1 IU 的顶体酶活性表示在 24℃下水解1.0 µmol/min DL-BAPNA, 顶体酶活性可根据以下公式计算:顶体酶活性(µIU/10 6 )=[(OD T )– OD C ]× 10 6 /1 485 ×精子计数(× 10 6 )。1.7 统计学分析各组观测值以均数±标准差(x- ± s)表示, 组间均数比较用 t 检验, 同组内均数间比较用单因素方差分析, 样本均数间两两比较用 q 检验。统计学处理采用SPSS11.0 软件进行, P<0.05为差异有 -224-统计学意义。2 结果2.1 小鼠体内受精的卵裂率和囊胚形成率实验组卵裂率为 88.3 ±1.3%, 高于对照组的62.1 ±3.5%, 差异有统计学意义(P=0.005)。受精卵体外培养3 d后囊胚形成率实验组为87.0±3.3%,与对照组的 83.0 ± 3.4% 相比, 差异无统计学意义(P=0.295)。2.2 小鼠 M II 期卵 IVF后受精率和囊胚形成率实验组IVF 率为 82.4 ± 2.9%, 高于对照组的62.5 ± 3.6%, 差异有统计学意义(P=0.015)。实验组囊胚形成率为 86.3 ± 3.5%, 与对照组的 83.7 ±2.3% 比较, 差异无统计学意义(P>0.05)。2.3 FITC-PSA 染色和顶体酶活性检测实验组完整顶体(AIS)率为89.1±1.2%, 与对照组的87.2± 2.4%相比, 无统计学差异(P= 0.257)。图1分别显示实验组和对照组精子的完整顶体(AIS)。2.4 顶体酶活性检测实验组顶体酶活性为 44.29 ± 5.49 IU, 高于对照组的 27.12 ± 4.87 IU, 差异有统计学意义(P=0.048)。3 讨论本研究结果显示实验组体内、体外受精率和卵裂率均高于对照组, 差异有统计学意义(P<0.05); 但其囊胚形成率 2 种受精方式均无统计学差异(P>0.05)。这表明补肾经典名方左 / 右归丸能显著提高精子的受精能力, 而对受精后的胚胎发育至囊胚无明显影响。现代临床研究表明 [1-4] , 左 / 右归丸对男性不育症有较好疗效, 但机理不详。邹震乾以左归丸治疗男性精液异常不育 [1] , 中医辨证属肾阴阳两虚者, 以左归丸加减治疗 1~2 个疗程即可见效。辜大为选用左归丸加黄芪为基础方按中医证型加味治疗精子异常者 [2] , 取得了满意的疗效; 对患者的精液量、精子数量、精子活动度均有明显的改善作用。上述研究证明, 左归丸能显著改善男性的生精功能, 但左/右归丸对精子受精能力即精子功能的研究至今仍未见报道。临床上不少精液常规正常的患者, 由于精子功能低下即精子受精能力(或穿卵能力)的减弱而不得不选择 ICSI。为了规避ICSI的遗传风险,如果能够通过中医药介入, 充分发挥中医药的助孕优势, 提高精子的受精能力, 改善精子功能, 将有助于提高精子功能低下患者做第一代试管婴儿——IVF 的机会, 也有助于提高IVF 的成功率。目前对左/右归丸调控精子受精能力的机理研究方面, 国内、外未见报道, 有许多未知领域值得我们去探索。本研究从左/右归丸对顶体功能的影响来探索其作用机理, 而评价顶体功能最重要的指A: 实验组 experimental group B: 对照组 control group图1 完整顶体精子(AIS)(FITC染色)Figure 1 The acrosome-intact spermatozoa (AIS)(FITC stain) -225-标即为精子完整顶体率和顶体酶活性 [6,7] 。完整的顶体形态是发生顶体反应的重要前提, 只有完整的顶体形态才能发生有效的顶体反应 [6] , 本研究中FITC-PSA染色显示AIS率组间无差异, 即在孕酮诱导下,实验组和对照组均能发生正常的顶体反应, 由此说明左/右归丸与顶体的形态发育无关。精子顶体酶活性检测是评价精子功能非常重要的指标, 也是临床上对不明原因男性不育患者较敏感的生物学指标之一 [7] 。本研究表明左/右归丸能显著提高小鼠精子的顶体酶活性, 因此我们认为左/右归丸有可能通过调节顶体酶活性来影响小鼠精子的受精功能。参考文献:[1] 邹震乾, 陈大舜, 易发银. 运用左归丸治疗男性病举隅. 辽宁中医学院学报, 2002, 4(1):40-2.[2] 辜大为. 辨证运用左归丸加味治疗精子异常43例临床观察. 中医药导报, 2005, 11(7):30-1.[3] 王琦, 王灿晖. 右归丸加减治疗男性雄激素缺乏综合征.浙江中西医结合杂志, 2004, 14(11):678-9.[4] 周长金. 中医药治疗勃起功能障碍的临床观察. 中国性科学, 2006, 15(1):32-3.[5] Kennedy WP, Kaminski JM, Van der Ven HH, et al. Asimple, clinical assay to evaluate the acrosin activity ofhuman spermatozoa. J Androl, 1989, 10(3):221-31.[6] Beaver L, Giebultowicz J. Regulation of copulation durationby period and timeless in Drosophila melanogaster. CurrBiol, 2004, 14(16):1492-7.[7] Zaneveld LJ. A simple, clinical assay to evaluate the acrosinactivity of human spermatozoa. J Androl, 1989, 10(3):221-31. (2011 年11 月16 日 收稿)