Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
## 呼吸器感染症

・パラインフルエンザウイルス

・メタニューモウイルス

・RSウイルス

・アデノウイルス

・コクサッキーウイルス

・麻疹ウイルス

·百日咳菌

・肺炎マイコプラズマ

・肺炎クラミジア

ヘルペスウィルス感染症

・サイトメガロウイルス

・水痘・帯状疱疹ウイルス

・エプスタインバーウイルス

消化器感染症

・A型肝炎ウイルス

・ロタウイルス

・赤痢アメーバ

図1 霊長類研究所チンパンジーにおける各種ヒト病原微生物に対する特異抗体の保有状況
図２　飼育下チンパンジーにおける EBV 特異的 IgG、IgA 特異抗体の検出

図 3 WB 法による飼育下チンパンジーにおける EBV 特異的 IgA 特異抗体の検出
図４ コンゴ民主共和国における野生ボノボ糞試料採集地

そこで、コンゴ共和国の野生ボノボ各生息地（図4）から採取した糞便サンプルから IgA 抗体を抽出し、ELISA 法により抗 EBV 抗体について検討を行った。その結果、100 頭中 25 頭において EBV に対する特異抗体を保有していることが明らかになった（図5）。

図 5 野生ボノボにおける抗 EBV-IgA 抗体価
興味深いことに、ボノボ生息地ごとに抗体陽性率が顕著に異なることを見出した（表1）。すなわち Wamba，TL2，Lomako では 19-41% という高い抗体陽性率であるのに対し LacTumba では全頭陰性であった。その結果より、ボノボの生息地により EBV 感染分布に大きな偏りがあることが初めて明らかとなった。

表 1 異なる地域の野生ボノボの糞試料における EBV 特異 IgA 抗体の陽性率

Habitat	% positive for EBV-specific IgA
Wamba	6/31 (19.4)
TL2	12/35 (34.3)
Lomako	7/17 (41.2)
Lac Tumba	0/17 (0)

以上の結果より、類人猿由来糞便サンプルからの病原体特異抗体の定性、定量解析系が確立されたと判断し、最後に野生チンパンジーでアウトブレークが観察されている呼吸器感染症の原因ウイルス（インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、RSウイルス）について、それぞれの特異抗体を検出するELISA系を独自に構築した。この系を用いて、野生ボノボの糞便におけるIgA型特異抗体を調べた（図6，7）。その結果、インフルエンザウイルスにおいては、21-28%が陽性であることが示された。またパラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、RSウイルスに対する抗体陽性率は、22-27%であった。この時点では、複数の異なるウイルスに対して一見同等な抗体陽性を示していたことから、本法による検査結果が非特異的反応によるものである可能性を否定できなかった。しかし個体ごとの結果を精査すると、ウイルス種ごとに、もしくは同じウイルス種内でも異なるジェノタイプ間では特異抗体の有無やその抗体価が大きく異なっていた。したがって本法により検出される抗体反応は特異的であるものと考えられた。

注目すべきことに、ボノボ生息地によりウイルス抗体陽性率は顕著に異なっていた（図8,9）。ウイルス種により多少ばらつきがあるがLacTumbaでは全般的に陽性率が低く、このことはEBVにおける結果と同様であった。ただし、インフルエンザB型やパラインフルエンザ2型、RSV-Bでは中等度の陽性率であり、病原体によっては一定の感染歴があることが推定された。他方、TL2，Lomakoでは全般的に陽性率が高かった。以上の結果から、生息域により全般的なウイルス流行傾向に大きな偏りがあること、同じ生息域であってもウイルスの種類やその型別によって流行状況にかなり違いがあることが明らかとなった。
Influenza A H1N1 Brisbane

Influenza A H1N1 Swine

Individual number

図6 野生ボノボにおけるオルソミクソウイルス科呼吸器感染症ウイルス特異的 IgA 特異抗体の検出。P/N 比が 2 以下は特異抗体陰性。

図7 野生ボノボにおけるパラミクソウイルス科呼吸器感染症ウイルス特異的IgA特異抗体の検出
Influenza B

Influenza A H1N1 Brisbane

Influenza A H3N2

Influenza A H1N1 Swine

図8 野生ボノボ生息地域別のオルソミクソウイルス科呼吸器感染症 ウイルス特異抗体陽性率の比較

Parainfluenza type 1

Parainfluenza type 2

Parainfluenza type 3

RSV-A

RSV-B

図9 野生ボノボ生息地域別のパラソミクソウイルス科呼吸器感染症

ウイルス特異抗体陽性率の比較
ところで、今後の類人猿保護政策を考える際、こうした感染疫学的知見は、どのような意義があるだろうか？ヒト由来ウイルスに暴露する機会が多く、ウイルス特異的な抗体を高頻度で保有するボノボ個体群では、結果論として感染により致死性症状を呈さず治癒したことを表しており、その多くが多様なウイルスに対する防御免疫を獲得している可能性がある。この場合、その地域個体群は当該ウイルスおよび近縁ウイルスによる再感染流行に対し抵抗性を示す（いわゆるワクチン効果）ことが期待される。一方、過去にこうした感染流行のなかった生息域では、ウイルスの新規流行（特に現地住民ではなく海外からの観光客や研究者が持ち込むもの）に対して免疫学的にナイーブであり、ある生息域の個体群が特定のウイルスに対して感受性が高く致死性症状を呈してしまう恐れがある。実際、さまざまな感染症において特定のMHCハプロタイプが感染への抵抗性/感受性を規定することはよく知られており、他の地域との交流がない孤立個体群では遺伝子型の多様性に乏しいためにある種の病原体侵入に対して適切な防御免疫を誘導できないといった可能性も想定される。こういった可能性を考慮し、例えばLacTumbaのような、過去にウイルス感染流行頻度が少なかったと推測される生息域では、特に海外からの観光客や研究者の立ち入りを制限する、もしくはリスク抑制を念頭にした予防策（事前の健康チェックやマスク装着等）をより厳格に実施するなどのオーダーメード対策を執ることが望ましい。

