注意点.使用するカラムの耐圧（Max Pressure、MPa）、推奨流速（Default flowrate、ml/min）、カラムポリューム（Column volume = C.V.、mL）を確認する。 (GE純正のカラムはMethod EditorのEdit → Column Listから確認できる) . AKTA本体は使用時のみON（UVランプの保護）。 . .使用するBufferおよび20% EtOHは0.2 μmフィルターろ過する。防腐剤（アジ化ナトリウム等）無しの場合には作成後1週間以上経過したbufferは使用不可。MilliQは毎日交換する。サンプルは使用直前に0.2 μmフィルターろ過する。超遠心サンプル（15,000 rpm以上）の上清やAKTA分画直後のサンプルはそのままカラムにかけてOK。 .デフォルト設定（起動時、END時）は以下の通り。ENDを押せばデフォルト設定に戻る。 > Injection Valve: Load V Column position: 1 (bypass) Pump Inlet: A1, B1 > > Outlet Valve: Waste . .全ての流路が20% EtOHで満たされている。カラムの接続、取り外しは、20% EtOHで行う。インレットチューブを他の溶媒系に変更する時は、混入を防ぐためにMilliQでの洗浄を行う（ピーカーに入れたMilliQによるPumpWashを行う）。 .マニュアル操作のコマンドは、[nsert]でコマンド表示をした方が入力ミスを防げる。本体の構成1操作法起動1. 2. AKTA本体の電源をONにし、1 ～ 2分待つ（Pump Calibration等が行われる）。 UNICORNにてLogon。接続されていなければ、接続（Connect）をする。
systemの準備
1.定期的にリンス液（20% EtOH;ポンプの洗浄）を交換する（一ヶ月に１度程度）。 2.長期間使用していないときは流路に気泡が発生していることがある。気泡が発生していれば、ポンプのエア抜き操作を行う（操作方法は後述の使用溶媒の準備のところを参照）。
使用溶媒の準備
使用溶媒に移行する前にMilliQによる20%  EtOHの追い出しを行う。高塩濃度の溶媒が20%  EtOHに触れることで塩が析出してしまうことを防ぐため。 1. 2.使用するインレットチューブ吸入口を、MiliQをいれたビーカーにうつす。ポンプのエア抜き:パージバルブにシリンジを接続し、バルブゆるめて、流路の気泡がなくなるまでゆっくりと吸引する。終了後バルブを閉める。もし、A1、B1以外のインレットチューブを使用する場合には、Inlet valveを変更しつつ使用するすべてのインレットチューブに対して行う。終了後はバルブ付近の水滴をキムワイプで拭き取る。次の操作であるPumpWashのあとにバルブからの漏れがないかを確認する（キムタオルを敷いておくとわかりやすい。
PumpWashを実行:
3. 4. Manual ţ Pump… → PumpWashExplorer →ラインを選択→ [nser] →確認→ Executeインレットチューブ吸入口をそれぞれ使用するbufferのボトルに移し、PumpWashを実行する。通常A1が平衡化buffer、B1が溶出用buffer。イオン交換等の場合には、B1が高塩濃度bufferとなる。 Manual ţ Pump… → PumpWashExplorer →ラインを選択→ Insert →確認→ Execute SystemWashを実行。 Manual ţ Pump… → SystemWash / 75 mL → Insert →確認→ Execute 5.サンプルのManual injectionやSample Pump fillingを行う場合、volumeに応じてSuper loopまたはSample loopを選択し、接続する。 Super loopの準備sample vol.: 10 mL, 50 mL 1.パッキン保護、スムーズな送液のため、各パーツをMilliQで満らしつつ組み立てること。 2. Glass tube下端よりmovable sealをゆるく挿入（Oリングのついている方が下端側にくるように）する。 3.上端側よりMilliQを注いでから、movable sealを押し込む。 (Oリングが0 mLの位置よりも上に来るまで。seal側面に水が入り込むことが重要） 4.上下を逆さまにし（上端側のMilliQは排出してしまうがOK）、下端側よりMilliQを満たし、下端側のInner end pieceを空気が入らないように、液面の横からスライドさせながらはめる。はめた後、Glass tubeに刻まれた三角形のくぼみとinner end pieceの溝を合わせる。movable sealが下端まで到達したときに、このくぼみと溝を通って送液される（Bypass）。 