Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
精密ろ過した後、紫外線照射（セン特殊光源，UZ40TMR）した海水を水槽容量の2倍を1日に換水する量で注水し、弱いエアーレーションを施した。餌料はパブロバPavlova lutheriを、 $ 3\times10^{4} $ cells/mlの濃度になるように1日1回給餌した。幼生の成長を調べるために、孵化後2日目から16日目まで幼生の殻長を毎日30個体測定した。また、着底初期稚貝は、砂を敷き詰めた着底水槽で育成し回収するとともに、愛知県・六条潟で採集した天然稚貝も用いた。

## b 貧酸素耐性試験

貧酸素耐性試験は、種苗生産に合わせて、平成22年度（2010年度）と平成23年度（2011年度）は春季と秋季の2回行った。平成24年度（2012年度）は春季のみ行った。

貧酸素耐性実験は、以下のように実施した。すなわち、2つの200Lポリプロピレン製タンク内の精密ろ過海水に空気と窒素を別々に曝気した海水（それぞれ、DO 100%海水及びDO 0%海水という）を定量送液ポンプで混合して掛け流す流水式連続曝露とした（図(1)-2）。気密性を高めつつDOの低濃度実験区を安定的に再現するために、ア.5Lのプラスチック容器を試験水槽として使用して換水率を高めるとともに、イ.天然ゴムパットで表面を覆い、且つ、ウ.通気性が低いファーメドチューブを継ぎ目なしで使用した（図(1)-2）。その結果、流水条件でも低DOの実験区（1 mg/L以下の貧酸素実験区）を安定して再現することができるようになった。さらに、電磁弁とタイマーを組み合わせて夜間にDO 0%の母水槽に窒素を定期的に曝気させ、母水槽のDOをより低いレベルで安定的に維持させるよう改良を図った（図(1)-3）。

試験水槽（実験区）は、春季実験と同様に、6個（6区）とした。試験海水の通水量（流速）は約30L／試験水槽／日とした。また、これら6個の試験水槽は外水槽内に設置され、水温が25℃となるように設定・制御された。

各試験水槽に7つの塩化ビニル製円筒ケース（両端をφ50μmのメッシュで覆ったもの：図(1)-2）を設置し、それぞれのケースに、ベリジャー幼生約20～100個体程度を収容した（但し、後述するように、7つの塩化ビニル製ケースのうち、3つは24時間後あるいは96時間後の取り上げ・ホルマリン固定用*、残り4つは24時間後、48時間後、72時間後及び96時間後の取り上げ・実体顕微鏡観察用とした）。

また、ベリジャー幼生の分注法は、操作・取扱時の幼生の損傷を最小限に抑えるため、攪拌して分布密度が均一となるようにした大型ビーカーの中から50mLビーカー及び10mLスピッツ管を用いて海水とともに試験水槽へ分注した（実際に収容されたホルマリン固定用の幼生は概ね100～200個体程度、実体顕微鏡観察用はいずれも30～60個体程度であった）。試験期間は、原則として96時間とし、試験開始前にパブロバを与え、試験期間中は無給餌とした。

所定の時刻に取り上げた塩化ビニル製円筒ケースは、クロレラ高密度海水（50万cells/cm³の密度）中に1時間静置し、ベリジャー幼生にクロレラを摂取させた（体内に取り込んだクロレラを観察することによる簡易生死判定法の検討のため）。この後、実体頭微鏡観察用の塩化ビニル製円筒ケース以外は3%中性ホルマリンで固定後、冷蔵庫で保存し、後日、光学頭微鏡で検鏡した。実体頭微鏡用試料は、試験終了後直ちに実体頭微鏡により幼生の生死を判定し、クロレラの取り込み状況も調べた。ホルマリン固定は、1回目は全て24時間後、2回目はD型のみ24時間後でアンボ期以降は96時間後とした。
図(1)-2 アサリ浮遊幼生の貧酸素耐性を調べる流水式の試験装置

図(1)-3 電磁弁とタイマーを組み合わせた改良型の流水式試験装置

## c 水柱実験によるアサリ幼生貧酸素応答試験

アサリ浮遊幼生は、後述するように、斃死の前段階として、遊泳停止の行動をとることが明らかとなった。また、海域分布調査結果（後述）では、海域底層に貧酸素水塊が発生すると、アサリ
リ浮遊幼生は底層で分布数が少なくなり、底層より上層に多く分布していた。これを受けて、アサリ浮遊幼生が貧酸素水の影響を受けて取る行動を、忌避、遊泳停止からの沈降、斃死の3つのパターンから把握することとし、シミュレーションによる貧酸素影響評価に用いるアサリ幼生の貧酸素応答式を得るため、水柱実験を行った。

密度成層水柱による浮遊卵の比重測定法（Coombs，1981；田中，1991）に準じて、斉藤ほか（2002），石田ほか（2005）が実施した塩分勾配作製手法を用いてDO勾配を作製した。石田ほか（2005）によると、幼生はD状期の初期には一旦やや高塩分層に分布し、その後アンボ期からフルグロウン期にかけて次第に低塩分層（塩分21-23付近を中心とする層）へ浮上する傾向を強めることが報告されている。そこで、D状期では分布の中心に近い塩分層が、アンボ期からフルグロウン期では浮上過程の塩分層が低DOとなるように、全体の塩分20-28のうち塩分24-28を目処に貧酸素層とした。塩分およびDO勾配を作成する実験装置を図(1)-4に示した。円筒ガラスシリングー（内径50 mm，高さ800 mm）に近いフラスコには塩分20の海水を、シリングーから遠いフラスコには塩分30の海水をそれぞれ用意し曝気を施した。連結したこの2つのフラスコから、ぜん動ポンプ（Iwaki, PST-100）で円筒シリングーに海水を注入した。この際、曝気を空気から窒素ガスへ切り替えていき、最後に円筒シリングーの底に低DOの海水を注入することにより、DO勾配を作製した。空気から窒素ガスへの切り替えのタイミングは、鉛直方向に3等分したシリングーへの海水の注入量を目安とし、1段目の注入までは空気のみの曝気、2段目の注入までは空気と窒素ガスの混合曝気、3段目の注入は窒素ガスのみの曝気と連続して変化させた。ここでは、底層のDOが0近くから飽和に近くなる範囲の間に、3つの成長段階でそれぞれ8実験区（A区からG区と対照区）を作製した。対照区は全量を空気の曝気とし高濃度区とした。浮遊幼生は、明条件と暗条件で塩分選択行動が変わらない（石田ほか，2005）ことから、恒温室内を暗条件として実施した。また、幼生の水温ストレスを避けるため、飼育水温に近い23℃に室温を設定した。

