广东医学2014 年 6 月 第 35 卷第 12 期 Guangdong Medical J ournal Jun. 2014 , Vo1.35.No.12 得良好效果, 是治疗复发难治性肺癌的一条新途径。 参考文献 [ 1] 徐克成 ,牛立志.肿瘤冷冻治疗 学[ M] .上海 : 上海科技教育 出版社 , 2007 : 22 — 29. 申文江.放射性粒子植入的现状与进展[ J ] .中国微创外科杂 志 , 2007 , 7(2 ) :118 —119. GAGE A A, BAUST J.Mechanisms of tissue injury in cr yosurger y [ 2] [ 3]·1877 · [ J j .Cr yobiology,1998, 37( 3) :l71 —186. LEE W,DALY B D , DI PETRILLO T A.et a1 .Lim ited esection 南r non — small c ell lung canc er :observ ed loeal control with im. [ 4]plantation of 1125 brachytherapy seeds [ J ] .Ann Thorae Surg, 2003, 75( 1) : 237 — 242. 屈立新 , 牛立志 ,鲜华 , 等.微创 氩氦靶 向冷冻治疗高龄-tM , 细胞肺癌体会[ J ] .广东医学, 2008 , 29( 9) : 1499 —1500. ( 收稿日期: 2013 — 09 — 27[ 5] 编辑: 陈嘉伟) MGIT960 法和绝对浓度法对耐多药结核杆菌药敏 检测 比对分析 术 孙炳奇 ,张娟 , 孙秀华 ,孟冬娅 ’ 辽宁省沈阳市胸科医院结核病实验室(11 0044) ; 沈阳军区总院检验科( 沈阳 11 0044) 【 摘要】 目的评价 MGIT960 法和绝对浓度法( L — J 法) 在耐多药结核杆菌药敏试验中的临床应用价值, 确 定一种快速准确的药敏检测方法。方法收集痰培养阳性 , 经菌种鉴定和异烟肼、 利福平药敏试验确定为耐 多药 的结核杆菌菌株, 采用 MGIT960 法和 L —J 法对一线抗结核药物链霉素(SM) 、 乙胺丁醇( EMB) 和二线抗结核药物 卷曲霉素(CPM) 、 卡那霉素( KM) 、 氧氟沙星( OFX ) 和乙硫异烟胺(ETH )进行药物敏感性检测, 比较两种检测方法 的一致性 。结果212 例 阳性标 本 中分 离出耐药菌株 118 例 , 经一线药敏 试验确 定为耐 多药的菌株 80 例 , 占总耐 药率的 67. 8%。MGIT960 法和 L —J 法进行 药物敏 感性检测 , 符合率除 ET H 以外均在 80% 以上 , 以L — J 法为金标 准, MGI'P960 法的敏感度和特异度分别是 SM 100% 和93% , E MB 86%和 81% , OFX 93%和 88% , KM 92%和 94% , ETH 100%和 56% , CPM 88% 和 87% 。结论MGIT960 法与 L —J 法对耐 多药结核杆 菌药敏检 测结果除 了ET H 以 外均具有很好的一致性, 为耐多药患者一、 二线药敏检测提供快速有效的诊断方法。 【 关键词】 耐多药结核杆菌; MGI'I960 法; 绝对浓度法; 药敏试验 目 前 , 耐药结核病仍 旧是全球结核病疫情控制 的最 大障碍之一。我国是全球 27 个耐药结核病高负担国家 之一, 总耐药率为 37. 79%, 耐多药结核病( MDR —TB) 占8. 32%, 广泛耐药结核病 ( X DR —TB ) 占0. 68%⋯ 。 MDR — TB 是指结核病患者至少包括对异烟肼和利福 平耐药者, XDR — TB 是指在 MDR — TB 的基础上还对任 何氟喹诺酮类药物 以及至少对 以下 3 种注射药物 : 卷曲 霉素( CPM) 、 卡那 霉素 ( KM) 和 丁胺卡 那霉 索 ( AMK ) 中的一种产生耐药 的结 核病 疗效果差, 慢性排菌造成更多的 MDR —TB 传染源 , 是 造成近年结核病疫情难以控制的重要原因之一, 为结 核病的防治工作带来了严峻挑战。为此, 探索研究准 确、 快速和有效的一、 二线药敏检测手段是结核病防控 的当务之急。目前 , 实验室有多种药敏检测方法 , 如传 统罗氏法, 液体培养法和分子生物学的方法等 , 然而对 这些检测方法准确性的报道却不尽相同, 对一线抗结 核药物异烟肼和利福平已经进行了详尽的研究, 并取 得了一致 性结 果, 然 而对 链霉 素 ( SM) 、 乙胺 丁 醇 ( E MB) 和二线抗结核药物的报道还存在争议 是对耐多药患者。本实验 旨在利用 BACTE C MGIT960 法对 MDR —TB 患者常用抗结核药物进行药敏检测 , 。 