第83回
日本細菌学会北海道支部学術総会
プログラム・抄録集

会期：

平成 28 年 9 月 17 日（土）会場：

北海道大学大学院歯学研究科・歯学部講堂（2F）〒060-8586

総会長： 柴田札幌市北区北 13 条西 7 丁目

健一郎

（北海道大学大学院歯学研究科 口腔分子微生物学教室・教授）
事務局：〒060-8586

札幌市北区北 13 条西 7 丁目

北海道大学大学院歯学研究科 口腔分子微生物学教室

プログラム概要

8：25

～

8：30

～

8：56

セッション 1（座長・長谷部）

8：56

～

9：01

休憩

9：01

～

9：40

セッション 2（座長・大久保）

9：40

～

9：45

休憩

9：45

～

10：37

セッション 3（座長・佐伯）

10：37

～

10：42

休憩

10：42

～

11：21

セッション 4（座長・佐藤）

11：21

～

11：26

休憩

11：26

～

12：05

セッション 5（座長・村田）

12：05

～

13：00

昼休み（評議員・幹事会）

13：00

～

13：30

総会

13：30

～

13：40

休憩

13：40

～

14：45

セッション 6（座長・楠本）

14：45

～

14：50

休憩

14：50

～

15：55

セッション 7（座長・白石）

15：55

～

16：00

休憩

16：00

～

17：15

特別講演

17：15

～

17：30

表彰式・閉会の辞

17：30

～

開会の辞

懇親会

1

目次

プログラム概要・・・・・・・・・・・・・・・・・・

1

目次・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

2参加されるみなさまへのご案内・・・・・・・・・・・

3

会場案内・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

4

プログラム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

6

講演要旨・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

13

特別講演・・・・・・・・・・・・・・・・・・

14

一般演題・・・・・・・・・・・・・・・・・・

15

協賛一覧・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

41

2

参加されるみなさまへのご案内
1.

参加受付
受付時間：
受付場所：
参加費：
懇親会費：

9月17日（土） 8:00~
北海道大学大学院歯学研究科2F・講堂入口前
無料
3,000円（参加希望者のみ）

ただし、支部会のみに入会されている方、また新たに支部会のみに入会される方は、当日支部会年会費1,000円を受付にて申し受けます。
2.

一般演題 について
演者の先生へ
発表時間は、発表10分、質疑3分（演者交代時間を含む）です。発表時は、9分で予鈴、10分で本鈴がなり、質疑応答終了時にもアラームが鳴ります。
講演の発表はノートパソコンによるプレゼンテーションとし、演者の方は、ご自身のノートパソコンをご持参いただき、発表をするようお願い致します。
ご自身のノートパソコンをご持参いただく事が無理な場合は、事務局にご連絡ください。
ご持参いただくノートパソコンはWindows、Machintoshのいずれでも結構です
が、会場の液晶プロジェクターとの接続はD-sub15ピンとなりますので、コネクターが必要な場合はご持参ください。また、電源アダプターもご持参いただき、発表中にスクリーンセーバーや省電力モードにならないように設定をお願い致します。万が一に備えてバックアップデータをお持ちくださるようお願いします。
座長の先生へ
発表時間は、発表10分、質疑3分です。演者交代も含めて13分といたしますので、質疑応答終了の最終アラームは12分30秒で鳴ります。座長席から経過時間等を確認できるようにしていますので、時間厳守でお願い致します。

3.

日本細菌学会北海道支部会賞選考要領
本学術総会では、一般演題のうち、学生、ポスドク、助教を対象に最優秀発表者（1名）と優秀発表者（2名）の表彰を行います。選出対象となる発表について
は、各演題要旨の左上にそのように記載しておりますのでご確認ください。
選出は参加者全員の投票によって行われます。当日配布された投票用紙に必要事項を記入し、一般演題終了後、投票用紙を会場の投票箱に投函ください。

3

会場案内
学会会場：

北海道大学大学院歯学研究科・歯学部講堂（2F）

懇親会会場：

北海道大学大学院歯学研究科・リフレッシュラウンジ（1F）

評議員・幹事会： 口腔分子微生物学教室医局（5F）

北海道大学大学院歯学研究科
札幌市北区北 13 条西 7 丁目
地下鉄南北線北 12 条駅から徒歩 5 分

歯学部講堂
矢印にしたがって歯学研究科までお越しくだ
さい。
この玄関からしか入館はできません。

なお、セキュリティの関係上、休日の歯学部玄関は基本的に終日施錠されており、館内からのみ解錠可能です。
みなさまの円滑な入館のため、係のものを歯学部玄関に配置し、入館に対応する予定ですが、万が一何らかの理由により入館不可能となった場合は、長谷部か佐伯までメールを送ってください。すぐに対応させていただきます。
長谷部 晃： akkun#den.hokudai.ac.jp (#→@に書き換えて送信して下さい)佐伯 歩：saeki23#den.hokudai.ac.jp (#→@に書き換えて送信して下さい)

4

講堂へは、玄関ホール左手のエレベータ、もしくは右手の階段で 2 階に上がり、建物内の案内表示にしたがってお越しください。

5

第 83 回日本細菌学会北海道支部学術総会 プログラム

8：25 ～

開会の辞

8：30 ～

一般演題

セッション 1

座長

長谷部 晃（北大院・歯）8：30～8：43
1. MIRU-VNTR typing of the Beijing genotype Multidrug-resistant
Mycobacterium tuberculosis strains from Myanmar◯Lai Lai San1, 2, Nan Aye Thida Oo1, 2, Khin Saw Aye2, Chie NAKAJIMA1,
Yasuhiko SUZUKI1
1

Division of Bioresources, Research Center for Zoonosis Control, Hokkaido
University, Sapporo, Japan2
Department of Medical Research, Myanmar
8：43～8：56
2. Detection of drug resistance-associating mutations in multidrugresistant Mycobacterium tuberculosis isolates from Myanmar○Nan Aye Thida Oo1,2 , Lai Lai San1,2, Khin Saw AYE 2, Wah Wah AUNG
2
, Chie NAKAJIMA1, Yasuhiko SUZUKI1
1

Division of Bioresources, Research Center for Zoonosis Control, Hokkaido
University, 2 Department of Medical Research, Ministry of Health and Sports,
Myanmar,3
Hokkaido University The Global Station for Zoonosis Control
8：56 ～

休憩

9：01 ～

一般演題

セッション 2

座長 大久保 寅彦（北大院・保健科学）

9：01～9：14
3. Distribution of Oral Veillonella species Associated with Oral Hygiene
Status◯Citra Fragrantia THEODOREA1, Izumi MASHIMA1,
NAKAZAWA1
1

2, Futoshi

Department of Oral Microbiology, School of Dentistry, Health Sciences
University of Hokkaido, 2 Postdoctoral Fellow of Japan Society for the
Promotion of Science69：14～9：27
4. 口腔 Veillonella 全 6 菌種同定 One Step PCR 法の開発
◯眞島 いづみ 1, 2、Citra F. THEODOREA2、中澤 太 2
1

日本学術振興会特別研究員 PD、2 北海道医療大学歯学部微生物学分野
9：27～9：40
5.

致死性菌血症を惹起するセレウス菌の系統解析◯赤松 玲子 1、鈴木 仁人 2、冲中 敬二 3、藤倉 大輔 1、鈴木 里和 2、
大西 なおみ 4、馬場 尚志 3、江崎 孝行 5、柴山 恵吾 2、東 秀明 11

北海道大学 人獣共通感染症リサーチセンター、2 国立感染症研究所
細菌第二部、3 国立がん研究センター中央病院 感染制御室、4 公益財団法人がん研究会 ゲノムセンター、5 岐阜大学大学院医学系研究科
再生分子統御学講座 病原体制御学分野
9：40 ～

休憩

9：45 ～

一般演題

セッション 3座長

佐伯 歩（北大院・歯）9：45～9：58
6. Helicobacter pylori LPS は TLR2/TLR10 に認識される○永島 裕之 1,2,3、横田 伸一 21

札幌医科大学腫瘍内科、2 札幌医科大学微生物学教室、3 ベイラー
医科大学、4 大分大学環境・予防医学講座

9：58～10：11
7. 納豆抽出物由来ペプチドの殺菌作用の特異性○北川 学 1,2、白石 宗 1、山本 聡 1、佐藤 豊孝 1、小笠原 徳子 1、宮本 篤 2、横田 伸一 11

札幌医科大学医学部微生物学講座、2 札幌医科大学附属病院薬剤部

7

10：11～10：24
8.

Aspergillus flavus 国内臨床分離株のマウス病原性に関する研究○濱田 早帆、豊留 孝仁
帯広畜産大学

動物・食品検査診断センター

食品リスク分野

10：24～10：37
9.

マイコプラズマ由来リポペプチド・リポタンパク質によるインフラ
マソームの活性化○佐伯 歩 1、長谷部 晃 1、亀崎 良助 1、鈴木 敏彦 2、柴田 健一郎 11

北海道大学大学院 歯学研究科 口腔分子微生物、2 東京医科歯科大学大学院医歯学総合研究科 細菌感染制御学分野

10：37～

休憩

10：42～

一般演題

セッション 4座長

佐藤 豊孝（札幌医大・医）10：42～10：55
10. 十勝地方における酪農場の土壌からのレプトスピラ分離◯神田 珠希 1、森谷 浩明 2、村田 亮 1、菊池 直哉 1
1

酪農学園大学・獣医学群・獣医細菌学ユニット、2 十勝 NOSAI

10：55～11：08
11. 北海道におけるヒトのレプトスピラ症例発生報告◯村田 亮 1、小笠原 卓 2、大島 美保 2、成田 光生 2、岡 敏明 2、菊池直哉 1
1

酪農学園大学・獣医学群・獣医細菌学ユニット、2 札幌徳洲会病院・小児科

11：08～11：21
12. Molecular epidemiology of pathogenic Leptospira spp. among large
ruminants in the Philippines

8

Marvin A. Villanueva1, Claro N. Mingala2, Michelle M. Balbin2, Chie
Nakajima1, 3, Norikazu Isoda3, 4, Yasuhiko Suzuki1, 3, Nobuo Koizumi5
1

Division of Bioresources, Research Center for Zoonosis Control,
Hokkaido University. 2 Animal Health Unit, Philippine Carabao Center
National Headquarters and Gene Pool, Science City of Muñoz, Nueva Ecija
Philippines. 3 Hokkaido University The Global Station for Zoonosis
Control. 4 Unit of Risk Analysis and Management, Research Center for
Zoonosis Control, Hokkaido University. 5Department of Bacteriology I,
National Institute of Infectious Diseases, Tokyo.

