DNA一般以双链的形式存在,而且双链的比单链的稳定。
DNA的复制需要双链打开,同样,PCR扩增也需要单链的模板,所以就有了PCR引物这个东西,引物简单来说就是一引路的,告诉聚合酶“呐,就从这里开始”。PCR的基本过程包括变性、退火和延伸。DNA的双链主要是靠氢键联系在一起,高温时,氢键很容易就被断开了,双链变成了单链,提供了PCR的模板。当然解旋酶也可以做到断裂氢键,尚且不考虑温度,我只需考虑 1.酶活,酶活是有限的,如果酶量不足,是否会影响到最终的产量,酶都不便宜。2.PCR需要引物,如果使用解旋酶,是否会把引物从模板上裂解下来?
热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,简单来说,复性不就是两条互补的单链变成双链吗,所以根据这个特性,完全可以在DNA聚合酶的作用下把已经和引物结合在一起的模板链复制出来。所以,pcr必然有有一个温度变化的过程。一般来说DNA在高温中容易变性,这就决定了使用的聚合酶必须是耐高温的。