INT　J　TUBERC　LUNG　DIS　11(7):803–807　©　2007　The　Union　Diferenciação　entre　Mycobacterium　tuberculosis　e　outras　Micobactérias　com　ácido　ρ　ρ　ρ　ρ-nitrobenzóico　utilizando　o　sistema　MGIT960　C.　M.　S.　Giampaglia,*　M.　C.　Martins,*　E.　Chimara,*　R.　S.　Oliveira,*　G.　B.　de　Oliveira　Vieira,†　A.　G.　Marsico,†　F.　C.　Q.　Mello,†　L.　de　Souza　Fonseca,†　A.　Kritski,†　M.　A.　da　Silva　Telles*　*　Instituto　Adolfo　Lutz,　São　Paulo,　†　Universidade　Federal　do　Rio　de　Janeiro,　Rio　de　Janeiro,　Brazil　RESUMO　INTRODUÇÃO:　O　crescimento　de　micobactérias　em　meios　suplementados　com　substâncias　inibitórias　é　usado　na　identificação　das　espécies.　O　crescimento　do　complexo　Mycobacterium　tuberculosis　(MTC)　é　inibido　pelo　ácido　ρ　ρ　ρ　ρ-nitrobenzóico　(PNB),　enquanto　que　as　micobactérias　não-tuberculosas　(NTM)　são　resistentes.　OBJETIVO:　Desenvolver　um　teste　PNB　rápido　usando　o　sistema　automatizado　BACTEC　MGIT960　e　avaliar　sua　utilidade　na　triagem　dos　isolados　micobacterianos.　MÉTODOS:　Os　testes　PNB　foram　realizados　em　93　cepas　MTC　e　61　NTM　da　Coleção　de　Cultura　do　Instituto　Adolfo　Lutz.　O　PNB　foi　adicionado　ao　meio　Löwenstein-Jensen　(LJ)　e　ao　meio　utilizado　no　sistema　BACTEC　MGIT960.　RESULTADOS:　Todas　as　cepas　MTC　foram　sensíveis　ao　PNB,　confirmando　a　identificação　original.　Entre　as　10　espécies　NTM,　apenas　uma　cepa　de　M.　kansasii　e　uma　de　M.　marinum　foram　sensíveis　ao　PNB.　O　tempo　médio　para　obtenção　da　identificação　presuntiva　do　MTC　pelo　teste　de　inibição　no　sistema　BACTEC　MGIT960　foi　de　6,3　dias,　e　de　NTM　foi　de　2,5　dias.　A　identificação　presuntiva　do　MTC　em　LJ　foi　obtida,　em　sua　maioria,　após　20　dias.　CONCLUSÃO:　O　principal　achado　desta　análise　foi　a　possibilidade　de　combinar　o　método　tradicionalmente　aceito,　proposto　por　Tsukamura　e　Tsukamura　em　1964,　com　uma　metodologia　moderna,　segura　e　rápida,　o　BACTEC　MGIT960.　PALAVRAS-CHAVE:　M.　tuberculosis;　NTM;　diferenciação;　PNB　Apesar　do　progresso　obtido　na　promoção　da　saúde　pública,　o　aumento　da　tuberculose　(TB)　tem　surpreendido　comunidades　em　muitos　países,　em　diferentes　regiões　do　mundo.　Mesmo　no　século　21,　esta　antiga　doença　continua　sendo　um　problema.　O　diagnóstico　rápido　e　preciso　de　cada　caso　é　necessário　para　um　controle　apropriado　da　doença.　Isolamento,　identificação　e　testes　de　sensibilidade　são　procedimentos　essenciais　que　devem　ser　realizados　o　mais　rápido　possível　para　que　o　tratamento　adequado　seja　prescrito.　O　uso　de　meios　líquidos　foi　sugerido　como　o　procedimento　mais　rápido　e　eficiente　para　o　isolamento　de　micobactérias　e　testes　de　sensibilidade.　No　entanto,　além　de　ser　isolada,　essa　espécie　de　microorganismo　deve　ser,　também,　prontamente　identificada.　