临床研究重庆医学2011年2月牡0誊第5期 荧光原位杂交对乳腺癌HER2基因的检测及临床应用 (1.湖南中医药大学第一附属医院病理科,长沙410007;2.桂林医学院病理科,广西541001)摘要:目的探讨荧光原位杂交法(FIStt)检测乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2(HER2)表达的临床意义。方法 采用FISH和免疫组织化学(IttC)法分别检测28例乳腺癌标本中HER2基因扩增状况和lIER2蛋白表达。结果 在IHC法检 测HER2蛋白表达(++)的22例标本中,FISH检出6例HER2基因扩增,16例无变化。在IIER 2蛋白表达(+++)的6例 标本中,FISH检出5例HER2基因扩增,l例无扩增。结论 对于IHC法初筛为(++)的患者应再进行FISH检测,以确定 HER一2基因的状态,从而确定是否应用曲妥珠单抗治疗。 关键词:乳腺肿瘤;原位杂交,荧光;受体。表皮生长因子基因;免疫组织化学 doi:10.3969/j.issn.1671—8348.2011.05.019 文献标识码:A 文章编号:167卜8348(20"11)05—0460—02 Detection HER2gene situhybridization clinicalapplication breastcancer Fang Yul,Zeng Sien“。Xiao Sher!gJun 2,Mo Wenfa 2(1.Department Pathologic,TheFirst AJfiliated Hospital,Hunan University TraditionalChinese Medicine,Changsha 410007,China;2.Department Pathologic,GuilinMedical University,Guanxi 541001。China) Abstract:Objective To explore clinicalsignificance HER一2gene expression status situhybridization (FISH)in breast cancer.Methods FISH Immunohistochemistry(IHC)wereemployed HER-2gene expres—sion HER一2protein,respectively,in paraffin—embedded tissues specimens from twenty eight patients breastcancer.Results Among 22 patients IHC,6patients were showed HER-2 gene amplification detec— ted 16patients were amplification.Among6patients IHC.5patients were showed ttER一2 gene amplification detected amplification.ConclusionIHC can initialscreening FISHshould HER-2gene.to determine whether select herceptin clinicaltherapy Keywords:breast neoplasms;in situ hybfidization,fluorescence;receptor,epidermal growth factor genes;immunohistochemistry 乳腺癌是女性最常!lL的恶性肿瘤之一,发病率逐年上 升…。人类表皮生长因子受体2(HER2)定位于17号染色体 q12上,具有酪氨酸激酶活性。已有研究证实在20%~30%的 乳腺癌患者中HER2基因或蛋白过表达口。3一。因此.精确评估 HER2基因扩增状况十分重要。目前国际公认的用于检测 HER2的方法有两种,一是免疫组织化学(1ttC)法,二是荧光 原位杂交法(FISH)。IHC法操作简便,价格低廉.目前被广泛 应用.但假阳性较高l。因此需联用FISH检测/j‘能提供准确 的HER2基凶状态,为治疗提供可靠的依据。 1资料与方法 1.1 一般资料 标本来源为本院2008年6月至2009年9月 手术切除的乳腺癌标本28例。经10%中性甲醛固定,常规石 蜡包埋,4 btm切片,HE染色证实为乳腺癌,IttC法榆测 HER2蛋白表达为(十.+)、(+++)的标本进行FIStt检测。 1.2 IHC法 采用EliVision步法进行III(:榆测。tIER2 抗体购自福建迈新牛物公司。HER2阳件物质定佗于细胞膜。 IHC结果评定标准.(一):肿瘤组织细胞膜无棕黄染色或仪少 于10%肿瘤组织细胞膜甓较j;;;棕黄染色;(+):>10%肿瘤组 织的部分细胞膜呈不完整较弱棕黄染色;(++):>10%肿瘤 组织细胞膜呈完整的较弱到I|『等强度棕萤染色;(+++): >10%肿瘤组织细胞膜全层旱高强度棕黄染色。 1.3 FISH经fi蜡切片脱蜡、梯度脱水后,蛋白酶硝化,HCl 浸泡25 min后,蒸馏水洗.梯度乙孵脱水.丙酮周定,56烤 min,加l肛I。探针丁作液于组织切片卜..加盖玻片,中性树胶封片,80变性25 min后于原位杂交仪中杂交,42湿盒 通讯作者,Tel:13607738882;E—ma’il:zse@91mc.edu.cn。 孵育48 h。次日取出标本,72洗涤2 min,再于室温下分别 洗涤1、5 min。暗处自然干燥玻片,用二脒基苯基吲哚(DAPI) 复染.封片。在荧光显微镜下选用特异的单通道滤波片观察癌 细胞核FISH检测结果。橙红色荧光为17号染色体着色,绿 色荧光为HER2基因,细胞核由DAPI复染成蓝色。FISH检 测结果评定标准:在观察癌细胞并进行信号计数时,选择细胞 核大小一致、核的边界完整、DAPI染色均一、细胞核孤立无莺 叠、绿色信号清晰,以及一一般为两个或以上信号点的细胞,随机 计数30个细胞,统计ratio值(30个细胞核中红信号总数与绿 信号总数之比)。ratio<1.8为阴性。提示该样本无HER2基 因;ratio>2.2为阳性,提示样本中HER2基闪发生扩增;ratio 1.8~2.2时,选择增加计数细胞至100个,或重做FISH以判 断最终结果。 1.4统计学处理试验数据采用SPSSl3.0统计软件进行统 计学处理 率的比较采用x2检验,以PO.05)。IHC法检测HER2蛋白表达(++)的 22例标本中,见封3图1A,6例经FISH榆测为IIER2基因扩 增.见封3图2A,16例FISH检测无基因扩增。见封3图2B。 IHC法检测HER2蛋白表达(++)的标本中基冈扩增比例为 27.3%(6/22)。IHC法榆测HER2蛋白表达(+++)的6例 标本中,见封3图1B,5例经FISH榆测为HER2基凶扩增,见 封3图2C,l例FISH检测无基因扩增。IHC法检测HER2蛋 万方数据 重庆医学2011年2月第40卷第5期白表达(+++)的标本中基因扩增比例为83.3%(5/6)。 HER2蛋白IHC法表达强度越高,患者HER2基因扩增的可 能性越大,差异有统计学意义(P