The 43rdd Scientifi
ficc Meeting of
the Japanese Medical Society for
Lung Surfactant and Biological Interface

日本
肺サーファクタント
・
界面医学会

肺サーファクタン
肺サーファクタントおよび界面現象に関する学術集会
トおよび界面現象に関する学術集会（旧 日本界面医学会）
日本界

第43回学術研究会

2007年

土
10月13日■札幌医科大学記念ホール
札幌市中央区南1条西18丁目

会 長 ■ 高橋弘毅 札幌医科大学医学部内科学第三講座

開催のご挨拶

札幌医科大学医学部内科学第三講座

高橋 弘毅

日本肺サーファクタント・界面医学会第 43 回学術研究会を平成 19 年 10 月 13
日 ㈯に札幌医科大学記念ホールで開催させていただくことになりました。会長の大任を仰せつかり誠に光栄に存じます。
今回は、日本界面医学会から名称が変更されて初めての学術研究会となります。
新しい名称によって、本学会が肺サーファクタントを研究のメインとする団体であることが理解されやすくなったのではと思います。
1975 年に第 1 回の学術研究会が開催されて以来、肺サーファクタント学は人工
サーファクタントの開発をはじめとし、様々な領域へ研究が拡大・発展してまいりました。その成果のひとつは免疫学への進出です。4 種類ある特異蛋白質のなかで、サーファクタント蛋白質（SP）‑A と SP‑D がコレクチンと呼ばれるファ
ミリーに属し、肺の自然免疫機構に重要な役割を果たしていることが明らかになりました。今回の特別講演において、この分野の第一人者である札幌医科大学医学部生化学第一講座 黒木由夫先生に「肺コレクチン（SP‑A・SP‑D）」による自然免疫の分子機構」と題して、最新の知見を含むレクチャーをお願いしております。また、長崎大学大学院医歯薬学総合研究科感染免疫学講座の迎 寛先生には「デフェンシンと肺の感染制御、炎症、線維化」と題し、デフェンシンについて抗菌作用を超えた様々な機能の解説をしていただく予定です。
デフェンシンの産生細胞と分子構造はサーファクタント成分とは全く異なりますが、肺コレクチンと同様に気道での感染防御に関与する重要なペプチドであり、SP との関係についても触れていただけるものと思います。また、教育講演を東京大学生産技術研究所基礎系部門の酒井啓司先生にお願いしました。
「分子物理

−1−

からみた界面計測」と題して、酒井先生が考案された流体粘弾性・表面張力測定のプローブをご紹介いただき、参加者の皆様と医療への応用の可能性を探っていきたいと考えております。
会場は札幌の都心にありながら、山々が近くに望まれ、一足早い紅葉を楽しんでいただけるものと存じます。また、本学会が実りある学会になりますように、多くの方にご参加いただき、明日からの研究・診療に役立てていただけることを心より希望いたします。
平成 19 年 10 月吉日−2−演者の方へのお願い
1）一般演題の講演時間は 12 分、討論時間は 3 分です。必ずお守り下さい。

2）発表は PC プレゼンテーションのみで行います。
今回はパソコン（一面投影）による発表のみとさせていただきます。
OHP および 35㎜スライドプロジェクターは準備いたしませんので、ご注意下さい。
PC 環境は、OS：Windows XP、Application：Microsoft PowerPoint で対応いたします。
Macintosh の場合は PC 持参による発表となります。なお、AC アダプターと外部出力に特殊なコネクターが必要な場合コネクターも併せてご持参下さい。
発表データは上記 PC 環境で再生可能なファイルを作成して下さい。使用フォント
は Windows に標準で装備されているもの（MS 明朝、MS ゴシック、Times New
Roman、Arial、Century 等）を使用して下さい。
発表ファイル名は、「演題番号−演者名 .ppt」として下さい。
（例：札幌花子.ppt）
発表データは USB メモリまたは CD‑R で準備し、学会の始まる前までに会場入口「発表受付」までお持ち下さい。これら以外のメディアは受付出来ませんのでご注意下さい。USB メモリ、CD‑R はその場で返却いたします。なお、発表ファイル
は学会終了後に消去いたします。
発表の際は、演台にセットされている、モニター、キーボード、マウスを使用し、演者の先生ご自身で操作願います。

−3−

役員会（ 理事会・評議員会）
・会長招宴・懇親会のご案内
1 ）役員会（理事会・評議員会同時開催）：
日 時：平成 19 年 10 月 12 日㈮ 15：30 〜 18：00
場 所：札幌プリンスホテル国際館パミール 3 階「風連の間」
札幌市中央区南 2 条西 11 丁目
TEL：011‑241‑1111

2 ）会長招宴：
日 時：平成 19 年 10 月 12 日㈮ 18：00 〜
場 所：札幌プリンスホテル国際館パミール 3 階「屈斜路の間」
札幌市中央区南 2 条西 11 丁目
TEL：011‑241‑1111

3 ）懇親会：日 時：平成 19 年 10 月 13 日㈯ 17：30 〜
場 所：札幌プリンスホテルタワー 1 階「HAPUNA」
会費：500 円（学会受付の時に出欠を確認させていただきます。
）−4−

