第一篇:血型鉴定与交叉配血制度

血型鉴定与交叉配血制度
1.病人急需鉴定血型或交叉配合时,医生应在检验单上注明“急”字,并注明时间到分。
2.血型鉴定包括ABO血型和Rh(D)血型,两人核对操作,正反定型相符,方可报告。
3.交叉配血试验的血样标本必须是输血前3天之内的。
4.输血科工作人员必须认真核对申请单、受血者和供血者的血样,复查受血者和供血者ABO血型,Rh(D)血型,正确无误后再进行交叉配血。 5.凡输注全血、浓缩RBC、洗涤RBC、冰冻RBC、浓缩WBC、浓缩血小板、机采血小板,都应做交叉配血试验,输注血浆(普通浆、冰冻血浆)也应做次侧配血试验。
6.血库必须严格按照实验规程操作,认真仔细做好交叉配血试验,两人核对操作相符,方可报告,并详细填写好“交叉配血报告单”,报告单上必须双人签名,时间精确到分钟。
7.交叉配血合格后,受血者与供血者的血样及主侧、次侧管均应放入2~6℃专用冰箱内至少保存7天,以备对输血不良反应追查原因。
8.对于手术上或其他急诊大输血时,输血科应先交叉配合1~2袋血并及时送往病室或手术室,然后再交叉配合剩下的血液。

第二篇:交叉配血法验证鱼类血型

交叉配血法验证鱼类血型
Cross matching blood method validates fish blood type
邓韩涛2009308200608水族090
3摘要本试验中通过抗体来区分红细胞膜上的抗原的方法来证明鱼类血型存在。先用不同的浓度梯度实验找出最适合该实验的红细胞悬液浓度,然后按照该浓度配制红细胞悬液,放于冰箱冷冻待用。再制作血清,静置后离心,上清液即为血清。最后用红细胞悬液与血清进行交叉配血,观察是否发生凝集现象,从而来判断鱼类是否存在血型。
关键字 血型 红细胞悬液 血清 抗原 抗体 交叉配血
血型指红细胞膜上存在的特异性抗原的类型。正常情况下,红细胞是均匀分布在血液中的,如果将血型不相融的两个个体的血滴在玻片上混合,红细胞即出现凝聚成团的免疫反应,在补体作用下,红细胞的凝集伴有溶血,其凝集本质是抗原—抗体反应。红细胞表面的抗原即特异性糖蛋白或糖脂为凝集原,血清中的能将红细胞膜上凝集原引起凝集反应的特异抗体为凝集素。同种血型的抗原抗体不发生凝集反应,而相异血型则发生。本试验中通过抗体来区分红细胞膜上的抗原的方法来证明鱼类血型存在。先做一个浓度梯度实验找出最适合该实验的红细胞悬液浓度,然后按照该浓度配制红细胞悬液,冷冻,再分别制作血清,静置后再离心,最后用红细胞悬液与血清进行交叉配血,观察是否发生凝集现象,从而来判断鱼类是否存在血型。 证明鱼类血型存在有着重要的实际意义:进行鱼类血统登记,为鱼类建立准确可靠的系谱资料,能够防止血统混乱,保证育种工作的可靠性,减少繁殖配种工作的误差。选择鱼类经济性状,可以利用血型与生产力,抗病力之间的关系,作为优良个体选育和品种改良的依据。在鱼类分类上的应用,用血清蛋白中的不同抗原作为种类鉴别的辅助特征。判别鱼类亲缘的远近。
一 研究内容
将异体鲫鱼的血清与红细胞混合,观察是否发生凝集反应。
二 研究对象
鲫鱼4条
三 实验设备及药品:
2ml注射器5支,尖头滴管8支,试管20只,玻璃滴定板4片,解剖盘1个,显微镜1台,试管架2个,纱布,50ml烧杯1个,500ml烧杯1个,镊子1把,记号笔1只,鱼用生理盐水,离心机,冷冻箱,1000ul移液枪一支,棉花
四 实验方法与步骤:
(一)按下列药品制备1000ml鱼用生理盐水
NaCl:5.9g、 KCl: 0.25g 、 CaCl2: 0.28g、 MgSO4. 7H2O: 0.29gNaHCO3:2.1g、 KH2PO4:1.6g加蒸馏水溶解定容至1000 ml
(二)取血
将鱼体用纱布包住,侧卧于解剖盘中,在鱼尾部(腹鳍和尾鳍之间)侧线下1cm处用镊子去除少许鳞片,将注射器垂直插入肌肉,穿到脊椎骨后,稍往下方移动,插入尾静脉内,轻轻抽取注射器,让血在负压作用下自然流入注射器内。
(三)制备适宜浓度的红细胞悬液。
选择一条鱼的血液,分别滴一滴血液到加有0.4ml,0.8ml,1.0ml,2.0ml鱼用生理盐水的小试管中制备红细胞悬液,分别编号为a、b、c、d,静置五分钟,观察溶液凝聚情况。结果显示c管中凝聚现象最不明显,编号血细胞1。重复上述步骤,按照c管的浓度配制其他三条鱼的红细胞悬液,并分别编号
3、4。将1,2,3,4号管放入4℃的冰箱里冷冻3到4小时,备用。
(四)制备血清
剩余血液注入另一只试管中,不加抗凝剂,放到1500r/min的离心机中离心30分钟,然后取出,吸取上清液,分装备用,分别编号血清1,2,3,4。
(五)、交叉配血
1、取玻璃滴定板4块,编号1,2,3,4,在1号板上四个孔里分别滴一滴1号鱼的红细胞悬液,2,3,4号板重复上述操作分别滴加2,3,4号红细胞悬液,
2、将1号鱼的血清依次滴一滴到4块玻片的第1孔鱼红细胞悬液中,将2,3,
4号鱼的血清重复上述步骤滴一滴到3块玻片的2-4孔鱼红细胞悬液中。
3、放置10-30min后观察,如肉眼不易观察则使用显微镜观察。
五 实验结果与分析
“+”——表示出现凝聚现象,“—”——表示没出现凝聚现象, “*”——表示无实验结果。
注:第三组血清实验由于第三条鱼所取血清过少,吸取的血清中含有红细胞,所以未看到实验结果。
结果分析:
1.由于实验误差的原因,导致一,二,四组实验都没发生凝集现象,所以可能导致实验失败。
2.在存在的实验误差是在允许的范围内,而导致一,二,四组没有发生凝集,可能证明鱼类不存在血型。
3.由于离心所得血清过少导致现象不足以观察。
误差分析:由于实验条件的问题,鱼类种类不多,不能具有普遍性。另外操作过程存在错误,尤其取血环节花费大量时间,可能对实验会有影响。
六、清洗并整理实验器具及材料
参考文献:
杨秀平,《动物生理学实验》,第1版,北京,高等教育出版社,2004
注:实验设备及药品:
10ml注射器4支,尖头滴管8支,试管20只,双凹玻片6片,解剖盘1个,显微镜1台,试管架2个,纱布,50ml烧杯1个,500ml烧杯1个,大剪刀1把,镊子1把,记号笔1只,鱼用生理盐水.

