ISSN 0912-3636
Vol. 30 No. 1
MARCH 2011

組織培養研究第30巻 1 号 2011 年 3 月

日本組織培養学会

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組織培養研究 The Journal of Experimental & Applied Cell Culture Research

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複写される方へ本会は下記協会に複写に関する権利委託をしていますので、本誌に掲載された著作物を複写したい方は、同協会より許諾を受けて複写して下さい。但し（社）日本複写権センター（同協会より権利を再委託）と包括複写許諾契約を締結されている企業の社員による社内利用目的の複写はその必要はありません。
（社外頒布用の複写は許諾が必要です。）
権利委託先：（中法）学術著作権協会〒１０７－
００５２ 東京都港区赤坂９－６－４１ 乃木坂ビル
電話 （０３）３４７
５－５６１８
FAX（０３）
３４７５－
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なお、著作物の転載・翻訳のような、複写以外の許諾は、学術
著作権協会では扱っていませんので、直接発行団体へご連絡ください。
また、アメリカ合衆国において本書を複写したい場合は、次の団体に連絡して下さい。
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Coverphoto
細胞アレイ上に形成されたヒト肝細胞スフェロイドの共焦点レーザー
顕微鏡像（左）。肝細胞がトランスポーター依存的に排出する蛍光物
質、CDFをプローブとして胆管腔への排出を調べたところ、明らか２+を除去するこに輸送が確認された（中）。このプールは培地中の Caとにより境界が不明瞭になった（右）。この胆汁プールは肝細胞間に形成された微小胆管腔であり、排出機能も有していると考えられた（演題 YIA－
３より）。

日本組織培養学会第 84 回大会	 抄録集 pdf 化に際してのごあいさつ	
 
	
 
	
 
	
  日本組織培養学会第 84 回大会は 5 月 27 日（金）、28 日（土）に国立成育医療研究センターにて開催され、無事終了いたしました。ご参加、ご協力いた
だきました皆さまに心より感謝申し上げます。	
 	 	  かいつまんで開催結果をご報告いたします。	
 	 	  演題数はシンポジウム等を含め全 44、参加者は概数でおよそ 150 名でした。
44 演題すべてが選り抜きのご研究で、しかも各先生方がきわめて丁寧なご発表をしてくださいました。また、非会員参加者が 33 名もいらしたことは、今後の本学会の発展が予見できるようでたいへん喜ばしく思っております。	
 	 	  参加者数のピークは 27 日午後の動物実験代替法学会との合同シンポジウムから特別講演にかけてであったように思われます。今後も両学会の密接な交流が期待されます。また 2 日目午前中の細胞培養指導士講習会（トライアル）にも指導士だけでなく 50 人前後がお集りくださいました。厳密な方法論の確立
およびその伝達を信条とする本学会の方針の正しさが裏付けられたものと思います。それに続く Session	
 in	
 English においては極めて質の高い講演と活発な議論がなされました。	
 	 	  市民公開シンポジウム「病気に立ち向かうー市民と研究者の理解のもとにー」には 20~30 名程度の一般の方が加わってくださり、深い議論ができたと思います。しかしながら、このテーマは 2 時間程度で語り尽くせるものではな
く、いろいろな場を使い、継続した取り組みが必要と感じました。	
 	 	  大会は終了しましたが、これから合同シンポジウムおよび公開シンポジウムを中心に記録集の作成を計画しております。少々先のことになると思いますが、出来上がりましたら学会ホームページなどを通じ、ご連絡いたします。	
 	 	  最後になりましたが、本大会にご参加、ご協力いただきました皆さまに再度感謝するとともに、皆さまの益々のご活躍をお祈り申し上げます。	
 	
 平成 23 年 6 月 30 日	
 
	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  絵野沢	
 伸	
 
	
 
	
 
	
 
	
 
日本組織培養学会第 84 回大会会長	
 ipdf 版抄録集における変更点など

・	
  出稿原稿ベースで pdf 化しておりますのでレタープレス社製作の冊子体抄録集とは若干レイアウトが異なります。
・	  ページ番号は冊子体に合わせてあります。番号が抜けているのは冊子体の構成上白紙となっているページです。
・	  誤植等を訂正しました。冊子体と異なる部分はこちらのファイル体の記載内容を優先してください。なお、誤植等につきまして編集責任者として深くお詫び申し上げます【主な訂正】
P.65

シンポジウムの開催時間を訂正しました。

P.89

要旨本文を演題と合わせました（冊子体において次ページの要旨が重複して入っておりました）。

P.107

司会者名を訂正しました（一部冊子ではシールを貼って対応してあ
ります）。

・	
  広告はファイル容量が重くなるため省略いたしました。ご容赦ください。広告掲
載をいただきました各社様には記して謝意を表します。
株式会社

アビー

株式会社

メド城取

株式会社

高長

株式会社

薬研社

ニプロ株式会社
株式会社

メディネットロシュ・ダイアグノスティックス株式会社

（掲載順）

・	
  冊子体をご希望の方は絵野沢宛ご連絡ください。連絡先は P.3 に記載してあります。なお、送料のみご負担いただきます。
絵野沢 伸

ii

日本組織培養学会第８４回大会（東京都世田谷区）

会期 ： 平成２３年５月２７日（金）、２８日（土）会場 ： 国立成育医療研究センター「講堂」「研究所２階セミナー室」〒157-8535 東京都世田谷区大蔵 2-10-1

大会長：絵野沢 伸
国立成育医療研究センター
臨床研究センター 先端医療開発室
東京医科大学 外科学第三講座（客員）TEL：03-5494-8163 ； FAX：03-3417-2864
e-mail：senosawa@nch.go.jp

3

ご	
  挨	
  拶	
 
	
 
	
  今大会を開催させていただきます絵野沢でございます。昨年１月に鈴木崇彦
会長よりこのお話をいただきたいへん光栄に思うとともに、重責に耐えられるか大きな不安を感じておりました。しかしながら、準備を進めるにつれ、本学会は大会運営を支援する体制がきちんと整っていることがわかりました。今回、このように要旨集を出版できることになりましたのも、ひとえに先輩諸先生方のご指導、ご支援のおかげであります。この点に、まずは心より感謝申し上げ
ます。	
 
	
 
	
  本学会と私のつながりは、倫理問題検討委員会の初代委員長でいらした松村
外志張先生（名誉会員）の公共的ヒト組織バンクプロジェクトに入れていただ
いたことに始まります。非医療分野におけるヒト由来組織の研究利用の重要性と倫理的配慮について徹底的に仕込まれ、その後の研究人生に大きな影響を受けました。大会テーマを「病気に立ち向かう」といたしましたのは、ヒト組織利用研究への私なりのメッセージのつもりでおります。	
 	 	  一方、本学会の生い立ちは、人のがん細胞を体外で培養して研究するための情報交換、切磋琢磨の場であったとうかがっております。この精神は、教育研究システム委員会をはじめとする学会活動に脈々と引き継がれ、また大会の一
般演題重視の姿勢によく表れていると存じます。今大会の企画にあたりそのよき伝統を継承するよう精一杯の努力をしたつもりでおります。	
 	 	  開催に際しては、いろいろ至らぬ点があるかと存じますが、よろしくご協力のほどお願い申し上げます。	
 
	
 
絵野沢	
 伸	
  （第 84 回大会会長）	
 国立成育医療研究センター	
 臨床研究センター	  先端医療開発室	
 東京医科大学外科学第三講座（客員）	
 5

大会参加者へのご案内
１．大会会場
会場：東京都世田谷区大蔵２−１０−１
国立成育医療研究センター

講堂、研究所セミナー室

http://www.ncchd.go.jp/
http://www.ncchd.go.jp/access/index.html（交通案内）＜お願い＞・	
 患者様、ご家族との共用スペース（病院ロビー、エレベーター内など）ではご静粛にお願いいたします。
・	
 敷地内禁煙（分煙ではありません）なので、喫煙は周辺の飲食店の喫煙コーナーでお願いします。
・	
 同時期（5 月 26 日~29 日）に近隣の NHK 技術研究所で「技研公開」がございます。最寄り駅からのバス便は技研公開への参加者も使いますので混雑が予想されます。お時間に余裕をもってお越しください。
・	
 駐車場はございますが、大会参加者に料金の割引はございません。30 分以内
無料、31 分以上 1 時間まで 600 円、以後 30 分毎 300 円です。

急行で15分程度

新宿駅

成城学園前駅
小田急線

バス
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バス
30分
便数
注意

待ち時間、移動時間を入れて
新宿駅から40-50分です。

バス
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渋谷駅

東急田園都市線

二子玉川駅
参考） 小田急線祖師ケ谷大蔵駅（成城学園前駅の新宿寄り隣、緩行のみ停車）から歩くことが可能です。所要時間は慣れた人で12分ですが、道がわかりにくいので注意が必要です。

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病院!
玄関

病 院

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所
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２．大会日程１日目

5 月 27 日（金曜日）

研究所 2 階、セミナー室にて9:00受付開始（研究所 2 階、セミナー室）

9:25

開会挨拶

9:30~10:30

奨励賞対象演題

10:30~10:45

休憩

10:45~11:29

一般演題（I）「細胞の樹立と解析」

11:29~12:35

一般演題（II）「方法論」

12:35~13:08

一般演題（III）「研究基盤」

13:00~14:00

休憩

病院 1 階、講堂にて
14:00~17:00 日 本 組 織 培 養 学 会 ̶ 日 本 動 物 実 験 代 替 法 学 会
合 同 シ ン ポ ジ ウ ム 「 ES、 iPS 細 胞 の 培 養 技 術 と代替法への利用スキーム」
17:00~17:10

休憩

17:10~18:00 特別講演

阿久津英憲

「 再 生 医 療 を 見 す え た ヒ ト ES 細 胞 の 樹 立 」
18:10~

懇親会

国立成育医療研究センター病院 12 階
レストラン

7

つばさ

２日目

5 月 28 日（土曜日）

病院 1 階、講堂にて8:30

受付開始（病院 1 階、講堂）

8:50~ 9:30

総会

9:35~10:35

第 3 回培養指導士講習会・細胞培養基盤技術講習会コース III トライアル
10:40~12:00

Session in English「Cell culture stress models in aging and cancer」
12:00~13:00

休憩

13:00~13:44

一般演題（IV）「正常細胞とがん化」

13:44~14:28

一般演題（V）「角膜」

14:28~14:45

休14:45~16:45

憩

市民公開シンポジウム「病気に立ち向かうー市民と研究者の理解のもとに」
後援
16:45

国立成育医療研究センター

閉会の辞

３．演者の皆様へ
今回は大会事務局による発表ファイルの受け付けはいたしません。大会事務局は
最大限の器材整備をいたしますが、基本的には演者の責任において準備および発表を行ってください。
１）	
 会場には投影用 PC と動作チェック用 PC（両者ともに Windows およびMacintosh ） を 配 備 し ま す 。 パ ワ ー ポ イ ン ト の バ ー ジ ョ ン は 2007
（Windows）と 2008（Mac）です。
２）	
 発表ファイルの移送は USB フラッシュメモリをお使いください。
３）	
 持ち込み PC の使用も可能ですが、接続にかかる時間は発表時間に含まれることをご了承ください。
４）	
 動作確認などでトラブルが起った場合は、ご遠慮なく早めに大会スタッフにご相談ください。
５）	
 発表時間は下記になります。
口演時間

質疑時間

全体

一般演題

7分

4分

11 分

奨励賞対象演題

10 分

5分

15 分

Session in English, TOPIC

16 分

4分

20 分

Session in English, Others

8分

2分

10 分

合同シンポ、コース III、公開シンポ

オーガナイザーの指示による

8

４．奨励賞対象演題の発表と審査
大会初日（5 月 27 日（金））の最初のセッション（9:30~10:30）として行います。演者はポスター掲示（サイズは A0 見当（横 84cm

縦 119cm）と口演の両方の準備をお願いします。どちらも研究所セミナー室で行います。ポスター掲示
は 9:20 までに完了してください。口演時間は発表 10 分、討論 5 分とします。
審査は研究内容だけでなく、発表の技量（資料作成、口演の仕方、ストーリー性、
質問に対する答え方、など）も対象となります。
学会奨励賞選定制度に基づき、日本組織培養学会幹事が受賞者を決定します。受
賞者発表は大会 2 日目の総会で行いますので、発表をされた方は必ず総会にご出席ください。受賞者には賞状ならびに副賞（賞金）が授与されます。
受賞者は

１）会員通信へ「受賞の感想」を寄稿する、２）受賞演題に関する（原著）論文を 1 年以内に本学会機関誌「組織培養研究（Tissue Culture ResearchCommunications）」へ投稿する、などの学会活動へのご協力をよろしくお願いい
たします。
５．総会
大会 2 日目（5 月 28 日（土））8:50~9:30 です。各種報告、審議・決議等の議事を予定しておりますので、会員の皆様のご出席をお願いいたします。また、奨励賞受賞者の発表と表彰を行います。
６．第 3 回培養指導士講習会・細胞培養基盤技術講習会コース III トライアル
大会 2 日目（5 月 28 日（土））9:35~10:35 です。参加者はどなたでも聴講できます。細胞培養実験一般に共通する内容ですので、是非、ご参加ください。
７．登録と参加費の支払い
当日、会場受付にてお願いします。
一般会員（日本動物実験代替法学会員を含む）

6,000 円

学生会員（

3,000 円

同

上

）

非会員

12,000 円（抄録集込）

非会員学生

6,000 円（同上）

・名誉会員は無料です（あらかじめ参加証を送付いたします）。
・大会２日目の市民公開シンポジウム「病気に立ち向かう」の参加は無料です。
８．懇親会
大会初日（5 月 27 日（金））18:10 から国立成育医療研究センター12 階レス
トランつばさにて行います。会費は 2,000 円（一律）です。奮ってご参加ください。
9９．企業展示について
大会初日（5 月 27 日（金））に研究所セミナー室で行います。是非ご来場ください。
１０．幹事会
大会前日（5 月 26 日（木））に国立成育医療研究センター会議室 11（講堂のとなり）で開催いたします。詳細は幹事役員にメールにてお知らせします。

10

日

程

表

5 月 27 日（金）5 月 28 日（土）
8:30

9:00

受付開始

8:50

9:25

開会挨拶

9:30

9:30
10:30
10:45

9:35

奨励賞対象演題

10:35
10:40

一般演題
II 方法論12:00

III 研究基盤
昼休総会
第 3 回培養指導士講習会
コース III トライアル
Session in English ʻCell
culture stress models in

I 細胞の樹立と解析

13:08

受付開始

aging and cancerʼ
昼

み

13:00

休

み

一般演題
IV 正常細胞とがん化

14:00

日本組織培養学会̶日本動物実験代替法学会

14:28

合同シ

ンポジウム「ES、iPS 細胞

14:45

用スキーム」
17:00

18:00
18:10

市民公開シンポジウム「病気に立ち向かうー市民との培養技術と代替法への利

17:10

V 角膜

16:45
16:45

特別講演 「再生医療を見すえたヒト ES 細胞の樹立」
懇親会

11

研究者の理解のもとに」
閉会の辞

＜謝辞＞

（敬称略、五十音順）

大会実行委員
浅香 勲、江藤哉子、鈴木崇彦、間中研一、山本直樹

プログラム作成
浅香 勲、酒井康行、竹澤俊明（合同シンポジウム）
梅澤明弘、鎌田伸之（奨励賞対象演題、一般演題）
Renu Wadhwa（Session in English）
小門 穂、増井 徹（市民公開シンポジウム）
坂野俊宏、間中研一（要旨集編集）

協賛
株式会社

アビー

株式会社

医学生物学研究所

株式会社

イノメディックス

株式会社

機能性ペプチド研究所

コーニングインターナショナル株式会社
株式会社

細胞科学研究所

シグマ アルドリッチ ジャパン株式会社
住友ベークライト株式会社
株式会社

関内薬局

株式会社

高長

DS ファーマバイオメディカル株式会社
株式会社

トランスパレント

日本ベクトン・ディッキンソン株式会社
ニプロ株式会社
株式会社

メディネット

株式会社

メド城取

株式会社

薬研社

ライフテクノロジーズジャパン株式会社
ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社
市民公開シンポジウム後援
国立成育医療研究センター
12

ポスター作成協力
公益財団法人ドナルド・マクドナルド・ハウス・チャリティーズ・ジャパン
株式会社ホイチョイプロダクションズ
その他協力
竹内久雄

（株式会社ドリーム）事務局
小林美香子、道善公美

13

プログラム日本組織培養学会 第８４回大会
会場：「国立成育医療研究センター講堂・研究所セミナー室」（東京都世田谷区）
総合テーマ：「病気に立ち向かう」
1 日目
9:00

5 月 27 日(金曜日)

受付
会場：研究所 2 階セミナー室（初日午前のみ）

9:25-9:30

開会挨拶
学会長

鈴木 崇彦

(東京大学大学院医学系研究科)

9:30-10:30

奨励賞対象演題
座長
9:30

YIA-1

中村 幸夫 (理化学研究所)
間中 研一 (獨協医科大学)

Molecular biology of the role of CARF in aging and cancer: basic andinterventional approaches -- P.39
1

筑波大学 生命環境科学研究科, 2 独立行政法人 産業技術総合研究所○シング・ルマニィ 1,2, カウル・スニル 2, ワダワ・レヌー2
9:45

YIA-2

RHAMM の細胞増殖および分化への関与の検討 -- P.40
1

広島大学大学院 医歯薬学総合研究科 展開医科学専攻 顎口腔頚部医科学講座（口腔外科学教室）, 2（独）日本学術振興会 特別研究員 DC1○波多野寛子 1,2, 重石英生 1, 鎌田伸之 1
10:00

YIA-3

細胞非接着性表面処理による 3 次元培養基板を用いたヒト初代肝細胞機能評価 -- P.42
株式会社 トランスパレント○高橋由里子, 城村友子, 小関恵美子, 池谷武志

10:15

YIA-4

ヒト遺伝病に由来する肝細胞コレクション構築と疾患モデルの創成 ‒- P.44
国立成育医療研究センター研究所○牧野初音, 梅澤明弘

10:30

生殖・細胞医療研究部

休憩（15 分）
会場：研究所 2 階セミナー室

10:45-11:29

一般演題(I)「細胞の樹立と解析」
座長

三井 洋司
梅澤 明弘

14

(徳島文理大学)(国立成育医療研究センター)

10:45OG-1-1ヒト赤血球系前駆細胞株の樹立 ‒- P.47
理化学研究所 バイオリソースセンター○中村幸夫, 栗田 良

10:56

OG-1-2細胞材料開発室

ヒト iPS テラトーマに由来する新規細胞株の樹立と特性の解析 -- P.48
徳島文理大学 香川薬学部 生理化学講座○三井洋司, 鎌田瑞菜, 熊崎 努, 東條 恵, 松尾 平, 高橋知子

11:07

OG-1-3ヒト胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、間葉系幹細胞の細胞特性比較解析 -- P.49
1

独立行政法人 医薬基盤研究所 難病・疾患資源研究部 培養資源研究室,
独立行政法人 国立病院機構 大阪医療センター 臨床研究センター,
3
独立行政法人 医薬基盤研究所 創薬基盤研究部 幹細胞制御プロジェクト,
4
独立行政法人 医薬基盤研究所 創薬基盤研究部 バイオインフォマティクスプロジェクト,
5
大阪大学大学院 薬学研究科 分子生物学分野○平田みつひ 1, 林田みどり 1, 館山大揮 1, 小澤 裕 1, 松村紘子 1, 家村将士 1,
AHMAD SHANDAR4, 正札智子 2, 金村米博 2, 小原有弘 1, 川端健二 3, 水口賢司 4,
水口裕之 3,5, 古江̶楠田美保 1
2

11:18

OG-1-4

胆道閉鎖症肝における肝幹/プロジェニター細胞の分離と培養の試み -- P.50
1

財団法人 河野臨床医学研究所 肝細胞学研究室,
国立成育医療研究センター 移植外科,
3
国立成育医療研究センター 病理部,
4
国立成育医療研究センター 臨床研究センター 先端医療開発室○山崎泰助 1,4, 笠原群生 2, 福田晃也 2, 阪本靖介 2, 重田孝信 2, 中澤温子 3, 絵野沢 伸 4,
常盤孝義 1
2

会場：研究所 2 階セミナー室
11:29-12:35

一般演題(II)「方法論」
座長
11:29

OG-2-1

中村 和昭 (国立成育医療研究センター)
三浦 巧 (国立成育医療研究センター)

iPS 細胞の大量組織培養・分化におけるマイクロカプセル化 -- P.53
東京大学 生産技術研究所○堀口一樹, チョードリ・モハメドマハフズ, 酒井康行

11:40

OG-2-2酸素透過膜を用いる肝細胞培養法 -- P.54
東京大学生産技術研究所○酒井康行, エベヌー・ファニー, アモン・モーガン, 藤井輝夫

11:51

OG-2-3マイクロ空間培養系を用いたヒト肝毒性試験法の検討 -- P.55
1

国立成育医療研究センター 研究所 薬剤治療研究部,
株式会社クラレ つくば研究センター○中村和昭 1, 江尻洋子 2, 田上昭人 1
2

15

12:02OG-2-4

培養空間の有効利用を目指したマルチフラスコの開発 -- P.56
1

日本ベクトン・ディッキンソン株式会社 バイオサイエンス,
Becton, Dickinson and Company, BioSciences○江藤哉子 1, キアン・スーザン 2, アブラハム・エリザベス 2
2

12:13

OG-2-5CAS 機能により凍結した細胞組織の観察 -- P.57
1

株式会社アビー, 2 千葉大学大学院工学研究科メディカル機器工学講座○岩坂正和 2, 栗田 学 1, 大和田哲男 1
12:24

OG-2-6

関節軟骨全層欠損に対する三次元軟骨様組織同種移植後の細胞運命：量子ドットを用いた細胞標識による家兎モデルでの検討 -- P.58
1

茨城西南医療センター 整形外科, 2 筑波大学 臨床医学系整形外科, 3 産業技術総合研究所○吉岡友和 1,2, 菅谷 久 2, 三島 初 2, カウル・ゼニア 3, 植村寿公 3, カウル・スニル 3,
ワダワ・レヌ‐3
会場：研究所 2 階セミナー室
12:35-13:08

一般演題(III)「研究基盤」
座長
12:35

OG-3-1

吉田 東歩 (ヒューマンサイエンス研究資源バンク)
星 宏良 (機能性ペプチド研究所)

手術摘出組織の研究利用 -- P.61
財団法人 ヒューマンサイエンス振興財団 ヒューマンサイエンス研究資源バンク
ヒト組織バンク○大西‐笠松 礼, 小阪拓男, 佐藤元信, 吉田東歩

12:46

OG-3-2

医薬基盤研究所の難病研究資源バンクについて -- P.62
1

独立行政法人医薬基盤研究所難病資源研究室,
独立行政法人医薬基盤研究所政策・倫理研究室○亀岡洋祐 1, 坂手龍一 1, 高橋一朗 1, 田沼玲子 1, 平田 誠 1, 竹村 清 2, 松下京子 2,
坂口由希 2, 東濃篤徳 1, 伊藤絵望子 1, 岩江荘介 2, 増井 徹 1,2
2

12:57

OG-3-3ヒトゲノム・遺伝子解析倫理指針の改訂に臨んで：課題について -- P.63
独立行政法人医薬基盤研究所○増井 徹
昼食（52 分）

13:08

会場：

センター講堂

14:00-17:00

日本組織培養学会・日本動物実験代替法学会

合同シンポジウム「ES・iPS 細胞の培養技術と代替法への利用スキーム」
オーガナイザー・座長

竹澤 俊明
浅香 勲

14:00

(独立行政法人農業生物資源研究所)(京都大学)

本シンポジウムのねらい1614:05SP-1

安全性評価における in vitro 試験法を確立するために何をなすべきか -- P.67
国立医薬品食品衛生研究所 安全性生物試験研究センター 薬理部 新規試験法評価室
○小島 肇

14:30

SP-2

化学物質の経皮吸収性および皮膚中濃度評価を目的とした 3 次元培養ヒト皮膚モデルの有用性と問題点 -- P.68
城西大学 薬学部
○杉林堅次

14:55

SP-3

ビトリゲルチャンバーあるいは組織切片を用いて、ヒトに於ける化学物質の ADMET を外挿する培養技術の開発状況 -- P.70
独立行政法人
○竹澤俊明

15:20

SP-4

農業生物資源研究所

ES/iPS 細胞から肝への分化誘導 -- P.72
1

熊本大学 発生医学研究所, 2 国立法人環境研究所 環境健康研究領域○粂 昭苑 1, 白木伸明 1, 山添大士 1, 曾 勤 2, 持立克身 2
15:45

SP-5

疾患特異的 iPS 細胞の樹立とその応用 -- P.73
京都大学 iPS 細胞研究所
○浅香 勲

16:10

SP-6

規制科学部門医薬品開発におけるヒト多能性幹細胞利用の展望 -- P.74
日本製薬工業協会 医薬品評価委員会○神野敬將, 新井裕幸, 中村和市

16:35

SP-7

基礎研究部会

iPS 細胞関連特許の実用化と iPS 細胞提供 -- P.76
iPS アカデミアジャパン株式会社
○白橋光臣

16:５0

まとめ

17:00

休憩（10 分）会場：

センター講堂

17:10-18:00

特別講演

再生医療を見すえたヒト ES 細胞の樹立 -- P.79

国立成育医療研究センター研究所

生殖・細胞医療研究部

阿久津英憲
座長

18:10

懇親会

鈴木崇彦

(日本組織培養学会会長、東京大学大学院医学系研究科)

