東京医療保健大学紀要

原 著

第7巻第1号

2013. 3. 1

フグ肝投与による血清脂質の変動および病理組織学的観察
Change of serum lipid and histopathological observation of the liver in a mouse by a dose of non-toxic pufferfish liver

大貫和恵
Kazue ONUKI,

柴真悟

Shingo SHIBA,

武藤亜矢
Aya MUTOH,

野口玉雄

Tamao NOGUCHI

〈 原著論文 〉

フグ肝投与による血清脂質の変動および病理組織学的観察

Change of serum lipid and histopathological observation of the liver in a mouse by a dose of non-toxic pufferfish liver

大貫和恵
1

1

柴真悟

東京医療保健大学
2

2

武藤亜矢

医療保健学部

東京医療保健大学大学院
1

Kazue ONUKI ,2

Shingo SHIBA ,1野口玉雄

2

医療栄養学科

医療保健学研究科
1

Aya MUTOH ,2

Tamao NOGUCHI

1

Division of Medical Nutrition, Faculty of Healthcare, Tokyo Healthcare University
2

Division of Medical Nutrition, Tokyo Healthcare University Graduate School

要

旨：人工飼料で陸上養殖された無毒トラフグの肝臓（フグ肝）には、機能性成分 DHA やIPA が多量に含まれている。DHA は、血漿や肝臓コレステロールの低下作用が報告されていることから、本研究では、マウスを用いる飼育実験により上記の効果を調べた。
フグ肝を与えたマウス（フグ肝投与群）より血液を採取し、血清脂質濃度を測定するとともに、その肝臓を Sudan Ⅲ染色（脂肪染色）して、顕微鏡下でフグ肝を与えないマウス（コントロール群）と比較した。血清総コレステロール（TC）濃度は、フグ肝投与群がコントロール群より低値を示し（p ＜ 0.05 ）、フグ肝には、血清 TC 濃度の低下作用があることが示された。また、脂肪染色したマウスの肝臓の組織標本より、コントロー
ル群は、びまん性に著明な脂肪陽性である一方、フグ肝投与群は、強拡大で微細な顆粒状脂肪滴の沈着が確認された。フグ肝投与群は、コントロール群より脂肪の沈着が弱かったことが明らかとなった。

キーワード：フグ肝、機能性成分、DHA、コレステロール
Key words：Pufferﬁsh liver,Functional components,

Docosahexaenoic acid,

受付：2012 年 4 月 6 日

Cholesterol

受理：2012 年 9 月 20 日研究を重ねてきた。

はじめに

当 該 の フ グ 肝 に は、 生 だ け で な く 加 工 品（ レ1983 年、当時の厚生省は、環境衛生局長通知「フグ1）ト ル ト パ ウ チ 詰， 缶 詰， ぬ か 漬 け 等 ） に も DHAの衛生確保について」 により、有毒種、無毒種を含（Docosahexaenoic acid）や IPA（Icosapentaenoic acid）

めたすべてのフグの肝臓（以下、フグ肝）を食用とし等の機能性成分が多く含まれており、その嗜好性につて販売することが禁止されている。そのため、現在もいても官能評価から高い評価を得ることができた ） ）。

なお、費用をかけて廃棄されており、フグ肝の入手がこれら成分には、一般的に心血管系疾患の予防効果 ），4 567）

8）

困難なことから、フグ肝の特性研究は、殆ど行われて視覚機能の向上 ，老人性認知症の改善 ，精神安定化いない。

作用 ），脳の発達促進作用，記憶学習の維持向上作用
9一方、野口らの研究 ） ）により、テトロドトキシン
2310 ）11 ）が報告されており、機能性成分を多く含むフグ肝（TTX）を保有する生物が存在しない環境で養殖されにも、これらの効果が期待された。これらの効果のうたフグは、毒性を持たないことが明らかとなり、現在

ち脳の記憶学習の維持向上については、前報

では、無毒フグの生産が可能となった。これらの研究明らかにした。

12 ）によりにより，費用をかけて廃棄してきた無毒のフグ肝が，本研究では、フグ肝にそれ以外の機能性成分による将来的には安全で栄養価の高い食品として利用される効果（心血管系疾患の予防効果）をマウスにフグ肝をことを期待し、その特性を栄養学的側面に焦点を絞り、摂餌させる実験により、摂取後のマウスの血清の脂質̶ 19 ̶

