为纯化免疫金探针的最好方法,其特点是简便,过滤的胶体金颗粒比较均匀,不容易凝集,而离心方法转速高,时间长,胶体金颗粒沉淀容易凝集,用凝胶过滤克服了这一弱点。选用本方法时胶体金溶液必须用牛血清白蛋白作稳定剂。具体操作过程如下:
(1)将浓缩好的胶体金以1500r/min离心去掉大的聚合物。吸出上清待过柱。
(2)柱高34cm,直径1cm,加样体积为柱床体积的1/10。
(3)丙烯葡聚糖S-400(Sephacryls—400, Pharmacia, Sweden)装柱后用0.02mol/lpH8.2TBS平衡层析柱(pH7.4者用于标记的SPA),平衡好后,吸取上清胶体金液体加入层析柱内,加样时请注意不要破坏S—400的界面。
(4)用0.02mol/lpH8.2 TBS洗脱,先行滤出的液体有少量微黄不透亮的液体,紧接着是浓度高红色而透亮的胶体金,注意颜色的变化,如红色变淡,变黄立刻停止收集。如Sephacryls—400没有,也可以用Sepharose –4B或6B代替(Pharmacia,Sweden)也能收到较好的效果。