環境感染誌

Vol. 34 no. 2, 2019

〈原 著〉

大量調理施設衛生管理マニュアルに基づいたノロウイルス検査法 4 法の比較
荻原真二 1,2,3）・井上修 2）・莊司

2）

2）

松村大樹 ・矢崎智和 2）・窪川正浩 ・井上克枝佳世 2）

1,3）Multiple Comparisons of Four Methods for Norovirus Detection Based on the“Sanitary Management Manual for Large Cooking Facilities”
by the Ministry of Health, Labor and Welfare in Japan
Shinji OGIHARA1,2,3）, Osamu INOUE2）, Tomokazu SHOJI2）, Kayo KUBOKAWA2）,
Hiroki MATSUMURA2）, Masahiro YAZAKI2）and Katsue INOUE-SUZUKI1,3）
1）Central Laboratory Unit, University of Yamanashi Hospital,2）Division of Infection Control and Prevention, University of Yamanashi Hospital,
3）
Department of Clinical and Laboratory Medicine, Faculty of Medicine, University of Yamanashi（2018 年 6 月 11 日受付・2018 年 11 月 22 日受理）
要旨
平成 29 年 6 月に大量調理施設衛生管理マニュアルの改正が通達され，ノロウイルスの流行期間の 10 月〜3 月までの間，大量調理施設の調理者を対象に高感度検査法でノロウイルス検査を行うことと記載されている．そこで現在国内で実施可能なノロウイルス検査法 4 法について感度，検査実働時間，トータル検査時間，コストについて比較分析した．
健常人ボランティアより提出された 53 名の便検体（陽性例の追跡検査分を含む 62 検体）を用い
GeneXpert システム，TaKaRa ノロウイルスキット，TaqMan

Probe 法，クイックナビ―ノロ 2の 4 法について検討した．
GeneXpert システム，TaKaRa ノロウイルスキット，TaqMan

Probe 法の 3 法は，大量調理施設衛生管理マニュアルが求める感度の検査法であった．53 名の便検体の検査実働時間は各々 106分，260 分，687 分，76 分，トータル検査時間は各々 2,434 分，320 分，857 分，91 分，コストは各々 202,089 円，73,644.4 円，152,249 円，79,500 円であった．
本検討より我々が理想的と考える検査法の選択は，大量検体を処理するスクリーニング検査法は
TaKaRa ノロウイルスキット，さらに陽性者の追跡調査は GeneXpert システムの組み合わせである．検査法にはそれぞれ特徴があり，それらを理解した上で検査法を使い分けることが肝要である．
Key words：ノロウイルス，大量調理施設，高感度検査，検査コスト，PCR

序

105 オーダーのノロウイルスを検出できる検査法を用い文
平成 29 年 6 月 16 日に厚生労働省より大量調理施設衛１）ることが望ましい．」と記載されており，ノロウイルス生管理マニュアルの改正が通達された ．大量調理施設に関する感染防止及び衛生管理を重視した内容となって衛生管理マニュアルは，「10 月から 3 月までの間には月いる．そのため，同一メニューを 1 回 300 食以上又は 1に 1 回以上又は必要に応じてノロウイルスの検便検査に

日 750 食以上を提供する病院などの大量調理施設ではノ努めること．」，さらに検査法として「概ね便 1 g 当たり

ロウイルスを高感度に検出できる検査体制を保有してゆく必要がある．
ノロウイルスは，ウイルス性胃腸炎の原因ウイルスの

1）山梨大学医学部附属病院検査部，2）山梨大学医学部附属病院感染制御部，3）山梨大学大学院総合研究部医学域臨床検査医学講座一つであり，冬季に流行をする２）．ノロウイルス感染症― 83 ―

