Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
表 32 事業所の排水の排水指定物質に係る許容限度

有害物質の種類	許容限度
銅及びその化合物	3 mg/L (46 μM)
亜鉛及びその化合物	2 mg/L (30 μM)
溶解性鉄含有量	10 mg/L (180 μM)
溶解性マンガン含有量	10 mg/L (180 μM)
ニッケル及びその化合物	1 mg/L (17 μM)

本実験条件で、レアメタル類を吸着した BMO について、BMO 中のレアメタル濃度を算出し、可採品位（すなわち精錬原料となる鉱物として採鉱価値があるかどうか）を評価した。レアメタルを吸着した BMO が各レアメタルの可採品位を満たす条件 $ ^{33)} $ として、Zn の場合が 7.2 mol%（固相 Mn に対する相対モル濃度、=54 g/kg-MnO $ _{2} $ ）、Ni の場合が 1.0 mol%（=6.7 g/kg-MnO $ _{2} $ ）、Co の場合が 0.3 mol%（=2 g/kg-MnO $ _{2} $ ）以上とされている。Co の場合、pH 6.0 及び pH 6.5 の中和溶液を対象として、1 回目の処理でほぼ全量が回収でき、その時の BMO 中の濃度は 0.63 mol%（pH 6.0 中和）、0.77 mol%（pH 6.5 中和）となり、可採品位を上回った（図 61）。このことは回収後の BMO は Co の製錬原料として利用価値をもつことを示している。Ni では、pH 6.0 の中和リーチング溶液に対しては 1～4 回目、pH 6.5 の中和リーチング溶液に対しては 1～3 回目の回収処理を経て、2.3 mol%以上の濃度が得られ可採品位を上回ることができた。Zn は可採品位濃度 (7.2 mol%) が高いため、pH 6.0 の中和リーチング溶液に対して 2 回目の処理でのみ可採品位を上回った。一方、pH 6.5 の中和リーチング溶液に対しては 1 及び 2 回目の処理で可採品位を上回ることが示された。

これらの結果から、集積培養系 NE によるバイオリーチング、浸出液の化学的中和、BMO による吸着によって、廃電子基板中のコモンメタルやレアメタルを効果的に回収でき、有害金属イオンに関しては排水基準以下の濃度レベルにまで、レアメタル類に関しては吸着媒（BMO）中の濃度が可採品位を上回る程度まで濃縮しながら、定量的に水相から回収できることが明らかになった。

pH6.0中和リーチング溶液 pH6.5中和リーチング溶液 → 4 mM BMO → 2 mM BMO

図 61 （A）4 mM BMO を用いた 1 段階中和リーチング溶液（pH 6.0；140529-2）からの Cu、Ni、Zn、Co 及び Mn の多段階回収処理。（B）2 mM BMO を用いた 1 段階中和リーチング溶液（pH 6.5；140619-1）からの Cu、Ni、Zn、Co 及び Mn の多段階回収処理。

データは BMO 中のレアメタル濃度を示しており、★は対応するレアメタルが可採品位を満たしている。
### c. 廃電子基板のバイオリーチング溶液の2段階中和によるコモンメタルとレアメタルの分離

BMO の $ Mn^{2+} $ 酸化活性に注目すると、 $ Mn^{2+} $ の連続酸化能を維持できる pH は 7.0 であり（図 58）、BMO の最大の特徴である $ Mn^{2+} $ 酸化活性を活用することで、より高い効率でレアメタル回収が可能であると考えられた。先の結果から、バイオリーチング原液を pH 7.0 まで 1 段階で中和した場合には、Zn、Ni、Co の多くが不溶化し、中和によるコモンメタル類との分離の効率は低かった（表 31）。ここで再度、pH－溶解度ダイアグラム（図 59）に着目すると、pH 7.0 における $ Co^{2+} $ の溶解度は $ 10^{-2}\ mol/L $ 以上であり、この値はリーチング原液に溶解している $ Co^{2+} $ 濃度より十分高く、よって 1 段階中和（pH 7.0）における Co の不溶化は、Fe、Al、Cu の水酸化物沈殿に吸着、もしくは共沈による可能性が考えられた。そこで、バイオリーチング原液を一旦 pH 6.0 まで中和し（1 段階目）、不溶化物を遠心分離、ろ過することで除去し、残った上清液をさらに pH 7.0 まで中和した（2 段階目）。その後、溶存しているイオン濃度を測定した。その結果を表 33 に示す。このようにバイオリーチング原液を 2 段階で中和した場合、コモンメタル類のほとんどが不溶化されること、一方、レアメタル類は平均で Zn が 51%、Ni が 65%、Co が 73%、Mn が 90%、溶存態として残存することが明らかとなり、先の 1 段階で pH 7.0 に中和するよりも、高い割合でレアメタル類を溶存態として水相に残存させることができた。

#### d. 2 段階中和リーチング溶液（pH 7.0）からの BMO によるレアメタル回収（バッチ回収試験）

2 段階中和リーチング溶液（pH 6.0 → pH 7.0）（表 33、150618）を対象として、BMO による Ni、Zn、Mn、Co 及び Cu のバッチ回収試験を行い、回収効率における BMO 濃度依存性、回収選択性、回収固体の元素資源価値について詳細に検討した。

図 62 に 2 段階中和リーチング溶液（最終 pH=7.0）に対して、BMO 添加濃度を変化させて処理した時の残存金属イオン濃度を示す。また、残存した溶存イオン濃度から求めたそれぞれの元素回収率を図 63 に示す。溶存 Mn、Co は、最低添加量である 1 mM BMO（87 mg/L MnO₂）でほぼ全量が回収できた。また、Cu は 1 mM BMO 添加濃度で 85% 程度の回収率であった。一方、初期濃度が高いかった Ni と Zn は、1 mM BMO の添加濃度で初期全量の 15~20% 程度のみが回収された。BMO の添加濃度を増加させると回収率は濃度依存的に増加し、6 mM 以上の BMO 濃度（>435 mg/L MnO₂）で 95% 以上の回収率を得た。

図 62 2 段階中和リーチング溶液 (pH 6.0 → pH 7.0) からの BMO による溶存態 Cu、Ni、Zn、Co 及び Mn の回収（水相残存濃度の変化） —BMO 添加量の影響（20 mM HEPES 緩衝、pH 7.0）
表33 磨電子基板のバイオリーチング溶液の2段階pH中和による溶存金属イオン濃度の変化と回収率

