选择出发菌株时应考虑出发菌株的稳定性,尽量挑选纯系菌株,以排除异核体与异质体菌株。出发菌株对诱变因素敏感可以提高突变频率,菌株的生理状态及不同的生长发育时间与诱变效应密切相关,一般细菌处理其营养体,真菌和放线菌处理它们的孢子,并以对数生长期为佳。翔实的菌种来源资料,应能详细说明从野生菌种到生产菌株进行了那些处理,以便从源头掌握产品质量信息。
3、菌种的知识产权保护
得到的工程菌应具备一定的遗传稳定性,需提供传代10代以上的记录和研究资料,说明菌株在多次传代后,生物学特征以及目标物的产生量等是否发生改变、是否发生了变异,以确保菌种在生产中不会发生回复突变;同时,工程菌这种渊源关系的把握不仅便于从源头掌控药品质量,而且对于知识产权的保护亦为一种有效措施。
比如,采用某机构的标准菌株为出发菌,经一系列诱变、选育得到工程菌生产目标物,但很多机构的标准菌株仅供科学研究使用,如用于商业用途须经许可,否则,将会引发知识产权的法律纠纷,同时,这种做法也不符合菌种筛选的习惯做法;以野生菌为出发菌得到能产生目标物的工程菌在过去几十年中一致是人们发现新目标物的主要途径,在菌种选育过程中获得其遗传标记,对日后申请知识产权保护、避免法律纠纷具有重要意义,需引起相关关注。
4、菌种的鉴定
(1)菌种鉴定原因
生产菌株是生物合成的主要基础,应能保证在特定条件下能够稳定产生目标物,同时还要具备产量高、遗传稳定和容易培养等特点。工程菌既是药物制备过程的微型(生物)反应器,又是参与反应的原材料,因而对于药品质量的影响是显而易见的。要求提交菌种鉴定资料,主要目的是判断菌种的可靠性和特异性,以便从源头上把握产品的质量信息,确保拟定的制备工艺能够始终如一地生产出目标产品。
(2)菌种鉴定及申报资料的要求
提供的菌种鉴定资料应能准确、全面、特异性地把握其特征,有些申报资料仅提供了菌株的形态特征,难以确定生产菌的种属特征。目前的菌种的分类检定主要依据细菌的形态学、代谢产物、酶活性和表面抗原等表型特征,这些方法能对菌种进行初步分类。
随着分子生物学的发展,出现了多种对细菌分类、鉴定的DNA 技术,因此,需要提供其形态特征、培养特征、生理生化反应、目标物的胞内胞外含量数据和细胞壁化学组分的研究信息,以确定生产菌的种属,并结合菌种特点,采用DNA技术,提供专属性能