早在远古时代, 人们就很敬畏地看待血液,认为它是生命的源泉, 并试图用 血液来延年益寿或者是挽救生命。 1492年罗马教皇生病,喝了 3个男孩子的血, 结果连他在内 4个人全部送了 命。 1616年, 法国人丹尼斯首次把羊血输给一个贫血病人, 病人的病情好转了 。后来, 他又把羊血输给精神病患者, 发现病人陷入休克状态, 他又继续给病人输入羊血,结果病人死亡。 除此之外, 许多 医生在大量的输血临床实践中, 发现有的病人在接受输血后, 会突然出 现发冷发热、 头痛胸闷、 呼吸紧迫和心脏衰竭等症状, 甚至会死亡。 也有的病人输血后, 生命得救。为什么有的人接受输血后可以得救, 而有的人却发生致命的反应呢? 为了 揭开输血反应之谜, 人们进行了 种种探索和研究。 奥地利科学家兰德斯坦纳首先揭开了 谜底。 这节课让我们共同了 解输血与血型的奥秘。 最早, 血型是指存在最早, 血型是指存在于红细胞上特异性同种抗于红细胞上特异性同种抗原而言, 后来发现红细胞原而言, 后来发现红细胞上具有的同种抗原远较想上具有的同种抗原远较想上具有的同种抗原远较想上具有的同种抗原远较想象的复杂, 而且除红细胞象的复杂, 而且除红细胞外, 白细胞、 血小板上也外, 白细胞、 血小板上也都有同种抗原, 这就使血都有同种抗原, 这就使血型的概念有所扩大。 目 前型的概念有所扩大。 目 前可理解为血型是血液系统可理解为血型是血液系统的一种遗传多 态性的一种遗传多 态性。 。每个人都有自 己的血型。每个人都有自 己的血型。 一、 ABO血型系统目 前已识别的血型中, 以红细胞抗原检出的数量最多 , 约有400多 种。 按其性质和遗传上相关性, 可分别归类为若干血型系统, 以及高频率、 低频率血型抗原组等。 ABO系统是第一个被描述的红细胞血型系统。 1930年, 兰德斯坦纳获得诺贝尔奖。  1. 血型的发现 1900年, 奥地利科学家兰德斯坦纳(1868--1943) 发现了人类的血型。 在实验中发现, 一个人的红细胞 在遇到某些人的血浆细胞, 在遇到某些人的血浆时这些红细胞回黏结在一起,发生凝集; 遇到另一些人的血浆时, 却不发生凝集。 为什么 会有这样的不同呢?  经过他进一步的研究,人类的红细胞含有两种凝集原, 分别叫做A凝集原和B凝集原; 人类血清中则含有与它们相对抗的两种凝集素, 分别叫做抗A凝集素, 抗B凝集素. 按照红细胞所含A, B凝集原的不同, 把人类血液分成四型: A型 B型AB型 O型. 2.什么 叫ABO血型19001900年发现的年发现的ABOABO系 统是第一个系 统是第一个血型系 统。血型系 统。根据红细胞上有无根据红细胞上有无血型抗原血型抗原A A或分为四个基本类型分为四个基本类型: : A A、 、 B B、 、 AB。 。或B B. 可. 可AB和和O O A A型 型就是红细胞上有就是红细胞上有A A抗原B B型 型是红细胞是红细胞B B上有如果红细胞上有如果红细胞上有A A和凡红细胞上没有抗原的, 称为凡红细胞上没有抗原的, 称为O O型 型。 。另 一方面, 在人体血清中则有针对本身红细另 一方面, 在人体血清中则有针对本身红细胞所缺抗原的天然凝集抗体,胞所缺抗原的天然凝集抗体,A A型者血清中有抗型者血清中有抗B B凝集素凝集素( (抗血清中有抗血清中有抗A A凝集素凝集素( (抗抗A A抗体无抗无抗A A和抗和抗B B凝集素,凝集素, O O型者血清中有抗凝集素凝集素抗原(A抗原(B (B凝集原和B B两种抗原, 则称为两种抗原, 则称为AB(A凝集原凝集原) ); ;凝集原) ); ;上有B B抗原AB型 型; ;抗B B抗体抗体) ), , B B型者抗体) ), , ABAB型者血清中型者血清中型者血清中有抗A A和抗型者和抗B B 3、 ABO血型系 统的分子基础ABOABO血型抗原血型抗原决定簇是一种特决定簇是一种特异性多 糖,异性多 糖, ABO异性多 糖,异性多 糖,抗原有共同 的前抗原有共同 的前身物身物H H物质。物质。H H物质最后的物质最后的一个糖基决定一个糖基决定ABO(ABH)ABO(ABH)血型的型别。的型别。ABO血型 O O型个体只能产生型个体只能产生H H物质物质( (孟买型例外孟买型例外) ); ;H H物质末端增加一物质末端增加一分子的分子的α α - -N N- -乙酰半乳糖胺半乳糖胺(GalNAc)(GalNAc)即 即半乳糖胺半乳糖胺((成为成为A A抗原抗原; ;H H物质末端增加一物质末端增加一分子分子α α - -N N- -乙酰乙酰- -D D- -半 半乳糖乳糖(Cal)(Cal)即成为即成为B B抗原 原。 