## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN PENENTUAN TOTAL KANDUNGAN FENOLIK EKSTRAK  ETANOL DAUN NANAMUHA
( Bridelia monoica
Merr)
Julia Elsa Lakoro 1) , Max R. J. Runtuwene 1) , Paulina V.Y. Yamlean 1)
Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Nanamuha (Bridelia monoica Merr.) is a plant that was used as a cancer and tumor drug by the Sangihe Islands  community.  This  plant  contains  phenol  compounds,  flavonoids,  alkaloids  and  tannins.  The purpose of this study was to determine the potential of nanamuha leaves that grow in the Sangihe Island to  have  antioxidant  activity  and  determine  the  total  phenolic  ethanol  extracts  of  nanamuha  leaf.  The extraction  method  used  is  maceration  with  ethanol  solvent  p.a.  The  extracts  obtained  was  determined total  phenolic  and  antioxidant  activity  test  using  DPPH  method.  Based  on  the  results  obtained,  the ethanol extracts of nanamuha leaves has antioxidant activity with an IC 50 value of 75,03 µg / mL and the result showed that the total phenol content the ethanol extracts of nanamuha leaves of  53,34 mg / L.
Keywords : Nanamuha leaf, total phenol, antioxidant activity , DPPH

## ABSTRAK
Nanamuha  ( Bridelia  monoica Merr .) merupakan  tanaman  yang  dimanfaatkan  sebagai  obat  kanker  dan tumor oleh masyarakat Kepulauan Sangihe. Tanaman ini memiliki kandungan senyawa fenol, flavonoid, alkaloid dan tanin. Tujuan dari penelitian ini adalah unutuk mengetahui potensi dari daun nanamuha yang tumbuh di Kepulaun Sangihe ini memiliki aktivitas antioksidan dan menentukan total fenolik dari ekstrak etanol  daun  nanamuha.  Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah  maserasi  dengan  pelarut  etanol  p.a. Ekstrak  yang  diperoleh  ditentukan  total  fenolik  dan  uji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH. Berdasarkan hasil yang didapatkan ekstrak etanol daun nanamuha memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai  IC 50 75,03  µg/mL  dan  hasil  penelitian  menunjukan  total  kandungan  fenolik  ekstrak  etanol  daun nanamuha sebesar 53,34 mg/L.
Kata kunci : Daun Nanamuha, Total fenol, Aktivitas antioksidan, DPPH

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  yang memiliki  berbagai  jenis  tumbuhan  yang berguna  untuk  menjaga  daya  tahan  tubuh dari serangan penyakit. Salah satu penyebab terjadinya  penyakit  dalam  tubuh  adalah radikal  bebas.  Radikal  bebas  adalah  atom atau  gugus  yang  memiliki  satu  atau  lebih elektron  tidak  berpasangan.  Radikal  bebas juga  dijumpai  pada  lingkungan  seperti  pada logam  (contohnya  besi  dan  tembaga),  asap rokok,  obat,  makanan  dalam  kemasan,  dan lain lain (Droge, 2002).
Radikal  bebas  yang  terbentuk  dalam tubuh akan menghasilkan radikal bebas baru melalui  reaksi  berantai  yang  akhirnya jumlahnya  terus  bertambah  dan  menyerang sel-sel  tubuh  (Rohdiana,  2001).  Dalam melindungi  tubuh  dari  serangan  radikal bebas,  diperlukan  suatu  bahan  baku  obat tradisional  dari  luar  tubuh  yang  berfungsi sebagai antioksidan untuk menangkal radikal bebas dengan melengkapi kekurangan  elektron  dari  radikal  bebas sehingga  menghambat  terjadinya  reaksi berantai (Windono et al , 2001).
Antioksidan  adalah  substansi  yang diperlukan  untuk  menetralisi  radikal  bebas dan  mencegah  kerusakan  yang  ditimbulkan oleh  radikal  bebas  dengan  melengkapi kekurangan  elektron  yang  dimiliki  radikal bebas  dan  menghambat  terjadinya  reaksi berantai  dari  pembentukan  radikal  bebas yang  dapat  menimbulkan  stres  oksidatif. Antioksidan  dapat  diperoleh  dari  makanan yang  banyak  mengandung  vitamin  C, vitamin  E  dan  beta  karoten  serta  senyawa fenolik.  Antioksidan  dari  tumbuhan  bekerja menghalangi  kerusakan  oksidatif  dengan membentuk  kelat  dengan  senyawa  logam
katalik,  dan  menangkap  oksigen  (Najoan et al., 2016).
Secara  turun  temurun  masyarakat Indonesia telah menggunakan obat tradisional  sebagai  salah  satu  upaya  dalam penanggulangan  masalah  kesehatan  jauh sebelum  layanan  kesehatan  formal  dengan obat-obatan modernnya menyentuh masyarakat . Pengetahuan mengenai tumbuhan obat memiliki karakteristik berbeda-beda pada suatu wilayah. Pengetahuan  tersebut  biasanya  merupakan warisan turun-temurun hanya sebagian kecil masyarakat  yang  mengetahui  jenis-jenis tumbuhan obat. Masyarakat khususnya yang bermukim disekitar kawasan hutan seringkali  menggunakan  tumbuhan  alam untuk pengobatan tradisional. Daun Nanamuha  merupakan  salah  satu  tanaman berkhasiat  obat  yang  dimanfaatkan  sebagai obat  kanker  dan  tumor  oleh  masyarakat Kepulauan  Sangihe  khususnya  kampung Sensong Tabukan tengah. Menurut Rumouw (2015), daun  Nanamuha  ( Bridelia  Monoica Merr) mengandung senyawa fenol, flavonoid,  alkaloid  dan  tanin.  Senyawa- senyawa  aktif  tersebut  memiliki  aktivitas antioksidan.
Berdasarkan  latar  belakang  diatas, maka  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut tentang  uji  aktivitas  antioksidan  dan penentuan  total  kandungan  fenolik  ekstrak etanol  daun  Nanamuha  ( Bridelia  Monoica Merr)  yang  di  ekstraksi  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut etanol.

