## Andrografolid : Potensi Sebagai Antiaterosklerosis Pada Sitokin Il-1β
Andrographolide : Potency as Antiatherosclerosis in Il-1β Cytokine
Putu Yudha Ugrasena 1 , Iwan Saka Nugraha 1 , Ni Wayan Rika Kumara Dewi 1
1 Program Studi S1 Farmasi Klinis Komunitas, Institut Teknologi dan Kesehatan Bintang Persada
DOI: https://doi.org/10.35816/jiskh.v12i1.991 Received: 2022-12-01 / Accepted: 2023-04-04/ Published: 2023-06-01
©The Authors 2023. This is an open-access article under the CC BY 4.0 license

## ABSTRACT
The focus is how the role of cytokines in atherosclerosis as a chronic inflammatory disease, as it is known that  cytokines  regulate  complex  inflammatory  responses  in  atherosclerotic  plaques  especially  IL-1β. Sambiloto  (Andrographis  Paniculata)  is  a  plant  with  various  pharmacological  activities  with andrographolide (AND) is the main bioactive compound belonging to  the diterpene lactone group. The purpose  of  this  literature  study  is  the  potential  of  AND  on  the  proinflammatory  cytokine  IL-1  β  as  an antiatherosclerosis. This type of research is a qualitative review of various studies on the use of sambiloto plants  or  andrographolide  compounds  (AND).  Search  literature  using  the  Google  Scholar  database. Keywords  used  "Andrographis  paniculata,  andrographolide,  IL-1β,  Atherosclerosis.  The  results  showed that  AND  has  effects  as  an  anti-inflammatory,  antiatherosclerosis  as  well  as  cardiovascular-related diseases. There are not many articles on the activity of AND in IL-1β against atherosclerosis, but AND is able to provide inhibitory activity of the cytokine IL-1β against inflammation. Not many researchers have discussed the pharmacological effects of AND as an antietherosclerosis on IL-1β therapeutic targets, but from the results of the review AND has a strong potential in inhibiting IL-1 cytokine secretion β.
Keywords : andrographis paniculata, andrographolide, il-1β, atherosclerosis.

## ABSTRAK
Fokus utama yaitu bagaimana peran sitokin pada aterosklerosis sebagai penyakit inflamasi kronis, seperti yang diketahui bahwa sitokin mengatur respons inflamasi kompleks dalam plak aterosklerotik khususnya IL- 1 β. Sambiloto ( Andrographis Paniculata ) merupakan tanaman dengan berbagai aktivitas farmakologi dengan andrografolid (AND) merupakan senyawa bioaktif utama yang termasuk golongan diterpen lakton. Tujuan  studi  literatur  ini  yaitu  potensi AND  pada  sitokin  proinflamasi  IL-1  sebagai  antiaterosklerosis. Jenis penelitian merupakan tinjauan kualitatif dari berbagai penelitian penggunaan tanaman sambiloto atau senyawa andrografolid (AND). Pencarian literature menggunakan database Google Scholar . Kata kunci yang  digunakan  “ Andrographis  Paniculata , Andrographolide ,  IL-1β,  Aterosklerosis.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa AND  memiliki  efek  sebagai  antiinflamasi,  antiaterosklerosis  serta  penyakit  yang berhubungan dengan cardiovascular. Tidak banyak ditemukan artikel mengenai aktivitas AND pada IL-1β terhadap  aterosklerosis,  namun  AND  mampu  memberikan  aktivitas  penghambatan  pada  sitokin  IL-1β terhadap inflamasi. Belum banyak peneliti membahas efek farmakologi AND sebagai  antieterosklerosis pada target terapi IL-1β namun dari hasil tinjauan AND memiliki potensi kuat dalam menghambat sekresi sitokin IL-1  . Kata Kunci : andrographis paniculata , andrografolid, il-1β, aterosklerosis
Corresponding author Nama : Yudha Ugrasena Email : ugrasenayudha@gmail.com

## Pendahuluan
Aterosklerosis  merupakan  kondisi  perubahan  patologi  vaskular  yang  ditandai  dengan peradangan  dan  plak  didinding  arteri  [1]. Aterosklerosis  adalah  penyakit  arteri  progresif  yang nantinya  dapat  berkembang  menjadi  penyakit  jantung  dan  stroke.  Kondisi  aterosklerosis  dari cedera  awal  pada  endotel  arteri  yang  disebabkan  oleh  faktor  mekanis  dan  lingkungan, mengakibatkan  respon  inflamasi  pada  dinding  pembuluh  darah  [2].  Penyakit  aterosklerotik kardiovaskular  (ACD)  meliputi  dua  kondisi  utama:  penyakit  jantung  iskemik  (IHD)  dan serebrovaskular  (terutama  stroke  iskemik).  IHD  dan  stroke  adalah  masing-masing  penyebab kematian pertama dan ketiga di dunia 247,9 kematian/ 100.000 orang pada 2013, mewakili 84,5% kematian kardiovaskular dan 28,2% dari semua penyebab kematian. Komplikasi aterosklerosis dengan  prevalensi  kecil  termasuk  aterosklerosis  aorta  dan  penyakit  vaskular  perifer  [3],  [4]. Proses inflamasi pada fase awal aterosklerosis dapat terjadi karena paparan LDL teroksidasi pada makrofag, kemudian pada fase lanjut inflamasi meningkat dengan paparan 'molekul tersembunyi' pada makrofag. Paparan LDL yang teroksidasi secara terus-menerus dan 'molekul tersembunyi' menyebabkan makrofag lebih aktif dan lepasnya sitokin proinflamasi, termasuk IL-1, IL-6, IL-17 dan TNF-α. Sitokin proinflamasi ini dapat menyebabkan kecenderungan diferensiasi sel T naif menjadi  sel  T  efektor  proinflamasi,  sel  Th1,  Th2  dan  Th17  daripada  menjadi  sel  T counter- inflammatory [5].  Fokus  utama  yaitu  bagaimana  peran  sitokin  pada  aterosklerosis  sebagai penyakit  inflamasi  kronis,  seperti  yang  diketahui  bahwa  sitokin  mengatur  respons  inflamasi kompleks dalam plak aterosklerotik [6].
