島根県産業技術センター研究報告資第55号 （2019）

料

クロモジ枝抽出物によるヒト真皮線維芽細胞の紫外線損傷DNAに対する修復効果
正知＊ , ＊＊・太田

牧野
1．目

ゆかり＊＊・勝部

拓矢＊

膚の炎症，免疫抑制の原因となるほか，核DNAを直接的に的酸化損傷しシクロブタンピリミジン二量体（以下CPDと略

我が国の総人口は,平成29年10月1日において1億2,671万す）や6-4光産物を生成する7~9）．これらのDNA損傷は遺伝人である．65歳以上の人口は3,515万人で，総人口に占める情報の欠失や改変になるため，生体はその修復機構である

割合は27.7%となった1）．高齢化率は，出生率の低下に伴うヌクレオチド除去修復（以下NERと略す）によって恒常性

人口自然減少と医療技術・栄養状態の向上による寿命伸長を維持している10）．しかし加齢に伴い，NERの一つであるによって今後も上昇するものと予想されている．島根県産

CPD除去修復機能は低下する11）, 12）．また先天的にNER機能

業技術センターでは，平成24年度から平成29年度にかけての欠損あるいは低下した色素性乾皮症やコケイン症候群な高齢化社会対応の機能性素材開発プロジェクトを実施し，どの遺伝性疾患では，若くして老人様顔貌，シミそばかす，このような社会背景に対応するための研究開発を進めてきドライスキンなどの加齢様症状が強く見られることから，た．そのうち筆者らは皮膚老化に焦点を絞り機能性素材のDNA損傷あるいはその修復は皮膚老化に強く関係している開発を行った．と考えられている13）.従ってその修復を助けることで皮膚老皮膚は，外界からの刺激に対しての感知・応答，境界の化に対応できると考えられた．

形成，熱交換，物質の透過排泄といった多機能を有する身2）

本研究では島根県内で栽培されている植物や自生してい体最大の器官である ．また他の臓器組織と異なり外界にる植物，島根県産業技術センターで保有している微生物な直接露出しているため，顔面や首などの老化現象は目につどを収集し，これらのうちCPD除去修復を促進するものをきやすくかつ個人差も強く現れる．そのため高齢者のみな皮膚の培養細胞を用いた評価系により探索した．そしてそらず性別年代を超えて皮膚老化に対する関心は高い．そのこから効果が見出されたクロモジ枝について詳細な検証を

老化は他の臓器組織と同様に経時的で，老廃物の蓄積，機行ったので，その結果について報告する．

能性蛋白質の劣化，細胞内シグナル伝達の破綻などから組

2．試料および方法

織障害や構造機能不全を惹起する退行性変化によると考えられている．またタバコの煙，環境ホルモンやホルムアル

2.1

収集した試料原料

デヒドなどの化学物質や太陽紫外線に対する暴露のほか，島根県内で栽培されている植物，自生している植物ある

乾燥，熱，寒冷など環境に依存するストレスによる外因老いは島根県産業技術センターで分離した乳酸菌を試料原料化も上乗せされる.特に皮膚の太陽紫外線への暴露はマトとして収集した．内訳は野菜（葉あるいは豆，44種類），樹リックスメタロプロテアーゼやエラスターゼの発現を誘導

木（葉，枝，樹皮あるいは根，37種類），山野草（葉，35種類），し，それに引き続く膠原線維や弾性線維の分解・断裂によっ

果実（果実，果皮，種皮あるいは種子，22種類），キノコ（子て美容上好ましくないシワやシミ，たるみなどの表現系変実体，13種類），乳酸菌（破砕液，9種類），ハーブ（葉, 6種類）
，3~5）化をもたらす花（花弁，2種類）である．

.

