ISSN

1341−1594

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20

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2012

日本血液代替物学会会誌
http：〃www．blood−sub．jp／

第19回年次大会プログラム

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The

Societyof

Blood

Substitutes，

Japan

19th

AnnualMeeting

Program

大会長挨拶……・…………・・…・・……………・・…・……………・………
お知らせとお願い…・…・…………・…・………・……・…………・……・・

大会日程表………・………・・………………・……・……………・………
交通案内図・…………・……・……・…・………・………・………・・………

プログラム・………・…………………………・………・・＿＿＿．＿＿＿
抄録・……………・…・………………………………・…・・………………

79th

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Meeting

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Abstracts…………・・……・……・…

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第19回年次大会プログラム

第19回日本血液代替物学会年次大会
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AnnualMeetingoftheSocietyof

Blood

Substitutes，Japan「細胞型血液代替物の新たな展開」

一酸素治療薬としての臨床応用を目指して一大会長

束寛（旭川医科大学小児科学講座

教授）

会

期

平成24年10月25日（木）〜26日（金）会場

旭川大雪クリスタルホール（旭川市神楽3条7丁目）

ランチョンセミナー：平成24年10月26日（金）12：10−12：50「虚血肢治療の現状と問題点」

年次大会事務局〒078−8510

旭川市緑が丘東2条1丁目1−1

旭川医科大学小児科学講座
TEL：Ol 66−68−2481
FAX：Ol 66−68−2489
E−mail：ketsuekトdaitai＠asahikawa−med．ac．jp

2

人工血液Vol．20，No．1，2012

大会長挨拶

第19回日本血液代替物学会年次大会を主催させていただくことになりました。欧米で開発が進んでいた非細胞型の人工酸素運搬体は、安全性への疑問が投げかけられ今後の展望を模索している状況です。一方、我が国で開発がつづけられている細胞型酸素運搬体は、ヒトヘモグロビン分子を脂質の2重膜（リボソーム）に包埋したもので、その酸素運搬体としての有効性や大量投与での安全性に関する基礎的なデータが長い時間をかけて着実に蓄積されてきました。その結果、実際にヒトへの投与を行う段階に来ています。

臨床の場では、緊急を要する大出血が起こることがあり、その時に人工血液代替物を即座に使用することができれば、救命できると思われる局面が実際にあります。こういった局面で人命を救助することを可能にするためにも、ヒトへの臨床治験を一日もはやく実現する必要があると思います。

一方で、組織へ酸素を運搬することが、単に低酸素状態の組織を保護するだけではなく、それを積極的に治療に応用しようという試みも現実味を帯びてまいりました。即ち、酸素治療薬としての臨床応用の可能性であります。

今回の年次大会のタイトルを「細胞型血液代替物のあらたな展開一酸素治療薬としての臨床応用を目指して一」とさせていただいたのも、このような背景があったからです。

どのような形にせよ、一日もはやく、日本で開発されてきた細胞型人工酸素運搬体のヒトへの投与を実現させ、これを世に送り出すことができるよう、この年次大会がその後押しとなることができるよう、皆様のご協
力を心よりお願い申し上げます。

第19回日本血液代替物学会年次大会
会長

ARTIFIC肌BLOOD

VoL

20，No．1，2012

束

寛

3

お知らせとお願い■会員・参加者の方へ
く会場〉

旭川大雪クリスタルホール（旭川市神楽3条7丁目）〈受付〉

平成24年10月25日（木）9：00から
平成24年10月26日（金）9：10から
く参加登録〉
参加登録費は10，000円です．事前参加登録はおこないません．

ネームカードをお渡ししますので，所属・氏名を各自でご記入ください．会期中は会場内で必ず着用ください．
〈新入会受付〉
日本血液代替物学会に未入会の方は，受付で入会手続きをおとり下さい．
会費は，正会員10，000円，購読会員6，000円，学生会員5，000円です．

〈抄録集〉

抄録集は会員全員に事前送付しています．当日お忘れなくご持参ください．
また，当日，受け付けにて一部1，500円で販売しています．

〈呼び出し〉
場内での呼び出しは行いません．
〈懇親会〉

懇親会を開催いたします．参加費は2000円です．ふるってご参加ください．
日時：平成24年10月25日（木）18：00から

場所：大雪地ビール館1階（旭川市宮下通11丁目1604番地の1

TEL：0166−25−0400）■演者の先生へ●発表時間

1．一般演題：15分（発表10分，質疑応答5分）

2．特別講演：60分

3．トピックス：40分※発表1分前に予告ランプ，終了時に赤ランプが点灯します．くれぐれも時間厳守にてお願いします●受付場所，受付時間
1．PC受付，発表データの受付は1階ロビーで行います．
2．受付は，10月25日，26の両日9：00より開始します．
※演者の先生は発表の30分前までに，受付をお済ませ下さい．

・発表形式と使用機材
1．発表形式はパソコンによるプレゼンテーションのみとします．

2．PCはご自分で操作をお願いします．
演台上にモニター，キーボード，マウスを用意します．

3．会場で用意するPCのOSはWindows

7です．

4．使用出来るアプリケーションは，Windows＊（Mac版PPT，

Power

Point

2010，2007，2003です．

Keynoteには対応しておりません．）

Macintoshで作成されたデータはPC本体をお持ち下さい．

4

人工血液Vo1．20，No．1，2012

・データの作成について
1．データの作成はMicrosoft

Of丘ce

Power

Pointでお願いします．

2．フォントは下記でお願いします．
日本語：MSゴシック，
英語：Arial，

Arial

MSPゴシック，Black，

3．動画ファイルはWindows

Century，

MS明朝，

Media

Century

MSP明朝

Gothic，

Times

New

Roman

Playerで再生できるものでお願いします．事前に再生出来るかご確認下さい．

4．画面の解像度はXGA（1，024×768ピクセル）ですので画面の設定をXGAに合わせて下さい．
5．発表データにリンクファイル（静止画・動画・グラフ等）がある場合は発表分のPower

Pointファイルとリンクファイル

を1つのフォルダにまとめて保存して下さい．事前にデータを作成したPC以外でのチェックをお願いします．
6．発表データをCD−R等にコピi−・・一する時には，ファイナライズ（セッションのクローズ・使用したCDのセッションを閉じる）

作業を必ず行って下さい．
・受付方法

1．メディア持参の発表者＊発表用データをUSBフラッシュメモリまたはCD−Rに保存してご持参下さい．また，保存の際にはデータのファイル名
を「（演題番号）（氏名）」として下さい．

＊メディアの中には当日発表分のデータのみ入れて下さい．

＊コピーさせていただいた発表データは学会終了後事務局が責任を持って消去いたします．
＊発表データ保存媒体はPCセンターでの受付終了時に返却いたします．

＊データをメディアで持参出来るのはWindowsのみです．
2．PC本体持参の発表者（Macintosh使用の方など）＊お持込みいただくPCはmini

D−sub

15pinのモニター出力端子が必要です．この端子が無いPCをご使用の場合は別途変換コネクタを必ず持参下さい．

＊Macを使用の発表者は必ず外付けのコネクタをご持参下さい．
＊電源アダプターを必ずお持ち下さい．

＊スクリーンセーバー，ならびに省電力設定は予め解除して下さい．
＊万一に備えバックアップ用のデー一タ（USBメモリ，

CD−R）をご持参下さい．

＊PCセンターで受付と確認を済ませましたら，発表会場内のオペレーター席へPCをお持ち下さい．

PCの返却も発表終了後，会場内のオペレーター席で行います．

■各種会議日程

理事会：平成24年10月25日（木）11：20〜12：20

第一会議室

評議員会：平成24年10月25日（木）12：20〜12：50

第二会議室

総

大会議室

会：平成24年10月25日（木）12：50〜13：20■大会事務局〒078−8510

旭川市緑が丘東2条一丁目1−1

旭川医科大学

小児科学講座TEL：0166−68−2481

FAX：0166−68−2489
E−mail：ketsueki−daitai＠asahikawa−med．acjp

学会のホームページにて，最新のお知らせ，注意事項，プログラム等を掲載してゆきます．合わせてご確認，ご利用ください．

日本血液代替物学会ホームページ

ARTIFICIAL

BLOOD

Vol．20，No．1，2012

http：／／www．blood−sub．jp／info／announce．html

5

大会日程表平成24年10月25日（木）9：00

平成24年10月26日（金）9、10．9、40受付

9、00．9、25受付

g・25開会の辞
9：30

g：30．10：30一般演題1

1

演者：大柿 滋（熊本大学）
南雲恒平（熊本大学）
藤原満博（日本赤十字社北海道ブロックセンター）

司会：藤原満博（日本赤十字社北海道ブロック血液センター）
O：OO

酒井宏水（早稲田バイオサイエンスシンガポール研究所）
10：30

10：30−11：10

g：40．tO：55一般演題2
司会：小田切優樹（崇城大学）
演者：太田英伸（国立精神・神経研究センター）
勢司泰久（慶雁義塾大学）
酒井宏水（早稲田バイオサイエンスシンガポール研究所）

トピックス

百武徹（横浜国立大学）「再生因子（HGF）の神経系における機能と神経再生医療への展開の可能性」
洋（旭川医科大学）
寛（旭川医科大学）

室
議
会

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理

第
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11：30

演者：船越
司会：東

会
事

11：00

惚 20

一

11・00−t2、00特別講演II「臓器保存から臓器蘇生への展開」
演者：小林英司（自治医科大学）
司会：堀之内宏久（さいたま市立病院）
12：00−12：50ランチョンセミナー

12：00

12：20・12：50
12：30

冨田大樹（中央大学）

評議員会（第二会議室）「虚血肢治療の現状と問題点」
演者：東信良（旭川医科大学）
司会：東寛（旭川医科大学）

12、50−13，10休憩

13：00．15：10シンポジウム2

13：00

会

総

議

室

︵
会

大

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13：30

14：00

14：30

13：40．15：40シンポジウム1「人工酸素運搬体治療薬のヒトでの実効性について」
司会：小林紘一（慶懸義塾大学）
高折益彦（東宝塚さとう病院）
演者：堀之内宏久（さいたま市立病院）
田口和明（熊本大学）「人工血小板開発の現状」
司会：武岡真司（早稲田大学）
松野一彦（北海道大学）
演者：藤山敦史（早稲田大学）
丸山 徹（熊本大学）
土井麻美（早稲田大学）
萩沢康介（防衛医科大学校）
木下 学（防衛医科大学校）【招待講演】

