Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
いはかなり低いものと判断された。

表 1 カエルツボカビ症事例のプロフィール

地域(由来)	種類	計	原産地
1	東京(個人)	パジェットガエル	1	南米(繁笹)
アマソンツノガエル	1	南米
ベルツノガエル(発産)	1	南米(繁笹)
ナンベイウシガエル	1	南米
2	埼玉(繁笹家)	ベルツノガエル	7	南米
3	埼玉(量販店)	パジェットガエル	5	南米
アジアウキガエル	2	アジア
4	埼玉(専門店)	アルビノベルツノガエル	2	南米(USA輸入)
5	北海道(小売店)	イエアメガエル	1	オセアニア
6	東京(個人)	ビババババ	1	南米
7	静岡(卸業者)	ベパーミントツノガエル	5	南米(国内繁笹)
8	東京(繁笹家)	ベルツノガエル	20	南米(国内繁笹)
9	茨城(繁笹家)	ベルツノガエル	2	南米(国内繁笹)
10	東京(個人)	イエアメガエル	1	オセアニア
11	東京(個人)	セアカアデエル	1	マダガスカル
12	兵庫(卸業者)	ベルツノガエル	2	南米(USA輸入)
13	沖縄	ベルツノガエル	1	南米
14	神奈川	アジアウキガエル	2	アジア
15	東京(専門店)	クラシウエルツノガエル	38	南米(国内繁笹)
合計	9種類	94

表 2 野生両生類の不審死・大量死事例の病性鑑定

月日	場所	種組	匹数	検査数	場所	通報者(発見者)・仲介者
1	07.02.07	東京都	ヤマアカガエル	3匹	1	殻山・多隆丘蔵	自然輪家吉
2	07.02.21	長崎県	ジンマアカガエル	20匹	3	河川	野生生物センター
ジンマアカガエル	1匹	1
3	07.03.05	千葉県	ニホンアカガエル	多數	2	千葉県市區市	カエル保護局会員
4	07.03.26	神奈川県	ニホンセカエル	2匹	2	湿地輪の水路と多道	自然輪家保全センター
5	07.03.27	横浜市	ニホンセカエル	多數	1	学校の池	一般临床輪医師
6	07.04.04	宮城県	ニホンアカガエル	>100匹	0	自然輪家吉
7	07.04.20	沖縄県	オキナリアオガエル	1	林道	自然輪家吉
8	07.04.25	茨城県	ニホンアカガエル	50-100匹	6	用水路	地方組合事務所環境保全課
ジンマーグルアオガエル	1
9	07.04.27	沖縄県	オキナリアオガエル	3	水族館輪育	コア輪医師
10	07.04.28	千葉県	ロウキュウダルマガエル	1匹	1	水田	JAI生きもの儀
11	07.05.15	横浜市	ニホンセカエル	1匹	1	一般家庭輪育	コア輪医師
12	07.06.06	東京都	アズマセカガエル	1匹	1	自宅の輪の池	コア輪医師
13	07.06.13	静岡県	トノラマガエル	2匹	1	自宅の輪の池	一般人
14	07.06.15	奈良県	トノラマガエル	3匹	1	一般家庭輪育	一般人
15	07.06.18	埼玉県	クシガエル	1	保護	コア輪医師
16	07.06.23	東京都	アカハライリ	100匹	1	一般家庭輪育	コア輪医師
17	07.06.24	東京都	セガエル	1匹	1	自宅の輪の池	コア輪医師
18	07.06.26	北海道	ヤマアカガエル	多數	5	一般家庭輪育	カエル保護局会員
19	07.06.28	福岡県	ニホンアカガエル	1	自宅の輪の池	生活環境課
20	07.07.01	千葉県	カジカガエル	1匹	4	深谷	一般临床輪医師
21	07.07.03	東京都	アズマセカガエル	100匹以上	4	学校の池	一般人
22	07.07.04	福島県	ヤマアカガエル	労休20匹以上	5	山間部の水田	一般人
23	07.07.13	北海道	ロウキュウダルマガエル	1匹	1	植物園輪育	コア輪医師
24	07.07.18	滋賀県	アズマセカガエル	1匹	1	民家	博物館学芸員
25	07.07.19	静岡県	アミレオガエル	労休20匹	3	水族館輪育	水族館成员
26	07.07.20	山形県	アカハライリ	3匹	3	一般家庭輪育	一般临床輪医師
27	07.07.23	東京都	ロウキュウダルマガエル	26匹	5	水族館輪育	輪物園輪育
28	07.07.24	千葉県	アズマセカガエル	1	博物館輪育	博物館学芸員
29	07.06.01	神奈川県	アズマセカガエル	1匹	1	輪上	カエル保護局仲介
30	07.06.22	大分県	トノラマガエル	1匹	1	水田の水路	県全國輪與部員組自総室
31	07.06.29	東京都	アズマセカガエル	1匹	1	一般家庭輪の池	自然公開輪員
32	07.09.14	沖縄県	セエエエル	1匹	1	林道	野生生物保護センター
33	07.09.14	沖縄県	サキシマズマガエル	成体12匹	3	工場内用水路	野生生物保護センター
34	07.09.14	沖縄県	リュウキュウガカガエル	労休100匹	2	輪上	コア輪医師
35	07.09.29	香川県	ニホンアカガエル	2匹	1	深谷	自然輪家吉
## 3 ）オオサンショウウオにおけるカエルツボカビ保有率と除菌実験

オオサンショウウオ 10 匹中 6 匹がカエルツボカビ陽性と判定された。除菌実験では、1 群全頭が 5 回目の除菌後に PCR 検査陰性となり、その後の検査でもカエルツボカビは検出されなかった。この結果を受け、当初、無処置対照としていた 2 群に、回数を減らして 5 回薬浴した。2 群も 5 回ですべて PCR 検査陰性となった (表 3)。

今回の研究により、0.01%イトラコナゾール溶液を1日5分、5回の薬浴と、大変簡便な方法で、安全に除菌できることを検証した。今回の薬浴方法は従来行われていた薬浴時間、薬浴日数を大幅に短縮したため、動物のストレスを軽減する他、使用薬剤が少量で済み、1匹あたりの除菌単価が安価になり、効果的で大変推奨できる方法である。有尾類を用いた除菌研究の報告はなく、本実験が初の試みとなった。特に、本方法は、稀少な有尾類が多く生息する日本における生息域外繁殖事業に貢献するものと考える。

