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68 巻 3 号 2022［身近で活躍する有用微生物］67

身近で活躍する有用微生物
環境と有用微生物 6.

海洋の極限環境微生物を環境保全に応用
いし

石

はじめにだ

まさ田真

み巳

Masami ISHIDA

Ⅰ. 海洋の低温・高圧環境に生息する
極限環境微生物

地球上には、火山周辺、極海、深海、塩湖などの様に、高温、低温、高圧、高塩濃度、高アルカリな

1. 好冷菌・低温菌

どの極端に偏った物理的・化学的環境が存在する。
普通の生物が生息できない、これらの極限環境にも、海洋には、北極海や南極海を始めとする高緯度海各環境に適応し、その環境を好んで生息する極限環域や深海など、温度の低い環境がある。こうした低境微生物がいる。極限環境微生物は、好熱菌 ther-

温環境には、低温に適応した好冷菌や低温菌が生育mophiles、好冷菌 psychrophiles、好アルカリ菌 al-している。一般に、0℃付近で増殖する微生物を低kaliphiles、好酸菌 acidophiles、好圧菌 piezophiles、温適応微生物と呼ぶ。さらに、Morita好塩菌 halophiles 等、各々の環境を好む（-philes は適生育温度の違いを主な判断基準とする区分がよく愛するの意）微生物群が主に含まれている。また、用いられ、0℃付近（0℃以下も）で生育する微生物

高い放射線に耐える放射線耐性微生物など、極限の内、最適生育温度が 15℃以下で最高生育温度が環境に「耐える」ものも含まれる。1973 年に極端な20℃程度までのものを好冷菌 psychrophiles とし、（extreme）環境を好む生物全体をまとめる extrem-

最適生育温度が 15℃より高いものを低温菌 psychro-ophiles（極限環境微生物）という名称が使用され、trophs とする。psychrotroph という用語は、低温をその後、乾燥耐性をもつクマムシやユスリカなど微食べるような意味なので不自然だが、伝統的に広く生物でない生物も含めて極限環境生物ともいわれ用いられてきた。現在では、低温菌を psychrotoler-る。極限環境微生物やその酵素の応用・利用では、

ant microorganisms（耐冷性の微生物の意）と呼ぶ

好熱菌の DNA ポリメラーゼによる PCR や好アルこともある。また、低温適応微生物全体を psychro-カリ菌のセルラーゼの洗剤配合などが良く知られてphiles と呼ぶこともある。好冷菌は、南極海・北極いる。本稿では、海洋の低温環境、高圧環境に適応海や深海など、常に低温である環境に生息しており、する極限環境微生物である好冷菌、低温菌、耐圧菌、低温菌は、南極海・北極海や深海にも、水温の季節好圧菌とそれらの酵素について解説し、筆者が行っ変動がある寒海にも生息している。

が示した最

1）

海洋の低温適応微生物には、Pseudomonas 属、ている環境保全を目指す研究の一部を紹介する。

Pseudoalteromonas 属、Vibrio 属、Allivibrio 属、Shewanella 属、Photobacterium 属をはじめ多種のものが含まれ、同じ属内に種や株の違いによって常温菌と低温菌、低温菌と好冷菌が存在することが多い。
低温適応微生物に特徴的な低温適応機構をいくつかあげる。細胞膜の脂質組成は、低温環境でも膜の流
東京海洋大学 海洋資源環境学部 海洋環境科学科 教授〠108 - 8477 東京都港区港南 4 - 5 - 7

Laboratory of Marine Biochemistry, Department of Ocean Sciences,
Tokyo University of Marine Science and Technology(4-5-7 Konan, Minato-ku, Tokyo)

