## ISOLASI DAN KARAKTERISASI FISIOLOGIS PGPR DARI RIZOFER TANAMAN KACANG TANAH (Arachis hypogaea) VARIETAS LOKAL MAYBRAT

## ISOLATION AND PHYSIOLOGICAL CHARACTERIZATION OF PGPR FROM THE RHIZOFER OF PEANUT PLANTS (Arachis
hypogaea) LOCAL VARIETIES OF MAYBRAT
Kristi Lenci Patty 1 , Laury Chara Marcia Huwae 2 , , Yulia Yunita Mayor 1

## A BSTRACT
Sustainable agriculture systems utilizing PGPR (Plant Growth-Promoting Rhizobacteria) have the potential to increase due to their environmentally friendly and practical nature, to replace  the  increasing  use  of  chemical-based  fertilizers  and  pesticides.  Peanut  (Arachis hypogea L) local variety Maybrat is a plant that has the potential to be isolated by bacteria in  its  rhizosphere  area  to  be  used  as  a  biostimulant  candidate.  This  study  aimed  to determine the type of rhizobacteria in the rhizosphere area associated with local varieties of  peanuts  in  the  Maybrat  Regency  and  obtain  superior  rhizobacteria  for  biostimulants (PGPR). A total of 8 isolates were successfully isolated from peanut rhizosphere and based on  physiological  characteristics  showed  that  KM2  isolates  produced  the  highest  IAA  of 2,625 mg l -1 , and KM8 isolates produced the highest GA3 concentration of 4.19 mg l -1 . KM7 isolates  produce  salicylates  with  the  highest  concentration  of  0.788  mg  l -1 ,  while  KM3 isolates produce the highest type of catechols of 1.89 mg l -1 . The KM8 isolate is capable of dissolving the highest phosphate of 12.46 mg l -1 . Cyanide production tests showed that all eight bacterial isolates did not have the ability to produce cyanide.  Based on physiological characteristics,  it  shows  that  these  8  isolates  have  the  potential  to  be  biostimulants  and biofertilizers for plants.
Keywords: PGPR, Isolation, Characterization, Rizofer, Arachis hypogea

## 1. PENDAHULUAN
Sistem  Pertanian  berkelanjutan  menuntut  adanya  inovasi  dibidang  pertanian  untuk  memenuhi pemintaan  pangan  yang  meningkat  tanpa  memberi  dampak  yang  besar  terhadap  lingkungan.  Inovasi dibidang pertanian ini dikenal dengan biorevolusi yang didasarkan pada dua hal mendasar yaitu input biologis melalui pemanfaatan fitomikrobioma (inokulasi, senyawa yang diproduksi melalui mikroba), dan tanaman yang lebih berkualitas (manipulasi struktur komunitas fitomikrobioma) [1] . Fitomikrobioma merupakan  mikroba  yang  berasosiasi  dengan  jaringan  tanaman  dan  berkombinasi  dengan  tanaman membentuk holobiont pada semua bagian tanaman yaitu bunga, buah, batang, daun dan akar. Kondisi fitomikrobioma bervariasi pada setiap jaringan tanaman dan dihuni oleh mikroba spesifik.
PGPR  ( Plant  Growth-Promoting  Rhizobacteria )  merupakan  bagian  dari  fitomikrobioma  yaitu mikroba  yang  berasosiasi  dengan  jaringan  tanaman  pada  bagian  akar.  Komunitas  mikroba  yang berasosiasi  dengan  akar  tanaman  disebut  rhizomikrobioma.  Rhizomikrobioma  memainkan  peranan penting dalam perolehan nutrisi dan asimilasi, peningkatan tekstur tanah, mensekresi, dan memodulasi molekul ekstraseluler seperti hormon, metabolit sekunder, antibiotik, dan berbagai senyawa sinyaling yang  semuanya  mengarah  pada  peningkatan  pertumbuhan  tanaman,  sehingga  memegang  peranan penting dalam memodulasi respon stress tanaman. Penelitian telah menunjukkan bahwa menginokulasi
