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念発売記 ーンペキャン

リアルタイムPCR用cDNA合成試薬 完全プレミックスタイプ

ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix 50%off
ゲノムDNA除去試薬をプラスしたリアルタイムPCR用cDNA合成試薬
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover■期間：2012年1月16日〜2012年3月30日（ご注文分）

リアルタイムPCR用のcDNA合成に最適化された、プレミックスタイプの逆転写試薬です。
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)は、高効率逆転写酵素「ReverTra Ace®」を用いて開発された、リアルタイムPCR用の逆転写反応キットです。逆転写反応に必要な成分を全て含んだ5×濃度の完全プレミックス試薬であり、鋳型RNAと水を添加するだけで、迅速に反応を開始することができます。また、リアルタイムPCRのターゲットとなる短鎖cDNAの合成に最適化された反応組成の採用により、リアルタイムPCRに適したcDNA鋳型を短時間で効率良く調製することが可能です。
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No. FSQ-301)は、強力なDNA分解活性を有するgDNA Removerを付属しており、逆転写反応前に鋳型RNAを処理することによって、ゲノムDNAフリーのcDNAを簡便に調製することができます。検出するターゲットに偽遺伝子が存在する場合や、イントロンをまたぐ位置にプライマーを設定できない場合など、鋳型RNAにコンタミするゲノムDNAの残存が問題となるリアルタイムPCR実験に最適です。

特長1 完全プレミックス試薬
・−20℃においても凍結しない完全プレミックスタイプの試薬です。鋳型RNAと水を加えるだけの操作で、簡便に再現性良くcDNAを合成することができます。

特長2 逆転写反応(−)コントロールの調製が容易
・同じくプレミックスタイプの no-RT Controlが付属していますので、逆転写反応（−）のコントロールも、容易に調製することができます。

特長3 幅広いダイナミックレンジを実現
・Oligo dTと Random Primerの最適な混合比を持つプライマーミックスの採用により、RNAの全領域を均一に、高い効率で逆転写反応を行うことができます。よって、広いダイナミックレンジでの解析が可能となります。

特長4 リアルタイムPCR試薬との高い適合性
・リアルタイムPCRの反応系への影響を最小限に抑える組成を採用しており、最大で20%液量の逆転写反応液をPCRに添加した場合でも、高い直線性を示します。発現量が少ないmRNAの高感度検出にも最適です。

特長5 簡便、迅速にゲノムDNAを除去 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover®

・ゲノムDNA除去試薬と逆転写反応試薬を順次添加するだけの約20分の操作で、ゲノムDNAフリーのcDNAの調製が可能です。

【ReverTra Ace® リアルタイムPCR用cDNA合成試薬シリーズフロー】
ReverTra Ace® qPCR RT Kit(Code No. FSQ-101)
スタンダードタイプ（従来品）
Gene Specific Primer使用可能

RNAサンプル

RT反応← 5× RT buffer← Enzyme Mix← Primer Mix
37℃, 15min.
98℃, 5min.

cDNA

ReverTra Ace® qPCR RT
Master Mix

ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix
with gDNA Remover(Code No. FSQ-201)(Code No. FSQ-301)

プレミックスタイプ
no-RT Control付属

プレミックスタイプ
no-RT Control付属
ゲノムDNA除去試薬付属

RNAサンプルRT反応← 5×RT Master Mix
37℃, 15min.
98℃, 5min.

cDNA
qPCR

RNAサンプル
gDNA
除去反応

RT反応

← 4×DN Master Mix（gDNA Remover含有）
37℃, 5min.
← 5×RT Master Mix Ⅱ
37℃, 15min.
98℃, 5min.

cDNA（gDNA-free）

qPCR

qPCR

1

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実施例1 他社プレミックスcDNA合成試薬との逆転写反応効率（cDNA合成量）の比較
HeLa total RNA100ngを鋳型に、各社キットの推奨条件にて逆転写反応を行い、続いてリアルタイムPCRにて5種類のターゲットの定量を行いました。その結果、本キットを用いることで最も高い収量が得られることが示されました。

試薬：ReverTra Ace ® qPCR RT Master Mix（Code No.FSQ201）及び他社の同タイプ（プレミックスタイプ）の製品
鋳型：HeLa total RNA 100ng /10μl反応系
条件：各社キットの推奨条件に従って実施●リアルタイムPCR

cDNA相対量（％）●cDNA合成120
100806040200

試薬：THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（Code No.QPS-201）
鋳型：上記cDNA 2μl/20μl反応系(持込量10%)
Target：代表的な遺伝子 5種

ACTB
GAPDH
IL8
KRT10
TNF-α

ReverTra Ace®
qPCR RT
Master Mix

A社キット

B社キット

測定：Applied Biosystems 7900HT

実施例2 鋳型RNA量に対する合成効率の検討（検量線の直線性の確認）
鋳型RNA量に対する逆転写合成効率を評価するため、HeLa total RNA 2pg〜2μg（8水準）を鋳型に逆転写反応を行ない、続いてリアルタイムPCRにて5種類のターゲットの定量を行ないました。その結果、5種類のターゲットの検量線が交差することなく、かつ高い直線性を示しました。このことから、広いRNA濃度範囲にわたって、同等な効率にて逆転写ができていることが示されました。
●cDNA合成
試薬：ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix（Code No.FSQ-201）

36

鋳型：HeLa total RNA 2pg-2μg /20μl反応系
3432●リアルタイムPCR
試薬：THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（Code No.QPS-201）
鋳型：上記cDNA2μl/20μl反応系（持込量10%）28

Target：代表的なHouse Keeping Gene 5種

26

Template
Log（RNA量）
RNA量（pg）
ATP5F0.301qPCR での各TargetのCt値
TFRC

RPLP1

RPLP2

RPS18

33.76

31.16

32.89

32.54

Ct

測定：Applied Biosystems 7900HT

224
22

20

1.301

31.43

30.73

27.70

30.05

28.65

20200

2.301

28.64

27.29

24.44

26.72

25.22

18

2,000

3.301

25.41

23.79

21.12

23.31

21.98

20,000

4.301

21.86

20.43

17.69

19.88

18.42

16200,000

5.301

18.65

17.09

14.14

16.59

15.10

14

1,000,000

6.000

16.03

15.03

11.63

14.37

13.09

2,000,000

6.301

15.42

14.28

11.11

13.53

12.28

Slope-3.280-3.303-3.384-3.284-3.368

R20.9990.9991.000

1.0000.999

Eff.

