Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
XDS-CALUX 法よりも DR-CALUX アッセイ法で EC が低い傾向であったが、その差は 2,3,7,8-TCDD でみられる程ではなかった。実際に、臭素化ダイオキシン類と臭素化塩素化ダイオキシン類の REP は、OBDD や 3-B-2,7,8-TriCDF の一部異性体を除き、XDS-CALUX アッセイ法で高く、DR-CALUX アッセイ法と比較して EC_{5TCDD}-REP で 2.6±1.9 倍（平均±標準偏差）、EC_{20}-REP で 2.5±1.6 倍、EC_{50}-REP で 2.6±1.7 倍高かった。2,3,7,8-TCDD を基準とすると、マウス由来細胞を用いる XDS-CALUX アッセイでは、ラット由来細胞を用いる DR-CALUX 法と比較して、臭素化ダイオキシン類及び臭素化塩素化ダイオキシン類の相対的反応性が高いことが示唆された。

既報 $ ^{16-19} $ で得られている臭素化ダイオキシン類と臭素化塩素化ダイオキシン類のREPを表4に示す。DR-CALUXアッセイ法では、Behnischら $ ^{16} $ によって3PBDDs、4PBDFs、2Co-PBBs、5PXDDs及び1PXDFsのREP-EC $ _{20} $ が、Olsmanら $ ^{17} $ によって2PBDDs、1PBDF及び3PXDDsのREP-EC $ _{25} $ が、それぞれ報告されている。本研究のDR-CALUXアッセイ法で得られたREP-EC $ _{20} $ は、10倍の差が示されたPBB-77を除くと、21物質中20物質が既報と概ね同程度であった。XDS-CALUXアッセイ法では、Samaraら $ ^{18} $ によって2PBDDs、4PBDFs及び2PXDDsのREP-EC $ _{20} $ が、Brownら $ ^{19} $ によって1PBDDs、1PBDF及び1PXDDsのREP-EC $ _{20} $ が、それぞれ報告されている。本研究のXDS-CALUXアッセイ法で得られたREP-EC $ _{20} $ は、38倍程度の差が示されたPBB-77 $ ^{18} $ を除くと、11物質中9物質が既報と概ね同程度であった。これらの結果は、本研究で実施されたDR-CALUXアッセイ法及びXDS-CALUXアッセイ法による評価結果の再現性と妥当性を示している。一方、PBB-77でみられる大きな差の原因は不明である。

## 3 ）臭素化ダイオキシン類の REP と WHO-TEF の比較評価

WHO-TEF は塩素化ダイオキシン類に設定されている毒性等価係数であるが $ ^{15} $ 、2011 年 11 月に開催された WHO/UNEP 専門家会合において臭素化ダイオキシン類にも適用することが推奨された $ ^{13} $ 。本研究では、これに準じて、臭素化ダイオキシン類及び臭素化塩素化ダイオキシン類の REP-EC_{5TCDD} と WHO-TEF を比較した（図 4）。

臭素化ダイオキシン類の$\mathrm{REP-EC_{5TCDD}}$ については、$\mathrm{PBB-77}$ を除くと、概ね対応する$\mathrm{WHO-TEF}$ と同程度であった。臭素化ダイオキシン類の$\mathrm{WHO-TEF}$ によるリスク管理に関して$\mathrm{WHO/UNEP}$ 専門家会合が取りまとめた総説$^{13)}$では、哺乳類を用いた臭素化ダイオキシン類の毒性試験で得られた$\mathrm{REP}$ が、対応する塩素化ダイオキシン類の$\mathrm{WHO-TEF}$ と1オーダー以内の差であったと報告している。本研究の$\mathrm{REP}$ は、哺乳類細胞を使用するレポーター遺伝子アツセイ法、いわゆる$\mathrm{in\ vitro}$ 試験法で得られているものの、図4に示す通り、1オーダー以内の差であり、$\mathrm{WHO-TEF}$ を良く反映していると考えられた。一方で$\mathrm{PBB-77}$ については、$\mathrm{REP-EC_{5TCDD}}$ と対応する$\mathrm{WHO-TEF}$ に2オーダー以上の差が生じている。$\mathrm{WHO-TEF}$ は、動物実験に基づいて決定されており、$\mathrm{Ah}$ レセプターへの結合性と下流遺伝子発現だけでなく、代謝や体外排出も考慮されている。ダイオキシン類と同様に、臭素化ダイオキシン類についても、体内で代謝を受けにくく残留性が高いと考えられている$^{13)}$が、本研究の結果は、$\mathrm{PBB-77}$ がその他の臭素化ダイオキシン類と比較して代謝を受け易く残留性が低いことを示すのかもしれない。$\mathrm{PBB-77}$ とハロゲン置換位置と数が同じ$\mathrm{PCB-77}$ については、代謝や体外排出について種間差が大きいと言われており、$\mathrm{PCB-77}$ の代謝能が高い哺乳類の$\mathrm{WHO-TEF}$ が0.0001であるのに対し$^{13)}$、$\mathrm{PCB-77}$ の代謝能が低い鳥類の$\mathrm{WHO-TEF}$ が0.05と設定されている$^{14)}$。これらを考慮すると、$\mathrm{PBB-77}$ の$\mathrm{REP-EC_{5TCDD}}$ は、代謝や体外排泄を動物実験のように考慮できないことに起因すると考えられた。

臭素化塩素化ダイオキシン類の\mathrm{REP-EC}_{5\mathrm{TCDD}} についても、概ね対応するWHO-TEFと同程度であった。臭素化ダイオキシン類と同様に、臭素化塩素化ダイオキシン類のREPについても、図4に示す通り、1オーダー以内の差であり、WHO-TEFを良く反映していると考えられた。但し、PXDFsのREP-EC_{5TCDD}については、WHO-TEFよりも1オーダー程度高くなる傾向であった。中でも、2,3-B-7,8-DiCDF、3-B-2,7,8-TriCDF及び4-B-2,3,7,8-TCDFは、2,3,7,8-TCDDと同程度以上のREP-EC_{5TCDD}を有しており、最も毒性の強い2,3,7,8-TCDDよりも毒性が強い可能性がある。これらの結果は、臭素化ダイオキシン類と同様に、TEQによる臭素化塩素化ダイオキシン類のリスク管理も重要であることを示唆している。但し、PXDDsは1550異性体が、PXDFsで3050異性体が、それぞれ理論上存在する可能性がある $ ^{20} $ 。これらを考慮した塩素化ダイオキシン類、臭素化ダイオキシン類及び臭素化塩素化ダイオキシン類の包括的なリスク管理法の開発が必要と考えられる。

