Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
血中ダイオキシン類濃度が高い場合には男児出生割合が低下する傾向があった。このように高濃度のダイオキシン類に曝露した油症患者より出生した児で観察された健康影響のなかには、母体のダイオキシン類曝露量と関連するものと関連しないものが存在すること、さらに次々世代にも影響、すなわち継世代的な影響があるものがあることが示された。

## [キーワード]

カネミ油症、ダイオキシン類、児健康影響、ダイオキシン受容体、遺伝子多型

### 1. はじめに

ダイオキシン類などの化学物質曝露が次世代の健康にどのような影響をいかに及ぼすのかという継世代的な健康影響とその発現機序に世界的な関心が高まっている。わが国においても環境省の「子どもの健康と環境に関する全国調査：エコチル調査」が平成22年度に始動し、化学物質曝露等が子どもの健康に与える影響を明らかにする目的でコホート調査をすすめている。

ヒトが高濃度のダイオキシン類、なかでも2,3,4,7,8-5塩化ジベンゾフラン(PeCDF)に曝露した事例であるカネミ油症患者における観察から、油症発生から10年以内の妊娠では流産、早産、胎児死亡の発症頻度が増加すること $ ^{1} $ 、児の出生体重は母体血中ダイオキシン類濃度と有意に負の相関を示すこと $ ^{2} $ 、母親が20歳未満で油症に曝露した場合、女系の2世、3世では男児の出生割合が有意に低いこと $ ^{3} $ が明らかとなった。このように高濃度のダイオキシン類に曝露した事例において、ダイオキシン類曝露と児の健康影響との関連を検討することは、ダイオキシン類曝露による次世代への健康影響とその発現機序を明らかにするうえで極めて有用な知見をもたらすと考えられる。一方、ダイオキシン類の母児間移行に関する観察から、母体から児へのダイオキシン類の移行はダイオキシン受容体(AhR)との親和性とは関係なく、ポリ塩化ジベンゾパラジオキシン（PCDDs）、なかでも八塩化ジベンゾパラジオキシン（OCDD）が移行しやすいこと $ ^{4} $ 、カネミ油症患者ではダイオキシン類の児への移行量は少なく、児の血中ダイオキシン類濃度は正常健常人と比して有意な差は認められないこと $ ^{5} $ も明らかになった。これらの成績から、高濃度のダイオキシン類曝露による児への健康影響の発現機序には、胎盤を介して児に移行したダイオキシン類の量的な問題ばかりでなく、ダイオキシン類に対する遺伝的感受性（遺伝子多型やエピジェネティックな変化など）が関与する可能性が考えられる。

## 2 ．研究開発目的

カネミ油症発症後に児を得た油症曝露世代とその後世代を対象として、ダイオキシン類曝露による世代別の健康影響の発生状況と母体血中ダイオキシン類濃度との関連の観察を介して、母体ダイオキシン類曝露による次世代への健康影響を明らかにすることを目的とした。さらに、ダイオキシン類曝露による世代別の健康影響と母体ダイオキシン類受容体遺伝子多型との関連の観察を介して、次世代への健康影響と母体遺伝的感受性との関連を明らかにすることを目的とした。
### 3. 研究開発方法

九州大学病院油症ダイオキシン研究診療センターに登録されているカネミ油症女性患者737例を対象として妊娠・分娩情報（経姫経産回数、分娩時年齢、分娩日、分娩時妊娠週数、魚介類摂取回数）と児の健康情報（流産・胎児死亡、皮膚色素沈着[black baby]、アレルギー疾患[気管支喘息、アトピ一性皮膚炎、アトピ一性鼻炎]、代謝内分泌疾患[甲状腺機能低下症、糖尿病]、生殖機能[出生児の性別]）に関するアンケート調査を施行した。581例（78.8%）より回答を得、カネミ油症発生後に妊娠・出産となった油症患者は206例であった。

この206例のうち油症一斉検診時に血液を採取できた64例（117妊娠）においては、カネミ油症患者より出生した児への健康影響（色素沈着、アレルギー疾患、代謝内分泌疾患）と母体分娩時の血中ダイオキシン類推定濃度との関連について解析した。

また、この206例のうち59例（142妊娠）においては、児への健康影響（流産・胎児死亡、男児出生割合）と母体ダイオキシン類受容体（AhR）遺伝子多型との関連について解析した。

さらに、油症発生後に妊娠・出産となった油症患者27例（31妊娠）においては、次々世代（49例）における男児出生割合と油症患者のAhR遺伝子多型との関連について解析した。

血中ダイオキシン類濃度の測定には、大量試料注入装置(アイスティサイエンス製LVI-S200)付き高分解能ガスクロマトグラフ／高分解能質量分析計(Agilent 6890／Micromass AutoSpec Premier、HRGC/HRMS)を用いて、7種類のポリ塩化ジベンゾパラジオキシン(PCDDs)、10種類のポリ塩化ジベンゾフラン(PCDFs)および4種類のnon-orthoポリ塩化ビフェニル(non-ortho PCBs)を測定した。ダイオキシン類受容体遺伝子多型を測定は、採取した血液からリンパ球を分離した後、DNAを抽出し、AhRプロモータ領域(-130bp)のC/T一塩基多型(-130bpAhR遺伝子多型)を解析した。分娩時の血中ダイオキシン類濃度は、検査時血中濃度×2[分娩から血液検体採取までの期間(年)/ダイオキシン類の半減期(年)]の式を用いて推定した¹。統計学的解析には、Student t-検定、Mann-Whitney U-検定、χ²検定、変量効果ロジスティックモデル(Random effects logistic model)を用いた。

