厚生労働科学研究費補助金（難治性疾患等克服研究事業（難治性疾患等実用化研究事業（免疫アレルギー疾患等実用化等研究事業免疫アレルギー疾患実用化研究分野）））

分担研究報告書
研究課題：抗 CCP 抗体陽性未発症例における末梢血 T 細胞サブセットの解析
研究分担者 西本 患弘 東京医科大学医学総合研究所難病分子制御部門 兼任教授
研究協力者 村上 美帆 東京医科大学医学総合研究所難病分子制御部門 特任助教
伊藤 眞里 東京医科大学医学総合研究所難病分子制御部門 客員講師
研究要旨：抗CCP抗体は関節リウマチ（RA)に特異度の高い自己抗体である。抗CCP抗体の出現は、抗原特異的なT細胞の活性化による。抗CCP抗体陽性の疾患活動性を有するRA患者の末梢血単核球では、抗CCP抗体陰性のRA患者ならびに健常人群に比べて、CD25を高発現する活性化T細胞の割合が、有意に増加していることから、活性化T細胞の割合を知ることで、発症前の病態を知ることができるかも知れない。そこで抗CCP抗体陽性の未発症例において、末梢血におけるT細胞サブセッ卜の解析を行った。杭CCP抗体腸性の未発症例では、CD4+T細胞におけるCD25+活性化T細胞の割合は、疾患活動性を有するRA患者に比べて低く、健常人の値と同等であった。活性化T細胞の増加が発症に関与する可能性がある。

A. 研究目的

抗 CCP 抗体は関節リウマチ（RA)に特異度の高解析を行った。
B. 研究方法

い自己抗体であり、発症の 5 年前に約 40%の患者

抗 CCP 抗体陽性の未発症例から末梢血単核球で陽性となり、その陽性率は経年的に上昇する。

を分離し、CD4+ T 細胞における CD25+細胞、また、抗 CCP 抗体陽性の無症候者における RATreg、Thl、Th2 ならびに Thl7 細胞の割合を FACSの発症率（陽性的中率）は 16%と報告されているで解析した。

(Arthritis Rheum2004 ； 50：380-6)。

活性化を PMA/Ionomycine で 4 時間刺激し、我々は、これまでの研究で、抗 CCP 抗体陽性

抗 IFN-γ、抗 IL-4 または抗 IL-17A 抗体を用いの疾患活動性を有する RA 患者の末梢血単核球でた細胞内染色を行い、Thl、Th2 および Thl7 細胞は、抗 CCP 抗体陰性の RA 患者ならびに健常人を FACS で定 量した。同 時に、制 御性 T 細群に比べて、CD25 を高発現する活性化 T 細胞の(CD4+CD25+Foxp3+)も測定した。

割合が、有意に増加していること、治療により活性化 T 細胞の割合が減少することを報告してきた（村上 2013 年日本リウマチ学会学術集会)。

(倫理面への配慮）
患者検体の採取はヘルシンキ宣言を遵守し、東抗 CCP 抗体の出現は、抗原特異的な T 細胞の京医科大学の倫理委員会の承認のもとに行った。

活性化によると考えられることから、抗 CCP 抗患者情報に閲しては、治療施設•氏名•生年月日

体陽性の RA 患者と類似のプロフイ一ルを呈する•住所などの情報を削除し、匿名化した。"臨床研可能性がある。そこで抗 CCP 抗体陽性の未発症究に関する倫理指針”に沿って、人権の保護につい例において、末梢血における T 細胞サブセットのて、十分配傲しながら実験を行った。

(Actemra) Monotherapy (DREAM) study.

C. 研究結果

Mod Rheumatol. 2014 Jan;24(1):17-25.

抗 CCP 抗体陽性の未発症例において、CD4+ T細胞の割合 20.1%であり、健常人群の 36.3±2.

Horiuchi T, Ishii T, Iwahashi M, Iwamoto

12.4%(平均±標準偏差）に比べて低かった。また、

M, Kohsaka H, Kondo M, Matsubara T,

抗 CCP 抗体陽性の未発症例の CD4+T 細胞におMimura T, Miyahara H, Ohta S, Saeki Y,

ける CD25+活性化 T 細胞の割合は 7.3%であり、Saito K, Sano H, Takasugi K, Takeuchi T,

疾患活動性を有する抗 CCP 抗体陽性 RA 患者のTohma S, Tsuru T, Ueki Y, Yamana J,13.9±5.4%に比べて低く、抗 CCP 抗体陰性 RA

Hashimoto J, Matsutani T, Murakami M,

患者（6.7±2.9%)あるいは健常人(7.6±5.2%)の値

Takagi N. Retreatment efficacy and safetyと同等であった。

of tocilizumab in patients with rheumatoid
arthritis in recurrence (RESTORE) study.

D. 考察

抗 CCP 抗体陽性の未発症例の活性化 T 細胞のNishimoto N, Amano K, Hirabayashi Y,

Mod Rheumatol. 2014 Jan;24(1):26-32.
3.

割合は、RA 発症群に比べると低い傾向にあり、

Fujita R, Kawano F, Ohira T, Nakai N,Shibaguchi T, Nishimoto N, Ohira Y.

抗 CCP 抗体産生は生じているが、活性化 T 細胞Anti-interleukin-6の増加は生じていない可能性がある。

(MR16-1) promotes muscle regeneration

RA の発症メ力ニズムを考える上で興味深い。

via

ininfiltrated

また、T 細胞の活性化を抑えることで、発症を4.

BiochimT.

Longtermsafetyandeffectiveness of the anti-interleukin 6る。RA 発症には活性化 T 細胞の増加が関連する

receptor monoclonal antibody tocilizumab

可能性がある。

inpatientswithsystemic

juvenile

idiopathic arthritis in Japan. J Rheumatol.

F. 研究発表

2014.Apr;41(4):759-67.
5.

Tsuru T, Terao K, Murakami M, Matsutani
T, Suzaki M, Amamoto T, Nakashima H,

Horiuchi T, Ishii T, Iwahashi M, Iwamoto
M, Kohsaka H, Kondo M, Matsubara T,Mimura T, Miyahara H, Ohta S, Saeki Y,

ImmuneAkiyamaA,

NishimotoN.

response

toinfluenza

vaccinepneumococcal

Saito K, Sano H, Takasugi K, Takeuchi T,

polysaccharide

andvaccine

under IL-6 signal inhibition therapy with

Tohma S, Tsuru T, Ueki Y, Yamana J,

tocilizumab.

Hashimoto J, Matsutani T, Murakami M,
activity after cessation of tocilizumab

macrophages.

Yokota S, Imagawa T, Mori M, Miyamae T,Kishimoto

割合は増加しておらず、健常人群とほぼ同等であTakagi N. Drug free REmission/low disease

expressions

T, Miyoshi M, Tomiita M, Nishimoto N,

抗 CCP 抗体陽性の未発症例の活性化 T 細胞のNishimoto N, Amano K, Hirabayashi Y,

gene

Takei S, Iwata N, Umebayashi H, Murata

E. 結論

1.

of

antibody

BiophysActa.2014.Oct;1840(10):3170-80.

予防することが可能かも知れない。

1. 論文発表

modulation

receptorMod

Rheumatol.

2014

May;24(3):511-6.
6.

Inui S, Itami S, Murakami M, Nishimoto N.
Dermoscopy

ofdiscoidlupus

erythematosus: Report of two cases.

Jmonocytes. EULAR 2014. Paris. France.

Dermatol. 2014 Aug;41(8):756-7.
7.

Quartuccio

L,IsolaM,

2014.6.11-14.

CorazzaL,

2.

