情報・システム機構シンポジウム2014（一橋講堂） ２０１４年１０月１７日	

第１部 これまでの１０年	  融合研究の苦労と成果	  	  「遺伝学と統計学の再融合」	

情報・システム研究機構 国立遺伝学研究所	  	  	  	  	  	  	  	   城石俊彦	

近代統計学と遺伝学の再融合  

22000055  新領域融合研究センター  
22000044  情報・システム研究機構  
22000000  ヒトゲノム解読  Genetics	
分子遺伝学  の隆盛  

Statistics	

11995533  DDNNAA二重鎖構造    の発見  

11993366  FFiisshheerr  RR  AAの  メンデル論文批判                        FFiisshheerrの論文の    約半数は遺伝学  ((集団遺伝学))  関係  

11990000  メンデル遺伝則の再発見  
11886666  メンデル遺伝則の論文発表  近代統計学と遺伝学	
1936年 フィッシャーのメンデル論文への批判	
Fisher, R. A.
“Has Mendel’s work been rediscovered?”
Annals of Science, 1, 115–137.	
「カイ二乗検定で、期待値と観察値が	  あまりに良く一致し過ぎている」	

1900年 「メンデルの遺伝則」の再発見	
Hugo de Vries	
Comtes Rendus
de l'Académie desSciences	

1960年 Fisher博士の遺伝研来訪。右は木村資生博士。
東京での国際統計協会総会に出席のため来日。	  
このとき、九大（北川敏男博士）を訪問。	  	
Carl Erich Correns	..	

Berichte der deutschenbotanischen Gesellschaft
18: 158–168	

1866年 “メンデルの遺伝則”論文発表	
Gregory Mendel: “Experiments on Plant Hybridization.”
The Proceeding of the Natural History Soceity of Brunn. 	

言語の分化	
統計数理の世界	  	バベルの塔 （ピーター・ブリューゲル）	

順問題：	  原因から結果を推定	  （数理モデルの解析・数理モデルからの予測）	  	  	逆問題：	  結果から原因を推定	  （データから数理モデルを推定：“データ中心科学”）		  	旧約聖書創世記１１章	  遺伝学の世界	  		「神は降臨してこの塔を見、「人間は言葉が同じなため、このようなことを始めた。
人々の言語を乱し、通じない違う言葉を話させるようにしよう」と言った。このため、人間たちは混乱し、塔の建設をやめ、世界各地へ散らばっていった。」	

順遺伝学（フォワードジェネティクス）：	  結果（表現型）から原因（遺伝子）を同定	  	  	逆遺伝学（リバースジェネティクス）：	  原因（遺伝子）の破壊から結果（表現型）を評価	

統計学と遺伝学の融合研究	
平成１７−２１年	
プロジェクト名：「統計・情報技術を駆使したゲノム多型と表現型多様性の連関解析システムの開発」	  	  	  	  	  	  	  	  	  	  	  	  	  	  	   ＰＤ：城石俊彦	
サブテーマ１：「表現型数値計測システムの開発と実験データの収集」（代表：城石俊彦）	  サブテーマ２：「生物多様性データの統計的モデリングと解析システムの開発」 （代表：栗木 哲）	
【国立遺伝学研究所】 倉田のり 伊藤幸博 春島嘉章 久保貴彦 永久貢 堀内陽子 田村勝 高田豊行 岡（木曾）彩子
細谷正樹 城石俊彦 小出 剛 梅森十三 杉本大樹	
【統計数理研究所】 栗木哲 江口真透 奥田将己 川崎能典 坂口隆之 田中英希 種村正美 田村義保 土谷 隆 	  藤澤洋徳 Dou	  Xiaoling	  	  	  Nurul	  Haque	  Mollah 池田思朗 坂口隆之	  平成２２−２７年	
プロジェクト名：「超大容量ゲノム・多元軸表現型データの統計情報解析」	   ＰＤ：倉田のり	

サブテーマ１：「次世代シーケンサによるゲノム関連情報の大規模生産とその情報解析手法の開発」	  	  	  	  	  	  	  	  	  	  	  	  	  （代表：藤山秋佐夫）	  サブテーマ２：「大量ゲノム関連データと多元的な生物表現型データの統合による遺伝的相関構造描出の	  のための統計手法の開発と最適化」（代表：栗木 哲）	  サブテーマ３：「大量で多元的なデータの情報・統計手法を適用したゲノム機能と遺伝的ネットワーク抽出」 	  （代表：倉田のり）	
【国立遺伝学研究所】 倉田のり 春島嘉章 久保貴彦 永久貢 堀内陽子 田村勝 高田豊行 岡（木曾）彩子 城石俊彦 				 小出 剛 高橋阿貴 後藤達彦 藤山秋佐夫 豊田敦 野口英樹	
【統計数理研究所】 栗木 哲 藤澤洋徳 Dou	  Xiaoling 間野修平 加藤省吾 小山慎介		
【国立極地研究所】
近藤伸二 	
【国立情報学研究所】 宇野毅明 井ノ上克巳	
【政策研究大学院大学】 土谷隆 【新潟大学】 原尚幸 阿部貴志 	【山形大学】 坂口隆之 【大阪府立大学】 川野秀一 【九州大学】 二宮嘉行 【大阪大学】 片山翔太 	
【高知大学】 清澤秀孔 			  	  	  	  	  	  	  業績リスト	  融合研究の存在無しでは成立しなかったもの。著者名の下線は融合研究センター所属が記載されているもの、茶色の著者名は統数研、緑字は遺伝研、青色は情報研、銀色は機構外からの著者
2007年	  1.	  Oka	  A,	  Aoto	  T,	  Totsuka	  Y,	  Takahashi	  R,	  Ueda	  M,	  Mita	  A,	  Sakurai-­‐Yamatani	  N,	  Yamamoto	  H,	  Kuriki	  S,	  Takagi	  N,	  Moriwaki	  K,	  Shiroishi	  T*.	  DisrupGon	  of	  geneGc	  interacGon	  between	  two	  autosomal	  regions	  and	  the	  X	  chromosome	  causes	  reproducGve	  isolaGon	  between	  mouse	  strains	  derived	  from	  diﬀerent	  subspecies.	  
GeneGcs.	  175:	  185-­‐197	  (2007).	  	  2008年	  2.	  Takada	  T,	  Mita	  A,	  Maeno	  A,	  Sakai	  T,	  Shitara	  H,	  Kikkawa	  Y,	  Moriwaki	  K,	  Yonekawa	  H,	  Shiroishi	  T*.	  Mouse	  inter	  subspeciﬁc	  consomic	  strains	  for	  geneGc	  dissecGon	  of	  quanGtaGve	  complex	  traits.	  Genome	  Res.	  18:	  500-­‐5008	  (2008).	  	  2009年	  3.	  Fujisawa	  H*,	  Horiuchi	  Y,	  Harushima	  Y,	  Takada	  T,	  Eguchi	  S,	  Mochizuki	  T,	  Sakaguchi	  T,	  Shiroishi	  T	  and	  Kurata	  N.	  SNEP:	  Simultaneous	  detecGon	  of	  nucleoGde	  and	  expression	  polymorphisms	  using	  Aﬀymetrix	  GeneChip.	  
BMC	  BioinformaGcs.	  (1):131.	  (2009).	  	  2010年	  4.	  Mizuta	  Y,	  Harushima	  Y,	  Kurata	  N*.	  Rice	  pollen	  hybrid	  incompaGbility	  caused	  by	  reciprocal	  gene	  loss	  of	  duplicated	  genes.	  Proc.	  Natl.	  Acad.	  Sci.	  47:	  20417-­‐20422.	  (2010).	  
5.	  Fujita	  M,	  Horiuchi	  Y,	  Ueda	  Y,	  Mizuta	  Y,	  Kubo	  T,	  Yano	  K,	  Yamaki	  S,	  Tsuda	  K,	  Niihama	  M,	  Kato	  H,	  Kikuchi	  S,	  Hamada	  K,	  Mochizuki	  T,	  Tsutsumi	  N,	  Kurata	  N*.	  Rice	  expression	  atlas	  in	  reproducGve	  development.	  Plant	  Cell	  Physiology.51:	  2060-­‐2081.(2010).	  

