抗凍蛋白

不凍蛋白質（抗凍蛋白）（Antifreeze proteins ，AFPs）或叫冰結構蛋白（ice structuring proteins ，ISPs) 是指一類由某些脊椎動物、植物、真菌和細菌產生的多肽。這些多肽能保證這些物種在零下溫度環境下生存。AFP 結合到小的冰晶上，阻止冰的結晶化和晶體的生長，不然，將會對那些生命物種是致命的。越來越多的證據表明，AFP 與哺乳動物細胞膜相互作用保護細胞膜不會被凍壞。關於不凍蛋白的研究提示 ATF 參與生物體對冷氣候的適應過程。

非依數性

不像廣泛使用的汽車抗凍劑，乙二醇，AFP 對冰點的降低不和濃度成正比。它們不是按照依數性規律起作用。這樣，就能使它們在相當於其他溶解的溶質的 1/300 到 1/500 的濃度，而起到防凍劑的作用。這將使它們對滲透壓的影響降至最小。AFP 得到這種非凡的能力歸因於它們在特定的冰晶表面上的結合能力。.

熱滯後現象

AFP 所產生的熔點和冰點間的差值叫做熱滯後。在固態的冰和液態的水之間的介面上加入 AFP 阻止冰晶生長的熱力學的有利條件。從動力學角度講，AFP 覆蓋住水進入冰的表面。

熱滯後在實驗室裡很容易用納升滲透壓計（nanolitre osmometer）測量。不同的生物體具有不同的熱滯後值。最大的熱滯後值是魚的 APF 的熱滯後值，接近 - 1.5°C (2.7°F)。然而，昆蟲的不凍蛋白是任何已知的魚類的不凍蛋白活性的 10-30 倍。這可能是由於昆蟲在地面上遇到的低溫要比魚在凍水中遇到的–1°C or –2°C 還要低。在嚴冬月份裡，雲杉實心蟲可以戰–30°C 低溫，而不會被凍僵。 阿拉斯加的甲殼蟲 Upis ceramboides 可以在–60°C 的低溫下存活，但它使用的抗凍分子不是由蛋白質組成的。

冷凍的速率可以影響 AFP 的熱滯後值。迅速的冷卻可以顯著地降低非平衡態冰點，並且，因而降低熱滯後值。這意味著如果溫度驟然下降，生物體可能無法適應它們所處的零下環境。

耐凍和防凍

含 AFP 的物種可以分為一下幾類：

防凍，避凍類（Freeze avoidant）: 這些物種能保護它們的體液，防止凍到一起。一般說來，在極冷的溫度下 AFP 功能會受損，導致冰晶的迅速增長，以至生物體死亡。

耐凍類（Freeze tolerant）：這些物種在體液凍結時，仍能生存。一些耐凍物種被認為是用 AFP 作為低溫保護劑（cryoprotectants）以保護生物體免受凍傷，而不是不結凍。這種作用的確切機理還不知道。然而，人們認為這裡 AFP 可能是抑制重結晶化和穩定細胞膜以防止其被冰損害。AFP 與冰核蛋白聯合作用在結凍後，控制冰的擴充套件速率。

多樣性

有許多類已知的非同源 AFP

4.1 魚類 AFP

Figure 1. The three faces of Type I AFP 抗凍糖蛋白或 AFGP 是在南極魚科和北部的鱈魚體內發現的。它們的分子量 2.6-3.3 kD

I 型 AFP 是在美洲擬鰈（winter flounder）、長角杜父魚（longhorn sculpin）和短角杜父魚（shorthorn sculpin）中發現的。這一類 AFP 有很完備的文獻資料，因為它們的三維結構是最先被測定出的。I 類 AFP 由單條、長的、兩性的阿勒發螺旋構成。分子量約為 3.3-4.5 kD。三維結構有三面，即疏水面、親水面和 Thr-Asx 面

I-hyp 型 AFP (這裡 hyp 代表高活性（hyperactive）是在幾種三斑沙鰈（righteye flounders）中發現的。該類 AFP 的分子量約為 32kD（兩個 17kD 組成的二聚體分子）。該蛋白已經從美洲擬鰈的血漿中分離出來。它比大多數魚的 AFP 對降低冷凍溫度的作用效果好得多。

II 型 AFP 是在大牛尾魚（sea raven）、胡瓜魚（smelt fish）和鯡（herring）中發現的。它們是富含半胱氨酸的球蛋白。其中含五個二硫鍵。

III 型 AFP 是在南極鯰魚類（Antarctic eelpout）中發現的。在整個冰結合表面它們表現了與 I 型 AFP 相似的疏水性。它們的分子量接近 6kD

