Kajian Potensi Whey Yogurt Sebagai Bahan Alami Pencegah Jerawat Study of Fermented Whey as Natural Treatment for Acne Prevention
Rahman, A 1 , E. Taufik 2 , S. Purwantiningasih 3 , B.P. Purwanto 4 1 Sekolah Pascasarjana, Departemen Ilmu Produksi dan Teknologi Peternakan, Institut Pertanian Bogor 2 Departemen Ilmu Produksi dan Teknologi Peternakan, FakultasPeternakan, InstitutPertanian Bogor 3. Departemen Kimia, Fakultas Matematikan dan IPA, IPB, Bogor, 16610, Indonesia 4 Program Diploma, Institut Pertanian Bogor E-mail : awliarahman.sanusi@ gmail.com

## ABSTRACT
Cheese processing always produce a liquid by product, called as whey. Whey contains 50% of milk nutrients, but  currently  in  Indonesia  whey  is  not  used  optimally. Whey  contained  some  lactose,  and  can  be  used  as fermented  media. This  study  used  cheese  whey  as  a  fermented  media  for  Streptococcus  thermopillus  (St- RRM01) and Lactobacillus bulgaricus (Lb-RRM01) called as Whey Yogurt (WY). WY compared to fresh whey (control) on this study for skin care, include of acne treatment. Data were analyzed by T-test on SPSS statictical program. The research showed that WY inhibited the growth of bacteria Propionibacterim acnes 4.35 mm, while there was no inhibition on control (P <0.05). Fermentation process increased the antioxidant activity for 27.7%. WY had the good potential for the acne treatment. This study showed that whey had a value-added, furthermore in the future might be used to develop into a natural ingredient cosmetics for skin care.
Keywords : Whey, acne, Propionibacteriun acnes, antioxidant

## PENDAHULUAN
Konsumsi  bahan  baku  susu  di  Indonesia  mengalami peningkatan  setiap  tahunnya.  Indonesia  mengonsumsi bahan baku susu pada tahun 2008 sebanyak 11 kg/kapita/ tahun.  Nilai  ini  naik  sebesar  18,27  %  jika  dibandingkan dengan konsumsi bahan baku susu tahun 2004 (Departemen Perindustrian, 2009). Susu banyak dikonsumsi tidak hanya dalam  bentuk  segar,  tetapi  juga  dalam  bentuk  olahannya, seperti keju. Keju merupakan produk olahan susu hasil proses penggumpalan susu, yang menghasilkan produk sampingan berupa whey. Satu  kg  keju  dihasilkan  dari  penggumpalan susu sebanyak 10 liter dan menghasilkan whey sebanyak 8- 9  liter.  Pada  umumnya whey dimanfaatkan  sebagai  pakan ternak  dan  sebagai  tambahan  dalam  pembuatan  beberapa produk pangan (de Witt, 2001). Di Indonesia, whey belum banyak  dimanfaatkan  karena  industri  pengolahan  keju saat  ini  masih  fokus  pada  produk  utamanya  yaitu  keju, padahal  komposisi whey masih  mengandung  50%  nutrisi susu. Komponen terbesar whey adalah laktosa (4,5-5%) (de Witt, 2001; Magalhaes, 2010). Laktosa dapat dimanfaatkan sebagai  sumber  nutrisi  bagi  bakteri  asam  laktat  untuk menghasilkan  berbagai  senyawa  metabolit  seperti asam  laktat  dan  antimikroba  melalui  proses  fermentasi. Antimikroba  pada  fermentasi  asam  laktat  dimanfaatkan sebagai bahan terapeutik karena menghambat pertumbuhan bakteri patogen (Rolfe, 2000).