（1）

68

動性を維持するため、飽和脂肪酸より融点が低いオ

部分の海洋は低温環境なので、好圧菌・耐圧菌の殆レイン酸などの不飽和脂肪酸が多く含まれており、どは、低温適応微生物である。

脂肪酸の分岐、脂肪酸鎖長を短くする等の特徴もあ

好圧菌・耐圧菌の低温適応機構は、Ⅰ- 1 で示したる 。また、イコサペンタエン酸など多価不飽和脂好冷菌・低温菌の場合とよく似ているが、高圧適応肪酸を持つものもいる 。低温で生ずる mRNA のの分子機構は分かっていることが少ない。Abe は、不必要な二次構造をほどく RNA シャペロンなど、出芽酵母 Saccharomyces cereviciae の多数のノック

様々な cold-shock タンパク質（低温ショックによっアウト変異株で圧力適応に関係する遺伝子を明らかて合成されるタンパク質）も存在する 。酵素につにしたことを中心に、圧力生理学を提唱している。

2）

7）

3）

4）

いてはⅡ- 1 で示す。

Ⅱ. 海洋の低温・高圧環境の微生物がもつ酵素

2. 好圧菌・耐圧菌
地球の海洋の平均深度は約 3,800 m であり、海洋の大部分は低温・高圧の極限環境である。
「深海」

1. 低温適応酵素には統一された定義はないが、光合成と呼吸が等し好冷菌・低温菌の酵素は、図 1 のように、常温くなる深度 200 m より深い領域を深海と呼ぶことがよくある。海洋学研究では、0 ～ 200 m を表層、生物の酵素（図中の点線

200 ～ 1,000 m を中層、1,000 ～ 4,000 m を漸深層、が低く低温活性が高いもの（図中の一点破線

4,000 ～ 6,000 m を深海層という区分を用いることから、安定性を維持しながら低温活性が高いものが多い。深度が 10 m 増えると水圧は約 0.1 MPa（約（図中の実線1 気圧）上がるので、深度 1,000 m なら水圧は 10総説

MPa（100 気圧）になる。高緯度の海域では、水温は、

徴は、常温生物酵素と比べて、0℃付近などの低温海表面から低温で、海底まで 4℃程度で一定してい域で比活性が高いことと、最適温度が低温側に移動る。一方、中緯度～低緯度の海域では、表層の温度していることであるとしている。確かに、好冷菌・低は海域によって異なるが、深度 200 m になると 10温菌の酵素は常温生物酵素より低温での比活性が高～ 20℃程度になり、深度が増すと共に水温が低下

い。一方、最適温度の低温側への移動は熱安定性のして 1,000 m では 4℃程度になる。それより深くな低下を意味するが、熱安定性の低さは、低温環境でると海底まで 4℃以下で一定している。

酵素が正しい立体構造になるために必要な folding8））と比べて、安定性））まであると考えられる。Feller はの中で、好冷菌（低温菌を含む）の酵素の特一般に陸上の常圧菌は、常圧（大気圧）から圧力にも関係がある。低温菌 Shewanella frigidimarinaが上昇するにつれて増殖速度が低下し、30 ～ 50のトリプトファン合成酵素は、大腸菌の同酵素と比MPa で生育しなくなる。それに対して海洋の耐圧して、低温での活性は高いが、熱安定性は殆んど変菌 piezotolerant microorganisms は、明確な定義はないが、常圧が最適で、圧力が上がっても増殖速度が常圧と同程度であり、さらに高圧になると増殖速度が低下していく。一方、深度の深い深海層などに酵
素活性は、 高 圧 の 方 が 常 圧 よ り 増 殖 速 度 が 速 い 好 圧 菌piezophiles（通性好圧菌 facultative piezophiles ともいう）も生息しており、Moritella 属、Colwellia 属、Photobacterium 属、Shewanella 属、Psychromonas 属5）等が知られている 。マリアナ海溝底の様な非常に温 度高圧の環境からは、常圧では生育しない偏性好圧菌

