Studi Gen Parp-1 Ekson 23 pada Testis Mencit Setelah Induksi Formalin: Tidak Terdeteksi Mutasi
1) Is Karima, 2) Sri Widyarti
1) & 2) Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya
Email: 2) swid@ub.ac.id

## ABSTRAK
Penelitian      ini      bertujuan      untuk      mengetahui  pengaruh  induksi  formalin  terhadap  mutasi p a d a   g e n P A R P -1 ekson  23.  Penelitian  ini  menggunakan  hewan  coba  mencit  ( Mus  musculus )  Balb-c jantan berumur 3 bulan, berat 20-30 g, yang dibagi menjadi 3 kelompok, yaitu kelompok kontrol tanpa paparan  formalin  (KB),  kelompok  formalin  dosis  2  mg/kg  BB  (F2),  dan  kelompok  formalin  dosis  25 mg/kg  BB  (F25).  Sediaan  formalin  dalam  bentuk  cairan  diberikan  secara  peroral  menggunakan  sonde selama 60 hari. DNA diisolasi dari organ testis dilakukan amplifikasi  menggunakan primer forward (5’- GTTGTTTGTGGTT  TGTCCTA-3’)  dan reverse (5’-TTTTTAGCTCAAAATAAATGCTTAA-3’).  Hasil sekuensing menunjukkan tidak ada perubahan basa nukleotida (mutasi) gen PARP-1 ekson 23 pada testis mencit ( Mus musculus ) Balb-c setelah induksi formalin.
Kata kunci: formalin, mutasi, Parp-1, testis

## ABSTRACT
This  study  aimed  to  determine  the  effect of  formaldehyde  induction  to  the PARP-1 gene  exon 23.  The  study used  male  mice  ( Mus  musculus )  Balb-c  3  month  old,  20-30  g  of body weight, that were divided  into  3  groups:  a  control  group  (KB),  formaldehyde  group  with  a  dosage  2  mg/kg  of  body weight  (F2), and  formaldehyde  group  with  a  dosage  25  mg/kg  of  body  weight  (F25).  Formaldehyde was  orally  given  1  ml  each  day  for  60  days  continuously.  DNA  was  isolated  from  testis  and  the PARP-1 gene exon 23 was amplified by PCR with the forward primer (5'- GTTGTTTGTGGTTTGTCCTA-3')  and  reverse  (5'-TTTTTAGCTC  AAAATAAATGCTTAA-3'). Sequencing  results  in  this  study  showed  that  there  was  no  mutation  of PARP-1 gene  exon  23  in  mice ( Mus  musculus )  Balb-c  testis  after formaldehyde induction.
Keywords: formalin, mutation, testis , Parp-1

## PENDAHULUAN
Formalin      adalah      bahan      kimia berbahaya      yang      dapat  menimbulkan dampak serius  bagi  kesehatan. Formalin  dapat berbentuk gas, cair, atau padatan memiliki bau menyengat  yang  biasanya  digunakan  sebagai bahan  pengawet  (spesimen  penelitian,  mayat), desinfektan,  dan  digunakan  pada  bidang industri.  Berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No.722/MenKes/Per/IX/88 tentang Bahan
Tambahan Makanan, satu dari beberapa bahan pengawet  yang  dilarang  adalah  formaldehida atau yang  lebih  dikenal  dengan  nama  dagang formalin  [ 1 ] .   Namun saat ini penggunaannya banyak disalahgunakan untuk pengawet makanan  dan  pada  umumnya  tidak  disadari oleh  masyarakat.  Dalam  tubuh  manusia  dan binatang,  paparan  formalin  yang  berlebihan dapat  bersifat  mutagenik  dan  karsinogenik,
serta dapat menyebabkan iritasi selaput lendir, pernapasan atas, mata, dan kulit [2].
Formalin  dapat  terhirup  melalui  polusi udara  dan  asap  rokok.  Metabolisme  formalin akan  menghasilkan  asam  format.  Selanjutnya, akumulasi  asam  format  dapat  menyebabkan asidosis  yang  akan  mengganggu  kerja  enzim. Formalin  dengan  konsentrasi  tinggi  dalam tubuh  dapat  memicu  produksi reactive oxygen  species (ROS)  dan radikal  bebas  yang dapat  merusak  sel  atau  jaringan  dalam  tubuh. Peningkatan  kadar  ROS  dapat  menyebabkan stres  oksidatif  yang  menginduksi  kerusakan oksidatif  berbagai  molekul  dalam  sel  seperti protein, karbohidrat, lemak dan DNA. Apabila  kerusakan  DNA  tidak  dapat  diatasi dan  terjadi  sebelum  replikasi  maka  akan terjadi  mutasi  [3].  Namun  dampak  langsung paparan  formalin  terhadap  DNA  sejauh  ini belum  diketahui  secara  pasti  [4].  Jika intake
formalin  melebihi batas yang sudah ditetapkan maka  dapat  menyebabkan  efek  toksik  bagi tubuh.
