## ISOLASI DAN PENAPISAN KAPANG LAUT ENDOFIT PENGHASIL SELULASE

## ISOLATION AND SCREENING OF ENDOPHYTIC MARINE FUNGI FOR CELLULASE PRODUCTION
Aulia Andhikawati 1 , Yulia Oktavia 1 , Bustami Ibrahim 1 , dan Kustiariyah Tarman 1,2*
1 Departemen Teknologi Hasil Perairan, FPIK-IPB, Bogor
2 Divisi Bioteknologi Kelautan, Pusat Kajian Sumberdaya Pesisir dan Lautan, LPPM, IPB, Bogor; *E-mail: kustya@gmail.com

## ABSTRACT
Cellulolytic  fungi  are  potentially  useful  in  biotechnology.  Decomposition  of  substrates containing cellulose can be applied in bioethanol and enzymes production. Fungi are one group of  microorganisms  that  can  decompose  cellulase  materials.    This  study  aimed  to  obtain potential cellulolytic fungi isolated from marine habitat. Screening of the fungi was performed using CBM media with different salinity. Six isolates were tested quantitatively for cellulolytic activity using congo red staining. Cellulolytic index of algicolous and manglicolous fungi were lower than those of EN isolate, Veronea sp. KT19, and sponge associate (SMH). Fungi cultured in freshwater and seawater media possessed higher cellulolytic index in compared to those of cultures in 3% NaCl medium. However, freshwater and seawater  media showed no significant effect.  Cellulolytic  index  of  EN  isolate,  Veronaea  sp.  KT19,  and  SMH  after  six  days  of incubation  were  1.357;  1.267,  and  1.278,  respectively.  All  six  isolates  potentially  produced cellulase in all medium tested.
Keywords: Cellulolytic, cellulose, endophytes, enzyme.

## ABSTRAK
Kapang  yang  memiliki  aktivitas  selulolitik  sangat  berpotensi  dalam  aplikasi  di  bidang bioteknologi.  Dekomposisi  bahan  yang  mengandung  selulosa  dapat  diaplikasikan  untuk produksi  bioetanol  dan  enzim.  Salah  satu  mikroorganisme  yang  mampu  memecah  komponen selulosa adalah kapang. Penelitian ini bertujuan mendapatkan kapang selulolitik potensial yang diisolasi dari habitat laut. Penapisan kapang dilakukan pada media CBM dengan salinitas yang berbeda  yaitu  air  laut,  air  tawar  dan  NaCl  3%.  Enam  isolat  kapang  diuji  selulolitik  secara kualitatif dengan pewarnaan congo red. Indeks selulolitik kapang yang diisolasi dari rumput laut dan daun mangrove lebih kecil dibandingkan dengan isolat kapang EN, Veronea sp. KT19, dan SMH.  Penggunaan  media  air  tawar  dan  air  laut  menunjukkan  nilai  rata-rata  indeks  selulolitik lebih tinggi dibandingkan pada media NaCl 3% tetapi penggunaan media air tawar dan air laut tidak  berbeda  nyata.  Indeks  selulolitik  isolat  kapang  EN  selama  6  hari  pada  media  air  tawar yaitu  1,357,  kapang Veronea  sp. KT19  sebesar  1,267,  dan  isolat  kapang  SMH  sebesar  1,278. Keenam isolat memiliki potensi sebagai kapang penghasil selulase pada semua jenis media.
Kata kunci : endofit, enzim, selulolitik, selulosa .