由于 MDR —TB 治 , 尤其 } 沈阳市科技计划项 目( 编号 : F12 — 255 —1—00) 并与传统 的绝对浓度法 ( L —J 法) 进行对 比, 探讨 MGIT960 法的临床应用价值, 为临床制定 MDR —TB 治疗方案提供重要依据。 1材料 与方法 1. 1 WS288— 2008( 肺结核诊断标准》 , 收集本院 2010 年 8 月至2011 年 1 月临床表现症状、 体征及胸部影像学检 查确诊 或高度 疑似的肺结核患 者痰 标本进 行实验室 涂 片、 分离培养等检查。筛选出耐多药的菌株 80 例。标 准菌株 H37Rv 由国家结核病参比实验室提供。 1. 2试剂MGIT960 液体培养基 , MGIT 生长添加剂 ( Growth supplement) 和 MGIT 杂菌抑制剂( PANTA ) 均 购自于美国 BD 公司, L — J 固体培养基依据《 结核病诊 断实验室检验规程》 由本院检验科微生物室制备。 鉴别用 PNB 和 TCH 以及 一 、 二 线 药粉 全 部购 于 美 国 Sigma 公 司 , MGIT960 法 所用一线抗 结核药物 由 BD 公 司提供 。 1. 3药敏试验 方法 1. 3. 1 MGIT960 法一线抗 结核药 物 SM 和 EMB 是 冻干药 粉 , 药粉 用 4 mL 无 菌蒸 馏 水 溶解 , 二 线 药 物 CPM、 KM、 氧氟沙量 ( OFX ) 和 乙硫 异烟 胺 ( ETH) 药粉 配制同一线药物 , 每株结核杆菌需标记 5 支 MGIT 管 , 标 本及 菌株 来 源 根 据卫生 部发 布的 国标 .1 878. 查堕 兰 生! 笙 鲞 箜 塑 竺 !! ! ! !: ! : ! : : : 分别为生长对照管和 4 个加药管, 加 0. 8 mL SIRE 添 加剂至每一试管 , 每个加药 MGIT 管加 100 液 , 移取 0. 1 mL 菌液至 10 mL 无菌生理盐水 , 1: 100 稀 释 , 加 0. 5 mL 稀释后 的菌液至生长对照管 , 混 匀 , 在加 药管中加入未稀释的菌液 0. 5 mL , 混匀。将准备好的 MGIT 管按顺序放人标记好的 AST 试管架 , 系统扫描 试管架条形码 , 按照仪器指示位 置放入 BACTEC MGIT 960 仪器。各药物在培养基 中的终浓度见表 1。 1. 3. 2 L —J 法选取罗氏培养 阳性菌株, 挑取培养 基上菌落, 用无菌 0. 5%TWEEN80 生理盐水溶解、 稀 释 。与标准麦 氏比浊管 比浊 , 即制成 1 mg/ mL 菌悬液 , 10 倍稀释至 0. 01 mg/ mL , 用灭菌 吸管准确吸取 0. 1 mL 菌液分 别接种 至对照及 含药培 养基斜 面 , 每管 接种量 为 0. 001 mg。各药 物在 培养基 中的终浓度见表 1。 药物溶 表 1 各药物在培养基中的终 浓度 mL 方法 SM E MB CPM K M OFX ETH MGIT960 法 1. 0 5. 0 2. 5 2. 5 2. 0 5. 0 L —J 法 4 . 0 2 . 0 40 . 0 30. 0 2 . 0 40 . 0 1. 44 ~ 21 d 内, 根据 GU值报告实验结果 , 结果为定性的, 包括敏感 ( S) 、 耐药 ( R ) 、 不确 定 ( X ) 。L —J 法 结果 : 37~ C 温箱培养4 周后报告结果, 在对照培养基上生长 旺盛的前提下 , 培养基斜面无菌落生长 , 耐药判定为敏 感( S) , 若含药培养基上生长菌落数大于 20 个 , 则判定 为耐药( R ) , 少于 20 个 , 记录实际菌落数 , 重复试验。 1. 5统计学方法采用 SPSS 13. 0 统计软件, 以 L — J 法检测结果为判断标准 , 计算 MGIT 960 法的敏感度和 特异度 , 两种方 法检 测结果 的一致性 用 Kappa 检验判 别 , Kappa 值≥0. 75, 说明两种方法具有较好的一致性 , 0. 4< ~ Ka ppa 值 <0. 75 说明两种方法 的一致性一般 , Kappa 值 <0. 4 说明两种方法的一致性不好。 结果判 定MGIT960 法结果 : MGIT960 仪 器会在 2结果 2. 1菌株 118 例, 耐药率为 55. 7%, 经一线药敏试验确定为 MDR 的菌株 80 例, 占总耐药率的67. 8%。 2. 2药敏试验结 果MGIT960 法和 L —J 法对耐多药 结核杆菌药敏试验结果显示 , 两种方法对药物敏感性 检测的符合率除了 ETH 以外具有很好 的一致性, 见表 标本 筛查 结果212 例 阳性标 本 中分 离 出耐药 2 ~3 。 3讨论 耐药结核病的出现和流行已成为结核病防治领域 的难点和关注焦点。