5.同様に上端側をMilliQで満たし、上端側のInner end pieceをはめる。 6. Protective jacketをかぶせて上下に黒のouter end pieceを取り付ける。 7. 8. Injection Valve の#2 からのチューブとSuper loop下端を、空気が入らないように接続する。シリンジでInjection Valve #3（Valve正面のポート）からMilliQを注入し、Super loop上端から空気を追い出す。 9. Injection Valveの #6 からのチューブとSuper loop上端を、空気が入らないように接続する。 Super loopの0 mLの目盛りがある方が下になっていることを確認する。 10. movable sealによるsuper loop内のMilliQ排出: 11. Manual ţ Flowpath… → InjectionValve → inject → Insert Manual ţ   Pump...   →   Flow   →   5 ml/min   →   Insert →  確認  → Execute MilliQが排除されるまで平衡化バッファーを流す（0 mlの目盛まで）。 12. END 13. サンプルインジェクションポートからSuper loopへの流路洗浄 : Injection ValveがLoadであることを確認する。 5ml程度の平衡化バッファーをシリンジでInjection Valve #3（Valve正面のポート）から注入する。 Manual ţ   Flowpath…   →   InjectionValve   → inject   →   Insert Manual ↓   Pump...   →   Flow   →   5 ml/min   →   Insert   →  確認  → Execute平衡化バッファーを流す（0 mlの目盛まで）。
14. END
Sample loopの準備sample vol.: 5 ml以下取り付け: Injection Valveの#2と#6の間にサンプルループを接続。 1. Injection ValveがLoadであることを確認する。 2.サンプルループ体積の３倍量以上の平衡化バッファーをシリンジでInjection Valve #3（Valve正面のポート）から注3.入し、洗浄を行う。
カラムの接続
取り外されているカラムは20％ EtOHで満たされている。HiLoad 26/60などについているBack Pressureユニットも同様。 FlowRateを0.2〜1 ml/min（カラムによる）程度の低流速とし、FlowpathのColumn Positionは３とする。 1. Manual ↓   Flowpath…  →   ColumnPosition  →   3   →   Insert Manual ↓   Pump…  →   Flow  →   1 ml/min  →   Insert  →  確認  →   Execute Alarm Pressureをセットする。設定値は、カラムのMax Pressureとする。ここでは例として、0.3 MPaとする。 2i Manual ↓   Alarm&Mon…  →   Alarm_Pressure  →   HighAlarm / 0.3 MPa  →   Insert  →  確認 →   Execute Column Selection Valve, V2の#3から出ているチューブとダミーの接続を外し、カラム上端をゆるく接続する。こ3.のとき、なるべく空気が入らないようにする。接続部のネジサイズには種類があるので適宜アダプターを使用する。カラム下部を解放し、カラム上部とチューブの接続をきつく締める。 4. 5.カラム下部と、Colum Selection Valve, V3の#3 から出ているチューブを接続する。途中、Alarm Pressureにより停止（Pause）してしまった場合には、FlowRateを下げてからcontinueする。 6.カラムの接続部をキムワイプで拭き取り、漏れがないか確認する。 7. END ai
カラム平衡化
取り付けた直後のカラムは、20％ EtOHで満たされている。これを使用するbuffer系へと置換する必要がある。多くの場合、A液を1.2 C.V. +20 mL程度をカラムに流す（UV、Condが安定するまでが平衡化）。イオン交換等のB液グラジエントを使用する場合には、マニュアルグラジエントによりカラムの状態を確認しておくとさらに良いだろう。マニュアルグラジエント後には再度Ａ液で平衡化しておく。ここでは例として、Max Pressureが0.3 MPa、Default flowrate 5 ml/min、C.V. 5 mLであるイオン交換カラムの場合とする。 1.