Kerusakan DNA akibat bahan karsinogen  dapat  terjadi  pada  gen Parp-1. Poly(ADP-ribose  polymerase-1) merupakan salah  satu  protein  yang  terlibat  dalam  respon terhadap kerusakan   DNA, cell   cycle   arrest , dan  apoptosis  [5].  Protein Parp-1 disintesis dalam  jumlah  rendah  pada  kondisi  fisiologis dan  mengalami  peningkatan  jika  terjadi kerusakan  DNA.  Gen Parp-1 ekson  23 mengkode  domain katalitik  yang  berisi motif PARP  signatur  yang  membentuk  situs  aktif [6].
Dalam dekade terakhir Parp-1 diketahui memainkan  peran  penting  dalam  perbaikan kerusakan  DNA  dari  sel  germinal  dan apoptosis pada sel germinal testikular. Beberapa  studi  menunjukkan  efek  teratogenik dan sitotoksik formalin, salah satunya melaporkan pemberian formalin secara intraperitoneal dosis tinggi dapat menyebabkan  perubahan  sel  spermatogonium [7].  Selanjutnya  dalam  studi  lain  pemberian formalin  menyebabkan  penurunan  motilitas dan jumlah spermatozoa.   Data dari penelitian Imron  [8]  menunjukkan  bahwa  perlakuan  oral formalin 2 mg/kg BB dan 5 mg/kg BB selama tiga  bulan  menyebabkan  perubahan  struktur histologis  testis  mencit.  Namun  demikian, belum ada bukti ada tidaknya perubahan  pada level  gen.  Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan penelitian  untuk  mengetahui  pengaruh  induksi formalin pada testis mencit yang memungkinkan  terjadinya  perubahan  DNA terutama pada gen Parp-1 .

## METODE PENELITIAN

## Perlakuan Hewan Coba
Mencit    ( Mus    musculus )    Balb-c jantan    berumur    3    bulan  dibagi  menjadi  3 kelompok,  yaitu  kelompok  kontrol  tanpa paparan  formalin    (KB),    kelompok    formalin dosis    2    mg/kg    BB    (F2),    dan  kelompok formalin  dosis  25  mg/kg  BB  (F25).  Sebelum perlakuan, mencit    diaklimatisasi    selama    7 hari    di    dalam    laboratorium,  diberi  pakan berupa  pellet  serta  minum  secukupnya,  dan mencit dipuasakan selama 18-20 jam. Sediaan formalin dalam bentuk cairan diberikan secara peroral menggunakan sonde setiap hari selama 60 hari.

## Pembedahan  Hewan  Coba  dan  Koleksi Organ
Mencit didislokasi  leher, dibedah, diambil  organ  testis,  dan  dilakukan      perfusi terhadap      organ      testis      menggunakan larutan fisiologis NaCl 0,9 % untuk menghilangkan  darah  dari  organ.  Organ  testis kemudian dimasukkan dalam nitrogen cair dan disimpan pada suhu -20°C.

## Isolasi DNA Organ
Prosedur isolasi  DNA diadopsi  menurut Ausubel  dkk  [9].  Organ  testis  ditimbang sebanyak  20  mg.  Testis  dihomogenasi  dalam mortar dan pestel. Homogenat ditambah 250 µl digestion  buffer (100  mM  NaCl;  10  mM Tris  Cl,  pH  8;  25  mM EDTA,   pH   8;   0,5
%    (w/v)    SDS;    0,1   mg/ml proteinase   K ) dan  dimasukkan  dalam  tabung  ependorf  1,5 ml.  Selanjutnya  ditambah  3  µl proteinase K , di vorteks ,  dan  diinkubasi  pada  suhu  55  °C selama 12-18  jam.  Homogenat  ditambah larutan CI ( chloroform:isoamyl alcohol ) sebanyak  250  µl  dan  disentrifugasi  pada kecepatan  4000 rpm,  4  °C  selama  10  menit.
