## PENGARUH KOMBINASI EKSTRAK TERPURIFIKASI HERBA
ARTEMISIA ( Artemisia annua (L.)) DAN HERBA SAMBILOTO ( Andrographis paniculata (Burm.f) Nees) TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH PADA TIKUS DIABETES  MELLITUS TIPE 2 RESISTEN INSULIN
Kyky Herlyanti 1) , Yuvianti Dwi Franyoto 1), Etty Sulistyowati 1)

## 1) Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi "Yayasan Pharmasi" Semarang

## INTISARI
Resistensi  insulinadalah  kondisi  umumyangdiyakini  memainkanperan  utamadalam patogenesissindrom metabolik, obesitas dandiabetes mellitus tipe 2, sertapenyakit jantung. Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  Aktivitas  antidiabetes  mellitus  kombinasi  ekstrak terpurifikasi  herba  sambiloto  dan  herba  artemisia  pada  tikus  diabetes  mellitus  tipe  2  resisten insulin dibandingkan dengan pengaruh  dari masing-masing ekstrak.
Uji aktivitas ekstrak terpurifikasi herba sambiloto, ekstrak terpurifikasi herba artemisia dan kombinasinya dilakukan dengan pengelompokan hewan uji yang telah dinyatakan resisten insulin dibagi menjadi 7 kelompok, Kelompok I : kombinasi ekstrak terpurifikasi herba sambiloto 390,9 mg/kg  BB  dan  herba    artemisia  83,56  mg/kg  BB;Kelompok  II  :  kombinasi  ekstrak  terpurifikasi herba  sambiloto  651,5  mg/kg  BB  dan  herba    artemisia  41,7  mg/kg  BB;Kelompok  III  :  ekstrak terpurifikasi  herba  sambiloto  tunggal  dosis  651,5    mg/kg  BB  tikus;Kelompok  IV:  ekstrak terpurifikasi  herba  sambiloto  tunggal  dengan  dosis  1303  mg/KgBB,  p.o.;Kelompok  V  :  ekstrak terpurifikasi  herba  artemisia  tunggal  dengan  dosis 41,78    mg/KgBB,  p.o.;Kelompok VI  :  ekstrak terpurifikasi herba artemisia tunggal dengan dosis 83,56  mg/KgBB, p.o.;Kelompok VII : kontrol positif (diberi metformin dosis 45 mg/KgBB, p.o); Kelompok VIII: kontrol negatif, (diberi CMC- Na 1%, p.o). Kemudian hasilnya dianalisis dengan Uji statistika SPSS 16.
Hasil  persentase  penurunan  kadar  glukosa  darah  preprandial  dari  pemberian  ekstrak artemisia  tunggal  dosis  83,56    mg/KgBB    lebih  baik  dibandingkan  dengan  kombinasi  ekstrak sambiloto dan herba artemisia, sedangkan persentase penurunan kadar glukosa postprandial  pada pemberian  kombinasi  ekstrak  sambiloto  dosis    herba  sambiloto  651,5  mg/kg  BB  dan  herba artemisia  41,7  mg/kg  BB  lebih  baik  dibandingkan  dengan  pemberian  ekstrak  herba  sambiloto maupun ekstrak herba artemisia secara tunggal.
Kata kunci: Herba sambiloto, herba artemisia, diabetes mellitus, kadar glukosa

## ABSTRACT
Insulin  resistance  is  a  common  condition  that  is  believed  to  play  a  major  role  in  the pathogenesis of the metabolic syndrome, obesity and type 2 diabetes mellitus, and heart disease. The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  antidiabetic  activity  mellitus  combination  of purified  extract  of  bitter  herbs  and  artemisia  herb  in  rats  with  type  2  diabetes  mellitus  insulin resistance compared with the effect of each extract.
