; 2 DNA连接酶 DNA Ligase DNA连接酶催化一个DNA链的5′磷酸根与另一DNA链的3′羟基形成磷酸二酯键。 但两个链都必须与同一另外的链互补结合,而且两链必须相邻,即只能连接一个切口(nick)而不能连接一个豁口(gap)(丢失核苷酸),如图7-15所示。 例子:T4诱导的连接酶不仅能在模板上连接DNA和DNA之间的切口,也能连接RNA和RNA之间的切口,不仅能连接DNA中的单链切口或双链的粘性末端,而且能连接平头双链DNA 。大肠杆菌连接酶则不行。 ;3 与解链有关的酶和蛋白质 DNA是双螺旋,在复制中双螺旋要解开,双螺旋的解开使得复制叉前面产生正超螺旋,如果这些应力不以某种方式释放将妨碍复制叉前进。 现在已找到一些酶和蛋白质,它们或者能使DNA双链变得易于解开,或者可以使超螺旋分子松弛,以下介绍一些这类蛋白质。 ; (1) 单链结合蛋白 (SSB蛋白) SSB蛋白:是缺乏酶活性的复制辅助蛋白,可以在远低于Tm的温度下使双链DNA拆开,并牢牢地结合在单链DNA上,稳定单链区域的蛋白质。( SSB保护复制中的DNA单链部分不被核酸酶降解) 首先在大肠杆菌中发现,后来发现许多种生物中都有这类蛋白质。在文献中,这类蛋白曾用过多种名称:解旋蛋白(unwindingproteill),熔化蛋白(mel2ingprptein),螺旋降稳蛋白(helixdestabizingprotein)。 ; (2) 解链酶(DNA解旋酶;DNA helicases) 解链酶(解螺旋酶):是一类能通过水解ATP获得能量来解开双链DNA的酶称为DNA解链酶。 解链酶依赖于单链DNA 的存在 分解ATP获得能量 具引发酶的功能(合成小片段的RNA作为后随链的引物) 如果双链DNA中有单链末端或缺口,则DNA解链酶可以首先结合在这一部分,然后逐步向双链方向移动,复制时大部分DNA解链酶可以沿着后随链模板的5′→3′方向随着复制叉的前进而移动,只有rep蛋白(一种大肠杆菌解链酶)是沿前导链模板的3′→5′方向移动。因此在复制时rep蛋白和某DNA解链酶分别在DNA的两条母链上协同作用以解开双链DNA(图7-16) ;; (3) 拓扑异构酶(Topoisomerase): 是催化DNA拓扑异构体(Topoisomer)相互转换的一类酶。 拓扑异构酶能与DNA形成共价结合的蛋白质-D