[实验目的]
1、了解生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的存在。
2、初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
[实验原理]
某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应,对生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质进行鉴定。
1、还原糖的鉴定原理
生物组织中普遍存在的还原糖种类较多,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具有还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原性糖;蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基,因此叫做非还原性糖,不具有还原性。实际上本实验中,用斐林试剂只能检验生物组织中可溶性的还原糖存在与否,而不能鉴定可溶性的非还原性糖。
斐林试剂由氢氧化钠的质量浓度为0.1g/mL的溶液和硫酸铜的质量浓度为0.05g/mL的溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下,能够生成砖红色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身氧化成葡萄糖酸。其反应式如下:
CH20H-(CHOH)4-CHO + 2Cu(OH)2→CH20H-(CHOH)4-COOH + Cu20↓ + 2H20
用斐林试剂鉴定还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。
2、脂肪的鉴定原理
鉴定生物组织中是否含有脂肪时,可用苏丹Ⅲ染液、苏丹Ⅳ染液。因为苏丹Ⅲ染液可将脂肪染成橘黄色,苏丹Ⅳ染液可将脂肪染成红色。
3、蛋白质的鉴定原理
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是氢氧化钠的质量浓度为0.1g/mL的溶液和硫酸铜的质量浓度为0.01g/mL的溶液。在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此,蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应,从而用来鉴定蛋白质的存在。
[实验材料、试剂和仪器]
1、可溶性还原糖的鉴定
还原糖的含量、生物组织中有无色素是影响实验结果及其观察的最重要因素。因此要选用可溶性还原糖含量高、白色或近于白色的植物组织,其中以苹果、梨最好。也可用白色的甘蓝叶、白萝卜替代(不能选西瓜)。经实验比较,颜色反应的明