茨城県自然博物館研究報告
茨城県におけるヒタチノスナジホコリタケの追加記録とその系統的位置
Bull. Ibaraki Nat. Mus.,（16）: 43-49（2013）43

茨城県におけるヒタチノスナジホコリタケ（担子菌門，ハラタケ科）の追加記録およびその系統的位置
糟谷大河＊・宇野邦彦＊＊・保坂健太郎＊＊（2013 年 9 月 26 日受理）

Additional Records of Lycoperdon ericaeum（Basidiomycota,
Agaricaceae）from Ibaraki Prefecture, Japan, withNotes on Its Phylogenetic Placement
Taiga Kasuya ＊ , Kunihiko Uno ＊＊ and Kentaro Hosaka ＊＊（Accepted September 26, 2013）

Abstract
A lycoperdaceous fungus, Lycoperdon ericaeum was collected in a coastal pine forest of Hitachinaka,Ibaraki Prefecture, Japan. This is the second report of L. ericaeum in Japan. To reveal the phylogenetic
position of Japanese specimens of L. ericaeum, molecular phylogenetic analyses of the present fungus wereconducted. By maximum parsimony analyses of nuclear rRNA ITS region, materials of L. ericaeum collectedfrom Japan（Ibaraki）and Europe（Sweden）were placed within the same well-supported clade. The present
analyses revealed that Japanese and European specimens of L. ericaeum are monophyletic, identical taxon.
Key words: Ibaraki Prefecture, lycoperdaceous fungus, Lycoperdon ericaeum, molecular phylogeny,
taxonomy.

はじめに
担子菌門ハラタケ科ホコリタケ属に属するきのこの

市内の海岸砂地の針葉樹林内において，新たにヒタチ
ノスナジホコリタケの子実体発生を確認したのでここに報告する．

一種，ヒタチノスナジホコリタケ Lycoperdon ericaeum

ところで，ヒタチノスナジホコリタケを含むホコBonord. はヨーロッパ，北アメリカおよび日本に分布

リタケ属菌については，これまでに詳細な分子系統する（糟谷，2011）．日本においては，茨城県那珂郡

学的研究が行われている（Larsson and Jeppson，2008;

東海村および稲敷市の針葉樹林内の砂地上で採集さJeppson et al.，2012）．ホコリタケ属内におけるヒタチれ，糟谷（2011）が日本新産種として報告したが，そノスナジホコリタケの系統的位置もすでに明らかとなれ以降の報告例はない．筆者らは，茨城県ひたちなかっているが（Larsson and Jeppson，2008），日本産標本* 千葉科学大学危機管理学部環境危機管理学科 〒 288-0025 千葉県銚子市潮見町 3 番地（Department of Environmental
System Science, Faculty of Risk and Crisis Management, Chiba Institute of Science, 3 Shiomi-cho, Choshi, Chiba 288-0025,
Japan）．
** 国立科学博物館植物研究部 〒 305-0005 茨城県つくば市天久保 4-1-1（National Museum of Nature and Science, 4-1-1
Amakubo, Tsukuba, Ibaraki 305-0005, Japan）．

糟谷大河・宇野邦彦・保坂健太郎

44を用いた分子系統解析は行われておらず，日本産標本

類の子実体を発見した（図 1B-D）．採集した子実体はの系統的位置は明確になっていなかった．そこで筆者

写真撮影の後，肉眼的特徴を記録した．これらの形態

らは，今回採集したヒタチノスナジホコリタケの標本的特徴は，糟谷（2011）による記載とよく一致していを用いて分子系統解析を試みた．本報告ではその系統たことから，筆者らはこれらをヒタチノスナジホコリ

的位置についても考察する．

タケと同定した．
子実体は，食品用乾燥機（Snackmaster Express FD-

材料および方法
1．子実体の採集および標本作製

61，Nesco/American Harvest，WI，USA）を用いて 46℃
で 36 時間熱乾燥させ，乾燥標本を作製した．乾燥標
本に加えて，Hosaka and Castellano（2008），Hosaka et

筆者の一人，糟谷は 2011 年 10 月 21 日および同年

al.（2010），Kasuya et al.（2012）の方法に従い，新鮮

11 月 6 日に，茨城県ひたちなか市馬渡，国営ひたちな子実体から剃刀の刃を用いてグレバ（基本体）の一海浜公園内のアカマツ Pinus densiﬂora Siebold et Zucc.

