环糊精cyclodextrin, CD)是一类环形寡聚糖为手性高分子物质。根据分子中葡萄糖单元的个数不同环糊精可分为α 、β 、γ 三类他们分别由 6、7、8 个 D-吡喃葡萄糖组成将 CD 分别通过硅烷链连接在硅胶表面就构成环糊精手性固定相。环糊精分子成锥桶状内腔的直径由组成环糊精的葡萄糖个数决定如常用的β -环糊精由 7个葡萄糖分子组成内腔直径为 0.8nm。 用环糊精手性固定相进行分离时首先要求被拆分的组分进人洞穴形成包合物保留时间以组分能否进人洞穴及其紧密的程度而定环糊精环上还有多个手性中心能选择性地; 与对映体作用从而导致对映异构体的保留不同而被分离。如用β -环糊精手性固定相已经成功地分离了二茂铁等金属有机络合物、氨基酸以及生物碱等。 除环糊精外多糖类的手性固定相还可以用纤维素、直链淀粉作成如纤维素三醋酸醋手性固定相、纤维素三苯甲酸醋手性固定相和纤维素氨基甲酸酯手性固定相等。 (4)冠醚Grown ether类手性固定相 冠醚与环糊精类似是本身具有手性的低聚糖是含醚键的环状化合物呈王冠状结构外层是亲脂性的乙撑基环的内层是富电子的杂原子如氧、氮、硫等。通常使用的是 18-冠-6 的衍生物健合在聚苯乙炜骨架或硅胶上形成冠醚手性固定相。用冠醚手性固定相分离对映体时不同对映异构体 因与冠醚环腔形成的主客体络合物的稳定性不同而被分离。在冠醚上引人双萘基双萘基可以形成“手性墙”增加固定相的立体选择性。能质子化的氨基化合物特别是氨基酸对映体在冠醚手性固定相上可以得到很好的分离。 除以上手性固定相外还有模拟酶手性固定相、配位交换手性固定相等。 2.手性流动相chiral mobile phase CMP拆分法 手性流动相拆分法是将手性试剂添加到流动相中利用手性试剂与对映异构体结合的稳定常数不同或结合物在固定相上分配的差异进行分离。近年来手性流动相拆分法已广泛应用于药物对映体的拆分。此法的最大优势在于可采用普通的非手性固定相不需对样品进行衍生化手性添加物本身可流出也可更换同时添加物的可变范围较宽稳定性好且价格便宜。 (1) 配体交换型手性添加剂 配体交换型手性添加剂由手性配基和含二价金属离子的盐组成。手性配基多为具有光学活性的氨基酸及其衍生物他们和二价金属离子螯合分布于流动相中遇到待分离的对映异构体时即形成配合物再在流动相和固定相之间分配而实现分离。分离的机理一般认为是配基和金属离子形成的螯合物被吸附在固定相上形成动态的手性固定相而发挥作用。也可以看成是手性配基、金属离子和对映异构体形成的配合物稳定常数不同而产生分离。采用 5µm粒径的 C18 固定相阿司帕坦作为 CMPA与硫酸铜络合测定高血溶素患者 尿中 D-和 L-2-哌啶酸的浓度。 (2)环糊精添加剂 环糊精在水中有一定的溶解度用环糊精作为手性添加剂加入流动相中其分离机理与环糊精手性固定相相同但保留行为正好相反。对映异构体与环糊精形成的包合物稳定性越强随流动相出柱越快,www.yiyucn.com保留时间越短。 (3) 手性离于对添加剂 解离的有机化合物能与含互补电荷的试剂相互作用生成电中性离子对。分离带电荷的对映异构体时可以在流动相中添加手性的离子对试剂对映异构体和离子对试剂形成电中性的离子对离子对在固定相和流动相间分配系数不同而得到分离。常用的手性离子对试剂有10-樟脑磺酸、奎宁等。 二、高效液相色谱仪高效液相色谱仪主要由输液系统、进样系统、色谱柱系统、检测系统、数据记录处理系统等组成。 (一)输液泵 高效液相色谱的流动相采用高压泵输送有不同类型的输液泵按输液性质可分为恒压泵和恒流泵。目前使用较多的是柱塞式往复泵...