マニュアルグラジエントによるカラム確認（イオン交換オプション）:
Manual ↓ Alarm&Mon… → Alarm_Pressure → HighAlarm / 0.3 MPa → [Insert Manual ↓ Pump… → SystemPumpControlMode → PressFlowControl / 0.28 MPa / 0.1 → linsen Flowpath… → ColumnPosition ↑           ↑ Insert Manual ↓ Manual ↓ Pump… → Flow → 3 ml/min → Insert Manual ↓ Pump… → Gradient → 100%B / 10 min → Insert Manual ↓ Other… → End_Timer → Acc. Volume / 50 mL → Insert →確認→ A液による平衡化: 2i Manual ↓ Manual ↓ Manual ↓ Manual ↓ Alarm&Mon… → Alarm_Pressure → HighAlarm / 0.3 MPa → Insert Pump… → SystemPumpControlMode → PressFlowControl / 0.28 MPa / 0.1 → Insert Flowpath… → ColumnPosition ↑ 3 → Insert Pump… → Flow → 3 ml/min → Insert UV、Condが安定化するまで続ける。サイズの大きなゲルろ過カラム等で時間がかかる場合には、EndTimerを設定しておく。 Other… → End_Timer → Acc. Volume / 400 mL → Insert →確認→ Manual ↓ Executeメソッド作成（基本ルール）カラムごとにWizard形式でテンプレートとなるメソッドを作成する。(ex. HiTrap DEAE FF 5mL temp) Method Editor → File ↓  Method Wizard   から始める。サンプルごとにメソッドに変更を加えた場合には、名前を変えて保存する。(ex. HiTrap DEAE FF 5mL TICAM1 TIR)メソッドの名前には、a-z（小文字）、A-Z（大文字）、0-9（数字）、-（ハイフン）およびスペースが使用できる。また最大の文字数にも制限がある。カラムは使用前に平衡化を、使用後に洗浄を行う必要がある。メソッドに平衡化や洗浄を含ませることもできるが、このマニュアルでは手動で平衡化や洗浄を行うこととし、メソッドからは極力省く。 Peak Auto detection機能（Peakが出たらフラクションをとる）も使えるが、ここでは使用しないこととする。
メソッド作成例（HiTrap DEAE FF 5mL）
HiTrap DEAE FF 5mLなどの、FF（FastFlow）タイプのカラムはMax Pressureが低い。そのため、Super Loopを使用するとすぐにAlarm Pressure Limitに引っかかりPauseしやすい。また一般にイオン交換にかけるサンプルは液量が多く、 Sample Loopの使用も適していない。そのためSuper Loop、Sample Loopは使用せず、System Pump Direct LoadingによりA12のラインからサンプルを流すこととする。A12からサンプルを流すが、Sample Injectionの量はサンプル液量よりも多めに設定しておき、A12の液量がかなり減ったときに平衡化bufferを追加し流路に残るサンプルを完全に押し出すことをお勧めする。またそのときには、液の枯渇には十分に注意すること。 1. Main Selection, Column and BufferPrep (ア)    Anion Exchange / HiTrap_DEAE_FF_5mL [Grobal] / Position 3 (イ) Flow Reguration of the System Pumpにチェック/ 0.28 MPa / 0.1 ml/minこのFlow Reguration of the System Pumpは、設定圧力に到達したときに自動で流速を下げるもの。下げられた流速は、圧力が下がったときに元に戻される。 2. Wavelength and Buffer Inlets (ア) Wavelength UV    280 / 260 / 220 (イ) Inlet A1 / B1 / A11 Equilibration vi (ア)    Start %B   0 / Equilibration volume   0.1 CV (イ)    Watch Equilibration    OFF 4. Sample Injection (ア)    System Pump Direct Loading    (Sample Pump Direct Loadingと間違えないようにする) Injection volume    10 mL （Injection volumeはメソッド実行時に適宜変更できる） (イ) (ウ)　Sample Inlet　Buffer Valve A1 / A12 (A12からサンプルを入れる) Watch Out Unbound Sample（非吸着成分のフラクション） 5. Watch Out Unbound Sample (2 CV)にチェック(ア) (イ)    Frac-900 / 12 mL Elution Fractionation 6. (ア)    Frac-900 / Fixed Volume Fractionation Fraction Volume   4 mL (イ) 7. Elution Linear Gradient (ア) Target Concentration 50%B / Gradient Length 20 CV (イ) Use Cond or ConcB to Start and Stop Fractionation   No (うClean after Elution at 100 %B (5 CV)にチェック(H) Reequibration after Elution (5 CV)はチェックオフ(オ) [Variables] が表示される。