朱素菲 华夏 高飞 刘海英 B族链球菌(group B Streptococcus,GBS),又称无乳链球菌,属革兰阳性球菌,是引起新生儿败血症和脑膜炎等侵袭感染的首要致病菌 [ 1 ] 。肛直肠/阴道分泌物细菌培养鉴定方法为GBS筛查的传统方法,2010年美国CDC颁布的《围产期B族链球菌疾病预防指南》 [ 2 ] 与2015年欧洲共识 [ 3 ] 均视经选择性肉汤增菌的培养鉴定为首选标准方法。细菌培养耗时长,检验人员需经一定时间的技术培训,从而限制了一些临床实验室的常规开展。随着近年的生物技术发展,出现了许多操作简便、敏感度高、检测时间短、结果判断简单或能自动化判读的新检测方法。本研究以增菌培养法为参考,采用双盲研究,分别评价直接培养法、液体显色培养法以及核酸环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)法对GBS的检测性能。 对象与方法 一、对象 二、方法 1 .仪器与试剂: Vitek 2 Compact全自动微生物分析仪购自法国生物梅里埃公司。革兰染液和触酶试剂购自珠海贝索公司,哥伦比亚血琼脂平板、GBS增菌肉汤(Todd-Hewitt型)购自广州市迪景微生物科技有限公司。液体显色培养法试剂、仪器(B群链球菌培养分析系统DL-GBS48)均由珠海迪尔生物工程有限公司提供;LAMP法试剂、仪器均为国外进口(HG Group B Streptococcus,HiberGeneDiagnostics,爱尔兰)。 2 .增菌培养法: 将拭子标本置于GBS增菌肉汤管中,35 ℃、5%CO 2 恒温箱中孵育18~24 h后,转至哥伦比亚血琼脂平板;将平板置于35 ℃、5%CO 2 条件下孵育18~24 h,可疑菌落用革兰染色和触酶试验筛选;对革兰阳性球菌和触酶阴性菌落用Vitek 2 Compact全自动微生物分析仪进行鉴定。若没有观察到可疑菌落,则将孵育时间延长到48 h再次观察,报告结果。 3 .直接培养法: 以拭子标本直接按三线法接种至哥伦比亚血琼脂平板,置于37 ℃、5%CO 2 孵育18~24 h,对血平板可疑菌落处理同增菌培养法后续操作。 4 .液体显色培养法: 5 .LAMP法: 操作方法严格按照试剂盒说明书进行:加80 μl洗脱标本至裂解剂中,混匀后室温孵育20 min;将裂解产物以干浴孵育器加