IV 型 AFP 是在長角杜父魚（longhorn sculpin）中發現的。它們是富含穀氨酸和谷氨醯胺的阿勒發螺旋蛋白。. 這種蛋白的分子量接近 12KDa 並且含有一個 4 螺旋的束。其唯一的翻譯後修飾是一個焦穀氨酸殘基、一個環化的穀氨酸殘基處於 N - 末端。在加拿大的貴湖大學（the University of Guelph）目前正在考查這種焦穀氨酸殘基在來自於長角杜父魚的 IV 型 AFP 的抗凍活性。

4.2 植物 AFP

當植物中的不凍蛋白質被發現後，AFP 的分類就更復雜了。. 植物的 AFP 在下列方面與其他的 AFP 相當不同：

與其他的 AFP 相比較，植物的 AFP 的熱滯後活性要弱得多。
植物 AFP 的生理功能似乎是抑制冰的重結晶而不是防止冰的形成。
大多數植物 AFP 是進化了的致病性相關蛋白，有時保持著抗真菌的性質。

' 也參見脫水蛋白

4.3 昆蟲 AFP

有兩種型別的昆蟲不凍蛋白質，“擬步行蟲科”（Tenebrio）和 “樹的”（Dendroides）AFP 它們處於不同的昆蟲科。它們彼此相似，都是超活性的（比如，具有高的熱滯後值）而且，是由不同數量的分子量大約為 8.3 到 12.5 kD 的 12 或 13 聚體構成。透過蛋白分子鏈的全長，至少，每第六個殘基是一個半胱氨酸。

“擬步行蟲科”（Tenebrio）或 V 型 AFP 來源於甲殼蟲，而 “樹的”（Dendroides）或雲杉黃卷蛾（Choristoneura fumiferana ）AFP 來源於一些鱗翅目昆蟲。

4.4 海冰微生物物種的 AFP

人們在生活在海冰裡的微生物體內也發現有 AFP。圓柱擬脆桿藻（Fragilariopsis cylindrus）和脆桿矽藻 '（F. curta）這兩種矽藻在極地海冰中的矽藻群落中扮演了重要的角色，主宰著小板冰層和浮冰群內的聚集過程。AFP 廣泛散佈在這些物種中，並且，AFP 基因的存在作為多基因家族顯示著這一組 AFP 對於脆桿藻屬（the genus Fragilariopsis）的重要性。在圓柱擬脆桿藻（F. cylindrus）中鑒定出的 AFP 屬於在不同的分類單元中代表的 AFP 家族，並且，也可以在其他與海冰相關的生物物種中發現，如：南極嗜冷菌（Colwellia spp）、冰川舟形藻（Navicula glaciei）、矽藻 Chaetoceros neogracile、浮游動物 Stephos longipes 和南極白冬孢酵母（Leucosporidium antarcticum）) 和南極內陸冰菌黃桿菌科（Flavobacteriaceae），以及，在耐寒真菌雪腐黒色小粒菌核病菌（Typhula ishikariensis）、, 冷季型香菇（Lentinula edodes）和金針菇類（Flammulina populicola 中。)

進化

APF 顯著的多樣性和分佈提示進化成不同型別是相應 1-2 百萬年前在北半球發生和 1 千萬－3 千萬年前在南極發生的海平面冰川作用的結果。這種獨立發展的相似的適應化叫做趨同演化（進化）。為什麼許多型別的 AFP 儘管它們具有多樣性，但是卻能執行相同的功能。這有兩個原因：

儘管冰是統一由 氧和氫構成的，它有許多暴露的、用於結合的表面。不同型別的 AFP 可以與不同的表面相互作用。
儘管五種 AFP 的氨基酸的初級序列不同，但當它們每一種折疊成功能蛋白時，它們可以具有三維的或四級結構的相似性。這種相似性為它們和冰的同樣的相互作用提供了方便。

作用機制

人們認為 AFP 抑制冰晶的生長是靠一種吸附–抑制機制。它們被吸附到冰的非底平面，從而，從熱力學角度不利於冰的生長。在一些 AFP 上存在平的、剛性表面看來有利於該 AFP 與冰透過範德華力（Van der Waals force）發生表面互補性相互作用。

與冰結合

正常地，在溶液裡生長的冰晶只展示底面 (0001) 和稜面 (1010), 並呈圓或扁盤狀。然而，在 AFP 的存在下會暴露出其他表面。現在出現的 2021 表面至少對於 I 型 AFP 是首選的結合表面。. 透過對 I 型 AFP 的研究，冰和 AFP 最初被認為是透過氫鍵相互作用 (Raymond and DeVries, 1977)。然而，當被認為是有益於這種氫鍵的蛋白部分發生突變後，並沒有觀察到人們所推測會發生的抗凍活性的降低。最近的資料提示疏水相互作用可能是主要的貢獻因素。由於復雜的水冰相互作用，很難體察到結合的確切機理。最近人們透過使用分子建模程式設計的分子熱力學方法（molecular modelling programs molecular dynamics）或蒙特卡洛方法（Monte Carlo method）試圖揭示精確的機理。

