報告
鴻巣麻子¹、鈴木竜斗¹、武田颯汰¹、村上瑠音¹、吉川草人 ¹、佐野海咲 ¹,²、東出正人 ³ 1 つくぼ国際大学医療保健学部臨床検査学科²（株）サンリツラボサービス部鉄蕉会グループ亀田幕張クリニック（元臨床検査学科助手） 3（株）江東微生物研究所   品質保証部受付: 2023年9月12日  ／　採択: 2023年11月9日  ／オンライン公表: 2023年11月22日連絡責任者：鴻巣　麻子〒 300-0051茨城県土浦市真鍋6-20-1つくぼ国際大学医療保健学部臨床検査学科Tel: 029-826-6000 FAX:029-826-6937 E-mail: a-kounosu@tius.ac.jp 【要旨】近年、動物とヒトに病気をおこす人獣共通感染症の出現により、重大な課題が生じている。獣医学の分野では通常、感染症既往歴のあるペットを対象とした研究が行われてきた。しかしながら、健康なペットにおける細菌の保菌に関する調査はほとんど行われていない。健康そうに見えるペットにも、ヒトへ感染を起こす菌を保有している可能性は考えられる。本研究では、健康体なペット１１個体から、 32株が同定され、いくつかの病原性のある菌株の存在も明らかになった。これらの細菌は、食中毒や日和見感染などの病気を引き起こす可能性がある。特に飼い主が高齢者や持病をもっている場合は、ペットとの接し力に注意が必要である。現在の研究の焦点は、感染症既往歴があるペットが保有する菌である。しかし、将来的には、健康なペットの保菌に関する研究も人獣共通感染症を減らすという観点からも重要になってくるであろう。このように、健康なペットの常在菌を調査することは有益であり、今後も研究を積極的に続けていきたい。キーワード：人獣共通感染症、健康なペット、常在菌、目和見感染Report
Investigation of indigenous bacteria in healthy pets
Asako KOUNOSU¹, Ryuto SUZUKI¹, Souta TAKEDA¹, Rune MURAKAMI¹, Takuto YOSHIKAWA¹, Usaki SANO², Masato HIGASHIDE3 1 Department of Medical Technology, Faculty of Health Scieneces, Tsukuba International University ² Sanritsu Co.,Ltd. Department of Labo service 3 Koto Biken Medical Laboratory inc. Department of Quality Assurance Received: Sep 12 2023 / Accepted: Nov 9 2023 / Published Online: Nov 22 2023
Abstruct
Recently, the emergence of zoonotic diseases affecting both animals and humans has posed a significant challenge. In veterinary medicine, studies have typically involved pets with a history of infectious diseases. However, investigations of bacterial carriage among healthy pets have been rare. Pets that appear healthy may harbor bacteria that infect humans. In this study, 32 strains were identified from 11 healthy pet individuals, and the existence of several pathogenic strains was also clarified. These bacteria can cause food poisoning and opportunistic infections, among other illnesses. In particular, if pet owners are elderly or have chronic diseases, it is necessary to pay attention to how they contact pets. Currently, research is focused on pets with a history of infectious diseases.   However, in the future, research on bacterial carriers among healthy pets will be significant in terms of mitigating zoonotic diseases. Thus, a survey of indigenous bacteria carried by healthy pets is advantageous and we are enthusiastic about continuing our research. Keyword: Zoonotic diseases, Healthy pets, Indigenous Bacteria, Opportunistic infections