## 4 ）塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類の混合物への相加性評価の適用評価

塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類の混合物への相加性評価の適用性を評価するために、環境省が特措法の附則第二条に基づき実施している「臭素系ダイオキシン類排出等実態調査(平成13年度〜)」
5,21-33)や既報9,12)で、環境大気、環境水、底質、地下水、土壌、降下ばいじん、汚泥、焼却灰、排出ガス、排出水、建屋内空気及びハウスダストを対象として得られている測定データに基づいて臭素化ダイオキシン類と塩素化ダイオキシン類の混合物を調製した。具体的には、各種試料媒体毎に臭素化ダイオキシン類及び塩素化ダイオキシン類濃度データを取りまとめ、各異性体濃度にDR-CALUXアッセイ法のREP-EC5TCDDを乗じて、生物検定法における反応性を考慮した個別異性体のTEQ(Theoretical CALUX-TEQ)を算出した。DR-CALUXアッセイ法とXDS-CALUXアッセイ法のREP-EC5TCDDは、図4に示す通り同程度であることを既に述べた。各種試料媒体のTheoretical CALUX-TEQに対する各異性体の平均構成割合をみると（表5及び表6）、臭素化ダイオキシン類では2,3,7,8-TBDF、1,2,3,7,8-PeBDF、2,3,4,7,8-PeBDF、1,2,3,4,7,8-HxBDF及び1,2,3,4,6,7,8-HpBDFが、塩素化ダイオキシン類では1,2,3,7,8-PeCDD、1,2,3,6,7,8-HxCDD、1,2,3,4,6,7,8-HpCDD、2,3,7,8-TCDF、1,2,3,7,8-PeCDF、2,3,4,7,8-PeCDF、1,2,3,4,7,8-HxCDF、2,3,4,6,7,8-HxCDF及びPCB-126が、それぞれ媒体問わず共通して高い傾向であった。これらの結果に基づいて、臭素化ダイオキシン類については主要5異性体から構成される混合物を、塩素化ダイオキシン類については主要9異性体から構成される混合物を、それぞれ調製した。文献調査に基づく各種試料媒体のTheoretical CALUX-TEQに対する各異性体の平均構成割合と、実際に調製した混合物の構成割合を、臭素化ダイオキシン類と塩素化ダイオキシン類別に図5に示す。

臭素化ダイオキシン類と塩素化ダイオキシン類の混合物を用いて、塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類の混合物への相加性評価の適用性評価を実施した。具体的には、臭素化ダイオキシン類と塩素化ダイオキシン類のCALUX-TEQの比率が、1:9、1:1、9:1になるように調製した混合物について、DR-CALUXアッセイ法及びXDS-CALUXアッセイ法に供した。図6に示すように、DR-CALUXアッセイ法及びXDS-CALUXアッセイ法共に、得られた実験値は、用量相加性に基づいて計算される値と同程度の値を示した。塩素化ダイオキシン類については、各異性体の濃度に個別のWHO-TEFを乗じた値を総和してWHO-TEQが算出されており、WHO-TEQを用いてリスクが管理されている。これは、塩素化ダイオキシン類の毒性が用量相加性を示すことに基づいた評価法である $ ^{14,35} $ 。臭素化ダイオキシン類については、データが限られているものの、幼魚を用いたバイオアッセイによって2,3,7,8-TBDDと1,2,3,7,8-PeBDD、2,3,7,8-TBDDと1,2,3,7,8-PeBDF、1,2,3,7,8-PeBDDと2,3,4,7,8-PeBDF、3,3',4,4'-TBBと2,3,4,7,8-PeBDFのペアについて用量相加性が確認されている $ ^{35} $ 。当該研究に基づき、WHO/UNEP専門家会合は臭素化ダイオキシン類の毒性も用量相加性で評価できると結論付けている $ ^{13} $ 。塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類の混合物への相加性評価の適用については、これまでに議論されてこなかったが、本研究によって実験的に評価され、その妥当性が示された。

## (4) まとめ

本研究では、塩素化ダイオキシン類の簡易測定法として環境省が特措法に追加した生物検定法のうち、Ahレセプターバインディングアッセイ法に分類されるDR-CALUXアッセイ法とXDS-CALUXアッセイ法を用いて、臭素化ダイオキシン類を含む臭素系ダイオキシン類のAhレセプターを介したルシフェラーゼ活性能を評価し、DR-CALUXアッセイ法とXDS-CALUXアッセイ法の臭素化ダイオキシン類の検出ツールとしての妥当性を評価した。臭素化ダイオキシン類18種（PBDDs7異性体、PBDFs9異性体、Co-PBBs2異性体）と臭素化塩素化ダイオキシン類14種（PXDDs6異性体、PXDFs8異性体）を評価したところ、WHO-TEFによるリスク管理が推奨されている2,3,7,8-位に臭素が置換している臭素化ダイオキシン類について顕著な用量反応が示され、得られた用量反応曲線の形状が2,3,7,8-TCDDと良く似ていた。また、2,3,7,8-位に臭素や塩素が置換している臭素化塩素化ダイオキシン類も基本的に同様の傾向を示した。臭素化ダイオキシン類と臭素化塩素化ダイオキシン類のEC及びREPに基づくと、臭素化ダイオキシン類のPBDD/Fsについては、2,3,7,8-位に臭素が置換している異性体の反応性が強くなる傾向であり、4臭素化体から8臭素化体へと臭素の数が増えるに応じて反応性が弱くなった。臭素化塩素化ダイオキシン類についても、2,3,7,8-位に臭素や塩素が置換している異性体の反応性が強くなる傾向であり、2,3,7,8-位のいずれかに臭素や塩素が置換していない異性体の反応性が低かった。臭素化ダイオキシン類及び臭素化塩素化ダイオキシン類のREPについては、PBB-77を除くと、対応するWHO-TEFとの差が1オーダー以内であり、WHO-TEFを良く反映していると考えられた。また、臭素化ダイオキシン類と塩素化ダイオキシン類の混合物を用いて、塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類の混合物への相加性評価の適用性を確認した。本研究の実施によって、DR-CALUXアッセイ法及びXDS-CALUXアッセイ法の臭素化ダイオキシン類検出ツールとしての妥当性が確認された。
図1 化学物質標準品で得られる用量反応曲線の$\mathrm{EC}_{5\mathrm{TCDD}}$、$\mathrm{EC}_{20}$及び$\mathrm{EC}_{50}$
図2 DR-CALUX アッセイ法における 2,3,7,8-TCDD、臭素化ダイオキシン類及び臭素化塩素化ダイオキシン類の用量反応曲線
図3 XDS-CALUX アッセイ法における2,3,7,8-TCDD、臭素化ダイオキシン類及び臭素化塩素化ダイオキシン類の用量反応曲線
表 2 DR-CALUX アッセイ法における臭素化ダイオキシン類及び臭素化塩素化ダイオキシン類の用量反応曲線の各種効果濃度と 2,3,7,8-TCDD に対する比活性

