Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
ガリウム標準液またはヒ素標準液(金属濃度:100mg/l)を用いた場合の、ガリウムイオン、ヒ素イオンに対する吸着剤の吸着特性を図2.23に示す。ヒ素イオンに対して選択的な吸着特性を示した。

GaAs 半導体を 5％硝酸で処理した場合の溶液に含まれる Ga イオン、As イオンに対する吸着特性を図 2.24 に示す。標準液の場合と同様に、ヒ素に対して特異的な吸着特性を示した。ガリウムのヒ素からの分離の程度について、下式(i)に従って定義した純度について、ろ液中のガリウム濃度とヒ素濃度から評価すると、ガリウムの純度は、＞99％であった。

$$ \begin{aligned}w\left(Ga\right)/\left[w\left(Ga\right)+w\left(As\right)\right]\times100\cdot\cdot\cdot\cdot\left(i\right)\\ \left[ ただし、w\left(Ga\right): ガリウムの重量、w\left(As\right): ヒ素の重量 \right]\end{aligned} $$

GaAs 半導体を 5％硝酸で処理した溶液に対する吸着反応後 (図 2.24)、溶液から吸着剤を取り出し、アルカリ溶液中で処理することにより、選択的に吸着したヒ素イオンがアルカリ溶液中に脱離した (図 2.25)。HPLC-ICP-MS 法により、遊離したヒ素イオンの化学形態は、5 価の無機ヒ素 [ヒ酸イオン、iAs(V)] であった。

GaAs 半導体の酸処理溶液から、吸着剤を用いてガリウムから分離した無機ヒ素 $$ iAs(V) $$ を $ CH_{3}B_{12} $ 、Cys で処理し、選択的にトリメチルアルシンオキシド(TMAO)に変換した $$ 図 2.26(b) $$ 。更にヨード酢酸とCys により、無機ヒ素を定量的にアルセノベタインに変換した $$ 図 2.26(c) $$ （無毒化ヒ素純度：>99%）。

ヒ化ガリウムの水溶液から、吸着剤 Ad（日本板硝子製）を用いてヒ素イオンを選択的に吸着し、ガリウムを回収した $ \left[\mathrm{Ga}/\left(\mathrm{Ga}+\mathrm{As}\right)>99\%\right] $ 。吸着した無機ヒ素は、 $ CH_{3}B_{12} $ と Cys を用いてアルセノベタインに変換された（純度：>99%）。

レアアースであるセリウムは、国内では、主にガラス用研磨剤、紫外線吸収ガラスなどに使用されている。本研究に用いたヒ素選択吸着剤に使用されるセリウムは、ガラスを研磨した後の使用済み研磨屑を再資源化したものである。吸着したヒ素を脱離することにより、吸着剤の再利用も可能となり、持続可能なセリウムの再利用プロセスを提案することができた[図2.27.(a)]。しかしながら、酸化セリウムの価格が、2010年から2011年にかけて、急騰し（価格上昇率：1200%）、セリウムの需給が逼迫したため、セリウムの再資源化とともに、セリウム代替材料によるガリウムとヒ素の分離プロセスについての検討も行った。セリウムフリープロセスの設計は、無毒化処理の特徴を利用した分離プロセスを適用することにより可能である。無毒化処理により、無機ヒ素は有機ヒ素化合物であるアルセノベタインに変換される。アルセノベタインは、トリメチル体であり、対応する無機イオンよりも高い疎水性を有する。したがって、クロマトグラフ法における分離モードを選ぶことにより、ガリウムイオンとの分離が容易になる。本検討では、ユビキタス元素である珪素を構成元素とするシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフ法によりガリウムから、ヒ素を分離した[図2.27.(b)]。写真で示したように、GaAs半導体由来のヒ素は、アルセノベタインとして高純度で単離されることが実証された。
図 2.23. Ga と As に対する吸着特性(標準液)

図 2.24. Ga と As に対する吸着特性 (GaAs 半導体)
図 2.25. Ga と As に対する脱離特性 (GaAs 半導体)

図.HPLC-ICP-MSクロマトグラム

図 2.26. GaAs 半導体のヒ素の無毒化反応生成物
(a)

(b)

図 2.27. GaAs 半導体からガリウムの回収とと�素の無毒化処理のスキーム.

写真右は、GaAs 半導体の無機ヒ素を無毒化処理して単離されたアルセノベタイン

(a)セリウム系ヒ素吸着剤を用いたプロセス、(b)セリウム系ヒ素吸着剤を用いたプロセス
### 4. GaAs 半導体廃棄物の Ga リサイクル

GaAs 半導体製造メーカから提供された GaAs 半導体製造プロセスの実際の廃棄物について、ヒ素を選択的に溶出させる条件について検討した。ガリウムとヒ素を当量含む廃棄物（固形分：約 90%）（図 2.28）について、pH を変化させた場合のヒ素の溶出率 $$ =\frac{ヒ素溶出量}{（ヒ素溶出量+ガリウム溶出量）} $$ を調べた。

図 2.28. GaAs 半導体のプロセス廃棄物(図中の写真)の Ga リサイクルと比素無毒化処理
結果を図2.29に示す。中性からpH12の範囲で、ヒ素が選択的に溶出する領域があることが確認された。したがって、ヒ素吸着剤、シリカゲルやイオン交換樹脂等のクロマトグラフィーによるヒ素とガリウムの分離プロセスを必要としない低コストのプロセスが提案される(図2.28)。

図 2.29. GaAs 半導体のプロセス廃棄物(図 2.28 の写真)に対するヒ素溶出率の pH 依存性 [溶出比素率 = $ \frac{b_{2} - b_{1}}{b_{1} + b_{2}} $ ] / (比素溶出量 + ガリウム溶出量)、室温].

