## JIFI (JURNAL ILMIAH FARMASI IMELDA)
Vol.3 No.1, September 2019, pp. 1-6 ISSN: 2597-7164 (Online), 2655-3147 (Print) https://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALFARMASI  1

## ISOLASI SENYAWA STEROID β-SITOSTENON DARI EKSTRAK METANOL TANAMAN DAUN DEWA

## ( GYNURA PSEUDOCHINA (LOUR) DC)
Roby Gultom
Program Studi S1 Farmasi STIKes Imelda Medan
Article Info

## ABSTRACT
The isolation of steroid compounds from Dewa Dewa Plants (Gynura pseudochina  (Lour)  DC)  has  been  carried  out.  The  compound extraction process is carried out using maceration using methanol as the solvent. The separation process until purification was carried out using  Vacuum  Liquid  Chromatography  (KCV)  and  radial chromatography.  The characteristics of the isolated compounds were identified  using  the  UV,  IR  and  1H-NMR  spectra. The result  of  the isolation is suspected to be β-cytostenone.
Keywords:

## Steroids
Leaf Plants Dewa β-cytostenone
This is an open access article under the CC BY-SA license.
Corresponding Author:
Roby Gultom, Program Studi S1 Farmasi, STIKes Imelda Medan, Jl. Bilal No. 52 Kelurahan Pulo Brayan Darat I Kecamatan Medan Timur, Medan - Sumatera Utara. Email: roby.gultom@gmail.com

## 1. INTRODUCTION
Tanaman  daun  dewa  (Gynura  pseudochina  (Lour)  DC)  merupakan  genus  Gynura  dan  termasuk dalam  famili  Asteraceae.  Gynura  ini  telah  diketahui  mengandung  komponen  aktif  alkaloid,  flavonoid, terpenoid,  tanin,  saponin,  steroid  dan  asam  klorogenat  (Wijayakusuma,  1997).  Daun  dewa  merupakan tanaman  yang  mudah  diperoleh,  dapat  tumbuh  di  segala  musim,  dan mempunyai  banyak  khasiat. Tanaman ini  memiliki  bioktivitas  sebagai  anti  koagulan,  antikarsinogen,  antimutagenitas,  antibakteri,  antipem- bengkakan, antikanker, obat demam, penurunan kadar gula darah dan luka bakar (Dondin, 2001).
Berdasarkan  studi  literatur  yang  dilakukan,  informasi  mengenai  kandungan  kimia  dan  bioaktivitas dari  daun  tanaman  daun  dewa  masih  belum  terlalu  banyak  dilaporkan.  Kandungan  kimia  yang  telah dilaporkan  adalah  senyawa  kuersetin  3-rutinosida,  asam  4,5-dikafeolkuinat  dan  asam  3,5-dikafeolkuinat (Siriwatanametanon  dan  Heinrich,  2011).  Bioaktivitas  dari  daun  dewa  masih  terbatas  pada  ekstraknya  saja yaitu  antikanker  dan  antioksidan  (Alisyahbana  2003;  Winarto,  2003).  Uji  pendahuluan  yang  dilakukan diketahui daun  dewa mengandung senyawa steroid. Berdasarkan pertimbangan tersebut dan melihat potensi kimia yang ada, maka dilakukan isolasi senyawa steroid yang terdapat pada bagian daun tanaman daun dewa ( G. pseudochina (Lour) DC).
2

## 2. RESEARCH METHOD
Waktu  dan  Tempat  Penelitian  pada  penelitian  ini  dilakukan  dari  bulan  Oktober  2017  sampai  Mei 2018  di  Laboratorium  Kimia  Organik,  Jurusan  Kimia  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Sumatera Utara, Pengukuran spektroskopi UV, IR, dan 1 H-NMR dilakukan di Institut Teknologi Bandung (ITB).

## A. Alat dan Bahan
1. Alat
Alat-alat  yang  digunakan  berupa  seperangkat  alat  destilasi, rotari  evaporator R-114  Buchi dengan sistem vakum  Buchi B-169,  corong  pisah,  chamber,  pipet  kapiler, neraca  analitis,  kromatografi  cair  vakum, kromatografi  radial,  lampu  UV,  peralatan  gelas  ukur  lainnya  yang  lazim  digunakan  di  laboratorium  kimia, spektrofotometer  ultraviolet  varian,  spektrofotometer  FTIR  Shimadzu  8400  dan  spektrofotometer  NMR JEOL, JNMECA 500 (500 MHz), Hot plate , bunsen, cawan petri, tabung reaksi.
2. Bahan
Bahan-bahan  yang  dibutuhkan  antara  lain  daun  dari  daun  dewa,  metanol,  n-heksana,  aseton, kloroform, etil asetat, silika gel G 60 (35-70 mesh), silika gel G 60 (230-400 mesh), KLT silika gel G 60 F 254 , silika gel GF, serium sulfat, akuadest, biakan.
B. Prosedur Kerja
1. Persiapan Sampel
Sampel daun dari daun dewa kering diperoleh dari Bandung sebanyak 1 kg. Sampel diidentifikasi di ‘Herbarium Bogoriense’ Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi, LIPI, Cibinong.

