一。蛋白质沉淀方法 1.中性盐盐析法 ⑴在一定的 pH值及温度条件下,改变盐的浓度(即离子强度)达到沉淀的目的,称为“Ks”分级盐析法。 (Ks盐析:固定pH, 温度,改变盐浓度) ⑵在一定的离子强度下,改变溶液的pH值及温度,达到沉淀的目的,称为“β”分级盐析法。 (β盐析:固定离子强度,改变pH及温度。) 2.等电点沉淀法 蛋白质等电点沉淀法是基于不同蛋白质离子具有不同等电点这一特性,依次改变溶液pH值的办法,将杂蛋白沉淀除去,最后获得目标产物。 3.有机溶剂沉淀法 许多能与水互溶的有机溶剂如乙醇、丙酮、甲醇和乙腈,常用于低盐浓度下沉淀蛋白质。 4.非离子型聚合物沉淀法 20世纪60年代非离子型聚合物开始用于分离血纤维蛋白原和免疫球蛋白,从此高相对分子质量非离子聚合物沉淀蛋白质的方法被广泛使用,如:聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、葡聚糖等。 5.金属沉淀法 能与羧基、胺基等含氮化合物以及含氮杂环化合物强烈结合的金属离子,如:Mn2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Cu2+、Zn2+、Cd2+; 能与羧酸结合而不与含氮化合物结合的金属离子,如:Ca2+、Ba2+、Mg2+、Pb2+; 与巯基化合物强烈结合的金属离子,如:Hg2+、Ag+、Pb2+。 实际使用时,金属离子的浓度常为0.02 mol/L。 6.亲和沉淀 初始阶段:将一个目标蛋白质与键合在可溶性载体上的亲和配体络合成沉淀; 所得沉淀物用一生中适当的缓冲溶液进行洗涤,洗去可能存在的杂质; 用一种适当的试剂将目标蛋白质从配体中离解出来。 7.选择性变性沉淀法 (1)例如对于α-淀粉酶等热稳定性好的酶,可以通过加热进行热处理,使大多数杂蛋白受热变性沉淀而被除去。 (2)根据欲分离物质所含杂质的特性,通过改变pH值或加进某些金属离子等使杂蛋白变性沉淀而被除去。 8.反胶束萃取蛋白质 菌体细胞提取 固液分离是生物产品生产中的重要单元操作。培养基、发酵液、某些中间产品和半成品等都需进行固液分离。发酵液由于种类多、粘度大及成分复杂,其固液分离最为困难。 固液分离的方法很多,生物工业中常规的方法有分离筛、重力沉降、浮选分离、离心分离和过滤等,其中用于发酵液固液分离的方法主要是离心分离和过滤。 二。超滤膜滤去。