Efek Pati Tahan Cerna Tipe 3 Singkong Kuning ( Manihot esculenta Crantz) Terhadap Kadar Glukosa Darah Puasa Tikus Wistar Model Diabetes Mellitus
Type 3 Resistant Starch Effect of Cassava (Manihot esculenta Crantz ) on Fasting Blood Glucosein Diabetes Mellitus Wistar Rat Models
Ariani Widiastini 1 , Elly Nurus Sakinah 2 , Yudha Nurdian 3 , Jauhar Firdaus 4
1 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran, Universitas Jember
2 Laboratorium Farmakologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jember
3 Laboratorium Parasitologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jember
4 Laboratorium Fisiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jember Jalan Kalimantan No.37 Kampus Tegalboto, Jember, Indonesia, 68121 e-mail korespondensi: ellyns.fk@unej.ac.id , arianiwidia@gmail.com

## Abstrak
Diabetes  Mellitus  Tipe  2  (DMT2)  merupakan  kondisi  gangguan  sekresi  insulin  maupun  gangguan sensitivitas  insulin.  Salah  satu  pilar  perencanaan  DMT2  adalah  dengan  pemberian  terapi  nutrisi medismelalui  pemberian  pati  tahan  cerna  untuk  mengendalikan  glukosa  darah  basal  (puasa  dan setelah  makan).  Pati  singkong  kuning  memiliki  kadar  amilosa  28,57%  dan  amilopektin  51,24%  dan dapat  ditingkatkan  kadarnya  melalui  teknik  modifikasi  yaitu  melalui  metode autoclaving-cooling sehingga diharapkan lebih tahan terhadap enzim amilase. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian pati tahan cerna tipe 3 singkong kuning ( Manihot esculenta Crantz) terhadap kadar  Glukosa  Darah  Puasa  (GDP)  tikus  wistar  model  diabetes  mellitus.  Desain  penelitian  yang digunakan  adalah quasy  experimental  post-test  only  control  group  design menggunakan  16  ekor tikus  wistar  jantan,  yang  dibagi  menjadi  empat  kelompok  yaitu  KN,  K-  (DM),  P1  (DM  +  diet  pati singkong),  dan  P2  (DM  +  RS  Tipe  3).  Induksi  diabetes  menggunakan  diet  tinggi  lemak  dan streptozotocin  dosis  rendah.  Tikus  diberi  diet  pati  singkong  kuning  atau  RS  Tipe  3  selama  28  hari. Pengukuran  kadar  GDP  dengan  metode  GOD-PAP.  Analisis  data  menggunakan One  Way  ANOVA didapatkan  p>0,05.  Hal  ini  menunjukkan  tidak  terdapat  perbedaan  signifikan  pada  kadar  GDP antarkelompok perlakuan.
Kata kunci : singkong, autoclaving-cooling, pati resisten, GDP

## Abstract
Type 2 Diabetes Mellitus (T2DM) is a condition in which both insulin  secretion and insulin  sentivity disturbed. One of therapeutic approach of T2DM is through diet modification using resistant starch (RS)  that  has  proven  controlling  both  postprandial  and  fasting  blood  glucose.  Cassava  starch  has 28,57% amylose and 51,24% amylopectin that can be increased through autoclaving-cooling process. Therefore, it can resist the digestion proess by amylose enzyme. The aim was to describe the effect of type 3 resistant starch cassava (Manihot esculenta Crantz ) on fasting blood glucose (FBG) in Wistar diabetic rat models. This study was quasy experimental post-test only control group design using 16 Wistar rats  divided into 4 groups, KN (normal), K- (DM), P1 (DM + cassava starch diet), and P2 (DM + type 3 RS cassava diet). High fat diet (HFD) and low dose streptozotocin (STZ) used as diabetic agents. Rats fed cassava starch or type 3 RS cassava diet for 28 days. GOD-PAP method used to measure the FBG level. The data analyzed using One Way ANOVA test with p>0,05 as significant value. The result shows no significant differences within experimental groups.
