Uji Cemaran Logam Mangan (Mn), Tembaga (Cu), dan Mikroba pada Air Minum dalam Kemasan
[Testing for Manganese (Mn), Cooper (Cu), and Microbial Contamination in Bottled Drinking Water]
Tita Rosita  , Inne Sadiyah
Program Studi Analisis Kimia, Politeknik AKA Bogor Jl. Pangeran Sogiri No.283, Tanah Baru, Bogor Utara, Kota Bogor, Jawa Barat 16154
Abstract. The  presence  of  metal  contaminants  such  as  Manganese  (Mn)  and  Copper  (Cu)  and  microbial contaminants in bottled drinking water (AMDK) that are potentially harmful to human health must be maintained so as not to exceed the set limits. The standard method of testing for Mn and Cu metal contamination in bottled water involves  the  use  of  Inductively  Coupled  Plasma-Optical  Emission  Spectrometry  (ICP-OES)  which  refers  to  SNI 3554:2015. Microbial contamination testing in bottled water was carried out by measuring several parameters such as total plate count (ALT), Coliform test, E.coli test and Pseudomonas aeruginosa test with methods referring to SNI 3554:2015. The test results show that the level of Mn metal in AMDK is 0.001 mg/L with a very low relative variation  (%RSD  0.00%),  and  the  level  of  Cu  metal  is  0.004  mg/L  with  the  same  low  relative  variation  (%RSD 0.00%). In addition, the microbial contamination test results for total plate counts were <1 CFU/mL, and the average test results for E.coli , Coliform , and P.aeruginosa bacteria were 0 colonies/250 mL samples. These results illustrate that the levels of Mn and Cu metal contamination and microbial contamination found in AMDK do not exceed the limits set in SNI 3553: 2015. Based on the tests conducted, bottled drinking water is proven safe from Mn and Cu metal contamination and microbial contamination.
Keywords: AMDK, metal contamination, microbes, manganese, copper, ICP-OES, ALT, Coliform, E. coli, P. aeruginosa.
Abstrak. Keberadaan cemaran logam seperti Mangan (Mn) dan Tembaga (Cu) serta cemaran mikroba pada air minum  dalam  kemasan  (AMDK)  yang  berpotensi  berbahaya  bagi  kesehatan  manusia  harus  dijaga  agar  tidak melebihi batas yang ditetapkan. Metode standar pengujian cemaran logam Mn dan Cu dalam AMDK melibatkan penggunaan Inductively  Coupled  Plasma-Optical  Emission  Spectrometry (ICP-OES)  yang  mengacu  pada  SNI 3554:2015.  Pengujian  cemaran  mikroba  pada  AMDK  dilakukan  dengan  mengukur  beberapa  parameter  seperti angka lempeng total (ALT), uji Coliform , uji E.coli dan uji Pseudomonas aeruginosa dengan metode yang mengacu pada  SNI  3554:2015.  Hasil  pengujian menunjukkan  bahwa  kadar  logam Mn  dalam  AMDK  sebesar  0,001  mg/L dengan variasi relatif yang sangat rendah (%RSD 0,00%), dan kadar logam Cu sebesar 0,004 mg/L dengan variasi relatif yang sama rendah (%RSD 0,00%). Selain itu, hasil pengujian cemaran mikroba untuk angka lempeng total yaitu <1 CFU/mL, dan hasil rata-rata pengujian untuk bakteri E.coli, Coliform , dan P.aeruginosa adalah 0 koloni/250 mL  sampel.  Hasil  ini  menggambarkan  bahwa  kadar  cemaran  logam  Mn  dan  Cu  serta  cemaran  mikroba  yang ditemukan dalam AMDK tidak melampaui batas yang telah ditetapkan dalam SNI 3553:2015. Berdasarkan uji yang dilakukan, air minum dalam kemasan terbukti aman dari cemaran logam Mn dan Cu serta cemaran mikroba.
Kata kunci : AMDK, cemaran logam, mikroba, mangan, tembaga, ICP-OES, ALT, Coliform, E. coli, P. aeruginosa
Diterima: 25 Oktober 2023, Disetujui: 29 April 2024
Sitasi: Rosita, T., dan Sadiyah, I. (2024). Uji Cemaran Logam Mangan (Mn), Tembaga (Cu), dan Mikroba pada Air Minum dalam Kemasan. KOVALEN : Jurnal Riset Kimia , 10(1): 41-57.
https://bestjournal.untad.ac.id/index.php/kovalen
 Corresponding author E-mail: tita.rosita.bz@gmail.com

## Rosita & Sadiyah.

## LATAR BELAKANG
Laboratorium  PAM  JAYA  merupakan laboratorium  yang  bertanggung  jawab  untuk melakukan  pengujian  dan  analisis  terhadap kualitas air minum, air bersih, air minum dalam kemasan,  serta  air  permukaan.  Laboratorium PAM  JAYA  sudah  tersertifikasi  oleh  ISO/IEC 17025:2017  dan  melakukan  pengujian  air berdasarkan metode Standar Nasional
Indonesia (SNI) dan metode Standar Internasional  (APHA,  AWWA,  WEF)  yang meliputi pemeriksaan  fisika,  kimia,  dan bakteriologis.  Laboratorium  ini  melakukan pengujian  secara  rutin  terhadap  parameter- parameter penting, termasuk kandungan logam berat, cemaran mikroba, pH, kekeruhan, klorin, dan parameter lainnya yang dapat mempengaruhi kualitas air.
Air  minum  dalam  kemasan  (AMDK) adalah air baku yang telah diproses, dikemas, dan  aman diminum mencakup air  mineral dan air demineral (BSN , 2015). Kualitas air minum dalam  kemasan  harus  memenuhi  berbagai standar  mutu  yang  dijelaskan  dalam  SNI 3553:2015,  baik  dari segi  fisik,  kimia, maupun mikrobiologi Secara  fisik,  air  tersebut  tidak boleh  memiliki  warna,  rasa,  atau  aroma  yang tidak biasa. Kualitas air secara kimia dianggap baik  jika  tidak  mengandung  kadar  zat  kimia berbahaya  seperti  logam  berat  Mangan  (Mn), Tembaga  (Cu),  dan  zat  lainnya  dalam  jumlah yang  melebihi  standar  yang  ditetapkan.  Di samping  itu,  air  minum  dalam  kemasan  juga harus  terbebas  dari  kontaminasi  mikroba seperti Total  Coliform,  Escherichia  coli ,  dan Pseudomonas  aeruginosa untuk  memastikan keamanan konsumsi.
Penelitian  tentang  uji  cemaran  logam mangan (Mn), tembaga (Cu), dan mikroba pada air minum dalam kemasan (AMDK) merupakan
sebuah  upaya  yang  penting  dalam  menjaga kualitas dan keamanan sumber air minum yang banyak digunakan oleh masyarakat. Kesehatan publik menjadi fokus utama dalam penelitian ini karena keberadaan logam-logam seperti mangan  dan  tembaga  dalam  jumlah  yang berlebihan  dapat  berdampak  negatif  terhadap kesehatan  manusia.  Meskipun  sudah  ada penelitian sebelumnya tentang kualitas AMDK, namun  penelitian  tentang  cemaran  logam mangan  (Mn)  dan  tembaga  (Cu)  pada  AMDK mungkin  masih  kurang  atau  belum  dilakukan dengan cukup luas. Oleh karena itu, penelitian ini  menjadi  penting  untuk  memperbaharui informasi  dan  memastikan  keamanan  AMDK yang beredar di pasaran.
Penelitian ini memperhitungkan kemungkinan  cemaran  mikroba  dalam  AMDK, yang dapat menyebabkan  masalah kesehatan yang serius bagi konsumen. Pendekatan multi- parameter dalam penelitian ini menjadi penting karena memastikan evaluasi yang komprehensif  terhadap  keamanan  air  minum, tidak  hanya  terfokus  pada  satu  aspek  saja. Dengan  demikian,  penelitian  ini  memberikan kontribusi  penting  dalam  pemahaman  risiko yang terkait dengan AMDK dan pengembangan langkah-langkah untuk memastikan keamanan air minum yang dikonsumsi oleh masyarakat.
Secara khusus, penelitian yang dilakukan bertujuan untuk mengidentifikasi tingkat cemaran  logam  mangan  dan  tembaga  dalam sampel  AMDK  yang  beredar  di  pasar,  serta menilai kemungkinan adanya cemaran mikroba yang dapat membahayakan kesehatan konsumen.  Cemaran  logam  maupun  mikroba pada  air  minum  dalam  kemasan  harus memenuhi  persyaratan  mutu  sesuai  dengan regulasi  yang  berlaku.  Dalam  memastikan  hal tersebut,  maka  perlu  dilakukan  pengujian

