培训人: 无菌的概念 什么是无菌?  理论上:无菌=没有任何活的微生物  实际上:我们无法证明产品中没有活微生物存在 无菌的概念  最终灭菌无菌制剂:微生物存活的概率达到10 -6 ,即保证一百万个已灭菌物品或制剂中存活的微生物数低于一。  非最终灭菌无菌制剂:目标是零生长,但在污染率低于0.1%,可信度在95%时是可以接受的。 我们如何做到“无菌”? 无菌生产工艺 什么是无菌生产工艺?  产品、容器和密封件分别进行灭菌,然后进行灌封  在极高洁净环境下进行灌装和密封  产品在最终容器中不再做进一步的灭菌处理  对各个组成部分的灭菌工艺需要进行严格验证和监控  在灌封前和灌封过程中的操作会带来污染风险 什么是无菌生产工艺?  生产环境(洁净区、人员)  药液制备和过滤  药液除菌过滤前的微生物负荷  过滤器完整性测试和验证  生产设备和内包装材料的准备和灭菌  灌装过程  无菌工艺过程验证 作业环节 验证难易度 人员依赖程度 相关风险 灭菌 易 低 低 房间设计 N/A N/A 中等 环境监测 中等 可变 高 消毒 难 高 高 更衣 难 很高 很高 物品转移 难 高 高 无菌技术(灌封) 难 很高 很高 无菌装配 难 很高 很高 作业环节与风险  无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之一,确保产品无菌是该工艺最大的难点  减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措施 人员培训 无菌工艺验证 为何要进行培养基模拟灌封? 一、定义  使用培养基模拟药品进行无菌灌封,对无菌工艺进行验证,又称为“工艺模拟试验”。  目的  证明生产线采用无菌工艺生产无菌产品的能力  对人员进行资格确认  符合GMP的要求 二、试验前的准备工作  设备确认  通风系统、水系统的验证  设备的清洗和消毒 CIP,SIP  灭菌工艺验证  湿热、干热灭菌工艺  除菌过滤的验证  空气过滤器的完好性检测  容器、胶塞密闭性测试  人员培训  洁净室环境达到设计要求 三、培养基灌装原则  通常情况下,应该包括产品实际操作过程中可能发生的“最差条件”  最差条件:高于或低于正常范围的条件限度,与正常生产条件相比最有可能造成工艺或生产失败的条件。 四、需要考虑的关键因素  起始步骤  试验的次数和频率  培养基及培养条件  灌装数量  容器体积  灌装体积  灌装速度  灌装过程的持续时间  人员和工作班次  环境监测措施  干预措施  容器的检查  培养方法  可接受标准  污染调查 1.起始步骤  从配制开始 从液体配料开始,需要更多量的培养基,考察的最全面。  从除菌过滤前开始 考察的内容包括除菌过滤系统,考察较全面,培养基不需要灭菌,需要考虑生物负荷。  从除菌过滤后开始 只考察灌封等操作过程,培养基需要事先灭菌。 新版GMP第四十八条:。。。应尽可能模拟常规的无菌生产工艺,并包括所有对结果有影响的关键生产工序。。。 2.试验的次数和频率  培养基模拟试验的初始验证,至少需要成功的连续进行3次独立的模拟试验(建议在不同的工作日进行试验)。  首次验证后,培养基模拟试验通常每年进行2次,每次进行1批即可。  当生产线发生变更,并且经过评估可能对无菌生产工艺有潜在危险时,应当进行额外的培养基灌装试验。 3.培养基的选择  培养基必须适应广谱微生物的生长,包括需氧菌、酵母菌和霉菌(非选择性培养基)。  较好的澄明度,较小的粘度,易于除菌过滤。  推荐使用大豆消化酪素琼脂培养基(SCD) ,以及大豆胰蛋白胨肉汤(TSB)。  如果产品在缺氧条件、通常在氮气保护下灌装时,或在环境中分离出厌氧菌时,可能需要使用厌氧培养基:液体硫乙醇酸盐培养基(FTM)。  培养温度:全部样品应在20-35 (±2.5)℃下培养14天。通常在20-25℃下培养7天,然后在30-35℃下培养7天;或者在30-35℃培养7天后,再转移到20-25℃培养7天。  原则:选择的温度适宜那些从环境中分离的微生物或生物负荷中的微生物的培养。 4.培养条件 5.灌装数量  灌装的数量应该能够真实的反应批量;但允许根据需要,采取最低灌装数量,前提是应足以反应操作员工疲劳时对产品质量潜在的影响 ,并且足以体现了尽可能发生的干预措施。  一般生产量小于5000,培养基灌装数量应等同批量;生产量大于5000时,培养基最小灌装数量不少于5000。  一些法规中建议应该根据批量确定灌装的数量。 6.容器体积  应该考虑到灌装容器的极端尺寸。  最大的容器(通常由于充填体积较大而导致最小的充填速度)通常开口较大,所以从环境中微生物侵入的潜在风险是最大的。  最小的容器(通常由于充填体积较小而导致最大的充填速度)体现了最大的操作难度;小的容器更容易破碎,稳定性差,在设备中更容易破裂或堵塞。 7.灌装体积  培养基灌装体积不需要与现实中常规的灌装体积一致。  