DNA的提取问题问:经过近一个周的努力,终于提取出了像样的 DNA,不过还不是十分满意,但已经 能独立进行实验了,不用再“见人就抓,抓住就问”了,呵呵!记得曾经抓过黄清师兄、梁 伟锋师兄、康云师兄、王宝生师兄、杨霞师姐、冬梅、艳艳等,还有一位不知道名字的师兄, 当然老公是必定要抓地,嘿嘿!真心感谢他们对我的耐心指导和帮助!没有他们的出手相助, 我真的心里没底。邱志敬提DNA提的挺好的,向他学习! 同时,丁香园上不知名的朋友给了我很多的实验技巧,现摘录如下以作学习之用: 我现在所提取的植物基因组 DNA 均为黄褐色沉淀,参考了一些文献将实验条件做了相 应修改,但结果不理想,请问有什么有效的方法可以解决此问题吗?多谢! 答:DNA 经离心后沉积在离心管底部时会有一些颜色,大概是很浅的黄褐色,如果蛋 白没有抽提干净,就会呈现出白色,所以我觉得你先跑个胶试试,我觉得没有什么问题。 问:谢谢,我提的DNA沉淀颜色较深,有点接近于棕褐色,最后溶解于TE 后颜色也很深, 不象他们提取的呈透明状,跑琼脂糖凝胶电泳可看到在 20kb 出有一透亮条带,如果去除这些 杂质后不知DNA的量是否会多一点? 答:棕褐色应该是由于多酚类物质氧化所致--可考虑在提取液中添加抗氧化剂和 PVP 来控制,但对你的DNA量不会有什么影响.多酚类的存在可能会影响你的DNA的限制性酶切 效果. 在提取某些植物DNA时总是遇到多糖成分的干扰,尝试了几种方法效果一直不大理想, DNA质量一直不高,哪位高人指点一下如何消除多糖的影响? 不知楼主用的什么方法提取,是SDS 法还是CTAB法。一般来说,SDS 法提取的DNA 会还有较多的多糖,使DNA成胶冻状。而CTAB法提取可基本上除去多糖。如果楼主用的 是SDS 法,可以考虑改用CTAB法试一试。 如果是植物材料本身含糖量比较高,可用以下方法试一试: DNA未溶出之前,先用一些缓冲液洗去多糖。如可用缓冲液: 100mmol/LTris-HCl(pH=8.0)、5mmol/LEDTA 和0.35mol/LSorbitol 洗几次。 使DNA提取液中的多糖先沉淀。在提取液中加入0.35倍体积的无水乙醇,迅速混匀, 多糖会先沉淀。 沉淀DNA 时,使多糖保留在溶液中。如用乙醇沉淀时,在待沉淀溶液中加入 1/2 NH4Ac使终浓度为 10mmol/L 0.5mLDNA液中加 0.125mL4mol/LNaCl 和0.625mL13%PEG8000(冰浴1h)。 多糖和DNA 的共沉淀物进行再分离。如用 TE 缓冲液反复清洗共沉淀物,将清洗液 合并再用醇沉淀 DNA,或将沉淀物溶解后,经琼脂糖电泳,切下 DNA 部分再将胶回收, 或者用多糖水解酶将多糖降解。还有在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2 体积),氯苯可以 与多糖的羟基作用而去除多糖。 上述方法还可组合使用,以达到最佳效果。然而这些方法均会在一定程度上减低 DNA 的提取量;如果材料较少或要求较高,则可考虑用柱层析方法,使用对DNA具有特异性吸 附的树脂来纯化DNA。