演者：Dr．

Plock（University Hospital Zurich）「Hemoglobin Vesicles and Wound Healing」

会
閉

15：00

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の辞

15：30

15、40．15、50休憩
16：00

16：30

15、50−16、50特別講演1「新たな臓器保存液開発への挑戦一ET−Kyoto液一」
演者：坂東 徹（京都大学）
司会：古川博之（旭川医科大学）

17：00

17：30

18：00

18：30

6

人工血液Vo1．20，No．1，2012交通案内
旭川市大雪クリスタルホール案内図

年次大会会場までのアクセス

旭川大雪クリスタルホール■JR線〒070−8003

・「旭川駅」より、徒歩約30分

北海道旭川市神楽3条7丁目

・「旭川駅」から、バス「1条TEL：0166−69−2000

大雪地ビール館

1階〒070−OO30

北海道旭川市宮下通11丁目1604番地の1
TEL：0166−25−0400

通7丁目（！EXC前）より乗
車、「神楽4条7丁目（大雪アリーナ前）」下車徒歩3分⑫番乗り場
・電気軌道バス

80番、

81番
⑪番乗り場
・道北バス 14番、39番、43番他
・「旭川駅」から、タクシー約

5分
ARTIFICIAL

BLOOD

Vol．20，No．1，20127

平成24年10月25日（木）9：25開会の辞
9：30〜10：30

一般演題1

司会：藤原満博（日本赤十字社北海道ブロック血液センター）

1．「出血性ショックモデルラットにおける一酸化炭素付加型赤血球の肝チトクロームP450保護効果」
大柿滋（熊本大学大学院薬学教育部）

2．「ESI−TOF／MSを用いたシステイン付加型ヒト血清アルブミンの検出と機能相関一慢性肝疾患の影響一」
南雲恒平（熊本大学大学院薬学教育部）

3．「空リボソームの投与によるexvivoでのラット脾臓T細胞の増殖抑制における細胞周期調節タンパクの関与」

藤原満博（日本赤十字社北海道ブロックセンター）

4．「人工赤血球（ヘモグロビン小胞体）をブタに少量投与したときの血行動態に関する検討」
酒井宏水（早稲田バイオサイエンスシンガポール研究所）

10：30〜11：10

トピックス「再生因子（HGF）の神経系における機能と神経再生医療への展開の可能性」
船越司会：東洋（旭川医科大学教育研究推進センター）
寛（旭川医科大学）

11：20〜12：20

理事会（第一会議室）

12：20〜12：50

評議員会（第二会議室）

12：50〜13：10休憩
13：10〜13：40

総会（大会議室）

13：40〜15：40

シンポジウム1「人工酸素運搬体治療薬のヒトでの実効性について」
司会1：小林紘一（慶雁義塾大学医学部）
司会2：高折益彦（東宝塚さとう病院）

1．「固形腫瘍組織の酸素加による治療効果の増強」
堀之内宏久（さいたま市立病院呼吸器外科）

2．「細胞型人工酸素運搬体ヘモグロビン小胞体のカニクイザルへの大量投与の結果からみた実効性」
田口和明（熊本大学大学院薬学教育部）
3．【招待講演】「Hemoglobin
Dr．

Plock（University

VesiclesHospitalandZurich，

Wound

Healing」

Switzerland）

15：40〜15：50休憩
15：50〜16：50

特別講演1「新たな臓器保存液開発への挑戦一ET・Kyoto液一」坂東徹（京都大学大学院医学研究科呼吸器外科学）

司会：古川博之（旭川医科大学第二外科）

8

人工血液Vol．20，No．1，2012

平成24年to月26日（金）9：40〜10：55

一般演題2

司会：小田切優樹（崇城大学薬学部）

1．「ラット妊娠母体におけるヘモグロビン小胞体の胎盤通過性」
太田英伸（国立精神・神経研究センター精神保健研究所）

2．「メチレンブルー及びアスコルビン酸を配合した還元剤によるヘモグロビン小胞体の酸素運搬機能延長の試み」
勢司泰久（慶鷹義塾大学医学部総合医科学研究センター）

3．「メチレンブルーによるヘモグロビン小胞体の酸素運搬機能持続の機序に関する検討」
酒井宏水（早稲田バイオサイエンスシンガポール研究所）

4．「微小血管内における人工赤血球の酸素運搬モデルに関する研究」
百武

徹（横浜国立大学大学院工学研究院）

5．「人工ヘム蛋白質（ヘモグロビンーアルブミン）クラスターの開発」
冨田大樹（中央大学理工学部応用化学科）

11：00〜12：00

特別講演E「臓器保存から臓器蘇生への展開」
小林英司（自治医科大学先端医療技術開発センター）
司会：堀之内宏久（さいたま市立病院呼吸器外科）

12：00〜12：50

ランチョンセミナー「虚血肢治療の現状と問題点」
東

司会：東信良（旭川医科大学第一外科）

寛（旭川医科大学）

13：00〜15：10

シンポジウム2「人工血小板開発の現状」

司会1：武岡真司（早稲田大学大学院先進理工学研究科）
司会2：松野一彦（北海道大学大学院保健科学研究院）

1．「血小板代替物Hl2−（ADP）リボソームの物理化学的評価法の確立」
藤山敦史（早稲田大学大学院先進理工学研究科）

2．「血小板代替物Hl2（ADP）リボソームの体内動態に及ぼす血小板減少症の影響」
丸山徹（熊本大学大学院薬学教育部）
3．「血小板減少病態時におけるHl2−（ADP）liposomeの止血能に果たすHl2ドデカペプチドの役割について（出血前投与による検討）」

土井麻美（早稲田大学大学院先進理工学研究科）

4．「大量出血後輸血による血小板減少状態下で進行する肝外傷出血に対してHl2（ADP）リボソーム同時投与は血小板投与と同等の止血および救命効果を有する」
萩沢康介（防衛医科大学校生理学）

5．「血小板代替物Hl2（ADP）リボソーム開発の必要性一大規模災害時への対策の1つとして一」木下

学（防衛医科大学校免疫微生物）

閉会の辞

15：10

ARTIFICLAL

BLOOD

Vo1．20，No．1，2012

9

ti寺男lI言蓋ラ宙

新たな臓器保存液開発への挑戦一・一
板東

1

ET−Kyoto液一徹

京都大学大学院医学研究科呼吸器外科学
低温・凍結，乾燥などの環境ストレス下で細胞膜保護効果を有する二糖類トレハロースを，臓器保存に利用するというコンセプトで，1994年，我々は，ET−Kyoto液を肺保存液として開発した．肺保存に最適の保存液を開発することを目指して，血管内皮細胞やラット，
ラビット，イヌを用いたin・vitro，

ex

vivo，

in

vivoの基礎研究を積み重ねた結果，この保存液が，既存の臓器保存液に比べて，優れた肺保存効果を有すること，トレハロースが他の糖類（グルコース，スクロース，マルトース，ラフィノース）に比べて優れていること，
Na＋濃度＝100 mm／L， K＋濃度＝40 mmol／L付近の陽イオン組成が肺保存に適していること，陰イオン成分としては，バッファー能を有するHPO4

よりも，グルコネートが重要であること，コロイドとして平均分子量の大きなHESが有用であることを突き止めた．さらに，

細胞内メッセンジャーとして細胞内のcAMP， cGMPを維持する目的で， db−cAMPとニトログリセリンを添加したnew ET−Kyoto液が，従来のET・・Kyoto液の肺保存効果をさらに向上させることが明らかにされた．2002年より，このnew ET−Kyoto液を，実際に臨床肺移植に使用を開始し，これまで全国で約80例の肺移植で用いられている．京都大学での2011年末までに同液を用いた45例の肺移植での使用成績では，特に脳死移植において，平均8時間を超える長時間の虚血時間にもかかわらず，移植後の肺機能は良好に維持されており，また，長期成績も移植後の5年生存率が82．5％と，国際統計での5年生存率53％と比較して，十分に満足すべき結果であった．
肺以外の臓器・組織保存に関しても，他部門・他施設との共同研究としてET−Kyoto液の効果を検討した結果，ラット臓器（腎，肝，心）保存，ラビット皮膚弁保存などの動物実験においてもET−Kyoto液の有効性が示された．また，臨床腎移植，膵島移植，切断指保存でも優れた臓器・組織保存効果が認められた．さらに，こうした検討から，保存液の効果には臓器別に特異性があることも明らかになり，今後，各臓器・組織毎の至適な保存液組成や保存方法の確立に向けてさらなる検討を要すると思われる．
今後は，ETLKyoto液を用いた過冷却保存や持続灌流保存の可能性の検討，幹細胞保存などの再生医療分野におけるET・・Kyoto液の有用性の検討など進めていきたいと考える．

10

人工血液Vol．20，

No．1，2012

＃寺男1」言黄演皿

臓器保存から臓器蘇生への展開
小林英司

自治医科大学先端医療技術開発センター
20世紀の奇跡の医療と言われた臓器移植では、「脳死ドナー」から摘出された臓器を 鮮度 を落とすことを最低限にするため冷臓状態（4℃）で保存された。臓器移植の臨床的発展に伴って、1980年一2000年にかけて、摘出臓器を還流しながら冷保存する手法（還流冷保存）と単純に冷浸漬する手法（単純浸漬冷保存）が開発されたが、後者は簡便であり、それに適する優れた保存液が開発された。
一 方、世界的な臓器不足から2000年以降「心停止ドナー」を利用する試みが再度なされ始めた。心停止状態のドナーに直ちに送血チューブを挿入し、酸素化血液を流しながら臓器を摘出する手法（NECMO）や摘出臓器に酸素化血液を回路で送り移植に備える手法（exvivo perfUsion）を駆使するものである。いずれも、温度を過度に低下させることなく、血液を用いて臓器・組織間のガス交換を再開させることで、死に至る臓器を蘇生させようとするものである。今、本領域で血液に代わる酸素運搬体が注目を集めている。
先に我々は、臓器のバイアビリテーや酸素化の程度を可視化するシステムとして世界に先駆け全身にルシフェラーゼ遺伝子組み込んだトランスジェニック（Luc−Tg）ラットを作出した。従来の臓器保存液のスクリーニング（Negishi 2011）のみならず、移植臓器の回復度を評価できる（lwai 2012）。さらに光合成を利用して呼吸不全に陥らせたラットとのガス交換や心停止後に摘出した膵臓の蘇生に成功した（Yamaoka 2012）。本講演では、これらの実験データを紹介し、本学会に関わる幅広い領域の人工酸素運搬体の研究者とともに将来の臓器蘇生について討議したい。

ARTIFICIAL

BLOOD

Vol．20，No．1，201211

トピックス
再生因子（HGF）の神経系における機能と神経再生医療への展開の可能性
船越洋1，島田（大谷）若菜1，角山圭一2，加藤貴史3，北村和也4，中村雅也4，戸山芳昭4，岡野栄之5，青木正志6，中村敏一31旭川医科大学教育研究推進センタ・一一）2姫路掲協大学薬理学，3大阪大学先端科学イノベーションセンター，4慶慮義塾大学整形外科，

5慶慮義塾大学生理学，6東北大学神経内科

21世紀は脳科学の時代と言われ研究が精力的に進められているが，神経疾患の克服にはいたっていない．我々は，この課題に対して肝細胞増殖因子（Hepatocyte

GrowthFactor：HGF）に注目し研究を行っている．

HGFは，長らく不明であった肝再生因子の本体として，1984年に初代培養肝細胞の増殖活性を指標に血清より部分精製され，1989
年にヒトHGF遺伝子がクローニングされた（Nakamura・et・al．，BBRC，122：1450，1984；Nakamura・et・al．，

