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第4章 リン系難燃剤の動物毒性・行動学的影響評価

分担研究者：川口 真以子（明治大学 農学部）

鈴木 剛、滝上 英孝（国立環境研究所 資源循環・廃棄物研究センター）

### 1. はじめに

我々の生活は、多くの化学物質の研究や開発によって豊かなものとなっている。その一方で、これらの化学物質の中には、生活の質を向上させるだけでなく、人体へ悪影響を及ぼすものも存在する。このような化学物質のうち、特に内分泌系へ影響を及ぼして個体の発達・発育、あるいは体内環境の恒常性の維持をかく乱するものを「内分泌かく乱化学物質」と呼ぶ。このようなヒトや動物へ影響を及ぼす内分泌かく乱化学物質は、我々の身近に多く存在する。内分泌かく乱化学物質は我々の生活空間に漂う埃、ハウスダストの中からも多数検出されており、これらハウスダスト中の化学物質は呼吸によって慢性的に体内へ取り込まれている。ハウスダスト中から検出される化学物質の1つに、家具や家電に添加し、火災などにより炎が燃え広がることを予防する難燃剤がある。過去に難燃剤として幅広く利用されていた臭素系難燃剤Polybrominated diphenyl ethers（PBDEs）は、体内での蓄積性、内分泌かく乱性、そして胎児の成長阻害性といった健康被害から使用が禁止、あるいは制限されている $ ^{1,2)} $ 。近年、PBDEsの代替物質としてリン系難燃剤tris-(1,3-dichloro-2-propyl) phosphate（TDCIPP）やTripropyl phosphate（TPhP）が利用されている。ヒト細胞を用いたin vitroの研究から、TDCIPPとTPhPに抗アンドロゲン作用を示し、TPhPはさらにエストロゲン様作用を示すことが認められている $ ^{3)} $ 。このような内分泌かく乱作用は生体へ悪影響を及ぼす可能性が懸念されるものの、この可能性を明らかにするための動物実験はほとんど実施されていない。

そこで、本研究では実験動物であるラットを用い、リン系難燃剤 TDCIPP と TPhP が生体へどのような影響を及ぼすかを明らかにすることを目的とした。そのため、生後 0 日齢から 28 日齢までの連日これらの化学物質を曝露し、幼若期と成熟期の末梢臓器重量への影響、成熟期の行動と中枢神経系への影響について検討した。

### 2. 研究方法

## 2 ．1．投与物質と評価項目

ハウスダスト中のTDCIPPとTPhPは、呼吸により口から体内へと取り込まれることから、本研究での被験物質は全て強制経口投与とした。TDCIPPの投与量は、既報研究のワーストシナリオでのハウスダスト摂取量とハウスダスト中被験物質濃度を参考に、0.25 mg/kg/day、2.5 mg/kg/day、25 mg/kg/day、そして250 mg/kg/dayとした。TPhPの投与量は、TDCIPPと比較検討が可能になるよう25 mg/kg/day、250 mg/kg/dayとした。これらの被験物質の陽性対照物質として、本研究では前立腺ガンの抗ガン剤として用いられる抗アンドロゲン剤flutamide（Fl）を用い、投与量を2.5 mg/kg/dayとした。また溶媒対照物質としてSesame oil（Oil）を用いた。成熟後の行動への影響を調査するために、情動行動・学習行動・生殖行動に関する各行動実験を実施した。情動行動を評価するためにオープンフィールド試験と高架式十字迷路試験、学習行動を評価するために受動回避学習試験、生殖行動を評価するために性行動試
験を実施した。また、成熟後の末梢臓器への影響を調査するために、下垂体、肝臓、腎臓、副腎、精巣上体、精巣、凝固腺、前立腺、精囊、陰茎、および球海綿体筋の各組織重量を測定した。加えて中枢神経系への影響を調査するために、脊髓の球海綿体脊髓核 (Spinal nucleus of the bulbocavernosus、SNB) でのアンドロゲン受容体 (AR) の発現量と脳の外側中隔 (Lateral septum、LS) および内側視索前野 (Medial preoptic area、MPA) での AR とエストロゲン受容体 (ER) の mRNA の発現量を測定した。

## 2 ．2．TDCIPP の生体への影響の調査

#### 実験 1: 0.25、2.5 mg/kg/day TDCIPP

Wister-imamichi 系雄ラットに対して、被験物質を 0 日齢から 28 日齢まで強制経口投与を実施した。被験物質には TDCIPP、陽性対照物質に F1、そして溶媒対照物質に Oil を用いた。各被験物質の投与量は、TDCIPP:0.25 mg/kg/day (LTD 群)、2.5 mg/kg/day (HTD 群)、F1:2.5 mg/kg/day (F1 群)、Oil:5 ml/kg/day (Oil 群) とした。被験物質の投与最終日の翌日となる 29 日齢で各群の半数の動物を麻酔下にて断頭し、臓器の摘出を行った。摘出した臓器は、各組織重量を測定した。

各群残り半数の動物は、15週齢時に高架式十字迷路試験と性行動試験（初回）を実施した。16週齢時に性行動試験（2回目）を、17週齢時に性行動試験（3回目）を、18週齢時にオープンフィールド試験と受動回避学習試験を実施した。全ての行動試験終了後、19週齢時に麻酔下にて断頭し、臓器の摘出を行った。これらの試料に対し29日齢と同様の測定を行った。

## 実験 2: 25、250 mg/kg/day TDCIPP

Wister-imamichi 系雄ラットに対して、被験物質を 0 日齢から 28 日齢まで強制経口投与を実施した。被験物質には TDCIPP、陽性対照物質に F1、そして溶媒対照物質に 011 を用いた。各被験物質の投与量は、TDCIPP:25 mg/kg/day（LTD群）、250 mg/kg/day（HTD群）、F1:2.5 mg/kg/day（F1群）、011:5 ml/kg/day（Oil群）とした。被験物質の投与最終日の翌日となる 29 日齢で各群の半数の動物を麻酔下にて断頭し、臓器の摘出を行った。摘出した臓器は、各組織重量を測定した。