紫外線は波長によってUVA（315–400 nm），UVB（280–3152.26）

試料調製nm），UVC（100–280 nm）に分類される ．この中で最も試料原料は、凍結乾燥後，それぞれ熱水抽出とエタノーエネルギーが高く有害なUVCはオゾン層や大気中の酸素分ル抽出に供した．前者は乾燥試料原料にその重量の20倍子によって吸収されるため地表には届かず老化には寄与し体積量の加熱した蒸留水を加え，湯浴上で20分間保持してない．UVBはUVAと比較して1,000倍程度エネルギーが強抽出した．得られた抽出液は濾過・濃縮したのち凍結乾燥く7），日光暴露に引き続き起こるサンタンやサンバーン，皮させ，これを熱水抽出物とした．後者は乾燥試料原料にその重量の20倍体積量の60%（v/v）含水エタノールを加え，高齢化社会対応の機能性素材開発プロジェクトチーム

遮光し一晩撹拌して抽出した．得られた抽出液は濾過・濃（*現：生物応用科，**現：生物機能応用技術開発プロジェ

縮したのち凍結乾燥させ，これをエタノール抽出物とした．

クトチーム）

熱水抽出物とエタノール抽出物を50 mgずつ採取し，それ― 10 ―

牧野・太田・勝部：クロモジ枝抽出物によるヒト真皮線維芽細胞の紫外線損傷DNAに対する修復効果
ぞれ 1 mLの超純水と 1 mLの60%（v/v）含水エタノールで濃度は残留重量の平均値から重量%濃度（w/v）として求溶解したのち，遠心分離して得られた上清を熱水抽出物試めた．

料とエタノール抽出物試料として以後の実験に使用した．

2.5

2.3

残存CPD量測定によるCPD除去修復促進機能の細胞生存率測定による細胞毒性評価

培地に懸濁したNHDF細胞を96ウェルプレートに5,000細スクリーニングと経時的変化胞/ウェルとして播種した．CO2インキュベータ（5%（v/10％（v/v）牛胎児血清（Gibco, Invitrogen Japan, Tokyo,v）CO2, 37℃）で16時間培養した後，2.3項と同様に培地をJapan）含 有イーグル 最 小 必 須 培 地（ 以 下 培 地と略 す,PBSに置換したのち総曝露量9 mJ/cm2となるようUVBを照Sigma-Aldrich Japan, Tokyo, Japan）に正常ヒト真皮線維射した．その後，速やかに培地のみ，溶媒対照としての超芽細胞（以下NHDF細胞と略す, Lonza, Inc. Walkersville,純水と60%（v/v）含水エタノール，クロモジ枝の熱水抽出MD, USA）を懸濁し，96ウェルプレートに10,000細胞/ウェ物試料またはエタノール抽出物試料を含む培地にそれぞれルで播種してCO2インキュベータ（5%（v/v）CO2, 37℃）置換した．作用時の試料濃度は2.3項と同様に50倍希釈を基内で2日間培養した．

準とし，さらに100, 200, 400倍希釈（2倍希釈系列，培地に96ウェルプレートの各ウェルの培地を100μLのリン酸緩よる希釈）とした．溶媒対照もまた試料と同様に希釈して衝生理食塩水（以下PBSと略す）に置換したのち，UVBNHDF細胞に作用させた．なお培地のみNHDF細胞に作用ランプG15T8（Sankyo Denki, Japan）を用いて発生させたさせたものを対照（control）とした．
7時間後の細胞生存率は既報16）と同様にハイコンテントイ

UVBをプレートの上方30 cmから照射した．このとき一部のウェルはアルミシールを貼りUVBが照射されないようしメージングの手法で求めた．すなわちHoechst 33342とヨウ化て，後述するELISA測定における陰性対照とした．UVB暴

プロピジウム（それぞれDojindo Molecular Technologies,

露 量 は，Radiometer Sensor UVX-31（Analytik Jena USInc., Kumamoto, Japan）を用いて核を染色した．Hoechst

LLC, CA, USA）により測定した310 nmにおけるUVBの輝33342で染色された細胞核を全細胞数，またヨウ化プロピ度と露光時間で調節した．本実験における総暴露量は，細ジウムで染色された細胞核を死細胞数とし，撮影画像内の胞へのダメージとCPD発生量を予め検討して9 mJ/cm2としそれらの割合から細胞生存率を求めた（n=3）
．

た.