試料ID	中和処理方法	溶存態濃度mM
Cu	Fe	Al	Zn	Ni	Mn	Co
141208	リーチング原液	34.8	9.01	5.85	1.71	0.76	0.22	0.027
一段階中和(pH6.0)	0.83	0.01	0.011	1.17	0.62	0.20	0.023
二段階中和(pH7.0)	0.14	0.01	0.009	1.09	0.60	0.20	0.023
最終回収率(%)	99.6	~100	~100	36	22	8	17
150618-1	リーチング原液	33.6	8.39	7.16	1.74	0.76	0.018	0.030
一段階中和(pH6.0)	0.50	0.00	0.003	0.86	0.49	0.016	0.021
二段階中和(pH7.0)	0.15	0.01	0.005	0.79	0.48	0.016	0.021
最終回収率(%)	99.5	~100	~100	54	36	11	30
150618-2	リーチング原液	33.8	8.54	7.47	1.75	0.77	0.018	0.030
一段階中和(pH6.0)	0.66	0.00	0.011	0.99	0.53	0.016	0.022
二段階中和(pH7.0)	0.15	0.00	0.008	0.94	0.53	0.017	0.022
最終回収率(%)	99.6	~100	~100	46	31	8	26
150910-1	リーチング原液	29.5	9.88	5.76	1.77	0.77	0.020	0.028
一段階中和(pH6.0)	0.89	0.00	0.026	1.08	0.53	0.018	0.021
二段階中和(pH7.0)	0.15	0.01	0.000	1.05	0.53	0.018	0.021
最終回収率(%)	99.5	~100	~100	41	32	9	26
150910-2	リーチング原液	29.5	9.53	6.01	1.78	0.77	0.020	0.028
一段階中和(pH6.0)	0.27	0.00	0.000	0.59	0.37	0.018	0.018
二段階中和(pH7.0)	0.13	0.00	0.006	0.56	0.37	0.018	0.018
最終回収率(%)	99.6	~100	~100	69	53	11	38
2段階中和後の溶存濃度平均(mM)	0.14	0.007	0.005	0.89	0.50	0.054	0.021
最終回収率平均(%)	99.6	~100	~100	49	35	10	27
溶存態としての残存率(%)	~0.4	~0	~0	51	65	90	73
図 63 2 段階中和リーチング溶液（pH 6.0 → pH 7.0）からの BMO による溶存態 Cu、Ni、Zn、Co 及び Mn の回収—BMO 添加量の影響（20 mM HEPES 緩衝、pH 7.0）

これらの BMO の添加条件における固相中の Ni、Zn 及び Co 濃度を算出したところ（図 64）、添加 BMO 濃度が 8 mM までの範囲であれば、Zn、Ni、Cu ともに可採品位（Zn 7.2 mol%、Ni 1.0 mol%、Cu 0.8 mol%）を上回ることが明らかになった。Ni の固相濃度に注目すると、BMO 添加量が 4 mM 程度で極大を示し、それより低い BMO 添加量では他の元素が Ni よりも高い選択性で回収されていることを示唆している。Co はリーチング溶液中の含有量が極めて低濃度であるため、BMO 添加量が高いところでは可採品位（Co 0.3 mol%）を僅かに下回るが、BMO 添加量が 5 mM 以下では可採品位を上回ることが示された。

これらの結果から、2段階で中和したバイオリーチング浸出液からのBMOによるレアメタル類の回収について、次の重要な事項が明らかとなった。

2 段階中和リーチング溶液中の溶存 Cu、Ni、Zn、Co 及び Mn イオンは、BMO を適切な濃度で添加すればほぼ全量を回収することができる。

■ Cu、Ni、Zn 及び Co を回収した BMO 相は、これらの元素の可採品位を多くの場合で上回る。ただし、BMO の添加量が多くなると、固相中のレアメタル濃縮率が低下する（資源としての品位が低下する）。

■ 溶存金属イオン濃度に比して BMO の添加量が少ない場合には、それらの金属の中で Mn、Co 及び Cu が選択的に回収できる。
図 64 2 段階中和リーチング溶液（pH 6.0 → pH 7.0）からの BMO による溶存態 Cu、Ni、Zn 及び Co の回収と可採品位との比較（20 mM HEPES 緩衝、pH 7.0）

これまでに得られた結果を踏まえ、以下の3つの条件を満たすためのバイオリーチング浸出液からの金属回収法について考察した。①元素が選択的に回収できること、②回収したBMO固相が最大限にレアメタル類を濃縮していること、③処理後の浸出液中の金属濃度は排出準値を下回ること。図65にその概要をまとめた。①の選択回収のためには、二段階中和リーチング溶液（pH7.0）に対して、1 mM BMOで回収処理する。このことで、Co、Mn、Cuをほぼ全量回収する一方、Zn及びNiは溶液中にできるだけ残存させる。②のため、残存するZn及びNiを最も効率よく回収できる4 mM BMOで回収する。③最終的に残存する微量金属イオンを排水基準値以下にするため、さらにBMOで処理する。

図 65 BMO 添加によるバイオリーチング浸出液（2 段階中和液）からの効率的な金属イオン回収法
これらの手順に基づいて実際に回収試験を実施した結果を図66に示す。1段階目の1 mM BMO処理によって、CoとMnが90%、Cuを80%以上回収でき、このとき固相中Coについては可採品位を上回ることが示された。一方で、ZnとNiは80%以上が溶存態として溶液中に残存していたが、浸出液中の濃度が高いため、1段階目の回収操作により固相濃度は可採品位を上回っていた（図67）。さらに、2段階目、3段階目（各4 mM BMOで処理）の処理によって、水相中に残存していたZn及びNiのほぼ全量を回収することができ、このときZnは2段階目のみで、Niは2段階目と3段階目の双方において可採品位を上回ることが示された。最終的に、3段階目処理後の溶存Ni、Zn、Mn、Co、Cuは全て検出下限値以下（5 μM以下）となり、排水基準値の設定されている金属についてはその濃度値以下になっていた。これらの結果から、本研究の到達目標である、BMOを用いて浸出液から回収可能な金属を製錬原料レベルに濃縮できること、及び有害金属イオンについては排水基準値以下に低減できることを達成することができた。

B

図 66　2 段階中和リーチング溶液（pH 6.0 → pH 7.0）からの BMO による溶存態 Cu、Ni、Zn、Co 及び Mn 多段階回収（20 mM HEPES 緩衝、pH 7.0）

