## DAYA HAMBAT ZAT ANTI MIKROBA EKSTRAK DAUN SAMBILOTO (Andrographis paniculata (Burm.f.) Ness) TERHADAP PERTUMBUHAN

## JAMUR Candida albicans SECARA IN-VITRO
Syaiful Eddy e-mail: syaifuleddy@gmail.com
Dosen Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas PGRI Palembang

## ABSTRACT
The  ability  of  sambiloto  leaves  ekstract  (Andrographis  paniculata  (Burm.f.) Ness)  to  inhibited  of  Candida  albicans  growth  by  used  in-vitro  method  has  been carried  out  from  April  to  Mei  2008  in  Balai  Besar  Laboratorium  Kesehatan Palembang.  The  research  objectives  were  to  obtain  information  about  the  ability  of sambiloto  leaves  ekstract  to  inhibit  Candida  albicans  growth.  It  used  RAL  method with 5 treatments (0%, 10%, 30%, 50% and 70% w/v) and 3 replications. The results analysed  by  F-test  and  BNT-test.  The  results  indicated  that  sambiloto  leaves  extract could be inhibited of Candida albicans growth. The treatment of 70% w/v showed the clear  zone  diametre  bigger  than  other  treatments.  The  result  indicated  that  higher concentration made diametre of clear zone bigger.
Key words : sambiloto leaves extract, clear zone, Candida albicans.

## ABSTRAK
Penelitian  tentang  daya  hambat  anti  mikroba  ekstrak  daun  sambiloto (Andrographis  paniculata  (Burm.f.)  Ness)  terhadap  pertumbuhan  jamur  Candida albicans  secara  in-vitro  telah  dilakukan  di  Balai  Besar  Laboratorium  Kesehatan Palembang  pada  bulan  April  sapai  dengan  Mei  2008.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui besarnya daya  hambat zat anti mikroba ekstrak daun sambiloto terhadap pertumbuhan  jamur  Candida  albicans.  Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  dengan  5  perlakuan  konsentrasi  ekstrak  daun  sambiloto  yaitu  0%, 10%,  30%,  50%  dan  70%  b/v  masing-masing  diulang  sebanyak  3  kali.  Data  yang diperoleh berupa diameter zona hambat dianalisis dengan analisis sidik ragam (uji F) dan  uji  Beda  Nyata  Terkecil  (BNT).  Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa ekstrak daun sambiloto memiliki kemampuan dalam menghambat pertumbuhan jamur Candida  albicans  secara  in-vitro.  Ekstrak  daun  sambiloto  pada  konsentrasi  70% memberikan  hasil  berupa  diameter  zona  hambat  rata-rata  terbesar  yaitu  11,89  mm sedangkan  konsentrasi  0%  memiliki  diameter  zona  hambat  rata-rata  terkecil  yaitu  3 mm. Ada kecenderungan semakin besar konsentrasi ekstrak daun sambiloto semakin besar pula diameter zona hambat.
Kata kunci : ekstrak daun sambiloto, zona hambat, Candida albicans.

## PENDAHULUAN
Penyakit infeksi yang disebabkan  oleh  bakteri,  jamur  dan virus  banyak  ditemukan  di  negara- negara beriklim tropis termasuk
Indonesia.  Daerah  beriklim  tropis sangat  cocok  bagi  pertumbuhan  dan perkembangbiakan mikroba, baik yang bersifat patogen maupun yang memberi manfaat bagi manusia. Menurut Akmal (1993), sampai saat ini penyakit  infeksi  di  Indonesia  masih menduduki urutan teratas dalam penyebarannya,  sehingga  dibutuhkan biaya  penanggulangan  yang  cukup besar  terutama  untuk  pengadaan  obat- obatan golongan antibiotika.
Berbagai  cara  dapat  dilakukan dalam  rangka  mengantisipasi  penyakit infeksi, salah satunya dengan
memanfaatkan  obat  tradisional  seperti tanaman  obat.  Adapun  yang  dimaksud dengan obat tradisional adalah  ramuan bahan alam yang berasal dari tumbuhan,  hewan  dan  mineral,  atau campuran  bahan-bahan  tersebut  yang secara  tradisional  telah  di  sesuaikan untuk pengobatan secara alami.