### 5. 液晶パネルの ITO ガラスからインジウムの回収

液晶テレビからインジウムの回収において、液晶パネルのガラスからのヒ素の溶出が問題となる可能性が指摘されている。ITOガラス（図2.30、図2.31）からインジウムの回収の検討を行った(図2.32)。ガラスを破砕(powder)した場合と破砕しない場合(plate)について（図2.31）、ITOエッチング液に対する溶出特性を評価した(非破砕品：図2.33、破砕品：図2.34)。

インジウム（図2.35）、スズ（図2.36）の溶出については、非破砕品(plate)でエッチング液に対して溶出量が大きい傾向が見られた。また、非破砕品についてはヒ素の溶出は認められなかった（図2.37）。

破砕品(powder)の ITO エッチング溶液処理液にヒ素吸着剤を添加した場合のインジウム、スズ、ヒ素イオンの変化をに示す（図 2.38）。ヒ素イオンは、インジウム、スズから分離が可能であることが示された。

液晶パネルの処理については、破砕しない処理法が推奨される。また、ヒ素は吸着剤でガリウム、スズから分離することが可能である（図2.38）。分離したヒ素は第1章で示した方法により、無毒化処理することが提案される（図2.27、図2.28、図2.39）。
図 2.30. 液晶用ガラスと ITO 製膜ガラス
図 2.31. 液晶用 ITO 製膜ガラスとその破碎品

図 2.32. 液晶用 ITO 製膜ガラスとその破砕品のエッチング液処理プロセス
図 2.33. 液晶用 ITO 製膜ガラスのエッチング液に対する溶解特性

図 2.34. 液晶用 ITO 製膜ガラス(破砕品)のエッチング液に対する溶解特性
図 2.35. 液晶用 ITO 製膜ガラスのエッチング液に対するインジウムの溶解特性の 破碎品と非破碎品の比較

図2.36. 液晶用ITO製膜ガラスのエッチング液に対するスズの溶解特性の 破砕品と非破砕品の比較
時間(h)

図2.37 液晶用ITO製膜ガラスのエッチング液に対するヒ素の溶解特性の 破砕品と非破砕品の比較

図 2.38. ITO ガラス破碎品のエッチング液を吸着剤で処理した場合の金属イオン濃度の変化
図 2.39. ITO ガラスからのインジウムの回収プロセス
## 第 3 章 安全性試験

毒物劇物取締法により、ヒ素を含む化合物は毒物に分類されている。アルセノベタイン（AsB）についても、法規制上は毒物と解釈される。AsBを毒物指定解除することにより、AsBの取り扱い、保管について、過剰な設備が不要となる。また、AsBの自然還元が可能となれば、最終処分場を不要とする処理法を提案することができる。これまで毒物指定解除されているヒ素化合物には、ヒ化インジウム、ヒ化ガリウム、メタンアルソン酸塩等がある。AsBの安全性試験を実施して、毒物劇物判定基準に該当しない結果を示すことにより、AsBの毒物指定解除が近い将来に可能となるとみられる。AsBを毒物指定解除するためには、急性毒性試験（経口、経皮、吸入）、皮膚刺激、眼刺激試験を実施して、法規制上の毒物劇物指定基準に該当しないことを示す必要がある。また、厚生労働省の担当部署からの情報により、OECD、GLPに準拠した研究機関で実施した動物実験のデータが必要である。AsBの安全性試験については、これまで、文献により経口急性毒性試験の結果 $$ LD_{50} 10,000mg/kg $$ が報告されているが、OECD、GLPに準拠してはいない。昨年の本研究については、皮膚刺激、眼刺激試験についてOECD、GLPに準拠した研究機関で実施し、AsBは安全な化合物であり、毒物、劇物には該当しないことを明らかにした。AsBの急性毒性試験（経口、経皮、吸入）を、OECD、GLPに準拠した研究機関で実施し、毒物指定解除に必要なデータを獲得する。また、ヒ素無毒化の副生成物、中間体物質であるTMAOについても同様の検討を行う。

### 1. アルセノベタイン

#### 1.1. 急性経口毒性試験

##### 1.1.1. 要旨

試験結果より、Annex VI to Commission Directive 2001/59/EC と Annex I of Regulation (EC) 1272/2008 に基づき、アルセノベタインは、毒性物質に分類されなかった。GSH (Global Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals) により、アルセノベタインは、毒性物質に該当しないため表示義務はない。

##### 1.1.2. 方法

2群各3匹のラット[メス、WISTAR Crl:WI(Ham)]に強制経口投与により2000mg/kg-体重となるようにアルセノベタインを投与した。0.2g/mLの濃度になるように生理的食塩水(0.9% NaCl)にアルセノベタインを溶かし、ラットに投与した。全てのラットは、投与後1日目、8日目、15日目に、毒性による異常が発現していないか目視により観察した。また、体重についても測定した。

##### 1.1.3. 結果

全ての実験動物は、検査の最終日まで生存し、毒性による影響は認められなかった(表 3.1～表 3.4)。14 日間の体重測定の結果、体重の増加は、実験動物の種において、通常認められる範囲内であった(表 3.2)。
表 3.1. 各段階での結果

段階	性/動物番号	投与量（mg/kg）	動物数	死亡数
1	メス/1-3	2000	3	0
2	メス/4-6	2000	3	0

表 3.2. 実験動物の体重(g)と体重増加(%)

動物番号/性	g
1 日目	g
8 日目	g
15 日目	g
1 日目～15 日目
段階1 (2000mg/kg 体重
1/ヌス	184	208	215	17
2/ヌス	170	197	203	19
3/ヌス	178	198	198	11
段階2 (2000mg/kg 体重
4/ヌス	177	202	207	17
5/ヌス	193	216	225	17
6/ヌス	161	172	188	17

表 3.3. 解剖検査の所見

動物番号/性	臓器	目視検査
段階1 (2000mg/kg 体重)
1/メス	-	所見なし
2/メス	-	所見なし
3/メス	-	所見なし
段階2 (2000mg/kg 体重)
4/メス	-	所見なし
5/メス	-	所見なし
6/メス	-	所見なし

(病理学的変化なし)

表 3.4. LD50 Cut-Off

投与量(unit)	動物数	死亡数	LD50 Cut-Off
2000mg/kg 体重	6	0	該当せず
#### 1.2. 急性眼刺激性／腐食性試験

##### 1.2.1. 要旨

試験結果より、Annex VI to Commission Directive 2001/59/EC と Annex I of Regulation (EC) 1272/2008 に基づき、アルセノベタインは、刺激性物質に分類されなかった。

