用于促 生长试验的培养基培养前需经过同样的工艺步骤 (例如清洗、灭菌、充氮、灌装、冻干等) ? 通常情况,在培养结束后,一些玻璃瓶(从生产 开始、中间、结束时取样)进行微生物接种。 www.themegallery.com 关键因素三: 培养基及培养条件 (3/3) ? 培养温度 全部样品应在20-35℃(±2.5℃)下培养14天。通常 在 20-25℃下 培养 7 天,然后在30-35℃下培养 7 天;或者在30-35℃培养 7 天后,再转移到 2025℃培养 7 天。 ? 原则:选择的温度适宜那些从环境中分离的微生 物或生物负荷中的微生物的培养。 ? 关于培养条件的选择,补充一个没有形成共识的 建议,在培养过程的前半个周期,将所有产品进 行倒置后培养;然后在剩余时间内,将产品恢复 直立位置后进行培养。 www.themegallery.com 关键因素四: 灌装数量 ? 灌装的数量应该能够真实的反应批量;但 允许根据需要,采取最低灌装数量,前提 是应足以反应操作员工疲劳时对产品质量 潜在的影响 ,并且足以体现了尽可能发生 的干预措施。 ? 一般生产量小于5000,培养基灌装数量应 等同批量;生产量大于5000时,培养基最 小灌装数量不少于5000。 ? 一些法规中建议应该根据批量确定灌装的 数量。 www.themegallery.com 关键因素五: 容器体积(1/2) ? 应该考虑到灌装容器的极端尺寸。 ? 最大的容器(通常由于充填体积较大而 导致最小的充填速度)通常开口较大,所 以从环境中微生物侵入的潜在风险是最大 的。 ? 最小的容器(通常由于充填体积较小而 导致最大的充填速度)体现了最大的操作 难度;小的容器更容易破碎,稳定性差, 在设备中更容易破裂或堵塞。 www.themegallery.com 关键因素五: 容器体积(2/2) ? 在最初的验证中,可以二次选用最大的容器(配 合一次最慢、一次最快的灌装速度),第三次选 用最小的容器(配合最快的灌装速度)。 ? 在每年2次的再验证中,用其它规格尺寸的容器轮 转试验。 ? 不能使用琥珀色的容器,而应该使用透明的容器, 保证可以目视检测到微生物的生长。 www.themegallery.com 关键因素六: 灌装体积 ? 培养基灌装体积不需要与现实中常规的灌装体积 一致。(可能因为模拟装量调节过程,使有包含 不一致的培养基装量) ? 应确定足够的灌装体积,保证可以充分接触到容 器和密封部位的表面(当它倒置和旋转时),并且 足以目视检测到微生物在培养后的生长情况。 ? 较小的容器不能灌装的太满,因为容器上部的空 间中应保持足够的空气,以支持需氧微生物的生 长(通常应该保留25%的空间)。 www.themegallery.com 关键因素七: 灌装速度 ? 培养基灌装的速度,应符合实际生产的灌装速度 范围。如果超过了限度,应该进行评估。 ? 每次模拟试验中确定的速度应该是符合要求的。 ? 较高的生产速度,可以适用于生产过程中经常 受到干扰或手工操作较多的生产工艺。 ? 较低的生产速度,可以应用于在无菌区域中无 菌部件长时间暴露的生产工艺。 ? 在灌装生产线的起始验证中,一次可以选用最 低速度,另外二次可以选用最高速度。 ? 在生产线的每年2次的再验证中,模拟试验的 速度应该进行变换。 www.themegallery.com 关键因素八:灌装的持续时间 ? 通常情况,培养基灌装的时间应该足够长,能够 包括所有的必需的干扰、生产中断,包括正常的 无菌操作如开始前的安装、重量或体积的调整、 改变设备或手动维修等,还包括更衣、暂停、换 班等,持续时间还应能反映出潜在的人员疲劳。 ? 对于非常大的批量或较长的生产过程,通常使用 一些空白样品(空的或者灌水)以维持模拟试验 的动态环境。这些技术可以应用于持续多个工作 日的工艺验证,用于验证可以批准的最长的生产 周期。 www.themegallery.com 关键因素九: 人员和工作班次 ? 需要进行无菌工艺操作的每个操作员工包括设备 工程师和环境取样人员应该每年参加不少于一次 成功的模拟试验。 ? 仅仅参加(看)是不够的,操作人员(包括设备 安装人员)必须执行他们在正常生产中会进行到 的操作 。 ? 应该确定无菌操作间可以最多容纳的操作人员 数量(n+1)。 ? 当一个企业有多个班次工作时,第二个班次、 第三个班次也应该包括在培养基灌装试验的计划 中。包括班次的更换、暂停和必要的更衣。 