No.89.qx 07.12.7 15:43 ページ 1

念
発売記 ーン
キャンペ

サブクローニング用大腸菌コンピテントセル

f

30%of

Competent Quick DH5α

■期間：2007年12月3日〜2008年2月29日（ご注文分）

わずか10分間で形質転換可能な大腸菌コンピテントセルです。コストパフォーマンス抜群！
！
本製品は、短時間で高い形質転換効率が得られるように調製されたサブクローニング
グレードの大腸菌DH5αコンピテントセルです。従来のコンピテントセルでは、形質転換に1.5〜2時間を要しましたが、本製品では、約10分のプロトコールで確実に形質転換体を得ることができます。また、−80℃での長期保存が可能です。

特長1 簡便・迅速に形質転換可能 注1）
・約10分間で形質転換が完了します（図1）。

特長2 高い形質転換効率 注2）
・pBR322を用いて形質転換を行い、アンピシリンにてセレクシ
ョンした場合、≧1×108 transformants/μg・pBR322のコンピテントセル
解凍
00:00:30

効率が得られます。

特長3 保存安定性良好注3）

プラスミドDNA
添加

・−80℃で少なくとも3ヶ月は安定です（図2）。
00:01:00

特長4 高いコストパフォーマンス
On ice5min.

・20本入りとなり、お求めやすくなりました。
注1）本形質転換プロトコールによって得られるコロニー数は、セレクションに用いる抗生物質の種類および寒天培地中の濃度等によって変動します。特に、アンピシリン以外の抗生物質を使用する場合には、形質転換効率が著しく低下する場合があります（図3）。
※カナマイシンにつきましては、効率が薬剤濃度の影響を受けやすいので、本コンピテン
トセルをお使いの場合は、特に薬剤濃度への配慮が必要です。
※アンピシリン以外の薬剤（特に、テトラサイクリンとクロラムフェニコール）を使用される
場合には、Competent high DH5α(Code. DNA-903）のご使用をお薦めします。
注2）ライブラリーの作製など、さらに高い形質転換効率が必要な用途には、Competenthigh DH5α (Code. DNA-903）のご使用をお薦めします。

in!!

10m

00:06:00

ヒートショック
42℃ 30sec.
00:06:30

プレーティング

注3）長期間保存される場合には、液体窒素中での保存をお薦めします。

形質転換効率（transformants/μg・pBR322）

00:10:00

1.0E+0937℃
終夜培養

1.0E+08

1.0E+07

1.0E+060

1

2

17:00:00

3−80℃保存期間（ヶ月）

図1．Competent Quick DH5αでの形質転換プロトコール

図2．Competent Quick DH5αの-80℃での保存安定性

891

No.89.qx 07.12.7 15:43 ページ 2

実施例
pBR322(4.4kb:Ampr, Tetr)、pAK119M(4.3kb:Kanr)、pAT5（4.6kb:Cmr）の各プラスミド10pg/5μl TE bufferを用いて本プロトコールに従って形質転換を行い、各抗生物質でセレクションした場合の形質転換効率の評価を行いました。また、同時に、本プロトコールのヒートショック操作の後に、SOC培地での培養ステップ（37℃、30分間あるいは60分間）を追加したプロトコールでも評価を行いました。
その結果、アンピシリン及びカナマイシンでセレクションした場合には、わずか10分間の本プロトコールで108transformants/
μg・plasmid以上の効率が得られました。一方、テトラサイクリン及びクロラムフェニコールでセレクションした場合では、
ヒートショ
ック後にSOC培地での培養ステップを追加することにより、108以上の効率が得られることが分かりました。なお、本実験では、LB寒天培地の各抗生物質は下記の濃度にて実施しました。
カナマイシンに関しましては、薬剤濃度に影響を受けやすいため、本コンピテントセルを用いる場合は、薬剤濃度への配慮が必要となります。
〈使用した薬剤の濃度〉
形質転換効率（transformants/μg・plasmid）

・アンピシリン（Amp）：50μg/ml
・カナマイシン（Kan）：10μg/ml
・テトラサイクリン（Tet）：20μg/ml・クロラムフェニコール（Cm）：100μg/μl

1.0E+09
Amp
Kan
Tet
Cm

1.0E+08

1.0E+07

1.0E+06

本プロトコール+SOC培地30min 培養

+SOC培地60min 培養

図3．Competent Quick DH5αを各種抗生物質にてセレクションした場合の形質転換効率

表1．Competent Quick DH5αと弊社従来品Competent high DH5αの比較

製

品

名

内

Competent Quick DH5α（Code No:DNA-913）

Competent high DH5α（Code No:DNA-903）

容

用

途

形質転換効率

形質転換所要時間

コンピテントセル100μl×20本≧1×108transformants/μg・pBR322

約10分

サブクローニング

コンピテントセル100μl×10本SOC培地 1ml×10本
pBR322 Plasmid×1本≧1×109transformants/μg・pBR322

約1.5〜2時間

ライブラリーの作製等、高い形質転換効率が必要とされる場合●Genotype:

deo R, end A1, gyr A96, hsd R17(rk-,mk+), pho A, rec A1, rel A1, sup E44, thi -1, Δ(lac ZYA-arg F)U169, φ80dlac ZΔM15, F-, λ＊Competent Quick DH5αと弊社従来品Competent high DH5αの遺伝子型は同じです。

発売キャンペーン品

30％OFFキャンペーン期間：2007年12月3日〜2008年2月29日［ご注文分］

名包Competent Quick DH5α

装＊

保存温度

Code No.

価-80℃

DNA-913￥29,000

100μl×20本

格

キャンペーン価格￥20,300＊コンピテントセルのみの包装となります。SOC培地 及びPositive Control Plasmidは添付されておりません。

品

名

包

装

＊

保存温度

Code No.

