UJI AKTIVITAS REPELLENT FRAKSI N-HEKSAN EKSTRAK ETANOLIK DAUN MIMBA ( Azadirachta indica A. Juss) TERHADAP

## NYAMUK AEDES AEGYPTI
Muhamad Djatmiko, Yance Anas, dan Sri Murti Handayani Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang

## ABSTRAK
Daun  mimba  dipercaya  masyarakat  dapat  menolak  hinggapan  nyamuk Aedes aegypti ,  sehingga  dapat  digunakan  sebagai repellent. Penelitian  ini  bertujuan  untuk membuktikan  aktifitas repellent fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba  terhadap nyamuk Aedes aegypti, dan mengidentifikasi senyawa golongan terpenoid dalam fraksi n- heksan tersebut.
Ekstrak etanolik daun mimba dibuat dengan menggunakan metode Maserasi dan selanjutnya difraksinasi dengan menggunakan pelarut n-heksan.  Fraksi n-heksan ekstrak etanolik  daun  mimba  konsentrasi  10,  20,  40%  dalam  pelarut  etanol  dioleskan  pada pergelangan  tangan  bagian  atas  hingga  ujung  jari  dan  kemudian  dimasukkan  ke  dalam sangkar  nyamuk.    Tiap  sangkar  nyamuk  berisi  30  ekor  nyamuk Aedes  aegypti betina berumur  3-5  hari  yang  telah  dipuasakan  selama  24  jam.  Pengujian  dihentikan  apabila terdapat hinggapan nyamuk untuk pertama kalinya. Data yang diperoleh berupa rata-rata waktu penolakan terhadap hinggapan nyamuk.  Analisa statistik dilakukan terhadap data waktu  penolakan  menggunakan  uji  Kruskal-Wallis  yang  dilanjutkan  dengan  uji  Mann- Whitney  pada  taraf  kepercayaan  95%.  Identifikasi  senyawa  aktif  golongan  terpenoid dilakukan dengan menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT).
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun mimba  mengandung  senyawa  aktif  golongan  terpenoid.    Pada  konsentrasi  20  dan  40%, fraksi  n-heksan  tersebut  memiliki  aktivitas  sebagai repellent karena  dapat  menolak hinggapan  nyamuk Aedes  aegypti secara  berturut-turut  selama  329  dan  915  detik  (5,48 dan15,25 menit).
Kata kunci : Repellent, fraksi n-heksan ekstrak etanolik daun mimba, Aedes aegypti

