上田泉子*，金子周平り，水海吉太郎♭，田中研実♭，近藤隆一郎♭果樹國から排出されるカキノキ（Diospyros kaki）剪定枝の新たな処理方法を開発するため，剪定枝チップを培地の基材としたヒラタケ（Pleurotus ostreatus）の無殺菌栽培を検討した。無殺菌の剪定枝チップにヒラタケ種菌を混合して温湿度無管理で培養を行った後，プランターに埋設する手法とした。本手法では，チップだけでも子実体は発生し， 2.5kgの菌床あたり積算収穫量が355ｇ，収穫回数は3.0回だった。栄養材として米ヌカを添加することで，それぞれ1035 gおよび6. 0回に増大した。種菌量の強い（培地全体重量の10％，20％および40％）で積算収穫量に有意な差はなかった。子実体が形成生育する場所，すなわち発生場所としては，クヌギ林内で積算収穫量および収穫回数がそれぞれ679 g /菌床および5. 4回と建物の軒下よりも多かった。プランター内の剪定枝は収穫開始から約 1年後には原型をとどめない程度まで形状が崩壊していた。以上のことから，チップ化したカキノキ剪定枝を塔地としたヒラタケ無殺菌栽培は，柿農家が特別な施設なしに剪定枝を処理できる方法として期待されるとともに，収穫した子実体も収入源にできる有効な技術と考えられた。 [キーワード:子実体収穫量,ヒラタケ,カキノキ,剪定枝,無殺菌塔地] Cultivation of Pleurotus ostreatus on Unsterilized Chips Kaki( Diospyros kaki ) Pruned Branches. Ueda Keiko *, Shuhei Kaneko , Yoshitaro SUIMI, Kiwami TANAKA and Ryuichiro KONDO(Fukuoka Agriculture and Forestry Research Center , Chikushino, Fukuoka,818-8549,Japan) Bull. Fukuoka Agric. For.Res. Cent. 1: 49-54(2015) To develop disposal method of the pruned branches of kaki ( Diospyros kaki ) ,we cultivated Pleurotus ostreatus on their chip media. Inoculums of P. ostreatus were mixed with unsterilized kaki chips ,and the mixture were incubated at ambient conditions until the mycelia spread over the bed .Then,two mushroom beds were filled with wood chips in a container. When rice bran was added to the media, the fruit body yield and frequency of harvest were 1035g/bed(2.5kg) and 6.0times r espectively,and the indexes higher than those cultured without rice bran,.  There were not significant differences in the fruit body yield among inoculum doses (10, 20 and 40%). When the containers including mushroom beds were placed in the Sawtooth Oak ( Q. acutissima ) stand, the fruit body yield and frequency of harvest were 679g/ bed(2.5kg) and 5.4times, and these indexes were higher than the beds under eaves. The kaki chips were hardly observed one year after harvest. These results suggest that it is useful to cultivate P ostreatus without sterilization for disposal of kaki branches. [Key words: fruit body yield, Pleurotus ostreatus, Kaki, pruned branch, unsterilized media.]
