一、测定原理
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化,产生重氮盐,此重氮盐再与偶合试剂(盐酸萘乙二胺)偶合形成紫红色染料,染
料的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比,其最大吸收波长为538nm,测定其吸光度后,可与标准比较定量。
二、实训操作
1.仪器设备
小型绞肉机或组织捣碎机或研钵;可见分光光度计;天平(感量为0.1mg和lmg);,50ml烧杯;500ml容量瓶;小玻棒;比色管;比色架。
2.试剂
①亚铁氰化钾溶液(106g/L):称取106.Og亚铁氰化钾用水溶解,并稀释至1000ml。
②乙酸锌溶液(220g/L):称取220.0g乙酸锌,先加30ml冰醋酸溶解,用水稀释至1000ml。
③饱和硼砂溶液(50g/L):称取5.0g硼酸钠,溶于100ml热水中,冷却后备用。
④氨缓冲溶液(pH9.6—9.7):量取30ml盐酸,加100ml水,混匀后加65ml氨水,再加水稀释至1000ml,混匀。调节pH至9.6~9.7。
⑤缓冲液的稀释液:量取50ml氨缓冲溶液,加水稀释至500ml混匀。
⑥盐酸(0.1mol/L):量取5ml盐酸,用水稀释至600ml。
⑦对氨基苯磺酸溶液(4g/L):称取0.4g对氨基苯磺酸,溶于100ml 20%(v/v)盐酸中,置棕色瓶中混匀,避光保存。
⑧盐酸萘乙二胺溶液(2g/L):称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100ml水中,混匀后,置棕色瓶中,避光保存。
⑨亚硝酸钠标准溶液(200µg/mL):准确称取0.1000g于1lO~120℃干燥恒重的亚硝酸钠,加水溶解移入500ml容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。
⑩亚硝酸钠标准使用液(5.0µg/mL):临用前,吸取亚硝酸钠标准溶液5.00ml,置于200ml容量瓶中,加水稀释至刻度。
3.样品预处理
(1)提取 火腿肠一捣碎_取匀样0.5g一50ml。烧杯一加入饱和硼砂液12.5ml。—搅拌均匀一用约70℃的水大约300ml。将试样洗入500mL容量瓶一沸水浴加热15min一冷水冷却至室温。
(2)提取液净化 上述提取液→加亚铁氰化钾和乙酸锌各5mL→定容→放置0.5h→撇去脂肪层→过滤(弃去不溶物)→弃去初滤液约30mL→滤液待测。