液相色谱异常峰是色谱实验工作中最头疼的问题,不仅影响色谱分析的定量和积分,甚至会造成严重的经济损失。色谱峰的异常通常不是单个环节的问题,而是要和整个分离系统都有关联。 在发现异常峰并进行排查之前,首先确认以下信息: ▪仔细核查异常谱图的实验条件,包括分析条件、进样条件、操作步骤等,是否与正常谱图完全一致; ▪对比正常谱图和异常谱图涉及的仪器参数设置、配件、色谱柱是否有更换 ▪检查仪器操作是遵照说明书及相关操作规范正确操作 无峰可能出现的问题及解决方案 ▪进样器未吸入样品,检查进样量设置 ▪样品浓度低于检测限,增加样品浓度 ▪样品被保留在分析柱中,更换适合的色谱柱/流动相 ▪样品定量环堵塞,冲洗定量环 ▪该波长下样品无特征吸收,可更改波长(针对紫外检测器) ▪蒸发管温度设置过高,可调整至合适温度(针对蒸发光散射检测器) 峰高重复性不稳定可能出现的问题及解决方案 ▪样品不均匀,摇匀样品 ▪实验条件的变化(环境温度等),稳定实验环境 ▪仪器未完全平衡,平衡仪器 ▪管路接头未插紧,存在死体积,重新连接相应管路 ▪自动进样器中有气泡/堵塞,疏通/冲洗管路 ▪检查各接口,看是否存在管路漏液现象 前延、拖尾峰分析可能出现的问题及解决方案 (1)峰前延 ▪柱温选择过低,升高柱温 ▪样品溶剂选择不当,选择适当溶剂 ▪样品过载,稀释样品,降低样品的进样量 ▪色谱柱损坏,冲洗/更换色谱柱 (2)拖尾峰 ▪存在干扰峰,减小流速/降低柱温 ▪色谱柱塌陷,更换色谱柱 ▪筛板阻塞,冲洗/更换色谱柱 ▪流动相PH不合适,调节PH值 ▪样品与填料发生反应,更换适合的色谱柱 峰展宽可能出现的问题及解决方案 ▪死体积过大,缩短管路长度 ▪仪器有漏液(特别是柱和检测器之间),检查漏液 ▪管路接头未插紧,存在死体积,重新连接相应管路 ▪柱温过低,升高柱温 ▪色谱柱未分离样品,更换色谱柱/实验方法 ▪漏液,排查漏液点 ▪流动相流速太低,增加流速 ▪流动相组分变化,重新配置流动相 ▪缓冲液浓度太低,重新配置流动相 ▪保护柱污染/失效,冲洗/更换保护住 ▪分离柱污染/失效,冲洗/更换分离住 ▪柱子到检测器连接线过长,缩短管路长度 ▪进样体积过大,调整到合适的进样体积 ▪时间常数设置不合理,调整时间常数(针对紫外检测器) 平头峰可能出现的问题及解决方案 ▪样品浓度过高,稀释样品 ▪选择的信号增益过高,降低信号增益 ▪分析柱中有其他残留物质,冲洗分析柱 出峰时间不稳定可能出现的问题及解决方案 ▪泵流速不稳定,排查泵相应问题 ▪漏液,排查漏液点 ▪柱温箱/环境温度不稳定,稳定实验环境 ▪样品不均匀,充分混合样品 所有出峰都偏小可能出现的问题及解决方案 ▪进样量太小,增加进样量 ▪存在漏液,检查漏液处 ▪检测器时间常数设置过大,调整时间常数(针对紫外检测器) 峰变形可能出现的问题及解决方案 (1)峰变形 ▪样品过载,稀释样品 (2)早出的峰发生变形 ▪样品溶剂选择不当,选择适当溶剂 (3)晚出的峰发生变形峰拖尾 ▪缓冲不合适,选择pH与流动相相同的缓冲液 峰分叉 可能出现的问题及解决方案 ▪保护柱或分析柱污染,冲洗/更换柱子 ▪样品溶剂不溶于流动相,更换流动相 ▪喷嘴污染,冲洗喷嘴(针对蒸发光散射检测器) 额外的峰可能出现的问题及解决方案 ▪杂质组分 ▪前一次进样的残留,增加单针时间 ▪流动相不纯净,更换流动相 分离度降低可能出现的问题及解决方案 ▪流动相污染,更换流动相 ▪保护住/分离柱阻塞,冲洗/更换色谱柱 负峰可能出现的问题及解决方案 ▪流动相吸收本底值过高。此时可适当改变检测波长。 ▪进样过程中进入空气。进行排气处理 , 直到基线平稳再进样。 ▪样品组分的吸收低于流动相。可改变流动相或改变检测波长。 ▪配制样品的溶液与流动相不一样。重新配制样品 , 用与流动相一样的溶剂配制或稀释样品。 ▪所有的峰均负,检测器信号输出线颠倒(针对紫外检测器) 更多液相色谱仪维护技巧,可联系小编!!!