会場周辺図交通手段
札幌医科大学記念ホール
タクシー： JR 札幌駅から乗車 10 分
地 下 鉄：南北線「 さっぽろ 」駅（JR 札幌駅直結 ）から「 真駒内 」行に乗車、「 大通」駅で東西線「宮の沢」行に乗換え「 西 18 丁目 」駅で下車、徒歩 5 分
札幌プリンスホテルタワー・国際館パミール
タクシー：JR 札幌駅から乗車 5 分
地 下 鉄：「 東西線西 11 丁目駅」2 番出口から徒歩 2 分

JR札幌駅
西

西

西

丁目

丁目

12

丁目

11

石山通り

県立近代美術館
●
●知事会館

北海道大学
北方生物園
●
◎
北海道庁
北１条

地下鉄南北線

西

丁目

15

さっぽろ

西

丁目

16

丁目

西

17

18

北５条

至 新さっぽろ

地 下 鉄
４番出口●

西18丁目
地 下 鉄●
６番出口

西11丁目

地下鉄東西線

大 通●地 下 鉄
５番出口
南１条
市電

札幌医科大学西15丁目電停

札幌医科大学
附属病院●

国際館パミール

南２条

中央区役所
南３条

札幌プリンスホテル（役員会／会長招宴） タワー（懇親会）

−5−

至 真駒内

札幌医科大学
記念ホール

札幌プリンスホテル別館●

プログラム
10：00 〜 10：05

開会の挨拶
第 43 回肺サーファクタント・界面医学会学術研究会会長 高橋弘毅（札幌医科大学 ）10：05 〜 10：35

一般演題 1
座長：白鳥正典（ 札幌医科大学 ）01 ウランの代わりにウーロン茶抽出物（ OTE ）を用いた電子染色法−Ⅱ型肺胞上皮細胞の観察○佐藤 茂、安達彰子、佐佐木喜広
日本医科大学 中央電子顕微鏡研究施設

02 肺魚気道および肺胞上細胞の形態学的研究○松村豪一 1）、椎橋孝太郎 1）、森元貴子 1）、佐藤 茂 2）、永田元春 3）、
高橋常男 4）、上田真太郎 5）
聖学院大学人間福祉学部 1 ）、日本医科大学中央電子顕微鏡研究施設 2 ）、サンショウウオ研究所 3 ）、神奈川歯科大学口腔解剖学 4 ）、
上田老人医学研究所 5 ）10：35 〜 11：05

一般演題 2
座長：長 和俊（ 北海道大学 ）03 Rab38 欠損ラット由来初代培養肺胞Ⅱ型上皮細胞におけるフォスファチジルコリンの分泌活性○長内和弘 1）、小林 誠 1）、八田理恵子 1）、三輪知子 1）、土原一真 1）、
井口晶晴 1）、黄正寿 1）、栂博久 1）、樋口純子 2）
金沢医科大学呼吸機能治療学（呼吸器内科学 ）1 ）、山形大学人体病理学 2 ）−7−

04 肺サーファクタントおよび肺胞Ⅱ型細胞と緑膿菌 quorum sensing 機構との相互作用

○山田友紀 1）、小笠原理恵 1）、諏訪部章 1）、舘田一博 2）
岩手医科大学医学部臨床検査講座 1 ）、東邦大学医学部微生物・感染症学講座 2 ）11：05 〜 11：15

コーヒーブレーク

11：15 〜 12：00

一般演題 3
座長：長内和弘（金沢医科大学 ）05 Human Pulmonary Surfactant Protein D Binds to MD-2
○ Xiaomeng Nie, Chiaki Nishitani‑Ono, Masami Yamazoe, Takeyuki
Shimizu, Hiroaki Mitsuzawa, Kaku Sawada, Motoko Takahashi, Hiroki
Takahashi and Yoshio Kuroki

06 間質性肺炎の SP-D 光顕免疫染色○樋田寿々子、安田寛基
帝京大学医学部病理学講座

07 間質性肺炎に対する Cyclosporin A 使用例の検討

─治療有効性と血清マーカー SP-A、SP-D、KL- 6 ─○大塚満雄、白鳥正典、北田順也、中村直人、工藤和実、村上聖司、
千葉弘文、高橋弘毅
札幌医科大学医学部内科学第三講座−8−

12：00 〜 13：15

ランチョンセミナー・教育講演
日本肺サーファクタント界面医学会・エーザイ㈱共催
座長：黒木由夫（札幌医科大学 ）「分子物理から見た界面計測」
東京大学生産技術研究所基礎系部門 准教授

酒井啓司 先生

13：15 〜 13：45

総会

13：45 〜 14：30

会長講演
座長：阿部庄作（ 札幌医科大学名誉教授 ）「基礎臨床連携の重要性─肺サーファクタント研究の軌跡に学ぶ─」
札幌医科大学医学部内科学第三講座 教授

高橋弘毅 先生

14：30 〜 15：30

特別講演 1
座長：諏訪部 章（岩手医科大学 ）「デフェンシンと肺の感染防御、炎症、線維化 」
長崎大学大学院医歯薬学総合研究科感染免疫学講座 准教授

15：30 〜 15：45

コーヒーブレーク

−9−

迎

寛 先生

15：45 〜 16：45

特別講演 2
座長：高橋弘毅（札幌医科大学 ）「 肺コレクチン（SP‑A・SP‑D）による自然免疫の分子機構 」
札幌医科大学医学部生化学第一講座 教授

黒木由夫 先生

16：45 〜 16：50

次期会長の挨拶
第 44 回日本肺サーファクタント・界面医学会学術研究会会長

松村豪一（聖学院大学）− 10 −

抄

録

会 長 講 演
特 別 講 演
ランチョンセミナー・教育講演
一 般 演 題

会長講演

基礎臨床連携の重要性─肺サーファクタント研究の軌跡に学ぶ─

高橋 弘毅
札幌医科大学医学部内科学第三講座

私が肺サーファクタント研究に足を踏み入れたのは、かれこれ 23 年前になる。
生化学第一講座（秋野豊明教授）で基礎研究をさせていただいたのがその発端である。1984 年当時、新生児／周産期の分野では、新生児呼吸窮迫症候群の病態解明のために肺サーファクタント研究が活発に行われ、岩手医大小児科（藤原哲郎教授）を中心に治療薬としての人工サーファクタントの開発が進行中であった。
実験技術の習得を兼ねて、先ずはリン脂質分析を始めた私が最初に思ったこと、この研究が果たして臨床の役に立つのであろうかという素朴な疑問であった。また、臨床医として私が専攻した呼吸器内科学においては、肺サーファクタント研究に携わる研究者は極めて少なく、日の当たらぬ関心薄き分野であるとも感じた。
その頃は肺サーファクタント特異蛋白質の研究が始まって間もない時代でもあった。同講座では黒木由夫助手らが着手したモノクローナル抗体の作製に力を注いでいて、私もこのプロジェクトに加わった。その後、研究は「羊水迅速診断キットの開発」の形で結実した。基礎研究が臨床応用される実例を初めて目にすることができた。一方、内科学第三講座の中村光成講師が中心となって腺癌
組織の脂質分析をしていた。そのなかで原発性肺癌は転移性肺癌に比し肺サー
ファクタントに近いリン脂質組成を有することを明らかにした。このことがヒントになり、同じく肺サーファクタント成分である SP‑A が肺癌の免疫組織学的マーカ−として臨床応用されるに至った。これが、基礎臨床連携の重要性を肌で感じた 2 回目であった。
2 年半の基礎研究を修了し、内科学第三講座（鈴木明教授）に帰ってからは本− 12 −

田泰人講師が束ねる研究チームのなかで SP‑A の検討を続行した。様々な検討の末、研究チームは「間質性肺炎患者では血清 SP‑A 値が上昇している」ことに気づいた。1992 年からは阿部庄作教授の下、基礎臨床連携がさらに密接に推進され、1999 年には SP‑A と SP‑D の ELISA が間質性肺炎の診断キットとして厚生省の承認を受けるに至った。また、2003 年に改訂された特発性間質性肺炎の診断基準に SP‑A と SP‑D の項目が採用された。研究を始めたときに思った「臨
床の役に立つのであろうか」という素朴な疑問は消えた。
私の歩んだ肺サーファクタント研究の軌跡を振り返った時、有用な臨床研究を目指すには基礎部門の発信する科学的証拠を土台とすること、その重要性が浮き彫りにされたように思う。本学会は肺サーファクタントを共通のキーワードとする基礎研究と臨床研究の交流の場である。私達の研究活動へのエネルギーを注入していただいた学会関係諸先生に感謝し、そして、肺サーファクタント学に傾倒する研究者が増えることを願い、会長講演とさせていただきたい。

− 13 −

特別講演 1

デフェンシンと肺の感染防御、炎症、線維化迎寛

長崎大学大学院 医歯薬学総合研究科 感染免疫学講座（第二内科）

肺は外気に曝露されているため、病原微生物の定着や侵入が絶えず行われている。そのため肺においては気道粘液（液性因子）を中心とした自然免疫が発達している。その中で surfactant protein A や D とならんでデフェンシンなどの抗菌ペプチドが現在注目されている。デフェンシンは幅広い抗菌活性を持つ塩基性のペプチドであり、ヒトではαとβ型の 2 種類に分類される。ヒトではα型が 6、β型は遺伝子解析を含め約 20 種類以上が知られているが、αは主に好中球を中心とした、またβは上皮細胞を中心とした抗菌作用をぞれぞれ担っている。われわれはαデフェンシンに属する human neutrophil peptide（ HNP）1 とβデフェ
ンシン 1, 2, 3, 4 を合成し、ウサギに免疫することで得られた抗血清を用いてそれぞれの radioimmunoassay（RIA）を開発し、検討を加えてきた。まず作製したそれぞれの合成ペプチドの抗菌活性を検討したが、大腸菌などに対する抗菌活性はデフェンシンの種類により差がみられたが、各菌種に対して明らかな抗菌作用を認めた。RIA による検討では、肺炎などの呼吸器感染症患者の血漿、気管支肺胞洗浄液においてはαデフェンシンとβデフェンシン 1 が一番多く存在し、
αデフェンシン、βデフェンシン 2, 3 は、急性期に高値となり、回復期には正常化した。これらの結果から、βデフェンシン 1 は侵入してきた病原微生物に対して速やかに作用するために恒常的に発現し、β 2 や 3 は感染が生じた後に上皮細胞が産生していることが推測される。デフェンシンには抗菌活性以外にも樹状細胞や T 細胞の遊走活性をもつなど様々な作用が知られている。われわれの検討
では HNP1 で気道上皮細胞を刺激すると IL‑8 の mRNA や蛋白発現の亢進がみ− 14 −

