特許第7304022号

目次
1. はじめに・・・

２2. Meshtable®の特徴

・・・

３「マイクロメッシュ培養法」とは・・・

３

特徴① 厚みのある細胞シート・・・

５

特徴② 長期培養性・・・

６

特徴③ 高い増殖率・・・

７

特徴④ 細胞デブリの除去

・・・

８

特徴⑤ 配向性をもった増殖・・・

９

特徴⑥ 既存リソース活用

・・・ １０特徴⑦ 様々な応用用途

・・・ １１3. 製品一覧

・・・ １２4. 製品仕様

・・・ １５a)メッシュ寸法・・・ １５b)各素材材質

・・・ １５c)滅菌仕様

・・・ １５d)注意事項

・・・ １５e)製品寸法

・・・ １６5. 使用方法

・・・ １８a)細胞播種の方法

・・・ １８b)培地交換方法

・・・ ２３c)観察方法

・・・ ２４d)メッシュ取り外し方法・・・ ２４e)トリプシンによる細胞回収方法

・・・ ２４

6. 参考 タイムラプス動画

・・・ ２５7. 各種ダウンロードご案内

・・・ ２６1

１.はじめにMeshtable®は、マイクロスケールの網目を持ったシート上で細胞を培養することを可能にした新しいタイプの細胞培養デバイスです
一般的な平面培養とは異なり、メッシュの目の中で細胞間接着のみを行っている細胞を作り出すことができます
Meshtable®を用いて厚みのある三次元細胞シートや強度のある細胞シートがこれまでに作製されています

Meshtable®は研究用の細胞培養デバイスです
治療・臨床用として使用しないでください

Meshtable®は理化学研究所(神戸)との共同研究開発品です(国内特許取得済 , 国際特許出願中）

2

2.Meshtable® の特徴『マイクロメッシュ培養法』とは微細メッシュを足場に三次元細胞培養を簡単に実現する技術です

CellDay 0（4～5h）

Day 1～2
MicroMesh(Polyester fiber：thickness < 10㎛)

Day 7～14
Cell sheet(Thickness < 200㎛)

播種初期段階では細胞はメッシュを足場として増殖しますが、増殖するに従い細胞は細胞間接着でのみ保持された状態で増殖します

Meshtable®はマイクロメッシュ培養法を安価に実現できるデバイスです
ポリエステル製の極細糸を用いた織物を弊社特殊技術でプレスしたメッシュ構造膜を取り外し可能な枠体に装着し製品化しました[メッシュ詳細][一般的なメンブレンシート]
開口率
約５０％

開口率 １０％以下

厚さ：約１０μｍ

従来の培養デバイスに比し、圧倒的な開口率を有する培養方法により従来になかったさまざまな特徴をもった培養が出来ます31. 細胞間接着で維持された細胞シート形成が可能です
2. ケミカルな刺激によらないメカノトランスダクションが可能です3. 通常の平面培養に比べ、細胞の機能を亢進することが期待できます4. 細胞塊の状態で、長期連続培養が可能です ※１
5. メッシュの隙間から細胞デブリが脱落することで、健全な細胞のみを残して培養できます。※２
6. マイクロメッシュ培養した細胞をメッシュごと脱着することができます7. マイクロメッシュ培養した細胞を両面から観察可能です（裏返して観察できます）※３
8. 両面に播種できます（共培養）※４
9. 既存製品のウェルプレートやディッシュに適用可能であり、一般的な倒立顕微鏡等で観察しやすい形状です
10.頑丈かつ大面積の細胞シートが作成できます（移植治療への期待）
11.24well及び12wellタイプはあえて播種面積を小さくしており、培地交換周期を長くできます12.比較的安価です※１ 細胞種によります※２ 細胞種によります 積み重なった細胞塊の内部死細胞は落ちません※３ 12well/24well品の透過試験用タイプは裏返して観察することはできません※４ 12well及び24well品のみ（裏面播種用アダプタ装着時）
他機種は表面より２段階播種し２層共培養が可能です4『Meshtable®』の特徴①

厚みのある細胞シート<平面培養との細胞維持数比較>
細胞：HepG2（ヒト肝臓がん細胞)

