シナモン含有食品のクマリン分析法及び実態調査
岩崎由美子，田端節佐々英子，根木子，飯岸田潤，井東京都健康安全研究センター研究年報
２００８憲司，伊藤部広明第５９号

別刷

弘一，

東京健安研セ年報

Ann. Rep. Tokyo Metr. Inst. Pub. Health, 59,143-148, 2008

シナモン含有食品のクマリン分析法及び実態調査
岩 崎 由 美 子*，田 端 節 子*，飯 田 憲 司*，伊 藤 弘 一**，佐 々 木 英 子***，根 岸 潤***，井 部 明 広****シナモン含有食品中のクマリン分析法を検討した．試料を90%アセトニトリルで抽出後，その上澄液をBOND
ELUT MEGA-BE-C18 500MGで精製し試験溶液とし，試験溶液を逆相系高速液体クロマトグラフ（HPLC）で定量し，高速液体クロマトグラフ／タンデム質量分析装置（LC/MS/MS）で確認した．本試験法での定量限界はシナモ
ンパウダーで2 µg/g，ビスケットで1 µg/g，回収率は92%，97%及びCV%は2.1%，0.4%であった．本試験法を用いてシナモン含有食品30製品について調査した結果，クマリン含量はシナモンパウダー，シナモンスティックでは11～6,700 µg/g，菓子類では10製品中9製品から2～81 µg/g及びサプリメントでは2,300～2,900 µg/gであった．
キーワード：クマリン，シナモン，セイロン，カシア，シナモン含有食品，HPLC，LC/MS/MS
1. 試料

は じ め に市販のシナモンパウダー，シナモンスティック，シナモ

シナモンは香辛料として，菓子，料理に使用されるほか，芳香性健胃薬原料として胃腸薬にも処方されている．

ンサプリメント( 以下シナモン製品と略す)，ビスケット類，焼八ッ橋，生八ッ橋，ニッキ飴及びシナモンベーグルを用いた．
2. 試薬

図 1. クマリン

標準品：和光純薬製のクマリン(試薬特級)を用いた．
標準溶液：クマリン500 mgをアセトニトリル50mLに溶解

シナモンには芳香成分としてクマリンを含むことが知られている．シナモンには大きく分けてセイロン(Cinnamo-mum zeylanicum Nees）とカシア（C. cassia Blume）の2種類があり，後者の方がクマリンの含有量が高いと言われている．
クマリンには肝毒性があり，ドイツ連邦リスクアセスメント研究所（BfR：Bundesinstitut für Risikobewertung）は，したものを標準原液(10,000 µg/mL)とし，適宜アセトニトリル-水（9:1）で希釈したものを標準溶液とした．
固相抽出カラム：BOND ELUT MEGA-BE-C18 500MG(バリアン社製)
その他の試薬，溶媒は市販の特級，液体クロマト用を用いた．

2006 年にクマリンの耐容 1 日摂取量（TDI）を 0.1 mg/kg体

3．装置および測定条件重/日と設定した1)．
日本人の通常の食習慣ではクマリンの多量摂取はないものと思われる. 現在まで，我が国でシナモンによる被害報
告はないが，近年健康食品として「シナモンカプセル」が市販されるようになったため，TDI以上のクマリンを摂取した場合の健康被害を否定できない．そこで，国内に流通

高速液体クロマトグラフ： LC-1500シリーズ（日本分光製）
高速液体クロマトグラフ／タンデム質量分析装置：
Waters 2695（Waters社製）,Quatro Ultima Pt（MICROMASS社製）

するシナモン含有食品のクマリンの含有量実態を調査する

4．試験溶液の調製ため，食品中のクマリンの試験法を開発した2)．
本試験法を用いて，スパイス 15 製品，菓子類 10 製品及びシナモンサプリメント（シナモンが主原料）5 製品についてクマリン含有量を調査したので報告する．

シナモンパウダーはそのまま，シナモンスティック，ビスケット類及び焼八ッ橋は，ミキサーで粉砕し，生八ッ橋はハサミで細切して試料とした．シナモンサプリメントは内容物の粉末をそのまま試料とした．ニッキ飴は水で溶解

