Aktivitas Anti-inﬂ amasi Parem Instant Tradisional dari Bahan Usada Bali pada Mencit Inﬂ amasi yang Diinduksi Karagenan
(Anti-Inﬂ ammatory Activity  of Traditional  Instant  Parem From  Usada  Bali  on  Carrageenan-Induced  Inﬂ ammatory Mice Model)
PUTU  ERA  SANDHI  KUSUMA  YUDA 1 *,  GUSTI AYU  PUTU  YOSINTA  SASMITA 1 ,  ERNA CAHYANINGSIH 1
1 Departemen  Farmasi  Bahan Alam,  Fakultas  Farmasi,  Universitas  Mahasaraswati  Denpasar, Denpasar, Bali, 80233, Indonesia
Diterima 1 April 2021, Disetujui 16 Agustus 2022
JURNAL ILMU KEFARMASIAN  INDONESIA, Oktober 2022, ISSN 1693-1831
Abstract: The increase of adverse reactions from anti-inﬂ ammatory drugs that are used in the long term by rheumatic patients requires a relatively safer alternative therapy. This research was aimed to evaluate the eﬀ ectiveness of Usada Bali's instant parem (BIO-PAREM) as an anti-inﬂ ammatory agent against carrageenan-induced inﬂ ammatory mice. The method used was randomized pre-test and post-test with control group design using 24 mice which were divided into 4 treatment groups. The negative control group was given a vehicle, the positive control group was given anti-inﬂ ammatory gel of diclofenac sodium, group 3 (P1) was given BIO-PAREM with a concentration of 12.5% and group 4 (P2) was given  BIO-PAREM  with  a  concentration  of  25%.  All  groups  were  induced  with  1%  carrageenan, then the mice's paw edema volume was calculated using a plethysmometer at 0, 1, 2, 3, and 4 hours. The Kruskal Wallis and Mann Whitney test were used to analyse the relative change of inﬂ ammation volume. The BIO-PAREM phytochemical screening assay showed the presence of alkaloids, ﬂ avonoids, tannins, steroids and triterpenoids. BIO-PAREM showed signiﬁ cant inhibition of  mice's paw edema at concentrations of 12.5% and 25% (p <0.05) indicating its potential as a candidate for topical alternative treatment for rheumatism.
Keywords: Balinese Usada, inﬂ ammation, instant parem, jamu, traditional medicine
Abstrak: Maraknya  efek  samping  penggunaan  obat  anti-inﬂ amasi  steroid  dan  non  steroid  yang digunakan dalam jangka panjang oleh pasien rematik memerlukan alternatif terapi yang relatif lebih aman.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efektivitas  parem  instan  dari  Usada  Bali  yang diberi  nama  BIO-PAREM  sebagai  agen  anti-inﬂ amasi  terhadap  mencit  inﬂ amasi  dengan  diinduksi karagenan.  Penelitian  ini  merupakan randomized  pre-test  and  post-test  with  control  group  design dengan subjek 24 ekor mencit terbagi dalam empat kelompok perlakuan. Kelompok pertama sebagai kontrol  negatif  diberikan  pembawa  (aquadest),  kelompok  dua  kontrol  positif  diberikan  gel  natrium diklofenak,  kelompok  tiga  (P1)  diberikan  BIO-PAREM  konsentrasi  12,5%  dan  kelompok  4  (P2) diberikan  BIO-PAREM  konsentrasi  25%.  Seluruh  kelompok  diinduksi  dengan  karagenan  1%  (b/v), kemudian diberikan perlakuan secara topikal dan kemudian dilakukan pengukuran perubahan volume peradangan kaki mencit menggunakan pletismometer pada jam ke-0, 1, 2, 3, dan 4. Uji Kruskal Wallis dan Mann Whitney (taraf kepercayaan 95%) digunakan untuk melakukan analisis terhadap perubahan volume peradangan relatif. Dari hasil pengujian skrining ﬁ tokimia BIO-PAREM baik pada konsentrasi 12,5% maupun 25% menunjukkan adanya kandungan senyawa tannin, steroid, triterpenoid, ﬂ avonoid dan  alkaloid.  BIO-PAREM pada kedua  konsentrasi  mampu  menghambat  inﬂ amasi  secara  bermakna jika dibandingkan dengan kontrol negatif (p<0,05), namun kedua konsentrasi tersebut menghasilkan aktivitas antiinﬂ amasi yang sebanding (p>0,05).
Kata kunci: Inﬂ amasi, jamu, obat tradisional, parem instan, Usada Bali
YUDA ET AL.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
143
dalam bentuk sediaan semipadat memiliki aktivitas anti-inflamasi  melalui  mekanisme  pengurangan migrasi  leukosit  dan  penurunan  kadar  sitokin  dan kemokin (9) . Hal ini menunjukkan adanya potensi bahan herbal sebagai agen anti-inﬂ amasi topikal. Hal ini juga diperkuat  oleh  hasil  penelitian  dimana  penggunaan secara topikal dari campuran daun Lawsonia inermis L. (Henna) dengan ekstrak air daun Ricinus communis L telah terbukti memiliki efek yang signiﬁ kan dalam mengurangi nyeri dan inﬂ amasi pada hewan coba (10) . Pengobatan  tradisional  telah  lama  digunakan sebagai  salah  satu  alternatif  dalam  terapi  beberapa penyakit.    Di  Bali  khususnya  terdapat  lontar  yang membahas  tentang  pengobatan  tradisional  yaitu Usada  Bali.  Kata  “Usada”  berasal  dari  bahasa Sansekerta ausadhi dengan  makna  yaitu  tumbuhan yang  berkhasiat  obat.  Usada  adalah  warisan pengetahuan pengobatan tradisional Bali yang telah ada sejak lama dan diperoleh dari berbagai gabungan sumber, menggunakan tanaman obat lokal Bali serta memadukan  pengalaman  masyarakat  tradisional Bali (11) .  Salah  satu  bagian  dari  Usada  Bali  adalah Lontar Usada Taru Pramana yang berisi penjelasan mengenai berbagai macam tumbuhan yang berkhasiat obat. Dalam lontar tersebut terdapat berbagai bentuk formula tradisional salah satunya adalah dalam bentuk boreh  atau  parem (12) .    Parem  telah  dikenal  sebagai sebuah  bentuk  obat  tradisional  berbentuk  serbuk atau campuran herbal yang dikombinasikan dengan air atau minyak untuk dibalurkan pada bagian tubuh yang sakit. Pada masyarakat Bali, parem atau boreh ini digunakan secara topikal pada daerah persendian yang mengalami inﬂ amasi akibat rematik.