Test  activity  of  purified  extract  of  bitter  herbs,  herbal  extracts  purified  artemisia  and combinations thereof done by grouping test animals which have been declared insulin resistance is divided into 7 groups, Group I: a combination of purified extract of bitter herbs 390.9 mg / kg and 83.56  mg  of  the  herb  artemisia  /  kg;  Group  II:  a  combination  of  purified  extract  of  bitter  herbs 651.5 mg / kg and herb artemisia 41.7 mg / kg; Group III: purified extract of bitter herbs single dose of 651.5 mg / kg rat; Group IV : purified extract of bitter herbs single dose of 1303 mg / kg, po;  Group  V:  purified  extract  of  the  herb  artemisia  single  dose  41.78  mg  /  kg,  po;  Group  VI: purified  extract  of  the  herb  artemisia  single  dose  83.56  mg  /  KgBW  ,  po;  Group  VII:  positive control  (given  metformin  dose  of  45  mg  /  kg,  po);  Group  VIII:  negative  control  (CMC-Na  was given 1%, po). Then the results were analyzed with SPSS 16 statistical test.
The  percentage  decrease  preprandial  blood  glucose  levels  of  administration  of  a  single dose  of  artemisia  extract  83.56  mg  /  KgBW  better  than  the  combination  of  bitter  and  herbal
extracts  artemisia,  while  the  percentage  reduction  in  postprandial  glucose  levels  in  the administration  of  a  combination  of  extracts  of  bitter  herbs  bitter  dose  of  651.5  mg  /  kg  BB artemisia  herb  and  41.7  mg  /  kg  better  than  the  extract  of  bitter  herbs  and  herbal  extracts artemisia singly.
Keywords: bitter herbs, Artemisia herb, diabetes mellitus, glucose levels
PENDAHULUAN Resistensi insulinadalah kondisi umumyangdiyakini  memainkanperan  utamadalam patogenesissindrom metabolik, obesitas
dandiabetes  mellitus  tipe  2,  sertapenyakit  jantung (Miccoli et al ., 2008). Resistensi insulin didefinisikan  sebagai  kondisi  klinis  dengan penurunan  potensi  insulin  baik  endogen  maupun eksogen  terhadap  pengambilan  glukosa  dan penggunaan  glukosa  oleh  sel-sel  tubuh  (Marfianti, 2009).Resistensi  insulinmerupakan  perkembangan daridiabetes mellitus tipe
2 yang
disebabkanolehketidakmampuan  reseptor  insulin untukmerespons insulin secara tepat, dan berkontribusi terhadapkematian yang dikarenakanobesitas. Aksi insulinmelibatkanserangkaian signalingcascades yang mengakibatkan insulinberikatan denganreseptormya, sehingga terjadiautofosforilasireseptor  tirosin  kinase  dan fosforilasitirosindari tyrosine receptor
substrates (IRSs).
FosforilasiIRSsmenyebabkanaktivasi phosphatidylinositol3-kinase (PI3K)  danselanjutnya, untukaktivasiAktdan AS160, yang semuanyamerupakan langkah
pentinguntuk merangsang  transportasi  glukosa  olehinsulin  (Choi dan Kim, 2010).

## MANFAAT PENELITIAN
Hasil  dari  penelitian  ini  diharapkan  dapat memberikan  pilihan  terapi  bagi  masyarakat  terkait penggunaan obat herbal kombinasi ekstrak terpurifikasi  herba  sambiloto  dan  herba  artemisia
sebagai  antidiabetes  mellitus  khususnya  pada pasien  diabetes  mellitus  tipe  2  resisten  insulin dengan obesitas.

## TUJUAN PENELITIAN
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui Aktivitas antidiabetes mellitus kombinasi ekstrak terpurifikasi herba sambiloto dan herba  artemisia  pada  tikus  diabetes  mellitus  tipe  2 resisten  insulin  dibandingkan  dengan  pengaruh dari masing-masing ekstrak.

## METODE PENELITIAN
1. Herba  sambiloto  dari  tanaman  sambiloto ( Andrographis  paniculata (Burm.  F)  Ness) yang diperoleh dari Balai Besar Penelitian dan Pengembangan  Tanaman  Obat  dan  Obat Tradisional, Tawangmangu, Karanganyar.
