## JBIO: JURNAL BIOSAINS (The Journal of Biosciences)
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/biosains email : jbiosains@unimed.ac.id
PENGARUH EKSTRAK ETANOL DAUN BUASBUAS ( Premna pubescens Blume) TERHADAP GAMBARAN HISTOPATOLOGI HATI PADA TIKUSPUTIH ( Rattus novergicus ) YANG DIINDUKSI KANKER7,12 Dimethylbenz[a]antrasena (DMBA)
Martina Restuati, Poppy Audina Nasution
Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Medan, Medan Email korespondensi: t.restuati@gmail.com
Diterima:  Juni 2019; Direvisi: Juli 2019; Disetujui: Agustus 2019

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol  daun  buasbuas ( Premna pubescens Blume ) terhadap perubahan sel hepatosit hati pada tikus putih ( Rattus novergicus ) yang diinduksi DMBA. 25 ekor sehat (umur 3 bulan berat ± 200 gr) diambil secara acak dan kemudian dibagikan dalam  5  kelompok:  KN,  KP,  P1,  P2,  dan  kelompok  P3  dan  diberi  perlakuan  selama  8  minggu.  KN  hanya diberi  pakan dan aquades,  KP hanya diberi DMBA 10mg/KgBB, P1 diberi DMBA  10mg/KgBB  dan EEDBB 150mg/KgBB, P2 diberi DMBA10mg/KgBB dan EEDBB 300mg/KgBB dan P3 diberi DMBA 10mg/KgBB dan EEDBB  450mg/KgBB.  Uji  ANOVA  didapatkan  perbedaan  yang  bermakna  (p=0,000)  terhadap  semua kelompok.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  jumlah  rata-rata  kerusakan  sel  hepar  pada  KN    (1,62  ± 0,40) KP (14,4 ±  0,78) P1 (12,2 ± 1,31) P2 (11,8 ± 2,62) P3 (4,36 ± 0,21). Pada Uji Post Hoc LSD didapatkan perbedaan  bermakna  p<0,05.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  buas  buas ( Premna  pubescens Blume)  dapat  menurunkan  kerusakan  sel  hepar  tikus  yang  diinduksi  DMBA  akibat kandungan antioksidannya.
Kata kunci : Daun buas buas (Premna pubescens Blume), Histopatologi, Hati, Tikus Putih, DMBA .
EFFECT OF EXTRACT ETHANOL LEAF OF BUAS BUAS ( Premna pubescens Blume ) TO THEHISTOPATOLOGY OF LIVER RATSWHITE ( Rattus norvegicus ) INDICATEDCANCER7,12Dimethylbenz[a]antrasena (DMBA)

## ABSTRACT
The aim of this study was to determine the effect of extract ethanol leaf of buas buas ( Premna pubescens Blume) on liver hepatocyte cell changes in rats white  ( Rattus norvegicus )induced by DMBA. 25 healthy animals (age 3 months ± 200 gr weight) were taken randomly and then disributed in 5 groups KN, KP, P1, P2, and P3 and treated for 8 weeks. KN is only fed and distilled water, KP is only DMBA 10mg/kgBB. P1 is given a DMBA 10mg/kgBB and EEDBB 150mg/kgBB, , P2 is given a DMBA 10mg/KgBB and EEDBB 300mg/KgBB and P3 is given a DMBA 10mg/KgBB and EEDBB 450mg/KgBB. ANOVA test found significant differences (p=0,000) in all groups.  The results showed that the average of liver cell damage in KN  (1,62 ± 0,40) KP (14,4 ±  0,78) P1 (12,2 ± 1,31) P2 (11,8 ± 2,62) P3 (4,36 ± 0,21). In the Post Hoc LSD test it was found  that  extract  ethanol  leaf  of  buas  buas  ( Premna  pubescens Blume)  can  reduce  rat  liver  induced  cell damage a DMBA due to its antioxidant conte
Keywords : Buasbuas ( Premna pubescens Blume),
Histopathology,
Liver,
Rat (Rattus norvegicus), DMBA.
Pendahuluan Kanker  menjadi  perhatian  serius  karena penyakit  ini  merupakan  pembunuh  nomor  2 setelah  penyakit  kardiovaskuler  di  Amerika
Serikat.  Survei  kesehatan  rumah  tangga  di Indonesia tahun 2001 menunjukkan bahwa 6,5 persen  dari  total  kematian  disebabkan  kanker dan  berada  pada  peringkat  ke-6  penyebab
Jurnal Biosains Vol. 5 No. 2 Agustus 2019                                                                         ISSN 2443-1230 (cetak) DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v5i2.14152
kematian (American Cancer Society, 2011).Kanker  hati  merupakan  kanker  dengan insidensi  kematian  ketiga  terbesar  di  dunia (Garcia  dkk,  2007).Jumlah  kematian  di  dunia yang disebabkan oleh kanker hati menunjukkan  lebih  dari  satu  juta  kematian pertahun.Sedangkan  di  Amerika  Serikat terdapat  lebih  dari  18.910  kematian  yang disebabkan  oleh  kanker  hati  (NCI,  2009). Kematian  akibat  kanker  hati  diproyeksikan akan  terus  meningkat  hingga  tahun  2025 (Price dkk, 2006).
Hati  merupakan  salah  satu  organ  viseral yang paling sering terkena penyebaran  kanker (Kumar dkk, 2007).Sel – sel  hati  atau hepatosit mempunyai regenarasi yang cepat. Oleh karena itu hati akan dapat mempertahankan fungsinya apabila  terjadi  kerusakan  yang  ringan,  akan tetapi  akan  menjadi  fatal  jika  kerusakan manjadi  berat  dan  serius.  Penyebab  tersering adalah  akibat  virus,  efek  toksik  obat,  racun, jamur  dan  lain  sebagainya.Di  Indonesia prevalensi belum diketahui secara pasti, tetapi menurut  WHOpenyakit  hati  ini  menjadi penyakit  endemik  di  Indonesia  dan  menjadi penyebab  kematianyang  tergolong  tinggi (Depkes RI, 2007).Hati sebagai pendetoksifikasi  racun  bekerja  dengan  cara memecah  senyawa  beracun  menjadi  beberapa senyawa  seperti  urea,  amonia  dan  asam  urat (Supratanda, dkk, 2013).  Karena  fungsinya tersebut  maka  hati  sangat  rentan  mengalami kerusakan karena zat-zat tosik.
Salah  satu  tanaman  obat  yang  dikenal dimasyarakat  Indonesia  yaitu  buasbuas ( Premna  pubescens Blume).Buasbuas  ini terkenal dikalangan masyarakat dapat menyembuhkan  berbagai  penyakit.  Menurut (Restuati,  2014).  Buasbuas  ( Premna  pubescens Blume)  memiliki  berbagai  macam  kandungan metabolit  sekunder  yang  menjadikannya sebagai  salah  satu  tanaman  yang  bermanfaat sebagai  obat  obatan.Penelitian  ini  berusaha menelaah  aktivitas  antikanker  dari  ekstrak etanol daun
buasbuas ( Premna pubescensBlume) yang  mengandung  senyawa luteolin secara  in  vivo  menggunakan  tikus putih  betina  yang  diinduksi  dengan  bahan karsinogen 7,12 dimetylbenz(α)antrasen (DMBA).  Senyawa DMBA merupakan zat yang sering digunakan karena memiliki potensi yang
lebih  tinggi  dan  lebih  stabil  sebagai  zat karsinogen  untuk  pembuatan  hewan  model kanker.
