[Key Words] Xiaoer Feire Kechuan Particles; Bacteriostatic; Antiviral;Protection 小儿肺炎是儿科呼吸系统常见疾病,多为感染细菌及病毒引起,以咳嗽、发热为主要症状。 临床上西医治疗主要以抗生素、抗病毒药为主,有明显的不良反应和副作用,不利于儿童的健康成长。 现代研究表明,中药治疗小儿肺炎具有明显优势,临床广泛应用,具有很好的发展前景。 小儿肺热咳喘颗粒(XiaoerFeire Kechuan Particles)是由名方麻杏石甘汤加减得来,由麻黄、苦杏仁、生石膏、甘草、金银花、连翘、知母、黄芩、板蓝根、麦冬、鱼腥草组成,具有清热解毒,宣肺止咳,化痰平喘功效。 本次研究考察小儿肺热咳喘颗粒抑菌抗病毒作用,为临床应用提供参考。1 材料1. 1 动物SPF 级 ICR 种小鼠:由扬州大学实验动物中心提供,许可证编号:SCXK(苏)2012-0004。1. 2 药物及主要试剂小儿肺热咳喘颗粒(2. 65 g 生药/ 颗粒,规格:每袋 4 g,批号 160901,海南葫芦娃药业集团股份有限公司)、林可霉素(金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂,批号:121005)、银黄颗粒(江西济民可信药业有限公司,批号:121203)、绵羊红细胞(江宁防疫站,批号:20130415)、胃膜素(重庆市江峡生化制药· 9 8 2 · 2019 年第 36 卷第 4 期有限公司,批号:120824)、全价营养颗粒饲料(江苏协同医药技术有限责任公司,批号:130412)、利巴韦林颗 粒 ( 四 川 百 利 药 业 有 限 责 任 公 司, 批 号:121204)、甲型流感病毒 A/ PR8/34(H 1 N 1 )(中国预防医学科学院病毒研究所)、乙型流感病毒 B/ 京防78-76(中国预防医学科学院病毒研究所)。标准菌株:金黄色葡萄球菌(26003)、大肠杆菌(44104)、枯草芽孢杆菌(63501),由卫生部微生物鉴定所提供。临床分离菌株:大肠杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、洋葱假单孢杆菌、表皮葡萄球菌、乙型链球菌、科代葡萄球菌,由江苏省人民医院微生物鉴定室提供。1. 3 主要仪器电子天平(FA1104 型,上海天平仪器厂)、隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)、超净工作台(苏州净化设备厂)。2 方法2. 1 抗病毒作用 [1-6]2. 1. 1 对甲型流感 A/ PR8/34 和乙型流感 B/ 京防78-76 病毒感染小鼠肺指数的影响 取 ICR 种小鼠60 只,体质量 14 ~16 g,雌雄各半,随机分 6 组,每组10 只:正常组,模型组,小儿肺热咳喘颗粒 3. 5、7. 0、14. 0 g 生 药 · kg-1剂 量 组, 阳 性 药 利 巴 韦 林(60 mg·kg-1 )组,给药容积为0. 1 mL·10 g -1 体重,正常组与模型组给予等容积的 0. 9% 氯化钠注射液。每天 1 次,连续 7 d。 给药前各组小鼠(除正常组)在乙醚浅麻醉下,以甲型流感病毒或乙型流感病毒尿囊液滴鼻感染小鼠,每鼠 100 μL。 末次给药后,各组小鼠称重,脱颈处死,解剖,观察肺部病变;取全肺称重,计算各鼠肺指数,比较各组间差异。 肺指数 = 肺脏质量(g) / 体质量(g) ×10。2. 1. 2 对甲型流感病毒 A/ PR8/34 和乙型流感 B/京防 78-76 病毒感染小鼠的死亡保护作用 ICR 种小鼠 120 只,体质量 13 ~ 16 g,雌雄各半,随机分 6组,每组 20 只:正常组、模型组、小儿肺热咳喘颗粒3. 5、7. 0、 14. 0 g 生 药 · kg-1剂 量 组, 利 巴 韦 林(60 mg·kg-1 )组,灌胃给药,0. 1 mL·10 g -1 体重,正常组与模型组给予相同容积的氯化钠注射液,每天1 次,连续 7 d。 给药当日,各组小鼠(除正常组)在乙醚浅麻醉下,以甲型流感病毒或乙型流感病毒尿囊液给小鼠滴鼻感染。 每鼠 100 μL,观察记录感染后的存活时间及 14 d 内死亡数。2. 2 体内外抑菌试验 [7-11]2. 2. 