## HISTOLOGI LIVER BURUNG PUYUH DENGAN PEMBERIAN MINYAK ATSIRI BAWANG PUTIH

## (Liver Histologic of Quail with Administration of Garlic Volatile Oil)

## Andi Mushawwir, An An Yulianti dan Nono Suwarno
Fakultas Peternakan, Universitas Padjadjaran Kampus Jatinangor, Jl. Raya Bandung-Sumedang Km. 21 Jatinangor, Sumedang Jawa Barat 45363 Email: mushawwir@unpad.ac.id.

## ABSTRACT
Sixty-four of female quails, twenty-two weeks old, were used in the current study to evaluate the potential of volatile oil from garlic extract in improving histological liver of the quails. Volatile oil isolated from garlic by using destilated technique. This study was designed according to completely randomized design, consisted of four treatment groups and six replications. Each treatment group consisted of 16 quails, with supplemental volatile oil (VO) by orally, as follow L0=without of VO; L1= VO of 75 µL; L2= VO of 100 µL and L3= VO of 125 µL. Liver tissue samples were collected using a fixative solution and the liver samples were used to determine the liver histological parameters (necrosis, apoptosis, fat degeneration, hydropic degeneration, acute inflammation, hemorrhagic) by a Mallory-asan technique dan binocular microscope. The current study showed that overall results indicated a significant treatment effect (P<0,05) for the liver histological condition. In conclusion, VO resulted in supplemented levels that significantly raised protein and lipid anabolic and induced hormone signal related growth liver tissue
Key words : Volatile oil; histological, liver, quail

## ABSTRAK
Enam puluh empat ekor puyuh berjenis kelamin betina, berumur 22 minggu telah digunakan dalam penelitian ini untuk mengkaji pengaruh pemberian minyak atsiri terhadap kondisi histologi liver  puyuh.  Minyak  atsiri  dari  bawang  putih  telah  diisolasi  dengan  teknik  destilasi.  Percobaan ini dirancang dengan rancangan acak lengkap dengan empat kelompok percobaan dan enam kali ulangan,  masing-masing  kelompok  terdiri  dari  16  ekor  puyuh,  dengan  level  pemberian  minyak atsiri L0 (tanpa minyak atsiri); L1 (75 µL/ekor ); L2 (100 µL/ekor) dan L3 (125 µL/ekor). Perlakuan telah diberikan dengan cara dicekok. Pengambilan sampel jaringan dilakukan pada akhir penelitian dengan menggunakan larutan fiksatif dan pembuatan preparat jaringan, untuk memeriksa parameter- parmater  histologi  liver  (nekrosis,  apoptosis,  degenerasi  lemak,  degenerasi  hidrofik,  inflamasi dan hemoragik) dilakukan dengan teknik Mallory-Asan dan dianalisis menggunakan mikroskop binokuler.  Berdasarkan  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  secara  keseluruhan,  minyak  atsiri mempengaruhi (P<0,05) kondisi histologi liver puyuh. Disimpulkan bahwa minyak atsiri mampu menstimulan  anabolisme  protein  dan  lipid,  juga  signal  hormonal  terkait  dengan  pertumbuhan liver.
Kata kunci : Atsiri; histologik, liver, puyuh

## PENDAHULUAN
Ternak  puyuh  salah  satu  ternak  yang sedang  banyak  dibudidayakan.  Ternak  ini memiliki produktivitas yang tinggi dengan siklus biologis  yang  pendek.  Sebagai  ternak  unggas yang  bersiklus  biologis  pendek,  memiliki  laju metabolisme  yang  lebih  tinggi  dibandingkan ternak  unggas  yang  lain.  Konsekuensi  ternak
dengan laju metabolisme, salah satunya adalah konsumsi oksigen yang tinggi untuk menunjang penyediaan  energi  (ATP)  melalui  oksidasi reduksi di matrik dalam mitokondria.
Dalam  kondisi  normal,  sintesis  ATP memicu  produksi  oksigen  bervalensi  satu yang  merupakan  sumber  radikal  bebas. Meskipun  di  dalam  sel-sel  normal  memiliki enzim  yang  berperan  sebagai  antioksidan,