Embora　a　infecção　por　Mycobacterium　tuberculosis　seja　a　mais　comum,　infecção　por　outras　micobactérias　diferentes　de　M.　tuberculosis,　ou　seja,　micobactérias　não　tuberculosas　(NTM),　está　em　ascensão　em　muitos　países.1　É　importante　detectar　infecção　por　M.　tuberculosis　em　um　estágio　precoce　para　estabelecer　o　tratamento　adequado　aos　pacientes　com　TB　que　seguem　regimes　de　tratamento,　diferentes　daqueles　pacientes　infectados　com　outras　micobactérias.　O　sistema　BACTEC　460TB　(Becton　Dickinson　Diagnostic　Systems,　Sparks,　MD,　USA)　permite　a　diferenciação　entre　o　complexo　M.　tuberculosis　(MTC)　e　outras　micobactérias　pelo　teste　NAP　(ρ-nitro-α-　acetilamino-β-hidroxipropiofenona),　o　qual　produz　resultados　em　4–6　dias,　porém,　com　a　utilização　de　meios　radioativos.2　Outros　métodos,　tais　como　sondas　moleculares　e　cromatografia　líquida　de　alta　eficiência　(HPLC),　foram　propostos　para　diferenciação　de　espécies　micobacterianas.　Esses　métodos,　no　entanto,　requerem　procedimentos　tecnicamente　complexos,　laboriosos　e　caros,　e　os　países　com　poucos　recursos　podem　não　estar　aptos　a　realizá-los.　Testes　simples　e　rápidos　são,　portanto,　necessários.3　Um　sistema　de　monitoração　contínua,　não　radiométrico,　totalmente　automatizado　foi　recentemente　introduzido　como　um　alternativo　ao　radiométrico　BACTEC　460　para　cultivo　e　detecção　de　micobactérias.　Esse　sistema　utiliza　o　caldo　Middlebrook　7H9　modificado　e　tecnologia　que　detecta　o　metabolismo　dos　microrganismos　no　meio　através　da　detecção　do　consumo　de　oxigênio　dele　resultante,　evidenciado　por　emissão　de　fluorescência.　Os　tubos　de　cultura　são　monitorados　a　cada　hora　pelo　equipamento　e　sinalizados　como　positivos　com　base　em　algoritmos　de　crescimento　específicos.　Esse　sistema　é　considerado　como　eficiente　no　isolamento　rápido　e　detecção　de　resistência　às　drogas　para　esses　microorganismos.4　A　habilidade　das　micobactérias　em　crescer　na　presença　de　substâncias　inibitórias,　em　um　meio　adequado,　é　largamente　usada　na　identificação　de　diferentes　espécies.2,5　Foi　descrito　que　o　crescimento　do　MTC　é　inibido　pelo　ácido　ρ-　nitrobenzóico　(PNB)　500　µg/ml,　enquanto　que　as　NTM　são　resistentes　a　esta　concentração6　embora,　conforme　sugerido　por　Rastogi　et　al.7　e　Tsukamura　&　Tsukamura5　uma　pequena　porcentagem　dessas　bactérias　possa　ser　sensível　à　substância.　O　estudo　desenvolvido　por　Martins　et　al.　demonstrou　que　o　crescimento　micobacteriano　em　meio　contendo　PNB　pode　ser　usado　como　um　teste　presuntivo　para　NTM.8　O　objetivo　do　presente　estudo　foi　desenvolver　um　teste　adicionando　PNB　ao　meio　usado　no　sistema　automatizado　não　radiométrico　Mycobacterium　Growth　Indicator　Tube　960　(Sistema　MGIT　960,　Becton　Dickinson　Microbiology　Systems,　Sparks,　MD,　USA)　e　verificar　sua　utilidade　para　diferenciar　MTC　de　outras　micobactérias.　