吸光度也可以用参考样品与未知样品之间的强度比来计算。计算公式为A = log10(Io/I)。[4]强度可以用分光光度计测量得出。溶液的吸光度会根据通过溶液的波长的变化而改变。溶液对某些波长的吸收能力会强于其他波长,具体取决于溶液的组成。记得说明计算中使用的是哪种波长。[5]
将朗伯-比尔公式变形,求摩尔吸光系数。根据代数原理,我们可以用吸光度除以长度和浓度,使公式的一边变成摩尔吸光系数:ɛ = A/lc。现在,我们可以使用基本公式来计算给定波长的摩尔吸光系数。读数之间的吸光度可能因为溶液浓度和用于测量强度的容器形状而变化。摩尔吸光系数会抵消这些变化。[6]
使用分光光度法取得公式中变量的值。分光光度计是一种仪器,它可以让特定波长的光通过物质并检测透出的光线量。有些光会被溶液吸收,剩下的光会穿透溶液,可以用来计算溶液的吸光度。制备一种浓度c已知的溶液,用于分析。浓度的单位是摩尔或摩尔/升。[7]