会場：国立成育医療研究センター12 階レストランつばさ

17

2 日目

5 月 28 日

会場：
8:30

(土曜日)

センター講堂(終日)受付

8:50-9:30

総会（奨励賞受賞者発表が行われますので、演者はご待機をお願い致します）
9:35-10:35

第 3 回培養指導士講習会・細胞培養基盤技術講習会コース III トライアル
教育研究システム委員会

WS-1細胞の検索方法とデータシートの読み方について -- P.83
DS ファーマバイオメディカル株式会社
○上田忠佳

10:00

WS-2

WS-3

研究開発本部

研究第二グループ

株化細胞の増殖曲線の作成方法 -- P.84
京都大学 iPS 細胞研究所
○浅香 勲

10:20

(独立行政法人医薬基盤研究所)

本セッションのねらい

9:35
9:40

古江-楠田 美保

規制科学部門研究の進め方と細胞を扱うときの倫理問題 -- P.85
国立成育医療研究センター○絵野沢 伸10:40-12:00

Session in English “Cell culture stress models in aging and cancer”
Chairpersons:Dr. ISHII NAOAKI(Tokai University School of Medicine)Dr. WADHA RENU
(National Institute of Advanced Industrial Science & Technology)
10:40

OE-1

TOPIC- The role of oxidative stress from mitochondria on aging and are-related diseases-- P.89
Tokai University School of Medicine, Basic Medical Science and Molecular Medicine,
Department of Molecular Life Science
NAOAKI ISHII, TAKAMASA ISHII, MASAKI MIYAZAWA

11:00

OE-2

TOPIC- Biology of stress protein MORTALIN: focus on cancer and neurodegeneration -P.90
National Institute of Advanced Industrial Science & Technology (AIST),RENU WADHWA, SUNIL KAUL18

11:20

11:40

OE-3

OE-4

TOPIC- Molecular insights into Ashwagandha leaf-derived factors for stress and aging -P.91
National Institute of Advanced Industrial Science & Technology (AIST)SUNIL KAUL, DIDIK PRIYANDOKO, NAVJOT SHAH, RENU WADHWA
hnRNP-K promotes tumor metastasis by induction of genes involved in extracellularmatrix, cell movement and angiogenesis -- P.92
1National Institute of Advanced Industrial Science & Technology (AIST),
2Graduate School of Life & Environmental Sciences, University of Tsukuba

RAN GAO1,2, TETSURO ISHII2, SUNIL KAUL1, RENU WADHWA1
11:50

OE-5

PINK1 knockdown increases the apoptosis induced by adenovirus-mediated REIC/Dkk-3
overexpression on bladder cancer cells -- P.93
Dept. Cell Biol., Okayama Univ. Grad. Sch. Med., Dent. & Pharm.
YU JIN, HITOSHI MURATA, KEN KATAOKA, MASAKIYO SAKAGUCHI,
NAM-HO HUH
昼食（60 分）

12:00
13:00-13:44

一般演題(IV)「正常細胞とがん」
座長

片岡 健
山崎 泰助

13:00

OG-4-1(岡山大学大学院)(財団法人河野臨床医学研究所)

Ashwagandha leaf-derived withanone protects normal human cells against the
toxicity of methoxyacetic acid, a major industrial metabolite -- P.97
1

独立行政法人 産業技術総合研究所, 2 筑波大学 生命環境科学研究科○プリヤンドコ・ディディック 1,2, 石井哲郎 2, カウル・スニル 1, ワダワ・レヌー1
13:11

OG-4-2

Alcoholic extract of Ashwagandha leaf and its component withanone induce
differentiation in brain derived cancer cells -- P.98
1

独立行政法人 産業技術総合研究所, 2 筑波大学 生命環境科学研究科○シャハ・ナブジョット 1,2, 石井哲郎 2, ワダワ・レヌー1, カウル・スニル 1
13:22

OG-4-3

REIC/Dkk-3 の扁平上皮における発現とその制御因子の探索 -- P.99
岡山大学大学院 医歯薬学総合研究科 細胞生物学分野○片岡 健, 阪口政清, 杜 剛, 前原奈都美, 村田 等, 許 南浩

13:33

OG-4-4

悪性中皮腫細胞の増殖における CTGF (connective tissue growth factor)の役割について -- P.100
1

愛知県がんセンター研究所 分子腫瘍学部, 2 国立医薬品食品衛生研究所
安全性生物試験研究センター 病理部第三室, 3 愛知県がんセンター研究所 腫瘍病理学部,4
愛知県がんセンター中央病院 臨床検査部, 5 兵庫医科大学 病理学講座○藤井万紀子 1, 豊田武士 2, 中西速夫 3, 矢田部 恭 4, 伊藤成美 1, 近藤栄作 3, 松平康枝 1,
辻村 亨 5, 関戸好孝 1
13:44-14:28

一般演題(V)「角膜」
座長

横尾 誠一 (東京大学)
山本 直樹 (藤田保健衛生大学)

19

13:44OG-5-1コラーゲンビトリゲル薄膜チャンバーを利用した新しい培養技術とその眼刺激性試験への応用 -- P.103
1

独立行政法人 農業生物資源研究所, 2 関東化学株式会社○岡本 愛 1, 山口宏之 1,2, 竹澤俊明 1
13:55

OG-5-2ヒト角膜組織より分離した角膜上皮細胞への不死化遺伝子の導入と評価 -- P.104
1

藤田保健衛生大学 共同利用研究施設 分子生物学・組織化学研究室,
藤田保健衛生大学 医学部 眼科学教室, 3 国立医薬品食品衛生研究所 薬理部
新規試験法評価室, 4 ホーユー株式会社 総合研究所 基盤技術研究室○山本直樹 1, 平野耕治 2, 小島 肇 3, 住友万里子 1, 山下宏美 1, 中村政志 4, 原 和宏 4,
谷川篤宏 2, 谷口孝喜 1, 堀口正之 2
2

14:06

OG-5-3ヒト培養角膜上皮シートを用いた塩化ベンザルコニウムと抗緑内障薬の点眼毒性の評価 -P.105
1

東大病院眼科, 2JR 東京総合病院, 3 宮田眼科病院, 4 関東中央病院○中川 卓 1, 横尾誠一 1, 臼井智彦 1, 大道幸子 1,2, 森 洋斉 3, 宮田和典 3, 相原 一 1,
天野史郎 1, 新家 眞 1,4
14:17

OG-5-4角膜上皮幹細胞と角膜上皮シートのムチン分泌 -- P.106
東京大学 医学部付属病院 眼科学教室○横尾誠一, 山上 聡, 臼井智彦, 天野史郎
休憩（17 分）

14:28
14:45-16:50

公開シンポジウム「病気に立ち向かう - 市民と研究者の理解のもとに -」

14:45
14:50

後援

国立成育医療研究センター

司会

増井 徹 (独立行政法人医薬基盤研究所)
小門 穂 (大阪教育大学)

本シンポジウムのねらい -- P.109
OS-1

理解して、協力していただくこと -- P.112
国立成育医療研究センター研究所所長
○名取道也

15:00

OS-2

病気に立ち向かうヒトの分身‐組織・細胞‐と３５年のつきあいから -- P.114
1横浜バイオリサーチアンドサプライ取締役研究部長, 2 日本組織培養学会名誉会員○松村外志張 1,2
15:30

OS-3

医薬品の開発における患者・家族と医師・研究者の協力 -- P.116
国立成育医療研究センター臨床研究センター○藤本純一郎

15:50

センター長

総合討論

16:50

閉会挨拶
大会長

絵野沢 伸

(国立成育医療研究センター)

20

The Japanese Tissue Culture Association
84th Annual Meeting“Work on and Overcome Diseases”(Setagaya, Tokyo)

27th, 28th, May, 2011
National Center for Child Health and Development
2-10-1 Ookura, Setagaya-ku, Tokyo 157-8535 Japan

Pres: Shin Enosawa
National Center for Child Health and Development
Clinical Research Center, Division for Advanced Medical Sciences
Tokyo Medical University, Third Department of Surgery

TEL: 03-5494-8163

FAX: 03-3417-2864

e-mail: senosawa@nch.go.jp

21

Greetings
When appointed to set up 84th annual meeting by Scoiety President, Dr.
Takahiko Suzuki, I was deeply honored and a little embarassed whether I could
manage the meeting. However, as things are going, I realized the Japanese
Tissue Culture Society (JTCA) has firm hard- and softwares to support theholding of annual meeting. On publishing the Book of Abstracts, first of all, I
would like to express my deepest gratitude for persons who have devoted to givehands.
The opportunity that I became a member of JTCA was given by Dr. Toshiharu
Matsumura (current Honorary member). At that time, Dr. Matsumura wasforwarding the establishment of public human tissue bank and I joined his
project. I learned the significance of research use of human materials and ethicalconsiderations from him. The experience influenced my later research life. The
present theme of the meeting, ‘Work on and Overcome Diseases’ is a message
derived from our human tissue bank work.
I hear that early JTCA members exchanged enthusiastically the information
about culture techniques to establish cell lines from surgically resected tumor
tissues. This original spirit is well taken over at present, shown as activities
such as Education and Research Committee, etc. Also each annual meeting
values the session of original papers. This time I do my best to keep the tradition.
I wish you all have an invaluable time at the meeting.
Best regards,
Shin Enosawa
Meeting president

22

Guidance for participants
1. Place
Lecture Hall in Hospital, Seminar Hall in Research InstituteNational Center for Child Health and Development
2-10-1 Ookura, Setagaya-ku, Tokyo 157-8535 Japan
	
  	
  	
  http://www.ncchd.go.jp/
	
  	
  	
  http://www.ncchd.go.jp/access/index.html (Access)<Please note following items>・	 Please be quiet in Hospital Lobby, Elevator, etc, where patients andfamilies are using.
・	 All areas of the Center, including the garden and pavements aresmoke-free. There is no smoking room inside the Center. Please use
smoking rooms in the fast food shops or restraunts nearby.
・	
 An annual public event is being held from 26th to 29th of May in Scienceand Research Lab of NHK, one block apart from the Center. Because thevisitors use the same bus services from train stations, please have enoughtime to come.
・	
 No discount of parking fee. Under 30min = free, from 31min to 60min =¥600, additional 30min = ¥300

Approx. 15min by Express !"#$%&'&!(#%)*+'&($,+(Odakyu Line
-&.
/0,

Bus
30m
Low No. of services

N

Roughly it takes 40-50minfrom Shinjuku, including wait
time

-&.
20780,9:)59;)<9)=99.(>?#@(.

3&4+')4+,+*+5+

-&.9407C0,9;)4(94>+D@9%+,96)*+

!"#1&2+A)'2&9B($7($74)."#9:#$(Supplementary Guidance) May walk from Soshigaya-Ookura station (local only) that is
one stop nearer than Seijogakuenmae from Shinjuku. It takes approx.12min for people
who know geography well. Prepare a precise map when you try to walk.

23)*&+'*,-."/.
!"#$%&'(!"#$%&'(0.2* #-'+
#3 ,1
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for Seijogakuenmae

&
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7'.

'6'

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Bus stopfor Yoga, Shibuya

2. Schedule
27th, May 2011
At Seminar Hall in Research Institute
9:00Registration
9:25
Opening remark by Dr.Takahiko Suzuki, Society President
9:30-10:30 Young investigator’s awards nominees
10:30-10:45
Break
10:45-11:29 Original papers (I) “Establishment and characterization of cells”
11:29-12:35 Original papers (II) “Methodology”
12:35-13:08 Original papers (III) “Research infrastructure”
13:08-14:00
Break
At Lecture Hall in Hospital
14:00-17:00 Joint Symposium of Japan Tissue Culture Association andJapan Society for Alternative to Animal Experiments“Culture technology of ES and iPS cells and prospectus foralternative to animal experiments”
17:00-17:10
Break
17:10-18:00 Plenary Lecture
Dr.Hidenori Akutsu“Establishment of human embryonic stem cell with an aim ofclinical research”
18:10Reception at Restaurant TSUBASA, 12th floor in Hospital24

28th, May 2011
At Lecture Hall in Hospital
8:30Registration
8:50-9:30
General assembly meeting
9:35-10:35 3rd Session of Training for Tissue Culture Instructor Course III(Trial)10:40-12:00 Session in English “Cell culture stress models in aging andcancer”
12:00-13:00
Break
13:00-13:44 Original papers (IV) “Cell intactness and transformation”
13:44-14:28 Original papers (V) “Cornea”
14:28-14:45
Break
14:45-16:45 Public Symposium“Work on and Overcome Diseases –based on the Collaboration
between Patients/Families and Researchers/Doctors”
Supported by National Center for Child Health andDevelopment
16:45
Closing remark
3. To speakers
This time, the head office does not receive submission of presentation files.
Please note that speakers are responsible for own presentation. Of course,organizer does best to prepare presentation equipment;１）	
 There are PCs for projection and checking (Windows and Macintosh).
The PCs are installed PowerPoint 2007 (Windows) and 2008 (Mac).
２）	
 Files are acceptable only by USB flash memory.
３）	
 May use personal PC. Please note that the time to connect is included in
the presentation time.
４）	
 When you have any trouble, feel free to consult staffs.
５）	
 Presentation time;	 Presentation	
  Discussion	 Total	
 Original	 papers	
 

7	
 min	
 

4	
 min	
 

11	
 min	
 

YIA	
 

10	
 min	
 

5	
 min	
 

15	
 min	
 

Session	 in	
 English,	
 TOPIC	
 

16	
 min	
 

4	
 min	
 

20	
 min	
 

Session	 in	
 English,	 Others	
 

8	
 min	
 

2	
 min	
 

10	
 min	
 

Joint	
 &	
 Public	
 Symp,	
 Course	 III	 Indicated	
 by	 organizers	 4. To nominees for Young Investigator’s Awards
The session is held from 9:30 to 10:30, 27th (Friday) of May, at Seminar Hallin Research Institute. The speakers are required both to make oralpresentation and to display poster presentation (size; approx. A0 (W84cm	
  x	
 
L119cm). Posters are put up on a given place by 9:20. Time for presentation25

and discussion are 10 min and 5 min, respectively.
Nominees are reviewed on not only the quality of research but alsopresentation skills such as construction of story, way of data presentation,adequateness of reply, etc.
According to YIA Institution of the Japanese Tissue Culture Association,board members determine awardees. Awardees are announced at General
assembly meeting held on Saturday, 28th of May (8:50am-9:30am). All
nominees are required to attend the meeting. Awardees receive diploma andprize.
Awardees are obliged 1) to write an essay to member correspondence, 2)
submit an article about the work to Tissue Culture Research Communications.

5. General assembly meeting
Being held from 8:50 to 9:30 on Saturday, 28th of May. Reports,
deliberations, and resolutions are scheduled. Also, YIA awardees areannounced and commended.

6. Session of Training for Tissue Culture Instructor (Trial)
Being held from 9:35 to 10:35 on Saturday, 28th of May. The session is
open for all participants. Since the session deals general contents about tissue
culture, please join the session.

7. FeesPlease pay at the entrance of the Hall.
Member
¥ 6,000(including Japanese Society for Alternative to Animal Experiments)
Student member¥ 3,000(including as above)
Non member¥ 12,000 (with an Abstract Book)
Non member, student¥ 6,000 ( as above )Honorary member Free (Participation Card sent in advance)
Public symposium Free

8. Reception
Being held from 18:10 on Friday, 27th of May at Restaurant TSUBASA(12th Floor in Hospital). Fee; ¥ 2,000

9. Booth
At Seminar hall in Research Institute on Friday, 27th of May.

26

10. Board member meeting
Being held on Thursday, 26th of May at Meeting Room 11 (The next room to
Lecture Hall in Hospital). Details are mailed to the members.

27

Time Table
27th, Friday, May 2011

9:009:25
9:30
10:30
10:45

13:08

28th, Saturday, May 2011

Registration
Opening remark
Young investigator’s awards
nominees
Original papers
I Establishment and characterization of cells
II Methodology
III Research infrastructureBreak

8:308:50
9:30
9:35
10:35
10:40
12:00
13:00

14:00
Joint
SymposiumofJapanese Tissue Culture
Association
and
Japan
Society for Alternative toAnimal Experiments“Culture technology of ES
and iPS cells and prospectus
for alternative to animal
experiments”
17:00
17:10
18:00
18:10-Plenary Lecture“Establishment of humanembryonic stem cell with anaim of clinical research”
Reception

28

14:28
14:45

16:45
16:45

Registration
General Assembly meeting
3rd Session of Training for
Tissue Culture Instructor(Trial)Session in English ‘Cell
culture stress models in
aging and cancer’
BreakOriginal papers
IV Cell intactnesstransformation
V Cornea

andPublic Symposium“Work on and Overcome
Diseases – Based on the
Collaboration
betweenPatients/Families
andResearchers/Doctors”
Closing remark

<Acknowledgments>(Japanese alphabetical order)

Planning Committee
Isao Asaka, Kanako Eto, Takahiko Suzuki, Kenichi Manaka, Naoki Yamamoto
Program planning
Isao Asaka, Yasuyuki Sakai, Toshiaki Takezawa (Joint Symposium)
Akihiro Umezawa, Nobuyuki Kamata (YIA, Original papers)
Renu Wadhwa (Session in English)
Minori Kokado, Tohru Masui (Public symposium)
Toshihiro Sakano, Kenichi Manaka (Edit of Abstract Book)
Supporting companies
ABI CO., LTD.
MEDICAL ＆ BIOLOGICAL LABORATORIES CO., LTD.
INNOMEDICS Medical Instruments Inc.
Research Institute for the Functional Peptides
Corning International K.K. Life Sciences Division
Cell Science & Technology Institute, Inc.
Sigma Aldrich Japan K.K.
SUMITOMO BAKELITE CO., LTD.
Sekiuchi Pharmacy, Inc.
TAKACHO CO., LTD.
DS Pharma Biomedical Co., Ltd.
Transparent Inc.
Nippon Becton Dickinson Company, Ltd.
NIPRO CORPORATIONMEDINET Co., Ltd.
MED SHIROTORI CO., LTDYAKUKENSHA CO., LTD.
Life Technologies Japan Ltd.
Roche Diagnostics K.K.
Support for public symposium
National Center for Child Health and Development
Contribution for poster
Ronald McDonald House Charities Japan
HOICHOI PRODUCTIONS INC
Head office
Mikako Kobayashi, Masaharu Dozen

29

PROGRAM
YIA-1

Molecular biology of the role of CARF in aging and cancer: basic andinterventional approaches:
RUMANI SINGH1,2, SUNIL KAUL2, RENU WADHWA2
1Graduate

School of Life & Environmental Sciences, University ofTsukuba, 2National Institute of Advanced Industrial Science &Technology (AIST)
YIA-2

RHAMM may control cell proliferation and differentiation.:
HIROKO HATANO1,2, HIDEO SHIGEISHI1, NOBUYUKI KAMATA1
1Departmentof Oral and Maxillofacial Surgery, Division ofCervico-Gnathostomatology, Programs for Applied Biomedicine,
Graduate School of Biomedical Sciences, Hiroshima University,
2Research Fellow of the Japan Society for the Promotion of Science
YIA-3

Functional Evaluation of 3D-culture human hepatocytes on a novel
multi-well plate microfabricated with highly hydrophilic polymer:
YURIKO TAKAHASHI, TOMOKO JOMURA, EMIKO OZEKI,TAKESHI
IKEYA
Transparent Inc.

YIA-4

Establishment of disease models of human genetic disorder using
hepatocytes isolated from surgically resected samples.:
HATSUNE MAKINO, AKIHIRO UMEZAWA
Department of Reproductive Biology, National Research Institute forChild Health and Development

OG-1-1

Establishment of immortalized human erythroid progenitor cell lines:
YUKIO NAKAMURA, RYO KURITA
Cell Engineering Division, BioResource Center, RIKEN

OG-1-2

Establishment and characterization of transformed cell lines fromhuman iPS teratoma:
YOUJI MITSUI, MIZUNA KAMADA, TUTOMU KUMAZAKI,MEGUMITOUJOU, TAIRA MATSUO, TOMOKO TAKAHASHI
Department of Physiological Chemistry, Faculty of Parmaceutical
Sciences at Kagawa campus, Tokusima Bunri University30

OG-1-3Comparative analysis of characteristics among human iPS, ES and MSC
Cell lines:
MITSUHI HIRATA1, MIDORI HAYASHIDA1, DAIKI TATEYAMA1,YUTAKA OZAWA1, HIROKO MATSUMURA1, MASASHI IEMURA1,
SHANDAR
AHMAD4,TOMOKOSHOFUDA2,YONEHIRO
2
1
KANEMURA , ARIHIRO KOHARA , HIROYUKI MIZUGUCHI3,5,
MIHO FURUE K1
1JCRB Cell Bank, Laboratory of Cell Cultures, Department of Disease

Bioresources National Institute of Biomedical Innovation, 2Institute forClinical Research, National Hospital Organization Osaka National
Hospital, 3Laboratory of Stem Cell Regulation, National Institute of
Biomedical Innovation, 4Laboratory of Bioinfomatics, National Instituteof Biomedical Innovation, 5Department of Biochemistry and Molecular
Biology, Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Osaka University
OG-1-4Isolation and culture of hepatic progenitor cells from liver cirrhosis
secondary to biliary atresia:
TAISUKE YAMAZAKI1,4, MUREO KASAHARA2, AKINARI FUKUDA2,SEISUKESAKAMOTO2,
TAKANOBU
SHIGETA2,
ATSUKO
3
4
NAKAZAWA , SHIN ENOSAWA , TAKAYOSHI TOKIWA1
1Department of Liver Cell Biology, Kohno Clinical Medicine ResearchInstitute, 2Division of Surgery, National Center for Child Health andDevelopment, 3Department of Clinical Pathology, National Center forChild Health and Development, 4Division for Advanced Medical Science,
National Center for Child Health and Development
OG-2-1

Feasibility of hydrogel-based microencapsulation for propagation anddifferentiation of induced pluripotent stem cells in scalable suspension
culture:IKKI
HORIGUCHI,YASUYUKI SAKAI

MOHAMMADMAHFUZCHOWDHURY,

Institute of Industrial Science,The University of Tokyo
OG-2-2

Culture of liver-derived cells using oxygen-permeable membranes:
YASUYUKI SAKAI, FANNY EVENOU, MORGAN HAMON,TERUO
FUJIIInstitute of Industrial Science, Univeristy of Tokyo

OG-2-3

Evaluation of drug toxicity with human hepatocytes cultured in a
micro-space cell culture system:KAZUAKI NAKAMURA1, YOKO EJIRI2, AKITO TANOUE1
1Departmentof Pharmacology, National Research Institute for Child
Health and Development, 2Tsukuba Research Center, Kuraray Co., Ltd.

31

OG-2-4

Development of the Multi-Flask for an effective use of the culture space.:
KANAKO ETO1, SUSAN QIAN2, ELIZABETH ABRAHAM2
1NipponBecton Dickinson Ltd., BioSciences, 2Becton, Dickinson andCompany, BioSciencesOG-2-5Characteristics of tissue cryopreserved by cell alive system, CAS :MASAKAZU IWASAKA2, MANABU KURITA1, NORIO OOWADA1
1ABI Inc., 2Department of Biomedical Engineering, Graduate School ofTechnology, University of Chiba
OG-2-6

Fate of bone marrow mesenchymal stem cells following the allogeneictransplantation of cartilaginous aggregates into osteochondral defects ofrabbits:
TOMOKAZU YOSHIOKA1,2, HISASHI SUGAYA2, HAJIME MISHIMA2,ZEENIA KAUL3, TOSHIMASA UEMURA3, SUNIL KAUL3, RENU
WADHWA3
1Departmentof Orthopaedics Surgery, Ibaraki Southwest Medical
Center, 2Department of Orthopaedics Surgery, University of Tsukuba,
3National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
OG-3-1

Research use of remnant human tissues obtained from surgeries:
AYA ONISHI-KASAMATSU, TAKUO KOSAKA, MOTONOBU SATOH,TOUHO YOSHIDA
Japan Health Sciences Foundation, Health Science Research Resources
Bank, Human Tissue Bank

OG-3-2

Activities of intractable disease bioresource bank in National Institute of
Biomedical Innovation:
YOUSUKE KAMEOKA1, RYUICHI SAKATE1, ICHIRO TAKAHASHI1,
REIKO TANUMA1, MAKOTO HIRATA1, KIYOSHI TAKEMURA2,KYOKO
MATSUSHITA2,YUKI
SAKAGUCHI2,
ATSUNORIHIGASHINO1, EMIKO ITO1
1Laboratoryof Rare Disease Biospecimen, National Institute of
Biomedical Innovation, 2Office of Policy and Ethics Research, National
Institute of Biomedical Innovation
OG-3-3

About the revision of Ethics Guideline for Human Genome/GeneAnalysis Research.:
TOHRU MASUINational Institute of Biomedical Innovation

SP-1

What should be done to establish a in vitro testing for safety evaluation?:
HAJIME KOJIMANational Institute of Health Sciences

32

SP-2

Usefulness and Problem in Three-dimensional cultured human skinmodel to evaluate skin permeation and concentration of chemicalcompounds:
KENJI SUGIBAYASHI
Faculty of Pharmaceutical Sciences, Josai University

SP-3

Development of culture technologies utilizing a vitrigel chamber and a
TOSHI (tissue/organ sections for histopathology)-substratum and theiradvantages for extrapolating ADMET of chemicals in human:
TOSHIAKI TAKEZAWA
National Institute of Agrobiological Sciences

SP-4

Differentiation of ES/iPS cells into the hepatic lineage:
SHOEN KUME1, NOBUAKI SHIRAKI1, TAIJI YAMAZOE1, QIN
ZENG2, KATSUMI MOCHITATE2
1Institute of Molecular Embryology and Genetics, Kumamoto University,
2Environmental

Health Sciences Division, National Institute forEnvironmental Studies
SP-5

Establishment of Disease-specific iPS Cells and The Applications:
ISAO ASAKA
Dept. Regulatory Science, Center for iPS Cell Research and Application,
Kyoto University

SP-6

Expectation to utilization of human pluripotent stem cells for drug
discovery and development:
NORIMASA JINNO, HIROYUKI ARAI, KAZUICHI NAKAMURA
Non-Clinical Evaluation Subcommittee, Drug Evaluation Committee,
Japan Pharmaceutical Manufacturers Association

SP-7

Licensing activity under iPS cells patents and distribution of iPS cells:
MITSUOMI SHIRAHASHIiPS Academia Japan, Inc.

