PENGARUH EKSTRAK RIMPANG KENCUR ( Kaempferia galanga L .) TERHADAP TINGKAT KESEMBUHAN BENIH IKAN LELE DUMBO ( Clarias sp ) YANG TERINFEKSI Saprolegnia sp.
EFFECT OF RHIZOME EXTRACT ( Kaempferia galanga L .) FOR THE CURE RATE OF CATFISH FRY ( Clarias sp ) INFECTED by Saprolegnia sp.
Nadia Fierias Fathma Riza, Hari Suprapto dan Rahayu Kusdarwati
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Saprolegnia sp. is a fungus that causes the disease Saprolegniasis on eggs and fresh  water fish such  as  catfish  ( Clarias sp.).  Treatment  of Saprolegniasis have  done  using  chemical  drugs  such  as malachite green, formalin, sodium chloride and asetic acid. However, the use of chemical drugs is bad for the environment and biota.
The  purpose  of  this  study  is  to  determined  the  antifungal  activity  from  rhizome  extract ( Kaempferia  galanga L .) for  the  cure  rate  of  catfish  fry  ( Clarias sp ) infected  by Saprolegnia sp.  The research  was  conducted  on  June  2013  at  Fisheries  and  Marine  Faculty  of  Airlangga  University.  The method  used  in  this  study  is  experimental  method  using Kruskall  Wallis followed  by  Two  Sample Independent test design with 5 treatments and four repetitions.
Results  showed  that  the  extract  of Kaempferia  galanga L . has  antifungal  activity  to  recovery infected  catfish  fry.  The  optimal  concentration  from  this  research  is  64%.  The  existence  of  antifungal activity of Kaempferia galanga L. extracts to Saprolegnia sp. showed that Kaempferia galanga L. extract consists some compounds as fungistatic and fungicidal such as flavonoid, saponin, phenolic and essential oil compounds.
Keywords : Rhizome Extract, Saprolegnia sp., Cure Rate

## Pendahuluan
Perkembangan  budidaya  ikan  akhir- akhir  ini  masih  terkendala  dengan  serangan penyakit  ikan  yang  menjadi  salah  satu  faktor pembatas.  Salah  satu  penyakit  yang  biasa menyerang ikan lele adalah penyakit saprolegniasis atau  penyakit white  cotton growth yang disebabkan oleh jamur Saprolegnia sp (Muklishoh, 2008).
Menurut  Data  statistik  dari  Departemen Kelautan  dan  Perikanan  Direktorat  Jendral Budidaya  (2012),    nilai  produksi  ikan  lele  di Jawa  Timur  pada  tahun  2008  sebesar  274.542 ton  dan  tahun  2010  naik  sebesar  407.555    ton. Dari  tahun  2007-2011  permintaan  lele  sebesar 59,09% dan tahun 2010-2012 meningkat dengan nilai  permintaan  sebesar  67,74%  sekitar 900.000 ton.
Penyakit  mikotik  pada  ikan  lele  akan muncul  setelah  dua  minggu  lele  ditebar.  Ikan lele  mudah  terserang  penyakit  karena  lele merupakakan ikan yang tidak bersisik, sehingga kulitnya  tidak  dapat  terlindungi  apabila  terkena gangguan  lingkungan  (Dardiani  dan  Intan, 2010).
Upaya  pencegahan  dan  pengobatan yang  lazim  dilakukan  pada  ikan-ikan  yang
terkena  penyakit  mikotik    adalah  menggunakan bahan kimia seperti malachite  green ,  formalin, hidrogen peroxida, dan sebagainya. Penggunaan bahan kimia cenderung tidak ramah lingkungan dan  ada  yang  bersifat  karsinogenik    (Fakhrizal dkk., 2013) . Fitofarmaka sudah sangat dikenal terutama  untuk  pengobatan  manusia,  namun belum  dimanfaatkan  dalam  budidaya  ikan. Beberapa jenis fitofarmaka yang dapat dicobakan  untuk  pengobatan  penyakit  ikan karena  merupakan  bahan  alami  yang  mudah hancur  sehingga  aman  dan  ramah  lingkungan adalah penggunaan rimpang kencur ( Kaempferia  galanga L.)  yang  mengandung flavonoid,  saponin,  senyawa  polifenol  dan minyak atsiri (Gholib, 2009).
