Desember 2023, Vol. 10 No. 2: 52 – 59
pISSN : 2355-9942, eISSN:2656-792X
Terakreditasi Nasional, Dirjen Pendidikan Tinggi, Riset, dan Teknologi
Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Riset dan Teknologi RI
S.K. No. 105/E/KPT/2022 Received: 24 Mei 2023, Accepted: 28 Desember 2023 Published online: 30 Desember 2023 Doi: https://doi.org/10.35508/nukleus.v10i2.11176
https://ejurnal.undana.ac.id/index.php/nukleus/article/view/11176

## KUALITAS SEMEN BEKU SAPI BALI PASCA THAWING DALAM WAKTU BERBEDA
(Quality of Bali Bull Frozen Semen Post Thawing in Differents Times)
Fafandri 1 , N. L. G. Sumardani 2 , I. W. Suberata 2
1 Program Studi Peternakan, Fakultas Peternakan, Universitas Udayana
2 Lab Reproduksi Ternak, Fakultas Peternakan, Universitas Udayana , Jln. Raya Bukit Jimbaran, Kuta Selatan, Badung, Bali, Indonesia, 80361
* Correspondent author, email: nlg_sumardani@unud.ac.id

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kualitas  semen  beku  sapi  bali  pasca  thawing  dalam  waktu  berbeda. Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Reproduksi  Ternak  Fakultas  Peternakan  Universitas  Udayana,  Bukit Jimbaran,  Provinsi  bali  selama  satu  bulan.  Rancangan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  tiga  perlakuan  dan  lima  ulangan.  Perlakuan  terdiri  atas  semen  beku  yang  di thawing pada suhu 37ºC selama 15 detik (P1), 30 detik (P2), dan 60 detik (P3). Variabel yang diamati meliputi motilitas  spermatozoa,  viabilitas  spermatozoa,  dan  abnormalitas  spermatozoa.  Hasil  penelitian  menunjukan bahwa kualitas semen beku sapi bali pasca thawing dalam waktu berbeda P1 (15 detik), P2 (30 detik), dan P3 (60 detik) tidak berbeda nyata (P> 0,05). Adapun waktu thawing terbaik yaitu thawing pada suhu 37ºC selama 60 detik (P3) dengan motilitas spermatozoa mencapai 71,00±2,00%, viabilitas spermatozoa 56,07±1,69%, dan abnormalitas  spermatozoa  1,97±0,47%.  Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  semen  beku  sapi  bali  dapat  di thawing pada suhu 37ºC selama 60 detik.
Kata-kata kunci: semen beku, sapi bali, waktu thawing, kualitas semen beku

## ABSTRACT
The  aim  of  this  research  was  to  know  quality  of  bali  bull  frozen  semen  post  thawing  in  defferent  times.  The research  was  conducted  in Livestock  Reproduction  Laboratory of  the  Faculty of  Animal  Husbandry,  Udayana University, Bukit Jimbaran, bali Province in one months. The treatment of this research are T 1 (thawing in 15 seconds),  T  2  (thawing  in  30  seconds),  and  T3  (thawing  in  60  seconds)  on  temperatur  37oC.  The  data  of research  was  sperm  motility,  sperm  viability,  and  sperm  abnormality.  Result  of  this  research  showed  that  the quality of bali bull frozen semen post thawing in defferent times that 15 second (T 1), 30 second (T 2), and 60 second  (T  3)  did  not  significantly  (P>  0.05).  The  best  thawing  is  at  T3  treatment  with  sperm  motility 71.00±2.00%, sperm viability 56.07±1.69%, and sperm abnormality 1.97±0.47%. The conclusion of this study is the bali bull frozen semen can be thawed at temperature 37oC in 60 seconds.
Keywords: frozen semen, bali bull, thawing, quality of frozen semen

## PENDAHULUAN
Sapi bali ( Bos sundaicus ) merupakan hasil domestikasi  dari  banteng  ( Bos  javanicus ), populasinya  mewakili  sekitar  27%  dari  total populasi  sapi  di  Indonesia  yang  habitat  aslinya di  Pulau  Bali  (Suwiti et  al. , 2017).  Sapi  bali memiliki  beberapa  keunggulan  karakteristik yaitu  memiliki  daya  adaptasi  tinggi  terhadap lingkungan yang kurang baik, dapat memanfaatkan  pakan  dengan  kualitas  rendah, mempunyai  tingkat  fertilitas  tinggi  (80-82%), produksi  karkas  yang  tinggi,  heterosis  positif tinggi  pada  persilangan  dan  memiliki  daging
berkualitas  baik  dengan  kadar  lemak  rendah (Zulkharnaim et  al., 2010).  Keunggulan- keunggulan ini harus didorong dengan kemajuan teknologi  khususnya  teknologi  reproduksi  agar dapat meningkatkan efisiensi reproduksi ternak.
