Detection of anti-human leukocyte antigen (HLA) class I antibodies in female blood donors
Deteksi antibodi anti-human leukocyte antigen (HLA) kelas I pada donor darah wanita
Eti Herani 1 *, Ni Ken Ritchie 2, Heri Wibowo 3
*1,2,3 Program  Magister  Ilmu  Biomedik,  Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia, JL Salemba Raya No.6 Jakarta 10430 Indonesia, email: eti_pmi@yahoo.com ,
bowoheri04@gmail.com I N F O  A R T I K E L

## A B S T R A C T

## ARTICLE HISTORY:
Artikel diterima: 3 Juni 2022 Artikel direvisi:  26 Juni 2022 Artikel disetujui: 15 Juli 2022

## KORESPONDEN
Eti Herani, eti_pmi@yahoo.com , Orcid ID:

## ORIGINAL ARTICLE
Halaman: 171-183 DOI: https://doi.org/10.30989/mik.v11i2.673
Penerbit: Universitas Jenderal Achmad Yani Yogyakarta, Indonesia. Artikel terbuka yang berlisensi CC-BY- SA .
Background : HLA class I is very polymorphic, if it enters the body of another person  it  will  be  considered  foreign  so  that  alloimmunization  can  occur  by producing  class  I  anti-HLA  antibodies.  These  antibodies  are  found  in individuals  exposed  to  allogeneic  cells  due  to  transfusion,  problems,  and pregnancy. Female blood donors who have anti-HLA class I antibodies when donating blood and transfused to patients who have the appropriate HLA can cause a transfusion reaction. This research is further to get an overview of class I anti-HLA antibodies in female blood donors.
Objective :  To  determine  the  presence  of  potential  class  I  anti-HLA antibodies in female donors.
Methods : The subjects of this study were 30 female donors who had never been pregnant and 60 donors who had been pregnant and gave birth who donated  their  blood  at  UTD  PMI  DKI  Jakarta.  The  collected  samples  were screened  using  the  whole  platelet  ELISA  method  to  detect  platelet antibodies,  namely  anti-HPA  and  anti-HLA  class  I  antibodies,  followed  by consulting anti-HLA class I antibodies with the MAIPA method.
Results : Sixteen samples were detected to contain anti-platelet antibodies and  74  were  negative.  Identification  of  class  I  anti-HLA  antibodies  in  16 samples showed all negative results.
Conclusion :  Identification  of  16  positive  anti-platelet  antibody  samples  in female donors did not show class I anti-HLA antibodies. keywords: Anti-HLA class I antibody, female donor, MAIPA

## A B S T R A K
Latar  belakang :  HLA  kelas  I  sangat  polimorfik,  apabila  masuk  ke  tubuh orang lain akan dianggap asing sehingga dapat terjadi aloimunisasi dengan memproduksi antibodi anti-HLA kelas I. Antibodi ini ditemukan pada individu yang terpapar sel allogenik karena transfusi, transplantasi, dan kehamilan. Donor  darah  wanita  yang  memiliki  antibodi  anti-HLA  kelas  I  apabila mendonorkan  darahnya  dan  ditransfusikan  ke  pasien  yang  memiliki  HLA yang sesuai dapat mengakibatkan reaksi transfusi. Penelitian ini lebih lanjut untuk mendapatkan gambaran tentang antibodi anti-HLA kelas I pada donor darah wanita.
Tujuan :  Mengetahui  potensi  keberadaan  antibodi  anti-HLA  kelas  I  pada donor wanita.
Metode : Subyek penelitian ini adalah 30 donor wanita belum pernah hamil dan  60  donor  sudah  pernah  hamil  dan  melahirkan  yang  mendonorkan darahnya  di  UTD  PMI  DKI  Jakarta.  Sampel  yang  dikumpulkan  diskrining dengan metode whole  platelet ELISA  untuk mendeteksi antibodi  trombosit yaitu antibodi anti-HPA dan anti-HLA kelas I dilanjutkan identifikasi antibodi anti-HLA kelas I dengan metode MAIPA.
Hasil : Enam belas sampel terdeteksi mengandung antibodi anti-platelet dan 74  negatif.  Identifikasi  antibodi  anti-HLA  kelas  I  pada  16  sampel menunjukkan semua hasil negatif.
Kesimpulan :  Identifikasi  terhadap  16  sampel  antibodi  anti-platelet  positif pada donor wanita tidak menunjukkan adanya antibodi anti-HLA kelas I Kata kunci: Antibodi anti-HLA kelas I, donor wanita, MAIPA