実 験 方 法*して，シナモンベーグルはクッキングカッターで粉砕して東京都健康安全研究センター食品化学部食品成分研究科****

東京都健康安全研究センター医薬品部微量分析研究科****

東京都健康安全研究センター広域監視部食品監視指導課****

東京都健康安全研究センター精度管理室

169-0073

東京都新宿区百人町 3-24-1

163-8001

東京都西新宿区 2-8-1

144

Ann. Rep. Tokyo Metr. Inst. Pub. Health, 59, 2008

試料とした．
シナモンパウダー，シナモンスティック，シナモンサプ
リメント，ビスケット，シナモンベーグル：試料4 gを50 mL

温度：45°C
スパイス（セイロン）のHPLCクロマトグラムを図2に示した．

遠沈管に秤取し，アセトニトリル-水（9:1）20 mLで15分

クマリン

振とう抽出後，遠心分離（3,000 rpm，15分）し，その上澄A液を抽出溶液とした．
シナモン製品は，抽出溶液2 mLを水で8 mL（4倍希釈）とし，その2 mLをアセトニトリル3 mL及びアセトニトリル-水（1:3）3 mLでコンディショニングしたBOND ELUT
MEGA-BE-C18 500MGに負荷した．アセトニトリル-水（1:3）2 mLで洗浄後，アセトニトリル-水（7：3）2 mLで溶出し，0.45 µmフィルターでろ過したものを試験溶液とし102030た．

40B

油脂の多いビスケット類については，抽出溶液5 mLとアクマリン

セトニトリル飽和n-ヘキサン1 mLを分液ロートにとり，緩やかに約20回振とうし，下層を試験溶液とした．
シナモンベーグルは抽出溶液を0.45 µmフィルターでろ過したものを試験溶液とした．
焼八ッ橋：試料1 gを50 mL遠沈管に秤取し，メタノール-102030

水（7:3）25 mLで20分振とう抽出後，遠心分離（3000 rpm，

図2. クマリンのHPLCクロマトグラム15分）し，その上澄液を0.45 µmフィルターでろ過し，試験A：スパイス B：クマリン標準品40溶液とした．
生八ッ橋：試料5 gを100 mLブレンダーカップに秤取し，メタノール-水（7:3）50 mLで5分ホモジナイズ（10,000 rpm）

結 果 及 び 考 察
1．抽出溶液の精製し，抽出液を50 mL遠沈管に移し，遠心分離（3,000 rpm，シナモン製品の抽出溶液にはシナモン由来の物質が含ま15分）し，その上澄液を0.45 µmフィルターでろ過し，試験れ，HPLCクロマトグラム上の妨害物質となったため，精製溶液とした．

法の検討を行った．BOND ELUT-C18，Oasis MCX，MAX，ニッキ飴：1粒（約4.3 g）を水50 mLに溶解し，食塩5 gを加えて，酢酸エチル50 mLで2回振とう抽出し，液相分離ろWAX，HLB（ウォーターズ社製）の5種類の固相抽出カラムについて検討した．

紙でろ過し，溶媒を留去した．残渣をアセトニトリル-水（7抽出溶液2 mLをそのままアセトニトリル-水（9:1）5 mL：3）2 mLで溶解し，0.45 µmフィルターでろ過したものをでコンディショニングした各固相抽出カラムに負荷し，続試験溶液とした．

いてアセトニトリル-水（9:1）2 mLを流下したところ，使用したすべての固相抽出カラムで，負荷したクマリンの995．測定条件%以上が溶出された．しかし，妨害物質も同時に溶出され，

1) HPLC条件除去が不十分であった．

カラム：Discovery HS C18（5 µm，4.6 mm i.d.×250 mm

そこで抽出溶媒を水で希釈してカラムに保持させ，洗浄SUPELCO社製)，カラム温度：45°C後，溶出させる方法を検討した．抽出溶媒を水で4倍及び10

移動相：水 (A)，60%アセトニトリル（B）A:B= 58:42(38倍に希釈して，それぞれの2 mLをアセトニトリル3 mL及びmin) →(5 min)→20:80(10 min) →(5 min)→58:42(7min)，アセトニトリル-水（1:3）3 mLでコンディショニングした

流速：0.5 mL/min，検出波長：280 nm，注入量：10 µL

BOND ELUT-C18カラムに負荷した．それぞれをアセトニト2) LC/MS/MS条件

リル-水（1:3）2 mLで洗浄した後，アセトニトリル-水（7::3）

測定モード：ESI(+)，モニターイオン(m/z)：147,103,91，又はアセトニトリル-水（1:1）2 mLで溶出した．カラム負イオンソース温度：130°C，デソルベーション温度：450°C，荷時の水での希釈率は4倍の方がHPLC上の妨害ピークが少キャピラリー電圧：3.00 kV，コーン電圧：45 V，コリジョなかった．また溶出溶媒は，アセトニトリル-水（7:3）でンエネルギー電圧：18 eV，カラム：TSK GEL ODS-100V（3は2 mLで溶出が完了したが，アセトニトリル-水（1:1）でµm，3.0 mm i.d.×150 mm）東ソー製，は4 mLの溶出液が必要であったため，溶出はアセトニトリ

