## ISOLASI DAN KARAKTERISASI KOLAGEN DARI KULIT
IKAN PATIN ( Pangasius sp.)
Pipih Suptijah 1) ,  Dini Indriani 1)* , dan Supriyono Eko Wardoyo 2)
1) Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, Kampus IPB Dramaga, Jalan Agatis, Bogor 16680 Jawa Barat
2) Dosen Program Studi Kimia FMIPA Universitas Nusa Bangsa Jl. KH. Soleh Iskandar KM 4 Cimanggu Tanah Sareal, Bogor 16166 *email : dini_indriani88@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Isolation and Characterization of Collagen from the Skin of Catfish (Pangasius sp. )
Skin of catfish is one of aquatic by-products which could be used as an alternative source of collagen. This research is aimed to isolate and characterize collagen from skin of catfish. Methods of  isolation of collagen included three stages, the first was deproteinization using NaOH solution with concentration of 0.05 M; 0.10 M; 0.15 M; 0.20 M for 12 hours, the second was soaking in  CH 3 COOH solution with concentration of 0.05 M; 0.10 M; 0.15 M; and 0.20 M for 2 hours, and the third was extraction in water at a temperature of 40 0 C for 2 hours; characterization of collagen  was  included  chemical  and  physical  properties.  The  results  showed  that  the  best  extraction  method ofcollagen from skin of catfish was soaking the skin in 0.05 M NaOH solution for 12 hours and soaking the skin in 0.05  M  acetic  acid  for  2  hours.  Extraction  yields  of  collagen  was  12.15%.  Chemical  characteristics  included proximate  and  amino acid  composition.  Proximate  value  of  collagen  consisted  of  moisture  was  6.55%,  ash  1.80%, protein  64.74%  and  fat  8.85%.    The  major  amino  acid  composition  of  collagen  were  glycine,  proline,  alanine, arginine and glutamate. Physical characteristics of collagen resulted from FTIR analysis showed amide A, amide B, amide  I,  amide  II  and  amide  III,  triple  helical  structure  of  the  amide  I  and  amide  III  indicates  that  the  compound produced was collagen; color analysis was 66.39%; thermal analysis showed a melting temperature peak was 154.47 0 C and pH value was 5.34.
Keywords: Catfish, isolation, characterization, collagen, skin

## ABSTRAK
Kulit ikan patin merupakan salah satu limbah hasil perairan yang dapat digunakan sebagai sumber alternatif kolagen.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  dan  karakterisasi  kolagen  yang  diperoleh  dari  kulit  ikan  patin. Isolasi  kolagen  yang  dilakukan  meliputi tiga  tahap,  yaitu  tahap  pertama  adalah  proses  deproteinisasi  menggunakan larutan  NaOH  dengan  konsentrasi,  yaitu  0,05  M;  0,10 M;  0,15  M;  0,20  M dan lama  waktu  perendaman selama  12 jam; tahap kedua, yaitu perendaman dalam larutan CH 3 COOH dengan empat konsentrasi CH 3 COOH  yaitu 0,05 M; 0,10 M; 0,15 M; dan 0,20 M dan lama waktu perendaman selama 2 jam; dan tahap ketiga, yaitu ekstraksi dengan air pada  suhu  40 0 C  selama  2  jam;  serta  karakterisasi  kolagen  yang  dilakukan,  meliputi  sifat  kimia  dan  fisik.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  metode  ekstraksi  kolagen  dari  kulit  ikan  patin    terbaik  diperoleh  melalui  proses perendaman  kulit  dalam  larutan  NaOH  0,05  M  selama  12  jam  dan    perendaman  kulit  dalam  asam  asetat  0,05  M selama 2 jam.  Rendemen serbuk kolagen yang dihasilkan sebesar 12,15 %. Karakteristik kimia meliputi proksimat dan komposisi asam amino. Nilai proksimat kolagen terdiri dari kadar air 6,55 %,  abu 1,80 %, protein 64,74 % dan lemak  8,85  %.  Komposisi  asam  amino  yang  dominan  pada  kolagen  adalah  glisina,  prolina,  alanina,  arginina  dan glutamat.  Karakteristik  fisik  kolagen  yang  dihasilkan  adalah  analisis  FTIR  menunjukkan  adanya  gugus  amida  A, amida B, amida I, amida II dan amida III, struktur triple heliks pada amida I dan amida III mengindikasikan bahwa senyawa  yang  dihasilkan  adalah  kolagen;  analisis  warna    yaitu  66,39  %;  analisis  termal  yang  menunjukkan  suhu puncak pelelehan adalah 154,47 0 C dan nilai pH kolagen yaitu 5,34.
Kata kunci : Ikan patin, isolasi, karakterisasi, kolagen, kulit

## PENDAHULUAN
Kolagen  memegang  peranan  cukup penting  dalam  industri  makanan,  kosmetik,
biomedis,  dan  farmasi  (Chai et  al ., 2010). Keistimewaan penggunaan kolagen berkaitan  dengan  karakteristik  fisikokimia dari  kolagen,  diantaranya  mudah  diserap dalam  tubuh,  sifat  antigenitas  rendah,
https://doi.org/10.31938/jsn.v8i1.106
afinitas  dengan  air  tinggi,  tidak  beracun, biocompatible dan biodegradable ,  relatif stabil,  dapat  disiapkan  dalam  berbagai bentuk  sesuai  kebutuhan,  dan  mudah dilarutkan  dalam  air  maupun  asam  (Lee, Singla & Lee, 2001).
Sumber kolagen yang paling banyak di  pasaran  umumnya  berasal  dari  kulit  dan tulang sapi ataupun babi yang keamanan dan kehalalannya  perlu  diwaspadai,  sehingga diperlukan  alternatif  sumber  kolagen  yang aman  dan  halal.  Salah  satu  biota  perairan yang  berpotensi  sebagai  sumber  kolagen adalah  ikan.  Kulit  ikan  yang  di fillet dari berbagai  perusahaan  industri  atau  pabrik fillet ikan  dianggap  sebagai  produk  limbah, sehingga  pemanfaatan  kulit  ikan  sebagai sumber  kolagen  alternatif  tidak  hanya  dapat mengurangi jumlah limbah industri pengolahan, tetapi sekaligus juga
meningkatkan  nilai  tambah  limbah  tersebut. Friess  (1998)  menyatakan  bahwa  lebih  dari 50  %  protein  ekstra-seluler  pada  kulit merupakan kolagen.
Salah  satu  bahan  kulit  ikan  yang berpotensi  sebagai  sumber  kolagen  adalah kulit ikan patin. Ikan patin telah dimanfaatkan  dalam  bentuk  produk  pangan, namun  kulit  dari  ikan  patin  tersebut  belum dimanfaatkan  secara  optimal.  Dari  data statistik Kementerian Kelautan dan
Perikanan  (KKP)  menunjukkan  bahwa produksi  nasional  budidaya  ikan  patin meningkat  dari  tahun  ke  tahun.  Pada  tahun 2006,  produksi  ikan  patin  mencapai  31.490 ton/tahun  dan  pada  tahun  2012  mengalami peningkatan  menjadi  651.000  ton/tahun. KKP  terus  memacu  peningkatan  produksi ikan patin dari tahun ke tahun dengan target produksi  nasional  pada  tahun  2013  sebesar 1.107.000 ton (Sistem  Informasi Diseminasi Data  Statistik  Kelautan  dan  Perikanan [SIDATIK],  2013).  Hal  ini  menunjukkan potensi  bagi  pemanfaatan  kulit  ikan  patin ( Pangasius sp.)  sebagai  sumber  kolagen. Penelitian mengenai optimasi metode
ekstraksi  kolagen  dilakukan  karena  belum ada  metode  yang  baku  secara  resmi,  dan proses pembuatan
kolagen, serta karakterisasi  fisikokimianya  dari  kulit  ikan patin perlu  dilakukan untuk aplikasi sebagai bahan baku kosmetik.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  adalah  kulit ikan  patin ( Pangasius sp.).  Kulit  ikan  patin diperoleh dari limbah Laboratorium Produksi  Teknologi  Hasil  Perairan  (THP) Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  IPB. Bahan-bahan yang digunakan untuk ekstraksi  kolagen  terdiri  dari  natrium hidroksida (NaOH), asam
asetat
(CH 3 COOH),  akuades,  Natrium  Klorida
(NaCl) dan pH indikator. Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah untuk ekstraksi kolagen,  diantaranya  peralatan  gelas  merek Pyrex  Iwaki,  pisau,  timbangan  digital analitik merek AND, kain kasa,
Spektrofotometer  UV-VIS  merek  RS  UV- 2500  Labomed  USA, Waterbath  Incubator Shaker BT  25  merek  Yamato dan freeze dryer merek EYELA FDU-1200. Sementara alat-alat  yang  digunakan  untuk  analisis adalah alat untuk analisis proksimat menggunakan  Oven  merek  Yamato  DV  41, Tanur merek Yamato FM 38, Soxhlet merek Yamato  Scientific  Co.,LTD,  Destruktor protein merek Tecator dan Destilator protein merek  Labentech;  alat  untuk  analisis  logam berat  menggunakan Atomic  Absorption Spectrophotometer (AAS)  AA-7000  merek
Shimadzu, High Performance Liquid Chromatography (HPLC)  merek  Waters coorporation  USA,  pH  meter  merek  Eutech Instruments, Differential Scanning Calorimetry (DSC) merek Shimadzu, Chromameter CR-310  merek  Minolta  dan Spektrofotometer Fourier  Transform  Infra Red (FTIR) merek BRUKER TENSOR 37.

