技術レポート
田中里美*,桑原正良* Development of Simultaneous Determination Method of Carbaryl, Carbofuran and Fenobucarb in Feed by LC-MS/MS Satomi TANAKA* and Masayoshi KUWABARA* (* Kobe Regional Center, Food and Agricultural Materials Inspection Center) An analytical method was developed to determine the levels of carbaryl, carbofuran and fenobucarb in feed using a liquid chromatograph-electrospray ionization-tandem mass spectrometer (LC-ESI-MS/MS). After adding water to the sample, carbaryl, carbofuran and fenobucarb were extracted with acetone and the extracted solutions were filtered.  The filtrate was then diluted with acetone to a volume of 200 mL. The sample solution was purified with a SPE column (InertSep Slim-J C18-B, GL sciences Inc.; Tokyo, Japan) and injected into the LC-MS/MS to determine the levels of carbaryl, carbofuran and fenobucarb.  LC separation was carried out on an ODS column (ZORBAX Eclipse XDB-C18, 2.1 mm i.d. × 150 mm, 5 μm from Agilent Technologies Inc.; Santa Clara, CA, USA) using a gradient with 2 mmol/L ammonium acetate solution and acetonitrile as a mobile phase.  In the MS/MS analysis, positive mode electrospray ionization (ESI+) was used. Recovery tests were conducted on formula feed for finishing beef cattle, wheat, corn, milo and Formula feed for finishing beef cattle and corn were spiked with 0.01 or 0.1 mg/kg of oaten hay. carbaryl, 0.01 or 0.05 mg/kg of carbofuran and 0.01 or 0.3 mg/kg of fenobucarb. Wheat was spiked with 0.01 or 2 mg/kg of carbaryl, 0.01 or 0.2 mg/kg of carbofuran and 0.01 or 0.3 mg/kg of Milo was spiked with 0.01 or 10 mg/kg of carbaryl, 0.01 or 0.1 mg/kg of carbofuran fenobucarb. and 0.01 or 0.3 mg/kg of fenobucarb.   Oaten hay was spiked with 0.1 or 250 mg/kg of carbaryl, 0.1 or 13 mg/kg of carbofuran and 0.1 or 10 mg/kg of fenobucarb.   The mean recoveries ranged from 86.6 to 103 % for carbaryl, 91.3 to 105 % for carbofuran and 85.5 to 99.1 % for fenobucarb. The relative standard deviations of repeatability (RSD t ) were not more than 10 % for carbaryl, 7.4 % for carbofuran and 11 % for fenobucarb. Key words: carbaryl; carbofuran; fenobucarb; liquid chromatograph-tandem mass spectrometer (LC-MS/MS); electrospray ionization (ESI); feedキーワード：カルバリル；カルボフラン；フェノブカルプ；液体クロマトグラフ型質量分析計；エレクトロスプレーイオン化法；飼料
11
結
lin