られ、上皮細胞からのサイトカイン産生にも影響していることが示唆された。
また、デフェンシンは気道上皮細胞からのムチンの合成促進作用を持つこと、デフェンシンは高濃度で肺線維芽細胞や気道上皮細胞の傷害を起こすが低濃度では上皮細胞の増殖やコラーゲンの産生亢進作用を有することなども明らかとなってきた。臨床的検討においてもデフェンシンと肺線維症や急性呼吸促迫症候群との関連性がもみられた。これらの結果はデフェンシンが、抗菌作用や免疫調節作用
以外にも気道感染や肺線維化においてで肺障害にも直接的に関与している可能性を示唆するものと考えられるが考えられた。今回、この様なわれわれの研究結果
を中心にして、surfactant protein とデフェンシンの関連性にも言及しながら、現在まで明らかとなっているデフェンシンの持つ抗菌活性やそれ以外の種々の作用を紹介したい。

− 15 −

特別講演 2

肺コレクチン（ SP‑A・SP‑D）による自然免疫の分子機構
黒木 由夫
札幌医科大学医学部生化学第一講座

肺コレクチンのサーファクタント蛋白質 A と D（SP‑A と SP‑D）は、マンノー
ス結合レクチンとともに、C 型レクチンのコレクチン・グループに属する。
SP‑A と SP‑D は、疎水性の SP‑B と SP‑C、および、特異リン脂質とともに、
肺サーファクタントを構成する成分で、肺の生体防御を担っている。呼吸器は外界に開放しており、常に病原微生物侵入の危険に曝されているので、肺コレクチ
ンによる自然免疫機構は重要である。
SP‑A ノックアウトマウスでは、smooth LPS の気管内投与によって肺内炎症反応が有意に亢進する。SP‑A は、ペプチドグリカン、ザイモサンおよびsmooth LPS に結合しないが、これらのリガンドにより惹起される炎症性サイト
カイン分泌と NF‑κB 活性化を有意に抑制した。さらに、SP‑A は、Toll 様受容体（TLR）2 と 4 の細胞外ドメインに結合し、SP‑A 存在下では、TLR 細胞外ドメインと上記リガンドとの結合が有意に抑制された。このことは、SP‑A がTLR 細胞外ドメインに結合することによって、TLR‑ リガンド相互作用が阻害され、TLR 介在炎症反応が抑制されることを示唆している。
コレクチンは、細菌に直接結合し、オプソニンとしてマクロファージによる細菌貪食を促進することが知られている。一方では、肺コレクチンは細菌に結合できない条件下でも細菌貪食を促進することが示され、オプソニン効果の他にもマクロファージによる細菌貪食促進の機構が存在することが明らかにされた。肺コ
レクチン存在下では、マクロファージにおけるスカベンジャー受容体 A やマン
ノース受容体の貪食受容体の細胞膜局在が有意に増加することが示され、そのこ− 16 −

とによって、マクロファージによる肺炎球菌や非定型抗酸菌の貪食が促進されると考えられる。
このように、肺コレクチンは、マクロファージを活性化することによって病原菌クリアランスに寄与する一方で、TLR との相互作用を介して過剰な炎症から肺組織を防御している。
TLR は、パタン認識受容体として自然免疫における中心的役割を担っており、
ノックアウトマウスによる解析によってそれぞれの TLR に対するリガンドは明らかにされたが、TLR によるリガンド認識機構については不明の点が多い。
LPS のシグナル伝達に必須な TLR4 は、単独では細胞応答を惹起できず、MD‑2の存在が必須である。本講演では、TLR4 による MD‑2 認識機構についても討論したい。

− 17 −

ランチョンセミナー・教育講演

分子物理から見た界面計測酒井 啓司
東京大学生産技術研究所基礎系部門 准教授

液晶やゲル、ミセルや分子膜など分子集合体が形成する生体系などの複雑流体
は、自己組織化的に高度に秩序化された内部構造を形成します。これらの物質群
はソフトマテリアルとも呼称されるように、温度や電場・磁場などの外的刺激に応じて容易にその構造を変化させ、さまざまな機能を発現ことが知られています。
このため近年では、これらの性質を新しいミクロデバイス材料へと応用しようとする試みが盛んに進められています。同時にこれらの材料群は、生体を特徴付けるラメラ、リポソーム、ミエリンなどの生体構造の基本要素を構成することでも重要な存在です。
ソフトマテリアルを素材とするデバイス形成プロセスでは、流体材料が分子レベルまで分割可能であるという特質が最大限に利用されます。具体的には従来のスピンコートやオフセットプリンティングに加え、近年大きく発展しているインクジェット技術など、原理が比較的単純な過程によってナノメートルの厚みの薄膜や、サブピコリットル体積のドットパターンを任意の空間配置に迅速に形づくることが可能となっています。このように流体を用いた加工プロセス技術は大きく発展しておりますが、しかし一方で、薄膜や微小液滴という特殊形状において、また実際のインクジェットや印刷プロセスに対応する超高速変形下において、材料である流体の真の粘弾性や表面張力を測定する手法はまったくといっていいほど存在しません。
研究会では、これら極限環境下にあるソフト材料群の、とりわけ表面近傍の物性を計測するために開発された新しいプローブを紹介するとともに、これらの新− 18 −

