陸の水（Limnology in Tokai Region of Japan）87 : 23 - 30（2020）

報告（Report）

弁天池（岐阜県可児市）のヒメコウホネ（広義）Nuphar subintegerrima（Casp.）Makino sensu lato 地域個体群の水上葉の形態的特徴と DNA 情報を用いた分類学的再考
南基泰1)・吉田桃子1)・藤井太一1)・森

高子1)・村上哲生1)

Taxonomic reconsideration of the local population of Nuphar subintegerrima (Casp.)
Makino sensu lato in Benten-ike Reservoir, Kani City, Gifu Prefecture, Central Japan
using the morphological characteristics of the emergent leaves and DNA information
Motoyasu MINAMI 1), Momoko YOSHIDA1), Taichi FUJII 1), Takako MORI 1) and Tetuo MURAKAMI 1)

摘要2015年に絶滅した弁天池（岐阜県可児市）のヒメコウホネ（広義）Nuphar subintegerrima（Casp.）Makino sensu
lato（スイレン科 Nymphaeaceae）個体群再生事業を，2017年から実施してきた。コウホネ属の形態には種内および種間で多様な変異があるため，本事業開始時点では本個体群を他のコウホネ属と明確に識別することができていなかった。そのため，これまでは本個体群を暫定的にヒメコウホネ（広義）としていた。本事業の学術的価値を保証するためには，保全対象種の正確な種名を同定しておく必要がある。そこで，本事業に関わる一般の人々でも容易に種同定可能な水上葉の形態的特徴を用いて，種同定を行った。本個体群の水上葉の葉身形は広卵形から狭卵形で，裏面にはわずかに毛が生え，サイコクヒメコウホネ N. saikokuensis Shiga et Kadono の葉身形の形態的特徴と一致した。また，葉身長と葉身幅についても，本個体群（葉身長8.5~16.2 cm，葉身幅8.0~11.9 cm）とサ
イコクヒメコウホネ（葉身長10~30 cm，葉身幅7~20 cm）は重複していた。水上葉の形態的特徴から，本個体群をサイコクヒメコウホネと同定した。さらに，水上葉の形態による種同定結果の補完と他のコウホネ属との分子系統関係を明らかにするために，ヒメコウホネ（狭義）N. subintegerrima sensu stricto，サイコクヒメコウホネ，
コウホネ N. japonica DC.，オグラコウホネ N. oguraensis Miki を入手し，核 ITS および葉緑体 trnL―trnF 遺伝子
間領域を用いて分子系統学的解析も実施した。本個体群は，サイコクヒメコウホネと最も近縁となり，水上葉の形態的特性による種同定結果と一致した。かつて，サイコクヒメコウホネはヒメコウホネ（広義）として分類されてきたが，2015年に独立種になったことが報告されている。したがって，本事業が開始された2017年の段階で，本個体群はヒメコウホネ（広義）からサイコクヒメコウホネに修正されなくてはいけなかった。しかし，本事業に参加していた研究者の文献調査不足が原因で種名が修正されないまま2019年まで放置されてしまった。本事業に参加した研究者として，早い段階で本個体群の再同定を行い，常にコウホネ属に関連する情報収集を継続的に実施することの必要性を再認識した。さらに，事業終了後も保全対象生物の分類学的再考が可能なように，保全対象とした生物の写真や証拠標本を保管していくことも必要である。
キーワード：サイコクヒメコウホネ，ヒメコウホネ（広義），弁天池（岐阜県可児市），分子系統学

1)〒487-8501 愛知県春日井市松本町1200 中部大学応用生物学部（南基泰 E-mail; minami@isc.chubu.ac.jp）College of Bioscience and Biotechnology,
Chubu University, 1200 Matsumoto-cho, Kasugai City, Aichi Prefecture, 487-8501 Japan

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南

基泰ほか

Abstract
We conducted a regeneration project of a local population of Nuphar subintegerrima (Casp.) Makino sensu lato
(Nymphaeaceae), which has been extinct since 2015, in the Benten-ike reservoir, Kani City, Gifu Prefecture, Central
Japan, from 2017. The species name of the population had not been precisely identiﬁed, due to the inter- and intraspeciﬁcmorphological variations within the genus Nuphar, and had been provisionally referred to as N. subintegerrima sensu
lato. Identification of the exact species name of the population became necessary to enhance the academic value of thepreservation project. The species were initially identified using morphological characteristics of the emergent leaves sothat individuals engaged in the regeneration project can easily identify the species. The shape of emergent leaf bladesof the population was widely ovate to narrowly ovate, and slightly pilose on the underside, which was consistent withthose of N. saikokuensis Shiga et Kadono. In addition, the length and the width of emergent leaf blades of the population(length, 8.5 – 16.2 cm; width, 8.0 – 11.9 cm) and those of N. saikokuensis (length, 10 – 30 cm; width, 7 – 20 cm)
overlapped. Identiﬁcation from the morphological features of emergent leaves thus revealed that the population consistsof N. saikokuensis. We then obtained samples of N. subintegerrima sensu stricto, N. saikokuensis, N. japonica DC., and N.
oguraensis Miki, and determined the DNA sequences of the nuclear internal transcribed spacer (ITS) and chloroplast trnL–
trnF intergenic spacer regions in order to enhance the morphological identiﬁcation and to identify the species’ molecularphylogenetic relation to other members of the genus. The population was found to be phylogenetically very closely related toN. saikokuensis, which was traditionally identiﬁed as N. subintegerrima sensu lato, but was deﬁned as a new distinct species
in 2015. At the start of the project in 2017, the species name should have been corrected from N. subintegerrima sensu
lato to N. saikokuensis; however, due to the lack of background research, it was left uncorrected until 2019. Prior thoroughbackground research on the genus Nuphar would have led to early re-identiﬁcation of the species name of the population. In
addition, it is necessary to keep photographs and voucher specimens of conserved organisms so that their classiﬁcation canbe reconsidered even after the project is over.
Key words: Nuphar saikokuensis, Nuphar subintegerrima sensu lato, Benten-ike Reservoir (Kani City, Gifu Prefecture,
Central Japan), molecular phylogeny（2020年2月14日受付；2020年4月8日受理）
し，著者らが入手できた最も古い記録の「可児の植物」
（可

