e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume IX No 2 Februari 2021 p-ISSN: 2302-3600, e-ISSN: 2597-5315

## GROWTH PERFORMANCE AND IMMUNE RESPONSE OF SILVER POMPANO SEEDS (Trachinotus blocii) FED WITH FEED CONTAINING IMMUNOSTIMULANT SUPPLEMENTS
Herno Minjoyo* 1 , Arief Prihaningrum 1 , Arief Rahman Rivaie 1 , Verly Dharmawati 1

## ABSTRACT
The increase of the growth performance and control of disease can be done by  the  use  of  imunostimulan.  Immunostimulant  is  a  material  that  capable  of increasing the non-specific immune response of fish. The purpose of this study was to determine the best concentration of immunostimulants in self-formulated pellet feed on the growth performance and immune response of silver pompano fingerling. The  immunostimulant  content  used  it  was  sourced  from  commercial  products Nutricell. There was three concentrations of imunostimulan were used in this study, namely 0.3% (treatment A), 0.5% (treatment B), and 0,0% (treatment K) and one group fish fed with commercial feed as the control and a comparison (treatment P). A  total  of  840  silver  pompano  fish  seeds  with  an  average  initial  body  weight  of 11,13± 1,39 g were kept in 12 cages (0.8 x 0.8 x 0.6 m 3 ) for 30 days. The results showed  that  the  provision  of  feed  supplements  containing  commercial immunostimulants did not significantly affect the growth rate, The feed conversion and survival rate but produced the highest total leukocyte count of 65,775. x 10. cells/ml and 35.10% phagocytosis rate achieved on the 30th day of treatment. The results  of  the  five-day  challenge  test  showed  that  treatment  A  which  was  the addition of 0.3% immunostimulant feed had lower mortality than other treatments, after being injected with Vibrio alginolyticus bacteria at a dose of 3 x 10 9 cfu/ml. /0.002 g/head fish weight. Based on the results above, it can be concluded that the formulated feed in treatment A which was added with immunostimulant 0.3% (0.7% total  in  the  feed  formula)  showed  a  higher  survival  performance  in  the  nursery phase of silver pompano fish compared to other treatments.
Keyword: Fish feed, Feed supplements, Imunostimulant, Silver Pompano
Pendahuluan Ikan Bawal Bintang ( Trachinotus blochii ) merupakan salah  satu  jenis  komoditas  ikan  laut yang mempunyai prospek pasar yang
* E-mail: ariefrahmanrifaie@gmail.com
1 Perekayasa pada Balai Besar Perikanan Budidaya Laut Lampung Jln. Yos Sudarso, Desa Hanura, Kecamatan Teluk Pandan, Kabupaten Pesawaran, Lampung
cukup  baik  dalam  keadaan  hidup, serta  memiliki  keunggulan  karena pertumbuhannya  yang  cepat,  nilai pasar yang cukup tinggi dan keberhasilan produksi benihnya
sudah  dapat  dilakukan  secara  masal.
Oleh  karena  itu  komoditas  ini  telah menjadi  popular  untuk  budidaya  di karamba  jaring  apung  di  Asia. Keberhasilan  Balai  Besar  Perikanan Budidaya  Laut  (BBPBL)  Lampung dalam  memproduksi  benih  ikan Bawal  Bintang  memberikan  dampak yang  positif  terhadap  potensi  dan pengembangan  pakan  formula  benih ikannya (Prihaningrum et al ., 2020) Pakan merupakan sumber nutrisi yang penting bagi pertumbuhan dan perkembangan biota  akuatik.  Pakan  dengan  nutrisi terbaik akan mendorong pertumbuhan biota tersebut  menjadi  lebih  optimal. Selain itu, nutrisi pakan juga berperan penting  dalam  mengontrol  sistem metabolisme dari tubuh biota akuatik dan  membantu menjaga  sistem imunitas  biota  dari  infeksi  penyakit. (Rusydi et  al .,  2017).  Menurut (Novriadi,  2014),  dalam  budidaya ikan  bawal  bintang,  penyakit  yang sering  timbul  adalah  adanya  infeksi bakteri dari jenis Vibrio sp. (Taslihan et  al .,  2000)  menambahkan,  Vibrio alginolyticus merupakan jenis bakteri yang paling sering menginfeksi  pada ikan  laut  sehingga  menyebabkan kematian masal.
Upaya  pengendalian  penyakit jenis  bakteri  dapat  dilakukan  dengan pemberian  antibiotik,  namun  residu yang  ditimbulkan  dari  pemberian antibiotik  sangat  berbahaya  bagi manusia di samping itu pula penggunaan antibiotik dapat menyebabkan resistensi pada bakteri.
