一步一步教你读流式图: 凋亡和坏死的区别 2008-08-05 00:00 来源: 丁香园 点击次数: 841 关键词: 流式图 调亡 坏死 区别 分享到: • 收藏夹 • 腾讯微博 • 新浪微博 • 开心网 下图为坏死图。 坏死的位于 G0/G1 峰前的峰形为从左至右的反抛物线形。 如下: 而 APOptosis 则是一个较为对称的峰。 如下: . 而有时凋亡和坏死同时存在。 如下图: 蓝色的为 apo 峰(第一个三角) , 而白色的为坏死峰。 第二个三角为 G0/G1 峰。 第三个为异倍体 G0/G1 峰。 实际上, 很多时候我们诱导的凋亡峰不像上图那样明显, 如下: 原因要从实验的原理开始, 到细胞状态, 实验步骤, 试剂效能等, 一一分析。 例如, 某因素诱导的凋亡需要较长时间, 而我们培养时间还没到, 就有可能不出凋亡峰; 或是在早期凋亡是用 PI 染色做 SUB-G1 , 凋亡率会不高, 而用 API 法则更好地测出其凋亡率。 编辑: famsking 一步一步教你读流式图: 凋亡诱导 2008-08-05 00:00 来源: 丁香园 点击次数: 978 关键词: 流式图 教程 调亡诱导 分享到: • 收藏夹 • 腾讯微博 • 新浪微博 • 开心网 先发一张关于 PI 染色的 uv 诱导凋亡的图片, 这是 con: 这是诱导凋亡的流式图, 我们称之为 sampl: 那么怎么看这两张图呢? 首先, 我们要知道各个参数的意义。 这在流式原理中有介绍。 然后, 我们要知道各个图之间的联系。 大家看一下下面的图。 R1 主要代表粘连细胞 R2 主要代表 G2/M 期细胞 R3 主要代表 G0/G1 期细胞 R4 主要代表 s 期细胞 R5 主要代表凋亡细胞 “主要”是因为大家可以看到设的 gate 后各个 gate 中的细胞有位置重叠。 FL2-W/FL2-A 和 FL2-A/COUNT 之间的关系。 这两张图的最大区别在于 G0/G1 期前面的亚 G1 峰。 这个峰就是 FL2-W/FL2-A 图上的左下方的“小尾巴”, 小尾巴越大, SUB-G1 峰就越高。 也就是说凋亡的越多。 当然这需要跟整张图比较, 就是选取 mark 后测量其 gate%。 编辑: famsking 一步一步教你读流式图: 表型 CD4CD8 2008-08-05 00:00 来源: 丁香园 点击次数: 927 关键词: 表型 CD4CD8 流式图 教程 分享到: • 收藏夹 • 腾讯微博 • 新浪微博 • 开心网 大鼠外周血 T 细胞 CD 亚群 CD4/CD8 比值所做的流式分析图 右上角的图片是 CD4和 CD8的双荧光检测。 右下象限是 CD8单阳性, 左上是 CD4单阳, 右上为二者双阳, 左下为双阴。 比例如图。 剩下的二图为 CD4、 CD8直方图。 实际上用刚才的双标也可以看出比例来。 R1 为淋巴细胞群体, 是您的目的细胞群体, 针对这一群细胞进行分析! 一步一步教你读流式图: sub-G1 凋亡图 2008-08-05 00:00 来源: 丁香园 点击次数: 1 851 关键词: 流式图 sub-G1 凋亡图 教程 分享到: • 收藏夹 • 腾讯微博 • 新浪微博 • 开心网 凋亡都比较多, 但遗憾的是与 G1 峰分得不是很开, 因此, Modfit 分析的时候, 会根据结果用统计学 原理将它们分为 Apo 和 G1 , 但这样可能掩盖真正的结果! 建议做 PI 染色的时候, 在 PBS 洗两次后, 加入 PC buffer, 这是一种轻破膜剂, 可以使断裂成小片断的 DNA 出细胞而降低其在 FL2-Ad 上的值, 这样就容易区分 G1 和 APO 了。 凋亡诱导, 左边为对照, 右边为凋亡组 对照很好, cv值不错, 凋亡率控制得也不错! 凋亡非常明显, 而且峰也很漂亮。 唯一的美中不足就是凋亡峰的位移稍低, 如能用 PC buffer 轻破膜, 效果将更漂亮! 请查阅 cnki 中关于 Sub-G1 法测凋亡的关于 PC buffer 的使用方法(作者: 龚建平 关键字: Sub-G1 查) , 将对实验有很大帮助! 细胞周期分析,modifit ,不知凋亡细胞为什么没和 G1 期分开?右图为对照, 左图实验组 作者用的是 muticycle, 所以不太能确定。 但是不管是哪家的软件, 都是按一定的数学模型(公式)结合数据进行模拟, 所以在数据分布不够典型的时候是会产生很大误差的。 就像你的结果, 我根据经验判 断是 modfit 强行进行 subG1 计算, 其实算进去的基本上都不是凋亡细胞, 但是它没有模糊概念, 生硬地套用了 subG1 的模拟方程, 所以才有“subG1 ”的出现。 如果你对 sample 只进行 one cycle 模拟, 结果会不一样的。 建议, 除非 subG1 和 G1 分隔干净利落, 否则不要随便应用 cycle 软件进行模拟, 否则大部分结果是错误的, cycle 软件本质上说适合作周期分析, 作 AP 分析有较为严格的限制。 直接拉水平门就可以了。