## PENDAHULUAN
Angka  kejadian  penyakit  demam  berdarah  (DBD)  meningkat  secara  dramatis dalam 10 tahun belakangan ini.  Demam Berdarah Dengue disebabkan oleh virus dengue yang  ditularkan  melalui  nyamuk Aedes  aegypti (Satari  dan  Meiliasari,  2004).  Saat  ini, belum ada obat atau vaksin yang terbukti efektif mengobati demam berdarah.  Salah satu cara  untuk  mencegah  penularan  penyakit  ini  adalah  dengan  mencegah  transmisi  virus dengue  penyakit  yang  ditularkan  oleh  serangga  (Misni,  dkk.,  2008),  yaitu  dengan menggunakan repellent serangga. Repellent adalah  suatu  senyawa  yang  beraksi  secara lokal,  atau  pada  jarak  tertentu  yang  mempunyai  kemampuan  mencegah  antropoda (termasuk  nyamuk)  untuk  terbang,  mendarat  atau  menggigit  pada  permukaan  kulit manusia (Nerio, dkk., 2010). Penularan DBD hanya terjadi melalui gigitan nyamuk Aedes yang  didalam  sungutan  ada  virus  demam  berdarahnya  (Nadesul,  2007).  Hanya  jenis betinanya  saja  yang  menghisap  darah  manusia  dan  menularkan  virus  dengue  ke  dalam tubuh manusia.
Salah satu upaya pencegahan yang dapat dilakukan dalam kehidupan sehari-hari adalah dengan menggunakan bahan alami yang terdapat disekitar kita. Salah satu tanaman
yang  bisa  digunakan  sebagai  insektisida  adalah  tanaman  mimba.  Salah  satu  komponen aktif  dalam  biji  dan  daun  mimba  adalah  senyawa  golongan  terpenoid  azadirachtin  yang diyakini memiliki daya bunuh terhadap serangga (Oesman dan Rukmana, 2002).
Beberapa  penelitian  terdahulu  menyimpulkan  bahwa  minyak  atsiri  dan  senyawa golongan  terpenoid  memiliki  aktivitas repellent terhadap  serangga.  Ekstrak  kulit  buah jeruk nipis dalam sediaan lotion dengan konsentrasi 55% mengandung senyawa golongan terpenoid dan dapat menolak nyamuk Aedes aegypti selama 36 menit 1 detik (Tesaviani, 2009).  Pada  penelitian  Choi,  dkk.  (2002),  minyak  atsiri Thymus  vulgaris (thyme) memiliki  potensi  aktivitas  repellensia.  Pada  konsentrasi  0,05%,  minyak  atsiri  tersebut dapat  menolak  hinggapan  nyamuk  sebesar  91%.  minyak  atsiri T.vulgaris (thyme) memiliki  kandungan  5  monoterpen  yaitu  thymol,  p-cymene,  carvacrol,  linalool  dan  α- terpentine.    Monoterpen  α-terpinene  memiliki  aktifitas repellent yang  cukup  poten dengan efek perlindungan terhadap hinggapan nyamuk Culex pipiens pallens sebesar 97 %  pada  konsentrasi  0,05  %.  Pada  penelitian  Jebanesan  dan  Rajkumar  (  2005),  minyak atsiri  dari  tanaman Moschosma  polystachyum pada  konsentrasi  4%  memberikan perlindungan 332,2 menit terhadap gigitan nyamuk Culex quinquefasciatus. Minyak atsiri Solanum  xanthocarpum pada  konsentrasi  8%  memberikan  perlindungan  311,4  menit. Minyak  atsiri  tersebut  mengandung  terpenoid  yang  dapat  menghasilkan  aktivitas repellent. Berdasarkan  literatur  di  atas,  penelitian  ini  mencoba  untuk  melihat  apakah fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba  yang  diduga  kaya  akan  senyawa  aktif golongan  terpenoid  memiliki  aktivitas repellent terhadap  nyamuk Aedes  aegypti , sehingga ekstrak daun mimba diharapkan dapat digunakan sebagai repellent.

## METODOLOGI

## Bahan Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan dalam  penelitian ini berupa : daun mimba (kebun Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta); Nyamuk Aedes aegypti betina, umur 3-5 hari (Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada Yogyakarta); Soffel® dan bahan kimia lainnya ( pharmaceutical grade ) seperti etanol 70 %, n-heksan, terpineol, toluene, etil asetat, silica gel 60 F 254, vanilin asam sulfat.

## Alat Penelitian
Peralatan  yang  digunakan  diantaranya  adalah  :    seperangkat  alat  gelas, oven automatic  thermo  controller (mammert,  type:  IL-70-110/220  Volt  max  3A  50/60), timbangan  elektronik  (AND  GE  600  Japan),  stopwatch,  aspirator,  sangkar  nyamuk berukuran 22 x 22 x 22 cm, pengayak serbuk no. 40., water bath (Memmert).

