发明人张海江长期从事麦蓝菜多糖的研究,分别于2011年3月16日、2011年6月3日提交了两份申请(申请号分别为201110072211.2、201110158539.6),公开了麦蓝菜多糖的制备方法及麦蓝菜多糖用于制备治疗前列腺增生或尿路感染药物的用途,并于2013年授权。
发明人发现,先前要求保护的麦蓝菜多糖由于分子量较大,水溶性较差,服用剂量大,影响其成药性能。为此,发明人对麦蓝菜多糖进一步改进,以提高其药理活性和成药性能。
技术实现要素:
本发明的目的是对现有技术进行改进,对麦蓝菜多糖产品进行进一步开发,提供一种水溶性高、服用剂量小、起效快、疗效高的麦蓝菜多糖产品,改善成药性能。
上述目的是通过如下技术方案实现的:
一种麦蓝菜多糖水解物,由麦蓝菜种子多糖水解得到,分子量1.7-50kDa。
进一步地,水解物中多糖含量≥45%。
进一步地,所述麦蓝菜种子多糖用麦蓝菜种子提取得到,多糖含量≥40%。
进一步地,所述麦蓝菜种子多糖通过水提醇沉得到,步骤为:取麦蓝菜种子,加入蒸馏水提取,提取液过滤收集滤液,滤液加热浓缩;搅拌下向浓缩提取液中加入乙醇至乙醇浓度为50-95%,静置或离心,收集沉淀即得。
进一步地,所述蒸馏水与麦蓝菜种子的水料比为5-15mL/g;滤液加热浓缩至浸膏密度为1.05-1.15g/mL;采用热水浸提法提取,浸提温度为60-100℃,浸提1-5次,每次浸提时间为0.5-5小时。
进一步地,所述水解方法为:将麦蓝菜种子多糖溶解于pH值为0.5-3的稀酸中,加热水解,再用碱调节pH至中性,脱盐即得。
进一步地,所述酸为盐酸或硫酸;加热水解的温度为30-45℃,水解时间为10-60分钟。
进一步地,所述碱选自氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠中的一种或多种。
进一步地,脱盐方法选自方法A或B或二者的组合;方法A为:将中性水解液浓缩至干,加入脱盐溶剂震荡洗涤,离心,收集沉淀,重复一至多次;方法B为:将中性水解液浓缩后经纳滤机过滤除盐后减压浓缩至干;所述脱盐溶剂选自甲醇、乙醇或丙酮中的一种或多种。
上述麦蓝菜多糖水解物在制备治疗尿路感染、前列腺增生的药物中的应用,所述药物包括麦蓝菜多糖水解物和药学上可以接受的载体或赋形剂,制成药学上可以接受的剂型。
本发明的有益效果:
已知多糖生物活性与其分子量大小、聚合度以及高级构象等都有关,多糖分子量太大或太小均会引起活性的下降,但本发明提供的麦蓝菜多糖水解物比现有的麦蓝菜多糖具有更强的药理活性,且水溶性高、服用剂量小、起效快,成药性能优异。本发明与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明的技术方案。
实施例1:麦蓝菜多糖水解物的制备
1、实验方法
1.1多糖提取
采用热水浸提法提取麦蓝菜多糖,提取条件为:提取温度100℃,提取时间2h,水料比10mL/g,提取3次,100目滤布过滤,合并提取液,浓缩至浸膏密度为1.05-1.15g/mL,加无水乙醇至浓度约75%,醇沉12h,倾出上清液,再向沉淀中加80%乙醇适量,醇沉8h,5000r/min离心,沉淀经60℃减压干燥后研磨,得麦蓝菜多糖。
1.2多糖水解
将上述麦蓝菜多糖溶解于适量pH值为1的盐酸溶液中,于37℃搅拌水解30min后加入氢氧化钠溶液中和至中性,离心取上清液。上清液减压浓缩后经纳滤机过滤除盐后减压浓缩至干,得浅灰色固体粉末;或上清液浓缩至干,加入甲醇溶解,离心,沉淀复以甲醇溶解,离心,沉淀减压烘干,得浅灰色固体粉末。采用上述水解方法即得麦蓝菜多糖水解物。
1.3多糖含量测定