Sapi bali juga memiliki performa produksi yang cukup bervariasi dan kemampuan reproduksi yang tetap tinggi, sehingga, sumberdaya  genetik  sapi  bali  merupakan  salah satu  aset  nasional  yang  merupakan  plasma nutfah  yang  perlu  dipertahankan  keberadaannya dan  dimanfaatkan  secara  lestari  sebab  memiliki
keunggulan  yang  spesifik.  Salah  satu  upaya untuk  melestarikan  ternak  lokal  adalah  melalui peningkatan populasi ternak dengan pemanfaatan  teknologi  inseminasi b uatan  IB) (Zulyazaini et  al., 2016).  Menurut  Udin  (2012) IB  merupakan  salah  satu  teknologi  yang  dapat memberikan peluang bagi pejantan unggul untuk menyebarluaskan keturunannya secara maksimal,  dimana  penggunaan  pejantan  pada kawin  alam  terbatas  dalam  meningkatkan populasi  ternak,  karena  setiap  ejakulasi  dapat membuahi seekor betina. Dijelaskan lebih lanjut bahwa, tingkat keberhasilan IB sangat dipengaruhi  oleh  empat  faktor  yang  saling berhubungan  yaitu  kualitas  semen,  pemilihan sapi  betina  akseptor,  akurasi  deteksi  birahi,  dan keterampilan inseminator (Susilawati, 2013).
Namun, dalam beberapa kasus dilapangan, terjadi gagal kebuntingan disebabkan  rendahnya  kualitas  semen  beku pasca thawing (Salim et  al., 2012).  Hal  ini disebabkan  salah  satunya handling semen  beku
yaitu  pada  saat  t hawing . Thawing dimaksudkan untuk  mencairkan  kembali  semen  beku  dengan menggunakan  media  dan  durasi  atau  waktu tertentu  sehingga  semen  dapat  dideposisikan  ke dalam  saluran  reproduksi  betina  (Arifiantini, 2012).  Kondisi  ini  menimbulkan heat  shock effect maupun kontaminasi dengan oksigen pada spermatozoa  sehingga  memengaruhi  kestabilan membran  yang  berdampak  pada  kualitas  semen beku.  Hasil  penelitian  Ansary et  al .  (2010) melaporkan  motilitas,  viabilitas  dan  integritas membran  spermatozoa  tertingi  yaitu thawing pada  air  dengan  temperatur  37ºC  selama  30 detik. Pesch dan Hoffmann (2007) menyarankan untuk  keperluan  IB  komersial  pada  sapi, sebaiknya thawing dilakukan  pada  air  dengan temperatur  37ºC  selama  20  detik  karena  lebih praktis serta semen beku tidak boleh di thawing dibawah  temperatur  15ºC.  Berdasarkan  uraian tersebut penelitian ini dilakukan untuk mengetahui kualitas semen beku sapi bali pasca thawing dalam waktu berbeda.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Materi  yang  digunakan  adalah  semen beku  sapi  bali  yang  diperoleh  dari  Balai Inseminasi Buatan (BIB) Baturiti, Provinsi Bali. Pengamatan  dilaksanakan  di  Laboratorium Reproduksi Ternak Fakultas
Peternakan
Unversitas  Udayana.  Alat-alat  yang  digunakan meliputi: container N2 cair, mikroskop binokuler, counter check, water bath, mikropipet,  eosin  2%,  objek  glass,  cover  glass, tissue,  dan  gunting.  Bahan  yang  digunakan meliputi: aquabides dan semen beku sapi Bali.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan acak  lengkap  (RAL)  dengan  tiga  perlakuan yaitu:  P1:  Thawing  dalam  temperatur  37oC selama 15 detik, P2: Thawing dalam temperatur 37oC  selama  30  detik,  dan  P3:  Thawing  dalam temperatur  37oC  selama  60  detik.  Metode thawing semen beku diawali dengan mempersiapkan waterbath dengan temperatur air mencapai  37oC,  dan  mengambil  semen  beku dengan  penjepit  (pinset)  dari  container  serta memasukkannya  ke  dalam  waterbath  selama waktu  perlakuan.  Semen  beku  di  dalam  straw dipegang  secara  vertikal,  ujung  filter  di  bawah dan  penutup  (segel)  di  atas,  kemudian  straw  di potong  pada  bagian  atas  dengan  gunting  agar gelembung  udara  di  tengah  straw  berpindah  ke
atas.  Selanjutnya  semen  diteteskan  sebanyak satu  tetes  pada  gelas  objek  kemudian  diperiksa dengan  mikroskop  untuk  mengetahui  kualitas semen pasca thawing.