環境感染誌

Vol. 34 no. 2, 2019
表1

各検査法の特徴

検査法

GeneXpert システム

TaKaRa ノロウイルスキット

TaqMan Probe 法

クイックナビ原理
反応時間
長所

Real-Time PCR 法
90 分・操作が簡便・結果判定が容易
・自動化されている・特別な装置が必要
・キットが高価

Real-Time PCR 法
60 分
・多くのサンプル数に適する

Real-Time PCR 法
60 分
・多くのサンプル数に適する・厚生労働省が推奨

イムノクロマト法
15 分
・操作が簡便・安価・特別な装置が必要
・ピペット操作を要する

・特別な装置が必要
・ピペット操作を要する・低感度 7）

短所

表2

ノロウイルス検出システム 4 種による糞便 53 検体からのノロウイルス検出の比較

サンプル

GeneXpert システム

TaKaRa ノロウイルスキット

TaqMan Probe 法

陽性
3陽性
1陽性
0

＊

陽性コントロール
糞便検体（n＝53）＊
GI，GII：1−2×104 copy/μL．
表中の数字は陽性検体数を示す．

は，ウイルスで汚染された食品を喫食することで感染がイックナビ―ノロ 2（以下；クイックナビ）（デンカ生拡大するため，大量調理施設である病院では集団感染の研株式会社）を用いて，全 4 法を検討した．各方法は添３）付文書または厚生労働省が推奨している方法に準じて実2発生に警戒する必要がある ．ノロウイルスは，10 −103のウイルス粒子でも感染が成立するなど感染性が高く，４）施した．TaKaRa ノロウイルスキットと TaqMan Probe

しばしば大規模な集団感染を引き起こす ．ノロウイル

法で使用するリアルタイム PCR 装置は Applied Biosys-

スによる食中毒では，調理者を介したアウトブレイク事

temsⓇ 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo例も報告されている５）．さらにノロウイルスの不顕性感

Fisher Scientific 株式会社）を使用した．各方法の特徴

染者は便中に感染者と同程度のウイルス粒子が存在しては表 1 に示す．陽性コントロールは遺伝子検査法であ６）いる ．そのため，ノロウイルスを迅速かつ高感度に検る GeneXpert システム，TaKaRa ノロウイルスキット，出する検査法は，診断や治療のみではなく感染制御にもTaqMan

大きな意義を持つ．

整方法は各方法で陰性と確認された便検体を使用し，便現在，ノロウイルス検査法には複数の方法があり，方７，８）法や原理により感度と特異度が異なる ．多数のノロウ

Probe 法で実施した．陽性コントロールの調検体 1 g にノロウイルス GI・GII の既知濃度 1〜2×104
copy/μL を 1 μL 添加，混和し各方法を実施した．

イルス検査法が存在するが，これらの検査法の特徴を比検討項目は，検出感度，検査実務時間，トータル検査

較した報告は少なく，特に遺伝子検査法を複数比較した時間，検査コストとした．陽性と判定された被検者では論文は存在しない．そこで我々は現在国内の主なノロウ

1 週間毎に便検体が提出されており，陰性化するまでのイルス検査法 4 法を様々な視点で比較検討し，その特徴期間も検討した．検査実働時間は，試薬分注，チューブを明らかにした．の準備，遠心機への装填の操作時間，判定時間など実際の操作時間とした．トータル検査時間は，検査実働時間

材料と方法に遠心時間，反応時間を含めたものとした．

サンプルは，2016 年 10 月から 2017 年 3 月までに提陽性と判定された被検者の追加検査および陽性コント

出され，−80℃ に凍結保存されていた健常人ボランティ

ロールは検査実務時間，トータル検査時間，検査コスト

ア 53 名（陽性例の追跡検査分を含む 62 検体）の糞便をから除外した．

用いた．凍結検体を室温で溶解後，各検査法を同時に実本研究は山梨大学医学部倫理委員会（病原体等安全管施した．ノロウイルス検査法は，遺伝子検査法として理委員会を含む）の承認（承認番号 1686）を得て行っ

GeneXpert システム GX-II XpertⓇ Norovirus（以下；た．

GeneXpert システム）（セフィエド合同会社），TaKaRa
ノロウイルス GI/GII 検出キット（以下；TaKaRa ノロ結果ウイルスキット）（タカラバイオ株式会社），厚生労働省

53 名の糞便検体中，GeneXpert システムで 3 名の便が推奨する TaqMan Probe 法（以下；TaqMan Probe

検体が陽性となり，うち 1 名の便検体は TaKaRa ノロ法）の 3 法を用いた．さらにイムノクロマト法としてクウ イ ル ス キ ッ ト で も 陽 性 と な っ た（表 2）．TaqMan― 84 ―

