四种 方法显示的结果均为微量重金属的硫化物微粒均匀混悬在溶液中所呈现的颜色; 采用滤 膜法可获得“色斑” ;如果重金属离子浓度大,加入显色剂后放置时间长,就会有硫化 物聚集下沉。重金属硫化物生成的最佳 PH 值是 3.0-3.5,选用醋酸盐缓冲液(PH3.5) 2.0ml 调节 PH 较好,显色剂硫代乙酰胺试液用量经实验也以 2.0ML 为佳,显色时间一 般为 2 分钟。以 10-20μ g 的 Pb 与显色剂所产生的颜色为最佳目视比色范围。在规定实 验条件下, 与硫代乙酰胺试液在弱酸条件下产生的硫化氢呈色的金属离子有银、 铅、 汞、 铜、镉、铋、锑、锡、砷、锌、钴与镍等。由于在药品生产过程中遇到铅的机会较多, 且铅易积蓄中毒,故以铅作为重金属的代表,用硝酸铅配制标准铅溶液。 2.仪器与用具 2.1 纳氏比色管 50ml 应选玻璃质量好、无色(尤其管底) 、配对、刻度标线高度一 致的纳氏比色管。 2.2 滤器 见中国药典重金属检查法第四法附图,由具有螺纹丝扣并能密封的上、下 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 重金属检查法标准操作规程 文件编号:QC-FF-0007 版本号:00 第 2 页 共 6 页 两部分以及垫圈、滤膜和辅助滤板组成。 2.2.1 滤器上盖部分 A 的入口处应能与 50ML 注射器紧密联接,滤器下部 F 的出口 处能套上一合适橡皮管。A 与 F 能通过螺纹丝扣密封。 2.2.2 垫圈应内径光滑、大小相同,以使斑点边缘圆整、清楚、大小一致。在滤器上 加上橡皮垫圈,既可使滤膜与滤板紧密结合,又可避免在旋紧滤器接头时扭曲或损坏滤 膜。 2.2.3 滤膜的直径为 10MM,孔径为 3.0μ m,使用前在水中浸泡 24 小时以上,可使 色斑均匀。 2.2.4 50ml 注射器,应能与滤器上盖入口处紧密联接。 3.试药和试液 3.1 标准铅溶液 精密称取在 105℃干燥至恒重的硝酸铅 0.160g,置 1000ml 量瓶中,加硝酸 5ml 与 水 50ml 溶解后,用水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。临用前,精密量取贮备液 10ml, 置 100ml 量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得(每 1ml 相当于 10μ g 的 Pb) 。 3.2 硫代乙酰胺试液、硫化钠试液、醋酸盐缓冲液(PH3.5)与抗坏血酸等均按药的 规定。 3.3 稀焦糖溶液 取蔗糖或葡萄糖约 5g,置磁坩埚中,在玻璃棒不断搅拌下,加热至 呈棕色糊状,放冷,用水溶解成约 25ml,滤过,贮于滴瓶中备用。临用时,根据供试 液色泽深浅,取适当量调节使用。 4.操作方法 4.1 第一法 4.1.1 除另有规定外,取 25ml 纳氏比色管两支,甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸 盐缓冲液(pH3.5)2ml 后,加水或各药品项下规定的溶剂稀释成 25ml,乙管中加入按各药 品项下规定的方法制成的供试液 25ml;若供试液带颜色,可在甲管中滴加少量的稀焦 糖溶液或其他无干扰的有色溶液,使之与乙管一致;再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺 试液各 2ml,摇匀,放置 2 分钟,同置白纸上,自上向下透视,乙管中显出的颜色与甲 管比较,不得更深。 4.1.2 如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时, 可取该药品项下规定的二倍 量的供试品和试液,加水或该药品项下规定的溶剂使成 30ml,将溶液分成甲乙二等份, ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 重金属检查法标准操作规程 文件编号:QC-FF-0007 版本号:00 第 3 页 共 6 页 乙管中加水或该药品项下规定的溶剂稀释成 25ml;甲管中加入硫代乙酰胺试液 2ml,摇 匀,放置 2 分钟,经滤膜(孔径 3μ m)滤过,然后甲管中加入标准铅溶液一定量,加水或 该药品项下规定的溶剂使成 25ml;再分别在乙管中加硫代乙酰胺试液 2ml,甲管中加水 2ml,照上述方法比较,即得。 