表 3 オオサンショウウオ PCR 検査結果

登錄番号	チッフD	除商前	業務5日目	業務10日目	業務7日目	業務14日目
1群	0411	0006711739
(000669819D)	+	-	-	-	-
0175	00066C6BC3	+	-	-	-	-
0211	00066ADB74	+	-	-	-	-
0190	0006695096	+	-	-	-	-
2群	0479	00066DEC66	+	-
0344	0006701525	+	-

## 4 ）自然発生性ツボカビ症を用いた治療実験

治療実験に用いた動物のうち、1匹を除くすべてで、臨床症状が改善し、薬浴7回目にPCR検査で陰性となり、治療後20-57日（平均34.4日）追跡して、PCR検査を行なったが陰性のままであった。その後現時点まで発症はない。また、色素消失などの副作用は確認できなかった。なお、死亡した1匹は受診時、すでに重篤な症状を示し、供試動物中、最も幼若であった。この実験により、除菌実験での結果が再現され、効果的で、安全な治療法を確立することができた。これにより、希少種の生息域外繁殖事業におけるカエルツボカビのリスクの軽減が可能となった。

## 5 ）カエルツボカビ菌培養株の樹立、増殖評価方法および銅イオンの影響の検討

## a）培養株の樹立

日本で発見されたカエルツボカビ症発症例から培養株の樹立に成功した(図1)。これにより、カエルツボカビの病原性の検討、在来種への影響、消毒法、診断法などの検討が可能となった。

図１ 樹立した培養株

中心部の黒色部は遊走子囊の集合。周囲に遊走子が観察される。
## b）増殖評価方法の検討

i. 培養方法：振盪培養では、カエルツボカビが管壁に付着することはなかったものの、遊走子、遊走子囊ともに、互いに接着して塊状となり、カエルツボカビが均一に分布する培養液にはならなかった(図2)。また、遊走子囊から遊走子が放出されずに、遊走子囊内でさらに小さな遊走子囊を形成したり、遊走子の頭部が通常よりかなり大きい、仮根が一本しかない遊走子囊など、遊走子と遊走子囊との鑑別が極めて困難になるといった通常の培養とは異なるカエルツボカビの形態がみられた。一方の静置培養では、遊走子囊が底面に付着するため、遊走子囊の増殖評価は出来ないが、順調に発育し、放出された遊走子によって、経時的に培地の濁度が増していった。

ii. 増殖評価方法：(i) 振盪培養では上述のように遊走子と遊走子囊が絡まりあってしまったため、血球計算盤で正確な数を数えることは不可能であった。静置培養では、遊走子数を数えることができ、6日目から遊走子濃度の急激な上昇がみられ、8日目のピークを境に濃度は徐々に下がり始め、培養14日目にはほとんどみられなくなった。遊走子囊濃度は8日目から上昇し始めたが、その速度は緩やかで、培養14日目でも上昇傾向であった(図3)。(ii) 吸光度計による測定では、振盪培養、静置培養いずれの培養方法とも、増殖極期にあると思われる培地を測定したが、ピーク、バレーともに検出することは出来ず、測定できなかった。

当初は、遊走子、遊走子囊濃度をともに増殖評価対象としていたため、カエルツボカビが均一に浮遊している培養液を作成する必要があった。このため、培養ボトル壁面に遊走子囊が付着すると、遊走子囊の正確な増殖評価ができないので、緩やかに振盪しながら培養した。しかし、緩やかであっても、振盪によって遊走子、遊走子囊が互いに絡み合って塊状となったり、通常と異なる発育をして遊走子と遊走子囊を明確に区別することが困難となったため、血球計算盤で遊走子、遊走子囊の正確な数を数えることは出来なかった。一方、細胞接着性の培養フラスコを用いた静置培養では、遊走子囊が底面に付着できるため、良好に発育し、血球計算盤を用いた方法で遊走子の経時的増殖を知ることが出来た。このことから、カエルツボカビの増殖を評価するには静置培養を行い、血球計算盤で遊走子濃度を求めることが最適であると考えた。また、付着しているはずの遊走子囊の数が培養日数がたつにつれ増加したのは、増殖が進み、底面に付着できなかった遊走子囊が培地中に浮遊してきたためと思われた。

吸光度測定は、振盪培養では、塊状になると重量が増すためか沈みやすくなり、セルに検体をいれるとすぐ底に沈んでしまい、測定が出来なかった。静置培養では、増殖極期と思われるかなり濁りのある時期の培地を検体として測定を試みたが、ピークもバレーも検出されず、吸光度を測定することは出来なかった。海外では、吸光度計を用いてカエルツボカビの増殖を評価した論文があるが、この論文では、細胞培養プレートでカエルツボカビを培養し、遊走子囊が付着するプレート底面の不透過度が増すことによる吸光度の変化を測定することで増殖を評価していた。カエルツボカビ遊走子の頭部径は6～15μmとかなり大きく、なぜ吸光度が測定できなかったかは不明であり、我々が検討していた遊走子を対象とした吸光度の測定は難しいと思われた。
図２振盪培養したカエルツボカビ培養液。

遊走子、遊走子嚢ともに、互いに接着して塊状となっている。

図3. 遊走子および遊走子囊濃度の推移

## c）銅イオンの影響

培養3日目にコントロールで遊走子が確認され始め、培養4日目で1 ppmでも遊走子が見られた。その後、培養7日目まではコントロール、1 ppmのみ遊走子がわずかに観察された。しかし、培養8日目からコントロール、1 ppmで顕著な遊走子の増加が認められ、5 ppmにも遊走子囊が観察された。培養10日目で10 ppmに遊走子囊がわずかに観察された。その後、培養12日目までコントロール、1 ppmでは遊走子が増殖していたが、5 ppm以上では遊走子が確認できなかった(表4、図4)。

銅イオン添加 PmTG 液体培地で 13 日間培養後、各濃度の培地を 3,000rpm 10 分遠心、沈渣を 100μl とり、銅イオンを添加していない新しい PmTG 液体培地 10ml に各々加え、22℃ で更に培養したところ、1 週間後にコントロールと 1 ppm から継代した培地で明らかな遊走子の増殖が確認された。5 ppm 以上の濃度の培地からの継代では遊走子は確認できなかった。その後 1 週間ごとに 5 ppm 以上の培地中の遊走子数をカウントしたが、4 週間経過しても 5 ppm 以上の培地では遊走子は確認できなかった。

