? 356 ? 临床与实验病理学杂志 J Clin Ex p Pathol 1999 Aug; 15( 4) 冷冻切片常见问题分析与预防 骆新兰 冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬 度进行切片的一种方法。它是术中诊断的一种重要 方法。但由于各种原因, 影响冷冻切片的质量 , 拖延 病理报告发出的时间, 直接影响着病理诊断的及时 性、 准确性 , 间接影响着病人的预后。归结起来有以 下几方面。 1 切片不全或不能切片 切片不全是指切出的切片组织切面不完整、 有 缺损现象; 不能切片是指组织块的温度过高或过低 不能制作一张完整的切片。切片不全直接影响着冷 冻报告切片的准确性。导致切片不全或不能切片的 常见的原因有几下几方面。 1 1 组织内含过多的脂肪或坏死组织 脂肪或坏 死组织较一般的组织冷冻的温度要低些, 当活组织 达到所需的温度时, 其还比较软, 从而影响切片的完 整性和拖延冷冻报告发出的时间。 1 2 组织块过冷 组织冷冻过度易致切片破碎或 呈粉沫状 , 不能制作一张完整的切片。 1 3 组织块冷冻不均匀 在配合使用液氮时 , 组织 块放入液氮时不能保持水平状态且液氮量不足的情 况下 , 可产生此现象。 1 4 冻头的温度不足 冷冻切片时要求冻头的温 度保持在 - 25 ~ - 30 左右 , 冻头的温度达不到 要求时, 组织很快回软, 也不能保证切片的完整。 1 5 组织块过大 预 防与处理 : 注意组织 的性 质。冷冻切片的组织除了要保持新鲜外, 还应注意 避免组织内含过多的脂肪 ( 脂肪组织除外) 及坏死组 织。 ! 组织大小要适中。冷冻切片机内切片刀移动 的范围有一定的限制 , 超出其范围时 , 易致切 片不 全。一般情况下 , 冷冻切片的组织块大小 1 cm ? 1 cm ? 0 3cm, 但卵巢肿 瘤及脂肪组织 可稍为大些。 另外 , 包埋时, 应将组织平放在冻头的中央。 # 掌握 好冷冻时间。根据组织块的大小、 性质 , 确定冷冻时 间, 一般 13~ 17 s( 使用液氮者) , 若组织较大或脂肪 组织时间可适当长些 , 而甲状腺、 脑组织和淋巴结等 收稿日期 : 1998 03 30 作者单位 : 广东省人民医院病理科 , 广州 作者简介 : 骆新兰 , 男 , 30 岁 , 技师 510080 冷冻的时间相对要短些。 ?保持冻箱的温度。做到 每次做完冷冻切片应关好冷冻箱的盖子。 2 切片皱缩或卷缩 这也是影响切片质量的重要因素之一。常见的 原因有 : ( 1) 刀锋变钝。 ( 2) 防卷板粘有异物, 防卷板 的作用是防止切片卷缩 , 但若粘有异物, 切片时组织 会被挤压而缩在一起。 ( 3) 防卷板与刀锋的位置不 平行、 不协调。( 4) 组织块包埋不完全, 缺乏支撑作 用。预防与处理的方法 : 注意检查刀具 , 及时更换 刀口, 定期磨刀。 ! 保持防卷板的清洁, 每做一例冷 冻切片 , 均应将刀口及防卷板拭擦干净, 防止切片的 污染和切片皱缩。 # 调整刀、 防卷板的位置, 保证两 者平行, 且防卷板比刀锋前 0 2 mm 左右。 ?包埋 组织应完全 , 没法切片者再滴加包埋胶。 3 切片脱落 冷冻切片是利用温度差 ( 即玻片与组织切片的 温度差 ) 将切片粘贴在玻片上, 然后进行固定、 染色。 下面几种情况下可影响切片粘贴的牢固程度 , 而导 致切片脱落 : ( 1) 组织内含过多的坏死组织。组织细 胞坏死崩解后, 局部的渗透压升高 , 吸收水分 , 切片 一经固定, 水分逸出 , 坏死组织失去支撑作用 , 染色 时组织容易脱落。 ( 2) 固定液浓度过低, 这是最常见 的原因。( 3) 载玻片不干净。( 4) 切片太厚。预防及 处理方法: 避免组织内带有坏死组织, 条件允许者 重新取材 ; 若没有组织可代替, 切片固定时间长些, 经 95% 乙醇双重固定后 , 用电吹风将切片吹干 ( 温 度不能过高 , 以防破坏组织结构 ) 然后再行染色且动 作应轻柔。 ! 定期更换 固定液。一般 每周更换一 次 , 例数较多者 , 适当增加次数; 另外 , 每次做完冷 冻 , 应及时将盛固定液的瓶盖盖好, 以防固定液挥发 而降低其浓度。 # 保持载玻片干净, 平时应将玻片 盖好 , 防止灰尘或其它异物的污染。若新购买的玻 片较脏 , 洗涤过后才使用。 ? 调好切片的厚度, 切片 厚度以 5~ 7 m 较为合适 ( 脂肪组织可稍为厚些) 。 4 % 结晶水& 现象 它是由于组织细胞在冷冻过程中, 冷冻时间过 长 , 其蛋白质与水所形成的胶体状态受到破坏, 水分 临床与实验病理学杂志 J Clin Ex p Pathol 1999 Aug; 15( 4) ? 357 ? 从胶体状态的蛋白质中分离出来所造成。% 结晶水& 的出现易导致误诊。为防止这一现象的发生, 宜做 到: 配合使用液氮冷冻组织。因为细胞的保存与 致冷的时间有着密切的关系, 致冷所需的时间越长 , 细胞的形态改变越大。普通的恒冷切片机组织冻台 的温度大约 - 30 ~ - 35 , 凝固组织所需时间约 3~ 4 min, 而液氮的温度约为 - 198 , 冷冻组织时 间大约 13~ 17 s, 大大地缩短了冷冻组织的时间, 可 杜绝% 结晶水&现象。 ! 操作者的动作应迅速。笔者 曾在动作迅速程度上做过试验 , 得出的结论是% 结晶 水& 现象的发生率与动作的迅速程度成反比。 5 组织块脱落 冷冻切片一般要求在 30 m in 内发出病理报告 , 以便手术医生能尽快选择手术方式。但若组织块脱 落 , 会拖延病理报告发出的时间 , 而耽误病人的手术 时间。常见原因有 : ( 1) 冻头在冷冻机内放置时间过 长 , 致使包埋胶还来不及渗到冻头的底部便凝固了, 导致包埋胶与冻头粘连不紧 , 稍受外力的作用便脱 落 ; ( 2) 冻头上的包埋胶冲洗不干净。 总之, 要制作一张优质的冷冻切片, 除了要求医 生要注意取材外, 技术人员必须加强责任心, 做好日 常的检查工作和预防工作, 力争做到防患于未然。 关键词 冷冻超微组织切片术 R446; R361 2 文章编号 1001 7399( 1999) 04 0356 02 中国图书分类号 文献标识码 A 甲状腺恶性纤维组织细胞瘤 1 例 1 史东宏 2 孟 刚 Weiss 等报道 , 在 200 例 M FH 中 , 发 生在下 肢者 98 例 , 腹 膜 后和腹腔者 31 例 , 躯干 19 例 , 头颈 6 例 , 其它 部位 9 例 。作 者复 习 了 M EDLI NE ( R ) ( 1987 ~ 1997 年 ) 报 道 的 甲 状 腺 M FH 共 7 例 , 其中转 移性 的 4 例 , 原 发 2 例 , 继发 1 例。 在 A ckerman 等 统计甲状腺 转移肿瘤 中 , 以 恶性黑色素 瘤、 乳腺 癌、 肾癌、 肺癌最常见 , 肉瘤转移较少 , 其中以 M FH 转移率 较 高。一些作者认为原先 存在 疾病 的甲状 腺组 织容易 发生 肿 瘤转移。本例患者未发现其它部位 M FH, 且有多年病史。 目前人们对该肿瘤细胞多形性仍未 达成共识 , 多数学 者 认为 M FH 中的纤维母细胞和组织细胞都来自未分化的间 叶 细胞。