第 71 回 日 本 大 学 歯 学 会 総 会 ・ 学 術 大 会〔 抄 録 〕
期日

令和元年 5 月 19 日（日）会場

日本大学歯学部

大講堂

データをもとに，健康寿命の延伸に役立つ口腔保健に関する最新《特別講演》

情報と，これらが身体あるいは精神的な健康状態とどのような関超高齢社会を迎え，いま何が補綴歯科医療に求められているか－超高齢者疫学調査から得られたデータを基に－歯科治療が高齢者の全身管理にいかに重要な役割を担っているか

連性を持つかについて解説し，これからの歯科医療，とくに補綴について述べたい。

《一般講演》
飯沼利光

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅰ講座

1．眼窩下神経損傷後の口髭部機械痛覚過敏に対する損傷部オキシトシン投与の効果

現在，日本は超高齢社会を迎え，2017 年の高齢者人口は 3514
万人，総人口に占める割合は 27.7％と共に過去最高となり，80 歳○安藤正敏 1，篠田雅路 3，岩田幸一 3，金子忠良 2，

以上人口も 1074 万人と報告されている。さらに，日本人の平均

外木守雄 2

寿命は男性が 81.0 歳，女性が 87.1 歳で過去最高を更新したにも日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 ¹

かかわらず，健康寿命は男性が 72.1 歳，女性が 74.8 歳（2016）と，

日本大学歯学部 口腔外科学講座 2

介護や病気で自立して過ごせない期間が約 10 年間も存在する。

日本大学歯学部 生理学講座 3

そのため，高齢者や超高齢者（85 歳以上）を要介護とさせない環境づくり，あるいは社会の超高齢化に応じた新たな価値観の創造とオキシトシンは侵害受容ニューロンの興奮性を調節し，異常疼

社会システムの構築が急務であると考える。この問題は，口腔機痛発症に関与することが知られている。本研究では，眼窩下神経

能の健康維持を担う私たち歯科医師においても重要な課題と捉え損傷後の口髭部機械痛覚過敏に対する損傷部へのオキシトシン投ると同時に，これに資する研究者や歯科医師の育成が私たちには与の効果を検討した。

求められている。

深麻酔下にて，雄性 SD ラットの眼窩下神経束の 1/2 から 1/3

これまで高齢者が要介護となる原因疾患として，脳卒中や骨折を 6-0 絹糸にて結紮して眼窩下神経損傷モデルを作製し，同時にが知られているが，最近の疫学研究から，超高齢（85 歳以上）世代

眼窩下神経部分損傷部にオキシトシン（20μL，50 mg/mL）を含においてその原因は必ずしも疾患ではなく，むしろ加齢による「低有した MedGel ® を留置した。眼窩下神経損傷後，von Frey fila-

栄養・やせ」や「虚弱（フレイルティー）」に起因する部分が大きい

ment を用いて口髭部への機械刺激による逃避反射閾値を経日的ことが分かっている。そのため，口腔機能を維持し，豊かな食生に計測した。眼窩下神経損傷後に逆行性トレーサー（3% Fluoro

活の実現により栄養状態や QOL の向上を成し得ることは，健康Gold（FG））を口髭部に注入し，損傷後 5 日目に眼窩下神経損傷部

寿命の延伸にとても重要と考えられ，この対応として国も，65 歳

および FG 標識三叉神経節（TG）ニューロンにおけるオキシトシ

以上の高齢者を対象に口腔機能低下症への口腔機能管理を保険収

ン受容体，TRPV1，TRPV4 の発現を免疫組織学的に解析した。

載した。一方，高齢者の認知症による交通事故が近年数多く報道

損傷後 1 日目より，口髭部への機械刺激による逃避反射閾値がされている。そのため国は，超高齢世代に自動車免許書の自主返有意に低下した。オキシトシンの損傷部投与は，損傷後 5 日目よ納を呼び掛けているが，自動車が日常生活に深く溶け込んでいる

り逃避反射閾値の低下を抑制した。損傷後 5 日目，眼窩下神経損

現代社会では，その達成は不可能と思われる。これに関し，悪い傷部の非損傷神経線維および FG 標識 TG ニューロンにオキシトのは自動車の運転ではなく，超高齢者が，加齢による運動能力やシン受容体の発現を認めた。さらに，損傷後 5 日目の FG 標識

判断能力の低下を自覚，あるいは周囲が察知することなく，通常

TRPV1 及び TRPV4 陽性 TG ニューロン数の増加がオキシトシの社会生活を送っていることが原因との論評がある。これまで，

ンの損傷部投与により有意に抑制された。

この判断は医師に委ねられてきた。しかし，最近の研究から高齢

このことから，眼窩下神経損傷後のオキシトシン損傷部投与は，者の加齢による運動能力や，社会生活での判断能力低下の診断に損傷部投射 TRPV1 および TRPV4 陽性 TG ニューロン数の増加

口腔機能測定が有効であることが明らかとなっており，この活用を抑制することにより，口髭部機械痛覚過敏を抑制することが示のため歯科医師は積極的にこの普及にかかわるべきと感じてい

唆された。

る。
そこで今回のお話では，本講座研究チームがこれまで行ってきた超高齢者を対象とした「お口と身体の健康調査」から得た疫学

91

2．眼窩下神経結紮による神経障害性疼痛モデルラッ
トにおける三叉神経脊髄路核尾側亜核ミクログリ
アと IFN-g の関係○淺野早哉香

1,2,3

，岡田明子

1,2

3．舌癌性疼痛に対する Protease-activated receptor 2の関与〇赤坂竜太 1,2，篠田雅路 3，古川明彦 2，米原啓之 2，
岩田幸一 3，篠田雅路 ，岩田幸一 ，
3

3

今村佳樹 1,2

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野
日本大学歯学部 口腔診断学講座

日本大学歯学部臨床医学講座 21

日本大学歯学部生理学講座 32

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 生理学

目的

講座 3

近年，癌細胞から放出される様々な分子が癌性疼痛を調節していることが知られている。癌細胞から放出される Protease は癌目的
三叉神経傷害による持続的な痛みを持つ患者が多い一方で，メ浸潤に伴う組織破壊に関与し，Protease-activated receptor 2

カニズムの複雑さのために適切な診断や治療は困難である。近年，（PAR2）を介して癌性疼痛が調節されていると報告されている。

脊髄後角において，末梢神経障害によりミクログリアの活性化やまた，PAR2 シグナルは Transient receptor potential vanilloid

IFN- g 発現量の上昇を引き起こすことが報告されている。そこで4（TRPV4）を介して炎症性疼痛に関与しているとの報告がある

眼窩下神経障害モデルラットを用いて，口腔顔面領域における神が，舌癌性疼痛に対する Protease の役割は不明である。そこで，

経障害性疼痛への IFN-g の関与を調べることを目的とした。

本研究では，舌癌性疼痛に対する PAR2 および TRPV4 の役割を
検討した。

方法

材料及び方法ラ ッ ト の 左 側 眼 窩 下 神 経（infraorbital nerve）を 半 結 紮 し た
IONI ラットおよび眼窩下神経の剖出だけを行った sham ラット

