浜松医科大学滝浩姓//l Contact photosensitivity (CPS) is successfully induced in mice by application of photosensitizing agents plus irradiation with ultraviolet A (UVA ). By using this mouse model, we e valuated the photoallergenicity of cosmetic agents and the protective- ness by sunscreens. Photoallergic cutaneous responses were induced by photosensitizing agents, including tetrachlorosalicylanilide (TCSA), tribromosalicylanilide, bithonol, musk ambrette, and methylcoumarin. In CPS to TCSA, two UVA-absorbing sun- screens, benzophenone-3 and Parsol 1789, dramatically inhibited the CPS response, whereas the two UVB-absorbers, p-aminobenzoic acid and 2-ethyl-hexyl-p- methoxycinnamate, exhibited much less suppressive effect. These findings indicated that the murine CPS model is useful for screening of photoallergenicity of cosmetics and evaluation of photoprotectiveness by sunscreens.
k.猪言
我々はマウスを用いた接触光過敏症の実験モデルを確立し、テトラクロロサリチルアニリド( TCSA )の光アレルギー反応を、剃毛腹部にTCSAを塗布し同部に長波長紫外線（UVA）を照射することにより誘導しうることを示した･ * 。この過敏症反応はT細胞による遅延型反応であり''-³'、主要組織適合抗原遺伝子複合体に支配されている'・''。。このマウスの実験系を化粧品の光アレルギー能のスクリーニングおよびサンスクリーンのUVに対する遮断効果の評価に利用することは可能である。化粧品には古くは殺菌剤であるハロゲン化フェノールや人工香料であるマスクアムブレットを含Screening for photoallergenicity of cosmetic agents and evaluation of photo- protection by sunscreen agents using a mouse model of contact photosensitivity Masahiro Takigawa Hamamatsu University School of Medicineんだものが使われ、それらが光接触皮膚炎の原因となった。現在使われているあるいは将来使われる化粧品にも光アレルギーを惹起する新たな物質が含まれている可能性があり、個々の化粧品における光アレルギー能のスクリーニングが必要とされる。また一方では現在サンスクリーンの使用が注目されており、その造断波長として中波長紫外線（UVB）のみならずUVAの遮断が期待されている。造断効果の評価において生体系を用いての検討が望まれるが有用な方法は確立していない。本研究ではこうした化粧品による光アレルギー能のスクリーニングとサンスクリーンの効果の評価という2点について、接触光過敏症のマウスモデルを用いて検討した。
2 .実験
2 . 1 光アレルギー能のスクリーニング基本となる接触光過敏症の感作と惹起のプロトコールは、マウス剃毛腹部に試験物質を塗布しUVA照射を行い光感作し（day 0、1）、 day5に耳翼に試験物質塗布プラスUV A照射を行い光惹起する方法である' ' 。過敏症の程度は光惹起の翌日耳翼随誤を測定し、耳翼厚の増加分をもって表した。光アレルギーを通常の接触アレルギーと区別考慮するために、惹起の際、左耳翼に光惹起、右耳翼に単に試験物質を塗布するだけの惹起を行った''。また過敏症反応を増強させるために光感作の2日前にシクロフォスファミドを腹腔内投与する群をも併せて検討した『・努’。試験物質としては、TCSA 、トリプロモサリチルアニリド(TBS)、ビチオノール、マスクアムブレットを検討した。
2 . 2 サンスクリーン剤の効果の評価
TCSAを光ハプテンとする接触光過敏症において、光惹起の際、 UV A照射前に耳翼にサンスクリーン剤を塗布し、耳翼腫脹の抑制度を調べた"'。サンスクリーン剤としてはbenzophenone -3, Parsol 1789, p-aminobenzoic acid ( PABA ), 2-ethyl-hexyl-p-methoxycin- namate (EHMC)を用い、1％および5％にエタノールにて溶解したものを検討した''。 TCSAと表皮細胞との結合物の定量は、TC− SA塗布、 UV A照射した耳翼より表皮細胞浮遊液を作製、これをfreezing/thawing, sonica- tionして抽出物を得、TCSA結合物の吸収波長である260nm付近での吸光度を測定することによって行った''。結果は無処置表皮細胞抽出物の吸光度でサブトラクションして表した。
3.結　果
3 . 1
光接触性皮膚炎を起こす種々の物質の光
アレルギー能
