宫颈注射辣椒素:将辣椒素溶解在 0.5 ml 赋形剂(盐水-乙醇-吐温 80,体积比为 8:1:1)中,并在注射前制备不同浓度(7.5、15、22.5 μg/μl)的辣椒素溶液。溶剂比率基于先前实验的结果,辣椒素剂量和辣椒素注射后持续时间根据我们的初步实验确定。实验前一天大鼠适应测试环境30分钟,并在测试开始前再次适应30分钟。将大鼠短暂麻醉并维持在自主通气。大鼠用 4% 异氟烷在 100% 氧气中以 1 L/min 的流速诱导麻醉。一旦大鼠不再对挤压有反应,它们就会被转移到温控手术板上,并在 0.5%–0.9% 的异氟烷维持麻醉下给药。调整异氟烷的浓度,以防止过度麻醉,以及避免轻麻醉导致得疼痛和自发运动。大鼠保持相对舒适的姿势,仰卧,骨盆抬高 3 cm。 凡士林涂在阴道区域,以避免接触刺激性化学物质。使用圆形金属尖端的无菌微量注射器(50 μl),手动控制速度为8-10 μl/min,将少量溶液(40 μl)注入大鼠宫颈管。注射器针尖插入阴道约2cm,注射后10min取出,在此期间大鼠保持原位,以减少由于液体流动造成干扰的可能性。使用此方法将相同体积的染料注射到完整大鼠的子宫颈管中,以验证药物的局部释放,而没有泄漏到子宫角、阴道或腹腔中。检查员接受过培训,以确保将体积注射到同一区域而不会损坏动物的阴道或子宫颈。
图1、 宫颈痛模型的建立。(A) 红色直线代表插入大鼠阴道约 2 厘米直到到达子宫颈管的微型注射器。 (B) 将辣椒素应用到子宫颈后大鼠的行为特征。
宫颈辣椒素给药诱发的自发行为:宫颈辣椒素给药相关典型行为:为了确定诱导子宫颈炎性伤害感受所需的辣椒素的有效剂量,进行了初步的辣椒素剂量-反应实验,并观察和评估了自发行为。根据已有的研究和在我们的模型中观察到的动物行为,选择并记录6种典型行为的发生率和持续时间,包括0.3-0.9mg辣椒素注射后的梳理、养育、转头、舔背、驼背和后肢过度伸展。为了准确分析与辣椒素引起的宫颈炎性疼痛相关的每一种特定行为,我们对六种行为的持续时间与不同剂量辣椒素的持续时间进行了 Pearson 相关分析。在六种行为中,舔和转头是仅有的两个 r > 0.4 的参数. 辣椒素治疗组大鼠舔舐腹部和转头的持续时间显着高于赋形剂组大鼠,呈剂量依赖性,而行为持续时间没有统计学显著差异,然而,在赋形剂和辣椒素治疗组之间,行为持续时间(包