1.1 初选材料200 例乳腺癌病例中免疫组化结果为(-)和(+)的病理切片样本。 1.3 研究方法 1.3.1 免疫组化法 200 例乳腺癌患者活体标本经取材制成蜡块,将其切成厚度4um 切片,经温箱80烘烤15 分钟后,二甲苯,酒精脱蜡,EDTA(PH9.0)修复液修复,滴加丹麦Dako 公司提供CerbB-2 一抗工作液常温孵育30 分钟后经BUFFER 溶液反复冲洗3 次以上加入由丹麦Dako 公司提供 的二抗工作液孵育20 分钟后再经BUFFER 溶液冲洗3 次以上加入由丹麦Dako 公司提供DAB 工作液进行10 分钟显色,最后回收DAB 试剂,BUFFER 溶液及去离子水冲洗进行苏木素复染 。在常规显微镜下将观察到检测结果,记录最终检测结果,后与荧光原位杂交法检测结果做对比。 1.3.2 荧光原位杂交法 选择结果(++),(+++)的病例另切片,经80烤箱烘烤15 分钟,二甲苯,酒精脱 蜡,后用酸性亚硫酸钠处理组织标本30 分钟,加入消化酶5~10 分钟后SSC 洗液洗片3 上,后经甲酰胺溶液中变性5分钟,脱水干燥,加入由安必平公司提供的PathVysion Her-2 探针于杂交湿盒内42过夜杂交,最后经DAPI 复染制得,再经荧光显微镜下观察获得结果, 记录最终检测结果,后与荧光原位杂交法检测结果做对比 1.4结果判断 1.4.1 免疫组化结果判断 根据我国通用标准,阳性表达部位位于肿瘤细胞薄膜其可将结果分为:常规显微镜下 肿瘤细胞细胞膜染色或小于10%为(-);常规显微镜下肿瘤细胞细胞膜大于10%部分染色 为(+);常规显微镜下肿瘤细胞细胞膜大于10%染色为(++);常规显微镜下肿瘤细胞细 胞膜大于 10%完全染色为(+++)。一般以(-)和(+)作为阴性,以(++)和(+++)为 阳性。 1.4.2 荧光原位杂交结果判断 在荧光显微镜下17 号染色体着丝粒位于核内显示绿色荧光信号,Her-2 基因位于核内 显示红色荧光信号。