Untuk  meningkatkan  sistem  imun pada  ikan  salah  satu  upaya  yang dilakukan  adalah  dengan  pemberian bahan-bahan  alami  yang  memiliki kemampuan  immunostimulan  atau meningkatkan sistem imun pada ikan. Keunggulan  imunostimulan  antara
lain tidak meninggalkan residu dalam tubuh  ikan  sehingga  aman  bagi kesehatan manusia maupun lingkungan  (Payung  &  Manoppo, 2015). Bahan  imunostimulan  yang digunakan pada penelitian ini bersumber  dari  produk  komersial berupa  suplemen  pakan  ikan  dan udang  yang  merupakan  produk  dari nutricell, yang penggunaannya dicampurkan  bersama  bahan  pakan lain dalam pembuatan pakan. Menurut  Manurung et  al .  (2013), pemanfaatan  ragi  roti  komersial sebagai  bahan  imunostimulan  yang ditambahkan dalam pakan memperoleh  hasil  yang  positif  baik dari  sisi  pertumbuhan  dan  respon imun  nonspesifik  pada  ikan  nila. Selanjutnya  Dias et  al .,  (2019), berpendapat bahwa pemberian Aquate  FishTM®  sebagai  aditif pakan  komersial  yang  mengandung imunostimulan yang diberikan
selama  30  hari  pada  benih  ikan
Arapaima  ( Arapaima  gigas )  sudah cukup  untuk  merangsang  kinerja pertumbuhan dan meminimalkan penanganan stres dan infeksi Aeromonas. hydrophila, serta memodulasi respons kekebalan bawaan.  Oleh  karena  itu,  pada pengujian  ini  dilakukan  penambahan suplemen  pakan  yang  mengandung immunostimulan pada formulasi pakan  buatan  benih  ikan  bawal bintang dimana fase ini termasuk fase yang sangat rentan terhadap serangan penyakit. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui konsentrasi imunostimulan terbaik dalam formulasi pakan mandiri serta pengaruhnya terhadap performa
pertumbuhan  dan  respon  imun  benih ikan bawal bintang.
Metode
Waktu dan Tempat Kegiatan Penelitian ini dilakukan  selama  35  hari  dari  bulan Oktober s/d Nopember 2020 di modul 3,  Balai  Besar  Perikanan  Budidaya
Laut, Lampung.
Hewan Uji dan Wadah Wadah pemeliharaan yang digunakan adalah waring yang berukuran  80x80x60  cm,  dengan ukuran mata 5 mm sebanyak 12 buah (tiga  perlakuan,  satu  kontrol,  masing masing tiga ulangan) yang dimasukan dalam  bak  fiber  berbentuk  persegi panjang dengan ukuran ukuran 2x1x1 m. Tiap bak berisi 2 buah waring yang diisi  dengan  benih  Bawal  Bintang sebanyak  70  ekor/waring  dengan berat awal rata-rata 11,13± 1,39 g. Bahan Uji Bahan uji adalah pakan mandiri formulasi BBPBL dengan penambahan suplemen pakan Aquacell-GF yang mengandung organic  mineral  Cu,  Zn,  Mn  dan imunostimulan  pada  formulasinya. Suplemen pakan Aquacell GF merupakan produk dari nutricell yang diproduksi di Indonesia dan diproduksi dengan bahan baku berkualitas Eropa untuk meningkatkan sistem kekebalan tubuh ikan dan udang pada budidaya intensif.  Sebagai  kontrol  (K)  adalah pakan  mandiri  dengan  kandungan immunostimulan standar (0,4% = 0,0) dan  sebagai  perlakuan,  kandungan imunostimulan  ditambah  menjadi 0,7%  atau  0,3%  (A)  dan  0,9%  atau 0,5%  (B).  Komposisi  dan  hasil analisis  proksimat  pakan  disajikan pada Tabel 1 dan Tabel 2. Tabel  1.  Komposisi  bahan  baku  masing-masing  formulasi  dan  hasil  proksimat bahan baku pakan Bahan Baku K (0,0) A (0,3) B (0,5) Tepung Ikan 42,80  42,80  42,80 Tepung MBM ( Meat and bone meal) 8,03 8,03  8,03 Tepung PBM ( Poultry by product Meal) 19,50  19,50  19,50 Tepung SBM ( Soybean Meal) 6,10 6,10  6,10 Tepung CGM ( Corn gluten meal) 4,00 4,00  4,00 Tepung tapioka 4,00 4,00  4,00 Tepung terigu 3,00 3,00  3,00 Tepung polard 2,00 2,00  2,00 Minyak Ikan 7,00 6,70  6,50 Lechitin 0,40 0,40  0,40 Vit C 0,05 0,05  0,05 Vit Pre-mix 0,50 0,50  0,50 Taurin 0,10 0,10  0,10 Imunostimulan 0,40 0,70  0,90 Anti mold 0,05 0,05  0,05 Anti oksidan 0,07 0,07  0,07 Mineral mix 0,40 0,40  0,40 Enzim 0,05 0,05  0,05 Garam 0,35 0,35  0,35
Metionin 0,65 0,65  0,65 Lisin 0,55 0,55  0,55 Jumlah 100 100 100 Hasil Proksimat bahan baku pakan Kadar Protein 46,69  46,69  46,69 Kadar Lemak 15,41  15,21  15,62 Kadar Karbohidrat 12,1 12,1  12,1 Energi (kkal/g) 4665  4637  4619 C/P** 9,99 9,93  9,89 Keterangan : **C/P (Calori/protein)
