2 9 9 2 年第 。 期 自制 尿 素 试纸快速检测 胃 幽 门螺 旋 菌 的研究 南京 大 学 医 学 院 附 属 鼓楼 医 院 木 文 以 自 制尿 素 试 纸 检 测 胃 幽 门 螺旋菌 (H 确 诊 的 胃病 患者 两 者 符 合率为 9 5 , 张志 宏 韩树 堂 . 郭文 琦 ’ P) , 其最适 p H 为 6 . 5 。 共检 测 1 8 4 例 经 ‘ 镜 和 病 理检 测 了 。 H P 阳 性 检 出率 为 6 6 3 % . . , 敏感 性为 9 9 。 82 % , 特 异 性1 0 % 与 病 理 检 测 法 对照 , 65 , % 检 测 结 果 1 分 钟 内 即 可确 定 认 为 自 制 尿素试 纸 是 一 种检 测 胃H 5 , 即 勺简 易 新 方法 , 。 在正 常情 况 下 人 的 胃粘 膜 无 尿 素酶 而 当 胃 粘膜有 幽 门螺 旋 菌 ( H H e 性 + , 并 根 据 紫 红 色 由 浅 到 深 的 程度 变化 什 、 分为 。 l e o ba e i tc r o p yl r i , 、 什十 三级 , 无 紫 红 色 出现 则为 ( 一 ) . ) P 感 染时 。 , 由于 H P 含有 丰 富 的 胞 外尿 素 酶 目前 , , P 分 别 配 制 不 同p H 值 ( H 为 5 7 . 9 ; ? . 6 2 , 6 8, . 因此 检 测 尿 素 酶 的存 在 即 可 以 诊 断 胃 粘 膜 有 H P感 染 川 ) 1 系 列 尿 素 甲酚红 混 合液 一 , , 并 按 上 述 方法 . 国 内外 均 有 多种 检 测尿 素 , 制成 相 同 大小 的 试 纸 条 、 与p H 6 5 的 试纸及 病 。 酶 的 试 剂 盒 但 一 般 以 液 体或 琼 脂 为 载体 且一 , 理 细菌 学检测 于 同 一 组织 标本 上 作 对 照 试 验 4 些 检测 方法 需 要 数 小 时 甚 至 2 小时才 能 作 出 了尿 素试 纸 旨在 以 固 诊 断 为 此 我 们试 制 , 。 , , 三 病 理 细 菌学 检测 0 取 上 述 方 法 中的 另 一 组 织 块 置于 1 % 甲 醛 溶液 中 固定 , 体 为载 体 , 缩短 观 察 时 间 。 , 降 低 检 测 成本 , 使 经 石 蜡 包 埋切 片 按 改 良 G i , , “ m s a 之 为 基 层 医 院推 广 应 用 染色 , 在 油 镜下 作 H P 计 数 , 。 以 H P 数 量 最 多的 , 材 料 与方 法 视 野 中菌 数 为 标准 分 为 。 四级 s例 , < 5 5 ~ 1 0 , > 1 0 一 胃镜 及 病 理诊 断 经 临 床 验 证 1 8 例患者 男 n 4 , 、 女6 例 , 实 验数 据 以 x 检 验确 定实 验组 与对 照 组 的 “ 8 3 年龄1 ~ 6 岁 , 平 均4 岁 2 。 经 胃镜 及病 理 诊断 , 差 异显 著 性 、 , P < 0 0 认 为有 统 计 学 5 . 意义 。 后 , 慢 性 浅 表 性 胃 炎1 0 5 例 1 慢性 萎 缩 性 胃炎 8 结 一 果 , 2 例 (其 中包 括 慢性 浅 表萎缩 性 胃 炎 胃炎 46 例 优状 , , 两 种检 测 方法 的比 较 1 例) 例 , , 胃溃疡 4 例 3 2 , 十二 指肠 球 部 溃 疡 , 。 如表 130 ) 13 0 , 所示 , 尿 素试纸 检 测 1 2 例 阳 性 . 例 (包 括 复 合 性 溃疡 1 例 ) 幽 门管 馈 疡 4 例 例 , 阳性 检 出率 为 6 6 例 H P阳 性 二 、 3 % , 放感 性 。 . 93 . 85 % (1 2 2/ 胃癌 十二 指肠 炎 , ) 特 异 性 1 0 % (5 4 / 5 4 , 病 理 细菌 学 检 出 5 6 % 。 