SL-1

Establishment of human embryonic stem cell with an aim of clinicalresearch:
HIDENORI AKUTSU
Research Institute, National Center for Child Health and Development

WS-1

A search method of cell lines and usage of the data sheet:
TADAYOSHI UEDADS Pharma Biomedical Co.,Ltd. Research and Development Div.
Research Group II

33

WS-2

Procedure for Growth Curve Analysis of Animal Cell Lines:
ISAO ASAKA
Dept. Regulatory Science, Center for iPS Cell Research and Application,
Kyoto University

WS-3

Designing and Compliance in Research with Mammalian Cell Culture:
SHIN ENOSAWA
National Center for Child Health and Development

OE-1

The role of oxidative stress from mitochondria on aging and are-relateddiseases:
NAOAKI ISHII, TAKAMASA ISHII, MASAKI MIYAZAWA
Tokai University School of Medicine, Basic Medical Science andMolecular Medicine, Department of Molecular Life Science

OE-2

Biology of stressneurodegeneration:

protein

MORTALIN:

focus

on

cancerand

RENU WADHWA, SUNIL KAUL
National Institute of Advanced Industrial Science & Technology (AIST)
OE-3

Molecular insights into Ashwagandha leaf-drived factors for stress andaging:
SUNIL KAUL,WADHWADIDIKPRIYANDOKO,NAVJOT

SHAH,RENU

National Institute of Advanced Industrial Science & Technology (AIST)OE-4

hnRNP-K promotes tumor metastasis by induction of genes involved in
extracellular matrix, cell movement and angiogenesis:
RAN GAO1,2, TETSURO ISHII2, SUNIL KAUL1,RENU WADHWA1
1National Institute of Advanced Industrial Science & Technology (AIST),
2Graduate

Tsukuba
OE-5

School of Life & Environmental Sciences, University of

PINK1
knockdown
increases
theapoptosis
inducedbyadenovirus-mediated REIC/Dkk-3 overexpression on bladder cancer
cells:YU JIN, HITOSHI MURATA,SAKAGUCHI, NAM-HO HUHKENKATAOKA,MASAKIYO

Dept. Cell Biol., Okayama Univ. Grad. Sch. Med., Dent. & Pharm.

34OG-4-1

Ashwagandha leaf-derived Withanone protects normal human cells
against the toxicity of methoxyacetic acid, a major industrial metabolite:
DIDIK PRIYANDOKO1,2, TETSURO ISHII2, SUNIL KAUL1, RENU
WADHWA1
1National Institute of Advanced Industrial Science & Technology (AIST),
2Graduate

Tsukuba
OG-4-2

School of Life & Environmental Sciences, University of

Alcoholic extract of Ashwagandha leaf and its component withanone
induce differentiation in brain derived cancer cells:
NAVJOT SHAH1,2, TETSURO ISHII2, RENU WADHWA1,SUNIL
KAUL1
1National Institute of Advanced Industrial Science & Technology (AIST),
2Graduate

Tsukuba
OG-4-3

School of Life & Environmental Sciences, University ofExpression of REIC/Dkk-3 in squamous epithelia and screening of its
regulating factors:
KEN KATAOKA, MASAKIYO SAKAGUCHI, GANG DU,NATSUMIMAEHARA, HITOSHI MURATA, HUH NAM-HO
Department of Cell Biology, Okayama University Graduate School of
Medicine, Dentistry and Pharmaceutical Sciences

OG-4-4The Role of CTGF in the Growth of Malignant Mesothelioma Cells:
MAKIKO FUJII1, TAKESHI TOYODA2, HAYAO NAKANISHI3,
YASUSHI YATABE4, HIDEMI ITO1, EISAKU KONDO3, YASUEMATSUDAIRA1, TOHRU TUJIMURA5, YOSHITAKA SEKIDO1
1Divisionof Molecular Oncology, Aichi Cancer Center ResearchInstitute, 2Division of Pathology, National Institute of Health Sciences,
3Division of Oncological Pathology, Aichi Cancer Center ResearchInstitute, 4Division of Pathology and Molecular Diagnostics, Aichi
Cancer Center Hospital, 5Department of pathology, Hyogo College ofMedicine
OG-5-1

A novel culture technology utilizing a collagen vitrigel chamber and its
application to eye irritation test:
CHIKA OKAMOTO1,TAKEZAWA1

HIROYUKIYAMAGUCHI1,2,

TOSHIAKI

1National Institute of Agrobiological Sciences, 2Kanto Chemical Co. Inc.

35

OG-5-2

Making immortalized cells by normal human corneal epithelium:
NAOKI YAMAMOTO1, KOJI HIRANO2, HAJIME KOJIMA3, MARIKOSUMITOMO1, HIROMI YAMASHITA1, MASASHI NAKAMURA4,
KAZUHIRO HARA4, ATSUHIRO TANIKAWA2, KOKI TANIGUCHI1,
MASAYUKI HORIGUCHI2
1Laboratoryof Molecular Biology & Histochemistry, Fujita Health
University Joint Research Laboratory, 2Department of Ophthalmology,
Fujita Health University School of Medicine, 3Japanese Center for the
Validation of Alternative Methods (JaCVAM), Division of Pharmacology,
National Institute of Health Sciences, 4Hoyu Co., Ltd.
OG-5-3

In Vitro Studies Of Toxic Damage Of Benzalkonium Chloride andAntiglaucoma Drugs In Stratified Human Cultivated Corneal Epithelial
Sheets:SUGURU NAKAGAWA1, SEIICHI YOKOO1, TOMOHIKO USUI1,SACHIKO OMICHI1,2, YOSAI MORI3, KAZUNORI MIYATA3,
MAKOTO AIHARA1, SHIRO AMANO1, MAKOTO ARAIE1,4
1The

Department of Ophthalmology, University of Tokyo School of
Medicine, 2JR Tokyo General Hospital, 3The Department ofOphthalmology, Miyata Eye Hospital, 4Kanto Central Hospital
OG-5-4The mucin secretion of corneal epithelial stem cell and the corneal
epithelium sheet:
SEIICHI YOKOO, SATORU YAMAGAMI, TOMOHIKO USUI,SIROU
AMANO
Department of Ophthalmology Fuculty of Medicine University Hospital
The Uviversity of Tokyo

OS-1

Medical research based on mutual understanding between patients anddoctors:
MICHIYA NATORI
Research Institute, National Center for Child Health and Development

OS-2

Human tissues and cells as the other selves committed to combat against
diseases: What learned from my thirty five year interaction with them:
TOSHIHARU MATSUMURA1,2
1Yokohama

BioResearch and Supply Inc.,
Japanese Tissue Culture Association
OS-3

2Honorary

member, The

Collaboration between Patients/Families and Researchers/Doctors forthe Development of New Drugs:
JUNICHIRO FUJIMOTO
Clinical Research Center, National Center for Child Health andDevelopment36

日本組織培養学会第８４回大会
奨励賞対象演題 （YIA-1〜4）

5 月 27 日(金)（１日目） 9:30‐10:30
座長 中村 幸夫 理化学研究所
間中 研一 獨協医科大学

37

YIA-1

Molecular biology of the role of CARF in aging and cancer: basic
and interventional approaches
シング	
 ルマニィ 1,2,	
 カウル	
 スニル 2,	
 ワダワ	
 レヌー2	
 	
 (1 筑波大学	  生命環境科学研究科,	
 2 独立行政法人	
  産業技術総合研
究所)	
 
	
 

CARF (Collaborator of ARF) was first cloned as an ARF-interacting protein and shown toregulate the p53-p21WAF1-HDM2 pathway, a central to tumor suppression via senescence andapoptosis. CARF inhibition in cancer cells led to polyploidy and caspase-dependent apoptosis.
In order to determine the mechanism of CARF silencing-induced apoptosis, we examinedvarious cell death and survival pathways including the mitochondrial stress, ATM/ATR,
Ras/MAP kinase and retinoblastoma cascades in cultured CARF-compromised cancer cells.
We found that CARF is a pleiotropic regulator with widespread effects; its suppression affected
all investigated pathways.

Most remarkably, CARF-knockdown elicited DNA damage

response as evidenced by increased levels of phosphorylated ATM and gH2AX, leading to
induction of mitotic arrest and eventual apoptosis. CARF was upregulated during replicative,
oncogenic and stress-induced senescence in cultured cells. We demonstrate the upregulation of
CARF beyond a certain threshold level causes shift of cellular phenotype from growth arrest totransformation and hence may provide a potential molecular bridge between aging and cancer.

39

YIA-2

RHAMM の細胞増殖および分化への関与の検討波多野	
 寛子 1,2,	
 重石	
 英生 1,	
 鎌田	
 伸之 1	
 (1 広島大学大学院	
  医歯薬学総合研究科	
  展開医科学専攻	
  顎口腔頚部医科学講座	
 2（口腔外科学教室）,	
 （独）	  日本学術振興会	
  特別研究員 DC1)	
 	
 骨形成線維腫（セメント質骨形成線維腫）は硬組織の形成を伴い，線維性組織が腫瘍性に増殖する病変であり，歯原性腫瘍の骨関連疾患に分類される. 病理組織学的には，細胞成分に富む線維性結合組織の中に，さまざまな程度に骨組織の形成を認める．また，その組織像が線維性異形性症と類似しているため，臨床的所見や X 線所見を元に診断される場合が多い．骨形成線維腫は歯根膜由来の未分化な細胞から生じると考えられているが，その発症原因は不明な点が多い.
我々は，下顎骨骨形成線維腫疾患部から細胞を分離し，SV-40 T antigen および h-TERT 遺伝子を導入した不死化細胞株を樹立し，その特異的増殖・分化能の検討を行ってきた．
この不死化骨形成線維腫由来細胞株を用いて，正常顎骨骨芽細胞をコントロールとし，cDNA マ
イクロアレイを行い，その発現遺伝子のプロファイリング解析を行ったところ，いくつかの遺伝子が高発現していることを同定したが，中でも，ヒアルロン酸の受容体として機能するタンパク質
RHAMM（receptor for hyaluronan-mediated motility）に着目した．
不死化骨形成線維腫由来細胞株において，RHAMM のノックダウンにより，細胞増殖は抑制され，細胞周期 G2/M 期への進行が抑制された．また，RHAMM は ERK1/2 と相互作用し，ヒアルロン酸添加により誘導される ERK1/2 のリン酸化に必要であることが明らかとなった．RHAMM
はヒアルロン酸存在下で細胞質から核内に移行し，TPX2 と相互作用することによって，AuroraAのリン酸化に関与することが明らかとなった．更に蛍光免疫染色法で，RHAMM は TPX2 と同じ
く，centrosome や mitotic spindle にその局在を認めた．以上のことから，不死化骨形成線維腫由来細胞株において RHAMM は ERK1/2 や TPX2 と相互作用することにより，細胞増殖に重要な役割を担っている可能性が明らかとなった．
今回我々は，細胞の増殖と分化のバランスに着目し，RHAMM が細胞の増殖能を亢進し，一方で分化能を抑制するのではないかと考えた．そこで，各種細胞株に RHAMM を遺伝子導入した細胞株を樹立し，その増殖能と分化能に関する検討を行ったので報告する．
【方法】不死化骨形成線維腫由来細胞株を用いて，正常顎骨骨芽細胞をコントロールとし，cDNA
マイクロアレイからその発現遺伝子のプロファイリング解析を行い，RHAMM が高発現していることを同定した．また，siRNA を用いて RHAMM のノックダウンを行い，その細胞の増殖・分化を検討した．また，骨分化能を有し RHAMM の過剰発現を認めない，マウス頭蓋冠由来骨芽細胞株 MC3T3E1 およびヒト骨肉腫由来骨芽細胞様細胞株 U2 を用いて，RHAMM を遺伝子導入した細胞株を樹立し，その細胞の増殖・分化を検討した．
【結果】不死化骨形成線維腫由来細胞株において，RHAMM のノックダウンにより，細胞増殖は抑制され，骨分化が亢進した．また，RHAMM を過剰発現させたマウス頭蓋冠由来骨芽細胞株

40

MC3T3E1 およびヒト骨肉腫由来骨芽細胞様細胞株 U2 では，コントロールの細胞株と比較して，細胞増殖は亢進し，骨分化が抑制された．
【結論】RHAMM は ERK1/2 や TPX2 と相互作用することにより，細胞の増殖と分化に重要な役割を担っている可能性が示唆された．

41

YIA-3細胞非接着性表面処理による 3 次元培養基板を用いたヒト初代肝細
胞機能評価
高橋	
 由里子,	
 城村	
 友子,	
 小関	
 恵美子,	
 池谷	
 武志	
 	
 
(株式会社	
  トランスパレント)	
 
	
 

≪目的≫
初代肝細胞培養は創薬研究など医学生物学研究に欠かせない技術だが，従来の単層培養は形態的にも機能的にも十分に in vivo の状態を反映しているとはいえない．近年，肝細胞の機能維持に優れる培養系として 3 次元スフェロイド培養が注目されている．3 次元培養用基板の一つ，細胞アレイ
はウェル底面に高分子表面処理を施し，細胞接着領域と非接着領域とをパターン化した培養システムである．また，フィーダー細胞との共培養を行うことによってさらに安定した機能維持を現出している．本研究では手術摘出肝組織から分離した初代ヒト肝実質細胞または凍結肝実質細胞を細胞アレイで培養し，薬物動態研究で必要とされる代謝・抱合・取込・排泄活性について，培養下での機能維持の観点から検討を行った．
≪方法≫
新鮮ヒト肝実質細胞は，国立成育医療研究センターにおける生体肝移植時にドナー肝組織が過大な場合の縮小化処置で得られる余剰肝組織から分離した（倫理審査 No.385，396）．凍結ヒト肝実質細胞は Xenotech 社より購入した．3 次元培養には細胞アレイ（Cell-able，トランスパレント）を用いた．対照としてコラーゲンコートプレート（セルタイト，住友ベークライト）を用いた．細
胞アレイ培養では予めフィーダー細胞としてマウス線維芽細胞（JCRB 9019 又はATCC CCL-163）
を培養した Cell-able に，ヒト肝実質細胞を 4 104 cells / well (96 well type)，4 105 cells / well (12well type)播種した．対照のコラーゲンコートプレート培養ではフィーダー細胞は用いなかった．培地は Williams E 培地ベースで 1% 牛胎仔血清を含む RM101（トランスパレント）を使用した．
1）テストステロン代謝能測定
新鮮ヒト肝実質細胞培養3，
7 日目に基質としてTeststerone を100 micro-mol/L となるよう添加，
4 時間反応後上清中の代謝物 6beta-hydroxy testosterone（6OHTS），Testosterone glucuronide（TSGln）を UPLC (Waters) で測定した．
長期培養試験では凍結肝実質細胞を 54 日目まで培養し，7，14，54 日目に上述の Testosterone
代謝活性を測定した．薬物代謝酵素誘導は rifampicin（25 micro-mol/L）を培地に添加し 3 日間培養した．
2）取り込みトランスポーター試験 (uptake)新鮮肝実細胞を用い，分離直後，培養後 3,7 日に基質として[3H(G)]-Taurocholic acid
(PerkinElmer 社) 1 micro-mol/L を加え 2, 5, 10 min 反応させた．その後未反応基質を洗浄，除去し，細胞が取り込んだ基質量を液体シンチレーションカウンターによって測定した．
3）胆管腔構造の確認による排泄機能評価42

新鮮肝実質細胞を播種，培養し，2,4,7 日後に，5(6)-carboxy-2ʼ,7ʼ-dichlorofluorescein Diacetate（以下 CDF-DA）を添加し，37℃, 10min 反応させた．生細胞内で生成・排泄された CDF を共焦点レーザー顕微鏡（オリンパス）にて観察した．
≪結果≫
1）テストステロン代謝能測定
新鮮肝実質細胞を播種した場合，培養 1 日目においてスフェロイドが形成され，その後日数を経るごとにしっかりとしたスフェロイド形態をとるようになっていった．培養 3,7 日目の 6OHTS 活
性はそれぞれ 3.9 pmol/106 cells/min, 4.0 pmol/106 cells/min であった．TSGln 活性は 1.7 pmol/106
cells/min, 1.8 pmol/106 cells/min であった．
凍結肝実質細胞を用いた場合，培養 3 日目にスフェロイドが形成された．培養 7，14，54 日目の
6OHTS 活性は，180 pmol/106 cells/min，195 pmol/106 cells/min，150 pmol/106 cells/min と，良好に維持された．また，rifampicin による誘導試験では 54 日目においても 5 倍 (800 pmol/106
cells/hr)の誘導が確認できた．
2）取り込みトランスポーター試験 (uptake)
初期活性は 24.1 nmol/106 cells であった．3 次元培養では培養 3 日目で 2.84 nmol/106 cells, 培養
7 日目で 6.83nmol/106 cells を示したが，単層培養では培養 3 日目で 0.49nmol/106 cells となり，極めて低かった．
3）胆管腔構造の確認による排泄機能評価
2, 4, 7 日と経過するにともない，肝細胞間に管腔様構造と思われるスポットを強く確認することができた．これらのスポットは，Ca2+非存在下において消失した．従ってこのスポットは細胞間隙に存在する bile pool と考えられた．
Cell-able を用いたヒト肝実質細胞の 3 次元培養は，単層培養に比べ，薬物動態・毒性研究に必要な種々の肝機能の維持に優れることがわかった．Cell-able は 100 ミクロン径のスフェロイドを規則的に配列できるよう表面加工がなされている．このため，少数の肝細胞でも良好な高密度 3 次元培養が可能となる．また，フィーダー細胞として血管内皮細胞を用いた場合，ディッセ腔様構造を有する人工肝小葉を構築することがわかっている．これらより，3 次元培養と非実質細胞の混合培養の組み合わせはトランスポーター機能を含めた肝機能全般の発現，維持に寄与している可能性がある．以上より，Cell-able は，貴重かつ稀少な研究資源であるヒト肝細胞の利活用に極めて有用なツールであると考えられる．

43

YIA-4ヒト遺伝病に由来する肝細胞コレクション構築と疾患モデルの創成
牧野	
 初音,	
 梅澤	
 明弘	
 	
 
(国立成育医療研究センター研究所	
  生殖・細胞医療研究部)	
 	
 国立成育医療研究センターでは、これまでに胆道閉鎖症、劇症肝炎、先天代謝疾患などの小児に対して生体肝移植手術を行っているが、新生児のように患者の体重が小さく通常の生体肝移植手術が困難なケースや、至適生体ドナーがいないなど、移植手術が困難な症例がある。このような症例に対する橋渡し的な治療法として肝細胞移植療法が期待されており、すでに海外では数十例施行され、肝不全、先天代謝性肝疾患で臨床的肝細胞移植の有効性が報告されている。また、特に希少疾患である先天性代謝酵素異常症では宿主の肝構造は正常であり、細胞移植で欠損する酵素の機能を補うことにより充分に治癒できる可能性があることから、肝細胞移植治療は、肝疾患の症例によっては肝臓移植の代替療法として期待できる。
このような背景の中、私は日本においても肝細胞移植療法を確立し、日本の小児患者に対する肝細胞移植療法の有効性と安全性を検証することが急務であると考え、当センターにてインフォーム
ドコンセントが得られた、ヒト余剰肝、および肝移植を受けた遺伝疾患の患者から摘出されたレシ
ピエント肝より正常な機能を保持した肝細胞を分離し、希少疾患肝細胞コレクションの構築を試みた。その結果、有機酸代謝異常症、尿素サイクル異常症、糖原病、胆道閉鎖症を含めた余剰肝組織
41 検体の供与を受け、41 株の肝細胞の分離に成功した。
獲得した初代培養肝細胞と培養細胞の in vitro の特性解析として PCR を行った結果、初代培養肝細胞において正常肝細胞特異的遺伝子の発現を確認することができた。現在、マイクロアレイを用いた網羅的遺伝子発現解析を進めており、この結果は未だ原因不明な劇症肝炎や胆道閉鎖症の病態解明につながる可能性が高い。
さらに in vivo の特性解析として前述の初代培養肝細胞と培養細胞を免疫不全マウスに移植した
結果、移植後 4 週間目に摘出したマウス組織において、抗ヒトアルブミン抗体陽性、抗ヒト肝細胞抗体（CK8/18）陽性、PAS 染色陽性を示すヒト細胞を検出することに成功した。このマウスは由来する疾患肝の性質を反映する細胞を保持することから、移植した細胞の生体内での機能を明らかにする目的だけでなく、肝細胞移植の効果を確認し、安全で効果的な新しい治療方法を確立するための疾患モデルとしての応用が期待できる。
遺伝病では生体試料の収集が非常に困難と考えられている背景の中で、患者由来の組織より複数の細胞株を樹立し、それらが生体内に生着し肝機能を保持することを明らかにしたことは、肝細胞移植療法の有効性と安全性を提示しただけでなく、肝細胞移植療法に用いる細胞の品質管理技術開発、および有効な治療法のない先天性代謝異常症治療法を開発する上で独創的かつ大きなアドバン
テージと言える。

44

日本組織培養学会第８４回大会
一般演題(Ⅰ) （OG-1-1〜4）「細胞の樹立と解析」
5 月 27 日(金)（１日目）10:45‐11:29
座長 三井 洋司 徳島文理大学
梅澤 明弘 国立成育医療研究センター45

OG-1-1

ヒト赤血球系前駆細胞株の樹立	
 	
 
中村	
 幸夫,	
 栗田	
 良	
 	
 
(理化学研究所	  バイオリソースセンター	
  細胞材料開発室)	
 	
 赤血球輸血は現在の医療において必須の治療法の一つであるが、輸血体制は未だにたくさんのボ
ランティアからの献血に依存している。今後益々高齢化社会が進行し、輸血を必要とする人口が増える一方で、献血をする人口比率が低下することで、輸血用血液の供給不足状態になることが強く懸念される。また、ウイルス感染症の初期には検査にて確実に感染状態を把握することは不可能であり、従って、献血に依存する輸血体制下では輸血によるウイルス感染症をゼロにすることは不可能と言っても過言ではない。そこで、安全な材料から赤血球を人工生産する技術が求められている。
我々の研究室では以前に、マウス胚性幹細胞（ES 細胞）から「脱核赤血球を生産可能な赤血球系
前駆細胞株」を樹立したことを報告した。このことはヒト ES 細胞からも「脱核赤血球を生産可能
な赤血球系前駆細胞株」が樹立できることを示唆するものであり、その樹立を試みた。しかしながら、ヒト ES 細胞からの目的細胞株の樹立には成功していない。ES 細胞は株により細胞特性が大きく異なるため、成功しない理由は使用した ES 細胞の特性によるものである可能性もあったため、独自に樹立したヒト iPS 細胞を用いて同様な試みを行った。結果として、ヒト iPS 細胞からの血球系細胞の分化誘導効率もあまり高くなく、目的の細胞株樹立には到らなかった。そこで、ES 細胞
や iPS 細胞に導入することで血球系への分化誘導効率を高くすることが報告されている転写因子「Tal1/SCL」を強制発現させた iPS 細胞株を樹立した（iPS-Tal1/SCL 細胞）。iPS-Tal1/SCL 細胞
からは親株の iPS 細胞に比べてきわめて高い効率で血球系細胞を誘導でき、長期培養を行うことで血球系不死化細胞株の樹立に成功した。樹立した血球系細胞株は赤血球系の特性を有しているが、残念ながらさらなる分化誘導にて脱核赤血球を生産する能力がきわめて低く、その改善を図るべく、細胞株の樹立戦略を含めて検討を行っている。大会ではその経過を報告する予定である。

47

OG-1-2

ヒト iPS テラトーマに由来する新規細胞株の樹立と特性の解析	
 
三井	
 洋司,	
 鎌田	
 瑞菜,	
 熊崎	
 努,	
 東條	
 恵,	
 松尾	
 平,	
 高橋	
 知子	
 	
 
(徳島文理大学	
  香川薬学部	
  生理化学講座)	
 	