Interleukin (IL) -1 merupakan pro-inflamasi sitokin yang menginduksi produksi sitokin dan kemokin  serta  meningkatkan  ekspresi  adhesi  molekul pada  sel  endotel,  sehingga  mengarah ke perekrutan sel inflamasi. Selain itu, IL-1 berkontribusi pada perkembangan kerusakan jaringan dengan  merangsang  selproliferasi  dan  pelepasan  matriks  metaloprotease  [7].  IL-1α  dan  IL-1β adalah sitokin proinflamasi yang diproduksi oleh sel myeloid. Sekresi sitokin keluarga IL-1 dan ekspresi  reseptornya  meningkat  pada  aorta  aterosklerotik.  IL-1β  merupakan  faktor  esensial diferensiasi  sel  Th17  yang  dapat  memperburuk  inflamasi  pada  dinding  pembuluh  darah. Eksperimen pada model tikus mengkonfirmasi sifat proaterogenik IL-1α dan IL-1β yang terlibat dalam peningkatan regulasi ekspresi molekul adhesi oleh sel endotel serta aktivasi makrofag [8]. Sambiloto ( Andrographis paniculata (Burm.f.) Ness) telah banyak digunakan sebagai pengobatan alternative di Negara India, Pakistan, Sri Lanka dan Negara Asia Tenggara termasuk Indonesia [9]. Pada studi fitokimia sambiloto disebutkan bahwa andrografolid (AND) merupakan senyawa bioaktif utama yang termasuk golongan diterpen lakton dan ditemukan golongan senyawa aktif lain  seperti  terpenoid,  glikosida,  flavonoid,  asam  kuinat,  xanthone  dan  noriridoids  [10][11]. Berdasarkan kandungan bioaktif sambiloto yang melimpah, sambiloto memiliki beberapa  efek farmakologi seperti sebagai antikanker, hepatoprotektif, antivirus, efek antipiretik dan analgesik, imunomodulator, antioksidan, antiinflamasi dan aktivitas antimikroba [10].
Kaitannya  terhadap  aterosklerosis  bahwa  AND  memiliki  efek  menghambat  sitokin proinflamasi pada aterosklerosis. IL-1β dan TNF-α termasuk sitokin yang memiliki peran penting dalam respon inflamasi dan sejumlah besar penelitian telah dicoba untuk menggambarkan peran sitokin ini dalam aterogenesis [12]. Setelah mengikat IL-1 reseptor (IL-1R), IL-1 menginduksi produksi  sitokin  dan  kemokin  serta  ekspresi  adhesi  molekul  pada  sel  endotel  (EC),  sehingga mengarah  keperekrutan  sel  inflamasi.  Selain  itu,  IL-1  berkontribusi  untuk  perkembangan kerusakan  vaskular  dengan  merangsangproliferasi  dan  diferensiasi  sel  serta  pelepasan  enzim pengurai  matriks  (8)(12).  IL-1β  adalah  faktor  penting  diferensiasi  sel  Th17  yang  dapat memperburuk  peradangan  pada  dinding  pembuluh  darah.  Eksperimen  dalam  model  tikus mengkonfirmasi sifat proatherogenik dari IL-1α dan IL-1β yang terlibat dalam upregulasi ekspresi molekul adhesi oleh sel endotel serta aktivasi makrofag [8]. Sitokin IL-1α, IL-1β dan IL-18 pro- inflamasi  memainkan  peran  utama  dalam  perkembangan  penyakit  aterosklerosis  [13].  Pada penelitian sebelumnya bahwa pemberian andrographolide secara mampu menghambat pelepasan
dan  ekspresi  mRNA TNF- 𝛼 ,  IL-6,  dan  IL-1 𝛽 pada  sel  RAW264.7  yang  mengalami  stimulasi lipopolisakarida (LPS) [14]. Disebutkan pula rasio IL-1/ IL-1Ra memainkan peran penting dalam mekanisme peradangan vaskular dan aterosklerosis pada tikus ApoE [7]. Pemberian AND pada kelinci  aterosklerosis  yang  diinduksi Porphyromonas  gingivalis ( Pg )  juga  menunjukkan penurunan kadar IL-1 𝛽 [15]. Oleh karena itu perlu diulas mengenai potensi aktivitas penggunaan sambiloto dan senyawa AND dalam usaha preventif ataupun kuratif pada aterosklerosis. Beberapa penelitian menunjukkan agen antiinflamasi yaitu antibodi monoklonal anti-interleukin-1-beta (IL- 1β), Canakinumab, dalam uji klinis Canakinumab Anti-inflammatory Thrombosis Outcome Study (CANTOS)  menunjukkan  hasil  positif  pada  penurunan  peradangan  dan  menjadi  target  terapi aterosklerosis  [16].  Sehingga  diharapkan  nantinya  sambiloto  ataupun  AND  mampu  menjadi alternative pada pengobatan dengan target terapi IL-1 β pada aterosklerosis.

