日大歯学 , Nihon Univ Dent J, 89, 63-70, 2015

ラットの歯肉への LPS 接種が IL-6 と TNF-α 産生性に及ぼす影響―

微小透析法を用いた解析―
田

口

寛

子

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻（指導：清水典佳 教授，浅野正岳 准教授，川戸貴行 准教授）

要旨：Urethane 全身麻酔下のラットを用い，由来の LPS（ -LPS）の上顎切歯歯肉への接種が，同部位の IL-6 と TNF- α 産生性に及ぼす影響を微小透析法により解析した。 -LPS と異なり
Toll-like receptor（TLR）2 よりも TLR4 を選択的に刺激する由来の LPS（ -LPS）の接種実験も行った。 -LPS（1μg）と-LPS（1 および 6μg）は試料回収用透析膜の表面に据え付けたニードルより歯肉へ接種
し，同部位の細胞外液をこの透析膜を介して試料として 1 時間ごとに回収した。ELISA の結果，LPS 接種前の試料で IL-6 は約 372 pg/ml 検出されたが，TNF- α は検出限界以下だった。 -LPS 接種では IL-6 産生性に変化はな
かったが TNF-α は 2 時間にわたり増加した。 -LPS 接種では IL-6 と TNF-α 産生性に影響はなかった。RT-PCRと免疫組織化学染色法により，歯肉での TLR2 と TLR4 の mRNA 発現とこれらの受容体が歯肉上皮細胞に分布することが示された。
以上の結果から-LPS の歯肉への接種は，IL-6 産生性に影響を与えずに TNF- α を一過性に増加させ，また，
この-LPS による TNF-α の増加は歯肉上皮細胞の TLR2 を介する可能性が示唆された。
微小透析法，lipopolysaccharide，歯周組織，IL-6，TNF-α

キーワード：

緒

炎症性細胞の遊走および破骨細胞の形成に関与すること

言から歯周病発症を促進する役割を果たすと考えられてい矯正装置の口腔内への装着に伴う自浄性の低下およびる 13,14）。TNF-α も歯槽骨の吸収や歯肉上皮の結合組織性

不潔域の増加は，歯周疾患を進展させる誘因のひとつで付 着 の 喪 失 を 起 こ す こ と が 知 ら れ て お り 13,15）， さ ら に

ある

1,2）

IL-1βおよび IL-6 といった炎症促進性サイトカインの産。歯周病では歯周組織の破壊を起こす慢性の炎症
3）

生 も 亢 進 さ せ る こ と が 報 告 さ れ て い る 13,16-18）。 一 方 でが見られ ，その発症にはグラム陰性菌の感染の関与が4）示唆されている 。グラム陰性菌の細胞壁の構成成分でTNF- α は，感染や炎症を起こしている部位への食細胞ある lipopolysaccharide（LPS）は，歯周組織における炎症の遊走を促進させることで歯周病の進行を抑制することの惹起とこれに伴う組織破壊において重要な役割を担うも示されており 12），歯周病の発症を促進させるだけでなことが実験動物を用いた基礎研究から指摘されており 5），

く抑制する可能性も考えられる。

口蓋歯肉への（

これまでの実験動物を用いた研究の結果，）由来の LPS の反

由来

-LPS）
の歯肉への反復接種 6），

復接種は接種部位での持続的な炎症性細胞浸潤と，結合

の LPS
（

組織成分の分解に関与するマトリックスメタロプロテ

由来の LPS の歯肉への単回接種 8）のいずれにおいても接

ア ー ゼ -13 の 発 現 を 誘 発 す る（

6,7）

種後少なくとも 5 〜 7 日が経過してから歯周組織の破壊が）由来の LPS の歯肉への観察されている。しかしながら。 ま た，と接種は，炎症性細胞浸潤，付着上皮の退縮，歯槽骨吸収はいずれも一般に歯周病原菌として報告されておらず，および破骨細胞の活性化を伴う歯周組織の炎症を惹き起LPS の歯肉への接種が同部位における炎症性サイトカイ

こす 8）。歯肉への LPS 接種は，接種部位において炎症のンに及ぼす影響については明らかでない。グラム陰性嫌ケミカルメディエーターを増加させることが推察される。

