Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
表.10 廃培地マーカー候補の構造検索結果（327.1444 m/z）

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
CH	327.1454	6051	327.1444	1	1	0	1	0	C16H23O7	none
241.1088	5678	241.1076	1	1.2	2	3	2	C12H17O5	C4H6O2
241.1088	5678	241.1076	2	1.2	2	3	2	C12H17O5	C4H6O2
241.1088	5678	241.1076	3	1.2	2	3	2	C12H17O5	C4H6O2
241.1088	5678	241.1076	4	1.2	2	3	2	C12H17O5	C4H6O2
Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
CH	327.1454	6051	327.1444	1	1	0	1	0	C16H23O7	none
281.1391	6628	281.1389	1	0.2	2	3	1.5	C15H21O5	CH2O2
281.1391	6628	281.1389	2	0.2	2	3	1.5	C15H21O5	CH2O2
281.1391	6628	281.1389	3	0.2	2	3	1.5	C15H21O5	CH2O2
263.1288	3036	263.1283	1	0.5	3	2	2	C15H19O4	CH4O3
263.1288	3036	263.1283	2	0.5	3	2	2	C15H19O4	CH4O3
263.1288	3036	263.1283	3	0.5	3	2	2	C15H19O4	CH4O3
Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
CH	327.1454	6051	327.1444	1	1	0	1	0	C16H23O7	none
281.1391	6628	281.1389	1	0.2	1	0	1	C15H21O5	CH2O2
281.1391	6628	281.1389	2	0.2	1	0	1	C15H21O5	CH2O2
263.1288	3036	263.1283	1	0.5	2	-1	1.5	C15H19O4	CH4O3
263.1288	3036	263.1283	2	0.5	2	-1	1.5	C15H19O4	CH4O3
263.1288	3036	263.1283	3	0.5	2	-1	1.5	C15H19O4	CH4O3
263.1288	3036	263.1283	4	0.5	2	-1	1.5	C15H19O4	CH4O3
241.1088	5678	241.1076	1	1.2	1	2	1	C12H17O5	C4H6O2

表.11 磨培地マーカー候補の構造検索結果（521.3473 m/z）

Fragment Pattern 解析 521.3473m/z Mass differenceの小さい組成式 C30H49O7 について

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
\(\ce{CH3CH2
表.11 廃培地マーカー候補の構造検索結果（521.3473 m/z）（つづき）

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
522.3509	3860	522.3557	1	-4.8	0	2	0	C30H50O7	none
521.3469	10295	521.3478	1	-0.9	0	1	0	C30H49O7	none
475.3434	905	475.3423	1	1.1	1	0	1	C29H47O5	CH2O2

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
CH2CH2CH2

表.12 廃培地マーカー候補の構造検索結果（509.3474 m/z）

Fragment Pattern 解析 509.3474m/z 組成式 C33H49O2S について

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
H	510.3517	2245	510.3532	1	-1.5	0	2	0	C33H50O2S1	none
509.3503	7346	509.3453	1	5	0	1	0	C33H49O2S1	none

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
H	510.3517	2245	510.3532	1	-1.5	0	2	0	C33H50O2S1	none
509.3503	7346	509.3453	1	5	0	1	0	C33H49O2S1	none

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
510.3517	2245	510.3532	1	-1.5	0	2	0	C33H50O2S1	none
509.3503	7346	509.3453	1	5	0	1	0	C33H49O2S1	none
表.13 廃培地マーカー候補の構造検索結果（537.3413 m/z, 523.3632 m/z）

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
データベース上に推定組成式に適合する化合物無

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
データベース上に推定組成式に適合する化合物無

237.0763m/z の LC/MS 分析を例として図.22(1)，(2)に示すように、ソフト水熱処理により変化した成分を処理強度（温度・時間）により再生培地側で抽出したマーカーについてさらに解析を進めた（図.23～図.25参照）。また、廃培地側マーカーについても、同様に解析を進めた（図.26～図.31参照）。

図.22(1) ソフト水熱処理により変化した成分（237.0763m/z）の比較（Negative mode）
Soft-hydrothermal processing

図.22(2) ソフト水熱処理により変化した成分（237.0763m/z）の比較（Negative mode）

再生培地側で抽出したネガとポジ多量成分の一致ピークをマーカーとして、ソフト水熱処理により変化した成分を処理強度（温度・時間）により図.23から図.25において提示する。これらはきのこ栽培で消費された物質（栄養素等の可能性あり）であって、ソフト水熱処理で再生可能な物質の群を提示する。（以下、未接種培地は「通常培地であり、処理時間0分は「廃培地」である。）