11：21～

休憩

11：26～

一般演題

セッション 5座長

村田 亮（酪農学園大・獣医）11：26～11：39
13. Evaluation of the newly developed enrichment broth for the growth of
Listeria monocytogenes〇Letlhogonolo Koogotsitse1, Akiko Kusumoto1, Shintaro Shichinohe1,
Takayuki Ezaki2, Keiko Kawamoto1
1

Section of Food Microbiology and Immunology, Diagnostic Center for
Animal Health and Food Safety, Obihiro University of Agriculture andVeterinary Medicine. 2 Department of Microbiology, Graduate School of
Medicine, Gifu University.

11：39～11：52
14. 札幌地下歩行空間での空気中浮遊細菌の調査○酒井 昂平 1、大久保 寅彦 1、松尾 淳司 1、山口 博之 1
1

北大院・保健科学・病態解析

11：52～12：05
15. メタゲノム解析による鶏肉表面細菌叢の経時的変化の検出○瀧 圭介 1、大久保 寅彦 1、松尾 淳司 1、山口 博之 1
1

12：05～

北大院・保健科学・病態解析

昼休み
9評議員・幹事会（於 歯学部 5 階・口腔分子微生物学教室医局）

13：00～

総会

13：30～

休憩

13：40～

一般演題 セッション 6
検査診断センター）

座長

楠本 晃子（帯広畜産大・動物・食品

13：40～13：53
16. 巨大ウイルス Mimivirus の蛋白間相互作用に関与するアンキリンリ
ピートをコードする遺伝子とクラミジアの進化○山崎 すみれ 1、松尾 淳司 1、大久保 寅彦 1、山口 博之 1
1

北大院・保科・病態解析

13：53～14：06
17. 唐辛子の辛味成分 Capsaicin による Chlamydia trachomatis の細胞内増殖抑制効果について○山川 和也 1、松尾 淳司 1、大久保 寅彦 1、中村 眞二 2、山口 博之 1
1

北大院・保健科学・病態解析、2 順大・医・研究基盤センター

14：06～14：19
18. DNA マイクロアレイを用いたトランスクリプトーム解析によるNeochlamydia S13 共生アメーバのレジオネラ撃退に関わる遺伝子の探索○松下 瑞江 1、米田 千夏 1、松尾 淳司 1、大久保 寅彦 1、三宅 正紀
2、永井 宏樹 3、山口 博之 1
1

北大院・保健科学・病態解析、2 静岡県立大・薬・免疫微生物、3 大
阪大学微生物病研究所

14：19～14：32
19. アメーバに共生する Neochlamydia S13 による宿主アメーバのアクチンの修飾について10

○米田 千夏 1、松尾 淳司 1、大久保 寅彦 1、中村 眞二 2、永井 宏樹
3、山口 博之 11

北大院・保科・病態解析、2 順大院・医・研究基盤センター、3 阪大
微研

14：32～14：45
20. Chlamydia trachomatis 低酸素培養モデルの構築○松尾 淳司 1、酒井 昴平 1、山川 和也 1、大久保 寅彦 1、中村 眞二
2、山口 博之 11

北大院・保健科学・病態解析、2 順大院・医・形態解析イメージン
グ

14：45～

休憩

14：50～

一般演題

セッション 7座長

白石 宗（札幌医大・医）14：50～15：03
21. タゾバクタム／ピペラシリン耐性大腸菌の耐性機構の解析○鈴木 裕樹 1、佐藤 豊孝 1、山本 聡 1、小笠原 徳子 1、白石 宗 1、品川 雅明 2、高橋 聡 3、横田 伸一１
札幌医大・1 医学部・微生物学、2 附属病院検査部、3 医学部・感染制
御・臨床検査医学

15：03～15：16
22. 北海道大学病院にて分離されたニューデリー・メタロベータラクタ
マーゼ NDM-5 産生大腸菌の性状解析○大久保 寅彦、松尾 淳司、山口 博之
北大院・保健科学・病態解析

15：16～15：29
23. Actinobacillus pleuropneumoniae のキノロン耐性決定領域におけるア
ミノ酸変異
11

○井澤 将規、真能 敬弘、村田 亮、菊池 直哉
酪農学園大学・獣医学群・獣医細菌学ユニット

15：29～15：42
24. 牛及び食肉由来メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)の特徴とヒトへの影響○佐藤 友美 1、臼井 優 1、小西 典子 2、甲斐 明美 1、田村 豊 11

酪農大・獣医・食品衛生、2 東京・健安研

15：42～15：55
25. 日本における大腸菌のプラスミド性コリスチン耐性遺伝子(mcr-1)保有状況とヒト医療に与える影響○福田 昭 1、佐藤 豊孝 2、鈴木 裕樹 2、臼井 優 1、浅井 鉄夫 3、横田伸一 2、田村 豊 11

酪農大 獣医・食品衛生、2 札医大 医・微生物、3 岐阜大院連獣

15：55～

休憩

16：00～

特別講演座長

柴田 健一郎（北大院・歯）特別講演
病原細菌、マイコプラズマの滑走運動 -メカニズムと起源
宮田真人（大阪市立大学大学院理学研究科・教授）

17：15～

表彰式・閉会の辞

17：30～

懇親会（1 階・リフレッシュラウンジ）

12

講演要旨

13

特別講演

病原細菌，マイコプラズマの滑走運動-メカニズムと起源宮田 真人
大阪市大・大学院理学研究科・細胞機能学研究室

魚病原性細菌であるマイコプラズマ・モービレは，菌体の片側に滑走の装置を形成し，固形物表面をすべるように動く‘滑走運動’を行います．この運動は毎秒 4.5
ミクロンにも達しますが，他の生体運動と根本的に異なるユニークなものです．私たちは 1997 年から現在までに，装置の構造，構成タンパク質，結合対象，エネ
ルギー源，力学特性，などを明らかにし，そのメカニズムを提案しました．「ATP 合成酵素に由来する特殊なモーターで発生した力が，外部表面に伝わる．その力は巨大な“クランク”タンパク質を介して，もうひとつの巨大な“あし”タンパク質 450 分子を動かし，宿主表面のシアル酸オリゴ糖を，つかみ，引っ張り，離すことにより，菌体を前に進める」セミナーでは，生体運動の起源と分布についての議論も行います．

参考）
Miyata M, Hamaguchi T (2016) Current Opinion in Microbiology. 29, 15-21. PMID
26711226. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1369527415001307
Miyata M, Hamaguchi T (2016) Frontiers in Microbiology 7, 960. PMID 27446003.
http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fmicb.2016.00960/full14

セッション 1（支部会賞候補演題）

1. MIRU-VNTR typing of the Beijing genotype Multidrugresistant Mycobacterium tuberculosis strains from
Myanmar◯Lai Lai San1, 2, Nan Aye Thida Oo1, 2, Khin Saw Aye2, Chie NAKAJIMA1,
Yasuhiko SUZUKI1
1

Division of Bioresources, Research Center for Zoonosis Control,
Hokkaido University, Sapporo, Japan2

Department of Medical Research, Myanmar

Introduction
Multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) is a high burden for many countries. Myanmar isamong the 22 countries with the highest burden of tuberculosis (TB) and also one of the 27 high
MDR-TB burden countries in the world. The estimates of MDR-TB burden in Myanmar by
WHO in 2014 is 5% of new cases and 27% of retreated cases. Previous studies on genotyping
in Myanmar pointed out that the Beijing strain has a significant association with MDR-TB.
Hence we tried to identify the transmission status of MDR Beijing genotype MTB strains using
detailed genotyping methods.
Materials and Methods
To determine the genotype and to identify the transmission pattern, a total of 212 Beijing MDRMTB isolates collected from Myanmar were analyzed by variable number of tandem repeat(s)of mycobacterial interspersed repetitive units (MIRU-VNTR) typing. Fifteen loci of MIRUVNTR (QUB26, Mtub21, MIRU31, MIRU10, QUB11b, MIRU26, MIRU4, MIRU39,
MIRU40, Mtub4, QUB4156, Mtub30, MIRU39, ETRA, and MIRU16) were used and theresults were analyzed by Bionumeric software.
Results
There were 38 clusters in 212 isolates and 102 unique patterns in phylogenetic analysis. The
biggest cluster consisted of 8 isolates. MIRU-VNTR pattern of isolates from Myanmar wasdifferent from that of neighboring countries. The strains from Myanmar showed no significant
clonal expansion and less clustering.
Conclusion
VNTR set used in this study was suitable for the discrimination of Beijing genotype MDRMTB. The finding of the highly diverse Beijing genotype MDR-MTB can be inferred that theoutbreak is less likely to occur. It can be concluded that the strains may be emerging in eachpatient individually. This study contributes to make effective measures for the better treatment
strategies and prevention from further development of multidrug-resistant TB.
15

セッション 1（支部会賞候補演題）

2. Detection of drug resistance-associating mutations in
multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates
from Myanmar
Nan Aye Thida Oo1,2 , Lai Lai San1,2, Khin Saw AYE 2, Wah Wah AUNG 2,
Chie NAKAJIMA1, Yasuhiko SUZUKI1
1

Division of Bioresources, Research Center for Zoonosis Control, Hokkaido University,2
Department of Medical Research, Ministry of Health and Sports, Myanmar,
3
Hokkaido University The Global Station for Zoonosis Control
ayethidaoo@czc.hokudai.ac.jp

Background
Tuberculosis (TB) caused by M. tuberculosis (MTB) still remains as one of the leading causesof morbidity and mortality in the world. Controlling TB has become troublesome with the
emergence of multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB). Currently, mutation detection of
specific genetic loci associated with drug resistance is the most valuable approach for rapid andreliable diagnosis of DR-TB. Pyrazinamide (PZA) is important first-line TB drug, as well as
streptomycin (STR), is included in both retreatment and MDR-TB treatment regimen. To
elucidate mutations responsible for the resistance to these drugs, we performed sequence
analysis of PZA resistance associating gene, pncA, and STR-resistance associating genes (rpsl,
rrs and gidB) in MDR-MTB isolates of Myanmar.
Materials and Methods
From 230 MDR-MTB isolates, DNA fragments encoding pncA were amplified by PCR andsequenced. In addition, rpsL, rrs and gidB fragments were amplified from 141 STR-resistantand 10 STR-susceptible isolates and the nucleotide sequences were analyzed. Mutations
associating with PZA and STR resistance were identified by comparing obtained sequenceswith those of the susceptible strains.
Results
Sixty-nine different types of mutations were dispersed on the pncA and thirty-four of them werenovel. Only 3.5% (5/141) of STR-resistant isolates had mutation in rrs, but 70.2% (99/141)
carried mutations in rpsL. Fourteen different types of mutations throughout gidB were found in
21.3% (30/141) of STR resistant isolates.
Conclusion
In this study, most of the MDR-MTB isolates carried drug resistance-associating mutations in
the analyzed genes. The findings from this study could contribute to detail understanding ofdrug resistance acquisition mechanisms and lead to a good way for the rapid and effective
method for the diagnosis and monitoring of drug-resistant TB in Myanmar.

