2. 213号染色体长臂( 13q ): R b 基因( 视刚膜母细胞瘤基因)位。 1二13q 14 , 是最早确定抑癌基因, R b 蛋白通过磷酸化和去磷酸化渊节细胞周j驷, R b 基因失活可使细胞G 1 jfliI唰近代点异常, 细胞过度增生。 食管鳞癌中R b 基因中所在区L O H 高达55%。 在R b 基因发生L O H 的J|||I瘤标本中, 9 0 %显示R b 蛋白表达水平下降或榆测不到, 而没有发生L O H 的标本中, 只有20 %R b 蛋白表达发生改变, 在R b 基因的L O H 和R b 蛋白表达异常之间有很强的相关性, 提示L O H 可能是导致R b 失活的主要事件。 在伴随p 53基因突变的肿瘤中,R b 基因L O H 发生率显著提高, 二者之“lJ具有较强相关性, 提示R b 和p 53通路的缺陷及他们在细胞周期和细胞凋亡硼控中潜在的协同f ix f H 可能是食管瘸发生的重要机制[ 8 ,9 1。 进一步研究发现13q 12—13缺失频率较高( 38 . 6 —4 3. 7 %), 但这~区域的B R C A 2基因未检测出肿瘤特异性突变, 也未发现表达缺失, 提示B R C A 2可能不是等位缺失的靶基因。 此区域可能存在与原发食管鳞癌发展及淋巴结转移有关的还未证实的抑癌基因, 其位置很可能位于13q12. 3. q13. 1和13q12. 11110- 12l。 另外, 在有上消化道家族史和无家族史的患者中对照研究表明13qL O H 率有家族史的明显高于无家族史的, 提示13q 可能存在与食管癌遗传易感性有关的基因IJ…。2. 39 号染色体: 自从19 9 3年B e a c h 首次分离出P 16 c D N A , 并提出P 16 基因结合C D K 4和抑制C D K 4 /cy clinD 酶的分解活性以来, 位于9 P 21的P 16 ( C D K N 2/M T S l)基因和P 15( C D K N 2B /M T S 2)基因失活与食管癌的关系引起了研究着极大的兴趣。 P 16和P 15属于1N K 41( cy clin . d ep en d en tk in a se4in h ibito rs)家族, 此外该家族还包括P 18( IN K 4C )基因¨ 41】 珂和P 19 ( IN K 4 D )基因【15,161o P 16 和P 15在细胞周期G 1期调控细胞增生。 P 16 蛋白为C D K 4特异性抑制剂, 通过与细胞周j{ J]素D —C D K 4 复合物紧密结合或与C D K 4 结合竞争性地阻断细胞周期索D —C D K 4 复合物的形成, 维持R B 蛋白非磷酸化状态, 阻』 E 细胞从G l期进入s期, 抑制细胞增殖。 H a rm o n 【I” 等还发现P 16蛋白用同样的方式与C D K 4 结构功能相似的另一个激酶C D K 6 的作用。 P 15从P 16 分离而来, 与P 16 有9 5%的序列相同, P 16 的改变往往伴有P 15的改变【14J7 1, 目前已被认为是另一个具有研究意义的新的抑癌基因。 有关P 18和P 19 在各刖t瘤和细胞系中结构异常的报道很少{ 18 训。 P 16基因的突变与缺失是人类肿瘤常见的遗传异常【2。 ” J。 研究发现在55%的食管鳞癌细胞系中显示有P 16, P 15和/或9P 21相邻位点有纯合性缺失。 R T - P C R 也证明了m R N A 水平的改变与其纯合性缺失之间有非常好的相关性, 因此P 16 和P 15的失活可能与食管癌细胞恶性表型有关。 P 16 和P 15通过不同的机制失活[ 29 ,30 1, P 16失活l_ q - 优辫作用的是启动子区C P G 岛异常甲基化, 突变和纯合性缺失相对较低, 而P 15常发生纯合性缺失。 有关9 p 21区域的r. O H 在各种肿痛中可见报道[ 31。 4 1】 。19 P T C H ( t h e h u m a nh o m o lo g u eo f th eD r o so p h lase g m e n t p o la r ityg e n e p a tch ed )攮因定位于9 q 22. 3, 已经被啪: 州足痣样≯。 S 底自ll胞癌综合征毋I敞发的基底钏胞癌的抑癌基因。 M a esa w aeta l[ 4 2]{ _ i)f 究结果提示在部分E S C C 中, P T C H 基Ⅲ州能通过突变和L O H 双重打击机制而失活。 D E C l( d e le te dine so p h a g e a l c a n c e r 1)基因定能于9 q 32一k , 是最近JL q Z 发现的新的候选抑癌基因阻4…, N ish iw a k i q ,143I等_ j匝过L O I. I检测f ¨ R T - P C R 分析食管jN f f ,j 9 q 32区域, 发现该区域的L O H 率很高, 并且D E C l基因的c D N A 可以抑钳J某些癌细胞系的生跃, 提示D E C l基因的分予改变可能和食管癌的恶性生长何关。 ’ 引j; j胱癌发生密切杜l关的D B C C R l( d eleted in b la d d e rc a n c e rc h m m o so m er e g io nc a n d id a te1)基因定位于9 q 32. 33上14 51, 是另外的候选基因。2. 43号染色体: 3号染色休上的等位基因缺失见于3q 25, 3p 22, 3p 13- 14 。 有报道3q 25区域的L O H 与淋巴结转移显著相关。 位于3p 22附近的h M L H 基因是一个借配修复基因,与遗传性非息肉性结肠直肠癌( h er ed ita r yn o n p o ly p o sisco lo r e e ta lca n cer, H N P C C )f I‘J易感性相关。 有报道在散发性结直肠癌、 子宫内膜癌和剐帝中h M l。 H 基因启动子区高甲基化可引起微卫星不稳定性14 6 J。 F H IT 基因定位于3p 14 , 和F R A 3B 攮因相重叠。 F H IT 基因失活可能与基因缺失和5’ C p G 岛甲基化有关, 其蛋白表达下降与E S C C 的发展有关。 F H I’ F 基因在食管癌发展中可能起着重要作用【47 , 4引。2. 55号染色体: 家族性腺瘤样息肉易感基因( A P C )和家族性结肠息肉易感基因( M C C )紧密连锁, 定位于5q 21, 在食管癌c p 二者均检测到L O H , 但二者L O H 之问无相关性。 有报道食管癌中A P C 和M C C 的L O H 率分别为29 %f f ll 33%。 S h ib a g a k ie t a 114 9 1检洲了60 例原发食管鳞癌和20 个食管鳞癌- g H J旭系A P C 基因第15外显子( 突变热点)的突变情况, 未发现任何突变。 A o k ieta l[ 501检测了A P C 的三分之一的编码区, 也未发现突变。 K a w a k a m ie t“∥ I】 发现A P C 启动子区甲基化在A D C 和S C C t¨ 都很高, 分别为9 2%( 4 8 /52)和( 16/32),分析甲基化作用可能是A P C 失活的主要机制或者5q 上还可能存在别的与食管癌有关的基因。 另外5p 15. 2区域也频发L O H , 推测该区域可能存在未知l的抑癌基因。2. 618 号染色体: 18 号染色体L O H 高频区包括18 q 12. 2一q 12. 1, 18 p 11. 2和18 q 21. 1, 包括已知脆性位点F R A l8 A [ 52,531。 D C C 基因位于18 q 23. 3, M ig a k ee ta l[ 54峙艮道D C C 基因突变率为4 %( 2/51), 还发现23%( 10 /4 4 )的食管癌发生L O H , 且淋巴结转移越远, 丢失率越高。 进一步研究发现这种丢失只发生在中、 低分化的食管鳞癌中, 在高分化的食管鳞癌q 一1不i丑现, 提示D C C 基因的改变与食管痛淋巴结转移和分化程度相关。 但也有研究报道D C C . L O H 与淋巴结转移、 病理分级与肿瘤分划均无显著相关性, 提示18 q 司’ 能存在其他与E S C C 发生、 发展有关的未知抑癌基因。 D C C 基因与食管癌发生发展的关系有待进一步研究。 M A D ( m o th er sa g a in std eca p en ta p leg ic)相关基因S m a d 2和S m a d 4 已被定位于18 @ 1. 1,有关S m a d 家族在食管癌中的作用还有待研究。2. 7 其它染色体: p 7 3基因定位于1p 36. 3, 在食管癌中, p 7 3等位基因多态性普遍存在. p 7 3等位≥tI因缺失或突变可能并不是川, 癌发生的主要遗传事f t。 。 W W O X ( W Wd o m a inc o n ta in in g o x id o r ed u cta s)il因定位于16 q 23. 3. 24 . 1, 这…区域包括F R A l6 D 脆性位点。 在食管鳞癌中, W W O X 基因L O H 检出率为39 %( 14 /36 ), 并检测出肿瘤特异性锚义突变和拱阏转录畸变, 提示W W O X 失活在E S C C 中可能有重要作t¨ j155J。 p 21( W a f1)基因定位于6 p 21. 2曾有报道该位蹬有高发的L O H , p 21基因与肿瘤发生发展的关系及其Jlf ij床意义还需进一步研究。 另外, 11号染色体中11p 15. 5和11q 22. 3…, 2l号染色1小整个I受臂都经常发生缺失, 提示这些区域可能存在未女11的抑癌基因。