实验二 玻璃器皿的清洗,包扎及灭菌 一、目的要求 1、学习并掌握玻璃器皿的清洗,包扎方法 2、学习并掌握玻璃器皿灭菌的方法。 二、实验原理及操作 玻璃器皿一般要求硬质玻璃,才能承受 高温和短暂灼烧而不致破裂; 玻璃器皿的游离碱含量要少,否则会影 响培养基的酸碱度; 玻璃器皿的形状和包装方法要求能防止 污染杂菌为准; 洗涤玻璃器皿方法不当会影响实验结果 1、玻璃器皿的清洗方法 (1)、新购的玻璃器皿 首先浸泡于1~2%的盐酸或洗涤液中数 小时,最后用流水冲净。 (2)、使用过的玻璃器皿的清洗方法 试管、培养皿、等 可用瓶刷及去污粉刷 洗然后自来水冲洗干净。 若内壁水均匀分布成一薄层而不出现水珠, 为油污完全洗净。否则,再浸泡数小时。 装有固体培养基的器皿,应先将其刮去,再洗涤 带菌的先浸在2%煤酚皂溶液或0.25%新洁尔 灭消毒液内24h或煮沸0.5h,再洗涤 带病原菌的先高压蒸汽灭菌,然后将培养 物倒去,再进行洗涤 玻璃吸管 立即浸泡在自来水中,免得干燥后难以冲洗 干净,待实验结束后集中冲洗 若吸管顶部塞有棉花,则先用水将棉花冲 出,再洗涤 吸过微生物培养物的吸管应立即浸泡在盛有 2%的煤酚皂溶液或 0.25%新洁尔灭消毒液 内,24h后方可取出冲洗 吸管内部如有油垢,同样应先在洗涤液中 浸泡数小时,然后冲洗 载玻片与盖玻片 若滴加有香柏油,先用邹文纸擦去或浸在二甲 苯里摇晃几次,再在肥皂水中煮沸5~15min 用软纸或脱脂棉花擦拭,立即冲洗,然后在稀 洗涤液中浸泡0.5~2h,自来水冲洗,最后用 蒸馏水换洗几次,干后浸于95%乙醇中保存。 使用时在火焰上烧去乙醇 检查过活菌的先2%煤酚皂溶液或0.25%的 新洁尔灭溶液中浸泡24h,然后按上述洗 涤和保存。 2 、空玻璃器皿的包装 (1) 、培养皿的包装 5~8套,旧报纸包装,干热或湿热灭菌 若放入金属桶内进行干热灭菌,则不 必纸包 (2) 、吸管的包装 粗头顶端约0.5cm处塞1.5cm长的棉花, 报纸条包装每只吸管,与报纸约呈45°, 并将左端多余的部分覆折在吸管上,再将 整根吸管卷入报纸,有段多余的纸条打一 小结。再用大报纸包装单只吸管,干热灭 菌? 报纸条包装好的许多单只吸管,也可装入 金属筒中干热灭菌。若一次灭菌的吸管可 一次用完,也可将玻璃吸管直接放入金属 筒内,管尖朝筒底,粗端在筒口,干热灭 菌。使用时,筒横卧,手持粗端取用 (3) 、试管和三角烧瓶的包装 洗净干燥后的试管和三角烧瓶,管口和 瓶口塞棉花塞。许多试管装入铁丝筐内, 再用大张报纸或牛皮纸捆扎,干热或湿热 灭菌。三角烧瓶再用报纸或牛皮纸包扎, 细线捆之 附:棉塞的制作 棉塞的作用 防止杂菌污染 保证通气良好 棉塞:加塞时,1/3在试管口外,2/3在试管 口内。如图2-2所示。做棉塞的棉花要选 纤维较长的,一般不用脱脂棉做棉塞 通气塞:几层纱布(一般8层)相互重叠,或两 层纱布间均匀铺一层棉花而成 3、消毒与灭菌 ? 消毒:一般是消灭病原菌和有害微生物的 营养体而言 灭菌:则是消灭一切微生物的营养体,芽 孢和孢子 ? ? ? 分类: 加热法—干热灭菌,湿热灭菌 过滤除菌 辐射灭菌 化学药品灭菌 掌握各类灭菌原理 步骤:高压蒸汽灭菌 此法是将物品放在密闭的高压蒸汽锅内0.1MPa, 121℃保持15~30min进行灭菌。时间长短可根据 灭菌物品和数量的不同而有所不同,以达到彻底 灭菌为准。这种方法适用于工作服\ufe51橡胶物品\ufe51 培养基的灭菌,也可用于玻璃器皿的灭菌。 高压蒸汽消毒器高 压蒸汽消毒器(干热灭菌) (1)将培养皿、吸管等玻璃器皿洗净干燥后,用报纸包好, 或装入特制的铁筒中。 (2)将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中,彼此间留有一 定的空隙以便流通空气。 (3)关紧箱门,打开排气孔接上电源。 (4)待箱内空气排出到一定程度时,关闭上排气孔,继续 加热至一定温度后,调节温度控制旋钮固定温度,在160℃~165℃保持2小时即可。 (5)待自然降温冷却后(60℃以下)才能开门取出玻璃器皿。 鼓风干燥箱