16

セッション 2（支部会賞候補演題）

3. Distribution of Oral Veillonella species Associated with
Oral Hygiene Status◯Citra Fragrantia THEODOREA1, Izumi MASHIMA1, 2, Futoshi NAKAZAWA1
1

Department of Oral Microbiology, School of Dentistry, Health Sciences University of
Hokkaido, 2Postdoctoral Fellow of Japan Society for the Promotion of Science

Background: Oral hygiene status has influence to the microbial profile in terms of both
numbers and diversity of microorganisms in oral biofilms. In addition, it was reported thatoral Veillonella species had been frequently isolated and known to have a central role in thebiofilm formation at early stage. Six species of genus Veillonella such as V. atypica, V.
denticariosi, V. dispar, V. parvula, V. rogosae, and V. tobetsuensis have been isolated fromhuman oral cavities. The main habitats of these oral Veillonella species are tongue, buccal
mucosa, and saliva. However, the pathogenicity roles and the distribution of oral Veillonella
species in saliva associated with oral hygiene status in the children have not been clarified.
Aim: This study aimed to evaluate the distribution and frequency of oral Veillonella species
in the saliva of Thai children associated with oral hygiene status.
Methods: A total of 107 saliva samples (subjects) were collected from Thai childrenand
divided into 3 groups (Good, Moderate and Poor oral hygiene) depended on the results of
Simplified Oral Hygiene Index. After homogenization, aliquots of serial 10-fold dilution(100μl) were used to inoculate on BactoTM Brain Heart Infusion (BHI) agar and the selective
medium, Veillonella agar. After inoculation, all samples were incubated under anaerobic
condition. Samples on Veillonella agar were incubated for 5 days and those on BHI agar wereincubated for 7 days. CFUs were counted and stainability were confirmed by using lightmicroscopy after gram staining. Afterward, Genomic DNA was extracted by using theInstagene® Matrix kit (Bio-Rad) from each samples for polymerase chain reaction (PCR)
analysis. Oral Veillonella species were assessed by using one-step PCR method based onsequences of the rpo B gene after PCR at genus level.
Results: The total number of Veillonella isolates in poor oral hygiene was higher than that ingood oral hygiene. V. rogosae was detected as the most predominant species in all groups.
The next was unknown strains of genus Veillonella. Interestingly, the number of V. rogosae
and V. atypica decreased from good to poor oral hygiene. Otherwise, the number of V.
parvula increased from good to poor oral hygiene. V. denticariosi had less number in allgroups, whereas the number of V. dispar and V. tobetsuensis did not change in all groups.
Discussion and Conclussion: Based on the results, V. parvula might have potential
association with deterioration of oral hygiene status of Thai children. In addition, it wassuggested that these unknown strains might be novel species of genus Veillonella.

17セッション 2（支部会賞候補演題）

4. 口腔 Veillonella 全 6 菌種同定 One Step PCR 法の開発
◯眞島 いづみ 1, 2、Citra F. THEODOREA2、中澤 太 2
1

日本学術振興会特別研究員 PD、2 北海道医療大学歯学部微生物学分野【目的】Veillonella 属細菌はグラム陰性の偏性嫌気性菌であり、口腔 Veillonella として、現在、V. atypica, V. dispar, V. denticariosi, V. parvula, V. rogosae, V. tobetsuensis の
全 6 菌種が分離同定されている。これまでの研究によって、う蝕や歯周病巣からこれらの菌種が高頻度に分離されることが明らかとなっている。しかし、これら 6 菌種を同定するには、複数遺伝子の塩基配列解析や、数段階に渡る PCR 法など、その同定法が複雑で時間を要していた。
本研究では、上記の欠点を克服した、6 菌種を一度に同定できる One Step PCR 法を開発したので、その成果を報告する。

【材料と方法】供試株は口腔 Veillonella 全 6 菌種とも標準株を使用し、BHI 血液寒天培地で 37℃、5 日間、嫌気条件下で培養した。培養後、ゲノミック DNA を抽出し、PCR テンプレートとした。
特異的プライマーを設計するにあたり、ハウスキーピング遺伝子の一つである rpo
B（RNA polymerase β subunit）遺伝子を使用した。6 菌種間の rpo B 遺伝子の類似性
解析には LASERGENE（DNASTAR 社）を使用し、CLUSTAL W 解析を行った。また、同解析により可変領域の検出を行い、菌種特異的プライマーの設計を行い、その特異度と感度を検証した。

【結果】rpo B 遺伝子の 6 菌種間の類似性は 73.7 - 90.9%であり、2500 – 3100 番の領域で最も塩基配列に差が見られた。本領域において 6 本のリバースプライマー、本領域外の 6 菌種間共通配列部分において、1 本のフォワードプライマーの設計を行った。これら 7 本の混合プライマーと 6 菌種の DNA テンプレートを用いた PCR の結果、各菌種固有の産物を確認することが出来た。各プライマーは DNA テンプレート
量 1pg – 0.01 ng の間で検出することが出来た。

【考察と結論】本研究により、口腔 Veillonella 全 6 菌種を一度に同定できる One Step
PCR 法を開発できた。今後、口腔 Veillonella の各菌種を本手法で容易に同定することで、う蝕や歯周病の予防、診断、及び治療に役立つことが示唆される。
18

セッション 2（支部会賞候補演題）

5. 致死性菌血症を惹起するセレウス菌の系統解析◯赤松 玲子 1、鈴木 仁人 2、冲中 敬二 3、藤倉 大輔１、鈴木 里和 2、大西 なおみ 4、
馬場 尚志 3、江崎 孝行 5、柴山 恵吾 2、東 秀明 11

北海道大学 人獣共通感染症リサーチセンター、2 国立感染症研究所 細菌第二部、3
国立がん研究センター中央病院 感染制御室、4 公益財団法人がん研究会 ゲノムセン
ター、5 岐阜大学大学院医学系研究科 再生分子統御学講座 病原体制御学分野【背景】一般にセレウス菌 (Bacillus cereus) は、食中毒原因菌として知られる。しかし近年、セレウス菌に感染した患者が血流感染症等の極めて重篤な症状を示すアウ
トブレイク事例が報告されている。multilocus sequence typing (MLST) 法を用いた遺伝子解析から、これらセレウス菌アウトブレイク株は、セレウス菌標準株よりも、炭疽菌 (B. anthracis) に近いゲノム性状を持つ菌種である可能性が示唆されている。
【目的】ある医療機関で 2013 年に発生したアウトブレイクに関与した B. cereus について、その遺伝子学的背景を明らかにすることを目的として、アウトブレイクに関連した株を収集し解析するとともに、過去の他地域におけるアウトブレイク株、炭疽菌並びにセレウス菌標準株のゲノム情報と比較し、系統解析を行った。
【材料と方法】アウトブレイク関連株 (患者由来及び院内備品由来計 69 株) からゲノムを抽出し、7 つのハウスキーピング遺伝子を用いた MLST 解析、ならびに炭疽菌
ゲノムマーカー (Ba813) を標的とした PCR を行った。
【結果・考察】MLST 解析の結果から、アウトブレイク関連株の 47 株 (68%) は炭疽菌に非常に近い Cereus III lineage１）に分類されることが明らかになった。さらに、
Cereus III lineage に分類された 47 株中の 17 株 (36%) は、Ba813 に陽性であることを見出した。特に患者由来株 13 株に着目すると、12 株 (92%) が Cereus III lineage に分類され、3 株 (25%) が Ba813 陽性であった。以上の結果から、今回のアウトブレイク
は、炭疽菌様のゲノム性状を持つセレウス菌により引き起こされたことが示唆された。
1) Priest et al., J. Bacteriol., 2004

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セッション 3（支部会賞候補演題）

6. Helicobacter pylori LPS は TLR2/TLR10 に認識される○永島 裕之 1) 2) 3) 4)、山岡 吉生 2)、横田 伸一 3)1

札幌医科大学腫瘍内科、2 大分大学環境・予防医学講座、
3

札幌医科大学微生物学教室、4 留萌市立病院【目的】Helicobacter pylori 感染症では virulence factors の研究は多くされているものの、host factors に関する研究は未だ十分とはいえない。今回、疫学調査で得られた標本を用いて感染にかかわる host factors を検索した。
【方法】健常者 293 例を対象とした。H. pylori 感染者と H. pylori 非感染の胃粘膜生検組織からマイクロアレイを行った。候補遺伝子について全症例を対象に定量 RTPCR にて測定した。免疫染色を行い、変動遺伝子の組織発現部位を同定した。胃がん患者由来細胞株 NCI-N87 に対して H. pylori 株 26695 を感染実験させ、遺伝子変動のパターンを検討した。TLR を遺伝子導入した HEK 細胞を用いて H. pylori LPS のligand の同定を行った。
【結果】マイクロアレイ解析では H. pylori 感染者で H. pylori 非感染者に比較して全TLR 中 TLR10 が最も上昇していた[fold change (FC)＝15]。全症例を対象とした定量
RT-PCR においても、TLR10 は H. pylori 感染者で有意な上昇を認めた（FC＝3）。
TLR10 の発現は TLR2 と正の相関を認めた(R = 0.583)。免疫染色では、主に胃上皮細胞に TLR10 の発現を認めた。In vitro で NCI-N87 に 26695 菌体を感染させると、時間、菌量依存的に TLR10 の上昇を認めた。HEK 細胞に TLR の遺伝子導入を行い、
heat-killed H. pylori、および H. pylori LPS で刺激したところ、TLR2,TLR10 の共導入において、その他の組み合わせよりも有意に高い NF-κB 活性の上昇を認めた。
【考察】H. pylori LPS が TLR2/TLR10 の ligand であること示された。GWAS を用いた解析でも TLR10 は重要な host factor であることが報告されている（JAMA2011）。H. pylori LPS は tetra-acyl lipid A の構造を有しており、TLR10 の ligand 構造を示唆する所見と考えられた。

