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モダンメディア 通巻750号記念特集 1

64 巻 5 号 2018［通巻 750 号記念特集 1］109

感染症の診療・検査・研究を担う次世代へのメッセージ

Ⅲ. 感染症診療に貢献できる臨床検査技師を目指して
お

小

ぐり

栗

とよ

豊

Toyoko OGURIこ

子

を思い起こしつつ、感染症診療に貢献できる技師像

はじめにについて考えてみたい。

Ⅰ. 微生物検査近代化への発展

私が検査技師として就職したのは今から 55 年前、東京オリンピックの 1 年前の 1963 年（昭和 38 年）のことである。当時、同定できる菌名は黄色ブドウ球菌 Staphylococcus aureus, 赤痢菌 Shigella spp., サ

1. 微生物検査の自動化は“夢”の“実現”ルモネラ Salmonella spp. など病原性の強い菌に限この半世紀余、微生物検査の技術革新には凄まじられ、日和見病原菌の同定菌名は少なかった。現在のいものがある 1 ～ 3）。当初はすべて用手法で始まった

コアグラーゼ陰性ブドウ球菌は「白色ブドウ球菌」

臨床検査は、臨床化学や血液検査が自動化され大型“Staphylococcus albus”と呼ばれていた。腸内細菌科の分析器が導入されていく中で、微生物検査は用手の同定にはクリグラー培地、SIM 培地などを用い法から抜け出せないでいた。1970 年代に入り API

た IMViC 反応が用いられ、赤痢菌やサルモネラでシステム（ビオメリュー） などの数値同定によるはこれらの生物学的性状検査と抗原決定のための免同定キット（図 1）の普及を機に、微生物検査の自疫血清が用いられていた。ブドウ糖非発酵グラム陰動化も夢ではなくなり、薬剤感受性検査ではマイク性桿菌では緑膿菌 Pseudomonas aeruginosa のほか、ロトレイを用いた微量液体希釈法が自動化され、同Bacterium anitratum（現在の Acinetobacter bauman-

定・薬剤感受性検査の自動機器導入へと続いた。

nii）、Fravobacterium spp.、Alcaligenes spp. が類似し1980 年代では臨床検査のシステム化が進み、すべた菌のグループ分けのように使われていた。特殊培て手書きであった検査結果報告書から、きれいに印養法としては嫌気培養では黄燐燃焼法とピロガロー

字された検査伝票を診療科に配達する時期がしばら

ル法、炭酸ガス培養法ではローソク法が用いられ、

く続き、やがて、オーダリングシステムや電子カル分離培地は SS 寒天培地、BTB 乳糖寒天培地、血液テの導入で病院施設全体のシステム化が普及した。

寒天培地などを市販粉末培地から自家調製してい微生物検査の自動機器もシステム化の一環として取た。血液寒天培地の血液は輸血用保存血の有効期限

り入れられていった。大型機器の導入やシステム化の切れたものが使われ、試験管やシャーレ、ピペッ

によりもたらされた功績は計り知れない。培地作製

トなどはガラス製ですべて使用済みのものを消毒・は不要となり、菌種同定のレベルが著しく向上して洗浄、乾燥後、試験管には青梅綿（布団用の綿）で初心者とベテラン技師の差が狭められた。また、記綿栓をして、シャーレやピペットは専用の滅菌缶に録・入力の手間が解消され、正確性や省力化が飛躍入れるか、または紙で包んだものを乾熱滅菌して使的に向上した。

4）

用していた。このような時代から 50 年余、技師と微生物検査が他の化学や血液検査と大きく差がつして歩んできた長いようで短かくも感じられる過去

くのは、今もなお、患者検体の分離培養から釣菌す

順天堂大学医学部付属練馬病院 臨床検査科〠177- 8521 東京都練馬区高野台3 - 1 - 10

Clinical Laboratory, Juntendo University Nerima Hospital(3-1-10 Takanodai, Nerima-ku, Tokyo)（ 17 ）

110

基質

O

GLU

FLU MNEMAL

LAC TRE MAN

XLTMEL NIT PALVPRAF XYE

SAC MDG

NAG ADH URE

判定

－

＋

＋

＋

＋

＋

－

－

－

－

＋

－

－

－

－

＋

－

－

＋

＋

数値

1

2

4

1

2

4

1

2

4

1

2

4

1

2

4

1

2

4

1

2

6

合計

7

0

2

0

1

3

図 1 API-STAPH によるブドウ球菌属菌の同定
新鮮培養菌を用いて特定の濃度の菌液を調製し，指定された方法でチューブに接種し培養する．
各チューブには基質が含まれ，菌が利用すると色調が変化するので陽性（＋），陰性（－）で判定する．
図の下のように 3 個ずつに区切り，1, 2, 4 の数値を与える．3 個を 1 組とし，陽性の性状の数値を合計し，全体で 7 桁の数値とし，データベースで菌名を検索すると，確率の高い順に菌名が得られる．
図では 6702013 のコードが得られ、Staphylococcus epidermidis と同定された。
（図 1 は巻末のカラーページに掲載しています。
）