DO成層の崩壊を避けるため、円筒シリンダーの水面からピペットを用い静かに幼生を注入し、24時間後の幼生の鉛直分布を調べた。幼生の取上げは、試験開始24時間後に予め設置したガラス管を用いて、底層からサイフォンで100 mlずつ13回採取した。なお、水面から1層、2層と順に命名し、最下層を13層とした。採取した海水は、直ちにDO（東亜ディーケーケー株式会社製，

ポータブル溶存酸素計DO-31P型）と塩分（東亜電波工業株式会社製，WM-22EP）を測定した後、3%中性ホルマリンで固定し、後日、幼生数を計数した。この幼生数を実験に供した全幼生数で除したものを浮遊率とした。

本研究では、低DOに対するアサリ浮遊幼生の行動影響の指標として、遊泳を停止してシリンダーの底に沈降する行動の多寡を判断基準にした。そこで、全ての海水を採取した後、シリンダーの底に沈降した幼生を培養水と同様の海水で洗浄して回収し、直ちに実体顕微鏡下

図(1)-4 アサリ浮遊幼生シリンダー実験装置
で生死別に幼生を計数した。アサリ浮遊幼生は、殻が半透明で内容物が透けて見えることから、沈降した幼生を観察し、繊毛活動が有り内蔵塊が縮動しているものを生存個体、動かないものを斃死個体とした。なお、1シリンダーあたり、1,977-4,333個体の幼生を使用した。

## 3 ）海洋生物幼体の貧酸素応答試験

貧酸素水塊に遭遇した海産生物の幼体が斃死するまでに忌避を含めた何らかの応答を示すと考えられるが、詳しい知見はきわめて少ない。そこで、本研究では、海産生物幼体が貧酸素水塊に遭遇した際の行動の変化を定量的に調べ、比較できるような試験系の構築を試みた。当該実験には、夏季に出現する貧酸素水塊に曝される可能性があるものとして、アサリ(Ruditapes philippinarum)とヨシエビ(Metapenaeus ensis)、並びにサザエ稚貝(Turbo cornutus)を供試生物とした。アサリ幼生は孵化後12日(アンボ〜フルグロウン期)のものを、ヨシエビ幼生は孵化後7日(ミシス期)、14日(ポストラーバ4日齢期(以降、P4期とする))、25日（ポストラーバ15日齢期(以降、P15期))のものを、サザエ稚貝は孵化後98〜107日のものをそれぞれ用いた(図(1)-5)。

図(1)-5 供試生物

A, アサリ幼生(アンボ期) B, サザエ稚貝,

C, ヨシエビ幼生(ミシス期) D, ヨシエビ幼生(P4期)

E, ヨシエビ幼生(P15期)

本実験では、Tanaka(1990)による連続密度勾配カラム（高さ約85cm）の形成過程に $ N_{2} $ ガスを加えることで密度勾配と同時にDO濃度勾配を作成した(図(1)-6)。実験には、塩分のみ勾配をつけたカラム(対照区)と塩分とともにDO濃度にも勾配つけたカラム(実験区)を用い、カラム内の供試生物の分布から貧酸素応答について検討した。実験は25±1℃、表層の光量約100μmol/m²/sec、12時間明期：12時間暗期の条件で行った。塩分は4つの密度球(密度1.0150、1.0175、1.0200、1.0225g/cm³)をカラム内に入れ、水温一定の条件下で密度から推定した。また、DO濃度は溶存酸
素計(オキシガード社製)で水深10cmごとに計測した。DO濃度の計測時間はヨシエビ幼生では8時間間隔で、3回目のサザエ稚貝では6時間ごとに、それ以外では実験前と実験後で計測した。なお、アサリ幼生は25個体、ヨシエビ幼生は15個体、サザエ稚貝は10個体を各濃度勾配カラムに加え、注入30分後から3時間ごとに分布水深の観察を行った。

図(1)-6 塩分勾配カラム（対照区）と塩分・酸素濃度勾配カラム（実験区） 対照区：塩分のみの勾配、実験区：DO濃度および塩分勾配

対照区と実験区において $ \chi^{2} $ 検定により分布に有意な差(P<0.05)があるかどうか推定した。また、底層以浅のDO濃度が分布に影響を及ぼしているかを検討するため、底層を除いてさらに検定を行った。すなわち、分布の有意差(P<0.05)が見られなくなる水深まで検定を行い、その境界域のDO濃度を生物が忌避する上限値とした。なお、 $ \chi^{2} $ 検定の方法について、ミシス期幼生は各層10cmごとに区切り、層別の分布数を対照区と実験区で比較した。この際に、対照区に著しく分布の偏りがある場合には検定の信頼性が損なわれる恐れがあるため（石居，1985）、「集中が見られる層」と「それ以外の層」の2層に分けた。なお、本実験では「底層」に分布しているとは、生残する幼生がカラム底にいる状態のことを指す。

### 4. 結果及び考察

## （１）マコガレイ稚魚の貧酸素耐性

マコガレイ当歳魚（5ヶ月齢）のDO濃度別斃死率を片対数でプロットし、直線を当てはめて半数致死濃度（LC_{50}）を推定した結果、24時間及び1時間（それぞれ、24h及び1h）LC_{50}が1.5 mg/L及び1.1 mg/Lとなった（図(1)-7）。1歳魚の24h LC_{50}は0.77 mg/Lであったことから、当歳魚（5
ヶ月齢）の方が低酸素ストレスに弱いと考えられる。また、貧酸素条件下では、生きていてもほとんどの個体が仰け反り、呼吸数（鯆蓋の開閉速度）が増すことから、生残した個体が健全に成長し、個体群に加入できる可能性は小さいと考えられる。

図(1)-7 マコガレイ 当歳魚のDO別斃死率

## (2) アサリ生活史初期個体の貧酸素耐性

## 1 ）アサリの種苗生産

10～15 個体/mLの収容密度で幼生の飼育を開始した。幼生の生産例として、平成24年度（2012年度）の成長と飼育水温の変化を図(1)-8に示した。D状期幼生（105μm）、アンボ期幼生（133μm）、フルグロウン期幼生（177μm）を貧酸素影響実験及び貧酸素応答試験に供した。その後も飼育を継続し、殻長346μmの着底初期稚貝を貧酸素影響実験に供した。D状期からフルグロウン期（孵化後16日目）までの生残率は35%で、30L水槽を用い10個体/mLの収容密度で実施した幼生飼育事例（上妻，1994）の収容15日目の生残率21%と比較してもほぼ順調な歩留りであった。また、孵化後3日目（110.1±5.5μm）から15日目（177.9±13.1μm）までの日間成長量は5.7μm/dayであった。上妻（1994）の孵化後3日目（114±1.6μm）から15日目（185±19.4μm）までの日間成長量は5.9μm/dayであったことから、本研究のアサリ浮遊幼生の生産における成長はほぼ順調であった。なお、平成22年度春季・秋季、23年度春季1回目・春季2回目・秋季の歩留りは各々67%、58%、28%、37%、12%であり、平成23年度秋季以外はほぼ順調な生産であった。