2.6

NHDF細胞相対増殖率の測定

UVB照射後，試料を含む培地と試料を含まない培地と培地に懸濁したNHDF細胞を96ウェルプレートに4,000細にそれぞれ置換して，引き続きCO2インキュベータ内で保胞/ウェルとして播種した．CO2インキュベータ（5%（v/持しNHDF細胞に作用させてCPD除去修復を図った．スv）CO2, 37℃）で17時間培養した後，熱水抽出物試料を200

クリーニングの際は試料を含む培地として，熱水抽出物試倍，800倍，3200倍となるよう培地で希釈したものに置換料またはエタノール抽出物試料を培地でそれぞれ50倍希釈した．この際，培地のみを作用させたものを対照（control）（2.0%（v/v））したものを用いた．UVB照射後8時間経過とした．24時間CO2インキュベータで培養したのち，テトした時点でウェル内のNHDF細胞をアセトン−メタノール

ラゾリウム塩 WST-1 と 1- Methoxy PMS（それぞれDojindo液（−20℃，1：1容量）により10分間作用させ固定化した．

Molecular Technologies, Inc., Kumamoto, Japan）を使用しCPD量は西永らの方法14） に従い，抗CPD抗体15） を用いたた比色法17）により細胞増殖率を求めた．すなわち超純水にELISA法により求めた（n=3）．各試料におけるCPD量は，溶解した0.5 mLの2.0 mmol/Lの１-Methoxy PMSと4.5 mLの培地のみを作用させた8時間後のそれを100%とした相対値

WST-1溶液（16.3 mgを4.5 mLの20 mmol/L HEPES（pH7.4）を計算して比較した．に溶解）を混合して反応液とし，このうち10μLを各ウェ

経時的なCPD量の変化を検証する際は，UVB照射後0（照ルの培地に添加した．4 時間後の 450 nmの吸光度をプレー

射終了直後），1, 4, 7時間の時点で細胞固定を行い，上記とト リ ー ダ ー（EnSpire; PerkinElmer, Inc., Wellesley, MA,同様の方法で残存するCPD量を測定した（n=3）．なおこのUSA）で測定し（ｎ=3），controlにおける吸光度を100%と場合，1, 4, 7時間後のCPD量は，0時間時のそれを100%としした相対値を細胞増殖率として比較した．

た相対値を計算して比較した．

2.7

2.4

クロモジ枝抽出試料濃度測定

統計解析

統計処理ならびにグラフの作成には統計解析言語R18）をスクリーニング試験だけでなく詳細を検討したクロモジ用いた．

枝抽出物については試料濃度の測定を行った．2.2項で調3． 結果および考察

製した熱水抽出物試料とエタノール抽出物試料をそれぞれ500μLずつアルミ皿に採取し，それらを105℃の乾燥器中

3.1

CPD除去修復促進試料のスクリーニング結果で恒量となるまで乾燥させた．アルミ皿に残留した残渣の熱水抽出物試料またはエタノール抽出物試料を作用さ

重量は精密電子天秤（Excellence Plus XP, Mettler Toledo

せ，それぞれ8時間後に残存するCPD量の相対値（相対International Inc. Tokyo, Japan）で測定した（n=3）．試料

CPD量）を求め，試料原料ごとにプロットした（図1）．な― 11 ―島根県産業技術センター研究報告

図1第55号 （2019）

相対CPD量と抽出方法の関係

熱水抽出物試料あるいはエタノール抽出物試料を作用させた
相対CPD量の平均値（n=3）を，抽出原料ごとにプロットした．
また直線回帰によって相関を推定した．

図2

残存CPD量の経時的変化（A）熱水抽出試料，（B）エタノール抽出試料．統計学的に有意であるものについては異なるアルファベットを付した．
p<0.05, One-way ANOVA post hot test（Tukey HSD検定,n=3）

お細胞剥離などにより相対CPD量を測定できなかった試料
原料についてはプロットしていない．溶媒対照である超純水あるいは60%（v/v）含水エタノールを培地で50倍に希釈（2.0%（v/v））して作用させた場合の相対CPD量はそれぞれ98%と100％であった．そのため溶媒対照による影響は可能性を踏まえ今後別に報告する．

