植物的原生质体是一个成熟的生理的和灵活的电池系统,广泛应用于高通量和基因的功能鉴定分析。绿色植物的原生质体已被成功地用于植物信号转导通路相关的激素和环境调查,代谢产物挑战。水稻的原生质体悬浮培养细胞或黄化苗的制备一般,但只有少数的研究从绿色植物中探索原生质体的使用。
原生质体指采用机械或酶解法去掉细胞壁的裸露细胞,“protoplast”一词最早出现于1880年,当时Hanstein用它指由细胞壁包围的活物质。自1971年植物原生质体培养成功以来,关于原土质体的研究层出不穷,被研究的植物也不断增多,研究的结果也逐渐显示出它在作物遗传改良中具有较大的应用潜力。
现在已有不少研究者试图寻找简单有效的原生质体分离方法并已取得了初步成功。Aoyagi 等发展了一种简单的原生质体分离方法,将植物细胞(如悬浮系愈伤组织)进行排气处理,然后将处理的细胞与藻酸钠滴入含有分离原生质体的酶液中,原生质体分离和胶的固化同时进行,此法可以明显缩短时间,而且原生质体的活力较高。
3. 原生质体活力的测定方法
获得的原生质体是否健康和具活力是后续培养成功的关键因素之一。常用于测定原生质体活力的方法计有:染色法、胞质环流法、渗透压变化法等。
4. 影响原生质体分离的因素
从植物材料中是否成功的分离原生质体,是否具有高产量及存活率,受许多因素包括酶种类、组合与浓度,稳压剂类型与浓度,保护物质的应用,酶液酸碱度,保温温度与时间, 保温方式,光照条件及供体植物的生理条件等所影响。