二価性試薬

細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ
細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
イオン
電 極
シ ン チ
レーター
生化学用
緩衝剤
キレート
比色 / 金属
試
薬
水質
分析 用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒
その他
機能性
有機材料

二価性試薬

9

二価性試薬は 2 つの官能基を有する試薬で、イムノアッセイやタンパク質研究などで広く利用される。同仁化学
ではスペーサー鎖長や官能基の異なる種々の二価性試薬を取り揃えているので、用途に合わせ選択頂きたい。
Hetero-bifunctional Reagents は、1 級 ア ミ ノ 基 と 反 応 す る NHS エ ス テ ル (OSu) 基 と、 チ オ ー ル (SH 基 ) と 反応するマレイミド基を有する試薬群で、Fab' のような SH 基を有するタンパク質に POD や ALP などの酵素を結合する場合などに利用できる。
Homo-bifunctional Reagents は、2 つの NHS エステルを有する試薬群である。近接した 2 つのタンパク質を結合したり、アミノ基を有する化合物をアミノ基反応性にする際などに活用できる。

9-1 Hetero-bifunctional Reagents

9-3 その他

EMCS… ……………………………………………………… 190

BABE… ……………………………………………………… 198

HMCS………………………………………………………… 192

Aminobenzyl-EDTA… ……………………………………… 200

GMBS………………………………………………………… 191
KMUS………………………………………………………… 192
Sulfo-EMCS… ……………………………………………… 193

Sulfo-GMBS… ……………………………………………… 193

Sulfo-HMCS… ……………………………………………… 193

Sulfo-KMUS… ……………………………………………… 193
Sulfo-SMCC… ……………………………………………… 194

9-2 Homo-bifunctional Reagents

FeBABE… …………………………………………………… 198
Isothiocyanobenzyl-EDTA… ……………………………… 200
AB-NTA free acid… ………………………………………… 201
Maleimido-C3-NTA………………………………………… 202
Isothiocyanobenzyl-NTA… ………………………………… 203

Dithiobis(C2-NTA)… ……………………………………… 203

Sulfo-AC5 -SPDP……………………………………………… 204
SPDP… ……………………………………………………… 205

BS3… ………………………………………………………… 195

DSP…………………………………………………………… 195

DTSSP………………………………………………………… 196
Dithiobis(succinimidyl undecanoate)………………… 197

Dithiobis(succinimidyl octanoate)… ………………… 197

Dithiobis(succinimidyl hexanoate)… ………………… 197

189

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二価性試薬9-1 Hetero-bifunctional Reagents
EMCS

同仁品コード：E018
50 mg ￥10,400 344-05051
100 mg ￥17,600 340-05053

N -(6-Maleimidocaproyloxy)succinimide〔 CAS No. 55750-63-5 〕

Protocol 「抗体に標識したい（架橋剤）:」(1) 性状：白色～微黄白色粉末(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上(3) ジメチルホルムアミド溶状：試験適合(4) 融点：63℃ 以上(5) IR スペクトル：試験適合(6) NMR スペクトル：試験適合
溶解例
200 mg/ml（ジメチルホルムアミド）
取扱注意 1. 保存方法：冷蔵

規格

構造式

C14H16N2O6=308.29
示すように、芳香族系のマレイミド架橋試薬 (R=(1),(2),(3))
が中性から弱アルカリ性で不安定であるのに対し、EMCS,
GMBS などの脂肪族系の架橋剤は広い pH 領域で安定である。

性 質 EMCS はアミノ基と SH 基との架橋反応が可能な
異反応性二価性試薬である。構造はマレイミド基と N - ヒドロキシスクシンイミド活性エステルを分子の両端にもち、アミノ基に対しては活性エステルが反応し SH 基とはマレイ
ミド基が選択的に反応する。酵素標識体の調製や単純ハプテ
ンを担体タンパク質に結合させる時に有用である。次表に
OCH3

X
Y

Y

X

Y
X

（1）

（2）

（3）

＊使用方法はプロトコルをご覧下さい。

O

X＝−coo −N

N-ヒドロキシスクシンイミド
O

O

Y＝−N

マレイミド基O

マレイミド基の分解率
（％）
化合物
(1)
(2)
(3)

EMCS

pH5.0

pH6.0

pH7.0

pH7.5

pH8.0

3.8

6.6

32.0

37.5

52.0

3.1
3.0
5.3

6.2
0.7
3.0

21.4
2.0
4.5

18.8
8.3
5.0

69.0

キレート

41.0
8.4

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参考文献

E018

で検索

1) S. Yoshitake, Y. Yamada, E. Ishikawa and R. Masseyeff, "Conjugation of Glucose Oxidase from Aspergillus Niger and Rabbit Antibodies Using N -Hydroxysuccinimide Ester of N -(4-Carboxycyclohexylmethyl)-Maleimide", Eur. J. Biochem ., 1979, 101 , 395.
2) T. Kitagawa, T. Shimozono, T. Aikawa, T. Yoshida and H. Nishimura, "Preparation and Characterization of Hetero-bifunctional Crosslinking Reagents for Protein Modifications", Chem. Pharm. Bull ., 1981, 29 , 1130.
3) S. Yoshitake, M. Imagawa, E. Ishikawa, Y. Niitsu, I. Urushizaki, M. Nishimura, R. Kanazawa, H. Kurosaki, S. Tachibana, N. Nakazawa
and H. Ogawa, "Mild and Efficient Conjugation of Rabbit Fab' and Horseradish Peroxidase Using a Maleimide Compound and Its Use
for Enzyme Immunoassay", J. Biochem ., 1982, 92 , 1413.
4) E. Ishikawa, M. Imagawa, S. Hashida, S. Yoshitake, Y. Hamaguchi and T. Ueno, "Enzyme-Labeling of Antibodies and Their Fragments
for Enzyme Immunoassay and Immunohistochemical Staining", J. Immunol ., 1983, 4 , 209.
5) 石川榮治 , " エンザイムイムノアッセイ ", Dojin news , 1983, 28 , 1.
6) 北川常廣 , " 蛋白質の選択的な化学修飾法における最近の進歩 ", 有機合成化学 , 1984, 42 , 283.
7) S. Hashida, M. Imagawa, S. Inoue, K. Ruan and E. Ishikawa, "More Useful Maleimide Compounds for the Conjugation of Fab' toHorseradish Peroxidase through Thiol Groups in the Hinge", J. Appl. Biochem ., 1984, 6 , 56.
8) S. Inoue, M. Imagawa, S. Hashida, K. Ruan and E. Ishikawa, "A Small Scale Preparation of Affinity-Purified Rabbit Fab'-Horseradish
Peroxidase Conjugate for Enzyme Immunoassay", Anal. lett ., 1984, 17 , 229.
9) M. Koizumi, K. Endo, M. Kunimatsu, H. Sakahara, T. Nakashima, Y. Kawamura, Y. Watanabe, T. Saga, J. Konishi, T. Yamamura, S.
Hosoi, S. Toyama, Y. Arano and A. Yokoyama, "Ga-Labeled Antibodies for Immunoscintigraphy and Evalution of Tumor Targeting ofDrug-Antibody Conjugatesin Mice", Cancer Res ., 1988, 48 , 1189.
10) T. Kohno and E. Ishikawa, "Novel Enzyme Immunoassay(Immune Complex Transfer Enzyme Immunoassay) for Anti-insulin IgG in
Guinea Pig Serum", Anal. lett ., 1988, 21 , 1019.

