第49回ペプチド討論会報告

平成24年度日本ペプチド学会奨励賞を受賞して

1．はじめに
ペプチドを基盤とするケミカルバイオロジー分野において，その機能を外部から制御する方法論が求められています。外部からの刺激によるペプチド主領切断は機能の劇的変化が期待できることから，近年，精力的に研究が進められています（図１）。本手法では刺激により主鎮切断を誘起する刺激応答部位をペプチド中へ導入し，ここへ対応する刺激を与えることでその不活性化もしくは活性化を行います。現在までに開発された刺激応答部位は，特定の刺激にのみ応答するよう設計されています。このため，別の刺激に応答するペプチドを調製する場合，刺激応答部位を一から設計および合成しなおす必要がありました。これに対し著者らは，保護基を置換するのみで種々の刺激に応答可能な人工アミノ酸，すなわち刺激応答型アミノ酸の開発を行うこととしました。図1   刺激によるペプチド機能制御.
2.刺激応答型アミノ酸の開発
刺激応答型アミノ酸の分子設計を図２に示します。図中のPGは，対応する刺激により除去可能な保護基を表します。刺激応答型アミノ酸を含むペプチドへ対応する刺激を与えると、まずPG部位が除去されます。生じた無保護トリメチルロック部位は，温和な条件下においてラクトン化反応を誘起します》。この結果,ペプチド結合が切断される設計です。現在までにPG部位を種々置換し，紫外線応答型²，近赤外二光子励起応答型9 ,アルカリホスファターゼ応答型9 ,チオール応答型』および低酸素環境応答型アミノ酸®の開発に成功しています。あわせて，共通合成中間体の不斉合成法を確立し、一部刺激応答型アミノ酸の立体選択的合成を達成しています》。さらに，アミノ酸配列がペプチド結合切断反応速度に与える影響についても明らかにしました81 。現在，他の刺激応答型アミノ酸の開発について検討しており，この内のいくつかは適からず公表できそうです。
3.ベブチド機能制御への展開
冒頭でも述べた通り，ペプチドを基盤とするケミカルバイオロジー分野において，その機能を外部から制御する方法論が求められています。現在までに，種々の機能制御法が報告されています。これら方法は活性型から不活性型への変換,もしくは不活性型から活性型への変換を可能とするものでした（図１）。これら手法は、ペプチド機能の“ON” → “OFF”もしくは"OFF" → "ON"制御法と見做すことができます。これに対し著者らは、これまでに報告例のない“ON” → “ON”創御法,すなわちある活性ペプチドへ刺激を与えることにより別の活性ペプチドへと変換する方法の開発を目指しました9 。分子設計を図３に示します。このペプチドは，紫外線応答型アミノ酸のN末端側に活性ペプチドAを，C末端側にはイソペプチド化により失活させたペプチドBを有します。このため本ペプチドは、まずペプチドA由来の活性を示します。ここへ柴外線を照射するとペプチド結合切断反応がおこり，イソペプチド中間体を生じます。この中間体はクリックペプチド同様,ただちにO → Nアシル基転移反応をおこし》,セリンを含む活性ペプチドBを生成します。つまり本ペプチドの機能は，紫外線照射をトリガーとして“A”から“B”へと変換される設計でヤこの設計に基づき，核－細胞質シャトルペプチドを開発しました。このペプチドはペプチドAとして細胞膜透過ペプチドおよび核移行シグナル配列を,ペプチドBとして核外移行シグナル配列を含みます。本ペプチドを細胞へ添加したところ，設計通りまず核内へ移行し（機能A)、紫外線照射をトリガーとして細胞質へ再移行する（機能B）ことが明らかとなりました。この結果から、著者らの設計したペプチド機能"ON" → “ON”制御法が細胞内においても実用可能であることが証明されました。著者らは，刺激応答型アミノ酸の他の応用についても精力的に研究を展開しています。詳細については割愛しますが、細胞内移行をトリガーとしてDNAを放出するDNA送達システムの基盤技術9やセラミド濃度の時空間的馴御を可能とするケージドセラミド10，低酸素環境応答型蛍光色素を開発しました61 (図4）。この他にも“ON” → “ON”創御系同様の機能変換を利用したin cellタンバク質ラベル化法の開発など，様々な応用研究が現在進行中です。また，刺激応答型アミノ酸と類似した分子骨格を基盤とした酵素活性制御系の構築についても鋭意検討しているところで-3-11)答型蛍光色素.