Tabel  2.  Hasil  proksimat  pakan  formula  benih  ikan  bawal  bintang  pada  fase pendederan dengan komposisi imunostimulan 0,0%, 0,3% dan 0,5%
Kode Perlakuan Air (%) Abu (%) Lemak (%) Protein %) Serat (%) P Max 11  10,12 12-25 Min 46 Max 5 K (0,0%) 3,93 17,19 15,25 48,21 1,30 A (0,3%) 2,14 16,01 9,74 48,96 1,49 B (0,5%) 2,81 16,59 9,91 47,43 1,35

## Rancangan Percobaan
Pengujian  ini  menggunakan
Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  menggunakan  2  perlakuan dan  2  kontrol,  masing  masing  3 ulangan. Setiap unit percobaan
ditempatkan secara acak untuk mendapatkan  perlakuan  yang  sama. Perlakuan  yang  digunakan  adalah penambahan  imunostimulan  sebesar 0,7%  atau  0,3%  (A),  penambahan imunostimulan  sebesar  0,9%  atau 0,5% (B), dan sebagai kontrol pakan mandiri dilakukan penambahan imunostimulan  standar  0,4%  atau 0,0% (K) dan kontrol pakan
pembanding  dengan  menggunakan pakan komersial (P).
Prosedur pengujian dan pengambilan data
Sebelum  pengujian  dimulai, ikan  uji  dipelihara  selama  7  hari dalam bak fiber yang berukuran 2 x 1 x  1  m,  dengan  menggunakan  pakan campuran  (pelet  komersil  dan  pakan
mandiri).  Tujuannya  adalah  untuk weaning  (adaptasi  terhadap  pakan) karena  sebelumya  ikan  uji  ini  diberi makan  dengan  pelet  komersial. Setelah  ikan  uji  100%  mau  makan dengan pakan mandiri, maka pengujian  siap  untuk  dilakukan. Setelah  proses  weaning  selesai, kemudian  dilakukan  penimbangan berat  dan  pengukuran  panjang  ikan untuk  mengetahui  berat  awal,  lalu ikan  dipindahkan  ke  dalam  waring yang  diletakan  dalam  bak  fiber. Masing  masing  bak  berisi  2  unit waring.  Selama  30  hari  pengujian, ikan diberi  makan 3  kali sehari pada pukul  08.00;  11.00;  dan  14.00  WIB. Penggantian  air,  penyiponan  kotoran di dasar bak dan pembersihan dinding bak dilakukan 2 kali sehari, pagi dan sore  hari  setelah  ikan  diberi  makan. Pengambilan sampel untuk parameter pertumbuhan  dilakukan  seminggu sekali  kemudian  untuk  sampling  uji imunitas nonspesifik meliputi uji total leukosit, uji laju fagositik dan indeks
fagositik,  diamati  pada  saat  awal penelitian  dan  kemudian  setiap  10 hari  sekali.  Sedangkan  uji  tantang dilakukan pada akhir pengujian yaitu selama 5 hari mulai hari ke-31 sampai hari ke- 35.
Parameter yang Diamati 1. Laju Pertumbuhan Spesifik
(SGR),  dengan  menggunakan
rumus  (Tacon,  1993)  sebagai berikut:
SGR = LnWt − LnWo
t x 100 %
Keterangan:
SGR  = Specific growth rate (%)
W t = Rerata bobot individu pada akhir pemeliharaan (g)
W 0 = Rerata bobot individu pada
awal pemeliharaan (g)
t = Waktu pemeliharaan (hari)
2. Pertumbuhan Bobot Mutlak
(PBM)  dihitung  dengan  rumus Effendie (1997):
PBM (g) =  W t – W 0
Keterangan: PBM =  Pertumbuhan  bobot  mutlak (g)
Ŵ t =  Rerata  bobot  individu  pada
akhir pemeliharaan (g) W 0 =  Rerata  bobot  individu  pada awal pemeliharaan (g)
3. Tingkat kelangsungan hidup (SR), dengan menggunakan rumus Effendie (1997):
SR = N t N 0 x100
Keterangan:
SR  = Kelangsungan hidup ikan (%)
N t = Jumlah ikan pada akhir pemeliharaan (ekor)
N 0 = Jumlah ikan pada awal pemeliharaan (ekor)
4. Rasio  Konversi  Pakan  (FCR), dengan  menggunakan  rumus Effendie (1997) :
∑F
FCR =   --------------------- (W t –W o ) + (W d )
Keterangan: ∑F  = Total pakan yang dikonsumsi
(g)
W t = Total Bobot ikan akhir (g) W o = Total bobot ikan awal (g) W d = Total bobot ikan mati (g)
5. Total  Leukosit,  dengan  cara diambil masing masing perlakuan  2  ekor  ikan  untuk diambil  ginjal  bagian  pangkal (anterior) dan limfa untuk kemudian  dihancurkan  dalam larutan  HBSS  ( Hank's  Balance Salt Solution ). Selanjutnya disaring  dengan  menggunakan cell  strainer (saringan  100μm) dan dimasukan ke dalam tabung, yang sudah berisi percoll dan di - centrifuge dengan kecepatan 500
rg dan suhu 4 ○ C selama 40 menit.
