日大歯学 ，97（1），12-17，2023

原著

IL-1 receptor type 2による細胞内 pIL-1αの細胞外分泌抑制
定

村

正

之

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻

応用口腔科学分野

日本大学歯学部病理学講座（指導：浅野正岳 教授）

要旨【目的】Interleukin-1（IL-1）receptor（IL-1R）family の一員である IL-1R type 2（IL-1R2）は，マクロファージ内において precursor IL-1α（pIL-1α）と結合して，その分泌を抑制することが知られている。本研究では，ヒト子宮頸癌由来線維芽細胞である HeLa 細胞においても，この抑制効果が維持されるか，その効果に細胞膜貫通領域の関与があるのかという点について検討した。
【方法】HeLa 細胞に，pIL-1αおよび IL-1R2を単独または co-transfection し，pIL-1αの細胞外分泌量を ELISA にて測定した。また，IL-1R2の細胞膜貫通領域を欠失した mutant（ΔTM）を作製し，同様に pIL-1α細胞外分泌量を測定した。それぞれの分子の細胞内局在を蛍光免疫染色により確認した。また，pIL-1αと IL-1R2の結合を免疫沈降実験とこれに続く western blot により検出した。
【結果】HeLa 細胞において，pIL-1αは核に，IL-1R2は細胞質に拡散して存在した。IL-1R2存在下では，pIL-1αの細胞外分泌を抑制した。また，ΔTM は wild type IL-1R2よりも pIL-1αの細胞外分泌を強く抑制した。さらに，pIL-1αとIL-1R2は HeLa 細胞内で結合していることが確認された。
【結論】HeLa 細胞において，IL-1R2は pIL-1αと細胞内で結合し，pIL-1αの細胞外分泌を抑制していることが示唆された。また，IL-1R2の細胞膜貫通領域の存在は，pIL-1α分泌に対して促進的に作用する可能性が考えられた。
キーワード：IL-1α，IL-1R2，decoy receptor，細胞膜貫通領域

Inhibition of pIL-1α extracellular secretion by intracellular IL-1 receptor type 2
Masayuki Sadamura
Nihon University Graduate School of Dentistry, Major in Applied Oral Sciences
Department of Pathology, Nihon University School of Dentistry（Director: Prof. Masatake Asano）

Abstract【Purpose】Interleukin-1 (IL-1) receptor type 2 (IL-1R2) is a member of the IL-1R family. IL-1R2 was shown tobind with precursor IL-1α (pIL-1α) in macrophage and inhibit its extracellular secretion. Using the human uterine
cervical cancer-derived fibroblastic cell line (HeLa cell), the inhibitory function of IL-1R2, especially thetransmembrane region, on pIL-1α extracellular secretion was examined.
【Methods】HeLa cells were transfected with pIL-1α, IL-1R2 or in combination with both plasmids and the pIL-1α
concentration in the culture supernatants were measured by ELISA. In addition, the plasmid containing the mutant
IL-1R2 lacking the transmembrane region (ΔTM) was constructed and examined as well. Intracellular localization of
pIL-1α and IL-1R2 was examined by immunofluorescence staining. The binding between pIL-1α and IL-1R2 wasdetected with immunoprecipitation followed by western blot.
【Results】pIL-1α was localized mainly in the nucleus. On the other hand, IL-1R2 was localized diffusely in thecytoplasm in HeLa cell. Intracellular IL-1R2 inhibited the extracellular secretion of pIL-1α. The ΔTM much highly
suppressed pIL-1α extracellular secretion. Moreover, both pIL-1α and IL-1R2 bind each other and made an
intracellular complex in the cytoplasm.
【Conclusion】Intracellular IL-1R2 inhibits the extracellular secretion of pIL-1α by binding directly withintracellular pIL-1α in the HeLa cell. The transmembrane region of IL-1R2 may have enhancing effect on pIL-1α
extracellular secretion.
Keywords: IL-1α, IL-1R2, decoy receptor, transmembrane region（受付：令和 5 年 1 月13日）
責任著者連絡先：定村正之
日本大学歯学部病理学講座〒101-8310 東京都千代田区神田駿河台 1 ‒ 8 ‒13