緒
ific
福岡県は柿の生産が盛んであり，2012年栽培面積は1, 970ha を占める（農林水産省 2013)。柿果樹園では,毎年冬季に樹形を整え,枝葉の生長と結実の均衡を保つために剪定作業が行われ，県内では2012年で約6200tの柿剪定枝残さが発生したと推定される（佐野・三浦2003, NEDO  2011,農林水産省 2013)。この剪定枝は,過去においては野焼き処分が行われていたが,煙の悪臭,大気汚染およびダイオキシン問題から，2001年に「廃棄物の処理及び清掃に関する法律（環境省2010）」で原則禁止されている。最近は，剪定枝を粉砕してチップ状にして園内に散布している例がみられるが，剪定枝は雛分解性物質であるリグニンを含むため腐りにくいこと（広居1992),腐熟が十分でない木質物は生育阻害物質や室茶飢餓による植物の生育阻害を引き起こすこと（坂本・青山2004)などの懸念がある。剪定枝の分解を促す手段の一つとして，リグニンの分*連絡責任者解酵素を産生する木材白色腐朽菌（樋口1984,西田1996）を用いることが考えられる。通常キノコの菌床栽培では木材チップに木材白色腐朽菌を接種する。このように栽培に使われた木材はリグニンが分解され，セルラーゼ糖化率,すなわちセルロースとヘミセルロースの加水分解率が高まる(Hiroi 1981)。さらに，菌糸体自身が室素源となるため微生物によって分解され易くなり（広居1992),土壌中に還元した場合の室茶飢餓を抑制することができると考えられる。このことからカキノキのチップに木材腐朽菌を接種すれば，短期間で土壌還元時に生育障害が生じない程度まで剪定枝を分解できると考えられる。さらに，収穫した食用キノコは柿農家の副収入にもつながる。実際に，ウメ（Prunus mume）剪定枝を用いたマンネンタケ（Ganoderma lucidum）およびシイタケ(Lentinula edodes)栽培試験(熊倉ら2007, 2008) ,ナシ（Pyrus serotina）剪定枝を用いたヒラタケ( Pleurotus ostreatus)栽培試験(Terashima et al. 2011),ナシ,カキノキ,イチジク(Ficus carica L.)の剪定枝を用いたシイタケ栽培試験(門屋ら2004)など4）九州大学大学院農学研究院が行われている。しかし，いずれもその培養前段階において殺菌が必要とされ，殺菌施設のない果樹生産現場で行える技術ではない。このことから我々は，剪定枝を用いた無殺菌栽培技術を確立することで，柿農家が行える剪定枝の新たな処理方法の開発を目指した。本研究では，供試菌として害菌に比較的強いヒラタケ(山本, 2005)を用い，どのような培地条件であれば実用的な収量が得られるのか調べるために，種菌の量および米ヌカの添加について,子実体発生との関係を調べた。さらに，どのような環境条件であれば果樹園内で子実体の発生を促すことが可能か調べるために，通常キノコの発生に適した場所であるクヌギ林と果樹園内でも場所を確保しやすく作業しやすい建物の軒下で子実体発生を比較した。
材料および方法
1　供試菌
供試菌は，（有）微創研の保有菌株であるヒラタケ「BMC9073」（第一1表）である。種菌は，供試菌をおがこなどに蔓延させた元菌で，栽培コストの中で最も大きな割合を占める。試験１は市販の菌床を手で細かくほぐしたものを種菌とした。なお，試験 2はBMC9073株を当センターで市販品と同様の手法で培養し細かくほぐしたものを種菌とした。
2 プランター栽培に適した培地条件の検討(試験1)適正な培地条件を検討するために，種菌の量および栄養材である米スカの添加が子実体発生に与える影響を調べた。試験は，カキノキ剪定枝を用いた菌床の調製（第1図a)とそれをプランターに入れて子実体を発生させる栽培実験（第1図b）の順に実施した。 ( 1)菌床の調製カキノキ枝は，2009年3月24日に剪定した生枝（含水率38%）を用い，樹木粉砕機（GS120G　株式会社大橋製）で1～ 3 cmに粉砕してチップ状にした。培地の調製および種菌接種は翌日行った。試験区ごとの塔地組成比を第２表に示した。水道水で含水率が60～65％となるように水分調整を行った後種菌を混合接種した。種菌量は，全体重量の10%，20%および40%とした。栄養材の効果をみるために，種菌量20％の米ヌカを添加しない試験区も設けた。