4.おわりに
以上，刺激応答型アミノ酸の開発とペプチド機能制御への展開について概説しました。著者は今後，刺激応答型アミノ酸を起点とした様々な基礎・応用研究をさらに展開し，これら成果をペプチド討論会にて発表できるよう精進するとともに日本ペプチド学会のさらなる発展に微力ながらも貢献したいと考えております。これからも学会員皆様のご指導、ご親捷を賜りますよう心よりお願い申し上げます。最後になりましたが，本研究を行うにあたり終始温かくご指導くださいました徳島大学大学院ヘルスバイオサイエンス研究部大高章先生に深く感謝いたします。あわせて，引用文献に記載しました共同研究者の諸先生方および学生の皆様に心よりお礼申し上げます。本研究の一部は科学研究費補助金　若手研究(B),基盤研究(C),新学術領域研究「融合マテリアル」（領域番号2206）アステラス病態代謝研究会、武田科学振興財団,国際科学技術財団,三菱化学研究獎励基金，および有機合成化学協会味の茶研究企画賞の助成を受けて行われたものであり，ここに深謝いたします。 1）重永  拿. 薬学雑誌132 , 1075–1082（2012）. 2 ) A. Shigenaga, D. Tsuji, N. Nishioka, S. Tsuda, K. Itoh, A. Otaka, ChemBioChem 2007 , 8 , 1929–1931. 3 ) S. Milstien, L. A. Cohen, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 67 , 1143–1147 (1970); M. Levine, R. T. Raines, Chem. Sci.  3 , 2412-2420 (2012). 4 ) A. Shigenaga, J. Yamamoto, Y. Sumikawa, T. Furuta, A. Otaka, Tetrahedron Lett. 2010, 51 , 2868–2871. 5 ) A. Shigenaga, J. Yamamoto, H. Hirakawa, K. Ogura, N. Maeda, K. Morishita, A. Otaka, Tetrahedron Lett. 2010, 51 , 2525–2528. 6 ) A. Shigenaga, K. Ogura, H. Hirakawa, J. Yamamoto, K. Ebisuno, L. Miyamoto, K. Ishizawa, K. Tsuchiya, A. Otaka, ChemBioChem 2012 , 13 , 968–971. 7) A. Shigenaga, J. Yamamoto, N. Nishioka, A. Otaka, A. Tetrahedron 2010, 66, 7367–7372. 8 ) A. Shigenaga, J. Yamamoto, H. Hirakawa, K. Yamaguchi, A. Otaka, Tetrahedron 2009, 65, 2212-2216. 9 )  Y. Kiso, A. Taniguchi, Y. Sohma "Wiley Encyclopedia of Chemical Biology" Vol.  1 , ed. by Begley, T. P., John Wiley & Sons, Inc., Hobeken, 2009, pp. 379–383. 10) A. Shigenaga, H. Hirakawa, J. Yamamoto, K. Ogura, M. Denda, K. Yamaguchi, D. Tsuji, K. Itoh, A. Otaka, Tetrahedron 2011, 67, 3984–3990. 11) A. Shigenaga, K. Morishita, K. Yamaguchi, H. Ding, K. Ebisuno, K. Sato, J. Yamamoto, K. Akaji, A. Otaka, Tetrahedron 2011, 67, 8879-8886.しげなが　あきら徳島大学大学院ヘルスバイオサイエンス研究部(薬学系) shigenaga.akira@tokushima-u.ac.jpこの度は，日本ペプチド学会獎励賞という名誉ある賞を賜りまして大変光栄に感じております。学会長の下束康幸先生をはじめ，理事，幹事，評議員，選考委員の諸先生方に、本紙面をお借りしまして厚く御礼申し上げます。本稿では、受賞の対象議良となりました「生理活性ペプチドの高機能性誘導体設計と動態制御学的研究」についてご紹介させて頂きます。私は岡山大学大学院薬学研究科を修了後，数年前まで企業に所属して医薬品の研究開発に従事しておりました。企業研究者となって一年目に，故・矢内原昇先生（静岡県立大学薬学部名誉教授）が当時所属していた食品会社医薬品部門の顧問に就任され、たいへん厳しくも温かい先生独特の御指導を受ける好機を得ました。矢内原昇先生は残念ながら2001年に急逝され、その後，奥様の故・矢内原千鵜子先生（元・大阪薬科大学理事長, 2011年に御逝去）が救いの手を差し伸べて下さり，引き続き御指導を受けることができました。予期せぬうちに矢内原御夫妻による指導を受けることが出来た筆者はたいへん幸運と常々感謝しつつ研究活動を進め，また，この御指導の御陰で自らの研究の方向性が徐々に固まって参りました。メガファーマ勤務を経て今は矢内原御夫妻がかつて教観をとられた静岡県立大学薬学部の教員となり，生理活性ペプチドの医薬応用を目指した高機能性誘導体とその体内動態制御を目的としたdrug delivery system（DDS）の開発をテーマとして学生達と一緒に日々取り組んでおります。一般に生理活性ペプチドは物理化学的ならびに生物化学的にハンドリングが容易でないことが多く、それ故，それらを医薬応用するには多くの化学的あるいは薬剤科学的な工夫が必要となります。たとえば（i）構造改変による代謝安定性の向上, （ii）作用持続のための製剤学的工夫, （iii）副作用回避のための特異的薬物送達法の開発等を余儀なくされますが、我々も血管作動性腸管ペプチド（vasoactive intestinal peptide, VIP）の医薬応用を目指して種々検討を行っています。VIPは強い抗炎症作用と気管支平滑筋弛緩作用を併せ持ち，これらの興味ある生理活性により，炎症性呼吸器疾患治療薬としての応用が強く期待されています。