日大歯学 , 95（2）, 69-79, 2021

特別依頼原稿

第 73 回日本大学歯学会特別講演寄稿
骨および歯による年齢推定の実際と最近の動向
網

干

博

文

日本大学歯学部法医学講座

要旨：遺体発見時，検査で最も優先される事項は亡くなった方の個人識別である。身元不明遺体の場合，個人識別作業の第一段階は生物学的な個人情報の収集，すなわち，性別，年齢，身長および帰属集団（人種）などの推定となる。なかでも年齢推定は，警察の捜査対象を絞る意味からも重要であり，その推定には可能な限りの正確性が求められる。対象となる遺体が成長期（胎生期から 20 歳代前半）にある場合は骨や歯の成長発育状態を，成人期以降（20歳代半ば以降）の場合は退行性の変化を用いて年齢を推定する。成長期における成長発育は，遺伝学的なプログラ
ムに基づいて進行することから年齢との相関が高く，年齢推定の精度は比較的高いが，成長期以降の退行性の変化
は生活様式など環境の影響を受けやすいため，年齢推定の精度は低下する。このように，生物学的な年齢推定に使用される形態学的特徴は，年齢とともに変化しながら胎生期から老齢期まで徐々に増えていくため，それに対応する様々な年齢推定法が開発されている。また近年，生化学的な分析技術の進歩により，DNA やアミノ酸などの生物学的指標の定量分析法も開発され，年齢推定に応用されている。
このレビューでは，主に形態的な特徴を利用した年齢推定法の変遷をたどるなかで，歯による年齢推定法を中心に概説するとともに，最近の動向として研究の成果が目覚ましい生化学的な手法による年齢推定法についても紹介する。
キーワード：歯科法医学，年齢推定，形態学的特徴，退行性指標

A review of the age estimation in forensic odontology and recent trends
Hirofumi Aboshi
Department of Legal Medicine, Nihon University School of Dentistry

Abstract: When human remains are found, the priority of the investigation is to ascertain the identity ofthe deceased. The first step in the identification process is to build up a biological profile, which is a generaldescription of the individual’s sex, age, stature, and ancestry. Age estimation should be an important part ofevery identification process. The estimation should be as accurate as possible since it narrows down thepool of potential identities to be investigated by the police. The choice of the method is inherently related
to whether the unidentified remains are those of a juvenile or an adult. In age estimation, whiledevelopmental morphological features in bones or teeth can be applied to a juvenile, degenerative features
are applicable only to an adult. As progressive developmental changes in bone size and morphology occur
from genetic programing at relatively predictable rates with a positive correlation between skeletal andchronological age, age estimation is usually most accurate in immature individuals. On the other hand, inmature individuals, the low accuracy of age estimation by degenerative morphological markers is due to thefact that they are more influenced by environmental factors. The variability in the morphological features
used to assess biological age thus progressively increases from fetal life to old age. Numerous age estimation
methods corresponding to developmental markers have been developed. In the last decade, because of theadvances in the field of biochemical analytical technology, biochemical parameters have also been applied toage assessment such as DNA, and amino acid analysis.
This article will review the principal methods and techniques of predominantly dental age assessment
practices by morphological features of the deceased and the recent trends of molecular methodologies.
Keywords: forensic odontology, age estimation, morphological features, degenerative markers（受付：令和 3 年 10 月 18 日）
責任著者連絡先：網干博文
日本大学歯学部法医学講座〒 101-8310 東京都千代田区神田駿河台 1-8-13

TEL：03-3219-8119
FAX：03-3219-9343
E-mail：aboshi.hirofumi@nihon-u.ac.jp

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第 95 巻第 2 号制御された規則的な形成と萌出により，年齢推定に広くはじめに利用されている。成人期までの個人の暦年齢を推定する

白骨遺体の発見時，検査で最も優先される事項は，亡く際，よく参照されるものに，生後 4 か月から 21 歳までなった方の個人識別である。身元不明死体の個人識別作業の 歯 の 発 育 状 態 を 年 代 順 の 20 の ス テ ー ジ で ま と め たでは，所持品が発見されなければ，該当者が挙げられず，Schour and Massler 7）の発育年表がある。このデータの生前情報がないので歯科所見や DNA 型の照合も不可能と原型は，1933 年 Logan and Kronfeld が 25 体の解剖組なる。そのような場合，第一のステップとして，骨硬組織の織標本をもとに作成した成長発育表であったが，当初は形態的特徴を指標として性別，死亡時年齢，身長および帰評価もあいまいなまま少しずつ追加・訂正されながら使属集団（いわゆる人種）などを推定し，これらの個人識別の用 さ れ て い た と い う。 そ れ を 最 終 的 に Schour and情報をもとに絞り込みを行う。このなかで死亡時の年齢はMassler が修正し，アメリカ歯科医師会でアトラスにし極めて重要な情報となる。性別や帰属集団は，DNA 型などて一般開業医にも広まったものと言われている。1930 年

他の手法でも判定あるいは推定可能であるが，年齢の推定代後半に多数撮影された子供のエックス線写真をもとには原型保存性が高く，死後変化も少ない骨硬組織の形態か作成された歯の成長ステージの分類結果が，現在でも使らの判断に頼らざるを得ない。またその際，警察に提供さ用されていることになる。その後，Moorrees らは歯のれる推定結果はその後の捜査の方向性をも左右し，事件解成熟度を咬頭形成から根尖の完全閉鎖まで 14 のステー

