QTRAP的工作原理就是,Q0中第一次捕获、富集离子,Q1中选择母离子,Q2中碰碎,Q3捕获、富集后质量扫描。采用多重EPI(增强子离子扫描)可以检测共流出的代谢物。经过试验发现QTRAP的EPI全扫描的灵敏度比普通PI(子离子扫描)的灵敏度高出500倍,即使含量很低的物质也可以检测出来。
QTRAP除了具有串联四极杆和离子阱的所有功能外,信息关联采集的功能也可以保证切换快速完成,发现代谢物的同时也能够进行确证工作。经过比较可以看到pMRM的扫描模式在体内和体外代谢物检测时灵敏度、选择性都很优秀,代谢物的覆盖率也很好。
QTRAP®系统的扫描模式都包含在LightSight®v2.2软件中。使用该软件可以建立MRM、母离子丢失、中性离子丢失和EMS的扫描方法,软件和仪器连接,图谱可以自动添加,选择创建采集方法,能够自动得到分析结果。张老师举例向大家展示,LightSight 软件窗口一个工作区内,软件自动关联MS和MS/MS,对数据能够进行快速浏览,而且也方便对代谢物和母药MS/MS图谱的比较而进行代谢物结构鉴定。
QTRAP系统进行代谢物鉴定的方法
1、目标代谢物的鉴定方法
张老师以pMRM(预见的MRM检测)和IDA分析方法对大鼠静脉给药1mg/kg维拉帕米的代谢物检测为例来介绍QTRAP对目标代谢物的鉴定。
维拉帕米分子结构容易发生氧化和去甲基化,不同位置发生不同的反应后经过Q1、Q3会得到不同的质量峰。维拉帕米给药2小时以后大鼠的胆汁和尿样使用QTRAP进行测定,200多个离子对2.4s 就可以完成一个循环测定,在尿样中,pMRM检测维拉帕米代谢物得到色谱图后,可以自动给出二级图谱进行代谢物鉴定。使用pMRM-EPI方法,一次进样能够检测到23个维拉帕米的代谢物,使用3个EPI,多个共洗脱代谢物也可以被检测到,保证主要代谢物没有遗漏。
2、非目标代谢物的鉴定方法
张老师以使用MIM方法对奈法唑酮代谢物鉴定为例介绍了QTRAP进行非目标代谢物的鉴定方法。非目标代谢物检测时由于不知道代谢物类型,因而不能使用预测pMRM的方法,使用MIM方式或者Q3全扫描,MS判断同位素分布,使用IDA自动给出二级图谱。MIM是2008年Ming Yao博士提出的,就是在Q1时选择离子,Q2时只给一个很低的能量让其通过,Q3中进行检