1　取材1. 1　组织托　组织托是冰冻检查时用于支持取材组织块,使组织保持所需切面, 经冷冻后进行快速冰冻切片制作的必备工具。 组织托平常若放置在冷冻机外常温下, 不进行预冷, 将使冷冻时间延长。 我们做过以下实验, 有三种组织用六个组织托分别取材放入冷冻机, 其中三个组织托是在冷冻机内预冷过的, 另外三个组织托取自 室温下放置的, 结果, 经过预冷的组织托速冻组织时间比未预冷组织托快 3 ~ 5min。 所以, 在日 常工作中我们应及时将冷冻组织托洗净擦干并置于冷冻机内预冷备用。1. 2　包埋剂　包埋剂是用来把组织与组织托很好的凝结在一起, 避免切片时组织从组织托上脱落,延误时间。 同时, 包埋剂还可以避免组织切不全,边缘粗糙及折、皱等问题, 但要注意包埋剂不能加太多,否则会因冷冻包埋剂而延长出片时间。 医师取材后把组织“载入”已预凝好的( 不能完全凝固)包埋剂,置于冷冻切片机中速冻制片。 有些医师加水速冻固定组织, 这种做法会使组织内形成冰晶,影响病理诊断。1. 3　取材　标本离体后应马上取材冷冻, 标本表面若附着大量黏液或血液避免用水冲洗,需用纸巾擦拭干净,组织取材块不能太大、太厚,否则影响冷冻时间,大小以 1 ~ 1. 5cm × 1 ~ 1. 5cm, 厚 2mm 为宜,不能超过 3mm,尽量少带或不带脂肪组织或坏死组织,切面要平整, 囊性组织内的内容物不要用水冲洗,以免切片产生冰晶影响诊断。2　温度2. 1　不同组织冷冻温度要求不同　一般来讲, 肝脏、脾脏、脑组织应在 - 15℃; 子宫肌瘤、纤维组织在 -18 ~ -20℃;脂肪组织在 -25 ~ -30℃。2. 2　控制好组织的冷冻时间　虽然不同组织温度要求不同,但在实际中很难操作, 尤其是像只有一台冷冻机,并且标本量又多, 标本种类复杂的病理科,很难完全按照要求满足冷冻组织。 这就是要控制好组织的冷冻时间。 例如把 100% 定为冷冻标准,那么肝、肾、脑等冻到 70% 左右即可,冷冻时间过长会使组织变脆, 易碎, 不易切片; 肌瘤、纤维等冻到 80% 左右即可,冷冻时间过长会使组织变硬,不仅容易损刀, 而且组织的切片会出现裂痕、搓板样等,图 1( 封 2) 是在冷冻程度不同条件下子宫肌瘤切片镜下观察,冻到 80% 组织镜下无搓板样、裂痕现象,冻到 100% 镜下有搓板现象; 脂肪组织必须冻到 120% 以上, 这样脂肪组织才能冻住, 利于切片。・ 6901・ 第 34 卷　10 期　2012 年 10 月宁夏医科大学学报Journal of Ningxia Medical University3　切片　　冷冻切片常见的问题有准备不充分,防卷板使用不当,贴面不能每切完 1 次彻底清洁干净, 切片时用力不均,进刀快慢不均, 不注意技巧等等。 做冷冻切片前,应提前调整好角度, 刀要锋利, 刀头、刀架、组织托等都要上紧, 不能有任何松动。 每切完一张切片都要彻底清洁防卷板及贴面,这样可防止污染,避免切片皱褶和不能成片, 防止刀痕。 切片中要注意使用技巧,例如,从组织好切的部位、组织最小面进刀, 往往容易切片, 带包膜组织最好把包膜放上面,让刀最后切到, 这样容易切出较完整的切片等。4　固定　　冷冻切片固定要求“ 立刻” 固定。 所谓“ 立刻”,就是切完一张要马上固定在固定液里,不能等切片晾干再固定, 更不能用吹风机吹干, 否则容易发生细胞退变。 正确的方法是把固定液置于冷冻机上,切一张马上放入固定液里固定一张液的选择各家医院有所不同。 目 前病理科所用的固定液有五种:95% 酒精、甲醇、丙酮、AAF 液、10%甲醛。 不管选用哪一种,切片固定时间均应为30 ~50 s。 切片固定时间过短, 组织水肿, 细胞体积大,易造成判断失误;固定太长,细胞核固缩,核染色质结构不清晰,同样影响诊断。5　染色　　染色是制作切片的关键步骤,一是要求染液要新鲜,二是要保证染色试剂的浓度准确。 染液更换不及时,组织红蓝染色掌握不好, 各级梯度酒精时间控制不当,都会影响切片质量。 组织细胞核浆颜色深浅程度,关键要掌握好分化时间深染、充分分化、返蓝,高浓度酒精脱水时间不宜过短,时间过短, 组织显微镜下模糊不清。 目 前病理[ 1]。 固定[ 2]。 苏木素应科成熟的染色程序为:切片切好后立刻放入固定液中固定 30s→水洗→苏木素染色 1 ~ 2min→水洗→盐酸酒精分化 3 ~5s→水洗→氨水返蓝 3 ~ 5s→水洗→伊红染色 20 ~30s→稍洗→梯度酒精脱水→二甲苯透明( 最好用三缸二甲苯) →封固。6　封片　　封片是将染色完成后的切片滴加光学树脂胶,以盖玻片覆盖,便于长期保存。 封片时最容易出现的问题是滴胶过多, 树胶溢出盖玻片, 造成切片表面污染,归档时切片黏连,难以分开。 对此,技术操作人员应视组织大小及厚薄适量滴加树胶,熟练掌握封片技术,如有胶液溢出, 应及时以少许二甲苯棉签擦拭周边,保证切片外观干净整洁。　　怎样才能制作一张质量优良的冷冻切片呢?经过多年的工作经历和参加全国冰冻切片大赛经验,我认为,一张优良的冷冻切片必须具有切片的完整性,厚薄均匀, 无折叠和切痕, 组织内无冰晶,保证染色核、浆分明, 红蓝适度, 组织结构清晰; 特别强调冷冻切片立刻固定,千万不要等待下一张切片,固定时间要充分; 足够的苏木素、伊红深染, 深分化,不必晾干即可封片。 要求病理技术人员应掌握制作精良、染色完美的冷冻切片的标准和正确的操作流程,养成染色后显微镜观察的习惯, 以便不断调整流程和总结经验。参考文献:[1] 　魏永敬,张滇新,蔡敏琪, 等. 手术中冰冻切片病理诊断的体会[ J] . 西南军医,2006,14(2) :51 -53.[2] 　张剑虹,成日 青,林媛媛,等. 1091 例手术中冰冻切片病理诊断准确性分析[ J] . 河北北方学院学报: 医学版,2007,24(1) :41 -43.( 责任编辑:路锦绣)参考文献中英文作者名的著录方法　　医学期刊的论文中,引用英文文献的比例很高,但有不少作者将英美人的姓、名或姓名写错。 英美人姓名的习惯写法是:名 - 名 - 姓,“名”可以有 1 个、2 个或 3 个, 但“姓” 只有 1 个。 引用英文文献时, 要将次序调整为: 姓 - 名 - 名。“姓”采用全拼写,“名”用第一个字母的大写作为缩写,不用缩写点。 数据库在著录作者姓名时, 已经调整著录格式为:姓 - 名 - 名,可参阅。 例如:Kate Smith Stafilidis 可以写为 Stafilidis KS。( 本刊编辑部)・ 7901 ・