##### 1.2.2. 方法

BSL BIOSERVICE Scientific Laboratories GmbH（プラネック、ドイツ）で実施した。GLP規制(Good Laboratory Practice)を遵守した。方法は、OECD 405、EC 440/2008、OPPTS 870.2400に準じた。ウサギ：3羽、New Zealand White Rabbits Crl: KBL (NZW)、暴露時間：4時間、サンプル量：0.1g/各試験部位。結果を表3.5～表3.11に示す。

##### 1.2.3. 初期症例

投与後1時間後

3羽のうち3羽に、グレード1の発赤とグレード2の結膜浮腫が見られた（表3.5、表3.6、表3.8、表3.9）。

##### 1.2.4. 最終症例

動物番号1については、72時間後にグレード1の発赤が見られた（表3.6）。

動物番号2については、48時間後にグレード1の発赤が見られた（表3.8）。

動物番号3については、6日後にグレード1の発赤が見られた（表3.10）。

##### 1.2.5. 観察された症例の可逆性

動物番号1については、4日後に完全に可逆的に回復した（表3.7）。

動物番号 2 については、72 時間後に完全に可逆的に回復した（表 3.8）。

動物番号3については、7日後に完全に可逆的に回復した（表3.10）。

表 3.5. 眼反応の平均データ (24、48、72 時間)

動物番号	性	結膜	結膜浮腫	虹彩	角膜
1	メス	1.00	0.67	0.00	0.00
2	メス	0.67	0.33	0.00	0.00
3	メス	1.00	0.33	0.00	0.00

表 3.6. 眼反応の個別データ

単一動物の眼反応データ (動物番号1)
処方後の時間	平均得点
1時間	24時間	48時間	72時間
試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照
結膜発赤	1/0	1/0	1/0	1/0	1.00
結膜腫脹	2/0	1/0	1/0	1/0	0.67
虹彩	0/0	0/0	0/0	0/0	0
角膜	0/0	0/0	0/0	0/0	0

表 3.7. 眼反応の個別データ

単一動物の眼反応データ（動物番号1）
処方後の時間
4日	試験／対照
結膜発赤	0/0
結膜腫脹	0/0
虹彩	0/0
角膜	0/0

表 3.8. 眼反応の個別データ

単一動物データ (動物番号2)
処方後の時間	平均得点
1時間	24時間	48時間	72時間
試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照
結膜発赤	1/0	1/0	1/0	0/0	0.67
結膜腫脹	2/0	1/0	0/0	0/0	0.33
虹彩	0/0	0/0	0/0	0/0	0
角膜	0/0	0/0	0/0	0/0	0

表 3.9. 眼反応の個別データ

単一動物の眼反応データ (動物番号3)
処方後の時間	平均得点
1時間	24時間	48時間	72時間
試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照
結膜発赤	1/0	1/0	1/0	1/0	1.00
結膜腫脹	2/0	1/0	0/0	0/0	0.33
虹彩	0/0	0/0	0/0	0/0	0
角膜	0/0	0/0	0/0	0/0	0
表 3.10. 眼反応の個別データ

単一動物の眼反応データ (動物番号3)
処方後の時間
4日後	5日後	6日後	7日後
試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照
結膜発赤	1/0	1/0	1/0	0/0
結膜腫脹	0/0	0/0	0/0	0/0
虹彩	0/0	0/0	0/0	0/0
角膜	0/0	0/0	0/0	0/0

表 3.11. 眼反応の所見

動物番号1
処方後の時間	全身所見	特異的所見
1時間後	所見なし	流涙1
24時間後	所見なし	所見なし
48時間後	所見なし	所見なし
72時間後	所見なし	所見なし
4日後	所見なし	所見なし
動物番号2
処方後の時間	全身所見	特異的所見
1時間後	所見なし	流涙1
24時間後	所見なし	所見なし
48時間後	所見なし	所見なし
72時間後	所見なし	所見なし
動物番号3
処方後の時間	全身所見	特異的所見
1時間後	所見なし	所見なし
24時間後	所見なし	所見なし
48時間後	所見なし	所見なし
72時間後	所見なし	所見なし
4日後	所見なし	所見なし
5日後	所見なし	所見なし
6日後	所見なし	所見なし
7日後	所見なし	所見なし
##### 1.2.6. 結論

本研究の結果、一羽のウサギの眼にアルセノベタインを1回投与（処方量：0.1g）したところ、刺激性が観察された(表3.6、表3.8、表3.9)。しかしながら、7日以内に完全に可逆的に回復した(表3.6～表3.10、図3.1～図3.16)。致死や重篤な臨床症状は観察されなかった。Annex VI of Commission Directive 2001/59/ECとAnnex I of Regulation (EC) 1272/2008に基づき、供試物質、アルセノベタインは、眼刺激物質には分類されない、また、眼刺激性としての表示義務はない。OECE-GHS (Globally Harmonized Classification System)によると、アルセノベタインは、眼刺激性については、Category 2Bに分類された。ウサギを用いた無機ヒ素（三酸化ニヒ素）の急性眼刺激毒性試験については、眼晻の浮腫、角膜の損傷および混濁が認められたとの報告があり（CERIハザードデータ集、2001-8、2001年）、Category 2Aに分類されている。無機ヒ素に比べて、アルセノベタインは、著しく減毒されていることが実証された。
図3.1. 試験前の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号1、対照群）

図3.2. 試験前の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号1、試験群）
図 3.3. 72 時間後の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号 1、対照群）

図 3.4. 72 時間後の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号 1、試験群）
図3.5.4日後の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号1、対照群）

図 3.6. 4 日後の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号 1、試験群）
図3.7. 試験前の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号2、対照群）

図3.8. 試験前の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号2、試験群）
図3.9. 72時間後の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号2、対照群）

図 3.10. 72 時間後の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号 2、実験群）
図 3.11. 試験前の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号 3、対照群）

図 3.12. 試験前の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号 3、試験群）
図 3.13. 72 時間後の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号 3、対照群）

図 3.14. 72 時間後の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号 3、試験群）
図 3.15. 7 日後の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号 3、対照群）