## Andi Mushawwir, dkk
namun  seiring  dengan  masa/umur  sel  maka kapasitas  antioksidan  menurun.  Kondisi  ini menjadi  salah  satu  faktor  penyebab  nekrosis dan  apaptosis.  Nekrosis  dan  apoptosis  adalah kematian  sel,  menjadi  pemicu  kamatian jaringan dan penurunan fungsinya. Oleh sebab itu, peningkatan metabolisme dan umur ternak selalu  diiukuti  dengan  penurunan  fungsi organ,  antara  lain  organ  hati  (Weng et  al ., 2007). Penurunan fungsi organ adalah dampak penurunan fungsi sel-sel hati karena kerusakan dan  kematian  sel  (Mushawwir  dkk.,  2017  dan 2018).
Pemicu  kerusakan  dan  kematian  sel-sel hati  juga  disebabkan  oleh  faktor  lain,  seperti cemaran kapang dan aflatoksin dalam ransum. Data FAO menyatakan bahwa 25% suplai biji- bijian  di  dunia  terkontaminasi  oleh  kapang dan  mikotoksin.  Bahkan  di  Asia  Tenggara ditemukan  sebanyak  50%  jagung  dan  90% bahan  pakan  ternak  unggas  terkontaminasi mikotoksin. Hasil penelitian Rachmawati (2005), menunjukkan  bahwa  sejumlah  sampel  jagung bahan pakan dari berbagai sumber di Indonesia menunjukkan lebih 50% mengandung aflatoksin melebihi kisaran toleransi (>50 ppb). Aflatoksin sumber pakan dipicu oleh salah satunya karena faktor makroklimat (Mushawwir dkk., 2010 dan 2011). Upaya penanggulangan kerusakan jaringan  hati  perlu  dilakukan,  antara  lain dengan  pemberian  bahan  additif  alamiah, seperti  minyak  atsiri.  Hasil-hasil  penelitian terdahulu  menunjukkan  beberapa  zat-zat aktif  dari  bahan  alami  berpotensi  sebagai  zat aditif  untuk  meningkatkan  immunintas  dan memperbaiki  profil  darah  (Mushawwir  dkk., 2018); menurunkan kematian sel (Korivi et al., 2012;  Lee  et  al.,  2014),  menurunkan  hemoragi pada  jaringan  hati  (Cortes-Coronado et  al ., 2017). Zat-zat aktif yang terdapat dalam minyak atsiri  terutama  komponen  diallyl,  mampu bertindak  sebagai  zat  antioksidan.  Bebeberapa penelitian terdahulu menunjukkan kemampuan allyn dalam menghambat keracunan kimia dari bahan  alam  (misalnya  alfatoksin)  (Yang  et  al., 2011),  menginduksi  fungsi  glutation  sebagai enzim  antioksidan  (Bose  et  al.,  2012)  dan komponen dially trisulfida dalam minyak atsiri mampu  meregulasi  sinyal  transduksi  terkait dengan radikal bebas dalam mencegah kanker (Antosiewicz et al. , 2016). Meskipun demikian, masih sangat minim informasi tentang efek pemberian minyak atsiri yang mengandung komponen zat aktif seperti diallyl  terhadap  kondisi  histologi  liver  puyuh. Oleh karena itu, peneliti tertarik untuk mengkaji dampak  pemberian  minyak  atsiri  terhadap
kondisi  histologi  liver  puyuh  yang  dipelihara secara intensif.

## MATERI DAN METODE

## Ternak dan kandang percobaan
Enam  puluh  empat  ekor  puyuh    berjenis kelamin  betina,  berumur  22  minggu  dengan kisaran berat badan 121±4,63 g, telah digunakan dalam  penelitian  ini  untuk  mengkaji  dampak pemberian  minyak  atsiri  terhadap  histologi livernya. Sampel ternak puyuh percobaan dibagi kedalam empat kelompok percobaaan, masing- masing kelompok terdiri dari 16 ekor.
Setiap  kelompok  percobaan  terdiri  dari delapan  kotak/sangkar,  sekaligus  sebagai ulangan, sehingga setiap ulangan terdiri dari 2 ekor  puyuh.  Masing-masing  kotak  berukuran 25 cm x 18 cm dan dilengkapi dengan tempat makan dan minum.
Percobaan  ini  telah  dilakukan  di  salah satu peternak puyuh di Kabupaten Sukabumi, Jawa Barat, selama satu bulan. Sampel jaringan telah  dianalisis  di  Laboratorium  Stuktur Hewan, Jurusan Biologi Fakultas MIPA dan di Laboratorium  Fisiologi  dan  Biokimia,  Fakultas Peternakan, Universitas Padjadjaran.
Isolasi  minyak  atsiri,  ransum  basal  dan rancangan percobaan
Pemisahan  senyawa-senyawa  minyak atsiri dari bawang putih dilakukan berdasarkan Block (1985), dengan prosedur, s ampel bawang putih diiris dan dimasukkan ke labu alas bulat kemudian tambahkan akuades sampai seluruh sampel terendam sempurna di dalam labu alas bulat  berleher  panjang  yang  telah  dirangkai dalam perangkat alat destilasi.
Destilasi  dilakukan  bertahap  pertama dengan temperatur 75-80 0 C dan tahap berikutnya selama  4-5  jam  pada  temperatur  100 0 C  (Block, 1985). Senyawa atsiri yang diperoleh pada tahap pertama  ditampung  dalam  corong  pisah  lalu dipisahkan antara atsiri dengan air. Kemudian minyak  atsiri  ditampung  dalam  wadah tertutup.
Ransum  basal  yang  diberikan  selama penelitian  mengandung  energi  metabolisme 2800  kkal/kg,  protein  kasar  18,18%,  lemak kasar  7,64%,  serat  kasar  3,32%,  Ca  3,5%  and available  phosporus 0,35%.    Ransum  diberikan secara terbatas sesuai kebutuhannya yaitu 17 g/ ekor, sedangkan air minum diberikan secara ad libitum .
Percobaan dirancang menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap,  terdiri  dari  4 perlakuan  level  minyak  atsiri  dan  8  ulangan.