 正常なヒト細胞をもとに、培養システムにおいてがん細胞を樹立するのは、がん遺伝子の導入法を用いてさえ至難の技である。ましてや再現性が高く、しかも同一遺伝子背景の細胞系から異なった組織特徴を持つ異種がん細胞株の樹立は、皆無と理解している。
本研究は、その意図を実現する目的で、３０年前に老化研究用に樹立した細胞系、ヒト胎児肺由来の正常な繊維芽細胞、TIG-1 細胞をもとに、新しい不死細胞株の樹立に成功し、特性を解析したので、ここに報告する。	
  TIG-1 細胞に、OCT4, KLF4,そして SOX2 を２A で連結したプラスミド
pCX-OKS-2A そしてプラスミド pCX‐c‐Myc を、Nucleofection 法にて、遺伝子導入し、18 ク
ローンの iPS 様細胞株を樹立するにいたった．培養系で３種の胚葉に分化する事を RNA 発現で確認した４細胞株について、さらに、免疫不全マウスに移植して、テラトーマの形成を計った。得られた組織内で、外胚葉、内胚葉、中胚葉に分化したことを、免疫組織学法で確認する事ができ、ヒト人工多能性幹細胞の樹立を認めた．それらテラトーマで皮下固形種の一つである K4 について組
織から酵素法で細胞を分散し、増殖してくる細胞群について継代培養を重ねた。初期には、がん幹細胞の培養に適すると言われる培地を用いて、継代培養した。その結果、密集すると繊維芽細胞様の形態を示す細胞株を得た。一方、高希釈率で、まばらな状態でも、旺盛に増殖する異なった形態の細胞群を長期に継代培養する事が出来た．
その細胞群から、造血幹細胞に適用する培地を使うと	  より旺盛にクローナルグロースが出来る
球形の細胞株を樹立できた。更に、前記細胞群から、通常の 1０％FBS 入り DMEM 培地で、増殖する接着系細胞株も得る事が出来た．
	  親株の TIG-1 細胞は、65PD が分裂寿命であるのに対して、球形細胞は組織から単離以来 120PD 以上の分裂回数で旺盛に増殖を続けており、中胚葉系のマー
カを発現する細胞であった．軟寒天培地でのコロニーも形成するところから、不死化した形質転換細胞である事、其れが培養系で、形態分化も起こす事が明らかとなった．
同一遺伝子背景を持つ正常細胞から、異なったタイプの形質転換株が樹立出来たものと考えて、その詳細な特性解析を進めている．

48

OG-1-3

ヒト胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、間葉系幹細胞の細胞特性比較解析	 平田	
 みつひ 1,	 林田	
 みどり 1,	
 館山	
 大揮 1,	
 小澤	
 裕 1,	 松村	
 紘子 1,	
 家村	
 将士 1,	
 AHMAD	 SHANDAR4,	
 正札	
 智子 2,	
 金村	
 米博 2,	
 小原	
 有弘 1,	 	 川端	
 健二 3,	
 水口	
 賢司 4,	
 水口	
 裕之 3,5,	
 古江―楠田	 美保 1	
 	 (1 独立行政法人	
  医薬基盤研究所	
  難病・疾患資源研究部	
  培養資
源研究室,	
 2 独立行政法人	
  国立病院機構	
  大阪医療センター	
  臨床研究センター,	
 3 独立行政法人	
  医薬基盤研究所	
  創薬基盤研究部	
 幹細胞制御プロジェクト,	
 4 独立行政法人	
  医薬基盤研究所	
 創薬基
盤研究部	
 バイオインフォマティクスプロジェクト,	
 5 大阪大学大学院	
  薬学研究科	  分子生物学分野)	
 	
 創薬研究における薬物代謝や毒性評価系において、ヒト胚性幹（hES）細胞やヒト人工多能性幹（hiPS）細胞から誘導した肝細胞の応用に期待が高まっている。しかしながら、ヒト ES/iPS 細胞からの肝細胞への分化誘導効率は高くない。また、株間における分化効率の差も大きい。多くの
hES/iPS 細胞株の中から肝細胞への分化効率の高い細胞株を選択する為には、ハイスループットな評価方法が必要である。まず、我々は未分化状態での hES/iPS 細胞株間の差を明確にする為に、
JCRB 細胞バンクにて資源化した、あるいは、National Stem Cell Bank、京都大学ならびに大阪
医療センターより、分譲あるいは分与された、ES/iPS 細胞、胚性幹腫瘍（EC）細胞、ヒト間葉系
幹細胞（hMSC）、neuroblastoma 細胞の遺伝子発現を、PCR アレイを用いて解析し、株間の類似点や相違点をバイオインフォマティックスな手法を用いて解析した。その結果、hES/iPS/EC 細胞
は同じクラスターに分類され、neuroblastoma 細胞や hMSC とは異なるクラスターに分類されることが分かった。次に、hES/iPS 細胞の三胚葉への分化能を評価する為に、胚様体（Embryoid
bodies）形成により自然分化させ、遺伝子発現を比較解析した。さらに、我々が開発した無血清培
地 hESF9(1)を用い、二次元培養プロトコールによりマルチウェルプレート中にて内胚葉細胞へ分化させ、免疫染色を行い、イメージアナライザーを用いて解析した。その結果、株間の内胚葉細胞への分化効率の違いが明らかとなった。この分化効率は、我々が開発したアデノウィルスベクターを用いた分化プロトコール(2)による最終的な成熟肝細胞への分化効率と相関があることが示唆された。一方、自然分化能との相関は示唆されなかった。ヒト ES/iPS 細胞の未分化状態の遺伝子発
現プロフィール、初期段階での分化効率、成熟細胞への分化効率に相関性があれば、細胞株を選択する際に、最終分化段階まで分化誘導せず、株の選択効率が上昇し、コストおよび時間短縮も期待される。今後、株数を増やして、詳細な検討をする予定である。
1) MK. Furue, et al. Heparin promotes the growth of human embryonic stem cells in a defined	
 serum-free medium.	
  PNAS 105:13409-14（2008）
2) Inamura M., et al. Efficient generation of hepatoblasts from human ES cells and iPS cells bytransient overexpression of homeobox gene HEX. Molecular Therapy Feb;19(2):400-7（2010）49

OG-1-4

胆道閉鎖症肝における肝幹/プロジェニター細胞の分離と培養の試み	 	 山崎	 泰助 1,4,	
 笠原	
 群生 2,	
 福田	
 晃也 2,	
 阪本	
 靖介 2,	
 重田	
 孝信 2,	 	 中澤	
 温子 3,	
 絵野沢	
 伸 4,	 常盤	
 孝義 1	
 	 (1 財団法人	  河野臨床医学研究所	
  肝細胞学研究室,	
 2 国立成育医療研究センター	  移植外科,	
 3 国立成育医療研究センター	
  病理部,	
 	
 4
国立成育医療研究センター	
  臨床研究センター	
  先端医療開発室)	
 	
 【目的】小児胆道閉鎖症（BA）は肝硬変をともない、肝移植の適応対象となる難病である。肝硬変では、肝幹/プロジェニター細胞の活性化が起きている可能性が考えられる。この点を明らかにするために、BA 肝（肝硬変＋）と Non-BA 肝（肝硬変‐）から非実質細胞をそれぞれ分離し、肝幹/プロジェニター細胞マーカーとして知られる EpCAM あるいは Thy-1 陽性細胞の比較を行った。
【方法】国立成育医療研究センター病院において、BA（胆道閉鎖症）あるいは Non-BA（代謝性疾患）肝臓組織からコラゲナーゼ潅流法により細胞浮遊液を調整し、低速遠心後、上清に含まれる細胞を非実質細胞として実験に用いた。EpCAM あるいは Thy-1 陽性細胞は、非実質細胞の培養 1日後、EpCAM あるいは Thy-1 抗体を用いたフローサイトメトリー分析により検出した。遺伝子発現の検討は、RT-PCR 法あるいは免疫染色法により行った。
【結果】
フローサイトメトリー分析による BA 肝における EpCAM 陽性細胞の割合は、
2.9 0.4％(n=5)、Non-BA 肝では 0.9 0.4%(ｎ=3)であり、BA 肝において有意に高い傾向が認められた（p＜(0.01)。Thy-1 においては BA 肝で 15.8％ 4.6(n=5)、Non-BA 肝で 2.7 3.4％(n=3)であり、EpCAM と同様に BA 肝において有意に高かった（p＜0.05）。いずれの場合においても EpCAM 陽性細胞に比べ、Thy-1 陽性細胞の割合が高い傾向が認められた。EpCAM および Thy-1 陽性細胞をソーティング後、
肝プロジェニターマーカーの遺伝子発現について調べた。
EpCAM 陽性細胞では、BA 肝、Non-BA 肝に関わらず、EpCAM および Thy-1 両方の遺伝子発現が認められた。しかし、Thy-1 陽性細胞では、BA 肝において Thy-1 の発現のみしか認められなかった。α-fetoprotein の発
現は、いずれのサンプルにおいても検出されなかった。
【結論】肝硬変を伴う胆道閉鎖症肝は伴わない代謝性疾患肝に比較して、EpCAM あるいはThy-1 陽性細胞の割合が高く、前者における肝幹/プロジェニター細胞の活性化が示唆される。	
  また、EpCAM 陽性細胞と Thy-1 陽性細胞の遺伝子プロファイルは異なり、両者の性質は異なることが示唆される。

50

日本組織培養学会第８４回大会
一般演題(Ⅱ) （OG-2-1〜6）「方法論」
5 月 27 日(金)（１日目）11:29‐11:35
座長 中村 和昭 国立成育医療研究センター
三浦 巧

国立成育医療研究センター

51

OG-2-1

iPS 細胞の大量組織培養・分化におけるマイクロカプセル化	
 	
 
堀口	
 一樹,	
 チョードリ	 モハメドマハフズ,	
 酒井	
 康行	
 	
 
(東京大学	
  生産技術研究所)	
 
	
 

【目的】
ES 細胞や iPS 細胞はあらゆる細胞に分化できる性質を持つため，再生医療への応用が期待されている．しかしながら，これら幹細胞を用いた再生医療の実現には，実用に堪えうる細胞数を得られる大量培養システムの構築が必要である．動物細胞の大量培養システムとしては浮遊懸濁培養が一般的に用いられているが，直接 iPS 細胞の浮遊懸濁培養を行なうと，培養液の剪断応力による細胞死や細胞塊同士の無秩序な会合が起こる．これらの問題点を解決する方法の１つとして，マイクロカプセル培養が報告されている．本研究では，iPS 細胞の未分化増幅・分化誘導におけるマイク
ロカプセル化の利点と欠点を明確化するために，3 種類の異なる形式のマイクロカプセルでマウス
iPS 細胞を培養した．
【方法】
マイクロカプセル化法として，１）アルギン酸カルシウムのみで作成したゲルカプセル化，２）アルギン酸ビーズをポリ-L-リジンでコートしたコアシェル型カプセル化，３）コアシェル型カプセ
ルを EDTA 処理することで内部のゲルを溶解した中空カプセル化，の３種を行った．Nanog プロ
モータの下流域に EGFP を導入したマウス iPS 細胞（iPS-MEF-Ng-20D-17 : 理研 BRC セルバン
ク[1]）
，３つの手法でマイクロカプセル化（直径 500-600 μm）し，旋回振盪培養を行った．
【成績】
どのカプセル化でも iPS 細胞はコロニー状に増殖した．均一ゲル型とコアシェル型では，複数個のコロニーを形成したが，中空型ではカプセル内部の全ての細胞が凝集し，各カプセルに１個の細胞塊が形成された．また，ポリ-L-リジンコートされていないアルギン酸ビーズでは細胞の増殖が進むにつれて，細胞のカプセル外への漏出及び，カプセル外での増殖が顕著であったが，この現象は
ポリ-L-リジンコートを行ったコアシェル型では見られなかった．一方で，播種細胞数を広範に変えたところ，初期細胞数が少ない（50 個/カプセル）と増殖が殆ど起こらず，より多い細胞数（160個/カプセル）では増殖が観察されたことから，増殖開始に必要な最小の細胞数があることも示唆された．また，160 個/カプセルの初期条件では，nanog-GFP の蛍光が 10 日目まで観測された．
【結論】
以上の結果から，ポリ-L-リジンコートされていないアルギン酸ビーズは iPS 細胞の大量培養には不利であり，中空型カプセルは均一な凝集体の形成に有効である事がわかった．現在，マイクロカ
プセルに細胞を封入することで細胞自身の分泌因子の効果が増幅されるという仮定のもと，初期の分化傾向に関する検討を進めている．
[1] Okita, K. et al., Nature 448: 313-317 (2007).

53

OG-2-2酸素透過膜を用いる肝細胞培養法	
 
酒井	
 康行,	
 エベヌー	 ファニー,	
 アモン	
 モーガン,	
 藤井	
 輝夫	
 	
 
(東京大学生産技術研究所)	
 	
 肝細胞の酸素消費速度は他の細胞に比べて格段に高く，例えば初代培養肝細胞を通常の組織培養
用ディッシュ・プレート上で飽和密度にて静置培養すると著しい酸素不足になることは既に 1960
年代から指摘されてきた．培養系での酸素供給改善に関する様々な試みが行われきており，その中でも酸素透過膜を用いる手法は，培養液の灌流を必要とせず通常の静置培養に適用可能な簡単な手法であるが，実はその有効性と限界性は必ずしも明確にされてはこなかった．
そこで，透明な酸素透過材料の一つであるポリジメチルシロキサン(poly-dimethylsiloxane,
PDMS)を底面とするマルチウェルプレートを作成し，各種肝由来細胞の培養を行ってきた．各種肝細胞を PDMS 上に安定培養するためには，親水化処理のみでは不十分で，コラーゲン等の付着進
展糖タンパクの共有結合固定化が必要であった．増殖性の Hep G2 細胞は自発的に 5‐6 層まで増殖し高密度な擬似三次元組織を形成した．そのエネルギー代謝をグルコース消費・ラクテート産生から評価すると，通常のディッシュ培養と異なり非常に好気的であった．ラット成熟肝細胞は最大で通常の約５倍の 5 105 cells/cm2 での播種が可能であり，線維芽細胞との共存下で平均３層の肝細胞からなる擬似三次元的組織を形成しえた．
肝前駆細胞のモデルとして胎児ラット肝細胞を培養すると，底面側に線維芽細胞やマトリックス
物質からなる厚い下層が培養液側に肝細胞からなる上層が形成された．その挙動はガス相の酸素濃度に依存し，21%酸素では下層が薄くなりアルブミン分泌は亢進したが，5％酸素では下層がより厚くなった．5%から 21%に培養中期でスイッチした場合に最も厚く機能も高いヘテロ肝組織が形成され，内部では肝前駆細胞からなる管腔構造の形成が見られた．
以上の結果から，従来の肝培養でやはり酸素供給不足がやはり最大の制限要因になっていたこと，それを抜本的に改善することで今まで観測し得なかった現象が見られるようになった．また，PDMS 膜の高い酸素供給能のために，細胞への暴露濃度をほぼヘンリー則による平衡溶存酸素濃度とすることができ，in vivo と同様に生理学的低酸素濃度・好気的エネルギー生産条件下で培養を行うことができる点も大きなメリットである．

54

OG-2-3マイクロ空間培養系を用いたヒト肝毒性試験法の検討	 中村	
 和昭 1,	
 江尻	
 洋子 2,	
 田上	
 昭人 1	
 (1 国立成育医療研究センター	
 研究所	
  薬剤治療研究部,	
 2 株式会社クラレ	  つくば研究センター)	
 	
 【目的】薬物の安全性評価は医薬品開発において特に重要であり、薬物の安全性スクリーニング法として培養肝細胞を用いた薬物毒性試験が広く用いられている。一般的に肝細胞の培養にはコラーゲンコート上での単層培養が用いられているが、単層培養では組織学的三次元構造の消失等により薬物代謝等の肝細胞特異的機能が著しく低下し、薬物毒性試験において毒性を過小に評価する恐れがある。肝細胞特異的機能維持のため、マトリゲルやコラーゲンゲルを用いて肝細胞塊を形成させる方法など、いくつかの培養方法が開発されてきた。しかし、これらの方法はゲルの作成など
簡便性に欠き、また肝機能維持の面でもさらなる改善が求められている。また、種差等を考慮すると、in vitro 系における薬物毒性試験にはヒト初代肝細胞を用いるのが適切と考えられるが、ヒト肝細胞の使用は欧米等から供給される凍結保存肝細胞を用いているのが現状である。しかし、凍結保存は肝細胞特異的機能を減弱させると考えられ、薬物毒性を正確に評価するには必ずしも適さない。
これらを踏まえ、今回我々は薬物安全性評価を行うために、ヒト肝癌細胞株 HepG2 および生体肝移植により摘出される小児レシピエント肝より単離した新鮮肝細胞を対象とし、新規培養法による肝毒性試験系の検討を行った。
【方法】単層培養並びに縦 200 μｍ 横 200 μｍ 高さ 50 μｍの規則的な小空間を持つマイクロ空間培養プレートにより肝細胞を培養し、小空間の中に肝細胞塊を形成させ三次元構造を再現させた。アルブミン分泌、シトクロム P450 酵素群の遺伝子発現レベルによりその肝機能を評価し、肝毒性の知られているアセトアミノフェンを用いて細胞生存率の測定を行い、肝毒性試験系の検討を行った。本研究は「臨床研究の指針」に基づき、国立成育医療研究センター倫理委員会において研究計画の承認を受け、摘出肝の使用にあたっては成人ドナー本人および小児レシピエントの保護者に対して文書による同意を得て実施された。
【結果と考察】単層培養に比べマイクロ空間培養によりアルブミン分泌の上昇及びシトクロム
P450 酵素群の発現上昇が認められた。さらに、アセトアミノフェンを用いた薬物毒性試験では、
マイクロ空間培養において感受性の上昇が認められた。これらのことから、マイクロ空間培養によるヒト肝細胞培養系は、薬物毒性試験系として有用であることが示唆された。

55

OG-2-4

培養空間の有効利用を目指したマルチフラスコの開発	 江藤	
 哉子 1,	
 キアン	
 スーザン 2,	 アブラハム	 エリザベス 2	 	
 (1 日本ベクトン・ディッキンソン株式会社	  バイオサイエンス,	 2Becton,	
 Dickinson	
 and	
 Company,	
 BioSciences)	
 	
 抗体などのたんぱく質発現系のように大量の細胞を培養する場合、底面積の大きい細胞培養用フラスコやローラーボトル、三角フラスコなどが用いられてきた。この中で、培養フラスコを用いる
静置培養の場合、CO2 インキュベータ内の限られた空間にいくつのフラスコを入れることができる
かにより、どの程度の規模の培養を行うことができるかが制限される。特に、フラスコの高さは、空間の利用効率に大きく影響することが認識されている。そこで、CO2 インキュベータ内の空間を有効に利用し、少ない培養器材で効率よく細胞を培養するための新たなデバイスとして、BD Falcon
Cell Culture Multi-Flask を開発した。3 層あるいは 5 層からなる多層式のフラスコは、従来の Tフラスコの課題であった培養容器の高さの課題を解決すべく、天面と各培養面の間の高さが低く設計されている。フラスコの角には、各培養面を貫通する培地の通過部位が設けられ、培地は各培養面へ均等に行き渡ることができる。培地と細胞の混合もデバイス内で行うことが可能で、コンパク
トな形状を実現しつつ、層ごとの培養ムラを減らすよう工夫されている。培養面の多層化による細胞の培養効率への影響を調べるため、3 層、5 層それぞれの BD Falcon Cell Culture Multi-Flask
を用いて、T-フラスコとの比較を行った。まず、BD Falcon Cell Culture Multi-Flask に培地を入れ、培養層ごとの培地量を調べた。各層の培地量は、ほぼ同等の量であった。また、HepG2 細胞を
5 x 106 cells/layer で播種し、48 時間培養して培養後の単位面積当たりの細胞数を比較した結果では、Multi-Flask の各層で一般的なT-Flask と同等の培養成績が得られた。
一方、
BHK-21 細胞を3 x 106
cells/layer 播種し、培養面のクリスタ 72 時間後に行ったバイオレッド染色による評価において、どの層でも偏りなく細胞が接着、増殖できることも示された。

56

OG-2-5

CAS 機能により凍結した細胞組織の観察	 岩坂	
 正和 2,	
 栗田	
 学 1,	 大和田	
 哲男 1	
 	
 (1 株式会社アビー,	
 2 千葉大学大学院工学研究科メディカル機器工学
講座)	
 
	
 

CAS（Cells Alive System）機能付き急速凍結技術は CAS 機能で食品を凍結することで限りなく生の「新鮮さ」と「おいしさ」が戻ることで組織を生かす技術として評価されてきている。これはCAS 機能によって氷結晶が微細化し、細胞組織が殆ど損傷されずに生の組織がしっかり保持されることによるものである。	
  このように CAS 機能で凍結した食品の氷結晶が小さくなる根拠につて
分光学的観測から次のようなメカニズムがみえてきている。すなわち、CAS 機能であるパルス磁場と複数のエネルギー（電場、疎密波、機械的振動）とを組合わせたエネルギーを食品や生体などの細胞組織体に作用させることで細胞組織体中に確率共鳴的に「揺らぎ」振動が共鳴増幅して起こり、この共鳴した揺らぎによって過冷却状態から凝固点をへて凍結点にいたる過程で凝固と潜熱融解が繰り返されて起こる事から微細な氷結晶を生成しながら凍結するに至ると考察される。この内容について紹介したい。注	  CAS とは「Cells Alive System」の略で「細胞が生きている」凍結しても細胞が破壊されず解凍後に鮮度が生き生きとよみがえることを意味している。

57

OG-2-6

関節軟骨全層欠損に対する三次元軟骨様組織同種移植後の細胞運命：量子ドットを用いた細胞標識による家兎モデルでの検討	
 
	
 
吉岡	
 友和 1,2,	
 菅谷	
 久 2,	 三島	
 初 2,	 カウル	 ゼニア 3,	
 植村	
 寿公 3,	 	 カウル	
 スニル 3,	
 ワダワ	
 レヌー3	 	 (1 茨城西南医療センター	
  整形外科,	
 2 筑波大学	
  臨床医学系整形外科,	
 3 産業技術総合研究所)	
 	 【背景・目的】我々のグループではこれまで擬微小重力環境下三次元培養法を用いて家兎骨髄細胞から硝子軟骨様組織の構築に成功し、膝関節軟骨全層欠損モデルを用いた同種移植実験において良好な軟骨修復が得られたことを報告してきた。しかしながらその修復過程における移植細胞の動態は明らかでない。本研究では量子ドットを移植細胞内に導入しその動態を追跡した。
【方法】12 日齢日本白色家兎長管骨から骨髄細胞を採取し、単層培養で接着性紡錘型細胞 が占める面積がフラスコ底面全体の面積の約 80%に達した時点で、量子ドット (Qdot655 ナノクリスタ
ル; Invitrogen) と抗体との複合体作製キット (Qdot655 antibody conjugation kit; Invitrogen) を用いて量子ドットとモータリン抗体の複合体を作製した。この複合体を 0.2-0.4 mg/ml の濃度で 24
時間、共培養することで量子ドットを細胞内に導入した。細胞が 100%以上コンフルエントとなった時点で、細胞懸濁液とし、TGF-β3 を含む培地で動的回旋培養 (RCCSTM-4D system; Synthecon,
Houston, TX, USA) 下に軟骨分化誘導を 1 週間行い、三次元軟骨様組織を構築した。この軟骨様組
織を 10 週齢日本白色家兎大腿骨膝蓋大腿関節部に作成した全層軟骨欠損（直径 5mm、深さ 4mm）部に同種移植した。移植後 4・8・26 週で組織学的評価および蛍光顕微鏡で量子ドットの局在を観察した。
【結果】移植後 4、8 週の短期的評価に加え、26 週の評価においても欠損部は硝子軟骨様組織での修復が得られていた。4 週において量子ドットの蛍光は欠損修復組織の正中で中間層から深層を中心に観察され、関節面側に向かうに従って蛍光強度は減弱した。同一の非脱灰凍結薄切標本で量子ドットの観察後にサフラニンOファストグリーン染色を行ったサンプルでは修復組織深部の血管周囲に蛍光が観察された。8 週では修復組織全体に蛍光が観察された。蛍光が観察された領域は欠損修復組織の深層から中間層、浅層にいくにしたがって減弱した。軟骨層と思われる関節面表層では、正中部ではなく隣接正常軟骨に近い部分で蛍光が観察された。26 週では骨梁壁の一部に蛍光がわずかに観察されたのみであった。
【考察】移植細胞は軟骨修復のみならず、骨・骨髄組織の修復にも寄与している可能性、また移植細胞が直接的に間葉系組織に分化するのみならず栄養因子として間接的に修復に寄与している可能性が示唆された。導入された量子ドットがその後の細胞増殖・分化過程でどのように局在、代謝されていくのか、in vitro および in vivo でのさらなる詳細な検討が必要である。

58

日本組織培養学会第８４回大会
一般演題(Ⅲ) （OG-3-1〜3）「研究基盤」
5 月 27 日(金)（１日目）12:35‐13:08
座長 吉田 東歩 ヒューマンサイエンス研究資源バンク
星 宏良

機能性ペプチド研究所

59OG-3-1

手術摘出組織の研究利用	 大西‐笠松	
 礼,	
 小阪	
 拓男,	
 佐藤	
 元信,	
 吉田	
 東歩	
 	
 
(財団法人	
  ヒューマンサイエンス振興財団	
  ヒューマンサイエン
ス研究資源バンク	 ヒト組織バンク)	
 	
