标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。
注意事项:收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定,对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融,标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月,-70度可保存6个月。
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分: (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂); (2)酶标记的抗原或抗体(结合物); (3)酶的底物; (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中); (5)结合物及标本的稀释液; (6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水; (7)酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液终体积而异,在板式ELISA中一般采用3mol/L。主要包括37000多种一抗,1689种二抗,61种标签和标记物及42种试验小包装产品。
具体步骤如下:
1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中。一传二。传代后一半用我们的培养基,一半用你们的,以免细胞不适应而造成生长不好。
注:(1)各种试剂禁忌常年续加;
(2)同一品牌不同批号的试剂不能混用;
(3)续加试剂后要重新定标,标准液即开即用;
(4)不同厂家的试剂禁用同一标准液定标;
(5)质控必须用高、中、低值三个样本每天随患者标本测定;
(6) 抗凝剂的使用;
(7) 校准液的正确使用。如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。如果细胞已长满,即可进行传代培养.