## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI

## Antihyperuricemic activity test of bay leaf (Syzgium polyanthum) ethanol extract on white rats
(Rattus norvegicus)
Uji Aktivitas Antihiperurisemia ekstrak etanol daun salam (Syzgium polyanthum) pada tikus putih (Rattus norvegicus)
Meivita Sahensolar 1) , Edwin de Queljoe 1) ,  Surya Sumantri 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Samratulangi Manado
suryasumantri@@unsrat.ac.id

## ABSTRACT
Antihyperuricemic  activity  test  of  bay  leaf  (Syzgium  Polyanthum)  ethanol  extract  on  white  rats  (Rattus Norvegicus). Bay  leaves  contain  chemicals  such  as  essential  oils  containing  citral,  eugenol,  tannins,  and flavonoids. This study aims to determine the antihyperuricemic effect of bay leaf ethanol extract with 3 levels of dosage, namely, 200mg, 400mg, and 800mg. Comparison of Salam leaves as many as 5 groups consisting of 3 rats in each treatment group, namely CMC 1% (negative control), Allopurinol 100 mg (positive control), ethanol  extract  of  bay  leaves  in  doses  of  200  mg,  400 mg,  and 800  mg, which was  induced  by potassium oxonate. . Observations were made for 6 hours. The data were tested using ANOVA (Analysis of Variant), HOMOGENITY test (Test of Homogenity of Variance) and continued with LSD (Least Significant Different) test. The results of statistical tests showed that of the three doses, the best reduction in uric acid levels was at a dose of 400 mg.

## Keywords: Bay Leaf Extract (Syzgium Polyanthum), Antihyperusemia

## ABSTRAK
Uji aktivitas antihiperusrisemia ekstrak etanol daun  salam (Syzgium Polyanthum) pada tikus putih (Rattus Norvegicus). Daun salam memiliki kandungan kimia seperti minyak atsiri yang mengandung sitral, eugenol, tannin,  dan  flavonoida.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  adanya  efek  antihiperurisemia  ekstrak etanol  daun  salam  dengan 3  tingkatan  dosis  yaitu,  200mg, 400mg, dan  800mg.  Perbandingan  daun Salam sebanyak  5  kelompokyang  terdiri  dari  3  ekor  tikus  disetiap  kelompok  perlakuan,  yaitu  CMC  1% (kontrol negatif), Allopurinol 100mg (kontrol positif), ekstrak etanol daun salam dalam dosis 200mg, 400mg, dan 800 mg,yang diinduksi kalium oksonat. Pengamatan dilakukan selama 6 jam. Data diuji dengan menggunakan ANOVA  ( Analisis  Of  Variant )  ,uji  HOMOGENITAS  ( Test  of  Homogenity  of  Variance )  dan  dilanjutkan dengan  uji  LSD  ( Least  Significant  Different ).  Hasil  uji  statistik  menunjukan  bahwa  Dari  ketiga  dosis, penurunan kadar asam urat terbaik terdapat pada dosis 400 mg.
Kata     Kunci: Ekstrak daun salam (Syzgium polyanthum), Antihiperusemia