## 4 ．結果及び考察

## （１）次世代への健康影響と母体血中ダイオキシン類濃度との関連

油症発生後に妊娠・出産となった油症患者64例および出生した児117例の臨床像を表(1)-1に示す。血液採取時の母体年齢（mean ± SD）は、53.0 ± 9.1歳（範囲；32－70歳）で、出産から血液採取までの期間（mean ± SD）は、24.8 ± 9.6年（範囲；0－38年）であった。出産時期は油症発生から5年以内（1968－1972年）が29例（24.8%）、油症発生後6-10年（1973－1977年）が19例（16.2%）、油症発生後11-20年（1973－1977年）が32例（27.4%）、油症発生後20年以降（1988－2006年）が37例（31.6%）であった。出生児117例のうち66例（56.4%）は男児で、出産時妊娠週数（mean ± SD）は39.1 ± 1.1週、出生体重（mean ± SD）は3051 ± 376gであった。

カネミ油症発生後に油症患者64例より出生した児117例のなかで、皮膚色素沈着は10例(8.5%)、気管支喘息は11例(9.4%)、アトピ一性皮膚炎は16例(13.7%)、アレルギ一性鼻炎は11例(9.4%)、甲状腺機能低下症は1例(0.8%)、糖尿病は1例(0.8%)に認められた。
表(1)-1 カネミ油症患者64例の臨床像(TSUKIMORI et al. Chemosphere 2013 $ ^{6} $ )より引用)

Characteristics
Mothers (n = 64)
Maternal age at exposure (years)	15.8 ± 8.3 (0-29) $ ^{a} $
Prenatal	3 (4.7) $ ^{c} $
0-10	17 (26.6)
11-20	21 (32.8)
21-29	23 (35.9)
Age at blood sampling (years)	53.0 ± 9.1 (32-70) $ ^{a} $
Date of blood sampling (years)	2006 (2002-2008) $ ^{b} $
Frequency of seafood consumption every day	10 (15.6) $ ^{c} $
3-4 times/week	26 (40.6)
1-2 times/week	25 (39.1)
1-2 times/month	3 (4.7)
Almost never	0 (0)
Number of pregnancies	117
1	24 (37.5) $ ^{c} $
2	31 (48.4)
3	6 (9.4)
4	2 (3.1)
5	1 (1.6)
Date of delivery (year)	1981 (1968-2006) $ ^{b} $
1968-1972	29 (24.8) $ ^{c} $
1973-1977	19 (16.2)
1978-1987	32 (27.4)
1988-2006	37 (31.6)
Age at delivery (years)	27.8 ± 4.1 (18-37) $ ^{a} $
Interval between delivery and blood sampling (years)	24.8 ± 9.6 (0-38) $ ^{a} $
Smokers during pregnancy	6 (5.1) $ ^{c} $
Descendants (n = 117)
Gestational age at birth (weeks)	39.1 ± 1.1 (32-42) $ ^{a} $
Birth weight (g)	3051 ± 376 (1900-3980) $ ^{a} $
Descendant gender
Male/female	66 (56.4)/51 (43.6) $ ^{c} $
Number of black babies	10 (8.5)
1968-1972 (year)	8 (80)
1973-1977 (year)	1 (10)
1978-1987 (year)	0 (0)
1988-2006 (year)	1 (10)
Number of breast-fed	68 (58.1)
## ①児の皮膚色素沈着

児に皮膚色素沈着を認めた群（色素沈着群）と皮膚色素沈着を認めなかった群（非沈着群）における血中ダイオキシン類の分娩時血中推定濃度を表(1)-2に示す。色素沈着群における母体分娩時のtotal PCDDs、total PCDFs、total coplanar PCBsおよびtotal dioxinsの平均血中TEQ濃度は各々736.5、1923.9、57.6、2719.7 TEQ pg/g lipidであった。一方、非沈着群における母体分娩時のtotal PCDDs、total PCDFs、total coplanar PCBsおよびtotal dioxinsの平均血中TEQ濃度は各々243.0、460.7、31.8、761.7 TEQ pg/g lipidで、これら母体分娩時血中ダイオキシン類濃度は色素沈着群の方が非着色群に比して有意に高い値を示した。異性体毎の検討では、21種類の異性体のうち13異性体(2,3,7,8-TetraCDD、1,2,3,7,8-PentaCDD、1,2,3,4,7,8-HexaCDD、1,2,3,6,7,8-HexaCDD、1,2,3,7,8,9-HexaCDD、1,2,3,4,6,7,8-HeptaCDD、OctaCDD、2,3,4,7,8-PentaCDF、1,2,3,4,7,8-HexaCDF、1,2,3,6,7,8-HexaCDF、1,2,3,4,6,7,8-HeptaCDF、3,3',4,4',5-PentaCB(#126)、3,3',4,4',5,5'-HexaCB(#169))が50%以上の症例で検出され、これら13異性体すべてにおいて色素沈着群の方が非着色群に比して有意に高い値を示した。

母児双方の血中ダイオキシン類濃度を測定した24例における児の皮膚色素沈着の有無と母体分娩時の血中ダイオキシン類濃度および児の現在の血中ダイオキシン類濃度との関連を表(1)-3に示す。母体分娩時のtotal PCDDs、total PCDFs、total coplanar PCBsおよびtotal dioxinsの血中濃度は色素沈着群と非沈着群の両群間に有意な差はなかった。異性体毎の検討では、21種類の異性体のうち13異性体が50％以上の症例で検出され、このなかで1,2,3,6,7,8-HexaCDDのみ色素沈着群の値(50.4 TEQ pg/g lipid)が非着色群の値(21.0 TEQ pg/g lipid)に比して高い傾向(p=0.07)を示した。

一方、児の現在のtotal PCDDs、total PCDFs、total coplanar PCBsおよびtotal dioxinsの血中濃度においても色素沈着群と非沈着群の両群間に有意な差はなかった。異性体毎の検討では、21種類の異性体のうち8異性体が50%以上の症例で検出され、このなかで1,2,3,6,7,8-HexaCDDのみ色素沈着群の値(2.30 TEQ pg/g lipid)が非着色群の値(1.06 TEQ pg/g lipid)に比して有意(p=0.04)に高値を示した。

児の皮膚色素沈着は油症患者より出生した児に特異的に認められる症状で、胎児油症とも称されている。今回の検討から皮膚色素沈着を発症した群では母体の分娩時血中ダイオキシン類濃度が高いことが分かった。このように母体の高濃度のダイオキシン類曝露による児の健康影響のひとつとして皮膚色素沈着が示された。
表(1)-2 児の皮膚色素沈着群と非沈着群における母体の分娩時血中ダイオキシン類推定濃度 (TSUKIMORI et al. Chemosphere 2013 $ ^{6} $ ) より引用)

Estimated maternal blood TEQ concentrations (TEQ pg g $ ^{-1} $ lipid) of PCDFs and coplanar PCBs at delivery.

