精确称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖500mg于50mL容量瓶中,加去离子水至刻度,超声溶解得10mg/mL的标准葡萄糖母液。基于母液配制0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mg/mL的系列葡萄糖标准溶液。用移液枪分别吸取上述浓度的葡萄糖标液2.0mL于25mL具塞比色管中,然后加入DNS试剂4mL,摇匀,置沸水浴加热7min,流水冷却至室温,以去离子水定容。取2.0mL去离子水进行同样的操作作为空白对照,于540nm处测定吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
分别用移液管取2mL供试品溶液A和供试品溶液B于25mL具塞比色管中,定容,摇匀。加入DNS试剂4mL,摇匀,置沸水浴加热7min,流水冷却至室温,以去离子水定容。取2.0mL去离子水进行同样的操作作为空白对照,于540nm处测定吸光度,根据标准曲线,分别计算供试品溶液A和供试品溶液B的葡萄糖含量为CA和CB。麦蓝菜多糖或麦蓝菜多糖水解物中的多糖含量=CA-CB。
1.4分子量范围测定
用分子排阻高效液相色谱法(HPGPC)测定麦蓝菜多糖和麦蓝菜多糖水解物的分子量。
2、实验结果
含量测定结果和分子量范围测定结果如下表。
实施例1-5中,也可以使用碳酸钠或碳酸氢钠代替氢氧化钠,水解时也可以使用硫酸代替盐酸。
实施例6:麦蓝菜多糖水解物的安全性实验
采用本发明实施例1中制备的麦蓝菜多糖水解物进行毒性实验。取昆明种小鼠64只,随机分组,采用服用和不服用麦蓝菜多糖水解物进行毒性对比实验研究。结果表明,麦蓝菜多糖水解物组在高达500mg/kg的剂量下,无任何毒副作用,通过对心、肝、肾、肺解剖观察均无异常,并且体重均有增加。实验结果见表1。
表1麦蓝菜多糖水解物毒性实验
实施例2-5制备的麦蓝菜多糖水解物具有类似的安全性。
实施例7:麦蓝菜多糖水解物对尿路感染模型大鼠的治疗作用
SD小鼠70只,雌性,按体重随机分成7组,即空白对照组(蒸馏水10mL/kg)、模型组(蒸馏水10mL/kg)、三金片组(2.5g/kg)、麦蓝菜多糖水解物低、中、高剂量组(分别对应麦蓝菜多糖水解物0.1g/kg、0.2g/kg、0.4g/kg)和麦蓝菜多糖组(1.0g/kg)。麦蓝菜多糖和麦蓝菜多糖水解物的制备方法见实施例1。
除空白对照组外,其余动物实验前一天禁水15h,用乙醚麻醉,固定,下腹壁去毛,正中切开正腹壁约3cm长,暴露腹腔,用穿4号线角针由左肾输尿管中段两侧分别向后腹壁处侧穿针。将丝线两头引出腹壁外,然后向膀胱内注射约0.6mL大肠杆菌液(浓度为6×107g/mL),当见到菌液从尿道口流出时即停止注射。为提高模型成功率,短时性结扎输尿管,缝合切口,恢复饮水和喂饲料。术后24h,拆去输尿管结扎线。所有动物按剂量灌胃相应药物,每天1次,连续7d。测定下列指标:(1)处死动物,从膀胱中抽取尿液0.3mL,检测膀胱尿液中大肠杆菌阳性率;(2)各组大鼠取右肾脏,用手术刀将肾脏纵向切为两半,右肾脏取一半称重后加5mL灭菌生理盐水匀浆,做细菌阳性率检测。所有数据用均数±标准差表示,采用SPSS13.0统计软件处理,组间比较作X2检验,p