## PENDAHULUAN
Seiring  dengan  perkembangan  zaman, banyak  masalah  kesehatan  muncul  berkaitan dengan  kebiasaan  makan.  Salah  satunya  adalah penyakit  asam  urat  yang  timbul  akibat  kebiasaan mengonsumsi  makanan  yang  mengandung  purin tinggi.  Penyakit  asam  urat  ditandai  dengan  rasa sakit terutama di daerah persendian tulang dan tidak jarang  timbul  rasa  nyeri  bagi  penderitanya. Penyakit  ini  merupakan  suatu  bentuk  arthritis (peradangansendi)  yang  umumnya  menyerang jarijari  kaki,  lutut,  tumit,  pergelangan  tangan, pergelangan kaki, jari-jari tangan, dan  siku (Utami, 2010).
Peningkatan    asam    urat    dalam    darah /hiperurisemia  merupakan  keadaan  dimana  ginjal gagal  mengeksresikan  asam  urat  sehingga mengakibatkan  tingginya  kadar  asam  urat  . Tingginya  kadar  asam  urat  akan  dikarenakan mengendapnya Kristal monosodium akibat pemecahan  purin  maupun  keduanya  .  Asam  urat akan  diekresikan  melalui  ginjal  bersama  urin, menurunnya  sekresi  asam  urat  kedalam  tubuli ginjal  dikarenakan  adanya  gangguan  eliminasi asam urat menuju ginjal yang menyebabkan kadar asam  urat  dalam  darah  meningkat  (Ningtiyas  & Ramadhian, 2016).
Daun salam adalah tanaman yang memiliki nama ilmiah Syzgium polyanthum (wight)/ Eugenia polyantha  wight. Daun  salam  sering  digunakan terutama  untuk  bahan  rempahrempah  pengharum masakan  di  sejumlah  Asia  Tenggara  termasuk  di Indonesia.  Selain  sebagai  rempah-rempah,  daun salam  juga  dapat  digunakan  sebagai  obat tradisional.  Beberapa penelitian  disebutkan  bahwa Daun  salam  memiliki kandungan  kimia  seperti minyak  atsiri  yang  mengandung  sitral,  eugenol, tannin,  dan flavonoida .
Senyawa flavonoid telah diketahui mempunyai kemampuan dalam menghambat enzim santin  oksidase,  yang  menyebabkan  kadar  asam urat  di  dalam  darah  turun  .Dalam  beberapa penelitian  flavonoid  diketahui  memiliki  aktivitas biologis  dan  farmakologi,  seperti  antioksidan, antibakteri, antivirus dan efek antimutagenik.Flavonoid  juga  dapat  menghambat
beberapa enzim, seperti xantin oksidase, siklooksigenase,  lipoksigenase,  dan  fosfoinositida 3-kinase.Xantin  oksidase  bersifat  oksidatif  dalam kerusakan jaringan hidup serta dapat
menyebabkan
hiperurisemia.
Flavonoid mengkatalisis  oksidasi  hipoksantin  dan  xantin untuk asam urat (Nagao et al ., 1999).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Lanjutan Farmasi Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas  Sam  Ratulangi  Manado  yang  dimulai pada Oktober 2021- Maret 2022.

## Alat dan Bahan Alat
Syringe  1  mL,  alat  ukur  asam  urat (Autocheck),oven,sonde  oral,  batang  pengaduk, timbangan  analitik  (ADAM,KERN), alat-alat gelas  (pyrex),  kertas  saring,  sarung  tangan  lateks, masker  (SENSI  Mask),  botol  sampel,  blender, kandang pemeliharaan hewan, dispo, dan  ayakan.

## Bahan
Tikus putih  jantan  ( Rattus  norvegicus) 15 ekor,  daun  Salam (Abelmoschus  manihot  (L.) Medik) ,  CMC  ( Carboxymethylcellulose ),  aquades, etanol 96%, pangan tikus putih jantan galur wistar ( Rattus  norvegicus ),  Allopurinol,kalium  oksonat, aquades steril dan strip asam urat.

## Populasi dan Sampel
Populasi  penelitian  ini  adalah  semua  jenis  tikus putih  jantan  galur  wistar (Rattus  norvegicus) . Sampel  yang  digunakan  yaitu  tikus  galur  wistar putih jantan yang berusia 2-3 bulan dengan bobot rata-rata 150-200 gram.

## Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  murni  ( true  experiment )  yang dilakukan di dalam laboratorium dengan menggunakan hewan coba tikus putih jantan galur wistar  sebagai  hewan  uji.  Design  penelitian  yang digunakan  adalah Post  Test  Control  Group
Design ,  yaitu  dilakukan  pengamatan/pengukuran kadar asam urat sesudah perlakuan (Rofieq,2001).
Hewan uji dikelompokan  dalam  5 grup kelompok masing-masing terdiri dari 3 ekor hewan uji  yang  sudah  diadaptasikan  terlebih  dahulu selama  7  hari.  Kelompok  3-5  diberikan perlakuan ekstrak  daun  salam  dengan  variasi  dosis yang berbeda-beda  yaitu  200mg,  400mg,  dan 800mg pemberian  dosis terlebih dahulu dikonversikan dengan  menggunakan  faktor konversi  untuk  manusia  70kg  BB  ke  tikus  200gr BB ialah 0.018.

