平成27年度
静岡県臨床検査精度管理調査
病理検査部門
平成27年12月13日
静岡県男女共同参画センター「あざれあ」

参加施設 24施設
沼津市立病院
順天堂大学医学部付属静岡病院
富士市立中央病院
富士宮市立病院
静岡県立静岡がんセンター
静岡市立清水病院
静岡市立静岡病院
静岡県立こども病院
静岡県立総合病院
静岡赤十字病院
静岡済生会総合病院
焼津市立総合病院

藤枝市立総合病院
市立島田市民病院
榛原総合病院
静岡徳洲会病院
聖隷浜松病院
中東遠総合医療センター
磐田市立総合病院
浜松労災病院
浜松赤十字病院
浜松医療センター
聖隷三方原病院
浜松医科大学医学部附属病院

メーカーサーベイ協力企業
ダコ・ジャパン株式会社
株式会社ニチレイバイオサイエンス
ライカ マイクロシステムズ株式会社
ロッシュ・ダイアグノスティック株式会社

調査内容
・TTF-1,p40,p63抗体の免疫組織化学染色「病理組織検査サーベイ調査書」「染色結果の判定」

・アンケート調査「プレアナリシスにおける作業工程（固定・脱脂・脱灰）の実態調査」

肺の新WHO分類（第4版）
推奨される免疫組織化学的マーカー• 腺癌： TTF-1 , Napsin A• 扁平上皮癌： p40 > p63 ,CK5/6
質の高い免疫染色精度管理の重要性
抗体cloneの違いよる染色性の変化と解釈抗体保有率（事前調査結果）
○×保有率

TTF-1

23196%

Napsin A

131154%

Surfactant apoprotein A

111346%

Cytokeratin 5/618675%

扁平上皮癌 Cytokeratin 14
マーカー p4071729%

131154%

p63

18675%

腺癌マーカー配布材料①肺癌組織（肺腺癌 リンパ節転移組織）②肺癌組織（肺扁平上皮癌 リンパ節転移組織）③正常肺組織※①②：10％非緩衝ホルマリン固定※③ ：20％中性緩衝ホルマリン固定

ティッシュマイクロアレイブロックを作製し、3μｍ前後で薄切した切片を貼付したシランコーティ
ングスライド5枚評価判定方法①染色性評価9名の病理医に5段階評価として評価していただいた。
（1：診断不適正標本、2：評価困難、3：要努力、4：普通、5：良好 ）②マイナス評価「血球の非特異反応の有無」、「背景の非特異反応の有無」、「染色斑の有無」を各々（非特異反応無し：2、診断に影響ない程度に有：1、強い非特異反応：0）と評価し合計6ポイントを3段階評価（A：5～6、B：3～4、 C：2以下 ）とした。

コントロール切片貼付〈実施のねらい〉• 各施設が染色性の自己評価を行う際に、普段通りの染色性が得られているか確認する材料とする• 施設コントロールの染色状態からプレアナリシスの状況を把握する
組織1
組織2
組織3

自施設
コントロールコントロール切片貼付
〈結果〉
TTF-1
実施あり 19/23施設(83％)（肺⑧、肺腺癌⑤、甲状腺③）※調査試料と施設コントロールの染色性に一部乖離あり
p40
実施あり 12/14施設(86％)（皮膚②、乳腺②、扁桃②、肺②、扁平上皮癌②）
p63
実施あり 15/19施設(79％)（皮膚③、前立腺③、乳腺②、扁桃②、肺②）

結果判定自己評価について〈実施のねらい〉
日常業務における染色性の確認と評価【染色結果の判定方法】
1. 今回の染色結果：核染色とのコントラスト（通常よりも良好：１、通常と同様：２、通常よりも悪い：３）
2. 今回の染色結果：DAB発色（通常よりも良好：１、通常と同様：２、通常よりも悪い：３）
3. 今回の染色の自己評価（通常よりも良好：１、通常と同様：２、通常よりも悪い：３）
今回の三抗体の調査で低評価(3.4以下）となった施設は合計15施設あったが、そのうち13施設（87%）で自己評価「通常と同様」と判定

調査回答結果からの集計
TTF-1染色TTF-1染色 評価判定結果
マイナス評価判定別
評価

施設数 （%）

A評価

23 (100%)

B評価0 ( 0%)

