仪器、耗材
实验步骤一、玻璃器皿的收集和清洗
1. 玻璃器皿用后要立即将其收集到含有消毒剂(次氯酸盐,用清洁剂稀释,最少应含有300 μg/g 的氯,如常规用的次氯酸钠)
的清洁剂(如,7× 或Decon)中。在浸泡或清洗前绝不能让玻璃器皿变干,否则会非常难清洗。
2. 在清洁剂中浸泡过夜。
3. 漂洗:
(a) 次日早,用试管刷手工刷洗或机器刷洗玻璃器皿,自来水冲洗 4 次后用去离子水冲洗 3 次。保持水流喷射非常有必要,否则每次都要将瓶子装满后再倒空。将许多瓶子固定在篮子中会使冲洗速度加快。
(b) 机器清洗不需要清洁剂。如果接一个龙头,则可减少两次自来水冲洗和一次去离子水冲洗的过程。
4 . 在彻底冲洗之后,将瓶子倒置在不锈钢篮子(盛放漂洗过的玻璃器皿然后晾干)中烘干。
5 . 冷却后用铝箔封口保存。
二、玻璃器皿的消毒
1. 在玻璃器皿上贴上小正方形的无菌指示胶带(这与高压灭菌器中的无菌指示胶带不同 ,因为烤箱中的温度更高。大多数高压灭菌器中的无菌指示胶带会烤焦,黏合剂中的易爆炸成分就会残留在烤箱和玻璃器皿中。)或其他的指示标签,并写上日期。
2. 将玻璃器皿放人烤箱(在有风扇的情况下温度可以达到160°C ,宜使用可记录温度计和易弯曲的探针)中,烤箱应有可循环空气的风扇,并将温度设定在 160°C 。
3. 确保烤箱的中央温度达到160°C:
(a) 将一个无菌指示器(Alpha Medical 适用于干热或蒸汽消毒,Thermalog 指示器只适用于蒸汽消毒)放人瓶中或其他器皿内,置于烤箱中央。
(b) 如果用可记录的麵计,将感应部分放入瓶中或其他器皿内,符于烤箱中央。
(c) 不要将物品堆得过紧,要留出热空气对流的空间。
4. 将烤箱盖好,检杳温度旋钮是否在 160°C ,用胶带将烤箱封好并按预定时间保持 1h (或用自动锁和自动记录仪)。
5. 1h 后将电源关掉,不开箱冷却。如果有自动计时器则非常方便,因为它晚上能自动断电,次日早就可以继续实验。这样做可使冷却在无菌的环境中进行,也使白天产生的热量降低到最少。
6 . 消毒的玻璃器肌要在 24~48h 内使用。
注意事项1. 有机物要放在烤箱外面。不要用纸质的胶带或包装材料,除非你能确定其加热时不会产生爆炸性物质。这些物质最终会留在烤箱中,加热时会产生气味,有的会残留在消毒过的玻璃器皿中。
2. 用121°C高压灭菌20min,要经过一个前真空和后真空的循环,可以将瓶子的螺口盖松开或用铝箔包住口后再用高压灭菌胶带粘住。待冷却后,再将松开的瓶盖拧紧。在高压灭菌的过程中,瓶盖应拧得非常松(拧一圈即可),这样做是为了让蒸汽进人瓶中,也能阻止垫片(如果有)被瓶盖吸住而堵住瓶口。在高压灭菌器的灭菌过程中如果瓶口被堵住,会导致灭菌不完全。不幸的是,在高压灭菌过程中经常会出现薄雾,在薄雾蒸发的过程中会在瓶中留有残留物。同时瓶子在密封之前,冷却的时候也可能被未消毒的空气所污染。干热灭菌相对好一些,因为它可以使瓶子在移动之前在烤箱中直接冷却。