TEL：03-3219-8124
FAX：03-3219-8340
E-mail：dema18018@g.nihon-u.ac.jp

12

日大歯学

図 2 Transfection に用いたベクター
ベクターの Xho1，Xba1間に IL-1R2を挿入した pCMV-SPORT 6 IL-1
receptor type 2（pCMV-R2）を鋳型として transmembrane 領域（黒矢印）である344-369のアミノ酸配列を欠失させたΔ transmembrane
IL-1R2（ΔTM）を作製した（左図）。pcDNA の EcoR1間へ N 末端に HiBiT-tag が付与されている pIL-1αを挿入した HiBiT-pIL-1αの C
末端に histidine-tag を付与した HiBiT/His-pIL-1αを作製した（右図）。

図 1 pIL-1αの processing
IL-1αは pIL-1αと し て 細 胞 質 内 で 産 生 さ れ た の ち，calpain や
granzyme B などの酵素により分子のほぼ中央部で切断され，N 末
端側の ppIL-1αと C 末端側の mIL-1αに分離する。ppIL-1α側に nuclear
localization sequence（NLS）配列が存在する 2 ）。

緒

第 97 巻第 1 号

言材料および方法

細胞が障害を受けたときに放出される分子は alarmin と1 ．細胞

総称される 。Interleukin-1（IL-1）αは代表的な alarmin

本研究には，ヒト子宮頸癌由来線維芽細胞である HeLaとして知られている。IL-1αは細胞内で約31 kDa の前駆体細胞（ヒューマンサイエンス研究資源バンク，大阪）を用

precursor IL-1α（pIL-1α）として産生され，図 1 に示すよいた。培養は Dulbeccoʼs Modified Eagle’s Medium（Thermo

うに calpain や granzyme B などの酵素によって propiece

Fisher Scientific，Waltham，MA，USA）に10％ ウシ胎児（pp）IL-1αと mature（m）IL-1αに切断される 。

血清（Thermo Fisher Scientific）および 1％ ペニシリン‐

1）2）IL-1αの主要な受容体サブユニットとして，IL-1 receptor

ストレプトマイシン（Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany）

type 1（IL-1R1）と type 2（IL-1R2）が知られている。IL-を添加したものを用い，インキュベータ（37℃，5% CO2）

1R1はシグナルを伝達できるのに対し，シグナル伝達に必で行った。HeLa 細胞を24-well plate に 5 ×10⁴ cells/well

須の配列である Toll/IL-1 Receptor（TIR）ドメインを欠となるように播種した。

く IL-1R2はシグナル伝達できない。このことから，IL1R2は decoy receptor と呼ばれている 3 ）。IL-1R2は，IL-1α2 ．Plasmid の構築と transfection

および IL-1βと直接結合することでシグナル伝達を阻止す

HeLa 細胞への IL-1R2の強制発現には，pCMV-SPORT

るだけでなく，IL-1 receptor accessory protein（IL-1RAcP）

6 IL-1R2（pCMV-R2, 理研 BRC，つくば）を用いた。このとも複合体を形成し，IL-1α結合に伴うシグナル伝達を抑ベクターを鋳型として細胞膜貫通領域の26アミノ酸残基制する 3 , 4 ）。IL-1R2ノックアウトマウスの解析から，IL-（ASSTFSWGIVLAPLSLAFLVLGGIWM） を 欠 失 さ せ た

