Preparasi dan Karakterisasi Sistem Pembawa Liposom dari Ekstrak Etanol Daun Miana ( Coleus atropurpureus L. Benth)
Muhamad Handoyo Sahumena 1*, Suryani 2 , Widya Pratiwi 3
1,2,3 Jurusan Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Halu Oleo, Kota Kendari, Indonesia.
* E-mail: handoyosahumena@uho.ac.id
Article Info: Received: 18 Januari 2023 in revised form: 23 Maret 2023 Accepted: 29 April 2023 Available Online: 1 Mei 2023

## ABSTRACT
Miana  ( Coleus  atropurpureus L.  Benth)  is  a  plant  in  the ornamental plant group that has benefits for the body. The part of the plant that is efficacious as medicine is on the leaves with a brownish red color. However, extracts from miana leaves are hydrophilic,  making  it  difficult  to  penetrate  biological membranes  which  are  rich  in  lipids  and  difficult  to  use topically.  One  way  to  overcome  this  problem  is  by  making liposome  carrier  systems.  Liposomes  are  carrier  systems consisting of phospholipids and cholesterol with the ability to encapsulate  hydrophilic  and  hydrophobic  compounds. Parameters  for  the  success  of  the  liposome  formula  include vesicle shape, high adsorption efficiency and liposome vesicle size using a particle size analyzer (PSA). The liposome formula was obtained through the thin layer hydration method using phosphatidylcholine  and  cholesterol.  The  composition  of  the optimum  liposome  formula  of  miana  leaf  ethanol  extract  is 0.2% phosphatidylcholine and 0.4% cholesterol. The optimum formula  obtained  is  a  complex  spherical  structure,  efficiency entrapment  92.91%,  vesicle  size  573.6  nm  and  polydispersity index is 0,505. Keywords : Miana Leaf; Coleus atropurpureus; Phosphatidydilcholine; Liposome

## Corresponding Author:
Muhamad Handoyo Sahumena Jurusan Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo
Kota Kendari Indonesia E-mail: handoyosahumena@uho.ac.id
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6 th Style): Sahumena, M.H.,Suryani.,Pratiwi,W. (2023). Preparasi dan Karakterisasi Sistem Pembawa Liposom dari Ekstrak Etanol Daun Miana (Coleus atropurpureus L. Benth) . Indonesian Journal of Pharmaceutical (e-Journal),
3 (2), 297-308.
Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal) 2023; 3 (2): 297 – 308 ISSN : 2775- 3670 (electronic) Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/ijpe/index DOI: 10.37311/ijpe.v3i2.20414

## ABSTRAK
Miana (Coleus atropurpureus L. Benth) merupakan tanaman dalam kelompok jenis tanaman hias yang memiliki khasiat bagi tubuh. Bagian tanaman yang berkhasiat sebagai obat berada pada  bagian  daun  dengan  warna  merah  kecoklatan.  Akan  tetapi  ekstrak  dari  daun  miana bersifat hidrofilik sehingga sukar menembus membran biologis yang kaya akan lipid dan sulit digunakan  secara  topical.  Salah  satu  cara  untuk  mengatasi  hal  tersebut  dengan  pembuatan sistem  pembawa  liposom.  Liposom  merupakan  sistem  pembawa  terdiri dari  fosfolipid  dan kolesterol dengan kemampuan mengenkapsulasi senyawa bersifat hidrofilik dan hidrofobik. Parameter keberhasilan formula liposom meliputi bentuk vesikel, efisiensi penjerapan yang tinggi  serta  ukuran  vesikel  liposom  menggunakan  particle  size  analyzer  (PSA).  Formula liposom diperoleh melalui metode hidrasi lapis tipis dengan menggunakan fosfatidilkolin dan kolesterol.  Komposisi  formula  optimum  liposom  ekstrak  etanol  daun  miana  adalah  0,2% fosfatidilkolin  dan  0,4%  kolesterol.  Formula  optimum  diperoleh  struktur  bola  kompleks (spherical), efisiensi penjerapan 92,91%, ukuran vesikel 573,6 nm serta indeks polidispersitas 0,505.
Kata Kunci: Daun Miana; Fosfatidilkolin; Liposom

