(一)酶浓度 在底物浓度远大于酶浓度时,酶促反应随酶浓度的增加而增加,即反应速率与酶的浓度成正比。在病理情况下,酶浓度过高时,底物过早而且过多地被消耗,影响酶活性测定,故需用生理盐水或其他缓冲液进行适当的稀释。但要注意稀释对测定结果的影响,如低酶浓度时,酶易解离为单体,常比多聚体更易失活。 (二)底物的种类和浓度 有些酶专一性不强,可作用多种底物,则须根据需要选择合适的底物。研究酶的生理作用时,一般选择Km最小的最适底物。临床酶学测定时,应首先考虑有较高诊断价值的底物。底物专一性强的酶,如其所催化的为可逆反应,则和专一性不强的酶一样,需要从测定技术和实用方面考虑选择速度较快的正向或负向反应。根据米-曼氏方程,当底物浓度[S]>>Km时,则反应速率v=Vmax=K2[E],即反应速率与酶浓度[E]成正比,此为零级反应。在此种条件下,酶均能与足够的底物进行反应。因此,临床酶学测定时应给予充分的底物浓度。在一定酶量下(Vmax),反应速率视底物浓度[S]而定。当[S]