 ヒューマンサイエンス研究資源バンク（HSRRB）は、2001 年よりヒト組織を研究用として譲渡する公共的ヒト組織バンク業務を行っている。
ヒト組織バンクが扱う試料は、外科手術等で摘出され、診断などに使用された残りの組織またはその組織に由来する。ヒト組織の提供は、提供者への十分な説明と同意のもと、連結不可能匿名化などの個人情報保護に係る手続きが厳重に行われた後に実施される。当バンクが扱うヒト組織は、凍結、固定、新鮮（冷蔵）試料に分類されており、一部は組織から細胞や細胞内画分に加工され、凍結保存されている。当初は、凍結および固定試料の収集に注力し、産学官の研究者に利用されてきた。一方で、「生きた」状態の細胞を利用したいという要望が多く、2006 年より新鮮組織の譲渡を開始した。今回、現在もっとも需要の多い新鮮組織について、その譲渡実績および利用例について紹介する。これまでに、複数の提携医療機関から 100 例以上の新鮮組織、主に正常皮膚、関節リ
ウマチ滑膜組織、内臓脂肪（腸間膜脂肪）、大腸（癌部位と非癌部位のペアー）および胃（癌部位と非癌部位のペアー）が提供された。これらはいずれも摘出後冷蔵状態で数時間以内に研究機関へ譲渡され、皮膚は培養皮膚の作製や薬物代謝研究、滑膜、内臓脂肪は薬理学研究、大腸および胃は癌研究の目的で活用されている。また、2009 年より、新鮮組織から培養細胞を調製し、凍結チューブで譲渡する事業も開始した。現在、脂肪前駆細胞および滑膜細胞が譲渡可能である。これら細胞は、由来組織の性状を維持するため、可能な限り若い継代数で凍結チューブを作製している。作製した細胞については、機能的性状確認を含めた品質管理および、マイコプラズマなどの微生物汚染が無いことをチェックしている（kasamatsu et al., Tissue Cult. Res. Commun. 2010）。創薬研究に対するヒト組織の需要は増しているが、国内での供給体制は十分とはいえない。HSRRB ヒト組織バ
ンクは、倫理面と安全なヒト組織の取扱いに配慮した上で、創薬研究に有用なヒト試料の種類、質、量を確保し、加工技術、品質管理法についてのさらなる研究が必要と考えている。

61

OG-3-2

医薬基盤研究所の難病研究資源バンクについて	
 亀岡	
 洋祐 1,	
 坂手	
 龍一 1,	
 高橋	
 一朗 1,	
 田沼	
 玲子 1,	
 平田	
 誠 1,	
 	 竹村	 清 2,	 松下	
 京子 2,	
 坂口	
 由希 2,	
 東濃	
 篤徳 1,	
 伊藤	
 絵望子 1,	 	
 岩江	
 荘介 2,	
 増井	
 徹 1,2	 	
 (1 独立行政法人医薬基盤研究所難病資源研究室,	
 2 独立行政法人医薬基盤研究所政策・倫理研究室)	
 	
 近年の医学研究の進歩により、生体試料（組織、血液、細胞、遺伝子等）と病歴情報等（２つをあわせて以下「研究資源」という）を利用した研究が、疾患の予防、診断及び治療方法の発展に繋がることが期待されている。しかし、難病のような罹患患者の多くない疾患では、研究資源の質と数量をそろえて研究を進めることは、臨床の場をもつ研究者ですら困難である。そこで、わが国での難病研究を推進するために、現在の研究体制を基盤として、細胞・遺伝子・組織バンク等を整備することとし、平成 21 年度より、難治性疾患研究事業において、「生体試料等の効率的提供の方法に関する研究」（提供研究班）を進めている。
	  本発表においては、医薬基盤研究所が実施するゲートキーパーとしての難病研究資源バンクの活動について、その課題と現状について紹介する。
	  提供研究班は以下の３班で構成される。
１）「難治性疾患克服のための難病研究資源バンク開発研究」（亀岡洋祐	
  独立行政法人医薬基盤研究所）◎研究資源のバンク化に関する研究倫理審査の一括実施、一括受け入れ、データベース化、さまざ
まなニーズに対応した保存管理と分譲を行う
２）「生体試料等の効率的提供の方法に関する研究」（中村幸夫	
  独立行政法人理化学研究所

バ

イオリソースセンター）◎ヒト培養細胞の作製及び分譲
３）「難治性疾患由来外来因子フリー人工多能性幹細胞の委託作製とバンク化」（江良択実	
  熊本大
学発生医学研究所）◎ヒト iPS 細胞の作製	
 提供研究班においては以下の研究を実施する。
１）収集研究班で収集された生体試料をモデル的に受け入れ、効率的な分譲を行う方法に関する研
究２）収集研究班に対する技術的支援等を通じ、収集をより一層効率的、効果的に行う方法に関する研究
	  本発表においては、医薬基盤研究所が実施するゲートキーパーとしての難病研究資源バンクの活動について、その課題と現状について紹介する。

62

OG-3-3ヒトゲノム・遺伝子解析倫理指針の改訂に臨んで：課題について	
 
増井	
 徹	
 (独立行政法人医薬基盤研究所)	
 医学研究において、ヒトゲノム情報を利用する重要性が高くなっている。しかし、一般に培養細胞を取り扱う研究において「ヒトゲノム・遺伝子解析に関する倫理指針」を意識することはない。
それは株化細胞が「ただし、学術的な価値が定まり、研究実績として十分に認められ、研究用に広く一般に利用され、かつ、一般に入手可能な組織、細胞、体液及び排泄物並びにこれらから抽出した人のＤＮＡ等は、含まれない」として、指針の除外規定に入っているからである。それゆえに、患者組織から直接調製された初代培養細胞を取り扱う研究においてゲノム研究が行われる場合は、
この指針が適応される。とはいえ、上記の除外規定については、研究倫理審査委員会によって意見が異なる、そこで研究者は属する研究機関の当該委員会の意見を聞く必要がある。
	  「ヒトゲノム・遺伝子解析に関する倫理指針」は 2001 年 3 月に策定され、2004 年に個人情報保護法の施行に伴い全面改正され、その後 2 回の軽微改正が行われている。しかし、この指針は単因子遺伝子疾患のゲノム研究を基本として想定して策定されており、現在のゲノム研究に対応できな
い面が明らかになってきた。そこで、2012 年 3 月を目標として、見直しのための委員会が組織された。
	  発表においては、本指針改正の課題について発表し、学会員諸賢のご意見を頂きたい。

63

日本組織培養学会第８４回大会
合同シンポジウム （SP-1〜7）
オーガナイザー： 竹澤 俊明（独立行政法人 農業生物資源研究所）
浅香 勲（京都大学）

5 月 27 日(金)（１日目）１４:００‐1７:００

ES、iPS 細胞の培養技術と 代替法への利用スキーム○小島 肇（国立医薬品食品衛生研究所）
安全性評価における in vitro 試験法を確立するために何をなすべきか○杉林 堅次（城西大学）
化学物質の経皮吸収性および皮膚中濃度評価を目的とした 3 次元
培養ヒト皮膚モデルの有用性と問題点○竹澤 俊明（独立行政法人 農業生物資源研究所）
ビトリゲルチャンバーあるいは組織切片を用いて、ヒトに於ける化学物質の ADMET を外挿する培養技術の開発状況○粂 昭苑（熊本大学）
ES/iPS 細胞から肝への分化誘導○浅香 勲（京都大学）
疾患特異的 iPS 細胞の樹立とその応用○神野 敬將（日本製薬工業協会）
医薬品開発におけるヒト多能性幹細胞利用の展望○白橋 光臣（iPS アカデミアジャパン株式会社）
iPS 細胞関連特許の実用化と iPS 細胞提供

65

SP-1

安全性評価におけるin	
 vitro 試験法を確立するために何をなすべきか	
 
	
 
小島	
 肇	
 (国立医薬品食品衛生研究所	
  安全性生物試験研究セン
ター	
  薬理部	
  新規試験法評価室)	
 	
 来年度に動愛法（動物の愛護及び管理に関する法律）の改訂が予定されていることもあり、動物実験の３R の動向に関する関心が高まっている。しかし、この法律により、３R の促進が強化されようがされまいが、欧州の３R における規制強化は受け止めねばならない事実であり、それらが化粧品や REACH（Registration, Evaluation, Authorization and Restriction of Chemicals リーチ法）
規制などで経済的な影響を与えている昨今、国際的な整合性を考慮に入れた対策を進めざるをえない。特に、安全性評価においては、動物実験代替法（以下、代替法と記す）の利用が叫ばれているが、EU の専門家曰く、一つの代替法で置き換えられる動物実験はなく、構造活性相関や複数の代替法を組合せ、偽陰性を限りなく少なくした ITS（Integrated Testing Strategy）に頼らざるを得ない。ところが、現在は開発された代替法は極めて少なく、ITS はまだ有効に機能していない状況である。では、いかなる方法を通して代替法、in vitro 試験法を確立すべきであろうか。まず、細胞や組織モデルの標準化、品質管理が重要となる。安価で安定な細胞やモデルを供給できる体制が必須である。しかも、既存の細胞バンクによりなされているような細胞の管理・供給ではなく、特定の毒性試験の採用基準を満たすことが絶えず確認されているような細胞や組織の供給が重要である。
次に、上記細胞や組織を用いた試験法の確立である。その指標は作用機構に起因したものでなければいけない。この場合、代替法の開発という既成概念を外した in vitro 試験の開発が重要である。
なぜなら、トキシコゲノミックスなどで検出される指標は毒性経路の入り口であることが多く、動物実験で毒性が明らかになる出口の毒性と比べることはナンセンスだからである。米国アカデミー
協会も書籍「21 世紀の毒性試験」の中で述べているが、既存の毒性学の考え方に拘らず、作用機構に起因した in vitro toxicology を発展させねばならない。とはいえ、まだまだこの考え方は普及していない。代替法の開発という視点において、科学的に有益でかつ、安価、大量処理（ハイスループッ
トシステム）のできる指標が求められている。以上の細胞、組織と測定指標を組み合わせた試験法
をバリデーションで検証する。バリデーションでは、プロトコルを確定するプレバリデーションを経て、技術移転性、施設内再現性、施設間再現性を確認しなければならない。これらを満たす試験法を用いて既存の毒性試験結果と比較し、その予測性を評価することになる。本発表では、この作業を理解しやすいように、現在進行している in vitro 皮膚感作性試験の一つである h‐CLAT（human Cell Line Activation Test）を例に挙げ、紹介したいと考えている。

67

SP-2

化学物質の経皮吸収性および皮膚中濃度評価を目的とした 3 次元培
養ヒト皮膚モデルの有用性と問題点	
 
	
 
杉林	
 堅次	
 (城西大学	  薬学部)	
 

皮膚適用した化学物質の全身毒性や全身循環系に移行後の効果・効能を調べるときは、まずそれら物質の血（漿）中濃度を評価する。なお、血（漿）中濃度は経皮吸収速度と全身クリアランスによって決定されることはファルマコキネティクスのテキストにも記載されている。一方、皮膚適用した化学物質の皮膚またはその近傍での毒性や効果・効能を調べるときは経皮吸収性よりむしろ皮膚中濃度を指標とすべきである。したがって、全身作用を示す物質は経皮吸収性を、また、適用部
位で作用を示すものは皮膚中濃度を調べることが大変重要になる。一般に、化学物質の毒性や有効性は、それら物質の作用部位中濃度に相関する。特に、酵素や生理活性物質がそれらの毒性・効果に関与しないとき（このケースが大部分を占める）は、毒性・効果はそれら化学物質の濃度に関して「直接反応モデル」で表すことができ、Hill 式で表現することになる。
物質の経皮吸収や皮膚中濃度は、皮膚バリアー中の拡散現象として（Fick の拡散第 2 法則を用いて）解析することができる。現在では、皮膚バリアーを角層とそれ以下の皮膚（生きた表皮と真皮）の 2 層膜として解析することが多い。ドレーズ法で評価されてきた化学物質の皮膚刺激性や MTT
アッセイで求めた皮膚中細胞のバイアビリティは、生きた表皮と真皮中での反応の結果ととらえられるので、この部分の物質濃度によって解析することも可能になった。
化粧品の研究・開発では、特に動物実験代替法を用いた評価手段の確立が急がれている。物質の透過バリアー能を有し、かつ細胞を用いた in vitro 試験を可能にする「3 次元培養皮膚モデル」が注目されるのは当然のことである。すでに、日米欧などで多くの 3 次元培養ヒト皮膚モデルが開発され、Episkin や EpiDerm は皮膚刺激評価代替物として利用されている。これらの 3 次元培養ヒ
ト皮膚モデルはコルネオサイトと細胞間脂質からなる角層とケラチノサイトを有する生きた表皮、そしてコラーゲンと繊維芽細胞からなる真皮を有している。しかし、これらの 3 次元培養ヒト皮膚モデルはあくまでもヒト皮膚ではない。すなわち、毛穴や汗腺といった付属器官がない。また、ランゲルハンス細胞などの免疫をつかさどる細胞がない。もちろん、栄養物質を供給する血管系も存在しない。しかしながら、実皮膚との違いを十分把握しておけば、3 次元培養ヒト皮膚モデルの有用性は極めて高い。実皮膚との違いで特に重要なのが、角層バリアーの脆弱性である。また、関連することとして、全層バリアーに対する角層バリアーの寄与率が低いことにも注目しなければならない。各 3 次元培養ヒト皮膚モデルと実皮膚は、前述した Fick の拡散第 2 法則で解析すれば、物質の膜分配性と拡散性に分離評価できる。また、皮膚中代謝が関与する皮膚刺激性についても、Kmと Vmax の違いから各 3 次元培養ヒト皮膚モデルと実皮膚を区別できるようになる。我々は、この手法によって、EpiDerm を用いた皮膚刺激評価代替試験の false positive と false-negative 結果の原因のほとんどを特定化することに成功した。
一方、化粧品や生活化成品中には治療用薬物よりはるかに水溶性の物質、脂溶性の物質、さらに68

は高分子量の物質やナノマテリアルが配合され、これらの安全性を評価することが必要になっている。しかし、これら難経皮吸収性物質に関しては、ほとんどの治療用薬物とは異なり、毛嚢などの非実質ルートの寄与を無視することができない。毛嚢などの付属器官を有する 3 次元培養ヒト皮膚モデルの開発が待たれる。また、皮膚刺激性評価モデルだけでなく、拡散理論を駆使しなくとも使用できるような経皮吸収性評価モデルについても開発されんことを望む。動物を必要以上に犠牲にすることなく、優れた化粧品や医薬品が開発できるのももうすぐだと信じたい。

69

SP-3

ビトリゲルチャンバーあるいは組織切片を用いて、ヒトに於ける化学物質の ADMET を外挿する培養技術の開発状況	
 
	
 
竹澤	
 俊明	
 (独立行政法人	
  農業生物資源研究所)	
 ヒトに於ける化学物質の ADMET（吸収・分布・代謝・排泄・毒性）は、動物実験では必ずしも外挿できない。これは、同じ化学物質であってもヒトの細胞と動物の細胞では、その応答性に種差が生じることがあるためである。それにも関わらず創薬をはじめ化学物質に関連した製品の開発研
究では、動物実験が行われ続けるのは何故だろうか？科学的な理由と行政的な理由があると考えられる。つまり、ヒトに対する化学物質の影響を予測するヒト細胞の培養技術は、化学物質の全身に対する作用はもとより特定の器官に対する作用であっても満足できるレベルまでに開発されてきた培養技術が少ないことに起因している。このような科学的な背景もあり、本邦では薬事法の規定に基づいて、医薬品や医療機器の安全性に関する非臨床試験を実施する基準に関して厚生労働省の省令があると考えられる。一方、欧州では、動物実験を行って開発した化粧品の販売は輸入品も含めて 2009 年より原則禁止されている。この背景としては、ヒト細胞より作製できる培養皮膚モデルを用いた腐食性試験法など培養細胞を利用した in vitro 試験法の開発が著しく発展してOECD ガイ
ドラインとして 2004 年より登録され始めたことがある。つまり、まだまだ限られた試験法ではあるが、動物実験を代替できる in vitro 試験法として細胞培養技術が活用される時代に突入している。
動物実験代替の目的は、科学研究や教育、化粧品・医薬品や工業製品の生産等に用いる動物実験について、使用動物数の削減（Reduction）、代替法による置き換え（Replacement）、および動物の苦痛の軽減（Refinement）の３Ｒを目指すことである。したがって、生体内の細胞応答を反映できる細胞培養技術の開発、あるいは従来法に比べて使用する動物数を削減できるような試験法の開発を推進することで、化学物質の特定の器官に対する作用、ひいては化学物質の全身に対する作用を解析できる技術を確立していくことが重要な課題となる。そこで、本講演では、化学物質のヒト各器官に於ける影響を予測するために開発を進めているコラーゲンビトリゲル膜チャンバーを用いた培養技術、および化学物質の全身に対する影響を予測するために開発を進めている組織切片を用いた培養技術について開発状況を紹介する(1)。
生体内の結合組織に匹敵する高密度コラーゲン線維より構成されるコラーゲンビトリゲル薄膜は、強度、透明性およびタンパク質透過性に優れ、両面に異種細胞を培養できるので、３次元培養担体としての利用が進んでいる(2)。化学物質の動態解析への応用を指向したコラーゲンビトリゲル膜
チャンバーの開発では、各器官の最小ユニットを上皮・間充織・内皮と捕らえると、化学物質の動態は皮膚や角膜や消化管のように上皮側から間充織・内皮側へ移行する経路と、血管内に投与された薬剤のように内皮側から間充織・上皮側へ移行する経路になることに着眼した。そこで、コラー
ゲンビトリゲル薄膜を培養担体に用いて、化学物質の移行経路を反映できる３次元培養モデルを再構築する培養技術の開発を目指した。その結果、コラーゲンビトリゲル薄膜を貼ったチャンバーを開発することで、化学物質が最初に暴露される上皮細胞あるいは内皮細胞のみで構成される「組織70

シート」モデルと、上皮細胞と間充織細胞と内皮細胞で構成される「器官様プレート」モデルを容易に再構築できる培養技術の開発に成功した。
動物組織の複雑な微細構造と成分を保持している組織病理学用の切片を、動物細胞の培養担体に利用する培養技術を世界に先駆けて開発した(3)。その結果、切片担体は部域特異的なシグナルを細胞に伝達し、細胞はシグナルを認識するセンサーとして働くことが分かってきた。具体的には、マウスに四塩化炭素を投与して軽度の肝障害を惹起した後の様々な再生過程にある肝組織より作製した切片担体上でマウス ES 細胞を培養することで、障害肝組織の切片には ES 細胞の接着、伸展および成長を阻害する活性があること、また、特定時期の再生肝組織の切片にのみ ES 細胞をアルブ
ミン発現細胞へ分化誘導する活性があることを見出した。また、ラットの様々な臓器より作製した切片担体上で異なる細胞株を培養して各々の細胞挙動を比較することで、細胞の接着、増殖、分化などの挙動は、細胞が同じでも組織切片に依存して異なること、また組織切片が同じでも細胞に依存して異なることを見出した。つまり、化学物質を投与した実験動物一個体を有効に活用して、標的器官のみならず全身の諸器官から多数の切片担体を作製できるので、切片担体に介在する薬効・毒性を様々な培養細胞の挙動で解析する新しい培養システムの構築が期待できると考えている。
【参考文献】(1) 竹澤俊明.「ヒト試料の研究利用を促進する新しい培養技術の開発」	
  HAB Newsletter 17(2):9-12, 2011.
(2) 竹澤俊明、他.「コラーゲンビトリゲル薄膜の特徴を活用した新しい細胞培養システムの開発」
	 Yakugaku Zasshi 130(4): 565-574, 2010.
(3) 竹澤俊明、他. 「組織病理学用の切片を動物細胞の培養担体に利用した先端研究」	
  Organ
Biology 15(2): 107-114, 2008.

71

SP-4

ES/iPS 細胞から肝への分化誘導	 粂	
 昭苑 1,	 白木	
 伸明 1,	
 山添	
 大士 1,	
 曾	
 	
 勤 2,	 持立	 克身 2	
 	 (1 熊本大学	
  発生医学研究所,	
 2 国立法人環境研究所	
  環境健康研究
領域)	
 
	
 

私たちは、マウスおよびヒト ES/iPS 細胞を用いて肝臓への分化誘導研究に取り組んでいる。
ES/iPS 細胞を用いて、正常な発生分化過程を試験管内で再現できる系を構築し、再生医学および創薬への応用を目指している。これまでに、ES/iPS 細胞から前駆細胞を効率よく誘導する支持細胞を用いた独自の共培養系を開発した。このマウス胎仔中腎培養細胞 M15 細胞との共培養系を用いる
ことで、３胚葉由来の細胞を分化誘導することが可能だが、液性成長増殖因子を添加することで、とりわけ肝膵などの消化器官細胞を選択的に分化誘導することが可能になった (Stem Cells 2008,
Genes Cells 2008, BBRC 2009)。様々な検討の結果、消化器官細胞の分化誘導過程には、細胞基底膜成分が重要な役割を果たしていることが示唆された。成長増殖因子と細胞基底膜が相乗的に作用することで、細胞分化を引き起こされる。今後、細胞基底膜構造を利用して、さらに成熟肝臓機能細胞の分化誘導方法を改良し、再生医療、創薬の応用可能な細胞の創出へ向けて研究を進めていき
たい。

72

SP-5

疾患特異的 iPS 細胞の樹立とその応用	
 
浅香	
 勲	
 (京都大学	  iPS 細胞研究所	
  規制科学部門)	
 iPS 細胞（induced Pluripotent Stem Cells）
は，
既に分化した体細胞に ES 細胞（Embryonic StemCells）で発現している Oct3/4，Sox2，Klf4，c-Myc の 4 つまたは c-Myc を除く 3 つの遺伝子を導入することで樹立される全く新しい多能性幹細胞である．皮膚生検組織のように既に分化した体細胞から樹立可能であるため，ES 細胞では困難であった難病患者からの疾患発症に関与する遺伝情報を有した多能性幹細胞の樹立が可能となった．これらの疾患特異的 iPS 細胞はそれぞれの疾患によって傷害される細胞あるいは組織へ分化させ，病態を再現することで，発症あるいは進行機序の解明や治療薬探索に有用なツールとなる．
京都大学では 2008 年 6 月より疾患特異的 iPS 細胞の樹立プログラムが，「医の倫理委員会」の承認の元に開始され，現在種々の疾患由来の iPS 細胞の樹立が進められている。そして、これまでに神経変性疾患，呼吸器疾患，腎疾患，循環器疾患，内分泌代謝疾患 ，免疫疾患等の患者より iPS
細胞株が樹立された．<BR>本講演では，京都大学 iPS 細胞研究所で実施している，患者由来の皮膚生検組織を材料として Oct3/4，Sox2，Klf4，c-Myc の 4 因子をレトロウィルスベクターにて遺伝子導入する疾患特異的 iPS 細胞の樹立法を解説する．また，既に樹立された腎疾患，免疫疾患等いくつか疾患特異的 iPS 細胞株を用いた病態解析研究の応用例についても紹介したい．

73

SP-6

医薬品開発におけるヒト多能性幹細胞利用の展望	
 
神野	
 敬將,	
 新井	
 裕幸,	
 中村	
 和市	
 	
 
(日本製薬工業協会	
  医薬品評価委員会	
  基礎研究部会)	
 	
 人工多能性幹（iPS）細胞、胚性幹（ES）細胞及び間葉系幹細胞などの多能性幹細胞は自己複製能及び多分化能を有しており、再生医療、創薬、医薬品安全性評価および病態モデル作製など様々な分
野での応用が期待されている。一方、多能性幹細胞の応用については克服すべき課題も多く、実用化への見通しは明確ではない。そこで今回、日本製薬工業協会に加盟している 62 社を対象に、ヒト多能性幹細胞に対する期待や各社の取り組みなどについてアンケート調査（回答：内資 26 社、外資 7 社、
回答率 53%）を行い、医薬品開発におけるヒト多能性幹細胞利用の展望について検討した。
現在までに幹細胞を利用した経験がある企業は 33 社中 13 社であるが、今後利用を希望している企業も含めると、大半の企業が多能性幹細胞研究に興味を示している傾向が得られた。利用する幹細胞については、これまでは iPS 細胞、ES 細胞及び間葉系幹細胞、いずれもほぼ同数の企業で利用されてきたが、今後は iPS 細胞の利用を希望する企業が多かった。また、目的とする分化誘導後の細胞としては主に心筋細胞、肝細胞、神経細胞が挙げられたが、特に肝細胞については、今後幹細胞の利用を希望する企業からの高いニーズが認められた。
心筋細胞に関して、幹細胞利用の目的はマルチイオンチャネルへの影響評価、トルサード・ド・
ポアンツの発現予測、薬効スクリーニング、hERG チャネルへの影響評価、細胞毒性評価などが挙げられた。使用したい分化後の細胞については、心室筋細胞、洞結節細胞、心房細胞、プルキンエ
線維細胞など、細胞機能については、活動電位伝播、膜電位、拍動、イオン電流などであった。
肝細胞に関して、薬物動態及び毒性分野からの需要が高く、肝毒性、酵素誘導、トランスポーター
輸送、代謝物予測などへの利用が目的とされている。また、現在、製薬企業で汎用されている市販のヒト肝細胞の持つ大きな問題点は、良質な同一ロットの細胞の供給が限られていることであり、この問題が幹細胞由来肝細胞の樹立により、少なからず改善されるものと期待されている。分化誘導後の肝細胞に要求される機能は、十分な薬物代謝酵素活性及びトランスポーター輸送活性であった。
神経細胞に関して、薬効薬理分野からのニーズが最も高く、次いで毒性、安全性薬理分野での需要が認められた。利用の目的としては、神経毒性及び中枢神経系への作用の評価、作用機序の解明などが多く寄せられた。目的とする分化後の細胞は、ニューロンが多く、ドパミン受容体やセロトニン受容体などの十分な発現を望む声が多かった。
上記の細胞以外にも、消化管上皮細胞、腎細胞及び血管内皮細胞などへの分化誘導を望む声が多く、作用機序の解明、スクリーニング及び薬効モデルの構築などが主な利用目的であった。
幹細胞利用のための解決すべき課題として、分化細胞の品質の保証、細胞の供給システムの構築、分化細胞の標準化、分化細胞を用いた薬物評価試験の精度保証などが挙げられた。その他、特許使用料も含めて、知的財産権の問題も解決すべき課題と考えられている。また、国内の幹細胞研究体制に関して、プロジェクト同士の連携を深めてほしい、より産官学一体となった取り組みをしてほしい、

