人绒毛膜促性腺激素(HCG)稀 释经验分享和临床应用介绍 郑州金域生化发光室 李利娟 概述 ? ? ? 人绒毛膜促性腺激素(HCG)的简单介绍 人绒毛膜促性腺激素(HCG)的定量检测 人绒毛膜促性腺激素(HCG)的临床应用 关于人绒毛膜促性腺激素(HCG) HCG是由两个非共价键相连的肽链组成的糖蛋 白激素。其单个亚基不具有生物活性,当连接 成完整化合物时始具活性,分子量约为 4.7万。 HCGα亚单位的氨基酸排列与黄体生成素(LH) α亚单位相似,故用完整的抗HCG分子的抗体测 定HCG时与LH间有免疫交叉反应。但它们的β 亚 单位各不相同。因此为避免交叉反应,目前 均采用抗β-HCG单克隆抗体进持特异的HCG检 查,近年来还有报道采用抗β- HCG羧基末端肽 单克隆抗体以进一步提高检测的敏感性和特异 性。 HCG与其它激素的区别 ? ? HCG与LH、FSH、TSH有一个相同的α亚基 和一个不同的β亚基。 LH的β亚基含121个氨基酸,HCG的β亚基相 当于在LH的β亚基的C末端延伸了24个氨基 酸,共有145个氨基酸。 HCG的检测 ? ? ? 最初为胶体金法进行定性检测(试纸条定性) 上世纪九十年代,使用放射免疫法 目前主流使用化学发光、电化学发光(贝克曼 库尔特Access,雅培Axsym,德普DPC系列,罗 氏Elecsys,强生Eci) 定性检测局限 ? ? ? ? 定性检测的应用与局限 1、由于是定性的方法也就是说只是给出阳性阴性 的结果,而不能给出正确的数值。因此在用于判 定其它疾病方面用定量检测血清HCG来代替。 2、由于检测者可能是取随机尿液检测,就有可能 在妊娠早期出现假阴性的结果。 3、一些与HCG有相同或相适片断的激素可能会与 尿试纸条上的抗体结合而造成假阳性。如黄体生 成素(LH)、某些前列腺素、某些激素类避孕药 定量检测 ? 放射免疫分析由于其灵敏度及稳定性不如 现在的化学发光也已被淘汰。 (电)化学发光检测 (电)化学发光检测相比较放射免疫分析灵 敏度,准确度,稳定性及线性范围均有明 显的优势,但是由于临床所需检测HCG范 围极广,且由于免疫检测钩状效应的存在 使得(电)化学发光检测HCG检测仍然存 在一定的局限。在日常检测中我们通过利 用HCG试纸条联合应用达到节约试剂的目 的,同时可以有效避免钩状效应的出现。 钩状效应 ? 钩状效应是指免疫检测中由于抗原、抗体浓度比例不合适 而致检测结果呈假阴性的现象。1929年Heidelberger利用等 量抗体检测浓度递增抗原,当抗原浓度较低,抗体浓度相 对较高时,沉淀反应不明显;当抗原浓度增加到与抗体浓 度比例合适时,沉淀反应明显;继续增加抗原浓度时,沉 淀反应反而减弱。据此绘出双相应答曲线,曲线高峰区域 ,抗体、抗原浓度呈最适比,沉淀反应明显,称等价带。 高峰区域左侧,由于抗体浓度过高,沉淀反应不明显,称 前带;高峰区域右侧。由于抗原浓度过高,沉淀反应也不 明显,称后带。抗体浓度过高所致结果称前带现象,抗原 浓度过高所致结果称后带现象,统称为带现象。1977年 Green把此现象称为钩状效应(hook effect),包括了前后 带现象。 定量检测HCG现状 ? 在HCG的定量检测中经常会遇到一些高值标 本,超过仪器的分析范围,只能报告:>线性。 而临床要求检验科提供准确的检验结果,以便采 取适当的治疗措施。为了避免盲目选择稀释倍数 ,造成不必要的试剂浪费和延长检验时间。我们 发现可以借助HCG试纸条先定性检测血HCG,根 据检测带(以下简称T带)出现或不出现的时间和 颜色的深浅,经过与质控带(以下简称C带)比较 来选择稀释倍数,从而使超过仪器分析范围的高 值标本尽快地、并尽可能地一次就报告准确结果 。 定量检测HCG现状 ? 由于HCG在体内的变化很快,个体差异极大。而且在妊娠期 的不同时间(平均2.2天,HCG上翻一倍)HCG水平差异极大 。特别是对于葡萄胎,恶性葡萄胎,绒毛膜癌等疾病,血清 HCG极高。这样就有一些极高值的HCG标本,无法准确报告 结果。但临床又要求一个准确的检验结果,以便采取适当的 治疗方法。这样,有的实验室盲目地选择稀释倍数,必定浪 费试剂和时间。如果稀释倍数选择太小,稀释后仍大于仪器 分析范围,必然要试着增加稀释倍数后重新测定。