移動相：1.0%ギ酸(C)，60%アセトニトリル(D)，C:D=ル-水（7::3）とした．

50:50(25 min) →(1 min)→ 10:90(15 min) →(1 min)→また，ビスケット類には多量の油脂が含まれるため，C18

50:50(20 min)，流速：0.2 mL/min，注入量：2 µL，カラムカートリッジ及びアセトニトリル飽和n-ヘキサン洗浄によ東京健安研

セ年報

る油脂の除去法について検討した結果，油脂の除去効果が145

59, 2008

表1. クマリンの回収率及び検出限界高いアセトニトリル飽和n-ヘキサンによる洗浄法を選択し定量限た．

添加量

回収率

CV(µg/g)

(%)

(%)

食品

焼八ッ橋については試料4 gを50 mL遠沈管に秤取し，ア界セトニトリル-水（9:1）20 mLで15分振とう抽出したところ，試料粉末が固まって，抽出溶媒に分散しなかった．アセト(µg/g)
シナモン製品

10091.92.12

ビスケット

1096.60.4

1

焼八ッ橋

100

88.7

3.2

1

生八ッ橋

2097.41.6

1

生八ッ橋も同様にアセトニトリル-水では抽出溶媒に分ニッキ飴

2090.60.8

1散しなかったため，メタノール-水（7:3）を抽出溶媒とし

ベーグル

40

97.0

3.91

ニトリル-水（7:3）も同様であった．そこで，採取量を1 gとし，メタノール-水で抽出したところ，試料粉末が分散し，88%以上の回収率が得られたためメタノール-水（7:3）を抽出溶媒とした．

た．
ニッキ飴は水で溶解し，食塩5 gを加えて，酢酸エチル，クロロホルム，n-ヘキサンで抽出した．酢酸エチル，クロ4. 食品中のクマリン含有量実態調査の結果ロホルムでは90%以上の抽出率であったため，酢酸エチル本法を用いてシナモンパウダー及びシナモンスティックを抽出溶媒とした．
シナモンベーグル，焼八ッ橋，生八ッ橋及びニッキ飴については，クマリン付近にHPLC上の夾雑ピークがなかっ（以下スパイスと略す）15製品，菓子類10製品及びシナモンサプリメント5製品の合計30製品について測定したクマリン含有量を表2に示した．

たため，抽出溶液を0.45 µmフィルターでろ過したものを試表2. 食品中のクマリン含有量験溶液とした．

検検

クマリン平均体

出含有量(µg/g)

数数(µg/g)

スリランカ

7711-1714

ベトナム

444,500-6,700

5,400

インドネシア111,900

マレーシア

111,300の条件を検討した．カラム①では水-アセトニトリル(75:中国

22310, 85025)でクマリンの保持時間は8.5分であったが，クマリン付

計88310-6,700

3,300

近の夾雑ピークとの分離がよくなかった．カラム ②，③で計

1511-6,700

1,700

食品

産地

2. HPLC条件の検討
TSK GEL ODS-80TS（5 µm，4.6 mm i.d.×150 mm）東ソー

ス

製（以下カラム①と略す），TSK GEL ODS-100V(5 µm，4.6パmm i.d.×250 mm）東ソー製（以下カラム②と略す），Discoveryイ

HS C18（5 µm，4.6 mmi.d.×250 mm）SUPELCO社製（以下セイロンカシアス

カラム③と略す）について，水-アセトニトリル系の移動相は水-アセトニトリル(70:30)のクマリンの保持時間はそれ菓

ぞれ26分，19分で，夾雑ピークと分離も良好であった．

子カラム③について，移動相を水-60%アセトニトリル（58類:42)にしたところ，クマリンの保持時間は25分で，夾雑ピークとの分離がさらに良好になった．しかし，長時間に渡って夾雑ピークが溶出してきた．そこで測定時間の短縮をサメ図るため，上記移動相の条件で分析後，グラジエントを行プンい，夾雑物を除去することとした．

リト

決定した条件での検量線は0.1～100 µg/gの範囲で直線性

ビスケット

442-53.5

焼八ッ橋

2240, 8161

生八ッ橋

212513ニッキ飴

114ベーグル

1113

セイロン

112,900

カシア

332,300-2,90011

未表示計が得られた．各食品の定量限界は表1のとおりで，シナモン製品で2 µg/g，菓子類（ビスケット，焼八ッ橋，生八ッ橋，ニッキ飴，ベーグル）で1 µg/gであった．

