Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
表 3.3.2 変異株 M2 と m11 及び融合株 FSC のグルコース・キシロースの発酵特性（30℃）

Strain	Cells $ ^{a} $ (g-DW/L)	$ R_{xylose} $ (g/g-cell.h)	$ v_{EtOH} $ (g/L.h)	$ r_{EtOH} $ (g/g-cell.h)	$ Y_{p} $ (g/g-substrate)
Ethanol	Xylitol	Cells
M2	0.4	ND	0.46	0.61	0.14 (0.28)*	ND	0.005 (0.01)*
m11	0.4	ND	0.25	0.34	0.03	ND	0.06
FSC1	1.3	0.18	0.33	0.09	0.38	0.08	0.06
FSC3	1.4	1.07	0.65	0.17	0.42	0.03	0.06

$ ^{a} $ ,初期濃度； $ R_{xylose} $ ,比キシロース消費速度； $ v_{EtOH} $ ,エタノール生成速度； $ r_{EtOH} $ ,比エタノール生成速度（最終菌体濃度当り）； $ Y_{p} $ ,生成物収率；ND, not detected； $ ^{*} $ ,グルコース当りの収率.

#### 3.4.2 低温性セルラーゼと融合酵母 FSC3 株による稲藁の並行複発酵

本研究で開発した亜塩素酸・重曹法による前処理、T. reesei MT957 株が産生する低温性セルラーゼによる糖化及び融合酵母 FSC3 株による発酵を組み合わせて、稲藁の前処理と並行複発酵の一連の実験を行った。具体的には、稲藁を亜塩素酸・重曹法により前処理し、その前処理済み稲藁 50g/L（乾燥重量）に対して酵素／基質（E/S）比＝1/100 として低温性セルラーゼ 0.5g/L を添加し、微好気・30℃の条件で並行複発酵を行った。その結果を図 3.3.9 に示す。

エタノール生成は発酵48時間で頭打ちになり、エタノール生成量は最大で16.2g/Lであった。反応器の写真に見られるように、発酵開始時にあった繊維状の稲藁固形分は48時間後には完全に糖化（可溶化）されていた。発酵糖としてはグルコース、セロビオース及びキシロースが反応初期に蓄積したが、36時間後にはすべて消失した。最終菌体量は14.1gDW/Lであり、12.5gDW/Lの増殖量であった。最大エタノール生成量からエタノール収率を計算すると、

#### エタノール収率=0.324（g/g-前処理済み稲藁）又は0.41（L/kg-前処理済み稲藁）

となる。これは本研究の目標値 0.4（g/g-前処理済み稲藁）の 81% に相当する。この実験では菌体増殖量から計算した菌体収率が 0.25（g-cell/g-前処理済み稲藁）であり、前出のグルコース・キシロース基質の菌体収率 0.06（表 3.3.2 参照）に比べて約 4 倍高い。稲藁においては、基質が菌体増殖に使われたためにエタノール収率が低くなったと考えられ、エタノール収率を高めるためには溶存酸素や pH 等を制御して菌体への転換量を減らす必要があると思われる。

図 3.3.9 前処理済み稲藁の低温性セルラーゼと改良型 FSC3 株による並行複発酵前処理：亜塩素酸・重曹法

並行複発酵：T. reesei MT957 株産生の低温性セルラーゼによる糖化と融合酵母 FSC3 株による同時発酵、酵素/基質（E/S）比=1/100、酵母窒素ベース 1.7g/L 添加、前処理済み稲藁 50g/L、初期菌体量 1.6gDW/L、pH5.0、30℃、微好気
### 4. 結論

本研究は、稲藁を原料としたエタノール発酵において、亜塩素酸・重曹法による前処理、低温性セルラーゼによる糖化及び変異・融合酵母による発酵の3課題について検討した。本研究により得た知見と開発した技術は以下の通りである。

## ・亜塩素酸・重曹法による前処理

稲藁の前処理は、酢酸酸性域での亜塩素酸 Na (ASC) 処理による脱リグニンと重曹 (SB) 処理による膨潤化とセルロース結晶構造の改変を行った。稲藁は ASC 処理により脱リグニンされ、SB 処理により膨潤した微細繊維（ミクロフィブリル）に変化し、特に（3 回 ASC+SB）処理が最大の効果を発揮した。稲藁のリグニン量は約 14%（乾重%、クラーソン法）、κ 価は約 16 であり、（3 回 ASC+SB）処理はリグニン除去率 88% を達成した。FTIR 解析から、ASC 処理は主にリグニン構造ユニットを除去し、SB 処理は内部リグニンの除去に関与することが分かった。稲藁の前処理は ASC 処理の後段に SB 処理を行う必要があり、その逆順では効果が低くかった。生成される塩素種の分析から、リグニンは亜塩素酸イオンにより酸化・除去、すなわち脱リグニンされ、亜塩素酸イオンは塩化物イオンに還元されることが分かった。

稲藁のセルロース結晶構造の変化について、X線回折とFTIR解析により、3回ASC処理による表面リグニンの除去により結晶性が見かけ上増加し、その後SB処理を施すと再び減少するが、これは膨潤・微細繊維化と共にミクロフィブリルの非晶質化が起きているためと推測された。セルロースの結晶型は、(3回ASC＋SB）処理を施すことによって、無処理稲藁のタイプⅠから、結晶密度が低くかつ分解性の高いタイプⅡに変化した。