Tanaman  tersebut  memiliki  potensi untuk menghambat dan membunuh pertumbuhan  jamur  sehingga  perlu  dilakukan percobaan  pengaruh  ekstrak  rimpang  kencur sebagai  bahan  pengobatan  alternatif  untuk mengatasi  infeksi  pada  benih  ikan  lele  yang disebabkan oleh jamur Saprolegnia sp . Tujuan  dalam  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui  potensi  ekstrak  rimpang kencur ( Kaempferia galanga L. ) untuk
menyembuhkan  benih  ikan  lele  ( Clarias sp ) yang  terinfeksi Saprolegnia sp.  dan  untuk mengetahui  dosis  optimal  dari  ekstrak  rimpang kencur ( Kaempferia galanga L. ) untuk mengatasi  infeksi Saprolegnia sp  pada  benih ikan  lele  ( Clarias sp ). Manfaat  yang  dapat diperoleh  dari  penelitian  ini  diharapkan  dapat memberikan informasi ilmiah kepada masyarakat  bahwa  serangan  jamur Saprolegnia sp.  dapat  ditangani  dengan  pemberian  ekstrak rimpang  kencur  dan  dapat  digunakan  sebagai dasar pengembangan penelitian selanjutnya dan dapat berguna dalam mendukung perkembangan perikanan

## Materi dan Metode
Waktu dan Tempat Penelitian  ini  dilakukan  di  Fakultas Perikanan  dan  Kelautan,  Universitas  Airlangga, Surabaya.  Penelitian  telah  dilaksanakan  selama satu  bulan.  Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Juni  2013  dan  selesai  pada  bulan September 2013.
Sterilisasi Alat dan Media Penyediaan wadah uji sebelum digunakan, wadah uji dibersihkan dan didesinfeksi  terlebih  dahulu  dengan chlorine selama  30  menit,  kemudian  dibilas  dengan  air bersih  dan  dikeringkan  (Rahmaningsih,  2012). Upaya  untuk  mencegah  adanya  kontaminasi pada  alat  dan  media,  cawan  Petri  dan  media yang  digunakan  dimasukkan  dalam  autoklaf bertekanan  1atm  pada  suhu  121 0 C  selama  15 menit,  serta  meja  dan  alat  yang  digunakan dibersihkan dengan alkohol 70%.
Kultur dan Identifikasi Saprolegnia sp Proses  harus  dilakukan  dalam  kondisi aseptis untuk meminimalkan terjadinya kontaminasi  oleh  bakteri.  Sampel  yang  didapat dari  biakan  murni  kemudian  ditanam  pada media  SDA  dan  penanamannya  dilakukan  di belakang api bunsen untuk mencegah kontaminasi. Media diberi label pada bungkusnya  dan  diinkubasi  pada  suhu  27-28ºC selama  4-5  hari.  Setelah  diinkubasi,  koloni jamur  yang  tumbuh  dapat  diidentifikasi  teknik selotip.
Metode  selotip  merupakan  metode identifikasi yang paling sederhana. Selotip yang telah berisi jamur ditempelkan pada object glass yang  sudah  ditetesi  dengan lactophenol  blue lalu  diamati  di  bawah  mikroskop  dengan pembesaran  100x  dan  400x  (Balai  Karantina Ikan, 2011).
Pembuatan Larutan Zoospora Pembuatan larutan zoospora dilakukan untuk    menginfeksi  jamur  ke  suatu  organisme air.  Bagian  jamur  yang  berperan  sebagai penginfeksi  adalah zoospore yang  dihasilkan dari  sporangium  pada  media  air.  Infeksi  buatan dilakukan  dengan  cara  perendaman  spora Saprolegnia sp.  yang  berasal  dari  hasil  kultur media  SDA.  Sebelum  dilakukan  perendaman terlebih  dahulu  dilakukan  penghitungan  spora dengan menggunakan haemacytometer . Kepadatan  spora  minimal  yang    akan  direndam adalah  sebanyak    2×10 5 spora/ml  (Hatai  and Hoshiai, 1993).