BIO-PAREM adalah suatu formula boreh/parem yang  diambil  dari  bahan-bahan  Usada  Bali  dengan kandungan  rempah-rempah  khas  Bali  seperti  jahe ( Zingiber  officinale Rosc.),  kencur  ( Kaempferia galanga L.),  cengkeh  ( Syzygium  aromaticum ), kunyit  ( Curcuma  domestica Val),  bangle  ( Zingiber cassumunar Roxb.),  kayu  manis  ( Cinnamomum burmannii ),  dan  pala  ( Myristica  fragrans Houtt). BIO-PAREM  sangat  berpotensi  dijadikan  sebagai obat  herbal  terstandar  dengan  didukung  beberapa penelitian  yang  menyatakan  bahan-bahan  yang digunakan dalam BIO-PAREM mengandung senyawa metabolit  sekunder  yang  bermanfaat  sebagai  anti- inﬂ amasi seperti etil-p-metoksisinamat pada kencur, gingerol pada jahe, kurkumin pada kunyit, eugenol yang  terkandung pada  cengkeh  serta  asam  miristat yang terkandung dalam biji pala (13-17) .
Melihat adanya potensi BIO-PAREM untuk dapat dikembangkan menjadi obat herbal terstandar yang anti-inﬂ amasi dengan khasiat yang dapat dibuktikan

## PENDAHULUAN
RHEUMATOID  arthritis  (RA)  merupakan salah  satu  masalah  autoimun  yang  melibatkan beberapa  persendian  secara  bilateral.  Ini  ditandai dengan  peradangan  tendon  (tenosinovitis)  yang mengakibatkan  kerusakan  tulang  rawan  dan  erosi tulang (1) . Bukti mayoritas yang berasal dari analisis genetika,  analisis  jaringan,  model,  dan  studi  klinis, menunjukkan  etiologi  yang  dimediasi  oleh  sistem imun yang terkait dengan disregulasi jaringan stroma yang bersama-sama memicu peradangan kronis dan kerusakan artikular (2) .
Tujuan  utama  pengobatan  RA  adalah  untuk mengontrol rasa  sakit dan  peradangan, mengurangi kerusakan sendi dan kecacatan, serta mempertahankan atau meningkatkan fungsi ﬁ sik dan kualitas hidup (3) . Obat-obatan,  yang  dianggap  bekerja  cepat  adalah obat  antiinflamasi  nonsteroid  (NSAID)  karena penghambatan  prostaglandin.  Efek  samping  dari beberapa  NSAID  pada  dosis  tinggi  termasuk diantaranya  adalah  tinitus,  gangguan  pendengaran, dan  intoleransi  lambung.  NSAID  bekerja  dengan menghambat  siklo-oksigenase  untuk  mencegah sintesis prostaglandin, prostasiklin, dan tromboksan. Mual,  gangguan  perut,  tukak,  serta  perdarahan gastrointestinal  merupakan  beberapa  kejadian  yang dapat terjadi oleh penggunaan obat tersebut (4) . Studi meta-analisis dan beberapa uji klinis terkontrol telah memberikan cukup petunjuk mengenai adanya efek samping NSAID pada komplikasi saluran pencernaan, hati,  jantung  dan  pembuluh  darah,  paru-paru  dan ginjal (5,6) .  Oleh  sebab  itu,  diperlukan  penelitian untuk  mendapatkan  obat  anti-inﬂ amasi  yang  dapat digunakan secara topikal dengan efek samping yang relatif lebih aman.
Salah  satu  alternatif  pengobatan  dalam peradangan sendi adalah menggunakan bahan herbal yang berasal dari pengobatan tradisional. Beberapa tanaman  herbal  telah  diketahui  memiliki  khasiat dalam  meringankan  inﬂ amasi  pada  persendian  dan tulang  seperti Whitania  somnifera,  Boswellia  spp., Curcuma spp., Equisetum arvense, Sesamum indicum, Harpagophytum  procumbens,  Salix  spp.,  Zingiber oﬃ  cinalis, Symphytum oﬃ  cinalis, Arnica montana, dan Panax notoginseng (7) . Selain itu, hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak herbal yang mengandung tinggi piperin yang diformulasikan secara transdermal menunjukkan aktivitas anti-inﬂ amasi yang bergantung pada  dosis  melalui  penghambatan  produksi  oksida nitrat dan prostaglandin E2 pada sel makrofag (8) . Hasil penelitian lainnya menunjukkan bahwa ekstrak kering Aleurites moluccana yang deiberikan secara topikal
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia ` 144 secara  ilmiah  melalui  uji  pra-klinik,  maka  perlu dilakukan  pengujian  antiinﬂ amasi  secara  pra-klinik dengan  metode paw  edema pada  mencit  jantan inﬂ amasi yang diinduksi karagenan.

