学 会 抄 録

新

潟

歯

学

会

285

学

会

抄

録

細胞が一過性に出現することも明らかになっている。ス

平成15年度 新潟歯学会第一回例会

トレス蛋白と抗原提示細胞の相互作用が歯髄侵襲後の迅

日時

平成15年７月12日（土） 午前９時00分〜

速な象牙芽細胞分化に一役を担っているのかもしれな

場所

新潟大学歯学部第三講義室（５F）い。歯髄の再生過程は，上皮組織が存在しない環境下で，象牙質を含む細胞外基質，免疫担当細胞の遊走，象牙芽［教授就任講演］

細胞の変性という３つの側面から現象を捉える必要がある。講演の最後に，組織幹細胞を用いた歯髄再生研究の歯髄修復機構の解明から歯の再生研究への展開

問題点ならびに展望について述べ，今後の我々の研究の展開についても述べてみたい。
大島 勇人（おおしま はやと）略歴

顎顔面再建学講座 硬組織形態学分野

1961年 東京都に生まれる

大島 勇人

1987年 新潟大学歯学部卒業
1991年 新潟大学大学院歯学研究科修了（歯学博士）

生物のもつ最も生命らしい現象の一つに再生がある。

1992年 新潟大学歯学部 助手（口腔解剖学第二講座）

我々のからだは，外傷や切断などの物理的損傷に対して

1997年 新潟大学歯学部 講師（口腔解剖学第二講座），文部省在外の治癒能力を備えており，その傷を受けた場所に応じて研究員（ヘルシンキ大学 バイオテクノロジー研究所 発生

修復し，元通りに再生する。この様な再生現象において，生物学分野）

細胞が作り出されるかなめの部分には組織幹細胞が存在

1998年 新潟大学歯学部 助教授（口腔解剖学第二講座）する。歯科領域においても再生現象が知られており，窩

2001年 新潟大学大学院医歯学総合研究科

洞形成や移植・再植等の歯の損傷に対して，歯髄は再生

助教授（顎顔面解剖学分野）能力を有している。しかしながら，歯髄組織再生に必要

2002年 新潟大学大学院医歯学総合研究科 教授（硬組織形態学分野）

な組織幹細胞の存在は臨床経験的に推察されているものの科学的には解明されていないのが現状であり，再生の場が大きく失われると再生が期待できない場合が多い。
最近，NIHのShiの研究グループにより，ヒトの智歯や［一般講演］
１．実験的筋への痛み刺激が顎反射に及ぼす影響

脱落乳歯から歯髄幹細胞を同定したという報告が相次
新潟大学大学院医歯学総合研究科

ぎ，歯髄の再生医療は手の届きそうな段階まできたかの

顎顔面機能学分野，

１

印象を受ける。本講演ではまず，これまで我々が明らか

小児口腔科学分野

２にした研究データを基盤に，歯の損傷後の歯髄再生過程○黒瀬雅之 ，山村健介 ，井上誠 ，野口真紀子２，
１における抗原提示細胞とストレス蛋白の役割について紹

１

１Sajjiv Ariyasinghe１，山田好秋１

介する。
ストレス蛋白heat shock protein（Hsp）とは，生物【目的】

が高温などのストレスにさらされた時に一時的に合成が近年健常者の咬筋の高張食塩水を注入することにより誘発される蛋白質で，ストレスによる損傷からの防御と筋痛を伴う運動性障害の症状が引き起こせることが明ら修復に関与するが，炎症反応を活性化することも知られかになった。この手法により実験的な筋への痛み刺激が，ている。この様なストレス蛋白のうち低分子量のHsp25

様々な運動機能に及ぼす影響が研究されてきた。しかし，

が象牙芽細胞に高濃度に発現している。窩洞形成・歯牙筋への痛み刺激が，モダリティの異なる２種類の刺激

再植後の歯髄再生過程においても，再生象牙芽細胞が（侵害性および非侵害性）により誘発される開口反射，

Hsp25発現を獲得することが明らかになっており，歯髄並びに閉口反射に及ぼす影響を同一条件下で検討した報

間葉細胞の象牙芽細胞への最終分化にストレス蛋白が重告はない。我々は，各反射応答が咀嚼筋（側頭筋）の実要な役割を果たすとともに，変性した象牙芽細胞から漏験的筋痛によりいかなる影響を受けるのかを検討した。

出したストレス蛋白が免疫反応に影響を与えていること【方法】

が推測された。一方，このような歯髄再生過程において，

開口反射は下顎切歯の歯髄電気刺激(侵害性刺激)，下歯髄・象牙境にクラスII主要組織適合性複合体（major

歯槽神経電気刺激(非侵害性刺激)により誘発し，誘発応

histocompatibility complex: MHC）分子をもつ抗原提示

答は顎二腹筋筋電図として記録した。閉口反射は三叉神

−119−

286

新潟歯学会誌

33（2）
：2003

経中脳路核微小電気刺激により誘発し，誘発応答は咬筋児における刺激間に有意差を認めたが，性別間に差は示

筋電図として記録した。実験的筋痛として，炎症性刺激

されなかった。②発達的変化：年齢群間ではnormal-物質であるMO（Mustard oil）20μl を側頭筋に注入しspeedとmild-slowに有意差が示された。多重比較によりた。MO注入前と注入後の誘発応答を経時的に記録し，両刺激とも３歳児群と４歳児群に差はなく，５歳児群と反射応答量を指標としてMO注入の効果を評価した。まの間に有意差が示された。slowestには示されなかった。