Além　de　diminuir　o　trabalho　e　eliminar　potenciais　dificuldades　de　leitura　durante　a　análise　visual　dos　tubos,　que　ocorrem　nos　métodos　tradicionais,　a　metodologia　proposta　fornecerá　dados　em　um　tempo　menor　do　que　o　observado　com　os　testes　atuais　que　usam　meios　sólidos　para　diferenciar　as　espécies.　MATERIAL　E　MÉTODOS　Locais　das　avaliações　Este　estudo　foi　realizado　na　região　Sudeste　do　Brasil,　no　Laboratório　de　Referência　da　Universidade　Federal　do　Rio　de　Janeiro,　Laboratório　de　Micobacteriologia,　Programa　Acadêmico　de　Tuberculose　(Local　1),　e　no　Laboratório　Estadual　de　Saúde　Pública,　Laboratório　de　Referência　Estadual　de　Micobactérias,　Instituto　Adolfo　Lutz,　Secretaria　Estadual　de　Saúde　do　Estado　de　São　Paulo　(Local　2).　Esses　laboratórios　de　referência　fazem　parte　da　Rede　Brasileira　de　Pesquisa　em　Tuberculose　(REDE-TB)　cujo　objetivo　é　a　avaliação　clínica　e　laboratorial　integrada　de　novos　métodos　diagnósticos　para　TB.　Microorganismos　Um　painel　de　86　isolados　clínicos　de　M.　tuberculosis　e　um　painel　de　53　isolados　clínicos　de　NTM　foram　selecionados　da　coleção　de　cultura　do　Laboratório　de　Referência　Estadual　de　Micobactérias,　Instituto　Adolfo　Lutz.　A　seleção　levou　em　consideração　a　freqüência　de　isolamento　de　cada　espécie　a　partir　de　amostras　clínicas.　As　cepas　foram　mantidas　a　–　70o　C　em　miçangas　de　vidro　embebidas　com　o　meio　Sauton　adicionado　de　10%　de　glicerol.　As　miçangas　congeladas　foram　inoculadas　em　tubos　de　meio　Löwenstein-Jensen　(LJ)　e　cada　um　dos　laboratórios　participantes　recebeu　um　deles.　As　cepas　de　M.　tuberculosis　foram　identificadas　por　suas　características　culturais　e　por　testes　bioquímicos　clássicos.9,10　Os　isolados　clínicos　de　NTM　foram　identificados　por　suas　características　culturais,　testes　bioquímicos　clássicos　e　pela　reação　em　cadeia　da　polimerase　(PCR)　seguida　da　digestão　do　cDNA　por　enzimas　de　restrição　e　análise　do　gene　hsp　65.　Cinco　cepas　de　referência　de　M.　tuberculosis　da　American　Type　Culture　Collection　(ATCC®　)　foram　incluídas　no　estudo:　ATCC®　35822,　isoniazida-resistente;　ATCC®　35838,　rifampicina-resistente;　e　as　cepas　totalmente　sensíveis,　H37Rv　ATCC®　27294,　H37Ra,　ATCC®　25177,　Erdman　strain　ATCC®　35801,　uma　M.　africanum　(ATCC®　25420)　e　uma　M.　bovis　(ATCC®　19210).　O　estudo　também　incluiu　cepas　de　referência　de　outras　espécies　de　micobactérias:　M.　kansasii　(ATCC®　12478);　M.　chelonae　(ATCC®　35752);　M.　avium　subsp.　avium　(ATCC®　25291);　M.　intracellulare　(ATCC®　23434);　M.　xenopi　(ATCC®　19250);　M.　gordonae　(ATCC®　14470);　M.　terrae　(ATCC®　15755);　M.　marinum　(ATCC®　927).　Testes　O　Local　1　realizou　o　teste　da　produção　de　niacina,　teste　da　redução　de　nitrato　e　o　teste　da　catalase　termo-estável　(68o　C),　os　quais　são　os　métodos　fenotípicos　clássicos　para　identificação　do　MTC　de　acordo　com　Kent　&　Kubica10　bem　como,　o　teste　da　inibição　pelo　PNB　no　meio　BACTEC　MGIT960.　