1 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Teknik dan Pertanian, Universitas Nani Bili Nusantara
Jl. Bandara, Epiglottis SP2
Mariat, Kabupaten Sorong, Indonesia kristipatty08@gmail.com
2 Progam Studi Bioteknologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pattimura Jl. Ir. M. Putuhena, Kampus poka, Ambon, Indonesia laury.huwae@fmipa.unpatti.ac.id
tanaman  dengan  PGPR  dapat menjadi  strategi  yang  efektif  untuk  merangsang  pertumbuhan  tanaman dan  dapat  meningkatkan  toleransi  tanaman  terhadap  tekanan  abiotik  seperti  kekeringan,  panas,  dan salinitas  yang  cenderung  menjadi  lebih  sering  terjadi  karena  kondisi  perubahan  iklim  yang  terus berkembang. Penemuan ini telah menghasilkan formulasi berbasis PGPR multifungsi untuk pertanian komersial, yang bertujuan untuk meminimalkan penggunaan pupuk sintetis dan agrokimia. [2]
Rhizomikrobioma adalah komunitas mikroba yang paling kompleks dari semua fitomikrobioma yang berasosiasi dengan tanaman. Rhizomikrobioma dapat dipahami dan ditandai dengan mudah adalah rhizobia pengikat nitrogen yang berasosiasi dengan kacang-kacangan [2] Spesies rhizomikrobioma yang berasosiasi dengan tanaman dapat berubah sesuai dengan kondisi, genotip tanaman dan perkembangan tanaman. [2][4][5]
Penggunaan biofertilizer komersial yang mengandung strain PGPR terbaik terus meningkat pesat, dan untuk alasan ini, pentingnya untuk mencari strain PGPR dan caranya bekerja bagi tanaman. PGPR dapat  dibagi  menjadi  tiga  kategori  sebagai  biopestisida,  biofertilizer,  dan  fitostimulator. [6] Sejumlah penelitian  telah  dilakukan  dengan  menggunakan  sampel  yang  bervariasi  dari  berbagai  habitat  untuk mendapatkann berbagai jenis PGPR seperti ditunjukan pada tabel dibawah ini. [7]
Kacang tanah ( Arachis hypogeae L) varietas lokal di Kabupaten Maybrat, Papua Barat merupakan salah  satu  tanaman  kacang-kacangan  ( leguminoceae )  yang  dibudidayakan  oleh  petani  lokal  dengan menggunakan kearifan lokal, mempunyai rasa yang berbeda dengan kacang tanah yang diperdagangkan di  pasaran.  Oleh  karena  itu,  kacang  tanah  varietas  lokal  Maybrat  sangat  cocok  untuk  diisolasi  dan dijadikan sebagai kandidat biostimulatan (PGPR).
Tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui jenis  rhizobakteria  yang  berada  di  daerah  risofer yang  berasosiasi  dengan  kacang  tanah  varietas  lokal  di  Kabupaten  Maybrat  dan  mendapatkan rhizobakteria yang unggul untuk dijadikan sebagai biostimultan (PGPR). Studi kelayakan dari penelitian ini  adalah  untuk  mengembangkan  kearifan  lokal  masyarakat  papua  dalam  pengelolaan  budidaya tanaman  endemik  maupun  tanaman  pertanian  lainnya  tanpa  menggunakan  pupuk  berbasis  kimia sehingga dapat mengoptimalisasi hasil pertanian dan meminimalisasi dampak pencemaran lingkungan.

