如果上游引物 和下游引物都找到的相同的基因,并且分数非常高。这种结果表明所设计的引物序列特异性 不高,最好重新设计引物,否则会得到非特异扩增的PCR 产物。 如何验证设计引物序列是否合适?zz 合集 (2012-08-10 11:09:38) 1.检验引物的特异性Primer-BLAST,在线设计用于聚合酶链反应(PCR)的特异性寡核苷酸引物。 Primer-BLAST 可以直接从Blast 主页(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)找到,或是直接用 下面的链接进入: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/ 这个工具整合了目前流行的Primer3软件,再加上NCBI 的Blast 进行引物特异性的验证。 Primer-BLAST 免除了用另一个站点或工具设计引物的步骤,设计好的引物程序直接用Blast 进行引物特异性验证。并且,Primer-BLAST 能设计出只扩增某一特定剪接变异体基因的引 importantfeature PCRprotocols measuring tissue specif ic expression(注:没 办法准确的翻译,只好作罢,汗!)。