Silviase/jgov_v1.4_full_ann huggingface dataset:
これに対して、アジア地域に棲むコウモリからはこれまで人に狂犬病を発病させるようなリッサウイルスが分離されたという報告はない。

## カ）リス

上記のように、狂犬病常在地であっても、リスなどの齧歯類が狂犬病ウイルスに感染していることは少ないといわれているが、リスに咬まれるのは指先などが多いので狂犬病暴露後発病予防を受けたほうがよい。

## (参考)

狂犬病暴露後発病予防治療の開始（または中止）を判断する際の参考として、以下にフローチャートを示す。

(注)

狂犬病常在地である米国で用いられているフローチャートであるので、狂犬病清浄国である日本の状況には適合しない部分もある。

## (引用文献)

Feameyhough,G. Rabies postexposure prophylaxis: Human and domestic animal considerations.

In: Rabies: Guidelines for Medical Professionals.

Veterinary Learning Systems, a division of Medi-Media Merial

pp44-54 1999 ISBN 1-884254-47-0
cf. コウモリによる感染の有無を本フローから判断することは極めて困難であり、接触の恐れがある場合には全て直ちに暴露後予防接種の対象と考える。
### 付属書6. 狂犬病が疑われる患者への対応

狂犬病は、狂犬病常在地での滞在歴や動物による咬傷歴が不明である場合は、臨床症状から診断することは困難である。狂犬病を、破傷風、ウイルス性または細菌性髄膜炎、脳炎、薬物中毒などと鑑別することは必ずしも容易ではない。

原因不明の神経症状を示す患者を診た場合には、

ア）海外渡航歴および海外での動物咬傷歴を確認する

イ）臨床症状を注意深く観察する

狂犬病の前駆症状のうち比較的特徴的なものとして、すでに治癒した古い咬み傷が再び痛んだり、傷口の周辺が痒くなることがある。

さらに進行した場合には、強い不安感、1日のうちに意識が清明になったり、混濁したりする症状、飲水をきらう症状（恐水症）、風が顔に当たるのをきらう症状（恐風症）などがある。

ウ）生前診断のための検査

発病以前に狂犬病を確定できる検査法は開発されていない。

狂犬病が疑わしい患者では下記の検査が行われる。

角膜塗沫標本または皮膚生検標本からの蛍光抗体法による狂犬病ウイルス抗原の証明

唾液または髓液からの狂犬病ウイルス分離

血液中ないし髓液中の抗狂犬病ウイルス抗体の証明は、抗体が発病初期には上昇しないので、生前診断のためにはほとんど役立たない。また、ワクチン接種者では狂犬病ウイルス感染の証明が不可能である。

以下に、人の狂犬病の検査材料及び方法を示す。
## 検査法の概要

ヒトの狂犬病検査（生前診断）

検査材料	検査法
直接蛍光抗体法	RT-PCR法	ウイルス分離	(中和抗体価測法)
唾液	○	○
脳脊髓液	○	○	○
項部皮膚生検	○	○	○
唾液腺	○	○	○
気管吸引材料	○	○
(角膜塗沫標本)	○

ヒトの狂犬病検査（死後診断）

検査材料	検査法
直接蛍光抗体法	RT-PCR法	ウイルス分離	(中和抗体価測法)
中枢・末梢神経組織	○	○	○
唾液腺組織	○	○	○

(参考)

地方自治体より国立感染症研究所への検査依頼については以下を参考にされたい。

「ウイルス行政検査について」

（平成12年 5月 8日 健医感発第43号）

「ウイルス検査について」

（平成2年2月13日予研総発第33号）

(平成 9年 4月 1日 感染研総発第178-2号 [一部改正])

（平成12年12月14日 感染研総発第638号 [一部改正]）
### 付属書7. 狂犬病と確定診断された患者への対応

狂犬病に対する特異的治療法はない。1980年代にインターフェロンが治療に用いられたことがあるが、無効であった。狂犬病と診断された患者は数日ないし1～2週の内に死亡するという運命を受け入れなければならない。したがって、狂犬病という診断を告知する際には精神的な支援が可能になっている必要がある。

狂犬病患者の診察、看護および諸検査を行う医療職員はあらかじめ狂犬病暴露前免疫を受けておくが、患者が狂犬病と診断された時点で速やかに暴露後免疫を開始する必要がある。
### 付属書8. 狂犬病患者の家族への対応

上記のように狂犬病と確定診断された患者は近い将来必ず死亡する運命にあるので、家族に対しても精神的援助が必要になる。また狂犬病患者の唾液を介して狂犬病ウイルスに暴露されている可能性もあるので、患者と接触した家族や友人には狂犬病暴露後発病予防を実施する。

## 参考1：人の狂犬病の症状

人の狂犬病の経過は、潜伏期、前駆期、急性神経症状期、昏睡期の4期に分けられている。

潜伏期は、咬傷を受けた部位、咬傷の程度、衣服の上から咬まれたか素肌を咬まれたか、ただちに傷を洗浄したか否か、その他不明の要因によって左右され、15日程度から1年以上とばらつきが大きい。患者の約60%では潜伏期が1～3カ月であり、1年以上の潜伏期が7～8%の患者で記録され、最長例は7年前にラオスで受けた犬による咬傷が原因で発病した米国への移民少女である。

前駆期は2日～10日間で、発熱や食欲不振など非特異的症状に加えて、すでに治癒した咬傷部位が再びチクチク痛んだり、咬傷周囲の知覚過敏、かゆみなどが現れる。知覚過敏や疼痛は求心性に範囲が広がり、咬傷を受けた上下肢のけいれんも起こる。

急性神経症状期は2日～7日間続く。患者は間欠的に強い不安感に襲われ、精神的動揺を示すが、それ以外のときは意識清明で医療職員にも協力的である。患者の約半数に噸頭喉頭筋群のけいれんに起因する嚥下障害が起こる。このけいれんには強い痛みを伴うため、患者は発作の原因となる飲水を避けるようになる（恐水症）。また喉頭のけいれ
んは顔面に冷たい風が当たっても誘発されるため、患者は風を避ける（恐風症）。さらに進行すると、高熱、幻覚、錯乱、麻痺、協同運動失調などが見られ、ときには意味不明の叫びや犬の遠吠えにも似た叫び声をあげることもある。やがて全身けいれんなどが現れ、ついで昏睡に陥る。

昏睡期に入ると、低血压、不整脈、呼吸不全などが起こり、やがて呼吸停止、心停止して死亡する（狂躁型）。一方、恐水発作や恐風症を示さず、麻痺が主な症状となる狂犬病（麻痺型）も患者の20%程度あるとされている。麻痺型狂犬病はポリオと誤診されることもある。

狂犬病の予後はきわめて不良であり、ほぼ100%死亡する。現在まで回復例は3例報告されているが、うち1例は以前に狂犬病ワクチン接種を受けた研究者であったので、厳密な意味での回復例は米国での6歳男児とアルゼンチンでの45歳女性の2例のみである。