気性桿菌の

（

）は

歯周病においてインターロイキン（IL）や腫瘍壊死因子

歯周病の進行に関わる病原菌のひとつであり 4），その細（TNF）をはじめとする炎症性サイトカインは，歯周組織

胞壁には LPS が含まれている 19,20）。そこで本研究ではの破壊を促進する 9-11）。特に，IL-6 と TNF-α は微生物刺

urethane 全身麻酔下のラットを用いて，激により産生が促される炎症性サイトカインであり，歯来 の LPS（

周病の発症に関与している 12）。IL-6 は，歯周病におけるIL-6 および TNF- α 産生に及ぼす影響について（受付：平成 27 年 1 月 21 日）〒 101 8310 東京都千代田区神田駿河台 1 8 13

63

由-LPS）の 歯 肉 へ の 接 種 が 同 部 位 に お け る微小透析法により解析した。

ンタル酵母工業）と水道水を自由に摂取させた。

微小透析法は同一個体の脳内や末梢組織の特定の部位から透析膜を通して実験は日本大学歯学部動物実験委員会の承認の下（承細胞外液を試料として継続的に回収することができ

認番号 AP12D003），動物実験指針に従って行い，実験る 21,22）。したがって本法は生体から切除しホモジナイズ

動物の苦痛軽減および使用動物数の低減に努めた。

された組織を試料とする方法とは異なり，LPS の接種直

2.

微小透析法
透析実験には，4.5 mm の柄部の先端に膜長 2 mm，直後の細胞外サイトカイン量の変化を観察するうえで有用

径 440μm，カットオフ分子量 1,000 kDa のポリエチレンである。
微小透析法を用いた研究は製微小透析膜と，その隣に薬物局所投与用ニードルを備

なく，著者は歯肉組織の細胞外液に含まれる IL-6 およびえた市販の直管型透析プローブ（PEMI-4.5-02; EICOM）

TNF- α の回収に応用できるのではないかと考えた。本を用いた。薬物局所投与用ニードル（フューズドシリカ

研究では，-LPS の歯肉内接種が同部位における IL-6

製，外径 150μm，内径 75μm）の先端は，このプローブ

歯周組織においておよび TNF- α 量に及ぼす影響について解析する目的で，の微小透析膜の表面中央部から 40μm の直上に位置する

透析膜の表面に薬物局所投与用微小ニードルを備えた透

よ う 設 定 し た。 透 析 プ ロ ー ブ は ポ リ エ チ レ ン 膜 を

析 プ ロ ー ブ を 使 用 し た。 一 方， こ れ ま で にethanol に 3 秒浸漬したのち歯肉へ植立した（第 1 図）。

-LPS と-LPS とでは歯肉の上皮細胞 23）および線維芽細胞 19,20），
24）

ラ ッ ト は urethane（Sigma-Aldrich）に て 全 身 麻 酔

19）に お け る IL-6 や（1.5 g/kg，i.p）したのち，ヒートパッド上で実験中の体TNF- α を含む炎症性サイトカインの発現に及ぼす影響

温を 36℃に保った。麻酔深度は角膜反射の有無および後が異なることが

歯根膜細胞，マクロファージ

で示されている。また，それら肢への侵害刺激からの回避行動を観察することで評価しの 発 現 に は LPS の Toll-like receptor（TLR）2 お よ び

た。ラットの上顎右側切歯遠心部の歯肉に 2％ lidocaine

25,26）。

（AstraZeneca）による表面麻酔を施し，同部位に手指でTLR4 への関与が重要であることが報告されている-LPS の影響と比較する目的

微小透析プローブのポリエチレン膜を挿入した。プロー-LPS が歯肉の IL-6 および TNF- α 産生性に及ぼす

ブの先端は歯肉表面からおよそ 3 mm 下方に位置させ，影響についても検討を加えた。さらに，これら LPS の

2 mm の微小透析膜の全体を歯肉組織内に留置したのち，receptor として働く TLR2 および TLR4 の歯肉におけるこのプローブの柄部を切歯に歯科用常温重合レジンで固mRNA 発現の有無，免疫組織化学によりこれら receptor

定した。この透析プローブの inlet と outlet にフッ化エの歯周組織における局在についても解析を行った。

チレンプロピレン（FEP）チューブ（内径 250μm）を接続

そこで，本研究では，でし，0.15％ bovine serum albumin（BSA）を含む改良リ材料および方法
1.

