美迪西药理学服务为您提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验,详情可联系获得。邮箱:marketing@medicilon.com.cn 电话:021 58591500。裸鼠服务流程
1、操作方案设计
2、方法开发
3、细胞制备
4、裸鼠成瘤
裸鼠皮下成瘤动物实验方法
分组:SW620细胞组、SW620转染无关siRNA组、SW620转染目的基因(每组6只)。
细胞准备及注射裸鼠方法: 到动物室准备实验。
取出未作处理的小鼠和处理后小鼠用鼠笼,顺序摆放在超净台中。选体形较大的小鼠称重,以3μl/g剂量,腹腔注射10%水合氯醛麻醉小鼠。约5分钟,小鼠开始进入安静状态,将其仰卧固定。切忌麻醉剂过量使用。
(1)铺白布于鼠板上,仰卧位固定小鼠四爪,碘伏棉球消毒腹侧面上至颈部、下至腹股沟、后至腋后线。消毒两次。铺手术巾于小鼠上,在其左侧剪口(4*4cm),暴露其左侧腹部, 用碘伏消毒一次。在左侧肋弓下缘1cm处向下剪开2cm皮肤,暴露腹壁肌肉,镊子牵拉腹壁肌肉,避开腹腔内脾脏,剪开腹壁肌肉,暴露内脏。用棉签蘸PBS,拨出脾脏下极,切忌牵拉,以免损伤脾脏和胰腺。
(2)找到脾脏同时,用25微升Matrigel混合于细胞管中,打悬细胞沉淀,使细胞分散均匀成单细胞悬液。用BD针吸净EP管中的单细胞悬液,稍退针芯,打出气泡,在脾脏下极内侧(凹面)进针向脾门方向约2mm开始注射细胞,注射完毕停留约30秒钟,缓慢退出针,以防细胞渗出。同时用蘸PBS的棉球压迫周围出血点止血。
(3)用注射器吸取庆大霉素注射液(用生理盐水250:1稀释)约400微升,注入腹腔,棉球蘸干皮缘渗出的抗生素。开始缝合腹壁肌肉(连续缝合4针)。再次用注射器吸取庆大霉素注射液约400微升冲洗缝合口,棉球蘸干。缝合皮肤(间断缝合4针)。碘伏棉球消毒缝合口。撤除固定,使小鼠处于自然体位,放于鼠笼中。
(4)所有细胞注射完毕,剪耳标记,记录剪耳标记及分组情况。
Day5-7:注意小鼠的状态,及时发现小鼠是否有因手术刺激、胰腺损伤、感染等死亡的情况。
Day42:颈椎离断,处死小鼠,解剖尸体,观察脾脏肿瘤生长状况,肝脏、肺脏及其他器官是否有转移瘤形成。所有可疑组织均做好标记,拍照,若有表面结节,计数后,冻于液氮中。视结果情况用10%甲醛溶液固定过夜