第三篇:交叉配血和定血型的注意事项

交叉配血和定血型的注意事项
一、操作技术错误(最常见)
二、红细胞标本问题
1、未加入抗体或血清
2、实验温度(37℃凝集会下降)
3、未识别溶血
4、血清与红细胞比例不当
5、离心速度、时间不够
6、使用失效或错误试剂
7、实验结果记录、解释错误
8、离心速度过大、时间过长
9、使用了受到细菌污染的试剂
10、试验器皿不干净
11、实验结果记录、解释错误
患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞,如骨髓移植患者,或非O型人接受O型红细胞
某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞,一些白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱,应用抗-A、抗-B试剂未能出现预期的凝集反应
红细胞获得性或遗传性的异常,如获得性B抗原红细胞或Tn/T多凝集红细胞,人血清抗-A、抗-B试剂可能与这些异常的红细胞反应 使用未洗涤的红细胞标本,其表面黏附的血浆或血清中含针对抗-A、抗-B试剂中染色剂或其他成分的抗体,出现假阳性反应
患者血清中高活性、高浓度冷自身抗体严重致敏(包被)自身红细胞,以至自发地发生凝集,而不是抗体试剂的特异性免疫反应所致
红细胞表面包被IgG类抗体
三、血清标本的问题
小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块被误认为是血液凝集,如使用血浆标本或未完全去除纤维蛋白的血清标本时。
免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。老年人ABO抗体减弱
4-6月龄内婴儿血清中ABO抗体阴性或很弱,一般只测正定 血清中不正常浓度和比例的蛋白质成分或高分子蛋白增多可引起非特异凝集,如缗钱状红细胞的非特异凝集。
血清中含抗-A、抗-B以外的其他红细胞抗体,如抗-M、抗-I等。
患者接受了ABO血型不同的骨髓移植 患者血清中含有针对红细胞保护剂的抗体
大量C 1分子由于异常高效价的补体结合抗体抗-A、抗-B作用,结合到红细胞膜上,遮蔽了A、B抗原位点,不发生凝集
四、分析和处理
1、重新采集标本,以避免采集、标记、污染等错误
2、查询患者既往病史、输血史、用药史、骨髓移植史
3、彻底洗涤标本或试剂红细胞
4、应用抗-AB、抗-A
1、或抗-H检测红细胞
5、分析抗筛结果,确定结果是否受同种异型或自身冷抗体干扰
6、室温孵育30min后,离心观察结果,以检测弱的抗原抗体反应
7、 做自身红细胞做对照,以确定自身抗体的干扰 意外的血清学反应所致的ABO正反定不符 抗体太弱或消失
非正常高浓度的抗-A、抗-B可引起前带现象 A
2、A2B或其他ABO亚型人血清中可能有抗-A1 患者血浆蛋白浓度过高或静脉输用了大量大分子药物等原因,可发生类似凝集现象,如缗钱状凝集
冷自身抗体,如抗-I、抗-IH、抗-IA等 自身免疫性温型抗体 同种抗体/意外抗体
五、ABO正反定不符及其处理
1、抗体太弱或消失
如新生儿、老年人、免疫抑制患者,应注意患者的年龄和诊断
2、非正常高浓度的抗-A、抗-B可引起前带现象,导致假阴性,将血清稀释或用EDTA(2.5%)处理可消除
3、A
2、A2B或其他ABO亚型人血清中可能有抗-A1, 抗-A1只凝集A1型红细胞而不凝集A