Metode pewarnaan eosin digunakan untuk mengukur  viabilitas  spermatozoa  atau  rasio spermatozoa  hidup  dan  mati  (Graham,  2000). Spermatozoa yang mati mempunyai permeabilitas  membran  yang  tinggi,  sehingga akan menyerap warna yang dipaparkan. Sebaliknya  spermatozoa  yang  hidup  tidak  akan menyerap  warna.  Pewarnaan  semen  untuk melihat  rasio  spermatozoa  yang  hidup  dan  mati ini menggunakan pewarnaan eosin 2%. Prosedur untuk  menghitung  rasio  hidup  dan  mati spermatozoa  menurut  Sumardani  et  al.    (2008) dan  Arifiantini,  (2012)  sebagai  berikut:  Tiga gelas  objek  yang  bersih  dan  bebas  lemak disediakan  (dibersihkan  dengan  alkohol  dan dikeringkan  dengan  tisu),  Eosin  2%  diteteskan dicampurkan sedikit dengan semen menggunakan objek glass lainnya Perbandingan antara  larutan  pewarna  dan  semen  disesuaikan dengan karakteristik semen tersebut. Semen sapi menggunakan  perbandingan  1:4  atau  1:5, kemudian  kedua  larutan  dihomogenkan  secara cepat, lalu dibuat preparat ulas pada object glass ketiga,  dan  segera  dikeringkan  di  heating  table sampai  kering  (10-15  detik).  Penghitungan persentasi  spermatozoa  hidup  dan  mati menurut
Arifiantini (2012) yaitu: 1) Pengecekan dilakukan  dari  10  lapang  pandang  dengan jumlah  sel  minimal  >200  sel,  2)  Spermatozoa hidup  tidak  menyerap  warna,  sedangkan spermatozoa mati akan menyerap warna, dan 3) Penghitungan spermatozoa menggunakan rumus:
% Viabilitas spermatozoa= (jumlah spermatozoa  hidup)/(total  spermatozoa  yang diamati) x100
Pengamatan  abnormalitas  spermatozoa dapat  dilakukan  setelah  pengamatan  viabilitas spermatozoa  menggunakan  preparate  ulas  yang sama.  Perhitungan  persentase  abnormalitas menggunakan rumus:
%  Abnormalitas  spermatozoa=(jumlah spermatozoa  abnormal)/(total  spermatozoa  yang diamati) x100%
Pengamatan motilitas spermatozoa dilakukan untuk melihat pergerakan spermatozoa  yang  bergerak  progresif  dengan cara  meneteskan  semen  diatas  object  glass, ditutup  dengan  cover  glass,  dan  diamati  di mikroskop  dengan  pembesaran  400  kali  pada temperatur yang dijaga konstan 37°C (Susilawati, 2013).

## Analisis Statistika
Data yang diperoleh dianalisis menggunakan  analisis  Varian’s  (ANOVA), apabila  hasil  analisis  berbeda  nyata  (P<0,05) akan  diuji  lebih  lanjut  dengan  uji  Duncan’s menggunakan  program  SPSS  versi  25  tahun 2020.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengambilan  semen  sapi  bali  dilakukan dua  kali  dalam  seminggu,  pada  sapi  pejantan yang  sehat.  Sebelum  diproses  menjadi  semen beku,  semen  segar  sapi  bali  melewati  evaluasi makroskopis  (volume,  warna,  bau,  kekentalan, pH)  dan  evaluasi  mikroskopis  (motilitas  dan konsentrasi  spermatozoa),  selanjutnya  semen segar yang sesuai dengan standar dapat diproses menjadi  semen  beku  dan  disimpan  dalam container  yang  dilengkapi  dengan  nitrogen  (N 2 )
cair.  Pengamatan  kualitas semen  segar  sapi  bali pada penelitian ini tercantum dalam Tabel 1.
Volume  semen  segar  dapat  diketahui secara  langsung  sesaat  setelah  dilakukannya penampungan semen. Setelah dilakukan penampungan  maka  dengan  sigap  kolektor semen  ( master  bull )  segera  membawa  semen segar  ke  Laboratorium  dan  langsung  terbaca pada tabung semen berskala. Berdasarkan Tabel 1  dapat  dilihat  bahwa  volume  semen  segar  sapi bali yaiu, 6,6 mL berada dalam kisaran normal.
Tabel 1. Semen segar sapi bali
Kriteria Jumlah Standar* Volume semen (mL) 6,6 3,2-7,3 Warna Putih-krem putih-krem Bau khas semen sapi khas semen sapi Kekentalan (Konsistensi) kental (+++) kental (+++) pH 6,2-6,8 6,4-7,8 Motilitas Spermatozoa (%) 70 50 Kosentrasi spermatozoa (10 6 )/mL 1094 1000-2000 Sumber*: Bardan et al ., (2009); Feradis (2010); Hartanti, et al. (2012); SNI 4869.1 (2017)
Hal ini sesuai dengan pernyataan Hartanti, et  al. (2012)  yang  menyatakan  bahwa  volume semen sapi jantan muda berkisar 3,2-7,3 mL dan volume semen sapi jantan dewasa mencapai 10- 15 mL. Adapun faktor-faktor yang memengaruhi produksi  semen  sapi  antara  lain:  umur,  genetik, suhu dan musim, frekuensi ejakulasi, pakan, dan berat  badan  (Ismaya,  2014).  Hasil  penelitian Lestari, et  al. (2013)  menyatakan  bahwa  umur memberikan  pengaruh  yang  sangat  nyata
terhadap  volume  semen  segar.  Demikian  pula halnya  pada  ternak  non  ruminansia,  seperti ternak  babi,  volume  semen  dan  motilitas spermatozoa dapat dipengaruhi oleh umur ternak (Sumardani et al., 2019).