カルバリルは，米国Union Carbide社が開発したカーバメート系の殺虫剤であり，我が国では1959年に国内登録されているり. カルボフランは米国FMC社が導入したカーバメート系の殺虫剤であり，国内登録はされておらず，米国でも使用が中止されている²).フェノプカルブはクミアイ化学が開発したカーバメート系の殺虫剤であり， 1968年に国内登録されている19,3).これらの農薬の我が国における飼料中の残留基準としては，飼料及び飼料添加物の成分規格等に関する省令4)において，カルバリルはえん麦及びマイロで10 mg/kg，大麦及びライ麦で5 mg/kg,小麦で2 mg/kg，とうもろこしで0.1 mg/kg及び牧草で250 mg/kg，カルボフランは，カルボフラン及び3-OHカルボフランをカルボフラン含量に換算したものの和と規定され5),えん麦,マイロ及びライ麦で0.1 mg/kg，大麦及び小麦で0.2 mg/kg，とうもろこしで0.05 mg/kg及び牧草で13 mg/kg,フェノブカルプはえん麦，大麦，小麦，とうもろこし，マイロ及びライ麦ともに0.3 mg/kgの基準値が設定されている.また，フェノプカルプは，飼料の有害物質の指導基準及び管理基準9において飼料用イネ（稲わら，稲発酵粗飼料及び靱米）の管理基準値が設定されている.飼料（飼料用イネを除く．）中の当該3成分を含むカーバメート系農薬の同時定量法としては,飼料分析基準りにポストカラム蛍光誘導体化液体クロマトグラフで定量する分析法が収載されている．しかし，この方法は上記基準値を念頭に置いた妥当性確認が実施されていない．また，測定機器についても，より汎用性のあるものが望ましい.榊原は，財団法人日本食品分析センターが平成21年度飼料中の有害物質等分析法開発委託事業において開発したLC-MS/MSを用いた定量法8)（以下「JFRL法」という．）を基に，飼料用イネ中の当該3成分を含む8成分の同時定量法について飼料分析基準への適用の可否を検討し，稲わら,稲発酵粗飼料及び积米に適用可能な定量法")（以下「イネ法」という．）を確立した．今回，飼料(飼料用イネを除く. )中のカルバリル,カルボフラン及びフェノプカルブについて, JFRL法及びイネ法を基に飼料分析基準への収載を目途とした同時定量法の開発等について検討したので，その概要を報告する.参考にカルバリル,カルボフラン及びフェノプカルブの構造式等をFig. 1に示した. 1-naphthyl methylcarbamate C 12 H 11 NO 2  MW: 201.2 CAS No.: 63-25-2 Chemical structures of carbaryl, carbofuran and fenobucarb

2　実験方法
2.1
統、科
成鶏飼育用配合飼料，種豚飼育用配合飼料，肉用牛肥育用配合飼料，えん麦，大麦，小麦，とうもろこし，マイロ，ライ麦，アルファルファ乾草及びオーツ乾草はそれぞれ１ mmのスクリーンを装着した粉砕機で粉砕した．なお，検討に用いた配合飼料の配合割合をTable 1に示した．

2.2 紙楽
1)アセトンは残留農薬・PCB 試験用を用いた. アセトニトリルはカラム処理には残留農薬・ PCB 試験用を用い，標準液及び LC-MS/MS 溶離液には液体クロマトグラフ用を用いた．酢酸アンモニウムは高速液体クロマトグラフ用（1 mol/L溶液，和光純薬工業製）を用いた．水はMillipore, DIRECT-Q UV 3 （Merck Millipore製）により精製した超純水（JIS K0211の5218に定義された超純水）を用いた. 2)　カルバリル標準原液カルバリル標準品（純度99.8 %, 関東化学製)  25 mgを正確に量って50 mLの全量フラスコに入れ，アセトンを加えて溶かし，更に標線までアセトンを加えてカルバリル標準原液を調製した（この液1 mLは，カルバリルとして0.5 mgを含有する．）. 3)　カルボフラン標準原液カルボフラン標準品（純度99.8 %, 関東化学製）25 mgを正確に量って50 mLの全量フラスコに入れ，アセトンを加えて溶かし，更に標線までアセトンを加えてカルボフラン標準原液を調製した（この液1 mLは，カルボフランとして0.5 mgを含有する．）.
4) フェノブカルブ標準原液
フェノブカルプ標準品（純度98.4 %, 関東化学製）25 mgを正確に量って50 mLの全量フラスコに入れ，アセトンを加えて溶かし，更に標線までアセトンを加えてフェノブカルプ標準原液を調製した（この液1 mLは,フェノブカルブとして0.5 mgを含有する. ）. 5)　混合標準液各標準原液各2 mLを100 mLの全量フラスコに入れて混合し，更に標線までアセトンを加えて混合標準原液を調製した（この液1 mLは，カルバリル，カルボフラン及びフェノプカルブとして各10 μgを含有する．）.使用に際して，混合標準原液の一定量を，アセトニトリルー水（3+2）で正確に希釈し，1 mL中にカルバリル,カルボフラン及びフェノプカルブとして各0.04, 0.06, 0.08, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 20, 40, 60, 80, 100, 200, 400及び600 ngを含有する混合標準液を調製した.