各培地のpHを測定し，栽培に適しているか調べた。培地を 2. 5kgずつ菌床用通気フィルター付き培養袋(シナノパック2.5kg用,株式会社シナノポリ製)に詰め成形し(W21×D12×H15cm) ,殺菌せずに作業室内で83日間培養した。なお，作業室は採光や温湿度を制御しなかった。同年６月16日に培地全体に菌糸が蔓延した後に菌床を袋より取り出し，以下のようにプランターに設置した。 ( 2)プランター栽培プランター（W65×D23×H18.5cm） 1個につき2個字つ菌床を設置し，隙間には，補填材として上記と同様に粉砕したカキノキ剪定枝チップを浸漬処理して菌床の上面が約1cm出るように敷き詰めた。さらに、上層に乾燥防止のため水を含ませた市販の殺菌済ポラ土を菌床上面が隠れる程度に被せた。通常キノコの発生に適した環境であるクヌギ林内に設置し,被陰とキノコバエ侵入防止のためプランター全体を寒冷紗で覆った（第２図）。散水は適宜行った。培養中の室温測定を温度データロガー (TR-52S,株式会社ティアンドディ製）で行った。傘が20〜50mmに生長したところで子実体の収穫を行い，発生量と発生回数を調査した。林内における菌床の設置期間は次の年の10月までとし,その時のプランター内のチップの腐朽状況を目視で親察した。た
※底はすべて乾重比で小数点以下を四捨五入したもの。ただし，米ヌカの含水率は日本標準飼料成分表（独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 2009）の値を用いて算出※接種日は2009年３月25日※培養日数は83日間※n= 5～ 6第２図　菌床を埋設したプランターをクヌギ林内に設置した様子（試験2）
３　子実体発生に適したプランター設置条件の検討
(試験2)
子実体の発生に適したプランターの設置条件を検討するために，通常キノコの発生に適した場所であるクヌギ林と，果樹園内でも場所を確保しやすく作業しやすい建物の軒下で栽培試験を行い，子実体発生に与える影響を調べた。カキノキ枝は，2010年 3月に剪定し，枝のまま野外で乾燥したものを用いた。同年６月16日に粉砕機（NFD13,ヤンマー株式会社製）で1～ 5cmにチップ化し一昼夜流水に浸漬した。培地の調製と種菌接種は翌日に行った。試験1と同様にチップと米ヌカと種菌を乾重量比で8: 1: 1で混合接種した。作業室で34日間培養した後菌床を袋から取り出して,同年７月21日に試験1と同様の方法でプランターに埋設し，クヌギ林内と建物の軒下の 2箇所に設置した（第 3図）。本試験では埋設時にカキ剪定枝が手に入らなかったことから，補填材として上記と同様に粉砕したウメ剪定枝チップを用いた。各設置場所におけるヒラタケ子実体の発生量および発生回数を調査した。設置期間は試験１と同様に次の年の10月までとした。また，培養中の温度を2010年 6月17日から埋設した７月21日まで，発生場所の気温を同年7月21日から2011年１月７日まで測定した。また，2010年 8月 3日から2011年 1月 7日までの発生場所の雨量を雨量計で測定した。第３図　菌床を埋設したプランターを建物の軒下に設置した様子（試験2）
結果
1　プランター栽培に適した培地条件の検討（試験1)本試験の種菌混合前培地のpHは米ヌカ添加区で5. 9,米ヌカ無添加区で5.7であり（第3表），ヒラタケ菌糸の生長が良好となるpH 5～ 6 (山中ら1987)の範囲内であった。米ヌカを添加しない場合で若干菌糸伸長が遅れる傾向があったものの，15日後には全ての試験区で菌糸の蔓延がみられた。蔓延するまでの室温は平均で15.4℃であった。プランター埋設前の培養期間全体では，平均21.0℃,最低9.1℃,最高37.6℃だった。培養期間中の苦菌汚染率はすべての試験区で0%であった。 2009年10月19日に種菌量10％および20％区でヒラタケ子実体が初めて発生し（第4図），米ヌカを添加した3つの試験区では2010年 2月中旬まで発生が続いた。 1菌床あたりの積算収穫量および収穫回数を第 4表に示した。米ヌカを添加した場合，種菌量が多くなるほど積算収穫量が増大する傾向があったが，これらの間では有意な差は見られなかった。種菌量20％で米ヌカ添加区と無添加区を比較すると,無添加区では積算収穫量が2.5kgの1菌床あたり355 gであったのに対し，添加区は1035 gと多かった。収穫回数も無添加区で3.0回であったのに対して添加区は6.0回と多かった（pK0.05）。埋設したプランター内の菌床および補填材は，子実体発生から 1年後にはほとんど原型をととめていなかっ