Nature342：440，1989）．生物活性としてHGFは肝細胞増殖活性に加えて，発見当初の予測を遥かに凌ぐ多彩な機能（増殖・分化・遊走・抗アポトーシスなど）を持つことが明らかとなった．特にその旺盛な器官再生促進作用は多くの臓器で認められ，リコンビナントHGF投与例では急性，慢性肝炎や肝硬変，急性，慢性腎不全，心虚血，拡張性心筋症，肺繊維症動物モデルで著しい治療効果を認めている．
本講演では，HGFのもつ神経系に於けるinvitro，

invivoにおける多彩な生理活性について紹介するとともに，筋萎縮性側索硬化症（ALS），脳梗塞，脊髄損傷等の神経難病のモデル動物に対するHGFの治療効果を紹介する．また，私達は神経変性疾患の1つのモデ
ルでHGFが神経新生促進作用を示すことを明らかにした．このことから，一旦神経細胞数が減少した疾患に対する神経再生医療への適用への可能性が示唆されている．最後に現在私達が大阪大学，東北大学，慶磨義塾大学とともに進めているHGFの神経再生医療への臨床適用に向けての取り組みについても紹介したい．
Reference：Funakoshi

H．

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Current

12uryA）iseases．

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SignalT，

Hepatocyte

Transduction

GrowthFactor（HGF）：Neurotrophic

FunctionsandTherapeutic

Implications

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Neuronal

Therapy，2011，6，156−167

人工血液Vol．

20，No．1，2012

シンポシワム1−1
固形腫瘍組織の酸素加による治療効果の増強
堀之内宏久1，山本尚志2，勢司泰久3，山本学4，泉陽太郎5，酒井宏水6，小松晃之7，小林紘一5
1さいたま市立病院呼吸器外科，2ニプロ㈱医薬品研究所，3慶鷹義塾大学総合医科学研究センター，4足利赤十字病院呼吸器外科，
5慶雁義塾大学医学部呼吸器外科，6早稲田大学バイオサイエンスシンガポール研究所，7中央大学理工学部
はじめに
悪性新生物による死亡は、1981年以来国民の死亡原因の第1位であり、疾患の克服には治療の進歩が必要である。悪性腫瘍は未熟な腫瘍循環に支配されるため、腫瘍細胞は低酸素環境にあり、このために照射や化学療法に対して抵抗性である。
人工酸素運搬体は血漿相に分布し、生理的な赤血球のみの酸素運搬を上まわる酸素運搬が可能で、かつ、Plasma flowとなっている未熟な血管にも循環するため、腫瘍組織の組織酸素分圧を上昇させ照射等の治療効果を増強すると考えられる。
放射線治療は局所治療の大きな柱であり、機器の発達に伴い、病巣に集中的に高線量の照射が可能となり、高い効果も報告されているが、根治に至らない症例も少なくない。
人工酸素運搬体による腫瘍の酸素加と照射の抗腫瘍効果増強について検討を行ってきたので、その成果を踏まえ、ヒトでの応用の可能性について報告する。

方法
人工酸素運搬体としてはアルブミンヘムおよびヘモグロビン小胞体について検討を行った。

1．まずアルブミンヘムの検討ではDonryuラットに発生した腹水肝癌であるLY80を用いた。 LY80をDonryuラット右大腿鼠径部に移植し、腫瘍径がlo㎜となった時点で実験を開始した。照射は特注のプロテクターを用い、腫瘍領域のみに20Gyが1回で照射されるように調節した。アルブミンヘムは腹部下大動脈よりの動注とし、100％酸素加した状態で投与した。照射は投与とほぼ同時に開始した。

照射後の腫瘍の成長を毎日計測し、検討した。

2．ヘモグロビン小胞体ではLewis肺癌株を用い、

C57BLの足背に移植し、直径が10㎜となった時点でHbVの静注直後に照射を行い腫瘍の成長速度を計測した。

結果
アルブミンヘムは動注後8分間にわたり腫瘍内酸素分圧を上昇させる事が明らかとなった。また照射と組み合わせることで照射単独群
よりも腫瘍の成長を有意に抑制することができた。ヘモグロビン小胞体を用いた検討では、p50の異なるヘモグロビン小胞体を準備し（通常型（p50ニ34mmHg）及び高酸素親和型（p50−5mmHg）） を用いて検討を行った。高親和性のヘモグロビン小胞体は静脈内投与により腫瘍の酸素加は約30分間持続し、照射に対する抗腫瘍効果の増強も確認された。
考察
人工酸素運搬体による腫瘍の酸素加は動注では8分程度、静注でも30分程度得られることが明らかとなり、この酸素加が明らかな時期を治療のターゲットとすることで抗腫瘍効果が得られた。人工酸素運搬体の投与量はアルブミンヘムでは循環血液量の17％、HbVでは20％であった。選択的動注により、腫瘍のみに薬剤を投与することにより投与量をコントロールして最大限の効果を期待することができると考えられ、臨床での応用が期待される。前厚生労働省科学研究班ではこの方針のもと企業と連携しPMDAの戦略薬事相談を行った。

ARTIFICLA］しBLOOD

Vol．20，No．1，201213

シンホシワム1−2
細胞型人工酸素運搬体ヘモグロビン小胞体の力ニクイザルへの大量投与の結果からみた実効性田口和明1、酒井宏水2，堀之内宏久3，小林紘一3，丸山

徹1，小田切優樹1

4

51熊本大学大学院薬学教育部，2早稲田大学バイオサイエンスシンガポール研究所，3慶雁義塾大学医学部呼吸器外科，4崇城大学薬学部，

5崇城大学DDS研究所
医薬品を開発する過程の中で，前臨床段階として製剤化試験，薬理試験，薬物動態試験，さらには毒性試験など多くの段階を経て，その有効性と安全性を確立していく必要がある．細胞型人工酸素運搬体であるヘモグロビン小胞体（HbV）は様々なin vitro試験に加え，
マウス，ラット，ウサギ，ビーグル犬，ミニブタなどを用いたin・vivo試験において物理化学的特性や有効性及び安全性が証明されており，今後の臨床試験への導入が期待される．HbVの臨床試験への移行を想定した場合，蓄歯類や中型動物における前臨床評価に加え，ヒトと同じ霊長類であるサルを用いた評価も重要であると考えられる．その主な理由として，サルにおける試験結果は，（i）ヒトに医薬品を投与した後の生体反応性を予測する上で有用である，（ii）臨床試験のプロトコール作成を行う際に有益な情報になる，ことが挙げられる．そのため，霊長類，特にカニクイザルやアカゲザル，における各種評価は前臨床試験の重要評価事項の一端を担っており，多くの医薬品開発段階で評価が行われている．しかしながら，これまでにHbVを霊長類に投与し生体反応性を評価した報告はほとんどない．我々は4匹の雄性カニクイザルにHbVを1400 mg Hb／kgで単回投与し， HbV投与14日後までの生体反応性（血行動態，生化学
パラメータの変動），血中滞留性について観察を行った．本シンポジウムでは，これまでに我々が明らかにしてきた健常・病態モデルマ

ウス，ラットに加え，カニクイザルにHbVを単回大量投与した後の生体反応性及び血中動態の結果から示唆されるHbVの安全性，有効性について報告する．また，種差の違いからみたHbVのヒトにおける実効性についても考察した．
【参考文献】
Taguchi

K

et

al．

Drug

Taguchi

K

et

al．

J

14

Metab

Drug

Metab

Rev．（2011）43（3）：362−73．
Toxico1．

in

press

人工血液Vo1．20，No．1，

2012シンボシワム1−3（招待講演）
Hemo910bin

VesiclesJan

NassimA．

Plock，

DivisionofPlastic

Department
Advanced

HandofClinical

OxygenoxygenRafatmehr，andResearchplays

Research，

role

in

healingarterial
occur．

The

rationaleofdeveloping

transfUsions

infections，

limitedcapacity，

newservesasofancomplications

traumaor

hypoxiainsuchapplication

anesthetized

mice

and

concludethat

ARTIFIC】LAL

BLOOD

impaired

restricted
has

and

healing

in

aim

to

such

benefit

HbVs

Vol．20，No．1，2012

may

to

avoid

a

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blood

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to

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wounds

and

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blood

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compounds，

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initiallytissueshypoxic

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healing

based

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animals

artificial

and

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treated

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in

blood

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blood−bometoincreaseoxygenthisconcept，

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vessel，morbidity．

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of

transmitted
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survival

in

blood

due

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byemergedsupplycritically

as

15

rnm

were

with

solutionswithphysiologica1（P50＝25

l

day

after

sutureline

receiving

HbV250r

O．9％NaCL

primary

wound

HbV

surgery．
betweenthehealing

HbVg

x

axial

have

30

healedandoxygenmeasuringandsurviValtothelengthmargindue
results

ofsubstitute．

wound

animals

product

toimmediately

in

the

includingcarriers

primary

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craniallyThede丘nedreduced，

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artificial

in

to

study

surface，

thedeveloped

original

HbV9）oxygen
flap

order

vesicles（HbVs）．

their

total

perfluorocarbons

consistsofthisistraumatic

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which

Initially

pel血sionorJapan

Oxygensuch

emerged，

thathemoglobin

Ifblood

WhereasasT〈）kyo，

wounds．

ofsurgicaltime．

disease．

The

surgicalstoragetissuesin

University，

compartment．

occur

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to

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animals）toWetissueleadingratherincreased（P50＝9mmHg，

No

traumatic

therapeutic（untreated

p＜0．05）．

Wasedaofacertain

action

HbV25）ormm（bothof

Emi

Switzerland

Engineering，

loss

liposomal

l2．7

Switzerland

blood

may

57％oftheZurich，

excessive

andocclusive

suturedHospital

carriers，conditions．

ofDominiqueoxygenoxygenhealing

Sakai，

artificial

their

Wound

arterial

is

after

availability

surgery，

systemic

inflowThis

required

perception

theHiromiofBem，

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the

treat

University
and

may

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University

SciencecmcialHealing

Tsuchida，

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oxygenEishunlnstitUte

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WoundSurgery，

critical

blood

content

andimprovedischemic

in

flaps

criticallyraisedtissuewasbacksurvival丘om

increasedischemic

on也e

from

6．6

of

mmHg，

33％
mm

to

skin．

15

ンンホンワム2−1

血小板代替物H12−（ADP）リボソームの物理化学的評価法の確立
藤山敦史，池田康夫，武岡真司
早稲田大学大学院先進理工学研究科生命医科学専攻【緒言】

フィブリノーゲン由来ドデカペプチド（HHLGGAKQAGDv；Hl2）をポリエチレングリコール（PEG）鎖末端に担持させ，かつ，リボソー
ム内に血小板凝集惹起物質であるADPを内包させたリボソーム（H l 2−（ADP）リボソーム）は，止血能を有し，血小板減少症モデル動物の出血時間を短縮することが報告されている1）．Hl2−（ADP）リボソームは， H l 2を介して活性化血小板間を架橋し， ADP放出による血小板の更なる活性化を通して止血能の向上が期待されている．
本研究では，Hl2−（ADP）リボソームの仕様や物性評価に関して，精緻な解析を行うためにリホソームの構成脂質の混合比の解析方法

