Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
Pharmacology, 2011. 59(1): p. 157-175.

43. Han, X., et al., Binding of perfluorooctanoic acid to rat and human plasma proteins. Chemical Research in Toxicology, 2003. 16(6): p. 775-781.

44. Benninghoff, A.D., et al., Estrogen-Like Activity of Perfluoroalkyl Acids In Vivo and Interaction with Human and Rainbow Trout Estrogen Receptors In Vitro. Toxicological Sciences, 2011. 120(1): p. 42-58.

45. Joensen, U.N., et al., PFOS (perfluorooctanesulfonate) in serum is negatively associated with testosterone levels, but not with semen quality, in healthy men. Human Reproduction, 2013. 28(3): p. 599-608.

46. Liu, C., Y. Du, and B. Zhou, Evaluation of estrogenic activities and mechanism of action of perfluorinated chemicals determined by vitellogenin induction in primary cultured tilapia hepatocytes. Aquatic Toxicology, 2007. 85(4): p. 267-277.

47. Qiu, L., et al., Sertoli Cell Is a Potential Target for Perfluorooctane Sulfonate-Induced Reproductive Dysfunction in Male Mice. Toxicological Sciences, 2013. 135(1): p. 229-240.

48. Wan, H.T., et al., Testicular Signaling Is the Potential Target of Perfluorooctanesulfonate-Mediated Subfertility in Male Mice. Biology of Reproduction, 2011. 84(5): p. 1016-1023.

49. Okada, E., et al., Temporal trends of perfluoroalkyl acids in plasma samples of pregnant women in Hokkaido, Japan, 2003-2011. Environment International, 2013. 60(0): p. 89-96.

50. Okada, E., et al., Prenatal exposure to perfluoroalkyl acids and allergic diseases in early childhood. Environment International, 2014. 65(0): p. 127-134.

51. Ivell, R., J.D. Wade, and R. Anand-Ivell, INSL3 as a biomarker of leydig cell functionality. Biology of Reproduction, 2013. 88(6): p. 1-8.

52. David, R.M., Proposed mode of action for in utero effects of some phthalate esters on the developing male reproductive tract. Toxicologic Pathology, 2006. 34(3): p. 209-219.

53. Hu, G. X., et al., Phthalate-induced testicular dysgenesis syndrome: leydig cell influence. Trends Endocrinol Metab, 2009. 20(3): p. 139-45.

54. Lind, P.M., et al., Serum concentrations of phthalate metabolites are related to abdominal fat distribution two years later in elderly women. Environmental Health, 2012. 11(1): p. 21.

55. Main, K.M., et al., Human breast milk contamination with phthalates and alterations of endogenous reproductive hormones in infants three months of age. Environmental Health Perspectives, 2006. 114(2): p. 270-276.

56. Andrade, A. J. M., et al., A dose-response study following in utero and lactational exposure to di-(2-ethylhexyl)-phthalate (DEHP): Non-monotonic dose-response and low dose effects on rat brain aromatase activity. Toxicology, 2006. 227(3): p. 185-192.
57. Zhou, L., et al., Oxidative stress and phthalate-induced down-regulation of steroidogenesis in MA-10 Leydig cells. Reproductive Toxicology, 2013. 42(0): p. 95-101.

58. Orth, J.M. and R. Boehm, Functional coupling of neonatal rat sertoli cells and gonocytes in coculture. Endocrinology, 1990. 127(6): p. 2812–2820.

59. Hart, R., et al., The influence of antenatal exposure to phthalates on subsequent female reproductive development in adolescence: a pilot study. Reproduction, 2014. 147(4): p. 379-390.

60. Silva, M., et al., Glucuronidation patterns of common urinary and serum monoester phthalate metabolites. Archives of Toxicology, 2003. 77(10): p. 561-567.

61. Bizzari, S.N., M. Blagoev, and A. Kishi, Plasticizers. Chemical Economics Handbook 2013.

62. Ait Bamai, Y., et al., Associations of phthalate concentrations in floor dust and multi-surface dust with the interior materials in Japanese dwellings. Science of The Total Environment, 2014. 468-469(0): p. 147-157.

63. Hoppin, J.A., et al., Reproducibility of urinary phthalate metabolites in first morning urine samples. Environmental Health Perspectives, 2002. 110(5): p. 515-518.

64. Suzuki, Y., et al., Exposure assessment of phthalate esters in Japanese pregnant women by using urinary metabolite analysis. Environmental Health and Preventive Medicine, 2009. 14(3): p. 180-187.

65. Townsend, M.K., et al., Within-person reproducibility of urinary bisphenol A and phthalate metabolites over a 1 to 3 year period among women in the Nurses’ Health Studies: a prospective cohort study. Environmental Health, 2013. 12.

66. Bornehag, C.G., et al., Prenatal phthalate exposures and anogenital distance in Swedish boys. Environ Health Perspect, 2015. 123(1): p. 101-7.