Keywords : cassava, autoclaving-cooling, resistant starch, FBG

## Pendahuluan
Diabetes Mellitus (DM) merupakan suatu kelompok penyakit metabolik dengan karakteristik hiperglikemia  yang  terjadi  karena  kelainan  sekresi insulin,  kerja  insulin,  atau  kedua-duanya.  DM ditegakkan  bila  terdapat  gejala  khas  berupa poliuria,  polidipsia,  polifagi,  dan  penurunan  berat badan  yang  tidak  dapat  dijelaskan  penyebabnya dan  pemeriksaan  Glukosa  Darah  Sewaktu  (GDS) ≥ 200  mg/dl  dan  pemeriksaan  Glukosa  Darah  Puasa (GDP)  ≥  126  mg/dl  (Perkeni,  2015). Saat  ini diperkirakan  9,1  juta  orang  penduduk  Indonesia didiagnosis  sebagai  penyandang  DM.  Dengan angka tersebut Indonesia menempati peringkat ke- 5  dunia,  atau  naik  dua  peringkat  dibandingkan data  IDF  tahun  2013  yang  menempati  peringkat ke-7  di  dunia  dengan  7,6  juta  penyandang  DM (Anonim, 2015). Obesitas sebagai salah satu faktor predisposisi  DMT2  memodulasi  penigkatan  FFA yang  mengakibatkan  peningkatan  lipolisis  adiposa yang  meningkatkan  konsentrasi  FFA  di  sirkulasi sehingga  mengganggu  jalur signaling  insulin. Keadaan  ini  menyebabkan  terganggunya  uptake glukosa  di  perifer,  juga  terjadi  peningkatan gkukoneogenesis  di  hepar  sehingga  terjadi  dua input glukosa di sirkulasi darah. Sel beta pankreas yang  tidak  mampu  mengompensasi  peningkatan sekresi  insulin  menyebabkan  sekresi  insulin menurun  sehingga  terjadilah    hiperglikemia (Tjandrawinata, 2016 dan Defronzo, 2004).
Tujuan penatalaksanaan DM melalui pengendalian glukosa  darah,  tekanan  darah,  berat  badan,  dan profil  lipid,  salah  satunya  melalui  perencanaan diet.  Salah  satu  pemilihan  diet  yang  tepat  adalah melalui konsumsi pati tahan cerna/ resistant starch (RS), yaitu sejumlah pati dan produk degradasi pati yang  tidak  diserap  di  usus  kecil  sehingga berpotensi  untuk  digunakan  dalam  mendorong pertumbuhan  bakteri  probiotik  melalui  proses fermentasi  oleh  bakteri  probiotik  di  dalam  usus besar  (Sajilata et  al. ,  2006).  Hasil  fermentasi  ini akan menghasilkan asam lemak rantai pendek/ Short chain fatty acids (SCFA) yang melalui serangkaian mekanisme diakui dapat mempertahankan kadar glukosa darah pada pasien diabetes,  antara  lain  melalui  mekanisme  aktivasi reseptor  Ffar2  dan  Ffar  3  dengan  meningkatkan hormon  GLP1  dan  PYY  (Besten et  al., 2013)  dan aktivasi  AMP- activated  protein  kinase (AMPK)  di hepar (Sakakibara et al, 2006).
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Lin et  al (2012) dengan  memberikan  diet  kombinasi  asetat, butirat,  dan  propionat  yang  merupakan  produk akhir  fermentasi  RS  diberikan  selama  4  minggu menunjukkan  penurunan  kadar  GDP  secara
signifikan.  Namun,  penelitian  yang  dilakukan  oleh Mustaghfiroh  dan  Probosari  (2014)  dilakukan dengan  pemberian  diet  kombinasi  tepung  tempe dan  pati  garut  termodifikasi  dengan  metode autoclaving-cooling pada  tikus  model  diabetes. Hasil menunjukkan bahwa tidak terjadi penurunan (GDP)  yang  signifikan  pada  semua  kelompok  baik kontrol  maupun  perlakuan  setelah  14  hari perlakuan.  Pemberian  diet  ini  diduga  kurang efektif  sebagai  alternatif  bahan  hipoglikemik dengan beberapa kemungkinan yaitu pembentukan  tikus  diabetes  yang  belum  tepat sebagai  model  hewan  coba  dan  terjadinya peningkatan  kadar  glukosa  darah  yang  tidak seharusnya  yang  disebabkan  oleh  kandungan bahan  makanan  pada  pati  garut  maupun  tepung tempe.
Singkong  kuning  ( Manihot  esculenta Crantz) merupakan  salah  satu  bahan  makanan  pokok sumber karbohidrat yang diproduksi dalam jumlah besar di Indonesia, selain beras dan jagung (Asbar et  al. ,  2014).  Indeks  Glikemik  (IG)  pada  pati singkong  kuning  yaitu  59,34±32,42  pada  pasien diabetes  dan  40,12±25,27  pada  pasien  non diabetes  (Itam et  al., 2012).  Angka  ini  termasuk rendah  bila  dibandingkan  dengan  beras  yang merupakan  sumber  pangan  pokok  masyarakat Indonesia  memiliki  IG  99,26  (Idril et  al., 2013). Kadar  amilosa  pati  singkong  kuning  28,57%  dan amilopektin  51,24%.  Kadar  pati  tahan  cerna memiliki  kandungan  alami  pada  setiap  tanaman namun  dalam  konsentrasi  yang  berbeda-beda (Nugent,  2005)  dan  dapat  ditingkatkan  kadarnya melalui  teknik  modifikasi  yaitu  melalui  metode autoclaving-cooling atau siklus pemanasan bertekanan dan pendinginan (Setiarto, 2015). Pada metode  ini  pati  akan  mengalami  proses retrogradasi  dan  gelatinisasi  sehingga  semakin tahan teradap enzim amilase (Setiarto, 2015).