## I. PENDAHULUAN
Selulase  adalah  enzim  yang  dapat mengkatalis  terjadinya  reaksi  hidrolisis pada  polimer  organik,  seperti  selulosa menjadi  komponen  gula  sederhana  yang
mencakup  glukosa.  Pada  enzim  selulase kompleks terdapat tiga enzim utama yaitu endoglukanase, eksoglukanase dan selobiose (β-glukosidase) (Winarno, 2010). Endoglukanase menghidrolisis ikatan  β-1,4-glikosidik  secara  acak  pada
daerah  amorf  selulosa  menjadi  glukosa, selobiosa  dan  selodektrin.  Eksoglukanase menghidrolisis selodektrin dengan memutus  unit  selobiosa  dari  ujung  rantai polimer,  sedangkan  selobiose  menghidro- lisis  selobiosa  dan  selo-oligosakarida menjadi glukosa (Syamsudin et al ., 2008). Selulase  memiliki  potensi  yang sangat  besar  pada  aplikasi  di  bidang industri.  Selulase  sering  digunakan  pada industri  tekstil,  detergen,  makanan,  kertas dan industri pakan hewan untuk meningkatkan  daya  cerna  pakan.  Pada masalah  keterbatasan  jumlah  bahan  bakar fosil,  emisi  gas  rumah  kaca  dan  polusi udara  yang  ditimbulkan  dari  bahan  bakar fosil,  maka  perlu  dikembangkan  industri bioetanol  dari  komponen  lignoselulolitik yang  menggunakan  enzim  selulase  dan hemiselulase  dalam  proses  hidrolisis bahan  yang  mengandung  lignoselulosa. Pada  produksi  bioetanol,  biaya  pada enzim  komersial  yang  digunakan  untuk proses  hidrolisis  bahan  baku  perlu dikurangi  dan  perlu  ditingkatkan  efisiensi dalam  proses  produksi  secara  ekonomi (Sukumaran et al ., 2005).
Enzim  selulase  dapat  dihasilkan oleh  makroorganisme  dan  mikroorga- nisme.  Salah  satu  mikroorganisme  yang dapat memproduksi enzim selulase adalah kapang.  Enzim  selulase  yang  dihasilkan oleh  kapang  genus Trichoderma sebagian besar  adalah  enzim  selobiohidrolase, sedangkan  enzim  selulase  yang  berasal dari  genus Aspergillus yaitu  enzim  β- glukosidase. Fikrinda et al . (2000) menya- takan  bahwa  mikroorganisme  selulotik mampu  menghasilkan  selulase  kompleks, yaitu  suatu  campuran  beberapa  jenis selulase  yang  berbeda.  Selulase  kompleks mampu  menghidrolisis  Kristal  selulosa menjadi gula terlarut yang efisien.
Kapang endofit merupakan kapang yang  hidup  di  bagian  dalam  tumbuhan, seperti  daun,  ranting,  cabang  kecil  atau akar (Gandjar et al ., 2006). Selain itu, jika dibandingkan  dengan  jamur  patogen  pada
tumbuhan  dan  isolat  kapang  dari  tanah, relatif  sedikit  metabolit  sekunder  yang telah  diisolasi  dari  kapang  endofit  (Tan and  Zou,  2001).  Sekitar  6500  kapang endofit  diisolasi  dari  tanaman  herbal  dan pohon  serta  alga  untuk  mengetahui aktivitas  biologis  dan  profil  kimianya. Proporsi  kapang  endofit  dari  yang diisolasi  dari  tanaman,  alga  dan  tanah untuk  menghasilkan  aktivitas  biologis masing-masing  sebesar  80%,  83%  dan 64%        (Schulz et al ., 2002).
Kapang  endofit  dapat  mengha- silkan enzim-enzim penting, seperti enzim pendegradasi oligosakarida (selulase), xylanase, mannanase dan inulinase.
Kapang  laut  endofit  dapat  menghasilkan hormon yang dapat memacu pertumbuhan inangnya,  zat  antibiotik  dan  metabolit sekunder lainnya yang bermanfaat (Ranghukumar,  2008).  Sebagian  besar fungi  endofit  menghasilkan  metabolit sekunder  jika  dikultur  dan  difermentasi, tetapi  temperatur,  komposisi  media  dan intensitas  cahaya  sangat  menentukan jumlah  dan  komponen  yang  dihasilkan oleh  fungi  endofit  (Cai et  al .,  2012). Kapang yang dapat menguraikan senyawa selulosa,  umumnya  berasal  dari  kapang terestrial  dimana  salinitas  media  yang digunakan yaitu salinitas air tawar, seperti Mucor sp, Aspergillus sp, Penicillium sp (Subowo,  2010)  dan Thricoderma sp (Delabona et al ., 2012), sedangkan kapang yang  berasal  dari  material  laut  belum banyak dieksplor. Optimasi media pertumbuhan  kapang  dengan  salinitas berbeda  perlu  dilakukan  untuk  menen- tukan  media  pertumbuhan  terbaik  bagi kapang  dalam  menghasilkan  selulase. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan kapang  selulolitik potensial  yang diisolasi dari habitat laut.