➢ 再生培地（ソフト水熱プロセス）特有の物質（ネガとポジ多量成分の一致ピーク）

図.23 151.0394 m/z*のピーク面積グラフ（ソフト水熱処理により増加する成分）(Negative mode) (注記：*151.0394 m/z はバニリンと同定済み)
Soft-hydrothermal processing

図. 24 177.0548 m/z のピーク面積グラフ（ソフト水熱処理により増加する成分）（Negative mode）

図. 25 237.0763 m/z のピーク面積グラフ（ソフト水熱処理により増加する成分）（Negative mode）

同様に再生培地側で抽出された特徴的な成分(Negative mode)135.0445 m/z, 163.0393 m/z $ ^{\dagger} $ , 163.0395 m/z, 165.0184 m/z, 167.0342 m/z, 193.05 m/z $ ^{\ddagger} $ , 179.0341 m/z, 197.0447 m/z, 209.0451 m/z, 223.0612 m/z, 255.04 m/z, 237.0762 m/z, 261.0876 m/z, 342.0822 m/z, 267.0866 m/zについても同様に、未接種培地にはもともと存在するが、しかしきのこ栽培で消費された物質（栄養素等の可能性あり）であって、ソフト水熱処理で再生された生成可能な物質群の結果が得られた。（グラフ省略）

(注記： $ ^{†} $ 163.0393 m/z はクマル酸と同定済み、および $ ^{‡} $ 193.05 m/z はフェルラ酸と同定済み)
## Soft-hydrothermal processing

廃培地側特徴的成分のマーカーとしてソフト水熱処理により変化した成分を処理強度（温度・時間）により図.26から図.31に提示する。これらは本来未接種培地には存在しない、しかしきのこ栽培で増加した物質（老廃物、代謝物等の可能性あり）であって、ソフト水熱処理で除去可能な物質である。

## ➢ 廃培地特有の物質

図.26 281.1385 m/z のピーク面積グラフ（ソフト水熱処理により減少する成分）（Negative mode）

図.27 521.3473 m/z のピーク面積グラフ（ソフト水熱処理により減少する成分）（Negative mode）
図.28 327.1444 m/z のピーク面積グラフ（ソフト水熱処理により減少する成分）（Negative mode）

図.29 509.3474 m/z のピーク面積グラフ（ソフト水熱処理により減少する成分）（Negative mode）
図.30 537.3413 m/z のピーク面積グラフ（ソフト水熱処理により減少する成分）（Negative mode）

図.31 523.3632 m/z のピーク面積グラフ（ソフト水熱処理により減少する成分）（Negative mode）

ソフト水熱処理により変化した成分の処理強度（温度・時間）による解析において、ソフト水熱プロセスの加水分解作用によりリグニンを穏やかに分解し、きのこの生育に必要なリグニン系香族モノマーが生成されること（図.23-25）、およびソフト水熱プロセスの抽出除去作用により老廃物質、腐敗物質と考えられる有機物質が処理強度（温度、時間）に比例して除去されたこと（図.26-31）が実証された。
##### 2.4.1.2 ブナシメジ培地の成分分析 未接種培地と廃培地

図.32 S-plot 両端のピークを解析（Negative mode）-未接種培地（通常培地）と廃培地の比較-

表.14 マーカー候補(Negative mode) - 未接種培地（通常培地）と廃培地の比較-

未接種培地側	廃培地側
Selected Peak	Retention Time (min)	Measured MW (m/z)	Retention Time (min)	Measured MW (m/z)
1	2.6809	119.0499	3.1475	173.1175
2	2.6828	163.0393	2.3121	171.0658
3	4.0449	207.1033	2.8068	185.0812
4	2.493	237.0762	3.4936	187.1329
5	2.6052	237.0763	3.2824	199.0967
6	2.7114	267.0866	3.4011	201.1125
7	4.6616	287.2227	2.4301	239.092
8	3.2017	279.0859	2.7658	263.1283
9	2.9262	293.1031	0.7535	312.0945
10	5.8499	293.2114	4.5135	521.3473
11	5.7118	293.2117	4.1322	503.3002
12	5.6732	295.2267	4.1308	523.3632
13	5.054	311.222
14	4.9546	313.2374
15	5.3131	315.2529
16	3.7234	327.2169
17	2.3429	319.1178
18	4.3525	329.2326
19	4.2421	329.2323
20	3.9012	329.2328
21	3.7008	439.244
22	3.6995	403.2688
23	3.6995	449.2744
24	3.9249	793.4361
## Soft-hydrothermal processing

未接種培地側で抽出したマーカーにおける、ネガとポジモードの両方で一致したピーク（赤文字）についてさらに解析を進めた（表15～表22参照）。また、多量成分（MSイオンの強度に基づく）が高かった4成分（黒文字背景ハイライト）についても同様に解析を進めた（表19(1)～(2)参照）。

