2020年 9月

体外診断用医薬品製造販売承認番号：30200EZX00015000

組織検査用腫瘍マーカーキット

ヒストファイン シンプルステイン MAX-PO(MULTI) ALK

組織検査用腫瘍マーカーキット

ヒストファイン シンプルステイン MAX-PO(MULTI) ALK
製造販売承認番号：30200EZX00015 0 0 0○ 製 品 情 報（ 構 成 試 薬 第 一 抗 体 ）医薬品 : 体外診断用医薬品品

名医薬品 ヒストファイン シンプルステイン MAX-PO(MULTI) ALK第一抗体

抗ALKモノクローナル抗体(AL1-2963)

製品形態

コ ード用手法用428321

包装20テスト（2mL×1本）

価格（円）

270,000＊AL1-2963
ホルマリン固定パラフィン包埋標本での ALK 免疫組織染色が可能な新たな抗 ALK モノクローナル抗体です。

○構成○ 形 状・構 造 等（ キットの 構 成 ）
本キットの構成試薬・付属品は、以下の製品を組み合わせてご利用ください。

構成試薬第一抗体

陰性コントロール

酵素標識第二抗体

発色基質（試薬A）成

抗ALKモノクローナル抗体(クローン：AL1-2963)(動物種：マウス) 0.25μg/mL含有

製品「ヒストファイン 抗ALKモノクローナル抗体(AL1-2963)」をご使用ください。
コード: 428321

20テスト￥270,000

マウスイムノグロブリン

自家調製してください。

ペルオキシダーゼ標識抗マウスIgG
ポリクローナル抗体(Fab')(動物種: ヤギ)「ヒストファイン シンプルステインMAX−PO(MULTI)
ユニバーサル試薬」をご使用ください。
コード: 424151 170テスト￥40,000
コード: 424152 500テスト￥58,000
コード: 424154 1500テスト ￥120,000

ペルオキシダーゼ標識抗ウサギIgG
ポリクローナル抗体(Fab')(動物種: ヤギ)
3,3'−ジアミノベンジジン・4HCl「ヒストファイン DAB基質キット」をご使用ください。

基質緩衝液（試薬B）
発色試薬（試薬C）

分

コード: 425011

500テスト￥24,000過酸化水素水

付 属 品
抗原賦活化液｢ヒストファイン 抗原賦活化液 pH9 ｣をご使用ください。
コード: 415211 50mL×10本（10倍濃縮） ￥35,000

ブロッキング試薬

30％過酸化水素水をメタノールで 10 倍希釈し、自家調製してください。

PBS｢ヒストファイン PBS ｣をご使用ください。
コード: 415223 191g（20L用） ￥28,000○ 貯 蔵 方 法・有 効 期 間〇 貯蔵方法 : 2−8℃で保存〇 有効期間 : 18 ヶ月〇注意
本キットは悪性リンパ腫における ALK タンパクを測定するよう検出感度が最適化されているため、非小細胞肺癌における ALK 陽性肺癌の診断および ALK 阻害剤の適応判定に用いないでください。

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ヒストファイン シンプルステイン MAX-PO(MULTI) ALK

○臨床性能試験
検体189例について、本キットと他社品（研究用試薬）との染色性を比較したところ、良好な相関性が得られました。
他社品 (研究用試薬)
本キット

陽性陰性合計陽性29029

陰性0160160

合計
29160189

陽性一致率: 100%（ 29検体 / 29検体）
陰性一致率: 100%（160 検体/160検体）
全体一致率: 100%（189 検体/189検体）

検体189例について、WHO分類第4版に基づき事前に検体採取施設でなされた診断を基準として、本キットの陽性一致率、陰性一致率を算出したところ、良好な一致率を示しました。
WHO分類第4版に基づくリンパ腫分類