www.themegallery.com 关键因素十: 环境监测措施 ? 在培养灌装过程中,微生物监测(主动或被动 的空气采样、设备表面、人员)以及悬浮粒子监 测应该按照日常的操作程序进行。包括间隔期间 和不同的人员。 ? 微生物监测程序的详细原则,包括取样点的选 择、行动限和警戒线、方法学等可以参考PDA技 术报告N0. 13。 ? 工艺模拟实验中收集到的环境监测数据有利于建 立和支持正常无菌操作区域的环境监测的行动限。 www.themegallery.com 关键因素十一: 干预措施 ? 干预措施应该模拟实际运行时可能发生的情况;培养基灌 装记录中应该记录所有发生的干预措施,以及被移走产品 的数量。 ? 常规的干预措施:对于无菌生产线的安装、拆卸和连 接,如果已经灭菌的部件脱离保护措施而被安装的话,是 一个潜在危险。因此,开始灌装的容器更容易反映出无菌 设备装配的潜在问题(注:如果正常生产过程中开始会有 部分产品丢弃的话,可以不进入培养计数,但是也可以进 行培养,能提供额外的信息)。 ? 其它的常规干预措施:胶塞供给, 移走掉落的玻璃瓶, 移走堵塞的胶塞,人员的停顿,换手套,环境的监测。 ? 非常规的干预措施(意外发生):玻璃瓶破裂,灌装 针头的更换或重新安装,装量调整的干预,传感器故障, 传输带的调整等。 www.themegallery.com 关键因素十二:容器的检查 ? 任何灌装的产品都应该在培养前进行检查,发现 任何不合格品(如容器密封性存在问题或完整性 不好)时,都应该被剔除并记录。(还包括检查 后被损坏的如向培养箱中转移的过程中) ? 模拟过程最好有全程录像,瓶子或托盘应编号, 阳性样品可追溯。每个瓶子都要目视检查,阳性 的样品应别标记并移出培养箱。 ? 破损的样品不应包括在对无菌工艺能力的评价中。 但破损的来源应被调查和纠正。 www.themegallery.com 关键因素十三: 可接受标准 ? 新版GMP第四十八条:培养基模拟试验的目标是 不出现长菌,且遵循以下原则: ? 灌装少于5000支时,不应检出污染品; ? 灌装在5000至10000时: 有1支污染需进行调查,并考虑重复培养基灌 装试验 2支污染需进行调查,并可即视作再验证的理 由 ? 灌装超过10000支时: 1支污染需进行调查 2支污染需进行调查,并可即视作再验证的理由 发生任何微生物污染时,均应进行调查。 www.themegallery.com 关键因素十四:污染调查(1/9) ? 调查的范围应包括 ? 环境微生物监测数据,空气悬浮粒子监测数 据 ? CIP设备,清洁、消毒程序的执行情况 ? 培养基、设备和零件的灭菌工艺,灭菌釜的 校正情况 ? 高效过滤器检测(空气悬浮粒子水平,过滤器 检漏,风速测量,密封系统检查,使用年限等) ? 除菌过滤器完好性 ? 房间气流形式与压差 ? 人员操作技术培训情况 www.themegallery.com 关键因素十四:污染调查(2/9) ? ? ? ? ? ? ? ? ? 调查的范围还应包括 以往产品无菌检查实验结果 人员卫生状况监测数据 培养基灌装实验中的干预方式分析 该区域近期是否有过维修活动,生产线的改 造情况 该生产线培养基灌封实验历史数据 已灭菌物品的储存条件 培养基灌封过程中的异常事件 阳性污染菌与环境监测污染菌的鉴别 www.themegallery.com 关键因素十四:污染调查(3/9) ? 调查结论与风险评估 一、培养基灌封实验结果有效 ? 暂停生产,直至确定污染来源并采取有效的 纠偏措施。 ? 再验证合格后,产品方可放行。 ? 对培养基灌封试验后和此前所生产的产品, 进行风险评估,包括对已经放行批次的影响 二、培养基灌封实验结果无效→实施适当的纠偏措 施和预防措施后→重新进行培养基灌封实验 ? 条件1无菌灌装区的物理条件不满足要求 ? 条件2人员未按照正常生产程序操作 www.themegallery.com 关键因素十四:污染调查(4/9) ? 不管试验的数量,被污染的产品数量都应 该是零。 ? 调查前的准备工作:录像资料、瓶子或托 盘的编号等。 ? 发生失败 (污染)时,必须确定最根本的原因, 或者至少是最可能的原因。 ? 如有能力应对微生物进行分离和鉴别(鉴 定到种)。 ? www.themegallery.com 关键因素十四:污染调查(5/9) ? 在灌装过程中污染率上升 这表明污染可能来源于液 体培养基 (如与培养基贮 罐非无菌连接,在循环管 路中受到污染)。