参考2. 現存人体用狂犬病ワクチンの種類

組織培養ワクチン	凍結乾燥型ワクチン	人2倍体細胞ワクチン (HDCV)精製ペロ細胞ワクチン (PVRV)精製ニワトリ胚細胞ワクチン (PCEC)(化血研:日本で承認・販売されている唯一の人体用狂犬病ワクチン)吸着型狂犬病ワクチン (RVA)ハムスター腎細胞ワクチン (中国製)
トリ発育胚ワクチン	精製アヒル胎児ワクチン (PDEV)
感染動物脳由来ワクチン	センプル型ワクチン乳のみマウスワクチン(注:これらのワクチンは後遺症が残ることがあるので、使用は避ける。)
# 付属書9. 狂犬病の疑いのある動物発見の報告用様式例

# 狂犬病（疑似）発見報告書

年 月 日

様

願届者 住所

氏名

下記のとおり、狂犬病にかかった（疑いのある）動物（動物の死体）を発見しましたので報告します。

記

動物所有者住所・氏名・連絡先
動物の発見場所・日時
動物の現所在地
動物	種 類
年 龄
性 別
品 種
毛 色
名 前
体 格
特 徵
犬の場合	登録年月日・番号
注射年月日・番号
診断又は検案の日時、場所及び結果(症状)
発 病 年 月 日
発病後の措置又は死体の措置
備 考
### 付属書 10. 確定診断のための検体送付方法等

（参考：CDC狂犬病検査マニュアル「Laboratory Methods for detecting Rabies」、「ハワイ州 Rabies Contingency Plan Incident Command System 2001」、「英国 Memorandum on Rabies、Prevention and Control」および「国立感染症研究所、病原体等安全管理規定」）

「(A) 検体送付方法」

## 概要

原則として、直接検査機関へ持参（輸送）する。狂犬病が疑われた動物は、致死処分後速やかに頭部を切り離し検査可能な施設へ冷蔵状態（氷上もしくは4℃）で直ちに輸送する。コウモリ、マウス等の小動物、実験動物の検体を送る場合には解剖を行わず全身（もしくは頭部）を直接輸送する。致死処分後の動物死体もしくは頭部は、外部寄生体をクロロホルム処置により麻酔・殺処理して除去しておく。また、致死処分時には、頭部への障害を加えないように注意を払う。切り放した頭部は、液漏れのしない密閉容器にいれた後にビニール袋で3重包装とする。3重包装された袋は氷詰めにして（1）宛先、（2）送り主、（3）データシートに検体の内容と必要事項を明記して輸送する。

頭部切り離しに関する注意点

致死処分された動物は、体液・皮下組織の飛散に十分
注意して頭部を体幹から切り放す。頭部は、頷部腹側の皮膚を切開して第1頸椎（環椎）と第2頸椎（軸椎）を繋ぐ皮下組織、筋肉、勒帯、関節包、脊髄を切断して両関節面を遊離させる。使用器具は解剖後に消毒液に入れてオートクレーブで滅菌処理して最後に洗剤と温水で洗浄する。動物の残骸はタオル等に包み、焼却処分用のビニール袋に入れる。作業面及び床等を消毒液で拭き、洗剤と温水で洗浄する。

なお、頭部から脳を摘出する場合には、「付属書10.確定診断のための「（B）脳の取出し方」」（P. 90）にしたがう。

## 採材した感染脳材料の梱包

（1）体積が50ml未満：材料を液漏れのしない密閉容器（1次容器：ポリプロピレン製のチューブ、ガラスの小ビン等）に入れてしっかり閉ざし、これを別の耐久性ある液漏れのしない密閉容器に入れる。複数の1次容器を、その総体積が50mlを越えない範囲で、1個の2次容器に入れてもよい。1次容器と2次容器との間の上部、底部、側部の空間には、1次容器（単数または複数）が万一壊れたり漏れたりした場合に漏れた液体等を十分吸収可能な吸収剤を詰める。次に、1次容器と2次容器の各セットを波状繊維板、段ボール紙、木製、または同等の強度を持つ他の材料製の輸送用外装容器に入れる。

（２）体積50ml以上：体積が50ml以上の材料を梱包する場合は、2次容器と輸送用外装容器との間の上部、底部、側部の空間に、1次容器と2次容器の間に詰
めた吸収剤と少なくとも同等の体積の衝撃吸収材（ペーパータオル等）を詰める。個々の1次容器には500ml以上の材料を詰めてはならない。しかし、2個以上の1次容器の合計体積が500mlを越えないものは、それらを1個の2次容器に入れてもよい。1個の輸送用外装容器には2次容器を8個まで入れてよい（この1個の輸送用外装容器の最大収容量は4000mlを越えてはならない）。

（3）ドライアイス：冷凍剤としてドライアイスを使用する場合は、2次容器の外側に置く。2次容器と輸送用外装容器との間にドライアイスを使う場合は、ドライアイスが昇華しても2次容器が輸送用外装容器内で緩むことがないように、衝撃吸収剤をいれなければならない。

注）検体の処理は原則として周囲と区画された専用の部屋で行い、担当者は狂犬病ワクチンを接種して規定値以上の抗狂犬病抗体価を保持していることが求められる。必要に応じて追加免疫を行う。検体の取り扱いに際しては組織等の飛散に十分注意を払い、中枢神経系組織、体液、特に唾液に接触しないように注意する。検体の頭部と体を取り扱う場合には防護用の手袋とマスクを着用する。（その他「ウイルス暴露を防ぐための環境」(P.107)を参考とする。

検査材料輸送に際しての注意点

（１）複数の検査材料（検体）は必ず個体の区別を明か
とした状態で輸送を行う。輸送にあたっては郵政省告示第760号（平成2年12月28日号外）に基づいた包装を行い感染性を明示する（図1）。

（２）検査材料は解剖及び生検後（４時間以内）すみやかに冷蔵状態（氷上もしくは４℃）とし、温度管理を十分に行い直ちに検査室へ輸送する。

（3）搬送に際しては、「データシート」に必要事項を記入して検査材料に添付する。検体に関する必要な情報：（1）提供者名、（2）採取年月日、（3）採取地、（4）動物種と品種、（5）咬まれた人や動物、（6）検査動物は死亡が致死処分かの別、（7）検査動物のワクチン接種状況、（8）検査動物は死亡前に捕獲、隔離、観察されたかの別、（9）検査動物の生前の挙動、（10）噛みつき等の暴露事故発生状況、（11）検査結果の情報提供を受ける担当官および医務担当者の氏名、住所、電話番号、FAX番号、E-mailアドレス。

図1. 供試物の記録をつけ、識別番号をつける
「(B) 脳の取出し方」

頭部は、脳の取りだしを行う専用の部屋で包装容器から取りだす。添付されている（1）宛先、（2）送り主、（3）データシート等の記載事項に誤りのないことを確認する。

脳の取り出し専用の部屋は照明と室内の換気を十分に行う。壁、床、解剖台等の作業面は洗浄がしやすく容易に汚れを落とせるものがよい。解剖台はステンレス鋼製の剖検テーブルが好適である。脳の取り出し作業は、厚いゴム手袋、保護面、ガウンや研究室用白衣を着用する。頭を切開する場合は機械的拘束具で頭を固定すると安全である（図2）。

