Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
る炭素数18のn-3系不飽和脂肪酸のα-リノレン酸(18:3n-3)を前駆体として生合成することができる（図(3)-1）。一方、α-リノレン酸はDHAを直接摂取する場合に比べ、DHAの供給源としての効率が悪いため、胎児からの要求と母乳への移行のためにDHA必要量が大きくなる妊娠・授乳期には、魚介類を積極的に摂取することが望ましいとの考えが欧米では主流になっている。たとえば、子宮内胎児発育遅延と脂肪酸の関連を調べた学際的研究プロジェクトであるPeriLip（Perinatal Lipid Metabolism；欧州委員会）では、妊娠・授乳期の女性に対し一日200 mg以上のDHAの摂取を推奨しており $ ^{1} $ 、これは一週間に2回程度、海の魚を摂取することに相当する。しかし、妊娠・授乳期における脂肪酸代謝に関する知見は乏しく、魚介類を摂取しない場合の、α-リノレン酸のDHA前駆体としての有効性について詳細は明らかになっていない。

図(3)-1 脂肪酸合成経路と関連する主な酵素

α－リノレン酸がDHA前駆体として限定的である根拠は、主に以下の三つの理由が挙げられている。1）猿を用いた実験で、妊娠したアカゲザルに投与したα－リノレン酸は胎児の脳に取り込まれるものの、その効率はDHAを投与した場合の20分の1と効率が悪い $ ^{2)} $ 。2)ヒトへの介入試験で、α－リノレン酸のサプリメントにより血中のエイコサペンタエン酸(20:5n-3)、ドコサペンタエン酸(22:5n-3)は上昇するが、DHAの上昇はみられない $ ^{3)} $ 。3）安定同位体ラベル化α－リノレン酸を若い女性に投与した代謝追跡試験では、投与したα－リノレン酸の22%が24時間以内にβ酸化され、DHAに代謝されるのは9％に過ぎない $ ^{4)} $ 、というものである。ただし、これらの報告はα－リノレン酸がDHA源として効率が悪いことを示しているが、α－リノレン酸のみをn-3系脂肪酸源として摂取した場合に、DHAが不足する可能性を指摘するものではない。恒常的にDHAを摂取していない完全菜食主義者の母乳を調査した報告では、完全菜食主義者の母乳DHA量は0.14％と、雑食者の0.37％の半分以下になると報告されているが、この報告で子の身長、体重、及び頭囲に有意な差はみられなかった $ ^{5)} $ 。すなわち、DHAを摂取しない場合、母乳のDHA含量は減少するものの、α－リノレン酸由来と推定されるDHAは母乳中に存在することが示されている。

妊婦・胎児のDHA必要量について、出生後死亡した新生児の組織を用いた調査から知見が得られ
ている。正期産児の場合は、DHAの蓄積は妊娠第三期より急激に増加し、およそ67 mg/日の速度で蓄積すると見積もられている $ ^{6)} $ 。また、Innisの試算によると完全母乳児が一日780 mLの母乳を飲み、その脂質含量が3.7 g/dLで母乳のDHA含量が0.35%とすると、一日に分泌されるDHAは100 mgとされる $ ^{7)} $ 。平成17年及び18年国民健康・栄養調査によると、日本人妊娠の一日のα-リノレン酸摂取量の50パーセンタイル値は1.34 g(n=65)であり、若い女性でのα-リノレン酸からDHAの代謝転換効率9％を積算した場合、一日120 mgのDHAがα-リノレン酸から合成される $ ^{4)} $ ため、α-リノレン酸のみで妊娠・授乳に必要なDHAを供給できる可能性が高い。しかし、α-リノレン酸からのDHA合成の代謝転換効率は、性ホルモン、喫煙、摂取する脂肪酸種（リノール酸、α-リノレン酸、DHA、エイコサペンタエン酸及びトランス酸）、ならびにα-リノレン酸からDHAを合成する酵素の遺伝的変異等により影響を受けるため（図(3)-2）、これらの交絡因子によっては生成されるDHAが不足することが予想される。しかし、魚介類の摂取量が多い我が国ではDHAが常に充足されており、これまでα-リノレン酸のDHAの供給源としての役割については関心がもたれてこなかったと考えられる。

図(3)-2 ほ乳類における脂肪酸代謝の概要と、その酵素反応における交絡要因

そこで本サブテーマでは、妊娠期におけるDHA要求量の増加に伴う、α-リノレン酸からのDHA生成の関与について明らかにするため、母体血、臍帯血、及び胎盤の脂肪酸同士の関連性、特にn-6系、n-3系の不飽和脂肪酸について解析を目指した。また長鎖不飽和脂肪酸合成経路の交絡因子として、脂肪酸の代謝経路に影響するとされるトランス酸についても着目し、n-6系、n-3系の不飽和脂肪酸との関係を明らかにすることとした。

## 2 ．研究開発目的

サブテーマ3では、妊娠期における脂肪酸生成ならびにその阻害要因に関する解析を行うことを目的とした。特に、α-リノレン酸からDHAへの生成成経路について、交絡要因としてトランス酸を含めて解析を行った。サブテーマ2にて、妊娠の魚摂取の推定および母子間のDHAの移行を推定する目的で、既に妊娠及び胎児の赤血球脂肪酸組成が測定されている。サブテーマ3では、これに加え、胎盤中の脂肪酸組成を測定し、母児赤血球脂肪酸組成との関連性の詳細な解析を目指し
た。

胎盤に着目した理由としては以下の3点があげられる。まず、胎盤は胎児とともに成長するため、胎児に送られる脂肪酸組成の特徴を反映すると考えられたこと。また、胎盤は胎児の発育のための器官で、呼吸（ガス交換）、不要な物の排泄、有害物質に対する障壁の他に、胎児へ栄養の供給およびホルモンや酵素など胎児に必要な物質の産生などの仕事を担うため、母親から子へ送られる脂肪酸の代謝にも関与していると考えられていること。さらに、胎盤は娩出後に医療廃棄物として破棄される臓器であり、入手が容易な上、人体より非侵襲的に採取できる生体試料としては大きな臓器であるという、材料としての利点があることである。臍帯血はエコチル調査で優先して確保を行うため、サンプル数（と量）を十分量確保できないケースが想定され、追加調査では臍帯血が欠損する可能性が高い。特に、低出生体重児の場合、臍帯血の採取可能量も少ないと考えられるものの、そのような児の成長こそ丁寧にフォローすべきとも考えられる。胎盤の活用が期待された。

