Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
事業名	共催者	会場	都市	期間	內容
2	風独楽展	工芸美術館	ブダペスト	04.05.11～04.05.30	2004年3月にブダペスト事務所に移管された、ブダペスト事務所所蔵展示セットである「風独楽展」の展示。移管後初めての展示であり、ケルン日本文化会館、カイロ事務所からも展示作品を借り受け、規模の大きい展示を行なった。展示作品数は、風、独楽それぞれ約60点
【公演】	トラフォ劇場マジャールスズキ(協賛)	トラフォ劇場	ブダペスト	04.10.16～04.10.17	トラフォ劇場にて勅使河原三郎のダンス公演「Bone in Pages」を実施した
【講演・シンポジウム】	ブダペスト事務所	ブダペスト	04.07.28	甲斐睦朗(国立国語研究所所長)に「日本語から見える日本社会の変化」と題する講演を実施した。内容は、日本で話題になっている日本語の諸問題
【映画】	ハンガリー国立フィルムアーカイブ	ウルクモズゴー映画館	ブダペスト	04.07.08～04.07.14	「日本文学作品を原作とする映画」のテーマの下、欧州フィルムライブラリーより7作品を選び、一週間にわたり上映を行なった。上映作品は「夜明け前」『野麦峠』『それから』『野菊の墓』『次郎物語』『二十四の瞳』『螢川』の7作品である
2	日本映画祭(35ミリ)	グランドカフェ・セゲド映画館、ウラーニア映画館	グランドカフェ・セゲド・ウラーニア映画館	セゲドブダペスト	05.01.15～05.02.20	国際交流基金事業にて欧州巡回上映中の35mmフィルム映画9作品の上映を行なった
【日本語教育】	国際交流基金ブダペスト事務所	ブダペスト	04.10.01～05.03.31	秋の新学期開始にあわせ、日本語講座を開講・運営した。初級Ⅰ、初級Ⅱ、初級Ⅲの3レベルを設定し、人数が多い初級Ⅰのみ2クラス、他は1クラスの構成となった。各クラス週2回、前期(10月～2月)、後期(2月～6月)ともに授業回数は30回であり、最終週には習熟度をはかるための試験を実施した
【出版・広報】
事業名	共催者	会場	都市	期間	內容
1	ニューズレター発行	04.04.01～00.03.31	事務所広報誌『縁側』を発行

18. ブダペスト事務所	(2)助成・協力

合計額 658,033円

事業名	協力対象団体	期間	内容
【助成事業】
1	事務所助成金	ハンガリー相撲連盟、ペーチギャラリー、日本ハンガリー合唱交流委員会	04.04.01～05.03.31	ハンガリー相撲連盟の「欧州相撲選手権」開催への広報経費への支援(5月)、ジャパンフェスティバルにおける日本人演奏家のツインバロンコンサートの宿泊費、移動費への支援(8月)、ペーチギャラリーの日本作家展覧会「刻一刻」展への広報経費、会場設営経費への支援(9月～10月)
2	日本研究企画開発事業(日知小規模助成)	Fundacja Polsko-Japansoka YAMATO	05.03.17～05.03.17	ポーランドのプシェミシルにおいて、平成15年度基金「民主化・開放化支援特別フェロー」で訪日したMERKLEJN, Iwona Reginaが、「日本のメディア・システム」というタイトルで講演を行なった
【文化備品・視聴覚資料貸出】
1	事務所所蔵展示品外部貸し出し	近隣公館、外部団体	04.04.01～05.03.31	平成16年4月～5月、エステルゴムの学校にて「日本の世界遺産」展を開催。平成16年9月～平成17年1月は、「日本の世界遺産」「日本人の日常生活」展を、クロアチアに貸出し。平成17年2月～3月は、マコーのヨーゼフ・アティラ美術館において「日本の世界遺産」展を実施した
19. カイロ事務所	(1) 主催・共催事業

合計額 3,589,396円

事業名	共催者	会場	都市	期間	內容
【講演・シンポジウム】
1	日本文学サロン	カイロ大学文学部アハマド・ファトヒ助教授	カイロ事務所	カイロ	04.04.08～04.10.11	エジプト人の文学愛好家、翻訳者、学生が集まり、日本文学の作品鑑賞、作家・作品研究を試みる集い。アハマド・ファトヒ（カイロ大学文学部助教授・日本文学専門）との協力でカイロ事務所で実施。平成16年度は、沖縄文学をテーマに作家・目取真俊の作品を取り上げ、4月8日、9月27日、10月4日、10月11日の4回開催した
2	考古学講演会	日本エジプト学協会	カイロ事務所図書室	カイロ	05.01.26～05.01.26	民間グループ（日本エジプト学協会）との共催による、各国の考古学者を招いての公開講演会。聴衆は、エジプト人およびカイロ在住の日本人その他外国人
【映画】
1	映画専門家招聘（カイロ日本映画週間）	文化省芸術創造センター	カイロ	05.02.18～05.02.24	国際交流基金主催の「2005カイロ日本映画週間」（2005年2月20日～23日）に合わせて、パリ在住の日本人映画専門家（川喜多清政）をカイロに招き、4日間の上映期間中、毎晩、作品上映前に観客向けに同氏が日本映画全般と作家・作品についての解説を行なった
【日本語教育】
1	日本語教育レクチャー	カイロ事務所	カイロ	04.04.01～04.04.01	日本語教育専門の森下雅子（早稲田大学）を講師に招き、「日本語学習者の会話能力をいかに測るか」とのテーマで、在カイロの日本語教育関係者を対象にレクチャーを実施
2	教科書『エジプト人のための日本語音声』制作協力	カイロ大学文学部日本語日本文学科（ハナーン・ラフィーク講師）	04.04.01～04.09.30	カイロ大学日本語日本文学科講師ハナーン・ラフィーク執筆のアラビア語話者向け日本語音声教材『エジプト人のための日本語音声』の教科書本体編集およびCD音声録音・編集など、制作編集過程に協力した
3	日本語教師養成講座	カイロ事務所	カイロ	04.04.01～04.11.30	エジプトの日本語教師不足状況の改善を図るため、日本語教師志望者、関心を有する者を対象に、日本語教師養成講座を運営
事業名	共催者	会場	都市	期間	內容
4	「ことばと文化」講座	中東日本語教師連絡会	カイロ事務所	カイロ	04.04.01～05.03.31	中級・上級の日本語学習者を対象として日本語講座を開講。様々の話題でディスカッションを行なう上級コースをはじめ、中級コース、日本語能力試験1級・2級準備講座等。平成16年度は、8コースを開講し、計75人が受講
5	2004中東日本語教育セミナー	MoevenpickCairoPyramids	カイロ	04.08.28～04.08.29	中東各地の日本語教師が年1回カイロに集まり、教師研修のセミナーと、広域ネットワーク（中東日本語教師連絡会）の年次会合を開催する。2004年のセミナーは、中東10カ国41名の日本語教育関係者が参加。研修セミナーの講師には、伊勢田京子氏（東京海洋大学）を招いた
【図書館運営】	カイロ事務所	カイロ	04.04.01～05.03.31	カイロ事務所内図書室の一般向け閲覧サービス（年会員制）。平成16年度は、述べ4,038人の利用者があった
1	ライブラリー運営
【出版・広報】	04.04.01～05.03.31	従来のカイロ事務所の広報定期刊行物を刷新し、新しいアラビア語広報誌『WAVES』を創刊。若い世代向けに現代的な日本文化イメージを紹介するためのグラフィック・デザイナーを起用し、写真・グラフィックスを多用することとした。平成16年度は、創刊号および第2号を刊行
1	ニューズレター
【教室事業】	茶道同好会	カイロ事務所、在エジプト大使館広報文化センター	カイロ	04.04.01～05.03.31	毎週、日本人とエジプト人の愛好家による茶道の会を開催。会場は、カイロ事務所と大使館広報文化センターを季節で分けて使用。カイロ事務所では、10月～翌年4月の間、毎週火曜日に開催した。10月7日には「秋のお茶会」、2月24日には「春のお茶会」を催し、一般エジプト人向けの茶道紹介活動を行なった
1	茶道同好会
## 海外事務所

