一、实验原理 微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征,也是分类 鉴定的依据之一。微生物大小的测定,需要在显微镜下,借 助于特殊工具—测微尺,包括目镜测微尺和镜台测微尺。 镜台测微尺适用于校正目镜测微尺每个的相对长度。然后,根据微生物细胞相当于目镜测微尺的个数,即可计算出 细胞的实际大小。 实验程序 (测定微生物的大小) 测定的工具:目镜测微尺 镜台测微尺 实验程序 (测定微生物的大小) 目镜测微尺的校正:在高倍镜下,看清镜台测微尺的刻 度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行, 移动推动器,使目镜测微尺的0 点与镜台测微尺的某一刻度 重合,然后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两 刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测 微尺的刻度每格长10μm,所以可得: 目镜测微尺每格长度( μm)=(镜台测微尺格数10)/ FS 实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第11 页/总21 注意:校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的接物镜、接目镜、镜筒长度等)进行,而且只能在 这特定的情况下才可重复使用。 菌体大小的测定:取下镜台测微尺,将细菌染色标本置 于载物台上,然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。 操作步骤 2、校正目镜测微尺3、菌丝体大小测定:将观察的黄曲霉菌丝体直接进行 菌丝体大小的测定 4、测定完毕后,取出目镜测微尺用擦净纸擦干净,放 回盒内保存。 第三节 微生物的显微计数 血球计数板通常是一块特制的厚载玻片,载玻片上有四 条槽而构成三个平台。 中间的平台较宽,其中间又被一短 横槽而隔成两半,每个半边上面各刻有一个方格网。 每个方格网共分九大格,其中间的一大格又称为计数室, FS 实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第12 页/总21 微生物的计数就在此大格中进行。常用的血球计数板的计数室有两种规格的刻度网格。 一种是一个大方格分成 16 个中方格,而每个中方格又 分成25 个小方格,即为1625。 另一种是一个大方格分成 25 个中方格,而每个中方格 又分成16 个小方格,即2516。 但是不管计数室是那种规格,其计数室的小格数总是相 同的,即1625=25l6=400(小格) 计算 每一个大方格边长为1mm,则每一大方格面积为1mm2。 盖上盖玻片后,载玻片计数室与盖玻片之间的高度为0.1mm, 所以每个计数室(大方格)的体积为0.1mm3。 在计数时,通常数五个中方格的总菌数,求得平均值。 再乘上16 或25 就得一大方格中的总菌数。然后再换算成1 毫升菌液中的总菌数。 (1ml=1cm3=1,000mm3) 实验材料 酵母菌悬液 显微镜,血球计数板。 FS 实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第13 页/总21 取酵母菌液,摇匀,用滴管由盖玻片边缘滴一小滴,使菌液自行渗入,计数室内不得有气泡。 个)中格的平均值,然后求得每个中格的平均值。乘上 16(或25)就得出计数 区总菌数,最后再换算到每mL 注意事项:计上不计下,计左不计右。出芽计一半实验程序 计数步骤: 取酵母菌液,摇匀,用滴管由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多),使菌液自行渗入,计数室内不得有气泡。 分钟后,将血球计数板置于显微镜载物台上,先用低倍镜找到计数板的大方格网位置。寻找时光圈要缩小, 光线要偏暗些,并将计数室移至视野中央。 在高倍镜下计数:随机地计数五个中格内的菌数,然FS 实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第14 页/总21 后求得每个中格的平均值。乘上16(或25)就得出一大格 中的总菌数,最后再换算到每毫升菌液中的含菌数量。 由于菌体细胞在血球计数板上处于不同的空间位置,要 在不同的焦距下才能看到,故观察时必须不断调节微调节器, 方能数到全部菌体,以免遗漏。 计算方法:酵母菌细胞数/毫升=[(X1+X2+X3+X4+X5)/5]*25(或16)101000稀释倍数 注意事项。计数时,为避免重复或遗漏计数,凡是遇到压在方格线 上的菌体,一般以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内, 遇到有芽体的酵母时,如果芽体和母体同等大时,就按两个 酵母菌体计数。 计数完毕后,血球计数板要立即清洗干净,并用吸水纸吸干,最后用擦镜纸擦干净并放回盒。 将显微计数结果记录于下表中。T 表示五个中方格中的 表示菌液稀释倍数。篇三:霉菌的形态观察 FS 实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第15 页/总21 姓名系年级 学号 组别 科目 题目霉菌的形态观察 同组者: 霉菌的形态观察 实验目的1.掌握配制马铃薯培养基(PDA)的一般方法。 2.学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。 3.了解并掌握四类霉菌(根霉、毛霉、曲霉、青霉) 的基本形态。 二.实验原理 1.