新柱柱效测试,为何塔板数明显偏低?　n　确保系统状态正常,如有必要再冲洗一次。　n　柱效受系统死体积扩散影响。沃特世(Waters®)色谱柱出厂测试是在体积最小化的系统上进行,塔板数较高。通常自测如　能达到70%以上,就可以接受。　n　色谱柱体积越小,系统死体积(管路、检测器流通池)对柱效的影响就越大。对于小内径色谱柱(2.1和3　mmid)、和/或短的　色谱柱(≤10cm),尽可能减少系统死体积(管路长度/内径、流通池),并仔细检查管路与色谱柱的连接。检测器采样频率　应设置为20　Hz。　n　用什么条件和什么样品测试的?峰保留时间越短,越容易受系统死体积影响。建议调整流动相条件,使峰保留时间在10分钟　(常规HPLC系统)或5分钟(UHPLC系统)。　n　样品进样体积越大,样品溶剂会导致峰扩散。HPLC柱可进样1　µL,UPLC柱可进样0.1　µL。　新柱上机,基线一直不能平衡,怎么办?　n　首先断开检测器,按照对色谱柱的高洗脱强度溶剂5倍柱体积或者重复5次梯度冲洗色谱柱,然后按照测试柱效的方法测试。　n　无规律的噪音,可考虑是否有气泡进入检测池,沃特世仪器用户请拨打免费售后服务热线800(400)　820　2676,获得冲洗　检测池指导。　n　规律性的上下波动基线,可考虑是否泵混合效率不足,在泵后增加mixing　loop,具体请咨询仪器维修工程师。　n　实验室内的环境条件是否会干扰到仪器,以及色谱柱柱温情况。　n　如果基线缓慢上飘或下飘,检查流动相是否存在配制不均匀、或者在缓慢挥发的情况。　n　更换同类型的旧柱情况会如何?有时需要对新色谱柱进行一定的老化(可以运行几次梯度方法)。　新柱一进样峰就拖尾,是色谱柱已经坏了吗?　n　检查系统状态正常,检查管路与色谱柱连接无死体积。　n　对新色谱柱进行柱效测试,检查是柱效问题还是应用问题(可向我们索取柱效测试标准品或标准品配方)。　-　若柱效测试峰塔板数明显偏低,请参考问题1。　-　若柱效测试结果正常,判断为应用问题。　请考虑:这根色谱柱是否适合这个应用项目?过去那根旧色谱柱在进行这个项目测试时,色谱柱是否已经被离子对条件或其　他改性条件用过?　新柱不能重现旧色谱柱谱图,是色谱柱的批次问题吗?　n　新色谱柱是否需要老化或充分的活化平衡?旧色谱柱是否在测试项目以前经历过变性条件(如离子对试剂)?项目之前用过　不同批次色谱