## PENDAHULUAN
Human Leukocyte Antigen (HLA) kelas I  sangat  polimorfik,  bahwa  dua  orang  yang tidak  terkait  sangat  tidak  mungkin  akan memiliki  HLA  yang  identik,  sehingga  apabila HLA  satu  orang  masuk  ke  orang  lain  akan dianggap  asing  dan  bersifat  antigen.  HLA kelas  I  adalah  salah  satu  molekul  dari  kelas molekul HLA yang ditemukan pada permukaan  sel  berinti  dan  trombosit  pada manusia,  merupakan  protein  membran  pada ujung terminal gugus amino yang berisi celah pengikat peptida dan molekul ini terlibat pada proses penyajian antigen kepada sel limfosit T sitotoksik. 1 HLA kelas I diekspresikan secara luas  pada  hampir  semua  sel  berinti  pada manusia, sehingga kemungkinan besar pengenalan jaringan atau sel dari satu orang ke  orang  lain  akan  mengakibatkan  penerima terpapar  HLA  kelas  I  asing,  dan  berpotensi terjadinya respon alloimmune humoral dengan memproduksi antibodi anti-HLA kelas I.  Antibodi  ini  dapat  ditemukan  pada  individu yang  terpapar  oleh  paparan  sel  allogenik karena transplantasi, transfusi dan kehamilan. 2
Janin  adalah semi-allograft ,  yang merupakan  benda  asing yang  dapat  memicu terjadinya  respon  imun  dari  ibu  terhadap antigen  ayah  yang  diekspresikan  dalam  sel janin  sehingga  ketika  sel  janin  masuk  ke sirkulasi  ibu  melalui  plasenta  akan  terjadi pembentukan antibodi anti-HLA kelas I. 3,4 Sel- sel  dari  janin  dapat  keluar  dari  uterus  dan masuk ke dalam sirkulasi ibu: pembuluh darah janin di vilus korion dipisahkan dari darah ibu
di  ruang  intervilous  oleh  lapisan  sel  tipis. Perdarahan  fetomaternal  dapat  terjadi  jika lapisan  sel  ini  kehilangan  integritasnya sehingga eritrosit dan leukosit janin dilepaskan ke dalam darah ibu. Respons imun ibu  terhadap  sel  leukosit  sangat  efektif sehingga terbentuk antibodi terhadap antigen leukosit yaitu antibodi Anti-HLA kelas I. 5
Beberapa literatur melaporkan prevalensi  antibodi  anti-HLA  ini  pada  wanita, salah  satunya  De  Clippel, et  al. (2014)  yang melaporkan  prevalensi  antibodi  anti-HLA kelas I pada populasi wanita di Belgia, dengan prevalensi  31,2%  pada  wanita  riwayat  hamil dan 7,7% pada wanita tidak pernah hamil. 6
. Acute  non-hemolytic  transfusion reactions (ANHTRs)  adalah  reaksi  akut  non hemolitik  berupa  urtikaria,  reaksi  demam hingga cedera paru akut terkait transfusi yang paling  mengancam  jiwa  yaitu Transfusion ‐ Related  Acute  Lung  Injury (TRALI).  Antibodi terhadap  (HLA)  kelas  I  dalam  darah  donor dikaitkan pula dengan ANHTRs. 7 Berdasarkan beberapa penelitian retrospektif, antibodi anti- HLA  kelas  I  dalam  donor  darah  dapat menimbulkan  kasus  TRALI  sebesar  14,3 – 26,7%. 8
Berdasarkan  rekomendasi American Association of Blood Bank (AABB), disyaratkan  mulai  1  April  2014  semua komponen  yang  mengandung  plasma  dan darah lengkap untuk transfusi harus dikumpulkan  dari  pria,  wanita  yang  belum pernah  hamil,  atau  wanita  yang  telah  dites negatif  untuk  antibodi  anti-HLA.  Oleh  karena itu  negara  seperti  Amerika,  Inggris,  Kanada,
Media Ilmu Kesehatan Vol. 11, No. 2, Agustus 2022 https://doi.org/10.30989/mik.v11i2.673
Belanda,  Jerman  dan  negara-negara  Eropa memberlakukan  rekomendasi  tersebut. 9 Hal ini karena penelitian sebelumnya
menghasilkan  penurunan  yang  signifikan akan  terjadinya  TRALI  dari  1  dalam  4000 menjadi 1 dalam 12.000 unit yang ditransfusikan  setelah  melakukan  upaya mengurangi resiko tersebut. 9,10
Merujuk  data  Laporan  Tahunan  UTD PMI Pusat tahun 2018, jumlah donasi seluruh Indonesia  3.410.880  orang  donasi,  dengan prosentase donasi pria 73%, dan wanita 27%. Di Indonesia ada 224 UTD PMI dan UTD PMI DKI  adalah  UTD  dengan  jumlah  donasi terbesar  di  Indonesia  dengan  jumlah  donasi 312.716  orang  terdiri  67%  donasi  pria  dan 33%  wanita  sebanyak  211.048  orang.  Rata- rata donasi wanita setiap bulan adalah 8.472 donasi  dan  setiap  hari  282  orang.  Distribusi pemakaian komponen darah di UTD PMI DKI adalah 491.433 kantong dan 56% diantaranya adalah komponen darah kaya plasma berupa berupa whole  blood (WB),  plasma, fresh frozen plasma (FFP), thrombocyte concentrate (TC) dan cryopresipitate. 11
Penelitian  terkait  antibodi  anti-HLA kelas  I  pada  donor  wanita  masih  sangat sedikit,  sementara  memberikan  jaminan keamanan  kepada  pasien  penerima  donor adalah  suatu  kewajiban  setiap  insan  medis. Penelitian  lebih  lanjut  untuk  mendapatkan gambaran  potensi  individu  dengan  antibodi anti-HLA  kelas  I  pada  donor  darah  wanita dengan  riwayat  melahirkan.  Selain  itu diharapkan dari penelitian ini didapatkan data
donor wanita dengan antibody anti-HLA kelas I.

## BAHAN DAN CARA PENELITIAN
Desain  penelitian  yang  digunakan adalah  studi  deskriptif  observasional  dengan pendekatan cross sectional. Penelitian dilakukan  pada  bulan  Juli  sampai  Desember 2020 di UTD PMI DKI Jakarta. Populasi pada penelitian  ini  adalah  pedonor  darah  wanita sukarela yang mendonorkan darahnya di UTD PMI  DKI  Jakarta.  Sampel  adalah  populasi yang  memenuhi  kriteria  pemilihan.  Sejumlah 90  sampel  diambil  dari  wanita  yang  belum pernah  hamil,  wanita  yang  hamil  dan melahirkan 1 kali dan ≥2 kali masing-masing 30  sampel.  Tehnik  pengambilan  sampel penelitian  ini  dilakukan  secara  acak.  Darah berasal  dari  donor  darah  wanita  di  UTD PMI DKI  Jakarta  dalam  kurun  waktu  penelitian, dengan  kriteria  inklusi;  donor  darah  wanita sukarela,  belum  pernah  hamil  dan  riwayat hamil  sampai  melahirkan  1  kali  atau  lebih pada  usia  17-60  tahun.  Kriteria  Ekslusi: pernah transfusi, pernah transplantasi, pernah kehilangan  kehamilan  (keguguran,  hamil diluar kandungan) dan sampel darah pendonor  wanita  yang  mengkonsumsi  obat- obatan seperti anti-histamin, aspirin dan non- steroidal  anti-inflammatory  drugs  (NSAID) lainnya dalam dua minggu sebelum pengambilan  darah.  Selanjutnya  diskrining antibodi  anti-trombosit  dan  diidentifikasi antibodi  anti-HLA  kelas  I  dengan  metode MAIPA.
Sampel  darah  lengkap  (whole  blood) dikumpulkan  dari  pedonor  darah  wanita sukarela  Unit  Transfusi  Darah  Palang  Merah Indonesia DKI Jakarta yang memenuhi kriteria inklusi. Sampel ditempatkan di tabung koleksi tanpa antikoagulan dengan volume sebanyak 5 ml. Darah dipisahkan dan serum digunakan untuk  pemeriksaan  skrining  antibodi  anti trombosit  dan  untuk  identifikasi  antibodi  anti- HLA  kelas  I.  Serum  yang  belum  diperiksa disimpan beku pada suhu -20 0 C.