## JITP Vol. 8 No. 1, Januari 2020
Perlakuan diberikan sebagai berikut :
Kelompok L0  = Tanpa pemberian minyak atsiri (MA) Kelompok L1  = Pemberian MA 75 µ L/ekor Kelompok L2  = Pemberian MA 100 µ L/ekor Kelompok L3  = Pemberian MA 125 µ L/ekor Pemberian  minyak  atsiri  pada  tiap-tiap ekor  puyuh  percobaan  dilakukan  pada  setiap pagi hari (jam 06.00 – 07.00) selama satu bulan, sebelum ternak diberi makan. Pemberian minyak atsiri pada ternak percobaan tersebut dilakukan dengan  teknik  pencekokan,  menggunakan mikropipet.

## Koleksi dan analisis sampel
Koleksi  atau  pengambilan  sampel  telah dilakukan  diakhir  percobaan,  dengan  memilih secara acak masing-masing 10 ekor pada setiap kelompok  percobaan.  Sampel  puyuh  yang terpilih, dipotong dan segera dipisahkan jaringan hatinya (liver) sambil meneteskan larutan NaCl fisiologis.  Liver  yang  telah  dipisahkan  segera dimasukkan ke dalam botol sampel yang telah berisi larutan fiksatif.
Analisis  sampel  dilakukan  dengan menggunakan  teknik  pewarnaan  Mallory- Asan.  Larutan-larutan  reagen  yang  digunakan antara lain, larutan A (Minyak Aniline, ehanol 95%,  Aquades),  larutan  B  (Azocarmine  G  Cl n.50085, Asam Asetat Glasial, Aquades), larutan C  (ethanol  95%,  Asam  Asetat  Glasial,  Asam Phospomolybdic),  larutan  D  Trikrom  Mallory (Aniline blue Cl n. 42755, Orange G Cl n. 16230, Aquades, Asam Asetat Glasial).  Larutan utama disiapkan  yang  terdiri  dari  larutan  A  (ethanol 95% 100 ml, Minyak Aniline 0,1 ml), larutan B (Azocarmine G 0,1 mg, Aquades 100 ml, Asam Asetat  Glasial  1  ml),  larutan  C  (ethanol  95% 100 ml, Asam Asetat Glasial 1 ml), larutan D (
Aniline blue 0,5 mg, Orange G 2 mg, Aquades 100 ml, Asam Asetat Glasial 5-7 ml ). Preparat  yang  selesai  dalam  tahap pewarnaan,  selanjutnya  dianalisis  parameter histologinya  (apoptosis,  nekrosis,  degenerasi hidropik,  degenerasi  lemak,  inflamasi  sel, hemoragik)  dilakukan  dengan  menggunakan mikroskop.

