第 73 回

日本大学歯学会総会・学術大会
一般講演・特別講演一覧

番号

講演者

所

属

審査員

1

小方

彩乃

法医学

2

上道

一輝

口腔外科学Ⅰ3桐原祐喜

口腔外科学Ⅰ

4髭内美穂

口腔外科学Ⅱ

5

清水

なつ生

歯科矯正学

6

笠原

悠太

歯科保存学Ⅰ7三枝眞

歯科保存学Ⅰ

会長：本田和也

8田村友彦

歯科保存学Ⅰ

副会長：鈴木直人

9

廣兼

榮造

歯科保存学Ⅰ

集会担当：白川哲夫

10

中村

健志

歯科保存学Ⅱ

11

藤原

慎太郎

歯科補綴学Ⅰ12高野了己

歯科補綴学Ⅲ

13

尾辻

盛

小児歯科学

14

廣瀬

健佑

小児歯科学

15

星

まなみ

小児歯科学

白抜

は奨励賞対象者

特別講演

網干

博文

法医学

動画配信期間 令和 3 年 5 月 16 日（日）～令和 3 年 5 月 30 日（日）youtube による限定公開

1

第 73 回 日 本 大 学 歯 学 会 総 会 ・ 学 術 大 会
動画配信期間

令和 3 年 5 月 16 日（日）～令和 3 年 5 月 30 日（日）
一

般

講

演

1. EDARADD を標的遺伝子とした歯由来 DNA のメチル化率による年齢推定法の検討○小方彩乃 1,2，近藤真啓 2,3，堤

貴通 1,2，網干博文 2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部法医学講座 2
日本大学大学院総合歯学研究所 社会歯学研究部門 3

2. 短鎖脂肪酸誘導細胞死にはヒストンのアセチル化亢進が必要である○上道一輝 1,3，津田啓方 2,4，篠塚啓二 3,5，鈴木直人 2,4，外木守雄 3,5
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部生化学講座 2
日本大学歯学部口腔外科学第Ⅰ講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所 機能形態部門 4
日本大学歯学部総合歯学研究所 生体防御部門 5

3. 嗅脳溝と中大脳動脈を基点とした体部位局在地図○桐原祐喜 1,2，小林真之 3，外木守雄 2，藤田智史⁴，坐間学⁵

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部口腔外科学講座 2
日本大学歯学部薬理学講座 3
日本大学歯学部基礎自然科学分野⁴
獨協医科大学医学部口腔外科学講座⁵

4. 軟骨移植による骨造成，骨再建の臨床応用にむけた実験○髭内美穂 1,2，生木俊輔 2，古川明彦 2，米原啓之 2
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部口腔外科第Ⅱ講座 2

5. 張力負荷に対する骨細胞用細胞株 MLO-Y4 の反応性の検討○清水なつ生 1,2，藤原恭子 3,4，髙橋富久 3,4，本吉

満 2,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部歯科矯正学講座 2
日本大学歯学部解剖学第Ⅰ講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所 機能形態部門 4
日本大学歯学部総合歯学研究所 臨床研究部門 5

6. 異なるタイプのエッチ & リンスシステムにおける象牙質接着疲労耐久性および接着界面の SEM 観察○笠原悠太 1,2，高見澤俊樹 2,3，廣兼榮造 1,2，辻本暁正 2,3，石井日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔化学分野
日本大学歯学部歯科保存学第Ⅰ講座 2日本大学歯学部総合歯学研究所 生体工学研究部門 32

1

亮 2,3，宮崎真至 2,3

7. 窩洞の深さが構造色を応用したコンポジットレジンの色調適合性に及ぼす影響○三枝

眞 1，小森谷康司 1,2，杉村留奈 1，飯島達也 1，奥脇岳人 1，甘利佳之 1，黒川弘康 1,2，宮崎真至 1,2

日本大学歯学部歯科保存学 第Ⅰ講座 1
日本大学歯学部総合歯学研究所 生体工学研究部門 2

8. ユニバーサルアドヒーシブ応用型 2 ステップアドヒーシブの歯質接着性能について○田村友彦 1,2，髙見澤俊樹 2,3，笠原悠太 1,2，石井
宮崎真至

亮 2,3，横山宗典 1,2，廣兼榮造 1,2，辻本暁正 2,3，

2,3

日本大学大学院歯学部研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部保存学教室修復学講座 2
日本大学歯学部総合歯学研究所 生体工学研究部門 3

9. ユニバーサルアドヒーシブの 2 度塗りが初期エナメル質接着強さに及ぼす影響○廣兼榮造 1，髙見澤俊樹 1,2，笠原悠太 1，石井亮 1,2，横山宗典 1，田村友彦 1，辻本暁正 1,2，宮崎真至 1,2（1 日大・歯・保存修復，2 日大・歯・総歯研・生体工学）

10. 歯内療法への応用を考えた Biphasic calcium phosphate cement の基礎的研究−逆根管充塡材として応用した際の辺縁封鎖性について−○中村健志 1,2，林
伊藤智加 4,7，武市

誠 2,5，鈴木裕介 2,5，安川拓也 2,5，遠山由理香 1,2，菅原明喜 8，掛谷昌宏 3,6，
収 2,5

日本大学歯学部大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯科保存学第Ⅱ講座 2，歯科理工学講座 3，歯科補綴学第Ⅰ講座 4日本大学歯学部総合歯学研究所 高度先端医療研究部門 5，
生体工学研究部門 6，顎口腔機能研究部門 7，菅原歯科 8

11. 加齢が神経障害性疼痛の異所性疼痛発現機構に与える影響○藤原慎太郎 1,2，浦田健太郎 2,3，篠田雅路 4,5，飯沼利光 2,3
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻

応用口腔科学分野 1

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅰ講座 2日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能研究部門 3
日本大学歯学部生理学講座 4 日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 5

12. 小臼歯部ハイブリッドアバットメントクラウンの破壊強度○高野了己 1,2，本田順一 2,3，小林達朗 1,2，小峰

太 2,3，松村英雄 2,3

日本大学大学院歯学研究科歯科専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座 2
日本大学歯学部総合歯科研究所 高度先端医療研究部門 3

13. 新生児期外傷性ストレスによる顎顔面異常疼痛に対する性差の検討○尾辻盛 1,2，林良憲 3,4，人見涼露 3,4，篠田雅路 3,4，白川哲夫 2,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部小児歯科学講座 2
日本大学歯学部生理学講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所 機能形態部門 4
日本大学歯学部総合歯学研究所 顎口腔機能研究部門 53

14. 光遺伝学的手法による島皮質興奮性ニューロンの腕傍核外側部ニューロンに対する投射様式○廣瀬健佑 1,2,3，中谷有香 3，松村幸恵 2,3，白川哲夫 2，小林真之 3
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部小児歯科学講座 2
日本大学歯学部薬理学講座 3

15. MECP2 遺伝子変異を有するヒト歯髄幹細胞の特性解析○星まなみ 1,2，石山未紗 2,5，伊藤寿典 2，浅野正岳 3,4，白川哲夫 2,5
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部小児歯科学講座 2
日本大学歯学部病理学講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所 生体防御部門 4日本大学歯学部総合歯学研究所 顎口腔機能研究部門 5

特

別

講

演

骨および歯による年齢推定の実際と最近の動向
日本大学歯学部法医学講座

網干博文

4

第 73 回 日 本 大 学 歯 学 会 総 会 ・ 学 術 大 会
動画配信期間

令和 3 年 5 月 16 日（日）～令和 3 年 5 月 30 日（日）youtube による限定公開《一般講演》《特別講演》

1．EDARADD を標的遺伝子とした歯由来 DNA のメチル化率による年齢推定法の検討

骨および歯による年齢推定の実際と最近の動向○小方彩乃 1,2，近藤真啓 2,3，堤
網干博文

日本大学歯学部法医学講座

貴通 1,2，網干博文 2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部法医学講座 2

歯科的個人識別作業における身元不明死体の検査では，後日入日本大学大学院総合歯学研究所 社会歯学研究部門 3

手されるかもしれない生前の歯科資料を念頭に，いかに個人の特定につながる情報を収集できるかが鍵となる。該当者絞り込みの目的ための高い精度の情報提供は，その後の警察捜査の方向性をも左

身元不明死体における年齢の推定は，個人を識別するうえで重右し，事件の解決にも寄与する。

要な事項のひとつである。近年，DNA のメチル化率と暦年齢と骨及び歯の成長変化は 20 歳代前半まで継続することから，若の相関が注目され，法医学の分野でも年齢推定への応用に期待が年層に属する遺体では歯の成長発育や萌出状態をもとに比較的正寄せられている。しかし損傷の激しい遺体からでも DNA の採取

確な年齢推定が可能となる。しかし，成人以降の年齢層においてが可能な歯を用いた研究は少ない。最近，我々は歯由来の DNA

は退行性の加齢変化を指標とするしかなく，また，生活様式，健康・を試料とし，ELOVL2 を標的遺伝子とすることで，比較的実施が栄養状態でその変化の様相が大きく変動することから，年齢の推簡便なリアルタイムメチル化特異的 PCR（以下，リアルタイム

定精度は低下する。試料（骨や歯）が完全であれば，肉眼的及びエッMSP）法を用いた年齢推定について検討し，一定の精度を得た。

クス線学的な非破壊検査が行われるが，断片化した試料について

今回，更なる精度の向上を目指すべく，新たに標的遺伝子としては破壊的な組織学的検査法も選択される。

EDARADD を選択した。

歯髄腔の生理学的な退縮は，環境による影響が少なく年齢と相

材料及び方法関のある安定した指標として知られる。講演者の講座でも 1974

20 〜 60 歳の抜去歯（計 12 例）から通法に従い genomic DNA を

年から歯髄腔の狭窄化を簡便かつ非破壊的に捉える年齢推定法の抽出後，バイサルファイト処理を行った。次に EDARADD の上開発に着手し，エックス線フィルム上で設定した歯髄腔の幅，高流に存在する異なる 3 組の CpG 配列を標的としたメチル化認識

さおよび面積値の比，また 1990 年代にはデジタルエックス線撮

プライマー，及びヒト Alu 配列に対するプライマーを作製し，リ影画像上で設定した歯根部歯髄腔幅の部位別計測値，さらに 2000

アルタイム MSP を行い，Percent Methylated Reference（以下，

年代に入り新たに開発された歯科用エックス線 CT 撮影装置によPMR）を算出した。さらに PMR を説明変数とする年齢推定のたる根部歯髄腔の横断面面積比，そしてμ CT 撮影装置による 3 次

めの回帰式を算出し，その精度を検討した。

元計測値から根部歯髄腔の体積比をそれぞれ変数とした年齢推定

成績及び考察法を相次いで発表し，良好な結果（実年齢と推定年齢との重相関

3 組のメチル化認識プライマーのうち，1 組が増幅に成功し，係数：0.70 〜 0.85）を得ている。

解離曲線においてもシングルピークが得られたことから，このプ

一方，1975 年 Helfman らは，象牙質中のアスパラギン酸のラライマーの反応特異性が示された。また，各試料の DNA 量とセミ化反応に注目し，加齢に伴い D- アスパラギン酸が蓄積してPMR との相関は非常に弱く（R2=0.16），各試料の PMR は実年齢

いくことを見出し，この変化を年齢推定に利用した。日本でもと比較的強い負の相関を示した（R2=0.53）。さらに，回帰式より1984 年以降，萩野ら，大谷らがガスクロマトグラフィーを用いて算出した推定値と実年齢との差の絶対値の平均値は 10.54 歳で年齢推定を行い，その法医学的有用性を報告している。また最近，あった。

Horvath らにより DNA のメチル化（エピジェネティックな変化）

本 解 析 に よ り， 試 料 数 が 少 な い も の の，EDARADD はの程度と暦年齢の相関が示され，これを指標とした年齢推定法がELOVL2 に続く新たな年齢推定のための標的遺伝子となり得るこ

発表され始めており，我々も歯由来の DNA を試料に，新たにリとが示唆された。今後は試料数を増やし回帰式を改良して行く予アルタイムメチル化特異的 PCR を応用した年齢推定法に着手し