## II. METODE PENELITIAN
Bahan  yang  digunakan  untuk isolasi  dan  penapisan  kapang  adalah
kapang  koleksi  dari  Kustiariyah  Tarman (Isolat  EN, Veronaea  sp .  KT19,  dan SMH),  Isolat  dari  rumput  laut,  daun mangrove,  agar,  KH 2 PO 4 ,  MgSO 4 .7H 2 O, yeast extract , CaCl 2 .2H 2 O, Potato Dextrose  Agar (PDA), Potato  Dextrose Broth (PDB), Carboxyl  Methyl  Cellulose (CMC), congo  red ,  NaCl,  dan  air  laut. Alat  yang  diguna-kan  yaitu  mikroskop (Cole Parmer).

## 2.1.  Isolasi Kapang Endofit
Isolasi  kapang  endofit  mengacu pada  penelitian  yang  dilakuan  Tarman, 2011  dengan  cara  sterilisasi  permukaan. Sampel  dipotong  sebesar  ±  1  cm  dan ditanam  di  dalam  media  PDA  air  tawar, air  laut  dan  NaCl  3%  yang  telah ditambahkan  kloramfenikol  1  mg/l  dan diinkubasi pada suhu ruang selama 3 hari.

## 2.2. Penapisan Kapang Selulolitik
Penapisan kapang selulolitik dengan  metode  zona  bening  (Purwadaria et  al ,  2003)  dilakukan  dengan  menggu- nakan  pewarnaan  merah  kongo  0,1%. Isolat  kapang  ditumbuhkan  pada  media Cellulolysis  Basal  Medium (CBM)  yang berbeda (air tawar, air laut dan NaCl 3%) dengan  sumber  karbonnya  yaitu  CMC. Kapang  diinkubasi  selama  6  hari  pada suhu  ruang.  Zona  bening  akan  terbentuk setelah melakukan penambahan NaCl 1 M dan  didiamkan  selama  15  menit.  Adanya aktivitas  selulase  dilihat  dari  indeks selulolitik yang terbentuk. Indeks seluloli- tik  merupakan  nisbah  antara  diameter zona bening dengan diameter koloni.

## 2.3.  Pengukuran Pertumbuhan Kapang
Pengukuran  pertumbuhan  kapang dilakukan  berdasarkan  metode  Subowo (2010). Isolat kapang endofit yang terpilih berdasarkan uji zona bening ditumbuhkan pada  media  cair  PDB.  Kultur  kemudian
diinkubasi  pada  suhu  ruang  selama  27 hari.  Pengukuran  bobot  biomassa  kapang dilakukan  setiap  3  hari.  Miselia  kapang yang  tumbuh  di  dalam  media  PDB kemudian  disaring  dengan  menggunakan kertas  saring  Whatman  No.  1  dan dikeringkan  dalam  oven  selama  24  jam pada  suhu  80 o C.  Bobot  kering  miselia ditentukan  dengan  menghitung  selisih bobot  antara kertas kering kosong dengan kertas saring yang berisi miselia.

## 2.4. Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dilakukan  uji normalitas  kemudian  dianalisis  dengan sidik  ragam  atau Univariate Analysis  of Varians (ANOVA). Apabila F hitung menunjukkan  perbedaan  nyata  pada  taraf uji  95%  dan  perbedaan  sangat  nyata  pada taraf uji 99% maka dilanjutkan dengan uji Duncan  untuk  mengetahui  perbedaan antar  perlakuan.  Penelitian  ini  mengguna- kan  percobaan  faktorial  yang  melibatkan dua  faktor  yaitu  faktor  pertama  (isolat kapang)  yang  terdiri  dari  7  taraf  faktor yaitu  isolat  EN,  KT19,  SMH,  RL6,  RL9, D1, D3 dan faktor kedua (salinitas media) yang  terdiri  dari  3  taraf  faktor  yaitu  air tawar,  air  laut  dan  NaCl  3%  serta rancangan  model  percobaan  sebagai berikut:
Keterangan : Y ijk = pengamatan pada ulangan ke-k yang mendapat  perlakuan  faktor  pertama  taraf ke-i  dan faktor kedua taraf ke-j; µ= rataan umum;  α i =pengaruh  faktor  pertama  taraf ke-i;  β i =pengaruh  faktor  kedua  taraf  ke-j; (αβ) ij =pengaruh  interaksi  faktor    pertama taraf  ke-i  dan  faktor  kedua  taraf  ke-j;  dan ε ijk =komponen galat.