各群残り半数の動物は、実験1と同様のスケジュールで各行動実験を行った。全ての行動試験終了後、麻酔下にて断頭し、臓器の摘出を行った。これらの試料に対し29日齢と同様の測定を行った。また同時にHTD群、Fl群、そしてOil群のみ脊髓L4-S1および脳を摘出し、定量的Real-Time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)によりSNBでのAR発現量、LSとMPAでのERあるいはARのmRNA発現量を測定した。

## 2 ．3．TPhPの生体への影響の調査

## 実験 3: 25、250 mg/kg/day

Wister-imamichi 系雄ラットに対して、被験物質を 0 日齢から 28 日齢まで強制経口投与を実施した。被験物質には TPhP、陽性対照物質に F1、そして溶媒対照物質に 0il を用いた。各被験物質の投与量は、TPhP : 25 mg/kg/day（LTP 群）、250 mg/kg/day（HTP 群）、F1 : 2.5 mg/kg/day（F1 群）、0il : 5 ml/kg/day（Oil 群）とした。被験物質の投与最終日の翌日となる 29 日齢で各群の半数の動物を麻酔下にて断頭し、臓器の摘出を行った。摘出した臓器は、各組織重量を測定した。

各群残り半数の動物は、実験1と同様のスケジュールで各行動実験を行った。ただしオープンフィールド試験は15週齢で行い、高架十字迷路試験は19週齢で行った。全ての行動試験終了後、麻酔下にて断頭し、臓器の摘出を行った。これらの試料に対し29日齢と同様の測定を行った。
### 3. 結果と考察

#### 3.1. TDCIPP の生体への影響

#### 実験 1: 0.25、2.5 mg/kg/day TDCIPP

29 日齢（幼若期）での解剖結果を表1に示す。F1群の精巣上体および副生殖腺の体重あたり重量において0il群と比較して減少が認められた（P < 0.01）。

15 週齢時の高架式十字迷路試験の結果、各被験物質曝露間で総移動距離、Open arm 侵入回数、そして Open arm 滞在時間に差は認められなかった（図 1）。

性行動試験（初回）の結果を図2に示す。各被験物質曝露間で観察時間5分あたりのMount回数およびMount潜時にOil群と比較して差は認められなかった。Fl群のIntromission回数は、Oil群と比較して減少し（P < 0.05）、Intromission潜時およびEjaculation潜時では、Fl群がOil群と比較して増加した（P < 0.01）。

16 週齢時の性行動試験（2 回目）の結果を図 3 に示す。各被験物質曝露間で Mount 回数に Oil 群と比較して差が認められなかったが、Fl 群の Mount 潜時が Oil 群と比較して長くなった（P < 0.05）。また、Fl 群の Intromission 回数は Oil 群と比較して減少し（P < 0.05）、Intromission 潜時の増加（P < 0.01）と Ejaculation 潜時の増加が認められた（P < 0.01）。

17 週齢時の性行動試験（3 回目）の結果を図 4 に示す。F1 群の観察時間 5 分あたりの Mount 回数は、Oil 群と比較して減少し（P < 0.05）、Mount 潜時が長くなった（P < 0.01）。また F1 群の Intromission 回数は表れなくなった（P < 0.01）

18 週齢時のオープンフィールド試験の結果、各被験物質曝露間で総移動距離に差は認められなかった（図5）。また、受動回避学習試験においても群間の差は認められなかった。

全行動実験終了後（成熟期）の解剖結果は、表2に示す。F1群の体重は0il群と比較して減少が認められた（P＜0.05）。またF1群の肝臓および陰茎の体重あたり重量は0il群と比較して減少が認められ（肝臓重量：P＜0.05、陰茎重量：P＜0.01）、陰茎長の短縮が認められた（P＜0.01）。

## 実験 2: 25、250 mg/kg/day TDCIPP

幼若期での解剖結果は、表3に示す。LTD群の腎臓および副腎の体重あたり重量は0il群と比較して増加した(P<0.01)。HTD群では肝臓および腎臓の体重あたり重量が0il群と比較して増加した(P<0.01)。F1群では精巣上体、副生殖腺、そして陰茎の体重あたり重量が0il群と比較して減少し(P<0.01)、さらに陰茎長が短くなった(P<0.01)

15 週齢時の高架式十字迷路試験の結果、各被験物質曝露間で総移動距離、Open arm 侵入回数、そしてOpen arm 滞在時間に差は認められなかった（図6）。

性行動試験（初回）の結果を図7に示す。各被験物質曝露間で観察時間5分あたりのMount回数およびMount潜時にOil群と比較して差は認められなかった。Fl群のIntromission回数は、Oil群と比較して減少し（P＜0.01）、Intromission潜時およびEjaculation潜時では、Fl群がOil群と比較して増加した（P＜0.01）。
16 週齢時の性行動試験（2 回目）の結果を図8に示す。全ての群の Mount 回数および Mount 潜時は Oil 群と比較して差が認められなかった。一方で、Fl 群の Intromission 回数は、Oil 群と比較して減少し（P < 0.01）、Intromission 潜時の増加と Ejaculation 潜時の増加が認められた（P < 0.01）。

17 週齢時の性行動試験（3 回目）の結果を図 9 に示す。F1 群の観察時間 5 分あたりの Mount 回数および Mount 潜時に差は認められなかった。一方で、F1 群の Intromission 回数は、Oil 群と比較して減少し、Intromission 潜時と Ejaculation 潜時はいずれも増加がした（P < 0.01）