Whey mengandung laktoferin yang berfungsi sebagai antioksidan  (Coimbra  dan  Teixeira,  2009).  Bahan  dengan kandungan antioksidan dapat dimanfaatkan untuk mengurangi stres oksidatif pemicu pertumbuhan jerawat (Sarici et al. , 2010;  Batubara  dan  mitsunaga,  2013).  Kombinasi  antara
senyawa  antimikroba  dan  kandungan  antioksidan  dapat dimanfaatkan  sebagai  bahan  pencegah  jerawat.  Dalam hal  pencegahan  jerawat,  senyawa  antimikroba  dapat dimanfaatkan  untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri dominan penyebab jerawat yaitu Propionibacterium acnes. Batubara et al. (2009) menjelaskan bahwa senyawa dengan target  jerawat  harus  mampu  menghambat  pertumbuhan P.  acnes, menghambat  aktivitas  lipase P.  acnes dan menghambat stres oksidatif. Dalam kata lain, senyawa atau bahan  yang  dianjurkan  untuk  mengontrol  jerawat  harus memiliki  antibakteri,  penghambat  lipase,  dan  aktivitas antioksidan (Batubara et al ., 2009). Fokus  penelitian  ini  yaitu  kajian  pemanfaatan whey sebagai bahan fermentasi bakteri asam laktat Streptococcus thermopillus (St-RRM01) dan Lactobacillus  bulgaicus (Lb-RRM01)  yang  disebut  sebagai Whey Yogurt  (WY) untuk diamati potensinya sebagai bahan pencegah jerawat. Penelitian  terdahulu  mengenai  kemampuan whey sebagai bahan  perawatan  kulit  telah  dilakukan  oleh Chen et  al . (2006)  yang  menyebutkan  bahwa  asam  laktat whey kefir pada  level  lebih  dari  60  mg/ml  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri Propionibacterium  acnes .  Melalui penelitian ini, diharapkan dapat menambah nilai guna whey , dan menunjukkan potensi non-pangan whey sebagai bahan alami kosmetik perawatan kulit.
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengamati proses fermentasi pada whey serta menjelaskan potensi whey yang difermentasi  oleh  bakteri Staphilococcus  thermopillus dan Lactobacillus    bulgaricus (WY)  dalam  menghambat pertumbuhan jerawat.
Jurnal Ilmu Produksi dan Teknologi Hasil Peternakan ISSN 2303-2227 Vol. 02 No. 1, Januari 2014 Hlm: 238-242

## MATERI DAN METODE
Bahan dan Alat Media fermentasi yang digunakan adalah whey hasil samping pembuatan keju ( cheese whey ) yang diperoleh dari home  industry pembuatan  keju  “Trie’s  Cheese”,  Depok. Bakteri  asam  laktat  yang  digunakan  adalah Streptococcus thermophillus (St  RRM-01)  dan Lactobacillus  bulgaricus (Lb  RRM-01) koleksi  dari  laboratorium  pengolahan  susu bagian Teknologi Hasil Ternak Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor. Bakteri patogen yang digunakan sebagai bakteri  uji  pada  uji  penghambatan  pertumbuhan  bakteri penyebab jerawat adalah bakteri Propionibacterium acnes yang diperoleh  dari  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran  Universitas  Indonesia  (FKUI)  dalam  bentuk biakan agar miring.
Bahan-bahan  untuk  analisis  aktivitas  antioksidan, diantaranya: etanol p.a, 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH). Bahan mikrobiologi yang digunakan, antara lain: Tryptone Soya  Broth (TSB), Nutrient  Agar (NA), Mueller  Hinton Agar (MHA), deMan’s  Rogosa  Sharpe  Broth (MRSB), Bacteriological  Agar (BA),  dan Buffer  Peptone  Water (BPW). Alat-alat yang digunakan, antara lain: mikropipet, labu  Erlenmeyer,  cawan  Petri,  tabung  reaksi,  , bunsen , vortex ,  inkubator, autoclave ,  oven,  timbangan  digital, waterbath , burret , pH meter, microplate 98- well , sentrifuge dan multi-well plate reader ELISA.
Prosedur Persiapan Kultur Bakteri Starter Sebelum  digunakan,  kultur  bakteri  St-RRM01  dan Lb-RRM01  disegarkan  dan  diperiksa  kemurniaan  dari kontaminasi  dengan  bantuan  pewarnaan  Gram  (Fardiaz, 1992), kemudian diperbanyak menjadi kultur induk, kultur antara, dan kultur kerja di dalam susu skim steril.
Persiapan Kultur Bakteri Uji Sebelum  digunakan,  bakteri P.acnes diperiksa kemurniannya dari kontaminasi dengan bantuan pewarnaan Gram (Fardiaz, 1992), kemudian diambil 1 ose dari biakan agar  miring  ke  dalam  ke  dalam  Nutrient  Broth  (NB), diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37ºC.  Kultur  dari NB kemudian digoreskan pada NA, setelah itu diinkubasi selama 24 jam dan disimpan sebagai kultur stok.