## III.  HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1.  Isolasi Kapang Endofit
Kapang  endofit  yang  digunakan pada  penelitian  ini  diisolasi  dari  rumput laut  dan  daun  mangrove.  Kapang  laut umumnya  diisolasi  dari  tumbuhan  yang hidup  di  dalam  laut  dan  sekitarnya,  dari alga, hewan laut dan juga dari buih air laut (Gandjar et  al .,  2006).  Hasil  isolasi kapang endofit pada rumput laut dan daun mangrove  diperoleh  masing-masing  dua isolat kapang. Keempat jenis isolat kapang yang  telah  diisolasi  dapat  tumbuh  pada berbagai  media  yaitu media NaCl  3%,  air laut dan air tawar. Media  yang digunakan untuk  isolasi  kapang  ini  ditambahkan klorampenikol  sebanyak  1  ppm.  Hal  ini dilakukan agar dapat mencegah pertumbuhan bakteri pada media. Kumala dan  Siswanto  (2007)  menyatakan  bahwa kapang  endofit  dapat  tumbuh  pada  media PDA  yang  telah  ditambahkan  dengan klorampenikol  (0,005%  w/v)  sebagai bahan  antibakteri  untuk  pertumbuhan kapang. Keempat isolat kapang yang telah diisolasi (D1, D3, RL6 dan RL9) dan tiga isolat  kapang  koleksi  Kustiariyah  Tarman (EN,  KT19  dan  SMH)  diremajakan  pada media  PDA  cawan  dan  dilihat  secara mikroskopik  pada  bagian  miselia  kapang (Tabel 1).
Kapang  endofit  laut  ini  dapat tumbuh  pada  kondisi  di  media  NaCl  3%, air  tawar  dan  air  laut.  Hal  ini  diduga kapang  tersebut  merupakan  fungi  laut yang fakultatif, dimana fungi dari lingkungan  air  tawar  atau  terrestrial mampu  tumbuh  dan  bersporulasi  di lingkungan  laut  (Gandjar et  al .,  2006).
Isolat  kapang  dari  daun  mangrove  dapat tumbuh  pada  ketiga  salinitas  media  yang berbeda  karena  mangrove  dapat  tumbuh pada  lingkungan  dengan  salinitas  antara air  laut  dan  air  tawar,  air  laut  umumnya mengandung 35 gram/liter garam (Hogarth, 2007). Salinitas laut di
Indonesia berkisar antara 30-31 ‰. Semua
kapang  yang  telah  diisolasi  tersebut diduga  merupakan  kapang  endofit  laut karena semua isolat kapang dapat tumbuh pada  kondisi  lingkungan  laut.    Penelitian Ranghukumar et  al .  (1994)  kapang  yang diisolasi  dari  lingkungan  laut  dapat tumbuh  pada  media  yang  ditambahkan garam laut sebanyak 1,5% - 3%.

