非化学结合法 1、物理吸附法 (physical adsorption) 是通过氢键、疏水键等作用力将酶吸附于不溶性载体的方法。 选择载体的原则要有巨大的比表面积 要有活泼的表面 便于装柱进行连续反应。 氧化铅、皂土、白土、高岭土、多孔玻璃、二氧化钛等。 将酶与含有离子交换基团的水不溶载体相结合而达到固定化 的一种方法。 在适宜的pH和离子强度条件下,利用酶的侧链解离基团和离子 交换基团间的相互作用而达到 酶固定化的方法。 离子交换剂的吸附容量一般大于物理吸附剂。 阴离子交换剂:二乙基氨基乙基(DEAE)—纤维素、混合胺类(ECTEDLA)- 纤维素、四乙氨基乙基 (TEAE)-纤维素、DEAE-葡聚糖凝 胶、Amberlite IRA-93、410、900等。 阳离子交换剂:羧甲基(CM)—纤维素、纤维素柠檬酸盐、Amberlite CG50、 IRC—50、IR—200、 Dowex-50等。 1969年,最早应用于工业生产的固定化氨基酰化酶就是使 用多糖类阴离子交换剂DEAE-Sephadex A-25固定化的。 吸附法特点 优点:操作简单,可供选择的载体类型多,吸附过 程可同时达到纯化和固化的目的,所得到的 固定化酶使用失活后可以重新活化和再生。 酶活性中心不易被破坏和酶高级结构变化少, 酶活力损失很少。 缺点:酶与载体相互作用力弱导致酶易脱落。 蛋白质浓度:若吸附剂的量固定,随蛋白质浓度增加,吸附量也增加,直至饱和。 吸附速度:蛋白质在固体载体上的吸附速度要比小分子慢得多。 载体:非多孔性载体---颗粒越小吸附力越强。