種苗生産に供試する親貝の生理状態などに左右されるためか、種苗生産によって得られた浮
遊幼生及び着底初期稚貝の生残率には相当のばらつきが生じることが、アサリ種苗生産の経験上、知られており、また、本研究でも記録されている。浮遊幼生及び着底初期稚貝の健全性に依存して、これらを用いて行う貧酸素耐性試験の結果が変動することは明らかである。そのため、一連の試験の品質管理のため、フルグロウン期幼生の時点での生残率が21％以上の場合に限り、その幼生等を用いた貧酸素耐性試験結果を有効あるいは妥当と判断し、フルグロウン期幼生の時点での生残率が21％未満の場合、その後の全ての試験結果を棄却することが望ましい。ここでは、種苗生産時にフルグロウン期までの生残率が21％を上回ったもののうち、平成24年度（2012年度）（春季）の種苗生産結果と、その後の貧酸素耐性試験結果を記述する。

図(1)-8 アサリ浮遊幼生の殻長と飼育水温の変化

アサリ初期生活史段階の貧酸素影響評価を目的に、標準試験法を確立しデータを得るべく、試験用アサリ幼生の飼育を行い、D状期、アンボ期、フルグロウン期の各浮遊生活史段階及び着底初期稚貝を貧酸素耐性試験に供した。

## 2 ）貧酸素耐性試験

実体顕微鏡による観察結果に基づいて、D型幼生、アンボ期幼生、フルグロウン期幼生及び着底初期稚貝のDO－斃死率関係を調べた。但し、殻のみの数は斃死率の算出の際に除外した。即ち、

斃死率= $ \left\{\left(\frac{\text{斃死個体数}}{\text{可動個体数}+\text{瀕死個体数}+\text{斃死個体数}}\right)\right\}\times100 $ として算出した。また、実体顕微鏡による生体試料観察に基づくベリジャー幼生の生死判定結果は以下の通りとした。

生存：自由遊泳、回転、繊毛運動、内臓塊の収縮等（但し、自由遊泳はおろか、その場での回
転運動もできず、ほぼ静止した状態でありながら、繊毛運動あるいは内臓塊の収縮等が見られたものは「生存」個体として算定したが、外見上、健常とは見なせないので「瀕死」として併せて記録した）。

斃死：上記のいずれにも該当しないもの。

殻のみ：軟体部が見られないもの

フルグロウン期幼生についてもこれに準じ、斧足による移動等が観察された個体も「生存」とした。

種苗生産により供給されたアサリ浮遊幼生（D状期、アンボ期、フルグロウン期の各浮遊幼生）を用いて貧酸素耐性試験を実施した。平成24年度は、前述のように、電磁弁とタイマーを組み合わせて夜間にDO 0%の母水槽に窒素を定期的に曝気させ、母水槽のDOをより低いレベルで安定的に維持できるよう、流水式実験装置の改良を図った（図(1)-3）。その結果、平成23年度までは1 mg/L以下であったDOの最低試験濃度を10分の1程度に低下させ、0.1 mg/L以下のレベルでもDOを安定的に再現して実験することができた（表(1)-1）。本試験で得られた結果からアサリ幼生の斃死率曲線を得た（図(1)-9）。また、これに基づいて、片対数グラフでの直線回帰により、アサリ浮遊幼生及び着底初期稚貝の半数致死濃度（LC_{50}）を推定した（表(1)-2）。

なお、D型幼生、アンボ期幼生、フルグロウン期幼生及び着底初期稚貝におけるクロレラ摂食率の観察結果及び実体顕微鏡によるそれぞれの生残率の観察結果との比較から、低DO区ほどクロレラの摂食率が低く且つばらつきが大きくなることがわかった。概ね、摂食率と生残率との関連付けは可能と考えられたが、浮遊幼生は貧酸素ストレスにより摂食率が低下し、やがて餓死に至る可能性もあり、摂食率に基づく貧酸素による斃死率の推定には注意を要する場合がある。

D型幼生

表(1)-1 各試験区における DO 実測データ

貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	コントロール
mean	0.15	0.61	1.18	2.35	3.96	5.10
s.d.	0.10	0.26	0.19	0.21	0.63	0.41

貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	コントロール
mean	0.06	0.28	1.03	2.22	3.55	5.02
s.d.	0.03	0.05	0.19	0.26	0.26	0.16

貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	コントロール
mean	0.08	0.21	1.30	2.25	3.87	4.88
s.d.	0.07	0.13	0.75	0.36	0.60	0.17

貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	貧酸素試験区	コントロール
mean	0.05	0.11	0.86	1.40	2.76	4.13
s.d.	0.03	0.04	0.09	0.26	0.19	0.53
図(1)-9 アサリ幼生のDOに対する斃死率曲線

表(1)-2 DOに対するアサリ浮遊幼生及び着底初期稚貝の半数致死濃度（LC_{50}）

水温	24h	48h	72h	96h	120h
D型	25℃	< 0.15	0.4	0.5	0.9	no data
アンボ期	25℃	< 0.06	0.1	0.15	0.5	no data
フルグロウン期	25℃	< 0.08	< 0.08	0.2	0.4	0.5
着底稚貝	25℃	< 0.05	< 0.05	< 0.05	< 0.05	< 0.05

*赤字は片対数グラフによる直線回帰で得た推定値であることを示す。

## 3 ）水柱実験によるアサリ幼生貧酸素応答試験

塩分、DOおよび幼生の鉛直分布を成長段階ごとに図(1)-10に示した。塩分は、成長段階毎の各実験区とも1層（20.4-22.3）と13層（26.5-28.3）の間は逆転がなく、ほぼ均等な密度勾配を持つ成層状態が再現された。DOは、1層および13層がそれぞれD状期幼生では5.0-5.9 mg/Lおよび0.69-5.34 mg/Lの幅、アンボ期幼生では5.13-5.99 mg/Lおよび0.7-5.4 mg/Lの幅、フルグロウン期幼生では3.76-5.97 mg/Lおよび0.79-4.72 mg/Lの幅にあった。対照区の塩分成層に応答した幼生の分布は、D状期幼生では全体の92.1%が浮遊し、塩分26.8-28.3（12,13層）の下層に43.1%と密度が高くなった。アンボ期幼生は全体の90.2%が浮遊し、塩分25.9-27.9（11-13層）の下層に46.4%が分布し、13層を頂点としたなだらかな分布となった。フルグロウン期幼生は全体の94.9%が浮遊し、そのうち塩分21.2の1層に12.3%が分布した。
図(1)-10 アサリ浮遊幼生発育段階毎のDO濃度、塩分及び幼生の鉛直分布（△：DO濃度、□：塩分、○：幼生（上層）、●：幼生（下層））

