指示植物一般有两 种类型:一种是接种后产生系统性症状,其病毒可 扩展到植物非接种部位,通常没有局部病斑;另一 种是只产生局部病斑,常由坏死、褪绿或环状病斑 构成。 几种马铃薯病毒种类的症状 种类 马铃薯X病毒 马铃薯S病毒 马铃薯Y病毒 症状 脉间花叶 叶脉深陷粗缩 随品种而异,有些 微花叶、有些坏死 指示植物 千日红 曼陀罗 辣椒 心叶烟 番茄 千日红 苋色藜 光曼陀罗 野生马铃薯 洋酸菜 曼陀罗 马铃薯卷叶病毒 浅白色、紫色、红色 洋酸菜 方法 ? 摩擦接种法: ? 嫁接法: 木本多年生果树植物及草莓等无性繁殖的草 本植物用汁液接种法比较困难,所以通常采用嫁 接接种的方法。植物作砧木,被鉴定植物作接穗, 常用劈接法。 ②抗血清(antisemm)鉴定法 用已知抗血清可以鉴定未知病毒的种类。 这种抗血清就是高度专一性的试剂,这种方法 特异性高,测定速度快,一般几小时甚至几分 钟就可以完成。所以抗血清法成为植物病毒鉴 定中最有用的方法之一。 血清学技术鉴定病毒的原理: 抗血清制备:利用植物病毒衣壳蛋白的抗原(antigen)特性, 可以制备病毒特异性的抗血清(antiserum)。先将纯化的植物 病毒注射小动物(兔子、小白鼠、鸡等),一定时间后取血,获 得抗血清。血清制备的关键是病毒的纯化,纯度高的病毒才能 获得特异性强的抗血清。 血清反应:植物病毒与其血清的反应有好多种,但依据的 原理都是抗原与抗体的特异性结合。最常用的两种方法是琼脂 双扩散和酶联免疫吸附测定法。 植物病毒血清学鉴定病毒的常见方法 ? 琼脂双扩散法:在一定浓度的琼脂凝胶中,抗 体和抗原互相扩散,在适当的位置形成沉淀; 沉淀线的形状说明抗原和抗体的相互关系。 ? 酶联免疫吸附(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)法:该方法利用了酶 的放大作用,使免疫检测的灵敏度大大提高。 ? ③电子显微镜(elecmc microscope)检查法 由于人的眼睛难以观察小于0.1mm的微粒,而借助 于普通光学显微镜也只能看到小至200bm的微粒,所 以只有通过电子显微镜才能分辨0.5μm大小的病毒颗 粒。这样采用电子显微镜既可以直接观察病毒,检查 出有无病毒存在,了解病毒颗粒的大小、形状和结构, 又可以鉴定病毒的种类。这是一种较为先进的方法, 但需一定的设备和技术。 这一方法的优点是灵敏度高和能在植物粗提取 液中定量测定病毒。 ④酶联免疫鉴定法(Enzyme linked immunity absorption assay ELISA) 酶联免疫法是指采用酶标记抗原或抗 体的定量测定法。将抗原固定在支持物上, 加入待检血清,然后加入酶(过氧化物酶或 碱性磷酸酶)标记的抗体,使待检血清中与 对应抗原的特异性抗体结合,最后用特殊 分光光度计测定。此法是现在灵敏度较高 和常使用的方法。 ? 2. 无病毒苗的保存繁殖 无病毒植株并不是有额外的抗病性,它们 有可能很快又被重新感染。所以一旦培育得到 无病毒苗,就应很好地隔离与保存。 无病毒苗在生产中的利用 ? 无病毒苗在生产中的利用也要防止病毒的再感染。 生产场所应隔离病毒感染途径,做好土壤消毒或 防蚜等工作。在此种植区及种植规模小的地方, 要较长时间才会感染。而在种植时间长、轮作及 种植规模大的产地则在短期内就可以感染。一旦 感染,便会影响产量和质量的保证。因此,应重 新采用无病毒苗,以保证生产的质量。 ? 无病毒苗的效果 无病毒苗可以表现出明显的优良效果。如草 莓可增产20%—50%,植株结果多,单果重增加, 上等果比例提高。菊花切花品种的脱毒株,表现 出株高增加,切花数增多,花朵大,切花较重等 特点。 ? 无毒种苗的繁育体系: 流程 第一年 脱毒试管苗 工作区域 无菌室 无菌室 网室or温室 隔离区 第二年 第三年 第四年 原原种 原种 良种 第五年 商品种 生产 繁殖区 生产大田 ? 课堂练习: 1、为什么对脱毒处理后产生的植株必须进行 病毒鉴定?为什么已通过病毒(特定病毒)鉴 定的无病毒苗还须重复鉴定? 2、 某地区的一种马铃薯经多年的种植后, 植株变的矮小,产量和品质都下降,怀疑 是由病毒所至。请你设计一个病毒的鉴定 和脱毒的技术方案。