I. 鉄品説明
GeneAce SYBR™™ qPCR Mix IIは、2×プレミックスタイプのインターカレーター法用のリアルタイムPCR用試楽です。本製品は、ホットスタートPCR用酵素Hot-Start Gene  Taq NTと最適化されたバッファーにより、非特異的増幅を抑制し、高い特異性と再現性を実現しています。また、別途Uracil- N-Glycosylase (UNG)を添加することで、キャリーオーバー防止処理を行うことがきます。(本品にUNGは含まれておりません。)本製品は、パッシブリファレンス色素が予め添加されているため、各種リアルタイムPCR装置で使用することが可能です。
保存
II.
ー20°C (遮光) 4℃C保存(道光)も可能ですが、その場合は1ヶ月以内にご使用下さい。
qPCR Mix II *s) Hot-Start Gene  Taq NT,  dATP, dCTP, dGTP, dUTP, * 1) Mg²*,  SYBR™ Green I, Passive Reference Dye, Stabilizersを含んでいます。
注意
IV.
・化学修飾を施したホットスタートPCR用講業を用いているため、酵衆活性化ステップ(95℃ 10min.)を必ず実施して下さい。 ・ PCRサイクルは2ステップを推奨します。 (V使用例参照) ・使用時は、泡立てないように穏やかに転倒混和し、試薬を十分均一にしてからご使用下さい。 V. 使用例ご使用の装置に対応した反応液量でご使用下さい。
本品にUNGは含まれておりません。UNG処理を行う場合、 * 2)別売のUracil-DNA Glycosylase (UNG) (Code No. 317- 09041) をご利用いただけます。反応液に別途UNGを添加し、酵素活性化ステップの前にUNG処理ステップを設定してください。 ＜推奨PCRサイクル条件＞ *习*列*列95°C 10 min ■東括性化ステップ95℃ 5 sec (or 15 sec) 'マ45 cycles 60℃ 1 minプライマーの設計や鋳型DNA等により反応の至適条件が* 3)変わることがあります。推奨Ramp rate範囲は、2.63-4.4°C/sec（温度上昇速度） ✦ 4)と2.2-3.5°C/sec(温度下降速度)です。Thermo Fisher Scientific社製のリアルタイムPCR装置を使用する際は、 Standard mode ramp speedではなく、「Fast mode」を選択してください。その際、初期設定から「推奨PCRサイクル条件」に設定を変更してください。必ず啓果の活性化ステップ(95°C10分間)が含まれていることを確認し、60°Cの伸長時間を1分間にしてください。増幅領長が200 bp以上の場合は、サイクル内の変性時* 5)間を５ secから15 secに変更することを推奨します。なお、プライマー設計の際は、増幅領長が500 bpを超えないようにしてください。増幅領長を80-180 bp程度にすることが最も望ましいです。注）SYBR商標は米国Life Technologies  Corporationのライセンスに基づき使用されています。本製品は、試楽（試験研究用）として販売しているものです。医薬品の用途には使用しないでください。 www.nippongene.com

Description
l.
GeneAce SYBR™™ qPCR II is a convenient 2X premix for real-time qPCR using SYBR™™ Green I dye. This product provides high specificity and reproducibility and allows for reducing non-specific amplification by using optimized buffer components and Hot-Start Gene Tag NT, a chemically modified Tag DNA Polymerase. This product contains dUTP and therefore carryover contamination is prevented by adding UNG (This product does not contain UNG). This product contains a unique passive reference dye that is compatible across a variety of instrument platforms.
II.
Storage
–20°C, protected from light. This product should be protected from light. After thawing, the master mix may be stored at 4°C for up to one month or returned to -20°C for long term storage.
*1) It contains Hot-Start Gene Taq NT, dATP, dCTP, dGTP, dUTP, Mg²*, SYBR TM Green I, Passive Reference Dye, Stabilizers.
Notes
IV.
• The PCR must start with an initial 10 minutes incubation at 95°C to activate the chemically modified hot-start Taq DNA polymerase. • We recommend two-step cycling protocols. (See V. Typical PCR protocol) • Always ensure that the product has been fully thawed and mixed before use. Gently mix the mixtures without creating bubbles.
V.
Typical PCR Protocol
Choose an appropriate total reaction volume, depending on the instrument used.
*2) UNG is not included in the GeneAce SYBR™™ qPCR Mix IL UNG can be purchased separately from Nippon Gene (Code No. 317-09041). If optional treatment with UNG is required, add UNG to the reaction mixture (see the UNG manual). Recommended thermal cycling conditions. *3). *3). 95°C 10 min Enzyme activation 95°C 5 sec (or 15 sec) 's) 60°C 1 min 45 cycles
Melting curve analysis
*3) Optimal PCR condition depends on primer sequence and template DNA and so on. *4) Recommended ramp rates are 2.63-4.4°C/sec (up ramp) and 2.2-3.5°C/sec (down ramp). When using Thermo Fisher Scientific thermal cycler, we recommend selecting the "Fast mode" ramp speed instead of Standard mode. Ensure that the cycling program includes the initial 10 min 95 8 C step required to activate the DNA polymerase. Also, the extension time should be 1 min at 60°C. *5) For PCR fragments <200 bp, this denature time is 5 sec. For PCR fragments 200-500 bp, the denature time is 15 sec. For optimal results, PCR products should be between 80-180 bp and should not exceed 500 bp.
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