LAMP 法用核酸増幅試薬

2×LAMP MASTER
マニュアル（第 1 版）202005cn
濁度検出用「LAMP MASTER for Turbidity」(Code No. 311-08961)
蛍光検出用「LAMP MASTER for Fluorescence」(Code No. 317-08941)
目視判別用「LAMP MASTER for Turbidity (Visible Dye)」(Code No. 314-08951)

Ⅰ

製品説明

「LAMP MASTER for Turbidity」（2×LAMP MASTER）は、*1) 本品のラベルに使用期限が表示されております。使用期限を守っ

LAMP 法による等温核酸増幅のためのマスターミックス試薬てご使用下さい。

です。LAMP 法に必要な耐熱性鎖置換型 DNA ポリメラーゼ、*2) 遮光保存して下さい。

Mg2+、dNTPs、至適化されたバッファーなどを含むため、2×LAMP MASTER にプライマーと鋳型核酸を添加するだけでLAMP 法による DNA 増幅を行うことができます。また、DNAⅢ

プロトコール増幅を蛍光検出用装置で検出するための試薬をセットにした「LAMP MASTER for Fluorescence」や、目視判別用試薬をセットにした「LAMP MASTER for Turbidity (Visible Dye)」も反応液の調製方法①あり、検出方法に合わせてお選びいただけます。

本品、鋳型核酸*3)、プライマー*4) 等、使用する試薬を室温で完全に融解する。
*3) 対象ごとに適した方法を用いて鋳型核酸を調製して下さい。

＜使用上の注意＞重要 試験環境の汚染を避けるため鋳型核酸の調製は本品を使・ 本品は試験研究用ですので、医薬品、その他の目的にはご使用になれません。また、試薬についての基本的な知識のある方以外は用する区域とは区別して行って下さい。

取り扱わないで下さい。

*4) あらかじめ標的遺伝子に対する 6 種類（または 4 種類）の・ 本品の取り扱いはマニュアル記載内容通りに行って下さい。マニ

LAMP プライマーの混合液を調製して下さい。

ュアル記載内容と異なった取り扱いによるトラブルにつきまし例）10×LAMP Primer Mix:ては、弊社では責任を負いかねます。
16 µM FIP, 16 µM BIP,・ LAMP 法は栄研化学株式会社が特許を保有しています。株式会社

8 µM Loop Primer F, 8 µM Loop Primer B,

ニッポンジーンは本品の製造及び販売を栄研化学株式会社より

10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT許諾されています。

②

Ⅱ

各試薬をボルテックスミキサーにて 1 秒間×3 回混合して均一にした後、スピンダウンを行い、氷上に静置する。

製品内容

本品（－20℃保存）③

1.5 ml あるいは 2.0 ml チューブに下記の反応例を参考に鋳型核酸以外の試薬を必要反応分ずつ分注し、ボルテッ

LAMP MASTER for Turbidity
2×LAMP MASTER *1)

2 µM F3 Primer, 2 µM B3 Primer,クスミキサーにて 1 秒間×3 回混合した後、スピンダウ625 µl×6 本セット品ンを行う。これをマスターミックスとし、氷上に静置す（－20℃遮光保存）る。

LAMP MASTER for Fluorescence
本品（2×LAMP MASTER）

625 µl×6 本

参考 RT-LAMP 法において AMV Reverse Transcriptase を使用

10×Intercalation Mix *2)

750 µl×1 本

する場合は、25 µl の反応系あたり 0.2 units を添加して下さい。

LAMP MASTER for Turbidity (Visible Dye)
本品（2×LAMP MASTER）
25×Visible Dye*2)

株式会社ニッポンジーン
www.nippongene.com

625 µl×6 本④

使用する装置の推奨チューブに 1 反応分ずつマスターミックスを分注する。

300 µl×1 本

TEL 076-451-6548

⑤

鋳型核酸またはコントロールを～5 µl 添加し全量 25 µlとする。まず、陰性コントロール（ddWater 等）を添加してキャップを閉じる。次に、鋳型核酸を添加してキャ⑥＜蛍光測定＞
二本鎖 DNA に結合して蛍光を発するインターカレーターを反応系に添加し、DNA 増幅に伴う蛍光を検出する。

ップを閉じる。 最後に、陽性コントロールを添加してキ蛍光検出用装置として、リアルタイム PCR 装置を使用する場ャップを閉じる。このとき、ピペッティングまたはキャ合は、蛍光波長の設定を ResoLight Dye もしくは SYBR®

ップを閉めた上でのタッピングにより良く混合した後、Green I を測定する波長に設定する（蛍光検出装置の設定方法スピンダウンする。また、混合の際は気泡が立たないよは、使用する装置の取扱説明書に従う。）

うに注意する。

注意

検出装置にチューブをセットし、60～68℃*5) で 30～60には使用できません。

10×Intercalation Mix は蛍光検出用試薬のため、濁度測定装置

分間*6) の LAMP 反応を行う。
*5) 設計したプライマーによって最適な温度が異なるので、あらかじめ条件検討を行ってから反応温度を決定する。
*6) 反応時間は、下記の反応例を参考にする。

LAMP MASTER for Turbidity (Visible Dye) 反応例

LAMP MASTER for Turbidity 反応例
2×LAMP MASTER

2×LAMP MASTER

12.5 µl

25×Visible Dye

1.0 µl10×LAMP Primer Mix

2.5 µl

鋳型核酸

～5 µl

ddWater

up to 25 µl

12.5 µl

10×LAMP Primer Mix

2.5 µl60～68℃、40 分間（LAMP 反応）

鋳型核酸

～5 µl

80℃、5 分間（反応停止）

ddWater

up to 25 µl
目視判定

60～68℃、60 分間（LAMP 反応）＜目視判定＞＜濁度測定＞

可視光下で、陰性では淡い赤色を呈し、陽性では鮮明な黄緑

LAMP 法による DNA の増幅によって反応副産物であるピロリ色を呈する。この発色は蛍光に由来しているため、紫外線照ン酸マグネシウムが蓄積されて反応液が白濁する。この濁度

射下ではより正確な判定が可能である。

を濁度測定装置で測定することにより、増幅の有無を判定で重要きる。
（濁度測定装置の設定方法は、使用する装置の取扱説明

同時に反応させ、コントロール液の発色の有無を確認してから、検体目視判定の場合、必ず陰性コントロールと陽性コントロールをの判定を行う（60 分間まで反応時間を長くすることも可能だが、そ書に従う。）の場合、陰性コントロールで非特異反応がないことを確認する。）
注意

LAMP 反応液を長時間放置すると、反応の進行に関わらず、蛍光の発色あるいは消光が起こり誤判定の原因となるため、反応停止後、速やかに目視判定を行う。また、反応液を調製する際、EDTA 等の金

LAMP MASTER for Fluorescence 反応例
2×LAMP MASTER

12.5 µl

10×Intercalation Mix

2.5 µl10×LAMP Primer Mix

2.5 µl

鋳型核酸～5 µl

ddWaterup to 25 µl

属キレート化合物を含む TE 等を用いない。

製品安全データシートや、実験例などは、ニッポンジーン Web
サイトをご覧ください。

60～68℃、30 分間（LAMP 反応）
本品は、試薬(試験研究用)として販売しているものです。
会合曲線解析もしくは融解曲線解析

株式会社ニッポンジーン
www.nippongene.com

医薬品の用途には使用しないでください。

TEL 076-451-6548