F344 系雄性ラットの舌に扁平上皮癌（SCC）細胞を接種し，舌を作製した。神経結紮前と結紮 3，7，10，14，21 日目に両ラッ癌モデルラットを作製した。対照群として phosphate buffered

トの三叉神経第 2 枝領域（V2）に機械刺激を加え，逃避反射閾値

saline（PBS）を接種した。SCC 細胞接種後，浅麻酔下にて SCC 接（HWT）を測定した。また，神経結紮 3 日目の三叉神経脊髄路核種部への機械刺激に対する逃避反射閾値（MHWT）を経日的に計尾側亜核（Vc）において，ミクログリアのマーカーである Iba1，

測した。SCC 細胞接種後 7 日目，舌投射三叉神経節（TG）ニューIFN- g と IFN- g 受 容 体 の 陽 性 発 現 様 式 を 免 疫 組 織 学 的 手 法 とロンにおける PAR2 および TRPV4 の発現変化および舌トリプシ

Western blot 法を用いて，IONI ラットと sham ラットを比較検

ン量を免疫組織学的および Western blot 法により解析した。ま討した。さらに，3 日間，IFN-g ，IFN-g アンタゴニストまたはそた，TRPV4 陽性 TG ニューロンにおけるリン酸化 TRPV4 量をれぞれの vehicle をラットのくも膜下腔内に持続投与し，HWT

免疫沈降法にて定量した。また，SCC 細胞接種後 7 日目，PAR2の変化を調べた。

拮抗薬（FSLLRY-NH2）または TRPV4 拮抗薬（RN-1734）を舌に注

結果

射し，注射後 360 分まで MHWT を経時的に計測した。さらに，

IONI の HWT は，結紮 3，7，10，14 日目において有意に低下

舌へ FSLLRY-NH2 またはトリプシン阻害薬（STI）を連日投与し，
MHWT を経日的変化についても解析した。

したが，sham ラットでは変化しなかった。また，IONI ラットの成績及び考察Iba1 陽性発現は有意に増加し，Iba1 陽性細胞に IFN- g 受容体の陽性発現が認められた。IONI ラットの IFN- g 受容体陽性発現量

SCC 接種後 2 日目から 21 日目まで，MHWT は有意に低下しは神経結紮 3 日目に傷害前と比べて有意に増加したが，21 日目でた。SCC 細胞接種後 7 日目，舌投射 PAR2/TRPV4 陽性 TG ニューは有意差は見られなかった。IFN- g の持続投与により HWT の有

ロ ン 発 現 に 変 化 は 見 ら れ な か っ た が， 舌 ト リ プ シ ン 量 お よ び

意な低下が認められたが，vehicle 投与では変化しなかった。さTRPV4 陽性 TG ニューロンにおけるリン酸化 TRPV4 量が増加

らに，IFN- g アンタゴニスト投与により，HWT の低下は抑制さした。また，舌への FSLLRY-NH2 または RN-1734 注射は，SCCれた。

接種部による MHWT の低下を抑制した。さらに，SCC 細胞接種

考察

後の舌への FSLLRY-NH2 または STI 連日投与は，MHWT の低以上より，IFN- g は Vc 領域で活性化されたミクログリアから下を有意に抑制した。
以上の結果から，SCC 接種後に生じる舌の癌性疼痛には，舌投放出され，眼窩下神経障害により引き起こされる口腔顔面領域で射 TG ニューロンにおける PAR2 シグナルを介した TRPV4 のリの痛覚過敏に関与している可能性が示唆された。

ン酸化が関与している可能性が示された。

92

4．口腔粘膜切開後の三叉神経脊髄路核尾側亜核におけるミクログリア極性変化に対する加齢の影響

口腔顔面領域を支配する三叉神経節（TG）ニューロンと非神経細胞の機能連関が関与することが知られているが，その詳細は不明である。そこで，本研究では神経損傷時に出現する macrophage〇生田目大介 1,2，浦田健太郎 2,5，篠田雅路 3,4，に 注 目 し， 歯 髄 炎 に 起 因 す る 異 所 性 痛 覚 過 敏 に 対 す る macro-

岩田幸一 3,4，飯沼利光 2,5

phage と TG ニューロンの機能連関機構を解明することを目的と

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1した。

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅰ講座 2

材料および方法日本大学歯学部生理学講座 3

深麻酔下で SD 雄性ラットの左側下顎第一臼歯（M1）を露髄さ

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 4

せ，歯髄炎モデルを作製した。M1 露髄後 1 日目より，浅麻酔下日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能研究部門 5にて露髄歯同側舌縁部に機械および熱刺激を与え，逃避反射閾値

目的（HWT）を計測した。露髄前 3 日目に逆行性トレーサー（4% Fluo-

加齢によって口腔顔面領域の疼痛強度は変調することが知られ

ro Gold（FG）；5μ l）を同側舌縁部に投与し，M1 露髄後 1 日目にている。近年，延髄後角におけるミクログリアの活性化が口腔顔灌流固定し，同側 TG を摘出した。TG 第三枝領域における FG

面領域の傷害による機械痛覚過敏発症に関与することが報告され

標識 Toll-like receptor 4（TLR4）陽性ニューロン数および FG 標ている。しかし，加齢がミクログリアの活性化様式にどのように識 Interleukin-1 receptor （IL-1
I
R I）陽性ニューロン数，macro-

関与するかは不明である。本研究では，口蓋粘膜損傷後の三叉神

phage の活性化マーカーである Ionized calcium binding adaptor

経脊髄路核尾側亜核（Vc）における活性化ミクログリアの極性変化（Iba1）陽性細胞と共発現を示す Interleukin-1β（IL-1β）陽性細胞に対する加齢の影響について検討した。

数の変化を免疫組織化学的に解析した。三叉神経第三枝分岐部領

材料及び方法域に macrophage 枯渇剤を投与して M1 露髄後 1 日目に，浅麻酔

深麻酔下にて，老化促進モデルマウス（SAMP8）及びコントロー

下にて露髄歯同側舌縁部に機械および熱刺激を与え，逃避反射閾
値（HWT）を計測した。

ルマウス（SAMR1）の左側口蓋粘膜に切開を加えた。経日的に，結果および考察

浅麻酔下にて口蓋粘膜切開部にデジタルフォンフライによる機械
刺激を加え，逃避反射閾値（MHWRT）を計測した。また，口蓋粘M1 露髄後 1 日目から 3 日目まで，同側舌縁部への機械および膜切開後 3 日目および 11 日目の Vc における活性型ミクログリア

熱刺激に対する HWT は非露髄群に比較し有意に低下した。さらおよび，そのサブタイプである傷害性ミクログリア（M1）と保護に露髄後 1 日目における，FG 標識 TLR4 陽性ニューロン数およ性ミクログリア（M2）発現を免疫組織化学的に解析した。

び FG 標識 IL-1RⅠ陽性ニューロン数，Iba1 および IL-1β共発現

成績及び考察を示す細胞数が有意に増加した。また，三叉神経第三枝領域に

SAMP8 群 で は 口 蓋 粘 膜 切 開 後 1 日 目 か ら 21 日 目 ま で，macrophage 枯渇剤を投与後 M1 露髄後 1 日目における同側舌縁部への機械および熱刺激に対する HWT が有意に上昇した。

