Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
伝搬等について調べた。また分布拡大予測を行うために、10月末に越冬巣を採集することにより、愛知県豊田市周辺の分布状況を調査した。採集した新成虫を-10～15℃で10月～4月まで維持し、死亡率を調べた。このことから分布拡大予測を行った。また本調査の結果をふまえて越冬巣駆除について検討した。

## （３）在来生態系におけるインベントリに基づく侵入リスク評価

輸入材に随伴する糸状菌のリスク評価のために、それぞれの生態学的特性と分散様式を文献ベースで調査した。日本に大量に輸入されているクワガタムシについて、随伴ダニと線虫および菌のリスク評価を行うために、在来種のインベントリ作成を行った。捕獲したクワガタムシは、体表面からダニを分離した後解剖し、随伴線虫の分離、検出を試みた。分離した線虫を実体顕微鏡下で観察し、その食性を確認した後に、リボソームRNA遺伝子の塩基配列決定により種同定を行い、クワガタムシの分離地域、系統（分類）関係と比較した。また在来クワガタムシの体表面（鞘翅表面）、鞘翅下からダニを採集した。これらのダニに寄生する菌も調べた。輸入クワガタに寄生するダニについては地球環境研究総合推進費F-3侵入種生態リスクの評価手法と対策に関する研究（H16～18）で調査・報告済みである¹）。これらの結果から微生物の移入におけるクワガタムシというペット輸入（侵入経路）の評価と、微生物がクワガタムシに与える影響を評価した。

また我が国への侵入が警戒されているヒアリをケーススタディとして、随伴ダニのリスクについて、対象ダニの生態と国内のアリ共生ダニの既存情報を元に評価を行った。ヒアリに関する情報はUSDA Forest ServiceのJohn Moser博士から入手した。

## （４）随伴侵入生物リスク評価手法の開発

微小な随伴侵入生物は目視が困難なため、検疫体制を整備することが困難である。そこで輸入資材から採集された随伴侵入生物の種数、頻度、個々の種のリスク評価から、侵入経路のリスクを評価し、経路に対して対策をとることが必要である（図1）。そのため、微小な随伴侵入生物のリスク評価手法を開発した。

図1. 随伴侵入生物のリスク評価手法
## 4 ．結果・考察

（１）侵入生物のインベントリと生態系リスク

## 1 ）杀状菌

輸入木材を観察したところ、糸状菌による汚染が容易に確認できた。中には明らかに腐朽菌と思われる菌糸体が木材表面に付着している例も見られた。初年度は分離に供試したロシア産輸入製材では合計で8種類の糸状菌、Penicillium expansum、P. biourgeianum、Alternaria alternata、Cladosporium cladosporioides、Ophiostoma floccosum、O. minus、Leptographium wingfieldii、Phlebiopsis giganteaが検出されたが、2年目は、Cladosporium以外は異なる種類が検出された。引き続き3年目も調査したところ外国産ヨーロッパアカマツよりFusariumなどの植物寄生菌の他、青変菌のLeptographium truncatum、木材腐朽菌のSistotrema brinkmanniiが検出されること、ガーデニング用のマツ樹皮からOphiostoma ips、Ophiostoma floccosum、O. quercus、O. piceae、O. nigrocarpum、Sporothrix variecibaが検出された。また、オーストラリア産のヒノキ科樹木のチップ、ラジアータマツの樹皮といったガーデニングに用いる園芸用資材からも非常に様々な糸状菌が検出された。その中でも特に材に変色を引き起こすOphiostoma属菌や植物寄生菌であるBotryosphaeria属菌等、複数の潜在的植物寄生菌が複数種検出された。このことから輸入木材に加え、樹木由来の園芸用資材からも豊富に糸状菌が検出されることが明らかとなった。また、今回の調査は限定的なものであるため、検出される糸状菌は未だ全てが把握されているわけではないことが明らかとなった。

Leptographium truncatumは日本に分布しているとされる種類であるが、近縁種も多く、その実態は十分には把握できていない。しかし、その分散戦略はキクイムシ等節足動物に依存していることが分かっている。一方、樹皮からは材を上回る数のオフィオストマ科菌類（青変菌）が検出された。このグループのほとんどは節足動物に分散を依存しているが、特にOphiostoma ipsはキクイムシのみに分散を依存する。日本国内でも見出される種類であるが、樹皮下に穿孔するキクイムシからのみ検出されている種類である。この木材には輸入後のキクイムシによる加害の形跡がないため、この随伴菌が検出されたということは、いずれも木材、樹皮にともなって侵入した可能性が非常に高い。これらの糸状菌は多点接種によりマツ樹皮に壊死を引き起こすことが知られており、森林生態系に与える影響は無視できないが、輸入木材から分散する可能性は低いと考えられ、現時点での生態系への影響は大きくはないと考えられた。本研究では実際に検出できた糸状菌を対象に、その生態、分散方法に基づいてリスクを想定したが、これをより客観的なものにするためには、分布、宿主特異性等さらに詳細な情報が必要である。また現状では侵入後の防除よりも、輸入以前の駆除処理を行い、侵入経路として重要な製材に関しては検疫を検討する必要があると考える。

ニレ類立枯病はアジア起源と考えられており、ヨーロッパで1940年代に大流行した後北米に侵入して大流行しヨーロッパに再導入された、侵入種ワースト100に数えられる病害である。H20年度に本プロジェクトでニレ立ち枯れ菌の発見を報告したが、その後北海道のニレ類を対象に糸状菌の探索を行ったところ、ハルニレ、オヒヨウの樹皮とそこに穿孔しているニレノオオキクイムシ(Scolytus esuriens)体表よりニレ類立枯病菌が検出された。出現頻度はほぼ100%であり、穿孔している全てのキクイムシ孔道から検出された。分離された菌は全て、コロニーの形状、子実
体の形態、遺伝子解析により 0. ulmi、0. novo-ulmiであることが明らかになった。北海道全域10か所の調査では道東を中心に6地点から両種が検出された（図2）。利尻島では 0. ulmiのみが検出された。0. ulmiと 0. novo-ulmiが同所的に存在することは非常に少ないという事実と、0. ulmiは急速に 0. novo-ulmiに置き換わることが知られていることから、北海道で両種が同所的に存在するのは本病原菌の侵入後まだ長時間が経過していないためと想定された。日本国内ではニレノオオキクイムシから 0. ulmiと 0. novo-ulmiが検出されているが、海外では別のキクイムシが主要なベクターであることが知られている。このことから、ベクタースイッチが起こっていることも明らかになった。今後、本病原菌の北海道以外の分布、病原力の評価を行なう計画である。また1950年代に芦別市で、現在のニレ立ち枯れ病菌の国内ベクターであるニレオオキクイムシによる集団枯損が起こっていたことがわかった。このことから侵入後のベクターの重要性についてあらためて検討する必要がある。22年度には初めてニレ立ち枯れ病菌による樹木の枯れが発見された（図3）。日本のハルニレやケヤキ等に病原性は明らかになっていなかったが、感染樹の枯死にはほかの病気の場合と比較して長い時間を要することが示唆された。

これまで本州ではニレ立ち枯れ病菌は報告されていないが、引き続き監視を続ける必要がある。また22年度には北海道で本菌によるニレの立ち枯れ木が発見されたことから、日本においても病原性が証明された。残存する枯死薬が少なかったことや、半分は枯死してから時間が経過している様相であったことから、時間をかけてゆっくり枯死していったと考えられる。今後は防除法を含めた対策が必要である。本病原菌は植物防疫の検疫対象であったことから、農林水産省の研究課題等として継続して防除法を検討する予定である。