図2. 頭を拘束する器具

必要な機器と材料

1. 作業面上で使う使い捨てのタオルもしくは新聞紙。

2. 動物の残骸や汚れたタオル類を処分するためのビニール袋。

3. 頭部切開用の滅菌済み器具一式（複数の脳を取り出す場合は器具一式を必要数用意しておく）。
4. 汚染器具を入れる消毒液の入った薬槽。

5. 室内要所に消毒薬のビンを配置。

6. 摘出した脳を置くぺトリ皿もしくは紙の皿。

7. 汚染器具を滅菌するためのオートクレーブ。

8. 滅菌済み器具および手を洗うための洗剤と温水（水道）。

9. 床、壁、作業面を洗浄するための洗剤と温水(水道)。

焼却装置（動物の残骸や汚染タオル類の処分）。

頭蓋骨切開器具（図3）。下記器具は一般的なもの：

1. ハンマーとタガネ、大包丁、または肉切り包丁

2. 骨のこまたは弓のこ

3. 電動のこ

図3. 動物の頭蓋を切開するための各種器具

く脳の取り出し方法>

以下に大型の動物（犬、ネコ等）と小型の動物（コウモリ、マウス、実験動物等）それぞれについて脳の取り出し方を示す。器具類は検体ごとに1セットを用意して、
複数の動物処理が遅滞なくできるようにしておく。

注意点：小型の動物ではハサミや鉗子を使用して脳を取りだす。複数の検査を1度に行う場合には検査間での汚染を防止するために動物個体もしくは検査組織ごとに別の滅菌器具を使用する。「唾液腺」を検査する場合は、唾液腺を脳より先に取り出して脳からの汚染を防止する。脳の摘出に使用した使用器具は消毒液に漬けて作業終了時にオートクレーブを行いウイルスの不活化を行う。動物の残骸と汚染タオル類は全て焼却する。各検査材料について脳の取りだし作業終了ごとに使用した作業面を消毒する。脳の取りだしを行った一日の作業終了時に、室内全体を洗剤等で十分に洗浄する。

<脳の取り出し方法（犬、ネコ等）>

A. 試薬

1. 消毒液の入った薬槽

2. 消毒液の入ったビン

3. 洗剤と温水

### B. 設備

1. 器具

a. 拘束具

b. メス

c. 鉗子

d. 骨カッター

e. 舌圧子

2. 頭蓋骨を切る器具

a. ハンマーとタガネ、大包丁、または肉切り包丁

b. 骨のこ、弓のこ、または電動のこ
3. ステンレススチール剖検台

4. ベンチコート、使い捨てタオル、紙タオルもしくは新聞紙

5. ビニール袋

6. オートクレーブまたは器具滅菌器

7. 烧却炉

8. 厚いゴム手袋

9. フェイスガード（防災面）保護メガネ

10. 白衣等の研究室用コート

11. 紙皿

### C. 实施方法

1. テンレススチール剖検台のテーブル面が清浄であることを確認する。

2. 面にベンチコートを敷き、その上に紙タオルもしくは新聞紙を広げて滅菌済みの器具を配置する。

3. 脳を載せるペトリ皿か紙皿に検体を区別できるラベルを貼る。

4. 白衣等の研究室用コート、ゴム手袋、防災面、保護メガネを着用する。

5. 動物の頭を拘束具にセットする（図4）。

6. 頭頂中央部の皮膚、結合組織、筋肉にメスで切り込みを入れる。切り込み線を両眼の中間点から後頭部に向けてまっすぐに入れる（図5）。

7. 鉗子とメスを使用して切開した皮膚を耳の真上まで剥ぐ。脳組織に体毛が付着しないよう皮膚を外側に折り畳む（図6）。

8. 切開した頭部に残っている筋肉組織をメスでできるだけ切り取る（図7）。

9. 頭蓋骨の4カ所に切り込みを入れる：両眼窩の後
ろに1カ所、耳の真上に横方向から2カ所、頭蓋骨

の後側（脊髄が頭蓋腔に入り込む部位）に1カ所。

10. 切り方

a. ハンマーとタガネ、大包丁、または肉切り包丁を使用する場合

（１）頭をしっかりと固定して、すべらないようにする。

（２）タガネの刃は眼窩の頭蓋後部に横向きに当てる。

(3) ハンマーでタガネの背を強く叩いて、頭蓋骨を貫くきれいな切り口を作る(図8)。

（４）頭蓋骨の両側２カ所と頭蓋後部に同様に切り口を作り、眼窩の切り口と連絡させる（図９、１０、１１）。

b. 骨のこまたは弓のこを使用する場合（図12）

（１）のこぎりでaに示したと同様の切り口を頭骨に作る。

(2) のこが筋肉組織で滑って怪我をすることを防ぐために、切開した頭部に残っている筋肉組織をメスでできるだけ切り取る。

c. 電動剤検のこを使用する場合（図13）

（１）電動剖検のこでa.に示したと同様の切り口を頭骨に作る。

（２）この場合ものこが筋肉組織で滑って怪我をすることを防ぐために、切開した頭部に残っている筋肉組織をメスでできるだけ切り取る。

### 11. 頭蓋を取り外す（図14）。

a. 頭蓋をこじるようにして緩める。
b. 付着している骨は骨切り鉗子か骨タガネで切り離す。

12. 頭蓋腔から脳を取り出すときは、滅菌済みの器具一式を使用する。

a. 脳を包む髄膜をメスで取り除く。

b. 脳を前部から持ち上げ、下側に伸びている神経を切り落とし、脊髓が頭蓋腔に入り込む部位で脳幹を切って脳を分離する（図15）。

c. 脳を鉗子か舌圧子で持ち上げて、ラベルを貼ったペトリ皿か紙皿に載せる。

13. 使い終わった器具類を消毒液に入れる。

14. 動物の残骸と汚染タオル類を焼却処分用のビニール袋に入れる。

15. 作業面を消毒液で拭き、次に洗剤と温水で洗浄する。

16. 器具類をオートクレーブ滅菌して、洗剤と温水で洗浄する。

17. 取りだした脳を検査室に持ち込む。

図4. 犬の頭を拘束具で保定する

図5. 頭頂部皮膚に切り込みを入れる
図6. 皮膚を取り除く

図7. 頭蓋骨の筋肉組織を取り除く

図8. 眼窩の後ろ位置に頭蓋を貫く切り口を入れる

図9. 側頭部に頭蓋を貫く切り口を入れる
図10. 反対側の側頭部に頭蓋を貫く切り口を入れる

図11. 頭蓋後部に切り口を入れる

図12. 弓のこで頭蓋を貫く切り口を入れる

図13. 電動剖検のこで頭蓋を貫く切り口を入れる
図14. 頭蓋を取り除く

図15. 脳幹につながる神経を全て切断して脳を分離する

図16. 脳を取り出してペトリ皿に入れる

図17. 器具を消毒液に入れる
図18. 動物の残骸と汚染したタオルを焼却用のビニール袋に入れる

<下顎唾液腺の取り出し方>

A. 試薬

1. 消毒液の入った薬槽

2. 消毒液の入ったビン

3. 洗剤と温水

### B. 設備

1. 器具

a. 拘束具

b. メス

c. 鉗子

2. ステンレススチール剖検台

3. ベンチコート、使い捨てタオル、紙タオルもしくは新聞紙
4. ビニール袋

5. オートクレーブまたは器具滅菌器

6. 烧却炉

7. 厚いゴム手袋

8. フェイスガード（防災面）保護メガネ

9. 白衣等の研究室用コート、ガウン、またはエプロン

10. ペトリ皿または紙皿

### C. 实施方法

1. 下顎唾液腺の検査をする必要があるときは、脳より先に唾液腺を取り出して脳の狂犬病ウイルスで汚染されないようにする。

2. ステンレススチール剖検台の作業面が清浄であることを確認する。

3. 作業面にベンチコートを敷き、その上に紙タオルもしくは新聞紙を広げて滅菌済みの器具を配置する。

4. 検体を区別できるラベルを、唾液腺を載せるペトリ皿か紙皿に貼る。

5. 白衣等の研究室用コート、ゴム手袋、防災面、保護メガネを着用する。

6. 動物の頭は下側を上にしてテーブルに載せる。

7. 口の両隅の中間点から中心線に切り口を入れ、この切り口を首のうしろまで伸ばす（図19）。

8. メスと鉗子を使って、中心線切り口の両側の皮を横方向に口の両隅まで剥ぐ（図20）。下顎の後部境界部位の皮下組織を取り除く。

9. 下顎の後部境界部に下顎唾液腺が見える（図21）。下顎唾液腺を、その前面にある下顎リンパ腺と間違わないように注意する。犬の下顎唾液腺は中型犬で長さ約5センチ、幅約3センチの長円形で、色はピン
クからグレーで、繊維状のカプセルに被われている。