る技術が必須であり、結果が出るまでに日数を要す

スタチン（IPM/CS）が登場した。細菌検査の斜陽化ることである。良質な培地や培養法の開発は検査精がささやかれたのはこの頃で、“抗菌薬を上手に使度を大きく向上させたが、基本技術のトレーニング

えば感染症は制御できる、細菌検査の結果は遅いし、は不可欠であり、検査所要日数の短縮には至ってい

手数がかかり、検査をすればするほど赤字になる”

ない。一方、抗原・抗体を扱う免疫学的検査や、核というのが理由であった。確かに一部の感染症では酸（DNA や RNA）を検出する遺伝子検査、菌体蛋

細菌検査は必要ないとされているものもあるが、先白を質量分析法により同定する技術が微生物検査にの考えは正しいとは言えない。感染症の診断・治療導入され、検査所要日数や所要時間は大幅に短縮さは迅速に起炎菌を推定し、必要に応じ経験的治療

れ、データの正確性や信頼性も向上した。しかし、（empiric therapy）を行い、その後、患者検体からこれらはごく一部であり、感染症の迅速診断や治療

病原微生物を分離・同定して、薬剤感受性検査結果のためにはさらなる開発・改良が要求されるものもに基づいて適切な抗菌薬に修正される標的治療（de-数多く残されている。

finitive therapy）を行うことが原則である。標的治療の際には抗菌薬の抗菌スペクトルにも配慮し、デ -2. 細菌検査斜陽化論からの逸脱

エスカレーション（de-escalation；広域スペクトル

微生物検査は今や感染症診断や治療に不可欠の検から狭域の抗菌薬への変更）を行う。

査であり、その検査結果は施設内の感染制御の中核

細菌検査の斜陽化論を吹き消し、細菌検査の重要を成す重要な情報として高い評価を得ている。しか性が強調されて不可欠な検査となったのは、院内感し、過去には細菌検査の斜陽化論が飛び交った時代

染（現在では医療関連感染）の問題がクローズアッもあった。1960 年代後半から 1980 年代では抗菌薬

プされ、その対策が急務になったことが大きく関の開発が目覚ましく 、幅広い細菌に抗菌力を発揮す

6）わっていたと思う 。院内感染の問題はわが国ではる第 3 世代セファロスポリン、セフォタキシム（CTX）

川名林治先生（岩手医科大学細菌学教授）が 1983 年

が 1981 年にわが国で発売され、以後、1986 年にセに東八幡平シンポジウムを開催されたのが最初であ

フタジジム（CAZ）、セフトリアキソン（CTRX）、そる 。この会は毎年夏、院内感染の現状や対策が岩の後、さらに 1987 年には広域スペクトを有し、レ手の山の中でセミクローズの研究会として検討されンサ球菌から緑膿菌、嫌気性菌にまでに強い抗菌力

11 回まで続いた。この会では当時、外部には出せを発揮するカルバペネム系抗菌薬イミペネム・シラ

なかった院内感染の現状とその対策のノウハウがマ

5）

7）（ 18 ）

111

スコミなどに流れることなく安心して討議できる唯も乏しかった昔、伝染病が流行し、これらの検査の一の会ではなかったかと思う。
“院内感染の本音”

ため病原体別に検査法の確立がなされたことによが話せ、夜には個人的に意見交換もできたこの会にる。当時の微生物検査は厚生省編纂の衛生検査指針

は全国から医師、看護師、臨床検査技師が出席した。

（1952 年）として出版され版を重ね、赤痢菌、チフス

この会が前身となり 1986 年に日本環境感染学会が菌、ペスト菌、日本脳炎など 15 項目の病原体別検設立された。この頃はわが国では MRSA が急増し

12）
査法が解説されている 。一方、検査材料別検査法

院内感染が多発していたが、感染対策はほとんど手は検査技師の教科書として最初に編纂された臨床検付かずの状態であった。夫の手術は成功したにも関

査技術講座（細菌学、1959 年）で解説されている。

13）

わらず、MRSA 感染症で命を奪われたという病院内

著者の小酒井 望先生はアメリカの病院を視察さでの感染の詳細を手記にまとめた富家恵美子氏の書れており、検査材料別検査法はこの時に遭遇されて「院内感染」は、医療従事者のみならず一般社会にいたと思われる。現在では特殊な病原体についてはも院内感染の恐怖とその対策の重要性を改めて痛感