Variables	Half life(10^10 years)	TEF	Black baby (n = 10)	Non-black baby (n = 107)	Odds ratio(95% CI)	p Value(2)
% > DL	TEQ concentration	% > DL	TEQ concentration
Mean	SD	Median	Mean	SD	Median
Total levels
Total PCDs	74	100	736.5	526.5	647.0	100	243.0	275.9	139.0	21.5	(1.48-310.9)
Total PCDs	7.74	100	1923.9	2273.8	1313.1	100	460.7	905.3	141.6	3.46	(1.07-11.2)
Total coplanar PCBs	14.64	100	57.6	30.4	45.6	100	31.8	29.7	27.1	24.0	(1.25-463.6)
Total PCDs, PCDs and coplanar PCBs TEQ	7.74	100	2719.7	2706.8	1969.1	100	761.7	1164.0	410.8	7.54	(1.27-44.9)
Congener levels
PCDDs
2,3,7,8-TetraCDD	6.24	1	70	87.2	60.8	96.9	54	33.6	47.1	14.0	6.55
1,2,3,7,8-PentacDD	8.64	1	100	213.7	153.1	180.9	100	75.0	78.4	52.4	28.4
1,2,3,4,7,8-HexacDD	8.44	0.1	70	5.4	3.7	5.4	62	2.8	3.5	1.6	7.83
1,2,3,6,7,8-HexacDD	13.14	0.1	100	41.1	34.0	33.8	100	15.2	16.9	10.0	28.6
1,2,3,7,8,9-HexacDD	8.54	0.1	100	9.0	5.0	8.4	79	4.2	4.8	2.2	10.7
1,2,3,4,6,7,8-HeptaCDD	6.64	0.01	100	21.8	13.6	19.7	100	9.3	10.2	5.5	17.4
OctaCDD	5.64	0.0003	100	19.2	13.7	16.6	100	7.5	9.2	3.6	21.1
PCDDs
2,3,7,8-TetraCDF	0.44	0.1	40	NA	50	NA
1,2,3,7,8-PentacDF	0.94	0.03	30	NA	24	NA
2,3,4,7,8-PentacDF	7.74	0.3	100	1728.4	2032.4	1191.4	100	404.9	805.8	122.8	3.27
1,2,3,4,7,8-HexacDF	5.14	0.1	100	689.9	988.9	355.4	90	153.6	350.9	28.5	3.31
1,2,3,6,7,8-HexacDF	5.14	0.1	100	254.1	307.2	167.7	90	66.8	117.5	18.6	4.83
1,2,3,7,8,9-HexacDF	1.14	0.1	0	NA	0	NA
2,3,4,6,7,8-HexacCDF	2.44	0.1	0	NA	10	NA
1,2,3,4,6,7,8-HeptaCDF	3.54	0.01	70	41.2	39.2	27.2	60	11.1	17.9	2.6	4.93
1,2,3,4,7,8,9-HeptaCDF	3.24	0.01	0	NA	3	NA
OctaCDF	0.24	0.003	0	NA	4	NA
Coplanar PCBs
3,3,4,4'-TetraCB(#77)	14.64	0.0003	0	NA	1	NA
3,4,4'-TetraCB(#81)	14.64	0.0001	20	NA	8	NA
3,3,4,4'-TetraCB(#126)	14.64	0.1	100	32.5	19.3	27.0	99	20.3	20.4	13.9	14.9
3,3,4,4',5'-HexacCB(#169)	14.64	0.03	100	25.1	20.1	23.2	100	11.5	13.6	7.2	9.74

$ ^{a} $ Half-life data are from Masuda (2001). $ ^{b} $ Half-life data are from Liem and Theelen (1997). $ ^{c} $ WHO 2005 toxic equivalent factor values (Van den Berg et al., 2006). $ ^{d} $ Odds ratio for a 10-fold increase in blood lipid level adjusted for age at delivery, gestational age at birth, birth weight, descendant sex, and consumption of fish (times per week). $ ^{e} $ Calculations were performed when the detection rate in the sample was >50%, DL, detection limit; NA, not applicable; CDD, chlorinated dibenzo-p-dioxins; CDF, chlorinated dibenzofurans; CB, chlorinated biphenyls.
表(1)-3 児の皮膚色素沈着の有無と母児双方の血中ダイオキシン類濃度との関連 (TSUKIMORI et al. Chemosphere 2013 $ ^{6} $ ) より引用)

Blood dioxin levels between the black baby group and non-black baby group in the mother-descendant pairs.