目的化合物に応じた最適なタンパク質架橋剤と取扱い方法を一覧で解説しております。
架橋剤ガイド細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ
細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
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化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
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電 極
シ ン チ
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緩衝剤

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190

比色 / 金属
試
薬
水質
分析用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒
その他
機能性
有機材料

二価性試薬細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
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細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
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生化学用
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キレート
比色 / 金属
試
薬
水質
分析 用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒

GMBS

50 mg
100 mgN -(4-Maleimidobutyryloxy)succinimide〔 CAS No. 80307-12-6 〕

同仁品コード：G005￥10,400 347-05041￥17,600 343-05043( 架橋剤 )」
Protocol 「抗体に標識したい:(1) 性状：白色粉末(2) 純度（HPLC)：95.0％以上(3) クロロホルム溶状：試験適合(4) ジメチルホルムアミド溶状：試験適合(5) 融点：124 ～ 132℃
(6) IR スペクトル：試験適合(7) NMR スペクトル：試験適合
溶解例
50 mg/5 ml（クロロホルム）、
50 mg/5 ml( ジメチルホルムアミド )取扱注意 1. 保存方法：冷蔵構造式

性 質 GMBS は二官能性の架橋試薬である。ハプテンと担体タンパク質 (BSA など ) との結合反応や、酵素標識体を調製する際に利用される。構造はマレイミド、ヒドロキシス
クシンイミジルエステル型で、アミノ基に対しては活性エステルであるヒドロキシスクシンイミジルエステル基が反応し、SH 基とはマレイミド基が選択的に反応する。
薬剤検出用の抗血清を得るために、抗がん剤を BSA に結合するためにも GMBS が用いられている。ネオカルチノス
タチン (NCS) を GMBS で β -D- ガラクトシダーゼで標識し、10 － 15 mol レベルの血清中 NCS のモニタリングを可能としている。ドラッグキャリヤーとしてのリポソームに標的指向性を持たせるために、GMBS によるモノクローナル抗体の結合も試みられている。
＊使用方法はプロトコルをご覧下さい。

規格

C12H12N2O6=280.23

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参考文献

G005

で検索

1) S. Yoshitake, Y. Yamada, E. Ishikawa and Rene Masseyeff, "Conjugation of Glucose Oxidase from Aspergillus Niger and Rabbit Antibodies Using N -Hydroxysuccinimide Ester of N -(4-Carboxycyclohexylmethyl)-Maleimide", Eur. J. Biochem ., 1979, 101 , 395.
2) H. Tanimori, T. Kitagawa, T. Tsunoda and R. Tsuchiya, "Enzyme Immunoassay of Neocarzinostain Using β -Galactosidase as Label", J.
Pharm. Dyn ., 1981, 4 , 812.
3) K. Fujiwara, M. Yasuno and T. Kitagawa, "Novel Preparation Method of Immunogen for Hydrophobic Hapten, Enzyme Immunoassay
for Daunomycin and Adriamycin", J. Immunol. Methods , 1981, 45 , 195.
4) T. Miura, H. Kouno and T. Kitagawa, "Detection of Residual Penicillin in Milk by Sensitive Enzyme Immunoassay", J. Pharm. Dyn .,1981, 4 , 706.
5) S. Yoshitake, M. Imagawa, E. Ishikawa, Y. Niitsu, I. Urushizaki, M. Nishiura, R. Kanazawa and H. Ogawa, "Mild and Efficient Conjugation of Rabbit Fab' and Horseradish Peroxidase Using a Maleimide Compound and Its Use for Enzyme Immunoassay", J. Biochem .,1982, 92 , 1413.
6) T. Kitagawa, H. Tanimori, K. Yoshida, H. Asada, T. Miura and K. Fujiwara, "Studies on Viomycin. XV. Comparative Study on the Specificities of Two Anti-viomycin Antisera by Enzyme Immunoassay", Chem. Pharm. Bull ., 1982, 30 , 2487.
7) T. Kitagawa, T. Kawasaki and H. Munechika, "Enzyme Immunoassay of Blasticidin S with High Sensitivity:A New and Convenient
Method for Preparation of Immunogenic(Hapten-Protein) Conjugates", J. Biochem ., 1982, 92 , 585.
8) 北川常廣 , " 酵素免疫測定法の開発と応用 ", 臨床病理 , 1982, 30 , 377.
9) 北川常廣 , " 選択的な蛋白の修飾法と応用 ", ファルマシア , 1983, 19 , 781.
10) 北川常廣 , " 蛋白質の選択的な化学修飾法における最近の進歩 ", 有機合成化学 , 1984, 42 , 283.
11) J. Sunamoto, T. Sato, M. Hirota, K. Fukushima, K. Hiratani and K. Hara, "A Newly Developed Immunoliposome - an Egg Phosphatidylcholine Liposome Coated with Pullulan Bearing Both a Cholesterol Moiety and an IgMs Fragment", Biochim. Biophys. Acta , 1987,
898 , 323.
12) K. Fujiwara, N. Matsumoto, S. Yagisawa, H. Tanimori, T. Kitagawa, M. Hirota, K. Hiratani, K. Fukushima, A. Tomonaga, K. Hara and K.
Yamamoto, "Sandwich Enzyme Immunoassay of Tumor-associated Antigensialosylated Lewis Using β -D-Galactosidasecoupled to a
Monoclonal Antibody of IgM Isotype", J. Immunol. Methods , 1988, 112 , 77.

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架橋剤ガイド

同仁 検索

その他
機能性
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二価性試薬

HMCS

50 mg

N -(8-Maleimidocapryloxy)succinimide〔 CAS No. 87981-03-1 〕

同仁品コード：H257￥18,600 342-06191( 架橋剤 )」
Protocol 「抗体に標識したい:(1) 性状：白色粉末又は結晶性粉末(2) 純度 (HPLC)：90.0％以上(3) IR スペクトル：試験適合(4) NMR スペクトル：試験適合
溶解例
20 mg/ml（アセトニトリル）
取扱注意 1. 保存方法：冷蔵

規格

構造式

C16H20N2O6=336.34

KMUS

50 mg

N -(11-Maleimidoundecanoyloxy)succinimide〔 CAS No. 87981-04-2 〕

同仁品コード：K214￥18,600 345-06201( 架橋剤 )」
Protocol 「抗体に標識したい:(1) 性状：白色粉末又は結晶性粉末(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上(3) IR スペクトル：試験適合(4) NMR スペクトル：試験適合
溶解例
20 mg/ml( アセトニトリル )、20 mg/3 ml( メチルアルコール )取扱注意 1. 保存方法：冷蔵構造式

性 質 アミノ基と SH 基との架橋反応が可能な異反応性
二価性試薬である。構造はマレイミド基と N - ヒドロキシス
クシンイミド活性エステルを分子の両端にもち、アミノ基に対しては活性エステルが反応し SH 基とはマレイミド基が選択的に反応する。酵素標識体の調製や単純ハプテンを担体タンパク質に結合させる時に有用である。

規格

C19H26N2O6=378.42

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H257/K214

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キレート
比色 / 金属
試
薬
水質
分析用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒

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架橋剤ガイド細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ
細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
イオン
電 極
シ ン チ
レーター
生化学用
緩衝剤

同仁 検索

その他
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二価性試薬細 胞
増殖 / 毒性
酸化
N -(6-Maleimidocaproyloxy)sulfosuccinimide, sodium salt
ストレス 〔 CAS No. 103848-61-9(free acid) 〕
分 子( 架橋剤 )」
Protocol 「抗体に標識したい:
生物学(1) 性状：白色～微黄桃色粉末
規格
細 胞 内(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上
蛍光プローブ(3) 水溶状：試験適合
細胞(4) IR スペクトル：試験適合(5) NMR スペクトル：試験適合
染色
溶解例
20 mg/ml（水）細菌研究用
取扱注意 1. 保存方法：冷蔵
試
薬
膜タン
パク質
ラベル N -(4-Maleimidobutyryloxy)sulfosuccinimide, sodium salt
〔 CAS No. 185332-92-7 〕
化 剤( 架橋剤 )」
Protocol 「抗体に標識したい:
二価性(1) 性状：白色～微黄桃色粉末
規格
試 薬(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上
酸化(3) 水溶状：試験適合(4) IR スペクトル：試験適合
還元(5) NMR スペクトル：試験適合
イオン
溶解例
20 mg/ml（水）電 極
取扱注意 1. 保存方法：冷蔵
シ ン チ
レーター
生化学用
緩 衝 剤 N -(8-Maleimidocapryloxy)sulfosuccinimide, sodium salt

Sulfo EMCS

50 mg

構造式

C14H15N2NaO9S=410.33

Sulfo GMBS

50 mg

比色 / 金属
試
薬
水質
分析 用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒
その他
機能性
有機材料

