嗅球神経回路の調節に関する三次元構造解析
Three-Dimensional Structural Analysis for Regulation of Neural Circuitin the Olfactory Bulb
樋田一徳，清蔭恵美，鈴木良典，浜本真一

Kazunori Toida, Emi Kiyokage, Yoshinori Suzuki and Masakazu Hamamoto
川崎医科大学解剖学
要旨

脳の基本的神経回路のモデルとして注目される嗅覚系の一次中枢の嗅球は，これまで介在ニューロンを中心としたニューロン構成の解析から始まったが，最近の新たな細胞標識法や顕微鏡技術の発展などにより，従来同定できなかったニューロン，特に他の脳領域からの長距離にわたる遠心性投射系ニューロンの単一標識が可能となってきた．これらのニューロンによる神経回路調節の構造的基盤は従来推測の域を出ていなかったが，遺伝子改変動物，ウイルスベクターを用いた遺伝子導入，多重免疫染色，レーザー顕微鏡と電子顕微鏡を直接組み合わせた統合解析，デジタル単一ニューロントレース，電子線トモグラフィーを駆使することで，嗅球神経回路への遠心性調節ニューロンの存在意義が分かり始めた．本稿では最近の筆者らのセロトニンニューロンについての所見を紹介し，神経回路への調節系の三次元構造解析の有用性と意義，そして今後の発展の可能性を論じたい．

キーワード：嗅球，神経回路，調節，セロトニン，ニューロン標識1.

されたが 1），小坂らはこれらの介在ニューロンを，嗅神経終はじめに末との近接度の高い type1 と近接度の低い type2 に分類し 3），嗅覚系の一次中枢の嗅球は，従来，脳の基本的神経回路のこの分類が現在では広く受け入れられている．筆者らは両タモデルとして注目され，カハール以来，現在に至るまで魅力イプの代表的なニューロンである calbindin（CB）免疫陽性

1）的な解析の対象となってきている ．この中で筆者らはこれニューロン（CB ニューロン；type2）と tyrosine hydroxylase

まで一貫して，電子顕微鏡連続切片再構築法を基軸として，（TH）免疫陽性ニューロン（TH ニューロン；type1）につい様々な手法を用いて嗅球神経回路を解析してきた．神経回路て，ラット嗅球において，共焦点レーザー顕微鏡三次元解析を解析する当初は，我々の研究は介在ニューロンを中心としと電子顕微鏡連続切片三次元再構築法を直接組み合わせた手たニューロン構成の解析から始まったが，現在では細胞標識法によりシナプス結合の解析を行った．その結果，CB ニュー法や顕微鏡の応用など，様々な技術的進歩がある．本稿では

ロンは嗅神経から直接シナプス結合を受けず，投射ニューロ

これまでの我々の研究をベースに，特に新たな手法で解析をンの樹状突起との間に相反性シナプス（reciprocal synapse）進めた嗅球神経回路の調整系に焦点を当て，最近の知見を含を形成し 4），一方 TH ニューロンは嗅神経からの直接的なシめて解説したいと思う．

ナプス結合を頻繁に受け，投射ニューロンの樹状突起との間

2.に相反性シナプスを形成せず，非対称性シナプスを受け，別嗅球神経回路の概要の投射ニューロン樹状突起に対称性シナプスを形成する連続まず嗅球神経回路の概要を説明したい（図 1）2）．嗅神経は性シナプス（serial synapse）を形成することがわかった 5）．

嗅球に入り，表層の糸球体内で終末する．その終末の先は二以上の所見はマウスにおいても同様な傾向がある（筆者らの次ニューロンであり，嗅球から高次中枢への投射ニューロン未発表データ）．嗅神経との直接入力の有無で，type1 とである僧帽細胞で，これにより嗅覚情報が高次脳中枢へ伝達type2 に分類された介在ニューロン群が化学的性質と形態的される．その高次への投射の際に，糸球体において傍糸球体特徴が異なり，更にニューロンの神経回路内のシナプス結合細胞と総称される介在ニューロン群が多様な様式でシナプスが異なる事実は興味深い．この真の意味は今後の機能的解析結合し，嗅覚情報の伝達調節を行っている．介在ニューロンによる検証に委ねたいが，少なくとも形態学的所見から，群は，GABA 系ニューロンとドーパミン系ニューロンが同定