定である。

ている。
今回はこのような遺体検査時の年齢推定にスポットを当て，その基本的な考え方や各種推定法の特徴を最近の動向も含め紹介する。

5

2．短鎖脂肪酸誘導細胞死にはヒストンのアセチル化
亢進が必要である
○上道一輝

1,3

，津田啓方

2,4

，篠塚啓二

3,5

，鈴木直人

2,4

3．嗅脳溝と中大脳動脈を基点とした体部位局在地図○桐原祐喜 1,2，小林真之 3，外木守雄 2，藤田智史⁴，坐間，外木守雄 3,5

学⁵

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

日本大学歯学部口腔外科学講座 2

日本大学歯学部生化学講座 2

日本大学歯学部薬理学講座 3

日本大学歯学部口腔外科学第Ⅰ講座 3

日本大学歯学部基礎自然科学分野⁴

日本大学歯学部総合歯学研究所 機能形態部門 4

獨協医科大学医学部口腔外科学講座⁵

日本大学歯学部総合歯学研究所 生体防御部門 5

目的
感覚情報は大脳皮質で処理され，末梢の部位によって，大脳皮背景及び目的
歯周病原細菌が産生する酪酸などの短鎖脂肪酸の作用がヒト歯質の異なる領域で情報処理が行われる，いわゆる体部位局在が存

肉上皮細胞の非アポトーシス細胞死を引き起こす。本研究では，

在することが知られている。以前の研究から，嗅脳溝と中大脳動この短鎖脂肪酸誘導細胞死のメカニズムの一端を解明することを脈を基点として口腔領域のマッピングが可能なことが示唆されて目的とする。

いるが，この 2 つを基点とした包括的なマップは明らかとなって材料及び方法いない。本研究では，眉，角膜，耳介，髭部，鼻尖，鼻腔粘膜，

死細胞の破綻した細胞膜のみを透過し，二本鎖 DNA に結合す

下唇，舌，上下顎の門歯と臼歯の体部位局在地図を作成することを目的とした。

る事で緑色蛍光を発する SYTOX-Green 色素を用いて死細胞量を材料および方法測定した。細胞内ヒストン H3 のアセチル化をウエスタンブロッ

実験には雄性 Wistar ラットを用いた。ウレタン麻酔下にて，トで評価した。ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（HAT）阻左側大脳皮質の体性感覚野，島皮質を含む部位に開窓を行った。

害剤として C646 を用いた。
成績及び考察大脳皮質表層に膜電位感受性色素 RH1691 を負荷し，電気刺激空歯周病原細菌の培養上清をヒト歯肉上皮 Ca9-22 細胞に作用さ

気圧刺激を行いその時の大脳皮質の神経活動を光学計測法にて記せたところ，Porphyromonas gingivalis および Fusobacterium

録した。眉，髭部，下唇，舌尖，舌背，上下顎の門歯と臼歯の歯髄，

nucleatum の培養上清のみが細胞死を引き起こした。短鎖脂肪酸

上下顎の門歯の歯根膜に対しては電気刺激を，また，眉，耳介，である酪酸が細胞死を引き起こすことから，細菌培養上清中の短

角膜，髭部，鼻尖，鼻腔粘膜，下唇に空気刺激を与え，大脳皮質

鎖脂肪酸濃度を調べたところ，これらの培養上清中には酪酸，プの応答を記録した。

ロピオン酸，イソ酪酸，イソ吉草酸が多く含まれていた。これら

結果および考察の短鎖脂肪酸をそれぞれ単独で Ca9-22 細胞に作用させたところ，

眉，髭部，下唇の空気刺激に反応する領域は，電気刺激に反応

濃度依存的に細胞死を促進した。酪酸は有名なヒストンデアセチする領域にほぼ対応しており，体表を刺激する方法による応答部

ラーゼ（HDAC）阻害剤で，その作用によりヒストンアセチル化は位の差異は無いことが示唆された。鼻の周辺領域に刺激をした時亢進されるため，短鎖脂肪酸誘導細胞死にヒストンアセチル化がの応答部位は，眼の周辺領域および耳の刺激に応答する領域に対関与している可能性を考えた。細胞死を誘導した酪酸，プロピオ

して，吻側に位置していた。口腔領域の刺激に対する初期応答はン酸，イソ酪酸，イソ吉草酸は濃度依存的にヒストン H3 のアセ吻側に位置する一次体性感覚野（S1）と尾側に位置する二次皮質とチル化を亢進したことから，C646 による HAT 活性阻害でヒスト

島皮質の境界（S2/IOR）の 2 つの領域それぞれに存在し，そこか

ンアセチル化の抑制したところ，短鎖脂肪酸誘導の細胞死は有意

ら同心円状に興奮が広がった。口腔領域の感覚情報処理を行う S1に 抑 制 さ れ た。 さ ら に， 酪 酸 と 同 様 に HDAC 阻 害 作 用 を も つと S2/IOR の体部位局在は体表で認められるようなミラー像を示SAHA およびバルプロ酸の作用によっても細胞死が引き起こささ な か っ た。 こ の こ と か ら， 口 腔 領 域 か ら の 感 覚 情 報 は S1 とれ，C646 の作用により抑制された。

S2/IOR で並行して処理され，皮質領域の反応は一般的な体部位
局在地図とは異なる場合があることが示唆される。

これらの結果から，短鎖脂肪酸誘導細胞死にはヒストンアセチ
ル化が必要であることが示唆された。

4．軟骨移植による骨造成，骨再建の臨床応用にむけた実験○髭内美穂 1,2，生木俊輔 2，古川明彦 2，米原啓之 2
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部口腔外科第Ⅱ講座 2

目的
再生医療技術の進歩により各種移植材料が開発されているが，いまだ構造体としての骨組織は完成していない。一方，軟骨組織
は培養軟骨が開発され，臨床応用が開始されている。軟骨は条件

