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## (2) 高選択性分離膜の開発と実用化に関する研究

京都府立大学 大学院生命環境科学研究科 応用生命科学専攻 細矢 憲

京都大学 大学院工学研究科 材料化学専攻 久保 拓也

（株）力ネカ R&D企画部 井上 健二

平成20～24年度累計予算額：20,545千円

（うち，平成24年度予算額：2,409千円）

予算額は，間接経費を含む。

平成20年度まではナノテクノロジーを活用した環境技術開発推進事業予算にて実施。

## [要旨]

最初に，分子インプリント法に基づき，溶媒インプリント法を用いることで，揮発性有機化合物を選択的に吸着する架橋ポリマーを基材にした分子認識材料の開発に成功した。

次に，環境分析および生体試料分析における新規分離剤として，エチレン-酢酸ビニル共重合体（EVA）から調製されるスポンジモノリスを適用し，分離剤のクロマトグラフィー特性の解明と化学修飾による選択性付与の検討を行った。

さらに，ポリ塩素化ビフェニル（polychlorinated biphenyl : PCB）やダイオキシン類などの，塩素を含む芳香族化合物の分析前処理として，日本の多くの公定法に採用されている，ジメチルスルホキシド（DMSO）分配による抽出精製方法（以下，DMSO処理）に代わる前処理を可能にする固相カラムを開発した。

次に，高親水性物質，特に残留医薬品を含むPPCPs関連物質の効率的な分析を目的として，官能基間距離固定化法を用いて分子鋳型を合成し，評価した。その結果，選択的分子認識能に基づく効果的な濃縮が達成され，実河川試料中の抗うつ剤の高感度分析を実現した。

また，光触媒の酸化チタンに同手法を適用することで，天然毒物の選択的吸着・分解を可能とする光触媒ハイブリッド材料の開発に成功した。

次に，分子銹型と多孔性膜とのハイブリッド化技術について，機能性ポリマー粒子（イオン交換樹脂）とスポンジモノリスのハイブリッド化技術を確立させるとともに，ハイブリッド化後の粒子の機能性を検証し，高流速化における吸着性能を実証した。

最後に，ヒドロゲルを利用した分子認識技術の可能性を見出し，擬似分子鋳型を用いる分子インプリント法をヒドロゲルに適用することで，特定のタンパク質を選択的に吸着し，特異的に体積変化する機能性材料の開発にも成功した。

[キーワード] 擬似分子鋳型，官能基間距離固定，ポリ塩素化ビフェニル，医薬品およびパーソナルケア製品，スポンジモノリス
### 1. はじめに

## （１）難捕捉有機分子に対する疑似分子鋳型についての検討

## 1 ）揮発性有機化合物の選択的吸着に関する研究

これまでガス状物質に対する選択的捕捉については，検証が成されていなかった。現在，自動車の排気ガス，工場からの排煙など，大気汚染も深刻となっており，人体に重大な悪影響を及ぼす恐れがある。そこで，大気中から選択的に特定の汚染物質を除去する技術が求められている。

## 2 ）スポンジモノリスの調製と保持特性

環境問題への関心の高まりと共に，河川や湖沼，海洋での有機物質による汚染が問題視されている。これらの汚染有機物質は極めて微量で生態系に影響を与えることが懸念されており，汚染状況を頻度高くモニタリングすることは，リスク管理の面からも非常に重要性が高い。環境水中の汚染有機物質の例として，BPAやE2，PAHs等，非常に多くの物質が問題となっている。さらに近年では河川に流出した医薬品が下水処理場の活性汚泥法で除去されずに河川に流出し，新たな環境問題を引き起こす要因となっている $ ^{1} $ 。

この様な多種多様な環境水中の汚染物質をモニタリングするためには，信頼性の高い高速，高感度な分析手法の開発が必要であり，定量下限値の目安として10 ng/L（ppt）程度の微量濃度が安定して測定できる分析システムが必要となる。現在までに環境水中の微量汚染物質を定量する方法として，主にHPLCが用いられている。近年，HPLCは質量分析計と組み合わせ，測定感度や測定対象物選択性が大きく向上した。しかし，グローバルな意味での環境モニタリングを行うという観点から，汎用装置の利用は大きな意味を持っている。環境水中の有機汚染物質濃度は極めて低く，試料には多くの夾雑成分が含まれるため，汎用装置でのモニタリングを可能にするには，前処理による選択的な濃縮も必要である。一方で前処理操作は環境分析で求められる分析コストや実験者の人的負担を増加させる要因となりやすく，大量の試料の連続処理が可能で，かつ高速処理可能な高選択性分離剤の開発は上記の分析コストの削減や多検体処理の問題を解決し，環境科学の発展に貢献しうる研究課題である。

現在までに前処理法として固相抽出（Solid Phase Extraction, SPE）法が広く用いられ，盛んに研究されている $ ^{2)} $ 。SPE法に用いられる分離剤は，粒子充てん型とモノリス型に大別される。粒子充てん剤（図(2)-1a）はもっとも広く用いられる分離剤であり，数nmのメソポアを有し，比表面積が大きい特徴を持つ。この粒子を充てんしたカラムにおいて，より高性能の分離を行うためには，分離剤粒子径を小さくする必要がある。しかし粒子径の減少は通液に伴うカラム圧力の上昇をもたらすため $ ^{3)} $ ，分離性能の向上には限界があり，前処理用分離剤としては粒子径50-200 μm程度の粒子が用いられている。また均一サイズの粒子径を持つ粒子充てんカラムは，高い分離性能を持つが，均一な粒子を得るために一般に長時間の分級操作が必要であり，分離剤コストの上昇要因となっている。さらに粒子充てん型カラムはカラムへの充てん操作が煩雑であり，合成，充てん操作自体のコストや，経験的充てんノウハウ開発にかかる研究費用は

a）粒子充てん型

b) モノリス型

図(2)-1 既存分離剤のSEM写真
全て前処理剤のコストに反映される。環境分析に必要なスケールアップについても，大きな外とうと大量の粒子を用いることで理論上可能であるが，大量合成・分級操作の煩雑さや，スケールアップによる負荷圧上昇の問題等から，粒子充てん型分離剤のスケールアップは実用的ではない。