本例中也 见到 三者之 间过 渡移 行区 , I noue 也 认为 前 二者具有共同的组 织细胞 性质。 对于甲 状腺 肿瘤内 见到 席 纹状结构及细胞呈多形性 , 本 人认为即应 考虑 M FH, 但需 与 未分癌鉴别。未分化癌由不同比例梭形、 多边 形和巨细胞 组 成 , 但一般以梭形和巨细胞为主 ; 该肿瘤 中常混合 多种成分 , 包括鳞状细胞和肉 瘤灶 , 例如 纤维 肉瘤、 M FH 等 , 如 能证 实 有上皮成分 , 应分类为未分化癌 , 即使出 现特殊肉瘤 分化 , 亦 不称为癌肉瘤。本例中上皮标记 keratin( - ) , 并参考纪小 龙 ( 常见肿瘤反 证法 参 考抗 体表 ) 进 行标 记 , 结 果与 该表 相 吻 合。本人认为鉴别 M FH 与 未分化 癌应多 取材 , 有条 件可 做 电镜观察 , 网状纤维染色是一种 切实可行的 方法。未分化 癌 嗜银 纤维癌细胞间 阴性 或包绕 癌巢 周围 , M FH 细胞 间嗜 银 纤维 阳性 , 有时甚或 包绕 每个 癌细胞 , 本 例中 细胞间 有丰 富 的嗜银纤维。 关键词 甲状腺肿瘤 ; 纤维组织细胞瘤 ; 病例报道 中国图书分类号 R581 3; R736 1 247100 患者女 , 63 岁。发 现右 颈部 包 块缓 慢 性生 长 30 余年。 体检 : 双侧甲 状腺 明 显增 大 , 肿 块表 面光 滑 , 与 周围 组 织 界 清 , 质偏韧 , 未闻 及血 管杂 音。肿 块随 吞咽 上下 移动。 B 超 示右甲状腺不均质实性占位 , 肿块向 左侧推移气 管及左甲 状 腺 , 使之偏移。临 床诊断 : 右 侧甲 状腺腺 瘤。术 中见 肿块 位 于右侧甲状 腺 , 瘤体 与甲 状腺腺 体连 为一 体 , 分离至 最底 部 时见瘤体与气管相连 , 行瘤体切除。 病理检查 灰白结节状标本 , 大小 10 5 cm ? 10 0 cm ? 8 0 cm, 质硬、 包膜 完整。 切面 灰 黄、 灰白 , 部分 区 域坏 死。 镜下 : 瘤细胞呈 多形性 及席 纹状结 构。主要 由成 纤维 细胞、 组织细胞、 巨 细胞、 泡沫 细胞 组 成 , 并有 不 等量 的炎 细 胞 浸 润。成纤维细胞 呈细 长梭 形 , 多 排列 成席纹 状结 构 , 部分 呈 束状。组织细胞呈短梭形或 多角形 , 胞 质丰富 , 淡伊红色 , 细 颗粒状。细 胞核卵圆 形 , 核膜 增厚 , 核仁 明显。 多数 区域 可 见到散在或聚集成簇的黄色瘤细胞和 多核巨细胞。 此外 , 还 可见一些难以分类的幼稚细胞 , 核浆 比例较大 , 核深 染 , 似 原 始间充质细胞 , 在组织细胞及成纤维 细胞之间存 在过渡形 态 的细胞。瘤组织中核 分裂 象偶 见。网状纤 维染 色显 示瘤 细 胞间有丰富的网状纤维。 免疫组 织化学 染 色显 示 : V im ( + ) , keratin ( - ) , desmin ( - ) , SMA ( - ) , myoglobin( - ) , lysozy me( + ) 。 病理诊 断 : 右甲状腺 恶性纤 维组 织细胞 瘤 ( malignant fi brohistiocytoma, M FH) 。 讨论 M FH 可发 生 于 任 何 年 龄 , 多 见 于 软 组 织。 据 收稿日期 : 1998 08 10 作者单位 : 1 安徽省池州地区医院病理科 ( 进修医师 ) 2 文献标识码 A 文章编号 1001 7399( 1999) 03 0357 01 安徽医科大学附院病理科 , 合肥 230032