Pembuatan Whey Yogurt Pembuatan WY mengacu pada Tamime (2006) dengan modifikasi  pada  lama  inkubasi. Whey dipasteurisasi  pada suhu  83  –  85°C  selama  30  menit,  kemudian  didiamkan sampai  suhunya  turun  menjadi  ±  40°C,  dan  dipindahkan ke  dalam  wadah. Whey pasteurisasi  dalam  wadah diinokulasikan  kultur  starter Streptococcus  thermophillus (St-RRM01) dan Lactobacillus  bulgaricus (Lb-RRM01) masing-masing  sebanyak  2,5%.  Diaduk  hingga  homogen, kemudian  diinkubasi  37 o C  sampai  mencapai  pH  4,5  (pH isoelektrik). Setelah mencapai pH 4,5. WY disimpan pada suhu 4°C. Selanjutnya digunakan untuk penghitungan total BAL, persen asam laktat, uji penghambatan pertumbuhan bakteri P.acnes , dan pembuatan ekstrak.

## Pembuatan Ekstrak Sampel
Mengacu  pada  Shori  dan  Baba  (2031)  dengan modifikasi  pada  penyaringan  tahap  akhir.  Sampel  kontrol dan  WY  masing-masing  dihomogenkan  dengan  aquades (1:4)  dan  diturunkan  pH  nya  sampai  4,0  dengan  HCl  0,1 M, kemudian diinkubasi dalam water bath 45°C  selama 10 menit, dilanjutkan dengan sentrifugasi (5.000 ppm, 10 menit, 4°C)  untuk  menghilangkan  protein.  Supernatan  kemudian dipanen  dan  dinaikkan  pH  nya  sampai  7,0  menggunakan NaOH 0,1 M, dilanjutkan dengan sentrifugasi kedua (5.000 ppm,  10  menit,  4°C)  untuk  menghilangkan  sisa  protein dan  garam.  Supernatan  kemudian  disaring  menggunakan syringe wathman 0,45 µm untuk mendapatkan ekstrak yang benar-benar jernih. Supernatan dipanen dan disimpan pada suhu  -20  ºC  hingga  dibutuhkan  untuk  analisis  aktivitas antioksidan.
Pengukuran pH dan Total Asam Tertitrasi (TAT) WY difermentasi dan diukur pH nya setiap jam sampai pH  mencapai  4,5.  Pengukuran  pH  mengacu  pada AOAC (2005). Pengukuran TAT menggunakan metode titrasi.

## Penghitungan Jumlah Bakteri Asam Laktat
Sampel  dan  BPW  dihomogenkan  hingga  didapat pengenceran  sepersepuluh  (P-1).  Selanjutnya  dari  P-1 dipipet  1  ml  dan  dilarutkan  ke  dalam  larutan  pengencer BPW  9  ml  untuk  memperoleh  P-2,  demikian  seterusnya dengan  cara  yang  sama  dilakukan  sampai  dengan  P-7. Pemupukan dilakukan pada P-5 sampai P-7 dengan media deMan  Rogosa  Sharpe  Broth (MRSB)  yang  ditambahkan dengan Bacteriological Agar (BA) pada suhu 37 ºC selama 24-48 jam. Jumlah bakteri dihitung dengan metode BAM (2011).

## Pengujian Penghambatan Pertumbuhan Bakteri
Propionibacterium acnes Uji penghambatan pertumbuhan P.acnes menggunakan metode  difusi  sumur  dengan  diameter  25  mm  (Taufik, 2004). Populasi P.acnes yang digunakan adalah 5 log 10 cfu/ ml.  Zona  penghambatan  ditunjukkan  dengan  area  bening di  sekitar  sumur.  Setiap  area  bening  diukur  diameternya sebanyak 3-4 kali dan dirata-ratakan.

## Pengukuran Aktivitas Antioksidan
Pengukuran  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode  penghambatan  radikal  bebas  1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH) dalam etanol (Shori dan Baba 2013) dengan  modifikasi  konsentrasi  DPPH  dan  perbandingan sampel dengan DPPH, yaitu 1:1 dengan konsentrasi DPPH 0,1 mM. Pengujian dilakukan dalam microplate 96- well .
