问题1:培养液pH 值变化太快
可能原因
(1)CO2 张力不对
(2)培养瓶盖拧得太紧
(3)NaHCO3缓冲系统缓冲力不足
(4)培养液中盐浓度不正确
(5)细菌、酵母或真菌污染
建议解决方法
(1)按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度,2.0g/L 到3.7g/L 浓度NaHCO3对应CO2浓度为5% 到10%。
(2)松开瓶盖1/4 圈。
(3)改用不依赖CO2 培养液。加HEPES 缓冲液至10 到25mM 终浓度。
(4)在CO2 培养环境中改用基于Earle′s 盐配制的培养液,在大气培养环境中培养改用Hanks 盐配制的培养液。
(5)丢弃培养物,或用抗生素除菌。
问题2:培养液出现沉淀,但pH值不变
可能原因
(1)洗涤剂清洗后残留有磷酸盐,将培养基成分沉淀下来
(2)冰冻保存培养液
建议解决方法
(1)用去离子水反复冲洗玻璃器皿,然后灭菌。
(2)将培养液加热到37℃,摇动使其溶解如沉淀仍然存在,丢弃培养液。
问题3:培养液出现沉淀, 同时pH 发生变化
可能原因
细菌或真菌污染
建议解决方法
丢弃培养物,或用抗生素除菌。
问题4:培养细胞不贴壁
可能原因
(1)胰蛋白酶消化过度
(2)支原体污染
(3)培养瓶瓶底不干净
(4)培养液pH值过碱(NaHCO3分解)
(5)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当
(6)细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性)
(7)接种细胞起始浓度太低或太高
建议解决方法
(1)缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。
(2)分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。
(3)注意刷洗,或换用一次性塑料培养瓶
(4)使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可)
(5)重新配置消化液或培养液
(6)启用新的保种细胞
(7)调节最佳接种细胞浓度
问题5:悬浮细胞成簇
可能原因
(1)培养液中含钙、镁离子
(2)支原体污染
(3)蛋白酶过度消化使得细胞裂解释
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