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动物实验
裸鼠成瘤
医学上通常用裸鼠成瘤实验来研究肿瘤及其治疗:用带有人源移植瘤的裸鼠来试可能的靶向药物,可以在肿瘤复发之前都找到真正有效的靶向药物。裸鼠成瘤实验,即在裸鼠皮下注入肿瘤细胞,观察肿瘤的形成、发展及抗肿瘤药物的效果。
今天以Hep-G2细胞为例,介绍裸鼠皮下成瘤的实验小技巧及问题解答!
一、接种步骤
1、接种是选好进针部位,大部分选择腋下接种,接种前用75%的酒精对进针部位擦拭消毒。
2、排去一次性针头内空气,从进针部位向前穿刺大约1cm,进行皮下注射。
3、注射时,每次注射量大约为0.2ml,每日观察。
4、注射完毕后,缓慢退出针头,尽量避免漏液;
5、注射过程中,细胞需一直置于冰上,使细胞处于比较低的代谢状态,并尽量在半小时内完成。
实验结果:一般接种7-10天后便可看到肿块长起;
二、操作小技巧
1、细胞的状态是成瘤实验的关键,所以细胞生长状态一定要好,取处于对数生长期的细胞,细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基;
2、注射向前方穿行,注射前针头稍微动一动,能动说明在皮下,否则可能在皮内或者肌肉内;
3、注射前,要排去针管内的空气;
4、针头在皮下走一段再注射,速度不可太快
5、接种点离进针点尽量1cm远,减少漏液和污染的可能;
三、常见问题及解答
1、这个实验为什么用裸鼠而不用普通的老鼠或者小白鼠?
裸鼠成瘤实验用的裸鼠,最大的特点是没有胸腺等免疫器官,它的免疫力几乎为0,对肿瘤细胞没有免疫作用,易于成瘤。
自然状态下的老鼠和小白鼠有完整的免疫系统。免疫系统有免疫防御、免疫自稳、免疫监视三大生理功能,并通过免疫识别和免疫排斥攻击两大生理反应起作用。具有完整免疫系统的老鼠和小白鼠,会通过免疫识别反应来识别自己与非己,发现注入的肿瘤细胞这种非己抗原后,会启动免疫排斥攻击反应进行杀灭,这样肿瘤就很难形成,实验就难以进行下去。
2、小鼠瘤子长起来又消失?
肿瘤块先缩小,后变大很常见,很可能是炎症反应,肿瘤细胞被小鼠自身吸收,继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过几周还能长出来,长不起来建议换鼠。
3、如何抓牢裸鼠?
可以用左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤,小