## Jalannya Penelitian
1. Determinasi Tanaman Mimba
Daun  mimba  diperoleh  dari  kebun  Fakultas  Farmasi  Universitas  Gadjah  Mada Yogyakarta.  Proses determinasi tanaman mimba ( Azadirachta indica A.Juss) dilakukan di  Laboratorium  Biologi  Farmasi,  Fakultas  Farmasi,  Universitas  Gadjah  Mada Yogyakarta  dengan  mengacu  pada  buku Flora  of  Java karangan  Backer  dan  Van  De Brink (1968).
2. Pengumpulan Simplisia
Daun  mimba  dikumpulkan  pada  saat  daun  mimba  mulai  menua,  dengan parameter  daun  yang  berwarna  hijau  tua.  Daun  mimba  dicuci  dengan  air  sampai  bersih
untuk  menghilangkan  pengotor  lain  yang  melekat  pada  daun,  kemudian  ditiriskan  agar terbebas dari air cucian (Depkes RI, 1985).

## 3. Pembuatan Fraksi N-heksan Ekstrak Etanolik Daun Mimba
Daun  mimba  segar  seberat  8,5  kg  yang  telah  bersih,  dikeringkan  dalam  oven dengan pengaturan suhu ± 50  C, selanjutnya diserbuk sehingga didapatkan serbuk halus daun mimba sebanyak 1 kg. Serbuk selanjutnya dimaserasi dengan  pelarut etanol 70 %. Sisa  pelarut  ekstrak  etanolik  daun  mimba  dikeringkan  dengan  cara  diuapkan  di  atas waterbath pada suhu 50  C.  Ekstrak etanolik kental daun mimba yang didapatkan adalah seberat 187 gram.  Selanjutnya, ekstrak kental ini disuspensikan dengan menggunakan air sebanyak  187  mL  dan  difraksinasi  dengan  pelarut  n-heksan  (1:1).  Fraksinasi  dilakuan sebanyak  tiga  kali.      Fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba  yang  didapatkan adalah sebanyak  20,12 gram.

## 4. Uji Aktivitas Repellent
Uji  aktivitas repellent fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba  dilakukan dengan metode Fradin dan Day (2002) yang dimodifikasi.  Sebelum pengujian, dilakukan penyiapan  sangkar  nyamuk  berukuran  (22  x  22  x  22)  cm  yang  berisi  30  ekor  nyamuk Aedes  Aegypti yang  berumur  3-5  hari  dan  telah  dipuasakan  selama  1  hari.    Setiap percobaan  menggunakan  nyamuk Aedes  aegypty yang  belum  pernah  dipakai  untuk  uji aktifitas repellant senyawa uji.  Data penelitian berupa total waktu penolakan senyawa uji terhadap  hinggapan  nyamuk Aedes  aegypti (detik).  Tangan  yang  sudah  diolesi  senyawa uji  dimasukkan  ke  dalam  sangkar  nyamuk  selama  1  menit  setiap  1  menit  sampai  20 menit,  apabila  nyamuk  belum  ada  yang  hinggap,  maka  tangan  dimasukkan  kembali  ke dalam sangkar nyamuk selama 1 menit setiap 15 menit.  Apabila nyamuk juga belum ada yang  hinggap,  maka  selanjutnya  tangan  dimasukkan  kembali  ke  dalam  sangkar  nyamuk selama 1 menit setiap 1 jam. Dari setiap percobaan tersebut dicatat waktu gigitan pertama kali.    Pada  penelitian  ini,  dilakukan  replikasi  sebanyak  tiga  kali  dan  menggunakan  3 orang probandus yang berumur 19-26 tahun.
Kelompok  perlakuan  (senyawa  uji)  dibagi  menjadi  lima  kelompok.  Kelompok  I merupakan  kelompok  kontrol  negatif  (KN),  kulit  punggung  telapak  tangan  probandus hanya  diolesi  dengan  etanol  70  %.  Kelompok  II  adalah  kelompok  kontrol  positif  (KP), kulit punggung telapak tangan probandus diolesi dengan lotion Sofel® yang mengandung DEET 13 %. Kelompok III-V merupakan kelompok senyawa uji (F1, F2 dan F3) dengan konsentrasi  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba  berturut-turut  sebanyak  10%, 20% dan 40%.