4.1.3 供试品如含高铁盐影响重金属检查时, 可取该药品项下规定方法制成的供试溶 液,加抗坏血酸 0.5~1.0g,并在对照液中加入相同量的抗坏血酸,再照上述方法检查。 4.1.4 配制供试品溶液时, 如使用的盐酸超过 1.0ml (或与盐酸 1.0ml 相当的稀盐酸) , 氨试液超过 2ml,或加入其他试剂进行处理者,除另有规定外,对照液中应取同样同量的 试剂置瓷皿中蒸干后,加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml 与水 15ml,微热溶解后,移置纳氏比 色管中,加标准铅溶液一定量,再用水稀释成 25ml。 4.2 第二法 4.2.1 除另有规定外,取炽灼残渣项下遗留的残渣,加硝酸 0.5ml,蒸干,至氧化氮蒸 气除尽后(或取供试品一定量,缓缓炽灼至完全炭化,放冷,加硫酸 0.5~1.0ml,使恰湿 润,用低温加热至硫酸除尽后, 加硝酸 0.5ml, 蒸干, 至氧化氮蒸气除尽后, 放冷, 在 500~ 600℃炽灼使完全灰化) ,放冷,加盐酸 2ml,置水浴上蒸干后加水 15ml,滴加氨试液至 对酚酞指示液显中性,再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml,微热溶解后,移置纳氏比色管中, 加水稀释成 25ml; 4.2.2 另取配制供试品溶液的试剂,置瓷皿中蒸干后,加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml 与水 15ml, 微热溶解后, 移置纳氏比色管中, 加标准铅溶液一定量, 再用水稀释成 25ml; 照上述第一法检查,即得。 4.3 第三法 除另有规定外,取供试品适量,加氢氧化钠试液 5ml 与水 20ml 溶解后,置 25ml 纳 氏比色管中, 加硫化钠试液 5 滴, 摇匀, 与一定量的标准铅溶液同样处理后的颜色比较, 不得更深。 4.4 第四法 4.4.1 标准铅斑的制备 精密量取标准铅溶液一定量,置小烧杯中,加水或各品种项下规定的溶剂稀释成 , 加入醋酸盐缓冲液(PH3.5)2.0ml 与硫代乙酰胺试液 1ml,摇匀,放置 10 分钟,用 50ml 注射器转移至过滤器中进行压滤(滤速约为每分钟 1ml) ,滤毕,取下滤膜,放在滤纸 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 重金属检查法标准操作规程 文件编号:QC-FF-0007 上千燥,即得。 4.4.2 检查法 照各品种项下规定方法制成的供试液 10ml,照 4.4.1 标准铅斑的制备,自“醋酸盐 缓冲液(PH3.5)2.0ml ”起,依法操作,将生成的色斑与标准铅斑比较,不得更深。 4.4.3 若供试溶液有颜色或浑浊,应用滤膜进行预滤,如滤膜上有污染,应换滤膜再 滤, 直至滤膜不再染色; 然后取滤液 , 照 标准铅斑的制备, 自 “醋酸盐缓冲液 (PH3.5) 2.0ml”起,依法操作。所得供试液的铅斑与标准铅斑比较,不得更深。 5.注意事项 5.1 标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制,以防止硝酸铅水 解而造成误差,配制与贮存标准铅溶液使用的玻璃容器,均不得含有铅。 5.2 硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳 PH 值是 3.5, 故配制醋酸盐缓冲液 (PH3.5) 时,要用 PH 计调节,硫代乙酰胺试液加入量以 2.0 时呈色最深;第四法中的检测范围 为 2-5μ g 的 Pb,且因体积小,所以硫代乙酰胺试液的用量为 1.0ml。硫代乙酰胺试液显 色剂的最佳显色时间为 2 分钟,除第四法由于检测限量低,且为了方便过滤,显色时间 为 10 分钟外,第一、二法均为放置 2 分钟。 5.3 为了便于目视比较,第一、二和三法中的标准铅溶液用量以 (相当于 20μ g 的 Pb)为宜,小于 1.0ml 或大于 3.0ml,呈色太浅或太深,均不利于目视比较。 5.4 如需将炽灼残渣项下遗留的残渣作重金属检查时,则炽灼温度必须控制在 500-600℃。实验证明,炽灼温度在 700℃以上时,多数重金属盐都有不同程度的损失。 5.5 在炽灼时能腐蚀瓷坩埚而带入较多的重金属,应改用石英坩埚或铂坩埚操作。 