根据作者经验,雌激素受体、孕激素受体、细胞周期调节相关蛋白质(如Ki-67、PCNA、cyclinD1、bcl-6)、甲状腺转录因子-1抗原等容易降解,因此石蜡块的切片不适合长时间储存。
(4)如果存档的石蜡切片的染色出现不一致,应该用新鲜切片重复一次实验。
细胞块这一步骤适用于由于组织块太小导致普通石蜡包埋变得困难,需要一种能形成所谓细胞块的试剂。以下是四种不同的细胞块制备法:
一、琼脂细胞块制备法:
(1)取底部沉淀样本20ml,3000转/分,离心5-10分钟。
(2)吸干上清液,离心沉渣用10%中性福尔马林固定1小时。
(3)吸干液体。
(4)滴加少许融化的琼脂,摇动试管使其充分混合,3000转/分,离心,5-10分钟。此时,琼脂已凝固。
(5)将琼脂块取出,切成大小合适的块状放入脱水盒,按常规制备蜡块。
二、蛋清细胞块制备法:
(1)取底部沉淀样本20ml,3000转/分,离心5-10分钟。
(2)加鸡蛋清lml,用扁平的竹签轻轻刮取试管底部的细胞,尽量使细胞成团悬浮于蛋清中,离心5min(2000转/ min)。
(3)去除多余蛋清,沿管壁轻轻加入10 %中性福尔马林固定液2ml。蛋清遇到福尔马林立即凝固使细胞成团块状,轻轻摇动,让细胞团块悬浮于固定液中固定,过夜,轻轻取出细胞团块,用包埋纸包好,放入脱水盒,按常规制备蜡块。
三、直接细胞块制备法(当细胞量较多时可使用)
(1)取底部沉淀样本20ml,3000转/分,离心5-10分钟。
(2)吸干上清液,轻轻沿管壁加入95%酒精,3000转/分,离心5分钟,静置1小时。
(3)用竹签轻轻将沉淀物取出,用包埋纸包好。
(4)放入脱水盒,10%中性福尔马林固定1小时,按常规制备蜡块。
四、戊二醛细胞块制备法:
(1)取底部沉淀样本20ml,3000转/分,离心5-10分钟。
(2)吸干上清液,加入3 %戊二醛10ml,充分混合,3000转/分,离心5-10分钟。
(3)用竹签轻轻将沉淀物取出。
(4)放入脱水盒,10%中性福尔马林固定1小时,按常规制备蜡块。