Lapisan  supernatan  yang  terbentuk  diambil, ditambah    larutan    CI    sebanyak    volume supernatan    yang terambil (1:1), dan disentrifugasi  pada  kecepatan  4000  rpm,  4 °C  selama  10  menit.  Untuk  tahap  purifikasi DNA, supernatan dipindah ke tabung ependorf  baru,  ditambahkan  1,5  volume  7,5 M Ammonium  acetate dan  2  kali  volume etanol  absolut.  Kemudian  disentrifugasi  pada kecepatan  10000  rpm,  4  °C  selama  10  menit. Supernatan  dibuang,  pelet  ditambah  etanol 70  %  sebanyak  500  µl,  dan  disentrifugasi kembali  pada  kecepatan  10000  rpm,  4  °C selama 10 menit. Selanjutnya pelet dikeringanginkan  dan  ditambah TE  buffer sebanyak  50  µl  hingga  DNA  larut.  Isolat kemudian disimpan pada suhu 4 °C.

## PCR ( Polymerase Chain Reaction )
Sampel  DNA  testis  dilakukan  PCR untuk  mengamplifikasi  gen PARP-1 ekson 23.    Ukuran  produk  amplifikasi  gen PARP-1 ekson  23  sebesar  245  bp  ( base  pairs ). Primer forward dan reverse yang  digunakan dirujuk  dari  penelitian  Widyarti  &  Wibi (2009), yaitu primer forward (5’-
GTTGTTTGTGGTTTGTCCTA-3’)
dan reverse (5’-TTTTTAGCTCAAAATAAATG CTTAA-3’).  Komposisi  reaksi  untuk  proses PCR sebagai berikut (Tabel 2):
Tabel 1. Komposisi reaksi untuk amplifikasi gen
PARP-1 ekson 23 No Komposisi Volume (µl) Konsentrasi 1 BSA 6 400 ng/µl 2 Primer forward 3 10 pmol/µl 3 Primer reverse 3 10 pmol/µl 4 PCR Mix ( KAPA 2G Fast Ready Mix ) 15 100 ng/µl 5 DNA template 3 400 ng/µl
Proses PCR  menggunakan  instrumen TaKaRa PCR  Thermal  Cycler dengan program sebagai berikut (Tabel 3).
Tabel 2. Program PCR gen PARP-1 ekson 23 No Proses Suhu Waktu 1 Denaturasi awal 95°C  5 menit Denaturasi 95°C 2 Annealing 55°C  45 detik Ekstensi 72°C 3 Ekstensi akhir 72°C  10 menit

## Elektroforesis Gel Agarosa 1,5 %
Elektroforesis  gel  agarosa  1,5    % dilakukan  untuk  mengetahui  keberhasilan PCR. Alat yang digunakan adalah plate, comb, dan chamber . Plate yang telah terpasang comb diatur kedatarannya dengan waterpass . Selanjutnya bubuk agarosa ditimbang sebanyak    0,3    g    dalam    erlenmeyer    dan ditambah    TBE  buffer  1X  dengan  volume  20 ml.  Erlenmeyer  yang  berisi  larutan  agarosa kemudian    ditutup    dengan plactic    wrap (dilubangi    bagian  atasnya  untuk  penguapan) dan  dipanaskan  dalam microwave selama  1-2 menit  pada  suhu  medium  (50  °C)  hingga mendidih  dan  terlihat  bening.  Selanjutnya ditambah  3  µl  EtBr  dan  dihomogenkan. Larutan  agarosa  dituang  ke plate dan didiamkan  ±  1  jam  hingga  gel  mengeras. Setelah  gel  agarosa  mengeras, comb dilepas, plate dipasang  ke chamber ,  dan  dituang  TBE buffer  1X  sampai  gel  terendam.  Sampel  hasil amplifikasi  dan  DNA marker (O'GeneRuler™ 50  bp)  masing-masing  diambil  sebanyak  3  µl dan dimasukkan dalam tiap sumuran . Elektrode dihubungkan  dengan power  supply pada  tegangan  100 volt selama 30-45   menit. Gel      hasil  elektroforesis      diambil,
divisualisasikan  dengan UV  transluminator, dan didokumentasikan dengan kamera polaroid.
