用异丙醇将DNA重新沉 淀,换了TE 溶解,检测主带仍旧清晰,可是用酶切之后DNA还是被切烂。为什么? 参考见解: 1、公司的酶不行。 2、如做酶切,DNA最好不用异丙醇(因其不易挥发)而用无水乙醇沉淀。 3、酶量大或作用时间太长了。 建议重提 DNA,取少许用超纯水溶解(非TE),按照说明书进行酶切。要用新鲜样品 或液氮冷冻-70 度保存的样品。这样通过降低内切酶的活性减少DNA的降解; 要得到全血基因组 DNA,可以先用分层液密度梯度离心将淋巴细胞分离吗?这样做, 与沉淀全血细胞然后破坏红细胞得到的结果有何差异? 参考见解: 1、觉得还是先分离细胞好,因为DNA和RNA大都是在细胞核内,有红细胞反而不太 好。从血里面提RNA,用淋巴细胞分离液先分离有核细胞的,效果还是不错的。 2、现在提取全血的DNA,也就是提取淋巴细胞中的DNA,用密度梯度离心,只是富积 淋巴细胞,能得到更多的DNA而已。一般如果DNA的量的要求不太多的话,没必要。 3、如果对基因组的要求不高,可以试试这个方法。