67. Rust, J., et al., The role of brothers and sisters in the gender development of preschool children. Journal of experimental child psychology, 2000. 77(4): p. 292-303.
（３）異物・ステロイド代謝酵素やホルモンレセプター等の遺伝子多型によるリスク発現の感受性の差とメチル化との交互作用

国立保健医療科學院 佐田 文宏

国立保健医療科學院 健康危機管理研究部 江藤亜紀子

平成24～26年度累計予算額：10,141千円（うち、平成26年度予算額：3,438千円）

予算額は、間接経費を含む。

[要旨]

近年、ゲノムワイド関連研究（GWAS）の普及により、発育・肥満、末梢血性ホルモン濃度等に関連する遺伝子座が次々と明らかになってきた。本研究では、わが国の出生コホート研究の草分けである北海道スタディ参加者（小規模コホート参加者総数514名）を対象に、児の性ホルモン、発育・肥満関連一塩基多型（SNP）約90種と発育、臍帯血ホルモン濃度、第2指・第4指比（2D/4D比）とともに環境化学物質（PCB・ダイオキシン類、有機フッ素系化合物、フタル酸エステル）との関連を調べた。性ホルモン関連遺伝子ZBTB10近傍及び性ホルモン関連領域8q24のSNPは臍帯血ホルモン濃及び2D/4D比とともにPCB・ダイオキシン類及びフタル酸エステル（ZBTB10遺伝子近傍のみ）との関連がみられた。一方、肥満関連遺伝子MC4RのSNPにおいて臍帯血ホルモン濃及び2D/4D比とともにPCB・ダイオキシン類及び有機フッ素系化合物との関連がみられ、同様に肥満関連遺伝子GNPDA2近傍のSNPにおいて身長・BMI等とともにPCB・ダイオキシン類との関連がみられた。このように、PCB・ダイオキシン類曝露の感受性と発育及び性分化との関連が示唆されることから、今後、ダイオキシン類の抗エストロゲン作用に関与する遺伝要因等を詳細に検討し、環境化学物質曝露と発育及び性分化との遺伝・環境交互作用を解明し、ハイリスク群の同定と予防対策に繋げたいと考えている。

[キーワード]

一塩基多型（SNP）、ゲノムワイド関連研究（GWAS）、性ホルモン、発育、PCB・ダイオキシン類、遺伝・環境交互作用

### 1. はじめに

性機能に関連する異常（停留精巣や尿道下裂など）の発生数は欧米で増加傾向にある。その原因のひとつとして環境化学物質曝露による胎児期のホルモン環境の影響が挙げられる。エストロゲン作用がある環境化学物質への曝露が増加したために精巣形成不全症候群に至り、また女児の遊び方や思春期発来の早期化等への影響が懸念されている。その影響には一塩基多型などの遺伝子型による化学物質やステロイドへの感受性差、化学物質曝露によるゲノムへのエピジェネティックな修飾も関連していると考えられている。このような背景から、World Health Organization (WHO) も2012年に内分泌かく乱物質による潜在的なヒトおよび野生動物への影響についての報告書を作成している $ ^{[1]} $ 。環境化学物質曝露による性ホルモンや性腺機能への影響については、動物を用いた実験データは報告されているが、ヒトのデータは不十分である。
従来、ステロイド代謝酵素、受容体及び結合蛋白の遺伝子多型が、性ホルモン濃度と関連があることが報告されていた $$ 2-8 $$ 。また、このような遺伝子多型は、新生児の体格と関連があることも報告されていた $$ 9-11 $$ 。近年、ゲノムワイド関連研究（GWAS）により、テストステロン（testosterone, T）、エストラジオール（estradiol, E2）及び性ホルモン結合グロブリン（sex hormone binding globulin, SHBG）濃度に影響を及ぼす、これまでに知られていなかった多くの遺伝子座が報告された $$ 12-17 $$ 。また、欧州人10,623人のGWASにより、出生時体重とADCY5遺伝子rs9883204（\mathrm{P}=7\times10^{-15}）及び\mathrm{CCNL1}遺伝子近傍の\mathrm{rs900400}（\mathrm{P}=2\times10^{-35}）との間に有意な関連がみられることが初めて報告された $$ 18 $$ 。ADCY5遺伝子には2型糖尿病の感受性SNPも存在することから、出生時体重と2型糖尿病との間に遺伝的な関連があることが初めて示され、注目を集めた。ただし、このSNPは日本人には存在しないので、日本人の評価には用いることはできない。最近、欧州の主要な出生コホート研究が参画するGWASのメタアナリシスより、これらのSNPと出生時体重との関連が確認された他、CDKAL1、ADRB1、HMGA2、LCORL、5q11.2が出生時体重に関連している遺伝子座であることが報告された $$ 19 $$ 。この研究では、ADCY5とともにCDKAL1は2型糖尿病と、ADRB1は成人期の血圧と、HMGA2、LCORLは成人期の身長に関しても遺伝的な関連が存在することが示された。従来、欧州系人種のGWASにより、Body mass index（BMI）と関連する遺伝子座としてFTO, MC4R等が知られていたが $$ 20,21 $$ 、最近、アジア系人種においては、BMIと関連するGIPR, CDKAL1等の遺伝子座が新たに報告された $$ 22,23 $$ 。また、胎生期のアンドロゲン曝露の指標とされている第2指・第4指比（2D/4D比）に関しても、GWASにより関連する遺伝子座としてLIN28Bが初めて示された $$ 24 $$ 。

## 2 ．研究開発目的

北海道大学では全国に先駆け、環境化学物質が次世代に与える影響について明らかにしてきた（北海道スタディ）。北海道スタディで得られた母が曝露した血液中のPCB・ダイオキシン類や有機フッ素化合物PFOS・PFOA、フタル酸エステルなどの環境化学物質の曝露濃度、臍帯血中のホルモン濃度、第2指/第4指比（2D/4D）のデータを用いることができる。