Variables	TEF	Maternal estimated blood TEQ concentrations (pg TEQ g−1 lipid) at delivery

WHO 2005 toxic equivalent factor values (Van den Berg et al., 2006). Statistical comparisons were made with a random effects model adjusted for age at delivery, gestational age at birth, birth weight, descendant sex, and consumption of fish (times per week) for mothers; age at sampling, sex, and duration of breast feeding in infancy (years) for descendants. Calculations were performed when the detection rate in the sample was >50%. DL, detection limit; NA, not applicable; CDD, chlorinated dibenzo-p-dioxins; CDF, chlorinated dibenzofurans; CB, chlorinated biphenyls.
## ②児のアレルギー疾患

児のアレルギー疾患（気管支喘息、アトピ一性皮膚炎、アレルギー性鼻炎）の有無と母体の分娩時血中ダイオキシン類推定濃度との関連を表(1)-4に示す。気管支喘息およびアトピ一性皮膚炎を発症した群における母体分娩時のtotal dioxins、total PCDDs、total PCDFsおよびtotal coplanar PCBsの血中濃度は非発症群の値と比較して低い値を示すが、両群間に有意な差はなかった。一方、アレルギー性鼻炎を発症した群における母体分娩時のtotal PCDFsおよびtotal coplanar PCBsの血中濃度は非発症群の値と比較して低い傾向(各々p=0.063、p=0.089)を示した。

表(1)-4 児アレルギー疾患の有無と母体の分娩時血中ダイオキシン類推定濃度の関連

アレルギー性疾患	発症	症例数	有病率(%)	母体血中濃度(TEQ pg/g-lipid)
Total TEQ	Total PCDDs	Total PCDFs	Total coplanar PCBs
Median (Range)	p	Median (Range)	p	Median (Range)	p	Median (Range)	p
気管支喘息	あり	11	9.4%	254.1(13.9-1367.4)	0.544	151.1(7.4-556.6)	0.852	46.0(3.0-1050.4)	0.262	23.2(2.7-105.6)	0.563
なし	106	466.0(10.6-8926.9)	162.2(5.5-1775.5)	181.5(2.3-7155.5)	29.1(2.4-184.2)
アトピ一性皮痛炎	あり	16	13.7%	331.1(13.9-2886.0)	0.152	110.2(7.4-494.5)	0.161	74.9(3.0-2356.2)	0.152	24.2(2.7-40.4)	0.179
なし	101	482.2(10.6-8926.9)	169.9(5.5-1775.5)	178.3(2.3-7155.5)	29.8(2.4-184.2)
アレルギー性鼻炎	あり	11	9.4%	68.4(13.9-1293.5)	0.130	32.5(7.4-797.0)	0.218	28.9(3.0-1050.4)	0.063	11.2(2.7-74.2)	0.089
なし	106	475.5(10.6-8926.9)	162.2(5.5-1775.5)	196.2(2.3-7155.5)	30.1(2.4-184.2)

Statistical comparisons of dioxin concentrations between the two groups were made with the Mann-Whitney U-test.

母体分娩時血中推定濃度が10倍上昇した場合の児にアレルギー疾患が発症するオッズ比を表(1)-5に示す。母体分娩時のtotal dioxins、total PCDDs、total PCDFsおよびtotal coplanar PCBsの血中濃度が10倍上昇した場合の気管支喘息およびアトピ一性皮膚炎が発症するオッズ比は、すべて1未満であったが統計学的に有意差はなかった。一方、アレルギー性鼻炎が発症するオッズ比は、total dioxinsでは0.37、total PCDFsでは0.43、total coplanar PCBsでは0.20と低い傾向(各々p=0.080、p=0.075、p=0.073)を示した。

表(1)-5 母体血中濃度が10倍上昇した場合の児レルギー疾患の発症リスク

アレルギー性疾患	発症リスク
Total TEQ	Total PCDDs	Total PCDFs	Total coplanar PCBs
OR (95%CI)	p	Median (Range)	p	Median (Range)	p	Median (Range)	p
気管支喘息	0.76 (0.28-2.11)	0.599	0.98 (0.32-3.05)	0.977	0.65 (0.28-1.52)	0.321	0.85 (0.17-4.14)	0.840
アトピー性皮膚炎	0.59 (0.24-1.48)	0.261	0.54 (0.19-1.49)	0.232	0.63 (0.30-1.34)	0.234	0.49 (0.12-2.00)	0.318
アレルギー性鼻炎	0.37 (0.12-1.13)	0.080	0.37 (0.11-1.27)	0.114	0.43 (0.17-1.09)	0.075	0.20 (0.04-1.16)	0.073

OR for 10-fold increase in lipid blood level (95% CI) adjusted for gestational age, maternal age at delivery, parity, smoking status during pregnancy, gender, birth weight and infant.

一方、児の現在の血中ダイオキシン類濃度(total PCDDs、total PCDFs、total coplanar PCBsおよびtotal dioxins)は全てアレルギー性疾患発症群と非発症群の両群間に有意な差はなかった(表(1)-6)。
表(1)-6 児アレルギー疾患発症と児血中ダイオキシン類濃度との関連

アレルギー性疾患	発症	症例数	見血中濃度(TEQ pg/g-lipid)
Total TEQ	Total PCDDs	Total PCDFs	Total coplanar PCBs
Median (Range)	p	Median (Range)	p	Median (Range)	p	Median (Range)	p
気管支喘息	あり	6	12.3(7.0-18.4)	0.600	5.3(3.2-9.0)	0.382	4.2(1.3-5.0)	0.816	2.6(2.2-5.6)	0.861
なし	21	15.0(2.6-30.4)	6.7(1.5-14.3)	3.3(0.7-18.3)	3.1(0.4-6.9)
アトピー性皮膚炎	あり	6	11.2(7.0-20.3)	0.448	5.1(3.2-13.0)	0.382	3.2(1.3-5.0)	0.414	2.6(2.2-5.6)	0.600
なし	21	15.0(2.6-30.4)	6.7(1.5-14.3)	3.8(0.7-18.3)	3.1(0.4-6.9)
アレルギー性鼻炎	あり	5	12.2(6.7-20.3)	0.417	5.5(3.6-13.0)	0.618	3.9(1.4-5.0)	0.901	2.4(0.7-3.4)	0.151
なし	22	15.1(2.6-30.4)	6.8(1.5-14.3)	3.5(0.7-18.3)	3.2(0.4-6.9)

Statistical comparisons of dioxin concentrations between the two groups were made with the Mann-Whitney U-test.