た，反射応答の変調が認められた場合には，その機序のさらに，刺激間，特にnormal-speed〜mild-slowにおい検討のためにオピオイド系拮抗薬であるNaloxoneを投て，SRTの変化量が加齢に伴って小さくなった。

与し，反射応答の変調に対するオピオイド系下行性疼痛

【考察】

抑制系の関与を検討した。

幼児の発話応答時間は性差に関係なく成人の発話に影【結果及び考察】響される。しかし応答は1sec以内が限度であろう。ゆっ下歯槽神経由来の開口反射応答はMO注入後抑制されくりとした発話は幼児の応答時間を長くさせ，発達差をた。歯髄由来の反射応答はMO注入直後から有意に抑制生じさせない効果をもつと考えられる。さらに，普通のされ，下歯槽神経由来の反射応答のMO注入による抑制

発話刺激〜少しゆっくりとした発話刺激の影響力は，加効果と比較すると，その効果は強かった。閉口反射応答

齢に伴って小さくなると推測できる。

は，MO注入直後に一過性に促通され，その後に抑制さ発話応答がスムーズに遂行できない症状に，幼児期にれた。以上より，モダリティの異なる刺激により誘発さ高頻する吃音のBlockageがある。本結果は吃音発症のれた開口反射に対して，実験的な筋痛は異なる変調を引予防的措置として，流暢性発話獲得初期における成人のき起こすこと，また閉口反射に対しても変調を引き起こ

言語的かかわり方に有用な示唆を提供すると思われる。

すことが示唆された。また，MO注入後歯髄由来の反射応答が抑制されている段階（30分後）にNaloxone の投３．Effects of sensory inputs on the extrinsic tongue muscle

与を行った結果，MO注入による反射応答に対する抑制

activity during cortically evoked rhythmic jaw movements

効果が減弱した。この結果から，歯髄由来の反射応答のDivision of Oral Physiology,

抑制には，オピオイド系の疼痛抑制機構が関与している

Niigata University Graduate School of

ことが示唆された。

Medical and Dental Sciences○Sajjiv Ariyasinghe, Makoto Inoue, Yohji Harasawa,

２．発話刺激の変化に対する幼児の発話応答時間

Kensuke Yamamura, Masayuki Kurose, Yoshiaki Yamada

新潟大学大学院医歯学総合研究科
１【Objectives】

顎顔面機能学分野，２顎顔面口腔外科学分野○前新直志１，山田好秋１，寺尾恵美子２【目的】

This study was designed to investigate themodulation of the extrinsic tongue muscle activities by
sensory inputs during cortically evoked rhythmic jaw

幼児の発話は主に成人話者の影響を受けているが，発話応答時間も影響している可能性が考えられる。

movements（CRJMs）.
【Methods】

我々は成人の発話刺激の変化に対する健常幼児の発話応Seven male rabbits were anesthetized using a

答時間（speech response time；SRT）を検討した。

mixture of urethane（1g/kg）and alpha-chloralose（60【方法】

mg/kg）. Electromyograms（EMGs）of jaw-closing

対象児は言語能力を含む発達が正常範囲の３歳〜５歳（Masseter）, jaw-opening（Digastric）, tongue-retrusive

までの幼児90名（男児45名，女児45名）。刺激は３音節（Styloglossus, Sg）and tongue-protrusive（Genioglossus,

10単語を用いた。健常成人女性（31歳）が「普通に」Gg）muscles, and jaw movements in the frontal plane（以下，normal-speed），「少し遅く」（以下，mild-slow），

were recorded. To elucidate the effects of the sensory「できるだけ遅く」（以下，slowest）発話した音声と画

inputs on the tongue muscle activities during CRJMs,

像を提示した。刺激の基準値を求めるために，音声の平a wooden stick was applied（Insertion）between the

均発話持続時間を計測した。時間が一定になるように加upper and lower molar teeth on the working side, the

工・編集された音声と画像を提示し，幼児に模倣で発話

side opposite to the cortex stimulated. The peak

応答させた。採取された幼児の発話サンプルは音響解析

amplitude, area and duration of EMG bursts of the

ソフトを用いて，そのSRTが計測された。

muscles and jaw movement trajectories were【結果】

compared between the conditions.

