農薬製剤中におけるダイオキシン類の分析法の確立（２）池長 宙 、斎藤玲奈＊１、横山央子*1*2

Ozora IKENAGA, Rena SAITOU, Yoko YOKOYAMA（平成 19 年度実績）
要 約

農薬補助成分中のダイオキシン類分析法について検討した。昨年度の成果を踏まえ、内標準物質を添加した試験を実施し、補助成分中のダイオキシン類の分析法を検討した。
その結果、6 種類の補助成分に対して、硫酸シリカゲルカラムクロマトグラフィなど 5種類の前処理操作を施すことにより十分な精製効果がみられた。また、全試料において JIS
K0311 で求められている回収率を達成し、分析法を確立できた。なお、供試した 6 種類の補助成分のダイオキシン類の定量値はすべて定量限界未満であった。
はじめに第１期中期計画において、農薬原体を用いた農薬中のダイオキシン類の分析法を検討したところであるが、農薬製剤を構成する原体以外の成分である農薬補助成分については、分析法の検討を実施していなかった。
そこで、昨年度に引き続き農薬補助成分中のダイオキシン類の分析法を検討することとした。検討に使用した補助成分は、昨年度入手した 6 種類（ベンゼン環に塩素が結合している構造を持つ化学物質又は当該化学物質を含む混合物で、防黴、安定化などの目的で使用されている）である。
調査研究方法１．概要
ポリ塩素化ジベンゾ-p-ジオキシン(以下、「PCDDs」という。)、ポリ塩素化ジベンゾフラン(以下、「PCDFs」という。)、コプラナーポリ塩素化ビフェニル(以下、「Co-PCBs」という。)の回収率算出のため、補助成分約 140mg に、Clean up spike(測定対象のダイオキシン類の C 体。以下「CS」という)を添加。その後、精製して夾雑物を除去し、アルミナカラムクロマトグラフィを用いて、PCDDs 及び PCDFs と、Co-PCBs とに分画し、定13（独）農林水産消費安全技術センター 農薬検査部 検査技術研究課*2（独）農林水産消費安全技術センター 農薬検査部 化学課*1-1-量のため Syringe spike(測定対象以外のダイオキシン類の C 体。以下「SS」という。)を添加。最後に高分解能ガスクロマトグラフ質量分析装置(GC/HRMS) にて測定を行った。
補助成分によって、夾雑物の種類が異なるため、昨年度に確認された前処理法を参考に、表１に示すとおり精製を行った。
なお、補助成分 E に関しては、昨年度の結果では硫酸シリカゲルカラムクロマトグラ
フィで精製可能としていたが、除去効果が不十分な場合があったため、ロング硫酸シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィを選択した。
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２．試験法の詳細
２．１ 精製方法
２．１．１ 硫酸シリカゲルカラムクロマトグラフィ
カラムクロマトグラフ管の底部に石英ガラスウールを詰め、シリカゲル 1g、硫酸（44mass%）シリカゲル 3g、シリカゲル 1g を順次充てんし、硫酸ナトリウムを約 10mm の厚さになるように載せ、ヘキサン 50mL を流下させた。CS を添加した試料をジクロロメタンで溶解し、これをカラムに静かに注ぎ入れ、ヘキサン約 1mL で 2 回洗い込んだ。ヘキサン 100mL を毎秒一滴程度の流量で流下させ、得られた溶出液を数 mL まで濃縮し、次の操作の試料液とした。
２．１．２ ロング硫酸シリカゲルカラムクロマトグラフィ
カラムクロマトグラフ管の底部に石英ガラスウールを詰め、シリカゲル 1g、硫酸（22mass%）シリカゲル 6g、シリカゲル 1g を順次充てんし、硫酸ナトリウムを約 10mm の厚さになるように載せ、ヘキサン 50mL を流下させた。CS を添加した試料をジクロロメタンで溶解し、これをカラムに静かに注ぎ入れ、ヘキサン
約 1mL で 2 回洗い込んだ。ヘキサン 100mL を毎秒一滴程度の流量で流下させ、得られた溶出液を数 mL まで濃縮し、次の操作の試料液とした。
２．１．３ 多層シリカゲルカラムクロマトグラフィ
カラムクロマトグラフ管の底部に石英ガラスウールを詰め、シリカゲル 1g、、水酸化カリウム（2mass%）シリカゲル 3g、シリカゲル 1g、硫酸（44mass%）シリカゲル 4.5g、硫酸（22mass%）シリカゲル 6g、シリカゲル 1g、硝酸銀（10mass%）
シリカゲル 3g、シリカゲル 1g を順次充てんし、硫酸ナトリウムを約 10mm の厚さになるように載せ、ヘキサン 50mL を流下させた。CS を添加した試料をジクロロメタンで溶解し、これをカラムに静かに注ぎ入れ、ヘキサン約 1mL で 2 回洗い込んだ。ヘキサン 100mL を毎秒一滴程度の流量で流下させ、得られた溶出液を数 mL まで濃縮し、次の操作の試料液とした。
２．１．４ トルエン共沸
CS を添加した試料に、トルエン 20mL を加えて数 mL まで濃縮する操作を 4 回繰り返した。その後、ヘキサン 20mL を加えて数 mL まで濃縮する操作を 3 回繰り返し、得られた溶液を次の操作の試料液とした。
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２．１．５ ソックスレー抽出
試料をソックスレー用円筒型ろ紙にいれ、トルエン 500mL で約 18 時間、ソックスレー抽出を行った。得られたトルエン溶液を数 mL まで濃縮し、これを次の操作の試料液とした。
２．２ 分画方法
カラムクロマトグラフ管の底部に石英ガラスウールを詰め、硫酸ナトリウムを約10mm の厚さになるように加え、続いてアルミナ 10g を充てんし、その上に硫酸ナトリウムを約 10mm の厚さになるように載せ、ヘキサン 50mL を流下させた。
精製した試料液を静かに移し入れ、ヘキサン約 1mL で 2 回洗い込み、ヘキサン40mL を毎秒一滴程度で流して夾雑物を溶出させた。次に、ジクロロメタン/ヘキサン（5:95）150mL を毎秒一滴程度で流出させ、Co-PCBs を含む第 1 画分を得た。
更に、ジクロロメタン/ヘキサン（50:50）100mL を毎秒一滴程度で流出させ PCDDs及び PCDFs を含む第 2 画分を得た。第 1 画分及び第 2 画分をそれぞれ数 mL まで濃縮し、次の操作の試料液とした。
２．３ 濃縮方法
調整した試料液をクデルナダニッシュ濃縮管に移し、ヘキサン約１ mL ずつで 2回洗い込んだ。窒素気流によって溶媒を揮散除去し約 40 μ L とした後、SS 及びノナン約 200 μ L を加え、再度窒素気流で 40 μ L にした。分画の際、第 1 画分であったものは Co-PCBs の測定試料、第 2 画分であったものは PCDDs 及びPCDFs の測定試料とした。
２．４ 測定方法
ガスクロマトグラフ：HP6890 使用カラム：DB-5MS
カラム温度：100 ℃(1min)→(20 ℃/min)→ 200 ℃→(2 ℃/min)→ 280 ℃(12min)→(10 ℃/min)→ 300 ℃(12min)
注入口温度：300 ℃
試料導入法：スプリットレス方式(90s)
試料注入量：1 μ L
キャリアガス：He 1mL/min
インタフェース温度：300 ℃
質量分析計：Auto Spec-Ultima
分解能：10000 以上
イオン化法：電子衝撃イオン化法
電子加速電圧：30 ～ 40V
イオン化電流：500mA
イオン源温度：280 ℃
イオン加速電圧：最大 8000V
結果及び考察～ F の全試料において、5 種類の精製方法による前処理を施す（表 1 参照）ことにより十分な精製効果が認められた。また、全試料において、JIS K0311 で求められている回A-3-

