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課題名 C-1006 妊婦の環境由来化学物質への曝露が胎盤栄養素輸送に与える影響の研究

課題代表者名 柴田 英治 （産業医科大学 エコチル調査産業医科大学サブユニットセンター特任准教授）

研究实施期间 平成22～24年度

累計予算額 19,031千円（うち24年度4,838千円）

予算額は、間接経費を含む。

本研究のキーワード（5～10個 ニル、胎盘増殖因子、妊娠高血压症候群、妊娠糖尿病 以下程度）

## 研究体制

(1)環境由来化学物質が胎盤栄養素輸送機能に与える影響の研究(産業医科大学)

(2) 胎盤のアミノ酸・糖輸送活性および低酸素障害に関する研究（産業医科大学）

## 研究概要

### 1. はじめに(研究背景等)

近年、わが国では様々な環境政策がなされ、環境汚染は減少していると考えることが多い。しかしながら、近隣諸国の急速な産業化に伴い、大気・海・輸入食料などを媒介として曝露をもたらす“外からの”環境汚染問題や、重金属やダイオキシン類のように、環境中や生体内で分解速度の遅い化学物質の人体内への蓄積による影響が危惧されている。また、胎児期や学童期の未成熟な器官は、極微量の化学物質曝露によっても影響を受け易い。ところが、胎児や学童期に必要とされる環境基準が明確でなく、胎児や学童の発育・発達に影響する環境要因やその作用について明らかにし、このような時期に見合う

図1: 胎盤バリアと栄養素輸送機構(アミノ酸輸送機構について)

適切な環境基準を作成することが急務となっている。

子宮内胎児発育遅延は周産期死亡率の増加、精神神経発達障害、また将来の生活習慣病発症のリスク因子である。また、正常な胎児発育は胎盤の栄養素輸送機能に強く依存している。従来、子宮内胎児発育遅延は子宮胎盤血流量の減少による母体から胎児への酸素・栄養素の供給量低下が主病態とされてきた。しかしながら、近年、無機物質（重金属）、残留性有機汚染物質（POPs）類、農薬などの環境由来化学物質の妊婦への曝露と出生体重減少（子宮内胎児発育遅延）との関連が報告されている。様々な環境化学物質の胎児毒性については、胎盤を通過し胎児に直接到達した化学物質の影響について論じられている報告が多い。しかしながら、化学物質は胎盤通過性がなくても胎盤の母体面（合胞体栄養膜細胞層）に到達し胎盤機能を修飾することによって、間接的に胎児に悪影響を与え得る（図1照）。また、病的に胎児発育が制限されている子宮内胎児発育遅延児では、将来様々な小児疾患（先天性奇形・周産期死亡率の上昇・胎児機能不全・学習障害・多動・注意欠
陥障害・神経学的異常・生活習慣病)の有病率が高いことが報告されている。さらに、子宮内胎児発育遅延児の胎盤では糖・アミノ酸輸送活性そのものが低下していることも示されている。これらは、胎盤の糖・アミノ酸輸送活性が、子宮胎盤血流障害のみでなく、環境因子(環境化学物質)によって修飾されていることを示唆している。そこで我々は、環境化学物質は、胎盤栄養素輸送障害により胎児発育を制限するという研究仮説をここに提案した。

### 2. 研究開発目的

子宮内胎児発育遅延は、胎盤機能障害（栄養素輸送障害）が主病態と考えられており、環境化学物質が与える胎児・小児疾患の研究においては胎盤機能評価が極めて重要であり、本調査は、我が国の「エコチル調査」においても重要な役割を果たすと考えられる。古くより子宮内胎児発育遅延の主病態は母体から胎児への血液供給量低下であることが指摘されているが、そのような病態に加えて、環境化学物質（環境因子）が、母児生体内でどのようなレベルで存在しどのように胎児発育（胎盤栄養素輸送）を制限しているのか調べることを本研究の目的とした（図2照）。また、環境化学物質により胎児発育制限を受けた胎児が、将来様々小児疾患（先天性奇形・周産期死亡率の上昇・胎児機能不全・学習障害・多動・注意欠陥障害・神経学的異常・生活習慣病など）を発症し易いのか否か調査することを最終目的とした。

図2: 研究の目的・概要

### 3. 研究開発の方法

## (1) 環境由来化学物質が胎盤栄養素輸送機能に与える影響の研究

1）環境化学物質が、実際に母児生体内でどのようなレベルで存在するか明らかにするため、妊娠末期の分娩時（9症例）に採取された母体静脈血・尿、臍帯静脈血中の金属（鉛、水銀、ヒ素、カドミウム）および農薬（DDT、ペンタクロルフェノール、ピレスロイド剤：フェンパレレート、シペルメトリン、ペルメトリン）濃度について原子吸光法で分析したが、多くが測定感度以下であったため金属元素分析法をICP-Ms法に変更した。また、分析項目は血液26元素、尿14元素について分析した。その結果と、妊娠・胎児・新生児の臨床情報、胎盤栄養素輸送機能との関連を分析した。

2）北九州地区のエコチル調査パイロット調査で得られた55症例の妊娠・分娩データ、職業歴、胎盤機能、胎盤の低酸素指標として胎盤由来蛋白である胎盤増殖因子（PIGF:Placental Growth Factor）、可溶性血管内皮増殖因子受容体タイプ1（sFlt-1:Soluble-VEGF-Receptor-1）の発現をウェスタンブロット法、ELISA法で測定した。これらの測定データと国立環境研究所で測定された妊娠中の母体血および分娩時に採取された母体血・臍帯血中の環境化学物質（PCBなどのダイオキシン類、DDT、残留有機汚染物質、農薬）濃度との相関関係について分析した。

3）過去の文献報告や我々のこれまでのin vitroにおける分析の結果、様々な環境化学物質の中で胎盤栄養素輸送機能に影響を与える化学物質を抽出した。アルデヒド類ではGlutaraldehyde（グルタルアルデヒド）、pFormaldehyde（パラホルムアルデヒド）、Acetaldehyde（アセトアルデヒド）について、金属元素では、Arsenic（ヒ素）、Cadmium（カドミウム）、Methyl Mercury（メチル水銀）、プラスチック樹脂ではToluene Diisocyanate（トリレンジイソシアネート）、Phthalic Anhydride（無水フタル酸）、Methyl Acrylate（メチルアクリレート）、Acrylamide（アクリルアミド）について、それぞれの物質がSystemAアミノ酸輸送活性に与える影響を詳細に分析した。また、その影響がどのようなメカニズムで起こっているのか分析した（培養液中の乳酸脱水素酵素濃度を測定した。また培養絨毛に化学物質を添加し胎盤栄養素輸送蛋白の分子構造の変化についてウェスタンブロット法で調べた）。