①全体と性差：SRTは全て1sec以内であった。全対象【Results】−120−

学 会 抄 録

287

The jaw and tongue muscles were rhythmically

者284名とした。心理状態の評価には，手術前日およびactive during CRJMs. A clear double burst was seen

手術後７−10日目の２時点において，Hospital Anxiety

in the Sg and Gg muscles on the working side. The

and Depression scale, State Trait Anxiety Inventry

first burst in the Sg muscle（Sg1）was in the jaw-

test, Somatosensory Amplification scaleを用いた。さらopening（Op）phase and the second burst（Sg2）inに，周術期の身体愁訴に関しては，患者問診，患者カル

the jaw-closing（Cl）phase. In the Gg muscle the first

テ，アンケート調査，および術後の薬剤使用状況を用い

burst（Gg1）was in the early Op phase and theて評価を行った。

second（Gg2）in the late Op phase. The gape of the【結果および考察】

jaw increased and the lateral excursion decreased

心理状態の評価では，患者の不安得点は術前が高く，

during Insertion. The Sg2 burst was significantly

術後は有意に低下をしたが，抑うつ得点は術前後共に低increased in peak amplitude, area and duration during

く，術前後で有意差はみられなかった。SSASでは，術Insertion and the Sg1 burst was also increased in the

前後の得点変化は少ないものの術前に対して術後が増加

peak amplitude and area. The Gg2 burst was

する傾向がみられた。さらに身体愁訴のうち，術後の疼significantly increased in the peak amplitude, area and痛では，術前の不安，抑うつ得点が高いほど，強くかつduration during Insertion and the Gg1 burst was also

長期間訴え，鎮痛薬使用回数も増加する傾向がみられた。

increased in the peak amplitude. The Sg burst in the

以上より，口腔外科手術患者では，術前は急性の強い不Cl phase and Gg burst in the late Op phase were likely

安状態にあり，さらに術前の不安，抑うつが強いほど術

to be predominantly modulated by the sensory inputs.

後の身体愁訴の訴えが強いことから，心理状態が身体愁【Conclusions】

訴に影響を及ぼす一因になっていることが示唆された。

The jaw and tongue movements were wellcoordinated during CRJMs and the EMG activities of

５．歯周炎患者におけるFcαレセプター遺伝子多型の解析

tongue muscles were affected by the oro-facial sensory
inputs.

１

新潟大学大学院医歯学総合研究科

摂食環境制御学講座歯周診断・再建学分野，
新潟大学歯学部附属病院総合診療部

２４．口腔外科手術患者の周術期心理状態と身体愁訴に関す○金子る心身医学的研究

進１，小林哲夫1, 2，山本幸司１，
杉田典子１，吉江弘正１

新潟大学大学院医歯学総合研究科

１

【目的】

口腔生命科学専攻顎顔面再建学講座歯科侵襲管理学分野
２○ 田中

新潟大学医学部保健学科

裕１，村松芳幸２，染矢源治１【目的】

免疫グロブリンA（IgA）のFc部に対するレセプターであるFcαRは，多形核白血球（PMN），単球，マクロ
ファージ，好酸球などの炎症性細胞に発現し，貪食，抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ADCC），炎症性メ

術前の外科手術患者は高い不安や恐怖を有するのが一

ディエーターの産生を誘導する。歯周炎病変部において，般的である。さらに，口腔外科手術では術後に呼吸・摂歯周ポケット中にFcαRを発現したPMNが多く集積し，

食・会話などの日常活動が強く障害されるため，患者はFcαR発現が末梢血中PMNよりも亢進していることか不安状態だけでなく抑うつ状態など特殊な心理状態にあら，歯周病原性細菌の排除にFcαRを介した機構の重要る可能性がある。一方，術後疼痛 などの身体愁訴は同性が示唆されている。近年，FcαR遺伝子の機能的プロ一手術であっても患者の反応は様々である。この背景因モーター領域に+56T/C遺伝子多型が発見され，FcαR子の一つに患者の心理的因子の関与が推測される。しかの発現レベルへの関与が示された。しかしながらFcαR

し，現在まで口腔外科領域における周術期の心理状態の遺伝子多型と歯周炎感受性との関連性については未だ明

評価，および身体愁訴に関与する因子の解析についてのらかにされていない。そこで我々は，FcαR遺伝子上の詳細な報告はみられない。そこで，今回口腔外科 手術

新たな遺伝子多型の有無を検索し，検出された遺伝子多患者の周術期の心理状態を評価するとともに身体愁訴に型ならびに+56T/C遺伝子多型と歯周炎との関連性を検及ぼす心理的因子の影響について研究を行ったので報告

証した。

する。

【方法】

【方法】

インフォームドコンセントが得られた侵襲性歯周炎

対象は，新潟大学歯学部附属病院中央手術室において，（Aggressive Periodontitis; AGP）患者46名，慢性歯周全身麻酔下に口腔外科手術を予定した，既往歴のない患炎（Chronic Periodontitis; CP）患者93名，日本人健常

−121−

288

新潟歯学会誌者対照（Healthy Control; HC）群89名，およびコーカ

33（2）
：2003

患との関連性についての統計学的解析を行い，p<0.05の

サス系白人HC群59名を対象とした。ダイレクトシーク

場合を統計学的に有意差があるものとした。

エンス法によりFcαR遺伝子上の新たな多型の有無を検【結果】

索後，同定した多型部位ならびに+56T/C遺伝子多型に

１）TNFR2 +587（T/G）の遺伝子多型のアレル頻度についてアレル特異的PCR法を用いて遺伝子型を決定しおいて，またアレル保有率でも重度慢性歯周炎患者

た。遺伝子型分布については３×２分割表，アレル頻度では軽度〜健常者群に比べ，TNFR2（+587G）

およびアレル保有率については２×２分割表においてc2alleleが有意に高く見られた（カイ２乗検定，重度検定にて解析した。

群 vs. 軽 度 〜 健 常 者 群 ； ア レ ル 頻 度 20.7％【結果】

9.1％ p=0.0097，オッズ比＝2.61，アレル保有率

vs37.9％ vs. 16.7％, p=0.0075，オッズ比＝3.06）。

リガンド結合部に相当する細胞外第１ドメイン（EC1）に新たな１塩基変異nt324A/Gを認め，この遺伝子多型２）患者群を+587Gアレル保有の有無で分け，臨床パラの分布に民族差は認められなかった。AGP群とHC群間メーターとの関連性について検討したところ，PPD，でnt324A/G遺伝子型分布に有意な偏りを認め(c2=6.66,