## BAHAN DAN METODE
BAHAN. Beberapa material yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  BIO-PAREM,  etanol  70% (Bratachem, Indonesia), HCl pekat (Merck), pereaksi Dragendorf, larutan Pb-asetat, NaOH (Merck), larutan FeCl 3 , Aquadest, larutan kloroform (Merck), larutan H 2 SO 4 pekat (Merck), pereaksi Liebermann-Burchard, aquadest,  gel  natrium  diklofenak  (VE,  GSK),  dan karagenan (Sigma, USA).
Alat. Beberapa  peralatan  pendukung  dalam penelitian ini diantaranya adalah timbangan elektrik (Acis), oven (Memmert, KG), pletismometer (Orchid, India), spuit injeksi (Terumo), dan alat-alat gelas.
METODE.  Determinasi  Tanaman. Tahap pertama ini dilakukan pengumpulan tumbuhan seperti rimpang  kunyit,  rimpang  jahe,  rimpang  kencur, rimpang bangle, kulit kayumanis, buah pala dan bunga cengkeh, kemudian  dilakukan  determinasi  tanaman untuk memastikan kebenaran identitas tanaman yang digunakan dalam penelitian bertempat di UPT Balai Konservasi  Tumbuhan  Kebun  Raya  Eka  Karya, Bedugul-Bali.
Pembuatan  BIO-PAREM. Rimpang  kunyit, rimpang jahe, rimpang kencur, rimpang bangle, biji pala, bunga cengkeh dan kulit kayu manis dibersihkan, kemudian  dicuci  dan  ditiriskan.  Bahan-bahan  ini kemudian dikeringkan di dalam oven pada suhu 40 o C. Setelah kering bahan-bahan ini selanjutnya disortasi kering  untuk  memisahkan  bahan  atau  benda  asing pada simplisia, kemudian simplisia ini dihancurkan menggunakan blender hingga menjadi serbuk halus (melalui  ayakan  nomor  20).  Semua  bahan  yang meliputi  serbuk  kering  dari  kencur,  jahe,  cengkeh, pala, kayu manis, kunyit dan bangle dicampur dengan perbandingan yang sama dan kemudian diaduk sampai homogen. Bahan yang telah tercampur disuspensikan dalam air hangat (suhu 60 o C) sampai homogen.
Penapisan Fitokimia. Tahap ini diawali dengan melarutkan  500  mg  produk  BIO-PAREM  kedalam 50 mL pelarut air hangat, kemudian disaring untuk memisahkan ampas sehingga dihasilkan larutan yang akan digunakan pada pengujian skrining ﬁ tokimia.
Pengujian keberadaan alkaloid dilakukan dengan menguapkan  larutan  uji  sebanyak  2  mL pada cawan  porselen  hingga  diperoleh  residu yang  akan direkonstitusi dengan 5 mL larutan HCl 2N. Kemudian didinginkan dan disaring, selanjutnya larutan dibagi menjadi dua. Sampel pertama sebagai larutan blangko,
sampel  kedua  diberikan  3  tetes Dragendorf .  Hasil positif  alkaloid  ditunjukkan  jika  timbul  endapan berwarna jingga kecokelatan (18) .
Pemeriksaan  flavonoid  dilakukan  dengan memasukkan  masing-masing  1  mL  larutan  uji  ke dalam  3  tabung  reaksi  dimana  sampel  pertama berfungsi sebagai blangko, tabung kedua direaksikan dengan larutan Pb asetat (timbal asetat) 10%. Hasil positif  ﬂ avonoid  ditunjukkan  dengan  terbentuknya endapan berwarna kuning (19) sedangkan sampel ketiga direaksikan dengan larutan NaOH 20%, jika terbentuk larutan berwarna kuning maka diduga mengandung ﬂ avonoid (20) .
Pemeriksaan saponin dilakukan dengan menam- bahkan 5 mL larutan uji dengan 5 mL aquadest dan dikocok  selama  30  detik  kemudian  dibandingkan dengan blangko. Terbentuknya busa setinggi 1-10 cm selama sepuluh menit dan tidak hilang dengan penam- bahan larutan HCl 2N menandakan adanya saponin (18) .
Pemeriksaan tanin dilakukan dengan mereaksikan 2  mL  larutan  uji  dengan  beberapa  tetes  FeCl 3 5%. Terbentuknya  warna  hijau  kehitaman  menandakan adanya kandungan tanin (21) .
Pemeriksaan  steroid/  triterpenoid  dilakukan dengan  menguapkan  2  mL  larutan  uji  kemudian direkonstitusi dengan 2 mL kloroform dan pereaksi Liebermann-Burchard .  Jika  pada  perbatasan  dua pelarut terbentuk warna hijau atau biru menandakan adanya  steroid  sedangkan  terbentuknya  warna coklat atau violet mengindikasikan adanya senyawa terpenoid (22,23) .