使用デバイス：Meshtable 12wellタイプ

培養面積,播種細胞数を同一条件にし、生細胞数を比較培養部面積：12.5mm25x10^5播種 ⽣細胞数

1x10^5播種 ⽣細胞数
3.0E+05

6.0E+05

2.5E+05

5.0E+05

2.0E+05

4.0E+05

1.5E+05

3.0E+05

1.0E+05

2.0E+05

5.0E+04

1.0E+05

0.0E+00
day0
mesh

day7
セルディスク

day14

0.0E+00
day0
mesh
Meshtable®

day7
セルディスク

day14

day14

[結果(day14)]・維持細胞密度平面培養： ８ ×103 cells/ｍｍ２

約３倍
メッシュ培養： 2.3×104 cells/ｍｍ２
・細胞厚さ
平面培養

平面培養

day14

: 80μｍ程度

メッシュ培養： 180μｍ程度

厚みのある細胞シートが簡便に作製可能で、平面培養比 約3倍の細胞を維持可能
5

『Meshtable®』の特徴②

長期培養<共培養、長期培養>
細胞： HCM（ヒト心筋細胞）＋HUVEC(ヒト臍帯静脈血管内皮細胞)

培養面積,播種細胞数を同一条件にし、生細胞数を比較
培養部面積 ：12.5mm2
使用デバイス：Meshtable12well φ４タイプ
day0 HCM播種(2×105cells)
day2 HUVEC播種(2×105cells)

最終４５８日培養継続

平面培養はday21で細胞剥離し、実験終了[その他長期培養実績]
・HCM（ヒト心筋細胞）

３６０日

・Ｃarmy-A(ヒトiPS由来心筋細胞) 120日 (同期拍動継続日数)
・HUVEC85日 (継続中)

・hMSC(ヒト間葉系幹細胞)

８8日

・HUVEC&hMSC

108日 (継続中)

平面培養では不可能だったレベルの長期培養を実現
メッシュ構造は細胞に十分な酸素と栄養を供給することができ、細胞の生存率と機能性を高めます6『Meshtable®』の特徴③

高い増殖率<平面培養との増殖率比較>細胞： hMSC-BM(ヒト骨髄由来間葉系幹細胞)

培養面積,播種細胞数を同一条件にし、増殖率を比較
培養部面積：12.5mm2

使用デバイス：Meshtable 12wellφ４タイプ

総細胞数
day

Meshtable 平面培養
0 1.0×104 1.0×104
7 5.96×104 2.83×104
14 1.28×105 5.18×104
23 3.12×105 1.13×105
４時間後

day4

day7

平面培養

Meshtable®

播種直後

平面培養比２～３倍の増殖率 → 試験時間の短縮が可能
7

『Meshtable®』の特徴④

細胞デブリの除去<培養>
単層形成細胞の場合、細胞デブリはメッシュ隙間から容器底に落ち、メッシュ上には健全な細胞のみ残した形で増殖します
細胞： HUVEC（ヒト臍帯静脈血管内皮細胞）
コラーゲンコート：IAC50 10倍希釈 １時間浸漬→風乾後細胞播種
細胞播種数：５×104cells

培養部面積：12.5mm2

使用デバイス：Meshtable12well φ４タイプ【day１０】

容器底面

メッシュ面

細胞デブリが落ちて底に溜まります

細胞デブリを効率的に除去し、純度の高い細胞培養が可能です
細胞遊走観察Hoechst33342で核染色し、タイムラプス撮影
0.5Hr

1Hr

細胞遊走
1.5Hr

細胞が非常に高い活性を示し活発に遊走し、観察しやすい8

『Meshtable®』の特徴⑤

配向性をもった増殖<配向性観察>細胞： HCM (ヒト心筋細胞)

播種細胞数 ： 2×104cells
染色

培養部面積：12.5mm2：生細胞 Calcein-AM(緑)死細胞 Cellstain-PI(赤)使用デバイス：Meshtable 12well φ4タイプ【day14】Meshtable®

メッシュ長辺に沿って配向性が確認された

平面培養

死細胞多く、一部剥がれた【day２4】Meshtable®

平面培養

死細胞多く
実験中止

死細胞殆どみられず
細胞塊厚み約１００μｍ
360日培養継続

メッシュに沿って配向性があり、長期培養できた9

『Meshtable®』の特徴⑥

既存リソース活用<培養>
市販のwellプレート/dishにMeshtable®を装着し、従来の平面培養と同様に培養できます<観察>
通常の観察機器がそのまま使えます

全てのタイプで下記の距離を確保

表からも裏からも観察可能！
Meshtable®

平面培養(Celldisk)