はじめに

児市教育委員会，1998）には本個体群の種名は，コウホネ

ヒメコウホネ（狭義）Nuphar subintegerrima（Casp.）Makino

N. japonica DC. と記載されている。その後，どのような経緯

sensu stricto（スイレン科 Nymphaeaceae）は，東海地方に産があったかは不明だが，「可児市史第4巻自然編」（可児市，する日本固有の水草である（志賀，2015）。しかし，生育地

2007）では本個体群の種名はヒメコウホネ（狭義，広義にの消失や生育環境の変化によって多くの個体群が衰退もしく

ついては不明）と修正されている。このように種名が修正は絶滅している（例えば，名古屋市動植物実態調査検討会，されたのは，コウホネ属は形態に多様な変異があり（角野，2004；山岡，2016）。岐阜県可児市東帷子薬王寺境内弁天池

1994），その変異も種を超えて連続するため（志賀・角野，（以降，弁天池）にもヒメコウホネ（広義）N. subintegerrima

2005），最初に誤同定されたことが原因と考えられる。ヒメsensu lato 個 体 群（ 以 降， 本 個 体 群 ） が 生 育 し て い た が，

コウホネ（狭義）は，Makino（1910）の原記載では長さ5～2015年に絶滅してしまった。幸にも本個体群の一部は，地元

11 cm，幅4.8～8.5 cm で円みのある水上葉を持つ小型の植物の自然保護団体「鳩吹山を緑にする会」によって弁天池下のとしている。しかし，西日本には葉身の長さが20 cm を超え

休耕田に移植されていた（以降，休耕田に移植されていた個る個体や，コウホネとオグラコウホネ N. oguraensis Miki の体群を休耕田個体群と称す）。そこで，2017年より，鳩吹山

中間の形態的特性をもつ個体が生育している（志賀・角野，を緑にする会，可児市環境課，中部大学によって，休耕田個

2005）。これらの個体は他に該当する分類群がないことから，体群を用いて本個体群を再生する取り組みが行われている

ヒメコウホネ（狭義）に，これらの個体も含めてヒメコウホ（村上ほか，2018）。

ネ（広義）とされていた時期がある（志賀・角野，2005）。

本事業を開始した当初から，本個体群は鳩吹山を緑にす

その後，分類学的再考がされ，ヒメコウホネ（広義）に含まる会によってヒメコウホネ（広義）と呼ばれていた。しかれていた中部から西日本に分布する広卵形から長楕円形の葉Ⓒ2020

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弁天池（岐阜県可児市）ヒメコウホネ（広義）地域個体群の分類学的再考
形を持つものを，ヒメコウホネ（狭義）とは別種のサイコク

る自主独立的な自然保護活動に落とし込むことができない。

ヒメコウホネ N. saikokuensis Shiga et Kadono として独立させ

しかし，水上葉の形態による再同定の補完だけでなく，本個た（Shiga and Kadono, 2015；志賀，2015）。本個体群をヒメ

体群の地域固有の遺伝的特性まで配慮した再生のためには遺コウホネ（狭義，広義については不明）と記載している「可伝的地域性についても明らかにしておく必要性があると判断

児市史第4巻自然編」（可児市，2007）が発刊された頃は，サしたため DNA 解析も実施した。

イコクヒメコウホネはヒメコウホネ（広義）に含まれていた（志賀・角野，2005；Shiga and Kadono, 2015；志賀，2015）。

供試試料および方法

このような分類学的問題点を認識していたが，本個体群を形態や DNA 情報に基づく再同定をしていなかったため，前報

水上葉の形態学的特徴による種同定
水上葉の状態，葉身形，葉身サイズ（長さ，幅）の形態的（村上ほか，2018）では本個体群をヒメコウホネ（広義）と特徴を用いて（表1）（志賀，2015），休耕田個体群の種同定表記した。
最新の植物分類体系 APGIII によると，日本国内に生育すを行った。また，葉身形については，志賀 (2015）と分子系

るコウホネ属植物は6種および数種の変種，雑種に分類され統学的解析用サンプルとして各地より分与を受けたコウホネている（志賀，2015）。本事業の学術的価値を高めるために属の水上葉も参考とした（表2，図1）。

は，本個体群の正確な種名を同定しておく必要がある。コウホネ属は，水上葉の形態を比較することによって，植物学的分子系統学的解析

専門知識を有しない一般の人々でも容易に種同定が可能であ

分子系統学的解析のために，各地で保存されてきたコウホ

る（志賀，2015）。そこで，休耕田個体群を水上葉の形態的

ネ属の新鮮な水上葉の分与を受けた（表2，図1）。分与され特徴で再同定した（志賀，2015）。さらに，水上葉の形態にた同属植物は，いずれも研究者によってすでに種同定され，よる再同定結果の補完と他のコウホネ属との分子系統関係を自生地もしくは施設内で保存栽培されてきたヒメコウホネ