同仁品コード：S025￥32,600 347-06021

構造式

C12H11N2NaO9S=382.28

Sulfo HMCS

キレート

同仁品コード：S024￥32,600 340-06011

50 mg

同仁品コード：S026￥34,600 341-06041〔 CAS No. 211236-35-0 〕( 架橋剤 )」
Protocol 「抗体に標識したい:(1) 性状：白色～微黄桃色粉末(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上(3) 水溶状：試験適合(4) IR スペクトル：試験適合
溶解例
20 mg/ml（水）取扱注意 1. 保存方法：冷蔵

規格

構造式

C16H19N2NaO9S=438.39

Sulfo-KMUS

50 mg

N -(11-Maleimidoundecanoyloxy)sulfosuccinimide, sodium salt
〔 CAS No. 211236-68-9 〕

同仁品コード：S250￥34,600 342-06211( 架橋剤 )」
Protocol 「抗体に標識したい:(1) 性状：白色～微黄桃色粉末(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上(3) 水溶状：試験適合(4) IR スペクトル：試験適合(5) NMR スペクトル：試験適合
溶解例
1 mg/ml（水）取扱注意 1. 保存方法：冷蔵

規格

参考文献

構造式

C19H25N2NaO9S=480.47
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S024/S025/S026/S250

で検索

1) J. V. Staros, "N -Hydroxysulfosuccinimide Active Esters:Bis(N -hydroxysulfosuccinimide) Esters of Two Dicarboxylic acids Are Hydrophilic, Membrane-impermeant, Protein Cross-linkers", Biochemistry , 1982, 21 , 3950.
2) P. S. R. Anjaneyulu and James V. Staros, "Reactions of N -Hydroxysulfosuccinimide Active Esters", Int. J. Peptide Protein Res ., 1987,
30 , 117.
3) Y. Fukami, K. Sato, K. Ikeda, K. Kamisango, K. Koizumi and T. Matsuno, "Evidence for Autoinhibitory Regulation of the c-src Gene
Product a Possible Interaction Between the Src Homology 2 Domain and Autophosphorylation Site", J. Biol. Chem ., 1993, 268 , 1132.

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架橋剤ガイド

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二価性試薬Sulfo-SMCC

N -[(4-Maleimidomethyl)cyclohexylcarbonyloxy]sulfosuccinimide, sodium salt
〔 CAS No. 92921-24-9 〕

50 mg

同仁品コード：S330￥27,600 349-09141(1) 性状：白色～殆ど白色粉末(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上(3) 水溶状：試験適合
溶解例
10 mg/ml（水）取扱注意 1. 保存方法：冷凍 2. 吸湿注意

構造式

性 質 Sulfo-SMCC は、分子の両端に反応性が異なる N ヒドロキシスクシンイミド活性エステルとマレイミド基を導入した二価性試薬である。マレイミド基は SH 基、N - ヒ
ドロキシスクシンイミド活性エステルはアミノ基と特異的に反応する。活性エステル基は、中性以上の pH でアミノ基と効率よく反応し、アミノ基と安定なアミド結合を形成する。一方、マレイミド基は、アルカリ性条件下では、中性に比べてアミノ基とも反応性するため、pH6-7 の条件下でチオール基に対して選択的に反応することができる。また、リンカー部位にシクロヘキサン構造を有する Sulfo-SMCC
は、リンカー部位に芳香環を有する同種の架橋剤と比較して、マレイミド基の安定性が増すという特徴を持つ。更に、スルホン酸基を有する活性エステル基が導入されているため、試薬を溶解するための DMF や DMSO など有機溶媒を用いることなく標識反応を行うことが可能である。

規格

C16H17N2NaO9S=436.37

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参考文献

S330

で検索

1) 酵素免疫測定法（第 2 版）, 石川榮治 , 河合忠 , 宮井潔 , 医学書院 , 1978
2) S. Hashida, M. Imagawa, S. Inoue, K.-H. Ruan and E. Ishikawa, "More Useful Maleimide Compounds for the Conjugation of Fab' toHorseradish Peroxidase Through Thiol Groups in the Hinge", J. Appl. Biochem ., 1984, 6 , 56.
3) O. Prat, E. Lopez and G. Mathis, "Europium(III) Cryptate: A Fluorescent Label for the Detection of DNA Hybrids on Solid Support",
Anal. Biochem ., 1991, 195 (2), 283.
4) O. Siiman, A. Burshteyn, J. A. Maples and J. K. Whitesell, "Tris(3-mercaptopropyl)-N -glycylaminomethane as a New Linker to Bridge
Antibody with Metal Particles for Biological Cell Separations", Bioconjugate Chem ., 2000, 11 (4), 549.
5) T. P. Thomas, A. K. Patri, A. Myc, M. T. Myaing, J. Y. Ye, T. B. Norris and J. R. Baker Jr., "In Vitro Targeting of Synthesized Antibodyconjugated Dendrimer Nanoparticles", Biomacromolecules , 2004, 5 (6), 2269.
6) V. Gauvreau, G. Laroche, "Micropattern Printing of Adhesion, Spreading, and Migration Peptides on Poly(tetrafluoroethylene) Films to
Promote Endothelialization", Bioconjugate Chem ., 2005, 16 (5), 1088.

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架橋剤ガイド細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
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薬
膜タン
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比色 / 金属
試
薬
水質
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二価性試薬細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
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細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
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化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
イオン
電 極
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生化学用
緩衝剤
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比色 / 金属
試
薬
水質
分析 用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒
その他
機能性
有機材料

9-2 Homo-bifunctional Reagents
BS3

50 mg

Bis(sulfosuccinimidyl)suberate, disodium salt
〔 CAS No. 82436-77-9(free acid) 〕

同仁品コード：B574￥17,000 348-09111(1) 性状：白色～殆ど白色粉末(2) 純度 (HPLC)：93.0％ 以上(3) 水溶状：試験適合
溶解例
10 mg/ml( 水）取扱注意 1. 保存方法：冷蔵 2. 吸湿注意

構造式

性 質 アミノ基同士の架橋反応が可能な試薬である。N ヒドロキシスクシンイミド活性エステルを分子の両端に有しており、アミノ基に対して選択的に反応するため、酵素標識体の調製や単純ハプテンを担体タンパク質に結合することが可能である。BS3 はリンカー部分にアルキル鎖を有する化学構造をとる。一方、DSP および DTSSP は、リンカー

部位にジスルフィド基が導入されていることで還元剤により容易に還元されリンカー部位の切断が可能である。また、
BS3 および DTSSP は、スルホン酸基を有する活性エステ
ル基が導入されているため、試薬を溶解するための DMF やDMSO など有機溶媒を用いることなく標識反応を行うことが可能である。

規格

C16H18N2Na2O14S2=572.43

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参考文献

B574

で検索

1) J. V. Staros, "N -Hydroxysulfosuccinimide Active Ester: Bis(N -hydroxysulfosuccinimide) Ester of Two Dicarboxylic Acids Are Hydrophilic, Membrane-impermeant, Protein Cross-Linkers", Biochemistry , 1982, 21 , 3950.
2) J. M. Salhany, R. L. Sloan and K. A. Cordes, "In Situ Cross-linking of Human Erythrocyte Band 3 by Bis(sulfosuccinimidyl)suberate", J.
Biol. Chem ., 1990, 265 (29), 17688.
3) J. E. Gestwicki, C. W. Cairo, L. E. Strong, K. A. Oetjen and L. L. Kiessling, "Influencing Receptor-Ligand Binding Mechanisms with
Multivalent Ligand Architecture", J. Am. Chem. Soc ., 2002, 124 , 14922.
4) S. S. Mark, N. Sandhyarani, C. Zhu, C. Campagnolo and C. A. Batt, "Dendrimer-functionalized Self-assembled Monolayers as a Surface Plasmon Resonance Sensor Surface", Langmuir , 2004, 20 , 6808.