一方で、胎盤の脂肪酸組成の報告例は、世界的にみても血漿や赤血球と比べ非常に少ない。そこで、まずは胎盤の脂肪酸組成についてGC-FID法とGC-CIMS法を用い、詳細な組成分析法の開発を行った。特に、後述するように、トランス酸が脂質代謝に影響を与えている可能性があることから、トランス酸の化学分析系の構築を行った。並行して、胎盤が疫学試料として利用可能であることを確認するため、胎盤試料の冷蔵保存における脂肪酸組成の安定性と、胎盤中の採取部位によるばらつきの程度を評価した。

次に、妊娠期の脂肪酸合成についての特徴を捉えるため、母体血、臍帯血、及び胎盤の脂肪酸同士の相関を調べた。さらに、上述のように、臍帯血はエコチル調査で優先して確保を行うため、胎児の成長との比較が欠かせない出生体重が小さい児に偏って試料が欠損する危険性が高い。そこで、試料量が豊富で、エコチルの採取試料との競合がなく、採取試料の欠損が少ないメリットを持つ胎盤や母体血のデータから、臍帯血欠損事例で臍帯血赤血球脂肪酸組成を推定することが可能かの検討を行った。

さらに、不飽和脂肪酸を人工的に水素添加した際に副生成物で生じるトランス酸についての検討を行った。トランス酸により脂肪酸代謝系が攪乱される可能性がこれまでに報告されており、胎盤試料を用いてトランス酸を分析し、トランス酸が他の脂肪酸に与える影響についての評価を目指した。

### 3. 研究開発方法

妊娠及び授乳期間におけるn-3系不飽和脂肪酸の代謝系解析を目的とし、1）胎盤の脂肪酸組成の詳細な解析と、保存性・部位毎の組成の変動の調査、2)サブテーマ2と連携した母体・膚帯血赤血球との比較、3）その他の交絡要因としてのトランス脂肪酸の化学分析と、トランス酸による阻害反応の確認について基礎的な解析を進めた。

胎盤脂肪酸の化学分析方法について、簡単には、凍結保管されていた胎盤試料（1g程度）を生理食塩水で洗浄し、凍結乾燥により保管した。分析時に凍結乾燥品を粉砕し、Folch法に準じクロロホルム・メタノールによる脂質抽出及び洗浄を行い、得られた総脂質をアルカリ条件で脂肪酸に分解（100℃、7分）した後、三フッ化ホウ素メタノール（室温、30分）でメチルエステル化を行った。得られた脂肪酸メチルエステルはヘキサンにて抽出し、ガスクロマトグラフィー分析用試料
とした。

ガスクロマトグラフィーとしてGC-4000（ジーエルサイエンス株式会社、東京）、カラムとしてSP-2560（Sigma-Aldrich社、USA、カラム長100m、内径0.25mm、膜厚0.25μm）を用いた。移動相はヘリウムガスとし、水素炎イオン化検出器を用いた。検出器温度250℃、注入口温度220℃、昇温プログラムは45℃4分保持→13℃/分で昇温→170℃27分保持→4℃/分で昇温→215℃24分保持→4℃/分で昇温→240℃10分保持とした。試料の同定は既知の市販標準品を用い、溶出保持時間との比較により行った。市販標準品からの推定が出来ないものについては、試料の溶出順より推定される炭素数・不飽和度・不飽和結合の位置と、GC-CI/MSにより推定された分子量から推定を行った。

次に、脂肪酸の母児移行の要因を詳細に検討するとともに、胎盤や母体血のデータから臍帯血の値を推定することが可能かの検討を行った。すなわち、サブテーマ2と連携し、1）母体血・臍帯血との相関を調べ、ここからα-リノレン酸からエイコサペンタエン酸、DHAへの変換能の推定、2)トランス脂肪酸の化学分析と、トランス脂肪酸による阻害反応の確認、などについて基礎的な解析を進めた。

## 4 ．結果及び考察

n-3系不飽和脂肪酸の合成と代謝に対する交絡要因として、母親年齢、BMI、喫煙習慣、女性ホルモンのレベル、運動習慣、リノール酸摂取量、及びトランス酸摂取量などが関与するものと考えられる（図(3)-2）。このうち、栄養疫学的には、遺伝子多型とトランス酸の摂取量が重要な要因と推測された。このため、遺伝子多型については、サブテーマ2と連携しゲノム解析の準備を行うとともに、本サブテーマでは胎盤を用いた脂肪酸の分析法を確立した。また、胎盤試料は、分娩後に寸法や肉眼的な検索が行われるため、すぐには凍結できない事情がある。このため胎盤試料を冷蔵保存した場合の安定性を検討するとともに、採取部位によるばらつきの程度を評価した。

図(3)-3 脂肪酸の詳細分析条件での市販標準品のクロマトグラム
1: C14:0, 2: imp, 3: C15:0, 4: DMA16:0, 5: C16:0, 6: xD1, 7: xD2, 8: UK01, 9: UK02, 10: C16:1(n-7), 11: C17:0, 12: DMA18:1, 13: xD3, 14: xD4, 15: C18:0, 16: xD5, 17: t9C18:1, 18: t10C18:1, 19: t11C18:1, 20: UK03, 21: C18:1(n-12), 22: C18:1(n-9), 23: C18:1(n-7), 24: UK04, 25: UK05, 26: xD6, 27: C19:0(ints), 28: xD7, 29: C18:2(n-6), 30: C20:0, 31: C18:3(n-6), 32: C20:1(n-11), 33: C18:3(n-3), 34: UK06, 35: UK07, 36: C20:2(n-6), 37: C20:3(n-9), 38: C22:0, 39: UK08, 40: C20:3(n-6), 41: C22:1(n-9), 42: C20:3(n-3), 43: C20:4(n-6), 44: C20:4(n-3), 45: C22:2(n-6), 46: C24:0, 47: C20:5(n-3), 48: UK09, 49: C24:1(n-9), 50: C22:4(n-6), 51: C22:5(n-6), 52: UK10, 53: C22:5(n-3), 54: C22:6(n-6), 55: UK11, 56: xD8, 57: UK12

