## Jurnal Pendidikan Matematika dan IPA
Vol 10, No 2 (2019) h. 243-258

## NILAI RUJUKAN UNTUK EVALUASI FUNGSI HATI DAN
GINJAL PADA TIKUS ( Rattus norvegicus Berkenhout, 1769) GALUR WISTAR
Laksmindra Fitria, Fajar Lukitowati, dan Dian Kristiawati Laboratorium Fisiologi Hewan, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada Email: laksmindraf@ugm.ac.id
DOI: 10.26418/jpmipa.v10i2.34144

## Abstract
Evaluation of liver and renal functions are routine tests performed in pre- clinical studies. Liver plays a role in detoxification and secretion of vari- ous substances to regulate a wide range of metabolic functions. Kidneys serves  as  the  main  excretory  and  osmoregulatory  organs.  Thus,  assess- ment  of  liver  and  renal  functions  are  important  in  identifying  the  pres- ence of damages and diseases as well as monitoring body responses to- wards treatments or therapy. Therefore, normal values should be estab- lished  for  valid  reference.  Until  now,  many  researchers  still  use  refer- ences from various publications, including foreign countries with differ- ent  environmental  factors  and  method  of  animals  care.  This  study  was aimed  to  provide  reference  values for liver  and renal  functions  in  male and female Wistar rats. Animals were sourced from LPPT - UGM. Age 4 - , 6 - , and 8 - week - old represent juvenile, preadult, and adult. Blood samples were collected from orbital sinus of anesthetized animals. Sera were test- ed for ALT, AST, BUN, and creatinine based on spectrophotometry. Re- sults demonstrated that values of most parameters varied, depend on sex and age. According to this finding, it can be concluded that reference val- ues cannot be generalized but must be determined by sex and age in local population.
Keywords: Wistar rats, liver functions, renal functions.
Received : 22/06/2018 Revised : 30/06/2019
Accepted : 10/07/2019

## JURNAL PENDIDIKAN MATEMATIKA DAN IPA
Vol 10, No 2 (2019) h. 243-258
http://jurnal.untan.ac.id/index.php/PMP
Penggunaan  hewan  sebagai model  dalam  penelitian  biomedik sangat  penting  (Hewitt et  al., 1989). Percobaan  secara  langsung  kepada manusia  dinilai  tidak  etis  karena berisiko mengancam kesehatan, mengakibatkan  gangguan  fisik  mau- pun psikis, hingga dapat mengakibat- kan kematian (Ihedioha et al., 2012). Oleh  karena  itu,  harus  dipilih  model hewan  yang  mampu  merepresentasi- kan fisiologis manusia dengan baik.
Menurut  Koolhaas  (2010), tikus species Rattus norvegicus Galur Wistar  adalah  salah  satu  hewan  la- boratorium  yang  paling  sering digunakan  dalam  penelitian  praklin- ik.  Tikus  Wistar  (Wistarat â )  pertama kali  dikembangbiakkan  pada  tahun 1906 di Wistar Institute dan menjadi hewan  model  praklinik  yang  ideal hingga kini (Fitria & Mulyati, 2014).
Salah satu uji pokok yang harus dilakukan  dalam  penelitian  praklinik adalah  pemeriksaan  darah  karena profil  darah  dapat  menggambarkan status fisiologis individu. Di samping itu,  parameter  darah  juga  dapat digunakan  untuk  analisis  kondisi kesehatan  meliputi  diagnosis  dan prognosis  (Pagana  &  Pagana,  2014). Pemeriksaan  darah  secara  lengkap dan  komprehensif  dapat  dibedakan menjadi  dua  macam,  yaitu:  (1)  uji hematologi rutin atau complete blood count (CBC)  yang mengkaji kompo- nen  sel-sel  darah  atau  korpuskula meliputi eritrosit, leukosit, dan trom- bosit;  (2)  uji  kimia  darah  atau clini- cal chemistry yang mengkaji kompo- nen  cair  darah  menggunakan  sampel berupa  plasma  atau  serum  (Evans, 2009; Thrall et al., 2012).
Menurut  Fitria  &  Mulyati
(2014),  nilai  rujukan  untuk  profil darah  tikus  Wistar  yang  dipelihara dan  dikembangbiakkan  di  Indonesia belum  banyak  tersedia.  Berdasarkan penelusuran  hasil-hasil  penelitian yang  telah  dipublikasikan,  hingga kini  masih  banyak  peneliti  yang mengacu  pada  nilai  rujukan  yang bersifat  umum  atau  tidak  spesifik untuk tikus Wistar. Bahkan ada yang mengacu  pada  sumber  dari  luar negeri  padahal  pada  rodensia  variasi nilai fisiologis antar galur dalam satu species  sangat  tinggi.  Menurut  Ho- gan et  al. (2018),  di  samping  faktor genetik,  metode  pemeliharaan  dan perbedaan  kondisi  lingkungan  baik makro  maupun  mikro  juga  me- nyebabkan  variasi  nilai  yang  sangat beragam. Oleh karena itu, diperlukan nilai  rujukan  lokal  berdasarkan  tem- pat asal atau sumber hewan diperoleh yaitu fasilitas animal house setempat.
Penentuan  profil  hematologis tikus  Wistar  jantan  dan  betina  umur 4,  6,  8  minggu  telah  dilakukan  oleh Fitria  &  Mulyati  (2014).  Hasilnya menunjukkan  bahwa  nilai  bervariasi tergantung  pada  jenis  kelamin  dan umur. Sementara itu, penentuan nilai profil  beberapa  parameter  kimia darah  pada  tikus  Wistar  jantan  dan betina  juga  telah  dilakukan  namun belum  pernah  dipublikasikan.  Oleh karena  itu,  artikel  ini  ditulis  dalam rangka  mempublikasikan  salah  satu parameter  penting  dalam  pemerik- saan  kimia  darah  yaitu  evaluasi fungsi  hati  dan  ginjal  pada  tikus Wistar jantan dan betina umur 4, 6, 8 minggu  guna  melengkapi  profil  he- matologis yang sudah tersedia.