## Metode
Penelitian  ini  dilakukan  dalam  tiga tahap,  yaitu  1)  preparasi  dan  karakterisasi bahan  baku  kulit  ikan  patin;  2)  optimasi ekstraksi  kolagen;  dan  3)  karakterisasi kolagen, meliputi nilai rendemen, komposisi proksimat,  asam  amino,  gugus  fungsi dengan Fourier  Transform  Infra  Red (FTIR),  analisis  warna,  analisis  termal  dan pH.

## Preparasi  dan  Karakterisasi  Bahan  Baku Kulit Ikan patin
Kulit  ikan  patin  dibersihkan  dan dipisahkan  dari  daging  yang  masih  tersisa menempel  pada  kulit.  Sampel  kulit  ikan patin  tersebut  dipotong-potong  kemudian disimpan dalam freezer lemari pendingin (- 15˚C) sampai sampel tersebut akan digunakan.  Kulit  ikan  patin  yang  akan digunakan  dikarakterisasi  terlebih  dahulu dengan  melakukan  analisis  komposisi  kimia kulit  (SNI  01-2891-1992) yang  meliputi kadar  air,  abu,  protein,  lemak  dan  logam berat Hg (SNI 01-2354.6-2006), Pb (SNI 01- 2354.7-2006), serta As (SNI 01-4866-1998).
Optimasi Ekstraksi Kolagen (Modifikasi  dari    Singh,  Benjakul, Maqsood & Kishimura , 2011)
Ekstraksi  kolagen  dilakukan  dengan
tiga
tahap, yaitu deproteinisasi
menggunakan  larutan  natrium  hidroksida (NaOH),  perendaman  dalam  larutan  asam asetat  (CH 3 COOH),  dan  ekstraksi  dengan air. Tahap pertama adalah proses deproteinisasi, yaitu perendaman kulit dalam larutan  NaOH  dengan  tujuan    untuk menghilangkan  protein  non  kolagen.  Rasio antara kulit dan larutan NaOH adalah  1 : 10 (b/v).  Pada  tahap  ini  digunakan  empat variasi konsentrasi NaOH yaitu 0,05 M; 0,10 M;  0,15  M;  0,20  M  dengan  lama  waktu perendaman  selama  12  jam.  Larutan  NaOH sisa  hasil  perendaman  kulit  yang  dihasilkan diuji  kandungan  protein  secara  kuantitatif dengan  uji  biuret  (Apriyantono,  Fardiaz, Puspitasari,  Yasni  &  Budiyanto ., 1989)  dan Bovine  Serum  Albumin (BSA)  sebagai standar  serta  untuk  menentukan  konsentrasi NaOH dan lama waktu perendaman terbaik.
Kulit  hasil  proses  deproteinisasi dengan  perendaman  konsentrasi  NaOH terbaik  dicuci  dengan  akuades  sampai mencapai  pH  netral  sebelum  dilanjutkan pada  tahap  kedua  yaitu  hidrolisis  dengan perendaman  kulit  dalam  larutan  CH 3 COOH. Pada  tahap  ini  digunakan  empat  variasi konsentrasi  CH 3 COOH,  yaitu  0,05  M;  0,10 M; 0,15 M; dan   0,20 M dengan lama waktu perendaman selama 2 jam. Rasio antara kulit dengan larutan CH 3 COOH adalah 1:10 (b/v). Parameter uji yang digunakan pada tahap ini adalah  pengukuran  Derajat  Pengembangan
(DP)  dari  kulit  dan  uji  kelarutan  kolagen dalam  larutan  asam  asetat  (CH 3 COOH) dengan menggunakan natrium klorida (NaCl) 5 M.
Kulit  hasil  perendaman  larutan CH 3 COOH  dengan  perlakuan  terbaik  dicuci dengan  akuades  sampai  mencapai  pH  netral sebelum  dilanjutkan  pada  tahap  ketiga  yaitu ekstraksi dengan air pada suhu 40 0 C selama 2  jam  dengan  rasio  antara  kulit  dan  air adalah  1:1  (b/v).  Hasil  ekstraksi  berupa kolagen  larut  air,  selanjutnya  dikeringkan dengan  menggunakan freeze  dryer untuk memperoleh kolagen dalam bentuk serbuk.
Karakterisasi Kolagen Tahap ini bertujuan untuk mendapatkan  karakteristik  kolagen  yang dihasilkan  dari  perlakuan  terbaik  pada penelitian  tahap  ketiga  yang  mencakup karakteristik kimia maupun fisik. Karakteristik kimia meliputi analisis proksimat  (SNI  01-2891-1992)  dan  jenis asam  amino  (AOAC,  1995),  sedangkan karakteristik  fisik  yang  diukur  antara  lain gugus fungsi dengan menggunakan spektrofotometer  FTIR  (Muyonga,  Cole,  & Duodu, 2004b), analisis warna ( Chromameter Minolta)  (Gaurav,  2003), analisis  termal  (Martianingsih  dan  Atmaja, 2009), dan pH (AOAC, 2005).

## Rancangan  Percobaan  dan  Analisis  Data (Steel dan Torrie, 1993)
Rancangan  yang  digunakan  untuk tahap  perendaman  dalam  larutan  NaOH adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  Faktorial (RALF) dengan dua faktor yaitu konsentrasi larutan  NaOH  sebanyak  4  variasi  (0,05; 0,10;  0,15;  dan  0,20  M)  dan  faktor  lama waktu perendaman dengan 6 variasi (2; 4; 6; 8;  10;  dan  12  jam).  Perlakuan  merupakan kombinasi  antara  konsentrasi  NaOH  dengan waktu perendaman. Rancangan yang digunakan  untuk  tahap  perendaman  dalam larutan  CH 3 COOH  adalah  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL).  Perlakuan  merupakan kombinasi  antara  konsentrasi  CH 3 COOH dengan  waktu  perendaman.  Konsentrasi CH 3 COOH    sebanyak  4  variasi  (0,05;  0,10; 0,15;  dan  0,20  M)  dan  faktor  lama  waktu perendaman selama 2 jam. Semua perlakuan dilakukan  sebanyak  3  kali  ulangan.  Data
yang  diperoleh  dianalisis  dengan  analisis ragam  (ANOVA),  dan  apabila  ada  beda nyata  dilanjutkan  dengan  uji Duncan’s Multiple  Range  Test (DMRT)  pada  taraf kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Preparasi  dan  Karakteristik  Bahan  Baku Kulit Ikan patin
Kulit  ikan  patin  yang  digunakan pada  penelitian  ini  diperoleh  dari  limbah Laboratorium  Produksi  Teknologi  Hasil Perairan (THP) Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan  IPB,  dengan  bobot  ikan  rata-rata 500  –  600  gram/ekor.  Sampel  kulit  ikan patin  yang  diperoleh  kemudian  dibersihkan dan  dipisahkan  dari  daging  yang  masih tersisa  menempel  pada  kulit.  Sampel  kulit ikan patin tersebut dipotong-potong, dikemas  dalam  plastik  kemudian  disimpan dalam freezer sampai  sampel  tersebut  akan digunakan pada tahap selanjutnya.
Karakteristik  bahan  baku  merupakan  sifat penting  untuk  mengetahui  potensi  yang terdapat pada bahan tersebut.
Karakteristik  bahan  baku  dapat
diketahui dengan melakukan analisis komposisi  kimia.  Analisis  komposisi  kimia kulit  ikan  patin  yang  dilakukan  pada penelitian  ini,  meliputi kadar air, kadar abu,
kadar  lemak,  kadar  protein  dan  logam  berat (Hg,  Pb  dan  As).  Analisis  komposisi  kimia kulit  ini  dilakukan  dengan  tujuan  untuk menilai  kelayakan awal  dari  kulit  ikan patin sebagai  bahan  baku  pembuatan  kolagen. Hasil  analisis  komposisi  kimia  proksimat kulit  ikan  patin  dan  berbagai catfish lain dapat dilihat pada Tabel 1.
Kadar  air  yang  terkandung  dalam kulit  ikan  patin  sebesar  65,59%.  Kadar  air ini  paling  tinggi  bila  dibandingkan  dengan jenis catfish lainnya  (Tabel  1),  namun  nilai kadar  air  ini  masih  berada  dalam  kisaran kadar  air  kulit    ikan  pada  umumnya, sehingga  dapat  dikatakan  kulit  ikan  patin masih dalam kondisi cukup segar.
Kadar  abu  kulit  ikan  patin  yang dihasilkan  sebesar  0,19%  hampir  sama dengan  kadar  abu Pangasianodon  gigas sebesar  0,25  %  dan P.  hypophthalmus sebesar  0,23%,  namun  sedikit  lebih  rendah dibandingkan  dengan Pangasius sutchi sebesar 0,73% (Thitipramote and Rawkdkuen,  2011;  See,  Hong,  Wan  & Babji, 2010). Kadar abu yang rendah kurang dari  0,5%  merupakan  bahan  baku  yang memiliki kualitas yang baik untuk pembuatan  kolagen  dan  gelatin,  karena dengan proses demineralisasi dapat mengurangi  kadar  abu  yang  dihasilkan  (See et al ., 2010).
Tabel  1.  Komposisi  Kimia  Proksimat  Kulit  Ikan  Patin  ( Pangasius sp.)  dan  Berbagai Catfish Lainnya No Analisis Nilai (%) 1 Hasil penelitian Nilai (%) 2 Referensi Nilai (%) 3 Referensi Nilai (%) 4 Referensi 1 Air 65,59 39,24 64,86 51,85 2 Abu 0,19 0,73 0,25 0,23 3 Lemak 2,69 10,65 2,69 20,24 4 Protein 30,28 18,96 34,03 27,26 Keterangan  : 1 Data  Pribadi  ( Pangasius sp.); 2 See et  al .  (2010)  ( P. sutchi ); 3 Thitipramote  & Rawkdkuen (2011) ( P. gigas ); 4 Thitipramote & Rawkdkuen (2011) ( P. hypophthalmus )
Tabel 2. Komposisi Kimia Logam Berat Kulit Ikan patin ( Pangasius sp.) No Parameter uji Satuan Nilai Keterangan Syarat SNI 7387-2009 1 Merkuri (Hg) µg/kg -11,375 Ttd 0,5 mg/kg 2 Timbal (Pb) mg/kg -0,422 Ttd 0,3 mg/kg 3 Arsen (As) µg/kg -11,714 Ttd 0,1 mg/kg Keterangan : ttd : tidak terdeteksi
Limit Deteksi Hg < 0,002 mg/kg; Pb < 0,005 mg/kg; dan  As < 0,002 mg/kg
Hasil pengujian menunjukkan bahwa kulit ikan patin memiliki kadar lemak sebesar 2,69%. Kadar lemak ini menunjukkan  hasil  yang  sama  dengan  ikan
P.  gigas, yaitu  sebesar  2,69%.  Kadar  lemak ini  paling  rendah  bila  dibandingkan  dengan jenis catfish lain,  namun  jauh  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  kulit  ikan  cucut (0,16%)  (Mahardika,  2013).  Kandungan lemak  pada  kulit  ikan  patin  yang  cukup tinggi ini mengindikasikan perlunya optimasi  proses pretreatment kulit  untuk menghilangkan  lemak  dalam  kulit  ikan, sehingga dapat meningkatkan kualitas kolagen  yang  dihasilkan.  Shon,  Ji-Hyun,
Hwang  &  Jong-Bang  (2011)  menyatakan bahwa  keberadaan  lemak  dan  mineral- mineral lainnya akan mengganggu efektivitas  kolagen  dalam  aplikasinya  pada berbagai produk.
Kandungan  protein  kulit  ikan  patin  yang dihasilkan  adalah  sebesar  30,29%.  Nilai kadar  protein  ini  sedikit  lebih  rendah dibandingkan dengan P. gigas (34,04%) dan lebih  tinggi  bila  dibandingkan  dengan P. sutchi (18,96  %)  dan P.  hypophthalmus (27,26%) (See et al ., 2010; Thitipramote and Rawkdkuen, 2011). Kandungan protein kulit ikan patin yang cukup tinggi ini memungkinkan  untuk  digunakan  sebagai bahan  baku  kolagen.  Hasil  komposisi  kimia yang ditunjukkan pada Tabel 3 berbeda-beda antara jenis catfish . Perbedaan tersebut dapat disebabkan  oleh  perbedaan  spesies,  umur, habitat,  jenis  pakan  dan  preparasi  bahan (Songchotikunpan,  Tattiyakul  &  Supaphol , 2008).
Analisis  kandungan  logam  berat  juga merupakan  analisis  komposisi  kimia  yang penting. Analisis logam berat pada kulit ikan patin  dilakukan  agar  produk  kolagen  yang dihasilkan  terjamin  keamanan  dari  cemaran logam.  Keberadaan  logam  berat,  misalnya merkuri  (Hg),  timbal  (Pb)  dan  arsen  (As) dalam  bahan  pangan  dapat  membahayakan kesehatan  jika  jumlahnya  melebihi  ambang batas  yang  ditentukan.  Kandungan  logam berat  untuk  ikan  dan  hasil  olahannya  yang ditetapkan  oleh  SNI  7387-2009  adalah  0,3 mg/kg (Pb); 0,5 mg/kg (Hg); dan  0,1 mg/kg (As).  Berdasarkan  hasil  pengujian  yang dilakukan,  kandungan  logam  berat  Hg,  Pb dan  As  pada  kulit  ikan  patin  dapat  dilihat
pada Tabel 2 dan hasil tersebut
menunjukkan bahwa logam berat Hg, Pb dan As  pada  kulit  ikan  patin  tidak  terdeteksi, artinya  kulit  ikan  patin  tersebut  sangat sedikit  sekali  mengandung  logam  berat  Hg, Pb maupun As. Dengan kata lain, kandungan  logam-logam  tersebut  berada  di bawah  nilai  ambang  batas  dan  di  bawah limit  deteksi  alat,  sehingga  kulit  ikan  patin aman  untuk  digunakan  sebagai  sumber bahan baku kolagen.

## Optimasi Ekstraksi Kolagen
Pembuatan  kolagen  dari  kulit  ikan patin  terbagi  dalam  dua  tahap,  yaitu pretreatment (perendaman  kulit dalam larutan  NaOH  yang  dilanjutkan  dengan perendaman  kulit  dalam  asam  asetat)  dan ekstraksi  dengan  air.  Optimasi  pada  tahap perendaman  kulit  dalam  larutan  NaOH adalah untuk mendapatkan perlakuan kombinasi  konsentrasi  NaOH,  dan  waktu perendaman  terbaik  dalam  menghilangkan protein  non  kolagen  pada  kulit  ikan. Optimasi  pada  tahap  perendaman  asam asetat adalah untuk mendapatkan konsentrasi terbaik terhadap DP kulit dengan tingkat kehilangan kolagen yang rendah.

## Perendaman Kulit dalam Larutan NaOH
Isolasi  kolagen  atau  pembuatan kolagen diawali dengan perlakuan
deproteinisasi,  yaitu  penghilangan  protein non  kolagen  menggunakan  larutan  alkali. Zhou  dan  Regenstein  (2005)  menyatakan contoh  dari  larutan  alkali  yang  dapat digunakan untuk menghilangkan protein non kolagen, yaitu NaOH dan Ca(OH) 2 . Perendaman  dalam  alkali  juga  dapat menghilangkan  keberadaan  lemak  pada bahan.  Larutan  yang  digunakan  pada penelitian  ini,  yaitu  NaOH  dengan  empat variasi konsentrasi berbeda 0,05: 0,10; 0,15; dan  0,20  M.  Penggunaan  larutan  basa  pada pretreatment kulit lebih efektif dalam proses pengeluaran  protein  non  kolagen  dan  hanya menyebabkan  tingkat  kehilangan  kolagen yang rendah dibandingkan dengan penggunaan  larutan  asam  (Zhou  dan Regenstein, 2005). Hasil pengamatan kandungan  protein  dari  larutan  NaOH  sisa perendaman kulit (Gambar 1).
