因为硅胶中有大量的羟基裸露在外,很容易是样品分解,特别是金属有机化合物和含磷化合物。而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的,选择余地比 较大,但是比硅胶要贵些。 听说有个方法,就是用石英做柱子,然后用HF254 做固定相,这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品 在哪里了,没有验证过。哪位做过可以提出来大家参详参详。 关于湿法、干法上样。 湿法省事,一般用淋洗剂溶解样品,也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等,但溶剂越少越好,不然溶剂就成 了淋洗剂了。 很多样品在上柱前是粘乎乎的,一般没关系。可是有的上样后在硅胶上又会析出,这一般都是比较大量 的样品才会出现,是因为硅胶对样品的吸附饱和,而样品本身又是比较好的固体才会发生,这就应该先 重结晶,得到大部分的产品后再柱分,如果不能重结晶那就不管它了,直接过就是了,样品随着淋洗剂 流动会溶解的。 有些样品溶解性差,能溶解的溶剂又不能上柱(比如 DMF,DMSO 等,会随着溶剂一起显色是一个很长的 脱尾),这时就必须用干法上柱了。样品和硅胶的量有一种说法是 1:1,我觉得是越少越好,但是要保 证在旋干后,不能看到明显的固体颗粒(那说明有的样品没有吸附在硅胶上)。 溶剂的选择。 当然是最便宜,最安全,最环保的了。所以大多选用石油醚,乙酸乙酯。文献中有写用正己烷的,太贵 了,除非特别需要不要用不然银子哗哗的,流的比淋洗剂还快,不过因为极性很小,有时还是非它不可。 乙醚也可以用,但是就是容易睡觉,注意保持清醒别让溶剂流干了,那样柱子也就不爽了。二氯甲烷也 有用的,但是要知道,它和硅胶的吸附是一个放热过程,所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡,天 气冷的时候会好一些。甲醇,据说能溶解部分的硅胶,所以产品如果想过元素分析的话要留神,应该经 过后继处理,比如说重结晶等。其他的溶剂用的相对较少,要依个人的不同需要选择了。 由于某些原因,用到的淋洗剂多是大包装的(便宜嘛),我们这里是用 10 25升的塑料桶装的,就 要注意这些工业品的纯度是较低的。经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质,其他的杂质就可想而 知了,所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。当然过原料时就可以免去这一步了,反正下面还有提 纯的方法。 另外溶剂在过柱子后最好也回收使用,一方面环保,另一方面也能节省部分经费,缺点是要消耗一定的 人工。这里要注意的是,一般在过柱同时进行的是减压旋蒸,石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不 同会导致极性的变化,一般会使得极性变大,在梯度淋洗时比较合适,正好极性越来越大了。在过完柱 子后,溶剂最后回收要采用常压,因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来,常压时就会减少 这种现象,如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了。 关于操作问题。 柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂,会被淋洗剂带到产品中的,可以采用四氟节门的。干法和湿法装柱觉得没什么区别,只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧密(太密了淋洗剂走的太慢), 一定要均匀(不然样品就会从一侧斜着下来)。书中写的都是不能见到气泡,我觉得在大多数情况下有 些小气泡没太大的影响,一加压气泡就全下来了。当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。 但是柱子更忌讳的是开裂,甭管竖的还是横的,都会影响分离效果,甚至作废! 用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开,待溶剂层下降至石英砂面时,再加少量的低极性溶剂,然后再打开活塞,如此两三次,一般石英砂就基本是白色的了。 加入淋洗剂,一开始不要加压,等溶样品的溶剂和样品层有一段距离(2~4cm 就够了),再加压,这样 避免了溶剂(如二氯甲烷等)夹带样品快速下行。 淋洗剂的选择。感觉上要使所需点在 rf0.2~0.3 左右的比较好。不要认为在板上爬高了分的比较开,过柱子就用那种 极性,如果rf 在0.6,即使相差0.2 也不容易在柱子上分开,因为柱子是一个多次爬板的状态,可以通 过公式的比较:0.6/0.8 一次的分离度,肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大。 样品的收集。用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话,就不 容易流出。这样就会发生,后面的点先出,而前面的点后出。这时可以采用氧化铝作固定相。 另外,收集的试管大小要以样品量而定,特别是小量样品,如果用大试管,可能一根就收到了三个样品, wuwu。如果都用小试管那工作量又太大。 最后的处理。柱分后的产品,由于使用了大量的溶剂,其中的杂质也会累积到产品中,所以如果想送分析,最好用少 量的溶剂洗涤一下,因为大部分的杂质是溶在溶剂里的,一洗基本了,必要时进行重结晶。 另外,再过柱的时候,有时会出现气泡,一是 和使用的溶剂有关,如果是易挥发的溶剂,如乙醚、 二氯甲烷等,在 室温稍高的情况下,很容易出现这种现象,因此,在室温高的时候, 可以选择沸点较 高,挥发相对小的溶剂。还有,使用混合溶剂时,使用 的两种溶剂的沸点应该相差不大,如:乙酸乙 酯和石油醚(60~90),而 乙醚却要选择 30-60 的石油醚。二是:不论是用带砂板的还是塞棉花的, 装柱之前,都要将空气用加压的方法将空气排干,这样就可避免柱中有空气!