IgM / IgG Purification media

ImmunoAssist MG-PP Re仕様
平均粒径Kanto Reagents85 ‒ 105 μm

比表面積
沈降容積

BET法

8 ‒ 18 m2/g

乾式法

2.0 ‒ 2.5 mL/g

湿式法

2.4 ‒ 2.9 mL/g

●ImmunoAssist MG-PP Re γグロブリン保持量評価時のLC分析チャート
カ1.50

ム ：本製品2 gを約10 mLの緩衝液1で懸濁

40.0

30.0

緩 衝 液 3 ：300 mM リン酸緩衝液、pH 6.8
流速 ：1.0 mL/min

20.0

検出 ：UV（280 nm）

試料 ：ウサギγグロブリン

1.00

0.50

ラカラムサイズ ：Φ1 ㎝×10 ㎝
緩 衝 液 1 ：10 mM リン酸緩衝液、pH 6.8

10.0

タイムプログラム
0.000.00
A280（UV)ｍS/ｃｍ
06080

100min0-52 分：試料
52-80 分：緩衝液1 100 %80-95 分：緩衝液3 100 %95-125 分：緩衝液1 100 %120

青線：UV 280 nmの吸光度、赤線：電気伝導度

ImmunoAssist MG-PP Re is a ceramic chromatography media that consists
chiefly of Mg2P2O7. It is designed for easy purification of IgG and IgM fromserum, ascites, and culture supernatant.

保持量：14.1 ㎎/g●様々な動物種のIgGの保持量比較
動物種保持量（㎎/g）

動物種保持量（㎎/g）

マウス

１８．
７

ウシ

２７．
１

保持されたIgGはいずれも緩衝液3（300 mM リン酸緩衝液、pH ６．
８）で全量回収された

ラット

１７．
１

ヒツジ

２７．
２

ウサギ

１4.1

ウマ

１８．
２

ヒト３９．
２

吸着条件：10 mM リン酸緩衝液、pH 6.8Features※IgGの種類によってはImmuno Assist MG‐PP Reへの保持が弱い場合もあります

Easy Separation

You can use samples containing contaminant proteins

文献情報1）S. Inoue and N. Ohtaki, J. Chromatogr., 645 (1993) 57.

Wide Range

2）大瀧 伸之・井上 千也、分析化学, 44 (1995) 875
3）大瀧 伸之・井上 千也、CHEMICAL TIMES, 165 (1997) 21

製品情報
製品番号

製品名

容量

希望価格

20352-33

ImmunoAssist MG-PP Re

25 g

35,000 円

20352-23

ImmunoAssist MG-PP Re

100 g

★

BBz -13(201706)

It is available basically regardless of animal species※Depending on the antibody, retention may be weak

Maintain Activity

Delicate antibodies can be purified under mild neutral conditions

High Durability

It is a ceramic type material and can be alkali cleaned
or autoclave sterilized

Good Recovery

There is no nonspecific adsorption, IgM and IgG can be recovered
almost quantitatively

ImmunoAssist MG‐PP Re is a ceramic type carrier of porous spherical particles whose main
component is physicochemically stable magnesium pyrophosphate. There is no swelling
shrinkage found in organic polymer materials and handling is easy.
Kanto Kagaku found out that the physical properties of this product show excellent properties as aseparating agent for IgM, IgG, and commercialized it as a separation and purification media.
IgM and IgG are held in ImmunoAssist MG - PP Re due to electrostatic interaction. It is possible toeasily recover the target substance by passing a buffer solution with different ionic strength.

無血清培養上清からのマウスIgM抗体の精製実験例（スピンカラム法）（データ提供：国立研究開発法人 理化学研究所 脳科学総合研究センター 神経膜研究チーム 平林義雄様、長塚靖子様のご厚意による）無血清培養上清50 mLに対して0.2 gのImmunoAssist MG-PP Reを加え、必要に応じて500 mM

1リン酸緩衝液（pH 6.6)を加えてpHを6.6前後に調整しローテーターで一晩混和する。

◀Magnesium pyrophosphate■Buffer composition
BufferTargetPreparation method

Buffer 1：10 mM PB、pH 6.8

IgG

Mix 10 mM NaH2PO4 and 10 mM K2HPO4 solution, then adjust to pH 6.8.