アレルギー疾患診断・治療ガイドライン2010（日本アレルギー学会）によれば、小児の気管支喘息、アトピ一性皮膚炎、アレルギー性鼻炎の有病率は各々5～7%、10～20%、約20%であると報告されている。今回の検討では、油症患者より出生した児の気管支喘息の発症頻度は9.4%、アトピ一性皮膚炎は13.7%、アレルギー性鼻炎は9.4%に認められ、一般頻度と比較して気管支喘息の頻度は多く、逆にアレルギー性鼻炎の頻度は少ない傾向であった。また油症患者より出生した児のアレルギー疾患の有無と母体血中ダイオキシン類濃度との関連の観察から、母体の血中ダイオキシン類濃度は児の気管支喘息およびアトピ一性皮膚炎の発症リスクに影響を及ぼさないが、母体の血中ダイオキシン類濃度が高いと児のアレルギー性鼻炎の発症リスクは低下する傾向があることが分かった。これらの成績から母体の高濃度のダイオキシン類曝露では児のアレルギー性鼻炎の発症を抑制する可能性があることが考えられた。一方、油症患者より出生した児の気管支喘息の発症頻度は一般頻度よりも高く、母体の血中ダイオキシン類濃度は児の気管支喘息の発症リスクに影響を及ぼさないことから、ダイオキシン類曝露による児の気管支喘息の発症機序には曝露した量的な問題ばかりでなく、ダイオキシン類に対する感受性が関与している可能性があることが考えられた。

（２）次世代への健康影響と母体-130bpAhR遺伝子多型および母体血中ダイオキシン類濃度との関連

カネミ油症発生後の油症患者における児への健康影響としては、人工流産が15例（10.6%）、自然流産が19例（15.0%）、胎児死亡（自然流産+死産）が22例（17.3%）に認められた（表（1）-7）。油症発生前10年間に妊娠した油症患者50例（102妊娠）における発症頻度と比較すると、人工流産は1.89倍、自然流産は1.94倍、胎児死亡は1.47倍増加したが、有意な差はなかった。また、油症発生から10年間、発生から10-20年、発生から20年以降の3つの時期に分類し、児への健康影響について検討すると、各時期における人工流産、自然流産、胎児死亡の発症頻度は油症発生前の頻度と比べて有意な差はなかった。
表(1)-7. 油症患者における児への健康影響の発生頻度

健康影響	油症発生前
10年間	油症発生後
総数	発生から10年間	発生から10-20年	発生から20年以降
人工流産	5.9%(6/102)	10.6%(15/142)	13.6%(11/81)	10.0%(4/40)	0%(0/21)
Ref	1.89(0.71-5.05)	2.51(0.89-7.12)	1.78(0.47-6.67)	NA
p=0.250	p=0.122	p=0.468	p=1.000
自然流産	8.3%(8/96)	15.0%(19/127)	12.9%(9/70)	13.9%(5/36)	23.8%(5/21)
Ref	1.94(0.81-4.63)	1.62(0.59-4.44)	1.77(0.54-5.83)	3.44(0.99-11.85)
p=0.151	p=0.438	p=0.340	p=0.056
胎児死亡	12.5%(12/96)	17.3%(22/127)	15.7%(11/70)	13.9%(5/36)	28.6%(6/21)
Ref	1.47(0.69-3.14)	1.31(0.54-3.16)	1.13(0.37-3.47)	2.80(0.91-8.61)
p=0.352	p=0.651	p=0.779	p=0.091

Data are shown as \% (n/N) and OR (95%CI).

カネミ油症発生後に妊娠した油症患者142妊娠における-130bpAhR遺伝子多型の頻度は、C/Cが53例（37.3%）、C/Tが71例（50.0%）、T/Tが18例（12.7%）に認められた（図（1）-1）。油症発生前の頻度（C/C 47.1%、C/T 46.1%、T/T 6.9%）と比較して有意な差はなかった（p=0.173）。

AhR SNP	発生前	発生後	計
T/T	7(6.9%)	18(12.7%)	25(10.2%)
C/T	47(46.1%)	71(50.0%)	118(48.4%)
C/C	48(47.1%)	53(37.3%)	101(41.4%)
計	102(100%)	142(100%)	244(100%)

図(1)-1. 油症患者におけるAhR遺伝子多型の頻度（妊娠あたり）
各AhR遺伝子型における児への健康影響の発生頻度を検討すると、各々のAhR遺伝子型において人工流産、自然流産、胎児死亡の発症頻度は油症発生前の頻度と比べて有意な差はなかった（表(1)-8）。