図 1 好冷菌・低温菌の低温適応酵素の温度特性

5）obligate piezophiles も見つかっている 。また、海：熱安定性を保持した低温適応酵素、：熱安定の低下した低温適応酵素、：常温生物の酵素

底熱水噴出孔周辺から超好熱菌の新種として、偏性好圧菌 Pyrococcus yayanosii が単離されている 。大6）

（2）

69

わらない 9）。好冷菌・低温菌の酵素利用でも、低温benthica と常圧菌 Shewanella oneidensis 由来の酵素活性の高さをメリットとしている例（低温で使える3 - isopropylmalate dehydrogenase（IPMDH）を比べ洗剤のプロテアーゼ、低温で乳糖分解するβ-ガラると、226 番目の残基が好圧菌酵素では Ala（アラクトシダーゼなど）と、安定性の低さをメリットとニン）、常圧菌酵素では Ser（セリン）であった。加している例（遺伝子組換え実験や PCR で使用する

圧下での結晶解析（図 3）では、この部位が Ser（側酵素）がある 。

鎖に OH 基があって親水性）だと 3 分子の水（図中8）

好冷菌・低温菌に由来する酵素の構造の特徴は、の小さな黒丸）がクラスターになって結合し、酵素立体構造解析された酵素の構造からみると、分子内反応に必要なドメインの開閉が阻害された。この部部の疎水性・イオン対・水素結合の減少、αヘリッ位が Ala（側鎖はメチル基）だと加圧下でも水分子クスの不安定化、エントロピー的安定性の減少などクラスターは結合せず、ドメインが開閉して活性がが認められ 、好熱菌由来耐熱酵素の熱安定化をも維持された。各 IPMDH の 226 番の Ser と Ala を入たらす構造の特徴と概ね逆である。

れ替えると相手の酵素と同じ圧力特性に変わり、こ8）の部位の重要性が示された。この結果は、高圧適応

2. 高圧適応酵素に特有の仕組みの一つと考えられる。

酵素の圧力特性には図 2 の様な種類がある。常Ⅲ. 極限環境微生物と酵素の環境保全への応用

圧生物の酵素は、圧力上昇につれて活性が低下するものが多い。一方、好圧菌や耐圧菌の酵素は、圧力が上昇しても活性が低下しない耐圧性を示す。酵素によっては、常圧の活性より高圧の活性の方が高くなる好圧性を示すものもある。大前ら

1. 海藻多糖類分解酵素

は、酵素基

10）質複合体の基底状態と励起状態の体積変化である

現在、地球温暖化防止のため、化石燃料への依存「活性化体積ΔV 」と圧力特性との関係を示してい度を減らし、CO 2 などの温室効果ガスの排出量を削る。酵素の反応速度は、ΔV ＞ 0 だと加圧で減少し、減する必要がある。対策の一つに植物から製造する

ΔV ＜ 0 だと加圧で増大する。好圧性酵素では、バイオマス燃料で、カーボンニュートラルなエネル常圧から加圧で活性が上昇して極大になるまでの圧ギーであるバイオエタノールがある。農地が限られ力範囲ではΔV ＜ 0、さらに加圧して活性が低下するている日本では、農作物をバイオエタノールの原料範囲ではΔV ＞ 0 となる。これに対して、常圧菌の非に使うと食糧競合状態になる。世界第 6 位の排他的耐圧性酵素では、常圧～高圧の全範囲でΔV ＞ 0 と経済水域を有する日本では、未利用バイオマスとしなる。ΔV は、酵素分子内の空隙や酵素基質複合体て海藻がある。中でも褐藻は、繁茂量が多く、食用‡‡‡‡‡‡‡の水和状態も含む体積変化なので、高圧適応酵素の構造の特徴は、空隙や水和状態の違いに関係するかもしれない。Hamajama et al

