三、基于牛膝配伍对活性成分 体内分布的影响分析 除了牛膝本身发挥的作用,怀牛膝还具有引经 报使,引诸药下行,以达人体下半身,治疗下半身疾 患的作用。《寒温条辨》记载:“牛膝,生用其性下走如 奔,破血症,通经闭,引诸药下行。”牛膝“引药下行” 的作用虽然被诸多医书所记载,但其作用机理尚不 明确,如通过对三妙丸的研究,认为牛膝的“引药下 行”作用可能是与苍术、黄柏的药效协同作用 ,但是否与现代医学中认为的促进有效成分向病灶部位分 布有关尚待研究。 通过药代动力学组织分布研究法研究牛膝在正常大鼠体内对三妙丸中主要有效成分小檗 碱组织分布的影响,探讨其引药下行作用。结果含牛 膝三妙丸组动物给药后关节药物浓度在 2h 牛膝三妙丸组相近,4h明显高于去牛膝组,6h 牛膝组相近,多次给药后明显高于去牛膝组。含牛膝组的关节/ 心脏药物浓度比始终明显大于去牛膝组。 结果表明,牛膝具有促进三妙丸中有效成分小檗碱 向关节组织分布的作用。林月泉 [10] 通过研究牛膝引药 作用对双氯芬酸钠抗佐剂型关节炎大鼠的影响,研 究牛膝对双氯芬酸钠治疗佐剂型关节炎大鼠的影响 及其可能的作用机理。结果牛膝双氯芬酸钠复方组 的抗炎效果明显优于双氯芬酸钠组,药物组织分布 比双氯芬酸钠组更为合理,体内PGE2 水平也更接近正常水平。结论:牛膝能够提高双氯芬酸钠 在炎症靶点的组织分布,并与其药效作用相吻合。其 降低体内PGE2 的作用可能和促进双氯芬酸钠向病 灶组织分布蓄积有关。至于为什么牛膝可以促进双 氯芬酸钠向下肢分布,则可能是因为体内存在血- 节囊液屏障,使药物在关节囊中难以达到有效浓度,而牛膝有“通利筋脉”的作用,使药物可以穿透屏障, 使得关节中的药物浓度得到提高。该作用不仅可以 使牛膝在中药复方中发挥引药下行的功效,同时对 使用化学药治疗下肢疾病也具有一定的提高药物靶 向性,增强疗效的作用,但是对于治疗缺血性脑卒中 的话就不是很适合。 通过以上对牛膝引药下行的机理的研究和推 测,推测牛膝的作用靶点可能在肾脏或者下肢,而导 致具有同效的药物引入肾脏或下肢(下焦),或增加 了活性成分向肾脏或下肢积聚?通过对牛膝引药下 行的研究,我们发现不能光看到牛膝的作用对于缺 血性脑卒中的影响,而是要看到配伍之后整个复方 对于治疗缺血性脑卒中的作用。所以为了进一步研 究中药复方中配伍牛膝治疗缺血性脑卒中的合理 性,我们对通塞脉片进行处方优化。 通塞脉片是以四顾汤为基础研制而成的治疗血 栓闭塞性脉管炎的有效验方 [11] ,由黄芪、党参、石斛、 玄参、金银花、怀牛膝、当归、甘草 味中药组成,具有培补气血、养阴清热、活血化瘀、通经活络等功效, 临床治疗血栓闭塞性脉管炎疗效确切,被列为国家 中药二类保护品种。我们将通塞脉片处方分别按照 补气、养血活血、滋阴、清热解毒功效用药进行分类, 选择其中黄芪、当归、玄参与金银花为基本组成药 物,加减党参、怀牛膝、石斛、甘草进行拆方优化。结 果表明,通塞脉片组方舍去怀牛膝后的通塞脉微丸, 具有较好的延长小鼠脑缺血存活时间,提高血小板 聚集抑制率功效。主要药效学试验进一步表明:(1) 舍去怀牛膝后的通塞脉微丸在治疗和预防缺血性脑 卒中大鼠模型中,对脑部的作用,如缩小模型大鼠的 脑组织,降低缺血性脑组织的含水量,减轻脑水肿、 减轻缺血缺氧对脑组织损伤方面均比通塞脉片强。 (2)舍去怀牛膝后的通塞脉微丸能够显著增加颈内 动脉血流量和全脑血流量,降低脑血管阻力的作用, 并且优于通塞脉片组。(3)舍去怀牛膝后的通塞脉微 丸可升高大鼠脑微血流,对胶原蛋白- 肾上腺素所引 起的小鼠体内血小板聚集有抑制作用,从而抑制其 体内血栓的形成,作用均优于通塞脉片 12]。推测这里 引药下行的机理可能是取舍牛膝引起通塞脉方治疗 缺血性脑卒中靶部位主要活性成分质和量的分布改 变,或者表现为缺血性脑卒中后神经增殖的促进作 用和神经缺血后受损伤的保护作用产生差异的科学 假说。 由于下行的机理研究不够深入,我们只能推测牛 膝的作用靶点会不会在肾脏或者下肢,而导致具有 同效的药物引入肾脏或下肢(下焦),或增加了活性 成分向肾脏或下肢积聚,或者是牛膝有“通利筋脉” 的作用,使药物可以穿透屏障,使得关节中的药物浓 度得到提高。 牛膝“引药下行”科学内涵如何?怎样揭示牛膝“引药下行”与中药复方治疗脑卒中相关性,综合文 603 PDF 文件使用 试用版本创建www. 2011第十三卷 第四期 绎Vol .13 No.4 也Worl Science Technology/Moderni zati Traditi onal Chi nese Medi ci ne Medica页 献研究,结合实验室工作进展,特提出通过取舍牛 膝对中药复方制剂治疗缺血性脑卒中的影响研究 揭示牛膝的干预机制,是否影响复方主要活性成分 体内特异性分布?是否对缺血性脑卒中相关的神经 细胞因子起保护和再生影响?是否对脑缺血再灌注 后的脑水肿和脑保护起作用?以及是否对脑缺血再 灌注后的血脑屏障有影响?现提出研究思路如下: 通过对取舍怀牛膝不同组方在缺血性脑损伤不 同时段大鼠脑组织、血浆、肾脏、下肢关节中的活性 成分进行检测分析与对比研究,从化学成分特异性 体内分布的角度探讨牛膝“性善下行”的科学内涵。 从而揭示牛膝“性善下行”的药性特征是否与复方 主要活性成分体内特异性分布存在必然的联系? 