在 15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少 20 分钟),保存存于室温或 4℃冰箱 中。 需要注意的是, 通常所说的浓度 0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度, 而非 Na 离子或 K 离子的浓度,Na 离子和 K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于 免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入 100 u/ml 青霉素和链霉素之后再调 PH、定容、灭菌消毒。 PH H2O NaCl 7.6 1000 8.5 7.4 1000 8.5 2.2 0.2 7.2 1000 8.5 2.2 0.3 7.0 1000 8.5 2.2 0.4 Na2HPO4 2.2 NaH2PO4 0.1 根据经验来看,新鲜配置的 PBS 搅匀后其 PH 值约在 7.2-7.4 之间,可是在温度的 影响下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在经过昼夜的时间后,PH 值会明 显改变(我亲自测过偏酸)。所以做实验的同学可要注意了,PH 值可能会影响实 验结果,甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制 问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的 PBS,如果发生偏酸或偏碱,注意重 新换新液。 PBS 缓冲液 称取 NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g,溶于 900ml 双蒸水中,用盐酸调 pH 值至 7.4,加水定容至 1L,常温保存备用。 PBST 缓冲液 取 300?l Tween-20 加入 PBS 100ml 中,混匀后即刻使用。现用现配。 如果是把所有固体加大十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍稀释,那么,在刚配好 浓缩液时, 在 6.5 左右, PH 明显偏酸。 不能用盐酸调。 虽然可以用氢氧化钠颗粒调, 但是有更方便的方法。 十倍稀释以后,PH 自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取 少量试一试,配好之后再测一次~ PH8.0 的 PBS 配方详细 1. NaCl 137mmol/L, KCl 2.7mmol/L, Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L 2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 滴加浓盐酸将 pH 值调节至 8.0,然后加入去离子水将溶液定容至 1 L。 4. 高温高压灭菌后,室温保存。 注意:上述 PBS Buffer 中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充 1 mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2。 0.05mol/L PBS(磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution,PBS)的配制: 甲液:0.05mol/L Na2HPO4 溶液 :称取磷酸氢二钠 9.465g 7.099g,加蒸 馏水 至 1000ml ; 乙液:0.05mol/L KH2P04 溶液: 称取磷酸二氢钾, 9.07g 6.803g,加蒸馏水至 1000m1。 将甲乙液分装在棕色瓶内,于 4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混 合,即可得所需 pH 的缓冲液,见下表: pH 甲液 ml 乙液 mI 5.29 2.5 97.5 5.59 5.0 95.0 5.91 10.0 90.0 6.24 20.0 80.0 6.47 30.0 70.0 6.64 40.0 60.0 6.81 50.0 50.0 6.98 60.0 40.0 7.17 70.0 30.0 7.38 80.0 20.0 7.73 90.0 10.0 8.04 95.0 5.0 你要配制 pH=6.8 的 PBS,可用甲、乙液各 50ml 混合即可