## Skrining Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 70% Sepuluh Daun Tanaman Terhadap Klebsiella Pneumoniae
Antibacterial Activity Screening of Ten Leaves Extracts against

## Klebsiella Pneumoniae
Nurul Qolbi * dan Ratna Yuliani Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Jl. A. Yani Tromol Pos 1 Surakarta 57162 *email: nurulmadinahtulqolbi@gmail.com

## Abstrak
Klebsiella pneumoniae adalah bakteri penyebab penyakit infeksi seperti penyakit paru obstruksi kronik dan pneumonia.  Antibiotik  yang  digunakan  untuk  menangani  penyakit  infeksi  tersebut  menyebabkan  efek samping  sehingga  perlu  adanya  alternatif  obat  dari  bahan  alam  yang  dapat  menghambat K.  pneumoniae . Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  70%  sepuluh  daun  tanaman terhadap K.  pneumoniae, mengetahui  golongan  senyawa,  dan  golongan  senyawa  aktif  antibakteri  dalam ekstrak  daun  tanaman  yang  memiliki  diameter  zona  hambat  terbesar.  Ekstraksi  senyawa  dalam  daun dilakukan  menggunakan  penyari  etanol  70%  dengan  metode  maserasi.  Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan menggunakan  metode  difusi  disk . Identifikasi  golongan  senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak  yang memiliki  diameter  zona  hambat  terbesar  dilakukan  menggunakan  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT). Bioautografi  dilakukan  untuk  mengetahui  golongan  senyawa  aktif  dalam  ekstrak  yang  memiliki  aktivitas antibakteri  tertinggi.  Hasil  skrining  aktivitas  antibakteri  menunjukkan  bahwa  semua  ekstrak  mempunyai aktivitas antibakteri kecuali ekstrak daun bambu. Ekstrak etanol daun sukun ( Artocarpus altilis) mempunyai aktivitas antibakteri tertinggi dengan diameter zona hambat sebesar 18,33 ± 5,57 mm. Kandungan senyawa dalam  daun  sukun  adalah  tanin,  polifenol,  alkaloid, terpenoid,  dan  saponin  sedangkan  golongan  senyawa yang diduga memiliki aktivitas antibakteri adalah terpenoid dan saponin.
Kata kunci : antibakteri, Klebsiella pneumoniae , Artocarpus altilis , bioautografi.

## Abstract
Klebsiella  pneumoniae causes  several  diseases  such  as  chronic  obstructive  lung  disease  and  community pneumonia. The  antibiotics used for treating the infectious diseases cause several  side effects.  Therefore, alternative  medicines  which  have  minimal  side  effects  are  needed.  This  research  aimed  to  investigate antibacterial activity of ten ethanolic extract of leaves against K. pneumoniae, identify compounds and active compounds in extract which has the highest antibacterial activity. Compounds in leaves were extracted using 70% ethanol with maceration method. The disk diffusion method was used for screening antibacterial activity against K. pneumoniae . The identification of group of compounds in extract with the largest inhibitory zone diameter  was  done  using  Thin  Layer  Chromatography  (TLC)  and  bioautographic  test  was  performed  to determine the active compounds. The results of antibacterial activity screening tests showed that all extracts have antibacterial activity except bamboo leaf extract. Breadfruit extract ( Artocarpus altilis) has the highest antibacterial activity with diameter of inhibition zone of 18,33 ± 5,57 mm. Breadfruit extract contains tannin, polyphenol,  alkaloid,  terpenoid,  saponin,  and  the  active  antibacterial  compounds  were  terpenoid  and saponin.
Keywords: antibacteria, Klebsiella pneumoniae , Artocarpus altilis, bioautography.

## PENDAHULUAN
Klebsiella  pneumoniae adalah  bakteri Gram-negatif,  non-motil,  tidak  berkapsul, memfermentasi  laktosa,  bersifat  anaerob fakultatif yang merupakan kelompok Enterobakteriaceae  (Elmer et  al .,  2006). K. pneumoniae merupakan  salah  satu  bakteri
penyebab infeksi nokosomial seperti penyakit paru  obstruksi  kronik  (PPOK),  pneumonia, dan  infeksi  saluran  kemih  (ISK).  Hal  ini disebabkan  karena Klebsiella  pneumoniae memiliki kemampuan untuk  menyebar dengan  cepat. K.  pneumoniae berada  dalam saluran  pernafasan  dan  tinja  kurang  lebih
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon
pada  5%  individu  normal  akan  tetapi penyebaran  utama Klebsiella  pneumoniae adalah  di  saluran  pencernaan.  Infeksi terbanyak yang disebabkan oleh K. pneumoniae adalah  infeksi  saluran  kemih sebanyak 6%-17%.
