Authors: Yun Shi and Miao He, updated date:, view: 16066, Q&A: 0
Tags: 磷酸盐缓冲液, PBS and 常用试剂
Materials and Reagents

试剂
分子式
分子量
品牌
货号
十二水合磷酸氢二钠
Na2HPO4.12H2O
磷酸二氢钾
KH2PO4
氯化钠
NaCl
miniQ水
锡箔纸

Equipment
1. 量筒、烧杯、耐高温高压蓝盖玻璃瓶(Thermo fisher);
2. Rapid-FlowerFilter(滤器)(Thermo Nalgene)。
Procedure
以配制1L 10×PBS储存液为例:
1、用双蒸水清洗量筒、烧杯、10×PBS储存液玻璃瓶(3次)。
2、使用一次性称量船,分别用分析天平称取Na2HPO4.12H2O,35.814g;KH2PO4,2.4496g;NaCl,80.0669g;KCl,2.0129g。
3、将药品粉末倒入PBS配制专用烧杯中,加入800-900ml miniQ水,使用磁力搅拌器充分溶解(无任何固体)。
4、用移液枪吸取2-3ul溶液滴在pH试纸上测试酸度,pH应为6.8。
5、将溶液转移到PBS专用量筒或容量瓶中定容到1L(加miniQ水至1L),倒回烧杯中充分混合。
6、将滤器与微型台式真空泵相连,打开微型台式真空泵后,将PBS分批倒入滤器进行过滤。滤器价格昂贵,建议一次过滤4-5L溶液。
7、滤好的10XPBS可立刻稀释使用;稀释后可用pH试纸再次确认pH值。
8、暂时不用的10XPBS分装至10×PBS储存液玻璃瓶中(液面不超过瓶身的3/4高度),高压灭菌。
注意事项:瓶盖不能完全拧紧(保留约半圈),用锡箔纸包裹瓶盖;不能放到底层篮子,容易被脏水污染;降温后一旦打开灭菌锅,必须立刻拧紧盖子,防止外界细菌进入。
9、灭菌后的10XPBS可保存在室温或4℃冰箱中。每次分装后需盖紧瓶盖,降低污染概率。
10、取用前注意观察瓶底有无沉淀,摇晃后有无悬浮物;若有说明有微生物滋生,请勿使用,需重新配置。
11、每配500ml1XPBS可用50ml进口管测量50ml 10XPBS,加入450ml miniQ水,颠倒混匀。
Recipes

试剂
分子质量
10×储存液浓度(mol/L )
配制1L
所需质量(g)
配制2L
所需质量(g)
配制4L
所需质量(g)
配制5L
所需质量(g)
1X工作液浓度(mol/L )
配制1L
所需质量(g)
Na2HPO4.12H2O
pH=7.4
10×PBS储液的pH是6.8,稀释为1×PBS时,pH变为7.4。

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