〔生物工学会誌

第 93 巻第3号

122–129．2015〕2014 年度 生物工学奨励賞（斎藤賞） 受賞

代謝プロファイリングに基づく微生物育種技術の開発と応用
蓮沼

誠久

Development of microbe breeding technology
EDVHGRQPHWDEROLFSUR¿OLQJ
Tomohisa Hasunuma (Organization of Advances Science and Technology, Kobe University, 1-1
Rokkodai, Nada, Kobe657-8501) Seibutsu-kogaku 93: 122–129, 2015.

はじめに産業上有用な株には，基質から目的物質への変換効率の高さと，高い生産性を実現する細胞増殖能力が求めら

人類は 19 世紀まで植物資源から生活に必要なあらゆれる．一方で，微生物の細胞内代謝は，遺伝子発現，酵るものを作り出してきたが，20 世紀の急速な石油化学

素反応，分子間相互作用などを介して厳密に制御され，産業の発展により，大量消費・廃棄型の社会構造となりいわばシステムを構成している．したがって，人為的に地球規模の気候変動などの問題を生み出した．この問題

代謝系を改変し，有用な微生物を育種するためには，細を解決して持続可能な低炭素・自然共生型の未来社会を胞システムの中から最大の効果を生む代謝反応を見いだ

実現するためには，再生可能なバイオマスからバイオ燃すことが重要である．本研究では，オミクス解析を利用料や汎用化学品を経済性良く，高効率で生産する技術のして代謝状態をグローバルに捉え，in vivo 同位体標識法1)開発が必要である ．バイオマスを積極的に利用する技による代謝フラックス観測技術（動的代謝プロファイリ術が確立できれば，CO2 排出削減による地球上の炭素循ング技術）を構築して代謝物のターンオーバーを解析す

環の定常化，持続可能なエネルギーの供給に寄与できる．

ることにより，代謝改変の鍵反応を探索した．さらに，特に，賦存量が多く，食糧と競合しないリグノセルロー

遺伝子工学的に鍵反応を制御することで，微生物を高度

2)

ス系バイオマスへの期待は高い ．また近年，水圏のバイオマスを利用する第三世代バイオ燃料の生産が注目されている 3)．藻類の生育に必要なものは，光，水，CO2と微量のミネラルだけであり，倍加時間が短いため，一化する育種に取り組んだ．
オミクス解析に基づくリグノセルロース系
エタノール高効率発酵酵母の開発

定のバイオマスの収穫に必要な生産域が陸生のバイオマ

リグノセルロース系バイオマスの主なものとしては，スよりも少なくて済む．また，通年の収穫が可能な藻類

稲わら，麦わら，もみ殻，バガス，コーンストーバー，の利用は，より安定なエネルギー供給を実現し得る．さスイッチグラス，ネピアグラス，エリアンサスのようならに，海洋性藻類を利用すれば，陸生バイオマスの利用草本系バイオマスと，木材チップや廃材などの木質系バで直面する耕作地の限界や水資源の枯渇を回避できる．

イオマスがある．その主成分がセルロースであり，グルそこで筆者は，リグノセルロース系バイオマスを高い収コースが E1 → 4 グルコシド結合で直鎖状に重合した E-率でエタノールに変換する酵母の育種や，シアノバクテグルカンが水素結合を介して束となる繊維状の結晶構造

リア・微細藻類の生産性を向上させる育種技術の開発にをとっている 4)．セルロースを取り囲むようにヘミセル取り組んできた．

ロース，ペクチンといったマトリクス高分子が存在し，著者紹介

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神戸大学自然科学系先端融合研究環（教授） E-mail: hasunuma@port.kobe-u.ac.jp

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その外層にフェニルプロパノイド系芳香族化合物の重合を低下させる．細胞内 pH の低下は中央代謝系や核酸の体であるリグニンが沈着して繊維構造をさらに強化して生合成を阻害する．また，過剰に蓄積したプロトンを汲いる．ヘミセルロースの組成はバイオマスによって異な出すために ATPase が稼働して細胞内 ATP を枯渇させるるが，キシロースが E-1 → 4 結合したキシラン主鎖にグと考えられている．このように弱酸の細胞内への流入はルコースやアラビノース，グルクロン酸からなる側鎖が代謝系全般に悪影響を与えるため，発酵阻害を回避する

