雄蚕蛾:广西华佳蚕种场;枸杞、山药、益智仁、党参、桂圆、米香型白酒:市售;甲醛(AR级):东莞市东旺化玻仪器有限公司;睾丸酮标准样品:广东泛宏贸易有限公司;无水乙醇:广东光华科技股份有限公司。101-2-BS-II型电热烘箱:上海跃进公司;DF-20型粉碎机:温州市林大公司;KELAO型渗漉罐:上海科劳公司;Waters高效液相色谱仪:Waters中国有限公司;JM-B型天平:上海纪铭有限公司。
1.2.2.1 原料要求选用无化学农药污染及未交配家蚕活体初羽化雄蚕蛾为主料,以枸杞、山药、益智仁、党参、桂圆等为辅料,经过粉碎、渗漉、优化配比。1.2.2.2 雄蚕蛾去鳞毛除腥雄蚕蛾通过清水冲洗、机器揉搓脱毛、脱鳞,沥干水后在65℃左右的温度进行烘烤6 h。1.2.2.3 雄蚕蛾有效成分的提取为了能快速提取雄蚕蛾有效成分,将去除鳞毛和头部的雄蚕蛾用粉碎机进行粉碎,将蛾粉装入渗漉罐,加入50%vol米香型白酒进行渗漉,取滤液1.2.2.4 辅料有效成分的浸提为了使辅料有效成分能快速浸提,采用粉碎机进行粉碎,粉碎细度要求在200目以上,并用50%vol左右的米香型白酒浸提。1.2.2.5 混合调配雄蚕蛾渗漉液与中药材浸提液经优化配比,调配、过滤、杀菌、灌装得到养生酒。以睾丸酮提取率为考核指标,考察酒度、流加速度、米酒流加量对雄蚕蛾养生酒中睾丸酮活性物质的影响。选用流加速度、酒度、米酒流加量3个因素进行正交试验优化雄蚕蛾养生酒睾丸酮活性物质的提取工艺,因素水平设定如表1所示。睾丸酮含量采用高效液相色谱方法测定。
表1 正交试验因素与水平表
Table 1 Orthogonal test factors and levels
液相条件:Waters高效液相色谱仪,色谱柱(shin pack C18 150×4.6 mm);流动相1为乙腈,流动相2为超纯水,进样体积比70∶30;流速1.0 mL/min,进样量 10 μL;柱温室温20℃;检测波长242 nm;精确称取睾丸酮标样5 mg,置于10 mL容量瓶中,加入甲醛溶解稀释至刻度,摇匀。再将此溶液稀释100倍作为标准溶液。此时浓度为5 μg/mL。进样量分别为 2、4、6、8、10 μL。记录峰面积,以峰面积为纵坐标(y),以标准品的质量(μg)为横坐标(x),绘制标准曲线:y=4×106x+1 110