決にも直接寄与するため，正確性と精度が要求されることジで表し，男女別の表を作成した 8,9）。さらに Andersonになる。しかし，骨や歯からの年齢推定においては，一つのらは，Moorrees らのシステムを発展させ，第三大臼歯方法ですべての年代にわたり推定可能なものは存在しない。

を含む全歯を対象とした表を発表している 10）。最近では

骨および歯は，胎生期から乳児期，幼児期，少年期をUbelaker ら 11）が Schour and Massler の業績を基盤に，経て青年期に至るまで継続的に成長発育し，20 歳代半ば

北米アメリカ人集団の胎生 5 か月から 35 歳までの乳歯・で形成が完了する。成長発育は遺伝学的なプログラムに永久歯の歯ごとの形成，萌出状態を図譜で表現したアト

基づいて規則正しく進行することから年齢との相関が高ラスを発表し，暦年齢推定のための参照データの一つとく，年齢推定の精度は比較的高い。なかでも歯の成長発し て 使 用 さ れ て い る。 こ の 方 法 は，Schour and育は，骨の形成システムに較べ，周囲の環境要因の影響

Massler 7）の方法に較べ，より広い年齢範囲で適用可能で，をほとんど受けず，原形保存性も極めて高く，胎生期かさらに永久歯列の発育状態と乳歯の吸収状態がアトラス

ら成人期初期に至るまで成長発育が継続して進行するたとして同時に示され，視覚的にも把握し易いことから広め，この時期の年齢推定で最も信頼性の高い指標とされく歯科臨床の場でも使用されている。しかし Ubelakerている 1）。一方，成人期以降の年齢層に属する遺体では，

ら 11）の方法は，他の帰属集団にもその基準がしばしば適形成終了後の退行性変化を推定の指標とするしかなく，用されてはいるものの，追試報告はほとんど見当たらず，

しかもその変化は生活様式，健康・栄養状態などの影響

その精度に関する信憑性は不明である。

を受け，その様相も個人間で大きく変動する。したがって，

一方，日本では 1988 年に日本小児歯科学会による乳歯・その推定精度は若年層に較べ，おのずと低下する。以上

永久歯の萌出調査が初めて実施され，Ubelaker ら 11）のアのように生物学的な年齢推定に使用される形態学的特徴

トラスに類似した図譜も作成された 12）。そして 2018 年にはは，胎生期から高齢に至るまで徐々に増えていくため，

調査資料数 3 万人という全国規模で同じ調査が実施され，それに対応する様々な年齢推定法が開発されている 。

その結果は日本人乳歯と永久歯の男女別の標準萌出時期と2）

また，近年における生化学的な分析技術の進歩により，して公表されている 13）。利用に際しては各歯とも萌出時期

DNA やアミノ酸などの生物学的指標の定量分析法も開は１歳半前後の幅があり，各種感染や早期の喪失によって発され，年齢推定に応用されているも影響を受けることなども考慮すべきであるが，発表され

。

3-6）

たデータは調査時期，調査方法，資料数などから考えてもこのレビューでは，主に形態的な特徴を利用した年齢推定法の変遷をたどるなかで，歯による年齢推定法を中

現代日本人資料として参照するには十分信頼性に足る標準

心に概説するとともに，最近，新たに注目されている生データと言える。歯の萌出時期は，肉眼的に口腔内を覗い

化学的な手法による年齢推定法についても紹介する。

て判断した内容をもとにしているため，後継永久歯の歯冠・

1.

歯根の成長発育状態などは不明である。また変異の大きい

形態学的な特徴による年齢推定
1）出生から成人期までの個体の年齢推定

第三大臼歯は対象として除かれている。しかし，歯科法医（1）歯の石灰化と萌出学的見地から考えると，大規模災害時に一度に短時間で多a. 成 長発育のアトラスや標準萌出時期との比較による数の遺体の年齢推定を求められた場合，萌出時期の情報は肉眼的に迅速な判断を下すために役立つことから，信頼性

方法のある最新版の萌出時期の対照表の存在意義は大きい。

歯の発育は骨よりも暦年齢と密接に関係し，遺伝的に70

硬組織による年齢推定の実際と最近の動向

令和 3 年 12 月

b. スコアリングによる方法を算出している。そのなかで第三大臼歯の発育は，女性

1973 年 Demirjian ら 14）は年齢推定を簡略化するためより男性が有意に早く，他の歯で観察されるパターンとに，下顎左側の 7 歯を対象に，歯の発育段階を男女別に反対であったという。加えて，根尖が完全に閉じて歯周Ａ～Ｈの 8 段階に分け，各歯に割り当てられたスコアの靭帯の幅が一定であるステージ H であれば，その個人は合計を全体の歯の成熟度として推定年齢を算出する方法

少なくとも 18 歳に達している可能性が高く，その経験を発表した。この研究には約 3,000 枚もの子供のエック

確率は白人男性で 90.1％，白人女性で 92.2％であったと

ス線写真が使用され，後に第三大臼歯が対象歯に加わり報告している。その後，他の帰属集団の第三大臼歯の発一連の形成段階が扱われているため，法医学の分野でも育と暦年齢との関係を同様の方法，パラメータを用いて広く使用されている。このスコアリングによる推定は，調査した研究が報告されている 16）（Table 1）。

