第1 4卷9 1 9 7年增 刊4月砌 南医学Hu 们 a nMed l c al ju or a nlV d.1 4彻r.u Sp 词1 9 9 7肺结核 病 人痰液结核 杆菌 三 种 检 验 方 法检 测 结 果 分 析河 南省 义 马矿 务 局总 医 院(7 4 2 30 0 ) 董 守 池 金 润召 霍 鲜 荣 郭 旭 芹 李 陆兴潘 雪 娥痰 液 直接 涂片 查找抗 酸 杆 菌 和 结核杆 菌 培 养 等 方法,因 检 出 率低 和 实 验 时间 较 长,影 响 肺 结核病 的诊 断和 疗效 观 察。随着 聚 合 酶 链 反 应( P C R ) 技术 应 用于 结核 杆 菌D N A 的 检测,使 其检 出 率 有较大提高 . l [2 ]。’本文对 我院 传 染 科 收 治的1 2 6 例 肺 结核 病人 留 取晨痰 和收 集 2 4 h 痰 液,分别 采 用 直接 涂 片 法、培 养 法 和P 服法,对 痰 液 结核杆菌进行 检测,并 对检 测结 果 进 行 分析,现 报 道 如 下。1材料 和方法1.1观 察 对 象1 2 6例 肺 结 核 患 者 为19 9 5 年 1 月 至1 9 9 6 年·1 0 月 经本 院 传 染 科临 床 及 胸 片检查 确 诊 的 住院病 人,其 中 男 7 7 例,女 4 9 例,年 龄 1 8一 5 6岁,平 均3 1,2 岁。1.2标 本 采集晨痰 使 用一 次 性 痰杯 留取,2 4h 痰 液收 集 于 洁 净的玻璃培养 皿 中 送检。1.3仪 器 和 试 剂P E 淋 80 型 D N A扩增仪:美 国P E公 司 生 产。结 核杆 菌 P C R 试剂 盒:洛 阳 华 美 生 物 工 程 公 司。分 枝 杆菌 干 燥培 养 基:中国 科学院 上 海 植 物 生 理 研究方 法直 接 涂 片 法 晨痰 直 接 厚 涂 片,2 4 h 痰液 先高压灭 菌,然 后 按 离 心 沉 淀浓 缩集 菌 法厚涂 片,千 燥 后,进行 抗酸染 色,光 学 显 微镜 检查。观 察1 0 0 一 2 0 0 个 视野 或 连 续 观察 1 0一 2 0 m i n,未 见 抗 酸杆 菌 为 (一),1 1 ) 0个 视野 见 1一 2 条 抗 酸杆 菌 定 为 (+),根 据 抗 酸杆 菌 的多少 可 以 判定十一 洲 l [ ]。1.4.2结核杆 菌 培 养 法 晨 痰 和 2 4 h 痰液碱处 理 后,接 种 于 固 体 培 养基 上,3 7 ℃ 培 养 4 一 8 周。1.4.3 P C R 结核 杆 菌 D N A 检测 法晨痰、2 4h 痰 液标本 处理 后P C R 操 作方 法 按试剂 盒 说 明 书 要 求 进行。2结 果3 种检 测 方 法查痰 效 果 比 较,见 附表。附 表1 2 6 例 病 人 痰液 3 种 检 测 方 法 结 果 比 较标 本·而 丽 平儡 丽而痰 液 培 养 法P C R i 叁 一阳 性 数 (%) 阳 性 数 l % )晨 痰 1 2 67 9693 1 ( 2 4.6 )3 0 ( 2 3.8 ) 4 8 ( 3 8.1 )2 4 h 痰液 12 6 8 91 2 1 54 4 ( 3 4.9 ) 4 1 ( 3 2.5 ) 6 1 ( 4 8.4 )直 接 涂 片 法与培 养 法 检出率 比 较差 异 无 显 著性(尸 > 0.0 5 ),两 种 方 法 分别 与 R 二R 法 比 较 差 异 均有 显著 性 (p < 0.0 5 ); 2 4 h痰 液 直 接 涂 片 法、培 养 法 检 出 率比 较差 异 无显 著 性( P > 0.0 5 ),与 P C R 法 相 比 较差 异均 有 显 著 性 (P < 0.0 5 )。3 种方 法晨 痰 和 2 h 4痰 液 结核 杆菌 检 出 率 比 较差异 均有 显 著 性 (P < 0.0 5 )。3讨论本 文 1 26 例 肺结核病人 痰液 结 核杆菌检 测,以P C R法检 出 率 为最高,但 是P C R 法 需 要 一 定设 备,技术条 件 要 求 高,且成本 亦 较高,不 便 在 基 层 医 院 开 展。痰液直 接 涂片 法 简 便、快 速、成本低,但 检 出 率 亦较低,采 用厚涂 片 法 和2 4 h 痰液浓 缩 集 菌 法,可 以 提 高检 出 率 s [ ]。此外,加强 检 验 人 员 工作 责 任 心、增 加观 察时 间 和 观 察 视野,亦 可 提高检出率。因 此,痰液 直 接 涂片法 仍 不 失为 诊断 肺结核病 和 观察疗效 的 一 种 较 为实用 的方 法,便 于 在 各级 医 院 开 展。痰 液结 核杆 菌培养,虽 然检 出 率与 直 接 涂 片法相当,并 且 低 于P CR 法,但 是通 过培 养 可 以 对分 枝杆 菌进行菌 型 鉴定 和 药 敏 试 验 [ ’ 1,发现耐 药 菌 株 和 无 效药物,对 临 床 选择 抗 痛药物 和 制 定 治疗 方案 的 意 义,是其它 两种 方 法无法 替代 的。对 于 培 养 法,制 备培 养 基时加人 酮 康 哇 等 抗 污 染物质,亦 可 提高检 出 率 5 l [。2 4 h 痰液 浓 缩 集 菌 法,可 以 提高检出率,但 同时增加 了 传染 的危 险 性。因 此,一 定 要 对 标 本 进 行 灭 菌 处理,根 据 实 验 室 条件,选择 碱 煮 沸 法、高压 灭菌法 或 加人 高 效 消 毒 剂 ( 如 8 4 消 毒液 等 声 ] 等 处理,确保 检验人员的 安 全。所. lL参 考文献