10. 唾液腺を取り出すには清浄なメスと鉗子を使う。

11. ラベルを貼った別のペトリ皿か紙皿に、取り出した唾液腺を載せる。

12. <脳の取り出し方法> に続く。

図19. 下顎面の皮膚に顎の先端から後頭部に向けて切込みを入れる

図20. 切込んだ皮膚を下顎骨に向けて切開しながらめくる

図21. 露出した唾液腺
<脳の取り出し方法（コウモリ、マウス等）>

### A. 試薬

1. 消毒液の入った薬槽

2. 消毒液の入ったビン

3. 洗剤と温水

### B. 設備

1. 器具

a. ハサミ

b. 鉗子

2. 洗浄がしやすく容易に汚れを落とせるステンレススチール剖検台または金属作業台。

3. ベンチコート、使い捨てタオル、紙タオルもしくは新聞紙

4. 粘着テープ

5. ビニール袋

6. 汚染器具を滅菌器するためのオートクレーブ

7. 烧却炉

8. 外科用手袋

9. フェイスガード（防災面）保護メガネ

10. 白衣等の研究室用コート、ガウン、またはエプロン

11. 小形のペトリ皿または紙皿

### C. 实施方法

1. 金属作業台が清浄であることを確認する。

2. 作業面にベンチコートを敷き、その上に紙タオルもしくは新聞紙を広げて清浄な器具を配置する。

3. 脳を載せるペトリ皿か紙皿に検体を区別できるラベルを貼る。
4. 白衣等の研究室用コート、ゴム手袋、防災面、保護メガネを着用する。

5. 粘着テープを動物の背中まわりにかけ、テープ両端を金属面に接着させて動物を作業面に固定する。

6. ハサミと鉗子を使って頭蓋骨を覆っている皮膚を取り除く。

a. 皮膚は、頭蓋骨の基部から両側方向にそれぞれ耳の高さで水平横まわりに切り続ける（図22）。

b. 両側の切り先が両眼の中間で会うようにする。

c. 皮膚を、鼻越しに折り曲げる（図23）。

7. 滅菌されたハサミと鉗子を使って頭蓋を切り開く。

a. 頭蓋は、後頭部の大孔から耳の真上の高さのところで横回りに切り進める（図24）。

b. 両側からの切り口が両眼の間で出会うようにする。

c. ハサミの先端で頭蓋を前方に開いて脳を露出させる（図25）。

8. 脊髓が頭蓋腔に入り込む部位で脳を切り離す。

脳を持ち上げ、脳に連絡している全ての神経を

切断する（図26）。

9. ハサミの先か鉗子で脳を頭蓋腔からつまみ上げて、ラベルを貼った小形ペトリ皿か紙皿に載せる。

10. 器具を使い終わったら消毒液に入れる。

11. 動物の残骸を汚染タオルに包み、焼却処分用のビニール袋に入れる。

12. 作業面を消毒液で拭き、次に洗剤と温水で清浄にする。

13. 器具類をオートクレーブで汚染除去し、次に洗剤と温水で洗浄する。
図22. 頭部の皮膚を切り取る

図23. 切り取った皮膚を前方へ折り 曲げる

図24. 頭蓋に切り口を入れる

図25. 頭蓋を前方へ押す
図26. 脳に連絡している全ての神経を切断する。

図27. 脳を頭蓋腔から摘み上げる
### 付属書 11. 確定診断のための検査方法

（参考：「WHO、Laboratory techniques in Rabies. 4th ed.」、「CDC狂犬病検査マニュアル（Laboratory Methods for detecting Rabies）」、「ハワイ州Rabies Contingency Plan Incident Command System 2001」、「英国Memorandum on Rabies、Prevention and Control」および「国立感染症研究所、病原体等安全管理規定」）

動物に狂犬病が疑われた場合には速やかに致死処分を行い、中枢神経組織に対する狂犬病検査を行う。動物の狂犬病検査成績は、咬傷を受けた人への暴露後ワクチン接種や他の狂犬病暴露動物に対する対策等を適切かつ迅速に行うための最も重要な情報源でありその確定診断は慎重に行わなければならない。

実験室内で行われる狂犬病検査では、（1）脳組織の塗抹標本を用いた直接蛍光抗体法によるウイルス抗原検索、（2）脳組織乳剤を用いたRT-PCR法によるウイルス特異遺伝子の検出、（3）感染脳組織乳剤を乳のみマウス脳内およびマウス神経芽腫細胞に接種して行うウイルス分離法が一般に行われる。

感染が疑われた動物の脳は、「付属書10.確定診断の為の（B）脳の取出し方」（P.90）にしたがって摘出を行い、アンモン角、脳幹、小脳（必要であれば唾液腺）を採材し各部位について検査材料を作製してそれぞれ検査を行う。脳の摘出は周囲と区画された専用の部屋で行い、検査材料を取り扱う者はあらかじめ狂犬病ワクチンの接種を行うなどの予防的措置を必要とする。脳摘出後の操作は安全キャビネット（クラスⅡ）内で行うことが望ましい。検査材料の採材作業に際しては、組織等の飛散に十
分注意を払い感染組織（中枢神経系組織、体液、特に唾液）と皮膚及び粘膜との直接的な接触を避ける。作業中は防護手袋、マスク等の保護器具を必ず使用する。脳摘出後の頭部は2重に重ねた専用の袋に密閉してウイルスの不活化処置を行い廃棄する。解剖等に使用した道具、部屋等は作業終了後に十分なウイルスの不活化処理を行う。

検査の最終判定は、複数の検査官で行い「検査結果の確定」に基づいて速やかに関係者等に報告を行う。狂犬病が強く疑われたが陰性の場合や、検査成績が不明瞭で疑問のある場合には必ず追検査や異なる検査による診断の確定を行う。

## 補足）

## 検査手順に関する注意

・検査材料を受理した検査室は、「受理した検査材料」と「添付されているデータシート」の内容が同一であることを確認して追加すべき必要事項を記入して直ちに検査を実施する。

## 担当者に求められる必要事項

・狂犬病ワクチンの接種

・病原微生物取り扱いに関する十分な経験と理解

・検査器具等の正しい使用法

## ウイルス暴露を防ぐための環境

・外部と十分に隔離された部屋

・バイオセーフティーキャビネット（クラスⅡ）の使用（バイオセーフティーキャビネット内にはベンチコートを敷いて感染性溶液の飛散等を防ぎ、ウイルスを不活化できる溶液を満たした容器を常にベンチ内に
置いて使用済み器具等のウイルス不活化を適時行う）

