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组织切片伴随着显微镜技术和免疫实验等的发展已经得到广泛的认同和应用。其中各种组织切片方法的操作步骤和应用范围各不相同,本文对其中的石蜡切片、苏木精染色、结缔组织染色等方法进行介绍。
(一)常规石蜡切片的制备:
(1)取材与固定:切取组织时应使用锋利的刀、剪,切取组织块时,从刀的根部开始向后拉动切开组织。组织块的厚度约为0.2~0.3cm,大小为1.5cm x 1.5cm x 0.3cm为宜。取好的组织块用10%福尔马林溶液固定24~48h。
(2)包埋:先经梯度乙醇脱水后用二甲苯透明,然后入溶融的石蜡中浸透每次30min,共3次;再包埋。
(3)切片:包埋好的石蜡块即可进行切片;切片的厚度为5μm左右。
(二)苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色方法:
(1)脱蜡:主要用二甲苯脱蜡。
(2)梯度乙醇水化。
(3)自来水冲洗。
(4)苏木精染色:水化后的切片放入苏木精染液中浸5~20min,染细胞核 。自来水冲洗3~5min。
(5)1%盐酸乙醇分化5~30s。自来水冲洗1~3min。
(6)弱碱性水溶液返蓝30s~1min。自来水充分冲洗5~10分钟。
(7)伊红染色:充分水化后的切片直接入伊红染色液中,染细胞质5~15min左右。
(8)梯度乙醇脱水。
(9)二甲苯透明。
(10)中性树胶封片。
二、组织化学及免疫 组织化学技术
(一)组织化学(histochemistry):一般称为特殊染色,基本原理是通过应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显色试剂,定位地显示组织细胞的特殊化学成分并保持原有的形态学改变,对一些代谢性疾病的诊断具有一定的参考价值。通过光镜或电镜观察,可以检测组织切片内的蛋白质、糖类、脂类、酶类、核酸与某些金属元素等。
1.过碘酸雪夫氏染色(periodic acid-schiff stain,PAS染色):过碘酸是一种氧化剂,它能氧化糖类及有关物质中的1.2乙二醇基使之变为二醛,醛与Schiff氏试剂结合,形成红色的取代色素而得到定位。PAS染色可显示糖原、中性黏液物质、基底膜、软骨、垂体、霉菌及寄生虫等物质。是广泛应用的染色方法。在肾小球肾炎时PAS染色可显示基底膜和系膜区的改变。