Sel leukosit dipanen pada bagian tengah percoll dan dicuci menggunakan  larutan  HBSS  3 kali  dengan  sentrifugasi  3000 rpm  suhu  4 o C  selama  10  menit,
supernatan dibuang dan kemudian  ditambahkan  larutan L-15  medium  1  ml.  Leukosit dihitung  dibawah  mikroskop mengunakan haemocytometer.
Jumlah leukosit dihitung dengan menggunakan  rumus  menurut Blaxhall dan Daisley (1973):

## ∑ leukosit = ∑ rataan sel leukosit
terhitung x pengencer /volume
6. Aktifitas  Pagositosis, terdiri  dari laju  pagositosis  dan  indeks pagositosis. Pengukuran aktifitas pagositosis  dilakukan  dengan cara mengambil 200 μL suspensi leukosit kemudian diletakan pada gelas  objek  dan  dikeringkan selama  90  menit.  Setelah  90 menit  cuci  dengan  1  mL  larutan HBSS  dan  ditambahkan  200μl larutan  latex  beads  (1μL/5  mL HBSS)  diatas  lapisan  leukosit dan  dibiarkan  selama  30  menit kemudian dibilas kembali dengan 1 mL larutan HBSS. Selanjutnya diteteskan  metanol  sebanyak 200μl  dan  didiamkan  selama  5
menit,  terakhir  bilas  dengan ddH2O. Preparat kemudian diberikan pewarna giemsa, diamkan selama 40 menit, kemudian dibilas dengan ddH2O. Setelah preparat kering,
dilakukan  pengamatan  di  bawah mikroskop  dengan  pembesaran
100  kali.  Jumlah  sel  yang menunjukan aktifitas  pagositosis (laju  pagositosis)  dihitung  dari 200  sel  leukosit  yang  teramati.
Aktifitas fagositosis (laju fagositosis dan indeks fagositosis) dihitung dengan rumus:
Laju Fagositosis (%) = Ʃ Sel Fagositosis x 100%
Jumlah sel leukosit Index Fagositosis = ∑ latex beads yang difagositosis
∑ sel fagositosis
7. Uji  Tantang,  dilakukan  untuk melihat  respon  imunitas  ikan terhadap  infeksi  bakteri Vibrio. alginolyticus .  Sebanyak  10  ekor ikan dipilih dari semua perlakuan yang memiliki ukuran bobot rata- rata yang sama, kemudian dipelihara  dalam  akuarium  dan diinfeksi  dengan  bakteri V. alginolytius melalui injeksi secara  intraperitoneal  dengan dosis 3 x 10 9 cfu/ml/0,002 g/ekor bobot  ikan,  kemudian  diamati mortalitasnya selama 5 hari.

## Analisis Data
Data yang diperoleh dinyatakan dalam bentuk rata rata ± Stdv (standar deviasi).  Untuk  melihat  perbedaan pengaruh  antar  perlakuan  maka dilakukan  uji  Duncan  dengan  alat bantu SPSS.

## Hasil dan Pembahasan
Hasil  pengujian  pendederan ikan bawal bintang dengan
penambahan  suplemen  pakan  yang mengandung  imunostimulan  yang berbeda  dapat  dilihat  pada  Tabel  3, Gambar 1, Gambar 2, Gambar 3, dan Gambar 4.     Dari hasil yang diperoleh
dapat disimpulkan bahwa penambahan  suplemen  pakan  yang mengandung  imunostimulan  dalam formulasi pakan buatan tidak berpengaruh  nyata  terhadap survival rate (SR),  laju  pertumbuhan  harian
(SGR),  konversi  pakan  (FCR),  dan jumlah  konsumsi  pakan  harian  bila dibandingkan dengan perlakuan tanpa penambahan  suplemen  pakan  yang mengandung  imunostimulan,  tetapi ada  peningkatan  rata-rata  biomassa ikan  yang  dihasilkan  selama  30  hari pemeliharaan,  meskipun  hasil  yang diperoleh tidak berbeda  nyata (Tabel 3).  Di  samping  itu  pula  pemberian imunostimulan sebesar 0,5% (perlakuan  B)  ke  dalam  pakan formula  menghasilkan  jumlah  total leukosit tertinggi yaitu sebesar
65,775x10 6 sel/ml  dan phagocytic rate sebesar 35,10% yang tercapai di hari ke-30 (Gambar 1 dan Gambar 2).