明らかにするために，ヒメコウホネ（狭義），サイコクヒメ（狭義）（岐阜県岐阜市達目洞），サイコクヒメコウホネ（熊コウホネ，コウホネ，オグラコウホネを入手し，高等植物の本大学薬学部附属薬用植物園），コウホネ（昭和薬科大学附

分子系統学的解析に用いられることの多い核 ITS および葉緑属薬用植物園，熊本大学薬学部附属薬用植物園），オグラコ

体 trnL―trnF 遺伝子間領域（例えば，Minami et al., 2019）をウホネ（熊本大学薬学部附属薬用植物園）の4分類群である（表

用いて分子系統学的解析も行った。DNA 解析は，費用がか

2）。以降，休耕田個体群はヒメコウホネ（広義，弁天池）とかり，実験施設が必要なため大学や研究機関に依存しなくて称し，分子系統学的解析に供試したサンプルの略記は表2にはいけなくなる。そのため，DNA 解析は，一般の人々によ記載した。

表 1．ヒメコウホネ（広義，弁天池）とその他コウホネ属４分類群の水上葉の形態的特徴
Table 1. Morphological characteristics of emergent leaves in Nuphar subintegerrima sensu lato and other four Nuphar taxa
和名（学名）

水上葉の状態Japanese name (Scientiﬁc name)

State of emergent leaves

水上葉の葉身形
Shape of emergent
leaf blades

広卵形から狭卵形
ヒメコウホネ（広義，弁天池）1) 水面から抽出するか，浮葉となる(N. subintegerrima sensu lato) emergent from water or ﬂoating on water widely ovate to narrowly
surfaceovate
ヒメコウホネ（狭義）2)
水面から抽出するか，浮葉となる
円形(N. subintegerrima sensu stricto) emergent from water or ﬂoating on water roundish
surface

水上葉の葉身長（cm）水上葉の葉身幅（cm）
Length of emergent
Width of emergent
leaf blades (cm)leaf blades (cm)8.0～11.9

4～17

4～15

記載無
undescribed

10～30

7～20

裏面：わずかに毛
slightly pilose on the underside

水面から抽出するか，浮葉となる
広卵形から狭卵形
emergent from water or ﬂoating on water widely ovate to narrowly
surfaceovate

コウホネ 2)(N. japonica)

水面から抽出するか，浮葉となる
狭卵形から長楕円形
浅い水深では，水面から鋭角に抽出
emergent from water or ﬂoating on water
surfacenarrowly ovate to oblong
emergent at an acute angle from water
surface in shallow waters

20～52

ふつう水面に浮いて浮葉となる
normally ﬂoating on water surface

9～19

広卵形
widely ovate

Emergent leaf hair

裏面：わずかに毛
slightly pilose on the underside

8.5～16.2

サイコクヒメコウホネ 2)(N. saikokuensis)

オグラコウホネ 2)(N. oguraensis)

水上葉の毛

10～26

表面：無毛
裏面：若い時に少し毛
glabrous on the uppersurfaces
slightly pilose on the undersideduring immature stages

8～15

裏面：毛
pilose on the underside1) ヒメコウホネ（広義，弁天池）の水上葉の形態的特性については，2019年7月18日に本研究調査地で開花していたヒメコウホネ（広義）20個体を観察，測定したデータを記載した．
2) ヒメコウホネ（狭義），サイコクヒメコウホネ，コウホネ，オグラコウホネの水上葉の形態的特徴については，志賀（2015）より引用．
1) We collected a total of 20 ﬂowering plants of N. subintegerrima sensu lato (July 18, 2019) at the study site and measured the morphological characteristics of emergent leaves.
2) The morphological characteristics of emergent leaves of N. subintegerrima sensu stricto, N. saikokuensis, N. japonica, and N.oguraensis are cited from Shiga (2015).

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表 2．分子系統学的解析に用いたコウホネ属5分類群の履歴
Table 2. The source of ﬁve Nuphar taxa used in molecular phylogenetic analysis
略記 1)
Abbrevation 1)

和名（学名）
Japanese name (Scientiﬁc name)
ヒメコウホネ（広義）(N. subintegerrima sensu lato)

履歴Origin

ヒメコウホネ（広義，弁天池 -1, 2, 3）
N. subintegerrima sensu lato (Benten-ike-1, 2, 3)

薬王院弁天池（岐阜県可児市東帷子）保全株
Cultivar, Benten-ike reservior, Yakuo-in Temple, Higashikatabira, Kani City, Gifu
Prefecture, Japanヒメコウホネ（狭義）ヒメコウホネ（狭義，達目洞 -1, 2, 3）
逹目洞ヒメコウホネ特別保全地区（岐阜県岐阜市達目洞）保全株(N. subintegerrima sensu stricto) N. subintegerrima sensu stricto (Dachibokubora-1, 2, 3) Native variety, N. subintegerrima Preservation Area, Dachibokubora, Gifu City, Gifu
Prefecture, Japanサイコクヒメコウホネ(N. saikokuensis)

サイコクヒメコウホネ（熊大 -1, 2, 3）
N. saikokuensis (Kumamoto Univ.-1, 2, 3)

熊本大学薬学部附属薬用植物園（熊本県熊本市中央区大江本町）保存株
Cultivar, Eco-Frontier Center of Medicinal Resources, School of Pharmacy, Kumamoto
University, Oe-honmachi, Chuo-ku, Kumamoto City, Kumamoto Prefecture, Japanコウホネ(N. japonica)

コウホネ（昭薬大 -1, 2, 3）
N. japonica (Showa Pharm. Univ.-1, 2, 3)