解剖学的な特徴をエックス線写真上で読み取り発育ス

日本人については，Olze ら 17)，および Arany ら 18）にテージを決定するため，検査者の計測によるバイアスがよって別々に発表されたデータがある。それらによると，なく，評価の正確性，信頼性が確保されるという利点を

下顎第三大臼歯の Demirjian の各発育段階における平均有する。そのため，Demirjian ら 14）の方法は，他の帰属

出現年齢と標準偏差は，同じ日本人集団間でもステージ

集団への適用が可能か否かの検証や他の年齢推定法とのＨはほぼ同様であるが，ステージＥ，Ｆ，Ｇでは異なる。

比較などに簡便な方法として利用されている。

また他の帰属集団と比較すると，日本人は歯根形成開始（2）第三大臼歯の成長発育

時期も歯根完成時期も 2 年ほど遅い。逆にアメリカ系白第三大臼歯は，青年期後期から成人期初期の年齢推定

人・ヒスパニックやトルコ人では，ステージＨの平均年にしばしば利用される。なぜなら，この期間で成長発育

齢が 20 歳ほどで日本人より歯根完成期が 2 年ほど早い

中の歯は第三大臼歯のみで，信頼に足る生物学的な指標
がそれ以外に存在しないことによる。この時期の年齢推定では，法律の適用年齢，特に成人年齢が大きな問題となる。ヨーロッパやアメリカでは不法移民対策や年金受給問題など，個人が成人に達しているか否かを明確にすることは重要な課題になっている。国ごとに多少のばらつきはあるにせよ，多くの国で法的な成人年齢は 18 歳
であり，その年齢を推定するために，第三大臼歯の成長発育は重要な指標となっている。第三大臼歯は他の歯に
較べ，多様な環境要因や遺伝的要因の影響を受けるため，個人差が出やすく正確性に欠けるという指摘もあるが，個人が成人に達しているかどうかだけを判断するには，十分な合理的な指標として使えると言われている。
1993 年，Mincer ら 15）は，ＡＢＦＯ（American Board

Fig. 1 第 三大臼歯の発育を評価する際に使用する歯冠および歯根の８つの形成段階の模式図とその定義
模式図は Demirjian らの図を改編して作成し，定義は原文のまま。

of Forensic Odontology）の会員らにより収集された 823
名分のＯＰＧ資料をもとに，Demirjian の 8 段階分類法
で第三大臼歯の発育ステージを評価し，男女別に平均値

Table1

下顎第三大臼歯における各帰属集団の Demirjian の発育段階に属する男女別平均年齢と標準偏差

Cameriere et al. (2008) The comparison between measurement of open apices of third molars and Demirjian stages to test
chronological age of over 18 year olds in living subjects, Int. J. Legal Med.122, P494 より改編引用。
日本人集団については 2 名の研究者が，いずれも歯根形成開始時期（ステージ E）が他の集団に較べ少し遅いと報告している。また日本人の根尖閉鎖時期（ステージ H）の平均年齢は，22 歳前後で白系ヒスパニック系アメリカ人，トルコ人より２年ほど遅いことが読み取れる。

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ことが分る。他に特徴的な所見としては，南アフリカ黒どを指標とするのが一般的である。ここでは歯の生理学的人がステージＥからＧにおいて，ほかの集団より 1 ～ 4

加齢変化を指標とする代表的な年齢推定法のみ概説する。

歳も若いことが挙げられる。これらの結果から，18 歳の（1）Gustafson Method

個体における第三大臼歯の歯根形成ステージは帰属集団

歴史的に有名で歯による成人の年齢推定法でよく参照

間で異なるため，ステージＨの評価を 18 歳の閾値とすされるのが，1950 年に発表された Gustafson 法 26）であるのは難しいと言える。このように，第三大臼歯の成長る。この方法は歯の研磨標本による組織学的な観察法で，発育の情報だけで成人に達しているかどうかを判断する

熟練した手技を必要とする。具体的には，形成完了後かのは非常に危険であり，推定精度の向上のためには歯とら現れる 6 種類の退行性変化の進行程度に応じて 0 ～ 3

骨の成長所見を併用すべきという意見もある。

の 4 段階のスコアを与え，その数値の合計と回帰直線に

そこで，第三大臼歯の形態学的特徴による年齢推定法のトレンドの一つを紹介する。2008 年，Cameriere らより，推定年齢を算出する方法である。指標として使用された 6 項目は，以下のとおりである。

16）

は，第三大臼歯の成熟度指数 I3 （M Index 3M）
を提唱した

A ：Attrition（咬耗）（Fig. 2）。これはエックス線画像上で，歯の全長に対する，

P ：Periodontosis（歯周組織の退縮）

根尖孔の内径の合計の割合，すなわち根尖の開存程度を

S ：Secondary dentine（第二象牙質の添加）指数として表現したもので，0.08 以下であれば 18 歳以

C ：Apposition of cementum（セメント質の添加）

上，0.08 以 上 で あ れ ば 18 歳 未 満 と 判 断 で き る と い う。

R ：Resorption（歯根吸収）

またこの分析の感度は 70％，特異度は 98％であり，正T ：Transparency（歯根透明象牙質）

解と分類された割合は 83％であったとも報告されていGustafson の直線回帰式による精度は，集団の 95％でる。この方法は，比較的短期間で世界各地の歯科法医学