Nilai  sintasan  (SR)  pasca  uji tantang  terbaik  ditunjukan  pada perlakuan  A  (0,3%)  yaitu  sebesar 50%  pada  hari  kelima  setelah penyuntikan  bakteri  patogen V. alginolyticus (Gambar  4).  Menurut Dias et al . (2019) menyatakan bahwa suplementasi  Aquate  FishTM®  yang mengandung imunostimulan komersil selama  30  hari  pemeliharaan  tidak mempengaruhi  kelangsungan  hidup, panjang tubuh, asupan pakan, konversi  pakan,  faktor  kondisi  pada ikan  Arapaima  gigas  tetapi  dapat meningkatkan  biomassa  pada  ikan yang  diberi  12  g  imunostimulan  ini. Lebih  lanjut  dikatakan  Padua et  al . (2015) dalam Dias et  al .  (2019), bahwa  pemberian  suplemen  pakan yang  mengandung  imunostimulan komersial pada ikan nila O. niloticus memiliki  sintasan  yang  tinggi  tetapi tidak  berpengaruh  pada  tingkat pertumbuhan dan berat spesifik.
Tabel  3.  Data  laju  pertumbuhan  harian  (SGR)  dan  pertambahan  berat  (WG),
Konversi  Pakan  (FCR),  dan  sintasan  (SR)  benih  Ikan  Bawal  Bintang dengan imunostimulan selama pemeliharaan Parameter Perlakuan P (0,00) K (0,0) A (0,3) B (0,5) Berat awal (g/ekor) 10,78 ± 0,81 9,93 ± 1,0 11,71 ± 1,88  12,12 ± 1,90 Berat akhir (g/ekor) 23,88 ± 2,54 21,99 ± 3,3 24,41± 4,64  24,05 ± 4,95 Bobot mutlak (g/ekor) 13,10 ± 1,6 12,06 ± 1,15  12,69 ± 1,86  11,93 ± 1,85 Rata-rata Biomassa (g) 1530,4 ± 196,3 a 1464,5± 208,9 a 1651,1 ± 316 a 1569,1 ± 260 a SGR (%) 2,65 ± 0,11 a 2,65 ± 0,17 a 2,45 ± 0,11 ab 2,28 ± 0,23 b FCR 1,19 ± 0,12 1,28 ± 0,06 1,16 ± 0,09  1,20 ± 0,09 SR (%) 100,00 100,00 100,00 100,00 Menurut  Lemos  dan  Phan (2001) dalam Nurhudah et al . (2018) menyatakan bahwa kebutuhan energi untuk  maintenance  harus  terpenuhi terlebih  dahulu  sebelum  terjadi pertumbuhan.  Terjadinya  pertum- buhan  pada  ikan  uji  pada  semua perlakuan selama masa pemeliharaan menunjukkan  bahwa  energi  pakan
yang diberikan telah melebihi kebutuhan  ikan  itu  sendiri  untuk maintenance  (pemeliharaan  tubuh- nya)  sehingga  selebihnya  digunakan untuk pertumbuhan.

## Total Leukosit
Hasil  penghitungan  rata  rata total leukosit selama pengujian dilihat pada Gambar 3.
Gambar 1. Rata rata total leukosit (x 10 6 sel/ml) benih ikan Bawal Bintang
Dari  gambar  di  atas,  total leukosit  tertinggi  didapatkan  pada perlakuan  B  (0,5%)  di  hari  ke  30 pengujian, yaitu 65,775 x 10 6 sel/ml, sedangkan  jumlah  rata  rata  total leukosit  terendah  pada  perlakuan pakan  komersial  (P),  yaitu  33,075  x 10 6 sel/ml.  Hasil  rata      rata  total leukosit  perlakuan  A  berbeda  nyata dengan  perlakuan  B  tetapi  tidak berbeda nyata
dibandingkan perlakuan  kontrol  (K).  sedangkan perlakuan  B  berbeda  nyata  dengan kontrol (K) dan pakan komersial (P). Artinya
bahwa komposisi imunostimulan  sebesar  0,5%  (B) dalam  pakan  mandiri  memberikan dampak  yang  positif  dan  perbedaan yang nyata dalam peningkatan jumlah total  leukosit  bila  dibandingkan dengan ketiga perlakuan lainnya. Hal ini sesuai dengan pendapat Manurung et al . (2013), yang menyatakan bahwa penambahan bahan yang
mengandung  imunostimulan  berupa ragi  roti  komersil  yang  dicampur  ke dalam formulasi pakan buatan secara nyata  dapat  meningkatkan  jumlah leukosit  dan  aktifitas  fagositosis benih ikan nila ( Oreochromis niloticus ) selama 4 minggu pemeliharaan. Selanjutnya Dias et al . (2019), berpendapat bahwa suplemen makanan yang mengandung imunostimulan komersial yang diberikan selama 30 hari pemeliharaan  pada  ikan  Arapaima ( Arapaima gigas ), tidak mempengaruhi asupan pakan, konversi  pakan  dan  faktor  kondisi, tetapi  dapat  meningkatkan  biomassa panen,  jumlah  eritrosit,  trombosit, leukosit,
limfosit, monosit,
hemoglobin,  glukosa,  globulin,  dan trigliserida  plasma  pada  ikan  yang diberi  pakan  dengan  konsentrasi  diet 12 g/kg pakan.