Hati  dan  ginjal  merupakan  or- gan  vital  dalam  regulasi  fisiologis normal.  Hati  berperan  dalam  proses
detoksifikasi dan sekresi zat-zat yang diperlukan  tubuh,  sementara  itu  gin- jal  berperan  dalam  pembuangan limbah  hasil  metabolisme  (ekskresi) dan  fungsi  osmoregulasi.  Oleh  kare- na  itu,  hasil  evalusi  keduanya  dapat digunakan  untuk  identifikasi  potensi kerusakan  struktur  dan  fungsi  organ serta  adanya  gangguan  metabolisme (Calsey  & King, 1980;  Evans, 2009; Thrall et al. , 2012).
Variabel  dalam  evaluasi  fungsi hati  dan  ginjal  sangat  beragam,  se- hingga  harus  dipilih/disesuaikan dengan kebutuhan dan tujuan pemeriksaan.  Adapun  variabel  yang rutin  dilakukan  dalam  pemeriksaan awal  adalah  aktivitas  AST  dan  ALT untuk  evaluasi  fungsi  hati,  serta  ka- dar BUN dan kreatinin untuk evalusi fungsi ginjal (Basten, 2010, Bhutta et al., 2013; Pagana & Pagana, 2014).

## METODE
Tikus  Wistar  yang  digunakan sebagai  hewan  uji  dalam  penelitian ini  merupakan  hasil  pengembang- biakan  di  Laboratorium  Penelitian dan  Pengujian  Terpadu  Universitas Gadjah  Mada  (LPPT-UGM)  Unit  IV Yogyakarta.  Pemeliharaan  hewan telah  diupayakan  memenuhi  standar pemeliharaan  hewan  laboratorium yang  diatur  dalam guide menurut Garber et  al. (2011),  meliputi:  cara pengandangan (housing) ,  pengaturan lingkungan  makro  dan  mikro,  suhu dan kelembapan ruang pemeliharaan, sirkulasi udara, pencahayaan, tingkat kebisingan, enrichment, pemantauan dan perawatan kesehatan oleh dokter hewan,  perkawinan  terprogram,  ke- lahiran  tercatat  dengan  baik,  mana-
jemen kebersihan/sanitasi, serta teknisi (caretaker) yang terampil.
Tikus  yang  digunakan  berjenis kelamin  jantan  dan  betina,  masing- masing berumur 4, 6, dan 8 minggu, dengan  jumlah  individu  sebanyak  5 ekor  sebagai  ulangan  untuk  setiap kelompok.  Penetapan  jumlah  hewan ini mengikuti poin “ reduction” yaitu meminimalisir  jumlah  hewan  yang digunakan  dalam  penelitian  tanpa mengurangi validitas hasilnya, sesuai dengan  “Prinsip  3R” (Replacement, Reduction  and  Refinement) yang wajib ditaati oleh peneliti dalam riset in vivo (Festing, 2011).
Pemilihan  kelompok  umur  ter- sebut berdasarkan kriteria umur tikus Wistar  yang  sering  digunakan  se- bagai  model  dalam  penelitian  bio- medik/praklinik.  Selain  itu  juga mengacu  pada  penelitian  Fitria  dkk. (2015) yang menyatakan bahwa pada tikus  Wistar,  umur  4,  6,  dan  8 minggu  berturut-turut  merepresenta- sikan kategori umur muda (juvenile) , pradewasa (preadult) ,  dan  dewasa (adult) .
Hewan  uji  diambil  secara  acak dari  kandang  pemeliharaan,  kemudi- an dilakukan pengukuran berat badan menggunakan timbangan hewan digi- tal  (Ohauss ® ).  Hasilnya  dinyatakan dalam  satuan  “gram”.  Sebelum  dil- akukan  pengkoleksian  darah,  hewan dipuasakan  terlebih  dahulu  selama  6 jam  (Smith,  2009).  Selanjutnya  he- wan  dianestesi  dengan  cara  injeksi secara intramuscular menggunakan cocktail Ketamine-Xylazine  (Ho- lland ® )  dosis  50  mg/kgbb  dan  5  mg/ kg  bb  (Struck et  al., 2011).  Darah dikoleksi dari sinus orbitalis
sebanyak  1  mL  dengan  bantuan  ka-
piler  mikrohematokrit  (Assisstant ® ), kemudian  ditampung  dalam micro- tube (Brand ® ),  dan  selanjutnya  di- inkubasi  pada  suhu  ruang  selama  10 menit.
Serum  dipisahkan  dari whole- blood menggunakan micro - centrifuge (Corning ® Costar ® )  dengan  kecepatan 10.000  rpm  selama  10  menit.  Serum inilah yang digunakan untuk evaluasi fungsi hati dan ginjal. Variabel untuk evaluasi  fungsi  hati  adalah  aktivitas AST (U/L) dan ALT (U/L). Variabel untuk  evaluasi  fungsi  ginjal  adalah kadar  BUN  (mg/dL)  dan  kreatinin (mg/dL). Pengujian sampel dilakukan di  LPPT-UGM  Unit  I  berdasarkan metode spektofotometri mengg- unakan  kit  (Diasys ® )  dan  fotometer semi - automated  clinical  chemistry analyzer Microlab 300 ®.
Data  yang  diperoleh  ditabulasi dalam  Microsoft ®- Excel ® 2010  dan ditampilkan  sebagai  “rerata±standar deviasi”.  Data  selanjutnya  dianalisis secara statistik menggunakan perangkat  lunak  IBM ®- SPSS ® v.23. Untuk  membandingkan  antar  ke- lompok umur digunakan uji one - way ANOVA  dilanjutkan  uji  Duncan (a=0,05). Untuk membandingkan an- tar  jenis  kelamin  digunakan  uji Stu- dent’s independent t - test (a=0,05).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kondisi lingkungan pemeliharaan
Oleh  karena  kondisi  fisiologis hewan  laboratorium,  termasuk  nilai profil  darah,  dipengaruhi  oleh  faktor lingkungan dan metode pemeliharaan (Hogan et al., 2018), maka kami san- gat  memperhatikan  parameter  ling-
kungan  dan  mengikuti  metode pemeliharaan  hewan  sesuai  dengan panduan  oleh  Garber et  al. (2011). Hal  ini  supaya  data  yang  diperoleh benar-benar  dapat  dijadikan  sebagai nilai  rujukan  atau  kontrol  normal bagi penelitian-penelitian berikutnya. Data  parameter  lingkungan  dan metode  pemeliharaan  disajikan  pada Tabe1 1.