Penggunaan  bahan  alam,  baik sebagai  obat  maupun  tujuan  lain cenderung  meningkat,  terlebih  dengan adanya  isu  back  to  nature  serta  krisis berkepanjangan  yang  mengakibatkan turunnya daya beli masyarakat (Maheshwari,  2002).  Sementara  ini banyak  orang  beranggapan  bahwa penggunaan  obat  tradisional  relatif lebih aman dibandingkan obat sintetik.
Walaupun demikian bukan
berarti  obat  tradisional  tidak  memiliki efek  samping  yang  merugikan,  bila penggunaannya  kurang  tepat.  Agar penggunaannya
optimal, perlu diketahui  informasi  yang  memadai tentang  kelebihan  dan  kelemahan
dalam  penggunaan  obat  tradisional (Saptorini, 2000).
Indonesia merupakan salah satu negara  yang  kaya  akan  obat-obat tradisional,  khususnya  tanaman  obat. Letak  Indonesia  di  garis  katulistiwa dengan  iklim  tropis  menyebabkan tanahnya subur dan kaya akan keanekaragaman hayati. Keanekaragaman  flora  di  Indonesia sangat  luar  biasa,  namun  belum sepenuhnya dimanfaatkan secara
optimal.  Hal  ini  menuntut  kita  untuk berperan  aktif  dalam  menggali  potensi sumber  daya  alam  terutama  tanaman obat. Tumbuhan Sambiloto (Andrographis  paniculata  (Burm.f.) Ness)  merupakan  salah  satu  dari berbagai jenis tumbuhan yang dimanfaatkan  sebagai  tanaman  obat. Komponen  utama    sambiloto  adalah andrographolide  yang  memiliki  multi- efek  farmakologis.  Zat  ini  mampu menghambat  pertumbuhan  sel  kanker hati,  payudara  dan  prostat.  Sebagai koleretik andrographolide dapat meningkatkan  aliran  empedu,  garam empedu  dan  asam  empedu,  selain  itu zat  yang  terasa  pahit  ini  juga  bisa meningkatkan produksi antibodi (Prapanza, 2003).
Secara  tradisional  sambiloto telah  dipergunakan  untuk  pengobatan akibat  gigitan  ular  atau  serangga,
demam, dan disentri, rematik, tuberkulosis,  infeksi  pencernaan,  dan lain-lain. Sambiloto juga dimanfaatkan untuk
antimikroba/antibakteri, antihyperglikemik,  anti  sesak  napas dan  untuk  memperbaiki  fungsi  hati. Mengingat  fungsinya  yang  cukup besar, saat ini sambiloto banyak diteliti untuk  dikembangkan  sebagai  bahan baku obat modern, diantaranya pemanfaatan  sambiloto  sebagai  obat
HIV  dan  kanker  (Calabrese,  et.al., 2000).
Menurut  Pelczar  dan  Chan (1988),  Candida  albicans  merupakan jamur patogen yang dapat menimbulkan kandidiasis, yaitu
penyakit  pada  selaput  lendir  mulut,
vagina, dan saluran pencernaan.
Infeksi yang  lebih  gawat  dapat menyerang jantung (endokarditis), darah (septisemia), dan otak (meningitis).  Mengingat  bahaya  yang dapat  ditimbulkan  jamur  ini,  maka perlu dilakukan penelitian untuk mencari  tumbuhan  obat  yang  mampu mengatasinya.  Salah  satu  alternatif tanaman  obat  yang  dapat  digunakan adalah tanaman sambiloto.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  5  perlakuan  dan  3  ulangan. Penelitian ini dilakukan di Balai Besar Laboratorium  Kesehatan  Palembang pada  bulan  April  s/d  Mei  2008.  Alat yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  cawan  petri,  pipet  mikro, tabung  reaksi,  pipet  tetes,  erlenmeyer, timbangan,  penjepit  kayu,  kain  kassa, pinset,  jarum  ose,  lampu  spritus,  gelas ukur,  beaker  gelas,  kapas,  inkubator, seperangkat  alat  destilasi,  autoklaf, jangka  sorong  dan  kertas  cakram. Bahan  yang  digunakan  adalah  daun tumbuhan sambiloto, medium Mueller- Hiton  (MHA),  aquadest,  Etanol  96  %. Jamur uji yang digunakan adalah jamur Candida albicans.