从加减牛膝对脑神经细胞的增值与保护方面 来研究复方配伍牛膝的合理性,通过整体动物实验 评价通塞脉制剂取舍怀牛膝对缺血性脑损伤模型 中枢神经细胞增殖和细胞凋亡的影响,以免疫组织 化学方法检测大鼠病灶侧侧脑室下区(SVZ)、海马 齿状回(DG) 溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)和Nesti 的变化,了解细胞增殖情况。采用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的地高辛 dUTP 缺口末端标 记法(TUNEL)来识别凋亡细胞。比较取舍牛膝主要 活性成分内源性指标的差异,来评价牛膝的配伍作 用机制。 通过离体细胞模型(PC12 细胞) 14]评价取舍怀 牛膝对缺血性脑损伤模型中枢神经细胞的影响。取 舍怀牛膝的制剂对不同细胞损伤模型的作用,揭示 牛膝“性善下行”是否与复方取舍牛膝对缺血性脑 卒中相关的神经细胞因子的保护和再生影响有关? 通过检测缺血性脑卒中相关的蛋白质 通道蛋白-4,S100茁 蛋白,HSP70 蛋白等)的差异来 评价取舍怀牛膝对缺血性脑水肿和脑保护、脑缺血 再灌注血脑屏障、急性脑缺血再灌注后神经细胞损 伤保护作用的影响。 通过检测与细胞凋亡相关的基因bcl 与Bax[18~20] 评价取舍怀牛膝对缺血性脑损失模型神经细胞的凋亡情况,揭示牛膝对神经细胞的增殖和凋亡的影响。 牛膝作为“四大怀药”之一,用药历史悠久,药 源广泛,具有很大的开发潜力,在临床上已得到较 广泛应用。怀牛膝的功效较多,但无论从其基本功 能、衍生功能还是配伍功能来讲,“性善下行”是其 主要药性特征,因此探讨治疗缺血性脑卒中中药复 方中配伍应用牛膝的合理性,可为进一步揭示牛膝 “性善下行”科学内涵奠定基础。 参考文献 石圣洪,宋军,李祖伦,等.川牛膝本草考察.成都中医药大学学报,1998,21(4)颐4~6. 毛平,夏卉莉,袁秀荣,等.怀牛膝多糖抗凝血作用实验研究.时珍国医国药,2000,11(12)颐1075~1076. 崔瑛,侯士良.怀牛膝预防动脉粥样硬化的实验研究.基层中医杂志,1998,12(1)颐30~31. 怀牛膝的多倍体、单体和二倍体的药理作用比较.药学通报,1988,23(11)颐666. 孙水平,李新华,孙曙光.怀牛膝药理研究续报.河南中医,1985,5(1)颐39~40. 脉络宁注射液治疗脑供血不足28 例分析. 中国 误诊学杂志,2007,7(5)颐1097~1098. 中西医结合治疗中风病40 中国中医急症,2007,16(4)颐478. 加味四妙丸有效部位群的筛选研究.世界科学 技术- 中医药现代化,2005,7(4)颐28~33. 孙备,吕凌,陆忠祥.三妙丸中牛膝引药作用的机理研究.时珍国医国 药,2009,20(4)颐859~861. 10 牛膝引药作用对双氯芬酸钠抗佐剂型关节炎大鼠的影响. 中药新药与临床药理,2009,20(5)颐408~411. 11 新中医,2007,39(2)颐104~107.12 界科学技术-中医药现代化,2005,7(4)颐49~53. 13 Ma覸kowi ak Markowicz- Kul etal 2004,56颐673~687. 14 从内源神经干细胞神经再生探讨针灸治疗缺血性脑中风的机理. 针灸临床杂志,2006,22(7)颐54~56. 15 鲁宏,胡惠,杨娜,等.水通道蛋白- 在大鼠急性脑缺血再灌注脑组织中的表达. 解剖学杂志,2008,31(1)颐47~50. 16 电针加灸对急性脑缺血再灌注大鼠S100茁 蛋白的影响. 湖北中医学院学报,2008,10(4)颐8~10. 17 葛根素对大鼠急性脑缺血及缺血再灌注损伤后 HSP70 蛋白表达的影响.广西医科大学学报,2005,22(5)颐663~665. 18 Borst drugtransporters multi drug resi stance- associ ated protei ns. 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Study Chinese medi ci ne wi th Achyranthes root had shown Achyranthesroot haseffects atherosclerosi antithrombosi also has protecti ve effects neuroncel fea鄄ture eading medi ci ne effect downward Achyranthesroot may change active ngredients. Further study shoul rational mechanism Achyranthesroot Chinese medi ci ne treatment strokedi sease. Thi articl studied rational Chinese medi ci ne treatment strokecombi ned wi th without Achyranthes root aboratoryresearch. Re鄄search methodswere al so di scussed scienti fi eading medi ci ne effect downward feature Achyranthesroot Keywords: Achyranthes root, eading medi ci ne effect downward 605 PDF 文件使用 试用版本创建www.