DSP

1g

Dithiobis(succinimidyl propionate)〔 CAS No. 57757-57-0 〕
規格
溶解例
取扱注意

(1) 性状：白色～殆ど白色粉末(2) 純度 (HPLC)：95.0％ 以上(3) ジメチルホルムアミド溶状：試験適合
10 mg/ml（ジメチルスルホキシド）,
10 mg/ml（ジメチルホルムアミド）
1. 保存方法：冷蔵 2. 吸湿注意性 質 アミノ基同士の架橋反応が可能な試薬である。N ヒドロキシスクシンイミド活性エステルを分子の両端に有しており、アミノ基に対して選択的に反応するため、酵素標
識体の調製や単純ハプテンを担体タンパク質に結合することが可能である。BS3 はリンカー部分にアルキル鎖を有す
る化学構造をとる。一方、DSP および DTSSP は、リンカー

同仁品コード：D629￥30,400 345-09121

構造式

C14H16N2O8S2=404.42
部位にジスルフィド基が導入されていることで還元剤により容易に還元されリンカー部位の切断が可能である。また、
BS3 および DTSSP は、スルホン酸基を有する活性エステ
ル基が導入されているため、試薬を溶解するための DMF やDMSO など有機溶媒を用いることなく標識反応を行うことが可能である。
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参考文献

D629

で検索

1) P. F. Pilch and M. P. Czech, "Interaction of Cross-linking Agents with the Insulin Effector System of Isolated Fat Cells", J. Biol. Chem .,1979, 254 (9), 3375.
2) M. A. Gosselin, W. Guo and R. J. Lee, "Efficient Gene Transfer Using Reversibly Cross-linked Low Molecular Weight Polyethylenimine", Bioconjugate Chem ., 2001, 12 , 989.
3) M. A. Gosselin, W. Guo and R. J. Lee, "Incorporation of Reversibly Cross-linked Polyplexes into LPDII Vectors for Gene Delivery", Bioconjugate Chem ., 2002, 13 , 1044.
4) P.-Y. Zeng, C. R. Vakoc, Z.-C. Chen, G. A. Blobel and S. L. Berger, "In vivo dual Cross-linking for Identification of Indirect DNA-Associated Proteins by Chromatin Immunoprecipitation", BioTechniques , 2006, 41 (6), 694.
5) S. Santra, C. Kaittanis, O. J. Santiesteban and J. M. Perez, "Cell-Specific, Activatable, and Theranostic Prodrug for Dual-Targeted
Cancer Imaging and Therapy", J. Am. Chem. Soc ., 2011, 133 , 16680.

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二価性試薬

DTSSP

50 mg

Dithiobis(sulfosuccinimidyl propionate), disodium salt
〔 CAS No. 81069-02-5(free acid) 〕

同仁品コード：D630￥18,000 342-09131(1) 性状：白色～殆ど白色粉末(2) 純度 (HPLC)：80.0％ 以上(3) 水溶状：試験適合
溶解例
10 mg/ml( 水）取扱注意 1. 保存方法：冷蔵 2. 吸湿注意

構造式

性 質 アミノ基同士の架橋反応が可能な試薬である。N ヒドロキシスクシンイミド活性エステルを分子の両端に有しており、アミノ基に対して選択的に反応するため、酵素標
識体の調製や単純ハプテンを担体タンパク質に結合することが可能である。BS3 はリンカー部分にアルキル鎖を有す
る化学構造をとる。一方、DSP および DTSSP は、リンカー

部位にジスルフィド基が導入されていることで還元剤により容易に還元されリンカー部位の切断が可能である。また、
BS3 および DTSSP は、スルホン酸基を有する活性エステ
ル基が導入されているため、試薬を溶解するための DMF やDMSO など有機溶媒を用いることなく標識反応を行うことが可能である。

規格

C14H14N2Na2O14S4=608.51

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参考文献

D630

で検索

1) J. V. Staros, "N -Hydroxysulfosuccinimide Active Ester: Bis(N -hydroxysulfosuccinimide) Ester of Two Dicarboxylic Acids Are Hydrophilic, Membrane-impermeant, Protein Cross-Linkers", Biochemistry , 1982, 21 , 3950.
2) S. M. Jung and M. Moroi, "Crosslinking of Platelet Glycoprotein Ib by N -Succinimidyl(4-azidophenyldithio)propionate and 3,3'-Dithiobis(sulfosuccinimidyl propionate)", Biochim. Biophys. Acta , 1983, 761 , 152.
3) C. L. Swaim, J. B. Smith and D. L. Smith, "Unexpected Products From the Reaction of the Synthetic Cross-linker 3,3'-Dithiobis(sulfosu
ccinimidyl propionate), DTSSP with Peptides", J. Am. Soc. Mass Spectrom ., 2004, 15 , 736.
4) P. Kao, S. Doerner, T. Schneider, D. Allara, P. Hauptmann and S. Tadigadapa, "A Micromachined Quartz Resonator Array for Biosensing Applications", J. Microekectromech. Syst ., 2009, 18 (3), 522.
5) G. J. King, A. Jones, B. Kobe, T. Huber, D. Mouradov, D. A. Hume and I. L. Ross, "Identification of Disulfide-containing Chemical
Cross-links in Proteins Using MALDI-TOF/TOF-Mass Spectrometry", Anal. Chem ., 2008, 80 , 5036.

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細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ
細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
イオン
電 極
シ ン チ
レーター
生化学用
緩衝剤
キレート
比色 / 金属
試
薬
水質
分析用
溶媒
抽出
高純度
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その他
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二価性試薬細 胞
増殖 / 毒性
酸化
Dithiobis(succinimidyl undecanoate)
ストレス 〔 CAS No. 147072-47-7 〕
分 子(1) 性状：白色粉末
規格生物学(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上
細 胞 内(3) NMR スペクトル：試験適合
溶解例10 mmol/l 以上（Chloroform, Dichloromethane,
蛍光プローブ
Tetrahydrofuran, Acetonitrile, Ethyl acetate,細胞
Dimethyl sulfoxide, Dimethyl formamide）
染色取扱注意 1. 保存方法：冷蔵 2. 窒素置換 , 吸湿注意
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質 Dithiobis(succinimidyl octanoate)〔 CAS No. 1083285-39-5 〕
ラベル化 剤(1) 性状：白色粉末
規格(2) 純度 (HPLC)：90.0% 以上
二価性(3) NMR スペクトル：試験適合
試 薬
溶解例
10 mmol/l 以上（Chloroform, Dichloromethane,
Tetrahydrofuran, Acetonitrile, Ethyl acetate,
酸化Dimethyl sulfoxide, Dimethyl formamide）
還元
取扱注意 1. 保存方法：冷蔵 2. 窒素置換 , 吸湿注意
イオン
電 極
シ ン チ
レーター Dithiobis(succinimidyl hexanoate)
生化学用 〔 CAS No. 1083285-37-3 〕
緩衝剤(1) 性状：白色粉末
規格

Dithiobis(succinimidyl undecanoate)

同仁品コード：D537
10 mg ￥15,200
50 mg ￥46,200

構造式

C30H48N2O8S2=628.84

Dithiobis(succinimidyl octanoate)

同仁品コード：D538
10 mg ￥15,200
50 mg   request
構造式

C24H36N2O8S2=544.68

Dithiobis(succinimidyl hexanoate)

キレート
比色 / 金属
試
薬
水質
分析 用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒

(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上(3) NMR スペクトル：試験適合
溶解例10 mmol/l 以上（Chloroform, Dichloromethane,
Tetrahydrofuran, Acetonitrile, Ethyl acetate,
Dimethyl sulfoxide, Dimethyl formamide）
取扱注意 1. 保存方法：冷蔵 2. 窒素置換 , 吸湿注意

同仁品コード：D539
10 mg ￥15,200
50 mg   request
構造式

C20H28N2O8S2=488.58
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D537/D538/D539

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その他
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二価性試薬9-3 その他
BABE

同仁品コード：B437
Request1-( p -Bromoacetamidobenzyl)ethylenediamine-N ,N ,N ',N '-tetraacetic acid
〔 CAS No. 84256-91-7 〕
溶解例
取扱注意