O　Local　2　realizou　o　teste　da　inibição　pelo　PNB　usando　o　meio　LJ　conforme　proposto　por　Tsukamura　&　Tsukamura5　e　o　teste　da　inibição　pelo　PNB　usando　o　meio　BACTEC　MGIT960.　Além　das　cepas　testadas　pelo　Local　1,　o　Local　2　testou　53　isolados　clínicos　de　NTM.　Testes　de　inibição　pelo　ácido　ρ-nitrobenzóico.　PNB　foi　incorporado　ao　meio　LJ　e　ao　BACTEC　MGIT960,　na　concentração　final　de　500　µg/ml.　Tubos　controle　do　crescimento　foram　o　meio　LJ　e　o　BACTEC　MGIT960,　sem　substâncias　inibitórias.　A　concentração　final　de　PNB　foi　selecionada　com　base　em　relatos　prévios　de　estudos　realizados　com　outros　sistemas　tais　como　BACTEC　460　e　o　sistema　manual　BBL-MGIT11,12　.　Experimentos　preliminares　foram　conduzidos　para　estabelecer　a　concentração　efetiva　de　PNB　para　testes　no　BACTEC　MGIT960.　Diferentes　concentrações　de　PNB　(125　µg/ml,　250　µg/ml　e　500　µg/ml)　foram　preparadas　no　meio　MGIT960.　Preparação　do　inóculo　para　os　testes　PNB　nos　meios　LJ　e　BACTEC　MGIT960.　O　inóculo　foi　preparado　raspando-se　colônias　de　crescimento　jovem　da　superfície　do　meio　LJ.　Algumas　colônias　foram　emulsionadas　em　frasco　contendo　miçangas　de　vidro　e　2　ml　de　água　destilada　estéril　para　obtenção　de　turbidez　maior　que　o　tubo　1　na　escala　de　McFarland.　O　conteúdo　do　frasco　foi　homogeneizado,　mantido　em　repouso　por　15　min　para　precipitação　dos　grumos　maiores,　e　então,　1　ml　da　suspensão　sobrenadante　foi　transferido　para　outro　tubo　e　a　turbidez　ajustada　para　escala　de　McFarland　1,　adicionando-se　água　destilada　estéril.　Essa　suspensão　bacteriana　foi　utilizada　como　suspensão　de　trabalho.　Inoculação　O　meio　LJ　foi　inoculado　com　5　µl　da　suspensão　de　trabalho;　o　meio　BACTEC　MGIT960　foi　inoculado　com　500　µl　da　suspensão　de　trabalho　diluída　a　1:5.　Incubação　Os　tubos　com　meio　LJ　foram　incubados　a　37o　C.　Os　tubos　BACTEC　MGIT960　foram　colocados　no　equipamento　BACTEC　MGIT960　em　até　2h　após　a　inoculação.　Antes　de　colocar　os　tubos,　seus　códigos　de　barra　foram　escaneados　e　o　equipamento　designou-os　para　suas　estações,　conforme　o　manual　de　operações.　Leitura　A　leitura　dos　tubos　de　LJ　foi　iniciada　no　12o　dia　após　incubação　a　37o　C.　Uma　cepa　foi　considerada　resistente　quando　o　tubo　contendo　a　substância　inibitória　apresentou　um　padrão　de　crescimento　similar　ao　observado　no　tubo　controle　sem　droga.　O　crescimento　nos　tubos　controle　de　meio　BACTEC　MGIT960　foi　automaticamente　detectado　pelo　equipamento　BACTEC　MGIT960,　o　qual　é　capaz　de　monitorar　continuamente　a　fluorescência　decorrente　das　micobactérias　em　crescimento.　As　estações　positivas　eram　iluminadas　e　o　equipamento　indicava　o　dia　em　que　os　tubos　tornavam-se　positivos.　