それぞれの対照区で幼生の密度が高い層（下層：以下，下層と称する。下層より上を上層と称する。）と同じ層のDOを平均した。下層の平均DOは、D状期幼生では0.73-5.54 mg/L、アンボ期幼生では0.61-5.62 mg/L、フルグロウン期幼生では0.87-4.78 mg/Lの幅にあった。沈降率は、D状期幼生では下層の平均DO 2.35-5.54 mg/Lでは6.7-8.3%と低かったが（図(1)-10-F,G,Con）、1.39 mg/Lでは42.0%と高くなり（図(1)-10-E）、0.73-1.02 mg/Lでは80.9-99.5%とさらに高くなった（図(1)-10-A～D）。アンボ期幼生では、下層の平均DO 3.12-5.62 mg/Lでは6.7-10.8%と低かったが（図(1)-10-D～G,Con）、0.61-1.28 mg/Lでは76.1-99.6%と高くなった（図(1)-10-A～C）。フルグロウン期幼生では、下層の平均DO 2.03-4.78 mg/Lでは5.1-20.5%と低かったが（図(1)-10-E～G,Con）、0.87-1.09 mg/Lでは85.0-96.8%と高くなった（図(1)-10-A～D）。沈降中に占める斃死率は、D状期幼生では下層の平均DO 5.54 mg/Lでは16.5%と低かったが（図(1)-10-Con）、2.55 mg/Lでは53.0%と高くなり（図(1)-10-G）、0.73-2.35 mg/Lでは70.6-100%とさらに高くなった（図(1)-10-A～F）。アンボ期幼生では、下層の平均DO 3.12-5.62 mg/Lでは5.2-16.8%と低かったが（図(1)-10-D
～G,Con）、1.28 mg/Lでは20.7％と高くなり（図(1)-10-C）、さらに0.61-0.70 mg/Lでは71.8-73.8％と高くなった（図(1)-10-A,B）。フルグロウン期幼生では、下層の平均DO 2.71-4.78 mg/Lでは4.3-11.9％と低かったが（図(1)-10-F,G,Con）、0.87-2.03 mg/Lでは28.3-49.2％と高くなった（図(1)-10-A～E）。

成長段階毎に各データから対照区の沈降率を差し引いて、沈降率（Y：%）とDO（X：mg/L）の関係を図(1)-11のグラフに示した。なお、沈降率がマイナスの値になる場合はゼロとした。成長段階順に、

$$ \mathrm{Y}=\frac{100}{1+\left(\mathrm{X}/1.26\right)^{5.16}}\quad\mathrm{Y}=\frac{100}{1+\left(\mathrm{X}/1.45\right)^{3.88}}\quad\mathrm{Y}=\frac{100}{1+\left(\mathrm{X}/1.43\right)^{5.17}} $$

の関係式が得られた。D状期幼生、アンボ期幼生およびフルグロウン期幼生の半数沈降濃度は、1.26 mg/L・45 mg/L・43 mg/Lであった。D状期幼生、アンボ期幼生およびフルグロウン期幼生の各沈降率は、順にDO 3 mg/Lでは1.1%、5.6%、2.1%、DO 2 mg/Lでは8.5%、22.1%、15.0%、DO 1 mg/Lでは76.8%、80.7%，86.4%であった。このように、同成長段階ではDOが低下するに従って沈降率は上昇し、DOが2 mg/Lから1 mg/Lに低下すると、成長段階順に、9.0倍、3.7倍、5.8倍と急上昇した。

成長段階毎に各データから対照区の沈降中に占める斃死率を差し引いて、沈降中に占める斃死率（Y：%）とDO（X：mg/L）の関係を図(1)-11のグラフに示した。なお、沈降中に占める斃死率がマイナスの値になる場合はゼロとした。成長段階順に、

$$ \mathrm{Y}=\frac{100}{1+\left(\mathrm{X}/1.88\right)^{1.60}}\quad\mathrm{Y}=\frac{100}{1+\left(\mathrm{X}/0.78\right)^{3.40}}\quad\mathrm{Y}=\frac{100}{1+\left(\mathrm{X}/0.49\right)^{1.59}} $$

の関係式が得られた。D状期幼生、アンボ期幼生およびフルグロウン期幼生の沈降中に占める半数致死濃度は、1.88 mg/L、0.78 mg/L、0.49 mg/Lであった。D状期幼生、アンボ期幼生およびフルグロウン期幼生の各沈降中に占める斃死率は、順にDO 3 mg/Lでは32.2%、1.0%、5.4%，DO 2 mg/Lでは47.6%、3.8%、9.8%、DO 1 mg/Lでは73.3%、29.7%，24.6%となり、同成長段階ではDOが低下するに従って上昇した。D状期幼生の沈降中に占める斃死率は高DOから高く、他の成長段階と比較して2.8-32.2倍高かった。また、DO 1 mg/Lの沈降中に占める斃死率は、幼生の成長に伴って減少した。このことは、貧酸素耐性が幼生の成長に伴って高まるという、貧酸素耐性実験の結果（堀口ほか，2012）と符合した。

アンボ期幼生のC区およびフルグロウン期幼生のA区など一部において上層への忌避の可能性がある行動がみられたが、それ以外はいずれの成長段階においても、下層の浮遊率が低下すると上層の浮遊率も低下しており、上層への忌避行動は

図(1)-11 下層のDO濃度に対するアサリ浮遊幼生の沈降率及び沈降中の斃死率
みられなかった。以上の浮遊と沈降の行動から、幼生は塩分に応答して浮遊するが、DO 2 mg/Lを切るあたりから、浮遊率が低下し、沈降率が急上昇して、沈降中に占める斃死率も上昇するなど、幼生の行動に大きな影響が出ると考えられた。また、観察から約3時間で鉛直方向の分布がほぼ形成され、その後の変化も少ないことから、一旦沈降した幼生はほぼ再浮上せずに斃死に至ると考えられた。

貧酸素水塊が形成される時期に、アサリ浮遊幼生の生息密度が底層で低下し、底層よりも上層に高密度に分布する現象は、貧酸素水塊が形成される水深4-5mの躍層付近から下に分布する幼生が貧酸素水に接触し沈降して斃死し、躍層より上部に分布する幼生が貧酸素水に接触せずにたまたま生き残ったことを表していると考えられた。従って、貧酸素水塊が発達した海域において、躍層付近から下を浮遊する幼生は、貧酸素水塊のDO高低に強い影響を受け、躍層より上部に分布する幼生の一部に貧酸素水塊から忌避した個体の可能性はあるものの、湧昇流などの物理的な影響を受けない限り、沈降し再浮上せずに斃死に至ると見るのが妥当と思われた。