×20◎とても見やすい×20◎とても見やすい
3D Insert

Transwell×4×20△細胞とシート模様の区別がつきにくい

×殆ど分からない

平面培養の技術、設備をそのまま活用できます10様々な応用用途『Meshtable®』の特徴⑦

ボトムタイプ形状（カラムタイプでない）を活かし、種々の共培養への応用

エクソソーム抽出用途等バイオリアクターへの応用

ゲルを用いた実験のゲルの足場としてゲル11

３.製品一覧※入数は暫定【通常タイプ】

型番

適合容器

メッシュ部
色

径(mm)

入数

備考

MT24WB5-624well

黒Φ56

MT12WB4-612well

黒Φ46MT12WB6-612well

黒Φ66SA付

MT6WB-36well

黒Φ22.5

3SA,SP付

MT6DB-26cm dish黒Φ392SA,SP付

MT9DC-19cm/10cm dish透明Φ74.52SA:サポートアダプタ

SA付

SP付
SP:サポートプレート【透過試験タイプ】

型番

適合容器

メッシュ部

入数

色径(mm)

MT24WTB5-12 24well

黒Φ512MT12WTB4-612well

黒Φ46MT12WTB6-612well

黒Φ66

備考

【取り外しピン】

型番
MT-P

入数
24wellタイプ用以外に使用出来ます

備考

1

【特注品】
ご要望により種々カスタム対応させていただきます・強プレスメッシュ
メッシュ開口部を標準品より小さくしたもの

12単体部品販売（メッシュ無し,枠体のみ）※入数は暫定お客様でご用意された不織布やメンブレンシート等をセットして御使用される用途向けに枠体単品をご用意しました（内枠/外枠セット品）
専用組立治具,膜体抜き治具も販売しております【通常タイプ】
型番

適合容器

膜部直径(mm)

入数

T24W5-2424well

Φ５24T12W4-1212well

Φ４12T12W6-1212well

Φ６12T6W-106well

Φ２２．５10T6D-106cm dish

Φ３９10T9D-109cm/10cm dish

Φ７４．５

10TN24W8-2424well

Φ８24

Ｔ２４Ｗ５

Ｔ１２Ｗ４Ｔ６Ｗ

Ｔ１２Ｗ６Ｔ６Ｄ

ＴＮ２４Ｗ８※１Ｔ９Ｄ【透過試験タイプ】
型番

膜部直径(mm)

入数24well

Φ５24T12WT4-1212well

Φ４12T12WT6-1212well

Φ６12TN24WT8-2424well

Φ８24

T24WT5-24

Ｔ２４ＷＴ５

適合容器

Ｔ１２ＷＴ４

Ｔ１２ＷＴ６※１

Ｔ２４ＷＴ８※１TN24W8 及び TN24WT8（カラムタイプ）は１ピース構造であり、膜体は接着剤等で固定する必要がございます13組立,型抜き治具類販売【プレス/型抜き治具】

12/24wellデバイス用
6well/6cm dish/9cm dishデバイス用

基本材質：ステンレス/アルミ

適用可能シート厚み

クリーンルーム仕様：１０μm～１００μm程度

但し、シート材質によります。

各サイズ毎に組立/型抜きアタッチメントをご用意しております
お問い合わせ下さい【組立方法】

外枠
お客様でご用意されるシート

Ｔ１２Ｗ４/6

12

内枠Ｔ６Ｄ

14

4.製品仕様a)メッシュ寸法
厚さ：5～15μm

30～80μm

150～200μm※メッシュ開口寸法は調整しておりますが織物構造につき多少ばらつきが生じますb)材質
メッシュ：ポリエステル100% 透明 及び 黒色

枠体：ポリカ－ボネイト 透明

サポートプレート：ポリカ－ボネイト 透明
サポートアダプタ：ポリカ－ボネイト 透明
取り外しピン：ポリカ－ボネイト 黒色c)滅菌仕様
密封後γ線（線量：２５ｋＧｙ）にて滅菌しておりますd)注意事項・本品の再利用はできません
・本品はオートクレーブできません・メッシュに外力が加わるとメッシュが弛むことがあり取り扱いにご注意願います
・周囲温度によりメッシュが多少弛むことがあります15e)製品寸法【通常タイプ】