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セッション 3（支部会賞候補演題）

7. 納豆抽出物由来ペプチドの殺菌作用の特異性○北川 学 1,2、白石 宗 1、山本 聡 1、佐藤 豊孝 1、小笠原 徳子 1、
宮本 篤 2、横田1

伸一 1

札幌医科大学医学部微生物学講座、2 札幌医科大学附属病院薬剤部【目的】 納豆は日本固有の伝統的発酵食品の代表格であり、健康によい食物であると古来より考えられている。近年、納豆抽出画分に殺がん細胞作用があることが報告され、活性画分の精製により分子量約 5 000 のペプチド（納豆ペプチド）が同定された【畠山、伊藤ら 素材物質学雑誌 第 27 巻 第 1/2 号 2016】。また、本ペプチド
は抗菌ペプチドに特徴的とされるα-ヘリックスに富む両親媒性の構造を有していたことから、我々は納豆ペプチドの殺菌作用の評価を行った。

【方法】 納豆をホモジナイズ後に上清を回収して、30-50%飽和硫安沈殿画分を取得した。透析後、Butyl-Sepharose カラムクロマトグラフィーによって納豆ペプチドを精製した。①最小発育阻止濃度（MIC）測定は Clinical Laboratory Standards Instituteが定める方法を参考にして行った。培地は Todd Hewitt broth（THB）に適宜 5%ウマ
溶血液（HHL）を添加したものを用いた。②納豆ペプチドによる Streptococcus
pneumoniae R6 株の殺菌曲線を THB + 5% HHL 培地を用いて作成した。③納豆ペプチ
ド作用時の菌の形態を R6 株を用いて光学顕微鏡および透過電子顕微鏡にて観察した。④HHL に含まれる納豆ペプチドの殺菌作用に対する増強因子を検討した。

【結果と考察】 ①MIC による抗菌活性を検討したところ、測定した細菌の中で S.
pneumoniae および Bacillus 属細菌の一部に対してのみ抗菌効果が認められた（MIC:
80-160 μg/ml）。また、MIC 測定に使用する培地に対して HHL を添加することにより、菌の増殖の亢進と抗菌作用の増強が認められた。納豆ペプチドは非常に狭いユニークな抗菌スペクトルを示した。②S. pneumoniae R6 株の納豆ペプチドによる殺菌曲線から、納豆ペプチド添加直後は菌の増殖は正常に起きるが、添加数時間後から殺菌効果が出現することが示唆された。③納豆ペプチド作用時の R6 株の形態を観察すると、本来双球菌である S. pneumoniae が数珠つなぎ状になっており、分裂異常の起きていることが示唆された。④ヘミン存在下で濃度依存的に納豆ペプチドの MICの低下が見られたことから、HHL 成分のヘミンが納豆ペプチドの殺菌効果を増強していると考えられた。

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セッション 3（支部会賞候補演題）

8. Aspergillus flavus 国内臨床分離株のマウス病原性に関する研究○濱田 早帆、豊留 孝仁
帯広畜産大学

動物・食品検査診断センター

食品リスク分野【目的】Aspergillus flavus はアスペルギルス症の原因真菌の１つであり、免疫抑制状態の動物やヒトでしばしば致死的経過をとる。肺アスペルギルス症の原因真菌として最も一般的である A. fumigatus に比べ、A. flavus については感染実験による十分な知見が積み上げられていない。本研究では国内臨床検体から分離された A. flavus 3
株、および米国の環境中から分離された A. flavus 1 株をそれぞれマウスに経気道感染させ、病原性の比較検討を行った。
【方法】C57BL/6 マウスの気管内に A. flavus の胞子懸濁液を投与し、生存率の比較を行った。マウスには感染前後にヒドロコルチゾンによる免疫抑制処置を行った。
死亡時もしくは実験終了時点でマウスを解剖、肺の摘出を行い、菌の定量および病理学的評価を行った。
【結果および考察】今回検討を行った国内臨床分離株 3 株は、米国由来 A.flavus である NRRL3357 株に比べていずれも生存率が高く、病原性が低いと考えられた。今回用いた国内臨床分離株はアフラトキシン産生能を欠いており、アフラトキシン産生性を有する NRRL3357 株と大きく異なっている。また、我々が行っているゲノム比
較の結果からも国内臨床分離株と NRRL3357 株との間にいくつかの違いが見られており、これら差異の中に病原性に寄与する因子が含まれていることが示唆された。

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セッション 3（支部会賞候補演題）

9. マイコプラズマ由来リポペプチド・リポタンパク質によるインフラマソームの活性化○佐伯 歩 1、長谷部 晃 1、亀崎 良助 1、鈴木 敏彦 2、柴田 健一郎 112

北海道大学大学院

歯学研究科

口腔分子微生物、

東京医科歯科大学大学院医歯学総合研究科 細菌感染制御学分野【目的】インフラマソームは炎症性サイトカインのひとつである IL-1の産生を制御する細胞内センサーである。IL-1は歯周炎の病態形成において重要な役割を果たしている。我々はこれまで M. salivarium（Ms）ならびに M. pneumoniae（Mp）の菌体が 樹状細胞ならびにマクロファージに対して NLRP3 インフラマソームを活性化してIL-1を産生することを明らかにした。本研究では、これらのマイコプラズマの活性物質の一つがリポタンパク質（LP）・リポペプチドであことを明らかにしたので報告する。
【方法】M. salivarium ATCC23064 (Ms)ならびに M. pneumoniae ATCC15492(Mp)からTritonX-114 二相分離法で LP を調製し、それぞれ MsLP ならびに MpLP とした。標的細胞は C57BL/6 (B6)マウス、caspase-1、NLRP3 あるいは ASC あるいは TLR2 ノック
アウトマウス(caspase-1KO、NLRP3KO、ASCKO あるいは TLR2KO)より採取した骨髄由来マクロファージ(BMM)を用いた。IL-1の産生は大腸菌由来の精製リポ多糖(LPS)で 4 時間プライミングした後に、MsLP、MpLP あるいは Ms 由来リポペプチド
FSL-1 で更に 24 時間刺激した後、反応上清中に含まれる IL-1量を ELISA 法で測定した。
【結果ならびに考察】MsLP、MpLP あるいは FSL-1 は B6 由来の BMM に IL-1の産生を誘導したが、それらの活性は caspase-1、NLRP3 ならびに ASC をノックアウトす
ることによりほぼ完全に消失した。そこで、リポタンパク質のどの部分に活性があるのかを調べるために、MsLP を種々の濃度のプロテネース K で処理したところ、
IL-1産生誘導活性は、減弱することはなく逆に増強した。このことより活性部位はLP のタンパク部分ではなく、N 末端のリポペプチド部分にあることが示唆された。
また、MsLP、MpLP あるいは FSL-1 の IL-1産生誘導活性は TLR2KO でほぼ完全に消失した。さらに、P2XR および P2YR 阻害剤である oATP は本活性を有意に抑制した。以上の結果から、マウスマクロファージに対する Ms ならびに Mp の IL-1産生
誘導活性を示す活性物質の一つは LP であり、その活性発現には TLR2 ならびに
NLRP3 インフラマソームが重要な役割を果たし、さらに、細胞外に放出された ATPが関与している可能性が示唆された。

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セッション 4（支部会賞候補演題）

10. 十勝地方における酪農場の土壌からのレプトスピラ分離◯神田 珠希 1、森谷 浩明 2、村田 亮 1、菊池 直哉 1
1

酪農学園大学・獣医学群・獣医細菌学ユニット、2 十勝 NOSAI【背景・目的】レプトスピラ症は世界各国で発生が認められる人獣共通感染症である。牛のレプトスピラ症の多くは不顕性に経過するが、発症した場合貧血・黄疸・
血色素尿の他、泌乳牛は乳量低下や流死産を起こす。レプトスピラを保菌する動物
は尿中に菌を排泄し水系や土壌を汚染し感染源となる。牛のレプトスピラ症の発生は 1970 年以降少数例のみであるが、血清あるいはバルク乳を用いた抗体検査では高い陽性率を示している。このような農場の陽性牛はレプトスピラを排菌し土壌を汚染し、感染源となることが考えられる。本研究では血清学的に陽性を示した酪農場の土壌からレプトスピラの検出を試みた。
【材料・方法】対象農場：2015 年 8 月北海道十勝地方の 5 酪農場から採集した。これらの酪農場はバルク乳の調査によりレプトスピラ血清型 Hardjo に対して抗体陽性を示した農場である。土壌：各農場から 10 か所、計 50 検体を採取した。レプトス
ピラの分離: これらの土壌に HEPES(25mM, pH7.4)を加え、その上清を 5 種類の抗菌薬 STAFF を含む EMJH 培地および Korthof 培地に接種した。30℃2 週間培養後、暗視野顕微鏡下でらせん菌の有無を確認した。雑菌の汚染が認められた検体についてはポアサイズ 0.45 ㎛のフィルターで濾過し継代培養した。レプトスピラの確認: 培養
菌体から DNA を抽出し 23S rRNA 遺伝子、鞭毛遺伝子(flaB)を標的とした PCR を行
い病原性レプトスピラと確認した。病原性レプトスピラと確認した株を EMJH 寒天培地を用いてクローニングし、その flaB PCR 産物のシークエンス解析等を行い菌種同定を行った。flaB PCR の PCR 産物については RFLP を行い既知の血清型と比較した。
【結果・考察】レプトスピラ様菌は 5 農場すべての農場から検出され、土壌 50 検体
中 37 検体で確認された。23S rRNA 遺伝子を標的とした PCR を行った結果、35 検体(70％)がレプトスピラ属菌であることが判明した。さらに flaB 検出 PCR により、5株(10％)が病原性レプトスピラと推定された。EMJH 固形培地を用いてクローニング
した結果、3 株の病原性レプトスピラが得られた。これらの株の flaB のシークエン
ス解析を行った結果、病原性レプトスピラ L.alstonii と中等度病原性レプトスピラ
L.licerasiae と同定された。また RFLP パターンの比較の結果、3 株とも既知の血清型
切断パターンと一致しなかった。以上のように十勝地方の酪農場の土壌から病原性
レプトスピラが分離された。対象農場は血清学的には Hardjo 陽性であったが、本血清型については分離できなかった。
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セッション 4