およびHl2担持量の定量方法を検討した．
1）Okamura，

Y

et

al．」．

Thromb．

Hae〃iost．

7，470−477（2009）．

【実験】

Hl2−（ADP）リポソームの構成脂質であるDPPC，cholesterol，

DHSG，

PEG−DSPE，

H

l2−PEG−Glu2C18およびそれらの混合脂質（DPPC／cholestero1／DHSG／PEG−DSPE／Hl2−PEG−Glu2C18＝5／5／1／0．033／0．033）の核磁気共鳴（NMR）スペクトルを測定した．膜組成解析に利用するために，各試料のNMRスペクトルから各脂質に固有のピークを対象とした．
また，アミノ基蛍光標識試薬であるフルオレスカミンとDPPC，cholesterol，

DHSG，

PEG−DSPE，

H

12・・PEG…Glu2Ci8をそれぞれ反応させ，蛍光強度を測定した．フルオレスカミンと各脂質との反応性を測定し，Hl2担持量の定量への応用可能性を調べた．
【結果と考察】各脂質のNMRスペクトルを解析したところ，

DPPC，

cholesterol，

DHSG，

PEGは，それぞれ3．36

ppm，5．35

ppm，4．56

ppm，3．6ppm

において，他の脂質とは共有しないピークの存在が認められ，NMRによるリボソーム膜の組成解析が可能となった．また，フルオレ
スカミンはHl2−PEG−Glu2Cl8にのみ蛍光を標識できることから，これを用いたHl2担持量の蛍光定量が可能となった．
以上の膜組成の解析方法およびHl2担持量の定量方法の確立により，

H

12−（ADP）リボソームの仕様に関してより精緻な評価が可能となった．

Establishmentofmethodology

forphysical△一，Yasuon（eda，

Shinji

Department

Life

and

of

Science

Tel：＋81−3−5369−7324，

16

and

chemicalpropertiesofH

12−（ADP）1iposomes

asplateletsubstitutes．

Takeoka

Medical

Bioscience，Graduate

SchoolofAdvanced

ScienceandEngineering，

WasedaUniversity

E−mail：wisteria−mai1＠toki．waseda．jp

人工血液Vol．

20，No．1，2012シンポジウム2−2
血小板代替物Hl2（ADP｝リボソームの体内動態に及ぼす血小板減少症の影響
丸山

徹12，田口和明1，氏平隼人1，渡邊博志12，新井愛美3，池田康夫3，武岡真司3，半田誠4，小田切優樹5

6

1熊本大・院・薬，2熊本大学薬学部付属育薬フロンティアセンター，3早稲田大学理工学術院，4慶磨義塾大学医学部，5崇城大・薬，6崇城大・DDS研究所【目的】 血小板減少時には濃縮ヒト血小板による輸血治療が施行されているが，ウイルス感染の危険性が否定できない上，保存期間が短いなど，解決すべき課題が残されている．Hl2（ADP）リボソームは，リン脂質二重膜表面にフィブリノーゲンγ鎖C末端（Hl2）を担持し，内部にADPを内包した製剤であるが，血小板減少モデル動物を用いたin vivo検討において，ヒト血小板に匹敵する止血効果を発揮することから，血小板代替物としての臨床応用が期待されている．しかしながら，前臨床試験段階において必須項目である体内動態に関する検討はほとんど行われていない．本研究では，健常動物（マウス，ラット，ラビット）におけるHl2（ADP）リボソームの薬物速度論的解析結果を基盤として，体内動態パラメータに及ぼす血小板減少症の影響について検討し，本製剤の有効性及び安全性を薬物動態学的観点から評価した．
【方法】 リホソームの脂質膜を構成するコレステロールと内包されたADPを，それぞれ3H及び14Cで標識した3H・14C−H 12（ADP）リ
ホソームを，マウス，ラット，ラビットに投与し（10mglipid／kg），経時的に，血漿，尿中，糞中及び臓器中の放射活性を測定した．また，得られた結果をモーメント解析し，各種体内動態パラメータを算出した．ブスルファンをマウスの腹腔内に投与して，血小板減少症モデル動物を作製し，3H・14C−Hl2（ADP）リボソームの体内動態を評価した．

【結果及び考察】 マウス及びラットを用いてHl2（ADP）リボソームの体内動態を解析した結果，本製剤は二相性の血中濃度推移を示し，主に肝臓及び脾臓に分布した後，脂質成分は主に糞中へ，他方，ADPはげっ歯類における最終代謝産物であるアラントインに代謝され、主に尿中へ排泄されることが判明した．投与後7日後には，各臓器中の放射活性が消失したことから，Hl2（ADP）リボソームの臓器蓄積性は低いものと推察された．マウス，ラット，ラビットにおける体内動態解析結果から，アニマルスケールアップを行い，ヒトにおけるH12（ADP）リボソームの血中平均滞留時間（MRT）を外挿したところ，約141時間と予測された．また，血小板減少症
モデルラットにおける体内動態解析から，血小板減少状態では，肝臓への分布の増大と体外排泄の促進により，Hl2（ADP）リボソームの血中滞留性は若干低下するものの，代謝・排泄経路や臓器蓄積性は大きく影響されないことが判明した．
以上，本研究から得られた知見により，血小板代替物としてのHl2（ADP）リボソームの有効性及び安全性を，動態学的観点から支持することができた．

ARTIFIC肌BLOOD

VoL

20，No．1，201217シンポジウム2−3
血小板減少病態時におけるH12−（ADP）liposomeの止血能に果たすHl2ドデカペプチドの役割について（出血前投与による検討｝○土井麻実1，木下学2，西川可穂子3，萩沢康介4，柳川錬平5，半田誠6，池田康夫1，武岡真司11早稲田大学大学院先進理工学研究科，2防衛医科大学校免疫微生物学，3防衛医科大学校救急部，4防衛医科大学校生理学，

5防衛医科大学校防衛医学講座，6慶慮義塾大学医学部【諸言】フィブリノーゲンγ鎖ドデカペプチド（H12ドデカペプチド）を表面に結合させ血小板凝集惹起物質のadenosine5−diphosphatate（ADP）を内包したリボソーム（Hl2−（ADP）リボソーム）は，出血部位付近の活性化血小板同士を架橋し血小板凝集を促進させることで，血小板減少時の致死的な臓器出血を制御出来ることをこれまで出血前の投与のin・vivo試験にて明らかにしてきた．

しかし，臓器出血の際には臓器自身からも大量のADPが放出されることが予想されるため，本研究ではin vivoにおけるH12−（ADP）リ
ボソームの止血能に大きく関わっている因子を特定するために血小板減少病態モデルウサギを用いてADP未内包のHl2−（PBS）リポソ
ー ムを投与した際の止血能と生存率の検討を行った．

【実験】NZWウサギの大腿静脈にカニュレーションを行い，1回25mLの動脈血を脱血するとともに洗浄赤血球を輸血することを繰り返し行い，血小板数を50xlO3／pLまで低下させて血小板減少病態モデルウサギを作製した．本モデルにおいて，肝臓の外傷性臓器出血作製の10分前にHl2−（PBS）リボソームを投与し，これが肝臓の臓器出血制御に及ぼす影響を，血小板を多く含むplatelet−richとH12−（ADP）リボソームを陽性対照群，凝固因子は含むが血小板をほとんど含まないplatelet−poor

plasma（PRP）

plasma（PPP）やH12を表面に担持していない（ADP）リボソームの投与を陰性対照群として，比較した．

【結果と考察】血小板減少病態モデルウサギを用いた止血能評価実験において陽性対照群であるH12−（ADP）リボソームが最も止血能を示し，次いでADP未内包のH12−（PBS）リボソームが陰性対照群である（ADP）リボソームよりも優位に高い生存率を示した．このことより，H12−（ADP）リボソームは出血部位においてHl2ドデカペプチドが最初に活性化血小板同士を架橋することが止血能に大きく関わっていることが示唆された．
Study

of

Mami

Doii，Manabu

theiDepartment

role

of

H12

dodecapeptide

Kinoshita2，ofLifeforthehemostatic

KahokoNishikawa3，Kosuke
Bioscience，

ScienceandMedical

MedicalCollegelmmunology

andMicrobiology，3National

MedicalCollege，Physiology，National

Defense

Medicalabilityof

H12−（ADP）liposome

Hagisawa4，Rimpei

in

Yanagawa5，Makoto

Graduate

SchoolofAdvanced

Defense

MedicalCollege，

ScienceCollege，Medicine

defense，6SchoolandTraumatology
ofthethrombocytopenia

model．

Handa6，Yasuo

lkedai，Engineering，

WasedaUniversity，2National

and

Care

Medicine，4National

CriticalMedicine，

Keio

University

ShinjiTakeokal
DefenseDefenseTel：＋81−3−5369−7324，

E−mail：mami．d927＠gmail．com

18

人工血液Vol．20，No．1，2012シンポジウム2−4
大量出血後輸液による血小板減少状態下で進行する肝外傷出血に対してH12（ADP｝リボソーム
同時投与は血小板投与と同等の止血および救命効果を有する
萩沢康介1，木下学2，西川可穗子3，柳川錬平4，土井麻美5，武岡真司5，斎藤大蔵6，関修司2，西田育弘1

1防衛医科大学校生理学講i座，2同免疫微生物学講座，3同救急部，4同防衛医学講座，5早稲田大学先進理工学部，
6防衛医科大学校・防衛医学研究センター外傷研究部門【背景】外傷性大量出血に対しては出血量に応じて，細胞外液輸液そして濃厚赤血球輸血を行うのが一般的である．我々はそのような大量輸液による希釈性の凝固異常を生じ，なおかつ止血のコントロールがつかない重篤な状況をウサギ低血小板肝臓出血モデルとして確立している．今回，肝臓出血が進行する状況下でのHl2（ADP）リポソームの同時投与が止血治療ならびに救命効果を発揮するか検討した．

【方法】家兎の大腿動静脈より脱血および洗浄赤血球輸血を繰り返し（平均250mL），急性血小板減少状態を生起した．その後，肝臓に直径5mmの欠損孔を作成しoozing出血を持続させた．出血後，圧迫止血を行いながら，ただちにHl2（ADP）リボソームを投与する
もの、自己の血小板（plateletrichplasma：PRP）を投与するもの，血漿（platelet

poor

plasma：PPP）のみ投与するもので，24時間の生命予後と臓器出血量について比較した．
【結果】脱血・輸血により血小板の低下（〈5×104／μL）し，肝損傷部からの出血はPPP群では止血不能で全例が数時間で出血死したが、PRPとH12（ADP）リボソーム群は平均25分で止血され，約半数例を救命できた．
【結語】低血小板状態で進行する出血に対して，Hl2（ADP）リポソーム投与が血小板輸血と同等の止血ならびに救命効果を発揮し，血小板代替物として機能することを確認した．