霉菌 霉菌是可产生复杂分枝的菌丝体,其菌丝分基内菌丝和 气生菌丝,气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝,由 繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子 的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约3~10μm ),常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此,用 低倍显微镜即可观察。本实验采用毛霉、青霉,曲霉,根霉 四种常见的霉菌作为菌种进行观察。 FS 实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第16 页/总21 2.小室培养法观察霉菌的形态有多种方法,常用的有直接制片观察法、 载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法,本次实验采 用载玻片培养观察法(小室培养法)。 用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上,沿琼脂边 缘接种后盖上盖玻片培养,霉菌即在载玻片和盖玻片之间的 有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后,将载玻片 上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自 然生长状态,还便于观察不同发育期的培养物。 三.实验器材 1.菌种 曲霉(Aspergillus sp. ),青霉(Penicillium sp. ),毛霉 Mucorsp. )和根霉(Rhizopus sp.)培养48h 的马铃薯琼 脂(PDA)斜面培养物。 2.培养基及试剂 马铃薯琼脂(PDA),20%甘油(无菌),乙醇。 3.仪器及其它用品 无菌操作台,解剖刀,镊子,无菌吸管,U 型玻璃棒, FS 实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第17 页/总21 普通光学显微镜,擦镜纸,绸布,酒精灯,载玻片,接种针,培养皿等。 四.操作步骤 培养基的配制按附录所示配方称取PDA 各组分,先将马铃薯去皮,切 成小块称取20g 煮沸 姓名 系年级 学号 组别 科目 题目霉菌的形态观察 同组者: 20min,然后先用 层纱布过滤,将滤液体积用无菌水调至100mL,然后再加入糖及琼脂,加塞后用牛皮纸包好,准备灭菌。 培养基及装置的灭菌(1)灭菌准备 准备12 个平皿,在其中10 个平皿皿底铺一张略小于皿 底的圆滤纸片,再放一U 形玻棒,其上放一洁净载玻片和三 块盖玻片,盖上皿盖后再与另外2 个空平皿一起用牛皮纸包 100mL锥形瓶中用甘油配制 20%的甘油,加塞包好; 最后取2mL 移液管两支并用牛皮纸包好。 FS 实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第18 页/总21 (2)灭菌将上述用牛皮纸包好的仪器与试剂连同配好的PDA 培养 基一并放入灭菌锅中110灭菌20~30min(由于培养基中有 葡萄糖,为防止由于高温而使糖发生糊化而变质,灭菌温度 不宜过高)。 琼脂块制备分别取已灭菌并溶化冷却至约 50的马铃薯琼脂培养 基6~7mL 注入两个灭菌空平皿中,使之凝固成薄层。在两 个凝固后的平板背部用记号笔画下约11cm 的方格,通过无 菌操作,用解剖刀沿画下的方格线将其切成方形的琼脂块。 (注:解剖刀使用前应先在酒精中浸泡,然后在酒精灯上灼 烧,冷却后再进行切割操作) 接种在无菌操作台上,先用镊子将载玻片放于U型玻璃管上, 然后用解剖刀取一小块儿琼脂块,置于载玻片上,用接种环 分别从斜面培养物上挑取很少量的4 种菌的孢子,分别接种 于培养小室中琼脂块的边缘上,用无菌镊子将盖玻片覆盖在 琼脂块上。最后用移液管在培养小室中的圆滤纸上加2mL FS实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第19 页/总21 20%的甘油(用于保持平皿内的湿度 ,盖上皿盖并贴上标签,每一种菌接种两个小室(其中毛霉接种4 个小室)。 恒温培养将接种后的平皿正置于28培养箱中恒温培养7 在显微镜下直接观察小室培养后的载玻片,用低倍镜即可较为清晰的观察到霉菌的菌丝体及孢子,根据所学的四种 菌的基本特征对四种菌进行观察比较与区分,必要时可以采 用高倍镜对菌进行观察。 五.实验结果记录 1.四种霉菌的形态特征 姓名 系年级 学号 组别 科目 题目霉菌的形态观察 同组者: 毛霉、根霉、青霉、曲霉的形态特征比较 根霉的形态(1040)姓名 系年级 学号 组别 科目 题目霉菌的形态观察 同组者: FS 实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第20 页/总21 黑曲霉足细胞(1040)姓名 系年级 学号 组别 科目 题目霉菌的形态观察 同组者: 毛霉的形态(1040)分生小梗 青霉的形态(1040)六、实验小结 通过本次实验,学会了小室培养培及马铃薯培养基的配 制方法。另外,通过观察霉菌的形态并且有特别的关注不同 霉菌的细节及不同之处,比如菌丝是否有隔,孢子囊形态等 特征,细心比较各种霉菌细节状态的不同,掌握了霉菌的一 些基本形态特征,扩展了视野。 七、思考题 1、黑曲霉和黑根霉在形态特征上有何区别? FS 实用范本|DOCUMENT TEMPLATE 第21 页/总21 菌丝:根霉无隔有假根,曲霉无隔有足细胞。孢子梗:根霉位于假根上,曲霉由气生菌丝分化而来。 孢子囊形态:根霉孢子囊表面平滑,曲霉表面不平滑, 呈絮状。 2、如果要求对某放线菌或霉菌不同发育时期(基 内菌丝气生菌丝孢子丝或 Foonshion 图文设计有限公司 Fonshion Design Co., Ltd