http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah Piper crocatum ) terhadap Larva ( Artemia salina L.) dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test
Alfin Surya 1 , Zaiyar 2 , Riko Agustian 1
1 Program Studi D-3 Analis  Kesehatan Universitas Abdurrab Pekanbaru 2 Program Studi Teknik Sipil Sekolah Tinggi Teknologi Pekanbaru
*Correspondence e-mail: zaiyar@sttp-yds.ac.id

## Abstract
Sirih  merah  (Piper  crocatum)  adalah  salah  satu  tanaman  yang  sering  digunakan  sebagai  obat.  Sirih  merah  termasuk dalam famili piperaceae, tumbuh merambat dengan bentuk daun menyerupai hati dan bertangkai, yang tumbuh berselang seling  dari  batangnya  serta  penampakan  daun  yang  berwarna  merah  keperakan  dan  mengkilap  saat  terkena  cahaya matahari. Sirih merah memiliki kandungan senyawa flavonoid, alkaloid, tanin, senyawa fenolik dan minyak  atsiri. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun sirih merah mengandung senyawa aktif seperti flavonoid dan fenolik. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efek  toksik  ekstrak  etanol  daun  sirih  merah  terhadap  Artemia  salina. Metode yang digunakan adalah metode Brine Shrimp Lethality Test. Hasil yang diperoleh dianalisis menggunakan tabel probit untuk menemukan nilai LC 50 (Lethal concentration). Nilai LC 50 diperoleh berdasarkan uji toksisitas ekstrak etanol daun sirih merah pada 10 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun sirih merah sangat toksik terhadap larva udang (Artemia salina) . Keywords : Daun Sirih Merah, Toksisitas, Artemia salina, BSLT, LC 50

## Abstrak
Red betel (Piper crocatum) is a plant that is often used as medicine. Red betel belongs to the Piperaceae family, grows vines with heart-shaped leaves and stems, which grow alternately from the stem and the appearance of leaves that are silvery red and shiny when exposed to sunlight. Red betel contains flavonoid compounds, alkaloids, tannins, phenolic compounds and essential oils. The results showed that the ethanol extract of red betel leaf contains active compounds such as flavonoids and phenolics. The purpose of this study was to determine the toxic effect of red betel leaf ethanol extract  on  Artemia  salina.  The  method  used  is  the  Brine  Shrimp  Lethality  Test  method.  The  results  obtained  were analyzed using a probit table to find the value of LC50 (Lethal concentration). The LC50 value was obtained based on the toxicity test of the red betel leaf ethanol extract at 10 ppm. This indicates that the red betel leaf ethanol extract is very toxic to shrimp (Artemia salina) larva.
Kata kunci : Red Betel Leaf, Toxicity, Artemia salina, BSLT, LC50

## 1. Pendahuluan
Indonesia  merupakan  negara  yang  kaya  akan  keanekaragaman  hayatinya.  Berbagai  macam  tanaman tumbuh subur di tanah  air ini. Beberapa diantaranya digunakan sebagai obat tradisional oleh  masyarakat Indonesia.  Salah  satunya  tanaman  sirih.  Tanaman  sirih  mempunyai  beragam  spesies  antara  lain:  sirih gading, sirih hijau, sirih hitam, sirih kuning, dan sirih merah (Santoso, 2019).
Tanaman  sirih  merah  termasuk  dalam  famili Piperaceae, tumbuh  merambat  dengan  bentuk  daun menyerupai  hati  dan  bertangkai,  yang  tumbuh  berselang-seling  dari  batangnya  serta  penampakan  daun yang  berwarna  merah  keperakan  dan  mengkilap  saat  terkena  cahaya  matahari.  Secara  empiris,  Tanaman Sirih Merah telah digunakan untuk mengobati diabetes, menurunkan kolesterol, radang prostat, maag, asam urat, kelelahan, keputihan, dan obat antiseptik pada bau mulut (Hendarto, 2019).
Tanaman sirih merah memiliki kandungan senyawa flavonoid, alkaloid, tanin, senyawa polifenolat dan  minyak  atsiri.  Senyawa  aktif  yang  terkandung  pada  tanaman  sirih  merah  menyebabkan  tanaman  ini memiliki banyak potensi untuk mengobati berbagai penyakit, diantaranya berpotensi sebagai antioksidan, antihiperglikemia,  antikanker  dan  antidiabetes.  Metode  yang  digunakan  dalam  pengujian  toksisitas
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
seringkali menggunakan metode BrineShrimp Lethality Test (BSLT) (Puspita, dkk., 2019).
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) adalah metode yang digunakan dalam pengujian toksisitas akut karena  senyawa  yang  memiliki  bioaktivitas  tertentu  seringkali  bersifat  toksit  terhadap  larva  udang. Kemampuan  untuk  mematikan  larva  udang  dapat  digunakan  sebagai  uji  pendahulu  yang  cepat  dan sederhana untuk mengetahui bioaktivitas suatu senyawa secara in vitro . Brine Shrimp Lethality Test dipilih karena  metode  ini  sering  digunakan  dalam  pra  skrining  terhadap  senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam ekstrak  tumbuhan  karena  sederhana,  cepat,  murah,  mudah,  dipercaya,  dan  hasil  representative  (Putra, 2019).