価

格

Competent high JM109

100μl×10本

液体窒素

DNA-900￥17,000

Competent high DH5

100μl×10本

液体窒素

DNA-901￥17,000

Competent high HB101

100μl×10本

液体窒素

DNA-902￥17,000

Competent high DH5α

100μl×10本

液体窒素

DNA-903￥17,000＊コンピテントセルの他にSOC培地 1ml×10本、及びPositive Control Plasmidが添付されています。

289No.89.qx 07.12.7 15:43 ページ 3

本製品はすでに販売を中止しております。

核酸増幅リアルタイムモニタリング装置

LineGene

核酸の増幅過程をリアルタイムモニタリング。コストパフォーマンスに自信あり。
本品は、核酸の増幅過程をリアルタイムにモニタリングする装置です。33フォーマットのパーソナルタイプですが、再現性と精度に優れるデータを取得可能です。機器本体価格もさることながら、ランニングコストも安価に設定されています。ソフトウェアが日本語対応となり、さらに使いやすくなりました。

特長1 優れたコストパフォーマンス

特長3 多様な系に対応・対応試薬は、SYBR ® GreenⅠ、TaqMan ® Probes

・測定に専用チューブやキャピラリーは不要で、汎用0.2ml
PCR用チューブを使用できます。

（レポーター分子：FAM、クエンチャー分子：TAMRA）、・非常に少ない反応ボリューム（10μl〜）で安定した結果

Hybridization Probes、Molecular Beaconなど、多様を実現します。

な系に対応します。

・試薬ランニングコストを低減※します。

励起波長：470nm
検出波長：530nm 、640nm 、710nm※反応ボリューム10μlで…37円/チューブ（弊社キットSYBR®
Green Realtime PCR Master Mixを用いた場合）

特長4 操作性重視

特長2 高感度オプティカルユニット

・日本語対応ソフトウェア搭載

・励起用光源は、発熱性が低く安定かつ長寿命のBlue

・操作性抜群（Ct値も簡単に求められます）

LEDを採用しています。

・増幅曲線のリアルタイム表示により、反応の進行状況が一・蛍光検出器は、検出限界が高く高速応答低ノイズのPMT

目瞭然です。また、ランニング中にグラフのスケールを拡を採用しており、蛍光シグナル信号を高感度かつ高速に大し反応初期の微小な蛍光をモニタリングすることも可能

読み取り可能です。

です。
・増幅の程度に合わせ、反応中にサイクルを追加、削除する

無料訪問デモを行っております。

ことも可能です。

弊社ウェブサイト（www.toyobo.co.jp/bio）〈お問い合せ・
ご請求コーナー〉からご依頼いただけます。

性・定量解析および融解曲線解析（SYBR® GreenⅠアプリ
ケーション）のどちらも可能です。

能■テンプレート濃度2倍差の検出
初期の鋳型濃度が2倍差のサンプルを、はっきりと区別して検出できます。
■ウェル間均一性
全ウェルにわたり同等の解析が可能です。

■ダイナミックレンジ（図上・右）
広範囲かつ正確に未知試料を定量できます。
10コピー程度の低濃度での検出も可能です。

主な仕様
サンプル容量：0.2ml×33本

温度精度（設定温度）
：

励起波長：

470nm

検出波長：

530nm 640nm 710nm≦±0.5℃（95℃）≦±0.3℃（72℃）≦±0.2℃（55℃）
温度均一性（設定温度）：

励起用光源：Blue LED≦±1.0℃（95℃）≦±0.5℃（72℃）≦±0.3℃（55℃）

蛍光検出器：フォトマルチプライヤー
チューブ（PMT）

電源：

100V

50/60Hz

最大消費電力： 1000W

温度制御範囲：30℃〜99℃

外形寸法：

W514×D456×H292（mm）

温度変化率：最大4℃/sec

重量：

23㎏

（2ステップ，45サイクルの反応=約90分）

品 名 及 び 内 容※製品の性能および仕様、外観は改良のため予告なく変更することがあります。

包

核酸増幅リアルタイムモニタリング装置

装

1式

＊
LineGene（本体 + ソフトウェア）

Code No.
BFFQD-33A

価

格¥1,890,000＊別途制御用のパソコンが必要です（現在お持ちのパソコンもお使いいただけます）。本体とパソコンの接続にはRS232Cポートを使用します。USB
ポートに本機を接続する際には、別途シリアルコンバーターが必要です。

893

No.89.qx 07.12.7 15:43 ページ 4

スタンダードDNAポリメラーゼ

rTaq DNA Polymerase

大幅価格改訂Taq ポリメラーゼの価格を大幅改定し、さらに使いやすくなりました。¥38 /U！
！
rTaq DNA Polymeraseは、大腸菌組換え体を用いて生産され、高純度に精製されたTaq DNA polymeraseです。 r は リコン
ビナント を意味しており、通常のTaq DNA polymeraseとしてご使用いただけます。

特長1 高純度・本酵素は大腸菌組換え体（Recombinant）を用いて生産され、高純度に精製されています。

特長2 高いコストパフォーマンス
・この度の大幅価格改定により、よりお求め安い価格になりました。

特長3 ホットスタートに対応可能
・抗Taq抗体（anti-Taq high［Code No. TCP-101］）を混合することにより、ホットスタートPCRに対応可能です。ホットスタートにより、感度、特異性、及び再現性を格段に向上させることができます。

実施例
ヒトゲノムDNAを鋳型として様々なターゲットの増幅を検討しました。

M

1

2

3

4

5

結果、1.3kbまでのターゲットの明瞭な増幅が確認できました。

M: 100bp Ladder
1: 180bp p53 exon8
2: 444bp p53 exon8
3: 408bp β-globin
4: 1kb β-globin
5: 1.3kb β-globin

500bp

品

名

保存温度

Code No.

旧価格

新価格

250U×1本-20℃

TAP-201￥25,000￥9,500

250U×1本-20℃

TAP-211￥25,000￥9,500包

rTaq DNA Polymerase（Mg別添タイプ）
rTaq DNA polymerase（5U/μl）
10×Buffer
2mM dNTPs
25mM MgCl2
rTaq DNA Polymerase（Mg含有タイプ）
rTaq DNA polymerase（5U/μl）
10×Buffer
2mM dNTPs

装

3キ0ャ%ンOペFーFン【ホットスタート用抗Taq抗体】
Taq DNA Polymeraseと等量混合するだけで、効果的にホットスタートPCRを行うことができます。

30％OFFキャンペーン期間：2007年12月3日〜2008年2月29日［ご注文分］
品
anti-Taq high

名

包

装

保存温度

Code No.

