培养基的灭菌及保存方法 灭菌方法 1、高压蒸汽灭菌:高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培 养基在爱制备过程中混入各种杂菌,分装后应立即灭菌,至少应在24h 内 完成灭菌工作。 灭菌时一般是在0.105MPa 压力下,温度121℃时,灭菌15~30min 即可。消毒时间不宜过长, 也不能超过规定的压力范围,否则有 机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解,失去 营养作用,也会使培养基变质、变色,甚至难以凝固。 将蒸馏水或自来水装在三角瓶中,装水量一般不超过瓶的2/3,用牛皮纸或硫酸纸包扎 封口,然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d,若无污染现象,则证明灭菌是彻底的,可以 使用。暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。含 IAA 或 GA3的培养基应在1周内用完, 其 他培养基最多也不要超过1个月。 2、过滤灭菌:一些植物生长调节剂及有机物,如 IAA、GA3、ZT、CM 等,遇热容易 分解,不能与培养基一起进行高温灭菌,而要使用细菌过滤器滤去 其中的杂菌。细菌过滤 器与滤膜 (孔径0.45微米) 使用之前要先进行高压灭菌。 过滤后的溶液要立即加入培养基中, 若为液体培养基,可在培养基冷却至30℃ 时加入;若为固体培养基,必须在培养基凝固之 前(50-60℃)加入,振荡使溶液与其他成分混合均匀。 保存方法 已经灭菌完毕的培养基从高压灭菌锅中取出后, 立即放在平整的台面上, 若大批量生产 可用果箱装好并标记好 其用选后,送到接种室,让其自然冷却凝固。灭好的培养基最好经 过3d 的预培养,以便观察培养基是否彻底灭菌,这样能够使某些因为没有彻底灭菌的培养 基,在 接种前被检出,可避免杂菌污染而造成不必要的损失,这点对少而重要的材料尤其 值得注意。但是在同等条件下经多次使用无污染后,就没必要再摆3d 后才使用, 而是冷却 凝固后就可使用了。 (1) (1)防尘 已经灭好菌的培养基要注意防尘。 如果培养基在卫生条件差的地方贮存, 依附在尘埃中 的细菌、真菌等会落在培养瓶表面,使用前若不进行表面灭菌处理,在接种时 就容易随着 气流进入容器,使其受到污染,影响组织培养工作的顺利进行,因此培养基必须放在干净、 卫生的接种室内。 (2) (2)避光 备用培养基应贮于光线较暗的房子里面, 因为吲哚乙酸等某些物质易见光分解。 在光照 下, 一些培养基添加物的成分也会发生变化。 在接种室里挂上较厚的窗帘或在培养基的箱子 上加盖厚的黑布,这样可以使培养基免受光线的影响。 (3) (3)恒温 培养基冷却后, 可以将其放在10℃左右的冰箱中贮藏3~5周; 在大批量生产中可以放在 装有空调的接种室内,摆放2周左右,温度控制在20℃以内;若摆放时 间为2~5d,温度不 超过28℃即可。 但是在培养基摆放过程中温度不应过高, 同时还应避免温度有较大幅度的变 化,随着贮藏室气温的升高或降低,装有培养基 容器内的空气会跟着膨胀或缩小,带来菌 类进入培养基,造成贮藏期间培养基的大量污染。 (4) (4)定期更新 培养基不宜长期贮存,特别是固体培养基。随着时间的推移,培养基里的水分以气态选 出,培养基的含水量便逐渐降低,使培养基的浓度和理化性状发生改变,对以 后的外植体 培养或植株的继代转接及生根培养均不利;培养基贮存过长,空气中夹杂的细菌、真菌也可 能降落到培养基表面引起污染;当贮藏含有吲哚乙酸、椰乳等 物质的培养基时,环境中的 光线会使吲哚乙酸发生光解, 也会使椰乳所含的一些成分发生变化。 因此结合生产任务做好 培养基的配制和使用计划十分必要,一般情况 下培养基贮存时间不应超过1周。 转自:中国风景园林网