## DETEKSI FENOTIP Candida spp PADA PASIEN SUSPEK TUBERKULOSIS
Anita 1 , Nur  Qadri Rasyid 1 , Nurul Ni’ma Azis 1
1) Akademi Analis Kesehatan Muhammadiyah , Makassar. Alamat Korespondensi: nita_uh@yahoo.co.id

## Abstrak
Penyakit  paru  selain  disebabkan  oleh  Mycobacterium  tuberculosis  juga  ditemukan  adanya peranan  agen  yang  lain  yaitu  jamur  Candida  spp.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk    untuk mengidentifikasi  Candida  spp  secara  fenotip    yang  terbentuk  pada  medium  Sabaroud  Dekstrosa Agar dan mengukur kecepatan pertumbuhan dan keakuratan (sensitifitas dan spesifisitas) medium Sabaroud  Dekstrosa Agar.  Desain penelitian adalah  observational  studi dengan jumlah sampel 35  bilasan  bronkus  dari  penderita  suspek  tuberkulosis  sebanyak  33  orang.  Analisis  data  cross tabulasi  digunakan  untuk  mengukur  sensitifitas  dan  spesifitas    Sabaroud  Dekstrosa  Agar  untuk mendeteksi  Candida  spp.  Dari  hasil  penelitian  dtemukan  pertumbuhan    jamur  pada  dari  sputum BTA  negatif    pada  medium  Sabaroud  Dektrosa  Agar  (SDA)    37 0 C,  jumlah  sampel  yang  positif pertumbuhan Candida spp yaitu 17 (5.95 %), sedangkan yang negatip pertumbuhan Candida spp yaitu 15 (5.25 %) sampel, dan kontaminasi yaitu 3 (1.05%), dengan rata-rata waktu pertumbuhan berkisar  1-2  hari.  Dengan  demikian  dapat  disimpulkan  bahwa  media  Sabaroud  Dekstrosa  Agar sensitif  dan  spsesifik  dalam    mendeteksi  secara  fenotif  jamur  Candida  spp  pada  pasien  suspek tuberkulosis.
Kata Kunci: Bilasan bronkus,  Candida spp, Sabaroud Dektrosa Agar, Tuberkolosis.

## PENDAHULUAN
Penyakit infeksi masih tetap menjadi  masalah  utama  kesehatan  di
Indonesia,  salah  satunya  adalah  penyakit tuberkulosis  paru  yang  disebabkan  oleh Mycobacterium  tuberculosis (Sudoyo, 2007).  Laporan  WHO  yang  terbaru (2006),  masih  menempatkan  Indonesia sebagai  negara  dengan  pasien  TB terbanyak ke-3 di dunia setelah India dan Cina. Diperkirakan jumlah pasien tuberkulosis  di  Indonesia  sekitar  10% dari  total  jumlah  pasien  tuberkulosis  di dunia (Pedoman Nasional Penanggulangan Tuberkulosis, 2006). Sekitar  dua  dekade  terakhir  invasi penyakit  infeksi  jamur  terus  mengalami peningkatan  sebagai  akibat  penggunaan steroid  dan  antibiotik  spektrum  luas, terjadinya  infeksi  primer  dan  sekunder pada penderita tuberkolosis paru, terdapatnya  faktor  predisposisi  yaitu penyakit  kronik  yang  berat  termasuk penyakit  kegananasan  atau  penyakit kronik  lainnya  seperti  diabetes  melitus (Widyasari, et.al., 2012).
Gejala  umum  infeksi  jamur  paru sama  dengan  infeksi  tuberkulosis  atapun
dengan  mikroba  lainnya,  antara  lain batuk-batuk,  batuk  darah,  banyak  dahak, sesak,  demam,  nyeri  dada  dan  bisa  juga tanpa  gejala.  Oleh  karena  infeksi  jamur paru  sering  menyertai  penyakit  lain  dan tidak  ada  gejala  yang  khas  sehingga infeksi jamur paru sering tidak terdiagnosa, sehingga pengobatan terhadap  infeksi  jamur  paru  sering terlambat diberikan (Sukamto, 2004). Spesies Candida merupakan infeksi jamur tersering penyebab kandidiasis pada manusia, dapat terjadi di seluruh dunia dan menyerang segala usia, baik  laki-laki  maupun  wanita  (Maharani S., 2012).
Permasalahan  lain  yang  kemudian timbul ialah bahwa baik gambaran klinik maupun  radiologik  penderita  infeksi jamur  paru  tidak  khas  (Sudoyo,  2007). Beberapa identifikasi kultur konvensional dan  dilanjutkan  dengan  tes  biokimia membutuhkan waktu yang lama, (Mandigan  M.T.,  dkk,  2009).  Oleh karena  itu  diperlukan  metode  fenotip yang mudah, sederhana dan murah untuk mengidentifikasi antara Candida spp.

