1.温度效应:经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因。孔板的聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。2. 蒸发效应:虽然通常细胞培养箱中都会放置一盘双蒸水以维持培养箱中的湿度,但仍难达到多孔板中的湿度,特别是在培养箱经常开关的情况更是如此。由于位置效应,边缘孔的湿度较中间孔更低,水分挥发的现象就更为严重。这样就容易造成四周培养基的体积会明显少于中间孔,而四个角落的孔尤为严重。