Sekuensing Gen Parp-1 Ekson 23
Produk  PCR  akan  diperoleh  amplikon  yang digunakan untuk sekuensing.   Sekuensing gen Parp-1 ekson 23 dilakukan menggunakan jasa firstbase Malaysia  melalui  PT.  Genetika Science  Jakarta.  Data  hasil  sekuensing dianalisis  menggunakan software  sequencing scanner .  Data  sekuen  dipilih  berdasarkan urutan basa nukleotida terbaik yang ditunjukkan  oleh  warna  biru,  dimana  warna biru menunjukkan pembacaan atau penerjemahan  basa  nukleotida  yang  valid, artinya  sekuen  yang  dihasilkan  adalah  kuat. Kemudian sekuen tersebut dikonfirmasi menggunakan  BLAST  yang  terdapat  di  NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) untuk mengetahui  persentase  kesamaan  sekuen  gen Parp-1 ekson  23  pada  sampel  penelitian dengan  yang  dimiliki database .  Data  hasil sekuensing pada sampel penelitian selanjutnya    dibandingan    dengan    sekuen gen Parp-1 ekson  23  dari  NCBI  dengan pensejajaran
( alignment )
menggunakan ClustalW  pada software  BioEdit untuk mengetahui posisi sekuen target dan perbedaan basa nukleotida apabila terjadi mutasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  menggunakan  12  (dua belas)  sampel  yang  terdiri dari sampel kontrol tanpa  paparan  formalin  (KB), treatment formalin  dosis  2  mg/kg  BB  (F2),  dan treatment formalin  dosis  25  mg/kg  BB  (F25). Kedua  belas  sampel  dilakukan  isolasi  DNA kemudian  isolat  tersebut  digunakan  sebagai bahan untuk proses PCR.
Hasil  Amplifikasi  Gen Parp-1 Ekson  23 pada Testis Mencit ( Mus musculus ) Hasil amplifikasi gen Parp-1 ekson 23 pada  sampel  kontrol,  formalin  2  mg/kg  BB, dan  formalin  25  mg/kg  BB  menghasilkan amplikon sebesar 245 bp (Gambar 1).
Kedua  belas  sampel  menunjukkan amplikon  245    bp (base  pairs ).  Basa nukleotida  pada  DNA template dapat  dikenali oleh primer  sehingga  terjadi penempelan  yang spesifik  diantara  keduanya  dan  menghasilkan. Pita  DNA  menunjukkan  ketebalan  yang berbeda. DNA isolat yang diperoleh kemungkinan berjumlah sedikit, sehingga yang
1 Siklus
33 Siklus
1 Siklus
berhasil teramplifikasi juga sedikit dan tampak tipis  ketika  divisualisasi.  Amplikon  tersebut kemudian  disekuensing  untuk  mengetahui  ada tidaknya perubahan sekuen nukleotidanya untuk menentukan  ada  tidaknya  mutasi.  Proses sekuensing  hanya  dilakukan  pada  empat sampel  dengan  amplikon  yang  jelas,  yaitu sampel  kontrol  (KB)  sebanyak  dua  ulangan dan  sampel treatment (F25)  sebanyak  dua ulangan.  Sampel  yang  tidak  memperlihatkan amplikon yang jelas dimungkinkan konsentrasi  DNA template sangat  sedikit sehingga tidak dilanjutkan ke proses sekuensing.
Gambar 1 . Hasil amplifikasi gen Parp-1 ekson 23 pada testis mencit ( Mus musculus )
Balb-c
Alignment Hasil  Sekuensing  Gen Parp-1 Ekson  23  pada Testis  Mencit  ( Mus musculus )
Pengujian  sekuen    dari    keempat sampel    penelitian    dengan  data  sekuen  dari database NCBI  diperlukan  untuk  pembuktian posisi  sekuen  target.  Pembacaan  sekuen  gen Parp-1 ekson  23  dimulai  dari  basa    ke  3464 hingga  3533  berdasarkan  sekuen  gen PARP-1 Mus  musculus (NM_007415.2)  sebanyak  70 bp (Gambar 2).
