## UJI PRAKLINIK ANTIHIPERURISEMIA SECARA IN VIVO PADA MENCIT PUTIH JANTAN GALUR BALB-C  DARI EKSTRAK DAUN SALAM ( Syzigium polyanthum Walp) DAN DAUN BELIMBING WULUH ( Averrhoa bilimbi
L.)
Muhtadi 1*) , Andi Suhendi 1) , Nurcahyanti W. 2) , dan EM. Sutrisna 3)
1 Bagian Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta
2 Bagian Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta
3 Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran & Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta

## ABSTRACT
Antihyperuricemia activity in  vivo testing has  been done of single and combined extracts  of  Salam ( Syzigium polyanthum Walp ) and Belimbing Wuluh leaves ( Averrhoa bilimbi L. ), and  also standardized extracts . Salam leaves extraction and Belimbing Wuluh leaves carried by the water solvent. Dried extract of each ingredient had been done antihyperuricemia preclinical in vivo testing against male white mice strain Balb- C induced by potassium oxonate dose of 250 mg / kg b .w. Antihyperuricemia preclinical in vivo testing results showed that the single extracts of Salam and Belimbing Wuluh at a dose of 200 mg / kg b.w. had lower activity levels of uric acid in the blood serum of male white mice , respectively 0.640 and 0.680 . While the activity of the combination of extracts of Salam- Belimbing Wuluh is 1.380 .
Keywords : A ntihyperurisemia preclinical in vivo testing ; Salam leaves extract , Belimbing Wuluh leaves extract , male white mice Balb- C

## PENDAHULUAN
Asam  urat  adalah  senyawa turunan  purina dengan rumus kimia C 5 H 4 N 4 O 3 dan rasio plasma antara  3,6  mg/dL  (~214µmol/L)  dan  8,3  mg/ dL  (~494µmol/L)  (1  mg/dL  =  59,48  µmol/L)  . Kelebihan  (hiperurisemia, hyperuricemia )  atau kekurangan (hipourisemia, hyporuricemia ) kadar asam urat dalam plasma darah ini sering menjadi indikasi adanya penyakit atau gangguan pada tubuh manusia. Pada manusia, asam urat adalah produk terakhir  lintasan  katabolisme  nukleotida  purina, sebab tiadanya enzim urikase yang mengkonversi asam urat menjadi alantoin. Kadar asam urat yang berlebih dapat menimbulkan batu ginjal dan/atau pirai di persendian (Hediger, 2004).
Penyakit  asam  urat merupakan  akibat  dari konsumsi zat purin secara berlebihan. Purin diolah tubuh  menjadi  asam  urat,  tapi  jika  kadar  asam urat  berlebih,  ginjal  tidak  mampu  mengeluarkan sehingga  kristal  asam  urat  menumpuk  di persendian. Akibatnya sendi terasa nyeri, bengkak dan  meradang.  Asam  urat  adalah  penyakit  dari
sisa metabolisme zat purin yang berasal dari sisa makanan yang kita konsumsi. Purin sendiri adalah zat  yang  terdapat  dalam  setiap  bahan  makanan yang  berasal  dari  tubuh  makhluk  hidup.  Dengan kata  lain,  dalam  tubuh  makhluk  hidup  terdapat zat purin ini, lalu karena kita memakan makhluk hidup tersebut, maka zat purin tersebut berpindah ke dalam tubuh kita. Berbagai sayuran dan buah- buahan juga terdapat purin. Purin juga dihasilkan dari  hasil  perusakan  sel-sel  tubuh  yang  terjadi secara  normal  atau  karena  penyakit  tertentu. Biasanya asam  urat  menyerang  pada  usia  lanjut, karena penumpukan bahan purin ini.Pemanfaatan obat  tradisional  atau  jamu  di  Indonesia  pada hakekatnya  merupakan  bagian  kebudayaan bangsa  Indonesia.  Keuntungan  dari  penggunaan obat (ramuan) tradisional pada prinsipnya adalah efek samping yang relatif kecil dibandingkan obat modern. Meskipun secara empiris obat tradisional mampu menyembuhkan berbagai macam penyakit, tetapi khasiat dan kemampuannya belum banyak dibuktikan  secara  ilmiah  maupun  klinis.  Selain
itu,  belum  banyak  diketahui  senyawa  kimia  apa yang  bertanggung  jawab  terhadap  khasiat  obat tradisional tersebut (Wijayakusuma, 2002).