2.3 装置及び器具
1) 粉砕機：粉砕機1（乾牧草以外用）：ZM  200   Retsch製（1 mmスクリーン，使用時回転数14000  rpm）粉砕機2（乾牧草用）：SM 2000　Retsch製（1 mmスクリーン，回転数（仕様）835 rpm） 2)　振とう機：MW-DRV 宮本理研工業製（使用時振とう数300 rpm） 3) オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム: InertSep Slim-J C18-B（充てん剤量500 mg)ジーエルサイエンス製にリザーバーを連結したもの
4)  LC-MS/MS :
LC部：ACQUITY UPLC System Waters製MS/MS部：ACQUITY TQ Detector Waters製2.4 定量方法
1)抽出
分析試料10.0 gを量って300 mLの共栓三角フラスコに入れ，水20 mL（乾牧草は30 mL)を加え，30分間静置後，更にアセトン100 mL（乾牧草は120 mL）を加え， 30分間振り混ぜて抽出した. 200 mLの全量フラスコをプフナー漏斗の下に置き，抽出液をろ紙（5種B）で吸引ろ過した後，先の三角フラスコ及び残さを順次アセトン50 mLで洗浄し，同様に吸引ろ過した．更に全量フラスコの標線までアセトンを加えた．この液２ mL（乾牧草については，この液の一定量をアセトンで正確に10倍希釈した液2 mL）を50 mLのなす形フラスコに正確に入れ、水20 mLを加えて，カラム処理に供する試料溶液とした. 2)　カラム処理オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラムをアセトニトリル5 mL及び水5 mLで順次洗浄した．試料溶液をミニカラムに入れ，流速1 mL/min程度で吸引して液面が充てん剤の上端に達するまで流出させた.更に試料溶液の入っていたなす形フラスコを水ーアセトニトリル(9+1）5 mLずつで2回洗浄し、洗液を順次ミニカラムに加え、同様に流出させた． 10 mLの全量フラスコをミニカラムの下に置き，アセトニトリルー水（3+2）9 mLをミニカラムに加え,同様に吸引して各農薬成分を溶出させた.全量フラスコの標線まで同溶媒を加え,この液の一定量を5000×gで5分間遠心分離し，上澄み液をLC-MS/MSによる測定に供する試料溶液とし
た.
3)   LC-MS/MSによる測定
試料溶液及び各混合標準液各5 μLをLC-MS/MSに注入し，選択反応検出（以下「SRM」という. ）クロマトグラムを得た.測定条件をTable 2及び3に示した.

44)
算
計
得られたSRMクロマトグラムからピーク面積及び高さを求めて検量線を作成し，試料中のカルバリル,カルボフラン及びフェノブカルブ量を算出した.なお，定量法の概要をScheme 1に示した. Sample 10.0 g (300 mL Erlenmeyer flask) -add 20 mL of water (grass hay: 30 mL) and allow to stand for 30 min add 100mL of acetone (grass hay: 120 mL) and shake for 30 min filtrate through filter paper (No. 5B of JIS P3801) under reduced pressure (receiver: 200 mL volumetric flask) -wash with 50 mL of acetone -fill up to 200 mL with acetone dilute sample solution of grass hay 10-fold with acetone 2 mL of sample solution (50 mL eggplant flask) add 20 mL of water InertSep Slim-J C18-B (500 mg) (prewash with 5 mL of acetonitrile and 5 mL of water) apply sample solution -wash with 5 mL of water–acetonitrile (9:1) (twice) place a receiver (10 mL volumetric flask) elute with 9 mL of acetonitrile–water (3:2) –fill up to 10 mL with acetonitrile–water (3:2) centrifuge for 5 min at 5000×g LC-MS/MS Analytical procedure for carbaryl, carbofuran and fenobucarb in feed Scheme 1
３　結果及び考察
3.1 検量線
2.2の5)に従って調製した各混合標準液各5 μLをLC-MS/MSに注入し，得られたSRMクロマトグラムからピーク面積及び高さを用いて検量線を作成した．得られた検量線の一例は， Fig. 2- 1から2-3のとおりであり，カルバリル，カルボフラン及びフェノブカルプは各0.04~600  ng/mL (注入量として0.0002~3 ng）の範囲で直線性を示した.なお，当該検量線の濃度範囲は，カルバリル，カルボフラン及びフェノプカルブを0.004~60 mg/kg 含有する分析用試料を本法に従い調製した最終試料溶液中のカルバリル，カルボフラン及びフェノブカルブ濃度範囲に相当する.