Gambar 2. Alignment hasil sekuensing gen PARP- 1 ekson 23 pada testis mencit ( Mus musculus )
Data  hasil  sekuensing  menunjukkan tidak  terjadi  perubahan  basa  nukleotida, artinya  bahwa  pada  sampel  kontrol  dan formalin  dosis  25    mg/kg    BB    tidak mengalami   mutasi.  Tidak terdapatnya mutasi mengindikasikan bahwa fungsi protein Parp-1 tidak  mengalami  gangguan  aktivitas  sebagai sensor  kerusakan  DNA.    Data  histologi  testis sesudah  perlakuan formalin  pada  penelitian sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Imron (2010), menyebutkan bahwa perlakuan formalin  dosis  2  mg/kg  BB  dan  5  mg/kg  BB terjadi penurunan diameter tubulus seminiferus masing- masing 4,18 % dan 5,78 %, penipisan epitel  tubulus  seminiferus  masing-masing 13,91  %  dan  29,37  %,  penurunan  jumlah  sel spermatogonium  masing-masing  12,29  %  dan 39,64  %,  penurunan  jumlah  sel  spermatozoa masing-masing  41,16  %  dan  60,14  %  yang diikuti      oleh      penurunan      lapisan spermatogenik      masing-masing  sebesar  27,78 %  dan  35,19  %,  serta  terjadi  atropi  tubulus seminiferus.  Paparan  formalin  dosis  2  mg/kg BB  dan  5  mg/kg  BB  juga  menyebabkan atropi tubulus seminiferus testis mencit.
Penurunan  jumlah  sel  spermatogonium diduga  karena  terjadi  peningkatan  ROS.  Hal ini  sesuai  dengan  penelitian  Zhou  [10]  yang melaporkan  bahwa treatment formalin  secara inhalasi  pada  mencit  dapat  menurunkan efektivitas  sistem  antioksidan  testis  sehingga mengakibatkan penghambatan spermatogenesis,  menurunnya  jumlah  sel-sel spermatogenik,  dan  mengelupasnya  sel-sel epitel  seminiferus.  Berdasarkan  hasil  dari penelitian  ini,  terdapat  indikasi  bahwa menurunnya sistem antioksidan karena formalin  bisa  diatasi  oleh  sistem  perbaikan DNA.
Dalam  situasi  stress  oksidatif  yang parah  atau  berkelanjutan,  kerusakan  DNA mengakibatkan hiperaktifasi Parp-1 yang akan mengaktifkan mode kematian sel dari apoptosis  ke  nekrosis.  Hal  ini  dimungkinkan terjadi  karena Parp-1 mengalami PARylation sehingga mengakibatkan degradasi dan kematian  sel.  Pelepasan PAR dari PARP-1 (oleh PARG ) dapat memungkinkan
diaktifkannya PARP-1 untuk  mengikat  DNA break dan  menggunakan  lebih  NAD + untuk melanjutkan  siklus.  NAD + nantinya  akan  diisi
kembali  oleh  enzim nicotinamide yang mensintesis NAD + dari nicotinamide mononukleotida  dan  ATP.  Jika  tidak  diisi
ulang  atau  berlebihan  digunakan      untuk hiperaktivasi Parp-1 ,      NAD + akan menipis  (deplesi)  yang  akan  mengganggu metabolisme energi sehingga sel akan mengalami  nekrosis  [11].  Deplesi  NAD + dapat  memblokir  glikolisis  dan  juga  akan memblokir pengiriman substrat turunan glukosa ke mitokondria.
Parp-1 dipecah menjadi fragmen protein  89  kDa  dan 24 kDa  selama apoptosis. Pemecahan  ini  diperkirakan  terjadi  dalam berbagai  t ah ap   per kemb angan  t e s t i ku l a r d a n   pada  t est i s  dewasa  [12].  Pemecahan Parp-1 dimungkinkan untuk mencegah terjadinya  over  aktivasi  dan  deplesi  energi. Selama  tahap  awal  spermatogenesis  banyak sel  germinal  yang  mengalami  apoptosis, t e r u t a m a   p a d a   t a h a p   s p e r m a t o s i t . Dugaan l a i n  yang dapat dikemukakan terkait tidak  a d a n y a   mutasi  adalah  kerusakan DNA  yang  terjadi  berada  pada  level  rendah atau  sedang  sehingga PARP-1 masih  dapat berfungsi  sebagai  faktor survival dengan mekanisme  protein checkpoint pada  siklus  sel masih  baik.  Mencit  yang  digunakan  berusia sekitar tiga bulan dapat dikatakan  mencit  telah dewasa,  dimana  hal  ini  membuktikan  peran PARylation terkait  perbaikan  DNA  dan apoptosis sebagian besar dilakukan pada tahap awal  spermatogenesis  dan  meningkat  selama tahap  akhir  maturasi  sperma  seperti  yang diungkapkan oleh El- Domyati dkk. [13].
