## Jurnal Agrotek Tropika
Journal homepage: https://jurnal.fp.unila.ac.id/index.php/JA

## IDENTIFIKASI KONTAMINASI KULTUR JARINGAN PISANG CAVENDISH

## IDENTIFICATION OF CAVENDISH BANANA TISSUE CULTURE CONTAMINATION
Ellok Dwi Sulichantini * , Alvera Prihatini Dewi Nazari dan Achmad Nuansyah
Program Studi Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Mulawarman, Samarinda * Corresponding Author. E-mail address: ellok_ds@faperta.unmul.ac.id

## PERKEMBANGAN ARTIKEL:
Diterima: 15 Januari 2023 Direvisi: 28 Maret 2023 Disetujui: 17 Januari 2024
KEYWORDS: Ascorbic acid, citric acid, contamination, tissue culture, cavendish banana.
KATA KUNCI: Asam askorbat, asam sitrat, kontaminasi, kultur jaringan, pisang cavendish.
© 2024 The Author(s). Published by Department of Agrotechnology, Faculty of Agriculture, University of Lampung.

## ABSTRACT
Cavendish  banana  was  a  banana  with  high  economic  value.  Tissue  culture  propagation  was method plant propagation method  that  able to produce plants with the same quality as their parents in large numbers in a short time. One of the barriers to tissue culture propagation was contamination  so  knowledge  of  sterilization  techniques  and  causes  of  contamination  was necessary.  The  research  was  aimed  at  determining  the  cause  of  contamination  in  Cavendish banana tissue culture. The explant used was a banana bud. Sterilization of explant sources in the field  was  carried  out  with  fungicides  and  bactericides.  Sterilization  outside  the  laminar  uses detergent, while sterilization inside the laminar uses NaOCl, before inoculation the explant was treated with citric acid, ascorbic acid and  combination of citric acid with ascorbic acid. The study was arranged in a Complete Randomized Design with five replications.  The study consisted of seven treatments of explant soaking before inoculation, i.e. without immersion in citric acid or ascorbic acid, soaking in 2 g.L -1 citric acid, 2 g.L -1 ascorbic acid, 2 g.L -1 citric acid + 2 g.L -1 ascorbic acid, 4 g.L -1 citric acid, 4 mg.L -1 ascorbic acid, and 4 mg. L-1 citric acid + 4 mg. L-1 ascorbic acid. The results showed the contamination were caused by fungi and bacteria. The types of fungi that attack were  Aspergillus  sp., Colletotrichum sp., Rhizoctonia  sp. and Rhizopus sp.  Bacteria that attack all cultures belong to the class of gram-positive bacteria. The lowest contamination was found in 2 gL -1 citric acid treatment.

## ABSTRAK
Pisang Cavendish merupakan pisang yang bernilai ekonomi tinggi. Perbanyakan secara kultur jaringan  merupakan  metode  perbanyakan  tanaman  yang  mampu  menghasilkan  tanaman dengan  kualitas  yang  sama  dengan  induknya  dalam  jumlah  yang  besar  dalam  waktu  yang singkat.  Salah  satu  hambatan  perbanyakan  secara  kultur  jaringan  adalah  kontaminasi sehingga pengetahuan tentang teknik sterilisasi dan penyebab kontaminasi perlu dilakukan. Penelitian ditujukan untuk mengetahui  penyebab kontaminasi  pada kultur jaringan pisang Cavendish.  Eksplan  yang  digunakan  adalah  bonggol  pisang.  Sterilisasi  sumber  eksplan  di lapangan dilakukan dengan fungisida dan bakterisida. Sterilisasi di luar laminar menggunakan detergen,  sedangkan  sterilisasi  didalam  laminar  menggunakan  NaOCl,  sebelum  inokulasi eksplan diberi  perlakuan asam sitrat, asam askorbat dan kombinasi asam sitrat dengan asam askorbat.  Penelitian    disusun  dalam  Rancangan  Acak  Lengkap  dengan  ulangan  lima  kali. Penelitian terdiri dari tujuh perlakuan perendaman eksplan sebelum inokulasi, yaitu tanpa perendaman dalam  asam sitrat atau asam askorbat, perendaman dalam larutan 2 mg.L -1 asam sitrat, 2 mg. L -1 asam askorbat, 2 mg.L -1 asam sitrat + 2 mg. L -1 asam askorbat, 4 mg.L -1 asam sitrat,  4  mg.L -1 asam  askorbat,  dan  4  mg.L -1 asam  sitrat  +  4  mg.L -1 asam  askorbat.  Hasil penelitian menunjukkan kontaminasi  disebabkan  oleh  jamur  dan  bakteri.  Jenis  jamur  yang menyerang adalah Aspergillus sp., Colletotrichum sp. , Rhizoctonia sp. dan Rhizopus sp. Bakteri yang menyerang kultur semua termasuk dalam golongan bakteri gram positif. Kontaminasi terendah dijumpai pada perlakuan asam sitrat 2 mg L -1 .