検体数

陽性一致率

Anaplastic large cell lymphoma, ALK positive

2996.6％（28 例 /29 例）※

ALK positive large B-cell lymphoma0−（0 例 /0 例）

合計

96.6％ （28 例 /29例）※不一致の 1 例は、ALK FISH解析を行いましたが判定不能でした。

WHO分類第4版に基づくリンパ腫分類

検体数

陰性一致率

Chronic lymphocytic leukaemia /small lymphocytic lymphoma

2100%（2 例 /2 例）

Plasma cell neoplasms

1100%（1 例 /1 例）

Extranodal marginal zone lymphoma of mucosa-associatedlymphoid tissue (MALT lymphoma)

26100%（26 例 /26 例）

Nodal marginal zone lymphoma

1100%（1 例 /1 例）

Follicular lymphoma

27100%（27 例 /27 例）

Mantle cell lymphoma

7100%（7 例 /7 例）

Diﬀuse large B-cell lymphoma (DLBCL), NOS

59100%（59 例 /59 例）

EBV positive DLBCL of the elderly

1100%（1 例 /1 例）

Plasmablastic lymphoma

1100%（1 例 /1 例）

Burkitt lymphoma

2100%（2 例 /2 例）

Adult T-cell leukaemia/lymphoma

2100%（2 例 /2 例）

Extranodal NK/T-cell lymphoma, nasal type

1100%（1 例 /1 例）

Enteropathy-associated T-cell lymphoma

1100%（1 例 /1 例）

Peripheral T-cell lymphoma, NOS

1100%（1 例 /1 例）

Angioimmunoblastic T-cell lymphoma

4100%（4 例 /4 例）

Anaplastic large cell lymphoma, ALK negative

1190.9%（10 例 /11 例）※

Nodular lymphocyte predominant Hodgkin lymphoma

1100%（1 例 /1 例）

Classical Hodgkin lymphoma

5100%（5 例 /5 例）

Other iatrogenic immunodeﬁciency-associatedlymphoproliferative disorders4100%（4 例 /4 例）

Atypical lymphoid inﬁltration/Low grade lymphoa susp

1100%（1 例 /1 例）

Castleman disease

1100%（1 例 /1 例）

Lymphoid hyperplasia

1100%（1 例 /1 例）

Others

合計※不一致の 1 例は、ALK FISH解析によって ALK 遺伝子の転座が確認されました。

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ヒストファイン シンプルステイン MAX-PO(MULTI) ALK

99.4％ （159 例 /160 例）

○ ALK 遺 伝子と悪性リンパ腫
ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase) 遺伝子は染色体2p23に位置し、その遺伝子産物は1,620アミノ酸残基、約 176kDa の膜貫通型タンパクです。ALK タンパクはインスリン受容体ファミリーに属する受容体型チロシンキナーゼであり、リガンドが結合することにより二量体を形成し細胞質内にある（2）。
キナーゼドメインが活性化することで、その機能を果たすとされています（1）（4）、ALK 免疫組織染色はALK タンパクの発現は、正常組織では脳の神経細胞などに限られるため（3）

