影响层析柱整体渗透速度分布不均,导致色素带不是整齐的环状色素带,进而增长分离各色素的时间。
如何避免:
应在装填层析柱前用适量的丙酮润洗一下,后在装入氧化铝时应边加边敲打层析柱使氧化铝殷实,然后用真空抽滤方法,用乙醚进行抽滤至无气泡就行。
层析柱的高径比如何影响树脂分离效果:
层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外, 直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。