TH ニューロンは匂い識別に，CB ニューロンは匂い感度に〒 701–0192 岡山県倉敷市松島 577
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関わっている可能性が示唆される 2,6）．
このような嗅球神経回路は，そのニューロン構成や神経回路機能について様々な調節系の影響を受けていることがわ
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図1

化学的に同定されたニューロンによる嗅球シナプス神経回路（文献 2）より転載）

かっている 1）．本稿では，以前から解析が進んでいる嗅球独

発現は，TH，GFP の両タンパク共に低下しているものの，特の匂い刺激による神経回路調節と，最近注目が集まってい低下する TH と共存する GAD のタンパク発現は低下せず不る他の脳領域からの遠心性調節について，筆者らの最近の変であった．以上は従来の結果を指示する所見であるが 7），データをもとに以下に紹介したい．

興味深いことに TH-GFP モデルマウスでは，TH 遺伝子発現3.

を標識した GFP タンパクの低下が顕著でないこと，そして匂い刺激による嗅球神経回路の調節

TH タンパクの発現では比較的小型の細胞体の TH ニューロ

嗅球は嗅覚系の一次中枢であることから，その神経回路はンで低下の度合いが著しく，逆に大型の細胞体の TH ニュー一次ニューロンである嗅神経による匂い刺激が入力源とな

ロンでは長期鼻閉によっても発現が比較的温存されているこる．興味深いのは，無数の匂い刺激源となりうる化学物質のとである 9）．この多様な，わずかな変化の違いの理由は，組種類に関わらず，入力を完全に遮断すると神経回路内のみ替え遺伝子が挿入されたゲノム領域の影響による異所的発ニューロン構成が変わることである．正確には，ニューロン

現や TH プロモーターの GFP 発現効率の影響，TH と GFPの存在は変わらないものの，構成ニューロンの化学的性質のの合成・分解サイクルの違いなどが考えられるが，詳細は不発現に変化が見られるというべきであろうか．先に述べた

明である．一方で，筆者らの TH ニューロンの電気的特性とtype1 ニューロンとして前掲の TH ニューロンは GABA の主形態の解析から，TH ニューロンには嗅神経刺激に対する反3,5），このニューロン応性に高低の多様性があり，比較的大型のニューロンに反応は鼻閉や鼻粘膜傷害などによる嗅神経の物理的・機能的遮断性の低いものが認められたことから 10），TH という同じ化学を行うと，GABA 合成酵素の glutamate decarboxylase（GAD）的性質のニューロンで，形態的特徴と電気的特性に加えて，の発現は変化しないものの，同じニューロンに共存する TH

遺伝学的背景も加味すると，神経回路内での TH ニューロンの発現が下がる．このことは，嗅入力遮断によって嗅神経かの更に詳細な存在意義が明らかになる可能性がある．

要なサブポピュレーションでもあるがら密接にシナプス結合を受ける TH ニューロンの化学的性質

なお，鼻閉はヒトの場合に問題になるのは慢性鼻炎などでの変化の特徴として理解できるが，神経伝達物質の合成酵素ある．アレルギーなどで長期鼻閉の後，アレルギーが治まりの別の GAD が同じニューロン内に共存しているにもかかわ鼻閉症状が改善しても嗅覚を失う，あるいは機能が改善しならず不変であることは不思議である．従来，この現象は免疫いケースが多い．シナプス結合からみれば嗅神経からの入力染色などでわかっていたが 7），最近，個体レベルで TH のプ再開を考えると，理解しづらい現象である．このように，身ロモーター下に green fluorescein protein（GFP）遺伝子発現

近な疾患や発症の謎にも，動物モデルを用いた嗅球神経回路を導入した，TH-GFP トランスジェニックマウス（TH-GFPの解析は有用であろう 11）．

マウス）8）によって更に現象の詳細が明らかとなった．
マウスの外鼻孔を縫い合わせ，匂い刺激物質が鼻腔に達す

4.