図(3)-4 胎盤脂肪酸のクロマトグラム

A: 全体図、B: 溶出時間30分から62分までの拡大図、C: 溶出時間60分から92分までの拡大図．略号 imp：不純物、DMA：ジメチルアセタール，XD：DMA関連未同定成分,UK:未同定脂肪酸，t：トランス異性体，ints：内部標準品
まず胎盤の詳細な脂肪酸組成のための分析方法の確立を行った。トランス酸測定用のGCカラムSP-2560を用いた時の、市販標準品GLC-463(Nu-Chek Prep, Inc.)のクロマトグラムを図(3)-3に示す。次に図(3)-4に胎盤脂肪酸のクロマトグラムを示す。脂肪酸メチルエステルはGC-FID法で分析し、標準品との保持時間の比較とGC-MSによる分子量の推定から同定した。胎盤より57種のピークが検出され、34種が内部標準のノナデカン酸を含む同定済みの脂肪酸メチルエステル、12種が未同定脂肪酸メチルエステル、10種がジメチルアセタールとその関連物質、1種は不純物と推定された。ジメチルアセタールとはリン脂質グリセロール骨格の一位にビニルエーテル基をもつリン脂質、プラズマローゲンを酸性条件でメチルエステル化したときに、一位の側鎖に由来して生成する物質であり、脂肪酸と同様にリン脂質を構成する側鎖ではあるものの、脂肪酸メチルエステルで無いことと、化学的な安定性が低く今回の測定条件では測定誤差が大きいこと、胎盤リン脂質に占めるプラズマローゲン自体の割合は一定で脂肪酸組成に大きな影響を与えないことから、測定対象から除外した。図(3)-4Aのピーク番号40はC20:3n-6(ジホモッリノレン酸；DGLA)で、生体内でリノール酸からARAを生合成する時の中間体である。C20:3n-6はΔ5不飽和化酵素により代謝されARAとなるため(図(3)-1)、C20:3n-6とARAの比はΔ5不飽和化酵素の指標となる。胎盤の脂質のC20:3n-6は総脂肪酸メチルエステルの約5％と比較的高含量だったため、n-3系列脂肪酸でのC20:3n-6に相当するC20:4n-3が検出できることが期待された。そこで市販標品を使い、C20:4n-3の溶出位置を調べ(図(3)-5A)、胎盤試料においてはピーク番号44に相当する溶出位置（図(3)-5B）であることを確認した。

図3−5 C20:4n−3の溶出位置の決定

A: 市販標準品との比較、B: 胎盤脂肪酸との比較
図(3)-6 ガスクロマトグラフィーによるトランス酸の分析例

さらに胎盤脂質の脂肪酸メチルエステルへの20:4n-3の添加試験により、ピーク番号44がC20:4n-3であると同定した。また、α-リノレン酸のΔ6不飽和化酵素の代謝物で20:4n-3の前駆体の18:4n-3についても、同様に胎盤脂質に含まれるかの確認を行ったが、検出限界以下であった。18:4n-3に相当するn-6系列の脂肪酸C18:3n-6(図(3)-4,ピーク番号31)も、C20:3n-6に比べ小さく、これらの脂肪酸は合成後速やかに鎖長延長されるため、中間体としての存在量が少ないことが示唆された。以上より、リノール酸からARA、あるいはα-リノレン酸からエイコサペンタエン酸の生成の際に生ずる中間体として、n-6系列の脂肪酸では20:3n-6を、n-3系列の脂肪酸では20:4n-3に着目することとした。

トランス酸については、胎盤試料からもエライジン酸(t9 18:1)、t10 18:1、バクセン酸(t11 18:1)の3種のトランス酸が検出された(図(3)-6，ピーク番号31)。

次に、胎盘が疫学試料として利用可能であることを検証するため、胎盘試料の脂肪酸冷蔵保存での安定性の評価を行った。一般に組織中の脂肪酸組成は、冷凍条件では少なくとも2ヶ月以上安定であることが知られているが、本調査では胎盘試料は各医療機関での試料採取後、冷凍保存するまで一定期間冷蔵保存する必要があった。そこで、出産直後に得られた同一の胎盘試料の子葉側からランダムに試料を採取し、採取直後、4℃3日間及び7日間冷蔵保存したのち、上述の方法で脂肪酸メチルエステルを調製し、脂肪酸組成を測定した(表(3)-1)。その結果、上記の保存条件では脂肪酸組成に有意な変化は認められず、医療機関での採取試料の一時的な冷蔵保存は許容可能であることが示された。

組織は様々な細胞で構成されており均一ではない。特に、胎盤の構造は母体側と胎児側で大きく異なる(図(3)-7)。そこで、胎盤の試料採取部位の違いが脂肪酸組成に影響を与えるのかを確かめるため、同一胎盤の異なる部位から試料を採取し比較した。すなわち、胎盤（n=19）の母体側と胎児側からそれぞれ1か所（計2か所）から試料を採取し(図(3)-7A)、GC-FID法で脂肪酸組成を分析した。胎児側-母体側間の違いを同一の脂肪酸同士で対応のあるt検定で比較したところ、18:1n-9（オレイン酸）、18:2(n-6）（リノール酸）、20:3n-6（ジホモッリノレン酸）、ARA、及びDHAなどの主要な脂肪酸で母体側と胎児側の組成比が有意に異なることが明らかになった(表(3)-2)。すなわち、炭素数18の18:1n-9と18:2(n-6)は胎児側が、炭素数20以上の脂肪酸では母体
表(3)-1 胎盤脂肪酸組成への冷蔵保存の影響