Buffer 2：300 mM NaCl ,10 mM PB、pH 6.8

IgM
IgG

Mix 300 mM NaCl, 10 mM NaH2PO4 and 300 mM NaCl, 10 mM K2HPO4,
then adjust to pH 6.8

Buffer 3：300 mM PB、pH 6.8

IgM
IgG

Mix 300 mM NaH2PO4 and 300 mM K2HPO4 solution, then adjust to pH 6.8.

2

ImmunoAssist MG-PP Re沈殿を回収し、10 mM リン酸緩衝液(pH 6.6)で懸濁した

3

10 mM リン酸緩衝液 (pH 6.6)1 mLで5回wash(ﬂow through画分、1,200 rpm, 2分間遠心分離）
し、4300 mM リン酸緩衝液(pH 7.1)1 mLで5回elute(IgM画分、1,200 rpm,2分遠心）し、ImmunoAssist MG-PP Reスラリーを空のスピンカラム（例：Bed Volume 1.2 ml）に充填する。

溶出液（フラクションナンバー：1〜5）を回収する。

Flowchart

溶出液（フラクションナンバー：6〜10）を回収する。

Identify eluted fractions

Outline of operation method (Open column)

0.35

3.50

0.30

3.00

0.252.50

0.20

2.00

0.15

● Separation of IgG
Buffer2SampleBuffer
3

1.00

0.05

0.50

123456789100.00

12

フラクションナンバー
Buffer1SampleRemove insolubles
Adjust ionic strength, pH

1.50

0.100.00● Separation of IgM

ELISA法による溶出画分のIgM活性比較

A415

A280

Elute target

Elute contaminants

Load samples

Initialize column

Adjust theionic strength

Remove insoluble
materials

BCA法による溶出画分のタンパク質量比較

Buffer2

Remove insolubles
Adjust ionic strength, pH

345678

フラクションナンバー
平均収量：1.5 mg IgM/ 100 mL

分離精製が難しいIgMをマイルドな中性条件下で活性を保持したまま精製できます。
ContaminantsContaminants

IgG

IgM

IgG

Elute contaminants, IgG

Elute IgM

IgM

Elute contaminants

Elute IgG

910ImmunoAssist MG‐PP Reは物理化学的に安定なピロリン酸マグネシウムを主成分とする多孔性球状粒子のセラミックスタイプの担体です。有機高分子系材料にみられる膨潤収縮は無く、取扱いも簡単です。関東化学では本品の物理的性状がIgMやIgG等の分離剤として優れた特性を示すことを見出し、分離精製剤として製品化しました。
IgMやIgGは静電的な相互作用によりImmunoAssist MG-PP Re に保持されます。イオン強度の異なる緩衝液を通液することで目的物を容易に回収することが可能です。

Application: Purification of mouse IgM from serum-free culture supernatant●This protocol is provided by Dr. Hirabayashi and Dr. Nagatsuka of RIKEN Brain Science InstituteAdd 0.2 g of ImmunoAssist MG-PP Re to 50 mL of serum-free culture supernatant, adjust the pH to1around 6.6 by adding 500 mM phosphate buffer (pH 6.6) if necessary, and mix overnight with a rotator◀ピロリン酸マグネシウム■使用緩衝液組成
緩衝液

対象

調製方法

緩衝液１：10 mMリン酸緩衝液、pH 6.8

IgG

10 mM リン酸二水素ナトリウム溶液と、10 mM リン酸水素二カリウム溶液を混合し、pHを6.8に調整します。
リン酸緩衝液、pH6.8

緩衝液2：300 mM 塩化ナトリウム溶液,
10 mM リン酸緩衝液、pH 6.8

IgM
IgG

300 mM 塩化ナトリウム溶液, 10 mM リン酸二水素ナトリウム溶液と、300 mM
塩化ナトリウム溶液, 10 mM リン酸水素二カリウム溶液を混合し、pHを6.8に調整します。

緩衝液3：300 mM リン酸緩衝液、pH 6.8

IgM
IgG

300 mM リン酸二水素ナトリウム溶液と300 mM リン酸水素二カリウム溶液を混合し、pHを6.8に調整します。

2

Collect the ImmunoAssist MG-PP Re precipitate and fill ImmunoAssist MG-PP Re slurry suspended

3

Reconstitute the eluate by washing (flow through fraction, 1,200 rpm, 2 minutes) with 1 mL of 10 mM

in 10 mM phosphate buffer (pH 6.6) into an empty spin column (eg, Bed Volume 1.2 ml).

phosphate buffer (pH 6.6) 5 times (fraction number: 1 to 5).

