使用预混 其他问题:1)、文献上找到的引物和探针序列能否直接使用? 通常国外的文献可信度比较高,可直接使用;但为了保险起见,最好用blast 对引物探针的 序列进行必要的验证;或者再进一步用primer 软件对引物探针的二级结构和退火温度进行 分析,这样更有利于您对整个实验的把握。 2)、在实验之前要进行哪些准备工作? 首先要不加探针做常规的PCR 实验,验证引物是否工作、模板是否降解、模板纯度是否合适, 可以采用《通用PCR Master Mix 试剂盒》来缩短该过程。 3)、标本的采集和处理应该注意什么问题? 根据实验要求和目的,有针对性采集病灶部位的标本;采集好的标本,最好根据每次实验用 量,用冻存管分成几小份,放在-80保存,以免反复冻融;标本通常分成3 类,如细胞组 织、分泌物、血清全血;如果是血清,不能有融血现象的发生,否则会影响PCR 的扩增;如 果是全血,最好不用EDTA 作为抗凝剂,选用柠檬酸作为抗凝剂,否则会影响PCR 的扩增; 如果是组织,最好用蛋白酶K 消化;如果是提RNA 的标本,更应该防止反复冻融和保持标本 的新鲜。 4)、在做荧光定量实验时要注意些什么呢? 见产品操作注意事项。 5)、如果出现污染该怎么办? 以替换法确定污染从何而来,对症下药,值得注意的是,因荧光定量PCR 的敏感度极高,从 防止污染的角度出发,最好在体系中加有dUTP,一旦出现污染现象,可以用UNG 酶消除; 同时将实验室分成4 个区,即试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制、扩增 和产物分析区。