環境感染誌
表3検査法

陽性検体の追跡結果

GeneXpert システム

TaKaRa ノロウイルスキット

陽性検体

No. 1

No. 2

No. 3

No. 1

No. 2

No. 3

初回検査日
1 週目
2 週目
3 週目

検出
検出
検出
未検出

検出
検出
検出
未検出

検出
検出
未検出
未検出

検出
検出
未検出
未検出

未検出
未検出
未検出
未検出

未検出
未検出
未検出
未検出

表4

Vol. 34 no. 2, 2019

53 名分便検体の検査実働時間，トータル検査時間，検査コスト

検査法

GeneXpert システム

TaKaRa ノロウイルスキットTaqMan Probe 法

クイックナビ

検査実働時間トータル検査時間
検査コスト

106 分
2,434 分
202,089 円

260 分
320 分
73,644.4 円

687 分
857 分
152,249 円

76 分
91 分
79,500 円

Probe 法とクイックナビは 53 名の糞便検体全てが陰性

トがより高感度にノロウイルスを検出しており，その検となった．陽性コントロールは GeneXpert システム，

出感度は 10〜100 copy であった９）．本研究の厚生労働省

TaKaRa ノロウイルスキット，TaqMan Probe 法すべてが推奨する方法で実施した TaqManの方法で GI・GII ともに陽性を示した．GeneXpert シした検体では全て陰性であったが陽性コントロールであステムで陽性となった 3 名の便検体は，1 名の便検体がる 1〜2×104 copy/g では検出可能であった．林らの報Probe 法は，測定2 週目で陰性，2 名の便検体が 3 週目で陰性となった．

告でも，厚生労働省が推奨する方法で実施した TaqMan

TaKaRa ノロウイルスキットで陽性となった 1 名の便検

Probe 法の検出限界は，2.1×104 copy/g 糞便と評価し体は 2 週目で陰性となった（表 3）．53 名の便検体の検て い る１０）．こ れ ら の 結 果 か ら GeneXpert シ ス テ ム，

査にかかった検査実務時間，トータル検査時間，検査コ

TaKaRa ノロウイルスキット，TaqMan Probe 法の 3 法

ストは表 4 に示 す．GeneXpert シ ス テ ム，TaKaRa ノは，大量調理施設衛生管理マニュアルが求める感度の検ロウイルスキット，TaqMan

Probe 法，クイックナビ査法であった．一方，技術発展に伴い少数のウイルス粒の順に，検査実務時間は 106 分，260 分，687 分，76 分子まで検出できる検査法も開発されるようになった９）．

であった．以下同様にトータル検査時間は 2,434 分，320

便 1 g 当たり 105 オーダーの検査法の実施によるアウト分，857 分，91 分，検 査 コ ス ト は 202,089 円，73,644.4

ブレイクの抑制効果の報告はなく，またノロウイルスは円，152,249 円，79,500 円であった．

102−103 のウイルス粒子でも感染が成立することから，大量調理施設衛生管理マニュアルにおける検出感度の適考

察正については今後の検討課題と考える．特に易感染者が本研究では大量調理施設の調理者を想定し，多くのサ多数入院している病院などの大量調理施設では，検査技ンプル数で検討を行い，検出感度，業務的負担や経済的術の向上に合わせたより高感度な検査法でノロウイルス負担の指標として検査実務時間，トータル検査時間，検を検出することで，これまで以上に食の安全を保証する査コストを比較した．検出感度は GeneXpert システムことが可能になると考える．

が最も高く，次いで TaKaRa ノロウイルスキットであっ検査および結果判定にかかる時間を計測した検査実務

た．GeneXpert システムで陽性判定となった 3 名の便時間は，クイックナビが最も短く，次いで GeneXpert

検体，そのうち 1 名の便検体は TaKaRa ノロウイルスシステムであり，TaKaRa ノロウイルスキット，TaqMan

キットでも陽性を示し，両方法で 2 週から 3 週に渡りウProbe 法の順となった．クイックナビと GeneXpert シイルスの排出が確認された．さらに，両者は Probe 法