3. 问题与展望目前, L O H 的研究已经成为寻求浙的食管癌抑癌基因和探求已知抑痛撼因致癌机制晌热门. 利用这种技术, 大量的新的候选抑瘸基因已经被定位于不同的染色体上, 并且已有…些基l鲴被定位克隆和签定。 但目前研究中仍然存在许多问题: ( 1)微卫星数目庞大,分布广, 如何快速地检测有待解决, D N A : 占片的出现为这个问题的解决提供了希望; ( 2)通过等位基因筛选出的多个候选抑癌基因在食管癌发生发展中的作用有待于更深一步的研究; ( 3)许多L O H 研究结果相互矛盾, 需要在统一的研究标准下扩大研究范围来取得共以; ( 4 )传统的同位素标记和银染技术有待于被快速、 灵敏、 无污染的荧光索标记所取代。总之, 随着分子生物学技术的进展和L O H 研究的逐步深入, 与食管癌相关的L O H “热点” 一定会被发现, 并且作为食管癌早{ }f 【J诊断的分子标记物, 为食管癌的预防雨I临床诊断提供可靠的辅助依据。 参考文献1. 颜真。 简- "R 复序列一一类新的D N A 多态性杯志。 中华遗传学杂志。 1994; l】 ( 4):2232 . 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F r e q u e n tin a ctiv a tio n o f th e T P 53g e n eine so p h a g e a l sq u a m o u scell c a r c in o m af r o mah ig h - risk p o p u la tio nin C h in a . C lin C a n c e r R e s20 0 1; 7 : 8 8 3- 8 9 16 . H u a n g J, H u N , G o ld ste in A M , e ta lH ig h f r e q u e n c ya llelic lo ss o n c h r o m o so m e17 p 13. 3- p 11. 1ine so p h a g e a l sq u a m o u scell c a r c in o m a s f r o m ah ig hin c id e n c e a r e a inn o r th e r nC h in a . C a r c in o g e n e sis. 20 0 0 ; 21: 20 19 - 20 267 . M o r iT ’ A o k i T , M a tsu b a r a T ’ eta 1. F r e q u e n tlo ss o fh e te r o z y g o sityin th er e g io nin c lu d in gB R C A l o n c h r o m o so m e 17 qinsq u a m o u scell c a r c in o m a s O fth ee so p h a g u s. C a n c e rR es.19 9 4 ; 54 : 16 38 - 16 4 08 . . X in gEP 'Y a n gGY , W a n gL D , e ta l L o sso fh e te r o z y g o sityo f th eR bg e n eco r r ela tesw ithp R b p r o te in e x p r e ssio na n da sso cia tes w ithp 53a ltera tio nin h u m a ne so p h a g e a lc a n c e r . C linC a n c e rR es. 19 9 9 ; 5: 1231—124 09 . H a r a d aH , T a n a k aH , S h im a d a Y ’ eta 1. L y m p hm o d e M eta sta sis is a sso c ia te dw ith a llelic lo sso nc h r o m o so m e13q 12- 13ine so p h a g e a lsq u a in o u scellc a r c in o m a . C a n c e rR es.19 9 9 ; 59 : 37 24 —37 2910 . H a r a d aH , U c h id aN , S h im a d aY ’ et a lP o ly m o r p h isma n da llelic lo ss a t th eA S 3 lo c u s o n13q 12—13ine so p h a g e a l sq u a m o u scell c a r c in o m a . In t JO n c0 1. 