表.15 未接種培地マーカー候補の構造検索結果 (Negative, Positive に共通の成分)

Selected Peak	Retention Time(min)	Measured m/z	Possible Elemental Composition (Mass difference/mDa)	Hit compound searched by measured mass	Possible structure
5	2.6052	237.0763	(1)	C12H13O5 (0.0)	(1)	1,8-Diamino-9,10-anthraquinone
(2)	C13H9N4O (-1.3)	(2)	1,5-Diamino-9,10-anthraquinone
(3)	C11H10N4O Na (1.1)	(3)	2,6-Diamino-9,10-anthraquinone
11	5.7118	293.2117	(1)	C18H29O3 (0.0)	(1)	2-[2-[4-(2,4,4-Trimethyl-2-pentanyl)phenoxy]ethoxy]ethanol
(2)	C16H30O3 Na (2.4)	(2)	N,N-Dimethyl-3-(2-methyl-1-phenyl-2,3-dihydro-1H-isoindol-1-yl)-1-propanamine
(3)	C14H25N6O (2.7)	(3)	N,N-Dimethyl-3-(1-methyl-3-phenyl-2,3-dihydro-1H-indol-3-yl)-1-propanamine

Selected Peak	Retention Time(min)	Measured m/z	Possible Elemental Composition (Mass difference/mDa)	Hit compound searched by measured mass	Possible structure
14	4.9546	313.2374	(1)	C7H29N12S (1.5)	(1)	1,2-Ethanediyl dioctanoate	—
(2)	C4H25N16O (-2.3)	(2)	Dioctylperoxyanhydride	—
(3)	C11H33N6O2S (-1.2)	(3)	N,N-Dimethyl-2-[2-[2-(1-piperidinyl)ethyl]-1H-benzimidazol-1-yl]-1-propanamine
15	5.3131	315.2529	(1)	C18H35O4 (-0.6)	(1)	4-(2-Methyl-2-propanyl)-1,1-bis[(2-methyl-2-propanyl)peroxy]cyclohexane
(2)	C19H31N4 (-2.0)	(2)	3,3-(1,3-Propanediyldiyl)-4,1-piperidinediyldipropanentrile
(3)	C17H32N4Na (0.4)	(3)	9,10-Dihydroxyoctadecanoic acid	—
※ 未接種培地側の237.0763 m/zは前述の再生培地側のピーク15と同様（表1、表2(2)、表5参照）

表.16 未接種培地マーカー候補の構造検索結果（293.2117 m/z）

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
294.2136	8205	294.2195	1	-5.9	0	2	0	C18H30O3	none
293.2112	42652	293.2117	1	-0.5	0	1	0	C18H29O3	none
Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
294.2136	8205	294.2195	1	-5.9	0	2	0	C18H30O3	none
293.2112	42652	293.2117	1	-0.5	0	1	0	C18H29O3	none
Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
294.2136	8205	294.2195	1	-5.9	0	2	0	C18H30O3	none
293.2112	42652	293.2117	1	-0.5	0	1	0	C18H29O3	none

表.17 未接種培地マーカー候補の構造検索結果（313.2374 m/z）

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
データベース上に推定組成式に適合する化合物無

「Hit compound searched by measuredmass」においては、315.2529m/zと類似性のある化合物がヒットしていることから、表18のように類縁化合物であることも考えられる。
表.18 未接種培地マーカー候補の構造検索結果（315.2529 m/z）

Fragment Pattern 解析 315.2529m/z Mass differenceの小さい組成式 C18H35O4 について

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
Possible structure	316.2562	55989	316.2614	1	-5.2	0	2	0	C18H36O4	none
315.2529	273837	315.2535	1	-0.6	0	1	0	C18H35O4	none
297.2415	2155	297.243	1	-1.5	1	0	0.5	C18H33O3	H2O
297.2415	2155	297.243	2	-1.5	1	0	0.5	C18H33O3	H2O
297.2415	2155	297.243	3	-1.5	1	0	0.5	C18H33O3	H2O

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	<ecel>

表.19(1) 未接種培地マーカー候補の多量成分の構造検索結果 ①

Selected Peak	Retention Time(min)	Measured m/z	Possible Elemental Composition (Mass difference/mDa)	Hit compound searched by measured mass	Possible structure
2	2.6828	163.0393	(1)	C9H7O3 (-0.2)	(1)	2-Oxo-3-phenylpropanoic acid
(2)	C7H8O3Na (2.2)	(2)	4-Acetylbenzoic acid
(3)	C4H7N2O5 (3.8)	(3)	4-Oxatricyclo[5.2.1.0”2,6”]dec-8-ene-3,5-dione
4	2.493	237.0762	(1)	C13H9N4O (-1.4)	(1)	1,8-Diamino-9,10-anthraquinone
(2)	C12H13O5 (-0.1)	(2)	1,5-Diamino-9,10-anthraquinone
(3)	C11H10N4ONa (1.0)	(3)	2,6-Diamino-9,10-anthraquinone
表.19(2) 未接種培地マーカー候補の多量成分の構造検索結果 ②