・ オートクレーブ（汚染器具のウイルス不活化）の設置

・ウイルスは、石けん液、エーテル、クロロホルム、アセトン、45～70%エチルアルコール、5-7%ヨウド剤、第4級アンモニウム塩に感受性があり不活化される。

・ 専用着衣（手袋（2重に使用）着衣、マスク、ゴーグル、履き物等）の使用

以下に一般的な狂犬病ウイルスの検査方法を記述する

1. 直接蓝光抗体法

2. RT-PCR法

3. ウイルスの分離方法

a）乳のみマウスを利用したマウス接種法

b）培養細胞を利用したウイルス分離法

### 1. 直接蓝光抗体法

直接蛍光抗体法は脳の海馬、延髄、小脳を含む3ヶ所以上について行う。唾液腺の染色は咬傷時のウイルス排泄を知る1つの手掛かりとなる。ヒトでは主に頃部皮膚生検、唾液、脳脊髓液、気管吸引材料、角膜の塗沫標本等を使用して生前診断が行われる。特にウシ、ウマなどの大型の動物ではウイルスの抗原分布に偏りが見られるため検査部位を増やす必要がある。コウモリやマウスなどの小動物では脳全体に対して複数の塗沫標本を作製する。
<必要な試薬、器具、機材（記載されている同等品を使用）>

* 検査用標識抗体（Rabies FITC KIT/ CENTOCOR FITC anti-rabies monoclonal globulin、Fujirebio diagnostics, inc.（PBS（-）で50倍に希釈して使用）もしくはBBL anti-rabies globulin/ Fluorescein labeled、Becton Dickinson Microbiology Systems（PBS（-）で100倍に希釈して使用）；希釈抗体溶液中には1%エバンスブルー溶液を20μl/ml加える

* リン酸緩衝液（PBS（-））

$ ^{*} $ 蒸留水

* 封入材（50％グリセリン-PBS（-） pH8.5）

* ハサミ

$ ^{*} $ ピンセット

* 舌圧子もしくはペーパータオル

$ ^{*} $ 無蛍光スライドグラス(8穴、テフロンコーティング: HTC Super cured autoclavable)

* 塗抹標本固定用染色バット

* アセトン

* ベンチコート（検査材料等の飛沫吸収用に作業領域全域に敷く）

$ ^{*} $ 湿潤箱（蛍光抗体反応用）

* 孵卵器（37℃）

$ ^{*} $ 落射型蛍光顕微鏡(FITC検出用のフィルターを使用)

<検査手順(操作は安全キャビネット(クラスⅡ)内で行う)>

（１）摘出した脳から海馬、延髄、小脳の組織をそれぞれ1cm角大に切り出す。

(２) 切り出した組織を舌圧子もしくはペーパータオル上
に置き、組織に付着している血液（非特異反応の原因となりやすい）をできるだけ取り除く。スライドグラスの上面を組織片に向けて塗沫標本の作製を行う。厚い塗沫標本は脳組織の自家蛍光や非特異反応などにより蛍光顕微鏡での観察が困難となりやすいため、厚い標本を作成した場合は標本面を下にしてペーパータオル上でスライドを強く圧迫して組織を進展させるとよい。スライド標本は追検査用を含めて各組織について4枚から6枚作製する。

(3) 作製した塗沫標本をキャビネット内で十分に風乾させる。

(4) 染色瓶等に十分量の冷アセトンを満たしてこれにスライドを完全に浸す（30分以上の固定でウイルスは不活化される。1昼夜の固定でも抗原性には変化が見られない）。固定後はキャビネット内等で十分な風乾を行う。

(5) 十分に風乾したスライドに十分量の標識抗体を反応させる。反応は室温20分で十分である。

（6）標識抗体反応後、十分量のPBS（-）にて洗浄を行う（10分間、2回）。

(7) PBS（-）洗净後、スライドを蒸留水に2～3秒浸して塩を除去した後に風乾を行う。

(8) 染色操作の終了した圧片標本をグリセリンで封入して蛍光顕微鏡下で狂犬病ウイルス抗原を検索する。顕微鏡観察：通常200倍で観察。抗原量の少ない検体や蛍光の弱い検体では400倍で詳細な観察を行う。

### 2. RT - PCR法

RT-PCR法は脳組織以外に唾液や髄液、頸部の毛根部皮
膚生検等（主に人の生前診断）についても行われる。複数の検体を取り扱う場合には、目的遺伝子の重複汚染に注意をはらい、可能であれば検査施設は一般の実験室と独立していることが好ましい。

<必要な試薬、器具、機材（記載されている同等品を使用）>

* Oリング付き2.0ml遠心チューブ（IWAKI、スクリューキャップマイクロチューブ、No：2758-020）

* RNA抽出液：TRI-ZOL reagent（GibcoBTL社、No：15596）

* クロロホルム

* イソプロパノール

* 逆転写酵素：RTase（Promega社、AMV reverse transcriptase、No：M5101）

* Taq DNAポリメラーゼ（TaKaRa社、TaKaRa Ex Taq、No : RR001A）

RNase阻害剂（Promega社、Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor、No : N2511）

$ ^{*} $ エタノール

RNase free蒸留水

$ ^{*} $ エチジウムブロマイド（EtBr）

* アガロース (Wako社、Agarose1600、No : 017-09531)

* DNA サイズマーカー (New England BioLabs, Inc., 1kb DNA Ladder, No : 323-2L)

$ ^{*} $ マイクロチューブ用遠心機（TOMY社、MX-160）

* サーマルサイクラー（ASTEC社、PC707）

$ ^{*} $ 電気泳動槽（コスモバイオ社、ミューピッド2）

* UV トランスイルミネータ（フナコシ社、CSF-10BF）

* ポラロイドカメラ（フナコシ社、DS-300）
* ポラロイドフィルム（Fujifilm社、FP-3000B）

* 逆転写用プライマー：10g [CTA CAA TGG ATG CCG AC]

* PCRプライマーセット

1）フォワードプライマー：10g [CTA CAA TGG ATG CCG AC]、リバースプライマー：304 [TT GAC GAA GAT CTT GCT CAT]、1468bpを増幅

2）フォワードプライマー：N1[TTT GAG ACT GCT CCT TTT G]、リバースプライマー：N2[CC CAT ATA GCA TCC TAC]、443bpを増幅

* グローブ

<検査手順(操作は安全キャビネット内(クラスⅡ)で行う)>

ウイルスRNA の抽出：

（1）検査材料50～100mg当たり1mlのTRIZOL溶液でホモゲナイズを行う。検査材料はTRIZOL溶液の10％を越えてはならない。材料の容量に応じてチューブを選択するが、0リング付きスクリューキャップマイクロチューブ（2.0μl）を使用すると操作が容易で安全である。

（２）ホモゲナイズした溶液を室温（１５～３０℃）で５分間静置する。

（３）使用したTRIZOL溶液1mlに対してクロロホルム200μlを加えてキャップを閉じた後に15秒間激しくボルテックスで攪拌を行う。

（４）室温（１５～３０℃）で２-３分間静置した後に２～８℃、１２,０００×ｇで１５分間の遠心を行う。

（５）遠心により分離した液相を新しいチューブに移し
て使用したTRIZOL溶液1mlに対してインプロパノール500μlを加えて室温（15～30℃）で10分間静置を行う。