今回の感染疫学調査で対象とした呼吸器感染症では、原因ウイルス感染から長くとも数週間以内に治癒するのが通常であり、1度の感染であれば特異抗体価は1，2年程度で漸減しやがて検出限界以下となる。現時点で糞便から抗体が検出されるということは、原因ウイルスの野生個体群への感染流行が比較的最近に生じたか、もしくは現在流行している可能性が考えられる。今後、横断的調査に加えて一定地域の個体群における経時的な抗体価動態をフォローアップすることにより、病原体ごとに流行の消長が把握できるものと期待される。

## （２）外来マカクザル由来病原体によるニホンザルの感染症リスク研究

京都大学霊長類研究所では、この10年間で2回、血小板の急激な減少という症状でニホンザルが死亡する事例があった。いったん発症すると致死率は極めて高く、第1期の2001-2002年の約1年間に7頭発症して6頭が死亡し、6年間をおいて、第2期の2008年3月から2010年12月までの間に42頭発症して41頭が死亡した（図10）。

図 10 二ホンザル血小板減少症の発症数の推移
臨床症状としては皮下、口腔、消化管や肺などの出血や血便が典型的であり、発症後数日で急性転機を辿り死に至る。性、年齢、捕獲地などに発症の偏りは見られない。血液学的には通常30-40万/mm³ある血小板の激減とそれに続く赤血球ならびに白血球の減少が発症個体全頭に共通して認められる。特に死亡時には血小板数がほぼ0になるケースがほとんどであり、これが本疾病のもっとも特異的な現象となっている。第2期のアウトプレークにおける発症例の急激な拡大から、何らかの感染症が疑われた。そこでまず、Ebola（エボラ出血熱）、Marburg（マールブルグ病）、Lassa（ラッサ熱）、CCHF（クリミアコンゴ出血熱）等のヒトが感染すると重篤な出血性の症状を呈する病原体に対する抗体およびゲノムの有無を調べたが、いずれも陰性であった。そこで、社団法人予防衛生協会、国立感染症研究所、大阪大学微生物病研究所、京都大学ウイルス研究所等の研究機関の協力により、考えられるあらゆる方策（RDV法、次世代シークエンサーによるメタゲノム解析、電子頭微鏡による観察、培養試験、抗体検査等）を駆使し、複数の発症個体について病原体の同定を試みた。その結果、RDV法およびメタゲノム解析にてSRVに高い相同性を示すウイルスゲノムが検出された。その後、詳細なゲノム解析により、このウイルスがSRV-4であることが突き止められた。また電子頭微鏡解析の結果、発症ニホンザルの血漿中にはサルレトロウイルス4型（SRV-4）と非常に類似した形体のウイルス粒子が観察された(図11)。

図 11 発症個体血漿中の SRV 粒子像

以上の結果より、ニホンザルにおける血小板減少症の原因は、SRV-4である可能性が高いと判断された。そこで、研究所内の多様なサル種への感染流行状況の把握および感染ザルの摘発淘汰が急務と考えられたため、上述のウイルスゲノム情報を基に、血漿及び血球からのウイルスRNA検出法を確立した（図12）。
図 12 RT-PCR 法による SRV-4 ゲノムの同定

本法による解析の結果、発症個体の血漿中のみならず糞便や尿、各臓器中において SRV-4 遺伝子が確認された。他方、発症したサルとまったく接点のない正常ザルでは、いずれのサンプルからも SRV-4 遺伝子は検出されなかった。

次に発症個体及びハイリスク群（発症個体と同居飼育）、ローリスク群（同居ザルに発症個体なし）の血漿におけるウイルス遺伝子および抗SRV抗体について解析を行った（図13）。重要なことに、発症個体では全てSRV-4遺伝子が陽性であるにも関わらず、抗SRV抗体は全て陰性であった。一方、ハイリスク群では多くの例で抗体陽性であった。またローリスク群ではいずれも陰性であった。このことから、何らかの要因によりSRVに対して適切な抗体応答が誘導されないニホンザル個体群ではウイルス感染制御が破綻し、その結果ウイルスが骨髓細胞を傷害し血小板減少に至るものと考えられた。

興味深いことに、SRV-4 はカニクイザルが自然宿主であることがアメリカの研究グループによって最近報告された $ ^{2)} $ 。事実、当研究所で飼育されていたカニクイザルについて調査したところ、複数の個体から抗SRV特異抗体が陽性であることが確認され、また一部の個体からはSRV-4 遺伝子が検出された(図13)。国内カニクイザル繁殖施設においてSRV-4の高頻度な感染が確認されているが、今回ニホンザルで見られるような致死的血小板減少症は見られない。従って、自然宿主であるカニクイザルでは重篤な臨床症状を示さない（不顕性感染）が、ニホンザルへの感染により想定外の致死性疾患を呈するものと考えられた。最後に、感染ニホンザル生体内におけるSRV-4の組織分布について検討を行った（図14-19）。その結果、血小板減少症を発症した個体からサンプリングしたさまざまな組織（小腸、大腸、盲腸、腸間膜リンパ、腎臓）よりSRV-4 Env 蛋白特異的シグナルが検出された。それぞれの組織ごとに詳しく調べてみると、小腸、大腸、盲腸の粘膜上皮でSRV-4特異的反応が強く観察された。また、腎臓においては腎小体内部において、SRV-4特異反応が観察された。しかし心臓においては、SRV-4感染は観察されなかった。SRV-4非感染ザル由来組織ではいずれの部位でも陰性であった。
以上の結果より、SRV-4 はニホンザルにおいてリンパ組織のみならず、消化管や腎臓など多様な組織で感染増殖していることが示された。このことは、糞便や尿中にウイルスが検出されることと一致するとともに、ニホンザル放飼場やグループケージにおける糞便や尿を介した個体間の感染伝播の原因となっているものと考えられた。

発症群(12頭)

ハイリスク群(27頭)

カニクイザル群(30頭)

ローリスク群(15頭)

■ 抗体(−)ウイルス(+)

■ 抗体(+)ウイルス(+)