## 2. KAJIAN PUSTAKA / METODOLOGI /PERANCANGAN
Pertambahan  populasi  manusia  berdampak  terhadap  peningkatan  produksi  pangan  global  yang menyebabkan praktik pertanian menggunakan bahan kimia seperti pestisida, herbisida, dan pupuk kimia dalam  jumlah  banyak,  untuk  memenuhi  kebutuhan  permintaan  dan  ketersediaan  pangan,  serat  dan minyak.  Penggunanan  pupuk  dan  pestisida  berbasis  kimia  ini  menyebabkan  degradasi  lahan  dan hilangnya kenekaragaman hayati. [8] Menurut perkiraan, kerugian rata-rata produksi tanaman menjadi 10 miliar  USD  per  tahun  di  negara-negara  berkembang  di  Asia,  penyebab  utamanya  adalah  degradasi lahan. [9] Degradasi lahan mengakibatkan kelelahan, salinisasi, dan penggundulan tanah. Berdampingan dengan  pertambahan  populasi  manusia,  pada  abad  21  masyarakat  global  diperhadapkan  dengan  isu pemanasan  global  dan  revolusi  hijau  sehingga  menyebabkan  lingkungan  sebagai  suatu  ekosistem menjadi perhatian utama. Hal ini menyebabkan semua aktifitas manusia yang mengambil materi dari lingkungan maupun aktifitas manusia yang berdampak langsung terhadap lingkungan diharapkan tidak merusak lingkungan dan mengurangi pemanasan global.
Indonesia  sebagai  negara  berkembang  dengan  jumlah  penduduk  278  juta  jiwa,  dimana  sektor pertanian memegang peranan penting dalam pertumbuhan ekonomi dan kewirausahaanya, mengahadapi permasalahan  yang  sama  yaitu  naiknya  permintaan  akan  kebutuhan  pangan  dan  ketersediaannya, mengakibatkan  aktifitas  pertanian  di  Indonesia  sangat  bergantung  kepada  penggunaan  pupuk  dan pestisida  berbasis  kimia.  Oleh  karena  itu,  diperlukan  suatu  sistem  pertanian  berkelanjutan  yang digunakan untuk meminimalisasi dampak penggunaan pupuk dan pestisida kimia terhadap lingkungan.
Sistem  pertanian  berkelanjutan  dengan  memanfaatkan  PGPR  (Plant  Growth-Promoting Rhizobacteria)  berpotensi  meningkat  karena  sifatnya  yang  ramah  lingkungan  dan  praktis  untuk menggantikan  meningkatnya  penggunaan  pupuk  dan  pestisida  berbasis  kimia.  PGPR  merupakan
sekumpulan mikroorganisme rhizobakteria menguntungkan yang dapat meningkatkan atau menginisiasi pertumbuhan  tanaman  secara  langsung  maupun  tidak  langsung  melalui  berbagai  proses  seperti penyerapan  nutrisi,  sintesis  siderophore,  sintesis  fitohormon,  fiksasi  N 2 oleh  organisme  hidup, melarutkan  fosfat  yang  tidak  larut,  pengenalan  gen  toleransi  sistemik,  sintesis  ACC  deaminase,  dan berbagai senyawa organik volatil. Penggunaan biofertilizer komersial yang mengandung strain PGPR terbaik terus meningkat pesat, dan untuk alasan ini, pentingnya untuk mencari strain PGPR dan caranya bekerja bagi tanaman. PGPR dapat dibagi menjadi tiga kategori sebagai biopestisida, biofertilizer, dan fitostimulator. [10] (tabel 1).
Tabel 1. Tipe-Tipe PGPR dan Cara Kerjanya Untuk Menstimulasi  Pertumbuhan dan
Perkembangan Tanaman [10] Tipe PGPR Defenisi Mekanisme Referensi Fitostimulator Mikroorganisme yang mempunyai kemampuan untuk membuat fitohormon seperti IAA dan Etilen Sintesis fitohormon Lugtenberg et al . (2002) Somers et al . (2004) Bioinsektisida atau Biopestisida Jamur  dan  bakteri  yang  meningkatkan pertumbuhan dan perkembangan tanaman dengan cara mencegah pertumbuhan pathogen tanaman Sintesis  siderophore dan HCN Vessey (2003) Memproduksi enzim hidrolitik Somers et al . (2004) Pengenalan gen toleransi sistemik Chandler et al. (2008) Biofertilizer mikroorganisme  yang  berkolonisasi dengan  akar  di  bagian  rhizosfer  untuk meningkatkan  perkembangan  tanaman melalui peningkatan ketersediaan nutrisi BNF Vessey (2003) Melarutkan  fosfat  yang tidak larut Somers et al . (2004)
Sejumlah penelitian telah dilakukan dengan menggunakan sampel yang bervariasi dari berbagai habitat untuk mendapatkann berbagai jenis PGPR seperti ditunjukan pada tabel dibawah ini (Tabel 2).
Tabel 2. PGPR dan Afliasi Filogenetiknya [7] Sumber Asosiasi PGPR Famili Filum Referensi Rizosfer tanah dari Wesrernghats Micrococcus sp NII 0909 Micrococcaceae Actinobacteria Dastager et al . (2010) Pinus Brazil n/a Bacillaceae, Enterobacteriaceae, Pseudomonadaceae Firmicutes, Proteobacteria Ribeiro dan Cardoso (2012) Canola  ( Brassica napus ) Phyllobacterium Phyllobacteriaceae Proteobacteria Bertrand et al . (2001) Kentang Bacillus Bacillaceae Firmicutes Calvo et al . (2010) Tebu Burkholderia sp Burkholderiaceae Proteobacteria Luvizotto et al . (2010) Gandum Stenotrophomonas sp Xanthomonadaceae Proteobacteria Majeed et al . (2015) Gandum Enterobacter cloacae Pseudomonas monteili Bacillus pumilus Enterobacteriaceae Pseudomonadaceae Bacillaceae Proteobacteria Habibi et al . (2014) Jagung Padi Alcaligenes sp. Ochrobacterum sp. Alcaligenaceae Brucellacea Proteobacteria Bal et al. (2013)
Echinochloa  crus- galli Serratia plymuthica Enterobacteriaceae Proteobacteria Koo and Cho (2009) Tebu Azotobacter chrococcum Azospirillum brasilense Azotobacteraceae Rhodospirillaceae Proteobacteria Tejera et al . (2005) Suedafructicosa Kocuria turfanensis2M4 Micrococcaceae Actinobacteria Goswami et al. (2014b) Tembakau Agrobacterium tumefaciens Rhizobiaceae Proteobacteria Zhang and Kong (2014) Myroides odoratiminus Flavobacteriaceae Bacteroidetes
Kacang  tanah  ( Arachis  hypogeae L)  varietas  lokal  Maybrat  merupakan  kacang  tanah  yang dibudidayakan  oleh  masyarakat  lokal  dengan  menggunakan  prinsip  kearifan  lokal  sehingga  dapat dijadikan  kandidat  yang  baik  untuk  mengisolasi  dan  mendapatkan  PGPR  yang  berpotensi  sebagai biostimulan untuk pertumbuhan dan perkembangan tanaman budidaya lainya.

