2基因扩增的重要性福建医科大学附属厦门市第一医院(361 乳腺癌是女性最常见的癌症之一在乳腺癌患者中,约有 25% 的人恶化的速度会更快,而且容易复发,其中一个重要的原因是HE 2基因过度表达目前国内外一般采用免 疫组织化学(IH C)检测HE 2受体蛋白表达状态,应用荧光原位杂交(FI H)和显色原位杂交(CI H)检测H 2基因扩增水平的方法 相关研究显示,乳腺癌CI 检测结果的符合率达90 以上上述检测方法各有优缺点,我科已 开展IHC与FI 2是否扩增提供一定的参考,但是这种检查的结果对于部分患者,特别是报告为 2是否有扩增存在一定的困难,因为免疫组织化学法受很多因素的影响,如标本是否及时固定, 固定液的种类及浓度,固定的时间,温度,染色过程等因素的 影响,所以有假阳性的存在,即HE 2蛋白表达不一定存在基因的扩增,特别是H 2蛋白表达++的患者应进一步进行FI H检测分析来确定是否存在基因的扩增 荧光原位杂交(FIH):利用特异性分子探针与癌细胞中 HE 2基因是否有扩增,故成为检测癌细胞是否过度表达H 2IHC检测结果为+++及FI 扩增的浸润性乳腺癌可被确定为HE 2蛋白表达为++的乳腺癌对策:组织取材固定不当者,在条件允许的情况下,按规 范重新取材和固定;脱水不当者,在不影响诊断的原则下将 组织重新脱水透明浸蜡;切片与染色处理不当者,应重新切 片与染色 3.5 切片染色模糊不清 固定液浓度不当,取材组织块过大或过厚,常造成组织中央固定不佳,而出现切片染色发灰现象 组织标本已经发生霉腐自溶,或取材后没有及时固定,固定液浓度不够 包埋时如果温度过高或切片后烤片温度过高,均会使组织蛋白质发生质变,造成切片染色模糊不清 切片脱蜡不彻底可造成不着色或着色很淡 染料质量差或染色液配制不当,如配制苏木素时加热过度造成过度氧化,不能生成三氧 化苏木红,生成四氧化苏木红,使染液没有染色能力;或苏木 素使用时间过久,导致切片着色不良,切片模糊不清 分化过度,细胞染色较淡,造成切片模糊难辨 切片脱水,透明不彻底 封固剂接触水或其他液体;口,鼻呼出的气体接触组织切片上的封固剂均可造成切片模糊不清 对策:组织固定,取材,包埋温度不当者,条件允许的情况 下,重新固定,取材,调整适当的包埋,烤片温度;切片脱蜡不 彻底,染色不当者,退回重新脱蜡,染色,脱水,透明;封固不 当者,移去盖玻片,将切片放入二甲苯中脱去原来的封固剂, 重新封片 3.6 产生气泡 展片水温过低,组织未展开或水底产生的气泡浮到组织上,脑组织等在捞片时组织 下面易产生气泡 封固剂过稀或过稠,封固时操作不当,封固剂扩散不均易产生气泡 对策:切片厚薄不均,不平整,组织未展开等产生气泡者, 应重新切片;封固不当者,移去盖玻片,将切片放入二甲苯中 脱去原来的封固剂,重新封片 3.7 污染 取材中操作台上残留的破碎组织混入相邻其他组织内 刀刃不净,粘有其他切片的蜡屑 切片中出现蓝黑色沉淀物,为苏木素染液中的金属膜黏附在玻片上 对策:取材前应将手套,取材台面,取材工具洗净,防止交叉污染;配制缓冲中性甲醛,定期防止,去除甲醛色素结晶和 升汞结晶;注意去除切片刀上的蜡屑和黏附物;保持展片表面 清洁,防止交叉污染;选用洁净的载玻片;每天染色前仔细过 滤苏木素染液,或使用半氧化苏木素染液 总之,常规病理切片制作,首先必须有高度的责任心,更 要严格操作规范,并虚心向同事学习,互相交流,经常做切片 制作后的总结工作,不断优化制作方法,可制作出优良的病理 切片 参考文献 中华医学会.临床技术操作规范病理学分册.北京:人民军医出版社,20 田玉旺,李琳,朱红艳,等.常规HE染色易出现的问题,原因 及解决方法.诊断病理学杂志,20 8,15(6):50 郭楼英,刘瑞民,刘引连.注重病理切片过程提高病理诊断 正确率.山西医药杂志,20 8,37(5):473-474. 何丽馥,田杰,杨京京.改进病理切片质量的补求脱钙法.实用医技杂志,20 6,13(4):644. 王伯氵云,李玉松,黄高升,等.病理学技术.北京:人民卫生出版社,20 染色常见问题与对策.