遠心性入力による嗅球神経回路の調節ることのないように外気との遮断を行う機能的鼻閉は従来よ4.1

遠心性調節についてく用いられてきた手法であるが，筆者らは TH-GFP マウス

嗅球神経回路の調節系として，次に高次中枢，あるいは他の長期鼻閉モデルを作り，TH 遺伝子，TH タンパク，GFPの脳領域からの遠心性調節について述べたい．一般に感覚系タンパクの発現の変化を解析・検討した．その結果，TH のは感覚器官から末梢神経を経て中枢に入り，中枢神経系内の解説

嗅球神経回路の調節に関する三次元構造解析

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伝導路を通り，様々な脳領域，すなわち一次中枢，二次中枢，
12）膜タンパクシグナルに蛍光標識を行うことで，単一のニュー．この間に，ロンを細胞体から軸索末端まで可視化することに成功しそれぞれの脳領域において情報は適切に処理される．一方，

た 16）．この方法の神経科学史上の位置づけは当誌前号に掲載

情報処理は個々の脳領域の介在ニューロンを中心とした局所された優れた解説論文にわかりやすく述べられているが 12），の神経回路によって処理されるが，他の脳領域から投射して脳内に数少ないニューロンが浮かび上がる形態像は，ゴルジくるニューロン系によっても調節される．嗅覚系のように，銀染色によく似ている．第 113 回日本解剖学会全国学術総会

感覚系は情報伝達が脳の上位中枢へ向かうため，その方向性において京都大学の金子武嗣教授がシンポジウムの口演でから上行性あるいは求心性である．この観点からすれば，他“遺伝工学を用いた現代のゴルジ法”と解説されことは印象の脳領域から投射してくるニューロン系は遠心性調節入力と深い 17）．そこで筆者らは金子教授との共同研究を進め，嗅球いえる．嗅覚系では古典的なトレーサー実験によって，嗅球への長距離遠心性投射ニューロン系の解析を行った．

あるいは中継領域を経て，高次中枢へ向かうへ向かう 3 種の遠心性調節入力の存在がわかっている 1）．す
13）

4.3

嗅球へのセロトニンニューロンの投射，縫線セロトニンニューロンは，抗セロトニン抗体で免疫染色す核からのセロトニンニューロン 14），ブローカ対角帯水平脚かることで，細胞体，軸索，樹状突起は一応染まる．しかし起らのアセチルコリンニューロン 15） である．これらのニュー始核の細胞体はよく識別できても，樹状突起，そして軸索のロンは，注意，学習，記憶，感情，脳機能賦活，自律神経系

細い線維は脳内全体に観察され，その線維がどのように走行への影響など多彩な機能を持つ生理活性物質を含有するが，しているかは実際判別が不可能であるが，線維分布の密度は嗅覚系にどのように影響を及ぼすかは長らく謎であった．理わかり，起始核の縫線核と投射先の嗅球に濃染するのがわか

由は，それぞれのニューロンが起始核からどのような脳内経る（図 2）．これでようやく，点（縫線核）と点（嗅球），そ路によって嗅球へ至るのか，途中でどこに分枝し，またどこの間の線（軸索）が把握できるが，これも連続性の点では推からか影響を受けるのか，そして嗅球へ至った後，どのよう測にすぎない．わずかな距離であるが，嗅球内に分布するセなメカニズムで標的となるニューロンや局所回路にそれぞれロトニン免疫陽性線維を Neurolucida 18）によってデジタル立の物質が影響を及ぼすのか，など不明な点は数多く，存在が体トレースすることが出来た（図 3）．点（嗅球）から線（軸わかっていてもこれほどの長距離にわたる脳内投射系の全貌索）がつながり始めた．これによって嗅球の各層を横断しては把握できず，解析の糸口さえつかめなかったのが事実のよ線維を伸ばし，特定の領域（嗅球糸球体層）で分枝しているうである．しかし古典的とは言え，先人の苦労は事実を物語っことがわかった．次に実際にこのニューロンが縫線核から投ている．起始核から標的領域への順行性投射実験，逆に標的射しているか否かを検証するために，シンドビスウイルスを領域に逆行性トレーサーを注入して起始核を探索する解析な用いて解析することにした．そして鈴木らは条件設定の試行

ど，トレーサー実験は興味深い示唆を我々に与えてくれたが，を繰り返し，ようやく至適な標識条件を得て単一のセロトニ

やはり点と点の関係以上の解釈は推測の域を超えず，horse-ンニューロンの縫線核からの投射の全体像を明らかにするこ

radish peroxidase（HRP）のような可視化像の連続標本も，とに成功した（図 4）19）．

なわち，青斑核からのノルアドレナリンニューロン群としてのニューロン投射像としては十分な解明を得るに至方法を簡単に説明する．生体マウスを麻酔下で定位脳装置らなかった．このような中で，標識ニューロンのより選択的に固定し，目的の縫線核にカニューレを挿入し，微小注入器な標識の必要性が高まってきた．

によってシンドビスウイルスを注入した．注入後に頭皮を縫4.2

単一セロトニンニューロンの選択的標識合して覚醒し，数日間の生存後に固定液で灌流固定する．固古田らはリコンビナントウイルス（Sindbis virus；シンド定後に脳を取り出し，ビブラトームで 50 μm 厚の連続スラビスウイルス）を定位脳固定法により特定の脳領域に注入し，イスを作製し，個々のスライスを蛍光顕微鏡で観察すると，標的ニューロンを感染させることによって遺伝子を導入し，感染したニューロンが GFP などの蛍光標識によって同定で

図 2 抗セロトニン抗体を用いた免疫染色をしたマウス脳傍矢状断スライス（50 μm 厚）．起始核（DRN；背側縫線核，MRN；内側縫線核）と嗅球（OB；特に表層）に免疫陽性が高い．Bar = 2 mm．（文献 20）より転載）
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続によって，やがて嗅球に至る全経路がトレースできる訳である（図 4C–E）19）．埋没しているもの，現れているものは必ず追跡できるという事実を見据え，サイエンスの理論を信じて諦めず地道に探求することが成功の秘訣のようである．
結果であるが，周辺の脳の辺縁を同時にトレースして立体画像に残せば，あたかも透視スケール脳の中に一つのニューロンが浮かび上がる像が印象的である．経路も明らかとなった．縫線核を出た後，赤核，内側視床下核，内側視索状前核を避けて前視床下核，そして前嗅皮質を経て嗅索（遠心性では嗅球の入口）に至ることがわかった．脳を外側から透視す
ると比較的まっすぐに戸惑いなく投射しているようであるが（図 4D），上や正面から見ると随分と蛇行して，走行にも意
図 3 マウス嗅球において免疫染色されたセロトニンニューロン線維の Neurolucida によるデジタルトレース像．左右で ±8° のステレオ像となる．右図の線維上の赤い点は，シナプス結合が存在すると考えられる varicosity．分枝，varicosity の分布と数が層によって異なっている．Bar = 50 μm．
（文献 19）より転載）

味がありそうである（図 4C，E）19）．
4.4

嗅球内のセロトニンニューロンのシナプス

嗅球に入るとセロトニンニューロンは深部から表層に向かって比較的まっすぐに放射状に線維を伸ばす（図 3）．そして糸球体では分岐を繰り返して枝を出し，複数の糸球体をまたがって走行しているのがわかる（図 3）．線維の所々にきる．しかしこの感染ニューロンがセロトニンニューロンでは数珠玉状の varicosity が観察されるが，これは電子顕微鏡あるかはこの段階ではわからず，これらのスライスに抗セロでシナプス構造が高頻度に認められる部位である．電子顕微