18 週齢時のオープンフィールド試験の結果、各被験物質曝露間で総移動距離に差は認められなかった（図 10）。また、受動回避学習試験においても群間の差は認められなかった。

成熟期の脳内 LS 領域での ERα、ERβ および AR の各 mRNA 発現量を解析した結果、各被験物質曝露群間でそれぞれの受容体 mRNA 相対発現量に差は認められなかった（図 11 A-C）。同様に脳内 POA での各受容体 mRNA 発現量を解析した結果もまた、各被験物質曝露群間で mRNA 相対発現量に差は認められなかった（図 11 D-F）。また、脊髄 RDLN および SNB 領域での AR mRNA 発現量を解析した結果、いずれの領域においても被験物質曝露群間で差は認められなかった（図 11 F、G）。

成熟期での解剖結果は、表4に示す。HTD群の体重が0il群と比較して増加が認められた(P<0.05)。またF1群の凝固腺、精囊、球海綿体筋および陰茎の体重あたり重量が0il群と比較して減少が認められ(P<0.05)、陰茎長の短縮が認められた(P<0.01)。加えて、HTD群の精巣、精巣上体、前立腺、陰茎の体重あたり重量が0il群と比較して減少が認められた(P<0.05)。

#### 3.2. TPhPの生体への影響

## 実験 3:25、250 mg/kg/day TPhP

幼若期での解剖結果は、表5に示す。HTP群では、体重が011群と比較して減少し（P<0.01）、臓器重量については肝臓、腎臓、および副腎の体重あたり重量が増加し（P<0.05）、一方で副生殖腺の体重あたり重量は減少した（P<0.01）。LTP群では副生殖腺の体重あたり重量が011群と比較して減少した（P<0.01）。F1群では、精巣上体、副生殖腺および陰茎の体重あたり重量が011群と比較して減少し（P<0.01）、さらに陰茎長の短縮が認められた（P<0.05）。

15 週齢時のオープンフィールド試験の結果、各被験物質曝露間で総移動距離に差は認められなかった(図 12)。

性行動試験（初回）の結果を図13に示す。各被験物質曝露間で観察時間5分あたりのMount回数およびMount潜時にOil群と比較して差は認められなかった。Fl群のIntromission回数は、Oil群と比較して減少し（P＜0.01）、Intromission潜時およびEjaculation潜時では、Fl群がOil群と比較して増加した（P＜0.01）。

16 週齢時の性行動試験（2 回目）の結果を図 14 に示す。初回の結果と同様に、各被験物質曝露間で観察時間 5 分あたりの Mount 回数および Mount 潜時に Oil 群と比較して差は認められなかった。Fl 群の Intromission 回数は、Oil 群と比較して減少し（P < 0.01）、Intromission 潜時および Ejaculation 潜時では、Fl 群が Oil 群と比較して増加した（P < 0.01）。

17 週齢時の性行動試験（3 回目）の結果を図 15 に示す。Fl 群の観察時間 5 分あたりの Mount 回数および Mount 潜時に差は認められなかった。また Fl 群の Intromission 回数は、Oil 群と比較して減少した (P < 0.01)。HTP 群と Fl 群の Intromission 潜時と Ejaculation 潜時はいずれも増加した (P < 0.05)。
19 週齢時の高架式十字迷路試験の結果、各被験物質曝露間で総移動距離、Open arm 侵入回数、そしてOpen arm 滞在時間に差は認められなかった（図 16）。また、受動回避学習試験においても群間の差は認められなかった。

成熟期での解剖結果は、表6に示した。HTP群の体重が0il群と比較して増加し（P＜0.05）、精巣上体および陰茎の体重あたり重量が減少した（P＜0.05）。一方で、F1群の肝臓の体重あたり重量が0il群と比較して増加した（P＜0.05）。また、凝固腺、精囊、前立腺、陰茎および球海綿体筋の体重あたり重量が減少した（P＜0.01）。さらに陰茎長の短縮が認められた（P＜0.01）。

## 3 ．4．末梢臓器へのTDCIPP、TPhP、およびFlutamideの影響

Flutamide の亜慢性曝露により、幼若期の精巣上体および副生殖腺の重量が低下した（実験1）。さらに陰茎の重量増加や陰茎長の短縮（実験2）も認められた。これらの臓器の発達はアンドロゲンの作用により促進されることから、Flutamide によるアンドロゲン作用の阻害が原因であると考えられる。また、成熟期では幼若期の場合と同様に精巣上体、副生殖腺、および陰茎の重量の減少と陰茎長の短縮が認められた（実験1）。さらには凝固腺、精囊、および球海綿体筋の重量が低下した（実験2、実験3）。本研究で用いたFlutamideと同等の抗アンドロゲン作用を有する化学物質の幼若期曝露によりアンドロゲン依存性臓器の発達が不十分であると、生涯にわたって、その影響が残る可能性が示唆された。

TDCIPP の亜慢性曝露により、幼若期でのみ肝臓および副腎の臓器重量が増加し、腎臓の重量が減少した（実験2）。Flutamide 曝露においてはこのような影響が認められなかったことから、本試験で用いた濃度のTDCIPPには抗アンドロゲン作用とは異なる可逆的な毒性効果があると考えられる。成熟期では、体重が増加し、精巣、精巣上体、前立腺、および陰茎の重量が低下した（実験2）。幼若期でのTDCIPPの亜慢性曝露により、動物の摂食行動を支配する脳領域へ影響して摂食量が増加したか、代謝が変化したことで体重が増加したと考えられる。また精巣、精巣上体、前立腺、あるいは陰茎といった末梢臓器の重量が成熟期でのみOil曝露群より低下していたことは、TDCIPPの持つ作用により成熟後の精巣からのテストステロン分泌あるいはこれら臓器のアンドロゲンに対する感受性が変化し、成熟後の発達に影響が表れた可能性が考えられる。