CBH I を用いて糖化に対する前処理効果を調べたところ、3 回 ASC 処理と SB 処理の単純加算の糖化率は 40% であり、(3 回 ASC＋SB) 処理は 85% という 2.1 倍の相乗効果を示した。糖化に対する前処理の効果を工業用セルラーゼによる糖化で調べたところ、無処理稲藁は 48 時間でも糖化率 20% に留まったが、(3 回 ASC＋SB) 処理を行うと 6 時間で 86% に達した。

## ・低温性セルラーゼによる糖化

低温（30℃）で十分な活性を有するセルラーゼを生産するために、T. reeseiを野生株として亜硝酸添加・UV照射による変異処理と選択培地による選別で改良し、変異株MT957のを得た。BGL活性（CBU）では、MT957株は30℃で野生株（WT）の3倍及び工業用セルラーゼC1.5Lの6倍高い値を示した。FPU活性では、30℃活性が対50℃活性でC1.5Lが20％に低下したが、MT957株セルラーゼは40％を保持し、C1.5Lの約2.5倍の活性を示した。MT957株セルラーゼは単糖への転換量（単糖・二糖量の77%）がWT株とC1.5Lに比べて2倍以上であった。MT957株セルラーゼにはSDS-PAGEにおいてBGL、CBH、EG、XYNに相当するバンドが確認され、二次元電気泳動解析によればMT957株はBGL、CBH及びEGの発現量がWT株よりかなり増加していた。

各種セルロースに対する糖化活性を調べたところ、MT957株セルラーゼはWT株に比べて30℃でαセルロース活性が3.6倍、アビセル活性が5.4倍及びCMC活性が2倍高く、C1.5Lに比べると各々3.3倍、3.5倍及び4倍高い活性を示した。温度が50℃から30℃に低下すると、WT株とC1.5Lの活性が40%程度に低下するのに対して、MT957株セルラーゼは約70%を保持しており、低温（30℃）域で十分な活性を持つ低温性セルラーゼを生産できることを確認した。

亜塩素酸・重曹法で前処理した稲藁に対して、MT957株セルラーゼは酵素／基質比＝1/100で糖化率約86%（乾重%）であり、本研究の目標値90％に近い糖化率を達成できた。

稲藁をセルラーゼ産生の炭素源として利用するため、各種粉砕稲藁に対してMT957株が産生する酵素タンパク量を調べたところ、ボールミル粉砕で対照系標準セルロースの1.2倍のセルラーゼが得られた。酵素成分としては、粉砕稲藁の産生酵素は標準セルロース産生酵素よりEGとBGLとXYNがより多かった。炭素源として産生セルラーゼが高い比活性を示したのは30mmボールミル粉砕稲藁であり、稲藁を酵素産生の炭素源として利用できることが分かった。

## ・変異・融合酵母によるエタノール発酵

細胞融合の前に、S. cerevisiae のキシロース取込み能を高め、逆に C. intermedia のキシロース取込み能を抑えるために、各野生株を EMS 変異処理により改変した。S. cerevisiae 変異株は、DOG 耐性選別により、カタボライト抑制を抑えてグルコース存在下でもキシロース取込み能が野生株の 4.5 倍高い M2 株を獲得した。C. intermedia 変異株はキシリトール代謝に係る xdh 遺伝子を保
持しながらも、キシロース取込み能を抑えたm11株を得た。また、細胞融合においては両変異株の一倍体子囊胞子（a細胞・α細胞又は相当細胞）のプロトプラスト融合を行うが、事前にm11株を酢酸カリウム（KAc）胞子形成培地で培養し、ブリリリアントグリーン染色とSEMによる観察で胞子形成を確認した。

M2 株と m11 株の各胞子の一倍体細胞のプロトプラスト融合により、変異・融合酵母を製造し、活性の高い融合細胞を FSC1 株と命名した。DAPI 染色により、FSC1 株は核融合した単一核であることを確認。M2 株と m11 株及びその融合株 FSC1 株について、FSC1 株のみが DOG 耐性のキシロース代謝酵母であり、接合試験により M2 株と m11 株の親株同士の接合は起こらず、FSC1 株が融合株であることを再確認した。キシロース含有 MMGX 培地での発酵試験において、FSC1 株はグルコースとキシロースを着実に代謝し、その結果エタノール生成量は M2 株の約 2.7 倍に達し、さらに 14 世代に亘り安定した発酵を示した。FSC1 株のエタノール収率は 0.38 (g/g-基質) であり、M2 株より 2.7 倍高かった。また、FSC1 株は主要アミノ酸 7 種に対する要求性はなかった。

RT-PCR と二次元電気泳動による遺伝子やタンパクの発現解析の結果、FSC1 株において、キシロースのキシリトールへの転換遺伝子は m11 株の xr と M2 株の gre3、キシリトールのキシルロースへの転換遺伝子は m11 株の xdh、キシルロースのキシルロース-5-リン酸への転換遺伝子は M2 株の xks1 が発現しており、また発酵のアルコール脱水素酵素遺伝子は M2 株の adh1 が強く発現していた。FSC1 株には M2 株と m11 株の全てのタンパクスポットが見られ、そのほとんどが親株より濃く出ていた。このうち 2 種のタンパクが MALDI-TOF/TOF により同定され、FSC1 株に m11 株の XR と M2 株の TDH（グリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素）が確認された。