また、網羅的な臨床・疫学調査によって、呼吸器系におけるVIP欠損と喘息発症の因果関係を示唆するデータが得られ、VIP受容体アゴニストの喘息治療薬としての可能性がより強く支持されています。しかし、VIPは体内においてペプチダーゼによって速やかに分解され，作用持続が短くなることに加え，経口投与では生物学的利用率が低いため薬理効果が発現しにくいなどの問題点が指摘されています。また，静脈内投与などの非局所投与では低血圧やその他の副作用の危険性が高まると予測され、これらの短所を克服するため，近年，戦略的創薬の観点から生物学的に安定なVIP誘導体の合成と標的臓器への特異的な薬物送達を指向した新規製剤の開発がグローバルに進められています（表１）り。まず，我々は多くの合成VIP誘導体を用いて代謝安定性やアデニル酸シクラーゼ活性化作用を指標にVIPの構造活性相関研究を網羅的に行い、新規誘導体開発の手がかりを探しました。その結果, (i) VIPの4, 5位アミノ酸はPACl, VPACl, VPAC2受容体間の選択性に寄与する21 , （ii）VIPのC末端へリックス構造はVPAC 1 / 2受容体への結合に関与する³, （iii）VIPの活性最小単位はN末から23残基である1 , （iv）17位のメチオニンは酸化されるとヘリックス構造を壊し、活性を著しく低下させることりを示唆するデータをそれぞれ得ることができました。これらの情報を基にさらに機造活性相関研究を発展させた結果, 15, 20, 21番目のアミノ酸残基であるLysをArgに変更し，17番アミノ酸残基のMetをLeuに置換したVIP誘導体（[R15,20,21, L 17 ]-VIP）は代謝安定性において著しい改善をもたらすことを明らかにしました。さらに，この誘導体のC-末端を延長させた[R 15,20,21, L 17 ]-VIP-GRR（IK312532）は更に高い代謝安定性を有し、in vitroおよびin vivoにおいて天然のVIPよりも高い生物活性を示しましたり。代謝安定性に優れたVIP誘導体を得たものの、VIPまたはその誘導体の経口投与は低い酸安定性と乏しい膜透過性のために現実的ではなく、それ故、注射剤あるいはその他の投与形態の開発が医薬応用に際して必要不可欠となります（図１）。そこで我々はVIP誘導体の喘息や侵性閉塞性肺疾患（COPD）への適用を目指した粉末吸入製剤試作を検討しました。一般に吸入する粒子の粒径は薬物の肺到達量あるいは到達部位に大きな影響を与え、呼吸器系疾患への適用には数μm程度の粒径が好ましいと考えられています。一方，あまりにも細かい粒子（＜0.5μm）はタバコの煙と同様に呼気と共に体外に出てしまい，粒径のコントロールは極めて重要な課題です。そこで我々はVIP誘導体合有粒子の平均粒径を５μm以下にすべく，VIP誘導体とエリスリトールの混合物をJet millにて粉砕し,次に粒径50-60μmの乳糖キャリアー（Respitose SV- 003, DMV Japan）と混和することによって，安定した粉末吸入製剤を得ることができました。本製剤は人工肺モデルであるカスケードインバクターを用いたin
*, Ro25-1392とRo25-1553ではLys²¹とAsp²¹の側鎖間で lactam ring が形成されている.   Aib, α-aminoisobutyric acid; Gab, y-aminobutyric acid; Dip, β,β-diphenyl-L-alanine; mY, methoxy-tyrosine. vitro delivery予測試験において，吸入したVIP誘導体のうち約30％が気道あるいは肺へ到達することを確認でき，吸入時の肺局所における薬効発現が期待できます。また、局所投与とすることで，注射での投与に比べてその投与量を減らすことが可能となり，また全身性の副作用軽減をもたらすものと考えます。ラット気道炎症モデルを作成し，VIP誘導体粉末吸入製剤の作用について検証を行いましたり。抗原感作ラットではTh2細胞由来サイトカインのmRNAレベルの上昇が観察され、一方でIFN- βなどTh1細胞由来サイトカインの変動は認められず、すなわち抗原感作がThl/Th2バランスに影響を及ぼすことが示唆されます。これによって炎症性細胞の著しい肺組織内浸潤を認め，好中球およびマクロファージ由来の炎症の指標となる血勢中Myeloperoxidase（MPO）活性は有意な上昇を示します。一方，安定型VIP誘導体IK312532の粉末吸入製剤（50ug/rat）の前処置によって肺中の免疫系細胞の動員を著しく阻害し，気道粘膜の肥厚を有意に抑制することが明らかとなりました（図２A)。さらに炎症性バイオマーカーの有意な減少が認め，肺炎症における既知の病態過程と合わせて，VIP誘導体の抗炎症活性には，炎症カスケードの上流に位置する細胞遊走因子や炎症性ケモカインの放出に対する直接的な調節機能が関与していることを示唆しました。また，近年COPDの病態をより反映しているとされているタバコ煙聴露モデルでも同製剤の効果について検証を行いました89。ラットにタバコを11日間連日暴露し，最終暴露の１時間後にIK312532粉末吸入製剤(50μg/kg)を気道内投与して各種バイオマーカーの変動をモニタリングしました。タバコ煙聴露群では上皮組織の著しい肥厚，炎症性細胞の浸潤，杯細胞の過形成さらには間質細胞におけるアポトーシス誘発が見られたものの、IK312532粉末吸入製剤投与群ではこれらの現象は有意に抑制されました(図２B)。この効果は肺胞洗浄液中ならびに血漿中の各種バイオマーカーと良い対応を示し、すなわち持続型VIP誘導体の粉末吸入製剤が強い炎症性呼吸器疾患に有用である可能性を強く示唆するものと考えました。代謝安定性を向上させたVIP誘導体を用いても、十分な治療効果を得るためには１日に複数回の吸入を必要とする可能性があります。そこで、１日１回の投与を目指して生分解性ポリマーを用いた作用持続型粉末吸入製剤の開発を試みました%。まず、以前我々がグルカゴンを対象として開発したエマルジョン溶媒拡散法によって徐放性製剤を試作したところ10,平均粒子径140nmのnanosphereを獲得し，本粒子は約20％の初期バーストおよびその後の徐放性放出により24時間以内で約55％の放出を認めました（図３）。