Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
## 2 ）簡易型母体血中総PCB濃度

## a 对象者

エコチル調査に参加した姫のうち、千葉ユニットセンターでリクルートされた313名の妊娠前期の母体血中PCB濃度について簡易型血中PCB濃度測定法を用い測定した。参加者の特性を表(1)-3に示す。なお、本研究に用いた血液試料は、エコチル全体調査に提供された試料のうち、生化学分析を終えた血液（血清）の返却試料を用いた。

表(1)-3 参加者特性 $ (\text{N}=313) $

平均	標準偏差	最大	最小
登錄時年齡（歲）	31.65	4.66	43	17
身長（cm）	158.65	5.64	175	140
体重（kg）	53.77	5.30	95	35

## b ヒト血中総 PCBs 濃度の測定条件

総 PCBs 濃度の測定条件を以下に記す。血清試料 0.5 g をけん化して有機溶媒に抽出し、硫酸シリカゲルカラムにて精製した後、ガスクロマトグラフ-陰イオン化学イオン化法質量分析計（GC/NICI-MS）にて測定した。

## i 試料

ヒト血清：冷凍状態で受領し、測定までの間、冷凍（-20℃）にて保存した。

## ii 標準物質および試薬

表(1)-4 総 PCBs 濃度分析のために使用した標準物質と試薬

試 薬 名	規格	メーカー名
PCB11	WELLINGTON
PCB28	WELLINGTON
PCB60	WELLINGTON
PCB66	WELLINGTON
PCB74	WELLINGTON
PCB87	WELLINGTON
PCB99	WELLINGTON
PCB105	WELLINGTON
PCB118	WELLINGTON
PCB126	WELLINGTON
PCB138	WELLINGTON
PCB146	WELLINGTON
PCB153	WELLINGTON
PCB156	WELLINGTON
PCB170	WELLINGTON
PCB177	WELLINGTON
PCB178	WELLINGTON
PCB180	WELLINGTON
PCB183	WELLINGTON
PCB187	WELLINGTON
PCB194	WELLINGTON
PCB199	WELLINGTON
PCB201	WELLINGTON
PCB206	WELLINGTON
PCB209	WELLINGTON
PCB30	WELLINGTON
PCB55	WELLINGTON
PCB207	WELLINGTON
PBB154	Accustandrd
n-ヘキサン	ダイボシ類分析用	和光純薬
水酸化カリウム	特級	関東化学
エタノール	5000倍濃縮検定品: 残留農薬試験用・PCB試験用	関東化学
無水硫酸ナトリウム	残留農薬試験用・PCB試験用	関東化学
硫酸シリカゲルカラム	日本電子
DB-5MSUI 30m×0.25mm I.D. Df=0.25μm	Agilent

iii 分析機器

① ガスクロマトグラフ：Agilent 7890B、Agilent

②質量分析計 (MS)：JMS-Q1050GC、日本電子

③ オートインジェクター：Agilent 7693A、Agilent

iv 分析条件

① カラム : DB-5MSUI 30m×0.25mm I.D. Df=0.25μm Agilent

② カラム温度：130℃（1分）→40℃/分→160℃→4℃/分→265℃→40℃/分→320℃（2.62分）

③ 注入量： $ 2\mu L $

④ 注入口温度：280℃

⑤ 検出器温度：280℃

⑥ キャリアガス：高純度ヘリウムガス

⑦ 試薬ガス：メタン
v 濃度算出方法

① 相対感度の算出

RRFcs は、(1)式によって濃度ごとに求めたものを平均する。

$$ \mathrm{RRFcs}=\frac{\mathrm{Qcs}}{\mathrm{Qs}}\times\frac{\mathrm{As}}{\mathrm{Acs}}\cdots\cdots\cdots\cdots\cdots(1) $$

RRFcs：測定対象物質のクリーンアップスパイク内標準物質との相対感度

Qcs：標準液中のクリーンアップスパイク内標準物質の量(pg)

Qs：標準液中の測定対象物質の量(pg)

As：標準液中の測定対象物質のピーク面積

Acs：標準液中のクリーンアップスパイク内標準物質のピーク面積

同様に、クリーンアップスパイクの対応するシリンジスパイクに対する相対感度を(2)式によって算出する。

$$ RRFrs=\frac{Qrs}{Qcs}\times\frac{Acs}{Ars}\cdots\cdots\cdots\cdots\cdots\cdots(2) $$

RRFrs: クリーンアップスパイク内標準物質のシリンジスパイク内標準物質との

相对感度

Qrs：標準液中のシリンジスパイク内標準物質の量(pg)

Qcs：標準液中のクリーンアップスパイク内標準物質の量(pg)

Acs：標準液中のクリーンアップスパイク内標準物質のピーク面積

Ars：標準液中のシリンジスパイク内標準物質のピーク面積

② 定量値の算出

抽出液全量中の異性体の量は、それに対応するクリーンアップスパイク内標準物質の添加量を基準にして内標準法により求める。

$$ Qi=\frac{Ai}{Acsi}\times\frac{Qcsi}{RRFcs} $$

Qi：抽出液全量中の異性体の量(pg)

Ai：クロマトグラム上の異性体のピーク面積

Acsi：対応するクリーンアップスパイク内標準物質のピーク面積

Qcsi：対応するクリーンアップスパイク内標準物質の添加量(pg)