As　leituras　dos　tubos　contendo　o　inibidor　foram　interpretadas　manualmente,　utilizando-se　o　algoritmo　estabelecido　por　Giampaglia　et　al12　.　Uma　cepa　foi　considerada　sensível,　quando　o　tudo　contendo　o　inibidor　permanecia　negativo　por　2　dias　após　a　observação　de　um　resultado　positivo　no　tubo　controle　sem　droga.　Uma　cepa　foi　considerada　resistente,　quando　o　tubo　contendo　o　inibidor　tornava-se　positivo　em　até　2　dias　após　a　observação　de　um　resultado　positivo　no　tubo　controle　sem　droga.　RESULTADOS　Os　resultados　dos　testes　preliminares　realizados　no　BACTEC　MGIT960　demonstraram　que　todas　as　17　cepas　de　M.　tuberculosis　testadas　foram　sensíveis　ao　PNB　nas　concentrações　de　250　µg/ml　e　500　µg/ml,　e　que　quatro　cepas　foram　resistentes　ao　PNB　a　125　µg/ml,　mas　sensíveis　a　500　µg/ml.　Com　base　nesses　resultados,　foi　confirmado　que　a　concentração　ótima　para　teste　foi　500　µg/ml.　Os　resultados　dos　testes　de　inibição　por　PNB　das　cepas　de　M.　tuberculosis　em　LJ　e　no　sistema　BACTEC　MGIT960　estão　resumidos　na　Tabela　1　e　os　das　cepas　NTM,　na　Tabela　2.　O　tempo　para　o　resultado　final　variou　de　4,6　a　16,3　dias　(média　de　6,3)　para　as　cepas　de　M.　tuberculosis　e　de　2,5　a　10　dias　(média　de　2,5)　para　as　de　NTM.　DISCUSSÃO　Os　serviços　de　laboratório　são　muito　importantes　no　diagnóstico,　gerenciamento　e　investigação　epidemiológica　da　TB　e　outras　doenças　micobacterianas.　O　papel　de　cada　laboratório　difere　de　acordo　com　as　necessidades　locais　e　restrições　financeiras.　No　Brasil,　como　na　maioria　dos　países,　os　serviços　bacteriológicos　são　organizados　de　forma　hierárquica.　As　autoridades　estaduais　da　saúde　determinam　o　nível　dos　serviços　de　TB　que　cada　laboratório　é　capaz　de　proporcionar　ou　é　considerado　necessário.　Na　maioria　dos　laboratórios,　a　cultura　de　micobactérias　baseia-se　em　técnicas　convencionais　e　utiliza　o　meio　LJ.　Os　laboratórios　de　referência　recebem　as　culturas,　principalmente　em　meio　sólido,　dos　vários　laboratórios　para　dar　continuidade　à　identificação　das　micobactérias　até　o　nível　de　espécie　e　realizar　os　testes　de　sensibilidade　aos　antimicrobianos.　A　diferenciação　presuntiva　entre　MTC　e　NTM　pode　ser　feita　pelas　características　culturais　(colônias　rugosas　de　coloração　palha)　e　pela　observação　microscópica,　da　formação　de　corda　evidenciada　pela　coloração　de　Ziehl-Neelsen　(ZN)13,14　,　de　uma　cultura　positiva.　Isto　não　é,　entretanto,　uma　diferenciação　definitiva,　uma　vez　que　algumas　NTM　também　produzem　corda.　A　identificação　conclusiva　do　MTC　pode　ser　obtida　pela　utilização　de　testes　convencionais,　tais　como　o　teste　da　niacina,　redução　do　nitrato　ou　produção　de　catalase,　porém,　estes　procedimentos　são　demorados.　