Gambar 1. Grafik Konsentrasi Protein dalam Larutan NaOH sisa Perendaman Kulit Ikan Patin dengan Kombinasi Perlakuan Konsentrasi NaOH dan Waktu Perendaman
Kandungan  protein  dari  larutan NaOH  sisa  perendaman  kulit  untuk  setiap perlakuan  kombinasi  konsentrasi  NaOH dengan  lama  waktu  perendaman  2  jam, menunjukkan kandungan protein yang tinggi dan  nilai  kandungan  protein  semakin menurun seiring penambahan waktu perendaman.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa protein  non  kolagen  yang terkandung  dalam kulit  ikan  sudah  banyak  dilepaskan  dengan pelarut basa pada 2 jam pertama perendaman,  sehingga  jumlah  protein  non kolagen dalam kulit semakin berkurang yang ditunjukkan  dengan  semakin  kecilnya  nilai konsentrasi protein dalam larutan NaOH sisa perendaman kulit pada pengamatan berikutnya. Perlakuan  pada  setiap  konsentrasi dengan waktu perendaman 12 jam menunjukkan  nilai  konsentrasi  protein  yang cenderung  meningkat  kembali  dari  waktu perendaman sebelumnya. Hal ini mengindikasikan  bahwa  sebagian  kolagen dalam  kulit  mulai  terlarut  dalam  larutan NaOH.  Hal  ini  diduga  terjadi  karena kelebihan konsentrasi OH −
yang mengakibatkan  terputusnya  sebagian  ikatan kovalen  dalam  struktur  kolagen.  Hal  ini selaras  dengan  pendapat  Jaswir,  Monsur  & Salleh  (2011)  yang  menyatakan  bahwa NaOH  memiliki  peranan  dalam  pemisahan untaian  dari  batang-batang  serat  kolagen. Yoshimura,  Terashima,  Hozan  &  Shirai (2000)  melaporkan  bahwa  basa  menyerang terutama  wilayah  teleopeptida  dari  struktur kolagen selama proses pretreatment, sehingga  dapat  menyebabkan  kelarutan kolagen.
Hasil  analisis  ragam  (ANOVA) kandungan  protein  larutan  NaOH  sisa perendaman  kulit  menunjukkan  bahwa konsentrasi  NaOH,  waktu  perendaman,  dan kombinasi perlakuan  konsentrasi NaOH dan waktu perendaman berpengaruh nyata terhadap  kandungan  protein  pada  larutan NaOH sisa perendaman kulit. Hasil uji lanjut DMRT  5%  menunjukkan  bahwa  perlakuan terbaik  untuk  menghilangkan  protein  non kolagen  pada  kulit  ikan  patin  adalah perendaman  kulit  dalam  larutan  NaOH  0,05 M  selama  10  jam.  Hasil  ini  selaras  dengan penelitian yang dilakukan Zhou dan Regenstein (2005) yang menunjukkan bahwa protein non kolagen dapat dihilangkan  dengan  perendaman  dalam larutan  NaOH  dengan  konsentrasi  0,01 mol/L dan 0,1 mol/L. Peningkatan konsentrasi  OH - di  atas  0,1  mol/L  tidak memberikan pengaruh terhadap penghilangan protein non kolagen. Perendaman  Kulit  dalam  Larutan  Asam Asetat Pada tahap kedua dilakukan perendaman kulit dalam larutan asam asetat. Kulit  hasil  perendaman  larutan  NaOH dengan  perlakuan  terbaik  pada  tahap sebelumnya  yaitu  konsentrasi    0,05  M NaOH selama 10 jam, kemudian dilanjutkan pada tahap ini dengan melakukan perendaman dalam larutan asam asetat. Kulit yang  digunakan  dicuci  dengan  akuades sampai  mendekati  pH  netral.  Pencucian bertujuan  untuk  mengurangi  sisa  basa  yang masih  menempel  pada  kulit,  sehingga  tidak mempengaruhi  terhadap  pH  larutan  asam
asetat  yang  akan  digunakan  pada  tahap selanjutnya.
Pretreatment asam  diperlukan  untuk mengubah  struktur  serat  kolagen,  sehingga akan  mempermudah  proses  ekstraksi  pada tahap  selanjutnya.  Perendaman  dalam  asam menyebabkan  terjadinya  penggembungan kulit  ( swelling )  yang  diakibatkan  masuknya air ke dalam serat kolagen. Masuknya air ke dalam  serat  kolagen  disebabkan  terjadinya gaya  elektrostatik  antara  gugus  polar  pada serat  kolagen  dengan  H + dari  asam,  atau terbentuknya  ikatan  hidrogen  antara  gugus non polar pada serat kolagen dengan H + dari asam  (Jaswir et  al .,  2011).  Pembengkakan ini  penting  karena  dapat  mendukung rusaknya  struktur  serat  kolagen,  melalui terganggunya  ikatan  non  kovalen  dan  pada akhirnya mempermudah ekstraksi dan meningkatkan kelarutan kolagen.
Hasil  pengamatan  terhadap  Derajat Pengembangan  (DP)  kulit  hasil  perendaman dalam  larutan  asam  asetat  pada  konsentrasi yang berbeda dan waktu perendaman selama 2  jam  dapat  dilihat  pada  Gambar  2.  Derajat pengembangan kulit mengalami peningkatan dengan  semakin  tingginya  konsentrasi  asam asetat. Hal ini  menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi asam asetat yang digunakan,  mengakibatkan  semakin  banyak jumlah  air  yang  dapat  diserap  oleh  kulit sehingga serat kolagen menjadi lebih mudah untuk  dipisahkan  dan  akan  memudahkan proses ekstraksi kolagen pada tahap selanjutnya.
Hasil  analisis  ragam  (ANOVA) derajat  pengembangan  kulit  menunjukkan bahwa  konsentrasi  asam  asetat  berpengaruh nyata  terhadap  DP  kulit.  Hasil  uji  DMRT
5% menunjukkan bahwa perlakuan konsentrasi asam terbaik untuk menghasilkan  derajat  pengembangan  kulit yang tinggi adalah 0,20 M. Hasil uji kelarutan kolagen menggunakan larutan NaCl 5 M
menunjukkan  bahwa  perlakuan  dengan menggunakan  konsentrasi  asam  asetat  0,20 M  mengalami  tingkat  kelarutan  yang  lebih tinggi  dibandingkan  perlakuan  konsentrasi asam  asetat  0,05  M  dan    0,10  M;  namun sedikit  lebih  rendah  dibandingkan  dengan konsentrasi  NaCl  0,15  M  (Tabel  3).  Hal  ini mengindikasikan dengan perlakuan
konsentrasi  asam  asetat  0,20  M  sebagian kolagen  pada  kulit  sudah  banyak  terekstrak dalam  asam,  sehingga  dikhawatirkan  akan menurunkan rendemen kolagen yang dihasilkan.
DP  kulit  pada  konsentrasi  asam asetat  0,05  M  dan  0,10  M  menunjukkan hasil  yang  tidak  berbeda  nyata,  tetapi berbeda  nyata  dengan  konsentrasi  0,20  M. Tingkat  kelarutan  kolagen  pada  asam  asetat 0,20  M  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan konsentrasi asam asetat 0,05 M dan 0,10 M. Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  untuk  tahap ini  dipilih  perlakuan  terbaik  perendaman kulit  dalam  asam  asetat  0,05  M  dan  lama waktu  perendaman  2  jam  dengan    derajat pengembangan kulit mencapai 612,816 %.

## Ekstraksi dengan Air
Kulit hasil perendaman dalam  larutan asam asetat dengan perlakuan terbaik,  yaitu    0,05  M    selama  2  jam, dilanjutkan pada tahap ketiga, yaitu ekstraksi  dengan  air.  Kulit  dicuci  dengan akuades  sampai  pH  mendekati  netral.
