## PENGARUH VARIASI KONDISI FERMENTASI TERHADAP PRODUKSI METABOLIT ANTIBAKTERI EKSTRAK ISOLAT I5
FUNGI ENDOFIT Anredera cordifolia (Ten.) Steenis
Submitted : 26 Juli 2019
Edited : 20 Desember 2019 Accepted : 30 Desember 2019
Ismail 1 , Megawati 1 , Alimuddin Ali 2 , Fuji Asmiati Ningsih 1
1 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, Jl. Perintis Kemerdekaan Km 13,7, Daya, Makassar
2 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Makassar, Jl. Malengkeri No. 44, Parang Tambung, Tamalate, Makassar Email : ismail.farm27@gmail.com

## ABSTRACT
Endophytic  fungi  are  one  of  the  microorganisms  that  live  in  plants  and  symbiotic  with their  host  plant  produce  secondary  metabolites.  This  study  aims  to  determine  the  optimum growth profile of endophytic fungus isolated from the leaf of Anredera cordifolia (Ten.) Steenis namely  isolate  I5  as  antibacterial.  The  fungus  growth  profile  optimization  analyzed  by  a correlation between fermentation time and mycelium weight, which collected every 24 hours for 15 days. The media were varied at pH conditions of 4, 7, and 8 in each PDYB medium (glucose and fructose substrates). The results showed  that isolate I5 grew optimally on the 13th day on the  PDYB  medium  pH  8.  Ethyl  acetate  extract  5%  of  isolate  I5  could  inhibit  bacteria  growth with  the  largest  inhibition  zone  diameter  against  Staphylococcus  aureus  of  9.96  mm  (±  0.60) and Escherichia coli of 9.03 mm (± 0.46).
Keywords : Endophytic fungi, Anredera cordifolia (Ten.) Steenis , Antibacteria

## PENDAHULUAN
Mikroba endofit merupakan
organisme  yang  hidup  di  dalam  jaringan tumbuhan seperti akar, batang, daun, bunga, dan buah. Endofit dan tumbuhan inang dapat bersimbiosis  mutualisme,  dalam  hal  ini endofit  mendapatkan  nutrisi  dari  hasil metabolisme  tumbuhan  yang  mempunyai aktivitas untuk melindungi tumbuhan inangnya sedangkan tumbuhan mendapatkan derivat  nutrisi  dan  senyawa  aktif  yang diperlukan  selama  hidupnya (1) . Endofit yang diisolasi  dari  suatu  tanaman  obat  dapat menghasilkan metabolit sekunder yang sama dengan tanaman aslinya atau berbeda namun khasiat  yang  dipunyai  bisa  sangat  beragam dan  berkontribusi  menghasilkan  metabolit sekunder yang memiliki karateristik tertentu (2) . Kapang endofit merupakan
organisme  yang  hidup  di  dalam  jaringan tanaman tanpa menyebabkan gejala penyakit terhadap  tanaman  inangnya  dan  memiliki potensi  besar  untuk  menghasilkan  metabolit sekunder  yang  bermanfaat  sebagai  senyawa obat,  dan  senyawa  bioaktif  tersebut  antara lain  alkaloid,  terpenoid,  sterois,  quinon,  dan fenol (3) .
Salah  satu  jenis  tanaman  yang  layak untuk dikembangkan pemanfaatanya sebagai tanaman  obat  adalah  Binahong  ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). Kandungan kimia yang  terdapat  pada  daun  binahong  antara lain flavonoid, asam oleanolik, protein, asam askorbat  dan  saponin.  Berbagai  kandungan kimia  tersebut  menyebabkan  daun  binahong dapat  bersifat  sebagai  antibakteri,  antivirus, antiinflamasi, analgesik dan antioksidan (4) .
Bentuk  perkembangan  bioteknologi dalam  hal  ini  adalah  peningkatan  produksi metabolit sekunder melalui mikroba
khususnya  jamur  yaitu  melalui  proses fermentasi. Hal ini dilakukan untuk menghasilkan  produk  metabolit  sekunder yang  bersifat  unggul  dan  dalam  jumlah melimpah (2) .  Pembentukan  produk  hasil fermentasi  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa faktor  salah  satunya  yaitu  substrat  dan  pH. Pengukuran  pH  dilakukan  agar  medium dapat  dipertahankan  berada  pada  pH optimum selama fermentasi.
Pada  penelitian  sebelumnya  oleh Ismail et  al .,  2019  telah  dilakukan  isolasi fungi  endofit  dari  daun  tanaman  binahong ( Anredera cordifolia ( Ten. ) Steenis) sebagai senyawa  antiradikal  bebas  dan  antimikroba dan  diperoleh  hasil  isolat  fungi  endofit sebanyak Sembilan dan salah satu
diantaranya  I5  yang  memiliki  aktivitas penghambatan terhadap Staphylococcus aureus 9,73  mm  dan Escherichia  coli sebesar 13,18 mm (5) . Menurut VanderMolen et  al .,  2013  Variasi  dalam  lingkungan pertumbuhan  jamur  memiliki  dampak  yang signifikan  pada  kuantitas  dan  keragaman metabolit sekunder yang dihasilkan, optimasi kondisi tumbuh dapat meningkatkan  produksi  senyawa  secara
signifikan (6) .  Optimasi  merupakan  langkah awal  kultivasi  jamur  dalam  menghasilkan senyawa metabolit sekunder bioaktif.