5)連結している ．この強靭な繊維を利用するには，結晶酵母の育種は容易ではなかった．弱酸の流入を回避する構造を弛緩する前処理と酵素処理が必要になるが，酵素ために，発酵液の pH を上昇させる手段もあり得るが，処理に必要な酵素製剤のコストが高い点が問題である

コンタミネーションのリスクが高いリグノセルロース発（図 1）．筆者らは，セルラーゼやヘミセルラーゼを出芽酵においては得策ではない．そこで本研究では，メタボ

酵母 Saccharomyces cerevisiae の細胞表層に提示するこ

ローム解析によりグローバルな代謝物プロファイルを取とにより，リグノセルロース系バイオマスからのエタ得し，酢酸添加により阻害されるエタノール生合成系のノール生産における市販酵素剤の添加量を低減させるこ

ボトルネック反応を探索することとした 15)．実験としてとに成功してきた 6)．一連の研究の中で，細胞表層におは，Scheffersomyces stipitis 由来キシロースレダクター

けるセルラーゼ群の集積が，逐次的なセルロース加水分

キシリトールデヒドロゲナーゼ（XDH）
ゼ（XR）遺伝子，解反応を速やかに進行させること，加水分解反応の生成遺伝子，出芽酵母由来キシルロキナーゼ（XK）遺伝子物阻害を緩和できること，バイオマスに対するセルラーを染色体に導入したキシロース資化性酵母株を用いて，ゼの非特異的吸着を回避できること，酵母を回収して発0，30，60 mM の酢酸存在下でキシロースを単一炭素源酵に繰返し利用すれば酵素剤添加量をさらに削減できるとする微好気発酵を行い，解糖系，ペントースリン酸経こと，高温耐性酵母を宿主にすれば加水分解反応を促進路（PPP），TCA 回路の中間代謝物や補酵素類の細胞内できること，などを明らかにしてきた 7–13)．

蓄積量の経時変化を調べた．その結果，添加する酢酸濃一方で，リグノセルロース系バイオマスの利用にはも度とエタノール生産速度には負の相関がみられ，酢酸濃う一つの重大な課題がある（図 1）．それは，高温・高圧度依存的に PPP に関与する代謝中間体が蓄積している14)で生成するバイオマスことが分かった（図 2A）．特に，発酵開始 24 h 後のセド過分解物質（酢酸，ギ酸，フラン類，バニリン，シリンヘプツロース 7- リン酸は，60 mM の酢酸を添加するこグアルデヒドなど）による発酵阻害である 6)．特に，キとにより，酢酸非添加時と比べて 22 倍以上増加した．

シロース資化系酵素を導入した出芽酵母のキシロース発

この結果は，酢酸添加により PPP の代謝フラックスが条件下で行われる前処理工程

15)．酢酸やギ酸減速している可能性を示唆している．そこで，PPP の律といった低分子の弱酸は，非解離状態で細胞膜を通過し，速段階と考えられているトランスアルドラーゼの遺伝子細胞内で解離してプロトンを放出することで細胞内 pH

TAL1 を TDH3（トリオースリン酸デヒドロゲナーゼを酵は強く阻害されることが知られている

図 1．リグノセルロース系バイオマスからのエタノール生産プロセスの開発における課題と課題解決アプローチ

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コードする遺伝子）プロモーターの下流に連結して，構倍高いエタノール生産速度を示した 17)．さらに，27 mM成的に過剰発現させた．その結果，TAL1 高発現型キシ酢酸，20 mM ギ酸を含む稲わら水熱分解液を用いて，ロース資化性酵母は酢酸存在下で高いエタノール生産性実際のバイオマスからの発酵を試みた．発酵後の菌体はを示し，30 mM 酢酸存在下では 83％の対糖エタノール遠心分離により回収し，新たな稲わら水熱分解液と混合収率を達成した（図 2B）．実際，TAL1 過剰発現株ではして発酵を開始することとし，5 ラウンドの繰返し発酵PPP の中間代謝体の蓄積が解消されていることが確認された．また，TAL1 の過剰発現はギ酸存在下のエタノーを実施した（図 3）．その結果，一倍体のキシロース資化ル生産性を向上させることも明らかとした 15)．ギ酸は酢