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan Alat yang digunakan adalah
autoklaf, Bio Safety Cabinat (ESCO class II  Type  A2) ,  lampu  Bunsen,  inkubator, kaca  objek,  kotak  kaca  objek,  lemari asam,  mikroskop,  neraca  analitik,  ose bulat,  pH  meter, platel  well ,  rak  tabung, sentrifugasi, stopwatch, tabung eppendorf,  tabung  falcon  50  mL,  vortex, pinset,  gunting,  waterbath,  freezer,  gelas kimia,  Erlenmeyer,  sendok  timbangan dan stirrer magnetic.
Bahan  yang  digunakan  adalah sampel  cairan  pleura,  bilasan  bronkus, kapas,  alcohol,  karbol  fuchsin,  metilen blue,  medium  Sabaroud  Dextrose  Agar, dan air steril.
Prosedur Kerja Pembuatan  Sabouraud  glukosa  agar hipertonik Bahan medium Sabouraud dimasukkan  ke  dalam  labu  kimia  steril kemudian  dicampur.  Medium  kemudian diautoclave  pada  suhu  121 0 C  selama  15 menit  .  Medium  yang  telah  jadi dituangkan  ke  dalam  botol  McCartney steril sebanyak 6-8 ml.
Kultur  Sabouraud  Glukosa  Agar Hipertonik Sampel diambil dengan menggunakan ose bulat kemudian diinokulasi  pada  medium  Sabouraud Glukosa  Agar  Hipertonik 7x24    jam pada  suhu  28  ºC.  Koloni  jamur  pada media Sabouraud Glukosa Agar Hipertonik berwarna putih, agak mengkilat  dan  halus.  Sel  khamir  yang diamati berbentuk bulat atau oval. Smear dengan pengecatan  Gram Biakan Candida sp diambil menggunakan  ose  bulat  diteteskan  pada permukaan  gelas  benda  dan  dibuat preparat  dengan  ukutan  2  x  3  cm, kemudian  difiksasi  pada  hotplate  selama
2  menit.  Selanjutnya  dituangkan  cristal violet dibiarkan 2 menit , cuci dengan air mengalir, lalu dituangkan lugol dibiarkan  38  detik,  cuci  dengan  air mengalir.  Lalu  tuangkan  alkohol  96% dibiarkan  10  detik  ,  cuci  dengan  air
mengalir.  Kemudian  tuangkan  Fuchsin alkalis dibiarkan 40 detik, cuci dengan air mengalir.