SAMR1 切 開 群 で は 口 蓋 粘 膜 切 開 後 1 日 目 か ら 7 日 目 ま で
MHWRT が有意に低下した。口蓋粘膜切開後 3 日目から 21 日目

以上の結果から，M1 歯髄炎に起因して三叉神経領域に発症すまで，SAMR1 切開群と比較し，SAMP8 群における MHWRT のる異所性痛覚過敏には，TG の第三枝領域における macrophage

低 下 が 増 強 し た。 口 蓋 粘 膜 切 開 後 3 日 目 と 11 日 目 に お い て，の増加に伴う IL-1βの産生亢進，それに伴う TG ニューロンにおSAMP8 切開群のミクログリアの活性化が有意に増強し，M1 がける TLR4 および IL-1R の発現増加が関与している可能性が示さ

増 加 し た。 ま た，SAMP8 切 開 群 の 口 蓋 粘 膜 切 開 後 3 日 目 で はれた。

M2 が増加したが，口蓋粘膜切開後 11 日目においては減少した。

6．新生児期外傷性ストレスによる顎顔面部異常疼痛
調節に対する延髄ミクログリアの関与

以上より，加齢による口蓋粘膜損傷後に発症する機械痛覚過敏の増強は，Vc におけるミクログリアの活性化および M1M2 の発
現様式の変調が関与している可能性が示された。

○松井智行 1,2，篠田雅路 3,4，相馬久実 1,2，岩田幸一 3,4，
白川哲夫 2,55．歯髄炎による舌痛覚過敏発症に対する三叉神経節
内 macrophage の関与
○菅野浩平

1,2

小木曾文内

，清水康平

2,3

，篠田雅路

4,5

，岩田幸一

4,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部小児歯科学講座 2，

日本大学歯学部生理学講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 42,3

日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能研究部門 5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯科保存学第Ⅱ講座

2

目的

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3

新生児期の身体的ストレスは，成人後の感覚神経系にさまざま

日本大学歯学部生理学講座 4

な変化を引き起こし異常疼痛発症の原因となることが知られてい日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 5る。その異常疼痛発症メカニズムの一つとして，延髄における活目的および背景

性化ミクログリアの関与が考えられるが，詳細については不明な

歯髄炎が原因で三叉神経領域に発症する異所性痛覚過敏には，点が多い。本研究では，新生児期の外傷性ストレスによる顎顔面93

ロンは，活動電位の発火特性により高頻度かつバースト発火型・部異常疼痛増強メカニズムを解明することを目的とした。
材料及び方法

抑制性（HFB）ニューロンと興奮性（non-HFB）ニューロンの 2 種

実験には Sprague Dawley 系雄性ラットを用いた。生後 4 日目類に分類した。
結果および考察（新生児期）に深麻酔下にて口髭部皮膚に切開（長さ 1 cm）を加え，さらに生後 7 週目（成体期）に同部位へ再切開（長さ 1 cm）を加えプロポフォールの投与により HFB および non-HFB ニューロンた。生後 7 週目より 9 週目まで口髭部にフォンフライフィラメン

はともに発火頻度が減少し，特に HFB ニューロンにおいて顕著

トを用いて機械刺激を与え，逃避反射閾値を隔日的に測定した。

であった。また HFB ニューロンと non-HFB ニューロン間の発火

さらに，成体期再切開後 10 日目において，三叉神経脊髄路核尾の同期性を cross-correlogram を作成して調べたところ，プロポ

側亜核（Vc）におけるミクログリアの発現変化を免疫組織化学的にフォールは，規則的かつ同期性の高い発火を惹起することが明ら解析した。また，成体期再切開前 1 日目より成体期再切開後 5 日かとなった。これらの結果より，プロポフォールによるニューロ

目までミクログリア活性化阻害薬であるミノサイクリン（30 mg/

ンの顕著な発火頻度の減少や発火同期性の増大が大脳皮質ニュー

kg/day）を連日腹腔内投与し，口髭部皮膚の機械刺激に対する逃ロンの律動発火を惹き起こし，その結果，意識消失時に認められ避反射閾値を隔日的に測定した。さらに成体期再切開後 10 日目

る脳波の高振幅低頻度の徐波を形成すると考えられる。

に，Vc における活性化ミクログリア発現を免疫組織化学的に解8．ラットの大脳皮質におけるコリン作動性介在ニューロンは錐体細胞を脱抑制させる

析した。
結果及び考察成体期切開後の口髭部皮膚への機械刺激に対する逃避反射閾値○松村幸恵 1,2，金子啓介 4，白川哲夫 2，小林真之 3の低下および Vc におけるミクログリアの活性化は，新生児期切日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

開群において有意に増強した。さらに，ミノサイクリンの腹腔内

日本大学歯学部小児歯科学講座 2

連日投与により，新生児期切開群における逃避反射閾値低下およ日本大学歯学部薬理学講座 3

び Vc のミクログリア活性化の増強が抑制された。以上より , 新Division of Neurology, Department of Pediatrics, Children’s

生児期の外傷性ストレスに起因した顎顔面領域における外傷性疼

Hospital of Philadelphia, University of Pennsylvania, USA4

痛強度の増強には，Vc におけるミクログリアの活性化増強が関目的与している可能性が示された。

ア セ チ ル コ リ ン（ACh）を 神 経 伝 達 物 質 と す る コ リ ン 作 動 性

7．プロポフォールによる大脳皮質ニューロンの発火
特性の変調
〇梶原美絵

1,2

，大井良之 ，小林真之
2ニューロンは前脳基底部に存在することが知られているが，大脳皮質にも存在することが近年明らかにされた。皮質に存在するコ
リン作動性介在ニューロン（cortical cholinergic interneurons:

3CCN）は ,somatostatin（SST）や parvalbumin（PV）と 同 様 に日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

GABA 作動性ニューロンの分類に用いられるタンパク質である

日本大学歯学部歯科麻酔学講座 2

vasoactive intestinal peptide（VIP）陽性であり，ACh と GABA

日本大学歯学部薬理学講座 3を共放出する。VIP ニューロンは前脳基底部からの Ach 性入力

目的によって活性化され，PV ニューロンと SST ニューロンを抑制し，

今日プロポフォールは，全身麻酔や静脈内鎮静など様々な医療

興奮性錐体細胞（pyramidal neuron: PyN）を脱抑制させることが

現 場 で 最 も 多 く 使 用 さ れ て い る 麻 酔 薬 の 一 つ で あ る。 プ ロ ポ

示唆されている。しかし，PyN の脱抑制に関わる単一抑制性シナフォールは GABA 作動性抑制性シナプス伝達を増強し，大脳皮プスの電気生理学的メカニズムは不明のままである。そこで我々

質内の興奮と抑制のバランスを変調させることで意識消失をもたは，「CCN による GABA 放出は，共放出される ACh により制御らすと考えられている。しかし，プロポフォール投与時の大脳皮される」という仮説のもと，ラット島皮質に分布する CCN，PyN，

質局所神経回路における興奮性および抑制性ニューロンの相互間

GABA 作動性ニューロンの電気生理的解析を行った。

の挙動については不明な点が多い。そこで本研究では，プロポ

材料及び方法フォールによる興奮性および抑制性ニューロンの発火パターンと1．脳スライス標本作製

同期性の変調メカニズムを解明するため，マルチ・チャネル・ユ

ChAT-tdTomato × VGAT-Venus 共発現ラットを深麻酔下にニット記録用電極を用いて覚醒下および全身麻酔下のラット島皮て 断 頭 し， 脳 を 摘 出 し た 後 に マ イ ク ロ ス ラ イ サ ー に て 厚 さ

質における興奮性および抑制性ニューロンの活動を同時記録し解350μm の大脳皮質スライス標本を作製した。
2．ホールセル・パッチクランプ法

析した。

蛍光顕微鏡下にて tdTomato 陽性・Venus 陽性 / 陰性ニューロ

材料および方法
8 週齢 Wistar ラットの島皮質にマルチ・チャネル電極を刺入しンを同定し，島皮質のⅡ/Ⅲ層に分布する CCN，PyN，GABA 作

細胞外記録を行った。神経活動の記録は覚醒状態，プロポフォー

動性ニューロンから全細胞記録を行った。電気生理的解析には

ル（12 mg/kg）による麻酔状態から再び覚醒状態に至るまでとしClampfit 10.7 を使用した。

た。プロポフォールは尾静脈より単回投与を行った。記録終了後

成績及び考察ラット脳切片を作成し，電極刺入部位の確認を行った。記録ニューACh の投与は CCN で最も大きな脱分極を引き起こし，この脱94

10．歯周病と呼吸器疾患発症との関連-Porphyromonas gingivalis による MUC5AC
発現とムチン産生の誘導 -分極は α 2β2 サブユニットを有するニコチン受容体を介していた。 ま た，CCN に よ り 放 出 さ れ る GABA の 電 流 は 主 に low
threshold spike neurons と fast-spiking neurons で観察され，この応答はアトロピンによって減弱した。さらに CCN はしばしば○宮

ギャップジャンクションを介して近傍の CCN と相互に接続して

神尾宜昌 3,4，金子忠良 2,4 ，外木守雄 2,4おり，カルバコールによって活動電位の同期性が上昇した。これ

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

らの結果は，前脳基底部から投射される ACh が CCN を活性化さ日本大学歯学部口腔外科学講座 2

せ，CCN により放出される GABA による抑制性シナプス後電流

日本大学歯学部細菌学講座 3

は，共放出される ACh によって増強されることが示唆された。

日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 4

9．Burning mouth syndrome 患者におけるガム咀嚼
の影響

背景及び目的近年，周術期口腔機能管理の重要性が高まり，医科歯科連携による口腔ケアが広く行われている。特に有病者においては，術後〇関根尚彦 1,2，岡田明子 1,2，今村佳樹 1,2の摂食嚥下機能の低下により口腔細菌を含んだ唾液や食物残渣を日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部口腔診断学講座

千尋 1,2，鈴木隆太 1,2，今井健一 3,4，田村宗明 3,4，

誤嚥する機会が多く，誤嚥性肺炎発症のリスクも高い。しかし，

2

口腔細菌がどのように肺炎の発症に関与しているのか，なぜ肺炎

目的の予防に口腔ケアが有効なのかは解っていない。呼吸器におけるBurning mouth syndrome（BMS）は口腔粘膜に生じる原因不明

ムチンの過剰産生は喀痰過多の原因となるのみならず，気管支のの疼痛疾患である。不思議なことに食事中は痛みを訴えず，ガム狭窄をもたらすことから呼吸機能の低下に繋がる。そこで今回，を咀嚼して痛みを抑えていることも多いが，その疼痛抑制機構は口腔細菌がムチンのコア蛋白である MUC5AC の発現を誘導する

全く分かっていない。我々は，BMS 患者における咀嚼時の疼痛のではないかと考え本研究を企画した。

抑制の機序を調べることを目的とした。

材料及び方法方法

P. gingivalis（P.g.）標準株及びジンジパイン欠損株の培養上清対象は BMS 患者群 29 名と健常群 25 名の女性。両群とも無味を呼吸器上皮細胞株とプライマリー気管支上皮細胞に添加後，無臭ガムを用いたガム咀嚼 5 分群とガム咀嚼 20 分群に無作為にMUC5AC の発現を real-time PCR と ELISA にて定量した。また，分け，さらにガム咀嚼 20 分群は咬合接触を伴わない咀嚼運動（エマウスに P.g. 培養上清を誤嚥させ，肺における MUC5AC とムチア咀嚼）を行わせた。介入前後の疼痛強度を Visual Analog Scale

ンの発現を免疫染色と real-time PCR で検討した。

（VAS）値を用い，血漿カテコラミン類，セロトニン，プロゲステ

結果及び考察ロン濃度の変化と心理テスト POMS の変化を調べた。

P.g. 培 養 上 清 は 呼 吸 器 上 皮 細 胞 株 に お い て 濃 度 依 存 的 に

結果

MUC5AC の発現を誘導した。本作用は，P.g. の病原因子（LPS

BMS 群の VAS 値はエア咀嚼とガム咀嚼により有意な減少を示と線毛）では認められなかったことから 2 種類のジンジパインした。また，安静時における BMS 群と健常群のカテコラミン類（Kgp と Rgp）に着目した。欠損株を用いた実験から，P.g. によ

濃度に差はなかった。BMS 群のアドレナリン，ドーパミンおよ

る MUC5 AC の発現には特に Rgp が深く関与していることが明びセロトニン濃度はエア咀嚼により変化を認めなかったが，ガムらかとなった。同様の結果は，プライマリー気管支上皮細胞を用咀嚼後に有意な減少を示した。健常群のアドレナリンはエア咀嚼

いた実験においても認められた。さらに，マウス肺においてもとガム咀嚼後に有意な減少を示したが，ドーパミンおよびセロト

MUC5 AC の発現とムチンの産生が P.g. により強く誘導された。

ニンは変化を認めなかった。プロゲステロン濃度と POMS は両

我々はこれまでに，歯周病原菌が肺炎球菌等の受容体と炎症性群とも有意な変化はなかった。

サイトカインを誘導することを見出しているが，今回新たに，考察

P.g. がジンジパインを介して MUC5AC の発現を誘導し，ムチン咀嚼運動により BMS 患者の疼痛が強く抑制された。BMS 患者の過剰産生を引き起こすことにより呼吸機能の低下に関与するこにおいてガム咀嚼を 20 分持続することにより，末梢発痛物質でとが示唆された。

あるセロトニンが減少することがわかった。また，健常者では咀

11．流体解析を用いたシミュレーションによる顎変形症患者の手術前後の気道動態の変化

嚼運動のリラックス効果などによりアドレナリンが減少したが，BMS 患者では咀嚼運動だけでは低下しにくく，ガムを介した確
実な咀嚼によりアドレナリンが減少したと思われた。以上より，○山縣加夏子，篠塚啓二，外木守雄

セロトニンやアドレナリンの減少は，ガム咀嚼による鎮痛作用に

日本大学歯学部口腔外科学講座

関与している可能性が示唆されたが，BMS 患者特有の作用ではないことが分かった。

目的
閉塞性睡眠時無呼吸症候群（Obstructive Sleep Apnea:OSA）に対する治療法の一つとして上下顎前方移動術（Maxillomandibular
Advancement:MMA）があり，その有効性が報告されている。し95

かしその手術における治療予測は経験によるものが多く，現在移抽出した。microRNA マイクロアレイ解析を用いて，発現状態を動量の決定は骨格形態学的な解析によるものが主体となっている。

網羅的に解析をし，口腔癌細胞株 4 種類全てに共通して発現増強

本研究は MMA を行った患者の手術前後の気道モデルを作成

もしくは減弱している microRNA を検索した。さらに選定した

し，流体解析を用いて患者の気道内の気流変化をシミュレーショ

microRNA とその標的遺伝子を用いて，パスウェイ解析，カノニ

ンし，そして実測値と比べ合わせてシミュレーションが今後臨床

カルパスウェイとの関連性を検索を行い，microRNA を起点としを行う上で有用性を持つか評価することを目的とする。

た機能性 RNA ネットワークの探索を行った。

方法

成績及び考察顎変形症患者の手術前および術後 1 年経過時に撮影した気道解

マイクロアレイ解析の結果，HNOK と比較して口腔癌細胞株 4

析のための CT データから Cybernet 社の IntageVolume Editor

種類全てに共通して発現亢進を示した microRNA は 8 種類で，V1.1 を用い気道モデルを作成し，NUMECA 社製 FINE/OPEN

発現減弱を示した microRNA は 12 種類であり，癌細胞株で著明

V7.2 を用い流体解析を行った。そして日本光電社製の鼻腔通気度な発現変動を示し，口腔癌に関与していることが示唆される 20

計の MP3100 を用いて実際の患者の鼻腔通気度をアンテリオール

種類の miRNA を同定した。さらに同定した microRNA20 種類とマスク法で測定し，シミュレーションと実測値を比較検討した。

その標的遺伝子について検索をし，これらを用いてパスウェイ解結果

析 を 行 っ た と こ ろ， 癌 関 連 ネ ッ ト ワ ー ク に 含 ま れ る 11 種 類 の術前及び術後のシミュレーション結果は実測値とほぼ一致してmicroRNA を認め，miR-125b を中心としたネットワークが形成された。これらのネットワークは，Pancreatic Adenocarcinoma

いた。

Signaling や Molecular Mechanisms of Cancer，Cell Cycle: G1/

流量が大きくなるとやや乖離傾向にあるが定性的には吸気時，S Checkpoint Regulation などに強く関連していた。また，我々

呼気時共に一致していた。
考察の先行論文の結果において，miR-125b は口腔癌において，発症・

これまで生体に対する流体解析では，シミュレーション結果が進展に重要な機能を有していると考えられており，その結果と一

実際の生体の事象を再現できているか確認できないことが問題で致したことから，今後の腫瘍マーカー及び治療ターゲットとしてあった。本研究では，鼻腔通気度で実際の患者の実測値を使用すの可能性が示唆された。

ることでシミュレーションが，実際の事象を再現していることを確認した。今回の結果より，シミュレーションは実際の呼吸状態

13．虚血性病態における Iba1 陽性細胞の動態を概ね再現できており，気流の状態を再現する有用性を持ってい○深澤麻衣 1，工藤圭紘 1，浅野正岳 3,5，飯沼利光 2,4ると考えられる。現在，MMA の効果を実際の呼吸状態を再現し日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

可視化した研究はなく，このシミュレーションは十分意義のある

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅰ講座 2ものであると考えられる。OSA の治療法である MMA の顎の移動

日本大学歯学部病理学講座 3

距離と気道の広がりの確定的な基準は分かっていないのが現状で

日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能研究部門 4ある。今後，流体解析を用いた術前シミュレーションにより術後日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 5の変化量を総合的に判断するための一助になることが示唆された。
目的

12．口腔癌におけるエクソソーム内包マイクロ RNA
を起点とした機能性 RNA ネットワークの解析〇正岡

脳虚血性再灌流障害（ischemic-reperfusion injury：IRI）における脾臓の変化について免疫組織学的に検討を加えた結果，ionized-calcium binding adaptor molecule 1（Iba1）陽性細胞が増加

直 1,2，篠塚啓二 2，外木守雄 2する現象を見出した。そこで，本研究では，脾臓における Iba1

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

陽性細胞の characterization とその生物学的意義について検討を日本大学歯学部口腔外科学講座 2

加えた。
実験方法

目的
近年，がんの診断・治療をとりまく環境の変化のなかで注目さ

C57BL/6 マウスを全身麻酔下で開胸し，総頚動脈を 30 分間結れているのが，エクソソームである。エクソソームは mRNA や紮し脳虚血再灌流障害モデルマウス（IRI 群）とした。術後 1，3，

microRNA を含む核酸物質など多種多様な分子が内包されてお5 および 7 日目に灌流固定後，脾臓を摘出し，免疫組織染色に供り，細胞間のコミュニケーションツールとして働く可能性があり，した。また，未固定の脾臓から，細胞懸濁液を調整し，フローサ

その生物学的意義を明らかにすることで疾患メカニズムの解明に

イトメトリー解析とウエスタンブロッティングおよび RT-PCR につながることが期待されている。本研究では，エクソソームを介より，Iba1 タンパクおよび mRNA 発現変化について解析した。

して細胞外に放出されている microRNA の存在に着目し，新たさらに，ミクログリアの阻害薬であるミノサイクリンを投与したな診断・治療法を開発するため，口腔癌において活性化している

後に，同様に Iba1 の発現変化について検討を加えた。
結果・考察

分子経路を明らかにすることを目的とした。

脾臓における Iba1 陽性細胞数は，術後 1 日目から 7 日目まで

材料及び方法口腔癌細胞株 4 株とヒト口腔粘膜細胞（HNOK）の細胞上清から濾胞周囲領域で経日的に顕著な増加が確認された。さらにウエスエクソソームを回収し，エクソソームに含まれる microRNA を

タンブロッティングにより，Iba1 タンパク量は 5 日目でコント96

15．ppIL-1α の生物学的特性について

ロールと比較して約 1.7 倍に増加していた。一方，RT-PCR においては，IRI 群で Iba1 mRNA の発現増強が認められなかった。

○高田礼央 1,3，佐田英理 2,5，浅野正岳 4,6，白川哲夫 3,7

この結果は，脾臓における Iba1 陽性細胞数の増加は，個々の細日本大学大学院歯学研究科歯学専攻口腔健康科学分野 1胞における Iba1 mRNA 発現増強を伴わない現象であることが示

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻口腔構造機能学分野 2唆された。また，Iba1 陽性細胞数はミノサイクリン投与によりコ

日本大学歯学部小児歯科学講座 3

ントロールレベルにまで減少した。

日本大学歯学部病理学講座 4

これらの結果は，体内の他部位に存在する Iba1 陽性細胞が，日本大学歯学部矯正学講座 5

IRI に際して脾臓に集積した可能性を示唆するもので，今後は脾

日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 6

臓に集簇する Iba1 陽性細胞の由来について詳細に検討したいと

日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能研究部門 7

考えている。

IL-1 α は 34 kDa の前駆体（proIL-1 α ）として細胞内で産生され14．ヒト単球由来細胞株 THP-1 における alarmin の影響た後，カルパインなどの酵素により，N 末端側の propiece IL-1 α（ppIL-1 α ）と C 末端側の mature IL-1 α（mIL-1 α ）に切断される。
mIL-1 α は成熟型の IL-1 α で，細胞外に分泌されサイトカインと○西原安那 1,2，浅野正岳 3，金子忠良 2，外木守雄 2
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野
日本大学歯学部口腔外科学講座

して機能する。proIL-1 α と ppIL-1 α は分子内 nuclear localizing

1

signal（NLS）の存在により主に核内に局在する alamin である。細

2

胞障害に際し細胞外に放出される物質を alarmin と総称する。こ日本大学歯学部病理学講座 3

れまでの研究から，proIL-1 α および ppIL-1 α は酸性電解機能水

目的などの処理により細胞外に放出されることが明らかとなっておalarmin とは細胞が傷害された際に細胞外に放出される分子のり，alarmin の一種であると考えられる。本研究では ppIL-1 α の総称であり，代表的なものとして High mobility group box pro-alarmin としての細胞外機能を検索することを目的とした。

tein 1（HMGB1）や IL-1 α 等が知られている。これらは生体に加実験方法わった傷害に対して，これを修復すべく炎症を惹起させる役割がN 末 端 に ヒ ス チ ジ ン（His-Tag）を 結 合 さ せ た recombinant

あると考えられている。しかし，炎症細胞の遊走能に対する alar-ppIL-1 α 及び mIL-1 α を大腸菌を用いて作製した。その後 10％

min の効果の詳細については明らかでない部分がある。そこで本FBS 添加 DMEM を用いてヒト肺上皮癌由来細胞（A549）の培養研究ではヒト単球系細胞 THP-1 の走化性に対する各種 alarmin

を 5% CO2，37℃で行った。続いて LPS（100 ng/ml），mIL- α（1の影響について検討した。

nM），ppIL-1 α（1 nM）を添加し，オーバーナイトで培養した後材料及び方法に上清を採取し，ELISA 法にて IL-6 の産生を調べた。

ヒ ト 単 球 由 来 細 胞 株 THP-1 は 10％ FCS-RPMI 培 地 に よ り，

結果及び考察37℃，5％ CO2 インキュベーター内で培養し，実験に供した。細negative control に お い て IL-6 の 発 現 は み ら れ な か っ た が，胞の遊走能の評価はボイデンチャンバー法を用いて行った。すな

mIL-1 α ，LPS，ppIL-1 α を添加した培地において IL-6 の産生がわち，THP-1 細胞をポアサイズ 6μm のポリカーボネート膜付き認められた。IL-6 発現量は，LPS や mIL-1 α と比較して ppIL-1 α

イ ン サ ー ト に 3.0 × 105 個 /200μl の 割 合 で 播 種 し た。 下 層 に添加培地で低かった。以上の結果から ppIL-1 α が IL-6 の産生をrecombinant HMGB1（1μg/ml）及び recombinant IL-1 α（0.3μg/

誘導することが示唆された。

ml）を添加し，24 時間および，48 時間培養した。なお用いた培地

16．新規オフィスホワイトニング材の生活歯に対する漂白効果

は FCS を含有しない RPMI1640 培地を用いた。培養後，下層に移動した細胞を回収し細胞数の計測を行った。さらに，回収した細胞における各種遺伝子発現の変化について real-time PCR 法に○名倉侑子 1,2，辻本暁正 2,3，嶋谷祐輔 1,2，廣兼榮造 1,2，より検討した。

高見澤俊樹 2,3，宮崎真至 2,3

成績及び考察日本大学大学院歯学部研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

THP-1 細胞は，24 時間培養時には HMGB1 に対する遊走細胞

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅰ講座 2

数はコントロール群と大きな差は認められないが，48 時間培養時

日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門 3には HMGB1 に対する遊走細胞数はコントロール群と比較すると減少する傾向を示した。この結果は HMGB1 が THP-1 の遊走を目的抑制する可能性を示唆するものであった。一方，real-time PCR

今般，新規オフィスホワイトニング材が開発され，臨床使用が法では 24 時間では Toll-like-receptor 4（TLR4）をはじめとした遺開始された。このホワイトニング材に関しては，米国における使伝子発現にコントロール群と比較して有意な差は認められなかっ用法と異なる使用法が本邦では推奨されているが，その臨床効果た。今後各種 alarmin 遺伝子の発現変化についても検討していきについては不明な点が多い。そこで，このオフィスホワイトニン

たいと考えている。

グ材の生活歯に対する漂白効果について検討した。
材料および方法
供試したオフィスホワイトニング材は，オパールエッセンス

97

BOOST35%（Ultradent Japan）である。臨床研究の開始にあたっ

平 板 試 料 を 作 製 し， 前 装 面 の 注 水 研 削 を 行 っ た。 表 面 処 理 は，ては，日本大学歯学部臨床研究倫理委員会の承認を取得し，平成

KHF（
2
東 京 化 成 工 業 ）塗 布 後 280℃ の 加 熱 処 理（KHF2 群 ），30 年 2 月から 7 月までに日本大学歯学部付属歯科病院に来院し，NH4HF（シグマアルドリッチジャパン）2
塗布後 170℃の加熱処理

本研究の主旨を説明し，同意の得られた 30 名を対象とした。術（NH4HF2 群），アルミナ（ハイアルミナ，松風）によるブラスト処

前にウルトライーズトレイ（Ultradent Japan）を 30 分間装着後，理（AB 群）および未処理（NT 群）の計 4 条件とした。表面処理後，対象歯に対して歯面研磨ペーストを用いて歯面清掃を行い，オ

築盛面積を規定し，オペーク陶材（セラビアン ZR シェードベー

フィスホワイトニングを行った。光照射を行う条件として，オフィス，シェード A3，クラレノリタケデンタル）を一層築盛後，焼成

スホワイトニング材を塗布し，5 分間放置後，光照射を 3 分間行い，した。その後，試験体を治具に設置し，ボディ陶材（セラビアン

2 分間放置した（光照射あり条件）。また，光照射を行わない条件

ZR ボディ，シェード A3，クラレノリタケデンタル）を築盛，焼としては，オフィスホワイトニング材を塗布し，20 分間放置後，成した。試験体を 37℃の精製水中に 24 時間保管後，せん断焼付

これを除去した。これらのオフィスホワイトニング材の塗布およ強さを測定した。

び除去を繰り返す手順を，合計 3 回行った（光照射なし条件）。

成績及び考察色調変化の測色は，歯科用分光光度計 Crystaleye Spectropho-

従来型および高透過性ジルコニアにおいて，KHF2 群と NH4HF2

tometer（Olympus）を用い，術前および術後に行った。上顎右側群は NT 群と比較して有意に高い焼付強さを示した。また，KHF2

中切歯の歯面中央部の分光反射率を測定することで L*，a* および群は AB 群との比較においても有意に高い焼付強さを示した。

b* 値を算出し，その数値を用いて術前と術後の歯の色差を求めた。

本研究の結果から，KHF2 および NH4HF2 による表面処理は，

成績および考察ジルコニアをエッチングすることにより前装用陶材の焼付強度の色調変化の測定結果において，ホワイトニング後の色差ΔE は，向上に寄与していることが明らかとなった。また，KHF2 による光照射を行った条件で 3.30（1.54）および光照射を行わない条件でエッチングは，ブラスト処理より焼付強度において有効な処理方

3.40（1.58）であり，光照射の有無による影響は認めれらなかった。

法であることが示唆された。

また，L*，a* および b* の変化量は，光照射の有無にかかわらず

18．歯科用コーンビーム CT における実効解像力の評
価法の開発

L* は上昇し，a* および b* は低下した。
結論
本実験の結果から，新規オフィスホワイトニング材オパール○伊藤源大 1,2，林

エッセンス BOOST35% は，光照射の有無にかかわらず生活歯の色調改善を図ることが可能であり，その漂白効果としては，L*

日本大学大学院歯学研究科 口腔健康科学分野 1を向上させ，a* および b* を低下させることが明らかとなった。

日本大学歯学部歯科放射線学講座 2
日本大学歯学部総合歯科研究所 高度先端医療研究部門 3

17．フッ化水素カリウムおよびフッ化水素アンモニウ
ムによる表面処理がジルコニアの陶材焼付強度に
及ぼす影響

目的
歯科用コーンビーム CT の画像評価には，臨床条件下での空間分解能（以下；実効空間分解能）を求める必要があった。しかし，〇久津間亮平 1,2，小泉寛恭 3,4，米山隆之 3,4，松村英雄 2,5
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野

悠介 1,2，渡邉憲一郎 1,2，佐藤有華 2，

澤田久仁彦 2,3，新井嘉則 2,3,，本田和也 2,3

臨床条件を模した水槽中で実効空間分解能を一般的なワイヤー法

1で求めることは，散乱線によるワイヤーのコントラスト低下によ日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座 2

り困難であった。

日本大学歯学部歯科理工学講座 3

本研究ではこれを解決するために，エッジ法を二次元空間から

日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門 4

三 次 元 へ 拡 張 し た 方 法（ 以 下； パ イ プ 傾 斜 法 ）を 考 案 し，MTF

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 5（Modulation Transfer Function）で実効空間分解能の評価を試み，若干の知見を得たので報告する。

目的

方法

近年，高い機械的強度を持つジルコニアは，補綴装置のフレー
ムワークとして臨床応用されている。しかしジルコニアフレーム

撮影装置として Veraview X800™（モリタ製作所）を使用した。

上に焼成した前装用陶材の剥離や破折が，多数報告されている。

18 × 10 cm の水槽の中央に直径 10 mm，厚さ 1 mm のアルミニ

この原因として，ジルコニアへの前装用陶材の不十分な焼付が考

ウム製パイプ（以下；パイプ）を，回転軸に対しわずかに傾斜角度

えられ，焼付強度を改善することで剥離や破折の減少が期待できθをつけて設置した。照射条件は管電圧 100 kV，管電流 5 mA，る。本研究の目的は，ジルコニアへのエッチング効果が報告されボクセルサイズ 125 × 125 × 125μm，撮影範囲は 4 × 4 cm，照ているフッ化水素カリウム（KHF2）およびフッ化水素アンモニウ

射時間 17 秒とした。再構成し断層像は DICOM 形式で出力した。

ム（NH4HF2）を用いて，ジルコニアの表面処理を行い，前装用陶画像解析は本講座で Python™により開発したソフトウェア上で材との焼付強度に及ぼす影響を検討することである。

行った。

材料及び方法

画像解析は以下の手順で行った。

従来型ジルコニア（カタナ，クラレノリタケデンタル）と高透過

1. パイプの中心を通る矢状断面の断面像を得た。
2. この断面像の縦方向の LSF（Line Spread Function）を求め，性ジルコニア（KZR-CAD ジルコニア SHT，YAMAKIN）の円形

98

20．抜歯窩内骨増生に対する歯根膜組織の影響

移動平均を行った。
3. それを微分し，FFT（Fast Fourier Transform）処理をした。

○武元智子 1,2，小澤康正 4，太田裕崇 3,6，尾曲大輔 3,6，

4. パイプの傾斜角度θより空間周波数を換算し MTF を求めた。

納村泰弘 2,5，浅野正岳 3,6，本吉

結果

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 ¹

水槽中での MTF は 1 Line pair/mm で 0.55，2 Line pair/mm

日本大学歯学部歯科矯正学講座 2

で 0.18，3 Line pair/mm で 0.11 であった。

日本大学歯学部病理学講座 3結論

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 4

二次元のエッジ法を三次元に拡張したパイプ傾斜法で，実効空日本大学歯学部総合歯学研究所 臨床研究部門 5間分解能を MTF として求めることが可能となった。

日本大学歯学部総合歯学研究所 生体防御部門 6

19．窒素ガス大気圧プラズマが骨芽細胞に及ぼす影響についての研究目的
ラット頭頂骨骨欠損モデルを用いたこれまでの研究から，ハイドロキシアパタイト / コラーゲン複合体（HA/Col）の骨欠損部へ○佐藤諒一 1,2，田邉奈津子 3,4，納村泰弘 2,5，鈴木直人 3,4，
本吉の填入が骨再生を誘導することを確認してきた。また，HA/Col

満 2,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔機能構造学分野
日本大学歯学部歯科矯正学講座
日本大学歯学部生化学講座

満 2,5に電解酸性機能水を併用することによりさらに骨再生が促進され1ることが解った。歯科臨床において求められるのは，歯牙を喪失

2した後，顎骨の骨量を実際に増生させ得るかということであるが3

抜歯窩における骨増生は歯根膜組織の存在の有無により大きく左日本大学歯学部総合歯学研究所 機能形態学部門 4

右されるとされ，実験的に確かめることが必要である。そこで，

日本大学歯学部総合歯学研究所 臨床研究部門 5

本研究ではラットの歯牙を抜去した後，歯根膜組織の有無が抜歯

背景・目的

窩内の骨量増生に与える影響について検討し，さらに抜歯に際し広義ではプラズマは気体を構成する分子が電離し，陽イオンとて歯根膜組織に発現する各種 alarmin 分子の変化について検討す電子に分かれて運動している状態であり電離した気体に相当することを目的とした。

る。以前の多くの研究において大気圧下で発生させたプラズマは

実験方法

材料の表面処理，表面改質あるいは高機能化に対して有用である

6 週齢のラットに全身麻酔を施しさらに抜歯部位に局所麻酔をと言われている。そこで演者らは，プラズマの生体への応用を想施した。

定し，矯正治療の際に使用されるアンカースクリュー撤去後の治上顎臼歯を抜歯し，抜歯窩の歯根膜組織を歯科治療用ファイル

癒促進を目的として，窒素ガスを用いて大気圧プラズマ発生装置を用いて掻把する群 （掻把群）と掻把しない群（未掻把群）に分けで発生させたプラズマを細胞培養液に照射し作成したプラズマ照た。術後飼育を継続し，経日的に実験動物用マイクロ CT により射培地に対する骨芽細胞への影響を検討する本研究を企図した。