0days	3days	7days
平均	標準偏差	平均	標準偏差	平均	標準偏差
14:0	0.46	(0.07)	0.41	(0.12)	0.43	(0.13)
15:0	0.17	(0.02)	0.20	(0.05)	0.18	(0.04)
16:0	24.48	(2.3)	23.88	(0.04)	26.02	(3.15)
17:0	0.36	(0.04)	0.40	(0.03)	0.36	(0.07)
18:0	13.19	(0.42)	12.92	(0.17)	14.14	(2.33)
20:0	0.18	(0.07)	0.14	(0.01)	0.19	(0.11)
22:0	0.28	(0.08)	0.24	(0.02)	0.26	(0.13)
24:0	0.31	(0.09)	0.29	(0.02)	0.27	(0.15)
16:1n-9	0.36	(0.06)	0.31	(0.06)	0.35	(0.11)
16:1n-7	0.63	(0.07)	0.48	(0.14)	0.52	(0.15)
18:1n-9	9.61	(3.23)	10.08	(1.26)	10.98	(2.4)
18:1n-7	1.52	(0.52)	1.61	(0.04)	1.81	(0.44)
20:1n-11	0.29	(0.04)	0.29	(0.06)	0.30	(0.05)
22:1n-9	0.06	(0.03)	0.05	(0.01)	0.06	(0.04)
24:1n-9	0.16	(0.08)	0.15	(0.03)	0.18	(0.11)
20:3n-9	0.18	(0.04)	0.17	(0.07)	0.18	(0.03)
18:2n-6	LA	13.30	(1.44)	12.02	(1.94)	10.82	(1.41)
18:3n-6	0.08	(0.02)	0.07	(0.02)	0.07	(0.01)
20:2n-6	0.57	(0.08)	0.58	(0.06)	0.57	(0.03)
20:3n-6	GDLA	3.70	(0.28)	3.96	(0.48)	3.68	(0.88)
20:4n-6	ARA	21.04	(0.22)	22.30	(2.17)	19.74	(5.94)
22:2n-6	0.04	(0.02)	0.04	(0.01)	0.06	(0.03)
22:4n-6	1.51	(0.2)	1.27	(0.06)	1.34	(0.08)
22:5n-6	0.58	(0.02)	0.56	(0.07)	0.55	(0.11)
18:3n-3	ALA	0.18	(0.03)	0.14	(0.04)	0.14	(0.03)
20:3n-3	0.03	(0.01)	0.04	(0.01)	0.04	(0.01)
20:4n-3	0.07	(0.02)	0.08	(0.01)	0.06	(0.05)
20:5n-3	EPA	0.29	(0.1)	0.33	(0.05)	0.25	(0.11)
22:5n-3	0.92	(0.06)	1.04	(0.09)	0.90	(0.27)
22:6n-3	DHA	4.40	(0.41)	5.04	(1.47)	4.48	(1.57)
t9, 18:1	0.13	(0.02)	0.11	(0.02)	0.15	(0.02)
t10, 18:1	0.07	(0.01)	0.07	(0.01)	0.09	(0.02)
t11, 18:1	0.07	(0.02)	0.06	(0.02)	0.06	(0.02)
SFA	39.41	(2.41)	38.44	(0.33)	41.82	(6.05)
MUFA	12.59	(3.81)	12.94	(1.58)	14.16	(3.24)
PUFA	46.82	(1.47)	47.58	(1.91)	42.81	(9.31)
n-6 PUFA	40.79	(1.15)	40.77	(0.68)	36.79	(7.33)
n-3 PUFA	5.86	(0.57)	6.65	(1.3)	5.84	(1.99)
trans	0.25	(0.02)	0.23	(0.01)	0.29	(0.05)

略語：SFA 飽和脂肪酸、MUFA 一価不飽和脂肪酸、PUFA 多価不飽和脂肪酸

LA リノール酸、DGLA ジホモ $ \gamma $ リノレン酸、ARA アラキドン酸、

ALA、αリノレ酸、EPA エイコサペンタエン酸、DHA ドコサヘキサエン酸

n=3
表(3)-2 母体側と胎児側の脂肪酸組成の比較

(%)

母体侧	胎児側
平均	標準偏差	平均	標準偏差
14:0	0.40	(0.11)	0.49	(0.17) **
15:0	0.15	(0.03)	0.17	(0.05) *
16:0	24.25	(0.83)	24.40	(0.91)
17:0	0.28	(0.04)	0.29	(0.07)
18:0	12.63	(0.65)	12.82	(0.69)
20:0	0.13	(0.01)	0.15	(0.03) ***
22:0	0.15	(0.02)	0.16	(0.04)
24:0	0.21	(0.03)	0.20	(0.04)
16:1n-9	0.24	(0.04)	0.33	(0.1) ***
16:1n-7	0.66	(0.36)	0.80	(0.39) **
18:1n-9	9.97	(0.69)	11.13	(1.24) ***
18:1n-7	1.69	(0.13)	1.69	(0.15)
20:1n-11	0.25	(0.03)	0.26	(0.04)
22:1n-9	0.06	(0.02)	0.05	(0.02)
24:1n-9	0.09	(0.03)	0.08	(0.04)
20:3n-9	0.16	(0.04)	0.18	(0.04) *
18:2n-6 LA	10.67	(1.09)	11.32	(1.2) **
18:3n-6	0.08	(0.02)	0.10	(0.02) **
20:2n-6	0.49	(0.08)	0.45	(0.07) ***
20:3n-6	5.64	(0.75)	5.15	(0.99) **
20:4n-6 ARA	21.20	(1.46)	20.19	(2.14) **
22:2n-6	0.04	(0.01)	0.04	(0.02)
22:4n-6	1.27	(0.18)	1.29	(0.15)
22:5n-6	0.61	(0.13)	0.57	(0.11) *
18:3n-3 ALA	0.16	(0.05)	0.20	(0.07) **
20:3n-3	0.06	(0.02)	0.06	(0.02)
20:4n-3	0.11	(0.04)	0.11	(0.04)
20:5n-3 EPA	0.30	(0.12)	0.32	(0.16)
22:5n-3	0.96	(0.19)	0.95	(0.16)
22:6n-3 DHA	6.20	(0.99)	5.17	(0.68) ***
t9, 18:1	0.09	(0.02)	0.09	(0.03)
t10, 18:1	0.06	(0.02)	0.06	(0.02)
t11, 18:1	0.06	(0.03)	0.07	(0.02)
SFA	38.18	(0.73)	38.66	(0.76) **
MUFA	12.92	(1.1)	14.31	(1.72) ***
PUFA	47.87	(1.36)	46.02	(2.01) ***
n-6 PUFA	39.96	(1.65)	39.07	(2.36) **
n-3 PUFA	7.76	(1.25)	6.78	(0.89) ***
trans	0.20	(0.04)	0.21	(0.05)

略語：SFA 飽和脂肪酸、MUFA 一価不飽和脂肪酸、PUFA 多価不飽和脂肪酸

LA リノール酸、DGLA ジホモ γリノレ酸、ARA アラキドン酸、

ALA、αリノレ酸、EPA エイコサペンタエン酸、DHA ドコサヘキサエン酸 n=19, 対応のあるt検定, $ *p<0.05 $ , $ **p<0.01 $ , $ *\*\* $ p<0.001
側が高くなり、同じ胎盤でも胎児側と母体側では異なる部位として扱う必要があることが示唆された。ただし、ほとんどの脂肪酸で胎児側-母体側の違いは個体間の違いより小さく、胎盤の脂肪酸組成の測定は、胎児側-母体側のどちらか一方で十分であると判断した。そこで、試料採取の利便性から脂肪酸組成の測定は母体側に統一することとした。