ン ゲ ル 液（NaCl 147 mM，KCl 4 mM，CaCl2 2.3 mM，MgCl2 155.6 mM; pH7.4）を push pump（EP-60; EICOM）

実験動物
体 重 約 300 〜 350 g の Sprague-Dawley（SD）系 雄 性に取りつけたマイクロシリンジで，pull pump（ERP-10;

ラット（高杉実験動物）を用いた。飼育は，恒温恒湿（23 ±EICOM）を同時に稼働させて灌流した。これらの push

2℃，55±5％），午前 7 時点灯，12 時間明暗サイクルのpump と pull pump を同時に用いることで流速 1-10μl/

飼育室で行い，ラット・マウス用 MF 固形飼料（オリエmin で改良リンゲル液を透析プローブへ灌流させ，FEP

第1図

微小透析法の概要
a：微小透析実験装置
b：微小透析プローブ64

微小透析法と歯肉組織

チューブにて透析液を試料として回収し，温度調節機能

期 温 度 95℃ 3 分，95℃ 30 秒，60℃ 30 秒，72℃ 30 秒

付きの fraction collector（EFC-82; EICOM）に蓄えた。

を 40 サイクルで反応させた。PCR 産物を 2％ agarose

プローブへの改良リンゲル液の灌流速度は，実験条件をgel で電気泳動し，ethidium bromide 染色を行った。

安定させるため灌流開始 3 時間を 10μl/min としたのち，

6.

免疫組織化学染色
ラットを urethane で全身麻酔（1.5 g/kg，i.p.）した後，1μl/min に設定し 60 分毎に 6 時間にわたり灌流液を試

未接種ラット及び料として回収した。試料はポリプロピレンチューブへ回-LPS， -LPS 接種ラット（各 n ＝ 1）

収し，4℃で保管した。

は 接 種 2 時 間 後 に， 生 理 食 塩 水 と 0.1 M リ ン 酸 緩 衝 液

3.

（pH7.4）に 4％ paraformaldehyde を含んだ固定液にて灌LPS の歯肉への接種
LPS は-LPS（055:B5; Sigma-Aldrich，た。

-LPS） と流固定した。中性緩衝ホルマリンによる固定後，上顎切-LPS）を使用し

歯 を 含 む 周 囲 組 織 を 一 塊 と し て 採 取 し，10%-LPS（InvivoGen,-LPS はこれまでの報告をもとに選択した 6,27）。

ethylenediamine tetraacetic acid-5% 塩酸（K-CX;-LPS を含む注射用滅菌水 1μl はマイ

FALMA）にて 1 週間脱灰した後，パラフィンに包埋しクロシリンジ（Hamilton）により薬物投与用ニードルを介た。歯軸に垂直な面での厚さ 4μm の切片を作製し脱パ

して 30 秒かけて歯肉内に接種した。対照群には溶媒でラフィン処理後，HE 染色標本を作製した。免疫染色では，ある注射用滅菌水を注入した。マイクロシリンジは，注

脱パラフィン後の切片を同様に処理し，再水和後に，室入 液 の 逆 流 を 防 ぐ た め LPS を 接 種 終 了 後 も 30 秒 間 は

温で 20 分間，0.3% 過酸化水素水を作用させて内因性ペニードルと接続したままにした 28）。注入液の容積を 1μl

ルオキシダーゼを不活化し，続いて，10 mM のクエン酸-LPS または8）としたのは，Dumitescu ら（2004）の報告 に基づき LPS

緩衝液（pH6.0）に浸漬して 20 分間煮沸することで抗原のが作用する範囲を最小限にとどめるためである。

-LPS

賦活化を行った。さらに，非特異的反応部位をブロッキ-LPS（1 および 6μg）の接種量は製造者の指示

ングするため，切片を 1% BSA 含有トリス緩衝液（TBS）（1μg）と-LPS ではに 室 温 で 1 時 間 浸 漬 し た。 一 次 抗 体 と し た 抗 ラ ッ ト

6μg/1μl をそれぞれ超える高濃度は，非特異的作用を避TLR2 抗体および抗ラット TLR4 抗体（Santa Cruz）は，を参考に設定した。

-LPS では 1μg/1μl，けるため歯肉への接種に使用しなかった。

いずれも 1% BSA-TBS で 100 倍希釈し，それぞれ切片

4.

