1. 2. 4 . 3精密度试验用空白血浆加入米尔贝肟标准品溶液制成高、 中、 低三种浓度的血浆样品, 按照“线性范围与血浆标准曲线的制备” 项下操作, 每个浓度测定5个样品, 连续测定3天, 并与标准曲线同时进行, 以当日的标准曲线计算样品浓度, 计算日内、 日间精密度。1. 2. 4 . 4 数据处理根据给药后单个动物的血浆药物浓度一时间数据, 做药一时曲线, 曲线图采用E x cel软件绘制。 采用3p 9 7 程序运行计算药一时数据, 分别按一室、 二室、 三室模型运用M a r q u a r d t法迭代拟合,通过对模型拟合的评价, 利用F 检验法及根据A IC 最小的原则选出最佳模型, 计算药代动力学参数, 参数间比较采用整组的t检验。 回收率及精密度数据采用S P S S ll. 0 软件进行统计分析, 统计值以平均数± 标准差( x4 - S D )表示。 相对生物利用度( F )按以下公式计算:2 结果F= 瓮A U C舞茹勰枷。 %‘。 一。 ( 口服进口米尔贝肟片)2. 1方法学考察结果经H P L C 测定, 以峰面积( y )对药物浓度( x )回归, 得回归方程y = 9 4 . 237 9 x 一6 0 . 4 4 7 7( r = 0 . 9 9 9 551), 标准曲线见图l。 结果表明本试验条件下, 米尔贝肟在5~50 0 n g ・m L ‘1范围内线性关系良好, 最低定量检测限为5 n g ・m L ~, 以仪器基线噪声3倍色谱峰为检出衡量指标, 最低检测限为2n g ・m L ~。按5. 0 、 150 、 4 0 0 n g ・m L - '添加米尔贝肟, 按照1. 2. 2方法操作, 计算得米尔贝肟回收率及日内、 日间精密度, 结果见表1。响鏖度乞浓度( 职伽). J图l血浆中米尔贝肟标准曲线・- - ——879—・・—— 第口“t}】 目冉药★会* * m 十物学、 曾* 十物制“学学术论K 浩女m ( 20 12年表1米尔贝肟回收率殛精密度2 2色谱行为舟奉试骑条件下, 米尔贝肟的色谱峰能完仝分离, 没有明盟的内生杂质峰干扰, 可见本方法具有较高的专属性, 卒白血浆、 血浆添加标准品、 待测样品色岩划分别见罔2、 图孔图4 。23 血药浓度健康犬按O 25m g ・k 9 1单次口服固产米尔贝肟"和进u 米尔贝肟片后, 不l硎付问点对应的血药浓度值见表2。 进口、 国产的药时曲线见罔5。r卜_ =lJ。 L_ { 掣气毒击铲气矿1n・L叫≥勺—嗥扣萄r骶8}I。 j4l{ { l’ : 』 l“f 1_ j{ , , 旷垂睦釜L 萨刮峪‰、 H . ’ ’ …o。 …H _ 嚣5” ” ‘” ‘。 “。 ” 5“+ 4√药曲学参数参数值( 。 ± sD )药动学参数参数位( x ± 蛐嘲P 制剂进u 制剖目P 制剖迸[ j制剂 其它2. 4 药动学参数血浆中米尔贝肟的浓度数据经3P 9 7 处理后, 得出主要药物动力学参数见表3。 口服国产和进口制剂后, 药物动力学最佳数学模型均为一级吸收二室模型, 单次口服国产米尔贝肟片的相对生物利用度为99. 07 %。3 讨论3. 1检测方法的建立米尔贝肟是米尔贝霉素c一5羟基氧化水解后产生的, 米尔贝霉素类药物的检测多采用三氟乙酸酐进行衍生化, H P L C —F L D 检测H ’ 7 。 , 但米尔贝肟的C - 5形成肟, 没有共轭二烯结构, 衍生化产物较为复杂。 本研究中建立了米尔贝肟的H P L C —M S /M S 检测方法, 该方法的专属性、 在检测范围内线性关系良好、 添加回收率及精密度均能达到要求, 是适合犬血浆中米尔贝肟检测的方法。3. 2口服国产米尔贝肟的吸收与分布选用在国外已销售多年的进口制剂倍胍心In ter cep to r @ , 作为参比制剂, 测定口服国产米尔贝肟在犬体内的动力学特征。 本试验结果显示: 健康犬单剂量口服国产和进口米尔贝肟片后, 血浆药物浓度分别在4 . 26h 、 4 . 0 9 h 达到峰值, C m a x 为( 7 6. 7 1± 5. 17 )n g ・m l、 ( 7 4 . 36± 3. 68 )n g ・m l~, 吸收半衰期为1. 18 h 、 1. 0 7 h , 表观分布容积V /F 为2. 54 L ・k g ~、 2. 6 5 L ・k g ~, 相对生物利用度( F )达9 9 . 0 7 %, 表明两者均具有较快的吸收过程, 分布较广。 文献报道, 1lk g 的犬按2. 5m g /片, 服用1片的剂量口服米尔贝肟后, T m a x 为( 3. 3+ 0 . 3)h , C m a x 为( 10 2. 1± 9 . 7 )n g ・m l~, A U C ( 169 2. 1± 165. 2)n g ・L ~・h 。 以上结果显示, 本实验所得结果与报道犬口服米尔贝肟后的达峰时间稍有延迟、 峰浓度偏低,但吸收、 分布、 生物利用度结果基本一致。3. 3米尔贝肟的消除按约0 . 25m g ・k 9 1剂量口服国产、 进13米尔贝肟后, 消除半衰期t, , 。 ( k e)分别为( 11. 0 7 ± 0 . 11)h 、 ( 11. 8 5± 0 . 9 6)h , 表明米尔贝肟在动物体内消除较快, 给药后4 0 ~50 h 体内药物消除达95%。3. 4 米尔贝肟的给药方案数据表明, 犬按约0 . 25m g ・k 9 11剂量口服给药后1~36 h , 血药浓度均高于1 X10 一g /m l, 而文献报道, 米尔贝肟对体内线虫有效杀虫浓度为lX10 ~g /m l, 即米尔贝肟可持续有35h 的有效杀虫时间。 根据恶丝虫、 蛔虫、 钩虫等的生长发育特点, 对于预防用药, 一次给药即可杀灭体内的幼虫, 所以每0 . 5~1月 给药一次即可; 对于治疗给药应结合临床特征, 根据药代动力学特点随时调整: 治疗犬类螨虫病时, 所需剂量稍大博3, 可以选择按半衰期间隔给药4 ~5次, 达到稳态浓度, 以达到良好的杀虫效果, 这与文献报道的米尔贝肟的给药方案也是一致的心, 引。参考文献略一8 8 1—