抜歯窩に再生される新生骨量および既存骨の吸収量を計測した。

材料および方法

またこの際，抜去歯歯根周囲または抜歯窩内の歯根膜組織を採取

骨芽細胞様細胞（MC3T3-E1）をプラズマ照射培地で培養を行し，real-timePCR により各種 alarmin 分子の発現変化について検い，細胞増殖，ALP 活性値，照射培地の pH を測定した。細胞培討した。

養液は α -MEM 培地に 10％ FBS と 1% Penicillin-Streptomycin

結果及び考察を添加した培養液を使用し，50 ml チューブに 20 ml の培養液を

搔把群・未搔把群ともに抜歯直後の歯槽骨は一度吸収され，そ入れ，窒素ガスを用いて発生させたプラズマを照射時間 0，60，の後骨再生が開始されていた。未搔把群と比較し搔把群では骨吸120，180 秒で設定し，バブリングすることでプラズマ照射培地を収量が多くみられた。また，未搔把群で新生骨量が多く形成され作成した。ALP 活性値は p-NPP を基質とした ALP の酵素活性値ていた。一方，alarmin 分子としては bFGF などの発現が歯根膜を測定し，さらに骨芽細胞の細胞増殖へのプラズマの影響を調べ組織において増強される傾向を示した。

た。なお照射培地の pH 変化は pH 測定器を用いてプラズマ照射

今後は，歯根膜の機能についてさらに追及していきたいと考え

後の経時的変化を計測した。

ている。

考察
MC3T3-E1 細胞をプラズマ照射培地で培養を行うと，各条件下で細胞増殖に変化は認められなかった一方で，プラズマ 120 秒照射群において ALP 活性値が有意に増加した。プラズマ照射培地の pH 変化は，プラズマ照射時間依存的に pH が上昇し，全ての条件において約 3 時間後に pH は緩衝され一定となった。
結論
窒素ガスを用いた大気圧プラズマ照射は培養液の pH を一時的に上昇させ，MC3T3-E1 細胞の ALP 活性値を上昇させることが示唆された。

99

21．ゾレドロン酸が骨芽細胞のシクロオキシゲナーゼ
発現に及ぼす影響について

22．終末糖化産物 AGEs が骨芽細胞の骨形成に及ぼす影響◯長崎真希 1,2，田中秀樹 3,4，中井久美子 3,4，尾崎愛美 3,4，

○酒井真悠 1，富田景子⁵，加藤駿一郎 1，田邉奈津子 2,3，

川戸貴行

2,3

，金子忠良

2,5

，外木守雄

鈴木直人 2,3，植田耕一郎 3,4

2,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

日本大学歯学部口腔外科学講座

日本大学歯学部生化学講座 2

日本大学歯学部衛生学講座

2

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態学部門 33

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門

日本大学歯学部摂食機能療法学講座 44日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野⁵目的

目的

シクロオキシゲナーゼ（COX）-2 は，骨代謝調節因子であるプロ

糖尿病において骨折リスクが増加する原因の 1 つとして骨質のスタグランジン（PG）E2 の合成に関与する。破骨細胞性骨吸収を低下が挙げられる。近年，糖尿病の原因因子として，糖代謝異常抑制するビスフォスフォネート（BP）系薬剤は骨芽細胞の機能に状態で生成される過剰な糖とタンパク質がメイラード反応を起こも影響することが知られているが，骨芽細胞の COX-2 発現に及すことで生じる終末糖化産物（AGEs）の関与が注目されている。

ぼす BP 系薬剤の影響は明らかにされていない。そこで，本研究

特に AGEs はコラーゲン線維架橋構造に AGEs が蓄積すること

で は，BP 系 薬 剤 で あ る ゾ レ ド ロ ン 酸 で 骨 芽 細 胞 を 刺 激 し てで骨質の低下を引き起こすことが報告されている。しかしながら，

COX-2 の発現を検討した。また，薬剤関連顎骨壊死のリスクを高AGEs が骨芽細胞に及ぼす細胞学的メカニズムの詳細については

める歯周病と糖尿病を想定し，グラム陰性菌体内毒素（LPS）と高明 ら か に な っ て い な い。 そ こ で 演 者 ら は， 骨 芽 細 胞 様 細 胞

グルコース存在下で細胞をゾレドロン刺激し，COX-2 と破骨細胞（MC3T3-E1 細胞）を用い，糖代謝産物であるグリセルアルデヒド

分化促進因子（RANKL）の発現を調べた。

から作製した AGEs を用いて，AGEs 刺激が骨芽細胞の骨形成に及ぼす影響を検討することを目的として本研究を企図した。

材料および方法

材料および方法

ヒト骨芽細胞様細胞 MG-63 細胞を 6-well プレートに播種し，細胞がコンフルエントになった時点で，1μg/mL の LPS および

骨 芽 細 胞（MC3T3-E1）を 96 well plate に 播 種 し，AGEs（0，30 mM のグルコース存在下で 0（ コントロール），10 −8，10 −7 ま50，100，200μg/ml）を そ れ ぞ れ 添 加 し 1，3，5，7，10 お よ び

た は 10 −6 M の ゾ レ ド ロ ン 酸 で 24 時 間， 刺 激 し た。COX-2 と14 日間培養後の ALP 活性値および細胞増殖に及ぼす AGEs の影

RANKL の遺伝子発現は real-time PCR 法で調べた。

響を調べた。具体的にはアルカリホスファターゼ（ALP）活性値は成績および考察p-NPP を 基 質 と し た ALP の 酵 素 活 性 値 を 測定 し， 細 胞 増 殖 はグルコースと LPS の非存在下での COX-2 発現はゾレドロン酸

Cell Counting Kit 8 を用いて調べた。

刺激で増加したが，コントロールに比べて有意差は認められな結果

か っ た。 一 方， グ ル コ ー ス ま た は LPS の 存 在 下 で の COX-2 と培養 5 〜 10 日おいて AGEs 200μM 刺激群は無刺激群と比較し

RANKL の発現は，ゾレドロン酸刺激で有意に増加した。さらに，て有意に細胞数の低下を示した一方で，AGEs 50 および 100μM

グルコースと LPS の存在下では，ゾレドロン酸による COX-2 と刺激群では細胞数の有意な低下は認められなかった。さらに ALPRANKL の発現増加が最も顕著に認められた。本結果から，グル活性値は AGEs 50μM 刺激群は培養 5 〜 10 日，AGEs 100 およコースと LPS は，ゾレドロン酸による COX-2 と RANKL 発現増

び 200μM 刺激群において培養 5 〜 14 日で有意な低下が認めら加を誘導する可能性が示唆された。今後，ゾレドロン酸による骨れた。

芽細胞の PGE2 受容体の発現ならびに PGE2 産生に及ぼす影響を

結論

調べ，PGE2 の autocrine 作用による RANKL 発現増加の可能性

以上の結果より AGEs は骨芽細胞の ALP 活性を低下させることにより骨形成を抑制する可能性が示唆された。

を検討する予定である。

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