わが国における牛のサルモネラ症は，以前から乳用雄子牛³,4,5,9,10)や黒毛和種の繁殖牛²5)に数多く認められている。いっぽう，1990年台に入ってからは搾乳牛での発生例e.11.13,14)が増加してきた。栃木県内では, Salmonella Typhimurium (S. Typhimurium）による搾乳牛群の発生例が1991年と1994年に各１例ずつと，S. Thompsonによる例が1994年に1例観察され,いずれも乳量の著しい減少と長期にわたる本菌の汚染が認められたが，汚染源は特定されなかった。今回は1994年に発生した搾乳牛群のS. Typhimurium症について，その概要と疫学的な関係，および抗菌剤を主体とした本農場の衛生対嬢について報告する。
材料および方法
1.材料
発症期の糞便35検体(下痢便8検体，粘液便1検体,白色便1検体,軟便4検体,正常便21検体),牛舎塵埃（蜘蛛の巣が主体で以下も同じ）6検体,下痢便あるいは軟便排泄牛の血液10検体および死亡牛の肝臓が１検体。臨床症状の回復期の糞便8検体および牛舎塵埃6検体。発症1月後の糞便29検体と牛舎臨埃6検体および上記と同一の生存牛の血液7検体。発症2月後の繁便31検体と牛舎周囲の表土3検体。発症5月後の藥便34検体。
2.細菌学的検査
下痢便と一部の敏便は10倍段階希釈後，DHL寒天培地（日水製薬）およびカナマイシン(KM)
矢田谷
健（ジャパンカーフクリニック）加CW寒天塔地（日水製薬）に塗抹し37℃で培養後，菌数を計測した。前記以外の養便や塵埃などの検体はハーナテトラチオン酸塩基礎培地（栄研化学）で増菌培養し，一部の検体はラパポート培地(栄研化学)で再増菌後DHL寒天培地に画線し37℃で分離塔糞した。出現集落のうちサルモネラを疑うものは，純培糞後，常法により生化学的性状を確認した。また分離されたサルモネラの血清型の確認は，市販のサルモネラ診断用免疫血溝（デンカ生研）を用いKauffmann-Whiteの抗原構造表により決定した。KM加CW寒天培地に出現した集落は嫌気性菌用簡易同定キット(API 20 A)（日本ビオメリュウ・パイテック）を用いて同定後，市販の乾燥ウエルシュ菌A型抗帯紫ろ紙（デンカ生研）による毒寒中和試験を実施した。
3.疫学的検査
分離されたサルモネラは，12種類の薬剤感受性ディスク(ABPC, CEZ, SM, KM, TC, CP, NA, PPA, NFLX, BCM, FOM, ST) (昭和)による薬剤耐性型とDuguidの第一次生物型別ツ，およびKadoとLiuの方法ツによるプラスミドの分離と電気泳動法によるプラスミドプロフィールを観察した。また，それらの性状について今回の分離菌株と著者が1978年以降に栃木県内の病性鑑定材料から分離した保存菌株と比較した。
4.ウイルス学的検査
発症期と発症後１月目の７頭のペア血清を用い，牛ヘルペスウイルス１型(BHV-1)，牛ウイルス性下痢・粘膜病（BVD-MD)，パラインフルエンザウイルス３型(PI-3),アデノウイルス７型(Ad-3)および牛コロナウイルス(BCV)につい
30   動物抗菌会報（1997）
ては中和試験により，また牛ロタウイルス(Rota), PI-3, Ad-7およびBCVについては赤血球凝集抑制（HI）試験によりそれぞれ抗体価を測定した。
5.血液学的検査
発症期の下痢および軟便を排泄している搾乳牛10頭の血液を用い，一般血液性状と白血球百分比，血薄α酸性糖蛋白（α -AG）および肝機能について検査した。
成  績
1.発生状況
発生農場は水田酪農複合経営で，当時搾乳牛が29頭，未経産牛3頭，哺育牛3頭，黒毛和種肥育牛５頭を飼育し，搾乳牛と未経産牛は同一牛舎にスタンチョンで聚養され，哺育牛は搾乳牛舎横に単飼々育されており，無毛和種肥育牛は別牛舎に飼育されていた。なお，搾乳牛の配列と哺育牛の飼育場所は図１に示した。牛の導入は平成6年1月に北海道から2頭（牛床No. 7, 8)，同年5月に岩手県から2頭（No. 4, 12の列と23の列は対頭している。 ••：亜症時に含外に繁留されていた牛床番号牛。図1  搾乳牛の配列と哺育牛の飼育場所5)，同じく８月に１頭（No. 15）であった。下痢が最初に認められたのは平成6年10月3日にNo.1の搾乳牛であり，その後No.11の方向とNo. 12から22の方向に認められるようになった。獣医師による加療は６日からであり，発症牛に対し主に補液および強肝剤と整腸剤の投与が実施された。家畜保健衛生所による病性鑑定は10月17日であり，当日の臨床症状は表１のとおりであった。すなわち水様性の下痢便の排泄は8頭に認められ，うち3頭に血便が観察されたほか4頭では偽膜を含んでいた。このほかには起立不能と起立困難の牛が3頭，皮温低下が2頭観察された。死亡牛はNo. 3が10月18日, No. 9が10月19日、No. 13が10月21日で3頭認められた。また分娩後4日目のNo. 17は泌乳停止となった。発症牛群の乳量の推移を図2に示した。10月1日から乳量が減少する直前の14日までの平均乳量は711.6 kg/日であったが，その後11月1日までの間は488.9 kg/日で約68.7 ％の必乳量であった。臨床症状が概ね回復した11月１日から12月15日までの間は576.5 kg/日で，平成5年の同時期に比較すると約88.6 %の必乳量であった。
2.細菌学的検査