RRFcs：対応するクリーンアップスパイク内標準物質との相対感度
## 3 ）臍帶中 PCB 濃度

## a 对象者

本学の追加調査に同意を得た145名の妊娠出産時の臍帯中PCB濃度についてGCMS法を用い測定した。参加者の特性を表(1)-5および表(1)-6に示す。

表(1)-5 参加者特性 $ (\text{N}=135) $

平均	標準偏差	最大	最小
登錄時年齡（歲）	29.73	4.83	41	19
身長（cm）	157.82	9.15	172	145
体重（kg）	54.31	5.11	87	38
BMI	21.76	3.27	33.65	16.38

表(1)-6 参加者特性 $ (\text{N}=10) $

平均	標準偏差	最大	最小
登錄時年齡（歲）	29.00	4.52	37	22
身長（cm）	160.10	4.75	167	151
体重（kg）	55.25	8.48	70	45

## b ヒト臍帯中 PCBs 濃度の測定条件

総 PCBs 濃度の測定条件を以下に記す。臍帯試料 5g をけん化して有機溶媒に抽出し、フロリジルにて精製した後、ガスクロマトグラフ－質量分析計（GC-MS）を用いて SIM(Selected Ion Monitoring)法により分析を行った。

## i 試料

ヒト膚帯：冷凍状態で受領し、測定までの間、冷凍（-20℃）にて保存した。

## ii 分析条件

分析機器名 Waters/MICROMASS 社製 ガスクロマトグラフ－質量分析計

AutoSpec Ultima または NTS GC 部 Agilent Technologies HP-6890

GC 部 操作条件

$$ 分離力 ラム \quad HT8-PCB(SGE)fused silica capillary column\quad60m\times0.25mm(id) $$

$$ 力ラム温度 \quad120^{\circ}C——\longrightarrow180^{\circ}C\longrightarrow260^{\circ}C\longrightarrow\longrightarrow300^{\circ}C $$

$$ \left(0min\right)\left(20^{\circ}C/min\right)\left(0min\right)\left(2^{\circ}C/min\right)\quad\left(0min\right)\left(5^{\circ}C/min\right)\quad\left(4min\right) $$

オンカラム注入

表(1)-7 MS 部 操作条件

MS 部 操作条件

イオン化方法	EI
イオン化電圧	35V
イオン化電流	500μA
加速電圧	8kV
インターフェース温度	300℃
イオン源温度	300℃
分解能	10,000以上
設定質量数

M+	(M+2)+	(M+4)+	(M+6)+
MCBs	188.0393	190.0363
DiCBs	222.0003	223.9975
TrCBs	255.9613	257.9585
TeCBs	289.9224	291.9195
PeCBs	325.8805	327.8776
HxCBs	359.8415	361.8386
HpCBs	393.8025	395.7996
OCBs	427.7636	429.7606
NCBs	461.7246	463.7217
DeCB	497.6827	499.6798
13C12-MCB	200.0795	202.0766
13C12-DiCBs	234.0406	236.0376
13C12-TrCBs	268.0016	269.9987
13C12-TeCBs	301.9626	303.9597
13C12-PeCBs	337.9207	339.9178
13C12-HxCBS	371.8817	373.8788
13C12-HpCBS	405.8428	407.8398
13C12-OCBs	439.8038	441.8008
13C12-NCB	473.7648	475.7619
13C12-DeCB	509.7229	511.7199

## iii 同定及び定量

PCBs のイオン強度の強い $ M^{+} $ 、 $ (M+2)^{+} $ 、 $ (M+4)^{+} $ 、 $ (M+6)^{+} $ のイオンの内、塩化物ごとに測定対象物質と $ ^{13}C12 $ -内標準について各々 2 つをモニターし、PCB 全異性体（209 種）混合溶液から判断し、すべての PCBs 異性体の溶出する位置に相当するピークで、各 2 つのイオンの面積比率が標準品とほぼ同じで、同位体存在比から推定されるイオン強度比に対して ±15% 以内のものを PCBs として同定した。同定した PCBs を内標準物質の添加量を基準に相対感度を用いて、内標準法により S/N 3 以上のピークについてピーク面積で定量した。

定量した PCB 異性体濃度を塩素数ごとに足し合わせたものを同族体濃度（MCB s～DeCBs）とし、同族体濃度を足し合わせたものを PCBs の合計濃度（Total PCBs）とした。それぞれの計算過程では数字の丸めを行わず、報告結果において数値の丸めを行っている。そのため報告結果において、表示上の数値が一致しないことがある。同定、定量に用いた標準物質（Wellington Laboratories 製；関東化学株式会社調製品）を表(1)-8 に示す。
表(1)-8 同定、定量に用いた標準品