推定年齢と実年齢との差が 7 ～ 8 年程度と報告されてい者により検証作業が行われ 19-24），日本人資料についてもた。しかしその後の追跡研究により，各変数の独立性や成熟度指数 0.08 が 18 歳の閾値として有効であることが年齢推定に対する効果の程度に差があるのでは，との議報告されている25）。

論になり，結局，1971 年に Gustafson の後継者である

2）成人期以降の個体の年齢推定

Johanson により改良法が発表されている 27）。その方法

成人期以降の個体については，恥骨結合面の形態，頭は，歯髄の最も広い部分を含む厚さ 0.25 mm で唇舌方向

蓋縫合の閉塞程度，骨海綿質における骨梁構築像，腰椎にスライスした研磨標本を作製し，Gustafson と同様の椎体部の骨棘形成および歯の咬耗・歯髄腔の退縮程度な

6 種類の退行性変化に，0 ～ 3 の 0.5 刻みで計７段階のスコアを与え，変数ごとに重み付けられた重回帰式に代入
して推定年齢を求めるものである。性別や歯種については考慮されていないが，グスタフソン改良法と呼ばれ，以降しばらくの間，標準的な歯の組織学的な年齢推定法
として使用されていた。さらに 1978 年，Maples ら 28）はJohanson の方法を検証した際，年齢と相関の高い変数
は，①歯根透明象牙質，②第二象牙質の添加，③咬耗の順であり，①，②のみを使用した回帰式の推定精度が最も良かったと報告している。
そこで，その 2 つを指標とする代表的な年齢推定法についてそれぞれ説明する。
（2）歯根透明象牙質
透明象牙質は，象牙細管にハイドロキシアパタイト結晶が沈着し光が透見できる現象で，20 歳以前には現れないと言われる。また歯根の透明性は，根尖部から始まり
歯冠方向へと進行する。この変化に性差はなく，死体，
生体いずれの歯においても透明性に違いはなく，外的な影響も受けにくいと言われている。

Fig. 2 第三大臼歯の成熟度指数 I3 M のための計測
I3M は， 開 存 す る 根 尖 孔 の 内 側 の 幅 の 合 計（Width A ＋
Width B）を歯の全長（Tooth Length C）で割ることで求められる。Cameriere らによれば，18 歳以上か未満かの閾値は I3M ＝ 0.08 であり，0.08 未満であれば 18 歳以上，0.08 以
上であれば 18 歳未満と推定可能という。

a. Bang and Ramm29）による（1970 年）
この方法では歯をそのまま，あるいは切片標本の場合は，歯根部歯髄中央部を含む唇舌方向に切断した切片を用い，根尖から透明層上部までの長さを計測する。計測72

硬組織による年齢推定の実際と最近の動向

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③計 測誤差を避けるため，単根歯で回転していない歯に際して，透明層の歯冠側方向の位置が異なる場合は，である

最大透明層長と最小透層長の計測値の平均値が年齢推定に利用される。ただし，透明層の進行は根尖部から始ま資料となるエックス線画像間での拡大率や撮影角度にるが，70 歳を過ぎたころからその進行速度は遅くなるとよるズレの補正を行うため，歯のエックス線画像上で設言われ，年齢推定には 2 種類の回帰式が導出されている。

定した計測部位における歯に対する歯髄腔の割合を比とすなわち計測値が 9 mm 以内の場合と，9 mm 以上の場して表し（Fig. 3），それらを変数とした回帰分析が詳細

合で別々に用意された回帰式を使用する。この方法は，に実施されている。
歯の歯髄腔のサイズの変化を評価するため，すべての資料骨がわずかしか残っておらず，性別なども不明な場

歯種を用いた場合，上顎歯あるいは下顎歯のみを用いた合に広く適用される。
b. Lamendin ら30）による（1992 年）

場合，そして歯種ごとに推定を行う場合と，それぞれ設

これは Gustafson の方法で使用された変数を減らすと定した条件別に算出した回帰式を Table 2 に示した。回

同時に，歯を破壊しないで計測することを念頭に開発さ帰による推定精度が最も高かったのは 6 歯種すべて用いれた方法である。すなわち，抜去歯の唇側面で，①歯根た場合で，逆に下顎側切歯あるいは犬歯を用いた場合は透明象牙質，②歯周組織の退縮，③歯根長の 3 項目を計

精度が低い。なお，実際この手法を利用して多項目の計測し，それらの値を重回帰式に代入し年齢を推定するも測を行う際は，効率良く計測誤差を抑えるため，デジタのである。変数のなかで②歯周組織の退縮は，唇側面にル画像計測が推奨される。また画像計測ソフト上を用いおける CE-Junction と軟組織付着部の最大長であるが，たデジタル計測とデータ管理を同時に行うことで，よりこの部位は年齢に関与しない叢生，清掃不良，咬合性外簡便な推定も可能となる。
b. 歯 髄腔の加齢変化による年齢推定法の研究（日本大傷など種々の要因で容易に変化することが予想され，死学歯学部法医学講座 1974 年〜）