価-20℃

TCP-101￥16,000

100μl×1本

4格

キャンペーン価格￥11,20089

No.89.qx 07.12.7 15:43 ページ 5

本製品はすでに販売を中止しております。

ヒト前立腺由来細胞株 OPCシリーズ

前立腺における正常部位、および癌組織それぞれを株化したヒト前立腺癌由来細胞株です。
本細胞株は、前立腺における正常部位、および癌組織それぞれを株化したヒト

一口メモ

前立腺癌由来細胞株です。
3個体に由来する正常・癌細胞株を供給いたしますが、分離した組織の状態などが異なりますので、用途に合ったステージのものをご指定ください。

Asterand社は世界各国40ヶ所以上の提携先から提供された臨床データを備えた病理組織を約10万サンプル（2007年末現在）保有しており、お客様のご要望にマッチしたサンプルを検索し、提供するサービスを行っております。

特長1 同一個体に由来します
・同一個体に由来するOPCN（Normal）とOPCT（Tumor）をそれぞれご提供いたします。

特長2 3個体に由来する細胞株から選択可能・癌化ステージの異なる3種類の細胞から選択いただけます。

■由来：前立腺癌（T1cN0M0; Gleason 3+3）
●OPCN-1: 正常組織由来●OPCT-1: 癌組織由来
OPCN-1

OPCT-1■由来：前立腺癌（PT2aN0M0; Gleason2+3）●OPCN-2: 正常組織由来●OPCT-2: 癌組織由来
OPCN-2

OPCT-2■由来：前立腺癌（T3aN0M0; Gleason2+2）●OPCN-3: 正常組織由来●OPCT-3: 癌組織由来
OPCN-3

品

名OPCT-3

包装

保存温度

OPCN-1

格・非営利団体（大学等）：

OPCT-1
OPCN-2価

各¥100,000〜106cells

OPCT-2液体窒素
・営利団体（企業等）：

OPCN-3

お問い合わせください

OPCT-3

本製品の提供にあたっては、お客様と弊社間でのMTA締結が必要になります。詳しくは、弊社までお問い合わせください。

895

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 6

CELL APPLICATIONS, INC.

HUVEC
（ヒト臍帯静脈内皮細胞）
ディスカウントキャンペーン
正常細胞の実験によく使われるHUVECを、期間限定で、大変お求めやすい価格でご提供します。

期間：2008年1月10日〜2008年2月29日［ご注文分］
CELL APPLICATIONS, INC.（ CAI社）は、ヒト、動物正常細胞、組織及び細胞由来Total
RNA、抗体などの製品に特化して開発を行っている米国の企業です。今回ご紹介したHUVEC以外の血管系の細胞や皮膚由来の細胞、滑膜細胞、頭髪毛乳頭細胞など、様々な分野の研究に有用な細胞を扱っております。
（詳細はこちらをご覧ください。http://www.cellapplications.com/)
HUVEC(ヒト臍帯静脈内皮細胞)は、高分子輸送1）、血液凝固2）、線維素溶解3）などの生理学、薬理学実験において用いられており、CAI社HUVECは世界中で研究実績がございます4）5）6）7）8）。
1）T.L. Weiss et al., In Vitro Cell Biol., 26:759 (1990)
2）B. Furie et al., Cell, 53:505 (1988)
3）J. Wojta, et al., Blood, 81:3285 (1993)4）M. A. Ali et al., Neoplasia, 9:370 (2007)5）Y. I. Kawamura et al., Cancer Res., 65:6220 (2005)6）S. Hirono et al., Circ. Res., 93:710 (2003)
7）H. M. Ellerby et al., J. Biol. Chem., 278:35311 (2003)

価格を変更しております。
現在の情報は、お問い合わせいただきますようお願いいたします。

8）G. Srikrishna et al., J. Immunol., 166:4678 (2001)

装

Code No.

通常価格

キャンペーン価格

HUVEC（ヒト臍帯静脈内皮細胞）Total Kit, neonatal

品

名

包

1Kit

CA200K05n¥75,000¥50,000

HUVEC（ヒト臍帯静脈内皮細胞）, neonatal

1vial

CA20005n¥45,000¥30,000

HUVEC（ヒト臍帯静脈内皮細胞）Total Kit, neonatal, pooled

1Kit

CA200pK05n¥74,000¥50,000

HUVEC（ヒト臍帯静脈内皮細胞）, neonatal, pooled

1vial

CA200p05n¥44,000¥30,000※1. Total Kit には、各細胞1vial、
ヒト内皮細胞増殖培地（CA211500）、サブカルチャー試薬セット（A）（CA090K）が含まれます。細胞1vial には、5×105cellsが含まれます。
サブカルチャー試薬セット（A）には、ハンクス平衡緩衝液、トリプシン-EDTA溶液、
トリプシン中和液が各100ml 含まれます。
※2. 保存温度は、細胞 : 液体窒素、培地、サブカルチャー試薬セット（A）: -20℃です。
※3. 各Lotごとに、第ⅤⅢ因子発現、Dil-Ac-LDL取り込み陽性が確認されています。また、HIV、HBV、HCV、
マイコプラズマ、酵母、真菌陰性が確認されています。

装

保存温度

Code No.

価

ヒト内皮細胞増殖培地（基本培地+添加剤）

品

名

500ml

包

-20℃

CA211500¥19,000

格

サブカルチャー試薬セット（A）

1set

-20℃

CA090K¥13,000

HUVECの培養には専用の培地、試薬のご使用をお薦めします。

689No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 7

本製品はすでに販売を中止しております。

カルナバイオサイエンス社ヒトプロテインキナーゼ

30％OFF キャンペーン
（アカデミア限定）
カルナバイオサイエンス社はヒトプロテインキナーゼに特化した製品を提供しております。すべてのプロテインキナーゼは活性型として調製されており、また、コンタミ酵素レベルも低く、阻害剤実験を始
め様々な用途にお使いいただけます。また、他社にはないカルナバイオサイエンス社オリジナルの製品もございますので、この機会に是非ご検討いただきますよう、宜しくお願いいたします。
※ご注意：本キャンペーンは、大学等の非営利団体のみを対象とさせていただきます。

期間：2007年12月10日〜2008年2月29日［ご注文分］
通常価格

キャンペーン価格

A ¥38,000 a ¥26,600

通常価格

キャンペーン価格

B ¥40,000 a ¥28,000

通常価格

キャンペーン価格

C ¥80,000 a ¥56,000

Tyrosine Kinase
Cytoplasmic Tyrosine Kinase
品

名

ABL
ABL[T315I]
ACK
ARG
BLK
BMX
BRK
BTK
CSK
CTK
FAK
FER
FES
FGR
FRK
FYN
HCK
ITK
JAK1
JAK2
JAK3
LCK
LYNa
LYNb
PYK2
SRC
SRM
SYK
TEC
TNK1

Code No.