。 胃镜 检 查时 e 距 幽门 s m 常 规 在 胃窦 大 弯侧 或小 弯侧 约o . 0 阳 性检 出 率 7 . 两 种方 内取 胃粘 膜 一 块 , 4 x o . ze m Z , , 法 H P 的符 合 率 9 5 6 5 % (1 7 6 / 1 8 4 ) 尿 素试 纸 法 的 反 应时 间 , 无 菌 操 作下 分 为 两块 一 块 作尿 素 试 纸法 检测 另 一 块 送病 理 作 细 菌 学 检 测 为 对 照 。 2 我 们观 察 了 5 例 尿 素 试 纸 法 阳 性 的 紫红 色 二 6 5 . 、 尿 素 试纸 法 一 出现 时 间 表 1 4 结果如表 2 所示 。 1 分 钟 显 示 阳性 5 , 配 制尿 素 甲酚 红 混 合液 3 m l 调 整p H 至 , 尿 素 试 纸 法 与 病 理 细 菌学 检 测结果 比较 c 浸 泡 一张 功g m 的滤纸 O 小 时 取 出滤纸 . , 后 于 3 7 C 烤 箱 内烤干 , 并 裁 剪成 1 。 2 x o . c 6 m 的 条形 上 , , 常温 下干 燥器 中保 存 , 取 条 状试 纸一 张 组织 块 , 置于 经 消 毒 后 的 玻 片 , 用 无 菌 眼 科 镊 夹取 胃粘 膜 组 织 块 并 吸干 。 放 在试 纸 中央 , 取 另 一 玻 片覆 盖 在上 常温 下 静 置 观 察 合 计 13 0 54 面 以 巧 分 钟 内变 为 紫红 色 判 断 H P 检 出 阳 试纸在 , 井 轻轻 压 紧 两 玻 片 , 江 苏 院 药 的有 2 例 5 , 阳 性 出现 率为 4 8 , , . 08 %, . 5 分钟显 , 。 表2 尿 素试 纸 法 阳 性 的 反 应 时 间 阳 性 累计例 数 示 阳 性的有 4 例 2 果表 明 三 , 阳 性 出现 率 为8 0 7 % 5 1 反 应 时间 (边 二 ) m + 十 + + 分 钟全 部显 示 阳 性 阳性 出现 率 为 10 % 结 尿 素试纸 法 检测 H P 在1 分 钟 内可 以 5 。 合计 + + 阳 性 出现 率 (% ) 作 出诊 断 、 2 4 25 42 12 。 4吕 08 。 不 同 p H 值尿 素试纸 的结 果 比 较 . 32 80 7 7 。 分 别 用p H 为 5 试纸 与p H 6 5 3 。 9 , 6 2 . , e 8 . , 7 . 1的 尿素 照 。 33 7 . 52 . 100 。 00 尿 素试 纸 及病 理 细 菌 学 检 测 作对 结 果 如表 3 所示 p HS 9 及p H 6 2 的尿素 表 不 同 pH 尿 素 试 纸 检 浏 结 果 比 较 阳性 出现 率 (% ) . 14 0 01 。 。 29 二 。 2 8 57 协价 。 6 4 28 . 78 57 92 。 86 , 。 64 28 P< 0 0 5 一 二P< . 试纸 H P 阳 性检 出率 明 显低 于 病 理细 菌学检 出 P 率( < 6 . 四 2 1 、 胃粘 膜活 检部 位 与 尿 素 试 纸 H P 阳 性 胃炎 及 3 例 十 二 指 肠 球部 溃 疡 9 , 。 ? 1 0 . ); pH 7 1 的尿 素 试 纸 H P 阳性 检 出 率 ’ 检 出率 的关 系 7 例 慢性 明 显 高于 病 理 细 菌学 检 出率 ( p < 8 和p H 6 5 0 . 5 0 ) 0 . ’; r p H 的尿 素试纸 阳 性检 出 率 与病 理细 05 ) , 患者 行 胃镜 检 查 时 c 弯侧 距 幽 门 s m 处 活 检部 位为 窦 大弯侧 或小 菌学 检测 率 无 明 显 的 统 计 学 意 义 ( p > 但p H 6 5 . 。 在 慢 性 胃 炎患 者尿 素 试 纸 的尿 素 试纸 阳 性检 出率 与 病 理细 菌学 。 