発症期における整便中のサルモネラの菌量は10 CFU/g以下から10 10 CFU/gの範囲であった。また，定量培養した牛とそれ以外の牛も含めた糞便からのサルモネラの分離は，未経産牛と搾乳牛32頭中23頭(71.9 %)，哺育牛3頭中1頭であった。なお，No. 9, 10の牛の血液中からもサルモネラが分離されたほか，死亡後のNo. 9の肝臓からは本菌が106CFU/g分離された。牛舎塵埃は6検
体すべてからサルモネラが分離された。臨床症状が回復しつつある10月27日の搾乳牛（発症期に排菌が確認された牛）の排菌は8頭中7頭（87.5 %）であった。また要2に示すとおり，発症1月後のサルモネラの排菌は29頭中8頭(27.6 %)であり，塵埃は6検体中1検体（16.7 %）に認められた。発症2月後の糞便からは32頭中4頭(12.5 %)，牛舎周囲の表土3検体中1検体からサルモネラが分離された。発症後５月目の糞便24検体中4検体(11.8 %）から本菌が分離された。分離されたサルモネラはいずれもS. Typhimurium subserovar Copenhagenと同定された。下痢便中の大腸菌数は10℃FU/g以下から1010 CFU/gまでであり,便の性状と菌数に一定の傾向は認められなかった。また，Clostridium perfrin- gensの菌数は10°CFU/gから10°CFU/gの範囲であり，A型蒂素産生は各検体4ないし6菌株いずれも陽性を示した。
¹：10月18日²：11月22日³：12月20日に検査実施*：臨床症状回復後導入された牛の検査成績3月14日の検査時には牛舎内での移動があったため本表には分離成績を示していない。
3.疫学的検査
上記各検体から分離されたS. Typhimuriumの耐性型はABPC,  SM,  TCの3剤耐性型で，生物型は17に区分された。これらの菌株と保存菌株の性状を比較した成績が表3である。すなわち1978年以降の牛糞便，死亡牛，牛環境材料，牛飼育関係者および飼育鳩由来の38型186菌株とは異なった17/3 B 5-の疫学性状を示していた。またプラスミドプロフィールも本症例由来菌株と保存菌株との比較で，同一の性状を有するものは観察されなかった。
4.ウイルス学的検査
6種類のウイルスに対する抗体の保有状況は麦4に示すとおりである。抗体の陽転あるいは有意な上昇が認められたのはPI-3のみであり，中和抗体価で7頭中3頭，HI抗体価でも7頭中3頭で，その個体は中和抗体とHI抗体とも同一であ

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った。
6.衛生対策
5.血液学的検査
発症牛の血液性状は表５に示した。正常値を超えた項目はヘマトクリット値，白血球数，α-AG値およびGOT値であり，白血球の百分比では桿状好中球の増加と好中性後骨髄球の出現が観察された。今回の症例では下痢発生時から病性鑑定時までの間，飼育者は伝染性の疾病であるとの認識は薄く，血便の排泄と元気消失（起立困難）の搾乳牛3頭を含外に繋留したのみで，牛舎消毒などの衛生対策は実施されていなかった。いっぽう，サルモネラ症と診断されてからの衛生対策は，まず血便や水様便の排泄あるいは起立不能の牛7頭 (No. 2, 3, 9, 10, 13, 14, 17) に対してエンロフロキサシン製剤を5 mg/kg頚部皮下
に１回投与したほかは，他の薬剤などは投与されていない。飼育環境の衛生対策は，発症後2月目に蜘蛛の巣の除去を実施し，舎外では発症牛を繋留していた場所に生石灰を散布したのみであった。なお，牛舎にはドバトや野鳥の飛来が認められている。
7.経済的損失
まず乳量の減少に伴った損失は，前年を基準に算出したところ10月15日から10月30日までの発症期に356,000円，回復期の10月31日から11月21日までの間に270,000円の計626,000円,死亡牛が3頭発生し共済金支払額との差額が1頭当り100,000円で計300,000円。新規導入が3頭で1頭当り300,000円で計900,000円。以上の金額を合計すると1,826,000円となり，これに治療費や泌乳停止の損失を含めると200万円以上の損失になるものと推計された。
考
わが国の搾乳牛のサルモネラ症は1980年代前半から発生が確認され，1991年頃からは増加の傾向を示し1992年には全国各地で4件(全国家畜保健衛生業績抄録）など，以前から発生があった6,10,12)ものの，1992年北海道根室家畜保健衛生所管内で20戸97頭の搾乳牛に本症の発生が確認されか,注目を集めるようになった。いっぽう,栃木県内での搾乳牛のサルモネラ症は，本症例を含め現在までに4例確認されている。今回の症例ではPI-3の動きが認められ，かつC. perfringens A型毒茶産生株が分離されたものの主因はS. Typhimuriumと考えられた。本症例から分離されたS. Typhimuriumは，疫学的な性状から県内では稀なタイプといえるが，汚染源を特定するには至らなかった。本症の対策としては，まず最初に発症牛の症状軽減があげられる。ついで他の飼育牛への本菌の伝播防止が必要であり，さらには汚染農場の清浄化という，三段階に分けた対策が考えられる。本症例では重症な牛にのみ抗菌剤が投与され，その後の清浄化に向けた衛生対策は講ぜられなかった。この原因としては，本農場では飼育場所に余裕がなく隔離飼育が不可能なこと，さらには飼育者が牛舎消毒を拒否するとともに，環境の浄化に理解を示さなかったことにある。よって，搾乳牛の被害軽減を目的としたいわゆる現実的な対策を選択した。加えて，発症後抗菌剤の投与まで時間が経過したことから発症牛の被害軽減という所期の目的を達し得なかった。いっぽう，本農場では症状回復後も長期にわたりサルモネラの排菌が認められ，かつ新たな導入牛からも排菌が観察されていることから，当該農場は今後相当期間本菌による汚染が継続するものと考えられた。