ARTIFICIAL

BLOOD

Vol．20，No．1，

2012

19

シンボシウム2−5
血小板代替物H12（ADP｝リボソーム開発の必要性一大規模災害時への対策の1つとして一木下

学1，萩沢康介2，西川可穂子3，柳川錬平4，西山靖将4，半田

誠5，関

修司1

1防衛医科大学校免疫微生物，2同生理学，3同救急部，4同防衛医学，5慶磨義塾大学医学部輸血細胞療法部
東日本大震災では広範な地域が被災したため交通網の寸断は深刻なものとなり，医療用機材や医薬品の供給に多大な支障を来した．一方，このような大規模震災では救助を求める傷病者が同時大量発生することも現実のものとなり，かつ傷病者の救助は寸断され麻痺した交通網の中で一刻を争うものであった．自衛隊が有する機動力が大いに活用される場面も多々あった．さらに人口集中地帯における首都直下地震や東海地震は，発生の有無を問うのではなく今や発生時期が問題となっている段階で（ifではなくwhen），その対策は急務である．阪神淡路大震災で遭遇したような建物倒壊や事故などによる外傷患者のより深刻な大量発生が懸念される．中でも外傷性の大量出血を来たした患者には迅速な輸血が必要となってくるが，保存血輸血のみでは血小板がないため出血は制御出来ず，止血救命に
は外科処置と共に血小板輸血が必要となってくる．しかし，輸血用血小板は保存期限が1週間程度と短く大量保存が不可能なため，大震災時には輸血用血小板の極端な不足が懸念される．血小板代替物H12（ADP）リボソームは生体由来の材料を全く用いず作製出来る
ため，血液型をあわせる必要がなく，さらにエイズや肝炎など血液感染症の危険もなく，また本来の血小板のように振とうしながら厳重な温度管理をして保存する必要もなく静置だけで血小板のほぼ25倍の6カ月間は保存出来，大量生産も可能である．Hl2（ADP）リ
ボソームは，出血部位に付着した活性化血小板に結合し，そこで血中にわずかに残った血小板を集めて血栓を効率よく形成し止血する
ため，出血部位以外では血栓を作らず，血栓症の副作用はないと考えられる．大量出血と大量の赤血球輸血で血小板が減少したウサギの肝臓に臓器損傷を作製するとほとんどが出血死したが，H12（ADP）リボソームの前投与で血小板輸血と同様に全例の止血救命に成功した（J．Thromb．

Haemost．，inpress）．このような顕著な止血効果を持つ血小板代替物H12（ADP）リボソームは大震災などの際に大量に発生であろう大出血を来たした患者に対する止血救命治療に大いに役立つと期待され，国民の安心・安全のために寄与出来るものと考え
ている．

20

人工血液Vo1．20，No，1，2012

一

舟Q演是頁1＿1

出血性ショックモデルラットにおける一酸化炭素付加型赤血球の肝チトクロームP450保護効果
大柿滋1，田口和明1，渡邊博志L2，丸山徹1・2，小田切優樹34

1熊本大・院・薬，2熊本大・薬・育薬フロンティアセンター，3崇城大・薬，4崇城大・DDS研究所【緒言】我々は，出血性ショックに伴う赤血球（RBC）輸血時には，チトクロームP450（CYP）の肝発現量が低下すること，対照的に一酸化炭素（CO）をRBCに付加したCO−RBC輸血は，肝CYPに対して保護的に作用することを見出した．本検討では， CO−RBC輸血時に観察される肝CYP機能に対する保護効果の詳細と機序解明を目的として， CO−RBCによる肝CYP保護過程におけるクッパー細胞の関与について評価した．

【方法】血液量の40％を脱血することで出血性ショックモデルラットを作成した．等容量のRBCまたはCO−RBCにより蘇生し，蘇生
1及び24時間後における肝CYP（CYP

I

A2，2Cl1，2El，3A2）発現量をWestemblotting法により検討した．加えて，CYP分子種（CYPI

A2，2Cll，2El及び3A2）特異的基質薬物（カフェイン，トルブタミド，クロロゾキサゾン及びミダゾラム）を混合したCYPカクテルを尾静脈内投与（2．5mg／kg）後の体内動態について検討した．また，クッパー細胞不活剤であるガドリニウム塩化物（GdCl3）（10mg／kg，または抗酸化剤であるTrolox（25mg／kg，

i．p。）

i．v．）で前処置後，同様の検討を行った．

【結果及び考察】健常群と比較して，RBC蘇生群では，蘇生後1時間における肝CYP発現量の有意な低下と，それに伴うCYP基質薬
物の血漿中濃度の上昇が認められた．一方，CO−RBC蘇生群では， CYP発現量が維持されていたため，健常群と類似した血漿中薬物濃度推移を示した．そこで，CO−RBCによるCYP保護メカニズムを解明するために，虚血再灌流時に活性化される肝クッパー細胞及び産生がr〔進する活性酸素に及ぼすCO−RBC蘇生の影響を検討した．クッパー不活化剤であるGdCl3，または抗酸化剤であるTroloxによる前処置後，出血性ショックモデルラットにRBC蘇生を行ったところ，蘇生後1時間における肝CYP発現量の低下はいずれの処理群においても観察されなかった．これらの結果より，大量出血に伴うRBC輸血では，クッパー細胞の活性化や酸化ストレスの充進に伴い肝CYP発現量が低下するものの， CO−RBC輸血では，肝CYP発現量は維持されることが判明した．また，この機序として， COによるクッハー細胞活性化の阻害や抗酸化作用が重要な役割を果たしているものと推察された．以上の知見から，CO−RBCはCYP保護の観点から，大量出血時における蘇生剤として有用な可能性を見出すことができた．

ARTIFICIAL

BLOOD

Vol．20，Noユ，201221

一 般演題1−2
ES

1−TOF／MSを用いたシステイン付加型ヒト血清アルブミンの検出と機能相関○南雲恒平1，杉森剛志1，山田尚之2，窪田和幸2，渡邊博志1・3，異島

優1・3，田中元彦4，佐々木一慢性肝疾患の影響一

裕4，丸山

徹1・3，小田切優樹5・6

1熊本大・院・薬，2（株）味の素イノベーション研究所，3熊本大・薬・育薬フロンティアセンター，4熊本大・院・医，5崇城大・薬，6崇城大・DDS研究所【目的】ヒト血清アルブミン（HSA）は，血中に最も豊富に存在する血清タンパク質であり，リガンド輸送能，抗酸化能など様々な機能を併せ持つタンパク質であり，34番目に唯一遊離状態で存在するシステイン残基（Cys34）を有している．ところで，肝疾患のような酸化ストレス関連疾患では，HSAの翻訳後修飾が元進しその機能が変化する可能性が考えられる．このことは，慢性肝疾患時におけるCys34のレドックス状態の解析が， HSA機能の低下，ひいては病態の進展を予測する上でのバイオマーカーになり得る可能性を示唆している．そのため本研究では，Esl−ToF／Msを駆使し，慢性肝疾患時におけるcys34の酸化修飾を分子レベルで解析する新たな測定法を確立するとともに，得られた結果とHSAの機能や病態との関連性について検討した．
【方法】健常人及び慢性肝硬変患者（Child

Pugh

A，

B，C）から採取したHSAをESI−TOF／MSで測定した．その際，法によりデコンボリューション処理した．また，血漿中の酸化ストレスはdROMs

MSスペクトルをMaxEnt

testにより解析した．健常人及び慢性肝疾患患者よりHSAを単離・精製し，その機能解析（抗酸化活性，リガンド結合能）を行った．抗酸化活性は， DPPHに対するラジカル消去能により評価した．リガンド結合実験では，サイト1及びサイトIIマーカーとして，それぞれビリルビン及びL一トリプトファンを用い，これらの結合性を健常人と肝疾患患者で比較した．
【結果】健常人及び慢性肝疾患患者由来のHsAをESI−TOF／Msで測定し解析した結果，慢性肝疾患患者の場合， cys34の修飾体の大半はHsA・・Cysであった．興味深いことに， HsA−cysの程度は肝疾患の重症度に依存していた．これらサンプルの酸化ストレスをdRoMs
テストにより測定したところ，病態の進展に伴う血中酸化ストレスの元進が判明した．また，HSA−Cysの割合と血中酸化ストレスマー
カーとの間に有意な正の相関関係が認められた．このことから，HSA−Cysの含有率は，血中の酸化ストレスを反映したものであることが確かめられた．次に，単離・精製したHSAを用いて，そのラジカル消去能及びリガンド結合能を評価した．その結果，健常人に比べて，肝疾患患者群では抗酸化活性やリガンド結合能の有意な低下が観察された．興味深いことに，これらHSAの機能変化はHSA−Cysの割合と相関していた．また，肝硬変治療の標準薬である分岐鎖アミノ酸製剤を投与した患者群では，HSA−Cysの有意な低下とHSA
機能の回復が認められた．従って，Esl−ToF／MsによるHSA−cysのモニタリングは，慢性肝疾患における病態進行の予測や薬物療法の治療効果を判定する上での有用なバイオマーカーとなりうる可能性が示された．

22

人工血液Vol．20，No．1，

2012

＿

丹笠焉ヨ7貝1−3

空リボソームの投与によるexvivoでのラット脾臓T細胞の増殖抑制における細胞周期調節タンパクの関与
藤原満博1，東寛2，池田久實3，酒井宏水4，堀之内宏久5，高本滋1
1日本赤十字社北海道ブロック血液センター，2旭川医科大学小児科学講座，3日本赤十字社北海道赤十字血液センター，
4早稲田大学総合研究機構バイオサイエンス連携研究所，5慶雁義塾大学医学部呼吸器外科【目的】

これまでラットの免疫系へのヘモグロビン小胞体（HbV）の影響を，摘出脾細胞のex vivoでの培養系において非特異的マイトジェン
Concanavalin A（ConA）や特異抗原Keyhole limpet hemocyaninに対する反応性で評価をおこなってきた．その結果， Hbを含まない空リ
ホソームの投与のみで，一過性にこれらの刺激に対する反応性が低下すること，そしてこの低下にNitric・oxide（NO）が関与することを見出している．NOを介したT細胞の増殖抑制の誘導はさまざまな系において報告され，増殖シグナルの一つである転写因子STAr5のリン酸化の抑制が重要とされる場合や，細胞周期を正に制御するcyclin

D2，

D3の発現低下および細胞周期を負に制御するp27kiplの発現増強が重要とされる場合等が知られている．そこで，今回はこれらのタンパクの挙動に着目し，空リボソーム投与の影響について検討を試みた．
【方法】