A: 溶存態濃度の経時変化、B: 回収率
図 67 2 段階中和リーチング溶液（pH 6.0 → pH 7.0）からの BMO による溶存態 Cu、Ni、Zn、Co 及び Mn の多段階回収（20 mM HEPES 緩衝、pH 7.0）と可採品位との比較 *は可採品位を満たすことを示している

#### e. 2 段階中和リーチング溶液（pH 7.0）からの BMO によるレアメタル回収（カラム試験）

BMO を充填した吸着カラムを作製して、2 段階中和リーチング溶液（表 33、150910-2）の連続通水による Ni、Zn、Mn、Co 及び Cu の回収試験を行った。1 mM Mn $ ^{2+} $ を含む液体培地 200 mL で KR21-2 株を培養して BMO を調製した。これを Mn として 0.2 mmole、固体乾燥重量として約 40 mg とり、ガラス製カラムに充填した。また比較対象として、汎用的な陽イオン交換樹脂である DOWEX 50W x 8(200~400 mesh、H $ ^{+} $ -form) を固体乾燥重量として 50 mg とり、同ガラス製カラムに充填したものを用いた。これらは、試料を通水する前に 20 mM HEPES 緩衝液を流速 5 mL/分で通水し十分にコンディションニングした。これに 2 段階中和したリーチング溶液（20 mM HEPES 緩衝）を流速 2 mL/分で通水し、一定時間毎に溶出液を採取、溶存金属イオン濃度を測定して積算回収量を求めた。

BMO 及び DOWEX カラムに試料を通水したときの溶存態金属濃度の経時変化を図 68 に示す。DOWEX カラムでは、通水直後は全ての元素で濃度が低下し、イオン交換樹脂への吸着が認められた。しかしながら、Cu を除く元素では通水量 30 mL を超えると溶出液中の濃度はもとの試料中の濃度と等しくなり、吸着飽和によりカラムが破過することが示された。Cu についても、通水量が 50 mL を超えるとカラムによる有意な濃度減少は認められなくなった。

一方、BMO では、Co は通水量 240 mL まで溶出液中の溶存濃度はほぼゼロとなることが明らかになった。Cu についても、通水量の増加とともに溶出液中の濃度は徐々に増加したが、通水量が 300 mL に達しても試料中濃度の 20％以下を保持していた。Mn については、通水 20~100 mL で一過的な濃度上昇が認められたが、試験期間中を通して試料濃度を下回り、BMO によって有意に回収されることが明らかになった。Zn 及び Ni では、通水量がそれぞれ 150 mL、50 mL を超えるとカラムが破過することが分った。BMO のこれ
らの金属元素に対する吸着性能の違いは、BMOとの親和性や反応メカニズムの違いを反映していると考えられた。

即ち、本試験で用いた BMO は Mn 酸化酵素が保持されている「活性型」であるため、Mn は BMO の酵素活性によって連続的に酸化、不溶化している可能性がある。Mn の一過的な溶出は、調製した BMO の表面上に吸着していた $ Mn^{2+} $ が他のイオンとのイオン交換によって溶離したためと考えられた。 $ Co^{2+} $ は BMO に吸着後、急速に $ \mathrm{Co(III)} $ 酸化物に酸化、不溶化することが明らかになっており $ ^{34} $ 、この吸着／酸化反応により高効率で吸着回収できていると推察された。Cu は BMO への親和力が高いことを反映していると考えられる。一方で、前述のバッチ回収試験において、Ni、Zn の BMO に対する親和性は他の金属と比較して低かったが、カラム試験でも同様の挙動を示していた。

カラム回収試験において、BMO及びDOWEXの乾燥重量当たりの積算回収量を通水量に対してプロットした結果を図69に示す。250 mLを通水した時点で比較した場合、BMOはDOWEXと比較して、Coで21倍、Cuで24倍、Mnで14倍、Niで3.2倍、Znで7倍の積算吸着量（総金属で10倍）を示し、BMOに極めて高いレアメタル回収能力があることを提示できた（図70）。DOWEXのイオン交換容量は2価陽イオンに対して2.1 mmol/g（乾燥重量）であるが、2段階中和リーチング溶液から吸着したNi、Zn、Mn、Co及びCuの総積算吸着量は約0.2 mmol/gと吸着容量の1/10程度に留まっていた。この中和リーチング溶液には、集積培養系NEによるリーチング時に添加した培地成分由来と中和過程由来による陽イオンが、 $ NH_{4}^{+} $ で19 mM、 $ Mg^{2+} $ で2.0 mM、 $ Na^{+} $ で28 mM（これに加えて、20 mM HEPES緩衝液由来の $ Na^{+} $ も含む）が含まれ、これらの陽イオンがイオン交換過程で競合し、レアメタル類の回収量を低下させている可能性が高い。比較的イオン強度の高い中和リーチング溶液からレアメタル類を吸着回収するためには、一般的なイオン交換樹脂では効率が悪いが、BMOを用いることにより高効率でレアメタル類を回収できることが明らかになった。

最後に、二段階中和リーチング溶液（表33、150910-1及び150910-2）を約300 mL通水した後のBMO固相中のZn、Ni、Cu及びCo濃度をBMO（MnO₂）に対するmol%で示すと（中和リーチング液から回収されたMnは固相Mnとして組み込んでいる）、Znで9.2～12 mol%、Niで4.3～4.6 mol%、Cuで14～16 mol%、Coで2.5～2.6 mol%となり、いずれも可採品位（Zn7.2 mol%、Ni1.0 mol%、Cu0.8 mol%、Co0.3 mol%）を上回ることが明らかになった（図71）。即ち、BMOカラムによって中和リーチング溶液から吸着回収することで、精錬原料として利用可能なレベルに濃縮された状態でレアメタル類が得られることが示された。

本研究で得られた知見を基盤として、今後BMOの大量調製法を確立するとともに、BMO充填カラムを用いた実用化研究の展開が期待される。
通水量(mL)

(mm) 存濃存溶

図68 BMO充填カラムを用いた2段階中和リーチング溶液からのレアメタル類の回収試験連続通水時の溶出液の金属濃度の経時変化を示しており、点線は通水試料中の濃度である。比較対照として陽イオン交換樹脂（DOWEX 50W x 8）を用いて同条件で試験した。
(m/g dry sorbent) (m/g 回风量) (m/g 计算回风量)

図69 BMO充填カラムを用いた2段階中和リーチング溶液からのレアメタル類の回収試験（積算回収量）比較対照として陽イオン交換樹脂（DOWEX 50W x 8）を用いて同条件で試験した。
図70 バイオリーチング浸出液（2段階中和液、250 mL通水）からの金属イオンの積算回収量 BMOとDOWEXの比較