## 1. Pendahuluan
Tanaman Miana ( Coleus atropurpereus L. Benth) merupakan salah satu tanaman dari genus Coleus yang berasal dari Asia Tenggara dan terdapat di berbagai wilayah tropis  salah  satunya  di  wilayah  Indonesia,  terutama  pada  Provinsi  Sulawesi.  Miana termasuk  tanaman  hias  yang  unik  karena  memiliki  varietas  yang  sangat  banyak, perbedaan  varietas  tersebut  dapat  dilihat  dari  perbedaan  warna  daun  yang  sangat beragam.  Warna-warni  daun  ini  disebabkan  oleh  pigmen  yang  dimilikinya.  Formasi pigmen  di  dalam  daun  ditentukan  secara  genetik  dan  juga  dipengaruhi  faktor lingkungan  seperti  cahaya  dan  lingkungan.  Corak,  bentuk  dan  warna  miana beranekaragam,  tetapi  yang  berkhasiat  obat  adalah  daun  yang  berwarna  merah kecoklatan [1]. Tanaman yang dikelompokkan ke dalam jenis tanaman hias ini ternyata memiliki khasiat yang sangat banyak. Banyak penelitian yang telah dilakukan terhadap jenis tanaman Miana ini [2].
Telah  diketahui  beberapa  studi  yang  dilakukan  tentang  senyawa  aktif  daun miana  ( Coleus  atropurpereus) yaitu  berupa  flavonoid,  saponin,  steroid,  tanin,  minyak atsiri,  eugenol,  senyawa  polifenol,  alkaloid,  etil  salisilat,  kalsium  oksalat,  senyawa rosmarinic acid (RA) [1]. Salah satu senyawa yang bermanfaat pada tanaman ini adalah flavonoid berupa antosianin [3].
Antosianin  dan  flavonoid  lain  dibutuhkan  karena  kemampuannya  sebagai antioksidan yang berpotensi dapat menyebabkan pencegahan berbagai penyakit yang berhubungan  dengan  tekanan  oksidatif  [4].  Aktivitas  antioksidan  pada  daun  miana yang  mengandung  antosianin  cukup  tinggi  dimana  IC 50 yang  dimiliki  pada  ekstrak etanolnya yaitu 48,04 ppm [5].
Beberapa  penelitian  menyatakan  bahwa aktivitas antioksidan  pada  antosianin bersifat kurang stabil dalam larutan netral atau basa, serta  bersifat polar atau molekul larut air, diabsorbsi kurang baik karena ukuran partikel yang besar dimana tidak dapat terabsorbsi  dengan  difusi  pasif  atau  karena  kelarutannya  dalam  lipid  kurang  baik. Kemampuan dari senyawa ini sangat terbatas untuk menyeberangi membran biologis yang  kaya  akan  lipid  menghasilkan  ketersediaan  hayati  yang  kurang  baik  ketika digunakan secara oral atau digunakan secara topikal. Salah satu solusi yang digunakan untuk  menanggulangi  keterbatasan  stabilitas  antosianin  tersebut  adalah  melalui
formulasi ekstrak antosianin dalam bentuk vesikel lipid bilayer yang dikenal dengan liposom [6].
Liposom adalah berupa gelembung kecil atau vesikel yang terbuat dari fosfatidil lapis ganda. Komposisi liposom umumnya terdiri dari fosfolipid alami atau sintetis dan mengandung unsur lain seperti kolesterol, polimer hidrofilik lipid terkonjugasi dan air. Penambahan  kolesterol  sebagian  besar  telah  digunakan  untuk  meningkatkan karakteristik bilayer liposom [7]. Liposom memiliki ukuran yang beragam, mulai dari nanometer hingga mikrometer yang umumnya dalam rentang 25 nm-2,5 μm [8] .
Liposom  termasuk  salah  satu  sistem  penghantaran  obat  yang  unik,  dimana karakter  amfifiliknya  memungkinkan  solubilisasi  atau  enkapsulasi  obat,  baik  yang bersifat  hidrofobik  maupun  hidrofilik.  Seiring  dengan  kekuatan  solubilisasinya  yang baik,  pembuatannya  pun  relatif  mudah  dan  menjadikan  liposom  sebagai  sistem pembawa  obat  yang  menarik  [9].  Sehingga  dalam  sediaan  topikal  lebih  efektif digunakan  karena  liposom  topikal  mampu  meningkatkan  penetrasi  pada  kulit  dan kurang toksik [10].
Dalam  penelitian  ini  akan  dikembangkan  sistem  pembawa  liposom  ekstrak etanol  daun  miana  dengan  menggunakan  fosfatidilkolin  dan  kolesterol.  Terdapat beberapa  jenis  molekul  fosfolipida  yang  banyak  digunakan  dalam  pembentukan liposom yaitu fosfatidilkolin, fosfatidil etanolamin, fosfatidilserin, fosfatidilinositol dan fosfatidilgliserol  [11].  Fosfatidilkolin  merupakan  salah  satu  fosfolipid  yang  paling banyak  digunakan  karena  terbuat  dalam  bahan  alami,  membran  yang  terbentuk, menyerupai  lipid  membran  sel,  dan  bersifat  biokompatibel  (biodegradasi,  nontoksik, dan  tidak  memicu  respon  imun)  [12].  Liposom  tanpa  kolesterol  diketahui  dapat berinteraksi  dengan  cepat  dengan  protein  plasma  seperti  albumin,  transfering,  dan makroglobulin. Protein ini cenderung mengekstraksi fosfolipid dalam jumlah besar dari liposom,  sehingga  menipiskan  lapisan  luar  dari  vesikel  yang  menyebabkan ketidakstabilan  fisik.  Kolesterol  tampaknya  secara  substansial  mengurangi  jenis interaksi tersebut. Kolesterol telah disebut sebagai mortar bilayer, karena berdasarkan bentuk molekulnya dan sifat kelarutannya, kolesterol mengisi ruang-ruang kosong di antara molekul-molekul fosfolipid [13].

## 2.  Metode Penyiapan sampel
Sampel  daun  diperoleh  dan  dikumpulkan  dari  Kec.  Besulutu,  Kab.  Konawe, Provinsi Sulawesi Tenggara. Sampel daun yang digunakan adalah daun miana segar. Daun miana yang telah dikumpulkan dibersihkan dari pengotor, selanjutnya dicuci di bawah  air mengalir  sampai  bersih,  ditiriskan,  lalu  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan.  Sampel  yang  telah  kering  diserbukkan  dengan  menggunakan blender, Hasilnya dimasukkan ke dalam wadah gelas tertutup.

## Ekstraksi
Daun  Miana  di  ekstraksi  dengan  metode  meserasi,  pelarut  yang  digunakan adalah etanol 96% yang diasamkan dengan larutan HCl 1%. Maserasi dilakukan dengan merendam 200 gram serbuk simplisia dengan pelarut sebanyak 2000 ml selama 3 hari Kemudian  disaring  menggunakan  dengan  kertas  saring.  Ekstrak  hasil  maserasi  atau filtrat  yang  dihasilkan,  ditampung  menjadi  satu  dan  diuapkan,  untuk  memisahkan pelarutnya.  Penguapan  dilakukan  dengan  menggunakan  alat Rotary  evaporator 40°C, sampai  pelarut  habis  menguap,  kemudian  dipanaskan  diatas waterbath dengan suhu 50°C hingga diperoleh ekstrak kental daun miana.

