1. 核酸检测和基因型鉴定⑴Real-timeRT-PCRORF1/ORF2区是诺如病毒基因组中最保守的区域,在同一基因型不同毒株间有相同的保守序列,根据这段保守区域可用于设计TaqMan为基础的Real-time RT-PCR的引物和探针。除可检测病例临床标本中的诺如病毒RNA外,引物和探针经优化提高灵敏度后,还可用于环境样本(如食物和水)的检测。Real-time RT-PCR的敏感性高于传统RT-PCR,可检测诺如病毒G I群和G II群。⑵传统RT-PCR采用传统RT-PCR对Real-time RT-PCR阳性标本的PCR产物进行测序,通过序列分析确定诺如病毒的基因型。测定ORF2完整衣壳蛋白基因序列,是诺如病毒基因分型的金标准。基因组中四种不同的区域(Region A-D)均可用于诺如病毒基因分型,基于衣壳蛋白区Region C和D两区域分型效果更好。但对于GII.4变异株的进一步分型,仅根据Region C序列不足以区别,需进一步扩增Region D。2.抗原检测由于诺如病毒抗原高度变异(基因型超过29个)且某些基因型存在抗原漂移(如GII.4型),开发广泛反应的ELISA方法存在较大挑战。虽然已有商品化的试剂盒如IDEIA(Oxiod,英国)、SRSV(Ⅱ)-AD(Denka Seiken,日本)以及RIDASCREEN(r-Biopharm AG,德国),但其敏感性(36%-80%)和特异性(47%-100%)均不太理想。即使已通过美国FDA认证的RIDASCREEN诺如病毒第三代ELISA试剂盒,也没有在美国广泛应用。ELISA可适用于暴发疫情中大量样本的筛查,但不适合散发病例的检测。ELISA检测结果阴性的样本还需要通过Real-time RT-PCR进行第二次检验确认。鉴于ELISA试剂盒成本高、敏感性低,ELISA方法仅可作为辅助检测手段。