価格

CB08-001
CB08-093
CB08-196
CB08-102
CB08-164
CB08-179
CB08-165
CB08-080
CB08-111
CB08-012
CB08-037
CB08-039
CB08-140
CB08-166
CB08-167
CB08-068
CB08-169
CB08-181
CB08-144
CB08-045
CB08-046
CB08-170
CB08-171
CB08-172
CB08-138
CB08-173
CB08-174
CB08-176
CB08-182
CB08-104

A
B
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
B
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A

品

名

TXK
TYK2
YES
ZAP70

Code No.

価格

CB08-183
CB08-147
CB08-175
CB08-077

A
A
A
A

Receptor Tyrosine Kinase
品

名

ALK
AXL
DDR1
DDR2
EGFR
EGFR[L858R]
EGFR[T790M]
EphA1
EphA2
EphA3
EphA4
EphA5
EphA6
EphA7
EphA8
EphB1
EphB2
EphB3
EphB4
FGFR1
FGFR2
FGFR3
FGFR3[K650M]
FGFR4

Code No.

価格

CB08-105
CB08-107
CB08-113
CB08-114
CB08-115
CB08-502
CB08-194
CB08-119CB08-121
CB08-122
CB08-123
CB08-124
CB08-125
CB08-126
CB08-127
CB08-128
CB08-129
CB08-130
CB08-131
CB08-133
CB08-134
CB08-135
CB08-199
CB08-136

A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A

Code No.

価格

CB09-135
CB02-113
CB02-114

A
A
A

品

名

FLT1
FLT3
FLT4
FMS
HER2
HER4
IGF1R
INSR
IRR
KDR
KIT
LTK
MER
MET
MET[Y1235D]MUSKPDGFRαPDGFRα[T674I]PDGFRβ
RET
RON
ROR1
ROR2
ROS
TIE2
TRKA
TRKB
TRKC
TYRO3

Code No.

価格

CB08-189
CB08-154
CB08-190
CB08-155
CB08-016
CB08-118
CB08-141
CB08-142
CB08-143
CB08-191
CB08-056
CB08-106
CB08-108
CB08-151
CB08-198
CB08-153
CB08-157
CB08-503
CB08-158
CB08-159
CB08-152
CB08-160
CB08-161
CB08-163
CB08-185
CB08-186
CB08-187
CB08-197
CB08-109

A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
B
A
A
A

Code No.

価格

CB05-101
CB05-102
CB05-103

A
A
A

Ser/Threonine kinase
品

AKT1
AKT2
AKT3

89

名

Code No.

価格

品

CB01-101
CB01-102
CB01-103

A
A
A

ALK4
AMPKα1＊AMPKα2/β1/γ1

名

7

品

AurA
AurB
AurC

名

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 8

品

名BARK1＊BARK2
BMPR1A
BRAF[V600E]
BRAF
BRSK1
BRSK2
BUBR1
CaMK1αCaMK1δ
CaMK2αCaMK2γCAMK4CAMKK1
CDC2/CycB1
CDC7/ASK
CDK2/CycA
CDK3/CycE1
CDK4/CycD3
CDK5/p25
CDK6/CycD3
CDK7/CycH
CDK8/CycC
CDK9/CycT1
CGK2
CHK1
CHK2
CK1α
CK1δ＊
CK1ε
CK2α1
CK2α2
CLK1
CLK2
CLK3
COT
CRIK
DAPK1
DCAMKL1
DCAMKL2
DLK
DMPK1
DYRK1ADYRK1B
DYRK2
DYRK3
EEF2K
Erk1＊
Erk2＊
Erk5＊
GSK3β
HGK
HIPK1
HIPK2
HIPK3
IKKα
IKKβ
（IKBKB）
IKKε
IRAK1
IRAK4
JNK1＊
JNK2＊

Code No.

価格

CB01-111
CB01-112
CB09-137
CB09-144
CB09-112
CB02-115
CB02-116
CB05-105
CB02-104
CB02-106
CB02-109
CB02-112
CB02-108
CB05-107
CB04-102
CB05-109
CB04-103
CB04-104
CB04-105
CB04-106
CB04-107
CB04-108
CB04-109
CB04-110
CB01-143
CB02-117
CB02-162
CB03-101
CB03-103
CB03-104
CB05-310
CB05-183
CB04-126
CB04-127
CB04-128
CB07-301
CB01-104
CB02-134
CB02-139
CB02-140
CB09-111
CB01-105
CB04-130
CB04-131
CB04-132
CB04-133
CB10-113
CB04-142
CB04-143
CB04-146
CB04-141
CB07-137
CB04-135
CB04-136
CB04-137
CB05-112
CB05-013
CB05-114
CB09-101
CB09-145
CB04-163
CB04-164

C
A
A
A
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A
A
A
A
A
A

品

名

JNK3＊
LIMK1
LIMK2
LKB1
LOK
LRRK2
LRRK2[G2019S]
MAP2K1
MAP2K2
MAP2K3
MAP2K4
MAP2K5
MAP2K6
MAP2K7
MAP3K2
MAP3K3
MAP3K4
MAP3K5
MAP4K2
MAP3K14
MAPKAPK2
MAPKAPK3
MAPKAPK5
MARK1
MARK2
MARK3
MARK4
MELK＊
MGC42105
MINK
MLK1
MLK2
MLK3
MNK1
MNK2
MOS
MRCKα
MRCKβ
MSK1
MSK2
MST1
MST2
MST3
MST4
MYT1
NDR1
NEK1
NEK2
NEK6
NEK7
NEK9
NLK
NuaK1
p38α＊
p38β＊
p38γ＊
p38δ＊
P70s6k
P70s6kβ
PAK1
PAK2
PAK4

Code No.