FSC1 株の発酵能をさらに改良するため、再度 EMS により変異処理し、改良型の FSC3 株を製造した。FSC3 株によるグルコース・キシロース基質の発酵試験を行った結果、FSC3 株のキシロース消費速度（g/g-cell.h）が FSC1 株の 0.18 から約 6 倍の 1.07 にまで向上し、エタノール生成速度は FSC1 株の約 2 倍であった。FSC3 株のエタノール収率（g/g-基質）は FSC1 株の 0.38 から 0.42 に向上し、グルコース・キシロース基質ではあるが、FSC3 株の収率 0.42 は本研究の目標値 0.4（g/g-前処理済み稲藁）を上回る値であった。

亜塩素酸・重曹法による前処理、T. reesei MT957株が産生する低温性セルラーゼによる糖化及び融合酵母FSC3株による発酵を組み合わせて、稲藁の前処理と並行複発酵の一連の実験を行った。エタノール生成は発酵48時間で概ね最大に達し、最大エタノール生成量から計算したエタノール収率は0.324（g/g-前処理済み稲藁）であった。菌体収率は0.25（g-cell/g-前処理済み稲藁）であり、前出のグルコース・キシロース基質の菌体収率に比べて約4倍高い。稲藁においては基質が菌体増殖に使われたため、エタノール収率がやや低くなったと考えられる。エタノール収率0.324（g/g-前処理済み稲藁）は本研究の目標値0.4の81％に相当し、概ね目標値に近いエタノール収率を達成することができたと考える。

本研究は、稲藁を原料としたエタノール発酵において、亜塩素酸・重曹法による前処理、低温性セルラーゼによる糖化及び変異・融合酵母による発酵について検討した。稲藁はASC処理により脱リグニン、SB処理により膨潤・微細繊維化と結晶構造の改変が施され、特に(3回ASC+SB)処理はリグニン除去率88%、結晶型タイプⅡへの改変などを可能にした。T. reeseiを変異させたMT957株は30℃でも高い活性のセルラーゼを産生し、この低温性セルラーゼは亜塩素酸・重曹法による前処理済み稲藁の86%を糖化し、目標値90%に近い糖化率を達成できた。S. cerevisiae M2株とC. intermedia m11株との細胞融合によりキシロース利用FSC1株を獲得し、さらに変異をかけて発酵能を改良したFSC3株を製造した。FSC3株は、グルコース・キシロース基質に対してエタノール収率0.42（g/g-基質）という目標値0.4（g/g-前処理済み稲藁）を上回る発酵能を示した。亜塩素酸・重曹法による前処理済み稲藁に対しては、低温性セルラーゼとFSC3株による並行複発酵によりエタノール収率0.324（g/g-前処理済み稲藁）を達成し、目標値の81%相当のエタノール収率を得ることができた。このエタノール収率は滅量に換算すると0.41（L/kg-前処理済み稲藁）であり、これまでに報告されている各種バイオマスの0.30～0.35（L/kg）に比べて高いエタノール収率となっている。
### 5. 参考文献

1) Kahar P, Taku K, Tanaka S, Enhancement of xylose uptake in 2-deoxyglucose tolerant mutant of Saccharomyces cerevisiae, J Biosci Bioeng, 111/5, 557-563 (2011)

2) Lin Y, Tanaka S, Ethanol fermentation from biomass resources: current state and prospects. Appl Microbiol Biotechnol, 69, 627-642 (2006)

3) Kumar P, Barrett DM, Delwiche MJ, Stroeve P, Methods for pretreatment of lignocellulosic biomass for efficient hydrolysis and biofuel production, Ind Eng Chem Res, 48, 3731-3729 (2009)

4) Matsushika A, Inoue H, Kodaki T, Sawayama S, Ethnol production from xylose in engineered Saccharomyces cerevisiae strains: current state and perspectives. Appl Microbiol Biotechnol, 84, 37–53 (2009)

5) Runquist D, Hahn-Hägerdal B, Bettiga M, Increased expression of the oxidative pentose phosphate pathway and gluconeogenesis in anaerobically growing xylose-utilizing Saccharomyces cerevisiae. Microbial Cell Fact, 8, 49 (2009)

6) Hari KS, Janardhan RT, Chowdary GV, Simultaneous saccharification and fermentation of lignocellulosic wastes to ethanol using a thermotolerant yeast, Bioresource Technol, 77, 193–196 (2003)
### 6. 研究発表

## ·論文発表

1) Enzymatic digestion of corncobs pretreated with low strength of sulfuric acid for bioethanol production, J. Bioscience and Bioengineering, 110/4, 453-458 (2010)

2) Enhancement of xylose uptake in 2-deoxyglucose tolerant mutant of Saccharomyces cerevisiae, J. Bioscience and Bioengineering, 111/5, 557–563 (2011)

3) Factors affecting ethanol fermentation using Saccharomyces cerevisiae BY4742, Biomass and Bioenergy, 47(12), 395-401 (2012)

