Stein 等[16] 对传统的CTAB 法进行了优化,创建了一种从新鲜草本植物样本中提取DNA 的方法。首先在特制的有96 个孔的托盘上种植植物样本,并依照不同样本在托盘中的位置进行编号,然后取适量植物叶 子分装在充满提取液的塑料袋中,除去袋中的空气并封口,再用特制的手工匀化器将各袋中 的样本混匀,56`C 孵育 1h 后将袋中的液体取出进行离心以及DNA 的沉淀。Xin 等〔17〕 则采用简易的96 孔托盘作为提取时的容器,将多种植物样本经研磨处理后分别放在不同的 孔中进行提取,在一天内由一人就可完成上千个样本的DNA 提取,为高通量植物基因分析 及筛选提供了极大的便利。 2.2 SDS CTAB法试验步骤多、操作繁琐的不足之处,近年来又提出了利用SDSTris- Cl-- EDTA 等直接裂解细胞使其释放出DNA 的方法]。在该法后续的DNA 纯化过程中通常采用 酚/氯仿处理,但对于植物 DNA 纯化不是一个很好的选择,因为酚的使用可降低DNA 取效率和纯度。在用该法提取DNA的过程中采用较大的离心力和较长的离心时间,然后用 氯仿一异戊醇代替酚来去除变性蛋白质,从而克服了由于酚的掺人及残留对以后酶切带来的 困难。用琉基乙醇代替SDS,对大豆DNA 分离提取能够更有效地去除蛋白质,而且可以有 效防止褐变,获得天然双链高分子量的DNA 产物,并且减少了SDS PCR、随机扩增多态性DNA 技术(Random amplified polymorphic DNA, RAPD)等操作的影响。在对辣椒DNA 进行提取时为了提高DNA 的产率将待提取的植物材料首先在液氮中研磨成粉末,并且针对 辣椒叶子中多酚类物质极少的特点将其中的加人PVP 的步骤省去,消除了PVP 对以后操作 的影响. 2.3 氯化千法在对称猴桃的基因组DNA 提取过程中选用了氯化节法,与其他方法相比该法 的得率较高,其原因可能是氯化节不仅可与植物细胞壁上的多糖经基反应生成醚,而且与细 胞液中多糖物质的All 基反应,起到破坏糖链的作用,利于DNA 的释放和提纯。