做细胞实验的亲们,经常需要对细胞的活性进行验证,如何知道自己研究的细胞是否还活着,活性怎么样? PCR、抗体IHC染色等细胞分析方法进行活性检测,由于只能反映某个时间点的细胞行为而具有局限性。当传统细胞分析方法无法获得预期结果时,使用实时细胞分析方法通常会得到很多新的生物学发现,因此活细胞分析技术在科研过程中发挥着越来越关键的作用。今天小艾来为您介绍一下我们常用的分析细胞活性的方法。
实验室细胞活性检测的常用方法有(包括活性检测和增殖检测):
化学发光法细胞活性检测
荧光染料细胞活性检测
细胞代谢检测
细胞计数检测(台盼蓝)
DNA合成增殖
化学发光法细胞活性检:
腺苷三磷酸(ATP adenosine triphosphate)是由腺嘌呤、核糖和3个磷酸基团连接而成,水解时释放出能量较多,是生物体内最直接的能量来源。ATP发光法,是通过检测细胞内ATP含量来分析细胞活性及增殖的。常见的ATP发光法是利用外源萤火虫荧光素/荧光素酶与细胞内的ATP发生氧化反应而产生光子,通过监测光度来检测ATP含量,从而分析细胞活性与增殖。
原理图:
优点:灵敏、快速、便捷、稳定,同时可以把ATP数量化,用相对光强度(RLU)来进行定量。
ReadiuseTM快速发光ATP检测试剂盒,货号:AAT-21601
荧光染料细胞活性检测
在所有现有的荧光染料中,荧光素二乙酸酯(FDA)及其衍生物(如CFSE)是非荧光分子,其扩散到细胞中并被细胞内非特异性酯酶水解以产生荧光。荧光产物仅在具有完整细胞膜和活性酯酶活性的细胞中产生和积累,荧光产物会跟随细胞分裂,被平均分配到子细胞中。进一步可用流式细胞仪分析细胞分裂增殖的情况,还可以通过细胞完整性对活死细胞分别进行标记。
优点:活体标记、简单、稳定、荧光时间长
活细胞荧光示踪探针CFSE(CFDA-SE),货号:AAT-22022
细胞代谢检测
CCK-8检测是一种基于 SST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测。其主要成分为水溶性四唑盐 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),SST-8 是一种类似于 MTT 的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜。SST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。