Selected Peak	Retention Time(min)	Measured m/z	Possible Elemental Composition (Mass difference/mDa)	Hit compound searched by measured mass	Possible structure
20	3.9012	329.2328	(1)	C18H33O5 (0.0)	(1)	(1S,3aS,3bR,5aS,10aS,10bS,12aS)-1,10a,12a-Trimethyl-2,3,3a,3b,4,5,5a,6,10,10a,10b,11,12,12a-tetradecahydro-1H-cyclopenta[7,8]phenanthro[2,3-c][1,2,5]oxadiazol-1-ol
(2)	C16H34O5Na(2.4)	(2)	N,N-Diethyl-2-[2-[2-(4-morpholinyl)ethyl]-1H-benzimidazol-1-yl]ethanamine
(3)	C17H30N4ONa (1.1)	(3)	3-[(Dibutylamino)methyl]-7-methoxy-2-methyl-4-quinolinol
19	4.2421	329.2323	(1)	C18H33O5 (-0.5)	(1)	(1S,3aS,3bR,5aS,10aS,10bS,12aS)-1,10a,12a-Trimethyl-2,3,3a,3b,4,5,5a,6,10,10a,10b,11,12,12a-tetradecahydro-1H-cyclopenta[7,8]phenanthro[2,3-c][1,2,5]oxadiazol-1-ol
(2)	C17H30N4ONa (0.6)	(2)	N,N-Diethyl-2-[2-[2-(4-morpholinyl)ethyl]-1H-benzimidazol-1-yl]ethanamine
(3)	C16H34O5Na (1.9)	(3)	3-[(Dibutylamino)methyl]-7-methoxy-2-methyl-4-quinolinol

表.20 未接種培地マーカー候補の構造検索結果（163.0393 m/z）

Fragment Pattern 解析 163.0393m/z Mass differenceの小さい組成式 C9H7O3 について

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
HO-OH	164.0429	14908	164.0473	1	-4.4	0	2	0	C9H8O3	none
163.0395	154116	163.0395	1	0	0	1	0	C9H7O3	none
145.029	3797	145.029	1	0	1	0	0.5	C9H5O2	H2O
120.0531	10815	120.0575	1	-4.4	1	3	1	C8H8O1	CO2
119.0496	132946	119.0497	1	-0.1	1	2	1	C8H7O1	CO2
Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
164.0429	14908	164.0473	1	-4.4	0	2	0	C9H8O3	none
163.0395	154116	163.0395	1	0	0	1	0	C9H7O3	none
Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
164.0429	14908	164.0473	1	-4.4	0	2	0	C9H8O3	none
163.0395	154116	163.0395	1	0	0	1	0	C9H7O3	none
145.029	3797	145.029	1	0	1	0	0.5	C9H5O2	H2O
表.21 未接種培地マーカー候補の構造検索結果（237.0763 m/z） - Mass difference の小さい組成式 C12H13O5 について

表2(2) 記載の推定組成式

表.22(1) 未接種培地マーカー候補の構造検索結果 (329.2328 m/z および 329.2323 m/z)

Fragment Pattern 解析 329.2328m/z および 329.2323m/z Mass differenceの小さい組成式 C18H33O5 について

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
211.1331	80559	211.1334	2	-0.3	2	1	1.5	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	3	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	4	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	5	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	6	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	7	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
171.1018	31041	171.1021	1	-0.3	1	0	1	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	2	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	3	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	4	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	5	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	6	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
表.22(2) 未接種培地マーカー候補の構造検索結果 (329.2328 m/z および 329.2323 m/z)