## Penetapan Kadar Antosianin Total
Penetapan kadar antosianin total dilakukan dengan menggunakan metode pH differensial. Sebanyak masing-masing  5 mg sampel dimasukan ke dalam 2 buah tabung reaksi. Tabung reaksi pertama ditambah  larutan buffer  kalium klorida (0,025 M) pH 1 sebanyak 4,95 mL dan tabung reaksi kedua ditambahkan larutan buffer natrium asetat (0,4  M)  pH  4,5  sebanyak  4,95  mL.  Pengaturan  pH  dalam  pembuatan  buffer  kalium klorida  dan natrium asetat menggunakan HCl pekat. Absorbansi dari kedua perlakuan pH diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 520 nm dan 700 nm  pada  masing-masing  larutan  setelah  didiamkan  selama  15  menit  [14].  Nilai absorbansi sampel ekstrak dihitung dengan menggunakan persamaan :
A=[(A 520 - A 700 ) pH1–(A 520 - A 700 ) pH4,5 ]
Konsentrasi  antosianin  dihitung  sebagai  sianidin-3-glukosida  menggunakan koefisien ekstingsi molar sebesar 26.900 L cm -1 dan berat molekul sebesar 449.2 [15].
Konsentrasi antosianin (mg L -1 ) = A x BM x FP x 1000
( ε x 1)
keterangan:
A = Absorbansi
BM      = Berat Molekul (449.2 g/mol) untuk sianidin-3-glukosida FP = Faktor Pengenceran
ε           = Koefisien ekstingsi molar (26 900 L cm -1 )

## Uji Aktivitas Antioksidan
Metode  DPPH  adalah  metode  yang  banyak  digunakan  untuk  pengukuran kemampuan  antioksidan  radikal  bebas.  Metode  DPPH  ini  banyak  digunakan  karena sederhana,  pengerjaannya  cepat,  mudah  dan  hanya memerlukan  sedikit  sampel [16]. Pengujian  aktivitas antioksidan  dilakukan  dengan  menggunakan metode  DPPH (2,2- Difenill-1-Pikrilhidrazil) yang direaksikan dengan senyawa antioksidan yang terdapat pada sampel dan pembanding Vitamin C. Aktivitas antioksidan ditentukan berdasarkan nilai % Inhibisi dan nilai IC 50 . Presentase hambatan (IC 50 ) terhadap radikal DPPH dari masing-masing konsetrasi larutan sampel dapat dihitung dengan persamaan [17]:
% Inhibisi = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙−𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 x 100 %
Nilai presentasi hambatan (%) dan konsetrasi ekstrak  (µg/mL) diplot  masing- masing  pada  sumbu  x  dan  y,  sehingga  didapatkan  persamaan  y=  a  +  bx  dengan perhitungan regresi linear. Aktivitas antioksidan dinyatakan Inhibitor Concentration 50% (IC 50 ) yaitu konsentrasi sampel yang dapat merenam radikal DPPH sebanyak 50 %. Nilai IC 50 didapatkan  dari nilai x setelah mengganti y = 50.

## Formulasi Liposom
Formulasi  Liposom  dibuat  dengan  metode  hidrasi  lapis  tipis.  Dicampurkan Fosfatidilkolin dan  kolesterol  dengan  perbandingan  sesuai  formula  yang  tertera  pada tabel  di  atas.  Dilarutkan Fosfatidilkolin dan  kolesterol  ke  dalam  10  mL  kloroform. Diuapkan  pelarut  dengan  menggunakan  rotary  evaporator  pada  suhu  30°C  dengan kecepatan 125 rpm. Setelah terbentuk lapisan tipis pada dinding labu, hidrasi lapisan tersebut  dengan  10  mL  larutan  dapar  fosfat  pH  4,5  yang  mengandung  ekstrak  lalu dinyalakan  rotary  evaporator  tanpa  vakum  selama  1  jam  pada  suhu  40°C  dengan kecepatan  125  rpm.  Lakukan  metode  sonifikasi  selama  15  menit  untuk menghomogenkan ukuran liposom. Komposisi formula liposom terdapa pada tabel 1.
Tabel 1. Komposisi formula liposom (10 ml)
Bahan Formula I (%) Formula II (%) Formula III (%) Ekstrak daun Miana 1 1 1 Fosfatidilkolin 0,3 0,2 0,4 Kolesterol 0,3 0,4 0,2

## Karakteristik Liposom

## Pengamatan Organoleptis dan morfologi bentuk vesikel
Pengamatan  organolpetis  dilakukan  pada  suspensi  liposom  meliputi pengamatan  warna,  bentuk  dan  bau.  Untuk  mengetahui  bentuknya  1,0  mL  suspensi liposom  dimasukkan  kedalam  tabung  sentrifugasi  kemudian  disentrifugasi  dengan kecepatan 3000 rpm selama 30 menit. Kemudian endapan dari liposom tersebut diambil sebanyak  1  tetes  lalu  diteteskan  pada  kaca  objek,  ditutup  dengan  kaca  penutup  dan ditempatkan dibawah mikroskop optik kemudian diamati dan difoto [18].