病原体別検査法があり、これらは必要に応じ検査材

させる内容で、大きな反響を巻き起こした 。

料別検査法に追加する形で用いられている。このよ8）

感染症の初期治療に役立つ迅速検査として患者検

うに特殊微生物を外した検査法が現在では主流であ体のグラム染色の有用性が高まり 、さらに感染症るが、これらも含め一気に検査できる方法が日常検検査の POCT（病原微生物の迅速抗原・抗体検査）

査として定着する可能性がある。現に次世代 DNAが開発された。わが国初のインフルエンザ迅速診断

シークエンサーを用いたメタゲノム解析では、患者キット、ディレクティジェン Flu A（日本ベクトン・

検体から直接、含まれる微生物を網羅的に検出でき、ディッキンソン）は 1999 年に発売され、これを機にウイルス、細菌、真菌、寄生虫も含め単一の原理で多くの感染症の POCT が開発された。患者検体の14）検出可能とされている 。これらの技術は腸内、口グラム染色や POCT は臨床検査技師にとどまらず

腔内、皮膚などの細菌叢を DNA シークエンシング

研修医、さらに看護師、薬剤師にまでも習得者が拡技術で解明するものでマイクロバイオームと呼ば大している。また、日常よくみられる病原菌の間でれ、医学領域でも疾病の解明や治療法の開発などの薬剤耐性菌が増え続け、わが国でも 2016 年 4 月に新たな研究分野として注目されている。

9）

薬剤耐性（AMR ; Antimicrobial Resistance）対策ア
クションプラン 2016 - 2020 が宣言された。これ10 ～ 11）

2. 安全キャビネットの普及

により医療の分野のみならず一般市民、動物、食品、

無菌操作は細菌検査の特色とされ、現在でも重要環境などすべてを含め、国を挙げて薬剤耐性菌の制な基本操作であることには変わりはない。しかし、御に取り組むことになった。

無菌操作や正しい器具の持ち方が守られず、自己流

各種耐性菌の増加した昨今、感染症の診断と治療の操作がまかり通っており、また、滅菌器具の汚染には微生物検査が不可欠となったが、臨床検査技師

を考えず粗雑に取扱う操作が日常見受けられる。病は常に臨床に役立つ、有用性の高い検査を目指し努

原微生物の持つ危険性の認識も昔に比べると薄らい力しなければならない。

できており、安易に扱われているように思われる。
この背景には①健常者に感染を起こす病原性の強い

Ⅱ. 微生物検査発展の足跡から垣間見る「陰」

微生物は著減し、現在では病原性の弱い日和見病原菌がほとんどを占めていること、②安全キャビネッ

微生物検査は著しい発展を遂げてきており、そのトの普及、③優れた抗微生物薬治療の普及などがあ恩恵は計り知れない。しかし、その反面、“マイナス”

ると考えられる。また、昔は細菌検査担当技師にはとなった面も存在しており、これらを表 1 にまとめた。

結核に罹った経験のある人が非常に多かったが、近年では激減している。これには昔、結核で療養中に

1. 病原体別検査法から検査材料別検査法へ

臨床検査の教育を受け、回復後検査技師の職に就い

細菌検査は病原体別検査法から検査材料別検査法に移行した。この背景には、衛生状態が悪く治療薬たというケースが見受けられたが、業室感染 と15）

注）

して結核に罹った人も多かったのではないかと思わ（ 19 ）

112

表 1 細菌検査の進歩・省力化がもたらした功罪
項

目

【功】

【罪】

病原体別検査法から検査 ・中枢神経系感染症、呼吸器感染症、尿路感染 ・特殊な微生物は検査漏れになる
材料別検査法へ症など感染症別の起炎菌が幅広く検査できる （特殊な病原体は追加検査を怠ると検査漏れ（病原体別検査法は感染症の診断検査としてになる，初回検査に追加して用いた場合にはは効率が悪い）成績の遅れが生じやすい）
安全キャビネットの導入 ・業室感染防止・環境からの雑菌汚染防止（細菌検査担当者の結核感染者が著減）

・無菌操作の認識不足
・病原体や患者検体の危険性に対し無関心の傾
向あり

試薬・培地の自家調製か ・労力，時間が著しく短縮した・処方、培地作製の工程、反応の原理について
ら、既製品の購入へ
・品質管理がし易くなったの知識不足
・培地・試薬の性能の向上
・試薬などの自家製が困難（当初は自家製の性能が優れていたが現在で （培地・試薬に問題が生じた場合の解決策には逆転）
支障）確認培地，鑑別培地から ・同定技術が向上した・菌の特徴が覚えられない同定キット・自動機器へ （例外性状の菌も正しく同定）（菌の特徴をつかんでいない）
・判定が数値化され容易になった・菌名が正しいか否かの判断が困難
・初心者と熟練者の差が縮小
・用手法の性状検査と一致しない場合がある
・菌コード（性状を数値化したもの）は菌の類似 ・一部の性状が誤って判定されていても正しい性の判定に有用菌名が得られる
ディスク拡散法から微量 ・測定・判定とも著明に簡易化
液体希釈法へ・より精密な結果が得られる（MICが得られる）・検査可能な対象菌範囲が拡大