Kadar  GDP  adalah  salah  satu  metode  pengukuran homeostasis  glukosa  yang  umum  dilakukan, mudah,  cepat,  terjangkau  seluruh  pasien,  dan menandakan  kondisi  basal  (Suyono,  2014). Metode ini digunakan untuk mendiagnosis DM dan sebagai  kontrol  individu  dengan  DM  yang melakukan  pemeriksaan  rutin  tiap  bulannya dengan  sensitivitas  83%-95%  dan  spesifitas  96,6% (Anonim,  2003).  Berdasarkan  kandungan  potensi singkong  kuning  dan  modifikasi  pati  singkong dengan  penambahan  metode autoclaving-cooling sehingga  terbentuk  RS  tipe  3,  penulis  ingin meneliti  tentang  pengaruh  pemberian  pati  tahan cerna  tipe  3  singkong  kuning  ( Manihot  esculenta Crantz) terhadap kadar Glukosa Darah Puasa (GDP) tikus wistar model diabetes mellitus.

## Metode Penelitian
Desain  penelitian  yang  digunakan  adalah quasy experimental  post-test  only  control  group  design. Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Februari-April 2017 di Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember, Laboratorium Biokimia  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Jember, dan  Laboratorium  Biosains  Politeknik  Negeri Jember.  Populasi  penelitian  ini  adalah  tikus  putih jantan strain Wistar.  16  ekor  tikus  wistar  jantan, dibagi menjadi empat kelompok yaitu KN, K- (DM), P1 (DM + diet pati singkong), dan P2 (DM + RS Tipe
3). Kriteria inklusi adalah tikus dengan berat badan
(BB)  150-200  gram,  tikus  jantan,  umur  2-3  bulan, sehat  fisik  ditandai  dengan  nafsu  makan  baik  dan berperilaku baik dan normal. Kriteria eksklusi pada penelitian  ini  adalah  tikus  yang  selama  penelitian tidak  mau  makan,  diare,  dan  mati  sebelum maupun selama penelitian berlangsung.
Perhitungan  menggunakan  aplikasi  perhitungan sampel  G  Power  versi  3.1  dan  didapatkan  jumlah sampel 16 ekor dengan 4 ekor di tiap kelompok.
Pati  singkong  kuning  diekstraksi  patinya  dengan cara: umbi dikupas, dicuci, dihancurkan, diekstraksi  dengan  air  (umbi:air  =  1:4),  disaring, diendapkan  selama  24  jam,  dan  dikeringkan dengan  oven  (suhu  40 0 C),  dan  terakhir  disaring dengan saringan 100 mesh.  Pembentukan RS Tipe 3  dilakukan  dengan  metode autoclaving-cooling yang  dikemukakan  Lehmann et  al. (2002).
Sebanyak 20 gram pati singkong kuning dalam labu Erlenmeyer  300  ml  yang  disuspensikan  dalam akuades  (20%  b/b).  Sampel  kemudian  dipanaskan pada  suhu  tinggi  dalam  autoklaf  121 0 C  selama  1 jam.  Pasta  pati  didinginkan  pada  suhu  ruangan selama 2 jam, dibekukan pada suhu -20 0 C, terakhir dikeringkan di dalam oven bersuhu 60 0 C. RS Tipe 3 yang  terbentuk  kemudian  digiling  dan  diayak  60 mesh.Selanjutnya,  sampel  dianalisis dengan menggunakan Scanning  Electron  Microscope (SEM).
Pembuatan  tikus  model  DMT2  yaitu  pemberian diet tinggi lemak / (HFD) dengan pemberian kuning telur bebek 0,01 mg/kgBB (Ariantari, 2010). Empat minggu  setelah  pemberian  diet,  tikus  dipuasakan semalam,  hewan  kemudian  dinjeksikan  STZ dengan dosis rendah (35 mg/kgBB dalam 0.1M, pH 4.5)  secara  intraperitonial  (Srinivasan,  2005). Kemudian  ditunggu  1  minggu  dan  diukur  kadar GDP untuk mengonfirmasi keadaan diabetes pada hewan  coba.  Hewan  coba  diberikan  diet  sesuai kelompok dan air minum secara ad libitum selama 4 minggu.