2、O型红细胞
4、患者血浆蛋白浓度过高或静脉输用了大量大分子药物等原因,可发生类似凝集现象,如缗钱状凝集
将血清用生理盐水稀释3倍或用盐水替换技术可消除
5、冷自身抗体,如抗-I、抗-IH、抗-IA等(自凝) (1)所有试剂及细胞37℃孵育,37℃下判读结果 (2)将冷自身抗体吸收
(3)将血清用0.01mol/L DTT处理和再定型
6、自身免疫性温型抗体
自身免疫性溶血性贫血病人血清中可有温型自身抗体,37℃反应比室温强
血清能凝集自身和其他各型红细胞,若红细胞上吸附自这种自身抗体,在自身或他人血清中均可出现凝集,正定被误认为AB型,反定被误认为O型。
用递增温度(22℃,37℃,45℃)洗涤红细胞后再做血型鉴定
7、同种抗体/意外抗体
室温下抗-P、抗-M、抗E等,可能出现意外反应,干扰ABO血型鉴定
抗体特异性抗体鉴定,选择抗原阴性的红细胞做反定
六、应用举例
多发性骨髓瘤致ABO血型鉴定困难1例 多发性骨髓瘤(MM):
一种恶性浆细胞疾病,大量分泌异常的单克隆免疫球蛋白(M 蛋白) ,影响红细胞表面负电荷状态,血清蛋白浓度和比例异常,A/G比例失调,红细胞呈缗钱状非特异性聚集,给血型鉴定带来一定的困难。
血型血清学检查
正定: A型,RhD(+) 反定: O型 直抗:(-) 抗筛:(+) 处理
1、吸收试验
6次洗涤后的患者压积红细胞加等量的抗-A、抗-B血清(1:128)4℃ 1h,离心,取上清,测吸收液的抗-A、抗-B效价
抗-A降低明显,抗-B 1:128
2、放散试验
吸收后的患者RBC用NS洗涤6次+等量的NS,56℃ 10~15min,放散液与5%标准 A、B RBC反应,Ac:++ Bc:Bc:++
说明患者血清中有抗-B,无抗-A 患者血型最终确定为A型RhD(+),输注2U 经过筛选的A型悬浮RBC后,未见任何不良反应。

第四篇:血型及交叉配血检验

1 红细胞血型
血型:是指各种血液成分的遗传多态性,它受独立的遗传基因所控制。由若干个相互关联的抗原抗体组成的血型体系称血型系统。
目前已发现的红细胞抗原有400余种,被归纳为27个血型系统。其中发现最早,且与人类输血关系最密切的是ABO血型系统,其次是Rh血型系统。
ABO血型系统
现知ABO遗传座位在第9号染色体长臂上,A基因的产物是N-乙酰半乳糖转移酶,它能把α-N-乙酰半乳糖分子接到一个前身物糖蛋白上,产生A抗原决定簇;B基因的产物是半乳糖转换酶,它能把α-D-半乳糖接到前身物糖蛋白上并产生B抗原决定簇;O基因不编码酶,因此是一个无效等位基因,故O型又被称为缺失型(nun type);AB杂合子分别由A和B基因产生AB两种酶。
不同个体红细胞膜抗原经上述某种遗传基因作用,形成A、B、O、AB四种正常型别和许多亚型。它们的分型原则是:红细胞上有A抗原,血清中有抗B抗体的为A型,红细胞上有B抗原,血清中有抗A抗体的为B型;红细胞上有A和B两种抗原,血清中不含抗A和抗B的为AB型;红细胞上没有A和B抗原,血清中却有抗A和抗B抗体者为O型,H抗原存在于ABO各型红细胞上,称为H物质(基础抗原),但以O型最多。ABO血型系统的共同特点是红细胞上含有某种抗原,血清中就不存在对应的天然抗体。反之,血清中含有某种天然抗体,红细胞上就不存在其对应抗原,此规律是Landsteiner在1900年首先发现的,故称Landsteiner定律。根据此规律用标准抗血清检测红细胞上的抗原(正定血型),或用标准红细胞检测被检者血清中抗体(反定血型)来判断血型。