## Distribusi ukuran vesikel liposom
Distribusi  ukuran  partikel  liposom  dievaluasi  menggunakan  metode light scattering (pemendaran  cahaya)  dengan  menggunakan Particle  Size  Analyzer (PSA). Suspensi  liposom  diencerkan  dengan  pengenceran  1  tetes  dalam  10  ml  larutan pendispersi, yaitu akuades. Kemudian dimasukkan ke dalam kuvet dan dianalisis pada suhu 25°C [19].

## Efisiensi Penjerapan
Suspensi  disentrifugasi  selama  1  jam  dengan  kecepatan  14.000  rpm  [20]. Supernatan  diambil  untuk  mengukur  kadar  ekstrak  daun  miana  yang  tidak  terjerap dalam liposom. Sejumlah 1 mL supernatan dicukupkan volumenya menggunakan air suling  hingga  10  mL,  kemudian  diukur  serapannya  pada  panjang  gelombang maksimum antosianin 530 nm. Nilai persentase ekstrak buah okra yang terjerap dapat dihitung  dengan  menggunakan  rumus.  Rumus  perhitungan  yang  digunakan  adalah sebagai berikut [19]:
𝐸𝐸 = (𝑄𝑡 − 𝑄𝑠) 𝑄𝑡 × 100% Keterangan : EE = efisiensi penjerapan (entrapment efficiency) ( %)
Qt = jumlah zat aktif yang ditambahkan (µg/mL)
Qs =  jumlah zat aktif yang terdeteksi di supernatan (zat aktif  yang tidak terjerap) (µg/mL).

## 3.  Hasil dan Pembahasan Penyiapan Sampel
Sampel  daun  miana  ( Coleus  atropurpureus L.  Benth)  yang  digunakan  dalam penelitian ini diperoleh dan dikumpulkan dari Kec. Besulutu, Kab. Konawe, Provinsi Sulawesi  Tenggara.  Sampel  daun  yang  digunakan  adalah  daun  miana  segar,  yang ditandai dengan warna merah kecoklatan pada daun dan batang dari tanaman miana. Preparasi  dilakukan  dengan  sortasi  atau  pemilihan.  Daun  miana  yang  telah dikumpulkan  dibersihkan  dari  pengotor,  selanjutnya  dicuci  di  bawah  air  mengalir sampai  bersih,  ditiriskan,  lalu  dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan.  Proses pengeringan  berpengaruh  terhadap  kandungan  senyawa  kimia  maupun  efek farmakologis  yang  terkandung  dalam  suatu  tanaman  obat  terutama  senyawa  yang berkhasiat  sebagai  antioksidan.  Kandungan  flavonoid  dalam  suatu  simplisia  yang
Sahumean et al., 2023; Indonesian Journal of Pharmacetical Education (e-Journal); 3(2): 297-308
mempunyai  aktivitas  antioksidan  kestabilannya  dapat  dipengaruhi  oleh  proses pengeringan. Beberapa hasil penelitian diketahui bahwa aktivitas antioksidan dengan persen  inhibisi  tertinggi  terdapat  pada  sampel  ekstrak  hasil  perlakuan  pengeringan kering angina [21]. Sampel yang telah kering kemudian diserbukkan atau dihaluskan dengan menggunakan blender, Hasilnya dimasukkan ke dalam wadah gelas tertutup. Hasil  yang  diperoleh  dari  berat  kering  daun  miana  yang  telah  dihaluskan  yaitu sebanyak 600 gram.

## Ekstraksi
Ekstraksi  untuk  memperoleh  ekstrak  kental  dari  daun  miana  menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 96% karena etanol merupakan salah satu cairan pelarut  yang diperbolehkan yang  memenuhi syarat kefarmasian ( pharmaceutical grade ) serta mampu menyari dari senyawa non polar sampai senyawa polar [22]. Kemudian dengan penambahan HCl 1%. Metode maserasi digunakan karena maserasi merupakan metode  yang  sederhana  [23].  Dilakukan  dengan  memasukkan  serbuk  tanaman  dan pelarut yang sesuai ke dalam wadah inert yang tertutup rapat pada suhu kamar. Proses ekstraksi dihentikan ketika tercapai kesetimbangan antara konsentrasi senyawa dalam pelarut  dengan  konsentrasi  dalam  sel  tanaman.  Setelah  proses  ekstraksi,  pelarut dipisahkan  dari  sampel  dengan  penyaringan  [24].  Cara  ini  mudah  dan  tidak  perlu pemanasan sehingga kecil kemungkinan bahan alam menjadi rusak atau terurai. Metode maserasi  yang  lama  dan  keadaan  diam  selama  maserasi  memungkinkan  banyak senyawa yang akan terekstraksi [25]. Hasil ekstrak kental yang diperoleh dari ekstrak etanol daun miana ( Coleus atropurpureus L. Benth) yaitu sebanyak 50 gram dengan hasil rendamen sebanyak 5%.