後時間の経過した遺体などでは，正確な計測に困難を来す可能性もある。Lamendinら30）によれば，資料数は少な

当講座では，1974 年に歯髄腔の狭窄化を簡便かつ非破

いが，推定誤差の平均値はおよそ 10 年で，40 ～ 70 歳の壊的に捉える年齢推定法の開発に着手し，最初はエック

上顎中切歯には利用可能であったという。法医学的には，

ス線フィルム上で設定した抜去歯に対する歯髄腔の幅の証拠保全の立場から歯１本からでも非破壊的に，ある程比（水平示数）33）や歯の全長に対する歯髄腔の高さの比度の精度を持って推定が可能であるという点では実施に（垂直示数）34），ならびに歯全体に対する歯髄腔の面積の値する方法と思われる。

比（面積示数）35）をそれぞれ変数とした年齢推定のための（3）第二象牙質の添加

回帰分析を行い，0.6 前後の年齢との相関が得られてい象牙質の添加には二つの形式がある。一つは生理的なる。その後，上下顎中・側切歯と犬歯を資料に，それま

二次象牙質の添加で，歯根形成完了後から健全な歯髄組で検討した 3 種類の示数を用いた重回帰分析を行った結織で生涯にわたり，ゆっくり着実に形成される加齢変化である。他は，修復二次象牙質（第三象牙質）として知ら
れ，歯に対する外的な刺激により形成される。いずれも歯髄腔の形態からみると，歯髄腔の狭窄という形で現れる。狭窄状態は歯の切片上で顕微鏡的に直接観察，計測できるが，その切片標本の作製は特殊技術であり，歯も破壊される。また，生体では歯を抜去できない状況もある。そこで最近では，エックス線撮影やＣＴ撮影などによる非侵襲的な歯髄腔の計測が主流となっている 31）。
a. Kvaal ら 32）による（1995 年）
Kvaal ら 32）はデンタルエックス線写真上で歯髄腔の大きさを詳細に計測し，成人の暦年齢を推定する方法を開発した。対象歯は，上顎の中・側切歯，第二小臼歯，下顎の側切歯，犬歯，第一小臼歯の 6 種類，計 12 歯である。
歯種の選択に当たっては，第三象牙質の添加の影響など

Fig. 3 計測部位と計測項目（Kvaal ら）
上顎 1，2，5 と下顎 2，3，4 のデンタル X 線写真上に設定された計測項目は元の歯の拡大率，撮影角度による誤差を補正するため，長さと幅の比率が変数として用いられる。
年齢を独立変数とした回帰分析の結果，（M）と（W-L）が有意な予測因子として抽出された。
（参照：Table 2）

を可及的に減少させるべく，以下の前提が必要となる。
①通常の機能的咬合を有する②修 復処置，齲蝕，摩耗，異常な咬耗等，外的な刺激による徴候のない歯である

73

日大歯学

第 95 巻第 2 号

果，0.77 と高い重相関係数が得られた 36）。また 1998 年

かし，実務において抜去歯が実験室に持ち込まれ，その以降は，歯髄腔の計測部位をより鑑定実務で応用可能な

年齢推定を依頼される機会は少ない。推定精度を追求す

上下顎犬歯や下顎小臼歯部の主として歯根部に絞り，デる重要性もさることながら，一方でより広く簡便に実務

ジタルエックス線画像を用いた年齢推定法の研究が新たに応用できる手法を開発することも，非常に重要となる。

。さらに 2000 年には歯科領域の診断に2012 年，イタリアの Cameriere ら41）は，オルソパン

特 化 し た 小 型 エ ッ ク ス 線 CT 撮 影 装 置（3 DX Multi-

トモグラム（以下，OPG）を用いた下顎小臼歯の歯髄面積に開始された37）

Image Micro-CT，以下 Orhto-CT）が世界で初めて開発

比による簡便な年齢推定法を発表した。この方法はヨーされたのを機に，根部歯髄腔の横断面形態を画像計測し，ロッパ，アジア諸国を中心に短期間で追試が進み，一定

歯根部歯質および歯髄腔の断面形態を根管面積比としての成果も報告され始めている。その研究は，606 名分の算出し，年齢推定に応用した 38）。しかし，本来，複雑な

スペイン系白人の OPG 資料を用い，簡便なデジタル画

形態を有する歯および歯髄腔の形態的特徴を表現するに

像計測により算出した下顎小臼歯の歯髄腔面積比を変数

は立体計測による体積値を利用することが望ましい。当

とした年齢推定法である。すなわち下顎小臼歯の歯と歯時，Orhto-CT には体積値を求める専用プログラムが搭

髄 腔 を， フ リ ー の 画 像 計 測 ソ フ ト（Image J: National

載されておらず，多数の断層画像をスライス幅で補完しInstitute of Health, Bethesd, MD, USA）で指定するポても，煩雑で誤差も大きくなることが予想されていた。

イント数で外形を選択し，囲まれたそれぞれの面積の比

そ し て， そ の 10 年 後 の 2010 年， 焦 点 サ イ ズ が Orhto-を歯髄腔面積比として変数に使用するだけである。身元CT より小さく（20 ～ 50μm），微細形態を高解像度で撮確認作業の現場で遺体の OPG 画像を撮影し入手するこ

影可能なマイクロ CT 撮影装置を使用する機会に恵まれとは現実的には難しいが，ＡＩ（Autopsy Imaging）が法た。当時，その装置を年齢推定に応用しようとした試み