Pengujian Aktivitas Anti-inﬂ amasi. Prosedur pengujian  pada  penelitian  ini  telah  mendapatkan persetujuan  dari  Komisi  Etik  Penelitian  Fakultas Kedokteran  Universitas  Udayana  No.1762/ UN14.2.2.VI I.14/ LP / 2019. Pe neli t ia n  i ni menggunakan  mencit  putih  jantan  yang  dalam kondisi  sehat,  berusia  ±  2  bulan,  berat  berkisar antara 20-30 gram dan diadaptasikan dengan kondisi lingkungan  selama  tiga  hari  serta  dipuasakan  dari makanan selama 12 jam sebelum perlakuan. Hewan coba dibagi dalam empat kelompok (n=6). Kelompok pertama sebagai kontrol negatif diberikan pembawa berupa aquadest, kelompok kontrol positif diberikan gel  natrium  diklofenak  1%  (VE).  Penggunaan gel  natrium  diklofenak  sebagai  kontrol  positif didasarkan pada pertimbangan bahwa saat penelitian ini  dilakukan,  di  pasaran  belum  terdapat  sediaan parem  instant  yang  memiliki  bukti  ilmiah  sebagai anti-inﬂ amasi. Kelompok perlakuan diberikan BIO- PAREM konsentrasi 12,5% dan 25%. Seluruh mencit diinduksi  inflamasi  dengan  cara  menginjeksikan sebanyak 50 µL (0,05 mL) karagenan dalam larutan salin  (1%  b/v)  pada  kaki  kanan  bagian  belakang.
YUDA ET AL.
kasar, warna coklat kekuningan dan bau khas rempah- rempah  seperti  ditunjukkan  pada Tabel  1.  Sediaan konsentrasi  25%  memiliki  aroma  rempah-rempah yang lebih kuat dibandingkan konsentrasi 12,5%.
Kandungan  Fitokimia. Tahapan  selanjutnya yaitu  melakukan  analisis  kualitatif  keberadaan senyawa  metabolit  sekunder  pada  BIO-PAREM
Seluruh perlakuan diberikan dengan cara mengoleskan sediaan sebanyak 0,02 g secara topikal pada bagian telapak  kaki  yang  diinduksi  karagenan  dengan menggunakan cotton bud . Perlakuan diulang tiap 1 jam dalam 4 jam dan dilakukan setelah pengukuran volume  peradangan. Volume  peradangan  (mL)  dari telapak kaki mencit yang diinduksi inﬂ amasi diukur dengan plethysmometer (24,25) . Untuk meminimalkan pengaruh perbedaan ukuran kaki mencit awal terhadap nilai  volume  peradangan  setelah  perlakuan  maka volume  peradangan  dihitung  dalam  bentuk  volume peradangan relatif (V n /V o ) saat jam ke-n dibandingkan dengan volume awal dimana, V 0 : volume telapak kaki mencit  awal  (jam  ke-0)  setelah  diinduksi  karagena dan V n : Volume telapak kaki mencit pada jam ke-n. Analisis  Data. Uji Kruskal  Wallis dan Mann Whitney dengan  taraf  kepercayaan  95%  digunakan untuk menganalisis data perubahan volume peradangan kaki mencit menggunakan software SPSS for Windows Ver. 22.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Autentifikasi  Tanaman. Determinasi menunjukkan bahwa jenis tanaman yang digunakan untuk  pebuatan  produk  BIO-PAREM  meliputi Myristica  fragrans Houtt, Zingiber  montanum (J. Koenig) Link ex A. Dietr, Cinnamomum burmannii (Nees  &  T.  Nees)  Blume  (No.Spesimen:  B-1508/ IPH.7/AP/XII/2018.1-3), Curcuma  longa L, Kaemferia  galanga L., Syzygium  aromaticum (L.) Merr. & L.M.Perry, dan Zingiber oﬃ  cinale Roscoe (No.Spesimen: B.1783/IPH.7/AP/XII/2018.1-6).
Hasil  Uji  Organoleptis. BIO-PAREM  dibuat dengan cara mencampurkan serbuk kering simplisia ke  dalam  air  hangat  sebelum  digunakan.  Hasil  uji organoleptis BIO-PAREM yaitu kedua sediaan BIO- PAREM  baik  dengan  konsentrasi  12,5%  dan  25% memiliki bentuk setengah padat dengan tekstur agak
melalui penapisan ﬁ tokimia. Hasil skrining ﬁ tokimia BIO-PAREM  menunjukkan  adanya  alkaloid, ﬂ avonoid,  tannin,  steroid  dan  triterpenoid  seperti ditunjukkan pada Tabel 2. Namun pada BIO-PAREM tidak  ditemukan  adanya  kandungan  saponin  pada penelitian ini.
Tabel 2. Kandungan ﬁ tokimia BIO-PAREM.
Hasil  Uji  Aktivitas  Anti-inflamasi. Data pengujian aktivitas anti-inﬂ amasi dalam penelitian ini ditampilkan dalam bentuk volume peradangan kaki relatif. Volume peradangan relatif diukur dengan cara membandingkan  volume  peradangan  dari  masing- masing  kelompok  pada  saat  pengukuran  dengan volume peradangan awal masing-masing hewan coba (Vn/V ) selama 4 jam. Pengamatan dilakukan sampai jam ke-4 dengan mempertimbangkan hasil penelitian yang menunjukkan bahwa induksi inﬂ amasi dengan karagenan mencapai puncak maksimal pada jam ke-4 (26) . Adapun volume peradangan relatif tiap kelompok yaitu untuk kelompok kontrol negatif dari jam ke-1 hingga  jam  ke-4  volume  peradangan  relatifnya adalah 1,14±0,01; 1,27± 0,05; 1,25± 0,06; dan 1,15± 0,05. Untuk kelompok kontrol positif dari jam ke-1 hingga jam ke-4 volume peradangan relatifnya adalah 1,05±0,01;  1,06±0,03;  1,00±0,05;  dan  0,97±0,01. Untuk  kelompok  perlakuan  1  (P1)  pada  jam  ke-1, 2,  3  dan  4  volume  peradangan  relatifnya  berturut- turut  adalah  1,03±0,04;  1,05±0,02;  0,89±0,12;  dan 0,95±0,03. Untuk kelompok perlakuan 2 (P2) pada jam ke-1, 2, 3 dan 4 volume peradangan relatifnya berturut-turut  1,08±0,03;  1,13±0,03;  1,08±0,02; dan 1,00± 0,031. Hasil pengujian uji Kruskal-Wallis menyatakan  adanya  perbedaan  yang  signifikan terhadap volume peradangan kaki mencit pada jam ke-2, 3 dan 4 (p<0,05).