Pneumonia  dan  penyakit  paru  obstruksi kronik  adalah  penyakit  infeksi  saluran pernapasan  bawah  akut  yang  banyak ditemukan. Pada penderita infeksi pneumonia dalam keadaan normal tidak terjadi pertumbuhan mikroorganisme di paru. Hal ini disebabkan karena adanya mekanisme pertahanan paru. Jika daya tahan tubuh tidak seimbang maka mikroorganisme dapat berkembang  biak  bahkan  menimbulkan penyakit.  Cara  mikroorganisme  mencapai saluran pernapasan ada beberapa tahap yaitu inokulasi  langsung,  penyebaran  melalui pembuluh darah, inhalasi bahan aerosol, dan kolonisasi  pada  permukaan  mukosa.  Pada penderita  PPOK  organ  yang  diserang  yaitu bronkus.  Infeksi  PPOK  didahului  dengan adanya infeksi pada bronkus atau paru dengan cara  merusak  dinding  bronkus  sehingga terjadi  bronkiestasis.  Pemeriksaan  sputum pada  penderita  PPOK  dapat  ditandai  dengan sputum  berwarna  kuning  hingga  hijau  atau berbau busuk menandakan  terjadinya infeksi sekunder pada bronkus sehingga pemeriksaan dilakukan  secara  mikrobiologis.  Sputum berbau  busuk  menandakan  infeksi  sekunder yang disebabkan oleh bakteri anaerob seperti Klebsiella  pneumoniae .  Angka  kejadian infeksi  pneumoni  yang  disebabkan  oleh Klebsiella  pneumoniae sekitar  7%-14% sedangkan prevalensi kejadian PPOK didunia rata-rata berkisar 3-11% (GOLD, 2015). Pada tahun 2013, di Amerika Serikat PPOK adalah penyebab  utama  kematian  ketiga  (America Lung Association, 2015). Prevalensi kejadian PPOK  di  Asia  Pasifik  rata-rata  6,3% sedangkan di Indonesia menunjukkan prevalensi  sebanyak  5,6%  (Regional  COPD Working Group, 2003).
Tingginya  persentase  penderita  infeksi saluran kemih, pneumoniae, dan PPOK yang disebabkan oleh K. pneumoniae memerlukan
terapi  dengan  antibiotik. World  Health Organization (WHO)  menyatakan  bahwa penatalaksana farmakologinya menggunakan antibiotik yang telah ditetapkan sebagai terapi empiris  PPOK  eksaserbasi  akut  yaitu amoksisilin,  eritromisin,  dan  kloramfenikol (WHO,  2011 cit. Sonita  and  Masri,  2014). K.  pneumoniae memiliki  tingkat  resistensi terhadap  antibiotik  ampisilin  sebesar  76%, sulfametoksazol  dan  trimetroprim  sebesar 71%, dan eritromisin sebesar 69%. Penelitian tersebut juga menyatakan bahwa K. pneumoniae memiliki  tingkat  sensitivitas paling  tinggi  terhadap  antibiotik  netilmisin (53%). K.  pneumoniae juga bersifat  sensitif terhadap antibiotik meropenem dan seftazidin. K.  pneumoniae sensitif  pada antibiotik-antibiotik  tersebut,  akan  tetapi obat-obat  tersebut  baru  dipasarkan  sehingga penggunaan antibiotik ini tidak terlalu sering, jumlahnya  terbatas,  dan  pertimbangan  efek samping obat seperti nefrotoksik, ruam, diare, mual, dan muntah (Sonita dan Masri, 2014).
Berdasarkan  hal  tersebut  perlu  adanya alternatif  lain  atau  terobosan  baru  dalam mengembangkan  pengobatan  bahan  alam karena  efektif dan  lebih aman jika dibandingkan  dengan  obat  sintesis.  Bahan alam  dari  tumbuhan  diharapkan  menjadi solusi bagi masyarakat untuk dijadikan salah satu  pengobatan  alternatif  untuk  mengatasi penyakit yang ditimbulkan oleh K. pneumoniae .  Tumbuhan  yang  ada  di  alam banyak  ditemukan  di  sekitar  lingkungan masyarakat sehingga mudah untuk diperoleh serta terjangkau dalam hal biaya.
Penelitian  ini  menggunakan  sepuluh daun  tanaman  yang  telah  teruji  memiliki aktivitas  antibakteri  yaitu  daun  kersen,  daun salam,  daun  belimbing  wuluh,  daun  sukun, daun  kelengkeng,  daun  alpukat,  daun binahong,  daun  kayu  putih,  daun  rambutan, dan daun bambu. Sepuluh daun tanaman yang telah  diteliti  sebelumnya  diekstraksi  dengan pelarut  etanol  dan  metanol.  Ekstrak  etanol daun  kersen  ( Muntingia  calabura L.) memiliki aktivitas antibakteri  terhadap Escherichia  coli (Buhian et  al .,  2016) .
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon
Ekstrak etanol daun bambu mampu menghambat K.  pneumonia (Wasnik  and Tumane, 2014), ekstrak etanol daun rambutan ( Nephelium  lappaceum )  dapat  menghambat pertumbuhan E. coli (Nethaji et al., 2015) dan ekstrak etanol daun kelengkeng ( Dimocarpus longan ) dapat menghambat aktivitas Staphyllococcus  aureus (Wisitsak et  al., 2012).
Beberapa ekstrak yang disari menggunakan  metanol  juga  telah  diuji aktivitas  antibakterinya.  Ekstrak  metanol daun sukun ( Artocarpus altilis ) (Raman et al ., 2012)  dan  ekstrak  metanol  daun  salam ( Eugenia  polyantha )  dapat  menghambat pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa (Gowri and Vasantha, 2014). Ekstrak metanol daun binahong ( Anredera cordifolia ) memiliki  aktivitas  terhadap  bakteri P. aeruginosa dengan  Konsentrasi  Hambat Minimum sebesar 256 μg/mL (Nuryanti et al ., 2014)  sedangkan  ekstrak  metanol  daun belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi Linn) dengan  konsentrasi  400  μg/disk  dapat menghambat aktivitas P. aeruginosa (Das et al., 2011).  Ekstrak  metanol  daun  alpukat ( Persea  americana )  dengan  konsentrasi  50 mg/mL  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri K.  pneumoniae (Ogundare  and Oladejo,  2014)  dan  ekstrak  metanol  daun kayu putih ( Melaleuca leucadendra ) memiliki  aktivitas  terhadap Staphylococcus aureus (Al-Abd et  al., 2015).  Penelitian  ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antibakteri  sepuluh  ekstrak  daun  tanaman terhadap K.  pneumoniae dan  mengetahui golongan  senyawa  pada  ekstrak  daun  yang memiliki  aktivitas  antibakteri  tertinggi  dan golongan senyawa aktif antibakterinya.