のうち脳の記憶学習の維持向上については、前報

脂質源をラードのみ 7 g 使用し、DHA および IPA

12）

により明らかにした。

が 0 mg にした。一方、フグ肝投与群は、フグ肝 6

本研究では、フグ肝にそれ以外の機能性成分にg とラード 2.668 g を混合して脂質源が 7 g になるよる効果（心血管系疾患の予防効果）をマウスにように調整し、DHA が 512 mg、IPA が 394 mg

フグ肝を摂餌させる実験により、摂取後のマウス含まれている。また、フグ肝には、その他の成分の血清の脂質濃度および肝臓組織の変化を検討し、（タンパク質、炭水化物等）も含まれているため、フグ肝の栄養生理学効果を明らかにする。
年
2011

両群の組成が同等になるように配合を調整した。
大貫和恵 柴 真悟 武藤亜矢 野口玉雄

東京医療保健大学 紀要第1号

濃度および肝臓組織の変化を検討し、フグ肝の栄養生
方 法
理学効果を明らかにする。
Table1

１．試料
 ㈱萬坊（佐賀県唐津市呼子）の室内水槽で陸上方 法

養殖されたトラフグ 2 年魚より腑分けされた肝臓
1．試料を試料とした。なお、試料は、食品衛生検査指針・㈱萬坊（佐賀県唐津市呼子）の室内水槽で陸上養殖さ理化学編中のフグ毒検査法 13）に準じて毒性試験をれたトラフグ 2 年魚より腑分けされた肝臓を試料としし、毒量が 2 MU/g 未満（無毒）であることを確た。なお、試料は、食品衛生検査指針・理化学編中の認後に使用した。
13
フグ毒検査法 ）に準じて毒性試験をし、毒量が 2MU/g 未満（無毒）であることを確認後に使用した。
2．実験動物

2.1 飼育環境

2．実験動物

実験動物は、ddY 系雄マウス（約 20 g，5 週令）飼育環境を数日間予備飼育後，実験に用いた。また、マウ
実験動物は、ddY 系雄マウス（約 20 g，5 週令）をスは、フグ肝を含まない飼料を摂取させた群（コ
数日間予備飼育後，実験に用いた。また、マウスは、

2.1

2.2. マウスの飼育環境

マウスは、購入後から実験終了まで室温 23 ± 2℃，コントロール群

フグ肝投与群

コーンスターチ

カゼイン



スクロース



ラード

 

フグ肝‐  セルロースパウダー

ミネラルミックス

ビタミンミックス/シスチン

重酒石酸コリン



第三ブチルヒドロキノン





合計 

*1 配合無し。
*2 脂質は、合計 7 g/100 g にフグ肝とラードの量を調整した。
*3 フグ肝の水分量（1.32 g/6 g）を考慮した。

ントロール群：n=16）とフグ肝を含む飼料を摂取
フグ肝を含まない飼料を摂取させた群（コントローさせた群（フグ肝投与群：n=16）の2 群に分けてル群：n=16）とフグ肝を含む飼料を摂取させた群3 週間飼育した。）の 2 群に分けて 3 週間飼育し（フグ肝投与群：n=16た。 2.2.マウスの飼育環境

マウスの飼料配合（g/100 g）

Table 1 マウスの飼料配合（JJ）

3．血清脂質濃度測定
セリド（TG）濃度は GPO・DAOS 法、総コレステロー

2ル（TC）濃度はコレステロールオキシダーゼ・DAOS

湿度 50 ～ 60%，12 時間照明（午前 8 時～午後 8 時ま法および HDL- コレステロール（HDL-C）濃度はリンで点灯）で常時換気の環境下でプラスチックマウス

タングステン酸・マグネシウム塩沈殿法を用い、それケージ（サイズ：W245 × D175 × H125mm）に入れぞれ測定した。測定試薬は、それぞれ和光純薬工業㈱て飼育した。なお、飼料と水は自由摂取とし、摂食のトリグリセリド E- テストワコー、コレステロール E-量と体重を毎日測定した。