収率（CS の回収率）50 ～ 120%を達成し、分析法として適正であることが確認できた（表２、表３参照）。以上により、農薬補助成分中のダイオキシン類の分析法が確立できた。
なお、全てのダイオキシン類は定量限界未満であり、基準値を下回った。
表１ 精製方法
補助成分 外観
精製方法
A
粉末 ロング硫酸シリカゲルカラムクロマトグラフィ
B
液体 硫酸シリカゲルカラムクロマトグラフィC粉末 多層シリカゲルカラムクロマトグラフィD
液体 トルエン共沸E
粉末 ロング硫酸シリカゲルカラムクロマトグラフィF
粉末 ソックスレー抽出後に多層シリカゲルカラムクロマトグラフィ
表２ PCDDs 及び PCDFs の CS 回収率(単位：％)

PCDDs

PCDFs

補助成分2378-TeCDD12378-PeCDD
123478-HxCDD
123678-HxCDD
123789-HxCDD
1234678-HpCDD
OCDD
2378-TeCDＦ
12378-PeCDF
23478-PeCDF
123478-HxCDF
123678-HxCDF
234678-HxCDF
123789-HxCDF
1234678-HpCDF
1234789-HpCDF
OCDF

A

B
105
104
87
84
97
90
99
112
97
106
87
85
91
98
87
92
87

97
97
88
85
100
92
100
101
95
103
85
86
88
93
88
92
95

C
100
97
86
83
101
88
82
111
96
108
83
82
90
94
9785
78

表３ Co-PCBs の CS 回収率(単位：％)

補助成分
3,4,4',5-TeCB(#81)
3,3',4,4'-TeCB(#77)
3,3',4,4',5-PeCB(#126)
3,3',4,4',5,5'-HxCB(#169)
2',3,4,4',5-PeCB(#123)
Co-PCBs 2,3',4,4',5-PeCB(#118)
2,3,3',4,4'-PeCB(#105)
2,3,4,4',5-PeCB(#114)
2,3',4,4',5,5'-HxCB(#167)
2,3,3',4,4',5-HxCB(#156)
2,3,3',4,4',5'-HxCB(#157)
2,3,3',4,4',5,5'-HpCB(#189)

A
104
103
91
77
75
6879
8470
6971
53

B
100
95
92
73
6970
80
85676969
57-4-C9910693747070
8692756878
55D941009695
109
998510098
10773
8199102
989678D908980
72
69
68
77
74
63
65
68
51

E110
118
88
94
118
95
87
112
110
111
57
71
102
108
89
88
81

F
101
95
86
93
107
93
92
103
97
98
88
89
91
100
66
87
84

E
102
96
84
70
81
69
79
81
67
6870
54

F
107
102
92
74
82
78
87
82
69
69
7157