湿法装柱后,经赶气泡,加压压实后,上样。开始洗脱后在柱上出现不规则裂痕,请问大家有遇到这种情况吗?是什么原因呢?大家交流一下吧。
硅胶柱出现断层的原因,我想可能有:
一、洗脱剂没有脱气。特别是室内温度较高时,几相混合的洗脱剂,如果没有超声脱气,其中溶解的空气慢慢释放出来会使色谱柱断裂。
二、换洗脱剂。有些溶剂硅胶膨胀而还有的溶剂使硅胶收缩,洗脱剂梯度变化太大也会使色谱柱断层。
三、如果楼主用了加压装置如液氮,可能是加液时放气太快,气体从下端口冲进,使硅胶分段。这种情况不注意的话最容易导致硅胶断层。
此现象常见,可避免。
举例说明:
石油醚湿法装柱,二氯甲烷溶解样品。装柱后石油醚不要压到硅胶层,留5mm,加入二氯甲烷的样品溶液,这样不会有空气进入,一般不会有裂痕。
万一有气泡或裂痕,用极性最低的溶剂(如乙酸乙酯-石油醚洗脱,就选石油醚)多冲洗,将气泡赶出,再梯度淋洗。只要你的柱子够长,一般不会有多大影响的。
http://www.ionicliquid.org/forum/dispbbs.asp?boardid=19&Id=553
3.柱层析操作中应注意的问题
(1)要控制淋洗剂流出的速度。一般控制流速为1滴/秒。若流速太快,样品在柱中的吸附和溶解过程来不及达到平衡,影响分离效果。若流速太慢,分离时间会拖得太长。有时,样品在柱中停留时间过长,可能促成某些成分发生变化。或流动相在柱中下行速度小于样品的扩散速度,会造成色带加宽、交合甚至根本不能分离。
(2)以下现象会严重影响分离效果,必须尽力避免。
a.色带过宽,界限不清。造成的原因可能是柱的直径与高度比选择不当,或吸附剂、淋洗剂选择不当,或样品在柱中停留时间过长。但更常见的却是在加样时造成的。若在样品溶液加进柱中后,没有打开下部活塞放出淋洗剂使样品溶液降至滤纸片处,即急于加溶剂冲洗柱壁,造成样品溶液大幅度稀释,或过早加大量溶剂淋洗,必然会造成色带过宽。所以溶样时一定要使用尽可能少的溶剂,加样时一定要避免样品溶液的稀释。
b.色带倾斜。正常情况下柱中的色带应是水平的,而倾斜的色带,在前一个色带尚未完全流出时,后面色带的前沿已开始流出,所以不能接收到纯粹的单一组分。造成色带倾斜的原因是吸附剂的顶面装得倾斜,或柱身安装得不垂直。
c.气