## (2) 胎盤のアミノ酸・糖輸送活性および低酸素障害に関する研究
1）胎盤採取·保存·基本データ取得·胎盤形態学的分析

エコチル調査「パイロット調査」の55症例の胎盤の試料採取及び画像解析による形態学的検討を行った。

- 試料採取·保存方法-

(i) 妊娠・分娩・胎盘の基礎データ取得【母体年齢、分娩週数、分娩方法、出生児体重、妊娠週数で補正された出生体重パーセンタイル値、胎盘重量、胎盘体積（面積、厚み）、臍帯付着部位など】

（ii）分娩後、直ちに採取し液体窒素で凍結した胎盤組織2つ（3×3×3cm）を-70℃で保存。

（iii）ホルマリン固定した胎盤片 {胎盤組織2つ(3×3×3cm)} 及びそのパラフィン包埋（薄切切片作成）。

・胎盤の画像解析による形態学的検討項目。

イ) 胎盤栄養膜細胞の定量化

口) 胎盤血栓・梗塞範囲の定量化

ハ)絨毛間腔(胎盤内の母体血流スペース)の定量化

二)末梢絨毛の発達度の評価

木)絨毛膜羊膜炎の有無

へ)螺旋動脈再構築障害の評価

2）胎盤におけるラパマイシンの哺乳類標的(mammalian target of rapamycin: mTOR)シグナリングおよびアミノ酸輸送蛋白発現の検討

近年、化学物質や低酸素などの環境ストレスに反応して細胞内におけるタンパク合成をコントロールするmTORシグナリングが重要視されている。胎盤におけるmTORシグナリングについては、胎児発育にも深く関与していることが近年報告されている。55症例の胎盤のL型アミノ酸輸送蛋白（4F2hc、LAT1）、B°型アミノ酸輸送蛋白（ASCT2）、mTORシグナリング（mTOR、S6K、リン酸化-S6K:mTORシグナル活性化）の発現の程度をウェスタンブロット法で分析した。

3）胎盤におけるPIGF(Placental Growth Factor)、sFlt-1(Soluble-VEGF-Receptor-1)の発現の検討

環境化学物質の胎盤栄養素輸送機能への影響が胎盤低酸素障害に関連しているか否か知るために、胎盤低酸素の指標として胎盤（n=55）中のPIGF、sFlt-1をELISA法（R&D社）で測定定量した。

4）正常・妊娠高血压症候群（PIH）・子宮内胎児発育遅延（IUGR）・妊娠糖尿病／糖尿病合併妊娠（GDM/DM）の胎盤におけるMammalian target of rapamycin（mTOR）シグナリングおよびアミノ酸輸送蛋白発現の検討

近年、胎盤におけるmTORシグナリングが胎児発育に深く関与していることが報告されている。我々は、胎盤機能障害に基づき胎児発育が制限されているIUGR（10例）やPE（10例）、また逆に胎児発育が異常に亢進した妊娠糖尿病（10例）の胎盤におけるmTORシグナリングについて分析し、正常妊娠（10例）と比較検討した。アミノ酸輸送蛋白の胎盤における発現についてはIUGRとの関連が深いL型アミノ酸輸送蛋白（4F2hc、LAT1）およびB°型アミノ酸輸送蛋白（ASCT2）について免疫組織学的に分析した。

## 5 ）エコチル調査本調査における総合的胎盤栄養素輸送機能機能評価

平成24年度より北九州市八幡西区においてエコチル調査本調査でリクルートされた参加者（約600例：詳細調査対象者は約30人程度の見込み）の胎盤絨毛のアミノ酸輸送活性などの胎盤総合的栄養素輸送機能評価を行いそのデータを蓄積する。今後本調査のデータ固定がなされ妊娠・分娩時の臨床データや小児疾患との関連性を解析する。

### 4. 結果及び考察

## (1) 環境由来化学物質が胎盤栄養素輸送機能に与える影響の研究

1）妊娠末期の分娩時（9症例）に採取された母体尿及び静脈血、臍帯静脈血中の化学質濃度と胎盤栄養素輸送機能活性の関連

原子吸光法により9例中7例の母体静脈血および全臍帯静脈血において水銀が検出された。水銀においては母体血中よりも胎児血中で濃度が高い傾向であった。カドミウムは母体尿で検出されたが、胎児血では検出されたかった。水銀、カドミウムともに基準値以下であった。鉛、ヒ素や農薬（DDT、ペンタクロルフェノール、ピレスロイド剤）は、全ての生体試料において測定限界以下であった。金属測定法をICP-Ms法に変更し、妊婦・胎児（臍帯血）9例（内1例は子宮内胎児死亡、1症例は重症妊娠悪阻のため人工妊娠中絶）の金属濃度ついて分析した。分析項目は血液26元素、尿14元素について分析した。ICP-Ms法ではより多くの元素について一度に測定可能であり、かつ測定感度が高く全症例で測定値が得られた。また、同じ症例の総合的胎盤栄養素輸送機
学物質曝露による胎児発育制限には特有のPIGF、sFlt1プロファイルが存在することが示唆され、臨床応用の可能性が示唆された。PCBsは低濃度でも、胎盤栄養素輸送機能への生物学的活性が高く、妊婦への曝露は極力避けるべきである。さらに、PCBsと同様に農薬と胎盤機能に関して解析を行った。クロルデン類の

trans-Chlordane以外のすべての農薬において、母体血中の農薬濃度は臍帯血中の農薬濃度と比較し、有意に高い値を示した（図4参照）。また、母体血・臍帯血中のクロルデン類であるcis-Nonachlor、trans-Nonachlor、ヘキサクロロベンゼン（HCB）濃度とPIGFは有意な関係が認められた（図5参照）。農薬に対する胎盤のバリア機構は強いと考えられたが、胎盤は農薬曝露に対してPIGF産生を増加させる生物活性を有することが示唆された。

また、有職者群: 妊娠中も職業に従事している有職者(n=15)と非有職者群: 専業主婦(n=30)との間おいて胎盤基礎データおよび胎盤機能について比較検討した。有職者群においては胎盤重量と栄養膜細胞容積が減少傾向にあった。両群間に分娩週数や出生児体重に有意差は認めなかった。また、胎盤の低酸素指標であるPIGFやsFlt-1の発現にも有意差を認めなかった。

## 3 ）環境化学物質がSystemAアミノ酸輸送活性に与える影響（図6-9）

in vitroにおいてアルデヒド類、金属元素、プラスチック樹脂原料は、60分間の培養絨毛片への曝露によってSystemAアミノ酸輸送活性を有意に低下させた(n=12)。

$ ^{*} $ P > 0.05 vs. control

アルデヒド類曝露(1 hour)	% decrease in AAT / log $ ^{10} $ increase in chemical expo.*
Glutaraldehyde	44.2
pFormaldehyde	11.5
Acetaldehyde	< 0

$ ^{*} $ Chemical effect was estimated across experimental range graphed here.

