Jurnal Kedokteran Universitas Palangka Raya ISSN 2355-0015 EISSN 2723-5890
https://e-journal.upr.ac.id/index.php/JK DOI: 10.37304/jkupr.v10i2.5536

## ANALISIS FLAVONOID TOTAL DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL Syzygium aromaticum DAN Syzygium polyanthum

## ANALYSIS OF TOTAL FLAVONOID AND ANTIOXIDANT ACTIVITY ASSAY OF ETHANOL EXTRACT Syzygium aromaticum AND Syzygium polyanthum
Mia Aklimah 1* , Meiliza Ekayanti 1
1 Program Studi Farmasi, STIKes Prima Indonesia, Babelan, Jawa Barat, Indonesia,
* email: Aklimah3@gmail.com
( Naskah diterima: 13 September 2022. Disetujui: 24 Oktober 2022)
Abstrak. Syzygium  aromaticum dan Syzygium  polyanthum merupakan  spesies  dari  famili  Myrtaceae,  daun cengkeh  dan  daun  salam  memiliki  kandungan  senyawa  aktif  yaitu  flavonoid.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan tujuan  untuk  mengetahui  kadar  flavonoid  total  dan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  dari  daun  cengkeh ( Syzygium  aromaticum )  dan  daun  salam  ( Syzygium  polyanthum ).  Metode  ekstraksi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  ekstraksi  dingin  berupa  maserasi  dengan  pemilihan  pelarut  yaitu  etanol  96%.  Uji  kadar flavonoid  total  dilakukan  dengan  metode kolorimetri sedangkan uji aktivitas antioksidan menggunakan  metode DPPH  ( 1,1-diphenyl-2-picryl  hydrazil ).  Hasil  kadar  flavonoid  total  ekstrak  etanol  daun  cengkeh  dan  ekstrak etanol  daun  salam  sebesar  206.447  mgQE/g  dan  165.658  mgQE/g.  Nilai  IC 50 terhadap  daun  cengkeh  sebesar 3.026  μg/mL  dan  nilai  IC 50 terhadap  daun  salam  sebesar  3.555  μg/mL.  Kesimpulan  penelitian  adalah  bahwa ekstrak dari daun cengkeh terhadap kadar flavonoid total dan uji aktivitas antioksidan memiliki nilai tertinggi.
Kata Kunci: Antioksidan, DPPH, daun cengkeh, daun salam, flavonoid
Abstract. Syzygium  aromaticum and Syzygium  polyanthum are  species  of  the  Myrtaceae  family.  Clove  leaves and  bay  leaves  contain  active  compounds,  namely  flavonoids.  This  research  was  conducted  with  the  aim  of knowing  the  total  flavonoid  content  and  antioxidant  activity  of  the  ethanol  extract  of  clove  ( Syzygium aromaticum )  and  bay  ( Syzygium  polyanthum )  leaves.  The  extraction  method  used  in  this  research  is  cold extraction in the form of maceration with the choice of solvent, namely 96% ethanol. The total flavonoid content test  was  carried  out  using  the  colorimetric  method  while  the  antioxidant  activity  test  used  the  DPPH  (1,1- diphenyl-2-picridhydrazil)  method. The results of total  flavonoid content of clove leaf ethanol extract and bay leaf ethanol extract  were 206.447 mgQE/g and 165,658 mgQE/g.. The IC 50 for clove leaves  was 3.026 μg/mL and the IC 50 for bay leaves was 3.555 μg/mL. The conclusion of the study was that the extract from clove leaves on total flavonoid levels and antioxidant activity tests had the highest value.
Keywords: Antioxidant, DPPH, clove leaf, salam leaf, flavonoid

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  adalah  molekul  atau  atom  yang memiliki  satu  atau  lebih  elektron  yang  tidak berpasangan. Senyawa radikal bebas sangat reaktif dan selalu  berusaha  mencari  pasangan  elektron  agar kondisinya  stabil.  Kehadiran  radikal  bebas  dalam tubuh  merupakan  salah  satu  penyebab  berbagai penyakit kronis dan degeneratif seperti kanker, jantung koroner dan stroke. Reaksi oksidatif terjadi setiap saat di dalam tubuh  membentuk radikal bebas  yang sangat reaktif  yang  dapat  merusak  struktur  dan  fungsi  sel. Reaktivitas  radikal  bebas  ini  dapat  dihambat  oleh antioksidan yang melengkapi sistem imun 1 .