## Pengujian Kadar Antosianin Total
Penetapan kadar antosianin total ekstrak daun miana  dilakukan menggunakan metode pH differensial dengan alat spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 520 dan 700.  Panjang gelombang 520 nm merupakan panjang gelombang maksimum dari  sianidin-3glukosida,  sedangkan  panjang  gelombang  700  nm  untuk  mengoreksi sampel. Jika sampel benar-benar jernih maka absorbansi pada panjang gelombang 700 nm  adalah  0.  Penggunaan  panjang  gelombang  sianidin-3-glukosida  sebagai  acuan karena  sianidin-3-glukosida  merupakan  jenis  antosianin  yang  jumlahnya  paling melimpah  di  alam  termasuk  daun  miana.  Berdasarkan  hasil  pengukuran  yang diperoleh, kemudian dilakukan perhitungan kadar total antosianin. Hasil perhitungan kadar total antosianin dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Kadar total antosianin Rerata Total Antosianin (mg/L) Standar Deviasi 1,647 0,1155
Berdasarkan perhitungan dan hasil pada Tabel 3, Hasil kadar total antosianin yang diperoleh pada ekstrak daun miana (Coleus atropurpureus L. Benth) yaitu sebanyak 1,647 mg/L dengan standar deviasi 0,1155. Setiap spesies dari miana memiliki beberapa perbedaan kadar total antosianin. Kadar total antosianin Coleus scutellarioides var. yaitu sebanyak 0,8209 mg/L [26]. Perbedaan kandungan antosianin total dapat disebabkan oleh  intensitas  warna  daun  yang  berbeda,  varietas  yang  berbeda  dan  pengaruh lingkungan.  Pada  suhu  yang  lebih  tinggi  di  daerah  tanaman  tumbuh,  aglikon  yang dihasilkan  kurang  stabil  sehingga  dapat  mengurangi  pigmen  antosianin  pada tumbuhan [27].

## Uji Aktivitas Antioksidan
Pengukuran  antioksidan  secara  spektrofotometer  UV-Vis  dilakukan  pada panjang gelombang 515 nm, yang merupakan panjang gelombang maksimum DPPH. Panjang gelombang maksimum ini memberikan serapan paling maksimal dari larutan uji  dan  memberikan  kepekaan  paling  besar.  Panjang  gelombang  maksimum  tersebut digunakan untuk pengukuran aktivitas antioksidan sampel. Uji antioksidan dilakukan 3  kali  pengulangan  pada  masing-masing  konsentrasi  sampel  untuk  mendapatkan keakuratan data dan memperoleh data yang baik, sehingga dapat dihitung dari data yang diperoleh. Hasil uji antioksidan dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil uji aktivitas antioksidan Sampel IC 50 (ppm) Ekstrak Etanol Daun Miana 38,032 Vitamin C 8,609
Hasil Uji Aktivitas Antioksidan menunjukkan nilai aktivitas antioksidan (IC 50 ) yang diperoleh untuk ekstrak  daun miana yaitu sebanyak 38,032 ppm, sedangkan nilai untuk  pembanding  Vitamin  C  yaitu  sebanyak  8,609.  Hasil  nilai  aktivitas  antioksidan (IC 50 )  memiliki  perbedaan  yang  disebabkan  karena  vitamin  C  merupakan  senyawa tunggal  yang  lebih  murni  sedangkan  ekstrak  daun  miana  masih  terdiri  dari  banyak senyawa.  Namun  Nilai  IC 50 pada  ekstrak  daun  miana  termasuk  dalam  aktivitas antioksidan sangat kuat karena kisaran aktivitas antioksidan suatu bahan sangat kuat bila nilai IC 50 < 50 ppm, aktif bila nilai IC 50 bernilai 51-100 ppm, sedang bila nilai IC 50 bernilai 101-250 ppm, lemah bila nilai IC 50 bernilai 251-500 ppm dan tidak aktif bila nilai IC 50 bernilai >500 [28].

## Formulasi Liposom
Preparasi liposom pada penelitian ini menggunakan ekstrak etanol daun miana, fosfatidilkolin, kolesterol dan Kloroform untuk melarutkan bahan berupa fosfatidilkolin dan kolesterol serta menggunakan buffer pH 4,5. Pada penelitian ini dibuat tiga formula liposom  dengan  peningkatan  konsentrasi  fosfatidilkolin  dan  kolesterol  pada masing- masing formula.
Gambar 1 . Formula liposom ekstrak etanol daun miana dengan perbandingan (%) ekstrak daun miana:fosfatidilkolin:kolesterol (a) Formula I 1:0,3:0,3 ; (b) FII 1:0,2:0,4 ; (c) FIII 1:0,4:0,2
Hal  ini  ditujukan  untuk  melihat  pengaruh  jumlah  variasi  konsentrasi fosfatidilkolin  dan  kolesterol  terhadap  efisiensi  penjerapan  formula  liposom  ekstrak etanol daun miana. Metode pembuatan liposom pada penelitian ini yaitu menggunakan metode hidrasi lapis tipis. Metode hidrasi lapis tipis  merupakan metode yang paling sederhana  dan  umum  digunakan  karena  relatif  lebih  mudah,  lebih  sederhana  dan mampu  menghasilkan  vesikel  yang  relatif  stabil  selama  penyimpanan  [29].  Hasil
(a)          (b)         (c)
Sahumean et al., 2023; Indonesian Journal of Pharmacetical Education (e-Journal); 3(2): 297-308
pembuatan  ketiga  formula  liposom  ekstrak  etanol  daun  miana  dapat  dilihat  pada Gambar 1.

## Karakteristik Liposom

## Pegujian organoleptis
Organoleptik yang dilakukan pada suspensi liposom berupa warna, bentuk dan bau. Hasil penelitian dapat dilihat pada Tabel 4. Hasil pengamatan Organoleptik dari suspensi  liposom  ekstrak  daun  miana  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  siginfikan antara formula I, II dan III yaitu dengan hasil bentuk suspensi liposom yang cair, dengan warna orange serta memiliki bau khas fosfatidilkolin.
Tabel 4. Hasil pengujian organoleptis nanoemulsi ekstrak kulit bawang merah Formula Bentuk Warna Bau Formula I Cair Orange Khas fosfatidilkolin Formula II Cair Orange Khas fosfatidilkolin Formula III Cair Orange Khas fosfatidilkolin

