痛风是嘌呤代谢异常致使尿酸合成增加而导致的代谢性疾病。痛风与人体的代谢失衡有关,与血尿酸水平升高关系密切。在我国,该病的患病率逐年上升,某些地区高尿酸血症的发病率已达13.3%,且常与高血压、糖尿病、高脂血症、肥胖等共同存在。在我国,别嘌醇作为首选治疗痛风的药物。但是别嘌醇的使用会出现一定的药物不良反应。近年来,许多研究显示,别嘌醇相关的严重药疹与HLA-B*5801密切相关已经得到肯定。早在2008年,中国台湾地方行政部门就已经发布指令,在服用别嘌醇前必须进行HLA-B*5801检测。2012年美国风湿病学会痛风治疗指南中也强调,对于特定的人群,如韩国裔,同时有3级以上慢性肾脏病(CKD),及所有中国汉族人、泰国裔,因为人类白细胞抗原HLA-B*5801阳性率高,发生别嘌醇相关的严重过敏性药疹危险性增高,在使用别嘌醇前,应该进行HLA-B*5801基因检测。因此,在服用抗痛风药物之前,进行HLA-B*5801基因检测,实现了个体化用药并体现了药物经济学等因素。
[0003]目前检测HLA_B*5801的主要方法为PCR-SBT(基于测序分型的聚合酶链反应)、PCR-SSP (序列特异引物引导的聚合酶链反应)、PCR-SS0(序列特异性寡核苷酸探针杂交聚合酶链反应)和RT-PCR (荧光定量PCR反应)等检测方法。其中PCR-SBT方法是对HLA基因的B位点进行测序,进而确定HLA-B*5801高分辨率的方法,但其检测的步骤繁琐,费用昂贵并且周转时间较长(大于I天),不适合对于用药安全性的快速指导。RT-PCR的检测方法需要特定的仪器,且试剂、耗材较贵,而且需要制备标准品,对实验环境要求高。PCR-SSP方法是利用与HLA等位基因序列互补的引物,对待测样本DNA进行特异性PCR扩增,具有成本低,时间短的特性。虽然,总的来说PCR-SSP是一种相对简单方便、特异性高的方法,且目前已有基于PCR-SSP方法进行单特异引物检测HLA-B*5801的试剂盒,但目前市面上的试剂盒涵盖的基因型别不全,容易出现漏检情况,远远不能满足对用药安全性的快速、简便、高特异性检测HLA-B*5801基因的需求。
【发明内容】
[0004]本发明针对现有技术中存在的上述缺陷,基于最新的HLA数据库,考虑不同引物设计的位置、序列、涵盖的等位基因数量等因素,并应用单管多重PCR