## METODOLOGI PENELITIAN Alat
Alat-alat  yang  akan  digunakan  dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas (Pyrex®), mikropipet  (Socorex), rotary  evaporator (Heidolph), neraca analitik (Ohaus), waterbath (Memmert),  inkubator  bakteri (Memmert),  oven  (Memmert),  autoklaf
(Hirayama), incubator shaker (New Brunswick  Scientific), LAF  (Laminar  Air Flow) (CV.  Srikandi  Laboratory),  vorteks (Thermolyne  Corporation),  dan  mikroskop (Olympus).

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini  antara  lain  sepuluh  daun  tanaman  yaitu daun  kersen,  daun  salam,  daun  belimbing wuluh,  daun  sukun,  daun  kelengkeng,  daun alpukat,  daun  binahong,  daun  kayu  putih, daun  rambutan,  dan  daun  bambu  yang diperoleh  dari  daerah  sekitar  Kudus  dan Bojonegoro,  bakteri Klebsiella  pneumoniae diperoleh  dari  Laboratorium  Mikrobiologi, Fakultas
Farmasi, Universitas
Muhammadiyah  Surakarta,  etanol  70%, media  Mueller  Hinton  (MH),  media  BHI ( Brain  Heart  Infusion ), blank  disk ,  larutan hidrogen peroksida (H 2 O 2 ), NaCl 0,9%, disk siprofloksasin,  etanol  70%,  n-heksan,  etil asetat,  aseton,  silika  gel  GF 254 ,  pereaksi semprot  FeCl 3 ,  sitroborat,  Dragendorff,  dan vanillin-asam  sulfat.

## Penyiapan Bahan
Bahan  penelitian  yang  sudah  diperoleh yaitu  daun  kersen,  daun  salam,  daun belimbing,  daun  sukun,  daun  kelengkeng, daun  alpukat,  daun  binahong,  daun  kayu putih, daun rambutan, dan daun bambu dicuci dengan  air  mengalir  hingga  bersih  untuk menghilangkan semua kotoran yang menempel pada daun-daun tersebut. Kemudian  daun  dikeringkan  di  bawah  sinar matahari menggunakan penutup kain berwarna hitam. Hal tersebut dilakukan agar daun-daun  tersebut  terhindar  dari  degradasi metabolit  sekunder  akibat  sinar  matahari. Setelah  itu  daun  yang  sudah  kering dihaluskan dengan blender untuk memperkecil ukuran.

## Ekstraksi
Sebanyak lebih kurang 50 gram masing- masing  serbuk  daun  direndam  dalam  1500 mL etanol 70%, kemudian dimaserasi selama 3x24  jam  dan  sesekali  diaduk.  Setelah  itu maserat disaring menggunakan kertas saring. Lima  ampas  daun  yaitu  daun  kersen,  sukun,
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon
belimbing  wuluh,  kayu  putih,  dan  bambu diremaserasi  sedangkan  lima  ampas  lainya yakni  daun  binahong,  kelengkeng,  alpukat, rambutan, dan salam hanya dimaserasi 1 kali. Kemudian  filtrat  dari  masing-masing  daun dipekatkan  menggunakan  evaporator.  Hasil evaporasi  kemudian  diuapkan  di  atas waterbath hingga  diperoleh  ekstrak  yang kental.
Pembuatan Suspensi Bakteri Bakteri Klebsiella  pneumoniae diambil sebanyak  3-5  koloni  dengan  ose  bulat  yang sudah  steril  dari  persediaan  stok  bakteri, selanjutnya  disuspensikan  ke  dalam  5  mL media cair BHI. Bakteri diinkubasi selama 2- 6 jam dengan suhu 37 o C di shaking incubator . Selanjutnya  ditambahkan  salin  steril  hingga kekeruhan  sama  dengan  standar  Mc.Farland 1,5 x 10 8 CFU/mL.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  untuk  uji aktivitas antibakteri adalah metode disk difusi agar. Suspensi bakteri diambil sebanyak 100 µL  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi kosong  kemudian  ditambahkan  salin  steril hingga  kekeruhan  sama  dengan  standar McFarland  1,5  x  10 8 CFU/mL.  Selanjutnya suspensi  yang  telah  dihomogenkan  dengan salin steril diambil   200 µL kemudian ditetesi di  atas  media  MH  dan  diratakan  dengan spreader  glass steril . Larutan  ekstrak  daun dengan  konsentrasi  20%  b/v  diambil  10  µL selanjutnya diteteskan pada disk kosong lalu ditunggu  sekitar  15  menit  agar  pelarut menguap. Disk kemudian diletakkan di media yang  telah  diinokulasi  dengan  bakteri Klebsiella  pneumoniae .  Kontrol  positif menggunakan  disk  antibiotik  siprofloksasin dan  kontrol  negatif  menggunakan  disk  yang ditetesi  etanol  70%  sebanyak  10  µL. Kemudian  kultur  diinkubasi  selama  24  jam dengan suhu 37°C dan diamati diameter zona hambat yang terbentuk.
K romatografi Lapis Tipis
Plat  KLT  silika  gel  GF 254 yang  telah ditotolkan  ekstrak  daun  sukun  dan  ekstrak daun  kayu  putih  selanjutnya  dimasukkan  ke dalam  bejana  yang  berisi  fase  gerak.
Pemisahan  ekstrak  etanol  daun  sukun menggunakan fase gerak n-heksan : etil asetat (6:4)  sedangkan  ekstrak  etanol  daun  kayu putih  menggunakan  fase  gerak  n-heksan  : aseton  (6:1,5).  Plat  KLT    hasil  elusi diletakkan  pada  suhu  ruang  hingga  kering. Kemudian  plat  diamati  di  bawah  sinar tampak, UV 254 nm, dan UV 366 nm. Setiap plat  KLT  disemprot  dengan  reagen  FeCl 3 untuk mendeteksi adanya tanin dan polifenol, sitroborat untuk mengetahui adanya flavonoid,  Dragendorff  untuk  mendeteksi adanya  alkaloid,  dan  vanilin-asam  sulfat untuk  mendeteksi  adanya  terpenoid  dan saponin.

## Bioautografi
Metode  bioautografi  dilakukan  untuk mengidentifikasi  golongan  senyawa  aktif antibakteri.  Suspensi  bakteri Klebsiella pneumoniae yang telah dicampurkan dengan larutan  salin  diinokulasikan  ke  media  MH sebanyak 200 µL, selanjutnya plat KLT yang telah  dielusi  ditempelkan  pada  media  MH, kemudian  didiamkan  selama  5  menit  agar senyawa  aktifnya  dapat  berdifusi  ke  dalam media.  Setelah  itu  plat  KLT  diambil  dari media, cawan Petri diinkubasi selama 24 jam dengan  suhu  37°C.  Hasil  inkubasi  diamati, jika  ada  zona  hambat  dihitung  nilai  Rfnya. Senyawa  aktif  dalam  ekstrak  daun  yang memiliki  aktivitas  antibakteri  ditunjukkan dengan  adanya  daerah  yang  bening  pada media  MH.  Nilai  Rf  hasil  bioautografi dibandingkan dengan nilai  Rf terdekat hasil KLT  sehingga  golongan  senyawa  yang memiliki aktivitas antibakteri dapat diketahui.

## Analisis Data
Analisis  hasil  uji  aktivitas  antibakteri. Hasil  skrining  aktivitas  antibakteri  berupa diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  di sekitar  disk.  Hasil  diameter  semua  zona hambat tersebut diukur dan dihitung rata-rata diameter  dan  SDnya  (standar  deviasi). Ekstrak  daun  tanaman  yang  memiliki aktivitas  antibakteri  terbesar  ditentukan  dari diameter zona hambat yang paling besar.
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon
Analisis  hasil  kromatografi  lapis  tipis. Ekstrak  yang  telah  dielusi  oleh  fase  gerak kemudian  diamati  pada  sinar  tampak,  sinar UV  254,  dan  sinar  UV  366  dan  pengamatan setelah penyemprotan dengan reagen semprot.  Reagen  semprot  yang  digunakan adalah  FeCl3,  Dragendorff,  sitroborat,  dan vanillin-asam  sulfat.Reagen  FeCl 3 untuk mendeteksi  adanya  tanin  dan  polifenol, sitroborat untuk mengetahui adanya flavonoid,  Dragendorff  untuk  mendeteksi adanya  alkaloid,  dan  vanilin-asam  sulfat untuk  mendeteksi  adanya  terpenoid  dan saponin.
Analisis  hasil  bioautografi.  Analisis  uji bioautografi  dilakukan  dengan  menghitung nilai Rf bercak yang menyebabkan hambatan pertumbuhan  bakteri  kemudian  dicocokkan dengan  nilai  Rf  hasil  KLT.  Pada  tahap  ini dapat  diketahui  golongan  senyawa  yang memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap K. pneumoniae.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  tahap  ekstraksi  didapatkan  ekstrak kental  pada  masing-masing  daun  tanaman. Metode ekstraksi yang dipilih yakni maserasi karena  cara  pengerjaannya  yang  mudah  dan alat-  alat  yang  digunakan  sederhana.  Pelarut yang digunakan adalah etanol 70%. Arifianti (2014) dalam Wijesekera (1991) menyatakan bahwa pelarut yang sering digunakan adalah alkohol karena merupakan pelarut
pengekstraksi  yang  terbaik  untuk  hampir semua senyawa dengan bobot molekul rendah seperti saponin dan flavonoid. Hasil rendemen yang diperoleh berbeda-beda yakni berkisar  antara  10,597%  sampai  24,485%. Rendemen  yang  terendah  diperoleh  ekstrak daun  salam  sebesar  10,597%  sedangkan rendemen  yang  tertinggi  diperoleh  ekstrak daun kersen sebesar 24,485% (Tabel 1).
Perbedaan  perolehan  nilai  rendemen hasil  ekstrak  kental  sepuluh  daun  tanaman dikarenakan  perbedaan  berat  pada  masing- masing simplisia. Hal ini juga diduga  bahwa faktor  penyebab  rendemen  ekstrak  berbeda- beda  yang  didapatkan  saat  proses  maserasi ekstrak  tanaman.  Pada  proses  ekstraksi tersebut  ada  5  serbuk  daun  yang  dilakukan maserasi  diantaranya  daun  binahong,    daun kelengkeng,  daun  alpukat,  daun  rambutan, dan daun salam sedangkan 5 serbuk lain yaitu daun  kersen,  daun  sukun,  daun  belimbing wuluh,  daun  bambu,  dan  daun  kayu  putih diremaserasi. Beberapa faktor yang mempengaruhi yaitu faktor kimia seperti jenis dan jumlah senyawa kimia, metode ekstraksi, dan  pelarut  yang  digunakan  (Depkes  RI, 2000).