## 2. Metodologi
Uji toksisitas dalam penelitian ini menggunakan metode BSLT. BSLT adalah metode yang digunakan dalam pengujian  toksisitas  akut  karena  senyawa  yang  memiliki  bioaktivitas  tertentu  seringkali  bersifat  toksit terhadap larva udang. Oleh karena itu, kemampuan untuk mematikan larva udang dapat digunakan sebagai uji  pendahulu  yang  cepat  dan  sederhana  untuk  mengetahui  bioaktivitas  suatu  senyawa  secara in  vitro. . Suatu ekstrak dinyatakan bersifat toksit menurut metode BSLT jika memiliki LC 50 kurang dari 1000 µg/mL (Putra,  dkk.,  2019).  Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah:  Mikropipet,  lumpang,  timbangan, seperangkat  alat  pembiakan  larva  udang,  vial,  aluminium  voil,  botol  gelap,  gunting,  pipet  tetes,  lampu, sterofoam,  kertas  saring,  tabung  reaksi  dan  rak  tabung  reaksi.  Sedangkan  bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah: daun sirih merah ( Piper crocatum ), Etanol, Aquades, telur udang ( Artemia salina L.), air laut, HCL pekat, serbuk Magnesium, FeCL 3 10% dan Dimethyl sulfoxide (DMSO).

## 2.1. Pembuatan Ekstrak Daun Sirih Merah dengan Maserasi
Daun  sirih  merah  diperoleh  dari  pasar  bawah  Pekanbaru.  Daun  sirih  merah  dicuci  bersih  lalu  didiamkan selama  semalam.  Selanjutnya  dipotong  kecil–kecil  dan  dikeringkan  dengan  cara  diangin–anginkan  dalam ruangan  selama  2  hari.  Masukkan  10  g  daun  sirih  merah  kedalam  botol  gelap,  kemudian  ditambahkan pelarut  etanol    hingga  sampel  benar–benar  terendam.  Diamkan  selama  48  jam,  kemudian  disaring  lalu pelarut dikeringkan untuk mendapatkan ekstrak kental.

## 2.2. Penetasan Larva Artemia salina
L.
Wadah  disiapkan  untuk  penetasan  telur Artemia  salina L . Wadah  dibagi  menjadi  dua  bagian,  yaitu  ruang terang  dan  ruang  gelap.  Kedua  bagian  tersebut  dibatasi  dengan  sterofoam  yang  tepi  bawahnya  dilubangi sebagai tempat keluarnya yang telah menetas (Surya, 2018).
Dimasukkan air laut sebanyak 1 L kedalam wadah hingga kedua lubang pada sterofoam terendam. Salah  satu  ruang  pada  wadah  tersebut  diberi  penerangan  dengan  cahaya  lampu  untuk  menghangatkan dalam penetasan dan merangsang proses penetasan. Untuk penerangan, lampu dinyalakan selama 48 jam. Untuk  ruangan  gelap,  diisi  1  g  telur Artemia  salina L  ditutup  dengan  aluminium  foil  dan  lakban  hitam. Setelah 48 jam, telur akan menetas menjadi larva dan akan bergerak keruangan terang (Surya, 2018).