。乙酰- -D D- -))即 即抗 ABO血型的凝集原和凝集素血型红细胞凝集原血清凝集素A型A抗BB型B型BB抗A抗AAB型A, B无O型无抗A, 抗B返 回 4、 ABO抗原的遗传和生化特征ABOABO血型系 统抗原血型系 统抗原的合成受位于的合成受位于9 9号染色体长臂色体长臂( (9q34I IA A, , I IB B, , I Io o三个等位基因控制。基因控制。 I IA A和共显性、共显性、I Io o为隐性基因, 由此构成因, 由此构成6 6种基因型和四种表型因型和四种表型. .号染上的9q34) )上的q q三个等位和I IB B为 为为隐性基种基 现在知道现在知道A A抗原和H H物质为前提的物质为前提的,O质但不能产生质但不能产生A A抗原和质产质产抗原和B B抗原的合成是以抗原的合成是以,O型红细胞也有型红细胞也有H H物抗原和B B抗原:物抗原:ABOABO血型又称为血型又称为““ABHABH血型血型” ” 。 。基因酶合成抗原在 在ABOABO血型物质合成过程中:血型物质合成过程中:控制控制控制控制 血型遗传的图解如下:血型遗传的图解如下: 父母的血型与子女的血型关系父母血型子女可能有的血型子女不可能有的血型O+OOA、 B、 ABA+OA、 OB、 ABA+AA、 OB、 ABB+OB、 OA、 ABB+BB、 OA、 ABA+BA+BAA、 B、 AB、 OBABO---AB+OA、 BO、 ABAB+BA、 B、 ABOAB+AA、 B、 ABOAB+ABA、 B、 ABO 人类血型有数十亿种之多。 人类除同卵双生子女外,再也找不到两个血型完全相同的人。 5.ABO血型鉴定、 不规则抗体筛选 玻片法(正定型) 盐水法 试管法(正定型,反定型) 聚凝胺法 抗人球法 (1 ) ABO血型鉴定实验原理 抗原抗体反应——在ABO血型系统中, 红细胞膜上抗原分A和B两种抗原, 而血清抗体分抗A和抗B两种抗体A抗原加抗A抗体或 抗原加抗 抗体体。 A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体, 则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型则产生凝 抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥形成肉眼可见的颗粒状凝集团块. 见图 IgM抗体凝集红细胞示意图 IgM抗体凝集红细胞示意图IgGM在盐水介质中产生凝集 (2) 试 剂 抗A、 抗B试剂血清 5%的A型、 B型及O型试剂红细胞悬液 受检者血清 5%的受检者红细胞悬液 (从指尖或耳垂取血一滴,加入含1 ml生理盐水的小试管内, 混匀, 即得约5%红细胞悬液。 采血时应注意先用75%酒精消毒指尖或耳垂。 )(取少量受检者红细胞(约0.2~0.5 ml) 用生理盐水洗涤3次, 然后加入适量生理盐水调配成5%浓度。 ) ( 3) 实验步骤 玻片法 ①取双凹玻片一块, 用干净纱布轻拭使之洁净, 在玻片两端用记号笔标明A及B, 并分别各滴入A及B标准血清一滴。 ②用滴管吸取红细胞悬液, 分别各滴一滴于玻片两端的血清上, 注意勿使滴管与血清相接触。, 注意勿使滴管与清相接触 ③竹签两头分别混合, 搅匀。 ④观察结果。 如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。 先用肉眼看有无凝集现象, 肉眼不易分辨时, 则在低倍显微镜下观察, 如有凝集反应, 可见红细胞聚集成团。 ⑤判断血型 根据被试者红细胞是否被A, B型标准血清所凝集, 判断其血型。 试 剂 ①①②②抗抗A A抗抗B B ③用70-75%的酒精消毒取血部位消毒取血部位消毒取血部位 用针扎一下消毒部位, 使血冒出,立即滴一滴血液在抗A或B上。④抗抗A A抗抗B B 再用70-75%的酒精擦洗消毒刚用针扎的部位, 然后再取一滴血液于抗B或A上。⑤抗抗A A抗抗B B 观察有无凝集, 并按下表判定结果。血型抗A试剂抗B试剂AB+--+OAB-+-+呈 现均匀 的淡红色时, 表明不凝集, 用 “一” 号表示。在试剂里凝结成絮团 状, 形成鲜明的对比, 表明凝集, 用“十” 号表示。 