活性部位

は、酵素の耐圧性をも11）Serたらす分子機構を報告している。好圧菌 Shewanella

open

活性部位

Ala

open

好圧性酵素
酵素
活性Ser

closeclose
Ala

耐圧性酵素
非耐圧性酵素

常圧菌IPMDH

好圧菌IPMDH

圧 力

図 3 好圧菌の耐圧性 IPMDH と常圧菌の非耐圧性 IPMDH の分子構造の違い

図 2 耐圧菌・好圧菌の高圧適応酵素の圧力特性

IPMDHはopen形とclosed形の間を開閉しながら反応する。図中のSerとAlaは酵素の226番目のアミノ酸残基。

（3）

70にしないものも多い。褐藻がもつ主な多糖類には、藻体を成すセルロース、防御等に働くアルギン酸や100

フコイダン、そして貯蔵物質のラミナランがある。

酵素
活 50性(%)

陸上植物や緑藻はデンプンを貯蔵するが、褐藻はβ-1,3 - 結合でグルコースが連なったラミナランを貯蔵する。ラミナランには、由来する褐藻の種類によっ0てβ-1, 6 - 結合が含まれる等の構造の多様性がある。
バイオエタノールは主に出芽酵母 Saccharomyces

0 10 20 30 40 50 60
温 度 (℃)

cerevisiae（以下、酵母と表記）によるエタノール発

図 4 低温菌 Pseudoalteromonas sp. LA 由来
ラミナラナーゼの活性の温度依存性酵で生産される。酵母は多糖類を分解できず、単糖グルコースや二糖マルトース等しか食べないので、：低温菌のラミナラナーゼ、：常温性真菌のラミナラナーゼ
灰色の温度域（20℃〜30℃）：
酵母のエタノール発酵効率が高い温度域

原料の多糖類を「糖化（単糖等に加水分解）」する必要がある。筆者らの研究室では、様々な酵母の探索も行ってきたが、ここでは糖化酵素について述べる。海外ではバイオエタノール生産のために、酸や2. タンパク質分解酵素

高温加熱でデンプンを加水分解するのが主だが、筆者らは、糖化と発酵を同一容器で行う並行複発酵でプロテアーゼやリパーゼには様々な利用可能性が環境負荷が少ないバイオエタノール生産を考えていあり、新たな基質特異性等をもつ新規酵素の探索がる。ラミナランは、細菌、真菌、巻貝などがもつ酵続いている。筆者らの研究室でも海洋の低温環境、素ラミナラナーゼによって糖化される。酵母のエタ高圧環境から新規のプロテアーゼやリパーゼの探索

ノール発酵効率は 25℃前後で高いので、温度特性を続けてきた。その結果の一つとして、相模湾の深が合うラミナラナーゼを探索し、酵母に遺伝子導度 320 ｍからポンプで汲み上げられた 15℃の海水入して表層提示させるか、酵素を固定化して酵母（神奈川県三浦市）からプロテアーゼを生産する低と混合させれば並行複発酵が可能であろう。先ず、温菌 Vibrio sp. Pr21 株を得た。この酵素（PR プロβ-1,6 - 結合が 10％程度と少ないコンブのラミナラテアーゼ）は、25℃でも 10℃でもミズクラゲを良ンを基質として分解低温菌を探索し、最適生育温度く分解した25℃の低温菌 Pseudoalteromonas sp. LA 株を得た。

ることを意図したが、350 MPa（海の深度に換算す

LA 株からラミナラナーゼ（LA-Lam）を精製し、遺ると 3 万 5 千 m 相当）の高圧でも大気圧下と同程伝子を分析した結果、未知の基質結合ドメインを複度の活性を示す高い耐圧性があり、200 MPa に極数もつ酵素であることが分かった。図 4 の様に、

12）。当初、この酵素を環境保全に利用す

13）大がある好圧性も示すことが分かった。

市販の常温性真菌 Trichoderma 由来ラミナラナーゼ

もし、酵素活性を圧力でコントロールできたら発は 最 適 温 度 が 55 ℃ で あ り、40 ℃ に な る と 活 性 が酵生産の制御等に大変有効であると思われるが、酵50％まで低下したのに対して、LA-Lam は最適温度