Gambar 1. Penampang Haemacytometer
Keterangan : A, B, C, dan D = kotak besar, sedangkan sel dihitung pada 9 kotak sedang (R) pada haemacytometer.
Diketahui : volume kotak sedang = (0,2 x 0,2 x 0,1) mm 3
= 0,000004 cm 3 = 4 x 10 -6 ml Jumlah spora =  426
Jumlah kotak sedang
=  9 kotak 1,18 x 10 6 sel/ml
Perhitungan  zoospora  dalam  penelitian ini  dilakukan  dengan  cara  meneteskan  1  ml suspense fungi  ke  dalam haemacytometer yang telah  ditutup cover  glass melalui  bagiannya yang berlekuk hingga memenuhi seluruh bagian yang  berskala.  Penghitungan  dilakukan  di bawah mikroskop dengan perbesaran 400 kali di 9 kotak sedang pada haemacytometer.

## Pembuatan Salep Ekstrak Rimpang Kencur
Salep
dibuat dengan cara mencampurkan  ekstrak  rimpang  kencur  dengan bahan  pembawa  berupa  vaselin.  Salep  yang akan  dibuat  sebanyak  10  gram,  sehingga  dosis ekstrak  yang  ditentukan  akan  dicampur  dengan vaselin dan dihomogenisasi dengan menggunakan  mortar.  Salep  yang  telah  jadi
dapat  disimpan  dalam  tabung  dan  diberi  label. Cara membuat salep adalah sebagai berikut : 16% : 1,6 gram ekstrak + 8,4 gram vaselin 32% : 3,2 gram ekstrak + 6,8 gram vaselin 64% : 6,4 gram ekstrak + 3,6 gram vaselin

## Tahapan Perlakuan
Menginfeksi Benih Ikan Lele Dengan Jamur Saprolegnia sp.
Benih  ikan  lele  dilukai  terlebih  dahulu pada  bagian  punggung  dengan  panjang  luka sekitar  3mm  dengan  menggunakan  pinset.  Ikan dimasukkan  ke  dalam  akuarium  yang  berisi  air empat  liter  yang  telah  terkontaminasi  jamur Saprolegnia sp.  sebanyak  1,18  x  10 6 sel/ml selama kurang lebih tiga hari. Metode Pengobatan Metode  pengobatan  yang  digunakan adalah  metode  pengolesan.  Proses  pengolesan diawali  dengan    menarik  jamur Saprolegnia sp pada  bagian  tubuh  ikan  yang  terkena  jamur dengan  menggunakan  gunting  atau  pinset, kemudian  bagian  tersebut  diolesi  dengan  salep ekstrak  rimpang  kencur  dengan  bantuan cutton bud sebanyak  konsentrasi  yang  ditentukan. Pengolesan  dilakukan  sehari  setelah  ikan diinfeksi.  Ikan  yang  sudah  diberi  perlakuan dimasukkan  kembali  ke  dalam  akuarium pengobatan  dan  pemeliharaan  yang  sudah  diisi air bersih.
Metode  pengobatan  diulang  setiap  satu kali  sehari  sampai  ikan  terlihat  normal.  Ikan yang  telah  diobati  selama  tujuh  hari  tersebut kemudian di scrapping pada bagian kulit untuk di  reisolasi  untuk  mengetahui  jumlah  koloni jamur  pada  tubuh  ikan.  Selama  kegiatan  ikan diberi  pakan  berupa  pelet  dengan  frekuensi pemberian  pakan  tiga  kali  sebanyak  3%  berat badan  ikan  rata-rata  sehari  yaitu  sekitar  dua gram  pada  pagi  hari  sekitar  jam  08.00  WIB, siang  jam  12.00  WIB  dan  sore  hari  sekitar  jam 16.00 WIB.
Analisis Data
Data  skoring  yang  berasal  dari  hasil reisolasi ikan pada penelitian ini kemudian diuji dengan Kruskal Wallis
dengan taraf kepercayaan 95 %. Analisis statistika dilakukan dengan  menggunakan  SPSS  versi  19.0 for Windows dan  dilanjutkan  dengan  analisis  dua sampel
independen untuk
melihat perbandingannya.
