一、琼脂介绍
琼脂是由植物中提取的一种多糖,主要来源于海生藻类植物。在微生物培养基中,琼脂一般只做为凝固剂使用,流体状培养基中琼脂的添加量一般为0.5-2g/L(琼脂使培养基具有一定黏度,阻止液体对流,常用于厌氧菌的培养),半固体培养基中琼脂的添加量一般为3.5-4g/L(常用于菌种保存、动力试验等),植物组织培养基中琼脂的添加量一般为5-10g/L,固体培养基中琼脂的添加量一般为12-15g/L。
琼脂粉一般为白色、淡黄色或淡灰色粉末状,在冷水中不溶解,加热煮沸或高压灭菌可使琼脂溶解(多数琼脂的熔点在90℃左右),冷却后可凝成固态(多数琼脂的凝固点在40℃左右),反复加热和冷却虽然可以使琼脂在液态和固态多次转换,但琼脂的凝胶强度会越来越低。
二、琼脂培养基的制备和使用方法
(1)按照培养基标签,称取适量培养基干粉溶解于纯化水中,加热煮沸至琼脂完全溶解,分装试管或锥形瓶;
(2)将分装后的培养基置于规定的条件下进行灭菌处理(加热灭菌的培养基可反复煮沸4-6次至培养基完全溶解,倾入平皿中制成平板使用);
(3)灭菌结束后,待培养基冷却至50℃左右,可置于47-50℃水浴保温(可根据实际培养基凝固温度适当提高水浴温度),放置时间一般不应超过4小时;
(4)临用前,加入相应的添加剂成分,摇匀后倾入平板,凝固后备用;或制成斜面、倾注使用等。
三、注意事项
(1)溶解干粉时,建议水温在40℃以下,最高不超过60℃。琼脂在遇到热水时,表面易吸水变硬,结成硬块,不利于分散溶解。因此在进行干粉溶解时,宜用冷水,并不停搅拌至分散均匀无团块,再进行加热处理;
(2)灭菌前需进行加热煮沸使琼脂完全溶解,分散均匀,方可进行分装试管或锥形瓶,否则分装后可能出现琼脂分布不均,凝固性不一;灭菌前的加热煮沸溶解同时有助于加快高压灭菌过程的热穿透,提高灭菌效果,降低灭菌失败的几率;
(3)已凝固的培养基不可以再次高温高压灭菌。若培养基内成分较稳定,可重新沸水浴溶化一次使用;
(4)需添加抗生素或其他不稳定成分的培养基,需在临用前,待培养基冷却至50-55℃时加入,过早或过热时加入这些成分,易导致不稳定成分分解,降低培养基使用效果;
(5)已凝固的培养基不可反复多次加热溶化使用。反复加热易使培养基内营养成分分解,琼脂的凝胶强