炽灼残渣加硝酸处理,必须蒸干,至氧化氮蒸气除尽,否则会使硫代乙酰胺水解生成的 硫化氢,因氧化析出乳硫,影响检查。蒸干后残渣加盐酸处理,使重金属转化为氯化物, 在水浴上蒸干以赶除多余的盐酸, 加水溶解, 加入酚酞指示液 1 滴, 再逐滴加入氨试液, 边加边搅拌,直到溶液刚显浅红色为止,再加醋酸盐缓冲液(PH3.5) ,使供试液的 PH 调节至 3.5。 5.6 供试品中如含有高铁盐,在弱酸性溶液中会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢进 一步氧化析出乳硫, 影响检查, 可加入抗坏血酸将高铁离子还原为亚铁离子而消除干扰。 5.7 如供试品自身为重金属的盐,在检查这类药品中的其他重金属时,必须先将供 试品本身的金属离子除去,再进行检查。如在枸橼酸铁铵中检查铅盐时,利用在一定浓 版本号:00 第 4 页 共 6 页 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 重金属检查法标准操作规程 文件编号:QC-FF-0007 版本号:00 第 5 页 共 6 页 度的盐酸中形成 ,用乙醚提取除去,再调节供试液至碱性,用氰化钾试液掩蔽微量的 铁后进行检查;右旋醣酐铁注射液中重金属检查,也是在一定浓度的盐酸中,用醋酸异 丁酯提取除去铁盐后进行检查。 5.8 药品本身生成的不溶性硫化物,影响重金属检查,可加入掩蔽剂以避免干扰。 如硫酸锌和葡萄糖酸锑钠中铅盐检查,是在碱性溶液中加入氰化钾试液,或在中性溶液 中加入酒石酸,使锌离子或锑离子生成稳定的络合物,再依法检查。 5.9 为了消除盐酸或其他试剂可能夹杂重金属,故在配制供试品溶液时,如使用盐 酸超过 1.0ml(或与盐酸 1.0ml 相当的稀盐酸)或使用氨试液超过 2.0ml,以及用硫酸或 硝酸进行有机破坏,或加入其他试剂进行处理者,除另有规定外,对照溶液应取同样量 试液蒸干后,依法检查。 5.10 当采用第四法时,将注射器套于滤器上后,让注射器内管自然下降,产生的压 力比较均匀,而且对于大多数样品溶液过滤速度达到每分钟左右;对于较粘稠的样品溶 液,可施加一均匀压力使达到该速度,以保证色斑上色调的均匀性。滤过时如滤器中存 在气泡则会影响色斑质量,故在装置辅助滤板(尼龙垫网) 、滤膜和垫圈时应以水排除 气泡。滤器上端与注射器连接处的尺寸大小应以两者能严密嵌合为宜,以免滤过时溶液 溢漏;必要时可改用乳胶管连接。 6.记录与计算 6.1 记录 必须记录所采用的方法,供试品取样量,标准铅溶液取用量,操作过程中使用的特 殊试剂,试液名称和用量或对检查结果有影响的试剂用量,实验过程中出现的现象及实 验结果等。 6.2 计算 6.2.1 标准铅溶浓度计算 1mol 的硝酸铅的质量为 331.2g,含铅为 207.2g,称取硝酸铅 0.1598g 配制 1000ml 贮备液,含铅量为: (207.2×0.1598×1000)÷(331.2×1000)=0.1000mg/ml 贮备液依法稀释 10 倍后所得标准铅溶液为每 1ml 含 10μ g 的 Pb。 6.6.2 重金属限量计算 进行检查时,如取供试品 1.0g,与标准铅溶液 2.0ml 制成的对照液比较,计算重金 属限量。 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 重金属检查法标准操作规程 文件编号:QC-FF-0007 版本号:00 第 6 页 共 6 页 重金属限量%=[标准铅溶液体积×标准铅溶液浓度/供试品量] ×100% 6.2.3 标准铅溶液取样量计算 根据取供试品量及限量计算公式: V=(重金属限量×供试品重/标准铅溶液浓度), 7.结果判定 7.1 第一、二、三法,甲管与乙管比较,乙管所呈颜色浅于甲管,判为符合规定。 7.2 第四法,供试液所得斑点浅于标准铅瘫的颜色,判为符合规定。 附件: 无 相关文件与记录: 无 培训范围: 质量控制部全体人员 参考文献: 《中华人民共和国药典》2010 年版第一增补本,2012 年 8 月 第 1 版,中国医药科技出 版社。 《中国药品检验标准操作规范》2010 版,2010 年 9 月 第一版,中国医药科技出版社。 编制历史与变更原因 : 本规程属于海南**制药有限公司第一版文件。 版次号 00 修订内容描述 初建 生效日期