Tabel 1. Skoring tingkat kesembuhan Jumlah Koloni Tingkat Kesembuhan Skor >30 Sakit 1 20-30 Sedang 2 10-20 Ringan 3 <10 Sembuh 4

## Hasil dan Pembahasan
Proses  identifikasi  dilakukan  untuk memastikan  kebenaran  terhadap  isolat  jamur yang  didapatkan  dari  Jurusan  Biologi  Fakultas Sains  dan  Teknologi  Universitas  Airlangga bahwa  jamur  tersebut  adalah Saprolegnia sp. Isolat  jamur  diidentifikasi  secara  morfologi mikroskopi dan  makroskopi (Purwantisari dkk., 2009).
Pengamatan  morfologi  secara  makroskopis dapat  dilihat  dari  bentuk  dan  warna  koloni jamur.  Koloni Saprolegnia sp.  berwarna  putih buram dan berbentuk seperti kapas. Pengamatan mikroskopis  menunjukkan  bahwa Saprolegnia sp. memiliki hifa yang lebih besar yaitu berkisar 26  –  40  μm.  Ujung  hifa  membulat  dengan sporulasi  tanpa  membentuk  kista  di  mulut sporangium , hal ini sesuai dengan yang dikutip oleh  Nuryati  dkk.,  (2008).    Pengamatan  secara makroskopis dan mikroskopis dapat dilihat pada Gambar 2.
Tujuan dilakukannya pengamatan reisolasi  adalah  untuk  mengetahui  tingkat kesembuhan benih ikan lele yang terinfeksi oleh Saprolegnia sp. dan diobati dengan menggunakan salep ekstrak rimpang kencur.
Tahapan  awal  dari  proses  reisolasi adalah  dengan  melakukan scrapping pada seluruh  permukaan  tubuh  ikan  dan  kemudian ditanamkan  pada  media Saboroud  Dextrose Agar (SDA)  dan  diinkubasi  selama  tiga  hari dengan  suhu  25-28 o C.  Hasil  reisolasi  dapat dilihat pada Gambar 3.
Hasil  penghitungan  jumlah  koloni kemudian  dianalisis  dengan  menggunakan  uji statistik  Kruskall  Wallis  agar  diketahui  skoring dari  tiap-tiap  perlakuan.  Skoring  digunakan untuk  menentukan  tingkat  kesembuhan  benih ikan  yang  terinfeksi  jamur.  Data  analisis statistik dapat dilihat pada Tabel 3.
Survival  rate (SR)  atau  biasa  dikenal dengan  sintasan  dalam  perikanan  budidaya merupakan  indeks  kelulushidupan  suatu  jenis ikan  dari  mulai  awal  ikan  ditebar  hingga  ikan dipanen. Survival  rate merupakan  salah  satu faktor  penentu  keberhasilan  suatu  budidaya. Survival  rate ditulis  dalam  bentuk    presentase mulai dari 0 – 100%.
Gambar 2.   (a). Koloni Saprolegnia sp. pada media SDA
(b) Saprolegnia sp. secara mikroskopis
Gambar 3 :   (a). Hasil reisolasi ikan pada perlakuan A (kontrol +) (b). Hasil reisolasi ikan pada perlakuan B (kontrol -)
(c). Hasil reisolasi ikan pada perlakuan C (dosis 16%)
(d). Hasil reisolasi ikan pada perlakuan D (dosis 32%) (e). Hasil reisolasi ikan pada perlakuan E (dosis 64%)
Tabel 2. Data Skoring Analisis Statistik Perlakuan Skor Mean Rank A (Kontrol +) 4 15,50 B (Kontrol -) 1 2,75 C (16%) 2 7,63 D (32%) 3 11,13 E (64%) 4 15,50 Tabel 3. Hasil kelulushidupan benih ikan lele selama tujuh hari Perlakuan Jumlah ikan awal Jumlah ikan akhir Kematian Rata-rata kelulushidupan (%) A (Kontrol +) 8 8 0 100 B (Kontrol -) 8 7 1 87,5 C (16%) 8 6 2 75 D (32%) 8 8 0 100 E (64%) 8 7 1 87,5
Penggunaan  ekstrak  rimpang  kencur ( Kaempferia  galanga L.)  terhadap  tingkat kesembuhan  benih  ikan  lele  dumbo  ( Clarias sp.)  yang  terinfeksi Saprolegnia sp.  dinilai berpotensi  sebagai  obat  untuk  mencegah  dan menanggulangi serangan penyakit jamur karena pada  penelitian  ini  telah  didapatkan  dosis optimal  dari  salep  ekstrak  rimpang  kencur ( Kaempferia galanga L.) sebesar 64% .