Penelitian  antioksidan  alami  terus  dilakukan bahkan  merambah pada tanaman obat. Terkait dengan komponen  herbal  tersebut  yang  kaya  akan  senyawa antioksidan. Senyawa antioksidan merupakan senyawa
yang  dapat  menangkal  atau  mengurangi  efek buruk oksidan  dalam  tubuh.  Senyawa  antioksidan  berfungsi dengan  cara  mendonorkan  elektron  pada  senyawa yang teroksidasi sehingga dapat menghambat aktivitas senyawa  yang  teroksidasi  tersebut 2 .  Senyawa  alam yang  termasuk  dalam  kelompok  antioksidan  adalah senyawa  fenolik  seperti  asam  galat  dan  flavonoid. Senyawa  fenol  dan  flavonoid  memiliki  gugus hidroksil  yang  dapat  menyediakan  atom  hidrogen, sehingga  dapat  berperan  sebagai  antioksidan  dan menetralisir  radikal  bebas  menjadi  senyawa  yang lebih stabil 3 .
Senyawa  flavonoid  adalah  suatu  kelompok senyawa  fenol  dan  telah  di  laporkan  merupakan senyawa  yang  memiliki  aktivitas  antioksidan  kuat. Senyawa  flavonoid  memiliki  kemampuan  untuk menghilangkan  senyawa  pengoksidasi  yang  secara efektif merusak 4 . Antioksidan dibagi menjadi dua
jenis   yaitu    antioksidan        sintetis    dan antioksidan alami. Antioksidan sintetis  yang   banyak   digunakan berbahaya  bagi  kesehatan  karena  bersifat  racun jika dikonsumsi  dengan  konsentrasi  berlebih.  Karena  hal itu diperlukan antioksidan alami yang cenderung tidak memiliki efek samping dan bermanfaat bagi kesehatan. Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan  untuk mengetahui  kadar  flavonoid  total  terhadap  aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  dari  daun  cengkeh ( Syzygium  aromaticum )  dan  daun  salam  ( Syzygium polyanthum )  sehingga  akan  diketahui  secara  langsung aktivitas antioksidannya.

## METODE PENELITIAN
Desain  penelitian  ini  yang  digunakan  adalah jenis penelitian eksperimental laboratorium. Laboratorium  Jurusan  Farmasi  Sekolah  Tinggi  Ilmu Kesehatan  Prima  Indonesia  dengan  waktu  penelitian dimulai  dari  Bulan  Maret  sampai  dengan  Juli  2022. Pada penelitian ini teknik pengumpulan data yang akan dilakukan  menggunakan  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT)  untuk  uji  kualitatif,  Spektrofotometri  UV-Vis untuk  uji  kuantitatif  penentuan  kadar  flavonoid  total serta  uji  DPPH  ( 1,1-  Diphenyl-2-Picryl  Hydrazyl ) untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  yang  ada didalam  sampel. Tanaman  sudah  di  determinasi  pada Pusat  Riset  Biosistematika  dan  Evolusi  Badan  Riset dan  Inovasi  Nasional  (BRIN): Cengkeh  ( Syzygium aromaticum (L.)  Merr.  &  L.M.Perry)  suku  Myrtaceae Salam  ( Syzygium  polyanthum Thwaites)  suku Myrtaceae.  Simplisia  daun Syzygium  aromaticum, Syzygium  polyanthum diperoleh  dari  Balai  Penelitian Tanaman Rempah dan Obat (BALITRO).
Sebanyak  500  gram  simplisia  ditimbang kemudian dimasukan kedalam bejana maserasi. Secara perlahan  dituang  etanol  96%  sebanyak  2  L  ke  dalam bejana  maserasi  yang  berisi  serbuk  simplisia.  Setelah itu dibiarkan cairan penyari  merendam seluruh serbuk simplisia selama 3 hari sambil diaduk secara periodik. Campuran kemudian disaring dan ampasnya direndam lagi dengan cairan penyari yang baru. Proses penyarian selanjutnya  dilakukan  sebanyak  2  kali  dengan  etanol 96%  setiap  kali  sebanyak  1  L.  Ekstrak  cair dikumpukan kemudian dipekatkan dengan menggunakan  alat  rotavapor  ( rotary  evaporator vacum )  hingga  diproleh  eksrak  kental  etanol 4 . Konsentrasi masing-masing ekstrak yang berbeda-beda diencerkan  dengan  150  μL  etanol.  Selanjutnya ditambahkan  10  μL  larutan  aluminium  klorida  10% dan  1  M  kalium  asetat  (10  μL)  dan  ditambahkan akuades  hingga  280  μL.  Larutan  dicampur  dan diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  40  menit. Absorbansi  diukur  pada  415  nm  menggunakan Spektrofotometri UV-Vis. Kuersetin digunakan sebagai standar 5 .
