I 製品説明
本品は大腸菌DH5 α 、JM109、XL1-Blue、BL21(DE3)のコンピテントセルです。本品ではプレーティング前の回復ステップであるSOC培地での約1時間の培養が不要なことから、短時間で形賀転換を行うことができます。また、本品は長期間高い形貨転換効率を保ったまま保存できることや、 1 度凍結融解(再凍結)しても形質転換効率があまり低下しないことなど、従来のコンピテントセルにはなかった特長を持ち合わせています。 ■特長· ECOS™™ 6分間プロトコールで高効率形質転換が可能• ECOS™™ 1分間プロトコールで最高速形質転換が可能• 凍結融解に対する高い耐性・長期保存が可能

皿 形首転換効率
ECOS™ 1分間プロトコールを以下の条件で実施した場合
DH5 α 、JM109、XL1-Blue ≥ 1 × 10 （cfu/μg pUC19 DNA） ≥ 1 × 10  （cfu/μg pUC19 DNA） BL21(DE3) ・コンピテントセルを室温のウォーターバスで約1/3量を融解してDNA溶液を添加。 ・形質転換にはpUC19 DNAを使用。 •全て室温で連続的に操作。 ・アンピシリンは50 μg/mlで使用。 • LBブレートは4°Cのものを使用。 IV 保存と凍結融解(再凍結)についてマニュアル(第14版) 1806KM保存温度:  －80°C ・温度変化の少ない条件下であれば長期間安定して保存することができます。長期保存による形質転換効率低下の目安は、1年間で約1/2に低下する程度です。 ・一度の凍結融解(再凍結)では形質転換効率はあまり低下しませんが、凍結融解の繰り返しは形質転換効率の大幅な低下の原因となりますので避けて下さい。凍結融解（再凍結）を行う場合は、融解、操作は氷上で素早く行い、一80℃で再凍結して下さい。 ・これらの内容については製品の性能として保証するものではありませんので、ご了承下さい。
V 注意
・本品は試験研究用ですので、医薬品、その他の目的にはご使用になれません。また、試薬についての基本的な知識のある方以外は取り扱わないで下さい。本品の取り扱いはマニュアル記載内容通りに行って下さい。マニュアル記載内容と異なった取り扱いによるトラブルにつきましては、弊社では責任を負いかねます。 ・本品に関連する技術については、現在特許出願中です。 • BL21(DE3)株はT7 Gene Expression System関連製品であり、T7 Gene Expression SystemについてはBrookhaven National Laboratoryが米国特許を有しております。 T7 Gene Expression System関連製品およびこれを利用して製造した製品を国外に持ち出すことを想定している場合には、Brookhaven National Laboratoryとライセンスを締結する必要があります。ライセンス締結については下記担当者に直接お問合わせ下さい。担当者Christine Brakel +1-631-344-7134　/　Fax +1-631-344-3729電話Email brakel@bnl.gov本製品を日本国内のみで研究用途にご使用いただく場合にはライセンス締結の必要はありません。 •製品「ECOS™ Competent E. coli BL21(DE3)」について(Code No. 318-06531, 314-06533, 312-06534)遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律第26条第1項に基づく情報提供
・カルタヘナ法(遺伝子組換え生物等規制法)につきましては、下記 URLに大変詳しく記述されておりますので、ご参考下さい。文部科学省ホームベージhttp://www.lifescience.mext.go.jp/bioethics/anzen.html#kumikae
VI  ECOS™™ 6分間プロトコール(高効率迅速形質転換法)
本プロトコールは、大腸菌の形質転換を高効率（ECOS™ 1分間プロトコールの2〜3倍)に短時間(6分間)で行うことができる優れたプロトコールです。特に、6 kbp以上の大きなブラスミドを使用する場合には、必ず本プロトコールで行って下さい。ECOS™  1 分間プロトコールでは形質転換効率が低下する場合があります。の氷上でコンピテントセルを融解する。( * 1)気に直ちに、4℃または氷上で冷却したプラスミド落液またはライゲーション溶液を添加する。( * 2)  直ちにボルテックスで1秒間搅拌する。( * 3) 49氷上で５分間インキュベートする。 55直ちに42°Cで45秒間インキュベートする。 60直ちにボルテックスで1秒間搅拌する。( * 3) 6直ちに全量をLBブレートに移し均一に塗布する。 ( * 4) Bo 37°Cで12～16時間インキュベートする。
VII  ECOS™ 1分間プロトコール(最速形質転換法)
本プロトコールは、最も時間と手間がかからないプロトコールです。 1チューブずつの操作であれば、氷上での操作も必要ありません。42℃のウォーターバスとボルテックスがあれば、約1分間で形質転換を行うことができます。複数本を同時に形質転換に用いる場合など、各操作を直ちに連続操作で進めることができない場合には、全ての操作を氷上で行うことで、安定した形質転換効率を得ることができます。 ①）氷上でコンピテントセルを融解する。( * 1) ②）直ちに、4°Cまたは氷上で冷却したプラスミド溶液またはライゲーション落液を添加する。( * 2) ↓ ③ 直ちにボルテックスで1秒間搅拌する。( * 3) ④ 直ちに42°Cで45秒間インキュベートする。 ⑤ 直ちにボルテックスで1秒間搅拌する。( * 3) ⑥》直ちに全量をLBプレートに移し均一に塗布する。( * 4) ⑦）37°Cで12～16時間インキュベートする。 WIブロトコールに関する注意ECOS™  1分間・6分間プロトコールは、薬剤にアンピシリンを使用する場合にのみ有効です。薬剤耐性機構の違いにより、薬剤にカナマイシンやテトラサイクリンを使用する場合には形質転換効率が低下しますので、熱処理後に培地を添加し回復培養を行ってからブレートに移して下さい。
①）氷上でコンピテントセルを融解する。( * 1)
②）直ちに、4℃または氷上で冷却したプラスミド溶液またはライゲーション落液を添加する。( * 2) l ③ 直ちにボルテックスで1秒間搅拌する。( * 3) ④）氷上で５分間インキュベートする。 ⑤直ちに42°Cで45秒間インキュベートする。 l 《6》氷上で2分間インキュベートする。 ⑦あらかじめ37°Cで保温しておいたHi-Competence BrothまたはSOC培地を、コンピテントセルの4倍量程度加え、37℃で約30分間インキュベートする。 ⑥）100 μl～全量をLBブレートに移し均一に塗布する。( * 4) ⑦）37°Cで12～16時間インキュベートする。 ( * 1) 水道水や室温のウォーターバスでコンピテントセルを表早く融解することも可能です。その場合は、約1/3量を融解した時点でDNAを添加して下さい。完全に融解させた場合には形質転換効率が約1/3に低下することがあります。 ( * 2) 添加するDNA落液の量はコンピテントセルの容量の5%以下にして下さい。5%以上のDNA溶液を添加した場合には、形質転換効率が低下することがあります。 ( * 3)  1 秒間のボルテックスは形質転換効率に悪影響を与えません。 ECOS™™ Competent E.coliはボルテックスに耐えられるように調製されています。 （＊4） LBプレートは4℃のものを使用することができます。また、セレクションに使用する薬剤は以下の濃度で使用することをお勧めします。アンピシリン50 μg/ml 25 μg/mlカナマイシンテトラサイクリン12.5 μg/ml薬剤濃度が高すぎる場合には、形質転換効率が低下する場合があります。また薬剤濃度が低すぎる場合には、サテライトコロニ一数が増加する場合があります。
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