H P 阳 性 检 出 率 窦小 弯 侧 明显 高于 窦 大 弯侧 , 检测 率相 近 表 故 认 为p H 。 6 5 . 的尿 素 试纸 较适 合 P ( < 0 . 5 0 ) , 而 对十二 指肠 球 部溃 疡 的 病 人 来 见表 4 、 于 作 H P 检测 说 , 两 处 活 检部 位 无 明 显差 异 5 。 4 慢性 胃炎 患 者 胃拈 膜 活 检 部 位 对 H P 检 浏 的影 响 尿 素 十 试 纸 一 法 合 活 丰 部位 众 计 阳 性检 出率 ( 外 ) 犷 窦 大 弯 窦 小 弯 合 份 50 22 72 55 。 69 44 8 7 2 7. 。 计 。 98 2 9 77 。 17 P< 0 0 5 表 活 5 十 二 指 肠 球 部 清 疡 患 者 胃 拈膜 活 检 部 位 时H P 检 浏 的 影 响 尿 素 + . 试 纸 一 法 合 计 检 阳 性 检 出率 ( % ) 窦 一 窦 大 一 小 弯 弯 18 19 又0 0 舀 。 90 94 。 . 4名 合 . 计 P> O 。 。 87 05 z 。 1年第 6 。 期 讨 目前 , 论 , 国 内 外 有许 多检 测 胃 H P 感 染 的 方 胃 粘膜 直接 涂 片 , 织 块 中作 实 验 和对 照 尿 素 试纸 法 阴 性 , 。 在 实 验 中仍 有 。 8 例呈 现 。 法“ 盒 一8 1 而 病 理 检测 阳性 , 我们 认 为 , 如细 菌分 离 培 养法 , 染色 检 查法 “一 组织 切 片 染色法 尿素酶 试剂 ‘ 1 9 可 能 是 同 一组 织块 中也 有 H P 分 布的 不 规 律 性 我 们 还 观 察到 l s 血 清 学和 免 疫学 检查 法 。 等 , 其 中以 , 尿 素 试纸 检 测 H P时 与 。 胃 粘膜 活 检部位 有 一定 的关 系 部 溃疡 的 患 者 炎 患者 侧高 , 对 十二 指肠 球 对慢 性胃 , 尿 素酶 检 测法 较快 且准 确 可 靠 点 根 据 尿 素 酶在 常 温 , ~ 尿 素酶 检 测 法 , , 是 利 用 H P 含有 丰富 的 特 异 性 胞 外 尿 素 酶 的 特 解尿 素 产氨 利 用 后 邸全 。 胃窦 大 弯 侧 和 小 弯 侧 的 组 织 活 检 时 H P阳 性 检 出 率 无 明 显 影 响 , , 者 可 使 周 围环 境 中 p H 值 升 高的 原 理 而设 计 尿 素酶 检 测 法 一 般 以液体 及琼 脂 为 载体 时 间较长 , , 窦小 弯侧 的H P 阳 性 检 出率 较 窦 大 弯 。 检测 其 原 因 有 待 进 一 步 探索 , , 我们 认 为 。 为 达 数 小 时 甚至2 小 时 4 , 。 我们 设计 以 了 提 高 H P 阳性 检 出率 在 不 增 加病 人 痛 苦 的 试 纸 为 固体 载 体 的 尿 素酶 检测 法 , 与病 理 细 菌 . 情况 下 一 般 活 检 部 位 以 窦小 弯 侧 为优 学 检测 法对 照 具有 较 高的 敏 感性 (9 3 5 8 %) 。 , 参考 文献 〔1 〕 M o rr 较强 的特 异 性 (1 0 % ) 9 6 65 . 。 两 者 H P 检 出符合 率达 % , 而 且 检 测 成 本降低 了 1 0 , io 倍以上 , A e t e e] : La n e e t 19 86 t , 1 , : 1 49 l: 〔2 〕 口 ro ha n D Y t a l : La n ee 10 8 9 本 法 以试纸 为 载体 挤 压 出的液 体 应 速度 加快 , 仅 需 部 分组 织 块 中被 , 1 17 4 , 液 体量少 缓 冲成 分 少 , 。 