1R2の上記のような decoy receptor としての特性はマクロΔ transmembrane IL-1R2（ΔTM plasmid）を，Quick

ファージにおいて機能していることが明らかとなっている

change site-directed mutagenesis kit（Agilent

が，マクロファージ以外の細胞における IL-1R2の機能はTechnologies，Santa Clara，CA，USA）により作製した

未だ不明な点が多い 4 ）。

（図 2 ）。また，Kudo ら 6 ）が作製した HiBiT-pIL-1αの C- 末

Zheng ら 5 ）は，IL-1R2は細胞膜上または細胞外で decoy

端 に histidine-tag を 同 kit で 挿 入 し， こ の ベ ク タ ー をreceptor と し て 機 能 し て い る だ け で な く， 細 胞 質 内 で

HiBiT/His-pIL-1αとした。ΔTM 作製時に使用した primer

pIL-1αと結合して pIL-1αの細胞外分泌を阻害することによ

配列は次の通りである（forward 5’-CAC CAC AGT CAA

り，無菌性炎症を抑制することを報告した。また，リポポ

GGA ACA CAG ACG GTG CAA AC-3’

リサッカライド（LPS）刺激による caspase 活性化を介し

TGC ACC GTC TGT GTT CCT TGA CTG TGG TG-3’）。

た細胞質内の IL-1R2分解は，pIL-1αと IL-1R2との結合を作製したすべての plasmid は，DNA sequence 解析（ファ切断して pIL-1αの細胞外分泌を促進するとも報告していスマック，厚木）によって DNA 配列に間違いがないことる 。本研究では，ヒト子宮頸癌由来線維芽細胞であるを確認した。なお，pCMV-R2の transfection によって発HeLa 細 胞 に IL-1R2と pIL-1αを 強 制 発 現 さ せ， 同 様 に現する IL-1R2を wild type IL-1R2とした。

5）

reverse 5’-GTT

pIL-1αの細胞外分泌抑制が起きるのかという点について検Transfection は，Lipofectamine 3000 reagent kit

討を行った。また，IL-1R2の細胞膜貫通領域の pIL-1α細（Thermo Fisher Scientific）を用いて，次のように行った。

胞外分泌に対する役割についても解析した。

それぞれの plasmid（250 ng）を OPTI-MEM（25 μ
ｌ; GE

13

pIL-1αの細胞外分泌抑制
表1

令和 5 年 6 月

pIL-1αとIL-1R2の複合体の検出のための免疫沈降とwestern blotの条件

沈殿物

IPに用いたreagent

容量

WB検出reagent

検出物

図①pIL-1αNickel-agarose beads

30 μｌ

Nano Glo HiBiT

pIL-1α

図6A

Nickel-agarose beads

30 μｌmouse anti-human IL-1R2 monoclonal 抗体

IL-1R2

図6B

mouse anti-human IL-1R2 monoclonal 抗体

30 μｌmouse anti-HiBiT 抗体

pIL-1α図6C②IL-1R2

免疫沈降実験において使用したbeadsおよび抗体を示す。
表2

pIL-1α量（%）

pIL-1α + pcDNA100

pIL-1α + wild type IL-1R2

47.0 ± 0.2＊

pIL-1α + ΔTM

26.4 ± 0.1＊

Healthcare，Chicago，IL，USA） に 溶 解 し， 同 kit に 含
まれる3000 Reagent（0.75 μｌ）と混和した。つぎに，同 kit
中の Lipofectamine 3000（0.75 μｌ）を OPTI-MEM（25 μｌ）に溶解した。両溶液を混合し，室温で15分間反応させた。

wild type IL-1R2およびΔTMのpIL-1α分泌抑制
transfectant

pIL-1α transfectantにおける細胞外pIL-1α分泌量を100%とし，wild
type IL-1R2またはΔTMとのco-transfectantにおける細胞外pIL-1α分泌量を示した。5 サンプルを測定し，結果を平均値±標準偏差で示した。＊: p < 0.05 vs. pIL-1α + pcDNA

反応後，混合液を培養液に添加し，細胞と共に18時間培養した。培養後の細胞を transfectant として実験に用いた。
3 ．蛍光免疫染色
HeLa 細胞（ 5 ×104 cell/well）を24-well plate 中に置いク 量 を 定 量 し，40 ng の タ ン パ ク を12% sodium dodecyl