Compounds	MW	M	DR-CALUX assay	Mass-basis
EC5TDD	EC20	EC50	REP-EC5TDD	REP-EC20	REP-EC50	REP-EC5TDD	REP-EC20	REP-EC50
Chlorinated dioxins
PCDD
2,3,7,8-TCDD	321.97	9.5E-13	3.0E-12	1.0E-11	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
Brominated dioxins
PBDDs
2,3,7,8-TBDD	499.78	2.1E-12	6.2E-12	2.0E-11	0.45	0.48	0.50	0.29	0.31	0.32
1,2,3,7,8-PeBDD	578.68	5.9E-12	2.2E-11	9.4E-11	0.16	0.14	0.11	0.090	0.076	0.059
1,2,3,6,7,8-HxBDD	657.58	2.0E-10	5.9E-10	1.8E-09	0.0048	0.0051	0.0056	0.0023	0.0025	0.0027
1,2,3,7,8,9-HxBDD	657.58	5.0E-11	2.2E-10	1.0E-09	0.019	0.014	0.010	0.0093	0.0067	0.0049
1,2,3,4,7,8-HxBDD	657.58	1.5E-11	1.0E-10	7.3E-10	0.063	0.030	0.014	0.031	0.015	0.0067
1,2,3,4,6,7,8-HpBDD	736.48	1.0E-10	4.3E-10	2.0E-09	0.010	0.0070	0.0050	0.0042	0.0031	0.0022
OBDD	815.38	3.5E-09	8.4E-09	2.4E-08	0.00027	0.00036	0.00042	0.00011	0.00014	0.00016
PBDFs
2-MBDF	247.08	>3.0E-07	>3.0E-07	>3.0E-07	—	—	—	—	—	—
2,8-DiBDF	325.98	>3.0E-07	>3.0E-07	>3.0E-07	—	—	—	—	—	—
2,4,8-TriBDF	404.88	>3.0E-08	>3.0E-08	>3.0E-08	—	—	—	—	—	—
2,3,7,8-TBDF	483.78	1.1E-12	4.5E-12	2.2E-11	0.86	0.67	0.45	0.57	0.44	0.30
2,3,4,7,8-PeBDF	562.68	2.2E-12	1.2E-11	7.4E-11	0.43	0.25	0.14	0.25	0.14	0.077
1,2,3,7,8-PeBDF	562.68	5.2E-12	1.9E-11	7.6E-11	0.18	0.16	0.13	0.10	0.090	0.075
1,2,3,4,7,8-HxBDF	641.57	4.5E-11	1.6E-10	6.1E-10	0.021	0.019	0.016	0.011	0.0094	0.0082
1,2,3,4,6,7,8-HpBDF	720.47	2.6E-10	1.2E-09	5.7E-09	0.0037	0.0025	0.0018	0.0016	0.0011	0.00078
OBDF	799.36	3.4E-09	1.0E-08	3.4E-08	0.00028	0.00030	0.00029	0.00011	0.00012	0.00012
Co-PBBs
3,3',4,4'-TBB (PBB-77)	469.80	3.6E-11	2.3E-10	1.4E-09	0.026	0.013	0.0071	0.018	0.0089	0.0049
3,3',4,4',5-PeBB (PBB-126)	548.69	6.0E-12	2.5E-11	1.0E-10	0.16	0.12	0.10	0.093	0.070	0.059
Mixed halogenated dioxins (X=Br, Cl)
PXDDs
7-B-2,3-DiCDD	331.98	1.1E-10	3.4E-10	1.2E-09	0.0086	0.0088	0.0083	0.0084	0.0086	0.0081
2,3-B-7,8-DiCDD	410.88	1.1E-12	5.3E-12	1.6E-11	0.86	0.57	0.63	0.68	0.44	0.49
2-B-3,7,8-TriCDD	366.43	1.9E-12	6.2E-12	1.9E-11	0.50	0.48	0.53	0.44	0.43	0.46
2-B-1,3,7,8-TCDD	400.87	1.7E-12	6.2E-12	2.2E-11	0.56	0.48	0.45	0.45	0.39	0.37
1-B-2,3,7,8-TCDD	400.87	2.7E-12	9.4E-12	3.2E-11	0.35	0.32	0.31	0.28	0.26	0.25
2-B-3,6,7,8,9-PeCDD	435.32	5.8E-12	2.0E-11	6.4E-11	0.16	0.15	0.16	0.12	0.11	0.12
PXDFs
8-B-2,3-DiCDF	315.99	>1.5E-08	>1.5E-08	>1.5E-08	—	—	—	—	—	—
2,3-B-7,8-DiCDF	394.89	4.9E-13	2.7E-12	1.9E-11	1.9	1.1	0.53	1.58	0.91	0.43
1,2-B-7,8-DiCDF	394.89	1.2E-10	4.4E-10	1.6E-09	0.0079	0.0068	0.0063	0.0065	0.0056	0.0051
3-B-2,7,8-TriCDF	350.43	9.4E-13	4.4E-12	2.7E-11	1.0	0.68	0.37	0.93	0.63	0.34
8-B-2,3,4-TriCDF	350.43	3.4E-09	5.5E-09	2.0E-08	0.00028	0.00055	0.00050	0.00026	0.00050	0.00046
1,3-B-2,7,8-TriCDF	429.33	4.1E-12	1.4E-11	9.3E-11	0.23	0.21	0.11	0.17	0.16	0.081
1-B-2,3,7,8-TCDF	384.88	3.5E-12	1.4E-11	4.7E-11	0.27	0.21	0.21	0.23	0.18	0.18
4-B-2,3,7,8-TCDF	384.88	8.3E-13	6.9E-12	2.5E-11	1.1	0.43	0.40	0.96	0.36	0.33