幼生への行動影響からすると、沈降率がDO 3 mg/Lから上昇し始めることから、海域における底層DOは3 mg/L以上が望ましい。今回は、アサリ浮遊幼生の塩分選択性を基に、塩分20-28の範囲でDOに対する影響実験を行ったが、今後は海域と同レベルの塩分で実験を行い、忌避行動についても確認する必要がある。特に、フルグロウン期幼生は、沈降中に占める斃死率が他の成長段階と比較して低い、つまり、貧酸素水に対する耐性が高まることから、沈降後の再浮遊についても観察が必要である。

## 4 ）海洋生物幼体の貧酸素応答試験

上層(表層～水深30cm)と中層(水深30cm～60cm)、下層(60cm～カラム底)の3層に分け、供試生物の分布傾向について検討した。

## アサリのアンボ期幼生(図(1)-12)

アサリのアンボ期幼生は、塩分勾配をつけたカラム（対照区）の上層への集中が見られ、低塩分(21～23psu)層にアンボ期幼生は集中するという既往知見（石田ほか,2005）と一致した。一方、全体の18.4%が下層に分布した。塩分およびDO濃度の勾配をつけた実験カラムでは、実験区1(底層DO濃度：3.5～3.6mg/L)、実験区2(底層DO濃度：3.0～3.2mg/L)で分布状況に対照区と大きな違いが見られず、下層に各々全個体数の21.7%と14.5%が分布した。貧酸素化した実験区3(底層DO濃度：2.0～2.3mg/L）、実験区4(底層DO1.7～1.9mg/L)では下層の分布割合が8.2%と4.4%となり、下層における値が減少した。このように、貧酸素化するに伴って、下層(水深60cm～カラム底)の分布率が減少する傾向が見られた。

$ \chi^{2} $ 検定を用いて統計的な検討(P < 0.05)を行ったところ、2つの酸素・塩分勾配カラム(底層DO濃度：1.7～1.9mg/L、底層DO濃度：2.2～2.3mg/L)において個体数の分布に対照区と有意差(P < 0.05)が見られた。

## b ヨシエビ幼生

ヨシエビのミシス期、ポストラーバ期幼生の貧酸素応答について検討した。また、ポストラーバ期については、P4期とP15期について比較し、成長による貧酸素応答の違いを検討した。なお、実験中にカラムのDO濃度が大きく低下したため、ミシス幼生とポストラーバ幼生(P4)は実験開始後16時間目まで、ポストラーバ幼生(P15)は8時間目までを検討対象とした。
## [ミシス期] (図(1)-13)

ミシス幼生は対照区で中層(塩分27.1～30.7psu)に集中し、全個体の52%が分布した。また、実験区においても同様の傾向が見られ、約50%の個体がこの層に集中した。一方、下層における分布割合は対照区において19.8%であったのに対し、実験区3(底層DO濃度：2.0～2.3mg/L)と実験区4(底層DO濃度：0.9～1.6mg/L)では、各々10.3%と9.0%で半分以下に減少した。 $ \chi^{2} $ 検定によりヨシエビミシス幼生の忌避濃度2.1～2.6mg/Lが得られた。

図(1)-12 アサリ幼生(アンボ期)における上層・中層・下層の分布割合 各実験区下の数値は底層のDO濃度(mgO₂/L)

図(1)-13 ヨシエビ幼生(ミシス期)における上層・中層・下層の分布割合 各実験区下の数値は底層のDO濃度(mgO_{2}/L)

## [ポストラーバ期](図(1)-14及び図(1)-15)

ポストラーバ幼生(P4)は対照区および実験区ともに下層に偏在し、分布割合は71.9%に達した。一方、実験区1(底層DO濃度：2.7-3.1mg/L)、実験区2(底層DO 2.4～2.7mg/L)、実験区3(底層DO 2.0～2.3mg/L)、実験区4(底層DO 1.6～1.7mg/L)における下層の分布は各々62.5、48.9、43.0、26.1%であり、底層が貧酸素化するに従ってヨシエビ幼生の分布数が減少する傾向が見られた。
ポストラーバ幼生P4期から11日経過したポストラーバ幼生P15期の対照区では、下層において全個体の69％が分布し、この内カラム底に60％が偏在した。実験区1(底層DO濃度：1.2-3.1mg/L)、実験区2(底層DO濃度：1.3-2.7mg/L)、実験区3(底層DO濃度：1.3-2.3mg/L)では、下層の分布割合がそれぞれ71.1、66.7、73.3％となり、3者に大きな違いは見られなかった。一方、実験区4(底層DO濃度：1.2-1.7mg/L)では分布割合が41.9％と値の減少が見られた。

ポストラーバ幼生がカラム底に偏在することから、「底層」と「底層以外」の2層に分け、対照区と比較・検討した。その結果、ポストラーバ幼生のP4期は実験区2、実験区3、実験区4で対照区と有意な差(P<0.05)が認められ、忌避するDO濃度の上限値として2.4～2.7mg/Lが得られた。また、ポストラーバ幼生のP15期は実験区2のみで対照区と有意差(P<0.05)が認められたことから、忌避濃度の上限値はDO 1.2～1.7mg/Lと考えられた。

図(1)-14 ヨシエビ幼生(ポストラーバ期 P4) における上層・中層・下層の分布割合 各実験区下の数値は底層のDO濃度(mgO_{2}/L)

図(1)-15 ヨシエビ幼生(ポストラーバ期 P15) における上層・中層・下層の分布割合 各実験区下の数値は底層のDO濃度(mgO₂/L)

## c サザ工程貝(図(1)-16)

対照区では、カラム底から水面に向かって上方移動する稚貝が多く、さらに水面の直上に分布する個体も見られた。この傾向は総ての実験（対照区）において確認された。DO濃度の鉛直勾配をつけた実験区では、カラム底に留まる個体が増加するケースが見られ、1回目の実験区1(底
層DO濃度：1.1～2.2mg/L)では83.7%、2回目の実験区1(底層DO濃度：2.3～2.4mg/L)と実験区2(底層DO濃度：1.6～1.7mg/L)ではそれぞれ全体の40.0%と55.7%がカラム底に分布した。一方、3回目の実験区1(底層DO濃度：4.1～4.3mg/L)、実験区2(底層DO濃度：3.6～3.7mg/L)、実験区3(底層DO濃度：2.4～3.0mg/L)におけるカラム底の分布割合は低下し、各々12.0、10.0、0%だった。なお、これら稚貝の生死を実験終了時に確認したところ、全実験において稚貝の生残が確認された。そのため、死亡したためにカラム底から動かなかったのではないことがわかる。

稚貝の上方移動に及ぼす貧酸素水の影響を見るために「底層」と「底層以外」に分布した個体に分け、対照区との有意差(P<0.05)を検討した。その結果、底層DO濃度2.3～2.4mg/L以下では貧酸素が上方運動を抑制することが示唆された。