たカバースリップ（10 mm diameter，松浪硝子工業，大sulfate-polyacrylamide gel を 用 い て 電 気 泳 動 し た。

阪）に播種し，18時間培養した。培養後，pIL-1αおよびImmobilon Transfer Membrane（Merck，Darmstadt

IL-1R2を transfection し，更に18時間培養した。上清を吸Germany）に泳動後のタンパクを転写し，1% BSA-PBS

引除去し，カバースリップを0.01 M リン酸緩衝生理食塩

でブロッキングした。IL-1R2の検出には，1 次抗体として水（PBS）で洗浄後，2% パラホルムアルデヒドにて室温

mouse anti-human IL-1R2 monoclonal 抗体（×500希釈，で10分間固定した。再び PBS にて洗浄し，1% Triton-X

Santa Cruz），2 次抗体として horseradish peroxidase

100/PBS を加え，室温で10分間処理した。PBS で洗浄し，（HRP）標識 goat anti-mouse IgG 抗体（×5,000希釈，1% BSA/PBS にて室温で10分間非特異的反応のブロッキ

Jackson Immuno Research，West Grove，PA，USA） をングを行った。蛍光免疫染色には，一次抗体として mouse用いた。pIL-1αの検出は，1 次抗体として mouse anti-

anti-histidine monoclonal 抗体（×100希釈，Proteintech，

HiBiT monoclonal 抗体（×1,000希釈，Promega Madison，

Rosemont，IL，USA），mouse anti-human IL-1R2

USA），2 次抗体として HRP 標識 goat anti-mouse IgG

monoclonal 抗体（×100希釈，Santa Cruz，Dallas，TX，抗体（×5,000希釈，Jackson Immuno Research）を使用

USA）を，二次抗体として FITC 標識 goat anti-mouse

した。

IgG monoclonal 抗体（×100希釈，Proteintech）を用いた。核染色は，DAPI-Fluoromount-G（Southern Biotech，

6 ．免 疫沈降（IP）と WB による pIL-1αと IL-1R2の複合

Birmingham，AL，USA）を用いて行った。細胞像は，オー体の検出

ルインワン蛍光顕微鏡（BZ-X810，キーエンス，大阪）を

pIL-1αと IL-1R2の 複 合 体 形 成 の 有 無 に つ い て，IP と用いて観察し，撮影した。

WB により確認した。pIL-1αの IP は，His-tag に特異的に結合する Nickel-agarose beads（タカラバイオ，草津）を

4 ．ELISA による pIL-1αの定量用いた（表 1 ）。また，IL-1R2の IP は，mouse anti-humanTransfection 後に培養液を交換し，3 ，6 ，9 および12

IL-1R2 monoclonal 抗体（Santa Cruz）と protein G

時間後に回収した培養上清を遠心分離し（16,900×g，1 分

sepharoseTM 4 Fast Flow（GE Healthcare）を用いた。そ間），抽出した上清をサンプルとした。Quantikine human

れぞれの IP 後の WB による pIL-1αおよび IL-1R2の検出

IL-1α ELISA kit（R&D Systems, Minneapolis, MN, USA）

は，表 1 に示した抗体または検出試薬を用いた。このうを用いて pIL-1αを定量した。

ち，HiBiT-tag の検出は，HiBiT に特異的に結合する Lg-

5 ．Western blot（WB）法（Promega）を用いた。

BiT に HRP を結合させた Nano Glo HiBiT blotting system
Transfectant を PBS で洗浄後，細胞溶解液（50 mM
Tris-HCl，150 mM NaCl，0.5% Triton X-100，pH 7.5）に