次に3次元の立体網目構造を持つモノリス型メディア（図(2)-1b）は，近年多くの研究者により報告され $ ^{4)} $ -6)，粒子充てん型カラムで実現困難な高い分離効率と高速送液を両立させた分離剤として注目されている。モノリス型分離剤は数μmサイズの貫通孔を持ち，粒子空隙を流路とする粒子充てん剤と比較して通液性が良い分離剤である。分離基材としてシリカモノリスやポリマーモノリスが利用できるが，特にシリカモノリスカラムは細い骨格に基づく高理論段数を利用して，迅速分析や生体試料の二次元クロマトグラフィーにも用いられている。しかしながら，モノリス型分離剤は孔径が10μmを超える大きな貫通孔を合成することが困難であり，通液性の向上については限界がある $ ^{7)} $ 。またモノリス型分離剤は相分離現象を利用して合成されるが，その重合速度や相分離速度は精密に制御する必要があり，合成のスケールアップの際に均一な構造を得ることは困難である。さらにモノリス型分離剤では，反応後に基材全体が収縮するため，合成後の成形性が低く，外とうへの充てんも困難である。

これら上述の問題を克服すべく，Kuboらが報告したスポンジモノリスは高い通水性を持ち，環境試料の分離・分析分野における新規高機能分離媒体として製品化が期待されている $ ^{8)} $ 。スポンジモノリスは汎用の熱可塑性ポリマーであるエチレン-酢酸ビニル共重合体（EVA）の多孔体であり，孔径が数十μm程度の大きな連通孔を持つため，高流速・低負荷圧で通液可能な媒体である（図(2)-2）。

(a): 外観写真 (4.7 mm i.d.),

(b): SEM写真 $ (\times500) $

図(2)-2 エチレン-酢酸ビニル共重合体スポンジモノリスの外観とSEM写真

また，スポンジモノリスは安価であり，合成の再現性にも優れている。さらに柔軟性なスポンジモノリスはカラムやカートリッジなどの外とうへの充てんも他の分離剤よりも容易である。このスポンジモノリスが環境用途の分離剤として実用できれば，環境科学分野及び生体分野における前処理や精製の諸問題の多くが解決可能であると考えられる。例えば，分離剤を環境モニタリングが必要な現場に持参し，オンサイトで目的物質を分離剤に吸着させた状態で試験機関に輸送すれば，実験者は大量の環境水試料の輸送業務から開放される。また高度な分析機器を持たない発展途上国の現場試料を我が国へ輸送し，高感度分析を行うなど，新たな分析ビジネスモデルの創出も期待できる。しかしEVA スポンジモノリスは，今までに分離媒体として用いられたことのない材料であり，分離基材のクロマトグラフィー特性については解明されていない。このような新規分離剤は環境分析に適した有用な分離選択性を保有しているものと期待され，そのクロマトグラフィー特性を評価することは重要である。そこで本研究では高速・高選択性と低コスト・低環境負荷を実現する新規多孔性高分子を開発し，広く普及しているクロマトグラフィー的手法を高性能化することを目標として，分離剤のクロマトグラフィー特性の解明と化学修飾による選択性付与の検討を行った。さらにスポンジモノリスを分離剤として環境試料や生体試料の分離に適用し，実試料への有用性の評価を行った。
## 3 ）PCBの選択的分離を目的としたスルホキシド含有型分子インプリント固相剤の開発～油中PCBの捕捉について～

環境中に存在する有機化合物の分析方法において，目的成分の分析は，各種媒体の共存物質が妨害となる場合が多く，選択的な抽出や精製に多くの時間と労力を費やしているのが現状である。特にPCBやダイオキシン類などのハロゲン元素の一つである塩素を含む芳香族系の有機化合物の分析方法において，前処理方法として，油分の多い試料からの分離精製には，DMSO処理が日本の多くの公定法に採用されている（表(2)-1）。

DMSO処理は，一般的に低極性の脂肪族炭化水素の除去を目的に使用することが多い。他の前処理操作とは異なり，単独での分画効果はないため確実な前処理のためには，他の精製方法との組み合わせが必要となっているのが現状である。

表(2)-1 日本におけるPCB分析の公定法

水質	JIS K0093（水質）	土壤	底質	廃棄物（廃油）
制定日	昭和46年（環境水）昭和49年（排水）平成9年（地下水）	1974年（平成18年改訂）	平成3年	昭和61年（平成13年改訂）	平成10年（平成12年）
事前調製	なし	ろ過	粉砕・風乾・溶出	風乾・アルカリ分解	なし
抽出	ヘキサン抽出（液液）	ヘキサン抽出（液液・固相）	ヘキサン抽出（液液）	ヘキサン抽出（液液）	DMSO分配抽出，ヘキサン抽出
精製	アルカリ分解，シリカゲル処理	アルカリ分解，シリカゲル処理，ケイ酸マグネシウム処理	アルカリ分解，シリカゲル処理	硫酸処理，シリカゲル処理	硫酸処理，アルカリ分解，シリカゲル処理，多層シリカゲル処理
機器分析	LRGC(ECD)	GC(ECD) GCLRMS	LRGC(ECD)	GC(ECD) GCMS	GC/HRMS

このDMSO処理を固相カラムによる前処理で対応可能となると，分析における前処理の効率化につながり単位時間あたりの処理検体数の増加につながる。これは，環境モニタリングのような短期間の大規模調査等に大きく役立つと考えられる。また，近年増加している新規化学物質においても類似な構造を持つ有機化合物が多く存在し，適用範囲は広がると考えられる。

## （２）難捕捉高親水性物質に対する疑似分子鋳型についての検討

## 1 ）高親水性化合物のためのトラップ層開発の検討

近年，PPCPsの環境中への流出が問題になっている。PPCPsの中には下水処理場で処理されない物質も存在し，環境中にそのまま排出される。PPCPsは生理活性を持つ物が多く，環境中では低濃度ながら生態系への影響が懸念されている。また，水系環境中の動物を介した薬剤耐性菌の発生
も懸念されている。そのような背景より，PPCPsの挙動に関する知見が早急に求められているが，PPCPsは様々な夾雑物を含む環境水中で低濃度で存在しており，そのような物質の分析は通常多くの手順や時間を必要とし，困難とされている。そのため，これらのPPCPsのための選択的な分離・濃縮を可能とする分離剤の開発が求められている。