本研究では、GWASで報告されたT、E2、SHBG濃度、出生時体重及びBMIに影響を及ぼす遺伝子座が新生児の体格、臍帯血ホルモン濃度及び2D/4Dに及ぼす影響とともに環境化学物質との関連を検討し、遺伝・環境交互作用を明らかにすることを目的に実施する。併せて環境化学物質に対する感受性からハイリスク群を同定し、発育、性分化との関連を検討する。

### 3. 研究開発方法

北海道札幌市で実施されている北海道スタディの小規模コホート研究の参加者514名のうち、臍帯血中で277名のT、E2、黄体化ホルモン（luteinizing hormone, LH）、卵胞刺激ホルモン（follicle stimulating hormone, FSH）、プロゲステロン（progesterone, P4）、SHBG、プロラクチン（prolactin, PRL）、インヒビンB（inhibin B, Inh-B）及び146名のインスリン様ペプチド3（insulin-like factor 3, INSL3）の濃度を測定したサブグループ及び7歳時に右手と左手の2D/4D比を測定した124名のサブグループを対象とした。また、予測因子として、環境化学物質及びその代謝物として、既に測定が行われていた妊娠後期の母体血で124名のポリ塩化ビフェニル（PCB）・ダイオキシン類（高分解能ガスクロマトグラフィー・高分解能マススベクロトメーター（HRGC/HRMS）法、福岡県保健
環境研究所）、104名のパーフルオロオクタンスルホン酸・ペルフルオロオクタン酸（PFOS・PFOA）（液体クロマトグラフィー-タンデム型質量分析（LC/MS/MS）法、星薬科大学）、及び117名のDEHP代謝物Mono-(2-ethylhexyl) phthalate（MEHP）（ガスクロマトグラフ質量分析（GC/MS）法、名古屋大学）を用いた。

小規模コホートは、北海道札幌市の一産科病院を受診した妊婦とその児を対象に出生前向きコホート研究「環境と子どもの健康に関する北海道スタディ」を実施した。札幌市およびその周辺に住む日本人で、2002年7月から2005年9月に産科を受診した妊婦1796名に研究への参加を依頼した。依頼した妊婦のうち、日本臍帯血バンク登録者（22%）と里帰り分娩（3%）（他施設で分娩）予定者は研究対象から除外した。最終的に妊娠23週から35週の妊婦514名（28.6%）が研究参加に同意した。コホートのながれを図4に示す。妊娠中期から後期に妊婦と配偶者から、自記式調査票により両親の既往歴、教育歴、世帯収入、妊娠中喫煙状況、妊娠中飲酒状況などの基本的情報を得た。医療診療録から母児の分娩・出生時所見を得た。妊娠中期から後期に妊婦から母体血40ml、および分娩時に膚帯血40mlを採取し、分析まで-80°Cで凍結保存した。（図(3)-1）

図(3)-1 小規模コホートのながれ

## （１）母体血中の環境化学質の測定

妊娠後期の母体血で426名のポリ塩化ビフェニル（PCB）・ダイオキシン類を高分解能ガスクロマトグラフィー・高分解能マススベクロトメーター（HRGC/HRMS）法（福岡県保健環境研究所）、447名のパーフルオロオクタンスルホン酸・ペルフルオロオクタン酸（PFOS・PFOA）を液体クロマトグラフィー・タンデム型質量分析（LC/MS/MS）法（星薬科大学）、および487名のDEHP代謝物Mono-(2-ethylhexyl) phthalate（MEHP）をガスクロマトグラフ質量分析（GC/MS）法（名古屋大学）で測定した。

## （２）臍帯血中のホルモン濃度の測定

臍帯血で295名の性ホルモンであるエストラジオール（E）、総テストステロン(T)、プロゲス
テロン(P)、デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)、アンドロステネジオン(A-dione)をLC-MS/MS法、黄体形成ホルモン（LH）、卵胞刺激ホルモン（FSH）、性ホルモン結合グロブリン（SHBG）、およびプロラクチン(PRL)を免疫放射定量測定(IRMA)法、Inhibin BをELISA法で測定した。また、INSL3をEIA法で測定した。測定は全てあすか製薬メディカル(株)で実施した。

北海道スタディから得られた261名の臍帯血よりQIAamp DNA Blood Mini kit (Qiagen)を用いてゲノムDNAを抽出した。これらのゲノムDNA上の多型を解析するため、まず、異物・ステロイド代謝酵素遺伝子等の一塩基多型（SNP）に着目した。使用するテンプレート量を少なくし、ハイスループットで効率的な解析を行うため、ジェノタイピングには、BioMark（Fluidigm社）を用い、Fluidigm 48.48 Dynamic Array biochip（Fluidigm社）上で行った $ ^{[25]} $ 。BioMarkはリアルタイムPCR機の1種であり、集積流体回路とナノバブルで構成されたバイオチップを反応チャンバーとして用いることにより、ナノリットルスケールでの遺伝子解析を可能にするシステムである。解析する多型は、最近のGWASの結果等から、T、E2及びSHBGとの関連が報告されたもののうち、日本人における出現頻度等をSNPデータベースで検索、確認の上、選択した46SNPに加え、出生時体重・BMI等の発育・肥満関連46SNPを追加した92SNPを検討した（表(3)-1）。SNPtypeアッセイ法でタイピングを行うため、着目したSNPに対し、多型を識別するプライマーを合成した。ナノスケールでの解析をより確実に行うために、ジェノタイピングのためのPCR反応に先立ち、ターゲットとする領域を特異的に増幅するSTA（Specific Target Amplification）反応を行った。STA反応を行ったゲノムDNAは希釈してジェノタイピングのテンプレートとした。ジェノタイピングの結果は、Fluidigm SNP Genotyping Analysis ソフトウェアを用いて解析した。