6によって骨化することが知られており，関節などにおいては骨化

ついては，リアルタイム PCR およびウエスタンブロッティング

が弊害となる。一定の条件下において軟骨が骨化することが可能

で発現パターンを調べ，細胞の生存率は WST8 アッセイによってであれば，硬組織の再建材料として使用することが可能となり，

計測した。
結果

臨床応用も期待できるとして実験を計画した。

張力負荷により有意に発現上昇した遺伝子群の中にはグルタチ

材料および方法
Wistar ラットの肋軟骨を採取。軟骨膜を除去し砕片状にする。

オン代謝関連酵素が多く含まれ，特に 10 倍以上の発現上昇を示

同ラットの脛骨の骨面を露出させ，1 mm × 1 mm × 5 mm の欠した 7 遺伝子のうち 3 つがグルタチオン S 転移酵素（GST）ファミ

損を作成し肋軟骨を移植。骨膜，筋肉，皮膚を旧位に覆し縫合しリー遺伝子であった。継時的な発現解析の結果，GST 遺伝子群は，術終了とした。また欠損のみ作成したラットをコントロール群と張力負荷を与え始めてから 20 分後に発現上昇を示した。張力負して用いた。術直後，1，2，4，8，12 週後に micro-CT 撮影，切荷によって細胞の生存率は 6 割程度に低下したが，抗酸化剤 α ト片の作成を行い経時的変化の観察および形成された骨の体積の計

コフェロール存在下では細胞生存率は低下しなかった。このこと測を行った。

から GST は張力負荷で生じる酸化ストレスの解消に関係してい成績および考察る こ と が 示 唆 さ れ た が，siRNA に よ っ て GSTA1，GSTA2，

micro-CT 画像により，術直後，移植群では欠損作成部に石灰GSTA5 の発現をノックダウンした場合の張力負荷で生じる細胞化度の低い不透過像を認めた。コントロール群，移植群の両群は生存率は，予想とは逆に上昇した。現在，骨細胞の張力負荷の応移植 1 週後には欠損作成部に新生骨と推測される不透過像を認め

答性と GST の役割を明らかにするために研究を続けている。

る。脛骨横断面において，コントロール群は皿状の陥凹を認めた
認めた。移植した軟骨は時間の経過に伴い石灰化度の上昇を認め，6．異なるタイプのエッチ & リンスシステムにおける象牙質接着疲労耐久性および接着界面の SEM 観察

これは軟骨の骨化を示唆している。HE 染色により移植群では時○笠原悠太 1,2，高見澤俊樹 2,3，廣兼榮造 1,2，辻本暁正 2,3，

が，移植群は 4 週目には周囲の骨と比較して膨隆した不透過像を間の経過とともに，軟骨細胞は一塊化する傾向を示し，4 週目に

石井

は軟骨細胞と骨髄間に骨様組織を認めた。また 8 週目になると，

亮 2,3，宮崎真至 2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔化学分野 1

TB 染色においては軟骨細胞の外周よりメタクロマジーを示しに

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅰ講座 2

くくなる傾向にあった。欠損作成 4 週後までの形成された骨の体日本大学歯学部総合歯学研究所 生体工学研究部門 3積は両群ともに骨の形成は認めたが有意差は示さなかった。これらのことにより，軟骨の存在が骨再生を妨げることはなかった。

目的

しかし欠損部断端における骨再生が認められるため，断端からのエッチ & リンス（ER）接着システムは，エナメル質接着性の向骨形成と軟骨が骨化した骨との比較検討が必要であると考える。

上および接着阻害因子の除去などの観点から，使用頻度は高い。
しかし，異なるタイプの ER 接着システムの接着耐久性について

5．張力負荷に対する骨細胞用細胞株 MLO-Y4 の反応性の検討○清水なつ生 1,2，藤原恭子 3,4，髙橋富久 3,4，本吉検討した報告は少なく，接着界面の微細構造においても接着シス
テムによって異なる可能性がある。そこで，異なるタイプの ER
接着システムにおける象牙質接着疲労耐久性について，繰り返し

満 2,5

荷重負荷が可能な疲労試験を行うことによって，その耐久性につ

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部歯科矯正学講座

いて検討した。また，接着界面の微細構造について走査電子顕微

2鏡（SEM）観察した。

日本大学歯学部解剖学第Ⅰ講座 3

材料及び方法日本大学歯学部総合歯学研究所 機能形態部門 4

供試した ER 接着システムは，3 ステップの OptiBond FL（OL,日本大学歯学部総合歯学研究所 臨床研究部門 5Kerr）お よ び Scotchbond Multi-purpose plus（SM, 3 M Oral

目的Care），2 ステップの Single Bond Plus（SB, 3 M Oral Care），ユ

矯正治療ではワイヤーの力で歯を移動する際，歯槽骨に骨の添ニバーサルタイプの Scotchbond Universal（SU, 3 M Oral Care）

加と吸収が起こる。この時，骨小腔に存在する骨細胞が力学的負を用いた。また，リン酸エッチング材として，Ultra-Etch を使用

荷を感受し，骨芽細胞や破骨細胞の働きを制御すると考えられてした。接着試験に際しては，ヒト象牙質を SiC #4000 まで研削し，いるが，その詳細な機序については不明な点が多い。本研究では被着歯面とした。被着歯面に対しリン酸処理後，製造者指示条件

力学的負荷に対し骨細胞が示す反応の分子機序を解明するために従い歯面処理を行なった。内径 2.36 mm，高さ 2.5 mm のステンに，マウス骨細胞様株化細胞 MLO-Y4 に張力負荷を与え，遺伝

レス型に，コンポジットレジンを填塞，40 秒間照射を行い，接着試験用試片とした。これら試片を 37℃精製水中に 24 時間保管後

子発現パターンや抗酸化剤への反応性を検討した。
材料及び方法に剪断接着強さを測定した。接着疲労強さは，剪断接着強さ試験

Flexcell Tension system を用いて MLO-Y4 細胞に張力負荷と同様に試片を製作し，得られた接着強さの約 50 ～ 60% の値の（18%，6 cycle/min）を与えた。24 時間後に細胞から RNA を抽出

荷重を 20 Hz の正弦波で繰り返し 50,000 回試片に負荷した。また，し，負荷を与えていない細胞との間で発現レベルに差のある遺伝

形態的な検討を行うため，SEM 観察を行った。本研究の実施にあ子をマイクロアレイで，網羅的に解析した。絞り込んだ遺伝子にたって，本学倫理審査委員会の承認を得ている（倫許 EP20 D007）。