Pemberian  dua  tipe  diet  yang  berbeda  untuk membandingkan efek kuratif kontrol glukosa darah
puasa  antara  kombinasi  diet  pakan  standar  dan diet  pati  singkong  kuning  dengan  diet  pakan standar dan diet RS Tipe 3 singkong kuning dimana dilakukan  pencatatan  sisa  pakan  yang  dikonsumsi oleh  tikus  tiap  harinya.  Menurut  Rahmawati  dan Yunita (2008) kebutuhan makan tikus wistar 20-30 gram/ekor/hari  sehingga  kebutuhan  energi  tikus per  hari  adalah  68,6  kkal.  Pada  penelitian  ini kelompok  kontrol  diberikan  diet  pakan  normal sebanyak 30 gram. Pakan perlakuan diformulasikan  untuk  mencapai  isokalori  dengan 2/3  dari  total  kalori  digantikan  pati  singkong kuning dan RS Tipe 3.
Tikus  dipuasakan  selama  8  jam  kemudian diterminasi  dengan  anestesi  pada  kandang tertutup  yang  sebelumnya  telah  diisi  kapas  yang dibasahi  dengan  eter.  Pengambilan  darah dilakukan  secara intracardiac sebanyak  5ml kemudian  dilakukan  pengukuran  dengan  metod GOD-PAP.  Pembacaan  dilakukan  menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 546 nm.  Adapun  perhitungan  kadar  GDP  dengan metode GOD-PAP yaitu.
Data diolah dengan software SPSS versi 23.0. Data numerik dilakukan uji normalitas Shapiro-Wilk dan uji homogenitas Levene. Didapatkan data terdistribusi  normal  dan  varians  data  sama.
Selanjutnya dilakukan uji One Way ANOVA.
Gambar  1.  Hasil  Pengamatan  Pati  Singkong  Kuning  dan RS  Tipe  3  Singkong  Kuning  dengan  SEM dengan perbesaran 1000x.
Gambar 2. Hasil Pengamatan RS Tipe 3 Singkong Kuning dengan SEM dengan perbesaran 1000x.

## Hasil Penelitian
Pengamatan  menggunakan Scanning  Electron Microscope (SEM)  dilakukan  untuk  menganalisis struktur/morfologi  pati  singkong  kuning  dan  RS Tipe  3  yang  ditunjukkan  pada  Gambar  1  dan Gambar  2.  Ukuran  granula  pati  singkong  kuning adalah  100 μm  dengan  bentuk  bulat.  Ukuran  RS Tipe  3  adalah  2  mm  membentuk  suatu  granula yang pecah/tidak utuh.
Tabel  1. Rata-rata  hasil  pengukuran  BB  sebelum  dan sesudah pemberian HFD dan STZ Sampel Penelitian BB Awal(g) (N=16) BB setelah pemberian HFD dan STZ (g) (N=16) K(N) 170,25 16,68 200 K(-) 161,25 258 P1 162,00 2 P2 151,75 226 *Data disajikan sebagai rata-rata ± SEM
Berdasarkan  Tabel  1  dapat  diketahui  terdapat peningkatan BB tikus setelah pemberian diet HFD.
Tabel 2 Rata-rata pengukuran GDP sebelum dan sesudah pemberian HFD dan STZ
Sampel Penelitian GDP Awal(mg/dl) (N=16) GDP setelah pemberian HFD dan STZ (mg/dl) (N=16) K(N) 106,07 97,66 8,01 K(-) 117,29 107,44 8,64 P1 89,61 147,40 44,37 P2 96,48 122,53 35,63
Berdasarkan  Tabel    2  dapat  diketahui  terdapat peningkatan  kadar  GDP  pada  kelompok  K(-),  P1, dan  P2  dengan  nilai  diatas cut  off hiperglikemia puasa sesuai dengan penelitian Zhang (2011).
Tabel 3. Rata-rata intake makanan tikus Intake Makanan (g) KN K(-) P1 P2 1 18,44 2 ,25 24,81 21,56 19,5
2 18 21,5 17,83 11,67 3 17,18 19,86 13,32 13,75 4 17,31 19,43 12,81 17,81
Berdasarkan  hasil  analisis,  rata-rata intake makanan  tikus  menunjukkan  tidak  terdapat perbedaan  antarkelompok  perlakuan  dengan  nilai p=0,77  (p>0,05).  Hasil  GDP post pemberian  diet menunjukkan  penurunan  GDP  pada  kelompok  P1 dan P2 serta peningkatan GDP pada kelompok K(-) akan  tetapi  secara  statistik  tidak  mengalami perbedaan  penurunan  secara  signifikan  dengan nilai p=0,827 (p>0,05).