ないか極めて小さいと考えられた．

3.2

クロモジ枝抽出物試料の濃度プロットの分布は，右肩あがりの直線的な傾向が見られスクリーニングに使用したクロモジ枝熱水抽出物とエタた．そこで回帰直線を求めたところ決定係数r2＝0.5632，傾

ノール抽出物から調製した試料のそれぞれの濃度は3.41%

き0.7438（p<0.01）となり各原料の熱水抽出物試料とエタ（w/v）と3.48%（w/v）で，50倍希釈してNHDF細胞に作ノール抽出物試料による相対CPD量の値には正の相関があ用させ たときに 濃 度 は0.0682%（w/v）と0.0696%（w/v）

ると推定された．すなわち各原料のCPD除去修復効果を検と計算された．以下この濃度を基準に検討を進めることと証するうえでは，抽出方法には大きく依存せずむしろ抽出した．

原料に依ることと，熱水抽出あるいはエタノール抽出のい3.3

クロモジ枝抽出物による経時的CPD除去修復

クロモジ枝抽出物から調製した試料をUVB照射NHDF細ずれの方法でもCPD除去修復に影響を与える成分が抽出さ胞に作用させると，作用させなかった対照と比較して，8れていることが示唆された．
多くのプロットは，抽出の方法によらず相対CPD量100%時間後のCPD量を減少させた．しかしどの時点でCPD除付近に集中した．これらについては溶媒対照と同様に相対去修復を促進しているか不明であったので，次に残存CPDCPD量を減少させる効果はないか小さいと考えられる．逆量を経時的に求めることとした．このときクロモジ枝熱水に相対CPD量100%を超えるものについては，試料由来の抽出物試料とエタノール抽出物試料の作用濃度はそれぞれ何らかの成分がNERを直接的あるいは間接的に阻害したと0.0682%（w/v）と0.0696%（w/v）とした．ここではUVBも考えられる．しかし顕微鏡下の観察ではこれらの値を示

照射直後に発生したCPD量を100%として相対CPD量を比す試料を作用させた場合の多くで細胞の萎縮が観察されて較した（図2）．
試料を作用させなかった対照における残存CPD量は，いる．このことから試料負荷による細胞ストレスにより，ネクローシスやアポトーシスが誘導されて正常にNERがUVB照射直後から1, 4, 7時間後においてそれぞれ87%±機能しなかったと推測される．一方，8時間後の相対CPD

13%，72±6.5%，69±5.6%であった．それに対しクロモジ量が60%以下となったものを，CPD除去修復に対して促進

枝熱水抽出物試料を作用させた試験区では，それぞれ64±効果が期待される原料として注目したところ，クロモジ枝

3.4%，39±11%，37±7.9%となり，4時間後と7時間後におとセイヨウトチノキ種子種皮など約10試料原料を見出した

いては対照と比較して有意に残存CPD量が低下していた

（図1）
．

（図2A）
．またクロモジ枝エタノール抽出物試料を作用させなおスクリーニングによって見出された試料原料のうちセた試験区では，それぞれ54±5.4%，43±6.6%, 45±5.2%とイヨウトチノキ種子種皮の効果については別に報告したたなり，1時間後と4時間後において有意にCPD量が減少し，

め16），以下クロモジ枝試料について詳細を検討した．それ7時間後においてもその傾向を維持していた（図2B）．これら以外で効果が見られた原料候補については，特許出願のらのことから抽出物を作用させたことによるCPD除去修復― 12 ―

牧野・太田・勝部：クロモジ枝抽出物によるヒト真皮線維芽細胞の紫外線損傷DNAに対する修復効果
表1 細胞増殖率の比較
熱水抽出物濃度(％, w/v)
0.01700.0043129±2.63% a

117±9.95% ab

control
0.0011110±4.54% bc

100±4.14% c

統計学的に有意であるものについては異なるアルファベットを付した．p<0.05, One-way ANOVA post hot test（Tukey HSD検定,n=3）物試料と比較してより疎水性の高い成分が多く含まれるた