Leukosit  merupakan  sel  darah yang berperan dalam sistem kekebalan tubuh. Respon yang diberikan ikan untuk menambah daya tahan tubuhnya dengan meningkatkan jumlah  leukosit  yang  mempunyai fungsi sebagai sel pertahanan. Leukosit  membantu  membersihkan tubuh  dari  benda  asing,  termasuk invasi patogen melalui sistem tanggap kebal  dan  respon  lainnya.  Faktor- faktor  yang  mempengaruhi  jumlah leukosit adalah kondisi dan kesehatan
33.075 12.8 21.72 39.25 65.775 0 10 20 30 40 50 60 70 80 D0 D10 D20 D30 Tot al le uk osi t (x10 6 se l/m l) Hari Ke- P K (0,0%) A (0,3%) B (0,5%)
tubuh ikan. Jumlah leukosit yang ada pada  satu  jenis  ikan  tertentu  dapat berubah sesuai dengan tingkat kesehatan ikan, apabila ikan terinfeksi oleh  suatu  bakteri  patogen  tertentu maka  yang  akan  terjadi  selanjutnya adalah  peningkatan  jumlah  total leukosit  atau  penurunan  jumlah leukosit.  Peningkatan  sel  leukosit merupakan refleksi keberhasilan sistem imunitas seluler (non spesifik) sebagai pemicu untuk respon
kekebalan.  (Suprayudi et  al .,  2006).
Purnomo et al . (2015) menambahkan bahwa  fungsi  dari  leukosit  yaitu menjaga  tubuh  dari  patogen  dengan cara  fagositosis  dan  menghasilkan antibodi. Faktor-faktor yang
menentukan  jumlah  leukosit  antara lain aktivitas biologis, kondisi lingkungan, umur dan pakan.
Respon  imun  untuk  semua perlakuan mulai nampak di hari ke 30 yang  ditandai  dengan  meningkatnya jumlah leukosit.

## Laju Fagositosis
Jumlah  sel  leukosit  yang  aktif dinyatakan  dengan  laju  fagositosis. Nilai  rerata  laju  fagositosis  ikan Bawal  Bintang  selama  30  hari pengujian  dan  diamati  setiap  10  hari setelah  diberi  pakan  mandiri  dengan penambahan  suplemen  pakan  yang mengandung  imunostimulan  dapat dilihat pada Gambar 2 di bawah ini.
Gambar 2. Rata rata laju fagositosis benih ikan Bawal Bintang
Laju  fagositik  pada  perlakuan pada  perlakuan  B  pada  Gambar  2  di atas  sampai  dengan  akhir  penelitian adalah sebesar 35,10% dan cenderung stabil  dan  hanya  sedikit  mengalami penurunan  pada  akhir  kegiatan, namun hasil ini masih lebih baik bila dibandingkan  dengan  perlakuan  A, kontrol  dan  pembanding.  Menurut Barman  (2011),  menyatakan  bahwa laju  fagositik  yang  dilakukan  sel-sel leukosit  akan  meningkat  pada  awal stimulasi  sistem  imun  dan  akan
mengalami penurunan. Pola peningkatan  ini  merupakan  fungsi dari  peningkatan  total  leukosit  pada masing-masing komponen darah seperti limfosit, monosit, dan neutrophil.
Indeks Fagositosis Jumlah partikel yang difagositosis oleh sel pagosit dinyatakan dengan indeks fagositosis. Dari  hasil  penghitungan,  rata  rata jumlah  partikel  ( latex  beads )  yang
48.16 42.04 41.69 35.10 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 D1 D10 D20 D30 P ha gocytic R at e (% ) Hari ke- P K (0,0%) A (0,3%) B (0,5%)
difagositosis  berkisar  antara  1,68  - 3,84.  Efek  pemberian  suplemen pakan  yang  mengandung  imuno- stimulan terhadap peningkatan indeks fagositosis  dapat  terlihat  pada  nilai rata rata indeks fagositosis ˃ 1 untuk kedua perlakuan dan kontrol.
Menurut  Kresno  (2001),  Jika nilai rata-rata indeks fagositosis lebih besar dari satu (>1) berarti menunjukkan  zat  uji  mempunyai kemampuan  imunostimulan.  Hal  ini berarti  bahwa  pemberian  suplemen pakan  yang  mengandung  imuno-
stimulan sebesar 0,0% (K), 0,3% (A) dan 0,5% (B) sudah mampu meningkatkan produksi antibodi, dan penambahan  imunostimulan  pada formulasi pakan ini memberikan hasil yang  tidak  berbeda  nyata  antara semua  perlakuan  artinya  bahwa komposisi  imunostimulan  standar sebesar  0,4%  atau  0,0%  pada formulasi  pakan  mandiri  BBPBL sudah  mampu  menghasilkan  indeks fagositosis  lebih  besar  daripada  >  1, yaitu, 3,84 (Gambar 3).
