2.002.html 包埋指是将组织放于受热熔化的载体中,通过载体冷却固化后支撑组织的过程 [1] ,是组织制片中重要的环节之一。临床上常用的包埋方法为石蜡包埋法 [2] ,而超小活检组织是石蜡包埋中的难点 [3-4] 。随着胃肠镜,纤维支气管镜及穿刺组织检查技术的日益成熟,超小组织活检成为门诊患者的主要病理检查项目之一,但因其送检组织具有体积微小,形态不规则,数量少等因素,因此病理技术人员在包埋和切片过程中稍有不慎将会导致制片失败,影响病理诊断。有报道 [5] 显示,包埋模具的温度可影响组织的包埋质量,常温包埋模具注入石蜡后,仅底部石蜡为熔化状态,表面及四周温度迅速下降,很快形成半凝固状态,不利于组织的包埋,影响切片质量。因此,本研究拟评价包埋模具的温度对超小活检组织包埋质量的影响,为临床病理技术提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料来源及分组 收集 2019 年 1-3 月在四川大学华西医院胃肠镜、纤维支气管镜下活检及超声科粗针穿刺的超小标本 120 例为研究对象,标本包括甲状腺、乳腺、肺、胃、肝、肾脏、前列腺等组织。依照随机数字表法分为两组,模具加热组(H 组)和模具常温组(C 组),每组 60 例。 1.2 仪器 LEICA HistocoreArcdaia C 组织包埋机,工作前 2 组蜡缸温度设置为 70℃,冷台温度设置为-10 ℃,电热镊设置为 70 ℃。 1.3 包埋方法 所有标本经过固定、脱水、透明、浸蜡处理后待用。H 组:1)每例取一个加热至 70℃的包埋模具,将热包埋模具放置包埋机蜡嘴下方热台(温度为 70℃),开始注蜡,第 1 次注蜡少许,一般超过包埋模底部即可;2)将组织用电热镊迅速从包埋盒取出,放入包埋模具底部中央、轻压、粘稳;3)选择组织的包埋方向,迅速将包埋模具移动到小冷冻台,使之底部快速凝固;4)包埋模底部凝固后,将包埋盒底盒放在该包埋模具上,沿包埋盒的四周进行二次注蜡,蜡量适中,不要超过包埋盒边缘;5)将注好蜡的包埋模具置于冻台充分冷却,再进行常规切片,然后行 HE 染色与网状纤维染色。C 组每例取一个常温包埋模具,其操作方法同H 组。 1.4 观察指标 比较两组包埋时间、包埋合格率、HE 染色后组织结构完整性、细胞显示效果、网状纤维染色效果及切片等级。包埋合格率依肉眼下组织切面是否完整判断,单张切片满分计 10 分,组织稍不完整扣 1~3 分,不完整扣 4~10 分,包埋合格率=切片满分例数占总切片例数的百分比。HE 染色后组织结构完整计 10 分,细胞显示效果包括细胞透明度及核质对比清晰度各计 10 分,网状纤维染色效果包括背景清洁度、纤维完整性、网状纤维与胶原纤维对比度各计 10 分,每项指标因质量缺陷扣减相应分值,以上指标由两名主治医师进行双盲评片,每项指标的分数取其均值。切片等级分为甲级片:≥90 分;乙级片:75~89 分;丙级片:60~74 分;丁级片:≤59 分 [6] 。 1.5 统计学方法 采用 SPSS20.0 统计学软件进行处理,计量资料以均数±标准差( x ±s ),采用成组 t 检验,计数资料以例(%)表示,比较采用  2 检验,等级资料的比较采用秩和检验(Z 检验),检验水准α除特别说明外均设定为 0.05。 2 结果 2.1 两组包埋时间及合格率比较 与 C 组比较,H 组包埋时间延长,包埋合格率增加(P<0.01)(表 1)。 表 1 两组包埋时间及合格率的比较(n=60) 组别 包埋时间/s 包埋合格率/% H 组 29.0±3.1 100 C 组 9.7±1.60 93 t/  2 42.511 7.254 P <0.001 0.007 2.2 两组包埋切片后肉眼及镜下比较 C 组包埋后切片存在切面不全现象,未展示最大组织面,染色组织较松散;H 组所有切片厚薄适当,切面完整,染色后对比分明(图 1)。 