Berat badan Berat  badan  adalah  variabel dasar dalam penelitian yang menggunakan  hewan  coba (in  vivo) . Hewan  yang  sehat  atau  normal  akan mengalami  peningkatan  berat  badan dengan  laju  pertumbuhan  dan  pola tertentu  yang  bervariasi  tergantung pada  jenis  kelamin  dan  umur.  Perla- kuan  terhadap  hewan  uji  dapat meningkatkan atau menurunkan berat badan.  Oleh  karena  itu,  diperlukan kurva normal sebagai kontrol.
Hasil penimbangan berat badan tikus  Wistar  jantan  dan  betina  umur
4,  6,  dan  8  minggu  disajikan  pada Tabel 2 dan Gambar 1. Hasil  penimbangan  berat  badan menunjukkan bahwa pada umur yang sama,  hewan  jantan  memiliki  berat badan  lebih  tinggi  daripada  betina. Seiring  pertambahan  umur,  tikus Wistar  jantan  dan  betina  mengalami pertumbuhan  dan  perkembangan. Pertumbuhan dapat diketahui melalui peningkatan  berat  badan,  sedangkan perkembangan  dapat  dipelajari  me- lalui  kajian  profil  reproduksi  (Fitria dkk., 2015). Pada hewan muda, pen- ingkatan  berat  badan  ini  tidak  ber- beda  nyata.  Namun,  pada  umur  pra- dewasa dan dewasa menjadi berbeda nyata  karena  selisihnya  semakin  be- sar.  Peningkatan  berat  badan  hewan dalam  penelitian  ini  sesuai  dengan
kurva pertumbuhan tikus Wistar yang dipublikasikan  oleh  Charles  River ®
Lab (2017) dan Envigo ® yang dahulu adalah Harlan ® Lab (2017). Keduan- ya  merupakan  fasilitas  penyedia  he- wan laboratorium tingkat internasion- al  yang  telah  dipercaya  selama  ber- tahun-tahun  dan  melayani  kebutuhan
hewan coba di seluruh negara-negara di dunia.
Pada  kondisi  normal/alamiah,
laju pertumbuhan hewan (yang dapat diindikasikan dari pertambahan berat badan)  berkorelasi  positif  dengan perkembangan/tingkat kedewasaan dan  jenis  kelamin  (Envigo,  2017; Tabel 1. Parameter lingkungan dan metode pemeliharaan hewan uji. Parameter Keterangan Ruang pemeliharaan Ruangan khusus untuk pemeliharaan tikus laboratorium di LPPT-UGM Unit IV Suhu ruangan pemeliharaan 24-26 °C (AC) Kelembapan ruang pemeli- haraan 65-75 % Sirkulasi udara Exhaust fan Pencahayaan Penerangan artifisial 12G:12T Pengandangan Kandang  komunal  dari  bahan  plastik polipropilen ukuran 50 cm x 40 cm x 20 cm, tutup kandang berupa grid dari bahan logam tahan  karat,  alas  tidur (bedding) berupa woodshaving . Alat makan dan minum Wadah pakan berupa mangkok dari bahan kaca, sedangkan tempat air minum berupa botol kaca dengan tutup karet yang dilengka- pi dengan pipa minum Pakan dan air minum Pelet  tikus  standar  RatBio â dan  air  minum reverse  osmosis (RO)  diberikan  secara ad libitum Sanitasi 2x seminggu Teknisi/ caretaker Ada  dan  telah  mengikuti  kursus  pemeli- haraan dan penggunaan hewan laboratorium Dokter hewan Ada, staf Fakultas Kedokteran Hewan UGM Tabel 2. Berat badan tikus Wistar jantan dan betina umur 4, 6, dan 8 minggu. Umur (minggu) Rerata berat badan (gram) Kisaran berat badan (gram) Jantan Betina Jantan Betina 4 62,36 a ±3,82 59,90 a ±2,30 58,54 – 66,18 57,60 – 62,20 6* 163,50 b ±13,09 132,28 b ±5,86 150,41 – 176,59 126,42 – 138,14 8* 196,78 bc ±21,63 151,60 bc ±8,54 175,15 – 218,41 143,06 – 160,14 Keterangan:  Angka yang diikuti huruf berbeda menunjukkan ada beda nyata (p<0,05) pada satu kolom (antar kelompok umur). Tanda * menunjukkan ada beda nyata (p<0,05) pada satu baris  (antar jenis kelamin pada umur yang sama)
Fitria dkk., 2015). Berat badan hewan jantan  lebih  cepat  meningkat  da- ripada  betina.  Hal  ini  karena  efek anabolik androgen (salah satunya tes- tosteron)  yang  memacu  metabolisme dan  proses-proses  fisiologis  tubuh. Hormon  steroid  mempengaruhi  berat badan dan konsumsi pakan mulai dari fase pubertas hingga dewasa (Wallen et al ., 2002). Selain efek reproduktif, testosteron yang merupakan androgen terkuat  juga  memiliki  efek  anabolik yang  berperan  dalam  mengendalikan pertumbuhan, dimulai pada masa pu- bertas  dengan  target  kulit,  otot,  tu- lang,  serta  metabolisme  air  dan  min- eral  (Fitria,  dkk.,  2015).  Sebaliknya, estradiol  memiliki  efek  hipofagik atau  menekan  nafsu  makan  (Wallen et  al .,  2002),  sehingga  berat  badan hewan  jantan  jauh  lebih  tinggi  da- ripada betina pada umur yang sama.
