## PUBLIKASI PENELITIAN TERAPAN DAN KEBIJAKAN
e-ISSN: 2621-8119
DOI : https://doi.org/10.46774/pptk.v6i2.547

## Perbandingan Aktivitas Antibiofilm Ekstrak Biji Kopi Hijau dan Sangrai Kopi Robusta terhadap Staphylococcus aureus

## Comparison of The Antibiofilmivities of Green Coffee Seed Extract and Robusta
Coffee to Staphylococcus aureus
Sri Khanti Urip * , Tatiana Siska Wardani, Tiara Ajeng Listyani Program Studi Farmasi, Universitas Duta Bangsa Surakarta, Jawa Tengah, Indonesia
* Korespondensi Penulis: Phone :  +628558914531, e-mail: srikhanti7@gmail.com

## ABSTRACT
Green  Coffee  Beans  (Coffea  canephora  P.)  and  Roasted  Robusta  Coffee  (Coffea canephora  L.)  contain  compounds  including  caffeine,  polyphenols,  flavonoids, chlorogenic acid. Chlorogenic acid is a phenolic compound contained in coffee beans which functions as an antifungal and antibacterial. Some infectious diseases caused by Staphylococcus aureus are boils, acne and wound infections and have the ability to  inhibit  biofilm.  Biofilms  are  aggregates  of  microorganisms  covered  by  an extracellular polymer matrix produced by microorganisms. This study aims to test the antibiofilm inhibition and destruction of green coffee bean extract (Coffea canephora P.) and roasted robusta coffee (Coffea canephora L.) against Staphylococcus aureus ATCC  25923.  The  antibiofilm  activity  test  consists  of  a  biofilm  formation  test,  a biofilm inhibition test, and a destruction of biofilm using the Microtitter Plate Biofilm Assay  method  on  extract  samples  macerated  with  96%  ethanol.  The  antibiofilm activity  test  used  concentrations  of  2,  4.8,  16  mg/mL.  The  results  of  testing  the antibiofilm  activity  of  green  coffee  bean  extract  and  roasted  robusta  coffee  had inhibitory activity with calculated IC50 values of 4.14 mg/mL and 2.13 mg/mL. The results of the crushing activity of green coffee bean extract and roasted robusta coffee with calculated EC50 values were 10.18 mg/mL and 19.32 mg/mL.
Keywords: biofilm, green coffee, microtitter, robusta coffee, staphylococcus aureus

## ABSTRAK
Biji Kopi Hijau ( Coffea canephora P.) dan Sangrai Kopi Robusta ( Coffea canephora L.)  mengandung  senyawa  antara  lain  kafein,  polifenol,  flavonoid,  asam  klorogenat. Asam klorogenat merupakan senyawa fenolik yang terkandung dalam biji kopi yang berfungsi  sebagai  antifungi  dan  antibakteri.  Beberapa  penyakit  infeksi  yang disebabkan oleh Staphylococcus aureus adalah bisul, jerawat, dan infeksi luka serta memiliki  kemampuan  untuk  menghambat  biofilm.  Biofilm  adalah  agregat mikroorganisme  yang  tertutup  oleh  matriks  polimer  ekstraseluler  yang  diproduksi oleh mikroorganisme tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk menguji penghambatan dan  penghancuran  antibiofilm  ekstrak  biji  kopi  hijau  ( Coffea  canephora P.)  dan sangrai kopi robusta ( Coffea canephora L.) terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923.  Uji  aktivitas  antibiofilm  terdiri  dari  uji  pembentukan  biofilm,  uji penghambatan  biofilm,  dan  uji  penghancuran  biofilm  dengan  metode Microtitter Plate  Biofilm  Assay pada  sampel  ekstrak  yang  dimaserasi  dengan  etanol  96%.  Uji aktivitas  antibiofilm  menggunakan  konsentasi  2,  4,8,  16  mg/mL.  Hasil  pengujian aktivitas  antibiofilm  ekstrak  biji  kopi  hijau  dan  sangrai  kopi  robusta  memiliki aktivitas penghambatan dengan perhitungan nilai IC 50 4,14 mg/mL dan 2,13 mg/mL. Hasil aktivitas penghancuran ekstrak biji kopi hijau dan sangrai kopi robusta dengan perhitungan nilai EC 50 sebesar 10,18 mg/mL dan 19,32 mg/mL. Kata kunci: biofilm, kopi hijau, kopi robusta, microtitter, staphylococcus aureus
Diterima : 21 Juli 2023
Direvisi : 24 Oktober 2023
Diterbitkan : 29 Desember 2023
This is an open access article under the CC BY-SA license ( https://creativecommons.org/lic enses/by-sa/4.0 )
PPTK is indexed Journal and accredited as Sinta 4 Journal ( https://sinta.kemdikbud.go.id/jo urnals/profile/7050 )

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  beragam  tumbuhan yang digunakan sebagai pengobatan dikarenakan  mengandung  bahan  kimia  yang berperan sebagai obat. Seiring berjalan waktu penggunaan  obat  kimia  mulai  dialihkan dengan  penggunaan  obat  tradisional.  Salah satu  alternatif  yang  dapat  digunakan  adalah memanfaatkan  zat  aktif  yang  terkandung dalam  tanaman  obat.  Menurut  (Iman,  2009) menjelaskan  bahwa  salah  satu  tanaman  yang secara  empiris  digunakan  sebagai  obat antibakteri adalah kopi.