## METODE PENELITIAN Bahan
Isolat  fungi  endofit  I5  diperoleh  dari penelitian  sebelumnya  (Ismail et  al .,  2019),
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  alkohol 70%,  aquadest,  asam  klorida  (HCl)  0.1  N, bakteri Escherichia  coli ATCC  83125 , bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 , etil  asetat,  etanol  70%,  fruktosa, isolat  I8  fungi  endofit  tanaman  binahong, glukosa,  medium Nutrient  Agar (NA) ( Merck ®),  medium Potato  Dextrose  Agar
(PDA)  ( Merck ®),  medium Potato  Dextrose Yeast  Broth (PDYB)  ( Merck ®),  natrium hidroksida  (NaOH)  0.1  N,  NaCl  fisiologis 0,9%, paperdisc blank, paperdisc Tertrasiklin Alat Alat-alat yang digunakan yaitu autoklaf ( Nuaire ®), batang pengaduk, bunsen, cawan petri, cawan porselin, corong pisah ( Pyrex ®), enkas, desikator, Erlenmeyer ( Pyrex ®), gelas kimia ( Pyrex ®), gunting,  inkubator  ( Memmert ®),  kaki  tiga, laminar  air  flaw  (LAF),  mikro  pipet ( Dragonmed ®),  ose  bulat,  ose  lurus,  oven
(Falc®), pH universal ( Suncare ®),
pencadang,  pinset,  pipet  tetes,  sendok tanduk,  tabung  reaksi  ( Pyrex ®),  timbangan analitik ( Toledo ®) dan vial.

## Sterilisasi Alat
Pertama-tama alat gelas yang digunakan dicuci dengan detergen, kemudian  dibilas  dengan  air  suling  lalu dikeringkan.  Untuk  alat-alat  gelas  yang berskala  dan  terbuat  dari  plastik  disterilkan dalam  autoklaf  pada  suhu  121 o C  selama  15 menit  dan  alat-alat  gelas  tidak  berskala disterilkan  di  oven  suhu  180 o C  selama  2 jam.

