缓冲液起作用的原理主要在磷酸一氢根离子,磷酸二氢根离子的电离,这两种离子既能水解也能电离,水解时与水分子中的一个氢离子结合,水分子中的氢氧根离子多余使溶液显弱碱性,电离时离子的氢离子被电离出来使溶液显弱碱性。当向缓冲液中加入少量酸溶液,电离大于水解,保持溶液PH值稳定,当向缓冲液中加入少量碱溶液,水解大于电离,保持溶液PH值稳定。
由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广,所以pbs缓冲液的应用比别的溶液次数多范围广。这也是pbs缓冲液最明显的特点。一般的生理盐水呈中性,不能调整保证PH值的稳定不变,活性物质不能保证其在最适PH值条件下参与反应,而蒸馏水不具有盐平衡能力,这会使得生物蛋白被破坏,所以既能平衡PH值,又能保持盐平衡,特点明显,作用强大,使用pbs缓冲液是首选。
pbs缓冲液的主要成分很简单,配置方法也很简单,1L的pbs缓冲液需要0.27g的磷酸二氢钾(KH2PO4),1.42g的磷酸氢二钠(Na2HPO4),8g的氯化钠(NaCl),0.2g的氯化钾(KCl),加入蒸馏水充分搅拌溶解,最后定容到1L便可以了。