11. 北海道におけるヒトのレプトスピラ症例発生報告◯村田 亮 1、小笠原 卓 2、大島 美保 2、成田 光生 2、岡 敏明 2、菊池 直哉 1
1

酪農学園大学・獣医学群・獣医細菌学ユニット、2 札幌徳洲会病院・小児科【背景】レプトスピラ症は、野生動物だけでなくウシやイヌなど人と密に関わる動物に至るまで、北海道でも広く発生が見られる人獣共通感染症である。これまで道内でのヒト症例は見当たらなかったが、2016 年 2 月にヒトにおけるレプトスピラ感染が疑われたので報告する。
患者は 10 歳男児。2 月 11 日から発熱、頭痛、腓腹筋の筋痛等を発症。第 8 病日に
札幌徳洲会病院に入院。結膜充血および舌先端の発赤などレプトスピラ症が疑われる皮膚粘膜症状が認められたことから当研究室に検査依頼があった。
入院前にトスフロキサシントシル酸塩（オゼックス）投与。入院時のγグロブリ
ンおよびドキシサイクリン塩酸水和物（ビブラマイシン）の投与を経て症状の改善が見られ、3 週間後に退院し、後遺症はない。
【材料・方法】① 2 月 24 日（第 13 病日）の患者尿及び血清について、ウマ血液寒天培地による 37℃48 時間の好気および嫌気培養、EMJH 培地による 30℃3 ヶ月間好気培養、および病原性レプトスピラが保有する鞭毛遺伝子（flaB）を標的としたNested PCR を実施した。② 2 月 24 日（第 13 病日）、4 月 14 日（第 61 病日）、8 月
6 日（第 177 病日）の患者血清について、Leptospira interrogans の各種血清型株（Autamnalis、Australis、Ballum、Grippotyphosa、Hebdomadis、Copenhageni、
Icterohaemorrhagiae、Pomona、Hardjo、Canicola、Pyrogenes、Tarassovi、Bratislava）
を用いた顕微鏡下凝集試験（MAT）を行った。
【結果・考察】血液寒天培地を用いた一般細菌の培養、および EMJH や PCR による
レプトスピラの病原学的検出については全ての結果が陰性であった。
MAT による抗体検査では、第 13 病日の血清は全ての抗原と反応を示さなかった。しかし第 61 病日の回復期血清が血清型 Copenhageni に対して 100 倍の凝集価を示したことから、本症例の原因がレプトスピラであることが示唆された。
患者はハムスターをゲージ内ではなく自宅に放し飼いにしていた。また、患者の第 13 病日にこのハムスターも体調を崩し、同日中に死亡していることから、感染経路と何らかの関係があったと考えられる。
本症例の発生によって、温暖な地域の疾病と考えられがちなヒトのレプトスピラ症が、道内でも発生リスクが存在することが明らかとなったため、注意喚起が必要である。
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セッション 4（支部会賞候補演題）

12. Molecular epidemiology of pathogenic Leptospira spp.
among large ruminants in the Philippines⃝Marvin A. Villanueva1, Claro N. Mingala2, Michelle M. Balbin2, Chie Nakajima1, 3,
Norikazu Isoda3, 4, Yasuhiko Suzuki1, 3, Nobuo Koizumi5
1

Division of Bioresources, Research Center for Zoonosis Control, Hokkaido University,
Sapporo, Japan. 2Animal Health Unit, Philippine Carabao Center National Headquarters andGene Pool, Science City of Muñoz, Nueva Ecija Philippines. 3Hokkaido University The
Global Station for Zoonosis Control, Sapporo, Japan. 4Unit of Risk Analysis andManagement, Research Center for Zoonosis Control, Hokkaido University, Sapporo, Japan
5
Department of Bacteriology I, National Institute of Infectious Diseases, Tokyo, Japan.
Introduction
The extent of Leptospira infection in large ruminants resulting to economic problems inlivestock industry in a leptospirosis-endemic country like the Philippines has not been
extensively explored. Therefore, we determined the prevalence and carrier status of
leptospirosis in large ruminants using molecular techniques and assessed the risk factors ofacquiring leptospirosis in these animals.
Materials and methods
Water buffalo and cattle urine samples (n=831) collected from 21 farms during 2013-2015
were subjected to flaB-nested PCR to detect pathogenic Leptospira spp. Positive amplicons
were subjected to direct sequencing and then analyzed. Amplicons with overlapping
sequences were cloned and sequenced.
Results and Discussion
Leptospiral flaB was detected in water buffalo and cattle with a detection rate of 17.3% and7.8%, respectively. Overall prevalence of Leptospira infection is 16.1%. Leptospiral DNA
was mainly detected in samples from animals managed in communal farms. Sequence
analysis of Leptospira flaB from positive animals revealed the formation of three majorclusters with L. borgpetersenii or L. kirschneri. One farm contained Leptospira flaB
sequences from all identified clusters in this study, suggesting that this farm was the main
source of leptospires for other farms, in accordance with its role as the main distributor of
milking water buffaloes in the country. Water buffalo, in particular, was infected withmultiple Leptospira species that diversified as a possible consequence of interaction with hostanimals and environmental factors.
Conclusion
This study suggested that these large ruminants are infected with various pathogenic
Leptospira species causing possible major economic loss in the livestock industry as well as
potential Leptospira reservoirs that can transmit infection to humans and other animals in thePhilippines.

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セッション 5（支部会賞候補演題）

13. Evaluation of the newly developed enrichment brothfor the growth of Listeria monocytogenes〇Letlhogonolo Koogotsitse1, Akiko Kusumoto1, Shintaro Shichinohe1, Takayuki Ezaki2,
Keiko Kawamoto1

1

Section of Food Microbiology and Immunology, Diagnostic Center for Animal Health andFood Safety, Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine.
2
Department of Microbiology, Graduate School of Medicine, Gifu University.

[Aim] The aim of this study is to evaluate a growth support ability of Food Pathogen
Enrichment (FPE), a newly developed enrichment broth, for the detection of Listeria
monocytogenes in food.
[Background] L. monocytogenes is a foodborne pathogen that causes severe and often fatal
disease in susceptible individuals. For detection of L. monocytogenes in food, ISO 11290-1,
USDA-FSIS and IDF methods are generally used. These standard methods are adequately
sensitive; however, they are complicated and time consuming. It is therefore important toestablish methods for rapid isolation and detection.
[Method] We compared growth in FPE and conventional enrichment media (LED, UVM andHalf Frazer broth), using low levels of L. monocytogenes (Scott A strain) cells. Growth wasevaluated by plate count at 4, 8 and 24 h post incubation (hpi). The same experiment was
repeated using heat injured cells to evaluate recovery. Growth of L. monocytogenes was
further assessed in milk spiked with 15 CFU/ml cells at 24 hpi.
[Results] Growth of both injured and uninjured L. monocytogenes in FPE broth was better
than in LEB, UVM and Half Frazer broth at 8 hpi. Recovery of heat injured cells was at least
sevenfold higher in the FPE than either media at the same time of incubation. On the other
hand, growth of uninjured cells was approximately double fold higher in FPE compared to
LEB. Among commonly used media, LEB showed the best growth followed by Half Frazer
broth. In the spiked milk experiments, FPE yielded highest concentration of L.
monocytogenes cells even ahead of recommended LEB. These results show that FPE is able toincrease the population of both injured and uninjured L. monocytogenes within a short timecompared to commonly used enrichment media. FPE present the possibility to shorten timerequired for detection of L. monocytogenes. Further assessments to determine detection limitof this enrichment protocol is still to be done.

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セッション 5（支部会賞候補演題）

14. 札幌地下歩行空間での空気中浮遊細菌の調査○酒井 昂平 1、大久保 寅彦 1、松尾 淳司 1、山口 博之 1
1

北大院・保健科学・病態解析＜背景＞ヒトやその生活環境に見いだされる菌叢は、ヒトの密集度と伴にダイナミックに変動しながら、健康や感染症の発症に少なからず影響を与えていると予想されるが、ヒトの密集度をその環境の菌叢と伴に正確に把握できるフィールドは少な
く、このような視点からの調査は限られている。一方、平成 23 年 3 月 12 日に完成した札幌地下歩行空間は全長約 520m に渡る誰もが自由に行き来できる直線空間であり、ヒトの密集度と環境細菌叢を同時にしかも容易に調査可能な最適な場と考えられる。そこで、我々は札幌地下歩行空間において空気を採取し、そこに含まれる細菌数および薬剤耐性菌を経月的に調査した。
＜方法＞作業は 2016 年 5 月 2 日、6 月 1 日、7 月 5 日の計 3 日で、各日午前 8 時から
午後 8 時の間に、ローボリウムエアサンプラーLV-40（柴田科学）に 0.3μm ガラス繊
維フィルターを装着して 40L/min で吸気し、2 時間ごとにフィルターを交換してエアサンプルを得た。また、吸気部は地上 1.5m に設置し、空気中の粒子数はハンドヘル
ドパーティクルカウンターP311（エアリーテクノロジー）を用いて 0.3～0.5μm、0.5～1.0μm、1.0～5.0μm の 3 分画を測定した。通行量調査では 10 分あたりの通過人数をカウントした。回収したエアサンプルは 0.05% TritonX 添加 PBS で洗浄し、遠心した後に沈渣を PBS で再懸濁した。細菌数測定ではその懸濁液をトリプトソイ寒天培
地、R2A 寒天培地に接種して 25℃3 日間培養し、コロニー数から空気中細菌数を算出した。また、その中の一部を選抜してグラム染色し、鏡検した。薬剤耐性菌検出
では、懸濁液をアンピシリン、アミカシン、テトラサイクリン、シプロフロキサシ
ン 10mg/L 添加トリプトソイ寒天培地／R2A 寒天培地に接種、発育株を耐性菌候補として継代し、16S rDNA 配列に基づいて菌種を同定した。空気の採取は、札幌駅前通
まちづくり株式会社の許可を得て実施した。
＜結果・考察＞測定した細菌数は 3 CFU/m3 から 2,000 CFU/m3 と大幅に変動した。また通行量と粒子数の間には明確な相関関係は見いだせなかった。一方、歩行空間内の温度の上昇とともに検出される菌数は増加した。耐性菌の検出においては、
Staphylococcus saprophyticus や Pseudomonas sp.のアンピシリン耐性株などが検出された。今後は菌叢解析を実施し、地下空間における細菌の構成の可視化を試みる予定である。
＜会員外協力者＞植村央（北大・医学部保健学科）

