人工血液第 14 巻 第 1 号 2006 年 8 月

目次
第13回年次大会プログラム ………………………………………………

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ARTIFICIAL BLOOD
Vol. 14 No. 1 Aug, 2006

Contents
The 13th Annual Meeting Program ………………………………………

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第13回日本血液代替物学会年次大会th

The 13 Annual Meeting of
The Society of Blood Substitutes, Japan

大会長：末松誠（慶應義塾大学医学部教授

医化学教室）

会期：平成18年8月24日（木），25日（金）会場：慶應義塾大学医学部

北里講堂（北里記念医学図書館2階）

東京都新宿区信濃町35

大会事務局：〒160-8582 東京都新宿区信濃町35
慶應義塾大学医学部医化学教室
第13回 日本血液代替物学会年次大会
事務局長 合田亘人
運営事務局：〒150-0021 東京都渋谷区恵比寿西1-20-4（株）アロフト 内
第13回 日本血液代替物学会年次大会運営事務局
担当 藤井律子
アドレス blood-sub-2006@aloft-inc.com
TEL 03-5784-3414
FAX 03-5459-3439

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人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

年次大会 大会長 挨拶
平素より、日本血液代替物学会に対しまして、趣旨をご理解頂き、ひとかたならぬご協力を頂いておりますことを心より深く感謝申し上げます。
このたび、日本血液代替物学会年次大会を開催するはこびとなりました。第13回目を迎える本会では、産学協同の特性を活かしたプログラムを鋭意企画いたしました。
まず、官共同の第１に実用化が間近に迫った人工酸素運搬体の担体等にも用いられるリポソームをベースにした製剤研究の現況、第２にアルブミンや抗体などの蛋白製剤の開発研究の現況にスポットをあてシンポジウムを企画いたしました。
また低体温療法の先導的研究者である日本大学の林成之教授に特別講演をいただき、救急蘇生学における輸液管理等のあるべき姿についてのご講演をお願いいたしました。
さらに実用化研究の色彩の濃い本学会ならではの企画として、基礎研究の新たな地平を模索する目的で血球機能や蛋白質機能の基盤研究成果を軸にした演題も広く受け付けさせて頂きます。
一般会員のみならず、学会賛助会員各社にもご発表を頂くことで、産学協同の闊達な交流を期待しております。
多数の皆様のご参加を心からお待ちしております。

第13回 日本血液代替物学会年次大会
大会長 末松 誠（慶應義塾大学医学部教授 医化学教室）

ARTIFICIAL BLOOD Vol. 14 , No.1, 20063

お知らせとお願い■参加者の方へ〈開場及び受付開始〉
開場、及び受付開始時間は 8月24日（木）12：30〜、8月25日（金）8：45〜です。
〈参加登録〉
参加費は10,000円（懇親会費を含む）です。
ネームカードをお渡ししますので、所属・氏名を各自でご記入の上、ご着用下さい。
会期中、会場へご入場の際には必ずネームカードをご着用下さい。
〈参加登録申込要領〉
第13回日本血液代替物学会年次大会への参加は、事前に参加登録が可能です。学会ホームページから参加登録をした上で、登録料を所定の銀行口座へお振込下さい（下記参照）。当日の受付は混雑することがありますので、事前にご登録ならびに登録料をお振込み下さいますようお願い申し上げます。
※事前にお振込みいただいた方は、当日、振込証明書を持参して下さい。
〈参加登録料振込先〉
・口座名：第13回日本血液代替物学会年次大会事務局
財団法人国際医学情報センター柳下俊江
ダイジュウサンカイニホンケツエキダイタイブツガッカイ
ネンジタイカイジムキョク
ザイダンホウジンコクサイイガクジョウホウセンター
ヤナギシタトシエ
・銀行名：三井住友銀行 麹町支店
・口座番号：普通預金 8808435※大変恐縮ですが、振込手数料は各自ご負担下さいますようお願い致します。
〈年会費及び新入会受付〉
日本血液代替物学会に未入会の方は、総合受付で入会手続きをおとりください。
年会費は正会員10,000円、購読会員6,000円、学生会員5,000円です。
〈抄録集〉
抄録集は会員全員に事前送付しています。又当日は受付にて 1 部1,500円で販売いたします。
〈懇親会〉
参加者相互の親睦を図るため、8月25日（金）午後5時40分よりレストラン オアシス（慶應義塾大学病院 新棟11階）において懇親会を開催します。参加費は無料ですので、ぜひご参加下さい。
■演題発表される方へ
第13回日本血液代替物学会年次大会では、発表はすべて液晶プロジェクターで行います。ご了承下さい。
1）事務局にて発表用のパソコン（Windows XP）を用意しておりますが、原則として各自パソコンをお持ち下さい。
パソコン持ち込みの方も発表データ（USBもしくはCD-Rのいずれか）をお持ちの方も、発表の1時間前までに受付へいらっしゃって、試写を行ってください。
2）発表時間はシンポジウムが25分（発表20分、質疑応答 5 分）、一般演題が15分（発表12分、質疑応答 3 分）です。
■各種会議日程
理 事 会：8月24日（木） 11：00〜12：00
評議員会：8月24日（木） 12：00〜13：00
総会：8月24日（木） 19：10〜■大会事務局〒160-8582 東京都新宿区信濃町35
慶應義塾大学医学部医化学教室
第13回 日本血液代替物学会年次大会
事務局長 合田亘人

慶應義塾大学医学部 北里記念医学図書館 2 階 第 1 会議室
慶應義塾大学医学部 北里記念医学図書館 2 階 北里講堂
慶應義塾大学医学部 北里記念医学図書館 2 階 北里講堂
■運営事務局〒150-0021 東京都渋谷区恵比寿西1-20-4（株）アロフト 内
第13回 日本血液代替物学会年次大会運営事務局
担当 藤井律子
アドレス blood-sub-2006@aloft-inc.com
TEL 03-5784-3414
FAX 03-5459-3439

学会のホームページにて、最新のお知らせ、注意事項、プログラムなどを掲載していきます。併せてご確認、ご利用下さい。
学会ホームページ http://www.blood-sub.jp/

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人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

交通案内図

北里講堂（北里記念医学図書館2階）

←新宿

JR
信濃町駅

JR総武線 信濃町駅より 徒歩5分

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人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

会長講演

大会長講演

血液代替物の開発―夢の実現に向って

Gas Biology: ガス分子による生体制御の生物学
と医学応用

小林紘一
日本血液代替物学会会長
慶應義塾大学医学部外科（呼吸器外科）

日本血液代替物学会が発足して以来，末松誠年次大会長のもとで行われる本年の年次大会は 13 回を数えることになりまた，機関誌「人工血液」も第 14 巻を発行するまでになった．
当初は人工酸素運搬体が主であったがその後は人工血小板や人工抗体も本学会の重要な対象テーマとなり，幅広い議論が行われるようになっている．
人工酸素運搬体に関しては全世界的研究が行われたが多くの試行錯誤の上，早稲田大学理工学部と慶應義塾大学呼吸器外科との精製ヒトヘモグロビンを脂質二層膜で被復したヘモグロビ
ン小胞体（hemoglobin vesicle）が安全性と有効性に優れていることが判明し，更にウィルス除去の工夫，脂質膜は可能な限
り 2 分子層に近づけ脂質量を減じて，被復されるヘモグロビン
量を多くする工夫，保存中の安定度を高める工夫など多くのknow how を蓄積してきた．
研究と開発の最終目的は当然のことながら臨床で応用され，人類の健康維持に貢献することは論を俟たない．そのためには
医学，工学の今まで以上の連係と企業化できる産業の創製が極めて重要となる．
hemoglobin vesicle に関しては間もなく臨床試験が開始されるところまで来ているが，安全で有効性の高い人工酸素運搬体を開発するという国民の負託に応えるためにも，功をあせることなく着実なデーター蓄積が重要である．そのために当学会では人工酸素運搬体製造に関する策定案を作成し自己規制を行っている．今後も行政からの支援，指導をふまえ臨床応用に向って邁進する必要がある．
講演では血液代替物の開発の過去に学び，現在を総括し未来に向ってどのように対処すべきかについて述べる所存である．

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末松 誠
慶應義塾大学医学部医化学教室

高等動物の代謝経路を俯瞰する時，ガス分子は分子状酸素以
外はその末席をけがす toxic waste として長く生命科学研究の対象としては軽視されてきた．しかし精緻な分光分析と構造生
物学的解析の進展により，生体高分子の隙間に浸透・結合しその機能変化をもたらす重要な情報伝達物質としてのガス分子の生物作用のメカニズムが近年明らかにされつつある．これらの分子の多くはもともと宇宙空間に漂う原始的構成成分であり，太古の地球環境を支配し，細菌などを育む有機分子のリソースとして用いられるばかりでなく，多細胞生物の情報分子として用いられ，高等動物でも巧妙に利用され続けていることが解明されつつある．ヒトが利用するもっとも代表的なガス分子は分子状酸素であり，その大部分はミトコンドリアのシトクロム酸化酵素で NADH ・電子伝達系から運ばれた４電子により還元
され水になる．NADH の酸化に伴い放出される自由エネルギ
ーはミトコンドリア内膜でのプロトンのくみ出しに使われ，最終的には ATP 合成酵素におけるプロトンの流入がもたらすエネルギーが ATP 合成を維持するために必要であることは論を待たない．一方分子状酸素の生体内利用の残り数％も非常に重要な役割をはたしており，アラキドン酸の酸素添加反応により生成されるプロスタグランジンやロイコトリエンなど少量でも強力な生物活性を発揮する化合物の生成に用いられるばかりでなく，酸素原子を含む生理活性ガス分子の合成に用いられる．
このような低分子化合物のうち，生体内で利用あるいは生成・受容されて生物作用を発揮するものとして一酸化窒素（NO）
や，ヘムの分解により生じる一酸化炭素（CO）など少量でも強力な生物活性を持つメディエータがある．これらの分子は，ストレス時の臓器機能制御に重要な役割を果たしている．NOと CO はヘム蛋白質への結合性を有するものの，結合の結果生
じる蛋白質の構造変化とそれに伴う機能変化は極めて対照的であることが，ヘム蛋白質であるヘモグロビン，可溶性グアニル酸シクラーゼ，あるいはシスタチオニン-β-合成酵素などで明らかにされている．これまで方法論的限界から，ガス分子の受容分子の機能解析と生物活性の発揮に必要なメカニズムの包括的理解は極めて遅れていたが，我々は生体内で生成される一酸化炭素（CO）の生物作用に関する研究から，生体内では異なる複数のガス分子と特定の蛋白質＝ガスセンサーが比較的シンプルな原理で相互作用し，多彩な生物作用を発揮する例を見い出しつつある．本講演では生体高分子の「隙間」を満たして生体機能を制御するこれらのガス分子のうち NO, CO の役割について概説し，このようなガス分子とヘモグロビンの相互作用から浮き彫りにされる救急救命に応用可能な付加価値赤血球製剤開発の可能性について論じたい．

人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

特別講演

ランチョンセミナー

血液と細胞の遺伝子対話で人間の心と知能を取Shedding Some Light on the Pathophysiology

り戻す脳低温療法の新展開

of Inflammation using Gene Expression and
Optical Imaging

林 成之
日本大学大学院・総合科学研究科
Ryon M Bateman, PhD
University of British Columbia
脳蘇生の治療は，瞳孔散大や呼吸停止患者の回復は難しく，
壊れた脳は治せないのでそこから二次的に発生する脳浮腫，脳循環障害，脳圧亢進に対する脳保護治療がおこなわれてきた．
動物実験に基づく一見科学的な概念と思われてきたこの考え方には実は幾つもの間違いがある事をとらえた．一定の麻酔条件下で研究されている実験動物と違って実際の患者では，脳障害時の脳内ストレス侵襲はカテコーラミン・サージから見る限る
数十倍強く，その為に，脳温が 40 〜 44 ℃まで上昇する脳内熱
貯留現象，インスリン抵抗性高血糖，ヘモグロビンから酸素を切り離す 2，3 diphosphoglycerate（DPG）の減少，心臓の拡張機能障害と言ったもっと複雑な病態が発生してくる．つまり，十分な治療をしないで，治らない結果をみて脳の治療は難しいと言っていた事にもなる．
脳低温療法はこれらの背景から生まれたものであるが，低体温そのものも生体にとって侵襲性の高い環境であり，地球と生命誕生の仕組みに組み込まれた細胞誕生期と人類誕生期の二度にわたる氷河期を乗り越えてきた，グルコースから脂質代謝への変換と血液と細胞の遺伝子対話によって生き残ってきた生体の潜在能力を配慮した管理をおこなわないと，十分な治療とならない難しい点もある．
脳の損傷時には，誰しも，知能障害や心の障害を残さないで治して欲しいと考える．脳の蘇生治療はこれに答えて，初めて，患者の治療に成功したと言えるのであって，脳低温療法も例外ではない．意識と心はどう違う？意識障害の判定法で推量れない心の障害をどのように治療する？といった基本的な事さえ未だ明確にされていない現状がある．
脳低温療法は，これらの脳蘇生治療の基本とも言える問題について科学的な分析に基づくエビデンスを背景に作り上げてきた病態重視の緻密な治療法であり，その成果は，従来の脳保護
治療では考えられない心停止患者の心臓マッサージで反応しない患者でも社会復帰を果たす事がある．人間の心は，本能，本性，理性と外の世界をつなぐ外意識と内意識によって機能している．最近，人類の生存に必要な「生きる仕組みと自己保存の生体メカニズム」はこのうち人間の本能として形を変えている事がとらえられ，その仕組みを配慮しながら，低酸素・低体温
時の heme oxygenase（HO）と hypoxia inducible factor（HIF）の血液とニューロンの遺伝子対話メカニズムを活用すると脳低温療法は知能障害や心の障害を最も少なくするエース治療である事には間違いない．従来の低体温療法と異なる脳低温療法の科学的な背景を紹介しながら脳蘇生治療の新展開について報告する．