養魚場では、水力ビの発生を抑えるには、銅イオンは5～10ppb程度で有効なことがわかっており、これ以上高い濃度では、尾が曲がるなどの奇形を起こす可能性があるといわれている。今回の実験では、1 ppmでカエルツボカビの顕著な増殖がみられた。また、5 ppm、10ppmでも遊走子囊が観察されたが、その後、銅イオンの添加されていない培地で継代培養しても遊走子がみられなかったことから、カエルツボカビは5 ppm以上の銅イオン濃度で増殖を抑えることが出来るといえる(追加実験として、2 ppm、3 ppm、4 ppmで同様の実験を行ったが、全ての濃度でカエルツボカビの明らかな増殖がみられた)。上水道における銅イ
オン基準濃度の上限が1 ppm、排水基準の銅イオン濃度が3 ppmであることを考えると、5 ppmという濃度はかなり高濃度である。このため、残念ながら、銅イオン水はカエルツボカビ除菌液としては不適当であるといわざるをえない。しかし、1 ppmの銅イオン濃度でほとんどの細菌、カビの繁殖を抑えることができるため、カエルツボカビの選択培地として利用できる可能性がある。

表 4 遊走子濃度(銅イオン感受性試験)

(温度:10⁴/m)
培养日数	C小口一孔	1ppm	5ppm	10ppm	15ppm	20ppm
2日目	0	0	0	0	0	0
3日目	0.074074	0	0	0	0	0
4日目	0.074074	0.148148	0	0	0	0
5日目	0.148148	0.074074	0	0	0	0
6日目	0.592593	0.37037	0	0	0	0
7日目	3.185185	0.740741	0	0	0	0
8日目	9.259259	4.666667	0	0	0	0
9日目	24.444444	8.222222	0	0	0	0
10日目	28.51852	14.22222	0	0	0	0
11日目	29.77778	18.14815	0	0	0	0
12日目	30.22222	17.40741	0	0	0	0
13日目	27.92593	12.96296	0	0	0	0

図4. 銅イオン濃度別の遊走子濃度の推移

## 6 ）野外でのカエルツボカビ浸淫状況と季節変動の検討

各月のカエルツボカビ陽性個体数は、4月51.4%（18/35匹）、5月41.9%（13/31匹）、6月20.8%（10/48匹）、7月18.2%（4/22匹）、8月0%（0/30匹）、9月0%（0/39匹）であり、4～5月の陽性率が高く、その後徐々に低下し、8月以降は全て陰性になった。

ウシガエルの幼生は、日本各地に生息していて、成体より採取が容易であること、富永らの結果(五箇らの成果参照)と我々の結果を考慮すると3、4月に採取することによって、国内カエルツボカビ浸淫状況の把握ができるものと考えられる。併せて、ウシガエルは多くのハプロタイプを保有していることが五箇らによって確認されていることから、ハプロタイプ分布の地域差なども検討することできるものと思われ、ウシガエルの幼生はカエルツボカビのモニター動物として有用であることを明らかにした。
## (2) ラナウイルス

## 1 ）ラナウイルス大量死事例の検索

2008 年 9 月、関西地方のある地域で、ウシガエルの変態途中あるいは変態直後の幼体（カエルジャクシ）の大量死が発見された。大量死は 9 月中旬から 10 月まで続き、ピーク時には毎日数千匹の死体が回収、廃棄された。なお、カエル成体や同じ池に生息する魚には異常が認められなかった。臨床症状および肉眼所見は、一般的な両生類のラナウイルス感染症と同様で、病理学的には、腎臓糸球体を主とする壊死、肝細胞のび慢性壊死が認められ、電子顕微鏡学的検索で、約 130nm の六角形（立体的には正二十面体）のウイルス粒子様構造物が糸球体内皮細胞と思われる細胞に観察された。分子生物学的には、MCP をコードする遺伝子の塩基配列が、2008 年 9 月に台湾の研究者によりデータベースに登録されたものと非常に類似していることから、我々は本ウイルスを日本初のラナウイルス確認事例とし、発見されたウイルスを RCV-JP と命名した。その翌年の 2009 年 9 月、再度、西日本各地からウシガエル大量死の通報があり、病性鑑定を依頼されたため、体表スワブを用いたカエルツボカビ PCR 検査、腎臓組織を用いたラナウイルス PCR 検査、病理検査を行った。通報月日、発生時期と発生場所は表 5 のとおりである。

No. 09-1 は池で、大量の変態途中、あるいは変態直後のウシガエルの死体が観察された。当初、農薬散布、酸欠、有毒プランクトン発生などが疑われ、地元の関係者により精査されたがすべて否定された。

No. 09-2 は川で、大量の幼生あるいは幼体のウシガエルの死体が腐敗して悪臭がするとのことで、地方自治体に市民より苦情が寄せられた。

No. 09-3 は川で、地元住民より麻布大学に直接異変の連絡があった。9月になって、雨が降るたび、川にカエルの死体が流れてくるという情報で、同様の現象が3回あったことを確認した。この事例は、写真のみの情報で検査はできなかったが、写真に写っていたカエルはウシガエルの幼生であった。

No. 09-4 は池で、関係者が No. 09-2 に関係する水系を調査している時、訪ねた私有地内の池の中と護岸に多くのカエルの死体を発見した。これらもウシガエルの幼生および幼体であった。

なお、2009年の4箇所と2008年の1箇所は、半径35km以内に入っていた(図5)。腐敗の激しいものを除いて、ほぼ同様の肉眼所見と組織所見が得られた。

皮膚潰瘍は陳旧なものが多く、潰瘍を有する割合も低かった。尾の変形が目立ったが、指端の欠損は少なくなかった。眼病变(前眼部炎症)が特徴的であった。組織学的には、肝臓細胞変性と壊死、腎尿細管の硝子滴変性と様々な程度の糸球体壊死を示した。また、しばしば各臓器に細菌塊が観察された。PCR検査にて、ラナウイルスに特有の584bpの産物が増幅され、この産物のシークエンス解析の結果、RCV-JPの塩基配列と一致した。なお、体表スワブを用いたカエルツボカビPCR検査では、カエルツボカビDNAは検出できなかった。
表 5 2009 年ウシガエル大量死事例のプロフィール

事例 No.	通報	発生	場所	検出ウイルス
No. 09-1	10月1日	9月26日～	池	RCV-JP
No. 09-2	10月5日	10月1日～	川	RCV-JP
No. 09-3	9月	9月13日～	川	NA
No. 09-4	10月15日	以前より(毎年)	池	RCV-JP

図 5. 国内におけるラナウィルス感染症発生状況

2008年1箇所でしか確認されなかったウシガエルのラナウイルス感染症が、少なくとも2009年に3箇所で確認され、これらが半径35km以内で発生しており、一部は同じ水系であることから、拡散している可能性が示唆された。