標準物質	内標準物質
IUPAC No.	IUPAC No.
#1	2-MCB	#3	13C12-4-MCB
#3	4-MCB
#10	2,6-DiCB	#9	13C12-2,5-DiCB(シリンジスパイク)
#4	2,2'-DiCB
#8**	2,4'-DiCB	#8**	13C12-2,4'-DiCB
#11	3,3'-DiCB
#12	3,4-DiCB
#15	4,4'-DiCB
#19	2,2',6-TrCB	#19	13C12-2,2',6-TrCB(シリンジスパイク)
#18	2,2',5-TrCB
#31	2,4',5-TrCB	#31	13C12-2,4',5-TrCB
#28**	2,4,4'-TrCB	#28**	13C12-2,4,4'-TrCB
#33	2',3,4-TrCB
#38	3,4,5-TrCB
#35	3,3',4-TrCB
#37	3,4,4'-TrCB
#54	2,2',6,6'-TeCB	#52**	13C12-2,2',5,5'-TeCB
#52**	2,2',5,5'-TeCB
#49	2,2',4,5'-TeCB
#44	2,2',3,5'-TeCB
#57	2,3,3',5-TeCB
#74	2,4,4',5-TeCB	#70	13C12-2,3',4',5-TeCB(シリンジスパイク)
#70	2,3',4',5-TeCB
#66	2,3',4,4'-TeCB	#79	13C12-3,3',4,5'-TeCB(サンプリングスパイク)*
#79	3,3',4,5'-TeCB
#78	3,3',4,5-TeCB	#81	13C12-3,4,4',5-TeCB★
#81	3,4,4',5-TeCB★	#77	13C12-3,3',4,4'-TeCB★
#77	3,3',4,4'-TeCB★
#104	2,2',4,6,6'-PeCB	#101**	13C12-2,2',4,5,5'-PeCB
#95	2,2',3,5',6-PeCB
#101**	2,2',4,5,5'-PeCB
#99	2,2',4,4',5-PeCB
#87	2,2',3,4,5'-PeCB
#110	2,3,3',4',6-PeCB	#111	13C12-2,3,3',5,5'-PeCB(シリンジスパイク)
#105	2,3,3',4,4'-PeCB★★	#105	13C12-2,3,3',4,4'-PeCB★★
#114	2,3,4,4',5-PeCB★★	#114	13C12-2,3,4,4',5-PeCB★★
#118**	2,3',4,4',5-PeCB★★	#118**	13C12-2,3',4,4',5-PeCB★★
#123	2',3,4,4',5-PeCB★★	#123	13C12-2',3,4,4',5-PeCB★★
#126	3,3',4,4',5-PeCB★	#126	13C12-3,3',4,4',5-PeCB★
#155	2,2',4,4',6,6'-HxCB	#153**	13C12-2,2',4,4',5,5'-HxCB
#149	2,2',3,4',5',6-HxCB	#138**	13C12-2,2',3,4,4',5'-HxCB(シリンジスパイク)
#153**	2,2',4,4',5,5'-HxCB	#156	13C12-2,3,3',4,4',5-HxCB★★
#138**	2,2',3,4,4',5'-HxCB	#157	13C12-2,3,3',4,4',5'-HxCB★★
#162	2,3,3',4',5,5'-HxCB	#167	13C12-2,3',4,4',5,5'-HxCB★★
#156	2,3,3',4,4',5-HxCB★★	#169	13C12-3,3',4,4',5,5'-HxCB★
#157	2,3,3',4,4',5'-HxCB★★	#178	13C12-2,2',3,3',5,5',6-HpCB(シリンジスパイク)
#167	2,3',4,4',5,5'-HxCB★★	#167	13C12-2,3,3',4,4',5'-HxCB★★
#169	3,3',4,4',5,5'-HxCB★	#169	13C12-3,3',4,4',5,5'-HxCB★
#188	2,2',3,4',5,6,6'-HpCB
# 187**	2,2',3,4',5,5',6-HpCB
# 174**	2,2',3,3',4,5,6'-HpCB
# 180**	2,2',3,4,4',5,5'-HpCB★★★	# 180**	$ ^{13} $ C $ _{12} $ -2,2',3,4,4',5,5'-HpCB★★★
# 170	2,2',3,3',4,4',5-HpCB★★★	# 170	$ ^{13} $ C $ _{12} $ -2,2',3,3',4,4',5-HpCB★★★
# 189	2,3,3',4,4',5,5'-HpCB★★	# 189	$ ^{13} $ C $ _{12} $ -2,3,3',4,4',5,5'-HpCB★★
# 202	2,2',3,3',5,5',6,6'-OCB
# 200	2,2',3,3',4,5,6,6'-OCB
# 203	2,2',3,4,4',5,5',6-OCB
# 195	2,2',3,3',4,4',5,6-OCB
# 194	2,2',3,3',4,4',5,5'-OCB	# 194	$ ^{13} $ C $ _{12} $ -2,2',3,3',4,4',5,5'-OCB
# 205	2,3,3',4,4',5,5',6-OCB	# 205	$ ^{13} $ C $ _{12} $ -2,3,3',4,4',5,5',6-OCB (シリンジスパイク)
# 208	2,2',3,3',4,5,5',6,6'-NCB
# 206	2,2',3,3',4,4',5,5',6-NCB	# 206	$ ^{13} $ C $ _{12} $ -2,2',3,3',4,4',5,5',6-NCB
# 209	2,2',3,3',4,4',5,5',6,6'-DeCB	# 209	$ ^{13} $ C $ _{12} $ -2,2',3,3',4,4',5,5',6,6'-DeCB

* $ {}^{13}C_{12}-3,3',4,5'-TeCB $ (#79)は、ガス・大気採取時のサンプリングスパイクとして使用するため、GC-MS用の標準溶液に含まれているが、今回の分析では、サンプリングスパイクは不要なので、 $ {}^{13}C_{12}-3,3',4,5'-TeCB $ (#79)を試料に添加していない。

## 4 ）母親の PCB 濃度に関与する遺伝子座位の探索

## a 对象者

エコチル参加者で追加調査に同意を得た母親のうち、妊娠中の血中 PCB 濃度が得られている 160 名を対象とした。GWAS 解析のフローと各段階でのデータ数を図(1)-1 に示し、順を追って説明を記載する。