テストワコーおよび HDL- コレステロール E- テストワ

2.3．飼料配合

コーを使用した。

マウスの飼料配合は、AIN（American Institute14 ）of Nutrition）-93Gに基づき調製した（Table 1 ）。

なお、比較対照として実験開始のマウス（n=5 ）の血清脂質濃度も測定した。

なお、本研究では、機能性成分（DHA、IPA 等）の効果を検証するため、飼料中の脂質源としてそれ4．病理組織学的観察

肝臓組織は、3. にてマウスの腹部を広く切開し、肝臓ら 成 分 が 微 量 で あ る ラ ー ド（SIGMA-ALDRICH，15 ）1.3 g/100 g）を使用した。

を肉眼的に観察後、速やかにマウスごと 10% ホルマリコントロール群の配合飼料（ 100 g あたり）は、ン水で十分に固定した。数週間後、マウスの肝臓から脂質源をラードのみ 7 g 使用し、DHA および IPA が小組織片を作製し再固定した後、脱水した。脱水され0 mg にした。一方、フグ肝投与群は、フグ肝 6 g とた小組織片をパラフィンで包埋し、厚さ 4µm の切片をラード 2.668 g を混合して脂質源が 7 g になるように作製して 2 種の染色をした。組織全体像をみる基本的調整し、DHA が 512 mg、IPA が 394 mg 含まれていな染色として Hematoxyline-Eosin 重染色（HE 染色）、る。また、フグ肝には、その他の成分（タンパク質、脂質の蓄積の程度とその沈着様式をみる Sudan Ⅲ染

炭水化物等）も含まれているため、両群の組成が同色で行った。なお、Sudan Ⅲ染色では、屠殺時に固定等になるように配合を調整した。

した肝組織の小組織片から凍結切片を作製した後、染色し、組織の脂肪沈着の変化をみた。

3．血清脂質濃度測定

なお、比較対照としてフグ肝投与群に含まれている飼育後のマウスに、エーテル麻酔下で全採血した後、屠殺および解剖した。血液を遠心分離して得た血清をDHA 量（ 592 mg/100 g）と同量をマウスに投与した
DHA 投与群も同様に観察した。

用いて脂質濃度を測定した。脂質について、トリグリ
̶ 20 ̶

Hematoxyline-Eosin 重染色（HE 染色）、脂質の度は、
TG 濃度が 135±54 mg/dl、
TC 濃度が 142±28

蓄積の程度とその沈着様式をみる Sudan Ⅲ染色

mg/dl、HDL-C 濃度が 76±15 mg/dl、TC 濃度中で行った。なお、Sudan Ⅲ染色では、屠殺時に固の HDL-C 濃度の割合が 54%であった。これらの定した肝組織の小組織片から凍結切片を作製した結果を上記と比べると、飼育後のマウスの TG お後、染色し、組織の脂肪沈着の変化をみた。

よび TC 濃度は、本来、増加する傾向にあるが、なお、比較対照としてフグ肝投与群に含まれている DHA 量（592 mg/100 g）と同量をマウスにフグ肝投与群の TC 濃度のみ上昇することなく、東京医療保健大学 紀要投与した DHA 投与群も同様に観察を行った。

若干減少していた。

フグ肝投与による血清脂質の変動および病理組織学的観察

5．統計処理5．統計処理2011 年

血清脂質濃度（

実験結果は、統計解析ソフト
SPSS（ver.11.5）
実験結果は、統計解析ソフト
SPSS（ver.11.5）によにより、平均値（mean）±標準偏差（SD）で表し、り、平均値（mean）±標準偏差（SD）で表し、有意有意差検定を T 検定にて行った。なお、有意水準差検定を T 検定にて行った。なお、有意水準を 5% とを 5%とした。

mg / dl

した。

第1号結果）

1．マウスの体重推移および累計飼料摂取量
結果
マウスの累計飼料摂取量は、コントロール群が1．マウスの体重推移および累計飼料摂取量
218±10 g（n=16）、フグ肝投与群が 215±15 g