78．ユニバーサルアドヒーシブ応用型 2 ステップアド
ヒーシブの歯質接着性能について

成績及び考察
3 ステップの ER 接着システムは，他の接着システムに比較して高い象牙質接着疲労強さを示した。また，SEM 観察から，SU○田村友彦 1,2，髙見澤俊樹 2,3，笠原悠太 1,2，石井

接着界面においては樹脂含浸層直下に高密度な反応層が観察され横山宗典た。これらのことから，ER 接着システムの象牙質接着疲労耐久

，廣兼榮造

1,2

，辻本暁正

2,3

亮 2,3，，宮崎真至 2,3

日本大学大学院歯学部研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

性および接着界面の微細構造は，用いるシステムによって異なる

日本大学歯学部保存学教室修復学講座 2

ことが明らかとなった。

日本大学歯学部総合歯学研究所 生体工学研究部門 3

7．窩洞の深さが構造色を応用したコンポジットレジ
ンの色調適合性に及ぼす影響
○三枝

1,2

目的
ユニバーサルアドヒーシブは，優れた汎用性から使用頻度が増加しているものの，その接着耐久性については従来の 2 ステップ

眞 1，小森谷康司 1,2，杉村留奈 1，飯島達也 1，

奥脇岳人 1，甘利佳之 1，黒川弘康 1,2，宮崎真至 1,2

セルフエッチングアドヒーシブと比較して低いことが懸念されて日本大学歯学部歯科保存学 第Ⅰ講座

いる。本研究では，多機能性を有するユニバーサルアドヒーシブ

1の組成と類似したプライマーを応用した新規 2 ステップアドヒー

日本大学歯学部総合歯学研究所 生体工学研究部門 2

シブの初期接着性について剪断接着強さ試験を行うとともに接着目的

疲労耐久性試験から接着耐久性を検討した。

構造色を応用したコンポジットレジンは，窩洞の明度が低い，

材料および方法

いわゆるカメレオン効果が得られにくい症例での使用が有効とな

ヒト抜去大臼歯（倫許 EP20 D007）を用いた。供試アドヒーシブ

る可能性が考えられる。そこで，人工歯に深さの異なる窩洞を形として，ユニバーサルアドヒーシブ応用型 2 ステップアドヒーシ

成し，構造色を有するコンポジットレジンを填塞した際の，レジブ G2-BOND Universal（GU，GC）および従来の 2 ステップセル

ン充填部と窩洞周囲の人工歯との色調適合性について検討した。

フエッチングアドヒーシブ Clearfil Mega Bond 2（CM，Kuraray

材料及び方法

Noritake Dental）を用いた。

構造色を有するコンポジットレジンとしてオムニクロマ（OC，

実験 1：プライマーへの光照射が GU の初期接着性能に与える

トクヤマデンタル）を，対照としてエステライトΣクイック（EL，

影響について。

トクヤマデンタル）およびフィルテックシュープリームウルトラ

GU プライマー塗布後，光照射を 10 秒間行った群とこれを行わ（FU，3 M ESPE）を用いた。人工歯として硬質レジン歯（ゼンオない群に対して，ボンディング材を塗布した後，光照射を 10 秒

パ ー ル，AU19， ジ ー シ ー）の 上 顎 中 切 歯（ シ ェ ー ド A2 お よ び

間行った。内径 2.38 mm，高さ 2.5 mm のステンレス型を設置し，A4）を用いた。

コンポジットレジンを填塞，光照射を行い，接着試験用試片とし

人 工 歯 の 唇 側 面 中 央 付 近 に， 直 径 4 mm， 深 さ 1.5 あ る い はた。これらの試片は，24 時間 37℃の精製水に保管した後，剪断

3 mm の規格円形窩洞を形成した後，窩洞内面をボンドマーライ

接着強さ試験を行った。

トレス（トクヤマデンタル）を用いて製造者指示条件で処理した。

実験 2：接着疲労耐久性について

次いで，レジンペーストを填塞，30 秒間照射した。なお，窩洞に製造者指示条件に従って歯面処理を行った試片に対して，実験

塡塞するレジンペーストのシェードは，OC ではいずれのシェー

1 と同様な方法で接着試験用試片を製作した。これらの試片に対ドの人工歯に対してもユニバーサルを，EL および FU では人工して，周波数 20 Hz の正弦波を 5 万回負荷した接着疲労耐久性試

歯と同色とした。

験を行った。

これらの試片を 37℃精製水中に 24 時間保管後，シリコーンポ

成績および考察

イントを用いて研磨し，測色用試片とした。色調適合性の評価に

実験 1 の結果から，いずれの歯質においても光照射を行った群はクリスタルアイ（CE100-DC/JP，オリンパス）を用い，レジン充

はこれを行わなかった群と比較して，有意に低い値を示した。実塡部と窩洞周囲の人工歯の色調を確認することでΔE＊ ab を算出

験 2 の結果からは，いずれの接着システムにおいてもその接着疲した。

労耐久性強さに有意差は認められなかった。

成績及び考察考察

OC の色差値は 1.4 〜 2.4 を示し，人工歯のシェードおよび窩洞

プライマーにユニバーサルアドヒーシブの技術を応用しているの深さにかかわらず，良好な色調適合性を示した。一方，EL お

GU は，従来の 2 ステップセルフエッチングアドヒーシブと比較

よび FU では，窩洞が深くなる条件で色差値が大きくなり，そのして同等以上の接着性能を有するため，更なる臨床応用範囲の拡傾向は A4 の人工歯で顕著であった。

大が期待できる。

OC はフィラー粒径および形状などを最適化することで構造色を発現するように設計されており，とくに窩洞が深い条件では入射した光が吸収されることで，構造色としての発色が強くなり，これによって良好な色調適合性を示したものと考えられた。

8

9．ユニバーサルアドヒーシブの 2 度塗りが初期エナ
メル質接着強さに及ぼす影響○廣兼榮造 1，髙見澤俊樹 1,2，笠原悠太 1，石井横山宗典 ，田村友彦 ，辻本暁正
1

1

1,2

10．歯内療法への応用を考えた Biphasic calcium
phosphate cement の基礎的研究－逆根管充塡材として応用した際の辺縁封鎖性について－