事業名	共催者	会場	都市	期間	內容
【その他】
1	日本文学エッセイコンテスト	在エジプト大使館広報文化センター、アレクサンドリア・センター・オブ・アーツ	Center of Arts, Alexandria	アレクサンドリア	05.02.07～05.03.31	エジプトの高校生による、吉本ばなの小説『TUGUMI』アラビア語訳の読書感想エッセイのコンテスト。カイロ市内の数十校の高校に『TUGUMI』アラビア語訳を寄贈、学校経由および個人参加により、高校生の感想エッセイを公募し、約50作品が集まった
2	アレクサンドリア日本文化週間	05.03.08～05.03.14	エジプト第2の都市アレクサンドリアにおいて、複数のイベントを集中的に実施する日本文化週間を開催。初日には生け花デモンストレーション（国際交流基金事業）を開催し、その後、期間中、日本映画上映（5夜）、生け花作品、日本人形、日本文化遺産写真パネル等の展示会等を実施した
【本部事業受入】
1	イラクへの児童書寄贈（在外事業費分）	エジプト文化省芸術創造センター	芸術創造センター（Artistic Creativity Center）	カイロ	04.04.01～05.03.31	イラクへの児童図書寄贈事業（国際交流基金事業）のため、カイロ事務所がエジプトでアラビア語児童図書を選び、発注、購入（7タイトル×1,500セット）
2	日本映画週間（カイロ）（在外事業費分）	05.02.20～05.02.23	最近の日本映画作品を35ミリ版にアラビア語字幕を付して紹介。山田洋次監督『たそがれ清兵衛』、『隠し剣鬼の爪』、天願大介監督『AIKI』、崔洋一監督『刑務所の中』の4作品を、2回ずつ上映した。4日間全8回の上映
# 文化交流施設等協力事業に必要な経費 文化交流施設等協力事業費

1. 文化交流施設等協力事業費

(1) 人物交流特定寄附

(2) 日本研究特定寄附

(3) 日本語特定寄附

(4) 催し等特定寄附

(5) 文化交流施設等特定寄附
### 1. 文化交流施設等協力事業費

日本の企業や個人が国際文化交流事業に対する支援を計画している場合に、国際交流基金がその支援資金を寄附金として受入れ、その寄附金を原資として対象となる団体に助成金を交付し、事業実施に協力する。

合計額 907,397,724円

事業名	寄附申込者	機関	国	期間	事業内容
(1)人物交流特定寄附
1	ACCの日米芸術文化交流プログラム基金	ブランシェット・ロックフェラー奨学基金-40募金委員会	アジアン・カルチュラル・カウンシル	米国	04.06.15～06.03.31	アジアン・カルチュラル・カウンシルの設立40周年を記念し、日米の文化交流促進を主眼として米国で調査、研究、視察及び劇作活動を行う日本のアーティストに助成金を提供する「ブランシェット・ロックフェラー（BHR）奨学基金」の積増しを実施
2	ロータリー国際親善奨学支援事業	日本ロータリー奨学金委員会	ロータリー財団	全世界区分困難	04.07.01～08.06.30	①日本研究機関で学ぶ外国人を援助する国際親善奨学金事業、②日本で日本語および平和を学ぶ外国人を援助する世界平和奨学金事業、③日本の語学学校で学ぶ外国人を援助するジャパン国際親善奨学金事業を運営、実施
(2)日本研究特定寄附
3	ダートマス大学における日本学基金	在日ダートマス大学卒業生同窓会	ダートマス大学	米国	04.01.01～04.12.31	ダートマス大学において、学士課程における日本語教育支援および経営学大学院（Tuck School of Business）における日本関連講座支援を実施
4	コロンビア・ロー・スクール日本法研究センター-25周年記念事業	長島・大野・常松法律事務所	コロンビア・ロー・スクール日本法研究センター	米国	04.09.01～06.06.30	コロンビアロー・スクール日本法研究センターの25周年を記念し、特別講義シリーズ、会議・ワークショップ、研究・出版促進、日本法のカリキュラム整備、日本の公共機関での夏季インターンシッププログラム、在学生と日本人学生との交流振興を実施
5	長島・大野・常松法律事務所奨学金（コロンビア・ロー・スクール）	長島・大野・常松法律事務所	コロンビア・ロー・スクール	米国	05.07.01～06.06.30	コロンビア・ロー・スクールにおいて、日本法を研究する学生に対する奨学金支給を実施
6	長島・大野・常松法律事務所：日本法・文化プログラム（シカゴ大学ロースクール）	長島・大野・常松法律事務所	シカゴ大学ロースクール	米国	05.07.01～06.06.30	シカゴ大学ロースクールにおいて、日本法専攻学生への奨学金支給、日本企業でのインターンシップ支援、日本研究活動支援、日本研修旅費支援を実施
事業名	寄附申込者	機関	国	期間	事業內容
(3)日本語特定寄附
7	特定非営利活動法人工エスエイチアジア奨学金	特定非営利活動法人工エスエイチアジア奨学会	特定非営利活動法人工エスエイチアジア奨学会	アジア地域区分困難	02.04.01～05.03.31	新大久保駅で転落者を救おうとして亡くなった韓国人留学生李秀賢の勇気を讃え、国内の日本語学校に通うアジアからの就学生を支援するための奨学金支給を実施
8	ジャパン・リターン・プログラム	ジャパン・リターン・プログラム募金委員会	特定非営利活動法人ジャパン・リターン・プログラム	全世界区分困難	03.04.01～05.09.30	世界で日本語を学ぶ優秀者を招へいする「日本語サミット」プログラム、二言語母語話者の人材育成のためビジネス日本語研修等を行う「ダブル・ネイティブ・エンパワーメント・プログラム」の実施
9	ドイツ社団法人日本語普及センターの事業資金	日本語普及センター国内募金委員会	ドイツ社団法人日本語普及センター	ドイツ	04.07.01～05.06.30	ドイツ社団法人日本語普及センターにおいて、日本語講座及び文化講座等の開講、日本人演奏家によるコンサートおよび書道や日本郷土玩具の展示会等の日本文化紹介事業を実施
(4)催し等特定寄附
10	四天王寺ワッソ	四天王寺ワッソ実行委員会	四天王寺ワッソ実行委員会	韓国、モンゴル	03.12.14～05.03.31	大阪四天王寺境内で古代衣装を身に纏い当時の東アジア交流を再現する催し「四天王寺ワッソ」(2004.11.7)を中心とし、四天王寺ワッソに関する歴史シンポジウム等の文化交流事業、韓国、モンゴル、日本の青少年のスポーツ交流事業等、韓国を中心とした東アジアと日本との文化交流促進のための事業を実施
11	日米交流150年委員会	日米交流150年委員会	日米交流150年委員会	米国	03.04.01～05.04.30	日米の公式な交流開始150周年を記念し、記念式典及び国際シンポジウム「日米関係の軌跡と展望」(2004.4.3)、公式ウェブサイトの構築及び運営、ロゴマーク使用による関連事業の促進、講演会「宮本亜門 プロードウェイミュージカル『太平洋序曲』を語る」(2005.3.2)を実施
12	ミュージック・フロム・ジャパン創立30周年記念音楽祭	ミュージック・フロム・ジャパン・インク	ミュージック・フロム・ジャパン・インク	米国	04.09.05～04.10.30	毎年1つのテーマに沿って日本の音楽を米国に紹介する音楽祭の創立30周年事業。古典雅楽、怜楽、委嘱新作世界初演奏曲を、雅楽演奏団体である怜楽舎が、ニューヨーク、ワシントンD.C.カリフォルニア州バークレーにて演奏、披露
13	第11回ホノルル フェスティバル	ホノルルフェスティバル財団	ホノルルフェスティバル財団	米国	05.03.11～05.03.13	日本とハワイの交流促進のため、ホノルル市内各所にて、日本の伝統的な祭り、美術工芸、舞踏、音楽、大衆芸能等のパフォーマンスやパレード、文化交流セミナー等の教育プログラムを実施
## 文化交流施設等協力事業費