ステムは便を希釈液に懸濁し検査キットに前処理液を分を原理としているため特異度が非常に高いことも考慮す注するのみであるため，短時間で検査可能である．一方

ると GeneXpert システムと TaKaRa ノロウイルスキッで，TaKaRa ノロウイルスキットと TaqMan

トの陽性結果は偽陽性ではなく真の陽性判定であったと

はバッチ方式であるため多くの検体を一度に検査可能で考える．左近の報告では，TaKaRa ノロウイルスキットあることが利点である．しかし TaqManと 厚 生 労 働 省 が 推 奨 す る 方 法 で 実 施 し た TaqMan

査実務時間のみで 10 時間以上を要した．チューブの準

Probe 法の比較検討を行い，TaKaRa ノロウイルスキッ

備や分注，遠心操作が複数回必要となるなど検査工程が― 85 ―Probe 法Probe 法は検環境感染誌

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多岐にわたるためであり，検査実務時間の長さがその他ある．しかし，各施設で設備，人員配置，予算などそれの業務に影響を及ぼす可能性はある．感染者の勤務再開

ぞれ異なることから，流行期の調理師ノロウイルス検査のためには，糞便中のノロウイルスが陰性化したことを体制は大量調理施設衛生管理マニュアルを踏まえた継続確認する必要があるが，GeneXpert システムと TaKaRa可能な各施設に適した検査法を構築し実施すべきである．

７）

ノロウイルスキットでは北川らの報告 と同様に 2 週から 3 週に渡りウイルスの排出が確認された．この間は定謝 辞：本研究で使用した試薬を一部提供していただいたセ期的に PCR 法での検査を繰り返す必要があり，TaKaRa

フィエド合同会社の田島久大様，ベックマン・コールター株式会

ノロウイルスキットでの検査実務時間と比べ GeneX-社の堂浦照也様に深謝申し上げます．また，ノロウイルス GI・GII

pert システムの検査実務時間は短く，検査者の負担をの陽性コントロールを分与していただいた山梨県衛生環境研究所減らすことに繋がる．の久田美子様，大沼正行様に深謝申し上げます．

一方で，トータル検査時間の検討では，クイックナビが最も短く，次いで TaKaRa ノロウイルスキットであっ利益相反自己申告：申告すべきものなし．

た．最も長かった検査法は GeneXpert システムの 2,434時間であった．

文

検査コストは，チップ等含めた消耗品と試薬及び検査キットを足し合わせたものであり，装置費用や人件費は含めていない．最も安価であった検査法は TaKaRa ノロウイルスキット，次いでクイックナビであった．最も高価であった検査法は GeneXpert システムであった．装置 費 用 は，GeneXpert シ ス テ ム GX-II が 4,250,000 円，
TaKaRa ノロウイルスキット，TaqMan Probe 法で使用した Applied BiosystemsⓇ 7500 Fast Real-Time PCR
System が 8,500,000 円であった．
今回の研究では，無症状の健常人ボランティアを対象にしたにも関わらず，ノロウイルスの陽性者が発見され，継続的にウイルス粒子の排出が見られた．このような不顕性感染者が大量調理施設内にウイルスを持ち込み，食事を介した集団食中毒の原因となる可能性があることが改めて示された．このような事態を可能な限り回避するために，大量調理施設における調理者を対象としたスクリーニング検査では，高感度かつ検査者の業務負担の少ない検査法が理想的である．大量調理施設衛生管理マ
ニュアルが求める感度は，遺伝検査法または今回検討に含めなかった生物発酵酵素免疫測定法（BLEIA 法）の感度が求められる．本検討より我々が理想的と考える検査法の選択は，①大量検体を処理するスクリーニング検査法はバッチ方式の TaKaRa ノロウイルスキット，②陽性者の追跡調査は短時間，低労力かつ高感度にノロウイルスを検出する GeneXpert システムの組み合わせで献