## 2 ）遡及的ラナウイルス感染症の調査

野外におけるツボカビ症の流行をモニタリングするために、提供された不審死、大量死事例を遡及的にラナウイルスを対象として検索した。その結果、西日本から提供されたカスミサンショウウオ大量死事例からラナウイルスを検出した。この事例は、公共事業による生息環境の変化を考慮して、カスミサンショウウオを保護・飼育している施設での発生である。1年以上前から飼育しているカスミサンショウウオの水槽2つに、2008年5月中旬から6月1日頃野外で採取した上陸前のカスミサンショウウオ幼生十数匹を加えたところ、成体、亜成体、幼体に関わらず次々に死亡し、最初の1匹が死亡してから2週間で80匹すべ
てが死亡した。死亡個体には、皮膚潰瘍、腹部の内出血がみられるものもあった。この間、飼育水の交換、薬浴、抗生物質塗布などを行ったが効果はなく、以前より、同所で、飼育していた魚類ドンコ、カワムツも死亡した。病理学的には、皮膚潰瘍や皮膚の限局性黒変、肝臓細胞変性と壊死、腎尿細管の硝子滴変性と様々な程度の糸球体壊死が観察された。また、しばしば各臓器に細菌塊が観察された。電子顕微鏡学的検索で、腎臓の間質細胞の細胞質内にラナウイルス様の粒子を確認した。これらの粒子の直径は約120nmで、六角形を呈した。主要カプシド・タンパク質（MCP）をコード化している遺伝子を増幅する一対のプライマー（M153とM154）を用いたPCR検査にて、ラナウイルスに特有の584bp遺伝子が増幅された。さらに、PCR産物の遺伝子配列を解析したところ、Frogウイルス3、RCV-JPの塩基配列とは異なっており、HNVと命名された。この事例は、本邦初のサンショウウオのラナウイルス感染症となる。ラナウイルスは幼生、幼体に対して病原性が高いとされるが、今回、すべての年齢層が感染し、全滅したことから、サンショウウオに対して非常に病原性の高いウイルスであると推察された。なお、この流行の機序やウイルスの起源については、さらなるウイルス学的、分子生物学的研究が必要である。

## 3 ）RCV-JP、HNV の在来両生類への感染実験

## a）ラナウイルス感染症の臨床症状および病理学的所見

感染、発症した動物の症状と病理学的所見は、無尾目と有尾目で違いがあったが、同一目の動物では、種類と生存期間に関わらず同様の所見を示したので、一括して記述する。

有尾目：幼生では、食欲減退、沈鬱、遊泳異常、逃避行動の消失などがあり、皮膚潰瘍や出血斑などが観察された。成体では、腹囲膨満が目立った。腎臓では近位尿細管上皮細胞の硝子滴変性、壊死と近位尿細管上皮細胞の好塩基性細胞質内封入体形成、糸球体壊死がみられた。肝臓ではメラノファージの高度集簇および肝細胞の萎縮・変性・壊死が認められた。脾臓ではリンパ球系細胞が減少し、脾臓被膜下の結合組織の高度な増生があった。また、敗血症化している個体もみられた。

無尾目：突然死するものが多く、皮膚潰瘍や出血などの症状は認められず、軽度の体腔水腫があり、RBには皮膚の発赤と皮下水腫がみられた。肝臓ではび漫性の肝細胞変性と少数の巣状壊死、稀に肝細胞細胞質内封入体を観察した。腎臓では尿細管、糸球体の壊死と変性がみられた。脾臓と皮膚に壊死などの変化は認められなかった。

## b）有尾目(成体)へのラナウイルスRCV-JPの病原性の検討

各死亡個体数は、HNe 5/5、HNi 2/2、CE 6/6、CP 1/1 で、実験に供したすべての動物で死亡率が 100% に達した。暴露後 9 日から死亡し始め、55 日までにすべて死亡した。生存期間はそれぞれ NHe 23～36 日、HNi 9 日、CE 9～55 日、CP 44 日で、動物種によって差があった。

c）無尾目(成体)へのラナウイルス RCV-JP の病原性の検討

各死亡個体数は RB3/3、RL 3/4、MO 2/3、BG 1/3 で、死亡率は 33.3～100%、暴露後 3 日目から死亡し始め、43 日以降は死亡する個体はいなかった。100% の死亡率を示した RB の生存期間は 3～15 日であった。

d）有尾目(成体)へのラナウイルス HNV の病原性の検討
それぞれの種類の死亡個体数は HNe 4/5、HNi 0/3、CE 8/10 で、死亡率 0～80%、種類により差があり、暴露後 15～45 日で死亡した。平均生存期間は HNe 32.3 日、CE 22.8 日で若干の差があった。また、生き残った個体は、目立った臨床症状を示さず、食欲も変わらなかったが、病理組織学的には、封入体を含めて病变が確認され、かつ PCR 検査で陽性となった。

## e）ラナウイルス RCV-JP と HNV の成体における病原性の比較

有尾類における RCV-JP 接種群の平均死亡率は 100%で、HNV 接種群の平均死亡率 53.3%とは大差があり、RCV-JP は、種類に関係なく病原性が強いと評価された。一方、HNV への感受性は、種類によって大きな差があった。また、2 種のウイルスに関連する病变に質的差はないものの軽重があり、CE を除いて、RCV-JP は、一般に皮膚潰瘍を形成しやすかった。

## f）ラナウイルス RCV-JP、HNV の病原性に関わる水温と年齢の検討

有尾目の幼生を用いて、水温が死亡率および病变に与える影響を検討した結果、RCV-JP接種群では、NHeとトウホクサンショウウオは水温に関わりなくすべて死亡したが、HTでは22℃条件で100%、15℃条件で80%であった。HNV接種群では、水温に関係なくNHeとHDはすべて死亡し、HLとHRでは温度差があり、特に後者では、22℃条件下100%、15℃条件10%の死亡率であった。生存期間も、両ウイルスを合わせた死亡のピークは22℃条件6～8日、15℃条件で11～13日であった。この傾向は、無尾目BJでも同様で、22℃条件14～17日、15℃条件で41～43日であった。22℃条件では死亡率が上昇し、経過も短かった。このことから、水温に関わりなく2種類のウイルスともに強い病原性を示し、その病原性は、水温の上昇により増強された。なお、水温による病变の違いとして、22℃下で、皮膚潰瘍の頻度が顕著に高かった。