Hasil uji Mann-Whitney memperlihatkan antara kelompok  kontrol  negatif  dengan  kontrol  positif pada jam ke-2, 3, dan 4 memiliki perbedaan volume peradangan  relatif  yang  signifikan  dengan  nilai p  berturut-turut  0,029;  0,020;  dan  0,003,  artinya pemberian  kontrol  positif  gel  natrium  diklofenak secara  topikal  menunjukkan  reaksi  penghambatan
Uji Organoleptis Hasil Pengujian BIO-PAREM 12.5% BIO-PAREM 25% Bentuk Setengah Padat Setengah Padat Warna Coklat kekuningan Coklat kekuningan Bau Khas rempah- rempah Khas rempah- rempah Golongan Senyawa Pereaksi Hasil Pengamatan Alkaloid Dragendroff + Flavonoid Pb-asetat 10% NaOH 20% + + Saponin Aquadest + HCl 2N - Tanin FeCl 3 5% + Steroid Triterpenoid Liebermann Burchard Liebermann Burchard + +
Tabel 1. Hasil pengujian organoleptis BIO-PAREM.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia ` 146
BIO-PAREM terbuat dari rempah-rempah yang secara  tradisional  digunakan  untuk  parem  oleh masyarakat  Indonesia  khususnya  oleh  masyarakat Bali yaitu berupa campuran dari bahan kencur, kunyit, jahe, cengkeh, kayu manis, bangle dan pala. Parem ini secara  tradisional  digunakan  untuk  menghangatkan badan atau meringankan nyeri termasuk pada kondisi peradangan  misalnya  pada  kaki,  tangan  maupun leher. Untuk itu, perlu dilakukan upaya pembuktian ilmiah terhadap khasiat dari parem ini sehingga dapat dikembangkan menjadi formula jamu saintiﬁ k yang bermanfaat  bagi  masyarakat.  Bahan-bahan  tersebut dibuat dalam bentuk parem instant dalam bentuk yang dikeringkan sehingga lebih praktis ketika digunakan mengingat  penyiapan  bahan  dan  pembuatan  parem secara tradisional memerlukan waktu dan tenaga yang cukup banyak.
Setelah  dilakukan  identifikasi  kandungan fitokimia  dapat  diketahui  bahwa  BIO-PAREM mengandung  beberapa  golongan  senyawa  bahan alam  yaitu  alkaloid,  ﬂ avonoid,  tannin,  triterpenoid dan  steroid. Adanya  efek  anti-inﬂ amasi  dari  BIO- PAREM  dapat  disebabkan  karena  adanya  beberapa kandungan  dari  BIO-PAREM  yang  memiliki mekanisme menghambat proses peradangan. Menurut D’Mello  dkk. (27) hasil  pengamatan  pada  ﬂ avonoid kelas ﬂ avon, ﬂ avonol, dan isoﬂ avon mengarah pada adanya  aktivitas  penghambatan  COX-2  (enzim siklooksigenase  2)  selektif  yang  berperan  dalam mediator  peradangan,  sehingga  dapat  memberikan aktivitas anti-inﬂ amasi yang baik dan mengurangi efek samping gastrointestinal. Selain itu proses peradangan atau inﬂ amasi dapat juga dipicu oleh adanya radikal bebas  seperti  misalnya Reactive  Oxygen  Species
inflamasi  mulai  jam  ke-2  dan  bertahan  sampai jam  ke-4.  Jika  dibandingkan  antara  kontrol  negatif dengan  BIO-PAREM  12,5%  menunjukkan  adanya perbedaan volume peradangan relatif yang signiﬁ kan pada jam ke-2, 3, dan 4 dengan nilai p yaitu 0,005; 0,005;  dan  0,010.  Sama  halnya  dengan  kontrol positif,  pemberian  perlakuan  BIO-PAREM  dengan konsentrasi 12,5% (P1) sudah menunjukkan adanya aktivitas  penghambatan  peradangan  pada  jam  ke-2 dan  bertahan  sampai  jam  ke-4, sedangkan  hasil  uji Mann  Whitney antara  kontrol  negatif  dengan  BIO- PAREM 25% (P2) pada jam ke-2 tidak menunjukkan adanya  perbedaan  volume  peradangan  relatif  yang signiﬁ kan  (p=0,053),  namun  pada  jam  ke-3  dan  4 antara kontrol negatif dengan P2 terdapat perbedaan volume  peradangan  relatif  yang  signiﬁ kan  dengan nilai  p=0,016  pada  jam  ke-3  dan  p=0,024  pada jam  ke-4.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pemberian BIO-PAREM dengan konsentrasi 25% (P2) mampu menghambat reaksi inﬂ amasi pada jam ke-3 sampai dengan jam ke-4.  Antara  kelompok  P1 dengan P2 pada jam ke-3 dan 4 tidak terdapat perbedaan volume peradangan  relatif  yang  signiﬁ kan  dengan  nilai  p berturut-turut 0,196 dan 0,294. Dari hasil tersebut baik pemberian BIO-PAREM dengan konsentrasi 12,5% (P1) dan konsentrasi 25% (P2) mampu menghambat reaksi inﬂ amasi secara signiﬁ kan pada jam ke-3 dan 4 dengan kekuatan yang sebanding atau tidak tergantung pada konsentrasi, sehingga formula yang digunakan dalam  BIO-PAREM  pada  kedua  konsentrasi  dapat disimpulkan memiliki efek anti-inﬂ amasi pada kaki mencit  inﬂ amasi  yang  diinduksi  karagenan.  Hasil pengujian aktivitas anti-inﬂ amasi beserta gambaran hasil statistiknya dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Graﬁ k perubahan volume peradangan relatif (Vn/Vo). Data Ditampilkan dalam bentuk Mean±SEM (n=6), Ket- erangan: KN = Kontrol Negatif yang diberikan aquadest, KP: Kontrol Positif yang diberikan Gel Natrium Diklofenak, P1: BIO-PAREM konsentrasi 12.5%, P2: BIO-PAREM konsentrasi 25%, * : P<0.05 vs KN.