2. Herba  artemisia  ( Artemisia  annua L.)  yang diperoleh  dari  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Tanaman  Obat  dan  Obat Tradisional, Tawangmangu, Karanganyar.
3. Hewan uji yang digunakan pada penelitian ini adalah  tikus  putih  jantan  (Rattus  norvegicus) galur  Wistar  umur  1,5  bulan  dengan  berat badan  100-150  gram.  Hewan  uji  tersebut diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi  Fakultas  Farmasi  Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.
4. Uji  kualitatif  ekstrak  terpurifikasi  herba sambiloto  dikerjakan  berdasarkan  acuan DepKes RI (2009) yang dimodifikasi sebagaimana ada dalam tabel I.
Tabel I. Tahapan analisis uji kualitatif Andrografolid secara KLT yang meliputi pelarut, fase diam, fase gerak, pengamatan noda dan deteksi kromatografi.
Tahapan analisa Depkes RI, 2009 Pelaksanaan Acuan Pelarut Metanol Etanol pa Chao and Lin, 2010 Fase diam Silika gel 60 F 254 Silika gel 60 F 254 Depkes RI, 2009 Aulia, 2008 Fase Gerak Kloroform:metanol (9:1) Kloroform:metanol (9:1) Depkes RI, 2009 Aulia, 2008 Pengamatan noda UV 254 UV 254 Depkes RI, 2009 Aulia, 2008
Pengujian secara kualitatif menggunakan KLT dilakukan  dengan  menyiapkan  larutan  uji  0,5% ekstrak  terpurifikasi  herba  sambiloto,  sedangkan sebagai larutan standar adalah larutan andrografolid 0,1%  dilarutkan  etanol  pa  (Chao  and  Lin,  2010). Sebagai fase gerak digunakan campuran kloroform: metanol  dengan  perbandingan  9:1  (Depkes  RI, 2009). Fase diam yang digunakan adalah silika gel
60  F 254 dan  jarak  elusi  8  cm.  Volume  penotolan adalah  5  μL  untuk  larutan  uji  dan  larutan  baku pembanding.  Pengamatan  noda  menggunakan  UV
254 .
5. Uji  kualitatif  ekstrak  terpurifikasi  herba artemisia dikerjakan berdasarkan acuan
Farmakope  Herbal  Indonesia  (DepKes  RI, 2009)  yang  dimodifikasi.  Pengujian  secara kualitatif menggunakan KLT dilakukan dengan  menyiapkan  larutan  uji  3%  dan  5% ekstrak terpurifikasi herba artemisia, sedangkan  sebagai  larutan  standar  adalah larutan  artemisinin  0,04%  dilarutkan  metanol pa.    Fase  gerak  digunakan  2  macam  untuk mencari hasil pemisahan yang sempurna, fase gerak  pertama:  n-Hexan  pa-etil  asetat  pa- dietilamin pa (80:20:2) dan fase gerak kedua: Butanol  pa-asam  asetat  pa-akuadest  (3:1:1). Fase  diam  yang  digunakan  adalah  silika  gel 60 F 254 dan jarak elusi 8 cm.