Nanosphereを含有した粉末吸入製剤の吸入特性評価を行ったところ、粉末吸入製剤として適切な吸入特性を持つことが明らかとなりました。この徐放性粉末吸入製剤と非徐放性吸入製剤をラットにそれぞれ投与（VIP誘導体として10μg/rat相当）したところ、いずれも投与後すぐに強い抗炎症作用を示しましたが、非徐放性吸入製剤では抗原感作後24時間では血漿中ならびにBALF中MPO活性の上昇を認めました。一方、徐放性粉末製剤では少なくとも抗原感作後24時間程度まではその活性を保持し、すなわち，開発した新規製剤は投与回数が少ない非侵襲投与形態として今後の展開が期待されます。本稿ではVIP誘導体のDDSについてご紹介しましたが、生理活性ペプチドの医薬応用の際には適切なDDSの開発が必須となることが多く，我々はより安全性と有効性の高い効果的DDS技術の開発に寄与したいと考えています。特にこれらの戦略的研究開発によって将来的にVIPまたはその誘導体が呼吸器疾患治療に大きく貢献し，VIPが"Very Important Peptide"とも称されるような日が来ることを強く期待するところです。当該研究成果は，静岡県立大学名誉教授故・矢内原昇博士, 大阪薬科大学前理事長故・矢内原千鵜子博士, 静岡県立大学山田静雄教授の御指導, 伊藤ハム株式会社医薬品部門（現ILS株式会社）ならびにファイザー株式会社所属時の多くの同僚研究者のご協力,多くの元・現学生の皆さんの努力の所産であり,本紙面をお借りして深謝致します。 1 ) Onoue, S., S. Yamada, and T. Yajima, Bioactive analogues and drug delivery systems of vasoactive intestinal peptide (VIP) for the treatment of asthma/COPD. Peptides, 2007. 28(9): p. 1640–50. 2) Onoue, S., et al., The neuromodulatory effects of VIP/ PACAP on PC-12 cells are associated with their N-terminal structures. Peptides, 2001. 22(6): p. 867–72. 3 )  Onoue, S., et al., Alpha-helical structure in the C-terminus of vasoactive intestinal peptide: functional and structural consequences. Eur J Pharmacol, 2004. 485(1-3): p. 307– 16. 4 )  Onoue, S., et al., Structure-activity relationship of synthetic truncated analogues of vasoactive intestinal peptide (VIP): an enhancement in the activity by a substitution with arginine. Life Sci, 2004. 74(12): p. 1465–77. 5 ) Onoue, S., S. Misaka, and S. Yamada, Structure-activity relationship of vasoactive intestinal peptide (VIP): potent agonists and potential clinical applications. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol, 2008. 377 (4-6): p. 579– 90. 6 )  Onoue, S., et al., In vitro and in vivo characterization on amorphous solid dispersion of cyclosporine A for inhalation therapy. J Control Release, 2009. 138 : p. 16–23. 7) Onoue, S., et al., New treatments for chronic obstructive pulmonary disease and viable formulation/device options for inhalation therapy. Expert Opin Drug Deliv, 2009. 6 (8): p. 793–811. 8) Onoue, S., et al., Inhalable powder formulation of vasoac- tive intestinal peptide derivative, [R15,20,21, L17]-VIP- GRR, attenuated neutrophilic airway inflammation in cigarette smoke-exposed rats. Eur J Pharm Sci, 2010. 41 (3- 4): p. 508-14. 9 )  Onoue, S., et al., Inhalable sustained-release formulation of long-acting vasoactive intestinal peptide derivative allevi- ates acute airway inflammation. Peptides, 2012. 35(2): p. 182-9. 10)  Onoue, S., et al., Inhalable sustained-release formulation of glucagon: in vitro amyloidogenic and inhalation properties, and in vivo absorption and bioactivity. Pharm Res, 2011. 28(5): p. 1157–66.おのうえせとみ静岡県立大学薬学部薬物動態学分野onoue@u-shizuoka-ken.ac.jp 2012年11月７日から９日にかけて鹿児島県民交流センターで開催された第49回ペプチド討論会において若手口頭発表の機会を与えていただきました実行委貝会の諸先生に，まずこの場をお借りして厚く御礼申し上げます。