## 3. METODE PENELITIAN
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Juni  –  Desember  2022.  Analisis  sampel  dilakukan  di Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Penegtahuan  Alam  Universitas  Pattimura Ambon. Metode penelitian yang digunakan adalah metode eksperimental.

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tanah dari perakaran disekitar tanaman kacang tanah lokal Maybrat yang diambil pada kedalaman 0-20 cm dari permukaan tanah.

## Prosedur Penelitian
Penelitian ini dilakukan dalam dua tahapan yaitu isolasi dan karakterisasi fisiologis yang terdiri dari uji produksi asam asetat indole (IAA), uji produksi asam giberalic (GA), uji produksi siderophore tipe salisilat, uji kelarutan fosfat, dan Uji HCN. [11][12]

## Isolasi
Sebanyak 10 g tanah yang berasal dari risosfer kacang tanah lokal Maybrat dilarutkan dalam 90 ml aquades steril dan dishaker selama 30 menit. 1 ml suspensi tanah risosfer dimasukan kedalam 9 ml NaCl fisiologis secara bertahap sampai pengenceran mencapai 10 -8 , dari setiap pengenceran diambil 0.1 ml suspensi dan disebarkan diatas media Natrium Agar (NA) dan diinkubasi pada suhu 30 0 C selama 1 hari.  Setiap  koloni  murni  yang  tumbuh  pada  media  NA  diambil  dan  di  reisolasi  untuk  mendapatkan kultur murni.

## Uji Produksi asam asetat indol (IAA)
Isolat murni bakteri dikulturkan dalam media Nutrien Broth (NB) yang telah ditambahkan 0,1 g l -1 L-triptofan.  dan  diinkubasi  selama  5  hari  pada  suhu  30 0 C.  sebanyak  2  ml  suspensi  bakteri  hasil inkubasi disentrifus selama 30 menit pada 3000 rpm. 2 ml supernatant diambil dan ditambahkan 2 tetes asam  ortho  fosfat  (HPO 4 )  dan  4 ml  regen  Salkowski  (50  ml  asam  sulfat  35  %  +  1  ml  0,5  M  larutan FeCl 3 ), kemudian diinkubasi selama 24 jam dalam ruang gelap. Perubahan warna larutan menjadi pink menunjukan produksi IAA. Larutan inkubasi diukur absorbansi pada panjang gelombang 535 nm.

## Uji Produksi Asam Giberalik
Isolat murni bakteri dikulturkan dalam media Nutrien Broth (NB) dan dinkubasi selama 7 hari pada  suhu  30 0 C.  15  ml  suspensi  bakteri  disentrifugasi  selam  10  menit  8000  rpm.  15  ml  supernata diambil dan ditambahkan 2 ml larutan zink asetat. Setelah 2 menit ditambahkan 2 ml kalium ferosianida dan disentrifugasi pada 8000 rpm selama 10 menit. 5 ml supernata diambil dan ditambahkan 5 ml asam klorida  30  %  kemudian  diinkubasi  pada  suhu 27 0 C  selam  75  menit.  Absorbansi larutan  diukur  pada Panjang gelombang 254 nm.

## Uji Produksi siderofor tipe salisilat dan katekol
Isolat murni bakteri dikulturkan dalam media Nutrien Broth (NB) dan dinkubasi selama 7 hari pada  suhu  30 0 C.  setelah  inkubasi,  kultur  disentrifugasi  selama  20  menit  pada  10000  rpm.  20  ml supernatant diatur pHnya sampai mencapai pH 2,0 menggunakan HCl. 20 ml etil asetat ditambahkan dan ekstraksi dilakukan dua kali. 5 ml supernatant diambil dan ditambahkan 5 ml regen hathway (1 ml 0,1  M  FeCl 3 ,  1 ml  0,1  N  HCl  dan  1 ml  0,1 M  kalium  ferisianida dan ditambahkan  ke  dalam 100  ml aquades).  untuk  uji  tipe  salisat  dilakukan  pengukuran  absorbansi  pada  Panjang  gelombang  560  nm dengan natrium salisat sebagai larutan standar. Untuk uji tipe katekol dilakukan pengukuran absorbansi pada Panjang gelombang 700 nm dengan 2,3 asam benzoate dihidroksi (DHBA) sebagai larutan standar.

## Uji HCN
Isolat  murni  bakteri  ditumbuhka  pada  media  NA  (30 g)  yang  telah ditambahkan  glisin  (4,4  g). produksi asam sianida dideteksi menggunakan kertas saring berukuran 1 x 1 cm yang telah disterilkan dan dicelupkan dalam larutan CDS (2 g asam pikrat, 8 g sodium karbonat dalam 20 ml aquades steril). Biakan diinkubasi pada suhu 30 0 C selama 4 hari., jika terjadi perubahan warna kertas saring menjadi orange kecoklatan maka isolat bakteri menunjukan kemampuan menghasilkan HCN.

