㈠ 凝胶色谱法(分配色谱法):
1、概念:根据被分离蛋白质的( ),利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,来分离蛋白质的有效方法。
2、原理:当不同的蛋白质通过凝胶时,相对( )的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程( ),移动速度( ),而( )的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在( )移动,路程( ),移动速度( ),相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
3、具体过程:
A. 的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒内部而被滞留; 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面,在了里之间迅速通过。
B. (1) 混合物上柱;
(2)洗脱开始, 的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内; 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外;
(3) 的蛋白质被滞留; 的蛋白质被向下移动。
(4) 不同的蛋白质分子完全分开;
(5) 的蛋白质行程较短,已从 中洗脱出来, 的蛋白质还在行进中。
㈡ 缓冲溶液:
1、概念:在一定的范围内,能对抗外来少量强酸、强碱或 不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用,具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。
2、作用:能够抵制( )的对溶液的( )的影响,维持PH基本不变。
3、缓冲溶液的配制
通常由( )种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的( )就可以制得( )使用的缓冲液。
3.电泳
电泳是指 。许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有可解离的基团,在一定的pH下,这些基团会带上 。在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。电泳利用了待分离样品中各分子 以及分子本身的 、 的不同,使带电分子产生不同的 ,从而实现样品中各种分子的分离。
两种常用的电泳方法是 和 ,在测定蛋白质分子量时通常使用