Skrining  aktivitas  antibakteri  dilakukan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol 70% sepuluh daun terhadap K. pneumoniae. Metode  yang  digunakan  yaitu metode  difusi  disk.  Metode  difusi  disk metode yang sederhana yang dilakukan untuk
Tabel 1. Hasil ekstraksi sepuluh daun tanaman menggunakan etanol 70%
Sampel Bobot serbuk (g) Bobot ekstrak (g) Rendemen (%) Daun kayu putih 50,59 9,76 19,292 Daun salam 55,20 5,85 10,597 Daun bambu 51,22 6,70 13,080 Daun kelengkeng 58,30 11,61 19,869 Daun sukun 32,92 3,87 11,755 Daun kersen 45,17 11,06 24,485 Daun binahong 49,50 5,70 11,515 Daun rambutan 55,30 8,57 15,497 Daun alpukat 60,80 7,90 12,993 Daun belimbing wuluh 53,46 9,19 17,190
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon
mengamati  diameter  zona  hambat.  Ada  dua macam  zona  hambat  yang  terbentuk  dalam metode difusi disk yakni zona hambat radikal dan  zona  hambat  irradikal.  Zona  hambat radikal merupakan daerah di sekitar disk yang tidak  ditumbuhi  bakteri  sedangkan  zona hambat  irradikal  yakni  daerah  hambat  di sekitar  disk  tetapi  masih  ada  sedikit pertumbuhan bakteri (bakteri tidak terbunuh) (Bauer et al ., 1966).
Uji  aktivitas  antibakteri  menunjukkan bahwa  dari  sepuluh  ekstrak  etanol  daun  ada sembilan  ekstrak  yang  memiliki  aktivitas terhadap Klebsiella  pneumoniae ditunjukkan dengan  adanya  zona  hambat  yang  semuanya radikal.  Hanya    ekstrak  etanol  daun  bambu yang  tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri. Sembilan  tanaman  yang  memiliki  aktivitas antibakteri  yaitu  ekstrak  etanol  daun  kayu putih dengan nilai rata-rata dan diameter zona hambat  sebesar  15,00  ±  0  mm,  daun  salam sebesar  10,00  ±  0  mm;  daun  kelengkeng sebesar 11,67 ± 1,52 mm; daun sukun sebesar 18,33 ± 5,57 mm; daun kersen sebesar 10,83 ±  0,76  mm  ;  daun  binahong  sebesar  7,83  ± 1,89  mm;  daun  rambutan    sebesar  10,67  ± 2,30 mm; daun alpukat sebesar 11,00 ± 1,00 mm; dan daun belimbing wuluh sebesar 9,67 ±  2,68  mm  (Tabel  2).  Ekstrak  etanol  daun sukun dan daun kayu putih memiliki diameter zona hambat yang besar.
Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun sukun  dan  ekstrak  etanol  daun  kayu  putih mempunyai aktivitas antibakteri dengan nilai diameter  zona  hambat  berturut-turut  sebesar 18,33 mm dan 15,00 mm. Raman et al. (2012) menyatakan  bahwa  ekstrak  metanol  daun sukun  mempunyai  aktivitas  terhadap K. pneumoniae dengan  diameter  zona  hambat sebesar 11,67 mm sedangkan pada penelitian Bharat  and  Praveen  (2015)  menyatakan bahwa  ekstrak  metanol  daun  kayu  putih memiliki aktivitas antibakteri dengan diameter  daerah  hambat  sebesar  17,00  mm. Perbedaan hasil tersebut kemungkinan disebabkan  oleh  penggunaan  jenis  pelarut. Metanol  merupakan  jenis  pelarut  yang mampu  menarik  lebih  banyak  jumlah senyawa  metabolit  sekunder  dibandingkan dengan pelarut etanol (Suryanto dan Wehantouw,  2009).  Mbaeyi  dan  Onwuka (2014) menyatakan senyawa aktif antibakteri yang terlibat dalam ekstrak daun sukun adalah saponin,  tanin,  alkaloid,  dan  flavonoid. Senyawa aktif pada ekstrak daun kayu putih yang diduga mempunyai aktivitas antibakteri adalah  flavonoid  dan  fenolik  (Al-Abd et  al , 2015).
Berdasarkan hasil uji aktivitas antibakteri ektrak etanol 70% dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun kayu
Tabel 2. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol 70% sepuluh daun tanaman terhadap Klebsiella pneumoniae Sampel Rata-rata diameter zona hambat ± SD (mm) Ekstrak daun kayu putih 15,00 ± 0 Ekstrak daun salam 10,00 ± 0 Ekstrak daun bambu 6,00 ± 0 Ekstrak daun kelengkeng 11,67 ± 1,52 Ekstrak daun sukun 18,33 ± 5,57 Ekstrak daun kersen 10,83 ± 0,76 Ekstrak daun binahong 7,83 ±1,89 Ekstrak daun rambutan 10,67 ± 2,30 Ekstrak daun alpukat 11,00 ± 1,00 Ekstrak daun belimbing wuluh 9,67 ± 2,08 Etanol 70% (K-) 6,00 ±0 Siprofloksasin (K+) 25,00 ±0 Keterangan:
Diameter zona hambat termasuk diameter disk (6 mm) Hasil perhitungan merupakan hasil 3x uji
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon
putih,  sukun,  kelengkeng,  salam,  kersen, binahong,  rambutan,  alpukat,  dan  belimbing wuluh  mempunyai  aktivitas  antibakteri terhadap Klebsiella pneumoniae . Dua ekstrak memiliki diameter zona hambat terbesar yaitu ekstrak etanol daun sukun dan ekstrak etanol daun  kayu  putih.  Oleh  karena  itu  kedua ekstrak  tersebut  diteliti  lebih  lanjut  pada  uji KLT  dan  bioautografi  yang  bertujuan  untuk mengetahui kandungan senyawa yang memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap K. pneumoniae.
