微生物实验思考题参考答案及知识要点 微生物实验思考题参考答案及知识要点 一.酵母菌形态观察及死活细胞鉴别 1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响 是分析其原因。 吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因 吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响 是分析其原因。 美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进 行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化 型变成为无色的还原型。因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的,而死细胞或代谢作用 微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 美蓝浓度高了,代谢不太活跃的活细胞也会被染色,从而使观察到的死细胞较多,活细 胞较少;反之,则代谢微弱的细胞也能还原美蓝,不被染色,从而使观察到的死细胞较少, 活细胞较多。 二. 细菌的简单染色和革兰氏染色 1. 革兰氏染色中那一步是关键 为什么?你是如何操作的? 革兰氏染色中那一步是关键?为什么?你是如何操作的? 为什么 革兰氏染色的关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间) 。如果脱色过度,革兰氏阳性菌也 可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌; 如脱色时间过短, 革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认 为是革兰氏阳性菌。 脱色时间的长短还受涂片的厚薄, 脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的 多少等因素的影响,难以严格规定(脱色是应当控制速度,脱色时间一般为 20—30s) 。 2. 固定的目的之一是杀死菌体,这与自然死亡的菌体有何不同? 固定的目的之一是杀死菌体,这与自然死亡的菌体有何不同? 自然死亡的菌体本身已经部分自溶, 结构已经改变。 固定杀死细菌时细菌结构是保持死 亡时的状态的。 3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌? 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌? 复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌 能。在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌(G+) ,被酒精脱色为革 兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染,是为了让结果更清楚。 4. 涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题? 涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题? a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上;b 增加其对染料的亲和力。 固定时应注意: 手持