マウス剃毛腹部に試験物質であるTCSA 、トリブロモサリチルアニリド、ビチオノール、マスクアムブレットを塗布後UVAを照射し、耳翼に当該物質プラスUV A照射にて惹起した。この結果、全ての検討物質において有意な耳翼腫脹が認められ、光アレルギー能が確認された''。特にTCSAは強い光接触性皮膚炎反応を示した。 U V A照射無しに感作物質塗布のみを行った右耳の腫脹は非常に弱く、得られた反応が光アレルギー反応であることが確認された''。。光感作の2日前にシクロフォスファミドを腹腔内投与することにより、耳翼腫脹反応の比較的弱い物質でも実質的な耳翼腫腸を得ることができた"。。
TCSA接触光過敏症におけるサンスク
3 . 2
リーン剤の抑制効果
TCSAを光ハプテンとする接触光過敏症において、光惹起の際、 U A照射前に耳翼にサンスクリーン剤であるbenzophenone-3,  Parsol 1789, PABA, EHMCを塗布し、耳翼随腸の抑制度を検討した。 Figure 1に示すように、 ben- zophenone-3, Parsol 1789はUVAサンスクリーンであり、PABA, EHMCはUVBサンスクリーンである。 Table 1に結果を掲げる。5 %溶液においてはbenzophenone-3, Parsol 1789は強い抑制効果を示し, PABA, EHMCの抑制は中等度であった（experiment 1)。 1 %溶液ではbenzophenone-3, Parsol 1789は依然強く接触過敏症を抑制し、PABA, EHMCは影響を与えなかった（experiment 2)。よってUVAサンスクリーンはUVBサンスクリーンより明らかに強いサンスクリーン効果を示した。またこのサンスクリーンの抑制効果は通常の接触過敏症であるDNFB接触過敏症には何ら影響を与えなかった( experiment 3 )。 Table 1 Effects of sunscreens on the elicitation of contact photoallergy and ordinary contact allergy
p<0.01. compared with Groups C and 0. statisticaliy not sienlficant, compared with Group E, UVAサンスクリーンであるbenzophenone- 3, Parsol 1789はUVBサンスクリーンであるPABA, EHMCより顕著なTCSA表皮細胞結合物生成に対する抑制を示し（Figure 2）、サンスクリーンがTCSAと表皮細胞の結合を阻止することによって接触光過敏症の惹起反応を抑えることが示された¹’。各サンスクリーンの抑制度をTable 2に掲げる。 Fig.2 Absorbance spectrum of TCSA-epider- mal cell photoadducts formed in ear- lobes. Five % solutions of sunscreen were applied to earlobes before irradiation. The values represent the absorbance of extracts equivalent to 2 × 10  cells/m2. The data were expressed by subtracting the absorbance of extracts from the same number of epidermal cells ob- tained from mice untreated with TCSA and sunscreens. Table 2 Amounts of TCSA-epidermal ceil pho- toadducts formed in earlobes
² Flve ¥ 20lutions vere applied to earlobes before irradiation. 0 The data represent the mean of ceak abaorbance between  254-262 fn extracts equivalent to 2x107 cells/mi. p<0.05, compared with the vehicle group. atatistlcally mot signiflcant. compared with
4.考祭
今回の実験結果はマウス接触光過敏症が化粧品の光アレルギー能のスクリーニングおよびサンスクリーンのU Aに対する遮断効果の評価に利用できることを示した。各光感作物質の耳翼腫脹度には差があり、惹起反応の弱いものもあったがシクロフォスファミドを前投与することにより反応をより顕現化することができた。化粧品に含まれる香料、植物由来の成分は、現在においても光アレルギー能を有するものが存在すると考えられ、さらにはサンスクリニン、ポディローションはそれ自体日光暴露を前提として使用されるため、本モデルを用いた光アレルギー能のスクリーニングは利用価値が高いと考えられる。またマウスを用いるため個々の化粧品における接触光過敏症の免疫学的な機序解明を可能としうる。 TCSA接触光過敏症モデルはUVAサンスクリーンの光遮断能を評価するうえで、有用であることも明らかとなった。この遮断効果は光ハプテンが表皮細胞に光結合するステップを抑えることによって起こされる。 TCSAは蛋白と光結合することが明らかとなっており、恐らく接触光過敏症のinitial stepはTCSAが表皮ケラチノサイトの陵あるいは細胞質の蛋白に光結合することによって生じると考えられる8 ’。サンスクリーンはUVAを吸収することにより、このstepを抑制するといえる7 '。サンスクリーンによるUVAの遮断は、隨床的にUVAを作用波長とする皮膚疾患が多いこと、UVAが色茶沈着の原因波長となることなどより注目を集めている。この意味において、本系は従来の物理学的計測法に加えて、 in vivoの系でのサンスクリーンの効果の評価を可能とする。
女
献
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