## i 試料

DNA 抽出の生体試料として母親の唾液 2ml を使用した。唾液採取には DNA Genotek 社 Oragene·DNA (OG-500) を用いた。採取した唾液溶液から Qiagen 社 Gentra Puregene DNA Purification Kit を使用し、ゲノム DNA を抽出した。抽出したゲノム DNA 濃度の測定には、二本鎖 DNA を正確に定量できる Lifetechnnologies 社 Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit を用いた。GWAS 解析では DNA の質と量が大きく結果に影響するため、前者を電気泳動により、高分子量が保たれている事で、後者を二本鎖 DNA の測定で確認し、遺伝子タイピング対象とした。本研究では DNA 抽出の生体試料として母親の唾液を使用したが、血液などからの抽出と異なり、抽出した DNA の量と質における個体差は大きい。図(1)-1 のフローに示すように DNA 抽出後、上記の定量と質の評価をおこない、両面からの GWAS を目的とした遺伝子タイピング解析への利用可能性により、順位付けを行った。また、GWAS を目的とした遺伝子タイピング数はキットの構成上、8 の倍数で行うことが無駄を省く上で必要であるため、最終的にリストの上位から 128 検体の遺伝子タイピングを実施した。その結果、下位グループから、安定したタイピングデータが得られなかったもの 1 検体、調整因子の年齢、出産回数、BMI に関するデータが欠損していた 5 検体を除いた、合計 122 検体の遺伝子タイピングデータを用いて GWAS を実施した（図(1)-1）。GWAS 解析は、測定された妊娠中の血中 PCB 濃度を量的形質として重回帰分析をおこなった場合に引き続き、PCB 値の中央値で高値群と低置群に分け、両者を質的形質としてロジスティック回帰分析をおこなった。前者の解析フローを図(1)-1 に、後者を図(1)-2 に記載した。
図(1)-1 GWAS解析のフロー①

図(1)-2 GWAS解析のフロー②
## ii GWAS 解析

遺伝子タイピングには、全ゲノムを網羅する約240万個(2,391,739個)のSNVs (Single Nucleotide Variants)がタイピングできる Illumina 社の遺伝子タイピングアレイ HumanOmni2.5-8 v1.1 DNA Analysis Kit を用いた。このDNA チップは、主に欧米人のデータを考慮して作成してあるため、日本人では存在しないSNVsも多くスポットされている。通常、生データを以下の3つの指標で評価し、合格したデータを実際のGWAS解析に使用する。一つ目は、タイピングデータの安定性から95%以上の確率で明確なデータが得られるもの(Call rate≥0.95と記載)、二つ目はハーディー・ワインバーグ平衡から大きくかい離しないもの(HWE p≥0.001)、三つ目はマイナーアレル頻度が5%以上あること(MAF≥0.05)である。その結果、実際に解析対象となったSNVsは1,122,527個であった(図(1)-1)。タイピングデータはIllumina社のマイクロアレイスキャナーiScanシステムを使用した。解析は2種類の方法で実施した（解析1および解析2）。解析1は測定された妊娠中の血中PCB濃度を量的形質として、コンピュータプログラムPLINK ver.1.09を用いて関連解析を行った。関連解析には線形回帰モデルを使用し、共変量として年齢、出産回数、BMIを用いた。すなわち、年齢、出産回数、BMIの影響を調整した上で、PCB濃度に関与するSNVsの有無を検討したことになる。各調整因子の分布を図(1)-3に示す。解析2では、PCBデータの中央値で高値群と低値群の2群間に分け、両群を質的形質としてロジスティック回帰分析をおこなった。図(1)-4にPCB低濃度群を青いドットで、高濃度群を赤いドットで示した。両群の年齢、BMI値、出産回数の分布も示した。

図(1)-3 GWAS 解析対象サンプル（N=122）の

血中PCB濃度、年齢、BMI、出産回数の分布（解析1）
図(1)-4 GWAS 解析対象サンプル（N=122）の血中 PCB 濃度、年齢、BMI、出産回数の分布（解析 2：PCB 低濃度群（青）、PCB 高濃度群（赤））
## 4 ．結果及び考察

（１）エコチル調査における母親・胎児PCB曝露量測定と母親の質問票からの母親及び胎児のPOPs曝露量推定方法の開発に関する研究：

## 1 ）パックドカラム簡易法による母体血中総PCB濃度

パックドカラム簡易法によるエコチル調査に参加する妊娠1490名の妊娠前期の母体血中PCB濃度の結果を表(1)-9に示す。測定対象者のなかには、検出限界値となる0.10未満のものが見られたが、本報告では検出限界未満のもののデータについては、検出限界0.10をデータとして換算した。

表(1)-9 母体血中総PCB濃度 (N=1490)

平均值	標準偏差	最大	最小
PCB濃度(ng/g-wet)	0.28	0.16	1.5	0.1

表から明らかなとおり、本研究で測定した対象者1490名の母体血中のPCB濃度の平均は0.28 ± 0.16 ng/g-wetであった。また、対象者の中で最大値は1.5 ng/g-wet、最小値は検出限界未満の0.10 ng/g-wetであった。本研究結果のPCB濃度量は、母体血中PCB類濃度範囲が0.22-5.70 ng/g-wet（報告書内記載量；220～5700 pg/g-wetを換算）であったとする報告 $ ^{8)} $ と比べれば、多少低い範囲にあると解釈できる。しかしながら、これらの濃度範囲の差が何に起因するかについては現段階では分からないため、結果を記すに留める。また、本研究を通して、検出限界未満の結果を示す参加者は見られたものの、多くの測定対象者の生体試料からPCBが検出されたことは、これまでの先行研究と同様の結果といえよう $ ^{9)} $ 。

次に、対象者の年齢、BMIと出産回数とPCB濃度との関係について、それぞれ表(1)-10から表(1)-12に示す。年齢、BMIおよび出産回数について、参加者から得た質問票による回答から得た。

年齢とPCB濃度との関係については、20歳未満、25歳未満、30歳未満、35歳未満、40歳未満、45歳未満および45歳以上の7つに区分し検討し、その平均値および標準偏差を表(1)-10に示す。なお、本データでは出産年齢情報を欠落する5名を除外した（N=1485）。