昭和薬科大学附属薬用植物園（東京都町田市東玉川学園）保存株
Cultivar, Medicinal Plant Garden, Showa Pharmaceutical University, HigashiTamagawagakuen, Machida City, Tokyo, Japan

コウホネ（熊大 -1, 2, 3）
N. japonica (Kumamoto Univ.-1, 2, 3)

熊本大学薬学部附属薬用植物園（熊本県熊本市中央区大江本町）保存株
Cultivar, Eco-Frontier Center of Medicinal Resources, School of Pharmacy, Kumamoto
University, Oe-honmachi, Chuo-ku, Kumamoto City, Kumamoto Prefecture, Japanオグラコウホネ（熊大 -1, 2, 3）
N. oguraensis (Kumamoto Univ.-1, 2, 3)

熊本大学薬学部附属薬用植物園（熊本県熊本市中央区大江本町）保存株
Cultivar, Eco-Frontier Center of Medicinal Resources, School of Pharmacy, Kumamoto
University, Oe-honmachi, Chuo-ku, Kumamoto City, Kumamoto Prefecture, Japanオグラコウホネ(N. oguraensis)

1) 各コウホネ属分類群より3サンプルについて，核 ITS，葉緑体 trnL–trnF 遺伝子間領域の塩基配列を決定した．
1) A total of three samples in each Nuphar taxon were determined the DNA sequences of the nuclear ITS and chloroplast trnL–trnF intergenic spacer region.

ヒメコウホネ（広義，弁天池）
ヒメコウホネ（広義，弁天池）
N. subintegerrima sensu lato (Benten-ike)

コウホネ（昭薬大）コウホネ（昭薬大）N. japonica (Showa Pharm. Univ.)

ヒメコウホネ（狭義，達目洞）ヒメコウホネ（狭義，達目洞）
N. subintegerrima sensu stricto (Dachibokubora)

サイコクヒメコウホネ（熊大）サイコクヒメコウホネ（熊大）N. saikokuensis (Kumamoto
N．saikokuensis(KumamotoUniv.)
Univ.)

オグラコウホネ（熊大）
オグラコウホネ（熊大）N. oguraensis (Kumamoto
N．oguraensis(KumamotoUniv.)
Univ.)

図 1. ヒメコウホネ（広義，弁天池）とその他コウホネ属４分類群の水上葉．各コウホネ属植物の履歴については，
図 1. ヒメコウホネ（広義，弁天池）とその他コウホネ属４分類群の水上葉．各コウホネ属植物の履歴については，表2を参照．写真中の直線は3cm．

表2を参照．写真中の直線は3cm．
Fig.1. Emergent leaves of Nuphar subintegerrima sensu lato and other four Nuphar taxa. The source of each Nuphar taxon are
Fig.1. Emergent leaves of Nuphar subintegerrima sensu lato and other four Nuphar taxa. The source of each Nuphar taxon are shown in Table 2. The scale
shown in Table 2. The scale bars in the photo correspond to 3 cm.
bars in the photo correspond to 3 cm.

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弁天池（岐阜県可児市）ヒメコウホネ（広義）地域個体群の分類学的再考
ヒメコウホネ（広義，弁天池）および入手した同属植物4

ウホネ（狭義）とは明らかに異なっていた（表1，図1）。ま

分類群の水上葉は，全 DNA 抽出まで -20℃で保存した。各た，葉身長と葉身幅についても，ヒメコウホネ（広義，弁天分類群ともに異なる個体から採集された水上葉3サンプルず池）（葉身長8.5~16.2 cm，葉身幅8.0~11.9 m）と，文献（志つを全 DNA 抽出用サンプルとした。各水上葉約30 mg を液賀，2015）に記載されているサイコクヒメコウホネ（葉身長

体窒素下で粉砕し，DNeasy Plant Mini Kit（QIAGEN, Hilden,

10~30 cm，葉身幅7~20 cm）と一致し，両分類群ともに葉裏

Germany） を 用 い て 全 DNA を 抽 出 し た 後，GENECLEAN

面には，わずかに毛が生えていた。

SPIN KIT（MP Biomedicals, CA, USA）を用いて精製した。精ヒメコウホネ（広義，弁天池）と他のコウホネ属4分類群

製した全 DNA を鋳型として，PCR 法による核 ITS および葉の核 ITS は788～794 bp の DNA 配列が決定でき，塩基置換

緑体 trnL―trnF 遺伝子間領域（以降，葉緑体 trnL/F）の増幅が8箇所，挿入または欠失が14箇所で確認された（表3）。ヒは TaKaRa Ex Taq (Takara Bio Inc., Kusatsu, Shiga, Japan) のプ

メコウホネ（広義，弁天池 -1, 2, 3）の核 ITS は，コウホネ

ロトコールに従った。核 ITS および葉緑体 trnL/F を増幅する（昭薬大 -2）と一致した。しかし，ヒメコウホネ（狭義，達ことのできるユニバーサルプライマー（各プライマー最終濃目洞 -1, 2, 3）（DNA 多型箇所：319番目），サイコクヒメコ

度0.2 µM）を用い，20 µl の PCR 反応液を調製した。核 ITS は，

ウホネ（熊大 -1, 2, 3）（DNA 多型箇所：512番目），コウホ

Forward プ ラ イ マ ー :5’-GACGTCGCGAGAAGTTCATT-3’，

ネ（昭薬大 -1, 3，熊大 -1, 2, 3）（DNA 多型箇所：749番目）

Reverse プ ラ イ マ ー :5’-GTAAGTTTCTCTTCCTCCGC-3’

およびオグラコウホネ（熊大 -1, 2, 3）（DNA 多型箇所：99,(Long et al., 2004)，葉緑体 trnL/F は Forward プライマー :5’