図6: アルデヒド類によるアミノ酸輸送障害

図6左上部の棒グラフに示すようにグルタルアルデヒドは比較的低濃度より濃度依存性にアミノ酸輸送活性を低下させた。ホルムアルデヒドは高濃度でのみアミノ酸輸送活性を低下させた。アセトアルデヒドは変化させなかった。図6右上部の棒グラスに示すように全てのアルデヒド類は培養液中の乳酸脱水素酵素を増加させなかった。アルデヒド類添加による細胞障害性が低いことが示された。図6下部に示すようにグルタルアルデヒドが最も強くアミノ酸輸送活性を低下させた。アルデヒド類のなかで、内視鏡の消毒薬などに利用されるグルタルアルデヒドは胎盤アミノ酸輸送障害を起こす毒性が高く危険であることが示唆された。
$ ^{*} $ P > 0.05 vs. control

図7: 重金属によるアミノ酸輸送障害

金属曝露(1 hour)	% decrease in AAT / log $ ^{10} $ increase in chemical expo.*
Arsenic	18.3
Cadmium	33.7
Methyl Mercury	< 0

$ ^{*} $ Chemical effect was estimated across experimental ranges graphed here.

図7左上部に示すようにヒ素は比較的低濃度より濃度依存性にアミノ酸輸送活性を低下させた。カドミウムは高濃度でのみアミノ酸輸送活性を低下させた。メチル水銀は変化させなかった。図7右上部に示すように全ての金属元素は培養液中の乳酸脱水素酵素を増加させなかった。金属元素添加による細胞障害性が低いことが示された。我々の研究の結果、カドミウムは胎盤通過性が低いが、カドミウムは胎児に直接到達しなくても、間接的に胎盤アミノ酸輸送障害を起こし胎児発育に悪影響を起こす可能性が示唆された。

$ ^{*} $ P < 0.05, $ ^{**} $ p < 0.005

樹脂への曝露(1 hour)	% decrease in AAT / 10-fold increase in chemical expo.*
Acrylamide	< 0
Methyl Acrylate	2.2
Phthalic Anhydride	3.1
Toluene Diisocyanate	7.6

$ ^{*} $ Chemical effect was estimated across experimental range graphed here.
図8:プラスチック樹脂によるアミノ酸輸送障害

図8左上部に示すようにトリレンジイソシアネート、無水フタル酸は比較的低濃度より濃度依存性にアミノ酸輸送活性を低下させたが、メチルアクリレートは高濃度でのみアミノ酸輸送活性を低下させた。アクリルアミドは変化させなかった。図8右上部に示すように全てのプラスチック樹脂は培養液中の乳酸脱水素酵素を増加させなかった。これらのプラスチック樹脂添加による細胞障害性が低いことが示された。図8下部に示すようにプラスチック樹脂のの中でトリレンジイソシアネートが最も協力にアミノ酸輸送活性を低下させた。プラスチック樹脂は近代社会では一般的に多用され胎児発育を修飾する環境化学物質として重要であると考えられた。

図9: グルタルアルデヒド曝露による糖・アミノ酸輸送蛋白分子構造の評価

胎盤絨毛を18時間グルタルアルデヒドに曝露したが、図9右のウェスタンブロットで示すようにアミノ酸輸送蛋白（L型、B°型）、糖輸送蛋白（SNAT2）の発現（分子構造）に変化は認められなかった。図9左に示すようにいずれの濃度においても培養液中のLDH（乳酸脱水素酵素）の上昇は認められなかった。

## (2) 胎盤の栄養素輸送機能（アミノ酸・糖輸送）および低酸素障害に関する研究

## 1 ）胎盘探取·保存·基礎データ取得·胎盘病理学的分析

エコチル調査「パイロット調査」において分娩となった55症例の妊娠・分娩情報、胎盤の試料採取および形態学的分析を行った。H.E.染色を用いた画像解析による胎盤栄養膜細胞の定量は可能であり、胎盤機能を反映する因子として重要であると考えられた。

## 2 ）胎盤におけるMammalian target of rapamycin（mTOR）シグナリングおよびアミノ酸輸送蛋白発現の検討（n=55）

エコチル調査「パイロット調査」において分娩となった55症例の胎盤のsystemAおよびLアミノ酸輸送蛋白（ASCT2、4F2hc）、およびmTORシグナリング（mTOR蛋白およびmTOR活性化シグナルであるp-70 S6Kとリン酸化-p-70 S6K）の発現の程度をWestern blot法で分析した。胎盤においてアミノ酸輸送蛋白（ASCT2、4F2hc）は、検出・定量された。またmTOR蛋白およびmTORターゲットであるp-70 S6Kとリン酸化-p-70 S6Kも検出・定量された。胎盤におけるmTORシグナル活性化が確認された。胎盤におけるアミノ酸輸送蛋白（4F2hc）とmTORシグナル系には正の相関性があった。また、妊娠中の体重増加が多いほど胎盤重量は重くなり、それに従い胎盤1つあたりの合胞体栄養膜細胞容積は大きくなる傾向にあったが、単位胎盤あたりのL型アミノ酸輸送蛋白の発現は低い傾向にあった。

3）胎盤におけるPIGF(Placental Growth Factor)、sFlt-1(Soluble-VEGF-Receptor-1)の発現の検討(n=55)

PIGFやsFlt-1は、胎盤のより抽出された総蛋白1mg当りに含まれる蛋白量(pg/mg)として算出した。単位蛋白あたりのPIGFは172±53(pg/mg)，sFlt-1は7836±3177(pg/mg):mean±S.D.でありであり過去の報告に述べられ
れている正常妊娠における測定結果と一致していた。

4）正常・妊娠高血压症候群（PE）・子宫内胎児発育遅延（IUGR）・妊娠糖尿病（GDM/DM）の胎盤における Mammalian target of rapamycin（mTOR）シグナリングおよびアミノ酸輸送蛋白発現の検討

正常および症例胎盤においてL型アミノ酸輸送蛋白である4F2hcは合胞体栄養膜細胞の核及び細胞質に局在していた。正常および症例胎盤においてB°型アミノ酸輸送蛋白であるASCT2は合胞体栄養膜細胞の基底膜に局在していた。L型アミノ酸輸送蛋白（4F2hc、LAT1）およびB°型アミノ酸輸送蛋白（ASCT2）は正常胎盤に比較してPE、IUGR、GDM/DMの胎盤において発現の程度が強い傾向にあった。mTORシグナル蛋白も同様の傾向を認めた。合胞体栄養膜細胞数は正常群と疾患群において有意差を認めなかった。