ARTIFICIAL BLOOD Vol. 14 , No.1, 2006

Bacterial infection or trauma leading to a systemic
inflammatory response, or sepsis, is the leading cause ofdeath in North American intensive care units. Sepsis causes
profound microvascular dysfunction leading to increased
capillary stopped flow and altered capillary oxygen
transport. Using a functional microvascular imaging system
we found that capillary oxygen flux, the amount of oxygen
diffusing into tissue, increased during the onset of sepsis.
When nitric oxide overproduction was inhibited, tissue
oxygen consumption increased indicating that NO wasinhibiting tissue oxygen consumption. In the heart, confocal
laser scanning microscopy revealed a loss of myocardial
capillarity during inflammation. This may have been afactor in decreased tissue oxygenation, tissue hypoxia,
stabilization of the HIF1α transcription factor andupregulation of HIF1α, VEGF and Glut1 mRNA. A positive
correlation between in vivo myocardial contractility and
Glut1 gene expression suggests that the heart endeavors to
respond to increased hypoxia by altering its energy
metabolism. Increased VEGF gene expression may provide
a partial explanation for increased microvascularpermeability and altered calcium dynamics in the heart via
fibrinogen/ICAM-1 binding. To non-invasively quantify
microvascular permeability in vivo, the limbal
microvasculature of the mouse eye was imaged using
multiphoton microscopy and back scatter second harmonic
generation（SHG）. Preliminary results indicate a differential
permeability with the larger limbal microvessels andcorneal loops leaking large molecular weight molecules into
the collagen space in the cornea. By integrating informationfrom optical imaging with gene expression, it will soon bepossible to elucidate the pathophysiolgy of systemic
inflammation at its most fundamental cellular and functional
levels.

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シンポジウム 1- 1
LIPOSOME-ENCAPSULATED HEMOGLOBIN（TRM645）
PROTECTS CEREBRAL ISCHEMIAAND REPERFUSION INJURY IN PRIMATES:EFFECTS OF OXYGEN AFFINITY AND
DOSE-RESPONSE RELATIONSHIP
Akira T. Kawaguchi, Munetaka Haida,
Yoshitaka Ogata, Hideo Tsukada
Tokai University School of Medicine

Background. We tested a hypothesis that liposomeencapsulated hemoglobin with a high（h-LEH, P50=10 mmHg）
or low（l-LEH, P50=40 mmHg, TRM645）O2 affinity may limit
damages in brain ischemia and reperfusion.
Methods. Cerebral metabolic rate of O （CMRO22 ）wasserially determined using positron emission tomography inprimates undergoing middle cerebral artery（MCA）
occlusion and reperfusion. After MCA occlusion, 10 ml/kg of
h-LEH, l-LEH, empty liposome and saline were infused tocompare protection, and 2 ml/kg and 0.4 ml/kg of l-LEH
were infused to define dose-response relationship.
Results. Area of mild CMRO 2 reduction（71 ％-100 ％）decreased and area of mild CMRO2 increase（101 ％ to 130 ％）increased in LEH-treated monkeys in the cortex.
Preferential protection of cortex for basal ganglia was also
apparent in histologic evaluation. Optimal dosage appeared
to be 2 ml/kg with an equivocal protection by h-LEH or lLEH（TRM645）.
Conclusion. LEH as small as 0.4 ml/kg was effective
regardless of O2 affinity in preserving CMRO2 and reducing
integrated area of morphologic damage mainly in the cortex
after occlusion/reperfusion of MCA in the monkey.

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シンポジウム 1- 2
Optimization of microvascular function by Hbbased oxygen carriers: Impact on Hbconcentration in resuscitation
Amy G. Tsai, Pedro Cabrales and Marcos Intaglietta
Dept of Bioengineering; University of California,
San Diego

Development of a viable blood substitute began byfocusing on recreating the O2-carrying capacity of blood,leading to the recognition that hemoglobin（Hb）is presently
unequalled for this function. However, as human Hb is the
only realistic source of this protein, the production of ablood substitute that solves transfusional blood availability
problems and shortages must introduce a multiplying factor
between supply of natural blood and blood substitute, while
maintaining equivalency of function/efficacy. A unit ofblood should produce several units of equivalent blood
substitute. Expansion is now because of new understandingof how blood delivers O2 in the microcirculation and theconsequences of reducing O 2 carrying capacity inhemorrhage. This information is used to provide improved
resuscitation capacity and maintenance of tissue metabolism
by tailoring the properties of a blood substitute tomaintaining microvascular function, rather than O2 carrying
capacity. Resuscitation from hemorrhage requires
maintenance perfusion, a process directly linked to thesustaining adequate levels of endothelial shear stressinduced by either increased blood/plasma viscosity or
increased blood flow velocity in the microcirculation. This
process must also be intimately coupled with therequirement that no portion of the tissue is anoxic. This
disparate set of requirements can be satisfied with highviscosity Hb solutions that have a relatively high affinity forO 2 . Excess O 2 carrying capacity of the circulation isnormally required to provide a margin of safety against
anoxia. An O2 carrier with O2 affinity comparatively higher
than blood, when mixed with blood in the circulation targets
O2 delivery to areas of low O2 , increasing the efficiency of O2
delivery by the remaining RBCs. Therefore combining
increased O2 affinity of the O2 carrier and increased blood
viscosity causes the microcirculation to remain functional at
a lesser concentration of circulating Hb, since the safetymargin against anoxia is maintained. This fulfills therequirement of ensuring efficacy and safety, while reducing
the quantity of transfused Hb. HbV（hemoglobin vesicles）
are viscous, delivery high Hb concentration and can beformulated to have different O2 affinities.

人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

シンポジウム 1- 3

シンポジウム 1- 4

ヘモグロビン小胞体の配位子反応

ヒトヘモグロビン小胞体（OXY − 0301）の治
験薬 GMP 製造への取り組み

酒井 宏水，土田 英俊
早稲田大学理工学総合研究センター 酸素輸液プロジ
ェクト

ヘモグロビン（Hb）は配位子として酸素を可逆的に結合・解離するだけでなく，CO 或は NO を強力に結合する．CO は意外と容易に解離する条件もある．臨床試験の開始が間近になった
Hb 小胞体（HbV）の調製，保存，そして輸血代替として投与した後の効能，安全性に至るまで，配位子反応の制御が強く関わっている．また最近，新しい応用も見つかって来た．
① HbV の調製工程で重要なのは，先ずヒト Hb 精製において加熱処理によりウィルス不活化を行うことである．配位子をCO に置換すると安定化され，ヒト血清アルブミンと同様に
60 ℃, 10 時間の加熱処理が可能となる．また安定な HbCO は濃厚蛋白質溶液としての取扱いを容易とし，HbV に加工する際の変性も無い．酸素気流下，可視光照射で CO は光解離し，代わって酸素が配位する．最終的に HbV 分散液から配位酸素を完全除去すればメト化が抑制され，粒子表面の PEG 修飾と合わせ長期保存安定度に寄与する．
② 分子状 Hb 溶液の投与で観察される血管収縮と血圧亢進は，HbV では回避されることが，ラット肝類洞血管，ハムスター
皮下抵抗血管の観察から明らかにされた．内因性 NO 或は COの捕捉の相違が要因と考えられている．ストップドフロー法による配位子結合速度の解析では，HbV の見かけの NO 結合速度（kon（NO））は Hb 溶液に比較して 1/4 程度に遅くなり，高濃度
Hb 溶液をカプセル化した効果である．しかし赤血球に比較す
るとまだ速く，kon（CO）は Hb 溶液とほぼ同等であった．粒子
径が大きい HbV が血管壁近傍の NO, CO 拡散領域に侵入しない
ことが血管収縮抑制の一因と考えられる．
③ 現行の HbV の酸素親和度はヒト血液と同等に調節され，輸血代替として十分に機能することが出血性ショック蘇生や血液希釈試験から解っている．他方，Allosteric 因子の添加量を調節してヒト血液よりも酸素親和度を高く（P50 値を小さく）す
れば配位酸素の放出が調節でき，低酸素領域に酸素を効率良く運搬することが内外の共同研究から解って来た．
④ 内因性 NO, CO の生理的役割が認知され，最近ではガス吸入やドナー分子投与による外因性 CO の薬理効果も報告されている．そこで，CO が配位した HbV をラットに投与したところ，
意外と速やかに CO が解離し，細胞保護効果を示唆する結果が得られた．効果と毒性の両面から詳細検討が必要であるが，新しい応用として期待できる．

ARTIFICIAL BLOOD Vol. 14 , No.1, 2006

松田 晃彦，堀 伸明，井上 逸男，太田 勝次，松浦 昭宏，
大村 孝男，高木 智史
株式会社オキシジェニクス

輸血医療は，未だ不適合輸血やウイルス感染の危険性が大きな問題として残されている．また，輸血用血液製剤は短い有効
期限故に，災害・事故に備えた備蓄という面でも問題を抱えている．このため，長期保存が可能で，血液型に関係なく，輸血による副作用やウイルス感染のリスクのない人工赤血球（人工酸素運搬体）の開発が強く望まれている．これまで国内外の多くの企業が開発に取り組んできたが，実用化までは至っていな
い．
1980 年代より早稲田大学理工学部の土田，武岡らが始めた
人工酸素運搬体（ヒトヘモグロビン小胞体）の開発は，1990
年代に慶應義塾大学医学部の小林，末松らも参画し，処方の最適化と製剤規格の設定，更には効果・安全性が確認された．そして 2002 年より両大学から start-up した株式会社オキシジェニ
クスが加わり，両大学で蓄積された膨大な技術やデータを基に医薬品としての開発が本格的に動き出した．
ヒトヘモグロビン小胞体（以下，OXY-0301）は，ヒト赤血球から精製したヘモグロビンを直径約 250nm の均一球径のリン脂質二分子膜小胞体に内包させた人工酸素運搬体である．
OXY-0301 は，ウイルスなどを不活化除去処理し，且つ膜成分
組成や表面修飾の工夫により物理化学的安定度を確保し，室温での長期保存，血中滞留寿命の延長，そして血液型不適合のない人工酸素運搬体として，医療現場のニーズに十分対応できるよう設計されている．既に霊長類やげっ歯類を用いた安全性の検証は終え，イヌ，ラット等を用いた種々病態を想定した薬理試験においても薬効が確認されている．
原料のヒト赤血球は日本赤十字社から期限切れの「人赤血球濃厚液」の供与を受けており，それを用いたヒトヘモグロビンの精製はローマン工業株式会社に GMP 基準下での精製を委託している．また，リポソーム膜の原料となる脂質類は，日本精化株式会社と日本油脂株式会社から供給を受けている．このよ
うに，OXY-0301 の治験薬 GMP 製造を支える協力体制は原料についても着実に整ってきた．
昨年，早稲田大学の指導のもと，オキシジェニクス社がOXY-0301 の安定製造法を確立したことを受け，今年，月産12 L の治験薬 GMP 製造施設を同社京都研究所内に設置し製造を開始した．2007 年より国内外で第 1 相臨床試験を開始する計画で，現在準備を進めている．更に，第 2 〜 3 相臨床試験用の大量製造プラントの設置についてもニプロ株式会社の全面的な協力を仰いで進めており，OXY-0301 の開発は実用化に向けた
新たなステージに入った．本シンポジウムでは，開発の現状について報告するとともに今後の予定についても紹介する．