手法によって計測されるミクロな物性が、特に医療分野において有効な指標を与えうるかについて、皆様とともに議論・検討できれば、と考えております。
また研究会では、ミクロな領域でナノリットル容量の試料で粘弾性を計測する技術や、ミクロの液滴が示す様々な振る舞いを、ビデオなどでご紹介いたします。

− 19 −

01

ウランの代わりにウーロン茶抽出物（ OTE ）を用いた
電子染色法 ─Ⅱ型肺胞上皮細胞の観察○佐藤 茂、安達彰子、佐佐木喜広
日本医科大学 中央電子顕微鏡研究施設【 はじめに 】透過型電子顕微鏡（TEM）の電子染色は酢酸ウランとクエン酸鉛の二重染色が 50 年余使われ続けている。しかしながら、酢酸ウランは放射性物質であることから購入、保管、廃棄などその扱いは煩雑である。その上、酢酸ウランは国際規制物質であり外国から日本への輸入は困難となっている。電子顕微鏡を扱ういくつかの施設では酢酸ウランが無くなって来ているのが現状である。そこで、ウランの代用としてタンニン酸や白金ブルーが候補にあげられている。しかしながら、タンニン酸はウランと鉛の二重染色と比較して微細構造が明瞭でない。また、白金ブルーは染色液の作製が煩雑である。そこで、タンニン酸と同じ
ポリフェノールである OTE（oolong tea extract）がウランの代用として電子染色出来るかを検討した。
また、電顕フィルムは 4 〜 6 年後には生産されなくなるといわれている。その為、（株）日立製作所や（株）日本電子ではフィルムを用いないデジタル TEM が発売されている。このデジタル TEM にも OTE による電子染色が使えないか二重染色と比較検討した。
【 材料および方法 】正常ラット肺を 2.5% グルタールアルデヒドおよび 1% 四酸化
オスミュウム固定し、常法に従って Epok812 樹脂にて包埋した。この試料を連続切片として、酢酸ウランとクエン酸鉛の二重染色と OTE 染色法を用いた。
OTE 染色法は 0.2%OTE（リン酸緩衝液）30 − 40 分、クエン酸鉛 3 分である。
使用した透過型電子顕微鏡は H‑7500 型で、CCD カメラはオプションとして付いている。
【 結果 】Ⅱ型肺胞上皮細胞をアナログ観察すると、ウランと鉛の二重染色とOTE 染色法はほぼ同様な超微形態を示した。また、CCD カメラによるデジタル
観察では、二重染色は単位膜が不明瞭であるが OTE 染色法は単位膜構造が明瞭に観察された。

− 20 −

【 結論 】OTE は酢酸ウランの代わりに成りうる。また、CCD 画像では OTE 染色法の方が二重染色より優れていた。

− 21 −

02

肺魚気道および肺胞上細胞の形態学的研究○松村豪一 1）、椎橋孝太郎 1）、森元貴子 1）、佐藤 茂 2）、永田元春 3）、
高橋常男 4）、上田真太郎 5）
聖学院大学人間福祉学部 1 ）、日本医科大学中央電子顕微鏡研究施設 2 ）、サンショウウオ研究所 3 ）、神奈川歯科大学口腔解剖学 4 ）、
上田老人医学研究所 5 ）【 はじめに 】
著者らは、これまでにメキシコサンショウウオ、カスミサンショウウオ、クロ
サンショウウオ、イモリなど両生類呼吸器の発生学的ならびに形態学的研究を実施し報告してきた。今回は肺魚の気道と肺胞上皮細胞について検索した結果を報告する。
【 方法 】
南米産の肺魚、レピドシレン パラドクサの成体 3 匹、アフリカ産の肺魚プロ
トプテルス アネクテンスの成体 2 匹を使用した。開胸および開腹後、胃、食道や十二指腸等の消化器および肝臓を摘出して、それらの背後に存在する肺嚢を観察しやすくした。ついで縦に細長い肺嚢を気管に接続している気道部、尾に近接している肺胞上皮部、とそれらの中間部の 3 箇所に分けて摘出し、光顕用には10％フォルムアルデヒド固定液で固定し、電顕用には 2.5％グルタールアルデヒ
ド固定液で固定し、以下通常の SEM 用及び TEM 用電顕試料を作成し、検鏡した。
【 結果 】
走査電顕で観察すると、肺嚢の気道部分は肺嚢の隔壁と襞の部分に多く見られ、線毛で覆われ、ところどころに、円形の粘液細胞が存在した。これら隔壁の中央
陥凹部に肺上皮が存在していた。透過電顕では、気道を構成する線毛上皮細胞と粘液産生細胞が観察された。肺胞上皮には、肺胞上皮細胞の細胞質と毛細血管内皮とそれらの間にある基底膜から構成される空気血液関門が明瞭に存在した。また、円形細胞の細胞質には封入層板小体（好オスミウム小体）が認められ、これらの肺魚の肺内腔に肺界面活性物質の存在する事が強く示唆された。
【 結論 】
肺魚レピドシレン パラドクサおよびプロトプテルス アネクテンス成体の肺嚢を形態学的に観察し、気道では線毛運動および粘液を産生する機能を有し、肺− 22 −