図 3.16. 7 日後の実験動物の試験部位（眼）の臨床観察（動物番号 3、試験群）
#### 1.3. 急性皮膚刺激性／腐食性試驗

##### 1.3.1. 方法

試験は、BSL BIOSERVICE Scientific Laboratories GmbH（プラネック、ドイツ）で実施した。GLP規制(Good Laboratory Practice)を遵守した。方法は、OECD 404、EC 440/2008、OPPTS 870.2500に準じた。ウサギ：3羽、New Zealand White Rabbits Crl: KBL (NZW)、暴露時間：4時間、サンプル量：0.5g/各試験部位、試験部位：胴体背部皮膚

表 3.12. 平均スコア(24、48、72 時間)

刺激スコアの平均値
動物番号	平均（24～72時間）
紅斑	浮腫
1	0	0
2	0	0
3	0	0
平均値	0	0

表 3.13. 個別スコア

動物
番号	適用
部位	刺激性(パッチ除去後の時間)
1時間	24時間	48時間	72時間
試験群	対照群	試験群	対照群	試験群	対照群	試験群	対照群
1	紅斑	0	0	0	0	0	0	0	0
浮腫	0	0	0	0	0	0	0	0
2	紅斑	0	0	0	0	0	0	0	0
浮腫	0	0	0	0	0	0	0	0
3	紅斑	0	0	0	0	0	0	0	0
浮腫	0	0	0	0	0	0	0	0

表 3.14. 個別データ

全身、特異的所見（動物番号：1）
パッチ除去後の時間	全身所見	特異的所見	備考
1時間	所見なし	所見なし	—
24時間	所見なし	所見なし	—
48時間	所見なし	所見なし	—
72時間	所見なし	所見なし	—
全身、特異的所見（動物番号：2）
パッチ除去後の時間	全身所見	特異的所見	備考
1時間	所見なし	所見なし	-
24時間	所見なし	所見なし	-
48時間	所見なし	所見なし	-
72時間	所見なし	所見なし	-
全身、特異的所見(動物番号:1)
パッチ除去後の時間	パッチ除去後の時間	パッチ除去後の時間	パッチ除去後の時間
1時間	所見なし	所見なし	-
24時間	所見なし	所見なし	-
48時間	所見なし	所見なし	-
72時間	所見なし	所見なし	-

##### 1.3.2. 結果の要約

皮膚刺激性、皮膚腐食性物質には分類されないことが示された（表 3.12～表 3.14）。

##### 1.3.3. 結論

本研究の結果、一羽のウサギの皮膚にアルセノベタインを単一塗布（処方量：0.5g）したところ、パッチ除去後に刺激性、腐食性は観察されなかった（表3.13～表3.14）。三羽のウサギの皮膚にアルセノベタインを単一塗布（処方量：0.5g）したところ、パッチ除去後に刺激性、腐食性は観察されなかった（図3.17～図3.28）致死や重篤な臨床症状は観察されなかった。Annex VI of Commission Directive 2001/59/ECとAnnex I of Regulation (EC)1272/2008に基づき、アルセノベタインは、危険性物質には分類されない。また、危険物質としての表示義務はない。OECE-GHS (Globally Harmonized Classification System)によると、アルセノベタインは、皮膚刺激性物質としての表示義務はない。
図 3.17. 試験前の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号 1、対照群、面積：約 6cm²）

図3.18. 試験前の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号1、試験群、面積：約6cm²）
図 3.19. 72 時間後の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号 1、対照群、面積：約 6cm²）

図 3.20. 72 時間後の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号 1、試験群、面積：約 6cm²）
図3.21. 試験前の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号2、対照群、面積：約6cm²）

図 3.22. 試験前の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号 2、試験群、面積：約 6cm²）
図 3.23. 72 時間後の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号 2、対照群、面積：約 6cm²）

図 3.24. 72 時間後の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号 2、試験群、面積：約 6cm²）
図 3.25. 試験前の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号 3、対照群、面積：約 6cm²）

図 3.26. 試験前の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号 3、実験群、面積：約 6cm²）
図 3.27. 72 時間後の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号 3、対照群、面積：約 6cm²）

図 3.28. 72 時間後の実験動物の試験部位（胴体背部の皮膚）の臨床観察（動物番号 3、実験群、面積：約 6cm²）
### 2. トリメチルアルシンオキシド

#### 2.1. 急性経口毒性試験

##### 2.1.1. 要旨

試験結果より、Annex VI to Commission Directive 2001/59/EC と Annex I of Regulation (EC) 1272/2008 に基づき、トリメチルアルシンオキシドは、毒性物質に分類されなかった。GSH (Global Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals) により、トリメチルアルシンオキシドは毒物に該当しないため表示義務はない。

##### 2.1.2. 方法

2群各3匹のラット[メス、WISTAR Crl:WI(Ham)]に強制経口投与により2000mg/kg-体重となるようにトリメチルアルシンオキシドを投与した。0.2g/mLの濃度になるように生理的食塩水(0.9% NaCl)にトリメチルアルシンオキシドを溶かしてラットに投与した。全てのラットは、投与後1日目、8日目、15日目に、目視検査により毒性による異常が発現していないか観察した。体重についても測定した。

##### 2.1.3. 結果

全ての実験動物は、検査の最終日まで生存し、毒性による影響は認められなかった(表 3.15～表 3.18)。14 日間の体重測定の結果、体重の増加は、実験動物の種において、通常認められる範囲内であった(表 3.16)。
表 3.15. 各段階での結果

段階	性/動物番号	投与量（mg/kg）	動物数	死亡数
1	メス/1-3	2000	3	0
2	メス/4-6	2000	3	0

表 3.16. 実験動物の体重(g)と体重増加(%)

動物番号/性	g
1 日目	g
8 日目	g
15 日目	g
1 日目～15 日目
段階1 (2000mg/kg 体重
1/ヌス	172	190	193	12
2/ヌス	177	189	198	12
3/ヌス	189	212	227	20
段階2 (2000mg/kg 体重
4/ヌス	189	205	214	13
5/ヌス	157	172	171	9
6/ヌス	190	216	215	13