亮 1,2，，宮崎真至 1,2

○中村健志 1,2，林（1 日大・歯・保存修復，2 日大・歯・総歯研・生体工学）

誠 2,5，鈴木裕介 2,5，安川拓也 2,5，

遠山由理香 1,2，菅原明喜 8，掛谷昌宏 3,6，伊藤智加 4,7，

目的

武市

充填直後のコンポジットレジン修復物には，重合時に発生する

収 2,5

日本大学歯学部大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

内部応力あるいは形態修正・研磨などによって外力が負荷される

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅱ講座 2，

ため，使用する接着システムの初期接着性能の把握は重要である。

歯科理工学講座 3，歯科補綴学第Ⅰ講座 4

そこで演者らは，最近使用頻度が増加しているユニバーサルアド

日本大学歯学部総合歯学研究所 高度先端医療研究部門 5，

ヒーシブの初期エナメル質接着性とともに，アドヒーシブの 2 度

生体工学研究部門 6，顎口腔機能研究部門 7，菅原歯科 8

塗りがその初期接着性に及ぼす影響について検討した。
材料および方法

研究目的

供試ユニバーサルアドヒーシブ 4 製品および対照として，2 ス

リン酸カルシウムセメントは数種のカルシウム化合物の粉末かテップセルフエッチング接着システムを用いた。アドヒーシブ塗

らなり，ヒドロキシアパタイト（HA）を生成する骨補塡材である。

布に先立って，リン酸エッチングを 15 秒間行うエッチ & リンス

しかしながら，正確な粉末配合比の調製が困難であり材料学的特モードあるいはこれを行わないセルフエッチモード条件を設定し性 に 影 響 を 及 ぼ す こ と が 指 摘 さ れ て い る。 そ こ で， 粒 子 内 にた。また，各エッチングモードに対してアドヒーシブを 1 度塗布，

α -tricalcium phosphate（α -TCP）と tetracalcium phosphate

あるいはアドヒーシブ塗布して光照射を行った後，アドヒーシブ（TTCP）が分子レベルで均一に分散し，単峰性粒度分布を示すを再度塗布する群についても条件に加えた。レジンペーストを塡

biphasic calcium phosphate cement（BCP）を試作した。本研究

塞，照射を行い，接着試験用試片とした。接着試験に際しては，では本材の歯内療法用セメントとしての可能性を検討するため，これらの試片を 5 分，1，6，12 あるいは 24 時間，37℃の精製水

BCP の粒径が逆根管充塡材に応用した際の辺縁封鎖性に及ぼす影に保管した後，剪断接着強さを測定した。また，使用したコンポ

響について解析した。

ジットレジンの機械的性質の経時的変化も接着強さへの影響因子

材料及び方法となるところから，曲げ特性について接着試験の保管条件と同一

BCP 粉 末 の 調 製 時 平 均 粒 径 は 9.96μ m で あ る た め， 粒 径

条件で測定した。

4.02μ m および 1.85μ m に粉砕した新たな被験材料を試作した。

成績及び考察液は酸性リン酸カルシウム溶液を使用し，粉液比は操作性を考慮

いずれのエッチングモードにおいても同一の保管条件では，ユ

し て 粒 径 9.96μ m は 3.5，4.02μ m は 3.0 お よ び 1.85μ m は 1.8

ニバーサルアドヒーシブの 2 度塗りは 1 度塗りに比較して高いエと規定した。辺縁封鎖性試験は split chamber 法にて実施し，代ナメル質接着強さを示した。一方，使用したコンポジットレジン

表的な歯内療法セメントであり，封鎖性に優れている Mineralの曲げ特性においても，保管時間の延長に伴ってその機械的性質

Trioxide Aggregate（MTA）を対照材料とした。

は向上する傾向を示した。本実験の結果から，リン酸エッチング

ヒト単根抜去歯（倫理 EP17 D013-5）を用いた split chamber 法を併用するエッチ & リンスモードおよびアドヒーシブの 2 度塗は根管拡大形成後，根尖部切断と逆根管充塡窩洞形成を行いプラりは，エナメル質の初期接着強さの向上に寄与することが明らか

ガーにて被験材料を充塡し，chamber 上部に固定した。chamberとなった。その理由としては，接着界面を構成するボンドおよび下部には生体内を模倣した擬似体液（Hanks’ 平衡塩溶液）を入れコンポジットの機械的強度の向上が影響していることが示唆され根尖部を浸漬し，メチレンブルーを根管内に注入した。漏洩の判た。

定は 37℃，湿度 100％で疑似体液の色の変化を 4 週間観察し，生存分析と log-rank 検定にて解析した。
成績及び考察辺 縁 封 鎖 性 を MTA と 比 較 す る と， 粒 径 9.96μ m と 1.85μ mでは有意に封鎖性が低かったが，粒径 4.02μ m では有意差は認められなかった。以上の結果から，BCP を根尖切除術の逆根管充塡
材として応用する際の適切な粒径は 4.02μ m 程度であり，BCPの粒径は辺縁封鎖性に影響を及ぼすことが推察された。
粒 径 は 硬 化 後 の 空 孔 率 や HA の 生 成 に も 関 与 す る こ と か ら，
BCP の粒径を適切に調整することで MTA の欠点である長い硬化時間を改善した新たな歯内療法用セメントとしての可能性が示された。

911．加齢が神経障害性疼痛の異所性疼痛発現機構に与える影響

12．小臼歯部ハイブリッドアバットメントクラウンの破壊強度○藤原慎太郎 1,2，浦田健太郎 2,3，篠田雅路 4,5，飯沼利光 2,3
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野○高野了己 1,2，本田順一 2,3，小林達朗 1,2，小峰
松村英雄

1

太 2,3，

2,3

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅰ講座 2日本大学大学院歯学研究科歯科専攻 応用口腔科学分野 1