## 2 ）官能基間距離認識による高親水性化合物の選択的分離に関する研究

近年，揮発性有機化合物，ダイオキシン類 $ ^{9} $ などに代表される人工化学物質，あるいはミクロシスチン，サキシトキシンなどの生物由来の天然毒物 $ ^{10} $ $ ^{11} $ が環境汚染物質として問題となっている。これらの環境汚染物質は極微量でも生体に影響を及ぼすため，環境保護やリスク管理の点から，高感度な定量分析や効率的な除去に寄与する分離・分析技術の開発が急務である。そこで，上述のような物理的・化学的性質の異なる環境汚染物質を選択的に吸着・分離する分離材料の開発が求められている。また，同様の分離材料は，精製が困難な抗体医薬品の単離，生体試料中の特定成分の定量等にも応用可能で，バイオ分野への展開も期待できる。

一方，特定の分子を選択的に吸着する方法として，分子インプリント法を用いる分子銹型が注目されている。分子インプリント法は文字通り特定の分子や官能基の配置を架橋ポリマーに転写し，人工レセプター様の分子認識能を獲得する手法である $ ^{12)13} $ 。同法では，比較的簡単な操作で選択的な分子認識能を得ることができるため，固相抽出担体，センサー材料など種々の応用研究が報告されている。しかしながら，一般的な分子インプリント法にはいくつかの問題点があるため，毒性物質や希少な物質，特異的な官能基を持たない物質，高親水性化合物や構造柔軟性化合物など多くの環境汚染物質に従来の分子インプリント法を適用できない。そこで，これらの問題点を克服する応用技術が求められている。

## 3 ）残留医薬品の分析前処理を目的とした分子鋳型の開発

河川，湖沼等の水環境試料中の残留医薬品やその代謝物（PPCPsを含む）による環境汚染が近年問題となっており，リスクマネージメントの観点から，PPCP関連物質の環境モニタリングが求められている $ ^{14)-19} $ 。一方，これらの医薬品類は，一般的に親水性が非常に高いため，通常の疎水性を利用する分析前処理では濃縮が困難であり，低濃度の残留医薬品を定量的に検出することとは容易ではない。そこで，分析前処理段階における効率的な濃縮に寄与する新規分離媒体の開発が必要とされている。

## 4 ）光触媒ハイブリッド分子認識材料による高親水性化合物の選択的吸着・分解に関する研究

一般的な分子インプリント法にはいくつかの問題点があり，その問題点を克服する応用技術が求められている。その解決法の1つとして，光触媒の酸化チタンに分子インプリント法を適用することで，天然毒物の選択的吸着・分解を可能とする光触媒ハイブリッド材料の開発が求められている。

## 5 ）多孔性膜と分子鋳型のハイブリッド化技術に関する検討

環境汚染物質の効率的な除去技術開発は，現在の環境汚染問題を解決する上で必要不可欠である。特に，汚染源からの直接的な汚染物質の除去が達成されれば，現在の問題が大きく改善され
る $ ^{20)-23)} $ 。一方で，既存技術では上記を達成できる手法はなく，主として活性炭を用いた網羅的な除去技術が主とされる。しかし，活性炭処理では，吸着に対する選択性がないため，吸着剤自身の吸着飽和がおこり，コスト面から見ても効率的ではない。そこで，本研究では，通水性に優れる連通多孔体 $ ^{24)-26)} $ と分子認識能を有する擬似分子鋳型（ポリマー粒子）のハイブリッド化を行うことで，実用性のある新規環境浄化膜の開発を目的とする。このようなハイブリッド体を用いる研究は他に例が無く，極めて独自性の高い研究であると言える。

先の結果では，シリコーン発泡体，擬似分子鋳型粒子のハイブリッド体合成において，粒子含有率25%程度までのハイブリッド体合成に成功したが，シリコーン基材の耐溶媒性の問題や，性能の低さから，実用性が見いだせないことがわかった。このため，EVA基材の連通多孔体に対して，新たな手法によるハイブリッド化を行い，その評価を行った結果，連通多孔体の細孔表面に粒子が効率的に化学結合する手法が見いだされ，さらに，その機能はこれまでのハイブリッド体に比べて飛躍的に高いことが明らかとなった。さらに基材となる多孔体の種類，同時に，その重合方法を変化させ，ハイブリッド化させる粒子の存在状態とその粒子の機能性の変化について検討した。ハイブリット体の基礎的検討として，種々のハイブリッド体を作製し，BPAバッチ吸着実験を行い評価した。

また，続けて分子選択的な吸着・分離能を有する分子銹型と高通水（気）性を有する多孔性膜とのハイブリッド化技術を確立し，環境汚染物質の効率的な除去技術に寄与する新規高選択性分離膜の開発を目指した。上記の結果から，ポリメタクリレート系のポリマー粒子，EVAを基材とする多孔性膜のハイブリッド化が有効であることが示された。そこで，ハイブリッド化の原理を検証すると共に，機能性粒子とのハイブリッド化，その機能評価について検討した。図(2)-3に，本研究の概念図を示した。

図(2)-3 多孔性膜と分子鋳型のハイブリッド化のイメージ図
## 6 ）距離認識を利用した伸縮性ヒドロゲルの開発とタンパク質の選択的吸着に関する研究

近年，特定の分子を選択的に吸着する人工的な分子認識材料の開発法である分子インプリント法をタンパク質などの生体高分子やウイルス，組織といった生体試料への応用が試みられている。同法で合成した分子インプリントポリマーは，抗体固定化材料などに比べて安価で化学的安定性が高く，簡便かつ短時間で合成できるため，分離剤，透析膜，バイオセンサーやアフィニティークロマトグラフィーなどへの応用が期待されている。しかしながら，タンパク質をターゲット分子とする場合，以下のような問題点が挙げられる。1点目に，分子インプリント法では非水系の架橋剤，機能性モノマーを用いることが一般的であるが，タンパク質は折りたたみ構造のために変性しやすく，重合の際に安定な天然状態を保つことが困難であることが挙げられる。2点目に，タンパク質表面に電荷を持つ官能基が多く存在し，非特異的な相互作用を低減する必要があることが挙げられる。3点目に巨大分子のため，架橋反応の後に鋳型分子を除去することが困難であることが挙げられる。そこで，これらの問題点を克服する新技術の開発が求められている。

## 2 ．研究開発目的

## （１）難捕捉有機分子に対する疑似分子鋳型についての検討

## 1 ）揮発性有機化合物の選択的吸着に関する研究

本研究において，はじめに，溶媒インプリント法を用いて気体試料である揮発性有機化合物（VOC）に対して選択的吸着能を示す架橋ポリマー基材の分子認識材料を合成し，手法の有効性および機能性モノマーを加えることによる選択性の向上に関して検討した。