## Rosita & Sadiyah.
terhadap  kandungan  cemaran  logam  Mn  dan Cu  yang  ditetapkan  menggunakan Inductively Coupled Plasma-Optical Emission
Spectrometry (ICP-OES)  serta  pengujian cemaran  mikroba  pada  air  minum  dalam kemasan  sesuai  dengan  SNI  3554:  2015 tentang cara uji air minum dalam kemasan.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  meliputi  bahan uji,  bahan kimia, dan media biakan.  Bahan  uji  yang  digunakan  adalah sampel air minum dalam kemasan Perusahaan X, Certified  Reference  Material (CRM)S293- 697 multi  element  VIII ,  Biakan  murni  bakteri Escherichia  coli,  Citrobacter  freundii, dan Pseudomonas  aeruginosa .  Bahan  kimia  yang digunakan  yaitu  larutan  induk  standar  logam multi  element VIII  dengan  konsentrasi  100 mg/L, larutan asam klorida (HCl) 37%,  larutan asam nitrat (HNO 3 ) 65%, aquabidest , gas argon Ultra High Purity (UHP), dan 2,3,5-
Triphenyltetrazolium chloride (TTC) 5%. Media biakan  yang  digunakan  meliputi Plate  Count
Agar (PCA), Chromogenic  Coliform  Agar (CCA), Buffered  Peptone  Water (BPW),  dan
Pseudomonas  CFC/CN  (Cetrimide-Fucidin-
Cephaloridine / Cetrimide Nalidixic acid) Agar . Alat  utama  yang  digunakan  adalah Inductively  Coupled  Plasma-Optical  Emission Spectrometry (ICP-OES) Thermo  Scientific iCAP  7000  Series,  Autosampler  Teledyne Cetac  Technologies  ASX-560,  Laminar  Air Flow  Thermo  Fisher  Scientific1300  Series  A2, Incubator  Memmert  INB-500 dan INB-200, Oven Binder ED-115, Autoclave Hirayama HV- 110, dan neraca analitik Ohaus Pioneer .  Alat penunjang  yang  digunakan,  yaitu  labu  takar (2000  mL,1000    mL,  100  mL),  pipet  mohr  (50
mL, 25 mL, 10 mL, 1 mL), pipet volumetrik (100 mL,  25  mL,  5mL), bulb merah,  pipet  tetes, corong,  vial,  rak  vial,  membran  filter  0,45  μm, botol semprot, labu erlenmeyer 250 mL, gelas ukur 100 mL, gelas piala, cawan petri, satu set alat vacuum ( based  and  stopper dan funnel filter ),    pembakar  bunsen, waterbath, dan lampu UV.

## Prosedur Penelitian

## Tahap persiapan
1.  Persiapan sampel
Sampel  air  minum  dalam  kemasan untuk  pengujian  logam  dihomogenkan terlebih  dahulu,  kemudian  disaring  dengan menggunakan membran filter 0,45 µm yang dibantu  dengan  alat vacuum  k emudian sampel dimasukkan ke gelas piala 50 mL.
2.  Pembuatan pelarut ICP-OES
Larutan HNO 3 32,5% (1:1) dan larutan
HCl  18,5%  (1:1)  dipipet  masing-masing sebanyak  40  mL  dan  200  mL  lalu dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  2000  mL. Campuran  larutan  HNO 3 32,5%  (1:1)  dan
HCl  18,5%  (1:1)  ditera  dengan aquabidest dan dihomogenkan.
3.  Pembuatan larutan standar induk dan deret standar multi element VIII
Larutan standar multi element VIII 100 mg/L  dipipet  sebanyak  10  mL  dan dimasukkan ke labu takar  100 mL.  Larutan standar multi  element VIII  10  mg/L  dipipet menggunakan  pipet  mohr  masing-masing sebanyak (0,00; 0,05; 0,10; 0,20; 0,50; 1,00; 2,00;  5,00;  10,00;  dan  20,00  mL)  dan dimasukkan ke labu takar 100 mL.
4.  Pengondisian sistem operasional ICP-OES Instrumen  ICP-OES Thermo  Scientific iCAP  7000  Series perlu  dikondisikan terlebih  dahulu  sebelum  dilakukan  analisis sehingga instrumen dapat beroperasi

## Rosita & Sadiyah.
dengan  baik  dan  memberikan  hasil  yang sesuai. Pengondisian alat ICP-OES Thermo Scientific  iCAP  7000  Series pada software Qtegra dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 . Kondisi Operasional Alat ICP-OES Thermo  Scientific  iCAP  7000 Series Instrumen ICP- OES Thermo Scientific iCAP 7000 Series Teknik Atomisasi Plasma RF Power 1150 watt Purge Gas Flow Trickle Auxilary Gas Flow 0,50 L/menit Coolant Gas Flow 12 L/ menit Nebulizer Gas Flow 0,65 L/menit Nebulizer Gas Pressure 0 kPa Pump Speed 45  pm
5.  Sterilisasi alat dan bahan
Sterilisasi  alat  dan  bahan  dilakukan dengan dua metode yaitu sterilisasi metode basah dan kering. Sterilisasi metode basah dilakukan  menggunakan autoclave pada suhu 121 o C dengan tekanan 1 atm selama 15-45 menit.  Alat yang disterilisasi dengan metode  basah  meliputi based  and  stopper .
Bahan  yang  disterilisasi  basah  meliputi aquabidest dan media biakan.
Sterilisasi  metode  kering  dilakukan menggunakan  oven  dengan  suhu  170- 180 o C  selama  2  jam.  Sterilisasi  metode kering  dilakukan  untuk  alat-alat  gelas  yaitu funnel filter , cawan petri, gelas ukur, tabung reaksi,  erlenmeyer,  pipet  mohr  dan  batang pengaduk.
6.   Pembuatan Media Biakan
1. Media CCA
Media  CCA  dibuat  secara  aseptik
dengan
menggunakan
peralatan
danbahan yang sudah disterilisasi. Hal ini dilakukan  karena  pada  media  CCA  tidak dilakukan  sterilisasi  dengan  autoclave. Area kerja disanitasi dengan alkohol 70%. Bubuk  media  CCA  ditimbang  sebanyak 34,5  gram  ke  dalam  gelas  piala  steril kemudian  dilarutkan  dengan aquabidest steril  sebanyak  1000  mL,  setelah  itu dipanaskan  di  dalam  air  mendidih  sambil diaduk  menggunakan  batang  pengaduk hingga bubuk CCA larut sempurna.  Media didinginkan dalam waterbath bersuhu  45- 50 0 C,  kemudian  dituangkan  ke  dalam cawan  petri  steril  dengan  ketebalan kurang  lebih  4  mm  dan  ditunggu  hingga media  memadat.  Media  diinkubasi  pada suhu  36±2 o C  selama  18±3  jam  untuk mengetahui  tidak  adanya  kontaminasi bakteri selama proses pembuatan media. Media CCA siap digunakan untuk
pengujian.
2.  Media PCA
Bubuk media PCA ditimbang sebanyak 22,5 gram ke dalam gelas piala dan dilarutkan dengan aquabidest sebanyak 1000 mL, kemudian dipanaskan sambil  diaduk  hingga  media  PCA  larut sempurna.  Media  PCA  dituangkan  ke dalam  erlenmeyer  250  mL  dan  ditutup dengan  aluminium  foil.  Media  disterilkan dengan autoclave pada  suhu  121 o C selama  15  menit.  Media  PCA  dapat digunakan untuk pengujian.
3.  Media Pseudomonas CFC/CN agar Bubuk media Pseudomonas CFC/CN  Agar  ditimbang  sebanyak  24,2 gram kemudian dilarutkan dengan aquabidest sebanyak  500  mL  dan ditambahkan  5  mL glycerol. Media dididihkan  agar  terlarut  sempurna,  lalu
Rosita & Sadiyah.
disterilisasi  dengan autoclave pada  suhu 121 o C  selama  15  menit.  Media  dibiarkan
turun suhunya hingga 45-50 o C menggunakan waterbath . Media ditambahkan 2 mL Pseudomonas CN Selective (dibuat dengan  melarutkan Pseudomonas  CN Selective menggunakan aquabidest steril sebanyak 1 mL dan etanol 1 mL (50:50)). Media dituang ke dalam cawan petri steril hingga  ketebalan  5  mm  dan  ditunggu hingga  media  padat.    Media  diinkubasi pada suhu 36±2 o C selama 18±3 jam untuk mengetahui  tidak  adanya  kontaminasi bakteri selama proses pembuatan media. Media Pseudomonas  CN  Agar siap digunakan untuk pengujian.
4.  Media BPW
Bubuk media BPW ditimbang sebanyak 25,5 gram ke dalam gelas piala dan dilarutkan dengan aquabidest sebanyak 1000 mL, kemudian dipanaskan sambil  diaduk  hingga  bubuk  media  BPW larut  sempurna.  Media  dituangkan  ke dalam  erlenmeyer  sebanyak  99  mL  dan ditutup  dengan  aluminium  foil.  Media disterilkan menggunakan autoclave dengan  suhu  121 o C  selama  15  menit. Media  BPW  dapat  digunakan  untuk pengujian.