## Metode
Penelitian  ini  merupakan  review  kualitatif  dari  berbagai  penelitian  penggunaan  tanaman sambiloto  atau  senyawa  andrografolid  (AND)  secara  preventif  ataupun  kuratif  melalui  target terapi IL-1β pada aterosklerosis. Metode analisa data dilakukan secara kualitatif dengan pencarian pada  aktivitas  and  terhadap  IL-1β  pada  aterosklesrosis  dan  penyakit  kardiovaskular  lainnya, aktivitas and terhadap sitokin proinflamasi IL-1β, aktivitas herbal lainnya terhadap IL-1β pada aterosklerosis.  Pencarian  literature  menggunakan  database Google  Scholar .  Kata  kunci  yang digunakan “ Andrographis Paniculata , Andrographolide ,  IL-1β, Aterosklerosis. Tanaman yang menjadi  fokus  adalah  Sambiloto  ( Andrographis  paniculata (Burm.f.)  Ness ) dan  senyawa aktif/biomarker  yang  digunakan  yaitu  andrografolid  (AND).  Sumber  data  merupakan  artikel penelitian primer yang dipublikasikan dalam bahasa Inggris dan/atau bahasa Indonesia. Kriteria inklusi  artikel  penelitian  sebagai  sumber  data  penelitian  mengenai  aktivitas  sambiloto  ataupun AND  terhadap  kadar  IL-1β  pada  aterosklerosis  atau  penyakit  yang  berhubungan  dengan aterosklerosis.  Serta  ditelusuri  pula  aktivtas  AND  terhadap  kadar  IL-1β  sebagai  proinflamasi sitokin. Metode analisis data secara kualitatif dengan mendeskripsikan bentuk sediaan tanaman yang  dikonsumsi,  dosis  penggunaan,  durasi  pemberian,  subjek  penelitian,  hasil  pengukuran sitokin IL-1β pada penggunaan sambiloto ataupun AND pada aterosklerosis.

## Hasil
Hasil penelurusan pustaka sebagai sumber data menggunakan media pencari online yaitu Google Scholar Diperoleh hasil seperti tabel 1.
Tabel 1. Potensi Aktivitas AND terhadap IL-1β pada Aterosklesrosis dan Penyakit Kardiovaskular Lainnya Sumber Bentuk Sediaan Subjek Penelitian Perlakuan Indikator Terukur Jia Shu et al , 2020 [17] Senyawa andrografolid standar  sigma aldrich Tikus  Jantan Sehat  C57BL/ 6 usia 8 minggu Tikus dibagi ke dalam 5 kelompok secara acak (n=10), Tikus di injeksikan vitamin  D3  (600.000 U/kg) untuk pengkondisian CHD - Kelompok Normal - Kelompok Andro (50mg/kg) - Kelompok CHD - CHD + Andro (10mg/kg) - CHD +Andro Dibandingkan dengan kelompok CHD, kelompok  CHD+AND 10mg/kg) * dan  CHD +AND (50mg/kg) ** menurunkan kadar IL-1β  berkaitan  dengan terjadinya inflamasi pada sistem kardiovaskular ( * P<0,05; ** P<0,01)
(50mg/kg) Durasi perlakuan selama 42 hari.
Batran et al , 2014 [15] Senyawa andrografolid standar  sigma aldrich (USA) Kelinci  jantan putih New Zealand, berat 3-3,5 Kg. Kelinci dibagi menjadi 5 kelompok acak (n=6). - Kelompok Normal - Kelompok Aterogenik - Kelompok kontrol positif (atorvastatin) - Kelompok aterogenik + AND (10mg/kg) - Kelompok aterogenik +AND (20mg/kg) Kelinci kelompok aterogenik diberikan Porphyromonas gingivalis (Pg) ATCC 33277 (0,2mL dari 1,5 × 10 𝑥 12
sel  bakteri  /  mL  dalam
2%  CMC  dengan  PBS)
5 kali seminggu selama 12 minggu. Kelompok perlakuan diberikan  AND  5  kali seminggu selama 12 minggu
Pengukuran kadar
IL-1β  dengan  ELISA (Abscam, USA). Kelinci pada kelompok aterogenik secara signifikan  lebih  tinggi kadar  IL-1 𝛽 ( 𝑃 <0,05) pada  nilai  84,33  ±  0,67
(pg / mL), dibandingkan dengan
kelompok kontrol normal. Khususnya, kelinci  yang  diberikan AND 10mg/kg dan AND 20mg/kg memiliki tingkat IL-1 𝛽 yang lebih rendah secara signifikan,  pada  nilai 62,45 ± 1,43 (pg  /  mL)  dan  55,95  ± 1,16 (pg / mL)dibandingkan dengan kelompok aterogenik
Pencarian dilakukan juga terhadap aktivitas AND pada pengambatan sitokin proinflamasi IL-1β. Dirangkum berdasarkan tabel 2.