## Analisis data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan menggunakan analisis varians acak lengkap dan uji beda kontras orthogonal (Gomes dan Gomes, 1995). Analisis dilakukan dengan aplikasi soft - ware SPSS IBM 21.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa pemberian  minyak  atsiri    berpengaruh  nyata (P<0,05)  terhadap  histologi  liver  puyuh  fase produksi.  Histologi  liver  berdasarkan  teknik pewarnaan  Mallory-Asan  menunjukkan  penu- runan  kerusan  sel-sel  hati  secara  keseluruhan, baik kamatian sel maupun degenerasi dan infla - masi sel (Tabel 1 dan Gambar 1), seiring dengan peningkatan level pemberian minyak atsiri.
Hasil analisis uji beda kontras orthogonal menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang nyata  (P<0,05)  jumlah  sel  yang  mengalami nekrosis,  apoptosis,  degenerasi  lemak  dan degenerasi  hidropik  jaringan  antar  kelompok perlakuan.  Semakin  tinggi  level  pemberian minyak  atsiri,  menunjukkan  penurunan kematian  sel  dan  kerusakan  jaringan  semakin rendah.
Penilaian  secara  kualitatif  (Tabel  1  dan Gambar  1),  juga  menunjukkan  inflamasi  sel dan  hemoragik    jaringan  hati,  tampak  terjadi kerusakan  agak  berat  (++)  pada  kelompok
Tabel 1. Histologi liver puyuh fase layer dengan pemberian minyak atsiri bawang putih Histologik Level Minyak Atsiri L0 L1 L2 L3 Nekrosis 115±3.93 a 77±4,11 b 43±2,15 c 26±3,63 d Apoptosis 125±4.83 a 85±2,05 b 46±3,05 c 35±2,83 d Degenerasi Hidropik 47±3.02 a 39±1,92 b 25±2,84 c 12±1,11 d Degenerasi Lemak 52±3.01 a 48±1,24 b 31±2,43 c 19±1,32 d Inflamasi Sel ++ + + + Hemoragik ++ ++ + +
L0 = Tanpa minyak atsiri; L1 = 75 µL/ekor; L2 = 100 µL/ekor; L3 = 125 µL/ekor
1 Rata-rata±Standard deviasi
a,b Nilai yang diikuti dengan notasi yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0.05) + kerusakan ringan; ++ kerusakan agak berat
puyuh fase produksi tanpa pemberian minyak atsiri.  Kerusakan  ini  menjadi  lebih  ringan (+)  pada  kelompok-kelompok  puyuh  yang mendapatkan minyak atsiri.
Beberapa  penelitian  terdahulu  terkait penggunaan  bahan-bahan  ekstrak  alamiah telah  dilaporkan    dan  menunjukkan  dampak yang  positif  terhadap  histologi  ginjal  (Ansar dkk., 2014; Eyng et al. , 2015), yaitu menurunnya kerusakan sel-sel dan jaringan ginjal dan mampu mencegah/menurunkan  kematian  sel  sebagai dampak  radikal  bebas  sehingga  menurunkan nekrosis  dan  apoptosis  (kematian  sel),  serta meningkatkan  fungsi  immunitas.    Efek  garlic yang  sama  juga  telah  dilaporkan  Mushawwir dkk.  (2017),  peningkatan  absorbsi  dan pemanfaatan  zat-zat  nutrisi  dan  menurunnya kadar  SGOT  dan  GPT  serta    menunjukkan peningkatan fungsi sel-sel hati.
Kuantifikasi  dan  uji  kualitatif  terhadap pengaruh  minyak  atrsiri  seperti  yang ditampilkan pada Tabel 1 dan Gambar 1, tampak bahwa  penanggulangan  kerusakan  sel  dan jaringan sebagai efek pemberian minyak atsiri, semakin  efektif  seiring  dengan  bertambahnya level  pemberian  minyak  atsiri.  Perbaikan atau recovery sel-sel  dipacu  karena  antara  lain
kehadiran  protein  glutamil  cystein  dalam minyak  atsiri,  yang  berperan  meningkatkan anabolisme protein.  Kim et al . (2009); Peinado et  al.  (2012)  dan  Damaziak et  al .  (2017)  telah melaporkan bahwa secara alamiah, minyak atsiri garlic mengandung γ -glutamyl cysteine.  Enzym ini  mampu  menghidrolisis  dan  mengoksidasi komponen  allin  menjadi  senyawa-senyawa allin. Allin dan alicin selanjutnya meningkatkan sintesis protein sehingga memacu pertumbuhan sel-sel (Robert et al. , 2011), dan mencegah mutasi DNA (Yarrus et al. , 2009; Sirovina et al. , 2013). Kematian sel baik nekrosis maupun apop- tosis memicu peningkatan degenerasi hidropik, degenerasi lemak, inflamasi sel dan hemoragik. Oksigen  bervalensi  satu  yang  dihasilkan  dari proses oksidasi reduksi di mitokondria selama respirasi selular, menjadi pemicu awal. Oksigen valensi satu ini adalah radikal bebas dan seka- ligus  prekursor  senyawa  radikal-radikal  yang lain, seperti H 2 O 2 , NOx  (Liu et al., 2010). Terkait  dampak  radikal  bebas,  Yarrus et al . (2009); Arya dkk. (2014) dan Lai et al. (2014), Chatterjee et  al .  (2015)  mengemukakan  bahwa sintesis  protein  dan  lipid  dapat  mengalami penurunan  dengan  tajam  sebagai  dampak senyawa-senyawa  radikal,  juga  dilaporkan
