一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法,HPLC法作为分析方法,检测饲料中苯甲酸含量。该方法可简化样品的前处理过程,节省有机溶剂的使用,操作简便。
二、实验目标物
苯甲酸(CAS:65-85-0)
三、应用范围
本方法适用于饲料中苯甲酸的检测的HPLC检测及确证。四、参考标准
《NY/T 2297-2012饲料中苯甲酸和山梨酸的测定高效液相色谱法》五、实验材料
NuAnalytical PolyClean X-MAX固相萃取柱60 mg/3mL。六、实验方法
1、 样品待测溶液制备
准确称取饲料样品2.0 g于50 mL离心管中,加入2%氨水水溶液(v/v)21 mL,超声
提取10min,振荡提取10min,准确加入0.25 mol/L的亚铁氰化钾溶液2mL、1 mol/L的乙酸锌溶液2mL,涡旋混匀。5000 r/min离心5min,取上清液5 mL转移至25 mL容量瓶中,用2%氨水水溶液(v/v)定容至25mL,备用。
2、活化
依次用3mL甲醇、3mL水活化
3、上样和洗脱
将在MAX固相萃取柱上加入5mL备用样品,弃去流出液;用3mL2%氨水水溶液(v/v)、
3mL甲醇淋洗,弃去淋洗液;抽干小柱;用5 %甲酸甲醇溶液(v/v)2 mL洗脱,收集洗脱液(整个上样、洗脱过程保持流速1mL/min)。
4、重新溶解
洗脱液过0.45 μm滤膜,供HPLC测定。
5、HPLC条件
色谱柱:SuperLu C18 (250×4.6mm, 5μm)
检测器:Waters 2487紫外双波长检测器;检测波长:230nm
流动相:A:乙腈B:磷酸盐缓冲溶液(磷酸二氢钾2.5g+磷酸氢二钾2.5加水溶解定容到1000mL)
洗脱方式:等度洗脱A:B=10:90
流速:1.0mL/min进样体积:20μL