Os　resultados　dos　testes　de　inibição　das　93　cepas　do　MTC　com　a　utilização　do　sistema　BACTEC-MGIT960　com　500　µg/ml　de　PNB　foram　concordantes　com　os　resultados　dos　testes　convencionais　realizados　em　LJ　e　com　os　resultados　relatados　anteriormente　na　literatura5,11,12,15　.　Todas　as　cepas　do　MTC,　incluindo　sete　cepas　padrões　do　ATCC®　e　86　isolados　clínicos,　foram　sensíveis　ao　PNB　em　LJ　e　no　meio　BACTEC-MGIT960.　Das　oito　cepas　padrões　NTM　testadas　com　PNB,　seis　foram　resistentes　em　LJ.　M.　xenopi　e　M.　marinum　foram　sensíveis.　Quando　os　resultados　foram　comparados　com　os　obtidos　com　BACTEC　MGIT960,　a　cepa　de　M.　xenopi　foi　considerada　resistente　nos　dois　locais　participantes.　A　cepa　padrão　de　M.　marinum　foi　sensível　no　Local　1　e　resistente　no　Local　2.　Dos　53　isolados　clínicos　representados　por　seis　espécies　de　NTM,　todos　foram　resistentes,　exceto　uma　cepa　de　M.　kansasii.　Em　concordância　com　Rastogi　et　al.7　,　a　discriminação　entre　M.　marinum　e　M.　kansasii　não　foi　completamente　alcançada.　Entretanto,　esses　dados　conflitantes　não　prejudicam　a　utilidade　do　teste　de　inibição　por　PNB　combinado　com　o　sistema　BACTEC　MGIT960,　uma　vez　que　M.　kansasii　requer　um　tempo　menor　para　produzir　crescimento　visível　do　que　M.　tuberculosis,　e　M.　marinum　geralmente　precisa　de　temperaturas　de　crescimento　menores.　O　tempo　médio　para　obtenção　de　identificação　presuntiva　do　MTC　pelo　teste　de　inibição　no　sistema　BACTEC　MGIT960　foi　de　6,3　dias,　enquanto　que　os　resultados　em　meio　sólido　foram　obtidos,　em　sua　maioria,　após　uma　incubação　mínima　de　20　dias.　O　principal　achado　desta　análise　foi　a　possibilidade　de　combinar　o　método　recomendado　tradicionalmente,　proposto　por　Tsukamura　&　Tsukamura　em　19645　,　com　a　metodologia　moderna,　segura　e　rápida,　o　BACTEC　MGIT960.　Em　resumo,　ele　representa　a　possibilidade　de　fornecer　resultados　rápidos　e　confiáveis　em　locais　onde　uma　alta　prevalência　da　TB　demanda　procedimentos　rápidos　para　identificação　e　testes　de　sensibilidade　frente　a　drogas　antituberculose.　Como　sugerido　anteriormente,12　os　seguintes　procedimentos　devem　ser　observados:　1)　realizar　a　identificação　presuntiva　do　MTC　pelas　características　culturais　(colônias　rugosas　de　coloração　palha)　em　adição　ao　exame　microscópico　de　esfregaço　em　lâmina　de　cultura　positiva　corado　por　ZN　para　observação　da　formação　de　corda,　e　2)　realizar　testes　combinados　de　sensibilidade　e　PNB　em　cepas　identificadas　presuntivamente　como　MTC.　Para　isso,　preparar　um　tubo　controle,　tubos　para　testes　de　sensibilidade　antimicrobiana　do　sistema　BACTEC　MGIT960　e　um　tubo　adicional　de　PNB.　Agradecimentos　Agradecemos　imensamente　o　apoio　da　Becton　Dickinson,　que　providenciou　o　meio　para　este　estudo　Correspondência　para:　Carmen　Maria　Saraiva　Giampaglia,　MD,　Setor　de　Micobactérias,　Instituto　Adolfo　Lutz,　Av　Dr　Arnaldo,　351　São　Paulo,　Brasil.　