16

【透過試験タイプ】※播種面
積違いで２品種有17５.使用方法a)細胞播種～培養
Meshtable®各サイズ毎の懸濁液量/推奨播種細胞数/推奨培地量は下記の通りです
最適な播種細胞数は細胞種/実験目的により異なります
12well及び24well品は播種面積を小さく抑えている為、比較的長周期での培地交換ができます
実使用前に播種細胞数を決定する予備実験を行うことをお勧めします【通常タイプ】
Meshtabale
型番

適合容器

メッシュ
径(mm)

懸濁液量

推奨播種細胞数(cells)(参考)

培地量
(参考)

MT24WB524well

Φ560～80μL

1.5×104～1.5×105

1.5mL

MT12WB412wellΦ440～50μL

1×104 ～1×1053mL

MT12WB612wellΦ6９0～1１0μL

2×104 ～2×1053mL

MT6WB6wellΦ22.50.8mL

２×105～２×1066mL

MT6DB6cm dish

Φ392.4mL

３×105～３×1068.5mL

MT9DC9cm/10cm dish

Φ74.58.7mL

５×10５～５×10６26mL【透過試験タイプ】
Meshtabale
型番

適合容器

メッシュ
径(mm)

懸濁液量

培地量(参考)推奨播種細胞数(cells)(参考)
45内側

外側

0.3mL

1mL

MT24WTB524well

Φ560～80μL

1.5×10 ～1.5×10MT12WTB412wellΦ440～50μL

1×104 ～1×1050.6mL

2mL

MT12WTB612wellΦ6９0～1１0μL

2×104 ～2×1050.6mL

2mL

参考：HPより培養動画をご覧ください
URL: https://www.biomedical.mizuta-inc.com/18

【12wellタイプ (MT12WB4/MT12WB6)】① 細胞懸濁液４０～５０μL(MT12WB4),９０～110μＬ(MT12WB6)をMeshtable®中央凹部へピペットチップがメッシュに接触しない様に注意しながら、少しずつメッシュに乗せます

サポートアダプタ

Meshtable®
細胞懸濁液

②

３７℃のCO2インキュベータの中で静置します
推奨：細胞がメッシュに接着するまで４～５時間静置培養してください
細胞懸濁液の蒸発を抑制する為、空きwellに滅菌水又はPBSを入れてください③ 顕微鏡下で細胞のメッシュへの接着を確認した後、各wellに３ｍLの培地を添加します
サポートアダプタの溜まり部に培地を入れることにより、Meshtabale®の浮き上がり防止と勢いよく培地を添加してしまい細胞を剥がしてしまうことを防止出来ます（サポートアダプタは使わなくても構いません）
５時間以上経過しても細胞がメッシュへ接着しない場合はメッシュのコーティングを行ってください（※コーティング後風乾させてください）④ インキュベータの中で培養を開始します19

【６well(MT6WB)/６cmディッシュ(MT6DB)/9cmディッシュ(MT9DC)タイプ】① 細胞懸濁液をサポートプレート中央穴へピペットチップがメッシュに接触しない様に注意しながら、少しずつサポートプレートとメッシュの間に充填します
サポートアダプタ

サポートプレート

Meshtable®
細胞懸濁液

サポートプレートがMeshtable®の凹部にきっちり入っていることを確認してください②

３７℃のCO2インキュベータの中で静置します
推奨：細胞がメッシュに接着するまで４～５時間静置培養してください③

顕微鏡下で細胞のメッシュへの接着を確認した後、各ウェルに培地を添加します
サポートアダプタの溜まり部に培地を入れることにより、Meshtabale®の浮き上がり防止と勢いよく培地を添加してしまい細胞を剥がしてしまうことを防止できます（サポートアダプタは使わなくても構いません）
５時間以上経過しても細胞がメッシュへ接着しない場合はメッシュのコーティングを行ってください

培地添加後、サポートプレートをピンセットで取り除いて下さい
ピンセット④ インキュベータの中で培養を開始します20【12well 透過試験用タイプ (MT12WTB4/6)】① 細胞懸濁液40～50μL(MT12WTB4)/80～100μL(MT12WTB6)をMeshtable®内部立壁に沿わせながら、少しずつ懸濁液を滴下しメッシュに乗せます。その際、ピペットチップが中央凹部のメッシュに接触しない様に注意してください。