Derajat  keasaman  (pH)  semen  sapi  bali merupakan  peubah  yang  sangat  penting  dan krusial  sebagai  penentu  kehidupan  spermatozoa di  dalam  semen.  Semen  sapi  Bali  dalam penelitian  ini  (Tabel  1)  berada  pada  kisaran  pH
normal  6,2-6,8.  Semen  sapi  yang  normal menurut  Ax et  al. (2000)  mempunyai  pH berkisar  antara  6,2-7,0;  menurut  Garner  dan Hafez  (2000)  mempunyai  kisaran  pH  6,4-7,8; dan menurut Bardan et al. (2009) pH semen sapi Bali mencapai 6,2-7,5. Derajat keasaman semen sangat menentukan status kehidupan spermatozoa  di  dalam  semen.  Semakin  rendah atau  tingginya  nilai  pH  suatu  semen  dari  nilai pH  normal  akan  memungkinkan  spermatozoa lebih  cepat  mati.  Sunami et  al. (2017) berpendapat  bahwa  tinggi  rendahnya  nilai  pH semen  berkaitan  dengan  keadaan  konsentrasi spermatozoanya,  konsentrasi  spermatozoa  yang tinggi  akan  berdampak  pada  pH  semen  yang cenderung asam dalam kisaran normal, dan nilai pH  semen  dapat  berubah  menjadi  ke  arah  yang lebih  asam  karena  adanya  penimbunan  asam laktat  yang  merupakan  hasil  metabolism  sel yaitu pemecahan fruktosa.
Sesuai  dengan  pernyataan  Sundari et  al . (2013)  bahwa  terdapat  beberapa  faktor  yang mempengaruhi  nilai  pH  semen,  diantaranya adalah  adanya  aktivitas  spermatozoa  dalam menguraikan  fruktosa  sehingga  nilai  pH menurun.  Tingginya  aktivitas  yang  dilakukan oleh  spermatozoa  dalam  menguraikan  sumber energi  yang  berasal  dari  fruktosa  akan meningkatkan  produksi  asam  laktat  dalam semen  sehingga  pH  menjadi  lebih  asam. Pernyataan  ini  didukung  pula  oleh  Aisah et  al. (2017)  yang  menyatakan  bahwa  konsentrasi spermatozoa  yang  tinggi  menyebabkan  semen lebih  asam  daripada  semen  dengan  konsentrasi spermatozoa yang rendah. Spermatozoa sapi bali mempunyai pH optimum berkisar antara 5,9-7,3 (Nirwana  dan  Suparman,  2017).  Contri et  al. (2013) menyebutkan dalam penelitiannya bahwa spermatozoa pada kondisi pH rendah antara 6,0- 6,5  mempunyai  motilitas  53,3%-  60,7%.  Pada pH tinggi antara 8,0-8,5 spermatozoa mempunyai  motilitas  yang  rendah  yaitu  33,9%- 23,1%.  Spermatozoa  menunjukkan  motilitas yang  baik  pada  pH  optimumnya  yaitu  pada  pH 7,0-7,5 dengan motiltas 66,8%-71,1%, sehingga pH optimum semen sapi berada pada kisaran pH netral.
Konsentrasi spermatozoa dalam penelitian ini  (Tabel  1)  mencapai  1094  10 6 sel/mL.  Hal ini  sesuai  dengan  yang  dikemukakan  oleh Feradis  (2010),  bahwa  pada  sapi  dengan konsistensi  semen  yang  kental  dan  berwarna krem mempunyai konsentrasi 1.000 juta sampai 2.000  juta  atau  lebih  sel  spermatozoa  per  mL, konsistensi  encer  berwarna  susu  memiliki
konsentrasi  500  juta  sampai  600  juta  sel spermatozoa  per  mL,  semen  yang  cairan berawan atau sedikit keruh memiliki konsentrasi sekitar 100 sampai 50 juta spermatozoa per  mL Konsistensi  sperma  ini  berkaitan  dengan  warna sperma,  dengan  mengetahui  warna  sperma (normal)  maka  dapat  diprediksi  konsentrasi spermatozoa,  yaitu  kental  atau  warna  krem 1.000 sampai 2.000 juta spermatozoa/mL, encer atau keruh 500 sampai 900 juta spermatozoa/mL,  cair  atau  agak  keruh  100-400 juta spermatozoa/mL dan jernih kurang dari 100 juta  spermatozoa/mL  (Ismaya,  2014).  Demikian pula  menurut  Campbell et  al. (2003)  bahwa konsentrasi  spermatozoa  pada  sapi  jantan dewasa  normalnya  berkisar  antara  800-1200  10 6 sel/mL.