3.2抽出後の希釈操作について
飼料中のカルバリル等について最も低い基準値は，カルボフランのとうもろこしで0.05  mg/kgと定められている．イネ法は，アセトン抽出後200 mLに定容し，更に10倍希釈（稲発酵粗飼料は100倍希釈）を行うが，定量下限が0.1 mg/kgであることから，飼料に適用するためにはより低い濃度まで定量下限を下げる必要がある．そのため，基準値が高い乾牧草以外については，抽出後の10倍希釈を行わないこととして以後の検討を行った. 3.3オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラムからの溶出画分の確認小麦を用い，2.4の1)により調製したカラム処理に供する試料溶液に、カルバリル、カルボフラン及びフェノブカルプとして1 mg/kg相当量（最終試料溶液中で10 ng/mL相当量）を添加し,オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラムからの溶出画分を確認した．その結果はTable ４のとおりであり，カルバリル，カルボフラン及びフェノプカルプはアセトニトリルー水(3+2) 0~9 mLの画分に溶出し，9~18 mLの画分には溶出が見られなかった．JFRL法89では10 mLで溶出させているが，溶出液を受ける容器が10 mL全量フラスコであり標線を超えるおそれがあることから，本法では、9 mLで溶出させた後，全量フラスコの標線まで同溶媒を加えLC-MS/MSによる測定に供する試料溶液とした.

3.4 妨害物質の検討
成鶏飼育用配合飼料，種豚飼育用配合飼料，肉用牛肥育用配合飼料，えん麦，大麦，小麦，とうもろこし，マイロ，ライ麦，アルファルファ乾草及びオーツ乾草各１検体を試料として，2.4の1)及び2)により調製した試料溶液をLC-MS/MSに注入し，得られたSRMクロマトグラムを確認したところ，いずれの試料においてもカルバリル，カルボフラン及びフェノブカルブの定量を妨げるピークは認められなかった.なお，当該試料のSRMクロマトグラムをFig. 3に示した. (LC-MS/MS conditions are shown in Tables 2 and 3.  Arrows indicate the retention time of 1: carbaryl, 2: carbofuran and 3: fenobucarb. The scale of vertical axis is normalized to chromatogram A, in which the peak height of the 0.1 ng/mL standard solution is to be shown as 100 % in each segment. The baselines are shifted for display.) A: Standard solution (The concentration is each 0.1 ng/mL as carbaryl, carbofuran and fenobucarb.) B~L: Blank sample solution (B: formula feed for breeding period chicken, C: formula feed for breeding period pigs, D: formula feed for finishing beef cattle, E: oat, F: barley, G: wheat, H: corn, I: milo, J: rye, K: alfalfa hay, L: oaten hay)
3.5マトリックス効果の確認
2.4の1)及び2)により調製した成鶏飼育用配合飼料，種豚飼育用配合飼料，肉用牛肥育用配合飼料及びとうもろこしのブランク試料溶液にカルバリルとして１ mg/kg相当量（最終試料溶液中で10 ng/mL相当量），カルポフラン及びフェノプカルプとして0.5 mg/kg相当量（最終試料溶液中で５ng/mL相当量）を，えん麦，大麦，小麦，マイロ及びライ麦のブランク試料溶液にカルバリルとして2  mg/kg相当量（最終試料溶液中で20  ng/mL相当量），カルボフラン及びフェノブカルプとして1 mg/kg相当量（最終試料溶液中で10 ng/mL相当量）を，アルファルファ乾草及びオーツ乾草のブランク試料溶液にカルバリル，カルボフラン及びフェノブカルブとして20 mg/kg相当量（最終試料溶液中で20 ng/mL相当量）をそれぞれ添加した各マトリックス標準液について，2.2の5)に従って調製した同濃度の混合標準液に対するピーク面積比を確認したところ，ピーク面積比はTable ５のとおり，カルバリルで93~108 %，カルボフランで97~109 %，フェノプカルプで93~104 %であり，カルバリル，カルボフラン及びフェノプカルプは試料マトリックスによる大きな影響を受けることなく測定可能であった.
