以下为正文:
对于每一个身经百柱的实验人员来说,液相色谱图是他们打开未知物质世界的大门,科研中的很多问题都能从色谱图中得到很好的反映,有些问题可以通过改变设备参数得到解决,而有些问题则必须通过修改操作程序来解决,毕竟,正确选择色谱柱和流动相才是得到好的色谱图的关键。
在此根据大家实践中可能会经常遇到的一些图谱问题进行了整理汇总,大家一起来看一下吧。
1、拖尾峰
1、筛板阻塞:柱子两头的过滤筛板如果堵塞,样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟,使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。需要通过反冲色谱柱,或者更换筛板。2、色谱柱塌陷:是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失,不能对物质形成保留,使得物质不在固定相上保留而随流动相流出,但是又还有一点柱效,因此形成拖尾。需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。3、有污染:即样品不在同一起跑线起跑,从后面开始跑得到达终点稍晚,表现出拖尾。更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上,以冲洗柱子。
4、流动相PH值选择错误:如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡,离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。调节PH值可抑制分子解离,改善拖尾,对于碱性化合物,相对较低的PH值更有利于得到对称峰。
2、前沿峰
1、样品过载:被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来,形成前沿峰。降低样品含量。2、样品溶剂选择不恰当:当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰,例如,在反相色谱中用已腈做样品溶剂,而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。3、色谱柱损坏:色谱柱柱效损失,不能对物质形成保留。更换色谱柱。
4、在大峰前有小峰出现,假象前沿峰,即大峰前包埋了没有分开的小峰。调整流动相洗脱梯度。
3、倒峰
1、样品折射率小:示差折光检测器测的信号是折射率,出现倒峰的原因是组分的折射率小于流动相。
2、密度的原因:密度不一样,出来的峰正倒不一样。
3、进样所致:进样时,样品对原有流动相产生瞬间阻断,然后瞬间涌流,所以产生先倒后高的“溶剂峰”。
4、基本不可避免:试着使用与流动相相同的溶剂作为溶样溶剂,另外进样之前注意平衡跟冲洗参比池。倒峰基本上不能避免,但是这样操作会小些。
4、包裹
1、色谱柱问题:色谱柱流失,柱子被污染。
2、样品溶解度差:温度可能会影响到溶解度。
3、流动相不均匀:一般是流动相没配好,管路流动相不均匀,也会导致上述现象。5、基线漂移
1、柱温波动:即使是很小的温度变化都会引起基线的波动,通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。使用柱温箱,控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器。2、流动相不均匀:流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。使用HPLC级的溶剂,流动相在使用前进行脱气处理。3、流通池被污染或有气体:用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。4、流动相配比不当或流速变化:更改配比或流速,为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
5、样品中有强保留的物质:以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。
6、出现宽峰