## Analisis Data
Data  penelitian  disajkan  dalam bentuk dekskriptif dan untuk pengelolaan datanya  digunakan  SPSS  19  dengan analisis data cross tabulasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium  Tuberkulosis,  Hasanuddin University  Medical  Research  Centre Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin  Makassar. Total  sampel dalam  penelitian  ini  yaitu  35  bilasan bronkus dari penderita suspek Tuberkulosis  sebanyak  33  orang  di Infection  Centre  Rumah  Sakit.  Wahidin Sudirohusodo.
Sebelum  melakukan  proses  kultur dengan medium Sabaroud Dektrosa Agar
37 0 C terlebih dahulu dilakukan pemeriksaan langsung secara mikroskopik  terhadap  sampel  bilasan bronkus  menggunakan  metode  smear dengan  pewarnaan  Ziehl-Neelsen.  Pada hasil  penelitian    menunjukkan  hasil pemeriksaan  BTA  dari  35  bilasan bronkus adalah negatif.
Tabel  1.  Perbandingan  tingkat  isolasi
Candida  spp  dari  sampel bilasan bronkus Media Hasil Kultur Positif Negati f Konta minasi N SDA 37 0 C 17 (5.95%) 15 (5.25%) 3 (1.05%) 35 Untuk sampel bilasan bronkus pada medium  Sabaroud  Dektrosa  Agar  (SDA) 37 0 C,  jumlah  sampel  yang  positif pertumbuhan Candida spp yaitu 17 (5.95 %), sedangkan yang negatip
pertumbuhan Candida spp yaitu 15 (5.25
%)  sampel,  dan  kontaminasi  yaitu  3
(1.05%).
Tabel 2.   Rata-rata ertumbuhan Candida  spp  dari  sampel bilasan bronkus
Untuk  rata-rata  hari  pertumbuhan koloni untuk Candida spp pada  medium Sabaroud  Dektrosa  Agar  (SDA)    37 0 C yaitu 1 hari yang berkisar antara 1-2 hari.
Hasil  dari  kultur  tersebut  yang positip  selanjutnya  dikonfirmasi  dengan pemeriksaan mikroskopik dengan menggunakan  pewarnaan  gram  yang bertujuan  untuk  menegaskan  kembali apakah  koloni  yang  tumbuh  tersebut benar adalah Candida spp.

## Gambar  1. Hasil mikroskopik Candida
spp dengan perbesaran 100x Sampel pada penelitian ini yaitu  35 bilasan  bronkus  dari  penderita  suspek Tuberkulosis sebanyak 33 orang. Selanjutnya dilakukan pemerikaaan mikroskopik  yang  memiliki  peranan penting  dalam  diagnosis  awal  infeksi Mycobacterium karena metode
pemeriksaan  smear  dapat  menunjukkan hasil  pemerikaaan  yang  cepat.  Selain  itu pemeriksaan  secara  mikroskopik  dengan basil  tahan  asam  (BTA)  merupakan pemeriksaan  yang  sederhana,  murah  dan cukup sensitif untuk mendukung
diagnosis  penyakit  tuberkulosis  serta untuk menilai kemajuan pengobatan.
Setelah dilakukan pemeriksaan mikrokospik selanjutnya
sampel
diinokulasikan pada medium pertumbuhan  yaitu  SDA  37 0 C  bertujuan untuk untuk mengetahui tingkat kemampuan  baik  sensitifitas  maupun sensifitas  medium  SDA  37 0 C  dalam mengisolasi  jamur Candida  spp .  Koloni Candida  spp yang  tumbuh  pada  medium SDA 37 0 C  akan tampak berwarna putih, halus,  licin,  ukuran  koloni  dari  kecil sampai  ukuran  besar,  jika  koloni  sudah berumur tua akan berwarna kecoklatan.
Dari  data  penelitian  diperoleh bahwa  medium  SDA  37 0 C  memilki tingkat pertumbuhan koloni yaitu  jumlah sampel yang positif pertumbuhan
Candida  spp yaitu  17  (5.95  %), sedangkan  yang  negatip  pertumbuhan Candida  spp yaitu  15  (5.25  %)  sampel, dan  kontaminasi  yaitu  3  (1.05%).  Kultur menjadi sangat penting untuk menghindari  kesalahan  dalam  rutin identifikasi  .  Dari  hasil  penelitian diperoleh pula rata-rata hari pertumbuhan Candida  spp antara  mediumSDA  37 0 C yaitu 1 hari pasca inokulasi (Tabel 1).
Untuk rata-rata pertumbuhan jamur Candida  spp pada  medium  Sabaroud Dekstrosa Agar  yaitu 1 hari (Tabel 2.) Setelah  didapatkan  hasil  kultur yang  positif  dari  medium  SDA  37 0 C selanjutnya  dilakukan  uji  konfirmasi dengan pemeriksaan mikroskopik kembali  menggunakan  pewarnaan  gram. Uji  konfirmasi  ini  dilakukan  bertujuan untuk menegaskan kembali apakah koloni  yang  tumbuh  pada media  tersebut benar adalah Candida spp (Gambar 1).
Hasil pengamatan mikrokopik tersebut menunjukkan
keberadaan
Candida  spp pada  media,  dimana  koloni tersebut  nampak  adanya  budding  spora pada ujung blastopora. Selain itu nampak pula  adanya  hifa  dimana  spora  jmaur melekat  pada  hifa  tersebut  (Gambar  1). Pemeriksaan  mikroskopik  yang  memiliki peranan  penting  dalam  diagnosis  awal infeksi Mycobacterium karena  metode pemeriksaan  smear  dapat  menunjukkan hasil  pemeriksaan  yang  cepat.  Selain  itu pemeriksaan  secara  mikroskopik  dengan basil  tahan  asam  (BTA)  merupakan pemeriksaan  yang  sederhana,  murah  dan cukup sensitif untuk mendukung
Media Waktu Pertumbuhan (Hari) Rata-Rata Waktu Pertumbuhan (Hari) SDA 37 0 C 1-2 1
diagnosis  penyakit  tuberkulosis  serta untuk menilai kemajuan pengobatan.
KESIMPULAN Dari penelitian ini dapat disimpulkan  bahwa  untuk  mendeteksi
Candida  spp dari bilasan  bronkus  pasien suspek  tuberkulosis  dapat  menggunakan Sabaroud  Glukosa  Agar  yang  merupakan medium  yang  murah,    sederhana  dan dapat  digunakan  untuk  rutin  identifikasi Candida spp.

