公式是根据测量结果自己算出来的:
考马斯亮蓝比色法是由Bradford等人建立 的1种测定微量蛋白质的方法L5],考马斯亮蓝所含疏 水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力,通过疏水作用与蛋白质相结合,形成的蓝色蛋白质一染料复合物,在595 nm处有最大吸光度,复合物1 h内保持稳定.在一定的蛋白质浓度范围内,蛋白质一染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质含量的测定.
测定时,用同一种标准蛋白(自己选,如牛血清白蛋白,所选的标准蛋白最好是纯化的待测蛋白——但这是理想状态,一般选择氨基酸构成与待测蛋白相近的标准蛋白.否则将影响测定结果)配制成覆盖待测样品蛋白浓度的标准蛋白溶液,然后加等量考马斯亮蓝G-250,混匀后用紫外分光光度计测定个标准蛋白样品的吸光值.并测定待测样品(可稀释成几个不同浓度的样品同时测)的吸光值.所有样品重复测三次.
最后以蛋白标准溶液浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘制标准曲线.计算出回归方程.如Y=aX+b
让后把待测样品的吸光值代入回归方程,算出待测样品浓度.
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