図2. 北海道におけるニレ立ち枯れ病発生地
図3. ニレ類立枯病によってかれた樹木

## 2 ）昆虫及びダニ

2006年前後に愛知県豊田市周辺で、中国大陸～台湾に分布するタイワンタケクマバチの侵入が確認された。タケクマバチ随伴ダニについては、ミトコンドリアDNAの解析結果が形態の解析結果と一致しなかったことから核DNA(ITS領域)を調べたところ、タケクマバチ随伴ダニは台湾のダニよりも日本の在来ダニに近縁であることがわかり、形態解析の結果と一致した。また近年の竹輸入状況を調査した結果、1990年代前半に日本への竹輸出国が台湾から中国大陸域に大きくシフトし、タケクマバチの侵入が確認された2000年代は9割以上の輸入竹が中国大陸産であることがわかった（図4）。随伴ダニの種類と近年の輸入動向から、タイワンタケクマバチは台湾からではなく、中国大陸からの侵入であることが明らかとなった。生態調査によってタケクマバチはやや乾燥した竹に好んで営巣することがわかったので、このハチと随伴ダニは植物検疫の対象外である竹加工材（乾燥剤を含む）とともに侵入したと考えた。

図4. 竹材の輸入推移
タケクマバチの現地調査によって、農家で刺傷害があったこと、建造物被害はないものの竹業者の貯木場でタケクマバチの営業による竹材の劣化が起こっていることが明らかとなった。しかし現地では園芸植物も含めた花卉が豊富で、在来種との競合は少ないと考えた。随伴ダニはタケクマバチの巣外でも花粉団子やタケクマバチ幼虫の糞で増殖可能だった。巣内では大量に増殖してタケクマバチ羽化後に便乗した。しかし第二若虫期（便乗ステージ）以降はタケクマバチなしでは発育しなかった。また巣内に特別な病害菌はなかった。これらのことからハウスダスト化や病原菌の伝搬の可能性は低いと考えた。しかし在来クマバチが竹林を飛翔していたこと、在来クマバチは既存の穴を越冬場所として利用することからダニのホストスイッチは可能で、ダニ在来種との競合の可能性が高いと考えた。寄生生物がホストスイッチによって病原性を発現することはミツバチヘギイタダニなどでよく知られていることから³)、ホストスイッチの影響については更に検討する必要がある²)。

H22年10月に豊田市周辺でタイワンタケクマバチの越冬巣調査を行った。その結果、4年間で西及び南にそれぞれ20数km程度分布を拡大していることが示唆された（図5）。調査は主に竹林が分布する河川敷などで行ったが、20mx5m程度の小さな竹林で最も巣の密度が高かった。クマバチの巣の内径は14.5±1.22cmだったことから、分布拡大には竹の主幹の太さが重要であると考えられた。一般にこのような太さの竹は、主幹の密度が高い放置された竹林では余り多くない。一方で、農業資材等として利用される竹材は巣材として好適である。今後はまだ未調査の竹垣などでの営業実態調査が必要である。

図5. 愛知県におけるタイワンタケクマバチの越冬巣の分布

越冬巣では平均6頭／巣が越冬しており、雌雄の割合は等しかった。しばしば巣内に残る育房跡よりも越冬個体数が多かったため、必ずしも自分の巣で越冬していないことが示唆された。

タイワンタケクマバチの低温耐性を調べたところ、-2℃で3ヶ月以上が経過すると7割程度が死亡することがわかった。また-10℃では24時間後に全個体が死亡した。これらの観察結果から、タイワンタケクマバチは本州の平地では関東地方まで分布が可能であることが示唆された（図6）。

竹材は輸入業者から全国へと出荷されているため、人為的な分布拡大の促進が懸念される。少なくとも平地では西日本と関東での分布が可能と考えられるので、これらの地域では警戒が必要である。野外では営業可能な竹が限られているため、巣の集中が予想される。今回の調査地でも、
越冬巣は比較的高密度に分布していたことから、冬季に越冬巣を防除することにより、刺傷害を避けつつ有効な駆除が可能と考えられた。

図6. タイワンタケクマバチの低温耐性：数値は温度（摂氏）を表す。

## 3 ）線虫

スズメバチタマセンチュウとセイヨウオオマルハナバチ（以下セイヨウ）を含むマルハナバチ類から検出された線虫幼虫の形態および遺伝子配列は大きく異なった。また、これらマルハナバチの寄生線虫の遺伝子配列はロシア産マルハナバチタマセンチュウと同じグループに入ることがわかった。しかし、北海道産のセイヨウ寄生線虫の遺伝子配列はロシア産寄生線虫より北海道在来種の寄生線虫の配列と近かった。これらから、セイヨウを含む北海道産のマルハナバチ寄生線虫はマルハナバチタマセンチュウであり、セイヨウの寄生線虫は北海道在来種である可能性が高いと結論した。