Uji  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT) dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan senyawa  dalam  dua  ekstrak  yang  memiliki diameter  hambat  besar  yaitu  ekstrak  etanol daun  sukun  dan  ekstrak  etanol  daun  kayu putih.  Fase  gerak  untuk  uji  KLT  ekstrak etanol daun sukun adalah etil asetat:n-heksan (4 : 6) sedangkan fase gerak yang digunakan untuk ekstrak etanol daun kayu putih adalah aseton : n-heksan (6 : 1,5). Uji ini dilakukan untuk  mengetahui  golongan  senyawa  yang terkandung  di  dalam  ekstrak  etanol  daun sukun dan daun kayu putih.
Hasil  KLT  dianalisis  dengan  melihat warna bercak yang terjadi setelah pemberian reagen  semprot.  Pereaksi  semprot  yang digunakan yaitu sitroborat, FeCl 3 , Dragendorff, dan vanillin-asam sulfat. Reagen sitroborat digunakan untuk mendeteksi  senyawa  flavonoid.  Bercak menunjukkan  hasil  positif  flavonoid  jika setelah  diberi  pereaksi  semprot  sitroborat bercak berfluoresensi kuning hingga kehijauan  (Markham,  1988)  atau  berwarna kuning-coklat  dan  oranye  pada  UV  366 (Nancy et  al ,  2015).  Hasil  yang  diperoleh menunjukkan tidak adanya senyawa flavonoid  dalam  ekstrak  etanol  daun  sukun sedangkan  ekstrak  etanol  daun  kayu  putih positif mengandung flavonoid yang ditunjukkan  dengan  fluoresensi  kehijauan pada Rf 0,42.
Pereaksi semprot FeCl 3 digunakan untuk mendeteksi  adanya  senyawa  tanin  dan polifenol.  Hasil  positif  ditunjukkan  adanya bercak berwarna abu-abu dalam pengamatan
visual  (Saifudin,  2014)  atau  warna  hijau hingga  hitam  (Ukoha et  al ,  2011).  Hasil identifikasi KLT yang diperoleh menunjukkan  hasil  yang  positif  adanya senyawa  tanin  atau  polifenol  pada  ekstrak etanol  daun  sukun  ditandai  dengan  adanya bercak  berwarna  abu-abu  dengan  Rf  0,32 sedangkan  ekstrak  etanol  daun  kayu  putih terbukti senyawa tanin atau polifenol pada Rf 0,47.
Pereaksi semprot Dragendorff digunakan untuk  mendeteksi  senyawa  alkaloid.  Hasil yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  daun  sukun  positif  mengandung alkaloid  ditandai  dengan  adanya  bercak berwarna coklat di bawah sinar tampak pada Rf  0,47  sedangkan  pada  hasil  KLT  ekstrak etanol daun kayu putih tidak terdapat bercak berwarna coklat sehingga disimpulkan bahwa ekstrak tidak mengandung senyawa alkaloid. Vanillin-asam sulfat digunakan untuk mengidentifikasi  adanya  senyawa  saponin dan  terpenoid.  Menurut  Wagner  and  Bladt (1996)  hasil  positif  saponin  dan  terpenoid ditandai dengan adanya bercak berwarna biru, biru hingga ungu pada pengamatan di bawah sinar  tampak  penyemprotan  dengan  vanilin- asam sulfat. Hasil yang diperoleh menunjukkan  bahwa  kedua  ekstrak  yaitu ekstrak etanol daun sukun dan ekstrak etanol daun  kayu  putih  memiliki  kandungan senyawa  saponin  dan  terpenoid.  Ekstrak etanol  daun  sukun  diduga  mengandung senyawa  saponin  dan  terpenoid  dengan  nilai Rf 0,57; Rf 0,67; Rf 0,77; dan 0,82 sedangkan senyawa saponin dan terpenoid pada  ekstrak etanol daun kayu putih berada pada Rf 0,22; Rf 0,47; dan Rf 0,90.
Berdasarkan hasil yang diperoleh ekstrak etanol  daun  sukun  mengandung  golongan senyawa tanin, polifenol, alkaloid, terpenoid, dan  saponin  sedangkan  kandungan  senyawa pada  ekstrak  etanol  daun  kayu  putih  adalah
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon
senyawa tanin, polifenol, flavonoid, saponin, dan terpenoid.