Sebanyak 1 mL larutan DPPH ( 1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl) 0,1  mM  dalam  metanol  dicampur dengan 1 mL masing-masing sampel pada konsentrasi
yang    berbeda    -    beda.      Sampel    kosong      yang sesuai  disiapkan.  Sebanyak  1  mL  metanol  dan  1  mL larutan DPPH ( 1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl) digunakan sebagai kontrol. Campuran dikocok dengan baik  dan  diinkubasi  selama  30  menit  dalam  gelap. Reaksi  dilakukan  dalam  rangkap  tiga  dan  penurunan absorbansi  diukur  pada  517  nm  setelah  inkubasi. Aktivitas  pengambatan  dinyatakan  sebagai  IC 50 (μg/mL) 5 .  Persentase  penghambatan  dihitung  dengan menggunakan rumus:
Analisis  data  diambil  dengan  melakukan observasi  langsung  terhadap  esktrak  daun  cengkeh ( Syzygium  aromaticum) dan  daun  salam  ( Syzygium polyanthum) dalam  konsentrasi  1000  ppm  yang  akan dibuat konsentrasi 1 ppm, 3 ppm, 5 ppm, 7 ppm dan 9 ppm  selanjutnya  diambil  1  mL  untuk  kemudian sampel  diinkubasi  dan  dibandingkan  dengan  larutan kontrol  yang  dibuat  oleh  peneliti.  Penelitian  ini menghitung  dan  menganalisis  kadar  flavonoid  total dan nilai IC 50 yang didapatkan dari persamaan regresi linear menggunakan Microsoft Excel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Hasil ekstrak etanol 96% dauh cengkeh dan daun salam
Simplisia Berat (g) Ekstrak Berat (g) Hasil % Daun Cengkeh 500 164.51 32.90 Daun Salam 500 150.97 30.19
Ekstraksi  pada  metode  maserasi  menggunakan pelarut etanol 96% yang dilakukan selama 120 jam (5 hari).  Ekstraksi  dilakukan  untuk  menarik  komponen kimia  yang  terdapat  dalam  suatu  bahan  simplisia. Ekstrak  kental  yang  diperoleh  masing-masing  dari daun  cengkeh  dan  salam  berwarna  hijau  tua mendapatkan  hasil  rendemen  pada  daun  cengkeh yaitu  32.90%%  dan  daun  salam  30.19%.  Hasil perhitungan rendemen dapat dilihat pada tabel 1.
Hasil penelitian menunjukkan ekstrak mengandung  flavonoid  total  yang  dikonfirmasi dengan kontrol positif yaitu kuersetin. Kurva kalibrasi dibuat berdasarkan absorbansi yang didapat pada lima konsentasi  dengan  nilai  r 2 mendekati  1  seperti  pada gambar  1.  Persamaan  linier  dari  kurva  kalibrasi kuersetin digunakan untuk menghitung kadar flavonoid total.
Berdasarkan  persamaan  linier  pada  kurva kalibrasi  pada  gambar  2  didapatkan  hasil  kadar flavonoid  total  pada  daun  cengkeh  yaitu  206.447 mgQE/g  ektrak  dan  daun  salam  yaitu  165.658 mgQE/g  ekstrak dapat  dilihat  pada  gambar  2.  Hasil berbeda dengan penelitian dari El-Refai dkk., (2020)
Gambar 1. Hasil Kurva Standar Kuersetin Gambar  2.  Kadar  Flavonoid  Total  Pada  (1)  Daun Cengkeh dan (2) Daun Salam
flavonoid  total  dalam  ekstrak  etanol  daun  cengkeh ( Syzygium  aromaticum )  (L.)  Merr  &  L.M.  Perry) sebesar 177.15 mgQE/g ekstrak 6 dan Hasil penelitian dari  Hastuti  dkk.,  (2021)  menyatakan  bahwa  kadar flavonoid total ekstrak daun salam dengan menggunakan  pelarut  etanol  96%  sebesar  5.028 mgQE/g ekstrak 7 .