Analisis Data Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  uji-T,  tingkat kepercayaan 95%,  melalui program statistik SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Nilai pH dan TAT Nilai pH control dan Whey Yogurt (WY) pada jam ke-0
berturut-turut adalah 5,38 ± 0,02 a , dan 5,25 ± 0,002 b . Whey memiliki pH asam meski tidak difermentasi karena berasal dari hasil samping pembuatan keju mozzarella. Pada proses pembuatan keju dilakukan penambahan asam sitrat pada susu untuk mendapatkan curd (padatan) saat proses pembuatan keju.  WY  memiliki  asam  yang  lebih  rendah  dibanding kontrol karena adanya penambahan bakteri starter.
WY  mencapai  pH  4,5  pada  jam  ke-13.  Penurunan pH  pada whey disebabkan  oleh  pembentukan  asam  laktat sebagai hasil metabolisme laktosa oleh Bakteri Asam Laktat (BAL). Whey mengandung 4,5 – 5% laktosa (Magalhaes et al , 2010). Laktosa ini digunakan oleh BAL sebagai sumber metabolit  untuk  menghasilkan  energi  dan  memproduksi asam laktat.
Penurunan pH menunjukkan terjadinya peningkatan asam  yang  dihitung  sebagai  %  asam  laktat.  Persen  asam laktat meningkat seiring dengan terjadinya penurunan pH. Hasil uji-T menunjukkan bahwa terdapat perbedaan nyata (P<0,05) total asam laktat antara kontrol dengan WY (Tabel 1). Hal ini menunjukkan bahwa laktosa pada whey berhasil difermentasi dengan baik oleh bakteri asam laktat. Rahman et al . (1992) mejelaskan bahwa pertumbuhan mikroba pada proses fermentasi dapat menimbulkan berbagai perubahan karakteristik salah satunya adalah pembentukan asam.
Jumlah Bakteri Asam Laktat dan Penghambatan Bakteri Propionibacterium acnes
Jumlah  BAL Whey Yogurt  (WY) pada  penelitian  ini memenuhi persyaratan minimal jumlah sel hidup pada susu fermentasi menurut CODEX STAN 243-200, yaitu 6 log 10 cfu/ml. Kontrol mengandung jumlah bakteri asam laktat lebih rendah (P<0,05) dengan WY (Tabel 1). Hal ini disebabkan karena  kontrol  merupakan whey yang tidak  mengalami proses  fermentasi.  Selama  proses  fermentasi  berlangsung, bakteri  asam  laktat  mempunyai  kesempatan  lebih  lama untuk  memanfaatkan  nutrisi  dalam  metabolismenya sehingga  terjadi  kenaikan  jumlah  sel  (Wright,  1998). Perbedaan jumlah bakteri asam laktat pada WD, WY, dan WK  dimungkinkan  karena  adanya  variasi  karakteristik bakteri  asam  laktat.  Faktor-faktor  yang  mempengaruhi pertumbuhan dan kelangsungan hidup bakteri asam laktat sangat beragam, namun yang paling mempengaruhi adalah komposisi kimia dan kandungan nutrisi pada media. Bakteri asam  laktat  memerlukan  nutrisi  yang  sangat  kompleks. Streptococcus thermophilus memerlukan asam panthotenat, niasin  dan  vitamin  sedangkan Lactobaciluus memerlukan asam  pantothenat,  niasin  dan  vitamin  lainnya  (Surono, 2004).
Streptococcus  thermopillus dan Lactobacillus bulgaricus pada  WY  sebagai  bakteri  asam  laktat berfermentasi    menghasilkan  senyawa  metabolit  primer berupa  asam  laktat  (metabolit  utama),  asam  asetat,  dan hidrogen  peroksida;  juga  metabolit  sekunder  (bakteriosin, senyawa  flavor,  dan  Eksopolisakarida  atau  EPS).  Hasil metabolit  sekunder  bakteriosin  merupakan  suatu  peptida yang bersifat antibakteri yang dapat mencegah pertumbuhan bakteri sejenis (Surono, 2004).  Bakteriosin dimanfaatkan sebagai  bahan  pengobatan  ( therapeutic )  pada  susu fermentasi (Rolfe, 2000).