ジェノタイピングの結果と、ジェノタイピングの結果と、子宮内胎児発育遅延（IUGR：出生時体重＜10パーセンタイル）、低出生体重（出生時体重＜2,500g）及び早産（在胎週数＜37週）との関連を、母親の出産時年齢、出産歴、妊娠中の喫煙及び飲酒歴、児の性別で調整した多重ロジスティック回帰分析により解析した。また、出生時体重、身長、頭囲、胸囲、在胎週数、BMI及びPonderal Index（PI）との関連を母親の出産時年齢、出産歴、妊娠中の喫煙及び飲酒歴、児の性別で調整した直線回帰モデルにより解析した。次に、ジェノタイピングの結果と、臍帯血中のT、E2、T・E2比（T/E2）、LH、FSH、P4、SHBG、PRL、Inh-B及びINSL3の濃度との関連を検討した。まず、遺伝子型（Genotype model）とホルモン濃度との関連をKruskal Wallis検定により解析した。Kruskal Wallis検定で有意差がみられたSNPにおいては、各遺伝子型間の濃度差を多重比較（Bonferroni補正Mann-Whitney検定）により検定した。さらに、優性遺伝モデル（dominant model）または劣性遺伝モデル（recessive model）を用いて、ホルモン濃度との関連をMann-Whitney検定により解析した。また、遺伝子型と2D/4D比との関連は、優性遺伝モデルまたは劣性遺伝モデルを用いて、重回帰モデルにより解析した。環境化学物質濃度に関しては、遺伝子型（Genotype model）との関連をKruskal Wallis検定により、MEHP濃度に関しては、底10の常用対数変換を行い、重回帰モデルにより解析した。
表(3)-1 解析した一塩基多型（SNP）と日本人のアレル頻度

一塩基多型(SNP)	遺伝子	領域	アレル頻度
rs776746	CYP3A5	Splicing defect	A:0.26, G:0.74
rs2257401	CYP3A7	mis	C:0.25, G:0.75
rs10211	CYP3A7	ut3, ese	A:0.75, G:0.25
rs12360	CYP3A7	ut3, ese	C:0.25, T:0.75
rs4545	CYP11B2	misese	A:0.47, G:0.53
rs743572	CP17A1	ut5, ese	A:0.51, G:0.49
rs727479	CYP19A1	intron	G:0.34, T:0.66
rs10046	CYP19A1	ut3, ese	C:0.55, T:0.45
rs700519	CYP19A1	mis, ese	C:0.78, T:0.22
rs1047303	HSD3B1	mis, ese	A:0.62, C:0.38
rs3088283	HSD3B1	mis	C:0.26, T:0.74
rs4659175	HSD3B2	ng5	C:0.78, T:0.22
rs2676531	HSD17B1	ut5, ese	A:0.42, G:0.58
rs4743709	HSD17B3	ng3, tfbs	C:0.26, T:0.74
rs293428	UGT2B15	intergenic	C:0.59, T:0.41
rs314276	LIN28B	intron	A:0.28, C:0.72
rs314277	LIN28B	intron	A:0.05, C:0.95
rs10475	ATF3	ut3, ese	C:0.48, T:0.52
rs135561	PPARA	ng5	C:0.94, T:0.06
rs727428	SHBG	intergenic	A:0.60, G:0.40
rs72829446	SHBG	intergenic	C:0.89, T:0.11
rs6259	SHBG	mis (D356N)	A:0.12, G:0.88
rs1641537	SHBG	intergenic	A:0.41, G:0.59
rs10454142	LHCGR	intergenic	C:0.49, T:0.51
rs4149056	SLC01B1	mis	C:0.18, T:0.82
rs780093	GCKR	intron	A:0.57, G:0.43
rs10488084	PLEKHA8	intron	A:0.92, C:0.08
rs440837	ZBTB10	intergenic	A:0.65, G:0.35
rs17496332	PRMT6	intergenic	A:0.70, G:0.30
rs7910927	JMJD1C	intron	G:0.50, T:0.50
rs10822184	JMJD1C	intron	C:0.48, T:0.52
rs5934505	FAM9B	intergenic	C:0.30, T:0.70
rs2411984	ZNF652	intergenic	A:0.24, G:0.76
rs8023580	NR2F2	intergenic	C:0.36, T:0.64
rs10896449	11q13.2	intergenic	A:0.86, G:0.14
rs597800	EHD3	intron	C:0.21, G:0.79
rs2727261	BEST1	intergenic	A:0.82, G:0.28
rs893226	MMP2	intergenic	G:0.58, T:0.42
rs10993994	MSMB	ng5	C:0.60, T:0.40
rs980171	8q24	intergenic	C:0.20, T:0.80
rs12334903	8q24	intergenic	C:0.19, T:0.81
rs1456310	8q24	intergenic	C:0.52, T:0.48
rs3779195	BAIAP2L1	intron	A:0.69, T:0.31
rs3822356	CD14	intergenic	C:0.27, T:0.73
rs1573036	TDGF3	intergenic	A:0.03, G:0.97
rs402675	CNTN6	intergenic	A:0.06, T:0.94
rs4432842	5q11.2	intergenic	C:0.34, T:0.66
rs9883204	ADCY5	intron	C:0.99, T:0.01
rs900400	CCNL1	intergenic	C:0.40, T:0.60
rs10440833	CDKL1	intron	A:0.40, T:0.60
rs10946398	CDKL1	intron	A:0.59, C:0.41
rs2206734	CDKL1	intron	A:0.39, G:0.61
rs4712523	CDKL1	intron	A:0.59, G:0.41
rs4712524	CDKL1	intron	A:0.54, G:0.46
rs6931514	CDKL1	intron	A:0.55, G:0.45
rs7747752	CDKL1	intron	C:0.41, G:0.59
rs7754840	CDKL1	intron	C:0.41, G:0.59
rs7756992	CDKL1	intron	A:0.54, G:0.46
rs7766070	CDKL1	intron	A:0.42, C:0.58
rs9295474	CDKL1	intron	C:0.61, G:0.39
rs9356744	CDKL1	intron	C:0.42, T:0.58
rs9465871	CDKL1	intron	C:0.45, T:0.55
rs1121980	FTO	intron	C:0.78, T:0.22
rs11642841	FTO	intron	A:0.06, C:0.84
rs12149832	FTO	intron	A:0.17, G:0.83
rs1421084	FTO	intron	A:0.94, G:0068
rs1421085	FTO	intron	C:0.19, T:0.81
rs1558902	FTO	intron	A:0.16, T:0.84
rs17817449	FTO	intron	G:0.18, T:0.82
rs6499640	FTO	intron	A:0.19, G:0.81
rs7202116	FTO	intron	A:0.82, G:0.18
rs8050136	FTO	intron	A:0.18, C:0.82
rs9922619	FTO	intron	G:0.76, T:0.24
rs9930506	FTO	intron	A:0.77, G:0.23
rs9939609	FTO	intron	A:0.19, T:0.81
rs9940128	FTO	intron	A:0.23, G:0.77
rs9941349	FTO	intron	C:0.78, T:0.22
rs10938397	GNPDA2	intergenic	A:0.63, G:0.37
rs1042757	ST6GAL1	ut3	C:0.62, G:0.38
rs724577	LCORL	intron	A:0.46, C:0.54
rs10871777	MC4R	intergenic	A:0.76, G:0.24
rs12967135	MC4R	intergenic	A:0.19, G:0.81
rs12970134	MC4R	intergenic	A:0.19, G:0.81
rs17773430	MC4R	intergenic	C:0.14, T:0.86
rs17782313	MC4R	intergenic	C:0.22, T:0.78
rs2331841	MC4R	intergenic	A:0.27, G:0.73
rs489693	MC4R	intergenic	A:0.32, C:0.68
rs8192678	PPARGC1A	mis	A:0.53, G:0.47
rs713586	RBJ	intergenic	C:0.48, T:0.52
rs2867125	TMEM18	intergenic	A:0.11, G:0.89
rs6548238	TMEM18	intergenic	C:0.82, T:0.18
rs7561317	TMEM18	intergenic	A:0.12, G:0.88