组织 使反 MeN 198 5 , u l ty l 吕 CA M , W is o : l丈 La n c e 全 块 中尿 素酶 因挤 压 而 能 够得到 充 分释放 反 应 时 间大 大 缩 短 , 144 3 5 1 分钟 内 即 1 〔4 」 M e N 1 98 6 , u lt v 1 : CA M , W t a i, e R : L a n ee t 可 判 断 H P 检测 结 果 。 近5 %可在 0 分钟 内 出 〔5 〕 3 吕7 现 阳性 结果 因此尿 素 试纸 法 是 一 种快速 的 H P M N e u lt y CA M e l : G u t 2 98 9 , 30 , 检测 方法 pH 6 2 . 。 10 5 8 . 尿 素试纸 本 身 的p H 值为 6 , 5 , 与 pH S 9 . , 【6 〕 M o r, , h a ll 1 1 BJ 。 W a r ren l : JR : Lo n ee t pH 6 8 . 及p H 7 . 1 的 尿 素试 , 有 较高的特 异 性 和 敏感 性 与 病 理 细 菌 学 检 出 率一 致 具 且 H P 阳 性 检 出率 pH 。 纸 比较 , 19 8 4 13 1 1 o H a za , ll S L 82 ‘ t a Am J G a o t ro en te ro 1 9 召7 2 92 : 。 值过 低 或 过 大 , 〔8 」 杨 海涛 等 第一 军 医 大 学 学 报 e 19 89 30 : , 7 1 会 引起 假 阴 性或 假 阳 性 增 多 。。 d w *。 L: 。, 提 出的 H P 在 胃 粘膜 上 根 据G 不 规 律 分 布 的论 点 们 在 活 检时 , 、内 沪. , 自沪 . 、门 护侧, 六护勺 皇 我 〔9 〕 O d e r d a G 〔1 0 」 G o o t 0 1 e . G a u : t 1 9 89 , 9 12 o dw , n 宜 CS . t l JCl in Pa th l , 为 避 免实 验 中的 误 差 , , 19 86 38 1 127 1 (1 9 9 0 ; 乒 2 月 5 卜l} 稿 ) { 又 . 于 一 部 位 取 一块 组织 在 同一 组 中母 亲 有 H B 3 A g 、 南 京 部 分 儿宜 H B V 感 染 血 清 二 对 半 流 行 病学 监 浏 我们 于 1 0 5 5 ~ 3 7 吕7 人 采用 E L 19 9 0 年 期 间对 来院 门诊 及 住院患 儿 H B eA g 、 ‘ H B e A b 三 lt 者 j 。 , 一 其子 女 一 感染 , 多 数受染 率 为2 0 . , 呈 家 庭聚集现 象 , 经 对我 院三 年 资料分 析表 明 39肠 i 。。 o 。 : 198 8 年H , s B A g 阳性 A g . 年为 1 7 . 99 , % 提 示 H B, S I A , 法检 测 血 清 二对 半 : 。 年龄均 在 1 有 明显 下 降趋 势 ] 99。 为 13 年 . 19 88 , 年H , B A g 阳 性 率为 2 工 2 5 % 。 4 天~ 1 岁 。 根 据 调查 资料 分析 确 诊的 小 儿 乙 型 肝 炎 、 7 4 % 说 明 传 染严 重 程 度 有 所 好 转 推 测 对 该 病 的防 疫 意 识 增 强 。 , 大多缺 乏典 型症 状 肠炎 为 主 要表现 , 主 要以 发 热 。 上呼 吸 道感 染或 胃 、 原 因与 小 儿注 射 乙 肝 疫 苗 (本 工 作 曾 检 验 科 王 均 乐 等 同 志的 大力 协 助 同 时 伴有 恶心 呕 吐 腹痛 , 、 腹泻 。 卫 生 状 况 有所 改 善有 密 切 关 系 、 易误 诊 为 上 感 病 率为 高 峰 , , 急性 胃 肠炎 等 本地 区 在 春秋 两 季发 程平 、 迟富丽 、 刘 海禅 患 儿 多分 布幼儿 园 或 家 庭 中 尤 其 家庭 , 在此一并感谢 ) 匡 玉莲 〕 (南京 市 儿 宜 医 院 戈建 军