## 3.2.  Penapisan Kapang Selulolitik
Tiga  jenis  isolat  kapang  koleksi Kustiariyah Tarman dan empat jenis isolat kapang  yang  telah  diisolasi  kemudian ditapis  berdasarkan  indeks  selulolitiknya dengan salinitas media yang berbeda-beda yaitu  dengan  penambahan  NaCl  3%,  air laut  dan  air  tawar.  Pada  media  dengan penambahan air laut dan air tawar, semua isolat  kapang  dapat  menghasilkan    zona bening  dengan  rata-rata  indeks  selulolitik yang berbeda selama 6 hari inkubasi pada suhu ruang, sedangkan pada media dengan penambahan  NaCl  3%  hanya  isolat  D1 yang  tidak  menghasilkan  zona  bening (Gambar 1). Hal ini diduga karena kondisi media  dengan  NaCl  3%  merupakan kondisi  yang  sesuai  dengan  isolat  kapang D3, sehingga isolat kapang tidak memproduksi enzim selulase yang menyebabkan tidak terdeteksinya aktivitas selulase  berdasarkan  uji  zona  bening. Mangrove  dapat  tumbuh  pada  lingkungan dengan konsentrasi garam laut sebesar 3,5 %.  Toleransi  terhadap  salinitas  bukan hanya  sekedar  kemampuannya  tumbuh pada  salinitas  yang  berada  sesuai  dengan lingkungannya  tetapi  mengenai  respon suatu spesies terhadap perubahan salinitas (Hogarth, 2007).
Gambar  1  menunjukkan  bahwa nilai  indeks  selulolitik  terbesar  terdapat pada  isolat  EN  yang  tumbuh  pada  media yang menggunakan air tawar yaitu dengan nilai  indeks  selulolitik  mencapai  1,357. Hasil  analisis  statistik  dengan  pola faktorial  RAL  menunjukkan  bahwa  rata- rata  indeks  selulolitik  terbesar  terdapat pada media  dengan  air laut  dan air tawar.
Tabel 1. Data kapang endofit yang digunakan.
Sumber Kode isolat Foto kapang Bentuk miselium Rumput Laut RL6 Septa membagi hifa menjadi kompartemen. Ujung hifa monositik. RL9 Septa membagi hifa menjadi kompartemen. Ujung hifa monositik. Konidia berbentuk seperti bulan sabit dan memiliki satu septum Daun mangrove D1 Septa membagi hifa menjadi kompartemen. Ujung hifa monositik. D3 Septa membagi hifa menjadi kompartemen. Setiap kompartemen ada satu inti. Ujung hifa monositik. Lamun EN Septa membagi hifa menjadi kompartemen. Setiap kompartemen ada satu inti. Ujung hifa monositik. Pasir laut KT19 Hifa terbagi oleh septa menjadi kompartemen yang terdiri dari satu inti tiap bagiannya. Spons SMH Hifa terbagi oleh septa menjadi kompartemen yang terdiri dari satu inti tiap bagiannya. Konidia berbentuk elips tanpa septum. Penggunaan  air  laut  dan  air  tawar  pada media  menghasilkan  nilai  nisbah  zona bening yang tidak berbeda nyata. Terdapatnya  nisbah  zona  bening  terbesar pada  isolat  kapang  EN  maka  isolat  ini memiliki potensi yang lebih efisien dalam menghasilkan  enzim  selulase.  Semakin besar  indeks  selulolitik  yang  dihasilkan maka semakin besar enzim yang dihasilkan oleh koloni kapang tersebut.
Kapang  EN  memiliki  nilai  indeks selulolitik  sebesar  1,357,  nilai  ini  tidak jauh berbeda dengan nilai indeks selulolitik  pada  kapang-kapang  selulolitik dari jenis Aspergillus tereus sebesar 1-10, Penicillium sp.  sebesar  0-6, Trichoderma harzianum sebesar  1,  dan Rhizopus sp. sebesar  0-4  (Jahangeer et  al .,  2005), Aspergillus flavus sebesar 1,4 (Purwadaria et  al .,  2003).  Hal  ini  diduga  adanya
Gambar 1.  Penapisan Kapang Selulolitik dengan Salinitas Media yang berbeda (  NaCl 3%;  Air laut;  Air tawar).
sekresi  enzim  selulase  pada  kapang selulolitik  dan  terjadi  degradasi  media yang  mengandung  selulosa  sehingga mampu  membentuk  nisbah  zona  bening. Menurut  Teater  and  Wood  (1992), penapisan  secara  cepat  pada  mikroba selulolitik dapat dilakukan dengan pengukuran  daerah  bening,  walaupun demikian penentuan tersebut hanya merupakan deteksi semi kuantitatif. Penapisan  kuantitatif  merupakan  suatu konfirmasi dan hasilnya belum tentu sama dengan penapisan daerah bening.
Kapang merupakan salah satu agen yang  mampu  mendekomposisi  sebagian besar material-material organik dan sebagian  kecil  substrat  yang  mengandung selulosa. Setiap kapang selulolitik
menghasilkan  kompleks  enzim  selulase yang  berbeda-beda,  tergantung  dari  gen yang  dimiliki  dan  sumber  karbon  yang digunakan  untuk  didegradasi  (Meryandini et  al .  2009).  Banyak  enzim  intraseluler dan  ekstraseluler  yang  terdapat  pada lamun  yang  tidak  toleransi  pada  garam dan secara signifikan tumbuh pada kondisi dengan  konsentrasi  NaCl  yang  rendah (Hogarth  2007).  Dalam  penelitian  ini,
semua  isolat  ditumbuhkan  pada  media basal selulolitik yang mengandung Carboxy  Methyl  Cellulose (CMC)  1%
(b/v)  sebagai  komponen  indusernya. Apabila  nutrisi  pada  medium  tumbuhnya habis maka mikroorganisme akan memanfaatkan  sumber  karbon  selulosa dengan mensintesis enzim selulase. Kemampuan  membentuk  zona  bening pada substrat amorf seperti CMC menunjukkan  adanya  enzim  endo-β-1.4 glukanase (CMCase) yang dapat memutuskan  ikatan  β-1.4  glikosida  pada serat  selulosa  tersebut  secara  acak  dan banyaknya  daerah  amorf  pada  substrat tersebut menyebabkan CMC dapat dihidrolisis  dengan  lebih  efisien  (Goto et al ., 1992).