## 2 ）スポンジモノリスの調製と保持特性

高通液性と低コストを実現する分離剤として，EVAから調製されるスポンジモノリスを分離剤として適用し，そのクロマトグラフィー保持特性を評価した。得られた結果より，スポンジモノリスに適した分離対象物質の選出とその環境並びに生体分野における応用について検討した。

さらに，高い通液性を確保すると同時にターゲット分子に対する選択的濃縮機能を発現させることを目的として，スポンジモノリス表面へのイオン交換基の導入方法を検討した。この化学修飾スポンジモノリスが高流速で使用した場合でも，安定した保持能を示し，高選択性ハイスループット分離剤として使用可能かを評価した。スポンジモノリスの新規分離剤としての保持特性を解明した後，製品化を目的とした応用についても検討した。

## 3 ）PCBの選択的分離を目的としたスルホキシド含有型分子インプリント固相剤の開発～油中PCBの捕捉について～

DMSO分配による前処理は，非常に操作が複雑であり，回収率が低いため，繰り返し操作を行わなければならないことや操作に熟練を要することが知られている。

沼田らは，DMSOに含まれるスルホキシドをシリカゲル基材に付加した新しい固相剤を開発し，DMSO分配処理を固相抽出の操作によりできるという手法を発表しており，この成果をもとにした固相剤も市販されている。

本研究は，このスルホキシドをシリカゲル以外のポリマー基材に付加させた新たな固相抽出剤
の設計を試み，PCBの分離を得られる固相剤を設計・合成し，DMSO分配処理の代替方法として適用可能か検討を行った。

合成した固相剤について，コプラナーPCB（ダイオキシン様PCB）を含む31種類のPCB異性体についての検討を行った。特に，図(2)-4に示すnon-ortho-PCB（2,6位に塩素が付加していないPCB）について考察した。

non-ortho

#81 3,4,4',5-Tetrachlorobiphenyl

#77 3,3',4,4'-Tetrachlorobiphenyl

#126 3,3',4,4',5-Pentachlorobiphenyl

#169 3,3',4,4',5,5'-Hexachlorobiphenyl

mono-ortho

#123 2',3,4,4',5-Pentachlorobiphenyl

#118 2,3',4,4',5-Pentachlorobiphenyl

#105 2,3,3',4,4'-Pentachlorobiphenyl

#114 2,3,4,4',5-Pentachlorobiphenyl

#167 2,3,3',4,4',5-Hexachlorobiphenyl

#156 2,3,3',4,4',5'-Hexachlorobiphenyl

#157 2,3,3',4,4',5,5'-Hexachlorobiphenyl

#189 2,3,3',4,4',5,5'-Heptachlorobiphenyl

図(2)-4 ポリ塩素化ビフェニルの構造

## （２）難捕捉高親水性物質に対する疑似分子鋳型についての検討

## 1 ）高親水性化合物のためのトラップ層開発の検討

本研究では，親水性化合物の分析の前処理としての，目的の物質の効率的な捕捉・濃縮を可能にする，新しい分離媒体の開発を親水性表面修飾を用いて検討した。

## 2 ）官能基間距離認識による高親水性化合物の選択的分離に関する研究

高親水性の天然毒物の選択的分離を目的とし，官能基間距離固定化法を用いて架橋ポリマー基材の分子認識材料を合成し，距離認識の有効性について評価した。

## 3 ）残留医薬品の分析前処理を目的とした分子鋳型の開発

本研究では，PPCPsの選択的な捕捉技術開発を目的として，本プロジェクトで研究を進めてきた官能基間距離固定化法 $ ^{27)(28)} $ を利用して，PPCPsに対して選択的吸着を可能とする新規前処理剤の開
発を目指した。先の報告で，PPCPsの1つであるメトクロプラミド（MCPA）の選択的吸着を試みた結果，認識部位を導入していない場合，MCPAは，基材の極性に関わらず，ほとんど吸着が確認されなかった。一方で，基材表面に距離固定を行うことにより，MCPAに対する選択性が増加することが観察された。そこで，距離固定したポリマーを合成し，様々な条件でMCPAやイオン性化合物に対する吸着性能の評価を行い，距離固定による選択的捕捉が実現可能であるか検討した。

さらに，国内の水環境中で比較的高濃度で検出されている抗うつ剤，スルピリドを対象物質として，分子鋳型に基づく分離剤を合成し，その分析前処理剤としての効果を評価した。一般的な分子インプリント法で得られた分離剤（sulpiride-MIP）および官能基間距離認識に基づく分離剤（I-MIP，図(2)-5参照）をそれぞれ合成し，HPLC用充てん剤として評価することで，分離選択性を比較した。また，SPE剤としての可能性を評価するために，各分離剤充てんカートリッジでのスルピリドの吸着選択性を種々の溶媒を用いて比較した。さらに，実試料分析として，I-MIPを分析前処理カラムとして導入したオンラインSPE-HPLCシステム $ ^{29)-31} $ を用いて河川試料中のスルピリドの定量を試みた。

本検討では，河川中のPPCP関連物質のモニタリング指標にもなり得るスルピリド $ ^{32)-36)} $ をターゲット物質として，オンラインSPE-HPLCシステムにおける分析前処理でのpptレベルの高感度分析を目的として，新規に分子鋳型を合成しその基礎的な保持選択性および前処理剤としての可能性を評価した。分子鋳型の合成には，一般的に用いられる分子インプリント法および当プロジェクト内で提唱した官能基間距離固定化法の2種類の手法を利用した。得られた分子鋳型をHPLCを用いて評価し，スルピリドに対する潜在的な分子認識能を知るとともに，特に，官能基間距離固定化法で得られた分子鋳型を用いて，オンラインSPE-HPLCシステムで実試料分析を目指した。

図(2)-5 スルピリドに対する距離認識型分子鋳型の概念図

## 4 ）光触媒ハイブリッド分子認識材料による高親水性化合物の選択的吸着・分解に関する研究

光分解機能を有する酸化チタンに官能基間距離固定化法を適用することで，選択的吸着・分解能を示す光触媒ハイブリッド分子認識材料を合成し，吸着・分解性能について検討した。
## 5 ）多孔性膜と分子鋳型のハイブリッド化技術に関する検討