に室温で 1 時間反応させた。1% BSA-TBS と反応させた

Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）
歯 肉 か ら 試 料 と し て 得 た 透 析 液 に お け る IL-6 と切片をコントロールとした。その後，切片は，1% BSA-

TNF- α 量 は 市 販 の ELISA kit（rat IL-6 お よ び rat

TBS で 500 倍希釈した horseradish peroxidase 標識のTNF- α ; R&D Systems）を用い，製造者の指示に基づい抗ウサギ IgG 抗体（Jackson lmmunoResearch）と室温でて定量した。透析液はポリプロピレンチューブに回収し

1 時 間 反 応 さ せ， 水 洗 後 に，diaminobenzidine 溶 液

た の ち た だ ち に 4℃ で 貯 蔵 し， 回 収 後 24 時 間 以 内 に（Sigma-Aldrich）中で 7 分間発色させて反応部位の検出

ELISA による解析を行った。試料の希釈は全て灌流に用を行った。Hematoxylin で核染色を施した免疫染色標本

いた改良リンゲル液で行った。

の顕鏡と撮影は，Leica DM5500B 光学顕微鏡（Leica）で

5.

行った。

Revers transcription polymerasechain reaction

7.

（RT-PCR）

統計解析

微小透析実験と同様にラット（n ＝ 1）を urethane で全経時データ（0-4 時間）の比較は二元配置分散分析（two-

身麻酔（1.5 g/kg，i.p.）した後，上顎右側切歯の歯肉に 2％

way AVOVA）を 使 用 し て 行 い，post hoc 検 定 と し て

lidocaine による表面麻酔を行った。上顎右側切歯遠心部のSchefféʼs test を行った。有意水準はいずれも

歯肉（約 2 mm×2 mm×2 mm）を採取し，RNase-free 条件下とした。

で，RNA stabilization reagent（RNA later; Ambion）
中に

結

移した。
Total RNA の抽出には RNeasy mini kit（QIAGEN）を用いた。cDNA の合成には random hexamers を使用し，1.

Superscript Ⅲ reverse transcriptase（Invitrogen）
を用いて行った。PCR 反 応は

＜ 0.05

果LPS の接種が IL-6 および TNF-α 産生性に及ぼす影響
歯肉から得た透析液には IL-6 が約 372 pg/ml 含まれていたが，TNF- α は本測定に用いた ELISA kit の検出限

（TaKaRa）を用いて，次のTLR2，TLR4 の PCR プライマーを用いて行った。TLR2，界（5 pg/ml）以下であった。

5 ' - G G C C A C A G G A C T C A A G A G C A - 3（
' f o r w a r d）

肉への接種は，歯肉から得た IL-6 量に対していずれも目5'-AGAGGCC-TATCACAGCCATCAAG-C-3'（reverse）

立った影響を与えなかった（第 2 図）。

TLR4，5'-CTCACAACTTCAGT-GGCTGGATTTA-3'-LPS または-LPS の歯-LPS の接種の結果，接種直後から 2 時間にわたる
TNF-α の増加が誘発された（第 3 図）。

（forward）5'-GTCTCCACAGCCACCAGATTCTC-3（reverse）。My Cycler（Bio-Rad）にて，反応条件は，初

一方，

65

-LPS 接種では TNF-α に影響は見られなかった（第 3 図 a, b）。Schefféʼs test の結果，溶媒処置群とがみられたことから，LPS 接種 2 時間後の歯肉を組織学-LPS 接種群の間に有意差が認められた（ ＜ 0.05）。
2.

的に検索した。その結果，-LPS と-LPS の歯肉内接

LPS の歯肉内接種が歯肉組織に及ぼす影響

種はリンパ球浸潤などの炎症性反応を誘発しないことが-LPS の接種後 1-2 時間で一過性に TNF- α 量の増加示された（第 4 図）。

第2図-LPS または-LPS の歯肉への接種が同部位の IL-6 に及ぼす影響
LPS 接種前 2 回（−1，0 の時点）の平均を 100％とし，それに対する各時点の IL-6 測定値を百分率で示した。データは平均値と標準誤差（S.E.M.）で示した。矢印は LPS 接種を示す。two-way ANOVA，treatment: （3，54）＝ 0.3， ＝ 0.8

第3図-LPS または-LPS の歯肉への接種が同部位の TNF-α に及ぼす影響
a： -LPS の歯肉への接種による TNF-α の一過性の増加（n ＝ 5）。データは平均値と標準誤差（S.E.M.）で示した。TNF-α は，基礎値が ELISA の検出限界以下だったため，歯肉からの透析液中の絶対量で示した（pg/ml）。矢印は LPS 接種を示す。two-way ANOVA，
treatment： （3, 54）＝ 6.2， ＜ 0.05
b： -LPS の歯肉への接種による TNF-α の最大増加
データは平均値と標準誤差（S.E.M.）で示した。これらの最大増加は-LPS 接種後 1 から 2 時間後の時点に認められた（ ＝ 5）。

第4図

上顎切歯部歯肉の-LPS および-LPS 接種後の HE 染色-LPS（a）と-LPS（b）いずれも 1μg 接種 2 時間後の像で，炎症性細胞浸潤は認められなかった。c は LPS 非接種のコントロール像である。すべて同倍率で，図中の bar は 100μm。

66

微小透析法と歯肉組織

3.

