PBS标准配方如下(1L): 成分 分子量 终浓度(mM) 用量(g) 近似用量(g) 半数用量(g) NaCl 58.44 137 8.006 8.00 4.00 KCl 74.551 2.7 0.201 0.20 0.10 Na 358.1410 3.581 3.58 1.79 KH 136.0861.76 0.240 0.24 0.12 理论上需要调pH,但在实际操作中,用蒸馏水或者超纯水配制后,pH 在7.3 左右,所以通常不用调pH。 10PBS 配方如下(1L): 成分 近似用量(g) NaCl 80.0 KCl 2.0 Na 35.8KH 2.410PBS 保存于4时,会析出晶体,且不易复溶,因此10PBS 要在室温保存。 PBS 在室温保存时容易长菌,应保存于4。 关于PBS 配方的比较与讨论: 我们平时会用到PBS,但网上PBS 的配方有多种,不知如何选择? 参考一: 看你的用途了。配方虽然有多种,但在“等渗”这个概念上相差都不大。常见的配方一般有三种: 1、0.9%的生理盐水 有些人也把它叫做PBS,实际上是错误的概念,它并没有“PB”,没有缓冲能力,纯化少用。 2、pH7.3,137mM NaCl,2.7mM KCl,10mM Na ,1.8mMKH 经验证,这种配方是没有办法加钙离子和镁离子的,会形成沉淀。此配方为0.01M PBS,所对应的质量分别为8g NaCl,0.2g KCl,1.44g(1.42g)Na 通常为Na 12H20,所以应该加3.58g。(修正过的)。这个配方比较常用的,含K,特别在分子生物学上常用。通常所说的浓度 0.01M 指的是缓冲溶液中所 有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免 疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100u/ml 青霉素和链霉素之后再调pH、定容、灭菌消毒。 3、pH7.2~7.4,20mM PB,150mM NaCl 这个配方是蛋白质纯化常用的PBS,配制起来比较方便。 具体到称量方面,要注意试剂是否有结晶水,分子量是不同的。 参考二: 关键看用途,如果是要活性,要考虑你的目的蛋白在什么样的环境下稳定,主要是掌握好钠钾平衡和 生理状态下离子强度,在此前提下有一定的缓冲能力。 参考三: PBS 是phosphate-buffered saline 的意思。 看看下面这个,或许对你有用 Applications PBS has many uses because dilutesubstances. rinsecontainers containing cells. PBS can drybiomolecules, watermolecules within structuredaround substance(protein, solidsurface. thinfilm substanceprevents denaturation otherconformational changes. Carbonate buffers may samepurpose lesseffectiveness. PBS can referencespectrum when measuring proteinadsorption ellipsometry.Additives can addfunction. example,PBS alsoused disengageattached clumpedcells. Divalent metals zinc,however, cannot applications,Good´s buffers recommended.Preparation manydifferent ways preparePBS. Some formulations do containpotassium, while others contain calcium magnesium.One mostcommon preparations describedbelow. simplestway PBSsolution usePBS buffer tablets. usePBS solution upon dissolution specifiedquantity distilledwater. standardvolumes: 100, 200, 500 1000ml. 10liter stock 10xPBS can dissolving800 NaCl,20 KCl,144 distilledwater, toppingup whendiluted 1xPBS shouldchange 7.4.When making buffer solutions, goodpractice alwaysmeasure pHdirectly using pHmeter. necessary,pH can adjustedusing hydrochloric acid sodiumhydroxide. resultant1x PBS should have finalconcentration 137mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Sodium Phosphate dibasic, mMPotassium Phosphate monobasic 7.4.Another preparation MolecularCloning Sambrook,Fritsch Maniatis,Apendix B.12 1xPhosphate-buffered saline (1x PBS buffer) use: 800ml NaCl(137mM) KCl(2.7mM) liter.Dispense sterilizethem autoclaving(20 min, 121, liquid cycle). Store roomtemperature. 参考四: 含钾盐的 PBS 应该和生理条件最为接近,可能是保持某些生物大分子功能性的要求,如酶的活性。而 在蛋白质纯化过程中,钠盐或钾盐所提供的就是离子强度,从方便性考虑,用一种就够了。钠盐最普通, 就选择氯化钠了。但也不是绝对的,在GST 亲和柱纯化中所用的平衡缓冲液就是含钾盐的PBS,可能因为 它的结合是酶和底物之间的关系吧。 PBS(Phosphate-buffered Saline) 分子克隆上的配方 NaCl 8g 137mM KCl 0.2g 2.7mM Na 1.44g10mM KH 0.24g2mM 溶到800ml 蒸馏水中,用HCl 调pH 到7.4,然后加水补充到1000ml,15psi(1.03410 )20min高压灭菌或 者滤膜除菌,室温保存。一般用于实验室中的 PBS 缓冲液都是这样配制,而不用摩尔分数表示。