7 ．統計学的解析て細胞を溶解した。溶解液を遠心分離し，抽出された上清

データの正規性を Shapiro-Wilk 検定，等分散性を Levene

を回収してサンプルとした。BioRad protein assay kit

検定で確認した。表 2 は一元配置分散分析後 Tukey の多（BioRad Hercules，USA）を用いてサンプルの総タンパ

重比較を用いて解析した。図 5 は ANOVA の分散分析法

14

日大歯学

図 3 Transfectant における pIL-1αおよび IL-1R2の発現
pIL-1αは31 kDa の単一のバンドとして，IL-1R2は59 kDa と51 kDaの 2 本のバンドとして検出された。Control HeLa 細胞ではバンドが検出できなかった。

第 97 巻第 1 号

図 5 pIL-1α分泌量の経時的変化
同じ実験を 5 回繰り返し，それぞれのサンプルを triplicate で測定した。平均値 ± 標準偏差でデータを示した。＊：p < 0.05 vs. 3 時間後の pIL-1α濃度

11.7 pg/ml，6 時 間 で287.0±27.9 pg/ml，9 時 間 で414.8±
27.0 pg/ml，12時間で461.9±8.6 pg/ml となり，経時的に
培 養 上 清 中 の pIL-1α濃 度 は 上 昇 し た（ 図 5 ）。 一 方，
insert の 入 っ て い な い コ ン ト ロ ー ル ベ ク タ ー で あ る
pcDNA transfectant では pIL-1α量は検出限界以下であった。以上の結果から，培地交換後 6 時間で，培養上清中に
ELISA によって検出可能な量の pIL-1α分泌が認められたことから，以下の実験では，培地交換 6 時間後の培養上清

図 4 Transfectant における pIL-1αおよび IL-1R2の細胞内局在
pIL-1αまたは IL-1R2を transfection した HeLa 細胞を蛍光顕微鏡で観察した。

中の pIL-1α濃度を測定することとした。
3 ．IL-1R2による pIL-1αの分泌抑制
IL-1R2が pIL-1αの分泌にどのような影響を及ぼすのかを用いて解析した。結果は，平均値±標準偏差で表した。

検討するために，IL-1R2存在下および非存在下で培養上清

0.05未満の p 値は統計学的に有意であるとみなした。

中の pIL-1α量を測定した。その結果，pIL-1αをコントロー

結

ルベクター pcDNA と共に co-transfection した細胞におけ果る pIL-1α量を100% としたとき，IL-1R2と pIL-1αの co-

1 ．pIL-1αおよび IL-1R2の細胞内局在

transfectant した細胞では，pIL-1α量は47.0±0.2% に低下

Transfectant における pIL-1αおよび IL-1R2の発現を WBした（表 2 ）。次に，IL-1R2の細胞膜貫通領域の pIL-1α分

により確認した。その結果，pIL-1αは31 kDa の単一のバ泌に対する影響を確認するために，IL-1R2の細胞膜貫通領ンドとして，また IL-1R2は59 kDa と51 kDa の 2 本のバン域を欠失させたΔTM plasmid を pIL-1αと共に transfection

ドとして検出された（図 3 ）。一方，pcDNA transfectant

し，培養上清中の pIL-1α量を測定した。その結果，pIL-1α

で は， バ ン ド は 検 出 さ れ な か っ た。 以 上 の 結 果 か ら，

量は，pIL-1αのみ transfectant した細胞と比較して，26.4±

HeLa 細胞においては内在性の pIL-1αおよび IL-1R2は存在

0.1% にまで低下した（表 2 ）。この結果から，細胞膜貫通領しないことが明らかとなった。次に，それぞれの分子の細域を欠失した IL-1R2は，wild type IL-1R2よりも，pIL-1α