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セッション 5（支部会賞候補演題）

15. メタゲノム解析による鶏肉表面細菌叢の経時的変化の検出○瀧 圭介１、大久保 寅彦１、松尾 淳司１、山口 博之１
1

北大院・保健科学・病態解析【目的】土壌や河川水、建物の床や溜め水さらに生野菜や食肉など身の回りのさま
ざまな環境中に普遍的に生息するアメーバなど原生生物は、微小生態系食物連鎖の頂点に位置する細菌捕食性微生物を含んでいる。その一方で、試験管内での実験では、原生動物に捕食された一部の食中毒菌が、捕食されたアメーバ内や表面で維持
あるいは増殖することが報告されている。しかしながら、これら実験に使用されている原生動物は ATCC 基準株などに限られており、実際の環境を必ずしも反映する
ものではない。そこで本研究では、実際の流通食品上で繰り広げられる食中毒菌とアメーバとの鬩ぎ合いが、食中毒菌の生存性や病原性の発動へのインパクトを明らかにすることを目的とし、流通生鮮鶏肉表面上の放置に伴う生菌数・菌叢変化と、その表面からの原生動物の検出・株化を試みた。
【方法】鶏肉(5 検体)はスーパー店頭で購入し、冷蔵条件 4℃と、中温菌が発育できる 15℃でそれぞれ静置した。購入直後、購入 2 日後（消費期限日）、購入 7 日後の時点で、100mL/100g sample の PBS で洗浄後に遠心沈渣を得た。沈渣は標準寒天培地
での混釈培養で一般細菌数を、DHL 寒天培地での培養で腸内細菌科細菌数を計測し、それぞれ CFU/1mL 洗浄液として算出した。また、遠心沈渣から DNA を抽出
後、16S rDNA を増幅し、メタゲノム解析は北海道システムサイエンスに委託した。
【結果・考察】各検体ともに、購入直後の生菌数は約 103 CFU/mL だった。4℃静置の場合、購入 2 日後には 105 CFU/mL 程度、購入 7 日後には約 108 CFU/mL 程度にまで増加した。一方、15℃静置の場合、購入 2 日後の時点で 108 CFU/mL 程度に達し、購入 7 日後にもほぼ同数であった。メタゲノム解析では購入直後でガンマプロテオ
バクテリアやバシルスなどが多く、細菌叢に多様性が見られたのに対し、4℃静置ではガンマプロテオバクテリアが圧倒的多数となっていた。属レベルで見た場合、こうしたガンマプロテオバクテリアの多くはエロモナス、シュードモナスなどの水系
細菌・低温発育菌であったことから、こうした細菌は冷蔵した鶏肉の上で増殖し続けていたと考えられた。一方、15℃静置においては、2days 時点ではガンマプロテオ
バクテリアが優占化したが、7days 時点ではバクテロイデスの大幅な増加が見られた。これは好気性菌の増殖によって鶏肉表面の酸素が消費されたことによるものと考えられる。また、食肉表面からは細菌を捕食すると思われる鞭毛虫(Parabodo sp.,
Sandona sp.)の株化にも成功した。これらの結果は、私達が食する流通生鮮鶏肉の表29

セッション 5（支部会賞候補演題）

面上にて細菌と原生動物の複雑なせめぎ合いが繰り広げられていることを示唆している。

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セッション 6（支部会賞候補演題）

16. 巨大ウイルス Mimivirus の蛋白間相互作用に関与するアンキリンリピートをコードする遺伝子とクラミ
ジアの進化○山崎 すみれ 1、松尾 淳司 1、大久保 寅彦 1、山口 博之 1
1

北大院・保科・病態解析

クラミジアの祖先は、7-10 億年前に二つの系統に分岐した。一方は比較的変動の少ない安定した環境である脊椎動物の祖先にゲノムのスリム化(約 1.0Mbp)を介して順応し、肺炎や性感染症等さまざまな感染症を起こす病原体(病原性クラミジア: 約1,000 ORFs)へと変貌した。もう一方は、過酷な環境に生息するアメーバの祖先の共生体として適応進化を遂げ(環境クラミジア: 約 2,500 ORFs)、そのゲノムサイズは約2.5Mbp とゲノムのスリム化は認められず、太古のクラミジアの特性を維持したまま進化してきたと考えられている。しかしながらこの多様性進化の誘因については不明である。一方、近年の研究で、土壌、水系環境、さらに 3 万年前のロシアの永久凍土といったさまざまな自然環境からアメーバを宿主とする光学顕微鏡でも可視化できる巨大な DNA ウイルスが多数見つけられた。この事実は、太古の昔、アメーバの祖先を伴に宿主とするクラミジアと巨大ウイルスの間で起こった生き残りをかけた鬩ぎ合いが、クラミジアの進化に大きな影響を与えた可能性を示唆している。そこで本研究では、クラミジアの進化における巨大ウイルスの痕跡を見出すために、
クラミジアと巨大ウイルスとの比較ゲノム解析を行った。ゲノム情報(環境クラミジ
ア n=12、病原性クラミジア n=12、巨大ウイルス n=5)は、NCBI データベースより取得した。ORF の抽出、遺伝子のアノテーション、BLASTp 解析、比較ゲノムは、主に RAST サーバー(http://rast.nmpdr.org/)を用いた。その結果、病原性クラミジゲノム
上では約 4%、環境クラミジアゲノム上では菌株間で差が見られるが、約 4-8%のORF が巨大ウイルスとヒットした。このヒット数はウイルスによって異なり、
Mimivirus において最もヒット数が多く、環境クラミジアの ORF 数と強い相関を示した(r=0.82786)。環境クラミジアにおいてそのヒットした遺伝子の多くが、蛋白間相互作用に深く関わるアンキリン蛋白(Ank)をコードしていることが分かった。その一方で、病原性クラミジアゲノム中には Ank をコードする遺伝子を見いだせなかった。これらの結果より、二つの系統に分岐する前の太古のクラミジア祖先と巨大ウイルス特に Mimivirus との間では、遺伝子の水平伝播が頻繁に起こっていた可能性が示唆された。また Ank を規定する遺伝子配列の存在の有無が、クラミジアの多様性
進化を規定する要因の一つであった可能性がある。

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セッション 6（支部会賞候補演題）

17. 唐 辛 子 の 辛 味 成 分 Capsaicin に よ る Chlamydia
trachomatis の細胞内増殖抑制効果について○山川 和也 1 、松尾 淳司 1 、大久保 寅彦 1 、中村 眞二 2 、山口 博之 1
1

北大院・保健科学・病態解析、2 順大・医・研究基盤センター

Chlamydia trachomatis(Ct)は偏性細胞内寄生性細菌であり、性感染症の起因菌として知られている。Ct は宿主細胞内においてユニークな二相性の増殖サイクルを持つ。細胞内での Ct の増殖には、食胞をリソソームと融合しない封入体の形成や脂質代謝の修飾変化を要求する。また Ct は、細胞への侵入や封入体膜を安定化させるために、感染細胞のアクチンを修飾することも知られている。一方、唐辛子の辛味成分である Capsaicin には、鎮痛作用、抗炎症作用、抗菌作用のみならず細胞の脂質代
謝や炎症応答、さらにアクチンといった細胞骨格の修飾作用があることも明らかになっている。
そこで本研究では、Capsaicin が Ct の発育を抑制するならば、Ct の細胞内修飾機構を紐解くモデルとなりうるのではないかと仮定し、Capsaicin が Ct の細胞内増殖に与える影響について検証した。
その結果、HeLa 細胞内での Ct (UW-3/CX)の増殖は、Capsaicin の添加濃度依存的に、未添加感染細胞に比べ、有意に 100 倍程度抑制された。100g/ml 添加濃度で最も強い Ct 発育抑制効果が認められた。また真核細胞に特異的な蛋白合成阻害剤サイ
クロヘキサミド添加によっても、この抑制効果は阻害できなかった。さらに Ct 菌数の増減を、Ct16SrRNA を標的としたリアルタイム RT-PCR によって確認したとこ
ろ、その値は Capsaicin 濃度 100μg/ml においてコントロールに比べ有意に減少した。
共焦点レーザー顕微鏡と TEM 像観察では、封入体サイズの減少や封入体内の菌数の減少が認められた。一方、Capsaicin レセプターのアンタゴニストである TRPV1 や
Capsaicin の添加で活性化する PPARγ や LXRα の阻害剤による処理は、Capsaicin の
Ct 増殖抑制効果には、ほとんど影響を与えなかった。これらの結果より、Capsaicinによる Ct の増殖抑制効果は、細胞内の修飾機構を介したものというよりむしろ、封入体や菌体への直接的な作用により誘導された可能性が高い。

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セッション 6（支部会賞候補演題）

18. DNA マイクロアレイを用いたトランスクリプトー
ム解析による Neochlamydia S13 共生アメーバのレジ
オネラ撃退に関わる遺伝子の探索○ 松下 瑞江 1、米田 千夏 1、松尾 淳司 1、大久保 寅彦 1、三宅 正紀 2、永井 宏樹 3、山口 博之 1
1