1 体外抑菌(平皿法) 取肉汤琼脂培养基溶化后倒入 9 cm 平皿约 20 mL,20 个,待其凝固。 用 1mL 无菌注射器吸取菌液 0. 1 mL 均匀涂布于凝固的肉汤琼脂平皿上,每块平皿涂布一种实验菌,然后用6 mm 无菌钢圈打 4 个孔,分别注入小儿肺热咳喘颗粒、林可霉素和银黄颗粒各0. 1 mL。 每种药液注入2孔,重复 2 次,37 ℃ 孵育 20 h 后用直尺测量抑菌圈直径。2. 2. 2 对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌感染小鼠的死亡保护作用 ICR 种小鼠 120 只,雌雄各半,体质量 18 ~22 g,随机分为 6 组,每组 20 只:为:正常组、模型组、小儿肺热咳喘颗粒 3. 5、7. 0、14. 0 g 生药·kg-1 剂量组,阳性药银黄颗粒组,正常组与模型组给予等容积的生理盐水,灌胃给药,0. 2 mL·10 g-1 体重,每天 1 次,连续 7 d,第 5 天给药后 1 h,各组小鼠(除正常对照组外)均腹腔注射金黄色葡萄球菌菌液(或肺炎双球菌菌液)0. 5 mL/ 只。 继续给药 2 d,观察各组注入金黄色葡萄球菌或肺炎双球菌菌液后的存活时间及 7 d 内死亡情况,比较各组间差异。2. 3 统计学处理采用 SPSS 17. 0 统计软件进行分析,数据以 ■ x ± s表示,多组间比较采用方差分析。3 结果3. 1 对甲型流感 A/ PR8/34 和乙型流感 B/ 京防 78-76 病毒感染小鼠肺指数的影响结果表明,小儿肺热咳喘颗粒 7. 0、14. 0 g 生药·kg-1 剂量组均可明显降低甲型流感 A/ PR8/34病毒感染小鼠的肺指数值,14 g 生药·kg-1 剂量组还显著降低肺重量(P <0. 01),与模型组比较有显著性差异(P <0. 05,P <0. 01)。 提示:对两种病毒感染小鼠肺部病变有改善作用。 见表 1,表 2。3. 2 对甲型流感病毒 A/ PR8/34 和乙型流感病毒B/ 京防 78-76 感染小鼠的死亡保护作用结果表明,小儿肺热咳喘颗粒 3. 5、7. 0、14. 0 g生药·kg-1 剂量组明显延长病毒感染后小鼠的存活时间、降低死亡率,与模型组比较具有显著性差异。提示:对两种流感病毒感染小鼠具有明显的保护作用。 见表 3,表 4。3. 3 体内外抑菌试验3. 3. 1 体外抑菌(平皿法) 小儿肺热咳喘颗粒对以上标准金黄色葡萄球菌、标准大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、临床分离的大肠杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、洋葱假单孢杆菌、表皮葡萄球菌、科代葡萄球菌均有较强的抑菌作用。 抑菌圈范围为 10. 5 ~ 14. 5mm。 见表 5。· 0 9 2 · 2019, Vol. 36, No. 4药物研究表 1 小儿肺热咳喘颗粒对甲型流感 A/ PR8/34 病毒感染小鼠肺指数的影响(■ x ± s,n =10)组别 剂量(生药·kg-1 )实验前重(g)实验末重(g)肺重量(g)肺指数(g·10g-1 )正常组 - 14. 36 ±0. 75 19. 34 ±1. 45 0. 12 ±0. 025 0. 06 ±0. 01模型组 - 14. 20 ±0. 85 13. 70 ±1. 37 ▲▲ 0. 19 ±0. 022 ▲▲ 0. 14 ±0. 03 ▲▲小儿肺热咳喘颗粒 3. 5 g 14. 60 ±0. 65 14. 40 ±2. 44 0. 19 ±0. 017 0. 13 ±0. 03小儿肺热咳喘颗粒 7. 0 g 14. 55 ±0. 80 15. 30 ±2. 24 0. 17 ±0. 023 ∗ 0. 11 ±0. 02 ∗小儿肺热咳喘颗粒 14. 0 g 14. 26 ±0. 80 14. 60 ±1. 90 0. 17 ±0. 021 ∗ 0. 12 ±0. 02 ∗利巴韦林组 60 mg 14. 56 ±0. 62 15. 00 ±0. 92 ∗ 0. 16 ±0. 011 ∗∗ 0. 11 ±0. 01 ∗∗ 注:与正常对照组比较: ▲▲ P <0. 01; 与模型组比较: ∗ P <0. 05, ∗∗ P <0. 