a) Converted from the concentration in the matrix standard solution b) Ratio of peak area of pesticides in the presence of matrix to that in the absence of matrix
3.6 添加回収試験
2.2の2)~4)のカルバリル標準原液，カルボフラン標準原液及びフェノプカルプ標準原液をアセトニトリルー水（3+2）で正確に希釈し添加に用いた.肉用牛肥育用配合飼料及びとうもろこしについて，カルバリルとして0.01及び0.1  mg/kg相当量（最終試料溶液中で0.1及び1 ng/mL），カルボフランとして0.01及び0.05 mg/kg相当量（最終試料溶液中で0.1及び0.5  ng/mL），フェノプカルプとして0.01及び0.3  mg/kg相当量（最終試料溶液中で0.1及び3 ng/mL），小麦について，カルバリルとして0.01及び2 mg/kg相当量(最終試料溶液中で0.1及び20 ng/mL) ，カルボフランとして0.01及び0.2 mg/kg相当量（最終試料溶液中で0.1及び2  ng/mL）, フェノブカルブとして0.01及び0.3  mg/kg相当量（最終試料溶液中で0.1及び3 ng/mL）,マイロについて,カルバリルとして0.01及び10 mg/kg相当量(最終試料溶液中で0.1及び100 ng/mL) ，カルボフランとして0.01及び0.1 mg/kg相当量（最終試料溶液中で0.1及び1  ng/mL）,フェノブカルプとして0.01及び0.3  mg/kg相当量（最終試料溶液中で0.1及び3  ng/mL），オーツ乾草について，カルバリルとして0.1及び250  mg/kg相当量（最終試料溶液中で0.1及び250 ng/mL）,カルボフランとして0.1及び13 mg/kg相当量（最終試料溶液中で0.1及び13  ng/mL），フェノプカルプとして0.1及び10  mg/kg相当量（最終試料溶液中で0.1及び10 ng/mL）になるようにそれぞれ添加後よく混合し，一夜静置した後に本法に従って定量し，平均回収率及び繰返し精度を求めた.その結果はTable 6のとおり，カルバリルの平均回収率は86.6~103 %,その繰返し精度はRSD,として10 %以下,カルボフランの平均回収率は91.3~105 %,その繰返し精度はRSD,として7.4 %以下，フェノブカルプの平均回収率は85.5~99.1 %，その繰返し精度はRSD,として11 %以下の成績が得られ，飼料分析基準の妥当性確認法ガイドラインり(以下「妥当性確認法ガイドライン」という．）に定められた真度及び併行精度の目標値を満たしていた．なお，得られたSRMクロマトグラムの一例をFig. 4に示した.
ー : Not tested a) Mean (n = 5) b) Relative standard deviation of repeatability Selected reaction monitoring chromatograms of standard solutions and spiked samples (LC-MS/MS conditions are shown in Tables 2 and 3.  Arrows indicate the peak of 1: carbaryl, 2: carbofuran and 3: fenobucarb.  Each peak is shown as 100 % in each segment. The baselines are shifted for display.) A: Standard solution (The concentrations of carbaryl, carbofuran and fenobucarb are 1 ng/mL, 0.5 ng/mL and 0.3 ng/mL, respectively.) B: Sample solution of formula feed for cattle spiked at 0.1 mg/kg of carbaryl, 0.05 mg/kg of carbofran and 0.3 mg/kg of fenobucarb (corresponding to 1 ng/mL as carbaryl, 0.5 ng/mL as carbofuran and 0.3 ng/mL as fenobucarb) C: Sample solution of corn spiked at 0.1 mg/kg of carbaryl, 0.05 mg/kg of carbofran and 0.3 mg/kg of fenobucarb (corresponding to 1 ng/mL as carbaryl, 0.5 ng/mL as carbofuran and 0.3 ng/mL as fenobucarb) D: Standard solution (The concentrations of carbaryl, carbofuran and fenobucarb are 250 ng/mL,13 ng/mL and 10 ng/mL, respectively.) E: Sample solution of oaten hay spiked at 250 mg/kg of carbaryl, 13 mg/kg of carbofran and 10 mg/kg of fenobucarb (corresponding to 250 ng/mL as carbaryl, 13 ng/mL as carbofuran and 10 ng/mL as fenobucarb)
3.7
定量下限及び検出下限
本法の定量下限及び検出下限を確認するため，肉用牛肥育用配合飼料，小麦，とうもろこし,マイロ及びオーツ乾草にカルバリル，カルボフラン及びフェノブカルブを添加し，添加回収試験により得られるピークのSN比が10及び3となる濃度を求めた.その結果，SN比が10及び３となる濃度は，カルバリル，カルボフラン及びフェノブカルブともに，オーツ乾草以外の試料については0.01 mg/kg及び0.003 mg/kg，オーツ乾草については0.1 mg/kg及び0.03 mg/kgであったことから，試料中で定量下限は0.01 mg/kg（乾牧草については0.1 mg/kg），検出下限は0.003 mg/kg（乾牧草については0.03 mg/kg）であった．設定した定量下限は，省令¶に定められた飼料中のカルボフランの基準値の最小濃度0.05 mg/kgに対して1/5の濃度であり，妥当性確認法ガイドラインに規定された目標を満たしていた．検出下限についても同様に目標を満たしていた.なお，Table 6に示したとおり，当該定量下限濃度における添加回収試験結果は良好であった.