発現は認められなかった。Selleri らが報告 29）した通り，

TLR2 と TLR4 の mRNA の発現
LPS 受容体である TLR2 および TLR4 のラット上顎切

TLR2 および TLR4 は毛包細胞に，そして TLR4 は筋細歯の歯肉組織における発現を RT-PCR によって検索し胞でも認められた（データは示していない）。

た。 そ の 結 果，TLR2 と TLR4 は， そ れ ぞ れ 105 bp，考

177 bp の単一のバンドとして検出された（第 5 図）。
4.

TLR2 と TLR4 の免疫組織化学

察

本研究では urethane による全身麻酔を施したラット

TLR2 は上顎切歯部の粘膜上皮である重層扁平上皮，を用い

主に基底細胞と有棘細胞に明瞭に発現がみられ，また，への一部の歯根膜細胞にも発現がみられた（第 6 図 a-c）。一び TNF- α 量に及ぼす影響について解析を行った。微小方，TLR4 は，粘膜上皮層の基底細胞と有棘細胞で発現

透析プローブを歯肉内に挿入し半透膜を介して回収したが認められたが , 歯根膜細胞では観察されなかった（第 6細 胞 外 液 か ら 得 た 透 析 液 中 の IL-6，TNF- α 量 は，

図 d-f）。なお，TLR2 も TLR4 も，歯肉線維芽細胞での

ELISA 法で定量した。その結果，歯肉から得た透析液に微小透析法により，切歯遠心部の歯肉内-LPS または-LPS の接種が同部位の IL-6 およは IL-6 が お よ そ 372 pg/ml 含 ま れ て い た の に 対 し，
TNF- α は 本 研 究 で 用 い た ELISA 法 の 検 出 限 界（5 pg/ml）以下であった。動物実験に用いる全身麻酔薬
は，基本的な免疫応答に対してわずかながら影響を及ぼす可能性が考えられる。本研究で用いた urethane の場合，ラットの脾臓において IL-6 の mRNA を増加させ，
TNF- α を減少させることが示されている 30）。したがって， 本 研 究 で 回 収 し た 歯 肉 透 析 液 中 の IL-6 お よ び
TNF- α 量が urethane 処置の影響を受けた可能性についても考慮する必要がある。
第5図

本研究から

歯肉における TLR2 および TLR4 の mRNA 発現
歯肉組織より抽出した total RNA を用いて cDNA を作製
し た。TLR2 お よ び TLR4 特 異 的 プ ラ イ マ ー を 用 い て
RT-PCR を行った。※ primer dimer-LPS の 歯 肉 内 接 種 は 同 部 位 に お い て

IL-6 量に目立った影響を及ぼさないものの，TNF- α 量は一過性に増加させることが示された。この結果はラットの足蹠への-LPS の接種が接種部位の TNF- α を一過性に増加させたとする報告と一致するものであった 31）。一方，-LPS とは異なり-LPS の歯肉内接種

は歯肉透析液中に含まれる IL-6，TNF- α のいずれの量にも影響を及ぼさなかった。

-LPS の作用機序としては，1）TLR2 の活性化が TLR4 よりも優位である 25），2）
TLR2 と TLR4 の 両 方 ま た は 一 方 を 活 性 化 す る 32），3）
TLR2 ではなく TLR4 を活性化する 33）ことがそれぞれの研究から示唆されている。これに対し-LPS は-LPSと比べて TLR4 を選択的に刺激することが知られている 21）。本研究では，微小透析を行った領域である上顎右側切歯遠心部歯肉において TLR2 および TLR4 の両方のmRNA が検出できた。さらに免疫組織化学的解析の結果，この領域の歯肉において，線維芽細胞ではなく上皮細胞に TLR2 および TLR4 タンパクが発現していることが明らかになった。前述の通り，-LPS は TLR2 のみ