## Persiapan Sampel Trombosit
Sampel  trombosit  diambil  dari  darah EDTA,  diputar  800  rpm  selama  25  menit, sehingga  didapatkan  Platelet  Rich  Plasma (PRP).  Platelet  Rich  Plasma  dipindahkan  ke tabung  baru  dan  diputar  selama  10  menit untuk mendapatkan trombosit pada 3000 rpm. Trombosit  dicuci  3  kali  dengan  larutan  NaCl 0.9%  PH  6,5  dan  selanjutnya  disuspensi dengan NaN3.
Dibutuhkan  2  pool  trombosit,  atau kumpulan trombosit yang diambil secara acak, tanpa  perlu  diketahui  antigen  trombosit  yang terdapat pada trombosit. Tiap pool terdiri dari 20 sampel darah EDTA donor darah golongan darah O, dengan volume masing-masing 3 ml. Jadi  dibutuhkan  40 sampel  darah  EDTA dari pedonor darah bergolongan O. 12
Pemeriksaan Skrining Antibodi Anti-

## Trombosit
Pemeriksaan  skrining  antibodi  anti- trombosit untuk mendeteksi antibodi terhadap trombosit  yaitu  antibodi  anti-HLA  kelas  I  dan
antibodi  anti-Human  Platelet  Antigen  (HPA) pada serum sampel. Diperlukan pool trombosit yang mengandung 20x10 6 /uL trombosit  untuk  skrining  antibodi.  Metode untuk  pemeriksaan  ini  digunakan  metode Whole platelet pada ELISA dengan prinsip bila terdapat  antibodi  dalam serum  sampel, akan terbentuk  ikatan  antigen-atibodi,  kemudian ditambahkan  antibodi  sekunder  maka  akan terbentuk  kompleks  antigen  antibodi  dan antibodi  sekunder.  Perubahan  warna  yang terjadi dibaca dengan spektrofotometer. 12
Pemeriksaan Metode MAIPA Untuk Identifikasi Antibodi anti-HLA Kelas I.
Antibodi anti-HLA kelas I dalam serum sampel darah dideteksi menggunakan metode MAIPA.  Isolat  trombosit  dengan  kadar trombosit minimal 20x10 6 /μL  diinkubasi bersama  serum  sampel  yang  akan  diperiksa dan  antibodi  monoklonal  anti-HLA  kelas  I selama 30 menit pada suhu 37°C. Campuran ini  kemudian  dicuci  dan  disentrifugasi,  untuk kemudian diambil supernatannya. Supernatan ditambahkan ke dalam mikroplate yang telah dilapisi  antibodi  terhadap  Goat  anti  mouse (GAM) IgG, diinkubasi selama 90 menit pada suhu  4°C.  Kemudian  dilakukan  penambahan Goat  anti  human  (GAH)  IgG  yang  telah berlabel  HRP,  dilanjutkan  dengan  inkubasi selama  120  menit  pada  suhu  4°C.  Tahap selanjutnya  adalah  penambahan  larutan substrat,  diinkubasi  dalam  ruang  gelap selama  15  menit  pada  suhu  kamar,  diikuti penambahan  stop  solution  dan  diukur
Media Ilmu Kesehatan Vol. 11, No. 2, Agustus 2022 https://doi.org/10.30989/mik.v11i2.673
absorbansi  pada  panjang  gelombang  429 nm. 12

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  pemeriksaaan  skrining  antibodi ini  untuk  mendeteksi  antibodi  terhadap trombosit yaitu antibodi anti-HLA Kelas I dan antibodi  anti-HPA  ( Human  Platelet  Antigen ), didapatkan  16  dari  90  sampel  yang  positif memiliki  antibodi  trombosit  atau  sebanyak 17.79%. (Gambar 1) Dengan perincian 2 dari sampel 0 melahirkan dan 14 dari sampel yang pernah melahirkan ≥ 1 kali.

## Gambar 1. Perbandingan Jumlah Hasil Skrining Antibodi Trombosit Total (antara yang positif dan negatif)
Terdapat  lima  kelompok  berdasarkan jumlah  paritas  atau  melahirkan  subyek penelitian  yaitu  kelompok  0  kali  sebanyak  2 dari 30 sampel, 1 kali (9 dari 30 sampel), 2 kali (4 dari 19 sampel), 3 kali (1 dari 8 sampel) dan 4  kali  melahirkan  (0  dari  3  sampel). Didapatkan  prosentase  hasil  positif  secara berurutan; 6,7%, 30%, 21.1%, 12.5% dan 0% sampel positif. (Gambar 2)

## Gambar 2. Hasil Prosentase Hasil Skrining Antibodi Trombosit Berdasarkan Jumlah
Melahirkan.
Waktu  melahirkan  anak  terakhir  dan waktu  pengambilan  sampel  dicatat  sehingga dapat  diketahui  jarak  atau  lama  tahun  dari melahirkan  terakhir  sampai  pengambilan sampel penelitian.
Gambar 3. Hasil Skrining Antibodi Trombosit berdasarkan jarak melahirkan terakhir sampai waktu dilakukan penelitian.
16 74 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Terdapat Antibodi Anti-Trombosit Tidak Terdapat Antibodi Anti-
Trombosit Hasil Srining Antibodi Anti- Trombosit 6,7 30 21,1 12,5 0 93,3 70 78,9 87,5 100 0 20 40 60 80 100 120 0x 1x 2 x 3 x 4 x Prosentase Frekuensi Melahirkan Prosentase Hasil Skrining Antibodi Trombosit Berdasarkan Frekuensi Melahirkan Negatif (%) Positif (%) 1 tahun ; 2; 14% 2 tahun ;
1; 7%
3 tahun ; 5; 36% 4 tahun ; 1; 7% 7 tahun ; 1; 7% 9 tahun ; 1; 7% ≥10 tahun ; 3; 22%