雄性WKAHラット（8−12週齢，体重約220−300g）を用い，循環血液量の20％（v／v）に相当する空リボソームまたは対照の生食を輸注した．空リホソームまたは生食を輸注後およそ16時間後に脾臓を摘出し，脾細胞を調製した．Con
増殖反応は，蛍光色素CFSE（Carboxyfluorescencediacetate

succinimidyl

A刺激に対するラット脾T細胞のester）で標識した細胞の分裂に伴う蛍光強度の低下を，培養72時

間後に細胞を回収し，フローサイトメトリーにて解析した．また，常法に従って細胞抽出液を調製し，SDS／PAGE後，イムノブロッテ
ィングを行った．NOの関与の検討においては，

NO合成酵素（NOS）阻害薬，

ット脾T細胞の培養液に添加した．リン酸化STAr5，

STAT5，

社より購入した．脾細胞の培養上清中のNO濃度は，cyclinGriessD2，

Assay

L−NMMA（〃G−monomethyl−L−arginine；Alexis

cyclinD3，

p27

kip

1に対する一次抗体はCell

Corp．）をラ

Signaling

Technology

Kitにより測定した．

【結果】（1）空リボソームの投与によってex vivoでの脾臓T細胞の増殖が抑制され，この抑制にはNOが関与していることを， CFSE法で再確認した．（2）ConA刺激によるSTAr5のリン酸化が，空リホソームの投与によって減少し， NOS阻害薬で回復する傾向がみられたがい
ずれも有意ではなかった．（3）ConA刺激によるcyclin D2， D3の発現は，空リボソームの投与によって有意に減少し， NOS阻害薬で回復した．（4）p27kip1の発現は，空リボソーム投与によって増強することはなく，むしろ減少した．
【考察】

空リホソームの投与によるexvivoでの脾臓T細胞のNO依存的な増殖抑制には，細胞周期を正に制御する，

cyclinD2およびD3の発現抑制が関与していると考えられた．

ARTIFICIAL

BLOOD

Vol．20，No．1，2012

23

冊V

膓罎冒是貝1＿4

一人工赤血球（ヘモグロビン小胞体｝をブタに少量投与したときの血行動態に関する検討酒井宏水12，鈴木勇司3，宗慶太郎4，狩野真由美3

1早稲田バイオサイエンスシンガポール研究所，2早稲田大学重点領域研究機構3日本バイオリサーチセンター，
4早稲田大学先端生命医科学センター【緒言】ごく少量のリボソーム製剤をブタに投与した際に，補体活性による疑似アレルギー反応により肺動脈圧の上昇，心拍出量の低下，血管抵抗の上昇，血球数の変動など重篤な反応が見られることがSzebeniらによって報告されている．ヘモグロビン11・胞体（hemoglobin−vesicles，

Hb＼りもリボソーム製剤の一つであるが，ブタに投与した場合についてはこれまで報告が無かった．本研究では，

HbVをブタに少量投与したときの血行動態の変動について確認することを目的とした．
【方法】麻酔下NIBSブタ（♂，33．6土1．Okg

小胞体（Empty

vesicles，b．w．）にスワンガンッカテーテルを導入した．ヘモグロビン小胞体（HbV），

Hbを含有しない空のEV），また，比較として補体活性を引き越す事が知られているDPPGを含有する空の小胞体（Conventional

Liposome，CL）について，ブタに二回投与した（3匹x3投与群）．一回目は0．05 mL／kgし，70分後に10倍の05mL／kgを投与した．投与後の血行動
態，血球数 トロンボキサンB2（TXB2）の変動を観察した．また犠牲死の後，肺の電子顕微鏡観察を行なった．

【結果および考察】CL投与群では，体動脈圧，肺動脈圧の上昇，心拍数の低下，心拍出量の低下，全身血管抵抗，肺血管抵抗が一回目の投与，二回目の投与で繰り返し見られた．一方，HbV投与群およびEV投与群では，一回目の投与で肺動脈圧の上昇が見られたが，体動脈圧の上昇は軽微であった．また，二回目の投与では顕著な変動は見られなかった．CL群のみ補体活性のため，血小板数と白血球数の減少が見られ、また血中TXB2が上昇した． HbV群， BV群では変動は軽微であった．電子顕微鏡観察の結果，肺血管内マクロファージ（pulmonary

intravascularmacrophage，

PIM）がHbVを倉食しており，1回目の投与による反応は補体活性のほかPIMによる非特異的な食食が関与している可能性が考えられた．HbVはCLとは違った脂質組成をしており，これが生体適合性（疑似アレルギー反応の低減）に寄与していると考えられた．

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人工血液Vol．20，No．1，2012

一舟合演昆頁2＿1

ラット妊娠母体におけるヘモグロビン小胞体の胎盤通過性
太田英伸1，李コウ1，加賀麻衣子2，田口和明3，大柿

滋3，泉

仁美1，稲垣真澄1，土屋滋4，岡村州博2，小田切優樹5，

酒井宏水6，八重樫伸生2
1国立精神・神経研究センター精神保健研究所知的障害研究部，2東北大学病院周産母子センター，3熊本大学大学院薬学教育部，
4東北大学病院小児科，5崇城大学薬学部，6早稲田大学バイオサイエンスシンガポール研究所【背景】輸血の代用として開発されてきたヘモグロビン小胞体（人工赤血球）は，期限切れのヒト赤血球からヘモグロビンを精製濃縮し，リン脂質小胞体に内包した小球粒子（直径250nm）である．これまでの研究から，蓄歯類モデルにて慢性投与された人工赤血球が細網内皮系で適切に代謝され副作用を伴わないことが確認された．
【目的】妊娠ラット・モデルにて人工赤血球の胎盤移行性と妊娠母体・胎児に与える生理学的影響を評価する．【方法】妊娠Wistar ratに妊娠16−22日の7日間，人工赤血球（Hb10mg／ml）を2m1／kg／day連日投与した（積算投与量はHb

1400

mg／kg／7

days，全血液量の25％）．

【結果】ヒトHb抗体を用いた免疫染色，1251にて標識した人工赤血球の投与実験により人工赤血球の胎盤透過性は認められなかった．

ヒトHb抗体で染色した免疫染色により，人工赤血球は母体側胎盤labyrinthに留まり，胎児側に移行しないこと，人工赤血球は妊娠母
体の脾臓・肝臓・腎臓に存在することを確認した．また胎児肝臓には1251にて標識した人工赤血球を認めなかった．人工赤血球を連日投与後した妊娠母体・胎児において，体重増加，血算・凝固・生化学的所見において生理食塩水を連日投与した対照群と比較し，有意差を認めなかった．

【結語】人工赤血球は妊娠母体・胎児発育に有害作用を認めず，慢性胎児低酸素症に対する有効な治療に応用できる可能性を示唆した．

ARTIFICIAL

BLOOD

Vol．20，No．1，

2012

25

一 般演題2．2

メチレンブルー及びアスコルビン酸を配合した還元剤によるヘモグロビン小胞体の酸素運搬機能延長の試み
勢司泰久1，堀之内宏久2，酒井宏水3，小林紘一2
1慶雁義塾大学医学部総合医科学研究センター，2慶磨義塾大学医学部呼吸器外科，3早稲田バイオサイエンスシンガポール研究所【目的】生体内に適用されたヘモグロビン（Hb）由来の人工酸素運搬体は次第にメトヘモグロビン（MetHb）へ変化し，酸素運搬機能が低減することが知られている．そこで，劣化したHb小胞体と還元剤を生体内で反応させることによって，酸素運搬機能を回復させる方法について検討した．

【方法】ラットを用いて2種類の検討を行った．還元剤の適用経路を検討する為に，高MetHb含有Hb小胞体を28mL／kg投与して高MetHb血症モデルを作製し，経口（PO），静脈内（IV），皮下（SC）及び腹腔内（IP）の経路からメチレンブルー及びアスコルビン酸
混合（MA）液を15mL／kg投与して24hrまで経時的に採血した．続いて，還元剤の効果を検討する為に，自己血ヘマトクリットが約1．5％の高度血液交換モデルを作製して還元剤を経口投与した．群構成は，Hb小胞体交換及びMA液投与（HbV＋MA）群， Hb小胞体交
換及び生理食塩液投与（HbV＋SaD群，洗浄赤血球交換及びMA液投与（wRBC＋MA）群とし，投与量は15mL／kgとした．血液交換終了後48hrまで観察し，経時的に採血した．採取した血液は血液ガス分析装置にて分析した．
【結果】投与経路による還元効果の比較では，各経路ともMetHb比の低下を示したが， PO群が投与24hrまで比較的緩やかな低下を示したのに対し，IV群は急速に， SC及びIP群は更に急激に低下し，24hrで再上昇に転じた．高度血液交換モデルに対する還元剤投与では，HbV＋Sa1群の全例が48hr以内に死亡したが， HbV＋MA群は66．7％， wRBC＋MA群は全例とも交換終了後48hr以上生存した．24hr
でのMetHb比及び血中乳酸値は，

HbV＋MA群が18．0±2．4％及び1．3±0．7mmo1／L，

HbV＋Sa1群が48．8±0．8％及び6．3±1

wRBC＋MA群が2．6±O．O％及び0．8±O．3mmol／Lであった．更に48hrではHbV＋MA群が14」±4．7％及び2．3±1．Ommo1／L，．4mmol／L

wRBC＋MA群が2．6±0．0％及び0．9±0．2mmol／Lであった．

【考察】MA液は，効果発現時間に違いが有るものの，多様な投与経路でのMetHb還元が可能であり，状況に応じた適用方法の選択が可能であった．また還元剤の経口投与では，致死的な高度血液交換条件でも生存性が向上するなど，還元されたHb小胞体が充分に機能していることが示された．

尚，本研究は平成23年度厚生労働省科学研究費補助金を用いて行われた．

26

人工血液Vol．20，No．1，2012

一 般演題2−3
メチレンブルーによるヘモグロビン小胞体の酸素運搬機能持続の機序に関する検討酒井宏水12，林儒莉3，李M〈i1早稲田バイオサイエンスシンガポール研究所，2早稲田大学重点領域研究機構，3Temasek

Polytechnic【緒言】人工赤血球（ヘモグロビン小胞体，HbV）は，メトヘモグロビン還元酵素系を含有しないため，投与後メトヘモグロビン（metHb）

含量が次第に増大する．これまでに様々な方法によりその抑制あるいは遅延を検討してきた．学術的に興味深い反応系も見つかったものの，効果が不十分であったり，またHbVの製造法を変更することが必要となっていた．メチレンブルー（MB）はメトヘモグロビン血症に対して有効な治療法として知られているが，最近，勢司らは，MBの併用がHbVの酸素運搬機能の持続に有効である事を動物投与試験から明らかにした．そこで，本研究ではMBの作用機序について検討した．
【方法】Isoflurane麻酔下Wistar系ラットにメト化率が約0％または50％程度のHbVを投与（10，20

mUkg），次いでメチレンブルー（MB）

水溶液を投与し，メト化率の推移を5時間観察した．またin・vitroの実験として，ラット新鮮血，洗浄赤血球，血漿に対してHbVおよびMBを添加し， metHbレベルの推移を計測した．アスコルビン酸（AsA）の添加効果についても検討した．

