J.  Agrotek    Tropika.    ISSN  2337-4993 Vol. 9,  No. 1 : 35 - 43 ,  Januari 2021

## IDENTIFIKASI BERBASIS MORFOLOGI NEMATODA PURU AKAR
(Meloidogyne spp.) PADA PERTANAMAN JAMBU BIJI KRISTAL DI PROVINSI LAMPUNG

## MORPHOLOGICAL BASED  OF  IDENTIFICATION  OF  ROOT  KNOT NEMATODES  (Meloidogyne  spp.)  ON  CRYSTAL  GUAVA  PLANTATION IN LAMPUNG

## Amirul Syahid*, I G. Swibawa, Solikhin, dan Y. Fitriana
Jurusan Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung Jl Sumantri Brojonegoro 1, Bandar Lampung 35145, Indonesia
*Email: amirulsyahid96@gmail.com

## ABSTRACT
Guava Crystals are currently popular among other tropical fruits in Lampung. Various factors can affect the production of Crystal guava, such as infestation of Root Knot Nematodes (RKN). This research that was aimed to identify the species of RKN (Meloidogyne spp.) associated with the Crystal guava plant in Lampung was conducted from January to April 2019. RKN sampling was carried out on Crystal guava plantations in PT GGF located in East Lampung, PT GGP located in Central Lampung, and guava plantation belonging to farmer in Sinar Betung village, Talang Padang Tanggamus. A total of 40 samples of guava roots were taken from the three plantations and counting of adult female RKN was carried out in the Laboratory of Plant Pest, Lampung University. The results show that the higher of root gall counts was found in GGF 2 plantations reached 88 gall/g of root, and the lower was found in PT GGP which was 27.6 gall/g of root. While the higher population of juvenile 351 indiv/g of root was found at the plantation block of 41 D2 and the lower, 10 indiv/g of root was found at block of 42 J1 of PT GGP. Two species of Root Knot Nematodes were found, namely Meloidogyne incognita and Meloidogyne javanica, with composition of 97.3% and 3.33% respectively.
Keywords: Guava, Meloidogyne, root knot nematodes.

## ABSTRAK
Jambu biji Kristal saat ini populer di Lampung di antara buah-buahan tropika lainnya. Salah OPT penting yang menyerang jambu biji ini yaitu nematoda puru akar (NPA). Penelitian yang bertujuan untuk mempelajari spesies nematoda puru akar yang berasosiasi dengan tanaman jambu biji kristal di Lampung dilakukan pada bulan Januari-April 2019. Pengambilan sampel nematoda dilakukan pada lahan pertanaman jambu biji kristal di PT GGF, PT GGP, dan di desa Sinar Betung Kecamatan Talang Padang Kabupaten Tanggamus. Sebanyak 40 sampel akar jambu diambil dari ketiga perkebunan tersebut dan dilakukan penghitungan nematoda betina dewasa di Laboratorium Ilmu Hama Tumbuhan Universitas Lampung. Hasil penelitian menunjukkan jumlah puru yang tinggi ditemukan pada pertanaman GGF 2 yaitu 88 puru/g akar, dan rendah di PT GGP yaitu 27,6 puru/g akar. Jumlah juvenil tinggi yaitu 351 indiv/g akar ditemukan pada Blok pertanaman 41 D2, dan rendah yaitu 10 indiv/g
akar di blok pertanaman 2 J1, PT GGP Lampung Tengah. Ditemukan dua spesies nematoda puru akar, yaitu Meloidogyne incognita dan Meloidogyne Javanica, dengan komposisi masing-masing 97,3% dan 3,33% .
Kata kunci: Jambu biji, Meloidogyne , nematoda puru akar.

## PENDAHULUAN
Jambu biji Kristal saat ini popular di antara buah-buahan tropika di Lampung.  Tanaman yang berasal dari Brasilia ini menyebar ke Thailand dan negara-negara Asia  lainnya  termasuk  Indonesia. Menurut Wang  (2011),  jambu  biji  Kristal  hasil pemuliaan dari Psidium guajava L. yang merupakan bantuan transfer teknologi Taiwan untuk Indonesia telah menyebar ke berbagai daerah di Indonesia.
Provinsi Lampung merupakan salah satu sentra produksi jambu biji Kristal di Indonesia. Produksi jambu ini mengalami penurunan setiap tahunnya yaitu 196,86 ton pada tahun 2012 menjadi 150,71 ton tahun 2013, 126,61 ton tahun 2014, dan 106,74 tahun 2015 (BPS, 2016).  Berbagai faktor mempengaruhi produksi jambu biji Kristal, salah satunya adalah serangan organisme pengganggu tanaman (OPT). OPT penting pada jambu biji Kristal di Lampung yaitu nematoda puru akar (NPA) yang akhir-akhir ini menjadi masalah yang sangat serius di daerah tersebut.
Nematoda  puru  akar  ( Meloidogyne spp.) bersifat parasit obligat dan memiliki banyak jenis inang. Nematoda  ini  menyerang  sekitar  2000  spesies tumbuhan (Taylor & Sasser, 1978).  Kerusakan jaringan akar akibat serangan NPA menyebabkan tanaman mengalami gangguan fisiologis.  Tanaman yang terserang NPA ditandai oleh terbentuknya puru atau gall pada sistem  perakarannya  yang  menyebabkan  daun mengalami klorosis, tanaman kerdil, daun layu, banyak
daun yang gugur, serta apabila serangan parah/hebat tanaman dapat mati (Taylor & Sasser, 1978).
Tujuan penelitian adalah untuk mempelajari spesies nematoda puru akar yang berasosiasi dengan tanaman jambu biji Kristal di beberapa perkebunan jambu biji Kristal yang ada di Provinsi Lampung.

## BAHAN DAN METODE
Pengambilan  sampel  nematoda  puru  akar dilaksanakan di lahan pertanaman jambu biji Kristal PT Great Giant Farm (GGF) Desa Rajabasa Lama, Kecamatan Labuhan Ratu, Kabupaten Lampung Timur, PT GGP (Great Giant Peonaple) Lampung Tengah, dan di lahan perkebunan warga yang ada di Desa Sinar Betung,  Tanggamus.  Identifikasi  dilakukan  di Laboratorium  Ilmu  Hama  Tumbuhan,  Fakultas Pertanian, Universitas Lampung.  Penelitian dilakukan pada bulan Januari - April 2019.
Penelitian ini menggunakan metode survei yang dilakukan di kebun jambu biji Kristal di PT GGF, PT GGP, dan desa Sinar Betung Talang Padang Tanggamus. PT GGF berlokasi di Rajabasa Lama, Labuhan Ratu, Lampung Timur dengan ketinggian 294 mdpl dan posisi geografi 5 0 4’0.8652  LS dan 105 0 41’33.3564 BT, PT GGP Terbanggi Besar dengan posisi 4 0 49’32.9412 LS dan 105 0 13’55.5744 BT, dan kebun warga di desa Sinar Betung, Tanggamus, dengan posisi geografi 5 0 21’2.8872" LS dan 104 0 47’12.5988" BT (Gambar 1). Kegiatan survei meliputi pengambilan sampel nematoda
di lapang, penghitungan puru akar dan nematoda di laboratorium menggunakan mikroskop binokuler, identifikasi spesies Meloidogyne berdasarkan ciri morfologi parennial pattern nematoda betina dewasa dan deskripsi larva juvenil II (J-2).
Nematoda Meloidogyne diidentifikasi sampai tingkat takson spesies berdasarkan karakter morfologi. Nematoda betina dewasa diambil dari jaringan akar berpuru  menggunakan  jarum  dengan  bantuan mikroskop. Nematoda betina dewasa dipotong pada bagian lehernya dan di pencet agar organ dalamnya keluar.  Selanjutnya nematoda ditaruh di dek glass, kemudian di beri setetes larutan asam laktat untuk membersihkan organ dalam dengan cara dipejet-pejet (Gambar 2).  Nematoda didiamkan selama 30 menit, setelah itu kutikula dipotong lagi untuk memperkecil ukurannya, kemudian ditetesi asam laktat 45 % untuk
Gambar 1.  Titik kordinat Lokasi Pengambilan
membersihkan  kutikula  dari  organ  dalamnya. Pewarnaan menggunakan larutan methylene blue dan didiamkan beberapa saat, kemudian ditutup cover glass. Preparat diamati di bawah mikroskop majemuk pada perbesaran, 100x, 400x, dan 1000x. Perineal pattern yang tampak dicocokkan dengan gambar perineal pattern pada Eisenback et al . (1981), seperti pada Gambar 3.