## JARAK DARI TERAKHIR
MELAHIRKAN-PENGAMBILAN
SAMPEL
Deteksi antibodi anti- human leukocyte antigen (HLA) kelas I pada donor darah wanita Eti Herani 1 *, Ni Ken Ritchie 2, Heri Wibowo 3 P-ISSN 2252-3413, E-ISSN 2548-6268
Gambar 4. Grafik hubungan antara interval waktu (antara pengambilan bahan uji dengan saat terakhir ibu melahirkan) dengan OD anti trombosit
Hasil  analisa  menunjukkan  bahwa terdapat  hubungan  negatif  yang  signifikan antara  interval  waktu  (antara  pengambilan bahan uji dengan saat terakhir ibu melahirkan) dengan OD anti trombosit (Spearman Rho, r= -0,27,  p=0,01).  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa semakin lama interval waktu (antara pengambilan  bahan  uji  dengan  saat  terakhir ibu melahirkan) kadar OD anti trombosit pada ibu semakin menurun.
Sampel yang positif antibodi trombosit dilanjutkan  diperiksa  dengan  metode  MAIPA untuk  mengetahui  apakah  sampel  tersebut memiliki  antibodi  anti-HLA  kelas  I.  Hasil pemeriksaan  MAIPA  pada  16  sampel  yang positif antibodi anti-trombosit tidak didapatkan antibodi anti-HLA kelas I.
Pada  permukaan  membran  trombosit terdapat  glikoprotein  yang  berperan  sebagai reseptor  dalam  fungsi  hemostasis.  Enam glikoprotein  terdapat  pada  permukaannya, yaitu GPIIb, GPIIIa, GPIbα, GPIbβ, GPIa dan CD109. Terdapat 33 HPA diekspresikan pada
enam  glikoprotein  trombosit  yang  berbeda tersebut.  Dari  33  HPA  tersebut,  dua  belas antigen dikelompokkan menjadi enam kelompok  bialel,  meliputi:  HPA-1,  HPA-2,
HPA-3, HPA-4, HPA-5 dan HPA-15. Penamaan berdasarkan pada urutan penemuannya,  dengan  antigen  frekuensi tinggi  yang  diberi  nama  'a'  dan  antigen frekuensi  rendah diberi  nama  'b'.  Disebutkan juga bahwa setiap trombosit
mengekspresikan  molekul  HLA  kelas  satu sekitar 20.000 molekul. 13 Selain mengekspresikan  HPA  dan  HLA  kelas  I, terdapat  juga  antigen  golongan  darah termasuk ABO dipermukaan trombosit. 14-16
Skrining  antibodi  trombosit  metode whole blood ELISA dilakukan untuk mendeteksi  antibodi  trombosit  yaitu  antibodi anti-HLA  kelas  I  dan  antibodi  anti-HPA. 12
Antibodi ABO tidak dideteksi pada metode ini karena  trombosit  yang  digunakan  adalah trombosit  yang  bergolongan  darah  O. 12,17,18 yang tidak memiliki antigen ABO di permukaan membrannya. 14 Hasil penelitian ini menemukan  ada  16/90  (17.79%)  sampel positif  antibodi  trombosit  (gambar  1)  dengan perincian  2  sampel  dari  wanita  yang  belum pernah  hamil  dan  14  sampel  berasal  dari wanita yang pernah hamil  dan melahirkan ≥1 (gambar  2).  Jadi  apabila  skrining  antibodi metode whole blood menunjukkan hasil positif berarti  antibodi  yang  terdeteksi  adalah antibodi  anti  HLA  kelas  I  dan  antibodi  anti- HPA.
Pada penelitian ini ditemukan prosentase  30%  pada  kelompok  satu  kali
Media Ilmu Kesehatan Vol. 11, No. 2, Agustus 2022 https://doi.org/10.30989/mik.v11i2.673
melahirkan,  21,1%  pada  kelompok  2  kali melahirkan,  12%  pada  kelompok  3  kali melahirkan  dan  0%  pada  kelompok  4  kali melahirkan  (gambar  2).  Berbeda  dengan penelitian Triulzi et al . dan Powers et al. yang menemukan  kecenderungan  peningkatan prevalensi  antibodi  anti-HLA  kelas  I  seiring peningkatan  jumlah  melahirkan,  terutama pada kelompok paritas 1 dan 2 kali. 19,20 Hal ini terjadi  mungkin  dikarenakan  hasil  positif antibodi  trombosit  bukan  antibodi  anti-HLA kelas I tetapi diduga antibodi anti-HPA.
Antibodi  hasil  aloimunisasi  karena kehamilan  dapat  bertahan  bertahun-tahun bahkan  sampai  puluhan  tahun. 21-23 Hal  ini sesuai dengan hasil penelitian yang menemukan  adanya  sampel  antibodi  anti trombosi positif 3/14 (22%) pada sampel yang memiliki  jarak  13,  14  dan  17  tahun  sejak terakhir melahirkan (gambar 3). Pada sisi lain antibodi  dari  waktu  ke  waktu  berangsur- angsur akan menurun dan menghilang. 1,21 Hal ini  sesuai  dengan  penelitian  ini  yang menunjukkan  bahwa  terdapat  hubungan negatif  yang  signifikan  antara  interval  waktu (antara  pengambilan  bahan  uji  dengan  saat terakhir  ibu  melahirkan)  dengan    OD  anti trombosit ( Spearman Rho, r= -0,27, p=0,01). Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  semakin  lama interval waktu (antara pengambilan bahan uji dengan  saat  terakhir  ibu  melahirkan)  kadar OD anti trombosit pada ibu semakin menurun (gambar 4).
Proses identifikasi dilanjutkan pada 16 sampel positif antibodi anti-trombosit tersebut
untuk  diketahui  adanya  antibodi  anti-HLA kelas I dengan metode MAIPA.
Methode MAIPA adalah metode pemeriksaan  antibodi  indirek  atau  secara tidak langsung untuk mendeteksi antibodi anti- HPA  dan  anti-HLA  kelas  I  sesuai  dengan antibodi monoklonal yang digunakan. Metode ini  spesifik  hanya  mendeteksi  antibodi  anti- HLA  kelas  I  saja  karena  menggunakan antibodi monoclonal  β2 Microglobulin yang spesifik  terhadap  antigen  HLA  kelas  I. 16