## Tabel  4.  Rata-rata  pengukuran  GDP  sebelum  dan sesudah pemberian diet
Sampel Penelitian GDPsetelah pemberian HFD dan STZ (mg/dl) (N=16) GDP Akhir (mg/dl) (N=16) K(N) 97,66 8,01 103,49 9,79 K(-) 107,44 8,64 118,39 24,24 P1 147,40 44,37 119,94 34,10 P2 122,53 35,63 112,53 33,29

## Pembahasan
Berdasarkan  data  Tabel  1  diketahui  bahwa  tikus yang  diberikan  HFD  selama  4  minggu  mengalami peningkatan BB. Menurut Roden (2004) pemberian HFD menyebabkan terjadinya penumpukan  simpanan  lemak  pada  jaringan adiposa melalui peningkatan kerja sterol regulatory  element  binding  protein (SREBP). Menurut  Jeon  dan  Osborne  (2012)  peningkatan kerja  SREBP  ini  akan  menginduksi  hipertrofi  dan hiperplasi  adiposit  sehingga  terjadi  penumpukan lemak viseral.

## Minggu
Tabel 2 menunjukkan pemberian STZ dosis rendah pasca  pemberian  HFD  mampu  menimbulkan kondisi hiperglikemia pada tikus kelompok K(-), P1, dan  P2.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Zhang  (2011)  dimana  nilai cut  off kadar  GDP  tikus  model  diabetes  yaitu  100  mg/dl. Pemberian  STZ  dosis  rendah  dapat  menginduksi terganggunya sekresi insulin yang menyerupai late stage DMT2.  Pemberian  STZ  dosis  rendah kemudian  menstimulasi  progresivitas  resistensi insulin pada tikus model diabetes. Menurut Lenzen (2008),  mekanisme  toksisitas  yang  ditimbulkan oleh STZ melalui aktivitas alkilasi DNA. Kandungan methyl yang  terdapat  di  STZ  akan  menyebabkan kerusakan  yang  akhirnya  akan  menyebabkan fragmentasi  DNA.  Usaha  memperbaiki  DNA kemudian dilakukan oleh poly (ADP -ribose ) polymerase (PARP)  yang  terstimulasi  secara berlebihan. Reduksi Nicotinamide-adenine dinucleotide (NAD + )  dan  ATP  terjadi.  Penurunan simpanan  energi  seluler  tersebut  menyebabkan nekrosis sel beta  pankreas. Menurut Srinivasan et al (2005),  keadaan  resistensi  yang  diikuti  dengan penurunan  fungsi  sel  beta  secara  masif  akan mewujudkan kondisi tikus yang semula mengalami hiperglikemia postprandial tidak mampu mengembalikan glukosa basal terjadilah hiperglikemia puasa.
Hasil  pengamatan  dengan  SEM  pada  Gambar  1 menunjukkan struktur native pati singkong kuning yang  belum  mengalami  gelatinisasi.  Dapat  dilihat bentuk  pati  singkong  kuning  berbentuk  bulat, dimana  hasil  yang  peneliti  dapatkan  mendekati penelitian  sebelumnya  oleh  Asbar et  al. (2014) yang menyebutkan bahwa struktur pati berbentuk bulat dan tampak struktur yang halus menandakan struktur  pati  yang  belum  mengalami  kerusakan. Gambar  4.2  menunjukkan  pengamatan  terhadap bentuk dan ukuran pati singkong kuning yang telah melewati  proses  modifikasi autoclaving-cooling . Proses ini menyebabkan granula pati hancur (tidak membentuk granula yang utuh). Proses autoclaving-cooling merupakan  gabungan  proses gelatinisasi  dan  retrogradasi,  selama  proses pemanasan  struktur  granula  pati  akan  mengalami kerusakan  dan  saat  pendinginan  akan  terjadi kristalisasi  kembali  komponen  pati  baik  amilosa maupun amilopektin (retrogradasi). Hasil pengamatan  SEM  RS  Tipe  3  yang  dibentuk  pada penelitian ini serupa dengan penelitian sebelumnya  yang  juga  dilakukan  oleh  Asbar et  al.
(2014).
Pemberian  RS  Tipe  3  pada  penelitian  ini diharapkan  dapat  menurunkan  kadar  GDP  tikus hiperglikemia, namum dalam penelitian ini berlaku sebaliknya. Berdasarkan Tabel 2, kelompok P1 dan
P2  dalam  penelitian  ini  mengalami  penurunan kadar GDP namun secara statistik tidak mengalami perbedaan  penurunan  secara  signifikan.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  pemberian  pati  singkong kuning  dan  RS  Tipe  3  kurang  efektif  sebagai hypoglycemic agent.
