考马斯亮蓝染色详细实验步骤 考马斯亮蓝染色液 R250 配方(100ml) : 考马斯亮蓝 R250 0.25g 甲醇 45ml 冰醋酸 10ml ddH2O 45ml 考马斯亮蓝脱色液配方: 甲醇 250ml 冰醋酸 80ml ddH2O 定容至 1000ml。 具体操作步骤: 1 电泳结束后, 切取少量含有 MARK 蛋白以及少许样品的小部分凝胶进行染色, 其余部分用保鲜膜包好, 放在 4℃冰箱保存。 取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中, 确保染色液可以充分覆盖凝胶。 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动, 室温染色 1 小时或更长时间。 注: 具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。 凝胶较厚,温度较低, 则染色时间宜适当延长。 凝胶较薄, 温度较高, 则染色时间可以适当缩短。 通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时, 可以认为已染色充分。 染色 2-4 个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。 2 倒出染色液。 染色液可以回收重复使用至少 2-3 次。 3 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液, 确保脱色液可以充分覆盖凝胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动, 室温脱色 4-24 小时。 期间更换脱色液 2-4 次, 直至蓝色背景基本上全部被脱去, 并且蛋白条带染色效果达到预期。 通常蛋白条带在脱色 1-2 小时后即可出现。 注: 脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸, 可以使部分染料吸附在吸水纸上, 加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。 4 完成脱色后, 用 ddH2O 浸泡, 至于未染色凝胶长度相等时, 参照MARK 蛋白, 与未染色凝胶对比, 切下所需蛋白成分的凝胶, 收集起来。 然后把所要提纯的蛋白从凝胶中分离出来。