結合機制和抗凍作用

根據魚類美洲擬鰈中的不凍蛋白質的結構和功能的研究，展示出 I 型 AFP 分子的抗凍機制是由於 AFP 是透過它的四個蘇氨酸殘基的羥基與沿著冰的晶格方向的氧之間形成的氫鍵以拉鏈式樣結合到冰的成核結構上。因而，停止或抑制冰的金字塔表面的生長，這樣降低冰點。

上述機制可以用來闡明具有下列兩個共同的特性的其他抗凍蛋白的結構 - 功能關係：

沿著相關序列，每 11 個氨基酸殘基週期內就出現一個蘇氨酸殘基（或任何其他側鏈能和水形成氫鍵的其他極性氨基酸殘基），並且，
其殘基組成中丙氨酸的百分含量高。

歷史

在 20 世紀 50 年代加拿大科學家 t Scholander 著手於解釋為何北極的魚類可以在低於其血液的冰點的冷水中生存。他做的實驗使他相信北極魚血液內有抗凍物質。. 然後，在 20 世紀 60 年代後期，動物生物學家 Arthur DeVries 已能夠從他考察的南極魚類體內分離出不凍蛋白質。後來，這些蛋白質被稱作為抗凍糖蛋白 (AFGPs) 或抗凍糖肽以區別於新發現的非糖蛋白生物抗凍劑。DeVries 與 Robert Feeney 合作 (1970) 勾畫出抗凍蛋白的物理和化學性質。1992 年 Griffith 等記載了他們在冬黑麥（winter rye）葉子中發現的 AFP。大約同時，Urrutia, Duman 和 Knight (1992) 記載了在被子植物（angiosperms）中的熱滯後蛋白。轉年，Duman and Olsen 指出已經在 23 種以上的被子植物中發現 AFP，包括，一些被人們作為食物的被子植物。他們還報道了 AFP 存在於真菌和細菌中。

名稱的改變

最近人們試圖把不凍蛋白質重新命名為冰結構蛋白 （Ice Structuring Proteins，ISP）以更精確地表達其功能並消除任何對 AFP 和汽車防凍液乙二醇之間的負面聯想。這是兩種截然不同的東西，僅是在功能上有一點點相似性。

商業用途

商業上，不凍蛋白質具有無數的用途。許多領域可以從它保護組織以免凍傷的作用方面受益。企業界目前正在考察不凍蛋白質在以下方面的使用：

增加谷類植物的耐凍性在寒冷氣候的區域拓寬收獲季節。
在寒冷氣候的地區改善漁業產量。
延長冷凍食品的貨架存放期。
改善冷凍手術
增強醫學上移植或輸血用組織的儲存效果。
用於體溫過低狀態的治療。

最近訊息

一項最近的成功的商業嘗試是將 AFP 引入到冰淇淋和酸奶產品中。這個成分被標示為冰結構蛋白 Ice Structuring Proteins，ISP）已經獲得 FDA（美國食品和藥物監管局）的批准。該冰結構蛋白分離自魚類並且在酵母中大規模復制。

對於這類事情引起了反對遺傳修飾生物物種（genetically modified organisms (GMOs)）的組織的反對。他們提出異議說，修飾過的不凍蛋白質會引起發炎。然而，正如已經指明的，ISP 在經過一些認真的試驗後，已經批准可以被人類所消費。似乎在極北部地區和溫帶地區的生活的人們已經在飲食中攝入大量的 AFP。根據已知的 AFP 的歷史消耗量，可以安全的得出結論：AFP 的功能性質不會對人體造成任何毒理性或過敏性影響。

同時，生產冰結構蛋白的轉基因過程已被廣泛地在社會上使用。例如，每年用巨大量的轉基因技術生產的胰島素有用於治療 I 型糖尿病的患者。轉基因過程對產品不造成影響；僅僅是可以提高產量，同時，防止僅為提取這種蛋白就要殺死大量的魚。

最近，聯合華利公司已經把 AFP 放到一些美國產品裡。包括，一些冰棒和一個新系列的 Breyers 品牌的輕雙攪雪糕（Light Double Churned ice cream bars）在雪糕（冰淇淋）中 AFP 在加較少新增劑的情況下使之產生非常滑膩，密實和低脂的效果。AFP 控制在裝卸處或廚房餐桌上的融化所產生的冰晶的生長，而這種冰晶的生長對雪糕的口感影響非常大。

2009 年 11 月，美國國家科學院院刊發表了在阿拉斯加的甲殼蟲中發現行為像 AFP 的分子，但是該分子是由二糖和脂肪酸組成。

一項 2010 年的研究證實了在 AFP 溶液中過熱水冰晶的穩定性，顯示該蛋白即可以抑制結冰，也可以抑制冰的融化。

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