将测序结果与NCBI中已知菌株进行比对。1.2.4 产蛋白酶菌株发酵条件的优化
(1) 碳源对菌株产蛋白酶的影响
在初始发酵培养基中分别添加1% (质量体积比)的葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、淀粉为碳源,目标菌株在28 ℃、200 r/min振荡培养24 h,测定蛋白酶活力。培养基中添加不同浓度(1.0%、1.5%、2.0%、3.0%、4.0%、5.0%)的最佳碳源,同上条件培养,测定蛋白酶活力。
(2) 氮源对菌株产蛋白酶的影响
选择蔗糖为碳源,培养基中分别添加1% (质量体积比)的干酪素、牛肉膏、蛋白胨、硝酸钠、硫酸铵为氮源,同上条件培养目标菌株,测定蛋白酶活力。培养基中添加不同浓度(0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、3.0%、4.0%)的最佳氮源,同上条件培养,测定蛋白酶活力。
(3) 金属离子对菌株产蛋白酶的影响
选择蔗糖为碳源、蛋白胨为氮源,培养基中分别添加0.5% (质量体积比)的Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+、Fe2+、Fe3+,同上条件培养目标菌株,测定蛋白酶活力。培养基中添加不同浓度(0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%)的最佳金属离子,同上条件培养,测定蛋白酶活力。
(4) 培养温度对菌株产蛋白酶的影响
调节培养温度,目标菌株分别在22、25、28、31、34、37 ℃振荡培养24 h,测定蛋白酶活力。
(5) 摇床转速对菌株产蛋白酶的影响
目标菌株分别在摇床转速为170、200、230 r/min的条件下振荡培养24 h,测定蛋白酶活力。
(6) 初始pH值对菌株产蛋白酶的影响
调节培养基pH值,目标菌株在初始pH值为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0的培养基中振荡培养24 h,测定蛋白酶活力。
(7) 接种量对菌株产蛋白酶的影响
种子液接种量分别为1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%,目标菌株振荡培养24 h,测定蛋白酶活力。
(8) 营养条件正交实验设计
发酵条件优化基础上,采用L9(34)正交表进行正交试验,研究碳源、氮源、金属离子对目标菌株产蛋白酶的影响。每个处理设定3个重复。正交试验设计表见表1。
表1 XC2营养条件优化的正交试验设计T