[注] mis: missense, ut3: 3' -untranslated region, ut5: 5' -untranslated region, ese: exonic splicing enhancers, tfbs: transcription factor binding sites, ng3: 3' -near gene region, ng5: 5' -near gene region
## 4 ．結果及び考察

優性遺伝モデル（例えば、rs402675におけるAA+AT型対TT型）により、出生時体格指標と血清性ホルモン濃度と関連のある一塩基多型との関連を検討した（表(3)-2）。rs402675（CNTN6遺伝子近傍）及びrs293428（UGT2B15遺伝子近傍）において平均出生時体重の低下、rs10454142（LHCGR遺伝子近傍）、rs2676531（HSD17B1遺伝子）、rs402675及びrs1641537（SHBG遺伝子近傍）において平均BMIの低下、rs10454142、rs2676531及びrs1641537において平均PIの低下がみられた（表(3)-2）。これらのSNPのうち、rs402675では平均出生時胸囲の低下、rs293428では平均出生時頭囲と出生時胸囲の低下も併せてみられた。

表(3)-2 出生時体格指標と血清性ホルモン濃度と関連のある一塩基多型との関連

rs番号	遺伝子(近傍)	出生時体重(g)	BMI(kg/m²)	PI(kg/m³)
B	SE	B	SE	B	SE
rs402675	CNTN6	-151*	58	-0.6*	0.3	-1.2	0.8
rs10454142	LHCGR	-53	42	-0.6**	0.2	-1.7**	0.6
rs1641537	SHBG	-55	49	-0.5*	0.2	-1.5*	0.7
rs293428	UGT2B15	-107*	48	-0.2	0.2	-0.2	0.7
rs4659175	HSD3B2	23	40	-0.02	0.2	-0.3	0.6
rs2676531	HSD17B1	-72	43	-0.5**	0.2	-1.5*	0.6

rs番号	遺伝子(近傍)	出生時身長(cm)	出生時頭囲(cm)	出生時胸囲(cm)
B	SE	B	SE	B	SE
rs402675	CNTN6	-0.2	0.3	-0.3	0.2	-0.7**	0.2
rs10454142	LHCGR	0.5*	0.2	-0.1	0.2	-0.2	0.2
rs1641537	SHBG	0.2	0.3	0.1	0.2	-0.2	0.2
rs293428	UGT2B15	-0.3	0.3	-0.5**	0.2	-0.6**	0.2
rs4659175	HSD3B2	0.1	0.2	0.4*	0.2	0.2	0.2
rs2676531	HSD17B1	0.2	0.3	-0.4*	0.2	-0.3	0.2