## Morfologi Vesikel liposom
Pengamatan morfologi vesikel liposom dilakukan dengan alat mikroskop optik binokuler. Suspensi liposom ekstrak etanol daun miana yang dihasilkan diteteskan pada atas  kaca  objek.  Suspensi  disebar  secara  merata  dengant  tujuan  agar  tidak  terjadi penumpukan  sampel  sehingga  memungkinkan  pengamatan  vesikel  terlihat  jelas. Pengamatan  dilakukan  dengan  perbesaran  1000x  karena  perbesaran  tersebut merupakan  perbesaran  maksimal  mikroskop  optik  sehingga  vesikel  dapat  teramati secara  jelas  pada  perbesaran  tersebut.  Hasil  pengamatan  morfologi  vesikel  liposom dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Gambar optik sampel liposom (a) Formula I; (b) Formula II; (c) Formula III, menggunakan mikroskop optic dengan perbesaran 1000 kali
Hasil  pengamatan  mikroskopis  menggunakan  mikroskop  optik  terlihat    seperti pada  gambar  di  atas  menunjukkan  adanya  struktur  bola  kompleks  ( spherical )  pada suspensi  liposom  ekstrak  etanol  daun  miana.  Hasil  ini  sesuai  yang  dilakukan  oleh Verawaty dkk [9] bahwa pada perbesaran ini terlihat globul globul liposom berbentuk bola sferis dan ada juga yang lonjong. Berdasarkan hasil pengamatan morfologi vesikel liposom, ketiga formula suspensi liposom yang dihasilkan masuk dalam kriteria vesikel yang diharapkan, yaitu memiliki morfologi berbentuk bola sferis ( spherical ).

## Distribusi ukuran partikel
Pengukuran  distribusi  ukuran  partikel  dilakukan  dengan  menggunakan menggunakan  alat Particle  Size  Analyzer (PSA)  dengan  metoda light  scattering
(a) (b) (c)
(pemendaran  cahaya)  [30].  Ukuran  vesikel  dan  indeks  polidispersitas  dianalisa  pada formula I, II dan III suspensi liposom ekstrak etanol daun miana dengan menggunakan alat PSA ( Particle Size Analyzer ) Model Horiba SZ-100 Nano dan menggunakan prinsip pengukuran Dynamic  Light  Scattering  (DLS) .  Hasil  pengamatan  ukuran  vesikel  dan indeks polidispersitas dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5 . Distribusi ukuran partikel dan indeks polidispersitas ekstrak etanol daun miana Sampel Formula Diameter (nm) Indeks Polidispersitas Liposom I 277,8 0,259 II 573,6 0,505 III 201,3 0,344
Hasil  pengamatan  yang  ditunjukkan  pada  tabel  5 di atas,  menunjukkan  bahwa ketiga formula liposom ekstrak etanol daun miana memiliki ukuran vesikel yang berada pada rentang 201,3-573,6 nm. Ukuran vesikel yang diinginkan tidak terlalu kecil < 10 nm  sebab jumlah zat aktif yang dapat terjerap juga semakin kecil.
(a) (b) (c)
Gambar 3. Kurva PSA liposom (a) Formula I, (b) Formula II, (c) Formula III.
Ukuran vesikel yang terlalu besar pun tidak diinginkan sebab ukuran vesikel yang besar  akan  sulit  untuk  berpenetrasi  ke  dalam  kulit  walaupun  dapat  menjerap  lebih banyak  zat  aktif.  Berdasarkan  hasil  pengukuran  liposom  ekstrak  etanol  daun  miana formula I dan II menghasilkan ukuran vesikel sebesar 277,8 nm dan 201,3 nm, ukuran vesikel  masuk  dalam  kategori Large  unilamellar  vesicles (LUV)  yang  memiliki  ukuran >100  nm,  sedangkan  untuk  formula  III  menghasilkan  ukuran  573,6  nm  dan  masuk dalam kategori Multilamellar vesicles (MLV) yang memiliki ukuran >500 nm [31]. Metode DLS juga dapat mengukur indeks polidispersitas (PDI). PDI yang lebih rendah menunjukkan homogenitas ukuran partikel yang lebih baik [32]. Nilai indeks
Sahumean et al., 2023; Indonesian Journal of Pharmacetical Education (e-Journal); 3(2): 297-308
polidispersitas  mendekati  0  menunjukkan  dispersi  ukuran  partikel  yang  homogen sedangkan  apabila  nilai  indeks  polidispersitas  >  0,7  menunjukan  heterogenitas  yang tinggi  [33].  Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan  nilai  indeks  polidispersitas  liposom ekstrak etanol daun miana untuk formula (I) 0,259, formula (II) 0,505 dan formula (III) 0,344. Berdasarkan hasil ini dapat disimpulkan bahwa formula (I) memiliki homogenitas ukuran partikel tertinggi karena memiliki nilai PDI yang paling mendekati nilai 0 yaitu 0,259. Kurva dari hasil PSA (Particle Size Analyser) liposom ekstrak etanol daun miana dapat dilihat pada gambar 3.

