多点校正法通过公式fi/s=(Ai/Ci)/(As/Cs)计算各成分的fi/s,式中Ai为待测成分i的峰面积,As为内参物s的峰面积,Ci为待测成分的浓度或质量,Cs为内参物的浓度或质量。样品中待测成分量的计算公式为Ci′=Cs′Ai′/(fi/sAs′),式中Ai′为样品中待测成分i的峰面积,As′为样品中内参物s的峰面积,Ci′为样品中待测成分i的浓度或质量,Cs′为样品中内参物s的浓度或质量[16]。
在待测成分标准曲线A=aC+b中,当a/b大于100时,b/a可忽略,此时可采用斜率校正法计算fi/s,公式为fi/s=ai/as,式中ai为待测成分i斜率,as为内参物s斜率。样品中待测成分量的计算公式为Ci′=Ai′/(fi/sas),式中Ai′为样品中待测成分i的峰面积,Ci′为样品中待测成分i的质量[8,17]。
本实验以TIIA为内参物,比较了在Waters色谱仪+DM色谱柱条件下2种不同算法对fi/s的影响,结果发现2种算法计算结果无显著性差异,见表2。考虑到斜率校正无需逐个浓度计算平均fi/s,且在样品指标成分量计算过程中更为简便,因此,在后续实验中采用斜率校正法建立的fi/s进行计算。
计算方法fDTI/TIIAfCT/TIIAfTI/TIIA
多点校正法0.7370.9050.773
斜率校正法0.7340.9160.774
RSD/%0.280.870.13
表2 不同计算方法得到的fi/sTable 2fi/sobtained by different calculation methods
2.2.2fi/s耐用性考察
(1)不同仪器和色谱柱对fi/s的影响:实验在不同实验室中进行,考察了Waters和Agilent 2种不同的色谱系统分别在DM、AJL、TCM 3种不同色谱填料下对待测成分fi/s的影响,结果见表3、4。结果显示不同仪器和不同色谱柱对待测成分fi/s均无显著影响(RSD均小于0.85%)。
色谱柱仪器fDTI/TIIAfCT/TIIAfTI/TIIA
DMWaters0.7340.9160.774
Agilent0.7360.9230.777
RSD/%0.230.480.22
AJLWaters0.7340.9270.778
Ag