Ekstraksi  juvenil  nematoda  dalam  akar menggunakan metode Baerman funnel yang dimodifikasi yaitu berupa mangkuk kecil yang dilengkapi saringan bermata lubang 1 mm.  Sampel akar yang telah dicuci dan dikeringanginkan ditimbang 5 g, dipotong-potong berukuran 0,5 cm.  Sebelumnya, telah disiapkan alat ekstraksi Baermann yaitu saringan yang dialasi dengan tisu dan diletakkan di atas mangkuk plastik.  Potongan akar dimasukkan merata ke dalam saringan, kemudian mangkuk diisi air hingga volumenya sedikit merendam potongan akar.  Setelah diinkubasi selama 24 jam, suspensi nematoda pada mangkuk ditampung di botol suspensi dan diendapkan selama 24 jam.  Kemudian volume suspensi dikurangi hingga menjadi 10 ml dengan pipet tetes, dan suspensi tersebut kemudian disimpan dalam botol suspensi nematoda.
Fiksasi merupakan metode yang dilakukan untuk  mengawetkan  nematoda  dengan  cara menambahkan larutan fiksasi larutan Golden X ke dalam  suspensi  nematoda.    Fiksasi  dan  proses pembuatan preparat permanen nematoda J2 NPA mengikuti metode Hoper et al . (2005).   Sebelum difiksasi,  nematoda  dimatikan  dengan  cara memanaskan  suspensi  sampai  suhu  60 o -70 o C menggunakan kompor listrik.  Suspensi dalam botol
Gambar 2. Prosedur pembuatan Perineal pattern NPA ( Meloidogyne spp.)  betina  Dewasa (Sumber : Eisenback, 2003)
a                                   b                                  c Gambar  3. Perineal  pattern, a.  M. javanica, b. M. incognita, c. M. arenaria
(sumber : Eisenback et al ., 1981)
140 ml didiamkan selama 24 jam, volumenya dikurangi dengan pipet secara hati-hati (agar tidak mengganggu endapan suspensi nematoda) sehingga tersisa sekitar 10 ml.  Sekitar 10 ml suspensi nematoda ini dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge dan didiamkan kembali selama 24 jam untuk dikurangi volumenya secara hati- hati menggunakan pipet hingga tersisa 3 ml.  Kemudian, ke dalam suspensi ini ditambahkan larutan Golden X hingga suspensi menjadi 10 ml, dengan demikian nematoda berada pada formalin 3 %. Juvenil nematoda dihitung menggunakan bantuan mikroskop dan hand counter .    Setelah  selesai  penghitungan  suspensi
nematoda dimasukkan kembali ke dalam tabung sentrifius untuk proses infiltrasi gliserin dengan metode Seinhorst.
Alat dan bahan yang digunakan dalam proses ini antara lain desikator, pipet tetes, larutan seinhorst I dan II, dan alkohol 90 %.  Volume suspensi nematoda dikurangi hingga menjadi 3 ml ditumpahkan dalam cawan petri 5 cm kemudian ditambahkan 7 ml larutan seinhorst I, dan ditaruh dalam desikator yang berisi alkohol, kemudian dioven selama semalam (12 jam) pada suhu 43 0 C.  Desikator diisi alkohol 90 % setengah bagian.    Selanjutnya,  suspensi  dikeluarkan  dari desikator, kemudian dikeringkan di dalam oven selama 4 jam pada suhu 43 0 C sehingga volume suspensi berkurang setengahnya.  Setelah itu, ditambahkan larutan seinhorst II hingga mencapai volume awal, ditaruh dalam desikator dan dioven kembali selama semalam (12 jam) pada suhu 43 0 C.