Hasil  uji  statistik  menunjukkan  bahwa tidak  terdapat  perbedaan  antara  perlakuan ekstrak  rimpang  kencur  konsentrasi  64% dengan  kontrol  positif.  Jika  konsentrasi  ekstrak lebih kecil dari 64% maka ekstrak tidak mampu untuk  membunuh Saprolegnia sp.  Semakin besar konsentrasi ekstrak rimpang kencur maka, semakin  besar  pula  daya  hambat  ekstrak tersebut  terhadap  pertumbuhan Saprolegnia sp. Hal  ini  sesuai  dengan  Kosenda  (2009)  yang menyatakan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi obat  maka    kematian  atau  penghambatan pertumbuhan jamur akan semakin besar.
Senyawa  aktif  yang  bersifat  antifungi berupa  flavonoid,  saponin,  senyawa  polifenol dan  minyak  atsiri  (Gholib,  2009).  Menurut Barus (2009) minyak atsiri pada rimpang kencur sebagian  besar  banyak  mengandung  senyawa etil  p-  metoksisinamat  (EPMS)  yang  umumnya dapat  larut  dalam  pelarut  etanol,  etil  asetat, methanol dan heksan.
Menurut  Waji  dan  Andis  (2009) flavonoid merupakan senyawa metabolit
sekunder  yang  terdapat  pada  tanaman.  Fungsi metabolit
sekunder adalah
untuk mempertahankan  diri  dari  kondisi  lingkungan yang  kurang  menguntungkan,  misalnya  untuk mengatasi hama dan penyakit, menarik polinator, dan sebagai molekul sinyal. Metabolit sekunder digunakan organisme untuk berinteraksi  dengan  lingkungannya..  Salah  satu golongan  flavonoid  adalah  kalkon.  Kalkon sebagai  senyawa  yang  bersifat  fungistatik  dan fungisida yang terdapat pada tumbuhan Kaempferia dari golongan Zingiberaceae . Selain  itu  flavonoid  mempunyai  senyawa genestein  berfungsi  menghambat  pembelahan atau proliferasi sel jamur.
Pengaruh senyawa fenol sebagai antifungal  adalah  dengan  mendenaturasi  ikatan protein  pada  membran  sel  sehingga  membran sel lisis dan memungkinkan fenol menembus ke dalam  inti  sel  yang  menyebabkan  jamur  tidak berkembang (Sulistyawati dan Mulyati, 2009).
Menurut  Agusta  (2006)  terdapat  dua tahap  mekanisme  obat  anti  jamur  yaitu  dengan menghambat reaksi demetilase eburikol menjadi 4,4  demetilfekosterol  dan  penghambatan  reaksi C  24  alkilase  yaitu  proses  penghambatan alkilase lanosterol untuk menghalangi terbentuknya  eburikol.  Menurut  Brennan  and Leyden  (1997)  hal  ini  mengakibatkan  dinding sel  menjadi  permeabel  dan  struktur  sel  jamur hancur karena  senyawa anti jamur  menghambat biosintesis  ergosterol  yang  merupakan  sterol utama untuk mempertahankan integritas membran sel jamur.
Kisaran  rata-rata  tingkat  kelangsungan hidup  benih  ikan    lele  dalam  penelitian  ini adalah  75-100%,  hal  ini  hampir  mendekati pendapat Rusmansyah (2012) yang menyatakan bahwa  tingkat  kelulushidupan  benih  ikan  lele berkisar  antara  80-90%.  Mortalitas  ikan terbanyak  terdapat  pada  perlakuan  C  (16%). Kematian  ikan  yang  terjadi  dapat  disebabkan oleh beberapa faktor seperti kondisi lingkungan dan  sistem  kekebalan  tubuh.  Perlakuan  dengan dosis  16% menunjukkan  bahwa kondisi lingkungan  berada  pada  batas  normal  sehingga kemungkinan  kematian  ikan  disebabkan  oleh rendahnya  sistem  kekebalan  tubuh  ikan  dan respon terhadap obat yang diberikan.