## Uji Kelarutan Fosfat
Isolat  murni  bakteri  dikulturkan  dalam  media  Pikovskaya  (10  g  glukosa,  5  g  Ca 3 HPO 4 ,  0,5  g (NH 4 )SO 4 ,  0,2 g KCl, 0,1 g MgSO 4 , 25 mg MnSO 4 , 25 mg FeSO 4 dalam 1 liter aquades) dan dinkubasi dalam keadaab dishaker pada suhu 30 0 C selama 7 hari. Kultur hasil inkubasi disentrifuga selam 15 m pada 1000 rpm. 5 ml supernatant diambil dan ditambahkan 0,5 ml perekasi P pekat (12 g ammonium molibdat,  0,277  g  kalium  antimol  tartrat),  kocok  beberapa  menit  dan  diamkan  selama  30  menit. Absorbansi larutan diukur pada panjang gelombang 693 nn dengan menggunakan PO 4 3- sebagai larutan standar.

## 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  isolasi  dan  karakterisasi  fisologis  PGPR  ( Plant  Growth  Promoting  Rhizobacteria )  dari rizofer tanaman kacang tanah lokal Maybrat diperoleh 8 isolat yang ditunjukan pada tabel 1 dibawah ini.
Tabel 3. Karakteristik Fisiologis Isolat PGPR Dari Risofer Tanaman Kacang Tanah Lokal Maybrat
No Isolat Produksi Hormon Produksi siderofor Uji HCN *) Kelarutan Fosfat Kosentrasi IAA (mg l -1 ) Kosentrasi GA (mg l -1 ) Tipe salisilat (mg l -1 ) Tipe katekol (mg l-1 ) Zona Bening **) Kosentrasi Kelarutan fosfat (mg l -1 ) 1 KM1 1,078 2,62 0,782 1,78 - + 5,83 2 KM2 2,625 2,70 0,469 1,282 - + 3,91 3 KM3 1,484 3,02 0,698 1,89 - + 10,07 4 KM4 0,531 3,09 0,782 1,861 - + 10,07 5 KM5 0,500 2,72 0,726 1,813 - + 11,06 6 KM6 2,203 3,11 0,559 1,579 - + 10,3 7 KM7 0,297 2,60 0,788 1,837 - + 11,66 8 KM8 1,297 4,19 0,777 1,746 - + 12,46 Keterangan:    *)   +   berwarna orange kecoklatan - tidak ada perubahan warna
**) +    zona bening terbentuk
- tidak terbentuk zona bening
***) +   resisten pada suhu 50 dan 700 C
- Tidak resisten

## Produksi asam asetat indol (IAA)
Hasil uji produksi asam asetat indol (IAA) dari 8 isolat bakteri menunjukan isolat yang mampu menghasilkan IAAA tertinggi pada isolat kode KM2 = 2,625 mg l -1 dan terendah pada isolat KM7 = 0,297 mg l -1 (tabel 3). Tiga isolat yaitu KM2, KM6 dan KM3 mempunyai kemampuan yang paling baik menghasilkan IAA (tabel 1).
Beberapa strain PGPR (Plant growth promoting rhizobacteria) merupakan prekursor yang mampu mensintesis  IAA  (bahan  dasar)  yang  terkandung  dalam  eksudat  akar  dan  bahan  organik.  Berbagai penelitian  menunjukkan  bahwa  IAA  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  PGPR  adalah Azospirillum dan Azotobacter paspali Brasiliense yang dapat meningkatkan jumlah akar lateral dan ukuran sistem akar sehingga  meningkatkan  penyerapan  air  dan  nutrisi  dari  tanah.  Sintesis  IAA  di  tanah  telah  tersedia melalui prekursor tertentu yaitu triptopan (L-triptofan). Triptofan merupakan salah satu sumber N untuk mikroba yang terkandung dalam eksudat akar dan bahan organik yang dapat diubah oleh mikroba tanah menjadi IAA. [13] Berbagai faktor yang mempengaruhi A. brasilense dalam biosintesis IAA seperti suhu, pH, keberadaan nitrogen dan konsentrasi triptofan dalam media kultur telah dilakukan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kondisi kultur yang cocok untuk biosintesis IAA pada pH 6,5, 30 °C, media kultur dengan nitrogen, dan 0,1% tryptophan [14]

## Produksi asam giberalik (GA3)
Hasil uji produksi asam giberalin (GA3) dari 8 isolat bakteri menunjukan bahwa kedelepan isolat ini mampu menghasilkan asam giberalin dengan kosentrasi GA3 tertinggi yaitu isolat KM8 = 4,19 mg l -1 dan terendah yaitu KM7 = 2,60 mg l -1 (tabel 3).
Asam  Giberalin  adalah  fitohormon  yang  termasuk  dalam  kelompok  besar  asam  tetrasiklik diterpen  yang  meregulasi  berbagai  macam  proses  dalam  pertumbuhan  dan  perkembangan  tanaman seperti perkecambahan, pemanjangan batang, pembungaan dan pembuahan. Penelitian yang dilakukan oleh  Gutiérrez-Ma˜nero et  al [15] menemukan  empat  bentuk  GA3  yang  mempunya  aktifitas  fisiologis yang berbeda dihasilkan oleh Bacillus pumilus dan B. licheniformis yang diisolasi dari risosfer Alnus glutinosa L. Gaertn. Sgroy et al. [16] juga menemukan starin Lysinibacillus fusiformis , Achromobacter xylosoxidans , Bacillushalotolerans , B. licheniformis , B. pumilus , dan B. subtilis yang diisolasi dari akar legum  halofit  Prosopis  strombulifera  menghasilkan  GA3.  Masciarelli et  al , [17] menemukan  bahwa B.
amiloliquefaciens menghasilkan  produksi  IAA,  GA3  dan  SA lebih  tinggi  dari  yang  lainnya  sehingga strain  ini  lebih  memungkinkan  mengatur  distribusi  nutrisi  tanaman  dan  pertumbuhan  jaringan  serta diferensiasi untuk membentuk nodul baru (sehingga mengubah nodulasi dalam proses utama fotosintesis dan menunda sementara pertumbuhan tanaman) dan untuk menciptakan lingkungan yang lebih cocok bagi B. japonicum untuk membangun dan memperbaiki nitrogen.