図(1)-16 サザエ稚貝におけるカラム底の分布割合

本実験で得られた、ヨシエビ幼生のミシス期、ポストラーバ期各々の貧酸素忌避濃度を比較したところ（表(1)-3）、ミシス幼生とポストラーバ幼生(P4)には大きな違いが見られなかった。しかし、同じポストラーバ期であるP4期とP15期では明らかに差が見られ、成長による忌避濃度の低下が認められた。大阪湾奥河口域に生息する稚ヨシエビ(体長40-72mm)は貧酸素耐性に優れていることが報告されており（Yamochi et al, 1995）、現地の状況と対応していた。このように、ヨシエビ幼生はポストラーバ後期に忌避酸素濃度が小さくなり、底生期への移行が終了するに合わせて貧酸素に対して強くなることが示唆された。

表(1)-3 アサリ、ヨシエビ幼生ならびにサザエ稚貝が忌避するDO濃度

発育段階	DO濃度上限値
アサリ幼生	アンボ期	2.6～2.7
ヨシエビ幼生	ミシス期	2.1～2.6
P4期	2.4～2.7
P15期	1.2～1.7
サザエ稚貝	稚貝	2.3～2.4
## 5 ．本研究により得られた成果

## （1） 科学的意義

今まで実際の海域におけるDOに対する生物の応答については不明な点が多く、特にDO耐性が低いと考えられてきた生活史初期段階あるいは発生初期段階の個体に関する知見はほとんど無かった。本研究によって、①貧酸素水塊の影響を調べるための流水式連続曝露試験装置を作製し、試験プロトコルを提示することができた。これにより、急性影響のほか、慢性影響や他の有害因子との複合影響を調べることが、試験装置・手法の確立という意味で可能となった。また、②貧酸素水塊の影響を調べるための水柱実験装置も作製した。これにより、海産生物幼生・幼体の忌避行動等を調べる実験も可能となった。以上により、東京湾のマコガレイ（着底稚魚）と三河湾のアサリ（浮遊幼生と着底初期稚貝）等を対象に実際に貧酸素耐性試験あるいは応答試験を行い、データを獲得することができた点が、第一の科学的意義である。

また、三河湾の干潟生態系における鍵種であり、重要漁獲対象種でもあるアサリについて、サブテーマ（2）において、発育初期段階である浮遊幼生の出現及び分布と現場DOとの関連に関するフィールド調査データが得られたこと、また、シリンダー実験（水柱試験）によって、フィールド調査データの特徴を裏付けるような、貧酸素水塊に遭遇した時のアサリ浮遊幼生の挙動を明らかにしたことは、貧酸素水塊が底棲生物に与える影響を考慮する上できわめて重要な科学的成果である。さらに、本研究によって、とりわけ、アサリ浮遊幼生を例に室内実験と野外調査、及び数値モデルによるシミュレーションを組み合わせて、科学合理性のあるプロセスを経て底層DOの環境基準値（試案）を導出・提示できたことは、単に科学的根拠を有する具体的な基準値案を提示したことに留まらず、今後、さまざまな種に対する底層DOの環境基準値案を科学合理的に導出するためのプロセスを構築できたという意味で、きわめて大きな科学的且つ環境政策上の成果である。

## （２）環境政策への貢献

## ＜行政が既に活用した成果＞

環境省の生活環境項目新規基準等検討会海域ワーキンググループ（WG）における下層DOの環境基準案の検討において、本研究成果であるアサリに対する環境基準値（試案）の試算結果を提示し、当該WGの報告書作成に貢献した。

## ＜行政が活用することが見込まれる成果＞

平成25年度（2013年度）中に透明度とともに新たな環境基準として導入される予定である底層DO（下層DO）に関して、2010年3月に示された「閉鎖性海域中長期ビジョン」に沿って、環境基準案が示されていないアサリに対するDO環境基準値導出に向けた考え方を整理し、生息域の確保のための底層DO目標値と再生産の場の確保のための底層DO目標値として、それぞれ、2mg/L及び3mg/Lを導出した。すなわち、アサリを対象に、科学的根拠を有する環境基準値・目標値の試案を提示することができた。

また、科学合理性のある底層DO環境基準値・目標値を導出するための方法論が構築された。
換言すると、室内実験結果及びフィールド調査・観測結果を盛り込んだ数値モデルを用いるという、科学合理性のある底層DO環境基準値・目標値の導出手法を提示することができた。

また、海産生物幼生あるいは幼体の貧酸素水塊に対する忌避行動に着目して、底層DOの保全目標値に対する基礎的情報を提供することができた。

## 6 ．国際共同研究等の状況

特に記載すべき事項はない。

### 7. 研究成果の発表状況

## （1） 誌上発表

## <論文（査読あり）>

特に記載すべき事項はない。

## くその他誌上発表（査読なし）>

1) 蒲原 聡・和久光靖・山田 智：愛知県水産試験場研究報告, 17: 27-30 (2012) 「アサリ浮遊幼生の貧酸素耐性」

## （2） 口頭発表（学会等）

1) 池田健・矢持進：日本土木学会関西支部（2011）「2010年大阪湾における貧酸素と海洋生物幼体の貧酸素応答に関する研究」

2) 池田健・矢持進・睦谷一馬：日本水産学会近畿支部 （2011）「酸素・塩分勾配モデルを利用した海洋生物幼体の貧酸素応答に関する検討」

3) 堀口敏宏・蒲原聡・山田智・和久光靖・岩田靖宏・石田基雄・鈴木輝明・白石寛明：第21回環境化学討論会（2012）「流水式曝露試験装置によるアサリ幼生及び稚貝の貧酸素耐性評価」

## （3） 出願特許

特に記載すべき事項はない。

## （４）シンポジウム、セミナー等の開催（主催のもの）

特に記載すべき事項はない。

## （５）マスコミ等への公表・報道等

特に記載すべき事項はない。

## (6) その他

特に記載すべき事項はない。
### 8 \. 引用文献

1) Coombs, S. H. (1981): A density-gradient column for determining the specific gravity of fish eggs, with particular reference to eggs of the mackerel $ Scomber\ scombrus $ . Mar. Biol., 63:101-106.

2) 堀口敏宏・蒲原聡・山田智・和久光靖・岩田靖宏・石田基雄・鈴木輝明・白石寛明（2012）：流水式曝露試験装置によるアサリ幼生及び稚貝の貧酸素耐性評価，第21回環境化学討論会，松山，同講演要旨集.

3) 石田基雄・小笠原桃子・村上知里・桃井幹夫・市川哲也・鈴木輝明(2005)：アサリ浮遊幼生の成長に伴う塩分選択行動特性の変化と鉛直移動様式再現モデル，水産海洋研究，69(2):73-82.