Uji bioautografi bertujuan untuk mengetahui  senyawa  yang  memiliki  potensi dalam  menghambat Klebsiella  pneumoniae . Aktivitas  antibakteri  dapat  dilihat  dengan adanya  zona  hambat  media  MH  yang  telah ditanami  bakteri.  Uji  ini  dilakukan  dengan menggunakan  dua  ekstrak  yang  memiliki diameter hambat terbesar yaitu ekstrak etanol daun  sukun  dan  ekstrak  etanol  daun  kayu putih.  Hasil  uji  bioautografi  menunjukkan adanya  zona  hambat  pada  daerah  yang sebelumnya  ditempeli  plat  KLT.  Ekstrak etanol  daun  sukun  memiliki  aktivitas antibakteri  ditandai  dengan  adanya  zona hambat pada Rf 0,57 dan Rf 0,67 sedangkan pada ekstrak etanol daun kayu putih tidak ada pertumbuhan  bakteri  pada  nilai  Rf  0,47 (Gambar  1).  Hasil  uji  KLT  dan  bioautografi menunjukkan  bahwa  golongan  senyawa dalam ekstrak etanol daun sukun pada Rf 0,57 dan  Rf  0,67  adalah  terpenoid  dan  saponin sedangkan  golongan  senyawa  dalam  ekstrak etanol  daun  kayu  putih  pada  Rf  0,47  adalah tanin, polifenol, terpenoid, dan saponin.
Mekanisme  senyawa  tanin  sebagai antibakteri adalah dengan menghambat enzim reverse  transcriptase dan  topoisomerase
DNA  sehingga  sel  bakteri  tidak  terbentuk (Nuria et  al. ,  2009).  Mekanisme  polifenol sebagai  antibakteri  yaitu  polifenol  berperan sebagai toksin dalam protoplasma, juga dapat merusak,  menembus  dinding  sel,  dan mengendapkan  protein  sel  bakteri  sehingga dapat menyebabkan denaturasi protein, enzim menjadi  tidak  aktif,  dan  menyebabkan kebocoran sel (Heyne, 1987).
Mekanisme kerja saponin dalam antibakteri  yaitu  mengganggu  permeabilitas membran  sel  bakteri,  yang  mengakibatkan kerusakan  membran  sel  dan  menyebabkan keluarnya  berbagai  komponen  penting  dari dalam sel bakteri yaitu protein, asam nukleat dan nukleotida (Ganiswarna, 1995). Senyawa terpenoid  juga  diketahui  aktif  melawan bakteri,  tetapi  mekanisme  antibakterial triterpenoid masih belum benar-benar diketahui.  Aktivitas  antibakteri  terpenoid diduga melibatkan pemecahan membran oleh komponen-komponen lipofilik (Cowan, 1999).

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  70%  daun  kersen, rambutan, kelengkeng, sukun, salam, binahong,  belimbing  wuluh,  alpukat,  dan kayu  putih  mempunyai  aktivitas  antibakteri
(A) (B)
Gambar 1. Hasil bioautografi ekstrak etanol daun sukun (A), bioautografi ekstrak etanol daun kayu putih (B). Golongan senyawa dalam ekstrak daun sukun pada Rf 0,57 dan 0,67 adalah terpenoid dan saponin.
Golongan senyawa dalam ekstrak daun kayu putih pada Rf 0,47 adalah tanin, polifenol, terpenoid dan
saponin.
Rf 0,47 Rf 0,67 Rf 0,57
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon
terhadap Klebsiella  pneumoniae sedangkan ekstrak  etanol  daun  bambu  tidak  memiliki aktivitas antibakteri. Senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol daun sukun yakni tanin, polifenol, alkaloid, saponin, dan
terpenoid.  Senyawa  aktif  yang  diduga  dapat menghambat aktivitas Klebsiella pneumoniae dalam  ekstrak  etanol  daun  sukun  adalah saponin dan terpenoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Abd N.M., Mohammed Nor Z., Mansor M., Azhar F., Hasan, M.S. and Kassim M., 2015, Antioxidant  Antibacterial  Activity  and  Phytochemical  Characterization  of Melaleuca  cajuputi Extract, Journal  of  BMC  Complementary  and  Alternative Medicine, 15 (1), 385.
America  Lung  Assosiation,  2015, Pneumonia ,  Terdapat  di http://www.lung.org/lung- disease/influenza/in-depth  resources/pneumonia-fact-sheet.html [Diakses  pada  14 Oktober 2017]
Bauer A.W., Kirby W.M., Sherris J.C., Turck M., 1966, Antibiotic Susceptibility Testing By a Standardized Single Disk Method, Am J Clin Pathol , 45 (4), 493-6.
Buhian W.P.C., Rubio R.O., Valle D.L. and Puzon J.J.M., 2016, Bioactive Metabolite Profiles and  Antimicrobial  Activity  of  Ethanolic  Extracts  from Muntingia  calabura L . Leaves and Stems, Article in Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 6 (8), 682-685.
Cowan M.M., 1999, Plant Products as Antimicrobial Agents, Clinical Microbiology Reviews, 12, 564-582.
Das S. C., Sultana S., Roy S. and Hasan, S.S., 2011, Antibacterial and cytotoxic activities of methanolic  extracts  of  leaf  and  fruit  parts  of  the  plant Averrhoa  Bilimbi (Oxalidaceae), American Journal of Scientific and Industrial Research , 531–536.
Elfidasari  D.,  Noriko,  Anita  M.,  Feroza  A.,  Fauziah  S.C.,  2014,  Deteksi  Bakteri Klebsiella pneumonia pada  Beberapa  Jenis  Rokok  Konsumsi  Masyarakat, Jurnal  Al-Azhar Indonesia Seri Sains dan Teknologi , 2 (1), 41-47.
Ganiswarna S., 1995, Farmakologi dan Terapi , Edisi 4, Penerbit UI, Jakarta.