Ramos-Casals M, Retamozo S, Ragab GM,

Matsui K, Kitano M, Imura Y, Ohmura K,Zoheir MN, El-Menyawi MA, Salem MN,

Fujii T, Kuroiwa T, Maeda K, Morita S,

Sansonno D, Ferraccioli G, Gremese E,

Kawahito Y, Mimori T, Sano H, Nishimoto

Tzioufas A, Voulgarelis M, Vassilopoulos D,N.

Scarpato S, Pipitone N, Salvarani C,

blockade does not suppress CD8 (+)

Guillevin L, Terrier B, Cacoub P, Filippini

subpopulation in the course of 48-week

D, Saccardo F, Gabrielli A, Fraticelli P,

treatment of patients with rheumatoid

Sebastiani

arthritis.EULAR2014.Paris.France.

M,

TomsicM,

TavoniA,

Mazzaro C, Pioltelli P, Nishimoto N, Scaini
P,

8.

ZignegoAL,

FerriC,

Monti

G,

T

cell

CD80/CD86

co-stimulatory

2014.6.11-14.
3.

Murakami M, Ito Nogami M, Sekiguchi M,

Pietrogrande M, Bombardieri S, Galli M,

Matsui K, Kitano M, Imura Y, Ohmura K,De Vita S. Validation of the classification

Fujii T, Kuroiwa T, Maeda K, Morita S,

criteria for cryoglobulinaemic vasculitis.

Kawahito Y, Mimori T, Sano H, Nishimoto

Rheumatology (Oxford).

N.

2014 Dec;53(12):2209-13.

blockade effectively suppresses CD25 (+) inOhtsuji M, Lin Q, Nishikawa K, Ohtsuji N,

CD4 (+) T cell subpopulation but not theOkazaki H, Tsurui H, Amano H, Shirai

ACPA titers in the course of 48-week

T, Nishimoto N, Nishimura H, Hirose S.

treatment of patients with rheumatoid

IL-6

thearthritis. EULAR 2014. Paris. France.

the2014.6.14.

signalenhanced

blockadeameliorates

osteoclastogenesis

andassociated joint destruction in a novel Fcγ

9.

Murakami M, Ito Nogami M, Sekiguchi M,

4.

T

cellCD80/CD86

co-stimulatory

Ishiguro N, Atsumi T, Harigai M, Mimori

RIIB-deficient rheumatoid arthritis mouse

T, Nishimoto N, Sumida T, Takeuchi T,

model. Mod Rheumatol. 2014 Aug 27:1-8.

Tanaka Y, Takagi N, Tanaka K, Yamanaka

Kawamura YI, Adachi Y, Curiel DT,

H.Effectiveness and safety of Tocilizumab

Kawashima R, Kannagi R, Nishimoto N,in Biologics-Naïve RA Patients-InterimDohi

Analysis of PMS for Investigating SuccessT.

transfer

Therapeuticofa

adenoviral

glycosyltransferase

geneforinAchieving ClinicalandFunctional

prevention of peritoneal dissemination andRemission and Sustaining Efficacy withmetastasis of gastric cancer. Cancer Gene

Tocilizumab

Ther. 2014 Oct;21(10):427-33.

Patients(FIRSTBio)Study.ACR2014.Bosto

inBiologics-Naïve

RAn.USA.2014.11.14-19.
2. 学会発表
1.

5.

関口昌弘、藤井隆夫、北野将康、松井聖、三Nishimoto N, Murakami M, Ito Nogami M,木健司、横田章、橋本英雄、山本相浩、前田

Saito M, Niwa A, Nakahata T. Appearance

恵治、藤本隆、新名直樹、日高利彦、黒岩孝

of CD14+CD15+ poplulation during the則、村上幸作、大村浩一郎、吉井一郎、川人

differentiation from RA-iPS cells into

豊、西本憲弘 、三森常世、佐野統．生物学的6.

製剤未治療関節リウマチ患者に対するアバ

いた治療戦略．第 58 回日本リウマチ学会総タセプトの有効性と安全性の検討

会・学術集会．グランドプリンスホテル新高（ABROAD 試験）－48 週の経過と高齢者に輪．東京．2014．4.24-26.