胎盤の周辺部は、母体側と胎児側がつながる部分であり、同じ母体側でも周辺部の脂肪酸組成が異なる可能性が考えられた。そこで、胎盤5検体の母体側中心部と周辺部からそれぞれ6か所ずつ（計12か所）試料を採取、脂肪酸組成を分析し、変動係数の比較を行った。その結果、胎盤5検体のうち2検体で、周辺側部の脂肪酸組成の変動が大きいことが示された（表(3)-3，組成比1％以上の脂肪酸のみを示した）。

さらに、胎盤毎に中心部と周辺部の脂肪酸組成の差を、対応のあるt検定で解析したところ、16:0(パルミチン酸)や22:5n-3などで有意に異なることが示された。しかし、これらの違いも個体間の差よりは小さく、中心部-周辺部のどちらか一方で十分であると判断した。最終的に、周辺部の変動係数が大きい個体があったことから、試料採取は母体側の中央部に統一することが望ましいと結論づけられた。

これまでに875件の胎盤試料を入手し、そのうち500件分で脂肪酸分析を進め、精査が終わった495件のデータの脂肪酸組成について表(3)-4にまとめた。495件の脂肪酸組成の平均値と中央値はほぼ一致し、胎盤脂肪酸の分布はほぼ対照であることが示唆された。ただし、D'Agostino-Pearson検定により分布の正規性を検定したところ、正規分布に従うと示唆されたのは、C18:0(ステアリン酸)、C18:1n-7(パルミトオレイン酸)、18:2n-6(リノール酸)、及びARAの4種であった。他の脂肪酸については尖度のみ大きい値を示した17:0以外は、歪度と尖度がともに正に大きく、これらの脂肪酸分布が右側に偏った太い裾を持つことが示された。これらの脂肪酸のヒストグラムを図(3)-8～11に示す。図(3)-11の20:5n-3(エイコサペンタエン酸)に代表されるように、脂肪酸の分布は、歪度と尖度から推察されたとおり、分布が右側に偏った太い裾を持つことが示された。すなわち、これらの脂肪酸は、ほとんどの個体がほぼ同じような脂肪酸組成比を持つ一方、一部の個体では他よりも高い組成比を持つことが明らかになった。

A

図(3)-7 胎盤試料採取箇所による脂肪酸組成の違いの検討．A：母体側と胎児側の比較、B：母体側の周辺と中心部の比較
表(3)-4 胎盤の脂肪酸組成の記述統計 (n=495)

平均	標準偏差	最小值	中央值	最大值	歪度	尖度
14:0	0.37	(0.08)	0.20	0.36	0.93	1.63	7.62
15:0	0.15	(0.03)	0.08	0.15	0.30	0.92	2.23
16:0	24.99	(1.09)	22.13	24.89	29.25	0.43	0.55
17:0	0.29	(0.05)	0.04	0.29	0.51	-0.16	3.49
18:0	11.94	(0.72)	9.86	11.92	14.18	0.04	-0.24
20:0	0.11	(0.02)	0.07	0.11	0.20	0.97	2.07
22:0	0.14	(0.06)	0.04	0.14	0.66	4.59	37.09
24:0	0.19	(0.15)	0.00	0.18	2.03	7.95	84.55
16:1n-9	0.29	(0.06)	0.17	0.28	0.66	1.31	4.87
16:1n-7	0.63	(0.18)	0.28	0.61	2.00	1.74	8.49
18:1n-9	10.05	(0.83)	8.21	10.00	13.64	0.53	0.80
18:1n-7	1.66	(0.15)	1.22	1.66	2.06	0.02	0.07
20:1n-11	0.24	(0.04)	0.13	0.23	0.38	0.38	0.63
22:1n-9	0.05	(0.02)	0.00	0.05	0.16	0.97	6.22
24:1n-9	0.08	(0.05)	0.00	0.08	0.43	3.92	26.83
20:3n-9	0.15	(0.04)	0.09	0.15	0.28	0.64	0.51
18:2n-6	11.28	(1.2)	7.94	11.24	15.25	0.22	0.19
18:3n-6	0.09	(0.02)	0.05	0.08	0.19	0.81	1.49
20:2n-6	0.44	(0.06)	0.31	0.44	0.66	0.47	0.40
20:3n-6	5.15	(0.74)	3.05	5.10	7.65	0.53	0.51
20:4n-6	21.28	(1.63)	16.45	21.26	25.55	-0.06	-0.25
22:2n-6	0.04	(0.03)	0.00	0.04	0.41	8.52	126.57
22:4n-6	1.12	(0.21)	0.63	1.11	2.53	0.77	4.06
22:5n-6	0.54	(0.17)	0.19	0.53	1.38	0.84	1.55
18:3n-3	0.15	(0.04)	0.06	0.15	0.33	1.09	2.87
20:3n-3	0.04	(0.02)	0.00	0.04	0.12	0.38	1.95
20:4n-3	0.11	(0.06)	0.03	0.10	0.42	2.03	7.40
20:5n-3	0.37	(0.2)	0.08	0.32	1.38	1.81	4.62
22:5n-3	0.98	(0.22)	0.44	0.95	1.75	0.62	0.40
22:6n-3	6.11	(1.03)	3.22	6.07	10.66	0.23	0.33
t9,18:1	0.09	(0.03)	0.04	0.08	0.19	1.25	3.23
t10,18:1	0.06	(0.03)	0.00	0.05	0.18	1.42	3.45
t11,18:1	0.05	(0.02)	0.02	0.05	0.11	0.70	0.56
SFA	38.19	(1.08)	35.50	38.11	43.10	0.56	0.95
MUFA	12.99	(1.07)	10.43	12.95	17.65	0.54	0.89
PUFA	47.85	(1.46)	42.43	47.93	51.59	-0.35	0.66
n-6 PUFA	39.94	(1.61)	33.98	40.01	43.78	-0.37	0.64
n-3 PUFA	7.76	(1.34)	4.01	7.64	13.61	0.41	0.64
trans	0.19	(0.05)	0.09	0.19	0.37	0.64	0.51