## 5. Identifikasi Senyawa Aktif Golongan Terpenoid
Identifikasi  senyawa  aktif  golongan  terpenoid  daun  mimba  dilakukan  pada ekstrak  etanolik  daun  mimba  dan  fraksi  n-heksan  dengan  menggunakan  teknik kromatografi  lapis  tipis  (KLT).  Fase  diam  yang  digunakan  adalah  silica  gel  F 254 dan sebagai  fase  gerak  digunakan  pelarut  toluene  :  etil  asetat  (93:7).    Sebagai  penampak bercak digunakan vanillin asam sulfat, sinar UV 254 nm dan 366 nm.  Ekstrak etanolik dan  fraksi  n-heksan  mimba  dinyatakan  mengandung  senyawa  aktif  golongan  terpenoid apabila  memberikan  warna  merah  violet  dengan  penampak  bercak  vanillin  asam  sulfat. Selanjutnya,  nilai  R f pada  bercak  yang  berwarna  merah  violet  ini  dihitung  (Wagner, 1984). Sebagai pembanding digunakan terpineol.

## 6. Analisa Data
Data penelitian berupa total waktu penolakan senyawa uji terhadap nyamuk yang hinggap  (detik)  dan  profil  KLT  pada  uji  identifikasi  senyawa  aktif  golongan  terpenoid. Senyawa uji dinyatakan memiliki efek repellent apabila data total lama waktu penolakan terhadap  hinggapan  nyamuk aedes  aegypti kelompok  senyawa  uji  lebih  lama dibandingkan kelompok kontrol.  Uji statistik yang digunakan adalah uji Kruskal-Wallis dan Uji Mann-Withney pada taraf kepercayaan 95%.  Data profil KLT pada identifikasi senyawa  aktif  golongan  terpenoid  pada  ekstrak  etanolik  dan  fraksi  n-heksan  ekstrak etanolik daun mimba dibahas secara deskriptif.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Uji Aktivitas Repellent Fraksi n-Heksan Ekstrak Etanolik Daun Mimba Uji  aktivitas repellent dari  senyawa  uji  dilakukan  dengan  mengamati  total  lama waktu  penolakan  terhadap  hinggap  nyamuk  pada  pemukaan  tangan  probandus.  Pada pengujian  ini  tangan  probandus  tidak  dimasukkan  ke  dalam  sangkar  terus  menerus, melainkan  dengan  interval  waktu  tertentu.    Hal  ini  dikarenakan  pemejanan  secara  terus menerus akan mengakibatkan nyamuk kelelahan serta menginduksi blockade dari antena kemoreseptornya,  hal  tersebut  akan  menyebabkan  penolakan  nyamuk  untuk  mengigit. Selama  pengujian  tangan  probandus  tidak  boleh  ditambah  dengan  senyawa  uji,  tidak boleh dicuci dan tidak boleh melawan apabila ada nyamuk yang akan hinggap. Data total waktu  lama  penolakan  terhadap  hinggapan  pertama  nyamuk Aedes  aegypti pada  tangan naracoba tersaji pada Gambar 1.
Gambar 1. Diagram batang rata-rata total waktu penolakan terhadap hinggapan nyamuk Aedes aegypty perlakuan fraksi n-heksan ekstrak etanolik daun mimba, kontrol negatif dan kontrol positif.
Keterangan  : * :  Hasil  uji  Mann-Withney  menunjukkan  perbedaan  bermakna  dengan  kelompok  kontrol negatif (p<0,05)
KN  :  Kelompok perlakuan kontrol negatif (perlakuan dengan) KP  :  Kelompok perlakuan kontrol positif (Soffel) F1  :  Kelompok perlakuan uji (konsentrasi 10%) F2  :  Kelompok perlakuan uji (konsentrasi 20%) F3  :  Kelompok perlakuan uji (konsentrasi 40%)
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  rata-rata  waktu  penolakan  terhadap hinggapan  nyamuk Aedes  aegypti yang  paling  cepat  terlihat  pada  kelompok  kontrol negatif,  sedangkan  yang  paling  lama  dicapai  adalah  pada  kelompok  kontrol  positif (Soffel ® ),  dengan  rata-rata  total  waktu  penoloakan  sebesar  4527  detik  (1  jam    15,45 menit).  Pada penelitian ini, fraksi n-heksan ekstrak etanolik daun mimba konsntrasi 20% dan  40%  terlihat  mempunyai  aktifitas repellent karena  menolak  hinggapan  nyamuk selama 329,3 detik (5,48  menit) dan 915 detik (15,25 menit).  Aktifitas repellent fraksi n- heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba  jauh  lebih  kecil  dibandingkan  dengan  Soffel ® dan perbedaan tersebut bermakna secara statistik (p<0,05).  Peningkatan konsentrasi fraksi n- heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba  memperpanjang  efek repellent ,  karena  dapat memperpanjang  waktu  penolakan  terhadap  hinggapan  nyamuk Aedes  aegypti .    Hal  ini disebabkan  karena  kandungan  senyawa  aktif  yang  lebih  tinggi  dalam  fraksi  n-heksan ekstrak etanolik daun mimba.