Hasil penelitian sebelumnya, menunjukkan bahwa  dekokta  daun  salam  pada  dosis  1,25  g/ kg  BB  mampu  menurunkan  kadar  asam  urat dalam  darah  mencit  putih  jantan  secara  efektif (Handadari, 2007). Sedangkan infusa daun Salam pada dosis 2,5 g/kg BB mampu menurunkan kadar asam urat yang setara dengan allopurinol dosis 10 mg/kg  BB  (Ariyanti,  2007).  Belimbing  wuluh dilaporkan  oleh  Muhtadi dkk.  memiliki aktivitas antihiperurisemia yang cukup  kuat dibandingkan dengan  meniran,  tempuyung  dan  jinten  hitam dengan nilai penurunan sebesar 78,06% (Muhtadi dkk., 2010).
Tulisan  ini  menjelaskan  tentang  pengujian aktivitas  antihiperurisemia  secara  in  vivo  pada mencit putih jantan galur Balb-C dari ekstrak air daun  Salam,  dan  Belimbing  Wuluh,  baik  dosis tunggal maupun dosis kombinasi.

## Metode
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah spuit injeksi volume 3,0 ml (Terumo), spuit injeksi untuk insulin 1,0 ml, spuit oral ukuran 15 gauge, ﬂ akon,  timbangan  mencit  kapasitas  2610 gram  (Lark,  Cina),  timbangan  analitik  (Presica A-SCS),  pipa  kapiler  (Assistent), mikrotube sentrifuge (eppendorf),  sentrifuge  (mini  spin), vortex, mikropipet ukuran 5-40 µl dan 200-1000 µl, blue  tip , yellow  tip, alat-alat  gelas  (Pyrex), StarDust FC* 15 (DyaSys) dan kuvet disposibel. Bahan  penelitain  adalah  Ekstrak  air  daun  Salam dan  daun  Belimbing  Wuluh,  Potasium  oksonat p.a (Aldrich Chemical Company), Allopurinol p.a (Sigma), NaCl 0,9 %, Aquadest dan reagen kit uric acid FS*TBHBA (DyaSys).
Hewan  percobaan :  mencit  putih  jantan galur Balb-C dengan berat badan rata-rata 30-40 gram dan berumur 2-3 bulan.
Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  serbuk daun  salam  atau  daun  Belimbing Wuluh  direbus dengan  air  sampai  volume  menjadi  separoh dari  volume  awal,  kemudian  disaring  dan ﬁ ltrat dievaporasi  dengan rotary  evaporator (RE) sehingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Kemudian
ekstrak  kental  yang  diproleh  dikeringkan  dalam Vaccum Dryer dan Vaccum Oven sampai kering. Pembuatan
Hiperurisemia dilakukan dengan cara menginjeksikan secara intraperitonial potasium oksonat 250 mg/kg BB atau 5 mg/20 g BB pada mencit (Zhao et al ., 2005).
Uji pendahulun ini dilakukan untuk tujuan mendapatkan  data  tentang  dosis  ekstrak,  waktu pengambilan darah, dan ekstrak tunggal yang aktif dalam menurunkan kadar asam urat.
Hewan  uji  dibagi  menjadi  beberapa kelompok  perlakuan,  yaitu  meliputi:  kelompok kontrol negatif / hiperurisemia (potassium oksonat dosis  250  mg/kgBB), kontrol  positif (allopurinol dosis  10  mg/kgBB),  ekstrak  air  daun  salam  dan Belimbing Wuluh dosis tunggal (200 mg/kgBB). Pemberian sediaan uji dilakukan satu jam setelah induksi  hiperurisemia  (potassium  oksonat  dosis 250  mg/kgBB).  Pengambilan  darah  dilakukan satu  jam  setelah  pemberian  sediaan  uji  atau  dua jam  setelah  induksi  hiperurisemia  (potassium oksonat dosis 250 mg/kgBB), darah diambil lewat mata  mencit  dengan  cara  menusuk  cabang  vena opthalmicus yang terletak pada saccus medianus orbitales dengan  pipa  kapiler.  Darah  yang mengalir  lewat  pipa  kapiler  ditampung  dalam tabung  ependorf,  setelah  darah  menggumpal disentrifus untuk mendapatkan serum.