マウスの血清脂質濃度
Fig.Fig.1
1 マウスの血清脂質濃度

マウスの累計飼料摂取量は、コントロール群が 218（n=16）を示し、若干、コントロール群の方が多± 10 g（n=16 ）、フグ肝投与群が 215 ± 15 g（n=16 ）3を示し、若干、コントロール群の方が多いが、両群間における有意差は認められなかった。また、体重増加量は、コントロール群が 12 ± 2 g、フグ肝投与群が 12± 3 g で、両群間における有意差は認められなかった。
2．血清脂質濃度マウスの血清脂質濃度の結果を Fig.1 に示した。
TG 濃度は、コントロール群が 139 ± 51 mg/dl、フグ肝投与群が 152 ± 44 mg/dl を示し、フグ肝投与群が高値を示したが、有意差は認められなかった。TC 濃度は、コントロール群が 163 ± 36 mg/dl、フグ肝投与群が 126 ± 38 mg/dl を示し、フグ肝投与群が有意に低値を示した（p ＜ 0.01 ）。HDL-C 濃度は、コントロー
ル群が 121 ± 24 mg/dl に対して、フグ肝投与群が 93 ±25 mg/dl を示し、有意差が認められた（p ＜ 0.01 ）。また、TC 濃度中の HDL-C 濃度の割合は、コントロールa）HE染色×10

肝正常構築の乱れ、線維の増生などは認められないb）HE染色

×40

細胞質内泡沫脂肪沈着を認めるc）Sudan Ⅲ染色×10

ビマン性に著しい脂肪沈着を認めるd）Sudan Ⅲ染色×40

沈着脂肪滴の大きさが目立つ
細胞質内の脂肪の色調の増加を認める群およびフグ肝投与群ともに 75% であり、両群間でのFig.2有意差は認められなかった。

マウスの肝組織の病理組織学的観察（コントロール群）

なお、実験開始のマウス（n=5 ）の血清脂質濃度は、TG 濃度が 135 ± 54 mg/dl、TC 濃度が 142 ± 28 mg/dl、HDL-C 濃度が 76 ± 15 mg/dl、TC 濃度中の HDL-C 濃度の割合が 54% であった。これらの結果を上記と比べると、飼育後のマウスの TG および TC 濃度は、本来、増加する傾向にあるが、フグ肝投与群の TC 濃度のみ上昇することなく、若干減少していた。
3．肝組織の病理組織学的観察

HE 染色および Sudan Ⅲ染色の結果を Fig.2 ～ 3 に示した。
HE 染色では、コントロール群が Eosin の染色がやや薄く、強拡大（× 40 ）にて、いずれの細胞質内にも無数の小空胞がみられた（Fig.2b）。一方、フグ肝投与群では、主に肝細胞の細胞質内において、中心静脈周囲性に顆粒状の細かい空胞が多数認められた（Fig.3a,b）。
両群の細胞質内には、同様の小空胞がみられたが、こa）HE染色

×10

肝臓の正常構築の乱れを認めないb）HE染色

×40

肝細胞における微細な脂肪沈着c）Sudan Ⅲ染色×10

小葉中心性脂肪沈着d）Sudan Ⅲ染色×40

肝細胞質内の弱い脂肪沈着

れは、脂肪滴が抜けてできたものと考えられ、コント̶ 21 ̶

Fig.3

マウスの肝組織の病理組織学的観察（フグ肝投与群）

東京医療保健大学 紀要第1号

大貫和恵

2011 年

柴真悟

武藤亜矢
17 ）

野口玉雄

18 ）

ロール群がびまん性に、フグ肝投与群が中心静脈周囲あることが明らかとなった。鈴木

性に無数に存在したことから、両群の脂肪の分布には油の摂取は、肝臓の脂肪を蓄積する抑制効果があると違いがみられた。

報告されている。本研究では、これらの報告と同様のSudan Ⅲ染色では、コントロール群の脂肪がびまん性に染色され、脂肪滴の大きさが顆粒状程度であったや餅らより、魚結果が得られたことから、フグ肝には、肝臓の脂肪を蓄積する抑制効果があることが示唆された。

（Fig.2c）。一方、フグ肝投与群では、肝小葉中心性脂肪また、今回の組織学的観察から、フグ肝投与群は、沈着がみられ、弱拡大（× 10 ）では帯赤色調から淡黄比較対照として用いた DHA 投与群と類似した脂肪の赤色調に斑状の染色性を示した（Fig.3c）。強拡大（×沈着様式を呈し、フグ肝を食品として摂取した際にも、40 ）では、非常に細かい顆粒状脂肪球の沈着がみられ内臓脂肪が蓄積しにくいのではないかと考えられる。