Gambar 3. Rata rata indeks fagositosis benih ikan Bawal Bintang
Uji Tantang
Hasil uji tantang dengan bakteri patogen V. alginolyticus dengan dosis 3  x  10 9 cfu/ml/0,002  g/ekor  bobot ikan,  yang  dilakukan  selama  5  hari setelah pengujian menunjukan bahwa perlakuan penambahan imuno- stimulan  sebanyak  0,3%  (A)  pada pakan  formula  memberikan  hasil sintasan yang terbaik bila dibandingkan dengan perlakuan penambahan imunostimulan sebanyak  0,5%  (B),  dan  perlakuan pakan  komersial  (P)  serta  pakan mandiri dengan
kandungan imunostimulan  sebanyak  0,0%(K). (Gambar  4).  Berdasarkan  Gambar  4, terlihat  bahwa  benih  ikan  bawal
perlakuan  A  mengalami  kematian yang  lebih  rendah  dibandingkan dengan perlakuan B, pembanding dan kontrol. Sedangkan pada perlakuan B yang  menghasilkan  jumlah  total leukosit  dan  phagocyte  rate  yang paling  tinggi  pada  semua  perlakuan diakhir pengujian, tetapi lebih rendah sintasannya bila dibandingkan dengan  perlakuan  A.  hal  ini  berarti bahwa  pemberian  imunostimulan dapat  menimbulkan feedback negatif pada  ikan,  yaitu  semakin  tinggi imunostimulan  belum  tentu  dapat mendorong respon imun yang dimiliki untuk bertahan dari serangan penyakit.  Hal  ini  sesuai  dengan pendapat  yang  dikemukakan  oleh
1.68 3.84 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 D0 D10 D20 D30 Pha goc yti c In d ex Hari ke- P K (0,0%) A (0,3%) B (0,5%)
Sakai  (1999) dalam Manurung et  al .
(2013),  bahwa  penggunaan  dosis imunostimulan yang berlebihan terkadang tidak mampu meningkatkan  pertumbuhan  maupun sistem  imun  tetapi  sebaliknya  akan menekan sistem imun maupun pertumbuhan.  Bricknell  dan  Dalmo (2005)  menambahkan  bahwa  ada beberapa  peneliti  yang  melaporkan bahwa  penggunaan  imunostimulan tidak memberikan efek menguntungkan, dan pemanfaatannya  dalam  pakan  larva dan  produk  pengayaan  makanan hidup untuk beberapa waktu, seringkali  tanpa  keberhasilan  yang tampak. Bila  dilihat  pada  grafik  uji tantang  (Gambar  4)  bahwa  pada perlakuan kontrol baik yang
menggunakan  pakan  komersial  (P)
maupun  kontrol  tanpa  penambahan imunostimulan (K), dari hari pertama sampai  dengan  hari  kelima,  sudah mulai  mengalami  kematian  sedang- kan  pada  perlakuan  penambahan suplemen  pakan  yang  mengandung imunostimulan  (perlakuan  A  dan perlakuan  B)  kematian  baru  terjadi setelah  hari  keempat  pengujian.  Hal ini  berarti  bahwa  pada  perlakuan  A, beberapa  ikan  sudah  membentuk respon  imun  nonspesifik  dalam tubuhnya, sehingga ikan dapat bertahan  hidup  dari  serangan  bakteri yang bersifat patogen. Sesuai dengan pernyataan  Johnny et  al. (2002) bahwa  untuk  mencegah  serangan bakteri maka digunakan imunostimulan  yang  sudah  terbukti dapat meningkatkan respon imun non spesifik, oleh karena dapat meningkatkan aktivitas fagositik..
Gambar 4. Kelulushidupan Pasca Uji Tantang dengan V. alginolyticus

## Kesimpulan dan Saran
Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  suplementasi  pakan  yang mengandung imunostimulan kedalam pakan  formula  tidak  berpengaruh nyata  terhadap  laju  pertumbuhan, konversi pakan  dan sintasan, namun kandungan  imunostimulan  sebesar 0,5% (perlakuan B)  ke dalam pakan
formula  menghasilkan  jumlah  total leukosit tertinggi yaitu sebesar 65,775 x  10 6 sel/ml  dan phagocytic  rate sebesar 35,10% yang tercapai di hari ke-30.  Nilai  sintasan  (SR)  pasca  uji tantang  terbaik  ditunjukan  pada perlakuan A(0,3%) yaitu sebesar 50% pada hari kelima setelah penyuntikan bakteri patogen V. alginolyticus .
100 80 40 30 30 100 90 60 10 10 100 100 100 50 50 100 100 100 50 30 0 20 40 60 80 100 120 D1 D2 D3 D4 D5 Si nt asa n (S R %) Hari ke- P K (0,0%) A(0,3%) B (0,5%)
Perlu dilakukan penelitian lanjutan  terkait  dengan  penambahan suplemen  pakan  yang  mengandung imunostimulan pada formulasi pakan, dengan  persentase  yang  lebih  tinggi atau pada stadia dan ukuran ikan yang lebih besar.