【結果および考察】MBの投与によって， HbVのメト化率は50％から10％程度に急激に低下し，約5時間低い値を推移した．またその効果は，MBの投与量に依存していた． metHb含量が0％のHbVを投与した直後にMBを投与した場合も， metHbの増大を若干遅延させる効果が得られた．In vitroの実験として，新鮮ラット血液をメト化率約50％のHbVと各種混合比にて好気的条件で混合し，そこにMBを添加したところ、メト化率は瞬時に低一ドし，約10％程度にまで還元され、invivoの還元効果がinvitroで再現された．洗浄赤血球との混合でも同等の効果が得られたが，血漿との混合では還元は見られなかったことから，赤血球の膜蛋白質に含まれる還元酵素系
がMBを還元型（MBH）に変換し，このMBHがHbVの脂質膜を透過し， metHb（Fe3＋）に電子供与して還元型（Fe2＋）に変換したものと考えられた．赤血球の混合比が低い条件（血液交換率が高い状態）にすると，還元効果は低減した．赤血球の無い状態では，アスコルビン酸（AsA）の添加によってMBがMBHに容易に還元され，HbV内のmetHbが還元された．

以1二のことより，HbVの投与量が比較的少ない場合には， MBの単独投与によってMBは体内の赤血球に還元されMBHとなりこれがHbV内のmetHbを還元することができる．他方， HbVの投与量が多く（循環血液量の50％超えるような場合），輸血治療まで長時間に及ぶ場合には，MBとAsAの併用が有効であることが考えられた． HbVの体内機能寿命の延長のために有効な手段と考えられた．

ARTIFICIAL

BLOOD

Vo1．20，No．1，201227

一 般演頴2．4
微小血管内における人工赤血球の酸素運搬モデルに関する研究
百武徹

横浜国立大学大学院工学研究院【緒言】急速な少子高齢化の到来に伴う輸血用血液製剤不足の解消，また現行の血液製剤に対する様々なリスクの軽減を目指し，現GE，
赤血球製剤の代替物として，ヘモグロビンをリボソームに封入したカプセル型人工赤血球の開発が進められている．カプセル型人工赤血球の特徴として，その直径が約200−250nmとヒトの赤血球の1／30程度のナノ粒子であり，微小循環系での人工赤血球の利用を考えた場合，血管内のおけるナノ粒子としての人工赤血球の流体力学的挙動，そして，人工赤血球から放出される酸素拡散に対する理解が非常に重要となってくる．特に，微小血管内では，赤血球の存在が重要となるため，赤血球も含めた酸素運搬過程を調べる必要がある．
一 方で，赤血球は微小血管内において変形しながら流れていくため，その挙動に関しては複雑となり，実験的アプローチのみでは詳細なことは分からない．このようなことから，微小循環系における人工赤血球，および酸素拡散を詳細に解明するためには，数値シミュ
レーションによる酸素運搬モデルによる解析が有効であると考えられる．
【方法】本研究では，流体力学的観点から血球を含む微小血管内を固液混相流と捉え，微小血管内における変形流動する赤血球の挙動解析に加えて，人工赤血球の拡散およびヘモグロビンの酸素解離を考慮した解析を行った．解析手法としては混相流に有力な手法である格子ポルツマン法（Lattice

Boltzmann

Method：LBM）という流体解析手法を適用した．また，赤血球に関しては、

Immersedboundary

methodを用いて赤血球の変形を計算した．人工赤血球および酸素とヘモグロビンの解離結合反応に関しては，流体解析に加えて反応拡散方程式を解くことによって，その挙動を調べた．
【結果及び考察】解析の結果，赤血球の存在下での人工赤血球の酸素運搬モデルの構築に成功した．赤血球に関しては，微小血管内をパラシュート型に変形流動する赤血球，および変形に伴う軸集中と血漿層の形成が再現できた．また，反応拡散方程式を解析すること
により，さまざまなタイプの人工赤血球に対して酸素分圧の違いにおける組織への酸素拡散の影響を明らかにすることができた．

28

人工血液Vol．20，No．］，2012

一 般演題2−5
人工ヘム蛋白質｛ヘモグロビンーアルブミン｝クラスターの開発
冨田大樹，木村拓矢，小松晃之
中央大学理工学部応用化学科【緒言】 大規模災害時に予想される輸血液の大量需要への懸念から，臨床利用可能な人工酸素運搬体に対する期待が益々高まっている．我々は，これまでヒト血清アルブミン（HSA， Mw：66，500）に合成ヘムを包接させたアルブミンーヘム複合体や，アルブミン変異体にプロトヘムを結合させた遺伝子組換えアルブミンーヘム錯体が，生理条件下で酸素を可逆的に吸脱着できる人工ヘム蛋白質として機能することを明らかにしてきた．HSAは血漿蛋白質の約60％を占める単純蛋白質であり，膠質浸透圧維持や薬物運搬などの役割を担っている．また，HSAの分子表面は負に強く帯電しているため，腎臓から排泄されにくい特徴を持つ．本報では，生体内でより効率高く酸素輸送のできる新しい人工酸素運搬体の開発を目的として，ヘモグロビン（Hb， Mw：64，500）にHSAを共有結合した（ヘモグロビンー
アルブミン）クラスター（Hb−HSA，）（Figl）を合成し，その構造，物性，酸素結合能を明らかにしたので報告する．

【実験】高純度HbのPBS溶液（［Hb］・0．1血）に，架橋剤α一succinimidyl一ε一malei皿ideを添加し，撹拝後，ゲル濾過クロマトグラフ
ィーにより未反応の架橋剤を除去した．そのHb溶液とHSAのPBS溶液（［HSA］＝0．5耐）を混合し（［HSA］／［Hb］＝10（mol／mol）），室温・遮光下で反応させ，Hb−HSA，クラスターを合成した、得られた混合物をサイズ排除クロマトグラフィーにより分画精製し，単離した各ク
ラスター成分の蛋白質定量，ヘム定量，CDスペクトル測定を行った．酸素親和性（Pso）， Hill係数（n）はHemox Analyzerを用いて，酸素結合解離速度定数（k。n，k，ff）はレーザーフラッシュフォトリシス法を用いて決定した．また，酸素錯体安定度を自動酸化速度定数（k。x）より評価した．

【結果と考察】単離したクラスターのHSA／Hb比から，各主要成分はそれぞれHbにHSAが1〜3個結合した構造（Hb−HSA。（mニ1〜3））であることを明らかにした．Hb−HSA3クラスターのAFM像には， HbにHSAが3分子結合した星型構造が明確に観測された．クラスターの分
子径は約12n皿であり，等電点はHSAと同等の値（pl ＝4．8）を示した．酸素親和性は調製条件を制御することにより調節可能で， Psoは8〜 28Torr（37℃），n値は1．1〜2．2となった． k。，はHbのR状態， k，ffはT状態に近い値であったことから，クラスター内のHbはR，T状態の中間構造にあるものと推定される．また，一般に修飾Hb製剤のk。xはHbに比べ高いが， Hb−HSA。のk。xはHbと同等の値に留まった．

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BLOOD

Vol．20，No．1，

2012

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人工血液Vol．20，No．1，2012

5）Originalarticles，review

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6）Research

conducted

with

topicalpieces，

and

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6

and

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1．Wongexample，iftheoxygenthedrugsetting．

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NS，

Chang

and

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last

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or

2．Natanson

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C，

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Cells

Blood

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Immobil

SJ，

Lurie

P，

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platelet−likehemoglobin−based

section．

TM．

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Biotechnolin2007：35：

Banks

SM，

Wolfe

SM．

substitutes

and

risk

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death：ameta・analysis．

J

Am

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Kobayashi

K，

Cell−free

myocardial
Assoc

2008；

299：2304−2312．

7）If

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3．SakaiwasH，

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Louis，

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Abbreviations
Index

Medicus．

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and

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Copyright

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right
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Journal，

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300ffprintsofchargedforcopiesexcessyencopy）．

be

100

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art

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etc．

must

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Authors

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Year

Book

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editor（s）．

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of

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Editor−in−Chief46｝，etc．

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the

and

Divisionpreviously

Society．

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Copyright

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obtained．

aforementionedbynumbers，

permission

the

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printsReferences

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12）References

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14）Regarding
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or

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Performances
RM，E．

Characteristics

Press（Elsevier），2006；514−522．
Project，

case

figures

copyright

cost

in

the

published

event

and

and

In：Winslow

Tsuchida

Assembly．

2008）

himself／herself，11）Figures

Process

Weights

numerals．

N／10．

and

Sept

Reproduction

shouldfollowings：m，fg，

accessedpublished

EnglishS，

Molecular

http：／／www．waseda．jp／prj−artifblood／index−ja．html（lastandindicated．

system（LEG−1000；Nihon

Symbol．

Infusionadistributor（manufacturer）andTokyo）．

9）The

Takeokaas

Carriers．

4．OxygensoK，

vesiclesLondon：Academic

manuscrlpt．
8）

Sou

Hemoglobin

for

of

manuscripts

General

Universlty，

35Shinanomachi，toEditorialbe

Substitutes，ThoracicSchoolofsent：

OfficeJapan

Surgery，Department

ofSurgery，Medicine

Shinjuku−ku，Tokyo

160−8582，Japan

E−mail：amorcito＠a5．keio．jp

numbers．
References

ARTKFICIAL

to

BLOOD

electronicsourcesshould

Vo1．20，No．1，2012

be

given

as

follows：31

投稿規定（平成20年9月30日改訂）
本誌は，血液を構成するあらゆる成分について，その代替物を開発する研究に貢献する論文，関連する情報，学会会員のための会報，学会諸規定等を掲載するが，形式にはこだわらず創

者名，全著者所属，英文著者名，英文著者所属，続いて連絡の取れる著者（corresponding author）の住所，英文住所を記入する．手書き原稿の場合はB5版，1行20字，20行とする．

意ある投稿を広く集める．本誌への投稿者は本学会会員であることが望ましいが，投稿を希望する者は誰でも投稿することが5）「原著論文」，「総説」，「トピックス」，「オピニオン」につ出来る．原稿掲載の採否は，査読結果に従って編集委員会が決定する．原著論文について，他誌に既発表あるいは投稿中の論

いては，第2頁以降に和文抄録，Keywords（英文で6個程度）
を付け，最終頁または別紙に英文抄録を付けること．

文は掲載しない．

6）投稿論文に記載の研究が公的助成を受けて実施された場合共著者がいる場合には，共著者全員の承諾を得てから投稿すには，謝辞にその旨を記載すること．また，Conflictofる．論文の版権は本学会に譲渡しなければならない．このため，