Dengan  demikian  ekstrak  etanol  daun buasbuas  ( Premna  pubescens Blume ) yang memiliki  senyawa luteolin diharapkan  dapat melindungi  aktivitas  karsinogenik  senyawa 7,12  dimetylbenz  (α)  antrasen  (DMBA).  Oleh karena  itu,  perlu  dilakukan  penelitian  untuk membuktikan potensi daun buasbuas ( Premna pubescens Blume ) terhadap  aktivitas karsinogenik  pada  tikus  putih  betina  ( Rattus novergicus )  yang  diinduksi  7,12  dimetylbenz (α)  antrasen  (DMBA).  Namun,  pengujian kepada  manusia  terlalu  berbahaya  dan dilarang,  sehingga  peneliti  ingin membuktikan efektifitas  senyawa  yang  terkandung  didalam daun  buasbuas  kepada  tikus  putih  betina ( Rattus  novergicus )  sehingga  peneliti  tertarik untuk  meneliti  tentang  pengaruh  ekstrak etanol  daun  buasbuas  terhadap  perubahan histopatologi  hati  tikus  putih  betina  yang diinduksi senyawa diinduksi 7,12  dimetylbenz (α) antrasen (DMBA) (Kartawiguna, 2001).
Bahan Dan Metode Waktu dan Tempat Penelitian. Penelitian  ini  dilaksanakan  dirumah  hewan percobaan FMIPA UNIMED.Selain itu penelitian ini  juga  dilakukan  di  RS.  Adam  Malik  Medan. Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Desember 2017 sampai Mei 2018.Penelitian ini dilakukan  dengan  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  non  Faktorial.  Jenis penelitian  ini  adalah  Metode  Eksperimental. Teknik  analisis  data  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  Analisis  Varian  (ANOVA) Non Faktorial.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  selama penelitian  :  Timbangan  digital,  tabung  reaksi, rotary  evaporator,  waterbath,  botol  sampel, pengaduk  magnetik,  homogenizer,  sonde  oral, spuit,  timbangan,  labu  erlenmeyer,  blender, alumunium foil, toples kaca, tabung ukur (1000 ml),  gelas  ukur  1000(ml),  kertas  kasa Weatmanbeaker  glass,  pinset,  botol  sampel, mikroskop, kandang tikus dan dot tikus.
Bahan-bahan  yang  digunakan  selama penelitian  antara  lain  :  Tikus  putih  betina ( Rattus  novergicus), sekam  tikus,  pakan  pelet
Jurnal Biosains Vol. 5 No. 2 Agustus 2019                                                                         ISSN 2443-1230 (cetak) DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v5i2.14152
PC  202,  CMC  1%,  etanol  96%,  Minyak  jagung, DMBA.  Klorofrom,  formalin  sebagai  awetan preparat,  hematoksilin  dan  eosin  sebagai pewarna  jaringan,  alkohol  series  (70%,  80%, 90%, 95% dan absolute). Berdasarkan  uji  pendahuluan  yang telah  dilakukan,  maka  peneliti  melakukan  5 taraf  perlakuan  dalam  penelitian.  Dosis pemberiaan terdiri dari
K n : Kontrol negatif (-) hanya diberi pakan + aquades K p :  Kontrol  positif  (+)  diberi  pakan  + aquades + DMBA 10mg/kg BB P 1 :  Pakan  +  DMBA  10mg/kgBB  +  EEDBB 150mg/kgBB P 2 :  Pakan  +  DMBA  10mg/kgBB  +  EEDBB 300mg/kgBB P 3 :  Pakan  +  DMBA  10mg/kgBB  +  EEDBB 450mg/kgBB Prosedur Penelitian Penelitian ini diawali dengan pembuatan  ekstrak  etanol  daun  buas-buas, daun  buas  buas  yang  telah  kering  dihaluskan dengan  blender  dengan  kecepatan  13000  rpm sampai  daun  buas  buas  halus  seperti  serbuk. Serbuk  simplisia  daun  buas  buas  direndam didalam  toples  kaca  besar  dan  ditambahkan pelarut etanol 96%.Kemudian hasil penyaringan diuapkan dengan rotary evaporator. Setelah kental dimasukkan
kedalam  cawan  uap  yang  dibungkus  dengan
alumunium foil selama semalaman, setelah itu diuapkan kembali hingga ekstrak kental.