部を切り取り，100 mM Tris-HCl（pH 8.0）および 0.1

およびクロマツ Pinus thunbergii Parl. からなる針葉樹

M 亜硫酸ナトリウム（Na2SO3）を添加した DMSO バ

林内（図 1A）において，複数のホコリタケ型きのこ

ッファー（Seutin et al.，1991）中に浸漬し，4℃で保図 1．ヒタチノスナジホコリタケの発生環境および子実体．A: 発生環境．B: 剥落しやすい顆粒状突起からなる外皮に覆われた，未熟な子実体（INM-2-71749）．C: 円錐形で先端部が癒合した外皮に覆われる，成熟した子実体（INM-2-71760）．D:
帯黄色の内皮に覆われる，成熟した子実体（INM-2-71760）．
Fig. 1. Habitat and baisidiomata of Lycoperdon ericaeum. A: Habitat of L. ericaeum. B: Immature basidiomata showing exoperidiumwith pulverulent granules（INM-2-71749）. C: A mature basidioma showing exoperidium with conical, convergent spines（INM-271760）. D: Mature basidiomata showing yellowish endoperidium（INM-2-71760）.

茨城県におけるヒタチノスナジホコリタケの追加記録とその系統的位置

45

表 1．本研究により新たに得られた核 rRNA ITS 領域の塩基配列情報およびそれらの GenBank 登録番号．
Table 1. Sequence data of the nuclear rRNA ITS region newly generated for the present study and associated GenBank accession
numbers.
Species
Lycoperdon ericaeum
Lycoperdon ericaeum
Lycoperdon perlatum
Lycoperdon perlatum
Calvatia craniiformis
Morganella subincarnata
Lepiota clypeolaria
Macrolepiota neomastoidea

Locality
Japan, Ibaraki, Hitachinaka, Hitachi-kaihin Park
Japan, Ibaraki, Hitachinaka, Hitachi-kaihin Park
Japan, Ibaraki, Tokai, Ishigami-uchijuku
Japan, Ishikawa, Suzu, Mt. Horyu
Japan, Ibaraki, Tokai, Ishigami-uchijuku
Japan, Ibaraki, Naka, To
Japan, Yamanashi, Narusawa, Mt. Fuji
Japan, Ibaraki, Tokai, Ishigami-uchijuku

存した．なお，供試標本はミュージアムパーク茨城県
自然博物館（INM）に保管した（表 1）．

Date
October 21, 2011
November 6, 2011
October 7, 2012
October 20, 2012
October 7, 2012
October 2, 2011
September 3, 2011
October 2, 2011

Collector
T. Kasuya
T. Kasuya
T. Kasuya
T. Kasuya
T. Kasuya
K. Iguchi
T. Kasuya
N. Tsuda

Herbarium
INM
INM
TNS
TNS
TNS
INM
TNS
INM

Specimen No. Accession No.
2-71749
KF551245
2-71760
KF551246
Kasuya B723
KF551247
Kasuya B780
KF551249
Kasuya B734
KF551248
2-71757
KF551244
Kasuya B256
KF551250
2-71756
KF551251

