;5'; ④ 内切酶活性: DNA聚合酶 I 也具有5ˊ→3ˊ 内切酶活性,如图7-13所示。在两个碱基之间切开产生一个具有5ˊ-P 末端的不配对碱基的片段。 很多实验证明DNA聚合酶 I 在大肠杆菌复制中不是主要的合成酶,而是在除去RNA引物和损伤修复中起重要作用。 ;; (2) 大肠杆菌 DNA聚合酶 Ⅱ DNA聚合酶Ⅰ缺陷的突变株仍能生存,这表明DNApolⅠ不是DNA复制的主要聚合酶。人们开始寻找另外的DNA聚合酶,并于1970年发现了DNApolⅡ。 ① 从5′→3′方向合成DNA ② 具有3ˊ→5ˊ外切酶活性,但没有5ˊ→3ˊ外切酶活性。 在体外的合成速率比体内的速率要低得多,带有这个酶缺陷的大肠杆菌突变株染色体的复制各方面都正常,它在体内的功能可能和DNA聚合酶 I 类似。 ; (3) 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ 聚合酶Ⅲ是体内DNA复制所必需的酶 带有DNA聚合酶 Ⅲ 的温度敏感突变 (polc) 的大肠杆菌在限制温度下是不能存活的,从这种菌株得到的裂解液也不能合成DNA,当加入正常细菌的DNA 聚合酶Ⅲ 时可以恢复它的聚合能力,因此不同于DNA聚合酶I和Ⅱ,聚合酶Ⅲ是体内DNA复制所必需的酶。 DNA多聚酶Ⅲ相当复杂,其结构和各亚基的功能如图11-24,25所示。 DNA pol Ⅲ具有5'→3'聚合功能。 ;; 聚合酶Ⅲ的活性 聚合活性: DNA复制时聚合酶 Ⅲ 全酶十分重要,它可以在DNA模板上的引物的3′-OH上以每分钟约50 000核苷酸的速率逐个延伸新生的DNA。 3′→5′和5′→3′的外切酶活性: pol Ⅲ的5′→3′外切酶活性与polⅠ的不同,pol Ⅲ的5′→3′外切酶活性只对 单链 DNA有作用,因此不能用于缺口翻译。 DNA聚合酶Ⅲ的作用范围如图7-14所示。 ;催化DNA聚合; (4) 真核生物中的DNA聚合酶 所有真核生物中的聚合酶的性质基本上同大肠杆菌中的聚合酶相似,它的活性有赖于模板,带3′-OH的引物,四种脱氧核糖核苷磷酸。 目前发现的真核生物DNA聚合酶有α β γ δ ε 。 DNA聚合酶α: 在迅速增殖的细胞中活力较高。酶分子量在165,000一175,000U之间。最合适的底物是带缺口的双链DNA,但是带引物的变性DNA也是很好的底物。