表(1)-8. 各遺伝子型における児への健康影響の発生頻度

健康影響	AhR SNP	油症発生前10年間	油症発生後
総数	発生から10年間	発生から10-20年	発生から20年以降
人工流産	C/C	8.3%(4/48)	11.3%(6/53)	20.0%(6/30)	0%(0/16)	0%(0/7)
Ref	1.40(0.37-5.31)	2.75(0.71-10.71)	NA	NA
p=0.744	p=0.171	p=0.565	p=1.000
C/T	4.3%(2/47)	12.7%(9/71)	11.1%(5/45)	19.0%(4/21)	0%(0/5)
Ref	3.27(0.67-15.85)	2.81(0.52-15.31)	5.29(0.89-31.61)	NA
p=0.196	p=0.262	p=0.068	p=1.000
T/T	0%(0/7)	0%(0/18)	0%(0/6)	0%(0/3)	0%(0/9)
Ref	NA	NA	NA	NA
p=1.000	p=1.000	p=1.000	p=1.000
自然流産	C/C	6.8%(3/44)	10.6%(5/47)	4.2%(1/24)	12.5%(2/16)	28.6%(2/7)
Ref	1.63(0.37-7.25)	0.59(0.06-6.05)	1.95(0.30-12.91)	5.47(0.73-41.03)
p=0.715	p=1.000	p=0.602	p=0.133
C/T	11.1%(5/45)	19.4%(12/62)	20.0%(8/40)	17.6%(3/17)	20.0%(1/5)
Ref	1.92(0.62-5.90)	2.00(0.60-6.71)	1.71(0.36-8.12)	2.00(0.19-21.62)
p=0.294	p=0.367	p=0.673	p=0.487
T/T	0%(0/7)	11.1%(2/18)	0%(0/6)	0%(0/3)	22.2%(2/9)
Ref	NA	NA	NA	NA
p=1.000	p=1.000	p=1.000	p=0.475
胎児死亡	C/C	13.6%(6/44)	14.9%(7/47)	12.5%(3/24)	12.5%(2/16)	28.6%(2/7)
Ref	1.11(0.34-3.60)	0.90(0.21-3.99)	0.90(0.16-5.02)	2.53(0.40-16.15)
p=1.000	p=1.000	p=1.000	p=0.300
C/T	13.3%(6/45)	19.4%(12/62)	20.0%(8/40)	17.6%(3/17)	20.0%(1/5)
Ref	1.56(0.537-4.53)	1.63(0.51-5.17)	1.39(0.31-6.33)	1.63(0.15-17.10)
p=0.447	p=0.560	p=0.696	p=0.546
T/T	0%(0/7)	16.7%(3/18)	0%(0/6)	0%(0/3)	33.3%(3/9)
Ref	NA	NA	NA	NA
p=0.534	p=1.000	p=1.000	p=0.213

Data are shown as \% (n/N) and OR (95%CI).
また、人工流産、自然流産、胎児死亡を認めた群における各遺伝子型の頻度はこれら合併症を認めなかった群の頻度と比較して有意な差はなかった（図(1)-2）。

図(1)-2. 油症患者における児への健康影響とAhR遺伝子多型の頻度

このように-130bpAhR遺伝子多型と人工流産、自然流産、胎児死亡の頻度との間に明らかな傾向はみられなかった。

一方、これらの児の健康影響と母体分娩時血中ダイオキシン類推定濃度との関連について観察すると、人工流産、自然流産、胎児死亡を発症した各群およびこれら合併症を発症しなかった群（正常妊娠）における母体分娩時血中ダイオキシン類（2,3,4,7,8-PeCDF[PeCDF]、3,3',4,4',5-PeCB[PCB-126]、3,3',4,4',5,5'-HxCB[PCB-169]）推定濃度を図（1）-3に示す。人工流産群では、PeCDFおよびPCB-169の血中推定濃度は正常妊娠群の値と比して有意に高値を示した。自然流産群および胎児死亡群におけるこれらの血中ダイオキシン類推定濃度は正常妊娠群の値と比して有意な差はなかった。

正常妊娠	人工流產	自然流產	胎兒死亡
n	92	12	13	16
2,3,4,7,8-PeCDF
Mean	2231.4	5346.1	2076.8
SD	3701.8	6540.9	2934.2
t test	Ref	0.015	0.886
Mann-Whitney U test	Ref	0.140	0.331
3,3',4,4',5-PeCB(#126)
Mean	318.8	316.5	254.9
SD	266.8	249.1	228.1
t test	Ref	0.978	0.413
Mann-Whitney U test	Ref	0.839	0.340
3,3',4,4',5,5'-HxCB(#169)
Mean	536.2	1171.4	569.4
SD	567.3	1140.9	725.0
t test	Ref	0.002	0.849
Mann-Whitney U test	Ref	0.045	0.371

図(1)-3. 油症患者における児の健康影響と母体分娩時血中ダイオキシン類推定濃度(pg/g lipid)との関連
今回の検討では、油症発生後に妊娠した油症患者59例（142妊娠）においては、-130AhR遺伝子多型の頻度は油症発生前の頻度と有意な差はないこと、児への健康影響（人工流産、自然流産、胎児死亡）の有無とAhR遺伝子多型との間に明らかな傾向はみられないことが示された。一方、人工流産群における分娩時推定血中ダイオキシン類濃度は正常妊娠群の値と比して有意に高値を示した。今回、油症発生後に自然流産や胎児死亡などの児合併症の頻度の増加が観察できなかった理由として症例数が少なかったことが要因のひとつとして考えられるので、今後さらに症例数を増やして-130AhR遺伝子多型と児合併症の頻度との関連を検討していく必要があると考えられた。また、人工流産の頻度や男児出生割合には少なくとも母体ダイオキシン類の曝露量が影響を及ぼしている可能性があると考えられた。

（3）次々世代への健康影響と母体-130bpAhR遺伝子多型および母体血中ダイオキシン類濃度との関連カネミ油症発生後に油症患者から出生した児における男児出生割合は0.55で、general populationの割合0.514と比較して有意な差はなかった。油症発生から10年間、発生から10-20年、発生から20年以降の3つの時期における男児出生割合も、general populationの割合と比較して有意な差はなかった（表(1)-9）。次々世代における男児出生割合は0.51と次世代より低下し、なかでも女系（母親）曝露では男児出生割合は0.38とさらに低下したが、general populationの割合と比較して有意な差はなかった。

表(1)-9. 油症次世代、次々世代における男児出生割合

男児出生割合	油症次世代	油症次々世代
総数	発生から10年間	発生から10-20年	発生から20年以降	総数	女系曝露
%(n/N)	0.55(55/100)	0.60(35/58)	0.45(13/29)	0.54(7/13)	0.51(25/49)	0.38(6/16)
OR(95%CI)	1.16(0.66-2.01)	1.44(0.69-3.00)	0.77(0.27-2.16)	1.10(0.24-5.15)	0.98(0.45-2.17)	0.57(0.14-2.32)
p value	p=0.671	p=0.455	p=0.793	p=1.000	p=1.000	p=0.722

