植物快繁

植物组培

植物组培培养基及其配制
培养基好比土壤,
是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此,
在组织
培养基的各个环节中,应着重掌握培养基,了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分
目前,大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质
和有机附加物等五类物质组成的。
无机营养物
无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成,
大量元素中,
氮源通常
有硝态氮或铵态氮,
但在培养基中用硝态氮的较多,
也有将硝态氮和铵态氮混合
使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子,
在
近代的培养基中,其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养
基所需的钠和氯化物,
由钙盐、
磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、
锰、
锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子,大多以螯合铁的形式存在,即
FeSO4
与
Na2
EDTA(
螯合剂
的混合。
它们的光合作用较弱。
因此,
需要在培养基中附加
一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养
基内的碳源和能源外,对维持培养基的渗透压也起重要作用。
维生素
在培养基中加入维生素,常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于
B
族维生素,
其中效果最佳的有维生素
B1
维生素
B6
生物素、
泛酸钙和肌醇等。
有机附加物
包括人工合成或天然的有机附加物。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、
椰子汁及各种氨基酸等。
另外,
琼脂也是最常用的有机附加物,
它主要是作为培
养基的支持物,使培养基呈固体状态,以利于各种外植体的培养。
生长调节物质
常用的生长调节物质大致包括以下三类:
植物生长素类。如吲哚乙酸
(IAA)
、萘乙酸
(NAA)
二氯苯氧乙酸
4-D)
细胞分裂素。如玉米素
(Zt)
苄基嘌呤
(6-BA
或
BAP)
和激动素
(Kt)
赤霉素。组织培养中使用的赤霉素只有一种,即赤霉酸
(GA3)
二、常用培养基配方及其特点
常用培养基配方
组织培养是否成功,
在很大程度上取决于对培养基的选择。
不同培养基有不
同特点,
适合于不同的植物种类和接种材料。
开展组织培养活动时,
应对各种培
养基进行了解和分析,
以便能从中选择使用。
下面介绍组织培养几种常用培养基
的配方见表
培养基中的激素种类和数量,
随着不同培养阶段和不同材料而有变化,
因此
各配方中均不列入。
几种常用培养基的特点
(1)MS
培养基。
MS
培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度,
对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。
由于配方中的
离子浓度高,在配制、贮存、消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不致影
响离子间的平衡。
MS
固体培养基可用来诱导愈伤组织,或用于胚、茎段、茎尖2
及花药培养,
它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。
这种培养基
中的无机养分的数量和比例比较合适,
足以满足植物细胞在营养上和生理上的需
要。因此,一般情况下,无须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子
汁等有机附加成分。与其它培养基的基本成分相比,
MS
培养基中的硝酸盐、钾
和铵的含量高,这是它的明显特点。
(2)B5
培养基。
B5
培养基的主要特点是含有较低的铵,这是因为铵可能对不
少培养物的生长有抑制作用。
经过试验发现,
有些植物的愈伤组织和悬浮培养物
在
MS
培养基上生长得比
B5
培养基上要好,
而另一些植物,
在
B5
培养基上更适
宜。
(3)N6
培养基。
N6
培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养,
在国内
外得到广泛应用。在组织培养中,经常采用的还有怀特
(While
培养基、尼
许
(Nitsch
培养基等。它们在基本成分上大同小异。怀特培养基由于无机
盐的数量比较低,更适合木本植物的组织培养。
三、培养液的配制
制备母液
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量,
应该将培养基中
的各种成分,按原量
倍称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫
做母液。这样,每次配制培养基时,取其总量的
,加以稀
释,即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。
大量元素。大量元素包括硝酸铵等用量较大的几种化合物。制备时,按
表中排列的顺序,以其
倍的用量,分别称出并进行溶解,以后按顺序混在一
起,最后加蒸馏水,使其总量达到
升,此即大量元素母液。
微量元素。因用量少,为称量方便和精确起见,应配成
倍
的母液。
配制时,
每种化合物的量加大
倍,
逐次溶解并混在一起,
制成微量元素母液。
铁盐。
铁盐要单独配制。
由硫酸亚铁
(FeSO4·
7H2O)5.57
克和乙二胺四乙酸
二钠
(Na
EDTA)7.45
克溶于
升水中配成。每配
升培养基,加铁盐
毫升。
有机物质。主要指氨基酸和维生素类物质。它们都是分别称量,分别配
成所需的浓度
毫升
,用时按培养基配方中要求的量分别加入。