さ
2　子実体発生に適したプランター設置条件の検討
(試験2)
本試験では，接種から８日後にはすべての試験区で菌糸の蔓延がみられた。蔓延するまでの室温は平均で26.2℃,プランター理設前の培養期間全体は平均26.4℃,最低23.3℃,最高34.8℃で,試験1より高かった。本試験では，培養中の菌床の一部に10％程度の害菌汚染がみられた。これらもプランターに埋設したが、
汚染の有無に関係なくすべての菌床から子実体が発生した。全試験区で2010年10月25日にヒラタケ子実体が初めて発生し，翌年２月中旬まで発生が続いた。 1菌床あたりの積算収穫量および収穫回数を第5表に示した。林内発生区と軒下発生区を比べると，積算収穫量および収穫回数は前者でそれぞれ2.5kgの菌床あたり679ｇおよび5.4回で,いずれも軒下試験区の379ｇおよび3.0回より有意に多かった(ρ〈0.05およびρ <0.01)第４表　菌床あたり積算収穫量,収穫回数およびBiological Efficiency(BE)の算出結果（試験1)
1）箇床は2.5kgの箇床ブロック。 ※表中（）内は標準偏差を示す。 ※＊は米ヌカ無種菌量20％区との間に有意に差があることを示す（t検定，ρ<0.05）。 2) 子英体生重(kg)/調整時の塔地乾重(kg) × 100 ※塔地乾重は，2.5× (1-塔地作製時の合水率/100) (kg)で算出。第５表　菌床あたり積算収穫量,収穫回数, Biological Efficiency(BE)の算出結果および栽培中の気温と雨量の
調査結果（試験2）

2）子漢体生重(kg)/調整時の塔地乾重(kg) × 100 ※塔地乾重は，2.5× (1-塔地作製時の含水率/100) (kg)で算出。 3)4)積筑時間は埋設時(2010年7月21日)から翌年１月７日の期間で算出。 5）積算雨量は2010年8月3日から翌年1月7日の合計雨量。 ※表中()内は標準偏差を示す。 ※＊は5%で，＊＊は1%水準で試験区間で有意に差があることを示す（t検定）。 ※n=5～6
考
察
に削減できると考えられる。一方，米ヌカを添加すると収穫量が有意に増大した。栄養源としての効果（田島1982）や塔地に保水性を与える効果(清水・近藤1981)が増収に寄与したと考えられた。米ヌカはフスマやおからなどと同様にキノコ栽培の一般的な培地資材であり，果樹農家が最も入手しやすいと考えられる。また，全体の材料費に占める割合も1%程度（第６表）で費用対効果は高いことから，本栽培手法では米ヌカは必須と考えられた。プランターの設置場所について，クヌギ林内の積算収複量は，建物の軒下に比べて積算収穫量は多かった。山中ら(1987)は子実体原基形成が誘導される温度帯は12 ～15℃，子実体生長の適温は13～16℃であると報告している。林内は軒下に比べ，各温度帯に達した積算時間が長かった。さらに，積算雨量も多かった。すなわち，林内では適正な温度帯に長く置かれたことや子実体発生のための水分量が多く得られため，良好な積算収穫量を示したと推察された（第5表）。このように，クヌギ林内の方が建物の軒下に比べて栽培環境としては好ましいが，実際にはそのような場所を確保できない場合も想定される。軒下では十分な収量を得られていないことから，軒下や庭先などでも林内と同様の収穫量を得るための,保湿や散水方法等の検討が今後必要と思われる。接種時期について，試験1は剪定枝の排出される3月に行い，試験 2では，ヒラタケの最適菌糸伸長温度の25 ～30℃ (山中ら1987)に近い6月に行った。培養初期(菌が蔓延するまで）の平均室温を比較すると，試験１では15.4℃だったのに対し，試験2では26.2℃で，６月に接種した場合のほうが７日早く菌糸が完全に蔓延した。しかし，試験2の培養温度は，ヒラタケの害菌であるPenicillium属菌, Aspergillus属菌にとっての適温（山中ら1987）と重なったためか6月に接種した菌床には一部害菌が発生した。また，単純に比較はできないが試験１と２の種菌量１０％区の積算収穫量を比較した場合，試験２すなわち６月接種の方が低かった。