## Prosedur  Penelitian Penyiapan Hewan Uji
Penelitian  ini  menggunakan  tikus  putih jantan  galur  wistar  ( Rattus  norvegicus) sebagai hewan uji yang terbagi atas 5 kelompok  uji dimana masing-masing kelompok terdiri  atas 3 ekor  tikus putih  jantan  ( Rattus  norvegicus )  yang  dipelihara dalam  kandang yang berisi  dedak  padi  dan  diberi pangan tikus.

## Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Tahap awal dilakukan dengan pengumpulan  bahan  baku  daun  salam yang diambil dari daerah Sulawesi Utara, Kota Manado kecamatan  Pal  2.  Daun  Salam  Daun  salam  ( Syzgium polyanthum (wight) dicuci bersih dengan air  mengalir,  ditiriskan  dan  ditimbang  berat basahnya.  Daun  salam  yang  telah  dibersihkan diangin-anginkan  didalam  ruangan.  Daun  salam yang telah kering diblender sampai menjadi halus dan diayak menggunakan ayakan.

## Pembuatan Ekstrak Daun Salam
Daun  Salam  yang  telah  menjadi  serbuk simplisia  ditimbang  sebanyak  112gram  dan dimasukan  kedalam  wadah  toples  kemudian diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan cara  serbuk  simplisia  direndam  dalam  pelarut etanol 96%. Perbandingan antara bahan dan pelarut adalah 1:5 (w/v) dan dibiarkan selama 5 hari sambil sesekali  diaduk  kemudian  disaring  menggunakan kertas  saring.  Filtrat  yang  diperoleh dipekatkan menggunakan  oven  pada  suhu  40ºC  sampai diperoleh ekstrak kental.

## Pembuatan Larutan CMC 1%
Larutan  stok  CMC  1%  dibuat  dengan menimbang  serbuk  CMC  sebanyak  1  gram kemudian  campurkan dengan  aquades sebanyak
100  mL,  dihomogenkan  dengan  cara  pemanasan menggunakan  hot  plate,  kemudian  didinginkan. Perbandingan antara aquades dengan CMC adalah 100:1  artinya  didalam  100mL  aquades  terdapat  1 gram CMC.

## Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan  larutan  uji  ekstrak  etanol Daun  salam  ( Syzgium  polyanthum (wight)  sesuai dengan  masing-masing  dosis  (200mg,400mg  dan 800mg), pemberian dosis terlebih dahulu dikonversikan dengan menggunakan faktor konversi untuk manusia 70kgBB ke tikus  200g BB ialah  0,018.  Sehingga  perhitungannya  sebagai berikut :
Dosis I  (200mg)  : 0,018 x 200mg = 3,6mg Dosis II (400mg)   : 0.018 x 400mg = 7,2mg Dosis III (800mg)   : 0,018 x 800mg = 14,4mg
Masing-masing  ekstrak etanol Daun salam  ( Syzgium  polyanthum (wight)  ditimbang sesuai  dosis  kemudian  ditambahkan  1  mL  larutan CMC  1%  dan  diaduk  sampai  homogen.Setelah homogen, masing-masing dosis  ekstrak dimasukan dalam  botol  sampel  dan  diberi  label.DSI  untuk ekstrak  etanol  daun  salam  dengan  dosis  3,6mg; DSII untuk ekstrak etanol  daun salam dengan dosis 7,2mg; dan DSIII untuk ekstrak etanol daun salam dengan dosis 14,4mg.