緩衝溶液、DMSO に可溶
1. 保存方法：冷凍 2. 吸湿注意

構造式

C19H24BrN3O9=518.31

FeBABE

同仁品コード：F279
1 mg ￥15,600

1-( p -Bromoacetamidobenzyl)ethylenediamine-N ,N ,N ',N '-tetraacetic acid, iron(III)〔 CAS No. 186136-50-5 〕(1) 性状：黄褐色粉末(2) 純度 (HPLC)：95.0％ 以上(3) 水溶状：試験適合
溶解例
緩衝溶液、DMSO に可溶
取扱注意 1. 安衛法 2. 保存方法：冷凍 3. 吸湿注意

規格

構造式

C19H21BrFeN3O9=571.13
性 質 EDTA は Fe イオンと結合すると、還元条件下でラジカルを発生し生体高分子を切断する性質をもっている。
DNA 結合タンパク質の DNA 上の結合部位を、FeEDTA による切断抵抗性領域として同定する「DNA フットプリンティング法」、タンパク質複合体中で表面に露出した部分を切断
感受性領域として調べる「プロテインフットプリンティング
法」は、生命科学では広く利用されている。FeEDTA のこの反応性を利用し、タンパク質の特定部位に FeEDTA を結合し、その周辺の接触する核酸やタンパク質を同定し、また接触点を同定する目的で、BABE が生命科学研究に広く利用されるようになってきた。
BABE は、当初、金属を生体物質に結合させる架橋試薬として開発され、EDTA 部分に放射性 111In3+ を結合させ、抗腫瘍性抗生物質であるブレオマイシン A2 の末端に結合し、その集積でマウスの腫瘍部位を同定するなどの、薬理学)的・臨床的な利用が計られてきた 1 。Fe イオンを結合した
BABE (FeBABE) がタンパク質のペプチド結合と核酸ホス
ホジエステル結合の両方を選択的に、しかしアミノ酸配列・ヌクレオチド配列に関係なく、非特異的に切断する活性が注)
目され 2, 3 、その有用性が認められたことで効率的合成法が)開発された 4 。
タンパク質結合性の EDTA 化合物は一般に Meares 試薬と呼ばれる。BABE は bromoacetamido 基によって、タン
パク質のシステイン残基の SH 基と温和な条件で反応する。
タンパク質の天然のシステイン残基あるいは遺伝子工学的手法によって導入したシステイン残基に FeBABE を結合し、アスコルビン酸と過酸化水素を加えると活性ラジカルが発生し、ラジカル飛程距離内の核酸やタンパク質の主鎖の切断が起きる。この切断反応は秒単位で進行するので、反応は 10 秒から 10 分程度の短時間で良い。FeBABE の分子構造から推定して、タンパク質システイン残基から 1.2 nm の位置に Fe イオンが配置されるので、開裂するのはその周辺に限られる。切断個所をヌクレオチド配列やアミノ酸配列から解析することで、接触していた相手物質とその分子上の接触点を同定することが出来る。従って、タンパク質非結合型の切断試薬では得られない、タンパク質の三次元構造に関する情報までも得ることができる。核酸の切断に関してはヒド
ロキシルラジカルを介した酸化的な反応によるものと考え)られているが 5 、ペプチド結合切断の機構としてはそれ以上に、鉄に配位したペルオキソ中間体によるカルボニル炭素の)求核攻撃説が提唱されている 3 。
FeBABE の利点としては、1）ペプチドやタンパク質へ
温和な条件で結合できること、2）温和な条件で開裂反応を行えること、3）開裂反応が速く、高収率であること、4）
核酸やタンパク質の主鎖が選択的に切断されるが、ヌクレ
オチドやアミノ酸配列に影響されないこと、などが挙げられる。また、タンパク質のリジン残基や末端アミノ基に、2-iminothiolane (2-IT) を 介 在 さ せ る こ と で、FeBABE を)結合する応用法が開発された 6 ことによって、FeBABE の
利用範囲はさらに拡大した。
FeBABE をタンパク質 - タンパク質間相互作用の接点解析に利用した例としては、大腸菌チトクローム bd オキシ)
ダーゼのサブユニット I と II の接点の同定 7 、大腸菌 RNA)
ポリメラーゼのα , β , β ', σサブユニット間の接点の同定 8,9などがある。一方、核酸切断からタンパク質の結合領域を同定した研究としては、大腸菌 RNA ポリメラーゼの遺伝子プ)
ロモーター結合域の同定 10,11 や、リボゾームタンパク質の)rRNA 結合点の同定 12-14 などがある。
このように高分解能の構造情報が得られない複雑なタンパク質集合体のサブユニット内、あるいはサブユニット間、
さらにそれらと相互作用する核酸分子との空間的関係を解明するのに有効であり、今後広く利用されると期待される。

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細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ
細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
イオン
電 極
シ ン チ
レーター
生化学用
緩衝剤
キレート
比色 / 金属
試
薬
水質
分析用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒
その他
機能性
有機材料

二価性試薬細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ
細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
イオン
電 極
シ ン チ
レーター
生化学用
緩衝剤
キレート
比色 / 金属
試
薬
水質
分析 用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒
その他
機能性
有機材料

FeBABE によるペプチド結合の切断機構 3）

参考文献

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B437/F279

で検索

1) L. H. DeRiemer, C. F. Meares, D. A. Goodwin and C. I. Diamanti, "BLEDTA II: Synthesis of a New Tumor-Visualizing Derivative ofCo(III)-bleomycin", J. Labelled Compd. Radiopharm ., 1981, 18 , 1517.
2) T. M. Rana and C. F. Meares, "Specific Cleavage of a Protein by an Attached Iron Chelate", J. Am. Chem. Soc ., 1990, 112 , 2457.
3) T. M. Rana and C. F. Meares, "Transfer of Oxygen from an artificial protease to peptide carbon during proteolysis", Proc. Natl. Acad.
Sci. USA , 1991, 88 , 10578.
4) D. P. Greiner, R. Miyake, J. K. Moran, A. D. Jones, T. Negishi, A. Ishihama and C. F. Meares, "Synthesis of the Protein Cutting Reagent Iron (S )-1-(p -Bromoacetamidobenzyl)ethylebediaminetetraacetate and Conjugation to cysteine Side Chains", Bioconjugate
Chem ., 1997, 8 , 44.
5) E. Platis, M. R. Ermacora and R. O. Fox, "Oxidative Polypeptide Cleavage Mediated by EDTA-Fe Covalently Linked to Cysteine Residue", Biochemistry , 1993, 32 , 12761.
6) S. L. Traviglia, S. A. Datwyler, D. Yan, A. Ishihama and C. F. Meares, "Targeted Protein Footprinting: Where Different Transcription
Factors bind to RNA Polymerase", Biochemistry , 1999, 38 , 4259.
7) J. B. Ghaim, D. P. Greiner, C. F. Meares and R. B. Gennis, "Proximity Mapping the suface of Membrane Protein Using an Artificial Protease: Demonstration That the Quinone-Binding Domain of Subunit I Is near the N -Terminal Region of Subunit II of Cytochrome bd ",Biochemistry , 1995, 34 , 11311.
8) R. Miyake, K. Murakami, J. T. Owens, D. P. Greiner, O. N. Ozoline, A. Ishihama and C. F. Meares, "Dimeric Association of Escherichia
coli RNA Polymerase α subunits, studied by Cleavage of Single-Cysteine α Subunits Conjugated to Iron-(S )-1-(p -(Bromoacetamido)
benzyl)ethylenediaminetetraacetate", Biochemistry , 1998, 37 , 1344.
9) J. T. Owens, R. Miyake, K. Murakami, A. J. Chmura, N. Fujita, A. Ishihama and C. F. Meares, "Mapping the σ 70 subunits contact sites
on Escherichia coli RNA polymerase with a σ 70-conjugated chemical protease", Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 1998, 95 , 6021.
10) J. A. Bown, J. T. Owens, C. F. Meares, N. Fujita, A. Ishihama, S. J. Busby and S. D. Minchin, "Organization of open complexes at
Escherichia coli promoters. Location of promoter DNA sites close to region 2.5 of the σ 70 subunit of RNA polymerase", J. Biol. Chem .,1999, 274 , 2263.
11) F. Colland, N. Fujita, D. Kotlarz, J. A. Bown, C. F. Meares, A. Ishihama and A. Kolb, "Positioning of σ S , the stationary phase σ factor,
in Escherichia coli RNA polymerase-promoter open complexes", EMBO J ., 1999, 18 , 4049.
12) G. M. Heilek, R. Marusak, C. F. Meares and H. F. Noller, "Directed hydroxyl radical probing of 16S rRNA using Fe(II) tethered to ribosomal protein S4", Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 1995, 92 , 1113.
13) G. M. Heilek and H. F. Noller, "Site-directed hydroxyl radical probing of the rRNA neighborhood of ribosomal protein S5", Science ,1996, 272 , 1659.
14) K. R. Lieberman and H. F. Noller, "Ribosomal protein L15 as a probe of 50S ribosomal subunit structure.", J. Mol. Biol ., 1998, 284 ,
1367.