操作手順フローチャート

Recover the eluate by elute (IgM fraction, 1,200 rpm, 2 min.) With 1 mL of 300 mM phosphate buffer

4

Determination of protein concentration by BCA assay
0.35

3.50

0.30

3.00

0.25

2.50

0.20

2.00

0.15

● IgGの分離精製

血清・腹水培養上清緩衝液
2緩衝液
3

血清・腹水培養上清

不溶分除去
pH・イオン強度調整

緩衝液
1緩衝液
2

不溶分除去
pH・イオン強度調整

1.50

0.10

1.00

0.05

0.50

0.00

● IgMの分離精製

Determination of IgM activity by ELISA assay

A415

A280

溶出画分確認

精製対象の溶出夾雑物の溶出試料の負荷

カラムの初期化

イオン強度調整

不溶分除去操作方法の概略（オープンカラム法）

solution (pH 7.1) 5 times (fraction number: 6 to 10).

123456
Fraction number

789100.00

1234567
Fraction number

Average protein yield：1.5 mg IgM/ 100 mL

IgM can be purified while retaining activity under neutral buffer conditions.
夾雑タンパク質
IgG
IgM

夾雑タンパク質
IgG

夾雑タンパク質、IgGの溶出

IgMの溶出

IgM夾雑タンパク質の溶出

IgGの溶出8910

IgM / IgG 分離精製剤

ImmunoAssist MG-PP Re

Specification

Kanto Reagents85 ‒ 105 μm

Mean particle size
specific surface area

BET method

8 ‒ 18 m2/gsedimentation
volumeDry method

2.0 ‒ 2.5 mL/g

Wet method

2.4 ‒ 2.9 mL/g

●ImmunoAssist MG-PP Re: LC analysis chart of γ globulin retention

40.0

1.50

30.0
1.00
20.00.50

Column：0.2 g of this product in 10 mL Buffer 1

Size：Φ1㎝ ×10 ㎝

Buffer 1：10 mM PB、pH 6.8

Buffer 3：300 mM PB、pH 6.8

Flow rate
Detection：1.0 mL/min：UV（280 nm）

Sample：Rabit γ globulin

10.0Time program
0.00

0.00
A280（UV)

ｍS/ｃｍ
06080

min

1000-52 min：Sample
52-80 min：Buffer 1 100 %80-95 min：Buffer 3 100 %95-125 min：Buffer 1 100 %120

ImmunoAssist MG-PP Reは、ピロリン酸マグネシウムを主成分とするセラミックスタイプの分離精製剤です。血清や腹水、培養上清などから簡単な操作で純度良くIgMやIgGを精製できます。

Retention: 14.1 mg/g

Blue：Absorption 280 nm、Red：Conductivity●Comparison of retention of IgG of various animal species
AnimalRetention (㎎/g)

AnimalRetention (㎎/g)

Mouse

１８．
７

Bovine

２７．
１

Rat

１７．
１

Sheep

２７．
２

Rabit

１4.1

Horse１８．
２

Human３９．
２

Retaining condition：10 mM PB、pH 6.8
All IgG was recovered by Buffer 3（300 mM PB、pH ６. ８）

特徴
簡単な分離操作夾雑タンパク質を含む試料から粗精製することなく使用できます

Papers1）S. Inoue and N. Ohtaki, J. Chromatogr., 645 (1993) 57.

幅広い分離対象

Product information
Product CodeName

動物種に関わりなく精製できます※抗体の性質によっては保持が弱い場合があります

抗体活性の保持デリケートな抗体をマイルドな中性条件下で精製できます

優れた耐久性

セラミックスタイプの素材であり、アルカリ洗浄やオートクレーブ滅菌が可能です

高回収率と精製能力

非特異的な吸着はなく、IgMやIgGはほぼ定量的に回収できます

Volume20352-33

ImmunoAssist MG-PP Re

25 g

20352-23

ImmunoAssist MG-PP Re

100 g

KANTO CHEMICAL CO., INC.
REAGENT DIVISION

East Muromachi Mitsui BLDG, 2-1, Nihonbashi Muromachi 2-chome,Chuo-ku, Tokyo, 103-0022, JAPANTelephone+81-3-6214-1092
Telefax+81-3-3241-1053
http://www.kanto.co.jp
E-mail; kanto-61@gms.kanto.co.jp
BBz -13(201706)