114, 162, 176, 241, 512, 519-526, 542-545, 581, 770番目）との-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3’，Reverse: プ ラ イ マ ー5’間に，塩基置換，挿入または欠失が認められた。一方，葉緑-ATTTGAACTGGTGACACGAG-3’(Taberlet et al., 1991) を体 trnL/F は1,048～1,059 bp の DNA 配列が決定でき，塩基置用いた。PCR 反応は DNA サーマルサイクラー（GeneAmp

換が4箇所，挿入または欠失が24箇所で確認された（表4）。

PCR System 9700, Applied Biosystems, Beverly, MA, USA） をヒメコウホネ（広義，弁天池 -1, 2, 3）は，ヒメコウホネ（狭用いて，両領域共に熱変性94℃，2分を1回，熱変性94℃，15義，達目洞 -1），サイコクヒメコウホネ（熊大 -1, 2, 3）およ秒，アニーリング60℃，30秒，伸長反応68℃，1分を1サイ

びコウホネ（昭薬大 -1, 2, 3，熊大 -1, 2, 3）と一致した。しクルとして30サイクル行い，最後に伸長反応68℃，7分を1かし，ヒメコウホネ（狭義，達目洞 -2, 3）（DNA 多型箇所：回の条件で行った。PCR 産物は2.0％アガロースゲル電気泳

303-305, 312-314, 347, 348-351, 352, 388, 407-412, 977番目）お動（1× TBE，100V，30分 間 ） で 増 幅 を 確 認 後，QIAquick

よびオグラコウホネ（熊大 -1, 2, 3）（DNA 多型箇所：303-

PCR Puriﬁcation Kit (QIAGEN) を用いて精製した。DNA シー

305, 347, 352, 373-378, 401, 920番目）との間に，塩基置換，

ク エ ン ス 反 応 は Bigdye Terminator v 3.1 Cycle Sequencing Kit

挿入または欠失が認められた（表4）。このように異なる種で(Applied Biosystems) を用い，核 ITS は PCR 増幅用プライマー，

あるにもかかわらず，核 ITS と葉緑体 trnL/F に共通の配列

葉緑体 trnL/F は PCR 増幅用の Forward プライマーおよび合が認められたのは，ヒメコウホネ（広義）はコウホネ，オグ

成したシークエンス用プライマー（Forward プライマー :5’

ラコウホネ，ヒメコウホネ（狭義）の種間雑種を起源とする-GGTTCAAGTCCCTCTATCCC-3’，Reverse プ ラ イ マ ー :5’

可能性があるという報告（志賀・角野，2005）を支持するも-GGGGATAGAGGGACTTGAAC-3’）を用いて，3500 Geneticのであった。特に，コウホネ（昭薬大 -2）は，核 ITS と葉

Analyzer System (Applied Biosystems) のプロトコールに従い緑体 trnL/F 共にヒメコウホネ（広義，弁天池）と一致した。

ダイレクトシークエンス法で各領域の塩基配列を決定した。

コウホネとヒメコウホネ（広義）は，両種の識別が困難な形決定された両領域の DNA 配列は DDBJ（DNA DATA BANK

態的に中間体があり（角野，1994），自然雑種と考えられる

of JAPAN）に登録し，アクセッション番号を取得した（表3,個体も報告されている（志賀・角野，2005）。コウホネ（昭4）。決定された塩基配列は MEGA7（Kumar et al., 2016) を用

薬大 -1, 2, 3）は，1993年4月に東京都薬用植物園から昭和薬

いて DNA 多型を検出し，Tamura 3-parameter model（Tamura，

科大学附属薬用植物園に導入され，形態的特徴からコウホネ

1992）によって最尤系統樹を構築した（図2）。また，系統樹として保存栽培されてきた。しかし，コウホネ（昭薬大 -2）の信頼性は，500回繰り返しによるブートストラップ解析には核 ITS と葉緑体 trnL/F 共にヒメコウホネ（広義，弁天池）

よって評価した。

と一致したことから，形態的に識別できなかったヒメコウホ
ネ（広義），もしくは核 ITS と葉緑体 trnL/F 共にヒメコウホ
ネ（広義，弁天池）と一致する両種の自然雑種の可能性が考結果および考察えられた。本研究のように，核 DNA および葉緑体 DNA を

ヒメコウホネ（広義，弁天池）の葉身形は広卵形から狭卵各一領域ずつ解析しただけでは，コウホネ（昭薬大 -2）が，形で，文献（志賀，2015）に記載されているサイコクヒメコ

形態的に識別できなかったヒメコウホネ（広義）なのか，自ウホネの葉身形の特徴と一致し，葉身形が円形となるヒメコ

然雑種なのかを断定することはできない。そのため，この問

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題を解決するためには解析領域を増やすか，もしくは次世代

た（表3）。また，ヒメコウホネ（狭義，達目洞）は，葉緑体

シーケンサーを用いた網羅的な解析が必要となってくる。

trnL/F で2つのハプロタイプが確認できたことから，種子親

ヒ メ コ ウ ホ ネ（ 広 義， 弁 天 池 ） は 核 ITS お よ び 葉 緑 体は少なくとも2系統（もしくは異なる2種）あることが明らか

trnL/F 共に集団内変異が認められなかった。しかし，同一個となった（表4）。
3株のみの解析だったため確信は持てないが，体群由来であっても，コウホネ（昭薬大）については，核ヒメコウホネ（広義，弁天池）は核 ITS および葉緑体 trnL/F