Nekrosis (a); Apoptosis (b); Degenerasi Hydropic (c); Degenerasi Lemak (d); Inflammasi akut (e); Hemoragik (f)
Gambar 1. Histologi liver puyuh tanpa dan dengan pemberian minyak atsiri bawang putih (x100 objek)
Group L0 (Tanpa MA) Group L1 (MA 75 µL/ekor)
Group L2 (MA 100 µL/ekor)
Group L3 (MA 125 µL/ekor)
JITP Vol. 8 No. 1, Januari 2020
terjadi peningkatan kerusakan jaringan (Burdick et al ., 2011; Mohanty et al ., 2015; Lee et al ., 2014; Adriani et al. , 2015); peningkatan kematian sel (Kumar et al ., 2015), serta mutasi dan kerusakan DNA (Bertaggia et al ., 2014).
Minyak  atsiri  mampu  mencegah  stress oksidatif  dan  kerusakan  yang  ditimbulkan oleh  senyawa  radikal,  sehingga  menyebabkan perbaikan sel bagi jaringan-jaringan di abdomen maupun  jaringan  otot.  Hasil  penelitian  lain menunjukkan  bahwa  pertumbuhan  jaringan yang  tinggi  sebagai  dampak  pemberian bahan  aktif  seperti  atsiri  juga  disebabkan  oleh menurunnya resiko inflamasi sel-sel (Sirovina et al ., 2013; McManaman et al ., 2014 dan Chatterjee et  al .,  2015),  menurunnya  radikal  bebas  dari stres oksidatif (Korivi et al ., 2012; Bertaggia et al ., 2014); juga karena menurunnya apoptosis atau kematian sel-sel sehingga metabolisme jaringan menjadi optimal (Liu et al ., 2010; Kumar et al ., 2015).
Minyak atsiri juga mengandung senyawa- senyawa    group  allyl  dan  sulfide  (Robert et al .,  2010;  Damaniziak et  al .,  2017).    Senyawa ini  menstimulasi  aktivitas  antioksidan  alami (misalnya  glutation),  meningkat  dengan pemberian senyawa dari grop allyl dan sulfide (Bose et  al .,  2002).  Peningkatan  glutation menginduksi  diferensiasi  sel-sel  leukosit terutama lymphosit  dan organ/jaringan yang berperan  dalam  sistem  immun  dan  hormon terkait  sistem  imun  (McManaman et  al. ,  2013), serta mencegah kerusakan gen (Pickler, 2013). Hal  yang  sama  juga  telah  ditunjukkan oleh  Borek  (2001),  bahwa  organosulfur  dan allyl  efektif  dalam  menghambat  kerusakan DNA  dan  mutasi  gen.  Hasil  penelitian  lain, Amagase et al. (2001) melaporkan peningkatan bioavailabilitas  nutrien  dalam  usus  sehingga pemanfaatan  asam-asam  amino  meningkat. Penurunan kerusakan/mutasi DNA dan mutasi gen  serta denaturasi protein dapat mensupport pertumbuhan jaringan.
Secara spesifik mengenai efek dialyl sulfida (komponen  atsiri)  terhadap  kemampuanya memperbaiki  histologi  liver,  telah  dilaporkan Picklaer et  al. (2013)  dan  Cortes-Coronado et al .  (2017),  ditunjukkan  bahwa  dially  sulfida memiliki  atom  S  dan  O  yang  bebas.  Kedua atom ini memiliki afinitas yang tinggi terhadap senyawa-senyawa radikal yang membawa atom S  dan  O  bermuatan.  Nelson  dan  Cox  (2008) serta  Murray et  al. (2012),  menyatakan  bahwa interaksi  ini    mampu  mencegah  kerusakan jaringan  seperti  hemoragik  dan  kematian  sel (apoptosis,  nekrosis,  inflamasi)  serta  mampu mempertahankan struktur protein, karbohidrat dan lipid yang menyusun sel dan jaringan.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Komponen  minyak  atsiri  dari  bawang putih  mampu  menginduksi  barbagai  jalur metabolisme terutama terkait dengan pertumbuhan jaringan termasuk liver.
Mekanisme  kimiawi  dari  komponen  minyak atsiri  mampu  mempengaruhi  dan  mencegah aktivitas  radikal  bebas  sehingga  menstimulan anabolisme  protein  untuk  pertumbuhan  dan immunitas. Selain itu, komponen minyak atsiri mampu  mensitimulan  signal  hormonal  terkait pertumbuhan  jaringan  dan  metabolisme.  Efek ini  menyebabkan  meningkatnya  pertumbuhan dan recovery sel-sel liver yang rusak.