トニン抗体を多重染色させて，はじめて細胞体レベルでのセ鏡では，このシナプスは形態的に非対称性シナプスに分類さロトニンの同定が可能となる（図 4A）．その後，セロトニンれるが，大型の有芯性のシナプス小胞があるなど形態がよりニューロンが確認されたスライス全シリーズで抗 GFP 抗体多様性に富む．切片により見え方が違う，あるいは DAB 反を用いて DAB 発色し（図 4B），スライドガラス上にエポン応産物により判別しづらい場面があるために，常に連続切片で包埋して永久標本とした．感染したニューロンの線維が認を 100 枚は切るようにして，複数の varicosity を解析カバーめられる全てのスライス標本を並べ，セロトニンニューロンできるようにしている．それでも判断に迷うことがあるので，と同定された細胞体から順次 Neurolucida による立体トレー

電子線トモグラフィーによって，シナプス結合の同定根拠とスを行う．切片の端で切り終わった線維は次の連続スライスなるシナプス前部（すなわちセロトニンニューロン側）のシで位置合わせをして断端を同定し，それをつなげる．その連ナプス小胞，シナプス間隙，シナプス後部（すなわちセロト

図 4 シンドビスウイルスベクターを用いた遺伝子導入による単一セロトニンニューロンの標識の一例．背側縫線核で感染したニューロン（A1；緑）は，抗セロトニン抗体（A2；青），抗セロトニン抗体（A3；赤）によっていずれも免疫陽性となり（A4；白），感染細胞がセロトニンニューロンであることが同定された．Bar = 200 μm（A, B），2 mm（D; C，D，E は同拡大率）．（文献 19）より転載）

解説

嗅球神経回路の調節に関する三次元構造解析

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図 5 マウス嗅球糸球体層の抗セロトニン抗体（赤紫），抗tyrosine hydroxylase（TH）抗体（緑），抗 calbindin（CB）抗体（青）による免疫多重蛍光染色．レーザー顕微鏡三次元再構築像（A）の部分を電子顕微鏡連続切片から三次元再構築すると（B），レーザー顕微鏡像の特定な部位（A の C, D）で電子顕微鏡によってシナプス結合が形成していることがわかった（A の（文献C1, C2, D1, D2）．Bar = 10 μm（A ～ E は全て同拡大率）
19）より転載）

図 6 マウス嗅球糸球体層の抗セロトニン抗体（赤），抗小胞性グルタミン酸トランスポーター 3（VGLUT3）抗体（青），抗セロトニン 2A 型受容体抗体による免疫多重蛍光染色．A の四角部分に注目．この部位を B で拡大する．B の矢印で示した部位には，セロトニン線維上（B1, B2）に VGLUT3 が発現しているが（B1, B3），セロトニン 2A 型受容体抗体はこの部位とは離れて存在することが多い（B1, B4）．Bar = 20 μm（オリジナル未発表データ）

ニンの標的ニューロン）の膜肥厚を詳細に解析した．その結グルタミン酸伝達マーカーである小胞性グルタミン酸トラン

果，シナプス小胞，シナプス間隙，シナプス後膜肥厚共に典スポーター 3（VGLUT3）がシナプス部位に共存することが型的な非対称性シナプスと対称性シナプスの中間的な構造でわかり，少なくともグルタミン酸を伝達物質として用いていあり，しかし形態的には非対称性シナプスに分類されることる可能性が明らかとなった 19）．

が明らかとなった 20）．

よく受ける質問は，“セロトニンニューロンの伝達物質は筆者らが一貫して行ってきた連続切片三次元再構築法は，セロトニンか？”というものである．セロトニンニューロンシナプスを確実に同定するためには不可欠な手法であるが，の放出部位と放出されたセロトニンそのものを同定すること労力も技術も必要であり解析に時間がとられてしまう．一方，は形態学的に難しいが，セロトニン受容体の同定は可能であ