図71 BMOによるバイオリーチング浸出液（2段階中和液、250 mL通水）からの金属イオンの積算回収量と可採品位との比較（n=2） *は可採品位を満たすことを示す

## （3）有用金属回収に関わる有用微生物の遺伝子情報基盤の整備 1）分離した微生物の全ゲノム解析

### a. GJ-E10 株

バイオリーチングによる金属回収への適用を試みた2種の細菌GJ-E10株（バークホルデリア目）とSulfobacillus thermosulfidooxidans NE106G株について、全ゲノムの解析を行った。初めに、本研究の以前に分離していたGJ-E10株で先行して解析を試み、全ゲノム解読へのアプローチを確立した（図11）。そして、その手法を用いて、本研究の実施中に分離されたNE106G株のゲノム解析を進めた。

GJ-E10 株の完全長ゲノム配列を以下のように決定した。PacBio RS II のデータから作成した 13 のコンティグ配列と HiSeq1000 と GS Jr の配列から作成した 16 のコンティグ配列を統合したところ（表 34）、1 つ
の環状の完全長のゲノム配列が構築された。その配列の中で、リード数が少なく不確実な配列部位が22箇所あったことから、それらの部位についてPCR-サンガー法で配列解析した結果、1塩基のみが間違っていたことが判明した。これらの解析により、最終的にGJ-E10株のゲノム（図72）は3,276,549塩基対からなり、環状で、GC含量は66.3%、タンパク質をコードしている領域は3,093個存在することが明らかになった。リボソームRNAオペロンは1つ、tRNA遺伝子は43個含まれていた。最終的な配列はDDBJ/EMBLE/GenBankデータ一ベースにてアクセッション番号AP014683として登録、公開している。

### b. NE106G 株

NE106G 株の PacBio RS II のデータのアッセンブルでは 4 つのコンティグ配列が得られた。それらの配列と MiSeq のデータを使用してギャップを埋め、最終的に 10 箇所の PCR-サンガー解析で全体の配列を決定した。その結果、一つの染色体外環状 DNA である巨大なプラスミドを再構成し、その大きさは 393,290 bp（図 73）であった。ゲノムについてはおおよそ 60 kb の大きな繰り返し配列が検出され、その周辺での配列決定は困難であったが、全体の大きさは 3,585,376 bp（図 74）と推定され、プラスミドと合計して 3,978,666 bp であった。これらの DNA の GC 含量は 48.9% であり GJ-E10 株の 66.3% と大きく異なっていた。この 2 つの菌株での GC 含量の違いは、分類上の違いを反映していると考えられた。即ち、GJ-E10 株はプロテオバクテリア門に、NE106G 株はフィルミクテス門に属している。NE106G 株ではタンパク質をコードしている遺伝子領域は 3,442 個が検出された。また、ゲノム中には rRNA オペロンが 6 個、tRNA 遺伝子は 51 個検出された。

表34 GJ-E10株ゲノムの解析手法と得られた解析データ

分析機器(次世代シーケンサー)	次世代シーケンサーによる解析結果
全配列数	平均鎖長(bp)	全堆基数	コンティグ数	N50値* (bp)	全コンティグの堆基数	GC含量(%)	CDS**	KEGGに上る機能付与されたCDS
Illumina HiSeq	160 M	100	16 G	102	100,198	3,157,742	66.2	2,989	1,537
Roche GS Jr	220,000	420	92 M	-	-	-	-	-	-
HiSeq/GS Jr データの紙合	-	-	-	16	778,421	3,311,903	66.29	2,980	1,525
PacBio RSII	550,000	2,400	1.3 G	13	2,118,697	3,451,727	66.27	-	-
PacBio RSII データの紙合	-	-	-	1	-	3,276,549	66.3	3,093	1,593

* ゲノム鎖長の50％に達したときの配列の長さ、** タンパク質をコードすると推定される遺伝子数、
図 72 GJ-E10 株のゲノム構造

COG (Clusters of orthologous groups): 遺伝子機能分類のコード http://www.ncbi.nlm.nih.gov/COG/参照

GC content: GC 含量、GC skew: G 含量と C 含量の偏りを表す指標。偏りの傾向（±）が逆転する部位が複製開始/終結点と一致する可能性がある

図 73 NE106G 株のプラスミドの構造
## 2 ）ゲノム配列からの機能遺伝子の特定

遺伝子解析ソフトウェア KEGG パイプラインを用いて、GJ-E10 株のタンパク質をコードしている 3,093 個の遺伝子配列から、1,593 個（51.5%）の遺伝子機能を特定することができた。これらの遺伝子機能を詳細に検討したところ、本菌は以下の代謝システムを保持していることがわかった。

■ 窒素固定遺伝子を持ち、窒素固定活性があると考えられた（図75）。

■ 二酸化炭素を固定する経路として、RubisCOを含むカルビンベンソン回路を利用している。Fe^{2+}酸化によりエネルギーを産生して炭酸固定を行う独立栄養細菌である。

一方、NE106G 株の 3,442 個のタンパク質をコードしている配列のうち KEGG パイプラインで 1,575 個（45.2%）の遺伝子の機能が特定された。本株も GJ-E10 株と同様に、二酸化炭素を固定する経路として RubisCO を含むカルビンベンソン回路を利用していることが示されたが、窒素固定遺伝子は保持していなかった。

図 75 GJ-E10 株の窒素固定遺伝子 (nif 遺伝子)
GJ-E10 株と NE106G 株の遺伝子を比較した結果を表 35 に示す。GJ-E10 株では 1,593 遺伝子、NE106G 株では 1,575 遺伝子の機能が特定されたが、それらのうちの 1,511 遺伝子が同じ機能を有することがわかった。これは GJ-E10 株では同定された遺伝子の 94.9%、NE106G 株では 95.9% に相当する。これらの 2 株は分類学的にかけ離れており増殖の温度条件も大きく異なることを考慮すると、2 株間で非常に高い相同性が見い出されたことは興味深い結果である。両株とも酸性条件で $ Fe^{2+} $ 代謝を行うため、それらの代謝様式や酸性環境への適応に必要な共通する遺伝子群を保有しているものと推察された。一方で、両株において約 50% の遺伝子が未同定であり、それらが菌種の違いを表していると考えられた。