20歳未満（N=13）および25歳未満（N=129）の対象者数は他の出産年齢群と比べ少ないものの、出産年齢の増加に伴いPCB濃度が微増とはいえ、濃度が高まる傾向が伺えた。この傾向は、我々の先行研究結果による加齢とともにPCB濃度の蓄積量も増加する傾向（結果）を示唆するといえよう（図(1)-5も参照されたい） $ ^{9} $ 。

表(1)-10 出産年齢区分によるPCB濃度（N=1485）

対象者数	PCB濃度 (ng/g-wet)	標準偏差
20歳未満	13	0.16	0.07
25歳未満	129	0.181767	0.111874
30歳未満	454	0.237445	0.113626
35歳未満	511	0.295245	0.152741
40歳未満	327	0.340795	0.182084
45歳未満	50	0.439	0.257874
45歳以上	1	0.37	NA
次に BMI と PCB 濃度との関係について、BMI25 未満、BMI25 超に大別した平均値および標準偏差を表(1)-11 に示す。なお、本データでは質問票への回答による BMI 情報を欠損する 72 名を除外した（N=1418）。

表(1)-11 BMIとPCB濃度 (N=1418)

对象者数	PCB濃度（ng/g-wet）	標準偏差
BMI >25	164	0.29	0.17
BMI <25	1254	0.28	0.16

BMIについては、肥満傾向の一般的な尺度となるBMI25を用い大別した。その結果、BMI＞25およびBMI＜25両群ともにPCB濃度が近似し、明らかな違い認められなかった。現段階において、BMIとPCBの関係については、明確な知見を得られなかったが、前記する加齢にともなうPCB蓄積量の漸増傾向による関与因子を探るためには、BMIだけではなく食生活に関連する何らかの指標を用い追究する必要があると考える。

さらに、出産回数とPCB濃度との関係について、初産および経産により区分した平均値および標準偏差を表(1)-12に示す。なお、本データでは質問票への回答による出産回数情報を欠損する36名を除外した（N=1454）。表から明らかなとおり、初産のPCB濃度が経産婦のPCB濃度と比べ多少高い傾向が認められた。

表(1)-12 出座回数とPCB濃度 (N=1454)

对象者数	PCB濃度（ng/g-wet）	標準偏差
初產	546	0.32	0.14
経産（2回以上）	908	0.26	0.18
図(1)-5に出産年齢と母体血中総PCB濃度の関係を図示する。本図から、本研究参加者のPCB濃度範囲と、出産年齢による濃度分布が明らかとなるが、先の結果に記したように出産年齢の増加に伴いPCB濃度が微増とはいえ、濃度が高まる傾向が見てとれる。なお、1 ng/g-wetより大きな値を記録した参加者のデータは、年齢とPCB濃度分布傾向を識別するため、本図から除外した。

図(1)-5 年齢と母体血中総PCB濃度の関係
図(1)-6 出産回数と母体血中総PCB濃度の関係

図(1)-6に出産回数と母体血中総PCB濃度の関係を図示する。本図から明らかなように、出産回数の増回に伴い母体血清中のPCBs濃度は低減傾向が認められた。また、母体血清中PCBs濃度は全体的に父親に比べ低い傾向が認められた。本結果より、出生・授乳等にともなう母体血清中PCBs濃度の低減が千葉ユニットセンターにおける参加者においても明らかとなった。
食習慣、年齢、出産回数から、母体血中のPCBs濃度の予測モデル構築を試みる。本研究では、エコチル調査で実施されているFood Frequency Questionnaire（FFQ:食事摂取頻度調査票）の結果を食習慣のパラメータとした。データ解析にはベイズ線形回帰モデルを用い、決定係数R2および、Widely-applicable information creationにより変数選択を行い、モデルの精度を最適化した。解析の結果を図(1)-7に示す。本図から、R2=0.2533で、PCBs濃度を予測できることが明らかになった。

図(1)-7 PCBs予測濃度と実測値の相関解析結果
図(1)-8 PCBs曝露量との関連要因解析結果

また、予測に関わるパラメータとして、年齢および魚・卵の消費量とPCBs濃度に正の、出産回数とPCBs濃度に負の相関が認められた（図(1)-8）。

諸外国においても魚介類の摂取はPCBsの主な曝露源として知られている $ ^{10-12} $ 。さらに、マーケットバスケット法を用いた先行研究において、日本人における食事由来のPCBs曝露経路は主に魚介類であり、続けて肉・卵類であることが報告されている $ ^{13} $ 。本研究では先行研究を、血中PCBs濃度とアンケート調査の関係解析から裏付ける結果が得られた。
## 2 ）簡易型母体血中総PCB濃度

簡易型 PCB 測定によるエコチル調査に参加する妊婦の妊娠前期の母体血中 PCB 濃度の結果を表(1)-13 に示す。

表(1)-13 母体血中総 PCB 濃度 (N=313)

平均值	標準偏差	最大	最小
PCB 濃度(ng/g-wet)	0.35	0.23	2.00	0.04

表から明らかなとおり、本研究で測定した対象者 313 名の母体血中の PCB 濃度の平均は 0.35 ng/g-wet であった。また、対象者の中で最大値は 2.00 ng/g-wet、最小値は 0.04 ng/g-wet であった。本研究結果の PCB 濃度量は、母体血中 PCB 類濃度範囲が 0.22-5.70 ng/g-wet（報告書内記載量；220～5700 pg/g-wet を換算）であったとする報告 $ ^{8)} $ と比べれば、多少低い範囲にあると解釈できる。しかしながら、これらの濃度範囲の差が何に起因するかについては現段階では分からないため、結果を記すに留める。また、本研究を通して、多くの測定対象者の生体試料から PCB が検出されたことは、これまでの先行研究と同様の結果といえよう $ ^{9)} $ 。