TPhP の亜慢性曝露により、Flutamide 曝露と同様に幼若期の副生殖腺重量が低下した（実験 3）。TPhP の持つ抗アンドロゲン作用によるアンドロゲン作用の阻害が原因であると推測される。また同濃度の TDCIPP では、副生殖腺重量の低下が確認されなかったことから、TPhP は TDCIPP に比べ高い抗アンドロゲン作用を持つ可能性が示唆される。また体重の減少や肝臓、腎臓、および副腎の重量が増加したことから、本試験で用いた濃度の TPhP には TDCIPP と同様に可逆的な毒性効果があると考えられる。成熟期では、TPhP の曝露により体重の増加と精巣上体および陰茎の重量が低下した。TDCIPP の場合と同様に、TPhP の持つ作用により成熟後の精巣からのテストステロン分泌あるいは臓器のアンドロゲンに対する感受性が変化した可能性が考えられる。ただし体重増加に関しては、エストロゲン作用による摂食調節中枢の雄性化もあり得る。

#### 3.5. 情動行動あるいは学習行動へのTDCIPP、TPhP、およびFlutamideの影響

TDCIPP、TPhP、およびFlutamideの亜慢性曝露は、成熟期の動物の示す情動行動あるいは学習行動へ影響しないことが明らかになった（実験1、実験2、および実験3）。アンドロゲンは不安の緩和、認知機能の促進、空間記憶の形成に関わることが明らかになっているものの、本研究の被験物質の曝露方法
である出生後28日間曝露によりアンドロゲン作用を阻害しても、成熟後には被験物質の影響が消失してしまうと考えられる。

#### 3. 6. 性行動への TDCIPP、TPhP および Flutamide の影響

Flutamide の亜慢性曝露により、性行動試験中の陰茎の挿入回数である Intromission 回数が減少し、Intromission 潜時、あるいは Ejaculation 潜時が増加した（実験 1、2 および実験 3）。これらの被験ラットでは、成熟期の陰茎の重量の低下および陰茎長の短縮が認められた。さらに射精と密接な関係をもつ球海綿体筋の重量の低下も認められた。このような、陰茎の発達不全や球海綿体筋の重量低下が、性行動中の一部の行動発現低下を引きおこしたと考えられる。

250 mg/kg/day TDCIPP および TPhP の亜慢性曝露により、3 回目の性行動試験中、被験ラットの射精に至るまでの時間である Ejaculation 潜時が増加した（実験 2 および実験 3）。これらの被験ラットでは、Flutamide の場合と同様に成熟期の陰茎の重量の低下および陰茎長の短縮が認められたことから、Ejaculation 潜時の増加は、TDCIPP および TPhP の抗アンドロゲン作用により陰茎の発達が不十分であったことによると考えられる。

本研究で用いた被験化学物質の亜慢性曝露により、性行動の一部が抑制されたことから、中枢神経系のホルモン受容体の発現量を測定した。性行動発現制御には、脳LSおよびmPOAが深く関与し、脊髓SNBは球海綿体筋へ神経投射を持つ。そこで、LSおよびmPOAではERあるいはARのmRNA発現量、脊髓SNBではAR mRNA発現量をそれぞれ測定した（実験2）。しかしいずれの領域についても被験化学物質によるER、ARのmRNA発現量への影響は認められなかった。

### 4. 結論

本研究から、リン系難燃剤 TDCIPP あるいは TPhP の生後早期の 28 日間経口曝露は、副生殖腺や陰茎の発達を阻害し、成熟期の性行動の一部を抑制することが明らかになった。またその最少影響濃度は、250 mg/kg/day と 25 mg/kg/day の間にあることが示された。一方、抗アンドロゲン剤である Flutamide もまた、出生後 28 日間経口曝露もまた、成熟期の副生殖腺や生殖器などの末梢臓器の発達を阻害し、性行動の一部を抑制することが明らかになった。加えてその最少影響濃度は、250 mg/kg/day と 25 mg/kg/day の間にあることが示された。

### 5. 参考文献

1) John D. Meeker, Paula I. Johnson, David Camann, Russ Hauser. Polybrominated diphenyl ether (PBDE) concentrations in house dust are related to hormone levels in men. Science of the Total Environment, 407, 3425-3429 (2009)

2) John D. Meeker $ ^{1} $ , Sheela Sathyanarayana and Shanna H. Swan. Phthalates and other additives in plastics: human exposure and associated health outcomes. Phil. Trans. R. Soc. B, 364, 2097-2113 (2009)

3) Suzuki G, Tue NM, Malarvannan G, Sudaryanto A, Takahashi S, Tanabe S, Sakai S, Brouwer A, Uramaru N, Kitamura S, Takigami H. Similarities in the endocrine-disrupting potencies of
indoor dust and flame retardants by using human osteosarcoma (U2OS) cell-based reporter gene assays. Environ Sci Technol., 47, 2898-908 (2013)

### 6. 研究発表

#### 6.1. 誌上発表

該当なし。

#### 6.2. 学会発表

1）神島 愛未、鈴木 剛、滝上 英孝、堀井 康行、渡辺 元、田谷 一善、近藤 保彦、川口 真以子．：幼若期の tris(1,3-dichloro-2-propyl) phosphate（TDCIPP）と flutamide（FI）の慢性曝露が雄ラットの性行動、副生殖腺重量、生殖器重量および血中 testosterone 濃度に及ぼす影響．第 17 回日本内分泌攪乱化学物質学会，（2014）

2）植村 英恵、神島 愛未、堀井 康行、渡辺 元、田谷 一喜、滝上 英孝、鈴木 剛、近藤 保彦、川口 真

以子：幼若期及び成熟期の TDCIPP 及び flutamide 慢性曝露が雄ラットの性行動、副生殖腺重量、血中ホルモン濃度に及ぼす影響．日本畜産学会第 118 回大会、(2014)