74

複数のプロジェクトが同様の研究に着手しており、研究の進捗が判断できないなどの意見も多かった。
今回の調査により、ヒト多能性幹細胞利用に対する企業の要望や課題が明らかとなった。また、企業のヒト多能性幹細胞への期待の高さも示された。今後、欧米に先行して各課題に取り組み、克服することにより様々な分野におけるヒト多能性幹細胞の実用化が期待される。

75

SP-7

iPS 細胞関連特許の実用化と iPS 細胞提供	
 
白橋	
 光臣	
 (iPS アカデミアジャパン株式会社)	
 iPS アカデミアジャパン株式会社（以下、弊社）は、山中教授による革新的な iPS 細胞技術をいち早く社会に還元し、かつ幅広く活用出来るように、その iPS 細胞技術に関連する知的財産（特許発明）を円滑かつ適切に管理し、これらの知的財産を用いて iPS 細胞技術の事業化を目指す企業等にその特許実施権を許諾することを目的として 2008 年 6 月に設立されました。 弊社は、iPS 細胞
技術がバイオ技術に於ける日本発のパイオニア発明であることに鑑み、これら iPS 細胞技術に関する知的財産が広く研究活動や事業活動に迅速に利用される様、非独占的な特許ライセンス許諾を原則としています。国内各大学、公的研究機関などの非営利団体が自らの研究、教育を目的として特許発明を実施する場合には無償で、企業などの営利団体には有償（適切な対価）で実施権を付与する旨を当社のライセンスポリシーの中で謳っています。 現在、弊社が実施権を保有している iPS
細胞技術のライセンス対象特許は、京都大学をはじめ大阪大学及び岐阜大学からそれら実施権の許諾を夫々受けており、その特許件数（出願件数を含む）は延べ 200 件近くに達しております。一方、2009 年 3 月に初めて国内バイオ企業リプロセル社との間でライセンス許諾契約を締結し、その後、国内外でライセンス活動を積極的に進めて参りましたが、本年 3 月にはその実施権許諾先が国内企
業 26 社、海外企業 5 社の総計 31 社に達しています。 弊社は、上記の特許ライセンス活動に加え、iPS 細胞関連技術の更なる普及を支援策の一環として、2010 年 4 月より、京都大学が樹立しました
iPS 細胞３株を京都大学に代わって企業の皆さまに配布しています。また、企業研究者に実際に iPS細胞に触れて頂けるように iPS 細胞の培養体験コースを設け、既に数社の企業の研究者の方に利用して頂いております。 本日は、これまでの当社の iPS 細胞関連特許の実用化の取り組み及び細胞提供の現状について簡単に紹介させて頂きます。

76

日本組織培養学会第８４回大会
特別講演 （SL）

5 月 27 日(金)（１日目）17:10‐18:00

再生医療を見すえたヒト ES 細胞の樹立
阿久津 英憲 （国立成育医療研究センター 研究所）

司会：鈴木 崇彦 （東京大学大学院）

77

SL-1

再生医療を見すえたヒト ES 細胞の樹立	
 
阿久津	
 英憲	
 	
 
(国立成育医療研究センター	
  研究所	
  生殖・細胞医療研究部)	
 	
 細胞治療を主にした再生医療の確実な成功には、ヒト組織から大量の正常な細胞が獲得できることと、臨床的な改善または治癒を維持するための十分な期間移植した細胞が生体内で増殖・維持され適切な機能を果たすことが必要である。十分な治療効果と安全性を担保した細胞治療にとって重要な課題は、治療に足る十分な細胞数を得ることであり、その細胞培養工程では品質管理と追跡可能性が確保され各種の汚染を防いで良質な細胞を提供しなければならない。ヒト ES 細胞に関して
は、細胞性質と培養技術上で特に考慮しなければならない問題がある。細胞性質については、高い多分化能性及び自己複製能を持つが故に含有する分化・増殖性制御であり、培養の技術的な点では未分化状態を維持するこが不安定であり、増殖過程で分化しやすい傾向にあるということである。
ヒト ES 細胞の医療応用に必要な技術的な要件としては、均一な細胞性質を保つ培養工程の確立、細胞の品質基準と管理体制の確立、長期培養工程における細胞品質の管理と評価方法の確立、そして動物由来成分の排除と感染性因子混入リスク管理などが主に考えられる。
1998 年にヒト ES 細胞樹立が報告され難治疾患への細胞治療が期待されてきたが、2010 年 10 月に世界で初めての“First in Man Trial”として、急性脊髄損傷への第 1 相臨床試験が米国で始まった。国立成育医療研究センターでは、再生医療を見据えてヒト ES 細胞樹立研究を行っている。今回は、ヒト多能性幹細胞研究の現況と我々のヒト ES 細胞研究の取組みについて報告する。

79

日本組織培養学会第８４回大会
第３回 培養指導士講習会
細胞培養基盤技術講習会コースⅢ トライアル （WS-1〜3）

5 月 28 日(土)（２日目） 9:35‐10:35
日本組織培養学会 教育研究システム委員会

企画

司会：古江-楠田 美保（独立行政法人医薬基盤研究所）

81

WS-1

細胞の検索方法とデータシートの読み方について	
 
上田	
 忠佳	
 (DS ファーマバイオメディカル株式会社	
  研究開発本部	
 研究第二グループ)	
 	 近年、インターネットを介した検索エンジンの発展に伴い、実験の目的や検索のキーワードを明確に設定すれば必要な情報を入手することが簡単に出来るようになった。また、細胞培養そのものの普及により細胞を用いた研究・試験は一般化されつつある。その反面、細胞を生き物として扱う
ことよりも試薬的に扱うことも多くなってきたように感じる。位相差顕微鏡で細胞の形態を観察せず、週 2 回培地交換、週 1 回継代といったルーチン化した培養手法で種を維持している施設や自己が使用する細胞が浮遊系なのか接着系なのかを知らずに細胞の供給を受け、HL60 細胞を購入してトリプシン処理したら細胞が無いといった問合せも半年に 1 回くらい寄せられるのが現状である。
これらの事例は、細胞を培養する前に原著論文や細胞供給時に付随するデータシートを読んでいないことに起因するものと推測される。また、細胞のデータシートについては慣例的な表現などもあり、
その意味などをよく理解しないと誤った培養方法により細胞を死滅させてしまう可能性もある。
細胞を研究・試験に使用するために最も重要なことは細胞のもつ特性を最大限に発揮させることにある。そのためには、細胞を殺さない、あるいは何とか生きているといった培養法ではなく健康な状態を保ったまま培養する必要がある。
そこで、本講演ではそのような慣例的な表現やデータシートの読み間違えによるトラブル例などをご紹介させていただきたい。

83

WS-2

株化細胞の増殖曲線の作成方法	
 
浅香	
 勲	
 (京都大学	  iPS 細胞研究所	
  規制科学部門)	
 増殖性の培養細胞は，一般に培養時間の経過とともに遅延期(lag phase)，対数増殖期（logarithmic
growth phase），定常期（stationary phase），死滅期(death phase)の状態を経ていく．細胞増殖曲線は前述の細胞状態の経時変化や，細胞の基本的性質である倍加時間，飽和細胞密度等，細胞の増殖サイクルを把握する上において有用な手法であるだけでなく，細胞の増殖能に変化がないかを確認するためにも重要な基本技術である．同時に，細胞増殖曲線の作成には，培養細胞の取り扱いで重視すべき基本操作や，細胞数の計数，生存率の算出，細胞増殖の概念などの細胞培養には必須の内容が網羅されているため，細胞培養技術の習得には欠かせない研究手法である。
本講演では，細胞数による細胞増殖曲線作成の手順と，増殖曲線を再現性よく作成するために必
須な，実験デザイン，実験操作のポイント，実験上考慮が必要な事項等について解説する．また，得られた増殖曲線の解釈や，細胞数以外の指標を用いた細胞増殖のモニタリングについても簡単に
触れたい．

84

研究の進め方と細胞を扱うときの倫理問題	
 

WS-3

絵野沢	
 伸	
 (国立成育医療研究センター)	
 個人的な経験をもとにお話しします。参考にしていただければ幸いです。
１． 研究の進め方○ 情報収集・ インターネット：	
  検索サイト、新・組織培養質問箱
・ 本、専門誌（ジャーナル）：	
  組織培養辞典、細胞バンク・遺伝子バンク、組織培養の技術、	
  細胞トキシコロジー試験法、組織培養研究、その他
・ 学術集会・	 人○	  実施に際して許認可の要があればその手続き（次項で）○ 機器、試薬（細胞を含む）などをそろえる○ 技術、知識の習得
・ 新・組織培養質問箱
・ 細胞培養基板技術講習会

２． 許認可に関する対応○ 基礎研究だけの場合
・ ヒトゲノム・遺伝子解析研究に関する倫理指針
・ 臨床研究に関する倫理指針
・ 疫学研究に関する倫理指針
・ ヒト ES 細胞の樹立及び分配に関する指針、ヒト ES 細胞の使用に関する指針
・ ヒトに関するクローン技術等の規制に関する法律、同法施行規則、特定胚の取扱いに関する指針
・ 遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律、および関連政令、省令、告示・	
 動物の愛護及び管理に関する法律85

○ 介入のある臨床研究の場合
・ 臨床研究に関する倫理指針
・ 疫学研究に関する倫理指針
・ 遺伝子治療臨床研究に関する倫理指針
・	 生殖補助医療研究目的でのヒト受精胚の作成・利用の在り方について（これまでの検討の状況の提示）○	  契約の遵守○	  利益相反（COI、Conflict of Interest）

参考）憲法、法律、政令、省令、規則、告示
指針 ＝ 告示
憲法第二十三条	  学問の自由は、これを保障する

86日本組織培養学会第８４回大会
Session in English（OE-1〜5）

5 月 28 日(土)（２日目）10:40‐12:00
Chairpersons
ISHII NAOAKITokai University School of Medicine
WADHA RENU
National Institute of Advanced Industrial Science andTechnology

87

OE-1

TOPIC- The role of oxidative stress from mitochondria on aging
and are-related diseases
NAOAKI ISHII, TAKAMASA ISHII, MASAKI MIYAZAWA(Tokai University School of Medicine, Basic Medical Science andMolecular Medicine, Department of Molecular Life Science)

We have previously demonstrated that excessive mitochondrial O2- caused by a mutation(G71E in C. elegans, I71E in Drosophila or V69E in mouse) in SDHC subunit of Complex II led
to premature death in C. elegans and Drosophila, tumors in mouse cells and infertility intransgenic mice. In humans, it has been reported that the mutation in SDHB, SDHC or
SDHD often results in familial paragangliomas (PGLs). Recently, we have established a
Tet-mev-1 conditional transgenic mouse with our uniquely developed a Tet-On/Off system
equilibrating expression levels from the transgene with endogenous that. The Tet-mev-1
mouse with mitochondrial respiratory chain dysfunction overproduced O2-. The mitochondrial
oxidative stress resulted in excessive apoptosis leading to low birth weight and growth
retardation in the neonatal developmental phase. We also observed that the Tet-mev-1 mouse
has low fertility, pregnancy and delivery rates, and occasionally result in habitual abortion ormaternal death. It has also been confirmed that this mutation caused chronic inflammations
in lung, lacrimal gland, liver and pancreas, and also caused decline of learning and memory
ability in the senior adult mouse. As it is thought that intracellular oxidative stress leads tolife-style related and age-related diseases such as diabetes, arteriosclerosis, cancer and neuronaldegenerative diseases, the Tet-mev-1 mouse could clarify that these diseases are caused byexcessive O2- produced from electron leakage in mitochondria.

89

OE-2

TOPIC- Biology of stress protein MORTALIN: focus on cancer
and neurodegeneration
RENU WADHWA, SUNIL KAUL (National Institute ofAdvanced Industrial Science & Technology (AIST))

Mortalin is a member of hsp70 family of stress proteins. It was first cloned in our laboratory
in 1993 in a cybrid screening system. Over the years, it has emerged as a dynamic proteinwith several essential functions including chaperoning, intracellular trafficking, mitochondrial
import of proteins, cell proliferation and control of ROS production. It is upregulated in avariety of cancers, showed correlation with tumor aggressiveness and contribute to humancancers by inactivation of tumor suppressor protein p53. Consistent with this, cancer cells
compromised for mortalin enter growth arrest or apoptosis. In contrast to the cancers, loss ofmortalin was associated with age-associated neurodegenerative diseases including Alzheimer's
and Parkinson’s. Furthermore, manipulations of mortalin level in dopaminergic neurons
resulted in significant changes in their sensitivity to PD phenotypes via pathways involving
mitochondrial and proteasomal function as well as oxidative stress. These data demonstrate
the key role of mortalin in mitochondrial function and stress management that are tightly
linked to aging and cancer.

90

OE-3

TOPIC- Molecular insights into Ashwagandha leaf-drived factors
for stress and aging
SUNIL KAUL, DIDIK PRIYANDOKO, NAVJOT SHAH, RENU
WADHWA (National Institute of Advanced Industrial Science &Technology (AIST))

Many of the traditional herbal extracts are increasingly being appreciated with Westernmodels of integrative health sciences and evidence-based approach both in research andpractice. Ashwagandha (Withania somnifera; Solanaceae) is one of the most commonly usedplants in Ayurveda (world’s oldest system of home medicine system). Extracts from different
parts of the plant including root, shoot, seed and berry have been in use for a variety of healthpromoting effects. The main active constituents of Ashwagandha leaves are alkaloids andsteroidal lactones (commonly known as Withanolides). We had previously investigated thebiological activity in the alcoholic extract of Ashwagandha leaf extract (i-Extract) anddemonstrated that it has a strong anti-cancer activity. By chemical fractionation, the activity
was assigned to its constituent Withanone (i-Factor). We have investigated the gene targets
and pathways involved in cytotoxicity of i-Extract by loss-of-function screening (abrogation ofi-Extract induced cancer cell killing) achieved by introduction of a shRNA and randomized
ribozyme library in cell based viability assays. Both of these revealed the involvement of tumor
suppressor protein p53 in i-Extract induced killing of cancer cells. Normal human fibroblasts,on the other hand, showed down-regulation of p53 function and delayed senescence.
Bioinformatics analyses revealed the involvement of apoptosis and insulin/IGF signaling
pathways that are well linked to the ROS signaling, DNA and mitochondrial damage in cancer
cells. Based on these data, we propose that in the present scenario of increase in aging society
and cancer incidence, i-Extract and Withanone are cheap, easily available potential reagentsthat could be recruited for stress, aging and cancer management.

91

OE-4

hnRNP-K promotes tumor metastasis by induction of genes
involved in extracellular matrix, cell movement and angiogenesis
RAN GAO1,2, TETSURO ISHII2, SUNIL KAUL1, RENU
WADHWA1(1National Institute of Advanced Industrial Science & Technology(AIST), 2Graduate School of Life & Environmental Sciences,
University of Tsukuba)

Cancer is a leading cause of death and still awaits effective therapies. Rapid growth ofindustrialization has contributed to increasing incidence of cancer globally. One of the reasonsthat most of the cancers fail therapy is due to the metastasis. Hence identification of thefactors leading to metastasis is highly important in designing of effective and novel anti-cancer
therapeutics. In our earlier study, we found that the heterogeneous nuclear ribonucleoprotein
K (hnRNP-K) is involved in metastasis.

Here, we studied the effect of hnRNP-K on

proliferation and metastatic properties of cancer cells in vitro and in vivo. We have establishedstably overexpressing hnRNP-K derivative cell lines of NIH3T3 and U2OS. hnRNP-K wascompromised in metastatic HT1080 cell line using intracellular antibody reported in our earlier
study. We studied the effect of hnRNP-K overexpression and silencing using xenograft and
tail vein tumor cell injections in nude mice model. Molecular basis of the hnRNP-K induced
malignant and metastasis phenotype was dissected by DNA microarray and pathway analyses.
We found that the hnRNP-K regulates extracellular matrix, cell motility and angiogenesis
pathways. Involvement of the selected genes (CCK, MMP3, PTGS2 and CTGF) and thepathways was validated by gene specific expression analysis. Our results demonstrated thatthe hnRNP-K is a potential target of metastasis therapy.

92

OE-5

PINK1 knockdown increases the apoptosis induced byadenovirus-mediated REIC/Dkk-3 overexpression on bladdercancer cells
YU JIN, HITOSHI MURATA, KEN KATAOKA, MASAKIYOSAKAGUCHI, NAM-HO HUH(Dept. Cell Biol., Okayama Univ. Grad. Sch. Med., Dent. &Pharm. )PINK1 is a serine/threonine kinase with a mitochondrial localization signal and mutations in
the gene are causatively linked to an autosomal recessive form of Parkinson's disease. In
addition, the expression levels of PINK1 are increased in different cancers with high metastatic
potential. We have found that overexpression of PINK1 can up-regulate the phosphorylation of
Akt through the mTORC2 complex in human neuroblasts. And it was also reported that
PINK1 may regulate mitochondrial proteins. REIC/Dkk-3 was first identified as adown-regulated gene in normal human fibroblasts immortalization and it is significantly
downregulated in a broad range of cancer cell types. Adenovirus-mediated REIC/Dkk-3(Ad-REIC) overexpression has showed a therapeutic effect on human prostate cancer, testicularcancer, renal cell carcinoma, pleural mesothelioma, and breast cancers. But some cancer cells
showed the resistance to Ad-REIC in different degrees and overexpression of Ad-REIC in thesecells only had partial apoptosis effects. For bladder cancer cells, they are resistant to Ad-REIC
because of the high expression levels of Bcl-2 and/or Bcl-xL which can reduce the apoptosis at
mitochondria. For these reasons, we planned to combine the PINK1 knockdown by siRNA with
Ad-REIC overexpression to increase the therapeutic effect on Ad-REIC resistant bladder cancer
cells. We started with seven bladder cancer cell lines, and six of them showed the resistant effectto Ad-REIC overexpression. Next, we checked the adenovirus infection efficiency of these six celllines with adenovirus LacZ. Two cell lines showed low infection efficiency, but the other four celllines showed high infection efficiency and resistance to Ad-REIC at the same time. With thesefour Ad-REIC resistant bladder cancer cell lines, we checked the apoptosis effect induced by
PINK1 knockdown and Ad-REIC overexpression. The results showed PINK1 knockdown canremarkably enhance the apoptosis induced by Ad-REIC overexpression. Western blotting
revealed that a anti-apoptotic protein of Bcl-2 family, Bcl-xL, has been down-regulated by
PINK1 knockdown. We conclude that PINK1 knockdown increases the apoptosis induced by
Ad-REIC overexpression through the down-regulation of Bcl-xL.

93

日本組織培養学会第８４回大会
一般演題(Ⅳ) （OG-4-1〜4）「正常細胞とがん化」
5 月 28 日(土)（２日目）13:00‐13:44

座長 片岡 健 岡山大学大学院
山崎 泰助 財団法人河野臨床医学研究所

95OG-4-1

Ashwagandha leaf-derived withanone protects normal humancells against the toxicity of methoxyacetic acid, a major industrial
metabolite
プリヤンドコ	 ディディック 1,2,	
 石井	
 哲郎 2,	
 カウル	
 スニル 1,	 	
 ワダワ	
 レヌー1	
 (1 独立行政法人	
  産業技術総合研究所,	
 2 筑波大学	
 生命環境科学研究科)	
 	
 The present day lifestyle heavily depends on industrial chemicals in the form of agriculture,cosmetics, textiles and medical products. Toxicity of the industrial chemicals is recognized as
an alarm to human health and hence the need for alternative non-toxic natural products or
adjuvants that may serve as antidotes are in high demand. We have investigated the effects of
Ayurvedic herb Ashwagandha (Withania somnifera) leaf extract on methoxyacetic acid (MAA)
induced toxicity. MAA is a major metabolite of ester phthalates that are commonly used inindustry as gelling, viscosity and stabilizer reagents. We report that MAA cause prematuresenescence of normal human cells by mechanisms that involve ROS generation, DNA andmitochondrial damage. Withanone protects cells from MAA-induced toxicity by suppressing
the ROS levels, DNA and mitochondrial damage, and induction of cell defense signaling
pathways including Nrf2 and proteasomal degradation. Based on these findings, we suggest
the use of withanone as health adjuvant in a variety of consumer products where the toxicity
has been a concern because of the use of ester phthalates.

97OG-4-2

Alcoholic extract of Ashwagandha leaf and its component
withanone induce differentiation in brain derived cancer cellsシャハ	
 ナブジョット 1,2,	
 石井	
 哲郎 2,	
 ワダワ	
 レヌー1,	
 カウル	
 スニル 1	 	 (1独立行政法人	
  産業技術総合研究所	
  ,	
 2筑波大学	  生命環境科学研究科)	
 	
 Alcoholic extract of Ashwagandha (Indian ginseng) leaves (i-Extract) was recently shown topossess anticancer activities that operate through selective activation of p53 pathway andinduction of oxidative stress in cancer cells. In a sharp contrast to cancer cells, normal cells
showed inactivation of p53 activity and protection against oxidative stress. Furthermore, we
found that the low doses of i-Extract and withanone induce differentiation of glioma andneuroblastoma cells. We next undertook C6 glioma and IMR32 neuronal cell regeneration
models to investigate whether these brain-derived cells could recover from oxidative stressinduced by hydrogen peroxide. We demonstrate that in response to the treatment with
i-Extract and withanone, but not withaferin A, glial and neuronal cell undergo differentiation as
seen by upregulation of GFAP in C6, and NF-H, MAP-2, PSD-95 and GAP43 in IMR32 cells.
We propose that the use of in vitro cell culture and differentiation models may serve as an easy
and economic way to identify new factors that could be employed for functional therapy of brain
cancers and other pathologies associated with aging.