Peningkatan  berat  badan  juga dapat  disebabkan  oleh  faktor  ma- kanan  (diet)  yang  meliputi  jenis  pa- kan, pola makan, jumlah yang diberi- kan (ransum) dan jumlah yang dikon- sumsi  (asupan).  Pakan  yang  tidak standar memiliki komposisi yang ku- rang sesuai dengan kebutuhan hewan,
sehingga  mengganggu  pertumbuhan normal  dan  berdampak  buruk  ter- hadap kesehatan dan sistem fisiologis normal (Calsey & King, 1980; Evans, 2009;  Thrall et  al. ,  2012).  Dalam penelitian ini hewan uji  diberi  pakan standar untuk tikus laboratorium atau rodents  diet (RatBio ® )  yang  diberi- kan  secara ad  libitum ,  artinya tidak ada  pembatasan  jumlah  ransum  dan pakan  dapat  diakses  oleh  hewan  se- tiap  saat.  Hal  ini  untuk  mengan- tisipasi  supaya  hewan  tidak  stres  ka- rena  kelaparan  (kurang  asupan). Dengan  demikian,  dapat  dipastikan bahwa hewan  yang digunakan dalam penelitian  ini  tumbuh  normal  yang diindikasikan  dengan  pertambahan berat badan yang wajar.
Evaluasi fungsi hati Alanine amino - transferase (ALT)  dahulu  dikenal  sebagai serum glutamic pyruvic transaminase (SGPT), sedangkan aspartate amino - transferase (AST) dahulu disebut se- bagai serum  glutamic  oxaloacetic transaminase  ( SGOT).  Keduanya merupakan  enzim-enzim  intrasel yang  dapat  dijadikan  sebagai  indi-
Gambar 1.  Berat badan tikus Wistar jantan dan betina umur 4, 6, dan 8 minggu.
kator  penurunan  fungsi  hati,  antara lain: detoksifikasi, glikogenesis, serta produksi enzim  dan  protein  plasma yang  penting  dalam  regulasi  fungsi sistem  tubuh.  Peningkatan  aktivitas kedua  enzim  tersebut  menunjukkan bahwa hati telah bekerja lebih keras. Hal ini dapat terjadi karena penyakit, banyaknya senyawa toksik  yang ma- suk  ke  dalam  tubuh,  termasuk  obat- obatan, atau karena kerusakan sel-sel hati akibat degenerasi (Basten, 2010, Evans,  2009;  Pagana  &  Pagana, 2014).
Skema  ekskresi  ALT  dan  AST dari  sel-sel  hati  ke  dalam  sirkulasi darah  disajikan  pada  Gambar  2. Pemeriksaan  ALT  dapat  digunakan untuk  indikator  adanya  peradangan hati  karena  virus,  obat-obatan,  atau toksin.  Sementara  itu,  pemeriksaan AST  penting  untuk  mempelajari  ke- rusakan  hati  yang  bersifat  aktif- progresif hingga kronik. Tidak seper- ti  ALT  yang  bersifat  spesifik,  AST diproduksi  tidak  hanya  di  hati  tetapi juga  di  jantung,  otot,  dan  beberapa organ  lainnya,  sehingga  peningkatan AST  juga  dapat  dijumpai  pada gangguan  fungsi  jantung.  Oleh  kare- na itu, ALT lebih spesifik untuk eval-
uasi fungsi hati daripada AST (Elinav et al. , 2005; Thrall et al. , 2012).
Hasil  pemeriksaan  ALT  dan AST  pada  tikus  Wistar  jantan  dan betina  umur  4,  6,  dan  8  minggu disajikan  berturut-turut  pada  Tabel  3 dan Tabel 4. Baik pada hewan jantan maupun  betina,  aktivitas  ALT  dan AST mengalami fluktuasi yang nyata seiring  pertambahan  umur,  terutama pada  individu  jantan.  Pada  saat  pra- dewasa, kadar AST antara jantan dan betina  berbeda  nyata,  di  mana  nilai pada hewan betina jauh  lebih rendah daripada jantan. Meskipun demikian, tidak  ada  perbedaan  nyata  untuk  ak- tivitas  ALT  di  antara  keduanya.  Hal ini sesuai dengan penelitian Poustchi et al. (2011) yang menyatakan bahwa umur  dan  jenis  kelamin  berpengaruh nyata  terhadap  aktivitas  ALT  dan AST  yang  dapat  digambarkan  se- bagai kurva U terbalik (Gambar 3).
Pada  individu  muda  yang  se- dang mengalami proses pertumbuhan dan  perkembangan,  termasuk  pema- tangan  reproduksi,  aktivitas  kedua enzim  ini  meningkat.  Seiring  per- tambahan  umur/penuaan  serta  ber- langsungnya  proses-proses  degen-
Gambar 2.  Skema ekskresi ALT (atas) dan AST (bawah) (Bhutta et al., 2013).
eratif, aktivitas enzim menurun. Pada manusia,  puncak  kurva  terjadi  pada umur 40-55 tahun atau sekitar seten- gah rentang hidupnya. Korelasi anta- ra  aktivitas  enzim  dan  umur  tampak jelas  pada  individu  jantan,  namun tidak pada individu betina (Elinav et al. ,  2005).  Jika  dikonversi,  maka umur manusia tersebut setara dengan umur  2  tahun  pada  tikus  (Sengupta, 2013).
Aktivitas  ALT  dan  AST  pada hewan betina cenderung lebih rendah daripada  jantan  atau  memiliki  nilai kisaran yang lebih sempit. Variasi ini dipengaruhi  oleh  kondisi  hormonal dan  massa  otot  (Adiga,  2016).  Prati et  al. (2002) dalam  Elinav et  al.
(2005)  menyatakan  bahwa  selain berkorelasi  dengan  berat  badan  dan jenis  kelamin,  ALT  dan  AST  juga berhubungan  dengan  abnormalitas metabolisme  lipid  dan  karbohidrat.