199

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二価性試薬Aminobenzyl-EDTA

1-(4-Aminobenzyl)ethylenediamine-N ,N ,N ',N '-tetraacetic acid
〔 CAS No. 84256-90-6 〕(1) 性状：微黄色～淡橙色粉末(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上(3) IR スペクトル：試験適合
溶解例
2 mg/ml(アセトニトリル：10 mmol/l リン酸 =1：1)
取扱注意 1. 保存方法：冷凍規格

同仁品コード：M029￥37,800 346-05991

25 mg

構造式

C17H23N3O8=397.38
参考文献

1) C. F. Meares and T. G. Wensel, "Metal Chelates as Probes of Biological Systems", Acc. Chem. Res ., 1984, 17 , 202.
2) S. V. Deshpande, R. Subramanian, M. J. McCall, S. J. Denardo, G. L. Denardo and C. F. Meares, "Metabolism of Indium Chelates Attached to Monoclonal Antibody: Minimal Transchelation of Indium form Benzyl-EDTA Chelate in vivo ", J. Nucl. Med ., 1990, 31 , 218.
3) S. Mirzadeh, M. W. Brechbiel, R. W. Atcher and O. A. Gansow, "Radiometal Labeling of Immunoproteins: Covalent Linkage of 2-(4-Isothiocyanatobenzyl)diethylenetriaminepentaacetic acid Ligands to Immunoglobulin", Bioconjugate Chem ., 1990, 1 , 59.

Isothiocyanobenzyl-EDTA

1-(4-Isothiocyanatobenzyl)ethylenediamine-N ,N ,N ',N '-tetraacetic acid
〔 CAS No. 105394-74-9 〕(1) 性状：白色～微黄褐色粉末(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上(3) IR スペクトル：試験適合
溶解例
2 mg/ml(アセトニトリル：10 mmol/l リン酸 =1：1)
取扱注意 1. 保存方法：冷凍 2. 吸湿注意

規格

同仁品コード：M030￥44,600 343-06001

10 mg

構造式

C18H21N3O8S=439.44

H
N

NCS
HOOC
HOOC

N

H2N
N

COOH
COOH

Isothiocyanobenzyl-EDTA
参考文献

キレート

S

HOOC
HOOC

H
N

N

N

COOH
COOH

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細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ
細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
イオン
電 極
シ ン チ
レーター
生化学用
緩衝剤

M029/M030

で検索

1) C. F. Meares and T. G. Wensel, "Metal Chelates as Probes of Biological Systems", Acc. Chem. Res ., 1984, 17 , 202.
2) S. V. Deshpande, R. Subramanian, M. J. McCall, S. J. Denardo, G. L. Denardo and C. F. Meares, "Metabolism of Indium Chelates Attached to Monoclonal Antibody: Minimal Transchelation of Indium form Benzyl-EDTA Chelate in vivo ", J. Nucl. Med ., 1990, 31 , 218.
3) S. Mirzadeh, M. W. Brechbiel, R. W. Atcher and O. A. Gansow, "Radiometal Labeling of Immunoproteins: Covalent Linkage of 2-(4-Isothiocyanatobenzyl)diethylenetriaminepentaacetic acid Ligands to Immunoglobulin", Bioconjugate Chem ., 1990, 1 , 59.

比色 / 金属
試
薬
水質
分析用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒
その他
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有機材料

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二価性試薬細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ
細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
イオン
電 極
シ ン チ
レーター
生化学用
緩衝剤

AB-NTA free acid

100 mgN -(5-Amino-1-carboxypentyl)iminodiacetic acid
〔 CAS No. 129179-17-5 〕
規格

溶解例(1) 性状：白色～淡黄白色粉末(2) 純度 (HPLC)：97.0％ 以上(3) 水溶状：試験適合(4) IR スペクトル：試験適合(5) NMR スペクトル：試験適合
10 mg/ml（水）構造式

C10H18N2O6=262.26

性 質 タンパク質を固体表面に並べるための “His-tag”と 呼 ば れ る 技 術 が 注 目 さ れ て い る。AB-NTA は、1987 年
Hochuli らによって報告されたもので、この “His-tag” 技術にとって欠かせない 基本的なツールになっている。この技術は、分子生物学の分野で（遺伝子組換え技術によって発現させた）人工タンパク質の精製に威力を発揮しているが、現在では、ガラス基板や金電極といった固体表面に、タンパ
ク質を一定の配向性で結合させる目的にも用いられている。
基本原理を次のスキームに示している。“His-tag” 技術により、複雑な高次構造を持つタンパク質を、その活性を損なわずに固体表面に化学的に結合させることが可能になった。
まず、AB-NTA を官能基（通常、活性エステルなどの反応性基）で修飾した固体表面と反応させ固定化する。次いでNi(II) を加え錯形成させる。ここで、Ni(II) の配位座は ABNTA によって完全には満たされず、空いた部分には水が配位している。この AB-NTA の Ni(II) 錯体に６個のヒスチジ
ンを末端に発現させた融合タンパク質を加えると、ヒスチジ
ン部分が Ni(II) に配位するため、特異的かつ一定方向に固体表面に結合されることになる（この結合は強固だが、フリーのヒスチジンやイミダゾールによって可逆的に解離する）。
画像は、この試薬を用いて His6-green fluorescent protein（His6-GFP）をポリスチレンビーズに結合させ、蛍光顕微鏡で観察した例である。 さらにこの “His-tag” 技術の一般的応用として、固体表面に生体機能を再現させることが可能であり、実際、バイオセンサーへの応用も盛んに研究されている。特に、生体分子の検出や相互作用の解析に有用な表面プラズモン共鳴（SPR）では、キーテクノロジーとなりつつある。また、タンパク質の構造解析法としても注目されている。これは、基板上にタンパク質単分子膜をつくり
蛍光Ｘ線干渉を測定するもので、結晶化しないタンパク質でも生理的条件下で、その構造についての情報を得ることができる。さらに、野地らは、ATP 合成酵素の F1 部分を Ni(II)を介してガラス基板上に固定し、ATP の加水分解に伴ってγサブユニットが回転する様子を捉えることに成功し、従来から提唱されてきた回転触媒説を実証している。

(1) AB-NTA

キレート

HOOC

N
COOH

COOH

比色 / 金属
試
薬
水質
分析 用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒

protein

COOH
N

同仁品コード：A459￥13,400 340-08071

HOOC

N

O
COOH

O
Ni

O
O

OH2
Ni
N

O

O

N
O

2+

N

protein

OH2

O
N
H HN

O
O

Ni
N

N

N
O
O

N

H 2N

+

HN

HN

HN

X

X

X

X

solid surface

solid surface

solid surface

solid surface

その他
機能性
有機材料

参考文献

最新の情報は web へ 同仁化学

A459

で検索

1) E. Hochuli, H. Doeli and A. Schacher, "New Metal Chelate Adsorbent Selective for Proteins and Peptides Containing Neighbouring
Histidine Residues", J. Chromatogr ., 1987, 411 , 177.
2) E. Hochuli, "Large-scale Chromatography of Recombinant Proteins", J. Chromatogr ., 1988, 444 , 293.
3) 河田聡 , 高木俊夫 , " 表面プラズモン共鳴センサとは ", 蛋白質、核酸、酵素 , 1992, 37 (15), 3005.
4) 笠井献一 , " 表面プラズモン共鳴 (SPR) を利用したバイオセンサー ", 蛋白質、核酸、酵素 , 1992, 37 (15), 2977.
5) Y. C. Sasaki, Y. Suzuki and T. Ishibashi, "Fluorescent X-ray Interference from a Protein Monolayer", Science , 1994, 263 , 62.
6) G. B. Sigal, C. Bamdad, A. Barberis, J. Strominger and G. M. Whitesides, "A Self-assembled Monolayer for the Binding and Study ofHistidine-tagged Proteins by Surface Plasmon Resonance”, Anal. Chem ., 1996, 68 , 490.
7) E. L. Schmid, T. A. Keller, Z. Dienes and H. Vogel, "Reversible Oriented Surface Immobilization of Functional Proteins on Oxide Surface", Anal. Chem ., 1997, 69 , 1979.
8) 橋本せつ子 , " 表面プラズモン共鳴現象を利用する生体分子相互作用の解析 ", ぶんせき , 1997, 362 .
9) R. Yasuda, H. Noji, K. Kinosita and M. Yoshida, "F1-ATPase is a Highly Efficient Molecular Motor that Rotates with Discrete 120 °Steps", Cell , 1998, 93 , 1117.