REP: Relative potency
表 3 XDS-CALUX アッセイ法における臭素化ダイオキシン類及び臭素化塩素化ダイオキシン類の用量反応曲線の各種効果濃度と 2,3,7,8-TCDD に対する比活性

Compounds	MW	M	XDS-CALUX assay	RE	Mass-basis
EC5TCDD	EC20	EC50	REP-EC5TCDD	REP-EC20	REP-EC50	REP-EC5TCDD	REP-EC20	REP-EC50
Chlorinated dioxins
PCDD
2,3,7,8-TCDD	321.97	4.1E-12	1.4E-11	4.6E-11	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
Brominated dioxins
PBDDs
2,3,7,8-TBDD	499.78	4.4E-12	1.5E-11	5.1E-11	0.93	0.93	0.90	0.60	0.60	0.58
1,2,3,7,8-PeBDD	578.68	8.1E-12	2.9E-11	1.0E-10	0.51	0.48	0.46	0.28	0.27	0.26
1,2,3,6,7,8-HxBDD	657.58	3.0E-10	1.8E-09	1.2E-08	0.014	0.0078	0.0038	0.0067	0.0038	0.0019
1,2,3,7,8,9-HxBDD	657.58	3.5E-11	1.6E-10	6.9E-10	0.12	0.088	0.067	0.057	0.043	0.033
1,2,3,4,7,8-HxBDD	657.58	5.7E-11	4.0E-10	2.4E-09	0.072	0.035	0.019	0.035	0.017	0.0094
1,2,3,4,6,7,8-HpBDD	736.48	5.7E-11	4.0E-10	2.4E-09	0.072	0.035	0.019	0.031	0.015	0.0084
OBDD	815.38	6.6E-08	NC	NC	0.000062	—	—	0.000025	—	—
PBDFs
2-MBDF	247.08	>3.0E-07	>3.0E-07	>3.0E-07	—	—	—	—	—	—
2,8-DiBDF	325.98	>3.0E-07	>3.0E-07	>3.0E-07	—	—	—	—	—	—
2,4,8-TriBDF	404.88	7.8E-09	1.3E-08	3.6E-08	0.00053	0.0011	0.0013	0.00042	0.00086	0.0010
2,3,7,8-TBDF	483.78	4.0E-12	1.9E-11	1.0E-10	1.0	0.74	0.46	0.68	0.49	0.31
2,3,4,7,8-PeBDF	562.68	6.2E-12	2.8E-11	1.4E-10	0.66	0.50	0.33	0.38	0.29	0.19
1,2,3,7,8-PeBDF	562.68	1.2E-11	6.3E-11	2.9E-10	0.34	0.22	0.16	0.20	0.13	0.091
1,2,3,4,7,8-HxBDF	641.57	3.8E-11	2.0E-10	7.7E-10	0.11	0.070	0.060	0.054	0.035	0.030
1,2,3,4,6,7,8-HpBDF	720.47	2.4E-10	1.5E-09	7.9E-09	0.017	0.0093	0.0058	0.0076	0.0042	0.0026
OBDF	799.36	2.2E-09	6.5E-09	1.9E-08	0.0019	0.0022	0.0024	0.00075	0.00087	0.0010
Co-PBBs
3,3',4,4'-TBB (PBB-77)	469.80	5.2E-11	3.7E-10	2.3E-09	0.079	0.038	0.020	0.054	0.026	0.014
3,3',4,4',5-PeBB (PBB-126)	548.69	1.3E-11	5.4E-11	2.0E-10	0.32	0.26	0.23	0.19	0.15	0.13
Mixed halogenated dioxins (X=Br, Cl)
PXDDs
7-B-2,3-DiCDD	331.98	3.2E-10	1.4E-09	5.3E-09	0.013	0.010	0.0087	0.012	0.0097	0.0084
2,3-B-7,8-DiCDD	410.88	3.5E-12	1.2E-11	3.4E-11	1.2	1.2	1.4	0.92	0.91	1.1
2-B-3,7,8-TriCDD	366.43	4.5E-12	1.7E-11	6.0E-11	0.91	0.82	0.77	0.80	0.72	0.67
2-B-1,3,7,8-TCDD	400.87	3.1E-12	1.1E-11	3.4E-11	1.3	1.3	1.4	1.1	1.0	1.1
1-B-2,3,7,8-TCDD	400.87	3.6E-12	2.0E-11	1.0E-10	1.1	0.70	0.46	0.91	0.56	0.37
2-B-3,6,7,8,9-PeCDD	435.32	1.2E-11	6.5E-11	2.9E-10	0.34	0.22	0.16	0.25	0.16	0.12
PXDFs
8-B-2,3-DiCDF	315.99	2.1E-09	2.8E-09	6.5E-09	0.0020	0.0050	0.0071	0.0020	0.0051	0.0072
2,3-B-7,8-DiCDF	394.89	4.0E-12	1.4E-11	4.3E-11	1.0	1.0	1.1	0.84	0.82	0.87
1,2-B-7,8-DiCDF	394.89	1.3E-10	6.7E-10	3.2E-09	0.032	0.021	0.014	0.026	0.017	0.012
3-B-2,7,8-TriCDF	350.43	1.3E-11	4.6E-11	1.6E-10	0.32	0.30	0.29	0.29	0.28	0.26
8-B-2,3,4-TriCDF	350.43	5.8E-09	1.3E-08	2.5E-08	0.00071	0.0011	0.0018	0.00065	0.00099	0.0017
1,3-B-2,7,8-TriCDF	429.33	1.1E-11	4.3E-11	1.5E-10	0.37	0.33	0.31	0.28	0.24	0.23
1-B-2,3,7,8-TCDF	384.88	9.1E-12	4.4E-11	1.7E-10	0.45	0.32	0.27	0.38	0.27	0.23
4-B-2,3,7,8-TCDF	384.88	3.9E-12	1.4E-11	4.3E-11	1.1	1.0	1.1	0.88	0.84	0.89