キシロース消費量とエタノール生産量が低下するのに対15)性酵母（コントロール株）では，発酵を繰り返すごとに酸よりも低濃度で発酵を阻害することが分かっている ．

し，TAL1/FDH1 共発現型二倍体キシロース資化性酵母

そこで，出芽酵母のギ酸耐性能をさらに強化するため，は，5 回の繰り返し発酵を行ってもキシロースを完全にトランスクリプトーム解析によりギ酸応答性の遺伝子を消費し，バイオマスからの発酵能を維持し続けているこ探索した．その結果，発酵液に添加するギ酸濃度依存的とが確認できた 17)．菌体の繰り返し利用は，酵母の細胞にギ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子（FDH1）の転写物量が増殖に投入するコストおよびエネルギーを節約できるた

16)．筆者らはギ酸デめ，バイオエタノール生産の実用化に向けた有効な手段

ヒドロゲナーゼによるギ酸分解反応がキシロース発酵中である．発酵阻害物質の存在はリグノセルロース系バイの酵母の生存戦略と推測し，FDH1 を過剰発現させたとオマスの繰り返し発酵のネックとなっていたが，オミクころ，20 mM のギ酸存在下でもギ酸非存在下と同程度

ス解析に基づいて作出したロバストな酵母株は，これを増加していることが明らかとなったのエタノールを生産することが分かった

16)．

初めて可能にした．

次に，TAL1 と FDH1 を同時に過剰発現するキシロース

弱酸以外の主要な発酵阻害物質としては，フルフラー資化性酵母を作出した 17)．また，これまでの研究で，二ルや HMF（ヒドロキシメチルフルフラール）などのフ倍体化育種が酵母の高温耐性や低 pH 耐性を強化する 18)

ラン類が問題である．最近の研究で，酵母はフラン類をことを明らかとしていたため，異なる接合型の TAL1/還元するアルコールデヒドロゲナーゼを有していること

FDH1 共発現株をメイティングして二倍体（MATa/D）が明らかとなり，ADH1 や ADH6 を過剰発現させることの TAL1/FDH1 共発現型キシロース資化性酵母を作出しにより，フラン存在下のキシロース発酵を向上させるこた．得られた酵母は，30 mM 酢酸，20 mM ギ酸の共存とに成功した 19)．さらに，NADH 要求性を有する変異在下のキシロース発酵で，コントロール株と比べて 12型 ADH1 の遺伝子過剰発現は，過剰発現した XDH が産

図 2．0 mM（●），30 mM（△），60 mM（□）の酢酸存在下でキシロース発酵を行った時の細胞内代謝物プールサイズの経時変化（A），0–60 mM 酢酸存在下におけるコントロール株と TAL1 過剰発現株（Tal1ox）のキシロース（Closed symbols）からのエタノール（Open symbols）生産（B）．

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としての利用が検討されている．筆者らは，台湾近海から新規の緑藻 Chlamydomonas sp. JSC4 を単離し，培養液中の窒素源濃度や塩濃度を制御することにより，従来株を上回る油脂生産性を実現してきた 26,27)．特に，培養液中の塩濃度を徐々に上げていくグラジエントオペレー
ションが油脂生産の向上に有効であることを明らかにした 26)．
一方で，藻類に多糖類を生産させる研究も行われている．多くの藻類ではグルコースを D1 → 4，D1 → 6 結合により連結し，緑藻ではデンプン，シアノバクテリアではグリコーゲンとして細胞内に蓄積する．これらは，微生物発酵の原料となる 28–32) だけでなく，オートファーメ
ンテーションによる物質生産の基質となる 33) ため，多糖類の生産性を向上させることは，藻類からのバイオリファイナリーを実現する上で有力なアプローチである．
筆者らは，細胞増殖が旺盛でアルカリ環境下での培養が可能なことから，屋外のレースウェイポンドで商業生産されているスピルリナ（Arthrospira platensis）に着目した．光強度，CO2 濃度，栄養塩濃度はスピルリナの細胞内グリコーゲン含有率に影響を及ぼす．特に，培養液中
図 3．コントロール株および TAL1/FDH1 共発現型二倍体キシロース資化性酵母（MN8140X/TF-TF）による稲わら水熱分解液からの 5 回繰返しバッチ発酵．発酵に用いた酵母は遠心分離で回収した後，新しい稲わら水熱分解液を加えて，次のラウンドのバッチ発酵を開始した．の窒素源（硝酸塩）濃度が枯渇すると，グリコーゲンの28–30)．そこで，強蓄積が進むことが分かっている（図 4）