表 3.17. 検査の所見

動物番号/性	臓器	目視検査
段階1 (2000mg/kg 体重)
1/メス	-	所見なし
2/メス	-	所見なし
3/メス	-	所見なし
段階2 (2000mg/kg 体重)
4/メス	-	所見なし
5/メス	-	所見なし
6/メス	-	所見なし

(病理学的変化なし)

表 3.18. LD50 Cut-Off

投与量(unit)	動物数	死亡数	LD50 Cut-Off
2000mg/kg 体重	6	0	該当せず

#### 2.2. 急性眼刺激性／腐食性試験

##### 2.2.1. 要旨

試験結果より、Annex VI to Commission Directive 2001/59/EC と Annex I of Regulation
(EC) 1272/2008 に基づき、トリメチルアルシンオキシドは、刺激性物質に分類されなかった。

##### 2.2.2. 方法

BSL BIOSERVICE Scientific Laboratories GmbH（プラネック、ドイツ）で実施した。GLP規制(Good Laboratory Practice)を遵守した。方法は、OECD 405、EC 440/2008、OPPTS 870.2400に準じた。ウサギ：3羽、New Zealand White Rabbits Crl: KBL (NZW)、暴露時間：4時間、サンプル量：0.1g/各試験部位。

##### 2.2.3. 初期症例

## 投与後 1 時間後

動物番号 1、2 については、グレード 1 の発赤、グレード 1 の結膜浮腫とグレード 1 の流涙が見られた（表 3.19～表 3.26）。

動物番号3については、グレード1の発赤、グレード1の結膜浮腫とグレード2の流涙が見られた（表3.19～表3.26）。

##### 2.2.4. 最終症例

動物番号1については、7日後にグレード1の発赤が見られた（表3.20と表3.21）。動物番号2、3については、6日後にグレード1の発赤が見られた（表3.22～表3.25）。

##### 2.2.5. 観察された症例の可逆性

動物番号1については、8日後に完全に可逆的に回復した（表3.20と表3.21）。

動物番号2、3については、7日後後に完全に可逆的に回復した（表3.22～表3.25）。

表 3.19. 眼反応の平均データ (24、48、72 時間)

動物番号	性	結膜	結膜浮腫	虹彩	角膜
1	メス	1.33	0.33	0.00	0.00
2	メス	1.00	0.33	0.00	0.00
3	メス	1.00	0.33	0.00	0.00

表 3.20. 眼反応の個別データ

単一動物の眼反応データ(動物番号1)
処方後の時間	平均得点
1時間	24時間	48時間	72時間
試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照
結膜発赤	1/0	2/0	1/0	1/0	1.33
結膜腫脹	1/0	1/0	0/0	1/0	0.33
虹彩	0/0	0/0	0/0	0/0	0
角膜	0/0	0/0	0/0	0/0	0

表 3.21. 眼反応の個別データ

単一動物データ (動物番号1)
処方後の時間
4日後	5日後	6日後	7日後	8日後
試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照
結膜発赤	1/0	1/0	1/0	1/0	0/0
結膜腫脹	0/0	0/0	0/0	0/0	0/0
虹彩	0/0	0/0	0/0	0/0	0/0
角膜	0/0	0/0	0/0	0/0	0/0

表 3.22. 眼反応の個別データ

単一動物データ (動物番号2)
処方後の時間	平均得点
1時間	24時間	48時間	72時間
試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照
結膜発赤	1/0	1/0	1/0	1/0	1.00
結膜腫脹	1/0	1/0	0/0	0/0	0.33
虹彩	0/0	0/0	0/0	0/0	0
角膜	0/0	0/0	0/0	0/0	0

表 3.23. 眼反応の個別データ

単一動物データ (動物番号2)
処方後の時間
4日後	5日後	6日後	7日後
試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照
結膜発赤	1/0	1/0	1/0	0/0
結膜腫脹	0/0	0/0	0/0	0/0
虹彩	0/0	0/0	0/0	0/0
角膜	0/0	0/0	0/0	0/0

表 3.24. 眼反応の個別データ

単一動物の眼反応データ（動物番号3）
処方後の時間	平均得点
1時間	24時間	48時間	72時間
試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照
結膜発赤	1/0	1/0	1/0	1/0	1.00
結膜腫脹	1/0	1/0	0/0	0/0	0.33
虹彩	0/0	0/0	0/0	0/0	0
角膜	0/0	0/0	0/0	0/0	0

表 3.25. 眼反応の個別データ

単一動物の眼反応データ(動物番号3)
処方後の時間
4日後	5日後	6日後	7日後
試験／対照	試験／対照	試験／対照	試験／対照
結膜発赤	1/0	1/0	1/0	0/0
結膜腫脹	0/0	0/0	0/0	0/0
虹彩	0/0	0/0	0/0	0/0
角膜	0/0	0/0	0/0	0/0

表 3.26. 眼反応の所見

動物番号1
処方後の時間	全身所見	特異的所見
1時間後	所見なし	流涙1
24時間後	所見なし	流涙2
48時間後	所見なし	所見なし
72時間後	所見なし	所見なし
4日後	所見なし	所見なし
5日後	所見なし	所見なし
6日後	所見なし	所見なし
7日後	所見なし	所見なし
8日後	所見なし	所見なし
動物番号2
処方後の時間	全身所見	特異的所見
1時間後	所見なし	流涙1
24時間後	所見なし	流涙1
48時間後	所見なし	所見なし
72時間後	所見なし	所見なし
4日後	所見なし	所見なし
5日後	所見なし	所見なし
6日後	所見なし	所見なし
7日後	所見なし	所見なし
動物番号3
処方後の時間	全身所見	特異的所見
1時間後	所見なし	流涙 2
24時間後	所見なし	流涙 1
48時間後	所見なし	所見なし
72時間後	所見なし	所見なし
4日後	所見なし	所見なし
5日後	所見なし	所見なし
6日後	所見なし	所見なし
7日後	所見なし	所見なし