## Pembuatan Larutan Allopurinol
Dosis  Allopurinol  pada  manusia  dewasa adalah 100mg/hari.Takaran konversi dosis Allopurinol  untuk  manusia  dengan  berat  badan 70kg  pada  tikus  dengan  berat  badan  200gr  ialah 0.018. Sehingga perhitungannya sebagai berikut : 0.018 x 100mg = 1,8mg
Jadi  dosis Allopurinol  pada  tikus  adalah  1,8mg .Allopurinol digunakan sebagai kontrol positif dan ditambahkan 1 mL larutan CMC 1%.

## Pembuatan Larutan Kalium Oksonat
Dosis  kalium  oksonat  untuk  tikus  200gr adalah sebagai berikut :
250 𝑚𝑔 𝑥 200 𝑔𝑟 = 250 =  50 𝑚𝑔 1000 𝑔𝑟 5 Jadi dosis kalium oksonat pada tikus adalah 50mg, ditambahkan  kedalam  1  mL  aquades  steril diberikan secara intraperitoneal.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Daun  salam  memiliki  kandungan  kimia seperti  minyak  atsiri  yang  mengandung  sitral,
eugenol,  tannin,  dan  flavonoida.  Minyak  atsiri secara umum mempunyai efek sebagai antimikroba, analgesik, dan meningkatkan kemampuan fagosit.
Pada Penelitian ini , berat simplisia yang di dapatkan  yaitu  112  gr  ,  kemudian  dilakukan maserasi dan mendapatkan ekstrak  sebanyak 10,91 gr .
Pengukuran kadar asam urat dilakukan sebanyak 5 kali , yaitu pada t0, t1,t2, t4 dan t6 selama 6 jam . dengan interval waktu yang berbeda – beda . Kadar asam  urat  tikus  diambil  setelah  tikus  dipuasakan selama 8 jam (t0) hanya diberi minum .  15  ekor  tikus  dibagi  menjadi  5  kelompok  , masing-masing  kelompok  terdapat  3  ekor  tikus .Untuk  kelompok  pertama  diberikan  CMC  1% (kontrol  negatif),  kelompok  kedua  diberikan Allopurinol  (kontrol positif)  dan kelompok ketiga diberikan ekstrak etanol daun salam dosis 200 mg ,  kelompok  keempat  diberikan  dosis  400mg,  dan kelompok  terakhir  diberikan  dosis  800mg.  Untuk rata-rata  pengukuran  hasil  dari  Penelitian  ini  , terlihat pada table 1. Yaitu rata-rata untuk t0 kadar asam  urat  pada  tikus  berkisar  3,6  mg/dL  sampai dengan  7,8  mg/dL.  Pengkondisian  hiperurisemia yaitu  dengan  menginduksikan  kalium  oksonat secara  intraperitoneal,  1  jam  setelah  diinduksi kalium  oksonat kadar  asam  urat  tikus  diukur  (t1). Pada tabel 1 rata-rata pengukuran kadar asam urat (t1)  berkisar  antara  3,8  mg/dL  -10,9mg/dL  . Pada saat penginduksian , 1 jam setelah itu di  ukur kadar asam  urat  akan  tetapi  beberapa  kelompok  tidak menunjukkan kenaikan kadar asam urat , sehingga peneliti menambah 1 jam lagi dan  di ukur kembali kadar asam urat . Namun demikian,
beberapa  di  antaranya  tetap  tidak  menunjukkan kenaikan  kadar  asama  urat  .  Dalam  hal  ini  ada beberapa  faktor  kemungkinan  yang  terjadi. Diantaranya  ,  Bahan  yang  digunakan  sebagai penginduksian  sudah  rusak  /  expired  ,  atau beberapa tikus tidak sesuai berat badannya dengan dosis  yang  di  berikan  ,  ada  pula  faktor  lain  yaitu alat  pengukuran  asam  urat  /  auto  check  kurang efektif  ,  mengingat  pada  saat  penelitian  untuk pengukuran  menggunakan  auto  check  harus dilakukan  berulang-ulang  ,  untuk  mendapatkan hasilnya.  Dari  ketiga  dosis  ini  pun  yang menunjukkan  penurunan  untuk  kadar  asam  urat terdapat pada dosis ke 2, yaitu dosis 400mg .
Hasil  untuk  Uji homogenitas  menunjukan p  =  0,120  di  mana  nilai  p  >  0,05,  maka  dapat disimpulkan  bahwa  varian  data  yang ada homogen. Hasil untuk uji ANOVA  adalah terdapat perbedaan  yang  bermakna  yaitu  dengan  nilai  p= 0,016 (<0,005)
Penurunan kadar  asam urat yang bertahap setelah  pemberian  dosis  ekstrak  daun  salam dikarenakan  daun  salam  memiliki  kandungan flavonoid  yang  diketahui  mampu  menurunkan kadar asam urat . Menurut Van Hoorn et  al (2002), flavonoid  dapat  menghambat  xantin  oksidasi. Hubungan  antara  struktur  flavoinoid  dengan aktivitasnya  sebagi  inhibitor  xantin  oksidasi dikarenakan  adanya gugus hidroksil  (gugus  –OH) pada C-5 dan C-7 serta ikatan rangkap antara C-2 dan C-3. Dengan  adanya ikatan rangkap pada atom C-2  dengan  C-3  sehingga  mengakibatkan  posisi ring  B co-planar terhadap  ring  A  hingga memudahkan  dalam  berinteraksi  dengan  xantin oksidasi.
12 10 8 6 2 0 Kontrol Negatif Kontrol Positif Dosis I Dosis II
Dosis III t0 t1 t2 waktu/jam t4 t6
K ad ar A sa m U ra t
Tabel 1. Rata-rata pemeriksaan kadar asam urat
Ket
T0 : T1 : Pemeriksaan Kadar Asam Urat sebelum penginduksian kalium Oksonat Kadar Asam Urat setelah 1 jam  penginduksian kalium Oksonat T2 : Pemeriksaan Kadar  Asam  Urat  setelah  2  jam  penginduksian  kalium Oksonat T4 : Pemeriksaan Kadar  Asam  Urat  setelah  4  jam  penginduksian  kalium Oksonat T6 : Pemeriksaan Kadar Asam  Urat setelah 6 jam  penginduksian kalium oksonat EEDS      : Ekstrak Etanol Daun Salam

