血清肌酸激酶MB同工酶测定 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。 实验原理使用 CK-M 多克隆抗体对肌酸激酶(CK)中CK-M 同工酶的活性进行抑制后, 采用德国临床化学会(DGKC)和国际临床化学会(IFCC)推荐的连续监测法测定 余下的肌酸激酶(CK)活性。其反应原理如下: CK-MM 型同工酶 CK-M抗体 CK-MM 型同工酶的活性被抑制;CK-MB 同工酶+CK-M 抗体 50%的CK-MB 型同工酶的活性被抑制; 剩余的50%无活性的CK-MB 型同工酶 N-乙酰半胱氨酸有活性的CK-B 型同工酶 磷酸肌酸 ATPATP 葡萄糖ADP 葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-6-磷酸+NADP 式中:ADP为二磷酸腺苷;ATP 为三磷酸腺苷;NADP+为氧化型辅酶II;NADPH+H+ 为还原型辅酶II。 在上述反应中,NADPH+H+ 的生成速率与样本中肌酸激酶B 型同工酶(CK-B) 的活性成正比。通过在波长 340nm 处监测吸光度值的上升速率,即可测得样本 酸激酶B型同工酶(CK-B)的活性。肌酸激酶B 型同工酶(CK-B)活性相当 于1/2 肌酸激酶MB 型同工酶的活性,将所测得的肌酸激酶B 型同工酶(CK-B) 的活性乘以2,即为肌酸激酶MB 型同工酶(CK-MB)的活性。 标本:3.1 病人准备:无特殊。 3.2 类型:血清或肝素血浆。 CK 同工酶 (G6P-DH) 己糖激酶(HK) 3.3 标本存放:稳定性:-20保存稳定4 周(避光保存)。活性损失:2~8 保存24 小时或18~22保存1 小时至少损失10%。 3.4 标本运输:常温条件下保存运输。血标本应尽快送往化验室,室温下放置 30―45 分钟,后离心,放置时间不得超过 3h.血清必须吸出,转移至有盖的试管 3.5标本拒收标准:细菌污染的标本。 实验材料4.1 试剂:上海复星长征医学科学有限公司 CK-MB 试剂盒(沪食药监械(准) 字2014 第2400166 YZB/沪1546-40-2014) 4.1.1 试剂组成 试剂1(R1): D-葡萄糖 27mmol/L 咪唑缓冲液 60mmol/L 乙酸镁 14mmol/L NADP 2.7mmol/L N-乙酰半胱氨酸 27mmol/L AMP 7mmol/L 试剂2(R2): 磷酸肌酸 160mmol/L 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 20KU/L ADP 11mmol/L 糖激酶 20KU/L CK-M 抗体 4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存:2~8避光、密封的储存条件下,试剂(盒)自生产 之日起有效期为12 个月。试剂1 与试剂2 启用后,在2~10避光的条件下可 稳定20 4.1.4变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有 沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。 4.1.5 注意事项:试剂中含稳定剂。不可入口!避免接触皮肤及粘膜。应采取必 要的预防措施使用试剂。 4.2 校准品: 4.2.1 采用以检测用水为空白的方式进行校准。 4.2.2 校准及校准频次的要求:正常情况下,应每周至少对测定进行一次校准。 当发生下列情况时(如:使用的试剂批号发生改变时、使用的仪器进行维修、保 养或关键部件进行更换后、质控品的测定结果发生漂移或超出规定的范围等), 应重新对测定进行校准后再对患者的样本进行检测。 4.3 质控品:使用正常值、病理值复合控制品。 仪器AU2700 生化分析仪,罗氏 P800 生化分析仪, 西门子 ADVIA-2400 生化分析仪, 东芝TBA-120 生化分析仪。 操作步骤6.1 样品的准备:将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测:仪器开机后,检查各种试剂的位置,体积等确认无误后方 可进行测定。 6.3 项目基本参数:参见生化检验AU2700 生化分析仪,罗氏P800 生化分析 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120 生化分析仪项目测定参数。 6.4 仪器操作步骤:参见生化检验 AU2700 生化分析仪,罗氏 P800 生化分析 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120 生化分析仪操作规程。 质量控制在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II 质控做为未知标本进行分析,以2S 为质控警告限,3S 为失控限,绘制质控图,判断是否在控。 计算方法在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以U/L 报告。 参考值范围:0-24U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验, 每个实验室应建立自己的参考值。 我室参考值0-25 10