Interests（例えば，論文に記載された薬品を販売する企業と著

著者の代表者は，本誌に添付の著作権譲渡同意書（Copyright

者との利害関係：雇用，コンサルタント，研究助成，株式，特Transfer

許など）があれば，これを第1頁の脚注，謝辞などに記載する

Agreement）或は，本会のホームページサイト（http：／／www．blood−sub．jp／home／index．html）からダウンロー

こと．

ドしたものに署名捺印の上，郵送，Fax，またはpdfファイル
としてE−mailにて編集委員会宛に提出する．

7）ヒトを対象とした研究結果，および動物実験の結果を掲載する場合には，各研究機関のガイドラインに従って実施したこ

ワープロを用いて作製した原稿の投稿を原則とする．ただし，とを方法等に明記すること．

手書き原稿による投稿でも受け付ける．欧文による投稿を歓迎する．

8）論文中の略語は初出の際に省略しないこと．薬品，医薬品，

1）原稿の種類は，「原著論文」，「総説」，「学会報告」，「トピ測定装置等は，外国語名の場合は言語のまま用い，日本語化しているものはカタカナとする．型式，販売（製造）元とその所ックス」，「オピニオン」，「海外文献紹介」から選び，これを第在地も記入すること．

1頁の右肩上に明記すること．これらに該当しない原稿も受け付ける．査読意見によっては種類が変更される場合がある．次フシステム（LEG−1000；日本光電工業，東京）（例）Rhodamine

B（Sigma−Aldrich，St．

Louis，USA），ポリグラのいずれかの方法により，送付状（任意のフォーマット）を添
えて編集委員長宛に投稿する．

9）句読点はコンマ（，）ピリオド（．）とする．

i）文章と図表の電子ファイルをE一メールで送付する（使用10）文中の英語に使用するフォントは，Times，

したソフトを明記すること）．文章・表のファイル形式は，

Courier，

doc，

文頭および固有名詞は大文字で書きはじめること．

txtが好ましい．図は，

ppt，

jpg，

tiffが好ましい．

ii）ハードコピー4部を郵送する．

Helvetica，

Symbolを原則とし，英文半角小文字とする．ただし，

11）数字はアラビア数字を使い，度量衡の単位はm，cm，L，

mL，μL，

mol．

g，mg，μg，

ng，

pg，

fg，

mm，μm，

N／10などを用いる．

2）投稿論文の査読は，編集委員長が選んだ人工血液分野の研送付状に「査読意見に対する回答」を添え，意見に対して一つ12）FigureとTable：引用順にそれぞれ番号を付けること．表
題，説明，図表中文字は，全て英文とすることが好ましい．本
文中に挿入箇所を明記すること．Figureは直接オフセット印刷

一 つ回答をするとともに，修正箇所がある場合にはこれを明記とする．Tableは編集部にて入力し原図とする．

究者に依頼する．査読意見によっては，原稿の修正を求める場合がある．修正論文（Revised

Manuscript）の投稿に際しては，する．

13）文献：本文に引用した順序に番号を付け，文中では23）掲載決定通知の後，著者は採択論文の文章・図表のファイ
ルを電子媒体として，指定する宛先に送付すること（使用した著者名．論文題名．誌名ソフトを明記すること）．文章・表のファイル形式は，doc，

誌名の省略は医学中央雑誌またはlndexが好ましい．図は，ppt，

jpg，

txt

tiffが好ましい．

4）原稿はA4版の大きさとし，第1頁には表題，英文表題，著32などとする．文献の記載法はthe

Vancouver，5），1・46）styleに従う．全

西暦発行年；巻数：頁〜頁．とし，Medicusに準拠する．

単行本の場合は全著者名．題名．編集者名．書名．発行地：発行書店，年号；頁〜頁．の順とする．電子文献の場合は，ホームページ名．改行してアドレス（引用した西暦年月）とする．

人工血液Vo1．20，No．1，2012

次掲載する編集者に最初に掲載されたもののコピー，別（例）

刷，もしくは原稿のいずれかを添付すること．

1．高折益彦．人工酸素運搬体：その将来への期待．人工血液c）論旨を変えないこと．執筆者は同一（順不同）であること．

2007；15：90−9＆

2．橋本正晴．単回投与毒性試験．野村護，堀井郁夫，吉田武美編．非臨床試験マニュアル．東京：エルアイシー，2001；37−d）二次掲載版のタイトル・ページに掲載される脚注には，その論文の全体もしくは一部分がすでに掲載されている旨を明記し，更に初出文献も示すこと．適切な脚注の例

48．

3．Wong

NS，

Chang

TM．

Polyhemoglobin・fibrinogen：anovel

oxygencarrierwithplatelet−likehemodiluted

setting．

Artif

Biotechnol
4．

Natanson

Cells

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Blood

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SM，

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SJ，

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blood

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Med

2008；299：2304−2312．

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K，

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Blood

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Lurie

myocardial
Assoc

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Cell−free

4．Sakaiを以下に示す．「ThisOxygenSubstitutes．

and

K，

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J

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E

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Carriers．

andln：Winslow

London：Academic

Press（Elsevier），2006；514−522．

5一早稲田大学酸素輸液プロジェクト．
http：／／www．waseda．jp／prj−artifblood／index−ja．html

これらの要件を満たしている場合は，その旨を明記して，総説
または論文記事（二次掲載）として投稿する．
16）本誌掲載著作物の二次利用および著作権について．本誌の一 部，もしくは全部をCD−ROM，インターネットなどのメディ

アに二次利用する場合がある．本誌に掲載する著作物の複製権・翻訳権・上映権・譲渡権・公衆送信権（送信可能化権を含む）は，著者が上述の著作権譲渡同意書を提出することにより，本学会に譲渡される．本項は，著作者自身の再利用を拘束する
ものでは無いが，再利用する場合は，編集委員長に通知をする
こと．

（2008年9月現在）

17）掲載料．掲載料は無料とし，論説，総説，原著，報告等に14）既発表の図表，その他を引用，転載する場合には，あらか
じめ版権所有者の許可を得ること．また，掲載論文の著作権は本学会に帰属する．

15）二次掲載について．本誌は，他の言語ですでに掲載された論文を和文で二次掲載することは二重投稿ではなく正当な掲載と認めるが，著者は以下の事項を遵守する．
a）すでに掲載された論文であること．

ついては別刷り30部を贈呈する．それを越える分についての費用は著者の負担とする（およそ1部100円）．カラー写真掲載・
アート紙希望などの場合は，著者の実費負担とする．
18）原稿の送付先〒160−8582

東京都新宿区信濃町35

慶鷹義塾大学医学部呼吸器外科内日本血液代替物学会 会誌「人工血液」編集部 宛
E−mail：amorcito＠a5．keio．jpb）著者は両方の雑誌の編集者より許可を得ていること．二ARTIFICIAL

BLOOD

Vo1．20，No．1，2012

33

人工血液
日本血液代替物学会会誌

Artificial
The

Official

Journal

of

The

Blood

Societyof

Blood

Substitutes，Japan

日本血液代替物学会

会長小林
To：Dr，

紘一殿

Koichi

Kobayashi

President
The

Societyof

Blood

Substitutes，Japan

日本血液代替物学会

会誌「人工血液」に投稿した論文

表題
Manuscript

Title：につきまして，倫理規定に準拠した内容であること，また，共著者の全員が内容を確認していることを誓約いたします．なお，掲載された論文の著作権は，貴学会に帰属することを認めます．
Iattest

that

the

the

journalofbeen

confirmed

content

the
by

of

Society
all

the
of

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Blood

coauthors．

manuscript，Substitutes，We

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submitted

Japan，
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Ar峨c↓01β1004
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Corresponding Author（Signature）

連絡先
Contact

Address：（本用紙はコピーしたものを使用されても結構です．）
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for

use．

日本血液代替物学会 会誌「人工血液」編集部〒160−8582東京都新宿区信濃町35 慶鷹義塾大学医学部呼吸器外科内E−mail：amorcito＠a5．keio．jp

The
DivisionofGeneralThoracic

35

Artificial Blood Editorial OfficeSociety of Blood Substitutes， Japan
Surgery，

Shinanomachi，Department

ofShinjuku−ku，Surgery，

Tokyo

Keio

University，

160−8582，

SchoolofMedicineJapan

E−mail：amorcito＠a5．keio．jp

34

人工血液Vo1．20，

No．1，2012

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BOLHEALQ㊨■健保適用●ご使用に際しましては製品添付文書をご参照下さい。
販売

TEIJIN帝人株式会社
医薬事藁本部〒1O｝8585東京郵千代田区内幸町2−1−1

0罐論

資料講求先：帝人㈱医薬事業本部第2学術部
化学及血清療法研究所営業部

熊本市大窪1−6−1〒〔Me56B

BOIIT9810

作成年月1998年io月

B52

禁忌（次の0者には投与しないこと）

本剤の成分に対しショックの既往歴のある患者
原貝li禁忌（次の胞音には投与しない

聯ことを■則とするが、特に必■とする●
合には慎量に投与すること）

︑〜2

本剤の成分に対し過敏症の既往歴のある患者
冷蔵保存から室温保存になりました。

漿分画製剤

献血べ：ロユKenlOU」VenilO■［i巴1〈乾燥スルホ化人免疫グロブリン〉

生物学的製剤基準
本剤は、献血による貴重な血液を原料として製冑Hヒされたものです。問診t感染症関連の検査等の安全対策を講じていますが、血液を原料としていることに由来する感染症の伝播等の危険性を完全に排除することはできないことから、疾病の治療上の必要性を十分に検討の上、必要最小限の使用にとどめるようお願いします。（「使用上の注意jの項参照）●ご使用に際しましては、製品添付文書をご参照下さい。

輌〉帝人株式会社

e化血研纏i禦瓢顯i

資料請求先：帝人（株）医薬医療事業本部学術情報部（財）化学及血清療法研究所営業管理部

医薬医■事篇本葛〒100−8585東京都千代田区内幸町2・1・1

資科目求先：帝人㈱医薬医療事業本部学術情報部

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BLOOD

Vol．20，No．1，201235

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NEUTROGIN注）注意一医師等の処方せんにより使用すること「効能・効果」、「用法・用量」、「用法・用量に関連する使用上の注意」、

1w

幽「【禁忌】を含む使用上の注意」等につきましては、添付文書をご参照下さい。
http：〃vvwvv．chugai−pharm．co．jp〔資料請求先〕

製造販売元中外製薬株式会社〒103−8324東京都中央区日本橋室町2−1・1●酒井宏水（委員長），東

編集委員会
寛，武岡真司，堀之内宏久，棟近公司，村田日本血液代替物学会会誌■発行

日本血液代替物学会■編集・制作「人工血液」編集委員会

■印刷

株式会社

研恒社

200510満，

渡辺真純●

人工血液v。1．20（1）2012年10月1日発t7〒160−8582 東京都新宿区信濃町35
慶慮義塾大学医学部呼吸器外科内TEL（03）5363−3493 FAX（03）5363−3499〒160−8582 東京都新宿区信濃町35
慶慮義塾大学医学部呼吸器外科内TEL（03）5363−3493 FAX（03）5363−3499〒102−0073 東京都千代田区九段北1−1−7
TEL（03）3265−8961 FAX（03）3264−1995

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