http://www.69jk.cn/yinshi/yysc/sc/400009.html 本次研究主要是对大蒜的抑菌作用进行了试验, 从而探究出大蒜是否对人体有一 定的作用,怎样处理的大蒜的抑菌效果最好,其次研究了蒜苗的不同部位的抑菌试 验,再次对蒜苗的哪个部位对人体的作用是最大的,三个部位各起什么作用等问题 进行了探讨。为将来更好地利用和开发大蒜和蒜苗提供依据。 1 实验材料 1.1 材料 大蒜(由市场新鲜购买) 新鲜蒜苗 1.2 实验用细菌:大肠杆菌 将活化的大肠杆菌菌种用灭完菌竹签挑取适量于制好的琼脂平板培养基上,置于 恒温箱倒置培养24小时,之后用革兰氏染色法鉴定大肠杆菌。革兰氏染色法是一种 用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类,即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓 革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后,再用脱色液处理,细菌仍保留染色液的颜 色;革兰氏阴性菌则相反(无色)。大肠杆菌属于革兰氏阴性菌。 步骤如下:单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,就会形成一个肉眼可见的, 具有一定形态结构的子细胞群体,叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。大肠杆 菌菌落为白色透明状。 然后再制备平板,将大肠杆菌划线接种于平板上以提纯,提纯连续两次(保证纯 度无杂菌),每次培养18到24小时,以保证大肠杆菌的生长活力,再制备斜面培养 基,划线培养18到24小时 ,用以纯化(分离)、鉴定、保藏。 1.3 基础培养基 LB固体培养基、大肠杆菌菌液(LB液体培养基)、 细菌培养基:牛肉膏0.6g,蛋白胨1 g,琼脂3.6 g 无菌水 200 mL,,在 0.1 MPa 下高压灭菌 30 min,备用 5 1.4 试剂 蒸馏水,无菌水,碘液,酒精,番红染液 1.5 主要仪器 LDZX-50KBS 立式压力蒸汽灭菌器;电热恒温培养箱;SW-CJ.1F 超净工作台;2A 型 数显式电热恒温干燥箱; 电子天平 2 实验方法:抑菌圈法 3 实验流程 配置培养基 包器材 分析实验结果 ↓ 灭菌 ↑ 拍照、测抑菌圈大小 ↓ 倒平板 ↑ 置于恒温箱倒置培养 18-24 小时 ↓ 接种、划线、提纯 ↑ 滴大蒜、蒜苗汁于放有滤纸片的混菌平板 ↓ 恒温箱培养 24 小时 4 实验步骤 ↑ → 制混菌平板、提大蒜液、蒜苗不同部位的汁 6 4.1 培养基的制备 按一定标准制备普通琼脂培养基:牛肉膏0.6g,蛋白胨1 g,琼脂3.6 g, 水200 mL,在0.1 MPa下高压灭菌30 min,超净台下倒平板,备用 4.2 菌悬液制备 将大肠杆菌接种于营养琼脂斜面, 37℃培养24h, 然后用竹签挑取少量菌苔置于按 标准制备好并灭过菌的液体培养基中, 培养18-24小时, 用血球计数板测出每毫升悬 7 9 液中的菌数,菌液浓度达1*10 -1*10 ,即制成菌悬液,备用。 4.3大蒜液的制备 取新鲜生大蒜、煮熟的大蒜还有发芽大蒜适量,去皮,洗净并晾干表面水分,在 无菌的试验条件下,用乙醇浸泡5分钟左右,再用无菌水冲洗两到三遍,用无菌刀片 将蒜分别切成小块,置于研钵中研碎至蒜泥状,然后将制得的蒜泥分别用两层无菌 纱布挤压过滤得到大蒜汁原汁, 同时将三种大蒜汁分别用无菌水稀释到不同的浓度。 先取生大蒜汁1ml, 分别加无菌水50ml、 25ml、 10ml,制成四种不同浓度的大蒜汁 (由 于此过程需要较长时间,大蒜可能都已氧化),其余两个类同,制好备用。观看各 浓度中是否有抑菌圈及其大小。通过实验得知,稀释浓度过大,抑菌作用不明显。 再取不同的稀释度,加无菌水5ml、10ml、20ml,再试验,结果稀释后的大蒜汁抑菌 作用不明显。则观察对比处理方法不同的大蒜的原汁对大肠杆菌的抑菌作用,做实 验比较,得出实验结果。 4.4 大蒜汁对试验菌抑菌圈的测定 将刚灭完菌的固体培养基待晾至适宜温度(防止高温杀死大肠杆菌,从而观察不 到结果)倒入平皿,同时马上取试验菌悬液1 mL,加入无菌平皿中制成混菌平板.待 平板凝固后,用无菌镊子在混菌平板表面放四张直径都为15mm的无菌滤纸片,用微 量注射器分别吸取相同的量的四种不同浓度大蒜汁滴加在四张滤纸片上, 做好标记, 每个浓度作三个重复。然后置于恒温培养箱37 ℃,倒置培养24 h, 24 h后观察滤 纸片周围是否有不长菌的透明抑菌圈,若有抑菌圈测定抑菌圈直径,并且各浓度作 比较。实验后再进行蒜苗的不同部位的抑菌实验。 5 、结果和分析 5.1 抑菌圈实验结果分析 经反复实验验证大蒜虽然不能完全抑制供试菌种的生长,但是可以有效减少供试 菌种生长的数量,因此以在一定范围内的菌落数量大大少于周围菌落数量的标准来 测定抑菌圈的直径。由图可知大蒜对大肠杆菌具有一定的抑制作用。