Kopi  secara  empiris  telah  digunakan sebagai  pengobatan  luka  ulkus  diabetikum oleh masyarakat. Dalam catatan sejarah, kopi digunakan  sebagai  ramuan  kuno  untuk mengobati  luka  karena  kopi  memiliki kandungan  senyawa  yang  bertanggungjawab terhadap  aktivitas  antibakteri  antara  lain kafein,  trigonelin,  glioksial,  asam  klorogrnat (Yuwono, 2014). Kopi jenis robusta memiliki senyawa bioaktif antibakteri yang lebih tinggi dibandingkan  dengan  kopi  jenis  arabika (Suhayat et al ., 2015). Hal ini juga dibuktikan oleh  penelitian  (Rubinadzari et  al .,  2022) yang  menunjukan  hasil  bahwa  kopi  robusta memiliki aktivitas antibakteri yang baik.
Jenis kopi yang sering digunakan adalah biji  kopi  robusta  yang  sudah  di  sangrai. Selama proses sangrai senyawa asam klorogenat  mengalami  degradasi  sehingga kadarnya  menjadi  lebih  sedikit  dibandingkan dengan  kopi  hijau.  Perbedaan  kopi  hijau dengan kopi robusta terletak pada bahan baku ekstraksi  berupa  kopi  hijau  yang  belum  di sangrai.
Berdasarkan  penelitian ( Rubinadzari et al. ,  2022)  terkait  aktivitas  antibakteri  kopi robusta  menunjukkan  bahwa  kopi  robusta dapat  menghambat  pertumbuhan  plak  gigi, Staphylococcus  aureus .  Beberapa  penyakit infeksi  yang  disebabkan  oleh Staphylococcus aureus adalah bisul, jerawat, dan infeksi luka serta memiliki kemampuan untuk menghambat  biofilm.  Biofilm  merupakan agregat  mikroorganisme  yang  tertutup  oleh
matriks polimer ekstraseluler yang diproduksi oleh mikroorganisme tersebut.
Berdasarkan uraian diatas, maka dilakukan penelitian untuk mengetahui perbandingan aktivitas antibiofilm ekstrak biji kopi hijau ( Coffea canephora P.) dan Sangrai Kopi Robusta ( Coffea canephora L.) terhadap bakteri Staphylococcus aureus .

## METODE PENELITIAN
Waktu  penelitian  dilaksanakan  pada bulan  Mei  sampai  Juni  2023  bertempat  di Laboratorium  Mikrobiologi  Universitas  Duta Bangsa Surakarta dan Laboratorium Biomedik Universitas Sebelas Maret.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah Microtitter  flate-bottom  96  wells , autoklav,  incubator,  freezer, imark-  Biorad Microplate Reader, rotary evaporator, moisture  balance,  waterbath,  vaccum, alat vortex , micropipet, Laminar air flow (LAF), timbangan  analitik,  cawan  penguap, jarum  ose,  bunsen,  gelas  ukur,  beaker  glass, Erlenmeyer,  tabung  reaksi,  ayakan,  lampu spirtus, alumunium foil.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  biji  kopi  hijau  ( Coffea  canephora P.)  dan  sangrai  biji  kopi  robusta  ( Coffea canephora L.), bakteri Staphylococcus aureus ATCC  25923,  Media Nutrient  Agar (NA), Brain  Hearth  Infusion (BHI),  kristal  violet 1%, ammonia 25%, kloroform, reagen mayer, reagen dragondrof, aquadest, serbuk Mg, HCl pekat,  etanol  96%,  Fecl 3 1%,  H 2 SO 4 pekat, asam  asetat  anhidrat,  lugol,  safranin,  larutan Mc. Farland 0,5 dan DMSO 10%, Listerin.
Determinasi tanaman pada penelitian ini dilakukan  dengan  tujuan  untuk  mengetahui kebenaran  tanaman  berdasarkan  ciri-ciri morfologi  yang  diinginkan  dalam  penelitian. Biji kopi hijau dan sangrai kopi robusta yang digunakan  dalam  penelitian  ini  dalam  bentuk biji  yang  sudah  kering  lalu  diayak  dengan pengayak Mesh No.40.
Serbuk  ditimbang  sebanyak  198,20  g dan di maserasi selama 5 hari dengan larutan etanol 96% dengan perbandingan 1:10.
Selanjutnya  maserat  disaring  dan  dilakukan evaporasi  dengan rotary  evaporator pada suhu  50 O C  sampai  terbentuk  ekstrak  kental dipekatkan  diatas  waterbath  hingga  seluruh pelarut  etanol  menguap  untuk  mendapatkan ekstrak pekat (Mubarak et al ., 2018).
Penentuan  susut  pengeringan  dengan cara  sebanyak  1  g  bahan  dimasukkan  ke dalam  krus  porselen  yang  telah  di  panaskan sebelumnya  selama  30  menit  pada  suhu 105 O C  dan  telah  ditara.  Dimasukkan  pada oven  pada  suhu  105 O C  selama  30  menit  lalu didiamkan  hingga  suhu  dingin,  ditimbang beratnya  dan  hitung  nilai  presentasinya dengan 3 kali replikasi (Utami, 2020).
Pada  uji  kadar  air  menggunakan  alat yang  bernama Moisture  balance .  Dua  gram serbuk  dimasukkan  dalam moisture  balance kemudian  alat  akan  berbunyi  lalu  catat  hasil uji kadar air (Anggraini et al ., 2021).
Uji  bebas  etanol  dilakukan  dengan memasukkan  1  ml  ekstrak  ke  dalam  tabung reaksi,  ditambahkan  2  tetes  H 2 SO 4 dan  asam asetat  anhidrat  kemudian  dipanaskan,  ekstrak dikatakan bebas bila tidak ada bau ester yang khas dari etanol (Tivani et al ., 2021)
Identifikasi  kandungan  senyawa  kimia terdiri  dari  uji  alkaloid,  flavonoid,  fenolik, steroid  dan  terpenoid  serta  saponin.  Uji alkaloid  yaitu  ekstrak  ditambahkan  5  ml ammonia  25%  dan  20  ml  kloroform  dalam gelas  kimia,  kemudian  dimasukkan  sebanyak 1 ml ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan dua  tetes  reagen  mayer  dan  dua  tetes  reagen dragendroff  pada  tabung  reaksi  lainya.  Hasil positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya endapan  berwarna  putih  untuk  sampel  yang ditetesi  reagen  mayer  dan  endapan  jingga kecoklatan  untuk  reagen  dragendroff  (Wigati et al. , 2019).
Uji  flavonoid  yaitu  ekstrak  dimasukkan 100 ml ke dalam gelas kimia, lalu dipanaskan kurang  lebih  lima  menit.  Setelah  dipanaskan, disaring  menggunakan  kertas  saring.  1  ml dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan
ditambahkan  0,1  g  serbuk  Mg  dan  lima  tetes HCl  pekat.  Sampel  positif  flavonoid  jika terbentuk  larutan  berwarna  kuning  jingga sampai merah (Ergina, 2014).
Uji  fenolik  yaitu  ekstrak  ditambahkan etanol  96%  diambil  1  ml  lalu  ditambahkan  2 tetes FeCl 3 1%. Sampel dikatakan mengandung  senyawa  fenolik  jika  terbentuk larutan berwarna hijau, merah, ungu, biru atau hitam yang kuat (Tahir et al ., 2017)
Uji steroid dan terpenoid yaitu ekstrak ditambahkan  3  ml  kloroform,  2  ml  H 2 SO 4 pekat,  dan  2  ml  asam  asetat  anhidrat  dalam tabung  reaksi.  Sampel  positif  mengandung steroid  jika  terbentuk  larutan  berwarna  biru atau hijau dan positif terpenoid jika terbentuk larutan  berwarna  merah  kecoklatan  (Utami, 2018)
Uji  saponin  yaitu  1  ml  ekstrak ditambahkan 10 ml air panas lalu didinginkan. Setelah  dingin  tabung  reaksi  dikocok  dengan kuat  selama  10  detik.  Sampel  positif mengandung saponin jika terbentuk busa yang stabil  setelah  penambahan  satu  tetes  larutan HCl 2N (Wigati et al. , 2019)
Pembuatan  larutan  uji  dan  larutan kontrol  dibuat  konsentrasi  2,4,8,16  mg/mL ekstrak  biji  kopi  hijau  dan  sangrai  kopi robusta. Kontrol negatif bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923  yang sudah  distandarkan  dengan  kekeruhan Mc. Farland 0,5.  Sedangkan  kontrol  positif menggunakan  larutan  listerin (Wardani, 2018).
Pembuatan  media  NA  yaitu  dengan menimbang  0,82  g  dilarutkan  dalam  40  ml aquadest. Kemudian dipanaskan sambil diaduk  diatas hot  plate  stirrer selanjutnya media  diisikan  ke  dalam  tabung  reaksi disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121 o C  selama  15  menit,  dibiarkan  pada  suhu ruang  selama  ±  30  menit  sampai  media memadat.
Pembuatan media BHI dengan menimbang  BHI  10g  dilarutkan  dengan
aquadest setelah homogen disterilisasi menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121 o C selama 30 menit.
Inokulasi dilakukan untuk memindahkan  dan  meremajakan  bakteri. Peremajaan  dengan  menggunakan  media miring NA dengan menggoreskan satu ose ke inokulum  pada  permukaan  agar  miring dengan cara zig zag dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C (Wardani, 2018).