6. Uji  aktivitas  ekstrak  terpurifikasi  herba sambiloto, ekstrak terpurifikasi herba artemisia dan kombinasinya dilakukan dengan pengelompokan hewan uji yang telah dinyatakan  resisten  insulin  dibagi  menjadi  7 kelompok,  Kelompok  I  :  kombinasi  ekstrak terpurifikasi herba sambiloto 390,9 mg/kg BB dan herba
artemisia 83,56 mg/kg BB;Kelompok II : kombinasi ekstrak terpurifikasi herba sambiloto 651,5 mg/kg BB dan herba artemisia 41,7 mg/kg BB;Kelompok III : ekstrak terpurifikasi herba sambiloto  tunggal  dosis  651,5    mg/kg  BB tikus;Kelompok  IV:  ekstrak  terpurifikasi herba  sambiloto  tunggal  dengan  dosis  1303 mg/KgBB,  p.o.;Kelompok  V  :  ekstrak terpurifikasi  herba  artemisia  tunggal  dengan dosis  41,78    mg/KgBB,  p.o.;Kelompok  VI  :
ekstrak  terpurifikasi  herba  artemisia  tunggal dengan dosis 83,56 mg/KgBB,
p.o.;Kelompok  VII  :  kontrol  positif  (diberi metformin dosis 45 mg/KgBB, p.o); Kelompok VIII: kontrol negatif, (diberi CMC- Na  1%,  p.o).  Kemudian  hasilnya  dianalisis dengan Uji statistika SPSS 16.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  proses  fraksinasi  diperoleh  fraksi yang  larut  dalam n -heksan  sebanyak  13,40  gram dengan  rendemen  6,81%.  Sedangkan  fraksi  tidak larut n -heksan  sebanyak  177,28  gram  dengan rendemen  90,05%.  Fraksi  tak  larut n -heksan berwarna coklat kehitaman dan cenderung mengering  sehingga  membentuk  gumpalan  kecil. Fraksi  tak  larut n -heksan  ditambahkan  air  panas untuk memisahkan senyawa yang polar, didapatkan fraksi  larut  air  panas  sebesar  62,20  gram  dengan rendemen  35,09%  dan  fraksi  tak  larut  air  panas sebanyak  108,75  gram  dengan  rendemen  61,34%, kemudian  fraksi  yang  tidak  larut  dalam  air  panas ditambahkan  etanol  90%,  kemudian  diuapkan diatas  penangas  air.  Fraksi  etanol  90%  ini  yang disebut sebagai ekstrak terpurifikasi herba sambiloto.  Ekstrak  tepurifikasi  herba  sambiloto yang  diperolaeh  sebanyak  99,60  gram  dengan rendemen 44,03%.
Proses  fraksinansi  dilakukan  dengan tujuan  untuk  memisahkan  antara  senyawa  yang relatif polar dan relatif non polar yang sebelumnya tersari  seluruhnya  ke  dalam  fraksi  etanolik  herba sambiloto.  Penggunaan n -heksan  dikarenakan sebagai  pelarut  yang  dapat  menarik  senyawa  yang relatif  non  polar  seperti  minyak  atsiri,  resin  dan senyawa  non  polar  lainnya  sedangkan  senyawa yang relatif polar terutama andrografolid akan tetap berada  dalam  fraksi  tak  larut n -heksan.  Fraksi  tak larut n -heksan  dilarutkan  dengan  air  panas bertujuan  untuk  menghilangkan  pengotor  yang bersifat relatif polar. Selanjutnya fraksi tak larut air panas ditambahkan etanol 90% dan diuapkan untuk mendapatkan ekstrak terpurifikasi herba sambiloto. Dilakukan  analisis  kualitatif  terhadap  masing- masing  fraksi  yang  diperoleh  dan  dibandingkan dengan baku andrografolid.
Gambar  1.  Profil  KLT  masing-masing  fraksi  herba  sambiloto  dibawah  sinar  UV  254.  Fase gerak :kloroform:metanol (9:1) dan fase diam silika gel 60 F 254
Keterangan :
A=  fraksi  etanol  kasar;  B=  fraksi  larut  heksan;  C=  fraksi  larut  air  panas;  D=  ekstrak  terpurifikasi  herba sambiloto; E= fraksi tak larut etanol; F= baku andrografolid.
a. Ekstrak terpurifikasi herba artemisia Ekstrak  terpurifikasi  herba  artemisia dibuat  dengan  metode  maserasi  menggunakan etanol 90%. Serbuk herba artemisia sebanyak 2 kg dimaserasi dengan etanol 90% sebanyak 20 L (1:10) selama  7  hari.  Pemilihan  pelarut  berdasarkan karena  etanol  90%  mampu  menarik  senyawa  yang bersifat  relatif  polar,  dimana  kandungan  triterpen dari  herba  artemisia  akan  berada  pada  fraksi  larut etanol  yang  didapat  sebanyak  378  gram  dengan rendemen  19,80%.  Kemudian  ditambahkan n - heksan  untuk  menarik  senyawa  lain  yang  bersifat relatif non polar seperti minyak atsiri, resin, lemak dan  klorofil.  Didapatkan  fraksi  larut n -heksan
sebanyak  85,00  gram  dengan  rendemen  22,49%. Fraksi  tak  larut  n-heksan  yang  didapat  disebut sebagai  ekstrak  terpurifikasi  herba  artemisia. Ekstrak terpurifikasi yang didapatkan sebanyak 286 gram dengan rendemen 14,30%.