Kadar  asam  urat  ditetapkan  berdasarkan reaksi  enzimatik  menggunakan  reagen uric  acid FS* TBHBA.  Serum  darah  yang  telah  dicampur homogen dengan pereaksi uric acid FS* TBHBA diinkubasi  selama  10  menit  pada  suhu  37º  C. Selanjutnya larutan sampel, standart dan blangko dibaca  absorbansinya  dengan  menggunakan spektrofotometer StartDust FC*15  pada  panjang gelombang 546 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  pendahuluan  dilakukan  untuk mengetahui  bagaimana  model  hiperurisemia pada  mencit  putih  jantan,  yaitu  dengan mencari dosis efektif potasium oksonat dalam menaikkan  kadar  asam  urat  dari  kondisi normal.

## Tabel 1- Data uji pendahuluan pembuatan model hiperurisemia
Perlakuan No. HU Kadar Asam Urat (mg/dL) Rata-rata SD Kontrol normal (Tanpa Perlakuan) 1 1.3 1.433 0.231 2 1.7 3 1.3 Potasium oksonat Dosis 250 mg/kgBB 1 3.1 3.067 0.950 2 4 3 2.1
Dari  hasil  uji  pendahuluan  tersebut  dapat dilihat  bahwa  dengan  potassium  dosis  250  mg/ kgBB  telah  mampu  menikkan  kadar  asam  urat mencit  yaitu  dari  kadar  normal  dengan  rata- rata  1,433  mg/dL  menjadi  3,067  mg/kgBB.  Hal ini  sesuai  dengan  pernyataan  yang  mengatakan bahwa mencit dikatakan hiperurisemia jika kadar asam urat darahnya berkisar antara 1,7-3,0 mg/dL. Dan  setelah  diuji  statistik  diperoleh  hasil  bahwa antara  kontrol  normal  dan  kelompok  potassium oksonat  sangat  berbeda  signi ﬁ kan  yaitu  dengan nilai  signi ﬁ kansi  sebesar  0,205  (p  >  0,05).  Jadi, dari hasil tersebut metode dalam penelitian dapat dilanjutkan penelitian selanjutnya yaitu perlakuan dengan ekstrak.
Hewan uji yang digunakan pada penelitian ini  adalah  mencit  putih  jantan  ( Mus  muculus ) yang  memiliki enzim  urikase  yang  dapat memecah  asam  urat  dengan  membentuk  produk akhir  allantoin  yang  bersifat  mudah  larut  dalam air  (Martin,  1987).  Untuk  memperkecil  variasi biologis,  maka  peneliti  melakukan  pengendalian terhadap beberapa variabel antara lain dengan cara menggunakan hewan uji yang kurang lebih sama variasi biologisnya yaitu diantaranya dengan berat badan sekitar 30 – 40 gram, umur 2-3 bulan, galur Balb-C,  jenis  kelamin  jantan  dan  diperlakukan sama  yaitu  ditempatkan  dalam  kandang  dengan jumlah tiap kandangnya sama dan diberi makanan yang  sama  serta  sebelum  diberi  perlakuan hewan  uji  dipuasakan  terlebih  dahulu  selama ±  2  jam  dengan  tetap  diberi  minum ad  libitum . Hal  ini  dilakukan  agar  kondisi  hewan  uji  sama dan  untuk  mengurangi  pengaruh  makanan  yang dikonsumsi  terhadap  sediaan  iji  yang  diberikan dalam penelitian.  Dan  untuk  mengurangi  tingkat kestresan hewan uji diadaptasikan dengan kondisi laboratorium selama 7 hari.
Pemilihan  jenis  kelamin  jantan  lebih didasarkan  pada  pertimbangan  bahwa  mencit
jantan  tidak  mempunyai  hormone  estrogen, jikalaupun ada hanya dalam jumlah yang relative sedikit  serta  kondisi  hormonal  pada  jantan  lebih stabil  jika  dibandingkan  dengan  mencit  betina karena pada mencit betina mengalami perubahan hormonal  pada  masa-masa  tertentu  seperti  pada masa siklus estrus, masa kehamilan dan menyusui dimana  kondisi  tersebut  dapat  mempengaruhi kondisi  psikologis  hewan  uji  tersebut.  Selain itu  tingkat  stress pada mencit  betina lebih tinggi dibandingkan dengan mencit jantan yang mungkin dapat mengganggu pada saat pengujian.
