分光光度法是基于不同分子结构的物质对电磁辐射的选择性吸收而建立的一种定性、定量分析方法,是居室、纺织品、食品中甲醛检测最常规的一种方法。涉及到的有乙酰丙酮法、酚试剂法、AHMT法、品红一亚硫酸、变色酸法、间苯三酚法、催化光度法等,每种检测方法所偏重的应用领域不同,并各有其优点和一定的局限性。⒈乙酰丙酮法乙酰丙酮法指在过量铵盐存在下,甲醛与乙酰丙酮通过45~60℃水浴30min,或25℃室温下经2.5h,反应生成黄色化合物,然后比色定量检测甲醛含量。优点是甲醛与乙酰丙酮反应的特异性较好,干扰因素少,酚类和其它醛类共存时均不干扰,显色剂较为稳定,检出限达到0.25 me/L[Bl,测定线性范围较宽,适合高含量甲醛的检测,多用于居室和水发食品中对甲醛的测定。但在进行水发食品中甲醛检测时,需将样品中的甲醛在磷酸介质中加热蒸馏提取出来,经水溶液吸收、定容后再检测,操作过程复杂、繁琐、耗时。⒉酚试剂法酚试剂法即MBTH法,即甲醛与酚试剂(3-甲基-2-苯并噻唑酮腙盐酸盐)反应生成嗪,嗪在酸性溶液中被铁离子氧化成蓝色,室温下经15min后显色,然后比色定量[m]。酚试剂法操作简便,灵敏度高,检出限为0.02mg/L,较适合测定微量甲醛测定。但脂肪族醛类也有类似的反应,对测定会有干扰,二氧化硫对测定也有一定的干扰,使结果偏低,所以,在测定吊白块时应用此方法要慎重。酚试剂的稳定性较差,显色剂MTBH在4℃冰箱内仅可以保存3d,显色后吸光度的稳定性也不如乙酰丙酮法,显色受时间与温度等的限制。本法多用于居室中对甲醛的检测。纺织品和食品中对甲醛的测定有时也用该方法。⒊AHMT法AHMT法指甲醛与AHMT(4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂)在碱性条件下缩合,经高碘酸钾氧化成紫红色化合物,然后比色定量检测甲醛含量的方法。AHMT法在室温下就能显色,且SO、NO共存时不于扰测定,灵敏度比比色法要好。该方法特异性和选择性均较好,在大量乙醛、丙醛、丁醛、苯乙醛等醛类物质共存时不干扰测定,检出限为0.04 mg/L。但AHMT法在操作过程中显色随时间逐渐加深,标准溶液的显色反应和样品溶液的显色反应时间必须严格统一,重现性较差,不易操作,多用于居室中对甲醛的检测。其检测技术要求如下所示:检测原理:碱性溶液中与AHMT发生反应,经高碘酸钾氧化成红色化合物,半定量地快速检测液体样品中人为加入的甲醛含量。该方法优点是抗干扰能力强,缺点是颜色随时间逐渐加深,要求标准比色卡显色标注时间和样品溶液的显色反应时间必须严格统一。主要仪器:10mL纳氏比色管,或者具塞塑料离心管。试剂:①试剂A:饱和氢氧化钾或5mol/L氢氧化钾溶液。取28 g氢氧化钾溶于适量蒸馏水中,稍冷后,加蒸馏水至100mL。②试剂B:5g/L AHMT盐酸溶液。取0.5g AHMT溶于100mL 0.2mol/L盐酸溶液中,此溶液置于暗处或保存于棕色瓶中,可保存半年。③试剂C:1.5%高碘酸钾的氢氧化钾溶液。称取1.5g KIO4于100mL 0.2mol/L氢氧化钾溶液中,置于水浴上加热使其溶解,备用。操作步骤:吸取样品提取液上清液0.5mL于检测管中,加入2滴试剂A溶液,2滴试剂B溶液,盖上盖子摇匀。1~2min后打开盏,向检测管中加入试剂C溶液1滴,并盖上盖子摇匀,观察情况。结果判定:室温下静置3min,肉眼观察显色结果,并与“3min时间点色阶”比较得出待测样品中甲醛含量。待测样品中甲醛含量在10mg/kg以下时建议采用15min时间点的反应结果,并与“15min时间点色阶”比较得出待测样品中甲醛含量。⒋品红一亚硫酸法品红一亚硫酸法指利用甲醛与品红一亚硫酸在浓硫酸存在条件下呈蓝紫色的特性,用比色定量进行检测的方法。本法利用的是甲醛的特有反应,其它醛与酚不干扰测定。此法操作简便、测定范围宽,但其比色液很不稳定,重现性较差,在测定甲醛含量较低的样品时,差异较大,精确度不如乙酰丙酮法,而且品红一亚硫酸法受温度影响较大,检测过程还需浓硫酸,故一般多用于食品中甲醛的定性分析。⒌变色酸法变色酸法指将甲醛在浓硫酸介质中与铬变酸(1,8-二羟基萘-3,6-二磺酸)作用,在沸水浴中生成紫红色化合物,进行比色定量的方法。此法灵敏度高,检出限为0.1 mg/L,比色液稳定。但当酚类和其添加剂离子共存时有干扰,因此该法不适用于测定甲醛含量较高的样品。因含甲醛量高的溶液遇酸极易产生聚合物,所以该反应须在浓硫酸介质作用下进行,操作较繁琐,因此该法多用于方法研究,实际检测时应用较少。⒍间苯三酚法间苯三酚法指利用甲醛在碱性条件下与间苯三酚发生缩合反应生成橘红色化合物的特性,进行比色定量检测甲醛含量的方法。此法操作简便、干扰物影响小,检出限为0.1mg/L。但甲醛与间苯三酚生成物的颜色不稳定,测定结果偏差较大,只适用于甲醛的定性分析.此法多用于水发食品中对甲醛的测定。⒎亚硝基亚铁氰化钠法检测原理:在碱性条件下,甲醛与亚硝基亚铁氰化钠反应后使溶液出现蓝色特征。本方法为农业部部颁标准方法。主要仪器:10mL纳氏比色管,或者具塞塑料离心管。试剂:①4%盐酸苯肼溶液:称取固体盐酸苯肼4g溶于水中,稀释至100mL(现用现配)。②5%亚硝基亚铁氰化钠溶液:称取固体亚硝基亚铁氰化钠5g溶于水中,稀释至100mL(现用现配)。③10%氢氧化钾溶液:称取固体氢氧化钾10g溶于水中,稀释至100mL。操作步骤:取样品制备液(为上文“样品处理”中的“上清液”或“浸泡液”)5mL于10mL纳氏比色管中,然后加入1mL4%盐酸苯肼、3~5滴新配的5%亚硝基亚铁氰化钠溶液,再加入3~5滴10%氢氧化钾溶液,5min内观察颜色变化。结果判定:溶液若呈蓝色或灰蓝色,说明有甲醛,且甲醛含量较高;溶液若呈浅蓝色,说明有甲醛,且甲醛含量较低;溶液若呈淡黄色,甲醛未检出。注意事项:该方法显色时间短,应在5min内观察颜色的变化。⒏氯化铁法5%氯化铁溶液:称取固体氯化铁59 g溶于水中,稀释至100mL(现用现配)。盐酸溶液:量取盐酸10mL,加到90mL的水中。取样品制备液5mL于10mL纳氏比色管中,加入新配的4%盐酸苯肼溶液1mL及氯化铁溶液3~5滴,加入盐酸使呈酸性,溶液如果呈红色,表示有甲醛。