常用的方法有 RIA 法、 ELISA 法和免疫荧光法等。其中 ELISA 法最简便,RIA 法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次,均阳性时才确定为 阳性克隆进行扩增。 5)克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细 胞是不稳定的,有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多,而最常用的 是有限稀释法。 (1)显微操作法:在显微镜下取单细胞,然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂,效率低,故不常用。 (2)有限稀释法:将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后,按每孔 1 个细胞接种在培养皿中,细胞增 值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化, 所以为获得稳定的单克隆细胞株需经 2~3 次的再克隆才成。应该注意的是,每次克隆化过程中所有有意义的细胞都 应冷冻保存,以便重复检查,避免丢失有意义的细胞。 (3)软琼脂法:将杂交瘤细胞稀释到一定密度,然后与琼脂混悬。在琼脂中的细胞不能自由移动,彼此互不相混, 从而达到单细胞培养的目的。但此法不如有限稀释法好。 (4)荧光激光细胞分类法:用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞,然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性 选出细胞,并进行单细胞培养。 6)细胞的冻存与复苏 7)大规模单克隆抗体的制备 选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备,因为融合细胞随培养时间延长,发生污染、 染包体丢失和细胞死亡的机率增加。