## KESIMPULAN
Pada  penelitian  ini  ,  pemberian  ekstrak etanol  daun  salam  (syzgium  polyanthum)  dari ketiga  dosis  (200mg,  400mg,  800mg)  yang memiliki pengaruh terhadap penurunan  kadar asam urat  tikus  putih  jantan  galur  wistar  ( Rattus norveggicus ),  terdapat  pada  dosis  400mg  .  Untuk Hasil Uji ANOVA pada taraf uji 0,05 menunjukan hasil  bahwa  terdapat  perbedaan  yang  bermakna antar kelompok perlakuan dan dengan hasil uji LSD ( Least  Significant  Difference )  menunjukan bahwa adanya  aktivitas  penurunan  hiperurisemia  dengan menggunakan  ekstrak  etanol  daun  salam  untuk dosis ke dua (400mg) .

## SARAN
Dalam melakukan penelitian ini diperlukan ketelitian .Dan untuk kekurangan pada penelitian ini terdapat pada alat pengukuran asam urat  yang  harus  dilakukan  secara  berulang  agar mendapatkan  hasil  yang  benar.  Dan  perlu  adanya penelitian yang lebih lajut untuk senyawa dari daun salam  agar dapat mengetahui selain
flavonoid  senyawa  apa  yang  terkandung  dalam daun  salam  yang  dapat  menurunkan  kadar  asam urat .