ALK 遺伝子の再構成に起因する腫瘍に高い特異性を示します。固形腫瘍では、肉腫の１つである炎症性筋線維芽細胞性腫瘍 (IMT) の約半数が ALK 陽性となることが知られています（5）。また、非小細胞肺癌の一部 (2-5% 程度 ) がALK 融合遺伝子を有していると報告されており（6）、ALK 阻害剤の適応判定のために、高感度化された ALK 免疫組織染色が利用されています。悪性リンパ腫では、成熟 T 細胞腫瘍である ALK陽性未分化大細胞型リンパ腫 (anaplastic large cell lymphoma, ALK-positive: ALK 陽性 ALCL) と成熟
B 細胞腫瘍である ALK 陽性大細胞型 B 細胞リンパ腫 (ALK-positive large B-cell lymphoma: ALK 陽性 LBCL)の２つの病型が ALK 陽性となることが知られており、この２つの病型以外は ALK 陰性となることから、悪性リンパ腫の鑑別診断にあたって ALK 免疫組織染色は極めて有用な手法です。
未分化大細胞型リンパ腫(anaplastic large cell lymphoma, ALCL)は、形態的にHodgkin細胞に類似したCD30(Ki-1抗原 ) 陽性の大型リンパ球の増殖を特徴とする腫瘍 Ki-1-positive anaplastic large cell lymphoma(Ki-1リンパ腫) として、1985 年 Stein らにより最初に提唱されました。その後1994年に、染色体転座 t(2;5)(p23;q35) を有する ALCL において、ALK融合タンパク（p80NPM-ALK）がはじめて報告されました。WHO 分類第3版(2001年)では、ALCLをT細胞性あるいはnull細胞性のものに限定し、WHO分類第4版(2008年)では、ALCLをALK陽性ALCL(ALCL, ALK-positive)、ALK陰性ALCL(ALCL, ALK- negative)、原発性皮膚ALCL(primarycutaneous ALCL)に 分 類 し、改 訂 第4版(2017年)か ら は、新 し く 乳 房 イ ン プ ラ ン ト 関 連 ALCL(breast（8）。
implant-associated ALCL) が追加されました（7）ALK 陽性 ALCL と ALK 陰性 ALCL は形態学的には区別ができず、ALK タンパクの発現の有無によって分けられる病型です（9）。ALK 陽性 ALCL は、染色体の再構成による ALK 融合遺伝子の形成を特徴とする腫瘍で、遺伝子産物である ALK 融合タンパクは二量体化し恒常的にチロシンキナーゼが活性化している（10）（11）。t(2;5)(p23;q35)にため、細胞増殖シグナルなどが亢進し、細胞ががん化すると考えられています（2）よる融合遺伝子 NPM1-ALK の形成がよく知られていますが、その他にも多くの転座様式が存在しており、転座相手によって ALK 免疫組織染色の染色パターンが異なることが知られています（7）。一方、ALK 陰性
ALCL が有する遺伝子異常としては、DUSP22 再構成、TP63 再構成などが知られていますが、DUSP22再構成を有する症例は ALK 陽性 ALCL と同様に予後良好であるのに対して、TP63 再構成を有する症例は予後不良であることが報告されています（12）。
ALCL, ALK-positiveにおける ALK 転座と融合遺伝子
染色体異常

融合遺伝子

ALK 染色パターン

頻度同じ融合遺伝子を示す疾患

t(2;5) (p23;q35)

NPM1-ALKt(1;2) (q25;p23)

TPM3-ALK

Nuclear and diﬀuse cytoplasmic

84%DLBCL

Diﬀuse cytoplasmic with peripheral intensiﬁcation

13% IMT, ALK + histiocytosis

inv(2) (p23q35)

ATIC-ALK

Diﬀuse cytoplasmic

1%t(2;3) (p23;q21)

TFG-ALK

Diﬀuse cytoplasmic< 1%t(2;17) (p23;q23)

CTLC-ALK

Granular cytoplasmic< 1%t(2;X) (p23;q11-12)

MSN-ALK

Membrane staining< 1%t(2;19) (p23;q13.1)

TPM4-ALK

Diﬀuse cytoplasmic< 1%t(2;22) (p23;q11.2)

MYH9-ALK

Diﬀuse cytoplasmic< 1%t(2;17) (p23;q25)

RNF213-ALK

Diﬀuse cytoplasmic< 1%IMTDLBCL, IMTSCC, IMTDLBCL: diﬀuse large B-cell lymphoma, IMT: inﬂammatory myoﬁbroblastic tumor, ALK+: ALK- positive, SCC: squamous cell carcinomaof esophagus
出典（7）より表１を引用改編

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ヒストファイン シンプルステイン MAX-PO(MULTI) ALK