## 5 ）エコチル調査本調査における総合的胎盤栄養素輸送機能機能評価

エコチル調査は子どもの健康に対する環境リスク評価を目的としている。一方、胎児発育が病的に制限された子宮内胎児発育制限は、先天奇形、学習障害、多動、注意欠陥障害、神経疾患、将来の生活習慣病などに関与しておりエコチル調査のアウトカムと問題点を多数共有している。子宮内発育遅延の基本病態は胎盤機能障害（栄養素輸送障害）であり、エコチル調査本調査においても胎盤機能評価を行うことは重要であると考えられる。平成24年度より北九州市八幡西区においてエコチル調査本調査でリクルートされた参加者（約600例：詳細調査対象者は約30人程度の見込み）の胎盤絨毛のアミノ酸輸送活性などの胎盤総合的栄養素輸送機能評価を行いそのデータを蓄積する。今後本調査のデータ固定がなされ妊娠・分娩時の臨床データや小児疾患との関連性を解析する。

胎児子宮内胎児発育遅延（IUGR）、妊娠高血圧症候群（PIH）および正常妊娠における胎盤アミノ酸輸送蛋白の細胞内局在に有意な違いはなく、疾患群（IUGR、PIH）に発症する胎児発育制限の要因としてL型およびB型アミノ酸輸送蛋白の細胞内局在異常は否定的であると考えられた。画像解析による組織学的検索では、正常と疾患群（IUGR、PIH）において合胞体栄養膜細胞数は有意差を認めなかったが、出血・壊死などの無機能領域は疾患群（IUGR、PIH）で広い傾向であり胎児発育制限の要因の一つと考えられた。

### 5. 本研究により得られた主な成果

## (1) 科学的意義

子宮内胎児発育遅延児は正常児に比べ周産期死亡率は8倍に上る。さらに子宮内での発育制限は将来の精神神経発達障害、小児期の肥満、耐糖能異常、脂質代謝異常、また成人後の心血管疾患や糖尿病発症のリスク因子である。胎盤は母体胎児間の物質交換を担い、正常な胎児発育は胎盤の栄養素輸送に大きく依存している。本研究の成果により胎盤の栄養素輸送障害を引き起こすような環境由来化学物質を抽出し、生殖期・妊娠女性への曝露を軽減し、子宮内胎児発育遅延を減少させることが期待される。その結果、周産期死亡率のさらなる減少による社会貢献、また生活習慣病減少による医療経済への多大な貢献も期待されるところである。さらに、エコチル調査では、児の身体発達、先天異常、性分化の異常、精神神経発達障害、免疫アレルギー系の異常、代謝・内分泌系異常の有無を出生時から12歳まで追跡調査する。本研究により、胎児期の栄養素の獲得障害（胎盤における糖・アミノ酸輸送障害）と前述した胎児・小児期に起こる疾患との因果関係についても明らかになる可能性がある。本研究の成果は、これらの疾患の早期発見・早期治療に貢献することも期待される。

## (2) 環境政策への貢献

環境由来化学物質がどのように子宮内でヒト胎児発育を制限するのかについては未解決である。本研究により多種多様な金属、農薬、ダイオキシン類のような環境由来化学物質の中の一体どのような物質が胎盤栄養素輸送障害によって胎児発育制限を起こし得るのか知ることができた。また、どのようなレベル（濃度）でその悪影響が発現するのか知ることができた。さらにエコチル調査・本調査と本研究で得られたデータを解析することにより、母体が過剰に曝露されると胎盤栄養素輸送障害によって胎児発育を制限するより多くの環境由来化学物質を特定することができる可能性がある。得られたデータは生殖年齢の女性における環境由来化学物質の許容摂取基準の作成に貢献すると思われ、周産期医療においても適切なリスク管理体制を構築できると期待される。

## ＜行政が既に活用した成果＞

「特に記載すべき事項はない」

## ＜行政が活用することが見込まれる成果＞

1）環境由来化学物質が胎盤栄養素輸送機能に与える影響の研究
①PCBsは低濃度曝露でも胎盤の栄養素輸送機能を担う合胞体栄養膜細胞数を減少させ胎盤機能を修飾し非常に高い生物活性を有し胎児毒性があり危険であること。

⇒行政は胎児健常性を守るため、妊婦のPCBs曝露を最小限にすることを産科婦人科学会などを通じて国民に知らせることが必要であるかもしれない。

②喫煙時のようにPCBs曝露に対する胎盤産生蛋白(Placental growth factor, sFlt-1)の修飾には特有のプロファイルが存在すること。

⇒行政は特発性胎児発育制限が化学物質で惹起される場合、胎盤産生蛋白(Placental growth factor,

sFlt−1)の特有のプロファイルが存在し、内因性の原因による胎児発育制限との区別に活用できる可能性がある。

③多種多様な環境化学物質のなかでアルデヒド類、重金属、プラスチック樹脂が胎盤アミノ酸輸送機能を低下させることが判明した。

⇒行政はアルデヒド類ではグルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、金属元素ではヒ素、カドミウム、プラスチック樹脂ではトリレンジイソシアネート、無水フタル酸、メチルアクリレートはアミノ酸輸送活性を低下させ、胎児発育を修飾する可能性が存在することに留意すべきであると思われた。

## 2 ）胎盤の栄養素輸送機能（アミノ酸・糖輸送）および低酸素障害に関する研究

本研究は、どのような環境由来化学物質が、どの程度の濃度により、胎盤機能（ヒト胎盤の糖・アミノ酸輸送活性など）を低下させるのかについて詳細に調べることが可能であり、エコチル調査の主旨においても欠くことができない情報である。得られたデータは生殖年齢の女性における環境由来化学物質の許容摂取基準の作成に貢献すると思われ、周産期医療における適切なリスク管理体制の構築に寄与すると期待される。また、エコチル調査に付随して胎盤栄養素輸送機能を評価し、環境リスクを適切に評価することは、安心して子育てができる国づくりにつながると考えられ、少子化対策にもなると考えられる。

### 6. 研究成果の主な発表状況

## (1) 主な誌上発表

## <査読付き論文>

1）菅 礼子、愛甲悠希代、David J Askew、川本俊弘、蜂須賀徹、田中政幸、辻 真弓、阿南あゆみ 柴田英治：産婦人科治療、vol.103 no.5（2011）550-51