## Tahap pengujian
Pengujian Kandungan Logam Mn dan Cu 1.  Pengujian Deret Standar
Larutan deret standar multi element VIII yang telah dibuat dengan konsentrasi (0,00;
0,005;  0,010;  0,020;  0,050;  0,100;  0,200;
0,500;  1,000;  2,000)  mg/L  dimasukkan  ke dalam vial dan disusun dalam rak vial. Rak vial diletakkan dalam Autosampler Teledyne Cetac Technologies ASX-560. Larutan deret
standar  diukur  intensitasnya  menggunakan ICP-OES  pada  panjang  gelombang  Mn 257,61  nm  dan  Cu  324,75  nm.  Intensitas yang  dihasilkan  dapat  diplot  terhadap konsentrasi  standar  untuk  membentuk kurva deret standar bagi unsur Mn dan Cu. Nilai  koefisien  korelasi  (r)  yang  memenuhi persyaratan adalah r ≥ 0,995.
2.  Pengujian CRM S293-697
Pengujian larutan CRM S293-697 yang telah  dilakukan  dua  kali    pengenceran dimasukkan  ke  dalam  vial  yang  tersedia dan  disusun  pada  rak  vial.  Rak  vial diletakkan  pada Autosampler  Teledyne Cetac Technologies ASX-560. Larutan CRM S293-697    diukur  konsentrasinya  dengan ICP-OES  sesuai  dengan  SNI  3554:2015 pada  panjang  gelombang  Mn  257,61  nm dan Cu: 324,75 nm. Pengujian CRM S293- 697 sebagai kontrol sampel untuk menjamin hasil pengujian yang akurat, dapat dipercaya dan tertelusur. Nilai hasil pengujian  CRM  S293-697  dapat  diterima apabila  masuk  ke  dalam  rentang  nilai keberterimaan, dan apabila dalam pengujian  CRM  S293-697  hasil  nilai  tidak masuk ke dalam rentang nilai keberterimaan, maka pengukuran terhadap CRM  S293-697  harus  diulang.  Konsentrasi hasil  pengujian  CRM  dapat  dibandingan dengan nilai benarnya dalam sertifikat CRM.
3.  Pengujian Logam Mn dan Cu pada Sampel AMDK
Sampel yang telah dipreparasi sebelumnya dimasukkan ke dalam vial dan disusun  pada  rak  vial.  Sampel  diuji sebanyak dua kali pengulangan menggunakan ICP-OES sesuai dengan SNI 3554:2015  pada  panjang  gelombang  Mn 257,61 nm dan Cu 324,75 nm.

## Rosita & Sadiyah.

## Pengujian Cemaran Mikroba
1.  Pengujian ALT
Pengujian ALT pada sampel air minum dalam  kemasan    menggunakan  metode pour  plate (cawan  tuang).    Metode pengujian ini mengacu pada SNI 3554:2015 yang telah disesuaikan dengan pengujian di laboratorium  mikrobiologi  PAM  JAYA. Pengujian  bakteri  ALT  dilakukan  secara aseptik  di  dalam laminar  air  flow dengan menggunakan  alat  dan  bahan  yang  telah disterilisasi.
Cawan  petri  steril  diberi  kode  sesuai
dengan kode sampel dan tingkat pengenceran. Contoh uji dipipet sebanyak 1 mL  dan  dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri steril (selanjutnya disebut pengenceran 10 0 ) dan  0,1  mL  contoh  uji  ke  cawan  petri (selanjutnya  disebut  pengenceran  10 -1 ).
Contoh uji juga dipipet 1 mL ke dalam 99 mL
larutan
pengencer (BPW),
lalu dihomogenkan.  Campuran  sampel  dan larutan pengencer (BPW) dipipet sebanyak 1  mL  ke  cawan  petri  (selanjutnya  disebut pengenceran  10 -2 ),  dan  sebanyak  0,1  mL dipipet  ke  cawan  petri  (selanjutnya  disebut pengenceran 10 -3 ).
Setiap  cawan  petri  yang  sudah  berisi sampel  dituangkan  media  PCA  sebanyak 20-25 mL yang telah dicairkan dengan suhu 45  ±  1  ˚C  dan  telah  ditambahkan  indikator TTC 5% (1 mL untuk 100 mL PCA)  dalam waktu ±15 menit dari pengenceran pertama. Media dihomogenkan dan dibiarkan hingga campuran  dalam  cawan  petri  memadat. Pengujian  ini  dilakukan  dua  kali  (duplo) untuk dua suhu pengujian.
Kontrol  negatif  dibuat  dengan  cara dituangkan media PCA sebanyak 20-25 mL telah dicairkan yang bersuhu 45 ± 1 ˚C dan
telah ditambahkan indikator TTC 5% (1 mL untuk  100  mL  PCA)  ke  dalam  cawan  petri steril  kosong  dan  dibiarkan  hingga  media dalam cawan petri memadat. Semua cawan petri dimasukkan ke dalam inkubator dalam posisi terbalik dan diinkubasi pada suhu 36 ± 2 ˚C selama 44 ± 4 jamdan suhu 22 ± 2 ˚C selama 48-72 jam. Koloni positif angka ALT ditandai dengan tumbuhnya koloni berwarna  merah  pada  media  PCA.  Total koloni bakteri yang tumbuh dihitung secara manual  dan  dicatat.  Jumlah  koloni  bakteri dapat dihitung dengan menggunakan rumus berikut:
ALT = 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎 ℎ 𝑘𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 × 1
𝑓𝑎𝑘𝑡𝑜𝑟𝑝𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟𝑎𝑛
2.  Pengujian Total Coliform dan Escherichia
coli secara Membran Filter Pengujian Total Coliform dan
Escherichia  coli ( E.coli )  secara  membran filter  mengacu  pada  SNI  3554:2015. Pengujian  bakteri Total  Coliform dan E.coli dilakukan pada satu cawan petri yang sama secara  membran  filter  dan  menggunakan media CCA. Pengujian ini dilakukan secara aseptik di dalam laminar air flow . Sampel air minum dalam kemasan dihomogenkan, lalu dituangkan sebanyak 250 mL ke dalam alat penyaringan yang sudah dipasang membran  filter  steril  dan  pompa  vakum. Membran  filter  diletakkan  ke  dalam  cawan petri  yang  berisi  media  CCA.  Pengujian  ini dilakukan dua kali (duplo). `  Kontrol  positif bakteri Total  Coliform dan E.coli dibuat dengan    campuran  10  mL  kultur  biakan murni  bakteri Citrobacter  freundii atau Escherichia  coli dan  240  mL aquabidest steril.    Kontrol  negatif  dibuat  dengan menggunakan  100  mL aquabidest steril.
Larutan  kontrol  positif  dan  negatif  diuji dengan  perlakuan  yang  sama  seperti
Rosita & Sadiyah.
sampel dengan menggunakan media CCA. Media CCA yang telah berisi membran filter diinkubasi  pada  inkubator  dengan  posisi cawan  terbalik  pada  suhu  36±2 o C  selama 21±3jam.  Hasil  inkubasi  diamati,  Jumlah bakteri E.coli diketahui dengan menghitung seluruh  jumlah  koloni  yang  berwarna  biru. Rumus  perhitungan  jumlah  bakteri E.coli adalah sebagai berikut:

## 𝐸. 𝑐𝑜𝑙𝑖 = jumlah koloni 𝐸. 𝑐𝑜𝑙𝑖 volume sampel(250mL)
Koloni bakteri Coliform akan berwarna merah  muda  sampai  merah.  Jumlah  total bakteri Coliform diketahui dengan menghitung  seluruh  jumlah  koloni  yang berwarna  merah  muda  ditambah  dengan seluruh koloni berwarna biru dengan rumus sebagai berikut:
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚 = Jumlah koloni 𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚 + 𝐸. 𝑐𝑜𝑙i volume sampel (250 mL)
3.  Pengujian
Bakteri Pseudomonas
aeruginosa secara Membran Filter
Pengujian bakteri P. aeruginosa secara membran filter dilakukan dengan cara kerja yang sama seperti pengujian Total Coliform dan E.coli .  Pengujian  ini  dilakukan  dengan menggunakan media selektif Pseudomonas CFC/CN  Agar dan  dibutuhkan  250  mL sampel.  Kontrol  positif  dibuat  dengan  240 mL aquabidest steril ditambah 10 mL kultur biakan  murni P.aeruginosa. Kontrol  negatif menggunakan aquabidest steril  sebanyak 250  mL.  Kontrol  positif  dan  negatif  diuji dengan  perlakuan  yang  sama  seperti pengujian sampel.
Media yang telah berisi membran filter diinkubasi  pada  inkubator  dengan  posisi
cawan terbalik pada suhu 36±2 o C selama44±4  jam.  Hasil  inkubasi  diamati, koloni P.aeruginosa akan berwarna fluoresen  kehijauan  yang  akan  berpendar jika diamati dibawah sinar UV (360±20 nm). Rumus perhitungan jumlah bakteri
P.aeruginosa adalah sebagai berikut:
𝑃. 𝑎𝑒𝑟𝑢𝑔𝑖𝑛𝑜𝑠𝑎 = 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑘𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 𝑃. 𝑎𝑒𝑟𝑢𝑔𝑖𝑛𝑜𝑠𝑎 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙(250 𝑚𝐿)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian  cemaran  pada  air  minum dalam  kemasan  (AMDK)  dilakukan  terhadap parameter  kimia  seperti  pengujian  logam  Mn dan Cu serta beberapa parameter mikrobiologi seperti pengujian ALT, Total Coliform, Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa .
Hasil  pengujian  yang  diperoleh  kemudian dibandingan  dengan  standar  mutu  yang ditetapkan  dalam  Standar  Nasional  Indonesia (SNI) 3553:2015 tentang Air Mineral.

## Cemaran Logam Mn dan Cu
Cemaran logam Mn dan Cu pada sampel air  minum  dalam  kemasan  ditetapkan  dengan menggunakan  ICP-OES.  Prinsip  pengujian  ini adalah  ketika  sampel  logam  diubah  menjadi bentuk  aerosol  oleh  gas  argon  melalui nebulizer  dengan  temperatur  plasma  yang tinggi.  Proses  ini  mengakibatkan  elektron- elektron dalam atom-atom sampel terdorong ke tingkat  energi  yang  lebih  tinggi  dan  kemudian kembali  ke  keadaan  dasarnya,  mengeluarkan energi dalam bentuk sinar. Sinar ini kemudian dipecah  menjadi  spektrum  garis  yang  khas untuk  setiap  atom  yang  ada  dalam  sampel. Intensitas sinar yang dipancarkan oleh elektron saat kembali ke keadaan dasarnya berbanding lurus  dengan  konsentrasi  unsur  yang  ada dalam sampel. Intensitas emisi yang dihasilkan dari  pengukuran  sampel  digunakan  untuk
Rosita & Sadiyah.
menunjukkan  konsentrasi  unsur  logam  dalam sampel  air  minum  dalam  kemasan  (Subianto , 2020).

## Kurva kalibrasi logam Mn dan Cu
Kurva kalibrasi adalah representasi  grafis dari  keterkaitan  antara  respons  instrumen dengan  berbagai  konsentrasi  yang  telah diketahui  dari  analit.  Berdasarkan  kurva kalibrasi  tersebut  akan  diperoleh  persamaan garis  yang  menggambarkan  relasi  antara konsentrasi  dan  respons  alat. Fungsinya adalah  untuk  menentukan  konsentrasi  zat dalam  sampel  yang  tidak  diketahui  dengan membandingkannya dengan serangkaian
standar  yang  telah  diketahui  konsentrasinya (Nisah & Husniah, 2020).
Kurva  kalibrasi  harus  dibuat  dengan memperhitungkan rentang konsentrasi sampel yang  relevan.  Untuk  menghasilkan  kurva kalibrasi  terhadap  logam  Mn  dan  Cu, digunakan sepuluh konsentrasi larutan standar multi  element  VIII yaitu  0,00;  0,005;  0,010; 0,020; 0,050; 0,100; 0,200; 0,500; 1,000; 2,000 mg/L.    Data  ini  kemudian  digunakan  untuk membuat  kurva  kalibrasi  standar  Mn  dan  Cu, serta  menentukan  persamaan  garis  regresi linier  dan  nilai  koefisien  korelasi  (r),  seperti yang terlihat pada Gambar 1.
Gambar 1 . Kurva kalibrasi logam Mn dan Cu
Berdasarkan  Gambar  1,  dapat  dilihat bentuk kurva yang diperoleh berupa garis linier yang  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi, semakin besar pula nilai intensitas yang dihasilkan. Persamaan regresi linier yang diperoleh dinyatakan sebagai y= a + bx, dimana y sebagai nilai intensitas, a sebagai intersep, b sebagai  slope,  dan  x  sebagai  konsentrasi analit.  Dalam  kurva  kalibrasi  untuk  Mn, diperoleh persamaan regresi yang menyatakan y=  0,9392  +  136,55x  sedangkan  persamaan regresi  untuk  logam  Cu  yaitu  y=  0,2791  + 25,722x.  Nilai  intersep  menyatakan  besar intensitas  yang  diperoleh  ketika  konsentrasi
analit  0  mg/L.  Pada  logam  Mn  diperoleh intersep sebesar 0,9392 c/s yang menunjukkan bahwa  intensitas  yang  diperoleh  sebesar 0,9392 c/s ketika konsentrasi Mn 0 mg/L,begitupun  pada  logam  Cu  dengan  nilai intersep sebesar 0,2791 c/s yang menunjukkan ketika  konsentrasi  Cu  berada  pada  0  mg/L maka intensitas yang diperoleh sebesar 0,2791 c/s.  Disamping  itu,  logam  Mn  memiliki kemiringan (slope) sebesar 136,55 (c/s)(mg/L), yang menunjukkan bahwa setiap kenaikan satu unit dalam konsentrasi menyebabkan peningkatan  intensitas  sebesar  136,55  kali konsentrasi.  Untuk  logam  Cu,  kemiringannya
y = 0,9392 +  136,55x r = 0,9999 0 50 100 150 200 250 300 0.000 1.000 2.000 3.000 In te n si tas (c /s) Konsentrasi Mn (mg/L) y = 0,2791 + 25,722x r = 0,9999 0 10 20 30 40 50 60 0.000 1.000 2.000 3.000 In te n si tas (c /s)
Konsentrasi Cu (mg/L)
Rosita & Sadiyah.
adalah  25,722  (c/s)(mg/L),  yang  menunjukkan bahwa  setiap  kenaikan  satu  unit  dalam konsentrasi  akan  menghasilkan  peningkatan intensitas sebesar 25,722 kali konsentrasi.
Hubungan  linier  antara  konsentrasi  dari deret standar dengan intensitas yang dihasilkan  dinyatakan  dalam  bentuk  koefisien korelasi  (r).  Hasil  koefisien  korelasi  (r)  yang diperoleh  adalah  0,9999  untuk  kedua  kurva kalibrasi  logam  Mn  dan  Cu.  Nilai  r    yang mendekati 1,0000 menunjukkan adanya korelasi positif dan erat antara konsentrasi Mn dan Cu dengan intensitasnya. Artinya, semakin tinggi  konsentrasi  analit  yang  diukur,  semakin tinggi  pula  intensitas  yang  dideteksi  oleh  alat. Lineritas  yang  diperoleh  tersebut  hanya terbatas pada rentang deret standar yang diuji. Respons alat terhadap konsentrasi analit telah memenuhi  standar  yang  ditetapkan,  yaitu dengan memiliki nilai r ≥ 0,9950. Oleh karena itu, persamaan garis linier yang telah diperoleh dapat digunakan untuk mengestimasi konsentrasi sampel.