（6）静置後、2～8℃、12,000×gで10分間の遠心を行う。

（7）遠心後の上清を取り除いた後で、使用したTRIZOL溶液1mlに対して75%エタノール1mlを加えてボルテックス後に7,500×gで5分間の遠心を行う。

（８）遠心上清を取り除いた後に５～１０分間の乾燥を行い５０μⅠの蒸留水（RNase不活化処理をした）に溶解して使用直前まで－８０℃に保存しておく。

## 逆転写反応（RT反応）：

(1) ウイルスRNA溶液10ulに逆転写用プライマー（10g）1μl（10pmol）を加えて95℃、1分間の加熱後に水中で急速冷却を行った後に室温（15～30℃）とする。

（２）ウイルスRNAと逆転写用プライマー混合液に順次4μlの5x反応用バッファー、4μlの2.5mM dNTP、1mlのRNasin、1μlのAMV RTaseを加えて反応液の総量を20mlとする。

（３）４２℃で４５分間、９５℃で５分間のRTを行う。

## PCR反应：

（1）RT 反応終了溶液1mlに順次PCR用プライマーセット「（1）10gと304」もしくは「（2）N1とN2」を各々1μl（10pmol）、10×ExTaq Bufferを5μl、dNTP Mixtureを4μl、TaKaRaEx Taq（5U/ml）を0.25μl加えたのちに総量を蒸留水で50μlとしてPCR反応を行う。
PCR反応は以下の条件で行う。

[プライマーセット「(1)10gと304」]

94℃、1分

----- 94℃、30秒

30回 50℃、30秒

----- 72℃、90秒

72℃、7分

[プライマーセット「(2)N1とN2」]
94℃、1分
----- 94℃、30秒
30回 45℃、30秒
----- 72℃、90秒
72℃、7分

増幅遺伝子の確認：

増幅産物をアガロース電気泳動後、EtBr染色を行いUV照射によって目的遺伝子の存在を確認する。

プライマーセット「（1）10gと304」では1468bpの増幅遺伝子を確認する。

プライマーセット「(2)N1とN2」では443bpの増幅遺伝子を確認する。

### 3. ウイルスの分離方法

狂犬病ウイルスの分離は乳のみマウスを利用したマウス脳内接種法とマウス神経芽細胞腫由来培養細胞（MNA細胞）を利用したウイルス分離法で行うことが可能である。マウス接種法は簡便で検出感度の優れた方法ではあ
るが検査に長い日数（一般に21～28日間の観察が必要）を必要とする。一方、培養細胞を利用したウイルス分離法は簡便であり、短期間でウイルス分離が出来る。

## a）乳のみマウスを利用したマウス脳内接種法

マウス接種法による狂犬病ウイルスの分離は脳組織や唾液線の乳剤をマウスの脳内に直接接種して行う。なお、ウイルス分離の最終確認は前述の「直接蛍光抗体法」によるウイルス抗原の検出で行う。生後3日以内のマウスが最も感受性が高いが、性成熟したマウスの使用も可能である。狂犬病ウイルスに対する感受性は雌雄間で差がない。

く必要な器具等（記載されている同等品を使用）>

マウス：

1から3日令の乳のみマウスもしくは6週令以前の成熟マウスを使用（Swiss albio、BALB/c、ICR等の白色マウスを使用する）

* マウスケージ

* 給餌及び給水器

$ ^{*} $ 麻醉瓶

* ハサミ

* ナイフ

$ ^{*} $ ピンセット

$ ^{*} $ 舌压子

* 針と注射器（ツベルクリン用、25μl容量、2段針もしくは1.0mlディスポ注射器、27～26ゲージ針）

* ホモゲナイザー（破砕する組織の大きさに応じたものを使用）
$ ^{*} $ 10～50%の非動化済み動物血清（ウマ、ウサギもしくはハムスター）を含む生理食塩水もしくはPBS（-）等の緩衝液（組織をホモゲナイズするのに使用）

* 麻酔用エーテル

* ピペット

* オートピペッター

$ ^{*} $ 試験管もしくはコニカルチューブ（乳剤の希釈及び分注）

<検査手順(操作は隔離された専用の感染実験動物区で行う)>

## 感染乳剤の作製：

感染乳剤は無菌的に作製する。接種乳剤中には重量あたり10%の検査組織が含まれるように調整する。乳剤は接種前に少なくとも30分以上静置してその上清を接種に使用する。もし可能であれば、5分間、150～200×gの遠心を行いその上清を接種に使用する。細菌汚染を防ぐために乳剤作製に使用する緩衝液にストレプトマイシン（100mg/ml）とペニシリン（100U/ml）を加える。

## マウスへの接種方法：

マウスへの乳剂接種はエーテル等で麻酔してから行う。親指でマウスの下顎、人さし指で反対側の頭部を抑えてマウスの頭部を固定する。一方の手で注射器をもちながら針をマウスの右目と右耳の中間点の頭頂部から脳内に0.1～0.2cm刺して30μlを注入する。接種の終わったマウスは速やかにマウスケージに移して次の接種を始める。接種事故によりマウスが死亡しないことを確認して狂犬病発症の観察に移る。もし、接種後短時間（2日以内）にマウスが死亡した場合は廃棄して別の接種マウスを加えて数をそろえる。
マウスの観察：

狂犬病ウイルスを脳内に接種されたマウスが接種後5日以内に病的症状を示すことはまれではあるが、接種1日目から毎日観察を行うことが望まれる。

接種マウスは、その数、病状、死亡について21日間継続して観察と記録を行う。

## < 記録すべきマウスの症状>

* 体毛の逆立

* 振戦（尾をピンセットでつまみ上げて空中で観察）

$ ^{*} $ 後肢の協調運動の欠落（テーブルに置いて歩かせて観察）

$ ^{*} $ 麻痺

$ ^{*} $ 衰弱（濒死状態）

ウイルスを接種して24～48時間で死亡したマウスは狂犬病ウイルスではなく、ウイルス接種時の外傷による場合や細菌感染もしくは狂犬病ウイルス以外のウイルス感染によるものである。

ウイルス接種5日目以降から、診断目的のために1ないし2匹のマウスを毎日致死処分して直接蛍光抗体法によるウイルスの検査を行う（付属書11.確定診断のための「（A）検査方法」（P.86）を参照）。ウイルス検査に必要なマウス脳の取りだしは「付属書10.確定診断の為の「（B）脳の取出し方」（コウモリ、マウス等）」（P.102）を参照する。
## b) 培養細胞を利用したウイルス分離法

狂犬病ウイルスの分離はマウス神経芽細胞腫由来培養細胞（MNA細胞）によって行う。本培養法は、マウスによる検査系の欠点である長い検査日数（一般に21～28日間の観察が必要）を必要としない点がすぐれているが、野外株によっては抗原の検出が難しい場合がある。

<必要な試薬と機材（記載されている同等品を使用）>

* 組織培養フラスコ（IWAKI、25cm²フラスコ、No：4100-010）

* 培養液（EMEM-10：MEM培地（SIGMA社、MEM、No：M-4655）に10％ウシ胎児血清に抗生物質（100U/ml-Penicillin、100mg/ml-Streptomycin）・抗力ビ剤（0.25mg/ml、アンホテリシンなど）を加える）

