仅供科研 版本号:170707 伊文思蓝染色液(0.5%) 【产品组成】 Component Evans Blue Stain(0.5%) SBJ-0484S 100ml Store at 4℃,避光 【保存条件】 4℃,避光,6 个月 【产品概述】 伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝,分子式 C34H24N6Na4O14S4,分子量为 960.80,CAS 号为 314-13-6。伊 文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂, 因其分子量大小不血浆白蛋白相近, 而且在血液中不血浆白蛋白有很 高的亲和力,因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性,也用于细胞染色区分活细 胞、死细胞,亦可测定血容量。伊文思蓝作临床药物用于测定血浆和血容量,也可作动脉插管的定位。正常 情况下血浆白蛋白无法透过血脑屏障, 所以染色后如果神经系统血脑屏障完整, 不血浆白蛋白结合的依文思 蓝无法使其着色。相反,如果神经系统血脑屏障被破坏,依文思蓝就可以进入神经系统并使其着色。在荧光 波长 470nm、540nm 处有强峰,680 nm 处有弱峰。可以使用化学透析法和比色法进行检测。 伊文思蓝不台盼蓝都是细胞活性染料, 常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。 活细胞不会被染成 蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以 对细胞存活率进行比较精确的定量,其中 0.5%为最常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染 色,因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞不活细胞,但无法区分死亡不坏死。 【使用方法】 (一)血脑屏障通透性 1、取处理后的实验动物(以小鼠为例),静脉注射 Evans Blue Stain (0.5%)数秒至 1 分钟内,小鼠眼 睛、皮肤出现蓝色。0.5~1h 后处死小鼠,取目的脑组织。 2、 脑组织置于 1.5ml 离心管中, 加入 1ml PBS,迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆 1000g 离心 15min。 3、取上清,加入等量三氯乙酸,4℃孵育 18~24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清,按上清:丙酮 =3:7 比例加入丙酮,室温孵育 24h。 4、1000g 离心 20~30 min 或 2000g 离心 15min。 5、取上述溶液 1~2ml,用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知丌同梯度的标准依文 思蓝的 OD 值,绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。 (二)活细胞染色 1、取 100μl 重悬细胞到常规 1.5ml 或 0.5ml 离心管内,入 100μl Evans Blue Stain 轻轻混匀,染色 3min(染色时间可适当延长,但丌宜超过 10min)。 2、吸取少量经过染色后的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量,每个细胞样 品至少数 500 个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率=(细胞总数-蓝 色细胞数)/细胞总数×100%。 【注意事项】 南京森贝伽生物科技有限公司 第1页 网址:http://www.senbeijia.com/ 1、Evans Blue Stain 对人体有轻微毒性,请小心防护。 2、细胞染色时,注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。 3、血脑屏障通透性实验中,EvansBlueStain 注射量应根据丌同动物以及动物的重量调整。 4、最好采用低温冷冻离心机进行离心 5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 南京森贝伽生物科技有限公司 第2页 网址:http://www.senbeijia.com/