## 1. PENDAHULUAN
Pisang Cavendish merupakan jenis pisang yang banyak digemari masyarakat. Perbanyakan pisang  dalam  jumlah  besar  secara  konvensional  terkendala  dengan  penyediaan  bibit  pisang berkualitas.  Perbanyakan  pisang  berkualitas  tinggi  dalam  jumlah  besar  dapat  dilakukan  dengan teknik kultur jaringan.   Perbanyakan secara kultur jaringan dapat dilakukan dengan menggunakan berbagai sumber eksplan seperti kotiledon  (Zimik & Arumugam, 2017), hipokotil, daun (Lukmana and  Rahmawati,  2018)  tunas  (Sulichantini et  al .,  2021),  pucuk    (Sulichantini et  al .,  2021),  batang (Dzikrana et al., 2018).
Keberhasilan perbanyakan secara kultur jaringan tergantung dari pemilihan jenis eksplan, media dasar, dan zat pengatur tumbuh. Jenis-jenis zat pengatur tumbuh yang digunakan untuk perbanyakan kultur jaringan antara lain BAP, 2.4-D (Hidayah & Dewanti, 2023; Sulichantini , et al ., 2021;  Sulichantini et al ., 2023), BA (Sukartini et al., 2014; Apriani, 2016), Kinetin dan NAA (Nisa & Rodiah, 2005).
Perbanyakan  pisang  Cavendish  secara  kultur  jaringan  umumnya  menggunakan  bonggol sebagai sumber eksplan, kendala yang dihadapi adalah browning pada eksplan yang menyebabkan kegagalan  regenerasi  bahkan  kematian  eksplan.  Penanggulangan  browning  antara  lain  dilakukan dengan  perlakuan  asam  askorbat  dan  asam  sitrat  (Sulichantini, et  al., 2023).  Asam  sitrat  juga memiliki kemampuan untuk menurunkan derajat keasaman sehingga mampu menghambat aktivitas mikroorganisme dan menghambat pertumbuhan bakteri (Sabahannur, 2020).
Kendala  regenerasi  pisang  secara  kultur  jaringan,  selain  browning  adalah  kontaminasi. Pencegahan  kontaminasi  yang  berasal  dari  eksplan  dilakukan  dengan  sterilisasi  beberapa  tahap, dimulai dari sterilisasi tanaman sumber eksplan di lapangan, dilanjutkan dengan sterilisasi eksplan di luar Laminar Air Flow Cabinet dan selanjutnya sterilisasi di dalam Laminar Air Flow Cabinet. Berbagai  penelitian  mengenai  sterilisasi  permukaan  eksplan  pada  perbanyakan      in  vitro menunjukkan perbedaan teknik pada setiap jenis eksplan. Menurut (Habibah et al., 2013 ) ,  sterilisasi eksplan  daun  burahol  paling  optimal  dengan  fungisida  selama  24  jam,  dilanjutkan  perendaman bakterisida dan fungisida 30 menit, alkohol 70% selama 1 menit, klorox 15% 10 menit, klorox 10% 10  menit  berturut-turut.  (Shofiyani    &  Hajoeningtijas,  2010),  menunjukkan  penggunaan  bayclin (NaClO) 20% dan alkohol 70% mampu mengurangi kontaminasi jamur maupun bakteri pada eksplan daun  kencur.  Putri et  al .  (2017),  menggunakan  detergen,  ditiokarbamat  dengan  bahan  aktif mankozeb,  senyawa  berbahan  aktif  NaOCl  5,25  %    direaksikan  dengan  sodium  hipoklorit  dan hydrogen oksida serta larutan Tween 20 (90 %) dan alkohol 70 % untuk sterilasi aksenik  ramin. Andriani  &    Heriansyah  (2021),  melakukan  sterilisasi  eksplan  anggrek  dengan  hipoklorit  70%, alkohol 95 % dan akuades.
Percobaan ini bertujuan untuk mengetahui penyebab kontaminasi yang terjadi   pada kultur pisang  Cavendish  yang  telah  diberi  perlakuan  sterilisasi  dengan  atau  tanpa    perlakuan  asam askorbat, asam sitrat dan kombinasi asam askorbat dengan asam sitrat pada berbagai konsentrasi.

## 2. BAHAN DAN METODE

## 2.1 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  selama  lima  bulan,  dari  bulan  Desember  2020  sampai  April  2021 bertempat di Laboratorium Kultur Jaringan, Fakultas Pertanian, Universitas Mulawarman, Samarinda.

