用乙醇沉淀DNA 时,为什么加入单价的阳离子? 用乙醇沉淀DNA 时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl NaAc,Na+中和DNA 分子上的负电荷,减少DNA 分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集 沉淀。 DNA提取分为三个基本步骤 每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有 区别。 .细胞的破碎 细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种;机械方法:超声波处理 法、研磨法、匀浆法;化学试剂法:用SDS 处理细胞;酶解法:加入溶菌酶或 蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。 利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂。 加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与DNA 结合的组蛋白。 将DNA 在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为DNA 在醇中不可溶而 黏在一起,这一步也能除掉盐分。 另外,目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA 的商业化试剂盒。 十六烷基三乙基澳化按(CTAB)法CTAB 一种阳离子去污剂,它能与核酸形成复合物,这些复合物在低盐溶液中会因溶解度的降低而沉淀,而在高盐溶液中可解离,从而使DNA 和多糖分开,再用乙醇沉淀DNA 除去CTAB。在该法中使用的聚维酮(PVP)与多酚结合形成复合物,从而可有效避免多酚 类化合物介导的DNA降解[121。王卓伟等[13〕在对桑叶DNA提取方法研究过程中发现PVI〕 还能有效地去除多糖。罗志勇等[14〕在研究中对这种方法进行了几点改进: 提高CTAB 的浓度;对于含多酚类较多的植物,增加CTAB 提取缓冲液中琉基乙醇的含量,同时加人 PVP 使其与多酚类物质结合形成复合物;增加低盐沉淀缓冲液的量;增加高盐溶液中盐 的浓度。用改进的方法从人参、西洋参、三七等药用植物中分离获得了高纯度的DNA, Porebski 等[1s]在沉淀粗提 DNA 时,将提取缓冲液中氯化钠的浓度提高至2.5m 使DNA在高盐缓冲条件下优先沉淀,可更有效地除去多糖。