・菌液接種器などの自動機器が必要
・抗菌薬がセット化されているため追加の抗菌薬は別法で測定・目視判定が不能な方法もある
・抗菌薬名，それぞれの特徴が覚えられない・菌の感受性パターンの特徴が覚えられない

血液培養・自動検出機器が必要
・菌数の測定ができない・雑菌混入か否かの識別が困難な場合がある
・培地に発育しない微生物が存在する・用手法から自動検出器へ・操作が著しく簡易化された・夜間、休日でも容易に実施
・サブカルチャーが省略できる

試験管やフラスコの綿栓 ・時間の短縮
・モルトン栓は綿栓に比べ培地が乾燥しやすいからモルトン栓へ・ほこりの発生が解消
・ 誤って内容をこぼしやすいことが欠点
・菌への有害作用が解消（綿栓は乾熱滅菌による加熱で不飽和脂肪酸（綿栓には脱脂綿は不適．青梅綿は脱脂綿に比が発生し，試験管の内壁を汚染，結核菌など
べ水をはじく作用が強い）の一部の細菌に有害とされている）
器 具 の 再 生 使 用（消 毒・ ・作業時間の短縮
・汚染物の取り扱いが粗雑化
洗 浄・ 滅 菌）か ら ディス ・器具の滅菌不十分が解消した（再生したガラ （消毒薬を用いず，ポリ袋に一時廃棄，その後ポーザブル製品へ
スシャーレでは枯草菌汚染がよくみられた）
滅菌など）
・洗浄時のガラス切傷事故防止
・無駄使いする（節約に対し鈍感）
・使用済み培地容器再生に伴い発生する悪臭の （使用済みガラスピペットは消毒薬で消毒後，軽減
洗浄，乾燥，滅菌していた）検査報告書の手書きから ・迅速化・正確性の向上
印字へ・解読しやすい・学名が正しく書けない・学名を正確に覚えない

微生物検査の指導・教育 ・経験者が付き添って個別指導
・個別指導に教育プログラムを併用（個別指導だけでは異なる時期に複数の技師を指導すると指導内容に差が生じやすい，評価も指導者と受ける側で不一致になる場合がある）

れる。安全キャビネットの普及は結核の業室感染防止に大きく貢献していることは否めないが、過信は

3. 培地・試薬の自家調製から市販品へ禁物である。最近では危険度の高い輸入感染症に遭

半世紀前の微生物検査では、信頼できる成績を得遇する可能性もある。微生物検査に携わる臨床検査

るためには性能の良い培地を用いる必要があり、培技師は作業の危険性に理解を深め、作業中は緊張感

地や試薬の調製には長年の積重ねにより培われたを持って行動すること、基礎技術では無菌操作の習“コツ”を発揮し、調製にも多くの時間が費やされた。

熟、器具や危険物の正しい取扱いを遵守、後輩に対

その後、生培地が市販されるが、最初のころは自家し綿密な指導を強化・徹底する必要がある 。

製の性能が優れ、市販品が自家製の性能を超えるま

16）

注）業室感染：筆者は検査室内で受けた感染を「実験室内感染」と呼ぶものと認識していた．臨床検査の専門学校では細菌学実習提要（伝染病学友会
編：，丸善，1961）が実習の教科書として用いられ，林 江沢先生（東京大学医学部細菌学教室）からこのように教えられていた．ある時，小酒井 望先生に原稿のご校閲をお願いした時，この用語を“これは「業室感染」だろ？”といわれ，次のように説明して下さった．検査室は実験するところではなく検査の仕事をするところだから「実験室内感染」はふさわしくない．
「業務感染」という用語も使われているが，検査室内の感染は必ずしも業務をしている人だけではなく，検査室に入室する人は感染を受ける可能性があるのだから「業室感染」がふさわしい．と教えられた．筆者にとって「業室感染」の用語は恩師の教えのひとつとして気に入っており，敢えて使用させていただいた．

（ 20 ）

113

でにはかなりの期間が費やされた。準備に費やされこれらの細菌による日和見感染は 1960 から 1970 年ていた時間は自動化や生培地の購入により大幅に短

代には著明に増加し、同定法の確立が強く望まれて縮された。この反面、培地や試薬の処方、調製法、いた。ただ Bacterium anitratum（現在の A. bau-