Dietiltoluamide  (DEET)  merupakan repellent sintesis  yang  memiliki  spektrum luas dan telah digunakan secara luas di Eropa dan Amerika Serikat setelah diperkenalkan pada  tahun  1950-an.    Akan  tetapi,  penggunaan  DEET  jangka  panjang  dilaporkan  telah menimbulkan  berbagai  efek  samping  yang  merugikan,  diantaranya  adalah  hipotensi, terganggunya  sistem  pernafasan,  depresi  SSP,  dan  terkadang  mengakibatkan  kematian. Penggunaan  secara  topical  terkadang  dapat  menimbulkan  reaksi  setempat,  seperti urtikaria  dan  kontak  dermatitis  (Goodyer  dan  Behrens,  1998).    Oleh  karena  itu,  beribu tamanan  telah  diuji  sebagai  sumber  potensial  senyawa repellent. Tanaman  yang mengandung  minyak  atsiri  dilaporkan  mempunyai  aktifitas  sebagai repellent termasuk citronella,  pohon  pinus,  verbena,  pennyroyal,  geranium,  lavender,  mimba,  buah  pinus, dan lain sebagainya (Fradin, 1998).
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun mimba memiliki aktivitas repellent terhadap nyamuk Aedes aegypti betina dalam kondisi laboratorium.  Hasi  identifitaksi  menunjukkan  bahwa,  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik daun  mimba  mengandung  senyawa  aktif  golongan  terpenoid.  Aktfitas repellent ekstrak etanolik  daun  mimba  jauh lebih  kecil  dibandingkan  dengan  DEET.    Hal ini diakibatkan karena  senyawa  aktif  yang  bertanggung  jawab  diduga  kuat  adalah  senyawa  golongan terpenoid.    Senyawa  golongan  ini  relatif  lebih  mudah  menguap  dan  cepat  hilang  dari tempat  aplikasi.    Seperti  halnya  aktifitas repellent dari  minyak  atsiri  yang  umumnya merupakan senyawa monoterpen dan sesquiterpen memiliki aktifitas penolakan terhadap hinggapan  nyamuk  yang  rendah  dan  efek  tersebut  relatif  cepat  hilang.    Senyawa monoterpen  yang  telah  terbukti  memiliki  efek repellent terhadap  nyamuk  diantaranya adalah  α–pinen,  cineol,  eugenol,  limonene,  terpinolen,  citronellol,  citronellal,  camphor dan  timol.  Begitu juga  dengan  senyawa  sesquiterpen,  seperti  β–cariopillen  (Nerio,  dkk., 2010).
Banyak faktor yang berperan dalam menentukan efektifitas repellent , diantaranya adalah frekuensi dan pemakian yang tidak merata, jumlah dan jenis organisme yang akan menggigit,  ketertarikan  serangga/anthropoda  penghisap  darah  terhadap  individu,  dan aktifitas  calon  individu  potensial  yang  akan  menjadi  korban.    Pengikisan  oleh  pakaian, penguapan dan absorpsi melalui permukaan kulit, tercuci karena keringat atau air hujan, temperatur  yang  tinggi  dan  kecepatan  aliran  angin  di  lingkungan  akan  mengurangi efektifitas repellent . Saat ini repellent yang tersedia harus diaplikasikan pada seluruh area permukaan kulit yang terbuka.  Kulit yang tidak terlindungi beberapa centimeter saja dari area  yang  dioleskan  dengan repellent dapat  diserang  oleh  nyamuk  yang  dalam  kondisi lapar (Fradin, 1998).
Repellent botani yang lebih lama adalah soybean oil dapat memberikan proteksi terhadap  nyamuk  selama  3,5  jam.  Sebuah repellent dikatakan  ideal  apabila repellent
tersebut  memiliki  daya repellent terhadap  banyak  spesies,  efektif  selama  8  jam,  tidak menyebabkan  iritasi,  tidak  bersifat  toksis  secara  sistemik,  tidak  mudah  hilang  di  kulit, tidak lengket dan tidak meninggalkan bau yang mengganggu (Fradin, 1998).