価格

CB04-150
CB09-105
CB09-106
CB02-119CB07-115
CB09-110
CB09-146
CB07-041
CB07-042
CB07-048
CB07-044
CB07-145
CB07-046
CB07-047
CB07-004
CB07-105
CB07-106
CB07-107
CB07-111
CB07-102
CB02-142
CB02-143
CB02-144
CB02-120
CB02-121
CB02-122
CB02-123
CB02-124
CB02-125
CB07-139
CB09-015
CB09-116
CB09-017
CB02-145
CB02-146
CB05-118
CB01-107
CB01-108
CB01-147
CB01-148
CB07-116
CB07-117
CB07-118
CB07-119CB05-176
CB01-125
CB05-123
CB05-126
CB05-130
CB05-131
CB05-133
CB04-151
CB02-126
CB04-152
CB04-153
CB04-155
CB04-154
CB01-154
CB01-155
CB07-123
CB07-124
CB07-126

A
C
C
A
A
C
C
A
A
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A
A
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B
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A
A
A
A
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A

品

名

PAK6
PASK
PBK
PCTAIRE1
PDHK2（PDK2）
PDHK4（PDK4）
PEK＊
PGK
PHKG1
PHKG2
PIM1
PIM2
PKACα
PKCα
PKCβ1
PKCβ2
PKCε
PKCγ
PKCδ
PKCι
PKCθ
PKCζ
PKCη/PRKCH
PKD1
PKD2
PKD3
PKN1
PKN2
PKR
PLK1
PLK2
PLK3
PLK4
PRKX
Raf1
RIPK2
ROCK1
ROCK2
RSK1
RSK2
RSK3
RSK4（RPS6KA6）
SGK
SGK2
SGK3
skMLCK
smMLCK
SRPK1＊
SRPK2＊
TAK1-TAB1
TAOK2
TBK1
TGFβR1
TSSK1
TSSK2
TTK
VRK1＊
WEE1
WNK1
WNK2
WNK3
WNK4

Code No.

価格

CB07-128
CB02-128
CB05-168
CB04-115
CB10-140
CB10-125
CB05-155
CB01-142
CB02-152
CB02-153
CB02-054
CB02-155
CB01-127
CB01-133
CB01-134
CB01-165
CB01-136
CB01-137
CB01-135
CB01-139
CB01-140
CB01-141
CB01-138
CB02-157
CB02-158
CB02-159
CB01-144
CB01-145
CB05-156
CB05-157
CB05-158
CB05-159
CB05-160
CB01-130
CB09-125
CB09-128
CB01-109
CB01-110
CB01-149
CB01-150
CB01-151
CB01-152
CB01-158
CB01-159
CB01-160
CB02-150
CB02-151
CB04-160
CB04-161
CB09-019
CB07-133
CB05-115
CB09-141
CB02-364
CB02-165
CB05-169
CB03-110
CB05-177
CB05-179
CB05-180
CB05-181
CB05-182

A
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A

※プライスリストの品名に＊印のついていない製品は、遺伝子組換え生物等使用製品です。
「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律（通称カルタヘナ法）」に基づく第二種使用を行っております。

889

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 9

TOYO

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高効率逆転写酵素、DNAラダーマーカーなどの人気商品をお手ごろな価格で入手するチャンスです！
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期間：2007年12月3日〜2008年2月29日（ご注文分）

30%OFF

修飾酵素（2006/2007総合カタログ P.5-67、5-69、5-78 ご参照）
品

ReverTra Ace®

名

包Code No.

価格

キャンペーン価格

10,000×1本

TRT-101¥15,000

2,500U×1本

SIN-201¥9,000¥6,300

100U×1本

BAP-111¥15,000¥10,500

プライマーなどのリン酸化に最適

1,500U×1本

PNK-111¥15,000¥10,500

高効率ライゲーション試薬（TAクローニング効率up）

750μl×1本＊

LGK-201¥22,000¥15,400

高効率逆転写酵素

RNase Inhibitor（Recombinant）
Alkaline Phosphatase（E.coli ） ベクターの脱リン酸化に最適
T4 Polynucleotide Kinase
Ligation high Ver.2

装（輸送･保存：-20℃）¥10,500

リアル
ル＊1反応に7.5μl使用する場合、100回用としてご使用いただけます。

30%OFFc

分子量マーカー■DNAラダーマーカー（2006/2007総合カタログ P.4-8〜4-10 ご参照）
品

名

包

装

（輸送･保存：-20℃）
Code No.

価格

キャンペーン価格

100bp DNA Ladder

100回用

DNA-030X¥15,000¥10,500

200bp DNA Ladder

100回用

DNA-031¥20,000¥14,000

1kb DNA Ladder

300回用

DNA-032¥22,000¥15,400

Loading Quick® 100bp DNA Ladder

100回用

DNA-130¥15,000¥10,500

Loading Quick® 200bp DNA Ladder

100回用

DNA-131¥15,000¥10,500

Loading Quick® 50bp DNA Ladder

100回用

DNA-133¥19,000¥13,300

好評発
好評※Loading Quick®タイプは、色素が混合されたReady-to-useタイプです。

■DNA Massラダーマーカー（2006/2007総合カタログ P.4-7、4-9 ご参照）
各バンドのDNA濃度から目的バンドの定量が可能。
品（輸送･保存：-20℃）
Code No.

価DNA Mass Ladder

名

100回用

包

装

DNA-034¥26,000

格

キャンペーン価格¥18,200

Loading Quick® DNA Mass Ladder

100回用

DNA-134¥27,000¥18,900※200bp〜1Kb（200bp刻み）＋1〜3Kb（500bp刻み）＋3〜6Kb（1Kb刻み）＋6〜10Kb（2Kb刻み）のバンドパターンを示します。
※Loading Quick®タイプは、色素が混合されたReady-to-useタイプです。

名

包

装

（輸送･保存：-20℃）
Code No.

価格

キャンペーン価格

λ/Hin dⅢ digest

120μg×1本

DNA-010¥9,000¥6,300φX174/HaeⅢ digest

15μg×1本DNA-012¥9,000¥6,300φX174/Hin cⅡ digest
λ/Hin dⅢ digest - φX174/HaeⅢ digest
λ/StyⅠdigest

15μg×1本DNA-014¥9,000¥6,30025μg×1本DNA-017¥17,000¥11,900

120μg×1本

DNA-026¥12,000¥8,400

Loading Quick® λ/Hin dⅢ

40μg×2本

DNA-110¥10,000¥7,000

Loading Quick® φX174/HaeⅢ

20μg×1本

DNA-112¥18,000¥12,600

Loading Quick® φX174/Hin cⅡ
Loading Quick® λ/Hin dⅢ digest - φX174/Hin cⅡ digest

20μg×1本

DNA-114¥18,000¥12,600

20μg×1本

DNA-116¥20,000¥14,000

Loading Quick® λ/Hin dⅢ digest - φX174/HaeⅢ digest

20μg×1本

DNA-117¥20,000¥14,000

Code No.