REP: Relative potency, NC: Not calculated because of no full dose-response curve
表 4 既報研究における DR-CALUX アッセイ法及び XDS-CALUX アッセイ法における臭素化ダイオキシン類及び臭素化塩素化ダイオキシン類の比活性

Compounds	DR-CALUX assay	XDS-CALUX assay
Mole-basis	Mole-basis
Behnisch et al. 2003 $ ^{16)} $	Olsman et al. 2007 $ ^{17)} $	Samara et al. 2009 $ ^{18)} $	Brown et al. 2004 $ ^{19)} $
REP-EC $ _{20} $	REP-EC $ _{25} $	REP-EC $ _{20} $	REP-EC $ _{20} $
Brominated dioxins
PBDDs
2,3,7,8-TBDD	0.87	0.42	0.78	0.49
1,2,3,7,8-PeBDD	0.25	0.30	1.4
1,2,3,6,7,8-HxBDD	0.017
PBDFs
2,3,7,8-TBDF	0.86	0.45	0.11
2,3,4,7,8-PeBDF	0.19	0.62
1,2,3,7,8-PeBDF	0.14	0.10	0.14
1,2,3,4,7,8-HxBDF	0.022	0.070
Co-PBBs
3,3',4,4'-TBB (PBB-77)	0.13	0.0010
3,3',4,4',5-PeBB (PBB-126)	0.21
Mixed halogenated dioxins (X=Br,Cl)
PXDDs
7-B-2,3-DiCDD
2,3-B-7,8-DiCDD	1.2	1.0	0.43
2-B-3,7,8-TriCDD	0.44	1.9	0.72
2-B-1,3,7,8-TCDD	0.47	1.5
1-B-2,3,7,8-TCDD	0.35
2-B-3,6,7,8,9-PeCDD	0.28
PXDFs
3-B-2,7,8-TriCDF	1.1

## REP: Relative potency
図4 臭素化ダイオキシン類及び臭素化塩素化ダイオキシン類の$\mathrm{REP-EC}_{5\mathrm{TCDD}}$と対応するWHO-TEF.

WHO-TEF は、ハロゲン置換位置と数が同じものを “対応する WHO-TEF” とした。

臭素化ダイオキシン類については、WHO/UNEP 専門家会合によって、対応する WHO-TEF によるリスク管理が推奨されている。
表 5 各種試料媒体中の臭素化ダイオキシン類の theoretical CALUX-TEQ に対する各異性体の平均構成割合

The average of % theoretical CALUX-TEQ
Compounds	Environmental air n=93	Environmental water n=88	Sediment n=94	Ground water n=14	Soil n=50	Dust fall n=59	Sewage sludge n=3	Incinerator ash n=3	Flue gas n=72	Effluent n=175	Indoor air n=33	Indoor dust n=36
Brominated dioxins
PBDDs
2,3,7,8-TBDD	0.44	<0.1	3.6	<0.1	2.0	0.47	<0.1	<0.1	0.73	<0.1	2.5	<0.1
1,2,3,7,8-PeBDD	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	1.2	<0.1	0.84	<0.1
1,2,3,6,7,8-HxBDD	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1
1,2,3,7,8,9-HxBDD	<0.1	<0.1	0.24	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	0.14	<0.1	<0.1	<0.1
1,2,3,4,7,8-HxBDD	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	0.51	<0.1	0.26	<0.1
1,2,3,4,6,7,8-HpBDD	<0.1	<0.1	0.24	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1
OBDD	<0.1	0.10	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	0.56	<0.1	<0.1
PBDFs
2,3,7,8-TBDF	41	34	40	100	51	42	6.4	46	30	46	21	64
1,2,3,7,8-PeBDF	6.2	4.0	7.5	<0.1	0.10	6.0	2.7	8.1	11	5.7	5.8	4.3
2,3,4,7,8-PeBDF	28	21	14	<0.1	23	27	10	44	20	18	23	11
1,2,3,4,7,8-HxBDF	5.7	12	16	<0.1	6.3	5.8	3.2	<0.1	7.9	2.7	6.3	3.7
1,2,3,4,6,7,8-HpBDF	16	21	17	<0.1	16	18	54	1.4	24	21	31	13
OBDF	2.3	7.2	1.5	<0.1	1.9	0.91	23	<0.1	3.6	5.5	8.9	4.4

$ ^{a} $ Theoretical CALUX-TEQs were calculated using the concentrations of PBDD/Fs and their DR-CALUX REP-EC $ _{5TCDD} $ for various samples.