Metode MAIPA ini dalam pengikatan antibodi (baik  manusia  dan  tikus)  untuk  masing- masing  antigen  pada  membran  trombosit berlangsung dalam kondisi konformasi antigen  relatif  masih  asli.  Ini  mencegah sensitivitasnya  menurun  karena  hilangnya epitop  yang  penting  secara  klinis  dan mengurangi  timbulnya  positif  palsu  karena pembentukan  neoepitop  yang  tidak  relevan secara  klinis.  MAIPA  adalah  teknik  rujukan standar  emas  dalam  imunologi  trombosit. 17
Metode ini digunakan dengan harapan dapat mendeteksi antibodi anti-HLA kelas I dengan valid.
Validitas  dari  pemeriksaan  ini  dapat dilihat  dari  kualitas  reagen  yang  digunakan, yang dapat dilihat dari hasil kontrol positif dan negatif  yang  masuk range .  Penelitian  yang dilakukan oleh peneliti hasil OD kontrol positif adalah 0,92 pada range 3 positif 0.801-1.200, sedang  kontrol  negatif  0,008  yang  masuk range  negatif  <0.150.  Perlakuan  terhadap sampel  juga  dapat  mempengaruhi  kualitas hasil,  apabila  perlakuan  sampel  sebelum dilakukan pemeriksaan tidak sesuai prosedur
maka dapat menyebabkan antibodi anti –HLA tidak  terdeteksi.  Dalam  hal  ini  perlakuan peneliti  terhadap  sampel  sudah  sesuai prosedur  dengan  menyimpan  serum  dalam keadaan  beku  dibawah  -20 0 C  sebelum dilakukan  pemeriksaan. 24 Dari  sini  dapat disimpulkan  bahwa  kondisi  reagen  dan sampel dalam keadaan baik.
Hasil  identifikasi  antibodi  anti-HLA kelas I pada 16 donor wanita yang positif pada pemeriksaan skrining antibodi dengan metode whole blood ELISA tidak didapatkan antibodi anti-HLA kelas I setelah diidentifikasi dengan metode MAIPA. Hal ini dapat terjadi mungkin karena sampel tersebut mengandung antibodi anti-HPA, 25 (perlu  penelitian  lebih  lanjut) karena skrining dengan metode ini menggunakan  trombosit  golongan  darah  O yang  di  permukaan  membrannya  terdapat antigen HPA dan HLA kelas I. 24,26
Dugaan tersebut berdasarkan beberapa  jurnal,  bahwa  paparan  antigen paternal  dari  ayah  yang  dibawa  janin  pada kehamilan selain dapat menginduksi terjadinya antibodi anti-HLA kelas I, juga dapat menginduksi  terjadinya  antibodi  anti-HPA pada ibu. 23,25,27 Yang et al. melaporkan bahwa dari  44  wanita  yang  pernah  hamil  dan melahirkan  dideteksi  dengan  metode  ELISA ditemukan  antibodi  anti-HLA  kelas  I  pada  7 (15,9%) sampel dan 5 (11,4%) sampel dengan antibodi  anti-HPA  pada  serum  wanita  yang diambil pada 28-26 minggu kehamilan atau 24 jam  setelah  melahirkan. 25 Jeremiah et  al. melaporkan  bahwa  pada  wanita  hamil  di Nigeria ditemukan antibodi spesifik
glikoprotein  trombosit  60/144  (41,7%)  dan memiliki antibodi HLA kelas 1 27/144 (18,8%). Prosentase  setiap  subkelompok  antibodi trombosit adalah: anti-HPA-1a,-3a,-4a (4,2%), anti-HPA-1b,-3b,-4a  (4,2%),  anti-HPA-30  5a dan  anti-GP  Ib/IX  (masing-masing  12,5%), anti-HPA-5b (8,3%) dan anti-GP IV (6,3%).Metode yang digunakan adalah metode  ELISA. 27 Schnait et  al. juga melaporkan  bahwa  dari  500  serum  donor wanita  yang  pernah  hamil  ditemukan  21 (4,2%)  sampel  positif  antibodi  anti  trombosit (HPA 1,3,5) ; anti-HPA-1a empat sampel, anti- HPA-5a  satu  sampel  dan  anti-HPA-5b  enam belas  sampel.  Metode  pemeriksaan  yang digunakan  adalah  metode  MAIPA  dan didapatkan  bahwa  setelah  30  tahun  setelah melahirkan,  antibodi  ini  masih  ditemukan. 23
Berdasarkan hal ini maka kemungkinan hasil positif 14 donor wanita yang pernah hamil dan melahirkan pada pemeriksaan skrining antibodi adalah antibodi anti-HPA.
Menurut  Van  Kampen et  al. bahwa antibodi anti HLA kelas I yang diinduksi karena kehamilan  ini  dapat  bertahan  bertahun- tahun 21 bahkan  dalam  laporannya  dalam jurnal lainnya Kampen et al .  antibodi bertahan sampai 10 tahun setelah melahirkan. 22 Triulzi et  al .  juga  menyatakan  bahwa  antibodi  anti- HLA  kelas  I  dapat  bertahan  pada  wanita dengan  riwayat  melahirkan  sampai  lebih  30 tahun.  Alasan  persistensi  jangka  panjang antibodi  ini  pada  tingkat  yang  agak  lebih rendah  tidak  diketahui,  tetapi  mungkin berhubungan  dengan  adanya microchimeric sel  janin  yang  persisten  pada  ibu  sehingga
Media Ilmu Kesehatan Vol. 11, No. 2, Agustus 2022 https://doi.org/10.30989/mik.v11i2.673
mempertahankan  tingkat  alloantibodi  dan karenanya dapat dideteksi. 19,28,29
Kampen et  al. melaporkan  bahwa sebagian  sampel  penelitian  sudah  tidak menunjukkan adanya antibodi anti-HLA kelas I  setelah  1-2  tahun. 21 Seluruh  sampel  donor yang pernah hamil dan melahirkan yang diteliti oleh peneliti memiliki jarak lebih dari 1 tahun (gambar 3) sejak terakhir melahirkan dengan waktu pengambilan sampel. Suciu Foca et al. menyatakan  bahwa  ada  auto  antibodi  yang dihasilkan oleh wanita yang pernah hamil dan melahirkan, yang menjadi penyebab berkurangnya  atau  menghilangnya  antibodi anti  HLA  kelas  I. 30 Hal  ini  dapat  digunakan untuk menjelaskan tidak ditemukannya antibodi anti-HLA kelas I pada sampel donor wanita  yang  pernah  hamil  dan  melahirkan pada penelitian ini.