価

RNA-101¥20,000※Loading Quick®タイプは、色素が混合されたReady-to-useタイプです。

■RNAサイズマーカー（2006/2007総合カタログ P.4-12 ご参照）品

名

包50μg×1本

RNA Size Marker（281b〜6,583b）

89

装

9

抜群
短時

■DNAサイズマーカー（2006/2007総合カタログ P.4-9〜4-11 ご参照）
品

■期間

リア

cD
HeLa細
して逆転
のcDNA

（輸送･保存：-80℃）
格

キャンペーン価格¥14,000※図下のNo.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 10

特集

TOYOBOリアルタイムPCR製品ガイド

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1-step 試薬

Realtime PCR
Master Mix シリーズ

RNA-direct ™ Realtime PCR
Master Mixシリーズ

cDNAを使って実験したい

ハイスループットに解析したい

多遺伝子を一度に解析したい

特異性をアップさせたい

cDNAを残しておきたい

感度をアップさせたい

cDNA

Total RNAmRNA

リアルタイムPCR用cDNA合成キット

ReverTra Ace® qPCR RT Kit
リアルタイムPCR用cDNA合成キット

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高効率
逆転写
ReverT 酵素
ra Ace ®®
使用

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PCR反応液の20%（V/V）
まで添加可能リアルタイムPCR試薬との適合性がアップ！
PCR反応に影響しにくいように設計されています。

1
cDNA合成量の比較
HeLa細 胞 由 来 のTotal RNA 100ngを鋳型として逆転写反応を行い、β-ActinとPolymerase εのcDNA量をリアルタイムPCRにより定量しました。
※図下の数値は、各社推奨の逆転写反応条件を示します。

ReverTra Ace® 弊社従来品
弊社従来品
qPCR RT Kit （Randomプライマー） （Oligo（dT）プライマー）
15min.
10min.
20min.
20min.

A社キット

15min.

B社キット

10min.
30min.

C社キット

15min.

D社キット

10min.
2hr.

図1 cDNA合成量比較（ReverTra Ace® qPCR RT Kitでの値を100としています）

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 11

特集

2 レア発現遺伝子の検出比較例

×：検出できず

HeLa細胞において低発現であることが知られているTNF-α遺伝子の検出効率について各キットの比較を行いました。
各キットを用い、HeLa細胞由来のTotal RNA 100ngを逆転写し、それをRealtime PCR溶液（SYBR® Green Realtime PCR Master
Mixを使用）に2%となるように添加してn=5で解析を行いました。
その結果、 TNF-αの発現量が低いためすべての反応でCt値は30を超えましたが、本キットを用いた場合がもっともCt値が低く良好でした。また、検出率も100%でした。一方、他社キットの場合は、PCR成功率が低く、Ct値も高い傾向にありました。

×× ×

××

××

×

図2 TNF-α遺伝子の検出における検出効率の比較

スタンダードタイプ

30%off

キャンペーン¡Realtime PCR Master Mix¡SYBR® Green Realtime PCR Master Mix¡SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-

Taq DNA polymeraseをベースとした汎用性の高いリアルタイムPCR Master
Mixです。SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-は、組成を最適化することで非特異反応を軽減しています。リアルタイムPCR用cDNA合成キット『ReverTra Ace® qPCR RT Kit』とセットで用いることで、より信頼性の高いデータを得ることが可能です（他の各種逆転写試薬もご使用いただけます）。

■期間：2007年12月3日〜
2008年2月29日［ご注文分］

抗体を用いるホットスタート法を採用しています。
キャピラリーを用いる装置や、パッシブリファレンスの必要な装置など様々な装置に対応します。

1

SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -Plusを用いた比較例

サンプル

培養細胞由来 Total RNAから調製したcDNA（10n倍希釈系列）（ReverTra Ace® qPCR RT Kit使用）

使用キット

SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-

測定機器

BIOER社 LineGene

ターゲット

β-actin結

A社キットに比べ、良好な結果が得られました。増幅曲線の間隔も一定であり、測定可能範囲も広い傾向を示しました。

果

図3 増幅曲線の比較

Realtime PCR Master Mix
2 を用いたTaqMan
アッセイ
®

サンプル

HeLa細胞 Total RNA（100ng）から調製したcDNA（5n倍希釈系列）

使用キット

Realtime PCR Master Mix

測定機器

ABI PRISM® 7700

ターゲット

β-actin

結増幅曲線が等間隔で良好な増幅結果が得られました。

果

図4 5n倍希釈系列の検量線

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 12

特集

1-step 試薬

ハイスループット解析に最適

キット外観：
Master Mix（青）、と酢酸
マンガン溶液（橙）がアルミ袋
で遮光包装されています。

¡RNA-direct ™ Realtime PCR Master Mix¡RNA-direct ™ SYBR® Green Realtime PCR Master Mix＊酢酸マンガンは RNA-direct ™シリーズ
のみへの添付となります。

逆転写活性を示すTth DNA polymeraseをベースとして開発された、1酵素・1-step用のリアルタイムPCR Master Mixです。逆転写反応とPCRを連続
的に1チューブで行うため、ハイスループット解析に適しています。また、高温で逆転写反応ができるため、従来の2酵素・1-step系に比べ特異性をアップさせることができます。逆転写プライマーにはPCRのリバースプライマーを用います。

Tth DNA polymerase はMn++イオン
存在下において、逆転写活性を示します。耐
熱性酵素なので、60℃付近の温度で逆転写反応を行うことができます。逆転写反応には
PCRのリバースプライマーを用います。

30%off キャンペーン
■期間：2007年12月3日〜
2008年2月29日［ご注文分］

抗体を用いるホットスタート法を採用しています。
キャピラリーを用いる装置や、パッシブリファレンスの必要な装置など様々な装置に対応します。

1

TaqMan®アッセイによる他社品（2酵素・1-step系）との比較

サンプル

ヒト培養細胞由来Poly（A）+RNA（10n倍希釈系列）

使用キット

RNA-direct ™ Realtime PCR Master Mix
A社 2酵素・1-stepキット（RTase+Taq使用）
BIOER社 LineGene
ターゲット β-actin