4　まとめ
飼料に残留するカルバリル，カルボフラン及びフェノブカルプについて，JFRL法及びイネ法を基に，LC-MS/MSを用いた定量法の飼料分析基準への適用の可否について検討したところ，抽出後の試料溶液を10倍希釈しないこと（乾牧草を除く）及びカラム処理における溶出溶媒量を10 mLから9 mLに変更することで，以下の結果が得られた． 1)検量繞は，0.04~600 ng/mL（注入量として0.0002~3 ng）の範囲で直線性を示した．なお，当該検量線の濃度範囲は，カルバリル、カルボフラン及びフェノブカルブを0.004~60 mg/kg含有する分析用試料を、本法に従い調製した最終試料溶液中のカルバリル，カルボフラン及びフェノブカルブ濃度範囲に相当する. 2)　成鶏飼育用配合飼料，種豚飼育用配合飼料，肉用牛肥育用配合飼料，えん麦，大麦，小麦，とうもろこし，マイロ，ライ麦，アルファルファ乾草及びオーツ乾草について，本法に従って得られたクロマトグラムには，定量を妨げるピークは認められなかった． 3)　本法に従い得られた試料溶液についてマトリックス効果を確認した結果，カルバリル，カルボフラン及びフェノブカルプは試料マトリックスによる大きな影響を受けることなく測定可能であった. 4)肉用牛肥育用配合飼料,小麦,とうもろこし,マイロ及びオーツ乾草にカルバリル,カルボフラン及びフェノプカルプとして0.01~250 mg/kg相当量を添加し，本法に従って5点併行分析を実施し、回収率及び繰返し精度を求めたところ，妥当性確認法ガイドラインに定められた真度及び併行精度の目標値を満たす良好な結果が得られた. 5) 本法のカルバリル、カルボフラン及びフェノプカルプの定量下限は試料中で0.01 mg/kg（乾牧草については0.1  mg/kg），検出下限は0.003  mg/kg（乾牧草については0.03  mg/kg）であった．設定した定量下限及び検出下限は，妥当性確認法ガイドラインに定められた目標を満たしていた.
文
献
1) 一般社団法人日本植物防疫協会：農薬ハンドブック2016年版（改訂新版）, 420-421,日本植物防疫協会，東京，(2016) (ISBN: 978-4-88926-146-2). 2) 内閣府食品安全委員会：食品安全総合情報システム, http://www.fsc.go.jp/fsciis/foodSafetyMaterial/show/syu02850270108, cited 21 Dec. 2016. 3) 食品安全委員会農薬専門調査会，食品安全委員会動物用医薬品専門調査会：農薬・動物用医薬品評価書(2013). 4)  農林省令：飼料及び飼料添加物の成分規格等に関する省令，昭和51年7月24日，農林省令第35号 (1976). 5)　農林水産省消費・安全局長通知：飼料及び飼料添加物の成分規格等に関する省令の一部を改正する省令の施行について，平成18年5月26日，18消安第2321号 (2006). 6)  農林水産省畜産局長通知：飼料の有害物質の指導基準及び管理基準について，昭和63年10月14日,  63畜B第2050号 (1988). 7)  農林水産省消費・安全局長通知：飼料分析基準の制定について，平成20年4月1日，19消安第14729号 (2008). 8) 財団法人日本食品分析センター：平成21年度飼料中の有害物質等分析法開発委託事業 (2010). 9) 榊原良成：飼料用イネ中のカルバリル他8成分の農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時定量法，飼料研究報告， 37， 19-45 (2012).