4) Multiple effects of swelling by sodium bicarbonate after delignification on enzymatic saccharification of rice straw, J. Bioscience and Bioengineering, http://dx.doi.org/10.1016/j.jbiosc.2013.05.036 (2013) (印刷中)

5) Xylose-fermenting yeast hybridized by intergeneric fusion between Saccharomyces cerevisiae and Candida intermedia mutants for ethanol production, Applied Microbiology and Biotechnology（投稿中）

## ·学会等発表

1) Improved Utilization of Xylose by Mutated-fused Yeast for Bioethanol Production, 14 $ ^{th} $ International Biotechnology Symposium, Rimini/Italy (2010)

2) Enhancement of Xylose Uptake in Saccharomyces cerevisiae by EMS mutagenesis、第 62 回日本生物工学会大会、宫崎（2010）

3）変異融合酵母による稲わらの高効率エタノール発酵技術の開発、明星大学連携研究センター研究成果報告会、東京（2010）

4）高効率エタノール変換に向けた稲藁の脱リグニン及び弛緩処理技術の開発、日本農芸化学会大会、京都（2011）〈東北地震のため直前に開催中止〉

5) Advanced Pretreatment Process for Enzymatic Saccharification of Rice Straw in Bioethanol Production, International Conference on Sustainable Energy Technologies, Istanbul/Turkey (2011年9月)

6）バイオエタノール生産のための細胞変異融合法によるキシロース代謝利用の分子育種、第63回日本生物工学会大会、東京（2011年9月）

7）稲わらの並行複発酵のための高活性セルラーゼ生産、日本農芸化学会 2012 年度大会、京都 (2012 年 3 月)

8）稲わらの酵素糖化における脱リグニン処理と弛緩処理の効果、第64回日本生物工学会大会、神戸（2012年10月）

9）バイオエタノール生産のためのセルラーゼ産生菌の変異処理、第4回大学コンソーシアムハ王子学生発表会、八王子（2012年12月）

10) キシロース発酵における細胞融合酵母 FSC 株の in vitro 代謝解析、日本農芸化学会 2013 年度大会、仙台（2013 年 3 月）

11) Trichoderma reesei 変異菌による低温性セルラーゼの産生、第 65 回日本生物工学会大会、広島（2013 年 9 月）（発表決定済み）
### 7. 知的財産権の取得状況

既に出願又は取得した特許権はない。但し、エタノール発酵能の高い S. cerevisiae 変異株 M2 とキシロース代謝能を持つ C. intermedia 変異株 m11 とのプロトプラスト融合で獲得した変異・融合酵母 FSC（ハイブリッド酵母 FSC）とその製造方法を特許出願すべく準備中である。
変異・融合酵母による稲藁の高度エタノール発酵技術の開発

達成目標

①低温性セルラーゼ：糖化率90%

②並行複発酵：エタノール収率

0.40（kg/kg-前処理済み稲藁）

草木質系バイオマスを原料とするエタノールは二酸化炭素の排出量削減に貢献するが、糖化されにくいリグノセルロース構造とキシロースが発酵されないという難点があり、また糖化酵素の高い反応温度（55℃）が並行複発酵を難しくしている。本研究の目的は、稲藁を原料として、脱リグニンと膨闊・結晶構造改変に効果的な前処理、低温性セルラーゼの生産、キシロース利用変異・融合酵母を用いる並行複発酵の各要素技術を研究し、それらを組み合わせた高度エタノール発酵技術を開発することである。

研究の年次計画

研究項目	2010年度	2011年度	2012年度
前処理 (亜塩素酸・重曹法)	←→
低溫性セルラーゼ産生・糖化	←→
変異・融合酵母製造・発酵	←→

E-mail: tanakash@es.mesiei-u.ac.jp

TEL/FAX: 042-591-5517

URL: http://www.meisei-u.ac.jp/
## 英語概要

Research theme

Development of Advanced Ethanol Fermentation Technology Using Mutated-fused Yeast

Representative researcher

Shuzo Tanaka (Meisei University)

## Abstract

In order to develop the advanced technology for bioethanol production from rice straw, acidified sodium chlorite (ASC) and sodium bicarbonate (SB) method for pretreatment, low-temperature cellulase for enzymatic saccharification and mutated-fused yeast for fermentation. In ASC-SB method, rice straw was delignified by ASC and swelled and altered in crystal structure of cellulose by SB, particularly the three time (3x) ASC + SB treatment achieved the 98% delignification and the change of crystal type from type I to type II. MT957 strain obtained by mutation of T. reesei produced cellulase active at 30°C, and this low-temperature cellulase saccharified rice straw by 86% and achieved the rate close to the target 90%. Xylose fermenting FSC1 strain was newly developed by intergeneric hybridization between Saccharomyces cerevisiae and Candida intermedia mutants by protoplast fusion and FSC3 strain improved the ability of FSC1 strain was obtained by further mutation. In the mixed substrate of glucose and xylose, FSC3 strain achieved 0.42 g/g-substrate in ethanol yield exceeding the target 0.4. In rice straw pretreated by the 3xASC-SB method, the simultaneous saccharification and fermentation (SSF) using the low-temperature cellulase and FSC3 strain achieved 0.324 g/g-pretreated rice straw in ethanol yield, which is close to the target yield (81% equivalent).