Potasium  oksonat  digunakan  sebagai induktor  hiperurisemia  karena  potasium  oksonat merupakan inhibitor  urikase yang  kompetitif ntuk  meningkatkan  kadar  asam  urat  dengan jalan  mencegah  perubahan  asam  urat  menjadi allantoin.  Dimana  allantoin  bersifat  larut  air  dan dapat  diekskresi  lewat  urin,  sehingga  dengan dihambatnya  enzim  rikase  oleh  potassium oksonat maka asam urat akan tertumpuk dan tidak tereliminasi dalam bentuk urin.
Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah allopurinol yaitu salah satu obat pirai atau gout yang sering  digunakan dalam  pengobatan. Allopurinol merupakan  satu-satunya  urikostatikum yang  saat ini  digunakan  secara  terapeutik,  dimana  bekerja untuk  mengurangi  pembentukan  asam  urat. Sedangkan  yang  bekerja  untuk  meningkatkan eliminasi  asam  urat  disebut  urikosurika (Mutschler,  1991).  Allopurinol  merupakan substrat ksantin oksidase dan dieliminasi melalui ginjal  terutama  sebagai  oksipurinol  (sering  juga disebut dengan istilah yang salah yaitu aloksantin) (Schunack dan Mayer, 1990). Allopurinol maupun oksipurinol,  menghambat  ksantin  dan  asam urat,  dimana  dalam  dosis  rendah  mekanisme penghambatan berlangsung secara kompetitif dan dalam dosis tinggi bekerja secara tidak kompetitif. Allopurinol  yang  memiliki  waktu  paroh  dalam
plasma sekitar 40 menit, dihidrolisis oleh ksantin oksidase  menjadi  metabolit  (Mutschler,  1991). Metabolit  allopurinol-1-ribonukleotida,  yang dapat  dinyatakan  kecil  dalam  ekstrak  organ, mungkin  bertanggung  jawab  untuk  inhibisi tambahan  dari  sintesis de  novo purin  (Schunack dan Mayer, 1990). Melalui penghambatan ksantin oksidase maka hipoksantin dan ksantin diekskresi lebih banyak dalam urin sehingga kadar asam urat dalam darah dan urin menurun (Mutschler, 1991).
Sediaan  uji  yang  digunakan  untuk menurunkan  kadar  asam  urat  dalam  penelitian ini adalah ekstrak air dari daun belimbing wuluh. Metode  penyarian  yang  digunakan  adalah ekstraksi  dengan  pelarut  air,  dimana  metode tersebut  mirip  dengan  penggunaan  bahan  nabati sebagai  obat  tradisional  (jamu)  yaitu  dengan merebus  bahan  dan  mengambil  konsentratnya untuk  diminum  sehingga  kesetaraan  perlakuan secara tradisional dan perlakuan dalam penelitian identik.  Bedanya  dalam  penelitian  ini konsentrat yang diperoleh setelah perebusan diuapkan dalam
vacuum  dryer  sampai  tebentuk  ekstrak  kering. Hal ini dimaksudkan untuk menjaga stabilitasnya selama penyimpanan karena jika disimpan dalam bentuk  cair  sangat  rentan  terkontaminasi  serta cepat ditumbuhi oleh jamur.
Penetapan  kadar  asam  urat  ditetapkan dengan  metode  enzimatik  dengan  menggunakan reagen  Uric  acid  FS*TBHBA  (2,4,6-tribromo- 3hydroxybenzoic acid) dengan menggunakan alat spektrofotometer  StarDust  FC  15.  Mekanisme yang  terjadi  adalah  asam  urat  dioksidasi  oleh enzim urikase dengan bantuan H 2 O dan O 2 menjadi allantoin, karbondioksida dan hidrogen peroksida. Hidrogen peroksida yang terbentuk akan bereaksi dengan  4-aminoantipirin  dan  TBHBA  menjadi kuinonimin  yang  berwarna  merah  muda  dimana reaksi tersebut dikatalisis oleh enzim peroksidase (POD). Besarnya intensitas warna yang dihasilkan oleh kuinonimin tersebut ekuivalen dengan kadar asam urat dalam darah. Mekanisme reaksi tersebut dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1- Mekanisme Reaksi Pembentukan Senyawa Kuinonimin (Schunack et al. , 1990)
Dalam penetapan kadar perlu diperhatikan kemungkinan  adanya  senyawa  pengganggu yaitu terutama dari sel-sel darah merah. senyawa dalam  sel  darah  merah  yang  diketahui  paling mengganggu adalah glutation dan ergotion. Untuk
mengurangi  ganguan  tersebut  digunakan  darah yang  tidak  hemolisis,  sehingga  dalam  penelitian ini  yang  digunakan  adalah  serum  bukan  plasma untuk mencegah agar glutation dan ergation tidak lepas dari sel darah merah (Dawiesh, 1989).