事業名	寄附申込者	機関	国	期間	事業內容
14	「オイディプス王」アテネカルチュラル・オリンピアード公演	2004年アテネ芸術オリンピックに「オイディプス王」公演参加を実行する会	2004年アテネ芸術オリンピックに「オイディプス王」公演参加を実行する会	キリシャ	04.07.01～04.07.03	アテネで開催された芸術オリンピック(Cultural Olympiad)において、蜷川幸雄氏演出によるギリシャ悲劇「オイディプス王」を上演
15	「ロシアにおける日本文化フェスティバル2003」「サンクトペテルブルク建都300周年」記念白翔會ロシア能公演	白翔會ロシア薪能実行委員会	白翔會ロシア薪能実行委員会	ロシア	04.03.23～04.03.28	ロシアにおける日本文化フェスティバル2003の一環として、モスクワおよびサンクトペテルブルクにて、能「隅田川」、「葵上」、「船弁慶」、「土蜘蛛」を上演
16	国際児童図書評議会(IBBY)第29回南アフリカ大会	株式会社山田養蜂場	国際児童図書評議会(IBBY)第29回世界大会実行委員会	南アフリカ	04.09.05～04.09.09	子供の本を通した国際理解推進活動を行なう国際児童図書評議会(IBBY)の世界大会。子供の本をテーマとした講演会・シンポジウム、「アフリカの絵本100冊」と題した巡回展示会、アフリカの小学校に図書室を設置して約300冊の児童図書を贈呈する記念プロジェクトを実施
17	ワールド・パートナーシップ・フォーラムin群馬	ワールド・パートナーシップ・フォーラム	ワールド・パートナーシップ・フォーラム	全世界区分困難	04.04.01～05.03.31	駐日大使館関係者と日本の経済界のリーダー等との交流を軸に、官界および学界からの参加も得て、世界的な諸問題や政策について理解を深めるためのフォーラム。今年度は9カ国の大使、公使が参加し、「国際観光立国」をテーマとして群馬県草津町にて実施
18	アジア太平洋こども演劇祭	アジア太平洋こども演劇祭実行委員会	アジア太平洋こども演劇祭実行委員会	全世界区分困難	04.06.25～05.06.27	アジアと環太平洋諸国の子ども達が、舞台芸術を通じて交流する演劇祭。16カ国19団体が参加し、演劇公演のほか、世界的に活躍する演劇講師を招いての国際セミナー・シンポジウム、舞台芸術や日本文化を学ぶワークショップを実施
19	2005年スペシャルオリンピックス冬季世界大会	2005年スペシャルオリンピックス冬季世界大会実行委員会	2005年スペシャルオリンピックス冬季世界大会実行委員会	全世界区分困難	05.02.26～05.03.05	世界84の国と地域から2,575人の知的発達障害を持つスポーツアスリートの参加により、長野県内の7カ所にてスキー、スケート等の冬季競技世界大会を開催
(5)文化交流施設等特定寄附
20	エスワイユー・ロースクール	NYUロースクール同窓会	ニューヨーク大学ロースクール	米国	01.09.28～04.12.31	ニューヨーク大学ロースクールが目標とし、推進している「Global Law School Program」の拡大を図り、研究の充実に資するための新ビルディングの建設
あ「愛・地球博」途上国支援事業……70
アジア市民交流（助成）……42
アジア青年文化奨学金……145
アジア青年文化奨学金（中等教育プログラム）……38
アジア地域研究センター支援（催し等）……234
アジア知的交流会議開催……233
アジア知的交流会議（企画参画助成）……233
アジア知的交流会議（公募助成）……224
アジア文化協力……13
アジア文化協力（助成）……14
アジア・リーダーフェローシップ（招へい）……223
アジア理解ワークショップ等……50
安倍フェローシップ……266
い李秀賢氏記念韓国青少年招へい（関）……184
インターネット・ホームページ……287
う内田奨学金フェローシップ……72
え映画・テレビ番組制作協力……122
映像出版情報交流（文化資料）……129
映像出版情報交流（催し）……115
お大阪府クイーンズランド州日本語教師研修……185
大阪府JET青年日本語研修……185
オーストラリア・ニュージーランド初中等日本語教師訪日研修……168
沖縄国際フォーラム……234
小渕フェローシップ……196
か海外公演……73
海外公演（助成）……79
海外展(企画)……54
海外展(巡回)……55
海外展（助成）……64
海外日本映画祭……103
海外日本映画祭（助成）……109
海外日本語教育支援NGO(助成)……136
海外日本語教育ネットワーク形成（助成）……155
海外日本語教師上級研修……162
海外日本語教師短期研修……164
海外日本語教師長期研修……163
海外日本語講座（助成）現地講師謝金……146
海外日本語講座（助成）専任講師給与……146
海外日本語弁論大会（助成）……149
海外フィルムライブラリー（FL)充実……121
外交官日本語研修（関）……177
開高健記念アジア作家招へい……38
カイロ事務所……406
き企画開発セミナー……285
機関誌……286
京都支部……295
くクアラルンプール日本文化センター……347
グループ招へい（指導者・専門家）……20

