1.2方法PathVysi on HER- 2 DNA探针试剂购自美国Vvsi s公司。标本固定于4%中性甲醛液24, 、, 48 hr后石蜡包埋,常规病理学诊断。经4~5岫厚切片、二甲苯脱蜡、100%乙醇脱二甲苯后,空气干燥或45---, 50"(2烤片。0.2 mM HCl 20 vai n,纯水充分洗涤,2 xSSC洗3rai n;1 mM NaSCN( 异硫酸氰钠) 80℃30 rai n( 温度要求准确) ,纯水及缓冲液洗片后,将组织片放入蛋白酶溶液3TCl 0 rai n( 250 mg/500 ml O.01 mol /L HCl ) 。纯水洗涤后经75%、95%、100%乙醇各1 rai n,空气干燥。加10ILl 探针混合液在组织片靶区域上,加18 mmx18呦盖玻片并用蜡胶封边。放入原位杂交仪(美[虱StatSpi n$500224)中:80℃变性10 mi l l 后37℃过夜( 14"18 hr) 。将切片置后洗液( 2xSSC,0.3%NP40) 中漂洗盖玻片,组织片入洗液后72℃2 rai n将其放置在室温暗处干燥,在组织片靶区域滴j 哪] 109l DAPI显色液,盖玻片封片,荧光显微镜观察结果或储存于· 20℃。1.3结果判定荧光原位杂交计算细胞核内绿色荧光信号为17号染色体倍体状况,根据信号的数目可分为单体、双体和多体( 即着丝粒绿色信号数>2) 。细胞核内橘红色的基因荧光信号和17号染色体的绿色荧光信号的数目比值>2,或细胞核内>4个橘红色的基因荧光信号者为阳性扩增。61 2鳍果2.1乳牖癌细胞中HER-2基因采用Vysi s HSH技术可以清楚地分辨,肿瘤细胞中17号染色件的着丝点和HER一2基因的情况。荧光原位杂交检测结果见图1~2。啊1 FISH拄术未检测到HER-2基因扩增 ■ 2 HsH拄木检铡到}啦-2基目扩增2.2乳腺癌基因扩增慵况具体结果见表1,本组5例HER-2蛋白(+++)病倒中,2倒40%)为基因扩增阳性;33例I砸R_2蛋白(++)病例中12例(孤4%)基因扩增。