Oleh karena itu, selain mengukur ak- tivitas  ALT  dan  AST,  penentuan  ra- sio  AST/ALT  juga  dapat  digunakan untuk  prognosis  kerusakan  hati. Lebih  lanjut  dijelaskan  oleh  Basten (2010), bahwa nilai ALT yang sangat tinggi  hingga  jauh  melebihi  kisaran normal  mengindikasikan  adanya  ke- rusakan hati akibat infeksi virus. Se- mentara  itu,  nilai  AST  yang  sangat tinggi  hingga  jauh  melebihi  kisaran normal  menunjukkan  adanya  pera- dangan  hati  akibat  obat-obatan.  Ber- dasarkan  hal  ini  maka  nilai  rujukan normal harus ditetapkan.
Evalusi fungsi ginjal
Menurut  Basten  (2010)  dan Bhutta et  al. (2013), blood  urea  ni- trogen (BUN)  dan  kreatinin  adalah variabel  utama  untuk  uji  fungsi  gin- jal.  Kedua  limbah  tersebut  secara konsisten  diekskresikan  melalui  gin- jal dan dikeluarkan dari dalam tubuh
Tabel 3. Aktivitas ALT tikus Wistar jantan dan betina umur 4, 6, dan 8 minggu.
Umur (minggu) Rerata ALT (U/L) Kisaran ALT (U/L) Jantan Betina Jantan Betina 4 55,33 b ±3,06 45,82 a ±11,89 52,27 – 58,39 33,93 – 57,71 6 39,90 a ±2,45 43,80 a ±13,23 37,45 – 42,35 30,57 – 57,03 8 41,27 ab ±7,14 44,48 a ±4,35 34,13 – 48,41 40,13 – 48,83 Keterangan:  Angka yang diikuti huruf berbeda menunjukkan ada beda nyata (p<0,05) pada satu kolom (antar kelompok umur). Tanda * menunjukkan ada beda nyata (p<0,05) pada satu baris  (antar jenis kelamin pada umur yang sama).
Tabel 4. Aktivitas AST tikus Wistar jantan dan betina umur 4, 6, dan 8 minggu.
Umur (minggu) Rerata AST (U/L) Kisaran AST (U/L) Jantan Betina Jantan Betina 4 172,40 a ±32,53 168,20 b ±47,29 139,87 – 204,93 120,91 – 215,49 6* 226,14 b ±25,03 132,78 a ±44,78 201,11 – 251,17 88,00 – 177,56 8 182,20 a ±88,04 124,78 a ±18,90 94,16 – 270,24 105,88 – 143,69 Keterangan:  Angka yang diikuti huruf berbeda menunjukkan ada beda nyata (p<0,05) pada satu kolom (antar kelompok umur). Tanda *
menunjukkan ada beda nyata (p<0,05) pada satu baris  (antar jenis kelamin pada umur yang sama).
sebagai.  Pada  evaluasi  fungsi  ginjal, kadar  BUN  di  atas  kisaran  normal menunjukkan gangguan fungsi ginjal akut,  sedangkan  kadar  kreatinin  di atas kisaran normal mengindikasikan gangguan  fungsi  ginjal  kronik. Penentuan rasio BUN/kreatinin dapat digunakan untuk mendeteksi masalah ginjal secara lebih baik (Evans, 2009; Thrall et al. , 2012).
Urea  adalah  produk  metabo- lisme  protein  internal  tubuh  maupun protein yang berasal dari asupan. Da- lam  sistem  pencernaan,  protein dipecah  menjadi  asam-asam  amino yang  kemudian  mengalami  katabo- lisme  di  dalam  sel-sel  hati  memben- tuk  amonia.  Molekul  amonia  selan- jutnya  dikonversi  menjadi  urea  dan diangkut  ke  ginjal  untuk  diekskresi- kan  melalui  urin  keluar  tubuh (Basten,  2010;  Bhutta et  al., 2013; Pagana  &  Pagana,  2014).  Metabo- lisme urea dalam tubuh disajikan pa- da Gambar 4.
Sebelum  dikeluarkan  bersama urin,  urea  beredar  dalam  sirkulasi
darah.  Oleh  karena  itu,  kadar  urea dalam  darah  atau  nilai  BUN  yang tinggi  menggambarkan  penurunan fungsi ginjal dalam mengekskresikan senyawa ini keluar tubuh.
Hasil  pemeriksaan  kadar  BUN  pada tikus  Wistar  jantan  dan  betina  umur 4,  6,  dan  8  minggu  disajikan  pada Tabel 5.
Pada hewan jantan, kadar BUN cenderung  lebih  tinggi  daripada  he- wan  betina  pada  umur  yang  sama. Pada hewan jantan dan betina, kadar BUN  mengalami  fluktuasi  seiring pertambahan umur. Kadar BUN pada hewan betina relatif stabil, sedangkan pada  jantan  mengalami  peningkatan yang nyata pada saat dewasa. Hal ini sesuai  dengan  Isobe et  al. (2005) yang menyatakan bahwa kadar BUN pada  hewan  jantan  dan  betina meningkat  secara  nyata  seiring  per- tambahan umur.
Kadar BUN akan terus mening- kat pada fase penuaan (ageing) yang mengindikasikan  terjadi  penurunan fungsi (degenerasi) ginjal secara pro- gresif.  Apabila  dibandingkan  antara
Gambar 3.  Korelasi antara aktivitas ALT dan umur (Elinav et al. , 2005).
kadar  BUN  pada  hewan  jantan  dan betina,  maka  tidak  ada  perbedaan nyata  pada  semua  kelompok  umur. Hal  ini  selaras  dengan  pernyataan Kamal  (2014)  bahwa  meskipun  ka- dar BUN juga dipengaruhi oleh jenis kelamin  dan  hormonal  (terutama setelah  pubertas  atau  pada  periode dewasa),  tetapi  pengaruh  jenis  ke- lamin tidak nyata apabila dibanding- kan dengan umur.