ITS で2つのハプロタイプが確認できたことから花粉親に少共に集団内変異が認められなかったことから，最初に弁天池

なくとも2系統（もしくは異なる2種）あることが明らかとなっに導入された個体群が同一の遺伝的系統であったことを示唆

表3．ヒメコウホネ（広義，弁天池）とその他コウホネ属4分類群の核 ITS の DNA 多型比較
Table 3. Comparison of DNA polymorphisms in the Nuclear ITS region in Nuphar subintegerrima sensu lato and other four Nuphar taxa
略記 1)

99

114

162

176

DNA 多型箇所 2)
Nucleotide position 2)
241319
512 519-526

LC512889

T

T

C

T

A

T

―

―

GTGG

―

G

G

ヒメコウホネ（狭義，達目洞 -1）
N. subintegerrima sensu stricto (Dachibokubora-1)

LC512891

*

*

*

*

*

C

―

―

*

―

*

*

ヒメコウホネ（狭義，達目洞 -2, 3）
N. subintegerrima sensu stricto (Dachibokubora-2, 3)

LC512892

*

*

*

*

*

C

―

―

*

―

*

*

サイコクヒメコウホネ（熊大 -1, 2, 3）
N. saikokuensis (Kumamoto Univ-1, 2, 3.)

LC512890

*

*

*

*

*

*

C

―

*

―

*

*

コウホネ（昭薬大 -2）
N. japonica (Showa Pharm. Univ.-2)

LC512894

*

*

*

*

*

*

―

―

*

―

*

*

コウホネ（昭薬大 -1, 3）
N. japonica (Showa Pharm. Univ.-1, 3)

LC512895

*

*

*

*

*

*

―

―

*

―

A

*

コウホネ（熊大 -1, 2, 3）
N. japonica (Kumamoto Univ.-1, 2, 3)

LC512896

*

*

*

*

*

*

―

―

*

―

A

*

オグラコウホネ（熊大 -1, 2, 3）
N. oguraensis (Kumamoto Univ.-1, 2, 3)

LC512893

C

C

T

C

G

*

C

CACCC
ACC

–

T

*

C

Abbrevation

DDBJ アクセッション番号1)

ヒメコウホネ（広義，弁天池 -1, 2, 3）
N. subintegerrima sensu lato (Benten-ike-1, 2, 3)

DDBJ accession no.

542-545

581

749

770

1) 略記は，表2を参照．2) DNA 多型箇所は，PCR 増幅領域のプライマーを含まない5' 末端からの塩基数．表中の「―」は欠失，「*」は最上段のヒメコウホネ（広義，弁天池）と同一の塩基．
1) Details for the abbreviation are shown in Table 2. 2) Variation sites are shown as nucleotide positions from the 5′ end of the PCR-ampliﬁed region without forward primer sequence.
Dashes (-) denote alignment gaps. Asterisks (*) indicate nucleotides identical to those in the top row.

表 4．ヒメコウホネ（広義，弁天池）とその他コウホネ属4分類群の葉緑体 trnL-trnF 遺伝子間領域の DNA 多型比較
Table 4. Comparison of DNA polymorphisms in the Chloroplast trnL-trnF intergenic spacer region in Nuphar subintegerrima sensu lato and other four
Nuphar taxa
略記 1)
Abbrevation

347

DNA 多型箇所 2)
Nucleotide position 2)
348-351 352 373-378 388

401

407-412920

977

DDBJ アクセッション番号
1)

DDBJ accession no.

303-305 312-314

ヒメコウホネ（広義，弁天池 -1, 2, 3）
N. subintegerrima sensu lato (Benten-ike-1, 2, 3)

LC512897

―

―

A

TATT

A

ATATAT

A

A

―

G

T

ヒメコウホネ（狭義，達目洞 -1）
N. subintegerrima sensu stricto (Dachibokubora-1)

LC512899

―

―

*

*

*

*

*

*

―

*

*

ヒメコウホネ（狭義，達目洞 -2, 3）
N. subintegerrima sensu stricto (Dachibokubora-2, 3)

LC512900

TTA

ATA

―

―

―

*

T

*

TTATAT*C

サイコクヒメコウホネ（熊大 -1, 2, 3）
N. saikokuensis (Kumamoto Univ.-1, 2, 3)

LC512898

―

―

*

*

*

*

*

*

―

*

*

コウホネ（昭薬大 -2）
N. japonica (Showa Pharm. Univ.-2)

LC512902

―

―

*

*

*

*

*

*

―

*

*

コウホネ（昭薬大 -1, 3）
N. japonica (Showa Pharm. Univ.-1, 3)

LC512903

―

―

*

*

*

*

*

*

―

*

*

コウホネ（熊大 -1, 2, 3）
N. japonica (Kumamoto Univ.-1, 2, 3)

LC512904

―

―

*

*

*

*

*

*

―

*

*

オグラコウホネ（熊大 -1, 2, 3）
N. oguraensis (Kumamoto Univ.-1, 2, 3)

LC512901

TTA

―

―

*

―

―

*

T

―

T

*

1) 略記は，
表2を参照．2) DNA 多型箇所は，PCR 増幅領域のプライマーを含まない5' 末端からの塩基数．表中の「―」は欠失，「*」は最上段のヒメコウホネ（広義，弁天池）と同一の塩基．
1) Details for the abbreviation are shown in Table 2. 2) Variation sites are shown as nucleotide positions from the 5′ end of the PCR-ampliﬁed region without forward primer sequence.
Dashes (-) denote alignment gaps. Asterisks (*) indicate nucleotides identical to those in the top row.