Keywords:

bioethanol, sodium bicarbonate, low-temperature cellulase, mutation and fusion, xylose fermentation
# 指 名 结 果 書

件名京都御所ほかまつ手入その他工事

指名通知日 平 成 27 年 3 月 3 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	A
2	B	造園	A
3	C	造園	A
4	D	造園	A
5	E	造園	B
6	F	造園	B
7	G	造園	B
8	H	造園	B

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H25.26年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	5088
・A, Bランク
希望する地域	・近畿	3619
指名競争入札参加業者数	8

入札日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年4月1日
2	契約業者名	株式会社河原勝庭園
3	契約業者の住所	京都市西京区松尾上ノ山町18番地
4	工事件名	京都御所ほかまつ手入その他工事
5	工事場所	京都市上京区京都御苑
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	樹木手入その他
8	工期(自)	平成27年4月2日
9	工期(至)	平成28年3月28日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	非公表円	非公表円	- %
11	入札金額	41,526,000円	38,450,000円
12	入札結果	下表のとおり
順	(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1	(株)河原勝庭園	38,450,000
2	(株)斉藤造園	38,500,000
3	(株)野間造園	39,000,000
4	樋口造園(株)	39,200,000
5	(株)茨木春草園	39,600,000
6	(株)青山造園	39,900,000
7	(株)河原造園	40,000,000
8	(株)植芳造園	40,900,000
9
10
順	(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
# 指 名 结 果 書

件名桂離宮まつ手入その他工事

指名通知日 平 成 27 年 3 月 20 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	B
2	B	造園	B
3	C	造園	B
4	D	造園	B
5	E	造園	C
6	F	造園	C
7	G	造園	C
8	H	造園	C

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H25.26年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	6040
・B, Cラソク
希望する地域	・近畿	2025
指名競争入札参加業者数	8

入札日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年 4月13日
2	契約業者名	株式会社 植治造園
3	契約業者の住所	京都市西京区大枝西長町10番地16
4	工事件名	桂離宮まつ手入その他工事
5	工事場所	京都市西京区桂御園
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	樹木手入その他
8	工期(自)	平成27年 4月14日
9	工期(至)	平成28年 3月28日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	非公表円	非公表円	- %
11	入札金額	14,742,000円	13,650,000円
12	入札結果	下表のとおり
順(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1(株)植治造園	13,650,000
2(株)加藤造園	13,850,000
3(有)植泰	13,900,000
4(株)鈴木庭園	13,900,000
5(株)マサミガーデン	13,950,000
6川勝量寿	14,000,000
7花豊造園(株)	14,300,000
8(株)中山造園	14,700,000
9
10
順(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
# 指 名 结 果 書

件名修学院離宮まつ手入その他工事

指名通知日 平 成 27 年 3 月 27 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	A
2	B	造園	A
3	C	造園	A
4	D	造園	A
5	E	造園	B
6	F	造園	B
7	G	造園	B
8	H	造園	B

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H25.26年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	5088
・A, Bランク
希望する地域	・近畿	3619
指名競争入札参加業者数	8
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年 4月16日
2	契約業者名	吉村造園株式会社
3	契約業者の住所	京都市左京区北白川下池田町145
4	工事件名	修学院離宮まつ手入その他工事
5	工事場所	京都市左京区修学院藪添
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	樹木手入その他
8	工期(自)	平成27年 4月17日
9	工期(至)	平成28年 3月28日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	非公表円	非公表円	- %
11	入札金額	24,840,000円	23,000,000円
12	入札結果	下表のとおり
順	(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1	吉村造園(株)	23,000,000
2	(株)曾根造園	23,500,000
3	(株)青木農園	23,600,000
4	(株)植藤造園	23,700,000
5	(株)小林造園	24,500,000
6	(株)小島庭園工務所	24,800,000
7	(株)高石造園土木	24,800,000
8	(株)山口造園	25,000,000
9
10
順	(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
3
4
5
6
7
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9
10
# 指 名 结 果 書

件名正倉院苑地管理その他工事

指名通知日 平 成 27 年 5 月 12 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	C
2	B	造園	C
3	C	造園	C
4	D	造園	C
5	E	造園	C

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H27.28年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	4067
・Cランク
希望する地域	・近畿	1102
指名競争入札参加業者数	5

入札日（予定）
入札·契約調書

1	契約年 月 日	平成27年 5月25日
2	契約業者名	奈良市森林組合
3	契約業者の住所	奈良市内侍原町6番地
4	工事件名	正倉院苑地管理その他工事
5	工事場所	奈良県奈良市雑司町
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	樹木手入その他
8	工期(自)	平成27年 5月26日
9	工期(至)	平成28年 3月 4日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	非公表円	非公表円	- %
11	入札金額	4,028,400円	3,730,000円
12	入札結果	下表のとおり
順	(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1	奈良市森林組合	3,730,000
2	寺辻あけみ	4,070,000
3	(株)ヤマカ造園土木	4,218,000
4	(株)ヒロタ旭翠園	4,890,000
5	(株)荻田造園	辞退
6
7
8
9
10
順	(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
3
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10
# 指 名 结 果 書

件名桃山陵墓地ほか枯損木処理工事

指名通知日 平 成 27 年 5 月 28 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	B
2	B	造園	B
3	C	造園	C
4	D	造園	C
5	E	造園	C