図3 細胞生存率
溶媒対照にはそれぞれ（A）超純水と（B）60%（v/v）含水エタ
ノールを用いた．培地のみを作用させたものをcontrolと表記した．

め，それらが細胞毒性に寄与するものの，CPD除去修復の促進に関与する成分も含まれていると考えられた．
3.5

クロモジ枝抽出物のNHDF細胞増殖効果の検証

クロモジ枝熱水抽出物あるいはエタノール抽出物による細胞毒性の評価には，細胞核蛍光染色画像による解析を用の促進は，試料作用後1時間で既に始まっており4時間程度いた．その際，クロモジ枝熱水抽出物試料を作用させた場で完了することが示唆された．

合，撮影視野における絶対細胞数が作用濃度によっては対3.4

照のそれと比べてやや増えている傾向が観察された．そこ

クロモジ枝抽出物の細胞毒性

クロモジ枝熱水抽出物試料とエタノール抽出物試料をそでクロモジ枝熱水抽出物試料を異なる濃度で24時間NHDF

れぞれ0.0682%（w/v）と0.0696%（w/v）の濃度で作用さ細胞に作用させ調べることとした．このときの細胞数はせた場合，速やかなCPD量の減少が見られた．この作用がWST-1による比色定量法17）によって求め，試料を作用させ細胞毒性によるものでないか次に評価した．すなわちUVBなかった対照との吸光度の比較から細胞増殖率として求め2を9 mJ/cm 照射した細胞に，培地のみ（control），溶媒対た．熱水抽出物試料を0.0011%（w/v）の濃度で作用させた

照のみ，クロモジ枝熱水抽出物試料またはエタノール抽出

ところ，controlと比較した細胞増殖率は110±4.54%と増加物試料をそれぞれ作用させた場合の細胞生存率を比較した傾向を示し，0.0170%ならびに0.0043%の作用における細胞2（図3）．なお 9 mJ/cm のUVBを照射したNHDF細胞に培地増殖率は有意に増加してそれぞれ129±2.63%と117±9.95%のみを作用させたcontrolにおける細胞生存率は99.2±0.1%となった．また作用濃度依存的に増加していることも示唆で，このことは9 mJ/cm2のUVB暴露量は細胞生存率に影響された（表1）．

を与えないことを示唆している．

3.6

まとめ

クロモジ枝熱水抽出物試料あるいは溶媒対照としての超

我々は島根県内で栽培されている植物あるいは採取でき純水を異なる濃度で作用させた場合の細胞生存率は，いずる植物，また島根県産業技術センターで分離した微生物なれの濃度においてもcontrolのそれと有意な差は見られなどを収集し，CPD除去修復を促進する一つの植物原料候補かった（図3A）．そのためこの濃度範囲におけるクロモジとしてクロモジ枝を見出した．またその効果は培養細胞を枝熱水抽出物試料のUVB照射NHDF細胞に対する毒性は，用いた試験では作用1時間後からと速やかに発揮されるこ見られないと考えられた．次にエタノール抽出物試料あるとがわかった．

いは溶媒対照としての60%（v/v）含水エタノールを異なる

クロモジ（Lindera）属に属する植物の抽出物には，セ濃度で作用させたところ，前者では作用量に依存した毒性ラミダーゼ活性を阻害することにより美肌，新陳代謝亢の誘発が見られたが，後者ではいずれの濃度においても毒進，肌荒れ防止，皮膚老化防止，ニキビ改善，及び消炎性が見られなかった（図3B）．このことからエタノール抽作用，並びにメラニン産生抑制作用及び色素沈着抑制作

出物試料の作用で見られる細胞毒性は，試料の溶解に使用用，繊維芽細胞賦活効果などが期待できると言われている

した60%（v/v）含水エタノールの影響ではなく，むしろ溶が19），CPDの除去修復を促進する作用については知られて解している試料物によるものであると考えられた．