## Saran
Pemberian  minyak  atsiri  atau  volatile  oil yang  diisolasi  dari  bawang  putih,  disarankan diberikan kepada burung puyuh sebanyak 125 µL/ekor  fase  layer  untuk  menurunkan  dan mencegah resiko kerusakan jaringan liver. Perlu pula  penelitian  lanjutan  tentang  teknik  pem- berian minyak atsiri tersebut yang lebih efektif malalui ransum komplit atau air minum.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Pelaksanaan  penelitian  ini  merupakan kerjasama dengan salah satu peternak puyuh di Kota Sukabumi, Jawa Barat. Untuk itu, peneliti menyampaikan terima kasih kepada Bpk Maman Suherman  untuk penggunaan ternaknya sebagai sampel dan bantuan fisik selama penelitian, juga kepada Sdr. Adang Sudrajat, Jali dan Vina yang telah  membantu  dalam  penelitian  ini.  Terima kasih juga kepada Dedi, M.Si., atas penyediaan reagent dan support biaya ransum.

## DAFTAR PUSTAKA
Adriani,  L.  Abun  dan  A.  Mushawwir.  2015. Effect of dietary supplementation of Jengkol ( Pithecellobium  jiringa )  skin  extract  on  blood biochemistry and gut flora of broiler chicken. Int. J. Poult. Sci., 14(2): 407-410.
Ansar, S.,  M. Iqbal and N. Aljameil. 2014. Diallyl sulfide,  a  component  of  garlic,  abrogates ferric  nitrilotriacetate-induced  oxidative stress and renal damage in rats. Human and Experimental Toxicology, 33(4): 1209-1216.
Antosiewicz, S., H. A. Anna, W.M. Stanley and V.S. Shivendra. 2016. C-jun NH2-terminal kinase signaling  axis  regulates  diallyl  trisulfide-