Tabel 2. Aktivitas AND terhadap sitokin proinflamasi IL-1β Sumber Bentuk Sediaan Subjek Penelitian Perlakuan Indikator Terukur Chandrase karannn et al, 2010 [18] Ekstrak Andrographis paniculata (AP) Kultur sel makrofag murine J774A.1 (TIB-67TM), HL-60  kultur sel leukemiapromy elocytic
manusia (CCL- 240TM) dan kultur sel leukemia basofilik RBL-
2H3tikus(CRL- 2256TM) Makrofag murine J774A.1 disemai pada
kepadatan 1x10 5 sel / sumur dan diinkubasi. Makrofag itu diberikan AP pada konsentrasi non- sitotoksik yang berbeda(5-40 µg/mL) dan diinkubasi selama 1 jam, LPS (5 µg / mL) ditambahkan dan inkubasi selama 6 jam. Sel-sel tersebut dilisiskan menggunakan buffer lisis sel [0,1% Triton X-100
AP menunjukkan penghambatan IL- 1 β dalam sel J774A.1 pada dosis 5, 10, 20, 30, 50 µg / mL. Penghambatan maksimum diamati pada dosis 30 dan 40 µg / mL (P<0,01 dibandingkan tanpa AP).
dan penghambat protease (1 ×)] dalam kombinasi dengan siklus freeze thaw yang berulang.Plat disentrifugasi dan
supernatan dikumpulkan. tingkat IL-1 βdiukur dengan kit ELISA. Dexamethason digunakan sebagai senyawa standar. Li et al , 2017 [19] Senyawa andrografolid ( Control of pharmaceutical and Biological Product, Beijing,China)
Sel makrofag monosit tikus RAW264.7 dari Universitas Jilin(Changchun , Cina) Sel RAW264.7 (2 × 10 6 sel / ml, dengan 2 ml masing-masing sumur) diinkubasi dengan penambahan konsentrasi AND yang berbeda (6.25, 12.5, dan25 𝜇 g / ml) selama
1 jam, diikuti dengan stimulasi
dengan LPS (l 𝜇 g / ml) selama 18 jam. Supernatanselkemudian digunakan untuk mengukur sitokin proinflamasi IL-1 𝛽
Efek AND pada sekresisitokin proinflamasi di sel RAW264.7 yang distimulasi LPS menggunakan ELISA. Hasil menunjukkan bahwa AND secara signifikanmenghambat ekspresi TNF- 𝛼 , IL-6, dan IL-1 𝛽 dalam  sel
RAW264.7 yang distimulasi LPS (P<0,01) Kim et al , 2019 [20] AND(Pubchem CID: 5318517) diperoleh dari Selleckchem (Houston, TX, USA), Purity > 99% Kultur sel makrofag murine RAW 264.7 diperoleh dari Shanghai Institute for Biological Sciences RAW264.7 (5 × 10 5 sel / ml di 12- well plate ) sel diberi perlakuan awal dengan atau tanpa Andro selama 1 jam kemudian diinkubasi dengan atau tanpa LPS selama 12 jam (untuk pengujian ELISA) dan supernatant dikumpulkan. Konsentrasi IL-1β ditentukan menggunakan Duo Set ELISA Kits (R&D Systems, Minneapolis, MN, AS). Perlakuan untuk menentukan produksi mRNA dengan isolasi total RNA RAW264.7 menggunakan RNAiso Plus. 1 μg dari RNA ditranskripsikan
Hasil ELISA menunjukkan produksi IL-1β menurun pada konsntrasi 1 µM dan 10 µM (p<0,05). Pada ekspresi mRNA bahwa kedua konsentrasi menurunkan ekspresi mRNA IL-1β dengan konsentrasi 1 µM (p<0,05) dan 10 µM (p<0,001).
secara terbalik menjadi cDNA menggunakan Prime Script RT Reagent Kit . Siklus PCR sebagai berikut: 95 ° C selama 10 menit, diikuti oleh 40 siklus 95 ° Cselama 15 detik dan 60 ° C selama 1 menit. Kelompok
perlakuan yaitu - Kelompok Normal - Kelompok LPS - Kelompok LPS+AND 1µM - Kelompok LPS+ AND 10µM Zhu et al , 2013 [21] Standar AND Mencit BALB/C jantan berusia 6 minggu dengan berat (16-20 g). 40  mencit BALB / c jantan dibagi secara acak menjadi 4 kelompok (n = 10) : - kelompok kontrol - kelompok LPS - kelompok perlakuan AND (Sigma, St.Louis, MO, USA) dosis rendah (1 mg/kg,
LPS + Andro-
Kelompok L) - kelompok perlakuan AND dosis tinggi - (10 mg / kg, kelompok LPS + Andro-H). 3 hari setelah injeksi
LPS, dengan atau tanpa pemberian AND mencit di buat preparat paru-parunya untuk melihat sitokin proinflamasi IL-1β dengan ELISA
Hasilnya kelompok dengan AND dosis rendah dan tinggi menunjukkan penurunan jumlah IL- 1β pada paru- paru mencit. Nilai signifikansi untuk AND dosis rendah yaitu p<0,01 dibandingkan kontorl dan kelompok LPS, untuk AND dosis tinggi yaitu p<0,01 dibandingkan kontrol, kelompok LPS, dan AND dosis rendah
Thakur et al , 2015 [22] Isolat AND (99.0% pure by HPLC) Kultur sel HL- 60 Sel HL-60 dikultur (1x10 6 sel / sumur / ml media RPMI)dalam 24 plat sumur. Ekspresi sitokinIL-1β dihitung dengan metode RT- PCR ( High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit,
Inkubasi sel dengan 10 μM andrographolide secara signifikan menekan ekspresi darisitokin anti-inflamasi IL-1β (p<0,05)
Applied BiosystemsTM, USA ).