## 3.3.  Pertumbuhan Kapang EN
Isolat  kapang  EN  (Gambar  2)  dari hasil  tahap  sebelumnya  memiliki  potensi sebagai  kapang  selulolitik  dengan  media air  tawar,  maka  isolat  kapang  EN ditumbuhkan  pada  media  PDA  air  tawar selama 6 hari dan di pre-culture ke media cair selama 7 hari. Pertumbuhan isolat EN dilakukan  pada  media  cair  yaitu Potato
Dextrose  Broth (PDB)    yang  diinkubasi selama  27  hari  pada  suhu  ruang  dengan kondisi  statis.  Setelah  diinkubasi  selama 27  hari  dihasilkan  miselium  berwarna putih  pada  seluruh  permukaan  media seperti  yang  terlihat  pada  Gambar  3. Pertumbuhan  isolate  EN  dihitung  berda- sarkan  berat  kering  miselium  kapang. Tingkat  pertumbuhan  isolat  kapang  EN yang diisolasi dari lamun laut berada pada kisaran 0,078–0,8 gram.
Gambar  2.  Isolat  EN  (atas)  pada  media
PDA dan konidia yang
tumbuh pada miselia (bawah).
Tingkat pertumbuhan tertinggi pada  isolat  kapang  EN  dicapai  pada  hari ke  21  dengan  berat  miselia  mencapai 0.855  gram.  Pada  Gambar  4  diketahui bahwa  kurva  pertumbuhan  isolat  kapang EN  memiliki  fase  adaptasi  hingga  hari  ke 3  dan  pada  hari  ke  12  memasuki  fase eksponensial.  Fase  stasioner  didapat  pada hari  ke  12  hingga  hari  ke  27.  Hal  ini diduga karena pada hari ke 3 hingga ke 12 kapang  memanfaatkan  semua  nutrien
media untuk pertumbuhan sehingga kapang  mengalami  pertumbuhan  miselia yang  cepat.  Media  PDB  mengandung sumber  karbon  yang  berasal  dari  kentang dan dextrose .  Sumber  karbon  merupakan komponen  terpenting  dalam  medium pertumbuhan,  karena  sel-sel  mikroba sebagian  besar  terdiri  dari  unsur-unsur karbon  dan  nitrogen  (Kusumaningtyas et al ., 2010).
Gambar 3. Pertumbuhan isolat kapang EN pada media PDB.
Gambar 4. Kurva pertumbuhan isolat Kapang EN.

## IV.  KESIMPULAN
Semua isolat kapang yang diperoleh  dari  rumput  laut  dan  daun mangrove  serta  isolat  kapang  koleksi Kustiariyah  Tarman  menghasilkan  nisbah
zona  bening  sehingga  berpotensi  sebagai kapang  selulolitik  pada  salinitas  media yang berbeda.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada  Direktorat  Jenderal  Pendidikan Tinggi,  Kementerian  Pendidikan  dan Kebudayaan Republik Indonesia atas dana penelitian  yang  berjudul  Pengembangan Teknologi  Produksi  Bioetanol  melalui
Pemanfaatan  Limbah  Industri  Rumput Laut  dengan  Kapang  Endofit  Indigenous Laut Indonesia, melalui program Penelitian  Unggulan  Perguruan  Tinggi kepada  Dr.  Kustiariyah  Tarman,  S.Pi., M.Si.

