Emprego da citometria de fluxo na avaliação do perfil imunofenotípico de pacientes com leucemia linfocítica crônica

A leucemia linfocitica cronica (LLC-B) e uma proliferacao clonal de linfocitos B maduros  caracterizada por curso clinico indolente. Biologicamente esta clonalidade e caracterizada  pela baixa expressao de imunoglobulina de superficie (sIg) com restricao a uma unica cadeia  leve de imunoglobulina, associada a alta expressao do antigeno CD5 e positividade a  antigenos relacionados a linfocitos B tais como: CD19, CD20 e CD23 e negatividade ao  FMC7. O perfil imunologico e a analise morfologica das celulas linfoides sao os principais  meios para o diagnostico diferencial LLC-B de outras doencas linfoproliferativas cronicas. O  objetivo deste estudo foi avaliar o padrao de expressao de uma variedade de antigenos de  membrana em celulas leucemicas procedentes de pacientes com LLC-B. No presente estudo,  amostras de sangue periferico de 80 pacientes com LLC-B foram analisados por citometria de  fluxo multiparametrica juntamente com analises hematologicas de rotina, com um painel de  anticorpos monoclonais (AcMo): CD45/CD14, CD3/CD19/CD45, CD4/CD8/CD3,  CD20/CD5/CD3, CD3/CD16-56/CD45, CD2/CD7, FMC7/CD23, CD103/CD22/CD20,  HLADR/CD38, CD10/CD19, CD1a, CD11b alem de IgM/gD, e cadeias leves das  imunoglobulinas kappa e lambda visando a deteccao sIg e do perfil de restricao clonal das  cadeia leves das imunoglobulinas. Os dados hematologicos foram obtidos a partir do  analisador hematologico e as analises citomorfologicas em distensao sanguinea coradas pelo  Leishmann. As amostras deste estudo foram procedentes de 45 homens e 35 mulheres, com  idade variando entre 55 e 84 anos (media de 65 anos). O hemograma revelou contagem total  de celulas branca variando de 10,0-42,0 x 109/l. (media de 50,0 x 109/l) e contagem de  linfocitos superior a 5,0 x 109/l em todos os casos. As celulas neoplasicas demonstraram um  fenotipo caracteristico para LLC-B (CD5+/CD19+/CD20+/HLADR+/CD23+) na maioria dos  casos, associados a ausencia de expressao para marcadores de celulas T (CD1a, CD2, CD4,  CD3, CD7, CD8), CD103, CD14 e FMC7. As celulas leucemicas da maioria dos pacientes  expressaram tambem IgM e IgD de baixa intensidade com predominio da restricao da cadeia  leve kappa, na maioria dos casos (59,7%). A presente observacao destaca a importância da  imunofenotipagem para o correto diagnostico das sindromes linfoproliferativas cronicas e  sendo o painel de AcMo utilizado capaz de estabelecer a confirmacao diagnostica da B-CLL

section_content: B (CD5+/CD19+/CD20+/HLADR+/CD23+) na maioria dos casos, associados à ausência de expressão para marcadores de células T (CD1a, CD2, CD4, CD3, CD7, CD8), CD103, CD14 e FMC7. As células leucêmicas da maioria dos pacientes expressaram também IgM e IgD de baixa intensidade com restrição clonal da cadeia leve kappa, na maioria dos casos (59,7%). A presente observação destaca a importância do imunofenotipagem para correto diagnóstico das síndromes linfoproliferativas crônicas e sendo o painel de AcMo utilizado capaz de estabelecer a confirmação diagnóstica da LLC-B. 

Palavras-chave: Leucemia linfocítica crônica; citometria de fluxo; imunofenotipagem.

section_content: Chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) is a clonal proliferation of mature B lymphocytes characterized by indolent clinical course. Biologically this clonallity is characterized by low expression of surface immunoglobulin (sIg) with restriction to a single immunoglobulin light chain associated with high expression of CD5 antigen and positivity to B cell antigens lymphocytes such as CD19, CD20 and CD23 and negativity to FMC7. The immunological profile and morphological analysis of lymphoid cells are the main means for the differential diagnosis of B-CLL from other chronic lymphoproliferative diseases. The aim of this study was to evaluate the expression pattern of a variety of membrane antigens in leukemic cells originating from patients with B-CLL. In this study, peripheral blood samples from 80 patients with B-CLL were analyzed by multiparametric flow cytometry in addition to routine hematologic exams, using a panel of monoclonal antibodies (MoAb): CD45/CD14, CD3/CD19/CD45, CD4/CD8/CD3, CD20/CD5/CD3, CD3/CD16-56/CD45, CD2/ CD7, FMC7/CD23, CD103/CD22/CD20, HLADR/CD38, CD10/ CD19, CD1a, CD11b and also IgM/gD, kappa and lambda immunoglobulin light chains for the detection of surface Avaliação: A RBHH publica os resumos e abstracts de teses da área apresentados em entidades que tenham programas de pós-graduação reconhecidos pelo MEC/Capes e considera a obtenção do título suficiente para sua publicação na forma como se propõe a seção. Suporte Financeiro: 1-Fapern (Fundação de Apoio a Pesquisa do Estado do Rio Grande do Norte); 2-Hemocentro Dalton Barbosa Cunha -Hemonorte; 3-Pro-Reitoria de Pesquisa da UFRN-Propesq. 

Recebido: 6/3/2010 Aceito após modificações: 7/5/2010

Rev. Bras. Hematol. Hemoter. 2010; 32(4):337-338 Resumo de Tese immunoglobulin and clonal restriction for immunoglobulin light chain. The Hematological data were obtained from the hematological analyzer and cytomorphological analysis in blood film stained by Leishmann. The study samples consisted of 45 men and 35 women, ages ranging from 55 to 84 years (mean 65 years). Complete white blood count showed count ranging from 10. 0 to 42. 0 x 10 9 /L. (mean 50. 0 x 10 9 /L) and lymphocytes count greater than 5. 0 x 10 9 /l in all cases. The neoplastic cells displayed B-CLL phenotype (CD5+/CD19+/CD20+/HLADR+/CD23+) in the vast majority of the cases, associated to failed to stain for T cell markers (CD1a, CD2, CD4, CD3, CD7, CD8), CD103, CD14 and FMC7. Leukemic cells of most patients also expressed low intensity of IgM and IgD with clonal restricted kappa light chain in most cases (59,7%). This observation highlights the importance of immunophenotyping for correct diagnosis of chronic lymphoproliferative syndromes and the panel of MoAb used was sufficient for diagnostic confirmation of B-CLL. 

Key words: Chronic lymphocytic leukemia; flow cytometry; immunophenotyping.
section_name: Abstract