我从今年八月份开始做western,也遇到了同样的问题,12,11kd的蛋白,用的3.03gtris,15.01g的甘氨酸,200ml甲醇,800ml的双蒸水配的转缓,90v,0.2um的PVDF膜,湿转转膜20min,做了很多次了,都快两个月了,都没做出来。着急啊,文章结果就差它了。求助啊,求助
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你好,请问你做这种12kd的蛋白跑胶的时候有什么特别注意的吗?我都是配的15%的聚丙烯酰胺胶,电泳的时候你是跑到什么程度呢?是看着上样缓冲液不跑过夹子的绿色的线,不跑过玻璃板的最下端还是比这个更早就停止电泳吗?我每次看到10kd的marker转膜后都在膜上,可曝光的时候还是没有。连核内参H3.1(17kd)都没做出来,欲哭无泪啊
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