## Pembuatan Medium
Pembuatan Medium Nutrient Agar
Serbuk  NA  sebanyak  23  gram dilarutkan  dalam  1000  mL  aquadest  dan dipanaskan,  kemudian  diukur  pH  medium menggunakan  pH  Meter  dan  penambahan Asam  Klorida  (HCl)  0,1  N  atau  Natrium Hidroksida  (NaOH)  0,1  N,  sehingga diperoleh  pH  7  dan  disterilkan  dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit.
Pembuatan Medium Potato Dextrose Yeast Broth (PDYB)
Serbuk PDYB (Potato Dextrose  Yeast Broth ) sebanyak 19,8 gram dilarutkan dalam
750  mL  aquadest  dan  dipanaskan,  setelah larut  kemudian  ditambahkan  3  gram  yeast ekstrak  dan  dipanaskan,  kemudian  diukur pH  medium  menggunakan  pH  Meter  dan penambahan Asam Klorida (HCl) 0,1 N atau
Natrium Hidroksida (NaOH) 0,1 N,
sehingga  diperoleh  pH  6  dan  dibagi  ke dalam  15  botol  kaca  steril  kemudian disterilkan  dalam  autoklaf  pada  suhu  121 o C selama 15 menit.
Pembuatan  Medium Potato  Dextrose Yeast Broth (PDYB) pH 4, 7 & 8 Medium  PDYB  masing-masing  50 mL  dimasukkan  ke  dalam  botol  kaca, kemudian  diukur  pH  medium  menggunakan pH  Meter  dan  penambahan  Asam  Klorida (HCl)  0,1  N  atau  Natrium  Hidroksida (NaOH)  0,1  N,  sehingga  diperoleh  medium PDYB pH 4, 7 dan 8, selanjutnya disterilkan dalam  autoklaf  pada  suhu 121 o C  selama  15 menit.
Pembuatan  Medium Potato  Dextrose Yeast  Broth (PDYB)  +  Glukosa  pH  4, 7 & 8 Medium  PDYB  masing-masing  50 mL  dimasukkan  ke  dalam  botol  kaca, ditambahkan  dengan  Glukosa  masing- masing  sebanyak  1  g  kemudian  diukur  pH medium  menggunakan  pH  Meter  dan penambahan Asam Klorida (HCl) 0,1 N atau Natrium Hidroksida (NaOH) 0,1 N, sehingga  diperoleh  medium  PDYB  pH  4,  7 dan 8, selanjutnya disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit.
Pembuatan  Medium Potato  Dextrose Yeast Broth (PDYB) + Fruktosa pH 4,
7 & 8
Medium  PDYB  masing-masing  50 mL  dimasukkan  ke  dalam  botol  kaca, ditambahkan  dengan  Fruktosa  masing- masing  sebanyak  1  g  kemudian  diukur  pH medium  menggunakan  pH  Meter  dan penambahan Asam Klorida (HCl) 0,1 N atau
Natrium Hidroksida (NaOH) 0,1 N, sehingga  diperoleh  medium  PDYB  pH  4,  7 dan 8, selanjutnya disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit.

## Pembuatan Kultur Starter Isolat I5
Pembuatan  kultur  starter  dilakukan dengan  cara  memasukkan  1  ose  isolat  fungi endofit  I5  yang  telah  diinkubasi  selama  5-7 hari  pada  suhu  25 o C  ke  dalam  botol  kaca yang  telah  berisi  medium  PDYB  sebanyak 50  mL,  selanjutnya  kultur  starter  diinkubasi pada suhu 25 o C selama 3 hari.

## Pembuatan Kultur Bakteri Uji
Pembuatan  kultur  starter  dilakukan dengan  cara  memasukkan  1  ose  isolat Staphylococcus  aureus  &  Escherichia  coli ke  dalam  medium  NA  miring  sebanyak  5 mL yang telah disterilkan, selanjutnya kultur bakteri diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam.
Pembuatan Suspensi Bakteri Staphylococcus aureus & Eschericia coli Inokulum  Staphylococcus aureus  & Eschericia  coli masing-masing  disiapkan dengan  menginokulasikan  1  ose  koloni murni yang telah berumur 24 jam. Inokulum diencerkan  menggunakan  Natrium  Klorida (NaCl) fisiologis 0,9% sampai setara dengan standar 0,5 McFarland.

## Fermentasi Fungi Endofit
Proses fermentasi dibuat dengan cara kultur starter sebanyak 1 mL, diinokulasikan ke  dalam  masing-masing  botol  kaca  yang berisikan  media  PDYB  sebanyak  50  mL yang telah disterilkan.  Fermentasi dilakukan selama 15 hari pada suhu kamar.