CAL，骨吸収度において+587Gアレル保有群の方がp=0.036），AGP群でのnt324Aアレル保有率がHC群と比有意に高かった（マン・ホイットニー検定p=0.035，
p=0.022，p=0.018）。

べ て 有 意 に 高 か っ た （ OR=2.54, 95％ CI 1.20-5.38,
c2=6.66, p=0.014）。一方，+56T/C遺伝子多型は各対象

３）ロジスティック回帰分析により，性別，年齢，プラー群間での遺伝子型分布に有意差は認められなかった。

クの量による影響を補正した上でもTNFR2 +587

【考察】（T/G）の遺伝子多型が重度歯周炎に関連することが分かった

本研究により，FcαR遺伝子のリガンド結合部相当領域EC1におけるnt324A/G遺伝子多型がAGPの感受性に【結論】
以上より，TNFR2（+587T/G）遺伝子多型は慢性歯関与している可能性が示唆された。

周炎においてリスクマーカーとなる可能性が示唆され
６．慢性歯周炎罹患者の重症度とTNFレセプター２型遺伝

た。

子多型の関連性について
７．禁煙によるヒト歯肉微小循環ならびに好中球mRNA発
１

新潟大学大学院医歯学総合研究科

現の変化

摂食環境制御学講座歯周診断・再建学分野，
新潟大学歯学部附属病院総合診療部

２

新潟大学大学院医歯学総合研究科○島田靖子 ，田井秀明１，遠藤基広１，小松康高１，
小林哲夫１,２，山崎和久１，吉江弘正１
１

摂食環境制御学講座歯周診断・再建学分野○ 両角俊哉，久保田健彦，佐藤 匡，板垣真奈美，
杉田典子，奥田一博，吉江弘正【目的】
近年，歯周炎はcommon diseaseの一つとして位置づ【目的】

けられ，その発症，進行に遺伝子多型の関与が示唆され禁煙が歯周組織に及ぼす影響や免疫機能の回復期間にている。我々はこれまでにTNF-α遺伝子多型やIL-1遺おける好中球の働きに関しては未だ詳細には知られてい伝子多型と侵襲性歯周炎との関連性を明らかにしてきない。そこで我々は８週間の禁煙を行う喫煙者の歯肉にた。そこで，今回我々は，日本人におけるTNFレセプ

おいて，歯肉血流・歯肉溝滲出液量の変化を測定し，歯ター２型+587（T/G）の遺伝子多型と慢性歯周炎の関

肉微小循環機能に及ぼす禁煙の影響を検討した。さらに連性について検討を行った。

は，禁煙期間において好中球より発現する炎症性サイト【材料と方法】

カインやMMPsのmRNA発現の変化についても検討し新潟大学歯学部附属病院歯周病診療室を受診しインた。

フォームドコンセントを得た日本人慢性歯周炎患者196【方法】

名（40〜65歳，うち５年以内の喫煙歴がある者は対象か

全身性および歯周疾患がない喫煙者（20本以上/日のら除外）から採取した末梢血よりゲノム DNAを抽出し喫煙歴５年以上）16名を被験者として選定し，８週間にた。TNFR2+587（T/G）の遺伝子多型はPCR-RFLP法

わたって禁煙を行った。対照被験者は喫煙歴の無い非喫にて検出し，遺伝子型，アレル頻度を決定した。慢性歯煙者11名とした。禁煙の確認には呼気中CO濃度

周炎患者はKornmanら（1997）による重症度の分類基（Micro Smokerlyzerｨ），血清中ニコチン・コチニン濃準に基づき，軽度〜健常者（n=66），中等度（n=72），

度を調べた。

重度（n=58）の３群に分け，各遺伝子多型の頻度と疾

〔実験１〕

−122−

学 会 抄 録289

禁煙直前（０日）および禁煙後１，３，５日目，１週，

measurement points between both sides for cleft

２週，４週，８週目に上顎左側中切歯における歯肉血流groups and left and right sides for the control group（Laser Doppler DRT4イ），歯肉溝滲出液量（GCF，and then evaluated by Student s paired t-test. The

Periotron 6000イ）を測定した。

differences among the three groups were statistically〔実験２〕

compared by ANOVA s Fisher ratio, at a significance

０日，１，４，８週後に各々より末梢血を採血し，好level of p<0.05. Mid-facial depth assessment revealed

中球を採取した。各群の好中球よりtotal RNAを抽出・

significant differences（p<0.05）between the three

精製し逆転写後，Semiquantitative RT-PCR法により各groups, in almost all the measurement points values

種mRNA（IL-1b，IL-8，TNF-a，VEGF，MMP-8）のcalculated. No significant difference was found in the

発現量を定量し，比較検討した。

case of sagittal mid-facial asymmetry, except on the【結果】

level of Exocanthion plane in the I stage group. The

被験者16名中11名が８週間の禁煙を継続し，いずれもstudy clearly demonstrates that two-stage palatoplasty

１日で呼気中CO濃度が有意に減少した。歯肉血流は禁

combined with Hotz

煙前と比較して３日後に有意に増加した。GCF量は禁

mid-facial development and facial balance in UCLP

plate has a beneficial effect on

煙前と比較して５日後に有意に増加し，非喫煙者と比べ

patients.