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シンポジウム 1- 5

シンポジウム 1- 6

ヘモグロビン小胞体（HbV）の臨床応用へ向Pichia pastoris による遺伝子組換えヘモグロビ

けた開発研究ンの発現と精製堀之内 宏久
慶應義塾大学医学部呼吸器外科
人工酸素運搬体の臨床応用としての最大の目標は赤血球代替物として安全に使用できることである．われわれは精製ヘモグ
ロビンをリン脂質小胞体（リポソーム）に内包したヘモグロビ
ン小胞体（以下 HbV） を 1988 年より開発を進めてきたが，Hbの純化精製と濃縮，効率のよいリポソームへの内包条件の確立，酸素運搬能を最大限に引き出すリポソーム内環境の調節，血球との相互作用を少なくする小胞体膜の改良，長期保存を可能とする技術の開発を行うと同時に，小動物での酸素運搬能，脱血ショックに対する治療効果，代謝過程，血液生化学に及ぼす影
響，長期生存などについて検討し，良好な成績を得てきた．しかし，小動物での検討では投与時の右室系の変動や心拍出量の変化などの変化を観察することが困難であった．
現在，企業（オキシジェニクス）の参画を得て実験室レベルの少量生産から大規模生産を実証する中規模 GLP プラントの確立を経て現在 GMP プラントによる生産が始まろうとしている．
2004 年からは中規模 GLP プラントで製造された安定的に製造された HbV を用いることが可能となり，免疫系への作用，
酸素治療薬としての応用の可能性など，多岐にわたる検討が可能となったばかりでなく，中型動物での検討が可能となり，投与時の循環動態の変化を細かく検討することが可能となった．
中型動物として犬を用いた検討では出血性ショックに対する蘇生液として輸血代替に用いることが可能であるかについて詳
細な循環動態を含めた検討を行った．
7kg の幼犬を用い，循環血液量の 50 ％脱血によるショック蘇生試験，血液のリザーバーとしての役割を持つ脾臓を摘出した
上での 50 ％脱血ショック蘇生試験を通して，右室系の機能と心拍出量の変化について自己血による蘇生群と比較・検討した．その結果，脾摘，40 ％脱血ショックの後に蘇生を行った
群では HbV 投与直後に平均肺動脈圧が一時的に上昇することが認められ，右室系に若干の負荷がかかることが示唆されたが，投与 30 分以降は自己血による蘇生群との間に有意差はなく，自己血と同等の影響があったことが明らかとなった．また，一時的な上昇も明らかな異常値を示さなかったこと，自己血蘇生
群でも肺動脈圧の一時的に上昇を示す動物を認めたことから，
HbV が出血性ショックの蘇生液として使用できる可能性があると考えられた．また，その他の循環動態の指標，血液ガスパ
ラメーターでは自己血と有意差のない変動を呈し，蘇生液として有効であることが明らかとなった．脾臓を温存した 50 ％脱血ショック蘇生モデルでも HbV 投与後の肺動脈圧の上昇は認められたが，その程度は脾摘モデルに比し軽度であり，ショッ
ク蘇生時の循環動態に脾臓が右心系の変動を緩和する役割を果たしている可能性が考えられた．
現在脱血ショック蘇生後の長期生存試験を遂行中であり，生存に関しては特に大きな問題を示さないことがわかりつつある．
今後は臨床現場での応用を見据えた動物モデルの確立とHbV の効果についての検討が望まれている．

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中城 圭介 1，帆足 洋平 1，宇野 公之 2，小田切 優樹 3，
甲斐 俊哉 1，3
1 ニプロ株式会社医薬品研究所
2 大阪大学大学院薬学研究科
3 熊本大学大学院医学薬学研究部【目的】輸血に代わりうる人工酸素運搬体としてヘモグロビン
をリン脂質の二分子膜で被覆したヘモグロビン小胞体（HbV）
が考案され，十分な酸素輸送能を発揮することが証明されてきた．一方，HbV に内包されているヘモグロビンは期限切れヒト赤血球由来であるため，依然として原料供給や未知ウイルス混入の危険性が指摘されている．そこで，カプセル化するヘモ
グロビンを遺伝子組換え体に置き換えるため，多くの異種蛋白質発現に用いられている Pichia pastoris（GS115）を宿主として遺伝子組換えヒトヘモグロビン（rHb）の発現・精製法について検討を行った．
【方法】ヒトヘモグロビン遺伝子をメタノール応答性の AOX1
プロモーター下流に接続し，ヘモグロビン発現ベクター HbβHbα-pAO815 を構築した．発現ベクターは Sal I で酵素切断し直線化後，エレクトロポレーション法により Pichia pastoris ゲ
ノムの HIS4 遺伝子座へ挿入した．ヘモグロビン高発現株を得るために MD 及び MM プレートを用いてスクリーニングを行ったところ，Muts 組換え体が高発現株であることが明らかとなった．rHb の精製は酵母を培養後，ガラスビーズで破砕し，その破砕液から陽イオン交換クロマトグラフィー，アフィニティクロマトグラフィー，疎水相互作用クロマトグラフィー法を用いて行った．精製した rHb の分子量は MALDI-TOF MASSにより測定した．また N 末端アミノ酸配列は Edman 分解法により確認した．
【結果】rHb は各種カラムクロマトグラフィー法により最終的に SDS-PAGE 上で単一バンドとして精製された．rHb の分子量及び N 末端アミノ酸配列を解析したところ，大腸菌の発現系で問題であった開始メチオニンはなく，ヒト血液由来ヘモグロビンと同等であった．
【結論】Pichia pastoris を宿主として発現させた rHb は，ヒト血液由来ヘモグロビンと同等の性状であり，さらにこの方法は大量製造にも応用可能であることから，組換え製剤としての可能性を十分に有していることが示唆された．

人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

シンポジウム 2- 1

シンポジウム 2- 2

遺伝子組換え型人血清アルブミン製剤（GB-

ヒト血清アルブミンの安定性に及ぼす各種添加1057）と血漿由来人血清アルブミン製剤との生剤の影響

物学的同等性比較試験
大西 久仁彦 1，川口 敦弘 2，森 博幸 2
1 大西内科
2 三菱ウェルファーマ株式会社

肝硬変に伴う低アルブミン血症や出血性ショックなどに用いられている人血清アルブミン製剤は，各種のウイルス不活化あるいは除去処理が施されているものの，これらによる感染の可能性を完全に否定することはできない．しかし，遺伝子組換え型人血清アルブミン製剤（GB-1057）は，ビール酵母やパン酵母と近縁のピキア酵母を産生細胞とする組換え DNA 技術により生産された人血清アルブミン製剤であり，その製造過程で感染性物質の混入の恐れがある血清等の動物由来材料を用いていない．
また，GB-1057 は一次構造解析，高次構造解析，物理化学的性質の検討結果から血漿由来人血清アルブミン（nHSA）と差が認められなかったことから，有効成分として同一であると考えられる．
本研究では GB-1057 と nHSA の体内動態について，肝硬変患者を対象に比較検討した．
【目的】肝硬変患者 22 例を対象として，GB-1057 もしくはnHSA を投与し，血清アルブミン濃度の経時的測定により，GB-1057 の生物学的同等性を並行群間比較法を用いて検討した．
【方法】肝硬変患者のうち，腹水及び浮腫が認められない 20 〜
75 歳の患者を対象とした．1 日 1 回 GB-1057 もしくは nHSA
25g（2 バイアル量）を 12.5g/時間（50 mL/時間）の速度で 3 日
間反復静脈内投与し，投与開始後 8 日目まで観察・検査を実施した．
【結果】GB-1057 投与群（11 例）と nHSA 群（11 例）の血清ア
ルブミン濃度の平均値は，それぞれ 1 日目投与開始直前値が3.21g/dL 及び 3.15g/dL，3 日目投与終了直後値が 4.17g/dL 及び4.21g/dL と投与に伴って両群とも同様に増加し，その後のアルブミン濃度の減少についても 8 日目が 3.72g/dL 及び 3.78g/dL であり，両群とも同様の推移を示した．また，血清アルブミン濃度-時間曲線下面積（AUC）の対数値の平均値の差の 90 ％信頼
区間は-0.0321 〜 0.0337 と算出され，生物学的に同等であると判定する基準 log
（0.8）
〜 log
（1.25）の範囲内であった．有害事象は
nHSA 群において，「不眠症」が 1 例 1 件に，BUN 上昇および血清クレアチニン上昇が 1 例 2 件に認められたが，いずれも消失または投与前値まで回復した．
以上より，GB-1057 は nHSA と生物学的に同等と判定した．
また，本試験では GB-1057 及び nHSA に臨床上問題となる所見は認めなかった．

ARTIFICIAL BLOOD Vol. 14 , No.1, 2006

安楽 誠 1，甲斐 俊哉 1，2，河野 陽介 1，山崎 啓之 3，
小田切 優樹 1
1 熊本大学大学院医学薬学研究部
2 ニプロ株式会社医薬品研究所
3 崇城大学薬学部【緒言】
アルブミン製剤は，循環血漿量の是正や浮腫の改善などを目的として種々の疾患で汎用されている．これは血液を原料とする
ため HIV，肝炎ウイルス及びプリオンをはじめとする未知の有害なウイルスや夾雑蛋白質が混入する可能性が予測される．現在，これらの混入を防ぐため，低温殺菌法（60 ℃，10hr）が用いられている．その際，アルブミンの熱変性を防ぐ目的でアルブミン製剤には，カプリル酸ナトリウム（Cap-Na）と N-ア
セチル-L-トリプトファン（N-Ac-Trp）の 2 種の安定化剤が添加されている．我々はこれまでに，これら添加剤，Capl，NAcTrp において，Capl は安定化剤として，N-AcTrp は酸化防止剤としての役割を果たしていることを明らかにした．そこで今回は，アルブミン製剤の処方の最適化を目的とし，N-AcTrpに代わる添加剤としての N-アセチル-L-メチオニン（N-AcMet）の有用性について評価した．
【方法】
添加剤による構造安定性の評価は，円二色性（CD）スペクト
ル及び示差走査熱量測定法（DSC）により行った．さらに，
NATIVE-PAGE により熱安定性を評価した．また，添加剤の抗酸化効果を評価するために酸化の指標であるカルボニル含量を測定すると共に，HSA 分子種（Reduced-HSA，Oxi-HSA）の変動挙動を 4Me-VP カラムを用いて調べた．
【結果及び考察】HSA の構造に及ぼす影響について検討したところ，Capl は，
HSA の立体構造の安定化を増大させるものの，N-AcTrp 及び
N-AcMet の効果は認められなかった．低温殺菌処理後 Capl 共存下では HSA は殺菌前の構造を維持していたものの，NAcTrp 及び N-AcMet 添加時では構造の崩れが観察された．加えて，Capl と N-AcTrp 及び N-AcMet の併用は，顕著に HSAの立体構造を安定化させた．HSA に対する酸化反応に及ぼす
添加剤の影響をカルボニル含量，NATIVE-PAGE 及びメルカ
プト分率を測定することにより評価した．その結果，Capl はHSA に対する酸化を抑制しなかったものの，Capl と N-AcTrp
及び N-AcMet の併用は明らかに酸化を抑制した．特に，その効果は N-AcMet 系で顕著であった．以上の結果より，NAcTrp に代わる添加剤として N-AcMet の有用性が示唆された．

15

シンポジウム 2- 3

シンポジウム 2- 4

遺伝子組換えアルブミン−プロトヘム錯体から

ポリ（エチレングリコール）修飾アルブミンー

なる新しい酸素輸送ヘム蛋白質の創製

ヘムの酸素結合能と新しい特徴

小松 晃之，中川 晶人，土田 英俊
早稲田大学理工学総合研究センター【緒 言】ヒト血清アルブミン（HSA）は血漿蛋白質の約 60
wt ％を占める単純蛋白質であり，コロイド浸透圧調整のほか，疎水性分子を非特異的に包接・運搬する役割を担っている．メ
トヘモグロビンから解離したプロトヘミンも，血中では HSAに捕捉される．我々は HSA −プロトヘミン錯体の X 線結晶構
造解析に成功し，ヘミンが HSA のサブドメイン IB 内に Tyr161 との軸配位結合を介して固定されていることを明らかにした．さらに，部位特異的アミノ酸置換により，ポルフィリン面
直下へ近位塩基となる His を変異導入すると，ヘモグロビンや
ミオグロビンのヘムポケットと同様なナノ分子空間を持つ
rHSA（mutant）が得られ，その組換えアルブミン−プロトヘム（rHSA-heme）錯体が，水中で酸素を吸脱着できることを初めて見出した．今回はさらに遠位塩基の効果を明らかにする
ため，Leu-185 の位置に Asn，Gln，His を導入，ヘムポケット
構造と酸素結合能の相関について検討した．
【実 験】pHIL D2-HSA へ変異を挿入，酵母（Pichia pastoris）を用いて 3 種の三重変異体 rHSA（I142H/Y161L/L185N），rHSA（I142H/Y161F/L185Q），rHSA（I142H/Y161F/L185H）を発現した．これらの rHSA（mutant）にヘミンを包接させ，rHSA（mutant）-hemin［1/1（mol）］錯体のリン酸緩衝水溶液（pH 7.0）を調製，アルゴン雰囲気下で亜二チオン酸ナトリウムを加え，中心鉄を Fe（Ⅱ）に還元した（deoxy 体）．酸素親和性（P1/2），O2 結合解離速度定数（kon，koff）は，レーザーフラッシュホトリ
シス法（Nd:YAG SHG;λ=532 nm）を用いて決定した．
【結果・考察】アルゴン雰囲気下における rHSA
（I142H/Y161L/
L185N）-heme 錯体の UV-vis.スペクトルは，Fe（Ⅱ）5 配位高ス
ピン錯体の形成を示し，そこへ酸素を通気するとスペクトルパ
ターンは速やかに酸素錯体型へと移行した．酸素親和性は 185
位置に Asn を持たない変異導入前のもの（rHSA（I142H/
Y161L））に比べ 18 倍増大し，これは koff の減少に起因した．他
方，L185 を Gln あるいは His に変換すると，アルゴン雰囲気下
では Fe（Ⅱ）6 配位低スピン錯体を形成し，酸素通気により中心鉄は瞬時に酸化した．磁気円偏光二色性（MCD）スペクト
ルの結果もこれを支持した．Gln や His 残基の Nεは中心鉄の配位圏内に存在するものと推測される．

