菌种保藏:甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏,保藏时间一般为2-4年左右。
(1)用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
(2)平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱,培养24-48小时,至单菌落的大小为3mm左右。
(3)挑取一个单菌落,接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时,至菌密度OD600为1.0-1.5。
(4)用火焰灭菌的接种环取少量种子液,涂片后,作革兰氏染色,在显微镜下观察菌体的形态,及是否有杂菌。(5)按30%甘油:种子液为1:1(V/V)的量加入无菌甘油,混合后分装至事先灭菌的菌种保存管(1-2mL/管),-70℃或液氮保存。
甘油保存菌种方法的改良摘要:
目的:将甘油原液保存菌种方法进行改良,寻找一种简便易行的保存实验室各种菌种的方法。
方法:将一般细菌的菌种纯化后接种于普通肉汤管,4~6h增菌后,加入适量甘油一生理盐水保存液,-20℃冰箱保存;链球菌属和奈瑟氏菌属的菌株纯化后接种于血清肉汤管,在5%~10%CO2中经8~10h增菌后,加入适量保存液,80℃低温冰箱保存;真菌菌种纯化后直接取菌洗入肉汤,不做培养,加入保存液后,-20℃冰箱保存。结果在连续3年实验期内,各菌种保存效果良好,且其形态结构、染色特性、生化反应等与标准株相符。结论使用甘油生理盐水保存法来保存菌种,各菌种保存时间长,方法简便,特别是使链球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般实验室得以保存。菌种的甘油冷冻保存法摘要:以体积分数为0.8的甘油生理直国水为保存液,在-20℃保存军团菌、葡萄球菌等35个菌株,观察9年,效果良好。
医学微生物教学用菌种保存方法的比较摘要:
目的:寻求一种简便实用的有效保存各种教学用菌种的方法。
方法:将各待保存的菌种纯化后用取菌环直接从平板上刮取,置于盛有0.5ml各保存液的菌种瓶中,甘油原液-20℃保存,石蜡油和兔防凝血4℃保存。结果在连续52个月的实验期内,甘油保存的各菌种效果较好,且各菌生化反应、形态结构、染色特性等与标准株相符。结论甘油保存法操作简便,保存时间长,适用于微生物教学用各菌种的保存。