禁煙１週までは有意に低かった。また，MMP-8のmRNA量は禁煙前と比較して禁煙８週後に有意に増加

９．軟骨細胞においてFGFR3はJAK/STAT系を介して
PTH/PTHrP受容体発現抑制を行う

した。
【考察】

新潟大学大学院医歯学総合研究科

禁煙により歯肉組織の代謝が活性化され，それにより
１

免疫防御機能が回復しうることが示唆された。また，喫口腔健康科学講座 顎顔面口腔外科学分野，
摂食環境制御学講座 顎顔面解剖学分野，２

煙者ではfMLP刺激後の好中球の転写産物の産生量が低

顎顔面再建学講座 硬組織病態生化学分野

３

下していることが示唆され，MMP-8の発現は禁煙後，○関早期に増加し，禁煙の影響を反映することが明らかに

雪絵１,２，網塚憲生２，永田昌毅１，織田公光３，高木律男１，前田健康２なった。
【目的】FGFR３は軟骨細胞に直接作用し，その増殖を８．Three dimensional evaluation of mid-facial development inunilateral cleft lip and palate

抑制する負の調節因子と考えられている。現在のところ，
FGFR３の軟骨細胞への作用は直接的であり，それはJAK/STAT系を介する事が知られている。一方で，Div. of Orthodontics, Polyclinic Intensive Oral Care Unit,

PTHrP，PTH/PTHrP受容体（PTH-R）も軟骨細胞のIshii Orthodontic Clinic,４Div. of Oral and Maxillofacial Surgery,

分化に重要な因子であり，特に肥大化細胞層に発現する

１

２

３

Niigata University Graduate School of Medical and Dental Sciences○C.E.Gramaticescu１, K.Terada２, K.Ishii３, N.Watanabe１,
K.Ono４, S.Morita１, K.Hanada１

indian hedgehog（IHH）とnegative feedback機構を形成することが知られている（PTHrP/IHH negativeloop）。そこで，本研究では培養軟骨細胞を用いて，This study investigate the effects of the two stage
palatoplasty combined with Hotz

plate on sagittal

mid-facial development in complete unilateral cleft lip

FGFR3, PTHrP, PTH-R間における発現制御とその機構について検索した。
【材料と方法】

and palate（UCLP）individuals, using the Optical

正常ラット由来の軟骨細胞株であるCFK２にPTHrP，Surface Scanner. The sample included 48 UCLP

PTH-RまたはFGFR３ cDNAsをtransfectionし，これら

patients（age:10-19）treated by two different surgical

遺伝子発現をRT-PCR，またはReal time PCRにて検討

techniques: one-stage palatoplasty and two-stage

した。また，FGFR3cDNAをtransfectionした細胞におpalatoplasty and 24 age-and gender-matched non-cleft

けるStat1の免疫局在を観察した。さらに，JAK

subjects with skeletal Class I. Mid-facial sagittal depth

Inhibitorsで処理した場合のPTHrP, PTH-Rの発現を

was determined by evaluating the z-coordinate values

Real time PCRにて検討した。

of 15 corresponding facial measurement points on both

【結果と考察】sides for each cleft group and the control group. Mid-

培養軟骨細胞であるCFK2は，PTHrP，PTH-R，

facial asymmetry was obtained by calculating the

FGFR3を発現したが，IHHは検出されなかった。従っdifference in z-values of these 15 corresponding facialて，PTHrP/IHH negative loopはこの培養系において成

−123−

290

新潟歯学会誌

33（2）
：2003

立せず，PTHrPとPTH-R発現におけるIHHの関与は排にはTRAP陽性破骨細胞が骨片上に局在していたが，除された。PTHrPまたはPTH-Rの過剰発現を行った

F4/80陽性マクロファージの集積は認められなかった。

CFK2ではFGFR3の発現変化を認めることはできなかっ術 後 ６ 日 で は ， 骨 折 近 傍 の 骨 外 膜 部 位 に type II

た。ところが，FGFR3 cDNAをtransfectionしたCFK2

collagen陽性を示す軟骨塊が形成しており，その表層をでは，FGFR3蛋白はその細胞膜にほぼ一致して観察さALP陽性細胞が覆っていた。また，骨折部位には破骨れ，そのようなCFK2ではPTHrPの発現は若干減少し，細胞が多数局在したが，依然としてマクロファージの集

またPTH-Rの発現は著しく抑制された。FGFR3を過剰積は観察されなかった。10日目では，骨折付近で形成さ発現した細胞ではStat1の核局在が認められたことから，れた軟骨には血管侵入および骨置換が認められた。

