CHINA TROPICAL MEDICINE Vol.9 No.7 July 2009CHINA TROPICAL MEDICINE Vol.9 No.7 July 2009中国热带医学 2009 年第 9 卷第 7 期中国热带医学 2009 年第 9 卷第 7 期论著乳腺癌的人表皮生长因子受体 2 human epidermal growthfactor receptor 2 HER2  是当前研究的热点之一 Vocaturo 等[1]研究发现有 20%~30%乳腺癌病人的肿瘤组织中有 R 基因的异常扩增或蛋白过表达。大量研究认为对此类患者应用激素治疗及常规化疗效果不佳 应用人源性抗 ER 抗体进行靶向治疗可取得较好效果 因此正确检测和评估乳腺癌的 ER 状态至关重要。本文应用荧光原位杂交 fluoresecence in situhybridization FIS  检测 R 基因扩增采用免疫组织化学immunohistochemistry IC  检测 ER 蛋白表达 分析二者的相关性和差异性 以便为临床选择有效 ER 检测提供依据。1材料与方法1.1材料选自 40 例 008 年外科手术切除标本、 4%中性甲醛固定 648h、 石腊包埋的原发性乳腺癌标本 其中浸润性导管癌 9 例 分泌型乳腺癌 1 例 免疫组化试剂购自北京中杉金桥公司荧光原位杂交试剂由北京金菩嘉医疗科技有限公司提供 荧光显微镜为日本奥林巴斯公司的产品 型号 BX51。1.方法免疫组化方法采用 EnVision 法[]检测 结果判断参照乳腺癌 ER 检测指南[]。1..11..荧光原位杂交检测 ER 基因扩增 ①切片预处理 取4μm 厚乳腺癌组织石蜡切片置硅化玻片上 68℃过夜烘烤 室温下常规脱蜡至去离子水 50℃用 0[w/v] 酸性亚硫酸钠处理切片 30min 漂洗后 37℃经蛋白酶 K 工作液消化 1 min 室温下充分漂洗依次置于-0℃预冷的 70%乙醇、 85乙醇和100乙醇中及室温浸入丙酮溶液中 min 脱水自然干燥玻片后加热至 56℃。②标本和探针混合物准备及变性 将盛有 70%甲酰胺/×SS 变性液 P 值 77  的容器置于 76℃水浴箱中预热 30min 玻片在变性液中浸泡 8min 变性 然后依次置于-0℃预冷的 70乙醇、 85乙醇和 100乙醇中各 3min 进行梯度脱水自然干燥后置于 45~50℃ 烤片机上预热等待与探针杂交。根据说明书暗处配制探针混合液 充分混匀后置于 75±1℃水浴箱中 5min 变性。③探针与样本杂交及洗脱 暗处将变性后的探针混合物滴于组织中央 加盖玻片 橡皮胶封边 将玻片置于预热的湿盒中 4℃杂交 16~0h。移去盖玻片 46℃水浴箱中依次置于 50%甲酰胺/SS 溶液 10min3 SS 溶液 10min SS/01%NP40 溶液 5min 及 70%乙醇漂洗。④结果判断 玻片自然干燥后滴加 15μl 二脒基苯基吲哚DAPI  复染液封片0min 后在荧光显微镜下选用特异的单通道滤波片观察癌细胞核的 FIS 结果。绿色荧光为 17 号染色体着丝粒 橙红色荧光荧光原位杂交技术在乳腺癌 HER2 的表达及其意义赵继红 卢义生 王晓文 尹有群摘要 目的探讨荧光原位杂交 FIS  与免疫组织化学 I  检测乳腺癌人表皮生长因子受体  ER  基因状态中的相关性和差异性。 方法对 40 例原发性乳腺癌组织做石腊切片分别用 FIS 和 I 检测 ER 基因扩增和ER 蛋白表达 以 FIS 检测结果为标准 评价 I 检测的基因扩增比率。 结果I 检测 ER 蛋白表达 3+ 的基因扩增比率为 889 8/9   1 例无扩增者为 17 号染色体多体 I +  的基因扩增比例为 714 5/7    例无扩增者中有 1 例为 17 号染色体多体 I1+和 0  的无基因扩增。 结论I 可以做为 ER 基因状态检测的初筛 I+  与 I 3+  存在假阳性 与 17 号染色体多体有关 故应该做 FIS 检测确诊。关键词 乳腺肿瘤 荧光原位杂交 免疫组织化学 ER 基因中图分类号 R7379文献标识码 A文章编号 1009-977 009  7-130-0Application nd significnce of fuorescence in situ hybridiztion tecnoogy in detection of HER2 gene in rstcncr ptints. ZAO Ji-ong LU Yi-Sheng WANG Xiao-Wen et alDepartment of Pathology The People's ospital ofDongguan Dongguan 5018 Guangdong PRhina strat: OjtivTo probe into the results of fluorescence in situ hybridizationFIS and immunohistochemistryI in detection of genetic state of epidermis growth factor receptor  ER in breast cancer pateintsMtosParaffin wax slice of 40 cases of primary breast cancer tissues was prepared and ER gene was amplified and ERalbumen expression was detected with FIS and I separatelyRsutsThe expression rate o ER albumen