ここで名前をつけて保存をしておく。 Save → HiTrap DEAE FF 5mL Temp / System 1 / Anion Exchange File ! [Gradient] Tabを表示し、理想とするGradientになっているか確認する。メソッド作成例（HiLoad 26/60 Superdex 75 prep grade） HiLoad 26/60 Superdexシリーズなどのサイズの大きなゲルろ過カラムは、排除限界（担体サイズをオーバーしてしまう大きな分子量をもつもの）まではカラム内の溶媒が大量に排出される。この排除限界の溶出は0.3  C.V.程度であり、排除限界以前の溶出は不要なフラクションになる。そのためFractionationは、0.3  C.V以降から行う。また、目的タンパク質が溶出される場所（C.V.）やそのUV吸収見込み量があらかじめわかっている場合には、C.V.を限定したFractionationやUV強度を利用したPeak Fractionationを行うこともできる。このマニュアルでは、C.V.を限定したFractionationを紹介する。そのため、一度メソッドを作成したあとでFractionation開始点と終了点を設定し、さらにElutionを追加する操作を行う。この操作はText Instructionで行う。 1. Main Selection, Column and BufferPrep Size_Exclusion / HiLoad_26/60_Superdex_75_prep_grade (Grobal) / Position 3 (ア) (イ) Flow Reguration of the System Pumpにチェック/ 0.48 MPa / 1 ml/min 2. Wavelength and Buffer Inlets (ア)    Wavelength UV    280 / 260 / 220 (イ) Inlet A1 / B1 / A11 vi Equilibration (ア) Start %B   0 / Equilibration volume   0.01 CV (イ)    Watch Equilibration    OFF Sample Injection 4. (ア)  Manual (イ)　Empty Loop　2.5 mL（Empty Loopサイズはメソッド実行時に適宜変更できる） 5. Elution Fractionation (ア)    Frac-900 / Fixed Volume Fractionation (イ)    Fraction Volume    5 mL Elution 6. (ア)    Isocratic with Delayed Fractionation (イ) (Wasteされる画分) Length of Elution Before Fractionation   0.3 C.V. (ウ)    Length of Elution with Fractionation    1.2 C.V.      (Fractionationされる画分) Variablesが表示される。ここで名前をつけて保存をしておく。 Save   →   Spd75 Temp / System 1 / Size Exclusion File ↓ Gradient Tabを表示し、理想とするGradientになっているか確認する。 Text InstructionによるFractionationの限定を行う（オプション）。ここでは、およその溶出位置が140〜200 mLのみをFractionationするものとする。ペンを持った手のアイコン（Text Instructuon）をクリックする。 1. Block Isocratic_Elution_Before_Frac 2. (ア) (0.3)#Length_Before_Frac End_Blockをクリックし、0.4 C.V.としてChange Block Isocratic_Elution_with_Frac (ア)　(1.2)#Length_with_Frac　End Blockをクリックし、0.19 C.V.としてChange Block Isocratic_Elution_Endの追加3. (ア) Block Isocratic_Elution_Before_Fracを選んで右クリックし、Copy (イ) Block Fractionation_Stop（一番下のブロック）を選んで右クリックし、Paste (ウ) (正) Do you wish rename the block (Isocratic_Elution_Before_Frac)? と聞かれるので、Yes Isocratic_Elution_End   とする。 (他のBlockとは違う名前にすること) (オ) Block Isocratic_Elution_Endが最下部に追加されることを確認する。 (カ)　(0.4)#Reame0　End Blockをクリックし、0.91 C.V.としてChange Elution C.V.の合計が1.5 C.V.（少なくとも1.3 C.V.以上）となるようにする。専用Templateとして名前を変えて保存しておく（ex. Spd75 Temp kume）。Fractionationしたい位置が変わる場合には、上記のC.V.値を適宜変更した上で、専用のメソッドとして名前を変えて保存する。(ex. Spd75 TICAM1 TIR kume)
メソッド実行