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中川 晶人，黄 宇彬，王 栄民，小松 晃之，土田 英俊
早稲田大学理工学総合研究センター【緒 言】
ヒト血清アルブミン（HSA）にテトラフェニルポルフィリ
ン鉄誘導体（FeP）を包接させたアルブミン-ヘム複合体（HSA-FeP）は，生体内で酸素輸送のできる完全合成系人工酸素運搬体である．本報では，ポリ（エチレングリコール）（PEG）
鎖で分子表面を被覆したアルブミン-ヘム［PEG（HSA-FeP）］の溶液物性，酸素結合能，血中滞留時間を評価するとともに，PEG（HSA-FeP）をガラス板上にキャストすると，赤色透明フィルムが作製できたので，その特性についても報告する．
【方 法】
酸素結合サイトとして FeP を包接させた HSA-FeP の分子表面を，片末端にマレイミド基またはスクシンイミド基を有する
活性化 PEG（分子量 2 kDa および 5 kDa）で修飾し，PEG（HSA-FeP）を合成した．MALDI-TOF MS から PEG 結合数を決定，1 分子当りの平均 PEG 結合数が 6 の PEG（HSA-FeP）を実験に用いた．PEG（HSA-FeP）溶液の粘度，コロイド浸透圧，
酸素親和度（P1/2），酸素錯体半減期，血中半減期（ラット）を測定し，溶液物性と酸素結合能を評価した．
【結果及び考察】PEG（HSA-FeP）水溶液のコロイド浸透圧および粘度は，PEG（5 kDa）で修飾した場合，同濃度の未修飾体に比べ有為に上昇し，PEG（2 kDa）で修飾した場合は，大きな変化は無かった．また，PEG の分子量，結合様式によらず，P1/2 値には修飾による影響は見られなかった．一方，FeP の酸素錯体半減期，血中半減期は，それぞれ 12 時間，16 時間に延長した．以上の結果から，HSA-FeP を PEG（2 kDa）で表面修飾すると，
溶液物性，酸素親和度を変えること無く，酸素運搬体としての血中有効半減期を延長できることが明らかとなった．
また，ガラス平板上に PEG（HSA-FeP）水溶液をキャストすると，赤色透明のフィルム（膜厚約 10 μm）が得られ，酸素を可逆的に吸脱着できることを見いだした（酸素錯体半減期：約1 週間）．このフィルムを水に再溶解させた後も，酸素結合能が変化しなかったことから，PEG（HSA-FeP）フィルムは，人工酸素運搬体の新しい保存形態となると考えられる．

人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

シンポジウム 2- 5

シンポジウム 2- 6

Beyond the transfusion trigger with PEG-

アルブミン重合体を用いた血小板代替物の展開

albuminAmy G. Tsai, Pedro Cabrales and Marcos Intaglietta
Department of Bioengineering; University ofCalifornia, San Diego and La Jolla Bioengineering
Institute, La Jolla, CA/USA

The transfusion trigger is defined as the clinical point
at which a blood transfusion becomes indicated. Dependingon the health status of the patient, this critical point can
range between 10 and 6 g/dl hemoglobin concentration.
Currently the most commonly used plasma expanders in
the clinic are those based on hydroxyethyl starch,polysaccharides and gelatins. These colloid based plasma
expanders are characterized by: 1）
circulating/intravasculartime and 2）colloid osmotic pressure.
Concepts forextending the transfusion trigger and delaying the use ofoxygen carriers have evolved by consideration of thephysical characteristics of blood which lead to maintenanceof microvascular perfusion. Survival has been directly
correlated to microvascular perfusion which is need for theelimination of metabolic byproducts as well as the deliveryof oxygen. Use of viscous fluids have supported the conceptthat oxygen carrying capacity is not the transfusion trigger
but rather a minimum level of viscosity is needed tomaintain the stimulation of the endothelial cells to permit
release of vasodilators to enhance perfusion. In support ofthis hypothesis, alginates were used to sustain viscosity
above 2.5 cp when hematocrit was reduced to 11 ％（3.6 g/dl）
during acute hemodilution. Microvascular flow andcapillary perfusion were found to be sustained. Highviscosity solutions increased perivascular nitric oxide levels
as compared to low viscosity solutions. Polyethylene glycol
decorated human serum albumin（PEG-HSA）was also able
sustain microvascular perfusion and increase nitric oxidelevels. We hypothesize that this molecule, PEG-HSA,
represents a different class of resuscitation fluid since it is
only moderately viscous. It has a large apparent molecularvolume due to the hydration of the PEG chains which maylead to a different interaction with the endothelium and/ortransport of vasoactive substances leading to the increase in
NO levels. These preclinical studies suggest the use of
PEG-HSA at concentrations as low as 2 - 4 ％ extends thetransfusion trigger. Deployment of PEG-HSA to clinical use
may be more rapid when compared to other experimental
materials since its components are already approved forother indications. Even though it is likely that PEG-HSA
will be effective in extending the transfusion trigger,
ultimately an oxygen carrier will eventually be requiredthat includes its plasma expansion properties. Therefore it
may be effective to consider its use in combination with amaterial such as HbV（hemoglobin vesicles）which have no
colloid osmotic pressure per se, and require an appropriate
fluid vehicle.

ARTIFICIAL BLOOD Vol. 14 , No.1, 2006

武岡 真司
早稲田大学理工学術院

我々は，リコンビナントヒト血清アルブミン（rHSA）を単量体とみなして，これを重合させて得られる無定形のアルブミン重合体（polyAlb）を，止血機能を有する血小板代替物の担体として研究を展開してきた．rHSA 溶液の pH と温度の変化
のみで rHSA の分子内ジスルフィド結合を分子間ジスルフィド結合に変換させながら，任意の粒子径の polyAlb（今回は200nm 程度）を簡便に調製することができる．polyAlb は，血液適合性と生分解性に優れた静注可能な担体であるものの血中滞留性が低い課題（半減期約 10 分）に対して，PEG 修飾を行うことによって約 3 時間の半減期の延長が可能となっている．
そこで，PEG-polyAlb の PEG 末端にフィブリノーゲンγ鎖 C 末
端アミノ酸配列であるドデカペプチド（HHLGGAKQAGDV;
H12）を結合させた H12-PEG-polyAlb の止血機能について検討した．多血小板血漿に H12-PEG-polyAlb を添加して，ADP による血小板凝集を試験したところ，添加による凝集促進効果が認められた．この際に効果的な PEG 分子量や PEG の表面密度を設定した．更に血小板減少モデルラットに投与したところ，
40mg/kg 投与 3 時間後の出血時間が生食投与のコントロールの半分にまで短縮され，in vivo 評価においても H12-PEG-polyAlbの有効性が確認された．また，polyAlb とリン脂質二分子膜小胞体について，表面を H12-PEG 修飾したもので比較すると，
polyAlb の方が高い止血機能が得られている．これは内部がrHSA にて充填されている polyAlb の構造が，出血部位を充填するのに適しているものと考察している．
他方，rHSA の利用の一環としてアルブミンシートの展開も試みている．親-疎水性マイクロパターン基板の疎水性領域にチオール基を導入した rHSA を密に単分子吸着させ，酸化触媒
にて分子間ジスルフィド架橋を形成させると，アルブミンシー
トが構築できた．基板上でシートの片面に修飾をしたあと，界面活性剤処理にてシートを基板から剥離させて，その後シート
表面を修飾すると，7nm 程度の膜圧のナノシートで表裏の修飾状態が異なるものが構築される．30 μ m x 10 μ m x 7nm の柔軟なアルブミンシートの研究動向についても報告する．

17

シンポジウム 2- 7
感染症及び癌治療用ヒト抗体開発
黒澤 良和
藤田保健衛生大学・総合医科学研究所

私の研究室では、臨床教室と協力して感染症及び癌治療用ヒト抗体開発を実施している。感染症に対しては、日頃から治療に携わることにより病原菌やウイルスに暴露される機会が多い
3 名の小児科医の協力（成分献血）を得て作成した抗体ライブ
ラリーを用いて抗体単離を実施している。本年は、インフルエ
ンザウイルスに対する中和抗体の報告をする。現在流行しているインフルエンザウイルスは、1968 年に大流行（pandemic）
した香港風邪に始まる H3N2 型である。1968 年から 2004 年にわたってワクチン株として用いられた 12 株（ほぼ 3 年毎）を抗原として用い、3 種類の抗体ライブラリーをスクリーニングすることにより得た多数の抗体の性質について述べる。この結果は、ヒト体内でインフルエンザウイルスに対して作り得る中和抗体の全体像を描くこととなる。更に現在心配されている新型イン
フルエンザ(H5N1)に対して抗体を準備する戦略にも触れる。
癌については、肝癌、膵癌、腎癌、肺癌、大腸癌、胃癌、乳癌、子宮癌（計 8 種）を対象として治療用抗体単離を進めている。我々が独自に開発した抗体スクリーニング法（ICOS）を用いて多数の抗体を単離したのち、手術除去した癌組織に対して免疫染色を実施し癌特異的染色像を与える抗体を選別する。
そののちそれぞれの抗体が認識する抗原（癌特異抗原）を同定するのが我々の採用している方針である。癌抗原の同定が完了すると、各抗体が癌細胞に及ぼす生物活性を測定して、そののち担癌動物モデルで抗腫瘍効果を示す抗体を選別する。すでに10 種類を越える癌特異抗原が同定されているが、臨床試験開始へ向けて、どの段階まで進んでいるかその現状を報告する。

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人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

一般演題Ⅰ- 1

一般演題Ⅰ- 2

ミオグロビンの酸素運搬分子への変換：新しいIn vitro におけるヘモグロビン小胞体の造血前酸素運搬物質の創製

駆細胞への影響

根矢 三郎，畑 晶之，星野 忠次
千葉大学大学院薬学研究院 薬品物理化学研究室

人工酸素運搬体の開発は近年急速に進展し，多くの実用的な血液代替物質が開発されている．その多くがヘモグロビン Hbを利用するものである．一方，ミオグロビン Mb は Hb サブユ
ニットと同様の分子構造をもつ単量体で，Hb からの酸素を筋肉に貯蔵する機能をもつ．Mb の酸素親和性は高く（P50 = 0.7
mmHg），Hb のような酸素運搬能はほとんどない．このため
Mb は酸素運搬物質にならない．Mb の酸素親和性を下げて酸素運搬能をもたせるには，遺伝子工学によるヘム周辺のアミノ酸残基の化学修飾も行われるが経済的に見合わない．また，補欠分子であるヘム（プロトヘム）の化学修飾もされているが，Mb に十分な酸素運搬機能を付与するのは難しい．私たちは新しいヘムを分子設計して，Mb を酸素運搬物質へ変換することを試みた．
近年，ポルフィリン環のテトラピロール配列を変えた異性体が合成できるようになった．その中で，コルフィセンとよばれる分子は 4 つのピロール環が台形に並んだ特異な構造をもつ．
コルフィセンは自然界に類似構造モチーフがない人工物質であるが，ポルフィリンと同様の芳香族性平面分子で化学的にきわめて安定である．大量に合成でき，鉄錯体への変換も容易である．
結 果 天然 Mb のプロトヘムを鉄コルフィセンで置き換えた
Mb をつくることができる．鉄コルフィセンで再構成した Mbには可逆的な酸素結合能がある．全アルキル型補欠分子 A を含
む Mb では P50 = 6.7 mmHg であり，天然 Mb の 1/13 まで酸素親和性は低下した．カルボン酸エステル置換基がある補欠分子 Bの Mb では P50 = 37.2 mmHg となり，天然 Mb に比べて酸素親和性は 1/50 に低下した．動脈血と静脈血の酸素分圧差を考えると，補欠分子 B の場合，結合酸素の 20 ％以上が末端組織で放出される．これは Mb を酸素貯蔵物質から酸素運搬物質に機能変換できたことを意味する．
議 論 鉄コルフィセンは鉄ポルフィリンに比べて低い酸素親和性を示す理由は固有の分子構造にある．テトラピロールの N
原子は台形に並び，ポルフィリンでの正方形配列とは対照的である．そのためコルフィセン鉄原子は分子平面内に収まりにく
く，近位ヒスチジンに引き寄せられやすい．したがって，酸素分子が第 6 配位座に結合しにくく，酸素親和性が低下すると考えられる．
Mb を酸素運搬体することに利点は多い．（1）Mb は筋肉か
ら大量抽出できる．（2）Hb よりも分子構造が簡単であるため安定である．（3）Hb で使うサブユニット間架橋などの化学修
飾操作は不要である．
（4）アロステリックエフェクターの影響を受けないので，人工血液物質としての溶液条件設定（pH や塩類濃度など）が容易である．
（5）補欠分子である鉄コルフィ
センは容易に合成できる．これらの理由から，鉄コルフィセンを利用すれば，Mb を使う実用的な新規血液代替物が開発できると考えられる．