## Penentuan  Profil  Pertumbuhan  Isolat  I5 Fungi Endofit
Selama  proses  fermentasi,  cairan fermentat  (cairan  fermentasi)  diambil  dan miselia  fungi  dipanen  setiap  24  jam  untuk
mendapatkan  profil  pertumbuhan  fungi endofit.  Profil  pertumbuhan  fungi  endofit dibuat  berdasarkan  pertambahan  berat  sel kering  miselia  fungi  dan  pengujian  aktivitas cairan  fermentat.  Adanya  penambahan  berat kering  dari  miselia  dan  hasil  uji  aktivitas cairan  fermentasi  selama  proses  fermentasi menunjukkan  pertumbuhan  dan  produksi metabolit  sekunder  dari  isolat  fungi, sehingga  dapat  dibuat  profil  pertumbuhan dan produksi metabolit sekunder isolat fungi endofit.  Penambahan  berat  kering  miselia dan  hasil  pengujian  aktivitas  diplotkan  pada sumbu Y ,  sedangkan  waktu  fermentasi diplotkan pada sumbu X . Dari grafik tersebut dapat  diperoleh  pertumbuhan  dan  produksi metabolit sekunder dari isolat fungi.

## Pengujian Aktivitas Fermentat dari Profil Pertumbuhan
Medium Nutrient  Agar sebanyak  5 mL  dituang  ke  dalam  cawan  petri  sebagai lapisan  pertama.  Setelah  medium  memadat, diletakkan  pencadang  di  atas  medium. Selanjutnya  1  ose  suspensi  bakteri  uji dicampurkan  bersama  10  mL  medium Nutrient  Agar (NA)  kemudian  dituang sebagai  lapisan  kedua.  Dicabut  pencadang setelah medium memadat. Selanjutnya setiap lubang sumuran diisi dengan cairan fermentat yang diperoleh dari hasil fermentasi  setiap  hari  kurang  lebih  20  µL dan  diinkubasi  selama  1-24  jam  pada  suhu 37˚C.  Untuk  melihat  aktivitas  dari  cairan kultur  isolat  kode  I5  ditunjukkan  dengan adanya zona jernih di sekitar sumuran.  hasil pengujian aktivitas diplotkan pada sumbu Y , sedangkan  waktu  fermentasi  diplotkan  pada sumbu X .  Dari  grafik  tersebut  dapat diperoleh pertumbuhan dan produksi metabolit sekunder dari isolat fungi.
Optimasi Kondisi Fermentasi Isolat Fungi
Endofit  I5  dengan  Variasi  pH  dan
Substrat Medium dalam Produksi Metabolit Sekunder Fermentasi Sebanyak 1 mL kultur starter diinokulasikan ke dalam botol kaca fermentasi  yang  berisi  50  mL  medium produksi  PDYB,  medium  PDYB  dengan penambahan  Glukosa,  medium  PDYB dengan penambahan Fruktosa dengan variasi pH  4,7  dan  8.  Fermentasi  dilakukan  sesuai dengan  waktu  optimum  pertumbuhan  I5 yang didapatkan sebelumnya.

## Pengujian Aktivitas Fermentat
Medium  Nutrient Agar sebanyak  5 mL  dituang  ke  dalam  cawan  petri  sebagai lapisan  pertama.  Setelah  medium  memadat, diletakkan  pencadang  di  atas  medium. Selanjutnya  1  ose  suspensi  bakteri  uji dicampurkan  bersama  10  mL  medium Nutrient  Agar (NA)  kemudian  dituang sebagai  lapisan  kedua.  Dicabut  pencadang setelah  medium  memadat..  Selanjutnya setiap  lubang  sumuran  diisi  dengan  cairan fermentat kurang lebih 20 µL lalu diinkubasi selama  1x24  jam  pada  suhu  37˚C.  Untuk melihat  aktivitas  dari  cairan  kultur  isolat kode  I5  ditunjukkan  dengan  adanya  zona jernih  di  sekitar  sumuran.  Hasil  pengujian aktivitas diplotkan pada sumbu Y , sedangkan waktu  fermentasi  diplotkan  pada  sumbu X . Dari grafik tersebut dapat diperoleh pertumbuhan dan produksi metabolit
sekunder dari isolat fungi.
Fermentasi  Produksi  Isolat  I5  Skala

## Besar
Sebanyak 5 mL kultur starter diinokulasikan  ke  dalam  erlenmeyer  yang berisi  250  mL  medium  PDYB  pH  8  yang telah didapatkan berdasarkan variasi pH dan substrat optimum sebelumnya.