##### 2.2.6. 結論

本研究の結果、一羽のウサギの眼にトリメチルアルシンオキシドを1回投与(処方量:0.1g)したところ、刺激性が観察された(表3.26)。しかしながら、7日以内に完全に可逆的に回復した(表3.26)。致死や重篤な臨床症状は観察されなかった。Annex VI of Commission Directive 2001/59/ECとAnnex I of Regulation (EC) 1272/2008に基づき、供試物質、トリメチルアルシンオキシドは、眼刺激物質には分類されない、また、眼刺激性としての表示義務はない。GHS (Globally Harmonized Classification System)によると、トリメチルアルシンオキシドは、眼刺激性については、表示義務はない。ウサギを用いた無機ヒ素（三酸化ニヒ素）の急性眼刺激毒性試験については、眼晻の浮腫、角膜の損傷および混濁が認められたとの報告があり（CERIハザードデータ集、2001-8、2001年）、Category 2Aに分類されている。無機ヒ素に比べて、トリメチルアルシンオキシドは、著しく減毒されていることが実証された。

#### 2.3. 急性皮膚刺激性／腐食性試驗

##### 2.3.1. 方法

試験は、BSL BIOSERVICE Scientific Laboratories GmbH（プラネック、ドイツ）で実施した。GLP規制(Good Laboratory Practice)を遵守した。方法は、OECD 404、EC 440/2008、OPPTS 870.2500に準じた。ウサギ：3羽、New Zealand White Rabbits Crl: KBL (NZW)、暴露時間：4時間、サンプル量：0.5g/各試験部位、試験部位：胴体背部皮膚

表 3.27. 平均スコア(24、48、72 時間)
刺激スコアの平均値
動物番号	平均（24～72時間）
紅斑	浮腫
1	0	0
2	0	0
3	0	0
平均値	0	0

表 3.28. 個別スコア

動物番号	適用部位	刺激性(パッチ除去後の時間)
1時間	24時間	48時間	72時間
試験群	対照群	試験群	対照群	試験群	対照群	試験群	対照群
1	紅斑	0	0	0	0	0	0	0	0
浮腫	0	0	0	0	0	0	0	0
2	紅斑	0	0	0	0	0	0	0	0
浮腫	0	0	0	0	0	0	0	0
3	紅斑	0	0	0	0	0	0	0	0
浮腫	0	0	0	0	0	0	0	0

表 3.29. 個別データ

全身、特異的所見(動物番号:1)
パッチ除去後の時間	全身所見	特異的所見	備考
1時間	所見なし	所見なし	-
24時間	所見なし	所見なし	-
48時間	所見なし	所見なし	-
72時間	所見なし	所見なし	-
全身、特異的所見(動物番号:2)
パッチ除去後の時間	全身所見	特異的所見	備考
1時間	所見なし	所見なし	-
24時間	所見なし	所見なし	-
48時間	所見なし	所見なし	-
72時間	所見なし	所見なし	-
全身、特異的所見(動物番号:3)
パッチ除去後の時間	パッチ除去後の時間	パッチ除去後の時間	パッチ除去後の時間
1時間	所見なし	所見なし	-
24時間	所見なし	所見なし	-
48時間	所見なし	所見なし	-
72時間	所見なし	所見なし	-

##### 2.3.2. 結果の要約

皮膚刺激性、皮膚腐食性物質には分類されないことが示された（表 3.27～表 3.29）。

#### 2.3.3 結論

本研究の結果、一羽のウサギの皮膚にトリメチルアルシンオキシドを単一塗布（処方量：0.5g）したところ、パッチ除去後に刺激性、腐食性は観察されなかった。三羽のウサギの皮膚にトリメチルアルシンオキシドを単一塗布（処方量：0.5g）したところ、パッチ除去後に刺激性、腐食性は観察されなかった（表3.29）。致死や重篤な臨床症状は観察されなかった。Annex VI of Commission Directive 2001/59/ECとAnnex I of Regulation (EC) 1272/2008に基づき、トリメチルアルシンオキシドは、危険性物質には分類されない。また、危険物質としての表示義務はない。GHS (Globally Harmonized Classification System)によると、トリメチルアルシンオキシドは、皮膚刺激性物質としての表示義務はない。

### 3. 文献

Chemikaliengesetz("Chemicals Act") of the Federal Republic of Germany, Appendix 1 to § 19a as amended and promulgated on 20 June 2002 (BGB1. Nr. 40 S. 2090), revised 31 October 2006 (BGB1. Nr. 50 S. 2407).

OECD Principles of Good Laboratory Practice (as revised in 1997); OECD Environmental Health and Safety Publications; Series on Principles of Good Laboratory Practice and Compliance Monitoring – Number 1. Environment Directorate, Organisation for Economic Co-operation and Development, Paris 1998

OECD Guidelines for Testing of Chemicals, No. 405, “Acute Eye Irritation/Corrosion” (2002)

OECD Guidelines for Testing of Chemicals, Section 4: Health Effects, No. 404, Acute Dermal Irritation/Corrosion (2002), Organisation for Economic Co-Operation and Development, Paris

Commission Regulation (EC) No 440/2008, L 142, Annex Part B of 30 May 2008 laying down test methods pursuant to Regulation (EC) No. 1907/2006 of the European Parliament and of the Council on the Registration, Evaluation, Authorization and Restriction of Chemicals (REACH)

EPA Health Effects Test Guidelines, OPPTS 870.2400 Acute Eye Irritation, EPA 712-C-98-195 (August 1998), United States Environmental Protection Agency, Prevention, Pesticides and Toxic Substances (7101)

EPA Health Effects Test Guidelines, OPPTS 870.2500 Acute Eye Irritation, EPA 712-C-98-196

August 1998, United States Environmental Protection Agency, Prevention, Pesticides and
Toxic Substances (7101)

EC, 2001: Commission Directive 2001/59/EC of 6th August 2001 adapting to technical progress for the 28th time Council, Directive 67/548/EEC on the approximation of the laws, regulations and administrative provisions relating to the Classification, Packaging and Labeling of Dangerous Substances. Official Journal of the European Communities, L 225, 21 August 2001

Regulation (EC) No 1272/2008 of the European Parliament and of the Council of 16 December 2008 on classification, labeling and packaging of substances and mixtures, amending and repealing Directives 67/548/EEC and 1999/45/EC, and amending Regulation (EC) No 1907/2006. Official Journal of the European Communities, L 353, 31 December 2008

GHS-Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals. Third revised edition, United Nations. New York / Geneva, July 2009

German Animal Welfare Act, Art. 9.2, No. 7 (Deutsches Tierschutzgesetz, 24. Juli 1972 (BGBl. IS. 1277), Inkrafttreten der letzten Änderung: 22. Juli 2009, (Art. 2 ÄndG vom 15. Juli 2009)

Merkblatt zur tierschutzgerechten Haltung von Versuchstieren; Merkblatt 55 Kaninchen; TVT Tierärztliche Vereingung für Tierschuntz

Planung, Struktur von Versuchstierbereichen tierexperimentell tätiger Institution; Veröffentlichung

GV-SOLAS (Gesellschaft für Versuchstierkunde, Society for Laboratory Animal Science),

Mai 1988

Draize, J. H. (1955), Dermal Toxicity pp. 46-59, Association of Food and Drug Officials of the U. S., Washington D. C.