1. 2.フラクションコレクタ：フラクションチューブセンサーの位置、アウトレットチューブの位置を確認すること。サンプルアプライ（Super loopまたはSample loopの場合）: Injection Valve #3（Valve正面のポート）よりシリンジをつかってサンプルをloopに送る。空気が入らないように気をつける。サンプル注入後、シリンジは差したままにしておく。メソッド実行: File ! Run... → 「メソッド選択」 → OK Show detailsにチェックを入れる。 Sample Injectionの液量を適宜変更する。 3. Next＞ :その他、必要に応じて数値を変更する。 Result名は、日付を最初に入れておくとあとで探しやすい。 (ex. 181121 HiTrap DEAE FF 5 mL Temp N TICAM1 NTD) start
|カラムの取り外し
Runが終了した時点で、カラムポジションやPump Inletはデフォルト設定に戻っているので注意する。ここでは例として、Max Pressureが0.3 MPa、Default flowrate 5 ml/min、C.V. 5 mLであるカラムの場合とする。 1.カラムの洗浄：イオン交換など溶出 buffer を使用するカラムの場合は、グラジエントをかけたとき、および溶出buffer100%のときに、溶出がなくなる（UVのピークがなくなる）まで洗浄を繰り返す。 Manual ↓ Alarm & Mon… → Alarm_Pressure → HighAlarm / 0.3 MPa → Insert Pump… → SystemPumpControlMode → PressFlowControl / 0.28 MPa / 0.1 → linsen Manual ↓ Flowpath… → ColumnPosition → 3 → Insert Manual ↓ Manual ↓ (少し低流速で行う) Pump… → Flow → 3 ml/min → Insert Pump… → Gradient → 100%B / 10 min → Insert Manual ↓ Other… → End_Timer → Acc. time / 15 min → Insert →確認→ Execute Manual ↓さらに汚れがひどい場合(カラム担体が着色している場合や、上記の洗浄を数回繰り返しても溶出が発生する場合)には、1  N  NaOH等による洗浄を行うことがある。その際には必ずカラムマニュアルの洗浄プロトコルに使って洗洋すること。 2.カラムのMilliQ置換:高い塩濃度のbufferを使用した流路に、すぐに20％ EtOHを流すとポンプおよびカラム内で塩が析出することがある。それを抑制するためにまずはMilliQを流路、カラムに流す。使用したインレットチューブ全ての吸入口をMiliQのビーカーに移す。 Manual !  Pump… → PumpWash Explorer →ラインを選択→ [Inser] →確認→ Execute 7 Manual ↓ Manual ↓た場合） Pump… → Flow → 3 ml/min → Insert →確認→ Execute以下の操作はMiliQを送液しながら行う。UVやCondが安定してから次のステップに進む。 Pump… → Gradient → 50%B / 0 min → Insert →確認→ Execute (Pump Bを使用しManual ļ    Alarm&Mon…   →   Alarm_Pressure   →   HighAlarm / 0.3 MPa   →   [Inser]   →  確認Execute Manual ↓ Flowpath… → ColumnPosition → 3 → Insert →確認→ Execute DEAE  FF等、C.V.の小さいカラムはUV、Condが安定するまで流す。HiLoad  26/60のようにC.V.が大きいカラムは0.1 C.V.以上流す。 END 3.カラムの20% EtOH置換:上記のMilliQ置換と同じ操作手順で、流路、カラムを20% EtOHで満たす。20% EtOHは水よりも粘性が高いため、内圧があがることに留意する（低流速で操作する理由）。 1.2 C.V. + 20 mL以上流し、カラム内を20% EtOHで満たすこと。時間がかかりそうなときは、End_Timerを使用すること。 END
4.
カラムの取り外し: Manual ↓  Alarm & Mon…   →   Alarm_Pressure   →   HighAlarm / 0.3 MPa   →   Insert Manual ↓   Flowpath…   →   Column Position   →   3    →   Insert Manual ↓   Pump…  →   Flow  →   1 ml/min  →   Insert  →  確認  →   Executeカラム下部から外す。カラム下部の接続を外し、ゆるくキャップをする。 (HiLoad 26/60などBack Pressureがかかるキャップのときはキッチリとキャップする)カラム上部の接続を外し、カラム上下のキャップをキッチリと締める。漏れがないことを確認する。 Column Selection Valve V2とV3はカラムなし（ダミー）で接続する。 END systemの後片付け1. 2. 3. Super Loopを使用した場合には取り外し、ダミーを接続する。Super Loopは別途、分解洗浄する。 SystemWashを行う。 Manual ţ Pump… → SystemWash / 75 mL → [Inser] →確認→ Execute使用した流路すべて（Sample Loop、フラコレのラインなど）を20% EtOHですすぐ。 UVが安定するまで行う。 Manual ţ Pump… → Flow → 5 ml/min → Insert →確認→ Execute以下の操作は送液しながら行う。 UVやCondが安定してから次のステップに進む。 Manual !  