3) Kamishima, M., Uemura, H., Horii, Y., Watanabe, G., Taya, K., Takigami, H., Suzuki, G., Kondo, Y., Kawaguchi, M.: ANTIANDROGEN DURING JUVENILE INDUCE HYPOPLASIA OF PENIS AND SUPRESSION OF SEXUAL BEHAVIOR OF MALE RATS. 4th International NeuroMalaysia Symposium, (2013)

4) Kamishima, M., Uemura, H., Horii, Y., Watanabe, G., Taya, K., Harigaya, T., Takigami, H., Suzuki, G., Kondo, Y., Kawaguchi, M.: EFFECTS OF ANTIANDROGEN ON SEXUAL BEHAVIOR, ORGAN WEIGHT AND HORMONE LEVELS OF MALE RATS. The Endocrine Society's 95th Annual Meeting & Expo, (2013)
表 1 TDCIPP、あるいは flutamide の亜慢性曝露後、29 日齢（幼若期）の各臓器重量

臟器重量(平均值±SEM)
Oil	(n)	LTD	(n)	HTD	(n)	Fl	(n)

体重(g)	92.980	±2.500	22	88.010	±2.860	15	94.830	±3.550	16	92.160	±2.320	19
下垂体/体重(%)	0.017	±0.004	6	0.018	±0.004	6	0.024	±0.003	6	0.017	±0.004	3
肝臟/体重(%)	4.553	±0.128	6	4.379	±0.054	6	4.520	±0.093	6	4.521	±0.153	3
腎臟/体重(%)	0.976	±0.019	6	0.932	±0.094	6	1.066	±0.017	6	1.005	±0.026	2
副腎/体重(%)	0.029	±0.001	6	0.026	±0.002	6	0.027	±0.002	6	0.028	±0.001	3
精巢/体重(%)	0.434	±0.080	6	0.561	±0.029	6	0.527	±0.017	6	0.435	±0.043	3
精巢上体/体重(%)	0.087	±0.004	6	0.087	±0.002	6	0.083	±0.003	6	0.057	±0.002*	3
副生殖腺/体重(%)	0.094	±0.006	6	0.110	±0.003	6	0.100	±0.003	6	0.071	±0.004*	3

LTD : TDCIPP (0.25mg/kg/Day)、HTD : 2.5mg/kg/Day、Fl : flutamide (2.5mg/kg/Day)

A

B

C

図１ TDCIPP、あるいは flutamide の亜慢性曝露後、15 週齢時の高架式十字迷路試験の結果 (A) 総移動距離、(B) Open arm への侵入回数、(C) Open arm 滞在時間

LTD : TDCIPP (0.25mg/kg/Day)、HTD : 2.5mg/kg/Day、Fl : flutamide (2.5mg/kg/Day)
B

C

D

E

図２ TDCIPP、あるいは flutamide の亜慢性曝露後、15 週齢時の性行動試験（初回）の結果 (A) 観察時間 5 分あたりの Mount 回数、(B) Mount 行動を示した動物の割合、(C) Intromission 行動の回数、(D) Intromission 行動を示した動物の割合、(E) Ejaculation 行動を示した動物の割合 LTD : TDCIPP (0.25mg/kg/Day)、HTD : 2.5mg/kg/Day、Fl : flutamide (2.5mg/kg/Day)
B

C

D

図3 TDCIPP、あるいはflutamideの亜慢性曝露後、16週齢時の性行動試験（2回目）の結果 (A) 観察時間5分あたりのMount回数、(B) Mount行動を示した動物の割合、(C) Intromission行動の回数、(D) Intromission行動を示した動物の割合、(E) Ejaculation行動を示した動物の割合 LTD: TDCIPP (0.25mg/kg/Day)、HTD: 2.5mg/kg/Day、Fl: flutamide (2.5mg/kg/Day)
B

D

E

図4 TDCIPP、あるいはflutamideの亜慢性曝露後、17週齢時の性行動試験（3回目）の結果 (A) 観察時間5分あたりのMount回数、(B) Mount行動を示した動物の割合、(C) Intromission行動の回数、(D) Intromission行動を示した動物の割合、(E) Ejaculation行動を示した動物の割合 LTD: TDCIPP (0.25mg/kg/Day)、HTD: 2.5mg/kg/Day、Fl: flutamide (2.5mg/kg/Day)
図 5 TDCIPP、あるいは flutamide の亜慢性曝露後、18 週齢時のオープンフィールド試験の結果 LTD : TDCIPP (0.25mg/kg/Day)、HTD : 2.5mg/kg/Day、Fl : flutamide (2.5mg/kg/Day)

表 2 TDCIPP、あるいは flutamide の亜慢性曝露後、19 週齢（成熟期）の各臓器重量

显示器重量(平均值±SEM)
Oil	(n)	LTD	(n)	HTD	(n)	Fl	(n)

