上一次推送文章(链接)提到过,免疫组织化学反应的组织准备在很大程度上决定了实验的成功与否。这篇文章详细介绍了5种组织准备的细节及方法。载玻片
高质量的免疫组组化结果需要组织切片与载玻片之间很好地结合,以防止由于组织黏附问题导致的试剂聚集和假染色。商品化的专门用来进行免疫组织化学染色的载波片是经过标准化
包被的。这里将介绍两种方法对常规载波片包被以用于免疫组织化学染色。1、聚左旋赖氨酸(poly-L-lysine)包被玻片法
(1)准备0.1%(w/V)聚左旋赖氨酸水溶液(Sigma P-8920)。
(2)将载玻片浸入溶液中。
(3)室温干燥。
(4)室温保存。
2 APTS包被玻片法
准备含2%(V/V硅烷(Sigma A-3648)的丙酮溶液。将载玻片浸人丙酮中1~5min。将载玻片浸入含2%硅烷的丙酮溶液中1~5min。将载玻片在丙酮溶液中连续洗两次,每次5min。室温干燥并储存。
细胞涂片/离心细胞涂片制备
(1)在硅烷/聚左旋赖氨酸包被的载玻片制备细胞刮片/细胞离心涂片。
(2)室温下干燥30min。
(3)在预冷的、新鲜的丙酮中一20℃固定20min。
(4)室温下风干至少15min。
(5)对细胞刮片/细胞离心涂片染色。
注意
(1) 100%乙醇可代替新鲜丙酮使用;固定剂的选择取决于组织中要染色的目的抗原。
(2)未染色的载玻片可以包被在铝箔中,-20℃保存。当准备染色时:打开铝箔,取出载玻片并恢复至室温,用保存之前相同的固定剂进行后固定至少30s,风干切片,在缓冲液中再水化5min,然后进行染色。
(3)未染色载玻片的稳定性取决于抗原性质;一些抗原很不稳定必须涂片后立刻染色。
冰冻切片
(1)切4个7um厚的未固定的冰冻切片。
(2)将切片置于硅烷/聚左旋赖氨酸包被的载玻片上。
(3)将切片在空气中风干30min。
(4)置于预冷至4℃的新鲜丙酮中,固定20min。
(5)室温风干切片至少15min。
(6)将切片染色。
注意
(1)100%乙醇可替代新鲜丙酮使用;固定剂的选择取决于组织中要染色的目的抗原。
(2)未染色的载玻片可以用铝箔包裹,-20℃保存。当准备染色时:打开铝箔,取