201

技術的な内容に関するお問い合わせ先：カスタマーサポート Free Fax:0120-021557 Free Dial:0120-489548
在庫や価格 (記載容量以外もしくは特注品) に関するお問い合わせ先：マーケティング部 Tel:096-286-1515 Fax:096-286-1525

二価性試薬Maleimido-C3-NTA

同仁品コード：M035
10 mg ￥17,600

N -[5-(3'-Maleimidopropylamido)-1-carboxypentyl]iminodiacetic acid, disodium salt, monohydrate〔 CAS No. 869843-95-8 〕(1) 性状：白色～淡黄白色粉末(2) 純度 (HPLC)：97.0％ 以上(3) 水溶状：試験適合(4) IR スペクトル：試験適合(5) NMR スペクトル：試験適合
溶解例
10 mg/ml（水）取扱注意 1. 保存方法：冷蔵 2. 吸湿注意

規格

構造式

C18H23N3Na2O9・H2O=489.38

性 質 タンパク質を固体表面に並べるための “His-tag”と呼ばれる技術が注目されている。AB-NTA(Code:A459)
は、1987 年 Hochuli らによって報告されたもので、この“His-tag” 技術にとって欠かせない基本的なツールになっている。この技術は、分子生物学の分野で（遺伝子組換え技術
によって発現させた）人工タンパク質の精製に威力を発揮しているが、現在では、ガラス基板や金電極といった固体表面に、タンパク質を一定の配向性で結合させる目的にも用いられている。
基本原理を次のスキームに示している。“His-tag” 技術により、複雑な高次構造を持つタンパク質を、その活性を損なわずに固体表面に化学的に結合させることが可能になった。
まず、Maleimido-C3-NTA を官能基（チオールなど）で修飾した固体表面と反応させ固定化する。次いで Ni(II) を加え錯形成させる。ここで、Ni(II) の配位座は Maleimido-C3NTA によって完全には満たされず、空いた部分には水が配位している。この Maleimido-C3-NTA の Ni(II) 錯体に 6 個のヒスチジンを末端に発現させた融合タンパク質を加えると、ヒスチジン部分が Ni(II) に配位するため、特異的かつ一定方向に固体表面に結合されることになる（この結合は強固だが、フリーのヒスチジンやイミダゾールによって可逆的に解離する）。

Maleimido-C3-NTA

HOOC

N

COOH
N

COOH

HOOC

COOH
N

O

N

HN

O

O

OH2
Ni

O

N

O

O

N
O

N

protein

OH2

2+

O

O
N
H HN

N

N

Ni

O

N

O

N

キレート
HN

HN

O

比色 / 金属
試
薬
水質
分析用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒

O

O

O
O

N

+

参考文献

O

O
COOH
Ni

HN

O

protein

O

O

N

O

細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ
細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
イオン
電 極
シ ン チ
レーター
生化学用
緩衝剤

N

O

O

SH

S

S

S

solid surface

solid surface

solid surface

solid surface
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M035

で検索

1) E. Hochuli, H. Doeli and A. Schacher, "New Metal Chelate Adsorbent Selective for Proteins and Peptides Containing Neighbouring
Histidine Residues", J. Chromatogr ., 1987, 411 , 177.
2) E. Hochuli, "Large-Scale Chromatography of Recombinant Proteins", J. Chromatogr ., 1988, 444 , 293.
3) 河田聡 , 高木俊夫 , " 表面プラズモン共鳴センサとは ", 蛋白質、核酸、酵素 , 1992, 37 (15), 3005.
4) 笠井献一 , " 表面プラズモン共鳴 (SPR) を利用したバイオセンサー ", 蛋白質、核酸、酵素 , 1992, 37 (15), 2977.
5) Y. C. Sasaki, Y. Suzuki and T. Ishibashi, "Fluorescent X-ray Interference from a Protein Monolayer", Science , 1994, 263 , 62.
6) G. B. Sigal, C. Bamdad, A. Barberis, J. Strominger and G. M. Whitesides, "A Self-Assembled Monolayer for The Binding and Study ofHistidine-Tagged Proteins by Surface Plasmon Resonance, Anal. Chem ., 1996, 68 , 490.
7) E. L. Schmid, T. A. Keller, Z. Dienes and H. Vogel, "Reversible Oriented Surface Immobilization of Functional Proteins on Oxide Surface", Anal. Chem ., 1997, 69 , 1979.
8) 橋本せつ子 , " 表面プラズモン共鳴現象を利用する生体分子相互作用の解析 ", ぶんせき , 1997, 362 .

＊表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
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202

その他
機能性
有機材料

二価性試薬細 胞
増殖 / 毒性
同仁品コード：I279
酸化
10 mg ￥19,000
N -[5-(4-Isothiocyanatobenzyl)amido-1-carboxypentyl]iminodiacetic acidストレス分 子(1) 性状：白色～微黄色粉末
規格
構造式(2) 純度 (HPLC)：90.0% 以上
生物学(3) IR スペクトル：試験適合
細 胞 内(4) NMR スペクトル：試験適合
蛍光プローブ
溶解例
DMSO に可溶
取扱注意 1. 保存方法：冷凍細胞
C19H23N3O7S=437.47
染色
細菌研究用性 質 Isothiocyanobenzyl-NTA（ITC-Bz-NTA） は、 生
生体分子、固体表面に金属イオンを導入することが可能であ
理的条件下においてアミン化合物、生体分子、固体表面などる。これら金属キレート化合物は、金属イオンと相互作用す試
薬の様々な物質にキレート部位を導入できる。NTA は重金属
る特定の物質の検出や分離に用いることができる。
膜タンと安定なキレートを形成するため、NTA と結合した化合物、
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
同仁品コード：D550
2イオン
10 mg ￥21,400
3,3'-Dithiobis[N -(5-amino-5-carboxypentyl)propionamide-N ',N '-diacetic acid] dihydrochloride
50 mg ￥85,400
電 極〔 CAS No. 1097730-65-8 〕
シ ン チ(1) 性状：白色～微黄色粉末又は結晶
規格
構造式
レーター
(2) 純度 ( 滴定 , 無水物換算 )：95.0％ 以上
生化学用(3) 水溶状：試験適合
緩衝剤(4) 水分：10.0％ 以下

Isothiocyanobenzyl NTA

Dithiobis(C NTA)

キレート
比色 / 金属
試
薬
水質
分析 用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒
その他
機能性
有機材料