$ ^{b} $ Data were cited from Ministry of the Environment $ ^{5,20-33)} $ and Suzuki et al $ ^{9,12)} $ .
表 6 各種試料媒体中の塩素化ダイオキシン類の theoretical CALUX-TEQ に対する各異性体の平均構成割合

The average of % theoretical CALUX-TEQa
Sampleb	Environmental air n=93	Environmental water n=88	Sediment n=94	Ground water n=14	Soil n=50	Dust fall n=59	Sewage sludge n=3	Incinerator ash n=3	Flue gas n=72	Effluent n=175	Indoor air n=33	Indoor dust n=36
Chlorinated dioxins
PCDDs
2,3,7,8-TCDD	1.3	0.56	0.13	4.1	0.69	1.3	2.4	2.1	2.4	0.67	1.4	0.52
1,2,3,7,8-PeCDD	4.8	2.8	0.26	<0.1	2.8	5.0	7.8	15	16	1.9	3.9	2.9
1,2,3,4,7,8-HxCDD	2.3	1.9	0.28	3.9	1.5	3.3	5.1	3.0	9.3	2.7	2.2	2.2
1,2,3,6,7,8-HxCDD	2.9	2.9	1.7	1.6	1.9	3.5	4.2	5.4	9.4	5.0	2.0	3.6
1,2,3,7,8,9-HxCDD	1.4	1.4	0.20	2.3	1.3	1.6	2.2	1.3	4.4	1.7	0.87	1.5
1,2,3,4,6,7,8-HpCDD	15	43	72	58	16	19	34	23	28	41	8.8	38
OCDD	0.70	6.3	6.7	2.7	1.5	0.63	7.8	4.4	0.50	3.7	0.28	2.2
PCDFs
2,3,7,8-TCDF	7.5	6.6	0.43	3.4	7.8	8.7	6.1	2.0	4.1	1.8	7.5	4.0
1,2,3,7,8-PeCDF	12	5.5	0.52	5.3	17	10	3.3	4.0	3.5	1.7	13	4.3
2,3,4,7,8-PeCDF	14	4.6	0.30	2.7	11	12	8.4	16	6.6	2.4	15	6.6
1,2,3,4,7,8-HxCDF	7.1	2.9	1.2	5.0	8.9	5.6	1.8	2.4	4.2	2.2	7.9	4.0
1,2,3,6,7,8-HxCDF	1.6	0.47	0.10	0.87	2.0	1.3	0.38	0.55	0.37	0.79	1.7	1.0
2,3,4,6,7,8-HxCDF	10	8.2	0.45	1.5	6.9	9.8	6.7	5.8	4.4	27	11	8.2
1,2,3,7,8,9-HxCDF	0.85	0.53	0.14	<0.1	1.5	0.64	0.28	1.5	0.31	0.30	0.68	0.16
1,2,3,4,6,7,8-HpCDF	3.9	3.3	5.4	2.7	3.8	3.3	1.4	0.94	0.59	1.2	4.6	5.3
1,2,3,4,7,8,9-HpCDF	0.76	0.58	0.77	0.10	1.0	0.80	0.23	0.49	0.73	0.42	0.82	0.59
OCDF	0.93	2.5	8.7	0.33	1.0	1.1	1.0	0.51	0.19	0.61	1.3	1.3
Co-PCBs
3,4,4',5-TCB (#81)	0.10	<0.1	<0.1	0.06	0.63	0.10	<0.1	<0.1	0.14	0.13	0.12	0.25
3,3',4,4'-TCB (#77)	0.31	1.0	0.10	0.73	0.11	0.55	0.69	0.21	0.80	1.0	0.62	1.8
3,3',4,4',5-PeCB (#126)	1.9	1.0	0.16	2.4	3.2	2.4	<0.1	<0.1	0.80	1.1	2.6	4.9
3,3',4,4',5,5'-HxCD (#169)	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1
2',3,4,4',5-PeCB (#123)	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1
2,3',4,4',5-PeCB (#118)	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1
2,3,3',4,4'-PeCB (#105)	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1
2,3,4,4',5-PeCB (#114)	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1
2,3',4,4',5,5'-HxCD (#167)	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1
2,3,3',4,4',5-HxCD (#156)	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1
2,3,3',4,4',5'-HxCD (#157)	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1
2,3,3',4,4',5,5'-HpCB (#189)	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1	<0.1

$ ^{a} $ Theoretical CALUX-TEQs were calculated using the concentrations of PBDD/Fs and their DR-CALUX REP- $ EC_{5TCDD} $ for various samples.

$ ^{b} $ Data were cited from Ministry of the Environment $ ^{5,20-33)} $ and Suzuki et al. $ ^{9,12)} $ .
図 5 臭素化ダイオキシン類と塩素化ダイオキシン類別の、文献調査に基づく各種試料媒体の Theoretical CALUX-TEQ に対する各異性体の平均構成割合（■）と実際に調製した混合物の構成割合（□）
図6 臭素化ダイオキシン類と塩素化ダイオキシン類の混合物による臭素化ダイオキシン類の用量相加性の評価
## 4 ．生物検定法による塩素化／臭素化ダイオキシン類測定評価法の確立に関する研究

## （1） 研究目的

本研究では、生物検定法による塩素化／臭素化ダイオキシン類測定評価法を確立することを目的として、塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類を分別して評価する簡易前処理法の開発と、生物検定法と簡易前処理法からなる塩素化／臭素化ダイオキシン類測定評価法（測定評価法）の妥当性を評価した。簡易前処理法には、精製カラムと分画カラムを用いた。精製カラムは、粗抽出液中の測定妨害成分となる有機成分等を除去してダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類を精製することを目的として開発した。精製カラムによる塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類の化学質標準品を用いた添加回収試験と各種試料媒体の粗抽出液を用いた破過試験を実施して使用条件を確定した。分画カラムは、精製抽出液中の塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類を分別することを目的として開発した。分画カラムについても化学質標準品を用いた添加回収試験を実施して使用条件を確定した。測定評価法の適用性評価については、はじめに、小型焼却炉の排出ガス、ばいじん及び燃え殻、排水、土壌、底質、建屋内空気及びハウスダストについて塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類のGC-HRMS法による化学分析を行い、WHO-TEQを把握して既知濃度試料を得た。次いで、既知濃度試料を測定評価法に適用して、CALUX-TEQ（CALUXアッセイにおける2,3,7,8-TCDD等量）とWHO-TEQの比較考察を行い、塩素化／臭素化ダイオキシン類スクリーニング法としての測定評価法の適用性を評価した。