次に、対象者の年齢と出産回数とPCB濃度との関係について、それぞれ表(1)-14および表(1)-15に示す。年齢および出産回数について、参加者から得た質問票による回答から得た。

年齢と PCB 濃度との関係については、20 歳未満、25 歳未満、30 歳未満、35 歳未満、40 歳未満、45 歳未満、45 歳以上の 7 つに区分し検討し、その平均値および標準偏差を表(1)-14 に示す。

20 歳未満（N=1）および25歳未満（N=22）の対象者数は他の年齢群と比べ少ないものの、年齢の増加に伴いPCB濃度が微増とはいえ、濃度が高まる傾向が伺えた。この傾向は、我々の先行研究結果による加齢とともにPCB濃度の蓄積量も増加する傾向（結果）を示唆するといえよう（図(1)-9も参照されたい） $ ^{9} $ 。

表(1)-14 年齢区分による PCB 濃度 (N=313)

対象者数	PCB 濃度 (ng/g-wet)	標準偏差
20 歳未満	1	0.12	NA
25 歳未満	22	0.28	0.12
30 歳未満	68	0.32	0.17
35 歳未満	136	0.35	0.22
40 歳未満	75	0.41	0.29
45 歳未満	11	0.42	0.17
さらに、出産回数とPCB濃度との関係について、初産および経産により区分した平均値および標準偏差を表(1)-15に示す。なお、本データでは質問票への回答による出産回数情報を欠損する7名を除外した（N=306）。表から明らかなとおり、初産のPCB濃度が経産婦のPCB濃度と比べ有意に高い傾向が認められた。

表(1)-15 出座回数とPCB濃度(N=306)

对象者数	PCB 濃度 (ng/g-wet)	標準偏差
初產	186	0.42	0.17
経産 (2 回以上)	120	0.32	0.29

図(1)-9 年齢と母体血中総 PCB 濃度の関係

図(1)-9 に出産年齢と母体血中総 PCB 濃度の関係を図示する。本図から、本研究参加者の PCB 濃度範囲と、出産年齢による濃度分布が明らかとなるが、先の結果に記したように出産年齢の増加に伴い PCB 濃度が微増とはいえ、濃度が高まる傾向が見てとれる。
図(1)-10 母体血中 PCB の異性体組成

続けて、図(1)-10 に母体血中 PCB の異性体組成を図示する。本図から、血中における PCBs の異性体組成は CB153 が最も高い割合を占め、続けて CB138、180 などの異性体が高濃度であることが明らかとなった。このような傾向は既存の日本人を対象とした研究でも報告されており、本研究においてもこの傾向が保持されていることが明らかになった。

本節の最後に、新たに確立した PCBs 分析法について示す。本手法はパックドカラム簡易法と比較すると、同程度の簡易さであるにもかかわらず、より高感度かつPCB個別異性体の測定が可能であるという利点がある（図(1)-11）。本手法の定量性・精度は、より高精度な手法である高分解能ガスクロマトグラフ質量分析計（GC-HRMS）における測定値（図(1)-12）および、米国立標準技術研究所（NIST）の提供する認証血清試料（SRM1957）を用いたラボ内試験（表(1)-16）を用いて確認を行い、いずれにおいても良好な結果を示したことを付記する（投稿中）。
図(1)-11 血清サンプルにおける塩素イオン(m/z 35) のマスクロマトグラム

図(1)-12 高分解能 GC-MS（GC-HRMS）と本分析手法の測定値比較結果
表(1)-16 SRM1957 認証値との比較結果

GC-NICI-MS 定量值 (pg g^{-1} wet wt)	SRM1957 認証值 (pg g^{-1} wet wt)
CB74	7.2 ± 2.6	13.8 ± 0.1
CB99	< MDL	11.6 ± 0.6
CB118	14 ± 2.1	18.9 ± 1.2
CB138	37 ± 1.7	36.9 ± 9.0
CB153	51 ± 2.8	58.2 ± 0.9
CB156	7.6 ± 2.8	8.2 ± 0.6
CB170	15 ± 1.6	16.2 ± 2.0
CB180	45 ± 3.4	46
CB187	10 ± 1.4	15.5 ± 0.5
## 3 ）臍帶中総PCB濃度

本研究での臍帯中PCBの濃度測定は、同族体および異性体に関する精密分析も行っているが、本報告では総PCB濃度および主要異性体濃度結果についてのみ記載する。

本学の追加調査に同意を得た135名の妊娠出産時の臍帯中PCB濃度結果を表(1)-17および図(1)-13に示す。

表(1)-17 臍帶中総PCB濃度 (ng/g-wet: N=135)

平均值	標準偏差	最小	最大
CB74	0.0013	0.0008	0.0002	0.0060
CB99	0.0017	0.0010	0.0003	0.0063
CB118	0.0024	0.0013	0.0004	0.0074
CB138	0.0041	0.0025	0.0006	0.016
CB153	0.0075	0.0045	0.0010	0.029
CB163/164	0.0019	0.0012	0.0002	0.0077
CB170	0.0013	0.0009	0.0002	0.0056
CB180	0.0034	0.0021	0.0005	0.013
CB182/187	0.0021	0.0013	0.0003	0.0085
総PCBs	0.047	0.021	0.016	0.150