(ROS),  dimana    radikal  bebas  tersebut  dapat distabilkan  oleh  senyawa  yang  memiliki  aktivitas antioksidan.  Flavonoid  memiliki  efek  antioksidan, sehingga  ﬂ avonoid  dapat  juga  berkontribusi  dalam penghambatan reaksi inﬂ amasi (28) . Senyawa polifenol, seperti ﬂ avonoid, tannin, dan asam fenolik juga telah dilaporkan  berperan  dalam  penghambatan  proses inflamasi  melalui  peredaman  radikal  bebas  yang terlibat dalam kaskade reaksi inﬂ amasi (29) . Senyawa polifenol mengatur imunitas dengan mempengaruhi regulasi  sistem  imun  termasuk  mengendalikan terbentuknya  sitokin  proinﬂ amasi  baik  di  tingkat protein maupun genetik serta menonaktifkan NF-κB yang merupakan faktor transkripsi mediator inﬂ amasi termasuk memodulasi jalur protein yang diaktifkan mitogen Kinase (MAPk) dan asam arakidonat. Selain itu beberapa enzim yang terlibat dalam pembentukan mediator  peradangan  seperti  lipoksigenase  (LOX), fosfolipase A2 (PLA2), dan siklooksigenase (COX) juga  dapat  dihambat  oleh  senyawa  polifenol  yang berujung  pada  terbatasnya  produksi  prostaglandin (PG)  dan  leukotrien  (LTs)  sehingga  memberikan efek antagonisme terhadap reaksi peradangan (30) . Hal ini  memperkuat  adanya  kemungkinan  bahwa  efek antiinﬂ amasi yang diberikan pada BIO-PAREM dapat disebabkan oleh adanya kandungan polifenol.
Terdapat banyak senyawa dari bahan alam yang telah  terbukti  memiliki  aktivitas  anti-inﬂ amasi  dan telah  diisolasi  selama  bertahun-tahun.  Salah  satu kajian  mengenai  senyawa  alkaloid yang bersumber dari bahan alam dengan efek anti-inﬂ amasi dimana sebagian besar diuji secara in vivo dengan metode paw edema yang diinduksi karagenan menunjukkan bahwa dari  49  alkaloid  yang  dievaluasi,  40  jenis  senyawa alkaloid  menunjukkan  aktivitas  anti-inﬂ amasi  dan jenis  yang  paling  banyak  dipelajari  sebagai  anti- inflamasi  adalah  alkaloid  isokuinolin (31) .  Selain polifenol, hasil penelitian juga memberikan indikasi bahwa senyawa alkaloid  dapat  menekan  proliferasi limfosit, menghambat sitotoksisitas sel natural killer , mengatur  produksi  histamin  dari  sel mast ,  serta mempengaruhi pelepasan interleukin-1 (IL-1) monosit dan aksi PAF ( Platelet Activating Factor ) pada platelet sehingga menghambat reaksi inﬂ amasi (32) .
Mekanisme  aksi  terpenoid  juga  telah menunjukkan adanya efek terapeutik pada peradangan dengan  menghambat  pembentukan  prostaglandin yang  memegang  peran  penting  dalam  proses inﬂ amasi (33) . Tumbuhan merupakan salah satu sumber senyawa  terpenoid.  Senyawa  terpenoid  tersebut telah banyak ditemukan dan terbukti memiliki efek antiinflamasi (34,35) .  Beberapa  senyawa  terpenoid diketahui  secara  signifikan  dapat  menghambat perkembangan inﬂ amasi sendi kronis dimana senyawa
ini  dapat  mempengaruhi beragam  mekanisme yang relevan  dengan  peradangan  yang  timbul  sebagai respons  terhadap  berbagai  faktor  etiologi (36,37) . Kerusakan jaringan yang terjadi saat proses inﬂ amasi yang disebabkan karena pengkerutan sel limfosit dapat dihambat oleh steroid glikosida dari ekstrak tanaman Trigonella foenum graecum (38) .
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  BIO-PAREM telah teruji khasiatnya sebagai anti-inﬂ amasi secara pra-klinis  pada  mencit.  Kajian  lebih  lanjut  tetap diperlukan untuk mengetahui senyawa ﬁ tokimia yang bertanggungjawab  terhadap  aktivitas  antiinﬂ amasi dari  BIO-PAREM.  Untuk  dapat  dikembangkan menjadi Obat Herbal Terstandar BIO-PAREM perlu dilakukan  pengujian  lebih  lanjut  yang  meliputi  uji keamanan/toksisitas  dan  standardisasi  bahan  baku, sehingga  BIO-PAREM  dapat  menjadi  salah  satu kandidat obat alternatif sebagai anti-inﬂ amasi.