日本大学歯学部総合歯学研究所 顎口腔機能研究部門 3

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座 2

日本大学歯学部生理学講座

日本大学歯学部総合歯科研究所 高度先端医療研究部門 34日本大学歯学部総合歯学研究所 機能形態部門

5目的補綴装置とアバットメントを一体化したスクリュー固定式イン目的
高齢者への歯科診療時に遭遇する異常疼痛の一つに神経障害性

プラント上部構造であるハイブリッドアバットメントクラウン

疼痛がある。近年，下歯槽神経損傷により，損傷部とは異なる部（HAC）が臨床応用されている。本研究では，異なる種類の CAD/

位に機械痛覚過敏が発症する，いわゆる異所性疼痛の発症が報告

CAM 用歯冠修復材料を用いて製作した HAC の破壊強度を比較，されている。しかし，下歯槽神経における加齢変化がこの病態に検討した。
材料および方法

及ぼす影響については不明である。そこで本研究では , 顎顔面領域の疼痛調節に関与するマクロファージ性免疫応答に着目し，老下顎第一小臼歯欠損症例に対するインプラント治療を想定し，化促進モデルマウス SAMP8（以下 P8）の下歯槽神経損傷後におけ

インプラント体を常温重合レジンに埋入した。チタンアバットメ

る三叉神経節（TG）中での活性化マクロファージである CD11 c，

ン ト に 接 着 す る 補 綴 装 置 に は， 陶 材 前 装 ジ ル コ ニ ア 補 綴 装 置

及び M1 から放出される炎症性ケモカインである CCL2 の各発現（LZ），モノリシック高透光性ジルコニア補綴装置（MZ），モノリ変化を解析し，顎顔面領域の神経障害性疼痛の発現機構の加齢にシック二ケイ酸リチウム含有ガラスセラミック補綴装置（LD）およびモノリシック CAD/CAM 冠用コンポジットレジン補綴装置よる影響を検討した。
材料及び方法（CM）を用いた。LZ のフレームワークは，アバットメント周囲に

深麻酔下にて P8 及び正常老化マウス（SAMR1，以下 R1）の左

均一な厚みとなるよう設計し，CAD/CAM を用いて製作した後，側下歯槽神経を 1 mm 切除し，それぞれ P8 切除群と R1 切除群と統一した形態になるよう陶材を前装した。MZ，LD および CMした。行動観察実験では，浅麻酔下にてデジタルフォンフライをは LZ と統一な形態になるよう CAD/CAM を用いて製作した。

用い，三叉神経第 2 枝支配領域の口髭部へ機械刺激を加え，逃避

LZ，MZ および CM の内面とアバットメント表面はアルミナブ

閾値（MHWT）を経日的に計測した。免疫組織学的解析では，まラスト処理およびプライマー処理を行った。LD 内面はフッ化水

ず神経逆行性トレーサーである Fluro Gold を口髭部に注入し，素酸処理およびプライマー処理を行った。すべての補綴装置はレ

続いて下歯槽神経切除を行い，切除後 5 日目及び 9 日目に，4%ジン系装着材料を用いてアバットメントに接着した。製作したパラフォルムアルデヒドによる灌流固定後，TG を摘出し，FG で

HAC をインプラント体に装着した後，アクセスホールは直接修ラベルされた TG 第 2 枝領域における Iba1/CD11 c 共陽性細胞と復用コンポジットレジンを用いて充填した。全ての試料は 37℃精CD11 c/CCL2 共陽性細胞の発現変化を解析した。

製水中にて 24 時間保管後，万能試験機を用いて破壊強度を測定した。

結果及び考察

成績および考察

行動観察実験の結果，下歯槽神経切除により，P8 と R1 の口髭部の MHWT は各非切除群と比較し有意な低下を認め，また P8

MZ および LD は，LZ および CM と比較して有意に高い破壊切除群の MHWT は R1 切除群と比較して有意に低下した。免疫強度を示した。これは，MZ および LD は CM と比較して材料自組織学的解析の結果，P8 切除群は R1 切除群と比較して，切除 5

体が高い曲げ強さを有しており，圧縮荷重に対して破壊抵抗を示

日目において Iba1/CD11 c 共陽性細胞は有意に増加し，さらに切したためと推察される。また，MZ および LD はモノリシック構

除後 9 日目では CD11 c/CCL2 は有意に増加した。以上より，下造であるため，LZ に存在するフレームワークと前装陶材の界面

歯槽神経損傷後に口髭部に発現する機会痛覚過敏は加齢により増がないことから高い破壊強度を示したと考えられる。

強 及 び 持 続 す る 事 が 明 ら か と な り，TG 中 の M1 発 現 増 加 及 び
CCL2 発現増加が関与する可能性が示された。

10

13．新生児期外傷性ストレスによる顎顔面異常疼痛に対する性差の検討○尾辻盛 1,2，林

白川哲夫

14．光遺伝学的手法による島皮質興奮性ニューロンの腕傍核外側部ニューロンに対する投射様式

良憲 3,4，人見涼露 3,4，篠田雅路 3,4，

○廣瀬健佑 1,2,3，中谷有香 3，松村幸恵 2,3，白川哲夫 2，
小林真之 3

2,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

日本大学歯学部小児歯科学講座 2

日本大学歯学部小児歯科学講座 2

日本大学歯学部生理学講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所 機能形態部門

日本大学歯学部薬理学講座 34

目的

日本大学歯学部総合歯学研究所 顎口腔機能研究部門 5

口腔顔面領域における侵害情報は一次求心性神経を介して主に目的

三叉神経脊髄路核尾側亜核に投射し，一次体性感覚野，島皮質（IC）

新生児期に被る外傷の経験が成人期における外傷後の痛覚受容を含む辺縁系の大脳皮質へ伝達される。この経路の中継核であるに影響し，これにはミクログリアの関与が示唆されている。慢性

腕傍核には，特に外側（LPBN）に侵害情報が入力する。IC は痛み

疼痛におけるミクログリアの関与は広く認知されているが，これの情動的側面を担い，LPBN への下行性投射が報告されているが，は雄のみで認められる現象であり，雌では T 細胞が選択的に寄与