Draize, J. H. (1965), Appraisal of the Safety of Chamicals, in: Foods, Drug and Cosmetics-Dermal Toxicity pp. 49-52., Assoc. of Food and Drug Officials of the United States, Topeka, Kansas

Weil, S. C., Scala, R. A., (1971), Study of Intra- and Interlaboratory Variability in the Results of Rabbit Eye and Skin Irritation Tests. Toxicol. Appl. Phamacol. 12: 276-360

### 4. 細胞毒性試験

## 実験方法

## 1 ）细胞

HeLa 細胞（ヒト子宮頸がん細胞）は ECACC（Cat. No. EC EC93021013）より購入し、10%牛胎児血清（Lot.No. 68313101, MOREGATE, Australia & New Zealand）を含む Eagle MEM 培地（Sigma-aldrich 社製）を用いて継代培養した。HL-60 細胞（ヒト急性前骨髓性白血病細胞）も同様に ECACC（Cat. No EC98070106）より購入し、10%牛胎児血清（Lot.No. 68313101, MOREGATE, Australia & New Zealand）を含む RPMI1640 培地（Sigma-aldrich 社製）を用いて継代培養した。
## 2 ）細胞毒性試験

細胞は 96-well culture dish に 90μl づつ播種し(HeLa; 5x10^{4} viable cells/ml, HL-60; 1x10^{5} viable cells/ml)、炭酸ガスインキュベータ内で 24 時間培養した。三酸化比素[iAs(Ⅲ)]およびアルセノベタイン（AsB）は最終濃度が 2.5-100 μM になるように 10μl づつ添加し、24 時間曝露した。曝露終了後、培地に Cell counting kit（DOJINDO 社製）を 10ul 添加し、さらに 1~4 時間（HeLa; 1 時間、HL-60; 4 時間）培養した。その後マイクロプレートリーダー（ARVO X4, Perkin Elmer 社製）を用いて 450nm（reference 650nm）の吸光度を測定することにより相対的生細胞数を測定した。iAs(Ⅲ)およびAsB を加えないウェルの吸光度を用いて規格化することにより iAs(Ⅲ)およびAsB の細胞毒性を測定した。

## 3 ）細胞の形態変化観察

細胞は培養フラスコに播種（5x10^{5} viable cells/T25 bottle）し炭酸ガスインキュベータ内で24時間培養した。iAs(Ⅲ)およびAsBは最終濃度が1ppmになるように添加し、24時間曝露した。曝露終了後、細胞は位相差頭微鏡下で形態観察を行った。

## 4 ）アポトーシス細胞および分裂期細胞誘発頻度の検討

細胞は培養フラスコに播種（5x10^{5} viable cells/T25 bottle）し炭酸ガスインキュベータ内で24時間培養した。iAs(Ⅲ)およびAsBは最終濃度が5～100μMになるように添加し、24時間曝露した。曝露終了後、HeLa細胞はPBSで2度洗浄後0.25%トリプシン-EDTA処理により15mlチューブに回収した。HL-60細胞はピペッティングにより15mlチューブに回収した。チューブに回収した細胞は遠心（1500rpm、3分）し、PBSで1回洗浄後、100μlの1%グルタルアルデヒドにて固定した(4℃、24時間)。遠沈（4℃、1000rpm、5分）後、上清を除去し、細胞を200μlのPBSに浮遊させた。細胞浮遊液10μlに1μlの1mM Hoechst 33342を添加した。一滴をスライドグラスに載せカバーグラスをかけ、蛍光顕微鏡（オリンパスIX-71、U励起、油浸100倍）でクロマチン凝縮を起こした細胞をアポトーシス細胞(図3.33、図3.34)とし、染色体分裂像を示す細胞を分裂期細胞(図3.37)として計数し、計数した全細胞数に対する割合を算出し、誘発頻度とした。

## 5 ）DNA ラダーの検出

iAs(Ⅲ)およびAsBを曝露したHeLa細胞は、24時間培養後、トリプシンで回収し、遠沈(1500 rpm、3分)した。HL-60細胞はiAs(Ⅲ)およびAsBを曝露後、24時間培養し、遠沈(1500 rpm、3分)した。PBSで1回洗浄後、500 μlのPBSに浮遊させ、微量遠心機で再び遠沈(1500 rpm、3分)した。上清除去後、ペレットを再分散させ200 μlの細胞融解バッファーを加え、4℃で10分、細胞融解させ、融解液を遠沈(4℃、15000 rpm、30分)して、DNA断片を含む上清を1.5 mlチューブに取った。4 μlの20 mg/ml RNase Aを加えて、37℃で1時間インキュベートした。4 μlの20 mg/ml Proteinase Kを加え、さらに37℃で1
時間インキュベートした。この DNA 抽出液に 50 μl の 5 M NaCl と 250 μl のイソプロパノールを加え、-20 ℃ で 24 時間安置した。遠沈（4 ℃、15000 rpm、20 分）上清除去後、イソプロパノールの除去を完全にするため、再度遠沈（4 ℃、15000 rpm、5 分）後、TE バッファー 12 μl に回収し DNA を電気泳動の試料とした。2 g のアガロース（タカラバイオ社製；LO3）に 100 ml の泳動用バッファー（10 ml TBE, 90 ml H₂O）を加え、電子レンジで加温溶解させ、ゲルトレー（Mupid2、コスモバイオ）に流してゲルを作製した。DNA 試料は DNA 抽出液とゲルローディング液を 5：1 となるように混合した（全量として 6 μl）。電気泳動槽（Mupid-2 plus, ADVANCE）に泳動バッファー（300 ml）をゲル上面がバッファー中に入らない程度入れ、泳動槽にセットしたゲルのウェルに試料および DNA 分子量マーカーを入れた。電圧 50 V で 5 分間泳動を行い、マーカー色素がゲルに入るのをみてから、一時停止し、泳動バッファーがゲル上を 3～5 mm 被う程度に追加した。さらに 50 V で泳動を続け、マーカー色素（BPB）が先端付近に達するまで氷上で泳動を行った（約 2 時間）。その後、蒸留水に最終濃度 0.5 μg/ml となるようにエチジウムブロマイドを加え、ゲルを染色後、紫外線検出器で DNA の蛍光を検出し、写真撮影を行った。
### 2. 結果と考察

