产品编号 P0017 考马斯亮蓝快速染色液 产品名称 考马斯亮蓝快速染色液 包装 250ml 产品简介: ? 考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast Staining Solution)是以考马斯亮蓝G250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性 PAGE等蛋白电泳胶的快速、高灵敏染色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。 ? 本考马斯亮蓝快速染色液是一种无毒,无刺激性气味的高度环保型染色液。普通的常规方法需使用剧毒的甲醇及强刺激 性的乙酸,而碧云天生产的考马斯亮蓝快速染色液则采取全新配方,实现了无毒和无刺激性气味。 ? 本考马斯亮蓝快速染色液只需一小时或更短时间就可以检测到低达100ng的蛋白电泳条带,而常规方法需3小时以上。 ? 本试剂盒可以进行高灵敏染色,最低可以清楚检测到10ng的蛋白电泳条带,参考图1。 蛋白上样量: 10μg 5μg 2μg 1μg 500ng 200ng 100ng 50ng 20ng 10ng 5ng 2ng 1ng 图1. 使用碧云天的考马斯亮蓝快速染色液对不同上样量的BSA蛋白样品用10% SDS-PAGE胶电泳后的两次染色结果。 ? 无需对蛋白和凝胶进行固定,可以不进行脱色,操作更加简单。 ? 本染色液和质谱分析兼容,即经过本染色液染色的蛋白条带或蛋白点可以用于后续的质谱分析。 包装清单: 产品编号 P0017 — 产品名称 考马斯亮蓝快速染色液 说明书 包装 250ml 1份 保存条件: 4℃保存,一年有效。 注意事项: ? 本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。 ? 如果使用微波炉加热,请特别注意避免沸腾。以免因暴沸而导致凝胶碎裂。 ? 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明: 1. 电泳结束后,取胶放入约50-100ml蒸馏水中,在摇床上摇动5分钟,倒弃液体,再重复两次,共洗涤三次。 注:本步骤的目的是为了洗去凝胶中的SDS等干扰物质。如果不能充分去除SDS会导致背景较高,如果胶非常厚,每次的 洗涤时间需适当延长并且洗涤次数也需适当增加。蒸馏水洗涤去除凝胶中的杂质时,如果使用经过加热至接近沸腾的蒸 馏水,每次洗涤1-2分钟即可。 2. 弃蒸馏水,加入适当体积的考马斯亮蓝快速染色液,使染色液能盖住凝胶,且液面至少高出三个胶的厚度为宜,在侧摆 摇床或水平摇床上进行染色。 3. 根据蛋白量的多少,蛋白量大的条带10-30分钟左右会出现,大部分蛋白条带会在1-2小时左右出现。如果希望获得染色灵 敏度更高的结果或希望加快染色进程,可以把凝胶放置在考马斯亮蓝快速染色液中在95-100℃水浴或烘箱中加热或使用 微波炉加热。加热至约95-100℃后,在摇床上进行染色。染色液稍冷或冷至近室温后可以继续同前进行加热和摇床染 色,可以重复2-3次。 注:染色时如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热,可以大大加快染色速度。但加热时宜尽量避免沸腾,以 免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。 4. 染色至看到清晰的目标蛋白条带后即可停止染色。弃染色液,加入适量的蒸馏水,停止染色反应。然后即可拍照记录。 注:通常使用本染色液染色后背景非常低,如果希望获得更加清晰的蛋白条带,可以加入适量的室温蒸馏水进行洗涤。 通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。在4℃蒸馏水中浸泡过夜可以获得背景更低,条带更清晰的条带。在次日对4℃蒸 馏水浸泡过夜的已经进行了染色的凝胶再同前一天一样进行染色和洗涤可以进一步改善染色效果,获得更好的考染蛋白 条带。 常见问题: 1. 无染色条带:可能上样量太少,建议电泳时加适当量的BSA等作为阳性对照。 2. 背景太高:可能杂质没有除尽,建议延长最初的蒸馏水洗涤时间或增加洗涤次数。也可以在完成染色后,把凝胶放置在 蒸馏水中在室温或4℃进行洗涤。在4℃蒸馏水中浸泡过夜,通常可以取得较好的脱色效果。 3. 染色条带的灵敏度不够理想:可以使用考马斯亮蓝快速染色液进行重复染色,重复染色可以改善染色效果。在加热情况 下染色可以显著提高检测灵敏度,另外染色后在室温或4℃用蒸馏水进行脱色也可以显著改善染色的灵敏度。 使用本产品的文献: 1. Liang W, Cheng J, Liu R, Wang JP, Mu JG, Wang QH, Wang HJ, Ma D. Peptide corresponding to the C terminus of tissue factor pathway inhibitor inhibits mesangial cell proliferation and activation in vivo. Peptides. 2009;30(12):2330-6. Epub 2009 Aug 29.