「妊娠中の体重変化が胎盤アミノ酸輸送機能に与える影響」

2）茗荷舞、愛甲悠希代、蜂須賀徹、柴田英治：日本周産期新生児学会雑誌、49（1）（2013）261-266

「妊娠糖尿病/糖尿病合併妊娠の胎盘におけるアミノ酸輸送機能の検討」

3) Mayumi Tsuji; Yukiyo Aiko; David J Askew; Toshiro Kawamoto; Tohru Hachisuka; Chihaya Kooriyama; Mai Myoga; Chiharu Tomonaga; Fumio Matsumura; Ayumi Anan; Masayuki Tanaka; Hsu-Sheng Yu; Yasuko Fujisawa; Reiko Suga; Eiji Shibata, PLACENTA 2013 In press "Polychlorinated Biphenyls (PCBs) decrease the Placental Syncytiotrophoblast Volume and increase Placental Growth Factor (PlGF) in the placenta of normal pregnancy"

## く査読付論文に準ずる成果発表>

「特に記載すべき事項はない」

## (2) 主な口頭発表 (学会等)

1）柴田英治、David A. Askew、愛甲悠希代、蜂須賀徹、川本俊弘、田中政幸、阿南あゆみ：「喫煙と胎児発育制限」一胎盤アミノ酸輸送および妊娠高血圧症候群との関連についてー」

シンポジウム「子宮内胎児発育遅延の基礎と臨床」,第18回日本胎盤学会学術集会(2010)

2）愛甲悠希代、柴田英治、David J. Askew、蜂須賀徹、菅礼子、阿南あゆみ、田中政幸、辻真弓、川本俊弘：日本産業衛生学会九州地方会（2011）

「妊娠中の労働が胎盤機能に与える影響の検討」

3）菅礼子、愛甲悠希代、柴田英治、David J. Askew、蜂須賀徹、阿南あゆみ、田中政幸、辻真弓、川本俊弘：日本産業衛生学会九州地方会（2011）

「母体の体重変化が胎児・胎盤機能に与える影響」

4）柴田英治、愛甲悠希代、David j. Askew、菅礼子、川本俊弘、蜂須賀徹：第32回日本妊娠高血压学会（2011）

「正常胎盤におけるmammalian target of rapamycin(mTOR)シグナル活性とアミノ酸輸送蛋白の発現の検討」
5）愛甲悠希代、柴田英治、David j. Askew、菅礼子、川本俊弘、蜂須賀徹：第32回日本妊娠高血压学会（2011）

「母体栄養状態と妊娠高血圧症候群、胎児発育不全の胎盤におけるアミノ酸輸送蛋白の検討」

6）茗荷舞、爱甲悠希代、柴田英治、David Askew、菅礼子、川本俊弘、吉村和晃、蜂須賀徹：第27回日本糖尿病·妊娠学会年次学術集会（2011）

「妊娠中の母体の体重変化と胎盘栄養素輸送機能についての検討」

7) Eiji Shibata, Toshihiro Kawamoto, Yukiyo Aiko, David J Askew, Rei Suga, Mai Myoga, Toru

Hachisuga: $ 59^{th} $ Annual Meeting Society for Gynecologic Investigation, March (2012)

–Investigation for the Effect of the Environmental Contaminants Exposure on the Placental Amino Acid Transport Activity–

8) Yukiyo Aiko, Eiji Shibata, David J Askew, Toru Hachisuga: 59 $ ^{th} $ Annual Meeting Society for Gynecologic Investigation, March (2012)

-Restricted Nutrient Supply from Mother to Fetus Is Associated with Up-regulated Placental Amino Acid Transporter and mTOR Protein Expression-

9) Eiji Shibata, Yukiyo Aiko, David J Askew, Rei Suga, Mayumi Tsuji, Toru Hachisuga,

Toshihiro Kawamoto: The $ 3^{rd} $ PPTOX conference, May (2012)

“Investigation of the Effect of Environmental Contaminants Exposure on the Placental Amino Acid Transport Activity”

### 7. 研究者略壓

## 課題代表者: 柴田英治

1970年生まれ、産業医科大学医学部卒業、医学博士、現在、産業医科大学エコチル調査産業医科大学サブユニットセンター特任准教授

## 研究参画者

(1): 柴田英治(同上)

川本俊弘

1957年生まれ、山口大学医学部卒業、現在、産業医科大学医学部産業衛生学教授

## 蜂須賀徹

1953年生まれ、順天堂大学医学部卒業、現在、産業医科大学医学部産科婦人科学教授

## (2) : 柴田英治(同上)

川本俊弘(同上)

蜂須賀徹(同上)
## C-1006 妊娠の環境由来化学質への曝露が胎盤栄養素輸送に与える影響の研究

## (1) 環境由来化学物質が胎盤栄養素輸送機能に与える影響の研究

産業医科大学医学部

$$ 柴田英治·川本俊弘·蜂須賀徹 $$

平成22(開始年度)～24年度累計予算額：19,031千円（一括使用）

（うち、平成24年度予算額：4,838千円）

予算額は、間接経費を含む。

## [要旨]

正常妊娠末期の9症例の母体・胎児試料の環境化学物質の測定を行った。当初原子吸光法で測定したが、鉛、ヒ素、農薬は、全ての生体試料において測定限界以下であった。そこで金属測定法をICP-Ms法に変更し、妊婦・胎児（臍帯血）9例の金属濃度ついて分析した。誘導結合プラズマ質量分析（ICP-Ms）法は測定感度が高く血液26元素、尿14元素について測定値が得られた。その結果、臍帯血カリウム濃度、マンガン濃度、鉛濃度は胎盤アミノ酸輸送活性と有意な負の相関があり、臍帯血カルシウム濃度は胎盤アミノ酸輸送活性と有意な正の相関性が認められた。エコチル調査パイロット調査参加者22人（正常妊娠）のPCB sの曝露推定を母体・臍帯血のPCB s濃度測定により行い、胎盤栄養素輸送機能との相関関係を解析した。その結果、母体・臍帯血液中のPCBs濃度上昇に伴い、胎児栄養化を担う合胞体栄養膜細胞が減少することを発見し、PCBs曝露による胎児発育制限機構の1つの可能性を見出した。in vitroにおいて、グルタルアルデヒドは比較的低濃度より濃度依存性にアミノ酸輸送活性を低下させた。ホルムアルデヒドは高濃度でのみアミノ酸輸送活性を低下させた。アセトアルデヒドは変化させなかった。ヒ素は比較的低濃度より、濃度依存性にアミノ酸輸送活性を低下させた。カドミウムは高濃度でのみアミノ酸輸送活性を低下させた。メチル水銀は変化させなかった。トリレンジイソシアネート、無水フタル酸は比較的低濃度より、濃度依存性にアミノ酸輸送活性を低下させたが、メチルアクリレートは高濃度でのみアミノ酸輸送活性を低下させた。アクリルアミドは変化させなかった。環境化学物質は、胎盤通過性がなく直接胎児に到達しなくても、胎盤能を修飾し間接的に胎児発育を制限している可能性が示唆された。