## DAFTAR PUSTAKA
Cai, M., X. Zhou, J. Lu, W. Fan, J. Zhou, C.  Niu,  L.  Kang,  X.  Sun,  and  Y. Zhang. 2012. An integrated control strategy for the fermentation of the marine-derived  fungus Aspergillus glaucus for the production of anti- cancer  polyketides  (short  commu- nication). J.  Marine  Biotechno- logy .  DOI  10.1007/s10126-012- 9435-6.
Delabona,  P.S.,  C.S.  Farinas,  M.R.  da Silva,  S.F.  Azzon,  and  J.G.  da Cruz Pradella. 2012. Use of a new
Trichoderma harzianum strain isolated  from  the  amazon  rainfo- rest  with  pretreated  sugar  cane bagasse for on-site cellulase production. J.  of  Bioresource Technology, 107:517–521.
Fikrinda, I. Anas, T. Purwadaria, dan D.A. Santosa.  2000.  Isolasi  dan  seleksi bakteri  penghasil  selulase  ekstre- mofil  dari  ekosistem  air  hitam. J. Mikrobiologi  Indonesia, 2(5):48- 53.
Gandjar,  I.,  W.  Sjamsuridzal,  dan  A.
Oetari.  2006.  Mikologi  dasar  dan
terapan.  Yayasan  Obor  Indonesia. Jakarta. 178 hlm. Goto, M., K. Furukawa, and S. Hayashida. 1992.  An  avicel  affinity  site  in  an avicel-digesting  exocellulose  from a  Trichoderma  viride  mutant. Bioscience  Biotechology  Bioche-
mistry , 56:1523-1528.
Hogarth,  P.J.  2007.  The  biology  of mangroves and seagrasses. Oxford University  Press.    New  York. 284p.
Jahangeer,  D.,  N.  Khan,  S. Jahangeer,  M. Sohail, S. Shahzad, A. Ahmad, and S.A.  Khan.  2005.  Screening  and characterization  of  fungal  cellu- lases  isolated  from  the  native environmental  source. Pakistan  J.
of Botany, 37(3):739-748. Kumala,  S.  and  E.B.  Siswanto.  2007. Isolation and screening of endophytic microbes from Morinda citrifolia and their ability to  produce  anti-microbial  substan- ces. J.  Mikrobiologi  Indonesia, 3(1):145-148.
Kusumaningtyas,  E.,  M.  Natasia,  dan Darmono.  2010.  Potensi  metabolit kapang  endofit  rimpang  lengkuas merah dalam menghambat pertum- buhan Eschericia  coli dan Staphy- lococcus  aureus dengan  media fermentasi PDB dan PDY. Prosiding Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner . Hlm.:819-824.
Meryandini,  A,  W.  Widosari,  B.  Marana- tha,  T.C.  Sunarti,  N.  Rachmania, dan H. Satria. 2009. Isolasi bakteri selulotik  dan  karakterisasi  enzim- nya. J. Makara Sains, 13(1):33-38. Purwadaria,  T.,  P.A.  Marbun,  A.P. Sinurat,  dan  P.P.  Ketaren.  2003.
Perbandingan aktivitas enzim
selulase  dari  bakteri  dan  kapang hasil  isolasi  dari  rayap. J.  Ilmu Ternak  dan  Veteriner, 8(4):213-
219.
Ranghukumar,  C.  2008.  Marine  fungal biotechnology: an ecological perspective. Fungal Diversity,
31:19-35.
Schulz,  B.,  C.  Boyle,  S.  Draeger,  A.K. Römmert,  and  K.  Krohn.  2002. Endophytic fungi:        a source of novel  biologically  active  secon- dary  metabolites. J.  Mycological Research, 106(9):996-1004.
Subowo,  Y.B.  2010.  Uji  aktivitas  enzim selulase  dan  ligninase  dari  bebe- rapa jamur dan potensinya sebagai pendukung  pertumbuhan  tanaman terong ( Solanum molongena ). Berita Biologi, 10(1):1-6.
Sukumaran, R.K., R.R. Singhania, and A.
Pandey. 2005. Microbial cellulases -production, application
and
challenges. J.  of  Scientific  and
Industrial Research, 64:832-844.
Syamsudin,  S.  Purwati,  dan  A.R.  Taufik.
2008.  Efektivitas  aplikasi  enzim dalam  sistem  lumpur  aktif  pada pengolahan limbah pulp dan
kertas. Berita  Selulosa, 43(2):83- 92. Tan, R.X. and W.X. Zou. 2001. Endophy- tes:  a  rich  source  of  functional metabolites. J. of Natural Products Rep ., 18:448-459.
Tarman, K. 2011. Biological and chemical investigations of Indonesian marine-derived  fungi  and  their secondary  metabolites  [diserta- tion]. Germany: Ernst-Moritz-
Arndt  University  of  Greifswald.
178p.
Winarno,  F.G.  2010.  Enzim  Pangan.  M- Brio Press, Bogor. 166hlm. Diterima : 14 Maret 2014 Direview : 7 Mei 2014 Disetujui : 19 Mei 2014