Gambar 2- Histogram hubungan antara kelompok perlakuan  dengan rata-rata kadar asam urat darah (mg/dL) pada mencit putih jantan
Data kadar asam urat dalam serum mencit setelah  diinduksi  dengan  potasium  oksonat  dan
pemberian  sediaan  uji  ekstrak  dosis  tunggal  200 mg/kgBB tersaji pada tabel berikut:
Tabel 2- Data Kadar Asam Urat Dalam Serum Setelah Perlakuan dengan Ekstrak
No. HU KELOMPOK PERLAKUAN BB (Gram) KADAR ASAM URAT SETELAH PERLAKUAN RATA- RATA SD 1 Kontrol Negatif (Potasium Oksonat 250 mg/kgBB)
39.3 3.1
3.100 0.3464
2 30.5 3.7 3 30 2.9 4 36 2.9 5 39 2.9 1 Kontrol Positif (Allopurinol 10 mg/kgBB)
37.5 0.1
0.2000 0.1000 2 36.5 0.2 3 36 0.3 4 39 0.3 5 38.5 0.1 1 Ekstrak Daun Salam (200 mg/kgBB) 36
0.5 0.6400 0.1673
2 36.5 0.5 3 37.5 0.9 4 38.5 0.6 5 39 0.7 1 Ekstrak Belimbing Wuluh (200 mg/kgBB)
35 1
0.6800 0.3493 2
34 0.3 3 32.5 0.3 4 36 0.9 5 35 0.9 1 Ekstrak  Salam – Belimbing Wuluh (200 mg/kgBB) 1 : 1
36.5 1.3 1.3800 0.4087 2
37.5 1.3 3 36.5 1.6 4 38 1.9 5 37 0.8
Dari  hasil  yang  tertera  dalam  tabel diatas, setelah  diuji  statistik  diperoleh  hasil  signi ﬁ kansi masing-masing  kelompok  perlakuan  seperti tertera pada tabel berikut:
Tabel 3- Hasil Uji Anova Setelah Perlakuan Dengan Ekstrak Tunggal Kelompok I II III IV V I - 0,000* 0,000* 0,000* 0,000* II - - 0,031* 0,020* 0,000* III - - - 0,835 0,001* IV - - - - 0,001* V - - - - - Ket: * : menunjukkan perbedaan yang signi ﬁ kan yaitu P < 0,05. Kelompok I : kontrol negatif/hiperurisemia (potassium oksonat 250 mg/kgBB) Kelompok II  : kontrol positif (allopurinol 10 mg/kgBB) Kelompok III  : ekstrak air daun Salam (200 mg/kgBB) Kelompok IV  : ekstrak air daun Belimbing Wuluh (200 mg/kgBB) Kelompok V  : ekstrak kombinasi Salam-Belimbing Wuluh (200 mg/kgBB)
Dari  hasil  uji  anova  diatas  dapat  dilihat bahwa  kadar  asam  urat  antara  kontrol  negative dengan kontrol positif maupun dengan kelompok ekstrak menunjukan hasil yang berbeda signi ﬁ kan dengan  nilai  signi ﬁ kansi  sebesar  0,000.  Hal  ini menunjukkan bahwa allopurinol dan ekstrak daun salam,  Belimbing  Wuluh  maupun  kombinasi ekstrak  salam  dan  Belimbing  Wuluh  mampu menurunkan kadar asam urat dalam darah mencit putih  jantan  galur  Balb-C  jika  dibandingkan dengan kontrol negatif (Potasium oksonat).
Jika  dibandingkan  dengan  kontrol  positif, penurunan  yang  dihasilkan  oleh  ekstrak  tunggal daun  salam  dan  Belimbing  Wuluh  berbeda signi ﬁ kan  dengan  nilai  berturut-turut  0,031  dan 0,020  (P  <  0,005).  Dari  hasil  yang  diperoleh dapat  dikatakan  bahwa  kedua  ekstrak  dengan dosis  tunggal  memiliki  potensiasi  yang  sama dalam menurunkan kadar asam urat mencit putih jantan galur Balb-C dimana hal tersebut didukung dengan hasil statistik antara kedua ekstrak adalah berbeda tidak signi ﬁ kan dengan nilai signi ﬁ kansi sebesar 0,835 (P > 0,05).