[注] B：非標準化係数、SE：標準誤差、BMI：Body mass index、PI：Ponderal Index

$ ^{*} $ P<0.05， $ ^{**} $ P<0.01， $ ^{\dagger} $ 母親の出産時年齢、出産歴、妊娠中の喫煙及び飲酒歴、児の性別、在胎週数で調整した重回帰分析

臍帯血ホルモン濃度のうち、T、LH、FSH、INH-B及びINSL3の各濃度に性差がみられた（いずれもp<0.001）。男児では、臍帯血E2濃度はrs700519（CYP19A1遺伝子）、rs440837（ZBTB10遺伝子）
近傍）及びrs17773430（MC4R遺伝子近傍）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、臍帯血T濃度はrs2411984（ZNF652遺伝子近傍）、rs727428（SHBG遺伝子近傍）及びrs3828356（CD14遺伝子近傍）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、P4濃度はrs9356744、rs7747752、rs7766070及びrs10440833（いずれもCDKL1遺伝子）において（いずれも$p<0.05$）、LH濃度はrs2727261（BEST1遺伝子）、rs17782313、rs2331841、rs10871777、rs12967135及びrs489693（MC4R遺伝子近傍）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、FSH濃度はrs314277（LIN28B遺伝子）、rs12970134（MC4R遺伝子近傍）、rs724577（LCORL遺伝子）及びrs700519（CYP19A1遺伝子）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、SHBG濃度はrs7910927及びrs10822184（いずれもJMJD1C遺伝子）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、PRL濃度はrs440837（ZBTB10遺伝子近傍）、rs9930506、rs1121980、rs9940128、rs9941349（いずれもFTO遺伝子）、rs980171（8q24領域）、rs12360及びrs2257401（CYP3A7遺伝子）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、INH-B濃度はrs440837の遺伝子型間において（$p=0.001$）、Ins13濃度はrs4712523（CDKLI遺伝子）及びrs6548238（TMEM18遺伝子近傍）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、有意差がみられた（表(3)-3）。一方、女児では、E2濃度はrs10488084（PLEKHA8遺伝子）及びrs1573036（TDGF3遺伝子近傍）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、臍帯血T濃度はrs10488084（$p<0.01$）及びrs1042757（HMGA2遺伝子）（$p<0.05$）の遺伝子型間において、P4濃度はrs314276（LIN28B遺伝子）及びrs1456310（8q24領域）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、SHBG濃度はrs9295474（CDKLI遺伝子）、rs440837（ZBTB10遺伝子近傍）、rs727479（CYP19A1遺伝子）及びrs402675（CNTN6遺伝子近傍）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、PRL濃度はrs440837（$p=0.001$）、rs7747752、rs7756992（いずれもCDKL1遺伝子）及びrs135561（PPARA遺伝子）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、Inh-B濃度はrs440837（$p<0.01$）及びrs893226（MMP2遺伝子近傍）、rs8192678（PPARGC1A遺伝子）、rs10822184（JMJD1C遺伝子）の遺伝子型間において（いずれも$p<0.05$）、Ins13濃度はrs4432842（5q11.2領域）の遺伝子型間において（$p<0.01$）、有意差がみられた（表(3)-4）。しかしながら、これらの関連は軽微で、多重比較により有意性を維持できないものがほとんどであったが、男児で、Inh-B濃度におけるrs440837（$p<0.001$）の優性遺伝モデル及び女児で、PRL濃度におけるrs440837（$p=0.001$）の優性遺伝モデル及びIns13濃度におけるrs4432842（$p<0.001$）の劣性遺伝モデルは比較的強い関連がみられた（いずれも$p<0.001$）。

表(3)-3 臍帯血ホルモン濃度と男児一塩基多型との関連

rs number	Gene/Locus	P (genotype model $ \dagger $ )	P (dominant model#)	P (recessive model#)
E2	rs700519	CYP19A1	0.012	ns	0.016
rs440837	ZBTB10	0.015	0.012	ns
rs17773430	MC4R	0.03	0.009	ns
rs724577	LCORL	ns	ns	0.015
T	rs3822356	CD14	0.015	ns	ns
rs2411984	ZNF652	0.012	ns	0.029
rs727428	SHBG	0.022	ns	0.042
rs980171	8q24	ns	ns	0.016
rs17773430	MC4R	ns	0.017	ns
T/E2	rs700519	CYP19A1	0.005	ns	0.002
P4	rs9356744	CDKL1	0.012	0.003	ns
rs7747752	CDKL1	0.02	0.011	ns
rs7766070	CDKL1	0.025	0.009	ns
rs10440833	CDKL1	0.048	0.014	ns
rs7756992	CDKL1	ns	ns	0.025
LH	rs2727261	BEST1	0.018	0.009	ns
rs17782313	MC4R	0.009	ns	0.044
rs2331841	MC4R	0.02	ns	0.019
rs10871777	MC4R	0.033	ns	ns
rs12967135	MC4R	0.033	ns	ns
rs489693	MC4R	0.04	ns	ns
rs9930506	FTO	ns	ns	0.033
FSH	rs314277	LIN28B	0.029	ns	ns
rs12970134	MC4R	0.042	ns	0.029
rs2727261	BEST1	ns	0.033	ns
rs724577	LCORL	0.038	0.036	ns
rs700519	CYP19A1	0.039	ns	0.048
SHBG	rs7910927	JMJD1C	0.032	ns	0.009
rs10822184	JMJD1C	0.033	ns	0.01
rs440837	ZBTB10	ns	0.035	ns
rs4432842	5q11.2	ns	ns	0.046
PRL	rs440837	ZBTB10	0.015	0.004	ns
rs9930506	FTO	0.015	0.017	ns
rs1121980	FTO	0.03	0.038	ns
rs9940128	FTO	0.03	0.038	ns
rs9941349	FTO	ns	0.038	ns
rs9941349	FTO	0.03	ns	ns
rs980171	8q24	0.029	ns	ns
rs1456310	8q24	ns	0.034	ns
rs12360	CYP3A7	0.044	0.025	ns
rs2257401	CYP3A7	0.042	0.025	ns
rs402675	CNTN6	ns	0.043	ns
rs597800	EHD3	ns	0.049	ns
Inh-B	rs440837	ZBTB10	0.001	<0.001	ns
rs135561	PPARA	ns	0.038	ns
rs727428	SHBG	ns	0.04	ns
Ins13	rs4712523	CDKL1	0.049	ns	0.017
rs1042757	HMGA2	ns	0.022	ns
rs980171	8q24	ns	0.024	ns
rs9295474	CDKL1	ns	0.025	ns
rs727428	SHBG	ns	ns	0.03
rs597800	EHD3	ns	0.035	ns
rs6548238	TMEM18	0.039	0.047	ns