略語：SFA 飽和脂肪酸、MUFA 一価不飽和脂肪酸、PUFA 多価不飽和脂肪酸

LA リノール酸、DGLA ジホモ γリノレン酸、ARA アラキドン酸、

ALA、αリノレ酸、EPA エイコサペンタエン酸、DHA ドコサヘキサエン酸 n=495
図(3)-8 胎盤脂質の飽和脂肪酸のヒストグラム
図(3)-9 胎盤脂質の一価不飽和脂肪酸およびn-9多価不飽和脂肪酸のヒストグラム
図(3)-10 胎盤脂質のn-6系多価不飽和脂肪酸のヒストグラム
図(3)-11 胎盤脂質のn-3系多価不飽和脂肪酸のヒストグラム
次に胎盤の脂肪酸同士の相関関係を検討した。相関係数を表(3)-5に示したが、多くの脂肪酸の間で有意な相関係数が観察された。特に、長鎖の飽和脂肪酸同士、炭素数の近い単価不飽和脂肪酸同士、及び炭素数20以上のn-6系またはn-3系脂肪酸同士など脂肪酸合成の反応系で関連性の強い脂肪酸同士の間に大きな相関係数が認められた。また、n-6系脂肪酸とn-3系脂肪酸の間では有意な逆相関係数が観察された。一方で、ARAの前駆体であるリノール酸(18:2n-6)が、代謝に関連するn-6系脂肪酸とは逆相関するなど、代謝生成物からのフィードバック阻害と考えられる举動も観察された。

図(3)-12 胎盤のΔ6不飽和化酵素に関与する脂肪酸の相関図．A：22:4n-6 vs 22:5n-6，B：22:5n-3 vs 22:6n-3，P；placenta

図(3)-13 胎盤でのΔ6不飽和化酵素活性指標の関係 P; placenta
図(3)-14 胎盤のΔ5不飽和化酵素に関与する脂肪酸の相関図. A: 20:4n-3 vs 20:5n-3, B: 20:3n-6 vs 20:4n-6, P; placenta

図(3)-15 胎盤でのΔ5不飽和化酵素活性指標の関係. P; placenta

本サブテーマでは、妊娠期におけるDHA要求量の増加に伴う、α-リノレン酸からのDHA生成の関与について明らかにすることを目的としていた。通常の生体内生理活性物質であれば、代謝経路の解析は、最終生成物(DHA)や主要な中間生成物(エイコサペンタエン酸)に着目して実施可能であるが、エイコサペンタエン酸及びDHAは魚介類に豊富に含まれるため、食事による影響が避けられない。そこでこの問題を回避するため、通常の食事には含まれない、22:4n-6、22:5n-6、22:5n-3、及び20:4n-3などの代謝産物に着目した。

すなわち、n-6系列とn-3系列の脂肪酸は共通の代謝酵素により代謝変換される。DHAはエイコサペンタエン酸から鎖長延長して生成した22:5n-3がペルオキシソームでさらなる鎖長延長を受け、Δ6不飽和化及びβ酸化を経て生成されるが、その反応の律速酵素はΔ6不飽和化酵素と考え
表(3)-7 胎盤及び母体血赤血球間の脂肪酸組成の相関

M16:0	M17:0	M18:0	M20:0	M22:0	M23:0	M24:0	M16:1	M18:1n-9	M18:1n-7	M20:1n-9	M22:1n-9	M24:1n-9	M18:2n-6	M20:2n-6	M20:3n-6	M20:4n-6	M22:4n-6	M22:4n-3	M22:5n-3	M22:6n-3	M22:6n	M22
表(3)-8 胎盤及び膵帯血赤血球間の脂肪酸組成の相関

C16:0	C17:0	C18:0	C20:0	C22:0	C23:0	C24:0	C16:1	C18:1n9	C18:1n7	C20:1n9	C22:1n9	C24:1n9	C18:2n6	C18:3n6	C20:2n6	C20:4n6	C22:4n6	C22:4n6	C22:5n3	C22:6n3	C22:6n3	C22:6n3	C22:6n3
たところ、有意な相関を示したものの、その相関はやや弱く0.388であった。しがって、DHA/22:5n-3比は22:5n-6/22:4n-6比、すなわちΔ6不飽和化酵素の活性で一部は説明できるものの、魚の摂取量など別の要因が関与している可能性が示された。今後、魚の摂取量を考慮しつつ魚摂取量によるグループ分けを実施し、魚介類摂取がΔ6不飽和化酵素に与える影響を明らかにしていく必要があると考えられた。

図(3)-16 胎盤と膵帯血赤血球のn-3系長鎖不飽和脂肪酸同士の相関図．A：22:6n-3，B：22:5n-3，P；placenta，C；cord blood

図(3)-17 胎盤と母体血赤血球のn-3系長鎖不飽和脂肪酸同士の相関図。A:22:6n-3, B:22:5n-3, P; placenta, M; maternal blood

魚の摂取量が関与しないα-リノレン酸からDHA合成の中間生成体としてエイコサペンタエン酸(20:5n-3)の前駆体の20:4n-3に着目し、相関を検討した(図(3)-14)。20:4n-3は22:4n-6や22:5n-6と同様、食事の影響が少ない脂肪酸であると考えられる。エイコサペンタエン酸含量は魚の摂取量を反映するため、20:4n-3との相関は低いと考えていたが、予想に反してエイコサペンタエン酸
と20:4n−3の相関係数は0.783と強い相関係数がみられた。この結果は、胎盤のエイコサペンタエン酸含量に、母体のΔ5不飽和化酵素活性が影響をしている可能性を示唆している。一方、n−6系列でのこれらの脂肪酸に相当する、ジホモγリノレン酸(20:3n−6)とARA(20:4n−6)では有意な相関は得られなかった。

図(3)-18 胎盤脂質のトランス脂肪酸のヒストグラム.