これらの結果から，最高気温が害菌汚染リスクの高まる概ね25℃を超えない４月上旬までに種菌接種と初期培養を完了させておく必要性が示唆された。最後に，試験後の剪定枝チップについて述べる。栽培に用いた剪定枝チップは，子実体発生から１年後にはほぼ原型をとどめていなかった。今回は，腐朽度(十和田, 1939)についての調査を行っていないが，形状からは腐朽が十分に進んでおり，高い木材分解性を有するヒラタケ（寺鳴2010）によるものと推察された。今後は，重量減少率などによって剪定枝の腐朽進行状況を定量する必要がある。また，分解された剪定枝の農地還元によって室素飢餓などが生じないか作物栽培試験を行って確認する必要もある。供試菌は，いずれの試験でも無殺菌の剪定枝チップに接種して培養した。培養を行った室内は温湿度管理がなく，外光が入るため，通常のキノコ栽培施設の培養室に比べて環境の変化が大きかったが，実用的には問題なく培養が可能だった。培地から得られるキノコの収量ポテンシャルを示す値にBiological efficiency (BE)があり,培地乾重あたりの子実体生重で求められる。剪定枝を用いたヒラタケ栽培を行った過去の報告を参照すると，ナシ剪定枝にフスマを40％含有した殺菌塔地でBE が50～ 70%程度(Terashima et al.  2011)であった。一方,本試験でBEを算出したところ,試験1の米ヌカ添加区で85.3～158.6％,試験２の林内発生 67.7％であった(第 4表，第５表）。米ヌカ無添加区と軒下発生区では36.0 ～ 37.5%と低かったものの,無殺菌栽培でも条件次第では殺菌培地とおおむね同等以上の効率で栽培が可能であった。ヒラタケは世界各地で栽培されており，使える料理の種類も多い食用キノコである。未利用の剪定枝からヒラタケを生産できれば,柿農家の新たな収入源となる。ただし，食用を前提にすると安全性についても検討する必要がある。つまり，カキノキの育成のために散布された農薬が剪定枝に残留し，ヒラタケが取り込むことが懸念された。これについて金子らは，本研究の手法を用いて発生させた子実体の農薬残留量を調べた。その結果，使用された13種の殺菌・殺虫農薬はすべて検出限界以下だったことを報告している。金子ら(2013)は剪定枝の農薬残留を調査したわけではないが，この結果を受けて，適正に農薬散布された枝を用いれば子実体に農薬が残留する可能性は低いと考えられた。次に，種菌量については，有意差はないものの，種菌量が多いほど積算収穫量は大きくなる傾向があった。しかし，種菌は材料費の中で最もコストがかかるため，種菌量を単純に増やせば良いということにはならない。そこで，材料コストと収穫量の両面から最適な種菌量を検討した（第６表）。種菌量が10%，20%，40%の場合，1菌床あたり種菌費は 325円， 647円，1, 195円と材料費全体に占める割合はかなり高い。それぞれ試験１の収量が得られたとすると，収益をプラスにするためには，種菌量10%では479円/kgで販売すればよいが， 20%では701円， 40%では995円以上で販売しなければならない。現在国内のヒラタケ生産量は減少しており，それに伴い市場価格は500円/kgを割り込んでいる（西井2013）ため，種菌量10%で栽培を行うのが適当と考えられた。金子ら(2013)は，米ヌカを10％加えた条件で10％の種菌量の半分をヒラタケ栽培後の菌床，すなわち廃菌床で置き換えた結果， 2.5kgの菌床あたり600～ 700gを収穫している。種菌に廃菌床を用いていない本研究の843 g（試験1）, 679g（試験2）と比べても，ほぼ同等の収穫量が得られている。廃菌床は，現在有効な用途がなく処理に苦慮しており，無料もしくは安価に購入できる。よって種菌の一部として利用すれば，材料費をさら
1)材料費は2013年の時点での生重あたり価格を参考。種菌：1. 4円/g，米ヌカ　: 27円/g，その他の主な材料として，培養袋：20円，プランター（商用年数5年として）：14円，寒冷紗（耐用年数5年として）：15円，ボラ土（耐用年数2年として）12.5円で算出。 2) 1菌床あたり材料費/1菌床あたり収穫量(kg)。
動
磁
本研究を行うにあたり，右田英訓氏および井上忠司氏にカキノキの剪定枝を提供いただいた。ここに深く感謝の音を表します。