グループ招へい(指導者・専門家) ……72
グループ招へい（中学高校教員） ……35
け ケルン日本文化会館……303
研究者・大学院生日本語研修（関）……180
こ 高校生日本語学習奨励研修（関）……184
公務員日本語研修（関）……179
国際会議出席（助成）[ア]……223
国際会議出席（助成）[欧]……251
国際会議出席（助成）[米]……202
国際会議場貸出……131
国際交流基金賞・国際交流奨励賞……287
国際交流基金フォーラム貸出……132
国際展……70
国際展参加……53
国際舞台芸術共同制作……95
国内映画祭……112
国内映画祭（AC）……114
国内映画祭（助成）……112
国内公演（AC）……98
国内公演（助成）……97
国内展……63
国内展（AC）……64
国内展（助成）……68
さ 在外日本文化専門家（助成）……31
在外日本文化専門家（助成）……96
在外邦人日本語教師研修……166
埼玉県JET青年日本語研修……168
在米談問委員会……191
サンパウロ日本文化センター……370
し GP研究協力事業……273
GP研究協力（助成）……270
JET青年日本語研修……185
JOI（Japan Outreach Initiative）プログラム……275
事業評価（企）……290
事業報告……286
司書日本語研修（関）……179
次世代リーダーフェローシップ（派遣）[ア]……222
シドニー日本文化センター……356
市民青少年交流……39
市民青少年指導者招へい……37
ジャカルタ日本文化センター……327
出版翻訳協力……124
招へいフェローシップ
（アーティスト・イン・レジデンス）……22
招へいフェローシップ（学者・研究者）[ア]……215
招へいフェローシップ（学者・研究者）[欧]……242
招へいフェローシップ（学者・研究者）[米]……196
招へいフェローシップ（短期）[ア]……220
招へいフェローシップ(短期)〔欧〕……247
招へいフェローシップ(短期)〔米〕……200
招へいフェローシップ(特定地域専門家)〔ア〕……220
招へいフェローシップ(文化芸術)……21
招へいフェローシップ(論文執筆)〔欧〕……246
招へいフェローシップ(論文執筆者)〔ア〕……218
招へいフェローシップ(論文執筆)〔米〕……198

す スポーツ専門家交流（助成）……32
スポーツ専門家短期派遣……31

せ 制作教材海外普及……169
青年日本語教師派遣（一般）……142
青年日本語教師派遣（NIS）……143
セミナー・シンポジウム開催（助成）（日欧）……253
セミナー・シンポジウム開催（日欧）……253

そ 造形美術情報交流(招へい)……53
造形美術情報交流(催し)……70
ソウル日本文化センター……316

た 大韓民国高等学校日本語教師研修……167
タイ中等教育日本語教師研修……167

ち 地域活動促進（小規模助成）……281
地域交流賞……288
中国社会科学院研究生院……214
中国日本語教師研修……167
中東次世代招へいフェローシップ……251
中東次世代派遣フェローシップ……251
中東市民青少年交流（助成）……47
中東知的交流セミナー（人物交流・招へい）……250
中東知的交流セミナー（人物交流・派遣）……250
中東知的交流セミナー（催し・主催）……259
中東知的交流セミナー（催し・助成）……260
中東文化芸術紹介（舞台芸術）……99
中東文化芸術紹介（映像出版）……115
中東文化財保存……15
中東理解ワークショップ等……48
調査研究……288
調査研究（企）……290

て テレビ番組放映……116
と 東南アジア元日本留学生活動支援……209
図書館運営……287
図書館運営（関）……176
図書館運営（日）……174
図書寄贈〔ア〕……234
図書寄贈〔欧〕……261
図書寄贈〔企〕……189
図書寄贈〔米〕……202
図書展参加……128
トロント日本文化センター……365

に 日欧市民交流（助成）……39
日米「教育を通じた相手国理解促進」……283
日米「教育を通じた相手国理解促進」（助成）……280
日米草の根交流推進事業……283

日米市民交流（助成）……276
日米センターNPOフェローシップ……275
日米知的交流事業……269
日米知的交流（助成）……267
新渡戸フェローシップ……195
日本研究基本書目……188
日本研究客員教授派遣（経費助成）（欧）……239
日本研究客員教授派遣（経費助成）（米）……192
日本研究客員教授派遣（直接派遣）（ア）……205
日本研究客員教授派遣（直接派遣）（欧）……238
日本研究客員教授派遣（直接派遣）（米）……192
日本研究拠点機関（助成）（ア）……206
日本研究拠点機関（助成）（欧）……239
日本研究拠点機関（助成）（米）……192
日本研究シニア客員教授派遣（直接派遣）（欧）……238
日本研究シニア客員教授派遣（直接派遣）（ア）……206
日本研究スタッフ拡充（助成）（ア）……207
日本研究スタッフ拡充（助成）（欧）……240
日本研究スタッフ拡充（助成）（米）……193
日本研究組織強化支援（助成）……241
日本研究調査（ア）……205
日本研究調査（企）……187
日本研究調査（米）……191
日本研究ネットワーク推進……187
日本研究フェローフォローアップ……187
日本研究リサーチ・会議等（助成）（ア）……207
日本研究リサーチ・会議等（助成）（欧）……240
日本研究リサーチ・会議等（助成）（米）……193
日本語教育開発機関（助成）……145
日本語教育企画開発型事業……137
日本語教育機関等調査……135
日本語教育国際シンポジウム……136
日本語教育指導者養成プログラム……161
日本語教育巡回セミナー……144
日本語教育専門家長期派遣（一般）……137
日本語教育専門家長期派遣（予備教育）……141
日本語教育フェローシップ……170
日本語教材寄贈……173
日本語教材自主制作……169
日本語教材制作助成……171
日本語成績優秀者研修（関）……182
日本語能力試験実施費……158
日本古美術保存専門家招へい……12
日本古美術保存専門家派遣……13
日本語履修大学生訪日研修（関）……182
日本文学作品翻訳出版……124
日本文化紹介（助成）……24
日本文化紹介派遣……23
日本文化紹介派遣……74
日本文化紹介派遣（助成）……86
ニューデリー事務所……382
ニューヨーク事務所……387

は派遣フェローシップ（学者・研究者）〔欧〕……242
派遣フェローシップ（学者・研究者）〔米〕……195
派遣フェローシップ（芸術家）……22
パリ日本文化会館……309
パンコク日本文化センター……340

ひ評価開発経費……159

ふ舞台芸術紹介日欧共同事業……101
舞台芸術紹介日米共同事業……85
舞台芸術情報交流……100
ブダペスト事務所……403
文化遺産保存専門家派遣……12
文化協力派遣……12
文化交流企画運営補助ボランティア……39
文化交流施設等協力事業費……410
文化事情調査……292
文化人短期招へい……18
文化人短期招へい〔欧〕……247
文化人短期招へい（国際会議）〔ア〕……221
文化人短期招へい（国際会議）〔欧〕……248
文化人短期招へい（国際会議）〔米〕……201