## Pengujian CRM S293-697
Ketertelusuran hasil pengujian merupakan  hal  yang  sangat  penting  sebagai suatu  penjaminan  mutu  hasil  analisis  yang dikeluarkan. Hasil analisis yang dapat diandalkan  diperoleh  dari  analisis  yang  dapat dilacak  kembali  ke  standar  nasional  atau
internasional  seperti  SI  (Sistem  Satuan Internasional). Jika tidak memungkinkan untuk dilacak kembali ke SI, yang sering terjadi dalam analisis  kimia,  maka  digunakanlah  CRM ( Certified Reference Material ) sebagai alternatif
(Putro , 2009).
Pengukuran  CRM  bertujuan  sebagai kontrol sampel untuk memastikan akurasi hasil pengukuran, kepercayaan  terhadap data yang diperoleh,  memastikan  ketertelusuran  hasil pengukuran  dan  sebagai  jaminan  mutu  yang membantu  mengurangi  kesalahan  analisis. Laboratorium PAM JAYA, yang telah mendapatkan  sertifikasi  ISO/IEC  17025  dan akreditasi  dari  Komite  Akreditasi  Nasional (KAN), menerapkan praktik pengukuran menggunakan  CRM  sesuai  dengan  ketentuan dalam  klausul  6.5.2  bagian  b.  Klausul  ini menegaskan bahwa laboratorium harus memastikan bahwa pengukuran yang dilakukan  dapat  dilacak  kembali  ke  Satuan Internasional  (SI)  melalui  penggunaan  nilai bersertifikat  dari  bahan  referensi  yang  telah disertifikasi, yang diberikan oleh produsen yang memiliki kompetensi dengan jaminan ketertelusuran  metrologi  yang  diakui  terhadap SI (International Organization For Standarization,  2017).  Hasil  pengujian  CRM S293-697  untuk  logam  Mn  dan  Cu  tertera dalam Tabel 2.
Tabel 2 . Pengukuran CRM S293-697 Pengukuran CRM S293-697 menggunakan larutan  CRM yang  telah
diencerkan sebanyak
dua kali pengenceran.Hasil  pengukuran  CRM  S293- Parameter Certified Value (mg/L) Quality Control Performance Acceptance Limits (mg/L) Blanko Sampel (mg/L) Hasil Uji CRM(mg/L) Cu 1,330 1,200 – 1,450 0,004 1,360 Mn 0,344 0,315 – 0,378 0,000 0,356

## Rosita & Sadiyah.
697  oleh  ICP-OES  yang  ditampilkan  pada aplikasi  komputer  dikonversi  dan  dikali  faktor pengenceran untuk mendapatkan kadar sebenarnya. Hasil uji CRM yang terdapat pada Tabel  2  merupakan  hasil  koreksi  dengan blanko sampel. Koreksi dengan blanko sampel dilakukan untuk menentukan seberapa banyak pengaruh  komponen  selain  bahan  yang  diuji (diukur).
Berdasarkan  Tabel  2,  hasil  pengukuran CRM S293-697 untuk logam Mn dan Cu yang telah  dilakukan  memasuki  rentang Quality Control  Performance  Acceptance  Limits serta memiliki  nilai  yang  mendekati Certified  value.
Hasil  pengukuran  CRM  S293-697  yang diperoleh menunjukkan keakuratan hasil analisis  oleh  alat  sehingga  data  yang dikeluarkan  terjamin  ketertelusurannya  dan dapat dipercaya.

## Pengujian logam Mn dan Cu dalam sampel
Pengujian  logam  Mn  dan  Cu  pada sampel  air  minum  dalam  kemasan  dilakukan secara  spektrometri  emisi  atom  ICP-OES berdasarkan  SNI  3554:2015  tentang  Cara  uji air  minum  dalam  kemasan.  Pengujian  sampel dilakukan  dengan  tiga  kali  ulangan  dan  untuk memperoleh  kadar  sebenarnya  maka  masing- masing  konsentrasi  logam  harus  dilakukan koreksi dengan blanko sampel. Koreksi dengan blanko sampel dilakukan karena dikhawatirkan pelarut  memiliki  serapan  pada  panjang gelombang yang digunakan sampel serta untuk mengetahui pengaruh komponen selain bahan yang  diuji  seperti  pelarut  dalam  proses pengujian  dan  memastikan  pelarut  yang digunakan  tidak  terdapat  kontaminasi.    Data hasil pengujian kadar logam Cu dan Mn dalam sampel  air  minum  dalam  kemasan  tertera dalam Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Pengukuran Logam Mn dan Cu pada  Sampel  Uji  Air  Minum  dalam
Kemasan Ulangan Konsentrasi Logam Mn (mg/L) Konsentrasi Logam Cu (mg/L) 1 0,001 0,007 2 0,001 0,007 3 0,001 0,007 Rerata 0,001 0,007 Blanko 0,000 0,004 Syarat Mutu (SNI 3553:2015) Maks. 0,050 Maks. 0,500 %RSD 0,00% 0,00%
Berdasarkan  Tabel  3,  kadar  logam  Mn dalam  sampel  air  minum  dalam  kemasan setelah dilakukan pengurangan dengan blanko sampel  yaitu  sebesar  0,001  mg/L  dengan  % RSD  sebesar  0,00%  artinya  data  yang diperoleh telah
memenuhi
syarat keberterimaan %RSD yang ditetapkan perusa haan  yaitu    ≤  5%  dan  data  tersebut memiliki  ketelitian  yang  tinggi.  Kandungan logam  Mn  dalam  sampel  air  minum  dalam kemasan  yang  diuji  masih  memenuhi  standar mutu  yang  ditetapkan  dalam  SNI  3553:2015 mengenai Air Mineral, dengan nilai maksimum yang diperbolehkan adalah 0,050 mg/L.
Mangan  dalam  air  biasanya  berada dalam bentuk ion Mn 2+ yang larut dalam air dan tidak berwarna. Dalam bentuk kalium permanganat, mangan dapat digunakan dalam proses pengolahan air minum untuk mengoksidasi dan menghilangkan kontaminan seperti  zat  besi  dan  jenis  kontaminan  lainnya. Toksisitas  Mn  relatif  sudah  tampak  pada konsentrasi rendah. Batas maksimum konsentrasi  Mn  pada  air  minum  dalam kemasan adalah 0,050 mg/L. Konsentrasi yang lebih  tinggi  dari  ini  dapat  menimbulkan  efek

