考马斯亮蓝染色详细实验步骤考马斯亮蓝染色液R250 配方(100ml): 考马斯亮蓝R250 0.25g 甲醇 45ml 冰醋酸 10ml ddH2O 45ml 考马斯亮蓝脱色液配方: 甲醇 250ml 冰醋酸 80ml ddH2O 定容至1000ml。 具体操作步骤: 电泳结束后,切取少量含有MARK蛋白以及少许样品的小部分凝胶进行染色,其余部分用保鲜膜包好,放在4冰箱保存。 取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝 胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1 小时或更长时 注:具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。凝胶较薄,温度较高,则染色时 间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近, 在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。染色2-4 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色 4-24 小时。期间更 换脱色液2-4 次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染 色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2 小时后即可出现。 注:脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使部分染料吸附 在吸水纸上,加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。 完成脱色后,用ddH2O浸泡,至于未染色凝胶长度相等时,参照MARK 蛋白,与未染色凝胶对比,切下所需蛋白成分的凝胶,收集 起来。然后把所要提纯的蛋白从凝胶中分离出来。