Sedangkan  kombinasi  ekstrak  Salam- Belimbing  Wuluh  jika  dibandingkan  dengan kontrol  positif  berbeda  signi ﬁ kan  dengan  nilai P  =  0,000  (P  <  0,05).  Hal  ini  berarti  penurunan yang  dihasilkan  oleh  kombinasi  ekstrak  salam dan  Belimbing  Wuluh  berbeda  jauh  dengan penurunan yang dihasilkan oleh allopurinol. Dan jika dibandingkan dengan ekstrak tunggal Salam maupun Belimbing wuluh memberikan hasil yang berbeda tidak signi ﬁ kan. Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak kombinasi dari  dua  ekstrak  tunggal  yang  masing-masing potensial  dalam  menurunkan  asam  urat  darah
mencit jika  digabungkan  akan memberikan  hasil yang  lebih  baik  karena  senyawa  aktif  masing- masing ekstrak berbeda.

## SIMPULAN
Ekstrak daun Salam dan daun Belimbing Wuluh  dosis  tunggal  200  mg/kgBB  terbukti berpotensi  menurunkan  kadar  asam  urat  dalam darah  mencit  putih  jantan  galur  Balb-C  yang dinduksi  potassium  oksonat  dimana  prosentase penurunan  kadar  asam  urat  yang  diberikan  oleh ekstrak  Salam  kurang  lebih  sebesar  79,35% dan  ekstrak  Belimbing  Wuluh  sebesar  78,06% sedangkan  penurunan  oleh  allopurinol  sebesar 93,55%. Penurunan kadar asam urat dalam serum dari kombinasi eksrak Salam dan Belimbing Wuluh dengan  perbandingan  sama  (1  :  1)  memberikan hasil yang berbeda tidak signi ﬁ kan dengan kontrol positif yaitu dengan prosentase penurunan sebesar 55,48%.

## DAFTAR PUSTAKA
Ariyanti, R., 2007, Pengaruh Pemberian  Infusa Daun Salam (Eugenia polyantha Wight .)Terhadap Penurunan Kadar Asam Urat dalam Darah Mencit Putih Jantan hiperurisemia , Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Dawiesah,  I.  S.,  1989, Penentuan  Nutrien  dalam Jaringan  dan  Plasma  Tubuh, Hal  54-61, PAU Pangan dan Gizi, UGM. Yogyakarta.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  1978.
Materia Medika Indonesia . Jilid 4.  Jakarta. 109-111.
Handadari,  H.  R.,  2007, Efek  Decocta  Daun  Salam (Eugenia  polyantha Wight .)  Terhadap Penurunan  Kadar  Asam  Urat  dalam
Darah Mencit Putih (Mus muculus) Jantan hiperurisemia , Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Hediger  MA.  2004  . Physiology  and biochemistry  of uric  acid.  Review.  Ther  Umsch. PubMed PMID: 15493112.  61(9):541-5
Martin,  D.  W.,  1987, Metabolisme  Nukleotida  Purin dan Pirimidin dalam Biokimia Harper , Edisi 20,  diterjemahkan  oleh  Darmawan,  Iyan, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Muhtadi,  Andi  Suhendi,  Nurcahyanti  W.,  EM. Sutrisna,  2010,  Pengembangan  Agen Fitoterapi Asam Urat  Dari Beberapa  Tum- Buhan  Obat  Indonesia  Untuk  Peningkatan Kapasitas  Bahan  Alam  Obat  Menjadi Produk  Obat  Herbal  Terstandar  (OHT), Laporan  Penelitian  RAPID ,  Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Mutschler,  E.,  1991,  Dinamika  Obat, Buku  Ajar Farmakologi dan Toksikologi , Edisi Kelima, ITB, Bandung, 217-221.
Schunack,  W.,  Mayer,  and  K.,  Manfred,  H.,
1990, Senyawa  Obat  Kimia  Farmasi , diterjemahkan  oleh  Joke,  Witlmena  dan Soebita,  S.,  Gajah  Mada  University  Press, Yogyakarta.
Wijayakusuma, H., 2002, Tumbuhan Berkhasiat Obat Indonesia  Rempah,  Rimpang  dan  Umbi. Prestasi Instan Indonesia, Jakarta.