DNA は 100 µl の TE バッファー中で保存した．
以上により得られた DNA を鋳型とし，PCR によ

供試標本 : 茨城県ひたちなか市馬渡，国営ひたち海

り核 rRNA 遺伝子の転写領域内部スペーサー（ITS）

浜公園，海岸の針葉樹林内砂地上，2011 年 10 月 21 日，

領域を増幅した．ITS 領域の増幅には ITS1f と ITS4

糟谷大河採集，INM-2-71749; 同所，2011 年 11 月 6 日，

（Gardes and Bruns，1993） の プ ラ イ マ ー セ ッ ト を そ糟谷大河採集，INM-2-71760．

れぞれ用いた．PCR は，反応液を 20 µl［1 µl の精製
DNA，1 µl の dNTP（4 mM），1 µl の各プライマー（82．子実体の形態観察µM），0.5 units の Taq ポリメラーゼ（Takara），2 µl の子実体の肉眼的特徴は，新鮮な生の子実体に基づき］
MgCl2（25 mM），2 µl の Bovine Serum Albumin（BSA）

観察した．光学顕微鏡観察には，基本体の切片を作成とし，以下の温度プログラムにより行った：前処理，し，それらを水，3%（w/v）KOH 水溶液，または 1%

94℃ 3 分を 1 サイクル；熱変性，94℃ 35 秒，アニー

ラクトフェノール・コットンブルー溶液を用いて観察

リング，51℃ 30 秒，伸長，72℃ 1 分を 30 サイクル；

した．担子胞子の大きさは光学顕微鏡の 1,000 倍の倍

後処理，72℃ 10 分を 1 サイクル．

率下で無作為に抽出した 40 個を用いて測定した．

PCR 産物は 1% アガロースゲルで電気泳動した後，エチジウムブロマイドにより染色させ，紫外線照射に3．DNA 抽出，PCR およびシークエンシング

より可視化させた．これにより遺伝子の増幅が確認さ採集した子実体からの DNA 抽出は，DMSO バッフ

れた場合，PCR 産物を illustra ExoStar（GE Healthcare，

ァー中に浸漬した試料を用いて行った．また，比較のUK）を用いて精製し，Big Dye Terminator v3.1 Cycle

ためにミュージアムパーク茨城県自然博物館（INM）

Sequencing Kit（Applied Biosystems Inc.，Norwalk，

および国立科学博物館（TNS）に収蔵されている，茨CT，USA）により定法に従ってダイレクトシークエ

城・石川両県産のヒタチノスナジホコリタケ以外のンスを行い，塩基配列を決定した．以上により得られホコリタケ型きのこ類の標本（表 1）からも DNA 抽

た 6 点のホコリタケ型きのこ類の塩基配列を，国際的出を行った．DNA 抽出は，グラスミルクを用いた改な遺伝情報データベースである GenBank（http://www.

変 CTAB 抽出法（Hosaka，2009; Hosaka and Castellano，ncbi.nlm.nih.gov/genbank/）に登録した（表 1）．

2008; 糟谷ほか，2013）によった．すなわち，試料を乳鉢に入れた後，液体窒素を加えながら乳棒を用いて4．系統解析攪拌し，CTAB バッファーを加えた．その後，65℃で本研究により新たに得られた ITS 領域の塩基配列

1 時間加温し，たんぱく質を除去するため，クロロホ（表 1）は ATGC Ver. 6（GENETYX，東京）でアセン

ルムとイソアミルアルコールの 24: 1 の混合液を加え

ブ ル し た 後，Muscle v.3.6（Edgar，2004a; 2004b） にた．試料にはさらに，6 M ヨウ化ナトリウムバッファ

よ り ア ラ イ メ ン ト を 行 い， さ ら に BioEdit ver. 7.0.1ー（Hosaka and Castellano，2008）を加えて DNA を抽（Hall，1999）を用いてその結果を目視で確認し，必出した後，グラスミルクを添加して DNA を吸着させ，要に応じて補正した．その後，GenBank 上に公開さエタノール／バッファー溶液で洗浄した．抽出したれている，ヨーロッパ産ヒタチノスナジホコリタケを糟谷大河・宇野邦彦・保坂健太郎

46

含む 43 点のホコリタケ型きのこ類の塩基配列（表 2）

sequences］．なお，外群にはヒタチノスナジホコリを加えて系統解析を行った．このデータセットは前タケと同様にハラタケ科に属するワタカラカサタケ＊

述の方法によりアライメントを行った後，PAUP ver.

