16倒蛋白“ )的病例中.5倒(31 2%)。54例病例中,1州(352%)基因扩增。本研究结果显示,基因扩增在HER-2蛋白表选各强度组分布的比较,差异无统计学意史卵>005)。表l HER-2基因扩增情况m.2#目! 塑! 坚.竺! ! !☆*}扩增l l ( 68 8*) 21(63肺) 3(乱O%) 35(乩8%)扩增5( 31弭) 12( 拍』%) 2(40嘏) 19( 35 2%)3讨论基因是否扩增不仅是预测乳腺癌预后的独立风险标记,同时还是曲妥珠( Hercepti n) 单抗治疗和辅助化疗的重要参考指标.所以准确检测非常重要u” 。免疫组化(1HC)因具有成本低、生物学关联性密切、技术易掌握等特点,以Ⅱ{c检测结果评估HER-2蛋白表达状况是目前临床上首选的方法,但Ⅱ{c染色本身所固有的特点:如抗体差异、抗原修复方法不同、组织固定和制片以及结果的主观判读等,使不同医院之间的结果差异较大⋯ 。免疫组化染色法与HSH均可使用福尔马林固定后的组织蜡块来作.与一般病理标本之处理相同.以前的组织蜡块也可以做,因此实验室目前一般均以这两种方法来检测HER-2.若拿IHC与FISH来作比较,IHC的操作时间比较短,约4{小时即可完成,而FISH必须隔夜。在设备上FISH需使用荧光显微镜,而IHC只需一般光学显微镜即可。在分子生物学上,FISH测的是肿瘤细胞的DNA,而免疫化学染色法测的是细胞膜表面的蛋白质。检测基因扩增的FIs}Ij 去具有较高的准确性、灵敏度和特异性,所以其结果在不同实验室问致性很高“ ” 。尽管IHC结果与FISH检测结果不同,但由于FISH目前是非常规分子病理技术并且成本高.故绝太多数学者建议结果误差最大的IHC( ++) 病例要进行FISH检测,以明确其基因是否扩增“ “ 。但是本研究显示.无论I] -IC( +) 、( +-) 、( +++) 的患者的FISH诊断结果之间均未 发现明显的统计学差异,因此我们认为无论IHC结果如何均应做FISH检测,以进一步明确基因是否扩增:而且如果条件允许,mC(卅)者也应做FISH确认。使用FISH的优点在于,用传统的分子生物方学法抽取肿瘤组织的DNA或RNA作Northern Bl ot或SouthernBl ot的时候,很难避免受到邻近肿瘤组织的间质组织之干扰,会稀释肿瘤组织所特有的DNA表现,而FISH可以避免这个问题。FISH在荧光显微镜下可以确认出肿瘤所在的位置,以PathVysi on Test来说,它会把HER-2基因部位呈现橘色荧光亮点,它也会将第17对染色体的中心粒( centromem) 呈现绿色亮点,我们只要比对橘色及绿色亮点的数目,若橘点,绿点大于2,就表示有HER2基因过度表现。然而也有人认为,真正执行基因功能的物质是蛋白质而不是DNA,我们要看HER-2基因是否过度表现,当然以观察细胞膜表面是否HER.2蛋白质的量有增加最为直接,也最为可信,实在没有道理去用HSH来检测DNA的量。因为有时即使DNA有过度表现,其结果未必能在蛋白质层面表现出来。我们要知道,由DNA表现到蛋白质被制造出来,必须经过很多程序,包括DNA_RNA_蛋白质,中间可能出现很多干扰因素,因此有时DNA有表现,蛋白质却未必有表现,此外,作免疫化学染色法比较便宜,又省时,比较适合优先当作筛选的工具。因此,我们认为HER.2 IHC(++)必须加作HSH来判断是否真的有加’ R.2过度表现。而HER-2阴性或HER.2(+)则表示没有HER-2过度表现,不必再作HSH( 除个别认为判断误差外) ,也不适合使用Hercepti n来治疗。本研究验证了目前所采用的IHC作为HER-2检测初筛,FISH对不确定病侧(*)进行补充确认的检测方案是必须的。同时,HER-2 IHC( +) 或( +++) 在条件允许的情况下,也应进行FISH检测,以确定HER-2基因的扩增情况。参考文献1.Bof i oncUol I,V。ct aL。Trastazumab admi ni strati on cal l effecti vel y target chemotherapy- resi stant cytokerati n一19 messengerRNA-posi ti ve tumor cel l s i n the peri pheral bl ood and bone morrow ofpati ents wi th breast cancFr.Ol i n Canogr Re, ,2004.10( 24) :P.8185-94.2.Bozzctl i ,C.。el aL,HER-2/neu ampl i fi cati on detected缈fl uorescence i n si tu hybri di zati on i nJ {ne needl e aspi ratesfrompri marybreast cance,:Ann OncoL 2002.13( 9) :P.1398-403.3.Press,M.E,el a1.,Di agnosti c eval uati on of HER- 2 as a mol ecul ar target:al l assessment of accuracy and reproduci bi l i ty ofl aboratory testi ng i n l arge, prospecti ve, randomi zed dinical触ain Cancer Res.2005.11( 18) :P.6598—607.4.Vogel ,C山.,J .C.Reddy, and L.M.Reyno, Eff, cacy oftrastuzumab.Cancer Res,2005.65( 5) :P.2044.5.Sl amon, D.J .,E.H.Romond’ and E.A.Pc-fez,Advances i n adj uvant therapyfor bmast cancer.Cl i n Adv Hematol Oneol , 2006.4( 3 Suppl7) :P.suppI 1.4-9;di scussi on suppl 10;qui z2 P fol l owi ng suppl 10。6,NabhoRz,J .M.and D.Sl amon, New adj uvant strategi esfor bmast cancer."meeti ng the chal l enge ofi ntegrati ng chemotherapyand trastuzumab( Hercepti n) .Semi nOncoL 2001.28( 1 Suppl 3):P.1-12.7.Schn五dt, M.,et a1.,l ong- term prognosti c sisnificance of HER- 2/neu i n untreated node- negati ve breast cancer dependson themethod oftesti ng.Breast Cancer Res。2005.7( 2) :P.R25每66.8.Chorn,N.,Accurate i denti fi cati on ofHER2-posi ti ve pati ents i s essenti al fo,superi or outcomes wi th trastazumab therapy.OncolNut' s Forum, 2006.35( 2) :P.265-72.9.J aeobs,T.W,ela1.,HER-2/neu protei n expresswni n breastcancer eval uated细i mmunohi stachemi stry.Astuay ofi nterl aboratory agreement.Am,ai n Path01.2000.113( 2) :P.251—8,10.Hammoc】【.L.。cta1,,Strong HER· 2/neu protei n Dw他甲形站洳毋i mmunohi stochemi stry oftendoes notpredi ct oncogeneampl i fi cati on byfl uorescence i n sf彬hybri di zati on.Hum Pathol 。2003.34( 10) :P.1043-7.11.Yazi j i ,H,,el a1.,HER一2 testi ng i n breastcancer usi ngparal l el t缸sue· based methods.J ama, 2004,291(16):P,1972-7.