光条件下で，培地中の硝酸塩濃度を通常の 1/10 まで減らし，全藻体重量の 65％までグリコーゲンを蓄積させることに成功した 28)．窒素源が枯渇した状況で光培養を続生する NADH による細胞内レドックスの不均衡を改善
19)

けると，細胞はグリコーゲンを蓄積するとともに，タンし，エタノール収率を向上させることを明らかにした ．

パク質含量を減少させる 34)．この時のメタボローム解析

一方，機能未知のアルカリフォスファターゼ（PHO13）を行ったところ，多くの遊離アミノ酸の細胞内含量が一の遺伝子過剰発現が弱酸，フラン存在下のキシロース発時的に増加した後，減少に転じていることが観測された酵を促進することを最近明らかにした

20)．また，発酵液（図 4C）．この結果は，タンパク質から遊離したアミノ2+への Zn の添加が酢酸存在下のエタノール生産を向上

酸がグリコーゲン生合成の基質となった可能性を導く．

させることが分かり，Zn2+ 応答性の遺伝子を単離した 21)．

近年，藻類のメタボローム解析に関する報告が増えつ

さらに，高温（38°C）で高いキシロース発酵能を示す

つあるが，メタボローム解析の大きな利点はその一般性

22,23)．バイオである．代謝経路は，多くの場合，種間で互換性を有すマスからの発酵では酵母は多様なストレスにさらされてるため，ゲノム・プロテオーム情報が不明な藻類にもメおり，複数の代謝向上因子を組み合わせることはマルチタボロームは適用できる．藻類をバイオ燃料の原料とす酵母で特異的に発現する遺伝子を単離した

17,24)．すでに，出ることを考えると，天然から増殖能や物質生産能力の高芽酵母の代謝物を幅広くカバーする代謝プロファイリン

い株を選抜することはきわめて重要であり，メタボロー

ストレス耐性向上の有効な手段である
グ技術を構築しており

25)，今後のさらなる解析により，分子育種が進むと考えられる．
藻類のメタボローム解析

ム解析は有効なツールとなりうる．
動的代謝プロファイリングの開発と応用
メタボローム解析により得られる情報は，細胞から代

藻類は光エネルギーを ATP や NADPH などの化学エ謝物を抽出した時点での蓄積量のスナップショットであネルギーに変換し，これらを使って CO2 から油脂や多り，代謝物の変換速度に関する動的な情報は得られない．

糖類を生産する．油脂はもっとも有望な藻由来バイオ燃

たとえば，糖リン酸や糖ヌクレオチド，アミノ酸のよう料の一つであり，ジェット燃料やバイオディーゼル燃料に，代謝産物であると同時に代謝反応の基質となる化合2015年 第3号

125

図 4．硝酸塩存在下（Closed symbols）と非存在下（Open symbols）で培養した A. platensis の細胞密度（A），タンパク質（Square）およびグリコーゲン（Triangle）（B），細胞内代謝物（C）の経時変化．硝酸塩非存在下において，グリコーゲン生合成前駆体であるグルコース 1 リン酸（G1P）およびグルコース 6 リン酸（G6P）が 36 h でプラトーに達するのに対し，アミノ酸類は 36 h から72 h にかけて減少する．

物の場合，蓄積量の増減だけではその代謝物が関わる代

14

謝系が活性化したかどうかを判断することは難しい．な物を決定した 36) ように，代謝経路や生体内物質の分布

ぜなら，代謝系が定常状態にある時，代謝物の合成と分などの研究に幅広く使用されてきた．ただし，放射性核解はつりあっており，総量は変わらないからである．つ種を使用する放射性トレーサー実験は放射線防護に注意

まり，生合成が活性化してもメタボローム解析でその変する必要があり，標識率を定量化できない，分子内の標化を捉えることはできない．しかしながら，代謝データ識部位を識別できないという欠点も有している．

CO2 を用いて還元的ペントースリン酸経路の構成化合に基づいて目的物質を高生産するためには，代謝物の蓄安定同位体は質量分析（MS）計や核磁気共鳴装置で積量だけではなく，反応速度論的な情報も重要となる．