医解剖の現場で実施される場面も年々増加し，CT によは，世界でも Vandevoort らの研究しかなかったが，る三次元立体構築画像から OPG に類似した断面画像を彼らが算出した回帰式の決定係数は残念ながら 0.31 と実作成することは比較的容易であることから，現場で撮影用可能なレベルには至っていなかった。そこで著者は，されるデンタルエックス線写真の活用法も含め，今後，

下顎小臼歯の三次元計測値をもとに，歯冠部と根部歯髄

日本でも利用される機会が増える可能性がある。

腔の部位別体積比を変数とした年齢推定のための回帰モ

2． 生化学的な手法による年齢推定39）。この一連の研究では，特に下顎第二広く生命に関する情報を扱う生化学的な分析は，法科

小臼歯の 4 か所の歯髄腔体積比を変数とした重回帰式に学の分野で有用なツールであることは言うまでもない。

より，暦年齢との相関が決定係数で 0.70 と高い精度が得

以下，年齢推定における最近の生化学的なアプローチのられている（Fig. 4）。

なかで有効なものを取り上げる。一般にこの類の推定法

デルを発表した40）以上の研究では，歯の退行性の加齢変化を歯髄腔の狭の精度は非常に高く，これまで述べた形態的特徴を指標窄程度として非破壊的に捉えることが目標であり，対象とする方法に較べ扱うデータも定量的で客観性があると資料はほとんどが抜去歯のエックス線画像であった。し言える。しかし実施には，高額で特殊な分析装置や高い

Table2

X 線写真を用いた年齢推定のための回帰式 (Kvaal ら，1995 を改編し引用）

回帰式の精度は上下顎６種類の歯のすべての比を使用した場合に最も高く , 片顎の歯を使用した場合は低くなり , なかでも下顎犬歯の場合で最小である。

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硬組織による年齢推定の実際と最近の動向

令和 3 年 12 月

専門性に裏付けられた分析技術などがあって初めてそのミノ酸の含有量が多く，ハイドロキシアパタイトにより精度が得られるという制限もある。

pH 値や水分量が一定に保たれ，またエナメル質やセメ

１）象牙質アスパラギン酸のラセミ化反応

ント質の内部に存在することで外部の環境要因から防御

アミノ酸はグリシンを除き，分子中に光学活性な不斉され安定性があること，さらには生体が活動している限炭素を持つ。それが一つの場合，そのアミノ酸は二つのり温度（体温）が保たれ，アミノ酸が一定の速度でラセミ光学異性体（Ｌ体とＤ体）に分けられる。ラセミ化反応は，化するのに適した条件を作り出していることなどが挙げ

一方のアミノ酸の光学異性体が他方に転換し，平衡状態られる 47）。

に向け変化が緩徐に進行し，最終的にこれらの等量混合

アミノ酸のラセミ化反応（速度）は環境要因，なかでも物（ラセミ体）となる反応をいう。出生時，生体を構成す

温度の影響を強く受けるとされている。そのため，死亡

るアミノ酸はすべてがＬ体であり，その後，すぐにラセあるいは歯が抜去された場合は急激に温度が下がり，ラミ化が開始される。代謝が活発な骨組織などでは，生涯セミ化反応の速度は遅くなる。これにより，死後経過時にわたりＬ体が補充されるが，代謝が低い歯や水晶体，間は年齢推定に影響せず，死亡時あるいは抜去された時脳の一部などでは D 体が排出されず，年齢とともに蓄積

点での年齢が推定可能となる。一方，高温にさらされたされていく。アミノ酸の反応速度は一般的に緩慢である

焼死体 48）や水中死体，さらには湿度やバクテリアなどのが，アミノ酸の種類や反応条件により異なり，アスパラ汚染 49）により，ラセミ化の生じる速度に変化するため，ギン酸の反応速度が最も早く，アラニンとグルタミン酸

年齢推定の信頼性は低くなる。

がそれに次ぐ。1975 年，Helfman ら 42）は，歯において象牙質のアミノ酸分析では，D/L 比はガスクロマトグ

アスパラギン酸が加齢とともに蓄積され，その D/L 比かラフィー（ＧＣ）により，アスパラギン酸のＬ体とＤ体をら年齢推定が可能であることを発表した。特にラセミ化

分離し，チャート上のピーク面積比から求められる。実反応速度が最も早いアスパラギン酸は，年齢推定に使用際の推定に当たっては，年齢既知の数歯の対照歯から D/するアミノ酸としては理想的であると言われる 43）。日本

L 比を求め，事前に年齢算出式を作成するのが理想であでも Ogino ら

が，象牙質中のアスパラる。しかしアミノ酸分析に使用するＧＣの分析条件は，，Ohtani ら

44）

45）

ギン酸のラセミ化反応を用いた年齢推定法を発表してい毎回微妙に違うことから同様の直線を求めることは困難る。 報 告 者 に よ り 多 少 成 績 は 異 な る が， そ の な か でとなる。したがって精度を求めるには，その都度同じ条

Ohtani ら

件で対照歯の D/L 比を求め，年齢推定算出式を作成するは，かなり精度の高い推定結果（実年齢± 346）ことが必要であり，そのために形成時期の同じ資料歯と歳）を報告している。

