最普 遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用 BALB/c 小鼠或其亲代小鼠,先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射,一周后将 杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生,每只小鼠可收集 5~10ml 的腹水,有时 甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高,每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外,腹水中的杂蛋白也较少, 便于抗体的纯化。 摘要 在单克隆抗体制备中两次提到筛选问题,对于两次筛选的方法和目的始终是一些人的困惑,那么两次筛选 的目的和方法到底是什么。 单克隆抗体制备过程中两次提到了筛选,对于两次筛选中的目的和方法许多人也存在疑惑,那么到底是如何筛选的 呢?现总结如下: 第一次筛选: 首先在(效应)B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行杂交时可能出现的情况应该先弄清楚, (一)可能的情况有: (效应)B淋巴细胞和(效应)B 淋巴细胞的融合 (效应)B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合(即杂交瘤细胞) 单个(效应)B淋巴细胞 (二)筛选的目的————获得杂交瘤细胞 (三)筛选的方法 用选择性培养基来完成,即HAT 培养基。含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶,其中氨基喋呤可阻断DNA 合成 的主要途径。主要途径阻断后,依靠应急途径即在HGPRT(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)和TK(胸苷激酶)作 用下,利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA,缺少其中一种,DNA 合成不能发生。用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有 毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞,细胞内均无TK 或HGPRT,所以单个或融合骨髓瘤细胞在HAT 培养液中 将死亡。B 细胞虽然有HGPRT 和TK,但在体外通常培养条件下,尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。 因此只有杂交瘤细胞才能在HAT 培养液中生长繁殖。 所以通过以上方法可以选择出杂交瘤细胞,但虽然都是杂交瘤细胞,但可能是同一抗原的不同抗原决定基刺激产生 的。所以产生抗体是不纯的。如果不进一步提纯,这样得到的是多克隆抗体。所以就有了第二次筛选。 第二次筛选 要想获得单克隆抗体,所以必须得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群, 由这样的细胞群产生的抗 体才是真正意义的单克隆抗体。 筛选的目的筛选只针对某一种特定的抗原决定簇产生抗体的杂交瘤细胞,即得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群并且能产生 所需抗体 (二)筛选的方法 1、分离单个细胞置入多孔培养板的每个孔中培养 2、检测每孔细胞是否产生所注射抗原的抗体(即教材插图中提到的选出能产生特定抗体的细胞群)所以筛选的条件 是两层意思:单个细胞单孔培养保证每个孔中的细胞在产生抗体时是针对同一抗原的同一抗原决定簇产生的的,但 每个孔中细胞却不一定都能产生抗体,把那些不产生抗体的细胞淘汰,对能分泌针对抗原某一决定簇抗体的阳性细 胞选择下来继续克隆,从而保证大量的生产所需抗体。 3、对选择下来的细胞进行克隆方法有两种:一种可以在体外培养;一种可以一直到小鼠腹腔中增殖,即可从中提取 所需要的单克隆抗体。 教你如何用WORD 文档 (2012-06-27 192246)转载 标签: 杂谈 问:WORD里边怎样设置每页不同的页眉?如何使不同的章节显示的页眉不同? 答:分节,每节可以设置不同的页眉。