## 2.2  Bahan dan Alat Penelitian
Bahan  yang  digunakan  untuk  sumber  eksplan  dalam  penelitian  ini  adalah  bonggol  pisang Cavendish yang berasal dari Kebun Percobaan Fakultas Pertanian di kebun Teluk Dalam, Samarinda.
Media  dasar  yang  digunakan  adalah  media  dasar Murashige  and  Skoog (MS).  Sumber  energi menggunakan gula pasir, dan sebagai bahan pemadat digunakan agar-agar swallow.  Zat pengatur tumbuh yang ditambahkan ke dalam media adalah Benzyl Amino Purine (BAP). Bahan sterilisasi eksplan  yang  digunakan  adalah  Dithane  M-45,  Agrept,  detergen  bubuk,  detergen  cair,  Tween, NaOCl, alkohol 70%, dan alkohol 95%. Zat antioksidan yang digunakan adalah asam askorbat dan asam sitrat.
Alat yang digunakan terdiri atas parang, linggis, cangkul, pisau, talenan, autoklaf , Laminar Air Flow Cabinet (LAFC), timbangan analitik, kompor gas, panci, botol kultur, gelas piala, erlenmeyer, petridish, pipet, gelas ukur, pengaduk gelas, bunsen, scalpel , pinset, gunting, hand spayer, rak kultur, mikroskop, dan kamera.

## 2.2  Prosedur Penelitian

## 2.2.1 Sterilisasi alat dan akuades
Alat-alat  yang  digunakan  seperti  botol  kultur,  Erlenmeyer, beaker  glass ,  petridish, scalpel , pinset, dan gunting dicuci bersih dengan menggunakan detergen.  Petridish, scalpel, pinset, gunting dibungkus  dengan  kertas.  Selanjutnya  botol  kultur,  erlenmeyer,  beaker  glass  petridish, scalpel , pinset, dan gunting disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121 0 C dengan tekanan 17,5 psi selama 60 menit.

## 2.2.2 Pembuatan media
Media dasar yang digunakan adalah media MS (Murashige &  Skoog, 1962).  Gula pasir  yang ditambahkan  ke  dalam  media  sebanyak  30  g,  agar-agar  sebanyak  8  g,  dan  2  mg.L -1 BAP.    Derajat kemasaman diatur pada pH 5,8-6,0. Kemudian media di strerilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121 0 C dengan tekanan 17,5 psi selama 30 menit.

## 2.2.3 Sterilisasi eksplan
Sterilisasi eksplan dilakukan tiga tahap yaitu di lahan, di luar Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) dan di dalam LAFC. Sterilisasi di lapangan dilakukan dengan penyemprotan sumber eksplan dengan 2 g Dithane M-45 L -1 air + 2 g Agrept L -1 air setiap tiga hari selama satu bulan.
Sterilisasi eksplan di luar LAFC dilakukan dengan cara mengupas pelepah dan bonggol pisang sampai diperoleh eksplan berukuran 8 cm x 4 cm, kemudian eksplan dibersihkan dengan aquadest, dilanjutkan eksplan  dipotong sampai eksplan berukuran 4 cm x 2 cm, kemudian dibersihkan dengan detergen, dan dibilas dengan aquadest.  Setelah itu eksplan kembali dipotong sampai berukuran 3 cm x 2 cm dan dicuci dengan detergen cair. Selanjutnya eksplan direndam dalam larutan 2 g Dithane M-45 L -1 air selama 12 jam kemudian dibilas dengan akuades.
Sterilisasi eksplan di  dalam LAFC dilakukan dengan cara merendam eksplan di dalam larutan 1,5 % NaOCl + 2 tetes Tween selama 5 menit, selanjutnya direndam dalam  1,0 % NaOCl + 2 tetes Tween selama 5 menit, terakhir direndam  dalam     0, 5% + 2 tetes Tween selama 10 menit, kemudian dibilas dengan akuades sebanyak tiga kali.

## 2.2.4 Perlakuan eksplan
Setelah  tahap  sterilisasi  eksplan  di  dalam  LAFC,  eksplan  diberi  perlakuan  perendaman  zat antioksidan selama 60 menit dengan perlakuan sebagai berikut: 0 AS/AA  (control), 2AS (2 g asam sitrat L -1 ), 2 AA (2 g asam askorbat L -1 ), 2AS + 2 AA (2 g asam sitrat L -1 + 2 g asam askorbat L -1 ), 4 AS (4 g asam sitrat L -1 ), 4 AA (4 g asam askorbat L -1 ), 4AS + 4 AA (4 g asam sitrat L -1 + 4 g asam askorbat L -1 ).

## 2.2.5 Penanaman eksplan
Eksplan diinokulasi pada media MS + 2 mg.L -1 BAP.  Selanjutnya kultur diletakkan di ruang inkubasi.

## 2.2.6 Pemeliharaan
Temperatur  di  ruangan  inkubasi  diatur  pada  suhu  25-28 0 C.  Sumber  pencahayaan menggunakan  lampu  neon.  Pemeliharaan  ruang  kultur  dilakukan  dengan  penyemprotan  alkohol 70% di sekitar botol kultur.

## 2.3  Pengambilan Data
Variabel yang diamati terdiri atas persentase kontaminasi dan identifikasi kontaminan pada kultur  umur  3,  5  dan  15  hari  setelah  inokulasi.  Identifikasi  kontaminasi  yang  terjadi  pada  kultur pisang  cavendih  dengan  cara  mengamati  morfologi  kontaminan  secara  makroskopis  dan mikroskopis.  Identifikasi  jamur  secara  makroskopis  yaitu  mengamati  ciri-ciri  morfologi  dari masingmasing koloni yang meliputi warna koloni permukaan atas, permukaan bawah, warna, dan zonasi,  serta  warna  hifa,  bentuk  konidia  dan  spora  untuk  pengamatan  mikroskopis.  Identifikasi didasarkan pada kunci determinasi (Barnett & Hunter, 1972).

## 3.     HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1  Persentase Kontaminasi
Kontaminasi pada kultur pisang Cavendish dapat disebabkan oleh jamur, bakteri atau jamur dan  bakteri.  Kultur  dapat  terserang  kontaminan  lebih  satu  jenis  terlihat  pada  Tabel  1,  kontrol terserang dua jenis jamur dan bakteri. Hasil pengamatan pada kultur pisang Cavendish umur 3 hari setelah inokulasi (HSI) terdapat dua perlakuan yang tidak mengalami kontaminasi, yaitu perlakuan
Tabel 1. Jenis kontaminan eksplan
Perlakuan Jamur Bakteri Kontrol Aspergillus sp. dan Colletotrichum sp. Bakteri gram + 2 AS - Bakteri gram + 2 AA Rhizoctonia sp. Bakteri gram + 2 AS + 2 AA Aspergillus sp. Bakteri gram + 4 AS Aspergillus sp. - 4 AA Rhizopus sp. Bakteri gram + 4 AS + 4 AA - Bakteri gram +
Gambar 1. Persentase kontaminasi pada kultur umur 3, 5 dan 14 hari setelah inokulasi
60 20 40 80 20 80 20 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 AS/AA 2 AS 2 AA 2 AS + 2AA
4 AS 4 AA 4 AS + 4 AA Kont am ina si ( % ) 3 HSI 5 HSI 14 HSI
2 AS dan 4 AS + 4 AA. Kontaminasi sebesar 20% terjadi pada perlakuan 2 AA dan 4 AS. Kontaminasi sebesar 40% diperoleh pada perlakuan kontrol dan 2 AS + 2 AA. Kontaminasi tertinggi diperoleh pada perlakuan 4 AA (4 mg asam sitrat L -1 ) (Gambar 1).
Peningkatan persentase kontaminasi terjadi pada kultur umur 5 HSI, pada perlakuan kontrol (60%), 2 AA (40%), 2 AS + 2AA (80%), 4 AA (80%) dan 4 AS + 4 AA (20%). Sedangkan perlakuan 2 AS belum mengalami kontaminasi (Gambar 1).
Semua  perlakuan  telah  mengalami  kontaminasi  pada  kultur  umur  14  HSI.  Kontaminasi terendah sebesar 20% terdapat pada perlakuan 2 AS, 4 AS dan 4 AS + 4AA, eksplant sehat sebesar 80%.  Eksplan yang mendapat perlakuan 2 AS mengalami kontaminasi paling lambat, terjadi pada saat kultur umur 14 HSI (Gambar 1), perendaman eksplan dalam asam askorbat terutama ditujukan untuk mengurangi terjadinya browning.
Penyebab kontaminasi pada kultur pisang Cavendish adalah jamur dan bakteri. Kontaminasi jamur mulai terjadi pada kultur umur 3 HSI, ditemukan pada tiga perlakuan yaitu kontrol (20%), 4 AS (20%) dan 4 AA (20%). Kontaminasi jamur pada kultur umur 5 dan 14 HSI ditemukan pada 4 perlakuan yaitu kontrol (20%), 2 AA (20%), 4 AS (20%) dan 4 AA (20%) (Gambar 2). Hasil penelitian ini sesuai dengan hasil penelitian  Shofiyani dan Budi (2011), yang melakukan perbanyakan pisang mas secara kultur  jaringan  yang  menunjukkan  bahwa  gejala  yang  ditimbulkan  dari  adanya  serangan  jamur adalah tumbuhnya hifa-hifa jamur pada permukaan media maupun eksplan setelah inokulasi selama rata-rata 4-14 hari setelah tanam.
Gambar 2. Persentase kontaminasi jamur pada kultur umur 3, 5 dan 14 hari setelah inokulasi
Gambar 3. Persentase kontaminasi bakteri pada kultur umur 3, 5 dan 14 hari setelah inokulasi
0 5 10 15 20 25 0 AS/AA 2 AS 2 AA 2 AS + 2AA 4 AS 4 AA 4 AS + 4 AA Kont am ina si ja m ur ( % ) 3 HSI 5 HSI 14 HSI 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 AS/AA 2 AS
2 AA 2 AS + 2AA 4 AS 4 AA 4 AS + 4 AA Kont am ina si b ak te ri ( % ) 3 HSI 5 HSI 14 HSI