表35 NE106株とGJ-E10株のゲノム解析結果の比較

菌株	分類(門)	グラム染色	芽胞形成	棲息環境	グラムサイズ	GC含量	ORF数*	機能推定したORF数	相同的な遺伝子数
NE106G	Firmicutes	+	+	酸性河川	3.59 Mb(+0.39 Mb)	48.9%	3,442	1,575	1,511
GJ-E10	Proteobacteria	—	—	酸性河川	3.28 Mb	66.3%	3,093	1,593

*タンパク質をコードする遺伝子の数

## 3 ）レアメタル回収に関わる有用遺伝子の特定

バイオリーチングによるレアメタル回収に関わる遺伝子の特定に関して、初めに $ Fe^{2+} $ 酸化に関与する遺伝子を明らかにした。これらの遺伝子は金属の酸化剤となる $ Fe^{3+} $ の供給機能をもち、バイオリーチングの要となる。好酸性鉄酸化菌による $ Fe^{2+} $ 酸化では、細胞表面にある cytochrome oxidase（シトクロムオキシダーゼ）が関与している $ ^{35)} $ 。Sulfobacillus 属細菌では図 76 に示すように 2 種類の cytochrome oxidase 系が関与することが報告されているが、GJ-E10 株、NE106G 株ともに、そのうちの $ aa_{3} $ cytochrome oxidase 系の遺伝子セットを保有することが明らかになった（表 36）。

図 76 Sulfobacillus 属の $ Fe^{2+} $ 酸化系 $ ^{35)} $

NE106G 株及び GJ-E10 株に $ aa_{3} $ cytochrome oxidase 遺伝子が見い出された
表 36 NE106G 株及び GJ-E10 株の Fe 酸化 cytochrome oxidase 系遺伝子

Sulfonobacillus thermosulfidooxidans NE106G	Burkholderiales GJ-E10
cytochrome aa3 quinol oxidase subunit 1 apoprotein	cytochrome o ubiquinol oxidase subunit I
cytochrome aa3 quinol oxidase subunit 2	cytochrome O ubiquinol oxidase subunit II
cytochrome aa3 quinol oxidase subunit 3	cytochrome ubiquinol oxidase subunit III
cytochrome b/b6 protein	ubiquinol-cytochrome c reductase, cytochrome b
cytochrome b/b6 protein	ubiquinol-cytochrome c reductase, cytochrome b
cytochrome bd quinol oxidase subunit 1	cytochrome bd quinol oxidase subunit 1 apoprotein
cytochrome bd quinol oxidase subunit 1	cytochrome bd quinol oxidase subunit 1 apoprotein
cytochrome bd quinol oxidase subunit 1	cytochrome bd quinol oxidase subunit 1 apoprotein
Cytochrome bd ubiquinol oxidase subunit I	cytochrome bd quinol oxidase subunit 1 apoprotein
cytochrome c assembly protein	heme exporter protein CcmC
cytochrome c oxidase subunit I	cytochrome o ubiquinol oxidase subunit I
cytochrome c oxidase subunit I	cytochrome o ubiquinol oxidase subunit I
cytochrome c oxidase subunit I	cytochrome o ubiquinol oxidase subunit I
Cytochrome c oxidase subunit II	cytochrome O ubiquinol oxidase subunit II
cytochrome c oxidase subunit II	cytochrome O ubiquinol oxidase subunit II
Cytochrome c oxidase subunit II	cytochrome O ubiquinol oxidase subunit II
Cytochrome c-type biogenesis protein CcmB	heme exporter protein CcmB
Cytochrome d oxidase cyd, subunit II	cytochrome d ubiquinol oxidase subunit II
Cytochrome d ubiquinol oxidase, subunit II	cytochrome d ubiquinol oxidase subunit II
Cytochrome d ubiquinol oxidase, subunit II	cytochrome d ubiquinol oxidase subunit II

本研究ではバイオリーチングに関与する重要な遺伝子として、Fe酸化系に加えて、重金属耐性を賦与する遺伝子に着目した。菌体がバイオリーチングで浸出する高濃度の有害金属イオン（Cu、Zn、Ni、Al等）の存在下で増殖し、Fe $ ^{3+} $ を供給し続けるために必要な機能であると推察された。（1）廃電子基板等のバイオリーチング技術の開発で述べた実験結果より、当初解析を進めたGJ-E10株は金属耐性が低く、バイオリーチングへの適用性は低いと判断された。一方で、NE106G株には高い金属耐性が見い出されると同時に、バイオリーチングへの適用性が高い有用微生物であることが分った。このNE106G株が持つプラスミドには薬剤耐性に関与する遺伝子とともに、少なくとも5個の金属耐性に関わると推察される遺伝子が存在していたが、これらの遺伝子はGJ-E10株には存在していなかった。他のSulfobacillus thermosulfidooxidansに関しては、チリの研究グループがCutipay株のゲノムの概要配列をすでに報告している $ ^{36)} $ 。表37にCutipay株ゲノムとの比較をまとめた。Cutipay株も比較的高い金属耐性を有することが報告されているが $ ^{24)} $ 、培養条件が同一ではないため直接比較することは難しいものの、NE106G株の方が高濃度の金属イオンに対して耐性を示すものと推察された（表12）。Cutipay株においてプラスミドの存在は報告されていないことからも、NE106G株の高い金属耐性がプラスミドによって決定付けられている可能性を支持している。即ち、NE106G株のプラスミド上の少なくとも5個の金属耐性遺伝子が本株のバイオリーチング液中での増殖特性を特徴付けていることが強く示唆された。
表37 S. thermosulfidooxidans GJ-E10株及UCutipay株のゲノ及び金属耐性遺伝子数の比較

菌株	ORF数	tRNA数	rRNA オペロン	重金属耐性遺伝子/タンパク質
As	Cu	Al	Te
NE106G	3,442	51	6	arsRBオペロン	—	タンパク質	タンパク質
Cutipay	3,600	54	3	arsRBオペロン	copAZ	—	—