Menurut  Dankers et  al. bahwa mekanisme dibalik terbentuknya antibodi anti- HLA  kelas  I  kemungkinan  tergantung  pada kombinasi  fenotipe  HLA  anak  dan  ibu.  HLA- A3, HLA-A32, dan HLA-B21 yang diekspresikan ibu, lebih memberikan insidensi alloantibodi  sedangkan  HLA-B13  dan  HLA- B17  yang  diekspresikan  ibu  menyebabkan alloantibodi yang jauh lebih rendah dibandingkan  dengan  antigen  HLA  lainnya yang diekspresikan ibu. Ketidakcocokan HLA- A2  atau  HLA-B5  pada  anak  menginduksi alloantibodi  secara  signifikan  lebih  sering sedangkan anak dengan HLA-A30, -A31 atau -A33  dan  HLA-A28  menginduksi  alloantibodi secara signifikan lebih jarang dari pada anak- anak  dengan  ketidakcocokan  kelas  I  HLA
lainnya. 31 Berdasarkan  penelitian  ini  ada kemungkinan  subjek  yang  diteliti  dalam penelitian  ini  mengekspresikan  HLA  yang rendah imunogenitasnya demikian juga fenotip  HLA  anaknya  sehingga  antibodi  anti- HLA  yang  terbentuk  sangat  rendah  dan mungkin sudah hilang pada saat diperiksa.
Hal  anomali  dijumpai  pada  penelitian ini yaitu terdapat 2 sampel wanita yang belum pernah  hamil  akan  tetapi  skrining  antibodi menunjukkan hasil positif.  (gambar 2) Hal ini diduga karena adanya antibodi lain yang tidak diinduksi  karena  kehamilan  yang  bereaksi silang  atau cross  reaction dengan  antigen trombosit pada permukaan trombosit.
Antibodi trombosit yang diduga antibodi  anti-HPA  pada  individu-individu  ini dapat  secara  otomatis  terjadi  autoantibodi karena  alloantibodi  yang  terkait  dengan kejadian imunisasi potensial seperti vaksinasi, antibodi reaksi silang terhadap antigen bakteri atau  virus  patogen  yang  membawa  elemen yang  mirip  dalam  urutan  atau  struktur  asam amino dengan self antigen sehingga patogen bertindak  sebagai self  mimic disebut  mimikri molekuler. 32
Mimikri  molekuler  adalah  salah  satu mekanisme  utama  di  mana  agen  infeksius atau kimia dapat menginduksi autoimunitas. 32
Sebagian  besar  hipotesis  menunjukkan mimikri  molekuler  antara  salah  satu  antigen permukaan Helicobacter pylori dan glikoprotein  trombosit  yang  menyebabkan produksi  autoantibodi  yang  bereaksi  silang terhadap  berbagai  antigen  glikoprotein  (GP IIb/IIIa, GP Ib/IX, dan GP Ia/IIa) yang terdapat
pada  membran  trombosit. 32-34 Prevalensi  H.
Pylori cukup tinggi dinegara berkembang dan diketahui  mempengaruhi  lebih  dari  50% populasi  dunia  baik  secara  klinis  maupun tanpa  gejala, 32 di  Indonesia  prevalensinya sebesar  22,1%  dan  di  Jakarta  prevalensinya menurut  berbagai  penelitian  bervariasi  dari 2,9-68%. 35
Cines et  al. menyatakan  bahwa antibodi dapat terbentuk karena infeksi bakteri dan  virus  yaitu  bakteri Helicobacter  pylori, Hepatitis  C  virus (HCV), cytomegalovirus (CMV), varicella  zoster virus (VZV), human immunodeficiency virus (HIV). 36
Vaksinasi  juga  dapat  menginduksi terjadinya antibody trombosit. Antibodi terhadap  GP  IIb/IIIa  juga  telah  diidentifikasi pada  beberapa  subjek  setelah  vaksinasi measles-mums-rubela (MMR). 36 Al-Samkari et  al .  melaporkan  adanya  autoantibodi trombosit  terhadap  glikoprotein  trombosit IIb/IIIa, GP Ib/IX dan GP Ia/IIa yang diperiksa dengan  metode  ELISA  setelah  vaksinasi dengan  vaksin  vektor  adenoviral  COVID  19 (Ad26.Cov2.s; Johnson & Johnson). 37
Immune  thrombocytopenic  purpura (ITP)  ada  keterkaitan  sebagai  komplikasi penting dari COVID-19. 38-42 Ada tiga mekanisme  yang  mungkin  terjadi  pada  ITP berkaitan  dengan  infeksi  COVID  19  yaitu penurunan  produksi,  peningkatan  konsumsi dan  terbentuknya  autoantibodi  dan  komplek imun dengan antigen trombosit yang menyebabkan dekstruksi trombosit. 39,43
Autoantibodi  yang  terbentuk  diduga  karena mekanisme mimikri molekuler.
Sampel yang diperiksa sudah diskrining  terhadap  penyakit  menular  lewat transfusi darah (HIV, HCV dan HBV) dengan hasilnya  nonreaktif  sehingga  disimpulkan bahwa  sampel  positif  anti  trombosit  pada donor wanita yang belum pernah hamil bukan karena  infeksi  virus  tersebut.  Pada  data persetujuan  donor,  subjek  penelitian  juga tidak melakukan vaksinasi sebelumnya. Oleh karena itu, dugaan sementara bahwa sampel donor  positif  pada  dua  wanita  yang  belum pernah  hamil  mungkin  mengandung  antibodi terhadap bakteri atau virus lain yang bereaksi silang  dengan  antigen  trombosit  pada permukaan trombosit. Namun demikian dugaan  ini  perlu  pembuktian  dan  penelitian lebih lanjut.
Kelebihan  dari  penelitian  ini  adalah bahwa  penelitian  terhadap  antibodi  anti-HLA kelas  I  pada  pedonor  wanita  di  Indonesia masih  sedikit.  Penelitian  yang  pernah dilakukan adalah penelitian antibodi anti-HLA pada  pasien  yang  menerima  transfusi berulang  oleh  Ritchie  2015.  Keterbatasan penelitian ini adalah tidak dilakukan pemeriksaan  dengan  antibodi  monoklonal terhadap  antigen  HPA,  sampel  yang  sedikit, tidak  dilakukan  typing  HLA  fenotip  anak  dan ibu dan tidak ada konfirmasi sebagian infeksi bakteri dan virus mimikri molekuler sebelumnya.