検出することによりトレーサー実験に適用される．天然

そこで筆者らは，代謝経路の活性化度を知るために，存在比が 100％に近い 1H，31P，12C，14N といった原子動的な代謝の流れ，「代謝ターンオーバー」を直接観測に対し，たとえば 13C は 1.1％，15N は 0.4％しか存在しする技術を開発することとした．中央代謝経路の代謝中ないため，これらを細胞内に取り込ませることにより，間体を網羅的に定量する技術と，安定同位体炭素（13C）標識された代謝物を選択的に観測することが可能であるによる in vivo 標識技術を組合せた「動的代謝プロファイ（図 5）．MS はイオン化した代謝物を質量電荷比（m/z）

リング技術」を確立し，代謝物の蓄積量と動的変動を同に従って分離して検出するため，安定同位体標識された時に俯瞰することが可能になった34,35)．

化合物は m/z が分子内に含まれる安定同位体の数だけ増同位体を利用して代謝経路の特定の原子を標識し，そ加した値を示す（図 5）．したがって，安定同位体が含まの変化を追跡するトレーサー実験は，代謝研究に必須のれない主分子イオン（Mm）と安定同位体を含む同位体技法の一つである．元素の化学的性質は電子配置，つまイオンの強度比を観測することにより安定同位体標識率り原子番号で決まり，原子量にはよらないため，代謝物を算出することができる．また観測したい化合物が開裂中のある原子のたどる道は，その原子を同位体で標識しして生じるフラグメントイオンは，試料分子の部分構造て代謝経路での行動を調べればよい（同位体の質量差にを反映するため，その構造が帰属できれば分子内の標識よる反応速度の差を同位体効果というが，一般には無視部位を識別することが可能である 37)．MS は通常，ガスできる）．同位体には，不安定で放射能を持ち崩壊するクロマトグラフィや液体クロマトグラフィ，キャピラ

放射性同位体と，安定で崩壊しない安定同位体とがある．

リー電気泳動（CE）などの分離装置と連結して用いる

放射性同位体を用いたトレーサー実験はトレーサーが放ため，分離モードを変えることにより幅広い化合物の分

出 す る 放 射 線 を 鋭 敏 に 検 出 で き る た め，Calvin ら が析に適用することが可能である．

126

生物工学

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図 5．動的代謝プロファイリングの実験手順（左）と 13CO2 標
識時間の経過に伴う細胞内リブロースビスリン酸（炭素数 5）のマススペクトルの変化（右）．右図は標識前（A）および
13
CO2 による標識開始後 1 min（B），10 min（C）のマススペ
クトルを表す．Mm は主分子イオン，M+n は同位体イオンを表す．

筆者らは，13CO2 を炭素源として植物体に与えて細胞図 6．動的代謝プロファイリングに用いるタバコ生葉の 13CO2
標識用チャンバー（A）とチャンバーへ供給するガス流路（B）．
CO2/H2O アナライザーにより光合成速度をリアルタイムで測定し，光合成速度が定常状態の時に Air と混合する炭酸ガスを
12
CO2 から 13CO2 へと切り替える．13CO2 標識用チャンバー①には，光源②，PAM プローブ③，リーフカッター④，液体窒素リザーバー⑤が連結しており，リーフディスクの作製と瞬間凍結が可能になっている．

間代謝物であるグルコース 1- リン酸の標識速度が，前内炭素代謝物を in vivo 標識し，同位体標識の濃縮度分駆体であるグルコース 6- リン酸の標識速度よりも遅い率を経時観測することで，糖リン酸などの微量一次代謝（図 7）ことが分かり，グルコース 6- リン酸をグルコー物のターンオーバーに関する情報を得た．13CO2 を利用

ス 1 リン酸に変換する酵素反応がスクロース合成の律速した植物体の標識実験は 30 年以上前から行われている段階であることが示唆された 34)．

が 38)，多くの場合，分析対象となる化合物は糖類や二次次に，シアノバクテリアの動的代謝プロファイリング代謝物質といった細胞内蓄積量の多い物質に限られていに取り組んだ．NaH13CO3 を用いて硝酸塩欠乏時の細胞た．しかしながら，近年の分析装置の検出機能の高感度の in vivo 13C 標識を行い，CE-MS を用いて同位体濃縮化，マススペクトル情報の高解像度化，データ取得速度度分率を経時観測したところ，グリコーゲンの生合成にの高速化などにより，代謝ネットワーク上の分岐点に位利用されている炭素の大部分は，13CO2 に由来する炭素．一ではないことが分かった 33)．このことは細胞内に遊離し方で，Calvin 回路をはじめとする主要経路のターンオーてきたアミノ酸が変換を受けて，アミノ酸由来の炭素がバーは非常に速く，ターンオーバーを正確に観測するた