by I+was 889%8/9  The expression rate of ER albumen by I +was 714%5/7    cases were not amplifiedtone of them had No17 chromosome multimer The I 1+ and 0 had not amplificationConusionI can be usedfor initial screening of ER while I + and I + might give false positive associated with No17 chromosomemultimer Thus FIS detection is necessaryu for a definite diagnosisKy wors: Breast cancer; Fluorescence in situ hybridizationFIS  ; Immunohistochemistry; ER gene* 作者单位东莞市人民医院病理科 广东 东莞作者简介 赵继红 1965~   副主任技师 主要从事免疫组化及分子病理学方面的工作50181230 中国热带医学 2009 年第 9 卷第 7 期中国热带医学 2009 年第 9 卷第 7 期CHINA TROPICAL MEDICINE Vol.9 No.7 July 2009CHINA TROPICAL MEDICINE Vol.9 No.7 July 2009finishing pigs fed ractopamineJ. J Anim Sci 1989 67: 225522623吴国富 范春仙 祝益民 . 盐酸克伦特罗食物中毒 102 例临床分析J 现代预防医学 2003 15 2   1141154Mitchell G Dunnavan G  Illegal use of β-adrenergic agonists inthe United StatesJ J nim Sci 1998 76:208~115王德强 新德 安宁  猪禽盐酸克伦特罗残留分析与对策 J 新疆畜牧业 2006 1   14156GBT5009  1922003  中华人民共和国国家标准食品卫生检验方法  S 北京 中国标准出版社 20047Stevenson D Immunoaffinty Solid Phase Extraction J Ch romatogr B200 745: 39488F Caloni M Montana C Pasqualucci G Brambilla and G  PompaDetection of β2agonists in milk replacer J Veterinary researchcommunications 1995 194  2852939Guy P  Savoy M C  Quantitative analysis of clenbuterol in meatproducts using liquid chromatography-electrospray ionization tandemmass spectrometry J J Ch rom a togr B 1999 736: 292191 Gonza leza P Fen teb C  Determination of residues of the βagonist clenbuterol in liver of medicated farm animals by gaschromatography mass spectrometry using diphasic dialysis as anextraction procedure J J Ch romatogr B 1997 693: 32132611吴平谷  生物材料中克伦特罗的气相色谱质谱法测定 J 分析测试学报 22 21:1921收稿日期 29-3-13为 HER2 基因 细胞核由 DPI 复染成蓝色。计数 3 个细胞必须是各通道信号均清晰可辨的细胞 统计比率值 3 个细胞核中红信号总数/绿信号总数  。比率值小于 18 为阴性结果 提示该样本无 HER-2 基因扩增 比值大于 22 为阳性结果 提示样本中 HER-2 基因发生扩增 在 18~22 之间时 可以选择增加计数细胞至 100 个,或重做 FISH 实验来判断最终结果。单个细胞 17 号染色体着丝粒绿色信号大于 2 即为 17 号染色体多体。2结果9 例 IHC 检测为 3+   其中 8 例经 FISH 检测为基因扩增1 例 FISH 检测无基因扩增 为 17 号染色体多体 7 例 IHC 检测为 2+   其中 5 例经 FISH 检测有基因扩增 2 例无扩增的其中1 例为 17 号染色体多体 IHC 检测为 1+ 和阴性的病倒 FISH检测无基因扩增。IHC 检测 HER2 蛋白表达 3+  的基因扩增比率为 88.9% 8/9   IHC +  的基因扩增比例为 74% 5/7  。3讨论自从人源性抗 HER2 抗体(曲妥珠单抗 Tratuzumab)应用于临床治疗以来, 对于乳腺癌患者 HER 最好检测方法的选择成了人们研究的热点。目前美国 FD 批准用于 HER 检测的方法有二种 即 IHC 检测 HER 蛋白及 FISH 检测 HER 基因。 免疫组化是以组织为基础的蛋白检测方法因其具有操作简单价格低廉等特点而成为目前临床病理实验室作为检测 HER的常规方法 但由于受甲醛固定 抗体批号差异及判读结果的主观因素等多种因素影响 免疫组化有时会得到相互矛盾的实验结果。