へ米国・カナダ・英国初中等日本語教師訪日研修……166
北京日本学研究センター（研究協力）……214
北京日本学研究センター招へい（北外）……213
北京日本学研究センター招へい（北大）……213
北京日本学研究センター派遣（北外）……209
北京日本学研究センター派遣（北大）……212
北京日本文化センター……324

ほ本部フィルムライブラリー（FL）充実……119
マニラ事務所……379

めメキシコ事務所……397

ろローマ日本文化会館……298
ロサンゼル事務所……392
ロンドン事務所……399

わワーキング・グループ関係費……293
課題名 5C-1101 解体現場のアスベストリスクに対応する特異的バイオプローブの創成と迅速検出入の応用

課題代表者名 黒田 章夫 （広島大学大学院先端物質科学研究科分子生命機能科学専攻教授）

研究实施期间 平成23～25年度

累計予算額 97,729 千円（うち 25 年度 32,089 千円）

予算額は、間接経費を含む。

本研究のキーワード、解体現場、環境リスク、バイオテクノロジー、迅速検査ワード

## 研究体制

(1) 解体現場のアスベストリスクに対応する特異的バイオプローブの創成と迅速検出への応用（広島大学）

## 研究概要

### 1. はじめに(研究背景等)

日本にはアスベストを含む建材が約4000万トンあるとされ、今後これらが使われた古い建物の解体のピークを迎える。その際、アスベストの飛散を現場で調べなければ、再び大きなアスベスト問題を引き起こす可能性があるとされている。現状の大気アスベスト検出の方法としては、大気を濾過したフィルターを透明化し、位相差顕微鏡により観察する方法が用いられている。しかし、この方法はアスベスト、非アスベスト繊維の判定は不可能なため、大気中の総繊維濃度が1本/L以上の場合、電子顕微鏡による判定を行うことが公定法となっている。しかしながら、電子顕微鏡で観察する場合には前処理等が煩雑である他、繊維一本ずつをエネルギー分散型X線解析装置で分析していくのは、非常に時間と根気のいる作業であり、解体現場でのアスベストリスクには対応できない。もはや日本のアスベスト発生源は、工場から、解体現場などの短期的に移動する現場に変わっており、その状況に対応して新たな検出法が必要となっている。すなわち、時間をかけて検査する定点観測では不十分であり、現場でのアスベスト迅速検出法の確立が急がれている。

### 2. 研究開発目的

研究代表者は細胞内タンパク質ライブラリーの中からアスベストに特異的に結合するタンパク質をスクリーニングし、このタンパク質を蛍光物質で修飾することにより、バイオプローブを作成した。この蛍光プローブを用い、フィルター上のアスベストを蛍光顕微鏡でとらえる方法（バイオ蛍光法）を開発した。染色の操作は簡単で、フィルターに数滴のバイオプローブを垂らすだけで前処理が完結する。このフィルターを蛍光顕微鏡で観察すると、アスベスト繊維が光って見えるため、約30ナノメートル幅の非常に微細なアスベスト繊維が、低倍率でも明瞭に観察できた。アスベストは蛇紋石系のアスベストであるクリソタイルと、他5種類が含まれる角閃石アスベストが存在する。アスベスト結合タンパク質のうち、DksAタンパク質はクリソタイルに特異的で、GatZタンパク質あるいはHNSタンパク質は角閃石系のアスベストに広く結合した。バイオ蛍光法は、位相差顕微鏡レベルの操作性である程度の確度でアスベストと判定できるので、現場での「迅速簡易検出法」として有望視されている（2010年6月改訂の環境省のアスベストモニタリングマニュアル第4版で紹介）。これらのアスベスト結合タンパク質を利用すれば、全種類のアスベストに対応できるが、残念ながらHNSとGatZがアスベスト以外のケイ酸アルミ繊維、ケイ酸カルシウム（ワラストナイト）、酸化チタンウイスカーとの交差が見られるという課題が残されていた。もしこの点が克服できれば、現場でアスベストと確定できる「迅速検出法」が確立できると考えられた。そこで、HNSとGatZのアスベストの結合に関与する領域を特定し、その他の無機繊維と結合する領域を取り除くことによって、アスベストに対する特異性が向上したバイオプローブを作成することを目的とした。また、実際のサンプルに対して、光・電子相関顕微鏡による蛍光繊維の分析を行うことによって、バイオプローブの特異性を検証することとした。

### 3. 研究開発の方法

アスベスト特異的バイオプローブの作成には次の方法を用いた。領域を分けた限定HNSタンパク質を発現させ
るために、プライマーを設計しPCRにて遺伝子の増幅を行った。精製した限定HNSタンパク質は、Cy3-Maleimide Reactive Dye（GE Healthcare社）を用いて蛍光標識を行った。ビオチン化HNSタンパク質及びビオチン化ペプチドについては、予めCy3蛍光体で修飾されたStreptavidin-Cy3、あるいはCF488Aで修飾されたStreptavidin-CF488A（Biotium社）と混合することによって蛍光標識を行った。

アスベストへの結合評価は、フィルターアッセイ法、チューブアッセイ法、遠心法、蛍光顕微鏡法によるアスベスト観察を用いて行った。フィルターアッセイ法では、メンブレンフィルター（MCE:ニトロセルロース）に塗布した標準繊維に対して、蛍光で修飾したHNSタンパク質を添加して反応させた後、蛍光顕微鏡を用いて観察を行ない蛍光の有無によりタンパク質が結合しているかどうか評価した。具体的には、アスベスト及びJFM標準繊維を塗布したメンブレンフィルターを吸収紙の上にのせ、洗浄液[0.3Mリン酸緩衝液(pH8.0)、0.3M NaCl、0.5% Triton X-100、1% デオキシコール酸ナトリウム]を1滴滴下し、完全に吸収させた。次にHNSタンパク質（10nM

蛍光顕微鏡と電子顕微鏡で同一の繊維を観察する際には、光・電子相関顕微鏡を用いて行った。標準試料を捕集したメンブレンフィルター、また実際の解体現場で採取したサンプルを吸収紙の上に載せ、アスベスト蛍光試薬を用いて処理を行った。基本的にはフィルターアッセイ法に従って行ったが、最後に超純水4滴滴下し、余分な成分を完全に取り除いた。このように処理を行ったメンブレンフィルターを、カーボンテープを貼付けた試料台に固定し、ステージホルダーに装着した。ステージホルダーを蛍光顕微鏡（Axio Imager、カールツアイス社製）にセットし、ステージホルダー上のマーカー3点を登録ステージ・キャリブレーションを行った。約50～100視野を蛍光観察して、繊維状の物質が検出された視野についてCCDカメラで撮影を行ない画像および位置情報の取得を行った。USBメモリを使って蛍光顕微鏡で取得した画像及び位置情報を電子顕微鏡システムに入力した。次に、ステージホルダーを電子顕微鏡（SIGMA VP、カールツアイス社製）の試料室に移し、観察位置を蛍光顕微鏡と同期させるために、ステージホルダー上のマーカー3点を再度登録ステージ・キャリブレーションを行った。蛍光顕微鏡で観察された繊維状物質が何であるか調べるために、記録した位置情報を入力して、電子顕微鏡の観察視野を移動させた。繊維が確認されたらエネルギー分散型X線分光器（QUANTAX 200、ブルカー社製）にて元素分析を行った。