○ 悪 性 リ ンパ腫の治療と A LK 免 疫組織染色
末梢性 T 細胞リンパ腫 (peripheral T-cell lymphoma: PTCL) のなかでも、ALK 陽性 ALCL は予後良好な病型であり、初発の ALK 陽性 ALCL には CHOP療法が有効とされています。一方、同じPTCLでも、ALK陰性ALCL や末梢性 T 細胞リンパ腫 , 非特定型 (PTCL, NOS) は標準治療レジメンが確立しておらず、臨床試験への参加なども推奨されています（13）。そのため、ALK タンパクの発現の有無を免疫組織染色で確認し、これらの病型を鑑別することは治療方針の決定において重要です。
また、古典的ホジキンリンパ腫、特に結節硬化型古典的ホジキンリンパ腫（nodular sclerosis classicalHodgkin lymphoma: NSCHL）と ALCL は形態的に類似していることがあり、それらの鑑別には ALK の免疫組織染色が有用です（14）。ABVD 療法を標準治療とするホジキンリンパ腫（15）と ALCL を鑑別することは、適切な治療を行ううえでやはり重要です。
初発のALK 陽性ALCL にはCHOP 療法が有効とされますが、大規模後ろ向き研究であるThe International
Peripheral T-cell Lymphoma Project にて、化学療法を受けたALK 陽性 ALCL患者の5年治療成功生存割合（5-year FFS）が 60％と報告されているように（16）、一部の症例は再発・難治例であり、新しい治療の開発が期待されていました。このような背景のもと、再発または難治性のALK陽性ALCLに対してアレセンサ（一般名: アレクチニブ塩酸塩）の有効性と安全性を評価する医師主導治験(ALC-ALCL試験)が実施され（17）、当該試験結果に基づき、2020 年 2 月、アレセンサが再発又は難治性の ALK 融合遺伝子陽性の未分化大細胞リンパ腫に適応拡大となりました（18）。ALK を標的とする分子標的治療が行われるようになり、悪性リンパ腫の診断における ALK 免疫組織染色の役割ははますます重要なものとなっています。

●ALK 陽性未分化大細胞型リンパ腫における ALK 染色パターンの例■ 核と細胞質に陽性■ 細胞質に陽性

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ヒストファイン シンプルステイン MAX-PO(MULTI) ALK

○染色例6■ [ 陽性]ALK陽性未分化大細胞型リンパ腫■ [ 陽性]ALK陽性未分化大細胞型リンパ腫■ [ 陰性]ALK陰性未分化大細胞型リンパ腫■ [ 陰性]

古典的ホジキンリンパ腫

ヒストファイン シンプルステイン MAX-PO(MULTI) ALK

○使用目的と臨床的有用性
組織、細胞中の ALK タンパクの検出 ( 悪性リンパ腫の診断補助 )悪性リンパ腫の病型分類に有用です。

○ 測 定 結 果 の 判 定 法 添付文書より一部抜粋・改編● 判定方法
光学顕微鏡によって陽性反応を観察します。
検体組織中の腫瘍細胞の細胞質、核、もしくは細胞膜に染色が認められるとき、これを陽性所見とします。

● 判定基準(1) 陽性検体組織中に、明らかな特異染色像 ( 茶褐色 ) を呈している腫瘍細胞があるときは陽性です。
(2) 陰性検体組織中に、明らかな特異染色像 ( 茶褐色 ) を呈している腫瘍細胞がないときは陰性です。

● 判定上の留意事項
神経系に分化した細胞を含む組織の一部に第一抗体による染色性が認められることがあります。
それらの組織を検体として使用する場合にはご注意ください。

○自動染色装置
自動染色装置を用いて染色を行う場合、ヒストステイナー 36A( 届出番号 13B3X10013036000) またはヒストステイナー 48A( 届出番号 13B3X10013048000) を用いてください。
ヒストファイン シンプルステイン MAX-PO(MULTI) ALK ( ヒストステイナー用 ) につきましては、弊社までご連絡ください。

ヒストステイナー 36A

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ヒストファイン シンプルステイン MAX-PO(MULTI) ALK