同一の歯種を用意しなければならない，という制限も出試料として歯の象牙質が用いられる理由としては，アFig. 4 計測部位と年齢推定のための重回帰式（下顎小臼歯による）Micro-CT を用いて保存された Raw Data は，スライス画像として再構成後，必要な部分をバイナリー画像としてされる。この画像をもとに三次元画像構築ソフトを用いて Voxel データとした。三次元画像上で年齢推定のためのパラメータを設定し（上図左），歯および歯髄腔の体積値を測定した。歯の歯髄腔体積比（PTVR）を指標とした重回帰分析を行なった。その結果，実年齢と推定年齢との係数は，第一小臼歯で 0.66，
第二小臼歯で 0.70 の精度であった。

75

日大歯学

てくる。

第 95 巻第 2 号

が，ある殺人事件における個人識別事例において 14C 分

この方法は，他の形態学的変化を指標とした年齢推定

析とアスパラギン酸のラセミ化反応による分析を同時に法に較べ，化学的変化に注目し，客観的で安定した結果行い，前者からは誕生年を，また後者からは死亡時年齢が得られ，しかも推定誤差は小さく優れた推定法ではあを推定して死亡時期を特定し，身元につながる重要な捜るが，それを実現するには，普段から継続的に資料収集・査情報を提供できたという。

保管する手間と高度の分析技術が必要となる。

骨や歯の形態学的評価では，たとえ死亡時の年齢が絞2）放射性炭素 14： Cれたとしても，具体的な死亡時期は不明である。 14C 分

142005 年，Spalding ら析による年齢推定については，大気中の 14C レベルがバッは歯のエナメル質中の C 濃

50）

14

度を利用した年齢推定法を発表した。

クグラウンドまで低下すると，死亡時期を特定するのは大気中の 14C 濃度は，1955 年までは比較的一定で安定困難になってくるのではという指摘もあるが，いまのとしていたが，1963 年にかけて世界中で行われた大気圏内

ころ他の年齢推定法との併用により，推定誤差が± 2 年

核実験により生成された中性子が大気中に放出され，核以内まで誕生年を絞れるという結果は特筆に値する。
3）エピジェネティックス

反応により 14C が急増した。この 14C 濃度は，部分的核実験停止条約が発効した 1963 年にはピークに達し，そエピジェネティックスとは，ゲノム上の塩基配列の変れ以降は急激に減少してきている。産生された核実験由化を伴わずに遺伝子発現を制御することで細胞個性を決来の 14C は大気中で酸素と反応し，放射性を有する CO 2定する仕組みである。代表的なものとして，DNA のメを産生する。その放射性 CO2 は世界規模で光合成によりチル化，ヒストン修飾，microRNA などが挙げられる。

植物に取り込まれ，その植物を動物が食べ，食物連鎖をDNA のメチル化は，脊椎動物のゲノムにおける唯一

通じて人体へ取り込まれる。この 14C の体内濃度は個体の生理的な修飾である。特に，転写開始点上流のプロモーが生存している間，大気中の 14C 濃度を反映する。

ター領域に存在する CpG アイランド（シトシンとグアニ

エナメル質は，形成完了後は改造されないため，エナンが隣り合って並んでいる CpG 配列の出現頻度が高い

メル質中の C 濃度は形成中に取り込まれた時期の大気領域）で，加齢に伴いそのメチル化の程度が亢進するこ

14

中の C 濃度をそのまま反映する。そこで，エナメル質とが知られている。メチル化反応は DNA メチル化酵素

中の 14C 濃度と，歯種ごとのエナメル質形成時期の情報

によって，CpG 配列のシトシン（C）にメチル基（-CH3）が14

をもとに，既に発表されている過去の大気中 C 濃度の付加されると，下流の遺伝子発現が抑制される。DNA

データを比較することで，資料の誕生年が推定可能となのメチル化は遺伝子および細胞の種類により出現頻度やる。この手法は，エナメル質の形成完了時期が最も遅い

時期が異なり，加齢に伴う老化促進や病的老化の指標と第三大臼歯を資料とした場合（およそ 12 歳），1955 年時して注目され，CpG アイランドのメチル化の程度が主な点で 12 歳以降，すなわち 1943 年以降に生まれた個人に分 析 の タ ー ゲ ッ ト と な っ て い る 52）。 例 え ば，2013 年

対してのみ適用可能となる。もっとも第三大臼歯のエナ

Hannum ら 53）は，イルミナ社の BeadChip を用いて 45

メル質の 14C 濃度が 0 であれば，その個人は 1944 年以前

万か所以上の CpG マーカーの中から選択した 71 か所のに誕生していた，という事実もまた明らかとなり，これシトシンのメチル化状態を血液試料で解析し，年齢の予だけでも法医学的には有用な情報となり得る。Spalding