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah, S.S., Djide, N., Natsir, S. (2021). KLT Bioautografi  Hasil  Partisi  Ekstrak  Etanol Herba Bandotan ( Ageratum conyzoides L. ) Terhadap Shigella  dysentriae . Chem. Prog. 14(1) .15-17 Abdullah, S.S., 2021. Pelatihan Produksi Minuman Serbuk Jahe, Kunyit, Temulawak  Majelis  Ta’lim  Irsyaadul Ibaad dan PKK Bailang Upaya Peningkatan  Produktivitas  Ekonomi  dan Imunitas. Vivabio. 3(3) :16-19.
Jayanti, M., Sumantri, S., Jayanto, I., Siampa, J.P.,
(2021),  Pemberdayaan  Anak-Anak  Panti Asuhan  melalui  Edukasi  dan  Pelatihan Pembuatan  Sabun  Cair  Antiseptik,  JPAI: Jurnal  Perempuan  dan  Anak  Indonesia, 3(1) , 15–21.
Mopangga, E., Yamlean, P. V. Y., & Abdullah, S.
S. (2021). Formulasi Sediaan Sabun Mandi Padat Ekstrak Etanol Daun Gedi ( Abelmoschus  manihot L.)  Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis .
Perlakuan Kadar Asam Urat (mg/dL) pada waktu T0 T1 T2 T4 T6 Kontrol Negatif 7.8 10.9 CMC 6.8 5.4 3.4 Kontrol Positif 4.7 3.8 Allopurinol 3.2 3 3.4 Dosis I 5.1 5.3 EEDS 200mg 5.3 7.3 5.2 Dosis II 3.7 5.9 EEDS 400mg 3 3.1 3 Dosis III 3.6 5.1 EEDS 800mg 5.7 6.2 5.4
Pharmacon, 10(3) , 1017–1024. Mandias, I.I., Yamlean, P. V. Y. , Abdullah , S. S. (2022), Formulation
and Antibacterial Activity Test of Peel-Off
Gel  Mask  Ethyl  Acetate  Fraction  of Cocoa  Pods  ( Theobroma  cacao L.) Against Staphylococcus  aureus as Anti-Acne,  Pharmacon, 11(4) ,  1258– 1265. Karamoy,  NYF., Yamlean,  P.  V.  Y. , Abdullah ,  S.  S. (2022), Formulation And  Test  Of  Antioxidant  Activity Lotion Ethyl Acetate Fraction Of Corn Silk ( Zea Mays L.), Pharmacon, 11(4) , 1058–1065. Legi, A.P., Edy, H.J., Abdullah , S. S., (2021),
Formulasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri  Sediaan  Sabun  Cair
Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak  ( Annona Muricata Linn)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus ,    Pharmacon, 10(3) , 1058–1065. Ningtiyas, I. F., & Ramadhian, M. R. (2016). Effectiveness of Bay Leaf Extract for
Decreasing  Uric  Acid  in  Gout Arthritis
Patient.
Majority , 5 (September), 105–110. Pandaleke, S.S., Queljoe, ED., Abdullah, S.S., (2022). Uji Efektivitas Ekstrak Etanol Daun  Sirsak  ( Annona  muricata  L. ) Untuk Menurunkan Kadar Gula Darah Tikus Putih Jantan ( Rattus
norvegicus ) Yang Diinduksi Aloksan,
Pharmacon , 11(1) , 1321–1324. Sahuleka, A.S.G., Edy, H.J., Abdullah, S. S., (2021),  Formulasi  Sediaan  Krim Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Eceng Gondok ( Eichhornia crassipes ) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus ,  Pharmacon, 10(4) ,  1162– 1168. Sinrang,  V.N.S.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.S.,,
(2022),  Formulasi  Sediaan  Obat
Kumur  Ekstrak  Etanol  Biji  Pinang ( Areca catechu L. ), Pharmacon, 11(1) ,
1342–1349. Utami,  P.  (2010). Solusi  Sehat  Mengatasi Asam Urat dan Rematik . Jakarta:Agromedia Pustaka.
Van  Hoorn,  D.  E.  C.,  Nijveldt,  R.  J.,  Van Leuwen,  P.  A.  M.,  Hofman,  Z., M’Rabet,  L.,  De  bont,  D.  B.  A.,  dan Van  Norren,  K. 2002.  Accurate Prediction  Of  Xanthine  Oxidase Inhibition  Based  on  the  Structure  of Flavonoids. European  Journal  of
Phamacology . 451 : 111-118.