现在,市面上的支原体清除剂大多是抗生素类的,主要是三种:四环素类、大环内酯类和喹诺酮类。它们对支原体的清除作用主要是抑制,而非直接杀死支原体。因此它们的效果不能持久,还会产生支原体的耐药和细胞毒。要想真正有效的杀死支原体,只有德国Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold产品。
Mynox®取自枯草杆菌发酵后的提取物。由于支原体没有细胞壁,只有简单的质膜。Mynox®基于生物物理原理,只与支原体膜特异性结合,改变支原体膜的通透性,导致支原体破裂死亡,而哺乳动物细胞能迅速返回它的原来形态,并保持正常的增殖速率。直至今日,Mynox®还没有显示任何导致正常细胞特性的改变。
注意:Mynox®用于清除细胞培养和病毒培养以及生物样本中的支原体和无胆甾原体,仅限于基础研究使用。
下面,简单介绍一下Mynox®及其用法:
Mynox®:无菌即用型,pH7.4,220µl/管,每管用1次
货号#10-0200 2 管
货号#10-0500 5 管
货号#10-1000 10 管
2-8°C保存。室温运输
建议采用DMEM或RPMI 1640培养基,5%FCS。如果清除病毒中的支原体,应使用无血清培养基。如果是贴壁细胞,应用胰酶消化,把细胞打散为单细胞,保证细胞与Mynox®充分接触,从而更有效地杀除支原体。
Mynox®的细胞毒效应在10%~80%,依赖于作用时间长短。通常能保证有充分存活的细胞应用于继续培养。支原体的高清除率带来更高的细胞增殖速率,能够弥补细胞毒带来的损失。
Mynox®用法:
1、贴壁细胞
150px培养皿中,先后加2.8ml培养基(5%FCS),Mynox®200 µl,2 ml 细胞(1x104~1x105)。细胞继续培养2小时,即完成治疗,即可换液。治疗可持续3-8天,不过需注意观察细胞状态。
2、悬浮细胞
无菌离心管里先后加1.6ml 含0.125%胰酶和5mM EDTA PBS,Mynox®200 µl,1.6 ml细胞(细胞数1x104~ 1x105,10%FBS)。室温孵育30分钟即完成治疗,即可将细胞离心换液。(注意:胰酶作用是防止细胞聚集。如不用胰酶解离细胞,可用培养基代替胰酶。要保证细胞与Mynox®混合物的总体积为3.4