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H27.28年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	5906
・B, Cランク
希望する地域	・近畿	2113
指名競争入札参加業者数	5

入札日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年 6月10日
2	契約業者名	有限会社 植泰
3	契約業者の住所	京都市左京区下鴨宮崎町1-30
4	工事件名	桃山陵墓地ほか枯損木処理工事
5	工事場所	京都市伏見区桃山町古城山ほか
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	枯損木伐採
8	工期(自)	平成27年 6月11日
9	工期(至)	平成27年 8月31日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	4,374,000円	4,050,000円	96.30%
11	入札金額	4,212,000円	3,900,000円
12	入札結果	下表のとおり
順(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1(有)植泰	4,500,000	4,200,000	3,900,000
2(株)大平造園	4,700,000	4,380,000	3,970,000
3(株)植治造園	4,660,000	4,300,000	辞退
4(株)斉藤造園	4,900,000	4,300,000	辞退
5川勝量寿	4,800,000	辞退
6
7
8
9
10
順(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
3
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5
6
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10
# 指 名 结 果 書

件名桃山陵墓地広葉樹手入その他工事

指名通知日 平 成 27 年 6 月 1 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	C
2	B	造園	C
3	C	造園	C
4	D	造園	C
5	E	造園	C

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H27.28年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	4067
・Cランク
希望する地域	・近畿	1102
指名競争入札参加業者数	5

入札日平成27年6月9日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年 6月12日
2	契約業者名	株式会社 吉村造園
3	契約業者の住所	京都市伏見区久我御旅町2番地の86
4	工事件名	桃山陵墓地広葉樹手入その他工事
5	工事場所	京都市伏見区桃山町古城山
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	樹木手入その他
8	工期(自)	平成27年 6月13日
9	工期(至)	平成27年 7月31日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	非公表円	非公表円	- %
11	入札金額	3,240,000円	3,000,000円
12	入札結果	下表のとおり
順	(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1	(株)吉村造園	3,000,000
2	(有)福島晴芳園	3,400,000
3	(有)阪本造園工務所	3,465,000
4	(株)マサミガーデン	3,510,000
5	(株)野村造園土木	4,000,000
6
7
8
9
10
順	(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
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3
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5
6
7
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9
# 指 名 结 果 書

件名神武天皇陵御休所修繕その他工事

指名通知日 平 成 27 年 5 月 29 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	建築	C
2	B	建築	C
3	C	建築	D
4	D	建築	D

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H27.28年度)建設工事競争参加有資格業者	・建築一式工事	5542
・C, Dランク
希望する地域	・近畿	1562
指名競争入札参加業者数	4

入札日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年 6月15日
2	契約業者名	株式会社 和田工務店
3	契約業者の住所	奈良県天理市富堂町211番地の1
4	工事件名	神武天皇陵御休所修繕その他工事
5	工事場所	奈良県橿原市大久保町
6	工事種別	建築一式工事
7	工事概要	御休所修繕
8	工期(自)	平成27年 6月16日
9	工期(至)	平成27年 8月 5日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	3,736,800円	3,460,000円	79.48%
11	入札金額	2,970,000円	2,750,000円
12	入札結果	下表のとおり
順	(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1	(株)和田工務店	2,750,000
2	(株)石田建設	4,900,000
3	(株)十三商事	辞退
4	(株)山田工務店	辞退
5
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7
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9
10
順	(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
3
4
5
6
7
8
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10
# 指 名 结 果 書

件名後鳥羽天皇火葬塚林相整備工事

指名通知日 平 成 27 年 5 月 26 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	町
2	B	造園	町
3	C	造園	町

入札日平成27年6月12日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年 6月25日
2	契約業者名	有限会社 ミナミ
3	契約業者の住所	島根県隠岐郡海士町大字海士1948番地3
4	工事件名	後鳥羽天皇火葬塚林相整備工事
5	工事場所	島根県隠岐郡海士町大字海士
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	下刈ほか
8	工期(自)	平成27年 6月26日
9	工期(至)	平成27年10月30日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	2,667,600円	2,470,000円	78.54%
11	入札金額	2,095,200円	1,940,000円
12	入札結果	下表のとおり
順	(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1	(有)ミナミ	1,940,000
2	(株)田脇土建	1,953,033
3	飯古建設(有)	2,750,000
4
5
6
7
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10
順	(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
# 指 名 结 果 書

件名桂離宮広葉樹手入工事

指名通知日 平 成 27 年 7 月 15 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	B
2	B	造園	C
3	C	造園	C
4	D	造園	C

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H27.28年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	5906
・B, Cランク
希望する地域	・近畿	2113
指名競争入札参加業者数	4

入札日（予定）
入札·契約調書

1	契約年 月 日	平成27年 7月27日
2	契約業者名	株式会社 中山造園
3	契約業者の住所	京都市右京区太秦一ノ井町32番地51
4	工 事 件 名	桂離宮広葉樹手入工事
5	工 事 場 所	京都市西京区桂御園
6	工 事 種 別	造園工事
7	工 事 概 要	樹木手入
8	工 期 (自)	平成27年 7月28日
9	工 期 (至)	平成27年10月30日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予 定 価 格	非公表円	非公表円	- %
11	入 札 金 額	3,078,000円	2,850,000円
12	入 札 結 果	下表のとおり
順	(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1	(株)中山造園	2,850,000
2	(株)斉藤造園	3,000,000
3	(株)大平造園	3,000,000
4	(株)マサミガーデン	3,100,000
5
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10
順	(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
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10
# 指 名 结 果 書