Tikus  sebanyak  25  ekor,  dikelom pokkan  dalam  5  kelompok.    Kontrol  negatif (K n ), hanya diberi pakan dan aquades. Kontrol Positif  (K p )  diberikan  DMBA  10mg/kgBB dilakukan  dengan  cara  injeksi  subcutan dibagian tengkuk tikus dilakukan setiap 48 jam sekali  sebanyak  10  kali  selama  4  minggu. Perlakuan 1 (P 1 ) pemberian DMBA 10mg/kgBB dan  EEDBB  150mg/kgBB,  Perlakuan  2  (P 2 ) DMBA  10mg/kgBB  dan  EEDBB  300mg/kgBB, Perlakuan  3  (P 3 )  DMBA  10mg/kgBB  dan EEDBB 450mg/kgBB,perlakuan diberikan secara  peroral  satu  kali  sehari  selama  4 minggu. Selanjutnya tikus dianesthesia kemudian  dilakukan  euthanasia.  Organ  hepar dibuat preparat histopatologi dengan pewarnaan Hematoksilin−Eosin.
Gambaran  kerusakan  hepatosit  tikus dilihat dengan melakukan pengamatan sediaan histopatologi  menggunakanmikroskop  dengan perbesaran 400x pada 5 lapangan pandangyang setiap lapangan pandang diamati berupa degenerasi bengkak keruh yang terjadi pada  hepatosit.  Skala  degenerasi  bengkak keruh kemudian dihitung secara semikuantitatif  dalam  5  lapang  pandang berbeda.  Berikut  ini  adalah  skala  penilaian Kawasaki et  al .9  dengan  modifikasi  seperti yang disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Skor Penilaian Derajat Degenerasi BengkakKeruh Tingkat Perubahan Skor Hasil Dan Pembahasan Dari hasil analisis mikroskopis gambaran
kerusakan hepatosit tikus, didapatkan  hasil  rerata  hepatosit  yang mengalami  degenerasi  bengkak  keruh  dari  5 lapangan pandang kelompok uji dengan ekstrak
etanol  daun  buas  buas  ( Premna  pubescens Blume)  berdasarkan mean dan  standar  deviasi (X±SD) pada KN (1,62 ±  0,40) KP (14,4 ±  0,78) P1(12,2  ±  1,31)  P2(11,8  ±  2,62)  P3  (4,36  ±
0,21)seperti yang terlihat pada Tabel 2. Tidak ada perubahan yang mengalami degenerasi bengkak keruh 0 1-10% hepatosit yang mengalami degenerasi bengkak keruh 1 10-33% hepatosit yang mengalami degenerasi bengkak keruh 2 34%-66% hepatosit yang mengalami degenerasi bengkak keruh 3 67%-100% hepatosit yang mengalami degenerasi bengkak keruh 4
Tabel 2. hasil rerata hepatosit yang mengalami degenerasi bengkak keruh dari 5 lapangan pandang kelompok uji dengan ekstrak etanol daun buas buas ( Premna pubescens Blume) Perlakuan Skor Kerusakan Bengkak Keruh (X±SD) KN 1,62 ±  0,40 KP 14,4 ±  0,78 P1 12,2 ± 1,31 P2 11,8 ± 2,62 P3 4,36 ± 0,21
Dari tabel 2 tampak peningkatan yang signifikan  jumlah  sel  hepatosit  yang mengalami  pembengkakan  pada  KP  jika dibandingkan  dengan  KN.  Rerata  jumlah  sel hepatosit  yangmengalami  pembengkakan untuk  P1,  P2,  dan  P3  sangat  menurun  jika dibandingkan dengan KN.