最近これらを確実に実行できる新たなイノベーションとしてる．興味深いこととしては，筆者らの予備的実験で，セロト走査型電子顕微鏡による連続断面撮影法がある．
（当誌 49 巻

ニンと VGLUT3 の共存する部位の近接部位，すなわち非対称3 号の特集を参照されたい．）これら新たな解析手法に対し，性シナプスを形成する相手側のニューロンのシナプス後部で筆者らの連続切片の有効性としては切片が残ることで，これはセロトニン受容体は発現せず，近傍に散在的に発現していによって電子線トモグラフィー法を用いれば，超薄切片内のることである（図 6；未発表所見）．このことは，セロトニン立体構造情報が分子レベルまで取得可能なことであろうか．

はシナプス前部付近から放出されるものの，受け取る受容体いずれの手法を選択するかは研究者の解析の対象が何にあるはやや離れた部位に存在する，いわば傍分泌のような volumeのかがポイントと思われる．

transmission を行っていることを示していると思われる 19）．

さて，このセロトニンニューロンが形成するシナプスの相

4.5

セロトニンニューロンの嗅球神経回路への調節

手側は何であるかを知らなければならない．そこでまず，こ以上の所見を，これまでの我々の所見に重ね合わせた

れまでの研究の集積から，蛍光多重染色を行い，セロトニン（図 7）．セロトニンが伝達物質としてどのように働いているニューロンが接触しているニューロン種をレーザー顕微鏡でかはまだ十分に解明できていないが，少なくとも興奮性に働探索した．するとほとんどの介在ニューロンマーカーと接触き，異種のニューロンに同時にシナプスしていることがわし，特に前述の type1 ニューロンの代表である TH ニューロかった．このことはセロトニンが嗅球神経回路の賦活系調節

ン，type2 ニューロンの代表である CB ニューロン共に，単を行っていることを示唆するものである 19）．セロトニン産生一のセロトニンニューロンが近傍でコンタクトする像を頻繁が睡眠と覚醒に伴う日内リズムを示し，脳機能全般の賦活系

19）に観察できた（図 5A） ．その一つをレーザー顕微鏡と一致機能を有していることからも，嗅覚神経回路をモデルとしたした領域を連続切片で解析したところ，TH ニューロンと更なる解析は有用性が高いと考えている．

CB ニューロンとの近傍に同時に非対称性シナプスを形成し4.6ていたことがわかった．これで，セロトニンニューロンの機個体レベル，単一ニューロンレベル，物質別に細胞標識が能の上で対照的と思われる異種のニューロンに同時にシナプ可能となった現在，これまでに十分に理解の進んでいなかっスするニューロンと結論づけられた（図 5B）9）．

た長距離投射系ニューロンや volume transmission の検証が今後の展望

非対称性シナプスは機能的には興奮性を意味することが知一歩前進した感がある．このような状況の中で，アセチルコられているが 1），セロトニンでもその可能性を検討した結果，リンやノルアドレナリンのような他の遠心性入力についても

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顕微鏡 Vol. 50, No. 1（2015）【著作権者：公益社団法人 日本顕微鏡学会】

図 7 （文献 19）より転載）これまでの所見からまとめた，セロトニンニューロンが嗅球神経回路において賦活化作用を示す模式図．

同時に解析を進めている．そしてセロトニンを含めた相互の比較により，遠心性調整の存在意義と嗅覚神経回路調節についても考えてゆきたいと思う．
5.