## （2） 研究方法

## 1 ）簡易前処理法の開発

### a. 精製カラム

### i. 塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類の化学物質標準品を用いた添加回収試験

精製カラムとしてプレセップタイプ型（図7）の55%硫酸シリカゲルカラム（10.6 mm i.d.×150 mm）を開発した（図8）。55%硫酸シリカゲルカラムは、ガラス製カラム管の底部に円筒状の脱脂綿を詰め、シリカゲル0.5 g、55%硫酸シリカゲル3.0 g、シリカゲル0.5 gを順次充填して、最後に円筒状の脱脂綿を上部に詰めたものである。当該カラムについて、塩素化ダイオキシン類（PCDDs7異性体、PCDFs10異性体及びCo-PCBs12異性体：100 pg～200 pg）と臭素化ダイオキシン類（PBDDs5異性体及びPBDFs6異性体：50 ng）の化学物質標準品による添加回収試験を実施した。はじめに、ヘキサン20 mlを流下して、当該カラムを洗浄した。ヘキサンに溶解した化学物質標準品の混合液1 mlをカラムに添加した。ヘキサン19 mlを分取して、混合液の容器を少量のヘキサンで洗浄し、洗液をカラム内壁を洗いながらカラムに流下して、液面をカラム上端まで下げた。この洗浄操作を3回繰り返した。残りのヘキサンを流下して、溶出液を回収した。窒素パージを用いて溶出液を濃縮して、塩素化ダイオキシン類は50 μlに定容してGC-HRMS法に、臭素化ダイオキシン類は1 mlに定容してGC-ECD（電子捕獲型検出器）法に、それぞれ供した。

### ii. 各種試料媒体の粗抽出液を用いた破過試験

小型焼却炉の排出ガス、ばいじん、燃え殻、排水・環境水、土壌、底質、建屋内空気及びハウスダストの粗抽出液を用いて破過試験を実施した。破過試験は、試料濃度を変えた粗抽出液1 mlを55%硫酸シリカゲルカラムに添加してヘキサン19 mlを流下することで実施した。粗抽出液中の有機成分は、当該カラムの硫酸によって分解されシリカゲルに吸着する。破過試験では、有機成分分解物のシリカゲルの着色状況によって破過を確認して、当該カラムで精製可能な試料量を把握した。各種試料媒体の抽出液は、塩素化ダイオキシン類の公定法やそれと同等の方法で調製した。抽出の詳細は、2）ii.抽出に記述した。

### b. 分画カラム

### i. 塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類の化学物質標準品を用いた添加回収試験

分画カラムとしてプレセップタイプ型の10％硝酸銀シリカゲルカラム（10 mm i.d.×150 mm）を開発した（図8）。10％硝酸銀シリカゲルカラムは、ガラス製カラム管の底部に円筒状の脱脂綿を詰め、10％硝酸銀シリカゲル0.75 gを充填して、円筒状の脱脂綿を上部に詰めたものである。当該カラムについて、塩素化ダイオキシン類（PCDDs7異性体、PCDFs10異性体及びCo-PCBs12異性体：100 pg～200 pg）と臭素化ダイオキシン類（PBDDs6異性体及びPBDFs6異性体：50 ng）の化学物質標準品による添加回収試験を実施した。はじめに、4％アセトン／ヘキサン10 mlを流下して、当該カラムを洗浄した。カラム内の有機溶媒をN₂パージで除去後、105℃で2時間乾燥した。ヘキサンに溶解した化学物質標準品の混合液1 mlをカラムに添加した。ヘキサン7 mlを分取して、混合液の容器を少量のヘキサンで洗浄し、洗液をカラム内壁を洗いながらカラムに流下して、液面をカラム上端まで下げた。この洗浄操作を3回繰り返した。残りのヘ
キサンを流下して、溶出液を塩素化ダイオキシン類画分として回収した。次いで、ヘキサン2mlを流下して、溶出液を回収した。最後に、4%アセトン／ヘキサン10mlを流下して、溶出液を臭素化ダイオキシン類画分として回収した。窒素パージを用いて溶出液を濃縮して、塩素化ダイオキシン類は50μlに定容してGC-HRMS法に、臭素化ダイオキシン類は1mlに定容してGC-ECD法に、それぞれ供した。

### ii. 臭素化ダイオキシン類の化学物質標準品を用いた脱臭素化評価試験

分画カラムの検討では、臭素化ダイオキシン類の脱臭素化現象の有無を確認するため、2,3,7,8-TeBDD、1,2,3,7,8-PeBDD、1,2,3,4,7,8-HxBDD、1,2,3,4,6,7,8-HpBDD、OBDD、2,3,7,8-TeBDF、2,3,4,7,8-PeBDF、1,2,3,4,7,8-HxBDF、1,2,3,4,6,7,8-HpBDF、OBDFの化学質標準品（50 ng/ml）について1異性体ずつn=2で10%硝酸銀シリカゲルカラムによる分画処理を行った。

### c. 機器分析法

塩素化ダイオキシン類は、GC-HRMSを用いて分解能10,000以上の条件で測定した。GC分離カラムには、2,3,4,7,8-PeCDF、1,2,3,7,8,9-HxCDF、2,3,6,7,8-HxCDFを除くTCDD/FsからOCDD/FsについてBPX Dioxin Iキャピラリーカラムを、上記3異性体及びCo-PCBsについてBPX Dioxin IIキャピラリーカラムを用いた。塩素化ダイオキシン類は、選択イオン検出法（SIM法）で検出、保持時間及びイオン強度比に基づいて同定、同位体希釈法で定量した。臭素化ダイオキシン類は、GC-ECDを用いて測定した。GC分離カラムには、DB-1HTキャピラリーカラムを用いた。臭素化ダイオキシン類は、絶対検量線法で定量した。

## 2 ）既知濃度試料による測定評価法の適用性評価

### a. 試料の採取と抽出

本研究では、小型焼却炉の排出ガス、焼却炉のばいじん及び燃え殻、排水、土壌、底質、建屋内空気及びハウスダストを各3試料の計24試料を用いた。土壌と底質は2012年に、それ以外の試料は2014年に採取した。各種試料媒体の採取と抽出方法を次に示す。抽出液は、ヘキサンに転溶後、精製と分画に供した。