Propionibacterium  acnes merupakan  bakteri  yang lazim  ditemukan  pada  jerawat  klinis,  dan  merupakan bakteri anaerob obligat, Gram positif. P. acne mengeluarkan produk  yang  berperan  penting  dalam peradangan jerawat, yaitu lipase, protease, hialurodinase, dan faktor chemotactic (Heyman, 2006). Lipase P. acnes merupakan faktor penting dalam pathogenesis jerawat karena membentuk asam lemak bebas  karena  efek  lipase P.acne pada  trigliserida  kelenjar subaceous menginduksi peradangan (Higaki 2003).
Penghambatan  pertumbuhan  bakteri P.  acnes dilihat dari  ada  dan  tidak  adanya  pertumbuhan  bakteri P.  acnes di sekitar sumur yang diisi dengan masing-masing sampel kontrol dan whey yogurt  (Gambar  1).  Menurut  hasil pengujian  (Tabel  1),  tidak  terdapat  penghambatan  bakteri P.acnes pada kontrol (diameter sumur 25 mm) (P<0,05), dan terdapat  penghambatan  bakteri P.acnes pada  WY  sebesar 4.35 mm (P<0,05). Pan et al (2009) mengategorikan zona
hambat  diantara  0-3  mm  adalah  lemah,  3-6  mm  sebagai sedang, dan lebih dari 6 mm sebagai kuat. Berdasarkan hal tersebut, maka penghambatan P. acnes oleh WY tergolong sebagai penghambatan sedang Kontrol tidak memiliki penghambatan terhadap bakteri P. acnes , mungkin disebabkan karena jumlah BAL pada whey (4,84 log 10 cfu/ml) lebih rendah dari P. acnes (5 log 10 cfu/ml), sehingga  antimikroba  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  asam laktat  pada whey tidak  cukup  menghambat  pertumbuhan P. acnes . Selain itu, kondisi pH kontrol (5,38) tidak cukup asam  untuk  menghambat  lipase P.  acnes. Higaki  (2003) menjelaskan,  lipase  yang  dihasilkan Propionibacterium acnes stabil dan aktif pada pH diantara 5-8 dan apabila pH lebih rendah dari 5 aktivitas lipase P.acnes menjadi lemah. Menurut  Surono  (2004),  pada  pH  rendah  sejumlah  besar asam  laktat  dalam  bentuk  tidak  terdisosiasi  dan  menjadi racun  bagi  banyak  bakteri,  kapang  dan  khamir.  Nilai  pH rendah  mengakibatkan  asidifikasi  sel  sitoplasma  sehingga mengubah  permeabilitas  sel  membran  dan  mengganggu sistem transport substrat.
Tabel 1. Total Asam Laktat, Jumlah Bakteri Asam Laktat, Daya Hambat P. acnes dan Aktivitas Antioksidan dalam Sampel Sampel Peubah Asam Laktat (%) Jumlah Bakteri Asam Laktat (log10 cfu/ml) Penghambatan P.acnes (mm) Aktivitas Antioksidan (%) Kontrol 0.28±0.011a 4.84±0.26a 0 ± 0a 38.89±0.67a Whey Yogurt 0.62±0.018b 7.18±0.29b 4.35 ± 0.477b 49.66±2.06b
Keterangan: superskrip berbeda pada baris atau kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata (P<0,05).
Penghambatan yang tidak kuat pada WY ini mungkin disebabkan  karena P.acnes termasuk  kelompok  bakteri Gram  positif,  dimana  bakteri  Gram  positif  memiliki dinding sel dan lapisan peptidoglikan yang tebal. Menurut Prescott et al. (2002), penghambatan BAL terhadap bakteri patogen dipengaruhi oleh perbedaan dinding sel dan lapisan peptidoglikan yang menyusun dinding sel.

## Aktivitas Antioksidan
Antioksidan  berperan  dalam  menangkal  radikal bebas  sehingga  membantu  pencegahan  pembentukan melanin. Fungsi lainnya yaitu membantu mengurangi stres oksidatif  sebagai  pemicu  peradangan  jerawat  (Batubara, 2010;  Batubara  dan  Mitsunaga,  2013). Whey Yogurt (WY)  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  lebih  tinggi (P<0,05) dibandingkan dengan kontrol (Tabel 1). Aktivitas antioksidan WY lebih tinggi yogurt berbahan baku susu sapi pada penelitian Shori dan Baba (2013), yaitu sebesar 23,5%. Hal ini dikarenakan kandungan antioksidan kontrol sudah cukup tinggi.
