板蓝根抗病毒研究 郑喆姣 (上海中医药大学 上海浦东新区 201203) 摘要:板蓝根为十字花科菘蓝属植物的干燥根,具有清热解毒、凉血利咽的作 用,本文从其化学成分、抗病毒机理、相关实验讨论板蓝根的抗病毒作用。 关键词:板蓝根 抗病毒 流感病毒 化学成分 最近,甲型 H7N9 禽流感在内地蔓延,江苏省、甘肃省等地方卫生厅提出 了中药防治禽流感,其中包括了板蓝根,遭到了许多砖家和民众的质疑,板蓝 根,别名靛青根、蓝靛根、靛根,为清热解毒之常用中药[1],板蓝根为十字 花科菘蓝属植物 Isatis indigotica Fort 的干燥根,具有清热解毒、凉血利咽的作 用[2],用于温病发热、发斑、风热感冒、咽喉肿烂、流行性乙型脑炎、肝炎、 腮腺炎[3],本文将从化学成分,抗病毒机理,相关实验讨论板蓝根的抗病毒 作用。 1. 化学成分: 板蓝根水提液浸膏,加适量蒸馏水溶解 ,经 D101 大孔树脂 ,依次用 水 、20%乙醇 、80%乙醇洗脱。水洗脱部分依次于碱性条件下用氯仿萃取,于 酸性条件下用正丁醇萃取。80%乙醇洗脱部分得到化合物 I、VI,正丁醇萃取部 分得到化合物 II、III、IV,氯仿萃取部分得到化合物 V。化合物 I:无色针晶, 为( +)-异落叶松树脂醇;化合物 II:棕红色油状物,为 5-羟甲基糠醛;化合 物 III: 无色片状结晶, 为 5-羟甲基糠酸; 化合物 IV: 无色针晶, 为 n-丁基-β-D吡喃型果糖;化合物 V:无色针晶,为表告依春;化合物 VI:无色方晶,为蔗 糖。[1] 2. 药理作用:板蓝根具有抗病原微生物作用,板蓝根的清热解毒功效主要体现 在治疗急性感染性疾病。细菌、病毒等病原体是感染性疾病的病因,大量的实 验证实板蓝根具有广泛的抗病原微生物作用,板蓝根还有抗内毒素作用,解热 作用,抗炎作用,抑制血小板聚集,对特异性免疫、非特异性免疫、体液免疫 和细胞免疫均有一定的促进作用[2],临床用于治疗防治流行性乙型脑炎,防 治流行性腮腺炎,治疗感冒,包括流感,治疗传染性肝炎等[3]。 3. 抗病毒活性成分:采用鸡胚法将病毒作 1:100 稀释后,取 2ml 分别加药物水 剂 2ml 和对照组生理盐水 2ml, 混合后在 37C 下作用 2h,随后接种鸡胚,每组 4 只, 每只接种 0.25ml 混合液,于 37C 继续孵化 3d 后,再分别收取尿液,进行血凝试验, 测定各不同样本的实验组和对照组流感病毒的血凝效价。以血凝效价为指标 ,对 它们进行抗病毒活性检验。 (1) 以药材水煎液、 醇提物及总生物碱为实验组, 阳 性组为利巴韦林,每组重复五管。(2)以靛玉红、2,4(1H,3H0 喹唑二酮 、 表告依春及生物碱提取物为实验组,每组重复五管。 实验结果表明水提物、醇提物、总生物碱具有 较强抗流感病毒作用,且作 用强度相近;靛玉红无抗流感病毒作用,喹唑二酮略有抗流感病毒作用, 表告依春 及生物碱提取物两组有明显的抗流感病毒作用[4]。 4. 抗病毒机理: 目前对板蓝根的活性成分和作用机制研究主要集中于抗内毒素、 抗炎和抗肿瘤等方面,其抗病毒成分和作用机制尚无定论。 有一个用人红细胞毛细管电泳法,表明板蓝根水提物抑制流感病毒结合到 红细胞表面的作用过程中,占主导地位的是板蓝根对红细胞本身的保护作用, 据此可以推断,板蓝根抗病毒的机制之一可能是板蓝根中的有效成分结合到红 细胞的膜表面,阻断了流感病毒与膜表面的唾液酸的结合,从而防止病毒对宿 主细胞的攻击,达到预防和治疗流感病毒感染的目的。鉴于板蓝根中亦含有对 病毒直接灭活和阻止病毒基因复制、蛋白组装的成分,上述机制在体内也可能 是与其他机理共同起作用而发挥板蓝根的多靶点抗病毒作用。[5] 另有一个通过 MTT 法研究受 HSV—I 感染细胞的活性, 初步确定提取药物 保护细胞.抑制病毒生物合成。推测板蓝根分离成分可能对早期 HSV-1 的 DNA 复制具有抑制作业,在防控病毒感染的初期具有更好的效果。[6] 5. 相关药效实验: 1.板蓝根对甲型 H1N1 小鼠的实验 1.1 材料:板蓝根颗粒,阳性对照品达非,A(H1N1)2009 病毒株,经无特殊 病原体鸡胚增殖后收集病毒尿囊液,SPF 级雌性 BALB/c 小鼠,4~6 周龄(体 重 18~20g) 1.2 分组:将 80 只 4~6 周龄雌性 BALB/c 小鼠随机分为 对照组、模型组、达 菲组、板蓝根组 4 组,每组 20 只, 每组 10 只用于观察受试药物对甲型 H1N1 流感病 毒感染小鼠死亡的保护作用,另 10 只用于观察受试 药物对甲型 H1N1 流感病毒攻毒后小鼠肺组织炎症 改善作用。 