擬似分子鋳型ハイブリッド膜の開発について，種々の基材多孔体を用いてハイブリッド体を合成し，擬似分子鋳型とのハイブリッド化に最適な条件を見いだすことを本研究の目的とした。

また，EVAを基材とする多孔性樹脂（以下スポンジモノリス）を支持媒体として，ポリマー粒子とのハイブリッド化の形成メカニズムについて評価した。メタクリレート系，dyvinylbenzene（DVB）系の架橋高分子，グラファイトカーボンをハイブリッド化させ，粒子の担持を確認した。さらに，ポリマー粒子のうち，効率的なハイブリッド化が確認された，メタクリレート系の粒子にイオン交換能を付与し，同じくハイブリッド化を確認し，加えて，イオン交換能を定量的に評価した。これらの評価では，ハイブリッド化のメカニズム検証と実証試験を見据えたハイブリッド膜の機能性評価を目的とした。

## 6 ）距離認識を利用した伸縮性ヒドロゲルの開発とタンパク質の選択的吸着に関する研究

ポリエチレングリコール基材の伸縮性ヒドロゲルを合成し，距離認識による体積変化の挙動，さらに，タンパク質に対する吸着性能および特異的な体積変化に関して詳細に考察した。

### 3. 研究開発方法

## （１）難捕捉有機分子に対する疑似分子鋳型についての検討

## 1 ）揮発性有機化合物の選択的吸着に関する研究

### a. 試薬

用いた試薬および溶媒は，特に断らない限り，市販品をそのまま使用した。実験に使用した水は，Milli-Q純水製造装置（Gradient-A10）を用いて精製した。また，HPLCにおける移動相は全てLC/MS gradeの溶媒を用いた。架橋剤のethylene glycol dimethacrylate (EDMA), divinylbenzene (DVB), glycerol 1,3-dimethacrylate (GDMA)と機能性モノマーのmethacrylic acid (MAA)は和光純薬工業株式会社（Osaka, Japan）から購入し，減圧蒸留により精製した。

### b. 揮発性有機化合物の選択的吸着に関する研究

## i．溶媒インプリント法を用いたインプリントポリマーの合成

架橋剤，ターゲット分子としての多孔質化溶媒，開始剤の2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile)(ADVN)をガラス瓶に加え，1時間かく拌した後，5分間窒素置換した。窒素置換後，ガラス瓶を50℃の湯浴に浸漬し，24時間重合した。重合後，得られた架橋ポリマーを粉砕機で粉砕し，106-212μmに分級した。得られた架橋ポリマーをmethanol, acetoneで洗浄することによって多孔質化溶媒や未反応の化合物を除去し，最後に60℃で減圧乾燥し，目的とするporogen imprinted polymer (PIP)を得た。合成したPIPの略号は次の通りに定義した。Chl-ED50は多孔質化溶媒としてchloroform，架橋剤としてEDMAを用い，全体積に占める架橋剤の体積比が50%であることを指す。また，その他の試薬の略号はbenzene (Ben), toluene (Tol), GDMA (GD), DVB (DV)とする。

## ii．鋳型分子，機能性モノマーを加えたインプリントポリマーの合成

合成時に鋳型分子，機能性モノマーを加え，iと同様の方法でGas-MIPを合成した。また，比較
として鋳型分子，機能性モノマーを加えないコントロールポリマー(Cont.P)，鋳型分子のみを加えないnon-imprinted polymer (NIP)も同様の方法で合成した。合成したGas-MIPの略号は次の通りに定義した。Tol-MIP（1）は多孔質化溶媒としてtolueneを用い，機能性モノマーのMAAが架橋剤の10vol%であり，鋳型分子を含むMIPであることを指す。また，その他の試薬の略号はpyridine (Pyri)とする。

### c. 気相中の揮発性有機化合物に対する吸着性能評価

乾燥した架橋ポリマーを一定量ガラス瓶に加え，VOCが飽和したデシケータ内に静置した。一定時間毎に重量変化を測定し，VOCに対する吸着量を評価した。また，VOCを混合した際の吸着実験方法は以下に示す。

乾燥した架橋ポリマーをガラス瓶に加え，3種類のVOC (chloroform/benzene/toluene = 1/1/1, v/v/v) が飽和したデシケータ内に静置した。3時間後，架橋ポリマーに吸着したVOCをmethanol 10 mLで抽出した。抽出液中のbenzene, toluene量をHPLCで定量し，全吸着量（重量）からbenzene, toluene量を引くことで，chloroformに対する吸着量を算出した。また，評価に用いた相対吸着率の算出式を（2.1）に示す。

### 相対吸着率 = 各気体の吸着量 / 全気体吸着量 (2.1)

また，iiで合成したGas-MIPの各VOCに対する吸着実験は上記と同様の方法で行った。一方，toluene, pyridineを混合した際の吸着実験は常圧ではなく減圧下で行った。詳細を以下に示す。乾燥した架橋ポリマーをガラス瓶に加え，toluene, pyridine (1/1, v/v)が飽和したデシケータ内に静置し，ダイヤフラムポンプを用いて60 Torrに調整した。48時間後，架橋ポリマーに吸着したVOCをmethanol 1.0 mLで抽出し，HPLCを用いてpyridineとtolueneに対する吸着量を算出した。benzene, toluene, pyridineのHPLC条件は以下に示す。

## HPLC Condition

Column, Mightysil RP–18 GP (150 × 4.6 mm i.d.); Flow rate, 0.5 mL/min; Mobile phase, 60% acetonitrile aq.; Temperature, 40 °C; Injection volume, 1.0 μL; Detection, photo diode array (PDA).