## Identifikasi Senyawa Golongan Terpenoid
Identifikasi senyawa aktif daun mimba dilakukan 2 kali yaitu pada ekstrak etanol daun  mimba  dan  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba.  Penelitian  ini  dilakukan untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  kimia  yang  terdapat  dalam  daun  mimba  yang memiliki potensi sebagai repellent terhadap nyamuk Aedes aegypti. Identifikasi senyawa aktif  dalam  ekstrak  etanolik  daun  mimba  dan  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun mimba  hanya  senyawa  terpenoid  saja  karena  yang  diduga  sebagai repellent pada  daun mimba.
Identifikasi  dilakukan  dengan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT).  Fase  diam  yang digunakan adalah silikagel 60 F 254 dan fase gerak campuran toluen dan etil asetat dengan perbandingan 93:7. Pembandingnya menggunakan terpineol dan yang digunakan sebagai penampak  bercak  adalah  pereaksi  vanilin  asam  sulfat.  Pengamatan  bercak  dilakukan  di bawah sinar UV 254, 365 nm dan sinar visible (Wagner, 1984).  Hasil kromatogram dapat dilihat pada Gambar 2.

## A
B
Gambar 2.
Kromatogram  identifikasi  senyawa  aktif  golongan  terpenoid  dalam  (A) ekstrak  etanolik  daun  mimba,  (B)  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun mimba
Hasil  kromatogram  ekstrak  etanolik  daun  mimba  dan  fraksi  n-heksan  ekstrak etanolik  daun  mimba  di  bawah  sinar  UV  254  nm  menunjukkan  bercak  berwarna  hijau kehitaman,  dan  pada  pengamatan  di  bawah  sinar  UV  365  nm  terlihat  bercak  berwarna biru  muda.    Pengamatan  bercak  di  bawah  sinar  visibel  menghasilkan  lebih  dari  satu bercak  berwarna  merah  violet.    Warna  bercak  tersebut  menyerupai  warna  bercak pembanding yang digunakan (terpeneol).
Bercak  terpenoid  ekstrak  etanolik  daun  mimba  terdeteksi  dengan  nilai  Rf  pada 0.19  ;  0.40  ;  0.85  ;  0.98.  Pada  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba,  bercak terpenoidnya  terdeteksi  dengan  nilai  Rf  sebesar  0.40  ;  0.58  ;  0.82  ;  0.98.  Hasil  tersebut mendekati  bercak  terpineol.  Hal  ini  menunjukan  di  dalam  ekstrak  etanolik  daun  mimba dan  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba  terdapat  berbagai  senyawa  terpenoid yang  diduga kuat memiliki aktivitas repellent terhadap nyamuk Aedes aegypti .

