http://www.solarbio.com 常规考马斯亮蓝染色液使用说明 货号:P1310 规格:100mL/500mL 保存:室温保存,有效期 12 个月。 产品说明: 考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝 R250 为染料可用 于 SDS-PAGE 或非变性 PAGE 等蛋白电泳胶的常规染色或 Western 转膜后 PAGE 胶上残余蛋白 的检测。采用常规染色方法需至少 1h,采用快速染色方法一般数分钟即可。本染色液经过 改良,不含有毒的甲醇,但含有刺激性气味的乙酸。 自备材料: 水平摇床或侧摆摇床、蒸馏水、20%甘油水溶液、(可选)加热装置 操作步骤(仅供参考): (一) 常规染色脱色方法 1、 PAGE 电泳结束后取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。 2、 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动, 室温染色 1 小时或更长时间。 具体的染色时间取 决于凝胶的厚度和染色时的温度。 凝胶较厚, 温度较低, 则染色时间宜适当延长。 凝胶较薄, 温度较高,则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在 染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。染色 2~4 个小时或更长时间不会对最 终的染色效果产生负面影响。 3、 倒出染色液。染色液可以回收重复使用 2~3 次。 4、 加入适量脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。推荐脱色液的配方是:40%乙醇,10% 乙酸,50%蒸馏水。 http://www.solarbio.com 5、 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色 4~24h。期间更换脱色液 2~4 次,直 至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色 1~ 2h 后即可出现。 6、 完成脱色后把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如 需避免溶涨,可以把胶保存在含 20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。 (二) 快速染色脱色方法 1、 PAGE 电泳结束后取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸 腾,立即停止加热。通常对于胶浓度大于 10%的胶比较坚韧,在发生煮沸时不易破损;对 于胶浓度小于 10%的胶,宜尽量避免煮沸,以免出现胶碎裂的情况。 2、 随后在染色液温度较高的情况下,在室温摇床上摇动 5~10min。 3、 倒出染色液。染色液可以回收重复使用 2~3 次。 4、 加入适量脱色液,确保染色液可以充分覆盖凝胶。推荐脱色液的配方是:40%乙醇,10% 乙酸,50%蒸馏水。 5、 微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。 6、 随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动 5~10min。此时通常可以观察到比较 清楚的蛋白条带。 7、 更换新鲜的脱色液,重复步骤 5 和步骤 6,直至蓝色背景基本上全部被脱去,蛋白条带 染色效果达到预期。 8、 完成脱色后,把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。 如需避免溶涨,可以把胶保存在含 20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。 注意事项: 1、 染色时,如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热,可以大大加快染色速度。 http://www.solarbio.com 但加热时宜尽量避免沸腾,以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。 2、 脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸, 可以使部分染料吸附在吸水纸上, 加快脱色。 脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。 3、 如果希望染色的背景更低, 希望获得更加清晰的蛋白条带, 可以加入适量的室温蒸馏水 进行洗涤。通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。在 4℃蒸馏水中浸泡过夜可以获得背景更 低,条带更清晰的条带。在次日对 4℃蒸馏水浸泡过夜的已经进行了染色的凝胶再同前一天 一样进行染色和洗涤可以进一步改善染色效果,获得更好的考染蛋白条带。 4、 常规染色脱色方法耗时较长,但检测灵敏度更高,染色效果更加稳定。