Kontaminasi yang disebabkan bakteri terjadi pada semua perlakuan pada kultur umur 3, 5 dan 14 hari setelah inokulasi. Pada kultur umur 3 hari kontaminasi terjadi pada perlakuan kontrol, 2 AA, 2 AS + 2 AA, 4 AS, 4 AA (Gambar 1). Hasil penelitian yang menarik adalah pada perlakuan eksplan yang direndam dengan asam askorbat 2 g L -1 ternyata tidak ditemukan adanya kontaminasi oleh jamur dan bakteri pada kultur umur 3 dan 5 hari setelah inokulasi. Ketika kultur berumur 14 hari setelah  inokulasi  baru  terdapat  serangan  bakteri  (Gambar  1,  2,  3)  perlakuan  perendaman  asam askobat  terutama  ditujukan  untuk  mengurangi  terjadinya  browning  pada  eksplan.  Eksplan  yang mengalami  browning  akan  terhambat  pertumbuhannya  dan  pengaruh  lebih  lanjut  dapat mengakibatkan kematian eksplan.  Selain untuk mengurangi browning pada penelitian ini ternyata asam askorbat juga dapat memperlambat terjadinya kontaminasi.
Persentase kontaminasi bakteri yang tinggi yaitu sebesar 80% ditemukan pada perlakuan 2 AS+2AA dan 4 AA pada kultur umur 5 hari setelah inokulasi. Kontaminasi bakteri yang tinggi dapat disebabkan  karena  alat,  bahan  dan  pelaksana.  Pada  kultur  pisang  Cavendish  ini  penyebab kontaminasi kemungkinan besar berasal dari sumber eksplan yang digunakan. Eksplan berasal dari mata  tunas  pisang  yang  diisolasi  bagian  meristemnya,  dimana  mata  tunas  tersebut  berada  pada bagian bawah (bonggol) tanaman yang bersentuhan langsung dengan tanah, sehingga kontaminan yang terdapat pada sumber eksplan sangat tinggi. Kemungkinan kontaminasi terjadi karena teknik sterilisasi eksplan yang kurang sesuai dengan kontaminan yang terbawa di bonggol pisang. Menurut Shofiyani dan Budi (2011),    kontaminasi jamur yang terjadi pada kultur pisang mas sudah terjadi pada kultur umur 2-7 hari setelah tanam yang dicirikan dengan munculnya lendir berwarna kuning kecoklatan di permukaan media dan eksplan.
Kontaminasi  yang  berasal  dari  eksplan  dapat  berasal  dari  faktor  internal  dan  eksternal eksplan. Kontaminasi yang berasal dari faktor internal sumber eksplan dapat disebabkan adanya infeksi  patogen  ke  dalam  jaringan  tanaman,  kontaminasi  jenis  ini  sangat  sulit  dihindari  dengan menggunakan sterilisasi permukaan karena kontaminan berada di dalam jaringan sumber eksplan. Kontaminasi eksternal eksplan berasal dari lingkungan sekitar eksplan berada. Tingkat kontaminasi dipengaruhi  beberapa  faktor  seperti  musim  saat  pengambilan  eksplan,  morfologi  eksplan,  bagian tanaman yang diambil sebagi sumber eksplan, dan umur eksplan (Gunawan, 1992).  Kontaminasi yang disebabkan faktor eksternal ini dapat dikurangi dengan melakukan teknik sanitasi di lapangan, sterilisasi  di  lapangan,  sterilisasi  sumber  eksplan  di  luar  LAFC  dan  sterilisasi  di  dalam  LAFC. Pengetahuan  tentang  teknik  sterilisasi  ini  sangat  menentukan  keberhasilan  perbanyakan  secara kultur jaringan. Hasil terbaik diperoleh apabila sumber eksplan tetap hidup dan tidak mengalami kontaminasi selama periode kultur.
Ketersedian  kultur  yang  steril  selain  ditentukan  oleh  metode  sterilisasi  eksplan  juga dipengaruhi oleh kondisi ruang kultur. Kondisi ruang kultur yang kurang steril, kelembapan tinggi, temperatur  yang  tinggi  juga  menyebabkan  kontaminan  seperti  jamur  dan  bakteri  tumbuh  dan berkembang  sangat  cepat  hal  ini  dapat  menyebabkan  kontaminasi  yang  tinggi.  Oleh  karena  itu kondisi ruang tanam harus dijaga selalu dalam kondisi steril sehingga saat pelaksanaan inokulasi kontaminasi dapat ditekan. Kondisi ruang inkubasi juga harus dijaga dalam kondisi steril agar selama pemeliharaan kultur kontaminasi dapat ditekan.