測 モ デ ル を 構 築 し て い る。 ま た 2015 年 に は Zbieć-

ら 50）の研究においては，歯のサンプルはスウェーデンのPiekarska ら 54）は， パ イ ロ シ ー ク エ ン ス 法 に よ り，

カロリンスカ研究所で収集され，14C 濃度は米国カリフォ

ELOVL2 や FHL2 のプロモーター領域に位置するメチル

ルニア，ローレンス・リバモアー国立研究所の加速器質化レベルが，法医学的な年齢推定に有効であることを報

量分析装置（AMS）を用いて 14C の原子の数として直接計

告 し て い る。 日 本 で は 2016 年 か ら 2017 年 に か け て測されている。この AMS は日本でも考古学，地質学，

Hamano ら 55）が，パイロシークエンス法に較べ，より簡

生物医学などの分野で利用されているが，非常に高価な単で迅速かつコストパフォーマンスに優れたメチル化感

大型分析機器で高精度に微量の同位体元素試料の測定が受性高精度融解分析（MS-HRM）を用い，生体および死体可能である。しかし機器が設置されている研究施設は少の血液，ならびに唾液由来の DNA におけるプロモーター

なく，ＡＭＳ分析を専門に請け負う会社も存在するもの

領域（ELOVL2，FHL2）のメチルレベルが年齢推定に有の，分析費用，分析期間を考えると残念ながら頻繁に利効であることを発表した。その年齢予測モデルの誤差平

用できる分析法とは言えない現状にある。法医学の分野

均は 7.7 歳であった。

14

では，Spalding が 2004 年 12 月に発生したインド洋津波

そこで当講座でも 2 年前から，法医鑑定資料として原によるスウェーデン人被害者 6 名の歯の分析を依頼さ

型保存性に優れている歯から DNA を抽出し，リアルタ

れ，1.6 年以下の誤差で年齢を推定できたという。また

イムメチル化特異的 PCR 法（MSP）を用いて，暦年齢と2009 年には Spalding らと同じ研究グループの Alkass ら 51）

DNA の メ チ ル 化 率 と の 関 連 性 に つ い て 検 討 し て い る76

硬組織による年齢推定の実際と最近の動向（Fig. 5）。

令和 3 年 12 月

おわりにゲ ノ ム DNA の メ チ ル 化 状 態（ メ チ ル 化 し て い る［mC］，またはメチル化していない［C］）は，単に DNA

歯の生物学的な年齢には個人差がある。しかし若年期を抽出しただけでは判断することができない。DNA をにおける成長発育は遺伝学的なプログラムに沿って進行

バイサルファイト処理すると，非メチル化シトシン（C）

するため，その指標により推定された生物学的年齢は暦をウラシル（U）に変換される。これにより，メチル化状

年齢との相関性が高い。しかし，成人期以降は外的な様々態（mC または C）を塩基の違い（C または U）に置換するな要因により，個体の生物学的な年齢と暦年齢は解離し，ことで，メチル化状態の解析が可能になる。MSP は，こその程度には個人差が生じる。すなわちその時期の個体のバイサルファイト処理後の DNA（メチル化 DNA およの推定には，性別，生活環境，経済状態，時代背景など，

び非メチル化 DNA）を鋳型として，各々の配列に特異的

様々な要因が関わってくる。したがって，成人期以降のなプライマーを作製して PCR を行い，その増幅の起こ時期における形態的な特徴を指標とする推定法の精度る状態から DNA のメチル化状態を判定（定量）する手法

は，せいぜい± 10 歳程度である。実際の鑑定においてである。

は出来る限り多くの検査を実施し，推定された年齢域がこれまで ELOVL2 のプロモーター領域に対して MSP

多く重なる部分をその年齢とするしかない。その際に重用プライマーを設計し，抜去歯 29 例の歯由来の DNA に要となるのが，検査法の選択である。当然，使用する推対して MSP を行い，そのメチル化率を算出した結果，定法の作成時の条件や背景，すなわち対象資料の帰属集

暦年齢と DNA メチル化率の正の相関が観察され，単回団，資料数や年齢構成，推定精度などは，事前に把握し帰式による年齢推定の精度は 8.9 歳であったておく必要がある。

。この結

56）

果は先行研究の精度にはわずかに及ばないが，ELOVL2

世界的にみると，法医学的な年齢推定に特化したワー以外で暦年齢と相関が高い遺伝子内の別の CpG 部位をクショップも毎年開催されている。そうした機会を利用検索し改良を加えることで，更なる推定精度の向上が期

し訓練を継続することも大切ではあるが，歯科臨床など待できる。

で年齢既知の歯を肉眼的に観察できる機会を利用し，普段から意識して観察力を涵養することも大事であろう。

ま た 今 後，DNA メ チ ル 化 を 中 心 と す る エ ピ ジ ェ ネ

本総説に関して，開示すべき利益相反はない。

ティックスは，エイジングに限らず，ストレスによる様々な生命現象を客観的に証明できるツールとして，将来，法医実務にも応用される可能性を秘めている。

稿を終えるに際し，これまでご支援，ご協力をいただいた日本
大学歯学部法医学講座医局員，法医学講座駿法会の会員の先生方ならびに研究へのご助言，ご協力をいただいたすべての方々に深く感謝申し上げます。

Fig. 5 C pG アイランド内でのシトシンのメチル化率 (PMR) と暦年齢との相関
A 遺伝子転写開始点の上流に存在する CpG アイランドのメチル化は，一般的に低い状
態に抑えられている。加齢に伴い，一部の遺伝子（ここでは遺伝子 3）の上流の CpG ア
イランドでシトシン残基のメチル化が徐々に上昇していく。
B ELOVL2 の上流の CpG アイランド内における PMR と暦年齢との間には，強い正の相関が認められる（R2 ＝ 0.71，Kondo ら 56），2020）。

77

日大歯学

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