## Produksi siderofor tipe salisilat dan katekol
Hasil uji produksi siderofor tipe salisilat dan tipe katekol dari 8 isolat bakteri menunjukan bahwa kedelapan isolat ini mampu menghasilkan siderofor tipe salisilat tertinggi pada isolat kode KM7 = 0,788 mg  l -1 dan  terendah  pada  isolat  KM2  =  0,469  mg  l -1 walaupun  jumlahnya  sangat  kecil  (Tabel  3), sedangkan siderofor tipe katekol tertinggi pada isolat KM3 = 1,89 mg l -1 dan terendah dihasilkan oleh isolat KM2 = 1,282 mg l -1 (tabel 3).
Siderophores  merupakan  strategi  yang  digunakan  oleh  mikroba  untuk  menjaga  kelangsungan hidupnya  karena  membentuk  kompleks  dengan  Fe  dan  meningkatkan  kelarutan  dan  penyerapannya dalam kondisi yang ketersediaan zat besinya rendah. [18] penelitian sebelumnya oleh Arzanesh et al , [19] menganalisis siderophores dan hubungannya dengan ketahanan terhadap kekeringan menemukan bahwa strain yang menghasilkan tingkat siderophores yang lebih tinggi berkaitan dengan ketahanan kekeringan yang sangat baik bagi tanaman inang. Dalam kondisi stres Pseudomonas sp menghasilkan kadar EPS yang lebih tinggi daripada dalam kondisi tanpa tekanan, menunjukkan bahwa pembentukan EPS pada bakteri terjadi sebagai reaksi terhadap stres. [20]

## HCN
Hasil Uji HCN dari 8 isolat bakteri memnunjukan bahwa kedelapan isolat bakteri ini tidak mampu untuk  menghasilkan  sianida.  Hal  ini  ditunjukan  dengan  tidak  adanya  perubahan  warna  kertas  saring menajdi orange-kecoklatan (tabel 3).
Salah  satu  karakteristik  dari  PGPR  adalah  kemampuan  untuk  meningkatkan  pertumbuhan tanaman  dengan  menghasilkan  HCN  yang  berfungsi  sebagai  antagonis  mikroba  yang  melindungi tanaman dari patogen yang menyerang. [21][22] menemukan bahwa beberapa strain Pseudomonas memiliki kemampuan untuk menghasilkan HCN, siderophores dan antibiotik yang dapat menekan pertumbuhan F.oxysporum patogen. Berdasarkan hal ini kemungkinan dalam proses isolasi isolat bakteri penghasil HCN tidak terambil sehingga dibutuhkan media spesifik yang lebih baik..

## Kelarutan fosfat
Hasil  Uji  kelarutan  fosfat  dari  8  isolat  bakteri  menunjukan  bahwa  kedelapan  isolat  ini  mampu untuk melarutkan fosfat teringgi pada isolat KM8 = 12,46 mg l -1 dan terendah pada isolat KM2 = 3,91 mg l -1 (tabel 3).
Kelarutan fosfat adalah salah satu sifat yang sangat penting dari promosi pertumbuhan tanaman karena  mikroorganisme  dapat  melarutkan  fosfat  yang  tidak  larut  sehingga  tersedia  bagi  tanaman. [21] Kemampuan  beberapa  mikroorganisme  untuk  mengubah  bentuk  larutan  yang  tersedia  misalnya ortofosfat menjadi fosfat merupaka salah satu sifat dari PGPR. [11] Kebanyakan spesies Bacillus seperti Bacillus subtilis , Bacillus amyloliquoefaciens, Bacillus cereus , Bacillus pumilus dan Bacilluispolymyxa dikenal luas karena kemampuan biokontrolnya dalam menghasilkan beberapa antibiotik dan mendukung promosi pertumbuhan tanaman dengan produksi fitohormon, solubilisasi fosfat, melepaskan amonia dari bahan organik nitrogen. [23]

