* 广西自然科学基金资助项目 ( 编号: 桂科自 0728132)▲在读硕士研究生△通信作者。 博士,教授甲状腺乳头状癌 BRAF V600E 突变蛋白质的表达及意义*江晓燊1▲, 解乃昌1广西医科大学研究生学院( 南宁 530021) ;2△2广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科( 南宁 530021)【摘要】目的探讨 BRAF V600E 突变蛋白质表达与甲状腺乳头状癌( PTC) 临床病理特性的关系。 方法应用抗 BRAF V600E 单克隆抗体和免疫组化 SABC 法检测 PTC( n = 50) 、结节性甲状腺肿( n = 30) 、甲状腺腺瘤( n = 25) 石蜡包埋组织切片中 BRAF V600E 突变蛋白质的表达,半定量分析 BRAF V600E 突变蛋白质表达与 PTC临床病理生物学特性的关系。 结果PTC BRAF V600E 突变蛋白质的阳性表达率为 74% ( 37 /50) , 甲状腺良性病变组织中的表达率为 0,差异有统计学意义( P < 0. 05) 。 PTC BRAF V600E 突变蛋白质的表达水平与颈部淋巴结转移、肿瘤分期( Ⅰ ~ Ⅱ 期 vs Ⅲ ~ Ⅳ期) 和组织分型( 经典型 vs 滤泡亚型) 有关,差异均有统计学意义( P < 0. 05) 。性别、年龄、肿瘤大小、甲状腺被膜外组织受侵犯与否对其表达水平均差异无统计学意义( P > 0. 05) 。 结论应用免疫组织化学技术可检测 PTC 石蜡组织切片 BRAF V600E 突变蛋白质的表达,可为 PTC 鉴别诊断,手术治疗和预后判断提供参考资料。【关键词】甲状腺乳头状癌; 免疫组织化学; BRAF V600E; 蛋白质表达甲状腺癌是一种组织形态学和病因学有差异性的疾病,其中约 90% 是甲状腺乳头状癌( papillary thyroidcarcinoma,PTC) 。 分子遗传学研究揭示 RET/PTC 和PAX8/PPARX 染色体重组,BRAF 和 RAS 基因点突变都与 PTC 的发生和发展有关,且相互之间有排他性基因分型诊断已成为 PTC 研究的重要内容。 BRAF 基因突变是 PTC 最常见的 遗传学事件, 90% 以上都是BRAF T1799A 错 义 点 突 变, 平 均 突 变 率 为 44% ~49%[2 - 3]。 基因突变导致 BRAF 蛋白质第 600 位缬氨酸( valine) 被谷氨酸( glutamic acid) 替换, 突变蛋白质BRAF V600E 因构象改变而激活, 向 MAPK 信号通路下游激酶( RAS→BRAF→MEK→ERK) 传递有丝分裂信号,促使 PTC 持续生长、浸润和转移。 本研究应用人BRAF V600E 蛋白质序列合成多肽的单克隆抗体和免疫组织化学染色技术( SABC 法) 检测 PTC 组织中的BRAF V600E 蛋白质表达,并分析其临床应用价值。[1], 故1资料与方法1. 1一般资料所有组织切片均由广西医科大学第一附属医院病理科提供, 全部是本院 2009 年 1 月 至2011 年 7 月 期间手术病例的存档组织蜡块,50 例 PTC临床资料完整, 均是甲状腺单侧腺叶甲状腺癌和初次手术病例。 其中男 11 例, 女 39 例, 年龄 18 ~ 78 岁, 平均( 42 ± 0. 6) 岁。 按照第 6 版美国 癌症联合委员 会( AJCC) 分化型甲 状腺癌 TNM 分期, Ⅰ 期 12 例, Ⅱ 期19 例,Ⅲ期 14 例,Ⅳ期 5 例。 同时收集 30 例结节性甲状腺肿( 男 7 例,女 23 例, 年龄 19 ~ 51 岁) 、25 例甲状腺腺瘤作为对照组( 男 5 例, 女 20 例, 年龄 21 ~ 63岁) 。 所有标本均经 10% 甲醛固定, 石蜡包埋, 每例标本连续切取 4 μm 厚切片, 共 5 张切片,1 张做 HE 染色,由病理科专家重新阅片确诊,1 张作为阴性对照,实验组用 3 张组织切片,结果取平均值。