98OG-4-3

REIC/Dkk-3 の扁平上皮における発現とその制御因子の探索
片岡	
 健,	
 阪口	
 政清,	
 杜	
 剛,	
 前原	
 奈都美,	
 村田	
 等,	
 許	
 南浩	
 	
 
(岡山大学大学院	
  医歯薬学総合研究科	
  細胞生物学分野)	
 	
 本研究室でクローニングされた REIC/Dkk-3 は Dickkopf（Dkk）ファミリーに属する分泌タン
パク質である。Dkk ファミリーの中で Dkk-1 などは Wnt-βカテニン伝達経路を負に制御することで知られるが、Dkk-3 に関してはこの経路への関与も含め生理機能がいまだにわかっていない。一方、多くのがんにおいて REIC/Dkk-3 の発現が低下しており、アデノウイルスを用いて強制発現させるとがん細胞特異的にアポトーシスが誘導されることも知られている。これまで REIC/Dkk-3 は正常組織においてユビキタスに発現すると思われていたが、我々の予備的な検討では皮膚などの扁平上皮組織では特異的な発現をしていた。本発表では各種扁平上皮組織における REIC/Dkk-3 の発現を詳細に検討し、さらに培養ケラチノサイトでの REIC/Dkk-3 発現を変化させる因子をスクリーニングした結果を報告する。
マウス皮膚組織を用いた分化マーカーとの二重免疫染色の結果から、REIC/Dkk-3 は表皮有棘層と毛嚢内毛根鞘に強く発現していることがわかった。各種扁平上皮組織での比較を行ったところ、眼球角膜を除いて調べた扁平上皮組織全て（耳介、口腔、舌、食道、子宮頸部、足底）で強い発現を認めた。培養細胞を用いた検討では、正常ケラチノサイトで認めた REIC/Dkk-3 の発現は、不死化したケラチノサイト株（HaCaT）や皮膚がん細胞株（A431、BSCC-93、HSC-5）で明らかに減少していた。また培養正常ケラチノサイトを用いた各種増殖因子のスクリーニングの結果、Tumor
Necrosis Factor（TNF）-αが REIC/Dkk-3 の発現を濃度依存的に減少させることがわかった。今後、TNF-αによる REIC/Dkk-3 の発現制御の機構を検討する方針である。

99

OG-4-4

悪性中皮腫細胞の増殖における CTGF (connective tissue growth
factor)の役割について藤井	
 万紀子 1,	
 豊田	
 武士 2,	
 中西	
 速夫 3,	
 矢田部	
 恭 4,	 伊藤	
 成美 1,	
 近藤	
 栄作 3,	
 松平	
 康枝 1,	
 辻村	
 亨 5,	 関戸	
 好孝 1	
 	
 (1 愛知県がんセンター研究所	
  分子腫瘍学部,	
 2 国立医薬品食品衛生研究所	
  安全性生物試験研究センター	
  病理部第三室,	
 3 愛知県がんセンター研究所	
  腫瘍病理学部,	
 4 愛知県がんセンター中央病院	
  臨
床検査部,	
 5 兵庫医科大学	
  病理学講座)	
 	
 悪性中皮腫細胞の増殖では、いくつかのがん抑制遺伝子の欠失が報告されており、代表的なもの
として p14INK4a/p14ARF, neurofibromatosis type2 (NF2)がある。一方、悪性胸膜中皮腫の患者の胸水中では TGF-βの濃度が上昇することが知られており、TGF-βの悪性中皮腫細胞に対する細胞増殖促進能が示唆されている。我々は YAP が Smad3 と結合し、CTGF タンパク質発現を調節することを見出した。興味深いことに、YAP が関与し Smad3 と協調的に転写を促進する標的遺伝
子は限定的であり、Smad7、MMP2、fibronectin などは YAP には影響を受けない。CTGF のプロ
モーター領域には特殊な配列があり、Smad3、YAP、p300 がその領域において複合体を形成し、転写を促進すると考えられた。CTGF は、CCN ファミリー (Cyr61、CTGF、Nov) と総称されるタンパクの一つであり、CCN2 とも呼称される。36-38 kDA 分子量 38 kD の分子で臓器線維化病
巣に過剰に発現されており、その発現量は線維化の程度に相関することが報告されている。CTGF
は TGF-βの有する多彩な作用の一部である線維芽細胞増殖/細胞外マトリックス産生亢進作用のカ
スケードの下流に位置づけられている。本研究では、CTGF の腫瘍増殖、形成における役割について検討を行った。レンチウィルスベクター発現系を使用し悪性中皮腫細胞株 NCI-H290 細胞を使用して focus assay を行ったところ、CTGF を強発現させるとコントロールに比べ、focus の数が上昇した。一方、CTGF をノックダウンさせるとフォーカス形成能が抑制された。CTGF をノックダウンした NCI-H290 細胞では、５日培養後の細胞数はコントロールに比べ減少した。更にヌード
マウスの胸腔に CTGF の発現をノックダウンした NCI-H290 細胞を移植したところ、コントロー
ルに比べ CTGF をノックダウンしたグループは、生存期間の延長が認められた。悪性中皮腫が腫瘍
周囲の微小環境を整えながら、より細胞を増殖・浸潤させる可能性が示唆された。

100

日本組織培養学会第８４回大会
一般演題(Ⅴ) （OG-5-1〜5）「角膜」
5 月 28 日(土)（２日目）13:44‐14:28
座長 横尾 誠一 東京大学
山本 直樹 藤田保健衛生大学

101OG-5-1

コラーゲンビトリゲル薄膜チャンバーを利用した新しい培養技術とその眼刺激性試験への応用岡本	
 愛 1,	 山口	
 宏之 1,2,	
 竹澤	
 俊明 1	
 	 (1 独立行政法人	
  農業生物資源研究所,	
 2 関東化学株式会社)	
 	
 

生体内の結合組織に匹敵する高密度のコラーゲン線維により構成されるコラーゲンビトリゲル薄膜は、強度、透明性およびタンパク質透過性に優れ、両面に異種細胞を培養できるので、３次元培養担体としての利用が進んでいる。しかし、これまでのコラーゲンビトリゲル薄膜は厚さが 15-20
ミクロンであり環状ナイロン膜の支持体がないと捻れ絡まるため、細胞を培養した際の取扱いは「細胞シート」の域を超えられなかった。本研究では、「組織シート」あるいは「器官様プレート」として取扱える厚さ数百ミクロンから 1 ミリ程度のコラーゲンビトリゲル厚膜の開発を行い、そのコラーゲンビトリゲル厚膜の両面に細胞が培養できることを確認した。
また、コラーゲンビトリゲル薄膜に関しては直径 15mm ほどのプラスチック円筒の底面に貼りつけることで、培養用プレートにセットして細胞を３次元的に培養することが可能な取扱い性に優れたコラーゲンビトリゲル膜チャンバーを開発してきた。本研究では、コラーゲンビトリゲル薄膜を貼ったチャンバーでヒト角膜上皮細胞株（HCE-T）を多層化培養して、ヒト角膜上皮組織シートを再構築した。このヒト角膜上皮組織シートのバリア機能、および眼刺激性の化学物質を曝露した後に惹起される経上皮電気抵抗（TEER）値の経時的変化について解析した。その結果、組織学的な観察よりヒト角膜上皮組織シートは 5 層前後の HCE-T 細胞層より構成され、外側の 2-3 層にタイトジャンクションおよびギャップジャンクション関連のタンパク質が強く発現していることが分かった。また、眼刺激性の化学物質 7 種類を曝露したところ TEER の経時的な減少が認められた。
このコラーゲンビトリゲル薄膜チャンバー内に再構築したヒト角膜上皮組織シートは、凍結切片を作製することが可能であるため組織学的な観察が容易である。さらに、TEER 測定にも適するため
眼刺激性の化学物質を短時間で評価できることから、今後、新しい in vitro 眼刺激性試験法としての発展が期待された。

103

OG-5-2

ヒト角膜組織より分離した角膜上皮細胞への不死化遺伝子の導入と評価
山本	
 直樹 1,	
 平野	
 耕治 2,	
 小島	
 肇 3,	
 住友	
 万里子 1,	 山下	
 宏美 1,	 	 中村	
 政志 4,	
 原	
 和宏 4,	
 谷川	
 篤宏 2,	
 谷口	
 孝喜 1,	
 堀口	
 正之 2	
 	 (1 藤田保健衛生大学	
 共同利用研究施設	
 分子生物学・組織化学研究室,	
 2 藤田保健衛生大学	
 医学部	
 眼科学教室,	
 3 国立医薬品食品衛生
研究所	
 薬理部	
 新規試験法評価室,	
 4 ホーユー株式会社	
 総合研究所	 基盤技術研究室)	
 	
 【背景】演者は、水晶体・虹彩・網膜などの眼科領域における組織幹/前駆細胞に p75NTR（CD271）が発現しており、このマーカーによる組織幹/前駆細胞の分離と組織の再生に関する報告をしている。
ヒト角膜輪部に存在する角膜上皮幹/前駆細胞についても p75NTR を発現しており、無血清培地を用いた角膜組織からの分離・培養法を確立した（In Vitro Cell Dev Biol-Animal., 2010）。
【目的】角膜上皮細胞は、細胞特性を保持した状態で複数回継代することが難しい細胞の１つである。また目的とする遺伝子を導入して強制発現細胞を作製する際には、殆ど生ウイルスを用いた遺伝子導入が行われている。今回、生ウイルスを用いずに不死化遺伝子を導入し作製した不死化ヒ
ト角膜上皮細胞（iHCE-NY）の性状について調査した。
【方法】研究目的のために米国アイバンクより購入した研究用ヒト角膜組織を用いて、演者が報告した分離培養法にて得られたヒト正常角膜上皮細胞（HCE）に対して、JCRB Gene Bank より購入した SV40 Large T Ag 遺伝子（SV40）を連結して作製したベクターをエレクトロポレーショ
ン法にて遺伝子導入した。遺伝子導入した細胞をクローニングし、Proteomics を行った。一方、ヒト不死化角膜上皮細胞のコントロールとして理研セルバンクの HCE-T（RCB2280）を用いた。なお用いた HCE-T は CD マーカーによるソーティングとクローニングを行い、さらに三次元角膜再構築モデルの作製も検討した。
【結果】生ウイルスを用いずに HCE に遺伝子を導入して、iHCE-NY を作出することに成功した。
HCE、
HCE-T および iHCE-NY を用いた Proteomics では、
SV40 の導入によって全体のスポットが極端に変化することはなかった。クローニングした HCE-T は、重層化して表層に向かうほど扁平な形態の細胞に分化していた。
【結論】これまでの報告で角膜上皮細胞は遺伝子導入が困難であり、生ウイルスによる遺伝子導入法が用いられているが、生ウイルスを用いなくても遺伝子導入できることが明らかとなった。また SV40 導入細胞でも、培養法を工夫することで細胞が分化できることが分かった。
本研究は、厚生労働科学研究費補助金（H19-医薬-一般-003、H22-医薬-一般-002）の補助を受けて実施した。

104

OG-5-3ヒト培養角膜上皮シートを用いた塩化ベンザルコニウムと抗緑内障薬の点眼毒性の評価
中川	
 卓 1,	 横尾	
 誠一 1,	
 臼井	
 智彦 1,	
 大道	
 幸子 1,2,	
 森	
 洋斉 3,	
 宮田	
 和典 3,	 相原	
 一 1,	 天野	
 史郎 1,	
 新家	
 眞 1,4	 	
 (1 東大病院眼科,	
 2JR 東京総合病院,	
 3 宮田眼科病院,	
 4 関東中央病院)	
 	
 【目的】抗緑内障薬は長期にわたり点眼することから角膜上皮に対する点眼毒性が問題となる。
一方われわれは近年、ヒト角膜上皮に近い、無血清培地にて 5〜6 層の重層扁平上皮のヒト培養角膜上皮細胞シートの作成に成功し、輪部機能不全の患者などに対する眼表面再建に用いている。今
回我々は、このヒト培養角膜上皮シートを用い、塩化ベンザルコニウム（以下 BAC）と近年発売さR
R
R
R
れた抗緑内障薬（Latanoprost○（日点）,LatanoprostPF○（日点）, TravatanZ○（アルコン）, Tapros○R（参天））と Xalatan○（ファイザー）の点眼毒性の評価を行った。

【対象と方法】各濃度（0.0002%, 0.002%, 0.01%, 0.02%. 0.2%）の BAC と各点眼液を、ヒト培
養角膜上皮シートに 10 分間負荷した。その後、細胞増殖能、バリア機能をそれぞれ WST-1 assay、
カルボキシフルオレセイン透過試験を用いて評価した。
R【結果】細胞増殖能、バリア機能ともに、0.01%BAC, 0.02%BAC, 0.2%BAC と Xalatan○で有意に低下した(P＜0.05)。他の 4 剤はコントロールと比べ有意差を認めなかった。
R【結論】ヒト培養角膜上皮を用いた我々の系において、0.01%以上の濃度の BAC と Xalatan○はRR角膜上皮の細胞増殖能、バリア機能に障害を与えるが、Latanoprost ○, LatanoprostPF ○,R
R
R
TravatanZ○, Tapros○は影響を与えないことが確認された。この結果は、Xalatan○に含まれる BACが角膜上皮に障害を与える一方で、より低濃度の BAC や他の防腐剤では角膜上皮への影響が少ないことによると考えられた。今回のわれわれの系はより生理的な状況に近い可能性があり、動物実
験代替法の有力な選択肢となりうることが示唆された。

105

OG-5-4

角膜上皮幹細胞と角膜上皮シートのムチン分泌
横尾	
 誠一,	
 山上	
 聡,	
 臼井	
 智彦,	
 天野	
 史郎	
 
	
 (東京大学	  医学部付属病院	
  眼科学教室)	
 	
 【背景】現在培養角膜上皮シートは、再生医療に用いられる他、動物実験代替法や薬理試験への使用が期待されている。再生医療で用いられている培養角膜上皮は現在、SHEM 培地とマウス 3T3
フィーダー細胞を用いた作成のほか、無血清・無フィーダー培養法などが報告されている。角膜上
皮表面はムチンも産生することが知られており上皮表面を親水性に保つほか上皮の保水性の維持、外界からの異物などを絡め取るなど様々な役割も担っている。しかしこれまで培養角膜上皮シート
でのムチン発現は不明であった。
【目的】培養角膜上皮におけるムチンの発現と発現機構を検討する。
【方法】米国アイバンクより研究用に提供されたヒトドナー角膜の角膜輪部組織より角膜輪部細胞を採取しコーニング社製 Trans Well 6Well Type に 10105cells/Well の密度で播種し、DMEM/F12 + B27 + EGF 20ng/ml の条件で三週間培養し、培養角膜上皮シートを作成した。10%ホルマリン緩衝液で固定したのち、パラフィン包埋後、培養角膜上皮細胞シートの断面を HE 染色
した後、組織像を確認した。また PAS 染色を行いムチンが分布するか評価した。更にヒトドナー角膜より採取した角膜上皮幹細胞を EGF 存在下、Control の他、MAPK の ERK 阻害薬 FR180204を添加し 7 日間培養し、PAS 染色を行い、ムチン発現の差異を検討した。
【結果】EGF 存在下で作成された無血清・無フィーダー培養角膜上皮細胞シートは PAS 染色により表層付近が特に染色され、無血清・無フィーダー条件でもムチンが産出されることを確認した。
また角膜上皮幹細胞由来コロニーでもPAS 染色に陽性であった。
ERK 阻害薬FR1800204 により、増殖は阻害されずコロニーが発生、成長したが PAS 染色の結果 Control と比較して PAS 陽性部分
が薄く、ERK1、2 を阻害することでムチン産出を抑えられることが示唆された。
【結論】無血清・無フィーダー培養角膜上皮シートはムチンを産生する。角膜上皮幹細胞はコロ
ニー形成時においてムチンを産生する。
ムチンの産生は MAPK の ERK 経路が関与していると示唆
される。

106

日本組織培養学会第８４回大会
公開シンポジウム （OS-1〜3）
オーガナイザー： 増井 徹（独立行政法人医薬基盤研究所）
小門 穂（大阪教育大学）
5 月 28 日(土)（２日目）14:45‐16:45

病気に立ち向かう̶市民と研究者の理解のもとにー
後援 国立成育医療研究センター○名取 道也（国立成育医療研究センター）
理解して、協力していただくこと○松村 外志張（横浜バイオリサーチアンドサプライ）
病気に立ち向かうヒトの分身‐組織・細胞‐と３５年のつきあいから○藤本 純一郎（国立成育医療研究センター）
医薬品の開発における患者・家族と医師・研究者の協力

107

日本組織培養学会第 84 回大会	  市民公開シンポジウム
病気に立ち向かう	  ‐市民と研究者の理解のもとに‐後援	
  国立成育医療研究センター

司会、オーガナイザーの紹介とシンポジウムのねらいについて
増井 徹	
  ますい	
  とおる	
  （司会、オーガナイザー）
国立医薬基盤研究所	
  難病・疾患資源研究部長、政策・倫理研究室長兼務
＜経歴＞
76 年	
  東京大学理学部動物学専門課程卒業
81 年	
  東京大学大学院理学系研究科修了
	  米国 NCI、国立医薬品食品衛生研究所変異遺伝部第三室（細胞バンク）などで研究を行う。自然科学研究に加え、ヒトに由来する組織・細胞の研究利用に関する倫理的考察を深める。著書等として、バイオ研究の舞台裏、生命
科学と法、改訂培養細胞実験ハンドブック、他多数。

小門 穂	  こかど	
  みのり	
  （司会、オーガナイザー）
大阪教育大学非常勤講師
＜経歴＞
01 年	
  大阪教育大学教育学部卒業
08 年	
  京都大学大学院人間・環境学研究科博士後期課程研究指導認定退学
	  科学技術文明研究所、東京医科歯科大学生命倫理研究センター、東京財団「生命倫理の土台づくりプロジェクト」、お茶の水女子大学 21 世紀 COE プ
ロジェクト「ジェンダー研究のフロンティア」などで活動。著書等として、
フランス生命倫理法における着床前診断、遺伝診療をとりまく社会—その科学的・倫理的アプローチ、など。

109

絵野沢 伸	  えのさわ	  しん	  （オーガナイザー）
国立成育医療研究センター	
  臨床研究センター	
  先端医療開発室長
東京医科大学	  外科学第三講座	
  客員教授＜経歴＞
80 年	
  東京医科歯科大学歯学部卒業
84 年	
  東京医科歯科大学大学院医学研究科修了
	  明治乳業ヘルスサイエンス研究所、国立小児病院小児医療研究センターを経て現職。主な研究歴は体外型バイオ人工肝臓の開発、免疫拒絶反応における性差、先端医科学の認知に向けた社会基盤調査、先端医学と社会の調和のための基盤整備、人由来組織利用研究円滑化のための社会的・技術的インター
フェースの整備など。著書等として、バイオバンク構想の法的・倫理的検討（上智大学出版）、移植のための臓器摘出と保存（シュプリンガー・ジャパン）など。

オーガナイザーより	  組織培養の研究者なら誰でも知っているヒーラ細胞。そのもとになったがん組織は、1951 年に米国人女性ヘンリエッタ・ラックスさんから提供されたといいます。ラックスさんは手術の甲斐なく、がんが見つかってから数ヶ月という早さで亡くなりました。後に、ラックスさんの子孫は、ヒーラ細胞が世の中でたいへん役立っていることを知り、とてもうれしく光栄に思うとともに、本人や自分たちが知らないところで使われていたことにとまどいも感じたそうです。今回のシンポジウムは、医療の進歩において、人から得られた試料の研究利用や、人をもって行う新薬開発について、専門家（研究者）と市民の望ましい協調関係を築きたいという気持ちで企画しました。

	  このシンポジウムの前半では、医学の進歩の過程でなされた「患者さんの協力」について、専門家側から話題提供をします。まず、名取道也先生１）は、110

研究のために検体を提供いただく、いわば入り口部分のお話を、次いで松村
外志張先生２）は、研究が円滑に進むためには、いただいた検体がどのように研究者の手に届けられなくてはならないかを、最後の藤本純一郎先生３）はご専門の白血病の治療法について、最近のめざましい進歩が患者さんと研究者の共同作業でなされてきたことについてお話しします。それらをふまえてご参集いただいた市民の皆さまと意見交換できればと考えております。

＜演者略歴＞１）	
 名取道也	
  なとり	
  みちや	
  国立成育医療研究センター研究所長。慶応義塾大学医学部卒業。国立大蔵病院臨床研究部、国立成育医療セン
ター病院副院長などを経て現職。専門は周産期・新生児医学。日本周産期・新生児医学会理事長を務めた。
２）	
 松村外志張	  まつむら	  としはる	
  横浜バイオリサーチアンドサプラ
イ取締役研究部長。東京大学理学部卒業、同大学院博士課程中退。東京医科歯科大学医学部、東京大学医科学研究所において生化学・細胞生物学、とくに癌と老化に関する研究に従事。その後、明治乳業ヘルスサイエンス研究所ではバイオテクノロジーに関わり、同細胞工学センター所長としてＢ型肝炎ワクチン開発を成功に導いた。同社退職後、ローマン工業に細胞工学センターを創設、次いで現職。人体組織取扱
いの生命倫理研究にも長年関わる。日本組織培養学会の黎明期からのメンバー。現在名誉会員。
３）	
 藤本純一郎	  ふじもと	  じゅんいちろう	
  岐阜大学医学部卒業。小児科を研修の後、札幌医科大学病理学教室、米国スタンフォード大学医学部腫瘍科に学ぶ。国立小児病院小児医療研究センターを経て、国立
成育医療センター研究所	
  発生・分化研究部長、副所長。2010 年 4 月より現職。専門は病理学、腫瘍学、免疫学、血液学。

111

OS-1

理解して、協力していただくこと	
 
名取	
 道也	
 (国立成育医療研究センター研究所所長)	
 日本組織培養学会が、「病気に立ち向かう」をテーマに開催されます。さらにその中で「市民と研究者の理解のもとに」というテーマでこの市民公開シンポジウムが企画されました。この公開シンポジウムには一般市民のかたも参加されておいでと思いますので、「皆で協力して病気に立ち向かう」ということについてお話させていただきます。
市民公開シンポジウム、市民公開講座などの活動を学会が行うようになったのは、かなり以前からのことではありますが、学問を追求することが目的の学会が、なぜこのような活動を行うようになったのかを考えてみたいと思います。医学はサイエンスの一つの分野ではありますが、医学をヒトに応用する医療は、サイエンスという言葉ではくくれないものです。ところで科学者が変人と言われることは珍しくありません。なぜ変人扱いされたかというと、その科学者が何を目的として、
具体的に何をしているのかが、周囲の人にはさっぱり理解できなかったからです。科学の一部の分
野では、一般のかたに理解されないと学問の進歩に支障があるわけではありません。しかし、ヒトを対象とする医学は、最も一般の方の理解が必要なサイエンスであることが特徴的です。医学研究
は、その発展のためには患者さんやその周囲の方、一般の方々の理解だけではなく、協力が必要な
サイエンスでもあります。医学・生物学系の研究においては、動物実験が行われることをご存知と思いますが、ネズミなどを使ってヒトの病気の研究をすることにより、医学の世界は大きな成果をあげてきました。しかし、ネズミとヒトは似ている部分もあれば全く違うところもあり、動物実験の結果をすぐにヒトに応用することは困難です。ヒトの病気の研究には、ヒトでのデータが不可欠の部分があります。そこでヒトの細胞や組織を使ってヒトの病気の研究をしようとする試みが始まりました。そこでは患者、家族を始め一般の方々の協力無くして進歩はありえません。
研究者がヒトの検体を使用して研究を行うときに、研究者には臨床の部門を介して組織や細胞が届けられる場合が少なくありません。研究者が臨床検体を使用して研究を行う時に、その検体がどのような経緯でラボに届いたかを考えることはあまりないと思われます。医療関係者は患者になってみて初めて患者の気持ちが解かると言われますが、患者は自分の病気について大きな不安を抱え、早く治して欲しいという思いで一杯です。中にはその思いを伝えられないほど重症な患者さんもいます。そのようなクリティカルな状況の中で、自分のあるいは家族の検体を医学の進歩のために提供することには、いわば必死の思いが込められていると思います。研究者はこの思いを大切にして研究をおこなってこそ、その研究に患者さんを含めた市民の皆さんの理解と協力が得られることを忘れてはいけないと思います。このシンポジウムは、市民の方々の理解と協力をえて、医学のさらなる一歩を踏み出したいとの思いから企画されたと思います。私の所属するこのセンターの病院にも、小さいこどもの時から入院を余儀なくされている患者がいます。患者はもちろん、家族のかたの心労、負担は計り知れないものがあります。その原因は、病気の原因や治療法がわからないからです。医学はまだまだ解決しなければいけない問題を山のように抱えています。市民の皆さんが医112

学研究に協力していただくことは、研究の対象となる病気に苦しむ患者を越えて、国全体さらには世界全体に貢献することを理解いただきたいと思います。

113

OS-2

病気に立ち向かうヒトの分身‐組織・細胞‐と３５年のつきあいから	
 
	
 
松村	
 外志張 1,2	
 (1 横浜バイオリサーチアンドサプライ取締役研究部長,	
 2
日本組織培養学会名誉会員)	
 	
 孫悟空が自分のニコ毛から何万人という分身を生み出して化け物と戦ったのは物語の世界のこと。
ところがいまや科学の世界で、だれでも自分の体の一部‐‐つまり組織・細胞のことであるが‐‐それが分身となれる。そんな可能性が云々される時代となった。
あらためてヒト組織・細胞の活躍の歴史を振り返ってみると、それは人間の分身となれる能力をもった彼らが人間の戦いに加わってきた、そんな歴史だったようにも見える。
現代的な意味で最初に戦列に加わった分身は HeLa 細胞である。HeLa 細胞は腫瘍由来で、遺伝子が少し壊れていて完全な分身にはなれないことが今となっては明らかではあるが、壊れていてもなお人間のために戦う分身の仲間として、ここでは同列に扱うことにする。Henrietta Lacks の子
宮癌からこの細胞株が樹立された１９５０年代は、米国が小児麻痺の恐怖におののいていた時代だった。小児麻痺ウイルスを分離・検出する簡便な方法がなかったところに HeLa 細胞が現れてこの難問を解決した。HeLa 細胞こそ、予防からワクチン製造に至る道を開いた、小児麻痺撲滅の主役だったといえる。
以来、分身としての組織・細胞の活躍にはめざましいものがある。組織・細胞培養がワクチン製造のためのウイルス産生を許す。繊維芽細胞の大量培養が驚異の医薬品インターフェロンを生産する。表皮細胞が培養皿のなかで増えて人工皮膚になる。骨髄細胞が体外培養から再び生体内に戻って、骨、軟骨、筋肉など、さまざまな臓器・組織を再生する。マイクロプレート中の肝細胞が、薬品を解毒し、人体実験の代替役を務める。さらに組織・細胞は生命科学研究者に人間の遺伝子を与え、彼らが生体の機能や病気の原因を明らかにするのを助ける。そしてその遺伝子資源から、たくさんのバイオ医薬品が生まれてきたのだ。このようにして組織・細胞は病人やけが人を助けたばかりでなく、研究者、病院や製薬企業、そして結局は社会全体がさまざまなルートを通じて助かったのだ。
さて我が国では、本人あるいは親族の治療の目的以外での組織・細胞の提供は、米国やヨーロッパ諸国と比較して圧倒的に少ない。かならずしもこれだけが原因という訳ではないかもしれないが、研究や開発の性質上ヒト組織・細胞と仲のいい医薬品工業の分野では、国際企業の研究所が我が国から撤退し、また国内企業も研究所を海外に移す動きが止まらない。その善し悪しをここで判断しようと言うのではない。ただ、なぜなんだろう。そんな疑問がいつも私の中にある。
そこで私事であるが、たまたま 35 年にわたっていくつかの人体組織や培養細胞のコレクションの構築と研究分野への提供に携わってきた。最初は情報だけの培養細胞株情報バンク、それから実体のある組織・細胞のコレクションとして、老化関連遺伝子疾患の組織・細胞、臍帯血管内皮細胞、扁桃腺リンパ組織などを対象としてきた。努力したが実現に至らなかった川崎病患者組織・細胞コ
レクションのようなものもある。