## SIMPULAN
Berdasarkan skrining ﬁ tokimia dan uji aktivitas anti- inﬂ amasi  dapat  disimpulkan  bahwa  BIO-PAREM mengandung  beberapa  senyawa  fitokimia  yaitu tannin,  terpenoid,  steroid,  alkaloid,  dan  ﬂ avonoid. BIO-PAREM  memiliki  aktivitas  yang  signifikan dalam  menekan  peradangan  kaki  mencit  inﬂ amasi yang  diinduksi  karagenan  secara  topikal  baik  pada konsentrasi 12,5% maupun  25%, dan antara kedua konsentrasi tersebut memiliki aktivitas anti-inﬂ amasi yang  hampir  sebanding  atau  tidak  berbeda  secara statistik.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  kepada  Fakultas Farmasi  Universitas  Mahasaraswati  Denpasar  yang telah menyediakan fasilitas dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Lin  YJ, Anzaghe  M,  Schülke  S.  Update  on  the Pathomechanism, Diagnosis, and Treatment Options for Rheumatoid Arthritis. Cells. 2020;9(4):880.
2.  Firestein  GS,  McInnes  IB.  Immunopathogenesis  of Rheumatoid Arthritis. Immunity. 2017;46(2):183-196.
3.  Ferro F, Elefante E, Luciano N, Talarico R, Todoerti M. One year in review 2017: novelties in the treatment of  rheumatoid  arthritis.  Clin  Exp  Rheumatol. 2017;35(5):721-34.
4.  Bullock J, Rizvi SA, Saleh AM, Ahmed SS, Do DP, Ansari  RA, Ahmed  J.  Rheumatoid  arthritis:  a  brief overview  of  the  treatment.  Medical  Principles  and Practice. 2018;27(6):501-7.
5.  Bindu  S,  Mazumder  S,  Bandyopadhyay  U.  Non-
YUDA ET AL.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
148
steroidal  anti-inflammatory  drugs  (NSAIDs)  and organ  damage: A  current  perspective.  Biochemical Pharmacology. 2020;180(114147):1-21. 6.  Baranowski DC, Buchanan B, Dwyer HC, Gabriele JP,  Kelly  S, Araujo  JA.  Penetration  and  efficacy of  transdermal  NSAIDs  in  a  model  of  acute  joint inﬂ ammation. Journal of pain research. 2018;11:2809- 19.
7.  Dragos D, Gilca M, Gaman L, et al. Phytomedicine in joint disorders. Nutrients. 2017;9(70):1-18.
8.  Asasutjarit R, Sookdee P, Veeranondha S, Fuongfuchat A,  Itharat A. Application  of  ﬁ lm-forming  solution as  a  transdermal  delivery  system  of  piperine-rich herbal mixture extract for anti-inﬂ ammation. Heliyon. 2020;6(6):e04139.
9.  Mendes  Hoepers  S, Tolentino de  Souza HG,  Meira Quintão  NL,  Roberto  Santin  J,  Cechinel  Filho  V, Silva  RM,  Garcia  Couto A,  Simão  da  Silva  KA. Topical  anti-inflammatory  activity  of  semisolid containing  standardized Aleurites  moluccana L. Willd  (Euphorbiaceae)  leaves  extract.  Journal  of Ethnopharmacology. 2015;173:251-5.
10.  Ziaei A, Sahranavard S, Gharagozlou MJ, Faizi M. Preliminary  investigation  of  the  eﬀ ects  of  topical mixture of Lawsonia inermis L. and Ricinus communis L. leaves extract in treatment of osteoarthritis using MIA model in rats. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences. 2016;24(12):1-20.
11.  Nala  IGN.  Usada  di  Bali  dalam  Usada  Majalah Kesehatan. Denpasar: Paramita; 2007.
12.  Sari M. Usada Bali seri menguak dahsyatnya khasiat ramuan  obat  herbal  (Taru  Pramanan).  Denpasar: Paramita; 2015.
13.  Sulaiman MR, Zakaria ZA, Daud IA, Ng FN, Ng YC, Hidayat MT. Antinociceptive and anti-inﬂ ammatory activities  of  the  aqueous  extract  of Kaempferia galanga leaves in animal models. Journal of Natural Medicines. 2008;62(2):221-7.
14.  Raji Y, Udoh US, Oluwadara OO, Akinsomisoye OS, Awobajo  O, Adeshoga  K. Anti-inflammatory  and analgesic properties of the rhizome extract Zingiber oﬃ  cinale . African Journal of Biomedical Research. 2002;5:121–4.
15.  Said, A. Khasiat dan manfaat kunyit. Jakarta: PT. Sinar Wadjar Lestari; 2007.
16.  Murakami  Y,  Shoji  M,  Hanazawa  S,  Tanaka  S, Fujisawa S. Preventive eﬀ ect of bis-eugenol, a eugenol ortho  dimer,  on  lipopoly  saccharide-stimulated nuclear factor kappa B activation and inﬂ ammatory cytokine  expression  in  macrophages.  Biochemical pharmacology. 2003;66(6):1061-6.
17.  Hartanto ES dan Silitonga FS. Ekstraksi asam miristat asal biji pala ( Myristica fragrans Houtt) dan limbah industri olahannya. Indonesian Journal of Industrial Research. 2018;35(1):38-45.
18.  Marliana SD, Suryanti V, Suyono. Skrining ﬁ tokimia dan analisis kromatograﬁ  lapis tipis komponen kimia buah labu siam ( Sechium edule Jacq. Swatz) dalam ekstrak etanol. Jurnal Biofarmasi. 2005;3(1):26-31.
