鉴别
1、取本品适量,加0.5%三氯化铁溶液2-3滴,摇匀,再加0.5%铁氰化钾溶液2-3滴,摇匀,显蓝绿色。
2、取本品适量,加乙醇制成每1ml中约含葛根素10μg的溶液,照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定,在250nm的波长处有最大吸收。
检查
1、pH值:应为3.5-5.5(通则0631)。
2、溶液的颜色:取本品,与黄色2号标准比色液(通则0901第一法)比较,不得更深。
3、有关物质:取本品,用溶剂[甲醇-0.1%枸橼酸溶液(25:75)]稀释制成每1ml中约含葛根素0.5mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取适量,用溶剂定量稀释制成每1ml中约含葛根素5μg的溶液,作为对照溶液。另取葛根素和咖啡因各适量,加溶剂溶解并稀释制成每1ml中分别含葛根素50μg和咖啡因150μg的混合溶液,作为系统适用性溶液。照高效液相色谱法(通则0512)测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm,5μm);检测波长为250nm;以0.1%枸橼酸溶液为流动相A,以甲醇为流动相B,按下表进行梯度洗脱。取系统适用性溶液10μl注入液相色谱仪,葛根素峰的保留时间约为14分钟,葛根素峰与咖啡因峰的分离度应大于4.0,精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰,在相对保留时间约为2.0和2.2处的色谱峰为8-(β-D-呋喃葡萄糖-1-基)-4',7-二羟基异黄酮(杂质I)峰和8-(α-D-呋喃葡萄糖-1-基)-4',7-二羟基异黄酮(杂质II)峰(必要时用如下方法确认:取葛根素对照品20mg,置20ml顶空瓶中,加水10ml,水浴加热使溶解,密封,于121℃高压蒸汽破坏20分钟,放冷,量取5ml,置20ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,取10μl,注入液相色谱仪,在主峰后应有两个明显的色谱峰,相对保留时间约为2.0和2.2),杂质I和杂质II的峰面积均不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍(1.5%),其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍(3.0%)。
时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)
4、丙二醇:精密量取本品1ml,置100ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml