琼脂糖凝胶电泳是实验室常用的技术之一,广泛运用于DNA与RNA的鉴定和分离。实验操作较为简单,主要步骤包括:
(1)样品准备:在核酸样品(RNA或者DNA)中加入电泳上样缓冲液,常用的如Gel Loading Dye, Purple (6x),即5份样品中加入1份缓冲液;
(2)制胶:称取1g琼脂糖,加入100ml 的TAE(1x)或者TBE(1x), 配制成1%的琼脂糖,使用微波炉加热数分钟使琼脂糖完全融化,加入10μl CelRed, 混匀后倒入制胶模具,插上适宜孔径的梳子,待胶凝固后,拔出梳子,放入含TAE(1x)或者TBE(1x)Buffer的电泳槽;注意:TAE使用范围较TBE更为广泛,要进行胶回收通常使用TAE,但TAE缓冲能力低,不宜进行长时间电泳。相比之下,TBE中离子强度高,缓冲能力好,可维持长时间电泳,若DNA大小在1000bp以内,且不进行胶回收,则选用TBE缓冲液更佳。
(3)电泳:(2)中的Buffer应完全浸没琼脂糖凝胶,在上样孔中加入Marker和样品,120V电泳(通常电泳时间在半小时以内)。注意,上样孔应在负极同侧。
(4)显像:将电泳后的凝胶进行紫外成像,拍照记录。
(5)胶回收,根据需要选择。
好了,以上是对琼脂糖凝胶电泳的简要介绍,如有缺漏或错误,欢迎批评指正!