I . 序論
近年、国内におけるペットの平均寿命は、獣医師団体などの調査によると年々延び続けており、ペットの寿命が延びるのと同時に、高齢ペットの罹患率も高くなっている（ Team HOPE公式サイト、ペットの健康管理に関する実態調査)。今や家族の一具となっているペットの健康状態を管理するのは飼い主の責任であり、ペットの定期健康診断率も増えてきている。しかしながらそのようなペットの健康診断のほとんどは、問診・触診・視診などが中心で、便検査などは健康状態がよけれぼあまり実地されな獣医学分野でのペットの菌の調査は、病原菌が主な対象であい。り、それさえもまだ調査が始まったぼかりである（嶋田他、 2011 ;嶋田他、 2012 ;露木と高橋孝、 2016 ;農林水産省動物医薬品検査所ホームページ、 2018)。さらに症状のない健康な動物の保菌調査はほとんど行われていない。近年、新型コロナ感染症に代表されるように、人獣共通感染症が問題となっている。身近に存在するペットが保有する常在菌を知っておくことは、一見、ペットに健康被害がなくても、高齢者や免疫が低下した飼い主には日和見感性を起こす可能性があり( Joseph et al、 2022 ) 、ワンヘルスの観点からもヒトとペットの共通の健康に役立つはずである。そのような状況を踏まえ、本報では、これまでに感染症既往歴のないペットがどのような菌を保菌しているのかを調査した。結果、ペット１１個体から３２株が同定された。これらの菌の中には、ペットのみならずヒトへも感5染を起こす菌が数菌種確認された。また大部分は、目和見感染を起こす可能性の菌であったが、飼い主の健康状態、年齢により感染を起こす可能性も考えられることから、重要な調査であると考える。
II.材料および方を
1. 対象動物および検体
本研究内容を理解し同意を得たつくぼ国際大学の学生、教員の計11名にサンプルを提供してもらい、イヌ（学名： Canis lupus familiaris)、ネコ（学名： Felis sylvestris catus)、ハムスタ一(学名 : Mesocricetus auratus)、ウサギ  (学名 : Oryctolagus cuniculus domesticus)、ハト（学名： Columba livia)、金魚（学名： Carassius auratus）、へビ（種は不明）（学名、へビ亜目: Serpentes)などのペット由来の検体から菌の分離を試みた。検体は動物種により異なるが、糞便、口腔内擦過物、内耳擦過物などを対象とした。口腔内および内耳擦過物は、滅菌生理食塩水を浸した滅菌綿棒にて採取した。糞便は滅菌容器に入れてもらうか、滅菌生理食塩水を少量入れた滅菌綿棒で糞便を擦過して検体とした。また、糞便は必要に応じて滅菌生理食塩水を加え均一化した。
2.  検体の分離・培養、同定
分離培地は普通寒天培地（栄研化学）、血液寒天培地（栄研化学) 、 B T B寒天培地 （栄研化学) 、 D H L寒天培地 （栄研化学）を用い、好気条件下で36℃ 、 18～ 24時間培養した。分離された集落についてはグラム染色を行い、グラム陽性球菌はカタラーゼ試験、グラム陰性桿菌はオキシダーゼ試験（日水製薬）を実施した。プドウ球菌属を疑う集落はID32 staph （ビオメリュー ) 、腸内細菌科が疑われる集落は API  20E  (ビオメリュー )を用い、手順書に従い同定した。 ID32staphやAPI 20Eで同定確立の低かった菌株や同定不能と判定された菌株については、質量分析装置 M A L D I  B i o t y p e r （ブルカージャパン）による同定検査を追加した。 (検体 No.8、 18、 44、 53、 54、 55、 63、 72)
III.結果
1. イヌ、ネコから分離された菌株について
表1に示すように、イヌ 3個体から Escherichia  coli  2 株、 Citrobacter freundii 1株、 Proteus mirabilis 1株、 Enterobacter asburiae 1 株、 Staphylococcus pseudintermedius 1 株、 Staphylococcus epidermidis 1株が分離された。ネコ2個体からはE. coli 2株、 Enterobacter cancerogenus 1株、 Serratia liquefaciens 1株、 Staphylococcus aureus 1株、 Staphylococcus warneri 1株、 Staphylococcus saprophyticus 1株、 Bacillus megaterium 1株が分離された。