Global  Initiative  for  Chronic  Obstruktive  Lung  Disease,  2015, Global  Strategy  for  The Diagnosis, Managemant, and Prevention of Chronic Pulmonary Disease
Gowri  S.S.  and  Vasantha  K.,  2010,  Phytochemical  Screening  and  Antibacterial  Activity  of Syzygium  cumini L.  (Myrtaceae)  Leaves  Extracts, International  Journal  of PharmTech Research , 2 (2), 1569-1573.
Heyne K., 1987, Tumbuhan Berguna Indonesia , Jilid III, Badan Litbang Kehutanan, Jakarta.
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon
Markham K.R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, diterjemahkan Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung.
Mbaeyi-Nwaoha  I.  E.,  and  Onwuka  C.  P.,  2014,  Comparative  Evaluation  of  Antimicrobial Properties  and  Pytochemical  Composition  of Artocarpus  altilis Leaves  Using Ethanol, n-Heksan, and Water, African Journal of Microbiology Research , 8 (37), 3409-3421.
Nansy  E.,  Harwoko  Pramono  S.,  Nugroho  A.E.,  2015,  Total  flvonoid  content  and in  vivo hypotensive effect of chloroform insolublefraction of Centella asiatica leaf extract, International Food Research Journal , 22 (5), 2119-2125.
Nethaji R., Thooyavan G., Nilla M. and Ashok K., 2015, Phytochemical Profiling, Antioxidant and  Antimicrobial  Activity  of  Methanol  Extract  In  Rambutan  Fruit  ( Nephelium Lappacium )  Epicarp  Against  The  Human  Pathogens, International  Journal  of Current Innovation Research , 1 (9), 201-206.
Nuria M.C., Faizatun A. dan Sumantri, 2009, Uji Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Jarak Pagar ( Jatropha  cuircas L.)  terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923, Escherichia  coli ATCC  25922,  dan Salmonella  typhi ATCC  1408, Jurnal  Ilmu  – ilmu Pertanian, 5, 26-37.
Nuryanti A., Yulinah E. and Firdianti I., 2014, Activity of Several Plant Extract Agains Drug- Sensitive  and  Drug-Resistant  Microbes, International  of  Seminar  on  Natural Product Medicines , Procedia Chemistry , 13, 164-169.
Ogundare A. and Oladejo B., 2014, Antibacterial Activities of the  Leaf and Bark Extract of Persea americana, American Journal of Ethnomedicine , 1 (1), 064-071.
Podschun R. and Ullman U., 1998, Klebsiella spp. as Nocosomial Pathogens, Epidemiology, Taxonomy,  Typing  Methods,  and  Pathogenicity  Factors, Journal  of  American Society for Microbiology, 11, 589-603.
Raman V., Sudhahar D., Anandarajagopal K., 2012, Preliminary phytochemical investigation and screening of antimicrobial activity of leaf extracts of Artocarpus altilis , Asian Journal of Biological and Life Sciences , 1, 104-197.
Riskesdas, 2013, Riset Kesehatan Dasar , Badan Penelitian Kesehatan Kementrian Kesehatan RI Tahun 2013, Jakarta.
Saifudin A., 2014, Senyawa Alam Metabolit Sekunder (Teori Konsep dan Teknik Pemurnian) , Deepublish, Yogyakarta.
Shaik G., Sujatha N. and Mehar S.K., 2014, Medicinal plants as Source of Antibacterial Agent to Counter Klebsiella pneumoniae, Journal of Applied Pharmaceutial Science, 4 (1), 135-147.
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon
Sonita A. and Masri M., 2014, Artikel Penelitian Pola Resistensi Bakteri pada Sputum Pasien PPOK Terhadap Beberapa Antibiotika di  Laboraturium Mikrobiogi RSUP  Dr. M. Djamil Periode 2010-2012, Jurnal Kesehatan Andalas, 3 (3), 354-357.
Ukoha  P.O.,  Cemaluk  E.A.C.,  Nnamdi  O.L.  and  Madus  E.P.,  2011,  Tannins  and  Other Phytochemical  of  the Samanaeasaman Pods  and  Their  Antimicrobial  Activities, African Journal of Pure and Applied Chemistry , 5 (8), 237-244.
Volk W.A. dan Wheeler M.F., 1993, Mikrobiologi Dasar , Erlangga, Jakarta.
Wagner H. and Bladt S., 1996, Plant Drugs Analysis: A Thin Layer Chromatography Atlas, 2nd ed., Germany, Springer.
Wasnik D.D. and Tumane P.M., 2014, Antibacterial Activity of Bambusa bambose L. against Multiple  Drug  Resistant  (MDR)  Bacteria  Isolated  from  Clinical  Specimen, International  Journal  of  Pharmaceutical  Sciences  Review  and  Research, 25  (1), 215-218.
WHO, 2011, World Health Organization (WHO), Burden of COPD cit. Sonita A. and Masri M.,  2014,  Artikel  Penelitian  Pola  Resistensi  Bakteri  pada  Sputum  Pasien  PPOK Terhadap Beberapa Antibiotika di Laboraturium Mikrobiogi RSUP Dr. M. Djamil Periode 2010-2012, Jurnal Kesehatan Andalas, 3 (3), 354-357.
Wisitsak P., Nimkamnerd J., Thitipramote N., Saewan T., Chaiwut P. and Pintathong P., 2012, Comparison the Bioactive Compounds and Their Activities Between  Longan And Litchi  Seeds  Extracts, Journal  of  1 st Mae  Fah  Luang  University  International Conference.
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia. Vol 15, No 1, (2018). ISSN 1411-4283 Available online at: http://journals.ums.ac.id/index.php/pharmacon