Lepiota clypeolaria（Bull.）P. Kumm. およびドクカラカ

4.0b10（Swofford，2002）を用いて最節約法［with the

サタケ Macrolepiota neomastoidea（Hongo）Hongo を用

heuristic search option（TBR and MULTREES option on）,

いた（表 1）．

and 1,000 replicates of random addition sequence］により系統樹を作成した．また，得られた系統樹のそれぞれ結果および考察のノードについて，ブートストラップ解析を行った［1,000 BS replicates using the heuristic search option（TBR
and MULTREES options on）, with 10 random addition

1．種の記載本種の子実体（図 1B-D）は洋梨形〜小頭形あるい は 類 球 形 と な り， 明 瞭 な 無 性 基 部 を 有 し， 高 さ

表 2．GenBank よ り 入 手 し， 系 統 解 析 に 用 い た 核 rRNAITS 領域の塩基配列情報．
Table 2. Sequence data used for the phylogenetic analysis of thenuclear rRNA ITS region obtained from GenBank.
Species
Arachnion
album
Bovistaaestivalis
Bovistadermoxantha
Bovistaplumbea
Calvatia
candidaCalvatia
candidaCalvatia
fenzlii
Calvatia
fragilis
Calvatia
gigantea
Calvatia
pachydermica
Calvatia
turneri
Disciseda
candidaHandkeafumosasubcretacea
HandkeaHandkea
utriformis
Handkea
utriformis
Holocotylon
brandegeeanum
Lycoperdon
altimontanum
Lycoperdon
caudatum
Lycoperdon
echinatum
Lycoperdon
ericaeum
Lycoperdon
ericaeum
Lycoperdon
foetidum
Lycoperdon
lambinonii
Lycoperdon
marginatum
Lycoperdon
molle
Lycoperdon
muscorum
Lycoperdon
norvegicum
Lycoperdon
perlatum
Lycoperdon
perlatum
Lycoperdon
perlatum
Lycoperdon
pulcherrimum
Lycoperdon
pusillum
Lycoperdon
pyriforme
Lycoperdon
pyriforme
Lycoperdon
pyriforme
Lycoperdon
pyriforme
Lycoperdon
rimulatum
Lycoperdon
umbrinumMorganella
subincarnata
Vascellumcurtisii
Vacellum
intermedium
Vascellum
pratense

OriginUSA
USA
USA
Pakistan
India
SwedenChina
Germany
China
USA
Sweden
USA
USA
USA
China
USA
USA
SwedenSwedenSwedenSwedenSwedenGermany
SwedenUSA
SwedenSwedenSwedenGermany
Sweden
USA
USA
Japan
USA
USA
USA
USA
USA
SwedenGermany
USA
USA
Japan

Accession No.
HQ235046
EU833650
HQ235050
JX183694
GU939632
DQ112624
FJ772413
AJ617493
HM237179
EU833653
DQ112596
EU833654
EU833655
EU833658
JN411549
EU833659
EU833660
DQ112589
DQ112633
DQ112578
DQ112605
DQ112606
AJ237623
DQ112576
EU833661
DQ112566
JN572904
DQ112631
AJ237627
DQ112630
AY264919
EU833663
AB067724
AJ237618
AJ237619
AJ237620
AY854075
EU833664
DQ112593
AJ237626
HQ235048
EU833667
AB067725

