柱层析法分离甲基橙和亚甲基蓝 1、装柱(湿法) 取一支色谱柱(25ml 酸式滴定管) ,在柱子的收缩部塞一小团脱 脂棉花,注意松紧要适度。将色谱柱垂直固定在铁架台上,往柱内加 适量 95%乙醇溶液,打开活塞,赶走气泡。再向柱中倒入适量 95%乙 醇溶液,控制滴速为 1 滴/秒,用小锥型瓶承接,同时通过漏斗慢慢 装入 15g 中性氧化铝(以 95%乙醇混悬) ,使其逐渐沉入底部。用洗 耳球敲打柱子,使氧化铝装实、均匀。 2、加样 当溶剂的液面刚好流至氧化铝表面时关闭旋塞, 立即用滴管加入 待分离混合液(甲基橙和亚甲基蓝混合液)0.5mL,尽量避免分离混 合液粘附在柱的内壁上。打开旋塞,当此溶液流至接近表面时,立即 用少量溶剂洗下管壁的有色物质,关闭旋塞。 3、洗脱 向柱内加入 95%乙醇,打开旋塞进行洗脱。用锥形瓶收集蓝色的 亚甲基蓝溶液。 当蓝色溶液收集完后, 等柱内柱内液面接近滤纸面时, 加入水洗脱,用锥形瓶收集橙色的甲基橙溶液。 注意洗脱时切勿使溶剂流干! 实验结束后,应让溶剂尽量流干,然后倒置,用吸耳球从活塞口向管 内挤压空气, 将吸附剂从柱顶挤压出。 使用过的吸附剂倒入垃圾桶里。