イヌ、ネコの糞便から分離されたグラム陰性菌は、ヒトと同様、腸内細菌科の細菌が中心であった。しぼしぼ動物や環境から分離され、食中毒起因菌としても知られる人獣共通感染症のサルモネラ属菌やアリゾナ菌は検出されなかった。グラム陽性菌ではヒトの常在細菌で化膿症の主要原因菌でもあるS. aureus、イヌの常在細菌で犬膿皮症の主要原因菌であるS. pseudintermediusが検出されている。 2. ハムスター、ウサギ、ハト、金魚、ヘビから分離された菌株について表２に示すように、草食動物であるハムスター 、ウサギからは5種類のコアグラーゼ陰性プドウ球菌が検出された。ハトの糞便からE. coli、口腔内からS. saprophyticusが検出されている。金魚からは水棲のグラム陰性菌である Aeromonas veroniiとPlesiomonas shigelloidesが検出されている。 Aeromonas属菌は淡水魚やカエルなどの病原菌であるが、 Aeromonas属菌のうちA. hydrophila/sobriaは P. shigelloidesと共に食中毒起因菌として知られる病原菌でもある。へビの糞便からは腸内細菌科の E. coli、 Klebsiella oxytocaが検出されている。
3.  倫理的配慮について
本研究は、愛玩動物（ペット）が対象であり、糞便や表皮に付着する菌を採取したため、動物に対する実験的処置は行っていない。しかしながら、本学の教員、学生の飼育する愛玩動物であるため、学内の倫理委員会にて承認を得た【承認番号R05-1】。記録の保管場所は、研究代表者である鴻巣の研究室（ B 2 0 2 ）にて、紙面および電子媒体にて鍵付き書庫に保存している。
IV . 考条
本研究では、健康と思われるペットを対象にその保有菌を検索した。各種ペットの糞便から分離されるグラム陰性菌はヒトと同様、腸内細菌科細菌が中心であった。イヌ・ネコにおける腸内細菌はヒトと同様に、健康にプラスやマイナスの影響があるとされる（日野と浅沼、 2 0 4 ;アニコム動物白書ホ一ムページ、 2 0 1 7 ) 。ハムスター 、ウサギなどのげっ歯類の便から分離されたのは、グラム陽性菌がほとんどであった。今回、犬の口腔内から S.  pseudintermediusが分離された。本菌は犬膿皮症の主要原因菌であるが、動物の口腔内および皮膚の常在細菌としても知られている。犬や猫などグルーミングを頻回に行うペットからヒトへの感染も考えられる（Karen et al, 2021)。グラム陽性菌として、9菌種 11株のコアグラーゼ陰性プドウ球菌（CNS）が検出された。 CNSはコアグラーゼ陽性菌（CPS）と9比較し、病原性は低いとされるが、日和見感染や医原性感染を起こす菌とされる。稀ではあるがペットが持つ CNSによる感染症が海外で報告されている（Gregorius et al, 2023)。本ケースは手術後の傷口から Staphylococcus felis が分離され、飼育しているネコ由来の S.  felisの遺伝子型と一致した。退院後にペットと接触があったためと考えられるが、健康なネコから一般的に分離される菌でもあり、飼い主の状態により注意が必要である。近年はメチシリン耐性の  CNS による感染症も間題になってお獣医学分野でも薬剤耐性菌を確認する必要性があると思われり、る。例えぼ、 Staphylococcus lugdunensisは、 S. aureusに近い病原性をもつ菌として注目されている。本菌における小児の臨床由来（菌）株では、メチシリン耐性は半数を超えるとの報告があり（桜井と堀越、 2019)、 CNS であっても病原性の高い菌は日和見感染や院内感染などでも問題となっている。金魚の便から分離された  Aeromonas 属菌は、淡水および汽水域に生息する水系細菌で淡水魚やカエルの病原菌であり、ヒトへも感染する人獣共通感染症の原因菌でもある（ Sana et al, 2023 ; Wafaa  et  al,  2023 ) 。    Aeromonas 属菌のうち  A. hydrophila/sobriaは、わが国で1982年に食中毒菌に指定されている。これらは、食中毒以外にも創傷感染症、腸管外感染症を引き起こし、腸管外感染症は慢性肝炎や糖尿病などの基礎疾患を有する人や免疫力が低下している人で報告されている。また、金魚から分離された Aeromonas veroniiも、ヒトからの分離が多い菌とされる。今回、古くから人獣共通感染症の起因菌として知られるサルモネラ属菌は検出されなかった。このように、ペットのみならずヒトへも感染可能な菌が、健康体とみられるペットから容易に分離されることは、それらの菌がいつでもヒトへ感染する可能性を示唆している。今後は、検体数を増やしていくことで、ペットの保有菌の調査を広げ、情報の共有・発信を行っていきたい。本論文内容に関連する著者(ら)の利益相反：なし
動辞
本報告は、江東微生物研究所の支援を受け、本学の教員、学生の飼育するペットの検体の解析を基にした研究であり、協力していただいた皆様に感謝申し上げます。