年齢による各ウイルスへの感受性の違いを HNe と HNi で検証した結果、HNV 接種群の HNi では、成体 0%、幼体 40% の致死率であったものの、他は年齢に関係なくすべて死亡し、本ウイルスの在来両生類への病原性の強さが示された。

今回、対象とした2種のラナウイルスは、ともに国内の罹患動物から分離された新規のウイルスで、今まで在来種への病原性が評価されたことはなかった。そこで、感染実験によってその病原性を評価した。その結果、RCV-JPおよびHNVの広宿主性および高致死性(平均死亡率84.0%)が明らかになった。特に、国内に生息する両生類58種のうち今回実験に用いた13種(22.4%)に致死性の病原性を示したことは重要である。

病態にかかわる動物種、発生ステージおよび水温などの因子を検討したところ、幼生での死亡率が高く、国内外の大量死の状況と一致した。水温の上昇は、感染後短時間での発症、経過時間の短縮、死亡率を上げる重要な因子であることがわかった。特に、HNV 感染群の HR においては、15℃と 22℃条件での死亡率がそれぞれ 10％と 100％で、90%も死亡率が増加した。なお、2 種類のウイルスを比較すると HNV より RCV-JP の方が病原性が高く、HNV の病原性では動物種差が明瞭で、HNi がキャリアーとなる可能性があることが示唆された。

臨床徴候と肉眼的所見は、発生ステージや動物種により差があることから、肉眼的に診断するのは難しいが、有尾目成体の腹囲膨満(体腔内および皮下水腫)、頭部挙上困難、幼生では沈鬱状態、逃避行動の消
失、皮下出血と皮膚潰瘍などは有用な所見と考えられ、病理組織学的には、肝臓、腎臓、脾臓における壊死性変化(成体では腎臓、幼生では肝臓)と、必発ではないが、これら臓器における好塩基性細胞質内封入体の存在が特徴的で、加えてPCR検査を行なうことで、診断はさらに確実になると思われる。最後に、国内において、すでに野生のウシガエルでラナウイルス感染症が流行しており、在来両生類に対して高致死性の危険な病原体であることから、今後、野外におけるラナウイルス保有調査などの疫学的な研究を進め、国内におけるラナウイルスの情報を蓄積、現状把握し感染拡大防止などのラナウイルス対策に寄与し、パンデミックを防止するよう早急に対策を立てる必要がある。

## 4 ）国内ラナウイルス浸淫調査と季節変動

流行地におけるラナウイルス保有率は、両生類 26.7%（104/389 匹）で、魚類(253 匹)、甲殻類(1 匹)は陰性であった。また、過去、ラナウイルス感染症が流行した3箇所で観察を行なったところ、うち1箇所で2010年9～10月に再度ウシガエルの大量死が発生し、この時期の陽性率は、両生類 56.0%（102/182 匹）で、死亡した幼生のほとんどがラナウイルス陽性となった。これらはすべてRCV-JPと同定された。また、流行地に隣接した田んぼで採取したヌマガエル10匹幼体のうち4匹からTiger frog virus:TFVが検出された。

ウシガエル幼生を対象としたラナウイルス検査結果は、神奈川県相模川の3点のうち、相模原市405匹中4匹、1%（6月1/36、9月2/39、12月1/36）、厚木市105匹中10匹陽性（4月18日4/13、4月25日3/27、5月5日3/33、5月16日0/17、7月12日0/14、10月22日0/1）、海老名市0/33、千葉県ウシガエル66匹中14匹陽性（10月20日0/1、10月25日12/14、7月31日0/21、10月2日2/30）、東京都0/73、埼玉県0/8、広島県0/9、群馬県0/3であった。その他の両生類としては、千葉県モリアオガエル幼生5匹中2匹陽性となった。

## （３）小型サンショウウオの皮膚メタセルカリア症

福島県の真野川の北岸、真野川と新田川の間、新田川の南岸の3箇所について、過去のデータと今回のデータをまとめたところ、表6のような結果が得られた。すなわち、寄生虫症に罹患している個体が観察されるエリアが増加し、有病率が上がった。さらに、茨城県のトウキョウサンショウウオ(雄、成体、軽度)1匹、高知県のハコネサンショウウオ（幼生、中程度）1匹、アベサンショウウオ(雌、成体、軽度)1匹に本寄生虫の感染を確認した。また、島根県で採取されたアライグマに本寄生虫の成体の寄生を確認した。

吸虫種自体が外来種か在来種か不明であるが、自然界で爆発的に増加するには、終宿主となる動物の異常繁殖が関与していると考えられる。今回、サンショウウオ類に吸虫感染症が異常発生している地域では、ここ10年間で、ミンクやアライグマ等の外来哺乳類の個体数が急激に増加していることが報告されており、これらの外来哺乳類が終宿主として吸虫の異常繁殖をもたらしている可能性が考えられる（図6）。今後、これら外来哺乳類の感染状況を調査する必要がある。

また、海外においても、近年両生類における吸虫感染症の異常発生が報告されており、除草剤アトラジンの多用が両生類の免疫機能をかく乱し、吸虫感染率を引き上げているという調査結果も出ている。サブテーマ1「非意図的な随伴侵入生物の侵入ルートの解明および防除対策」のカエルツボカビ調査においても議論しているが、外来種の侵入や生息環境の人為的改変によって、野生生物と寄生生物の共生関係がかく
乱され、感染症 pandemic を招いていることが本研究の結果からも示唆される。

表6 阿武隈山系におけるトウホクサンショウウオの皮膚メタセルカリア症確認状況

調查地	2001	2002	2003	2004	2005	2006	2007	2008	2009	2010
真野川北岸(伊達の北東部)	○	○	○	○	●
真野川南岸から新田川北岸有病率(個体数)	○	●	●	●	●	●	●
66.7(2/3)	80.0(12/15)	100.0(8/8)	100.0(13/13)	92.8(13/14)
新田川南岸有病率(個体数)	○	○	○	○	●	●	●
60.0(9/15)

図6 吸虫の生活史と宿主

外来種ミンクが終宿主として増加することで、吸虫が自然環境で異常発生し、同所的に両生類の感染率が急上昇しているという仮説が立てられる。
## 5 ．本研究により得られた成果

## （1） 科学的意義

世界的規模での両生類の減少に関わっているとされ、国際獣疫事務局のリストにも監視すべき重要な疾患としてリストアップされているカエルツボカビとラナウイルスを日本で初めて発見するとともに、その病原性について明らかにした。新たなる両生類の感染症「皮膚メタセルカリア症」を見出し、本疾患が外来哺乳類の分布拡大に関連する可能性が示した。