おける有効性．第 58 回日本リウマチ学会総11. 伊藤眞里 、村上美帆 、丹羽明、齊藤潤、中会・学術集会．グランドプリンスホテル新高

畑龍俊、西本憲弘 .疾患 iPS 細胞を用いた破輪．東京．2014.4.24－26．

骨細胞分化系の構築と分化能の検討.第 1 回

川人豊、藤井隆夫、横田章、橋本英雄、松井

日本骨免疫会議.万国津梁館.沖縄.2014.7.5.

聖、三木健司、北野将康、新名直樹、山本相

12. 西本憲弘 .DNA マイクロアレイを用いたトシ浩、大村浩一郎、黒岩孝則、日高利彦、関口

リズマブならびにインフリキシマブの関節Abatacept
昌弘、西本憲弘 、三森常世、
佐野統．

リウマチ治療効果予測.第 24 回日本リウマチの治療反応性予測因子の検討（ABROAD 試学会近畿支部学術集会.大阪・毎日新聞社オ験）．第 58 回日本リウマチ学会総会・学術集ーバルホール.大阪 2014.9.6.

会．グランドプリンスホテル新高輪．東
7.

8.

9.

13. 西本憲弘 .関節リウマチの最近の診断・治療.

京．2014.4.24-26.

第 44 回日本腎臓学会西部学術大会.神戸国際村上美帆 、伊藤眞里 、福家有子、関口昌弘、

会議場.兵庫.2014.10.4.

松井聖、北野将康、井村嘉孝、大村浩一郎、

14. 藤井隆夫、關口昌弘、松井聖、前田恵治、横藤井隆夫、黒岩孝則、前田恵治、川人豊、三田章、三木健司、新名直樹、黒岩孝則、尾崎森常世、佐野統、西本憲弘 ．RA 患者に対す

吉郎、樋上謙士、吉井一郎、野崎祐史、井川

る T 細胞共刺激シグナル抑制治療は抗感情シ

宣、村上孝作、大村浩一郎、森田智視、川上トルリン化ペプチド抗体価を下げない．第 58

豊、西本憲弘 、三森経世、佐野統.生物学的回日本リウマチ学会総会・学術集会．グラン

製剤未使用関節リウマチ患者におけるアバ

ド プ リ ン ス ホ テ ル 新 高 輪 ． 東

タセプトによる臨床的寛解予測因子の検討

京．2014.4.24-26．

（ABROAD 試験）.第 29 回日本臨床リウマRA
福家有子、村上美帆 、伊藤眞里 、西本憲弘 ．

チ学会.福岡国際会議場.福岡.2014.11.29-30.

患者由来 iPS 細胞を用いた単球系細胞分化に

15. 西本憲弘 .DNA マイクロアレイを用いたトシ

おける CD14+CD15+細胞の異常発現の検リズマブならびにインフリキシマブの関節討．第 58 回日本リウマチ学会総会・学術集

リウマチ治療効果予測.第 29 回日本臨床リウ会．グランドプリンスホテル新高輪．東マチ学会.シンポジウム 6「RA における生物京．2014.4.24-26．

学的製剤のテーラーメイド治療」.福岡国際会

伊藤眞里 、村上美帆 、福家有子、関口昌弘、

議場.福岡.2014.11.30.

松井聖、北野将康、井村嘉孝、大村浩一郎、藤井隆夫、黒岩孝則、前田恵治、川人豊、三Ｇ．知的所有権の取得状況

森常世、佐野統、西本憲弘 ．RA 患者に対す1. 特許取得

る T 細胞共刺激シグナル抑制治療は CD8 陽性サブセットには影響しない．第 58 回日本リウマチ学会総会・学術集会．グランドプリ
ンスホテル新高輪.東京.2014.4.24-26．
10. 西本憲弘 ．関節リウマチ治療におけるトシリズマブの位置づけと MMP-3 をマーカーに用

特記すべきことなし
2. 実用新案登録
特記すべきことなし
3.その他
特記すべきことなし