Gambar  2.  Grafik  DP  kulit  Ikan  patin  dengan  Perlakuan  Konsentrasi  dan  Lama  Waktu Perendaman Asam Asetat
Tabel 3. Kelarutan Kolagen dalam Larutan Asam Asetat selama 2 Jam No Konsentrasi asam asetat (M) Kelarutan Kolagen (g) 1 0,05 0,053 2 0,10 0,065 3 0,15 0,081 4 0,20 0,072 Tabel 4. Rendemen Kolagen Kulit Ikan patin dan beberapa Kulit Ikan lainnya No Sumber Kolagen Rendemen % (bb) 1 Kulit Ikan patin ( Pangasius sp.) 12,15 2 ASC Kulit Ikan patin Siam 1 5,10 3 PSC  Kulit Ikan patin Siam 1 7,70 4 Kulit Ikan Cobia ( Rachycentron canadum) 2 10,51
Keterangan : 1 (Singh et al ., 2011); 2 (Ariesta, 2014)
Ekstraksi  kulit  dilakukan  dengan air yaitu  akuabides,  dengan  perbandingan  kulit dan air yaitu 1:1 dengan menggunakan suhu 40 0 C selama 2 jam. Proses pemanasan kulit dalam air  hangat  menyebabkan berlanjutnya kerusakan ikatan hidrogen dan kovalen yang sebelumnya  sudah  berlangsung  selama proses  perendaman  asam  asetat.  Goméz- Guillén et  al .  (2011)  menyatakan  bahwa proses  kerusakan  ikatan  hidrogen  dan kovalen akibat
pemanasan kolagen meyebabkan terganggunya
kestabilan
struktur triple  heliks kolagen,  sehingga terjadi  perubahan  bentuk  menjadi  gulungan dan  akhirnya  kolagen  terdegradasi  menjadi gelatin  yang  larut air. Pemilihan suhu 40 0 C dilakukan  dengan  tujuan  untuk  menghindari terjadinya degradasi kolagen menjadi gelatin selama  ekstraksi  berlangsung.  Hal  ini didasarkan  pada  pendapat  Karim  dan  Bhat (2009)  yang  menyatakan  bahwa  suhu  40 0 C merupakan  suhu  transisi  perubahan heliks
menjadi  bentuk  gulungan  yang  mengarah pada pembentukan gelatin yang larut. Hal ini juga diperkuat oleh hasil penelitian Kolodziejska et al . 2008 yang  menunjukkan bahwa  degradasi  kolagen  menjadi  gelatin terjadi  di  atas  suhu  45 0 C.  Hasil  ekstraksi kulit  dengan  air  berupa  kolagen  larut  air, kemudian  dikeringkan  dengan Freeze  dryer sehingga  diperoleh  kolagen  dalam  bentuk serbuk.

## Karakterisasi Kolagen
Karakteristik  kolagen  merupakan sifat penting untuk mengetahui potensi yang terdapat  pada  kolagen  tersebut.  Kolagen yang  dihasilkan  dari  perlakuan  terbaik  pada penelitian  tahap  sebelumnya  dikarakterisasi baik  sifat  kimia  maupun  fisik.  Karakterisasi kolagen  yang  dilakukan  meliputi  nilai rendemen,  proksimat,  jenis  asam  amino, gugus  fungsi  dengan  FTIR,  analisis  warna, analisis termal dan pH.
Tabel 5. Komposisi Kimia Kolagen Kulit Ikan patin dan beberapa Kulit Ikan lain
No Analisis Nilai (%) 1 Hasil penelitian Nilai (%) 2 Referensi Syarat mutu kolagen SNI 8076:2014 1 Air 6,55 7,01 ≤ 12 2 Abu 1,80 3,38 ≤ 1,0 3 Protein 64,74 86,40 ≥ 75 4 Lemak 8,85 0,35 - Keterangan : 1 Data Pribadi ( Pangasius sp.); 2 Shon et al . (2011) kulit ikan skate (Raja kenojei )

## Rendemen Kolagen
Rendemen  merupakan  persentase kolagen  yang dihasilkan dengan bahan baku awal. Rendemen menunjukkan bagian bahan baku  yang  dapat  dimanfaatkan  dan  menjadi suatu parameter yang penting untuk mengetahui nilai ekonomis, serta keefektifan suatu  bahan  atau  produk.  Hasil  penelitian menunjukkan  kolagen  kulit  ikan  patin memiliki  rendemen  yang  lebih  tinggi  dari A cid  Soluble  Collagen (ASC), Pepsin Soluble  Collagen (PSC)  ikan  patin  siam (Singh et  al .  2011),  dan  kulit  ikan  cobia ( Rachycentron canadum ) (Tabel 4). Potaros, Raksakulthai, Runglerdkreangkrai & Worawattanamateekul  (2009)  menyatakan bahwa  perbedaan  nilai  rendemen  pada kolagen  yang  dihasilkan  dapat  disebabkan oleh perbedaan metode ekstraksi,
konsentrasi  larutan  untuk  menghilangkan protein  non  kolagen,  jenis  bahan, suhu  dan lama waktu produksi.

## Komposisi Proksimat
Komposisi kimia kolagen merupakan  parameter  keefektifan  proses deproteinisasi, defatting , demineralisasi, dan ekstraksi pada pembuatan kolagen. Perendaman  dalam  larutan  alkali  dan  asam bertujuan menghilangkan protein non kolagen,  serta  komponen  lain  yaitu  lemak dan  mineral.  Proses  ini  dilakukan  agar diperoleh  kandungan  protein  kolagen  yang tinggi.  Komposisi  kimia  kolagen  kulit  ikan patin  dan  beberapa  kolagen  kulit  ikan  lain disajikan pada Tabel 5.
Berdasarkan  Tabel  5  dapat  dilihat bahwa  komponen  utama  kolagen  adalah protein  dan  komponen  lainnya  berupa  air, abu  dan  lemak  dalam  jumlah  yang  sedikit. Kandungan air kolagen kulit ikan patin yang dihasilkan,  yaitu  6,55  %  lebih  rendah dibandingkan dengan kandungan air kolagen dari  kulit  ikan  skate  ( R.  kenojei )  yaitu  7,01 % dan  memenuhi syarat mutu kolagen (SNI 8076:2014)  yaitu  ≤  12.  Kandungan  protein kolagen  kulit  ikan  patin  lebih  rendah dibandingkan  dengan  protein  kolagen  dari kulit ikan skate ( R. kenojei ) dan syarat mutu kolagen  (SNI  8076:2014).  Jamilah,  Hartina, Hashim & Sazil (2013) menyatakan perbedaan  kadar  protein  dapat  disebabkan oleh  perbedaan  metode  ekstraksi  yang
digunakan. Perbedaan yang kurang
memenuhi  standar  mutu  kolagen  ini  pun dapat  disebabkan  oleh  proses pretreatment yg  masih  kurang  efektif.  Kadar  abu  pada kolagen  kulit  ikan  patin  lebih  rendah dibandingkan  dengan  kadar  abu  pada kolagen  dari  kulit  ikan  skate  ( R.  kenojei ) namun  sedikit  lebih  tinggi  dari  syarat  mutu kolagen (SNI 8076:2014). Kandungan lemak pada  kolagen  kulit  ikan  patin  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  lemak  dari  kolagen kulit ikan skate ( R. kenojei ).
Kolagen  kulit  ikan  patin  memiliki kandungan  lemak  yang  tinggi  dan  abu  yang sedikit  melebihi  dari  syarat  mutu  kolagen. Hal  ini  dapat  disebabkan  oleh  perbedaan komposisi  kimia  yang  terkandung  dalam bahan  baku  kulit  dan  teknik  ekstraksi  yang digunakan.  Shon et  al .  (2011)  menyatakan bahwa  kulit  yang  memiliki  kandungan lemak  dan  abu  yang  tinggi  memerlukan teknik  pemurnian  yang  berbeda  untuk menghasilkan produk kolagen dengan kemurnian  yang  tinggi.  Tingginya  nilai kandungan lemak dan abu pada kolagen dari kulit  ikan  patin  yang  dihasilkan,  dapat disebabkan  pada  proses pretreatment kulit dengan  perendaman  dalam  larutan  basa kurang  efektif  untuk  mereduksi  lemak  dan mineral-mineral dalam kulit ikan patin.

## Asam Amino
Asam  amino  merupakan  struktur pembentuk  protein.  Asam  amino  esensial adalah  asam  amino  yang  tidak  dapat disintesis oleh tubuh tetapi sangat diperlukan oleh  tubuh.  Asam  amino  esensial  dalam kolagen  diantaranya  isoleusin,  leusin,  lisin, metionin,  fenilalanin,  treonin,  valin  dan arginin  (Haris,  2008).  Kolagen  merupakan komponen  struktural  utama  dari  jaringan ikat  yang  meliputi  hampir    30  %  dari  total protein  tubuh.  Molekul  dasar  kolagen terbentuk  dari  tiga  rantai  polipeptida  yang saling  berpilin  membentuk  struktur triple heliks dengan  susunan  asam  amino  yang khas  yaitu  Gly-X-Y,  pada  posisi  X  adalah prolin  dan  posisi  Y  adalah  hidroksiprolin (Friess, 1998).