Cutipay株：文献36

## 4 ）遺伝子情報に基づく有用微生物育種法の提案

以上の結果を踏まえて、最後に有用微生物分子育種へのアプローチについて考察した（図77）。まず、リーチング菌育種の元になる微生物種にはS. thermosulfidooxidans NE106Gを使用する。本菌は金属耐性に関与しているプラスミドを保有し、またこのプラスミドは薬剤耐性遺伝子も保持していることから、遺伝子導入に使用できる。そこでまずこのプラスミドに $ Fe^{2+} $ 酸化に関わる遺伝子の高発現系を構築する。その際、非常に多くの細菌で使用されているリボソームタンパク質、rpsL遺伝子のプロモーターが使用できると考えられる。この段階で、 $ Fe^{2+} $ 酸化機能を強化してリーチング活性が大きく高まった菌体の創生が可能であろう。さらに、本プラスミドを利用して他の有用微生物に重金属耐性を賦与するほか、例えば水銀耐性遺伝子など他の微生物種から金属耐性遺伝子をクローン化して、NE106G株に再度導入することも想定できる。これらの手法により、廃電子基板のみならず様々な使用済製品や有害廃棄物、金属含有廃水の処理、金属回収に適用可能な微生物の育種を検討できるようになる。今後、本研究で得られた有用微生物(NE106G株)のゲノム情報を基盤としてスーパーリーチング菌の分子育種への展開が期待される。

• NE106G株: 約0.4 Mbpのプラスミド(染色体とは別のDNA分子)を保持し、5つの金属耐性に関与すると推定される遺伝子が含まれていた

本プラスミドが高度の金属耐性に関与する可能性が高い

NE106G株のプラスミドを用い

た好酸性鉄酸化細菌の分子育

種が期待

■ 鉄酸化経路遺伝子の高発現系の構築

■ プラスミドによる新たな金属耐性遺伝子の導入

■ Sulfobacillus属の遺伝子組換え体作製用のベクターとしての利用

図 77 NE106G 株の遺伝子情報に基づく有用微生物育種へのアプローチ
## 5 ．本研究により得られた成果

## （1） 科学的意義

資源循環型社会の構築に向けて、使用済電子機器等からの有用金属の回収、資源化技術の構築が重要な課題になっている。本研究では廃電子基板から有用金属を高効率で分離回収できる実用的技術を開発することを目的として、（1）廃電子基板等のバイオリーチング技術の開発、（2）廃電子基板の浸出液からの有用金属回収技術の開発、（3）有用金属回収に関わる有用微生物の遺伝子情報基盤の整備、の3つの課題について検討を行った。本研究で得られた成果の科学的意義は以下のようにまとめられる。

## 1 ）廃電子基板等のバイオリーチング技術の開発

有用微生物の探索、選抜に先立ち、廃棄物のバイオリーチングに関する既往研究を精査した。廃電子基板等のバイオリーチングでは、好酸性鉄酸化細菌の増殖の基質として、また金属酸化剤の供給のために高濃度の $ Fe^{2+} $ イオンを添加してきた（3～15 g/L）。本研究では $ Fe^{2+} $ 添加量の削減が重要な課題と位置付け、低濃度 $ Fe^{2+} $ 条件でも速い増殖速度を示し、 $ Fe^{2+}\leftrightarrow Fe^{3+} $ の回転数が大きくなるような微生物が望ましいと考えた。またバイオリーチング時に金属が高濃度で浸出しても金属耐性があり活性を維持できることが必要である。このような戦略でバイオリーチング微生物を探索、選抜した研究は見当たらないが、本研究で取得した混合栄養性（mixotrophy）の集積培養系NE（及びその単離株であるSulfobacillus thermosulfidooxidans NE106G株）を適用することにより、従来の1/10の $ Fe^{2+} $ 添加量で効率よくバイオリーチングできることを提示した。有用微生物を選抜することで廃棄物バイオリーチングの効率化が達成されたことから、バイオリーチング技術開発への新しい研究アプローチを示したものといえる。

集積培養系 NE の増殖特性に関して、高い塩化物イオン耐性が見い出されたことも重要な知見である。廃棄物のバイオリーチングは専ら硫酸系の培地が使用されている。塩酸系培地の利用を検討した研究は見当たらないが、塩化物イオンに対する感受性により塩酸系培地の利用が大きく制限されていた可能性がある。本研究でも Acidithiobacillus ferrooxidans NCIMB8455 株や GJ-E10 株は塩酸系培地では継代できなかった。塩酸系培地を用いた高効率バイオリーチングの研究は新規性が極めて高く、集積培養系 NE を用いて新しいバイオリーチング技術の創出につながることが期待される。同時に、成果の公表により、当該研究分野において今後活発な研究展開が想定されるため、学術的な波及効果が見込まれる。

廃電子基板の粉砕・選鉱プロセスの検討では、カッティングミル及び超遠心粉砕によって粒径0.5 mm以下のサイズにすることで、効果的にバイオリーチングが行えることを明らかにした。また、廃基板試料（パソコン由来及び家電品由来）の粉砕・選鉱条件が試料の金属組成に及ぼす影響を詳細に明らかにして、基礎データを取得することができた。本研究で確立した多段粉砕・多段選別法によって得られる精鉱には金属元素が濃縮され、樹脂等非金属成分も大きく取り除かれることから、その後の乾式、湿式製錬の原料として活用が期待される。バイオリーチングの前処理として、廃電子基板の粉砕・選鉱プロセスを研究した事例は少ないことから、本研究で得られた成果は貴重な知見となり得る。

また、バイオリーチング後、廃電子基板残渣に残存する貴金属やレアメタル類を回収することを目指して、酸で化学的に浸出したモデル浸出液からの活性炭吸着及び溶媒抽出を検討した。これらの結果をもとに、バイオリーチング残渣から貴金属及びレアメタル類を抽出回収するプロセスの提案に至った。

本研究では上記の研究成果をもとに、銅回収時のLCA及びコストの評価を試みた。ラボスケールの実験のため精密な評価は困難であるが、廃電子基板の乾式精錬プロセスと比較してエネルギー消費量・二酸化炭素排出量では2倍程度、銅生産コストでは3倍の範囲に収まることを示した。本プロセスの実用化に向
けて改善すべき点を提示できたことは重要な成果である。廃棄物を対象としたバイオリーチングの有効性について LCA やコスト面から評価した事例は殆どなく、本研究結果はバイオリーチングの有用性を支持する成果として、今後のバイオリーチング研究にインパクトを与えることが予想される。