いない．従って今回の結果はクロモジ枝の皮膚に対する新このように熱水抽出物試料が細胞生存率を低下させずにたな効果を示唆するものである．またクロモジ枝熱水抽出

CPD除去修復効果を促進するのに対し，エタノール抽出物物試料をNHDF細胞に作用させると増殖が促進されたことはCPD除去修復効果を促進すると同時に細胞生存率も低は，皮膚老化の観点から注目すべき効果の一つであるとい下させることから，CPD除去修復の促進と細胞ストレスはえる．

独立であること，またエタノール抽出物試料には熱水抽出― 13 ―

島根県産業技術センター研究報告
皮膚は表層を形成する表皮，それを裏打ちする真皮，そして皮下組織および付属器によって構成されるが，そのうち真皮は細胞外マトリックスとその産生細胞から成り立つ．
皮膚の形態を維持する上で特に重要である細胞外マトリッ
クスは，皮膚の力学的な強度を保つ膠原線維，弾力性を与える弾性線維，水分を保持して膠原線維や弾性線維と結合して柔軟性を発揮するムコ多糖や糖タンパク質等の基質な

5） Gordon, J. R. S.; Brieva, J. C. Unilateral Dermatoheliosis. New
England Journal of Medicine. 2012, vol.366, p.e25.
6） ISO 21348:2007. Definitions of Solar Irradiance Spectral
Categories.
7） Matsumura, Y.; Ananthaswamy, H. N. Toxic effects ofultraviolet radiation on the skin. Toxicology and Applied
Pharmacology. 2004, vol.195, p.298–308.
8） Setlow, R. B. Cyclobutane-type pyrimidine dimers inpolynucleotides. Science (New York, N.Y.）. 1966, vol.153,

どを含んでおり，それらはNHDF細胞で産生・維持されている2）．しかし加齢に伴いNHDF細胞の増殖能は低下して20）

p.379–386.
9） Rycyna, R. E.; Alderfer, J. L. UV irradiation of nucleic acids:formation, purification and solution conformational analysis of

皮膚の機械的・機能的構造の崩壊に至ると考えられている21）．

the ‘6-4 lesion’ of dTpdT. Nucleic acids research. 1985, vol.13,

そのためここで見出したクロモジ枝熱水 抽出物による
NHDF細胞の増殖促進効果がin vivoにおいても反映できれば，健康的な皮膚状態の維持に寄与すると期待される．

p.5949–5963.
10）Reardon, J. T.; Sancar, A. Nucleotide Excision Repair. Progressin Nucleic Acid Research and Molecular Biology. 2005, vol.79,

なおここでは示さなかったがクロモジ葉抽出物試料においてもNHDF細胞の増殖を促進する効果を確認しており，

p.183–235.
11）Takahashi, Y.; Moriwaki, S. I.; Sugiyama, Y.; Endo, Y.;
Yamazaki, K.; Mori, T.; Takigawa, M.; Inoue, S. Decreased

そのため増殖促進に関与する天然化合物は葉と枝に共通

gene expression responsible for post-ultraviolet DNA repair

して存在することも考えらえられる．また先に提案されてsynthesis in aging: A possible mechanism of age-related
reduction in DNA repair capacity. Journal of Investigative

いるクロモジ属植物の抽出物によるセラミダーゼ活性阻害

Dermatology. 2005, vol.124, p.435–442.

22）は，細胞増殖に対し抑制的に関与すると考えられるが ，本研究で示したように細胞へ作用させる濃度によっては，

12）Goukassian, D.; Gad, F.; Yaar, M.; Eller, M. S.; Nehal, U. S.;
Gilchrest, B. A. Mechanisms and implications of the age-

セラミダーゼ阻害に引き続く増殖抑制効果よりも増殖効果

associated decrease in DNA repair capacity. FASEB journal :official publication of the Federation of American Societies forの方が強く表れる可能性もある．
今回の検討ではクロモジ枝によるCPD除去修復促進がNERによるものかどうか明らかにするには至らなかった．

Experimental Biology. 2000, vol.14, p.1325–1334.
13）Cleaver, J. E.; Lam, E. T.; Revet, I. Disorders of nucleotide
excision repair: the genetic and molecular basis of