## 5. KESIMPULAN
Hasil isolasi PGPR (Plant growth promoting rhizobacteria dari rizofer kacang tanah lokal Maybrat diperoleh  8  isolat.  Uji  produksi  IAA  dari  8  isolat  bakteri  menunjukan  bahwa  3  isolat  memiliki kemampuan menghasilkan IAA yaitu KM2, KM3 dan KM6 paling baik. Uji produksi asam giberalin (GA3)  menunjukan  isolate  KM8  menghasilkan  kosentrasi  GA3 tertinggi  yaitu  4,19  mg l -1 sedangkan terendah dihasilkan oleh isolat KM7 dengan kosentrasi 2,60 mg l -1 . Uji produksi siderofor tipe salisilat menunjukan  isolat  KM7  menghasilkan  salisilat  dengan  kosentrasi  tertinggi  yaitu  0,788  mg  l -1 dan
terendah  pada  isolat  KM2 yaitu  0,469  mg  l -1 , sedangkan  uji  siderofor  tipe  katekol  menunjukan isolat KM3  menghasilkan  tipe  katekol  tertinggi  yaitu  1,89  mg  l -1 dan  terendah  dihasilkan  oleh  isolat  KM2 yaitu 1,282 mg l -1 .
Uji  kemampuan  melarutkan  fosfat  menunjukan  bahwa  isolat  KM8  mampu  melarutkan  fosfat sebanyak 12,46 mg l -1 dan terendah dimiliki oleh isolat KM2 sebanyak 3,91 mg l -1 . Uji produksi sianida menunjukan bahwa  kedelapan  isolat  bakteri  tidak  memiliki  kemampuan  untuk menghasilkan  sianida. isolate-isolat PGPR yang berhasil diisolasi ini  dapat menjadi kandidat potensial PGPR tetapi dibutuhkan studi  lanjut  untuk  mengetahui  jenis  rhizobakteria  dan  potensinya  Ketika  dikarakterisasi  di  lapangan kepada tanaman.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima kasih kepada DPRM DIKTI yang telah mendanai penelitian ini melalui hibah penelitian dosen  pemula  dengan  No:  SP  DIPA-Nomor  SP  DIPA-023.17.1.690523/2022  dan  Nomor: 845/LL14/PG.02.00.PT/2022  Kepala  Laboratorium  serta  Pranata  Laboratorium  Mikrobiologi  FMIPA Universitas Pattimura yang telah membantu selama proses penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]     Timmusk, S., Behers, L., Muthoni, J., Muraya, A., and Aronsson, A. C. (2017). Perspectives and challenges  of  microbial  application  for  crop  improvement.  Front.  Plant  Sci.  8:49.  doi: 10.3389/fpls.2017.00049.
[2]     Backer, R., Rokem. S.J., Ilangumaran, G., Lamont, J., Praslickova, D., Ricci, E., Subramanian, S.,  Smith,  L.D.,  2018.  Plant  Growth-Promoting  Rhizobacteria:  Contex,  mechanisms  of  action, and roadmap to commercialization of biostimulants for sustainable agriculture. Frontiers in Plant Science. 9: 1473. https://doi.org/10.3389/fpls.2018.01473
[3]      Delaplace, P., Delory, B. M., Baudson, C., Mendaluk-Saunier, De Cazenave, M., Spaepen, S., et al. (2015). Influence of rhizobacterial volatiles on the root system architecture and the production and allocation of biomass in the model grass Brachypodium distachyon (L.) P. Beauv. BMC Plant Biol. 15:195. doi: 10.1186/s12870-015-0585-3
[4]     Poli, A., Lazzari, A., Prigione, V., Voyron, S., Spadaro, D., and Varese, G. C. (2016). Influence of plant genotype on the cultivable fungi associated to tomato rhizosphere and roots in different soils. Fungal Biol. 120, 862–872. doi: 10.1016/j.funbio.2016.03.008
[5]      Wintermans,  P.  C.,  Bakker,  P.  A.,  and  Pieterse,  C.  M.  (2016).  Natural  genetic  variation  in Arabidopsis  for  responsiveness  to  plant  growth-promoting  rhizobacteria.  Plant  Mol.  Biol.  90, 623–634. doi: 10.1007/s11103-016-0442-2
[6]      Riaz,  U.,  Murtaza,  G.,  Anum,  W.,  Samreen,  T., Sarfraz,  M.,  Nazir,  Z.M.,  2020. Plant  Growth- Promoting Rhizobacteria (PGPR) as Biofertilizers and Biopesticides. Springer. doi: 10.1007/978- 3-030-48771-3_11
[7]      Kalayanasudaram,  T.G.,  Syed,  N., Subburamu, K.,  2021. Recent  Development  in  plant  growth promoting  rhizobacteria  (PGPR)  for  sustainable  agriculture.  Elsevier.  doi:  10.1016/B978-0-12- 821406-0.00017-5