Dilakukan pula pencarian terhadap potensi beberapa herbal yang memiliki aktivitas antiaterosklerosis pada target terapi IL-1β

## Tabel 3. Aktivitas herbal lainnya terhadap IL-1β pada aterosklerosis
Sumber Herbal dan Bentuk Sediaan Subjek Penelitian Perlakuan, Dosis, dan Durasi Konsumsi Indikator Terukur Xu et al , 2015 [23] Salviae miltiorrhizae /
Senyawa
Salviolic Acid
B (SAB purity 98% determined by HPLC)
Kultur sel endotel manusia EA.hy926 Inkubasi Sel EA.hy926 dengan platelet teraktivasi Dalam kelompok SAB,
sel endotel diberi perlakuan dengan SAB (konsentrasi 1, 0, 1, 5, 10 μg /ml masing- masing) selama 24 jam. Ko-kultur sel endotel dengan platelet dilakukan pada suhu 37 ° Cselama 12 jam. Ekspresi sitokin pro-inflamasi IL- 1βditentukan dalam supernatan kultur dengan Bead Based Multiplex
Flow Cytometrykit 5- plex kustom Aimplex® . Ekspresi mRNA IL-1β ditentukan dengan metode RT-PCR. Sel EA.hy926 dipanen dan total RNA diekstraksi. Selanjutnya dilakukan Real-time Quantitative RT-PCR Analysis
SAB Menghambat Ekspresi mRNA dan Pelepasan ProteinIL-1βdi sel EA.Hy926yang Diinduksi platelet. Dosis SAB 5 μg/ ml memberikan penurunan dengan nilai p<0,05 dan dosis SAB 10μg/ ml memberikan penurunan ekspresi dan pelapasan sitokin dengan nilai p< 0,01.
Liu et al , 2017 [24] Curcuma Wenyujin / senyawa β- Elemene dengan kemurnian 99.3% Mencit ApoE-/- jantan umur 4 Minggu degan genetik
C57BL/6 diperoleh dari Universitas Nanjing di Cina Mencit diberi makan diet tinggi lemak (HFD)
selama 16 minggu sebelum sebelum pemeriksaan aterosklerosis.Profil ekspresi sitokin pada lisat jaringan aorta mencit dilakukandengan array profiler proteome . Terdapat tiga kelompok dalam uji ini, yaitu kelompok kontrol,
HFD, dan β-Elemene
Pengaruh pemberian β-elemene pada aorta. Profil ekspresi sitokin di Arteri mencit dianalisis menggunakan Sitokin Array Proteome Profiler . IL-1β pada pemberian β- Elemene menunjukkan penurunan signifikan dibandingkan
dengan kelompok HFD
p<0,01
Wang et al , 2016 [25] Pogostemonis herba / Senyawa standar Patchouli alcohol (PA) Mencit ApoE KO usia  2 bulan. Mencti dibagi secara acak menjadi dua kelompok (diobati dengan PA vs.
tidak diobati, n = 16 untuk setiap kelompok) dan menjalani diet aterogenik yang mengandung 0,25% kolesterol(Sigma) dan 20% lemak babi selama 10 minggu. Untuk kelompok yang diobati dengan PA, PA disuspensikandalam minyak zaitun dan diadministrasikan secara intragastrik pada 40 mg / kg setiap hari selama pemberian makan aterogenik, sementara minyak zaitun dengan volume sama diberikan pada kelompok non-PA (kontrol)
Ekspresi IL-1β ditentukan
menggunakan RT-PCR.
Eksrpesi sitokin dengan pemberian PA dibandingkan
kelompok kontrol terjadi penurunan signifikan dengan nilai p<0,001 He et al , 2014 [26] Allium Fistulosum / ekstrak batang bawang fistular Tikus Sprague Dawley jantan (umur, 12 minggu; berat, 200-250 g) 30 tikus dibagi secara acak menjadi 3 kelompok sebagai berikut:
kelompok kontrol (n = 10), kelompok aterosklerosis dengan pengobatan non ekstrak (model, n = 10) dan kelompok aterosklerosis dengan pengobatan ekstrak batang bawang fistular (pengobatan, n = 10).Aterosklerosis diinduksi dengan makanan diet tinggi lemak dan vitamin D2. Kelompok perlakuan diberi pakan yang sama, dan ekstrak batang bawang fistular diberikan perfusi lambung (20 mg / kg) mulai minggu kelima

## Pembahasan
Pada hasil penelitian diatas bahwa AND memiliki efek antiinflamasi dan antiaterosklerosis serta  penyakit  yang  berhubungan  dengan  cardiovascular.  AND  dan  turunannya  menurunkan regulasi molekul adhesi, sitokin proinflamasi, kemokin, lipid mediator dan NO, terutama dengan menghambat  aktivasi  NF-κB  [20].  Dalam  review  tidak  banyak  ditemukan  artikel  mengenai aktivitas AND pada IL-1β terhadap aterosklerosis, namun AND mampu memberikan aktivitas penghambatan  pada  sitokin  IL-1β  terhadap  beberapa  penyakit  lainnya  seperti  inflamasi.IL- 1βmerpakan salah satu sitokin inflamasi terpenting dan memicu serangan akut pada inflamasi lokal  dan  sistemik.Juga  berkontribusi  pada  beberapa  penyakit  kronis  [27].  Pada  tabel  1 disebutkan  bahwa AND  memberikan  potensi  terhadap  sekresi  IL-1β  pada  aterosklerosis  dan CHD.  Sekresi  sitokin  keluarga  IL-1  dan  ekspresi  reseptornya  meningkat  pada  aorta aterosklerotik.  IL-1β  merupakan  faktor  penting  dari  diferensiasi  sel  Th17  yang  dapat memperburuk inflamasi pada dinding pembuluh darah [8].