素の耐圧性・好圧性の仕組みや設計につながる様なが 45℃であり、酵母の発酵温度 25℃で 50％の活性人工改変については既知の情報が非常に少ない。そを示し、並行複発酵可能と思われた。しかし、LA-こで、どこのネジを緩めるたり締めたりすると圧力Lam はβ- 1, 6 - 結合を 25％程度含むアラメのラミナ特性が変わるかアミノ酸置換で調べることにした。

ランを全く分解せず、ラミナラナーゼ利用のポイン

進化工学によって好冷菌プロテアーゼを熱安定化しトに基質特異性があると分かった。そこで、基質特た報告

異性の広いラミナラナーゼを求めてアラメのラミナダム変異を加えて、活性の変化を手掛りに変異酵素

ランを分解する低温菌を探索し、コンブ、アラメ両を探した。その結果、野生型酵素より活性が約 3 倍方のラミナランを分解するラミナラナーゼを生産す上がり、好圧性が増大して耐圧性が低下した Q301Pる低温菌を得た。現在、この酵素が並行複発酵に有変異酵素が得られた。この変異酵素では、野生型酵効か検討している。

素の Gln（グルタミン）- 301 が Pro（プロリン）に置（4）14）にならい、PR プロテアーゼ遺伝子にラン71換していた。図 5 の様に、Gln-301 は、活性部位のれまでに開発されている生分解性プラスチックに基質結合ポケットの近くにあるβシート（図 5 ではは、ポリカプロラクトン PCL（農業用マルチフィル

黒色の部分）上にあり、他のドメイン（図 5 では濃ムなどに使用）やポリ乳酸 PLA（農業用シートや食い灰色の部分）上にある Asn（アスパラギン）- 234

品トレーなどに使用）の様に石油やバイオマスを原と水素結合によってβシートを結びつけていた。

料として化学合成したもの、P（3HB）等のポリヒ

Q301P 変異酵素では、Gln から Pro へのアミノ酸置

ドロキシアルカン酸類 PHA の様に微生物がエネル換によってこの水素結合が欠失したためにβシートギー貯蔵物質として生産したもの等があり（図 6）、の動きが柔軟になり、耐圧性や好圧性の違いが生じ大部分がポリエステル構造を持っている。従来、実。PR プロテアーゼの高い耐圧性用化されている生分解性プラスチックの分解性能には複数の部位が関係していると考え、現在、進化は、土壌や淡水等の陸上環境で評価され、海水中で工学で耐圧性に影響する他の部位の変異も探しての分解性能は悪いものが多く、PLA は海水中ではいる。

殆 ん ど 分 解 さ れ な い。PHA の 一 種 で あ る PHBHたと考えられた

15）（copolymer of 3-hydroxybutyrate and 3-hydroxyhex-

3. 生分解性プラスチックの分解微生物

anoate）（図 6）は海水中の分解性が認められている。

現在、海洋のプラスチックごみ汚染は、地球規模また、千島海溝や日本海溝の底泥から PCL を分解。種々の生分の環境問題である。海洋に流出したプラスチック容する好冷性好圧菌が発見されている器等が紫外線や波の力などで破砕・劣化し、細片化

解性プラスチックについて、現在、海洋分解性を改されたマイクロプラスチック MPs になって海中を良するための研究が行われている。

16）

沈降し、汚染は深海底にまで及ぶ深刻な状況である。

現在、海水中で分解する生分解性プラスチックの比重が軽いポリプロピレンやポリエチレンなども細認証制度として TUV AUSTRIA による“OK biode-片化しながら藻類等の付着によって比重が増加し、gradable MARINE”があり、30℃の海水中で生分解深海底にまで沈降する。プラスチックは疎水性なの度が 6 か月以内に 90％以上、等のことを示す認証で海水中の残留性有機汚染物質 POPs（PCB や内分として、認証取得のための試験が行われている。海泌攪乱物質など）を吸着し、小さな海洋生物に摂食水中の MPs が低温・高圧の環境を沈降して深海底され、食物連鎖によって人間が食べる水産物に及ぶに蓄積していることから、石油系プラスチックに代と考えられ、食の安全が危惧されている。しかし、替可能な性能の生分解性プラスチックを開発・改良