图 1 两组胃窦近贲门处活检组织包埋切片后肉眼及镜下比较 注:1 图示胃窦近贲门处活检组织:经加热模具包埋切片后厚薄适当,切面完整(1A),镜下见少许胃黏膜组织,腺体减少,间质中见中等量的淋巴细胞浸润,灶性区见淋巴滤泡形成,可见多灶出血(1B);2 图示胃窦近贲门处活检组织:经常温模具包埋切片后切面不全,未展示最大组织面(1C),镜下见少许胃黏膜组织,腺体减少,间质中见中等量的淋巴细胞浸润,可见多灶出血(1D)。 2.3 两组包埋后制片评分的比较 经 HE 染色后,与 C 组比较,H 组织结构完整性、细胞显示效果(细胞透明度和核质对比度)、网状纤维染色效果(背景清洁度、纤维完整性、网状纤维与胶原纤维对比度)等项目评分增加(P<0.01)(表 2)。 表 2 两组包埋后制片评分的比较(分, x ±s, n=60) 组别 组织结构 完整性 细胞显示效果 网状纤维染色效果 细胞 透明度 核质 对比度 背景 清洁度 纤维 完整性 网状/胶原 纤维对比度 H组 9.95±0.22 9.92±0.28 9.97±0.18 9.97±0.18 9.98±0.13 9.95±0.22 C组 9.73±0.55 9.65±0.63 9.68±0.60 9.77±0.50 9.72±0.56 9.62±0.72 t 2.841 2.815 3.521 2.915 3.624 3.451 P 0.005 0.006 0.001 0.004 <0.001 0.001 2.4 两组切片等级的比较 H 组切片等级高于 C 组,差异有统计学意义(P<0.05)(表 3)。 表 3 两组切片等级的比较(n=60) 组别 甲级片 乙级片 丙级片 丁级片 H 组 58 2 0 0 C 组 50 9 1 0 Z 2.433 P 0.015 3 讨论 随着胃肠镜,纤维支气管镜及超声引导下粗针穿刺技术的日益发展和成熟,因其操作简便、损伤小、安全性大,确诊率高,其在临床中的应用也越来越广泛[7-9] 。超小组织活检是门诊患者的主要病理检查项目之一 [10-12] ,如声带肿物,因其组织体积较小,数量少,工作人员在包埋、切片过程中稍有不慎将会导致取材失误,包埋结果不理想,未包埋最大面,切片不全,导致制片失败,甚至发生组织遗失的严重情况,最终影响病理诊断,存在很大的医疗风险。所以在组织标本制作的整个环节中,不但要求病理技术人员要有高度的责任心,还需要有正确规范的操作流程,而包埋技术是病理组织制片过程中至关重要的环节之一,只有组织包埋合格后,才能为以后的切片、染色和诊断提供可靠的保证,为患者的后期治疗赢得宝贵时间。 在病理技术中常用的包埋方法为石蜡包埋法,石蜡是由于碳氢键所构成的正烷烃的混合物,没有固定的熔点,一般为 56~62℃ [13] ,因此在包埋过程中,石蜡受热熔化后,将组织放置于熔化的石蜡液中,通过石蜡冷却凝固后支撑组织,来实现包埋的过程,在此过程中,应在石蜡凝固的时间范围内将浸蜡的组织妥善放置于石蜡液的中央。常温包埋模具只有底部受热,其余部分为常温,当注入石蜡后,只有底部石蜡为熔化状态,表面及四周温度迅速下降,很快形成半凝固状态,不利于组织的包埋 [14] ,特别是当组织呈条索状时,容易导致蜡块切面中间凹陷,因组织不在一个切面上而丧失整条组织的完整性 [15] 。本研究中,将包埋 模具加热至 70℃,与石蜡温度一样,第一次注蜡后,温度下降速度减慢,保证了工作人员有足够的时间将组织从包埋盒取出,并妥善放入包埋模具底部中央,并调整组织的包埋方向,再移至小冷冻台,使之底部快速凝固后完成二次注蜡。