## [キーワード]

環境化学物質、胎盤、栄養素輸送、子宮內胎児発育不全、アミノ酸輸送、ポリ塩化ビフェニル、胎盤増殖因子

### 1. はじめに

近年、わが国では様々な環境政策がなされ、環境汚染は減少していると考えることが多い。しかしながら、近隣諸国の急速な産業化に伴い、大気・海・輸入食料などを媒介として曝露をもたらす“外からの”環境汚染問題や、重金属やダイオキシン類のように、環境中や生体内で分解速
度の遅い化学物質の人体内への蓄積による影響が危惧されている。また、胎児期や学童期の未成熟な器官は、極微量の化学物質曝露によっても影響を受け易い。ところが、胎児や学童期に必要とされる環境基準が明確でなく、胎児や学童の発育・発達に影響する環境要因やその作用について明らかにし、このような時期に見合う適切な環境基準を作成することが急務となっている。

子宮内胎児発育遅延は周産期死亡率の増加、精神神経発達障害、また将来の生活習慣病発症のリスク因子である。正常な胎児発育は胎盤の栄養素（糖・アミノ酸）輸送機能に強く依存している。従来、子宮内胎児発育遅延は子宮胎盤血流量の減少による母体から胎児への酸素・栄養素の供給量低下が主病態とされてきた。しかしながら、近年、無機物質（重金属）、残留性有機汚染物質(POPs)類、農薬などの環境由来化学物質の妊婦への曝露と出生体重減少（子宮内胎児発育遅延）との関連が相次いで報告されている。さらに、子宮内胎児発育遅延児の胎盤では糖・アミノ酸輸送活性そのものが低下していることも示されている。これらは、胎盤の糖・アミノ酸輸送活性が、子宮胎盤血流障害のみでなく、環境因子（環境由来化学物質）によって直接修飾されていることを示唆している。

そこで我々は、環境由来化学物質は、胎盤栄養素輸送障害により胎児発育を制限するという研究仮説をここに提案した。

## 2 ．研究開発目的

従来、様々な環境化学物質の胎児毒性については、胎盤を通過し胎児に直接到達した化学物質の影響について論じられている報告が多い。しかしながら、化学物質は胎盤通過性がなくても胎盤の母体面（栄養膜細胞層）に到達し胎盤機能を修飾することによって、間接的に胎児に悪影響を与え得る。

子宮内胎児発育遅延は、胎盤機能障害（栄養素輸送障害）が主病態と考えられており、環境化学物質が与える胎児・小児疾患の研究においては胎盤機能評価が極めて重要である。古くより子宮内胎児発育遅延の主病態は母体から胎児への血液供給量低下であることが指摘されているが、そのような病態に加えて、環境化学物質（環境因子）が、母児生体内でどのようなレベルで存在し、どのように胎児発育（胎盤栄養素輸送）を制限しているのか調べることを本研究の目的とした。

### 3. 研究開発方法

## （1） 母体血膵带血中金属元素濃度測定法

平成22年度、環境化学物質が、実際に母児生体内でどのようなレベルで存在するか明らかにするため、妊娠末期の分娩時（9症例）に採取された母体静脈血、臍帯静脈血中の金属（鉛、水銀、ヒ素、カドミウム）および農薬（DDT、ペンタクロルフェノール、ピレスロイド剤）濃度について原子吸光法で分析した。また、水銀、カドミウムについては母体尿中濃度についても分析した。分析項目を以下にまとめる。

1）母体血：金属：鉛、総水銀、ヒ素、カドミウム

農薬：DDT、ペンタクロルフェノール、ピレスロイド剤（フェンパレレート、

$$ \begin{aligned} シペルメトリン、ペルメトリン )\end{aligned} $$

2）母体尿：総水銀、カドミウム

3）臍帯血：金属：鉛、総水銀、ヒ素、カドミウム
農薬：DDT、ペンタクロルフェノール、ピレスロイド剤（フェンパレレート、

シペルメトリン、ペルメトリン)

農薬は全て測定限界以下であったが、重金属に関しては測定感度が低く検出限界以下の症例が多く存在したため、測定法をより感度の高いICP-Ms法【（株）キューリン】に変更し、妊婦・胎児（臍帯血）9例（内1例は子宮内胎児死亡、1症例は重症妊娠悪阻のため人工妊娠中絶）の金属濃度ついて分析した。分析項目は血液26元素、尿14元素について分析した。その結果と、妊娠・胎児・新生児の臨床情報、胎盤栄養素輸送機能との関連を分析した。

さらに、北九州地区のエコチル調査パイロット調査で得られた55症例の妊娠・分娩データ、職業歴、胎盤機能、胎盤の低酸素指標として胎盤由来蛋白である胎盤増殖因子：Placental Growth Factor（PlGF）、可溶性血管内皮増殖因子タイプ1：Soluble-VEGF-Receptor-1(sFlt-1)の発現をWestern blot法、ELISA法で測定した。これらの測定データと国立環境研究所で測定された妊娠中の母体血および分娩時に採取された母体血・臍帯血中の環境化学物質（PCBなどのダイオキシン類、DDT、残留有機汚染物質、農薬）濃度との相関関係について分析した。

## （２）胎盤の採取法および総合的栄養素機能評価

胎盤栄養素輸送機能評価として主として以下の項目を分析し、環境化学部室との関連を調べた。試料採取・保存方法

1. 妊娠・分娩・胎盘の基本データ取得(年齢、分娩週数、出生児体重、胎盘重量、胎盤容積、臍帯付着部位など)

2. 分娩後、直ちに採取し液体窒素で凍結した胎盤組織2つ(3X3X3cm)を-70℃で保存。

3. ホルマリン固定した胎盤片 {胎盤組織2つ(3×3×3cm)} 及びそのパラフィン包埋 (薄切切片の切り出しを含む)。

- 総合的栄養素機能評価-

①胎盤重量

②合胞体栄養膜細胞数などの病医理学的検討

③糖・アミノ酸輸送蛋白の発現

④SystemAアミノ酸輸送活性

画像解析による胎盤病理学的検討(ヘマトキシリン・エオジン(H.E.)染色標本):図(1)-1参照。測定項目を以下に示す。

1. 合胞体胎盤栄養膜細胞 (syncytiotrophoblast) の定量化

2. 末梢絨毛の発達度の評価

3. 絨毛膜羊膜炎の有無

4. 血栓・梗塞の有無

5. 螺旋動脈再構築障害の評価

胎盤微絨毛片における SystemA アミノ酸輸送活性測定において、従来、小絨毛片をフックに吊るす方法を行っていたが、より迅速に分析可能な SystemA アミノ酸輸送活性法を開発し、そのバリデーションアッセイを行った。計算式を以下に記す。