## 3.2 Jenis Kontaminan
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kontaminasi  pada  kultur  jaringan  pisang  disebabkan oleh  jamur  dan  bakteri.  Jamur  penyebab  kontaminasi  ada  empat  jenis  yaitu Aspergillus sp., Colletotrichum sp. , Rhizoctonia sp. dan Rhizopus sp.
Aspergillus sp.  merupakan  fungi  dari  filum  ascomycetes  yang  berflamen,  mempunyai  hifa berseptat.  Pengamatan  secara  makroskopis  koloni Aspergillus sp.  dengan  penampakan  seperti beludru serta berkerut. Warna koloni yang dihasilkan yaitu putih. Pengamatan secara mikroskopis
Miselium Aspergillus memiliki sekat konidospora yang tidak bercabang, bertekstur kasar atau halus, dengan  sel  kaki  di  dasar  akan  menopang  basarnya  vesikel  yang  terletak  di  ujung.  Vesikel  yang terbentuk satu atau dua baris, kemudian akan menopang vialid yang berbentuk seperti labu, baris vesikel tersebut akan memproduksi rantai filalokonidia yang halus maupun kasar.
Karekteristik  morfologi Rhizoctonia sp  mempunyai  struktur  miselium  yang  halus,  warma miselium  berwama  putih,  bertambahnya  umur  warna  abu-abu  kehitaman  dan  selanjutnya miseliumnya  berubah  menjadi  hitam,  benang-benang  miselium  lebar,  percabangan  membentuk sudut  lancip,  pada  titik  percabangan  terdapat  lekukan.  Arah  pertumbuhan  miselium  jamur  ini mengarah ke samping dan keatas. Secara mikroskopis jamur tidak menghasilkan spora, hifa bersekat, dan wama hifa coklat.
Karakteristik Rhizopus sp. secara makroskopis koloni memiliki warna putih keabuan dengan tekstur  koloni  menyerupai  kapas,  tidak  terdapat  zonasi,  dan  tidak  memiliki  garis  radial.  Hasil pengamatan secara mikroskopis menunjukkan bahwa Rhizopus sp. memiliki sporangium berbentuk oval, hifa tidak bersekat, memiliki rhizoid dan stolon.
Kontaminasi paling banyak  disebabkan oleh Aspergillus sp terjadi pada tiga perlakuan yaitu perlakuan kontrol, 2 AS + 2 AA, dan  4 AS. Rhizopus sp.  ditemukan pada perlakuan 4 AA. Rhizoctonia sp. ditemukan pada satu perlakuan yaitu perlakuan 2 AA. Kontaminasi pada kontrol disebabkan oleh dua  jenis  jamur  yaitu Aspergillus sp.  dan Colletotrichum  sp. (Tabel  1).    Kontaminasi  jamur  pada eksplan  dan  media  membentuk  serabut-serabut  berwarna  putih  seperti  rihat  pada  gambar  4. Kontaminasi  yang  disebabkan  oleh Aspergillus sp.  (Gambar  4A); Rhizoctonia sp.  (Gambar  4B); Rhizopus sp.  (Gambar  4C);  dan Colletotrichum  sp. (Gambar  4D).  Karakterisasi  morfologi  secara makroskopis  dan  mikroskopik  jamur Colletotrichum sp.  warna  koloni  pada  permukaan  atas  dan bawah  berwarna  putih  tidak  memiliki  zonasi.  Pengamatan  secara  mikroskopik  mempunyai konidia/spora  bulat  silendris,  dengan  hifa  bersepta  dan  hialin.  Menurut  Dickman  (1993),  ciri-ciri umum  jamur  dari  Genus  Colletotrichum  yaitu  memiliki  hifa  bersekat  dan  bercabang  serta menghasilkan  konidia  yang  transparan  dan  memanjang  dengan  ujung  membulat  atau  meruncing panjangnya  antara  10-16  µm  dan  lebarnya  5-7  µm.  Hasil  pengamatan  jamur  kontaminan  secara mikroskopis dapat dilihat pada Gambar 5.