修士1年生で初めてペプチ橋本知恵ド討論会に参加した際に若手口頭発表者の皆様が英語で質疑応答なさる姿を拝見して，私もいつかあの舞台に立ちたいという憧れを抱きました。あれから４年たち，学生のうちに受賞できる最初で最後のチャンスでしたが，若手口頭発表者が多かったなかでExcellent Stone Awardを賜りましたこと，審査員の諸先生に厚く御礼申し上げます。壇上では緊張で震えていましたが，発表の機会を与えていただきながら弱気になるわけにはいかないと踏ん張った結果,最優秀賞という名誉な賞を賜り,驚きとともに皆様への感謝の気持ちでいっぱいになりました。それでは，受賞の対象になりました発表演題「Synthesis of an Artificial gp41–C34 Trimer as an HIV– 1  Fusion Inhibitor」について簡単にご紹介させていただきます。 Human Immunodeficiency Virus type l（HIV−1）はヒトの免疫系で重要な役割を果たすCD4陽性細胞に感染し，免疫不全を引き起こすエイズの原因ウイルスです。HIV-1が発見されてから30年が過ぎた今，種々開発された抗HIV-1薬の中から複数の薬剤を組合せて投与する多剂併用療法（HAART）が成果を上げています。一方で，インフルエンザウイルスなどのウイルスとは異なり、未だ有効なワクチンが開発されていないというのが現状です。近年，先進国では唯一日本が，また中東および北アフリカなどでは新規感染者数が増加の傾向にあり，感染を予防および治療するためのエイズワクチン開発は急務であります1 。現在までに明らかにされているHIV-1の宿主細胞への侵入機構を以下に示します。まず，HIV-1外被タンバク質gp120は宿主細胞上の第一受容体CD4と結合した後に第二受容体CCR5/CXCR 4と結合します。これらの結合によってHIV-1外被タンバク質gp41の立体構造変化が誘起され、gp41のN末端が宿主細胞膜に突き刺さります。その後，gp41のN末端ヘリックス領域（NHR）のホモ三量体とC末端側へリックス領域（CHR）のホモ三量体がヘテロ６量体（６ helical bundle, 6HB）を形成することでHIV-1とCD 4陽性細胞との間で膜融合が起こり，感染が成立します(図1 )。よって，6HB形成を阻害すれば，膜融合およびHIV-1の侵入を阻害できると考えられます。当研究室ではこれまでに，NHRの立体構造を特異的に認識する抗体によって6HB形成を阻害するため、 NHR由来ペプチドN36を３本の等価なリンカーを有するC 3対称性テンプレート上に集積させた抗原分子N36 trimer mimicの合成に成功しております。N36 trimerをマウスに免疫して得られた抗N36 trimer抗体は，抗原であるN36 trimerの立体構造を特異的に認識し，抗N36 trimer抗体はN36 monomerを免疫して得られた抗N36 monomer抗体よりも4倍高い中和活性を示しました²。標的分子の立体構造を模倣した抗原分子設計が有効であることが示唆されたことから, N36 trimerと同様にCHR由来ペプチドC34をC 3対称性テンプレート上に集積させたC34 trimerは，抗原であるC34 trimerの立体構造を認識する中和抗体を誘導するのではないかと考えました。まず，ペプチドの水溶性向上のためにC34のアミノ酸配列のC末端にArgとGluの繰返し配列（RE）3を挿入し、C末端をチオエステル化したペプチドC34 monomer-thioesterを合成しました（図２a）。また,コントロールペプチドとしてC末端をチオエステル化しないペプチドC34 monomerも合成しました（図2b)。C34ペプチドを３本束ねることができるように新たなC3対称性テンプレートを設計しました。水済性を向上させるために３本の等価なリンカーの骨格にはPEGを用い，C34 monomer-thioesterとの反応点としてリンカーの末端にCysを縮合させました。次に，C34 monomer-thioesterをC 3対称性テンプレートとnative chemical ligationによって縮合し，C34 trimer mimicを合成しました（図２c）。 C34 trimerおよびC34 monomerをマウスに皮下投与して得られた血清を用い、まずはELISA法により抗体が産生されたかどうかを調べました。その結果, C34 trimerおよぴmonomerのどちらにおいても抗体産生を確認することができました。次に，C34 trimerの立体構造を認識する抗体が誘導されているかをELISA法により調べました。その結果，抗C34 trimer抗体は，抗C34 monomer抗体と比べてC34 trimerに対して23倍高い結合活性を有していました。さらに，産生された抗体がHIV-1の侵入を阻害するかどうかを評価するために，血清を用いてNL4-3株に対する侵入阻害活性をp24 ELISAにより測定した結果,  C34 trimerおよびC34 monomerを免疫して得られた血清は，いずれも同等に顕著な侵入阻害活性を有することが明らかとなりました》。よって，C34 trimerはN36 trimerと同様に抗原の立体構造を特異的に認識する中和抗体の誘導に成功しました。エイズワクチンからは話が変わりますが，2003年に米国FDAがEnfuvirtide/T20（Trimeris, Roche）の使用を承認したことにより，HIV-1感染者およびエイズ忠者に対する治療薬として腐融合阻害剤が注目されています。EnfuvirtideはCHR由来ペプチドであり、NHRとCHRの会合による6HB形成を阻害しますか。CHR由来ペプチドであるC34はNHR由来ペプチドN36と結合することがX線結晶構造解析からも示されていることから￼，合成したC34 trimerはN36に結合することで膜融合阻害剤としても働く可能性があると考えました。そこで，C34 trimerおよびC34 monomerの抗HIV-1活性を評価したところ，C34 trimerはC34 monomerと比較して100倍高い顕著な抗HIV-1活性を示しました（IC 50 = 1.3 nM）。