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28

弁天池（岐阜県可児市）ヒメコウホネ（広義）地域個体群の分類学的再考
1ヒメコウホネ（広義，弁天池-1,
N. subintegerrima sensu lato (Kanicity)N. subintegerrima sensu lato (Benten-ike-1, 2, 3)
2, 3）2, 3）N．saikokuensis (Kumamoto Univ.-1, 2, 3)
7サイコクヒメコウホネ（熊大-1,
N. saikokuensis (Kumamoto Univ.)
ヒメコウホネ（狭義，達目洞-1）
10
N. subintegerrima 1 (Gifu city) N. subintegerrima sensu stricto (Dachibokubora-1)
61

11
N. subintegerrima 2 (Gifu city) 3） N. subintegerrima sensu stricto (Dachibokubora-2, 3)
ヒメコウホネ（狭義，達目洞-2,
21
N. japonica 2 (Showa
Pharma.
Univ.) (Showa Pharm. Univ.-1, 3)
コウホネ（昭薬大-1,
3）N．japonica

64

22
N. japonica (Kumamoto
Univ.)
コウホネ（熊大-1,
2, 3）N．japonica(Kumamoto Univ.-1, 2, 3)

20
N. japonica 1 (ShowaN．japonica
Pharma. Univ.)
コウホネ（昭薬大-2）(Showa Pharm. Univ.-2)
2,Univ.)3）N．oguraensis (Kumamoto Univ.-1, 2, 3)
16オグラコウホネ（熊大-1,
N. oguraensis (Kumamoto

0.00100.001

図 2．核 ITS と葉緑体 trnL-trnF 遺伝子間領域によって構築されたコウホネ属5分類群の最尤系統樹．枝上の数字は以上のもの．図中のスケールは塩基置換数を示す．各コウホネ属分類群の履歴およ
図 2．核ITSと葉緑体500回のブートストラップ50%
trn L-trn F遺伝子間領域によって構築されたコウホネ属5分類群の最尤系統樹．学名の後のカッコ内はDDBJのアクセッション番号．
枝上の数字は500回のブートストラップ50%以上のもの．図中のスケールは塩基置換数を示す．各コウホネ属の履歴および略記は，表2を参照．
び略記は，表2を参照．
Fig.2. Maximum-likelihood
tree of the five Nuphar tree
taxaofbased
theNupharcombinedtaxa
analysis
ITS and Chloroplast
trnNuclear
L-trn F ITS and Chloroplast
basedofonNuclear
the combined
analysis of
Fig.2. Maximum-likelihood
the onfive
intergenic spacer regions. Numbers on the branches indicate the percentages of bootstrap probability based on 500 replicates; only
trnL-trnF intergenic spacer regions. Numbers on the branches indicate the percentages of bootstrap probability based on 500
values exceeding 50% are shown. The scale bar indicates 0.001 substitutions per site. Details for source and abbreviation of each Nuphar
only values exceeding 50% are shown. The scale bar indicates 0.001 substitutions per site. Details for source andtaxon are shown in replicates;
Table 2.

abbreviation of each Nuphar taxon are shown in Table 2.

する結果となった。今後は，ヒメコウホネ（広義，弁天池）

ネ属（オグラコウホネ，オゼコウホネ N. pumila（Timm）DC.

の集団内変異の有無について，サンプル数を増やして解析しvar. ozeensis H. Hara，シモツケコウホネ N. submersa Shiga etていく予定である。

Kadono，ネムロコホネ N. pumila（Timm）DC. var. pumila，ヒ核 ITS と葉緑体 trnL/F の両 DNA 配列を合わせて，他のコ

メコウホネ）は環境省レッドリスト2017（環境省，2017）にウホネ属との間で最も DAN 多型が検出されたオグラコウホ

記載され，サイコクヒメコウホネは京都府（京都府自然環境

ネ（熊大）をアウトグループとして最尤系統樹を構築した

課，
2015）
では絶滅危惧種に指定されている。保全活動を行っ（図2）。ヒメコウホネ（広義，弁天池 -1, 2, 3）は，ヒメコウていると「自分たちが保全対象としている生物は，地域固有

ホネ（狭義，達目洞 -1, 2, 3）のクラスターには含まれなかっの希少性の高いもの」と意識・無意識に期待してしまうことた。また，ヒメコウホネ（広義，弁天池 -1, 2, 3）は，核 ITSがある。確かに，保全対象種の地域固有性や希少性は，保全および葉緑体 trnL/F 共にコウホネ（昭薬大 -2）と一致したが，活動の理由づけ，活動のモチベーション維持につながるかも

その他のコウホネ（昭薬大 -1, 3，熊大 -1, 2, 3）によって形しれない。しかし，東海地方で情報公開されているサイコク

成されたクラスターには含まれなかった。そのため，形態的ヒメコウホネの保全は唯一本事業だけで，コウホネ属の生育に識別できなかったヒメコウホネ（広義）もしくは自然雑種

地は急速に消失している。本事業において再生を試みているだった可能性のあるコウホネ（昭薬大 -2）を除くと，ヒメ個体群が，東海地方固有ではなく，中部地方以西に広く分布コウホネ（広義，
弁天池 -1, 2, 3）はサイコクヒメコウホネ（熊するサイコクヒメコウホネであっても引き続き保全をしてい大 -1, 2, 3）と最も近縁であった。したがって，水上葉によくことは非常に意義深いことである。

る種同定と分子系統学的解析から，ヒメコウホネ（広義，弁かつて，サイコクヒメコウホネはヒメコウホネ（広義）と天池 -1, 2, 3）はサイコクヒメコウホネと同定できた。

して分類されてきたが（志賀・角野，2005），2015年に独立種になったことが報告されている（Shiga and Kadono, 2015；
志賀，2015）。したがって，本事業が開始された2017年の段保全対象種の分類に関する提言