## KESIMPULAN
Terdapat antibodi anti trombosit pada 16 sampel tetapi setelah diidentifikasi adanya antibodi  anti-HLA  kelas  I,  tidak  ditemukan
Media Ilmu Kesehatan Vol. 11, No. 2, Agustus 2022 https://doi.org/10.30989/mik.v11i2.673
antibodi  anti-HLA  kelas  I  pada  sampel tersebut.  Peneliti  yang  tertarik  melakukan riset lebih lanjut hendaknya meneliti pada 16 sampel positif antibodi anti-trombosit terhadap keberadaan antibodi anti-HPA.

## TERIMA KASIH
Unit Transfusi Darah Palang Merah Indonesia Daerah  Khusus  Ibukota  Jakarta.  Jl.  Kramat Raya  RT.  3  RW.  4,  Kramat,  Senen,  Jakarta Pusat, DKI Jakarta.

## KEPUSTAKAAN
1. Abbas AK, Lichtman AH, Pillai. S. Basic Immunology  Functions  and  Disorders the Immune system. 5th ed. St. Louis: Elsevier; 2014.
2. Dahl  J.  Maternal  Anti-HLA  Class  I
Antibodies in Connection with Pregnancy and Neonatal Thrombocytopenia –  A  Cause  for Concern?  UiT.  University  Of  Norway;
2017.
3. Lee J, Romero R, Xu Y, Miranda J, Yoo
W,  Chaemsaithong  P,  Kusanovic  JP,
Chaiworapongsa T, Tarca AL,
Korzeniewski SJN Hassan SS, Gabor T KC. Detection of anti-HLA antibodies in maternal blood in the second trimester to identify patients at risk for antibody- mediated  maternal  anti-fetal  rejection and spontaneous preterm delivery. NIH Public Access. 2013;70(2):162 –75.
4. Jeremiah  ZA,  Oburu  JE,  Buseri  FI, Harcourt P. Alloantibodies to HLA Class 1  Antigens  Detected  in  Multiparous Women  of  African  Descent  Are
Significantly Associated with Age , ABO /  Rh  Blood  Groups  and  Parity.  Am  J Biomed Sci. 2010;2(3):289 –94.
5. Weinstock  C,  Schnaidt  M.  Human Leucocyte Antigen Sensitisation and Its
Impact on Transfusion Practice. Transfus Med Hemotherapy. 2019;46(5):356 –68. 6. De  Clippel  D,  Baeten  M,  Torfs  A, Emonds MP, Feys HB, Compernolle V, et  al.  Screening  for  HLA  antibodies  in
plateletpheresis donors with a history of transfusion or pregnancy. Transfusion. 2014;54(12):3036 –42.
7. Imoto  S,  Kawamura  K,  Tokumine  Y,
Araki  N,  Akita  S,  Nishimura  C,  et  al.
Acute non-hemolytic transfusion reactions  and  HLA  class I  antibody : advantages  of  solid  phase  assay compared with conventional complement-dependent assay. 2019;95 –103. 8. Peters  AL,  Van  Stein  D,  Vlaar  APJ.
Antibody-mediated  transfusion-related acute  lung  injury;  from  discovery  to prevention. Br J Haematol. 2015;170(5):597 –614. 9. Association  Bulletin  #14-02.  TRALI Risk  Mitigation  for  Plasma  and  Whole Blood for Allogeneic Transfusion. AABB [Internet]. 2014; Available from: https://www.aabb.org/programs/publica tions/bulletins/documents/ab14-02.pdf 10. Otrock  ZK,  Liu  C,  Grossman  BJ. Transfusion-related  acute  lung  injury risk mitigation : an update. VoxSanguin. 2017;694 –703.
11. UTD  PMI  PUSAT.  Laporan  Tahunan UTD  PMI  Pusat  Jakarta.pdf.  Jakarta: UTD PMI Pusat; 2019.
12. Ritchie  NK.  Antibodi  Anti-HLA  Kelas  1 pada Serum Resipien Transfusi Darah Berulang sebagai Penyebab Inkompatibilitas Trombosit Pre- Transfusi. 2015.
13. Curtis  BR,  Mcfarland  JG.  Human platelet  antigens  -  2013.  Vox  Sang. 2014;106(2):93 –102.
14. Fung  MK,  Grossman  BJ,  Hillyer  CD, Wethoff. CM. AABB Technical manual. 19, editor. 2014. 243 –244 p.
15. Denise  M.  Harmening.  Modern  Blood Banking and Transfusion Practices. 5th ed. Philadelphia; 2001.
16. Heikal  NM,  Smock  KJ.  Laboratory testing  for  platelet  antibodies.  Am  J Hematol. 2013;88(9):818 –21.
17. Kaplan  C,  Freedman  J,  Foxcroft  Z, Husebekk A, Metcalfe P, Muniz-Diaz E, Ouwehand  W,  Panzer  S,  Rozman  P SB. Monoclonal platelet antigen capture assays (MAIPA) and reagents: A statement. Vox Sang. 2007;93(4):298 –9. 18. Curtis BR. Practical Transfusion
Medicine;  Platelet  and  Neutrophil Antigens. 5th ed. Practical Transfusion Medicine. John Wiley & Sons Ltd; 2017. 43 –52 p.
19. Triulzi  DJ,  Kleinman  S,  Kakaiya  RM, Busch MP, Norris PJ, Steele WR, et al.
The Effect  of  Previous  Pregnancy and Transfusion  on  HLA  Alloimmunization in  Blood  Donors:  Implications  for  a Transfusion Related Acute Lung Injury (TRALI)  Risk  Reduction  Strategy.  NIH Public Access. 2010;49(9):1825 –35.
20. Powers  A,  Stowell  CP,  Dzik  WH, Saidman SL, Lee H, Makar RS. Testing only  donors  with  a  prior  history  of pregnancy  or  transfusion  is  a  logical and  cost-effective  transfusion-related acute  lung  injury  prevention  strategy. Transfusion. 2008;48(12):2549 –58.
21. Kampen  CA  V,  Maarschalk  MFVV, Langerak-Langerak  J,  Roelen  DL,