Menurut Susilowati dan Listyawati, (1970), jenis jamur  yang mengkontaminasi pada kultur in vitro adalah Mucor , Rhizopus , Cladosporium , Aspergillus dan Dictyotelium , sedangkan khamir yang mengkontaminasi  adalah  Saccharomyces.  Jenis  mikroorganisme  yang  paling  sering  ditemukan adalah Mucor dan Rhizopus yang ditemukan pada hampir semua kultur in vitro yang terkontaminasi. Hasil penelitian Andriani dan Heriansyah, (2021),  pada kultur anggrek menunjukka  bahwa jamur kontaminan yang tumbuh didominasi jamur dengan warna putih dan abu-abu dengan bentuk permukaan kasar. Karakter mikroskopik sebagian besar memiliki hifa bersekat/bersepta dan tidak memproduksi spora. Jamur kontaminan yang ditemukan dari jenis Rhizoctonia sp. dan Mucor sp. Jenis  jamur  yang  banyak  dijumpai  menyerang  bibit  pisang,  yaitu Fusarium  oxysporum Schlecht.f.sp.cubense, penyebab layu Fusarium ; Mychosphaerella musicola Mulde r, penyebab bercak daun Mycosphaerella atau Sigatoka; Cordana musae (Zimm.) Hohn., penyebab bercak daun Cordana ; Curvularia  lunata ,  penyebab  bercak  daun;  dan Cladosporium  musae Mason,  penyebab  burik (Soesanto et al ., 2012).
Hasil Pengamatan pewarnaan Gram menunjukkan bakteri bersifat Gram positif. Bakteri gram positif pada pewarnaan Gram berwarna ungu akibat  zat warna kristal violet-yodium tetap bertahan walaupun  telah  diberi  larutan  alkohol.  Tidak  ditemukan  bakteri  kelompok  gram  negatif.  Bakteri gram negatif  kondisi yang terjadi pada bakteri gram negatif akan berwarna merah sebab kompleks tersebut larut pada saat pemberian larutan alkohol sehingga mengambil warna merah safranin.  Hasil pengamatan menunjukkan semua bakteri penyebab kontaminasi pada semua perlakuan termasuk dalam kelompok bakteri gram positif (Tabel 1). Kontaminasi yang disebabkan bakteri pada kultur
Gambar 4. Pengamatan fungi secara makroskopis (A) Aspergillus sp.; (B) Rhizoctonia sp.; (C) Rhizopus sp.; (D) Colletotrichum sp.
Gambar  5.  Pengamatan  fungi  secara  mikroskopis,    (A) Aspergillus sp.;  (B) Rhizoctonia sp.;  (C)
Rhizopus sp.; (D) Colletotrichum sp.
Gambar 6.  Pengamatan bakteri, (A) secara makroskopis; (B) secara mikroskopis
pisang  Cavendish  lebih  banyak  disebabkan  oleh  bakteri  yang  ditemukan  pada  enam  perlakuan daripada  yang  disebabkan  oleh  jamur  (lima  perlakuan)  (Tabel  1).  Kontaminasi  bakteri  secara makroskopis  dapat  dilihat  adanya  lendir  yang  ditemukan  pada  bagian  eksplan  dan  media  tanam. Hasil pengamatan secara makroskopis dan mikroskopis bakteri penyebab kontaminasi pada kultur jaringan pisang dapat dilihat pada Gambar 6.