试管法(正定型)A B 2滴 A标准血清 B标准血清 受试者的红细胞悬液 混匀后1 000rpm离心1 min或3000rpm离心1 5秒。 取出观察结果。 完全凝集的管底部有红细胞的凝块,管底细胞边缘呈花边状, 轻弹试管凝块不散; 完全不凝的试管, 血细胞均匀的沉到管底, 边缘整齐,用手轻弹试管, 红细胞像一缕烟似的立即上升, 随即成为均匀的悬液;轻微凝集的, 必须将液体转到载玻片上镜检后判定凝集程度。2滴1 滴1 滴。。 混匀后1 000rpm离心1 min或3000rpm离心1 5秒。 试管法(反定型)Ac Bc Oc2滴2滴1 滴1 滴 受检者血清 5%的A型红细胞悬液 5%的B型红细胞悬液 5%的O型红细胞悬液 立即以1 000rpm离心1 分钟或3000rpm离心1 5秒。 轻轻扣动试管底部, 观察结果----同前2滴1 滴 血型判定反定型正定型结果抗A 抗BA型RBC B型RBC O型RBC--+ + -O + --+ -A-+ + --B+ +---AB ( 4) 注意事项玻片 、 试管都要标记! ! ! A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠用 染料颜色标记血清。 工作中要形成自 己的习 惯!所用 玻片 、 试管实验前必须清洗干净, 以免出现假凝集现象。红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面, 竹签一端去混匀一侧就不能去接触另 一侧。一般先加血清, 然后再加红细胞悬液, 便于核实是否漏加血清。离心时间、 速度严格要求, 以防假阳 性或假阴性结果。试验用 血清和试剂红细胞都应标准化。要在光亮的背景下观察凝集, 可使用 光镜检查小的凝集, 同时应注意观察凝集强度, 有助于A、 B亚型的发现, 观察后立即记录观察结果。 ( 5) AB O正反定型结果不一致的常见原因有哪些? 人为因素: ①试剂不标准、 失效或污染; ③操作中加错样本或试剂、 离心速度不足或过度、 细胞与血清比例不当、 结果判断错误等。 客观因素: ①因某些疾病导致抗原减弱如: 白血病,MDS( 骨髓增生异常综合征) 患者血型抗原减弱导致误定血型。 ②受检者抗体效价低( 如婴幼儿、 老年人、 大量输液的患者, 血浆蛋白低下等) ③某些药物干扰如输注右旋糖酐后会干扰血型检定。 什么 叫RH血型 Rh是恒河猴( Rhesus Macacus) 外文名称的头两个字母。 兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时, 发现恒河猴和多 数人体内 的红细胞上存在Rh血型的抗原物质, 故而命名的。 凡是人体血液红细胞上有Rh抗原( 又称D抗原) 的, 称为Rh阳性,而缺乏Rh抗原的人是Rh阴性而缺乏Rh抗原的人是Rh阴性。 这样就使已发现的红细胞A、 B、 O及AB四种主要血型的人, 又都分别一分为二地被划分为Rh阳性和阴性两种。根据有关资料介绍, Rh阳性血型在我国汉族及大多 数民族人中约占99. 7%, 个别少数民族约为90%。 在国外的一些民族中, Rh阳性血型的人约为85%, 其中在欧美白种人钟, Rh阴性血型人约占15%。这样就使已发现的 二、 Rh 血型系统Rh blood group system (一) Rh 血型系统的发现 1937年--1939年用恒河猴(rhesus monkey) 红细胞免疫家兔和豚鼠得到的抗血清将人红细胞分为Rh阴性和Rh阳性。 1939年在一患死胎的孕妇血清中检测到一种抗体, 此为人类发现的第一例Rh抗体。  1940年Landsteiner 和 Wiener 发表了 动物抗血清对人类红细胞的分型结果, 被认为是第一篇有关Rh血型系统的报道。 1941年Levine 等在患新生儿溶血病患儿血清中发现抗D、 抗 C、抗 CD 三种特异性抗体, 并指出: 胎儿RBC增多症(HDN)与母婴间Rh血型不合有关。  1942年Fisk等发现某些用人Rh抗体鉴定的阴性红细胞与动物Rh抗体呈阳性反应 1941--1945年确定了 人体红细胞上含有Rh系统的六种抗原, 即D 、 d ; E 、 e ; C 、 c。 (二) Rh血型的定义根据红细胞上 D 抗原的有无,可将人类红细胞分为 Rh 阳性和 Rh 阴性, 即红细胞上缺乏 D 抗原的人是 Rh 阴性; 红细胞存在D 抗原的人是 Rh阳性。 Rh血型的遗传学说及命名 Rh--Hr命名法 (Wiener学说) CDE命名法 (Fisher--Race学说)