## C. Ekstraksi
Sampel  daun  dari  daun dewa  kering  sebanyak  1 kg  digiling  sampai halus.  Daun  dari  daun dewa  yang sudah halus diekstraksi dengan cara direndam (maserasi) menggunakan metanol dengan 3 kali pengulangan. Filtrat  yang  di  dapat  dipekatkan  dengan  cara  menguapkan  pelarutnya  menggunakan rotari  evaporator sehingga diperoleh ekstrak pekat metanol.

## D. Pemisahan dan Pemurnian Senyawa Aktif
Ekstrak  pekat  metanol  dilakukan  pemisahaan  dengan  menggunakan  kromatografi  cair  vakum.  Kolom kromatografi cair vakum (diameter 7 cm) diisi dengan menggunakan silika gel G 60 (230-400 mesh) dengan perbandingan  1:10  dengan  ekstrak,  lalu  dipadatkan.  Permukaan  silika  yang  telah  dipadatkan  dalam  kolom ditutupi  dengan  kertas  saring.  Sebelum  dioperasikan,  pelarut  n-heksana  dialirkan  pada  silika  untuk memastikan  silika  di  dalam  kolom  sudah  padat  dan  rata.  Ekstrak  pekat  dari  hasil  preabsorbsi  selanjutnya dimasukkan dalam kolom, kemudian dielusi dengan menggunakan eluen n-heksana, campuran n-heksana: etil asetat  dengan  kepolaran  bertingkat,  campuran  etil  asetat:  metanol  dan  metanol.  Setiap  eluat  yang  keluar ditampung dengan menggunakan vial dan diuapkan sampai kering dengan menggunakan rotari evaporator . Setiap  eluat  dalam  vial  dilakukan  kromatografi  lapis  tipis  dengan  eluen  yang  sesuai.  Eluat  dalam  vial–vial yang  menunjukkan  pola  noda  yang  sama  dikelompokkan  menjadi  satu  fraksi  sehingga  diperoleh  beberapa fraksi.  Fraksi  yang  menunjukkan  pola  noda  dengan  pengotor  yang  lebih  sedikit  selanjutnya  dilakukan pemisahan dan pemurnian lebih lanjut dengan kromatografi radial. Uji kemurnian senyawa hasil isolasi diuji dengan menggunakan pengukuran  titik  leleh,  spektrofotometer  ultraviolet,  inframerah,  dan 1 H-NMR  untuk mengidentifikasi struktur senyawa hasil isolasi.

## 3. RESULTS AND ANALYSIS
Isolasi dan Pemurnian Senyawa dari Daun Tanaman Daun Dewa ( G. pseudochina (Lour) DC) Maserasi yang dilakukan terhadap 1 kg serbuk daun dari tanaman daun dewa menghasilkan ekstrak pekat  35,71  g.  Pemisahan  terhadap  20  g  ekstrak  pekat  dilakukan  dengan  kromatografi  cair  vakum.  Hasil pemisahan ini  dikelompokkan menjadi  10  fraksi  utama  dan  dilakukan  kromatografi  lapis  tipis  terlihat  pada Gambar 1.

## A                                B
Gambar   1 . Hasil KLT di bawah lampu UV. Fraksi A - E dengan eluen n-heksana dan etil asetat (8:2) (A) dan fraksi F - J dengan eluen kloroform dan metanol (85:15) (B) .
Fraksi  A  (2,14  g)  dipilih  untuk  pemisahan  selanjutnya.  Pemilihan  ini  dilakukan  berdasarkan  pola noda kromatografi lapis tipis yang menunjukkan sedikit noda sehingga untuk tahap selanjutnya lebih mudah dipisahkan. Tahap selanjutnya dilakukan pemisahan dengan menggunakan kromatografi radial menggunakan eluen n-heksana  dan  etil asetat (95:5)  sehingga  diperoleh  4  fraksi  yaitu  fraksi  A 1 (0,44 g),  A 2 (0,23  g),  A 3 (0,23 g), dan A 4 (0,03). Fraksi  dari  A 3 (0,23  g)  memperlihatkan  pola  noda  tunggal  tapi  masih  ada  sedikit  pengotor, selanjutnya  dimurnikan  kembali  dengan  menggunakan  kromatografi  radial  dengan  menggunakan  eluen  n- heksana  :  etil  asetat  (95:5).  Sehingga  diperoleh  senyawa  murni  yang  berupa  padatan  dengan  berat  0,1  g. Kemurnian senyawa hasil isolasi diuji kembali dengan melakukan KLT menggunakan berbagai eluen gambar 2.