図 13 二ホンザル及びカニクイザルにおける SRV-4 及び抗体の検出
HE染色 粘膜上皮 Env抗体による免疫染色

図 14 SRV-4 感染ニホンザル小腸における SRV-4 Env 抗原の検出

HE染色 粘膜上皮 Env抗体による免疫染色

図 15 SRV-4 感染ニホンザル大腸における SRV-4 Env 抗原の検出

粘膜上皮 Env抗体による免疫染色

粘膜下組織

図 16 SRV-4 感染ニホンザル盲腸における SRV-4 Env 抗原の検出
図 17 SRV-4 感染ニホンザル腸間膜リンパ節における SRV-4 Env 抗原の検出

図 18 SRV-4 感染ニホンザル腎臓における SRV-4 Env 抗原の検出

図 19 SRV-4 感染ニホンザル心臓における SRV-4 Env 抗原の検出
## 5 ．本研究により得られた成果

## （1） 科学的意義

第1に、野生類人猿であるチンパンジーとボノボにおいてヒト由来人獣共通感染症のリスクが危惧される状況において、その克服に不可欠な科学的なエビデンスとしての野生霊長類における人獣共通感染症に関する感染疫学情報を得るための技術的基盤が初めて確立された。すなわち、類人猿由来糞便サンプルからのIgA抗体抽出技術とそれを応用した病原体特異抗体の定性、定量解析が本研究により可能となったことは画期的な進歩である。本成果は、霊長類生態学とウイルス学の専門家がそれぞれの得意分野を生かしつつ、本プロジェクトによる協調的かつ生産的な共同研究活動があって初めて成し遂げられたものである。また霊長類研究所という飼育下の類人猿のサンプルが比較的容易に入手できる希有な環境に支えられ、本研究実施に当たり最も困難と思われた方法論の確立が短期間に為し得たものであろう。本邦において、このような学術的にも疎遠な異なる他分野間での協力関係に基づくブレークスルーは希であり、まさに霊長類研究所というユニークな環境ならではの優れた成果であると言えよう。

これまでに類人猿の孤立個体群における人獣共通感染症が原因となる大規模な頭数減少が報告されている。こうした危機的状況の回避に向け、専門家会議等ではワクチン投与や治療などの人為的介入が検討されているが、その是非については今も意見が分かれるところである。その最大の問題は感染疫学調査に基づく科学的エビデンスの欠如にあり、旧来の経験則に基づく環境保護政策では必ずしも適切な対策を講じられないのが実情である。すなわち生息地域により異なる社会的および政治経済的な背景の多様性に起因して、孤立個体群によって感染症罹患状況や罹患歴、各病原体への防御免疫保有率などが異なる可能性が考えられるため、実際問題としてボノボ全体に一律の感染症対策を講じることが適切とは言いがたい。従って、よりピンポイントに適材適所の対策を講じることが望ましい。こうした背景において、本研究成果として様々な呼吸器感染症における疫学調査が可能となったことは意義深い。特に、昨年度の本研究において予備的結果ではあるが孤立個体群の生息地域によりウイルス特異抗体の保有率などに顕著な差が見られたことから、今後リスク要因となる各種病原ウイルスの孤立個体群におけるより精密な感染疫学データを積み重ね、そのエビデンスに基づいたリスク評価を行い、可能な限り孤立個体群ごとに最適化された感染症対策を実施していくことが重要である。

第2に、より私たちの身近に住むマカク類の種の壁を越えた感染症の疫学調査による感染源の特定と感染経路の予測が立てられたことである。霊長類研究所のニホンザルでは、数年前から原因不明の血小板の減少による致死的疾患が発生しており、その原因究明が急がれていた。そこで国内諸研究機関との共同研究により原因ウイルスの特定に尽力し、SRV-4のニホンザル感染こそがその原因であることを突き止めた。すなわちSRV-4特異的ゲノム検出系と抗体検査法を確立し、ニホンザルのみならず多様なサル種におけるSRV-4の疫学調査を行い、感染源の特定と感染経路の予測を行なった。その結果、SRV-4がカニクイザルからニホンザルに伝搬して、その「種の壁」を超えたことが想定外の致死的疾患をニホンザルに引き起こしたことが解明された。このような短期間で原因ウイルスを解明し、その防疫体制を確立できたことは感染症学的観点において特筆に値する。さらに放飼場で自然に近い飼育環境での感染が拡大したことは、万が一SRV-4の自然宿主であるカニクイザルが野生ニホンザルと接触することがあれば同様な悲劇が起こりえることを示唆するものであり、非常に意義深い。鳥インフルエンザなどの例にも見られるように、予想
を超えた劇症化をもたらす種の壁を越えたウイルス感染は、ヒトや野生動物にとって重大な問題であり、今後もその解明や予防策の更なる改善を図り、野生霊長類における感染症のアウトブレークが起こった場合に、直ちにその原因究明や感染拡大防止等に対応可能な基盤技術、霊長類感染症研究拠点の維持発展、さらにそのための人的育成が不可欠であろう。

## （２）環境政策への貢献

## ＜行政が既に活用した成果＞

特に記載すべき事項はない。

## ＜行政が活用することが見込まれる成果＞

アジア・アフリカ野生霊長類の人獣共通感染症に関して、その感染流行状況は充分把握されておらず、よって各病原体のリスク評価が行なわれていないのが実情であった。その原因として、野生霊長類の感染症研究を担う研究機関・施設がこれまで国内で欠如しており、そのため基盤的技術開発および人材育成が進められてこなかった事が挙げられる。3年間の本研究事業では、アジア・アフリカ野生霊長類に関する人獣共通感染症モニタリングのための基盤技術開発が大きく進捗した。これは今後の霊長類種や生息域に応じたリスク評価実施およびガイドライン策定に向け、具体性および実現可能性を高めた意義深い成果と言えるであろう。さらに、本研究実施に伴い、本サブテーマメンバーおよび若手スタッフによる感染症研究チームが新たに確立するとともに、社団法人予防衛生協会、国立感染症研究所、大阪大学微生物病研究所、京都大学ウイルス研究所、長崎大学熱帯医学研究所等との共同研究ネットワークが構築され、非常に効率的な研究推進が可能となった。この結果として、マカクザル間の病原体伝播が引き起こしうる重篤な人獣共通感染症の可能性を実証した事は、今後のリスク評価及びその対策立案といった側面も踏まえ、環境行政上非常に意義深い。以上、これらの成果は、霊長類感染症に関する研究拠点形成および若手研究者育成といった長期的ビジョンに立脚した野生霊長類関連環境政策に大きく貢献するものと期待される。