## 4.  KESIMPULAN
Jenis  kontaminasi  yang  menyerang  kultur  pisang  cavendish  dengan  menggunakan  eksplan bonggol pisang disebabkan oleh jamur dan bakteri. Jenis bakteri yang menyerang adalah Aspergillus sp.,
Colletotrichum sp. , Rhizoctonia sp. dan Rhizopus sp. Bakteri yang menyerang kultur semua  termasuk dalam golongan bakteri gram positif.
Penambahan perlakuan asam sitrat dan asam askorbat atau kombinasi keduanya pada teknik sterilisasi  permukaan  mengakibatkan  persentase  kontaminasi  yang  beragam.  Peningkatan konsentrasi asam sitrat dan asam askorbat tidak mengakibatkan penurunan tingkat kontaminasi. Kontaminasi terendah pada perlakuan asam sitrat 2 mg L -1 .

## 5. UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih disampaikan kepada Kepala Kebun Percobaan Fakultas Pertanian, yang telah memberikan bahan tanam untuk sumber ekspan pada penelitian ini.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
Alexopoulos, C.J., C.W. Mims, & M. Blackwell. 1996. Introductory Mycology. Ed. ke-New York: John Willey and Sons Inc .
Apriani, R. T.M.R. Kurnianingsih, & Fitrahtunnisa. 2016. Penggunaan BA pada mikropropagasi pisang ( Musa paradisiaca L.) kultivar Kusto. Jurnal Biologi Tropis. 16(1):33–40.
Andriani,  D.  &  P.  Heriansyah.  2021.  Identifikasi  jamur  kontaminan  pada  berbagai  eksplan  kultur jaringan anggrek alam ( Bromheadia finlaysoniana (Lind.) Miq. Agro Bali: Agricultural Journal. 4(2):192–199.
Barnett,  H.L.,  &  B.B.  Hunter.  1972.  Illustrated  Genera  Of  Imperfect  Fungi.  Burgess  Publishing Company, Mineapolis. United States Of America.
Nisa, C. & Rodinah. 2005. Kultur jaringan beberapa kultivar buah pisang ( Musa paradisiaca L.) dengan pemberian campuran NAA dan kinetin. Biocientiae . 2 (2): 23–36. Dickman, M.W. 1993. The Fungi. Academic Press. New York
Dzikrana,  R.,  E.D.  Sulichantini,  &  Eliyani.  2018.  The  effect  of  kinetin  concentration  on Eucalyptus pellita F.  Muell  micro  cutting  growth  (in  vitro). Jurnal  Agroekoteknologi  Tropika  Lembab. 1(1):34–37.
Gunawan, L.W. 1992. Teknik Kultur Jaringan Tumbuhan. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi, Pusat Antar Universitas Bioteknologi IPB, Bogor.
Habibah, N. A., Sumadi, & S. Ambar. 2013. Optimasi sterilisasi permukaan daun dan eliminasi endofit pada Burahol. Biosaintifika. 5 (2):95–98.
Hidayah, V.N & P. Dewanti. 2023. Pengaruh BAP(6-Benzylaminopurine) dan 2.4-D (Dichlorophenoxy acetic acid) pada mikropropagasu tebu ( Saccharum officinarum L.) melalui metode thin layer. Jurnal Agrotek Tropika . 11(1): 89–95.
Lukmana,  M.  dan  L.  Rahmawati.  2018.  Sterilization  effectiveness  of  rubber  leaf  explant  ( Hevea brasiliensis ) in in-vitro culture. Bioprospek . 13(1):19–25.
Murashige, T. and F. Skoog. 1962. Murashige1962Revised.Pdf. Physiologia Plantarum. 15:474–497. Putri,  I.  A.,  T.  Herawan,  Prastyono,  P.,  dan  L.  Haryjanto.  2017.  Pengaruh  teknik  sterilisasi  explan terhadap  tingkat  perolehan  kultur  jaringan  aksenik  ramin  ( Gonystylus  bancanus ). Jurnal Pemuliaan Tanaman Hutan. 11(2): 131–138.
Sabahannur, St. 2020. Penggunaan NaCl dan asam sitrat untuk memperpanjang umur simpan dan mutu cabai rawit (Capsicumfrutescent L.). Jurnal Galung Tropika . 9 (1): 31–40. Shofiyani, A. & O.D. Hajoeningtijas. 2010. Pengaruh sterilan dan waktu perendaman pada eksplan daun kencur ( Kaemferia galanga L.) untuk meningkatkan keberhasilan kultur kalus. Agritech. 12(1):11–29.
Shofiyani,  A.  &  G.P.  Budi.  2011.  Upaya  pengembangan  tanaman  pisang  mas  ( Musa  paradisiaca L.) bebas patogen melalui metode kultur meristem. Agritech . 13(1):46–66.
Sukartini,    S.  Ramadiana,  D.  Hapsoro.    2014.    Pengaruh  vitamin  B  dan  benziladenin  terhadap pertumbuhan  bibit  anggrek    Phalaenopsis  hasil  kultur  jaringan.  Jurnal  Agrotek  Tropika. 2(3):358–363 .
Soesanto, L., E. Mugiastuti, F. Ahmad, & W. Witjaksono. 2012. Diagnosis lima penyakit utama karena jamur  pada  100  kultivar  bibit  pisang. Jurnal  Hama  dan  Penyakit  Tumbuhan  Tropika. 12(1):36–45.
Sulichantini,  E.D.,  Eliyani,  A.P.D.  Nazari,  Susylowati,  &  A.  Saputra.  2021.  Pengaruh  zat  pengatur tumbuh dan bahan organik terhadap pertumbuhan anggrek tebu Grammatophyllum speciosum Blume secara kultur jaringan. Jurnal Agroekoteknologi Tropika Lembab. 4(1):13–19. Sulichantini,  E.D.,  Eliyani,  A.P.D.  Nazari,  Susylowati,  &  A.  Saputra.  2021.  Respon  pertumbuhan anggrek tebu ( Grammatophyllum speciosum Blume) Secara in vitro terhadap pemberian benzyl amino purin, kinetin, naphthalene acetic acid dan ekstrak ambon dalam media Murashige And Skoog. Ziraa’ah. 46(1):59–69.
Sulichantini, E.D., A.P.D.N, Nazari,  & A. Nuansyah. 2023. Aplikasi kombinasi jenis dan konsentrasi antioksidan yang berbeda sebagai penghambat browning pada perbanyakan pisang cavendish secara kultur jaringan. Jurnal Agroekoteknologi tropika Lembab. 5 (2): 78–83.
Susilowati, A. & S. Listyawati. 1970. Source of contaminant microorganisms in vitro culture at Sub lab.  Biology,  Central  Laboratory  of  Mathematics  and  Sciences,  Sebelas  Maret  University. Biodiversitas Journal of Biological Diversity. 2(1):110–114.
Zimik, M. & N. Arumugam. 2017. Induction of shoot regeneration in cotyledon explants of the oilseed crop Sesamum indicum L. Journal of Genetic Engineering and Biotechnology. 15(2):303–308.