た（Fig.3d）。なお、両群の肝臓には、脂肪滴がみられたが、フグ肝投与群がコントロール群よりも微細であ結ることが確認された。

論

なお、DHA 投与群の HE 染色は、中心静脈周囲性に本研究から、フグ肝を摂取することにより、血清顆粒状の空胞が認められ、Sudan Ⅲ染色は、肝小葉中TC 濃度の上昇抑制作用が得られることが明らかとな心性脂肪沈着がみられた。これらの結果は、フグ肝投った。フグ肝には様々な成分が含まれているため、食与群と類似しているが、DHA 投与群の方が脂肪の沈着品として摂取すれば、そのほかの成分との相乗効果か程度が弱かった。

ら、サプリメントなどの DHA 単体での摂取よりも機能性の効果を図れると推察される。また、フグ肝を食考品として摂取すれば、DHA 単体と同様に、内臓脂肪沈察着による脂質代謝異常を来たす可能性が非常に低いこ

1．血清脂質濃度とが示唆され、フグ肝は、機能性成分に富んだ優れたTG 濃度は、両群の数値に違いはみられたものの、有食品であると言える。

意差が認められなかったことから、フグ肝を摂取した以上より、優れた食品であるフグ肝が市場に流通すことによる TG の効果を血清結果からは明らかにするることで、日本のみならず、世界の食文化の発展に大ことができなかった。他方、TC 濃度は、フグ肝投与きく貢献することが期待できる。さらに、食品として群がコントロール群より低く、実験開始前より飼育後のフグ肝は、サプリメントのような単一成分ではなく、に減少したことから、フグ肝に含まれる DHA 等が血様々な成分を含有していることから、それらの相乗効

清 TC 濃度を低下させたと考えられる。

果が期待できる。

鈴木の報告16 ）より IPA には、中性脂肪を減少させ、DHA には、血清コレステロールおよび中性脂肪を減謝少させる効果が認められている。本研究でもこの報告と同様の結果が得られたことから、フグ肝に含まれる

辞本研究をするにあたり、マウスの肝臓組織標本作製

DHA には、体内にコレステロールの蓄積を抑制させるおよび観察でご教授いただいた桐蔭横浜大学効果があることが示唆された。

郎教授に心より謝辞を申し上げます。

2．肝組織の病理組織学的観察

大学院生

直江史

本研究を進めるにあたり協力した東京医療保健大学
脂肪沈着について、コントロール群は、びまん性脂島田誠、医療保健学部卒業研究生（小原伴美，小林なつき，近藤豊，酒井悠司，日原詩織，肪沈着が著しく、脂肪滴は顆粒状から中脂肪滴であっ皆川た。一方、フグ肝投与群は、肝小葉中心性脂肪沈着を式会社萬坊に深謝いたします。

彩）、さらに、試料を快く提供していただいた株呈しており、弱拡大（× 10 ）にて著しい斑状の脂肪沈

また、本研究の一部は、平成 23 年度東京医療保健大着が確認され、沈着している脂肪滴が微細顆粒状であ学医療保健学部医療栄養学科、特別研究費にて行われることから、コントロール群と異なっていた。また、た。

フグ肝投与群の脂肪沈着は、同様に実験をした DHA投与群と比較すると、類似していたが、その程度が弱かった。
以上の結果から、フグ肝投与群はコントロール群に比べて、脂肪沈着の程度が極めて弱く、脂肪が微量で̶ 22 ̶

参考文献1 ） 厚生省環境衛生局長通知：フグの衛生確保について．

環乳第 59 号，昭和 58 年 12 月 2 日 .

