5.1 ADC的药效学评价
ADC作用的机制是通过单抗的靶向作用特异性地识别肿瘤细胞表面抗原,利用靶抗原介导的内吞作用使ADC进入肿瘤细胞内部,在细胞内水解或酶解释放小分子药物,从而达到杀死肿瘤细胞的目的。应根据其药物结构特征和产品技术特点,开展药效学研究和评价。
5.1.1 ADC靶向作用考察
ADC是通过单抗靶向性引导小分子药物发挥作用的。在偶联连接子和小分子药物后,单抗对靶点的亲和力可能会受到影响,因此,ADC整体的靶向性是ADC开发的关键部分,建议采用体外和体内等多种方法和设计方案充分评价。体外可采用Biacore、竞争ELISA、流式细胞术等方法,检测ADC对靶抗原的结合活性(亲和力);体内可通过高表达靶抗原的肿瘤细胞在荷瘤鼠中的组织分布试验对ADC在肿瘤组织的富集情况进行考察(如因抗原干扰,无法采用常规ELISA方法检测,可考虑采用放射性免疫方法以及检测小分子药物方式进行评价)。体内和体外靶向性考察试验中可考虑使用靶抗原表达阴性的细胞或荷瘤鼠或者使用非特异性靶点的ADC作为对照,通过与其对比可以更好地显示ADC的靶向性特点,同时,也可考虑增加小分子药物组,进一步证明偶联抗体靶向性。另外,在单抗与小分子药物连接形成ADC后,其空间结构有可能发生变化,进而可能影响靶抗原的结合特异性。因此,有必要对ADC与靶抗原的结合特异性进行考察,可以采用ELISA或表面等离子体共振法等一些非标记技术进行评估。
5.1.2 肿瘤细胞对ADC内吞作用的考察
ADC的诱导内吞作用也是某些ADC发挥药效的关键环节,并且已经成为ADC开发阶段的重要考察内容。内吞作用受到多种因素的影响,如对抗原表位的选择性、抗体与抗原结合的亲和力以及ADC进入细胞内的运输模式等。因此,在药物研发早期阶段需要筛选出内吞作用最合适的ADC。用于提交IND申请的内吞试验,建议对候选分子进行内吞作用的时间动态考察(内吞动力学)。采用流式细胞术等体外技术或共聚焦免疫荧光法可以对ADC的内吞作用进行考察。细胞药代动力学也是一个较好的方法,通过比较阴性及阳性细胞中的小分子药物含量,来判断内吞效率。当然,对于不需要借助内吞作用发挥疗效的ADC可以忽略此项研究。
5.1.3 ADC抗肿瘤作用的考察
具体的体内外评价方法和模型与其他抗肿瘤药物没有差别。可以采用各种传统或者经验证