Tingginya  kadar  BUN  selain menunjukkan  kerusakan  fungsi  fil- trasi  ginjal  juga  mengindikasikan adanya kerusakan fungsi hati apabila
nilai  ALT  dan  atau  AST  juga meningkat  (Pagana    &  Pagana, 2014).  Menurut  Isobe et  al. (2005) kadar BUN berkaitan dengan metab- olisme  lipid.  Oleh  karena  itu, pemeriksaan  profil  lipid  juga  diper- lukan  dalam  rangka  diagnosis  status fisiologis  secara  lebih  baik.  Dit- ambahkan  oleh  Basten  (2010),  bah- wa kadar BUN ternyata juga berkai- tan  dengan  metabolisme  karbohidrat dan protein, sehingga evaluasi fungsi ginjal  juga sebaiknya diikuti dengan pemeriksaan  kadar  glukosa  darah, kadar protein plasma, rasio albumin/
Gambar 4. Skema pembentukan urea dan proses ekskresi (Bhutta et al., 2013).
Tabel 5. Kadar BUN tikus Wistar jantan dan betina umur 4, 6, dan 8 minggu.
Umur (minggu) Rerata kadar BUN (mg/dL) Kisaran kadar BUN (mg/dL) Jantan Betina Jantan Betina 4 33,66 ab ±5,31 33,08 a ±8,96 28,35 – 38,97 24,12 – 42,04 6 26,14 a ±2,45 31,66 a ±9,41 23,69 – 28,59 22,25 – 41,07 8 43,98 b ±10,90 33,90 a ±10,71 33,08 – 54,88 23,19 – 44,61 Keterangan:  Angka yang diikuti huruf berbeda menunjukkan ada beda nyata
(p<0,05) pada satu kolom (antar kelompok umur). Tanda * menunjukkan ada beda nyata (p<0,05) pada satu baris  (antar jenis kelamin pada umur yang sama)
globulin,  kadar  glukosa  urin  (untuk deteksi  glukosuria),  rasio  albumin/ kreatinin  (untuk  deteksi  albuminu- ria), dan sebagainya.
Kreatinin  merupakan  senyawa yang  dihasilkan  dari  kontraksi  otot. Kreatin yang disintesis di hati, ginjal, dan pankreas dikonversi menjadi sen- yawa  kaya  energi  yang  disebut fosfokreatin  (PCr)  atau  kreatinfosfat (CP) oleh enzim creatine kinase (CP) untuk  aktivitas  otot  (Bhutta et  al., 2013). Secara spontan, kreatinin akan terbentuk pada saat otot berkontraksi (Gambar 5).
Kadar  kreatin  per  unit  massa otot bersifat stabil/konsisten sehingga kreatinin yang diekskresikan pun ber- sifat stabil/konsisten. Sejumlah kreat- inin  akan  dibuang  melalui  urin  se- hingga  kadar  kreatinin  darah  yang tinggi dapat mengindikasikan kerusa- kan ginjal. Peningkatan kadar kreati- nin darah disebabkan oleh kerusakan
fungsi  filtrasi  ginjal  dan  inflamasi yang berdampak pada penurunan laju filtrasi glomerolus (GFR, glomerular filtration rate ). Oleh karena itu perhi- tungan  rasio  BUN/kreatinin  dapat digunakan untuk determinasi etiologi penyakit  dan  interpretasi  fungsi  gin- jal secara lebih baik (Basten, 2010).
Proses ekskresi kreatinin disajikan  dalam  Gambar  6.  Hasil pemeriksaan  kreatinin  pada  tikus Wistar  jantan  dan  betina  umur  4,  6, dan 8 minggu disajikan berturut-turut pada Tabel 6 berikut.
Kadar  kreatinin  pada  hewan jantan  mengalami  peningkatan  yang nyata seiring pertambahan umur. Se- mentara ini, kadar kreatinin pada he- wan betina awalnya mengalami fluk- tuasi  kemudian  mengalami  pening- katan  yang  nyata  pada  saat  dewasa. Pada  umur  pradewasa,  terdapat perbedaan  yang  nyata  antara  kadar kreatinin  pada  hewan  jantan  dan
Gambar 5. Skema pembentukan kreatinin (Bhutta et al., 2013).
betina, di mana kadar kreatinin pada hewan  betina  jauh  lebih  rendah  da- ripada  jantan.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Kamal  (2014)  bahwa jenis kelamin berpengaruh nyata ter- hadap kadar kreatinin, demikian juga umur,  yang  mana  hewan  jantan memiliki kadar kreatinin lebih tinggi daripada betina.
Individu jantan cenderung memiliki  lebih  banyak  massa  otot, sehingga  kadar  kreatinin  sebagai limbah  metabolisme  otot  juga  lebih banyak.  Pembentukan  massa  otot dipengaruhi  oleh  faktor  hormonal, salah  satunya  adalah  efek  myotropik testosteron (Fitria, dkk.,  2015). Oleh karena    itu,  massa  otot  pada  hewan jantan  relatif  lebih  tinggi  daripada betina.  Di  samping  faktor  hormonal,
Gambar 6.  Skema ekskresi kreatinin (Bhutta et al., 2013)
Tabel 6. Kadar kreatinin tikus Wistar jantan dan betina umur 4, 6, dan 8 minggu.
Umur (minggu) Rerata kadar kreatinin (mg/ dL) Kisaran kadar kreatinin (mg/dL) Jantan Betina Jantan Betina 4 0,10 a ±0,07 0,20 a ±0,12 0,03 – 0,17 0,08 – 0,32 6* 0,28 b ±0,04 0,14 a ±0,11 0,24 – 0,32 0,03 – 0,25 8 0,40 c ±0,10 0,30 b ±0,23 0,30 – 0,50 0,07 – 0,53 Keterangan:  Angka  yang  diikuti  huruf  berbeda  menunjukkan  ada  beda  nyata (p<0,05)  pada  satu  kolom  (antar  kelompok  umur).  Tanda  * menunjukkan ada beda nyata (p<0,05) pada satu baris  (antar jenis kelamin pada umur yang sama)
massa otot juga dipengaruhi oleh ak- tivitas fisik. Hal ini tampak jelas pa- da  manusia  yang  aktif  melakukan olah  raga  pembentukan  otot (body building) .
