典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色,圆形,边缘整齐,表面光滑湿润,常具有金属光泽,也有的呈　紫黑色,不带或略带金属光泽,或粉红色,中心较深的菌落。取疑似菌落1~2个作革兰氏镜检,同时接　种乳糖发酵管,置35　℃±2　℃恒温箱培养24　h,观察产气情况。凡乳糖胆盐发酵管产酸产气,乳糖发酵　管产酸产气,在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落,革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌,可报告为检出大肠杆　菌。　C.4　物体表面采样检测　C.4.1　采样方法　将5　cm×5　cm灭菌规格板放在被检物体表面,　用浸有无菌0.03　mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液　的棉拭子1支,在规格板内横竖往返涂擦各五次,拭子与物体表面呈30°,并随之转动拭子,连续采样4　个规格板面积,共100　cm2　,剪去手接触部位,将棉拭子放入装有10　mL采样液的试管内送检。如被检物　体表面使用消毒剂,采样液中应含相应中和剂。如被检物体表面积<100　cm2　取全部面积,不规则物体则　采用棉拭子直接涂擦物体采样,并对采样面积进行估算。　C.4.2　检测方法　将采样管振荡80次,取不同稀释倍数的洗脱液1　mL接种无菌平皿内,每个样本平行接种两个平皿,　将冷至40　℃~45　℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15　mL~20　mL,36　℃±1　℃恒温箱培养48　h,计数平　板上细菌菌落数。。　DB×　14　C.4.3　结果计算　按照公式(B.3)计算:　S　k　N　y　\uf0b4　\uf03d　3　B.3)　式中:　3　y　——物体表面细菌菌落总数,CFU/cm2　;　N　——平板平均细菌菌落数,CFU;　k　——稀释倍数;　S　——采样面积,cm2　。　C.5　餐(饮)具采样检测　C.5.1　采样方法　筷子:　以5根筷子为一件样品。　将5根筷子的下段　(进口端)　5　cm处　(长5　cm×周长2　cm×5根,　50　cm2)　,　置10　mL灭菌0.03　mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水大试管中,充分振荡20次后,移出筷子,视具体情况,　5根筷子可分别振荡。或用浸有无菌0.03　mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水的棉拭子1支,　分别在5根筷子的　下段(进口端)5　cm处表面范围均匀涂擦3次后,剪去手接触部位,将棉拭子放入装有10　mL相应液体　培养基的试管内送检。　其他餐(饮)具:用浸有0.03　mol/L磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的棉拭子1