PCR 培训班考试试题 一、选择题(共20 题,每题 2 分) 1、PCR 技术扩增 DNA,需要的条件是( A ) ①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA 聚合酶等⑤mRNA ⑥核糖体 A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥ 2、镁离子在 DNA 或RNA 体外扩增反应的浓度一般为( D ) A、0.3-1mmol/L B、0.5-1mmol/L C、0.3-2mmol/L D、0.5-2mmol/L 3、多重 PCR 需要的引物对为( D) A、一对引物 B、半对引物 C、两对引物 D、多对引物 4、PCR 是在引物、模板和 4 种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于 DNA 聚合酶 的酶促合成反应,其特异性决定因素为( B) A、模板 B、引物 C、dNTP D、镁离子 5、在PCR 反应中,下列哪项可以引起非靶序列的扩增的扩增( C ) A、TaqDNA 聚合酶加量过多 B、引物加量过多 C、A、B 都可 D、缓冲液中镁离子含量过高 6、PCR 技术的发明人是(A ) A、Mullis B、史蒂文.沙夫 C、兰德尔.才木 7、PCR 产物短期存放可在( A )保存。 A、4℃ B、常温 C、-80℃ D、高温 8、PCR 产物长期储存最好置于( D )。 A、4℃ B、常温 C、16℃ D、-20℃ 9、PCR 的基本反应过程包括(A ) A、变性、退火、延伸 B、变性、延伸 C、变性、退火 10、在实际工作中,基因扩增实验室污染类型包括( D ) A、扩增产物的污染 B、天然基因组 DNA 的污染 C、试剂污染和标本间交叉污染 D、A、B、C 都可能 11、PCR 技术于哪一年发明( A ) A、1983 B、1971 C、 1987 D、1993 12、Taq DNA 聚合酶酶促反应最快最适温度为(C ) A、37℃ B、50-55℃ C、70-75℃ D、80-85℃ 13、以下哪种物质在 PCR 反应中不需要( D ) A、Taq DNA 聚合酶 B、dNTPs C、镁离子 D、RNA 酶14、PCR 检测中,经过 n 个循环的扩增,拷贝数将增加( C ) A、n B、2n C、2n D、n2 15、PCR 基因扩增仪最关键的部分是( A ) A、温度控制系统 B、荧光检测系统 C、软件系统 D、热盖 16、以下哪项不是临床 PCR 实验室设计的一般原则( A ) A、各区合并 B、注意风向 C、因地制宜 D、方便工作 17、PCR 实验室一般包括( D ) A、试剂准备区 B、标本制备区 C、扩增区和产物分析区 D、A、B、C 都含 18、PCR 技术不仅为遗传病的诊断带来了便利,而且改进了检测细菌和病毒的方 法。若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒,你认为可以用 PCR 扩增血液中的 (D)。 A、白细胞 DNA B、病毒蛋白质 C、血浆抗体 D、病毒核酸 19、如果反应体系中加入模板 DNA 分子 100 个,则经过 30 个循环后,DNA 分子 的数量将达到( D )个。 A、100×30 B、100×30×2 C、100×302 D、100×230 20、PCR 扩增产物的分析方法主要有( D ) A、凝胶电泳分析法 B、点杂交法 C、荧光探针定量 PCR 法D、A、B、C 都是 二、判断题(共20 题,每题 2 分) 1、PCR 引物设计的目的是在扩增特异性和扩增效率间间取得平衡。(√ ) 2、在PCR 反应中,dATP 在DNA 扩增中可以提供能量,同时作为 DNA 合成的原料。 (√ ) 3、DNA 扩增过程未加解旋酶,可以通过先适当加温的方法破坏氢键,使模板 DNA 解旋。(√ ) 4、PCR 反应中,复性过程中引物与 DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则 完成。(√ ) 5、PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高。(√ ) 6、PCR 技术可用于基因诊断,判断亲缘关系等。(√ ) 7、PCR 技术需在体内进行。(×) 8、PCR 反应体系中的缓冲液相当于细胞中的体液。(√) 9、核酸的复制是由 5'——→ 3'方向进行的。(√) 10、配对的碱基总是 A 与T和G与C。(√) 11、HBsAg 转阴性后一段时间才出现可检测的 HBsAb,此段间隔期称之为“窗 口期”。(√) 12、市面上多数试剂用淬灭基团 Q 基团和报告基团 R 基团来标记荧光定量 PCR 的探针。(√) 13、PCR 反应体系中 Mg2+的作用是促进 Taq DNA 聚合酶活性。(√) 14、若标本中含有蛋白变性剂(如甲醛),PH、离子强度、Mg2+等有 较大改变都会影响 Taq 酶活性。(√) 15、每个子代 DNA 分子中均保留一条亲代 DNA 链和一条新合成的 DNA 链,这 种复制方式称之为半保留复制。(√) 16、发生溶血的标本对 PCR 结果没影响。(×) 17、“平台效应”是描述 PCR 后期循环产物对数累积趋于饱和。(√) 18、逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)就是在应 用PCR 方法检测 RNA 病毒时,以RNA 为模板,在逆转录酶的作用下形成 cDNA 链,然后以 cDNA 为模板进行正常的 PCR 循环扩增。(√) 19、在定量 PCR 中,72℃这一步对荧光探针的结合有影响,故去除,实际上 55℃ 仍可充分延伸,完成扩增复制。(√) 20、PCR 可应用于遗传病、肿瘤及病原体检测三大方面(√) 三、简答(共两题,每题 10 分) 1、PCR 技术 答:PCR 技术是用一对寡聚核苷酸作为引物(要点 1:2 分),通过高温变性、低 温退火、中温延伸(要点 2:5 分)这一周期的多次循环,使特异的 DNA 片段 数量指数倍数增加(要点 3:3 分)。 2、简述定量 PCR 检测操作的全过程。 答:标本的采集,保存(2 分)——→样品前处理(2 分)——→待样品充分裂 解后点样上机反应(2 分)——→反应结束后观察结果(2 分)——→发报告(2 分)