### i. 排出ガス、ばいじん及び燃え殻

リサイクル業や製造業の小型焼却炉の排出ガスの試料採取と抽出は、JIS K 0311:2005/AMENDMENT 1:2008「排ガス中のダイオキシン類の測定方法（追補1）」に準じて実施した。産業廃棄物焼却炉、一般廃棄物焼却炉や樹脂製造業等のばいじん及び燃え殻の試料採取と抽出は、平成4年厚生省告示第192号別表第一（第一号関係）（1）に準じて実施した。

### ii. 排水·環境水

一般廃棄物焼却炉のスクラバー廃液と、一般廃棄物埋立処分場の廃水原水と周辺地下水の試料採取と抽出は、JIS K 0312:2005/AMENDMENT 1:2008「排ガス中のダイオキシン類の測定方法（追補1）」に準じて実施した。一般廃棄物埋立処分場の周辺地下水の抽出は、ダイオフロックを用いたトルエンーソックスレーで実施した。

### iii. 土壤及び底質

土壌及び底質は、ベトナム北部の廃電子機器リサイクル村の処理施設周辺から採取した。風乾した2 mmふるい下試料について、高速加熱流下抽出装置（SE-100）を用いて、50％ヘキサン／アセトン（35℃、1 時間、6 ml/min）、トルエン（80℃、1 時間、6 ml/min）で抽出した $ ^{7)} $ 。

### iv. 建屋内空気

一般廃棄物焼却炉の建屋内空気の採取と抽出は、「廃棄物焼却施設内作業におけるダイオキシン類ばく露防止対策要綱」（平成13年4月25日基発第401号の2）に準じて実施した。

### v. ハウスダスト

ハウスダストは、一般家庭で使用されている掃除機のクリーナーバッグから採取した。250μmふるい下試料について、土壌及び底質と同様の方法で抽出した。

### b. 精製と分画

### i. 機器分析法
分取したヘキサン抽出液に内部標準物質として $ ^{13}C $ ラベル化体を添加して、基本的には、多層シリカゲルカラム処理と活性炭分散シリカゲルカラム処理を行った。汚い試料については、濃硫酸処理とDMSOカラム処理を行った後に多層シリカゲルカラム処理と活性炭分散シリカゲルカラム処理を行った。得られた抽出液をGC-HRMS法に供して、塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類を測定した。

### ii. 生物検定法

分取したヘキサン粗抽出液について、先述した手順で55%硫酸シリカゲルカラム処理と10%硝酸銀シリカゲルカラム処理を実施した。55%硫酸シリカゲルカラム処理した抽出液を精製画分として、さらに10%硝酸銀シリカゲルカラム処理して分別した抽出液を塩素化ダイオキシン類画分と臭素化ダイオキシン類画分として、それぞれ生物検定法に供した。精製画分、塩素化ダイオキシン類画分及び臭素化ダイオキシン類画分を調製する際には、先述の相加性評価の際に調製した塩素化ダイオキシン類混合液と臭素化ダイオキシン類混合液を回収率確認用の標準物質として用いた。即ち、試料粗抽出液だけでなく、塩素化ダイオキシン類混合液と臭素化ダイオキシン類混合液についても、精製画分、塩素化ダイオキシン類画分及び臭素化ダイオキシン類画分を調製して生物検定法に供した。

### c. 機器分析法

塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類は、GC-HRMSを用いて分解能10,000以上の条件で測定した。GC分離カラムには、2,3,4,7,8-PeCDF、1,2,3,7,8,9-HxCDF、2,3,6,7,8-HxCDFを除くTCDD/FsからOCDD/FsについてBPX Dioxin I キャピラリーカラムを、上記3異性体及びCo-PCBsについてBPX Dioxin II キャピラリーカラムを、TBDD/FsからHxBDD/FsについてENV-5MS キャピラリーカラムを、HpBDD/FsからOBDD/FについてDB-1HT キャピラリーカラムを用いた。塩素化ダイオキシン類と臭素化ダイオキシン類は、選択イオン検出法（SIM法）で検出、保持時間及びイオン強度比に基づいて同定、同位体希釈法で定量した。本研究では、異性体濃度にWHO-TEFを乗じてWHO-TEQを算出した。

### d. 生物檢定法

### e. 測定データの品質管理／品質保証（QA／QC）

### i. 機器分析

塩素化ダイオキシン類の内部標準物質（13Cラベル化2,3,7,8-TCDD、1,2,3,7,8-PeCDD、1,2,3,4,6,7,8-HpCDD、1,2,3,4,7,8-HxCDD、1,2,3,6,7,8-HxCDD、1,2,3,7,8,9-HxCDD、OCDD、2,3,7,8-TCDF、1,2,3,7,8-PeCDF、2,3,4,7,8-PeCDF、1,2,3,4,7,8-HxCDF、1,2,3,6,7,8-HxCDF、1,2,3,7,8,9-HxCDF、2,3,4,6,7,8-HxCDF、1,2,3,4,6,7,8-HpCDF、1,2,3,4,7,8,9-HpCDF、OCDF、PCB#77、PCB#81、PCB#126、PCB#169、PCB#105、PCB#114、PCB#118、PCB#123、PCB#156、PCB#157、PCB#167及びPCB#180）の回収率は、50%～120%（n=26）の範囲であった。臭素化ダイオキシン類の内部標準物質（13Cラベル化2,3,7,8-TBDD、1,2,3,7,8-PeBDD、1,2,3,4,7,8-HxBDD、OBDD、2,3,7,8-TBDF、2,3,4,7,8-PeBDF、1,2,3,4,7,8-HxBDF、1,2,3,4,6,7,8-HpBDF及びOBDF）の回収率は、51%～146%（n=26）の範囲であり、ばいじんを除くと51%～120%（n=23）の範囲であった。測定対象とした異性体のうち、定量下限以上の異性体については、操作ブランクの定量値を差し引いて、試料の定量値を算出した。

### ii. 生物検定法

DR-CALUX アッセイ法では、2,3,7,8-TCDD 検量線の $ EC_{50} $ が $ 9.8 \pm 2.2 \, \text{pM} \, (n=34) $ であり、2,3,7,8-TCDD 検量線の最高濃度のルシフェラーゼ活性を DMSO 溶媒コントロールのルシフェラーゼ活性で除して得られ