件名京都御所ほか広葉樹手入工事

指名通知日 平 成 27 年 7 月 21 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	B
2	B	造園	B
3	C	造園	B
4	D	造園	C
5	E	造園	C
6	F	造園	C

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H27.28年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	5906
・B, Cランク
希望する地域	・近畿	2113
指名競争入札参加業者数	6

入札日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年 8月10日
2	契約業者名	川勝量寿
3	契約業者の住所	京都市北区鷹峯土天井町41
4	工事件名	京都御所ほか広葉樹手入工事
5	工事場所	京都市上京区京都御苑
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	樹木手入
8	工期(自)	平成27年 8月11日
9	工期(至)	平成27年11月20日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	非公表円	非公表円	- %
11	入札金額	8,856,000円	8,200,000円
12	入札結果	下表のとおり
順	(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1	川勝量寿	8,500,000	8,200,000
2	花豊造園(株)	8,750,000	8,340,000
3	(株)鈴木庭園	9,000,000	8,350,000
4	(有)福島晴芳園	8,700,000	8,400,000
5	(株)青木農園	9,000,000	8,400,000
6	(株)野間造園	10,000,000	辞退
7
8
9
10
順	(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
# 指 名 结 果 書

件名修学院離宮広葉樹手入工事

指名通知日 平 成 27 年 8 月 5 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	B
2	B	造園	B
3	C	造園	B
4	D	造園	C
5	E	造園	C
6	F	造園	C

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H27.28年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	5906
・B, Cランク
希望する地域	・近畿	2113
指名競争入札参加業者数	6

入札日（予定）
入札·契約調書

1	契約年 月 日	平成27年 8月28日
2	契約業者名	北山安夫
3	契約業者の住所	京都市北区等持院中町1-11
4	工 事 件 名	修学院離宮広葉樹手入工事
5	工 事 場 所	京都市左京区修学院藪添
6	工 事 種 別	造園工事
7	工 事 概 要	樹木手入
8	工 期(自)	平成27年 8月29日
9	工 期(至)	平成27年11月 6日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予 定 価 格	非公表円	非公表円	- %
11	入 札 金 額	5,616,000円	5,200,000円
12	入 札 結 果	下表のとおり
順	(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1	北山安夫	5,200,000
2	(株)小鷹造園	5,583,000
3	(株)植芳造園	5,800,000
4	(株)青山造園	5,862,000
5	(株)山口造園	6,400,000
6	(株)野村造園土木	6,700,000
7
8
9
10
順	(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
3
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7
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10
# 指 名 结 果 書

# 件名男狹穂塚女狹穂塚陵墓参考地下刈その他工事

指名通知日 平 成 27 年 9 月 2 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	C
2	B	造園	C
3	C	造園	市
4	D	造園	市

入札日平成27年9月15日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年 9月18日
2	契約業者名	有限会社 茶臼原造園
3	契約業者の住所	宮崎県西都市大字茶臼原1553-4
4	工事件名	男狹穂塚女狹穂塚険墓参考地下刈その他工事
5	工事場所	宮崎県西都市大字三宅
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	下刈その他
8	工期(自)	平成27年 9月19日
9	工期(至)	平成27年11月30日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	3,272,400円	3,030,000円	90.76%
11	入札金額	2,970,000円	2,750,000円
12	入札結果	下表のとおり
順(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1(有)茶臼原造園	4,000,000	2,750,000
2(株)杉尾植木	4,550,000	3,120,000
3(有)黒木造園	4,852,000	3,432,000
4(株)橋口庭樹園	4,950,000	3,850,000
5
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順(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
3
4
5
6
7
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10
# 指 名 结 果 書

件名仁徳天皇陵ほか草刈その他工事

指名通知日 平 成 27 年 9 月 11 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	C
2	B	造園	C
3	C	造園	C
4	D	造園	C
5	E	造園	C
6	F	造園	C
7	G	造園	C
8	H	造園	C
9	I	造園	C

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H27.28年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	4067
・Cランク
希望する地域	・近畿	1102
指名競争入札参加業者数	9

入札日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年 9月28日
2	契約業者名	株式会社 盛翔
3	契約業者の住所	大阪府堺市中区深阪2丁13番69号
4	工事件名	仁徳天皇陵ほか草刈その他工事
5	工事場所	大阪府堺市堺区大仙町ほか
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	草刈ほか
8	工期(自)	平成27年 9月29日
9	工期(至)	平成27年11月20日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	非公表円	非公表円	- %
11	入札金額	3,866,400円	3,580,000円
12	入札結果	下表のとおり
順	(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1	(株)盛翔	3,580,000
2	(株)緑園	3,800,000
3	(株)大仲造園	5,200,000
4	(株)いずみ造園土木	5,400,000
5	グリーン建設(株)	辞退
6	(有)グリーンアカサカ	辞退
7	(株)万代園	辞退
8	(有)アイアイグリーン	辞退
9	(有)川岸造園	辞退
10
順	(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
1
2
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4
5
6
7
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10
# 指 名 结 果 書