Jika  dibandingkan  antara  P3  dengan KN, sel hepatosit yang mengalami pembengkakan tidak berbeda jauh dan hampir mendekati  gambaran  histopatologi  hepar normal.  Rerata  jumlah  sel  hepatosit  yang mengalami  degenerasi  bengkak  keruh  diuji normalitasnya  dengan  uji Saphiro-Wilk dan didapatkan  semua  kelompok  memiliki  nilai (p>0,05).  Setelah  dilakukan  uji  homogenitas dari  data  untuk  mengetahui  apakah  data
homogen atau tidak didapatkan hasil p=0,018. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  data  homogen karena  nilai  (p>0,05)  dan  dilanjutkan  dengan uji statistik parametrik ( one way annova ). Pada  uji  statistik One  way  annova , diperoleh  nilai  0,000  atau  (p<0,05)  yang artinya terdapat perbedaan jumlah sel radang yang bermakna antar kelompok. Analisis data dilanjutkan  menggunakan  analisis Post  Hoc LSD .Nilai ini berarti menunjukkan bahwa tikus yang diberikan ekstrak etanol daun buas buas mampu  memberikan  efek  protektif  terhadap tumor  hepar  yang  diinduksi  oleh  DMBA.Hasil penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  daun  buas  buas  ( Premna  pubescens Blume)  memiliki  efek  kerusakan  hati  pada hepar tikus yang diinduksi DMBA.
Keterangan : 1. Hepatosit
2. Vena Sentralis 3. Sinusoid 4. Degenerasi Bengkak Keruh 5. Degenerasi Parenkimatosa 6. Kongesti
Gambar1. Histopatologi Pada Hepar Tikus Putih ( Rattus novergicus ) HE, 400x Gambaran Histopatologi (KP) Kelompok  Positif    hanya  diberi  pakan  dan minum  (HE,  400x),(KN)  Kelompok  Negatif hanya  diberi  DMBA  10mg/KgBB  selama  4 KN KP
1 2 3 2 6 5 3 4 P1 P2 P3 1 2 3 6 4 2 3 4
Jurnal Biosains Vol. 5 No. 2 Agustus 2019                                                                         ISSN 2443-1230 (cetak) DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v5i2.14152
minggu,  terlihat  adanya  degenerasi  bengkak keruh  pada  sel  hepatosit,  sinusoid  melebar (HE,  400x).  Perlakuan  1  (P1)  DMBA 10mg/kgBB dan EEDBB 150mg/KgBB selama 4 minggu,  terlihat  adanya  degenerasi  bengkak keruh  pada  sel  hepatosit,  dan  penggumpalan darah  pada  vena  sentralis  atau  disebut kongesti  (HE,  400x),  (P2)  Perlakuan  2  (P2) DMBA  10mg/KgBB  dan  EEDBB  300mg/KgBB, terlihat adanya degenerasi bengkak keruh pada sel  hepatosit  (HE,  400x),  Perlakuan  3  (P3) DMBA  10mg/KgBB  dan  EEDBB  450mg/KgBB terlihat adanya degenerasi bengkak keruh pada sel  hepatosit  dan  adanya  sedikit  kongesti didalam vena sentralis (HE, 400x).