北大院・保科・病態解析、2 静岡県立大・薬・免疫微生物、
3

大阪大学微生物病研究所

クラミジアには、哺乳細胞に適応進化し性感染症や呼吸器疾患を引き起こす病原性
クラミジアと、自然環境に生息するアカントアメーバ(以下アメーバ)に共生する原始クラミジアの 2 系統が存在する。本来アメーバにとってレジオネラは天敵であるが、原始クラミジアの一種 Neochlamydia S13 が共生するアメーバ(S13WT アメーバ)
内では、レジオネラ(Legionella pneumophila: Lp)が増殖できない。共生菌をリファンピシンで除菌するとこの抵抗性がなくなることから、Neochlamydia S13 依存的な防御機構の存在が予想され、その防御に関わる菌体エフェクター分子は、感染症の新たな治療薬の開発に繋がる可能性がある。一方、Lp は、アメーバなど宿主細胞に感染し生存には、IV 型分泌装置(T4ASS と T4BSS)とそのエフェクター蛋白を要求する。
それ故に Neochlamydia S13 は Lp のこれら分泌装置関連蛋白を感知しその撃退現象が惹起している可能性がある。そこでこのアメーバ内の Neochlamydia S13 が認識する
Lp 側分子と、それに呼応して発現が上昇する共生菌側責任遺伝子を DNA マイクロアレイによるトランスクリプトーム解析にて探索した。S13WT アメーバは、PYG 培
地を用いて培養した。GFP を発現する 4 種類の Lp を用いた [JR32(T4ASS+/T4BSS+/Tra-), JR32Δ (T4ASS+ / T4BSS- / Tra-), Lp01 (T4ASS- / T4BSS+ / Tra+),Lp02 (T4ASS- / T4BSS- / Tra+)]。これらの Lp はクロラムフェニコール添加 B-CYE 寒天培地にて培養した。アメーバに 4 種類の Lp を感染(4 時間)後、30°C で 20 時間培養した。DNA マイクロアレイは、Neochlamydia S13 ドラフトゲノム情報(BASK01000001- 01001342)をもとにカスタマイズした。DNA マイクロアレイ解析：
DNA マイクロアレイへのハイブリダイゼーションと比較解析は北海道システムサイ
エンスに委託した。その結果、いずれの Lp 菌株を感染させた際にも Neochlamydia
S13 の遺伝子発現パターンは類似しており、Lp 菌株特異的に発現してくるような遺伝子は見いだせなかった。これらの結果より、S13 アメーバの Lp 撃退現象は、Lp の認識には依存しない副次的な現象である可能性が考えられた。

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セッション 6（支部会賞候補演題）

19. アメーバに共生する Neochlamydia S13 による宿主ア
メーバのアクチンの修飾について○米田 千夏 1、松尾 淳司 1、大久保 寅彦 1、中村 眞二 2、
永井 宏樹 3、山口 博之 1
1

北大院・保科・病態解析、2 順大院・医・研究基盤センター、3 阪大微研

原始的なクラミジアに属する Neochlamydia S13 は、アカントアメーバ (以下アメー
バ) に共生する偏性細胞内寄生性の難培養性細菌である。性感染症や呼吸器疾患を引き起こす病原性クラミジアと比べてゲノムサイズが約 2 倍程度大きく、このことは進化の過程において病原性クラミジアが宿主である哺乳動物に適応するために捨て去った機能分子を今なお保持している可能性を示唆している。また Neochlamydia
S13 は、一度アメーバから取り出すと二度とアメーバに感染できないが、除菌アメー
バが共生アメーバに比べ良く増殖することから、Neochlamydia S13 の共生が宿主アメーバにとって極めて大きな負担になっている可能性がある。その一方で、Neochlamydia S13 が共生しているアメーバでは本来天敵であるはずのレジオネラ(Legionella pneumophila: Lp)の感染・増殖が有意に抑制されることから(除菌アメーバ
ではこのような現象は見られない)、このアメーバは天敵 Lp から身を守るために
Neochlamdyia S13 との共生を成立させたとも考えられる。しかしながら Lp が感染した僅かな Neochlamydia S13 が共生するアメーバにおいても、除菌アメーバと同様にLp が増殖した。このことは、共生アメーバでは Lp の取り込みに何らかの異常が生じている可能性を示唆している。
そこで本研究ではその可能性を検証するために、GFP 発現 Lp や蛍光ラテックスビ
ーズの取り込み実験を行うと共に、ファロイジン染色や RT-PCR によりアメーバア
クチンの局在や発現について検討を行った。その結果、除菌アメーバに比べ共生ア
メーバにおいて Lp の感染、取り込み能が有意に低下していた。また RT-PCR では、アクチンの発現には差異は認められなかった。また以前に行った実験より、2DDIGE と質量分析からは、除菌アメーバでのアクチンの発現が顕著に低下していることが既に明らかになっている。これらの結果から、このアメーバは、アクチンの重合や再構成系に何らかの障害があり、その欠陥を共生する Neochlamydia S13 が補っている可能性が示唆された。恐らく Lp 撃退現象は、その二次的な副産物として起こっている可能性があると考えられる。

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セッション 6

20. Chlamydia trachomatis 低酸素培養モデルの構築○松尾 淳司 1、酒井 昴平 1、山川 和也 1、大久保 寅彦 1、中村 眞二 2、
山口 博之 11
2

北大院・保健科学・病態解析

順大院・医・形態解析イメージング【目的】偏性細胞内寄生性細菌 Chlamydia trachomatis は、世界中で感染者が認められる主要な性感染症起因菌である。C. trachomatis 感染の多くは無症候性に進行するため、無治療のまま放置されることも多い。その結果、C. trachomatis は上向性に卵管へと移行し、骨盤内炎症性疾患の発症に関与すると共に、卵管は繊維化に伴い閉塞し不妊の原因となる。しかしながら、C. trachomatis 感染に伴う卵管の繊維化に関与する因子は明らかではない。一方、低酸素状態は、組織の繊維化を誘導する重要な因子であり、また低酸素条件下では、炎症応答が修飾されることが知られている。そこで本研究では、C. trachomatis 感染が繊維化形成に与える影響を明らかにするために、C. trachomatis 低酸素培養モデルを構築し、低酸素状態における C.
trachomatis 感染動態を検証した。
【方法】菌株と細胞株：C. trachomatis D 型 UW3/CX 株（ATCC VR885）をヒト子宮頚癌細胞株 HeLa 細胞で 2 日間培養し、凍結融解後に精製したものを用いた。感染実
験：C. trachomatis を HeLa 細胞に遠心吸着法にて感染させ、低酸素培養チャンバー（MIC-101、Billups-Rothenburg 社）を用いて、低酸素（酸素 2％）ならびに通常酸素（酸素 21％）条件下で 2 日間培養し、C. trachomatis 感染粒子数ならびに DNA 量を
モニタリングした。また通常酸素濃度では C. trachomatis を異常体へと誘導するイン
ターフェロン γ（5 ng/ml）の効果を、低酸素条件下でも検討した。
【結果と考察】まず低酸素培養条件における酸素濃度を測定したところ、少なくとも培養開始 60 時間までは、低酸素濃度（1.9－2.1％）が維持されることが確認された。次に低酸素培養条件下で、C. trachomatis 感染粒子数を算定したところ、酸素濃度に関わらず C. trachomatis の増殖が認められた。その一方で、インターフェロン γ
存在下では、通常酸素濃度では C. trachomatis 感染粒子数が有意に減少したのに対し、低酸素条件下では、そのような効果は認められなかった。このように我々が構築した C. trachomatis 低酸素培養モデルは、低酸素状態を正確に再現できることが確認された。現在、構築した低酸素培養モデルを用いて、C. trachomatis 感染が誘導する宿主炎症応答に関する検討を進めている。〔非会員共同研究者：渡辺宜典 1〕

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セッション 7（支部会賞候補演題）

21. タゾバクタム／ピペラシリン耐性大腸菌の耐性機構の解析○鈴木 裕樹 1、佐藤 豊孝 1、山本 聡 1、小笠原 徳子 1、白石 宗 1、
品川 雅明 2、高橋 聡 3、横田 伸一１
札幌医大・1 医学部・微生物学、2 附属病院検査部、
3

医学部・感染制御・臨床検査医学

ピペラシリン（PIP）は緑膿菌を含むグラム陰性桿菌に対して抗菌活性を示す。しかし、近年では基質特異性拡張型β-ラクタマーゼ産生腸内細菌科細菌などの出現により、PIP 耐性株が増加している。これに対して PIP にβ-ラクタマーゼ阻害剤であるタゾバクタム（TAZ）を配合したタゾバクタム／ピペラシリン（TZP）がβ-ラクタマーゼを有する菌に対して使用され、大腸菌では 95%以上が感受性を示している。
我々は大腸菌臨床分離株 513 株の TZP 感受性を調査したところ、TZP に耐性を示
す株を 5 株認めた。これら TZP 耐性株は、感受性株と比較して耐性株に特有のβ-ラクタマーゼは認められなかった。本研究では、なぜこのように同じβ-ラクタマーゼを有するにもかかわらず、TZP に耐性を示す株が存在するのかに注目し、TZP 耐性機構の解析を行った。今回は菌株間で増殖の違いが TZP 耐性に影響がないかを調査した。また抗菌薬などの取り込みに関与するポーリン（OmpF, OmpC）, β-ラクタマーゼ, 薬剤排出ポンプの AcrAB の発現について解析した。
TZP 感受性株及び耐性株で増殖を比較したが大きな違いはなく、TZP 耐性には菌株間での増殖の違いによる影響はなかった。また TZP 感受性株及び耐性株の両間において OmpF, OmpC の発現量とβ-ラクタマーゼ遺伝子の発現量に差は認められなかった。AcrAB の発現量は TZP 耐性株 2 株で高く、これら 2 株の acrAB を欠損させた
ところ、ともに TZP の耐性度が 8 倍以上減少し、TAZ に対して 4 倍感受性が増加した。また DH5α株の acrAB 欠損株では PIP と TAZ それぞれの感受性が増加した。このことから、AcrAB の高発現が TZP 耐性をもたらすと考えられた。