## Pengukuran Efisiensi Penjerapan
Pengukuran efisiensi penjerapan dilakukan untuk mengetahui jumlah obat yang terjerap dalam vesikel liposom. Efisiensi Penjerapan (%EE) adalah perbandingan jumlah fitokonstituen  yang  terjerap  dalam  sistem  pembawa  terhadap  jumlah  fitokonstituen mula-mula. Nilai EE% yang diharapkan yaitu mendekati 100% atau 80-100 % [34].
Pengukuran nilai %EE dilakukan dengan sentrifugasi suspensi liposom terlebih untuk  memisahkan  vesikel  liposom  yang  mengandung  obat  dengan  obat  yang  tidak terjerap  (bebas).  Nilai  %  EE  formula  liposom  yang  dipreprasi  dengan  perbandingan kolesterol dan fosfatidilkolin pada tabel 6.
Tabel 6. Nilai % EE formula liposom yang dipreprasi dengan perbandingan kolesterol dan fosfatidilkolin. Formula Liposom Rata-rata Efisiensi Penjerapan (%) Standar Deviasi Formula I 88,08% 0,1433 Formula II 92,91% 0,2887 Formula III 88,58% 0,1443
Hasil  penelitian  nilai  EE%  yang  diperoleh  menghasilkan  nilai  rata-rata  dari ketiga  formula  berada  pada  rentang  88,08%  -  92,91%.  Nilai  %EE  antara  formula  I, formula II dan Fomula III terdapat perbedaan namun ketiga formula masih dalam batas rentang nilai %EE yang telah ditetapkan yaitu 80-100%. Nilai %EE antara formula I, II dan III terdapat perbedaan namun ketiga formula masih dalam batas rentang nilai %EE yang telah ditetapkan yaitu 80-100%. Nilai EE% tertinggi diperoleh dari formula II yaitu dengan nilai 92,91%, semakin meningkatnya kolesterol yang digunakan akan semakin meningkat  pula  efisiensi  penjerapan  obat.  Hal  ini  dikarenakan  kolesterol  berfungsi sebagai  penstabil  liposom  yang  menurunkan  permeabilitas  sehingga  mencegah kebocoran obat [9].

## 4.  Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dipaparkan  sebelumnya  maka  dapat disimpulkan bahwa komposisi yang tepat dalam formula liposom ekstrak etanol daun miana  ( Coleus  atropurpureus L.  Benth.)  terdapat  pada  formula  II  dengan  komposisi berupa  ekstrak  etanol  daun  miana  1%,  fosfatidilkolin  0,2%  dan  kolesterol  0,4%. Karakteristik liposom ekstrak etanol daun miana ( Coleus atropurpureus L. Benth.) yang dihasilkan  berupa  pengamatan  organoleptik  untuk  formula  I,  II  dan  III  tidak mempunyai perbedaan yang signifikan yaitu bentuk cair, warna orange serta bau khas fosfatidilkolin  serta  untuk distribusi  ukuran  partikel  liposom 573,6  nm  dan  nilai PDI 0,505.  Efisiensi  penjerapan  vesikel  liposom  sebesar  92,91  %  dan  morfologi  dengan bentuk bola ( spherical) dengan jenis vesikel Multilamellar vesicles (MLV).

