血型鉴定与交叉配血 医学检验系 陈丽华 一、ABO血型鉴定 ?盐水凝集法 ?玻片法 ?试管法 ?凝胶微柱法 血型鉴定原理 ?检测红细胞上存在的血型抗原,以及血清 中存在的血型抗体,依据抗原抗体存在的 情况判断血型。 ?常规的方法包括正向定型与反向定型 ?正向定型※:已知抗体特异性的血清 检查红细胞抗原 ?反向定型※:已知血型红细胞检查血 清抗体 正定型结果分析※ 抗A血清 抗B血清 抗A、B血清 + 被 检 红 细 胞 + — + A 型 正定型结果分析 — 抗A血清 抗B血清 抗A、B血清 + 被 检 红 细 胞 + + B 型 正定型结果分析 抗A血清 抗B血清 抗A、B血清 + 被 检 红 细 胞 — — — O 型 注意:正定型时抗A(-)抗B(-)抗A、B 管(+),应考虑到是否为亚型。应追踪。 正定型结果分析 抗A血清 抗B血清 抗A、B血清 + 被 检 红 细 胞 + + + AB 型 反定型结果分析※ (被检血清和标准红细胞) +A型RBC 被 检 血 清 +B型RBC +O型RBC 血型 A型 B型 O型 AB型 - + - - - - - + + - + - 注意:被检血清+O型RBC凝集,应考虑含有不 规则抗体或其他血型抗体。应追踪。 +表示凝集,-表示无凝集 对抗血清的要求※ ?①高度特异,只能与相应的红细胞抗原发 生凝集,无非特异性凝集, ABO 血 抗B血清效价在1:64以上。 型 鉴 ?③高亲和力,15秒内出现凝集,其强度 为3分钟时凝块>1mm2。 定 ?②高效价,抗A血清效价在1:128以上, ?④无冷凝集素。 ?⑤无菌。分离血清后56℃,30min灭活。 1.生理盐水凝集法 原理 ABO ? ①ABO血型抗体一般是IgM,属于完全 血 抗体 型 ?②IgM抗体分子链较长,能克服红细胞表 鉴 面排斥力,同时分子量较大,它能与相 定 应抗原特异性结合,在生理盐水中发生 肉眼可见的凝集现象。 IgM抗体凝集红细胞示意图 IgM在盐水介质中产生凝集 ①玻片法: ?操作简单,不需要离心,适于大规 模血型普查。 ?反应时间长,易忽略较弱的凝集而 导致定型错误。不适于反定型。 ABO 血 型 鉴 定 ABO 血 型 鉴 定(玻片法) 抗A血清1滴 加5%红细胞悬 液1滴,混匀 连续转动玻片 1~5min 凝 集 抗B血清1滴 抗A+B血清1滴 无凝集 镜检证实 ②试管法: ABO 血 型 鉴 定 ?需时间短,适用于急诊定型。 ?可正反定型。 ?可发现亚型或较弱抗原抗体反 应,结果判断可靠,为常规检 查方法。 正反定型结果不一致的解决办法 ABO 项 血 ①首先重复试验,如果仍然不符继续下列试 验。 型 鉴 ②重新采集新鲜血液标本,以纠正因污染或 定 样本错误造成的不符合。 ( 盐 水 ③多次洗涤被测红细胞和标准红细胞,除去 法 可能会影响试验结果的血浆中或红细胞保 ) 存试剂中的化学成分。 注 意 事 ④用抗A1、抗A+B检测红细胞。 正反定型结果不一致的解决办法 ⑤如怀疑血清中有抗A1,可用数份A2红细 胞标本进行检验。 ⑥如果试验结果未见凝集,应将反应管至 少在室温和40℃分别放置30min,用显 微镜检查。 ⑦若怀疑是由于抗原减弱造成的正反定型 不符,可进一步做木瓜酶试验、直接抗 球蛋白试验、吸收放散试验等加以鉴别。 ABO 血 型 鉴 定 ( 盐 水 法 ) 注 意 事 项 2.凝胶微柱法 ?凝胶具有分子筛效应和亲合效应 ?亲合效应:红细胞抗原与相应抗体结合 ABO 血 ?分子筛效应:低速离心后,凝集红细胞 型 悬浮在凝胶中,而未被抗体结合的红细 鉴 胞则沉于凝胶底部(管底尖部)。 