19.  Raphael  E.  Phytochemical  constituents  of  some leaves extract  of Aloe  vera and Azadirachta  indica plant species. Journal of Environmental Science and Toxicology. 2012;1(2): 14-7.
20.  Ugochukwu SC, Arukwe UI, Onuoha I. Preliminary phytochemical screening of diﬀ erent solvent extract of  stem  bark  and  roots  of Dennetia  tripetala G. Baker. Asian Journal of Plant Science & Research, 3. 2013;3(3):10-3.
21.  Nirwana AP, Astirin OP, Widiyani T. Skrining ﬁ tokimia ekstrak  etanol  daun  benalu  kersen  ( Dendrophtoe pentandra L. Miq.). El-Vivo. 2015; 3(2): 9-15.
22.  Jones WP, Kinghorn AD. Extraction of plant secondary metabolites. In: Sarker, S. D., Latif, Z. and Gray, A. I., eds. Natural products isolation. 2nd Ed. New Jersey: Humana Press; 2006.P.341-2.
23.  Evans  CW.  Pharmacognosy  trease  and  evans,  16th edition. Saunders Elsevier, London. UK; 2009.
24.  Coura CO, Souza RB, Rodrigues JA, et al. Mechanisms involved  in  the  anti-inflammatory  action  of  a polysulfated fraction from Gracilaria cornea in rats.
PLoS One. 2015;10(3):e0119319.
25.  Lingadurai S,  Nath LK,  Kar PK,  Besra  SE,  Joseph RV. Anti-inﬂ ammatory and anti-nociceptive activities of  methanolic  extract  of  the  leaves  of Fraxinus ﬂ oribunda Wallich. African  Journal  of  Traditional, Complementary  and  Alternative  Medicines. 2007;4(4):411-6.
26.  Amdekar  S,  Roy  P,  Singh  V,  Kumar A,  Singh  R, Sharma P. Anti-inﬂ ammatory activity of Lactobacillus on  carrageenan-induced  paw  edema  in  male wistar  rats.    International  journal  of  inﬂ ammation. 2012;2012:752015.
27.  D’Mello P, Gadhwal M, Joshi U. Modeling of COX- 2  inhibitory  activity  of  ﬂavonoids.  International Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences. 2011;3:33-40.
28.  Nijveldt  RJ,  van  Nood  E,  van  Hoorn  DE,  Boelens PG, van Norren K, van Leeuwen PA. Flavonoids: a review of probable mechanisms of action and potential applications.  The American  Journal  of  Clinical Nutrition. 2001;74(4):418-25.
29.  Hossain  H, Al-Mansur A, Akter  S,  SaraU, Ahmed MR,  Jahangir AA.  Evaluation  of  anti-inﬂ ammatory activity  and  total  tannin  content  from  the  leaves of Bacopa  monnieri (Linn.).  International  Journal of  Pharmaceutical  Sciences  and  R esearch. 2014;5(4):1246-52.
30.  Yahfoufi  N,  Alsadi  N,  Jambi  M,  Matar  C.  The Immunomodulatory  and  anti-inﬂ ammatory  role  of polyphenols. Nutrients. 2018;10(11):1618.
31.  Souto AL,  Tavares  JF,  da  Silva  MS,  Diniz  Mde F,  de Athayde-Filho  PF,  Barbosa  Filho  JM. Anti- inﬂ ammatory  activity  of  alkaloids:  an  update  from 2000 to 2010. Molecules. 2011;16(10):8515-34.
32.  Barbosa-Filho  JM,  Piuvezam  MR,  Moura  MD, Silva  MS,  Lima  KVB,  da-Cunha  EVL,  et  al. Anti- inﬂammatory activity of alkaloids: A twenty-century review.  RRevista  Brasileira  de  Farmacognosia.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia ` 149 in-vivo  anti-inﬂ ammatory,  and  acute  toxicity  study of  Indonesian  propolis  capsule  from Tetragonula sapiens .  Saudi  Journal  of  Biological  Sciences.
2022;29(4):2489-500.
37.  Ge J, Liu Z, Zhong Z, Wang L, Zhuo X, Li J, Jiang X, Ye  XY,  Xie  T,  Bai  R.  Natural  terpenoids  with anti-inﬂ ammatory activities: potential leads for anti- inﬂ ammatory drug discovery. Bioorganic Chemistry. 2022:105817:1-24.
38.  Ondeykal  JG,  Herath  KB,  Jayasuriya  H,  Polishook JD, Bills GF, Dombrowski AW, et al. Discovery of structurally  diverse  natural  product  antagonists  of chemokine  receptor  CXCR3.  Molecular  diversity. 2005;9: 123-9.
2006;16(1):109-39.
33.  Prakash V. Terpenoids as source of anti-inﬂ ammatory compounds. Asian  Journal  of  Pharmaceutical  and Clinical Research. 2017;10(3):68-76.
34.  Fristiohady A, Wahyuni  W,  Malik  F.  In  vitro  anti- inﬂ ammatory activity of Etlingera elatior ( jack) RM Smith by RBC membrane stabilization method. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia. 2020;18(2):150-7. 35.  Sahlan  M,  Devina A,  Pratami  DK,  Situmorang  H,
Farida S, Munim A, Kusumoputro B, Yohda M, Faried A, Gozan M, Ledyawati M. Anti-inﬂ ammatory activity of Tetragronula species from Indonesia. Saudi Journal of Biological Sciences. 2019;26(7):1531-8.
36.  Farida S, Pratami DK, Sahlan M, Laksmitawati DR, Rohmatin  E,  Situmorang  H.  In-vitro  antioxidant,