01表 2 小儿肺热咳喘颗粒对乙型流感 B/ 京防 78-76 病毒感染小鼠肺指数的影响(■ x ± s,n =10)组别 剂量(生药·kg-1 )实验前体重(g)实验末体重(g)肺重量(g)肺指数(g·10g-1 )正常组 - 14. 47 ±0. 99 19. 70 ±1. 08 0. 149 ±0. 023 0. 076 ±0. 011模型组 - 14. 88 ±0. 83 15. 19 ±4. 09 ▲▲ 0. 212 ±0. 026 ▲▲ 0. 147 ±0. 035 ▲▲小儿肺热咳喘颗粒 3. 5 g 14. 8 ±0. 99 14. 93 ±3. 45 0. 187 ±0. 020 ∗ 0. 130 ±0. 029小儿肺热咳喘颗粒 7. 0 g 14. 65 ±0. 98 16. 40 ±2. 95 0. 176 ±0. 057 0. 109 ±0. 032 ∗小儿肺热咳喘颗粒 14. 0 g 15. 15 ±0. 70 16. 66 ±3. 16 0. 169 ±0. 026 ∗∗ 0. 107 ±0. 035 ∗利巴韦林组 60 mg 15. 02 ±0. 62 15. 13 ±2. 37 0. 153 ±0. 038 ∗∗ 0. 103 ±0. 027 ∗∗ 注:与正常对照组比较: ▲▲ P <0. 01 与模型组比较: ∗ P <0. 05, ∗∗ P <0. 01表 3 小儿肺热咳喘颗粒对甲型流感病毒 A/ PR8/34 感染小鼠的死亡保护作用(■ x ± s,n =20)组别 剂量(生药·kg -1 ) 死亡数(只) 体重(g) 死亡率(%) 存活时间(d)正常组 - 0 14. 2 ±0. 5 0 14. 0 ±0. 0模型组 - 19 14. 1 ±0. 9 95 6. 4 ±2. 2 ▲▲小儿肺热咳喘颗粒 3. 5g 13 13. 9 ±0. 9 65 ∗ 9. 5 ±3. 4 ∗∗小儿肺热咳喘颗粒 7. 0 g 13 14. 0 ±1. 2 65 ∗ 9. 7 ±3. 2 ∗∗小儿肺热咳喘颗粒 14. 0 g 10 14. 2 ±0. 9 50 ∗∗ 10. 6 ±3. 3 ∗∗利巴韦林组 60 mg 10 14. 2 ±0. 8 50 ∗∗ 10. 4 ±2. 5 ∗∗ 注:与正常对照组比较: ▲▲ P <0. 01;与模型组比较: ∗ P <0. 05, ∗∗ P <0. 01表 4 小儿肺热咳喘颗粒对乙型流感 B/ 京防 78-76 病毒感染小鼠的死亡保护作用(■ x ± s)组别 剂量(生药·kg -1 ) 动物数(只) 死亡数(只) 死亡率(%) 存活时间(d)正常组 - 20 0 0 14. 0 ±0. 00模型组 - 20 19 95 ▲▲ 6. 5 ±2. 24 ▲▲小儿肺热咳喘颗粒 3. 5 g 20 15 75 9. 2 ±3. 01 ∗∗小儿肺热咳喘颗粒 7. 0 g 20 13 65 ∗ 9. 5 ±3. 55 ∗∗小儿肺热咳喘颗粒 14. 0 g 20 12 60 ∗ 10. 2 ±3. 31 ∗∗利巴韦林组 60 mg 20 9 45 ∗∗ 11. 4 ±3. 05 ∗∗ 注:与正常对照组比较: ▲▲ P <0. 01;与模型组比较: ∗ P <0. 05, ∗∗ P <0. 013. 3. 2 对金黄色葡萄球菌及肺炎双球菌感染感染小鼠的死亡保护作用 金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活时间明显减少,死亡率明显增加,与正常组比较,有显著性差异。 小儿肺热咳喘颗粒 7. 0、14. 0 g 生药·kg-1 剂量可明显延长感染小鼠的存活时间,与模型组比较具有显著性差异;14. 0 g 生药·kg-1 剂量明显降低感染小鼠的死亡率,与模型组比较具有显著性差异。 提示:对金黄色葡萄球菌感染小鼠具有明显保护· 1 9 2 · 2019 年第 36 卷第 4 期作用。 见表 6。肺炎双球菌感染小鼠明显减少存活时间、增加死亡率,与正常组比较有显著性差异。 小儿肺热咳喘颗粒 7. 0、14. 0 g 生药·kg-1 剂量组可明显延长感染小鼠的存活时间,与模型组比较具有显著性差异。 14. 0g 生药·kg-1 剂量组明显降低感染小鼠的死亡率,与模型组比较具有显著性差异。 提示:对肺炎双球菌感染小鼠具有明显保护作用。 见表 7。表 5 小儿肺热咳喘颗粒体外抑菌试验(平皿法)菌株 抑菌圈直径(mm)小儿肺...