Motilitas  spermatozoa  adalah  daya  gerak spermatozoa yang dapat dijadikan sebagai acuan dalam  penilaian  kualitas  spermatozoa  untuk  IB. Motilitas  atau  gerak  individu  spermatozoa merupakan  penilaian  gerakan  spermatozoa secara individual, baik kecepatan atau perbandingan  antara  yang  bergerak  aktif progresif  dengan  gerakan  spermatozoa  yang lainnya,  serta  umumnya  digunakan  sebagai ukuran  kesanggupan  dalam  membuahi  ovum (Arifiantini, 2012). Pemeriksaan motilitas spermatozoa  dilakukan  dengan  menggunakan object glass yang  ditetesi  satu  tetes  semen  dan ditutup  menggunakan cover  glass .  Selanjutnya dilakukan  pemeriksaan  di  bawah  mikroskop dengan  pembesaran  400x.  Spermatozoa  yang motil akan terlihat bergerak maju ke depan.
Motilitas spermatozoa dalam semen segar sapi bali (Tabel 1) mencapai 70%. Hasil tersebut masih  layak  digunakan  untuk  IB  dan  diproses menjadi  semen  beku.  Hal  ini  sesuai  dengan pendapat  Salim et  al .  (2012)  yang  menyatakan bahwa  jumlah  spermatozoa  motil  progresif dalam  semen  cair  maupun  semen  beku menentukan  tingkat  keberhasilan  terjadinya fertilisasi.  Nilai  standar  mutu  semen  4869.1 (2017)  tercantum  bahwa  motilitas  untuk  semen segar sapi minimum 50%. Tinggi dan rendahnya persentase  motilitas  spermatozoa  di  dalam semen  dapat  dipengaruhi  oleh  suhu  dan  kondisi cairan/plasma  semen  saat  pemeriksaan.  Ismaya (2014)  dalam  penelitiannya  menjelaskan  bahwa motilitas spermatozoa dipengaruhi oleh beberapa hal yaitu: suhu dingin akan menghambat  motilitas,  sedangkan  suhu  panas meningkatkan  motilitas  spermatozoa  zat  kimia; urine dan kotoran yang mencemari semen dapat menurunkan motilitas spermatozoa; dan ejakulat
pertama  sesudah  istirahat  lama  umumnya banyak sel spermatozoa yang mati.
Penggunaan  semen  beku  dalam  program IB dapat dipengaruhi oleh keterampilan
inseminator dalam melaksanakan proses thawing semen  beku.  Hasil  pengamatan  kualitas  semen beku  sapi  bali  pasca thawing dalam  waktu berbeda, disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Kualitas semen beku pasca thawing sapi bali pada pengamatan pasca thawing
Variabel yang diamati Perlakuan SEM * P1 P2 P3 Motilitas spermatozoa (%) 69,00±2,00 a 67,00±4,00 a 71,00±2,00 a 1,41 Viabilitas spermatozoa (%) 55,58±1,56 a 55,17±0,94 a 56,07±1,69 a 0,72 Abnormalitas spermatozoa (%) 2,26±1,06 a 2,57±0,67 a 1,97±0,47 a 0,39 P1 = lama thawing 15 detik; P2 = lama thawing 30 detik; P3 = lama thawing 60 detik; SEM = standar error of the treatment means; Nilai huruf kecil yang sama pada baris yang sama menunjukan tidak berbeda nyata (P>0,05)
Dalam  Tabel  2  terlihat  bahwa  persentase motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa  pada perlakuan  P3  menunjukkan  hasil  tertinggi dibandingkan dengan perlakuan pada P1 dan P2, namun  secara  statistik  adalah  tidak  berbeda nyata (P>0,05). Demikian pula pada abnormalitas spermatozoa terlihat bahwa persentase  abnormalitas  spermatozoa  terendah pada perlakukan P3, namun secara statistik tidak berbeda  nyata  (P>0,05)  dengan  perlakuan  pada P1 dan P2.
Berdasarkan hasil pengamatan mikroskopis  (Tabel  2)  dapat  diketahui  hasil analisis  motilitas  spermatozoa  menunjukkan bahwa  perlakuan  P1,  P2,  dan  P3  tidak menunjukkan  perbedaan  secara  nyata  terhadap kulitas  semen  beku  pasca thawing (P>0,05). Dari  penelitian  ini  diketahui  bahwa  rata-rata motilitas spermatozoa pasca thawing pada waktu 15  detik  adalah  69,00±2,00%,  waktu  30  detik 67,00±4,00%, dan waktu 60 detik 71,00±2,00%. Rata-rata  nilai  motilitas  pasca thawing pada penelitian  ini  layak  untuk  digunakan  dalam kegiatan IB karena masih melebihi standar mutu semen  beku,  SNI  4869.1  (2017)  yakni motilitas semen  beku  minimum  40%.    Rata-rata  nilai motilitas  pasca thawing pada  waktu  60  detik merupakan yang terbaik karena dapat memberikan  persentase  motilitas  spermatozoa lebih tinggi. Hal ini disebabkan kristal-kristal es pada  semen  beku  telah  mencair  dengan sempurna  dan  kondisi  fisiologis  spermatozoa juga  lebih  baik,  Sesuai  dengan  pendapat Partodiharjo  (1992)  bahwa  dinding  membran spermatozoa  tetap  terjaga  sehingga  motilitas spermatozoa menjadi lebih aktif. Ismaya . (2014) menyatakan  bahwa thawing menggunakan  air hangat  akan memberikan hasil  persentase  hidup spermatozoa  lebih  tinggi  jika  dibandingkan menggunakan air sumur.