## Rosita & Sadiyah.
racun  pada  manusia.  Mangan  yang  berlebih dalam  air  minum  memiliki  efek  neurotoksik yang  dapat  menyebabkan  gejala  seperti kerusakan  pada  sistem  syaraf,  sulit  tidur, kelemahan  pada  kaki,  dan  otot  wajah  (Ilham, 2020).
Berdasarkan  Tabel  3,  diperoleh  rerata kadar logam Cu pada sampel air minum dalam kemasan  setelah  dilakukan  pengurangan dengan  blanko  sampel  yaitu  sebesar  0,003 mg/L. Selain itu, %RSD yang diperoleh adalah 0,00% artinya  data yang diperoleh memenuhi syarat  keberterimaan  %RSD  yang  ditentukan oleh perusahaan yaitu ≤ 5% dan data tersebut memiliki  ketelitian  yang  tinggi.  Menurut ketentuan  dalam  Standar  Nasional  Indonesia (SNI)  3553:2015  mengenai  Air  Mineral,  batas maksimum  konsentrasi  logam  Cu  yang diperbolehkan dalam air minum dalam kemasan adalah 0,500 mg/L. Ini berarti bahwa kandungan logam Cu dalam sampel air minum dalam kemasan yang telah diuji sesuai dengan standar kualitas yang berlaku.
Menurut Adhani & Husaini (2017), logam Cu adalah unsur logam berat yang penting dan diperlukan  dalam  jumlah  kecil  oleh  organisme sebagai  koenzim  dalam  proses  metabolisme tubuh.  Sifat  racunnya  hanya  terungkap  ketika terdapat dalam konsentrasi yang tinggi. Racun tembaga  dapat  mempengaruhi  tubuh  secara akut  atau  mengakumulasi  seiring  waktu. Keracunan  akut  dapat  menghasilkan  gejala seperti  mual,  muntah,  sakit  perut,  kerusakan sel  darah  merah,  ganguan  saraf,  kejang, bahkan  kematian.  Dalam  kasus  keracunan kronis,  Cu  dapat  mengendap  di  hati  dan menyebabkan kerusakan sel darah merah.

## Cemaran Mikroba
Pencemaran air terjadi ketika zat, energi, atau komponen lainnya masuk atau
dimasukkan  ke  dalam  air  oleh  aktivitas manusia,  yang  mengakibatkan  penurunan kualitas  air  hingga  pada  tingkat  tertentu  yang dapat  membahayakan atau membuat air tidak lagi dapat digunakan sesuai dengan fungsinya. Dalam  hal  cemaran  mikroba,  penyebarannya dari tinja ke air minum dapat terjadi melalui air itu  sendiri,  kontaminasi  oleh  tangan,  melalui vektor,  dan  juga  tanah  (Notoatmodjo,  2011). Berdasarkan SNI 3553:2015, air minum dalam kemasan  tidak  diperbolehkan  mengandung bakteri  patogen  seperti Coliform ,  E.  coli,  dan Pseudomonas  aeruginosa .  Selain  itu,  jumlah cemaran mikroba dalam air minum tidak boleh melebihi  1,0 x 10 -2 koloni/mL dalam  pengujian Angka Lempeng Total.

## Angka Lempeng Total (ALT)
Angka  Lempeng  Total  (ALT)  adalah angka  yang  mencerminkan  jumlah  koloni bakteri  aerob  mesofilik  yang  terdapat  dalam setiap gram atau mililiter sampel uji (Sundari & Fadhliani,  2019).  Dalam  pengujian  ALT, digunakan  media  PCA  (Plate  Count  Agar) sebagai  media  biakan.  Media  PCA  ini merupakan media yang umum digunakan untuk menghitung  jumlah  bakteri  dalam  sampel produk  tertentu  menggunakan  metode  ALT. Media PCA mengandung glukosa dan  ekstrak ragi yang bertujuan untuk mendukung pertumbuhan  berbagai  jenis  bakteri  yang  ada dalam  sampel.  Selain  itu,  media  ini  juga mengandung  nutrisi  tryptone,  vitamin  dari ekstrak  ragi,  dan  glukosa  sebagai  sumber energi  bagi  pertumbuhan  bakteri  (Arianda, 2016).
Pada  penelitian  ini,  metode  yang digunakan  untuk  menghitung  angka  lempeng total adalah metode pour plate (cawan tuang), dengan penerapan dua suhu pengujian sesuai standar  SNI  3554:2015  untuk  uji  air  minum
Rosita & Sadiyah.
dalam  kemasan,  yai tu  36±2˚C  dan  22±2˚C.
Salah  satu  kelebihan  dari  metode  ini  adalah pertumbuhan  koloni  mikroorganisme  terjadi baik  di  dalam  maupun  di  permukaan  media agar, yang mempermudah dalam penghitungan jumlah koloni bakteri (Surahmaida & Sri, 2018). Pada  pengujian  ALT  terhadap  sampel  air minum  dalam  kemasan,  pengamatan  mikroba yang  tumbuh  pada  media  dilakukan  secara visual.
Pada  Gambar  2,  dapat  dilihat  tidak terdapat  pertumbuhan  koloni  bakteri  pada media  PCA  yang  dijadikan  kontrol  negatif (blanko),  baik  pada  suhu  pengujian  36±2 ˚C
maupun  suhu  22±2 ˚C.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  media  PCA  yang  digunakan  tidak terkontaminasi dan steril. Semua hasil pengujian  angka  lempeng  total  dapat  dilihat pada Tabel 4.
Gambar 2 .  (a)  Blanko  media  pada  suhu pengujian  22±2 ˚C  dan,  (b)  blanko pada suhu 36±2 ˚C
Tabel 4. Hasil pengujian ALT pada sampel air minum dalam kemasan
Berdasarkan  informasi  dari  Tabel  4, terlihat  bahwa  hasil  pengujian  angka  lempeng total sampel A pada suhu 36±2 ˚C menunjukkan tidak adanya pertumbuhan koloni bakteri pada
media  PCA  dengan  pengenceran  10 0 hingga 10 -3 .  Pengujian  pada  ulangan  1  dan  2 menunjukkan hasil yang sama. Hasil perhitungan  ALT  yang  diperoleh  sebesar  <1
Data Pengujian Angka Lempeng Total Suhu 36±2 ˚C Sampel Pengenceran Jumlah Koloni CFU/mL Ulangan 1 Ulangan2 Air Minum dalam Kemasan 10 0
0 0 <1 10 -1
0
0 10 -2 0 0 10 -3 0 0 Kontrol Media 0 <1 Data Pengujian Angka Lempeng Total Suhu 22±2 ˚C Sampel Pengenceran Jumlah Koloni CFU/mL Ulangan 1 Ulangan2 Air Minum dalam Kemasan
10 0
0 0 <1 10 -1 0
0 10 -2 0 0 10 -3 0 0 Kontrol Media 0 <1 Syarat Mutu (SNI 3553:2015) Maks. 1,0 x 10²
a b

## Rosita & Sadiyah.
CFU/mL.  Selain itu dilakukan pengujian angka lempeng  total  pada  suhu  22±  2 ˚C.  Pengujian pada  suhu  ini  dilakukan  mengingat  sejumlah bakteri  dapat  tumbuh  dan  berkembang  dalam air  dengan  suasana  aerob  pada  suhu  rendah (psikrofilik).  Bakteri  psikrofilik  adalah  jenis bakteri  yang  tumbuh  dan  berkembang  pada rentang  suhu  0-20°C,  dengan  suhu  optimal pertumbuhan sekitar 25°C (Soedarto, 2015).
Gambar 3. (a) Hasil pengujian ALT pada suhu suhu 22±2 ˚C, dan (b) suhu 36±2˚C
Pengujian pada suhu 22± 2˚C  ini dilakukan  sesuai  dengan  ketentuan  yang tercantum dalam  SNI 3554:2015 tentang cara uji air minum dalam kemasan. Hasil pengujian ALT sampel A pada suhu 22±2 ˚C menunjukkan tidak adanya jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada  ulangan  1  maupun  2  yang  dapat  dilihat pada Tabel 4 dan Gambar 3. Hasil perhitungan ALT  yang  diperoleh  sebesar  <1  CFU/mL. Berdasarkan syarat mutu pada SNI 3553:2015 tentang  air  mineral  batas  maksimal  jumlah bakteri  ALT  yaitu  1,0  x  10²  CFU/mL.  Hal  ini berarti sampel air minum dalam kemasan yang telah  diuji  memenuhi  standar  kualitas  yang ditetapkan  dalam  SNI  3553:2015  tentang  Air mineral.