2011年	  6.	  Sugimoto	  H.,	  Okabe	  S.,	  Kato	  M.,	  Koshida	  N.,	  Shiroishi	  T.,	  Mogi	  K.,	  Kikusui	  T.,	  Koide	  T*.	  A	  role	  for	  strain	  diﬀerences	  in	  waveforms	  of	  ultrasonic	  vocalizaGons	  during	  male–female	  interacGon.	  PLoS	  ONE	  (2011).	

2012年	  7.	  Huang	  X,	  Kurata	  N,	  Wei	  X,	  Wang	  Z-­‐X,	  Wang	  A,	  Zhao	  Q,	  Zhao	  Y,	  Liu	  K,	  Lu	  H,	  Li	  W,	  Guo	  Y,	  Lu	  Y,	  Zhou	  C,	  Fan	  D,	  Weng	  Q,	  Zhu	  C,	  Huang	  T,	  Zhang	  L,	  Wang	  Y,	  Feng	  L,	  Furuumi	  H,	  Kubo	  T,	  Miyabayashi	  T,	  Yuan	  X,	  Xu	  Q,	  Dong	  G,	  Zhan	  Q,	  Li	  C,	  Fujiyama	  A,	  Toyoda	  A,	  Lu	  T,	  Feng	  Q,	  Qian	  Q,	  Li	  J,	  Han	  B*.	  A	  map	  of	  rice	  genome	  variaGon	  reveals	  the	  origin	  of	  culGvated	  rice.	  Nature.	  490:	  497-­‐501.	  (2012).	  	  	  過去２年の業績（＊は責任著者）	
2013年	  8.	  Umemori	  J.,	  Mori	  A.,	  Ichiyanagi	  K.,	  Uno	  T.,	  Koide	  T*.	  IdenGﬁcaGon	  of	  both	  copy	  number	  variaGon-­‐type	  and	  constant-­‐type	  core	  elements	  in	  a	  large	  segmental	  duplicaGon	  region	  of	  the	  mouse	  genome.	  BMC	  Genomics	  	  (2013).	  
9.	  Goto	  T.,	  Tanave	  A.,	  Moriwaki	  K.,	  Shiroishi	  T.,	  Koide	  T*.	  SelecGon	  for	  reluctance	  to	  avoid	  humans	  during	  the	  domesGcaGon	  of	  mice.	  Genes,	  Brain,	  and	  Behavior	  (2013).	  
10.	  Takada	  T,	  Ebata	  T,	  Noguchi	  H,	  Keane	  TM,	  Adams	  DJ,	  Narita	  T,	  Shin-­‐I	  T,	  Fujisawa	  H,	  Toyoda	  A,	  Abe	  K,	  Obata	  Y,	  Sakaki	  Y,	  Moriwaki	  K,	  Fujiyama	  A,	  Kohara	  Y,	  Shiroishi	  T*.	  The	  ancestor	  of	  extant	  Japanese	  fancy	  mice	  contributed	  to	  the	  mosaic	  genomes	  of	  classical	  inbred	  strains.	  Genome	  Res.	  23:1329-­‐1338	  (2013).	  	  2014年	  11.	  Kuriki	  S*,	  	  Harushima	  Y,	  Fujisawa	  H,	  Kurata	  N.	  Approximate	  tail	  probabiliGes	  of	  the	  maximum	  of	  a	  chi-­‐square	  ﬁeld	  on	  mulG-­‐dimensional	  lakce	  points	  and	  their	  applicaGons	  to	  detecGon	  of	  loci	  interacGons.	  Annals	  of	  the	  InsGtute	  of	  StaGsGcal	  MathemaGcs.	  66:	  725-­‐757.	  (2014).	  
12.	  Dou	  X*,	  Kuriki	  S,	  Maeno	  A,	  Takada	  T,	  Shiroishi	  T.	  Inﬂuence	  analysis	  in	  quanGtaGve	  trait	  loci	  detecGon.	  Biom	  J.	  56:	  697-­‐719	  (2014).	  
13.	  Oka	  A,	  Takada	  T,	  Fujisawa	  H	  and	  Shiroishi	  T*.	  EvoluGonarily	  diverged	  regulaGon	  of	  X-­‐chromosomal	  genes	  as	  a	  primal	  event	  in	  mouse	  reproducGve	  isolaGon.	  PLoS	  Genet.	  10,	  e1004301,	  (2014).	  
14.	  Arakawa	  T,	  Tanave	  A,	  Ikeuchi	  S,	  Takahashi	  A,	  Kakihara	  S,	  Kimura	  S,	  Sugimoto	  H,	  Asada	  N,	  Shiroishi	  T,	  Tomihara	  K,	  Tsuchiya	  T,	  Koide	  T*.	  A	  male-­‐speciﬁc	  QTL	  for	  social	  interacGon	  behavior	  in	  mice	  mapped	  with	  automated	  pamern	  detecGon	  by	  a	  hidden	  Markov	  model	  incorporated	  into	  newly	  developed	  freeware.	  Journal	  of	  Neuroscience	  Methods	  (2014).	  
15.	  Kato	  S,	  Ishii	  A,	  Nishi	  A,	  Kuriki	  S,	  Koide	  T*.	  SegregaGon	  of	  a	  QTL	  cluster	  for	  home-­‐cage	  acGvity	  using	  a	  new	  mapping	  method	  based	  on	  regression	  analysis	  of	  congenic	  mouse	  strains.	  Heredity	  	  (2014).	  本日発表する主な成果	
１．ゲノム研究における多重検定	
多くの変数を観測するほど、ランダム誤差による見せかけの統計的「発見」がなされる。その多くは、再現実験で確認されず、偽陽性	  (false	  posi;ve)である。
ゲノム解析では多数の検定を繰り返すことが多く、偽陽性と真の陽性を区別する必要がある。融合研究では、この多重性を克服する方法を検討した。	

２．対立遺伝子発現量の比較解析研究基盤の構築	
体質や疾患の原因の多くは、遺伝子発現を制御するシス配列上の多型（変異）であることがわかってきた。制御配列多型を効率良く探索するための研究基盤として、遺伝子発現量を比較計測する解析プラットホームを構築した。	

１−１．生殖隔離障壁に関わるエピスタシスの統計学的検出と多重性調整 	
栗木哲・藤澤洋徳（統数研）春島嘉章・倉田のり（遺伝研）	
Kasalath	  (indica)	
日本晴	  (japonica)	

交配可能な亜種間でも種を隔てる遺伝的機構により、雑種後代で分離比がメンデル則からずれる所がある。	

生殖的隔離は相互作用によって起きる	相互作用の検出に	  全マーカー間(1000x1000)の	  χ2独立性検定を行うが、これは	  重篤な多重検定で、χ2値から	  p値を得られない。	
最大値は染色体9と12間の33.6を観測するが、p値は？	  
F2集団の連鎖地図上のマーカー分離比	追試実験では多くが再現できない	χ2 独立性検定の多重性調整	  遺伝マーカー間は連鎖しており独立ではない	  連鎖の確率構造を考慮し、３種類の方法で調整p値を計算	
１．Monte Carlo, ２．Nonlinear renewal theory, ３．Tube method	
３種類の方法で調整した p値は一致	

高密度連鎖地図における相互作用検定
時の、多重検定の調整p値を決定した	
Kuriki	  S,	  Harushima	  Y,	  Fujisawa	  H,	  Kurata	  N.	  
Ann	  Inst	  Stat	  Math	  66：725–755.	  (2014)	  	F2集団で連鎖しないマーカー間で観測された全てのχ2ピークは有意（＜0.05)では無かった。	

統計学的に有意でないと判定されたピークにも	実験で再現された真の相互作用も有る	

25 %

PNAS

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America

50 %25 %0%

501008080606040402020000%

10025 %12050 %この相互作用は、重複遺伝子でjaponica,	  indicaで別々に破壊され花粉管発芽に関与する二つの遺伝子によるものであった。	  
Mizuta	  Y,	  Harushima	  Y,	  Kurata	  N.	  (2010)	  Proc	  Natl	  Acad	  Sci	  USA	  107:	  20417–20422.	
November 23, 2010 | vol. 107 | no. 47 | pp. 20145–20592

0%

1200%

25 %

50 %

Chr	
650 %

Frequency of Genotype

染色体1と6の相互作用は、統計学的には有意な値を示さないが、別の集団でも独立性検定で高いχ２値を示し(赤い等高線）、二つの集団で同様にマーカーの分離比が歪む（再現性があった）。	

Frequency of Genotype

Chr	
1

255075 100 125 150 175

真の相互作用の判定方法の開発： (論文 in	  prepara;on)	   	  遺伝的相互作用モデルを建て、独立性検定値、マーカー分離比、F2生存率を考慮し、	  複合判定することにより真の相互作用の検出が可能である。		

www.pnas.org

１−２．疑似相関を利用した新しい多重性調整手法の開発	  
二宮嘉行（九州大）栗木哲・藤澤洋徳（統数研）高田豊行・城石俊彦（遺伝研）	
マウス表現型解析データ	
……	

表現形質３６	

サンプル１	

1.47	…	

2.84	

サンプル２	2.78	…	

2.96	

サンプル１	

2.87	

…	

4.34	

サンプル２	

2.56	…	

3.81	
…	

…	

…	  …	

…	

…	

…	

…..	
染色体	  置換系統２９	…	

…	

染色体	  置換系統１	…	  マウス	  C57BL/6	  (B6)	  系統：	  	  対照系統	  対象とする多重検定問題	  表現形質１	系統	

サンプル１	

1.98	…	

2.57	

サンプル２	2.32	

…	

3.15		  C57BL/6J（Ｂ６）系統と染色体置換系統の表現型の差を検定する。表現形質（特徴量）は３６種類、系統数は２９（雌雄で５８）あり、合計で	  ２,０００以上の検定数となる。	
各多重検定におけるp値：	  第j番目の表現形質を比較するt統計量をTｊ、その実現値をtjとしたとき、相関を考慮した検定の多重性調整済p値は次で与えられる。	  
①	  この確率は表現形質間の未知の相関に依存するため、厳密に評価できない。	  

…	…	…	  ② 相関を想定しないBonferroni法の上界を	  使う（Takada	  et	  al.	  Genome	  Res.	  2008)	  相関を考慮した多重性調整	
表現形質間の相関が大きいとき，②は大きな値を与えすぎて検出力を下げる			Bonferroni法はconservaGveな方法で、本当は系統差があっても検出できない場合がある	  疑似相関を利用した多重性調整手法の開発	
定理（Dudoit	  &	  Van	  der	  Laan,	  2008）	  未知の相関の代わりに通常の標本相関を用いて求めた①（MaxT法）は、漸近的に	多重性調整された p 値となる。ステップダウン法を組み込むこともできる。		

より検出力を上げるため，通常の標本相関より大きくなる傾向がある疑似相関を	用いることを検討する	

表現形質２	

図 疑似相関を用いた多重検定：	
C57BL/6系統（対照系統）と比較する染色体置換系統を合わせたデータの標本相関は“疑似相関”である。疑似相関は、帰無仮説が正しいときは良い推定値を与え、帰無仮説が正しくないときは意味の無い値となり、全体として多重検定のエラーに影響を与えない。	
図で疑似相関は0.30，通常の標本相関は0.12（青）と0.18（赤）。赤群と青群の比較で，通常の標本相関を使うと2特徴量とも受容（系統差なし），疑似相関を使うと2特徴量とも棄却（系統差有）される。	
表現形質１	定理（Ninomiya	  et	  al.,	  論文	  in	  preparaGon）	  ある（本問題では満たされるような）条件のもと，未知の相関の代わりに	疑似相関を用いて求めた①は，漸近的に多重性調整された p 値となる	

２．対立遺伝子発現量バイアスの解析プラットホームの構築	
高田・岡・藤山・豊田・城石（遺伝研）近藤（極地研）清澤（高知大）	  二宮・藤澤・栗木（統数研）	
Coding
(4/9%)	

Maurano, M. et al.
Science 2012. 	