1. Skrining Fitokimia
a. Herba Sambiloto Pemeriksaan organoleptis ekstrak terpurifikasi herba sambiloto meliputi konsistensi ekstrak, warna, bau  dan  rasa.    Pada  tabel  1,  hasil  pemeriksaan organoleptis  ekstrak  terpurifikasi  herba  sambiloto adalah  ekstrak  kental,  warna  hijau  kehitaman,  bau khas dan rasa sangat pahit.
Tabel 1. Ekstrak terpurifikasi herba sambiloto yang dibuat
Parameter Hasil Organoleptis Ekstrak kental Warna : hijau kehitaman Bau : khas Rasa : sangat pahit Rendemen ekstrak terpurifikasi terhadap bobot simplisia (%) 4,98%
Hasil  persentase  penurunan kadar  glukosa darah  preprandial  didapatkan  pada  pemberian ekstrak  artemisia  tunggal  dosis  83,56    mg/KgBB sebesar  124,71%,  sedangkan  persentase  penurunan kadar glukosa postprandial terbesar pada pemberian
kombinasi ekstrak sambiloto dosis  herba sambiloto 651,5  mg/kg  BB  dan  herba    artemisia  41,7  mg/kg BB.
A B C D E F
Gambar 2. Grafik persentase penurunan kadar gula darah preprandial
Gambar 3. Grafik persentase penurunan kadar gula darah postprandial

## KESIMPULAN
Hasil  persentase  penurunan kadar  glukosa darah  preprandial  didapatkan  pada  pemberian ekstrak  artemisia  tunggal  dosis  83,56    mg/KgBB sebesar  124,71%,  sedangkan  persentase  penurunan kadar glukosa postprandial terbesar pada pemberian kombinasi ekstrak sambiloto dosis  herba sambiloto 651,5  mg/kg  BB  dan  herba    artemisia  41,7  mg/kg BB.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Direktorat  Penelitian  dan  Pengabdian Kepada Masyarakat Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi  Kementerian  Pendidikan  dan  Kebudayaan atas  dana  Penelitian  Dosen  Pemula  Bagi  Dosen Perguruan Tinggi Swasta Sekolah  Tinggi  Ilmu  Farmasi  Yayasan  Pharmasi Semarang

## DAFTAR PUSTAKA
Aulia, N. 2008, Penetapan kadar andrografolid dan kurkumin  dalam  ekstrak  campuran  herba sambiloto  dan  rimpang  kunyit  dengan
metode  KLT-Densitometri, Skripsi ,  UNAIR (abstrak), Surabaya.
Chao,  W.W.,  and  Lin,  B.F.,  2010,  Isolation  and Identification  of  Bioactive  compound  in Andrographis paniculata (Chuanxinlian),
Chin. Med. , 5 :17
Choi,  K.  dan  Kim,  Y.B.  2010,  Molecular Mechanism  of  Insulin  Resistance  in  Obesity and Type 2 Diabetes, The Korean Journal of Internal Medicine , 25 :  2. Depkes  RI,  2009, Farmakope  Herbal  Indonesia , Departemen Kesehatan RI., Jakarta.
Marfianti,  E.,  2009,  Perbedaan  kadar  resistin  pada obes dengan resistensi insulin dan obes tanpa resistensi  insulin, Jurnal  Kedokteran  dan Kesehatan Indonesia ,1 (1) .
Miccoli, R., Bianchi, C., Penno, G., and Del Prato,
S.,  2008,  Insulin  Resistance  and  Lipid Disorders, Future Lipidology , 3 (6) : 651-664.