第二步是检测前的灭活处理。样本将在水浴箱经半小时56℃高温灭活,使病毒蛋白不再有生理活性,失去感染、致病和繁殖能力。这会让检测时相对安全,但病毒蛋白的基因序列并没有受到影响。
第三步是检测的核心环节——开盖加样和核酸提取。该院检验医学部副主任技师胡亮杉是进入P3负压实验室完成设备调试、程序设定、试剂试用等前期准备工作的第一人。“在标本处理间,实验员拿到灭活后的样本时,第一个动作就是振荡,尽量让拭子上的病毒洗脱在培养基溶液中,再静置5分钟沉淀。接下来是开盖加样,必须人工操作,且需要两个人高度配合才能完成。一人拧开样本罐盖子,另一人拿着微量移液器在样本罐中吸取微量溶液,放到另一个提取管里,再拧上管盖。”她介绍,就这样,400多份样本要打开瓶盖吸取转移400多次,每一次都是实验员与病毒面对面的“开撕”。
“在开盖转移过程中,病毒非常容易暴露在实验室空气中。”胡亮杉说,“开盖加样时,拿着微量移液器的手往往因为戴着双重手套,显得有些笨拙,可又不得不小心翼翼,再加上眼罩、面屏和生物安全柜玻璃窗的三重阻隔,所有动作都显得缓慢,手也因为动作的缓慢不时颤抖,经常是左手扶着右手完成加样的。”
人工核酸提取的步骤更为复杂,考验着实验员的耐心与谨慎。“核酸提取可以使用仪器辅助,但由于比对需要,往往要加以人工操作,需要反复进行离心、加试剂、洗涤等10多个步骤。其中,需要打开管盖的操作就达7次以上,完成一例人工核酸提取要50分钟左右。”胡亮杉说。
第四步是判断结果。提取的核酸送到核酸检测室内,就要上仪器了。实验员将提取的核酸加入到扩增试剂中,通过荧光PCR仪进行RT-PCR反应,用时约110分钟,就可分析判断结果为阴性或阳性了。
最后是污染物的高压灭菌处理。实验过程产生的污染物通过高压灭菌后,按普通医疗垃圾处理。
安全保障
再来看看工作人员是如何工作的。
首先,在清洁区内穿戴中级防护服——通过缓冲间进入实验室内负压工作间,在这里处理标本,核酸提取及检测——完毕后进行空间、表面消毒,按顺序脱下防护服,通过淋浴间更衣后,回到清洁区。这些步骤一个都不能少。