夹心ELISA实验需要用到配对抗体(捕获抗体和检测抗体),其实验原理是将捕获抗体结合到ELISA板上,通过捕获抗体固定抗原,随后通过直接ELISA或间接ELISA的方式进行检测,实验流程如下图所示。在夹心ELISA实验中,最重要的是对配对抗体进行验证,确保配对抗体能同时与抗原结合,以确保实验的顺利进行。夹心ELISA实验先将捕获抗体固定于ELISA板孔中,然后加入分析物或样品,接着加入检测抗体。如果检测抗体是酶标抗体,则可称为直接夹心ELISA;如果检测抗体不带有标记,则还需要使用酶标二抗与检测抗体结合,这种称为间接夹心ELISA。夹心ELISA的灵敏度高,它比直接或间接ELISA敏感2-5倍;同时夹心ELISA使用两种特异性抗体与抗原结合,拥有很高的特异性。另外夹心ELISA能够通过直接或间接的方式进行检测,有着不错的灵活性。夹心ELISA的缺点是对配对抗体要求很高,如果没有标准化的试剂盒或者已经通过测试的配对抗体,则需要进行配对抗体定制并进行优化,因为降低捕获抗体与检测抗体之间的交叉反应是非常重要的。
夹心ELISA尤其适用于复杂样品的分析,因为抗原不经纯化仍具能有高灵敏度和特异性(例如测量免疫应答中的细胞因子水平)。
总结:
优点缺点
灵敏度高特异性好更灵活对于配对抗体的要求高(了解更多配对抗体)
最佳用途:对复杂样品进行分析