20-30 mm，基本体の直径は 15-25 mm，無性基部の直径は 15-25 mm．子実体の上部を構成する外皮の刺状突起は脆く，白色あるいはクリーム色〜灰白色を帯び，微細な円錐形で，先端部が周辺の突起の先端部と癒合して星形をなし，もろく剥落しやすい（図 1C）．子実体の下部では，外皮は微細な粉状〜糠状の顆粒状突起からなる．時に，子実体の上部では刺状突起と顆粒状突起が混在する（図 1B）．内皮は紙質で薄く，子実体が成熟すると黄褐色〜淡褐色となる（図 1D）．基本体の内部は幼時白色〜クリーム色で密，やがて黄褐色の粘土状となり，成熟すると粉状で，オリーブ褐色の担子胞子が充満する．無性基部の内部は海綿状で密，幼時白色〜クリーム色，成熟すると黄褐色となる．
弾糸は Lycoperdon 型，黄褐色〜オリーブ褐色，直径 4-8 µm，厚壁，内部に隔壁を有し，隔壁部分で短く破断しやすく，叉状に分枝しながら細くなり，先端は尖る．弾糸表面には球形〜類球形の小孔を多数有す
る．偽弾糸を欠く．担子胞子は球形〜類球形，直径（3-）
3.5-4.5 µm（突起を含まない），厚壁，小柄を備えるか
欠く．担子胞子表面は微細な突起が散在し，黄褐色〜
オリーブ褐色．
本報告は日本におけるヒタチノスナジホコリタケの2 報目の記録であり，茨城県においては東海村，稲敷
市に次いでひたちなか市にも分布することが明らかとなった．茨城県内では，本種の既知の発生環境はいず
れも針葉樹林内の砂地上であり，本種は県内の同様の環境に広く分布している可能性がある．
2．日本産ヒタチノスナジホコリタケの系統的位置
核 rRNA 遺伝子の ITS 領域を用いた系統解析に基づき，ヒタチノスナジホコリタケを中心としたホコリタ
ケ型きのこ類の系統樹を構築した結果，日本（茨城県）

茨城県におけるヒタチノスナジホコリタケの追加記録とその系統的位置

図 2．ヒタチノスナジホコリタケの核 rRNA ITS 領域に基づく最節約法による系統樹．各枝上の数値は最節約法のブー
トストラップ値．
Fig. 2. One of 294 parsimonious trees of Lycoperdon ericaeum derived from maximum parsimony analysis based on the nuclear
rRNA ITS region. Numbers along branches are nodal supports（parsimony bootstrap values）.

47

糟谷大河・宇野邦彦・保坂健太郎

48

およびヨーロッパ（スウェーデン）産のヒタチノスナ

協力頂いた．また，ミュージアムパーク茨城県自然博

ジホコリタケは同一のクレードを形成し，単系統群を物館の鵜沢美穂子氏および今村なした（図 2）．また，このクレードは最節約法のブの保管に際してご協力いただいたほか，本稿をまとめートストラップ値で高く支持された（図 2）．このよるに際し有益なご助言を頂いた．以上の方々に厚く御うに，日本およびヨーロッパ産のヒタチノスナジホコ

礼申し上げる．

敬氏には，供試標本

リタケは単系統であり，クレード内での遺伝的差異もほとんどないことから，地理的な分化が進んでいないと考えられる．したがって，日本とヨーロッパ産のヒタチノスナジホコリタケは，形態的特徴および系統的位置から，分類学的に同一種として認識することが適切であると考える．
なお，Larsson and Jeppson（2008）は，ホコリタケ型きのこ類の系統樹において，ヒタチノスナジホコ
リタケが L. muscorum Morgan と姉妹群を形成することを示しているが，本研究の解析結果もそれを支持
す る も の で あ っ た（ 図 2）．Demoulin（1979） は，L.
muscorum が形態的にヒタチノスナジホコリタケに近 縁 で あ る と し て 両 者 を 同 種 と 扱 い，L. muscorum
を L. ericaeum の 異 名 と み な し て い る． し か し，L.
muscorum は子実体が著しい円筒形で細長く伸長した無性基部を有し，外皮が褐色を帯びる点，また弾糸表面の小孔がまれである点（Kreisel，1962）など，形態的にヒタチノスナジホコリタケと識別できる．さらに，系統的にも L. muscorum はヒタチノスナジホコリタケと異なる（図 2）ことから，両者は別種として扱うことが適当であると考える．
本研究の解析結果は，ヒタチノスナジホコリタケが日本とヨーロッパという，地理的に離れた地域に広く分布する種であることを示している．ホコリタケ型
きのこ類の栄養獲得様式は腐生性であり（Larsson andJeppson，2008），その分散に際しては特定の宿主の分布等による制限を受けにくいと考えられる．このため，ホコリタケ型きのこ類は広域に分布する種が多いと推測されているが（Larsson and Jeppson，2008），本
研究からもこのことが示唆された．なお，ヒタチノス
ナジホコリタケは北アメリカにも分布するため（糟谷，2011），今後は北アメリカ産標本の系統的位置も検討する必要がある．