Suspensi dikeringkan kembali di dalam oven pada suhu 43 0 C selama 4 jam.  Setelah itu, suspensi ditambahkan larutan seinhorst II hingga mencapai volume awal,  kemudian di oven  kembali  selama semalam  (12  jam)  pada  suhu  43 0 C,  kemudian dikeringkan selama 4 jam pada suhu 43 0 C.  Tanpa penambahan larutan Seinhorst, suspensi dioven kembali pada suhu 43 0 C selama semalam.  Suspensi dikeringkan didalam oven pada suhu 43 0 C selama 48 jam. Pada tahap ini proses infiltrasi gliserin selesai, nematoda siap digunakan untuk pembuatan preparat permanen.
Pembuatan  preparat  permanen  dilakukan dengan mengambil juvenil (J-2) nematoda pada cawan petri menggunakan pengait.  Beberapa juvenil (J-2) nematoda ditaruh di kaca preparat yang sudah ditetesi cairan gliserin, kemudian ditutup dengan cover glass
dan direkatkan menggunakan kitek kuku.  Setelah itu, diamati di bawah mikroskop majemuk binokuler dengan memperhatikan panjang dan lebar tubuh, panjang  stilet,  dan  panjang  ekor  nematoda  yang tampak di bawah mikroskop, pada perbesaran 400 kali.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Jumlah puru pada setiap gram akar jambu biji kristal dari beberapa perkebunan yang ada di provinsi Lampung disajikan pada Tabel 1.  Pada tabel tersebut tampak  bahwa  rata-rata  jumlah  puru  yang  tinggi terdapat pada akar tanaman jambu biji kristal dari pertanaman GGF 2 yaitu mencapai 88 puru/g akar, sedangkan jumlah puru rendah ditemukan pada sampel akar dari pertanaman PT GGP yaitu 27,6 puru/g akar. Jumlah puru maksimum ditemukan di pertanaman GGF 2 yang mencapai 138 puru dan minimum yaitu 11 puru/ g akar ditemukan di PT GGP.
Jumlah nematoda betina dewasa pada setiap gram akar jambu biji Kristal di beberapa perkebunan yang ada di Provinsi Lampung disajikan dalam Tabel 2.  Pada tabel tersebut tampak bahwa jumlah nematoda betina dewasa tinggi pada akar tanaman jambu biji Kristal dari pertanaman GGF 1 yaitu mencapai 8,2 indiv/g akar.  Sedangkan, jumlah nematoda rendah pada sampel akar dari pertanaman PT GGF C yaitu 4,8 indiv/g akar.  Jumlah nematoda dewasa maksimum ditemukan di pertanaman GGF 2 yang mencapai 18 indiv/g  akar,  minimum  yaitu  2  indiv/g  akar  di pertanaman PT GGF 2 dan GGF C.
Jumlah juvenil (J2) nematoda yang diperoleh pada sampel akar jambu biji kristal dari perkebunan GGP disajikan pada Tabel 3.  Jumlah juvenil (J2) nematoda maksimum ditemukan pada blok pertanaman 41 D2 yaitu mencapai 351 indiv/g akar, dan minimum yaitu 10 indiv/g akar di blok pertanaman 42 J1.