さらに、マカクザル間の病原体伝播が引き起こしうる重篤な人獣共通感染症の検出体制の充実により実態解明が進んだことは、今後の起こりうる感染症のアウトブレークに即応できる体制が整ったことを意味する。以上、これらの成果は、霊長類感染症に関する研究拠点形成および若手研究者育成といった長期的ビジョンに立脚した野生霊長類関連環境政策に大きく貢献するものと期待される。

## 6 ．国際共同研究等の状況

国際自然保護連合種生存委員会霊長類専門家グループ大型類人猿セクションに代表者の古市が執行委員として参加し、本研究プロジェクトサブテーマ1～3の成果を提供して、Bonobo（Pan paniscus）Conservation Strategy 2012-2022を作成。2013年1月に出版された。

コンゴ民主共和国では、ボノボの生態情報および分析用試料の収集のため、さまざま研究グループと協力して調査をおこなった。以下に調査地域と協力者（所属）を列挙する。

TL2: John A. Hart, Terese B. Hart (Lukuru Wildlife Research Foundation, Kinshasa, Democratic Republic of Congo)
Wamba: Monkengo-mo-Mpenge Ikali, Mbangi N. Mulavwa (Research Center for Ecology and Forestry, Ministry of High Education and Scientific Research, Mabali, Democratic Republic of Congo)

Iyobdji: Monkengo-mo-Mpenge Ikali, Mbangi N. Mulavwa (Research Center for Ecology and Forestry, Ministry of High Education and Scientific Research, Mabali, Democratic Republic of Congo); Jef Dupain (African Wildlife Foundation, Kinshasa, Democratic Republic of Congo)

Lomako: Jef Dupain, Amy K. Cobden (African Wildlife Foundation, Kinshasa, Democratic Republic of Congo)

Salonga: Gay E. Reinartz, Patrick Guislain (Bonobo and Congo Biodiversity Initiative, Zoological Society of Milwaukee, Milwaukee, Wisconsin, United States of America)

Lac Tumba: Mbangi N. Mulavwa, Kumugo Yangozene (Research Center for Ecology and Forestry, Ministry of High Education and Scientific Research, Mabali, Democratic Republic of Congo)

Malebo: Serge Darroze, Céline Devos (World Wide Fund for Nature, Kinshasa, Democratic Republic of Congo)

調查出発前に、各調査協力者と連絡を取ってボノボの生息情報を聞き、調査計画を検討した。現地においては調査許可発行省庁との話し合い等事務手続きから実際の野外調査まで助力をいただいた。調査中に現地スタッフに資料のサンプリング方法を詳細に伝え、試料採取に習熟してもらった。したがって複数のパーティーでボノボの痕跡を探すことができ、試料採取の効率が上がった。我々が現地を離れた後も、DNA試料の拡充、人獣共通感染症感染率の経時的変化を追跡するため、試料採取を継続するよう依頼し、機会がある度に試料とその他ボノボに関する情報をいただいた。なお、上記7地域のうちSalongaについては、キンシャサで試料調査方法を調査協力者に詳細に伝えたのち、現地調査を依頼した。これらの研究グループとは現在も緊密な連携を保っており、今後の研究および保護活動においても協力してあたることができる。この連携は、本研究プロジェクトで得られたきわめて大きな資産だといえる。

### 7. 研究成果の発表状況

## （1） 誌上発表

## <論文（査読あり）>

1) Yoshida T, Saito A, Iwasaki Y, Iijima S, Kurosawa T, Katakai Y, Yasutomi Y, Reimann KA, Hayakawa T, Akari H (2010) Characterization of natural killer cells in tamarins: a technical basis for studies of innate immunity. Frontiers in Microbiology 1: 128.

2) Saito A, Kawamoto Y, Higashino A, Yoshida T, Ikoma T, Suzuki Y, Ami Y, Shioda T, Nakayama EE, Akari H (2012) Allele Frequency of Antiretroviral Host Factor TRIMCyp in Wild-caught Cynomolgus Macaques (Macaca fascicularis). Frontiers in Microbiology 3: 314.

3) Saito A, Kono K, Nomaguchi M, Yasutomi Y, Adachi A, Shioda T, Akari H, Nakayama EE (2012) Geographic, genetic and functional diversity of antiretroviral host factor TRIMCyp in Cynomolgus macaque (Macaca fascicularis). Journal of General Virology, 93: 594-602.
4) Yoshida T, Omatsu T, Saito A, Katakai Y, Iwasaki Y, Iijima S, Kurosawa T, Hamano M, Nakamura S, Takasaki T, Yasutomi Y, Kurane I, Akari H (2012) CD16 positive natural killer cells play a limited role against primary dengue virus infection in tamarins. Archives of Virology, 157: 363-368.

5) Kooriyama T, Okamoto M, Yoshida T, Nishida T, Tsubota T, Saito A, Tomonaga M, Matsuzawa T, Akari H, Nishimura H, Miyabe-Nishiwaki T (2013) Epidemiological study of zoonoses derived from humans in captive chimpanzees. Primates 54: 89-98.

6) Yoshida T, Omatsu T, Saito A, Katakai Y, Iwasaki Y, Kurosawa T, Hamano M, Higashino A, Nakamura S, Takasaki T, Yasutomi Y, Kurane I, Akari H (in press) Dynamics of cellular immune responses in the acute phase of dengue virus infection. Archives of Virology. DOI: 10.1007/s00705-013-1618-6.

## くその他誌上発表（査読なし）>

特に記載すべき事項はない。

## （2） 口頭発表（学会等）

1) Akari H (2010.8) Novel non-human primate models for hepatitis C and AIDS, 2010 KALAS international symposium, Korea.