## KESIMPULAN
1. Fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik  daun  mimba  memiliki  aktivitas repellent terhadap nyamuk Aedes aegypti.
2. Waktu  penolakan  paling  lama  yang  dimiliki  oleh  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanolik daun  mimba  terhadap  nyamuk Aedes  aegypti adalah  pada  konsentrasi  40%  dengan rata-rata waktu 915 detik (15,25 menit).
3. Fraksi n-heksan ekstrak etanolik  daun mimba  mengandung senyawa aktif golongan terpenoid  yang  diduga  kuat  sebagai  salah  satu  senyawa  aktif  yang  bertanggung jawab terhadap aktifitas repellent daun mimba.

## DAFTAR PUSTAKA
Backer, C.A., Van De Brink, R.C.B. 1968, Flora of Java . Vol III. Noordhof N.V. Gronigen. The Nether Lands.
Choi,  W.S.,  Park  B.S.,  Ku  S.K.,  Lee  S.E,  2002,  Repellent  activities  of  essential  oils  and monoterpenes againts  Culex  pipiens pallens , J. Am.  Msog. Control.  Assoc. 18 (4) : 348- 351.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,  1985, Cara  Pembuatan  Simplisia, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Fradin,  M.S.,  1998,  Mosquitoes  and  Mosquito  Repellents:  A  Clinician's  Guide, Ann  Intern  Med . 128 : 931-940. Fradin,  M.S.,  dan  Day,  J.F.  2002. Comparative  Efficacy  of  Insect  Repellent  against  mosquito Bites . N. Eng. J. Med, 347 : 13-18 . Goodyer, L. dan Behrens, R.H., 1998, Short Report :  The Safety anf Toxicity of Insect Repellent , Am. J. Trop. Med. Hyg ., 59 (2), : 323–324
Jebanesan, A. and Rajkumar, S., 2005, Repellency of volatile oils from Moschosma polystachyum and Solanum  xanthocarpum againts  filarial  vector Culex  quinquefasciatus  Say, Trop. Biomed, 22 (2) : 139-142.
Misni,  N.,  Sulaiman,  S.,  and  Othman,  H.,  2008,  The  Repellent  Activity  of  Piper  aduncum  Linn (Family:  Piperaceae)  Essential  Oil  against  Aedes  aegypti  Using  Human  Volunteers,  J Trop Med Parasitol , 31 (2) : 63-69.
Nadesul, H, 2007, Cara Mudah Mengalahkan Demam Berdarah , Kompas, Jakarta.
Nerio, L.S., Olivero-Verbel, J., and Stashenko, E., 2010, Repellent Activity of Essential Oils: A Review, Bioresour. Technol, 101 : 372–378 Oesman,  Y.,  dan  Rukmana  R.,  2002, Nimba  Tanaman  Penghasil  Pestisida  Alami ,  Kanisius, Yogyakarta.
Satari,  H.  dan  Meiliasari,  M.,  2004, Demam  Berdarah  Perawatan  di  Rumah  dan  Rumah Sakit . Plus menu , Puspa swara, Jakarta.
Tesaviani, K., 2009, Daya Repelan Ekstrak Kulit Buah Jeruk Nipis ( Citrus aurantifolia Swingle) dalam  Sediaan  Lotion  Terhdap  Nyamuk Aedes  aegypti , Skripsi ,  Fakultas  Kedokteran UGM, Yogyakarta.
Wagner,  H.,  1984, Plant  Drug  Analysis  a  Thin  Layer  Chromatography  Atlas ,  Spinger-Verlag, Berlin Hedelberg New York.