标题:[求助]关于THP-1冻存前的一点小疑问

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小弟准备过两天冻存几管THP-1,书上说在冻存的前一天要换液.我考虑,悬浮细胞等于是要连续两天离心了,不知道大家有些什么好的建议?这样做应该对细胞损害很大啊?
另外,一般认为THP-1复苏效果不好,请问哪位知道原因吗?
谢谢
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我养悬浮细胞,天天离心换液,没有一点问题!
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怎么叫“一般认为”,我们这边复苏效果很好的
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呵呵,我问过周围人,离心完后,镜下会出现黑色的团状物,似乎是死了的细胞团,而且数量还不少哟,所以我一般不敢去离心
2楼的朋友,天天离心细胞还不死,真的佩服你,呵呵
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死了的细胞团是没离心前就出现了的,离心后不可能看得到细胞团。离心后不是要打散细胞吗?既然打散了你又怎么看得到细胞团?如果你的细胞真的成团的死亡,更应该离心换液,把毒性物质去除掉。离心对细胞是有损伤,但并不是那么大。如果你的细胞连离心都承受不了,状态肯定不好,趁早别冻存了。我养悬浮细胞快半年了,几乎每天都用1000转离心5分钟,有时候用1500转,2000转也用过,一点问题都没有。
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是离心后,放入培养箱培养后,在镜下发现有黑色的团状物,且肯定不是污染,因为连续培养3天,细胞密度非常高了.所以不能够确定到底是什么?恳请赐教
另外,我也非常佩服楼上的这位朋友,THP-1都是喜酸,换液一次后,应该静置培养3天,待培养液变黄后再离心换液.有机会非常想向楼上的大哥学习学习.小弟养THP-1两个星期,承蒙上帝厚爱,一直没有被污染.阿门
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我没有养THP-1,我养的是HL-60,一种很好养的细胞,24小时就长满了,不换液不行啊。曾经有一次偷懒,第3天才换液,细胞都死得差不多了。肿瘤细胞长得快,应该天天换液。
你说的黑色团状物就是抱团死亡的细胞。有时候是细胞生长不好,抱团死亡,有时候是成簇生长的悬浮细胞越来越大团,位于中间的细胞营养吸收障碍逐渐死亡,这跟离心是没有什么关系的。离心只是有一些细胞离不下来,数量减少而已。800~1000转离心对状态好的细胞没什么影响。
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原来如此,细胞种类都不同哟.那你细胞长的这么快,的确是要天天换啊.
抱团死亡的细胞我在平时的镜下看的很明显,而且颜色也不是黑色,只是比正常细胞稍微暗点.而离心后就出现黑色的团状物(离心前看不到),所以小弟一直不得其解.不过,根据周围养THP-1的学长说,不影响细胞生长.不过,小弟还是想知道其所以然.
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复苏第二天观察:细胞碎片很多,不过密度还行
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我也出现过和楼上一样的问题,离心后出现渣子,不是污染,不得其解