近年来 , 随着全球结核病疫情的 回升和抗结核药物的广泛使用, 耐多药菌株的不断扩 散 已成为全 球结核病 控制 中的一个 大 问题 , 尤 其是在 亚洲的一些发展 中国家 一 。WHO 推荐在中等和低 收入国家使用液体培养基进行结核分枝杆菌的培养和 药敏检测 , 以提高 MDR — TB 和 X DR — TB 的诊断速度 表 2两种方法对 2 种一线 和 4 种二线抗结核药物的 敏感性实验结果比较 注 : 一线药物的分离菌株为 80 例 , 二线药物 的分离菌株 为78 例 表 3 MGIT960 法与 L —J 法相 比结果分析 和检出率 物敏感性检测是对 MDR — TB 确定一个有效的治疗方 案和避免其耐药性进一步加重的一个重要策略。液体 培 养抗结 核药敏试 验 的应 用推广一 直受 到广泛关 注 , 由于 BACTEC MGIT960 系 统 的检 测 功 能 与 BACTEC 460 系统相 似 , 且 无放射 性污染 , 目前 被 WHO 认可 并 在 国外 多家结核病参 比实验室使用¨ 。 本实验采用 MGIr I960 方法通过对 MDR —TB 的 2 种 一线药 物和 4 种二 线药 物 的敏感 性 检测结 果显 示 , 以 L — J 法为金标准, 敏感度和特异度除 了 ETH 特异 度为 56%以外, 其他都在 80%以上, 符合率分别是 SM 99% , EMB 83% , 0 Fx 91% , K M 94% , ETH 65% 和 CPM 87% , ETH 出 现 特 异 度 较 低 的 原 因 可 能 和 MGIT960 误判有关 , 另外培 养基 成分 的差 异或 用于 生 长的两种方法之间的结果判定过程 中的技术差异 , 也 可 能影 响特异度 。 传统的罗氏方法尽管具有简单 、 经济等优势, 但耗 时较久, 远不能满足临床诊治的需要; 目前, 国外一些 结核病参比实验室已开始使用 MGIT960 法进行结核 杆菌的药敏试验 , 该技术 目前最多可检测 14 种抗结核 药物, 4 ~13 d 即可出检测报告 , 有利于患者的早期诊 断和治疗 , 但在国内关于 MGIT960 法进行药敏试验应用 报道不一致, 尤其是对 MDR — TB 患者。本实验结果显 。对一 、 二线抗结核药物准确 、 快速的药 广东医学2014 年 6 月 第35 卷第 12 期 Guangdong Medical J ournal J un. 2014 , Vo1 . 35 , No.12 示, MGIT960 法与传统的 L — J 法具有较好的一致性, 且 所需检测时间较短, 这样就可以为耐多药患者提供更快 速、 准确的耐药报告, 使得临床 MDR — TB 治疗的药物组 合有科学依据, 以便最大限度地减少 MDR —TB 的传 播, 降低发病率。 参考文献 [ 1] 中华人 民共 和国卫 生部.全 国结核 病 耐药 性基线 调 查报 告 (2007 — 2008 年 ) [ R ] .北京 : 人民卫生 出版社 , 2010: 24 — 33. 唐神结 ,肖和平.严重耐多药结核病的成 因与对 策[ J ] .中华 临床医师杂志, 2009, 3( 3) : 460 — 466. 唐神结.耐药结核病 防治 手册[ M] .北 京 : 人 民卫生 出版社 , [2][3]2009 :44 —150 . 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( 收稿 日 期: 2013 — 10 — 29编辑: 林培德) 红细胞膜总胆 固醇对急性冠脉综合征的 预测价值 木 严俊儒, 刘洁香, 李素颀, 梁健球, 胡蛟龙 广东省佛 山市第二人R 医院心内三区(528000) 【 摘要】 目的入 选 ACS 组患者 72 例 、 慢性稳定型冠 心病 ( SCAD) 组 43 例、 排 除冠脉病 变的非 冠心病 ( 对照组 ) 患者20 例, 分别测定 LDL —C、 HDL —C、 CEM 含量, 分析 3 组间3 个指标的差异及 CEM 含量与 ACS 发生的相关 性。结果3 组在 LDL —C、 HDL —C 方面差异无统计学意义; 在 CEM 含量方面, ACS 组较对照组、 SCAD 组均有明 显升高(P =0. 000) , SCAD 组较对照组差异无统计学意义( P =0. 159) 。应用多因素 logistic 回归分析, 在去除了 LDL —C 与 HDL —C 的影响 , CEM 含 量与 ACS 的发病密切 相关( OR = 1. 257、 P = 0. 002) 。结论有极 强的相关性 , CE M 与 ACS 的发病 密切相 关, 提 示 CE M 可能是 ACS 的一个独 立危 险因素。 【 关键词】 红细胞膜总胆固醇; 急性冠脉综合征...