ARTIFICIAL BLOOD Vol. 14 , No.1, 2006

藤原 満博 1，山口 美樹 1，若本 志乃舞 1，東 寛 1，
酒井 宏水 2，武岡 真司 2，土田 英俊 2，池田 久實 1
1 北海道赤十字血液センター
2 早稲田大学理工学総合研究センター【目的】へモグロビン小胞体（HbV）は人工酸素運搬体の一つとして開発され，動物モデルにおいてその有効性が示されている．非臨床試験がおこなわれるうえで，生体適合性の観点から
HbV のヒト血球細胞への影響を考慮する必要がある．骨髄は，肝臓，脾臓とともに HbV 投与後の組織分布の高い組織の一つである．そこで HbV の造血機能に及ぼす影響を推測する上で，造血前駆細胞の in vitro におけるコロニー形成能に対する HbVの影響について検討した．
【方法】（1）ヒト臍帯血より Ficoll-Paque を用いて単核球分画を分離し，CD34 陽性細胞が 300 個／ well になるように播種した．
メチルセルロース培地に，HbV（0，0.09，0.187，0.375，0.75，
1.5，3 ％）を添加し，37 ℃にて培養した．BFU-E，CFU-GM，
CFU-Mix，CFU-C は 2 週間後に，HPP-CFC は 4 週間後にコロ
ニーをカウントした．
（2）造血系サイトカインを添加した血清を含む培地に臍帯由来単核球を浮遊させ，HbV を添加しovernight または 3 日間培養した後，細胞を回収・洗浄してHbV を除去後，メチルセルロース・アッセイをおこなった．
（3）骨髄ストローマ細胞との共培養系： confluent にしたヒト
ローマ細胞株に CD34 陽性細胞を浮遊させ，HbV（0，0.75，1.5，
3 ％）を添加し無血清培地 X-VIVO 10（+ 造血系サイトカイン）にて培養した．1 週間後に等量の培地を加え，2 週間後に細胞を回収・洗浄し，CD34 陽性細胞数が一定になるように調製してコロニーアッセイをおこなった．
【結果】（1）臍帯血単核球を HbV と混合してコロニーアッセイをした場合には，培養 2 週間後の BFU-E，CFU-GM，CFU-Mix，
CFU-C の各コロニー形成への明らかな影響はみられなかった．
しかし，4 週間後での HPP-CFC の形成は，HbV の濃度に依存して有意な抑制が認められた．（2）臍帯血単核球を HbV に
overnight または 3 日間曝した後，洗浄操作により HbV を除去
後，コロニーアッセイをおこなった場合には，overnight では
HPP-CFC を含め，コロニー形成に有意な影響はみられなかった．3 日間曝した場合は HPP-CFC の抑制傾向がみられた．
（3）
CD34 陽性細胞とストローマ細胞共培養系において，HbV1.5 ％以下の濃度では，造血前駆細胞の細胞増幅および HPP-CFC を含むコロニー形成に影響はみられなかった．HbV 3 ％では細胞増幅は抑制されたが，コロニー形成には影響はみられなかった．
【結論】HbV が継続的に存在する系においては HPP-CFC 形成が抑制されるが，HbV に曝される時間が短い場合，または生
理的な条件に近いストローマ細胞との共培養系においては，
HbV の造血前駆細胞への影響は極めて少ないと考えられる．

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一般演題Ⅰ- 3

一般演題Ⅰ- 4

ラット摘出灌流心の虚血再灌流障害に対するア

ヘモグロビン小胞体（HbV）が免疫系に及ぼ

ルブミン−ヘム rHSA-FecycP の保護効果

す影響鈴木 佐緒里 1， 田 有紀子 1，小林 紘一 2，土田 英俊 3，
弘津 一郎 1
1 ニプロ株式会社医薬品研究所
2 慶應義塾大学医学部呼吸器外科
3 早稲田大学理工学総合研究センター【目的】アルブミン−ヘム rHSA-FecycP は，遺伝子組換えヒト
血清アルブミン（rHSA）に 4 つのシクロヘキサノイル基を有するテトラフェニルポルフィリン鉄錯体（FecycP）を包接させた完全合成系人工酸素運搬体である．今回，本剤の虚血組織への酸素供給能を調べるために，ラット摘出心臓灌流標本を用いて虚血再灌流障害に対する保護効果について検討した．
【方法】Wistar 系雄性ラットの摘出心臓を 330 beats/分のペー
シング下に Krebs-Henseleit 液（95 ％ O2 − 5 ％ CO2 通気，pH
7.4，37 ℃）を用いて 20 mL/分の速度でランゲンドルフ冠灌流を行った．心筋虚血は灌流速度を 2 mL/分に低下させることによって惹起させた．60 分間の低速灌流虚血後，20 mL/分で 60
分間の再灌流を行った．10 ％ rHSA-FecycP（rHSA 0.5 ％，FecycP 4.5 g/L）または 0.5 ％ rHSA を虚血中 60 分間または再灌流と同時に 10 分間適用した．心機能パラメータとして最大
左心室内圧（LVDP），左心室内圧最大上昇速度（LV dp/dtmax），左心室拡張終期圧（LVEDP），灌流圧，心拍数及び冠流量を測定した．対照には虚血再灌流を行った虚血対照群と120 分間定速灌流（20 mL/分）を実施した正常対照群を設けた．
【結果】虚血対照群では正常対照群に比べて低速灌流中に
LVDP 及び LV dp/dt max の低下，LVEDP の上昇が認められ，再灌流後には LVDP 及び LV dp/dt max の回復抑制，LVEDPのさらなる上昇並びに一過性の心室細動または心拍動停止などの心機能障害が惹起された．虚血中に適用した rHSA-FecycP
は，再灌流後 LVDP 及び LV dp/dt maxをほぼ正常対照レベルにまで回復させた．また，LVEDP の虚血中及び再灌流後の上昇を抑制し，虚血対照群に比べて有意な低値を示した．心拍数には変化はみられず，心室細動または心拍動停止は観察されなかった．一方，再灌流後に適用した rHSA-FecycP，虚血中または再灌流後に適用した rHSA は，いずれも心機能障害を改善させず，虚血対照群とほぼ同様に推移した．
【結論】虚血時に適用したアルブミン−ヘム rHSA-FecycP は心筋保護効果を有し，その効果は虚血組織への酸素運搬を介して発揮されたものと考えられた．本剤の虚血性心疾患治療薬としての応用が期待される．

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高橋 大輔 1，阿部 英樹 1，藤原 満博 1，東 寛 1，
酒井 宏水 2，武岡 真司 2，土田 英俊 2，池田 久實 1
1 北海道赤十字血液センター
2 早稲田大学理工学総合研究センター【目的】ヘモグロビン小胞体（HbV）は，高純度濃厚ヒトヘモ
グロビン溶液を脂質二分子膜で被覆し，表面をポリエチレング
リコールで修飾した人工酸素運搬体である．我々はこれまで，
HbV 投与後のラット脾細胞において，低濃度のコンカナバリ
ン A（ConA，0.3 μ g/mL）刺激に対する増殖能の抑制を見出してきた．今回は，蛋白抗原である KLH，および Hb を含有しない空の小胞体が，ラット脾細胞の増殖能に与える影響について検討を行った．また，HbV 投与群ラット脾細胞が，生理食塩水投与群の脾細胞増殖に与える影響についても検討した．
【方法】1）WKAH ラットに KLH（100 μ g）を皮下注し，5-7
日後に循環血液量の 20 ％相当の HbV（約 3mL）をエーテル麻酔下，尾静脈より輸注した．対照群には生理食塩水を輸注した．
HbV および生理食塩水投与 6 時間後，脾臓を摘出し，RPMI/FCS/2-ME で懸濁した後，KLH（3，10，30 μ g/mL）
刺激し，増殖能を測定した．2）WKAH ラットに空の小胞体，および生理食塩水を輸注し，同様に ConA（0.3，3.0 μ g/mL）
刺激に対する増殖能を測定した．3）HbV および生理食塩水投
与群のラット脾細胞を 1 ： 1 で混和し，ConA（0.3，3.0
μ g/mL）刺激に対する増殖能を測定した．
【結果】1）WKAH ラットにおいて，HbV 投与 6 時間後の脾細胞に，KLH 刺激に対する特異的増殖能の抑制が認められた．
このような抑制反応は，いずれの KLH 濃度においても確認された．2）空の小胞体投与群において，ConA 刺激に対する増殖能の抑制がみられた．3）HbV，および生理食塩水投与ラット脾細胞を混和した系においても，HbV 投与群同様に，ConA
刺激に対する増殖能の抑制がみられた．
【考察】HbV 投与群において，KLH に対する二次免疫応答性低下が認められた．しかしながら，ConA 刺激による増殖能の抑制が，HbV 投与後 7 日以内に回復していることから，KLH による応答性の低下においても，長期間は持続しないものと推測される．また，空の小胞体投与群も，ConA 刺激に対する増殖能の抑制が認められており，これら一過性の増殖能の抑制は，内包されているヒトヘモグロビンではなく，空の小胞体によって惹起されていると推測された．さらに，HbV および生理食
塩水投与ラット脾細胞の混合実験から，HbV 投与群ラットの脾細胞由来の，何らかのファクターが，生理食塩水投与群のラット脾細胞の増殖能に影響を及ぼしていることが示唆された．
今後，ヒトリンパ球においても，これらの一過性にみられる免
疫能（あるいは増殖能）の抑制が，起こり得るか検討する必要がある．また，これらの現象が，どのような機序で起こるのかを解明することは，HbV の大量投与が生体に及ぼす影響を明らかにする上で重要であると思われる．

人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

一般演題Ⅰ- 5

一般演題Ⅰ- 6

HbV による輸液蘇生：肺への影響

ヘモグロビン小胞体の脳梗塞における有効性に関する基礎的検討

杖下 隆哉，寺嶋 克幸，坂本 篤裕
日本医科大学附属病院麻酔科学教室

近年人工赤血球の開発が進み，全身的もしくは局所臓器における低酸素に基づく悪影響を早期に改善し，生命維持やその後の合併症を防ぐことが期待されている．以前我々はウサギを用いたショックモデルにおいて，Hemoglobin Vesicle（HbV）
solution が末梢の循環不全を改善することを示した．また，
HbV solution 自体が in vitro において，乳酸リンゲルと比較して凝固能に悪影響を及ぼさないことを示した．しかし，分子生物学的な見地から HbV が生体にどのように影響するかを調べた報告はない．人工赤血球の生体への影響を調査することは，人工赤血球の臨床応用以前に明らかとされるべきである．
今回我々はラットを用い，HbV solution を投与し生体にどのように影響するかを調査した．
（方法）今回我々は S-D ラットに対する生理食塩水投与をコントロールとした HbV 投与の影響を調べた．また出血性ショッ
ク後の Fluid resuscitation において乳酸リンゲル液または HbVを用い，それぞれの影響を調べるために RT-PCR 法を用い，TNF-α，IL-6，HMOX-1，HIF-1α，ICAM の mRNA 発現から経時的に評価した．さらに，我々の結果に対し，文献的考察を加える．

ARTIFICIAL BLOOD Vol. 14 , No.1, 2006

小松 弘嗣 1，佐藤 夏枝 1，太田 勝次 1，松浦 昭宏 1，
堀之内 宏久 2，小林 紘一 2
1 株式会社オキシジェニクス研究開発本部
2 慶應義塾大学医学部呼吸器外科【目的】ヘモグロビン小胞体（HbV）の脳梗塞への適応可能性について検討することを目的として，2 種類のラット脳梗塞モ
デルを用いて HbV の有効性を評価した．
【方法】①中大脳動脈（MCA）閉塞モデル：雄性 Wistar 系ラット（9 週齢）の右側内頸動脈内に 18 mm の栓子（シリコンコートした 4-0 号ナイロン糸）を挿入することにより右側 MCAへの血流を起始部から遮断した．60 分後に栓子を約 10 mm 引
き抜き，MCA への血流を再開させた．再開通 23 時間後に神経症状をスコア化すると共に常法に従って脳梗塞巣の体積をcortex，sub-cortex およびそれらの total について求めた．HbV（10 mL/kg）は MCA 閉塞直後または MCA 閉塞 20 分後に 2
mL/min の速度で尾静脈より投与した．Vehicle としては生理
食塩液（10 mL/kg）を使用した．②アラキドン酸（AA）誘発
モデル：雄性 Wistar 系ラット（9 週齢）の左側外頸動脈から内頸動脈の分岐部までカニューレを挿入し，内頸動脈の血流を遮断することなく 0.1 mL/sec の速度で AA（3 mg/kg）を注入した．AA 投与の 3 および 24 時間後にラットの生死を確認すると共に生存ラットについて運動機能障害（横転テスト，姿勢テス
ト，片麻痺テスト）をスコア化した．HbV および生理食塩液（いずれも 10 mL/kg）は AA 注入直後に 2 mL/min の速度で尾静脈より投与した．
【結果及び考察】① MCA 閉塞モデル：神経症状スコアに関しては，MCA 閉塞直後投与および MCA 閉塞 20 分後投与のいずれの条件においても生理食塩液群と HbV 群の両群間に有意な差は認められなかった．生理食塩液群と比し，HbV を閉塞直後に投与した群では cortex および cortex と sub-cortex の total
で有意な脳梗塞巣体積の減少が見られた．また，閉塞 20 分後投与においても sub-cortex の脳梗塞巣体積の有意な減少，cortex および cortex と sub-cortex の total の脳梗塞体積の減少傾向が観察された．② AA 誘発モデル： AA 注入 24 時間後の生存率に関し，生理食塩液群および HbV 群の間に著明な差は認められなかったが，3 時間後の生存率については有意ではないものの HbV 群で上昇傾向が認められた．また，死亡を含めた運動機能障害スコアに関しても，24 時間後では両群間に顕著な差は認められなかったが，3 時間後では HbV 投与により有意な減少が認められた．以上の結果から，HbV は脳梗塞領域の縮小や運動機能障害の軽減等に寄与しうると考えられる．
【結論】HbV が脳梗塞，特に急性期における新たな治療の選択肢となる可能性が示された．今後，更に検討を加える予定である．