Oleh  karena  kadar  kreatinin dipengaruhi  oleh  massa  otot,  maka dapat terjadi misinterpretasi. Sebagai contoh, individu yang memiliki mas- sa otot tinggi akibat rutin melakukan aktivitas fisik  (olah raga) maka hasil pemeriksaan  kreatinin  menunjukkan kadar yang relatif tinggi juga padahal fungsi  ginjalnya normal. Hal  ini ser- ing  menjadi  masalah  pada  kajian klinik karena kondisi fisik dan kebia- saan  hidup  pasien  yang  bervariasi (Baxman et al. , 2008). Sementara itu, uji  praklinik  menggunakan  hewan coba  yang  relatif  homogen  dengan pemeliharaan  yang  seragam.  Dengan demikian, tidak akan terjadi misinter- pretasi maupun subjektivitas mengenai  hasil pengukuran kreatinin sebagaimana pada pasien manusia.
Berdasarkan  keseluruhan  hasil yang  diperoleh,  tampak  bahwa  ham- pir semua nilai variabel yang diperik- sa  bervariasi  tergantung  dari  jenis kelamin  dan  umur.  Hal  ini  sesuai dengan  Pagana  &  Pagana  (2014) yang  menyatakan  bahwa  sebagian besar  variabel  kimia  darah  di- pengaruhi  oleh  umur,  jenis  kelamin, fase  reproduksi  (pertumbuhan  dan perkembangan) serta faktor makanan. Dengan  demikian,  nilai  rujukan  un- tuk individu muda berbeda dari indi- vidu dewasa. Lebih lanjut dikemuka- kan  oleh  Pagana  &  Pagana  (2014) bahwa  pada  umur  dewasa  pun  nilai rujukan  berbeda,  yang  secara  rinci dapat  dikelompokkan  menjadi  kate- gori young  adult , middle  adult ,  dan older adult (Sengupta, 2013).
Berdasarkan hal tersebut, maka nilai rujukan atau kontrol normal un- tuk  evaluasi  fungsi  hati  dan  ginjal tidak  dapat  digeneralir.  Nilai  ALT, AST,  BUN,  dan  kreatinin  pada  awal kehidupan  suatu  individu  cenderung tinggi  karena  berkaitan  dengan  per- tumbuhan,  perkembangan,  dan  pros- es-proses  metabolisme  yang  tinggi pula.  Nilai  tersebut  kemudian menurun  seiring  pertambahan  umur atau  pendewasan  hingga  penuaan akibat  berlangsungnya  proses-proses degeneratif.  Pada  individu  dengan gangguan fisiologis akibat masuknya agen  eksogen  seperti  patogen,  toksi- kan,  dan  obat-obatan,  nilai  keempat variabel  tersebut  meningkat  yang menunjukkan  bahwa  hati  dan  ginjal telah  bekerja  lebih  keras  dibanding- kan sebelumnya.
Di  samping  itu,  nilai  rujukan hendaknya mengacu pada tempat asal hewan  (bersifat  lokal),  tidak  ber- dasarkan literatur secara umum, apa- lagi  yang  bersumber  dari  luar  negeri dengan  perbedaan  faktor  lingkungan dan metode pemeliharaan.

## SIMPULAN DAN SARAN
Terdapat  variasi  nilai  ALT, AST,  BUN,  dan  kreatinin  dalam  se- rum  darah  tikus  Wistar  jantan  dan betina umur 4, 6, dan 8 minggu yang berkorelasi dengan jenis kelamin dan umur.  Oleh  karena  itu,  nilai  rujukan untuk  evalusi  fungsi  hati  dan  ginjal tidak dapat digeneralisir namun harus ditentukan berdasarkan jenis kelamin dan umur.
Cakupan  umur  hewan  dalam penelitian  ini  masih  terbatas,  oleh karena  itu  perlu  dilakukan  studi
lanjutan  sehingga  diperoleh  nilai  ru- jukan  untuk  kategori  umur  lainnya. Sebagai  contoh  umur  3  minggu  un- tuk  kategori  anakan  lepas  sapih,  12 minggu untuk kepentingan uji toksis- itas  subkronik,  umur  dewasa  (>1  ta- hun)  untuk  model  kategori young adult , middle adult , older adult age- ing/senescent, dan seterusnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Adiga,  U.S.  2016.  Gender  differ- ences  in  liver  function  tests  in Coastal Karnataka. IOSR Jour- nal of Dental and Medical Sci- ences  (IOSR - JDMS) 15(8):  30- 32.
Basten, G. 2010. Introduction to clin- ical  biochemistry:  Interpreting blood  results .  Ventus  Publish- ing  ApS.  Frederiksberg,  Den- mark.
Baxmann,  A.C.,  Ahmed,  M.S., Marques,  N.C.,  Menon,  V.B., Pereira,  A.B.,  Kirsztajn,  G.M., &  Heilberg,  I.P.  2008.  Influ- ence of muscle mass and physi- cal  activity  on  serum  and  uri- nary  creatinine  and  serum  cys- tatin C. Clinical Journal of the American  Society  of  Nephrolo- gy 3:348-354.  doi:  10.2215/ CJN.02870707
Bhutta, RA., Syed, N.A., Ahmad, A., & Khan, S. 2013. Lab Tests for SGPT  (ALT,  Alanine  amino - transferase,  Serum  Glutamic - Pyruvic  Transaminase),  SGOT (Aspartate  amino - transferase, AST,  Glutamic  oxaloacetic Transaminase),  Blood  Urea Nitrogen  (BUN,  Urea  Nitro-
gen),  and  Creatinine  (Serum Creatinine). http://www.lab pedia.net
Calsey, J.D. & King, D.J. 1980. Clin- ical  chemical  values  for  some common  laboratory  animals. Clinical  Chemistry 26(13): 1877-1879.
Charles  River  Laboratories  Interna- tional,  Inc.  2017. Wistar  IGS Rat (Crl:WI). http://www.
criver.com/products-services/
basic-research/find-a-model/ wistar-rat?loc=ID
Elinav, E., Ben-Dov, I.Z., Ackerman, E., Kiderman, A., Glikberg, F., Shapira,  Y.,  &  Ackerman,  Z. 2005.  Correlation  serum  ala- nine  aminotransferase  activity and  age:  An  inverted  U  curve pattern. American  Journal  of Gastroenterology 100:  2201- 2204. Blackwell Publishing.