## Daftar Pustaka
Barman, D. 2011. White Blood Cells and  Its  Function  in  Fish  Immune System. Aqua International, 42(1):
89 Blaxhall, P.C. & Daisley, K.W. 1973.
Routine  Haematological  Methods for  Use  with  Fish  Blood. J.  Fish Biology , 5: 577 – 581.
Bricknell,  I.  &  Dalmo,  R.A.  2005. The  use  of  immunostimulants  in fish  larval  aquaculture. Fish  &
Shellfish  Immunology ,  19:  457  –
472
Dias,  M.K.R.,  Yoshioka,  E.T.O.,
Rodriguez,  A.F.R.,  Ribeiro,  R.A.,
Faria,  F.S.E.D.,  &  Dias,  M.T.
2019.  Growth,  physiological  and immune  responses  of Arapaima gigas to Aeromonas hydrophila challenge and handling stress  following  feeding  with immunostimulant supplemented diets. Fish and Shellfish Immunology , 84: 843 – 847 Effendie, M.I. 1997. Biologi Perikanan . Yayasan Pustaka Nusatama, Yogyakarta. Johnny,  F.  &  Roza,  D.  2002. Pengaruh penyuntikan imunostimulan peptidoglikan terhadap peningkatan tanggap kebal  nonspesifik  ikan  kerapu macan, Epinephelus fusco- guttatus . Laporan Penelitian .
Balai  Besar  Riset Perikanan Budidaya Laut, Gondol.
Kresno,  S.B.  2001. Diagnosis  dan
Prosedur  Laboratorium  Edisi  IV.
Fakultas  Kedokteran,  Universitas Indonesia, Jakarta.
Manurung,  U.N.,  Manoppo,  H.,  &
Tumbo,  R.A.  2013.  Evaluation  of
Baker’s  Yeast  ( Saccharomyces cereviciae )  In  Enhancing  Non- Specific  Immune  Response  and Growth of Nile Tilapia ( Oreochromis  niloticus ). Jurnal Budidaya Perairan , 1(1): 8 – 14
Novriadi, R. 2014. Penyakit Ikan Air Laut di Indonesia . Balai Budidaya
Laut Batam, Riau. Nurhuda,  A.M.,  Samsundari,  S.,  & Zubaidah,  A.  2018.  Pengaruh perbedaan interval waktu pemuasaan  terhadap  pertumbuhan dan  rasio  efisiensi  protein  ikan gurame  ( Osphronemus  gouramy ). Aquatic Sciences Journal , 5(2): 59 – 63 Payung,  C.N.  &  Manoppo,  H.  2015. Peningkatan  Respon  Kebal  Non-
Spesifik  dan  Pertumbuhan  Ikan Nila ( Orechromis niloticus ) Melalui pemberian Jahe ( Zingiber officinale ). Jurnal Budidaya Perairan , 3(1): 11 – 18 Prihaningrum,  A.,  Supriatna,  E., Dharmawati, V., & Anis, Z. 2020. Rekayasa Teknologi Pakan Formula  Benih  Bawal  Bintang Dengan  Penambahan  Metionin. Buletin Budidaya Laut, No. 48 Purnomo,  D.,  Sugiharto,  &  Isroli. 2015. Total leukosit dan diferensial  leukosit  darah  ayam broiler  akibat  penggunaan  tepung onggok fermentasi Rhizopus oryzae pada  ransum. Jurnal  ilmu- ilmu peternakan , 25(3): 59 – 68
Raa, J. 2000. The Use of Immunostimulant  in  Fish  and Shellfish  Feeds. Avances en
nutricion acuicola : 47 – 56
Rusydi, R., Hartami, P., & Khalil, M.
2017.  Karakteristik  nutrisi  dan stabilitas  pakan  kombinasi  ampel (ampas  tahu  dan  pelet). Acta Aquatica. Aquatic Sciences Journal , 4(1): 4 – 7 Suprayudi,  M.A.,  Indriastuti,  L.,  & Setiawati,  M.  2006.  Pengaruh Penambahan Bahan Bahan Immunostimulan  dan  Formulasi Pakan  Buatan  Terhadap  Respon Imunitas  dan  Pertumbuhan  Ikan Kerapu Bebek Cromileptes altivelis . Jurnal Aquaculture Indonesia , 5(1): 77 – 86
Tacon, A.G. J. 1993. Feed Ingredients for  Wrom  Water  Fish:  Fish  Meal and  Other  Processed  Feedstuffs. FAO Fisheries Circulator , No. 856 Taslihan, A., Murdjani, M., Pubomartono, C., & Kusnendar, E. 2000.  Bakteri  Pathogen  Penyebab Penyakit  Mulut  Merah  pada  Ikan Kerapu Tikus Cromileptes
altivelis. Jurnal Perikanan , 2: 57 – 62