Fungsi  antioksidan  pada whey diperkirakan  karena kandungan  laktoferin.  Laktoferin  merupakan  antioksidan nonenzimatik yang ditemukan pada fraksi whey susu sebaik pada kolostrum (Coimbra dan Teixeira, 2009). Konsentrasi ion laktoferin dalam susu sapi dan kolostrum berturut-turut sekitar 0,2 mg/mL dan 1,5 mg/mL, sedangkan konsentrasi laktoferin pada kebanyakan whey protein bubuk komersial adalah 0,35-2% dari total kandungan protein (Coimbra dan Teixeira, 2009). Mekanisme laktoferin sebagai antioksidan adalah  dengan  menangkal  ion  besi.  Laktoferin  memiliki kemampuan  mengikat  membran  sel,  meningkatkan kemampuannya  mencegah  peroksidasi  lipid  (Konishi et al . 2006 dan Larkins, 2005). Efek antioksidan pada whey juga  terdapat  pada  kandungan  gluthatione.  Glutathione merupakan  senyawa  antioksidan  dan  detoksifying  alami yang sangat potensial, hasil sintesis asam amino cystein dan methionin yang terkandung pada protein whey (Hidayat et al. 2006). Aktivitas antioksidan meningkat dengan adanya proses fermentasi  yang  ditunjukkan  dari  persentase  aktivitas antioksidan  WY  yang  lebih  tinggi  (Tabel  1). Antioksidan pada WY selain berasal dari laktoferin dan gluthation diduga juga  berasal  dari  bioaktif  peptida  yang  dihasilkan  selama fermentasi laktat. Peptida ini dienkripsi dalam protein susu dan dilepaskan selama fermentasi karena kegiatan proteolitik dari organisme yang digunakan (Aloğlu dan Öner, 2011).
Antioksidan  merupakan  suatu  senyawa  kimia yang  dalam  kadar  tertentu  mampu  menghambat  atau memperlambat  kerusakan  lemak  dan  minyak  akibat proses  oksidasi  (Winarti,  2010).  Antioksidan  dapat digunakan  untuk  mengurangi  stress  oksidatif  yang  dapat menyebabkan  jerawat  (Sarici et  al. 2010;  Batubara  dan Mitsunaga 2013). Stres oksidatif dihasilkan dari kenaikan produksi oksidan dalam sel, menyebakan proses degenaratif sehingga  mengakibatkan  peradangan  pada  kulit.  Stres oksidatif merupakan sebuah istilah untuk mengindikasikan ketidakseimbangan  antara  konsentrasi  radikal  bebas  dan konsentrasi mekanisme pertahanan antioksidan dalam tubuh (Sezer et al ., 2007).

## KESIMPULAN
Proses  fermentasi  menaikkan  jumlah  bakteri  asam laktat whey hingga 48%, dan aktivitas antioksidan hingga 27,7%. Whey Yogurt  berpotensi  sebagai  bahan  alami pencegah jerawat.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  diberikan  untuk  Lembaga Pengelola Dana Pendidikan (LPDP), Kementerian Keuangan Republik Indonesia yang telah mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Aloğlu,H.S.  dan  Z.  Öner .  2011.  Determination  of antioxidant  activity  of  bioactive  peptide  fractions obtained from yogurt. J.Dairy Sci. 94 : 5305-5314.
[AOAC] .  2005.  Official  method  of  analysis  962.09  (18th Edition)  Volume  I.  Maryland  (US):    Association  of Official Analytical Chemists Inc
[BAM]  Bacteriological    Analytical    Manual .  2011.
Quantitative Analysis of Bacteria in Foods as Sanitary Indicators.
Batubara,  I., Tohru  M.,  dan  Hideo  O .  2009.  Screening antiacne  potency  of  Indonesian  medicinal  plants: antibacterial,  lipase  inhibition,  and  antioxidant activities. J.Wood Sci. 55: 230-235.
Batubara I. dan T. Mitsunaga . 2013. Use of indonesian medicinal  plants  products  against  acne.  Reviews  in Agricultural Science 1: 11-30.
CODEX .  2003.  Codex  Standard  for  Fermented  Milks: Codex STAN 243. FAO/WHO Food Standards; Codex Alimentarius Commission.