Pada  penelitian  ini  tikus  model  diabetes  tidak hanya  diberikan  diet  pati  dan  RS  saja  namun dikombinasikan  dengan  pakan  normal  dengan pemberian  diformulasikan  mencapai  isokalori dengan  2/3  dari  total  kalori  diberikan  diet  pati singkong  kuning  maupun  RS.  Menurut  ESFA (2011),  pemberian  diet  RS  saja  atau  tanpa menurunkan  asupan  karbohidrat  pada  makanan tidak  akan  menurunkan  kadar  glukosa  darah. Pemberian  diet  diberikan  secara ad  libitum dan dilakukan  pengukuran  sisa  makanan  tiap  harinya. Rata-rata intake makanan  selama  28  hari  tikus penelitian  mencapai  belum  mencapai  isokalori yaitu  20-30  g/ekor/hari.  Analisis  sisa intake makanan oleh tikus menunjukkan  hasil yang tidak beda  antarkelompok  perlakuan.  Jumlah intake makanan pada masing-masing tikus yang sama dan tidak  mencapai  isokalori  ini  mempengaruhi  hasil pengukuran kadar GDP yang tidak signifikan.
Mikroflora  yang  terdapat  di  kolon  manusia menunjukkan suatu ekosistem yang kompleks dan memengaruhi  fisiologi host melalui  berbagai mekanisme.  Menurut  Lozupone et  al (2012)  pada keadaan  normal  manusia  memiliki  >1000  species mikroflora yang sebagian besar terdiri dari bakteri Bacteriodetes dan Firmicutes dan sisanya terdapat di  tubuh  namun  jumlah  yang  lebih  sedikit,  yaitu Actinobacteria,
Proteobacteria,
dan Verrucomicromicrobia. Sebuah studi yang dilakukan  oleh  Alpert et  al (2008)  melakukan penelitian pada  12 ekor tikus strain wistar dan 12 ekor tikus Fischer yang diberikan bakteri fekal yang terdapat pada manusia normal. Hasil menunjukkan bahwa  tikus  wistar  dan Fischer menunjukkan kemiripan populasi mikroflora yang kompleks yang terdapat  di  mikroflora  manusia  dengan  nilai  77% dan 88% dalam kurun waktu 3 bulan dan tikus ini dapat  mempertahankan  keadaan  mikroflora manusia selama kurang lebih satu tahun. Dan pada penelitian  tersebut,  tikus  wistar  dan Fischer juga dibandingkan  dengan  tikus  wistar  konvensional yang  sama  sekali  tidak  mendapat  induksi mikroflora  fekal  manusia.  Hasil  menunjukkan kemiripan hanya mencapai 25% yang mengonfirmasi  bahwa  terdapat  perbedaan  yang signifikan  antara  mikroflora  di  manusia  dan  tikus wistar  (p<0,05).  Hal  tersebut  menjelaskan  bahwa jelas  terdapat  perbedaan  komposisi  dan  aktivitas enzimatik  mikroflora  yang  terdapat  di  manusia maupun  tikus  wistar.  Pada  penelitian  ini  selain
kurangnya  pemberian  diet  yang  lama  dan kemungkinan  juga  oleh  karena  perbedaan mikroflora kolon tikus dengan manusia memengaruhi  kadar  GDP  yang  tidak  mengalami penurunan secara signifikan.
Penelitian-penelitian terdahulu menunjukkan inkonsistensi  apakah  pemberian  diet  RS  memang memiliki efek terhadap homeostasis glukosa. Pada penelitian  ini,  salah  satu  kemungkinan  tidak berefeknya  adalah  durasi  pemberian  RS  selama  4 minggu  yang  masih  tergolong  akut/pendek. Menurut  Robertson  (2012)  diketahui  bahwa microflora pada sistem pencernaan membutuhkan waktu  adaptasi  yang  lama  terhadap  pemberian diet  RS  hingga  mampu  mendorong  pelepasan hormon  pencernaan  GLP-1  dan  PYY.  Oleh  sebab itu, perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut dengan pemberian RS dalam kurun waktu yang lebih lama (8  minggu).  Kedua,  kurang  tepatnya  teknis  dan penentuan  dosis  pemberian  diet  RS.  Pada penelitian ini diet diberikan dengan mencampurkan  pakan  normal  dan  pati/RS  yang sebelumnya  dilunakkan  menggunakan  air  dan dibentuk seperti bola, bentuk yang sangat berbeda dibandingkan  pakan  normal  merk  Turbo  yang biasanya  diberikan,  sehingga  kemungkinan  tikus tidak  maksimal  dalam  konsumsi  makanan.  Ketiga, pengukuran kadar GDP tidak serta merta mewakili penilaian klinis dan penelitian oleh karena glukosa plasma  hanya  mewakili  suatu  waktu  pengukuran dan menurut Robertson (2012)
tidak mencerminkan kompleksitas normal kinetik glukosa.  Keempat,  akibat  dari  stress  selama perlakuan.  Stress  dapat  timbul  oleh  karena ketidaknyamanan  pemberian  kuning  telur  sebagai HFD  melalui  pemberian  sonde.  Hal  ini  sesuai dengan penelitian oleh Balcombe et al (2004) yang menyebutkan  ada  korelasi  positif  antara  stress dengan  penurunan  sistem  imun  baik  spesifik maupun  non  spesifik  yang  mengakibatkan penurunan produksi antioksidan. Sementara tubuh menghasilkan  radikal  bebas  alami  melalui  proses metabolisme,  kurangnya  jumlah  antioksidan  akan menyebabkan stres oksidatif. Pada keadaan tubuh seperti  ini,  sel  tubuh  rentan  untuk  mengalami kerusakan  akibat  serangan  dari  benda  asing maupun  radikal  bebas  itu  sendiri.  Kemungkinan hal-hal  tersebut  menjadi  penyebab  kemungkinan tidak  ada  perbedaan  secara  signifikan  kadar  GDP tikus penelitian.

