一种尿激酶分离纯化方法,其特征在于,其包含如下步骤
1)尿激酶的分离
a)男性尿液,在10℃以下,调节pH8.5,静置2小时,弃去沉淀,得上清液;
b)取上清液,调pH5.0-5.5酸化,得酸化尿,通过硅藻土柱进行吸附;
c)5℃冷水洗柱,以1%氨水和氯化钠进行洗脱,得洗脱液;
d)洗脱液用饱和硫酸铵和4%氨水盐析,得尿激酶粗品;
e)向沉淀中加入一定量的氨水,使沉淀中的尿激酶充分解离,得尿激酶溶液;
2)尿激酶的纯化
A)装柱,将凝胶介质混悬,取适量的凝胶装填于层析柱中,用3~5倍柱体积的水或缓冲液洗涤凝胶;装柱;
B)平衡介质,用5~10倍柱体积的样品缓冲液平衡凝胶柱;
C)上样,将尿激酶溶液通过凝胶柱;
D)收集样品流出液,收集洗脱液与流出液合并,即为去内毒素的尿激酶。