结果显示,H 组包埋模具加热后,延长了包埋时间,提高了包埋的合格率,后期切片和 HE 染色后,H 组组织结构完整性、细胞透明度和核质对比度以及背景清洁度、纤维完整性、网状纤维与胶原纤维对比度等项目评分增加,这与林倩等 [5]研究结果相吻合。 综上所述,热包埋模具可提高超小活检组织包埋的合格率,保证切片质量,提高诊断准确率。 参考文献 [1] 刘毓玲, 周林, 许爱萍. 石蜡对病理组织切片的影响[J]. 临床与实验病理学杂志, 2017, 33(4): 462-463. [2] 丁伟, 王德田. 简明病理学技术[M]. 杭州: 浙江科学技术出版社, 2014. [3] 钱红, 赵娟霞, 曹桂明. 诊刮组织过少的原因分析及病理取材方法改进[J]. 临床与实验病理学杂志, 2018, 34(3): 347-348. [4] Acs G, Paragh G, Chuang S T, et al. The presence of micropapillary features and retraction artifact in core needle biopsy material predicts lymph node metastasis in breast carcinoma[J]. AmJSurgPathol, 2009, 33(2): 202-210. [5] 林倩, 方庆全, LIN Qian, 等. 优化细小穿刺组织石蜡包埋质量的研究[J]. 中国临床解剖学杂志, 2018, 36(4): 465-469. [6] 中华医学会. 临床技术操作规范-疼痛学分册[M]. 北京: 人民军医出版社, 2004. [7] 曹莉, 王礼鑫, 曹颖, 等. 盐酸化伊红溶液在病理小标本包埋操作中的应用[J]. 临床与实验病理学杂志, 2016, 32(7): 829-830. [8] 李明显, 张志发, 李晓, 等. 前列腺穿刺组织石蜡包埋技术的改进方法[J]. 中华病理学杂志, 2018, 47(12): 959-960. [9] 杨洋, 季昌华, 杨京彦, 等. 连续超长切片在胃肠活检病理标本制片中的应用[J]. 临床与实验病理学杂志, 2017, 33(10): 1160-1161. [10] 崔卫新, 徐文, 杨庆文, 等. 声带白斑候选分子标志物的表达特征及临床意义[J]. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2018,53(8): 592-596. [11] Hui A B, Shi W, Boutros P C, et al. Robust global micro-RNA profiling with formalin-fixed paraffin-embedded breast cancer tissues[J]. Lab Invest, 2009, 89(5): 597-606. [12] 张保华,冯晓丹,史益凭,等.宫腔刷取子宫内膜“有形成份”石蜡切片诊断法的临床应用价值[J].实用癌症杂志,2014,29(04):429-431,434. [13] 康 冰 , 栾 洁 玉 , 邵 颖 惠 , 等 .DSC 固 化 点 法 测 定 石 蜡 的 熔 点 [J]. 火 炸 药 学报,2013,36(1):59-60,90. [13] 康冰, 栾洁玉, 邵颖惠, 等. DSC 固化点法测定石蜡的熔点[J]. 火炸药学报, 2013, 36(1): 59-60,90. [14] 袁潇. 取材厚度对脂肪组织石蜡切片质量的影响[J]. 中国血液流变学杂志, 2018, 28(2): 219-220. [15] 杨洋, 于洁, 潘成然, 等. 斜面包埋手法在组织石蜡包埋中的运用及体会[J]. 临床与实验病理学杂志, 2017, 33(3): 346-347.