2) Kooriyama T, Okamoto M, Nishida T, Nishimura H, Miyabe T (2010.9) Serological survey of human pathogens in captive chimpanzees at the Japanese Primate Research Center. The 23rd Congress of International Primatological Society, Kyoto.

3) Suzuki J, Yamamoto H, Ishida T, Li T-C, Takeda N (2010.9) Health management of macaque outdoor colonies with focus on hepatitis E infection. The 23rd Congress of International Primatological Society, Kyoto.

4) Akari H (2010.10) A novel monkey-tropic HIV-1: toward the development of a new non-human primate model, 11th Kumamoto AIDS seminar, Kumamoto.

5）吉田友教、岡本宗裕、明里宏文、今井啓雄、松井淳、早川敏之、生駒智子、伯川美穂、齊藤波子、渡邊朗野、兼子明久、宮部貴子、鈴木樹理、平井啓久（2011.5）京大霊長研に見られたニホンザル血小板減少症（4）：疫学調査．第58回日本実験動物学会総会、東京

6) 明里宏文、鈴木樹理、岡本宗裕、宮部貴子、渡邊朗野、兼子明久、熊崎清則、阿部政光、鎌中慶朗、前田典彦、森本真弓、渡邊祥平、須田直子、平井啓久、松沢哲郎（2011.5）京大霊長研に見られたニホンザル血小板減少症（1）：概要報告．第58回日本実験動物学会総会、東京

7) Yoshida T, Okamoto M, Akari H, Suzuki J, Miyabe-Nishiwaki T, Hayakawa T, Imai H, Matsui A, Watanabe A, Kaneko A, Hirai H (2011.9) Simian retrovirus-4-associated infectious thrombocytopenia in Japanese macaques. The Unlimited World Microbes International Union of Microbiological Societies 2011 Congress XV International Congress of Virology. Sapporo.

8）明里宏文、鈴木樹理、岡本宗裕、宮部貴子、渡邊朗野、兼子明久、阿部政光、釜中慶朗、
前田典彦、森本真弓、渡邊祥平、須田直子、平井啓久、松沢哲郎（2011.9）ニホンザル血小板減少症の発生に関する経過概要．第152回日本獣医学会学術集会、大阪

9) 明里宏文（2011.10）霊長類モデル動物を用いたウイルス感染症研究. 東京医科歯科大学・難治疾患共同研究拠点研究集会、東京

10) 吉田友教（2012.2）ニホンザル血小板減少症における病理組織解析．第1回 ニホンザル血小板減少症シンポジウム、京都

11）岡本宗裕(2012.5）実験動物感染症の現状：ニホンザル血小板減少症．第59回日本実験動物学会・第46回日本実験動物技術者協会総会、別府

12）吉田友教、宮部貴子、郡山尚紀、竹元博幸、生駒智子、渡邊朗野、兼子明久、渡邊祥平、齊藤暁、早川敏之、鈴木樹理、岡本宗裕、松沢哲郎、古市剛史、明里宏文（2012.5）大型類人猿における人獣共通感染症の抗体スクリーニング方法の開発．第59回日本実験動物学会、別府

13）吉田友教、竹元博幸、佐藤英次、坂巻哲也、宮部貴子、生駒智子、渡邊朗野、兼子明久、渡邊祥平、早川敏之、鈴木樹理、岡本宗裕、松沢哲郎、明里宏文、古市剛史（2012.5）アフリカ野生大型類人猿におけるIgA抗体スクリーニングによる人獣共通感染症の実態調査.第59回日本実験動物学会、別府

14）吉田友教、宮部貴子、郡山尚紀、竹元博幸、生駒智子、渡邊朗野、兼子明久、渡邊祥平、齊藤暁、早川敏之、鈴木樹理、岡本宗裕、松沢哲郎、古市剛史、明里宏文（2012.7）大型類人猿における糞便サンプルを用いた人獣共通感染症の抗体スクリーニング方法の開発．第28回日本霊長類学会、名古屋

15) Yoshida T, Takemoto H, Sato E, Sakamaki T, Miyabe-Nishiwaki T, Ikoma T, Watanabe A, Kaneko A, Watanabe S, Hayakawa T, Suzuki J, Okamoto M, Matsuzawa T, Akari H, Furuichi T (2012.8) Epidemiological study of zoonotic pathogens by screening of IgA antibodies in wild great apes in Africa. The 24th Congress of International Primatological Society, Cancun, Mexico.

## （3） 出願特許

特に記載すべき事項はない。

（４）シンポジウム、セミナー等の開催（主催のもの）

1) シンポジウム：霊長類モデル動物を用いたウイルス感染症研究（主催） 東京医科歯科大学・難治疾患共同研究拠点 研究集会（東京）平成23年10月7日

## （５）マスコミ等への公表・報道等

1) 「Japanese monkey deaths puzzle」 (Nature 英語版、2010年7月15日 vol 466)

2) 「ニホンザルで謎の出血症」 (Nature 日本語版、2010年7月15日 vol 466)

3) 「京大霊長類研サル50頭ウイルス死：ヒトに病気起こさず」（朝日新聞電子版、2010年11月11日）

4）「京大二ホンザル大量死　原因を特定」（産経新聞電子版、2010年11月11日）
5) 「ニホンザル大量死、別種からウイルス感染 京大霊長類研究所」（中日新聞電子版、2010年11月11日）

6) 「ニホンザル謎の大量死 ウイルス所内感染か」（京都新聞電子版、2010年11月11日）

## (6) その他

明里宏文 Early Investigator Award 受賞（29th Annual Symposium on Nonhuman Primate Models for AIDS, Seattle, USA, Oct. 2011）

### 8 \. 引用文献

1) Boesch C (2008) Why do chimpanzees die in the forest? The challenges of understanding and controlling for wild ape health. American Journal of Primatology 70, 722–726.