## 2.3. Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Telur Artemia salina L ditetaskan dalam wadah  pembiakan yang berisi  air laut,  digunakan setelah  48 jam setelah larva menetas. Pengujian dilakukan dengan konsentrasi 1.000 ppm, 100 ppm, dan 10 ppm dengan pengulangan masing-masing tiga kali. Pembuatan larutan induk 10.000 ppm dengan cara ditambahkan 0,09 g ekstrak lalu dilarutkan dalam 9 mL etanol. Pembuatan konsentrasi 1.000 ppm dengan cara pengenceran larutan  induk  10.000  ppm  dipipet  sebanyak  2  mL  dimasukkan  kedalam  vial  lalu  ditambahkan  etanol sebanyak  18  mL    maka  didapat  konsentrasi  1.000  ppm.  Pembuatan  konsentrasi  100  ppm  dengan  cara pengenceran  konsentrasi  1.000  ppm  dipipet  sebanyak  2  mL  dimasukkan  kedalam  vial  lalu  ditambahkan
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
etanol sebanyak 18 mL  maka didapat konsentrasi 100 ppm. Pembuatan konsentrasi 10 ppm dengan cara pengenceran  konsentrasi  100  ppm  dipipet  sebanyak  2  mL  dimasukkan  kedalam  vial  lalu  ditambahkan etanol sebanyak 18 mL  maka didapat konsentrasi 10 ppm (Surya, 2018).
Masing-masing  vial  yang  mengandung  ekstrak  dibiarkan  alkohol  menguap.  Larutkan  kembali ekstrak  uji  dengan  DMSO  sebanyak  0,5  µL,  selanjutnya  tambahkan  air  laut  hingga  batas  kalibrasi  (5  mL). Masukkan  larva  udang  ( Artemia  salina L.)  pada  masing–  masing  vial  sebanyak  10  ekor.  Kemudian  amati larva udang setelah 24 jam. Dari data yang didapat dihitung LC 50 dengan metode kurva menggunakan tabel probit (Surya, 2018).
Untuk kontrol negatif masukkan 10 ekor larva udang ke dalam botol vial kemudian ditambahkan 5 mL air laut. Masing– masing dibuat tiga kali pengulangan.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Hasil dari penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Perhitungan toksisitas. No Sampel Kons. (ppm) ∑ Larva ∑ larva mati % Kematian Log kons, (x) Nilai Probit (y) LC 50 1  2 3 ∑ 1 Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah 10 10 4  5 6 15 50
1 5,00 10 100
10 7  8 8 23 76 2 5,71 1000 10 9  9 10 28 93 3 6,48 2 Kontrol Negatif 0 10 0  0 0 0 0
0 0
Sedangkan pembahasan dari hasil penelitian dapat dilihat pada Gambar 1
Gambar 1. Grafik regresi linear konsentrasi ekstrak daun sirih merah ( Piper crocatum ) y = 5 y = mx + b
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
5 = 0,74x + 4,25 y = 5 - 4,25 0,74 = 1,0135 LC 50 = antilog (1,0135) = 10 ppm Toksisitas ditentukan dengan melihat  nilai LC 50 yang dihitung  berdasarkan  tabel probit.   Gambar 1 merupakan  grafik  hubungan  antara  persentase  kematian  larva  udang  ( Artemia  salina L.)  dengan  log konsentrasi ekstrak daun sirih merah ( Piper crocarum ). Persamaan regresi linear dari grafik diatas adalah Y= 0,74x + 4,25 Sehingga nilai LC 50 adalah 1,0135. Nilai LC 50 diantilogkan dan mendapatkan nilai 10 ppm.
Hasil  nilai  probit  menunjukkan  nilai  LC 50 dari  ekstrak  etanol  daun  sirih  merah  sebesar  10  ppm. Menurut  Meyer  dkk.,  (2010)  bahwa  suatu  ekstrak  menunjukkan  aktivitas  ketoksikan  dalam  BSLT  jika ekstrak dapat menyebabkan kematian 50% hewan uji pada konsentrasi kurang dari 1000 ppm. Berdasarkan tabel 1 ekstrak etanol daun sirih merah didapatkan nilai LC 50 10 ppm yang berarti esktrak tersebut sangat toksik terhadap larva udang ( Artemia salina ).

## 4. Kesimpulan
Hasil  penelitian  pada  uji  toksisitas  ektrak  etanol  daun  sirih  merah  ( Piper  crocatum )  terdapat senyawa aktif seperti flavonoid dan Fenolik. Ekstrak etanol daun sirih merah ( Piper crocatum ) didapatkan nilai LC 50 yaitu 10 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun sirih merah sangat toksik terhadap larva udang ( Artemia salina L.).

## Daftar Pustaka
Hendarto, D. (2019). Khasiat jitu daun kelor dan daun sirih merah tumpas penyakit. Jakarta Selatan: Laksana Meyer, B. N., Ferrigini, N. R., Putman, J. E., Jacsben, L. B., Nicols, D. E & McLaughlin, J. L. (2010). Brine Shrimp:
A Convinient General Bioassay For Active Plant Constituent. Plant Medica , 45 (5), 31–34. https://doi.org/10.1055/s-2007-971236
Puspita, P.J., Mega, S.,  &  Nirmala, P.S.  (2018). Antibacterial Activities of Sirih  Merah  ( Piper crocatum ) Leaf Extracts (Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Sirih Merah). Current Biochemistry , 5 (3), 1–10. Putra, K.A., Indah, P., & Kuswiyanto. (2019). Toksisitas Akut Ekstra Metanol Mentimun ( Cucumis savitus L.)
Terhadap Larva Artemia salina Leach Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Jurnal Laboratorium Khatulistiwa , 2 (2), 67–71. Santoso, H.B. 2019. Daun Sirih Merah . Yogyakarta:  Pohon Cahaya Semesta. Surya,  A.  (2018).  Toksisitas  Ekstrak  Metanol  Kulit  Jengkol  ( Pithecellobium  jiringa )  Dengan  Metode Brine Shrimp Lethality Test Terhadap Larva Udang ( Artemia salina ). Jurnal Rekayasa Sistem Industri , 3 (2),
149-153. Available at: https://ejournal.upbatam.ac.id/index.php/rsi/article/view/502