胞上皮に空気血液関門が存在することから、ガス交換を実施しており、肺内腔には肺界面活性物質の存在が強く示唆された。

− 23 −03

Rab 38 欠損ラット由来初代培養肺胞Ⅱ型上皮細胞におけるフォスファチジルコリンの分泌活性○長内和弘 1）、小林 誠 1）、八田理恵子 1）、三輪知子 1）、土原一真 1）、
井口晶晴 1）、黄正寿 1）、栂博久 1）、樋口純子 2）
金沢医科大学呼吸機能治療学（ 呼吸器内科学 ）1 ）、山形大学人体病理学 2 ）【 背景 】
Rab38 は細胞内小胞輸送を制御する Rab 低分子量 G タンパク質の一員であり、同 タ ン パ ク 質 を 欠 損 す る Fown‑Hooded、Tester‑Moriyama、Long Evans
Cinnamon/Crj（LEC）などは、ヘルマンスキー・パドラック症候群（HPS）のモ
デル動物とみなされ、Rab38 は HPS の候補遺伝子にあげられている。我々は前回の本学会において、LEC は気腫性肺病変を示すこと、透過型電顕による観察で、肺胞 II 型上皮細胞内には大型の層状封入体が多数みられること、肺サーファク
タン成分が全肺組織中や層状封入体画分では増加し、肺胞洗浄液中では減少していることを示した。これらの結果より Rab38 の欠損により肺サーファクタント
の分泌障害が起き、層状封入体が細胞内に蓄積し、気腫性肺病変が起きると推定された。
【 目的 】
Rab38 欠損肺胞 II 型上皮細胞において肺サーファクタントの主成分である
フォスファチジルコリンの分泌が抑制されているかどうか検討する。
【 方法 】
Rab38 欠損ラットとして雄 8‑10 週令 LEC ラットを、コントロールとして同令の雄 Sprague‑Dawley（SD）または Brown Norway（BN）を用いた。エラス
ターゼ消化、メトリザマイド密度勾配遠心法にて肺胞 II 型上皮細胞を単離し、［ 3H ］塩化コリンとともに 20 時間、プラスチック培養皿上に培養した。基礎分
泌およびアゴニスト刺激分泌を観察した。
【 結果 】
基礎分泌はコントロールラットに比べて LEC ラットはわずかだが有意に低下していた。ところが、フォルボールエステル、ATP、テルブタリンによる刺激
ではいずれにおいても LEC ラットでは著明な分泌亢進を示した。SP‑A は基礎− 24 −

分泌およびアゴニスト刺激分泌とも著明に抑制した。
【 考察 】
Rab38 欠損ラットにおいて肺胞 II 型上皮細胞からの肺サーファクタントの分泌は、無刺激状態では抑制されているが、種々の分泌刺激では過分泌になることが示唆された。自然の状態では生体は大気汚染物質、呼吸器病原体などにつねにさらされているところから、Rab38 欠損ラットがこのような環境で飼育されると肺サーファクタントの過分泌が起き、肺気腫ではなく別のタイプの肺障害が発生する可能性が示唆される。
【 結論 】
Rab38 欠損肺胞 II 型上皮細胞からのフォスファチジルコリン分泌は無刺激では抑制されているが、アゴニスト刺激では過分泌を示し、2 相性の反応をとる。

− 25 −

04

肺サーファクタントおよび肺胞Ⅱ型細胞と緑膿菌
quorum sensing 機構との相互作用○山田友紀 1）、小笠原理恵 1）、諏訪部章 1）、舘田一博 2）
岩手医科大学医学部臨床検査講座 1 ）、東邦大学医学部微生物・感染症学講座 2 ）【 はじめに 】
細菌の産生する autoinducer を介して病原因子産生を制御する quorum sensing（QS）機構が注目されている。緑膿菌の慢性感染症に QS 機構の関与が明らかとなり、その抑制機序の解明は新しい治療法の開発につながるとして期待されている。今回、肺サーファクタントおよび肺胞 II 型細胞と緑膿菌 QS 機構との相互作用を検討した。
【 方法 】
ラット肺より分離した肺胞 II 型細胞に、緑膿菌の autoinducer である N‑3‑oxododecanoyl homoserine lactone（C12‑HSL）と N‑butyryl‑L‑homoserine
lactone（ C4‑HSL）を作用させた。細胞傷害の評価は、培養上清の LDH 活性を測定した。アポトーシスの評価は、パパニコロー染色を行ない apoptotic body
数をカウントした。次に、人工肺サーファクタント（サーファクテン）の存在下で、緑膿菌のバイオフィルムとピオシアニンの産生量を測定した。また、サーファクテンによる作用がリン脂質成分による作用か否かを検討する目的で、dipalmitoyl
phosphatidylcholine（ DPPC）と dioleoyl phosphatidylcholine（ DOPC）の リ ポゾームを作製し、同様に実験を行なった。バイオフィルムの形態は電子顕微鏡によって確認した。統計学的解析は、one‑way ANOVA で群間の比較を行い、p<0.05 を統計上有意差ありとした。
【 結果 】
1. HSL による肺胞Ⅱ型細胞の変化
培養上清の LDH 活性は C12‑HSL の濃度依存性に高値を示した。C4‑HSL 処
理細胞の LDH 活性に変化は認められなかった。apoptotic body 数は、C12‑
HSL 処理細胞において濃度依存性に増加し、C4‑HSL 処理細胞では有意差は認められなかった。