## Pengujian  total  Coliform  dan  Escherichia coli
Salah  satu  parameter  untuk  menilai kualitas  air  minum  dalam  kemasan  secara mikrobiologis, sesuai dengan ketentuan dalam SNI  3553:2015  tentang  Air  Mineral,  adalah dengan  tidak  ditemukannya  bakteri Total Coliform dan Escherichia coli dalam setiap 100 mL sampel.  Bakteri Coliform adalah kelompok bakteri  gram-negatif  berbentuk  batang  yang mampu  fermentasi  laktosa  menjadi  asam  dan gas  pada  suhu  37°C  selama  48  jam.  Jumlah Coliform yang  terhitung  setelah  inkubasi  pada suhu tersebut disebut Total Coliform .
Escherichia  coli merupakan  bagian  dari Total Coliform dan memiliki kemampuan hidup dalam lingkungan  anaerob  fakultatif  serta  mampu fermentasi  berbagai  jenis  karbohidrat  menjadi asam dan gas (Rifai & Anissa, 2021).
Pengujian dengan metode membran filter menggunakan media CCA memiliki selektivitas yang  rendah,  karena  bakteri  selain  bakteri Coliform dan E.coli dapat tumbuh namun tidak memberikan  warna,  sehingga  pertumbuhan bakteri  lain  yang  tidak  diinginkan  dapat mengganggu  keakuratan  perhitungan Total Coliform dan E.coli . Oleh karena itu, pengujian dilakukan  secara  aseptik  di  ruang  steril  dan menggunakan laminar air flow untuk meminimalkan terjadinya kontaminasi. Metode membran  filter  ini  sesuai  untuk  pengujian  air dengan jumlah bakteri yang rendah, kelebihan lainnya  yaitu  metode  ini  merupakan  metode yang sederhana dengan waktu pengujian yang relatif  cepat  yaitu  dengan  waktu  inkubasi kurang  lebih  24  jam.  Hasil  pengujian  diamati secara  visual  dan  dihitung  mikroba  yang tumbuh pada media CCA.
a
b
Rosita & Sadiyah.
Gambar 4. (a) Hasil pengujian total Coliform dan E.coli sampel A pada media CCA ulangan 1 dan 2, (b) kontrol negatif , dan (c) kontrol positif
Berdasarkan  Gambar  4,  dapat  dilihat hasil  pengujian Total  Coliform dan E.coli sampel A pada media CCA menunjukkan tidak adanya pertumbuhan koloni bakteri pada media CCA, baik pada ulangan  1 (A1) maupun pada ulangan  ke  2  (A2)  yang  ditandai  dengan  tidak adanya  koloni  berwarna  merah  maupun  biru pada  media  CCA  yang  diuji.  Selain  itu dilakukan pengujian kontrol positif
menggunakan kultur biakan bakteri Citrobacter freundii ( Coliform ) dan kultur biakan Escherichia  coli ( E.coli )  dalam aquabidest steril. Hasil pengujian kontrol positif pada media CCA  menunjukkan  terdapat  banyak  koloni bakteri yang tumbuh  pada  media CCA.  Koloni bakteri berwarna merah menunjukkan pertumbuhan  bakteri Coliform sedangkan koloni  bakteri  berwarna  biru  menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri E.coli .
Perbedaan  warna  koloni  bakteri  ini disebabkan  adanya  reaksi  antara  enzim  yang dihasilkan  bakteri  dengan  substrat  yang
terkandung  dalam  media  CCA.  Media  CCA mengandung  dua  substrat  chromogenic,  yaitu Salmon-GAL dan X-beta-D-Glucuronide.
Bakteri Coliform menghasilkan  enzim  β- galactosidase yang menguraikan Salmon-GAL menjadi  senyawa  chromogenic,  sehingga menyebabkan  koloni  tumbuh  berwarna  merah salmon  di  media  CCA.  Sementara  itu,  bakteri E.coli mampu  menghasilkan  enzim  β- galactosidase dan β-D-glucuronidase. Enzim β- D-glucuronidase memecah substrat X- glucuronida  menjadi  senyawa  chromogenic berwarna  biru  tua-violet,  sehingga  koloni bakteri E.coli tumbuh dengan warna biru tua di media CCA (Hamida dkk,2019).
Pada Gambar 4, juga dapat dilihat media CCA hasil pengujian kontrol negatif menunjukkan  tidak  ada  koloni  bakteri  yang tumbuh pada media CCA, hal ini menunjukkan bahwa aqubidest yang  digunakan  sebagai pelarut dan pengencer pada pengujian kontrol positif  bakteri Total  Coliform dan E.coli tidak
Ulangan 2 Ulangan 1 a Kontrol (-) b E.coli Coliform c

## Rosita & Sadiyah.
memberi  pengaruh  terhadap  hasil  pengujian yang  diperoleh  dan  pelarut  tersebut  masih steril.  Seluruh  data  hasil  pengujian Total Coliform dan E.coli ditunjukkan dalam Tabel 5.
Tabel  5. Hasil  Pengujian Total  Coliform dan
Escherichia coli
Sampel Ulangan Hasil (koloni/250 mL) Total Coliform E.coli AMDK 1 0 0 2 0 0 Kontrol Positif TBUD TBUD Kontrol Negatif 0 0 Syarat Mutu (SNI 3533:2015) 0 Keterangan: TBUD : terlalu banyak untuk dihitung Hasil pengujian pada Tabel 5 menunjukkan bahwa sampel A yang diuji tidak menghasilkan  pertumbuhan  koloni  bakteri Coliform atau E.coli , dengan hasil 0 koloni/250 mL.  Hasil  ini  memenuhi  persyaratan  kualitas cemaran  mikroba Total  Coliform sesuai dengan  standar  SNI  3553:2015  tentang  Air Mineral,  yaitu  tidak  terdeteksi  (TTD)  koloni bakteri/250 mL sampel.

## Pengujian Pseudomonas aeruginosa
Pengujian
menggunakan
metode
membran filter juga dilakukan untuk mengidentifikasi bakteri Pseudomonas aeruginosa .  Bakteri  ini  tersebar  di  permukaan tanah  dan  air,  dapat  hidup  baik  dalam  kondisi aerob maupun anaerob fakultatif, dan seringkali ditemukan dalam air mineral sebagai indikator kontaminasi selama proses produksi atau pada produk  akhir. P.aeruginosa membentuk  koloni bundar dan licin berwarna fluoresen kehijauan, sering kali memproduksi pigmen kebiruan yang
tidak  berfluoresen,  yang  dikenal  sebagai piosianin. Pertumbuhan bakteri ini optimal pada suhu  35-42°C,  dan  pertumbuhan  pada  suhu 42°C  membantu  dalam  membedakannya  dari spesies Pseudomonas lainnya dalam kelompok fluoresen,  serta  memiliki  sifat  oksidase  positif (Rohmawati, 2019).
Pengujian P.aeruginosa dilakukan secara  membran  filter  menggunakan  media Pseudomonas CFC/CN Agar . Pseudomonas
CN  agar merupakan  media  selektif  bagi pertumbuhan
bakteri Pseudomonas
aeruginosa .  Media  ini  mengandung  cetrimide dan asam nalidiksat sebagai agen selektif yang akan menekan pertumbuhan spesies
Klebsiella, Proteus, dan
Providencia . Kandungan tryptone dan  gelatin  pepton  yang terdapat pada media tersebut akan menyediakan senyawa nitrogen, karbon, asam amino rantai panjang, dan nutrisi pertumbuhan esensial  lainnya.  Jumlah  ion  kalium  serta magnesium  dapat  mendukung  meningkatkan produksi pigmen (Himedia Laboratories, 2015). Bakteri P.aeruginosa yang tumbuh pada media Pseudomonas CN  agar  akan  menghasilkan pigmen  fluoresen  berwarna  hijau  yang  akan terlihat berpendar ketika disinari sinar UV.
Gambar 5 .  Hasil pengujian Pseudomonas aeruginosa pada  sampel  A  pada media Pseudomonas CN agar
Hasil  pengujian P.aeruginosa pada sampel A menggunakan media Pseudomonas CN  agar  seperti  yang  terlihat  pada  Gambar  5 tidak menunjukkan adanya pertumbuhan koloni
Ulangan 1 Kontrol (-)
Kontrol (+) dengan UV Ulangan 2 Kontrol (+)