表から明らかなとおり、本研究で測定した対象者135名の臍帯中の総PCB濃度の平均は0.047±0.021 ng/g-wetであった。また、対象者の中で最大値は0.150 ng/g-wet、最小値は検出限界未満の0.016 pg/g-wetであった。臍帯中総PCB濃度測定対象者のなかには、同族体・異性体によって検出限界値未満を示したデータも見られたが、臍帯中の総PCB濃度は、全参加者から得られた。

主要異性体の濃度はCB153、138、180、118、182/187、163/164、99、170、74（平均：0.075 ± 0.0045、0.0041 ± 0.0025、0.0034 ± 0.0021、0.0024 ± 0.0013、0.0021 ± 0.0013、0.0019 ± 0.0012、0.0017 ± 0.0010、0.0013 ± 0.0009、0.0013 ± 0.0009 ng g⁻¹ wet wt.）の順だった。PCB153、138、180、118が高い割合を示す傾向は既存研究 $ ^{10)} $ における臍帯血中のPCBs組成と同様の傾向を示した。
図(1)-13 臍帯血中の総PCBs及び主要異性体の分布

参考までに、母体血（妊娠前期と出産時）および臍帯のPCB濃度の関係を表(1)-18に示す。本研究の執行により得られたデータ（妊娠前期・臍帯）と本研究経費以外で得たデータ（出産時）との組合せが揃う114名の結果をまとめたものである。

表(1)-18 母体血（妊娠前期と出産時）および臍帯のPCB濃度の相関（参考データ）

妊娠前期_母体血	出產時_母体血	出產時_臍帶
妊娠前期_母体血	1	0.8032	0.5421
P_value	<.0001	<.0001
參加者數	114	114	114
出產時_母体血	0.8032	1	0.5977
P_value	<.0001	<.0001
參加者數	114	114	114
出產時_臍帶	0.5421	0.5977	1
P_value	<.0001	<.0001
參加者數	114	114	114

これらのデータは、本県内の一つの協力病院で出産する方々から得られたデータを連結したのもので、対象とした病院の所在が同一エリアであるため、ここでは傾向を記すに留める。妊娠前期と出産時の母体血中の総PCB濃度および、出産時の母体血と臍帯の総PCB濃度との間に相関する傾向がみられた。
なお、最終年度に行った臍帯中 PCB の濃度測定結果を表(1)-19 に示す。

表(1)-19 臍帶中総 PCB 濃度 (N=10)

平均值	標準偏差	最大	最小
PCB 濃度(ng/g-wet)	0.043	0.022	0.140	0.016

前節において得られた臍帯 PCB 濃度範囲（ $ 0.047 \pm 0.021 \, ng/g-wet $ ）と比べても同程度の $ 0.043 \pm 0.022 \, ng/g-wet $ の範囲にあり、同族体・異性体によって検出限界値未満を示したデータも見られたが、臍帯中の総 PCB 濃度は、全参加者から得られた。
## 4 ）母親の PCB 濃度に関与する遺伝子座位の探索

本研究で母親の唾液試料から抽出したゲノム DNA 量は、平均で 85.3 μg であったが、その範囲は 1～390 μg と大きなばらつきが見られた。DNA 収量が低い（DNA 濃度が低い）、あるいはゲノム DNA の分解が進んでしまっているものが一部見られたが、それらを除き、GWAS 解析のために全ゲノム遺伝子タイピングを実施した 128 例については、call rate（正しく遺伝子タイピングができた割合）が平均で 0.998 と解析に十分なクオリティであった。

GWAS のデータ解析には PLINK ver.1.09 を使用し、上記 3 条件を満たす、1,122,527 の SNPs を解析対象とした。共変量として年齢、出産回数、BMI を用い、測定された妊娠中の血中 PCB 濃度を量的形質として回帰分析をおこない、各 SNP の P 值を計算した。表(1)-20 に解析 1 の結果、-log10(P) が 4 以上の 160 SNVs を p 值順に記載した。