## Cara Kerja
a. Pengujian Sampel
Diambil  koloni  jamur  Candida albicans  dari  medium  Nutrient  Agar (NA) dengan menggunakan jarum ose,
kemudian  disuspensikan  ke  dalam pelarut  NaCl  fisiologis  dalam  tabung reaksi  dan  dikocok  sampai  homogen. Kekeruhan  suspensi  mikroba  diukur dengan  alat  spektrofotometer  yaitu pada λ 530  nm  dengan  transmitan 25%.
Disediakan Medium MHA dalam cawan  petri  yang  telah  disiapkan. Dengan  mulut  cawan  yang  masih menghadap  api  bunsen,  kemudian diambil  suspensi  jamur  uji  sebanyak  1 ml  dan  dituangkan  ke  permukaan medium    secara  merata.  Kemudian digoyang-goyangkan membentuk angka delapan sebanyak 5 kali. Setelah permukaan agar-agar lempengan dalam cawan  petri  terpenuhi  suspensi  jamur, maka medium pembenihan  siap untuk di uji.
Ekstrak  kental  daun  sambiloto diencerkan dengan beberapa
konsentrasi  yaitu 0%, 10%, 30%, 50% dan  70%  b/v  dengan  aquadest  steril. Diambil  medium  pembenihan  yang telah  diinokulasi  jamur  uji,  lalu diletakkan kertas cakram  yang telah di celupkan  ke  dalam  ekstrak  daun sambiloto  hasil  pengenceran  ke  dalam medium  pembenihan.  Masing-masing konsentrasi perlakuan diulang sebanyak  3  kali.  Kemudian  diinkubasi selama 24 jam pada suhu 25ºC.

## b. Analisis Data
Setelah  masa  inkubasi  berakhir, masing-masing perlakuan diukur
diameter  zona  hambatnya  sebanyak lima  kali  lalu  dirata-ratakan  sesuai rumus sebagai berikut:
d 1 + d 2 + d 3 + d 4 + d 5 d   =  _____________________ 5

## Keterangan:
d  =  Diameter zona hambat rata-rata d 1 =  Diameter zona hambat pertama d 2 =  Diameter zona hambat kedua d 3 =  Diameter zona hambat ketiga d 4 =  Diameter zona hambat keempat d 5 =  Diameter zona hambat kelima
Data  yang  diperoleh  berupa diameter zona hambat dianalisis dengan  analisis  sidik  ragam  (uji  F). Jika  terdapat  perbedaan  nyata  pada  uji F  pada  taraf  5%,  maka  dilanjutkan dengan  uji  Beda  Nyata  Terkecil (BNT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Data  diameter  zona  hambat  yang diperoleh  diuji  dengan  analisis  sidik ragam  dengan  hasil  seperti  pada  Tabel 1.  Dari  hasil  analisis  sidik  ragam diperoleh  F  hitung  sebesar  212,65 dimana nilai ini lebih besar dari F tabel 5%  dan  1%,  dengan  kata  lain perlakuan konsentrasi ekstrak berpengaruh  sangat  nyata  terhadap diameter zona hambat. Hal ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun sambiloto  memiliki  kemampuan  yang signifikan dalam menghambat pertumbuhan  Candida  albicans  secara in-vitro.  Untuk  itu  dilakukan  uji  lanjut BNT  pada  taraf  5%  dengan  hasil seperti pada Tabel 2.
Tabel 1. Hasil analisis sidik ragam diameter zona hambat yang terbentuk dari masing- masing konsentrasi perlakuan ekstrak daun sambiloto.
SK DB JK KT F-hitung F-tabel 5% 1% Perlakuan 4 144.60 36.15  212.65** 3.48 5.99 Galat 10 1.71 0.17 Total 14 146.31 **Berpengaruh sangat nyata
Tabel 2. Hasil uji lanjut BNT 5% terhadap diameter zona hambat yang terbentuk dari masing-masing  konsentrasi  perlakuan  ekstrak  daun  sambiloto  (BNT  5%  = 0,751).
*Angka yang diikuti oleh hurup yang berbeda menunjukkan perbedaan nyata untuk masing-masing perlakuan.