Viabilitas spermatozoa adalah daya hidup spermatozoa sebagai indikator kualitas spermatozoa.  Berdasarkan  hasil  pengamatan mikroskopis  (Tabel  2)  dapat  diketahui  hasil analisis  menunjukkan  bahwa  perlakuan  P1,  P2, dan  P3  tidak  menunjukkan  perbedaan  secara nyata  terhadap  viabilitas  semen  beku  pasca thawing (P>0,05).  Dari  penelitian  ini  diketahui bahwa  rata-rata  viabilitas  spermatozoa  sapi  bali pasca thawing pada  waktu  15  detik  adalah 55,58±1,56%, waktu 30 detik 55,16±0,94%, dan waktu 60 detik 56,07±1,6%.
Pada keseluruhan waktu thawing menunjukkan hasil viabilitas spermatozoa diatas 50%,  meskipun  berbeda  nyata  dan  waktu thawing 60 detik merupakan yang terbaik karena dapat memberikan persentase viabilitas spermatozoa  yang  lebih  tinggi  daripada  waktu thawing 15  dan  30  detik.  Hal  ini  disebabkan kerena  dinding  membran  spermatozoa  masih berfungsi  dengan  baik  sehingga zat  warna  tidak dapat  masuk  ke  dalam  spermatozoa,  maka spermatozoa  akan  tampak  transparan  sehingga diperoleh persentase viabilitas spermatozoa yang tinggi. Permeabilitas membran dari spermatozoa utuh  dan  berfungsi  baik,  maka  pewarna  tidak akan  bisa  masuk  ke  dalam  spermatozoa. Presentase  hidup  spermatozoa  ditentukan  oleh membran  plasma  yang  utuh.  Membran  plasma spermatozoa berfungsi untuk melindungi organel  spermatozoa  dan  transport  elektrolit untuk  metabolisme  spermatozoa.  Membran plasma  yang  rusak  dapat  berpengaruh  pada fungsi  fisiologis  dan  metabolisme  spermatozoa sehingga menyebabkan spermatozoa mati (Azzahra et al . , 2016). Metabolisme spermatozoa  dapat  memengaruhi  daya  hidup spermatozoa  karena  pada  spermatozoa  yang memiliki aktivitas metabolisme tinggi mengahasilkan  asam  laktat  yang  tinggi  yang dapat membunuh spermatozoa Varasofiari et al .,
(2013).  Membran  plasma  yang  utuh  memiliki kolerasi  dengan  motilitas  spermatozoa,  semakin banyak membran plasma spermatozoa yang utuh maka  semakin  banyak  spermatozoa  yang  motil (Azzahra et al . , 2016).
Abnormalitas  spermatozoa  merupakan salah  satu  variabel  yang  menentukan  kualitas spermatozoa semen beku. Abnormalitas spermatozoa merupakan kelainan struktur spermatozoa  dari  struktur  normal  yang  dapat disebabkan oleh beberapa faktor, yaitu lingkungan,  genetik,  atau  kombinasi  dari keduanya  (Chenoweth,  2005).  Hasil  analisis abnormalitas  spermatozoa  pada  penelitian  ini dapat  (Tabel  2)  diketahui  bahwa  perlakuan  P1, P2, dan P3 tidak menunjukkan perbedaan secara nyata  terhadap  kulitas  semen  beku  pasca thawing (P>0,05).  Adapun  rata-rata  masing- masing  viabilitas  spermatozoa  pasca thawing pada  waktu  15  detik  adalah  2,26±1,06%,  waktu 30  detik  2,57±0,67%,  dan  waktu  60  detik 1,97±0,47%. Hasil analisis yang tidak menunjukkan  perbedaan  secara  nyata  (P>0,05) dapat  disebabkan  karena  lama thawing pada semua  perlakuan  belum  memberikan  tekanan yang ekstrim bagi sel spermatozoa. Spermatozoa
abnormal dapat terjadi karena proses pembekuan,  proses thawing ,  serta  pada  saat proses  preparasi  seperti  pembuatan  preparat ulas. Spermatozoa pada penelitian ini masih bisa digunakan untuk IB karena nilai abnormalitasnya masih di bawah 20%. Diperkuat  oleh  (Ismaya,  2014),  bahwa  kualitas semen  termasuk  rendah  dan  daya  konsepsinya rendah  apabila  nilai  abnormalitasnya  lebih  dari 20%. Kusumawati et al. (2016) juga melaporkan bahwa, persentase abnormalitas semen beku sapi yang di thawing pada suhu 37ºC selama 7 detik, 15  detik,  dan  30  detik.  masing-masing  adalah 5,14%,  4,88%  dan  4,71%.  Abnormalitas morfologi  spermatozoa  dapat  terjadi  secara primer,  sekunder,  atau  tersier.  Abnormalitas primer  terjadi  pada  proses  spermatogenesis  di dalam  testis,  sedangkan  abnormalitas  sekunder terjadi  selama  perjalanan  spermatozoa  di epididimis  (Hafez et  al .,  2000a;  Parkinson, 2004).  Kerusakan  spermatozoa  juga  disebabkan selama  atau  setelah  ejakulasi,  serta  penanganan yang  salah  saat  IB  yang  disebut  sebagai abnormalitas  spermatozoa  tersier  (Hafez et  al ., 2000b).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  dapat disimpulkan  bahwa  kualitas  semen  beku  pasca thawing pada  sapi  bali  dengan  waktu  berbeda tidak  mempengaruhi  motilitas,  viabilitas,  dan
abnormalitas spermatozoa, namun waktu thawing terbaik  dalam  penelitian  ini  adalah thawing selama 60 detik.