* ウシ胎児血清（SIGMA社、No：F2138）

$ ^{*} $ 抗生物質（GIBCO社、Penicillin-Streptomycin、No：1570-063）

* 抗力ビ剤（WAKO社、Amphotericin B、No : 015-13361）

* トリプシン（Cellgro社、0.05%-Trypsin/E.TA、No：25-052-C1）

* メンブランフィルター（Millipore社、Millex-G5、No : 15070-063）

* 0リング付き1.5ml遠心チューブ（IWAKI、スクリューキャップマイクロチューブ、No：2752-015）

* ディスポザブルピペット（1ml、5ml、10ml）

$ ^{*} $ ピペットエード

$ ^{*} $ CO $ _{2} $ インキュベーター（5%-CO $ _{2} $ 、35℃）
* スライドグラス（8穴、テフロンコーティング：HTC Super cured autoclavable）

* 検査用標識抗体（1. 直接蛍光抗体法で使用しているものと同等品）

<検査手順(操作は安全キャビネット(クラスⅡ)内で行う)>

（１）Ｏリング付き１.５ml遠心チューブに８００ul のEMEM-10を準備する。

（２）およそ５０ｍｇの検体を遠心チューブに加えて２０％のホモゲナイズ液とする。

（３）遠心（４℃、１６００回転、１０分）を行い破砕した組織を沈殿させる。

（4）遠心上清を1.5mlの培養細胞浮遊液（およそ2×10⁶個のMNA細胞を15mlコニカルチューブに浮遊したもの）に加える（細菌等の汚染が強い場合には0.22mm径のメンブレンフィルターでろ過する）。

（５）ウイルスと培養細胞の混和液を37℃で1時間培養を行う（15分ごとに攪拌。1時間以上の培養も可能）。

(6) EMEM-10をウイルス-培養細胞液に加えて5mlに調整する。

（7）ウイルス-培養細胞液を8穴のスライドに1～2滴滴下（5mlピペット使用）してスライド上で培養を行う。残りのウイルス-培養細胞液（およそ半量）は培養フラスコ（25cm²（50ml）フラスコ）で培養を行う。

（８）48時間後に8穴スライドをPBS（-）で軽く洗いアセトン固定を行う。

（9）標識抗体を用いて培養細胞内のウイルス抗原を確認する。
※ 前述（9）でウイルス抗原の確認が困難な場合や、検査成績が陰性でも臨床所見や疫学的情報から狂犬病ウイルスの感染が強く疑われている場合には以下に進む

(10)(7)でウイルス-培養細胞液を播種した培養フラスコの培地を新鮮な培地と交換してさらに3日から4日間培養を継続する。

（11）継続培養が終了したら、トリプシン処理を行って培養細胞を培養フラスコからはがす。

（12）EMEM-10を培養細胞液に加えて5mlに調整する。

（13）8穴のスライドに培養細胞液を滴下して細胞をスライドに固着させる（3ないし4時間、もしくは翌日まで培養）。

（14）アセトン固定後に標識抗体を用いて培養細胞内のウイルス抗原を確認する。

（15）判定、もしくはウイルスの回収。

cf. スライドグラスによる感染細胞の培養はシャーレ等の容器内で行いウイルス液の外部への飛散を防ぐ。使用したシャーレ等の容器内には湿らせたペーパータオル等を敷いてスライド上の培養液の蒸発・乾燥を防ぐ。
（1）検疫が必要な動物の種類

動 物 種
犬	イヌ科、イヌ属、イエイヌ1種
ネコ	ネコ科、ネコ属、イエネコ1種
きつね	イヌ科、キツネ・クルペオギツネ・ホッキョクギツネ・オオミミギツネ属、全種
あらいぐま	アライグマ科、アライグマ属、全種
スカンク	イタチ科、スカンク・マダラスカンク・ブタバナスカンク属、全種

(2) 犬の輸入ができる空海港

空港	新千歳、新東京国際(成田)、東京国際(羽田)、名古屋、関西国際、福岡、鹿児島、那覇
海港	苦小牧、京浜、名古屋、大阪、神戸、関門、博多、鹿児島、那覇

### Ⅰ. 输入检疫

① 犬・ネコ

犬・ネコ	区分	狂犬病の予防注射を受けている1)	狂犬病の予防注射後30日を超えていない	家畜防疫官の許可を受けて係留場所で狂犬病の予防注射を実施	指定地域3)から直接輸入され、健康証明書がある	指定地域以外の地域から輸入され、指定施設で隔離されていたこと等についての証明書がある4)	その他
健康証明書がある2)	健康証明書がない	健康証明書がある	健康証明書がない	健康証明書がある	健康証明書がない
けい留期間	14日	30日	注射を受けた日からけい留を始めた日までの日数を	けい留を始めた日から注射を受けた日までの日数に	12時間以内	30日	180日
44日から差し引いた日数	60日から差し引いた日数	44日を加えた日数	60日を加えた日数
② あらいぐま・きつね・スカンク

あらいぐま	スカンク	区分	指定地域から直接輸入され、健康証明書がある³)	指定地域以外の地域から輸入され、指定施設で隔離されていたこと等についての証明書がある⁴)	その他
けい留期間	12時間以内	30日	180日

1) 狂犬病の予防注射：

注射後30日を超えており、

かつ、不活化ワクチンの場合は180日以内、生ワクチン

の場合は1年以内、輸出国政府機関がその有効期間を証明している場合はその期間

内であること。

2）健康証明に必要な事項：狂犬病にかかっていない、又はその疑いがないこと。

3）指定地域から輸入される犬等のうち12時間以内のけい留期間となるものの健康証明書に必要な事項：

Ⅰ．狂犬病にかかっていない、又はその疑いがないこと。

Ⅱ．当該地域において過去6カ月間又はその生産以来飼養されていたこと。

Ⅲ．当該地域に過去6カ月間狂犬病の発生がなかったこと。

$ ^{*} $ 農林水産大臣の指定する地域は下記のとおり（平成13年5月末現在）。

アジア州：サイプラス、シンガポール、台湾

ヨーロッパ州：アイスランド、アイルランド、スウェーデン、ノルウェー、連合王国（グレート・ブリテン及び北アイルランドに限る。）

大洋州：オーストラリア、グアム、ニュー・ジーランド、フィジー諸島、ハワイ
4）指定地域以外の地域から輸入される犬等のうち30日のけい留期間となるものの健康証明書に必要な事項：

IV. 狂犬病にかかっていない、又はその疑いがないこと。

V．狂犬病に感染するおそれのある動物の侵入を防止できる施設として輸出国政府機関が指定し、農林水産大臣に通知した施設において過去6カ月間又はその生産以来隔離されていたこと。

VI. 当該施設に過去6カ月間犬等が導入されていなかったこと。

VII. 当該施設において過去6カ月間狂犬病の発生がなかったこと。

### V III. 輸出檢疫

けい留期間は、12時間以内（輸出国の輸入条件がある場合、それに基づく検査）が必要となる。
### 付属書13. 汚染物品等の消毒方法

（参考：「ハワイ州Rabies Contingency Plan Incident Command System 2001」、「Laboratory Techniques in Rabies, Forth edition, World Health Organization」、「英国Memorandum on Rabies February 2000, Prevention and Control」）

