犬膀胱移行上皮细胞的体外连续培养及生物学特征观察韩平　杨志明　李秀群　王杨　罗静聪　解慧琪　　 【摘　要】　　目的　探讨犬膀胱移行上皮细胞体外连续培养和纯化方法, 为进一步构建组织工程尿路上皮组织提供实验依据。 　方法　无菌获取幼犬膀胱组织, 01 125% 胰蛋白酶消化获取单细胞悬液, 于上皮细胞无血清培养基中培养。 采用 01 05% 胰蛋白酶和 01 02% EDTA 消化、 纯化细胞, 动态观察细胞形态变化和增殖情况,M TT 法绘制生长曲线;透射电镜观察细胞超微结构; SABC 法对培养的细胞进行免疫组织化学鉴定; 并采用流式细胞仪检测不同代次细胞的细胞周期和倍体水平。 　结果　采用酶消化法能从4 ~ 6 cm2的膀胱黏膜组织中分离获取(1~ 5) × 106个细胞。 原代培养接种24 h 后可见大量细胞贴壁, 第7 天细胞生长融合达80%~ 90% , 细胞排列呈典型的铺路石样。 M TT 法测定第3 代细胞在传代培养7 d 生长达高峰; 传代并纯化的细胞纯度高, 无成纤维细胞污染, 至第4 ~ 6 代细胞仍保持良好形态。 透射电镜下, 可见上皮细胞特征性张力微丝和细胞间桥粒连接。 细胞角蛋白A E1 A E3 免疫组织化学染色, 胞浆呈棕黄色阳性反应。 不同代次细胞均为二倍体细胞。 　结论　酶消化法能从较少的膀胱组织中分离获取足量、 较纯的膀胱移行上皮细胞,细胞在无血清培养基中能连续传代扩增, 可以满足进一步构建组织工程尿路上皮组织的需要。