## 1 ）細胞毒性試験

HeLa 細胞に iAs(Ⅲ) および AsB を添加した際に観察される細胞毒性を図 3.29 に示した。5μM で iAs(Ⅲ) と AsB の細胞毒性に明らかな違いが観察された。iAs(Ⅲ) は濃度依存的に細胞致死効果が増強するのに対し、AsB は 100μM という高濃度になってもコントロールの細胞生存率と有意差が見られなかった。この結果より iAs(Ⅲ) は低濃度で明確な細胞致死効果を示すのに対し、AsB は高濃度でも細胞致死が観察されないことから、無毒化ヒ素化合物であることが明らかとなった。

図 3.29. iAs(Ⅲ), AsB 添加後の HeLa 細胞の細胞生存率

図 3.30 は HL-60 細胞に iAs(Ⅲ)および AsB を添加した際に観察される細胞毒性である。2.5μM で iAs(Ⅲ)と AsB の細胞毒性に明らかな違いが観察された。HL-60 細胞でも iAs(Ⅲ)は濃度依存的に細胞致死作用が増強するのに対し、AsB は 100μM という高濃度になってもコントロールの細胞生存率と有意差が見られなかった。この結果より iAs(III)は低濃度で明確な細胞致死作用を示すのに対し、AsB は高濃度でも細胞の致死作用が観察されないことから、HL-60 細胞についても無毒化物であることが明らかになった。

また、HeLa 細胞と HL-60 細胞の細胞毒性を比較すると、HL-60 細胞の方が HeLa 細胞よりも
やや iAs(Ⅲ)に対する細胞毒性が強く出現する傾向が示された。

すなわち、AsBは両細胞を用いた実験において共に毒性が観察されない結果が得られた。

図 3.30. iAs(Ⅲ), AsB 添加後の HL-60 細胞の細胞生存率
## 2 ）細胞の形態変化観察

iAs(Ⅲ)およびAsBを1ppm添加後24時間培養したHeLa細胞の位相差顕微鏡像を図3.31に示した。

control

iAs(III) 1ppm

AsB 1ppm

図 3.31. iAs(III)およびAsBを1ppm添加後24時間培養したHeLa細胞の位相差顕微鏡像

HeLa 細胞は上皮細胞様の接着細胞である。コントロールの細胞像には分裂期の細胞（写真左上、赤矢印）が観察され、細胞が活発に増殖している様子が見られた。

iAs(Ⅲ) 1ppm を添加した場合、コントロールで観察された石垣状の形態を持つ細胞は減少し、iAs(Ⅲ)の毒性により接着能が低下し球形を示す細胞（黄色矢印）が増加した。画面上の細胞数も減少していることから細胞増殖が阻害されていることが示唆された。

一方、AsB を添加した細胞ではコントロールの細胞像と相違が見られず、位相差顕微鏡下での形態観察では細胞毒性が認められなかった。

次に iAs(Ⅲ)および AsB を 1ppm 添加後 24 時間培養した HL-60 細胞の位相差顕微鏡像を図
### 3.32 に示した。

control

iAs(III) 1ppm

AsB 1ppm

図 3.32. iAs(Ⅲ)およびAsBを1ppm添加後24時間培養したHL-60細胞の位相差顕微鏡像

HL-60 細胞はリンパ球様の浮遊細胞である。コントロールの細胞では球状で細胞膜がしっかりとした光沢のある細胞が多数観察された。

iAs(Ⅲ) 1ppm を添加した場合、細胞質が膨潤し、体積が増加した細胞が観察された（赤矢印）。また細胞収縮した死細胞と思われる細胞（黄色矢印）が観察された。また画面上の細胞数も減少していることから細胞増殖が阻害されていることが示唆された。

一方、AsB を添加した細胞ではコントロールの細胞像と相違が見られず、位相差顕微鏡下での形態観察では細胞毒性が認められなかった。
## 3 ）アポトーシス細胞誘発頻度

①アポトーシス細胞の観察

図 3.33 は iAs(Ⅲ)および AsB を 1ppm 添加後 24 時間培養した HeLa 細胞をハキスト 33342 で染色し、蛍光顕微鏡下で観察した細胞像を示した。

iAs(Ⅲ)を添加した細胞にはアポトーシスが誘導され

大小多数の球状のクロマチン凝縮像が観察された

HeLa cell

正常な細胞にはクロマチンDNAの網目状の構造が見られる。

AsBを添加した細胞には正常細胞と比べて大きな変化は見られなかった

図 3.33. iAs(Ⅲ)およびAsBを1ppm添加後24時間培養したHeLa細胞の蛍光顕微鏡像

コントロールの細胞には核内に広がるクロマチン DNA が、Hoechst 33342 によって広い範囲で染色され網目状の構造が観察された。

iAs(Ⅲ) 1ppm を添加した場合、細胞核内にはコントロール細胞には観察されなかった粒状の多数の核が観察された。これらの細胞は iAs(Ⅲ) によって誘発されたアポトーシス細胞であり、クロマチン凝縮が生じ、濃染、小球状の像を示したものと考えられた。

一方、AsBを1ppm添加した場合にはコントロールの細胞像との違いが観察されず、蛍光頭微鏡下での観察では細胞毒性が認められなかった。