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
-	330.2361	996762	330.2406	1	-4.5	0	2	0	C18H34O5	none
329.2327	5137665	329.2328	1	-0.1	0	1	0	C18H33O5	none
229.1434	91713	229.144	1	-0.6	1	2	1	C12H21O4	C6H12O
211.1331	80559	211.1334	1	-0.3	2	1	1.5	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	2	-0.3	2	1	1.5	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	3	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	4	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	5	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	6	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	7	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
171.1018	31041	171.1021	1	-0.3	1	0	1	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	2	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	3	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	4	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	5	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	6	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
-	329.2327	5137665	329.2328	1	-0.1	0	1	0	C18H33O5	none
229.1434	91713	229.144	1	-0.6	1	2	1	C12H21O4	C6H12O
211.1331	80559	211.1334	1	-0.3	2	1	1.5	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	2	-0.3	2	1	1.5	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	3	-0.3	2	1	1.5	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	4	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	5	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	6	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	7	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
211.1331	80559	211.1334	8	-0.3	2	-1	2	C12H19O3	C6H14O2
171.1018	31041	171.1021	1	-0.3	1	0	1	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	2	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	3	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	4	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	5	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
171.1018	31041	171.1021	6	-0.3	2	1	2	C9H15O3	C9H18O2
## Soft-hydrothermal processing

前述の図.22(1)，(2)に示すように、ネガとポジ多量成分の一致ピークをマーカーとして、ソフト水熱処理により変化した成分を処理強度（温度・時間）により未接種培地（通常培地）側で抽出したマーカーについてさらに解析を進めた（図.33～図.35。237.0763 m/zは再生培地マーカーピーク15と同様、図25参照）。これらはきのこ栽培で消費された物質であって、ソフト水熱処理で変化しない物質の群である。

## ➢ 未接種培地（通常培地）特有の物質

図.33 293.2117 m/z のピーク面積グラフ (きのこ栽培により減少しソフト水熱処理で変化しない成分) (Negative mode)

図. 34 313.2374 m/z のピーク面積グラフ（ソフト水熱処理により増加する成分）（Negative mode）
図.35 313.2529 m/z のピーク面積グラフ (きのこ栽培により減少しソフト水熱処理で変化しない成分) (Negative mode)

これらの成分は未接種培地にきのこのエネルギー源として混合したコメヌカ、フスマ等の油分、すなわち脂肪酸と考えられる。これらの成分はきの二生育により消費されるがソフト水熱プロセスにより再生されることはない。しかし再生培地には未接種培地同様にこれらのコメヌカ、フスマ等の栄養源を混合するので再生培地の中にこれらの成分が取り入れられることになる。207.1033 m/z, 287.2227 m/z, 293.114 m/z, 311.222 m/z, 295.2267 m/z, 327.2169 m/z, 329.2323 m/z, 329.2326 m/z, 329.2328 m/z, 493.244 m/z, 449.2744 m/z, 403.2688 m/z, 793.4361 m/z についても同様である（グラフ省略）。

未接種培地（通常培地）側で抽出したマーカーについて同様に解析を進めた。図.36にきのこ栽培で消費された物質（栄養素等の可能性あり）であって、ソフト水熱処理で部分的に再生可能な物質の群を提示する。これらはきのこ栽培で消費された物質（栄養素等の可能性あり）であって、ソフト水熱処理で再生可能な物質の群を提示する。

図.36 163.0393 m/z, 237.0762 m/z のピーク面積グラフ （きのこ栽培により減少するがソフト水熱処理により増加成分）(Negative mode)
## Soft-hydrothermal processing

これらはリグニン系香族モノマーの237.0763 m/zと類似するが芳香環置換基の少ないきのこ培地に使用されるものに「草本系植物（ムギやイネに由来するコメヌカ、ワラ、フスマ等のいわゆる培地添加物）」系芳香族モノマーと考えられる。これらは添加材として通常培地と同様に再生培地においても適宜添加している。119.0499 m/z, 267.0866 m/z, 279.0859 m/z, 293.1031 m/z, 319.1178 m/z についても同様の群と考えられる。（グラフ省略）

また、廃培地側マーカーについても、同様に解析を進めた（図.37参照）。

## ➢ 廃培地特有の物質

図.37 173.1175 m/z, 185.0812 m/z, 171.0658 m/z, 187.1329 m/z のピーク面積グラフ（きのこ栽培により増加しソフト水熱処理で変化しない成分）(Negative mode)

これら成分は、きのこ栽培で増加した物質であり、ソフト水熱処理で変化しないあるいは更に増加する物質の群である。多成分が少量ずつ混在している。これらは実際に再生培地で通常の培地と同等、あるいは同等以上の収穫量及び品質を実証していることより、きのこの生育らは関与しないものと推察される。199.0967 m/z, 239.092 m/z, 201.1125 m/z, 263.1283 m/z, 312.0945 m/z, 503.3002 m/z についても同様の傾向が提示されたため、同様の成分の特徴を提示する群あると考えられる（グラフ省略）。

また 521.3473 m/z, 523.3632 m/z の成分については、前述のソフト水熱プロセスの再生培地と廃培地を比較したときの図.26から図.31と同様に本来未接種培地には存在しないが、しかしきのこ栽培で増加した物質（老廃物、代謝物等の可能性あり）であって、ソフト水熱処理で除去可能な物質と同様であった。（グラフ省略）
##### 2.4.1.3 ブナシメジ培地の成分分析 未接種培地と再生培地