### Data are shown as sex ratio (proportion of male births) (n/N) and OR (95%CI) against an expected sex ratio of 0.514

油症発生後に女児を出生した油症患者におけるPeCDFの分娩時血中推定濃度は男児を出生した群の値と比して高い値を示したが、有意な差はなかった（図(1)-4）。一方、PeCDFの分娩時血中推定濃度が1000 pg/g lipid以上の群では1000 pg/g lipid未満の群と比較して男児出生割合が低値を示す傾向(p=0.057)があった（表(1)-10）。
男児	女児
n	51	39
2,3,4,7,8-PeCDF
Mean	1730.7
SD	3004.3
p value	0.135
3,3',4,4',5-PeCB(#126)
Mean	309.5
SD	270.0
p value	0.675
3,3',4,4',5,5'-HxCB(#169)
Mean	466.7
SD	451.6
p value	0.168

図(1)-4. 油症患者から出生した児の性別と母体分娩時血中ダイオキシン類推定濃度(pg/g lipid)との関連

表(1)-10. 母体分娩時血中ダイオキシン類推定濃度と男児出生割合との関連

異性体	血中濃度(pg/g lipid)	男児出生割合(Male/Female)
2,3,4,7,8-PeCDF
> 1000	0.447(17/21)
< 1000	0.654(34/18)
p value	0.057
3,3',4,4',5-PeCB(#126)
> 300	0.514(18/17)
< 300	0.600(33/22)
p value	0.514
3,3',4,4',5,5'-HxCB(#169)
> 400	0.472(17/19)
< 400	0.630(34/20)
p value	0.193
各AhR遺伝子型における次世代および次々世代の男児出生割合を検討すると、各々のAhR遺伝子型において男児出生割合は次世代、次々世代ともにgeneral populationの割合と比べて有意な差はなかった（表(1)-11）。また、次世代および次々世代の性別が男児であった群における各遺伝子型の頻度は女児であった群の頻度と比較して有意な差はなかった（図(1)-5）。

表(1)-11. AhR遺伝型における男児出生割合

AhR SNP	男児出生割合	次世代	油症次々世代
総数	発生から10年間	発生から10-20年	発生から20年以降	総数	女系曝露
C/C	%(n/N)	0.51(20/39)	0.52(11/21)	0.46(6/13)	0.60(3/5)	0.44(12/27)	0.40(4/10)
OR(95%CI)	0.99(0.41-2.42)	1.04(0.31-3.49)	0.81(0.17-3.78)	1.42(0.12-17.37)	0.76(0.26-2.21)	0.63(0.11-3.71)
p value	p=1.000	p=1.000	p=1.000	p=1.000	p=0.786	p=1.000
C/T	%(n/N)	0.57(27/47)	0.65(20/31)	0.46(6/13)	0.33(1/3)	0.56(9/16)	0.40(2/5)
OR(95%CI)	1.28(0.57-2.88)	1.72(0.62-4.76)	0.81(0.17-3.78)	0.47(0.02-12.81)	1.22(0.30-4.89)	0.63(0.05-7.72)
p value	p=0.679	p=0.440	p=1.000	p=0.950	p=1.000	p=0.996
T/T	%(n/N)	0.57(8/14)	0.67(4/6)	0.33(1/3)	0.60(3/5)	0.67(4/6)	0(0/1)
OR(95%CI)	1.26(0.28-5.59)	1.89(0.18-19.50)	0.47(0.02-12.81)	1.42(0.12-17.37)	1.89(0.18-19.50)	NA
p value	p=1.000	p=0.992	p=0.950	p=1.000	p=0.992	p=0.500

Data are shown as sex ratio (proportion of male births) (n/N) and OR (95%CI) against an expected sex ratio of 0.514.

T/T	8 (15%)	6 (13%)
C/T	27 (49%)	20 (44%)
C/C	20 (36%)	19 (42%)

次々世代（女系曝露）

T/T	0(0%)	1(10%)
C/T	2(33%)	3(20%)
C/C	4(67%)	6(69%)

図(1)-5. 次世代および次々世代の性別とAhR遺伝子多型の頻度
これまでの油症曝露による次々世代への健康影響の観察から、20歳未満で母親が油症曝露した場合には、出生した児（次世代）の男児出生割合は0.450と低い傾向(p=0.06)を示し、さらにこの次世代が母親となった場合の児（次々世代）の男児出生割合は0.348と一般集団(0.514)と比較して有意に低値を示すことが分かった $ ^{3} $ 。今回の検討でも、女系油症曝露では次々世代における男児出生割合は0.38と低下する傾向が示されたが、-130bpAhR遺伝子多型と男児出生割合との間に明らかな傾向はみられなかった。

受精時の母体の性ホルモン状態は児の性の決定に影響を及ぼすことが報告されている $ ^{7} $ 。すなわち、受精時に母体の高エストロゲン状態、高アンドロゲン状態では男児が増加する。ダイオキシン類は抗エストロゲン作用、抗アンドロゲン作用を有するとともに、卵巣のエストロゲン受容体のエピジェネティックな変化をきたし、継世代的な生殖機能の障害をきたすことが報告されている $ ^{8} $ 。油症患者においては、PCDF濃度が高い症例では、血中エストロゲン濃度が低下していることが報告されている $ ^{9} $ 。今回の検討では、分娩時推定血中ダイオキシン類濃度が高い場合には次世代の男児出生割合が低下する傾向があったことから、カネミ油症患者で観察された次世代、次々世代における男児出生率の低下には、ダイオキシン類の胎児期曝露によるエピジェネティックな遺伝子発現制御の破綻がひとつの要因となっている可能性が示唆された。