2) Zao CL, Armstrong K, Tomanek L, Cooke A, Berger R, Estep JS, Marx PA, Trask JS, Smith DG, Yee JL, Lerche NW (2010) The complete genome and genetic characteristics of SRV-4 isolated from cynomolgus monkeys (Macaca fascicularis). Virology 405, 390-396.
(3) 孤立個体群の現状分析と生息地の維持・回復のための生態学的・社会学的研究

京都大学 野生動物研究センター

伊谷原一

松沢哲郎

幸島司郎

村山美穂

杉浦秀樹

中村美知夫

風張（長谷川）喜子

平成 22 年～24 年度累計予算額：37,571 千円

（うち、平成24年度予算額：11,571千円）

予算額は、間接経費を含む。

## [要旨]

霊長類の多くの種において、活発な人間活動による個体群の孤立が起こっている。孤立した小さな個体群は、さまざまな要因によって個体数が変動しやすく、絶滅のリスクが大きい。したがって、霊長類の保全においては、孤立個体群の保全が重要課題と言える。大型類人猿では、効果的な種の保全のためにプライオリティ・ポピュレーション(保全対策の優先的対象個体群)の選定が喫緊の課題とされているが、地域個体群に関する情報が集約されておらず、学術的根拠に基づいた選定が困難な状況が続いている。一方で、国内では孤立したニホンザル個体群がいくつも存在している。これらの多くは、客観的な存続可能性の検討が行われずに保全上の位置づけがなされ、また、農作物被害を軽減するための捕獲対象にもなっている。そこで、本サブテーマでは、大型類人猿とニホンザルの孤立個体群について、存続可能性の検討に必要な情報を収集し、データベースを構築した。また、大型類人猿のプライオリティ・ポピュレーションの選定・保全政策の立案・実証的研究の開始に向けて、予備的に個体群の存続可能性を分析した。今後、個体群の存続をおびやかす要因を考慮して存続可能性を再評価することで、具体的な保全政策の立案に結び付けることができる。さらに多くの個体群について分析が進めば、客観的な評価に基づいてプライオリティ・ポピュレーションを選定できる。ニホンザルについては、環境収容力の小さな島嶼個体群と本土の個体群における、個体群の縮小と回復の遺伝的影響を検討した。また、個体群動態パラメータの推定に使用したデータの年数や精度によって、存続可能性の評価(個体数変動の予測)の正確性がどのように異なるか検討した。これらの成果は、存続可能性を考慮したニホンザルの保全管理対策を考える際に、有用な参考情報として利用できる。

## [キーワード]

大型類人猿、ニホンザル、孤立個体群、データベース、存続可能性分析

### 1. はじめに

霊長類の多くの種において、活発な人間活動による個体群の孤立が起こっている $ ^{1),2),3)} $ 。孤立し
た小さな個体群は、近交弱勢、遺伝的多様性の消失、人口学的確率性、環境変動、カタストロフなどによって個体数が減少しやすく、絶滅のリスクが大きい $ ^{4} $ 。したがって、霊長類の保全においては、孤立個体群の保全が重要課題と言える。

全ての種が絶滅危惧種となっている大型類人猿では、ほとんどの個体群が孤立しており、効果的な種の保全のためには優先的に保全対策を実施するプライオリティ・ポピュレーションの選定が急務である $ ^{2)} $ 。プライオリティ・ポピュレーションを選定するには、各地域個体群の存続可能性と保全対策を実施した場合に見込まれる効果を検証する必要がある。しかし、地域個体群に関する情報が集約されていないため、学術的根拠に基づいたプライオリティ・ポピュレーションの選定が困難な状況が続いている。一方で、国内に目を向けると、日本の固有種であるニホンザルにおいても孤立した地域個体群がいくつも存在している。現在は分布、個体数ともに拡大中だという理由で、客観的な存続可能性の検討が行われずに保全上の位置づけがなされている（下北半島の個体群など $ ^{5)} $ ）。また、これらの多くは、農作物被害を軽減するための有害駆除の対象となっており $ ^{6),7),8)} $ 、実際の効果とは無関係に、毎年、多くの個体が取り除かれている地域もみられる $ ^{9)} $ 。このような行為が個体群の存続に及ぼす影響を危惧する声はあるものの $ ^{10)} $ 、その影響は未だ検証されていない。

## 2 ．研究開発目的

本サブテーマでは、大型類人猿とニホンザルの孤立した地域個体群について、存続可能性の検討に必要な情報を収集し、データベースを構築することを目的とした。また、大型類人猿のプライオリティ・ポピュレーションの選定・保全政策の立案・実証的研究の開始に向けて、各個体群の存続可能性を分析する。ニホンザルについては、有害駆除・個体数調整の影響を含め、個体群の存続可能性を正確に分析した上で保全管理が行われる必要がある。その助けとなるような情報を提供する。以下に、それぞれについての具体的な内容を記す。

## （１）データベースの構築

大型類人猿とニホンザルの孤立した地域個体群について、生息地に関する基礎的な事項(地形・気候・植物相など)や個体群動態、個体群存続を脅かす要因などの情報を収集し、データベースを構築する。

## （２）個体群の縮小と回復による遺伝的影響の検討（ニホンザル）

遺伝的多様性は、集団の存続に影響を及ぼす重要な要因の一つだと考えられている $ ^{11} $ 。近年、ニホンザルは人間活動によって多くの個体群が縮小と回復を経験した。島嶼や半島の孤立個体群も例外ではない。急激な有効集団サイズの縮小は、ボトルネック効果と呼ばれる極端な遺伝的浮動によって遺伝的多様性を低下させるが $ ^{11} $ 、個体群が速やかに回復する場合、突然変異によってボトルネック効果が緩和され、遺伝的多様性は比較的回復しやすいと考えられている $ ^{12),13),14),15} $ 。ただし、島嶼や半島などの環境収容力が小さい孤立個体群では、たとえ有効集団サイズが回復したとしても、突然変異が蓄積するほどの大きさでないために、ボトルネック効果の緩和はほとんど期待できず、遺伝的多様性の回復は著しく抑制されると考えられる。

宮城県石巻市金華山島の個体群は、戦中から戦後にかけて大幅な縮小を経験し、その後回復した $ ^{16} $ （図1）。ただし、環境収容力のために300個体を超えて増加したことはない（図2）。本
土側の個体群も、深刻な個体群の縮小を経験しているが $ ^{1)} $ （図1、2）、現在は個体群を拡大中である（図2）。同様の経験を持つニホンザル個体群のモデルとしてこれらの個体群に着目し、個体群の縮小と回復による遺伝的影響を検討する。