汚染された可能性のある「衣服」や「用具」は、家庭用の「消毒用石鹸」や「洗濯用洗剤」を使用した洗濯または「オートクレーブ滅菌」により狂犬病ウイルスを不活化することが可能であるが、所有者がいとわなければ衣服などは「焼却」する。

狂犬病の動物を飼育および解剖を行った部屋の床壁等は、「1%の温湯石鹸水」や「洗剤液」もしくは「第4級アンモニア塩」によって狂犬病ウイルスを不活化することが可能である。

注)洗剤等の噴霧により部屋を清浄化する前には、床や壁に付着した感染動物の飛散組織等の有機物を洗剤で十分に取り除いておくことが重要である。

ちなみに米国の動物検疫所の洗濯機は、通常の洗濯石鹸や家庭用の洗剤を摂氏63度で使用している。
## <対応の課題とその検討事項>

手引書中の箇所	課題とその検討事項
通常時の対応	犬の所有者や医療関係者等の狂犬病に対する意識、知識が低いことから、今後とも啓発活動に努めることが望ましい。検疫対象動物以外の近年ペットとして飼育される、例えばコウモリのような動物についても、何らかの安全性チェックを検討することが望まれる。手荷物として検疫対象動物を検疫せずに持ち込まないように検疫制度を周知することが望まれる。狂犬病の感染の恐れのある作業に従事する者への免疫付与、安全装備の配備が望まれる。国内で狂犬病の発生がないため、狂犬病を発症した動物の臨床症状を直接経験することが出来ず、狂犬病を疑って診察等を行わないため診断が遅れるおそれがあることから、狂犬病発症動物に直接接触する可能性の最も高い獣医師等の関係者に対して、定期的に狂犬病の実際を把握できるビデオ、講習などによる意識の啓発などが望まれる。また、野生動物等では臨床症状の不明な部分が多く判断が困難なことから、流行国の発生状況や具体的な臨床症状等に関する情報収集を適時行い、必要な注意喚起を行うことが課題。
(付属書1)
犬の抑留(I.1.(2).(ア))	狂犬病に感染している疑いのある動物を所有者宅で保管したい旨の希望があった場合には、まずは都道府県動物管理施設でけい留するよう勧めることとし、不可能な場合には感染の恐れがないよう十分に指導することが望まれる。
都道府県動物管理施設にあっては、狂犬病予防法の施行通知（昭和25年10月5日 厚生省発衛第170号）に記載の「一頭ずつけい留出来る設備のあること」に十分留意することが課題。
動物愛護(I.1.(3))	確定診断のための犬等の致死処分に対する反対を想定し、確定診断に際しては緊急時の措置として必要であることの理解を得られるよう配慮することが課題。（環境省自然環境局総務課動物愛護管理室とも連携が望まれる）
野生動物の捕獲(I.4.(3).ア)	野生動物のうち、「鳥獣保護法」の対象動物の捕獲である場合、環境省等への許可申請は、必要が生じた都度行う必要があるが、狂犬病対策の場合のような緊急時対策については、例えば、各年度始め等に事前に許可を受けておけるような対応の依頼を検討。
一斉ワクチン接種(VI.3.(1).キ)(VI.3.(2).ク.(ウ))	また発生時に必要となる人及び動物用ワクチンの量についての試算を行うことが課題。一斉ワクチン接種の対象とする犬の範囲の検討も課題。
確定診断(IV)(付属書10)	国立感染症研究所以外に検査実施可能な検査機関をリストアップすることが課題。検体の輸送手段について、あらかじめ想定して確保しておくことが望まれる。各自治体は少なくとも、狂犬病の疑いのある動物の頭部を切断し、国立感染症研究所に送付するための施設と職員を確保しておくことが望ましい。
(付属書11)	国立感染症研究所及び動物検疫所において直接蛍光抗体法に使用する抗体は輸入に頼っており、また人の生検を凍結材料として検査可能な機関がないことから、特異抗体の作成を行うか、遺伝子診断等の代替検査法を確立し、生検についてホルマリン固定材料を使用した検査方法を確立することが課題。輸入狂犬病ウイルスに対する新しい検査方法の検証が国内だけでは不可能なことから、狂犬病流行国との情報交換を常時行い、新しい検査方法に関する評価を含めた共同研究を積極的に行うことが望まれる。
人狂犬病発生予防対策(Ⅱ.1.(3).ウ)	1. 人抗狂犬病免疫グロブリン(HRIG) 狂犬病暴露後発病予防は狂犬病ワクチン接種とHRIGまたはウマ抗狂犬病免疫グロブリン(ERIG)の接種によって行うことがWHOなどから勧告されている。しかし、日本ではHRIGやERIGは輸入も製造もされておらず、入手不可能である。日本においてERIGは技術的にただちに製造可能であると思われる。ただし、平時の需要はきわめて少ないと推測されるので、まむし抗毒素血清のように政府が一定量を買い上げて備蓄する制度が必要である。HRIGはただちに製造することは不可能であるうが、一定量を海外メーカーから輸入することは可能であるう。ERIGはウマ由来で血清病の危険があり、またHRIGは人由来血液製剤であるため、製造量に限度があり、未知のウイルス混入を否定できないなどの問題がある。将来的には遺伝子操作によりHRIGと同等の抗狂犬病免疫グロブリンを微生物に生産させる技術の開発が望まれる。
(Ⅱ.1.(3).工)	2. 組織培養狂犬病不活化ワクチン日本では1社が製造しているが、年間生産量は高々2万ドーズにすぎない。これは約3,500人分の暴露後発病予防に必要な量であり、約6,700人分の暴露前免疫を行える量に過ぎない。国内で狂犬病が発生した場合には医療および獣医療関係者の暴露前免疫を行うための狂犬病ワクチンさえも不足することが明白である。したがって、外国産の組織培養狂犬病不活化ワクチンの輸入が必要となる。平时には狂犬病ワクチンの輸入が必要でなくとも、緊急輸入の方法についても検討することが望ましい。
(Ⅱ.1.(3))	3. 医療機関狂犬病暴露後発病予防を希望する咬傷被害者を受け入れて、接種スケジュールに従った狂犬病ワクチン接種を行える医療機関の数が絶対的に不足している。少なくとも各地の2次、3次救急病院では組織培養不活化狂犬病ワクチンを常備して、狂犬病常在地で咬傷を受けた被害者の処置要請に対応できることが望ましい。
厚生労働省と農林水産省の連携(動物検疫所における狂犬病の発生等について)(Ⅲ.2)(V.2)	国立感染症研究所とのダブルチェックの必要性、疑わしい事例(FA陽性等)は輸入禁止と判断する是否について、場合によっては厚生労働省の担当部局と相談できるような連絡体制の整備が課題。動物検疫所に置いて発生した場合、法律に基づく届出規定(法第8条)のみであり、疫学情報等の収集規定がないことから、農林水産省及び厚生労働省のそれぞれ担当部局による連絡体制の整備が課題。
都道府県等の動物管理施設(I.1.(2).イ.(ア))	自治体の動物管理施設の拡充を図り、疑わしい動物のけい留施設として、観察から致死処分、検体採取及び検体送付を一括して行えるよう整備することは、狂犬病対策はもとよりその他の動物由来感染症対策にも有益と思われ、その検討が望まれる。