一毛云星5101520浓度( m g/L)多一+HFM PA;+6-CBO;+HPFM PA;+恶唑酰草胺图3恶唑酰草胺及其代谢物的标准曲线Fi g.3The standard curve ofm etam i fopand i ts m etabol i tes3讨论3.1检测波长的选择对恶唑酰草胺及其3种代谢物的乙腈溶液分别进行紫外扫描,得H FM PA的A⋯ =223 am 、6一CBO的A。,=234 nm 、H PFM PAd的A。。;=225 nm 、恶唑酰草胺的A。。。=238 nl Tl 。分析紫外吸收光谱图,在224ni Tl 处恶唑酰草胺及其3种代谢物均有很好的吸收,而且灵敏度高,故兼顾4者选择224 hi l l 作为恶唑酰草胺及其3种代谢物的最佳检测波长。3.2流动相配比的选择常用的流动相为甲醇/水一驯或乙腈/水¨ 卜” 1,本研究在Ecl i pse XDB.C,。色谱柱上,选用了不同比∞柏加O∞∞∞∞∞∞∞∞042O8642 万方数据 江苏农业学报2010年第26卷第1期例的甲醇+水、乙腈+水、乙腈+甲醇+水作为流动相,对样品进行分离度试验,同时尝试在流动相中加入少量四氢呋喃或磷酸来改善峰形以及4种化合物之问的分离,但是流动相中加入四氢呋喃或者磷酸的效果并不理想。结果表明,用乙腈+水作流动相泵的操作压力低,色谱峰尖锐,分离时间短,并且分离效果较甲醇+水和乙腈+甲醇+水好。由于恶唑酰草胺与其3种代谢物之间的极性差异,导致恶唑酰草胺的保留时间太长,而其3种代谢物出峰又较早,并且保留时间彼此比较接近容易造成出峰重叠,因此表2恶唑酰草胺及其代谢物的添加回收率( n=5】Tabl e 2Recoveryrates ofm etam i f opand i tsm etaboH tes( 一=5)采用等度洗脱很难找到一个适宜的溶剂强度使极性相差很大的这4个化合物在合理的时间内全部流出色谱柱,并具有良好的分离度。所以,采用梯度洗脱不但使保留时间比较接近的3种代谢物能够很好地分离,而且能避开样品中杂质的干扰。为了在达到有效分离的情况下尽可能缩短分析时间,可在洗脱14m i n后将乙腈比例加大至75%,使恶唑酰草胺能较快出峰( 出峰时间为22.8 rai n),峰形尖锐,并且基线比较平稳,与其他杂质峰没有重叠。3.3样品前处理方法的优化3.3.1提取溶剂的选择根据恶唑酰草胺及其3种代谢物的性质,水样中分别选用二氯甲烷和乙酸乙酯进行液一液萃取。结果表明,使用二氯甲烷作提取溶剂时样品的添加回收率高于乙酸乙酯,提取液中的杂质峰较少,对目标峰无干扰,并且液一液萃取过程较简单,故选择二氯甲烷作为水样的提取溶剂。土壤、稻秆、糙米、稻壳样品分别选用丙酮一水、甲醇一水、乙腈一水的混合液进行振荡提取,试验结果表明,前2种提取剂对样品中的色素、脂类等杂质提取较多,而选用乙腈一水的混合液作提取剂可大大降低色素等杂质的提取量,既减少了杂质的影响,又具有较高的回收率。3.3.2净化方法的选择在农药残留测定中,常用的净化方法有液一液分配法、柱层析法、固相萃取( SPE) 法等一4。8。液,液分配法简单,但对植物样品的净化效果较差,因为稻秆、糙米和稻壳样品提取液中干扰杂质太多。本研究曾用c,。( 500 m g) 固相萃取小柱,以甲醇/水的体系进行淋洗,但不能从柱上完全洗脱恶唑酰草胺,回收率不理想。本研究选用硅胶柱层析进行净化,根据恶唑酰草胺及其3种代谢物的极性选用了二氯甲烷-丙酮、二氯甲烷一甲醇混合液进行淋洗试验。结果表明,二氯甲烷一甲醇混合液虽然能将恶唑酰草胺及其3种代谢物淋洗下来,但由于甲醇为强极性溶剂,淋洗下来的杂质对样品的干扰严重,影响样品的回收率;而采用二氯甲烷一丙酮混合液淋洗效果较好,反复试验,最后确定采用二氯甲烷:丙酮( 体积比8:2) 20 Il l l 洗脱,不但净化效果比较理想,而且4种化合物均得到了比较满意的回收率。