\ue50a来源:　\ue50b\ue50a互联网　\ue50b间接法(测抗体)　双抗体夹心法(测抗原)　竞争法(测抗原)　抑制性测定法　包被抗原:用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度(5~20μg/ml)各0.3ml加于微反应板每个凹孔中,4℃过夜或37℃水浴2~3小时,贮存冰箱　包被抗体:用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度(1~10μg　/ml),每凹孔加0.3ml,4℃过夜,或37℃水浴3小时,贮存冰箱 　包被特异性抗体:　同左　包被抗原:　同左　 洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次,每次5分钟　 同左　 同左　 同左　 加被检标本:每凹孔加入用含有0.05%吐温-20的稀释缓冲液稀释的被检血清各0.2ml,37℃,作用1~2小时　 每凹孔加入0.2ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本,37℃作用1~2小时。　 分2组,a组加酶标记抗原和被检抗原混合液0.2ml,另一组只加酶标记抗原液0.2ml,37℃作用1~2小时。(混合液可作成不同稀释度)。　 a组加参考抗体和被检抗原混合液0.2ml,另一组加参考抗体与等量稀释剂0.2ml,37℃作用1~2小时。　 洗涤:重复2　 同左　 洗涤:同左　 洗涤　 加入酶结合物:每凹孔加入稀释缓冲液稀释的酶结合物0.2ml。37℃作用1~2小时　 加入0.2ml用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液,37℃作用1~2小时或由预试实验确定作用时间。　 各加入0.2ml抗参考抗体的酶结合物37℃作用1~2小时。　 洗涤:重复2　 同左　 洗涤　 加入0.2ml底物溶液于每个凹孔,(O.P.D或O.T),室温作用30分钟(另作一空白对照,0.4ml底物加0.1ml终止剂)。　 同左　 同左　 同左　 加终止剂:每凹孔加2M　H　2　SO　4　或2M柠檬酸0.05ml。　 同左　 同左　 同左　 观察记录结果:目测或用酶标比色计测定(O.P.D用492nm)O.D值。　 同左　 用酶标比色计测定a、b两组O.D值,并求出a、b、O.D值的差数。　 同左