いずれの成果も、科学的見地から新規性のあるもので（今回確認されたカエルツボカビおよびラナウイルスともに、日本独自のハプロタイプや株である）、世界各地で生じているパンデミックの解析に重要な情報を提供するものと考える。

## （２）地球環境政策への貢献

両生類の野生個体群の急激な減少は世界的にも大きな問題とされている。特にカエルツボカビやラナウイルスはIUCN（国際自然保護連合）および国際獣疫事務局においても重要な野生生物感染症と認定されており、世界的な検疫と防除対策の推進が唱われている。本研究課題において得られた成果は、国際的な両生類感染症対策に対して、特にアジア地域の両生類保護という観点から重要な科学的知見を提供するものである。また、サブテーマ1でも主張されているように、生物多様性のかく乱と感染症pandemicという新しい概念にひとつの布石を提供するものである。

### 6 \. 引用文献

1) Une Y, Kadekaru S, Tamukai K, Goka K & Kuroki T (2008). First report of spontaneous chytridiomycosis in frogs in Asia. Dis. Aquat. Org. 82, 157-160.

2) Une Y, Sakuma A, Matsueda H, Nakai K & Murakami M (2009). Ranavirus Outbreak in North American bullfrogs (Rana catesbeiana), Japan, 2008. Emerg. Infect. Dis. 15, 1146-1147.

3) Berger L, Speare R, Daszak P, Green DE et al (1998). Chytridiomycosis causes amphibian mortality associated with population declines in the rain forests of Australia and Central America. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95, 9031-9036.

4) Lips KR, Brem F, Brenes R, Reeve JD et al (2006). Emerging infectious disease and the loss of biodiversity in a Neotropical amphibian community. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103, 3165–3170.

5) Speare R & Berger L (2000). Global distribution of chytridiomycosis in amphibians. James Cook University, Townsville. www.jcu.edu.au/school/phtm/PHTM/frogs/chyglob.htm

6) Weldon C, du Preez LH, Hyatt AD, Muller R & Speare R (2004). Origin of the amphibian chytrid fungus. Emerg. Infect. Dis. 10, 2100–2105.

7) Cunningham AA, Hyatt AD, Russell P & Bennett PM (2007). Emerging epidemic diseases of frogs in Britain are dependent on the source of ranavirus agent and the route of exposure. Epidemiol. Infect. 135, 1200–1212.

8) Miller DL, Rajeev S, Gray MJ & Baldwin CA (2007). Frog virus 3 infection, cultured American
bullfrogs. Emerg. Infect. Dis. 13, 342–343.

9) Daszak P, Berger L, Cunningham AA, Hyatt AD, Green DE & Speare R (1999). Emerging infectious diseases and amphibian population declines. Emerg. Infect. Dis. 5, 735–748.

10) 佐藤 宏、稲葉孝志、井濱 康、神谷晴夫（2000）寄生虫病学：本邦東北地方北西部に生息する野生肉食類の寄生虫調査. J. Vet. Med. Sci. 61:1023-1026.

11）伊原貞雄、宇根有美、佐藤宏、稲葉修（2010）阿武隈山地北部のトウホクサンショウウオにおける皮膚メタセルカリア結節の発生とその増加爬虫両生類学会報2：97-102.

12) Sato H, Ihara S, Inaba O & Une Y(2010). Identification of Euryhelmis costaricensis metacercariae in the skin of Tohoku hynobiid salamander (Hynobius lichenatus), northeastern, Honshu, Japan. J. Wildl. Dis. 46, 832-842.

13）宇根有美（2009）カエルの大量死-両生類の新興感染症-獣医疫学雑誌 13：138-140.

## 7 ．国際共同研究等の状況

パナマ大学とパナマスミソニアン熱帯研究所の研究員と共同研究の打ち合わせをした。フィリピン大学獣医学部病理学研究室教授マサガイ博士を共同研究の打ち合わせをし、協力を得て、フィリピンでの採材を実施した。タイ、チュラロコン大学獣医学部病理学研究室准教授アチャリア博士と共同研究をおこなうことになった。

## 8 ．研究成果の発表状況

## （1） 誌上発表

## <論文（査読あり）>

1) Une Y, Kadekaru S, Tamukai K, Goka K & Kuroki T (2008). First report of spontaneous chytridiomycosis in frogs in Asia. Dis. Aquat. Organ. 82, 157-160.

2) Une Y, Sakuma A, Matsueda H, Nakai K & Murakami M (2008). Ranavirus outbreak in North American bullfrogs (Rana catesbeiana), Japan, 2008. Emerg. Infect. Dis. 15, 1146-1147.

3) Goka K, Yokoyama J, Une Y, Kuroki T, Suzuki K, Nakahara M, Kobayashi A, Inaba S, Mizutani T & Hyatt A. D (2009). Amphibian chytridiomycosis in Japan: distribution, haplotypes and possible route of entry into Japan. Mol. Ecol. 18, 4757–4774.

4) Takano A, Goka K, Une Y, Shimada Y, Fujita H, Shiino T, Watanabe H & Kawabata H (2010). Isolation and characterization of a novel Borrelia group of tick-borne borreliae from imported reptiles and their associated ticks. Environ. Microbiol. 12, 134-146.

5) Tamukai K, Une Y, Tominaga A, Suzuki K & Goka K (2010). Treatment of spontaneous chytridiomycosis in captive amphibians using itraconazole. J. Vet. Med. Sci. 73, 155-159.

## くその他誌上発表（査読なし）>

1）宇根有美（2008）実験動物の力ビ問題 特集カエルのツボカビ症 アニテックス 20: 28-35.

2）宇根有美（2008）カエルツボカビのその後 エキゾチックペット研究会誌 10：10-14.
3）宇根有美（2009）カエルにせまるさまざまな危機 Newton 29：124.

4）宇根有美（2009）両生類のラナウイルス感染症 モダンメディア 55：11-19.

5) Masangkay S. J, Une Y & Yoshikawa Y(2009). The Silence of the Frog—due to a fungus. Animal Scene. 9, 26-31.