## Andi Mushawwir, dkk
induce generation of reactive oxygen species and cell cycle arrest in human prostate cancer cells. Cancer Research, 66(9): 5379-5386.
Arya  A,  M.M.  Al-Obaidi,  N.  Shahid,  M.I.  Bin Noordin, C.Y. Looi, W.F. Wong, S.L. Khaing and    M.R.  Mustafa.  2014.  Synergistic  effect of  quercetin  and  quinic  acid  by  alleviating structural  degeneration  in  the  liver,  kidney and pancreas tissues of STZ-induced diabetic rats:  a  mechanistic  study.  Food  Chem. Toxicol.,  71 (3):183-96.
Bertaggia, E., G. Scabia, S. Dalise, F. Lo Verso, F.
Santini,  P.  Vitti,  C.  Chisari,  M.  Sandri  and M. Maffei. 2014. Haptoglobin is required to prevent oxidative stress and muscle atrophy. PLoS One, 9: e100745.
Blok, E.  1985. The chemistry of garlic and onion. Sci. American, 252 (1): 115-119.
Borek, C. 2001. Antioxidant health effects of aged garlic extract. J. Nutr., 131(3): 1010S-1015S.
Bose,  C.,  J.  Guo,  L.  Zimniak,  S.K.  Sricastava, S.P.  Singh,  P.  Zimniak  and    S.  C.  Singh. 2002.  A  critical  role  of  allyl  groups  and disulfide  chain  in  the  induction  of  Pi  class glutathione  transferase  in  mouse  tissues  in vivo by diallyl disulfide, naturally according to  the  chemopreventive  agent  in  garlic. Carcinogenesis, 23 (5):1661-1665.
Bose, C., J. Guo, L. Zimniak, S.K. Sricastava, S.P.
Singh, P. Zimniak and S. C. Singh. 2012. Critical role of allyl groups and disulfide chain in the induction of Pi class glutathione transferase in mouse tissues in vivo by diallyl disulfide, a naturally according chemopreventive agent in garlic. Carcinogenesis, 23 (8): 1661-1665.
Burdick, N. C., J.A. Carroll  R. Randel, S. Willard, R.Vann,  C.C.  Chase,  S.  Lawhon,  L.  Hulbert and J.T. Welsh. 2011. Influence of temperament and  transportation  on  physiological  and endocrinological  parameters  in  bulls. Livestock Sci., 39(3): 213–221.
Chatterjee, N., S. Das, D. Bose, S. Banerjee, T. Jha and K.D. Saha.  2015. Leishmanial lipid affords protection  against  oxidative  stress-induced hepatic  injury  by  regulating  inflammatory mediators and confining apoptosis progress. Toxicol. Lett., 232(3): 499-512.
Cortes-Coronado, R.F.,  S. Gomez-Rosales M.D.L.
Angeles, M.T. Casaubon-Huguenin and  T. Sorensen-Dalgaard. 2017. Influence of a yeast fermented product on the serum levels of the mannan-binding  lectin  and  the  antibodies against the Newcastle disease virus in Ross broilers. J. Appl. Poult. Res., 26(5): 38-49 .
Damaziak, K.,  J. Riedel, D. Gozdowski, J.  Niemiec, A. Siennicka and D.  Rog. 2017. Productive performance and egg quality of laying hens fed diets supplemented with garlic and onion extracts. J. Appl. Poult. Res., 26(7): 337–349 .
Eyng,  C.,  A.E.  Murakami,  T.C.  Santos,  T.G.V. Silveira,  R.B. Pedrosa and D.A.L. Lourenco. 2015. Immune responses in broiler chicks fed propolis  extraction  residue-supplemented diets.  Asian-Australas.  J.  Anim.  Sci.,  28(1): 135-142.
Gomez,  K.A.  dan  A.A.  Gomez.  1995.  Prosedur Statistika  untuk  Penelitian  Pertanian.  Edisi Kedua.  Penerbit  Universitas  Indonesia, Jakarta.
Kim  Y.  J.,  S.K.  Jin  and  H.S.  Yang.  2009.  Effect of  dietary  garlic  bulb  and  husk  on  the physicochemical properties of chicken meat. Poult. Sci., 88(4): 398-405.
Korivi  M,  C.W.  Hou,  C.Y.  Huang,  S.D.  Lee,
M.F.  Hsu  M.F,  S.H.  Yu,  C.Y.  Chen,  Y.Y. Liu  and  C.H.  Kuo.  2012.  Ginsenoside-Rg1 protects the liver against exhaustive exercise induced oxidative stress in rats. Evid Based Complement Alternat Med., 2012: 932165.
Kumar,  S.N.,  B.  Bastia,  A.G.  Telang,  K.P.  Singh,
R.  Singh  and  A.K.  Jain.  2015.  Combined toxicity  of  endosulfan  and  ochratoxin-A  in rats:  histopathological  changes.  J.  Histol. Histopathol., 2(9): 22-27.
Lai, Y.S., W.C. Chen, C.T. Ho, K.H. Lu, S.H. Lin, H.C.  Tseng,  S.Y.  Lin  and  L.Y.  Sheen.  2014. Garlic  essential  oil  protects  against  obesity- triggered  nonalcoholic  fatty  liver  disease through modulation of lipid metabolism and oxidative stress. J. Agric. Food. Chem., 62(1): 5897-5906.
Lee  D.H.,  S.R.  Lim,  S.S.  Ra  and  J.D.  Kim.  2014. Effects  of  dietary  garlic  powder  on  growth, feed utilization and whole-body composition change in fingerling sterlet sturgeon, Acipenser ruthenus . Asian-Autralas. J. Anim. Sci., 27(5): 1419-1429.
Liu, C.M., Y.L. Zheng, J. Lu, Z.F. Zhang, S.H. Fan, D.M. Wu and J.Q. Ma. 2010. Quercetin protects rat liver against lead-induced oxidative stress and apoptosis. Environ. Toxicol Pharmacol., 29(7): 158-166.
McManaman,  J.L.,  E.S.  Bales,  D.J.  Orlicky,  M. Jackman, P.S. MacLean, S. Cain, A.E. Crunk, A. Mansur, C.E. Graham, T.A. Bowman and A.S.  Greenberg.  2013.  Perilipin-2-null  mice are  protected  against  diet-induced  obesity, adipose inflammation, and fatty liver disease. J. Lipid Res., 54(4): 1346-1359.