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2. サーファクテンによる緑膿菌病原因子産生への影響
バイオフィルムの産生はサーファクテンの濃度依存性に抑制された。しかし、DPPC, DOPC 処理のバイオフィルム産生量に有意差を認めなかった。電子顕微鏡による観察では、サーファクテン未処理の菌体表面は、菌体外物質が多く観察されたが、サーファクテン処理では、菌体外物質が減少した像が観察された。一方、ピオシアニンの産生はサーファクテンの時間・濃度依存性に抑制された。さらに DPPC では濃度依存性に産生抑制が確認されたが、DOPC では影響が認められなかった。
【 結論 】
緑膿菌 C12‑HSL は肺胞 II 型細胞に対してアポトーシスを誘導し、細胞傷害を起こすことが示唆された。一方、肺サーファクタントは、バイオフィルムやピ
オシアニンの産生を抑制した。以上より、肺サーファクタントおよび肺胞 II 型細胞と緑膿菌 QS 機構の相互作用が示され、肺における緑膿菌感染症の進展は両者の均衡の上に成立する可能性が示された。

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Human Pulmonary Surfactant Protein D Binds to
MD- 2○ Xiaomeng Nie, Chiaki Nishitani‑Ono, Masami Yamazoe,
Takeyuki Shimizu, Hiroaki Mitsuzawa, Kaku Sawada,
Motoko Takahashi, Hiroki Takahashi and Yoshio Kuroki

Pulmonary surfactant protein D (SP‑D), a member of the collectin family,
plays important roles in innate immunity of the lung. MD‑2 is critical for
Toll‑like receptor 4 (TLR4)‑mediated responses to lipopolysaccharide (LPS).
We have previously shown that SP‑A, a homologous collectin, interacts with
TLR4 and MD‑2 via its carbohydrate recognition domain (CRD), andmodulates TLR4/MD‑2‑mediated cell responses (Yamada C, et al. J Biol
Chem, 2006; 281:21771‑21780). In addition, we have also reported that SP‑Dbinds to the extracellular domain of TLR4 through the CRD (Ohya M, et al.
Biochemistry, 2006; 45: 8657‑8664). The purpose of this study was todetermine whether SP‑D interacts with MD‑2. Recombinant soluble form ofMD‑2 (sMD‑2) was produced by a baculovirus‑insect cell expression system.
Recombinant human SP‑D (rSP‑D) bound to MD‑2 coated onto microtiterwells in a concentration‑dependent manner in the presence of Ca2+. WhenrSP‑D and sMD‑2 were coincubated and sMD‑2 was immunoprecipitated,rSP‑D was co‑precipitated. Similarly, when biotinylated rSP‑D was pulled
down by streptavidin‑agarose, sMD‑2 was co‑sedimented. Inclusion of 5
mM EDTA or 0.2 M mannose in the binding buﬀer reduced the binding ofrSP‑D to sMD‑2 by approximately 70‑80%. Anti‑SP‑D monoclonal
antibodies 7A10 and 7C6 whose epitopes lie in the CRD and neck,respectively, were used to determine the roles of the SP‑D domains in thesMD‑2 binding. 7A10 but not 7C6 signiﬁcantly inhibited the rSP‑D binding
to sMD‑2, indicating the involvement of the CRD in the sMD‑2 binding.
These results clearly demonstrate for the ﬁrst time that SP‑D binds to MD‑
2 through its CRD.

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間質性肺炎の SP-D 光顕免疫染色○樋田寿々子、安田寛基
帝京大学医学部病理学講座【 はじめに 】
間質性肺炎（UI）はその原因や病態からいくつかの分類があるが、共通する病理像として、肺胞間質を主体とした瀰漫性で高度の炎症の広がりと線維化が指摘されている。そして、病因として、最近、肺サーファクタント、殊に SP‑D に対する IgG 関与の自己免疫が注目されている。そのため、今回、UI 症例の剖材肺
で SP‑D の光顕免疫染色による形態学的観察を実施し、更に、IgG との関連を試行した。
【 方法 】
症例；UI の剖検例の肺 16 例（主として IIP,