溶解例
取扱注意

(5) NMR スペクトル：試験適合
10 mg/ml( 水 )1. 窒素置換 , 吸湿注意

C26H44Cl2N4O14S2=771.68

性 質 近年、“His-tag” 技術により、複雑な高次構造を持つタンパク質を、その活性を損なわずに固体表面に化学的に結合させることが可能になっている。その基本原理は、
NTA 誘導体を官能基（通常、活性エステル、チオール、エポキシなどの反応性基）で修飾した固体表面と反応させ固定化した後、Ni(II) を加えて錯形成させる。その時、Ni(II) の配位座は完全には満たされず、空いた部分には水が配位する。この状態で 6 個のヒスチジンを末端に発現させた融合
タンパク質を加えると、ヒスチジン部分が Ni(II) に配位する
ため、特異的かつ一定方向に固体表面に結合される（この結合は強固だが、フリーのヒスチジンやイミダゾール、EDTA
等のキレート剤によって可逆的に解離する）。この “His-tag”
技術は、人工タンパク質の精製や表面プラズモン共鳴 (SPR)
等に使用されている。
Dithiobis(C2-NTA) は両端に NTA 基を持つジスルフィドである。アルキルジスルフィド化合物は、アルカンチオールと同様に、金表面と反応して Au-S 結合すると共に、アルキル鎖同士の相互作用によって高い配向性を持つ単分子膜を形成することが報告されている。Dithiobis(C2-NTA) も、他のアルキルジスルフィドと同様に SAMs を形成することをサイクリックボルタンメトリー (CV) で確認している。
この Dithiobis(C2-NTA) は、金表面上に SAMs を形成させた後、"His-tag" 技術を用いることで、特定の配向を維持したままタンパク質を結合できる可能性がある。各種センサー等への応用が期待される。
特 長1)	NTA 末端を持つ自己組織化単分子膜 (Self-Assembled
Monolayers : SAMs) を作製することができる。
2)	“His-tag” 技術により、特定の配向を維持したままタン
パク質を結合できる。

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参考文献

I279/D550

で検索

1) M. Murata, C. Gouda, K. Yano, S. Kuroki, T. Suzutani and Y. Katayama, "Piezo electric sensor for endocrine-disrupting chemicals using receptor-co-factor interaction", Anal. Sci ., 2003, 19 , 1355.

目的化合物に応じた最適なタンパク質架橋剤と取扱い方法を一覧で解説しております。
架橋剤ガイド203

同仁 検索

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二価性試薬Sulfo-AC5 -SPDP

N -{6-[3-(2-Pyridyldithio)propionamido]hexanoyloxy}sulfosuccinimide, sodium salt
〔 CAS No. 169751-10-4 〕(1) 性状：白色～殆ど白色粉末(2) 純度 (HPLC)：90.0％ 以上(3) 水溶状：試験適合
溶解例
95 mg/ml（水）取扱注意 1. 保存方法：冷凍 2. 吸湿注意

規格

50 mg

同仁品コード：S359￥66,000 346-09151

構造式

C18H22N3NaO8S3=527.57
性 質 Sulfo-AC5-SPDP は、 分 子 内 に N - ヒ ド ロ キ シ ス
クシンイミド活性エステル基を持つため、抗体や酵素等のタンパク質のアミノ基にピリジルジスルフィド基を導入することができる。ピリジルジスルフィド基は還元剤により容易に還元され SH 基とすることができる。また、タンパク質などの SH 基と交換反応するため、ジスルフィド結合を介してカラムの担体やタンパク質などと結合させることができる。本試薬は、SPDP と異なりスルホン酸基を有する活性エステル基が導入されているため、試薬を溶解するためのDMF や DMSO など有機溶媒を用いることなく標識反応を行うことが可能である。本試薬は、まず通常のアミノ基ラベ
ルの方法でタンパク質に導入し（1）、DTT 等とインキュベー
トすることにより還元して、ピリジル -2- チオンを解離させ、SH 基とすることができる（A）。また、（1）で得られた物を、
2-PDS と反応活性な SH 残基を持った別のタンパク質とイ
ンキュベートすることにより、タンパク質同士を結合させる事ができる（B）。

細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ
細胞
染色
細菌研究用
試
薬
膜タン
パク質
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
酸化
還元
イオン
電 極
シ ン チ
レーター
生化学用
緩衝剤
キレート

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参考文献

S359

で検索

1) A. K. Patri, A. Myc, J. Beals, T. P. Thomas, N. H. Bander and J. R. Baker, Jr., "Synthesis and in vitro Testing of J591 Antibody-dendrimer Conjugates for Targeted Prostate Cancer Therapy", Bioconjugate Chem ., 2004, 15 (6), 1174.
2) N. W. S. Kam, Z. Liu and H. Dai, "Functionalization of Carbon Nanotubes via Cleavable Disulfide Bonds for Efficient Intracellular Delivery of siRNA and Potent Gene Silencing", J. Am. Chem. Soc .,2005, 127 (36), 12492.
3) A. M. Derfus, A. A. Chen, D-H. Min, E. Ruoslahti and S. N. Bhatia, "Targeted Quantum Dot Conjugates for siRNA Delivery", Bioconjugate Chem ., 2007, 18 (5), 1391.
4) M. Ghasemi, M. Minier, M. Tatoulian and F. Arefi-Khonsari, "Determination of Amine and Aldehyde Surface Densities: Application to
the Study of Aged Plasma Treated Polyethylene Films", Langmuir , 2007, 23 (23), 11554.
5) C. L. Waite and C. M. Roth, "PAMAM-RGD Conjugates Enhance siRNA Delivery Through a Multicellular Spheroid Model of Malignant
Glioma", Bioconjugate Chem ., 2009, 20 (10), 1908.
6) R. Xu, M. Fisher and R. L. Juliano, "Targeted Albumin-Based Nanoparticles for Delivery of Amphipathic Drugs", Bioconjugate Chem .,2011, 22 (5), 870.

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204

比色 / 金属
試
薬
水質
分析用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒
その他
機能性
有機材料

二価性試薬細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
N -Succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate
ストレス 〔 CAS No. 68181-17-9 〕
分 子(1) 性状：白色～微黄色粉末
規格
生物学(2) 純度 (HPLC)：98.0％ 以上
細 胞 内(3) アセトニトリル溶状：試験適合(4) NMR スペクトル：試験適合
蛍光プローブ
溶解例
100 mg/50 ml（アセトニトリル）細胞
取扱注意 1. 保存方法：冷蔵
染色
細菌研究用性 質 有機溶媒に溶ける。分子内に N - ヒドロキシスクシ
試薬
ンイミド活性エステル基を持つため、抗体や酵素等のタンパ
膜タンク質のアミノ基にピリジルジスルフィド基を導入することができる。ピリジルジスルフィド基は還元剤により容易に還パク質
元され SH 基とすることができる。また、タンパク質など
ラベルの SH 基と交換反応するため、ジスルフィド結合を介してカラムの担体やタンパク質などと結合させることができる。
化 剤
二価性
O
O
試 薬
pH7-8
(1)
N
S
N
Protein X
+ H2N
S
O
酸化
O
還元
イオン
OH
SH
電 極
O
HS
DTT
(A)
N
S
OH
シ ン チ
S
Protein X
N
H
レーター
生化学用
O
緩 衝 剤 (B)
N
S

SPDP

S

キレート
比色 / 金属
試
薬
水質
分析 用
溶媒
抽出
高純度
溶 媒

参考文献

N
H

Protein X+

Protein YSH

同仁品コード：S291
100 mg ￥41,200

構造式

C12H12N2O4S2=312.37
本試薬はまず通常のアミノ基ラベルの方法でタンパク質に導入し（1）、DTT 等とインキュベートすることにより還元
して、ピリジル -2- チオンを解離させ、SH 基とすることができる（A）。また、（1）で得られた物を、2-PDS と反応活性な SH 残基を持った別のタンパク質とインキュベートすることにより、タンパク質同士を結合させる事ができる（B）。

N

S

O
S

Protein X

N
H

O
HS

N
H

Protein X

Protein Y

S

+

H
N

S

N
H

Protein X

O
S

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S291

H
N

+

S

で検索

1) P. Walden, Z. A. Nagy and J. Klein, "Major Histocompatibility Complex-Restricted and Unrestricted Activation of Helper T Cell Lines by
Liposome-bound Antigens", J. Mol. Cell. Immunol , 1986, 2 , 191.
2) R. D. Gordon, W. E. Fieles, D. L. Schotland, R. Hogue-Angeletti and R. L. Barchi, "Topographical Localization of the C-terminal Region of the Voltage-dependent Sodium Channel from Electrophorus Electricus Using Antibodies Raised Against a Synthetic Peptide",
Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 1987, 84 , 308.

その他
機能性
有機材料

205

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