位相差蛍光顕微鏡法によるアスベスト検査では、大気を捕集したメンブランフィルターの捕集面を上に向け、切断したフィルターに洗浄液を1滴滴下し、完全に吸収させた。続いて蛍光タンパク質を含む結合緩衝液を2滴、位置を変えながら滴下し、完全に吸収させた。再び洗浄液を1滴滴下し、続いて調整液を4滴滴下した。捕集面を上にしてスライドガラスに乗せて乾燥させた（80℃のホットプレート上に15分間静置）。捕集面を上にしてアセトン蒸気をあてフィルターを透明化した。カバーガラスに封入液を1滴滴下し、空気が入らないように注意しながら、カバーガラスをフィルター片に被せてサンプルとした。サンプルを位相差蛍光顕微鏡にセットして観察した。

### 4. 結果及び考察

## (1) アスベスト特異的バイオプローブの創成

HNSタンパク質は137アミノ酸からなるタンパク質で、アスベスト以外に、ワラストナイト（ケイ酸カルシウム繊維）、ケイ酸アルミ繊維、酸化チタンウイスカー、炭化ケイ素繊維などの無機繊維と結合する。そこで、HNSのアスベストの結合に関与する領域を特定し、その他の無機繊維と結合する領域を取り除くことによって、アスベストへの結合特異性を向上させることとした。

HNSの立体構造からN末端領域とC末端領域の2つの領域に分割可能と予測できた。N末端領域（1-59番目のアミノ酸）とC末端領域（60-137番目のアミノ酸領域）を作る様に遺伝子を設計した。それらを、大腸菌を宿主とする発現ベクターに組み入れ、遺伝子の発現誘導を行った。それぞれの限定HNSタンパク質の精製を行ない、直接蛍光色素（Cy3）で修飾して結合性を調べた。その結果、C末端領域（HNS60-137）が角閃石系アスベストと結合することがわかった（図1、

図1、HNSタンパク質の構造とアスベスト結合領域。HNSタンパク質をN末端領域（1-59）とC末端領域（60-137）に分割した。角閃石系アスベストの結合領域は、C末端領域にあることがわかった。

2）。さらに、HNS60-137は、ケイ酸アルミ繊維や酸化チタンウイスカーには結合しなくなったことから、予想通り、
その他の無機繊維と結合する領域を取り除くことによって、アスベストへの結合特異性を向上させることができた。

HNS60-137をさらに限定して、角閃石アスベストに結合する領域を探った。具体的には、60-90番目までと、91-137番目の領域に分けた。その結果、60-90番目の限定HNSペプチドは、角閃石系アスベストと炭化ケイ素繊維には結合するが、ワラストナイトには結合しなくなることが分かった。すなわち、60-90番目までに限定することによって、さらにアスベストへの結合特異性を向上させることができたことになる。

限定HNS60-90を用いて特異性評価を行った結果、ほぼアスベスト特異的であることが分かった（表1）。現在のところ、アスベストと炭化ケイウイスカーとの区別は出来ていない。しかし、炭化ケイウイスカーは軍事用の特殊繊維で現場にはほとんど存在しないことから、この交差は無視できると考えられた。一方、DksAは炭化ケイ素ウイスカーにも結合する他は、ほぼクリソタイル特異的である（表1）。従って、DksAとHNS60-90の組み合わせで、アスベストに対する十分な特異性が得られたと考えられた。

次に60−90番目のペプチドのアスベスト結合領域のさらなる絞り込みを行った。まず、C末端側からの限定を

図２、限定HNSタンパク質の結合評価。蛍光標識した限定HNSタンパク質とアスベストを混合後、位相差頭微鏡（左）と蛍光頭微鏡（右）によって観察した。60-90番目の限定HNSタンパク質はワラストナイトには結合せず、アスベスト（アモサイト）に結合したので、アスベストへの特異性の向上がみられた。

行った。具体的には、87-90番目の4つのアミノ酸を欠失させた60-86番目のペプチド（HNS60-86-AviTag）を作製したところ、角閃石系アスベストへの結合性が消失した。この結果から、角閃石系アスベストへの結合には87-90番目のKAKR（リジンーアラニンーリジンーアルギニン）というペプチドが重要である事がわかった。次にN末端側からの欠失を行った。具体的には、63-90番目、75-90番目に限定したペプチドの作製を行った。その結果、63-90番目、75-90番目共に角閃石系アスベストへの結合性を有していた。最終的に、アスベストへの結合には、KSGTKAKR（リジンーセリンーグリシンースレオニンーリジンーアラニンーリジンーアルギニン）というペプチドに配列が重要であることがわかった。

さらに、アスベスト結合領域であるKSGTKAKRのアミノ酸配列について詳細な解析を行った。リジン(K)とアルギニン(R)は正電荷を有するアミノ酸である。リジンをすべてアルギニンに置換したペプチド

(GGGSGGGSGGGSRSGRARR)についてアスベストへの結合性を調べると、著しい結合力の低下がみられた。また、負電荷を有するアミノ酸EをKの近傍に配置したペプチド(GGGSGGGSGGGSKEEEKEKR)についてもアスベストへの結合性を調べると、この場合も著しい結合力の低下がみられた。しかし、リジンの位置には比較的自由度があった。以上の結果から、アスベストの結合には同じ正電荷のアミノ酸でもアルギニンではなくリジンの方が重要であり、負電荷のグルタミン酸はアモサイトへの結合を低下させる効果があることがわかった。

表 1、アスベスト結合特異性

繊維	DksA	HNS	HNS60-90
アス
ベス
ト	クリソタイル	結合
クロシドライト	結合	結合
アモサイト	結合	結合
アンソフィライト	結合	結合
トレモライト	結合	結合
アクチノライト	結合	結合
非ア
スベ
スト	グラスウール
ロックウール
微細ガラス繊維
耐火性繊維(RF1)
耐火性繊維(RF2)
ケイ酸アルミニウム繊維	結合
チタン酸カリウム繊維
炭化ケイ素ウイスカー	結合	結合	結合
酸化チタンウイスカー	結合
ワラストナイト	結合

アスベスト結合タンパク質の結合力を強化させることに

よって、より明瞭なアスベスト蛍光画像が期待できる。スト

レプトアビジンは、4量体を形成するタンパク質である。従って4分子のビオチン化したタンパク質（ペプチド）がストレプトアビジンを介して繋がることになる（図3）。ストレプトアビジン複合体は1分子上に4カ所のアスベスト結合部位が存在することにより、分子全体の結合力は単体と比べて向上することが期待できた。そこで、単体であるHNS60-90-AviTagを直接Cy3蛍光物質で修飾したものと、4量体であるストレプトアビジン複合体