糖新生経路に入り，グリコーゲン生合成に利用された可めには，標識化細胞の採集から代謝反応のクエンチング能性を示唆している．に要する時間をできるだけ短くすることが重要となる．
また，短時間で標識を行う場合には CO2 固定速度を厳

in vivo 13C 標識技術はシアノバクテリアの炭素同化速度を直接評価できる唯一の手法であり，CO2 固定速度の密に管理する必要があり，光合成速度に影響を与える向上を捉えることも可能である（論文投稿中）．さらに，ファクター（光強度，CO2 濃度など）の制御も必須であ

炭素源の細胞内への流入速度と代謝中間体のターンオーる．そこで，光合成速度をリアルタイムで観測しながらバー速度には正の相関が見られることが明らかとなり，置する微量な中間代謝物質の分析が可能になった

1234)

13

通気する炭酸ガスを CO2 から CO2 へと切り替えるとその相関係数を調べることで代謝経路のボトルネック反ともに葉片を瞬時に凍結できるチャンバー（図 6）を開応を推定できることが分かってきた（論文投稿中）．

発した34,38)

2．光強度 1000 Pmol photons m

1s ，CO2 濃

度 1000 ppm で光合成させた時，3- ホスホグリセリン酸をはじめとする Calvin 回路系化合物は標識開始 10 分で13C 標識率が最大となった．この時，糖質生合成系の中2015年 第3号

おわりに近年，ゲノム解読技術ならびに合成技術が飛躍的に進歩するとともに，ゲノム編集が可能となり，不要な遺伝127

図 7．13CO2 標識後の G6P および G1P の質量分布（上図，m0；◆，m1；○，m2；▲，m3；□，m4；◇，m5；●，m6；△）と質量分
布から算出した 13C 濃縮度分率の経時変化（下図）．

子の除去や外来遺伝子の導入・機能改変などが比較的容易に行えるようになってきた．一方，代謝系の改変では，行き当たりばったりの遺伝子操作で細胞に目的の形質を付与できるとは限らず，対象経路の律速反応を的確に制御することが求められる．物質代謝系は，遺伝子の転写や翻訳，酵素活性などにより厳密に調節されるとともに，分子間相互作用によるネットワークを構成している．本
研究を通して，グローバルな代謝情報の取得が代謝改変の鍵反応の絞込みを可能にすることを明らかにした．最近は，あらたな代謝機能を持つ微生物の「合成」が期待され，時には大規模な代謝ネットワークの改変が必要になっている．代謝プロファイリングは代謝改変の戦略を導出し，合理的に微生物の代謝能力を向上させる道筋をつけることができる．今後，バイオリファイナリーに資する微生物の合成において重要な役割を担うであろう．
謝辞

本研究は，地球環境産業技術研究機構（RITE）
植物研究グループ，神戸大学大学院工学研究科応用化学専攻ならびに同自然科学系先端融合研究環にて遂行されました．多大な御指導，御鞭撻を賜りました近藤昭彦先生（神戸大学大学院工学研究科教授），福﨑英一郎先生（大阪大学大学院工学研究科教授）に心から御礼申し上げます．また，本研究を遂行するにあたり，御助言，御協力を頂きました小林昭雄先生（大阪大学名誉教授），新名惇彦先生（奈良先端科学技術大学院大学名誉教授），松永是先生（東京農工大学学長），富澤健一先生（旧 RITE 植物グループ グループリーダー），三宅親弘先生（神戸大学大学院農学研究科准教授），馬場健史先生（大阪大学大学院工学研究科准教授），荻野千秋先生（神戸大学大学院工学研究科准128教授），石井純先生（神戸大学自然科学系先端融合研究環准教授），原田和生先生（大阪大学大学院薬学研究科講師）に深く御礼申し上げます．また，ともに研究を行った RITE および神戸大学における所属研究グループのスタッフ・学生の皆様，科学技術振興機構（JST）さきがけ「藻類バイオエネルギー領域」の関係者の皆様に心から感謝申し上げます．本研究の一部は科学研究費補助金，JST さきがけ，新エネルギー産業技術総合開発機構などからの支援を受けて実施されました．

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