临床与实验病理学杂志,20 8,24(4):479.(收稿日期:20 23)569 小肠血管瘤病一例临床病理分析湖北省武汉市儿童医院(430 血管瘤病是一种不常见的疾病,发生在肠道的血管瘤病 一直是争论的热点 笔者通过对1 例肠壁血管瘤病的诊断并 参考相关文献加以分析 入院入院查体:神志清,精神反应差,腹部膨隆,可见肠型, 未及包块,肠鸣音活跃,可闻及气过水音,腹壁可见静脉曲 ;体质量5.5 超检查显示:肠套叠,肠积气,局限性肠管扩张,肠梗阻多考虑 初步诊断:急性肠套叠 心电图:窦性心 动过速;X 线片显示:中上腹见肠管胀气,扩张明显,可见多个 阶梯状液平,下腹致密,双膈下无游离气体 术中发现:距回 处有一肠套叠包块,套入肠管片状坏死,套叠头部见美克尔憩室,坏死肠管约1 伊红(HE)染色免疫组织化学采用P V90 法,检测CD34,波形蛋白(V )在肿瘤中的表达,免疫组织化学试剂盒及所有一抗均购自北京中山生物技 术有限公司,所有抗体均配有阳性对照 ,两侧切断缘直径分别为1 .6,1 镜下所见:两端切断缘肠黏膜血管扩张充血,见炎细胞浸润,局部黏膜缺损,杯状细胞数量减少;黏膜下组织水肿,血 管扩张;浆膜血管扩张充血 肠壁的肿物镜下主要为CD34 阳性平滑肌组织血管内皮细胞成团状,巢状分布在肠 壁黏膜,肌层及浆膜各层,局部环纵肌被破坏,淋巴细胞为主 的炎细胞弥散分布 病理诊断:小肠肠壁血管瘤病(由于血管瘤累及肠壁全层且有一定范围,考虑血管瘤病变较有可能) 肿瘤的性质和分布:血管瘤病几乎全部见于儿童或青少年,多以躯干和四肢常见,亦可发生在乳腺等处 ,家族性病例少见 典型的病例,病变累及肢体,可影响真皮,皮下组织,肌 肉甚至骨 常见症状为受累的肢体发生肥大,极少数患者伴有 内脏和中枢神经系统血管瘤,小肠血管瘤病是非常少见的良 性血管病变 小肠长度长,在体内游离度大,除非肿瘤相当大,数量较多一般不易检出,CT 及磁共振成像(MR I)在早期 诊断中可能给予一定的帮助 "入院,常伴有肠套叠等症状,一般以腹痛,腹胀,呕吐,大便带血等为首发症状, 由于肠壁黏膜至浆膜多个瘤体突起于肠腔,瘤体导致局部肠 患者中,多数患者FISH 检测HER 2基因扩增为阴性,但也有 一定数量的阳性,因此美国食品和药品管理局(FDA)要求必 须用FISH 技术检测出该基因的扩增才能进行赫赛汀的治 该项检查将给HER2基因扩增的乳腺癌患者进行靶向治 疗提供最有效地依据 结果与讨论诊断明确的乳腺癌患者可用IHC方法初步筛选HER 蛋白阳性患者IHC结果阴性或弱阳性的乳腺癌则表示没有 HER 2蛋白过度表达,同时亦可能提示HER 2基因扩增阴性; 此时再作FISH 的意义不大,也很可能不太适合使用赫赛汀 治疗;应该指出的是,IHC和FISH 检测试剂必须是经过我国 相关机构和(或)FDA 批准的试剂盒,HER 2蛋白阳性信号表 达定位应在细胞膜上 HER 2基因扩增必须同时有1 号染色体信号作为参照,杂交后的组织细胞中 75% 的细胞核显示 出双色信号时,视为检测成功,并且红,绿信号互为对照,癌 与非癌细胞互为对照 FISH 结果基因扩增是乳腺癌进行赫赛 汀有效治疗的标准 复发和转移是乳腺癌的重要特点,初诊乳腺癌患者约有 半数已出现血行转移,对死于晚期乳腺癌的尸检结果发现, 约有60 骨转移转移 性乳腺癌属肿瘤晚期,为非治愈性疾病,主要治疗手段是联 合化疗,且常因全身情况较差,转移器官的功能受损,肿瘤负 荷较大,骨髓抑制等因素而导致治疗失败 目前转移性乳腺癌 的联合化疗通常是姑息性化疗,一般采用2 种以上的化疗药物联合应用,联合化疗的有效率一般在20 45%,不良反 应较重 而抗HE 2受体的单克隆抗体赫赛汀,无论单药还是与化疗药物联合治疗HE 2基因扩增的乳腺癌均取得了良好的疗效 国内外临床研究发现赫赛汀治疗的有效率与乳腺癌细胞 HER 2基因扩增状况密切相关,因此荧光原位杂交在检测乳 腺癌组织HER 2是否扩增是十分重要的,是确定乳腺癌患者 是否对赫赛汀敏感的重要生物标记 (收稿日期:20 21)570