# 件名天皇皇族髪齒爪塔地ほか林相整備工事

指名通知日 平 成 27 年 9 月 4 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	町
2	B	造園	町
3	C	造園	町

入札日平成27年9月24日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年 9月29日
2	契約業者名	狗巻義博
3	契約業者の住所	和歌山県有田市千田1081
4	工事件名	天皇皇族髪歯爪塔地ほか林相整備工事
5	工事場所	和歌山県伊都郡高野町大字高野山
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	支障木手入
8	工期(自)	平成27年 9月30日
9	工期(至)	平成27年11月20日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	4,622,400円	4,280,000円	87.62%
11	入札金額	4,050,000円	3,750,000円
12	入札結果	下表のとおり
順	(入札者)	第1入札金額(円)	回第2入札金額(円)	回第3入札金額(円)	回第4入札金額(円)	回第5入札金額(円)
1	狗巻義博	3,750,000
2	森林組合こうや	8,010,000
3	高野山寺領森林組合	辞退
4
5
6
7
8
9
10
順	(入札者)	第6入札金額(円)	回第7入札金額(円)	回第8入札金額(円)	回第9入札金額(円)	回第10入札金額(円)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
## 指 名 结 果 書

件名修学院離宮御腰掛谷ほか災害復旧工事

指名通知日 平 成 27 年 9 月 11 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	土木一式	D
2	B	土木一式	D
3	C	土木一式	D
4	D	土木一式	D
5	E	土木一式	D
6	F	土木一式	D
7	G	土木一式	D
8	H	土木一式	D
9	I	土木一式	D
10	J	土木一式	D
11	K	土木一式	D

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H27.28年度)建設工事競争参加有資格業者	・土木一式工事	4926
・Dランク
希望する地域	・近畿	1096
指名競争入札参加業者数	11

入札日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成27年10月1日
2	契約業者名	株式会社岸組
3	契約業者の住所	京都市伏見区竹田醍醐田町37番2
4	工事件名	修学院離宮御腰掛谷ほか災害復旧工事
5	工事場所	京都市左京区修学院藪添(修学院離宮内)
6	工事種別	土木一式工事
7	工事概要	災害復旧
8	工期(自)	平成27年10月2日
9	工期(至)	平成27年11月20日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	4,849,200円	4,490,000円	77.19%
11	入札金額	3,743,280円	3,466,000円
12	入札結果	下表のとおり
順(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1(株)岸組	3,466,000
2(株)松山建設	4,480,000
3(株)星山建設	4,530,000
4(有)福田建材	4,780,000
5(有)KYOEI ECO	5,508,000
6(株)成義建設	辞退
7(有)大伸建設興業	辞退
8(株)東田建設	辞退
9(有)太秦建設工業	辞退
10片岡土木(株)	辞退
11土佐建設(有)	辞退
12
13
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15
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18
19
20
# 指 名 结 果 書

件名崇徳天皇陵支障木手入その他工事

指名通知日 平 成 27 年 10 月 2 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	B
2	B	造園	B
3	C	造園	B
4	D	造園	B
5	E	造園	B
6	F	造園	C
7	G	造園	C
8	H	造園	C
9	I	造園	C
10	J	造園	C

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H27.28年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	5906
・B, Cランク
希望する地域	・近畿	2113
指名競争入札参加業者数	10

入札日平成27年10月19日（予定）
入札·契約調書

不落随契

1	契約年月日	平成27年10月22日
2	契約業者名	株式会社桂組
3	契約業者の住所	高松市新田町甲1918番地1
4	工事件名	崇德天皇陵支障木手入その他工事
5	工事場所	香川県坂出市青海町
6	工事種別	造園工事
7	工事概要	支障木処理ほか
8	工期(自)	平成27年10月23日
9	工期(至)	平成28年1月29日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	3,855,600円	3,570,000円	98.04%
11	入札金額	3,780,000円	3,500,000円
12	入札結果	下表のとおり
順	(入札者)	第1入札金額(円)回入札金額(円)	第2入札金額(円)回入札金額(円)	第3入札金額(円)回入札金額(円)	第4入札金額(円)回入札金額(円)
1	(株)桂組	4,630,000	4,300,000
2	(株)二大緑化産業	6,500,000	辞退
3	森川ガーデン(株)	辞退
4	(株)イズミ	辞退
5	(株)源氏園	辞退
6	春日緑地建設(株)	辞退
7	(株)山本グリーン建設	辞退
8	末澤緑地(株)	辞退
9	山下達也	辞退
10	(株)山白八松園	辞退
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15
予算決算及び会計令第99条の2の規定により,随意契約によるものとする。
(見積者)	第1入札金額(円)回入札金額(円)	第2入札金額(円)回入札金額(円)	第3入札金額(円)回入札金額(円)	第4入札金額(円)回入札金額(円)
(株)桂組	3,500,000
第6入札金額(円)回入札金額(円)	第7入札金額(円)回入札金額(円)	第8入札金額(円)回入札金額(円)	第9入札金額(円)回入札金額(円)
# 指 名 结 果 書

件名可愛山陵林相整備工事

指名通知日 平 成 27 年 10 月 16 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	C
2	B	造園	C
3	C	造園	C
4	D	造園	市
5	E	造園	市
6	F	造園

入札日平成27年11月6日（予定）