定 ?结果观察: ?肉眼/血型分析仪 ABO ( 凝 胶 微 柱 法 ) ?操作标准化,结果特异、准确可靠,重 血 型 ?可手工、半自动及全自动操作 鉴 定 ?不足之处: 复性好、灵敏度高。 ?需要特殊试剂和离心机 ?成本较高。 全自动血 型仪 【原理】凝胶具有分子筛效应和亲合效应, ABO 血 型 鉴 定 ( 凝 胶 微 柱 法 ) 在微株凝胶介质中红细胞抗原与相应抗体 结合,经低速离心,凝集的红细胞悬浮在 凝胶上层,而未和抗体结合的红细胞则沉 于凝胶底部(管底尖部)※。 【器材】微量吸样枪,一次性吸头,微柱凝 胶卡专用水平离心机。 【试剂】 特异性凝胶微柱卡 【操作】 ABO ( 凝 胶 微 柱 法 ) (1)将被检者红细胞(不用洗涤)配成2%~3% 生理盐水悬液,向已标记好的特异性凝胶微柱卡 血 的微管反应腔内加50μL. 型 (2)立即水平离心1000r/min, 10min. 鉴 定 (3)观察及判断血型结果①阳性:对照管细胞沉 淀在管底,检测管凝集块在胶上或胶中。 ②阴性:对照管和检测管细胞沉淀均在管底。 ③试验失败:对照管细胞在胶上或 胶中,应重新做试验。 (4)报告方式:同生理盐水法。 注意事项 ABO 血 型 鉴 定 ( 凝 胶 微 柱 法 ) 1. 离心机选择:一般使用微柱凝胶卡专用 水平离心机。使凝集复合物不偏向一侧, 特别是阴性结果不偏向管底之一侧,以 免造成弱阳性假象。 2. 操作:每种微柱凝胶卡分为反应腔和凝 胶分离柱两部分。向反应腔内要先加红 细胞,后加血清或抗体。※ 3. 离心:为了应用不同离心半径和不同离 心机进行凝胶试验,应通过试验设定每 台离心机的最佳时间和速度。 ?ABO血型鉴定错误可以引起严重的后 果。 ?鉴定结果错误因素主要有技术问题及 ABO血型本身的问题。 二、交叉配血 (一)交叉配血的重要性 ?交叉配血是在输血前必须做的试验。 ?交叉配血中最重要的是ABO血型配合, 必需ABO血型相同,且交叉配血无凝 集才能输血。 (二)交叉配血一些基本概念 ? 概念:是检查供血者与受血者是否含有不相 合的抗原合抗体成分的试验,主要是检查受 血者血清中有无破坏献血者RBC的抗体。 ?供血者红细胞与受血者血清反应(主侧交叉 配血※) ?受血者红细胞与供血者血清反应(次侧交叉 配血※) 献血者 红细胞 血清 受血者 红细胞 血清 交叉配血目的 ①发现ABO血型鉴定的错误。 ②发现不规则凝集素。如冷凝集素。 ③发现其他血型抗体和一些不规则抗体。 (三)交叉配血方法 ?1、室温盐水配血法(只能检出IgM型 血型抗体) ?2、聚凝胺法 ?3、抗人球蛋白法 ?4、蛋白酶法 ?5、微柱凝胶法 方法选择原则 ①无输血及妊娠史者,只需作盐水配血。※ ②有输血史,妇女有原因不明的流产史及新生 儿溶血病者,应用木瓜酶或抗人球蛋白、聚凝 胺介质法。 ③有多发性骨髓瘤,进行性结核,肝损伤,输 过右旋糖酐的病人,为避免假阳性,作抗人球 蛋白配血。 1、室温盐水配血法 交 叉 配 血 【原理】天然IgM类血型抗体与对应红细 胞在室温下的盐水介质中出现凝集反应。 通过离心,观察受血者血清与供血者红 细胞(主侧)以及受血者红细胞与供血 者血清(次侧)之间有无凝集的现象, 判断受血者与供血者之间有无ABO血型 不合的现象。 判断配血是否相合※ 交 ①ABO同型配血,主、次侧均无溶血及凝 叉 集,血型相合,可以输血;主、次侧任 配 血 何一管发生溶血或凝集,不可输血,应 ( 盐 水 凝 集 法 ) 查找原因。 ②异型配血时,主侧无凝集无溶血,次侧 有凝集无溶血,可以输少量血;如主侧、 次侧均不凝集或主侧凝集,不能输血, 需查找原因 交 叉 (1)受血者xxx(X型)血清+供血者xxx 配 (X型)红细胞 凝集与否及强弱程度 血 ( (2)供血者xxx(X型)血清+受血者xxx 盐 水 凝 集 法 ) 报告方式 (X型)红细胞 凝集与否及强弱程度 (3)受血者xxx与供血者xxx配血是否相合 DC1滴 PS1滴 主侧配血管 1000r/min 离心1min 观 察 上 层 液 有 无 溶 血 轻摇试管 肉眼观察有无凝集 有凝集 PC1滴 DS1滴 镜检证实 无凝集 次侧配血管 交叉配血盐水介质法操作示意图 【注意事项】 交 1.如果对患者的输血史或妊辰史不明, 叉 必须使用48h内的标本。 配 血 2.不能使用溶血标本。 ( 盐 水 凝 集 法 ) 3.配血后,受血者/供血者的全部标本 须于2~6℃冰箱保存7d以备复查。 交 叉 配 血 ( 盐 水 凝 集 法 ) 【方法学评价】 本法简易、经济、快速,缺点是 仅用于检查ABO血型系统的IgM 血型抗体是否相配,不能检出不 相配的IgG血型抗体。 2、聚凝胺介质配血法(MPT)※ 【原理】:①聚凝胺是带有高价阳离子的多聚 季氨盐,溶解后能产生很多正电荷,可以中 和红细胞表面的负电荷,减少细胞间排斥力, 缩小了其间之距离,出现非特异性凝集。 ②低离子强度溶液降低红细胞的Zeta电位,可 进一步增加抗原抗体见的吸引力。 ③枸橼酸盐解聚液可消除聚凝胺的正电荷,使 非特异性凝集消散,但IgM或IgG类血型抗体 与红细胞产生的特异性凝集不会散开。 交 叉 配 血 交 叉 配 血 ( ) MPT DC1滴 PS1滴 LISS液 0.6ml 加凝聚胺2滴, 混匀15s 弃去上清 不凝集:试剂无效 1000r/min 离心1min 主 侧 、 次 侧 配 血 管 凝集 离 心 1 分 钟 加解聚液2滴 主侧配血管 1000r/min 离心1min 混匀 PC1滴 DS1滴 次侧配血管 判断配血是否相合 交叉配血凝聚胺介质法操作示意图 【方法学评价】 交 叉 配 血 ( ) MPT 聚凝胺介质法可加快凝集反应速度,使 原来在盐水介质中不能凝集红细胞的抗 体发生凝集,提高反应灵敏度,能检测 IgM、 IgG等引起溶血反应的几乎所有 规则与不规则抗体,适用于各类输血患 者的配血。故该法具有快速、灵敏、结 果可靠、能捡出完全抗体及不完全抗体 等优点。 交叉配血(抗人球蛋白法) 【方法学评价】本法是确定不完全 抗体最可靠的方法※,但操作较 繁琐,需多次洗涤,需要时间常, 试剂较贵,故始终未能成为临床 常规的配血方法。 交叉配血试验的临床意义 ? 1.进一步验证受血者和供血者血型鉴 定是否正确,发现ABO系统的不规则抗体, 以避免血型鉴定错误而导致的输血后的严 重溶血反应。 ? 2.发现其他的血型抗体 受、供血者如果 ABO血型相同,但其他血型不同时,在交叉配 血时也可出现凝集,为避免异型血输入后的 溶血反应,在目前许多实验室都不能进行稀 有血型鉴定的情况下,全靠交叉配血发现这 些血型的不同及免疫抗体的存在。 ? 3.当受血者一次输血超过1600~2000m1, 或在48小时内输入5L或更多血时,称为大量 输血,这时就需要多个供血者的血液,在配血 时不但受血者和供血者之间要交叉配血,多 个供血者之间也应互相交叉配血,为保证受 血者的安全,要求主侧、次侧及献血员之间 交叉配血均不凝集时,方可输血。 ? 4.在急诊配血时, 对急需情况可采用试管 法配血,在15min内发血。对特急情况应立即 发给O型浓缩红细胞或低凝集价的O型全血。 然后尽快复查血型和配血,如表现有配血禁 忌,应立即通知负责医师及时处理。 