1.2方法 1.2.1样品的分离与纯化称取209 100:1全叶芦荟冷冻干燥粉,置于索氏提取器中,以丙酮 200mL回流提取2h,加入2%的活性碳,趁热过滤以除去色素等杂质,将提取液减压浓缩、冷冻 169谱仪,以氯仿:乙醇:水(7:12:8)为固定相,保留值80%,主机转800 r/nfin,进样2mL,流动相由首端向尾 端洗脱,流速2.0 mL/min,示差折射检测仪检测(恒温300C,放大率x O.2),分别收集保留时间区域为 38~45min和112~123min两个主峰所对应的流份,合并5次分离所收集的流份,分别冷冻干燥, 保留时间保留时间区域为38~45min所对应为白色状粉体共1136.5mg,保留时间区域为112~ 123min 对应为柠檬黄结晶865.5mg。 将上述所得白色状粉体50.0mg加5.0mL水超声波助溶,上PARTISIL.10 ODS制备柱 (150x20.0mm,10 300C,放大率x0.5),上柱时分5次进样,每次1.0mL,收集保留时间为8.2、11.5和13.8rmn的三 流份。合并5次收集的流份,分别冷冻干燥,得三种白色晶体,各为17.1mg、20.4mg、11.2mg。 1.2.2芦荟多糖色谱和光谱性质的测定 1.2.2.1 HPLC分析”“J:将1.2.1所得白色粉体和三种白色晶体各配成0.1mg/mL 种溶液,分别上PARTISIL.5ODS色谱柱(150x6.0ram,5 室温,检测器用示差折射检测(恒温300(2,放大率x10.O),进样量为30ul。 1.2.2.2 uV分析”“1:将三种白色晶体分别配成lmg/mL的水溶液在紫外/可见光度计上作 1000~190 nm全程扫描;将三种白色晶体分别配成lmg/mL多糖.硫酸.苯酚液在1000~300nm作 扫描。 1.2.2.3 IR分析【9-”1: 取多糖20.0mg,加入适量KBr压片,在红外光谱仪中测定。 1.2.3芦荟甙色谱和光谱性质的测定 1.2.3.1薄板层析:取柠檬黄结晶体和芦荟甙标准样品(由国际芦荟协会提供)各5mg,分别溶 于5mL甲醇中。各取样5“1分别点于同一硅胶G薄层板上,分别在乙酸乙酯:甲醇:水(100:17:13 v,v,v)和正己烷:乙酸乙酯:甲酸(30:10:5 v,v,v)系统中展开,取出,晾干,在365nm紫外灯下对照 斑点。 1.2.3.2 HPLC分析:取柠檬黄结晶体和芦荟甙标准样品各5mg,分别溶于5mL甲醇 PARTISIL.5ODS色谱柱(150x6.0mm,5 m),以甲醇淋洗,流速为lmL/min,柱温为室温,检测器 为uv 354nm,进样量为20ul。 1.2.3.3 uV分析:取柠檬黄结晶体5mg溶于5mL甲醇中在紫外/可见光度计上作1000~190 am 全程扫描。 1.2.3.4 IR分析:取柠檬黄结晶体20.Omg,加入适量KBr压片,在红外光谱仪中测定。 2结果与分析 2.1芦荟多糖色谱和光谱性质的测定 2.1.1 FIPLC分析结果:A溶液经PARTISIL.5 ODS色谱柱(150x6.0mm,5“m)洗脱分离,得到 3个主峰(表1),B、c、D三种溶液经PARTISIL.50DS色谱柱(150x6.0mm,5 pm)洗脱分离 各得 一个孤峰,其保留值与A的3个主峰分别对应。 2.1.2 uV,可见光谱分析:3种白色晶体的水溶液全程扫描显示有相同的吸收图谱,呈现PSP、 PSK活性多糖相似的紫外,可见吸收特征,如都有末端吸收,400rim以后有较强吸收等,而一般淀粉 类多糖无此吸收f8】。三种白色晶体与硫酸.苯酚显色液反应的特征吸收峰如(表1),320nm、 420nm 和490nm叁处吸收峰再次表明了芦荟多糖与苯酚进行缩合反应后的紫#b/可见吸收峰特征, 淀粉类多 糖无此吸收口】。 170 表1多糖的色谱和光谱特征值 HPLC保留时间(min) 10.5 13 15.1UV/可见光谱特征吸收峰492(s) 488(s) 488(s) (nm)426(m) 421(m) 423(m) 321(m) 323(m) 319(m) 302(w) IR谱特征吸收峰(cm„1) 34025(s) 2926 7(m)3431 2928.8(m)3433.6(s)29295(m) 1732.1(m) 1646.6(s) 1741 1642.2(m)1740 1647.1(m)1248 1072.11239.5(s)1067.4(s) 1253.5(s)1058 7693(奶2.1.3 IR分析:3种多糖的红外光谱特征吸收峰如(表1),在3.43x103cm-1或3.40x103cm-1左右 和羧基)形成多种方式的氢键所致:2.92x103cm"1cm左右有吸收峰,这是糖类C.H键的伸缩振 是糖类的特征吸收;在1.73x103cm„1和1.25x103cm。1左右有吸收峰,说明有乙酰基的存 1.64x103cm~、1.066x103cm"1左右有吸收峰,说明有羧酸存在,因而这些多糖均为酸性多糖。在7.968x102crn-1处是甘露糖的特征吸收峰。 表1的数据经与IAscALOEVERA STANDARD DATABASE数据库(由国际芦荟协会 提供)比较,三种白色结晶体应分别为2,3乙酰化B.(1—4)D.甘露聚糖、6乙酰化B一(1—4)D 一甘露聚 糖、和B.(1—4)葡萄甘露聚糖。 2.2芦荟甙色谱和光谱性质的测定 2.2.1薄板层析:柠檬黄结晶体样品和芦荟甙标准样品的甲醇溶液在硅胶G薄板上展开后斑 一致。