王小主
[size=2][color=Black][font=黑体]在Western Blot实验中,转膜后,PVDF或者NC膜的正面应该就是靠正极那面吧?也就是靠胶的那面是反面?在接下来的实验操作,如洗膜、封闭、加一抗和二抗等,操作方面都有什么讲究呢?是不是都用反贴法?来自一个新手的疑问,谢谢大家的指点![/font][/color][/size]
yychen
[size=2][color=Black]
一般pvdf膜的正面是挨着胶的那面吧~如果有两张膜同时做封闭的话,注意把挨着胶的那边背靠背的放置,也就是最好不把两个膜的正面面对面的放置。
也不知道说清楚没有~[/color][/size]
vvmmoy
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我们在做这个的时候都是靠胶的那面朝上[/color][/size]
chuntian1983
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也没有什么严格规定,我 建议每次封闭,加一抗、二抗都
只加一张膜,膜多了会互相有点影响的,而且封闭会不好。[/color][/size]
王小主
[size=2][color=Black]我认为靠胶的那面是反面。在ECL发光的时候就要讲究正反面了,反贴法孵了A&B混合液后,再放在暗盒的保鲜膜里就是正面朝上。[/color][/size]
redbutterfly
[size=2][color=Black]我觉得靠胶的那面是正面。一抗二抗都是上在这一面上。[/color][/size]
yychen
[size=2][color=Black]
没有那么多“我觉得”。
转膜就是使用电力,将胶内的蛋白拉出来,遇到膜时吸附到膜上。所以,蛋白主要在靠胶这面,也就是这时正面。
当然这类膜都是有孔的,孔径有0.45、0.22、0.1um等等。而蛋白的大小远小于它的孔径,所以蛋白也是有可能从孔穿到对面的。而抗体、BSA、ECL等小分子都可以透过孔从这面到另一面的。
所以我觉得正反面不是很重要,我刚开始做的时候根本不注意这回事,也没有因为这个原因导致试验失败的。[/color][/size]
ROSE李
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我用