## JITP Vol. 8 No. 1, Januari 2020
Mohanty, S.R., S.K. Sahoo, L.K. Babu, C.R. Pradhan, B.  Panigrahi  and  S.K.  Joshi.  2015.  Effect  of feeding  different  levels  of  protein  on  egg weight, egg quality, fertility, hatchability and fatty acid profile of eggs in Khaki Campbell duck  during  laying  period.  Indian  Vet.  J., 92(4): 25-30.
Murray,  R.K.,  D.A.  Bender,  K.M.  Botham,  P.J. Kennelly, V.W. Rodwell and P.A. Weil. 2012. Biokimia  Harper,  Edisi  29.  EGC  Penerbit Buku Kedokteran, Jakarta.
Mushawwir,  A.,  U.H.  Tanuwiria,  K.A.  Kamil,  L. Adriani  and  R.  Wiradimadja.  2017.  Effects of  volatile  oil  of  garlic  on  feed  utilization, blood biochemistry and performance of heat- stressed japanese quail. Asian J. Poult. Sci., 11 (2): 83-89 .
Mushawwir, A., U.H. Tanuwiria, K.A. Kurnia, L.
Adriani,  R.  Wiradimadja  and  N.  Suwarno. 2018.  Evaluation  of  haematological responses  and  blood  biochemical parameters of heat-stressed broilers with dietary  supplementation  of  Javanese Ginger  Powder  ( Curcuma  xanthorrhiza ) and Garlic Extract ( Allium sativum ). Int. J. Poult. Sci., 17(3): 452-458.
Mushawwir, A., Y.K. Yong, L. Adriani, E. Hernawan and K.A. Kamil. 2010. The Fluctuation Effect of  Atmospheric  Ammonia  (NH3)  Exposure and  Microclimate  on  Hereford  Bulls Hematochemical.  J.  Indon.  Tropical  Anim. Agric., 35 (5): 232-238.
Mushawwir, A., L. Adriani and K.A. Kamil.  2011. Prediction models for olfactory metabolic and sows’ rnareticulocyt (Rnart) by measurement of  atmospheric  ammonia  exposure  and microclimate level. J. Indon. Tropical. Anim. Agric.., 36(1): 14-20.
Nelson,  D.L.  and  M.M.  Cox.  2008.  Lehninger Principles  of  Biochemistry.  W.H.  Freeman and Company, New York, USA.
Peinado M. J., R. Ruiz and A. Echavarri. 2012. Garlic derivative  propyl  propane  thiosulfonate  is effective  against  broiler  enteropathogens  in vivo. Poult. Sci., 91(1) : 2148-2157.
Pickler , L.,  C.B. Breno,  Beirão , M.H. Ricardo, F.D. Jean, C.L. Mariana, F.C. Luiz and E. Santin. 2013. Effect of sanguinarine in drinking water on  Salmonella  control  and  the  expression of  immune  cells  in  peripheral  blood  and intestinal mucosa of broilers. J. Appl. Poult. Res., 22(3): 430–438.
Rachmawati,  S.  2005.  Aflatoksin  dalam  pakan ternak di Indonesia: persyaratakan kadar dan pengembangan teknik deteksinya. Wartazoa, 15(3): 26-37.
Robert, V., B. Mouille, C. Mayeur, M. Michaud and F. Blachier. 2011. Effects of the galic compound diallyl disulfide on the metabolism, adherence and  cell  cycle  of  HT-29  colon  carcinoma cell: evidence of sensitive and resistant sub- population. Carcinogenesis, 22(8): 1155-1161.
Sirovina D, N. Orsolic, M.Z. Koncic, G. Kovacevic, V. Benkovic and G. Gregorovic. 2013. Quercetin vs chrysin: effect on liver histopathology in diabetic  mice.  Hum.  Exp.  Toxicol.,  32(7): 1058-1066.
Soisuwan, K. and N. Chauychuwong. 2013. Effects of  phytogenic  feed  additive  with  reduced dietary metabolizable energy and digestible essential  amino  acids  on  carcass  yields  and meat quality of pekin ducks. J. Appl. Sci. Res., 9(5): 6099–6102.
Weng, D., Y. Lu, Y. Wei, Y. Liu and P. Shen. 2007. The  role  of  ROS  in  microcystin-LR-induced hepatocyte apoptosis and liver injury in mice. Toxicology, 232(5): 15-23.
Yang,  S.  C.,  K.C.  Saranjit,  H.  Jun-Yan,  and  J.S. Theresa.  2011.  Mechanism  of  inhibition  of chemical  toxicity  and  carcinogenesis  by diallyl sulfide (DAS) and relate compounds from garlic. J. Nutr., 131(3): 1041S-1045S.
Yarrus,  L.  P.,  R.S.  Settivari,  N.K.S.  Gowda,  E. Antoniou, D.R. Ledoux and G.E. Rottinghaus. 2009. Effects of turmeric ( Curcuma longa ) on the expression  of  hepatic  genes  associated  with biotransformation, antioxidant, and immune systems in broiler chicks fed aflatoxin. Poult. Sci., 88(3): 2620-2627.