Claas  FHJ.  Kinetics  of  the  pregnancy- induced  humoral  and  cellular  immune response  against  the  paternal  HLA class  I  antigens  of  the  child.  Hum Immunol. 2002;63(6):452 –8.
22. Kampen  CA  V,  Maarschalk  MFJVDV, Langerak-langerak  J,  Beelen  E  Van, Roelen DL, Claas FHJ. Pregnancy Can Induce  Long-Persisting  Primed  CTLs
Specific  for  Inherited  Paternal  HLA Antigens. 2001;8859(01).
23. Schnaidt M, Wernet D. Platelet-specific antibodies in female blood donors after pregnancy. Transfus Med. 2000;10(1):77 –80.
24. Kiefel V, Santoso S, Weisheit M  et al. Monoclonal  antibody-specific  immo- bilization  of  platelet  antigens  (MAIPA): a  new  tool  for  the  identification  of platelet-reactive  antibodies  Kiefel  V,
Santoso  S,  Weisheit  M,  et  al. Monoclonal  antibody-specific  immo- bilization  of  platelet  antigens  (MAIPA. 1987;
25. Yang  WH,  Cheng  CS,  Chang  JB,  Liu KT,  Chang  JL.  Antibody  formation  in pregnant women with maternal- neonatal human platelet antigen mismatch  from  a  hospital  in  northern Taiwan. Kaohsiung J Med Sci [Internet]. 2014;30(1):25 –8. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.kjms.2013.0 7.005 26. Wang  E,  Adams  S,  Marincola  FM, Stroncek  DF.  Blood  Banking  And Transfusion Medicine. Human Leukocyte  and  Granulocyte  Antigens and  Antibodies:  The  HLA  and  HNA Systems. second edi. 2007. 129 –156 p. 27. Jeremiah  ZA,  Atiegoba  AI,  Mgbere  O. Alloantibodies to human platelet glycoprotein  antigens  (HPA)  and  HLA class  1  in  a  cross  section  of  Nigerian antenatal  women.  Hum  Antibodies. 2011;20(3 –4):71–5.
28. Nelson  JL.  The  otherness  of  self: Microchimerism in health and disease. Trends Immunol. 2012;33(8):421 –7. 29. Maloney S, Smith A, Furst DE, Myerson D,  Rupert  K,  Evans  PC,  et  al. Microchimerism  of  maternal  origin persists  into  adult  life.  J  Clin  Invest. 1999;104(1):41 –7.
30. Suciu-Foca  N,  Reed  E,  Rohowsky  C, Kung  P,  King  DW.  Anti-idiotypic antibodies to anti-HLA receptors induced by pregnancy. Proc Natl Acad Sci U S A. 1983;80(3 I):830 –4.
31. Dankers  MKA,  Roelen  DL,  Korfage  N, De Lange P, Witvliet M, Sandkuijl L, et al. Differential immunogenicity of paternal  HLA  class  I  antigens  in pregnant women. Hum Immunol. 2003;64(6):600 –6.
32. Ihtesham  A,  Maqbool  S,  Nadeem  M, Janjua  MBA,  Sundus  O, Naqqash  AB, et  al.  Helicobacter  pylori  induced immune thrombocytopenic purpura and perspective  role  of  helicobacter  pylori eradication therapy for treating immune thrombocytopenic purpura. AIMS Microbiol. 2021;7(3):284 –303.
33. Ercolini  AM,  Miller  SD.  The  role  of infections in autoimmune disease. Clin Exp Immunol. 2009;155(1):1 –15.
34. Hasni  SA.  Role  of  helicobacter  pylori infection in autoimmune diseases. Curr Opin Rheumatol. 2012;24(4):429 –34. 35. Syam AF, Miftahussurur M, Makmun D, Nusi  IA,  Zain  LH,  Zulkhairi,  et  al.  Risk factors and prevalence of Helicobacter pylori  in  five  largest  islands  of Indonesia:  A  preliminary  study.  PLoS One. 2015;10(11):1 –14.
36. Cines  DB,  Bussel  JB,  Liebman  HA, Luning  Prak  ET.  The  ITP  syndrome: Pathogenic and clinical diversity. Blood.
Media Ilmu Kesehatan Vol. 11, No. 2, Agustus 2022 https://doi.org/10.30989/mik.v11i2.673
2009;113(26):6511 –21.
37. Al-Samkari  H,  Leaf  RK,  Goodarzi  K.
Transient Thrombocytopenia With Glycoprotein-Specific Platelet Autoantibodies  After  Ad26.COV2.S Vaccination: A Case Report. Ann Intern Med. 2021;174(11):1632 –3.
38. Bhattacharjee  S,  Banerjee  M.  Immune Thrombocytopenia Secondary to COVID-19:  a  Systematic  Review.  SN Compr Clin Med. 2020;2(11):2048 –58.
39. Xu  P,  Zhou  Q,  Xu  J.  Mechanism  of thrombocytopenia in COVID-19 patients. Ann Hematol. 2020;99(6):1205 –8. 40. Deruelle  E,  Ben  Hadj  Salem  O,  Sep Hieng S, Pichereau C, Outin H, Jamme
M.  Immune  thrombocytopenia  in  a patient  with  COVID-19.  Int  J  Hematol [Internet]. 2020;112(6):883 –8. Available from: https://doi.org/10.1007/s12185-020- 02943-5
41. Bomhof  G,  Mutsaers  PGNJ,  Leebeek FWG,  te  Boekhorst  PAW,  Hofland  J,
Croles FN, et al. COVID-19-associated immune thrombocytopenia. Br J Haematol. 2020;190(2):e61 –4. 42. Ashraf  S,  Alsharedi  M.  COVID-19 induced  immune  thrombocytopenic purpura:  case  report.  Stem  Cell Investig. 2021;8:14 –14.
43. Johnsen  J.  Pathogenesis  in  immune thrombocytopenia : new insights [Internet]. American Society of Hematology; 2012. 306 –312 p. Available from: https://sci- hub.wf/10.1182/asheducation- 2012.1.306