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セッション 7（支部会賞候補演題）

22. 北海道大学病院にて分離されたニューデリー・メタ
ロベータラクタマーゼ NDM-5 産生大腸菌の性状解析
○大久保 寅彦、松尾 淳司、山口 博之
北大院・保健科学・病態解析【目的】ニューデリー・メタロベータラクタマーゼ(NDM)はカルバペネム系を含む
ほぼ全てのβラクタム系抗菌薬を分解する酵素であり、NDM-1 から NDM-14 までのバリアントが報告されている。NDM 産生菌はその耐性スペクトルの広さから『最も警戒すべき薬剤耐性菌』として知られており、国内でも海外渡航歴のある患者から散発的に分離されている。今回、NDM-5 産生大腸菌が道内で分離されたため、その性状について解析を行なった。
【材料・方法】被検株は北海道大学病院の細菌検査室において分離された、海外渡航歴のある 20 代女性の糞便由来の大腸菌１株(strain 9/III)である。最小発育阻止濃度
測定は寒天平板希釈法で行なった。PCR により NDM 産生遺伝子(blaNDM)およびその他の抗菌薬耐性遺伝子を検出し、blaNDM についてはシークエンス解析でバリアントを決定した。染色体上のキノロン耐性決定領域(QRDR)についてもシークエンス解析を行なった。また、被検株の病原性を検討するため、O 抗原型別と系統発生分類を行なうとともに、MLST により被検株の ST 型を決定した。接合伝達試験は大腸菌
ML4909 を受容株としてブロスメイティング法で実施し、得られた伝達株と被検株で性状を比較した。
【結果・考察】被検株はセフォタキシム、セフタジジム、イミペネムなどのβラクタム系抗菌薬に耐性だった他、テトラサイクリン、シプロフロキサシンにも耐性を示した。一方、NDM 産生菌に対する切り札的抗菌薬であるコリスチン、チゲサイク
リンには感受性だった。被検株は blaNDM-5 を保有していたほか、blaCTX-M-15 と tetA も検出された。QRDR には gyrA, parC, parE に遺伝子変異があった。O 抗原型は決定できず、系統発生型も A1 型（腸管内常在型）だったため、被検菌は非病原性大腸菌だと推察された。MLST 型別では ST410 と判定された。接合伝達試験では、1.47±1.58
x 10-4 の頻度で blaNDM-5 が伝達した。被検株は２本のプラスミドを保有しており、
blaNDM-5 伝達株にはそのうち１本が伝達していたが、blaCTX-M-15 や tetA は伝達していなかった。NDM 産生大腸菌の脅威は世界的に懸念されている問題であり、本例のよ
うに海外渡航者が持ち込むケースが今後も予想されることから、引き続き動向を注視していく必要がある。
【会員外協力者】 大原佑季子（北大・医・保健）、早坂かすみ、秋沢宏次、
澁谷 斉、加畑 馨、清水 力（北海道大学病院 検査・輸血部）
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セッション 7（支部会賞候補演題）

23. Actinobacillus pleuropneumoniae のキノロン耐性決定領域におけるアミノ酸変異○井澤 将規、真能 敬弘、村田 亮、菊池 直哉
酪農学園大学・獣医学群・獣医細菌学ユニット【背景・目的】豚胸膜肺炎は、世界各地の養豚現場に大きな経済的損失を与えているブタの呼吸器感染症である。本感染症の原因菌である Actinobacillus
pleuropneumoniae (App)は、既にキノロン系抗菌薬に対する耐性を獲得しつつある。
我々はこれまでに、国内分離 App 株の中に、アミノ酸残基変異を伴うフルオロキノ
ロン耐性株が含まれていることを明らかにした。そこで本研究では、App のキノロン耐性決定領域（QRDR）のアミノ酸残基変異部位の特定、耐性値との相関、および変異蓄積の順序を明らかにすることを目的とした。
【材料・方法】国内分離 App 株 5 株（血清型 1、2、5 型各 1 株、gyrA に変異を示す
血清型 1 型株、gyrA と parC に変異を示す血清型 1 型株）と基準株（ATCC 27088T）の計 6 株について、エンロフロキサシン、オルビフロキサシンの MIC 値を測定した。また、耐性値上昇試験は毎回 MIC 値を測定しながら 30 継代、抗菌薬の入った培地のみで 30 継代の計 60 継代行い、これら継代株について QRDR（gyrA、gyrB、
parC、parE）に変異が生じているかどうかを確認した。変異の確認された App 株については、増殖率や他の抗菌薬への感受性の変化を調べた。また、プラスミド媒介性キノロン耐性遺伝子保有の有無についても確認した。
【結果・考察】オルビフロキサシンの耐性値上昇試験の結果、gyrA に 1 箇所塩基変異を示す株が 1 株、gyrA、parC に 1 箇所ずつ変異を示す株が 1 株、gyrA、gyrB、
parC にそれぞれ 1 箇所ずつ変異を示す株が 1 株生じた。gyrA の変異はアミノ酸残基部位 83、87 に生じていた。他の 3 株は、MIC 値は上昇したものの新たな変異はなかった。変異前後の株で増殖率を比較したところ、変異後の株では増殖率が著しく低くなっていた。また、変異後の株では多剤耐性傾向にあることがわかった。プラス
ミド媒介性キノロン耐性遺伝子は、すべての株で検出されなかった。
本研究での gyrA、parC における変異部位は、大腸菌やパスツレラ属菌で報告されている変異部位と一致したことから、App においてもこれらのアミノ酸残基変異が耐性獲得に関与していると考えられる。しかし、アミノ酸の変異数が多ければ MIC
値の上昇が見られるものの、新たな変異が生じることなく MIC 値が上昇している株もあり、変異数と MIC 値が一概に相関関係にあるとは言えない。耐性値上昇が
QRDR の変異以外の要因（排出系の活性化など）によって起こる可能性もあるた
め、今後も検討の必要がある。
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セッション 7（支部会賞候補演題）

24. 牛 及 び 食 肉 由 来 メ チ シ リ ン 耐 性 黄 色 ブ ド ウ 球 菌(MRSA)の特徴とヒトへの影響○佐藤 友美 1、臼井 優 1、小西 典子 2、甲斐 明美 1、田村 豊 11

酪農大・獣医・食品衛生2

東京・健安研【背景】
MRSA は院内感染の原因菌として医療上、重要である。海外では家畜から MRSA
が高率に分離され、食肉を介したヒトへの伝播が懸念されている。今回、わが国の家畜と食肉由来 MRSA の関連を明らかにするため、分子疫学的特徴を比較した。
【材料・方法】
東日本の乳房炎牛由来 7 株、近畿地方と東京で流通していた食肉由来 8 株の計 15
株の MRSA について、SCCmec 型別、MLST、spa typing、pvl 遺伝子、エンテロトキ
シン(SEs)遺伝子、TSST-1 遺伝子および表層タンパクである CWASP/J 遺伝子の検索、11 薬剤に対する薬剤感受性試験、PFGE 解析を実施した。
【結果】
牛由来 7 株・食肉由来株 2 株が ST8/t1767/SCCmecIV1 に分類され、sec,sel,tet とCWASP/J を保有し、これら 9 株は β ラクタム系抗菌薬（100%）及びアミノグリコシ
ド系抗菌薬（92%）に耐性を示した。PFGE 解析の結果、牛由来 1 株と食肉由来 3 株
で 100％の相同性を示した。また、食肉由来 8 株中 7 株が SEs 遺伝子を保有し、1 株は食中毒と強く関連する sea を保有していた。台湾産冷凍鴨肉由来 MRSA は
ST573/t3523 に分類された。
【考察】
牛および食肉由来株に関連が認められたことから、家畜由来 MRSA が食肉を介してヒトへ伝播する可能性がある。今回、多く認められた ST8-MRSA は世界的に流行する USA300 とは異なり、国内で近年増加している市中感染型 MRSA“Japaneseclone”の特徴を示した。台湾産冷凍鴨肉由来から分離された ST573MRSA は、台湾などアジアで分離報告があるが国内での報告はないため、国内での汚染ではなく、海外から持ち込まれたものと推定された。食肉は、国内の家畜由来・市中感染型
MRSA だけでなく海外由来株の伝播媒体となり、ヒトの健康に影響を及ぼす可能性
がある。

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セッション 7（支部会賞候補演題）

25. 日本における大腸菌のプラスミド性コリスチン耐性遺伝子(mcr-1)保有状況とヒト医療に与える影響○福田 昭 1、佐藤 豊孝 2、鈴木 裕樹 2、臼井 優 1、浅井 鉄夫 3、
横田 伸一 2、田村 豊 11

酪農大 獣医・食品衛生、2 札医大 医・微生物、3 岐阜大院連獣【目的】
2015 年 11 月に中国でプラスミド性コリスチン(CL)耐性遺伝子(mcr-1)が報告され、その後、日本を含む世界各国で存在が確認された。現在、CL は、ヒト医療において多剤耐性グラム陰性感染症菌に対する最終選択薬として使用されている。一方、獣医療においては、飼料添加物や抗菌剤として長年使用されており、ヒト医療への影響が懸念されている。そこで、日本における大腸菌の mcr-1 保有状況を調査した。また、CL を用いた治療への影響を明らかにするため、多剤耐性グラム陰性菌への接合伝達試験を行った。
【材料・方法】
2008-2015 年に分離された大腸菌 1384 株(離乳後下痢症豚:600 株、成豚:42 株、和牛:38 株、乳牛:65 株、ハエ:125 株、ヒト:514 株)を用い、mcr-1 遺伝子の検出と CL の
薬剤感受性試験を行った。mcr-1 保有株を用い、実験室保存株大腸菌とヒト由来緑膿菌・Acinetobacter baumannii への接合伝達試験(broth/filter mating)を行い、mcr-1 伝達
株の CL 感受性を測定した。
【結果】
1384 株中 2012-2013 年に分離された 174 株(離乳後下痢症豚:171 株、成豚:1 株、和牛:1 株、ハエ:1 株)から mcr-1 が検出されたが、ヒト由来株からは検出されなかった。mcr-1 保有株では、CL の MIC は 4μg/ml 以上を示した。Broth mating により大腸菌へ 10-3~10-5 の頻度で mcr-1 が伝達し、CL の MIC は 3-4 管上昇した。Broth matingに加え、filter mating を行ったが、多剤耐性株を含む緑膿菌・A. baumannii への mcr-1の伝達は確認されなかった。
【考察】
日本全国で分離された家畜由来大腸菌から mcr-1 が検出された。mcr-1 は CL に対する感受性を低下させるが、現在多剤耐性化が問題となっている緑膿菌と A. baumanniiへの伝達は確認されず、ヒト医療への影響は少ないと考えられる。
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株式会社

モリタ

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TEL：011-252-1717

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新規遺伝子型ノロウイルス GII.17 の検出
PCR による便中の全ての腸管出血性大腸菌タイプの検出
ＨＡＣＣＰ認証取得コンサルティング
食品製造施設（工場・大量調理施設・飲食店）の衛生指導46