## 2 ）スポンジモノリスの調製と保持特性

### a. スポンジモノリスの合成

基材ポリマーであるEVA約21 wt%，孔型剤となる水溶性の高分子（pentaerythritol）64 wt%及び15 wt%の助剤（poly(oxyethylene, oxypropylene) triol）と共に130℃で熱溶解し，混練したのち，外径4.7 mmの円柱状に射出成形した。成形後のポリマーロッドは50% methanol中に浸漬し，減圧下で超音波振とうを行い，水溶性孔型剤を洗浄除去した。得られた高分子多孔体をさらに減圧乾燥し，スポンジモノリスを得た。合成のスキームを図(2)-6に示す。
polymer : pore template = 25:75 (v:v)

図(2)-6 EVA スポンジモノリスの合成スキーム

### b. スポンジモノリスの加水分解

300 mL ナスフラスコに6.0 M NaOH aq. 150 mL, methanol 150 mL 及びスポンジモノリスを加え，減圧下で5分間超音波処理を行った。次にフラスコ内に窒素を封入し，オイルバス中，65℃で24時間加熱還流を行った。反応後，ポリマーを取り出して50%methanol，水で超音波洗浄した後，再度50%methanol溶液に浸漬して12時間かく拌した。得られたポリマーモノリスをmethanolで洗浄し，減圧乾燥して加水分解スポンジモノリスを得た（EVA-HYD）。加水分解の反応スキームを図(2)-7に示す。

図(2)-7 EVAスポンジモノリスの加水分解

### c. スポンジモノリスカラムの充てん

スポンジモノリスのカラムへの充てん方法を図(2)-8に示す。カラム内径よりも大きい約4.8 mmの外径を持つスポンジモノリスの末端を熱収縮チューブにより加熱接続した。次にスポンジモノリス全体をmethanolに浸し，熱収縮チューブの末端を内径4.6 mmのステンレスカラムに通した後，そのまま引き込んでスポンジモノリスをカラム内に導入した。この状態でカラムをacetonitrileに浸し，約20分間超音波処理を行った後，両端の余剰スポンジモノリスを切断し，エンドジョントを取り付けてHPLCカラムとした。
図(2)-8 スポンジモノリスカラムの充てん法

### d. スポンジモノリスカラムのHPLC評価条件

評価を行ったスポンジモノリスカラムを以下に示す。カラムサイズは特に付記しない限り，内径4.6 mm，長さ100 mmサイズとし，流速，移動相組成，検出条件等の詳細は図表に付記した。

【スポンジモノリスカラム】

EVA25；酢酸ビニル含量25%のEVAスポンジモノリス

EVA15；酢酸ビニル含量15%のEVAスポンジモノリス

EVA25-HYD；EVA25を加水分解したスポンジモノリス，PE；ポリエチレンスポンジモノリス

## 【粒子充てんカラム】

EDMA ; EDMAを架橋剤モノマーとして合成したポリマー粒子カラム

GDMA ; GDMAを架橋剤モノマーとして合成したポリマー粒子カラム

Sil- $ C_{18} $ ；オクタデシルシリル化シリカゲル粒子カラム

逆相クロマトグラフィーにおけるSilica-C_{18}カラムの分離機構は詳細に解明されており，特定のクロマトグラフィー条件でカラムを評価することで充てん剤の合成で用いられたシリル化剤の官能性やエンドキャップの有無，基材シリカゲルの純度等多くの情報が得られる $ ^{37)} $ 。ここでは表(2)-2に示すSilica-C_{18}カラムの評価に用いられる分析条件により，スポンジモノリスカラム分離剤の疎水性，立体選択性及び水素結合性の評価を行った。また評価に用いた溶質の化学構造を図(2)-9に示す。
表(2)-2 カラム評価に用いたパラメータとHPLC条件

Parameters	Solutes	Mobile phase
Hydrophobicity, k	k (pentylbenzene)	80% methanol
Hydrophobicity, $ \alpha $ ( $ \mathrm{CH}_{2} $ )	$ \alpha $ (pentylbenzene/butylbenzene)	80% methanol
Selectivity of co-planner, $ \alpha $ (T/O)	$ \alpha $ (triphenylene/o-terphenyl)	80% methanol
Hydrogen bonding, $ \alpha $ (C/P)	$ \alpha $ (caffeine/phenol)	30% methanol

尚，保持係数：k，分離係数： $ \alpha $ は次式から求めた。

$ k = (t_{r} - t_{0}) / t_{0} $ (2.2) $ t_{r} $ ：試料の溶質時間， $ t_{0} $ ：非保持の試料の溶質時間

$ \alpha=k_{1}/k_{2} $ (2.3) $ k_{1} $ ：溶質1の保持係数， $ k_{2} $ ：溶質2の保持係数

【評価に用いた溶質の化学構造】

(A) 平面構造を持つ溶質群

(B) 立体的にかさ高い溶質群

図(2)-9 カラムの保持特性評価に使用した溶質18成分

### e. 2塩基酸クロライドによる表面修飾

10 mL acetonitrileに使用した加水分解スポンジ中（EVA-HYD）の水酸基モル数のおよそ20倍量となるsuccinyl chloride（3.870 mL）を加えてかく拌し，加水分解スポンジを浸漬した（溶液1）。次に10 mL acetonitrileに使用した加水分解スポンジ中の水酸基に対して20当量となるtriethylamine（9.466 mL）を加えた溶液（溶液2）を溶液1に水冷下で滴下した。滴下終了後，反応液を室温に戻し，24時間かく拌，反応させた（図(2)-10）。その後，50% acetonitrile aq.にスポンジモノリスを浸漬し，超音波振とう（20 min）を6回繰り返して洗浄した（図(2)-11）。さらにスポンジモノリスをacetonitrileで洗浄・乾燥し，目的のスポンジモノリスEVA15-HYD-SCCを得た（反応率61.9%）。
図(2)-10 ポリマー表面上のヒドロキシル基とsuccinyl chlorideの反応

図(2)-11 ポリマー表面へのカルボン酸の導入

f. ジェチルアミノ化スポンジモノリスの調製

10 mLのdimethylformamideに加水分解スポンジ中水酸基のおよそ20当量となるacrylyl chloride (AC)，12.4 mLを加えてかく拌，浸漬した（溶液1）。次に10 mLのdimethylformamideに，加水分解スポンジ中水酸基のおよそ20当量となるpyridine12.3 mLを加えてかく拌した溶液（溶液2）を溶液1に水冷下で滴下した。滴下終了後，60℃で48時間かく拌，反応させた。その後，50% acetonitrile aq.にスポンジモノリスを浸漬し，超音波振とう20 minを6回繰り返した。さらにスポンジモノリスをacetonitrileで洗浄・乾燥し，目的のスポンジモノリス（EVA25-HYD-AC）を得た。次にacrylyl chlorideで修飾したスポンジモノリスをフラスコ内で30 mLのジェチルアミンに浸漬し，48時間室温でかく拌，反応した。得られたスポンジモノリスをacetonitrileに浸漬し，超音波振とう（20 min）を6回繰り返し洗浄・乾燥し，目的のスポンジモノリス（EVA25-HYD-AC-DEA）を得た（図(2)-12）（全OH基に対する反応率16.0%）。