580

52,5002,7002,300-2,9002,6001) スパイス
スパイス15製品のクマリン含有量は11～6,700 µg/g，種別では，セイロンは平均で14 µg/g，カシアは平均で3,300 µg/g

各試料にクマリンが試料中で10～100 µg/gとなるようにであり，カシアがセイロンより200倍以上高い値であった．
カシアについて産地別にクマリン含有量を比較すると，添加し，回収試験(n=3)を行った結果は表1のとおりであっベトナム産は平均5,400 µg/gで最も高く，次いでインドネシ

た．6食品の回収率は88.7～97.4%，CV%は4%以下と良好な

ア産が1,900 µg/g，マレーシア産が1,300 µg/g，中国産が最も結果であった．

低く平均で580 µg/gであった．生薬のケイヒ（カシア）でも，

3. 添加回収試験

産地によってクマリン含有量に同様の差があることが報告

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146

されている3-4)．

あった．また，スパイスのTDI相当量はセイロンで平均360 g，食品のシナモンは本来セイロン（C. zeylanicum）が使用さカシアで平均1.5 gであった．これらのことから，香辛料とれ，味は甘く辛味は弱いとされ，本調査のシナモンもセイして通常の食事をする限りでは、TDIを超えることはないとロンは辛味が弱く，カシアでは辛味が強かった．

考えられる．（表3）2) 菓子類

2) 菓子類

ビスケットのクマリン含有量は2～5 µg/g，焼八ツ橋は40，

菓子類のTDI相当量は表4のとおりであった．TDI相当量

81 µg/g，生八ツ橋2製品中1製品が25 µg/g，もう1製品からははビスケットでは1,100～3,100 g，焼八ツ橋で62～130 g，生検出されなかった．ニッキ飴は4µg/g，シナモンベーグルで13 µg/gであった．

八ツ橋は200 g，ニッキ飴で1,200 g，シナモンベーグルで390gであった．菓子毎の1日許容量はビスケットで130～970枚，

3) シナモンサプリメント
個人輸入代行及び都内で購入したシナモンサプリメント
5製品（セイロン：1製品，カシア：3製品，種類未記載：1製品）のクマリン含有量の平均は2,600 µg/gであった．原料

焼八ツ橋は14～29枚，生八ツ橋は29枚，ニッキ飴で284粒，シナモンベーグルは4個で，通常の量ではTDIを超えることないと考えられる．（表4）
表4.菓子類のTDI相当量の種類別に見ると，セイロンと表示された製品は2,900 µg/g，カシアと表示された製品は平均2,500 µg/g，種類未記載の製
菓子類品は2,700 µg/gであった．クマリン含有量が低いとされていクマリン

TDI含有量相当量(µg/g)(g)るセイロン表示製品からは2,900 µg/gの高い値のクマリンが検出された．これらの製品の原材料は，カプセルの原料ビスケット

3.5

1,100-3,100となる「ゼラチン」等と「シナモン」のみであり，クマリ

焼八ツ橋

61

62-130ンの含有量から，主原料が「セイロン」と表示された製品，(-)

生八ツ橋25200ニッキ飴

4

1,200

ベーグル

13390

未表示の製品のいずれも，カシアが使用されている可能性が否定できない．
5. クマリン含有量からのリスク推定

3) シナモンサプリメント

成人の体重を 50 kg と仮定すると，BfR のクマリンの耐容 1
日摂取量（TDI）0.1 mg/kg 体重/日から，成人のクマリン耐
容 1 日摂取量は 5.0 mg となる．
クマリンの耐容 1 日摂取量と今回検査したクマリン含有製品に表示されている1日摂取目安量（2カプセル/日）のサプリメントを摂取したときのクマリン1日摂取量は表5のとおりであった．その結果，5製品のいずれもTDIを超えなかった．

量から，食品毎に TDI 相当量を算出した．

表5. シナモンサプリメントのクマリン１日摂取量

1) スパイス
平成17年「国民健康・栄養調査報告」の食品群別栄養素等摂取量によると，「香辛料・その他」の1日当たり摂取量

種別は0.2 gであった．一日に摂取するスパイス0.2 gをすべてシナモンで摂取した場合でも，各スパイスのクマリン摂取量

セイロン

はセイロンで0.0028 mg/day，カシア平均で0.66 mg/day，もっとも濃度の高かったベトナム産カシアでも1.1 mg/dayで
表3. スパイスのTDI相当量

2 カプセル

クマリン

含有量

内容量

１日摂取量

(µg/g)

(g)

(mg)

2,900

1.26

3.65

2,400

1.02

2.45

2,900

1.04

3.02

2,300

0.96

2.21

0.86

2.32

クマリン

TDI

カシア平均

2,500含有量

相当量

未記載

2,700(µg/g)