Penelitian  antioksidan  menggunakan  DPPH dapat dikatakan akurat karena senyawa DPPH bersifat dtabil  dalam  pengukuran,  pengujian  DPPH  dilakukan dengan  cepat,  mudah  dan  sensitive  pada  senyawa tertentu.  DPPH  mengalami  reaksi  perubahan  dari radikal  bebas  menjadi  senyawa  DPPH  stabil  ditandai dngan  pudarnya  warna  ungu  yang  terdapat  pada senyawa  DPPH  yang  berwarna  kuning 8 .  Pengujian menggunakan  metode  DPPH  didasarkan  pada  reaksi penangkapan  hidrogen  oleh  DPPH  dari  senyawa antioksidan.  DPPH  yang  berperan  sebagai  radikal bebas  akan  diredam  oleh  antioksidan  dari  ekstrak sampel.  DPPH  akan  diubah  menjadi  DPPH-H  oleh antioksidan 8 . Penelitian  menunjukkan  bahwa  semua  ekstrak memiliki  aktivitas  antioksidan.  Nilai  IC 50 untuk ekstrak  yang  diperoleh  dari  daun  cengkeh  3.026 µg/mL dan daun salam 3.555 µg/mL dapat dilihat pada Gambar  4.  data  ini  menunjukkan  semua  ekstrak memiliki  IC50  kurang  dari  50  ppm  dan  termasuk kedalam  kategori  penggolongan  aktivitas  antioksidan sangat  kuat.  Menurut  molyneux  penggolongan  tingkat aktivitas antioksidan terbagi menjadi 5 golongan yaitu kategori  aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  mempunyai nilai  IC 50 kurang  dari  50  ppm,  kategori  aktivitas antioksidan  kuat  mempunyai  nilai  IC 50 50  sampai kurang  dari  100  ppm,  kategori  antioksidan  sedang mempunyai  nilai  IC 50 100  sampai  kurang  dari  150 ppm, kategori antioksidan lemah mempunya nilai IC 50 150 sampai kurang dari 200 ppm, kategori antioksidan sangat  lemah  mempunyai  nilai  IC 50 kurang  dari  200 ppm 9 . Berdasarkan  penelitian  El-Refai  dkk.,  (2020) menyatakan  bahwa  kapasitas  penangkapan  radikal bebas  dari  daun  cengkeh  adalah  IC 50 2.75 μ g/ml  (6) dan  Hasil  penelitian  dari  Hidayati  et  al.  (2017) Berdasarkan  regresi  linear  diketahui  korelasi  antara
meliputi struktur o-dihidroksi (katekol) pada cincin B ( Syzygium  aromaticum )  (L.)  Merr  &  L.M.  Perry) sebesar 177.15 mgQE/g ekstrak 6 dan Hasil penelitian dari  Hastuti  et  al.  (2021)    menyatakan    bahwa    kadar yang sebagai target radikal dan donor elektron, gugus α-keto  dengan  konjugasi  ikatan  rangkap  C2-C3  yang mempunyai peran meningkatkan kapasitas scavenging radikal dan delokalisasi elektron cincin B dan adanya gugus  3-OH  dan  5-OH  dalam  kombinasi  dengan ikatan  rangkap  C2-C3  dan  fungsi  4-karbonil  yang menaikkan aktivitas scavenging radikal 8 .
Gambar 3. Aktivitas Antioksidan nilai IC 50 pada daun cengkeh dan daun salam
Gambar 4. Aktivitas ontioksidan % inhibisi pada daun cengkeh dan daun salam
kadar  flavonoid  total  dan  antioksidan  dari  ekstrak etanol daun cengkeh mempunyai nilai korelasi R 2 = 1(- 203.421+409.868)  dan  hasil  regresi  linear  nilai korelasi antara kadar flavonoid total dan antioksi dan menyatakan bahwa ekstrak daun Syzygium polyanthum DPPH   dengan  nilai   IC 50 44.35   μg/ml 10 .  Aktivitas menunjukkan  aktivitas  antioksidan  menggunakan  uji antioksidan  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  dan  struktur kimia terutama dari golongan flavonoid. Struktur ini dari  ekstrak  etanol  daun  salam  mempunyai  nilai korelasi  R 2 =1(-162.103+327.761).  Ini  menunjukkan bahwa  adanya  korelasi  antara  kadar  flavonoid  total dengan  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  etanol  daun cengkeh dan ekstrak etanol daun salam.