## Ekstraksi Media Fermentasi
Setelah  proses  fermentasi  berakhir, media  fermentasi  fungi  dipisahkan  dari miselia fungi dengan cara disaring
menggunakan kertas saring. Media
fermentasi  tersebut  diekstraksi  cair-cair sebanyak  tiga  kali  dengan  etil  asetat.  Media fermentasi  dan  etil  asetat  dimasukkan  ke dalam  corong  pisah,  kemudian  dikocok perlahan  selama  kurang  lebih  5  menit. Setelah dikocok, campuran media fermentasi dan  pelarut  didiamkan  beberapa  saat  untuk memisahkan  bagian  media  dan  pelarut  yang telah tercampur selama proses pengkocokan. Setelah  dua  bagian  tersebut  telah  terpisah kembali, pelarut yang mengandung senyawa bioaktif  terlarut  dituang  ke  dalam  cawan porselin, selanjutnya pelarut diuapkan untuk menghasilkan ekstrak.

## Uji Aktivitas Ekstrak Etil Asetat Isolat I5 Fungi Endofit
Paperdisk  direndam  ke  dalam  larutan ekstrak sebanyak  konsentrasi 0,5%, 1%, 3% dan  5%  lalu  didiamkan  ±  30  menit  hingga ekstrak  terserap  baik  oleh  paperdisk, selanjutnya  diletakkan  pada  permukaan medium Nutrient Agar (NA) yang
mengandung S.  aureus dan E.  coli .  Tiap cawan  petri  berisi  4  paperdisk  mengandung ekstrak  (0,5%,  1%,  3%  dan  5  %),  1  kontrol positif  (tetrasiklin),  dan  1  kontrol  negatif (DMSO).  Diinkubasi  selama  1  x  24  jam pada  suhu  37 o C,  lalu  diamati  zona  hambat dan  diukur  diameter  hambat  menggunakan jangka sorong.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  pengaruh  variasi  kondisi fermentasi  terhadap  produksi  metabolit antibakteri  terlarut  etil  asetat  isolat  I5  fungi endofit Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis dilakukan dengan tahapan sebagai berikut:
Isolat yang digunakan adalah isolat I5 fungi  endofit  ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis) yang merupakan hasil dari penelitian yang dilakukan oleh (Ismail et al ., 2019) (5) .
Penentuan  profil  pertumbuhan  Isolat I5  dimaksudkan  untuk  mengetahui  waktu optimum  pertumbuhan  Isolat  I5  yang
didasarkan  pada  bobot  miselium  dan pengujian  aktivitas  cairan  fermentat  setiap harinya selama 15 hari .
Gambar 1 . Profil  pertumbuhan  Isolat  I5 Fungi  Endofit.  Sumbu  X:  Waktu fermentasi  (hari);  sumbu  Y: Bobot  miselium  (mg);  sumbu  Z: Diameter  zona  hambat  (mm) terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli Berdasarkan grafik yang telah disajikan  pada  Gambar  1  bahwa  fungi endofit  Isolat  I5  dalam  fase  lag  (adaptasi) pada  hari  pertama,  fase  log  (pertumbuhan) pada hari ke-3, fase stasioner pada hari ke-7 hingga  hari  ke-9,  dan  fase  kematian  (Death Phase)  pada  hari  ke-11  hingga  hari  ke-15. Sehingga  dapat  diketahui  bahwa  waktu optimum pertumbuhan  Isolat  I5 terjadi pada hari  ke-13  dengan  diameter  zona  hambat tertinggi  yaitu  13,37  mm  terhadap  bakteri Escherichia  coli  dan  12,39  mm  terhadap bakteri Staphylococcus aureus .
Setelah  didapatkan  waktu  optimum pertumbuhan  Isolat  I5 yaitu pada  hari ke-13 maka  dilakukan  fermentasi  selama  13  hari dengan  melihat  pengaruh  substrat  dan  pH pada medium fermentasi. Kapang mempunyai pH optimum antara 5 dan 7, dan dapat  tumbuh  pada  kisaran  pH  3-8,5. Rentang pH yang divariasikan yaitu pH 4, 7 dan  8  yang  masing-masing  mewakili suasana asam, netral dan basa.