Tel:　(_55)　11　3068-2986.　Fax:　(_55)　11　3085-3505.　e-mail:　hrgiampa@uol.com.br　Artigo　submetido　em　26　de　outubro　de　2006.　Versão　final　aceita　em　7　de　abril　de　2007.　Tabela　1.　Avaliação　do　teste　de　inibição　por　PNB　no　meio　LJ　e　no　BACTEC　MGIT960　para　identificação　do　complexo　M.　tuberculosis　Local　1*　Local　2†　Catalase　MGIT　LJ　MGIT　Cepas　Niacina　Nitrato　68o　C　PNB　PNB　PNB　Espécies　n　P　N　P　N　P　N　S　R　S　R　S　R　M.　tuberculosis　(isolados　clínicos)　86　86　0　86　0　0　86　86　0　86　0　86　0　M.　tuberculosis　ATCC®　35838　1　1　0　1　0　0　1　1　0　1　0　1　0　M.　tuberculosis　ATCC®　35822　1　1　0　1　0　0　1　1　0　1　0　1　0　M.　tuberculosis　HRa　ATCC®　25177　1　1　0　1　0　0　1　1　0　1　0　1　0　M.　tuberculosis　HRv　ATCC®　27294　1　1　0　1　0　0　1　1　0　1　0　1　0　M.　tuberculosis　Erdman　ATCC®　35801　1　1　0　1　0　0　1　1　0　1　0　1　0　M.　africanum　ATCC®　25420　1　0　1　0　1　0　1　1　0　1　0　1　0　M.　bovis　ATCC®　19210　1　0　1　0　1　0　1　1　0　1　0　1　0　*　Laboratório　Universitário　de　Referência:　Laboratório　de　Micobacteriologia,　Programa　Acadêmico　de　Tuberculose,　Universidade　Federal　Rio　de　Janeiro.　†　Laboratório　Estadual　de　Saúde　Pública:　Laboratório　de　Referência　Estadual　de　Micobactérias,　Instituto　Adolfo　Lutz,　Secretaria　Estadual　de　Saúde　do　Estado　de　São　Paulo.　PNB　=　ácido　ρ-nitrobenzóico;　LJ　=　Löwenstein-Jensen;　MGIT　=　Mycobacterium　Growth　Indicator　Tube;　P=　positivo;　N　=　negativo;　S　=　sensível;　R　=　resistente;　ATCC®　=　American　Type　Culture　Collection.　Tabela　2.　Avaliação　do　teste　de　inibição　por　PNB　nos　meios　LJ　e　BACTEC　MGIT960　para　identificação　de　micobactérias　não　tuberculosas　Local　1*　Local　2†　MGIT　PNB　MGIT　PNB　LJ　PNB　Cepas　Espécies　n　=　61　S　R　S　R　S　R　M.　marinum　ATCC®　927　1　1　0　0　1　1　0　M.　chelonae　ATCC®　35752　1　0　1　0　1　0　1　M.　terrae　ATCC®　15755　1　0　1　0　1　0　1　M.　avium　ATCC®　25291　1　0　1　0　1　0　1　M.　intracellulare　ATCC®　23434　1　0　1　0　1　0　1　M.　kansasii　ATCC®　12478　1　0　1　0　1　0　1　M.　xenopi　ATCC®　19250　1　0　1　0　1　1　0　M.　gordonae　ATCC®　14470　1　0　1　0　1　0　1　M.　avium　24　24　NR　NR　0　24　0　24　M.　kansasii　14　14　NR　NR　2　12　0　14　M.　gordonae　2　2　NR　NR　0　2　0　2　M.　fortuitum　5　5　NR　NR　0　5　0　5　M.　chelonae　4　4　NR　NR　0　4　0　4　M.　abcessus　4　NR　NR　0　4　0　4　*　Laboratório　Universitário　de　Referência:　Laboratório　de　Micobacteriologia,　Programa　Acadêmico　de　Tuberculose,　Universidade　Federal　Rio　de　Janeiro.　†　Laboratório　Estadual　de　Saúde　Pública:　Laboratório　de　Referência　Estadual　de　Micobactérias,　Instituto　Adolfo　Lutz,　Secretaria　Estadual　de　Saúde　do　Estado　de　São　Paulo.　PNB　=　ácido　ρ-nitrobenzóico;　LJ　=　Löwenstein-Jensen;　MGIT　=　Mycobacterium　Growth　Indicator　Tube;　P=　positivo;　N　=　negativo;　S　=　sensível;　R　=　resistente;　ATCC®　=　American　Type　Culture　Collection.