## Rosita & Sadiyah.
pada media, baik pada ulangan 1 (A1) maupun pada  ulangan  ke  2  (A2).Pengujian  di  bawah lampu  UV  juga  tidak  menunjukkan  adanya koloni  yang  berpendar.  Pertumbuhan  koloni bakteri P.aeruginosa pada media Pseudomonas CN terlihat sebagai koloni yang berwarna  fluoresensi  hijau  hingga  kecoklatan dan  berpendar  ketika  disinari  oleh  lampu  UV seperti  yang  terlihat  pada  hasil  pengujian kontrol  positif.  Koloni  bakteri  yang  berwarna hijau  menghasilkan  pigmen  piosianin  yang dikonfirmasi  sebagai P.aeruginosa sedangkan koloni  yang  berwarna  kecoklatan  disebut pigmen  piomelanin  dan  pigmen  tersebut diidentifikasi sebagai P.aeruginosa yang gagal menghasilkan piosianin (Setyorini,2019).
Pengujian  kontrol  negatif  menunjukkan tidak adanya pertumbuhan koloni pada media.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa aquabidest yang digunakan  sebagai  pelarut  dan  pengencer pada pengujian kontrol negatif masih steril dan tidak  terkontaminasi  bakteri P.aeruginosa sehingga  tidak  memberi  pengaruh  terhadap hasil pengujian kontrol positif.
Tabel 6. Hasil Pengujian Pseudomonas aeruginosa Sampel Ulangan Hasil (koloni/250 mL) AMDK 1 0 2 0 Kontrol Positif TBUD Kontrol Negatif 0 Syarat Mutu (SNI 3553:2015) 0 Keterangan : TBUD : terlalu banyak untuk dihitung
Menurut data yang tercatat dalam Tabel 6  menunjukkan  bahwa  pada  sampel  A  yang diuji tidak terdapat pertumbuhan koloni bakteri
P.aeruginosa dalam  250  mL  sampel  dengan
dua  kali  pengulangan.  Hasil  ini  memenuhi syarat mutu yang ditetapkan Standar Nasional Indonesia  No  3553:2015  tentang  Air  mineral terkait  batas  cemaran  mikroba Pseudomonas aeruginosa yaitu tidak terdeteksi (TTD) adanya koloni bakteri/250 mL sampel.

## KESIMPULAN
Berdasarkan
hasil pengujian, disimpulkan bahwa kandungan logam  Mn dan Cu,  serta  cemaran  mikroba  seperti  ALT, Total Coliform , Escherichia  coli ,  dan Pseudomonas aeruginosa dalam  sampel  air  minum  dalam kemasan  tidak  melampaui  batas  maksimum yang telah ditetapkan. Hasil ini sesuai dengan standar  kualitas  yang  diatur  dalam  SNI 3553:2015 tentang Air Mineral..

## DAFTAR PUSTAKA
Adhani,  R.&  Husaini.  (2017). Logam  Berat Sekitar Manusia . Lambung     Mangkurat
University Press. Banjarmasin.
Agustina,  A.C.  (2021).  Analisis  Cemaran Coliform dan Identifikasi Escherichia  coli dari  Depo  Air  Minum  Isi  Ulang  di  Kota Semarang. Journal of Biology. 10 (1): 23- 25.
Amelia,F.  &  Rahmi.  (2017).  Analisa  Logam Berat  pada  Air  Minum  Dalam  Kemasan (AMDK) yang  diproduksi  di Kota Batam.
Jurnal Dimensi . 6(3), 434-440.
Arianda,  D.  (2016). Buku  Saku  Bakteriologi . AM-Publishing. Bekasi.
Badan  Standarisasi  Nasional.  (2009). Standar Nasional  Indonesia  7388:2009  tentang Batas  Maksimum  Cemaran  Mikroba dalam  Pangan. Badan  Standarisasi Nasional. Jakarta
Badan  Standarisasi  Nasional.  (2015). Standar Nasional  Indonesia  3553:2015  tentang
Air Mineral . Badan Standarisasi Nasional. Jakarta
Badan  Standarisasi  Nasional.  (2015). Standar Nasional  Indonesia  3554:2015  tentang

## Rosita & Sadiyah.
Cara  Uji  Air  Minum  dalam  Kemasan .
Badan Standarisasi Nasional. Jakarta
Hadi, Anwar. (2010). Verifikasi Metode Pengujian Air dan Air Limbah . IPB Press. Bogor.
Hamida,  F.,  Lisana, S.A.,  Vilya, S.  &  Della,  P. (2019). Escherichia coli Resisten Antibiotik  Asal  Air  Keran  di  Kampus ISTN. Jurnal Kesehatan . 12(1), 63-65.
Himedia  Laboratories.  (2015). Pseudomonas Agar Base . Himedia Laboratories.
Mumbai
Ilham, M. (2020). Analisis Kualitas Air (Mn, Cu, Zn,  F-  dan  Cl-)  Pada  Mata  Air Pegunungan  Desa  Sadar,  Kecamatan
Tellu  Limpoe,  Kabupaten  Bone. Skripsi . FMIPA Universitas
Hasanuddin.
Makasar.
International  Organization  For  Standarization.
(2017). ISO/IEC  17025:2017  General Requirements for Competence of Testing and Calibration Laboratories . Switzerland Notoatmodjo, S. (2011). Kesehatan Masyarakat,  Ilmu  &  Seni. Rineka  Cipta. Jakarta
Putro,  P.K.  (2009).  Pembuatan  Bahan  Acuan Standar (Standard Reference Material/SRM)  untuk  Pengujian  Kadar Pengotor Co, Al, Be, B, dan Cd di dalam
Serbuk  UO 2 dan  U 3 O 8 ,  hlm.  32-35. Prosiding Seminar Nasional Daur Bahan Bakar. Pusat  Teknologi  Bahan  Bakar Nuklir – BATAN. Serpong.
Pirdaus,  P.,  Miftahur,  R.,  Rinawati.,Ni  Luh,
G.R.J.,  Dian,  P.  &  Agung,A.K.  (2018).
Verifikasi Metode Analisis Logam Pb, Cd,
Cr, Cu, Ni, Co, Fe, Mn, dan Ba Pada Air
Menggunakan Inductivly Coupled Plasma-Optical  Emission  Spectrometer (ICP-OES). Analit: Analitycal and
Enviromental Chemistry . 3(1), 2-5.
Rifai, K.R. & Anissa. (2019). Verifikasi Metode Pengujian Coliform dalam  Sampel  Air Mineral. Jurnal  Teknologi  Proses  dan Inovasi Industri . 4(2), 45-48
Rohmawati,  H.I.  (2019).  Identifikasi  Bakteri Pseudomonas  aeruginosa Pada  Air Minum  dalam  Kemasan. KTI .  Jurusan
Analis Kesehatan, STIKES Insan Cendekia Medika. Jombang.
Setyorini, E. (2019). Identifikasi Pseudomonas aeruginosa Pada  Air  Minum  dalam Kemasan  dengan  Metode  Membrane Filter. KTI .  Prodi  Analisa  Farmasi  dan
Makanan, POLTEKES KEMENKES Jakarta II. Jakarta.
Soedarto.  (2015). Mikrobiologi  Kedokteran .
Sagung Seto. Jakarta.
Subianto,  A.Y.B.  (2020).  Analisa  Timbal  dan Kadmium  Pada  Polimer  Menggunakan Inductively  Coupled  Plasma  Optical Emission Spectrometry(ICP-OES) di Laboratorium  Sentral  PT.  Sucofindo.
Tugas  Akhir .  FMIPA  Universitas  Islam Indonesia. Yogyakarta.
Sundari,  S.  &  Fadhliani.  (2019).  Uji  Angka Lempeng  Total  (ALT)  pada  Sediaan Kosmetik  Lotion  X  di  BBPOM  Medan.
Jurnal Biologica Samudra. 1(1), 26-27.
Surahmaida  &  Sri,  N.  (2018).  Perhitungan Angka Lempeng Total Pada Telur Ayam Ras. Jurnal Stigma . 11(1), 33-36.
Tautkus,S., L, Steponeniene., & R, Kazlaukas.
(2003).  Determination  of  Iron  in  Natural and  Mineral  Waters  by  Flame  Atomic
Absorption Spectrometry . J.Serb.Chem.Soc. 69(5), 393-395.