## A               B              C
Gambar 2. Hasil KLT A 3 Dengan Berbagai Sistem Eluen. (A) n-heksana : etil asetat (95:5), (B) n-heksana : kloroform (5:5) dan (C) n-heksana: aseton (95:5).
Uji  kemurnian  selanjutnya  dilakukan  dengan  pengukuran  titik  leleh.  Titik  leleh  senyawa  isolasi adalah 97–98 o C. Range   2 o C memperkuat dugaan bahwa senyawa hasil isolasi telah murni.

## Identifikasi Senyawa Hasil Isolasi Identifikasi Spektrofotometer UV
Spektrum  UV  memberikan  serapan pada maks 231 nm  (Gambar  3).  Serapan  pada maks tersebut disebabkan karena adanya terjadinya transisi π   π * yang berasal dari ikatan rangkap yang terkonjugasi dari senyawa alifatik.
Gambar 3. Spektrum UV Senyawa Hasil Isolasi

## Identifikasi Spektrofotometer IR
Spektrum  inframerah  (Gambar  4)  mendukung  adanya  gugus  karbonil  ,    tak  jenuh  yang  terlihat dengan  munculnya  sinyal  pada  daerah  serapan  1669  cm -1 yang  berasal  dari  vibrasi  karbonil  terkonjugasi. Selain  itu  muncul  juga  daerah  serapan  pada  1617  cm -1 yang  berasal  dari  vibrasi  ikatan  rangkap  karbon. Serapan  pada  daerah  2930  cm -1 merupakan  vibrasi  ulur  asimetri  dari  C-H  alifatik  yang  diperkuat  dengan adanya  vibrasi  tekuk  pada daerah  serapan  1462  cm -1 sedangkan  serapan  pada  2869  cm -1 merupakan  vibrasi ulur simetri dari C-H alifatik yang didukung dengan munculnya vibrasi tekuk pada daerah serapan 1379 cm -1 .
4
Serapan  pada  bilangan  gelombang  3435  cm -1 lazimnya  berasal  dari  vibrasi  gugus  hikdroksil,  tetapi  pada senyawa  ini  diduga  bukan  vibrasi  dari  gugus  tersebut  karena  tidak  terdapat  serapan  kuat  dari  C-O  pada daerah serapan 1000–1200 cm -1 . Berdasarkan hal tersebut diduga bahwa gugus hidroksil tersebut berasal dari plat KBr yang berair.
Gambar 4. Spektrum Inframerah Senyawa Hasil Isolasi
Identifikasi Spektrofotometer 1 H-NMR
Spektrum data dari 1 H-NMR mendukung bahwa senyawa hasil isolasi merupakan senyawa alifatik yang ditunjukkan dengan munculnya banyak sinyal pada 1 H-NMR dibawah 3 ppm (Gambar 5).
Gambar 5. Spektrum 1 H-NMR Senyawa Hasil Isolasi
1 H-NMR  juga  memperlihatkan  bahwa  senyawa  hasil  isolasi  tersebut  merupakan  campuran  dari  3 senyawa  steroid  dengan  kerangka  stigmastan.  Hal  ini  didasarkan  atas  munculnya  6  gugus  metil  dengan multiplisitas  singlet,  sedangkan  pada  sebuah  senyawa  steroid  hanya  terdapat  2  gugus  metil  dengan multiplisitas singlet yaitu pada C-18 dan C-19. Keenam gugus metil tersebut muncul pada H 1,16 ppm (6H, s ) untuk 2 x CH 3 . Pada daerah H 0,69 ppm (3H, s ) untuk 1 x CH 3 dan daerah H 0,95 (9H, s ) untuk 3 x CH 3 (Gambar 6).
Gambar 6. Perbesaran Spektrum 1 H-NMR Proton Metil Pada H 1,16 ppm, H 0,95 ppm dan H 0,69 ppm.
Selain  itu  pada H 0,88  –  0,92  ppm  terdapat  12  proton  yang  diidentifikasi  berasal  dari  9  proton dengan  multiplisitas  doublet  untuk  3CH 3 yang  khas  untuk  C-21  dan  3  proton  lainnya  berasal  dari  proton metin  dengan  multiplisitas  multiplet.  Ciri  khas  yang  lain  ditunjukkan  pada  daerah H 0,77  –  0,85  ppm dengan integrasi 27 proton merupakan sinyal untuk 9 buah metil yang khas untuk C-26, C-27 dan C-29 dari senyawa  steroid  dengan  kerangka  stigmastan  yang  didukung  juga  dengan  munculnya H 1,24  (6H, m ) berasal dari 3 x CH 2 pada C-28 (Gambar 7).
Gambar 7. Perbesaran Spektrum 1 H-NMR Proton Pada H 1,24 ppm, H 0,88 – 0,92  ppm dan H 0,77 –
0,85 ppm.
Adanya  sistem  karbonil ,  tak  jenuh  didukung  pula  oleh  spektrum 1 H-NMR  yaitu  dengan munculnya  sinyal  pada H 5,7  ppm  (2H, s )  yang  berasal  dari  dua  buah  sistem  -  CO  –  CH  =  C  –  dan munculnya sinyal pada H 2,2 – 2,4 ppm (8H, m ) yang berasal dari proton metilen yang terikat pada gugus karbonil  (Gaspar,  1992).  Adanya  8  proton  yang  berasal  dari  4  CH 2 pada H 2,2  –  2,4  ppm  tersebut  juga mendukung  bahwa  terdapat  2  sistem  karbonil , tak  jenuh,  dimana  2  metilen  terikat  pada  karbon  dari gugus  karbonil  (C-2)  sedangkan  2 metilen lainnya  terikat  pada  karbon  dari  sistem  karbonil ,   tak  jenuh (C-6).
Data 1 H-NMR  senyawa  hasil  isolasi  menunjukkan  kesesuaian  yang  cukup  tinggi  dengan  data 1 H- NMR senyawa   -sitostenon (Marina et al, 1990) sebagaimana terlihat pada tabel 1. Berdasarkan hal tersebut maka  disarankan  bahwa  salah  satu  dari  ketiga  senyawa  steroid  itu  adalah -sitostenon  yang  mempunyai struktur sebagai berikut :
Gambar 8. Struktur Ketiga Senyawa Steroid
Tabel 1. Data NMR Senyawa Hasil Isolasi Dan   -Sitostenon
Proton H (ppm), Senyawa, isolasi (multiplisitas J dalam -sitostenon (   ) H-4 5,70 ( s ) 5,74( d ) H-18 0.69 ( s ) 0,72 ( s ) H-19 1,16 ( s ) 1,19 ( s ) H-21 0,88–0,92 ( d ) 0,93( d,J =6,6Hz) H-26 0,77–,85( d ) 0,84( d,J =6,0Hz) H-27 0,77–0,85 ( d ) 0,82( d,J =6,6Hz) H-29 0,77–0,85 ( d ) 0,85 ( d, J = 7,2 Hz)