Tabel 1.  Jumlah puru akar pada beberapa lokasi pertanaman (total puru/g akar) jambu biji kristal di Lampung
Lokasi Rata-rata SD Max Min GGF 1 75.2 36.7 128 33 GGF 2 88.0 22.5 138 56 GGF C 57.1 19.0 92 35 GGP 27.6 11.7 41 11 Tanggamus 45.8 12.9 62 29 Lokasi Rata-rata SD Max Min GGF 1 8.2 4.59 16 3 GGF 2 7.9 5.26 18 2 GGF C 4.8 1.99 7 2 GGP 6.6 4.22 14 4 Tanggamus 6.6 3.91 12 3
Tabel 2.  Jumlah nematoda puru akar betina dewasa pada beberapa lokasi pertanaman (indiv./g akar) jambu biji kristal di Lampung
Perinial pattern nematoda dari pertanaman jambu Kristal PT GGF (Gambar 4) menunjukkan dua jenis  yang  berbeda,  yaitu M . javanica dan M. incognita. Hal ini dapat dilihat pada ciri khas yang tampak dalam Gambar 4. Perineal  pattern pada Gambar  4a  terlihat  jelas  adanya  garis  lateral (ditunjukkan tanda panah) yang memisahkan bagian striae dorsal dengan ventral dan ini merupakan ciri khas dari Meloidogyne  javanica .    Garis  lateral  pada perineal pattern M. javanica memisahkan striae dorsal dan ventral sehingga terlihat daerah kosong diantara garis tersebut (Southey, 1978).  Adapun spesies M. javanica hanya di temukan pada lokasi pengambilan sampel 408 A1 di PT GGF, sedang sampel lainnya
Tabel 3.  Jumlah juvenil (J2) nematoda (indiv./g akar) pada beberapa Blok pertanaman jambu PT GGP
Blok Pertanaman Jumlah Larva 42 J 91 42 G 135 41 D3 90 42 J1 10 41 D2 351 Maksimum 351 Minimum 10.0 Rata-rata 135.4
Tabel 4.  Spesies Meloidogyne spp. yang ditemukan pada beberapa perkebunan Jambu Biji Kristal di Provinsi Lampung
Lokasi Blok Sampel Jumlah Nematoda teridentifikasi Spesies NPA Meloidogyne incognita Meloidogyne javanica PT GGF 408 A2 4 4 - 408 A1 9 8 1 408 C1 2 2 - 408 E1 3 3 - 408 G1 2 2 - GGP 41 D2 1 1 - 41 D3 - - - 41 J 2 2 - 41 J1 1 1 - 42 G - - - Tanggamus - 7 7 -
menunjukkan spesies M . incognita. Perineal pattern pada Gambar 4B terlihat lengkungan striae bagian dorsal (ditunjukkan tanda panah) berbentuk persegi (sudut ± 90 0 ) dan merupakan karakter khusus M. incognita (Eisenback et al., 1981).  Jika dibandingkan dengan spesies lain, M. incognita dapat dilihat bahwa lengkungan  striae  spesies  ini  tampak  jelas bergelombang.
Meloidogyne incognita merupakan parasit tanaman penting di seluruh daerah tropika.  Spesies ini dapat ditemukan dalam beberapa inang yaitu kapas, kentang, tebu, wortel, tomat, tanaman hias, dan lain- lain (Thomas et al., 2004), dan juga telah teridentifikasi di tanaman jambu biji Kristal. Suhu optimum untuk
Gambar 4. Perineal pattern nematoda sampel PT GGF, a. Meloidogyne, b. javanica, b. Meloidogyne incognita
Gambar 5. Nematoda puru akar jantan (perbesaran 100 kali)
Gambar  6.  Stilet  larva  nematoda  puru  akar
( Meloidogyne spp.) dengan perbesaran lensa mikroskop 400 kali
reproduksi dari spesies ini berkisar antara 18 0 - 30 0 C, namun spesies ini akan mengalami peningkatan populasi hingga 47% pada suhu 24 0 - 27 0 C (Eisenback, 2003).
Perineal  pattern nematoda  sampel  dari pertanaman jambu Kristal di PT GGP dan sampel dari pertanaman jambu di Tanggamus menunjukkan spesies Meloidogyne incognita. Semua gambar yang berhasil di visualisasikan dari sampel yang di ambil di PT GGP menunjukkan ciri perineal pattern yang sama yaitu ciri khas  yang  dimiliki Meloidogyne incognita, yaitu dengan terlihatnya lengkungan striae bagian dorsal yang dapat dilihat pada gambar diatas berbentuk persegi (sudut ± 90 0 ) (Eisenback et al. , 1981).
Nematoda Puru Akar (NPA) jantan berbentuk seperti cacing dengan ekor tumpul membulat  (Gambar 5).  Juvenil nematoda puru akar tubuhnya seperti cacing ( vermiform ),  dengan  panjang  stilet  0,00742  mm (Gambar  6) dan panjang ekor  sebesar 0,0215  mm (Gambar 7).  Panjang seluruh tubuh NPA J-2 yaitu 0,312 mm dan lebarnya  badannya 0,0234  mm.  Menurut Eisenback, et  al .,  (1991),  karakter NPA  J-2  yaitu kepala lurus ( not set off ), mengecil ke arah depan dan ujung kepala datar, stilet halus, knob stilet membulat, bagian ekor mengecil ke arah ujung, terdapat bagian hyaline pada ujung ekor dan bentuk ujung ekor tumpul. Ciri-ciri seperti ini sesuai dengan specimen yang diamati.