JAK/STAT系を介する可能性が推測された。JAK2【考察】

Inhibitor処理を行った場合はPTH-Rの発現は影響を受け骨折部位からの距離により骨外膜の反応が異なることなかったが，JAK3 Inhibitor処理によってPTH-Rの遺伝が明らかとなった。骨折近傍ではALP陽性細胞周囲に子発現が減少したことから，FGFR3のPTH-R発現抑制

type II collagen陽性基質が存在したことから，骨外膜機構はJAK3を介する可能性が推測された。

の細胞は骨芽細胞と軟骨細胞の性質を備えていると考えられた。一方，マクロファージの集積はそれほど顕著で10．骨折の初期治癒過程における組織化学的検討はないことから，骨折による炎症よりも露出した骨基質からの何らかの因子，あるいは骨折時の血管破壊による１○李

新潟大学大学院医歯学総合研究科

酸素供給の低下などが，周囲の骨外膜細胞の分化を調節

顎顔面解剖学，２顎顔面口腔外科学

している可能性が推測された。

敏啓１,２，網塚憲生１，竹内亀一１，
高木律男２，前田健康１

11．ラット上顎骨における吸収性膜を用いたGBR法の組織
学的観察

【目的】
骨折治癒過程における骨・軟骨形成と骨吸収の初期変新潟大学大学院医歯学総合研究科

化を明らかにする目的で，マウス肋骨骨折モデルを作製

口腔健康科学講座 加齢・高齢者歯科学分野，

１

し，骨形成あるいは軟骨形成といった骨外膜の反応を組

摂食環境制御学講座 顎顔面解剖学分野

２

織学的に検討した。

○田口裕哉，網塚憲生２，中舘正芳１,２，大西英夫１，

１,２【材料と方法】

藤井規孝１，野村修一１，前田健康２

生後７週齢ICR系雄性マウスにおける第８番肋骨を中央部で切断した。術後２，４，６，10日目に４％パラホ【目的】

ルムで灌流固定，骨折させた肋骨を提出し10％EDTAで骨欠損部における骨増生を目的としたGuided Bone

脱灰，パラフィン包埋した。同試料において，ALP，Regeneration（GBR）法に用いる遮断膜には生体吸収性

TRAP，オステオポンチン，type II collagenおよび抗マ

膜と非吸収性膜がある。e-PTFE膜に代表される非吸収

クロファージ抗体（F4/80）を用いた免疫組織化学を行っ性膜を用いたGBR法に関しては，多くの基礎的・臨床的た。

成果が報告されているが，近年その使用が盛んとなって【結果】

きた吸収性膜を用いたGBR法に関する研究報告の多くが術後２日後の骨折断面及びその周囲には変性組織が形術後に獲得された骨量に焦点を当てており，その骨形成成され，周囲の骨芽細胞のALP反応も上昇した。骨折過程の詳細について着目したものは少ない。そこで今回部位に近い骨外膜では強ALP陽性を示す骨芽細胞層が我々は，ラット上顎骨骨欠損部に吸収性膜を用いたGBR

肥厚し，これら骨芽細胞様細胞の周囲には極弱いtypeを行い，新生骨形成過程を吸収性膜と骨形成系細胞とのII collagen陽性反応も認められた。ところが，骨折部位関連性に注目して経時的組織学的に観察した。

から離れた骨外膜直下にはオステオポンチン陽性を示す【方法】

骨基質の添加が観察された。一方，骨折部位にマクロ

生後４週齢雄性Wistar系ラットの上顎臼歯を抜歯し，ファージ・破骨細胞の顕著な集積は観察されなかった。

抜歯窩の治癒後に規格化した骨窩洞を形成し，吸収性膜

４日後では，骨折部位に近い骨外膜においてtype II(Bio-Gideｨ)を用いたGBR法を行った。なお，反対側は骨collagen陽性を示す細胞外基質が増加したが，依然とし窩洞のみの対照群とした。術後１，２，３，４週に灌流てその中に存在する細胞は強ALP陽性を示した。一方，固定を行い，試料作成後，H-E染色およびアルカリフォス

骨折部位から離れた位置の骨外膜ではオステオポンチン

ファターゼ（ALP），酒石酸抵抗性酸性フォスファター

陽 性 を 示 す 骨 基 質 の 添 加 が 観 察 さ れ た が ， type II

ゼ（TRAP），オステオポンチン（OPN），オステオカル

collagen陽性反応は認められなかった。また，骨折部位

シン（OCN）の検出を行った。

−124−

学 会 抄 録【結果および考察】

291

【結果】

術後１，２週の対照群では，窩洞底からの線維性骨の変異型は野生型とは異なり高分子量凝集物を形成して形成が認められ，多くのALP陽性骨芽細胞が観察された。

おり，酵素活性を示さなかった。蛍光抗体染色では，野線維性骨にはTRAP陽性破骨細胞は少なく，骨形成が優生型が細胞表面に発現するのに対して，変異型は大部分

位であることが示唆された。術後３，４週では，多数のが小胞体に局在していた。変異型は生合成後分解された

ALP陽性骨芽細胞ばかりでなく，TRAP陽性破骨細胞がが，その分解はプロテアソーム阻害剤であるMG132の新生骨表層に散在した。また，新生骨の高さは既存の歯添加により阻害され，その結果細胞内にポリユビキチン