(HNS60-90-AviTag-Streptavidin-Cy3)のアスベストに対する結合を蛍光頭微鏡で観察した。その結果、単体では蛍光がほとんど見えない濃度条件でも、ストレプトアビジン複合体は非常に明瞭な蛍光画像が得られるようになった。
次にその結合力の違いを定量化するために、遠心法とスキャッチャードプロット解析から、単体と4量体であるストレプトアビジン複合体の解離定数を比較した。その結果、単量体であるHNS60-90-AviTag-Cy3の解離定数は260 nMであるのに対し、4量体であるストレプトアビジン複合体（HNS60-90-AviTag-Streptavidin-Cy3）の解離定数は1.0 nMと強固な結合を示した（図3）。すなわち、アスベストに対する結合力はペプチドを4量体化させることで約260倍向上した。これは、アスベスト表面とタンパク質の結合が複数箇所で起こることによって解離が起こりにくくなり、結合力が向上したためと考えられた。

## (2) 実サンプルを用いた検証 (相関顕微鏡を用いた繊維の特異性の検証)

標準サンプルを用いて、特異性を検証した結果、十分な特異性が得られた。しかし本方法が公定法化されるためには、実際のサンプルではどこまで信頼性があるのか、起こるとすればどのような問題が起こりえるのかを把握する必要性がある。すなわち、蛍光顕微鏡で見えている繊維が本当にアスベストであるのかの確証を得

アスベストに結合したプローブの濃度 (nM)

アスベストに結合したプローブの濃度 (nM)

図3、アスベストに対する結合力を向上させる方法の概念図（上）と結合力評価（下）。スキャチャードプロットによって解離定数を求めた。4量体化することで結合力が約260倍向上した。

る必要がある。そのために、蛍光顕微鏡で観察した視野と同一の視野を電子顕微鏡で観察して、エネルギー分散形X線分光器(EDX)で分析して同定する必要がある。しかし、蛍光顕微鏡で観察された同じ繊維を電子顕微鏡で探し出すのは非常に困難な作業である。さらにアスベスト捕集に使用するニトロセルロースフィルターは繊維で構成されているため、その上にある繊維状物質は、電子顕微鏡の低倍率では背景と区別が付きにくく、広範囲の中から同一の繊維を探し出すことはほぼ不可能に近い。光電子相関顕微鏡は蛍光顕微鏡と電子顕微鏡で試料ステージを共有する特殊な顕微鏡である。蛍光顕微鏡で観察した視野の位置情報を記録し、電子顕微鏡での観察に移した際に、同一の視野に自動で移動してくれる。

そこで、光・電子相関顕微鏡システムをリースにて導入し、蛍光顕微鏡と電子顕微鏡で同一繊維の観察及び分析を行った。まず標準サンプルのアモサイトを捕集したフィルターを、アスベスト蛍光試薬で処理した後、蛍光

顕微鏡で観察した。蛍光を放つ繊維の画

像及び位置情報の取得を行ない、次に試料台を電子顕微鏡に移した。位置情報を入力することで、同一視野、同一繊維を観察することができた（図4）。さらに、その繊維をエネルギー分散型X線分光器（EDX）で分析することにより、アモサイトであると同定できた。このように、標準繊維を用いて蛍光顕微鏡と電子顕微鏡で同一繊維の観察及び分析するシステムを確立した。

このシステムを用いて、実際の解体工事のサンプルを用いてプローブの性能を検証した。フィルター34種類を用いて蛍光法を実施し、蛍光を示した繊維340本を電子顕微鏡で観察し、エネルギー分散型X線分析装置（EDX）で分析した。その結果、322本（角閃石262本、クリソタイル60本）がアスベストであることが分かった。すなわち蛍光法によるアスベスト判定における偽陽性率は約5%であることが分

図4、光電子相関顕微鏡システム。蛍光を示すアスベストの位置を記録し、同じ位置の繊維を電子顕微鏡（SEM）で観察することができる。SEM-EDXで元素分析することでアスベストを確認する事ができる。観察図はアモサイト標準繊維を蛍光顕微鏡で観察した後、電子顕微鏡で同じ繊維を観察した結果である。
かった。

この確度は、迅速法としては、十分であると考えられるが、さらに蛍光を示しながらアスベストではないものを詳細に分析することによって、確度を100％に近づけるための改善方法を探った。分析の結果、アスベスト以外の繊維として、有機繊維6本、鉱物繊維（Mg: Al: Si: Ca = 0.3: 0.4: 1: 0.5）7本、ケイ酸アルミ（Al: Si = 0.7: 1）2本、鉱物繊維（Si）1本、鉱物繊維（Mg: Al: Si: Ca = 0.2: 0.4: 1: 0.2）1本、鉱物繊維（Na: Mg: Al: Si: K: Ca: Fe = 0.1: 0.3: 0.6: 1: 0.1: 0.1: 0.1）1本、であることがわかった。有機繊維については、蛍光を呈する励起波長の特性が異なるため、自家蛍光（蛍光プローブが結合して蛍光を持つものではなく、繊維自体が元来蛍光を持つもの）と考えられた。有機繊維の自家蛍光の特徴として、励起・蛍光波長の特性が、アスベストバイオプローブ標識に利用したCy3やCF488Aと異なる。そこで、この特徴を使えば、有機繊維なのか、アスベスト蛍光プローブが結合したアスベストなのかが判定できると考えられた。具体的には、蛍光タンパク質（CF488Aで修飾したアスベスト結合タンパク質）は、490nm付近に励起波長のシャープな吸収ピークがあるため、360nmや540nmの励起波長では励起されない（蛍光がない）。一方、自家蛍光を持つ有機繊維の場合、360nmや540nmでも励起されて蛍光があるので、見分けられた。

蛍光法によるアスベスト検出の感度については、これまでの研究結果から30ナノメートル幅の微細なクリソタイル繊維が検出できることが分っている。これは最も細いアスベストの単繊維と同等の太さである。このことから、蛍光法では微細なアスベスト繊維も見落とすことはないと考えられる。しかし一方で、様々な夾雑物がある実際の環境測定において、蛍光法がその性能を発揮できるかを確認する必要がある。そこで実際の解体現場やアスベスト除去作業現場において飛散しているものを用いて評価試験を行うために、アスベスト含有吹付け材を試料として使用することとした。これらの試料を粉砕後、水分散させメンブレンフィルター上に捕集して試料を作製した。この試料を電子顕微鏡観察及びEDXにより分析した結果、それぞれ繊維20本について、全てアスベストであった。次にこの試料を位相差で観察できた繊維365本の蛍光を調べた結果、358本に蛍光が見られた。実サンプルであるのでアスベスト以外のものが含まれていた可能性もある。従って、現状では偽陰性率が最大でも1.9%であると言える。