## Kesimpulan
Tidak  terdapat  perbedaan  efek  pemberian  pati singkong  kuning  dan  pati  tahan  cerna  tipe  3 singkong  kuning  ( Manihot  esculentas Crantz)
terhadap  kadar  Glukosa  Darah  Puasa  (GDP)  tikus model diabetes mellitus.
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  diperoleh  maka diperlukan penelitian lebih lanjut dengan menggunakan  parameter  lainnya  untuk  menilai homeostasis  glukosa  seperti  TTGO  dan  insulin untuk  memastikan  bahwa  telah  terbentuk  kondisi resistensi  insulin.  Diperlukan  tambahan  waktu pemberian  diet  RS  Tipe  3  untuk  menimbulkan perubahan  mikroflora  pada  sistem  pencernaan sehingga  pemberian  diet  RS  Tipe  3  dapat  benar- benar  memberikan  efek  terhadap  homeostasis glukosa.  Pada  penelitian  ini  belum  didapatkan bukti  yang  efektif  RS  Tipe  3  sebagai  bahan alternatif hipoglikemik namun konsumsi diet tinggi serat  pada  penderita  Diabetes  Mellitus  Tipe  2 tetap disarankan.

## Daftar Pustaka
Alpert, C., S. Sczesny, B. Gruhl, dan M. Blaut. 2008. Long-term  stability  of  the  human  gut microbiota in two different rat strains .Current Issue Molecular Biology 10:17-24.
Anonim.  2003.  Screening  for  Type  2  Diabetes: Report  of  a  World  Health  Orhanization  and International  Diabetes  Federation  Meeting. http://www.who.int/diabetes/publications/e n/screening_mnc03.pdf  [Diakses  pada  3 Desember 2017].
Anonim. 2015. IDF Diabetes Atlas, Seventh Edition. http://www.diabetesatlas.org/resources/201 5-atlas.html [Diakses pada 8 Juni 2017].
Ariantari,  N.P.,  S.C.  Yowani  dan  D.A.  Swastini.
2010.  Uji  Aktivitas  Penurunan  Kolesterol Produk Madu Herbal yang Beredar di Pasaran Pada  Tikus  Putih  Diet  Lemak  Tinggi. Jurnal Kimia 4(1): 15-19.
Asbar,  R.,  S.  Sugiyono  dan  H.  Bambang.  2014. Peningkatan Pati Resisten Tipe 3 Pada Tepung Singkong  kuning  Modifikasi  (Mocaf)  Dengan Perlakuan  Pemanasan-pendinginan  Berulang dan  Aplikasinya  Pada  Pembuatan  Mi  Kering. Tesis. Bogor: IPB.
Balcombe,  J.P.,  N.D.  Barnard,  dan  C.  Sandusky. 2004.  Laboratory  Routines  Cause  Animal Stress. American  Association  for  Laboratory Animal Science 43(6): 42-51.
Besten,  G.D.,  V.E.  Karen,  K.G.Albert,  V.Koen, J.R.Dirk, dan M.B. Barbara. 2013. The Role of Short-Chain  Fatty  Acids  in  The  Interplay Between  Diet,  Gut  Microbiota,  and  Host
Energy Metabolism . Journal of Lipid Research 54(9): 2325-2340.
DeFronzo  R.A.  2004.  Pathogenesis  of  Type  2
Diabetes  Mellitus. The  Medical  Clinics  of North America 88: 787-835.