槽骨頂部まで達しておらず，陥凹した形態を呈していた。

化された変異タンパク質が貯留した。これより，本変異

一方，術後１，２週の実験群では，対照群と同様に窩洞

酵素はユビキチン/プロテアソーム系で分解を受けるこ

底からの線維性骨の形成ならびに多数のALP陽性骨芽細とが示された。

胞の存在が確認された。術後２週になると，吸収性膜直【結論】下および膜由来膠原線維間にもALP陽性細胞が観察さ

TNSALP(D289V)は細胞内分解を受けることにより細れ，それにほぼ一致してOPNならびにOCN陽性反応が膠胞表面で機能発現できず，本変異を有するホモ型の患者

原線維の表層に検出された。従って，今回用いた吸収性は低ホスファターゼ症を発症すると考えられる。

膜は骨芽細胞の分化促進に関与しているものと推測された。術後３，４週の実験群では，線維性骨の緻密骨への13．突然変異型アルカリホスファターゼ（1559delT）の細胞内での動態

置換が進み，骨窩洞はほぼ新生骨で満たされた。また，膜由来と思われる膠原線維が新生骨骨基質中に取り込ま

新潟大学医歯学総合研究科

れており，骨芽細胞が吸収性膜の膠原線維を基質沈着の１足場としても利用していることが推察された。以上より，

硬組織病態生化学，２摂食機能再建学○小丸圭一１，石田陽子２，河野正司２，

吸収性膜を用いたGBR法において，コラーゲン性吸収性

天谷吉宏１，織田公光１

膜は骨原生細胞から骨芽細胞への分化促進に関与し，基質合成の足場として機能すると推察された。

【目的】

12．突然変異型アルカリホスファターゼD289Vの細胞生物の遺伝子は低ホスファターゼ症の原因となる遺伝子で，組織非特異的アルカリホスファターゼ（TNSALP）
学的解析

種々の変異により骨や歯などの硬組織に影響を及ぼすことが報告されている。この中で1559番目のチミン（T）の新潟大学医歯学総合研究科

欠失変異型（1559delT）は日本人低ホスファターゼ症

摂食機能再建学，２硬組織病態生化学

患者からのみ報告されているものである。本研究はこの１○石田陽子１，河野正司１，小丸圭一２，
伊藤将広２，天谷吉宏２，織田公光２

TNSALP（1559delT）の細胞内での動態を解析した。
【方法】

【目的】

野生型および本変異型酵素をin vitro translation /低ホスファターゼ症は，硬組織の低石灰化と血中におtranslocation系で解析し，またCOS-1細胞に発現後，細ける組織非特異型アルカリホスファターゼ活性の低下に

胞内動態を細胞生物学的手法を用いて比較検討した。

よって特徴付けられる遺伝性疾患である。本疾患は，組【結果】

織非特異型アルカリホスファターゼ（以下TNSALP）

変異型酵素は欠失変異によるフレームシフトのため野遺伝子の突然変異に起因していることが知られており，生型に比べ80アミノ酸残基大きい分子であることが確認

これまでに数々の突然変異が同定・報告されてきた。さされた。COS-1細胞においては変異酵素は活性を有してらに近年，289番目のアミノ酸であるアスパラギン酸がいたが細胞表面には発現せず，一部は分泌された。これ

バリンに変異した周産期致死型症例が報告された。本研

は変異酵素がGPI（グリコシルホスファチジルイノシトー

究ではこの変異タンパク質TNSALP（D289V）に注目

ル）で修飾されないことによる。大部分の新生変異酵素

し，その活性・細胞内動態を解析した。

は高分子凝集体を形成し，合成後急速に分解されたが，【方法】

さらにその分解はユビキチン/プロテアソーム系による野生型および本変異型タンパク質をCOS-1細胞に発現させ，p-ニトロフェニルリン酸を基質とした活性測定，ものであった。
【結論】

アゾ色素法による活性染色，蛍光抗体染色，放射性アミ

TNSALP（1559delT）はフレームシフト突然変異のノ酸標識/免疫沈降法，ウエスタンブロッティング法をためGPI化されず，大部分は小胞体内腔で凝集体を形成

用いて比較検討した。

後プロテアソームにて分解された。
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292

新潟歯学会誌

14．primary Sjogren's
syndrome 患者唾液中におけるMMP¨

33（2）
：2003

15．嚥下造影検査における被曝線量の測定

2,9およびTIMP-1,2量
新潟大学医学部保健学科放射線技術科学専攻，１

新潟大学大学院医歯学総合研究科

新潟大学大学院医歯学総合研究科

摂食・嚥下障害学分野，

２

摂食環境制御学講座
１

顎顔面放射線学分野， 加齢・高齢者歯科学分野，

４

摂食・嚥下障害学分野，２加齢・高齢者歯科学分野○浅妻真澄１，渡部新潟大学歯学部附属病院・放射線室

３

守１，五十嵐敦子１，野村修一２○ 長濱航永 ，豊里
１

【目的】
..
Sjogren's syndrome は外分泌腺の障害による口腔乾５晃２，竹内由一３，植田耕一郎２，林

孝文４，野村修一５【目的】

燥症や乾燥性角結膜炎を主徴とする全身性自己免疫疾患

ビデオX線透視検査は障害された器官の構造と機能をの一つであるが，その病因はいまだ明らかにされていな同時に評価することができるため，摂食・嚥下障害の診い。そのような中で本疾患とプロテアーゼとの関連を示

