解脲脲原体DNA检测方法评价及人群感染情况调查　宗曾艳　1,2　,熊 丹1,2　,汤花梅　2　,王萌萌　1,2　,孔凡虹　2　,阚丽娟　2　,张水兰　2　,张秀明　1,2　1　安徽理工大学,安徽 淮南 232000;　2　深圳市罗湖区人民医院检验科,广东 深圳 440301　摘要:目的 对实时荧光定量PCR方法检测解脲脲原体(UU)核酸进行方法学评价。方法 依据CNAS-GL039性能评价要求文　件及厂家声明,对本法重复性、准确度、测定下限和抗干扰能力进行验证;检测2018年1~12月我院门诊和住院患者UU标本共　22 468例并统计分析。结果 该方法检测结果精密度均小于允许变异度;准确度与基因测序金标准符合率为100%;最低检测　限为1×10　3　 copies/mL;常见生殖道感染微生物不会产生交叉反应,4%的内源性红细胞对检测结果没有干扰;总UU阳性率为　59.8%;女性UU检出率显著高于男性(χ　2　=525.613,P30岁年龄组差异具有统计学意义　(P30　years　old　(P95%则符合　要求。　1.2.2 准确度评估　取12例在本实验室用UU-DNA　核酸测定试剂盒检测的宫颈分泌物样本(其中阳性样　本10例,阴性样本2例),与测序方法进行对比分析,　分析结果的一致程度,阴阳性符合率>95%,则准确　度符合要求。　1.2.3 最低检测下限评估　依据上海之江UU核酸试　剂盒说明书和《感染性疾病个体化医学分子检测技　术指南》,取1例UU-DNA扩增结果Ct值约等于35(浓　度约在103　 copies/mL)样本,进行10次扩增,记录每次　检测结果。如为阳性,则记录相应的Ct值,统计10次　扩增结果,评判标准参考CLSI-MM17A文件关于检　测下限的标准可知,10次扩增结果总阳性率均>95%则满足要求。　1.2.4 抗干扰能力　(1)抗交叉反应评估:由之江公司　提供的包含淋球菌、沙眼衣原体、人型支原体、生殖　支原体、白色念珠菌和B组链球菌的质粒(浓度约　5×106　 copies/mL),分别加入到10例UU-DNA阴性标　本内,进行扩增,统计10例UU-DNA阴性标本的扩增　结果,依据上海之江UU核酸试剂盒说明书和CNAS　GL-039标准,要求10例标本结果总阴性符合率≥　95%。(2)内源性干扰评估:取1份UU-DNA阳性