内 PSS 3 例、RA 3 例、60 〜 70 歳）、

対照 8 例（著変のない肺、他）
方法；1）ホルマリン固定パラフィン切片による光顕免疫染色。抗体；SP‑D（mouse monoclonal , Abcom 社及び一部で rabbit polyclonal , Santa cruze 社）、
SP‑A（mouse monoclonal , DAKO 社）、IgG（rabbit polyclonal, DAKO 社）、
染色キット（ヒストファインシンプルステイン MAX‑PO、ニチレイ社）。2）1）と同様の方法による IgG と SP‑D の 2 重反応で SP‑D のみ発色；IgG（rabbit
polyclonal）反応後、水洗、SP‑D（mouse monoclonal）を反応させ、マウス 2 次抗体で反応、DAB 発色（SP‑D のみ発色）。同様に IgG と SP‑A、対照として
IgG と PBS（陰性対照）。
【 結果と考察 】
1）SP‑D 光顕免疫染色；UI で、肺胞のマッソン体（又は肺胞内線維化部）、
肺胞壁・間質に斑状の陽性部を伴い、その他の肺胞上皮等は陽性の低下傾向があり、一部に全体に染色性の悪いものも見られた。全体に浸潤リンパ球は一部陽性。
2）IgG 光顕免疫染色；UI の 1）の部位および壊死部を含むⅡ型肺胞上皮に強陽性。
浸潤リンパ球は一部陽性。

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3）IgG と SP‑D の 2 重反応；UI で、1）部の間質の斑状の陽性部の陽性の低下傾向。
4）1）3）は UI で SP‑D を SP‑A に変更するとⅡ型肺胞上皮のみ陽性。
5）比較対照群；①対照肺でⅡ型肺胞上皮は SP‑D、SP‑A、IgG に陽性、IgG とSP‑D, IgG と SP‑A の 2 重反応で①と同様。② IgG と PBS は全体に陰性。
6）以上から、UI では SP‑D に対する IgG 関連の反応があることが、1）〜 3）から、形態学的にも推察された。

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間質性肺炎に対する Cyclosporin A 使用例の検討
─治療有効性と血清マーカー SP-A、SP-D、KL- 6 ─○大塚満雄、白鳥正典、北田順也、中村直人、工藤和実、村上聖司、
千葉弘文、高橋弘毅
札幌医科大学医学部内科学第三講座【 背景 】特発性間質性肺炎（IIPs）に対する治療として、副腎皮質ステロイド薬（corticosteroid、以下 CS）単独での有効性は明らかでなく、また、その副作用
を 軽 減 す る 観 点 か ら も、 現 時 点 で は PSL と cyclophosphamide あ る い は
azathioprine との併用療法の可能性が 2000 年の米国胸部疾患学会と欧州呼吸器学会の International Consensus Statement で示されている。近年、IIPs に対す
る CS と免疫抑制薬である Cyclosporin A（CyA）の併用が有効であった症例が存在することや CS 抵抗性の症例に対する有用性が報告されている。
【 目的 】間質性肺炎に対して CyA を用いて治療を行った症例における有効性と血清マーカーである SP‑A、SP‑D、KL‑6 の変化を retrospective に検討した。
【 方法 】対象は 2003 年 4 月から 2006 年 12 月まで、札幌医科大学附属病院で CyAを使用した間質性肺炎症例 16 例で、内訳は特発性肺線維症（IPF）6 例、非特異型間質性肺炎（NSIP）5 例、膠原病肺（CVD‑IP）5 例であった。全例、CS を併用した。治療の有効性の検討は、ステロイドパルス療法を行っていない 8 例を対象に HRCT 所見の変化を検討した。CyA 投与前および投与後の SP‑A、SP‑D、KL‑6 の変化を有効例と無効例で比較検討した。
【 結果 】CyA 投与開始の背景は、CVD‑IP では CS 減量時の追加例が多かったが、IIPs では低用量の CS と併用した初回治療例が多かった。副作用として肝機能障
害が 2 例に認められ投与中止となった。CyA 投与後に HRCT 所見が改善した症例が CVD‑IP で多かったのに対して、IPF では悪化した例が多かった。CyA 投
与前後で、CT 所見が改善した群では SP‑A、SP‑D が有意に低下したのに対して、
CT 所見が悪化した群では KL‑6 が有意に増加した。
【 考察 】CyA 治療にも関わらず IPF 症例で悪化例が多かった理由として、CVD‑
IP 症例の多くが CS の減量過程に CyA が加えられたのに対して、IPF 症例の多くが低用量 CS とともに初回治療として CyA が開始されていた背景があり、− 32 −

IPF の活動性を抑制するのに CS 量が不十分であった可能性が考えられた。治療に伴う SP‑A、SP‑D の減少は CyA による治療の有効性の指標に、KL‑6 の増加は治療抵抗性の指標に、各々、なり得ることが示唆された。
【 結論 】CS と CyA の併用により HRCT 所見が改善する症例があり、CVD‑IPに多い傾向であったが、IPF や NSIP にも認められた。血清マーカーである
SP‑A、SP‑D は CyA 治療の有効性の指標として、KL‑6 は悪化の指標として有用である可能性が示唆された。

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日本肺サーファクタント・界面医学会
第 43 回学術研究会プログラム・抄録集
会 期：平成 19 年 10 月 13 日㈯会 場：札幌医科大学記念ホール
会 長：高橋弘毅

発行所：〒 060‑8543 札幌市中央区南 1 条西 16 丁目
札幌医科大学医学部内科学第三講座内
TEL（ 011 ）611‑2111・FAX（ 011 ）613‑1543
印 刷：

株式会社セカンド〒862 0950 熊本市水前寺 4 39 11 ヤマウチビル1F
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