Substrat  yang  ditambahkan  pada  media yaitu  glukosa  dan  fruktosa  yang  merupakan turunan monosakarida. Fruktosa dan glukosa merupakan  jenis  karbohidrat  yang  paling mudah  dimanfaatkan  oleh  fungi  sebagai sumber senyawa karbon untuk pertumbuhannya.  Menurut  Gandjar  (2006) bahwa  senyawa  karbon  organik  yang dimanfaatkan  oleh  fungi  sebagai  sumber senyawa karbon yaitu berasal dari karbohidrat (7) .  Karbohidrat  menyediakan hampir  semua  karbon  yang  dibutuhkan  oleh fungi.  Banyak  fungi  yang  memanfaatkan monosakarida  tetapi  hanya  sedikit  yang memanfaatkan  disakarida  dan  polsakarida karena  tidak  memiliki  kemampuan  untuk menghidrolisis molekul-molekul besar tersebut.
Gambar 2 .  Pengaruh variasi pH dan substrat  isolat  I5  fungi  endofit.
Sumbu  X:  Waktu  fermentasi (hari); sumbu Y: Diameter zona
hambat  (mm)  terhadap  bakteri
Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli.
Pada  fermentasi  variasi  pH  dan substrat yang disajikan pada Gambar 2 dapat diketahui  bahwa  medium  yang  paling  baik terhadap  pertumbuhan  isolat  I5  adalah medium  PDYB  tanpa  penambahan  substrat dengan  pH  8  dihasilkan  diameter  zona
hambat 13,98 mm terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan  13,62  mm terhadap  bakteri Escherichia  coli. Isolat  I5 kemudian  difermentasi  dengan  skala  besar berdasarkan  waktu  produksi,  pH  dan substrat  yang  paling  optimum  dari  profil pertumbuhan  yang  telah  didapatkan.  Dalam hal  ini,  Isolat  I5  tumbuh  baik  pada  hari  ke- 13 dengan medium PDYB pH 8.
Pada  hari  ke-13,  miselium  disaring dan  dikeringkan  untuk  mendapatkan  bobot miselium  dan  cairan  fermentat  diekstraksi cair-cair menggunakan pelarut etil asetat 1:1 (v/v), diuapkan fase etil asetat dan diperoleh ekstrak fermentat. Di samping itu, etil asetat digunakan  sebagai  pelarut  karena  menurut Wardhani  and  Sulistyani,  (2012)  bahwa  etil asetat dapat menyari senyawa-senyawa yang memberikan  aktivitas  antibakteri (8) .  Ekstrak fermentat dibuat dalam 4 konsentrasi ekstrak yaitu  0,5%,  1%,  3%  dan  5%  menggunakan DMSO. Pengujian aktivitas antibakteri Isolat I5  dilakukan  dengan  metode  difusi  yaitu menggunakan  paperdisk.  Sehingga  pada cawan  petri  berisi  4  konsentrasi  ekstrak,  1 kontrol  positif  (tetrasiklin)  dan  1  kontrol negatif (DMSO 10%).
Gambar 3. Aktivitas  ekstrak  etil  asetat Isolat  I5  fungi  endofit.  Sumbu X: Konsentrasi Ekstrak (%) dan sumbu Y: diameter zona hambat.
Hasil  uji  aktivitas  ekstrak  etil  asetat Isolat  I5  yang  disajikan  pada  Gambar  3 dapat  diketahui  bahwa  Isolat  I5  pada konsentrasi 0,5%, 1%, 3% dan 5% terhadap bakteri Staphylococcus aureus berturut-turut adalah  8,59  mm  (±0,30);  8,62  mm  (±0,49); 8,96  mm  (±0,36)  dan  9,96  mm  (±0,46)  dan terhadap  bakteri Escherichia  coli berturut- turut  adalah  6,75  mm  (±1,29);  8.28  mm (±0,16);  8,96  mm  (±0,27)  dan  9,03  mm (±0,60).  Berdasarkan  hal  tersebut  dapat diketahui  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak  etil  asetat  isolat  I5  maka  semakin tinggi  zona  hambat  terhadap  bakteri  uji,  hal ini  sesuai  dengan  pernyaatan  Sudarwati  & Sumarni  (2016)  bahwa  semakin  pekat ekstrak yang digunakan maka semakin besar zona  hambat  yang  terbentuk (9) .  Sehingga dapat disimpulkan bahwa konsentrasi paling baik dalam menghambat bakteri
Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli adalah konsentrasi 5% dengan diameter zona hambat  9,96  mm  (±0,60)  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan  9,03  (±0,46) terhadap bakteri Escherichia coli .