(g)

平均

2,600

14360

ベトナム

5,400

0.9

中国

580

8.6

インドネシア

1,900

2.6

マレーシア

1,300

3.8

平均

3,300

1.5

スパイス

セイロン（スリランカ）平均

カシア

カシア

クマリン

日本人の通常の食生活において，菓子類等の摂取ではTDIを超えることはほとんどないと考えられる．しかし，シナモンサプリメントは表示上の1日摂取目安量を摂取すると,1日のクマリン摂取量はTDIの44～74%であるため，他のシナモン含有食品をあわせて摂取した場合にはTDIを超える可能性があると考えられる．

東京健安研ま と めセ年報

14759, 2008

シナモンサプリメントのクマリン含有量は，平均で2,600

1. シナモン製品，ビスケット及びシナモンベーグルはアセµg/gであった．1日摂取目安量の摂取では，TDIを超えなかトニトリル-水（9:1），八ッ橋はメタノール-水（7:3），

った．

ニッキ飴は酢酸エチルで抽出した．

今回の調査の結果，成人が平均的な食事をする限りでは，2. シナモン製品の精製にはBOND ELUT MEGA-BE-C18をTDIを超えることはほとんどなかった．しかし，シナモンサ用いることにより，回収率も高く，高い精製能が得られた．

プリメントと他のシナモン含有食品をあわせて摂取した場

3. HPLCはDiscovery HS C18を用いてグラジエント分析を行合にはTDIを超える可能性があると考えられる．

うことにより，比較的短時間で良好なクロマトグラムが得られた．
4. 本法によるクマリンの添加回収実験の結果は，6食品の文 献
1) 国立医薬品食品研究所 安全情報部：食品安全情報 33-34

回収率は88.7～97.4%，CV%は4%以下と良好であった．

No.21/2006 (Bundesinstitut fur Risikobewertung：27.09.2006),

5. シナモンスパイスのクマリン含有量はセイロンで平均

http://www.nihs.go.jp/hse/food-info/foodinfonews/index.html

14 µg/g，カシアで3,300 µg/gであり，カシアがセイロンより（2006年10月11日現在，なお本URLは変更または抹消の可200倍以上高い値であった．特にベトナム産カシアが平均で能性がある）

は5,400 µg/gと高い含有量であった．スパイスのTDI相当量

2) 岩崎由美子，田端節子，飯田憲司，他：第 20 回地衛研はセイロンでは平均360 g，カシアで平均1.5 gであった．
菓子類のクマリン含有量は，ビスケットで2～5 µg/g，焼協議会関東甲信静年会要旨，28-30, 2008.
3) 日本薬局方解説書編集委員会編：第15改正日本薬局方解八ツ橋は40，81 µg/g，生八ツ橋2製品中1製品が25 µg/g，も説書，D199-209，2006，廣川書店，東京．

う1製品からは検出されなかった．ニッキ飴は4 µg/g，シナ

4) Sagara K., Oshima T., Yoshida T.: J. Chromatogr.,

モンベーグルで13 µg/gであった．

409, 365-370, 1987.

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Determination of Coumarin in Cinnamon Foods
Yumiko IWASAKI*，Setsuko TABATA*，Kenji IIDA*，Kouichi ITOU*，
Eiko SASAKI**，Jun NEGISHI**andAkihiro IBE*

A method for determining coumarin in cinnamon foods using HPLC was developed. Coumarin was extracted with 90%
acetonitrile and refined with a BOND ELUT MEGA-BE-C18 cartridge. The LC separation was performed on the Discovery
HS C18 column by using 60% acetonitrile and water as the mobile phase. Coumarin was confirmed by LC/MS/MS. The
average recovery rates of coumarin from cinnamon powder and a cinnamon cookie were 92% and 97%, respectively, withvariation coefficients of 2.1% and 0.4% and quantification limits of 2 µg/g and 1 µg/g respectively.
Thirty samples were examined using this method. Coumarin was found in spices in the range of 11～6,700 µg/g in sweets
from ND～81 µg/g and in supplements from 2,300～2,900 µg/g.
Keywords：coumarin, cinnamon, ceylon, cassia, cinnamon foods, HPLC, LC/MS/MS*

Tokyo Metropolitan Institute of Public Health3-24-1, Hyakunin-cho, Shinjuku-ku, Tokyo 169-0073 Japan**

Department of Regional Food and Pharmaceutical Safety Control, Tokyo Metropolitan Institute of Public Health2-8-1, Nishishinjuk, Shinjuku-ku, Tokyo 163-8001 Japan