ならず TLR4 にも作用する可能性が示唆されている。本
第6図

実験条件下においては，歯肉上皮細胞に局在が確認され

上顎切歯部歯周組織における TLR2 と TLR4 の免疫組織
化学
抗 TLR2 抗体（a，b）と抗 TLR4 抗体（d，e）による免疫染
色像で，hematoxylin による核染色を施している。それぞ
れ c と f は抗体との反応を省略したコントロール染色像である。すべて同倍率で f 中の bar は 100μm。
a，d：粘膜上皮層，b，e：歯根膜

た TLR2 への刺激が-LPS の誘発した TNF- α の増加に関与した可能性が推察された。
やヒト-LPS は，マウス 34）

35,36）

由来の歯肉上皮細胞において TNF- α の産生を誘発することが示されている。
-LPS による歯肉上皮細胞における TNF-α 産生の増

67

された。

加は，結合組織破壊および骨吸収の開始にそれぞれ相関
することが報告されている 37,38）。一方で TNF- α は，歯稿を終えるにあたり，懇切なるご指導およびご校閲を賜りました日本大学歯学部歯科矯正学講座の清水典佳教授に謹んで心より感謝申し上げます。
本研究をご指導下さいました日本大学松戸歯学部薬理学講座の三枝禎教授，日本大学歯学部病理学講座の浅野正岳准教授，衛生学講座の川戸貴行准教授に深く感謝申し上げます。また本研究の遂行を終始支援して下さいました日本大学松戸歯学部薬理学講座の青野悠里先生に深謝いたします。
最後に本研究にご協力を頂いた日本大学歯学部歯科矯正学講座の皆様に感謝いたします。

周病の発症において促進と抑制の両方に働く可能性があることが知られており 12），本研究で-LPS 接種が誘発した TNF- α の一過性の増加が歯周病発症の面で上記のいずれの役割を果たしているかは明らかでない。しかし，
本研究は，-LPS の歯肉内接種が少なくとも炎症性サ

イトカインの IL-6 量に目立った変化は起こさず，接種部位の歯肉の炎症性細胞浸潤も誘発しないとの結果を得た。また，-LPS のラットの歯肉への反復接種が接種開始から 5 日目で接種部位に炎症性細胞浸潤を引き起こすという報告とは異なり 6），本実験で行った-LPS の本研究の一部は，平成 24，25 年度大学院歯学研究科研究費（学生分，田口寛子）および平成 26 年度日本大学歯学部佐藤研究費の助成により行われた。

単回接種では接種部位に炎症性細胞浸潤は認められなかった。これらのことから 1）炎症性細胞浸潤を伴う歯肉の炎症は，-LPS または-LPS の歯肉への接種後，た文

だちには誘発されないうえに，2）歯肉組織に実験的炎症

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性変化を誘発するには，歯肉が継続的に LPS へ曝される必要があることが示された。この点で興味深いことにラットの歯肉への由来の LPS の場合，歯肉へ単回接種しただけで接種 7 日から 10 日後には炎症性細胞浸潤，付着上皮の根尖方向への移動，歯槽骨吸収および破骨細胞の活性化をいずれも伴う強い歯周炎様の症状を誘発することが報告されている 8）。これらの研究結果は，LPS の示す炎症性細胞浸潤を伴う歯肉炎を誘発する作用が細菌種によって異なることを示唆するものである。本研究においても，-LPS と-LPS はいずれも少なくとも接種 2 時間後は接種部位の歯肉で炎症性細胞浸潤を惹き起さなかったが，同部位の細胞外液中のTNF-α 量に対する影響が異なることが示された。
本報告は，脳内や末梢組織の細胞外液に含まれる生理活性物質の測定に用いられる

微小透析法により，炎症関連分子の IL-6 および TNF- α 量の動態をラットの歯肉において経時的に捉えることができることを明らかにしたもので，歯周疾患の病態解明と治療に関する基礎研究の発展に寄与することが期待できる。

結論

本 研 究 は urethane 全 身 麻 酔 下 の ラ ッ ト を 用 い，-LPS の 歯 肉 へ の 局 所 接 種 が 同 部 位 の IL-6 お よ び
TNF-α 量に及ぼす影響について

微小透析法により検討を行った。
その結果，以下の結論を得た。
1．

-LPS は-LPS とは異なり，歯肉内への単回接種

では，TNF- α を一過性に増加させたが，IL-6 産生
性には影響を与えないことがの条件下で示された。
2．

献-LPS による歯肉の TNF-α の一過性の増加は，歯肉上皮細胞に発現した TLR2 を介する可能性が示唆

68

微小透析法と歯肉組織

11）Maeno M, Tanaka H, Zhang F, Kitami S, Nakai K,
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