1）厚生労働省：大量調理施設衛生管理マニュアル 平成 29 年
6 月 16 日 付 け 生 食 発 0616 第 1 号：http://www.mhlw.go.jp/file/06-Seisakujouhou-11130500-Shokuhinanzenbu/000016
8026.pdf：2018 年 6 月 11 日現在
2）西尾 治，秋山美穂，愛木智香子，杉枝正明，福田伸治，西田知子，他：ノロウイルスによる食中毒について．食品衛
生学雑誌 2005; 46: 235-45.
3）大西 司，足立 満：教育病院におけるノロウイルス胃腸炎アウトブレイクへの対応．感染症学雑誌 2007; 81(6): 68994.
4）Teunis PF, Moe CL, Liu P, Miller SE, Lindesmith L, BaricRS, et al.: Norwalk virus: how infectious is it? J Med Virol
2008; 80: 1468-76.
5）田代隆良，浦田秀子：ノロウイルス感染症と集団感染対策．
保健学研究 2008; 20(2): 1-8.
6）Ozawa K1, Oka T, Takeda N, Hansman GS: Norovirus infections in symptomatic and asymptomatic food handlers
in Japan. J Clin Microbiol 2007; 45: 3996-4005.
7）北川誠子，藤井哲英，二宮洋子，河口 豊，平田早苗，東田志乃，他：病院調理従事者におけるノロウイルス対策―
迅速抗原検査とリアルタイム PCR 検査の比較―．環境感染誌 2015; 30(6): 418-21.
8）山崎 勉，由井郁子，森島直哉，黒木春郎：金コロイドを用いた新規イムノクロマト法による便中ノロウイルス検出試薬の有用性．感染症学雑誌 2013; 87(1): 27-32.
9）左近直美：核酸精製を必要としない one-step リアルタイム
PCR によるノロウイルス検査の有用性．日本食品微生物学会雑誌 2017; 34(2): 135-9.
10）林 志直，秋場哲哉，森 功次：東京都内における非発症
調理従事者のノロウイルス排泄期間．日本食品微生物学会
雑誌 2012; 29(2): 108-13.
〔連絡先：〒409-3898 山梨県中央市下河東 1110
山梨大学医学部附属病院検査部 荻原真二
E-mail: ogiharas@yamanashi.ac.jp〕― 86 ―

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Multiple Comparisons of Four Methods for Norovirus Detection Based on the“Sanitary Management Manual for Large Cooking Facilities”
by the Ministry of Health, Labor and Welfare in Japan
Shinji OGIHARA1,2,3）, Osamu INOUE2）, Tomokazu SHOJI2）, Kayo KUBOKAWA2）,
Hiroki MATSUMURA2）, Masahiro YAZAKI2）and Katsue INOUE-SUZUKI1,3）
1）Central Laboratory Unit, University of Yamanashi Hospital,
2）
Division of Infection Control and Prevention, University of Yamanashi Hospital,
3）
Department of Clinical and Laboratory Medicine, Faculty of Medicine, University of Yamanashi

Abstract
The Sanitary Management Manual for Central Kitchens legislated by the Japanese Ministry ofHealth, Labor and Welfare was revised on June 16, 2017. Based on the revised manual, employees in central kitchens need to undergo Norovirus testing with high sensitivity every monthfrom October to March, which is when Norovirus outbreaks occur. In the present study, we investigated the differences among 4 methods of Norovirus testing from the viewpoints of sensitivity, user time, total examination time, and running costs. All samples obtained from 53 healthy
volunteers were tested for Norovirus using the GeneXpertⓇ system, the TaKaRa Norovirus GI/
GII testing Kit, the TaqMan Probe assay, and the Quick NaviTM-Noro2. Among them, the GeneXpertⓇ system, TaKaRa Norovirus GI/GII testing Kit, and TaqMan Probe assay were all highly
sensitive, at the level required by the “sanitary management manual for large cooking facilities.”
The user working times of the GeneXpert, TakaRa, TaqMan, and Quick Navi testing methods
for 53 samples were 106, 260, 687, and 76 min, respectively. The total examination times of the 4were 2,434, 320, 857, and 91 min. The running costs of the 4 were 202,089, 73,644.4, 152,249, and79,500 JPY, respectively. Based on these studies, we concluded that the TaKaRa Norovirus GI/GII testing Kit is suitable for the screen testing for Norovirus detection, and the GeneXpertⓇ system for the follow-up testing of Norovirus-detected staff. We should understand the characteristics of the 4 methods and chose an appropriate one depending on the purpose.
Key words: Norovirus, central kitchen, highly sensitive method, running cost, PCR― 87 ―