Hasil  pengamatan  histologi  pada kelompok  kontrol  negatif  (KN)  menunjukkan hasil  histologi  hati  yang  normal.  Pada kelompok  kontrol  positif  (KP)  DMBA 10mg/kgBB terjadi kerusakan yaitu degenerasi bengkak  keruh  ( cloudy  swelling )  pada  sel hepatosit, hal ini disebabkan karena infeksi zat kimia,  terjadinya  timbunan  albumin  sel  hepar bengkak  dengan  sitoplasma  berbutir  keruh sehingga  terjadi  perubahan  morfologis,  serta degenerasi  parenkimatosa  yang  ditandai dengan  pembengkakan  sel  dan  munculnya granul-granul  dalam  sitoplasma,  kemudian ditandai dengan sinusoid melebar, pendarahan (kongesti)  yang  sangat  hebat  dan  adanya nekrosis. Sedangkan  pada  kelompok  P1 masih mengalami  kerusakan  degenerasi  bengkak keruh  dan  sinusoid  melebar    namun  secara morfologi masih adanya pendarahan (kongesti) tetapi  tidak  sehebat  terjadi  pendarahan  pada kelompok  positif.  Selanjutnya  pada  kelompok P2  menunjukkan  hasil  histologi  bahwa  sel hepatosit  menuju  perbaikan,  ditandai  dengan berkurangnya  kerusakan  degenerasi  bengkak keruh.Kemudian pada kelompok P3 mengalami perbaikan  yang  sangat  signifikan.Karena  pada preparat  hati  kelompok  P3  ini  perubahan degenerasi  bengkak  keruh  terlihat  sedikit  dan nekrosis  tidak  ada  lagi  hampir  mencapai kondisi normal.
Berdasarkan  penelitian  ini  perubahan fisik  yang  dialami  tikus  putih  pasca  diberikan zat  karsinogen  DMBA  mengalami  kerontokan pada rambut tikus, hal ini diduga akibat adanya stres  pada  hewan  uji.Kerontokan  rambut terjadi satu  hari  pasca  pemberian  DMBA  pada minggu ke 4, kemudian ditandai dengan luka di
daerah  subkutan,  serta  hilangnya  penurunan berat badan yang signifikan.
Daun buasbuas memiliki kandungan zat seperti  flavonoid,alkaloid  saponin  dan  fenolik, zat – zat  tersebut  dapat  berfungsi  sebagai antioksidan  dan  menghambat  terjadinya inflamasi.  Golongan  flavonoid  yang  dominan terdapat  pada  daun  buas    buas  antara  lain luteolin dan apigenin yang  memberi  efek  baik bagi  kesehatan  manusia. Luteolin memiliki peran  yang  penting  bagi  tubuh  manusia diantaranya  sebagai  antioksidan,  sedangkan efek  antiinflamasi  didukung  oleh  aksinya metabolit sekunder sebagai antihistamin..Beberapa  penelitian  menyatakan bahwa luteolin secara drastis dapatmenurunkan gejala infeksi dan peradangan, sedangkan apigenin juga memiliki kemampuan sebagai zat anti kanker, antibakteri,  mengatasi  permasalahan  lambung dan  anti  peradangan  (Cadenas  dan  Packer, 2002).
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  daun  buas  buas  memiliki  efek antikanker  terhadap sel hepar yang berfungsi menurunkan kerusakan sel – sel hepar. Antioksidan  ini  bekerja  dengan  menetralkan radikal  bebas  sehingga  bisa  mencegah kerusakan  oksidatif  lebih  lanjut  akibat akumulasi  zat  oksidan  seperti  DMBA.Pada sebagian  besar  biomolekul  dari  antikosidan menghasilkan efek proteksi terhadap kerusakan oksidatif secara signifikan (Sreelatha dan Padma, 2009). Antioksidan menstabilkan radikal bebas dengan melengkapi kekurangan elektron yang  dimiliki  radikal  bebas  dan  menghambat terjadinya  reaksi  berantai  dari  pembentukan radikal  bebas  yang  dapat  menimbulkan  stres oksidatif  (Waji  dan  Sugrani,  2009).Dengan demikian  kandungan  senyawa  daun  buasbuas ( Premna  pubescens Blume)  berpengaruh terhadap jumlah rata-rata kerusakan sel hepar tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  galur Sprague dawley yang diinduksi DMBA.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  buas buas ( Premna pubescens Blume) memiliki efek sebagai  antikanker  hepar  pada  tikus  yang diinduksi  zat  karsinogen  DMBA.Hal  ini
Jurnal Biosains Vol. 5 No. 2 Agustus 2019                                                                         ISSN 2443-1230 (cetak) DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v5i2.14152
dikarenakan aktivitas antioksidan dan antiinflamasi  yang  terkandung.  Pemberian perbedaan dosis ekstrak etanol daun buas buas ( Premna pubescens Blume) 150mg, 300mg, dan 450mg berpengaruh dan mampu memperbaiki gambaran  histopatologi  hepar  tikus  putih ( Rattus norvegicus ) galur Sprague dawley yang diinduksi  DMBA  yaitu  semakin  meningkatnya dosis,  rata-rata  jumlah  hepatosit  yang mengalami degenerasi bengkak keruh mengalami  penurunan  walaupun  belum mencapai pada kondisi normal.