ヒストステイナー 48A○出 典(1) Webb TR, et al. Anaplastic lymphoma kinase: role in cancer pathogenesis and small-molecule
inhibitor development for therapy. Expert Rev Anticancer Ther. 2009 Mar;9(3):331-56.
(2) Della Corte CM, et al. Role and targeting of anaplastic lymphoma kinase in cancer. Mol Cancer. 2018
Feb 19;17(1):30.
(3) P u l f o r d K , e t a l . D e t e c t i o n o f a n a p l a s t i c l y m p h o m a k i n a s e ( A L K ) a n d n u c l e o l a r p r o t e i nnucleophosmin (NPM)-ALK proteins in normal and neoplastic cells with the monoclonal antibody
ALK1. Blood. 1997 Feb 15;89(4):1394-404.
(4) Falini B, et al. ALK expression deﬁnes a distinct group of T/null lymphomas ("ALK lymphomas") with awide morphological spectrum. Am J Pathol. 1998 Sep;153(3):875-86.
(5) Mossé YP. Anaplastic Lymphoma Kinase as a Cancer Target in Pediatric Malignancies. Clin Cancer
Res. 2016 Feb 1;22(3):546-52.
(6) 日本肺癌学会バイオマーカー委員会 . 肺癌患者における ALK 融合遺伝子検査の手引き 第 3.1 版 . 2019.
https://www.haigan.gr.jp/modules/guideline/index.php?content̲id=6 (2020 年 8 月確認 )(7) 中澤 温子 . 未分化大細胞型リンパ腫・ALK 陽性型 . リンパ腫アトラス 第 5 版 . 中村 栄男 他編 . 文光堂 .
東京 . 2018; 258-261.
(8) Swerdlow SH, et al. eds. WHO Classiﬁcation of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues,
Revised 4th Edition. International Agency for Research on Cancer. Lyon. 2017.
(9) Falini B, et al. Anaplastic large cell lymphoma: changes in the World Health Organization
classiﬁcation and perspectives for targeted therapy. Haematologica. 2009 Jul;94(7):897-900.
(10) Zeng Y, et al. Genetics of anaplastic large cell lymphoma. Leuk Lymphoma. 2016;57(1):21-7.
(11) Amin HM, et al. Pathobiology of ALK+ anaplastic large-cell lymphoma. Blood. 2007 Oct 1;110(7):2259-67.
(12) Parrilla Castellar ER, et al. ALK-negative anaplastic large cell lymphoma is a geneticallyheterogeneous disease with widely disparate clinical outcomes. Blood. 2014 Aug 28;124(9):1473-80.
(13) 一般社団法人 日本血液学会 . 造血器腫瘍診療ガイドライン 2018 年版 . 第Ⅱ章 リンパ腫 , 末梢性 T 細胞リンパ腫 (peripheral T-cell lymphoma：PTCL).
http://www.jshem.or.jp/gui-hemali/2̲7.html#soron (2020 年 8 月確認 )(14) Tsuyama N, et al. Anaplastic large cell lymphoma: pathology, genetics, and clinical aspects. J Clin Exp
Hematop. 2017;57(3):120-142.
(15) 一般社団法人 日本血液学会 . 造血器腫瘍診療ガイドライン 2018 年版 . 第Ⅱ章 リンパ腫 , ホジキンリンパ腫 (Hodgkin lymphoma：HL).
http://www.jshem.or.jp/gui-hemali/2̲10.html#soron (2020 年 8 月確認 )(16) Savage KJ, et al. ALK- anaplastic large-cell lymphoma is clinically and immunophenotypicallydiﬀerent from both ALK+ ALCL and peripheral T-cell lymphoma, not otherwise speciﬁed: report fromthe International Peripheral T-Cell Lymphoma Project. Blood. 2008 Jun 15;111(12):5496-504.
(17) Fukano R, et al. Alectinib for relapsed or refractory anaplastic lymphoma kinase-positive anaplastic
large cell lymphoma: An open-label phase II trial. Cancer Sci. 2020 Dec;111(12):4540-4547.
(18) 中外製薬株式会社 . ニュースリリース .［アレセンサ、再発又は難治性のALK 融合遺伝子陽性の未分化大細胞リンパ腫に対する適応追加の承認を取得 , 2020 年 02 月 21 日］
https://www.chugai-pharm.co.jp/news/detail/20200221160002̲952.html (2020 年 8 月確認 )2021.04