図.38 S-plot 両端のピークを解析 (Negative mode)

-未接種培地と再生培地（ソフト水熱プロセス）の比較-

表.23(1) マーカー候補(Negative mode) - 未接種培地と再生培地（ソフト水熱プロセス）の比較

未接種培地側	再生培地側
Selected Peak	Retention Time (min)	Measured MW (m/z)	Retention Time (min)	Measured MW (m/z)
1	1.9826	203.0811	2.7458	135.0445
2	4.0449	207.1033	3.2818	163.0395
3	3.2382	259.0969	2.7847	159.1021
4	3.1701	263.1288	2.3584	159.0656
5	4.6616	287.2227	0.5431	158.9782
6	4.8988	307.1898	2.5481	158.0818
7	5.8499	293.2114	2.4027	167.0342
8	5.7118	293.2117	2.7233	173.0812
9	5.6732	295.2267	3.1475	173.1175
10	4.8352	311.2214	3.1175	177.0548
11	5.054	311.222	3.0698	187.0969
12	4.9546	313.2374	3.3753	193.05
13	5.3131	315.2529	2.4494	197.0447
14	3.7234	327.2169	2.5282	189.1127
15	4.3525	329.2326	3.4936	187.1329
16	4.2421	329.2323	4.3413	198.1486
Soft-hydrothermal processing

表.23(2) マーカー候補(Negative mode) - 未接種培地と再生培地（ソフト水熱プロセス）の比較

未接種培地側	再生培地側
Selected Peak	Retention Time (min)	Measured MW (m/z)	Retention Time (min)	Measured MW (m/z)
17	3.9012	329.2328	3.2824	199.0967
18	0.6305	341.1085	2.7752	205.0501
19	4.5624	357.2273	2.4812	203.0919
20	3.7008	439.244	2.8031	217.1074
21	3.6995	403.2688	2.6512	225.04
22	3.6995	449.2744	3.4029	223.0612
23	2.61	399.9146	4.3423	242.1389
24	3.9249	793.4361	2.918	261.1335
25	2.3209	261.0876
26	2.622	247.1181
27	2.8849	257.1497
28	2.7658	263.1283
29	3.6626	287.1495
30	3.8777	293.1509
31	4.1654	315.1804
32	3.7327	343.0822

未接種培地側で抽出したマーカーにおける、ネガとポジモードの両方で一致したピーク（赤文字）について、293.2117 m/z は、前述の表.14 の「マーカー候補(Negative mode) - 未接種培地（通常培地）と廃培地の比較-」ピーク11と共通である（表.14、表.15、表.16参照）。同様に313.2374 m/z は、表.14 の「マーカー候補(Negative mode) - 未接種培地（通常培地）と廃培地の比較-」のピーク14と共通である（表.14、表.15、表.17参照）。また、315.2529 m/z は、同様に表.14 の「マーカー候補(Negative mode) - 未接種培地（通常培地）と廃培地の比較-」のピーク15と共通である（表.14、表.15、表.18参照）。ソフト水熱処理培地側で抽出したマーカーにおける、ネガとポジモードの両方で一致したピーク（青文字）315.1804 m/z について、さらに解析を進めた。

表.24 ソフト水熱処理培地マーカー候補の構造検索結果（315.1804 m/z）

Selected Peak	Retention Time(min)	Measured m/z	Possible Elemental Composition (Mass difference/mDa)	Hit compound searched by measured mass	Possible structure
31	4.1654	315.1804	(1)	C15H24N4O2Na (0.7)	(1)	2-[4-(4-Fluorophenyl)-1-piperazinyl]bicyclo[3.3.1]nonan-9-one
(2)	C13H19N10 (1.0)	(2)	5-[(1-Methyl-3-pyrrolidinyl)methyl]-10,11-dihydro-5H-dibenzo[a,d][7]annulene-5-carbonitrile
(3)	C17H23N4O2 (-1.7)	(3)	2-Phenyl-4-[2-(4-piperidinyl)ethyl]quinoline
Soft-hydrothermal processing

表.24の推定組成式から、315.1804 m/zを次のように考察した。

(1) C15HU24N402Na はデータベース上に本組成式に適合する化合物はなかった。

(2) C13H19N10 は酸素を全く含まない化合物であり、生物由来でない可能性が高い。

(3) C17H23N4O2 は、次のような化合物がデータベース上でヒットした。

前述の図.22(1)，(2)に示すように、ネガとポジ多量成分の一致ピークをマーカーとして、ソフト水熱処理により変化した成分を処理強度（温度・時間）により未接種培地（通常培地）側で抽出したマーカーについて解析を進めた。

