包埋法 包埋法是制备固定化酶或固定化细胞的一种方法,是将酶或细胞包埋在能固化的载体中。如将酶包裹在聚丙烯酰胺凝胶等高分子凝胶中,或包裹在硝酸纤维素等半透性高分子膜中,前者包埋成格子型,后者包埋成微胶囊型。包埋法常用于微生物、动物和植物细胞的固定化,凝胶包埋法是应用最广泛的细胞固定化方法。如何提高包埋效果,哪些技巧又是我们应该掌握的? 效果 有些石蜡特别适合用于渗透,有些更适合用于包埋,而有些都适合(可以向供应商查询)。 1、石蜡应当在高于其熔点2°C至4°C的温度下进行熔化和储存,这样其中的添加剂才能溶解入液体。如果温度太低,其中一些较重的添加剂,比如聚合物就会沉在底部,然后最先流出。熔化的石蜡在流出以前最好先进行搅拌。 2、设定包埋机的参数,确保石蜡流出口过夜的时候处于保温状态。经常清空并清洗流出口。始终确保流出蜡缸的石蜡是过滤后的。 3、和以往的观点相反,将石蜡设定在高温(大约85°C)持续数星期,反而是无害的。尽管石蜡中添加了稳定剂,在氧化作用下,石蜡仍然会变质。最初的征兆就是颜色转变为草黄色直到黄色。随后可能有异味产生。 4、选择尺寸恰当的模具,确保样品的四周都被石蜡包围,样品置于中心。用压平装置或者弯头镊子的背部轻柔地将样品展平(易碎样品可能会被压碎)。不要让样品在模具中撑太满。 5、大或硬的样品必须按照一定角度放置在模具中。如果同一个样品包含多种不同密度的成分,则包埋的时候要确保样品最硬的部分必须最后接触到锋利的刀刃。皮肤往往带有毛发,则包埋的时候必须保证毛发最后才被切到。 6、动物样本中,如果组织的来源不同但是切片的性状相似则可以包埋在同一个蜡块中,比如肝脏和脾脏,脑组织和脊髓。脱钙的骨组织必须包埋在“硬”石蜡中,样品最窄的一端必须位于蜡块的底边,从而在切片的时候,最先接触到刀刃。 7、为了切片的稳定性,模具中必须添加足够的石蜡,确保包埋盒至少充盈一半。如果石蜡漏出,那么在蜡块完全固化之前,必须添加石蜡。 [1]