その機能については不明である。そこで我々は，IC ニューロンかしていることが報告されている。本研究では新生児期の外傷性ス

らの LPBN に存在する興奮性ニューロン，抑制性ニューロン，コ

トレスにより成体期に顎顔面領域で生じる異常疼痛に寄与する細リン作動性ニューロンに対するシナプス投射様式を光遺伝学的手胞で性差があるのかどうかを検討した。

法およびホールセル・パッチクランプ法を用いて検索した。
方法

方法
雄性および雌性の Sprague-Dawley ラットを用い，生後 4 日目

それぞれのニューロンを同定するために GABA 作動性ニュー（新生児期）に口髭部皮膚に 2.5 mm の切開を加え，生後 7 週目（成ロ ン に 緑 色 蛍 光 タ ン パ ク 質（Venus）を 発 現 し， コ リ ン 作 動 性体期）に同部位へ 1 cm の切開を加えた。成体期再切開後 2 日目か

ニューロンに赤色蛍光タンパク質（tdTomato）を発現させた遺伝

ら口髭部にフォンフライフィラメントにより機械刺激を与え，逃子改変動物である Venus × ChAT-tdTomato ラットを用いた。

避反射閾値を隔日的に 10 日目まで測定した。その後，三叉神経

さらに，青色光刺激によって活性化する非選択的陽イオンチャネ

脊髄路核尾側亜核（Vc）におけるミクログリアおよび T 細胞の数ルであるチャネルロドプシン 2（ChR2）をアデノ随伴ウイルスベクを免疫組織化学的に解析した。また，成体期再切開前から浸透圧

ターによってラットの IC ニューロンに導入した。4-5 週間後にポンプを用いてミクログリア活性化阻害薬（ミノサイクリン）およ

LPBN を 含 む 急 性 脳 ス ラ イ ス を 作 製 し，ChR2 を 発 現 し たび T 細胞活性化阻害薬（ピオグリタゾン）を大槽内へ持続投与し，IC → LPBN 下行性投射線維を光刺激にて選択的に興奮させて興口髭部皮膚への機械刺激に対する逃避反射閾値を測定した。その奮性ニューロン，抑制性ニューロン，コリン作動性ニューロンの後，Vc におけるミクログリアおよび T 細胞の発現を免疫組織化

各々から興奮性シナプス後電流（pEPSC）を記録した。
結果・結論

学的に解析した。

コリン作動性ニューロンの振幅は抑制性ニューロンに比較して結果
成体期再切開後の口髭部皮膚への機械刺激に対する逃避反射閾

有意に大きかった。また，興奮性ニューロン，抑制性ニューロン

値および Vc におけるミクログリア活性化に性差は認められな及びコリン作動性ニューロンの各々において pEPSC の振幅は，かった。一方で，ミノサイクリンによる逃避反射閾値低下および非選択的アセチルコリン受容体作動薬であるカルバコールの灌流

Vc におけるミクログリア数増加の抑制は雄でのみ認められ，雌投与により有意に減弱し，ムスカリン M1 受容体選択的拮抗薬ででは認められなかった。成体期再切開後 10 日目の Vc における T

あるピレンゼピンの灌流投与により振幅の減弱は阻害された。し細胞の浸潤は雌雄で同程度に認められたが，ピオグリタゾンによたがって，LPBN におけるニューロンには M 1 受容体が発現し，る逃避反射閾値低下の抑制効果は雌で顕著に認められた。

IC から投射を受けるコリン作動性ニューロンからのアセチルコ考察

リンの放出で LPBN 内で侵害情報を抑制している可能性が示唆さ

新生児期の外傷性ストレスによる顎顔面領域における外傷性疼れた。

痛強度の増強には，雄ではミクログリア，雌では T 細胞が優位に関与している可能性が示唆された。

11

15．
性解析

遺伝子変異を有するヒト歯髄幹細胞の特○星まなみ 1,2，石山未紗 2,5，伊藤寿典 2，浅野正岳 3,4，
白川哲夫 2,5
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部小児歯科学講座 2
日本大学歯学部病理学講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所 生体防御部門 4日本大学歯学部総合歯学研究所 顎口腔機能研究部門 5

目的
MECP2 は X 染色体長腕（Xq28）上の遺伝子で，MECP2 の変
異は Rett 症候群や重度神経発達障害を引き起こす。Rett 症候群
は主に女性に発症し，一対の X 染色体のうち片方の MECP2 に変異を認める。今回，MECP2 の 1 塩基変異により発症した Rett
症候群女児から得た歯髄から幹細胞を分離し，特性の解析を試みたので報告する。なお，本研究は日本大学歯学部倫理委員会の承認を得て実施した（倫許 EP18 D011）。
材料及び方法10 代 Rett 症候群女児及び健常女児の抜去歯から歯髄組織を採取し，20%FBS 添加 MEMα 培地により，37℃，5%CO2 インキュベーター内で培養した。アウトグロースした細胞について Cellartis MSC Xeno-Free Basal Medium（タカラバイオ）にて培養継続
し実験に供した。Rett 女児の MECP2 変異部位については，担当医からの情報に基づき変異部位を切断する酵素 Nla Ⅲにて処理し確認した。MeCP2 タンパクの発現と局在，ならびに幹細胞としての性質を調べる目的で，スライド上で歯髄細胞を 24 時間培
養後，4% パラホルムアルデヒドで固定し，MeCP2 ならびに幹細胞マーカーである Ki-67，STRO-1，SSEA3 に対する抗体にて免疫蛍光二重染色を行った。また，これらタンパクの核内局在について DAPI にて検討した。
結果及び考察
免疫蛍光染色にて，健常女児の細胞では全細胞で MeCP2 が主に核に局在していたのに対し，Rett 女児の細胞では細胞質と核がほぼ同レベルで染色された細胞も認められた。この結果は，Rett
女児の一部の細胞において MeCP2 タンパクの核内移行あるいは核内での DNA 結合能の低下があることを示しており，それらはMECP2 の変異アレルが活性化した細胞と考えられた。Ki-67 発
現は核内に限局し，DAPI 染色の核の濃淡と類似していた。またSTRO-1 は主に細胞質に，SSEA3 は細胞質と核の両方に免疫陽性反応が確認されたが，Rett 女児と健常女児の細胞で差異はみられなかった。以上の結果より，Rett 女児と健常女児の歯髄細胞が幹細胞としての性質を有すること，また Rett 女児の歯髄細胞ではMECP2 の変異アレルと正常アレルのいずれかが活性化している細胞が混在することが示唆された。

12