図１ 東北地方におけるニホンザルの生息域の変遷と金華山島および本土個体群。 （参考文献 $ ^{[17],18} $ ）を改変）

図２ 金華山島および宮城県本土個体群における個体数変動

●：実測値（参考文献 $ ^{[19]} $ ， $ ^{[20]} $ ， $ ^{[21]} $ ， $ ^{[22]} $ ， $ ^{[23]} $ より）◆：実測値（参考文献 $ ^{[24]} $ ， $ ^{[25]} $ ， $ ^{[26]} $ より）---：推定値

## （３）調査年数と個体数シミュレーションの正確性に関する検討（ニホンザル）

存続可能性分析では、個体群に関する複数の動態パラメータから将来の個体数をシミュレーションする。一般に、妥当な予測を得るには6年以上の調査によって動態パラメータを推定する必要があるとされている $ ^{27} $ 。しかし、ニホンザルにおいて、6年以上個体群動態が調べられている
個体群は多くない。保全管理の現場では、とくに農作物への依存が強い個体群に関しては、2～3年の調査でも十分に妥当な予測が得られるとの意見もあるようだ。そこで、数十年にわたって個体群動態が把握されている青森県下北半島のデータを利用して、調査の年数によってシミュレーションの正確性がどの程度異なるのか検証する。これらの結果から、妥当な予測を得るために必要な調査の年数を検討する。

## （４）個体群の存続可能性分析（大型類人猿）

データベースに集約した情報から、個体群動態パラメータを推定できた大型類人猿の個体群について、存続可能性を評価する。

## 3 ．研究開発方法

## （１）データベースの構築

図３　大型類人猿の対象種・地域個体群（参考文献 $ ^{3} $ を改変）

大型類人猿については、ボッソウ・ニンバ生態圈保護区（ギニア共和国、以下ボッソウ）、カリンズ森林保護区（ウガンダ共和国、以下カリンズ）、マハレ山塊国立公園・ウガラ森林保護区（タンザニア連合共和国、以下それぞれマハレ、ウガラ）、カフジ・ビエガ国立公園（コンゴ民主共和国、以下カフジ）、ムカラバ・ドゥドゥ国立公園（ガボン共和国、以下ムカラバ）のチンパンジー、ルオー学術保護区（コンゴ民主共和国、以下ルオー）のボノボ、カフジのヒガシゴリラ、ムカラバのニシゴリラ、ダナムバレー保護区（マレーシア、以下ダナムバレー）のオランウータ
ンを情報収集の対象とした（図3）。また、ガーナ共和国にもチンパンジーが生息している可能性があるため、生息状況の調査対象とした。ニホンザルに関しては、下北半島・津軽半島(青森県)、金華山島(宮城県)、淡路島(兵庫県)、小豆島（香川県）、幸島(宮崎県)、屋久島(鹿児島県)を対象とした（図4）。

図4 二ホンザルの分布と対象地域個体群（参考文献 $ ^{[18]} $ ）に加筆）

収集する情報の種類は、生息地に関する基礎的な情報(気候、地形、植生)、個体群の存続に影響を及ぼす人間活動を含めた個体群動態に関連する情報を、既存の文献から該当する記述を抽出、整理しデータベースに掲載した。ボッソウとマハレ、ウガラのチンパンジー、ダナムバレーのオランウータン、金華山島と屋久島のニホンザルについては、現地調査によっても情報収集を行った。
## （２）個体群の縮小と回復による遺伝的影響の検討（ニホンザル）

金華山島および宮城県本土側の個体群（それぞれ約40個体）から得られたマイクロサテライト8領域（D1s548, D3s1768, D6s493, D7s821, D14s306, D17s1290, D19s582, D20s484）を利用した。まず、ソフトウェアSTRUCTUREによるアサインメントテストとソフトウェアGenAlExによるAMOVAによって、個体群間の遺伝的構造を分析した。次に、両個体群の遺伝的多様性（領域ごとのアリル数・アレリックリッチネス・遺伝子多様度）を定量化した。また、ボトルネック効果の初期段階では、アリル数から予測されるヘテロ接合度よりも遺伝子多様度が高くなる（ヘテロ接合体過剰） $ ^{28),29} $ 。逆に、急激に拡大中の個体群ではその逆の現象（ヘテロ接合体過少）が起こることが知られている $ ^{28),29} $ 。本研究では、2通りの突然変異の起こり方（IAMおよびSMM）を仮定し、ソフトウェアBOTTLENECKを用いて、個体群ごとにヘテロ接合体過剰・過少を検証した。最後に、遺伝的浮動の強さは有効集団サイズに依存するので、個体群がこれまでに受けた遺伝的浮動の強さの指標として、有効集団サイズを推定した。本研究では、実際の個体数から、個体数激減の直前・直後、現在および個体群縮小以降の個体数変動を反映した長期的な有効集団サイズを推定した。また、マイクロサテライトのデータより遺伝的な有効集団サイズ(現在の遺伝的多様性に寄与する個体数)を推定した。各時期の有効集団サイズは個体数の3分の一 $ ^{30} $ 、長期的な有効集団サイズは各時期の有効集団サイズの調和平均とした $ ^{31} $ 。遺伝的な有効集団サイズの推定には、ソフトウェアONeSAMPを使用した。

## （３）調査年数と個体数シミュレーションの正確性に関する検討（ニホンザル）

下北の個体群では、現在までの約30年間、一部の群れについて個体識別に基づく調査およびセンサス調査が行われている。個体ベースおよび長期センサスのデータ（1986から個体数調整開始以前の2003年）について動態パラメータを推定し、群れのメスの個体数をシミュレーションした。さらに、長期センサスのデータから連続した2～6年のデータセットを作り、データセットごとに推定した動態パラメータをもとに、群れのメスの個体数をシミュレーションした。