Idril,  I.N.,  D.Aly,  dan  F.W.  Abdullah.  2013.
Preliminary  study:  glycemic  index  of  brown and  white  rice  variant  IR64  in  healthy  adult men. IJIHS 1(1): 37-41.
Jeon,  T.I.  dan  T.F.  Osborne.  2012.  SREBPs:
Metabolic  integrators  in  physiologi  and metabolism. Trends  in  Endocinology  and Metabolism 23(2): 65-72.
Lehmann  U.,  G.Jacobash,  dan  D.Schmiedl.  2002. Characterization  of  Resistant  Starch  Type  III from  Banana  (Musa  acuminate). Journal  of Agricultural  and  Food  Chemistry ;  50(18): 5236-5240.
Lenzen,  S.  2008.  The  Mechanisms  of  Alloxan  and Streptozotocin Induced Diabetes.
Diabetologia 51(2): 216-226.
Lin,  H.V.,  A.  Frasetti,  E.J.  Kowalik,  A.R.  Nawrocki, M.M.  Lu,  J.R.  Kosinski,  J.A.  Hubert,  D.  Szeto, X. Yao, G. Forrest, D.J. Marsh. 2012. Butyrate and  Propionate  Protect  Against  Diet-Induced Obesity and Regulate Gut Hormones visa Free Fatty Acid Receptor 3-Independent
Mechanisms. PloS ONE 7(4): e35240.
Lozupone,  C.A.,  J.I.Stombaugh,  J.I.Gordon,  J.K.
Jansson,  R.  Knight.  2012.  Diversity,  stability, and resilience of the human gut microbiota .Nature 489(7415): 220-230.
Mustagfiroh I.T. dan E. Probosari. 2014. Pengaruh Pemberian  Tepung  Tempe  dan  Pati  Garut ( Marantha arundinacea ) Termodifikasi
Terhadap  Kadar  Glukosa  Darah  Tikus Hiperglikemi. Journal  of  Nutrition  College 1(3); 76-82.
Nugent,  A.P.  2005.  Health  Properties  of  Resistant Starch. British Nutritional Foundation Nutritional Bulletin 30:27-54.
PERKENI.  2015. Konsensus  Pengelolaan  Diabetes Mellitus Tipe 2 di Indonesia 2015 . Jakarta: PB PERKENI.
Robertson, M.D. 2012. Dietary-resistant starch and glucose  metabolism. Co-Clinical  Nutrition
15(4): 362-367
Roden,  M.  2004.  How  free  fatty  acids  inhibit glucose  utilization  in  human  skeletal  tissue. News physiological science ; 19: 92-96.
Sajilata  M.G.,  Rekha  S.S.,  dan  Puspha  R.K.  2006. Resistant  Starch  a  review. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety 5(1): 1-17. Sakakibara, S., T.Yamauchi, Y.Oshima,
Y.Tsukamoto,  dan  T.Kadowaki.  2006.  Acetic acid  activates  hepatic  AMPK  and  reduces hyperglycemia  in  diabetic  KK-A(y)  mice.
Biochemical ad Biophysical Research Communications 344: 597 – 604.
Setiarto,  R.H.B.  2015.  Peningkatan  Pati  Resisten Tepung  Talas  Melalui  Fermentasi  dan Pemanasan  Bertekanan-Pendinginan  Serta Evaluasi  Sifat  Prebiotiknya. Tesis .  Bogor:
Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian.
Sherwood, L.  2009. Human Physiology: From Cells to  Systems.  6 th Edition .  Singapore:  Cengage. Tejemahan  B.U.  Pendit.  2011. Fisiologi Manusia: Dari Sel ke Sistem. Jakarta: EGC.
Srinivasan K., B.Viswanad, A.Lydia, C.L.Kaul, dan P. Ramarao. 2005. Combination of high-fat diet- fed and low dose streptozotocin-induced ype 2  diabetes  rat  model  and  pharmacological screening. Pharmacological Research 52: 313- 320.
Suyono,  S.  2014.  Diabetes  Mellitus  Di  Indonesia.
Dalam  Buku  Ajar  Ilmu  Penyakit  Dalam  Jilid  II Edisi  VI.  Editor  Setiati  S.,  A.Idrus,  W.S.Aru, S.K.Marcellus,  S.  Bambang,  dan  F.S.  Ari. Jakarta: Internal Publishing.
Tjandrawinata,  R.R.  2016.  Patogenesis  Diabetes Tipe  2:  resistensi  Insulin  dan  Defisiensi Insulin.
https://www.researchgate.net/publication/2 92615802 [Diakses pada 11 Desember 2017].
Zhang,  P.  2011.  Glucose  Tolerance  Test  in Mice .Bio-protocol: e159.