## 4. CONCLUSION
Pada penelitian ini telah berhasil diisolasi campuran senyawa steroid dimana salah satunya adalah -sitostenon dari daun tanaman daun dewa.

## REFERENCES
Achmad, S.  A.  (1986). Kimia  Organik  Bahan A lam .  Jakarta:  Departemen  Pendidikan  dan  Kebudayaan Universitas Terbuka.
6
Alisyahbana,  H.  M.,  Limyati,  D.A.,  &  Ervina,  M.  (2003).  Perbedaan  Daya  Antioksidan  dari  Daun  Dewa (Gynura  pseudochina  DC)  dan  Sambung  Nyawa  (Gynura  procumbens  (L)  Merr). Jurnal  Obat  Bahan Alam 2 (1) 19-23.
Dondin S. (2001). Ekstrasi, fraksinasi, Karakterisasi dan Uji Hayati In Vitro Senyawa Bioaktif Daun Dewa (Gynura pseudochina (L) DC sebagai Antikanker Tahap I. Buletin Kimia , Vol 1, hal (75-79). Gaspar,  Elvira  M  and  J.  Higuinaldo.  (1992).  Steroidal  Constituents  From  Mature  Wheat  Straw. Phytochemistry , Vol. 34(2). Page (523-527).
Harborne,  J.  B.  (1987). Metode Fitokimia  Penuntun  Cara  Modern Menganalisis  Tumbuhan .  Edisi  Kedua. Bandung: Institut Teknologi Bandung. Hal 367.
Santosa, D. (2003). Ramuan Tradisional untuk Penyakit Kulit. Jakarta: Penebar Swadaya. Sastrohamidjojo, H. (1995). Sintesis Bahan Alam . Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Siriwatanametanon,  N.  &  Heinrich,  M.  (2011). The Thai Medicinal Plant Gynura pseudochina var. hispida: Chemical  Composition  And  In Vitro  NF-kappaBIn  hibitory  Activity.  Natural  Product of Communication, Vol 6 (5), Page (627-630).
Wijayakusuma. (1997). Tanaman Berkhasiat Obat di Indonesia . Jakarta: Pusat Kartini. Winarto, W.  P. (2003). Daun  Dewa  Sebagai  Budidaya dan  Pemanfaatan  untuk  Obat .  Jakarta: Penebar Swadaya.