Sampel akar jambu biji kristal yang berasal dari PT GGF sebanyak 30 dan, sampel akar yang berasal dari PT GGP sebanyak 5 sampel serta sampel akar yang berasal dari perkebunan milik warga di Tanggamus sebanyak 5 (Tabel 4).  Dari tiga lokasi tersebut di buat preparat  30 perineal  pattern .    Berdasarkan  ciri perineal pattern pada Tabel 4 hampir semua nematoda yang  teridentifikasi  berdasarkan perineal  pattern adalah Meloidogyne incognita dan hanya satu perineal pattern yang menunjukkan ciri Meloidogyne javanica yaitu nematoda yang berasal dari lokasi PT GGF blok sampel 408 A1.

## KESIMPULAN
Nematoda puru akar spesies Meloidogyne incognita dan Meloidogyne javanica ditemukan berasosiasi dengan pertanaman jambu biji kristal di provinsi Lampung, dengan komposisi 96,7 % M. incognita dan 3,33 % M. javanica . Jumlah puru yang  tinggi  ditemukan  pada  sampel  akar  di pertanaman GGF 2, yaitu mencapai 88 puru/g akar, jumlah  nematoda  betina  dewasa  yang  tinggi
ditemukan pada sampel akar dari pertanaman GGF 1, yang mencapai 8,2 indiv/g akar. Jumlah juvenil (J2) nematoda puru akar maksimum ditemukan pada blok pertanaman 41 D2, yaitu mencapai 351 indiv/g akar dan minimum yaitu 10 indiv/g .akar pada blok sampel 42 J1 pertanaman PT GGP, di Lampung Tengah.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih disampaikan kepada Tim Penelitian “Penggunaan Jamur Paecilomyces lilacinus sebagai bionematisida pengendali Meloidogyne spp. pada pertanaman jambu kristal: efikasi formula padat” yang didanai oleh DRPM Kemristek Dikti Tahun 2019 yang telah memfasilitasi penelitian ini.
Gambar  7.  Ekor  larva  nematoda  puru  akar
( Meloidogyne spp.) dengan perbesaran lensa mikroskop 400

## DAFTAR PUSTAKA
Badan  Pusat  Statistik  (BPS).  2016. Statistik Tanaman  Buah-buahan  dan  Sayuran Tahunan  Indonesia  2016. https:// www.bps.go.id/publication/download.html. Diakses tanggal 05 April 2020.
Eisenback, J.D., H. Hirschmann, J.N. Sasser & A.C. Triantaphyllou. 1981. A Guide to the Four Most  Common  Species  of  Root-Knot Nematodes, (Meloidogyne species) with a pictorial  key . A  Coop.  Publ.  Depts.  Plant Pathol. and Genetics and U.S. Agency for International Development, Raleigh, NC.
Eisenback,  J.D.  2003. Nematology .  Mactode Publication. Blacksburg (US).
Hooper D.J., J. Hallman & S.A. Subbotin. 2005. Methods  for  extraction,  processing  and detection of plant and soil nematodes. In: Luc.
M, Sikora RA, Bridge J. Eds. Plant Parasitic Nematodes  in  Subtripocal  and  Tropical Agricuture 2 nd ed. CABI Publishing, CAB
International Wallingford. pp. 53-86.
Southey, J.F.   1978. Plant Nematology .  London: A.D.A.S. Plant Pathology Laboratory, Harpenden.
Taylor,  A.L.  &  Sasser,  J.N.  1978. Biologi,
Identification  And  Control  Of  Root  Knot Nematodes  (Meloidogyne spp .). North
Carolina State University Graphics. USA.
Thomas, S.H., J. Schroeder  & L.W. Murray.  2004 . Cyperus  tubers  protect  Meloidogyne incognita from  1,3-dichloropropene.  J. Nematology.
Wang, T.H. 2011. Taiwan guava production manual . Horticulture Crop Training and Demonstration Centre. Technical Mission of the Republic of China, Taiwan.