La localidad fue de la Orden de San Juan de Jerusalén primero y después de la de Santiago. Fallecido Fernando I pasó al Infantado de Campos, y por la hija de aquél, doña Elvira a San Isidoro de León.
Edificio situado a las afueras del pueblo, junto al cementerio, y construido en piedra y tapial. La sobriedad que caracteriza el exterior de la ermita, contrasta con la riqueza que presenta en su interior, construida hacia la mitad del siglo XVII. Por fuera descuella la organización del atrio y pórtico rodeando la nave que emerge ligeramente sobre los tejados de este y la espadaña que rompe la horizontalidad.
Tiene una sola nave que se cubre con armadura mudéjar del siglo XVI, en forma de artesa invertida con cuatro faldones inclinados decorados con doce pinturas sobre tablas del Antiguo Testamento. En los faldones de la cabecera, ocultos mediante un falso techo de madera, se representa la Coronación de la Virgen entre dos soles y dos escudos de la Casa Real de Felipe IV. Los dobles tirantes reforzados por ménsulas, y el friso presentan una decoración floral geométrica en blancos, rojos y azules.
Las paredes laterales tienen partes de pintura policromada del siglo XVII, pues una viga señala la fecha de 1675, se decora con motivos estilizados florales y geométricos, imitando cortinajes y azulejos. Fueron realizadas por pintores de Medina de Rioseco como Ignacio Fuertes, Agustín Guerrero y Manuel del Río (1664). Se han interpretado como el buen paso del cristiano por la tierra con la ayuda de los Apóstoles y con la intercesión de Santa Ana, por las imágenes y los textos que las acompañan.
El presbiterio se separa de la nave mediante reja de madera policromada del primer tercio del siglo XVII.
A los pies, situado en alto se encuentra el coro con tallas de gran finura, con columnas de piedra con capiteles corintios y zapatas de madera, cubierto por un artesonado decorado con casetones hexagonales y en su interior florones y descansando sobre ménsulas renacentistas. Presenta barandilla con pasamanos de madera tallado y policromada, con barrotes torneados que apoyan en zócalo de madera compuesto por tres franjas decoradas con triángulos, hexágonos y delfines enfrentados. En 1665 se hacían pagos por el coro a los carpinteros Juan de Monzón y Santiago Ruiz.
En la cabecera se construyó un Camarín para la Virgen; es de planta cuadrada y va en alto, enlosado con cerámica de Talavera del siglo XVII y cubierto por techo de madera policromada con pinturas florales y carnosas del tercer cuarto del siglo XVII. SE ha considerado la intervención en esta obra del carpintero y entallados riosecano Lucas González.
Espadaña de piedra a los pies, sobre el lado norte del hastial. Es de un solo cuerpo con gran tronera de medio punto para la campana moldurada en el riñón y con remate por piñón.
Pórtico formado al frente por seis columnas, las dos centrales más altas llegan hasta el suelo para permitir el acceso y marcar el eje central, las otra cuatro van sobre zócalo corrido, todas son toscanas rematadas con capitel y encima reciben un dintel de madera, que sirve de soporte a la cubierta a un agua. A los lados –norte y sur- muros cerrados de tapial creando pasillos perimetrales del mismo pórtico rodeando la nave. Fue realizada por el arquitecto Juan de Naveda y los carpinteros Juan de Bonal y Santiago de Villegas, entre 1652 y 1655.
Se conserva también la pavimentación realizada con azulejos de Talavera y obra del siglo XVII, como la mayoría de la ermita.
La entrada se verifica en la fachada occidental por un arco carpanel de amplias dovelas enmarcado por alfiz, con medallones en las enjutas, construido en cantería. La puerta original aún conserva herrajes del XVI decorados con serpiente y cabeza de dragón. Otro cerrojo es de 1848.
El conjunto se complementa con varios retablos de la misma época, siglo XVII.
Autor: Javier Rivera Blanco.
Bibliografía:ORTEGA Y RUBIO, J., Los pueblos de la provincia de Valladolid, 2 tomos, Valladolid, 1895; MARTÍN GONZÁLEZ, J.J. y otros, Inventario artístico de Valladolid y su provincia, Valladolid, 1970; ZALAMA RODRÍGUEZ, M.A., Ermitas y Santuarios...; RAMOS DE CASTRO, G., “La ermita de Santa Ana de Pozuelo de la Orden (Valladolid)”, B.S.A.A., T. LX, Valladolid, 1994, pp. 403-418; PARRADO DEL OLMO, J.Mª., Catálogo Monumental de la Provincia de Valladolid. Antiguo partido judicial de Medina de Rioseco, Valladolid, 2002.