一、目的和要求
掌握比色法测定土壤速效磷的方法,了解土壤中磷素形态及其土壤供磷能力与土壤速效磷的关系。掌握土壤速效磷的浸提,浸提液的处理,标准曲线制作,显色,比色,计算。
二、内容与原理
酸性土壤中的磷主要是以Fe—P,A1—P的形态存在,利用氟离子在酸性溶液中络合Fe3++和Al的能力,可使这类土壤中比较活性的磷酸铁铝盐被陆续活化释放,同时由于H的作用,也能溶解出部分活性较大的Ca—P,然后用钼锑抗比色法进行测定。 3+
三、主要仪器及试剂配制
仪器:塑料杯,往复式振荡机,分光光度计或光电比色计
试剂:
(1)0.03molL-1NH4F—0.025 molL-1HCl浸提剂
称取1.11克NH4F溶于800毫升水中,加1.0molL-1HCl25毫升,然后稀释至1升,贮于塑料瓶中,其它试剂同前法。
(2)钼锑抗试剂
称取酒石酸锑钾(KSbOC4H4O6)0.5克,溶于100毫升水中,制成5%的溶液。
另称取钼酸铵20克溶于450毫升水中徐徐加入208.3毫升浓硫酸,边加边搅动,再将0.5%的酒石酸锑钾溶液100毫升加入到钼酸铵液中,最后加至1升,充分摇匀,贮于棕色瓶中,此为钼锑混合液。
临用前(当天)称取1.5克左旋抗坏血酸溶液于100毫升钼锑混合液中,混匀。此即钼锑抗试剂。(有效期24小时,如贮于冰箱中,则有效期较长。)
(3)磷标准溶液
称取0.439克KH2PO4(105℃烘2小时)溶于200毫升水中,加入5毫升浓H2SO4,转入1
-1升量瓶中,用水定容,此为100 mgkg磷标准液,可较长时间保存。取此溶液稀释20倍即
-1为5 mgkg磷标准液,此液不宜久存。
四、操作方法与实验步骤
1、称取通过1毫米筛孔的风干土样品5克(精确到0.01克)于150毫升塑料杯中,加入
-1-10.03molLNH4F—— 0.025 molLHCl浸提剂50毫升,在20—30℃条件下振荡30分钟,取出后立即用干燥漏斗和无磷滤纸过滤于塑料杯中,同时作试剂空白试验。
2、吸取滤液10—20毫升于50毫升容量瓶中,加入10毫升0.8M H3BO3,再加入二硝基酚指示剂2滴,用稀HCl和Na0H液调节pH至待测液呈微黄,用钼锑抗试剂5毫升显色,并用蒸馏水定容,摇匀,在室温高于15℃的条件下放置30分钟,用红色滤光片或660nm波长的光进行比色,以空白溶液的透光率为100(即光密度为0),读出测定液的光密度,在标准
-1曲线上查出显色液的磷浓度(mgkg)。
3、标准曲线制备:
-1吸取含磷(P)5mgkg的标准溶液0、1、2、3、4、5、6毫升,分别加入50毫升容量
瓶中,加入10毫升0.8M H3BO3,再加入二硝基酚指示剂2滴,用稀HCl和Na0H液调节pH至待测液呈微黄,再加入钼锑抗显色剂5毫升,摇匀,定容即得0、0.1、0.2、0.3、0.4、
-10.5、0.6 mgkg磷标准系列溶液,与待测溶液同时比色,读取吸收值,在方格座标纸上以
-1吸收值为纵座标,磷mgkg数为横座标,绘制成标准曲线。
五、作业
根据以下公式计算土壤中速效磷的含量
-1 显色液磷mgkg数×显色液体积×分取倍数
-1 土壤中速效磷mgkg=—————————————————――――――――—————————
烘干土重(克)
-1-1 显色液磷mgkg数:从工作曲线查得显色液的磷mgkg数
显色液体积:50毫升
浸提液总体积(50毫升)
分取倍数=————--------—————————
吸取浸出液毫升数
六、参考指标
-1 土壤速效磷 mgkg等级
>20
很低 低 中等 高
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