## METODOLOGI PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan
Oktober 2018 sampai bulan Desember 2019 di  Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Bentuk penelitian ini merupakan eksperimental laboratorium

## Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  ialah  Ayakan mesh 65,  gelas arloji,  Timbangan  analitik  (AE  Adam) blender  (Philips),  Tabung  reaksi  (Pyrex), Rak tabung, Pipet tetes, Mikropipet 1000 µL (SHCHEER), cawan petri (Pyrex),
Mikropipet  200  µL  (SHCHEER),  Gelas Piala  (Iwaki),  Gelas  Ukur  (Pyrex),  Labu Takar  (Iwaki),  Erlenmeyer  (Pyrex),  Batang pengaduk,  Spatula,  Corong, Vacum  rotary evaporator (Steroglass  Strike  300),  vortex, dan spektrofotometer UV-Vis (Shimazu).

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini ialah  Daun  Nanamuha,  Etanol  p.a,  Reagen Folin-Ciocalteu,  DPPH,  Natrium  karbonat 2%, Asam Galat, Aquadest, N-Heksan.

## Pengambilan Sampel
Sampel  daun  Nanamuha  diambil  di Kabupaten  Kepulauan  Sangihe,  di  desa Sensong kecamatan Tabukan Tengah.
Bagian  yang  digunakan  ialah  daun.  Sampel yang  diambil  dibawa  ke  laboratorium  untuk dibersihkan  dari  kotoran  dan  serangga dengan air mengalir.

## Preparasi Sampel
Sampel  daun  Nanamuha  ( Bridelia monoica Merr)  dikering  anginkan  selama  ± 2  hari.  Setelah  itu  dimasukkan  ke  dalam oven  pada  suhu  40 0 C  hingga  benar-benar kering.  Setelah  kering  sampel  di  blender hingga berbentuk serbuk lalu diayak dengan ayakan mesh 65.

## Ekstraksi Sampel
Sebanyak  150  gram  serbuk  daun nanamuha  dimaserasi  dengan  pelarut  etanol dengan  perbandingan  1:5  selama  3  kali  24 jam  sesekali  sambil  diaduk.  Hasil  ekstraksi kemudian  di  saring  untuk  mendapatkan filtrat.  Selanjutnya  dilakukan  remaserasi  1 kali  selama  2    hari.  Kemudian  filtrat  yang diperoleh  setiap  pergantian  larutan  di gabungkan  dan  diuapkan  dengan rotary evaporator hingga  mendapatkan  ekstrak kental dari daun Nanamuha.

## Penentuan Total Kandungan Fenolik
Kandungan  total  fenolik  ekstrak etanol  daun  Nanamuha  ( Bridelia  Monoica. Merr)  ditentukan  dengan  metode  Folin Ciocalteu.  Sebanyak  0,1  mL  larutan  ekstrak ditambahkan 0,1 mL reagen Folin Ciocalteu 25%. Kemudian di vortex, lalu ditambahkan 2  mL  larutan  Natrium  Karbonat  (Na 2 CO 3 ) 2%.  Selanjutnya,  campuran  diinkubasi dalam  ruangan  gelap  selama  30  menit. Diukur  absorbansi  pada  panjang  gelombang 750 nm menggunakan spectrometer UV-Vis. Kandungan  total  fenolik  dinyatakan  sebagai mg ekuivalen asam galat/g ekstrak.

## Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  dengan
Metode DPPH
Pengujian aktivitas
antioksidan ekstrak  daun  Nanamuha  ( Bridelia  monoica Merr) ditentukan  dengan  metode  Molyneux (2004),  yakni  larutan  stok  ekstrak  etanol daun  Nanamuha  ( Bridelia  Monoica  Merr) dibuat konsentrasi 1000 µg/mL dengan cara sebanyak  10  mg  ekstrak  etanol  daun Nanamuha ( Bridelia Monoica Merr) . Kemudian,  dimasukkan  ke  dalam  10  mL pelarutnya.  Ekstrak  etanol  daun  Nanamuha ( Bridelia  Monoica  Merr) dibuat  dalam beberapa  konsentrasi,  yaitu  5  µg/mL,  10 µg/mL,  15  µg/mL,  20µg/mL,  25µg/mL. Larutan  DPPH  dibuat  dengan  konsentrasi 0,4  mM.  Larutan  sampel  yang  telah  dibuat, diencerkan dengan berbagai variasi konsentrasi  dengan  total  volume  5  ml  dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi sebagai larutan  uji.  Selanjutnya,ke  dalam  tabung reaksi larutan uji ditambahkan 1 mL larutan DPPH  dan  diinkubasi  selama  30  menit dalam  kondisi  gelap.  Setelah  30  menit, diukur  absorbansinya  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang  517  nm.  Nilai  absorbansi  dari setiap  variasi  konsentrasi  dicatat  dan dihitung  % scaveingnya dan  nilai  IC 50. Pengujian dilakukan sebanyak tiga kali. Perhitungan  nilai  IC 50 dinyatakan  dengan persamaan regresi linear dan perhitungan % inhibisi dinyatakan  dengan  persamaan berikut :

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pembuatan Ekstrak
Serbuk  simplisia  diekstraksi  dengan metode maserasi. Digunakan metode maserasi  karena  memiliki  keunggulan  yaitu cara  pengerjaan  yang  cepat,  peralatan  yang digunakan  sederhana,  relatif  mudah  dan murah.  Selain  itu,  pemilihan  metode ekstraksi  secara  maserasi  yaitu  dengan melihat  dari  sifat  zat  aktif  flavonoid  yang akan  ditarik  yang  tidak  tahan  akan  panas (Gandjar dan Abdul, 2008).
Pada proses maserasi serbuk simplisia  sebanyak  150  gram,  dilarutkan dalam 750 ml heksan. Maserasi dilakukan 3 kali  24  jam  kemudian  disaring,  didapat filtrate  pertama,  selanjutnya  untuk  filtrate pertama  di  destilasi  uap  lalu  rendam  lagi ditambah  300  ml  hexane  selama  2  hari. Dilakukan  hal  yang  sama  hingga  diperoleh filtrate ke 6 sampai kandungan klorofil pada ekstrak  terlihat  berkurang.  Selanjutnya ekstrak  direndam  dengan  etanol  800  ml selama  2  hari.  Kemudian  disaring  dan  di evaporasi,  lalu  dimasukkan  ke  dalam  oven 40 0 C tujuannya agar tidak merusak senyawa yang  terkandung  dalam  ekstrak  hingga diperoleh  massa  konstan  yang  disebut ekstrak kental.

## Total Kandungan Fenolik
Kandungan  total  fenolik  ekstrak etanol  daun  Nanamuha,  ditentukan  dengan metode  Folin  Ciocalteu.  Sebanyak  0,1  mL larutan  ekstrak  ditambahkan  0,1  mL  reagen Folin  Ciocalteau  50%.  Kemudian  di  vortex, lalu  ditambahkan  2  mL  larutan  natrium karbonat (Na 2 CO 3 ) 2%. Selanjutnya, campuran  diinkubasi  selama  30  menit. Diukur  absorbansi  pada  panjang  gelombang 750 nm menggunakan spektrofotometer UV- Vis.  Kandungan  total  fenolik  dinyatakan sebagai  mg  ekuivalen  asam  galat/g  ekstrak. Hasil  pengujian  disajikan  pada  tabel dibawah ini:
Tabel 1. Total Kandungan fenolik (mg/g)
Absorbansi           Fenolik

## Rata-rata
0,328                     38,54 0,430                     51,79 53,34 0,568                    69,71
Hasil  pengujian  total  kandungan fenolik  pada  tabel  di  atas,  ekstrak  daun Nanamuha  diketahui  positif  mengandung senyawa  fenolik.  Tingginya  kandungan fenol  yang terekstraksi dikarenakan pegaruh pelarut  yang  digunakan  untuk  ekstraksi. Pelarut seperti methanol dan etanol merupakan pelarut yang sangat luas digunakan  dan  efektif  untuk  ekstraksi
komponen-komponen  fenolik  dari  bahan alam (Katja dan Suryanto, 2009).