Pewarnaan  gram  dilakukan  dengan mengambil  1  ose  biakan  bakteri  pada  obyek glass  kemudian  ditetesi  aquadest  selanjutnya diratakan  setipis  mungkin  lalu  dilewatkan diatas  api  spirtus.  Preparat  kemudian  ditetesi dengan kristal violet selama ± 1 menit, warna dicuci  kemudian  tetesi  lugol  diamkan  selama ±  1  menit.  Preparat  kemudian  dilunturkan dengan menggunakan etanol 96% selama ± 1 menit  kemudian  tetesi  safranin  dan  biarkan selama  ±  1  menit.  Dibilas  menggunakan aquadest,  terakhir  tetesi  minyak  emersi. Preparat diamati dibawah mikroskop.
Bakteri Staphylococcus  aureus yang telah diremajakan di media NA padat diambil menggunakan  jarum  ose  dan  dimasukkan  ke dalam tabung reaksi berisi media BHI cair 10 ml  lalu  divortex  selama  1  menit.  Kemudian diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37 o C. Suspensi  bakteri  disesuaikan  dengan  standar kekeruhan Mc. Farland 0,5 (Wardani, 2018).
Uji  Aktivitas  antibiofilm  ekstrak  biji kopi hijau ( Coffea canephora P.) dan Sangrai kopi  robusta  ( Coffea  canephora L.)  terdiri dari:
Optimasi waktu pembentukan biofilm
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Pembentukan biofilm dilakukan
menggunakan microtiter  plate  flate-bottom polystyrene 96 wells dengan memasukkan 500 µl  suspensi  bakteri  ke  tiap wells .  variasi waktu inkubasi yang digunakan selama 3 hari. Setelah di inkubasi microplate dicuci menggunakan air mengalir tambahkan 500 µl kristal  violet  1%  ketiap well dan  diinkubasi
selama  15  menit.  Selanjutnya microplate dicuci  menggunakan  air  dan  ditambahkan etanol  96%  sebanyak  500  µl  ketiap wells diinkubasi  Kembali  selama  15  menit.  Tahap terakhir  dilakukan  pembacaan  pertumbuhan biofilm  pada  absorbansi  595  nm  (Wardani, 2018).
Uji Aktivitas Penghambatan biofilm Staphylococcus aureus ATCC 25923 Pengujian
penghambatan biofilm dilakukan  dengan  suspensi  bakteri  uji  500  µl dan  ekstrak  biji  kopi  hijau  dan  sangrai  kopi robusta  dengan  varian  konsentrasi  2,  4,  8,  16 mg/ml  dimasukkan  dalam  waktu  bersamaan kedalam  tiap wells selanjutnya  diinkubasi pada  waktu  optimum  pada  suhu  37 o C  lalu microplate dicuci  menggunakan  air.  Lalu tambahkan  kristal  violet  1%  ketiap wells diinkubasi Kembali selama 15 menit. Langkah selanjutnya microplate dicuci menggunakan  air  dan  ditambahkan  etanol 96% diinkubasi selama 15 menit. Selanjutnya dilakukan  pembacaan  penghambatan  biofilm pada absorbansi 595 nm (Wardani, 2018).
Uji Aktivitas Penghancuran biofilm

## Staphylococcus aureus ATCC 25923
Pengujian  ini  dilakukan  seperti  pada  uji penghambatan hanya saja ekstrak biji kopi hijau dan  sangrai  kopi  robusta  ditambahkan  pada biofilm yang telah terbentuk. Biofilm terbentuk setelah  masing-masing wells diinkubasi  selama waktu optimum pada suhu 37 o C dengan jumlah suspensi  bakteri  500  µl.  suspensi  bakteri  uji dalam microplate dibuang. Kemudian masukkan  ekstrak  biji  kopi  hijau  dan  sangrai kopi robusta dengan variasi konsentrasi 2, 4, 8, 16  mg/mL  selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu ruang  selamu  waktu  optimum,  kemudian microplate dicuci  menggunakan  air  dan ditambahkan  etanol  96%  dimasukkan  ketiap wells dan diinkubasi selama 15 menit. Terakhir dilakukan  pembacaan  penghancuran  biofilm pada absorbansi 595 nm (Wardani, 2018).
Analisis data pada penelitian ini menggunakan perangkat lunak SPSS 18 dengan uji One  Way ANOVA  ( Analysis  of  Varians ) dan perlu dilakukan uji lanjutan yaitu Post Hoc .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi  dilakukan  di  Balai  Besar Penelitian  dan  Pengembangan  Tanaman  Obat dan  Obat  Tradisional  (B2P2TOOT).  Hasil identifikasi tanaman benar merupakan biji kopi hijau  ( Coffea  canephora P.)  dan  biji  kopi robusta ( Coffea canephora L.).
Biji  kopi  hijau  dan  sangrai  kopi  robusta yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  dalam bentuk  biji  yang  sudah  kering  yang  diperoleh dari  kampoeng  kopi  banaran  di  daerah Semarang, Jawa Tengah.
Serbuk  biji  kopi  hijau  dan  sangrai  kopi robusta  yang  telah  diblender  kemudian  diayak menggunakan  ayakan  mesh  no.  40.  Metode ekstraksi  yang  digunakan  yaitu  metode maserasi  karena  mudah  serta  alat  yang digunakan  sederhana  dan  menggunakan  etanol 96% selama 5 hari. Hasil dari maserasi disaring menggunakan vaccum kemudian  diuapkan dengan rotary  evaporator dilanjutkan  dengan waterbath hingga  menghasilkan  ekstrak  kental yang berwarna hijau kecoklatan untuk biji kopi hijau  dan  ekstrak  berwarna  coklat  pekat  kental untuk  sangrai  kopi  robusta.  Randemen  yang diperoleh  dari  ekstrak  biji  kopi  hijau  12,60% dan sangrai kopi robusta 10,85%.