交叉配血试验的注意事项 ?1.用于交叉配血的病人(受血者)血液标 本应该是抽取的新鲜血,供血者的标本是 刚从血袋剪下来的原已加热封闭两端小管 的血液。 ? 2.采用试管法作交叉配血试验,最好 不用玻片法。 ?3.用生理盐水洗涤红细胞去除血浆,预防 纤维凝块的形成。 ?4.配血管中发生溶血现象,表明有抗原抗 体反应同时还有补体参与,是配血不合的 严重情况,应十分重视。 ?5.盐水配血试验阴性,但有反复输血史或 妊娠史的受血者,应加酶法、抗人球蛋白 法等配血。 ? 6.为确保输血的安全,应输同型血。 三、血型鉴定与交叉配血的异常及其克服 办法 ?(一)责任性错误 ? 血型鉴定和交叉配血的技术并不复杂, 因配血错误而导致输入不合血液的事故中, 大多数是因为不严格执行操作规程或操作 过程中精神不集中所致,因此为杜绝责任 性错误首先应该熟悉操作规程并严格执行。 ?(二)假 阴 性 ?1.标准血清不符合要求 ?2.被检红细胞抗原性减弱 ?3.红细胞悬液浓度配置不当 ?4.将溶血反应误认为不凝集 ?5.血型物质的中和作用 ?(三)假 ? 2.冷凝集 阳 性 ? 1.红细胞呈缗钱状排列 ? 3.全凝集与多凝集 ? 4.类B抗原 ? 5.自身免疫性温性抗体 冷凝集 ?冷凝集素是指冷反应型抗红细胞抗体,这些 自身抗体只能在低温时与红细胞膜相关抗原 结合。疑为存在冷凝集时,正定型采用经37 度生理盐水洗涤的红细胞3次,反定型采用患 者经4度放置1hr后分离的血清,将反应管放 37度水浴5min后观察结果。交叉配血存在冷 凝集现象时,仍然认为交叉配血是相合的, 可以输血。但需提醒临床保温输血。 红细胞呈缗钱状排列 ?某些疾病如肝病、肾炎因患者血清中白蛋 白含量低而致球蛋白含量相对或绝对性增 高,使红细胞成钱串状排列,外观类似凝 集,真与假的区别是在镜下观察时,假凝 集红稀薄啊成钱串状排列,形状基本完整, 加一滴等渗盐水于玻片上并混匀后钱串状 排列消失,而真凝集加等渗盐水红细胞不 会散开。 全凝集或多凝集现象 ? 正常人红细胞上有T抗原,血清中有抗T,但因红 细胞表面存在的唾液酸使T抗原无活性,如果红 细胞被细菌污染,细菌酶消化了红细胞表面的唾 液酸,暴露出T抗原而被激活,可与多数人血清 凝集称为多凝集,如与所有人血清都凝集称为全 凝集。出现这两种现象时可用多份AB型血清加以 证实,因此种现象与AB型血清也发生凝集,应重 新抽血。 血型鉴定与交叉配血的异常及其克服 办法 细菌 酶 RBCT抗原 (无活性) 激活 RBCT抗原 + 血清抗T抗体 (任何人) (有活性) 凝集 T凝集现象 凝集特点:4℃>室温>37℃。 血型鉴定与交叉配血的异常及其克服 办法 ?类B抗原 ORBC ARBC 细菌大肠 杆菌O86 感染 ORBC类B抗原 ARBC类B抗原 抗B 凝集 故常把O型误定B型,A型误定为AB型,呈假 阳性。病情好转时类B消失。 交叉配血试验中的不配合问题 首先应考虑受血者和供血者的血型鉴定是否有 错。必须重新鉴定血型,必要时进行Rh血型鉴 定及抗体筛选。 其次,应注意有无特异性同种抗体、特异性未 知的同种抗体存在。 交叉配血试验中不配合的处理 1、与个别同型献血者不能配合,可另选同型献血 者进行配血。 2、与多个献血者配血不合,如为盐水介质配血法, 应考虑 ① ABO血型鉴定是否有错。必须重新鉴定 血型 ②ABO亚型不合,做亚型及不规则抗体的鉴 定。③非特异性凝集。如冷凝集。 如为抗人球蛋白配血不合,应考虑Rh或其他系统 免疫性抗体的存在,应做Rh血型鉴定并用系列标 准RBC检测病人血清,确定抗体性质。