Envigo.  2017. Wistar  outbred  rat . http://www.envigo.com/pro- ducts-services/research-models -services/models/research- models/rats/outbred/wistar-out- bred-rat/
Evans, G.O. 2009. (ed). Animal clini- cal  chemistry: A  practical guide for toxicologists and bio- medical  researchers.  2 nd ed. CRC  Press,  Taylor  &  Francis Group.  Boca  Raton,  Florida, USA.
Festing,  M.F.W.  2011.  How  to  re- duce  the  number  of  animals used  in  research  by  improving experimental  design  and  statis- tics. ANZCCART Fact  Sheet T10 Pp. 1-11. https://
www.adelaide.edu.au/ANZC- CART/docs/fact-sheets/  T10_ HowtoReducetheNumberFact Sheet.pdf
Fitria, L. & Mulyati. 2014. Profil he-
matologi tikus ( Rattus norvegi- cus Berkenhout,  1769)  galur Wistar  jantan  dan  betina  umur 4, 6, dan 8 minggu. Biogenesis 2(2): 94-100.
Fitria,  L.,  Mulyati,  Tiraya,  C.M.,  &
Budi,  A.S.  2015.  Profil  repro- duksi  jantan  tikus  ( Rattus norvegicus Berkenhout,  1769) galur  Wistar  stadia  muda,  pra- dewasa,  dan  dewasa. Jurnal Biologi Papua 7(1): 29-36.
Garber, J.C., Barbee, R.W., Bielitzki, J.T.,  Clayton,  L.A.,  Donovan, J.C., Hendriksen, C.F.M.,
Kohn,  D.F.,  Lipman,  N.S.,
Locke,  P.A.,  Melcher,  J.,
Quimby,  F.W.,  Turner,  P.V.,
Wood,  G.A.,  &  Würbel,  H.
2011. Guide  for  the  care  and use  of  laboratory  animals. 8 th
ed. Committee for the update of the  guide  for  the  care  and  use of  laboratory  animals.  Institute for  laboratory  animal  research. Division on earth and life stud- ies.  National  Research  Council of the National Academies. The National  Academies  Press. Washington, DC, USA.
Hewitt, C.D., Innes, D.J., Savory, J., &  Willis,  M.R.  1989.  Normal biochemical  and  hematological values  in  New  Zealand  white rabbits. Clinical  Chemistry 35 (8): 1777-1779.
Hogan,  M.C.,  Norton,  J.N,  &  Reyn- olds, R.P. 2018. Environmental
factors: Macroenvironment ver- sus  microenvironment.  Chapter 20.  In:  Weichbrod,  R.H, Thompson,  G.A.H.,  &  Norton, J.N.  (eds.)  2018. Management of  animal  care  and  use  pro- grams  in  research,  education, and  testing. CRC  Press/Taylor & Francis. Boca Raton. Florida.
USA. https://www.ncbi.nlm.
nih.gov/books/NBK500431/
Ihedioha,  J.I.,  Ugwuja,  J.I.,  Noel- Uneke,  O.A.,  Udeani,  I.J.,  & Daniel-Igwe,  G.  2012.  Refer- ence  values  for  the  haematolo- gy  profile  of  conventional grade outbred albino mice (Mus musculus) in  Nsukka,  Eastern Nigeria. Animal  Research  In- ternational 9(2): 1601-1612.
Isobe,  T.,  Saitoh,  S.,  Takagi  S., Takeuchi, H., Chiba, Y., Katoh, N.,  &  Shimamoto,  K.  2005. Influence  of  gender,  age  and renal  function  on  plasma  adi- ponectin  level:  the  Tanno  and Sobetsu  study. European  Jour- nal  of  Endocrinology 153:  91- 98.
Kamal, A. 2014. Estimation of blood urea nitrogen (BUN) and serum creatinine  level  in  patients  of renal  disorder. Indian  Journal of  Fundamental  and  Applied Life Sciences 4(4): 199-202.
Koolhaas, J.M. 2010. The laboratory rat.  In:  Hubrecht,  R.  and  Kirk- wood,  J.  (eds.). The  UFAW handbook on the care and man- agement of laboratory and oth- er research animals. 8 th ed. Pp. 311-326.
Pagana,  K.D.  &  Pagana,  T.J.  2014. Mosby’s  manual  of  diagnostic and  laboratory  tests. 5 th ed. Mosby,  an  imprint  of  Elsevier Inc. Missouri, USA.
Poustchi, H., George, J., Esmaili, S., Esna-Ashari,  F.,  Ardalan,  G., Sepanlou,  S.G.,  &  Alavian, S.M.  2011.  Gender  differences in healthy ranges for serum ala- nine  aminotransferase  levels  in adolescence. PLoS  ONE 6(6): e21178.  doi:10.1371/  journal. pone.0021178
Sengupta,  P.  2013.  The  laboratory rat:  Relating  its  age  with  hu- man's. International Journal of Preventive Medicine 4(6): 624- 630
Smith,  A.  2009.  Fasting  in  rodents.
Norecopa  Veterinærinstituttet.
Oslo.  https://norecopa.no/  me- dia/6351/food-deprivation.pdf
Struck,  M.B.,  Andrutis,  K.A., Ramirez, H.E., & Battles, A.H. 2011.  Effect  of  a  Short-term Fast  on  Ketamine–Xylazine Anesthesia  in  Rats. Journal  of the  American  Association  for Laboratory  Animal  Science JAALAS 50(3): 344-348
Thrall,  M.A.,  Weiser,  G.,  Allison, R.W., & Campbell, T.W. 2012. Veterinary  hematology  and clinical  chemistry. 2 nd ed. Wiley-Blackwell,  John  Wiley & Sons. Oxford, UK.
Wallen,  W.J.,  Belanger,  M.O.,  & Wittnich,  C.  2002.  Body weight and food intake profiles are modulated by sex hormones and  tamoxifen  in  chronically hypertensive  rats. The  Journal of Nutrition 132(8): 2246-2250. The  American  Society  for  Nu- tritional Sciences.