表(1)-20 解析 1 における $ -\log_{10}(P) $ が 4 以上の 160 SNVs のリスト

SNP ID	Chromosome	position	Minor allele (tested)	Regression coefficient (Beta)	Coefficient t-statistic	P value	-log10(P)
kgp1927942	3	197779183	A	0.1006	5.003	2.01E-06	5.70
kgp7810243	16	17057339	A	0.1292	4.781	5.12E-06	5.29
rs7788668	7	22980638	A	0.1543	4.762	5.54E-06	5.26
rs10509615	10	92791516	A	0.2151	4.74	6.08E-06	5.22
rs11020261	11	93045561	G	0.1653	4.724	6.50E-06	5.19
kgp5401701	11	93056075	A	0.1653	4.724	6.50E-06	5.19
kgp2242062	11	93066879	G	0.1653	4.724	6.50E-06	5.19
rs11739264	5	174601205	A	0.1401	4.715	6.74E-06	5.17
kgp2044298	21	23962827	A	0.1658	4.709	6.91E-06	5.16
rs2286707	7	23028610	A	0.1511	4.698	7.23E-06	5.14
kgp10007776	7	22984967	G	0.1366	4.696	7.27E-06	5.14
kgp25813	7	22973853	G	0.1366	4.696	7.27E-06	5.14
rs17147527	7	23024795	G	0.1351	4.661	8.39E-06	5.08
kgp3941425	7	22985010	C	0.1351	4.661	8.39E-06	5.08
rs10508945	10	53250879	G	0.218	4.649	8.82E-06	5.05
rs10224604	7	22988381	G	0.1043	4.618	1.00E-05	5.00
kgp12198395	7	22925467	A	0.1358	4.603	1.06E-05	4.97
kgp8928005	13	70596638	G	0.1084	4.519	1.50E-05	4.82
kgp6059156	1	235188306	A	0.08953	4.508	1.57E-05	4.80
kgp1238123	3	112091526	G	0.1038	4.486	1.71E-05	4.77
rs7641311	3	112091696	A	0.1038	4.486	1.71E-05	4.77
rs1879512	3	112093900	A	0.1038	4.486	1.71E-05	4.77
rs12548341	8	110821596	G	0.1004	4.472	1.83E-05	4.74
kgp1357413	16	17035048	G	0.1366	4.467	1.85E-05	4.73
kgp16140207	18	47023639	A	0.1774	4.459	1.90E-05	4.72
kgp4746022	6	24819019	A	0.1437	4.458	1.91E-05	4.72
kgp10640563	1	170128903	A	0.1041	4.457	1.92E-05	4.72
rs471569	1	170103379	G	0.1041	4.457	1.92E-05	4.72
rs7775228	6	32658079	G	0.1005	4.443	2.03E-05	4.69
rs3129713	6	32657255	A	0.1005	4.443	2.03E-05	4.69
rs7215998	17	69074425	A	0.08874	4.42	2.22E-05	4.65
rs11696747	20	48128119	G	0.1236	4.419	2.23E-05	4.65
rs512778	6	79345146	G	0.09575	4.415	2.31E-05	4.64
kgp10706681	2	2677265	G	0.09629	4.41	2.31E-05	4.64
rs3829839	2	2678138	A	0.09629	4.41	2.31E-05	4.64
kgp555671	6	158969311	A	0.1144	4.388	2.52E-05	4.60
kgp1983250	6	79348656	A	0.09197	4.36	2.82E-05	4.55
rs6509966	19	56382152	A	0.1798	4.355	2.87E-05	4.54
kgp2021186	7	6734141	C	-0.1061	-4.354	2.88E-05	4.54
rs9639027	7	6746738	G	-0.1061	-4.354	2.88E-05	4.54
rs7798471	7	6744957	G	-0.1061	-4.354	2.88E-05	4.54
rs3801033	7	6734103	A	-0.1061	-4.354	2.88E-05	4.54
kgp10670730	2	230938135	A	0.1535	4.351	2.92E-05	4.53
kgp9301595	2	230941145	A	0.1535	4.351	2.92E-05	4.53
kgp7630532	22	48156449	G	-0.09906	-4.34	3.04E-05	4.52
kgp7064275	7	22931153	A	0.1459	4.34	3.05E-05	4.52
kgp453731	8	4240580	A	0.1305	4.325	3.22E-05	4.49
rs6964079	7	6706631	A	-0.1109	-4.322	3.27E-05	4.49
kgp6621837	13	58203524	C	-0.1157	-4.313	3.38E-05	4.47
rs2807640	13	58202109	A	-0.1157	-4.313	3.38E-05	4.47
rs1374482	13	58156310	A	-0.111	-4.312	3.40E-05	4.47
kgp5441005	7	6748594	G	-0.1052	-4.311	3.41E-05	4.47
kgp4596760	7	6746736	G	-0.1052	-4.311	3.41E-05	4.47
kgp1821563	7	6747267	A	-0.1052	-4.311	3.41E-05	4.47
rs1001026	7	22932736	A	0.1293	4.308	3.45E-05	4.46
rs7301283	12	116142039	A	0.1583	4.308	3.45E-05	4.46
rs17536636	10	92782367	C	0.187	4.305	3.49E-05	4.46
rs11072794	15	79006582	A	-0.08805	-4.299	3.57E-05	4.45
rs899997	15	79019578	C	-0.08809	-4.299	3.59E-05	4.44
rs11072793	15	79006442	G	-0.08725	-4.293	3.65E-05	4.44
kgp6754918	2	177301375	G	0.09149	4.287	3.74E-05	4.43
kgp11701396	13	58176546	G	-0.1104	-4.286	3.76E-05	4.42
kgp3699668	7	23098548	G	0.1474	4.284	3.78E-05	4.42
rs3807147	7	138440260	A	0.1789	4.28	3.84E-05	4.42
rs3793239	7	158917999	C	0.09947	4.28	3.84E-05	4.42
kgp8957881	11	117974541	A	0.097	4.276	3.90E-05	4.41
kgp375182	7	68715427	G	-0.08547	-4.274	3.93E-05	4.41
kgp2503162	3	71339279	G	0.155	4.271	3.98E-05	4.40
rs7811473	7	158947104	G	0.09431	4.264	4.09E-05	4.39
kgp4043717	8	24202760	G	-0.08607	-4.261	4.16E-05	4.38
kgp36684	1	235190411	C	0.08365	4.257	4.21E-05	4.38
kgp22808633	23	10131019	G	-0.1711	-4.241	4.47E-05	4.35
kgp22806426	23	10136702	A	-0.1711	-4.241	4.47E-05	4.35
kgp22735212	23	10143721	A	-0.1711	-4.241	4.47E-05	4.35
rs2239937	23	10125402	G	-0.1711	-4.241	4.47E-05	4.35
rs7535312	1	47288951	A	0.09344	4.239	4.51E-05	4.35
rs3766194	1	47285150	A	0.09344	4.239	4.51E-05	4.35
kgp11417113	1	165192480	G	-0.1118	-4.233	4.61E-05	4.34
rs9455952	6	168499925	G	0.1054	4.232	4.63E-05	4.33
rs7267020	20	48116682	A	0.1186	4.224	4.78E-05	4.32
rs6095547	20	48118822	A	0.1186	4.224	4.78E-05	4.32
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