精确称取麦蓝菜多糖或麦蓝菜多糖水解物100mg于安瓿瓶中,加15mL 2mol/L TFA,充氮气封口后120℃水解4h。取出冷却后,水解液旋转蒸发至干,加约2mL甲醇,再蒸干,如此重复多次,以除去TFA。加少量去离子水,超声溶解,转移至10mL容量瓶中,多次清洗转移,定容,摇匀,经0.45μm微孔滤膜过滤,得酸水解待测液。用移液管量取1mL酸水解待测液于25mL容量瓶中,去离子水定容,摇匀,即为供试品溶液A。
精确称取麦蓝菜多糖或麦蓝菜多糖水解物100mg,加入去离子水超声溶解,转移至10mL容量瓶中,清洗转移,定容,摇匀,经0.45μm微孔滤膜过滤得样品水溶液。用移液管量取1mL样品水溶液于25mL容量瓶中,去离子水定容,摇匀,即为供试品溶液B。参照中国药典2015版和文献报道的DNS法并稍作改进,以葡萄糖为标准品制备标准曲线。精确称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖500mg于50mL容量瓶中,加去离子水至刻度,超声溶解得10mg/mL的标准葡萄糖母液。基于母液配制0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mg/mL的系列葡萄糖标准溶液。用移液枪分别吸取上述浓度的葡萄糖标液2.0mL于25mL具塞比色管中,然后加入DNS试剂4mL,摇匀,置沸水浴加热7min,流水冷却至室温,以去离子水定容。取2.0mL去离子水进行同样的操作作为空白对照,于540nm处测定吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
分别用移液管取2mL供试品溶液A和供试品溶液B于25mL具塞比色管中,定容,摇匀。加入DNS试剂4mL,摇匀,置沸水浴加热7min,流水冷却至室温,以去离子水定容。取2.0mL去离子水进行同样的操作作为空白对照,于540nm处测定吸光度,根据标准曲线,分别计算供试品溶液A和供试品溶液B的葡萄糖含量为CA和CB。麦蓝菜多糖或麦蓝菜多糖水解物中的多糖含量=CA-CB。
1.4分子量范围测定
用分子排阻高效液相色谱法(HPGPC)测定麦蓝菜多糖和麦蓝菜多糖水解物的分子量。
2、实验结果
含量测定结果和分子量范围测定结果如下表。
实施例2:麦蓝菜多糖水解物的制备
1、实验方法
1.1多糖提取
采用热水浸提法提取麦蓝菜多糖,提取条件为:提取温度100℃,提取时间2h,水料比10mL/g,提取3次,100目滤布过滤,合并提取液,浓缩至浸膏密度为1.05-1.15g/mL,加无水乙醇至浓度约65%,醇沉12h,倾出上清液,再向沉淀中加70%乙醇适量,醇沉8h,5000r/min离心,沉淀经60℃减压干燥后研磨,得麦蓝菜多糖。
1.2多糖水解
将上述麦蓝菜多糖溶解于适量pH值为1的盐酸溶液中,于37℃搅拌水解30min后加入氢氧化钠溶液中和至中性,离心取上清液。上清液减压浓缩后经纳滤机过滤除盐后减压浓缩至干,得浅灰色固体粉末;或上清液浓缩至干,加入甲醇溶解,离心,沉淀复以甲醇溶解,离心,沉淀减压烘干,得浅灰色固体粉末。采用上述水解方法即得麦蓝菜多糖水解物。
1.3多糖含量测定
精确称取麦蓝菜多糖或麦蓝菜多糖水解物100mg于安瓿瓶中,加15mL 2mol/L TFA,充氮气封口后120℃水解4h。取出冷却后,水解液旋转蒸发至干,加约2mL甲醇,再蒸干,如此重复多次,以除去TFA。加少量去离子水,超声溶解,转移至10mL容量瓶中,多次清洗转移,定容,摇匀,经0.45μm微孔滤膜过滤,得酸水解待测液。用移液管量取1mL酸水解待测液于25mL容量瓶中,去离子水定容,摇匀,即为供试品溶液A。
精确称取麦蓝菜多糖或麦蓝菜多糖水解物100mg,加入去离子水超声溶解,转移至10mL容量瓶中,清洗转移,定容,摇匀,经0.45μm微孔滤膜过滤得样品水溶液。用移液管量取1mL样品水溶液于25mL容量瓶中,去离子水定容,摇匀,即为供试品溶液B。
参照中国药典2015版和文献报道的DNS法并稍作改进,以葡萄糖为标准品制备标准曲线。