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一般演題Ⅰ- 7

一般演題Ⅰ- 8

Liposome-Encapsulated Hemoglobin（TRM645）

Beagle 犬を用いた 50 ％脱血ショックにおける

as a Substitute for Transfusion

Hb 小胞体の蘇生効果および酸素運搬能の評価- Retrospective Simulation of Clinical Application Kawaguchi AT1, Kinoue T, Hyodo O1, Inokuchi S1,Yoshiba S1, Ogata Y2
1 Tokai University
2 Terumo Corporation
Introduction
Liposome-encapsulated hemoglobin（TRM645）has beendeveloped as a novel oxygen carrier primarily as a RBC
substitute for transfusion. Since the capsule has（1）nosurface antigen, ABO-typing and antibody-screening（T/S）
are unnecessary. Viral inactivation/filtration make it（2）extremely safe regarding blood bourn infection. TRM645
has a low O 2 affinity（P 50 O 2 =40 mmHg）to allow（3）acomparable O2 transport as RBC under room air. TRM645 is（4）stable without refrigeration for 6 months and ideal for
ubiquitous storage for emergency use. Under a hypothesisthat TRM645 is safe and efficient, we report a retrospective
simulation study to explore its clinical utility.
In the Emergency Medicine
The emergency department has been using O（+）Rh（+）RBC for an emergency transfusion. In our experience with
70 patients over the initial 2 years, those who happened tohave the same blood-type（no mismatch, n=33）had asignificantly better survival（ 49 ％）than those with adifferent blood-type or minor mismatch（n=37, 24 ％, p<0.05）.
If TRM645 is available for such an emergency use, thelatter majority could have avoided minor mismatch
transfusion.
In the Operating RoomAmong 2079 surgical cases who ordered T/S in 2003, only
29 ％ required transfusion, rendering >70 ％ of T/Sunnecessary. Only 154（7.4 ％）required 9 units（1170 ml）or
more, suggesting that in retrospect more than 92 ％ of T/Smight have been unnecessary if TRM645 is used for the
initial 8 units of transfusion.
Conclusion
TRM645 appears to be useful as blood substitute in an
emergency medicine especially in areas with a highprevalence of blood borne infections, and in surgical center
to reduce technical burden in an underdeveloped and/or
underpowered transfusion service environment.

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池田 達彦 1，堀之内 宏久 1，井澤 菜緒子 1，泉 陽太郎 1，
河野 光智 1，渡辺 真純 1，川村 雅文 1，酒井 宏水 2，
土田 英俊 2，小林 紘一 1
1 慶應義塾大学医学部呼吸器外科
2 早稲田大学理工学部＜目的＞ Hb 小胞体（HbV）の臨床応用を考えた場合，その安全性の評価は必須である．HbV は静脈内投与されて効率よく酸素運搬を行い，末梢臓器の隅々まで酸素を効率よく運搬することを主眼におき開発され，これまでにその生体投与に関する有効性と安全性について様々な角度より検討がなされてきた．
中動物での実験は臨床での使用を想定したモデルを作成し，小動物では検証できなかった，全身での酸素代謝，右室系の変化について検討し，酸素運搬機能，安全性について検証することを目的とした．前回脾摘後 50 ％脱血ショックの後に蘇生を行うモデルを用いた検討を行ったが，その際，投与後数分にわたって肺動脈圧の上昇を認めた．この肺動脈圧上昇の原因を明らかとするため，今回の検討では脾摘を行わない出血性ショック
モデルを作成し，ショック蘇生時の循環動態に与える影響を検討した．
＜方法＞月齢 6 ヶ月のビーグル犬を用い，全身麻酔下に，動脈ライン，Swan-Gantz catheter を挿入し循環系諸標を経時的に計測した．循環血液量の 50 ％相当量を 20 ml/min の速度で脱血し，1 時間の間ショック状態（血圧 50mmHg 以下）が継続する
ようにし，ショック蘇生を行った．蘇生液として 5 ％アルブミ
ン生食（リコンビナントヒトアルブミン（rHSA，ニプロ社製）
を生理的食塩水に５％濃度となるよう溶解した液体： rHSA群）
，脱血血液（Autologus shed blood ASB 群），HbV 分散液（HbV を 5 ％アルブミン生理食塩水溶液に分散した液体：
HbV/rHSA 群）を用いた．蘇生は 20 ml/min のスピードで脱血量と同量の蘇生液を上肢の静脈ラインより経静脈的に投与した．
計測は脱血前，脱血直後，脱血 1 時間後，蘇生液投与直後，30 分後，60 分後，90 分後，120 分後，180 分後，240 分後に血圧，PAP，CVP，PCWP，CO，動脈血血液ガス，混合静脈血
血液ガス，腎皮質酸素飽和度，CBC，血液生化学，ヘマトクリ
ットを測定した．
＜結果と考察＞ HbV/rHSA 群は rHSA 群，脱血血液群と同様の蘇生効果を示した．循環動態に与える影響では，rHSA 群では心拍出量が高く推移する傾向があった．その他の指標において 3 群間に有意差を認めなかった．酸素運搬は 24 〜 27 ％がHbV で分担されており，酸素運搬も十分に行われていると考えられた．蘇生直後にはいずれの群でも肺動脈圧の軽度上昇が認められていたが，有意差を認めなかったことから脾摘により右心系に影響が出た可能性が示唆された．
＜結論＞中動物での脱血ショック蘇生モデルを用いた投与後急性期の実験での安全性を確認することができた．

人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

一般演題Ⅰ- 9
人工赤血球（ヘモグロビン小胞体）を用いたビーグル犬人工心肺モデルにおける頚動脈血流量，脳酸素代謝量の検討
保土田 健太郎，饗庭 了，四津 良平
慶應義塾大学医学部外科（心臓血管）【背景と目的】新生児や乳児の先天性心疾患に対する開心術の成績は近年飛躍的に向上しているが，一般的には人工心肺回路の充填液として輸血が必須である．これは，低体重の患者に対する無輸血充填が高度の血液希釈を生じ，特に酸素需要の大きな脳の不可逆的障害を来たす可能性が高いためである．一方で，輸血には感染症，炎症性生体物質活性化による臓器障害等の合併症の危険が伴う．こうした臨床上のジレンマの一解決手段として，我々はヘモグロビン小胞体（HbV）に着目した．すでにラット人工心肺モデルを確立し，HbV 充填群において高次脳機能が維持されることが証明されたが，これは HbV の充填により末梢組織への酸素運搬が保持されたためと考えられる．さらに，体外循環後の脳浮腫や輸血による炎症性生体物質活性化によって脳血管抵抗が上昇し，脳血流低下を来たすことが知られている．そこで，幼若ビーグル犬を用いた人工心肺モデルにおいて，HbV 充填が頚動脈血流，脳酸素代謝に及ぼす影響を検討することを目的とした．
【方法】体重 3.0-4.0kg のビーグル犬人工心肺（CPB）モデルを確立した．ローラーポンプと動物実験用膜型肺を用いて CPB
回路（充填量 100ml）を作成し，回路の充填液を① 5 ％リコン
ビナントアルブミン（アルブミン群），②ヘモグロビン小胞体（HbV 群），③同種血（同種血群）の 3 群（各 n=6）に分けた．
HbV は 5 ％リコンビナントアルブミンに分散させ，Hb 濃度を8.6 g/dL とした．麻酔導入後，気管内挿管下にセボフルレン，
ペントバルビタール，ベクロニウムを用いて全身麻酔，筋弛緩を維持．右第４肋間より心臓に到達，上行大動脈送血，右房脱血にて CPB を確立．CPB 運転は常温下，無拍動送血法（ローラーポンプ）により 120-140ml/kg/分の流量を維持し，90 分間行った．CPB 離脱後，120 分間全身麻酔下に生存させた．計測
項目は，動脈圧，中心静脈圧，心拍数，直腸温，頚動脈血流量，
心拍出量とし，動脈血，頚静脈血，混合静脈血について血液ガ
ス分析，lactate 濃度，ヘマトクリット（Ht）値測定を行った．
頚動脈血流量，心拍出量はドップラー血流計を用いて測定した．
CPB 運転前，運転中，離脱後計 9 点を測定時点とした．同種血群では，イヌ赤血球抗体（DEA1.1）陰性のイヌをドナーとした．
【結果】CPB 運転前・後，各群において，pH，pO 2 ，pCO 2 ，BE，lactate 値に有意差を認めなかった．CPB 離脱後の Ht 値は，アルブミン群，HbV 群共に 21 ％，同種血群 27 ％と有意差を認めた．頚動脈血流量は CPB 離脱後各群で減少したが，HbV 群（15.6 ± 4.0ml/kg/min）はアルブミン群（8.5 ± 4.2ml/kg/min）に対し有意に高値，同種血群（12.8 ± 4.2ml/kg/min）に対して高い傾向にあった．動脈血・頚静脈酸素含有量較差は各群で有意差を認めなかった．
【結語】CPB 離脱後の頚動脈血流量は，アルブミン群，同種血群に比し HbV 充填群で保たれる傾向にあった．HbV 充填は
CPB 離脱後の脳血流量維持に有利である可能性が示唆された．

ARTIFICIAL BLOOD Vol. 14 , No.1, 2006

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一般演題Ⅱ- 1
LIPOSOME-ENCAPSULATED HEMOGLOBIN（TRM645）
DOES NOT INTERFERE WITH THE
IMMUNE RESPONSE TO BACTERIALENTEROTOXINS IN MICE RECONSTITUTEDWITH HUMAN IMMUNE SYSTEM
Akira T. Kawaguchi 1, Yoshie Kametani,
Akiko Sakai, Mamoru Ito, Norikazu Tamaoki,
Sonoko Habu.
1 Tokai University School of Medicine, Central
Institute for Experimental Animals

Background. Preclinical evaluation of new regimens inanimals with human immune system is desirable. We
studied if the presence of TRM645 interferes with the host's
immune response to bacterial enterotoxins in micereconstituted with human immune system by transfusion of
the human cord blood stem cells（CB-NOG）.
Methods. Plasma level of human IL-2 was monitored 4-hourand 3-day after intraperitoneal administration of Toxic
Shock Syndrome Toxin（TSST）in CB-NOG mice as well as
in wild mice immediately after infusion of 10 ml/kg of
TRM645（ TRM+TSST, n=4）or 10 ml/kg of saline（PBS+TSST, n=4）
. Mice receiving these solutions alone
without TSST served as controls.
Results. IL-2 level was elevated 4-hour after TSST either in
CB-NOG mice（human IL-2, right panel）or in the wild mice（murine IL-2, left panel）in a similar magnitude, both ofwhich returned to baseline in 3-day. IL-2 levels stayed at thebaseline in control mice receiving TRM645 or PBS alone.
Conclusions. The results suggest that TRM645（10 ml/kg）
does not largely modify host's immune response to bacterial
enterotoxins in murine as well as in human immune system.