図(3)-19 胎盤中のトランス酸とω6脂腦酸の相関図. A: 20:4n-6, B: 20:3n-6, P; placenta, M; maternal blood
表(3)-9 胎盤トランス酸と胎盤および母体血赤血球間の脂肪酸組成の相関

(%)
母年齢(歲)	在胎日数(日)	出生体重(g)	出生身長(cm)	出生腳腳(cm)	胎盤重量(g)	母親身長(cm)	非妊時体重(kg)	現在の体重(kg/m2)	非妊時BMI(kg/m2)	体重增加(kg)
Pt9,18:1	-0.031	0.072	0.017	0.005	-0.044	0.073	-0.007	-0.082	-0.013	-0.001	-0.077
Pt10,18:1	-0.091	0.142	0.124	0.084	0.063	0.088	0.027	-0.057	0.036	0.045	-0.018
Pt11,18:1	-0.034	0.046	-0.025	-0.011	-0.040	0.036	-0.108	-0.046	-0.028	-0.019	-0.039
P_trans	-0.071	0.118	0.060	0.040	-0.002	0.088	-0.027	-0.081	0.002	0.015	-0.057

n=386, peason相関係数, $ *p<0.05 $ , $ **p<0.01 $ , $ *\*\*p<0.001 $

表(3)-10 胎盤トランス酸と産科学的指標との関連性
しかし、Δ5不飽和化酵素の指標である20:5n-3/20:4n-3比と20:4n-6/20:3n-6について調べたところ、有意な相関関係が得られた(図(3)-15)。すなわち、20:3n-6と20:4n-6の間には単純な前駆体と生成物の関係は見られなかったものの、Δ5不飽和化酵素指標に変換した場合は、その指標の分布の傾向はn-6系列とn-3系列で一致することが示された。このような結果から、胎盤のエイコサペンタエン酸含量にも食事由来だけではなく、α-リノレン酸からの生成も関与する事が示唆された。

今回測定した胎盤495件と、対応する母体血及び臍帯血のデータが揃った385件での、胎盤、母体血、臍帯血の分析結果を表(3)-6に示した。ARAとDHAに着目すると、ARAは胎盤＞臍帯血＞母体血となり、ARAの前駆体である20:3n-6(DGLA)も同様の傾向を示した。一方、DHAは逆に胎盤＜臍帯血＜母体血となった。

胎盤中の脂肪酸含量と、母体血または臍帯血赤血球中の脂肪酸含量との間の関連性をそれぞれ表(3)-7及び表(3)-8に示した。多価不飽和脂肪酸において比較的高い相関係数が観察され、特にn-3系不飽和脂肪酸では、胎盤と臍帯血(図(3)-16)あるいは母体血(図(3)-17)に強い関連性が認められた。

表(3)-11 トランス酸との比較をおこなった産科学的指標

有効数	平均值	標準偏差	最小值	中央值	最大值
在胎日数	386	276	8	250	277	293
児体重(g)	386	3,119	403	1,926	3,086	4,602
児身長(cm)	386	48.5	2.0	35.0	48.5	55.0
頭囲(cm)	386	33.5	1.3	29.0	33.5	37.0
胸囲(cm)	386	31.8	2.2	3.5	32.0	38.9
体重tile	386	56.78	28.50	0.10	59.65	100.00
身長tile	386	41.27	26.88	0.00	38.30	99.80
頭囲tile	386	54.84	28.47	0.10	56.95	99.80
胎盤重量(g)	382	562	103	350	550	930
年齡(歲)	385	29	5	17	29	44
母親の身長(cm)	386	158.1	5.1	146.0	158.0	173.0
非妊時体重(kg)	386	54.2	9.0	37.9	52.8	88.0
現在の体重(kg)	386	55.0	9.0	36.5	53.8	94.5
体重增加(kg)	386	10.7	4.1	-1.0	10.5	23.2
BMI	386	21.7	3.5	16.0	20.8	23.0

トランス脂肪酸はサブテーマ3のみの分析のため、トランス酸については胎盤のみについて報告する。胎盤から抽出された脂質に含まれるトランス酸含量の平均値（標準偏差）はt9, 18:1（エライジン酸）で0.090%（0.02）、t10, 18:1で0.06%（0.02）、t11, 18:1（バクセン酸）で0.05%（0.02）であり、18:1のトランス酸合計で0.19%（0.05）であった（表(3)-6）。16:1などその他のトランス酸は検出されなかったが、未同定の脂肪酸の中には、トランス酸と強い相関を示し、トランス酸代謝物であることが示唆されたが、未同定のため今回は解析の対象としなかった。

今回測定したt9，18:1（エライジン酸）、t10，18:1、t11，18:1（バクセン酸）、18:1のトランス酸合計のヒストグラムを図(3)-18に示す。

胎盤のトランス脂肪酸と、胎盤、臍帯血、及び母体脂肪酸との関連性について単相関にて解析を行った(表(3)-9)。胎盤のエライジン酸t9，18:1は胎盤ARA及び母体血ジホモγリノレン酸
(20:3n-6) と負の相関が認められた (図(3)-19)。しかしその相関は弱く、胎盤の脂肪酸では他に、オレイン酸(18:1n-9)とその代謝物であるミード酸(20:3n-9)と有意な正の相関もみられることから、オレイン酸を多く摂取する食生活と関連している可能性が示唆された。今後、食事調査のデータとの比較により、解析を進めていく予定であると考えられた。その他にもトランス酸においても幾つかの脂肪酸と有意な相関が見られたが、そのほとんどが飽和脂肪酸もしくは単価不飽和脂肪酸であり、エライジン酸もしくはバクセン酸の供給源である油脂または乳製品との関係から生ずるものと考えられた。

胎盤中のトランス酸レベルと出生体重との間に負の関連性があるとの報告があり $ ^{8)} $ 、これを確認するため、産科学的指標とトランス酸との関係について、単相関による比較を行った(表(3)-10)。その際に解析に用いた各指標の基本情報を表(3)-11に示した。新生児の構成は男児49.2％及び女児50.8％、初産が44.6％であった。t10,18:1について在胎日数と児の体重に有意な正の相関係数が観察され、t11,18:1において胎盤重量との間に負の相関係数が観察されたものの、全体として負の影響を示す統計学的に有意な関係性は確認されなかった。

以上、本研究により、胎盤が母児の脂肪酸の状態を推定する上で有用な生体試料であることが示唆された。さらに、胎盤脂肪酸組成の分析から生体に必要なDHAがα-リノレン酸から合成されていることを示唆する結果が得られた。DHA生合成系の調節機構や妨害要因などについてさらに検討が必要であるが、自身でDHAを生合成できる能力があるとするならば、少なくとも魚介類摂取との関係において重要なポイントとなるものと思われた。ただし、遺伝変異がある場合にはDHA生合成能は低下すると懸念され、遺伝要因の解析が今後の課題と考えられた。なお、脂肪酸生合成の交絡因子としてのトランス酸が着目されているものの、本研究結果からはトランス体の関与を疑わせる現象は見いだされなかった。日本人のトランス酸の摂取量は低いとされているが、今後ともトランス体の有害性については検討する必要があると考えられた。