反応の原理などの理解や知識が薄らいだことも事実

mannii）は緑膿菌に次いで多く検出され同定法がである。粉末培地を調製するのに必要量の粉末の g

知られていた（図 2）。その他のブドウ糖非発酵グ

数は、通常、頭の中で計算したが、最近では時間がラム陰性桿菌の同定は籔内英子先生により確立さかかる技師も見受けられる。新技術のなかには原理

れ、これらの細菌による感染症が明らかにされてが難解なものもあるが、これらの理解を深めること

いった 。
17）

は結果の解釈や機器トラブルの解決に役立つので

TSI 寒天培地、SIM 培地などの確認培地は腸内細知っておく必要がある。また、培地、試薬などの自菌科の同定に不可欠であったが、同定キットや自動家調製についても臨機応変に対応できるよう身に着機器の普及により使用されない傾向にある。Acine-

けておかなければならない。

tobacter 属菌や Burkholderia 属菌などでは、腸内細菌などのブドウ糖発酵菌系統か、ブドウ糖非発酵菌

4. 鑑別・確認培地から同定キット・自動機器

系統かは同定キットや自動機器では正確に判定でき導入へない場合がある。このような時に TSI 寒天培地や1960 年代の菌種の同定は病原性の強い菌種は簡SIM 培地を用いれば確実に識別できる。質量分析

単な同定法が確立されていたが、日和見病原菌、特計検査法は迅速で正確な同定結果が得られることでに環境に生息するブドウ糖非発酵グラム陰性桿菌に

最近、日常検査に導入する施設が増加しているが、ついては緑膿菌以外の菌種は困難であった。一方、大腸菌（Escherichia coli）と赤痢菌（Shigella 属菌）、

（a）

（b）

（c）

（d）

①

②

③

④

⑤

⑥

図 2 Bactrerium anitratum の同定（a）喀痰のグラム染色で認められた B. anitratum．多数のグラム陰性球菌の中に短桿菌がわずかに存在する．多数の白血球の存在から感染症が推定される．（b）血液寒天培地上の集落．白色でやや隆起し，光沢あり、辺縁は滑ら
かな集落，大きい集落（3 ～ 8mm）で腸内細菌科と紛らわしい．（c）BTB 乳糖寒天培地では 24 時間以上経過すると乳糖分解のためやや黄色身を帯びてくる．培養すると短桿菌となる。
（d）① TSI 寒天培地（菌発育だが無変化、ブド
ウ糖非発酵菌と判定される）、②SIM 培地（培地表面には菌発育，高層には発育がほとんど見られない）．③OF 培地：
ブドウ糖（表面が黄色，下部は緑色から酸化的分解）、④麦芽糖（非分解）、⑤キシロース（酸化的分解）、⑥5％乳糖斜面培地（1 日目で分解（黄変）、但し、1％以下の乳糖（OF 培地）では 1 日では分解しない）。
（図 2 は巻末のカラーページに掲載しています。）（ 21 ）

114

炭疽菌（Bacillus anthrasis）とセレウス菌（Bacillus

一濃度法（昭和ディスク、金沢法、日水）と三濃度

cereus）、百日咳菌（Bordetella pertussis）とパラ百日法（三濃度ディスク、後にトリディスク、栄研）のい咳菌（Bordetella parapertussis）、Citrobacter amol-