またクロモジ枝に含まれるどのような成分がこれに関与しているかなど明らかにされなければならないことは多い．

heterogeneity. Nature reviews. Genetics. 2009, vol.10, p.756–768.
14）Nishinaga, M.; Kurata, R.; Onishi, K.; Kuriyama, K.; Wakasugi,M.; Matsunaga, T. Establishment of a microplate-formatted

さらにin vivoにおいてもここで示した複数の効果が発揮さ

cell-based immunoassay for rapid analysis of nucleotide

れるかについての検証も必要である．なお我々はクロモジ

excision repair ability in human primary cells. Photochemistry

以外の原料でも幾つか効果のあるものも見出しており，これらについても活用方法の検討を今後進めていく．

謝and photobiology. 2012, vol.88, p.356–362.
15）Mori, T.; Nakane, M.; Hattori, T.; Matsunaga, T.; Ihara,M.; Nikaido, O. Simultaneous establishment of monoclonal

辞

antibodies specific for either cyclobutane pyrimidine dimeror (6-4）photoproduct from the same mouse immunized with

実験で使用した植物試料の一部のうち，山野草やキノコ類は島根県中山間地域研究センター・冨川康之氏，野菜類
は島根県農業技術センター・杉山万里氏に収集していただ

ultraviolet-irradiated DNA. Photochemistry and photobiology.
1991, vol.54, p.225–232.
16）Makino, M.; Katsube, T.; Ohta, Y.; Schmidt, W.; Yoshino, K.
Preliminary study on antioxidant properties, phenolic contents,

いた．薬草については島根県美郷町役場産業振興課から，and effects of Aesculus hippocastanum (horse chestnut）seed

またハーブ類については香木の森公園（島根県邑智郡邑南shell extract on in vitro cyclobutane pyrimidine dimer repair.

町）からご提供いただいた．また一部の植物については島根県立八雲立つ風土記の丘の風土記植物園にて採取させていただいた．クロモジについては（有）ユーエムディーか

Journal of Intercultural Ethnopharmacology. 2017, vol.6, p.414–419.
17）Ishiyama, M.; Miyazono, Y.; Sasamoto, K.; Ohkura, Y.; Ueno,K. A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as

らご提供頂いた．ここに記して関係各位に謝意を表します．

文第55号 （2019）a chromogenic indicator for NADH as well as cell viability.
Talanta. 1997, vol.44, p.1299–1305.

献18）R Development Core Team, R.; R Core Team. R: A language
and environment for statistical computing. R: A language and1） 内閣府. 平成30年版高齢社会白書, 日経印刷, 2018, p.2-6.

environment for statistical computing. 2017.

2） 清水宏. あたらしい皮膚科学. 第2版, 中山書店, 2011, p.1-36.
3） Yaar, M.; Gilchrest, B. A. Photoageing: mechanism, prevention
and therapy. British Journal of Dermatology. 2007, vol.157,

19）国立大学法人富山大学; 株式会社伏見製薬所. セラミド調整剤.
特開2017-124984.
20）Gunin, G.; Kornilova, N. K.; Petrov, V. V.; Vasilyeva, O. V. Agep.874–887.
4） Gilchrest, B. A.; Krutmann, J. Skin Aging, Springer, 2006, p.1-53.

― 14 ―

changes in the number and proliferation of fibroblasts in thehuman skin. Advances in Gerontology. 2011, vol.1, p.299–303.

牧野・太田・勝部：クロモジ枝抽出物によるヒト真皮線維芽細胞の紫外線損傷DNAに対する修復効果
21）Quan, T.; Fisher, G. J. Role of Age-Associated Alterations of22）Coant, N.; Sakamoto, W.; Mao, C.; Hannun, Y. A. Ceramidases,

the Dermal Extracellular Matrix Microenvironment in Humanroles in sphingolipid metabolism and in health and disease.

Skin Aging: A Mini-Review. Gerontology. 2015, vol.61, p.427–

Advances in biological regulation. 2017, vol.63, p.122–131.

434.

― 15 ―