1.3 实验动物模型:将病毒液通过滴鼻途径感染小鼠,每只小鼠的接种剂量为 50μL,建立甲型流感病毒小鼠模型,对照组小鼠经鼻腔滴入等量的生理盐水 1.4 给药:板蓝根组的给药量为 4. 67 g/(kg· d) (参照临床剂量),达菲组的给药量 为 0. 03 g/(kg· d)。板蓝根组攻毒 2 h 后灌胃给药 200 μL、达菲组 攻毒 2 h 后 灌胃给药 200 μL,正常对照组及模型组 灌胃给予生理盐水 200 μL,每日 1 次, 连续用药 5 d。 1.5 观察:共观察 14 天,记录小鼠的死亡数及生存天数,并计算存活率及延 长生命率,在第五天处死小鼠,取肺组织做病理检查。 1.6 结果与结论:通过实验,板蓝根可明显降低甲型 H1N1 流感病毒感染小鼠 的死亡率,延长小鼠的存活天数(P<0.05),通过病理检查,板蓝根颗粒组部分 动物肺脏病变范围较模型组 小 , 病变程度与模型组基本一致 , 但其数量较阳性 药(达菲)组少,其余动物与模型组病变范围与程度基本一致。板蓝根组可 明显延 长甲型 H1N1 病毒感染小鼠的存活天数 , 提高存活率 , 与模型组比较差异显著 (P<0.05),提示 板蓝根颗粒对甲型 H1N1 病毒感染所致肺部病变具有减轻作用。 [7] 2. 板蓝根对柯萨奇病毒抑制作用的研究 2.1 材料与分组: 人宫颈癌传代细胞 (Hela 细胞) , 病毒株 CB4V (MK5P8 株) , 板蓝根 1:5 水煎液,研究对象分为实验组与对照组,实验组又分病毒药物直接作 用组(实验 A 组)、细胞培养同时加病毒与药物组(实验 B 组)、先加药物后 加感染病毒组(实验 C 组)和先感染病毒后加药物组(实验 D 组)。对照组又 分为~ela 细胞对照组(对照 A 组)、板蓝根对照组(对照 B 组)和 CB4V 对 照组(对照 C 组)。 2.2 方法: 实验 A 组:CB4V 与板蓝根水煎剂(100?l)在细胞培养板内直接作用 2 h,再 移入另一含 Hela 细胞的培养板内, 作用 30 min 后更换培养液, 同时设对照组。 在 37C、5 CO2 培养箱中培养 6 d,逐日观察 Hela 细胞病变。 实验 B 组:CB4V 与板蓝根水煎剂(10?l)同时加入含有 Hela 细胞的培养板 中,吸附 1 h 后更换培养液,同时设对照组。培养条件同上,逐日观察 Hela 细 胞病变。 实验 C 组:将板蓝根水煎剂(10?l)先加入含有 Hela 细胞的培养板中作用 24 h 弃去,再加入 CB4V 作用 30 min 后更换培养液,同时设对照组。培养条件、时 间同上,逐日观察~ela 细胞病变。 实验 D 组:先将 CB4V 加入含有 Hela 细胞培养板中作用 30 min 后弃去,再 更换含有板蓝根水煎剂的培养液培养,同时设对照组。培养条件、时间同上, 逐日观察 Hela 细胞病变。 用抑制病毒复制指数测定,实验组对数值比对照组减少 2 个对数(>2) 视为有抑制作用。 2.3 结果:实验结果表明,板蓝根水煎剂具有直接抑制 CB4V 作用,若先加板蓝 根水煎剂后再加 CB4V 可以明显抑制其生长,板蓝根水煎剂抑制 CB4V 的复制 指数为 2. 75 ( > 2.00) , 其结果表明板蓝根水煎剂在细胞水平具有明显抑制 CB4V 的作用。 通过讨论,可发现板蓝根确实有抗病毒作用,但是机制并不明确,但是对 H7N9,目前没有研究,也没有查到相关研究,因此无法确认板蓝根对人感染 H7N9 的预防有效。这次疫情还是新生事物,现有药物对其预防和治疗的效果, 全世界都还没有什么研究。因此,不建议盲目服用板蓝根。 参考文献: 1.张润珍 张玉文 板蓝根的研究进展[期刊论文] 中草药 2000/06 2.徐晗 方建国 刘云海 板蓝根最新研究进展[期刊论文] 中草药 2003/4 3.崔树玉 薛原 杨建莉 郝坚 板蓝根研究进展[期刊论文] 中草药 2001/07 引证文献: 1. 刘海利、吴立军、李华、王军 板蓝根的化学成分研究[期刊论文] 沈阳药 科大学学报 2002/3 2. 胡娅 方建国 刘云海 板蓝根的药理作用与临床应用[期刊论文]医药导报 2005/10 3. 林丽鹃 板蓝根的现代药理与临床应用研究[期刊论文]中国医药指南 2010 /6 4. 徐丽华 黄芳 陈婷 吴洁 板蓝根中的抗病毒活性成分[期刊论文]中国天然 药物 2005,3(6) 5. 陈智伟、吴灵威、刘树滔、蔡春平、饶平凡、柯李晶[期刊论文]