北海道恵庭市の針葉樹の落葉下からセイヨウ越冬女王を発見した。同所から在来種のエゾオオマルハナバチの越冬女王も検出した。これらからセイヨウと在来マルハナバチは越冬場所を共有していることが明らかになった。このことからセイヨウがマルハナバチ不姪化線虫の媒介者になる可能性が示唆された。

野外で捕獲されたセイヨウのタマセンチュウ寄生率を調べたところ、6月下旬にはほとんどの個体が寄生されていることがわかった（図7、図8）。この線虫はセイヨウも不姪化させるため、6月下旬にセイヨウを大量に捕獲しても次年度の個体数抑制にはほとんど貢献しないと考えられる。現在、セイヨウの駆除は野外での捕獲殺処分によるが、防除コストを軽減するためには駆除時期の再検討が必要と考えられた。
図7. タマセンチュウが寄生したセイヨウオオマルハナバチの卵巣

図8. タマセンチュウの寄生率の推移

## （２）国内のインベントリに基づく侵入リスク評価

在来種クワガタムシのうち8種（約150個体）を野外採集し、ダニや線虫の生体を分離した。分離された線虫は、一例を除きすべてDiplogastridae科細菌食性線虫の耐久（分散）型幼虫で、体表面（鞘翅下の背面）、もしくは、外部生殖器官（交尾器、産卵管）の隙間に侵入していたことから、クワガタムシ類を媒介者として能動的かつ恒常的に利用しているものと考えた。これらのうち、Koerneria luziaeとPseudodiplogasteroides compositesの2種、及びノコギリクワガタより得られたK. lucaniは、過去、ドイツにおいて、クワガタムシ類より記載された種であり、非常に広い分布域と媒介昆虫範囲を有していると考えられる。これら媒介昆虫特異性が低い広域分布種は、海外から日本列島へ同種個体群が侵入した場合、在来媒介昆虫種を利用して比較的容易に分散し、個体群レベルの遺伝的攪乱を引き起こす可能性が危惧される。
また成虫越冬性のクワガタムシからは比較的高い率でクワガタナカセ（コウチュウダニ科の一群）が採集された。このうちヒラタクワガタ、オオクワガタ、コクワガタの体表面には同種のダニが、スジクワガタには別属のダニが寄生していることがわかった。一方鞘翅の下からは、体表面とは異なる未知種のダニが発見され、これらはクワガタムシの種類によらず同属であった。またオオクワガタナカセ、アカアシクワガタナカセからはラブルベニア菌が発見されたほか、その他の随伴菌が複数確認された（図9）。同様の寄生生物が外来クワガタムシでも普通に感染しているとすれば、国内への導入は既に行われている可能性が高い。在来クワガタムシと在来寄生生物の関係は安定しているようだが、外来種のホストスイッチの影響は未知であり、今後は外来クワガタムシの調査を行う必要がある。

図9. コクワガタナカセに感染したラブルベニア菌

またサブテーマ1ではヒアリの侵入を警戒しているが、熱帯～亜熱帯産のアリからはしばしばアリ寄生ダニが知られており、寄生ダニがアリ幼虫や蛹を捕食することがわかっている。そこでUSDA Forest Serviceの協力を得てルイジアナに導入されたヒアリ（Solenopsis invicta）の便乗ダニのデータを収集したところ、中気門目のうち特にトダニ科とイトダニ科に共生ダニがいることがわかった。しかしこれまでの知見からこれらのダニはスカベンジャーと予想されるので、ルイジアナのヒアリに随伴して捕食性のダニが導入される可能性は低いと考えられた。このようなインベントリおよび生態情報の収集によっても、寄生生物のリスク評価が可能になると考える。