Komposisi  asam  amino  penyusun kolagen dapat dilihat pada Tabel 8. Kolagen kulit  ikan  patin  memiliki  komposisi  asam amino  yang  paling  dominan  adalah  glisin
dan  prolin  yaitu  berturut-turut  dengan  nilai 19,45  %  dan  11,78  %.  Hasil  penelitian  ini selaras  dengan  kandungan  asam  amino kolagen  dari  kulit  ikan striped  catfish ( P. hypophthalmus )  yang  paling  dominan,  yaitu glisin 30,9 % dan prolin 12,0 % (ASC); serta glisin  31,7  %  dan  prolin  12,6  %  (PSC) (Singh et  al .  2011).  Nalinanon,  Benjakul, Kishimura  &  Osako (2011)  mengatakan kolagen  tipe  I  mengandung  asam  amino glisin, alanin, dan prolin dalam jumlah yang tinggi,  sedangkan  asam  amino  tirosin  dan histidin  hanya  terdapat  dalam  jumlah  yang sedikit  serta  tidak  mengandung  sistin. Keberadaan  sistin  pada  kolagen  yang dihasilkan menunjukkan deproteinisasi
belum berjalan optimal sehingga memungkinkan  adanya  keberadaan  asam amino sistin. Penelitian ini dapat menggambarkan bahwa ekstrak protein yang dihasilkan  dari  kulit  ikan  patin  sudah termasuk  dalam  kolagen  karena  memiliki komposisi  asam  amino  glisin,  alanin  dan prolin dalam jumlah yang tinggi.
Tabel  6.  Komposisi  Asam  Amino  Kolagen dari Kulit Ikan patin No Asam Amino Hasil (%) 1 Histidin 1,45 2 Serin 6,40 3 Arginin 10,12 4 Glisin 19,45 5 Aspartat 5,31 6 Glutamat 12,17 7 Threonin 2,86 8 Alanin 11,78 9 Prolin 9,95 10 Sistin 3,07 11 Lisin 2,77 12 Tirosin 1,84 13 Metionin 0,59 14 Valin 4,72 15 Isoleusin 1,52 16 Leusin 4,15 17 Fenilalanin 1,85 Analisis  Gugus  Fungsi  dengan Fourier Transform Infrared (FTIR)
Analisis  FTIR  yang  dilakukan  pada penelitian ini bertujuan memastikan senyawa yang dihasilkan merupakan kolagen  berdasarkan  gugus-gugus  fungsi
penyusunnya.  Hasil  spektrum infrared
kolagen disajikan pada Gambar 3, sedangkan karakteristik gugus fungsi
kolagen  hasil  analisis  FTIR  disajikan  pada Tabel  7.  Berdasarkan  spektrum  FTIR kolagen  dari  kulit  ikan  patin  menunjukkan puncak-puncak serapan pada wilayah serapan  amida  yang  meliputi  amida  A, amida  B,  amida  I,  amida  II  dan  amida  III. Puncak  serapan  amida  A  yang  dimiliki kolagen  dari  kulit  ikan patin terdeteksi pada bilangan  gelombang  3407,37  cm -1 yang menunjukkan vibrasi stretching NH.
Nagarajan,  Benjakul,  Prodpran,  Songtipya, &  Kishimura  (2012)  menyatakan  bahwa bilangan  gelombang  normal  yang  dimiliki amida  A,  yaitu    3400  cm -1 –  3440  cm -1 . Ketika gugus N-H pada peptida dipengaruhi oleh  ikatan  hidrogen,  posisinya  akan bergeser  ke  frekuensi  yang  lebih  rendah. Spektrum  FTIR  kolagen  juga  menunjukkan adanya  puncak  serapan  pada  bilangan gelombang 2933,24 cm -1 yang mengindikasikan adanya gugus khas
kolagen,  yaitu  amida  B.  Coates  (2000) menyatakan gugus amida B  dengan  wilayah serapan pada bilangan gelombang 2915 cm -1 –  2935  cm -1 atau  2845  cm -1 –  2865  cm -1 . Kong  &  Yu  (2007)  menyatakan  bilangan gelombang  yang  mengindikasikan  serapan amida B terbentuk dari asimetrikal stretching CH 2 .
Bilangan  gelombang  amida  I  yang terdeteksi pada kolagen dari kulit ikan patin, yaitu  1640,89  cm -1 yang  menunjukkan adanya  vibrasi  peregangan  gugus  C=O. Amida I merupakan gugus fungsi khas yang menyusun  kolagen.  Kong  &  Yu  (2007) menyatakan  bahwa  amida  I  terdeteksi  pada kisaran  bilangan  gelombang  1600  cm -1 – 1690  cm -1 .  Nilai  ini  serupa  dengan  hasil yang  diperoleh  oleh  Singh et  al .  (2011), ASC  kulit  ikan stripped  catfish memiliki gugus  amida  I  pada  bilangan  gelombang 1651  cm -1 ,  dan  bilangan  gelombang  pada PSC  kulit  ikan stripped  catfish lebih  rendah yaitu,  1649  cm -1 .  Muyonga et  al .  (2004b) menyatakan  bahwa  amida  I  terdiri  dari empat  komponen  struktur  sekunder  protein, yaitu  α -heliks,  β-sheet,  β-turn, dan random coil .  Kong  &  Yu  (2007)  mengungkapkan bahwa  setiap  kom-ponen  dari  struktur sekunder  protein  memiliki  wilayah  serapan
yang berbeda. Komponen α -heliks ditunjukkan  pada  wilayah  serapan  bilangan gelombang  1654  dan  1658  cm -1 ; β-sheet pada 1624 dan 1642 cm -1 ; β-turn pada 1666, 1672,  1680,  1688  cm -1 ;  dan random  coil pada  1648±2  cm -1 .  Berdasarkan  hasil bilangan  gelombang  amida  I  pada  kolagen kulit ikan patin menunjukkan bahwa kolagen yang  dihasilkan  memiliki  struktur β-sheet . Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  senyawa molekul yang dihasilkan dari proses ekstraksi  dengan  air  pada  suhu    40 0 C merupakan  kolagen  dan  belum  terdegradasi menjadi  bentuk  gelatin.  Gomez-Guillén et al .  (2011)  menyatakan  bahwa  denaturasi kolagen akibat proses pemanasan,
menyebabkan  rantai triple  heliks kolagen secara  sempurna  bertransformasi  menjadi rantai tunggal α -heliks (gelatin).
Amida  II  yang  merupakan  gugus fungsi  khas  kolagen  yang  terdeteksi  pada bilangan  gelombang  1550,28  cm -1 .  Kong  & Yu  (2007)  menyatakan  wilayah  serapan
amida  II,  yaitu  pada  kisaran  1480  cm -1 – 1575  cm -1 .  Adanya  gugus  Amida  II menunjukkan  adanya  gugus  CN stretching dan  NH bending .  Kong  &  Yu  (2007) menyatakan  Amida  III  memiliki  wilayah serapan  1229  cm -1 –  1301  cm -1 .  Wilayah serapan  kolagen  pada  bilangan  gelombang 1239,46 cm -1 mengindikasikan adanya gugus fungsi  amida  III  yang  menunjukkan  CH stretching dan NH bending . Nilai ini serupa dengan  hasil  yang  diperoleh  oleh  Singh et al .  (2011),  ASC  kulit  ikan stripped  catfish memiliki  gugus  amida  III  dengan  bilangan gelombang  1242  cm -1 dan  nilai  bilangan gelombang  pada  PSC  kulit  ikan stripped catfish lebih  tinggi,  yaitu  1244  cm -1 . Muyonga et  al .  (2004b)  menyatakan  bahwa intensitas amida III berkaitan dengan adanya struktur triple  heliks .  Hal  ini  berarti  bahwa ekstraksi kolagen kulit ikan patin dengan air pada  suhu  40 0 C  belum  mengubah  kolagen menjadi  gelatin  yang  ditandai  dengan  masih adanya struktur triple heliks .