文件――页面设置――版式――页眉和页脚――首页不同。 问:请问word中怎样让每一章用不同的页眉?怎么我现在只能用一个页眉,一改就全部改了? 答:在插入分隔符里,选插入分节符,可以选连续的那个,然后下一页改页眉前,按一下“同前”钮,再做的改动 就不影响前面的了。简言之,分节符使得它们独立了。这个工具栏上的“同前”按钮就显示在工具栏上,不过是图 标的形式,把光标移到上面就显示出”同前“两个字来。 问:如何合并两个WORD文档,不同的页眉需要先写两个文件,然后合并,如何做? 答:页眉设置中,选择奇偶页不同与前不同等选项。 问:WORD编辑页眉设置,如何实现奇偶页不同 比如:单页浙江大学学位论文,这一个容易设;双页:(每章 标题),这一个有什么技巧啊? 答:插入节分隔符,与前节设置相同去掉,再设置奇偶页不同。 问:怎样使WORD文档只有第一页没有页眉,页脚? 答:页面设置-页眉和页脚,选首页不同,然后选中首页页眉中的小箭头,格式-边框和底纹,选择无,这个只要 在“视图”――“页眉页脚”,其中的页面设置里,不要整个文档,就可以看到一个“同前”的标志,不选,前后的 设置情况就不同了。 问:如何从第三页起设置页眉?答:在第二页末插入分节符,在第三页的页眉格式中去掉同前节,如果第一、二页还有页眉,把它设置成正文就可 在新建文档中,菜单―视图―页脚―插入页码―页码格式―起始页码为0,确定;菜单―文件―页面设置―版式―首页不同,确定;将光标放到第一页末,菜单―文件―页面设置―版式―首页不同―应用于插入点之后,确 步应用于插入点之后。这样,做两次首页不同以后,页码从第三页开始从1 编号,完成。 问:WORD页眉自动出现一根直线,请问怎么处理? 答:格式从“页眉”改为“清除格式”,就在“格式”快捷工具栏最左边;选中页眉文字和箭头,格式-边框和底纹 -设置选无。 问:页眉一般是---------,上面写上题目或者其它,想做的是把这根线变为双线,WORD中修改页眉的那根线怎 么改成双线的 答:按以下步骤操作去做: 选中页眉的文字,包括最后面的箭头格式-边框和底纹选线性为双线的在预览里,点击左下小方块,预览 的图形会出现双线确定上面和下面自己可以设置,点击在预览周围的四个小方块,页眉线就可以在不同的位置。 问:Word中的脚注如何删除?把正文相应的符号删除,内容可以删除,但最后那个格式还在,应该怎么办? 答:步骤如下:1、切换到普通视图,菜单中“视图”――“脚注”,这时最下方出现了尾注的编辑栏。2、在尾注的 下拉菜单中选择“尾注分隔符”,这时那条短横线出现了,选中它,删除。3、再在下拉菜单中选择“尾注延续分隔 符”,这是那条长横线出现了,选中它,删除。4、切换回到页面视图。尾注和脚注应该都是一样的。 10. 问:Word 里面有没有自动断词得功能常常有得单词太长了,如果能设置下自动断词就好了 答:在工具―语言―断字―自动断字,勾上,word 还是很强大的。 11. 问:如何将word 文档里的繁体字改为简化字? 答:工具―语言―中文简繁转换。 12. 问:怎样微调 WORD 表格线?WORD 表格上下竖线不能对齐,用鼠标拖动其中一条线,可是一拖就跑老远, 想微调表格竖线让上下对齐,请问该怎么办? 答:选定上下两个单元格,然后指定其宽度就可以对齐了,再怎么拉都行pressAlt,打开绘图,其中有个调整坐标线, 单击,将其中水平间距与垂直间距都调到最小值即可。打开绘图,然后在左下脚的绘图网格里设置,把水平和垂直 间距设置得最小。 13. 问:怎样微调word 表格线?我的word 表格上下竖线不能对齐,用鼠标拖动其中一条线,可是一拖就跑老远, 我想微调表格竖线让上下对齐,请问该怎么办? 答:可以如下操作:按住ctl 键还是shift,你have trydoubleclick line,try )打开绘图,设置一下网格(在左下角)。使水平和垂直都为最小,试一把!?press Alt 14. 问:怎么把word 文档里已经有的分页符去掉? 答:先在工具―― 选项―― 视图―― 格式标记,选中全部,然后就能够看到分页符,delete 就ok 15.问:Word 中下标的大小可以改的吗 答:格式―字体 16. 问:Word 里怎么自动生成目录啊 答:用“格式样式和格式”编辑文章中的小标题,然后插入-索引和目录 17. 问:Word 的文档结构图能否整个复制 论文要写目录了,不想再照着文档结构图输入一遍,有办法复制粘贴过 答:可以自动生成的,插入索引目录。