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ocJpn PigVetSocNo.
69 2017
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opneumoniae（APP）清浄化に向けた検査プロトコールの検討
小池郁子、村田知、大井宗孝（エス・エム・シー株式会社）

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(2017)
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europneumoniae(APP).
Proc.Jpn.Pi
gVet.So
c.69,1822.

キーワード：APP、清浄化、検査

査プロトコール作成について検討を行ったので報告する。

はじめにActi
nobacill
uspleuropneumoniae（以下 APP）は、豚１．呼吸器病起因病原体検出率の推移

繁殖・呼吸器障害症候群（PRRS）ウイルスや豚サー肺炎などの呼吸器病起因病原体の検出率の経時的変

コウイルス２（PCV２）が日本に侵入する以前から、化を調査するために、呼吸器症状を主症状とした死亡

豚の呼吸器感染症の主要な病原体であり、すでに一世豚から検出された病原体の検出率を、２００４年から２０１５代（約３０年）を越え、農場に根付いてしまっている。

年まで４年おきの年のデータを集計した。細菌は分離

そして現在も豚の呼吸器病の主要原因菌として問題視

培養法により、ウイルスおよびマイコプラズマは PCRされている。

法により検出した。２００７年、２０１１年の APPの検出率

近年、PRRSや PCV２の減少と共に APPの検出率ははそれぞれ３１．
９％（n＝２１０検体）、３１．
８％（n＝４０３検

弊社疾病調査において低下傾向にあるが、出荷豚での体）と高かったが、２０１５年には１７．
１％（n＝３７５検体）

APP様病変、血清抗体検査結果などから、農場単位でと検出率の有意な減少が認められた。APP以外の細みると、重篤な症例は減っているが農場から完全に排菌性の病原体としてはレンサ球菌が２１．
０％と最も高率除出来たケースは非常に少ないと考えられる。PRRSに検出された。ウイルス性の病原体としては、PRRSや、豚マイコプラズマ肺炎（MPS）等については臨床ウイルスの検出率が集計期間中最も高く、２００７年の検査データに基づいた清浄化対策に取組み、成功して２０．
０％から２０１１年には３９．
５％に有意に上昇し２０１５年にいる事例5)も報告されている。そこで、弊社での APPは僅かに減少したが有意差はなく、検出率は３３．
８％で検査結果を整理すると共に、APP清浄化に向けた検あった（図１）。

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19２．APP血清型の推移

低い検出率であったが平均で５％以上であり、これま

１９８９年～２０１５年の２６年間に分離された APP（２５７５での報告同様、これら３種類の血清型が日本での主要株）の血清型別（血清型１，２，３，５ａ，５ｂ，６，７，８，血清型であった。１９８９年～２０１５年までに分離された

９，１２）を血清凝集反応（自社保有）、血清型１５はゲルAPPの血清型を図２に示した。１９９６～２０００年の５年3,6)の併用により実施した。
内沈降反応および PCR法1,間では血清型１型の分離率が４１％と非常に効率であっ

調査期間中に分離された菌株の血清型は、血清型２がた。また、２００１～２００５年には血清型６が、２００６～２０１０

最も多く、供試菌株の５０％以上を占め、次いで血清型年には血清型１５が初めて分離された。年代別には１９８９１が２５％以上、血清型５は、２００６～２０
１０年は１．
８％と年～１９９５年には９種類の血清型が確認されていたがᅗ 㸬ศ㞳ࡉࢀࡓ $33 ࡢ⾑Ύᆺูࡢศᕸ㸦 ᖺ㹼 ᖺࡲ࡛ࡢ⣙  ᖺࡈ࡜ࡢ㞟ィ㸧ࠋ

20

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２００７年以降に分離された菌株では血清型の多様性は減I
DEXX Laboratories，Inc.
）が APP検査に利用されて少した。また、２０１１年～２０１５年は血清型２が７４％と高いる。今回、試験的に本キットを使用して APPの抗体

く、複数の抗血清で凝集し、PCR法での判別もできな検査を実施し、本キットの使用を想定した検査プロトかった型別不能株が１％であった。

コールの策定を行った。

３．APP検査方法

４．APPApxⅣ Abキット検査（以下 ApxⅣ検査）

APPの検査には、肺病変部および鼻腔スワブからの１）ApxⅣ検査結果と、と畜豚肺病変の確認

馬脱線血寒天培地（V因子入り）による分離培養法やAPPワクチン未接種のＡ農場とＢ農場（共に母豚抗体検査による血清学的診断法が実施されている。近２，０００頭規模、PRRS陽性農場）において、同一群の３年、口腔液を用いた PCR法による種々の呼吸器感染症～５頭に耳標を装着し、３０，６０，９０，１
２０，１５０日の各起因病原体の特異遺伝子検出が行われてきており、弊日齢で採血を行った。採血終了後の血清について、社でも APPでの応用の可能性について現在検討を

ApxⅣ検査を実施し、両農場の抗体価の推移と調査個行っている。血清抗体検査は、血清型１，２，５の補体を含む豚群のと畜場での APP肺病変の有病率の比体結合反応（CF試験）および各血清型の莢膜や、外較を行った。肺病変については、胸膜肺炎像が認めら膜蛋白、LPSなどを抗原とした ELI
SA検査、Apx毒れた肺を APP病変とし、肺の肝変化が認められた肺は素を抗原とした ELI
SA検査法などが実施されているMPS病変とした。

が、検査対象が特定の血清型のみである場合や、Apx

両農場とも３０，６０日齢で抗体が確認された。９０日齢Ⅰおよび ApxⅡ毒素を抗原に用いたウェスタンブで ELISA値の下降が認められたことから移行抗体のロット解析では Ac
tinobacillussuisとの交差反応が認め可能性が考えられたが、感染抗体であるか、今後継続られること4)、ワクチン抗体と感染抗体の識別ができ的に調査し判定する必要がある。Ａ農場では１２０日齢ないことなどの問題がある。ApxⅣは APPの全ての以降に ELISA値の上昇が認められたが、Ｂ農場では抗血清型が産生する種特異的な毒素であり、欧米では体価の上昇は認められなかった（図３）。両農場の肺のApx毒素Ⅳを抗原としたワクチン抗体と感染抗体のAPP有病率は、Ａ農場で６２．
５％（１０/１６頭）、Ｂ農場は区別が可能な ELI
SAキット（APPApxⅣ Abキット，０．
０％（０/１１頭）であり、ELISA値の推移と有病変率E್㸿㎰ሙAPP-ApxϫELISA್

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豚病会報

No.
69 2017が一致していることが確認出来た。

21１）APP感染状況の確認（APP発症時）
斃死原因究明：肺からの呼吸器感染症調査、APP

Ａ農場では、肥育舎へ移動後（約７０日齢）に、発咳等の呼吸器症状、PRRSの感染を、さらに出荷前の死亡分離および血清型別豚の病性鑑定にて APP感染を確認していたが、Apx（ワクチンの使用検討する際に血清型の確Ⅳ検査により、肥育舎移動後の早い段階で、APPに感認は特に重要である。
）
呼吸器症状原因究明：呼吸器症状を示す豚での類染していた可能性が示唆された。

症鑑別を含めた鼻腔スワブからの分離。なまた、ApxⅣ検査において、９０日齢以降の肥育豚で、ELISA 値が２峰性に上昇している個体が認められ

お鼻腔スワブからの確認は、斃死豚と比較（データ未掲載）、母豚で感染した APPと異なる血清し感度は低いため、検出されない可能性を型株による感染、あるいは肥育豚群内で複数の血清型考慮し、３～５頭程度にて確認することがが存在している可能性が考えられた。今後、血清型特望ましい。口腔液からの PCR調査（口腔液異的な ELISAなどを用いて詳細に調査する必要があ

からの検出については、APP以外の呼吸器ると考える。

病起因病原体の検出も可能で、簡便な採材方法であることから APP検査の一つに加えられるよう検討し組み入れていく必要が２）ワクチン抗体と感染抗体ある2)）。

Ｃ農場は、５０日、７０日にワクチンを接種しており、ワクチン接種後の９０日齢では血清型２莢膜抗原を用い出荷豚肺病変の確認：胸膜肺炎の割合など（毎月た ELI
SA 法にて抗体の上昇が認められ（図４右）、または季節ごとなど）

ApxⅣ検査により感染抗体は上昇していないことが

２）APP発症要因解明の各種呼吸器感染症調査：年明らかになった（図４左）。従来の ELISA法（血清型２回以上、各ステージ約１か月ごと出荷前

２の莢膜抗原、外膜蛋白を用いた抗原）と ApxⅣ検査まで各５頭程度の定期的な呼吸器感染症を組み合わせることで、ワクチンによる抗体の上昇と（APPの他 PRRS，PCV２，MPS，インフル感染による抗体の動きを識別することが可能と考えらエンザなど）の血清抗体検査および約１かれる。

月ごとの１～３豚房での口腔液 PCR検査、病性鑑定による発症要因の調査。
３）APP感染状況の確認：ワクチン抗体が確認できる

５．APP検査プロトコールの検討

ELI
SA 法 お よ び ApxⅣ 抗 原 を 用 い た

上記調査結果より ApxⅣ検査の使用を想定した、ELI
SA 法によるワクチン抗体と感染抗体

APPの感染状況や清浄化確認のための検査プロトの確認、APP感染時期の確認（年２回以上、コールとして以下の方法を提案したい。

繁殖豚含めた各ステージ、約１か月ごと出&㎰ሙ$33$3;ϫ(/,6$್
3.0
2.5
2.0
1.5
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69 2017
荷前まで）
。

4065.

４）APP清浄化の確認：年２回以上の ApxⅣ検査に５）Ra
utiainenE,etal.
(2001)Re
gionaleradicationof

よる陰性状態維持の確認。また、ApxⅣ検Mycoplasma hyopneumoniaefrom pi
g her
ds and査による導入豚の APP陰性確認。

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ffree
domo
ft
hedisease.Acta

なお、検査頭数については、農場規模や感染頭数を考慮する必要がある（参考サイト ht
tp://www.
wi
nepi.
net）。

VetSc
and,
42:
355364６）Sc
huc
her
tJ
A,
eta
l.
(2004)Detecti
onandident
ific
ationofAc
tinobacillusp
leuropne
umoniaeserotypes1,
2and8bymulti
plexPCR.JClinMi
crobiol,42:

６．まとめ
APP感染については、これまで著者らは日本での主要血清型である血清型１，２および５の CF試験および血清型特異的な抗原を用いた ELISAによる抗体検査を実施してきたが、これらの抗体検査法では、感染抗体とワクチン抗体の識別ができないことと、血清型
１５をはじめとする他の血清型や型別不能株が分離されている現状から、血清型特異的な抗体検査では不十分であると考えられた。
そこで、今回、APPの血清型に関係なく感染のみを
確 認 す る こ と が で き る APPApxⅣ を 抗 原 と し た
ELI
SA法を取り入れることで、農場での感染状況をより的確にとらえることが可能となった。
今後、APPApxⅣ Abキットが市販された場合は本キットを組み入れた APP検査体制を整備し、APPを含めた呼吸器感染症の定期的な検査を実施することにより、APP感染時期の特定と、発症要因の確認など清浄化対策を行う上で有用な知見が得られ、臨床検査の成績が APPの清浄化に向けた取組につながると考えられる。

引用文献
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