附:饲料中中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的测定 (附纤维素、木质素的测定) (一)原理 饲料养分的常规测定法中存在的重要缺点之一,是测得饲料的粗纤维与无氮浸出物的 数值不能反映饲料的真实情况。测定时粗纤维不是一种纯化合物,而是几种化合物的混 合 物,其中主要组成是纤维素、半纤维素与木质素。纤维素与半纤维素具有相似的营养价值, 它们的营养价值对反刍家畜较单胃家畜为高。木质素对全部家畜均不能被消化,但用常规 法测定饲料的粗纤维时,饲料中仅有一部分半纤维素和木质素量包括在粗纤维的数值内, 其余部分都被计算在无氮浸出物的数值中,且都被认为与糖和淀粉具有同样的消化性能。 由此可见,常规法测得粗纤维的数值不能全部反映饲料中大部分的不消化成分。 由于上述原因,Van Soest 氏与其伙伴提出测定饲料中中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维 的方法,原理为:植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理,不溶解的残渣为中性洗涤纤维,主 要为细胞壁成分,其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。植物性饲料经酸性洗涤 剂处理,剩余的残渣为酸性洗涤纤维,其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。酸性洗涤纤维 经 72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐,从酸性洗涤纤维值中减去 72%硫酸处理后的 残渣为饲料的纤维素含量。将 72%硫酸处理后的残渣灰化,在灰化过程中逸出的部分为酸 性洗涤木质素(ADL)的含量。 (二)试剂 1.中性洗涤剂(3%十二烷基硫酸钠) 准确称取 18.6g 乙二胺四乙酸二钠和 6.8g 四 硼酸钠均放入 1000mL 刻度烧杯中,加入少量蒸馏水,加热溶解后,再加 30 克十二烷基 硫酸钠和 l0mL 乙二醇乙醚,称取 4.56 克无水磷酸氢二钠置于另一烧杯中,加少量蒸馏水 微热溶解后倾入第一个烧杯中,再转入容量瓶中稀释至 1000mL,此溶液 PH 值在 6.9-7.1 左右(PH 值一般不需要调整)。 2.酸性洗涤剂 (2%十六烷三甲基溴化铵)制备 称取 20g 十六烷三甲基溴化铵溶 于 1000mL2.0 mol·L-1 硫酸溶液中,搅拌溶解,必要时过滤。 3.2.0 mol·L-1 硫酸溶液配制(1N 硫酸) 量取约 27.87 mL 浓硫酸(分析纯,比重 1.84,98%),徐徐加入已装有 500mL 蒸馏水的烧杯中,冷却后注入 1000mL 容量瓶定容, 标定; 4.无水亚硫酸钠 5.丙酮 6.十氢化萘 (三)操作步骤 1。中性洗涤纤维测定步骤 准确称取风干样(通过 40 目)1.0g,置于高型烧杯中,加入中性洗涤剂 100mL 和数 滴十氢化萘(消泡剂)以及 0.5g 无水亚硫酸钠,套上冷凝装置,立即置于电炉上尽快渚 沸(5~10min),溶液沸腾后调节电炉使其保持微沸状态(防止泡沫上升)。经常摇动烧杯, 使样品与溶液充分混合回流 1h。离火冷却 10min,将已知恒重的玻璃坩锅安装在抽滤瓶上, 将残渣全部移入,抽滤并用 2 倍于残渣的沸水冲洗抽滤,直至滤液呈中性反应为止(用蓝 色石蕊试纸检查);用 20mL 丙酮冲洗残渣两次,至流下的丙酮液呈无色为止,将玻璃坩 锅移入 100℃鼓风烘箱中烘 3h,再移入干燥器中冷却 30min 后,称量,直至恒重。 2.酸性洗涤纤维测定步骤 称风干样同上,加入酸性洗涤剂 100mL 和数滴十氢化萘,洗涤测定同“中性”,趁热 用已知恒重玻璃坩锅在抽滤装置上过滤,将残渣团块用玻棒打碎,用 20mL 沸水浸泡 15~30s 后冲洗过滤,反复三次,直至滤液呈中性反应为止(用蓝色石蕊试纸检查)。用少量丙酮 洗涤残渣,反复冲洗滤液至无色后,抽净全部丙酮。取下坩锅烘干、恒重。同中性洗涤纤 维测定步骤。 3。酸性洗涤木质素和酸不溶灰分(AIA)测定 将酸性洗涤纤维加入 72%硫酸,在 20℃消化 3h 后过滤,并冲洗至中性。消化过程中 溶解部分为纤维素,不溶解的残渣为酸性洗涤木质素和酸不溶灰分,将残渣烘干并灼烧灰 化后(500℃马福炉中灼烧 2h 或至坩锅中无炭粒为止,取出玻璃坩锅,放入干燥器中冷却 至恒重)即可得出酸性洗涤木质素和酸不溶灰分的含量。 (四)结果计算 1. NDF(%)的计算式 NDF(%) m1 m2 100% m 式中 m1-----玻璃坩锅和 NDF 的质量(g) m 2-----玻璃坩锅的质量(g) m -------样品的质量(g) 2.ADF(%)的计算式 ADF(%) m1 m2 100% m 式中 m1------玻璃坩锅和 ADF 的质量(g) m 2-----玻璃坩锅的质量(g) m -------样品的质量(g) 3.半纤维素(%)的计算式 半纤维素(%)= NDF(%)—ADF(%) 4.酸性洗涤木质素(ADL)的计算式 ADL(%)=残渣%—灰分(硅酸盐)% 5.酸不溶性灰分(AIA)的计算式 AIA(%)=残渣%—ADL% 6. 纤维素(%)的计算式 纤维素(%)= ADF(%)—(经 27%硫酸处理后的残渣)%