blaKPC、blaNDM-1、blaVIM、blaIMP和blaOXA-48-like50 μL反应体系:10×PCR缓冲液,3.5 mmol/L镁离子,2 mmol/L dNTPs,100 μmol/L引物,0.25 U Taq酶,1 μL粗制模板。95℃预变性5 min;95℃变性1 min,52℃退火复性30 s,72℃延伸40 s;第二步至第四步进行30个循环。72℃延伸10 min。PCR产物取3 μL进行琼脂糖凝胶电泳检测,并进行测序。
1.5 主要试剂与仪器
采用梅里埃公司GN16药敏测定卡进行药敏试验,采用全自动Vitek Compact II进行测定。实验过程中的引物由上海生工生物科技公司合成。实验过程所用的PCR相关试剂、2000 bp DNA Marker购于大连TAKARA公司。PCR扩增仪(Bio-Rad C1000)、电泳仪及凝胶成像系统由杭州市第一人民医院检验科PCR基因实验室提供。测序为杭州博尚生物科技公司提供。
1.6 统计学方法
采用SAS 6.12统计软件,计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验。P