## SARAN
Berdasarkan data hasil penelitian yang diperoleh dapat disarankan agar dilakukan penelitian lebih lanjut  tentang  thawing  semen  beku  sapi  dalam
mempertahankan  kualitas  spermatozoa  dengan temperatur yang lebih berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Aisah  S,    Isnaini  N,      Wahjuningsih  S.  2017. Kualitas  semen  segar  dan  recovery  rate sapi  bali  pada  musim  yang  berbeda. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan 27(1):  63-
79. https://doi.org/10.21776/ub.jiip.2017.027. 01.06
Ansary M S,  Bushra A, Rakha,   Akher S. 2010. Effect  of  straw  size  and  thawing  time  on quality of cryopreserved buffalo (Bbubalus bubalis) semen. J Reproductive Biology . 11(1): 49-54.
https://doi.org/10.1016/S1642- 431X(12)60063-1 Arifiantini  R  L.  2012. Teknik  Koleksi  dan Evaluasi  Semen  Pada  Hewan .  IPB  Press. Bogor.
Azzahra  F  Y,    Setiatin  ET  ,      Samsudewa  D.
2016.  Evaluasi  motilitas  dan  pesentase hidup  semen  segar  sapi  PO  Kebumen pejantan  muda. Jurnal  Sains  Peternakan Indonesia , 11(2):99-107. https://doi.org/10.31186/jspi.id.11.2.99- 107
Ax  R  L,    Dally  MR,    Didion  BA,    Lenz  RW, Love  CC,  Varner  DD,  Hafez  B  ,    Bellin ME.  2000. Semen  Evaluation . In ESE Hafez  (ed).  Reproduction  in  Farm Animal,  7 th Edition.  USA:  Lippincott Williams and Wilkins. P 365-375. Bardan,  Feradis  ,  Adelina T.  2009.  Penggunaan air  tebu  yang  dikombinasidengan  kuning telur  sebagai  pengencer  semen  sapi  bali.
Jurnal Peternakan . 6(2): 36-43. https://ejournal.uin-
suska.ac.id/index.php/peternakan/article/v iewFile/371/354
Campbell  J  R,    Campbell  KL,    Kenealy  MD. 2003. Artificial  Insemination:  in  Animal Sciences  Ed  4 th .  Mc  Graw-Hill,  New York.
Chenoweth  P  J.  2005.  Genetic  sperm  defect.
Theriogenology . 64(3): 457-468. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2
005.05.005
Contri  A,  Gloria  A,    Robbe  D,  C  Valorz  C, Wegher  L,    Carluccio  A.  2013.
Kinematic  study  on the  effect  of  pH  on bull sperm function. Animal Reproduction  Science 136(4):  252-259.
https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.201
2.11.008
Feradis.  2010. Bioteknologi  Reproduksi  pada Ternak . Alfabeta. Bandung.
Garner,  D  L,   Hafez  E  S E.  2000. Spermatozoa and Seminal Plasma . In E S E Hafez (ed).
Reproduction in Farm Animal, 7 th Edition. USA: Lippincott Williams and Wilkins. Graham  J  K.  2000.  Assessment  of  Sperm Quality.  Proceedings  of  the  Annual Convention of the AAEP AAEP. 47: 302- 305. https://doi.org/10.1016/S0378-
4320(01)00160-9
Hafez  B,  Bellin  M  E,  Varner  D  D,  Love  C  C, Lenz R W, Didion B A, Dally M, Ax R L. 2000a Semen Evaluation . In Reproduction in  Farm  Animals.  7 th Ed.  Philadelphia, USA: Lea dan Febiger. Hafez E S E ,  Garner D L. 2000b. Spermatozoa and  Seminal  Plasma . In Reproduction  in Farm Animals. 7 th Ed. Philadelphia, USA: Lea dan Febiger.
Hartanti    D,  Setiatin  ET,    Sutopo.  2012.