Pada  perlakuan  A  (kontrol  +)  dan perlakuan  E  (dosis  64%)  tidak  terdapat mortalitas atau dapat dikatakan tingkat kelulushidupan  ikan  pada  perlakuan  ini  adalah 100%,  hal  ini  dikarenakan  ikan  terinfeksi  telah diobati  dengan  menggunakan  salep  ekstrak rimpang  kencur  sehingga  kematian  akibat penyakit dapat terminimalisir.
Parameter kualitas air dalam penelitian ini  diantaranya  suhu,  pH  dan  oksigen  terlarut. Suhu  air  media  pemeliharaan  berkisar  27-28 o C, oksigen terlarut (DO) berkisar 4-5 mg/l dan pH berkisar  7-8,  hal  ini  sesuai  dengan  pendapat
Tabel 4. Hasil rata-rata pengamatan nilai kualitas air selama tujuh hari.
Perlakuan Kisaran parameter kualitas air yang diamati selama tujuh hari pH DO(mg/L) Suhu ( o C) A (Kontrol +) 7-8 4 27-28 B (Kontrol -) 6-8 4-5 27-28 C (16%) 6-8 4-5 27-28 D (32%) 7-8 4 27-28 E (64%) 7-8 4-5 28
Menegristek  (2000)  yang  menyatakan  bahwa ikan  lele  dapat  hidup  pada  suhu  20 0 C,  dengan suhu  optimal  antara  25-28 0 C.  Kualitas  air memiliki  peranan  penting  dalam  kegiatan budidaya.  Ketidakseimbangan  kondisi  air  dapat menimbulkan beberapa masalah seperti penyakit  yang  dapat  mengakibatkan  kematian bagi  ikan  budidaya.  Keadaan  kualitas  air  yang berada  dibawa  ambang  normal  dapat  memicu tumbuhnya  organisme    patogen  salah  satunya jamur.  Oleh  karena  itu  salah  satu  upaya pencegahan  munculnya  organisme  patogen penyebab  penyakit  adalah  dengan  menjaga keseimbangan air media budidaya ikan.

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil analisis dan
pembahasan dalam penelitian ini, dapat disimpulkan  sebagai  berikut:  ekstrak  rimpang kencur  ( Kaempferia  galanga L.)  dalam  bentuk sediaan  salep  dapat  digunakan  untuk  mengatasi infeksi  jamur Saprolegnia sp  pada  benih  ikan lele  dumbo  dengan  dosis  optimal  salep  ekstrak rimpang  kencur ( Kaempferia  galanga L) dalam penentuan  tingkat  sembuh  benih  ikan  lele  yang terinfeksi Saprolegnia sp adalah 64% (6,4 gram ekstrak  rimpang  kencur  ( Kaempferia  galanga L)  + 3,6 gram vaselin).
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan,  penulis  menyarankan  untuk  lebih memperhatikan kualitas air dan kondisi lingkungan  budidaya  ikan  guna  mencegah kematian  pada  ikan.  Penelitian  lebih  lanjut tentang histopatologi ikan yang diberi pengobatan  menggunakan  salep  ini  juga dibutuhkan.

## Daftar Pustaka
Agusta,  A.  2006.  Diversitas  Jalur  Biosintesis
Senyawa Terpena Pada Makhluk Hidup Sebagai Target Obat Antiinfektif.  Laboratorium  Fitokimia Bidang Botani. Pusat Penelitian
Biologi.  Lembaga  Ilmu  Pengetahuan Indonesia. Bogor. Berita Biologi 8(2) : 141-150.
Balai Karantina Ikan. 2011. Teknik Identifikasi Jamur Metode Selotip. Balai Karantina
Ikan Kelas II. Tanjung Emas. Semarang. Barus, R. 2009. Amidasi Etil P-Metoksisinamat yang diisolasi Dari Kencur
( Kaempferia  galangal  Linn ).  Tesis.
Universitas  Sumatera  Utara.  Medan.