Meshtable®

細胞懸濁液② ３７℃のCO2インキュベータの中で静置します
推奨：細胞がメッシュに接着するまで４～５時間静置培養してください
細胞懸濁液の蒸発を抑制する為、空きwellに滅菌水又はPBSを入れてください③ 顕微鏡下で細胞のメッシュへの接着を確認した後、Meshtabale®とウェルプレートの間から2mLの培地を各wellに添加します
５時間以上経過しても細胞がメッシュへ接着しない場合はメッシュのコーティングを行ってください④ Meshtable®中央凹部の立壁に沿うように600μLの培地を少しずつ添加します※外側のみ先に全量培地を追加しますとデバイスが浮き上がりますのでデバイス内側/外側への培地量/方法は適宜調整してください⑤ インキュベータの中で培養を開始します21

【24well 透過試験用タイプ (MT24WTB5)】①

細胞懸濁液60～80μLをMeshtable®内部立壁に沿わせながら、少しずつ懸濁液を滴下しメッシュに乗せます
その際、ピペットチップが中央凹部のメッシュに接触しない様に注意してください

Meshtable®

チップ先端ガイド

細胞懸濁液②

３７℃のCO2インキュベータの中で静置します
推奨：細胞がメッシュに接着するまで４～５時間静置培養してください
細胞懸濁液の蒸発を抑制する為、空きwellに滅菌水又はPBSを入れてください③

顕微鏡下で細胞のメッシュへの接着を確認した後、Meshtabale®とウェルプレートの間から1mLの培地を各wellに添加します
５時間以上経過しても細胞がメッシュへ接着しない場合はメッシュのコーティングを行ってください④Meshtable®中央凹部の立壁に沿うように300μLの培地を少しずつ添加します※外側のみ先に全量培地を追加しますとデバイスが浮き上がりますのでデバイス内側/外側への培地量/方法は適宜調整してください⑤ インキュベータの中で培養を開始します22b)培地交換
Meshtable®/サポートアダプタのＵ字凹部より培地を吸い取り、初回培地添加時と同様にサポートアダプタの溜まり部より新鮮な培地を添加してください
培地交換時、容器（well/dish)底面を観察し、メッシュより脱落した細胞が底面で増殖していた場合、容器を新しく交換することをお勧めします

アスピレータ※6well/6cm dish/9cmタイプは細胞当たりの培地量が少ない為、頻繁に培地交換する必要がありますc)観察
ピンセットを用いてMeshtable®を反転させることで細胞シートの両面から観察できます（透過試験用タイプを除く）

約４ｍｍ約２ｍｍd)メッシュシート取り外し
付属の取り外しピンをMeshtable®の穴部から押し込むことにより、メッシュシートを容易に取り外すことができ、その後の細胞解析等に使用することができます（24wellタイプを除く）

取り外しピン23e)トリプシンによる細胞回収方法
通常の平面培養と同様にトリプシン処理出来ますが、メッシュを取り外した方がトリプシン溶液量は少なくすみます。
通常の平面培養より細胞は剥がれにくい為、処理時間は長めにした方がよい場合があります。
時間経過後、ピペッティングにてメッシュにトリプシン溶液を吹きかけ、剥がしてください。

24

６.参考

タイムラプス動画※ＰＤＦ配布/ペーパー配布版の場合、静止画になります。弊社ＨＰをご覧ください

HepG2

ＨＣＭ

マイオリッジ社 Carmy-A(ヒトiPS由来心筋細胞)

mMSC(マウス間葉系幹細胞)

iPSC-CMs(ヒトiPS細胞由来心筋細胞)

Meshtable® 12wellタイプ（全細胞の拍動が同期する）

市販well plateに平撒（拍動が同期しない）

25

７.各資料ダウンロードのご案内
Meshtable®

取り扱い説明書（本書）

https://biomedical.mizuta-inc.com/dl/manual01.pdfMeshtable®

チラシ

https://biomedical.mizuta-inc.com/dl/leaflets.pdf

Meshtable®

手技動画

https://biomedical.mizuta-inc.com/techniques01

Meshtable®

価格表

https://biomedical.mizuta-inc.com/dl/price.pdf

Meshtable®

注文書フォーム

https://biomedical.mizuta-inc.com/dl/order.xlsx

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【お問い合わせ】お問い合わせはメールにてお願い致します株式会社 水田製作所 バイオメディカルラボ
〒650-0047
兵庫県神戸市中央区港島南町６丁目３番７号
クリエイティブラボ神戸（ＣＬＩＫ）３１３号室
メール meshtable@mizuta-inc.com
HPhttps://www.biomedical.mizuta-inc.com/

2024.6.15 MZT-M001-4.0