Chen,  M.J.,  J.R.  Liu,  J.F.  Sheu,  C.W.  Lin,  dan  C.L. Chuang . 2006. Study on skin care properties of milk kefir whey. Asian-Aust. J. Anim. Sci . 6 (19): 905-908. Coimbra, J.S. dan Teixeira J.A . 2009. Engineering Aspects of Milk and Dairy Product. New York:CRC Press. De  Witt,  J.N .  2001.  Lecture’s  Handbook  on  Whey  and Whey Product. European Whey Products Association. Brussels, Belgium.
Departemen  Perindustrian .  2006.  Roadmap  Industri Susu.  Direktorat  Jenderal  Industri  Agro  dan  Kimia Departemen Perindustrian, Jakarta.
Fardiaz,  S .  1992.  Mikrobiologi  Pangan  1.  PT  Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Gaspersz, V .  1991.  Metode  Perancangan  Percobaan.  CV. Armico, Bandung.
Heyman, WR . 2006. Use Of Indonesian medicinal plants products against acne. Reviews in Agricultural Science.
1:11-30
Hidayat,  N.,  Masdiana  C.P.  dan  S.Suhartini .  2006. Mikrobiologi Industri. Penerbit ANDI Yogyakarta.
Higaki, S . 2003. Lipase inhibitors for the treatment of acne. J. Mol. Catal. B. 22:377-384.
Konishi M, Iwasa M. Yamauchi K. Sugimoto R, Fujita N, Kobayashi Y, Watanabe S, Teragouchi S, Adachi Y, Kaito M . 2006. Lactoferrin inhibits lipid peroxidation in  patient  with  chronic  hepatitis  C.  Hepatology  Res.
36: 27-32. Larkin  N .2005.  Potencial  implications  of  lactoferrin  as
therapeutic agent. Am J Vet Res. 66: 739-742. Pan, X., Chen, F., Wu, T., Tang, H., and Zhao, Z . 2009. The acid, bile tolerance and antimicrobial property of Lactobacillus  acidophilus NIT.  J.  Food  Control 20  :
598-602.
Prescott.  L.  M.,  Horley.  J.  P.,  and  Klein.  D.  A .  2002. Microbiology 5th ed. Boston: Mc Graw-Hill. Rahman, A.,  S.  Fardiaz,  W.P.  Rahaju,  Suliantari,  dan C.C.  Sawitri .  1992.  Teknologi  Fermentasi  Susu. Departemen  Pendidikan  dan  Kebudayaan  Direktorat Jenderal  Pendidikan  Tinggi  Pusat  Antar  Universitas Pangan dan Gizi. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Rolfe,  R.D .  2000.  The  role  of  probiotic  cultures  in  the control of gastrointestinal health. Symposium: Probiotic Bacteria:  Implications  for  Human  Health. American Society for Nutritional Science.
Sarici, G. S. Cinar, F. Armutcu, C. Altinyazar, R. Koca,
dan  N.S .  Tekin.  Oxidative  stress  in  acne  vulgaris. JEADV. 24: 763-767.
Sezer E, Ozugurlu F, Ozyurt H, Sahin S, Etikan I . Lipid peroxidation  and  antioxidant  status  in  lichen  planus. Clin Exp Dermatol. 32: 430–434.
Shori, A.B., dan A.S. Baba . 2013. Antioxidant activity and inhibition of key enzymes linked to type-2 diabetes and hypertension by Azadirachta indica-Yogurt. Journal of Saudi Chemical Society. 17: 295-301.
Surono,  I.S .    2004.  Probiotik  Susu  Fermnetasi  dan Kesehatan. Jakarta:Tri Cipta Karya.
Susilorini, T. E. dan M. E. Sawitri . 2006. Produk Olahan Susu. Cetakan I, Penebar Swadaya, Jakarta.
Tamime, A.Y . 2006. Fermented Milks. Blackwell Publishing Company.
Taufik, E . 2004. Aktivitas antimikroba dadih susu sapi yang difermentasi dengan berbagai starter bakteri probiotik. Penelitian  Dosen  Muda  Fakultas  Peternakan  Institit Pertanian Bogor, Bogor.
Winarti,  S .  2010.  Makanan  Fungsional.  Graha  Ilmu, Yogyakarta.