活性が100倍も向上した原因については現在精査を行っておりますが, HIV-1外被タンバク質gp41の立体構造を模倣した分子設計はgp41を標的とした抗原分子および腐融合阻害剤の開発において有効であることが示唆されました。最後になりましたが、本研究は東京医科歯科大学・生体材料工学研究所の玉村啓和教授のご指導による研究であり、心より感謝申し上げます。また、抗HIV活性を評価していただきました国立感染症研究所の村上努博士, 駒野淳博士(現大阪府立公衆衛生研究所感染症部ウイルス課）および研究員の皆様,ご指導下さった教員の皆様・先輩の皆様，日頃より支えていただいている在学生の皆様に御礼申し上げます。 "stone=原石" は磨かなければ輝きません。玉村先生の恩師矢島治明先生も“stone=原石”を大切にされ，ひかり輝くstoneを常に探されていたと聞いています。今は「研究者としてやっていけるのだろうか」と悩んでしまいがちな私ですが、ひかり輝ける日が来るまで立ち止まらず、がむしゃらに転がり続けようと思います。まずは，ポスドクとして海外や国内で研鑽を積み、一日でも早くひかり輝くstoneとして皆様に見出していただけるように頑張りますので，今後ともご指導ご鞭搖のほどよろしくお願い申し上げます。 1 ) Hashimoto, C., Tanaka, T., Narumi, T., Nomura, W., and Tamamura, H., "The successes and failures of HIV drug discovery." Expert Opin. Drug Discov., 2011, 6, 1067- 1090. 2 )  Nakahara, T., Nomura, W., Ohba, K., Ohya, A., Tanaka, T., Hashimoto, C., Narumi, T., Murakami, T., Yamamoto, N. and Tamamura, H., "Remodeling of Dynamic Structures of HIV- 1  Envelope Proteins Leads to Synthetic Antigen Molecules Inducing Neutralizing Antibodies." Bioconju- gate Chem., 2010, 21, 709–714. 3 ) Hashimoto, C., Nomura, W., Ohya, A., Urano, E., Miyau- chi, K., Narumi, T., Aikawa, H., Komano, J. A., Yamamoto, N. and Tamamura, H., "Evaluation of a Synthetic C34 Trimer of HIV- l  gp4l as AIDS Vaccines." Bioorg. Med. Chem., 2012, 20, 3287–3291. 4 )  Liu, S., Jing, W., Cheng, B., Lu, H., Sun, J., Yan, X., Niu, J., Farmar, J., Wu, S., Jiang, S., "HIV gp41 C-terminal heptad repeat contains multifunctional domains: relation to mechanism of action of anti-HIV peptides." J. Biol. Chem. 2007 , 282 , 9612–9620. 5 )  Chan, D. C., Fass, D., Berger, J. M., and Kim, P. S., "Core Structure of gp41 from the HIV Envelope Glycoprotein." Cell, 1997, 89, 263–273. 6) Nomura, W., Hashimoto, C., Ohya, A., Miyauchi, K., Urano, E., Tanaka, T., Narumi, T., Nakahara, T., Komano, J. A., Yamamoto, N. and Tamamura, H., "Synthetic C34 Trimer of HIV- l  gp4l Shows Significant Increase of Inhibition Potency." ChemMedChem , 2012 , 7 , 205–208.はしもとちえ東京医科歯科大学大学院生命情報科学教育部生体材料工学研究所メディシナルケミストリー分野c.hashimoto.bio@tmd.ac.jp 32nd European Peptide Symposium（32nd EPS）が2012年９月２日から７日の６日間,ギリシャ・アテネのThe Megaron Athens International Conference Centreで開催されました。私にとって初めての海外旅行であり，期待と不安の入り交じる中真理菊池での参加となりました。アテネはバルテノン神殿などの古代遺跡が多数残る。歴史的文化にあふれる都市です。経済危機のニュースが話題となっている時期の開催となったため，現地での生活がどのようになるか不安を抱えていましたが，到着してみると人々は皆明るく，活気にあふれる楽しい雰囲気の街でした。開催中は暗天が続き日中は暑さに水が手放せませんでしたが，夜は比較的涼しく，過ごしやすい気候でした。バルテノン神殿会場となったThe Megaron Athens International Conference Centreは市街地からは少し離れたところにありましたが，交通の便が非常に良く，迷うことなくたどり着くことができました。初日にはKnud J. Jensen先生が「From microwave heating to control of nano-scale self-assembly in peptide science」という演題でLeonidas Zervas Award受賞譯演ならびに, David J. Craik先生が[Discovery and applications of cyclotides」という演題でJosef Rudinger記念講演を行いました。その日の夜には会場の中庭でWelcome Receptionが行われましたが，堅苦しい雰囲気はなくすんなりとなじむことができました。そこで初めて食べたギリシャ料理は特徴的な味付けだったものの、それほど抵抗なくいただくことができました。また，日本からは木曽良明先生をはじめ向井秀仁先生,玉村啓和先生,林良雄先生,北条恵子先生,日高興士先生など数十名の先生，企業の方がこの学会に参加されていました。２日目以降始まった講演はすべて英語のため，単語を聞き取るだけで精一杯でしたが,諸外国の先生方の講演はとても勉強になりました。 Tao Ye先生の「Total synthesis of marine cyclopeptide Scytonemin A」（O12）という譯演は私の研究内容にも関連する環状ペプチドの合成についての内容であり，特に印象に残っています。また,「A total new game for the synthesis of disulfide-containing peptides」 (O01)という演題で譯演されたFernando Albericio先生とわずかな時間でしたがお話しできたことはとてもうれしい出来事でした. Poster Sessionは２，３日目に行われ，私は３日目の夜に「Synthetic Study of Callipeltin B Analogues and its Cytotoxicity」（P368）という題目で発表させていただきました。前日には今野博行先生が「Synthesis of cyclic lipo octapeptide derivatives of burkholdines and its antifungal activity」（O44）という題目で口頭発表,当研究室の博士前期課程２年高沼大樹が「Synthesis and Evaluation of SARS  3 CL Protease Inhibitors Using the Serine Template」（P251）という題目でポスター発表しており，その様子を見て，私は英語でやり取りできるのだろうかという緊張感が増す一方でした。その日のPoster Sessionでは張り出されたポスターを見て回り，描い英語ながら質問し，交流することができました。自身のポスター発表では私と同じく環状ペプチドの合成に取り組むドイツの方や、講演された先生方に来ていただき，しどろもどろではありましたがディスカッションすることができました。アドバイスしていただいたことを，今後の研究につなげていきたいと思います。海外でネイティプの英語に触れられたことは貴重な経験になりました。 4日目の午後はエクスカーションの時間があったため，世界遺産のアクロポリスを観光してきました。近くからはもちろん、少し離れた丘から見えるバルテノン神殿の風景は感動的なものでした。近くの美術館等も散策し，普段見ることのできない古代彫刻に触れられたことはよい刺激になりました。 5日目には「Defying difficult diseases: design and synthesis of aspartic protease inhibitors and click peptides based on the O-acyl isopeptide method」という演題で木曽良明先生の特別講演（PL4）が行われました。日本でも聴く機会がなかった木曽先生の講演をこの学会で聴けたことは、これまでの研究について知ることができる貴重な時間となりました。その日の夜には学会会場からバスで約１時間の，市街地からはだいぶ離れたところにあるVorres MuseumでGala Dinnerが開かれました。美術館になっており，入ると独創的な芸術品が多く展示されていました。ビュッフェ形式のディナーでは，伝統的なギリシャの料理が並んでいました。ギリシャ特有（？）の固いバンが印象的です。陽気な音楽が流れると著名な先生方をはじめ参加者の多くが輪になってダンスを楽しんでおり,私自身も楽しむことができました。最終日、Gala Dinnerで一緒に写真を撮らせていただぃたAlex N. Eberle先生の「Tumor targeting with peptides in four decades: from initial concepts to an array of highly sophisticated methods」（PL5）という講演では，腫瘍細胞を標的としたこれまでの研究内容を話されており，今後の研究生活への大きな刺激を受け，とても有意義な時間となりました。初めての海外での学会参加は思った以上に早く過ぎ，時差に慣れた頃に帰国というあっという間の一週間でした。今回32nd EPSに参加して，国内の学会とはまた違った雰囲気を感じることができ、とても貴重な経験になりました。また，英語でもっと諸外国の研究者らと交流できるようになりたいと感じ，今後の研究活動に対してだけではなく国際交流に関する意識にも大きな刺激になりました。最後になりましたが，今回の32nd EPSへの参加において日本ペプチド学会Travel Awardとしてご支援いただきました。この場をお借りして，学会役員ならびに選考委員の先生方に心より感謝申し上げます。きくち　まり山形大学大学院理工学研究科バイオ工学専攻生物有機化学分野tks55022@st.yamagata-u.ac.jp
The 16th Korean Peptide and Protein Symposiumは, 2012年11月30日に，韓国の北西部にある水原市（Suwon）の成均館大學校（Sungkyunkwan University）にて開催されました（写真１）。本シンポジウムに参加するに当たって，日本ペ西村プチド学会よりTravel Awardをいただきました。また，この度はこのニュースレターにて，参加報告の機会をいただきました。併せてお礼申し上げます。私は，松島綾美先生の招待講演に同行する形で，後輩の西尾華奈子さん，松尾文香さんと一緒に本シンポジウムに参加しました。学会前日の29日より韓国入りし，学会翌日の12月１日に福岡に帰るという二泊三日の旅でした。私自身は2009年の３rd APIPS以来の韓国での学会参加となり，この3 rd APIPSがリゾート地として知られる済州島で開催されたこともあり，温暖な気候のなかで参加したことを覚えています。今回の開催地である水原は，福岡や済州島よりもはるかに北，ソウル市の隣に位置しており、11月であっても夜は道が凍るほどの寒さでした。