個体数変動のシミュレーションには段階構造モデルを使用した。生存曲線と調査における年齢査定の精度に応じて生活史を数段階に分け（個体ベース：0 歳・1-4 歳・5-19 歳・20-23 歳・24歳以上；センサス：0 歳・1 歳以上）、調査年ごとに各段階に加入・残留する率、各段階でメスの仔を出産する率を求めた。データセットごとに、これらの平均値±SD の範囲で各パラメータをランダムに変動させ、1986年から2003年までの17年間の個体数変動を100回ずつシミュレーションした。個体数の初期値は1986年の実際の個体数とし、環境収容力や密度効果は考慮しなかった。

シミュレーションの正確性は、シミュレーション平均値が実際の個体数から逸脱している割合（逸脱割合）によって評価した。2～6年間のデータセットについては、データの年数と逸脱割合との関係を検証した。シミュレーションの正確性は調査精度の影響も受けると考えられるので、正確なカウントが出来なかった調査の数を考慮した。

## （４）個体群の存続可能性分析（大型類人猿）

ルオーのボノボ個体群について、存続可能性の予備的な分析を行った。ボノボの個体群は、1990～2000年代の社会混乱期の大規模な密猟や環境破壊によって著しく縮小した $ ^{32)} $ ， $ ^{33)} $ 。長期データ
が蓄積されている群れでも、2000年代半ばまでに17個体まで個体数が減少した $ ^{34)} $ 。この群れでは、現在は社会混乱以前の個体数レベルにまで回復している $ ^{34)} $ 。そこで、本分析では、大規模密猟の影響を除いたポノボの自然な動態パラメータ（齢別生存率・出生性比・繁殖開始齢・年間の出産率）を推定した。これをもとに、大規模密猟以前の群れの個体数をシミュレーションし、パラメータの妥当性を確認した。次に、この動態パラメータを個体群全体にも適用できると仮定して、今後50年間の個体群全体の変動をシミュレーションした（繰り返し数=100回）。現在の個体数・環境収容力、生存・繁殖における密度効果については既存文献に基づいて決定した。シミュレーションにはソフトウェア VORTEX を用いた。

## 4 ．結果及び考察

## （１）データベースの構築

対象とした個体群のすべてにおいて、データベースを構築し公開できた（http://www.wrc.kyoto-u.ac.jp/PIP/index.html：図5、6）。長期研究が行われているチンパンジーの個体群（カリンズ・ボッソウ・マハレ）とボノボの個体群（ルオー）、ニホンザルの個体群（下北半島、金華山島、幸島）については、存続可能性分析に必要な動態パラメータに関する情報（表1、図7）を掲載できた。また、サブテーマ1によって、初めて明らかになった野生のボノボの遺伝的空間構造についてもデータベースに加えることができた。しかし、詳細な情報が欠如している個体群も多かった。効率的な保全管理のためには、現地調査によって存続可能性評価に耐えうるだけの情報の収集、蓄積が緊急の課題と言える。

図5 構築したデータベースのウェブサイトのトップページ
# Primate Isolated Populations Primate Isolated Populations

Source
Long-term study period	1965-present	[62]
The park area ( $ km^{2} $ )	1613	[63]
Population density (individuals/ $ Km^{2} $ )	0.41-0.44	[63]
Provisioning Period	1965-1986
Coordinated or personal	Coordinated	[64]
Part or whole of the population	Part
Conservation	1975 - present	[64]

[62] Itani J. (2002) Preface. In: Nishida T., Uehara S. & Kawanaka K. (ed.) The Mahale Chimpanzees: Thirty-seven Years of . Kyoto University Press, Kyoto (in Japanese)

[63] Idani G. (2009) Research on distribution and density of grate apes. In: Final Report: Search for measures to prevent the extinction of the great apes based on natural and social sciences, Global Environment Research Fund 2006-2008, Ministry of Environment, Tokyo. pp. 1-13 (in Japanese)

[64] Nishida T. (2002) The short history of research in Mahale. In: Nishida T., Uehara S. & Kawanaka K. (ed.) The Mahale Chimpanzees: Thirty-seven Years of . Kyoto University Press, Kyoto (in Japanese)

Distribution of unit groups in 1975, drown from source [67]

[67] Norikoshi K. (2002) Vegetation and ranging pattern in Kasoge region: changes during twenty years around establishment of national park. In: Nishida T., Uehara S. & Kawanaka K. (ed.) Thr Mahale Chimpanzees: Thirty-seven Years of . Kyoto University Press, Kyoto

Demographic change (csv), Life Table (csv), Causes of mortality (csv), Female reproductive parameter (csv)

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図6 収集した情報の公開例

(マハレのチンパンジ一個体群についてのページの一部)
表 1 存続可能性分析に向けて情報収集した項目

繁殖パラメータ	繁殖における環境変動
繁殖開始齢
繁殖可能な最高齢
1回の最大産子数
出生個体の性比
密度依存繁殖
繁殖率	繁殖可能なメスの割合
繁殖可能なメスの割合の変動
齢別死亡率
捕獲	捕獲個体数
捕獲個体の性・年齢
カタストロフ	生起頻度
繁殖率・生存率の低下
環境収容力

Cohort life table for M group chimpanzees during 19 years (1980-1999)

x	$ Nx^{*1} $	$ dx^{*2} $	$ cx^{*3} $	$ qx^{*4} $	$ lx^{*5} $
0	152	53	0	0.34868	1.00000
1	99	24	8	0.25263	0.65132
2	67	9	1	0.13534	0.48678
3	57	7	3	0.12613	0.42090
4	47	1	2	0.02174	0.36781
5	44	3	0	0.06818	0.35981
6-10	178	7	11	0.04058	0.34521
11-15	79	3	9	0.04027	0.32940
16-20	38	1	4	0.02941	0.31614
21-25	20	1	1	0.05128	0.30684
26-30	11	0	2	0	0.29111

$ ^{*1} $ The total number of individuals included in the specific age interval, from age x to age $ x+1 $

$ ^{*2} $ The total number of individuals that died between specific age intervals

$ ^{*3} $ The total number of individuals that emigrated from the group between specific age intervals

$ ^{*4} $ Annual mortality rate between specific age interval, calculated from the equation dx(Nx-cx/2)

$ ^{*5} $ Survival rate between birth and specific age x

## Source:

図7 収集した情報の公開例