PCR扩增失败的原因分析 2010-12-1316:48:31| 分类: 默认分类|字号 订阅 PCR扩增失败原因分析,PCR 产物电泳 2010-05-1516:07 1)模板提取不完整,其中不含你的目的基因,或目的基因含量太低。可以跑个电泳看看提取的DNA,PCR 阳性样品与阴性样品是否有明显差别。如果确定 是这种问题,可以增加模板量试试,但不一定行得通。 2)模板里面残留某种试剂成份,可能抑制Taq 聚合酶的活性,如果是这种情 况,可以用试剂盒把模板再纯化一下,或将模板做个梯度稀释以确定最佳的模板 有可能的因为你的电压调的太高了。电泳跟很多因素有关,其中就有一个是电压,在适当的电压范围 Taq 酶处于失活状态。因为活性降低了能出现二聚体。 tap酶种类 高度特异性地扩增所需的片段是PCR最基本的要求,影响PCR 特异性的因素 的出现大大减少了摸条件这一繁琐的实验过程,也为PCR 产物快速有效的纯化 (PCR 产物直接纯化)打下了基础。这类酶最典型的代表是热启动 Taq 家都知道,在PCR 第一个循环变性之前,有一个升温的过程,引物和模板会有 一些非特异性配对,如果这时Taq 酶发挥活性,就很容易产生非特异性扩增,由 于循环初期模板量非常少,产生的非特异性条带经过后面的指数扩增,就会严重 干扰目的片段的扩增,甚至导致特异性条带不能扩出。而热启动Taq 酶是必需经 过高温才能激活的酶,因此在初始循环的变性之前它没有活性,不会产生非特异 性扩增,这就大大提高了 PCR 扩增的特异性。