測定機器
結

果

10−5希釈A社の2酵素・1-stepキットに比べ、立ち上がり速度、および直線性において優れていることが分かりました。

2
測定機器
定量方法

PKCδ（発現量をβ-actinの発現量で補正して算出）

結2-step法と同じ定量結果を1-step法でより簡便に得ることができました。

使用キット

果

図5

SYBR® Greenアッセイによるプロテインキナーゼ
2-step法と同様な結果が得られました
遺伝子の定量ヒト組織由来Total RNA またはcDNA
・RNA-direct ™ ⇒Total RNA 50ng, 200ng
・SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -Plus⇒cDNA（Total RNA 10ng相当）＜2-step系＞
RNA-direct ™ SYBR® Green Realtime PCR Master Mix
SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -PlusRoche社 LightCycler™

サンプル

100希釈

パーソナルタイプの決定版

図6 1-step反応法と2-step反応法の比較 (PKCδ)
黄色のバーはRNA-direct ™（1-step法）による結果（Total RNA:50ng（左）,200ng（右））。青色のバーが2-step法での結果（Total RNA 10ng
RNA 10ng相当の逆転写反応液を使用）。縦軸は相対発現量を示します。

核酸増幅リアルタイムモニタリング装置好評発売中！！
無料訪問デモ実施中■コストパフォーマンス良好¡専用チューブやキャピラリー不要（汎用0.2mlチューブを使用可能）¡反応ボリュームは10μl〜¡0.2mlチューブ×33本に対応■多様な系に対応¡SYBR® Green I, TaqMan® probe（リポーター：FAM、クエンチャー：TAMRA）、
Hybridization probes, Molecular Beaconに対応。
¡励起波長：470nm ¡検出波長：530nm、640nm、710nm■ソフトウェア
¡日本語対応で操作性抜群¡増幅曲線のリアルタイム表示¡ランニング中にグラフスケール
を変更可能¡反応中に1サイクル単位で削除・追加可能¡定量解析、融解曲線解析可能¡測定の生データを参照可能■高感度オプティカルユニット¡励起用光源に、発熱性が低く安定、長寿命のBlue LED採用
検出器に高感度、低ノイズのPMTを採用

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 13

特集

キャンペーン期間 2007年12月3日〜2008年2月29日［ご注文分］

RT＆リアルタイムPCR試薬
品

名

装＊

Code No.

保存

価

200回用

FSＱ-101-20℃¥38,000¥26,600

200回用（1ml×5本）

QPK-101¥37,000¥25,900-20℃¥170,000

対象外

包

格

キャンペーン価格

リアルタイム PCR用cDNA合成キット

ReverTra Ace® qPCR RT Kit
5×RT Buffer (dNTP含有）
Enzyme Mix (ReverTra Ace®+ RNase inhibitor)
Primer Mix (Oligo dT + Random Primer)
Nuclease-free water
Realtime PCR Master Mix（2×濃度）［各種プローブアッセイ用］

1000回用（［1ml×5本］×5） QPK-101X5

SYBR® Green Ｒealtime PCR Master Mix（2×濃度）［SYBR® Green アッセイ用］®

SYBR Green Ｒealtime PCR Master Mix -Plus（2×濃度）［SYBR® Green アッセイ用］＜バージョンアップ品（Plus solution別添）＞

40回用（1ml×１本）

QPK-101T¥10,000

対象外

200回用（1ml×5本）

QPK-201¥37,000¥25,900¥170,000

対象外

1000回用（［1ml×5本］×5） QPK-201X5＊＊

40回用（1ml×１本）

QPK-201T

200回用（1ml×5本）

QPK-212

1000回用（［1ml×5本］×5） QPK-212X5
40回用（1ml×１本）

-20℃

-20℃

QPK-212T¥10,000

対象外¥37,000¥25,900¥170,000

対象外¥10,000

対象外®

＊ReverTra Ace qPCR RT Kitは1反応を10μlで行った時の使用回数を、Realtime PCR Master Mixシリーズは1反応を50μlで行った時の使用回数を表示しています。
＊＊仕様変更になり、Plus solutionが別添になりました。性能は変更前のものと同等です。Code No.が変更になっております。ご注意ください。

1-step用リアルタイムＰＣＲ試薬品

包名RNA-direct ™ Ｒealtime PCR Master Mix（2×濃度）＜酢酸マンガン溶液別添＞［各種プローブアッセイ用］®

RNA-direct ™ SYBR Green Ｒealtime PCR Master Mix（2×濃度）＜酢酸マンガン溶液別添＞［SYBR® Green アッセイ用］

装＊

100回用（0.5ml×5本）

Code No.

保存価

QRT-101

500回用（［0.5ml×5本］×5） QRT-101X5

-20℃

格

キャンペーン価格¥33,000¥23,100¥150,000対象外

40回用（0.5ml×2本）

QRT-101T¥17,000

対象外

100回用（0.5ml×5本）

QRT-201¥33,000¥23,100¥150,000

対象外¥17,000

対象外

500回用（［0.5ml×5本］×5） QRT-201X5
40回用（0.5ml×2本）

QRT-201T-20℃＊1反応を50μlで行った時の使用回数を表示しています。
※PCR関連商品のラベルライセンスについての詳細は、弊社ウェブサイト（www.toyobo.co.jp/bio)[PCRコーナー]をご覧ください。
※SYBR®は、Molecular Probes Inc.の登録商標です。 ※TaqMan®は、Roche Molecular Systems Inc.の登録商標です。
※ABI PRISM®は、Applied Biosystems Inc.の登録商標です。 ※LightCycler™は、Idaho Technology Inc.の商標です。

弊社webサイト（お問い合わせ・ご請求コーナー）
測定機器 無料訪問デモ実施中 からご依頼いただけます。
品

名

核酸増幅リアルタイムモニタリング装置

LineGene（本体＋ソフトウェア）

包

装
一式

Code No.
BFFQD-33A

価￥1,890,000※別途制御用のパソコンが必要です（現在お手持ちのパソコンもお使いいただけます）。本体とパソコンの接続にはRS232Cポートを使用します。
USBポートに本機を接続する際には、別途シリアルコンバーターが必要です。

製品及び原理等でご不明な点がございましたら
下記までお気軽にお問い合わせください。

ライフサイエンス事業部（大阪）〒530-8230 大阪市北区堂島浜二丁目2番8号
TEL.06-6348-3786 FAX.06-6348-3833
E-mail order̲lifescience@toyobo.jp

ライフサイエンス事業部（東京）〒103-8530 東京都中央区日本橋小網町17番9号
TEL.03-3660-4819 FAX.03-3660-4951
E-mail order̲lifescience@toyobo.jp

