Abdulhasan  Kareem,  Nidaa  Shihab  Hamad, Identification  of  five  newly  described  bioactive chemical  compounds  in  methanolic  extract  of Mentha viridis by using gas chromatography - mass spectrometry (GC-MS), Journal of Pharmacognosy and Phytotherapy , 7, 7, (2015) 107-125 https://doi.org/10.5897/JPP2015.0349
[22] W.  W.  Davis,  T.  R.  Stout,  Disc  plate  method  of microbiological antibiotic assay. II. Novel Procedure Offering  Improved  Accuracy, Appl  Microbiol ,  22,  4,
(1971) 666 – 670
[23] S Rodino, A. Butu, M. Butu, P.C. Cornea, Comparative Studies  on  Antibacterial  Activity  of  Licorice, Elderberry  and  Dandelion, Digest  Journal  of Nanomaterials and Biostructures , 10, 3, (2015) 947-955
[24] K. Radha Krishnan, F. James, A. Mohan, Isolation and characterization  of  n-hexadecanoic  acid  from Canthium parviflorum leaves, Journal of Chemical and Pharmaceutical Research , 8, 8, (2016) 614-617
[25] Zhong-hui Pu, Yu-qun Zhang, Zhong-qiong Yin, Jiao Xu,  Ren-yong  Jia,  Yang  Lu,  Fan  Yang,  Antibacterial Activity of 9-Octadecanoic Acid-Hexadecanoic Acid- Tetrahydrofuran-3,4-Diyl  Ester  from  Neem  Oil, Agricultural Sciences in China , 9, 8, (2010) 1236-1240 https://doi.org/10.1016/S1671-2927(09)60212-1
[26]Aurelio López-Malo, Stella Maris Alzamora, Enrique Palou,  Aspergillus  flavus  growth  in  the  presence  of chemical  preservatives  and  naturally  occurring antimicrobial compounds, Int J Food Microbiol , 99, 2,
(2005) 119-128 https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2004.08.010
[27] Purnama Darmadji, Masatoshi Izumimoto, Effect of chitosan  in  meat  preservation, Meat  Science ,  38,  2,
(1994) 243-254 https://doi.org/10.1016/0309-1740(94)90114-7
[28] Juliana  Bodoprost,  Helmut  Rosemeyer,  Analysis  of Phenacylester Derivatives of Fatty Acids from Human Skin  Surface  Sebum  by  Reversed-Phase  HPLC: Chromatographic Mobility as a Function of Physico- Chemical  Properties, International  Journal  of Molecular Sciences , 8, 11, (2007) 1111-1124
[29] Rengasamy  Ragupathi  Raja  Kannan,  Radjassegarin Arumugam,  Perumal  Anantharaman,  Chemical composition  and  antibacterial  activity  of  Indian seagrasses  against  urinary  tract  pathogens, Food Chemistry , 135, 4, (2012) 2470-2473 https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.07.070
[30] P. Awa, S. Ibrahim, D. A. Ameh, GC/MS Analysis and Antimicrobial  Activity  of  Diethyl  Ether  Fraction  of Methanolic  Extract  from  the  stem  bark  of  Annona senegalensis Pers., International Journal of Pharmaceutical  Sciences  and  Research ,  3,  11,  (2012) 4213-4218 http://dx.doi.org/10.13040/IJPSR.0975- 8232.3(11).4213-18
[31] Filomena  Conforti,  Mariangela  Marrelli,  Giancarlo Statti, Federica Menichini, Dimitar Uzunov, Umberto Solimene, Francesco  Menichini,  Comparative chemical  composition  and  antioxidant  activity  of Calamintha nepeta (L.) Savi subsp. glandulosa (Req.)
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (4) (2019): 105 – 111
Nyman  and  Calamintha  grandiflora  (L.)  Moench (Labiatae), Natural  Product  Research ,  26,  1,  (2012) 91-97 http://doi.org/10.1080/14786419.2010.545356
[32] Kavitha  Alli,  Lakshmi  Narasu  Mangamoori,
Phytochemical compound identification and evaluation  of  antimicrobial  activity  of  Eugenia Bracteata Roxb, International Journal of Biotechnology and Biochemistry , 12, 1, (2016) 73-83