Gambar 5. Kurva korelasi antara kadar flavonoid total dan  aktivitas  antioksidan  daun  cengkeh  dan  daun salam

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  penentuan  kadar flavonoid total dan aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun  cengkeh  ( Syzygium  aromaticum )  dan  ekstrak etanol  daun  salam  ( Syzygium  polyanthum )  dapat disimpulkan:  kadar  flavonoid  total  dari  ekstrak  etanol daun  cengkeh  dan  ekstrak  etanol  daun  salam  adalah 206.447 mgQE/g dan 165.658 mgQE/g serta nilai IC 50 dari  ekstrak  etanol  daun  cengkeh  dan  ekstrak  etanol daun salam adalah 3.026 μ g/mL dan 3.555 μ g/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Budiana,  W.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Kulit Buah  Kacang  Kratok  (Phaseolus  Lunatus)  Dan Kulit Buah Kacang Gude (Cajanus Cajan) Dengan Metode  Dpph  Serta  Penetapan  Kadar  Total Flavonoid Dan Fenol. J Pharmacopolium. 2019;1(3):162–9. doi: 10.36465/jop.v1i3.433.
2.   Alawiyah, A.L., Senania, A., Sari, H., Perdana, F., Musthafa,  I.  Antioxidant  activity  of  volatile compounds  from  Syzygium  aromaticum  (L.) leaves.  J  Phys  Conf  Ser.  2019;1402(5):2–7.  doi: 10.1088/1742-6596/1402/5/055038.
3. Primadiastri, I.Z., Wulansari, E.D.,
Suharsanti,  R.  Perbandingan  Kandungan Fenolik  Total,  Flavonoid  Total  Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Jambu Bol ( Syzigium malaccense L .) Dan Daun Jambu Air  Kancing  (  Syzigium  aqueum).  J  Media Farm  Indones.  2021;16  (2):1671–5.  doi: 10.53359/mfi.v16i2. 180
4. Wahyulianingsih,  W.,  Handayani,  S.,  Malik, A. Penetapan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Daun  Cengkeh  (Syzygium  aromaticum  (L.) Merr  &  Perry).  J  Fitofarmaka  Indonesia. 2016;3(2):188–93. doi:
10.33096/jffi.v3i2.221. 5. Priya,  S.H.,  Prakasan,  N.,  Purushothaman,  J.
Antioxydant  Activity,  Phenolic  Flavonoid
Content and High-Performance Liquid Chromatography Profiling of Three Different Variants  of  Syzygium  Cumini  Seeds;  J Intercult Ethnopharmacol. 2017;6(1):108–14. doi: 10.5455/jice.201612290 55555. 6. El-Refai,  A.A.,  Sharaf,  A.M.,  Azzaz, N.A.E., El-Dengawy, M.M. Antioxidants and Antibacterial Activities of Bioactive Compounds  of  Clove  ( S.  aromaticum )  and Thyme  (Tymus  vulgaris)  Extracts.  J  Food Dairy Sci. 2020; 11(9):265–9. doi:
10.21608/jfds.2020.118 367.
7. Hastuti,  Y.D.,  Mulangsri,  D.A.K.  Perbedaan Kadar  Flavonoid  Total  Ektrak  Daun  Salam (Syzygium  polyanthum)  Dengan  Metode Refluks  Dari  Beberapa  Jenis  Pelarut  Dan Aktivitas Antibakteri. J Ilmu Farm dan Farm Klin.  2021;18(2):85–93.  doi:  doi.org/10.319 42/jiffk.v18i2.5962.
8. Oktavia, F.D., Sutoyo, S. Skrinung Fitokimia,  Kandungan  Flavonoid  Total  Dan
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Tumbuhan  (Selaginella  doederleinii).  J  Kim Ris.  2021;  6(2):14153.doi:10.20473/jkr.v6i2. 30904.
9. Yuningtyas, S., Masaenah, E., Telaumbanua, M.  Aktivitas  Antioksidan,  Total  Fenol  Dan Kadar  Vitamin  C  Dari  Kombucha  Daun Salam (Syzygium polyanthum (Wight) Walp.).  J  Farmamedika  (Pharmamedica Journal). 2021;6(1): 10–4. doi:
10.47219/ath.v6i1.116.
10. Hidayati,  M.D.,  Ersam,  T.,  Shimizu,  K., Fatmawati,  S.  Antioxidant  activity  of Syzygium  polynthum  extracts.  Indones  J Chem.  2017;17(1):49–53.  doi:  10.22146/ ijc.23545.