よって，今回の症例から，サルモネラ汚染牛群への衛生対策は，まず発症牛に対す矢田谷　健／搾乳牛群におけるサルモネラ症／1997　35る抗菌剤の投与によって症状の軽減と排菌量の減少を図り，その後清浄化に対しては同居牛や飼育環境も含めた，広範囲な衛生対策が重要であることを再認識した。また全国的に搾乳牛への本菌の汚染が広まっていることから，公衆衛生上も危惧される。よって本症の場合，生物学的製剤を応用しながらの清浄化対策，あるいは生物学的競合を図った物質の応用も考える時期に来ているといえよう。いずれにせよサルモネラ汚染農場の清浄化については，臨床獣医師の本症に対する理解と検査機関との連携による的確な抗菌剤の投与，および汚染状況の把握が必要であると共に，何よりも重要なことは飼育者の長期にわたる努力と衛生意識の向上であろう。
要
約
1995年10月栃木県K市の1戸33頭の搾乳牛群でSalmonella  Typhimurium感染症の発生があった。食欲不振〜廃絶，水様〜粘血便，起立不能の症状に加え牛群の乳量は約63 ％まで低下し、死亡牛３頭と泌乳停止１頭が認められ，経済的損失は200万円と推計された。なお，牛群の臨床症状の回復は約半月後であったが，乳量は前年に比べその後も継続的に低下していた。発症牛の血液所見は白血球数の増加，ヘマトクリット値の上昇，好中球の左方転移と好中性後骨髄球の出現，GOT値とα1-AG値の上昇が観察された。 S. Typhimuriumの分離は発症期の飼育牛糞便からは62.5 ％で牛舎塵埃は100 ％,回復後の糞便からは27.6 ％で塵埃は16.7 ％であった。分離されたS. Typhimuriumはいずれもコペンハーゲン型であった。発症時および回復後の耐性型は12種の抗菌剤のうちABPC・SM・TCの3剤耐性でいずれも同ーであった。疫学的には分離されたS. Typhimuriumの生物型は17であり1978年以降県内の主として牛から分離された38型186菌株とは異なり,汚染源は特
定されなかった。
今回の発症牛に対する治療は，まず整腸剤と強肝剤の投与であり，S.  Typhimurium感染症と診断された後は水様～粘血便排泄牛あるいは起立不能の牛7頭に対してエンロフロキサシン製剤を5 mg/kg頚部皮下に1回投与したのみであった。本症例の衛生対策は重度発症牛に対する抗菌剤の投与が主体であることから，当該農場におけるS. Typhimuriumの継続的汚染および汚染域の拡大が懸念された。 1) Duguid, J. P., et al.: A new biotyping scheme for Salmonella typhimurium and its phylogenetic significance. J. Med. Microbiol, 8, 149-166 (1975) 2)衛藤宗人ほか:  牛のSalmonella  dublin感染症例について。獣畜新報，408-412 (1980) 3)遠藤信太郎: 乳用雄子牛の集団飼育場におけるネズミチフス菌感染症の集団発生例。畜産の研究, 28, 52-54 (1970)橋本和典ほか: 子牛のSalmonella typhimurium 4)感染症について。Bull. Nat. Inst. Anim. Hlth, 59, 14-22 (1969) 5)橋本和典: サルモネラ症。清水高正ら編，牛病学，第2版，近代出版，294-299  (1987) 6)楠本和典: 牛サルモネラ症と新しい血清診断法及びワクチンの開発。動生協会報, 27 (3), 1-12 (1994) 7) Kado, C. L. and Liu, S. T.: Rapid procedure for detection and isolation of large and small plas- mids. J. Bacteriol., 145, 1365-1375 (1981) 8)狩野弘生ほか: サルモネラ症発生農家の清浄化対策。家畜診療，360, 3-8 (1993) 9)喜多英治ほか:  若齢肥育牛群に発生したサルモネラ症について。日獣会誌，24, 77–82 (1971) 10)佐藤儀平:  最近における牛サルモネラ症の多発とその発生様相の変化。北獣会誌，25, 78-85 (1981) 11)佐藤儀平: 成牛サルモネラ症雑感。臨床獣医，11 (13), 38-42 (1993) 12)瀬能　昇ほか:　北海道十勝地区における牛サルモネラ症の発生状況とくに乳用種成牛症例。日獣会誌，35, 632-637 (1982) 13)渋谷光彦ほか:  大規模酪農にみられたSalmonel- la  Typhimurium感染症の発生と対策。畜産の研究, 48, 5, 575-580 (1994) 14） 東郷真子ほか:  根室管内における牛のサルモネラ症対策と発生。臨床獣医，11 (13), 21-26 (1993)
