龙马腰痛胶囊是南充市中医医院研制的中药复方制剂,已取得四川省食品药品监督管理局医院制剂批准文号[SZBZ20070396-10(Z)]。能温经通络,缓急止痛,用于腰椎间盘突出、腰肌劳损等所致的腰腿疼痛[1]。其组方较复杂,含有地龙等三种动物药材,其中蜈蚣和全蝎已有适宜的定性鉴别方法[2]。本次实验目的是为了探讨龙马腰痛胶囊组方中地龙的薄层色谱鉴别方法,现将实验结果报告如下:
1 仪器与材料
1.1 实验仪器及设备
LC1004型电子分析天平(上海良平仪器仪表有限公司),KQ2200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),TL80-1型医用离心机(姜堰市天力医疗器械有限公司),ZF-20C型暗箱式紫外分析仪(上海宝山顾村电光仪器厂),202-1型干燥箱(上海市实验仪器总厂)。
1.2 实验材料与试剂
龙马腰痛胶囊和地龙阴性样品为南充市中医医院制剂室配制,经本院药品检验室检验合格(批号: 20110902);地龙对照药材(批号:120919-201012);全蝎对照药材(批号120927-200613);蜈蚣对照药材(批号:120918-200809);亮氨酸对照品(批号:140687-200401);硅胶G(青岛海浪硅胶干燥剂厂,批号:091110);羧甲基纤维素钠(天津市福晨化学试剂厂,批号:20071012);对照药材与对照品均由中国药品生物制品检定所提供;化学试剂均为分析纯。
2 方法及结果
2.1亮氨酸对照品实验
2.1.1供试品的制备 取龙马腰痛胶囊10粒(相当于地龙处方量4.15g),除去囊壳,加水40ml,加热至沸,放冷,离心,取上清液作为供试品溶液。
2.1.2阴性对照品的制备 取本制剂组方除地龙外的其余中药饮片,按照该制剂的制法制成阴性样品,再按照供试品制备方法制成阴性对照品溶液。
2.1.3地龙对照药材的制备 取地龙对照药材1g,按照供试品制备方法制成对照药材溶液。
2.1.4亮氨酸对照品的制备 取亮氨酸对照品加水制成每1ml含1mg的溶液,即得。
2.1.5照薄层色谱法实验,取亮氨酸对照品溶液、地龙对照药材溶液各5ul、供试品溶液、阴性对照品溶液各10ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(4:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茚三酮试液,在105℃加热至斑点清晰[3]。实验观察发现,在与亮氨酸对照品色谱相应的位置上供试品、阴性样品和地龙对照药材均显相同颜色的斑点;但阴性样品斑点小于其他斑点(见图1)。
2.2地龙对照药材实验
2.2.1供试品的制备 取龙马腰痛胶囊20粒(相当于地龙处方量8.3g),除去囊壳,加三氯甲烷80ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加无水乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。
2.2.2地龙对照药材的制备 取地龙对照药材1g,按照供试品制备方法制成对照药材溶液。
2.2.3阴性对照品的制备 取阴性样品,按照本项实验供试品制备方法制成阴性对照品溶液。
2.2.4照薄层色谱法实验,取对照药材溶液5ul、供试品溶液、阴性对照品溶液各10ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-丙酮(9:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯下(365nm)检视[4]。实验观察发现,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点;阴性对照品亦出现与龙马腰痛胶囊供试品相同颜色的荧光斑点,但斑点较小(见图2 )。
2.3全蝎、蜈蚣筛查实验
2.3.1分别取蜈蚣、全蝎对照药材1g,按照上述两种实验方法分别制成对照药材溶液。
2.3.2取亮氨酸对照品鉴别实验中供试品溶液和阴性对照溶液各10ul及亮氨酸对照品溶液、地龙对照药材溶液、蜈蚣对照药材溶液、全蝎对照药材溶液各5ul 按照上文2.1.5项下的方法进行薄层色谱实验。实验观察发现,在与亮氨酸对照品色谱相应的位置上,供试品、阴性对照品、地龙对照药材、蜈蚣对照药材、全蝎对照药材均显相同颜色的斑点,但是阴性对照品斑点小于其它斑点(见图3)。
2.3.4取地龙对照药材实验中供试品溶液和阴性对照溶液各10ul及地龙对照药材溶液、蜈蚣对照药材溶液、全蝎对照药材溶液各5ul按照上文2.2.4项下的方法进行薄层色谱实验。实验观察发现,在与地龙对照药材色谱相应的位置上供试品、阴性对照品、全蝎对照药材均显相同的斑点,但是阴性对照品斑点小于龙马腰痛胶囊供试品;蜈蚣对照药材溶液未见斑点(见图4)。
图1: 图2:
亮氨酸对照品实验的鉴别 地龙对照药材实验的鉴别
1地龙对照药材; 1地龙对照药材
2亮氨酸对照品 2龙马腰痛胶囊供试品
3龙马腰痛胶囊供试品 3龙马腰痛胶囊地龙阴性
4龙马腰痛胶囊地龙阴性
图3: 图4:
亮氨酸对照品筛查实验鉴别 地龙对照药材筛查实验鉴别
1亮氨酸对照品 1地龙对照药材
2地龙对照药材 2龙马腰痛胶囊供试品
3龙马腰痛胶囊供试品 3龙马腰痛胶囊地龙阴性
4龙马腰痛胶囊地龙阴性 4全蝎对照药材
5全蝎对照药材 5蜈蚣对照药材
6蜈蚣对照药材
3 结果与讨论
3.1本次实验结果说明,按照上述两种实验方法不能对龙马腰痛胶囊中的地龙进行有效的鉴别。阴性对照品的斑点均比龙马腰痛胶囊供试品斑点小,笔者认为其原因是缺地龙药材而减少了该成分的含量。
3.2龙马腰痛胶囊组方中含有地龙、蜈蚣和全蝎三种动物药材,上述两种实验方法不能有效地将三者分离。笔者认为其原因与这三种动物药材所含成分有关,如三者均含氨基酸类(包括亮氨酸)成分,地龙、全蝎均含有脂肪酸成分 [5]。因此,中药制剂组方中若同时含有地龙、蜈蚣、全蝎三种药材,则地龙难以进行有效地鉴别;中药制剂组方中若含有地龙、全蝎两种药材,亦难以对地龙进行有效地分离和鉴别;中药制剂组方中若含有地龙、蜈蚣两种药材,则可以采用地龙对照药材实验法对地龙进行有效地鉴别;中药制剂组方中若仅含地龙药材,则可采用上述两种实验方法进行鉴别。
3.3经查阅文献资料,所载其他两种地龙的薄层色谱鉴别方法[6],因实验条件限制,未作进一步的验证。因此,地龙的专属性更强的薄层色谱鉴别方法有待于进一步的探讨。
参考文献
[1]