Gambar 3. Spektrum Infrared Kolagen A B I III II

## Tabel 7. Karakteristik Gugus Fungsi Kolagen Hasil Analisis FTIR
No Amida Bilangan gelombang (cm -1 ) Wilayah serapan (cm -1 ) Keterangan Referensi 1 Amida A 3407,37 3300- 3500 Vibrasi stretching NH Muyonga, Cole, & Duodu, (2004a) 2 Amida B 2933,24 2915- 2935 Asimetrimetrikal stretching CH 2 Coates (2000) 3 Amida I 1640,89 1600- 1690 Vibrasi stretching C=O Kong dan Yu (2007) 4 Amida II 1550,28 1480- 1575 CH stretching , NH bending Kong dan Yu (2007) 5 Amida III 1239,46 1229- 1301 CH stretching , NH bending Kong dan Yu (2007)
Gambar 4. Kurva Hasil Analisis Termal Kolagen dari Kulit Ikan patin

## Analisis Termal
Analisis  termal  digunakan  untuk memahami  sifat  termodinamis  material, sehingga  dapat  diketahui  sifat  material  di bawah pengaruh pemanasan atau pendinginan, di bawah atmosfer reduksi atau oksidasi  dan  di bawah tekanan  gas. Analisis termal dengan  metode Differential Scanning Calorimetry (DSC) dilakukan dengan
mengukur  perbedaan  aliran  panas  pada sampel  dan  standar.  Teknik  ini  biasa digunakan untuk mengukur fase-fase transisi,  yaitu  transisi  gelas  (Tg),  titik  leleh (Tm)  dan  suhu  dekomposisi  (Td)  pada polimer.
Kurva  hasil  analisis  termal  dari kolagen  kulit  ikan  patin  dapat  dilihat  pada Gambar  4.  Berdasarkan  kurva  tersebut, kolagen  memiliki  transisi  gelasi  pada  suhu 74,49 0 C  dan  suhu  puncak  pelelehan  terjadi
pada  154,47 0 C,  sedangkan  suhu  awal  dan akhir  pelelehan  adalah  pada  suhu  153,00 0 C dan  161,46 0 C.  Hasil  penelitian  analisis termal  ini  sedikit  lebih  rendah,  yaitu  154,47 0 C  dibandingkan  dengan  hasil  penelitian Nur’aenah  (2013)  yang  menunjukkan  suhu puncak  pelelehan  kolagen  kulit  ikan  pari terjadi  pada  suhu  165,88 0 C.  Perbedaan stabilitas  termal  dari  kolagen  ini  dapat disebabkan oleh beberapa hal, yaitu komposisi  dan  susunan  asam  imino  sebagai pembentuk  struktur  tersier  kolagen  (Ahmad dan  Benjakul,  2010),  musim  penangkapan dan  tingginya  komposisi  ikatan  1α  pada struktur  kolagen  (Duan et  al .,  2012),  asal bahan  baku  (Karim  dan  Bhat,  2009),  serta keberadaan  garam-garam  mineral  (Komsa- Penkova , Koynova,  Kostov  &  Tenchov ,
1996).
pH Hasil  pengukuran  pH  kolagen  kulit ikan  patin  bersifat  asam,  yaitu  5,34  pada suhu  ruang.  Hasil  tersebut  lebih  rendah dibandingkan  dengan  syarat  mutu  kolagen SNI 8076:2014 yaitu 6,5 – 8, namun sedikit lebih  tinggi  dari  pH  kolagen  beberapa  merk kolagen  untuk  kosmetik  yang  dilaporkan Peng,  Glattauer,  Werkmeister  &  Ramshaw (2004)  yaitu  berkisar  antara  3,8  –  4,7,  dan hampir mendekati bila dibandingkan dengan pH  kolagen  dari  sisik  ikan  yaitu  berkisar antar  5,5  –  6,6  (Hartati  dan  Kurniasari, 2010).
Selain  itu,  perbedaan  nilai  pH kolagen  tersebut  dapat  disebabkan  oleh perbedaan jenis dan konsentrasi larutan yang digunakan,  baik  asam  atau  basa  dan  proses penetralan. Kombinasi proses asam dan basa cenderung  menghasilkan  pH  mendekati netral  (Zhou  dan  Regenstein,  2005).  Proses penetralan yang dilakukan akan berpengaruh pada  pH  akhir  kolagen,  karena  selain  dapat mengurangi sisa-sisa larutan asam atau basa akibat perendaman, juga kemungkinan dapat ditimbulkan  dari  air  yang  digunakan  untuk menetralkan  kolagen  tersebut.  Air  yang digunakan  bersifat  kurang  mendekati  netral, sehingga  mengakibatkan  nilai  pH  akhir kolagen  yang  dihasilkan  kurang  mendekati pH netral.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang sudah dilakukan dapat disimpulkan bahwa: 1. Perlakuan terbaik pada proses pretreatment dalam larutan NaOH adalah konsentrasi  terkecil  0,05  M  dengan  rasio 1:10 (b/v) selama 10 jam.
2. Perlakuan  terbaik  pada  proses  hidrolisis dalam larutan asam asetat  adalah konsentrasi  terkecil  0,05  M  dengan  rasio 1:10  (b/v)  selama  2  jam,  dan  ekstraksi dengan air pada suhu 40 0 C dengan rasio 1:1  (b/v)  selama  2  jam.  Rendemen kolagen  yang  dihasilkan  dari  perlakuan terbaik tersebut adalah 12,15 %.
3. Karakteristik  kimia  kolagen  dari  kulit ikan patin meliputi analisis proksimat dan komposisi asam amino. Proksimat
kolagen  mengandung  air  6,55%,    abu 1,80%, protein 64,74% dan lemak 8,85%;
dan komposisi asam amino yang dominan  terdapat  pada  kolagen  adalah glisin, prolin, alanin, arginin dan glutamat.  Karakteristik  fisik  kolagen yang  dihasilkan  adalah  analisis  FTIR menunjukkan  adanya  gugus  amida  A, amida B, amida I, amida II dan amida III, struktur triple  heliks pada  amida  I  dan amida III mengindikasikan bahwa senyawa yang dihasilkan adalah kolagen; analisis warna yang menunjukkan derajat putih  kolagen  kulit  ikan  patin  adalah 66,39 %; analisis termal yang menunjukkan  suhu  puncak  pelelehan adalah    154,47 0 C  dan  nilai  pH  kolagen yaitu 5,34.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  M.,  &  Benjakul,  S.  (2010). Extraction  and  characterisation  of pepsinsolubilised  collagen  from  the skin of unicorn leatherjacket ( Aluterus monocerous ). Food  Chem,  120 ,  817- 824.
Association  of  Official  Analytical  Chemist.
(1995). Official  methods  of  analysis .
Washington, DC:  The  Association  of
Official Analytical Chemist. Inc.
Association  of  Official  Analytical  Chemist. (2005). Official  methods  of  analysis (18 Edn) . Mayland. USA: Association of Official Analytical Chemist Inc.
Apriyantono,  A.,  Fardiaz,  D.,  Puspitasari,
N.L.,  Yasni,  S.,  &  Budiyanto,  S. (1989). Analisis pangan .  Bogor:  IPB
Press. . Ariesta, C. (2014). Ekstraksi dan karakterisasi  kolagen  dari  kulit  ikan cobia ( Rachycentron canadum ) ( skripsi ). Bogor: Departemen Teknologi  Hasil  Perairan,  Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB. Chai,  H.J.,  Li,  J.H.,  Huang,  H.N.,  Li,  T.L., Chan, Y.L., Shiau, C.Y., & Wu1, C.J.
(2010). Effects of sizes and conformations  of  fish-scale  collagen
peptides  on  facial  skin  qualities  and transdermal  penetration  efficiency. J Biomed Biotechnol, 2010 , 1-9. doi:10.1155/2010/757301.
Coates,  J.  (2000). Interpretation  of  infrared spectra,  a  practical  approach .  Di dalam: Meyers RA, editor. Encyclopedia of Analytical Chemistry.  Chichester:  John  Wiley  & Sons Ltd.
Duan,  R.,  Zhang,  J.,  Li,  J.,  Zhong,  X., Konno,  K.,  &  Wen,  H.  (2012).  The effect  of  the  subunit  composition  on the  thermostability  of  collagens  from the  scales  of  freshwater  fish. Food Chem, 135 , 127-132.
Friess,  W.  (1998).  Collagen  –  biomaterial for  drug  delivery. Eur  J  Pharm
Biopharm, 45 , 113-136.
Gaurav,  S.  (2003). Digital  color  imaging handbook . CRC Press. ISBN
084930900X .
Gime´nez,  B.,  Turnay,  J.,  Lizarbe,  M.A., Montero,  P.,  &  Go´mez-Guillen,M.C.