[注] T:testosterone, E2: estradiol, P4: progesterone, LH: luteinizing hormone, FSH: follicle stimulating hormone, SHBG: sex hormone binding globulin, PRL: prolactin, Inh-B: inhibin B, INSL3: insulin-like factor 3, ns: non-significant

$ ^{\dagger} $ Kruskal-Wallis test, #Mann-Whitney test

太字： $ P \leq 0.01 $
表(3)-4 臍帯血ホルモン濃度と女児一塩基多型との関連

rs number	Gene/Locus	P (genotype model†)	P (dominant model#)	P (recessive model#)
E2	rs10488084	PLEKHA8	0.015	ns	0.007
rs1573036	TDGF3	0.016	0.016	ns
T	rs2411984	ZNF652	Ns	0.049	ns
rs10488084	PLEKHA8	0.006	ns	0.005
rs1042757	HMGA2	0.015	0.026	ns
T/E2	rs10896449	11q13.2	0.007	0.007	ns
rs10822184	JMJD1C	Ns	0.049	ns
rs9940128	FTO	0.026	ns	0.035
rs1121980	FTO	0.031	ns	0.036
rs9941349	FTO	0.031	ns	0.035
rs724577	LCORL	0.029	ns	ns
P4	rs1456310	8q24	0.018	ns	0.014
rs314276	LIN28B	0.013	0.007	ns
rs12970134	MC4R	Ns	0.042	ns
SHBG	rs9295474	CDKL1	0.016	0.004	ns
rs4712523	CDKL1	Ns	ns	0.023
rs440837	ZBTB10	0.018	0.005	ns
rs727479	CYP19A1	0.017	0.01	ns
rs700519	CYP19A1	Ns	ns	0.03
rs402675	CNTN6	0.048	0.017	ns
rs4432842	5q11.2	Ns	0.03	ns
rs10822184	JMJD1C	Ns	ns	0.033
rs727428	SHBG	Ns	ns	0.036
PRL	rs440837	ZBTB10	0.001	0.001	0.013
rs7747752	CDKL1	0.024	ns	0.01
rs7756992	CDKL1	0.037	0.023	ns
rs700519	CYP19A1	Ns	0.015	ns
rs135561	PPARA	0.033	ns	0.016
rs12360	CYP3A7	Ns	0.043	ns
rs2257401	CYP3A7	Ns	0.043	ns
Inh-B	rs440837	ZBTB10	0.006	0.002	ns
rs893226	MMP2	0.029	0.008	ns
rs8192678	PPARGC1A	0.035	0.01	ns
rs10822184	JMJD1C	0.034	0.027	ns
rs12970134	MC4R	0.035	ns	ns
rs4432842	5q11.2	Ns	ns	ns
Ins13	rs4432842	5q11.2	0.008	ns	<0.001
rs724577	LCORL	Ns	ns	0.035

[注] T:testosterone, E2: estradiol, P4: progesterone, SHBG: sex hormone binding globulin, PRL: prolactin, Inh-B: inhibin B, INSL3: insulin-like factor 3, ns: non-significant

$ ^{\dagger} $ Kruskal-Wallis test, #Mann-Whitney test

全体の2D/4Dの平均値±標準偏差は、右手94.4±3.4%、左手94.1±3.7%、右手と左手の平均（以下、平均）94.3±3.1%であった。男女間での2D/4Dの比較では、左手、右手及び平均ともに男女
間に有意差を認め、女児の方が男児に比べて2D/4Dの値は有意に高かった。重回帰分析の結果、右手の2D/4Dは、MC4R遺伝子近傍のrs17773430（p<0.001）、8q24のrs980171、rs12334903（ともにp<0.01）、TMEM18遺伝子近傍のrs2867125、rs6548238、rs7561317（いずれもp<0.01）及びCNTN6遺伝子近傍のrs402675（p<0.05）で有意に増加し、ZBTB10遺伝子のrs440837（p<0.05）で減少した。一方、左手の2D/4Dは、MC4R遺伝子近傍のrs17773430（p<0.01）で有意に増加し、ZBTB10遺伝子のrs440837及びSHBG遺伝子近傍のrs727428（ともにp<0.05）で減少した（表(3)-5、図(3)-2）。