体重(g)	572.963	±	16.455	9	576.706	±	14.417	9	564.776	±	10.688	9	521.291	± 9.124 *
下垂体/体重(%)	0.002	±	0.001	9	0.002	±	0.001	9	0.002	±	0.001	8	0.002	± 0.001
肝腺/体重(%)	3.669	±	0.055	9	3.693	±	0.056	9	3.687	±	0.071	9	3.464	± 0.054 *
肾腺/体重(%)	0.727	±	0.012	9	0.732	±	0.014	9	0.722	±	0.018	9	0.731	± 0.015
副肾/体重(%)	0.010	±	0.001	9	0.010	±	0.001	9	0.010	±	0.001	9	0.010	± 0.001
精巢/体重(%)	0.534	±	0.014	9	0.514	±	0.015	9	0.539	±	0.010	9	0.550	± 0.012
精巢上体/体重(%)	0.269	±	0.014	9	0.252	±	0.006	9	0.257	±	0.007	9	0.253	± 0.006
凝固腺/体重(%)	0.039	±	0.003	9	0.032	±	0.002	9	0.034	±	0.001	9	0.030	± 0.004
精囊/体重(%)	0.352	±	0.027	9	0.354	±	0.022	9	0.318	±	0.015	9	0.274	± 0.039
前立腺/体重(%)	0.266	±	0.022	9	0.281	±	0.011	9	0.252	±	0.015	9	0.226	± 0.027
隐茎重量/体重(%)	0.126	±	0.006	9	0.119	±	0.004	9	0.124	±	0.004	9	0.091	± 0.005 *
球海绵体筋/体重(%)	0.168	±	0.007	9	0.167	±	0.007	9	0.148	±	0.010	9	0.157	± 0.009
隐茎短(mm)	10.168	±	0.452	9	10.043	±	0.424	9	9.908	±	0.380	8	8.461	± 0.789
隐茎长(mm)	19.322	±	0.491	9	19.059	±	0.796	9	18.383	±	0.647	8	13.294	± 0.825 *

LTD : TDCIPP (0.25mg/kg/Day)、HTD : 2.5mg/kg/Day、Fl : flutamide (2.5mg/kg/Day)
表 3 TDCIPP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、29 日齢（幼若期）の各臓器重量

臟器重量(平均值±SEM)
Oil	(n)	LTD	(n)	HTD	(n)	Fl	(n)

体重(g)	92.980	±2.500	22	88.010	±2.860	15	94.830	±3.550	16	92.160	±2.320	19
下垂体/体重(%)	0.008	±0.002	14	0.007	±0.001	14	0.007	±0.002	7	0.008	±0.002	12
肝臟/体重(%)	4.940	±0.063	22	5.330	±0.273	15	6.130	±1.910*	16	4.980	±0.071	19
腎臟/体重(%)	1.030	±0.160	22	1.260	±0.075*	15	1.520	±0.054*	16	1.020	±0.022	17
副腎/体重(%)	0.026	±0.001	22	0.032	±0.001*	15	0.026	±0.001	16	0.028	±0.001	17
精巢/体重(%)	0.581	±0.011	22	0.620	±0.039	15	0.629	±0.012	16	0.583	±0.008	19
精巢上体/体重(%)	0.083	±0.003	22	0.087	±0.007	15	0.080	±0.003	16	0.065	±0.001*	19
副生殖腺/体重(%)	0.089	±0.003	22	0.095	±0.006	15	0.085	±0.004	16	0.061	±0.002*	19
隆茎重量/体重(%)	0.064	±0.003	22	0.069	±0.004	15	0.068	±0.002	15	0.041	±0.001*	19
球海绵体筋/体重(%)	0.037	±0.003	21	0.044	±0.004	15	0.034	±0.004	15	0.030	±0.002	18
隆茎短(mm)	5.500	±1.460	22	6.180	±0.183	15	5.710	±2.310	15	4.630	±0.184*	19
隆茎長(mm)	16.020	±3.290	22	15.360	±0.289	15	15.360	±2.890	15	13.000	±0.341*	19

LTD : TDCIPP (25 mg/kg/day)、HTD : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)

A

B

C

図6 TDCIPP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、19 週齢時の高架式十字迷路試験の結果

$$ arm\wedge\varnothing $$

LTD : TDCIPP (25 mg/kg/day)、HTD : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)
A

B

C

D

E

図７ TDCIPP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、15 週齢時の性行動試験（初回）の結果 (A) 観察時間 5 分あたりの Mount 回数、(B) Mount 行動を示した動物の割合、(C) Intromission 行動の回数、(D) Intromission 行動を示した動物の割合、(E) Ejaculation 行動を示した動物の割合 LTD : TDCIPP (25 mg/kg/day)、HTD : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)
A

B

C

D

ㄴ

図８ TDCIPP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、16 週齢時の性行動試験（2 回目）の結果 (A) 観察時間 5 分あたりの Mount 回数、(B) Mount 行動を示した動物の割合、(C) Intromission 行動の回数、(D) Intromission 行動を示した動物の割合、(E) Ejaculation 行動を示した動物の割合 LTD : TDCIPP (25 mg/kg/day)、HTD : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)
A

B

C

D

図9 TDCIPP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、17 週齢時の性行動試験（3 回目）の結果 (A) 観察時間 5 分あたりの Mount 回数、(B) Mount 行動を示した動物の割合、(C) Intromission 行動の回数、(D) Intromission 行動を示した動物の割合、(E) Ejaculation 行動を示した動物の割合 LTD : TDCIPP (25 mg/kg/day)、HTD : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)
図 10 TDCIPP あるいは flutamide の長期曝露後、18 週齢時のオープンフィールド試験の結果 LTD : TDCIPP (25 mg/kg/day)、HTD : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)

A

B

C

D

E

F

G

H

図 11 TDCIPP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、19 週齢時の脳および脊髓での ERα、ERβ、および AR の各 mRNA 発現量の測定結果

各グラフは脳内 LS 領域の（A）ER α 発現量、（B）ER β 発現量、（C）AR 発現量、脳内 POA 領域での（D）ER α 発現量、（E）ER β 発現量、（F）AR 発現量を示す。また、（G）脊髓 RDLN および（H）SNB 領域の AR 発現量を示す。

HTD : TDCIPP (250 mg/kg/day)、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)
表 4 TDCIPP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、19 週齢（成熟期）の各臓器重量

镧器重量(平均值±SEM)
Oil	(n)	LTD	(n)	HTD	(n)	Fl	(n)