## ➢ 未接種培地（通常培地）特有の物質

293.2117 m/z、313.2374 m/z、および315.2529 m/zは、前述の未接種培地（通常培地）特有の物質と同様である。（図.33～図.35参照）これらはきの二栽培で消費された物質であって、ソフト水熱処理で変化しない物質の群である。同様に、263.1288 m/z、259.0969 m/z、307.1898 m/z、311.2214 m/z、357.2273m/z、439.244 m/z、403.2688 m/z、399.9146 m/zもきの二栽培で消費された物質であって、ソフト水熱処理で変化しない物質の群である（グラフ省略）。

未接種培地（通常培地）側で抽出したマーカーについて同様に解析を進めた。203.0811 m/z ピーク成分はきのこの生育により増加しソフト水熱処理で減少する成分あり、341.1085 m/z ピーク成分はきのこの栽培により増加するがソフト水熱処理で減少する成分である。これらの成分は、多成分が少量ずつ混在している。これらは実際に再生培地で通常の培地と同等、あるいは同等以上の収穫量及び品質を実証していることより、きのこの生育は関与しないものと推察される。

## ➢ 再生培地（ソフト水熱プロセス）特有の物質

ネガとポジ多量成分の一致ピークをマーカーとして315.1804 m/zについて、ソフト水熱処理により変化した成分を処理強度（温度・時間）により再生培地（ソフト水熱プロセス）側で抽出したマーカーについて解析を進めた（図.39参照）。またほかのソフト水熱プロセス処理による再生培地側のマーカーも、同様に解析を進めた。

315.1804 m/z のピーク成分はきのこの生育に伴い増加した物質（老廃物、代謝物等の可能性あり）であって、ソフト水熱処理で変化しない、あるいは、更に増加する物質である。ほかの再生培地（ソフト水熱プロセス）の成分である159.1021 m/z, 158.9782 m/z, 159.065 m/z, 158.0818 m/z, 173.0812 m/z, 189.1127 m/z, 187.0969 m/z, 198.1486 m/z, 205.0501 m/z, 217.1074 m/z, 203.0919 m/z, 242.1389 m/z, 261.1335 m/z, 257.1497 m/z, 247.1181 m/z, 287.1495 m/z, 293.1509 m/z もきのこ栽培で増加した物質（老廃物、代謝物等の可能性あり）であって、ソフト水熱処理で変化しない、あるいは、更に増加す
## Soft-hydrothermal processing

る物質である。（グラフ省略）これらの成分は、多成分が少量ずつ混在している。これらは実際に再生培地で通常の培地と同等、あるいは同等以上の収穫量及び品質を実証していることより、きのこの生育らは関与しないものと推察される。

図.39 315.1804 m/z のピーク面積グラフ (きのこ栽培により増加しソフト水熱処理でも増加する成分) (Negative mode)

2.4.2 エノキタケ培地の成分分析 申請者らは、エノキタケにおいても同様にエノキタケ廃培地および条件の異なるソフト水熱プロセスによって再生させた培地、未使用培地から得られた温水可溶性画分を LC/MS 分析に供した。LC/MS 分析では、Negative と Positive の両モードで分析・検出を行い、得られた網羅的質量分析データに対し、主成分分析およびクラスター解析によるグルーピング、各グループに特徴的なピーク（マーカー）の抽出を行った。

その結果、ブナシメジ廃培地とほぼ同様の傾向を示す主成分分析、クラスター解析結果が得られ、ソフト水熱プロセスによるバイオマス改質を特徴付けるマーカー分子の存在が示唆された。

## 测定条件：

## サンプル調製

未接種培地、廃培地、およびソフト水熱処理した各サンプル（下表）を90℃で6時間乾燥後パウダー状に粉砕、10倍量のMQ水を加えて60℃で3時間静置することにより温水抽出した。これを8000rpmで5分間遠心分離し、上澄を固相抽出カラム（OASIS WAX: waters 社製）で前処理後、溶離液を窒素乾固し、20%のアセトニトリル水溶液に再度溶解し、下記条件でLC/MS分析に供した。