## 5 ．本研究により得られた成果

## （1） 科学的意義

人を対象とする研究において、その栄養摂取量などを評価する上で、主に血液を用いるバイオモニタリング法と、食事調査法による栄養摂取量の推定などが行われている。ただし、採血は侵襲性があり、また食事の影響を強く受ける。質問票調査は簡便であるものの、回答者の主観や思い出しによるバイアスなどがあり、推定精度に限界がある。今回、胎盤試料を用いてその脂肪酸について詳細な解析を実施し、胎盤、母体血及び臍帯血との間で脂肪酸レベルの関係性を調べたところ、多価不飽和脂肪酸で比較的高い相関係数が観察され、特にn-3系不飽和脂肪酸で強い関連性が認められた。胎盤は侵襲性がなく、再生医療分野との競合もないため、胎児の脂肪酸組成を推定する上で有望な試験試料であることが示された。

胎盤試料を材料としてDHA生合成能について検討し、脂肪酸の分析結果からは、胎盤が生体に必要なDHAを前駆体であるα-リノレン酸から合成していることを示唆する結果が得られた。DHA生合成系の調節機構や妨害要因などについてさらに検討が必要であるが、遺伝的変異を含めた今後の研究展開が期待された。仮に合成能を定量的に推定できれば、妊娠期間中のテーラーメードの栄養始動が可能になるとも期待された。
## （２）環境政策への貢献

## ＜行政が既に活用した成果＞

特に記載すべき事項はない。

## ＜行政が活用することが見込まれる成果＞

本サブテーマは、魚介類摂取のベネフィット面に着目して解析を担当したが、その過程で、脂肪酸代謝の交絡要因の一つと考えられるトランス酸の解析を行った。トランス酸は主に食品を介して摂取される。近年、このトランス酸について、周産期曝露により出生体重などに負の影響があることが指摘されている $ ^{8} $ 。本研究でより大規模に観察研究を行ったものの、胎盤中のトランス酸レベルと出生体重などの産科学的指標との間に有意な関連性は認められなかった。日本人のトランス酸摂取量は欧米に比較して低いものの、トランス酸の有害性について、さらなる検討が必要と考えられた。

## 6 ．国際共同研究等の状況

特に記載すべき事項はない。

## 7 ．研究成果の発表状況

## （1） 誌上発表

## <論文（査読あり）>

特に記載すべき事項はない。

## <査読付論文に準ずる成果発表>（対象：社会・政策研究の分野）

特に記載すべき事項はない。

## くその他誌上発表（査読なし）>

特に記載すべき事項はない。

## （2） 口頭発表（学会等）

1）山崎潔大，木村ふみ子，有馬隆博，仲井邦彦，仲川清隆，宮澤陽夫，ヒト胎盤組織の脂肪酸組成分析－疫学調査試料としての妥当性の検討－．日本農芸化学会2013年度大会、仙台市(2013)

2）川端輝江、香川靖雄、木村ふみ子、宮澤陽夫、仲井邦彦、有馬隆博、八重樫伸生：妊娠期の脂肪酸栄養に関する研究-母体及び臍帯赤血球中n-3系・n-6系長鎖多価不飽和脂肪酸組成の比較-．第67回日本栄養・食糧学会大会、名古屋市（2013）

3）山崎潔大、木村ふみ子、川端輝江、仲井邦彦、有馬隆博、八重樫伸生、仲川清隆、宮澤陽夫：ヒト胎盤組織の疫学調査試料としての有用性-母体血、臍帯血の脂肪酸組成との比較-．第67回日本栄養・食糧学会大会、名古屋市（2013）

4）下田和美、川端輝江、香川靖雄、木村ふみ子、宮澤陽夫、仲井邦彦、有馬隆博、八重樫伸生：母体および臍帯赤血球中脂肪酸組成と出産に関わる各種指標との関連．日本脂質栄養学会
第22回大会、高知市(2013)

5）山崎潔大、木村ふみ子、川端輝江、仲井邦彦、水野聖士、有馬隆博、八重樫伸生、宮澤陽夫：ヒト胎盤組織の脂肪酸組成と新生児の出生パラメータ一との比較．第47回 日本栄養・食糧学会東北支部大会、秋田市（2013）

## （3） 出願特許

特に記載すべき事項はない。

## （４）シンポジウム、セミナー等の開催（主催のもの）

特に記載すべき事項はない。

## （５）マスコミ等への公表・報道等

特に記載すべき事項はない。

## (6) その他

特に記載すべき事項はない。

### 8 \. 引用文献

1) Koletzko B, Cetin I, Brenna JT, Perinatal Lipid Intake Working Group.: Dietary fat intakes for pregnant and lactating women. Br J Nutr, 98:873-877 (2007)

2) Greiner RC, Winter J, Nathanielsz PW, Brenna JT.: Brain docosahexaenoate accretion in fetal baboons: bioequivalence of dietary alpha-linolenic and docosahexaenoic acids, Pediatr Res, 42:826–834 (1997)

3) Burdge GC, Calder PC.: Dietary alpha-linolenic acid and health-related outcomes: a metabolic perspective, Nutr Res Rev, 19:26-52 (2006)

4) Burdge GC, Wootton SA.: Conversion of alpha-linolenic acid to eicosapentaenoic, docosapentaenoic and docosahexaenoic acids in young women, Br J Nutr, 88:411–421 (2002)

5) Sanders TA, Reddy S.: The influence of a vegetarian diet on the fatty acid composition of human milk and the essential fatty acid status of the infant. J Pediatr, 120(part 2):S71–S77 (1992)

6) Clandinin MT, Chappell, Heim T, Swyer PR, Chance GW.: Fatty acid utilization in perinatal de novo synthesis of tissues. Early Hum Dev, 5:355-366 (1981)

7) Innis SM.: Omega-3 Fatty acids and neural development to 2 years of age: do we know enough for dietary recommendations. J Pediatr Gastroenterol Nutr, 48 Suppl 1:S16-24 (2009)

8) 山本周美，和田芳郎，道盛法子，和田芳直，北島博之．：胎盤組織中のトランス脂肪酸量と児の発育の関連，脂質栄養学，20:137（2011）