## SARAN
Oleh  karena  itu kami  menyarankan untuk  dapat  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  tentang  identifikasi Candida  spp dari berbagi sumber spesimen.

## DAFTAR PUSTAKA
Ayman,  A.,  Ihab,  M.  Salem.  2012. Evaluation  of  Rapid  Molecular Identification of Clinically Important  Candida  Spp  Isolated From Immunocompromised Patients  Using  RF-PCR .  Journal of American Sciense, 8 : 2. Chowdhry,  et.al.  2010. Application  of hypertonic Sabaroud glucose agar for  differentiation  of  Candida dubliniensis from Candida albicans . Diagnostic Microbiology
and  Infectious  Disease,  69:440-
442. Ells  R.,  2009. Candida  albicans or Candida  dubliniensis .  Mycoses Diagnosis, Therapy and Prophylaxis  of  Fungal  Diseases 54: 1-16. Liguori G., dkk. 2010. Candida albicans identification:  comparison  among nine  phenotypic  systems  and  a multiplex  PCR .  J  PREV  MED HYG, 51:121-124. Ligouri  G  dkk.  2010. Comparison
between multiplex PCR and phenotypic  systems  for  Candida spp identification . Medical Journal Indonesiaa, 33:63-67.
Maharani, S. 2012. Pengaruh Pemberain Larutan  Ektrak  Siwak  (Salvadora persica) Pada Berbagai Konsentrasi Terhadap Pertumbuhan    Candida  albicans. Semarang.
Moran  P,  dkk.  2011. Candida  albicans versus Candida  dubliniensis : Why Is  C.  albicans  More  Pathogenic . International Journal of Microbiology.7 pages. Sandra  A.,  dkk.  2010. Identification    of
Candida  spp  by  Phenotypic  Test and  PCR. Brazilian  Journal  of Microbiology .41: 286-294. Sukamto.  2004. Pemeriksaan  Jamur
Bilasan  Bronkus  Pada  Penderita Bekas  Tuberkulosa  Paru .  Medan: USU digital library. Tarini  dkk.  2010. Development  of multiplex-PCR  assay  for  rapid detection of Candida spp. Medical Journal  Indonesia . 19: 83-7. Widyasari,  K.,  dkk.  2012. Invitro susceptibility  of  Candida  spp isolate from pulmonary tuberculosis  suspected  patients  to antifungal agent in Jakarta.
Journal  of  Medicine  and  Medical
Sciences. Vol 3(3),pp 138-140.