Susut  pengeringan  yang  dilakukan  pada penelitian  ini  untuk  memberikan  batasan minimal tentang besarnya senyawa yang hilang pada saat proses pengeringan. Batas maksimum susut pengeringan menurut (Farmakope Herbal
Indonesia  Edisi  II  Tahun  2017,  2012)  tidak lebih  dari  10%.  Susut  pengeringan  ekstrak  biji kopi  hijau  ditemukan  hasil  0,23%  dan  sangrai kopi robusta ditemukan hasil 0,22% memenuhi standar susut pengeringan.
Uji  kadar  air  pada  penelitian  ini  bertujuan untuk mengetahui batasan minimal atau rentang besarnya  kandungan  Batas  kadar  air  menurut (Utami et  al. ,  2017)  tidak  lebih  dari  10%. Berdasarkan  hasil  uji  kadar  air  yang  diperoleh dinyatakan  bahwa  ekstrak  biji  kopi  hijau memiliki  nilai  1,95%  dan  sangrai  biji  kopi robusta  diperoleh  nilai  1,26%  memenuhi standar uji kadar air.
Uji bebas etanol dilakukan untuk mengetahui bahwa ekstrak yang akan digunakan sudah bebas sehingga saat digunakan sebagai  uji  aktivitas  antibiofilm  bukan  etanol yang membunuh bakteri melainkan ekstrak biji kopi hijau dan sangrai kopi robusta  (Anggraini et  al. ,  2021).  Pada  penelitian  ini  didapatkan hasil  tidak  tercium  bau  ester  yang  khas  dari etanol.
Ekstrak  biji  kopi  hijau  dan  sangrai  kopi robusta dilakukan menggunakan metode tabung dengan  reaksi  berwarna  bertujuan  untuk mengetahui  senyawa  yang  ada  pada  biji  kopi hijau dan sangrai kopi robusta.
Berikut  adalah  hasil  uji  kandungan  senyawa kimia terhadap biji kopi hijau dan sangrai kopi robusta yang disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1 . Hasil Uji Kandungan Senyawa Kimia ekstrak biji kopi hijau dan sangrai kopi robusta Golongan Senyawa Hasil Keterangan Biji Kopi Hijau Sangrai Biji Kopi robusta Alkaloid + - Endapan putih, Endapan cokelat + + Endapan cokelat Flavonoid + + Kuning kehijauan, Merah Fenolik + + Biru, Hitam Steroid - - - Terpenoid + + Merah kecoklatan Saponin + + Terbentuk busa
Keterangan : (+) Positif : mengandung golongan senyawa; (-) Negatif: tidak mengandung golongan senyawa
Hasil  uji  kandungan  senyawa  kimia terhadap  biji  kopi  hijau  dan  sangrai  kopi
robusta  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan (Rubinadzari et al ., 2022) yang
menyebutkan  bahwa  biji  kopi  hijau  dan sangrai  kopi  robusta  memiliki  golongan senyawa kimia alkaloid, flavonoid, fenolik,  fenolik,  terpenoid  dan  saponin. Namun  ada  sedikit  perbedaan  pada  hasil penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan (Mahajan & Kapoor, 2018) yang menerangkan  selain  senyawa  alkaloid,
flavonoid, terpenoid, fenolik dan saponin biji  kopi  hijau  dan  sangrai  kopi  robusta juga memiliki kandungan steroid. Perbedaan ini terjadi mungkin
disebabkan  terjadinya  perbedaan  tempat tumbuh  yang  berbeda  sehingga  kadar kandungan  senyawa  yang  terdapat  pada biji  kopi  hijau  dan  sangrai  kopi  robusta juga akan berbeda (Utami, 2018).
Pewarnaan gram
dilakukan menggunakan  cat  Gram  A  (Kristal violet),  Gram  B  (lugol),  Gram  C  (etanol
96%),  Gram  D  (safranin)  diamati
dibawah  mikroskop  dengan  minyak emersi. Pewarnaan gram dilakukan bertujuan untuk mengetahui bahwa bakteri  yang  digunakan  tergolong  gram positif atau gram negatif. Hasil pewarnaan gram pada bakteri Staphylococcus aureus menunjukkan gram  positif  dikarenakan  tampak  sel berwarna  ungu,  berbentuk  bulat  dan bergerombol.