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一般演題Ⅱ- 2
マウスにおけるヘモグロビン小胞体構成脂質の体内動態解析
田口 和明 1，浦田 由紀乃 1，安楽 誠 1，甲斐 俊哉 1，2，
武岡 真司 3，土田 英俊 3，小林 絋一 4，小田切 優樹 1
1 熊本大学大学院医学薬学研究部
2 ニプロ株式会社医薬品研究所
3 早稲田大学理工学総合研究センター
4 慶応義塾大学医学部外科【緒言】
輸血に代わりうる人工酸素運搬体としてヘモグロビン小胞体（HbV）の実用化が期待されており，HbV を製剤化する上で体内動態の検討は必要不可欠である．これまでに我々は HbV 内部の Hb を 125I 標識した HbV（125I-HbV）の体内動態特性を報告してきた．この HbV を投与した場合，ヘモグロビン（Hb）とともに高用量の脂質成分が体内に入ることになり，この脂質成分の体内動態の検討は HbV の有効性及び安全性を把握する上で重要である．しかしながら，HbV 脂質膜の体内動態の検討は未だ行われていない．このような背景の下，本研究は，HbV，マウスにおける体の脂質膜を 3H-cholesterol 標識し（3H-HbV）
内動態実験を行い，HbV 脂質膜の体内動態パラメータの検討を行った．また，HbV の脂質膜及び内部 Hb の体内動態を比較検討して，HbV の体内動態特性を考察した．
【方法】
3
H-HbV は 3H-cholesterol と HbV をインキュベートし作製した．HbV 投与液を ddY 系雄性マウスに投与後，経時的に開腹，採血及び臓器摘出した．尿・糞は代謝ゲージを用いて回収した．
3
H-HbV 投与マウスの血液，臓器及び尿・糞は可溶化後，放射活性を測定した．各パラメータは MULTI を用い算出した．
【結果及び考察】
脂質成分を標識した 3H-HbV をマウスに尾静脈内投与したところ，血中半減期は 19.2hr，血中濃度曲線下面積（AUC）
834hr ％ of dose/mL，クリアランス 0.12mL/hr，分布容積2.8mL であり，内部 Hb を標識した 125I-HbV とほぼ同等の値を示した．またその主要消失臓器は，肝臓及び脾臓であり，高い取り込みを受けることが確認された．しかしながら，分布の経時的推移においては，内部 Hb は投与後 7 日以内に消失するのに対し，脂質成分では一時的な蓄積性を示した後 14 日以内に消失した．また，内部 Hb は投与後 7 日以内に約 80 ％が尿中に排泄され，脂質成分では約 70 ％が糞中より排泄された．
以上のことにより，投与された HbV は intact HbV として血中を循環後，代謝臓器である肝臓・脾臓の細網内皮系組織に取り込まれ分解されことが明らかとなった．その後，内部 Hb は速やかに臓器より消失し尿中に排泄されるのに対して，HbV
脂質成分は，膜構成成分もしくは脂質滴として臓器中に存在した後，胆汁中より糞中に排泄されることが確認され，内部 Hbと脂質膜は HbV の分解後で異なる挙動を示す可能性が示唆された．

人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

一般演題Ⅱ- 3

一般演題Ⅱ- 4

持続性大量出血に対する人工血液輸血後のサイ

S-ニトロソ化アルブミンの調製と評価

トカインの推移と臓器障害について
野上 弥志郎 1，木下 学 2，高瀬 凡平 3，庄野 聡 4，
服部 秀美 3，松谷 哲行 1，磯田 晋 1，志水 正史 1，
木村 民蔵 1，中村 伸吾 1，石原 美弥 5，緒方 嘉貴 6，
金田 伸一 6，松村 光雄 6，山田 憲彦 4，斉藤 大蔵 2，
石原 雅之 3，菊地 眞 5，前原 正明 1
1 防衛医科大学校外科学第 2，2 防衛医科大学校防衛医学研究センター外傷研究部門，3 医療工学研究部
門，4 防衛医科大学校防衛医学，5 医用工学，6 テル
モ株式会社研究開発センター【はじめに】出血性ショックでは肺障害や肝障害を併発することが知られている．我々は持続性の大量出血に対するリポソー
ム内包型人工赤血球（TRM645 テルモ社製）投与による救命蘇生が肺や肝臓に及ぼす影響を検討した．
【方法】SD ラットの大腿動脈から 0.2ml/分で持続脱血し出血モデルを作成した．脱血と同時に大腿静脈より人工赤血球（TRM645 群）や 5 ％ Albumin（Alb 群），ラット洗浄赤血球（RBC 群； Hb 濃度 6g/dl）を 0.2ml/分で投与し蘇生を試みた．
この脱血／蘇生輸液を 150 分間行い，サイトカインの血中推移と肺や肝臓の障害を検討した．
【結果】実験終了後，TRM645 群では RBC 群と同様に全例 48 時
間以上生存したが，Alb 群では数時間以内に全例死亡した．実
験終了直後の血中乳酸値，pH，base excess は TRM645 群ではRBC 群と同様，Alb 群に比し有意に低かった．AaDO2 ，気管支肺胞洗浄液中蛋白量濃度，肺湿乾重量比は TRM645 群で Alb 群に比し有意に高く，RBC 群でも同様に高かった．脱血／蘇生
輸液中のサイトカインの推移は，TRM645 群で TNF が 30 分後より，MCP-1 が 60 分後より上昇し，その後も他群に比し有意に高値で推移した．IL-10 も TRM645 群で 30 分後より上昇し高値で推移した．組織学的な肺での好中球集積は，TRM645 群で他群に比し顕著であった．組織学的検討でも TRM645 群で軽度のうっ血肺水腫や肺胞中隔の肥厚が認められたが，Alb 群ではほとんどなかった．RBC 群でも TRM645 群と同様な軽度のうっ血水腫が認められた．血中 ALT 値は実験終了時，3 群とも上昇しなかったが，肝の組織学的検討では Alb 群で著明な中心静脈周囲の肝細胞の空胞変性が認められたのに対し，TRM645
群では RBC 群と同様に空胞変性は軽度であった．組織の低酸素状態により誘導される hypoxia-inducible factor 1α（HIF-1α）の免疫染色では，Alb 群で中心静脈周囲の肝細胞核で発現が認められたが，TRM645 群，RBC 群では染色されなかった．
【結語】持続大量出血に対する人工赤血球投与による蘇生では，肝臓をはじめとする組織の低酸素状態は回避されたが，人工赤血球投与により TNF が誘導され，ケモカインである MCP-1 が分泌されることで肺への好中球集積が惹起され肺障害が増強する危険性が考えられた．また通常の洗浄赤血球輸血でも肺障害が惹起されヘモグロビン投与がこれに何らかの影響を及ぼすことも考えられた．

ARTIFICIAL BLOOD Vol. 14 , No.1, 2006

廣山 秀一 1，異島 優 1，赤池 孝章 2，小田切 優樹 1
1 熊本大学大学院医学薬学研究部 薬物動態制御学分野
2 熊本大学大学院医学薬学研究部 微生物学分野【目的】
一酸化窒素（NO）は生理機能の調節，病態発現，治療への応用など多岐にわたり研究されている．中でも，虚血性疾患や臓器移植時などでは血流減少に伴う基質枯渇に起因する内因性NO の産生低下により様々な障害が引き起こされるため，外因的な NO の補充が必要不可欠である．これまでに NO 補充療法
として，NO 吸入療法などといった NO 補充療法が試みられてきたが，NO 自身の反応性の多様さゆえに選択的に有益な効果を示すことは困難であるのが現状である．我々は既に，ヒト血清アルブミン変異体（HSA R410C）の S-ニトロソ化体が，虚血・再灌流障害の改善や抗菌活性といった様々な生理活性を有することを報告した．そこで今回，現在上市されている HSA
製剤（カプリル酸ナトリウム及び N-アセチルトリプトファン
含有 HSA）を用いて，S-ニトロソ化 HSA（S-NO-HSA）を調製し，虚血性疾患や臓器移植時の付加的適用を目的とした NO ト
ラフィックタンパク質としての有用性を評価した．
【方法】
300 μ M カプリル酸含有 HSA と NO ドナーである S-nitrosoglutathione（GSNO）を反応させ，HSA の S-ニトロソ化を行った．NO の定量は，Griess 試薬を用いた HPLC-flow-reactor
system にて行った．まず，CD スペクトルを用い構造変化の有無，S-NO-HSA の安定性試験を評価した．次に 111In 標識した SNO-HSA の体内動態解析，生理活性の評価はラット肝虚血・再灌流障害モデルを用いて行った．S-NO-HSA（0.5mol/kg）の投
与は再灌流直後に行った．
【結果及び考察】HSA の S-ニトロソ化部位である 34 位の遊離の Cys の SH 基の反応性を測定したところ，脱カプリル酸 HSA と比較して反応性の上昇が認められた．また，同様に S-ニトロソ化効率の上昇も認められた．これは，HSA 製剤中に含まれているカプリル
酸ナトリウムが HSA に結合することによって，34Cys の SH 基が分子表面に露出してきたためと解釈された．CD スペクトルによる構造解析では，HSA の S-ニトロソ化前後での構造変化はほとんど見られなかった．また，ラット肝虚血・再灌流障害
モデルを用いた S-NO-HSA の臓器保護効果を肝酵素の細胞外逸脱により評価した結果，S-NO-HSA は GSNO よりも有意に肝障害を抑制した．

25

一般演題Ⅱ- 5

一般演題Ⅱ- 6

大量出血時のリポソーム内包型人工赤血球投与

ラット摘出潅流心臓での虚血-再潅流障害に対が加齢生体に及ぼす影響とその対策についてするヘモグロビン小胞体の保護効果−第 2 報

1

2

3

4

木下 学 ，高瀬 凡平 ，野上 弥志郎 ，庄野 聡 ，
緒方 嘉貴 5，金田 伸一 5，松村 光雄 5，小野 聡 3，
山田 憲彦 4，関 修司 6，石原 雅之 2，菊地 眞 7，
齋藤 大蔵 1
1 防衛医科大学校防衛医学研究センター外傷研究部
門，2 同医療工学研究部門，3 防衛医科大学校外科，
4 同防衛医学，5 テルモ株式会社研究開発センター，
6 免疫微生物，7 医用電子工学
大規模災害時には重度多発外傷などが大量発生するが，高齢化社会では災害弱者である高齢者の割合がより増加すると考えられる．また大量出血を伴う患者の救命に際し輸血用血液の極
端な不足が深刻な問題になると考えられ，人工赤血球の実用化が期待される．一方，我々は生体防御能，とくに細胞性免疫能が加齢と伴に変化しエンドトキシンショックなどに極めて脆弱になることをマウスやヒトで報告している．そこで出血性ショックに対するリポソーム内包型人工赤血球（TRM645，テルモ社製）投与が加齢生体に与える影響についてマウスを用いて検討した．
【方法】1，若年（6 週）および老齢（50 週）の C57BL/6 マウスに循環血液の 50 ％程度に相当する約 1cc の血液を大腿静脈より脱血後，同量の人工赤血球（TRM645 群）または 5 ％ albumin（Alb 群）を投与し蘇生後の予後や TNF の推移，肝障害の程度をみた．2，若年および老齢マウスの Kupffer 細胞を TRM645 添
加で 24 時間培養し TNF 産生をみた．3，老齢マウスで TRM645
投与後の TNF 上昇を中和抗体で阻害し予後への影響をみた．
【結果】1，若年マウスでは TRM645 群で Alb 群より予後が改善
したが（3 日後 80vs50 ％，P<0.05），老齢マウスでは TRM645の予後改善効果が全くなかった（20vs30 ％）．若年老齢全ての群で脱血による赤血球数やヘマトクッリト値の低下に差はなかった．また若年老齢マウス共にヘモグロビン濃度は TRM645
群で脱血直後全く低下しなかった（17g/dl）．しかし 1 日後は10g/dl と低下し TRM645 の代謝分解が示唆された．若年マウス
では TRM645 投与後血中 TNF 値は上昇しなかったが，老齢マ
ウスでは 12 時間後に Alb 群に比し著明な上昇を認め，24 時間
後の ALT 値も上昇し肝障害が認められた．2，若年老齢マウス
共に TRM645 添加培養で Kupffer 細胞の TNF 産生が増加したがとくに老齢マウスで TNF 産生が著増した．3，TNF 阻害により老齢マウスでの TRM645 投与による救命効果が若年マウスと同程度にまで改善し（83 ％），肝障害も消失した．
【結語】老齢マウスでは TRM645 投与による蘇生時に著明な
TNF の産生誘導とこれによる肝障害が惹起され，救命効果を減弱させる危険性が考えられた．高齢者の大量出血時のTRM645 を用いた蘇生には TNF の過剰産生を阻害する必要が示唆された．

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山岸 正，別所 基明，浜 御幸，加藤 隆一，
柳田 茂樹，楠原 正俊，大鈴 文孝
防衛医科大学校 内科 1

