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300mA,50min 肯定转过了 参考下别人文献上的试试(毕业论文上的条件很清楚) 可以染一下胶和膜看看 条件要慢慢摸索的 希望楼主早点曝出条带
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汗一个!真心不好意思,我用的是半干转
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我也一直在做小分子,比如caspase3(15kD)的WB,开始总是不出,但是这两次好了很多,总结经验就是:
1. 转膜液中不要加SDS
2. 转膜条件130mA 1h(不要超过1h)
3.最好使用0.22 PVDF
楼主可以试试,好运哦~~
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前天做了一次,转膜液中不要加SDS了,转膜条件是200mA, 70min,使用的是0.22 PVDF膜,昨晚曝光,还是没有条带,哎,伤心欲绝啊!昨晚睡眠中朦朦胧胧浮现的,全是WB实验啊!
我想请教各位同仁,我做这个小分子量蛋白,每次条带都没有,但每次曝光,整张膜背景非常高,如果曝光时间5min,整张膜全部发光,非常亮,不知道大家是否知道这是什么原因啊!
期待大家的帮助!
先谢谢大家了!
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前天做了一次,转膜液中不要加SDS了,转膜条件是200mA, 70min,使用的是0.22 PVDF膜,昨晚曝光,还是没有条带,哎,伤心欲绝啊!昨晚睡眠中朦朦胧胧浮现的,全是WB实验啊!