石油由来のプラスチックは非常に優れた物性や価格していくためには、低温・高圧の海洋環境における（安価）のために社会の様々な場面で使われ、使用分解微生物・分解酵素の情報が必要と思われる。低量を減らすことはできてもゼロにするのは困難と思

温・高圧環境の微生物がもつ分解酵素の立体構造がわれる。近年、自然環境で微生物に分解・消費され分かれば、より分解しやすい構造にプラスチック側る生分解性プラスチックに注目が集まっている。こを改良することもできるかもしれない。こうした観点から筆者らの研究室では、表層の海中浸漬による

βシート
OO

Asn234Gln301O
活性 Pro301
部位PCLOOP(3HB)

Q301P変異酵素

図 5 低温菌 PR プロテアーゼの野生型酵素とQ301P 変異酵素の分子構造の違い

nn

PLA

O

野生型PRプロテアーゼ

On

O

C3H7x

O

OyPHBH図 6 市販されている生分解性プラスチックの構造（代表的なものの一部）

（5）

72

増えつつあります。利用・応用は、まだ例が少なく、これからだと思います。一方、地球温暖化による荒天の頻発、海洋プラスチックごみ汚染などが確実に進み、SDGs の目標 14「海の豊かさを守ろう」も提言され、環境保全の対策が急務です。フラスコや水槽の様な限定された環境と違って、海は広大で、しかも低温・高圧の環境です。持続的な環境保全のためには、海で暮らす微生物の生態や能力を良く学び、ここまでは人間が合わせるから、ここから先は微生物さん頼むよ、という共存がゴールにつながるのではないでしょうか。
図 7 東京海洋大学の練習船神鷹丸に搭載されているニスキン採水器付 CTD謝

上方に並んだ縦長のものが採水ボトル、下方にあるのが温度、深度、塩分などの測定装置。写真は、これから海中にケーブルでCTDを下すところ。

辞

今回紹介させていただいた環境保全への応用のほとんどは、東京海洋大学 海洋資源環境学部 海洋環境科学

分解試験のみでなく、海洋中層を中心とした低温・科 海洋生化学研究室で行いました。ご協力頂いた先生

高圧環境における生分解性プラスチックの分解微生方、一緒に実験してくれた卒業生・学生の方々、ご協物を探索し、分解酵素の解明を目指している。この力頂いた企業の方々に感謝いたします。海水試料採取ための方法として、筆者の所属大学の練習船等ににご協力頂いた同大学練習船乗組員の方々にも感謝いよって様々な海域に行き、鉛直方向の温度、圧力、たします。また、深海微生物についてご指導頂いた加塩濃度などを測定する装置 CTD（conductivity tem-

藤千明先生（元 . 海洋研究開発機構、現 .NPO 法人チー

perature depth profiler）（図 7）を利用している。船ムくじら号）、加藤先生の研究室の方々に御礼申し上げ

上から CTD をケーブルで海中に下す。CTD には採ます。

水ボトルが装着されており、船上から信号を送って文各深度の海水を別々のボトルに採取することができる。この採水器で各観測点の深度 200 ～ 1,000 m の海水を採取し、海水中の微生物を低温で培養して、分解微生物の種類や分解能を分析している。分解微生物の海洋中の水平方向・鉛直方向の分布にどんな意味があるか明らかにしたい。また、分解酵素についても常温・常圧の分解菌が持つ酵素との違いも含めて特徴を明らかにしたい。
未公表データがあり、結果を十分にお伝えできないことをご容赦ください。