20 0 1; 18 : 10 0 3。 10 0 711. L iG H u N , G o ld ste in A M , e ta l. A lle liclo sso n c h r o m o so m eb a n d sl3 q 11- q 13 ine so p h a g e a lsq u a m o u scell c a r c in o m a . G e n e sc h r o m o so m e sea llcer. 20 0 1: 31: 39 0 - 39 712. 1luN , L i G1. iW J, eta 1. In f r eq u en tm u ta tio n in th eB R C A 2g e n eine so p h a g e a l sq u a m o u scellc a r c in o m a . C lin C a n c e r R e s. 20 0 2; 8 : 1121—112613. H uN , R o thM J, E n m a e r t—B u c kM R , eta l A lleliclo ss ine so p h a g e a l sq n a n a o u scell c a r c in o m ap a tien tsw ith a n dw ith o u tth m ily h isto r yo fu p p e r g a str o in testin a ltr a ct c a n c e r . C linC a n c e rR es. 19 9 9 ; 5: 34 7 6 —34 8 2 l嗡|: = 三{ : }夫= _ ; : !㈦I。 举1tIe史14 , G u a n , K L , Jen k in s, C . W , L i, Y . , eta lG r o w thsu p p r e ssio n b y p 18 , a p l6su pIN K 4 B /M 'I’ S 1・a n dp 14 su p |N K 4 B /M T S 2 ・r e la te dC D K 6in h ib ito r ,co r r ela tew ithw ild —ty p ep R bf u n ctio n . G en es. 1 9 9 4D ev . ; 8: 29 3915. H ira i, I‘1. , R o u ssel, M . F . , K a to , J. - Y , cta l N o v e l IN K 4p r o te in s, p 19a n dP 18 , a r e sp ecif icin h ib ito rso f th ecy clinD —d e p e n d e n t k in a se s C D K 4 a n d C D K 6 . M 0 1. C e ll. B i0 1.19 9 5; 15: 26 7 216C h a n , F . K . M . , Z h a n g , J. , C h en g , L . , eta 1. Id e n tif ic a tio no f h u m a na n dm o u seP 19 , an o v e lC D K 4a n dC D K 6 in h ib ito l’ w ithh o m o lo g ytop l6IN K 4 . M 0 1. C ell. B i0 1. 1995; 15: 2682.17 . H a r m o n G L . B e a c hD . P 16 IN K 4 B is ap o ten tia lef f ecto r o f T G F —b - in d u c e d cell c y c learrest[ ,i]. N ature. 1994; 371: 257・26018 . H u ssu ssia n , C . J. , S tr u e w in g , . I. E , G o ld ste in , A . M , , e la L G e r m lin ep l6 m u ta tio n s inf a m ilia l n le la n o m a N a tu r eG en et. 19 9 4 ; 8 : 1519. K a m b, A . , G ru is, N . A . , W ea v er- F eld h a u s, J. , eta L A cellc y c ler e g u la to r p o ten tia llyin v o lv e ding e n e siso fm a n yt u m o rty p es. 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