済州島のことを思い出しながら韓国に出発したこともあり，その寒さに衝撃を受けました。しかし，外が寒いのに対して室内はオンドルによって床が暖かく、快適でした。これに加えて，旅の疲れと夕飯の焼肉の食べ過ぎもあり，一日目はぐっすり眠れました（写真2)。今回の研究発表で私は, 「Pharmacological Chaperone for Fine Protein Expression of ORL1 Nociceptin Receptor in the Cell Membrane」の講演題目でポスター発表のみの予定でした。ところが、日本を出る二日前に５分間の口頭発表をとの学会側からの指示・依頼があり，スライドを急いで準備することになり，バタバタでの出発になりました。こういう経緯もあって，シンポジウム当日はとても緊張していました。ところで，会場の成均館大學校までは，ソウル大学のByung Woo Han先生に送っていただきました。車内では，Han先生がとても気さくに韓国の研究費の話や，映画や音楽の話をしてくださり，気付けば私や後輩達の緊張はほぐれ，去っていました。会場に着いてみると，日本人は私たちとペプチド研究所の西内先生の５名しかおらず、アウェーな雰囲気を感じました。しかし，それは私の勘違いだったようで，向こうの学生達が頑張れよと励ましてくれました。こちらのたどたどしい英語に対して流暢な英語での励ましであり，嬉しく思ったことでした。口頭発表の後は，日本に来たことのある学生から話しかけられたり，最近YouTubeで話題の「Gannam style」の話をして，韓国の皆さんと打ち解けた時間を持つことができました。ポスターセッションでは，同世代の学生の話を聞きに行きました。皆，英語がとても堪能でした。自分の英語力を意識して，思わず，「これは，」と感嘆するほどでした。逆に，自分のポスターの番になったとき，研究内容を相手に伝えることに一所懸命に努めました。口頭発表とは違い，ポスターセッションではポイントをその場面，その場面で押さえつつ，詳細に説明しなければなりません。皆にはあまりなじみの無い研究内容であるとの意識があったこともあり，一所懸命に説明しました。一人に説明するだけでずいぶんと大変だ，との感じもありました。しかしながら，研究成果を理解してもらい，「とても面白いアイデアだ」と，先生方からはお褒めの言葉をいただき，大層嬉しく思いました。研究者として，自分の研究を情報として発信することは非常に重要だと私は考えています。今回，急なことではありましたが，海外の学会に参加できたことをとても喜ばしく思います。今年，2013年11月に大阪に於いて開催される第４回APIPSで，今回知り合った韓国の先生や学生と再会できることをとても楽しみにしています。ところで昨年のノーベル生理学賞・医学賞の受賞で，京都大学の山中先生とiPS細胞が注目されていますが，Gタンバク質共役受容体の研究をしている私はRobert Lefkowitz先生とBrian Kobilka先生のノーペル化学賞の受賞にとても興奮していました。そうしたなかで，Kobilka先生の研究室で研究をされていたHee- Jung Choi先生の発表を閉けたことは，とても刺激的でした。残念ながら，直接お話をすることはできませんでしたが，旬な話題を提供していただき，日本ではなかなか閉けないGPCRの結晶構造解析についてのお話を聞くことができました。研究に対するモチペーションが上がる良い機会になりました。懇親会の最後には，授賞式がありました。私は2012 Young Scientist Awardを受賞することができました(写真３)。研究の内容に加えて発表が評価されということでしたが、これもひとえに日本のペプチド討論会での発表,質疑,ディスカッションで鍛えられた成果であると考えています。この受賞を機に，これからも日本ペプチド学会の一員として，ペプチド科学の発展に資するように尽力したいと強く感じています。今回のThe 16th Korean Peptide and Protein Sympo- siumを通して、海外の最新の研究成果を知り、さらに同世代の韓国学生と知り合ったことで，自分の今後の課題を見つけることができました。非常に意義深い参加であったと思います。末筆ではありますが、本シンポジウムの参加に当たり，ご支援してくださいました日本ペプチド学会の学会役員および，選考委員会の先生方に，この場を借りて，心よりお礼申し上げます。ありがとうございました。にしむら　ひろかず九州大学大学院理学府化学専攻構造機能生化学研究室し九州大学リスクサイエンス研究センター
日本ペプチド学会では，2013年度の日本ペプチド学会賞，日本ペプチド学会奨励賞，および第22回アメリカンペプチドシンポジウム（2013年6月22日～ 27日、 Hilton Waikoloa Village on the Big Island of Hawaii),第10回オーストラリアンペプチドシンポジウムカンファレンス(2013年９月８日～ 13日, Penang, Malaysia）への若手研究者の参加支援（JPS Travel Award）の公募を行います。詳細は日本ペプチド学会ホームページhttp://www.peptide-soc.jp/top.htmlをご覧ください。 PEPTIDE NEWSLETTER JAPAN編集・発行:日本ペプチド学会〒 562-8686  箕面市稲4-1-2 ㈱千里インターナショナル内類集委員野水基義(担当理事) (東京薬科大学薬学部) TEL · FAX 042-676-5662 e-mail: nomizu@toyaku.ac.jp寛(九州工業大学大学院情報工学研究院)坂本TEL 0948-29-7815, FAX 0948-29-7801 e-mail: sakakan@bio.kyutech.ac.jp小出  隆規（早稲田大学先進理工学部） TEL 03-5286-2569, FAX 03-5286-2569 e-mail: koi@waseda.jp 1徹（大阪大学蛋白質研究所） TEL 06-6879-8602,   FAX 06-6879-8603 e-mail: kawa@protein.osaka-u.ac.jp松島 綾美（九州大学大学院理学研究院） TEL 092-642-4353, FAX 092-642-2607 e-mail: ayami@chem.kyushu-univ.jp (本号編集担当：松島　綾美)