114

このことを皆様と考えるために、今日は私が今回の培養学会の大会会長である絵野沢伸先生と、さらに沢山の方々の協力を得て行なわれた扁桃リンパ組織コレクションの構築からＨＳバンクへの提供にいたるパイロット研究に触れたい。その経過、問題点とその解決等についてはすでに論文に公表しているのでそちらをご覧いただきたい(1)。このコレクションは昨年のＨＳＲＲＢバンクで供給トップの実績を上げたということである。さらに偶然のことに、このコレクションがある研究に大きな役割を果たしたことを知った。
扁桃リンパ組織のコレクションつくり、それは手間がかかったことではあったが、できないことではなく、結果的に稔りある仕事だった。とすれば、日本で非医療分野へのヒト組織・細胞の供給が全般として少ないことの原因は何なんだろうか。たまたまこれでうまくいったからといって、我が国における非医療分野への人体組織・細胞供給の風穴を開けることになるなどと楽観している訳ではない。しかし、そのプロセスがなんらかの形で、皆様のご参考となれば、と願うものである。
いずれにせよ、非医療分野での組織・細胞の取扱いについては、関わり合う人間だけでなく、それそのもの、唄孝一によってヒトモノとなずけられたそれらの命に対する配慮が必要であるように思われる(2,3)。
1)絵野沢 伸、鈴木盛一、雨宮 浩、土橋信明、川城信子、宇都木 伸、高村政範、松村外志張、公共的な研究用ヒト組織バンク設立のための検討―国立小児病院における摘出ヒト扁桃リンパ組織バンク構築の試み―：組織培養研究 19: 163-183, 2000
2)松村外志張：臓器提供に思う‐直接本人の医療に関わらない人体組織等の取り扱いルールのたたき台提案‐．移植 40(2): 129-142, 2005
3)松村らの非医療分野でのヒト組織・細胞の取り扱いにかんする研究論文の多くは日本組織培養学会のホームページから閲覧可能となっている。

115

OS-3

医薬品の開発における患者・家族と医師・研究者の協力	
 
藤本	
 純一郎	
 	
 
(国立成育医療研究センター臨床研究センター	  センター長)	
 	 テーラーメード医療という言葉が叫ばれています。何のことでしょうか？
わたくしが関わってきた白血病の研究を中心にお話ししたいと思います。
テーラーメード医療とは、患者さんひとりひとりの病気の特徴や体質にあわせて治療法を選択し、副作用が少なく、効果がより高い治療を行おう、ということを意味しています。病気の特徴や体質を知るには詳しく検査をしないといけませんので、そのことも含んでいます。
さて、このような医療が可能になるには、長い時間がかかります。慢性骨髄性白血病（CML、シー・
エム・エル）に対するイマチニブ（製品名はグリベック）というお薬を例にとってお話をします。グリベックという薬は、ちょっと難しいですが、チロシンキナーゼ阻害剤という作用を持っています。
実は長年の研究の結果、CML の原因がチロシンキナーゼというたんぱく質の働きが過剰になるためであることが分かりました。そこで、そのたんぱく質の働きを邪魔するお薬（すなわち、阻害剤）
としてグリベックが開発された、という歴史があります。
CML を根治させるためには骨髄移植しか方法がなかったのですが、グリベックが登場したおかげ
でたくさんの方たちが移植を受けることなく服薬だけで生活出来るようになりました。CML の原
因がチロシンキナーゼである、ということはどのようにして分かったのでしょうか？
それは沢山の患者さんにお願いをして血液を頂戴し、医師や研究者が長年にわたる研究を行って見つけたからです。すなわち、患者・家族と医師・研究者の協力の成果だと言えるのではないでしょうか？
シンポジウムの際には、他の同じような成功例も紹介いたします。また、これから新しいお薬を見つけるために、今から準備もしております。検体保存、試料保存、あるいは細胞バンクなどという活動がそれです。その活動についてもお話しをいたします。

116

演者索引
キーワード索引
組織培養研究投稿規程
日本組織培養学会会則と細則
広告（pdf では略）

119

演者索引
	
 
あ
相 原
一
阿久津 英憲浅 香
勲
A H M A DS H A N D A R
ア ブ ラ ハ ム
エ リ ザ ベ ス
天 野史 郎

アモン モーガン
新 井
裕 幸
新 家
眞

OG-5-3
SL-1
SP-5
WS-2
OG-1-3

将 士
武 志
恭 正
哲 郎

石 井
直 明
伊藤 絵望子
伊 藤
成 美
岩 江
荘 介
岩 坂
正 和

OG-3-1
OG-5-3OG-2-5OG-5-1OG-1-3
YIA-3

こ
小 阪
拓 男
小 島
肇
小 原
近 藤

OG-2-4OG-5-3OG-5-4OG-2-2
SP-6
OG-5-3

い
家 村
池 谷
石 井
石 井

お
大西‐笠松 礼大 道
幸 子
大和田 哲男岡 本
愛
小 澤裕
小関 恵美子OG-1-3
YIA-3
OE-1
OE-4
OG-4-1
OG-4-2
OE-1
OG-3-2OG-4-4OG-3-2OG-2-5有 弘
栄 作

OG-3-1
SP-1
OG-5-2OG-1-3OG-4-4

さか
カウルスニルカウル ゼニア
笠 原
群 生
片 岡
健
金 村
鎌 田
鎌 田
亀 岡
川 端

米 博
伸 之
瑞 菜
洋 祐
健 二

OE-3
OE-4
OG-4-1
OG-4-2
OE-2
YIA-1
OG-2-6OG-2-6
OG-1-4OG-4-3
OE-5
OG-1-3
YIA-2
OG-1-2OG-3-2OG-1-3

が
高

苒

酒 井

康 行

阪 口

政 清

坂 口
坂 手
阪 本
佐 藤

由 希
龍 一
靖 介
元 信

し
重 石
英 生
重 田
孝 信
シ
ャ
ハ
ナ ブ ジ ョ ッ ト
正 札
智 子
白 木
伸 明
白 橋
光 臣
シング ルマニィ

OG-2-2OG-2-1
OE-5
OG-4-3OG-3-2OG-3-2OG-1-4OG-3-1

YIA-2
OG-1-4OG-4-2
OE-3
OG-1-3
SP-4
SP-7
YIA-1

OE-4
じ

う
上 田
植 村
臼 井

忠 佳
寿 公
智 彦

梅 澤

明 弘

WS-1
OG-2-6
OG-5-3OG-5-4
YIA-4

え
江 尻
洋 子
江 藤
哉 子
絵 野 沢
伸
エベヌー ファニー

OG-2-3OG-2-4
WS-3
OG-1-4OG-2-2きキアン スーザン
金玉

OG-2-4
OE-5

く
熊
粂
栗
栗

崎
昭
田
田

努
苑
学
良

OG-1-2
SP-4
OG-2-5OG-1-1

城 村
神 野

友 子
敬 將

YIA-3
SP-6

す
菅 谷
久
杉 林
堅 次
住友 万里子OG-2-6
SP-2
OG-5-2せ関 戸

好 孝

OG-4-4

そ
曾

121

勤

SP-4

た
高 橋
一 朗
高 橋
知 子
高橋 由里子
竹 澤
俊 明
竹 村
館 山
谷 川
谷 口
田 沼
田 上

清
大 揮
篤 宏
孝 喜
玲 子
昭 人

ち
チ ョ ー ド リ
モハメドマハフズ

辻つ村

OG-3-2OG-1-2
YIA-3
SP-3
OG-5-1
OG-3-2OG-1-3OG-5-2OG-5-2OG-3-2OG-2-3OG-2-1

亨

OG-4-4

と
杜
剛
東 條
恵
常 盤
孝 義
豊 田
武 士

OG-4-3OG-1-2OG-1-4OG-4-4

な
中 川
卓
中 澤
温 子
中 西
速 夫
中 村
和 昭
中 村
和 市
中 村
政 志
中 村
幸 夫
名 取
道 也

は
波多野 寛子
林田 みどり原
和 宏

YIA-2
OG-1-3OG-5-2

ひ
東 濃
篤 徳
平 田
誠
平田 みつひ平 野
耕 治

OG-3-2OG-3-2OG-1-3OG-5-2

ふ
福 田
晃 也
藤 井
輝 夫
藤井 万紀子
藤本 純一郎古江̶楠田 美保

OG-1-4OG-2-2OG-4-4
OS-3
OG-1-3ぷ
プリヤンドコ
ディディックOG-4-1
OE-3

許
堀 口
堀 口

OG-5-3OG-1-4OG-4-4OG-2-3
SP-6
OG-5-2OG-1-1
OS-1

ほ
南

浩

一 樹
正 之

ま
前原 奈都美
牧 野
初 音
増 井
徹
松 尾
平
松 下
京 子
松 平
康 枝
松村 外志張
松 村
紘 子

122

OE-5
OG-4-3OG-2-1
OG-5-2OG-4-3
YIA-4
OG-3-3OG-3-2OG-1-2OG-3-2OG-4-4
OS-2
OG-1-3

み
三 島
初
水 口
賢 司
水 口
裕 之
三 井
洋 司
宮 沢
正 樹
宮 田
和 典

村

む
田

OG-2-6
OG-1-3OG-1-3OG-1-2
OE-1
OG-5-3等

OG-4-3
OE-5

克 身
洋 斉

SP-4
OG-5-3

や
矢 田 部
恭
山 上
聡
山 口
宏 之
山 崎
泰 助
山 下
宏 美
山 添
大 士
山 本
直 樹

OG-4-4OG-5-4OG-5-1OG-1-4OG-5-2
SP-4
OG-5-2

も
持 立
森

よ
横 尾

誠 一

吉 岡
吉 田

友 和
東 歩

わ
ワダワ レヌーOG-5-4OG-5-3OG-2-6
OG-3-1OG-2-6
OE-2
OG-4-2
YIA-1
OE-3
OE-4
OG-4-1

キーワード検索3

cartilage repair

OG-2-6

3D cultureOG-2-3CAS

OG-2-5

3D-culture

YIA-3

cell

SP-7

3D-cultured human skin model

SP-2

cell line

OG-1-2
WS-1

A
aging

WS-2
OE-1

cell transplantation

YIA-4

OE-2

clinical research

SL-1

aging and cancer

YIA-1

collagen vitrigel chamber

OG-5-1alcoholic extract ofashwagandha leaf
alginate gel

OG-4-2OG-2-1collection

OS-2

antibody drugs

OS-3

complianceWS-3

anti-cancer activity

OE-3

conflict of interest

WS-3

ashwagandha

OG-4-1corneaOG-5-3OE-3corneal epithelium

OG-5-1cryopreservation

OG-2-5

CTGF

OG-4-4SP-3

B
Bcl-xLOE-5

benzalkonium chloride

OG-5-3

BHK-21OG-2-4

data sheet

WS-1bioresource

OG-3-2differentiation

OG-4-2

blood transfusion

D

OS-2

SP-4

OG-1-1

YIA-2

Ccancer

OE-2
OE-4
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123

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OG-2-1

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OG-3-2

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SP-5

SP-4
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OG-5-1OG-1-3

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OG-2-1

L

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SP-4

liver cells

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OG-3-3

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OG-4-4

medical research

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H

OS-2

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OG-1-4

metastasis

OE-4

hepatocyte

OG-2-3

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YIA-3

mitochondria

OE-1

YIA-4

Mortalin

OE-2

HepG2

OG-2-4MSC

OG-1-3hnRNP-K

OE-4

mucin

OG-5-4

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OG-5-2

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OG-2-4

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human material

OS-3

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oxygenation

OG-2-2I
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OG-5-2P

in vitro

SP-1

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YIA-1

in vivo study

OG-2-6

patentSP-7124

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OS-1

synoviocytes

OG-3-1

PINK1

OE-5

pluripotent stem cell

SP-6polydimethylsiloxane

OG-2-2

TGF beta

OG-4-4

proliferation

YIA-2

Thy-1

OG-1-4tissue bankOG-3-2

TNF-alphaOG-4-3TQ
quantum dot

OG-2-6TOSHI-substratum

SP-3

questionnaire

SP-6

toxicology

OG-5-3SP-1

R

treatment for leukemia

red blood cell

OG-1-1

regenerative medicine

OG-1-1V

SL-1
REIC/Dkk-3

OS-3

validation

SP-1

OE-5
OG-4-3

remnant human tissues

OG-3-1

research design

WS-3

researching pathogenesis

SP-5

RHAMM

YIA-2

ROS

OG-4-1

W
withanoneSsearch

WS-1

shRNA

OE-3

skin concentration

SP-2

skin permeationSP-2

spheroidYIA-3

squamous epithelia

OG-4-3standard procedure

WS-2

stem cell

OG-5-4

SV40 Large T antigen

OG-5-2125

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───────────── 組 織 培 養 研 究 投 稿 規 定 ─────────────
１．投稿論文は原則として、組織培養領域に関する未発

９．数字は算用数字とし、単位は SI単位をもちいる。論

表の英文または和文の原著（r
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文中で略字を使う場合には論文中に初めて使用すると

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きに略する字句に続いてその略語を括弧でくくって示

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）とする。

すこととするが、最小限にとどめる。

２．原稿１部とそのコピー２部、著作権委譲書１部（組10．引用文献は論文中に引用した順にまとめて番号をつ

織培養研究に掲載してある様式使用のこと）を編集事

けて表示する。本文中では該当する位置に肩上付き1）

務局へ提出する。ただし、写真についてはすべて原図で表示し引用する。文献の記載は以下のようにする。

とする。投稿論文が受理されなかった場合は、著作権

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委譲書は著者に返却される。
３．投稿論文は編集委員会または編集委員会で依頼した審査員で審査し、掲載が決定したものについて決定順に掲載する。

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４．原稿の第１頁には表題、著者名、所属機関およびそ

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よる論文の場合には投稿論文に関する問いあわせの出

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来る著者を連絡者に選び、その電話番号とファックス

３．山田正篤、仙波まり：Ai
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番号を明記する。和文論文についての表題は、原則とルス治療の戦術、トキシコロジーフォーラム、1
1
、

して4
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語句以内とし、論文の内容を的確に表したもの

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とする。

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1
．図はそのまま写真製版できるように鮮明に作成する。

５．原稿の２頁には、表題および氏名を明記したうえで

図および表の上部余白には第一著者名および番号を明tle）およびキーワー
要約（a
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）略表題（runni
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記し、説明は別紙にまとめて記述する。写真は、鮮明

ド（ke
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）を記す。英文論文の要約は 2
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なものを用意し必要に応じて縮尺を写真内に明示する。

以内とする。和文論文の要約は400
語句以内としさらに写真の裏面に鉛筆で薄く第一著者名および番号を記入

その英訳をつける。略表題は８語句以内とする。キーする。図表および写真の本文中の挿入場所は、原稿のワードは５個以内を選ぶ。

余白部分に指示する。カラー写真も受け付けるが必要

６．原著論文の場合には、３頁以降に序文（I
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on）材料と方法（MaterialsandMet
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）、結果
）の
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）、考察（Discussion）、文献（Re
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順で配置する。原著論文以外は３頁以降の形式は問わない。

経費は投稿者の負担とする。
1
2．著者校正は原則として初校のみとし、その際の追加変更はできない。
1
3．刷りあがりで８ページを越える投稿原著論文および
10
ページを越える投稿総説には、それぞれ超過ページ

７．英文原稿は必ずダブルスペースで作成し、Ａ４判白１ページにつき５，０００円のページチャージが必要とな

色タイプ用紙に鮮明に印字する。和文原稿は、400
字詰る。投稿英文論文に関して英文校正が必要な場合には、原稿用紙を用いるか、ワードプロセッサで作成する。

その実費は著者負担となる。別刷費用は著者の実費負

英文、和文いずれの場合にも上下左右にそれぞれ 2c
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担とする。

程度の余白をとる。打ち出しプリンターは鮮明であれ

1
4． 投稿論文の著作権は、日本組織培養学会に帰属する。

ば機種を問わない。ワードプロセッサで作成した原稿

1
5．原稿の送付および投稿に関する問いあわせ先は下記についてはフロッピーディスクによる投稿が望ましい。
使用できるソフトについては事務局に問い合わせるこの編集事務局とする。
〒７３４－
８５５３ 広島市南区霞１－２－３と。フロッピーディスクにより投稿する場合には、フ広島大学大学院医歯薬学総合研究科

ロッピーディスク１枚とともに打ち出し見本２部をつ

先進医療開発科学講座分子口腔医学・け提出する。ただし、写真については３部提出する。

顎顔面外科学教室

８．外国の地名、人名等は原語または英語で表し、固有名詞についても最初の文字以外は小文字とする。専門

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本
電

哲

治
話 ０８２－
２５７－
５６６５

術語は、原則としてそれぞれの専門分野の用語集に従ファックス ０
８２－
２５７－
５６６９

うものとする。動植物の学名などでイタリック体で印「組織培養研究」編集事務局

刷されるべきものには下線をつける。

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日 本 組 織 培 養 学 会 会 則

第１章
第１条

名

称

本 会 は、日 本 組 織 培 養 学 会（The J
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on）と称する。

第２章
第２条

し、任期は４年とする。
第８条

目的および事業

務を運営する。
第９条

本会は、組織・細胞培養学およびその応用技術
本会は、本会の目的を達成するためにつぎのよ会長は、本会を代表し、会務を統轄する。特に対外活動に関して責任を負う。

第１０条

会長はその職務の補佐のため、正会員の中から庶務１名、会計１名を指名することができる。

の進歩発達に寄与することを目的とする。
第３条

幹事会は会長および幹事によって構成され、会任期は４年とし、重任は妨げない。
第１１条

うな事業を行なう。

会計監査は、会長が幹事を除く正会員の中より委嘱する。任期は１年とし重任は妨げない。

１．年１回総会を開く。その他必要に応じて臨時総第１２条

会を開くことができる。

幹事会は、大会の開催地および世話役を決定し、委嘱する。

２．年１回大会を開催し、学術上の研究成果の発表

第１３条

および知見の交換を行なう。
３．必要と認められた定期刊行物を発行し、会員に幹事会は、本会に必要と認める専門委員会をおくことができる。

第１４条

配布する。

専門委員会委員長（または委員長の指名する委員）は幹事会に出席して議事に参画する。但し、

４．学術研究の助成、顕彰、研究者の養成のための議決権は持たない。

資金の支給を行う。

第５章

５．国内および諸外国の関係学術団体および国際団
体との連絡ならびに協力をはかる。
６．その他、本会の目的達成のために、必要と認め第１５条

本会に評議員をおく。

第１６条

評議員は、細則の定めるところにより、正会員の中から幹事会により選出される。

た事業を行なう。

第３章
第４条

会

員

評議員の任期は４年とする。重任を妨げない。
第１７条

本会の会員は、正会員、学生会員、名誉会員、評議員は本会の中核として活動を担い、会長、幹事会に対し、必要な提言を行う。

賛助会員とする。

第６章

１．正会員および学生会員は、組織培養およびその関連領域の研究に従事する個人で、本会の目的

第１８条

２．学生会員は、大学の学部、大学院およびそれに

第１９条
第２０条

本会の経費は、会費、寄付金、その他の収入を本会に要する経費は、別にこれを徴収すること
本会の会計年度は、毎年４月１日よりはじまり、
翌年３月３１日をもって終る。

３．名誉会員は、本会の育成、組織培養の進歩に著しい功績のあった正会員で、幹事会の議決を経第７章た者とする。名誉会員は、会費を納めることを
第２１条

要しない。

総会、幹事会は会長が招集する。これらの会議

る。

第８章

特別の理由なく、引続き２年以上会費を納入し

執行役員

第６条

本会は次の執行役員をおく。

第７条

会長および幹事は、細則の定めるところにより、

会長１名、幹事８名、会計監査２名
正会員の中から正会員および学生会員の投票により選出される。
会長の任期は４年とする。幹事の定数は８名と議可否同数の時は、議長がこれを決定する。

賛助会費１口以上を納める個人または団体とす

第４章

会の議事は、出席者の過半数の賛成を得て決定し、

４．賛助会員は、本会の目的に賛同し、定められたない正会員は、除名することができる。

計

ができる。

準ずる教育機関に学生として在籍し、その証を提出した者とする。

会

もってこれにあてる。

に賛同し、定められた会費を納める者とする。

第５条

評 議 員

第２２条

会則変更

本会会則の制定変更は、総会の議決を経る必要
がある。

附

則

１．本会の入会金は １，０００円、会費は年額、正会員
６，０００円、学生会員３，０００円、賛助会員１口３
０，
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０
円とする。
２．本会則は平成２１年５月２０日施行する。

I
NTRODUCTION TO AUTHORS

日 本 組 織 培 養 学 会 細 則
第１章
第１条

第２条

会

本会に正会員および学生会員として入会を希望する者は、（日本組織培養学会機関誌「組織培養研究」に差し込まれている）入会申込み用紙に記入の上、 レタープレス株式会社 日本組織培養学会係へ送付するか、学会ホームページにて提供する手続によって申し込みを行う。
入会希望者は、上記手続の後、直ちに会員とみ
なす。

第２章
第３条

員

総

執行役員の選出

第４条 執行役員の選出は次のとおり行なう。
１．会長は、幹事のなかから２名の選挙管理委員を委託する。選挙管理委員は、選挙事務を行なう。
２．会長の投票は、正会員が無記名、郵送によって行なう。
３．会長の再選は禁止する。幹事会は、会長候補を推薦することができる。
４．幹事の投票は８名連記、無記名、郵送によって行なう。
５．幹事は任期後の４年間、幹事の被選挙権を有しないものとする。
６．選挙の結果、得票が同数の場合には年少者を会長あるいは幹事当選者とする。

第４章
第５条

第６条

幹 事 会

幹事会は年２回開催する。但し、会長が必要と認めた時、または幹事の３分の２以上が開催を要求した時は、臨時幹事会を開催することがで
きる。

第５章

第６章
第７条
第８条

会

総会では、本会の事業計画、収支決算が審議される。また、本会の役員人事に関する報告が行
なわれる。

第３章

１．会長、幹事は、その任期中、評議員となる。
２．評議員候補者は、会長あるいは評議員２名の連名によって、幹事会に推薦される。
３．評議員は、幹事会の議決によって選出される。

評議員会

評議員会は、学会活動に関する事項全般を審議する。
評議員会は、会長が必要と認めた時、または評
議員の３分の１以上が要求した時、開催される。

第７章

表

彰

第９条 本会に日本組織培養学会奨励賞を設ける．
第１０条 日本組織培養学会奨励賞の選考および授与にかかる詳細な規定は別に定める。
第１１条 本会に日本組織培養学会学術賞を設ける．
第１２条 日本組織培養学会学術賞の選考および授与にかかる詳細な規定は別に定める。
第１３条 本会に日本組織培養学会功労賞を設ける．
第１４条 日本組織培養学会功労賞の選考および授与にかかる詳細な規定は別に定める。

第８章

事 務 局

第１５条

本会の事務局は、〒１１３－００３
３ 文京区本郷７－３－
１ 東京大学大学院医学系研究科 附属疾患生命工学センター 放射線研究領域内とする。
第１６条 入会金および会費の送付先はレタープレス株式会社とする。

第９章
第１７条
第１８条

細則の変更

細則の変更は、幹事会の議決による。
本細則は、平成２１年５月２０日より実施される。

〒７３９－
１７５２ 広島市安佐北区上深川町８０９－５
レタープレス株式会社
日本組織培養学会 係

評議員の選出

評議員の選出は次のとおり行う。

日本組織培養学会奨励賞選考規定 （平成２２年４月１３日改正）
第１条
第２条
第３条

第４条
第５条

名称：日本組織培養学会奨励賞と称する。
目的：将来性ある若手研究者の研究を奨励し本学会の活性化を図る。
受賞対象：本学会大会の筆頭学術発表者であって、当該会計年度の４月１日現在で３５歳未満の会員あること。原則として３から５名に授与される。なほ、受賞者は再度応募出来ない。
発表期限：当該年度本学会で発表されたものに限る。
応募方法：演題申込に時に奨励賞応募の旨を明記し、本会評議員の推薦状ならびに履歴書各１
通を演題とともに大会事務局に提出する。なお、応募の期限は演題申込締切日とし、応募演題は一人一題に限る。

第６条

第７条

第８条

選考：審査員は本学会会長、幹事、各専門委員会委員長（前三者を執行役員と言う）、および大会会長が審査し、応募時の書類選考に加え、大会発表時の発表技術、理解度、方法論、討論力の優劣により決定する。
表彰：本学会の総会時に会長が発表し、賞状ならびに副賞（総額金３００，０００円以内）を贈呈する。
改訂：幹事会で行う。

附則： 本選考規定は平成２２年度から実施する。
細則： 本学会執行役員または大会会長が応募演題の共同演者の場合、その演題の投票はできないもの
とする。

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SSUE CULTURE RESEARCH COMMUNI
CATI
ONS
組織培養研究Vol.
30 No.
1 2011発行

日

２０１１年３月３１日

発

行

者

日本組織培養学会

編集事務局

岡

本

哲

治

〒７３４－
８５５３ 広島市南区霞１－２－３
広島大学大学院医歯薬学総合研究科
先進医療開発科学講座分子口腔医学・
顎顔面外科学教室「組織培養研究」編集事務局
TEL０８２－
２５７－
５６６５ FAX０８２－
２５７－
５６６９
制

作

レタープレス株式会社