## Uji Aktivitas Antibiofilm

## Optimasi dan pembentukan biofilm
Tujuan dilakukan optimasi waktu  biofilm  untuk  memastikan bahwa  bakteri  uji  saat  waktu  inkubasi optimal  dalam  membentuk  biofilm terbaik. Hasil optimasi waktu pembentukan  biofilm  dapat  dilihat pada tabel 2. Tabel 2. Hasil optimasi pembentukan biofilm ekstrak biji kopi hijau (data diperoleh dari pengolahan sendiri)
Keterangan Absorbansi 595 nm Hari Ke-1 Hari Ke-2 Hari Ke-3 KH 2 mg 0,038 0,036 0,035 KH 4 mg 0,051 0,036 0,041 KH 8 mg 0,043 0,046 0,051 KH 16 mg 0,043 0,062 0,049 K + 0,064 0,061 0,073 K- 0,044 0,064 0,098 Rata- Rata 0,047 ± 0,009 0,050 ± 0,013 0,057 ± 0,024 KR 2 mg 0,060 0,062 0,047 KR 4 mg 0,055 0,062 0,054 KR 8 mg 0,068 0,060 0,058 KR 16 mg 0,067 0,065 0,061 K + 0,064 0,061 0,073 K- 0,044 0,064 0,098 Rata-Rata 0,059 ± 0,009 0,062 ± 0,002 0,065 ± 0,018
Pada tabel 2 terlihat ekstrak kopi hijau dan  sangrai  kopi  robusta  dapat  membentuk biofilm  terbaik  dan  pada  waktu  inkubasi selama  3  hari  sejalan  dengan  penelitian sebelumnya  (Wardani,  2018).  Pembentukan biofilm  ekstrak  biji  kopi  hijau  paling  optimal sebesar  0,057  sedangkan  pada  sangrai  kopi robusta paling optimal sebesar 0,065.
a. Uji Aktivitas Penghambatan Biofilm Uji  kedua  yang  dilakukan  pada penelitian ini adalah uji penghambatan biofilm.  Ekstrak  dimasukkan  secara bersamaan dengan bakteri uji bertujuan  agar  ekstrak  biji  kopi  hijau dan  sangrai  kopi  robusta  dapat menghambat biofilm bakteri uji.

## PPTK : Publikasi PenelitianTerapan dan Kebijakan Vol 6 No 2 Tahun 2023
Ekstrak  biji  kopi  hijau  dan  sangrai kopi  robusta  yang  diuji  sebanyak  4 varian  konsentrasi.  Konsentrasi  yang digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  2 mg/mL,  4  mg/mL,  8  mg/mL,  16 mg/mL.
Aktivitas  penghambatan  biofilm ekstrak  biji  kopi  hijau  mendapatkan hasil  yang  semakin  meningkat  seiring dengan  penambahan  dosis  ekstrak, terlihat  pada  konsentrasi  16  mg/mL dengan persentase daya hambat
35,83%  sedangkan  aktivitas  daya hambat terendah terlihat pada konsentrasi 2 mg/mL dengan
persentase daya hambat 29,58%. Hasil uji  aktivitas  penghambatan  biofilm dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Persentase aktivitas penghambatan biofilm ekstrak kopi hijau
Aktivitas  penghambatan  biofilm kopi  robusta  mendapatkan  hasil  yang semakin  meningkat  seiring  dengan penambahan  dosis  ekstrak,  terlihat pada  konsentrasi  16  mg/mL  dengan persentase daya hambat 28,33%
sedangkan  aktivitas  daya  hambat terendah  terlihat  pada  konsentrasi  2 mg/mL dengan persentase daya hambat  5%.  Hasil  uji  aktivitas penghambatan  biofilm  dapat  dilihat pada gambar  2.
Gambar 2. Persentase aktivitas penghambatan biofilm sangrai kopi robusta
Kemudian  ditentukan  nilai  IC 50 dengan regresi linear. Harga IC 50 berbanding terbalik dengan  aktivitas  penghambatan  biofilm  yang artinya semakin besar harga IC 50 maka aktivitas penghambatan biofilm semakin  kecil.  Perhitungan  IC 50 dapat  dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil IC 50 ekstrak biji kopi hijau dan sangrai kopi robusta Sampel ekstrak Regresi Linear Hasil IC 50 Biji Kopi Hijau Y = 0,0119 x + 0,7247 4,14 Sangrai Kopi Robusta Y= 0,0213 x + 0,5905 2,13
Hasil  %  penghambatan  biofilm  pada  ekstrak biji  kopi  hijau  memberikan  nilai  IC 50 4,14 mg/mL  dan  untuk  sangrai  kopi  robusta  2,13 mg/mL.
b. Uji Aktivitas Penghancuran biofilm
Hasil  uji  penghancuran  biofilm  pada penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui kemampuan  ekstrak  biji  kopi  hijau  dan
sangrai  kopi  robusta  dalam  menghancurkan biofilm.
Aktivitas  penghancuran  biofilm  ekstrak biji  kopi  hijau  tertinggi  terlihat  pada konsentrasi  16  mg/ml  yaitu  sebesar  27,11%. Hasil  aktivitas  penghancuran  dapat  dilihat pada gambar 3.
Gambar 3. Persentase aktivitas penghancuran biofilm ekstrak biji kopi hijau
Aktivitas penghancuran biofilm sangrai  kopi  robusta  tertinggi  terlihat  pada konsentrasi  16  mg/ml  yaitu  sebesar  19,55%.