IL-1β  mempercepat  permeabilitas  endotel  dan  merangsang  pelepasan  kemokin,  yang mengarah  ke  akumulasi  sel-sel  inflamasi  termasuk  neutrofil  dan  makrofag  [17].  Berdasarkan hasil review bahwa AND mengalihkan polarisasi makrofag dari subset pro-inflamasi ke subset anti-inflamasi,  menurunkan  kadar  TNF-α,  MCP-1,  dan  hs-CRP,  IL-1β,  hal  ini  menunjukkan bahwa AND menekan inflamasi miokard pada tikus dengan penyakit jantung koroner. Keluarga IL-1 terdiri dari empat protein denganurutan homologi yaitu IL-1α, IL-1β, IL1 reseptor antagonis (IL-1ra), dan IL-18. Reaktivitas IL-1β ditemukan dalam monosit, makrofag, EC, dan VSMC pada plak  aterosklerotik.  [15].  Pada  penelitian  tabel  1  bahwa  setelah  12  minggu  pengobatan AND dengan  induksi Porphyromonas  gingivalis (Pg),  kadar  IL-1β  dalam  serum  menurun  setelah pemberian  AND.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  AND  dapat  mencegah  aterosklerosis,  dengan mengurangi  inflamasi  pada  pembuluh  darah.  Sebagai  kontrol  positif  bahwa  atorvastatin  (AV) telah secara signifikan menurunkan kadar IL-1, hal ini dikarenakan AV termasuk dalam kategori statin,  dan  statin  dapat  berperan  sebagai  agen  antiinflamasi  serta  memiliki  efek  penurun lipid [17].  Mekanisme  IL-1  termasuk  IL-1β  pada  aterosklerosis  menyebabkan  terjadinya  disfungsi endotel.
IL-1 menstimulasi pelepasan endotelin-1 yang merupakan suatu vasokonstriktor yang kuat. IL-1 juga menstimulasi inducible nitricoxide synthase (iNOS) yang menyebabkanpeningkatan pembentukan  ROS  dan reactivenitrogen  species  (RNS) seperti  nitrotyrosine  yang  selanjutnya akan  menyebabkan  stres  oksidatif  dan  disfungsi  endotel  [28].  Aktivitas  AND  sebagai antiaterosklerosis  pada  IL-1  searah  dengan  aktivitasnya  sebagai  antiinflamasi.  Penghambatan pada Isoform IL-1α dan IL-1β keduanya maemiliki aktivitas menurunkan tingkat keparahan lesi aterosklerosis. Namun netralisasi IL-1α tidak signifikan dalam menurnukan atheromata karena sitokin ini terlibat pada fase awal, berbeda pada IL-1β yang menyebabkan evolusi inflamasi awal hingga atheroma [29]. Pada tabel 2 disebutkan bahwa AND memiliki aktivitas yang kuat dalam menghambat pelepasan mediator pro inflamasi seperti IL-1β.
Disebutkan bahwa ekstrak Andrographis paniculata dan AND dilaporkan dapat menghambat IL-1β pada sel makrofag [18]–[20]. Makrofag berperan penting dalam proses inflamasi. Ketika inflamasi dipicu oleh suatu pathogen, makrofag mengenali PAMPs melalui TLR4 seperti LPS dan  protein  virus  lainnya.  Terbentuk  kompleks  TLR4  dan  aktivasi  NF-κβ  dan  MAPK  untuk aktivasi sitokin proinflamasi seperti IL-1β. Yang selanjutnya meningkatkan regulasi dari ROS, NO, dan PG E2 menyebabkan kerusakan dan inflamasi  [20]. Berkaitan dengan stabilitas plak, sitokin pro-inflamasi seperti TNF-α, IFN-γ dan IL-1β dapat menginduksi makrofag dan apoptosis sel  busa,  menyebabkan  melepasnya  kandungan  lipidnya  ke  intima  arteri  dan  berkontribusi terhadap ukuran inti lipid di dalam plak [13]. Hasil pada tabel 3 menunjukkan aktivitas tanaman kandungan  non  AND  memberikan  efek  penghambatan  pada  IL-1β  Secara  signifikan  pada kejadian inflamasi. Pengujian yang dilakukanmelalui ELISA ataupun ekspresi gen melalui teknik analisia PCR [23]–[26]. Pendekatan pada tabel 3 menunjukkan bahwa Il-1β memiliki perandalam terjadinya  inflamasi  dan  erat  kaitannya  dengan  kejadian  aterosklerosis.  Perkembangan pengobatan  dengan  target  terapi  IL-1β  pada  aterosklerosis  semakin  meingkat  dengan  adanya
upaya  untuk  mengurangi  inflamasi  sebagai  langkah  berikutnyadalam  mengurangi  risiko aterosklerosis ataupun penyakit kardiovaskular [16]. Hasil penelitian CANTOS (canakinumab) mengidentifikasi IL-1 sebagai target efektif untuk mitigasi risiko inflamasi residual. Oleh karena itu  pengembangan  pengobatan  herbal  (CAM)  termasuk  penggunaan AND  pada  sitokin  IL-1 mampu memberi arah pengobatan baru untuk terapi aterosklerosis.

