(enzme-linked immunospot assay,ELISA)将抗细胞因子抗体包被反应板,加入待测T细胞,孵育一段时间后,加酶标记抗细胞因子抗体的酶作用底物,通过细胞的比色印迹法检测信号,最后通过图像扫描或专用的酶标仪进行分析。ELISPOT法引入生物素,亲合素放大系统后,灵敏度大为提高,在测定产生细胞因子阳性细胞频度方面,与流式细胞仪法相平行,但后者可同时描述细胞性质和其他因子的产生情况,且结果更为客观,ELISPOT法一般双ELISA夹心法灵敏,因为其充分利用细胞因子在细胞分泌部位聚集浓度高的特点,并且ELISPOT法能够对每个细胞的分泌物定量。这是一类利用细胞因子的基因探针检测特定细胞因子基因表达的技术,绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存在,其存在的量与T细胞产生细胞因子的量有很好的相关性,所以,在大多数情况下,细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因子的情况,反有公认的细胞因子的基因均已克隆化,故能较容易地得到某一细胞因子的cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探行,利用基因探针检测细胞因子mRNA表达的方法多种多样,常使用斑点杂交、Northern blot、逆转录PCR、细胞或组织原位杂交等。实验的关键在于制备高质量的核酸探针和获得合格的待测物(提取的mRNA样品或细胞/组织标本)。