Hasil  aktivitas  penghancuran  dapat  dilihat pada gambar 4.
Gambar 4. Persentase aktivitas penghancuran sangrai kopi robusta
Hasil  %  penghancuran  biofilm  kemudian ditentukan  nilai  EC 50 dengan  regresi  linear.
Hasil EC 50 ekstrak biji kopi hijau dan sangrai kopi robusta dapat dilihat pada tabel 4.
Tabel 4. Hasil EC50 biofilm ekstrak biji kopi hijau dan sangrai kopi robusta Sampel Ekstrak Regresi Linear Hasil EC 50 biofilm Biji kopi hijau Y= 3,6877 x +12,455 10,18 Sangrai kopi robusta Y= 2,0007 x + 11,328 19,32
Hasil  %  penghancuran  biofilm  pada ekstrak biji kopi hijau memberikan nilai EC50 sebesar  10,18  mg/m  dan  untuk  sangrai  kopi robusta 19,32 mg/mL.

## Hasil Analisis Data
Analisis Data Uji Penghambatan Biofilm
Analisis  data  pada  penelitian ini  menggunakan  uji One  Way  Anova yang  dilanjutkan  dengan  uji Post  Hoc

## PPTK : Publikasi PenelitianTerapan dan Kebijakan Vol 6 No 2 Tahun 2023
dengan metode Bonferroni . Dari hasil uji One- Sample Kolmogrove- Smirnov untuk  kopi  hijau  diperoleh sig  0,914  >  0,05  dan  untuk  sangrai kopi  robusta  diperoleh  sig  0,925  > 0,05  maka  Ho  diterima,  data  tersebut dinyatakan terdistribusi normal.
Selanjutnya
dilakukan uji homogenitas  ( levene) diperoleh  hasil untuk  ekstrak  kopi  hijau  sig  0,263  > 0,05  dan  sangrai  kopi  robusta diperoleh sig 0,232 maka Ho diterima,  data  tersebut  dinyatakan bervariasi  homogen  sehingga  dapat dilanjutkan uji One- Way Anova hasil dari  uji  ANOVA  untuk  ekstrak  kopi hijau adalah 0,093 > 0,05 dan sangrai kopi  robusta  0,000  <  0,05  yang artinya sangrai kopi robusta memiliki perbedaan antar konsentrasi.

## Analisis Data Uji Penghancuran Biofilm
Analisis  data  pada  penelitian ini menggunakan uji One Way Anova yang dilanjutkan dengan uji Post Hoc dengan metode Bonferroni. Dari hasil uji One- Sample Kolmogrove- Smirnov  untuk  kopi  hijau  diperoleh sig  0,987  >  0,05  dan  sangrai  kopi robusta dengan sig 0,945 > 0,05 maka Ho diterima, data tersebut terdistribusi normal. Selanjutnya dilanjutkan  uji  homogenitas  ( levene ) diperoleh hasil untuk ekstrak biji kopi hijau  dengan  sig  0,584  >  0,05  dan sangrai kopi robusta dengan sig 0,215 >  0,05  maka  Ho  diterima,  data tersebut barvariasi homogen sehingga dapat  dilanjutkan  dengan  uji One-
Way  Anova hasil  dari  uji  ANOVA untuk ekstrak kopi hijau adalah  0,041 < 0,05 dan untuk sangrai kopi robusta dengan sig 0,845 > 0,05 yang artinya ekstrak kopi hijau memiliki
perbedaan antar konsentrasi.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  menyatakan  bahwa ekstrak  biji  kopi  hijau  dan  sangrai  kopi robusta memiliki aktivitas antibiofilm terhadap Staphylococcus aureus ATCC
25923.
Hasil dari ekstrak biji kopi hijau ( Coffea canephora P.)  memiliki  aktivitas  antibiofilm berupa penghambatan tertinggi pada konsentrasi  16  mg/ml  dan  untuk  perhitungan IC 50 didapatkan hasil 4,14 mg/mL. sedangkan untuk aktivitas antibiofilm berupa penghancuran  tertinggi  pada  konsentrasi  16 mg/ml  dan  untuk  perhitungan  nilai  EC 50 didapatkan hasil 10,18 mg/mL.
Hasil  dari  sangrai  kopi  robusta  ( Coffea canephora L.)  memiliki  aktivitas  antibiofilm berupa penghambatan tertinggi pada konsentrasi 16 mg/mL dan untuk perhitungan nilai  IC 50 didapatkan  hasil  2,13  mg/mL. sedangkan  untuk  aktivitas  antibiofilm  berupa penghancuran  tertinggi  pada  konsentrasi  16 mg/mL  dan  untuk  perhitungan  nilai  EC 50 didapatkan hasil 19,32 mg/mL.

