大西洋海岸铁路是U25C型柴油机车的首个用户,首批四台机车于1963年底率先交付使用。此后,北太平洋铁路、宾夕法尼亚铁路、路易斯维尔和纳什维尔铁路、伯灵顿铁路、苏必利尔湖铁路等铁路公司亦相继订购。至1965年12月停产为止,通用电气公司共生产了113台U25C型柴油机车;其中后期生产的10台机车的柴油机装车功率提高至2750马力,又称为U25CU型柴油机车以便区分。同级的后继产品为U28C型柴油机车。