## 2 ）廃電子基板の浸出液からの有用金属回収技術の開発

微生物が形成するマンガン酸化物（BMO）は金属陽イオンの優れた吸着材として機能することから、排水等の微量金属元素の回収技術への応用研究が活発に行われている。共同研究者の谷らの研究グループはBMOと金属元素の相互作用に関して世界をリードする成果を得てきた。特に本研究でも扱った「活性型BMO」は世界に先駆けて発見した重要な機能である。本研究では、浸出液（pH中和処理液）に含まれる微量元素回収を目的としてBMOの適用を試みた。基礎的検討として、BMOにより希土類元素やレアメタル類を高効率で吸着回収できることを示した。BMOによる種々の希土類元素の吸着性能は殆ど明らかにされていないため、貴重な科学的データを提示することができた。また、中和処理した実浸出液から微量のCu、Co、Mn、Ni及びZnを回収するとともに、有害金属イオンについては排水基準値以下にまで低減できることを明らかにした。中和処理した実浸出液はイオン強度が高く、汎用的な陽イオン交換樹脂では吸着回収は困難であったが、BMOでは金属に対する親和性が高いため高効率で回収できること、また回収金属は可採品位を上回る濃度でBMO中に濃縮していることを明らかにした。本研究で得られた成果は、BMOがバイオリーチングの浸出液のみならず、様々な高塩濃度の排水に適用できることを示しており、国内外でのBMO研究を一層活発化させることが期待される。

## 3 ）有用金属回収に関わる有用微生物の遺伝子情報基盤の整備

本研究では好酸性鉄酸化細菌2株（GJ-E10株及びNE106G株）の全ゲノム解読を達成した。特にNE106G株は集積培養系NEを構成する主要微生物であり、有用なバイオリーチング微生物であったため、その遺伝子情報基盤を構築できたことは非常に意義深い成果である。バイオリーチングプロセスの中で微生物がどのような代謝機能を発現しているのか未解明であるが、本研究で得られたゲノム情報を用いて分子遺伝学的アプローチにより全容を明らかにできると考えている。これにより、バイオリーチングの生物学的機構を詳細に記述できるようになる。

さらに全ゲノム解析を通じて NE106G 株に薬剤耐性、重金属耐性関連の遺伝子を保持するプラスミドが見い出されたことから、このプラスミドに着目したバイオリーチング微生物の分子育種の可能性を提示した。これらの手法により、廃電子基板のみならず様々な使用済製品や有害廃棄物、金属含有廃水の処理、金属回収に適用可能な微生物の育種を検討できるようになる。廃棄物のバイオリーチングにおいて、ゲノム情報を基盤とした機能解析、微生物反応の最適化や分子育種による高効率・高機能化を目指した研究事例は皆無である。今後、この集積培養系 NE（もしくは NE106G 株）を用いた研究が先駆的な役割を果たすことが予想され、新しいバイオリーチング研究分野の開拓につながることが期待できる。

## （２）環境政策への貢献

## ＜行政が既に活用した成果＞

特に記載すべき事項はない。

## ＜行政が活用することが見込まれる成果＞

## 1 ）廃棄物からの金属資源のリサイクルを促進する新技術の提案
使用済小型電子機器等の再資源化の促進に関する法律の施行に伴い、廃棄物収集先である民間事業所において実施可能な、比較的小規模で維持管理コストの低いレアメタル等有用金属の回収、再資源化システムの開発が急務の課題になっている。従来の粉砕・精錬工程の代替もしくは補完できる実用的技術がほとんどない現状において、金属の再資源化を推進するためには、複数の実用的技術の提案がなされ、選択肢を確保しておくことが必要である。このような背景の下、従来のバイオリーチング技術をより効率化し、実用的なシステムを構築することは環境政策への貢献において大きな意義を持つ。我が国では、廃電子基板等使用済製品の金属回収・リサイクルにおいて微生物技術の利用を検討した事例は少ないが、本研究で得られた成果はその有用性を提示しており、この先、金属リサイクル技術の選択肢の1つとして微生物技術が加えられることを期待している。

本研究で開発した粉砕・選鉱及びバイオリーチングプロセスは、設備規模としては他の湿式精錬と同様に比較的小規模であり、一般的な産業廃棄物処理リサイクル事業所で設置、操業が可能である。廃電子基板からの銅回収について LCA、コスト評価を行った結果、現時点において幾つかの課題は残されているが今後の展開によって、環境負荷、コストとも既存のプロセスと十分に競争し得る技術であるとの推算結果が得られた。さらにはバイオリーチングの既往研究を鑑みると、本研究で得られたバイオリーチング効率化に関する研究成果は、廃電子基板のみならず、脱硝触媒等の使用済触媒や使用済バッテリー、ガス化溶融炉残渣、焼却飛灰など多様な廃棄物からの回収リサイクルにも適用できるため、その波及効果は大きい。これらの理由から、将来的に産業廃棄物処理リサイクル事業者への技術移転を経て実用化することができれば、金属リサイクル施策を推進する技術として社会実装されるため、環境政策に直接的に貢献できると期待される。

## 2 ）微生物利用技術の有効性の提示

1) 述べたように廃電子基板からの銅回収について LCA、コスト評価を行った結果、本研究で開発してきた粉砕・選鉱及びバイオリーチングプロセスは、今後の展開により、環境負荷、コストとも既存のプロセスと十分に競争し得る技術であるとの推算結果が得られた。この研究成果は、金属回収リサイクルを推進するための技術課題の一つとして生物利用技術を政策的に位置付ける根拠になるものであり、その位置づけにより、今後、公設試や民間において当該技術の研究開発を推進する駆動力になることが期待される。

## 3 ）グリーンイノベーションへの貢献

さらに本研究の成果は、海外市場を見据えた我が国のグリーン成長戦略の観点からも意義あるものと考えている。粉砕・選鉱、バイオリーチングプロセスは運転条件など比較的平易な技術であり、設備規模が小さくて済む利点がある。経済産業の発展が著しい新興国や途上国では使用済電気電子機器類の排出量も増加していることから、それらの諸外国での技術の展開が想定される。近年、中国、韓国、インド等で微生物利用による廃電子基板等廃棄物からの金属回収技術の研究開発が活発化している。本研究で得られた成果は既往研究の成果と比較して一定の優位性をもつため、今後高い競争力をもって技術開発が進められる。即ち、本研究により、我が国のグリーンイノベーション施策の推進に貢献し得る有用な技術基盤を提示できたといえる。

## 6 ．国際共同研究等の状況

特に記載すべき事項はない。
### 7. 研究成果の発表状況

## （1） 誌上発表

## <論文（査読あり）>

1) J. Chang, Y. Tani, H. Naitou, N. Miyata, F. Tojo, and H. Seyama: Zn(II) sequestration by fungal biogenic manganese oxide through enzymatic and abiotic processes. Chemical Geology, 383, 155-163 (2014).

2) J. Chang, Y. Tani, H. Naitou, N. Miyata, and H. Seyama: Sequestration of Cd(II) and Ni(II) ions on fungal manganese oxides associated with Mn(II) oxidase activity. Applied Geochemistry, 47, 198-208 (2014).