4）石居進(1985)：生物統計学入門：具体例による解説と演習，培風館，pp.79-89.

5) 蒲原聡・和久光靖・山田智 (2012)：アサリ浮遊幼生の貧酸素耐性．愛知水試研報, 17:27-30.

6) 斉藤肇・中山和子・渡辺淳・村上知里・小山利郎・中村義治 (2002): ヤマトシジミ Corbicula japonica 幼生の個体発生に伴う塩分選好性の変化に関する室内実験. 日本ベントス学会, 第16回大会要旨集, 17.

7) Tanaka, Y. (1990): Changes in the egg and larval densities of striped beakperch (Pisces; Oplegnathidae) during development, 近畿大農紀要, pp.19-24.

8) 田中祐志 (1991): 魚卵・仔魚の比重変化と流れの構造に関連した分布・移動. 流れと生物と一水産海洋学持論—, 川合英夫編, 京都大学学術出版会, 61-78.

9) 鳥羽光晴・深山義文（1992）：アサリ産卵誘発方法の比較．水産増殖, 40(3), 303-311.

10) 上妻智行 (1994)：アサリ種苗生産における採卵および幼生飼育技術．福岡水技研報，2:67-77.

11) Yamochi, S., Ariyama, H., Sano, M. (1995): Occurrence and hypoxic tolerance of the juvenile Metapenaeus envis at the mouth of the Yodo River, Osaka, Fisheries Science, 61(3):391-395.
# (2) 貧酸素水塊が初期生活史段階の内湾代表種に及ぼす影響の解析と評価に関する研究

(独）国立環境研究所 環境リスク研究センター 生態系影響評価研究室 堀口 敏宏

愛知県水産試験場 漁場環境部 蒲原 聡

愛知県水産試験場 石田 基雄

(平成22、23年度)

<研究協力者>

愛知県水産試験場 岩田靖宏、山田智、和久光靖、大橋昭彦、岩瀬重元、柘植朝太郎、二ノ方圭介、中嶋康生、曾根亮太、戸田有泉

平成22～24年度累計予算額：30,285千円

（うち、平成24年度予算額：11,949千円）

予算額は、間接経費を含む。

## [要旨]

「閉鎖性海域中長期ビジョン（2010年3月1日）」で底層の溶存酸素量（DO）が海産生物の棲息に影響を与える主要要素の1つとされたが、魚介類の貧酸素耐性に関する情報が不足しているため、実験による貧酸素耐性の把握と共に、フィールド調査による影響解析が必要である。

東京湾ではマコガレイの初期生活史調査と貧酸素水塊の影響解析を行った。仔魚は内湾域の10定点においてマル稚ネットの傾斜曳網により、稚魚は内湾域の25定点においてソリネット及び桁網により、それぞれ、採集した。調査定点ではCTD/DOロガーによる水温とDO濃度の観測も行った。成魚の再生産特性データと横浜市漁業協同組合柴支所のマコガレイ漁獲統計資料により、産卵量指数も推定した。産卵量指数、仔魚密度及び稚魚密度の量的関係と環境因子との関係を調べ、仔稚魚の空間分布の時系列変化から貧酸素水塊が及ぼす影響を解析した。

アサリ浮遊幼生に及ぼす貧酸素水塊の影響を明らかにするため、初夏～秋季に毎月1回、三河湾東部の渥美湾（湾奥～湾口にかけての4定点）でアサリ浮遊幼生の鉛直分布と貧酸素水塊との関連を調査した。採集は水中ポンプを用い、4～5層で採集し、同時にCTDにより、DO、水温、塩分、クロロフィルaを測定した。また、貧酸素水塊が発達する夏季にA5地点において周日4時間毎に4層から採集し、アサリ浮遊幼生の日周鉛直移動を調査した。アサリ浮遊幼生は貧酸素水塊が未発達あるいは解消後に多く出現し、底層に多く分布した。一方、貧酸素水塊の発達期には底層にはほとんど出現せず、水温・塩分躍層上の3mにピークが見られた。また、周日観測から、アンボ期～フルグロウン期の幼生は貧酸素水塊が未発達の時期には昼間底層に多く、深夜～明け方に表層へ移動する日周鉛直移動が観察された。

上記の諸結果を基に、東京湾のマコガレイ仔稚魚と三河湾のアサリ浮遊幼生の孵化後の漂流・分散に関する数値モデルを作製し、貧酸素水塊の影響評価を試みた。また、アサリに対する底層DO環境基準値（試案）を導出した。

[キーワード] マコガレイ仔稚魚、アサリ浮遊幼生、分布、時系列変化、数値モデル
### 1. はじめに

閉鎖性海域の水環境改善のため、既に30年間に亘って水質総量規制が実施されている。しかしながら、東京湾、伊勢湾・三河湾、瀬戸内海などの総量規制制度を導入している海域の環境基準達成率は低い状況が続いている。中央環境審議会水環境部会の答申「第6次水質総量規制の在り方について（2005年2月）」においては、今後の総量規制推進のための課題として、「目標とすべき水質の検討」を挙げた。すなわち、今までの5次にわたるCODの総量規制により、COD負荷量が大幅に削減されてきているにもかかわらず、COD環境基準の達成率が改善しないことに対処するため、目標とすべき水質についてさらに検討を行う必要があることが指摘された。

これを受けた「今後の閉鎖性海域対策に関する懇談会」では、今後の閉鎖性海域対策を検討する上での論点整理(2007年3月)を行った。その結果、現在の環境基準であるCOD、T-N及びT-Pについては、汚濁負荷量の抑制により制御可能と考えられている指標であるが、生物生息環境を直接的に表現する指標とは言い難いこと、また、目標とすべき海域の状態となる指標（状態指標）と目標を達成するために抑制すべき指標（制御指標）とを分けて検討する必要があることが指摘された。生物生息環境を表現する状態指標の候補としては、広く水棲生物の生息に影響を与える主要な要素の一つと考えられる底層の溶存酸素量（底層DO）、及び水棲生物の育成など浅海域における良好な環境条件を示し景観的な要素も併せて示す透明度を挙げた。

このため、今後の「第7次水質総量規制のあり方（2009年3月諮問）」の検討に資するため、2008年度から、「閉鎖性海域中長期ビジョン策定に係る懇談会」を設置し、その中の目標設定WGにおいて、底層DOならびに透明度の目標設定に関する検討を行ってきている。底層DOの目標設定においては、底層DO濃度の低下や欠乏による魚介類等の海産生物への悪影響を軽減し、良好な海域環境を回復するための目標となる数値目標を設定すべく、魚介類の生息域確保や再生産の場の確保、さらには無生物域の解消のための必要なDO濃度を推定するために多数の文献情報の収集と整理を行ってきた。その過程で下記のような問題に直面している。

