6.2 低線量放射線の生体防御機能に与える影響調査
6.2.1 低線量率γ線連続照射マウスの移植腫瘍細胞に対する応答の解析
Response of B6C3F1 Mice Continuously Irradiated with Low-Dose-Rate Gamma-Rays toTransplanted Tumor Cells
高井 大策, 一戸 一晃, 田中 公夫, 小木曽 洋一
生物影響研究部

Daisaku TAKAI, Kazuaki ICHINOHE, Kimio TANAKA, Yoichi OGHISO
Department of Radiobiology
Abstract
Transplantability of a murine ovary granulosa cell tumor cell line was significantly enhanced insyngeneic B6C3F1 mice continuously irradiated with low-dose-rate (20 mGy/22h/day) gamma-rays to atotal accumulated dose of 8000 mGy. Since the enhancement may be due to a chemokine/chemokine
receptor system, we examined RNA expressions of chemokine receptors in blood cells of age-matchedirradiated and non-irradiated control mice. Expression of chemokine receptor Ccr5 gene was reduced inirradiated mice, and the low expression level of Ccr5 may result in enhanced tumor transplantability. The
alteration in expressions of chemokine receptors may play several important roles in response tolow-dose-rate and continuous gamma-ray irradiation.
1．目的

プター遺伝子について定量PCRを行い、その発現量

低線量率（20 mGy/22 時間/日；以下 20 mGy/日とを比較した。移植腫瘍細胞株としてB6C3F1 マウス表記）γ 線長期連続照射マウスで観察された(Takai etに自然発生した卵巣顆粒膜細胞腫由来の培養細胞株al. 2011) 移植腫瘍細胞生着率の有意な亢進をもた（OV3121）を使用した。培養した腫瘍細胞を回収・らす要因が、ケモカインーケモカインレセプター系計数した後、生理食塩水に懸濁し、マウスの背部皮にあると仮定し、照射マウスにおけるケモカインレ下に接種した。以後毎週 2 回観察を行い、触診によセプター発現の変化が移植腫瘍に対する応答（生着り腫瘤形成が確認された場合に腫瘍が生着したと判率）の差に及ぼす影響を明らかにすることを目的と断した。更にOV3121 細胞にケモカインCCL5 遺伝子した。さらに、移植腫瘍におけるケモカイン発現量の発現低下を誘導し、移植実験に用いた。の低下による応答（生着率）の違いを調べた。

3．成果の概要2．方法

低線量率（20 mGy/日）γ 線を長期連続照射（集積寿命試験(Tanaka et al. 2003)で用いられたマウス

線量 8.0 Gy）したマウス及び同日齢非照射対照マウと同系のB6C3F1 メスマウスをSPF下で使用した。連スから眼窩採血により末梢血を約 0.1ml 採取した。

137

続照射室に設置された Cs-γ線源を用い、低線量率血液細胞から RNA を採取し、逆転写定量リアルタ（20 mGy/日）γ線を約 400 日間連続照射（集積線量イム PCR 法によりケモカインレセプター遺伝子8.0 Gy）した。照射終了後に、照射及び非照射対照（Ccr1, Ccr2, Ccr3, Ccr4, Ccr5, Crc6, Ccr7, Ccr8, Ccr9,

マウスの末梢血からRNAを抽出し、ケモカインレセ

Ccr10, Cxcr1, Cxcr2, Cxcr3, Cxcr4, Cxcr5, Cxcr6,

Relative expression levels of chemokine receptors in blood cells of female B6C3F1 mice. RNAs fromblood cells of low-dose-rate (20 mGy/22h/day) gamma-irradiated mice (8000 mGy, red) andage-matched non-irradiated control mice (control, gray) were analyzed by quantitative real time PCR
methods.
Cxcr7, Cx3cr1, Xcr1）の発現量を定量し、照射・非照Ccr9 遺伝子発現の顕著な低下が照射マウスで観察
Fig. 1射群で比較した。その結果、Cxcr7, Xcr1 の発現は検された。この結果から更に、マウスを Ccr5, Ccr9 遺出できなかった一方で、Fig. 1 に示すように Ccr5,伝子発現の多い群と少ない群に分けて、OV3121 細Fig. 2 Tumor cell transplantability in B6C3F1 mice.
Expression levels of chemokine receptor Ccr5in blood cells of mice were measured using thequantitative real time PCR method. Mice
expressing low levels of Ccr5 (Low; red line)
and mice expressing high levels of Ccr5 (High;black line) were inoculated with 105 cells ofOV3121.

Fig. 3Tumor cell transplantability in B6C3F1 mice.
Expression level of chemokine CCL5 inOV3121 cell was reduced by gene silencing
methods. The cell clones with high (High; redline) or low (Low; black line) expression
levels of CCL5 were inoculated into the mice.

胞の移植生着率を観察した。その結果、Fig. 2 のよている可能性が示唆された。

うに、Ccr5 遺伝子発現の少ないマウスでのみ、移植また、移植に用いた腫瘍細胞が発現し分泌してい腫瘍生着率の有意な亢進が観察された。Ccr9 遺伝子

るケモカインリガンド CCL5 の発現の低下を誘導さに関してはこのような生着率の違いは見られなかっれた細胞の移植生着率が抑制されたことは、予想とた。

は逆の結果であった。これは CCL5 が腫瘍の生着にケモカインレセプターCCR5 と結合するケモカイ関わる効果がより強いことを示唆している。今後、ンリガンドとして CCL3, CCL4, CCL5 及び CCL8 がケモカインレセプターCCR5 と結合することが知ら知られているが、CCL3 は移植に用いた OV3121 細れている他のケモカインリガンド CCL4, CCL8 につ胞で発現が認められなかった。そこで他の 3 つのケいても、遺伝子発現の低下を誘導された細胞によるモカインリガンドを標的に、OV3121 細胞に遺伝子移植生着率を比較する実験を行う予定である。

発現の低下を誘導するために、市販されている

ケモカインシステムは生体内において免疫細胞

SureSilencing shRNA plasmid for CCL5 を OV3121 細等の遊走や腫瘍部位への浸潤等に関わる系である。

胞に導入し、選択培養により遺伝子発現が低下した腫瘍細胞や腫瘍周辺の細胞により産生されるケモカ細胞を得た。この細胞を B6C3F1 マウス皮下に移植

インは免疫細胞表面に発現しているケモカインレセ

し生着率を対照細胞と比較したところ、Fig. 3 に示プターと結合し、機能することが知られている。今すように、移植腫瘍生着率の有意な抑制が観察され回の結果から低線量率放射線の長期連続照射が生体た。に及ぼす影響にケモカインシステムの関与が強く示

今回の結果から、低線量率（20 mGy/日）γ 線連続唆されたことから、今後低線量率放射線の生体影響照射マウスでケモカインレセプター遺伝子 Ccr5 のを媒介する因子としてケモカインシステムに注目し発現の顕著な低下が観察され、また同時に Ccr5 遺伝た解析をすすめる計画である。

子発現の低いマウスでの移植腫瘍生着率の有意な亢進が観察されたことから、以前の研究において観察引用文献された低線量率（20 mGy/日）γ 線連続照射マウスにTakai, D. et al. (2011) Int. J Rad. Biol., 87, 729-735.

おける移植腫瘍生着率亢進が、ケモカインレセプタ

Tanaka, S. et al. (2003) Radiat. Res. 160, 376-379.

ー遺伝子 Ccr5 の発現の低下によって引き起こされ