ずれかにより行われていた。昭和ディスクは内科医

onaticus と Citrobacteer freundii, Staphylococcus

であられた金沢 裕先生により考案・改良された方intermedius と Staphylococcus pseudintermedius,

法

Streptococcus mitis と肺炎球菌（Streptococcus pneu-

性までを 4 段階（3＋：感性）、（2＋：やや感性）、（1＋：

moniae）などの組合せでは鑑別困難とされている 。

やや耐性）
（－
、 ：耐性）に分けて判定する方法である。

このように生物学的検査を主とする従来法では鑑別

現在の CLSI ディスク拡散法は Kirby-Bauer 法

できても遺伝学的には識別困難な場合があり、これ基にした方法であるが、金沢法はディスクの大きさ

らの機器を用いる場合注意しなければならない。最及び薬剤含有濃度はこれらとは異なる方法である。

先端の簡便で正確とされる優れた同定法でも、意外

金沢法の特徴は、ディスクの阻止円直径より MIC

な落とし穴がある。大きなミスを防ぐ意味で従来法値を推定できるように設定されている。ディスク法

による同定検査は確認培地も含め、十分使いこなせ

は定性的な方法であるが、MIC を推定することにつるよう訓練しておくことが勧められる。

いて金沢先生は「MIC 値は±2 倍の誤差があるので、

18）

5. ディスク拡散法で学んだこと（1 濃度法と 3 濃度法）

で、ディスクの阻止円直径により、感性から耐

19）

20）

を

ディスク法でも十分推定可能である」ことを強調されていた。
一方、三濃度ディスク法は、1 薬剤につき高・中・用手法が主流のころ、薬剤感受性検査はディスク

低の 3 濃度の薬剤含有ディスクを用いる方法である

拡散法が用いられていた。1960 年代はわが国では（図 3、4）。判定はディスクより阻止円までの距離

（a）

（b）

（c）

（d）

図 3 トリディスク法（a）：被検菌液（集落からブイヨン培地に接種し，明らかな混濁が認められたもの）をミューラー・ヒントン寒天
培地に毛細管ピペットで 1 滴滴下し，アルコール液で滅菌したコンラージ棒で寒天培地の表面に均一に塗り広げる．
（b）：小型の眼科用ピンセットの先端をガスバーナーで火焔滅菌後，冷ます．写真右上の箱に各薬剤の低・中・高のディ
スクが縦に配置され納められている．（c）：ピンセットで小ビンの中のディスクを取り出し，寒天培地の表面に配置する．
（d）: 培地の中心に 1 剤，その上下に 1 剤ずつ 3 剤の薬剤のディスクを配置．この際，低濃度ディスクの隣には高濃度ディスクが来るように配置する．37℃，1 夜培養後，判定する．
（現在では検査時には手袋の着用が原則であるが，当時は素手で行うことが多かった．）（ 22 ）

115

⑩

⑨

⑧

⑭

⑬

⑦

⑥

⑤

④

③

⑫

②

①

⑪

図 4 トリディスク法の判定（MRSA）
各ディスクの高濃度は青色，中濃度は赤色，低濃度は緑色の文字で印字されている．
菌液はコンラジ棒で接種したため塗布に斑（ムラ）がある．ディスクストリップもピンセッ（－）は耐性．
トで置いたためやや不規則である．以下のように判定される．
（3＋）は感性，① PCG（－），② MCIPC（1＋），③ ABPC（－），④ CEZ（－），⑤ CMZ（－），⑥ CTM（－），⑦ CMX（－），⑧ GM（3＋），⑨ AMK（1＋），⑩MINO（3＋），⑪EM（－），⑫ CLDM（－），⑬ OFLX（3＋），⑭ TC（3＋）が 1mm 以上あれば阻止円ありとみなし、高・中・耐性菌が見逃されていることには気付かなかった。

低の３つのディスクに阻止円があれば（3＋：感性）、

薬剤感受性検査は希釈法による測定が基準となる方

高濃度と中濃度に阻止円があれば（2＋：やや感性）、法であり、ディスク法と MIC 値の相関をみること

高濃度のみ阻止円があれば（1＋：やや耐性）、いずれ

で発見できる問題点であった。新しい方法を採用すのディスクにも阻止円がなければ（－：耐性）、と判る場合には、従来法との比較データをよくみること定する方法である 。昭和ディスクは阻止円直径のが大切である。また、3 濃度法は“接種菌量の影響測定（mm 単位）が必要なのに対し、3 濃度ディスは受けにくい”といわれていたが、実際には菌量がクは接種菌量による影響が少なく、3 つのディスク多くなると判定しにくいことも経験された。

21）の阻止円の有無で判定できることから、簡便な方法

そこで国際的にも通用する、センシディスク（ベとして広く用いられていた。著者がこの方法に疑問

クトン・ディッキンソン）を用いる NCCLS 法（現を持ったのはテトラサイクリン（TC）の感受性結果

在の CLSI 法）に変更し、精度管理も行いつつ長期である。当時、薬剤感受性の疫学調査として MICにわたり使用した。その後、菌株同定・薬剤感受性の測定も行っていた。MIC で TC 耐性株と判定されが同時に検査できる自動機械の導入に移行することたにもかかわらず、日常検査法のディスク法では感になる。国際的なデータの比較が難しいことから、性と判定されていた株のあることに気付いた。TC

昭和ディスクも姿を消すことになったが、金沢先生のディスク法を再検査したところ、3 種のディスクの 積 み 重 ね ら れ た デ ィ ス ク 法 の 阻 止 円直径からには感性株に比べると明らかに小さいが、高・中・MIC を推定できるという方法には今でも興味を捨