## (3) アスベスト迅速計測法の確立

位相差顕微鏡を用いたアスベスト検出法による数値が、長い間疫学的危険度の相関に使われてきたことから、今も基本的に位相差顕微鏡による数値が使われている。バイオ蛍光法は、位相差顕微鏡では検出できない微細なアスベスト繊維も検出できることから、検出されるアスベストの総数は、位相差顕微鏡によって検出される総数よりも多くなることが指摘されていた。それにより、従来の位相差顕微鏡・電子顕微鏡法によって取得された過去のデータと連続性がないのではないかといった懸念が専門家から指摘された。バイオ蛍光法を広く一般化するために、如何に従来の位相差顕微鏡による計測、電子顕微鏡法による判定の基準を変えないようにアスベストを計測するかという技術的課題を乗り越える必要があった。

位相差顕微鏡は、蛍光ユニットを追加して、同一視野を位相差モード（透過型）と蛍光モード（落射型）で切り替えながら観察することが可能である。このモードの切り替えは光源と光路の切り替えだけな

(A)

(B)

図5、位相差・蛍光顕微鏡法によるアスベスト計測。(A)は位相差顕微鏡画像。(B)は(A)の位相差顕微鏡画像と同一視野における蛍光顕微鏡画像を示す。位相差顕微鏡下で観察した繊維状の物質1,3,5において、蛍光顕微鏡下で蛍光タンパク質の結合を確認することができた。一方、位相差顕微鏡下で観察した繊維状の物質2および4においては、蛍光顕微鏡下で蛍光タンパク質の結合を確認することができなかった。この結果、繊維状の物質1,3,5は、アスベストであると判定し、繊維状の物質2および4は、アスベスト以外の繊維と判定できる。

ので、顕微鏡によってはレバー1つで簡単に切り替わる。確立した位相差蛍光法では、位相差モードで繊維を計測し、次に蛍光モードに切り替えて、その繊維がアスベストかどうかを判定する（図5）。すなわち、位相差顕微鏡で確認できた繊維のうち、蛍光を持つ繊維をアスベストとして計測するので、従来の位相差顕微鏡による計測、電子顕微鏡法による判定の数値を超えることはない。これにより、位相差顕微鏡の過去のデータとの連続性が担保され、基準が変わるのではないかといった危惧が払拭できた。さらに従来の電子顕微鏡では、位相差顕微鏡で見た繊維と同一の繊維を観察する（探す）ことが事実上不可能である一方で（光・電子相関顕微鏡では可能だが、高価のため一般普及は難しい）、位相差蛍光顕微鏡法は、同一の繊維を容易に確認できることは特筆すべき改良点である。

現在、『アスベスト・モニタリング・マニュアル 第4.0版』(環境省)による標準的な分析法では、まず位相差顕微
鏡によって非アスベストを含む総繊維での繊維数濃度を測定し、1本/L以上の場合に、さらに電子顕微鏡とX線分析装置(EDX)を用い、アスベストの同定を行いながらアスベスト繊維数濃度を測定することとなっている。蛍光顕微鏡法は手順・操作が簡単なため従来法より迅速性に優れる方法である。しかし、得られた測定結果を従来の基準（疫学的データや、環境基準）と照合しながら評価するためには、従来法による測定結果との関係を把握することが必要である。そこで大気捕集フィルター・サンプルを分割し、同一捕集フィルターを両分析方法によって測定することによって、その相関性の検証を行った。実際の解体現場において捕集したサンプル（19サンプル）を用いて、それぞれの方法により計測した結果、相関係数0.87（p<0.01）と高い相関性を示した（図6）。電子顕微鏡法による測定を行わずとも、同程度の計測が可能な方法であることが確認できた。

図6、公定法（電子顕微鏡法）と位相差・蛍光法によるアスベスト繊維数濃度測定結果の相関

### 5. 本研究により得られた主な成果

## (1) 科学的意義

バイオ蛍光法は、蛍光で修飾したアスベスト結合タンパク質によって、アスベストを蛍光で可視化する世界で初めての技術である。沢山の種類のタンパク質から無機物質に結合するタンパク質を選択し、蛍光で修飾することでバイオイメージングに応用した。バイオイメージングの世界を無機物質の検出に広げたことは、科学的に大きな意義がある（平成24年度文部科学大臣表彰科学技術賞受賞）。また、本研究開発によって、初めてアスベスト結合領域をペプチドレベルで特定し、特異性と結合性を実際の現場で利用できるレベルまで向上させることができた。実際、現場のサンプルを使って特異性を評価した結果、誤認識率は5%、偽陰性率2%以下でアスベストが問題なく検出できることが実証できた。遺伝子工学、タンパク質工学を駆使して、環境中のアスベスト検査に資するバイオプローブを作成できたことは意義深い。さらに、蛍光顕微鏡で観察できる微細クリソタイルの直径は、30-35nmであることがわかっている。ナノサイズの粒子は、通常の光学顕微鏡では見ることができないくらい小さいが、蛍光でラベルすれば、その存在は可視化できることを実証した。これによりバイオ蛍光法がアスベスト以外にも近年毒性が指摘されているナノ材料の簡便な可視化にも将来応用できる可能性を示したことは科学的に意義が大きい。

## (2) 環境政策への貢献

## ＜行政が既に活用した成果＞

バイオ蛍光法によるアスベスト迅速検出法は、環境省アスベストモニタリングマニュアル第4版に記載されている。本研究開発でより信頼性の高いアスベスト迅速計測法が確立できた。

## ＜行政が活用することが見込まれる成果＞

アスベストはこれまでの曝露だけでも今後2030年前後までに約10万人の中皮腫発症を予想する文献も存在する(The New England Journal of Medicine, 353:1591-1603, 2005)。解体現場や瓦礫処理の際のさらなる曝露が重なれば、さらに数十年先までもアスベスト起因性のガン発症の問題を抱えることになる（解体現場のアスベストリスク）。アメリカでは、アスベストは懲罰的損害賠償の対象になるが、日本ではこの賠償はほとんど認められておらず、検査の動機付けにはなっていなかった。そこで2013年6月、石綿飛散防止強化へ向けて法改正が行われ、届け出がなくともアスベスト飛散の恐れがある場合に自治体が立ち入りできる様になった。しかし、現在の大気アスベスト検出の公定法は時間がかかること、提案されている偏光頭微鏡法は複雑な方法であり、且つ微細アスベスト等を見逃してしまう等の問題があり、立ち入り検査の際に利用できる簡易迅速検査法が確立されていなかった。

本方法は、暗視野の中でアスベスト繊維が特異的に光っているために、直ちに微細アスベストも検出できる等の利点がある（推進費の中間評価でS評価）。平成25年10月23日、第10回中央環境審議会石綿飛散防止専門委員会の資料中で、簡便で迅速な蛍光法の普及を期待する旨が記述されている。

民間の検査会社では、方法論が優れているだけでは技術の普及に至らない。特にアスベストなど社会的な問題が大きい場合には、公的な機関の積極的な評価や自治体・民間への周知が必要となる。