## 5 ．本研究により得られた成果

## （1） 科学的意義

カネミ油症患者より出生した児（次世代）のなかで、皮膚色素沈着を発症した群では母体血中ダイオキシン類濃度が高く、母体の高濃度のダイオキシン類曝露による児の健康影響のひとつとして皮膚色素沈着が示された。また、母体の血中ダイオキシン類濃度は児の気管支喘息およびアトピ一性皮膚炎の発症リスクに影響を及ぼさないが、母体の血中ダイオキシン類濃度が高いと児のアレルギー性鼻炎の発症リスクは低下する傾向があることが分かった。一方、油症患者より出生した児の気管支喘息の発症頻度は一般頻度よりも高く、母体の血中ダイオキシン類濃度は児の気管支喘息の発症リスクに影響を及ぼさないことから、ダイオキシン類曝露による児の気管支喘息の発症機序には曝露した量的な問題ばかりでなく、ダイオキシン類に対する感受性が関与している可能性があることが考えられた。油症発生後の人工流産、自然流産、胎児死亡の頻度は油症発生前10年間に妊娠した油症患者における頻度と比較すると有意な差はなく、母体血中ダイオキシン類濃度や母体AhR遺伝子多型との間に明らかな関連はなかった。次々世代における男児出生割合は0.51と次世代より低下し、なかでも女系（母親）曝露では男児出生割合は0.38とさらに低下したが、general populationの割合と比較して有意な差はなかった。また、母体AhR遺伝子多型と次世代・次々世代の男児出生割合との間においても明らかな傾向はみられなかったが、母体の血中ダイオキシン類濃度が高い場合には男児出生割合が低下する傾向があった。このように高濃度のダイオキシン類に曝露した油症患者より出生した児で観察された健康影響のなかには、母体のダイオキシン類曝露量と関連するものと関連しないものが存在すること、さらに次々世代にも影響、すなわち継世代的な影響があるものがあることが示された。今後、ダイオキシン類の量的な問題ばかりでなく、児への健康影響と遺伝的感受性（遺伝子多型やエピジェネティックな変化）との関連について検討することが必要であると考えられた。
## （２）環境政策への貢献

## ＜行政が既に活用した成果＞

特に記載すべき事項はない

## ＜行政が活用することが見込まれる成果＞

高濃度のダイオキシン類に曝露した事例において、ダイオキシン類曝露と児の健康影響との関連を検討することは、ダイオキシン類曝露による次世代への健康影響とその発現機序を明らかにするうえで極めて有用な知見をもたらすと考えられた。

## 6 ．国際共同研究等の状況

特に記載すべき事項はない

### 7. 研究成果の発表状況

## （1） 誌上発表

## <論文（査読あり）>

1) K. TSUKIMORI, H. UCHI, S. TOKUNAGA, F. YASUKAWA, T. CHIBA, J. KAJIWARA, T. HIRATA and M. FURUE: Chemosphere, 90, 5, 1581-1588 (2013) “Blood levels of PCDDs, PCDFs, and coplanar PCBs in Yusho mothers and their descendants: association with fetal Yusho disease.”

## <査読付論文に準ずる成果発表>

特に記載すべき事項はない

くその他誌上発表（査読なし）>

特に記載すべき事項はない

## （2） 口頭発表（学会等）

特に記載すべき事項はない

## （3） 出願特許

特に記載すべき事項はない

## （４）「国民との科学・技術対話」の実施

特に記載すべき事項はない

## （５）マスコミ等への公表・報道等

特に記載すべき事項はない

(6) その他
### 8 \. 引用文献

1) K. TSUKIMORI, S. TOKUNAGA, S. SHIBATA, H. UCHI, D. NAKAYAMA, T. ISHIMARU, H. NAKANO, N. WAKE, T. YOSHIMUA and M. FURUE: Environ Healt Persp 116, 5, 626-630 (2008) “Long-Term Effects of Polychlorinated Biphenyls and Dioxins on Pregnancy Outcomes in Women Affected by the Yusho Incident”

2) K. TSUKIMORI, H. UCHI, C. MITOMA, F. YASUKAWA, T. CHIBA, T. TODAKA, J. KAJIWARA, T. YOSHIMURA, T. HIRATA, K. FUKUSHIMA, N. WAKE and M. FURUE: Environ Int, 38, 1, 79–86 (2012) “Maternal exposure to high levels of dioxins in relation to birth weight in women affected by Yusho disease”

3) K. TSUKIMORI, F. YASUKAWA, H. UCHI, M. FURUE and S. MOROKUMA: Epidemiology, 23, 72, 349–350 (2012) “Sex ratio in two generations of the Yusho Cohort”

4) K. TSUKIMORI, S. MOROKUMA, T. HORI, K. TAKAHASHI, T. HIRATA, Y. OTERA, K. FUKUSHIMA, T. KAWAMOTO and N. WAKE: J Obstet Gynaecol Res, 39, 1, 83-90 (2013) “Characterization of placental transfer of polychlorinated dibenzo-p-dioxins, dibenzofurans and polychlorinated biphenyls in normal pregnancy”

5) K. TSUKIMORI, H. UCHI, C. MITOMA, F. YASUKAWA, K. FUKUSHIMA, T. TODAKA, J. KAJIWARA, T. YOSHIMURA, T. HIRATA, N. WAKE and M. FURUE: Chemosphere, 84, 7, 928–35 (2011) “Comparison of the concentrations of polychlorinated biphenyls and dioxins in mothers affected by the Yusho incident and their children”

6) K. TSUKIMORI, H. UCHI, S. TOKUNAGA, F. YASUKAWA, T. CHIBA, J. KAJIWARA, T. HIRATA and M. FURUE: Chemosphere, 90, 5, 1581-1588 (2013) "Blood levels of PCDDs, PCDFs, and coplanar PCBs in Yusho mothers and their descendants: association with fetal Yusho disease."

7) WH. JAMES: J Endocrinol 198, 1, 3-15 (2008) “Evidence that mammalian sex ratios at birth are partially controlled by parental hormone levels around the time of conception”

8) AM. ZAMA and M. UZUMCU: Front Neuroendocrinol 31, 4, 420-439 (2010) “Epigenetic effects of endocrine-disrupting chemicals on female reproduction: an ovarian perspective”

9) 辻博、池田正春：福岡医学雑誌 98,5,166-169（2007）“油症における性腺機能の検討”