孕酮 1 包被缓冲液, (1)碳酸盐缓冲液(PH9.6 +0.2 0.05M) 《激素酶免疫测定技术》石老师编 著Na2CO3 ???? 1.59g NaHCO3 2.93g 加蒸馏水至 1000ml。 (2)tris 缓冲液(0.05mol/L)50ml 0.1mol/L (Tris)溶液与 x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后,加水稀释至 100ml 《酶 免疫测定技术》杨立国等编著 各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 所需 pH 值(25℃) 0.1mol/L HCl 的体积 7.1 45.7 7.2 44.7 7.3 43.4 7.4 42.0 7.5 40.3 7.6 38.5 7.7 36.6 7.8 34.5 7.9 32.0 8.0 29.2 8. 1 26.2 8.2 22.9 8.3 19.9 8.4 17.2 8.5 14.7 8.6 12.4 8.7 10.3 8.8 8.5 8.9 7.0 某一特定 pH 值的 0.05mol/L Tris 缓冲液的配制: 50ml 0.1mol/L Tris 碱溶液 将 与上表所示相应体积(单位:ml)的0.1ml/L HCl 混合,加水将体积调至 100ml 0.1mol/L 盐酸的配置: 买来的浓盐酸是 12 mol/L 的,以配制 1L 0.1mol/L 的盐酸为例: 先用量筒量取 8.3 mL 的浓盐酸倒入容量瓶, 然后将溶液加蒸馏水稀释至体积为 1 L, 此时的 溶液就是 0.1mol/L 的盐酸。 0.1mol/Ltris 的配置:0.1 mol/L 溶液为 12.114 g/L 则 配制 600mlTris 缓冲液的方法: 三羟甲基氨基甲烷: 3.6g 浓盐酸: 2.09ml 3)0.02mol/L 磷酸盐缓冲液(pH7.4) 磷酸二氢钾 0.2g 磷酸氢二钠 2.90g 氯化钠 8g 加去离子水定容到 1000ml。 2 洗涤缓冲液(pH7.4 0.05%Tween-20 0.15mol/L) 0.5ml 《激素酶免疫测定技术》石老师编著 加在 PBS 缓冲液 1000ml 中。 PBS 缓冲液: KH2PO4 Na2HPO4·12H2O NaCl KCl 加蒸馏水至 1000ml。 0.2g 2.9g 8.0g 0.2g 3 测定缓冲液(Ph7.0 含0.87\ufe6aNaCl 和0.1\ufe6aBSA 的0.1M 磷酸缓冲液)用于标 准孕酮,孕酮酶标物及奶样的稀释。 Na2HPO4·12H2O 21.85g NaH2PO4·2H2O 6.08g NaCl 8.70g BSA 1.00g 溶于 1000mL 蒸馏水中 《激素酶免疫测定技术》石老师编著 4 封闭缓冲液 牛血清白蛋白(BSA) 2% 2g (或5%脱脂奶粉)加洗涤缓冲液 100 ml。 0.05mol/L 碳酸盐缓冲液(pH9.6)+2.0%BSA 2.0gBSA 加配好的 0.05mol/L 碳酸盐缓冲液溶解定量至 100ml 5 底物缓冲液(pH5.4)磷酸盐-柠檬酸缓冲液 0.2M Na2HPO4(无水 28.4g/L,带12 结晶水 71.7g/L) 取25.7ml 0.1M 柠檬酸(无水 19.2g/L,带1结晶水 21.01g/L) 取24.3ml 加蒸馏水至 100ml。 或 柠檬酸(C6H8O7·H2O) Na2HPO4·12H2O 0.47g 2.00g 6(1) TMB(四甲基联苯胺)显色液(蓝色) A 液(3,3’ ,5,5’-四甲基联苯胺,TMB):称取 TMB20mg 溶于 10ml 无水乙 醇中,完全溶解后,加双蒸水至 100ml。 B 液(0.1mol/L 柠檬酸-0.2mol/L 磷酸氢二钠缓冲液,pH5.0-5.4): 称取Na2HPO4·12H2O14.34g,柠檬酸 1.87g 溶于 180ml 双蒸水,加0.75%过氧化氢尿 素1.28ml,定容至 200ml,调pH 至5.0-5.4。 将A液和 B 液按 1:l 混合后即成 TMB-过氧化氢尿素应用液 或TMB(2mg/ml 水) 底物缓冲液 30% H2O2 总体积 1ml。 (2)OPD(邻苯二胺)显色液(黄棕色) (现配避光) OPD(干粉) 0.004g 底物缓冲液 10ml 30% H2O2 0.015ml 总体积 10ml。 (3)TMBS 底物液(用于显色) 《激素酶免疫测定技术》石老师编著 10mg 四甲基联苯胺硫酸盐(TMBS)的二甲基亚砜溶液,用底物缓冲液 配成 0.2mg/ml 的TMBS 底物液。用前加 H2O2 溶液 30\ufe6a左右。 0.05ml 0.95ml 0.001ml 7 终止液 2mol/LH2SO4 用于终止反应 在178.3ml 水中,逐滴加入浓硫酸(18M,约98%)21.7ml,边加边摇。 (浓H2SO4:蒸馏水=1:9)