低の各濃度のディスクは明らかに阻止円ありと判定てきれずにいる。

された。1 濃度ディスでは阻止円の直径の大きさにより感性（または耐性）度を連続データとしてとら

6. 血液培養（用手法からカルチャーボトルを経て自えることができるが、3 濃度ディスクではこれができないことが欠点であることは知っていた。しかし、（ 23 ）

動検出システムへ）
1960 年当初、私の経験した血液培養はベッドサ

116

イドで行われていた。血液培養を行う場合、患者の液中の菌数を定量培養するためのものである。その主治医は検査室に連絡し、検査室では培養に用いる

後、病室でのこれらの操作は遅れると寒天培地が凝一式を小型の岡持ち（出前箱）タイプの木箱に入れ固する場合があり、また、無菌操作が十分できないて患者の病室に出向き、その場で行った。病室の窓などの無理があったため、採血した血液を検査室にやドアを閉め、術者とその補助者以外の立ち入りを提出してもらうようになった（図 5、図 6a, b）。検査

禁じ、無菌操作のもとに行われた。当時は心内膜炎

室では 3.8％クエン酸ナトリウム液を 2mL 入れて滅の場合は動脈血の検出感度が優れているとされ、動菌した中試験管を用意しておき、これに 10mL 採血

脈血と静脈血の両方から採血されていた（現在ではすることにしていた。クエン酸ナトリウムは細菌に動脈血、静脈血での差はほとんどないとされてい有害とされているがやむなく使用していた。

る）。採血後の注射針や試験管培地の管口の火焔滅1965 年に栄研化学からカルチャーボトルが市販

菌にはアルコールランプを使用した。医師が患者かされると、従来法に比べ、操作は非常に簡便化されら 10mL 採血し、滅菌シャーレや培地に入れてくれることから、多くの検査室がこの方法に切り替えたるので、検査技師は無菌操作を守りつつ、シャーレ（図 6c）。著者らもカルチャーボトルへの変更を望のふたの開け閉めや、試験管培地のキャップの開けんだが、臨床の先生方はそうではなかった。血液中閉めなどを補助した。最後に検査技師が温浴中で溶の菌数が出せなくなることに対する反対意見が強解しているハートインフュージョン寒天培地（中試く、特に内科の池本秀雄先生は血液中の菌数は重症験管入り）を用いて、シャーレに入った血液と混ぜ度や予後を知る上で重要であること、雑菌混入か否て混釈寒天を作製した。シャーレに入れた血液は血かの識別の参考にもなるとのことを強調された。検

（a）

（b）

（c）

（d）

図 5 カルチャーボトル発売以前の血液培養法（a）：試験管台の左は患者血液 10mL の入った試験管､次の 3 本はチオグリコレート培地（嫌気性菌用），右の3 本はブレイン・ハート・インフュージョン培地（好気生菌用）．手前には滅菌シャーレが 2 枚（血液中の菌数
算定用，1 枚に 2mL の血液を入れて混釈する），滅菌駒込ピペットとゴムキャップ．（b）：滅菌駒込ピペットで血液を 2mL 吸い上げ，滅菌シャーレに入れる（定量培養用）．
（c）：患者血液を 1mL ずつとり、6 本の液体培地に接種する．
（d）：20mL のあらかじめ溶解（40 - 45℃）したハート・インフュージョン寒天培地（中試験管に調製したもの）で混釈寒天を作製する．平板培地，液体培地は 37℃，毎日観察，1 週間観察後，菌の発育が見られない場合は、液体培地はグラム染色を行い菌発育の有無を観察する．
（検査時は手袋の着用が原則である．当時は素手で実施していた．）（ 24 ）

117

（c）
（b）
（a）

図 6 血液培養（用手法）の陽性例と最初の市販カルチャーボトル
（a）患者血液の混釈寒天培地の発育したレンサ球菌の集落．菌発育は黒い小さな点として観察される．
（b）上はブレイン・ハートインフュージョン培地に発育した菌の集落，下はチオグリコレート培地に発育した菌の集落．
（c）国内で最初に市販されたカルチャーボトル 2 号（栄研化学）．レンサ球菌が発育．
ビンが薄型なので菌発育時の培地の混濁状態が観察しやすかった．
図（a）,（b）：小酒井 望：集落の観察から同定へ（栄研化学，1964）より引用（図 6 は巻末のカラーページに掲載しています。
）

査部長で臨床病理学教授であられた小酒井 望先生が対応されたが、臨床側の許可をいただくにはかな

7. 微生物検査の効果的教育法

りの日数を要したことが懐かしく思い出される。栄

微生物検査の指導は適当なテキストを用い、技術研のカルチャーボトルが使用され、この後は BC ボ

指導はマンツーマンで行われてきた。この習慣は現

トル（ロシュ、ベクトン・ディッキンソン）、次い

在でも続いており利点が多いが、表に挙げたようなで自動検出器（バクテック、ベクトン・ディッキン

問題点もある。教えた後の評価は受講者自身および

ソン）に移行した。

指導者の双方で行い、両者が一致を確認することに微生物検査では国際的にみても最も重要な検体はより、行き届いた指導となる。教育プログラムを導髄液であり次が血液とされている。これらの検体で入すると、指導の内容やチェック点もそろえて行うは迅速で正確な結果が患者の予後を左右することか