体重(g)	583.160	±	7.770	16	569.740	±	8.090	16	622.810	±	11.490*	13	579.980	±	9.850
下垂体/体重(%)	0.004	±	0.001	15	0.003	±	0.001	15	0.003	±	0.001	13	0.003	±	0.003
肝膜/体重(%)	3.740	±	0.082	15	3.630	±	0.066	16	3.850	±	0.066	13	3.930	±	0.089
臀膜/体重(%)	0.725	±	0.012	16	0.729	±	0.021	16	0.674	±	0.014	13	0.736	±	0.011
副臀/体重(%)	0.011	±	0.001	16	0.010	±	0.001	16	0.009	±	0.001	13	0.011	±	0.001
精巢/体重(%)	0.545	±	0.008	16	0.575	±	0.011	16	0.503	±	0.009*	13	0.549	±	0.010
精巢上体/体重(%)	0.238	±	0.003	16	0.238	±	0.004	16	0.219	±	0.005*	13	0.225	±	0.005
凝固腺/体重(%)	0.046	±	0.002	16	0.047	±	0.002	16	0.042	±	0.002	13	0.035	±	0.002*
精囊/体重(%)	0.467	±	0.017	16	0.482	±	0.015	16	0.416	±	0.019	13	0.381	±	0.013*
前立腺/体重(%)	0.227	±	0.009	16	0.229	±	0.009	16	0.175	±	0.012*	13	0.198	±	0.015
隐茎重量/体重(%)	0.112	±	0.003	16	0.115	±	0.002	15	0.102	±	0.002*	13	0.088	±	0.003*
球海绵体筋/体重(%)	0.148	±	0.005	16	0.152	±	0.004	15	0.132	±	0.005	13	0.123	±	0.006*
隐茎短(mm)	9.015	±	0.730	15	8.456	±	0.219	16	7.987	±	0.152	12	6.433	±	0.430*
隐茎長(mm)	17.569	±	0.612	15	18.213	±	0.397	16	17.024	±	0.351	12	13.003	±	0.851*

LTD : TDCIPP (25 mg/kg/day)、HTD : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)

表 5 TPhP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、29 日齢（幼若期）の各臓器重量

臟器重量(平均值±SEM)
Oil	(n)	LTP	(n)	HTP	(n)	Fl	(n)

体重(g)	91.094	±2.451	25	95.339	±1.233	22	76.451	±3.800*	18	94.497	±1.848	27
下垂体/体重(%)	0.009	±0.002	17	0.005	±0.001	13	0.005	±0.001	10	0.008	±0.001	20
肝臟/体重(%)	4.941	±0.056	25	4.891	±0.071	21	5.575	±0.067*	18	4.972	±0.055	27
腎臟/体重(%)	1.030	±0.160	24	1.060	±0.018	22	1.155	±0.042*	18	1.045	±0.034	26
副腎/体重(%)	0.026	±0.001	24	0.029	±0.001	22	0.031	±0.002*	18	0.029	±0.001	27
精巢/体重(%)	0.567	±0.012	25	0.594	±0.010	22	0.605	±0.014	18	0.571	±0.009	27
精巢上体/体重(%)	0.082	±0.003	25	0.073	±0.002	22	0.077	±0.004	18	0.061	±0.001*	27
副生殖腺/体重(%)	0.089	±0.003	25	0.073	±0.003*	22	0.077	±0.004*	18	0.057	±0.002*	27
隆茎重量/体重(%)	0.064	±0.002	24	0.062	±0.002	20	0.063	±0.002	17	0.039	±0.001*	25
球海绵体筋/体重(%)	0.036	±0.003	23	0.036	±0.003	20	0.031	±0.004	15	0.030	±0.002	24
隆茎短(mm)	6.136	±0.362	25	5.903	±0.443	21	5.162	±0.123	17	4.890	±0.238*	26
隆茎長(mm)	13.839	±0.917	25	13.134	±0.964	21	15.709	±0.410	17	11.982	±0.629	25

LTP : TPhP (25 mg/kg/day)、HTP : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)
図 12 TPhP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、15 週齢時のオープンフィールド試験の結果 LTP : TPhP（25 mg/kg/day）、HTP : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide（2.5 mg/kg/day）

A

B

C

D

E

図 13 TPhP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、15 週齢時の性行動試験（初回）の結果

（A）観察時間5分あたりのMount回数、（B）Mount行動を示した動物の割合、（C）Intromission行動の回数、（D）Intromission行動を示した動物の割合、（E）Ejaculation行動を示した動物の割合 LTP: TPhP (25 mg/kg/day)、HTP: 250 mg/kg/day、Fl: flutamide (2.5 mg/kg/day)
A

B

C

D

図 14 TPhP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、16 週齢時の性行動試験（2 回目）の結果 (A) 観察時間 5 分あたりの Mount 回数、(B) Mount 行動を示した動物の割合、(C) Intromission 行動の回数、(D) Intromission 行動を示した動物の割合、(E) Ejaculation 行動を示した動物の割合 LTP : TPhP (25 mg/kg/day)、HTP : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)
A

B

C

D

図 15 TPhP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、17 週齢時の性行動試験（3 回目）の結果 (A) 観察時間 5 分あたりの Mount 回数、(B) Mount 行動を示した動物の割合、(C) Intromission 行動の回数、(D) Intromission 行動を示した動物の割合、(E) Ejaculation 行動を示した動物の割合 LTP : TPhP (25 mg/kg/day)、HTP : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)
C

図 16 TDCIPP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、19 週齢時の高架式十字迷路試験の結果 (A) 総移動距離、(B) Open arm への侵入回数、(C) Open arm 滞在時間

LTP : TPhP (25 mg/kg/day)、HTP : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)

表 6 TDCIPP あるいは flutamide の亜慢性曝露後、19 週齢（成熟期）の各臓器重量

镧器重量(平均值±SEM)
Oil	(n)	LTP	(n)	HTP	(n)	Fl	(n)