[8]      Carsten, S.J., Mathis, H.H., 2014. Agricultural soil, pesticides and microbial diversity. Curr. Opin. Biotechnol. 27, 15-20
[9]      Pandey,  A.,  Tripathi,  A.,  Srivastava,  P.,  Choudhary,  K.K.,  Dikshit,  A.,  2019.  Plant  growth promoting microorganisms in sustainable agriculture. Elsevier. doi: 10.1016/B978-0-12-817004- 5.00001-4
[10]    Riaz,  U.,  Murtaza,  G.,  Anum,  W.,  Samreen,  T., Sarfraz,  M.,  Nazir,  Z.M.,  2020.  Plant  Growth- Promoting Rhizobacteria (PGPR) as Biofertilizers and Biopesticides. Springer. doi: 10.1007/978- 3-030-48771-3_11
[11]  Kesaulya,  H.,  Baharudin.,  Zakaria,  B.,  Syaiful,  A.S.,  2015.  Isolation  and  physiological characterization of PGPR from potato plant rhizosphere in medium land of Buru Island. Procedia Food Science. 3: 190-199. doi: 10.1016/j.profoo.2015.01.021
[12]  Grobelak,  A.,  Napora,  A.,  Kacprzak,  M.,  2015.  Using  plant  growth-promoting  rhizobacteria (PGPR) to improve plant growth. Ecological Engineering. 84: 22-28. Doi: 10.1016/j.ecoleng.2015.07.019
[13]  Mu’minah.,  Baharudin.,  Subair,  H.,  Faharudin.,  2015.  Isolation  and  Screening  Bacterial Exopolysaccarida  from  Potato  Rhizospere  in  Highland  and  The Potential  as  a Producer  Indole Acetic Acid (IAA). Procedia Food Science. 3: 74-81.
[14]   Pham, T., Bui, D. X., Trang, K.V.L., Le, T., Nguyen, L.M., Trinh, D., Phoung, D.T.N., Khoo, S.K.,  Chew,  W.K.,  Show,  L.P.,  2022. Isolation  of  indole-3-acetic  acid-producing Azospirillum brasilense from  Vietnamese  wet  rice:  Co-immobilization  of  isolate  and  microalgae  as  a sustainable biorefinery. Journal Of Biotechnology. 349: 12-20.
doi.org/10.1016/j.jbiotec.2022.03.007
[15]   Gutiérrez-Ma˜nero F, Ramos-Solano B, Probanza A, Mehouachi J, Tadeo F, TalonM. The plant- growth-promoting  rhizobacteria Bacillus  pumilus and  Bacilluslicheniformis  produce  high amounts of physiologically active gibberellins.Physiol Plantarum 2001;111:206–11
[16]   Sgroy V, Cassan F, Masciarelli O, Del Papa MF, Lagares A, Luna V. Isolation and characterization of endophytic plant growth-promoting (PGPB) or stress homeostasis-regulating (PSHB) bacteria associated to the halophyte Prosopisstrombulifera. Appl Microbiol Biotechnol 2009:85371–81.
[17]  Masciarelli, O., Llanes, A., Luna, V., 2013. A New PGPR Co-Inoculated With Bradyrhizobium japonicum Enhances Soybean Nodulation. Microbiological Research. 169: 609-615
[18]  Rajkumar, M., Bruno, L.B., Banu, J.R., 2017. Alleviation of environmental stress in plants: The role  of  beneficial  Pseudomonas  spp.  Crit.  Rev.  Environ.  Sci.  Technol.  47  (6),  372–407. https://doi.org/10.1080/10643389.2017.1318619 .
[19]    Arzanesh,  M.H.,  Alikhani,  H.A.,  Khavazi,  K.,  Rahimian,  H.A.,  Miransari,  M.,  2011.  Wheat (Triticum aestivum L.) Growth Enhancement by Azospirillum sp. Under Drought Stress. World J. Microbiol. Biotechnol. 27 (2), 197–205. https://doi.org/10.1007/s11274-010-0444-1 .
[20]    Ali,  S.Z.,  Sandhya,  V.,  Venkateswar  Rao,  L.,  2014.  Isolation  and  characterization  of  drought- tolerant  ACC  deaminase  and  exopolysaccharide-producing  fluorescent  Pseudomonas  sp.  Ann. Microbiol. 64 (2), 493–502. https://doi.org/10.1007/s13213-013-0680-3
[21]    Goswami,  D.,  Vaghela,  H.,  Parmar,  S.,  Dhandhukia,  P.,  Thakker,  N.  J.,  2013.  Plant  Growth Promoting  Potential  of  Pseudomonas  spp.  Strain  OG  Isolated  From  Marine  Water.  Plant Interaction. 8: 281-290. https://doi.org/10.1080/17429145.2013.768360
[22]   Jan AT, Azam M, Ali A, Haq Q. Novel Approaches of Beneficial Pseudomonas in Mitigation of Plant Diseases – an Appraisal. J Plant Interact 2011;6(4):195–205.
[23]   Hayat R, Ali S, Amara U, Khalid R, Ahmed I. Soil beneficial bacteria and their role inplant growth promotion: a review. Ann Microbiol 2010;60(4):579–98.