謝辞

ひたち公園管理センター企画 2 課前課長の影山秀子
氏には，国営ひたち海浜公園内での野外調査に際しご引用文献
Demoulin, V. 1979. The typiﬁcation of Lycoperdon described by
Peck and Morgan. Beih. Sydowia, 8: 139-151.
Edgar, R. C. 2004a. MUSCLE: multiple sequence alignment
with high accuracy and high throughput. Nucleic Acids Res.,
32: 1,792-1,797.
Edgar, R. C. 2004b. MUSCLE: a multiple sequence alignment
method with reduced time and space complexity. BMC
Bioinformatics, 5: 113.
Gardes, M. and T. D. Bruns. 1993. ITS primers with enhanced
speciﬁcity for basidiomycetes: application to the identiﬁcationof mycorrhizae and rusts. Mol. Ecol., 2: 113-118.
Hall, T. A. 1999. BioEdit: a user-friendly biological sequencealignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT.
Nucleic Acids Symposium Ser., 41: 95-98.
Hosaka, K. 2009. Phylogeography of the genus Pisolithus
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Hosaka, K., T. Kasuya, H. T. Reynolds and G. H. Sung.
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糟谷大河．2011．日本産ホコリタケ科知見．6．茨城県から採集された日本新産種 Lycoperdon ericaeum．日本菌学会会報，52: 49-53．
Kasuya, T., K. Hosaka, K. Uno and M. Kakishima. 2012.
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糟谷大河・都野展子・橋屋 誠・黒川悦子・宇野邦彦・保坂健太郎．2013．石川県小松市においてナガエノスギタ
ケの発生により確認されたコウベモグラの営巣例，および日本産ナガエノスギタケの系統的位置に関する知見．
小松市立博物館研究紀要，47: 23-34．
Krei se l, H. 1 96 2. D ie Ly cop e rd a ce ae d er De ut sche n
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Seutin, G., B. N. White and P. T. Boag. 1991. Preservation of茨城県におけるヒタチノスナジホコリタケの追加記録とその系統的位置

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Swofford, D. L. 2002. PAUP ＊ : phylogenetic analysis using（要49

parsimony and other methods（＊ PAUP version 4.0 beta 10）.
Sinauer, Sunderland.

旨）糟谷大河・宇野邦彦・保坂健太郎．茨城県におけるヒタチノスナジホコリタケ（担子菌門，

ハラタケ科）の追加記録およびその系統的位置．茨城県自然博物館研究報告第 16 号（2013）

pp. 43-49．
茨城県ひたちなか市の針葉樹林内砂地上において，ヒタチノスナジホコリタケ Lycoperdon
ericaeum が採集された．これは本種の日本における 2 報目の記録である．日本産ヒタチノスナ
ジホコリタケの系統的位置を明らかにするため，核 rRNA 遺伝子の ITS 領域に基づき分子系統解析を行った結果，日本産標本はヨーロッパ産のヒタチノスナジホコリタケと同一のクレードに位置した．このクレードは最節約法のブートストラップ値でも高く支持された．今回の解析から，日本とヨーロッパ産のヒタチノスナジホコリタケは，系統的にも同一の分類群であることが明らかとなった．
（キーワード）: 茨城県，ホコリタケ型きのこ類，ヒタチノスナジホコリタケ，分子系統解析，分類学．