胞内局在について免疫蛍光染色により確認したところ，分泌に対する抑制効果が高いことが明らかとなった。

pIL-1αは主に核に局在し，IL-1R2は核および細胞質に拡散して存在することが明らかとなった（図 4 ）。

4 ．pIL-1αと IL-1R2の結合の確認
pIL-1αと IL-1R2の細胞内での結合の有無について，IP

2 ．pIL-1α分泌量の経時的変化とこれに続く WB により確認した。その結果，表 1 に示

pIL-1α transfectant の培養上清中の pIL-1α量を，ELISA

す①上段の条件で，pIL-1α単独および pIL-1αと IL-1R2のを用いて経時的に測定した。培地交換後，3 時間で149.7±

co-transfectant の両者において31 kDa の pIL-1αのバンド

15pIL-1αの細胞外分泌抑制

令和 5 年 6 月

きないため，シグナルが伝達されない 8 , 9 ）。また，IL-1
family に属する分子である IL-1R2は IL-1αまたは IL-1βと結合し，さらに IL-1RAcP との複合体を形成するにも関わらず，細胞内領域に TIR ドメインを持たないため，シグナルを伝達できない 4 , 8 ）。このように IL-1αシグナルの抑制系が複数存在することは，炎症制御の多様性を示すもの
であるが，これに加えて Zheng ら 5 ）は，I 型の膜貫通膜タンパクである IL-1R2が細胞質内で pIL-1αと結合し，pIL-1αの細胞外分泌を抑制するという新たなメカニズムを発見した。これによると，HeLa 細胞と同様に内因性の IL-1R2の発 現 が 見 ら れ な い 血 管 平 滑 筋 細 胞 に 対 し て，IL-1R2をtransfection し，LPS と ATP を作用させると mIL-1α分泌が 促 進 さ れ た 5 ）。 こ れ は，LPS と ATP に よ る 刺 激 がinflammasome を活性化させ，その構成成分である caspaseを活性化させることにより，基質である IL-1R2を分解することによるものであった。これによって pIL-1αと IL-

図 6 pIL-1αと IL-1R2の結合
pcDNA 単独，IL-1R2単独，pIL-1α単独および pIL-1αと IL-1R2の cotransfectant の細胞溶解液を調整し，表 2 の方法によって IP およびWB を行った。A：表 1 ①の方法で IP を行い，Nano Glo HiBiT により
pIL-1αを検出した。B：表 1 ①の方法で IP を行い，mouse anti-human
IL-1R2 monoclonal 抗体で IL-1R2の検出を行った。C：表 1 ②の方法
で IP を行い，mouse anti-HiBiT 抗体で pIL-1αの検出を行った。

1R2との結合が解消され，pIL-1αが細胞内で calpain による分解を受け，生成された mIL-1αを細胞外に分泌するとされた 5 ）。
本研究では，HeLa 細胞においても pIL-1αの細胞外分泌抑制メカニズムが機能するのかという点について検討した。その結果，HeLa 細胞においてもマクロファージなどが検出された（図 6 A）
。また，同じメンブレンを抗 IL-と同様に，pIL-1αと IL-1R2との結合に起因した pIL-1αの1R2抗体にて WB を行ったところ（表 1 ①下段）
，pIL-1α細胞外分泌抑制が見られた。さらに，IL-1R2の細胞膜貫通と IL-1R2の co-transfectant においてのみ，IL-1R2のバン

領域を欠失したΔTM では，wild type IL-1R2よりもさらド（59 kDa および51 kDa）が検出された（図 6 B）
。また，に高い抑制効果を示した。

抗 IL-1R2抗体で IP したものでは（表 1 ②の条件），pIL-1α

また，IL-1R2は IL-1αの第 2 のレセプターとしてクローと IL-1R2の co-transfectant に お い て の み，pIL-1αの バ ン

ニングされ，細胞膜表面で機能すると考えられている10）。

ド（31 kDa）が検出された（図 6 C）
。以上の結果から，

IL-1R2は，細胞膜外で matrix metalloprotease である

pIL-1αと IL-1R2が，細胞質内で結合していることが明ら

a disintegrin and metalloproteinase domain-containing

かとなった。

protein 17（ADAM17）によって切断される11）。これまで

考の 研 究 か ら，IL-1R2 をHeLa 細 胞 に 強 制 発 現 さ せ る と，

察

IL-1R2断端が細胞外領域に遊出されることを確認していpIL-1αは，processing の結果 ppIL-1αと mIL-1αに分断さる。このような切断された IL-1R2の細胞外領域はリガン