Saran Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  pengaruh  induksi  DMBA  dalam pembuatan  hewan  model  kanker  pada  organ- organ lain dan perlu dilakukan observasi lebih lanjut  terkait  dengan  dampak  induksi  DMBA dalam  pembuatan  hewan  model  kanker  pada hepar.

## Daftar Pustaka
American Cancer Society . 2011. Breast Cancer Fact  &  Figures  2011-2012. Atlanta  :
American Cancer Society, Inc.
Depkes  RI.  2007.  Profil  Kesehatan  Indonesia. Jakarta. Garcia, D, Quintana, J, Gonzalez, J, dan Garza,H, 2009. Liver  Cirrhosis  And    Diabetes:  Risk Factors, Pathophysiology, Clinical Implications And Management. WorldJournal  of  Gastroenterology ,  15: 280 – 288.
Kartawiguna,  E.  2001. Faktor-Faktor  Yang Berperan Pada Karsinogenesis . J. Kedokteran. Trisakti 20 (1) : 16
Kumar,  B.,  Harleen  K.S.,  Sunil  P.,  Prashant  T., Manoj S., and P. Sharma. 2011. A Review of  Phytochemistry  and  Pharmacology  of Flavonoids, Int.Pharma. Sciensia , 1, 1, 25- 41. Restuati, Martina, Ilyas, syafruddin, Hutahaean, Salomo,  Sipahutar,  Herbert.  2014. Study Of  The  Extract  Activities  Of  Buas  buas Leaves (Premna pubescens) As Immunostimulant  On  Rats ( Rattus
novergicus ). American Journal Of Bioscience :  Vol.  2,  No.  6,  ISSN  :  2330- 0159.
National  Cancer  Institue.  2009.
Breast
Cancer. http://cancerweb.ncl.ac.uk/cance rnet/100013.html. 3 maret 2009.
Packer,  L.  dan  Cadenas,  E.,  2002. Handbook  of Antioxidants ,  ed.  2,  Marcel  Dekker,  Inc., New York Price,  Sylvia  A  &  Wilson.2006. Patofisiologi Konsep Klinis Proses-proses Penyakit. Edisi 6  :  Volume  2,  Jakarta  :  Penerbit  Buku Kedokterab EGC.
Sreelatha  S,  Padma  PR.  2009. Antioxidant Activity  And  Total  Phenolic  Content  Of Moringa Oleifera Leaves In Two Stages Of Maturity.  Plant  Foods  For  Human Nutrition . 64(4): 303-11.
Supratanda  FE,  Carolia  N,  Muhartono.  2013. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun Sirsak  (Annona  muricata  Linn)  Terhadap Gambaran  Histopatologi  Sel  Hepar  Tikus Putih  (Rattusnorvegicus)  Galur  Sprague dawley  yang  Diinduksi  DMBA. ISSN  2337-
3776. Waji  RA,  Sugrani  A.  2009. Makalah  Kimia Organik Bahan Alam Flavonoid(Quercetin). Makasar:Universita s Hasanuddin. hlm. 8 – 9.