【目的】救急・災害医療に利用可能な人工赤血球として，細胞型のヘモグロビン小胞体（HbV）が有力な候補となっている．
HbV を外傷時や出血時に緊急投与する際には，心臓への影響，
特に虚血-再潅流時の心筋障害の発生への留意が必要となる．
昨年に続いて，ラットの摘出心臓をランゲンドルフ潅流する方法を用いて，HbV が虚血-再潅流時の心機能をどのように回復させるかを測定した．
【方法】9-12 週齢の Wistar 系雄性ラットにヘパリン 1000 単位を腹腔内投与し，キシラジン 10 mg/Kg とケタミン 90 mg/Kg を腹腔内投与して麻酔した．心臓を取り出し，Krebs-Henseleit
buffer（KH-buffer）を用いて静水圧 100 cmH2O，38 ℃でランゲ
ンドルフ潅流した．左心室にラテックスバルーンを挿入し，圧トランスデューサーを介して，左室発生圧（LVDP），心拍数（HR）などを連続的に記録して心機能の指標とした．また，冠潅流液中の Lactate 濃度を連続して測定した．HbV と Hb を含
まない空球小胞体（V）は，Hb 濃度が 0.10 g/dL および 0.33
g/dL になるようにそれぞれ KH-buffer で希釈し，38 ℃に加温
して 95 ％ O2 + 5 ％ CO2 混合ガスを通気した．約 20 分間 KHbuffer で control 潅流を行った後，対照群（n = 6）
，Va（Hb 0.10g/dL）群（n = 7）
，Vb（Hb 0.33 g/dL）群（n = 7）
，HbVa（Hb0.10 g/dL）群（n = 7）
，HbVb（Hb 0.33g/dL）群（n = 6）の 5 群に分けて以下の実験を行った．対照群では，control 潅流の後
虚血 30 分-再潅流 30 分の処置を施した．V 群と HbV 群では，虚血 30 分-再潅流 30 分処置の前に，それぞれに対応する上記の希釈溶液を 10 分間潅流した．
【結果】試験した Hb 濃度と潅流時間の範囲で以下の結果が得られた．① HbV も V も，実験を通じて冠潅流量にはほとんど影響を与えなかった．② HbV は，再潅流中の HR と LVDP の回復を有意に促進し，左室拡張末期圧（LVEDP）の上昇を有意に抑制した．③ HbV 群では，潅流開始から 5 分間の冠潅流液中のLactate 濃度が有意に低下し，HbVb 群では再潅流開始 1 分後のLactate 濃度も有意に低下した．④ V 群では，HbV 群で見られた再潅流中の明確な心機能の回復や冠潅流液中の Lactate 濃度の低下はほとんど見られなかった．
【考察】今回の実験結果から，① HbV は虚血-再潅流によって惹起される心筋傷害に対して何らかの保護作用を持つであろうことが示唆された．また，② Hb を含まない空球小胞体（V）では，HbV で見られた心機能回復効果と冠潅流液中の Lactate 濃度低下効果がほとんど見られなかったことから，HbV 中のヘ
モグロビン（Hb）がこれらの効果に寄与していると推定された．現在，HbV の作用メカニズムあるいは作用経路を明らかにするための実験を行っている．

人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

一般演題Ⅱ- 7
LIPOSOME-ENCAPSULATED HEMOGLOBIN（TRM645）IMPROVES ENERGY METABOLISM IN
SKELETAL MUSCLE ISCHEMIA AND
REPERFUSION AS SHOWN ON NUCLEARMAGNETIC RESONANCE
Akira T. Kawaguchi, Kensuke Aso, Daisuke Kurita,
Haruyuki Minamitani, Munetaka Haida
Tokai University School of Medicine

Background. We tested effects of liposome-encapsulated
hemoglobin（TRM645）in skeletal muscle ischemia andreperfusion, which simulates muscular necrosis andmetabolic syndrome in humans after limb entrapment.
Methods. Intracellular pH and inorganic-phosphate / highenergy phosphate ratio（Pi/PCr）were serially monitored
using a nuclear magnetic resonance in rodent hind leg
muscle undergoing, 1. Ischemia for 70 minutes, 2.
Intravenous systemic（10 ml/kg）administration of TRM645,
saline, empty liposome or no treatment, 3. Reperfusion for 60
minutes.
Results. Intracellular pH decreased precipitously after
ischemia and even following reperfusion regardless oftreatment. Pi/PCr increased after ischemia until reperfusion,
when the ratio returned toward normal or energy status
improved in TRM645-treated rats（right panel, n=6）while
Pi/PCr remained elevated in animals without treatment（leftpanel, n=5）as well as in other animals.
Conclusions. The results suggest that TRM645（10 ml/kg）
improves intracellular energy metabolism in the skeletal
muscle after ischemia and reperfusion. Return of pH maylag behind due to prevailing anaerobic metabolism due toprolonged ischemia.

ARTIFICIAL BLOOD Vol. 14 , No.1, 2006

一般演題Ⅱ- 8
ドデカペプチド結合リン脂質小胞体の内包物放出特性と止血能増幅効果
岡村 陽介 1，前川 一平 1，半田 誠 2，池田 康夫 2，
武岡 真司 1
1 早稲田大学大学院理工学研究科
2 慶応義塾大学医学部【目的】フィブリノーゲンγ鎖 C 末端ドデカペプチド（H12）を表面に結合させたリン脂質小胞体は，活性化血小板間を架橋して血小板凝集を促進させる機能を持ち，血小板減少ラットに静脈投与すると出血時間を短縮させることを既に報告してきた．
本報では，血小板凝集惹起剤（adenosine 5-diphosphate（ADP））
を内包させた H12 結合小胞体を調製し，血小板代替物としての機能の増強を評価した．
【方法】H12（HHLGGAKQAGDV）を，マレイミド基結合ポリ
エチレングリコール（MALPEG; Mw=3.4 kDa）を介して小胞体に担持させて H12-PEG-小胞体を調製した．CF（10 mM）を内包させた H12-PEG-小胞体（CF）を PRP に分散させ（［PLT］=
2.0 x 10 5 /μL，［小胞体］= f.c. 0.05 mg/mL），ADP 添加（［ADP］= f.c. 2 μM）により血小板凝集を惹起させて，血小板凝集計にて透過度と CF 蛍光強度を測定した．血小板減少ラット（Wister 系, 8 週齢, 250-280 g,［PLT］=2.0 × 105 /μL）に
H12-PEG-小胞体（ADP, 1 mM）を投与し，尾先端を切傷し（深さ 0.5 mm，長さ 1 mm），止血までの時間を測定した．
【結果及び考察】H12-PEG-小胞体（CF）（1）と PEG-小胞体（CF）（2）との血小板凝集能の比較では，（1）の方が透過度が約 10 %増大した．これは，H12-PEG 小胞体が活性化血小板とGPIIb/IIIa を介して多点結合し，血小板凝集が促進させたためと考えられる．この時の CF 放出率は，（1）の方が（2）の場合と比較して約 15 倍も高かった．これは，小胞体が H12 を介して血小板と結合し，凝集した血小板の形態変化による物理的刺激により小胞体膜バリアー能が低下して CF 放出が促進されたと考えられる．次に H12-PEG-小胞体（ADP）を血小板減少ラットに投与したところ（10 mg/kg），出血時間は 371 ± 54 秒となり，ADP 未内包群（573 ± 127 秒）や生食投与群（609 ± 153 秒）と比
較して著しく短縮した．これは，H12-PEG-小胞体にて短縮効
果の確認できた 1/4 の投与量で同程度の効果であった．以上より，ADP 内包による H12-PEG-小胞体の止血能の向上が in vivo
にて確認された．

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一般演題Ⅱ- 9

一般演題Ⅱ- 10

人工酸素運搬体ヘモグロビン小胞体による固形
腫瘍の酸素化
泉 陽太郎１，山本 学１，竹内 健１，渡辺 真純１，
堀之内 宏久１，寺村 裕治 2，酒井 宏水 2，武岡 真司 2，
土田 英俊 2，小林 紘一１
1 慶應義塾大学医学部呼吸器外科
2 早稲田大学理工学総合研究センター

背景：固形腫瘍の発育と転移には血管新生が必須である．固形腫瘍は様々な機構により独自の血管を誘導していると考えられるが，これらの新生血管は形態的および機能的に正常組織に分布する毛細血管とは幾つかの点で異なっている．具体的には血管径が大きく，蛇行が多く，血流速度や方向が不均一かつ不安定である点などが挙げられる．赤血球は正常組織の毛細血管において効率的に酸素を運搬する機能を持っているが，腫瘍組織の血管構築の中ではその酸素運搬能は十分に発揮されていない可能性がある．実際腫瘍組織中の酸素分圧は著しく低いことが知られており，この低酸素状態が腫瘍の悪性度を増し，治療抵抗性をもたらすと考えられている．このような血管構築下では血漿中に分布する酸素運搬体の方が効率的に酸素を運搬する可能性がある．今回我々は人工酸素運搬体として現在開発が進行しているヘモグロビン小胞体（HbV）を用いてこれを検証した．
方法：動物種は C57/BL6 マウスを用いた．腫瘍は Lewis 肺癌を用いた．下肢大腿皮下に腫瘍片を移植し径約８ mm に達した段階で実験を行った．組織酸素分圧の測定は蛍光消退法を応用した Oxyspot 法にて行った．麻酔下に尾静脈を確保しポルフィ
リン誘導体を静注した．その後移植腫瘍部分の皮膚を剥離し腫瘍表面を露出し，生食とカバーグラスで被覆した．試料はHbV とその分散液である生食を尾静注して比較した．
結果と考察：腫瘍組織酸素分圧は試料投与後約 10 分で HbV 投与群において生食投与群に比べ一過性に有意に上昇した．今後
放射線治療への応用を検討する．

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人工血液 Vol. 14 , No.1, 2006

投稿規定
本誌は，血液代替物開発研究に貢献する
論文，関連する情報，学会会員のための会
報，学会諸規定等を掲載するが，形式にはこだわらず創意ある投稿を広く集める．本誌への投稿者は本学会会員であることが望
ましいが，投稿を希望する者は誰でも投稿することが出来る．原稿掲載の採否は編集委員会が決定する．原著論文について，他誌に既発表あるいは投稿中の論文は掲載し
ない．

執筆規定
ワープロを用いフロッピーによる投稿を原則とする．ただし，手書き原稿による投稿でも受け付ける．欧文による投稿を歓迎する．
１）原稿はワープロを用いて作成し，使用したソフト名を記載してフロッピーにより提出すること．その際，ハードコ
ピー4部を添え右肩上に「論説」，「総説」，「原著」等を明記すること．オリジナルのソフトおよびテキストファイル形式
でも保存し提出すること．
２）原稿はA4版の大きさとし，第1頁には
表題，英文表題，著者名，全著者所属，
英文著者名，英文所属，ついで筆頭著者の住所，英文住所を記入する．手書き原稿の場合はＢ5版，1行20字，20行とする．
３）総説，原著，および報告については，第2頁以降に和文抄録，Keywords（英文で6個程度）を付け，最終頁または別紙に英文抄録を付けること．英文抄録
は英文ワープロを用いて，別の「ABSTRACT」ファイルとしてハードコピーとともに提出しても構わない．
４）句読点はコンマ
（， ）
ピリオド
（． ）
とする．
５）文 中 の 英 語 は ， Times, Helvetica,
Courier, Symbol フォントを原則とし，
英文半角小文字とする．ただし，文頭および固有名詞は大文字で書きはじめ
ること．
６）数字はアラビア数字を使い，度量衡の単位はm, cm, mm, μm, L, mL, μL,
mol, g, mg, μg, ng, pg, fg, N／10などを用いる．
７）FigureとTable：引用順にそれぞれ番号を付けること．表題，説明，図表中文字は全て英文とすること．本文ハードコピー上に挿入箇所を明記すること．
Figureは直接オフセット印刷とする．
Tableは編集部にて入力し原図とする．
８）文献：本文に引用した順序に番号を付け，文中では2），3-5），1 4-6）などとする．
文献の記載法はthe Vancouver styleに従う．全著者名．論文題名．誌名 西
暦発行年；巻数：頁〜頁．とし，誌名の省略は医学中央雑誌またはIndex
Medicus に準拠する．単行本の場合は全著者名．題名．編集者名．書名．発
行地：発行書店，年号；頁〜頁．の順とする．
１. 太田和夫. 移植医療と社会. 医学のあゆみ 1993;164:442-6.
２. 砂本順三, 岩本 清. リポソームの調製. 野島庄七, 砂本順三, 井上圭三 編.
リポソーム. 東京: 南江堂,1988;21-40.
３. Fowler SA, Andracki M, Hurst G,
Honkan VA, Walder J, Casteel DA.
Prolongation of the intravascularretention of hemoglobin modified
with a long-chain fatty acidderivative. Artif Cells Blood Substit
Immobil Biotechnol 1994;22:27-42.
４. Reichert CM, Kelly VL, Macher
AM. Pathologic features of AIDS.
In: DeVita VT Jr, Hellman
S,Rosenberg SA, eds. AIDS.
Philadelphia: Lippincott, 1985;111-60.
９）論文中の略語は初出の際に省略しない
こと．
10）既発表の図表，その他を引用，転載する場合には，あらかじめ版権所有者の許可を得ること．また，掲載論文の著
作権は本学会に帰属する．
[本誌掲載著作物の二次利用および著作権について]
以下の点につきまして，あらかじめご了承ください．
本誌の一部，もしくは全部をCD−ROM，
インターネットなどのニューメディアに二次利用させていただく場合があります．本誌に掲載する著作物の複製権・翻訳権・上映権・譲渡権・公衆送信権（送信可能化権を含む）は本学会に譲渡されたものとします．したがって，上記の諸権利の承諾は本学会で行います（本項については，著作者ご自身の再利用を拘束するものではありませんが，再利用される場合はご一報ください）．
掲載料は無料とし，論説，総説，原著，
報告等については別刷り30部を贈呈する．
それを越える分についての費用は著者の負担とする（およそ1部100円）．カラー写真掲
載・アート紙希望などの場合は，著者の実費負担とする．

編集委員会●武岡真司（委員長），東 寛，池淵研二，小林 薫，酒井宏水，福島昭二，堀之内宏久，村田 満，渡辺真純●日本血液代替物学会 会誌■発行

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vol.14（1） 2006年 8 月 8 日発行
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