23）
ことができ、指導内容の漏れを防ぐことができる 。

ら、検査法の開発が盛んである。現在では陽性のカ

教育は初心者のみならず、経験者も年、月単位でのルチャーボトルの培養液を用いて 20 の菌種または目標を定め、それに向けて行動し、その達成度を評

菌属と、主な耐性遺伝子 9 種を 2 ～ 2.5 時間で検出価することにより自身の技能を向上させ、成長しよできる方法が開発され市販された。これらは画期的うとする姿勢が現役の技師には課せられている。

な方法であるが検査コストが高く医療費の高騰に

Ⅲ. 感染症診療に貢献できる臨床検査技師を目指して繋がることから、日本臨床微生物学会、日本感染症学会から「新しい敗血症診断用検査薬を用いた遺伝子関連検査 Verigene の実施指針」が提案されてい®

。現在のカルチャーボトルを用いる方法では血半世紀余の間、検査技術は大きな発展を遂げてき

液中の菌数は不明であり、また、使用培地に発育でたが、臨床検査技師像にも変化が見られる。当時はきない細菌は検出できない。また、採血時のコンタ検査法も複雑なものが多く、優れた技術が信頼性のミネーションも診断の誤りや不必要な治療に繋がる高い成績に繋がった。現在では高度な技術とされた可能性があり、検査の労力や資材の無駄使いにもな

遺伝子検査でも GeneXpert のように簡単な操作でるので、よりよい方法を求めるためには大いに検討出来る方法が開発され、菌種の同定に用いる質量分の余地がある。

析計も操作は非常に簡易化されている。技術が非常る

22）に簡易化されている中で臨床微生物検査技師に求め（ 25 ）

118られていることは、第 1 に「臨床に役立つ微生物検る。感染症検査も従来の微生物検査に免疫学的検査査」を追求し、それに沿って努力することではないか

や遺伝子検査が多く取り入れられるようになった。

と思う 。検査結果を最大限に利用してもらうため

さらに感染制御、抗菌薬適正使用の分野でも役割がには検査依頼医師とのコミュニケーションをよくす

課せられている。もはや個人の余暇を利用した勉強。必要に応じ検査結果

ではこれらに十分に応じることはできない。日常のにコメントを付記することや、検査結果に対し臨床業務やチーム活動でのコミュニケーションを通じ的な患者情報が必要になった場合には問合わせをすて、また、種々の勉強会や学会参加を通じての積みること、重症患者では検査を希望される抗菌薬をた重ねが最も効率的な成長の糧になるのではないかとずね、追加して検査しておくのもよい。

思う。

24）

ることが非常に重要である

25）

第 2 に感染症の診断や治療に対し研鑽を積むこと

文である。臨床検査技師が医師や看護師、薬剤師に対し、専門分野での適切なコメントが出来るためには、
主な病原微生物に対する生物学的性状の特徴や臨床的な意義、さらにその微生物の感染症に用いられる
主な抗菌薬、その薬剤に対し耐性菌はどの程度出現
しているかなどをよく知っていなければならない。
臨床検査技師に求められる新しい分野として、感染制御や抗菌薬の適正使用のチームに加わり活動することが求められている。患者の診断や治療のために用いられた微生物検査結果を集計し、感染制御のための資料として利用すべく加工することも臨床微生物検査技師に課せられている（アンチバイオグラ
ム、各種臨床材料からの主要な分離菌種の年次的推移、主な耐性菌の病棟別分布など）。また、抗菌薬
適正使用チームの資料として血液培養の陽性患者リストが用いられるが、これらも他の職種の意見を取り入れ検査担当側が作成することで、正確で最新データを含めた使いやすいものに仕上げることができる。
臨床検査技師は感染症の臨床面に弱いといわれる。医師や看護師、薬剤師の専門分野にも一歩を踏
み入れ、知識を蓄える必要がある。このことは感染制御チームで活躍する際、他の職種とのコミュニ
ケーションをよくするために不可欠である。

おわりに以上、微生物検査の過去 50 余年を振り返り、感染症診療に貢献できる技師として心にとどめてほしいことを述べた。微生物検査の技術革新により検査は容易になったが、臨床微生物検査技師の守備範囲
は著明に拡大した。病原体もウイルス・細菌・真菌に、さらに原虫・寄生虫をも加える必要が生じてい献1 ）林 康之, 寺畑喜朔 , 酒井シズ . 第 37 回日本臨床病理学会
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