## （2） 学会発表

4）嘉手苅 将、中島康太、黒木俊郎、五箇公一、宇根有美：第145回日本獣医学会．(2008)「飼育下外国産カエルの自然発生性ツボカビ症の病理学的研究」

5) Une Y, Kadekaru S, Tamukai K, Goka K, Kuroki T : 26th Annual Meeting European Society of Veterinary Pathology. (2008)

「First Asian report of spontaneous Chytridiomycosis in captive frog.」

6）宇根有美：第47回日本爬虫両棲類学会.（2008）講演「カエルツボビとラナウイルス」

7）田中-上野寛子、松井久実、宇根有美、福山欣司：第47回日本爬虫両棲類学会.（2008）「カエルツボカビゲノムの微量検出法」

8）松井久実、田中-上野寛子、宇根有美、福山欣司：第47回日本爬虫両棲類学会.（2008）「日本産力エル類に対するカエルツボカビ感染実験の進捗報告」

9）宇根有美：第7回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ。（2008）講演「カエルツボカビその後とラナウイルス」

10）佐久間晶子、佐藤 宏、伊原禎雄、宇根有美：第7回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ。（2008）

11）中島康太、松井久実、宇根有美：第7回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ。（2008）「カエルツボカビ（Batrachochytrium dendrobatidis）の日本在来両生類へのリスク評価のための感染実験」

12）宇根有美：第7回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ.(2008）講演「パナマのカエルツボカビ事情」

13）宇根有美：第46回レプトスピラ・シンポジウム.（2008）講演

「カエルへの脅威は尽きない -カエルツボカビのその後と新たなる脅威-」

14）五箇公一、宇根有美、鈴木一隆、中原美理、小林亜玲、横山潤、D Hyatt Alex：第53回日本応用動物昆
15）宇根有美、佐久間晶子、中井克樹、村上賢：第147回日本獣医学会学術集会.（2009）「日本におけるウシガエル（Rana catesbiana）のラナウイルス感染症」

16）中島康太、松井久美、上野寛子、宇根有美：第147回日本獣医学会学術集会.(2009)

「カエルツボカビ（Batrachochytrium dendrobatidis）の日本在来両生類へのリスク評価のための感染実験」

17）川澄大河、宇根有美：第147回日本獣医学会学術集会．(2009)「オオサンショウウオ（Andrias japonicus）の腎芽腫の1例」

18）宇根有美：第49回獣医病理学研修会.（2009）「カエルの腎臓」

19) Une Y, Nakajima K, Taharaguchi S, Ogihara K, Murakami M : 27th Annual Meeting European Society of Veterinary Pathology. (2009)

「Ranavirus infection outbreak in the salamander (Hynobius nebulosus) in Japan.」

20）宇根有美、伊原禎雄、中島康太、佐久間晶子、稲葉修、佐藤宏：第148回日本獣医学会学術集会.(2009)「阿武隈山系トウホクサンショウウオ Hynobius lichenatus における皮下メタセルカリア症の集団発生」

21）佐藤 宏、伊原禎雄、稲葉 修、中島康太、宇根有美：第148回日本獣医学会学術集会.（2009）

「阿武隈山系トウホクサンショウウオで多発する皮膚結節の原因としての Euryhelmiscotaricensis」

22）伊原禎雄、稲葉修、佐藤宏、宇根有美：第15回野生生物保護学会.（2009）「阿武隈山地北部のトウホクサンショウウオにおける結節の発生」

23）亀田ももこ、辰巳智香、松井久実、中島康太、宇根有美、田中－上野寛子、稲葉重樹：第48回日本爬虫両棲類学会.（2009）

「純培養カエルツボカビを用いたヌマガエルに対する感染実験」

24）五箇公一、横山潤、鈴木一隆、富永篤、宇根有美、水谷知生、Jean-Marc Hero、Alex Hyatt：第48回日本爬虫両棲類学会，（2009）

「カエルツボカビ・アジア起源説の検証（その1）日本におけるカエルツボカビ多様性」

25）宇根有美：第8回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ。（2009）「両生類のラナウイルス」

26）松井久実、亀田ももこ、辰巳智香、中島康太、宇根有美、田中-上野寛子、稲葉重樹、福山欣司：第8回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ．（2009）

27）宇根有美、中島康太、田原口智士、荻原喜久美、村上賢：第8回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ。（2009）

28）中島康太、田原口智士、荻原喜久美、松井久実、村上賢、宇根有美：第8回爬虫類両生類の臨床と病
理に関するワークショップ. (2009)

「国内で発見されたウシガエルラナウイルスの在来両生類への病原性」

29）佐藤 宏、伊原禎雄、稲葉 修、宇根有美：第8回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ.(2009)

「阿武隈山系北部トウホクサンショウウオで目撃の増える Euryhelmis costaricensis による皮膚結節」

30）富永篤、五箇公一、鈴木一隆、田向健一、宇根有美：第57回日本生態学会.（2010)

「琉球列島におけるカエルツボカビの分布実態とその感染力」

31）中島康太、田原口智士、荻原喜久美、松井久美、村上賢、宇根有美：第149回日本獣医学会学術集会.(2010)

「在来両生類における実験的ウシガエルラナウイルス（RCV-JP）感染症の病理学的検索（最優秀ポスター賞受賞）」

32）高野 愛、藤田博己、角坂照貴、五箇公一、宇根有美、川端寛樹、渡邊治雄：第149回日本獣医学会学術集会.(2010)

「爬虫類および爬虫類寄生マダニより発見された新群のボレリアとその性状解析（プレリナリーセッション）」

33) Une Y, Goka K & Ohta H : 28th Meeting of the European Society of Veterinary Pathology and European College of Veterinary Pathologists. (2010)

「Origin of the world frog pandemic: Evidence from East Asia supports the novel pathogen theory.」

34）宇根有美、五箇公一、太田英利：第150回日本獣医学会学術集会．（2010）

35）佐藤暢浩、服部文乃、田原口智士、宇根有美、村上賢、原元宣：第150回日本獣医学会学術集会.(2010)「国内野生下両生類より分離されたラナウイルスの一般性状」

36）富永 篤、五箇公一、鈴木一隆、田向健一、宇根有美：第9回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ。（2010）

「中琉球におけるカエルツボカビの分布とその感染力」

（3）出願特許

特に記載すべき事項はない。

（４）シンポジウム、セミナーの開催（主催のもの）

1）第145回日本獣医学会 日本野生動物医学会 シンポジウムⅠ

「カエルツボカビ、発見から」

(2008年3月29日、麻布大学第7会场、参加者70名)

2）第7回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ。

(2008年11月8日、麻布大学8号館百周年記念ホール、参加者149名)

3）第8回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ。
(2009 年 11 月 14 日、麻布大学 8 号館百周年記念ホール、参加者 123 名)

4）第9回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ.