Hal. 23
Brennan  B.  and  Leyden  JJ.  1997.  Overview  of Topical Theraphy for Common Supperficial  Fungal  Infection  and  The
Role  of  New  Topical  Agents.  Journal of American Academy of Dermatology Part 1. Volume 36 : 2. Dardiani  dan  Intan.  2010.  Mata  Diklat  5  : Manajemen Pemeliharaan Benih. Departemen Pendidikan Nasional. Pusat Pengembangan dan Pemberdayaan  Pendidik  dan  Tenaga Kependidikan Pertanian.
Departemen  Kelautan  dan  Perikanan  Direktorat Jendral  Budidaya,  2012.  Statistik Kelautan  dan  Perikanan  2012.  Jakarta. hal 95-119.
Fakhrizal,  A.N,  Eka,R  dan  Tsaqif,  I.  2013. Pengaruh Ekstrak Bawang Putih Dengan Dosis Yang Berbeda Terhadap
Mortalitas  Kutu  Ikan  ( Argulus  Sp. ) Yang  Menginfeksi  Ikan  Mas  Koki ( Carassius  auratus Linn). Jurusan Budidaya Perairan. Universitas Lambung Mangkurat. Banjarbaru. 6hal. Gholib, D. 2009. Daya Hambat Ekstrak Kencur ( Kaempferia  galanga L.)  terhadap Trichophyton mentagrophytes dan Cryptococcus  neoformans. Balai  Besar Penelitian Veteriner. 20(1) : 59-67. Hatai  K.  &  Hoshiai  G.I.  (1993)  Characteristics of  two  Saprolegnia  species  isolated from  coho  salmon  with  saprolegniosis. Journal  of  Aquatic  Animal  Health  5,
115–118.
Kosenda,  L.  2009.  Penampisan  Senyawa
Bioaktif dari Daun Jambu Biji ( Psidium guajava L .) sebagai Anticandidiasis dan Profil Kromatografi  Lapis  Tipisnya.  Skripsi. Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu-Ilmu Kesehatan. Purwokerto. 167hal.
Menegristek.  2000.  Tekhnologi  Tepat  Guna Budidaya  Ikan  Lele  ( Clarias sp.). Kantor  Deputi  Menegristek  Bidang Pendayagunaan  dan  Pemasyarakatan IPTEK. Jakarta. 17hal.
Musklishoh, S.S. 2008. Karakterisasi Morfologi Dan  Patogenisitas  Jamur  Penyebab Saprolegniasis  Pada  Jaringan  Tubuh Ikan  Gurami( Osphronemus  goramy Lac.) Dan Ikan Lele ( Clarias batrachus L.). Tesis. Fakultas Biologi.
Universitas  Gajah  Mada.  Yogyakarta. hal 1-7.
Nuryati,  S.,  F.B.P.  Sari.,  dan  Taukhid,  2009,
identifikasi  dan  uji  postulat  Koch cendawan penyebab penyakit pada ikan gurame. Proram studi budidaya perairan.  Fakultas  perikanan  dan  ilmu kelautan.  Institute  pertanian  bogor. Bogor. Hal:21-27.
Purwantisari,  2009.  Isolasi  dan  Identifikasi Janur  Indigenous  Rhizosfer  Tanaman Kenteng  Organik  di  Desa  Pakis Magelang.FMIPA  UNDIP.  Vol-11.
No.2.
Rahmaningsih,  S.  2012.  Pengaruh  Ekstrak Sidawayah  Dengan  Konsentrasi  Yang Berbeda  Untuk  Mengatasi  Infeksi Bakteri Aeromonas  hydrophilla Pada Ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus ). Jurnal Aquasains Vol.1 Fakultas Pertanian Universitas Lampung. Lampung. Sulistyawati,  D.  dan  Mulyati,  S.  2009.  Uji Aktivitas Antijamur Infusa Daun Jambu  Mete ( Ana  ca  rdium  o ccidentale , L.) terhadap Candida albicans . Biomedika. 2(1): 47-51. Waji  R.A.  dan  Andi  S.  2009.  Makalah  Kimia Organik Bahan Alam Flavonoid (Quercetin). Program S2 Kimia Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Hassanudin. 4hal.