Flowpath… → InjectionValve → Inject → Insert →確認→ Execute Manual J    Flowpath…  →   ColumnPosition  →   3   →    Insert  →  確認  →   Executeフラコレに繋がっているチューブを外し、廃液行きとする。 Manual J    Flowpath...  →  OutletValve  →  Feed  →  Inseri  → 確認 →  Execute END 4. Sample Loopを使用した場合には、この時点で外し、ダミーを接続する。 5.インジェクションのルアーを取り外し、別途、洗浄する。 6. END]をしてから、PCとSystemをdisconnectし、AKTA本体の電源を切る。クロマトグラムの印刷Evaluation File ↓   Open →   Result… 「ファイル選択」 ok表示したいCurvesを選択:    マウス右クリック   Properties   →   Chromatogram Layout CurveタブでチェックボックスX-axisタブで横軸スケールのベース（Volume、Timeなど）やスケールの設定Y-axisタブで縦軸スケールの個別設定。UVのスケールは280,260は同じ設定値にすることが望ましい。 File ↓ Save File ↓   Print  → 実験ノート(A4)等に貼るのであれば、 1／２や１／４に分割されているものを使用するとはみ出さない。 → OK。
Tips
1.     システム背圧が高いとき送液を行っていない状態（20% EtOHで流路が満たされている状態）のときに、0.05 MPa程度の圧力がかかっている。これは、フローリストリクターによる流路の陽圧化による。フローリストリクターは、UVメーター内での気泡発生を抑制する。ポンプAのパージバルブを解放するとこれは0 MPaになるが、たまに圧力がかかっている表示になることがある。これは、圧力キャリブレーションがずれていることを示しているので、送液をせず、かつパージバルブを解放した状態で圧力キャリブレーションを行う。 System Controlから、 Systems ↓    Calibrate ↓    P900 pressureまた、フローリストリクターは、常時FR-902が使用されている。一部のカラム（逆相カラム等）を使用する際に、より圧力の高いFR-904を使用することがある。FR-904を使用した場合には、使用後にFR-902に戻すこと。 Injection valve=load, Column position=1(Bypass) またはカラムなし（ダミーで接続）の状態で20% EtOHをポンプAから1 mL/minで送液したときに表示される圧力を、システム营圧と呼ぶ。これが０である場合には流路に漏れがあるかを確認する。漏れが無い場合や値が安定していない場合（±0.03 MPa以上変動する場合）には、流路やポンプに気泡があることが考えられるため、エア抜きを行う。また、これが高い状態で安定しているときは、流路やポンプの詰まりが考えられる。もっとも詰まりやすい箇所は、オンラインフィルタ一部分であり、分解洗浄または交換することで解消されることが多い。オンラインフィルターは、10s explorerやPurifierと、100 explorerで形状が異なっている。特に、10s explorerやPurifierのオンラインフィルターは高額かつ小サイズであるため、取り扱いには十分に注意する（紛失とかしないように）。
2.
リンス液が流れていないとき
リンス液はポンプの稼働に合わせて自動で循環する。終夜運転等で低流速（0.1 ml/min）にしているときには、リンス液の循環も遅く見た目にはわからないかもしれない。普通の流速（1 ml/min以上）時やPumpWash / SystemWashのときにリンス液が循環されていないときは、リンス液の流路が詰まっている等が考えられる。まずはリンス液の状態（色や粘性）を確認し、不良であればすぐに交換すること。交換したばかりでも流れていないときには、流路への手動循環を行う。それでも改善しない場合には流路やポンプの分解洗浄をする。
3.
フラコレ不調要因
Frac-900のフラコレは、大きく分けてフラコレ本体、アーム、ドラムで構成されている。アームには、フラコレチューブのセンサーおよびOutlet valveからくるチューブがついている。フラコレ本体にはドラムを回転させるゴムキャッブ（drive sleeve）のついたFeed rodがある。ドラムをフラコレ本体にセットする際には、アームをずらし、rodをドラム中心より外側に向けて引っ張ってからドラムをセットする。 drive sleeveが摩耗してくると、ドラムをコントロールできなくなり、Fractionation中にFeed tube errorが出てPauseしてしまう。このときには、drive sleeveを交換する。カッタ一等で、摩耗したdrive sleeveに切れ込みをいれてからrodより外し、新品を装着する。アームには、フラコレチューブのセンサーがある。ドラムおよびフラコレチューブをセットしたときに、このセンサーによってフラコレチューブが認識されていることを確認する。Manual controlによるFeedで確認してみるのも良いだろう。また、Outlet valveからくるチューブが、フラコレチューブ中心に来ていることを目で確認すること。念には念を入れて、メソッド実行時のフラコレが開始するときに、液がフラコレチューブに入っていくこと、次のフラクションに移動したときにも同様であること、をそれぞれ確認しておくとさらに良いだろう。チューブの規格を変更したとき、例えば15 mLのコニカルチューブからディスポーザブルガラスチューブに変えたときにはアームの高さを再調整する。アームの高さを調整したときにも、センサーによってフラコレチューブが認識されていることを確認しておく。