体重(g)	592.680	±	11.146	24	597.736	±	9.961	16	640.694	±	11.532*	16	614.620	±
下垂体/体重(%)	0.003	±	0.001	23	0.003	±	0.001	16	0.002	±	0.001	15	0.003	±
肝膜/体重(%)	3.587	±	0.074	23	3.633	±	0.103	16	3.796	±	0.090	16	3.870	±
肾膜/体重(%)	0.691	±	0.013	24	0.705	±	0.013	16	0.629	±	0.013	16	0.717	±
副肾/体重(%)	0.011	±	0.001	24	0.011	±	0.001	15	0.010	±	0.001	16	0.011	±
精巢/体重(%)	0.532	±	0.008	24	0.548	±	0.011	15	0.492	±	0.011	16	0.528	±
精巢上体/体重(%)	0.226	±	0.005	24	0.218	±	0.006	15	0.200	±	0.005	16	0.213	±
凝固腺/体重(%)	0.044	±	0.002	24	0.041	±	0.002	16	0.043	±	0.004	16	0.032	±
精囊/体重(%)	0.415	±	0.020	24	0.343	±	0.024	16	0.355	±	0.026	16	0.328	±
前立腺/体重(%)	0.232	±	0.009	24	0.226	±	0.009	16	0.201	±	0.011	16	0.191	±
隐茎重量/体重(%)	0.110	±	0.003	23	0.112	±	0.004	16	0.097	±	0.003	16	0.085	±
球海绵体筋/体重(%)	0.143	±	0.005	23	0.139	±	0.006	16	0.126	±	0.003	16	0.116	±
隐茎短(mm)	8.735	±	0.485	23	8.141	±	0.139	16	7.869	±	0.181	16	6.966	±
隐茎長(mm)	17.537	±	0.406	23	17.484	±	0.396	16	16.831	±	0.434	16	11.606	±

LTP : TPhP (25 mg/kg/day)、HTP : 250 mg/kg/day、Fl : flutamide (2.5 mg/kg/day)
## 第5章 縮合型リン系難燃剤含有試料を用いた分解性と生成物の環境放散性評価

分担研究者：小瀬 知洋（新潟薬科大 応用生命科学部）

### 1. はじめに

難燃剤は、電気・電子機器、自動車や車両に用いられる樹脂、建築材料、紙、繊維などを難燃化し、火災による人的・経済的損失を低減するために用いられる。難燃剤は無機系難燃剤と有機系難燃剤に大別される。有機系難燃剤の中ではハロゲンラジカルによる強い難燃化性能を有する含ハロゲン系と、主に樹脂の可塑剤としての性質も併せ持ちポリリン酸被覆の形成による酸素遮断作用による難燃化性能を有するリン系難燃剤に分別される。PCB問題に代表される有機塩素化合物の有害性や塩素化ダイオキシンなどの環境問題が注目されたことから、含ハロゲン系難燃剤の主流は臭素系難燃剤(BFR)に移行した。臭素系難燃剤においても優れた難燃効果を有するのみならず、低有害性の難燃剤の開発及び実用化がされている $ ^{1)} $ 。BFRは経済的に安価かつ優れた難燃効果を有していることから世界中で最も多く使用されていた $ ^{2)} $ 。しかしながら、最も主要なBFRであったポリ臭素化ビフェニルおよびポリ臭素化ジフェニルエーテル類の人体残留性が指摘されたことから、2006年7月に欧州有害物質制限(Restriction on Hazardous Substances; RoHS)指令で使用が制限されている $ ^{3)} $ 。近年ではその規制はデカブロモシクロドデカン等の比較的新しいBFRに及び、これらは新規臭素系難燃剤(NBFR)で代替される一方で、一部は有機リン系難燃剤(PFR)で代替されている $ ^{4),5)} $ 。

有機リン系難燃剤の中でも近年使用が増加している縮合リン酸エステル類難燃剤(CPFR)はPC/ABSアロイ樹脂などの難燃剤として主にパソコンやテレビなどの電子機器に使用されている。CPFRにはビスフェノールAビスジフェニルホスフェート(BPA-BDPP)、レブルシノールビスジフェニルホスフェート(PBDPP)及びレブルシノールビスジキシレニルホスフェート(PBDXP)があり、BPA-BDPPは現在最も使用されているCPFRである。PBDPPはBPA-BDPPの使用以前に最も使用されていたCPFRでBPA-BDPPより高い加水分解性を有していることがわかっている $ ^{6} $ 。その使用のピーク時期を鑑みると現在静脈系において最も排出されているCPFRであると考えられ、廃プラのリサイクル工程中に混入する可能性が高い物質である。PBDXPについてはバイオアツセイの結果、他の2種のCPFRと比較して毒性が高かった $ ^{6} $ 。CPFRは古くから可塑難燃剤として使用されてきたリン酸トリエステル類が2価アルコール及びフェノールを架橋物質としてオリゴマー化した化合物でモノマー型リン酸エステル類というべき構造のリン酸トリエステル類難燃剤と比べて低可塑性かつ低揮発性であり、毒性も低い。しかしながら、加水分解性を有することから、添加された電化製品の使用時や埋め立てといった最終処分及びリサイクル時にフェノール類をはじめとする低分子量化合物の生成、放出のリスクが懸念される。

プラスチックは最終処分されるものもあるが、可能な限り再資源化し、再生利用することが重要視されている。廃プラのリサイクル方法には3種類あり、素材から素材へのリサイクルであるマテリアルリサイクル、化学的な工程を利用したケミカルリサイクル、焼却などにより熱エネルギーとして回収するサーマルリサイクルがある。特にサーマルリサイクルについては2005年5月に廃棄プラスチックの分別基準を可燃ごみに統一した際に、廃棄物処理法の基本方針を「廃プラについては、まず発生抑制を、次に再生利用を推進する」とし、「なお残るものについては、直接埋め立てを行わず、熱回収を行なうのが適当である」と改正・告示された。東京23区においては2008年度から本格的に焼却・エネルギー回収に