Ken YATAYA Japan Calf Clinic, 3469-65, Ujiie, Ujiiecho, Shioya-gun, Tochigi-ken 329-13, Japan In October 1995, there was an outbreak of Salmonella Typhimurium infection in 33 lactating cattle at a dairy farm located in K city, Tochigi prefecture. In addition to the symptoms of anorexia, deterioration, aqueous-mucous hematofecia, and astasia, the milk yield of the cows dropped drastically by approximately 63%, 3 cows died, and one cow ceased lactating. The economic damages were estimated to be more than two million yen. Although the symtoms of the animals were alleviated approximately a half month later, the milk yield decreased further to a lower level as compared to the previous year. The hematological findings observed in the diseased cows were increased leucocyte count, increased hematocrit, skeocytosis, the appearance of neutrophilic metayelocytes, and an increase in GOT and al-AG levels. During the critical stage of the disease, S. Typhimurium was isolated at a rate of 62.5% from the feces of the cows and at a rate of 100% from the dust of the stable.  S. Typhimu- rium was isolated at a rate of 27.6% from the feces at the recovery stage, and 16.7% from the dust of the stable after cessation of the disease. All the isolates of S. Typhimurium were Copenhagen type. The resistant type pathogens isolated at the onset of the disease and after cessation of the disease, were both equally resistant to 3 antibiotics, ABPC, SM and TC, among 12 antibiotics tested. Epidemiologically, the biotype of the S. Typhimurium isolates was type 17 and was different from the 186 strains of the type 38 which had been isolated mainly from cattle in the prefecture since 1978, but the source of contamination was not identified. For the cows in which the onset of the disease was indicated, intestinal regulators and liver tonic remedies were administered initially in the treatment, and after S. Typhimurium infection was clearly diagnosed, only the administered initially in the treatment, and after S. Typhimurium infection was clearly diagnosed, only the administration of enrofloxacin preparation subcutaneously in the neck was performed once, at a dose 5 mg/kg for 7 cows with symptoms of aqueous-mucous hematofecia or astasia. Since the measures adopted in these cases were mainly the administration of antibiotics to the cows with severe symptoms, there are serious concerns regarding consecutive contami¬ nation of S. Typhimurium in the farm and an expansion of the contaminated area.抗菌剤の投与法として，もし病初から投薬できたとして，牛群内の発症牛のみに投与する方が良いか，伝播の可能性のある他の未発症牛にも予防的投薬をやった方が良いのか，ご意見を。答（矢田谷健）搾乳牛に対しては，抗菌剤投与による生乳廃棄という経済的問題から発症牛のみに投与すべきと考えるが，育成牛などには予防的な投薬も伝播の拡大を防ぐという意味からも対策の一方法と思われる。