## Aktivitas Antioksidan
Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak  daun  Nanamuha  menggunakan metode  DPPH.  Metode  DPPH  merupakan metode pengukuran antioksidan yang sederhana,  cepat  dan  tidak  membutuhkan banyak  reagen  seperti  halnya  metode  lain. Hasil  pengujian  disajikan  pada  tabel dibawah ini:
Tabel 2. Aktivitas Antioksidan
Sampel Konsentras i (µg/mL) Absorbans i Inhibis i (%) IC 50 (µg/m L) Ekstra k Etanol 5 0,502 19,90
75,03 10
0,481 22,48 15 0,476 23,09 20 0,447 26,65 25 0,431 28,61
Hasil  tabel  hasil  pengujian,  menunjukan bahwa  ekstrak  terhadap  DPPH  memiliki nilai  IC 50 yaitu  75,03  mµ/mL.  Diketahnui bahwa  ekstrak  etanol  mengandung  empat senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan.  Menurut  Molyneux  (2004), aktivitas  antioksidan  dari  suatu  senyawa dapat  digolongkan  berdasarkan  nilai  IC 50 yang diperoleh. Jika nilai  IC 50 suatu ekstrak berada  dibawah  50  ppm  maka  aktivitas
antioksidannya sangat kuat, nilai IC 50 berada diantara  50-100  ppm  berarti  aktivitas antioksidannya  kuat,  nilai  IC 50 berada  di antara  100-150  ppm  berarti  aktivitas antioksidannya  sedang,  nilai  IC 50 berada diantara  150-200  ppm  berarti  aktivitas antioksidannya  lemah,  sedangkan  apabila nilai  IC 50 berada  di  atas  200  ppm  maka aktivitas  antioksidannya  sangat  lemah.  Hal ini  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  daun Nanamuha  merupakan  antioksidan  dengan aktivitas kuat.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol daun  Nanamuha  memiliki  kandungan  total fenolik  sebesar  53,34  mg/L  dan  ekstrak etanol  daun  Nanamuha  memiliki  aktivitas antioksidan  kuat  dengan  nilai  IC 50 75,03 µg/mL.

## SARAN
Dengan  hasil  penelitian  yang  didapatkan, sebaiknya  dilakukan  pengujian  lain  seperti uji Antimikroba

## DAFTAR PUSTAKA
Abdelhady,  M.I.S.,  Motaal,  A.A.,  dan Beerhues,  L.  2011.  Total  Phenolic
Content  and  Antioxidant  Actvity  of Standardized  Extracts  from  Leaves and Cell Cultures of Three Callistemon Species. American Journal of Plant Sciences. 2(6) : 847-
850 Andayani,  R.,  Lisawati,  Y.,  Maimunah. 2008. Penentuan Aktivitas Antioksidan,  Kadar  Fenolat  Total dan  Likopen  pada  Buah  Tomat ( Solamun  lycopersium  L.) Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi. 13 :3-4
Blois, MS. 2005. Antioxidant  determination by the use of stable free radical.
Nature.USA. 181 : 1191-1200.
Burda,  Oleszek,  W.  2001.  Antioxidant  and Antiradical  Activities  of  Flavonoids. Journal  of  Agricultural  and  Food Chemistry. 49: 2774-2779
Droge,  W.  2002.  Free  Radicals  in  The
Physiological Control of Cell Function. Physiol Rev. 82 : 47-95 Harborne,  J.  1996. Metode  Fitokimia  : Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan .  Institut Teknologi Bandung, Bandung.
Katja,  D.G.  dan  Suryanto,  2009.  Efek Penstabil  Oksigen  Singlet  Ekstrak Pewarna dari Daun Bayam Terhadap Fotooksidasi Asam Linoleat, Protein, dan  Asam  Askorbat. Chem.  Prog 2 : 27-33
Molyneux,  P.  2004.  The  use  of  the  stable
free  radikal  diphenylpicrylhydrazyl (DPPH)  for  estimating  antioxidant activity. Journal science of Technology. 26 (2):211-219. Rumouw,  Djemrie.  2015.  Identifikasi  dan Analisis Kandungan Fitokimia Tumbuhan  Alam  Berkhasiat  Obat yang Dimanfaatkan Masyarakat Sekitar  Kawasan  hutan  Lindung Sahendaruman. Journal LPPM Bidang Sains dan Teknologi.
4 (2):53-66.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan. Putra Media Nusantara. Surabaya.