System A活性は、特異的輸送基質： $ C^{14} $ -Methylaminoisobutylic acid(以下MeAIB)の小絨毛片（タンパク質1mg当たり）へのNa依存性および非依存性の取り込み量を調べ評価する。
System A 活性 (pmol C $ ^{14} $ -MeAIB/ mg protein/ 20 minutes) = Na依存性のC $ ^{14} $ -MeAIBの取り込み (pmol C $ ^{14} $ -MeAIB/ mg protein/ 20 minutes) — Na非依存性（非特異的）のC $ ^{14} $ -MeAIBの取り込み (pmol C $ ^{14} $ -MeAIB/ mg protein/ 20 minutes)

$ ^{*} $ 栄養膜細胞：SCT(Syncytiotrophoblast:合胞体栄養膜細胞)

$ ^{*} $ Placental trophoblast volume measurement protocol was adopted from Mayhew TM, et, al. (2003)

図（1）－1：画像解析による胎盤病理学的検討法

## （３）環境化学物質、金属の添加による胎盤SystemAアミノ酸輸送活性の測定

過去の文献報告や我々のこれまでのin vitroにおける分析の結果、様々な環境化学物質の中で胎盤栄養素輸送機能に影響を与える化学物質を抽出した。アルデヒド類ではGlutaraldehyde（グルタルアルデヒド）、pFormaldehyde（パラホルムアルデヒド）、Acetaldehyde（アセトアルデヒド）について、金属元素では、Arsenic（ヒ素）、Cadmium（カドミウム）、Methyl Mercury（メチル水銀）、樹脂原料ではToluene Diisocyanate（トリレンジイソシアネート）、Phthalic Anhydride（無水フタル酸）、Methyl Acrylate（メチルアクリレート）、Acrylamide（アクリルアミド）について、それぞれの物質がSystemAアミノ酸輸送活性に与える影響を詳細に分析した。また、その影響がどのようなメカニズムで起こっているのか分析した（培養液中の乳酸脱水素酵素濃度を測定した。また培養絨毛に化学物質を添加し胎盤栄養素輸送蛋白の分子構造の変化についてウェスタンブロット法で調べた）。

## （４）妊婦中の職業と胎盤機能の相関性の評価

環境化学物質曝露の有無は妊婦の職業の有無や職種にも密接に関わっているため、エコチル調査「パイロット調査」において分娩となった55症例の職業歴についてのアンケート調査を行った。妊娠中の職業歴、胎児・胎盤機能、胎盤低酸素曝露の相関性を分析した。
## 4 ．結果及び考察

## （１）妊娠末期の分娩時（９症例）に採取した母体尿及び静脈血、臍帯静脈血中の化学物質濃度

1）9例中7例の母体静脈血および全症例の臍帯静脈血において水銀が検出された。水銀においては母体血中よりも胎児血中で濃度が高い傾向であった。カドミウムは母体尿で検出されたが、胎児血では検出されなかった。水銀、カドミウムともに基準値以下であった。鉛、ヒ素や農薬（DDT、ペンタクロルフェノール、ピレスロイド剤）は、全ての生体試料において測定限界以下であった。そこで、金属測定法をICP-Ms法に変更し、妊婦・胎児（臍帯血）9例（内1例は子宮内胎児死亡、1症例は重症妊娠悪阻のため人工妊娠中絶）の金属濃度ついて分析した。分析項目は血液26元素、尿14元素について分析した。ICP-Ms法ではより多くの元素について一度に測定可能であり、かつ測定感度が高く全症例で測定値が得られた。また、同じ症例の総合的胎盤栄養素輸送機能についても詳細な分析し、胎盤アミノ酸輸送活性と関連性のある母体・胎児因子について分析した。図(1)-2（n=7）に示すように母体妊娠前BMI、胎盤重量、臍帯血カリウム濃度、マンガン濃度、鉛濃度は胎盤アミノ酸輸送活性と有意な負の相関があり、臍帯血カルシウム濃度は胎盤アミノ酸輸送活性と有意な正の相関性が認められた。

R value	P value	Relation
Pre-pregnancy BMI	0.85	0.03	negative
Placental weight(g)	0.78	0.06	negative
Cord blood K	0.93	0.006	negative
Cord blood Ca	0.84	0.03	positive
Cord blood Mn	0.76	0.02	negative
Cord blood Pb	0.9	0.01	negative

単回帰分析によるSystemAアミノ酸輸送活性値とPre-pregnancy BMI（妊娠前BMI），Placental weight（胎盤重量）、Cord blood K（臍帯血力リウム）、Cord blood Ca（臍帯血カルシウム）、Cord blood Mn（臍帯血マンガン）、Cord blood Pb（臍帯血鉛）濃度との相関性を示した。: R value 相関係数、P value 確立値、Relation 相関性、negative 負の相関、positive 正の相関

図（1）－2：SystemAアミノ酸輸送活性（pmol C^{14}-MeAIB uptake/mg protein/20 minutes）と関連する母体・胎児因子
## 2 ）PCBsおよび農薬の胎盤栄養素輸送に与える影響

平成23年度に北九州地区のエコチル調査パイロット調査で得られた55症例の妊娠・分娩データ、胎盤機能測定データ、胎盤の低酸素指標として胎盤由来蛋白であるPlacental Growth Factor (PlGF)、Soluble-VEGF-Receptor 1(sFlt-1)の胎盤中濃度（添付資料1,2,3）と国立環境研究所で測定された妊娠中の母体血および分娩時に採取された母体血・臍帯血中の環境化学物質（PCBなどのダイオキシン類、DDT、残留有機汚染物質、農薬）濃度との相関関係について解析を行った。エコチル調査パイロット調査参加者の22人（正常妊娠）の母体・臍帯血のPCBs濃度および農薬の測定が行われ、胎盤栄養素輸送機能との相関関係を解析した。

実験の概要及び研究対象を図(1)-3に示す。パイロット調査参加者のうち22例の血液中のPCBsの測定がなされた。

図（1）－3：実験の概要および研究対象
測定された母体血中および臍帯血中のPCBs濃度を図(1)-4に示す。

母体血中濃度(pg/g-fat)	臍带血中濃度(pg/g-fat)
Median	(95%CI)	Median	(95%CI)	P valuea
Total PCBs	33000	(30930, 44418)	12500	(10805, 16000)	<0.001
MoCBsb	0	(0, 0)	0	(0, 0)	N.D.
DiCBs	145	(99.1, 290)	120	(110, 141)	0.108
TrCBs	370	(289, 435)	205	(169, 251)	<0.001
TeCBs	1650	(1300, 2114)	685	(579, 861)	<0.001
PeCBs	4200	(2879, 4949)	1650	(1300, 2014)	<0.001
HxCBs	15000	(13000, 21070)	6000	(4923, 7814)	<0.001
HpCBs	10500	(8868, 12139)	3200	(2386, 4035)	<0.001
OcCBs	2100	(1693, 2621)	565	(419, 695)	<0.001
NoCBs	260	(199, 313)	54.0	(40.0, 93.0)	0.043
DeCB	160	(129, 313)	47.5	(40.0, 93.0)	0.068

Total PCBs is the total of the concentrations of the 209 congeners.

