1.缓冲pH范围

磷酸缓冲液的缓冲pH值范围非常广泛,可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液。
酸性缓冲液:可直接用NaH2PO4或KH2PO4,pH范围在1-5;
碱性缓冲液:可直接用Na2HPO4或K2HPO4,pH范围在9-12;
中性缓冲液:用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液按照不同比例进行混合,pH在5.5-8.5。

2.浓度计算

通常所说的磷酸缓冲液的浓度,比如0.1M、0.01M,是指溶液中含有的所有的磷酸根离子的浓度,包括解离的和未解离的,而不是Na+或者K+的浓度。
正是因为如此,在配制中性缓冲液时,用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液混合,并不影响磷酸根离子的浓度。

3.配置方法

PBS的配置方案有很多,最常见的如下所示。至于我们组目前在使用的方案,大同小异,原理是相同的,同学们在使用的时候自己判断吧。
1×PBS配置方法(1L):
按上表称取物质,溶于800ml水中。
调节pH至7.4,然后定容至1L。
由于使用量比较大,频率比较高,所以我们一般都会配置10×或者20×的母液,使用的时候直接稀释,这样比较方便。
10×PBS配置方法(1L):
按上表称取物质,溶于800ml水中。
调节pH至6.8,然后定容至1L。
使用的时候稀释10倍,pH就会变至7.4了(搜到的资料里都这么说,但是每个实验室的实验条件不一样,所以具体情况具体分析)。

4.磷酸缓冲液优缺点

优点:
易配制各种浓度的缓冲液;
适用的pH值范围宽,可配置各种pH值的缓冲液;
pH受温度影响较小;
缓冲能力强,缓冲液被稀释后pH变化小。
缺点:
易与常见的钙离子Ca2+、Mg2+及一些重金属离子缔合形成沉淀;
会抑制某些生化反应过程,如抑制某些酶的催化过程等。