## Simpulan dan Saran
AND  walaupun  belum  banyak  peneliti  membahas  mengenai  efek  farmakologi antieterosklerosis  pada  target  terapi  IL-1β  namun  memiliki  potensi  kuat  dalam  menghambat sekresi  sitokin  tersebut.  Kadar  sitokin  IL-1β  menurun  pada  aterosklerosis  dan  CHD  dengan pemberian AND. Efek AND pada inflamasi terhadap target IL-1β juga telah banyak dibahas dan menunjukkan bahwa terjadi penurunan IL-1β pada subjek penelitian. Hal ini menunjukkan bahwa andrographis  paniculata  memiliki  potensi  aktivitas  terhadap  pengobatan  aterosklerosis  melalui penghambatan IL-1β. Dibutuhkan penelitian lebih lanjut mengenai aktivitas AND pada sitokin IL-1β sebagai antiaterosklerosis secara in vivo dan mekanisme terhadap IL-1β

## Daftar Rujukan
[1] A. P. Hendrata, K. Handono, H. Kalim, and L. E. Fitri, “Andrographis paniculata can modulate the ratio of Treg to Th17 cells in atherosclerotic rats,” Clinical Nutrition Experimental , vol. 20, pp. 20–29, 2018, doi: 10.1016/j.yclnex.2018.05.002.
[2] R.  Mota,  J.  W.  Homeister,  M.  S.  Willis,  and  E.  M.  Bahnson,  “Atherosclerosis:  Pathogenesis,
Genetics and Experimental Models,”
in eLS , 2017, pp. 1–10. doi: 10.1002/9780470015902.a0005998.pub3.
[3] S.  Barquera et  al. ,  “Global  Overview  of  the  Epidemiology  of Atherosclerotic  Cardiovascular Disease,” Archives  of  Medical  Research ,  vol.  46,  no.  5,  pp.  328–338,  Jul.  2015,  doi: 10.1016/j.arcmed.2015.06.006.
[4] S. Barquera et al. , “Global Atlas on cardiovascular disease prevention and control,” Archives of Medical Research , vol. 46, no. 5, pp. 328–338, Jul. 2015, doi: 10.1016/j.gheart.2018.09.511.
[5] K. J. Moore and I. Tabas, “Macrophages in the pathogenesis of atherosclerosis.,” Cell , vol. 145, no. 3, pp. 341–355, 2011, doi: 10.1016/j.cell.2011.04.005.The.
[6] Di. Tousoulis, E. Oikonomou, E. K. Economou, F. Crea, and J. C. Kaski, “Inflammatory cytokines in atherosclerosis: Current therapeutic approaches,” European Heart Journal , vol. 37, no. 22, pp. 1723–1735, 2016, doi: 10.1093/eurheartj/ehv759.
[7] F.  Merhi-Soussi et  al. ,  “Interleukin-1  plays  a  major  role  in  vascular  inflammation  and atherosclerosis in male apolipoprotein E-knockout mice,” Cardiovascular Research , vol. 66, no. 3, pp. 583–593, 2005, doi: 10.1016/j.cardiores.2005.01.008.
[8] A. R. Fatkhullina, I. O. Peshkova, and E. K. Koltsova, “The role of cytokines in the development of  atherosclerosis,” Biochemistry  (Moscow) ,  vol.  81,  no.  11,  pp.  1358–1370,  2016,  doi: 10.1134/S0006297916110134.
[9] Y. P. Nagaraja and V. Krishna, “Hepatoprotective effect of the Aqueous Extract and 5-Hydroxy, 7,8,2′ Trimethoxy Flavone of Andrographis alata Nees. in Carbon Tetrachloride Treated Rats,” Achievements in the Life Sciences , vol. 7, pp. 1–6, 2016.
[10] W. Zou et al. , “The anti-inflammatory effect of Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees on pelvic inflammatory  disease  in  rats  through  down-regulation  of  the  NF-ΚB  pathway,” BMC Complementary and Alternative Medicine , vol. 16, no. 1, pp. 1–7, 2016, doi: 10.1186/s12906- 016-1466-5.
[11] N. K. Warditiani, N. M. P. Susanti, C. I. S. Arisanti, N. P. R. D. Putri, and I. M. A. G. Wirasuta, “Antidyslipidemia  and  Antioxidant  Activity  of  Andrographolide  Compound  From  Sambiloto (Andrographis  Paniculata)  Herb,” International  Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical Sciences , vol. 9, no. 7, p. 59, 2017, doi: 10.22159/ijpps.2017v9i7.18109.
[12] R.  Kleemann,  S.  Zadelaar,  and T.  Kooistra,  “Cytokines  and  atherosclerosis: A  comprehensive review  of  studies  in  mice,” Cardiovascular  Research ,  vol.  79, no. 3,  pp.  360–376, 2008,  doi: 10.1093/cvr/cvn120.
[13] J.  W.  E.  Moss  and  D.  P.  Ramji,  “Cytokines:  Roles  in  atherosclerosis  disease  progression  and potential therapeutic targets,” Future Medicinal Chemistry , vol. 8, no. 11, pp. 1317–1330, 2016, doi: 10.4155/fmc-2016-0072.