3) J. Fukushima, F. Tojo, R. Asano, Y. Kobayashi, Y. Shimura, K. Okano, and N. Miyata: Complete genome sequence of the unclassified iron-oxidizing, chemolithoautotrophic Burkholderiales bacterium GJ-E10 isolated from an acidic river. Genome Announcements, 3(1), e01455-14 (2015),

## <査読付論文に準ずる成果発表>

特に記載すべき事項はない。

## くその他誌上発表（査読なし）>

1) 宮田直幸：廃棄物からの金属回収・再資源化のためのバイオリーチング技術、クリーンテクノロジー、（印刷中）2016年5月号掲載予定

## （2） 口頭発表（学会等）

1) 東條ふゆみ、渡邊陽祐、宮田直幸、梁瑞録、福島淳、常佳寧、谷幸則：微生物形成した鉄・マンガン酸化物を用いた酸性溶液中からの金属イオンの吸着回収、第48回日本水環境学会年会（仙台市）、2014年3月17日.

2) 梁瑞録、宮田直幸、菊池遼太、佐藤盛南：廃電子基板の物性調査、資源・素材学会平成26年度春季大会（東京）、2014年3月27日.

3) 福島淳、東條ふゆみ、小林弥生、浅野亮樹、志村洋一郎、岡野邦宏、宮田直幸：酸性河川より分離された未分類の鉄酸化細菌 GJ-E10 株のゲノム構造、日本農芸化学会 2014 年度大会（東京）、2014 年 3 月 28 日.

4) 東條ふゆみ、渡邊陽祐、宮田直幸、梁瑞録、谷幸則、福島淳：好酸性鉄酸化菌を利用した廃電子基板からの有用金属回収、日本農芸化学会2014年度大会（東京）、2014年3月30日.

5) J. Fukushima, F. Tojo, Y. Kobayashi, R. Asano, R. Shimura, K. Okano, and N. Miyata: The genome structure of novel isolated iron-oxidizing Burkholderiales bacterium GJ-E10. 15th International Society for Microbial Ecology (Seoul, Korea), 2014.8.28.

6) 東條ふゆみ、宮田直幸、福島淳、梁瑞録、谷幸則：廃基板のバイオリーチングに適用可能な好酸性鉄酸化菌集積系の増殖特性、第66回日本生物工学会大会（札幌市）、2014.9.9.

7) 佐藤盛南、梁瑞録、高橋優太、宮田直幸：超臨界水による廃電子基板からの金属のリサイクル、平成26年度資源・素材関係学協会合同秋大会（熊本市）、2014.9.15.

8) 菊池遼太、梁瑞録、宮田直幸：廃電子基板からの金属のリサイクルに関する研究、平成26年度資源・素材関係学協会合同秋大会（熊本市）、2014.9.15.
9) 東條ふゆみ、大野谷成美、宮田直幸、梁瑞録、福島淳、谷幸則：好酸性鉄酸化細菌を用いた廃電子基板のバイオリーチングにおける pH 及び鉄濃度の影響、環境微生物系学会合同大会 2014（浜松市）、2014.10.22

10）福島淳、東條ふゆみ、浅野亮樹、小林弥生、志村洋一郎、岡野邦宏、宮田直幸：酸性環境より分離した新規鉄酸化細菌のゲノム構造から推定される代謝様式、環境微生物系学会合同大会2014（浜松市）、2014.10.22.

11）大野谷成美、東條ふゆみ、宮田直幸、福島淳、梁瑞録、谷幸則、岡野邦宏、尾崎保夫：好酸性鉄酸化細菌 NE106G 株を用いたバイオリーチングによる廃電子基板からの有用金属回収、日本水処理生物学会第 51 回大会（甲府市）、2014.11.14.

12）鄭海粟、谷幸則、内藤博敬、宮田直幸：Acremonium strictum KR21-2が形成したバイオマンガン酸化物によるLa^{3+}イオンの回収、日本水処理生物学会第51回大会（甲府市）、2014.11.14.

13）谷幸則、常佳寧、宮田直幸、東條ふゆみ、福島淳、梁瑞録：廃電子基板のバイオリーチング溶液からのバイオマンガン酸化物によるレアメタルの回収、日本水処理生物学会第51回大会（甲府市）、2014.11.14.

14）谷幸則、常佳寧、宮田直幸、東條ふゆみ、福島淳、梁瑞録：廃電子基板のバイオリーチングとバイオマンガン酸化物吸着によるレアメタルの回収、第49回日本水環境学会年会（金沢市）、2015.3.16.

15）東條ふゆみ、大野谷成美、宮田直幸、梁瑞録、谷幸則、福島淳：好酸性鉄酸化細菌の集積培養系と単離株を用いた廃電子基板のバイオリーチング効率の比較検討、2015年度農芸化学会大会（岡山市）、2015.3.28.

16）福島淳、東條ふゆみ、浅野亮樹、小林弥生、志村洋一郎、岡野邦宏、宮田直幸：酸性河川より分離された鉄酸化細菌 Sulfobacillus thermosulfidooxidans NE106G のゲノム構造、2015 年度農芸化学会大会（岡山市）、2015.3.28.

17) 梁瑞録、鈴木泰文、東條ふゆみ、宮田直幸：超臨界水を用いた廃電子基板からの金属の濃縮、資源・素材学会平成28年度春季大会（東京）、2016.3.28.

## （3） 出願特許

1) 宮田直幸、東條ふゆみ、梁瑞録、福島淳、谷幸則：公立大学法人秋田県立大学、静岡県公立大学法人；「好酸性鉄酸化細菌を用いた金属浸出方法」、特願 2014-181771、特願 2015-174284（優先権主張出願）、2015年9月

## （４）「国民との科学・技術対話」の実施

1) 科学技術振興機構 JST 新技術説明会にて技術者（企業関係者等）向けに講演（2014年11月4日、JST 東京本部別館ホール、東京都市ヶ谷、2014年11月4日、聴講者57名）、「好酸性鉄酸化菌を用いた廃基板等廃棄物からの効率的な有用金属回収・資源化技術」

2) あきた環境懇話会平成27年度第1回情報交換会にて県内の行政、技術者向けに講演（主催：あきた環境懇話会、2015年8月1日、秋田市カレッジプラザ講堂、聴講者約40名）、「微生物を利用した有用金属の再資源化技術開発」，（秋田市），2015.8.1.