## LC/MS 条件

移動層 A 液：2mM 酢酸アンモニウム、0.05% ギ酸 B 液：95% アセトニトリル

$$ 分析カラム \qquad 逆相モード \qquad ACQUITY\ UPLC\ C18\ 1.7\mu m $$

検出 飛行型精密質量分析装置 Xevo G2 Qtof ESI Negative/Positive モード

測定用サンプル名/解析用サンプル名：
Soft-hydrothermal processing

処理前(廃培地)	30分処理	60分処理
4/21付 未接種培地	1/eNEW(通常培地)	-	-
4/21付 (120℃処理)	2/e120-0	3/e120-30	4/e120-60
4/22付 (130℃処理)	5/e130-0	6/e130-30	7/e130-60
4/23付 (140℃処理)	8/e140-0	9/e140-30	10/e140-60
4/24付 (150℃処理)	11/e150-0	12/e150-30	13/e150-60

LC/MS ソフト水熱処理比較(120℃)(Negative mode)

LC/MS ソフト水熱処理比較(130℃)(Negative mode)
LC/MS ソフト水熱処理比較(140℃)(Negative mode)

LC/MS ソフト水熱処理比較(150℃)(Negative mode)

Enoki_11_1_naga_measure1 02:14:16
図.40 主成分分析とクラスター解析に基づき3グループに分けて比較(Negative mode) - エノキタケ -

##### 2.4.2.1 エノキタケ培地の成分分析 再生培地と廃培地

以下、エノキタケの S-plot 両端のピークを解析 (Negative mode) の再生培地（ソフト水熱プロセス）と廃培地との比較を図.41 に提示する。また、表.25 にそれぞれのマーカー候補をブナシメジとの共通成分と対照して提示する。

図.41 S-plot 両端のピークを解析 (Negative mode)

-エノキタケ 再生培地（ソフト水熱プロセス）と廃培地の比較-
Soft-hydrothermal processing

表.25 マーカー候補(Negative mode)-エノキタケ再生培地（ソフト水熱プロセス）と廃培地の比較

再生培地(ソフト水熱プロセス)側	廃培地側
Selected Peak	Retention Time (min)	Measured MW (m/z)	Retention Time (min)	Measured MW (m/z)
1	2.5566	121.0289	2.4182	168.0295
2	2.3127	136.0398	2.7628	283.1284
3	2.9933	137.0238	3.5074	426.2075
4	2.1853	137.0237
5	2.7187	135.0445
6	2.736	151.0392
7	2.2727	195.0293
8	3.5408	214.108
9	3.462	243.1597
10	2.504	515.1911 赤字:Negative, Positive 共通	青:シメジ、エノキ共通

表.26に選択したピーク（ネガティブ、ポジティブ共通-赤字）の構造検査の結果を提示する。また表.27にそのフラグメントパターン解析（136.0398 m/z）を提示する。

同様に、表.28に選択したピーク（ブナシメジ、エノキタケ共通）の構造検査の結果を提示する。また表.29、表.30にそのフラグメントパターン解析（それぞれ135.0445 m/zおよび151.0392 m/z）を提示する。

表.26 構造検索結果(136.0398 m/z)-エノキタケネガティブ、ポジティブ共通-

Selected Peak	Retention Time(min)	Measured m/z	Possible Elemental Composition (Mass difference/mDa)	Hit compound searched by measured mass	Possible structure
2	2.3127	136.0398	(1)	C5H7NO2Na (2.4)	(1)	3-Pyridinylacetic acid
(2)	C7H6NO2 (-0.1)	(2)	4-Aminobenzoic acid
(3)	C3H2N7 (2.6)	(3)	1-Methyl-2-pyridiniumcarboxylate
Soft-hydrothermal processing

表.27 Fragment Pattern 解析(136.0398 m/z)-mass difference の小さい組成式 C7H6N02-

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
136.0394	37719	136.0399	1	-0.5	0	1	0	C7H6N1O2	none

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
136.0394	37719	136.0399	1	-0.5	0	1	0	C7H6N1O2	none

Possible structure	daughter	intensity	mass	rank	mass error	bonds	h	score	formula	formula diff
136.0394	37719	136.0399	1	-0.5	0	1	0	C7H6N1O2	none

表.28 構造検索結果-エノキタケ ブナシメジ、エノキタケ共通-

Selected Peak	Retention Time(min)	Measured m/z	Possible Elemental Composition (Mass difference/mDa)	Hit compound searched by measured mass	Possible structure
5	2.7187	135.0445	(1)	C3H7N2O4 (3.9)	(1)	Methyl benzoate
(2)	C6H8O2Na (2.3)	(2)	3-Methylbenzoic acid
(3)	C8H7O2 (-0.1)	(3)	1-(4-Hydroxyphenyl)ethanone
6	2.736	151.0392	(1)	C8H7O3 (-0.3)	(1)	(4-Hydroxyphenyl)acetic acid
(2)	C6H8O3Na (2.1)	(2)	Hydroxy(phenyl)acetic acid
(3)	C4H3N6O (2.4)	(3)	3-Hydroxyphenyl acetate