おわりに皆様は、海洋の大部分が低温・高圧の環境であり、低温適応・高圧適応した極限環境微生物が生息していることをご存じでしたか。基礎的な理解という意
味では、低温適応の微生物学や生化学は説明できることが随分多くなり、高圧適応も説明できることが（6）

献1 ）R. Y. Morita（1975）Psychrophilic bacteria. Bacteriological Rev. 39（2）, 144-167.
2 ）N. J. Russel（2008）Membrane components and coldsensing. In Psychrophiles from Biodiversity to Biotechnology（eds. R. Margesin, F. Schinner, J.-C. Marx, C.
Gerday）, Springer-Verlag, Berlin Heidelberg. pp 177-190.
3 ）栗原達夫, 川本純 , 江崎信芳
（2009）好冷性細菌の低温適応に関わるタンパク質とリン脂質．生化学 81（12）, 10721079.
4 ）S. Phadtare and M. Inouye（2008）
Cold-shock proteins, In
Psychrophiles from Biodiversity to Biotechnology（eds. R.
Margesin, F. Schinner, J.-C. Marx, C. Gerday）, Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, pp. 191-209.
5 ）加藤千明（2013）深海微生物の圧力耐性機構．進化する食品高圧加工技術（重松 西海監修）, エヌ・ティー・エス ,東京 pp. 65-84.
6 ）J.-L. Birrien, X. Zeng, M. Jebbar, et al.
（2011）
Pyrococcus
yayanosii sp. nov., an obligate piezophilic hyperthermophilic archaeon isolated from a deep-sea hydrothermal
vent. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 61（12）, 2827-2831.
7 ）F. Abe（2007）
Exploration of the effects of high hydro-73

matic properties and the gene structure of a cold-adapted
laminarinase from Pseudoalteromonas species LA. J. Biosci. Bioeng. 126（2）, 169 -175.
13）M Ishida, C Yoshida-Mishima, Y Maeda, et al.（2016）Purification and enzymatic properties of a neutral metalloprotease produced from the cold-adapted Vibrio species
Pr21 isolated from deep seawater in Sagami Bay, Fish.
Sci. 82（4）, 675 - 683.
14）K. Miyazaki, P. L. Wintrode, R. A. Grayling, et al.（2000）
Directed evolution study of temperature adaptation in apsychrophilic enzyme. J. Mol. Biol. 297（4）, 1015 -1026.
15）M. Okai, C. Onoue, R. Tsuda, et al.（2020）Q301P mutantof Vibrio PR protease affects activities under low-temperature and high-pressure conditions. J Biosci Bioeng, 130（4）, 341-346.
16）T. Sekiguchi, T. Sato, M. Enoki, et al.（2010）Isolationand characterization of biodegradable plastic degrading
bacteria from deep-sea environments. JAMSTEC Rep.
Res. Dev. 11, 33 - 41.

static pressure on microbial growth, physiology and survival: Perspectives from piezophysiology. Biosci. Biotechnol. Biochem. 71（10）, 2347-2357.
8 ）G. Feller（2013）Psychrophilic enzymes: from folding tofunction and biotechnology. Scientifica 2013, Article ID
512840.
9 ）D. Mitsuya, S. Tanaka, H. Matsumura, et al.（2014）Strategy for cold adaptation of the tryptophan synthase αsubunit from the psychrophile Shewanella frigidimarina K142: crystal structure and physicochemical properties. J.
Biochem. 155（2）, 73 -82.
10）大前英司, 宮下友里奈 , 加藤千明（2016）酵素の構造安定性と機能におけるキャビティ−と水和の役割−深海微生物由来酵素からの治験−Netsu Sokutei 43（2）, 59 - 65.
11）Y Hamajima, T Nagae, N Watanabe, et al.（2016）Pressure adaptation of 3-isopropylmalate dehydrogenase froman extremely piezophilic bacterium is attributed to a single amino acid substitution. Extremophiles 20, 177- 86.
12）D. Mitsuya, T. Sugiyama, S. Zhang, et al.（2018）Enzy-（7）