101.8%

100.8%

97.5%

101.6%

98.1%/20μl

ATP5FTFRC
RP L P 1
RP L P 2
RP S 1 830121001234567LOG（RNA量）

実施例3 gDNA RemoverによるゲノムDNA除去効果の確認
gDNA RemoverによるゲノムDNAの除去効果を確認するため、下記の条件にて逆転写反応を行い、続いてβ-ActinをターゲットにリアルタイムPCRを行いました。その結果、gDNA Remover処理（＋）、逆転写（−）
〈下記③〉の条件では増幅が見られないことから、確実にゲノムDNAが除去されていることが示されました。
4×DN Master Mix●cDNA合成®

試薬：ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover（ CodeNo.FSQ-301）

5×RT Master Mix①gDNA Remover（−）

RTase（−）②gDNA Remover（−）

RTase（＋）③

gDNA Remover（＋）

RTase（−）④

gDNA Remover（＋）

RTase（＋）

鋳型：自家調製したHeLa total RNA 0.5μg /10μl反応系
条件：gDNA Remover添加（＋）、あるいは無添加（−）の4×DN Master Mixを用いてgDNA除去反応を行った後、それぞれをさらに、5×RT Master MixⅡ
あるいは5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Controlを用いて逆転写反応を実施②●リアルタイムPCR④①

試薬：THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（Code No.QPS-201）
鋳型：上記cDNA 2μl/20μl反応系（持込量10%）
Target：ACTB（188bp）
測定：Applied Biosystems 7900HT

2③

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実施例4 同タイプ他社品とのゲノムDNA除去能の比較
HeLa total RNAに大過剰のヒトゲノムDNAを添加したモデル実験にて、同タイプ他社キットとのゲノムDNA除去能の比較を行いました。
その結果、ReverTra Ace ® qPCR RT Master Mix with gDNA

ReverTra Ace®

Removerが最もゲノムDNA除去能に優れていることが示されました。 qPCR RT Master Mix
with gDNA Remover●cDNA合成
試薬：ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover（Code No.FSQ-301）および同タイプの他社キット2種
鋳型：HeLa total RNA（0, 1pg, 10pg, 100pg, 1ng, 10ng,100ng, 1μg）＋ヒトgDNA 100ng/20μl反応系

A社キット

条件：各社キットの推奨条件に従って実施●リアルタイムPCR
試薬：THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（Code No.QPS-201）
鋳型：上記cDNA 2μl/20μl反応系（持込量10%）
Target：ACTB（188bp）
測定：Applied Biosystems 7900HT
C社キット

包

品名および内容装

ゲノムDNA
由来の増幅

保存温度

Code No.

通常価格

キャンペーン価格®

ReverTra Ace qPCR RT Kit
・5×RT Buffer
・Enzyme Mix
・Primer Mix
・Nuclease-free Water

200回用（10μl反応）-20℃

FSQ-101¥38,000￥22,800

ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix
・5×RT Master Mix
・5×RT Master Mix no-RT Control
・Nuclease-free Water

200回用（10μl反応）-20℃

FSQ-201¥38,000￥19,000

ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover・gDNA Remover
・4×DN Master Mix
・5×RT Master Mix Ⅱ・5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Control
・Nuclease-free Water

200回用（10μl反応）-20℃

FSQ-301¥40,000￥20,000※ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix（Code No. FSQ-201）の5×RT Master Mix及び5×RT Master Mix no-RT Controlは、ReverTraAce® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover（Code No. FSQ-301）の5×RT Master Mix Ⅱ 及び5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Controlとは各々組成が異なります。それぞれのキット付属の試薬をご使用ください。

F
45%OF

THUNDERBIRD® qPCR Mix（p.4）とのセット品もございます。
包装

保存温度

Code No.

通常価格

キャンペーン価格

THUNDERBIRD Probe qPCR/RT Set Ⅱ
THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix（200回用）とReverTra Ace® qPCR RT Master Mix（200回用）とのセット

1セット-20℃

QPS101/
FSQ201¥63,000￥34,650

THUNDERBIRD® SYBR® qPCR/RT Set Ⅱ
THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（200回用）とReverTra Ace® qPCR RT Master Mix（200回用）とのセット

1セット-20℃

QPS201/
FSQ201¥63,000￥34,650

THUNDERBIRD® Probe qPCR/RT Set Ⅲ
THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix（200回用）とReverTra Ace®
qPCR RT Master Mix with gDNA Remover（200回用）とのセット

1セット-20℃

QPS101/
FSQ301¥65,000￥35,750

THUNDERBIRD® SYBR® qPCR/RT Set Ⅲ
THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（200回用）とReverTra Ace®
qPCR RT Master Mix with gDNA Remover（200回用）とのセット

1セット

-20℃

QPS201/
FSQ301¥65,000￥35,750

品名および内容®

※THUNDERBIRD®の反応回数は、50μl反応時のものです。
※SYBR®は、Molecular Probes Inc.の登録商標です。

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