C評価0 ( 0%)TTF-1染色 評価平均別施設数
3.0未満
(1施設）
4％

4.0以上
(13施設)
57%

3.0～3.4(7施設)30%
3.5～3.9(2施設)9%

施設数合計：23

TTF-1染色染色結果

922003792200639220088

Roche①922001792200629720018

Roche②922004292200719220118

Leica①922004792200789220101

9220306

92202539220100

DAKO

922005292200849220087

Nichirei

9220060

92200819220103922006792203339220090

未実施

Leica②※組織①

TTF-1染色評価平均別
組織① 対物×20倍
評価 4.9

評価 2.4

評価 3.8

TTF-1染色評価平均別
組織③ 対物×20倍
評価 4.9

評価 2.4

評価 3.8

TTF-1染色 まとめ• 高評価～低評価まで各施設により染色性の差が大きい結果となった• 「評価困難」と評価された施設が1施設あり、早急な是正処置が必要である

低評価原因 考察• Colne:8G7G3/1とRoche機器（賦活または検出系試薬）• 用手法（染色操作に何らかの原因）• 一次抗体濃度（メーカー推奨濃度より大幅な希釈）• 使用試薬の調整不良や劣化が染色性に影響を与えた可能性も文献的考察TTF-1 cloneによる違い

Andres Matoso,Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2010 March ; 18(2): 142–149.

文献的考察TTF-1 cloneによる違い

Kyuichi Kadota,Am J Surg Pathol 2015;39:1170–1180

調査回答結果からの集計
p40染色

p40染色 評価判定結果

マイナス評価判定
評価

施設数（%）

A評価

12 (86%)B評価

2 (14%)

C評価

0 ( 0%)

p40染色染色結果

9220037922006392200889220017922006297200189220042

未実施9220071

92201189220047

未実施

92200789220101

未実施

未実施

9220306

9220052

未実施

9220060

9220067

未実施

9220253

未実施

9220100

9220084

未実施

92200879220081

未実施

92201039220333

未実施

9220090

p40染色評価平均別
組織② 対物×20倍

評価 3.2

評価 4.8

評価 3.8

p40染色評価平均別
組織③ 対物×20倍

評価 3.2

評価 4.8

評価 3.8

p40染色 まとめ• 評価3.5以上の施設が86％を占め、比較的良好な結果が得られた• 背景への非特異反応が指摘される施設が多かった

低評価原因 考察• 2施設ともフルオート機器と希釈済抗体を用いており、ほぼ同じ条件で染色を行い、高評価を得ている施設も存在した⇒染色条件には問題は認められず、使用試薬（調整不良や劣化など）が影響か• ヘマトキシリンでの後染色が弱く、コントラストが悪いp40染色背景非特異
組織③ 対物×20倍

評価 3.7

評価 4.8

評価 3.8

p40染色monoclonal
polyclonal
組織② 対物×10倍

ﾆﾁﾚｲ Poly ,RTU, pH9 A/C

Roche clone:BC28,RTU ,CC1,OptiView

ﾆﾁﾚｲ clone:BC28,RTU, pH9 A/C

調査回答結果からの集計
p63染色

p63染色 評価判定結果

マイナス評価判定別 施設数
評価

施設数（%）

A評価

17 (89%)B評価

2 (11%)

C評価

0 ( 0%)

p63染色9220037

染色結果

92200639220088

Roche①92200629720018

Roche②922004292200719220118

Leica①922004792200789220101

未実施

Leica②9220306

92202539220100未実施

DAKO

9220052922008492200879220060

922008192201039220333922009092200179220067

未実施

未実施

未実施

Nichirei

p63染色評価平均別
組織② 対物×4倍

評価 3.0

評価 4.7

評価 3.8

p63染色 まとめ• 高評価～低評価まで各施設によりやや染色性の差が大きい結果となった

低評価原因 考察• 2施設ともフルオート機器と希釈済抗体を用いており、ほぼ同じ条件で染色を行い、高評価を得ている施設も存在した⇒染色条件には問題は認められず、使用試薬（調整不良や劣化など）が影響か• Clone：4A4、希釈済抗体、低pH系賦活液での賦活処理（高pH系抗原賦活液による熱処理を実施している施設では高評価）• 一次抗体反応時間とリンカー試薬の有無（一次抗体16分・リンカーなしと一次抗体32分・リンカーあり）の違いp40,p63についての考察
施設番号p40 組織②

p63 組織②

施設番号

p40 組織②

p63 組織②

施設番号9220037922007192201189220306

922007892200879220060

922008892201039220063972001892200909220062

p40 組織②

p63 組織②

まとめ• 抗体と機器、反応系の組み合わせ• 同一のフルオート機器と希釈済抗体を使用した
施設間での高評価と低評価の評価差が認められた
試薬類の保管や管理の徹底
プレアナリシスの管理（固定時間• メーカー推奨の染色条件からの逸脱等）