図(2)-12 ポリマー表面へのジェチルアミンのマイケル付加

3）PCBの選択的分離を目的としたスルホキシド含有型分子インプリント固相剤の開発～油中PCBの捕捉について～

検討に際して使用した試薬を，以下に示す。

· 重合開始劑：ADVN

·多孔質化溶媒：xylene（3異性体混合品），pentamethylbenzene (PMB)，dichlorobenzene（1,3-DB），trichlorobenzene（1,3,5-TB）

· 架橋剤：DVB，GDMA，EDMA

・機能性モノマー：chloromethyl styrene (CMS)，phenyl vinyl sulfoxide (PVS)

・その他 : dimethyl sulfoxide (DMSO), sodium iodide (NaI), thiophenol, potassium hydroxide (KOH), hydrogen peroxide ( $ H_{2}O_{2} $ )
· PCB標準品：関東化学 T-PCB Cleanup Spike, Syringe Spike, Sampling Spike ( $ ^{13}C_{12} $ Labeled mixture nonane solution)

### a. 基材ポリマーの合成

最初に3種類のモノマーと2種類の多孔質化溶媒を用いて基材ポリマーの合成を行った。

この合成は，基材ポリマーを合成した後に，スルホキシドを導入する2段階の合成で行った。合成条件は，表(2)-3に示す。また合成手順は以下に示すとおりである。

i．試験管に重合開始剤として ADVN，鋳型分子として xylene or PMB，架橋剤として DVB or EDMA or GDMA，機能性モノマーとして CMS を計量，かく拌したあと，60℃のウォーターバス中で 24 時間重合した。

ii．脱型し，acetoneで洗浄し，65℃で減圧乾燥した。

iii．粉碎し，methanolとacetoneで洗浄し，70℃で減圧乾燥した。

iv．106-212 mm に分級し，基材ポリマーを作製した。

表(2)-3 基材ポリマーの合成条件

xylene(ml)	PMB(ml)	monomer(ml)	CMS(ml)	ADVN(mg)
DVB-base4	8.0	—	4.0	4.0	160
EDMA	4.75	—	4.0	0.75	95
GDMA	4.75	—	4.0	0.75	94
DVB-PMB	—	4.59	4.0	1.0	100

### b. スルホキシド固相の作製と分画試験

i．DMSO にハロゲン化合物（NaI）を溶解し，分級した基材ポリマーを加え，80℃のオイルバス中で反応させた（図(2)-13，反応1）。その後，thiophenol に30% methanol aq.，KOH aq. 1.0 mol/L を加え，かく拌し，10分間反応させた（図(2)-14，反応2）。

図(2)-13 反応1

図(2)-14 反応2

ii．反応1の基材ポリマーに，反応2のthiophenolを10分おきに3回加え，3時間反応させた（図(2)-15，反応3）。反応後，洗浄と乾燥を行い，ポリマーを得た。得られたポリマーをmethanol aq.，$\mathrm{H_{2}O_{2}}$ 3.0 mol/Lに浸漬し，酸化させた（図(2)-16，反応4）。
図(2)-15 反応3

図(2)-16 反応4

iii．反応後，洗浄と乾燥を行い，スルホキシド固相ポリマーを得た。スルホキシド固相ポリマーの組成比を表(2)-4に示す。Clに対して，potassium iodideを1当量，thiophenolを1当量及びpotassium hydroxideを2当量加えた。

表(2)-4 固相ポリマーの組成比

monomer	potassium hydroxide (mmol)	thiophenol (mmol)	potassium iodide (mmol)
(ml)	d (g/ml)	Cl (mmol)
DVB-base4	4.0	0.914	6.0	12.0	12.0	6.0
EDMA	4.0	1.05	6.0	12.0	12.0	6.0
GDMA	4.0	1.12	6.0	12.0	12.0	6.0
DVB-PMB	4.0	0.914	6.0	12.0	12.0	6.0

### iv. 前処理カラムの作製

乾燥したスルホキシド固相ポリマーを，長さ52 mm × 内径9.0 mmのポリプロピレンカラムに詰め，前処理カラムを作製した（図(2)-17）（ポリマー充てん量：0.75 g）。

図(2)-17 作製したカラム

### v. 分画試驗

・カラムの上にディスポシリンジを接続し，展開する溶媒を入れた。はじめに，カラムをacetone 10 mL, hexane 20 mLにて洗浄してから使用した。絶縁油またはPCB標準品をカラムに添加したあと，hexaneで2.0 mLずつ分画した。

## ・絶縁油の溶出試験

作製したカラムにおける絶縁油（鉱油）の溶出状況を確認するため，フラクション毎にガスクロマトグラフ（水素炎イオン検出器：FID (Flame Ionization Detector)）で下記の条件により絶
縁油の溶出の確認を行った。

GC (FID): 島津製作所 GC-2010 (FID)

分離力ラム：J&W DB-5ms $ 0.32 \, \text{mm (ID)} \times 30 \, \text{m} $ ，注入量： $ 1.0 \, \muL $ ，注入口： $ 200 \, ^{\circ}C $

昇温条件： $ 160\;^{\circ}C $ （2 min） $ \rightarrow $ $ 20\;^{\circ}C/\min $ $ \rightarrow $ $ 320\;^{\circ}C $ （20 min）

## ・PCBの溶出状況確認試験

作製したカラムにおけるPCBの溶出状況を確認するため,各フラクション毎に下記の装置と条件で絶縁油の溶出の確認を行った。四重極GCMSを用いて下記の装置と条件で絶縁油の溶出の確認を行った。GCMS測定条件 $ ^{38)} $ は,以下に示すとおり。

GCMS : Agilent 5975C MSD

分離力ラム：J&W DB-5ms $ 0.32\ \text{mm}\ (\text{ID}) \times 30\ \text{m} $ 注入量： $ 1.0\ \muL $ ，注入口： $ 300\ ^{\circ}C $

异温条件： $ 70\;^{\circ}C $ (1.5 min)→ $ 30\;^{\circ}C $ /min→ $ 185\;^{\circ}C $ → $ 6.0\;^{\circ}C $ /min→ $ 300\;^{\circ}C $

測定イオン：m/z = 35.37 イオン源：250℃

イオン化モード：NICI (negative ion chemical ionization)