(2010年11月13日、麻布大学8号館百周年記念ホール、参加者161名)

（５）マスコミ等への公表・報道等

1）ABN ステーション「両生類絶滅の危機から」（2008年6月10日、長野朝日放送）

2）毎日新聞くらしナビ Pets「自然を模した空間で」（2008年6月25日、全国版）

3）朝日新聞「カエルの大量死招く ラナウイルスを警戒」（2008年11月14日、全国版）

4）共同通信社 excite ニュース「ラナウイルス感染、カエル大量死　国内初確認」(2009年2月27日)

5）西日本新聞、山陽新聞、中日新聞、東京新聞、北海道新聞、北日本新聞、岩手日報、京都新聞、静岡新聞、山梨日日新聞、山陰中央新報、河北新報、下野新聞、長崎新聞、神戸新聞、四国新聞、日本海新聞、徳島新聞、東奥日報、佐賀新聞、山形新聞、福島民報、岐阜新聞、高知新聞、大分合同新聞、宮崎日日新聞、共同通信47NEWS、秋田さきがけ新報さきがけ On The Web、共同通信社 Infoseek ニュース「ウシガエルにラナウイルス感染 国内初確認、池で大量死」（2009年2月27日）

6) The Japan Times [Frogs at risk after ranavirus found in pond] (2009年2月28日)

7）朝日新聞「カエルに新たな脅威「ラナウイルス」国内の池で初確認」(2009年3月1日)

8）朝日新聞「海外で猛威 ラナウイルス カエル大量死 国内確認」（2009年3月1日）

9）朝日新聞「ラナウイルス感染 カエル大量死確認」（2009年3月2日）

10）朝日小学生新聞「ラナウイルス」(2009年3月3日)

11）毎日新聞「カエル大量死「ラナウイルス」」(2009年3月6日)

12）読売新聞「国内のカエルにラナウイルス」（2009年3月8日）

13）CBC ラジオ多田しげおの気分爽快「カエル大量死！ラナウイルスとは？」(2009年3月17日)

14）ABN 長野放送「ラナウイルスについて」（2009 年 4 月 2 日）

15) JR トレインチャンネル「知ってる？サイエンス 動物の病気を捉えるハンター、獣医病理学者」(2009年4月30日)

16) JR トレインチャンネル「知ってる?サイエンス カエルの危機」(2009年4月30日)

17）文化放送 大村正樹のサイエンスキッズ「ヒトの体の中で繰り広げられている闘い」(2009年5月23日,30日)

18）フジテレビ 熱血！平成教育学院 「ツボカビ」（2009年6月7日）

19）読売新聞「生態系脅かす大量死」（2009年6月11日）

20）月刊ポプラディア「ラナウイルス」（2009年8月，ラナウイルス顕微鏡写真提供）

21）朝日新聞「電解質の流れが阻害され心不全」（2009年11月3日）

22）朝日新聞「ラナウイルス サンショウウオも感染」（2009年11月24日）

23）河北新報「「山椒魚は悲しんだ」感染症 福島で確認」（2010年4月17日）
24）読売新聞「菌に罪はない」（2010年5月6日）

25）しんぶん赤旗「怖〜い カエルツボカビ」(2010年5月10日)

26）朝日小学生新聞「ラナウイルスでカエルなど大量死」（2010年6月19日）

## (6) その他

1）宇根有美：第7回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ教本『AMPHIBIANS』（全188ページ）2008年11月8日発行

発行先 爬虫類・両生類の臨床と病理のための研究会

2）宇根有美：第8回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ教本『SNAKES』(全193ページ)

2009年11月14日発行

発行先 爬虫類・両生類の臨床と病理のための研究会

3）宇根有美：平成22年 麻布大学同窓会愛知県支部総会. (2010) 講演「ツボカビ症」

4）宇根有美：第9回爬虫類両生類の臨床と病理に関するワークショップ教本『LIZARDS』（全190ページ）2010年11月13日発行

発行先 爬虫類・両生類の臨床と病理のための研究会
# 指 名 结 果 書

件名京都大宮御所御殿棟耐震補強工事

指名通知日 平 成 26 年 3 月 13 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	建築	B
2	B	建築	B
3	C	建築	B
4	D	建築	B
5	E	建築	B
6	F	建築	C
7	G	建築	C
8	H	建築	C
9	I	建築	C
10	J	建築	C

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H25.26年度)建設工事競争参加有資格業者	・建築一式工事	5995
・B, Cランク
希望する地域	・近畿	1659
指名競争入札参加業者数	10

入札日平成26年3月31日（予定）
入札·契約調書

1	契約年月日	平成26年4月7日
2	契約業者名	株式会社安井夢工務店
3	契約業者の住所	京都府向日市上植野町馬立2番地4
4	工事件名	京都大宮御所御殿棟耐震補強工事
5	工事場所	京都市上京区京都御苑(京都大宮御所内)
6	工事種別	建築一式工事
7	工事概要	耐震工事その他
8	工期(自)	平成26年4月8日
9	工期(至)	平成27年3月10日
(税込み)	(税抜き)	落札率
10	予定価格	84,434,400円	78,180,000円	99.77%
11	入札金額	84,240,000円	78,000,000円
12	入札結果	下表のとおり
順(入札者)	第1回入札金額(円)	第2回入札金額(円)	第3回入札金額(円)	第4回入札金額(円)	第5回入札金額(円)
1(株)安井夢工務店	78,000,000
2(株)熊倉工務店	84,400,000
3伸和建設(株)	85,300,000
4(株)上宗建設	85,800,000
5社寺建築·(株)木澤工	86,000,000
6(株)西澤工務店	86,450,000
7(株)大滝工務店	89,000,000
8(株)前田英工務店	89,000,000
9(株)アラキ工務店	90,000,000
10(株)大亀工務店	94,500,000
順(入札者)	第6回入札金額(円)	第7回入札金額(円)	第8回入札金額(円)	第9回入札金額(円)	第10回入札金額(円)
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# 指 名 结 果 書

件名修学院離宮まつ手入その他工事

指名通知日 平 成 26 年 3 月 20 日

指 名 業 者

指 名 業 者	備 考
1	A	造園	A
2	B	造園	A
3	C	造園	A
4	D	造園	A
5	E	造園	B
6	F	造園	B
7	G	造園	B
8	H	造園	B

指名理由

指名基準	条件	対象業者数
内閣府 (H25.26年度)建設工事競争参加有資格業者	・造園工事	5088
・A, Bランク
希望する地域	・近畿	3619
指名競争入札参加業者数	8

入札日（予定）