## SIMPULAN
Profil pertumbuhan optimum isolat  I5 Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis  yaitu pada  hari  ke-13.  Isolat  I5 Anredera cordifolia (Ten.) Steenis dalam memproduksi  metabolit  sekunder  paling optimum sebagai antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli yaitu  pada  medium  PDYB  pH  8  dengan bobot miselium 899 mg dan didapatkan nilai zona  hambat  tertinggi  pada  konsentrasi  5% yaitu  9,96  mm  (±0,60)  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan  9,03  (±0,46) terhadap bakteri Escherichia coli.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Strobel,
G., Daisy, B., 2003. Bioprospecting for Microbial Endophytes
and  Their  Natural  Products.  Microbiol.
Mol. Biol. Rev. 67, 491–502. https://doi.org/10.1128/MMBR.67.4.491- 502.2003
2. Kuncoro,  H.,  Sugijanto,  N.E.,  2011.
Jamur Endofit, Biodiversitas, Potensi dan Prospek Penggunaannya Sebagai Sumber Bahan Obat Baru. J. Trop. Pharm. Chem. 1, 247–262. https://doi.org/10.25026/jtpc.v1i3.35 3. Zhao,  J.,  Zhou,  L.,  Wang,  J.,  Shan,  T.,
Zhong,  L.,  Liu,  X.,  Gao,  X.,  2010.
Endophytic fungi for producing bioactive compounds  originally  from  their  host plants 11
4. Utami, H.F., Hastuti, R.B., Hastuti, E.D.,
2015. Kualitas Daun Binahong (Anredera cordifolia) pada Suhu Pengeringan
Berbeda. J. Akad. Biol. 4, 51–59. 5. Ismail,  I.,  Megawati,  M.,  Bakri,  N.F., 2019.  Exploration  Of  Endofit  Fungus From Binahong Plants (Anredera cordifolia  (Ten.)  Steen)  As  Antibacterial Source. J. Pharm. Med. Sci. 3. https://doi.org/10.32814/jpms.v3i2.68 6. VanderMolen,  K.M.,  Raja,  H.A.,  El- Elimat, T., Oberlies, N.H., 2013. Evaluation  of  culture  media  for  the production  of  secondary  metabolites  in  a natural  products  screening  program. AMB Express 3, 71. https://doi.org/10.1186/2191-0855-3-71
7. Gandjar, I., Sjamsuridzal, W. dan Oetari,
A.,  2006, Mikologi:  Dasar dan Terapan , Yayasan Obor Indonesia: Jakarta.
8. Wardhani,  L.K.,  Sulistyani,  N.,  2012. ACETATE EXTRACT OF BINAHONG LEAF  (Anredera  scandens  (L.)  Moq.) AGAINST Shigella flexneri WITH 2, 16.
9. Sudarwati,  D.,  W.,  Sumarni.  2016.  Uji
Aktivitas  Senyawa  Antibakteri  pada Ekstrak  Daun  Kelor  dan  Bunga  Rosella.
Indonesian Journal of Chemical Science, 5(1): 11-14.