Telah dilaporkan bahwa Parp-1 terlibat  dalam  perbaikan  SSB (Single  Strand Break) ,      DSB (Double  Strand  Break) ,      dan BER (Base  Excision  Repair) ,      sehingga Parp-1 berinteraksi   dengan berbagai protein yang  terlibat  dalam  jalur  tersebut.  Dalam penelitian  El-Domyati  dkk.  [13]  melaporkan tingkat ekspresi Parp-1 pada tahap spermatosit menurun  drastis  sedangkan  pada  tahap spermatid  ekspresi  itu  kembali.  Hal  ini menunjukkan  bahwa PARylation mungkin terlibat dalam proses seluler yang berbeda dari perbaikan  DNA.  Kehadiran Parp-1 dalam tahap  spermatid  telah  dikaitkan  dengan  peran dalam  memfasilitasi  aktivitas  DSB  selama remodeling kromatin pada  spermiogenesis.
Efek  yang  paling  menonjol  dari  peningkatan level  PAR  setelah  aktivasi Parp-1 adalah pengaktifan      kematian      sel  melalui c a s p a s e - independent.
Caspase  9 diketahui  terdapat  dalam  sel Sertoli,  sehingga  dapat      dikatakan      bahwa
caspase      9 mungkin      berperan      dalam koordinasi  apoptosis  pada  testis.    Dapat disimpulkan peran PARylation terkait perbaikan  DNA  dan  apoptosis  sebagian  besar dilakukan  pada  tahap  awal  spermatogenesis. Dalam  tahap  akhir  dari  spermiogenesis, apoptosis    digunakan    tidak    hanya    sebagai mekanisme  program  kematian  sel  tetapi sebagai sarana untuk memfasilitasi remodeling sitoplasma  yang  terjadi  selama  tahap  akhir maturasi sperma.
Mutasi  merupakan  kejadian  acak  dan tidak  bisa  ditentukan  akan  terjadi  pada  suatu gen  atau  suatu  generasi  [14].  Meskipun treatment formalin        dosis      25      mg/kg BB        belum  membuktikan  efek  mutasi  pada gen PARP-1 ekson 23 pada basa nukleotida ke 3464  hingga  3533,  mutasi  mungkin  saja terjadi  pada  ur ut an  nukl eot i da  yan g  l ai n atau  pada    gen    yang    lain.    Mengingat metabolism  formalin  terjadi  dengan  cepat dalam  waktu  kurang  dari  dua  menit,  paparan formalin  dari  luar  tidak  memberikan  dampak langsung  pada  level  genetik  meskipun  secara histologis  memberikan  perubahan  struktur sehingga  dimungkinkan  sel  telah  mengalami recovery sebelumnya.  Untuk  memastikan toksisitas  formalin  secara  pasti  maka  perlu untuk dilakukan pengukuran metabolit formalin dalam serum dan urin.
Hasil  penelitian Myers  dkk.  [15]  terkait pemberian  formalin  melalui  rektal  pada mamalia,  kadar  30  ml  formalin  menunjukkan asam  format  dalam  serum  mencapai  tingkat beracun dalam waktu 15 menit pertama hingga 300  mg/ml  dan  kemungkinan  akan  tetap bertahan selama beberapa jam.  Namun tingkat beracun  formalin  dalam  serum  ini  akan kembali normal dalam waktu 3 jam. Metabolit formalin  dalam  urin  juga  meningkat  dalam waktu  15  menit  sesaat  setelah  kenaikan  kadar formalin  dalam  serum.  Meskipun  tingkat beracunnya formalin belum diketahui, Penelitian  Eells  dkk.  [16]  melaporkan  bahwa pada manusia, konsumsi 120 ml formalin 37 % menghasilkan  kadar  asam  format  mencapai 500 mg/L dan mengakibatkan kematian pasien 28 jam setelah konsumsi.

## KESIMPULAN
Paparan  formalin  dosis  2  dan  25  mg/kg  BB tidak  menghasilkan  mutasi  gen PARP-1 ekson 23.  Tidak  terjadi  perubahan  basa  nukleotida urutan ke 3464 hingga 3533 pada testis mencit ( Mus musculus ) strain Balb-c.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Cahyadi,      W.      2006. Analisis      dan Aspek      Kesehatan:      Bahan Tambahan  Pangan .  Bumi  Aksara. Jakarta.
