第一次跑SDSPAGE,
分离胶用的是12%,
在整 个跑的过程中,
电泳时间太长,
如何调整呢?
浓缩胶我跑了一个小时才进入分离胶,用的是90V,
分离胶最先用的是150V跑了一个小时,
发现太慢,
调整到200V再跑了一个小时,
后来又调整到220V跑了一小时,
现在都还有3厘米没有跑完,
听别人说,
跑个PAGE三个多小时就可以搞定了,我应该怎么办,
缩短跑胶时间?
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不敢把电压开得过大,
怕条带跑得不好,
我可否把分离胶浓度调为10%呢,
我要的蛋白大概44KDA
66+77
60KDA 的蛋白跑10%的胶是可以的。
电泳的时间长,是不是你的电泳缓冲液有问题?
ladyhuahua
60KD的蛋白,12%的胶,200V,2小时足够跑完了.
检查一下你的电流正常不?
我这通常用120-180V,初始电流大约在25左右(18-30),
如果电流不正常(一般是太小,比如在我这只有10以下),则检查:
1.running buffer的浓度对不?
2.胶里是否混有气泡?
xyw5
还有,如果用六一的电泳槽,会不是是跑胶前忘记把灌胶时密封用的胶条撕下了哪?
呵呵,我有一次就犯了这样一个低级错误,结果是干冒气泡,指示剂前沿就是不往下跑
建议检查一下先
H2O
谢谢大家,
缓冲液没问题,
胶里也没有气泡,
检查了一下电泳槽,
是北京六一仪器厂的,
难道就是acui提的六一电泳槽?
的确我是没有把封边用的琼脂糖去掉,
再试试看!
yes4
44KD的蛋白完全可以用10%的胶跑,我天天都这么用,效果也很好的啊,我们二十多KD的有时都用10%的胶,不过这样就不能用很高的电压,要是电压高了条带很难看的。四十多KD的一点问题都没有,估计浓缩胶80-90V50MIN就可以了,分离胶200V60-75MIN 就好了,要是还不行的话就是你的缓冲液有问题了,不过我们的BIO-RAD的仪器。楼主好运。。。DXY战友春节愉快!
H2O
将封胶用的琼脂去掉后,
仍然跑胶速度慢,
问了一下师兄,
他们的只需三个小时左右就跑完了,
条件是一样的,
我估计跑胶时间长可能是蛋白本身的原因!
glass
胶可能没压实可能使上下槽有些相通,使得电流低
H2O
应该不是这个问题,
另外一个实验室的他自己弄的胶,
不过表达载体同我一样,
也是跑了好几个小时,
应该不是胶的问题!
shenkunjie
是什么蛋白?最好能查一下你的蛋白同SDS的结合能力怎么样,会不会你的蛋白和SDS没有很好的结合而导致SDS-Pro结合体的电量太低而跑不动的?
shenkunjie
还有,如果是琼脂封胶的话基本不影响电泳,但如果是用的六一的橡胶条的话电泳时就得拿下来了~
2541
我用的也是北京六一的电泳槽,平时跑的是小板的胶,浓缩胶用的90V,分离胶用的140V,一般跑1.5小时或2小时就能跑完.楼主如果不电泳的缓冲液没有问题,那有可能在架板的时候没有夹紧,或你的电泳槽用太久,押边的橡胶条老化,造成缓冲液外泄.