细胞培养中常见的污染情况、可能原因、 细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法 细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下: 1、细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形, 培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。 仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够!尤其是和储存 培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意!下次 使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象! 可在培养液中加相应的抗生素处理 2、霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37 度孵箱培养 2-3 天,仍清亮,但出现 絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长 之后,细胞的活力状态变差, 用硫酸铜溶液擦拭 CO2 孵箱内, 再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。 或者在培养箱的托盘加 入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。 CO2 孵箱被霉菌污染后, 可把所有细胞暂时转移, 采用过氧乙酸擦洗孵箱 (包括隔板, 箱壁) 。 并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后,再移入细 胞。孵箱应定期清洁(2 月左右),尤其在多雨的季节。 其它培养箱清洗方法是:用 84 液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外灯照。 预防霉菌污染, 可在培养基里加 3u/ml 的两性霉素或制霉菌素或放线菌素 D 或双抗; 但细胞 一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素 D 或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞。, 将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只 是个别污染,可能是操作问题,就要注意操作 3、支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清 很多都没有做支原体阴性检测, 而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。 而且它不能用过 滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。 用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应。Sigma 公司的使用 时用 50ug/ml Tylosin 培养液培养 6 天或连续传两代即可清除支原体污染。 如果作为常用的 抗生素的话, 建议用 8ug/ml 的浓度。 4、黑蛟虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色 的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生 长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一 批号的血清养的细胞中发现类似现象。 对细胞生长状态不会有明显影响, 在细胞增殖旺盛之 后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增 加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率。 5、真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是 它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状 物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染 了,也很难救活了。 6、原虫:培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽 然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与 细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所 以不会影响到细胞的正常生长, 只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长, 最终 形成恶性循环。 污染的可能原因: 污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等 关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中(不加细胞),37 度试培养一段时间后观察。 如果没有细菌生长 就是操作的问题。 也可以在培养基中事先加入双抗(硫酸链霉素和氨苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状 态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果。 1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射,并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内 的水应是三蒸水 2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素 3、超净台的风机不能过大,风机到 6-8 格。否则也可能能致霉菌污染 4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水喷洒中和,约几小时即可进入操作。