Perlakuan (%) Rata-rata diameter Ket. zona hambat (mm) 0 3.00 a 10 7.00 b 30 8.44 c 50 10.67 d 70 11.89 e
Hasil perhitungan rata-rata diameter  zona  hambat  (Tabel  2) menunjukkan  adanya  kecenderungan semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak daun  sambiloto  semakin  besar  pula diameter  zona  hambat.  Zona  hambat merupakan  suatu  zona  bening  (clear zone)  yang  menunjukkan  indikasi adanya  hambatan  zat  anti  mikroba terhadap  mikroba  yang  diuji.  Semakin besar zona hambat maka semakin besar pula  kemampuan  zat  anti  mikroba tersebut dalam menghambat pertumbuhan mikroba yang diuji. Hasil penelitian ini menunjukkan
besarnya  konsentrasi  ekstrak  daun
sambiloto  lebih  kurang  berbanding lurus  dengan  diameter  zona  hambat. Lebih  jelas  dapat  dilihat  pada  Gambar 1,  dimana  kurva  cenderung  naik  yang menunjukkan  pola  perbandingan  lurus antara konsentrasi ekstrak dan diameter  zona  hambat.  Hal  ini  dapat terjadi  karena  semakin  meningkatnya konsentrasi  ekstrak  maka  kandungan senyawa  yang  bersifat  anti  mikroba semakin banyak sehingga daya hambat terhadap pertumbuhan
Candida
albicans akan menjadi lebih besar.
0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 0 10 30 50 70 Konsentrasi (%) D ia m e te r z o n a h a m b a t (m m )
Gambar  1.  Kurva  rata-rata  diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  untuk  masing- masing konsentrasi perlakuan ekstrak daun sambiloto.
Dinding  sel  Candida  albicans mengandung  6-25%  protein,  sisanya berupa  karbohidrat  (80-90%)  dan lemak  (1-7%),  disamping  itu  bagian luar  dindingnya  dilapisi  lapisan  fibril berupa  serabut  (Chaffin,  et.al.,  1998). Diduga  senyawa  yang  terkandung  di dalam ekstrak daun sambiloto menghambat  mikroba  dengan  cara merusak struktur peptidoglikan
(protein)  yang  ada  pada  dinding  sel melalui  denaturasi  protein,  selain  juga
dapat  merusak  membran  sel  dan menginaktifkan enzim. Menurut Kardono, et.al. (2003), bahwa daun sambiloto mengandung senyawa andrographolide, dehydroandro- grapholide, deoxyan-drographolide, neoandrographolide dan ninandrographolide,  yang  kesemuanya adalah  senyawa  diterpen  turunan phenol. Senyawa-senyawa ini diketahui berperan sebagai anti mikroba  yang  pernah  diuji  terhadap
beberapa  mikroba  patogen  diantaranya Aeromonas  hydrophila,  Streptococcus sp, E. coli, Staphylococcus aureus dan
Plasmodium falciparum. Mekanisme penghambatan mikroorganisme oleh senyawa antimikroba  dapat  disebabkan  oleh beberapa  faktor,  antara  lain:  (1) gangguan  pada  senyawa  penyusun dinding sel, (2) peningkatan permeabilitas  membran  sel  yang  dapat menyebabkan  kehilangan  komponen penyusun  sel,  (3)  menginaktivasi enzim, dan (4) destruksi atau kerusakan  fungsi  material  genetik (Ardiansyah,  2007).  Menurut  Black (1993), mekanisme hambatan senyawa turunan  phenol  terhadap  pertumbuhan bakteri  yaitu  dengan  cara  merusak membran sel, menyebabkan denaturasi protein  dan  menginaktifkan  enzim. Pengrusakan membran sel dengan cara mempengaruhi permeabelitas sel dengan mengikat sterol yang merupakan komponen penyusun membran  sel  sehingga  terjadi  luka pada  membran,  akibatnya  stabilitas membran terganggu.
Denaturasi
protein  yaitu  pengendapan  protein  sel menjadi  bentuk  terkoagulasi  sehingga protein  menjadi  tidak  berfungsi  dan akan  mematikan  sel.  Menginaktifkan enzim dengan cara menghambat sintesis atau kerja dari enzim sehingga mengganggu aktivitas metabolisme sel.