Perbandingan penggunaan pengencer semen  sitrat  kuning  telur  dan  tris  kuning telur  terhadap  persentase  daya  hidup spermatozoa  sapi  jawa  brebes. Animal Agri. Jour .1 (1): 33-42.
https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/aaj /article/view/89
Ismaya.  2014. Bioteknoloi  Inseminasi  Buatan pada  Sapi  dan  Kerbau .  Gajah  Mada University Press,Yogyakarta. Kusumawati E D, Krisnaningsih ATN, Romadlon R R. 2016. Kualitas
spermatozoa  semen  beku  sapi  simental dengan  suhu  dan  lama  thawing  yang berbeda. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan ,
26(3): 38-41. https://doi.org/10.21776/ub.jiip.2016.026.
03.06
Lestari  S,  Saleh,D  M,    Maidaswar.  2013.  Profil kualitas  semen  segar  sapi  pejantan limousin  dengan  umur  yang  berbeda  di Balai  Inseminasi  Buatan  Lembang  Jawa Barat. Jurnal  Ilmu  Peternakan .  1(3): 1165- 1172. http://dx.doi.org/10.35792/zot.40.2.2020.2 8438
Nirwana ,  Suparman. 2017. The effect of males age  on  the  quality  of  bali  cattle  fresh semen. Journal  of  Animal  Husbandry 2(2):
13-18. https://doi.org/10.31327/chalaza.v2i2.296
Parkinson  T  J.  2004.  Review:  Evaluation  of fertility  and  infertility  in  natural  service bulls. Vet. J. 168: 215-229. https://doi.org/10.1016/j.tvjl.2003.10.017
Pesch S,  Hoffman B. 2007. Cryopreservation of spermatozoa  in  veterinary  medicine. J. Reproduktionsmed. Endokrinol. 4(2):
101—105.
https://www.kup.at/kup/pdf/6429.pdf
Salim  M  A,    Susilawati  T,    Wahjuningsih  S. 2012.  Pengaruh metode  thawing  terhadap kualitas  semen  beku  sapi  bali,  sapi madura  dan  sapi  PO. Jurnal  Agripet . 12(2):
14-19. https://doi.org/10.17969/agripet.v12i2.197
Standar  Nasional  Indonesia.  2017. Semen  beku sapi (4869.1). https://www.bsn.go.id/main/bsn/isi_bsn/20004/s ni . Diakses 9 Desember 2022.
Sunami,  Isnaini  SN  ,  Wahjuningsih  S.  2017.
Kualitas  semen  segar  dan  recovery  rate (RR)  sapi  limousin  pada  musim  yang berbeda. J. Ternak Tropika. 18(1): 36-50. https://doi.org/10.21776/ub.jtapro.2017.01 8.01.6
Sumardani N L G, Tuty L Y, Siagian P H. 2008. The boar sperm viability in modified BTS (Beltsville Thawing Solution) in different storage. Media Peternakan . 31(2): 81-86.
https://jurnal.ipb.ac.id/index.php/mediapet ernakan/article/view/1085
Sumardani N L G,  Budaarsa K,  Putri TI,  Puger AW.  2019.  Umur  memengaruhi  volume semen  dan  motilitas  spermatozoa  babi landrace  di  Balai  Inseminasi  Buatan Baturiti,  Tabanan,  Bali. Jurnal  Veteriner 20(3): 324-329. https://doi.org/10.19087/jveteriner.2019.2 0.3.324
Sundari  T  W,    Tagama  TR,    Maidaswar.  2013.
Korelasi  kadar  pH  semen  segar  dengan kualitas  semen  sapi  limousin  di  Balai Inseminasi Buatan. Jurnal Ilmu Peternakan 1(3): 1043-1049. http://jos.unsoed.ac.id/index.php/jip/articl
e/view/691
Susilawati T. 2013 . Pedoman Inseminasi Buatan Pada Ternak . Universitas Brawijaya (UB)
Press, Malang.
Suwiti    N  K,    Besung  INK,    Mahardika  GN.
2017. Factors influencing growth hormone  levels  of  Bali  cattle  in  Bali, Nusa  Penida,  and  Sumbawa  Islands, Indonesia. Veterinary  World 10(10):
1250-1254.
http://www.veterinaryworld.org/Vol.10/O ctober-2017/14.html
Varasofiari  L  N,    Setiatin  ET,    Sutopo.  2013.
Evaluasi  kualitas  semen  segar  sapi  jawa brebes berdasarkan lama waktu penyipanan. Animal Agriculture 2(1):201- 208. https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/aaj /article/view/2163 Udin.  2012. Teknologi  Inseminasi  Buatan  dan Transfer  Embrio  pada  Sapi .  Penerbit Sukabina Press, Padang.
Zulyazaini,  Dasrul,    Wahyuni  S,    Akmal  M,
Abdullah  MAN.  2016.  Karakteristik semen  dan  komposisi  kimia  plasma seminalis  sapi  aceh  yang  diperihara  di BIBD  Saree  Aceh  Besar. Agripet, 16(2):121-130.
https://doi.org/10.17969/agripet.v16i2.580 3 Zulkharnaim, Jakaria, Noor RR. 2010.
Identifikasi keragaman genetik gen reseptor  hormon  pertumbuhan  (GHR  Alu
I)  pada  sapi  bali. Media  Peternakan . 33(2): 81-87. https://doi.org/10.5398/medpet.2010.33.2. 81