应确定足够的灌装体积,保证可以充分接触到容器和密封部位的表面(当它倒置和旋转时),并且足以目视检测到微生物在培养后的生长情况。  较小的容器不能灌装的太满,因为容器上部的空间中应保持足够的空气,以支持需氧微生物的生长(通常应该保留25%的空间)。 8.灌装速度  培养基灌装的速度,应符合实际生产的灌装速度范围。如果超过了限度,应该进行评估。  每次模拟试验中确定的速度应该是符合要求的。 在灌装生产线的初始验证中,一次可以选用最低速度,另外二次可以选用最高速度。 在生产线的每年2次的再验证中,模拟试验的速度应该进行变换。 9.灌装持续时间  通常情况,培养基灌装的时间应该足够长,能够包括所有的必需的干扰、生产中断,包括正常的无菌操作如开始前的安装、重量或体积的调整、改变设备或手动维修等,还包括更衣、暂停、换班等,持续时间还应能反映出潜在的人员疲劳。  对于非常大的批量或较长的生产过程,通常使用一些空白样品(空的或者灌水)以维持模拟试验的动态环境。这些技术可以应用于持续多个工作日的工艺验证,用于验证可以批准的最长的生产周期。 10.人员和工作班次  需要进行无菌工艺操作的每个操作员工包括设备工程师和环境取样人员应该每年参加不少于一次成功的模拟试验。  仅仅参加(看)是不够的,操作人员(包括设备安装人员)必须执行他们在正常生产中会进行到的操作 。  应该确定无菌操作间可以最多容纳的操作人员数(n+1)。  当一个企业有多个班次工作时,第二个班次、第三个班次也应该包括在培养基灌装试验的计划中。包括班次的更换、暂停和必要的更衣。 11.环境监测措施  在培养灌装过程中,微生物监测(主动或被动的空气采样、设备表面、人员)以及悬浮粒子监测应该按照日常的操作程序进行。包括间隔期间和不同的人员。  工艺模拟实验中收集到的环境监测数据有利于建立和支持正常无菌操作区域的环境监测的行动限。 12.干预措施  干预措施应该模拟实际运行时可能发生的情况;培养基灌装记录中应该记录所有发生的干预措施,以及被移走产品的数量。  常规的干预措施:对于无菌生产线的安装、拆卸和连接,胶塞供给,移走掉落的玻璃瓶, 移走堵塞的胶塞,人员的停顿,换手套,环境的监测。  非常规的干预措施(意外发生):玻璃瓶破裂,灌装针头的更换或重新安装,装量调整的干预,传感器故障,传输带的调整等。 13.容器的检查  任何灌装的产品都应该在培养前进行检查,发现任何不合格品时,都应该被剔除并记录。  模拟过程最好有全程录像,瓶子或托盘应编号,阳性样品可追溯。每个瓶子都要目视检查,阳性的样品应别标记并移出培养箱。  破损的样品不应包括在对无菌工艺能力的评价中,但破损的来源应被调查和纠正。 14.可接受标准  GMP第四十八条:培养基模拟试验的目标是不出现长菌,且遵循以下原则:  灌装少于5000支时,不应检出污染品;  灌装在5000至10000时: 1支污染需进行调查,并考虑重复培养基灌装试验 2支污染需进行调查,并可即视作再验证的理由  灌装超过10000支时: 1支污染需进行调查 2支污染需进行调查,并可即视作再验证的理由 发生任何微生物污染时,均应进行调查。 15.污染调查 调查的范围应包括  环境微生物监测数据,空气悬浮粒子监测数据  CIP设备,清洁、消毒程序的执行情况  培养基、设备和零件的灭菌工艺,灭菌釜的校正情况  高效过滤器检测  除菌过滤器完好性  房间气流形式与压差  人员操作技术培训情况 调查的范围还应包括  以往产品无菌检查实验结果  人员卫生状况监测数据  培养基灌装实验中的干预方式分析  该区域近期是否有过维修活动,生产线的改造情况  该生产线培养基灌封实验历史数据  已灭菌物品的储存条件  培养基灌封过程中的异常事件  阳性污染菌与环境监测污染菌的鉴别 调查结论与风险评估 一、培养基灌封实验结果有效  暂停生产,直至确定污染来源并采取有效的纠偏措施。  再验证合格后,产品方可放行。  对培养基灌封试验后和此前所生产的产品,进行风险评估,包括对已经放行批次的影响 二、培养基灌封实验结果无效  实施适当的纠偏措施和预防措施  重新进行培养基灌封实验 条件1无菌灌装区的物理条件不满足要求 条件2人员未按照正常生产程序操作 方案的执行与记录  培养基灌封的日期和时间  使用的房间和设备  容器胶塞的型号和尺寸  培养基种类和灭菌方式  每容器中的灌装体积  灌装速度  灌封的瓶数,灯检丢弃的瓶数和原因  培养的瓶数,阳性的数量 方案的执行与记录  培养时间和温度  环境监测的数据  参与培养基灌封的人员  培养基灵敏度检查的结果  有无阳性结果。如有,要给出微生物鉴定的结果  如发生异常情况,需给出调查报告 培养基灌封试验的总结报告  模拟的最差条件  事件表  环境监测报告  微生物鉴别结果  培养基的营养检查实验结果 培养条件、结果读取日、结果读取人、每位参与者的灌装瓶数等信息。 结论(结果是否可以接受) 合格证书 工艺验证/再验证合格证书 人员资格确认证书 最终报告中应包括以下内容: