糖原的显示—PAS反应 (periodic acid schiff’s reaction) 目的要求 ? 通过PAS反应,了解糖原显示的基本原 理、方法以及糖原在细胞中的分布。 基本原理 ? 糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成,在肝和肌肉最丰富。 过碘酸是一种强氧化剂,能将葡萄糖中乙二醇基(CHOHCHOH)氧化成二个游离醛基(—CHO),游离醛基与Schiff ‘s试剂反应生成紫红色产物,颜色深浅与多糖含量成正比。 ? 由于单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽 提掉,故一般组织标本上所能显示的糖类主要是多糖,包 括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要确定 此红色物质是否糖原还需要同时进行对照实验。糖原可被 唾液淀粉酶水解,先用唾液淀粉酶作用再进行PAS显色, 若反应为阴性,则表明是糖原,反之则为其他多糖。 实验用品 1.器材:石蜡切片机,盖玻片、载玻片、 染色缸等. 2.试剂 0.5%过碘酸溶液;Schiff‘s试剂 3.材料:小鼠肝石蜡切片 切片经二甲苯和各级酒精复水后,入0.5% 的过碘酸溶液中作用15分钟,取出后水洗。 切片充分洗净后入Schiff‘s试剂中进行显色。作用 15分钟左右,将切片取出水洗,为洗去非特异性着 色,将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗, 取出后水洗,镜检。 对照片的设置 ? 为了确保实验结果的可信性,在实验中 需设置阴性对照片。 ? 对照片在复水后,用唾液淀粉酶37℃水 解30—60分钟,取出后水洗,再入过碘 酸处理。 实验结果 实验报告 ? 绘图表示糖元在细胞中的分布情况; ? 在实验过程中,过碘酸处理能起到什么 作用,它和Feulgen反应中Hcl的作用有何 异同?