反応ガス：メタンガス（純度99.999％以上）

### c. 共重合法による基材ポリマーの合成

次に，基材ポリマーの合成時にスルホキンドを持つモノマーと同時に重合する方法を試みた。2種類のモノマーと3種類の多孔質化溶媒を用いて基材ポリマーの合成を行った。合成条件は，表(2)-5に示す。また合成手順は以下に示すとおり。

i．試験管に重合開始剤としてADVN，多孔質溶媒としてxylene or 1,3-DB or 1,3,5-TB，架橋剤としてDVB or EDMA，機能性モノマーとしてCMS or PVSを各々計量し，かく拌したあと，60℃のウォーターバスで24時間重合した。

ii．脱型し，acetoneで洗浄し，65℃で減圧乾燥した。

iii．粉碎し，methanolとacetoneで洗浄し，70℃で減圧乾燥した。

iv．106－212 mm に分級し，基材ポリマーを作製した。
表(2)-5 基材ポリマーの合成条件

略号	基材	monomer	多孔質化溶媒
DV-Xy	DVB	CMS	xylene (Xy)
DV-DB	DVB	CMS	1,3-dichlorobenzene (DB)
DV-TB	DVB	CMS	1,3,5-trichlorobenzene (TB)
ED-Xy	EDMA	CMS	xylene (Xy)
ED-DB	EDMA	CMS	1,3-dichlorobenzene (DB)
ED-TB	EDMA	CMS	1,3,5-trichlorobenzene (TB)
DV-Xy-S	DVB	PVS	xylene (Xy)
DV-DB-S	DVB	PVS	1,3-dichlorobenzene (DB)
DV-TB-S	DVB	PVS	1,3,5-trichlorobenzene (TB)
ED-Xy-S	EDMA	PVS	xylene (Xy)
ED-DB-S	EDMA	PVS	1,3-dichlorobenzene (DB)
ED-TB-S	EDMA	PVS	1,3,5-trichlorobenzene (TB)

また，合成について表(2)-6の通りおこなった。

表(2)-6 基材ポリマーの合成条件

Xylene	1,3-DB	1,3,5-TB	monomer (DVB)	monomer (EDMA)	CMS	PVS	ADVN
DV-Xy	10.0 mL (81.1 mmol)	-	-	8.0 mL (56.2 mmol)	-	2.0 mL (14.1 mmol)	-	200 mg
DV-DB	-	8.0 mL (68.1 mmol)	-	8.0 mL (56.2 mmol)	-	2.0 mL (14.1 mmol)	-	200 mg
DV-TB	-	-	7.0 mL (52.3 mmol)	8.0 mL (56.2 mmol)	-	2.0 mL (14.1 mmol)	-	200 mg
ED-Xy	10.0 mL (81.1 mmol)	-	-	-	8.0 mL (42.4 mmol)	1.6 mL (11.2 mmol)	-	190 mg
ED-DB	-	8.0 mL (68.1 mmol)	-	-	8.0 mL (42.4 mmol)	1.6 mL (11.2 mmol)	-	190 mg
ED-TB	-	-	7.0 mL (52.3 mmol)	-	8.0 mL (42.4 mmol)	1.6 mL (11.2 mmol)	-	190 mg
DV-Xy-S	10.0 mL (81.1 mmol)	-	-	8.0 mL (56.2 mmol)	-	-	1.9 mL (14.7 mmol)	200 mg
DV-DB-S	-	8.0 mL (68.1 mmol)	-	8.0 mL (56.2 mmol)	-	-	1.9 mL (14.7 mmol)	200 mg
DV-TB-S	-	-	7.0 mL (52.3 mmol)	8.0 mL (56.2 mmol)	-	-	1.9 mL (14.7 mmol)	200 mg
ED-Xy-S	10.0 mL (81.1 mmol)	-	-	-	8.0 mL (42.4 mmol)	-	1.4 mL (10.5 mmol)	190 mg
ED-DB-S	-	8.0 mL (68.1 mmol)	-	-	8.0 mL (42.4 mmol)	-	1.4 mL (10.5 mmol)	190 mg
ED-TB-S	-	-	7.0 mL (52.3 mmol)	-	8.0 mL (42.4 mmol)	-	1.4 mL (10.5 mmol)	190 mg
### d. 固相の作製と分画試験

上記と同様の方法に従い，合成した固相剤を用いた固相カラムの作製，分画試験，溶出試験を行った。

## （２）難捕捉高親水性物質に対する疑似分子鋳型についての検討

## 1 ）高親水性化合物のためのトラップ層開発の検討

### a. 基材ポリマー粒子の合成

基材ポリマー粒子は，多段階膨潤重合法を用いて合成した。最初に，ソープフリー乳化重合により，ポリスチレン種粒子の合成を行った。次に，架橋剤としてGDMA 5.0 mL，多孔質化溶媒としてtoluene 5.0 mL，開始剤としてADVN 0.15 gを用い，70℃で24時間重合を行った。重合後，水，methanol，tetrahydrofuranを用いて洗浄を行った。

### b. ポリマー粒子の修飾

作製したポリマー粒子 2.0 gをmethanol 100 mLに分散し，機能性モノマー0.75 gおよび開始剤ADVNを溶解し，70℃で24 時間反応を行った。反応後，methanolで洗浄を行った。機能性モノマーとしては，N,N-dimethylamino ethylacrylate, methyl chloride quaternary (DMAEA-Q)と，2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC monomer)を用いた。

### c. HPLCを用いたポリマー粒子の評価

修飾をしていないGDMA粒子と，2種類の修飾を施したGDMA粒子（DMAEA-Q, MPC）の表面状態を走査型電子頭微鏡（SEM）を用いてそれぞれ観察した。その後，作製したポリマ一粒子をステンレスカラム（100 mm × 4.6 mm i.d.）に充てんし，HPLCを用いてその保持特性の評価を行った（図(2)-18）。

GDMA

DMAEA-Q

MPC monomer

図(2)-18 GDMAと修飾に用いたモノマーの構造と略号

## 2 ）官能基間距離認識による高親水性化合物の選択的分離に関する研究

### a. 試薬

架橋剤のtributylamineは和光純薬工業株式会社（Osaka, Japan）から購入し，減圧蒸留により精製した。その他の試薬は，市販品をそのまま使用した。

### b. 鋳型分子の合成

α,α'-dichloro-p-xylene or 4,4'-bis(chloromethyl)biphenylとtributylamineをacetonitrileに溶解し，オイ