细胞的PFA固定实验
标签:细胞PFA固定
当纯净甲醛在水溶液中溶解时,会自动聚合成长链的多聚甲醛。其长度不一,在水中同时进行聚合与解聚反应。甲醛易溶于脂类物质,因此能穿过细胞膜进入细胞内。用多聚甲醛固定细胞时,能使细胞内的自由氨基基团发生化学交联。当不同的分子发生交联时,形成一网状结构,把细胞的各个结构成分连接起来。
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难度系数

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悬浮法

实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 吸取浓度为2×107细胞/ml 的细胞悬液10 μl,滴于多聚L-赖氨酸包被的载玻片上。置于加湿盒中,使细胞静置30 min。
2. 将玻片放入玻片架,浸于盛有4%PFA固定液的染色用玻璃盘中,室温固定 20 min。
3. 将玻片架移至另一盛有3×PBS的盘中,放置2 min(此步终止PFA固定作用)。
4. 将玻片架移至一新的含1×PBS的盘中,放置2 min。换1×PBS后,再放置2 min。
5. 在盘中相继加换50%、70%、95%、100%乙醇,在毎种溶液中放置5 min 以进行脱水。
6. 在空气中使玻片完全干燥,放于有干燥剂的玻片盒中,-70℃存放(可存数周)。

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