れるが，これら 3 種類の分子のうち pIL-1αおよび mIL-1αド結合部を含んでおり，血液中や細胞外液中に放出されるのみが機能的分子であるとされる 2 ）。また，サイトカインと IL-1αおよび IL-1βと結合し，IL-1αおよび IL-1βの作用をとしての活性は後者の方が高いとされ ，細胞内で抑制することで炎症を終息させる12-14）。これも，pIL-1αの効

processing されることによってより活性の高い mIL-1αが果を減弱させるメカニズムの一つと考えられる。さらに，

細胞外に分泌され，効率的に炎症を惹起するものと考えら

pIL-1αのみ transfection された HeLa 細胞から，非常に多れている。活性は異なるものの，pIL-1αおよび mIL-1αは

くの pIL-1αが放出されていた。従って，細胞外に分泌さ細胞外に分泌され，細胞膜表面で両者ともに IL-1R1に結れた pIL-1αが，HeLa 細胞の細胞膜表面に発現された IL-合する。その後，アクセサリータンパクである IL-1RAcP

1R2 に結合する可能性がある。あるいは，放出された pIL-が会合し，複合体を形成することでシグナルが伝達され1αが，細胞膜表面から酵素的に切断された IL-1R2 の細胞る。これによって転写因子 NF-κB や AP-1カスケードが外領域と結合する可能性も考えられる。さらに，こうして活性化され，種々のサイトカインが産生されるなどして炎形成された pIL-1αと IL-1R2 複合体は，本研究で用いた症反応が進行する 。IL-1 family には，構造的に類似した

ELISA では検出不可能であったのかもしれない。このこ

11種類の分子があるが，この中で IL-1 receptor antagonistとは，IL-1R2が細胞質内で pIL-1α細胞外分泌を抑制しては，IL-1R1に結合した後，IL-1RAcP との複合体を形成でいるという解釈とは相容れない現象であることから，本研

7）

2）

16

日大歯学

究で得られた IL-1R2による pIL-1αの細胞外分泌抑制メカ

Ikarashi T, Horai R, Kakuta S, Watanabe T, Iwakura
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regulators IL-1R2 and IL-1R8. Immunol Rev 281, 233247.

ニズムの詳細についてはさらに検討する必要がある。
IL-1R2による IL-1αの細胞外分泌制御は，炎症反応の調節にも深く関係していると考えられる。IL-1R2による IL-1αの細胞外分泌機能調節メカニズムの解明は多くの病態の改善や治療法の開発にも貢献しうる可能性があり，今後更なる研究を行う必要があると考える。

結論

IL-1R2および pIL-1αを transfection した HeLa 細胞を用いて，以下の結論を得た。
1 ．HeLa 細胞において，細胞内 IL-1R2は pIL-1αの細胞外分泌を抑制した。
2 ．Transmembrane 領域を欠失した IL-1R2は，wild typeIL-1R2よりもさらに高い pIL-1αの細胞外分泌抑制効
果を示した。
3 ．HeLa 細胞内で IL-1R2と pIL-1αは結合し，複合体を形成していた。
以 上 の こ と か ら，HeLa 細 胞 内 に 存 在 す る IL-1R2は，
pIL-1α細胞外分泌抑制効果を維持していることが示唆された。しかし，IL-1R2による pIL-1α細胞外分泌抑制の詳細なメカニズム解明には，さらなる研究が必要であると考えられた。
本研究の遂行にあたり，病理学講座 浅野正岳教授および講座
員の皆様にご指導いただいた。ここに深甚なる感謝の意を表する。
本論文に関して，開示すべき利益相反はない。

文第 97 巻第 1 号

献1）Jiang L, Shao Y, Tian Y, Ouyang C, Wang X (2020)
Nuclear alarmin cytokines in inflammation. J Immunol
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Garlanda C (2022) Negative regulation of the IL-1
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