階で，本個体群はヒメコウホネ（広義）からサイコクヒメコ

本個体群は，水上葉の形態的特徴（志賀，2015）および分

ウホネに修正されなくてはいけなかった。しかし，本事業に子系統学的解析から東海地方固有のヒメコウホネ（狭義）で参加していた研究者の文献調査不足が原因で種名が修正されはなく，中部地方以西に広く分布するサイコクヒメコウホ

ないまま2019年まで放置されてしまった。本事業に参加した

ネと同定された。環境省レッドリスト2017（環境省，2017）

研究者として，早い段階で本個体群の再同定を行い，常にコ

ではヒメコウホネは絶滅危惧 II 類となっているが，サイコウホネ属に関連する情報収集を継続的に実施することの必要

クヒメコウホネは記載されていない。しかし，他のコウホ性を再認識した。さらに，植田（1991）も提言しているよう

29

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日本陸水学会東海支部会

南

基泰ほか

に，事業終了後も保全対象生物種の分類学的再考が可能なよ村上哲生・三宅義信・岡崎敏広・南基泰（2018）：弁天池

うに，保全対象とした生物の写真や証拠標本を保管していく（岐阜県・可児市）のヒメコウホネ（Nuphar subintegerrima

ことも必要である。

（Casp.）Makino；Nymphaeaeceae）地域個体群の衰退と生育環境改善の試み．陸の水，80：1-9．

謝名古屋市動植物実態調査検討会（監）（2004）：ヒメコウホネ．

辞

名古屋市の絶滅の恐れのある野生生物レッドデータブック

本研究は，可児市の環境保全団体「環境パートナーシップ・

なごや2004―植物編―：103．名古屋市環境局環境都市推可児」の活動の一環として行ったものである。会員諸氏およ

進部環境影響評価室，名古屋．

び事務局を務められた可児市環境課のご理解とご協力に感謝

志賀隆（2015）：コウホネ属．改訂新版日本の野生植物１ソ致します。本研究は，「清流の国ぎふ森林・環境基金事業」

テツ科～カヤツリグサ科，大橋広好・門田裕一・木原浩・
邑田仁・米倉浩司（編）：46-48．平凡社，東京．

の助成を受けた。岐阜市逹目洞のヒメコウホネ（狭義）につ志賀隆・角野康郎（2005）：ヒメコウホネ（広義）の分類といては，岐阜市の許可（岐阜市自自（貴）指令第2号，平成30年10月26日）を得て，岐阜市自然共生部自然環境課自然係

生育地の現状について．分類，5：113-122．
Shiga, T. and Y. Kadono (2015): Nuphar saikokuensis

立ち合いのもと採集した。熊本大学薬学部の杉村康司准教授
からはコウホネ，サイコクヒメコウホネおよびオグラコウホ(Nymphaeaeceae), a new species from central to western Japan.

ネ，昭和薬科大学の高野昭人教授からはコウホネをご提供頂

The Journal of Japanese Botany, 90: 22-28.
Taberlet, P., L. Gielly, G. Pautou and J. Bouvet (1991): Universal

いた。以上の方々に深謝致します。

primers for amplification of three non-coding regions ofchloroplast DNA. Plant Molecular Biology, 17:1105–1109.
Tamura, K. (1992): Estimation of the number of nucleotide

引用文献

substitutions when there are strong transition-transversion andG + C-content biases. Molecular Biology and Evolution, 9:

角野康郎（1994）：コウホネ属．日本水草図鑑：112-116．文

678–687.

一総合出版，東京．
環 境 省（2017）： 環 境 省 レ ッ ド リ ス ト2017．http://www.env.

植 田 邦 彦（1991）： 学 名 と 証 拠 標 本 の 重 要 性． 雑 草 研 究，
36：227-235．

go.jp/press/ﬁles/jp/105449.pdf．最終閲覧日2019年12月11日．
可児市（編）（2007）：ヒメコウホネ．可児市史第4巻自然編：

山岡雅俊（2016）：犬山市のため池・農業用水路に生息する

192．可児市，可児．

絶滅危惧種～その現状と保護・保全に関わる課題～．ため

可児市教育委員会（編）（1998）：コウホネ．可児の植物（可池の自然，57：14-32．

児市の文化財第10集）：19．可児市教育委員会，可児．

（担当編集委員：野崎健太郎，椙山女学園大学教育学部）

Kumar, S., G. Stecher and K. Tamura (2016): MEGA7: Molecular
evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets.
Molecular Biology and Evolution, 33:1870–1874.
京都府自然環境課（2015）：京都府レッデータブック https://www.pref.kyoto.jp/kankyo/rdb/bio/db/ﬂo0232.html．最 終 閲 覧日2019年12月11日．
Long, C., N. Kakiuchi, A. Takahashi, K. Komatsu, S. Cai and M.
Mikage (2004): Phylogenetic analysis of the DNA sequence ofthe non-coding region of nuclear ribosomal DNA and chloroplastof Ephedra plants in China. Planta Medica, 70: 1080–1084.
Makino, T. (1910): Observations on the ﬂora of Japan (continued
from p.130). The Botanical Magazine, 24: 137-147.
Minami, M., M. Yasueda, T. Shirako, T. Murakami, T. Mori, T.
Fujii, T. Atsumi, T. Shibata and Y. Kadota (2019): Ecological,
phylogenetical, and pharmacognostical characteristics ofAconitum kiyomiense endemic to Hida highlands, Takayama city,
Gifu Prefecture, Japan. Journal of Natural Medicines, 73: 523532.

Ⓒ2020

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