ヒト集団で体質・疾患の原因ゲノム多型の位置。
原因SNPsが飜訳配列（タンパク質をコード）領域にみつかるケースは、わずか4.9%。原因の多くは、遺伝子発現を制御するシス配列多型（変異）にある。	

飜訳配列はゲノムの僅か２％。残りの９８％にある発現制御に働くエンハンサー上のゲノム多型を探すことが重要。発現制御に関わる染色体クロマチンの化学修飾も重要である。	

個体差（表現型多様性）は、遺伝子発現量の違いで生じる！	

遺伝子発現量の違いを網羅的に検出する研究基盤の必要性	
大型、高発がん、	  糖尿病傾向、低活動 	  老齢難聴、etc.	

小型、低発がん、	  低糖尿病傾向、高活動	  老齢でも健聴 etc.	

大きな表現型多様性	

C57BL/6
!!
西欧産	  C57BL/6	  (B6)	  系統	

日本産	  MSM	  !!
系統（遺伝研）MSM/Ms !
 ! MSM ATGCGGTCAGGATTACGATTTAGAC 
B6 ATGCGGTCAGGTTTACGATTTAGAC
（C57BL/6 x MSM)F1交雑個体から調整したmRNAを次世代シーケンサで大規模解析	
飜訳配列上のゲノム多型 (cSNP)で２系統からの遺伝子	の転写産物 （mRNA) を区別して発現量を正確に計測する	

全遺伝子の80%以上が区別される	  遺伝子発現量の系統比較計測のための解析プラットホーム構築	
C57BL/6  !!

MSM/Ms!!

リファレンスゲノム配列
ゲノム配列情報：UCSC mm9

ゲノム配列情報：
NIG MSM v1& 2

遺伝子発現量比の計測	 !
次世代シーケンサ ! MSM ATGCGGTCAGGATTACGATTTAGAC（HiSeq2000）による 
B6 ATGCGGTCAGGTTTACGATTTAGAC
RNA-sequencing
国立遺伝学研究所
倉田PJ サブテーマ１	

藤山秋佐夫・豊田敦 (遺伝研）

RNA調整（♀B6 x ♂MSM)F1(♀MSM x ♂B6)F1

DDBJ スパコン(アカウント名：tricmouse)

ゲノム・ビッグデータ情報解析	
城石俊彦
（遺伝研）

肝臓・精巣・骨・脳高田豊行（遺伝研）
岡彩子（融合セ）

中谷明弘（新潟大）近藤伸二

阿部貴志 高田豊行
清澤秀孔（新潟大）（遺伝研）
（極地研）
（高知大）

岡彩子
（融合セ）

情報・システム研究機構の融合研究で構築した	  遺伝子発現量比較解析プラットホーム：	  	  個体差が遺伝子発現量の違いによることが明らかになり、	  発現量の個体差を正確に計測する必要が出てきた。	  	  今後、研究基盤として、	  世界のゴールデンスタンダードになる可能性がある。	

結語	
20世紀初頭、遺伝学と近代統計学は一体となってスタートした。	  
分子生物学が起こると、遺伝学は遺伝子機能の詳細な解析に	  関心が移り、集団遺伝学を除くと独自の路線は歩むようになった。	  	  ゲノム科学の時代が到来して、遺伝学で扱うべき変数が爆発的に	  増大すると、遺伝学は統計学との再融合が必要となっている。	  	  情報・システム研究機構における融合研究は、そのような試みの貴重な一歩である。