聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色实验

聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色实验

标签:聚丙烯酰胺凝胶考马斯亮蓝蛋白质纯化与鉴定实验指南附录5二
本实验介绍关于聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。
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难度系数

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试剂、试剂盒
实验步骤材料与设备
待染色的聚丙烯酰胺凝胶
甘油 (4%;v/v)
干胶器
Whatman 1 号和 Whatman 3 MM 滤纸
溶液
染色液
高甲醇脱色液
标准 (低甲醇) 脱色液
操作程序
1) 凝胶置约 100 ml 染色液中染色。室温下,在平台摇床或旋转平台上孵育至少 20 min。
2) 弃去染色液(小心,它很容易溅出),用约 100 ml 高甲醇脱色液洗胶板。
3) 于100~200 ml 高甲醇脱色液中脱色。当脱色液的颜色与胶的颜色一样深时更换脱色液,约需 2?3 h。脱色液一般要换 3?4 次,通常至大部分蓝色褪尽为止。
4) 凝胶置约 100 ml 标准(低甲醇)脱色液中 4?6 h 或过夜,使之完全脱色。至此,胶板的本底应基本清洁。胶板在脱色液中时间过长(数日至数周),会使染上色的蛋白质带的顔色变浅。脱色后,胶板应保存于室温、蒸馏水中。
5) 凝胶在甘油(4%;v/v) 水溶液中平衡至少 60 min(乙酸往往会使干胶器和真空泵不能正常运转,甘油有助于使胶板在千燥时不干裂)。至此,胶板可长时间地保存于 4°C 或用干胶器干燥。
6) 干胶方法如下。