Laird 等人利用一种被称作 Methylight 的技术。 Methylight 是一种基于 Taqman 探针的甲基化特异定量 PCR 技术。在扩增之 前先处理 DNA ,使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影 响,用特异性的引物和 Taqman 探针来区分甲基化和非甲基化的 DNA ,这种方 法不仅方便而且灵敏度更高。 特异的引物和 Taqman 探针被用来区分甲基化和非 甲基化的 DNA 。和其它实时 PCR 方法一样,Methylight 无需电泳,因而提高 了反应的灵敏性和通量。 这种方法的灵敏性在食道癌病人血液中癌细胞异常甲基 化的 DNA 检测中被证明。 低密度表达谱分析:这一方面主要是配合 ABI 的系列产品:TaqMan? Low D ensityArrays。这个芯片是从人,小鼠和大鼠的基因中挑选的 4 万个 arrays, 可以根据用户要求在反应板中固化不同基因的检测探针和引物, 同时检测 1 个标 本的 384 个不同的基因或 8 个标本的 48 个不同的基因,而且这个试剂盒是 preloaded,方便使用,同其反应体积小(2ul),节省试剂的优点一起构成了这个适 用于标准化,中高通量基因表达研究的试剂。 SNP 分析:SNPs,即单核苷酸多态性,这种人类最常见的可遗传变异占据了 所有已知多态性的 90%以上,因此作为研究个体对不同疾病的易感性或者个体对 特定药物的不同反应有着重要的意义, 也因此国际人类基因研究学会花费大量的 资金来完成人类单体型图谱。SNP 分析从根本上来说其实就是确定一对染色体的 每种基因的两个拷贝, 哪种点突变在这两个拷贝中存在, 因此利用定量 PCR 方法, 并配合芯片技术可以快速灵敏的检测到 SNP 结果。ABI 号称有数以千记的定量 P CR 试剂盒,自然在这方面也不会留下空白,TaqMan SNP Genotyping Assays 包 含了一百万的 HapMap SNPs(人类单核苷酸多态性图谱 SNPs), 方便 SNP 分型高通 量研究。 细胞因子分析:细胞因子是一种由细胞分泌、能调节自身和其他细胞功能的 小分子可溶性蛋白质或多肽。 这种调节蛋白主要通过调节免疫反应而在免疫系统 中起着核心作用。因此在许多免疫致病途径,对细胞因子 mRNA 表达谱的可靠定 量是很重要的。由于受检样本中细胞因子含量往往往往都比较低下,因此定量 P CR 以其高敏感性和准确性在细胞因子的定量中越来越受到青睐。 MicroRNA 分析:miRNA 这种小分子从 2003 年一直“火”到了如今,其魅力 不可小窥, 传统的检测和定量 miRNA 的方法是 northern 杂交,芯片技术以及核糖 核酸酶保护分析(ribonuclease protectionassays),这些方法都需要标记探针 并与纯化的 RNA 进行杂交。 但是由于成熟的活性 miRNA 及其前体有一段相同的靶 序列,而基于杂交的各种技术又无法通过分子大小将它们区分,因此很难专一性 的识别成熟 miRNA,结果导致很高的前体背景信号,而且这些技术需要标记步骤 或放射性同位素,费时,费钱还不讨好。