断には，嚥下造影検査（VF：Video-Fluorography）が唆する報告もなされている。そこで今回，我々は..
primary Sjogren's syndrome患者の唾液中における細胞

ゴールドスタンダードとなっている。しかし，長時間の外マトリックス分解酵素の一つであるmatrix

きくなる。そこで今回我々は，VF検査時の皮膚吸収線

metalloproteinases（MMPs）と，その阻害因子である量を測定し，適切な検査時間，防護方法を検討したので検査や回数が多くなると，VF検査による被曝線量も大tissue inhibitor of metalloproteinases（TIMPs）を測定報告する。

し，これらの酵素と本疾患の病態との関連を調べること【方法】

を目的とした。

皮膚吸収線量の測定には，TLD素子（MSO-S）を使【方法】用した。頭部ファントムに，TLD素子を３本１組で外対象は，1999〜2002年の間に本学医学部附属病院にお..
いてprimary Sjogren's syndrome患者と確定診断された

眼角部，側頭部，甲状腺部に貼り付け，各部位における32名（男性１名，女性31名：平均年齢55.3±14.4歳）と，

VF検査時に本人の同意を得て同様の測定を行った。ビ

健常者26名（男性3名，女性23名：平均年齢52.6±9.8歳）

デオX線透視装置の設定条件は，FSD=60cm，管電圧とした。全被験者に対しパラフィンガムによる刺激唾液

55kV，Dose index 100，フレーム数は12.5フレーム/秒，

皮膚吸収線量を測定した。さらに，摂食・嚥下障害者のを吐出法にて採取した。遠心分離して得られた上清を試パルス幅の最大値を８msに設定した。

料としてELISA法，sandwich-ELISA法によってMMP-【結果および考察】

2,9，TIMP-1,2量を測定した。また，zymography法，

単位時間当たりの皮膚吸収線量は，外眼角部でreverse zymography法によってそれぞれMMP，TIMP

3.6mGy/s，側頭部，甲状腺部で4.3mGy/sであった。こを同定した。各々のタンパク量，さらにMMP/TIMP比の線量で，水晶体白濁が起こるしきい線量（1Gy）を越を比較し検討した。

えるまでの時間は４分30秒，初期皮膚紅斑が起こるしき【結果および考察】い線量（2Gy）を超えるまでの時間は７分30秒である。

MMP-９量は健常者群で145.87±111.65ng/ml，患者群

新潟大学歯学部附属病院では一回の検査時間はおよそ２で213.02±151.77ng/mlと有意差をみとめた。MMP-２量

分30秒であるため，これらの確定的影響がでる心配はは両群とも検出不可能であった。zymographyでは両群少ないと考えられる。しかし確率的影響については，一にMMP-9は認められたがMMP-２は確認できなかった。

回当たり200mGy程度が望ましく，一回の検査時間が45

TIMP-1,2量は両群間に有意差は認められず，reverse

秒でこの値に達する。VF検査時の被曝線量を軽減する

zymographyにおいても両群でほぼ同程度の像が確認さためには，検査時間の短縮のほか，読影可能な範囲で装れた。MMP/TIMP比においてはMMP-９/TIMP-1は健置の線量を減らす，管球からの距離を離すことが有効で常者群で1.28±1.11，患者群で2.60±1.18と有意差をみと..
めた。これらのことから，primary Sjogren's syndromeあった。

患者の唾液中MMP-9/TIMP-1は本疾患における唾液腺
破壊を反映している可能性が示唆された。

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学 会 抄 録

16．過去24年間における当科口内法撮影による患者被曝の推移
１新潟大学歯学部付属病院・放射線室，
２新潟大学医学部保健学科・放射線技術科学専攻，
３新潟大学大学院医歯学総合研究科・顎顔面放射線学分野○竹内由一１，長濱航永２，林孝文３【はじめに】
我々は1979年３月より2003年４月まで口内法撮影における患者被曝線量を測定している。今回，過去24年間における当科での口内法撮影による患者被曝線量の推移を検討したので報告する。
【材料と方法】
使用した歯科用Ｘ線装置は吉田社製パンパースE，シー
メンス社製 ヘリオデント70，同ヘリオデントMD。測定
対象はMix-Dファントム，ランドファントム，成人ボラ
ンティアである。1979年３月から2003年４月にかけて行ったTLD測定（KYOKKO TLD測定システム）５回と，1999年５月の照射線量測定（電離箱式線量計
CAPINTEC Model192）１回の結果を，測定値を時系列として検討し，装置の変更などの事項を加味して評価した。
【結果と考察】上顎大臼歯撮影における皮膚線量を指標とすると，フィルム変更時（ISO規格C感度からD感度へ）に半減していた。しかし現在も当科の患者被曝線量は全国歯学部附属病院のなかでは高いグループに属しており，今後も被曝軽減への努力が必要であると考えられた。

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