冰冻切片中常见问题分析 郑则钦 庞瑾昱 陈斌 【摘要】 目的 探讨冰冻切片技术在临床病理诊断中的应用。方法 收集外 方法 科手术中冰冻诊断病例,应用快速冰冻切片法、快速冰冻染色法等对冰冻诊断病 例进行分析。结论 冰冻切片技术中常见的问题及改进;影响冰冻切片质量的因 结论 素;冰冻切片在病理诊断中的作用。 【关键词】 冰冻切片; 病理诊断 冰冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度进行切片的一种方法, 是手 术过程中采取活体标本,进行快速的组织学诊断的方法,其便捷的优点,利于术 中确诊病变性质,决定手术范围,但由于各种原因,影响冰冻切片的质量,拖延 病理报告发出的时间,直接影响着病理诊断的及时性、准确性,间接影响病人的 预后。 材料与方法 1. 材料:收集外科手术中冰冻诊断病例 材料: 2. 方法:应用快速冰冻切片法、快速冰冻染色法等 方法: 结 果 1 2 3 4 组织取材大小要适宜,约为 1.5×1.5 ㎝,厚 2 ㎜。 坏死组织影响冰冻切片的完整性。 冰冻时间根据组织的大小及性质所决定。 冰冻温度一般设置在-18~-20℃。 5 染液的酸碱度要适宜。 1 组织取材对制片的影响 组织取材大小: 组织取材大小:组织块大小要适宜,冷冻切片机内切片刀移动的范围有一定 的限制,超出其范围时,易致切片不全。一般情况下,冰冻切片的组织大小为 1.5×1.5 ㎝,厚 2 ㎜。但卵巢肿瘤及脂肪组织可稍微大些。组织块过大,切片时 阻力过大,易产生皱折,刀痕,组织易崩碎,增加制片难度,影响诊断。如需在 同一标本托上放大于两块组织时,应尽量冻成一个平面,与刀锋平齐,以防切片 不完整,发生漏诊。若送检组织过小,请预先速冻一冷台面,再行包埋,利于制 片。另外,包埋时,应将组织平放在冻头的中央。 组织内含过多的脂肪或坏死组织:脂肪或坏死组织较一般的组织冷冻的温度 组织内含过多的脂肪或坏死组织: 要低些,当活组织达到所需的温度时,其还比较软,从而影响切片的完整性和拖 延冷冻报告发出的时间。 组织块过冷: 组织块过冷:组织冷冻过度易致切片破碎或呈粉沫状,不能制作一张完整的 切片。 组织块冷冻不均匀: 组织块冷冻不均匀:在配合使用液氮时,组织块放入液氮时不能保持水平状 态且液氮量不足的情况下,可产生此现象。 冻头的温度不足:冷冻切片时要求冻头的温度保持在-25℃~-30℃左右, 冻头的温度不足: 冻头的温度达不到要求时,组织很快回软,也不能保证切片的完整。 2 冷冻时间对制片的影响: 根据组织块的大小、 性质, 确定冷冻时间, 一般 13~ 冷冻时间对制片的影响: 17s(使用液氮者) ,若组织较大或脂肪组织时间可适当长些,而甲状腺、脑 组织和淋巴组织等冷冻的时间相对要短些。冷冻时间要严格掌握,时间过长, 切片易脆碎,其处理方法是:切出完整平面后用戴乳胶手套的拇指按压回温, 直到切片完整为止,反之,时间过短,则需继续冷冻,直到组织不粘刀片出 现完整切片为基准。 3 冷冻箱体工作温度对制片的影响: 冷冻箱体工作温度对制片的影响:一般组织设定为-18~-20℃。但对一些 较特殊的组织标本, 温度应适当调整, 如脂肪成分较多的组织以-30~-35℃ 为宜,纤维腺瘤,子宫等为-20℃,淋巴结,甲状腺为-18℃,切片时,表 面玻璃机器盖子不要打开过大,以免箱体回温过快,影响制片。