おわりに神経回路を解析するには，ニューロンの染色から始まるのが常ではあるが，そのニューロンの染色法は特異性，選択性の点で様々である．筆者らは最終的に電子顕微鏡による解析を目的としているために，用いる抗体でさえ制限を受けることもしばしばである．その中で，最近は TH-GFP マウスのように，遺伝子改変によって個体ごとニューロンを標識したり，シンドビスウイルスのように特定のニューロンに遺伝子を導入，更には Cre マウスを用いてより選択的に目的としたニューロンを標識することが出来るようになった 19）．こうなると，レーザー顕微鏡による光学顕微鏡レベルの解像度，すなわちより広範囲に，より多様な情報の集積が，電子顕微鏡によるシナプス結合や微細構造の解析に極めて重要となってくる．そのためには一つのニューロン，一つのニューロン種，一つの領域の，より確実な標識と同定を目指さなくてはならないと思う．そうしなければ，様々な技術に翻弄され，目的が曖昧・不明瞭になってしまう気がする．新たな技術革新による検証に晒された時，時代を超え常にレファレンスされ得る所見の取得をめざさなくてはいけない．これは大変なことであるが，“真の生命像は美しい”という形態学の原点を忘れてはならず 21），日々努力を重ね，更に解析を進めている．
6.

謝辞

本稿で紹介した研究の遂行にあたり，ご助言，ご協力いた
だいた九州大学・小坂俊夫名誉教授，国際医療福祉大学・小坂克子教授，京都大学・金子武嗣教授，同・古田貴寛准教授，同・日置寛之助教に深甚なる感謝の意を表したい．

解説

嗅球神経回路の調節に関する三次元構造解析

文献1）Shepherd G.M., Chen W.R. and Greer C.A.: in Shepherd G.M. (Ed.)
The Synaptic Organization of the Brain (5th ed.), Oxford, 165–216(2004)
2）樋田一徳：顕微鏡，40(1)，20–26（2005）
3）Kosaka, K., Toida, K., Aika, Y. and Kosaka, T.: Neurosci. Res., 30(2),101–110 (1998)
4）Toida, K. et al.: J. Comp. Neurol., 392(2), 179–198 (1998)
5）Toida, K. et al.: Neuroscience, 101(1), 11–17, cover image (2000)
6）Toida, K.: Anat. Sci. Int., 83, 207–217 (2008)
7）Kosaka, T., Kosaka, K., Hama, K., Wu, J.Y. and Nagatsu, I.: BrainRes., 413(1), 197–203 (1987)
8）Matsushita, N., Okada, H., Yasoshima, Y., Takahashi, K., Kiuchi, K.
and Kobayashi, K.: J. Neurochem., 82, 295–304 (2002)
9）谷口美季，清蔭恵美，小林和人，樋田一徳：川崎医学，40(2)，67–75（2014）10）Kiyokage, E. et al.: J. Neurosci., 30(23), 1185–1196, cover image(2010)
11）Ozaki, S., Toida, K., Suzuki, M., Nakamura, Y., Ohno, N., Ohashi, T.,Nakayama, M., Hamajima, Y., Inagaki, A., Kitaoka, K., Sei, H. andMurakami, S.: Auris Nasus Larynx., 37(5), 575–583 (2010)12）小林 靖：顕微鏡，49(3)，190–197（2014）13）Shipley, M.T., Halloran, F.J. and de la Torre: Brain Res., 329, 294–299 (1985)
14）McLean, J.H. and Shipley, M.T.: J. Neurosci., 7, 3016–3028 (1987)15）Zaborszky, L., Carlsen, J., Brashear, H.R. and Heimer, L.: J. Comp.
Neurol., 243, 488–509 (1986)
16）Furuta, T., Tomioka, R., Taki, K., Nakamura, K., Tamamaki, N. andKaneko, T.: J. Histochem. Cytochem., 49, 1497–1507 (2001)17）金子武嗣：Acta Anatomica Nippon., 83 (suppl.), p. 119, S20-4 (2008)18）清蔭恵美，野津英司，赤木貴彦，樋田一徳：顕微鏡，46(2)，132–136（2011）19）Suzuki, Y., Kiyokage, E. and Toida, K.: J. Comp. Neurol., 523, 262–280 (2015)20）鈴木良典，清蔭恵美，樋田一徳：川崎医学，40(2)，89–102（2014）21）樋田一徳，中村桂一郎：顕微鏡，46(4)，277–288（2011）53【著作権者：公益社団法人 日本顕微鏡学会】