Pada  konsentrasi  ekstrak  yang tinggi  dapat  menyebabkan  rusaknya dinding sel atau penghambatan pembentukkannya yang dapat mengakibatkan sel lisis. Selain itu juga enzim  yang  sangat  penting  bagi mikroba  untuk  melakukan  fungsi metabolismenya  diduga  dapat  dirusak oleh  bahan  anti  mikroba.  Menurut Harborne  (1987),  bahwa  senyawa turunan  fenol  dapat  menyebabkan gangguan  besar  bagi  mikroba  karena
kemampuannya  membentuk  kompleks dengan protein melalui ikatan hidrogen.  Akibatnya  sering  sekali terjadi  gangguan  terhadap  kerja  enzim yang tersusun atas protein. Selain itu juga menurut Wahyuningtyas,  dkk.  (1995),  senyawa turunan  phenol  dapat  mendenaturasi protein  dengan  cara  menghidrolisis asam amino. Denaturasi protein menyebabkan  ikatan  hidrogen  dan disulfida dirusak dan bentuk fungsional  molekul  protein  musnah sehingga mencegah molekul fiungsional protein dalam menyelesaikan fungsi normalnya. Hidrolisa tersebut mengakibatkan sintesis  protein  terhambat  sehingga  sel akan melemah.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  yang  dapat  ditarik dalam penelitian ini adalah:
1. Ekstrak daun sambiloto memiliki kemampuan  dalam  menghambat pertumbuhan jamur Candida albicans secara in-vitro. 2. Ekstrak  daun  sambiloto  pada konsentrasi  70%  memberikan hasil berupa diameter zona hambat  rata-rata  terbesar  yaitu 11,89 mm sedangkan konsentrasi
0%  memiliki  diameter  zona
hambat  rata-rata  terkecil  yaitu  3 mm. 3. Semakin besar konsentrasi ekstrak  daun  sambiloto  maka diameter zona hambat juga semakin besar.

## DAFTAR PUSTAKA
Akmal,  D.  1993.  Penapisan  dan Skrining Mikroorganisme Tanah yang Dapat Menghasilkan Senyawa
Antibiotika  dari  Sampel  Tanah di  Kawasan  Hutan  Raya  Bung Hatta, Seminar Hasil-Hasil Penelitian SPP/ DPP. Universitas Andalas. Padang. Ardiansyah.  2007.  Antimikroba  dari Tumbuhan, (Online), (http://www.beritaiptek.com/zb erita-beritaiptek). Black, J.G. 1993. Microbiology
Principle  and  Applications.
Englewood Cliffs. New Jersey.
Calabrese,  C.,  Berman,  S.H.,  Babishh,
J.G.,  Ma,  X.,  Shinto,  L.,  Dorr,
M.,  Wells,  K.,  Wenner,  C.A. dan  Standish,  L.J.  A  Phase  I Trial  of  Andrographolide  in HIV  Positive  Patients  and Normal  Volunteers.  Phytother. Ress. 14(5).
Chaffin,  W.L.,  Ribot,  J.L.L.,  Manuel,
C.,  Daniel,  G.  dan  José,  P.M.
1998.  Cell  Wall  and  Secreted Proteins  of  Candida  albicans:
Identification,  Function,  and Expression, (Online), Microbiol Mol Biol Rev, March  1998,  p.  130-180,  Vol. 62, No. 1. Dwidjosoeputro  D.  1998.  Dasar-dasar Mikrobiologi. Djambatan. Malang. Harborne J.B. 1987.  Metode Fitokimia
:  Penuntun  Cara  Modern
Menganalisis  Tumbuhan  edisi II. Diterjemahkan oleh : Padmawinata,  K.  dan  Soediro, I. ITB. Bandung.
Kardono,  L.B.S.,  N.  Artanti,  I.D. Dewiyanti,  T.  Basuki  dan  K. Padmawinata.  2003.  Selected Indonesian  Medicinal  Plants: Monographs  and  Descriptions.
Volume 1. Grasindo. Jakarta. Maheshwari,  H.  2002.  Pemanfaatan Obat Alami dan Prospek Pengembangan. http://www rudct.tripod.com. Pelczar, M. J. O. & E.S.S. Chan. 1986. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jilid  1.  Diterjemahkan  oleh  : R.H. Oetomo. Universitas Indonesia  Press. Jakarta.
Kesehatan  No.  58  (11-17  Agustus
2000).
Voight  R.  1995.  Buku  Pelajaran Teknologi Farmasi. Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.
Wahyuningtyas    E.,  Heriyanti,  A.K. dan Hoesni, T. 1995. Pengaruh Daya  Anti  Mitotik  Minyak
Atsiri  Sereh  Dapur  terhadap Pertumbuhan Candida albicans pada  Gigi  Tiruan  Lengkap Resin Akrilik. Laporan Penelitian. Departemen Kesehatan. Jakarta.