保持冻箱的 温度,做到每次做完冷冻切片应关好冷冻箱的盖子。 4 染色对制片的影响:尤以细胞核的染色最为关键,在寒冷的冬季,室温过低 染色对制片的影响: 时,影响核的着色,可适当加温,用以增色,苏木素的酸碱度应适宜,经常 观察其染液的 ph 值, 过碱时应及时更换, 盐酸酒精分化适度, 时间控制到位, 否则易造成核着色不佳,染色质不清晰,影响诊断的准确性。 5 冰晶的形成对制片的影响: 冰晶的形成对制片的影响:此原因主要取决于组织含水量的大小,尤以组织 细胞水肿,淋巴结,纵隔肿瘤,卵巢肿瘤为甚,送检取材过程中接触水源, 速冻过程中使用的液氮时间尚未控制好,同是造成冰晶形成的原因,其解决 方法为,使用液氮时间上控制到位,保证一次冻透标本,组织送检取材时, 尽量避开水源,如遇含水量高的标本时,应尽量用干纱布吸干水分后再行冷 冻,避免由于冰晶形成出现诊断上的失误。操作者的动作应迅速。 6 切片皱缩或卷缩: 切片皱缩或卷缩:这也是影响切片质量的重要因素之一。常见的原因有:① 刀锋变钝。② 防卷板粘有异物,防卷板的作用是防止切片卷缩,但若粘有异 物,切片时组织会被挤压而缩在一起。③ 防卷板与刀锋的位置不平行、不协 调。④ 组织块包埋不完全,缺乏支撑作用。 预防与处理的方法:① 注意检查刀具,及时更换刀口,定期磨刀。② 保持 防卷板的清洁,每做一例冷冻切片,均应将刀口及防卷板拭擦干净,防止切 片的污染和切片皱缩。③ 调整刀、防卷板的位置,保证两者平行,且防卷板 比刀锋前 0.2 ㎜左右。④ 包埋组织应完全,没法切片者再滴加包埋胶。 切片脱落: 7 切片脱落:冷冻切片是利用温度差(即玻片与组织切片的温度差)将切片粘 贴在玻片上,然后进行固定、染色。下面几种情况下可影响切片粘贴的牢固 程度, 而导致切片脱落: 组织内含过多的坏死组织。 ① 组织细胞坏死崩解后, 局部的渗透压升高,吸收水分,切片一经固定,水分逸出,坏死组织失去支 撑作用,染色时组织容易脱落。② 固定液浓度过低,这是最常见的原因。③ 载玻片不干净。④ 切片太厚。 预防及处理方法:避免组织内带有坏死组织,条件允许者重新取材;若没有 组织可代替,切片固定时间长些,经 95%乙醇双重固定后,用电吹风将切片 吹干(温度不能过高,以防破坏组织结构)然后再进行染色且动作应轻柔。 ② 定期更换固定液。 一般每周更换一次, 例数较多者, 适当增加次数; 另外, 每次做完冷冻,应及时将盛固定液的瓶盖盖好,以防固定液挥发而降低其浓 度。③ 保持载玻片干净,平时应将玻片盖好,防止灰尘或其它异物的污染。 若新购买的玻片较脏, 洗涤过后才使用。 调好切片的厚度, ④ 切片厚度以 5~ 7um 较为合适(脂肪组织可稍为厚些) 。 组织块脱落: 8 组织块脱落:冷冻切片一般要求在 30min 内发出病理报告,以便手术医生能 尽快选择手术方式。但若组织块脱落,会拖延病理报告发出的时间,而耽误 病人的手术时间。常见原因有:① 冻头在冷冻机内放置时间过长,致使包埋 胶还来不及渗到冻头的底部便凝固了,导致包埋胶与冻头粘连不紧,稍受外 力的作用便脱落;② 冻头上的包埋胶冲洗不干净。 总之,对于冰冻切片的质量因素主要有以上几点。如果能正确对待以上几方 面的问题,冰冻切片的质量方可得到保证,且能制备出一张质量优秀的切片,为 明确病理诊断提供较为便利的客观条件。