(2005).  Use  of  lactic  acid  for extraction  of  fish  skin  gelatin. Food
Hydrocolloid, 19 , 941-950
Gómez-Guillén, M.C., Turnay, J., ern nde -   a ,  M.D.,  Ulmo,  N., Lizarbe, M.A., & Montero, P. (2002). Structural  and  physical  properties  of gelatin extracted from different marine  species:  a  comparative  study .
Food Hydrocolloid, 16 , 25-34.
Haris,  M.A.  (2008). Pemanfaatan  limbah tulang ikan nila (Oreochromis niloticus) sebagai gelatin dan pengaruh  lama  penyimpanan  pada suhu ruang ( skripsi ). Bogor: Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB.
Hartati  I.,  &  Kurniasari,  L.  (2010).  Kajian produksi  kolagen  dari  limbah  sisik
ikan secara ekstrasi enzimatis.
Momentum, 6 (1), 33-35.
Jamilah,  B.,  Hartina,  M.U.,  Hashim,  D.M.,
&  Sazili,  A.Q.  (2013).  Properties  of collagen  from  barramundi  ( Lates calcarifer )  skin. International  Food Research Journal 20 (2), 835-842.
Jaswir,  I.,  Monsur,  H.A.,  &  Salleh,  H.M.
(2011).  Nano-structural  analysis  of fish collagen  extracts for new process development. Afr  J  Biotechnol,  10
(81), 18847- 18854.
Karim,  A.A.,  &  Bhat,  R.  (2009).  Fish gelatin:  properties,  challenges,  and prospects as an alternative to mammalian gelatins. Food Hydrocolloid, 23 , 563-576. Komsa-Penkova,  R.,  Koynova,  R.,  Kostov, G., & Tenchov, B.G. (1996). Thermal stability of calf skin collagen type I in salt solutions. Biochimica et
Biophysica Acta, 1297 , 171-181.
Kong, J., & Yu, S. (2007). Fourier transform infrared  spectroscopic  analysis  of protein  secondary  structures. Acta bioch bioph sin, 39 (8), 549-559.
Lee,  C.H.,  Singla,  A.,  &  Lee,  Y.  (2001). Biomedical  applications  of  collagen. Int J Pharm, 221 , 1-22.
Mahardika, S. (2013). Isolasi dan karakterisasi  kolagen  nanopartikel dari kulit ikan cucut bambu ( Chiloscyllium  punctatum )  ( skripsi ). Bogor:  Program  Studi  Teknologi Hasil  Perairan,  Fakultas  Perikanan dan Ilmu kelautan, IPB.
Martianingsih,  N.,  &  Atmaja,  L.  (2009). Analisis  sifat  kimia,  fisik,  dan  termal gelatin  dari  ekstraksi  kulit  Ikan  pari (himantura  gerrardi)  melalui  variasi jenis  larutan  asam .  Prosiding  KIMIA
FMIPA – ITS.
Muyonga,  J.H.,  Cole,  C.G.B.,  &  Duodu,
K.G.  (2004a).  Characterisation  of
acids  soluble  collagen  from  skins  of young  and  adulti  Nile  perch  ( Lates niloticus ). Food Chemistry  85 (1),  81- 89.
Muyonga,  J.H.,  Cole,  C.G.B.,  &  Duodu,
K.G.  (2004b).  Fourier  transform infrared (FTIR) spectroscopic study of acid soluble collagen and gelatin from skins  and bones  of  young  and  adult Nile  perch  ( Lates  niloticus ). Food Chem, 86 , 325-332.
Nagarajan,  M.,  Benjakul,  S.,  Prodpran,  T.,
Songtipya,  P.,  &  Kishimura,  H.
(2012).  Characteristics  and  functional properties  of  gelatin  from  splendid squid  ( Loligo  formosana )  skin  as affected  by  extraction  temperatures.
Food Hydrocolloids, 29 , 389-397.
Nalinanon,  S.,  Benjakul,  S.,,  Kishimura,  H.,
&  Osako,  K.  (2011).  Type  I  collagen from  the  skin  of  ornate  threadfin bream ( Nemipterus hexodon ):
Characteristics  and  effect  of  pepsin hydrolysis. Food Chem, 125 , 500-507.
Nur’aenah,  N.  (2013). Ekstraksi  dan karakterisasi kolagen dan nanopartikel  kolagen  dari  kulit  ikan pari (Pastinachus solocirostris)
sebagai  bahan  baku  kosmetik ( tesis ). Bogor: Sekolah Pascasarjana, IPB.
Peng,  Y.,  Glattauer,  V.,  Werkmeister,  J.A.,
& Ramshaw, J.A.M. (2004). Evaluation  for  collagen  products  for
cosmetic application. J Cosmestic Sci, 55 , 327-341.
Potaros, T., Raksakulthai, N., Runglerdkreangkrai, J., & Worawattanamateekul,  W.  (2009). Characteristics  of  collagen  from  nile tilapia  ( Oreochromis  niloticus )  skin isolated  by  two  different  methods. Kasetsart Journal, 43 , 584-593.
See,  S.F.,  Hong,  P.K.L.,  Wan,  A.W.M.,  & Babji,  A.S.  (2010).  Physicochemical of  gelatins  extracted  from  skin  of different  freshwater  fish  species.
International Food Reseacrh Journal, 17, 809-816.
Shon,  J.,  Ji-Hyun,  E.,  Hwang,  S.J.,  &  Jong- Bang,  E.  (2011).  Effect  of  processing conditions  on  functional  properties  of collagen  powder  from  Skate  ( Raja kenojei )  skins .  Food  Sci  Biotechnol,
20 (1), 99-106.
Sistem  Informasi  Diseminasi  Data  Statistik Kelautan dan Perikanan.  (2013). KKP targetkan  produksi  patin  11  juta  ton . Diperoleh dari www.antaranews.com.
Singh,  P.,  Benjakul,  S.,  Maqsood,  S.,  & Kishimura,  H.  (2011).  Isolation  and characterisation  of  collagen  extracted from  the  skin  of  striped  catfish ( Pangasianodon
hypophthalmus ). Food Chem, 124 , 97-105.
Standar  Nasional  Indonesia  01-2891-1992.
(1992). Cara  uji  makanan  dan minuman . Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
Standar  Nasional  Indonesia  01-4866.-1998.
(1998). Cara  uji  cemaran  arsen dalam  makanan .  Jakarta:  Badan Standarisasi Nasional.
Standar Nasional Indonesia 01-2354.6-2006.
(2006a). Cara  uji  kimia  Bagian  6: Penentuan kadar logam berat merkuri (Hg) pada produk perikanan . Jakarta:
Badan Standarisasi Nasional.
Standar Nasional Indonesia 01-2354.7-2006.
(2006b). Cara  uji  kimia  Bagian  7: Penentuan  kadar  logam  berat  timbal
(Pb)  pada  produk  perikanan .  Jakarta:
Badan Standarisasi Nasional.
Standar  Nasional  Indonesia  7387-2009.
(2009). Batas  maksimum  cemaran logam  berat  dalam  pangan .  Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
Standar  Nasional  Indonesia  8076:2014.
(2014). Kolagen Kasar dari Sisik Ikan –  Syarat  Mutu  dan  Pengolahan . Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
Songchotikunpan,  P.,  Tattiyakul,  J.,  & Supaphol,  P.  (2008).  Extraction  and electrospinning  of  gelatin  from  fish skin. Int  J  Biol  Macromol,  42 ,  247-
255. Steel, R.G.D., & Torrie, J.H. (1993). Prinsip dan Prosedur Statistika, Suatu Pendekatan  Biometrik .  Sumantri  B, penerjemah. Terjemahan dari : Principles and Procedures of Statistics. Jakarta:  Gramedia  Pustaka Utama.
Thitipramote,  N.,  &  Rawkdkuen,S.  (2011). Histological  structure  and  chemical
composition  of  the  farmed  giant catfish’s  skin. J  of  Microsc  soc  Thai , 4 (2), 89-93.
Yoshimura,  K.,  Terashima,  M.,  Hozan,  D., &  Shirai,  K.  (2000).  Preparation  and dynamic viscoelasticity characterization  of  alkali-solubilized collagen  from  shark  skin. J  Agric Food Chem, 48 , 685-690.
Zhou, P., & Regenstein, J.M. (2005). Effects of  alkaline  and  acid  pretreatments  on alaska pollock skin  gelatin  extraction. J  Food  Sci,  70 (6),  C392-C396.