（1）魚介類の貧酸素耐性（生息域確保）、幼稚仔の貧酸素耐性や成体の産卵行動への影響（再生産確保）等の情報が不足しているとともに、DO基準値設定に適した標準的な実験方法が提案されていない。

（２）CODやT-N、T-Pと異なり、DO目標は75％値や平均値での評価に適さないため、連続測定が不可能な場合にその達成度を評価する手法が確立されていない。

したがって、統一的、かつ科学的な目標設定がきわめて困難な状況に直面しており、現状では数多くの仮定や単純化によって目標を設定せざるを得ないとともに、その妥当性の評価も困難な状況にある。

## 2 ．研究開発目的

上記の問題を解決するため、本研究では3つのサブテーマを設けて、科学的根拠に裏付けられた底層DO目標値の導出と個体群に及ぼす影響の評価、水域区分の提案、並びにその達成度評価のための手法開発に向けて研究を推進した。本編では、サブテーマ（2）「貧酸素水塊が初期生活史段階の内湾代表種に及ぼす影響の解析と評価に関する研究」について記述する。
環境の変化に鋭敏に反応し、その後の個体数/資源量の減少に大きく寄与すると考えられる初期生活史段階に着目し、貧酸素水塊が内湾代表種（マコガレイ、アサリ）に及ぼす影響をフィールドで調査し、データを解析する。また、サブテーマ（1）の当該データやこれまでに実施されたフィールド調査・解析結果も含めて、貧酸素水塊が内湾代表種の初期生活史に及ぼす影響を評価するための数値モデルを作製し、当該モデルによるシミュレーションを行い評価する。最後に、アサリに対するDO環境基準値導出に向けた考え方を整理し、生息域の確保のための底層DO目標値と再生産の場の確保のための底層DO目標値を試算する。

## 3 ．研究開発方法

貧酸素水塊が初期生活史段階の内湾代表種に及ぼす影響の解析と評価に向け、内湾代表種・マコガレイとアサリの初期生活史段階に着目し、貧酸素水塊が及ぼす影響に関するフィールド調査を、それぞれ、東京湾と三河湾で行い、データを解析した。また、東京湾のマコガレイと三河湾のアサリが初期生活史段階で受ける影響を定量的に把握するため、東京湾と三河湾の流動モデル・生態系モデルを利用してマコガレイ仔稚魚とアサリ浮遊幼生の孵化後の漂流・分散と貧酸素水域への遭遇を再現する数値モデルを設計し、貧酸素水塊が及ぼす影響の定量評価を試みた。その上で、アサリに対するDO環境基準値（試案）を導出した。

## （１）東京湾のマコガレイに対するフィールド調査と解析

マコガレイ仔魚は2011年1〜3月に内湾域の10定点においてマル稚ネットの傾斜曳網により採集した。稚魚は内湾域の25定点において2010年3〜10月にソリネット及び桁網により採集した（図(2)-1）。仔稚魚の調査定点ではCTD/DOロガーによる水温とDO濃度の観測も行った。成魚の再生産特性（生殖腺体指数[GSI]の経月変化、組織学的観察による生殖腺の発達と退行、生殖周期）と、横浜市漁業協同組合柴支所のマコガレイ漁獲統計資料を用いて産卵量指数を推定した。2006年〜2010年の調査結果も合わせて、産卵量指数、仔魚密度及び稚魚密度の量的関係と環境因子との関係を調べ、仔稚魚の空間分布の時系列変化から貧酸素水塊が及ぼす影響を解析した。

図(2)-1 東京湾におけるマコガレイ仔魚及び稚魚の調査地点
（２）三河湾のアサリに対するフィールド調査と解析

アサリ浮遊幼生は水中ポンプを用い、所定の水深から200Lの海水を汲み上げ50μmのネットでろ過し採集した。調査は2010～2012年の3年間行った。2010年は6～10月、月1回、渥美湾奥～湾口にかけて4地点を設定し、表層から海底直上（8～15m）までを3m間隔で採水した。2011、2012年は5～11月、月2回、3地点（2011）および1地点（2012）で、3m（2011）および2m（2012）間隔で表層から海底直上までを採水した（図(2)-2）。また、水中ポンプには多項目水質計を縛り付け採水中の深度、水温、塩分、クロロフィルaおよび溶存酸素をモニターした。得られた光抗体法によりアサリ浮遊幼生を同定、成長段階毎（D型期、アンボ期およびフルグロウン期）に計数した。

インクトン試料は濃縮・凍結保存し後日単図(2)-2 アサリ浮遊幼生採集地点 (2010: A10, A5, A7, St18) (2011: A10, A5, St18; 2012: A5)

溶存酸素のある6月（2010～2012年：A5）および

下層に貧酸素水塊が形成された7月（2012：A5）と9月（2011：A10）に4時間毎に上記採集を6回行い、浮遊幼生の日周鉛直移動を観察した。また、2012年の6，7月調査時に海水中から沈降してくる浮遊幼生を捕集する目的で海底上に調査開始時にセジメントトラップを設置し調査終了時に回収した。得られたサンプルは実験室に持ち帰った後、直ちに生死毎に二枚貝浮遊幼生を選別・凍結保存し、後日上述の通り蛍光抗体法でアサリ浮遊幼生を検出した。

## （３）数値モデルによる解析

1）東京湾におけるモデルを利用したマコガレイ仔稚魚に対する貧酸素化の影響調査

東京湾における仔稚魚漂流シミュレーションの根幹となる、東京湾の流動及び酸素環境を再現するシミュレーションを行った。また、マコガレイ仔稚魚貧酸素影響モデルの開発にあたり必要な知見やデータを収集し、マコガレイ仔稚魚の漂流過程及び酸素環境に対する応答をモデル化した。その上で、影響解析及び定量評価として、マコガレイ仔稚魚の産卵から着底生活までの漂流シミュレーションを実施し、冬季高水温と貧酸素水塊による減耗を評価した。

2）三河湾におけるモデルを利用したアサリ浮遊幼生に対する貧酸素化の影響調査

三河湾におけるアサリ浮遊幼生の漂流シミュレーションの根幹となる、三河湾の流動及び酸素環境を再現するシミュレーションを行った。また、アサリ浮遊幼生貧酸素影響モデルの開発にあたり必要な知見やデータを収集し、アサリ浮遊幼生の漂流過程及び酸素環境に対する応答をモデル化した。加えて、忌避応答など水柱実験で得られた低酸素環境に対する応答を組み込み、アサリ浮遊幼生漂流モデルを改良した。その上で、アサリ浮遊幼生の孵化から着底までの漂流シミュレーションを実施し、貧酸素水塊にさらされた場合の減耗を影響解析として定量評価した。これにより、アサリ浮遊幼生の漂流や貧酸素水塊による影響等の概要をとりまとめた。