For congeners 図（1）－4：母体および臍帯血中のPCB s濃度

PCBs濃度と合胞体栄養膜細胞数、P1GH、sFlt-1濃度の関連を図(1)-5に示す。

ST	PIGF*	sFlt1*
Coefficient	SE	P value	Coefficient	SE	P value	Coefficient	SE	P value
Total PCBs (pg/g-fat) in maternal blood	-74.2	39.9	0.081	0.90	0.33	0.014	0.11	0.52	0.830
Total PCBs (pg/g-fat) in cord blood	-37.2	64.0	0.569	1.43	0.34	0.001	-0.29	0.75	0.707

胎盘增殖因子：PlGF (Placental Growth Factor):

血管内皮増殖因子：VEGF（Vascular Endothelial Growth Factor）ファミリーの一つで胎盤より分泌され胎盤の発育（血管新生）に関与する。

可溶性血管内皮增殖因子タイプ1：sFlt-1（soluble-VEGF-receptor-1）

* 特発性子宮内発育遅延ではPlGF、sFlt-1共に胎盤での産生は減少すると考えられている。

* 妊娠高血压症候群では sFlt-1 の胎盤での産生は著名に増加、PlGF は減少すると考えられている。

図（1）－5：PCB s 濃度と合胞体栄養膜細胞数（ST）、P1GF、sFlt-1濃度の関連
PCBs濃度とP1GH/ST:合胞体栄養膜細胞数、sFlt-1濃度の関連を図(1)-5に示す。

PIGF / ST a,b
Coefficient	SE	P value
Total PCBs (pg/g-fat) in maternal blood	2.86	0.82	0.003
Total PCBs (pg/g-fat) in cord blood	3.74	0.88	0.001

b) z-score transformation was performed.

P values were obtained by multivariate regression model.

Coefficient= regression coefficient

SE: standard error

*正常妊娠ではPCBs濃度が上昇するほど合胞体栄養膜細胞数は減少しP1GFは増加している。

図（1）－6：PCB s 濃度と P1GF/ST との関連

PCB s は母体血で臍帯血より有意に高い傾向にあり、分子量が大きいPCBほど胎盤を通過し難い傾向にあった。母体・臍帯血液中のPCBs濃度上昇に伴い、胎児栄養化を担う合胞体栄養膜細胞が減少することを世界で先駆けて発見し、PCBs曝露による胎児発育制限機構の1つの可能性を見出した。また、PCBs濃度上昇に伴い胎盤血管新生に寄与するP1GF産生は亢進していることを発見した。これは正常妊娠における胎盤の適応機能を反映していると考えられた。

化学物質曝露による胎児発育制限には特有のP1GF、s Flt1プロファイルが存在することが示唆された。
さらに、PCBsと同様に農薬と胎盤機能の関連性について解析を行った。

母体血中（Maternal blood）および臍帯血中（Cord blood）の様々な農薬濃度を図（1）-7に示す。

pesticide chemicals	Maternal blood (n=22)	Cord blood (n=22)	P value
pg/g-fat	pg/g-fat
Median	(95%CI)	Median	(95%CI)
p,p’-DDE	40000	(36830,60882)	15500	(7278,12638)	<0.0001
o,p’-DDT	N.D	N.D	N.D	N.D	N.D
p,p’-DDT	2400	(1942,2936)	805	(559,932)	0.0003
cis-Chlordane	120	(111,137)	195	(183,226)	<0.0001
trans-Chlordane	135	(125,183)	280	(263,332)	<0.0001
oxychlordane	3900	(3271,4788)	1850	(1657,2331)	<0.0001
cis-Nonachlor	1050	(906,1350)	330	(360,551)	<0.0001
trans-Nonachlor	8050	(6774,10822)	2600	(2680,4024)	<0.0001
Dieldrin	1300	(1104,2493)	990	(882,1506)	0.0124
cis-Heptachlorepoxide	890	(874,1432)	515	(583,1071)	0.0022
HCB	6050	(5176,7452)	3580	(3243,4901)	0.0036
$ \beta $ -HCH	11000	(11507,22261)	6500	(6027,12950)	0.0214
Mirex	490	(385,542)	N.D	N.D	N.D
ToxapheneParlar-26	280	(203,339)	N.D	N.D	0.0588
ToxapheneParlar-50	410	(361,532)	80	(114,199)	0.0009

P values were obtained by Mann-Whitney U test.

o, p'-DDD, o, p'-DDE, Aldrin, Endrin, Heptachlor, trans-Heptachlorepoxide, α-HCH, δ-HCH, ToxapheneParlar-40, ToxapheneParlar-41, ToxapheneParlar-44, ToxapheneParlar-62 were not detectable in both maternal and cord blood samples. p, p'-DDD, y-HCH were detectable few sample sets, statistics not performed (N.D.).

図（1）－7：母体血・臍帯血中の農薬化学物質濃度

母体血（maternal blood）および臍帯血（cord blood）中の農薬濃度と胎盤の合胞体栄養膜細胞数、PlGF、sFlt-1濃度との関連を図(1)-8に示す。

Coefficient	SE	Pvalue	Coefficient	SE	Pvalue	Coefficient	SE	Pvalue
cis-Nonachlor (pg/g-fat) in maternal blood	0.005	0.02	0.807	0.0004	0.0002	0.016	-0.0001	0.0002	0.903
cis-Nonachlor (pg/g-fat) in cord blood	0.073	0.048	0.151	0.0012	0.0003	0.002	-0.0003	0.0006	0.641
trans-Nonachlor (pg/g-fat) in maternal blood	-0.0001	0.0019	0.961	0.0001	0.0001	0.150	0.0001	0.0001	0.594
trans-Nonachlor (pg/g-fat) in cord blood	0.0055	0.0066	0.419	0.0001	0.0001	0.024	0.0001	0.0001	0.899
HCB (pg/g-fat) in maternal blood	0.001	0.004	0.783	0.0001	0.00003	0.003	-0.0001	0.0001	0.740
HCB (pg/g-fat) in cord blood	0.009	0.007	0.198	0.0002	0.00003	<0.001	-0.0001	0.0001	0.451

$ ^{*} $ N=21 P values were obtained by multivariate regression model. Coefficient: regression coefficient SE: standard error

図（1）－８：ST，P1GF，sFlt-1と農薬の関係