[2] Norliana,  S.,  Abdulamir  A.S.,  Abu  Bakar F.,  &  Salleh  A.B.  2009.  The  Health Risk  of  Formaldehyde  to  Human
Beings. American Journal of
Pharmacology  and  Toxicology, 4  (3): 98-106.
[3]  Allen,    R.G.    &    Tressini    M.    2000. Oxidative Stress and Gene
Regulation. Free Radical Biology Medicine ,  28:  463-499.
[4]  Widyarti,  S.  &  Wibi  R.  2009. Laporan Penelitian  Hibah  Penelitian Strategis
Nasional:  Potensi  Formalin  dalam Meningkatkan  Kerentanan  Mutasi
Gen Parp-1 dan Suseptibilitas terhadap    Bahan    Karsinogenik . Universitas   Brawijaya. Malang.
[5] Kim, M.Y., Zhang T., & Kraus W.L. 2005. Poly(ADP-ribosyl)ation  by PARP-1 :
‘PAR-laying’  NAD + into  a  Nuclear Signal. Genes  Development ,  19:  1951- 1967.
[6]  Yelamos,  J.,  Jordi  F.,  Laura  L.,  Coral  A., &  Juan  M.C.  2011.  Review  Article PARP-1 and PARP-2 :   New   Players in    Tumour  Development. American Journal of Cancer Research , 1 (3): 328- 346.
[7]  Golalipour,  M.J.,  Azarhoush  R.,  Ghafari S.,  Gharravi  A.M.,  Fazeli  S.A.,  & Davarian A. 2007. Formaldehyde
Exposure Induces  Histopathological and    Morphometric    Changes    in    The Rat  Testis. Folia  Morphology ,  66  (3): 167-171.
[8]  Imron,  M.T.A.  2010. Studi  Paparan
Formalin terhadap Struktur Histologi Testis Mencit ( Mus musculus )  BALB/c .  Jurusan  Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Brawijaya. Malang. Skripsi. [9]  Ausubel,  F.M.,  Roger  B.,  Robert  E.K., David  D.M.,  Seidman  J.G., John   A.S., &      Kevin      S.      2003. Current Protocols   in Molecular Biology . John Wiley & Sons, Inc. USA.
[10]  Zhou,  D.X.,  Qiu  S.D.,  Wang  Z.Y.,  & Zhang  J.  2005.  The  Protective Effect of Vitamin  E  Against  Oxidative  Damage Caused  by  Formaldehyde  in  the  Testes of  Adult  Rats. Asian  Journal  of Andrology , 8: 584-588.
[11] Alano, C.C., Garnier P., Ying W., Higashi Y.,  Kauppinen  T.M.,  Swanson  R.A. 2010.  NAD + Depletion  is  Necessary and  Sufficient  for  Poly(ADP-ribose)
Polymerase-1 Mediated
Neuronal
Death. Journal  Neurosci ,  30:  2967- 2978.
[12] Meyer-Ficca,  M.L.,  Lonchar  J.,  Credidio C.,  Ihara  M.,  Li  Y.,  Wang  Z.Q.,  & Meyer  R.G.  2009.  Disruption  of Poly(ADP-Ribose) Homeostasis  Affects Spermiogenesis  and  Sperm  Chromatin Integrity in Mice. Biology of Reproduction , 81: 46-55. [13] El-Domyati, M.M.M.D., Abo B.M.A.D.M.D., Manal T.B.M.D., Hasan M.E.F.M.D.,    Jiasen    X.,    &    Denny S.      2009.  Deoxyribonucleic  Acid Repair  and  Apoptosis  in  Testicular
Germ  Cells  of  Aging  Fertile  Men:  The
Role of The Poly(adenosine diphosphate-ribosyl)ation Pathway. Elsevier , 91 (5): 2221-2229.
[14]  Corebima,      A.D.      2000. Genetika Mutasi    dan    Rekombinasi . Handout Perkuliahan. Universitas Negeri Malang. Malang.
[15]  Myers,  J.A.,  Mall  J.,  Doolas  A.,  Jakate S.M., & Saclarides T.J. 1997. Absorption Kinetics of Rectal
Formalin  Instillation. World Journal of Surgery , 21: 886-889.
[16]  Eells,      J.T.,      Mc      Martin,      Black      K. 1981.   Formaldehyde Poisoning:  Rapid Metabolism  to  Formic  Acid. JAMA , 246:1237-1238.