東京医療保健大学 紀要

フグ肝投与による血清脂質の変動および病理組織学的観察2 ） 野 口 玉 雄， 高 谷 智 裕， 荒 川

第1号

修． 囲 い 養 殖 法 に より 養 殖 さ れ た ト ラ フ グ の 毒 性． 食 品 衛 生 学 雑 誌ての機能性に関する研究．博士論文，長崎大学大学院
2010;82．
16 ）Suzuki H., Wada S. Comparison of Docosahexaenoic

2004;45(3):146-149.
3 ） 大貫和恵，野口玉雄，荒川2011 年

修．開放系循環水槽におAcid with Eicosapentaenoic Acid on the Lowering

いて養殖されたトラフグ肝臓の無毒確認とその脂質

Effect of Endogenous Plasma Cholesterol in Adult

中の機能性成分．日本食品化学学会誌 2009;16(3):157-Mice. Fisheries Science 1995;61:525-526.
17 ）Suzuki H., Hayakawa S., Tamura S. et all. Effect of162.
4 ） 大貫和恵，野口玉雄，荒川修．安全なフグ肝加工品

Age on the Modification of Rat Plasma Lipids by Fishの栄養成分と機能性成分．日本食品化学会誌 2010;7:6-and Soybean Oil Diets. Biochimica et Biophysica

11.

Acta 1985;836:390-393.

5 ） Onuki K., Noguchi T. Reconfirmation of non-toxicity18 ）餅康樹 , 角田伸代 , 柴祥子他．マウスにおいてof the liver and nutritional function of its lipid，of

魚油はウェイトリバウンドによる体重増加および肝the pufferfish cultivated for 2 years in 2006 and 2007

臓への脂肪蓄積を抑制する．日本栄養・食糧学会誌

respectively，in the open system of circular aquarium.

2010;2:69-77.

Bulletin of Tokyo Healthcare University 2008;3:15-21.
6） Hirai, A., Hamazaki, T., Terano, T., et all.

Eicosapentaenoic acid and platelet function inJapanese. Lancet 1980;2:1132-1133.
7 ） Hoffman, DR., Birch, EE., Birch, DG., et all. Impactof early dietary intake and blood lipid compositionof long-chain polyunsaturated fatty acids on later
visual development. J. Pediatr. Gastroenterol Nutr.
2000;31:540-553.
8 ） Joshi, H., Kaur, N., Jyotibala, C. Evaluation ofnootropic effect of argyreia speciosa in mice. JHealth Sci. 2007;53:382-388.
9 ） Hamazaki, T., Sawazaki, S., Itomura, M., et all. The

effect of docosahexaenoic acid on aggression inyoung adults. J Clin Invest 1996;97:1129-1134.
10 ）Hashimoto, M., Tanabe Y., Fujii, Y., et all.

Mechanism of improvement of spatial cognition withdietary docosahexaenoic acid. Folia pharmacologica
japonica 2002; 120:54-56.
11 ）Suzuki H., Lipid (oil). Suzuki H., Wada T., MiuraR ., E d s .

S uis ans y ok uhi ne i y o u g a k u , To k y o ,gihodoshuppan 2004;118-187.
12 ）Onuki K., Shiba S., Shimada T., Noguchi T. Effect ofPufferfish liver on the ability of mice in learning andmemorizing. 東京医療保健大学紀要 2012;6:1-6.
13 ）厚生労働省監修．食品衛生検査指針・理化学編．東京，

日本食品衛生協会，2005;661-666．
14 ）Reeves PG，Nielsen FH，Fahey GC．AIN-93 G

purified diets for laboratory rodents，Final report ofthe American Institute of Nutrition ad hoc writing
Committee on the reformulation of the AIN-76A
rodent diet. 1993;1939-1951．
15 ）大貫和恵．無毒養殖トラフグ肝臓の食用化と食品とし̶ 23 ̶東京医療保健大学 紀要第1号

大貫和恵2011 年

柴真悟

武藤亜矢

A b s t r a c t：This study aims at elucidation of effective role on the decrease of the lipid and totalcholesterol(TC) contents in the serum by a dose of non-toxic pufferfish liver with a lotof functional DHA and IPA by feeding test using a mouse.
The lipid and its TC contents in the serum of the blood of the mouse fed on the liverof pufferfish were determined and the liver was stained with Sudan Ⅲ and its profile
was followed by observation under a microscope.
The pufferfish liver feeding group indicated a lower value of the serum TC(<0.05)
than that of no pufferfish liver feeding group(control group). The pufferfish liver was
shown to play the role of functionality to reduce cholesterol in the serum. In thestained tissue of the liver, the lipid of the control group showed remarkable positivity
to diffuse but that of the pufferfish liver feeding group the deposition of a loose
granular lipid droplet and weaker stained than the former.
This result also shows functionality of the pufferfish liver feeding group.

̶ 24 ̶野口玉雄