表(3)-5 2D/4D比と一塩基多型との関連

rs number	Gene/Locus	B	SE	P
右手2D/4D比	rs17773430	MC4R	2.74	0.66	<0.001
rs980171	8q24	2.01	0.69	0.003
rs12334903	8q24	1.93	0.71	0.006
rs2867125	TMEM18	2.08	0.77	0.008
rs6548238	TMEM18	2.05	0.76	0.008
rs7561317	TMEM18	2.05	0.76	0.008
rs402675	CNTN6	2.5	1.53	0.017
rs440837	ZBTB10	-1.62	0.67	0.018
左手2D/4D比	rs17773430	MC4R	2.2	0.72	0.003
rs440837	ZBTB10	-1.51	0.71	0.035
rs727428	SHBG	-1.61	0.73	0.03
平均2D/4D比	rs17773430	MC4R	2.47	0.61	<0.001
rs980171	8q24	1.66	0.63	0.01
rs12334903	8q24	1.55	0.66	0.02
rs440837	ZBTB10	-1.56	0.61	0.012
rs727428	SHBG	-1.5	0.64	0.02
rs6548238	TMEM18	1.6	0.69	0.021
rs7561317	TMEM18	1.6	0.69	0.021
rs2867125	TMEM18	1.54	0.7	0.029
rs11642841	FTO	1.76	0.82	0.034

$ ^{\dagger} $ 母親の出産時年齢、出産歴、妊娠中の喫煙および飲酒歴、児の性別、在胎週数で調整した重回帰分析（優性遺伝モデル）
$ ^{*} $ Mann-Whitney檢定

図(3)-2 2D/4D比とMC4R遺伝子近傍rs17773430との関連*

環境化学物質とホルモン濃度にともに有意な関連がみられたのが、ZBTB10遺伝子近傍のrs440837である。ZBTB10はzinc finger and BTB domain containing 10という性ホルモンの調節に関与するDNA結合タンパク質で、ZBTB10遺伝子近傍のrs440837を優性遺伝モデルで遺伝子型をAA型とAG/GG型に分けて検討すると、男女ともAG/GG型では、フタル酸エステルの代謝物MEHP濃度が有意に高く、SHBG、PRL及びInh-B濃度は有意に低く、男児でのみE2濃度が有意に高かった（表(3)-6、図(3)-3）。常用対数変換した重回帰分析によっても、ZBTB10遺伝子近傍rs440837 AG/GG遺伝子型では、AA遺伝子型より、男女ともMEHP濃度が有意に高く、男児でInh-Bの分泌が抑制され、E2が上昇することが示唆された（表(3)-7）。また、AG/GG型の男児では、MEHP濃度は高いほうにシフトし、高濃度群でInhibin Bの分泌が抑制されることが示唆された（図(3)-4）。

表(3)-6 ZBTB10遺伝子近傍 rs440837 の優性遺伝モデルによるフタル酸エステル、ホルモン濃度

ZBTB10	男児	女児
化学物質	rs440837	Median	25th-75th	Median	25th-75th
MEHP
(ng/mL)	AA
AG/GG	0.023
0.049	0.020-0.026
0.039-0.076	0.020
0.048	0.017-0.023
0.037-0.063
E2
(ng/mL)	AA
AG/GG	3.62
5.02	2.73-4.79
3.43-7.21	4.71
3.97	3.09-7.18
2.81-6.48
SHBG
(nmol/mL)	AA
AG/GG	16.5
15.6	13.1-21.1
13.1-19.0	15.9
15.3	13.7-19.0
11.8-16.8
PRL
(ng/mL)	AA
AG/GG	90.3
78.3	75.8-132.3
57.0-122.0	97.6
84.5	77.8-116.8
56.2-96.2
Inhibin B
(pg/mL)	AA
AG/GG	54.1
38.5	43.2-66.4
27.0-51.8	5.50
5.50	5.50-13.03
5.50-5.50
[注] ZBTB10: zinc finger and BTB domain containing 10, MEHP: mono(2-ethylhexyl) phthalate, E2: estradiol, SHBG: sex hormone binding globulin, PRL: prolactin, 赤字: P<0.05, 太赤字: P<0.01 (Mann-Whitney U 檢定)

図(3)-3 ZBTB10遺伝子近傍 rs440837 の優性遺伝モデルによるMEHP, E2 PRL及び Inhibin B 濃度 $ ^{*} $

表(3)-7 ZBTB10 遺伝子近傍rs440837の 優性遺伝モデルによるMEHP, E2, SHBG, PRL及び Inhibin B 濃度への影響†

全員	男児	女児
B	SE	P	B	SE	P	B	SE	P
MEHP (ng/mL)	0.347	0.049	<0.001	0.306	0.071	<0.001	0.349	0.071	<0.001
E2 (ng/mL)	0.046	0.055	0.402	0.162	0.079	0.046	-0.014	0.079	0.859
SHBG (nmol/mL)	0.035	0.050	0.488	-0.021	0.043	0.626	0.089	0.082	0.285
PRL (ng/mL)	-0.057	0.057	0.319	-0.104	0.067	0.131	-0.090	0.035	0.700
Inhibin B (pg/mL)	-0.746	0.054	<0.001	-0.168	0.059	0.007	-0.145	0.082	0.082

[注] ZBTB10: zinc finger and BTB domain containing 10, MEHP: mono(2-ethylhexyl) phthalate, E2: estradiol, SHBG: sex hormone binding globulin, PRL: prolactin,

赤字： $ P \leq 0.05 $ ，太赤字： $ P \leq 0.01 $ （重回帰分析）