## Referensi
[1] Anita,  Dewi,  A.  Andi,  F.,  2018,  Potensi  Flavonoid  Ekstrak  Daun  Miana  ( Coleus atropurpereus) Sebagai  Senyawa Anti Mycobacterium tuberculosis Strain H37rv Dan Mdr  Dengan  Microscopy  Observation  Drug  Susceptibility  (Mods), Jurnal  Ilmu Alam dan Lingkungan, Vol. 9 (18).
[2] Mahendra, B., 2005, Jenis Tanaman Obat Ampuh, Penebar Swadaya:Jakarta.
[3] Amrillah, M. S. Rolan, R. Jaka, F., 2015, Aktivitas Tabir Surya Daun Miana ( Coleus atropurpureus L. Benth) Secara In Vitro, Jurnal Sains dan Kesehatan, Vol. 1(4).
[4] Andersen, O.M. and Markham K.R., 2006. Flavonoid: Chemistry, Biochemistry, and Applications . Taylor and Francis Group. United States of America.
[5] Sari,  Devi.  D.  2013. Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun  Miana(Coleus athropurpureus) Terhadap DPPH . Universitas Mulawarman: Samarinda.
[6] Juniarka, I. G., Endang L., dan Sri, N., 2011, Analisis Aktivitas Antioksidan Dan Kandungan  Antosianin  Total  Ekstrak  Dan  Liposom  Kelopak  Bunga  Rosella ( Hibiscus Sabdariffa L . ), Majalah Obat Tradisional , Vol. 16(3).
[7] Febriyenti,  Deddi,  P.  Elyana,  I.  dan  Citra  D.,  2018,  Formulasi  Liposom  Ekstrak Terpurifikasi Centella asiatica Menggunakan Fosfatidilkolin dan Kolesterol, Jurnal Sains Farmasi & Klinis, Vol. 5(2).
[8] Ramadon,  D.  dan  Abdul,  M.  2016,  Pemanfaatan  Nanoteknologi  dalam  Sistem Penghantaran  Obat  Baru  untuk  Produk  Bahan  Alam, Jurnal  Ilmu  Kefarmasian Indonesia, Vol.14(2).
[9] Verawaty,  Auzal,  H.  dan  Febriyenti.,  2016,  Efektivitas  Sistem  Penghantaran Liposom  pada  Katekin  Sebagai  Antioksidan, Jurnal  Sains  Farmasi  &  Klinis, Vol. 2(2).
[10] Kamra , M. Diwan, A. dan Sardana, S., 2017, Topical Liposomal Gel: A Review, International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, Vol.8(6).
[11] Hudiyanti, D., 2018, Fosfolipida biosurfaktan, Deepublish publisher, Yogyakarta.
[12] Rowe,  Raymond,  C.,  2009, Handbook  Of  Pharmaceutical  Excipient  Edisi VI, Pharmaceutical Press:London.
[13] Thulasiramaraju,  T.  Sudhakar,  B.  A.Arunachalam,  M.Prathap,S.Srikanth, P.Sivaiah., 2012, Liposomes: a Novel Drug Delivery System, International Journal of Biopharmaceutics, Vol. 3(1).
[14] Prior, R,  L., G. Cao, A. Martin, E. Sofic, J. McEwen, C. O’Brien, N. Lischen, M. Ehlenfeldt, W. Kalt, G. Krewer, dan C. M. Mainland, 1998. Antioxidant Capacity  As Influenced  by  Total  Phenolic  and  Anthocyanin  Content,  Maturuty,  and  Variety  of Vaccinum of spesies, Journal Agric Food Chem 46; 2686-2693
[15] Ahmed, Jaleel.,Salih A.M Husain Dan Angham G. Hadi. 2013. Anthocyanins In Red  Beet  Juices  Act  As  Scavengers  For  Heavy  Metals  Ions  Such  As  Lead  And Cadmium. International  Jurnal  Of  Science  And  Technology, 2(3) .  Iraq:  Babylon University.
[16] Marinova,  G.  dan    Batchvarov  V.,  2011,  Evaluation  of  the  Methods  for Determination of the Free Radical Scavenging Activity by DPPH, Bulgarian Journal of Agricultural Science, Vol.17(1).
[17] Olugbami, J. O., Gbadegesin, M. A., & Odunola, O. A. (2014). In vitro evaluation of the antioxidant potential, phenolic and flavonoid contents of the stem bark ethanol extract  of Anogeissus  leiocarpus . African  journal  of  medicine  and  medical sciences , 43 (Suppl 1), 101–109.
[18] Purwanto,  U.R.E.,  Ariani  W.A.,  Pramitaningastuti,  A.S.,  2019.  Formulasi  Serum Liposom ANtosianin dari Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus) Untuk
Anti  Aging.  Cendekia  Journal  of  Pharmacy.  Vol  3(2):  96-105. http://cjp.jurnal.stikescendekiautamakudus.ac.id.
[19] Xue,  M.,  Wang,  J.,  &  Huang,  M.  (2022).  Inulin-Modified  Liposomes  as  a  Novel Delivery  System  for  Cinnamaldehyde. Foods  (Basel,  Switzerland) , 11 (10),  1467. https://doi.org/10.3390/foods11101467
[20] Bhulli, N., dan Arvind S., 2012, Preparation of Novel Vesicular Carrier Ethosomes With Glimepiride and Their Investigation of Permeabiity, International Journal of Therapeutic Applications, Vol 2.
[21] Luliana, S. Nera, U.P. dan Kris, N. M., 2016, Pengaruh Cara Pengeringan Simplisia Daun Senggani ( Melastoma malabathricum L.) Terhadap  Aktivitas   Antioksidan Menggunakan  Metode  DPPH  (2,2  difenil-1pikrilhidrazil), Pharmaceutical  Science Research, Vol. 3(3).
[22] Depkes  R.I.,  2000, Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat ,  Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
[23] Zhang,  Q.  W.  Li-GenlLin  dan  IWen,  C.  Y.,  2018,  Techniques  for  extraction  and isolation of natural products: a comprehensive review, Chinese medicine, Vol.2(26).
[24] Silva,  G.  O.  Achala,  T.  A  and  Malamige,  M.  W.,  2017,  Extraction  methods, qualitative  and  quantitative  techniques  for  screening  of  phytochemicals  from plants, American Journal of Essential Oils and Natural Product , Vol.5(2).
[25] Susanty,  dan  Fairus,  B.,  2016,  Perbandingan  Metode  Ekstraksi  Maserasi  Dan Refluks  Terhadap  Kadar  Fenolik  Dari  Ekstrak  Tongkol  Jagung  ( Zea  mays  L .), KONVERSI, Vol. 5(2).
[26] Hardiyanti Y., Djaswir D. dan Adlis S. 2013. Ekstraksi dan Uji Antioksidan dari Daun Miana ( Coleus scutellarioides L. (Benth) serta Aplikasi pada Minuman. J. Kimia Unand . Vol. 2(2).
[27] Akmarina,  C.  A.,  Musfiroh,  I.,    Moektiwardoyo,  M.  dan  Syifa,  G.,  2018,  Total Anthocyanin  Content  and  Identification  of  Anthocyanidin  From Plectranthus scutellarioides (L.)  R.  Br  Leaves, Research  Journal  of Chemistry  and  Environment , Vol.22(1).
[28] Blois, M. S., 1958, Antioxidant Determination By The Use Of A Stable Free Radical, Nature , Vol. 181 (4617).
[29] Monteiro,  N.  Albino,  M.  Rui,  L.  dan  Nuno,  M.,  2014,  Liposomes  in  tissue engineering and regenerative medicine, Journal of the royal society interface.
[30] Surianarayanan, R. Hosakote, G. S. Naga, S. K. dan Atul, S., 2016, Effect of sample Concentration  on  the  Characterization  of  Liposomes  using  Dynamic  light Scattering Technique, Pharm methods, Vol.7(1).
[31] Laouini, A., C. Jaafar-Maalej, I. Limayem, B.,S. Sfar, C. Charcosset, dan H. Fessi., 2012, Preparation, Characterization and Applications of Liposomes: State of the Art, Journal of Colloid Science and Biotechnology, Vol. 1.
[32] Malvern, 2011. Zeta Potensial An Introduction in 30 Minutes. Malvern Instruments . Ltd., 1-6.
[33] Avadi,  M.R.,  Assal  M.M  S., Nasser  M.,  Saideh  A.,  Fatemeh  A., Rassoul  D.,  dan Morteza R., 2010, Preparation and characterization of insulin nanoparticles using chitosan  and  arabic  gum  with  iconic  gelation  method, Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine.
[34] Wang,  Q.  dan  Yimin,  C.,  2018,  Multifunctional  quantum  dots  and  liposome complexes in drug delivery, The Journal of Biomedical Research, Vol.32(2).