1. 2. 3E lisp o tL 式剂盒检测采集7 _ ,- - 胺四乙酸( E D T A K 2)抗凝的静脉血10 m L , 血液标本采集后2小时内常规分离外周血单个核细胞( P B M C ), 洗涤2次后, 在预包被抗- - IF N . Y 抗体的E L IS P O T 培养板中每孔加入10 011L , 每孔细胞数为2× 10 5个细胞/孔。 阴性对照孔中不加任何刺激物, 阳性对照孔每孔加入终浓度为511g /m L 的植物血凝素( P H A )。 实验孔中加入特异性抗原刺激物E S A T . 6 、 P o o lA 、P o o lB , 终浓度均为511g /m L 。 将细胞置于37 ℃, 5%C 0 2培养箱培养16. 24 小时。 第二天洗板后加入检测抗体孵育l小时, 再加入亲和素孵育l小时。 最后加入显色剂显色。 待显色洗板后晾干,E L IS P O T 板斑点计数, 设定每一个反应孔中斑点数减去阴性孔中斑点数为检测结果, 结果> 30 为阳性, 如果三种抗原( E S A T 、 P o o lA 、 P o o lB )中任一抗原检测结果为阳性, 结果判为阳性; 三种抗原检测结果均为阴性, 结果判为阴性。1. 3统计学处理采用配对设计四格表X 2检验对E lisp o t与P P D 皮试结果进行比较分析, P < 0 . 0 5认为差异有统计学意义。2 结果2. 1 P P D 皮试结果在10 0 例受试者中有50 例为阳性, 占50 %, 其中P P D ( + )有20 例, 提示这部分个体内感染过M . tb( 包括接种卡介苗), 占受试者20 %; P P D ( + + )有30 例, 提示这部分个体内感染过M . tb ( 曾接触传染源, 不含接种卡介苗); 占受试者30 %; 未见强阳性( + + + )。2. 2E lisp o t检测结果在对10 0 例志愿者的检测中, E lisp o t阳性有20 人, 说明这部分个体内有较高水平的IF N —Y 释放, 占受试者20 %, 其余8 0 人为E lisp o t阴性, 即其个体内三种M . tb 特异性抗原( E S A T 、 P o o lA 、P o o lB )检测结果均为阴性。2. 3E lisp o t检测与P P D 皮试结果比较根据以上检测结果, P P D 皮试阳性率为50 %, 而E lisp o t阳性率仅为20 %, 在P P D 阳性的50 人中有37 人E lisp o t检测阴性, 而在P P D 阴性的50 人中有7 人为E lisp o t检测阳性。 结果显示两种方法结果差异有统计学意义( x2- - 20. 4 5, P < 0. 005, 见表1), 证明E lisp o t检测在健康者中阳性率明显比传统的P P D 皮试要低。