## SARAN
Bagi peneliti selanjutnya perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengetahui  mekanisme  yang  terjadi  pada aktivitas  terhadap  biofilm  ekstrak  biji  kopi hijau  dan  sangrai  kopi  robusta  dengan menggunakan metode yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggraini, P. H., Septiarini, A. D., & Siska, T. W.  (2021).  Uji  Daya  Hambat  Ekstrak Dan  Fraksi  N-Hekasan,  Fraksi  Etil Asetat, Fraksi Air Daun Kersen (Muntingia Calabura L) Terhadap BAKTERI Staphylococcus aureus ATCC
25923. Duta Pharma Journal , 1 (2), 8–19.
Ergina, S. N. (2014). Ergina, Siti Nuryanti dan Indarini  Dwi  Pursitasari  Uji  Kualitatif Senyawa Metabolit Sekunder Pada Daun Palado  (Agave  Angustifolia)  Yang Diekstraksi  Dengan  Pelarut  Air  Dan Etanol  Qualitative  Test  of  Secondary Metabolites  Compounds  in  Palado Leaves (Agave A. J. Akad. Kim , 3 (3).
Farmakope  Herbal  Indonesia  Edisi  II  Tahun 2017. (2012). Formularies. Pocket Handbook of Nonhuman Primate
Clinical Medicine , 213–218.
Iman,  M.  N.  (2009). Aktivitas  antibakteri ekstrak metanol bunga pepaya jantan .
Mahajan, R., & Kapoor, N. (2018). Phytochemical analysis and antimicrobial  activity  of  Roasted  beans of Coffea robusta. International Journal of  Pharmacy  and  Biological  Science ,
8 (1).
Mubarak,  F.,  Sartini,  S.,  &  Purnawanti,  D.
(2018).  Effect  of  Ethanol  Concentration on  Antibacterial  Activity  of  Bligo  Fruit Extract  (Benincasa  hispida  Thunb)  to Salmonella typhi. Indonesian Journal  of Pharmaceutical Science and Technology , 5 (3).
Rubinadzari, N., Sulfiani Saula, L., Rahmawati Utami,  M.,  Studi  Farmasi,  P.,  Ilmu
Kesehatan, F., & Singaperbangsa
Karawang,  U.  (2022).  Perbandingan
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Biji Hijau dan Sangrai Kopi Robusta (Coffea canephora  L.)  Serta  Kombinasinya Terhadap Bakteri Staphylococcus
aureus. Jurnal  Ilmu  Kefarmasian , 3 (2), 221–230.
Suhayat,  C.  K.,  Bahar,  M.,  &  Thadeus,  M.  S.
(2015). Perbandingan Hasil Uji Sensitivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Biji  Kopi  Robusta  (Coffea  canephora)
Sebelum  dan  Sesudah  Dipanggang Terhadap  Isolat  Bakteri  Plak  Gigi  di Poliklinik  Stan  Tangerang  Selatan. Bina Widya , 26 (3), 135–144.
Tahir,  M.,  Muflihunna,  A.,  &  Syafrianti,  S. (2017).  Penentuan  Kadar  Fenolik  Total
Ekstrak Etanol Daun Nilam (Pogostemon  Cablin  Benth.)  Dengan Metode Spektrofotometri Uv-Vis. Jurnal Fitofarmaka Indonesia , 4 (1).
Tivani,  I.,  Amananti,  W.,  &  Putri,  A.  R.
(2021). Uji Aktivitas Antibakteri Handwash Ekstrak  Daun Turi ( Sesbania grandiflora  L )  Terhadap Staphylococus aureus . Jurnal  Ilmiah  Manuntung , 7 (1),
86–91.
Utami.  (2018). Uji  Aktivitas  Antioksidan  Dari Biji  Kopi  Robusta  (Coffea  Canephora P.)  Berdasarkan  Perbedaan  Ekologi Dataran  Tinggi  Di  Pulau  Jawa . 8 (1),
67–72.
Utami,  Y.  P.  (2020).  Pengukuran  Parameter Simplisia  Dan  Ekstrak  Etanol  Daun Patikala  (Etlingera  Elatior  (Jack)  R.M. Sm) Asal Kabupaten Enrekang Sulawesi Selatan. Majalah Farmasi Dan
Farmakologi , 24 (1), 6–10.
Utami,  Y.  P.,  Umar,  A.  H.,  Syahruni,  R.,  & Kadullah, I. (2017). Standardisasi Simplisia  dan  Ekstrak  Etanol  Daun Leilem  (  Clerodendrum. Journal  of Pharmaceutical and Medicinal Sciences ,
2 (1), 32–39.
Wardani.  (2018). Fraksi  Teh  Hijau  (Camelia Sinesis  L)  Terhadap  Antibiofilm  Bakteri Pseudomonas  Aeruginosa  ATCC  27853 dan Staphylococcus Aureus ATCC 25923 . 1–127.
Wigati,  E.  I.,  Pratiwi,  E.,  Nissa,  T.  F.,  & Utami,  N.  F.  (2019).  Uji  Karakteristik
Fitokimia Dan Aktivitas Antioksidan Biji Kopi  Robusta  (Coffea  Canephora  Pierre) Dari Bogor, Bandung Dan Garut Dengan Metode Dpph (1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl). Fitofarmaka: Jurnal Ilmiah Farmasi , 8 (1).
Yuwono,  H.  S. (2014).  The  New Paradigm of Wound  Management  Using  Coffee Powder. Global  Journal  of  Surgery ,
2 (2).