[14] Y.  Li et  al. ,  “Andrographolide  Inhibits  Inflammatory  Cytokines  Secretion  in  LPS-Stimulated RAW264.7  Cells  through  Suppression  of  NF-κB/MAPK  Signaling  Pathway,” Evidence-based Complementary and Alternative Medicine , vol. 2017, 2017, doi: 10.1155/2017/8248142.
[15] R. Al Batran, F. Al-Bayaty, M. M. Jamil Al-Obaidi, S. F. Hussain, and T. Z. Mulok, “Evaluation of the effect of andrographolide on atherosclerotic rabbits induced by Porphyromonas gingivalis,” BioMed Research International , vol. 2014, 2014, doi: 10.1155/2014/724718.
[16] M.  T.  Nguyen,  S.  L.  Verweij,  F.  M.  Van  Der  Valk,  and  E.  S.  G.  Stroes,  “Inflammation  as  a Therapeutic Target in Atherosclerosis,” Journal of Clinical Medicine , vol. 8, no. 1109, pp. 1–20, 2019, doi: 10.1097/MOL.0000000000000233.
[17] J.  Shu,  R.  Huang,  Y.  Tian,  Y.  Liu,  R.  Zhu,  and  G.  Shi,  “Andrographolide  protects  against endothelial  dysfunction  and  inflammatory  response  in  rats  with  coronary  heart  disease  by regulating ppar and nf-κb signaling pathways,” Annals of Palliative Medicine , vol. 9, no. 4, pp. 1965–1975, 2020, doi: 10.21037/apm-20-960.
[18] C. V. Chandrasekaran, A. Gupta, and A. Agarwal, “Effect of an extract of Andrographis paniculata leaves on inflammatory and allergic mediators in vitro,” Journal of Ethnopharmacology , vol. 129, no. 2, pp. 203–207, 2010, doi: 10.1016/j.jep.2010.03.007.
[19] Y.  Li et  al. ,  “Andrographolide  Inhibits  Inflammatory  Cytokines  Secretion  in  LPS-Stimulated RAW264.7  Cells  through  Suppression  of  NF-κB/MAPK  Signaling  Pathway,” Evidence-based Complementary and Alternative Medicine , vol. 2017, no. June, 2017, doi: 10.1155/2017/8248142.
[20] N. Kim et al. , “Andrographolide inhibits inflammatory responses in LPS-stimulated macrophages and murine acute colitis through activating AMPK,” Biochemical Pharmacology , vol. 170, no.
August, p. 113646, 2019, doi: 10.1016/j.bcp.2019.113646.
[21] T. Zhu et al. , “Andrographolide Protects against LPS-Induced Acute Lung Injury by Inactivation of NF-κB,” PLoS ONE , vol. 8, no. 2, 2013, doi: 10.1371/journal.pone.0056407.
[22] A. K. Thakur, U. K. Soni, G. Rai, S. S. Chatterjee, and V. Kumar, “Andrographolide Modulate some  Toll-like  Receptors  and  Cytokines  Expressions  in  HL-60  Cell  Line,” Pharmacy  & Pharmacology  International  Journal ,  vol.  2,  no.  4,  pp.  116–120,  2015,  doi: 10.15406/ppij.2015.02.00027.
[23] S. Xu et al. , “Salvianolic acid B inhibits platelets-mediated inflammatory response in vascular endothelial  cells,” Thrombosis  Research ,  vol.  135,  no.  1,  pp.  137–145,  2015,  doi: 10.1016/j.thromres.2014.10.034.
[24] M.  Liu et  al. ,  “β-Elemene  attenuates  atherosclerosis  in  apolipoprotein  E-deficient  mice  via restoring NO levels and alleviating oxidative stress,” Biomedicine and Pharmacotherapy , vol. 95, no. July, pp. 1789–1798, 2017, doi: 10.1016/j.biopha.2017.08.092.
[25] H.  T.  Wang et  al. ,  “Patchouli  alcohol  attenuates  experimental  atherosclerosis  via  inhibiting macrophage  infiltration  and  its  inflammatory  responses,” Biomedicine  and  Pharmacotherapy , vol. 83, pp. 930–935, 2016, doi: 10.1016/j.biopha.2016.08.005.
[26] B.  He et  al. ,  “Fistular  onion  stalk  extract  exhibits  anti-atherosclerotic  effects  in  rats,” Experimental  and  Therapeutic  Medicine ,  vol.  8,  no.  3,  pp.  785–792,  2014,  doi: 10.3892/etm.2014.1790.
[27] C. Prachar, F.-J. Kaup, and S. Neumann, “Interleukin-1 Beta (IL-1&lt;i&gt;β&lt;/i&gt;) in the Peripheral  Blood  of  Dogs  as  a  Possible  Marker  for  the  Detection  of  Early  Stages  of Inflammation,” Open Journal of Veterinary Medicine , vol. 03, no. 07, pp. 302–308, 2013, doi: 10.4236/ojvm.2013.37049.
[28] M.  Y.  Hamidy,  “Mekanisme  Kerja  dan  Target  Molekuler  Interleukin-1  receptor  antagonist  ( Anakinra ) pada Aterosklerosis,” JIK , vol. 11, no. 2, pp. 59–64, 2017.
[29] G. B. Lim, “Research Highlights Inflamation & Myocardial Infarction,” 2019.