Toyoboテクニカルライン
TEL.06-6348-3888（9：00〜12：00 13：00〜17：00（土・日・祝を除く））
FAX.06-6348-3833
E-mail tech̲osaka@toyobo.jp

Toyobo Web Site
［ http：//www.toyobo.co.jp/bio ]格

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 14

SNAP-tag Capture Resinシリーズ

本製品はすでに販売を中止しております。

プルダウンアッセイに最適。磁性ビーズタイプもラインアップ。
SNAP-tagは、Human O6-alkylguanine DNA alkiltransferase（hAGT）を遺伝子工学的手法により改変した約20kDaの酵素タグであり、ベンジルグアニン（BG）基を有する人工基質と共有結合する性質を利用して融合タンパク質を固相へ固定することが可能です。本シリーズは、SNAP-Capture Resin-Sの後継試薬であり、プルダウンアッセイ用（通常タイプと磁性ビーズタイプ）、及び精製用のアガロースレジンの3種類から選択いただけます。より用途に合った実験が可能になります。
図1．ビーズ表面のベンジルグアニン基

図2．固相への特異的結合
SNAP-tag（金色）を結合したタン
パク質（青色）のBGリンカーを介した固定化。

特長1 3種類のレジンから選択可能
・プルダウンアッセイ用（通常タイプと磁性ビーズタイプ）、および精製用から選択可能です。

特長2 多目的な用途に応用可能
・プルダウンアッセイや精製に加え、固定化酵素実験等にも幅広く用いることができます。

実施例

SNAP-capture Pull Downを用いたp53とMDM2の相互作用の検出

SNAP-tag融合p53タンパク質（精製タンパク質、およびクルードタンパク質を使用）をベイトとしてSNAP-capture
Pull Downレジンに固定化し、蛍光ラベルしたSNAP-tag融合MDM2をプルダウンしました。その後、SDS-PAGE解析
により、SNAP-tag融合MDM2タンパク質の蛍光を測定した
ところ、プルダウンされたMDM2タンパク質の明瞭なバンドが確認できました。

図3．実験原理（左）及び結果（右）

品

保存温度

Code No.

価

1kit［25% Slurry、1ml］

4℃

CVIM220￥37,000

1kit［25% Slurry、5×1ml］

4℃

CVIM221￥84,000

名包SNAP-capture Pull Down Starter Kit
SNAP-capture Pull Down Bulk Kit
SNAP-capture Magnetic Beads Starter Kit
SNAP-capture Magnetic Beads Bulk Kit
SNAP-capture Purification Starter Kit

装格1kit［50% Slurry、1ml］

4℃

CVIM214￥66,000

1kit［50% Slurry、5×1ml］

4℃

CVIM215￥141,000

1kit［50% Slurry、4ml］

4℃

CVIM218￥56,000

SNAP-capture Purification Bulk Kit

1kit［50% Slurry、1×10ml］

4℃

CVIM219￥125,000

SNAP-capture Purification Bulk Kit

1kit［50% Slurry、2×10ml］

4℃

CVIM224￥230,000

装保存温度

Code No.

価

SNAP-sourse plasmid pSS26b （バクテリア発現用）

品

名

包

5μg

-20℃

CVPL022¥25,000

SNAP-sourse plasmid pSS26m（哺乳類細胞発現用）

5μg

-20℃

CVPL023¥25,000

Magical Trapper （磁性スタンド）

1個

室温

MGS-101¥38,00014

格89No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 15

Flexible KOD DNA polymerase

KOD FX
KOD FXは、高正確性PCR酵素KOD DNA polymeraseをベースに開発された高性能PCR試薬です。高い「増幅成功率」、「増幅効率」、および「伸長性」を示すことから、'07/5月の発売以来、多くの先生方から、「 他のPCR酵素では増えなかったターゲットが簡単に増えた！」との声を多く頂いております。
今回は、KOD FXを更に効果的かつ幅広くお使い頂くために、これまでに頂いたご質
問に対して、実施例をお示ししながら解説致します。

1

KOD FXの最大の特長は何ですか？ また、KOD -Plus-とはどのように使いわけたらよいですか?

1

以下に、弊社が販売しているPCR酵素の中でのKOD FXの位置付けに関する一覧表をお示しします。
表から、KOD FXの増幅成功率、増幅効率、及びGCリッチなサンプルの増幅において、KOD FXが格段に高い性能を示すことがお分かりいただけると思います。
表1．東洋紡のPCR酵素におけるKOD FXの位置付け

正確性
P
C
R
が
う
ま
く
い
か
ず
に
困
っ
て
い
る
︒
︵
幅
広
い
P
C
R
で
力
を
発
揮
︶

伸長性

増幅効率

（ロング性能）

（収量）

★★★★

高正確性
PCRを
したい

増幅成功率

ＧＣリッチ
サンプル

増幅末端

伸長時間
（/kb）

ホット
スタート

KOD FX （Taqの約１１倍） ★★★★★

★★★★★★

★★★★★★

★★★★★★

平滑末端

１min.

○

KOD DNA
Polymerase

★★

★★

★★

★★★★

平滑末端

３０sec.

ー

★★★★

★★★★

★★★

★★★★

平滑末端

１min.

○

★★★★

★★★★

★★★★

★★★★

平滑末端

１min.

○

★★★★★

★★★★★

★★★★

★★★

A付加あり

１min.

ー

★★★★★

★★★★★

★★★★★

★★★

A付加あり

１min.

○

★★★★★

★★★★★

★★★★

★★★★

A付加あり

３０sec.

ー

KOD -PlusKOD -PlusVer.2
Blend Taq®

高効率でBlend Taq®
汎用PCRを-Plusしたい
KOD Dash®

★★★★★
（Taqの約５０倍）★★★★★★
（Taqの約８０倍）★★★★★★
（Taqの約８０倍）★★
（Taqの約３倍）★★
（Taqの約３倍）★★
（Taqの約３倍）

実験1に示しましたように、KOD FXは、GCリッチなターゲットに対し抜群の増幅性能を示すことが特長です。

◆実験1◆ GC richターゲットの増幅ターゲット：ヒト IGF2R遺伝子[NM̲000876] 8.9kb

また、高い増幅成功率を示し、Long PCRのみでな（GC含量約90%の領域を含む遺伝子）

く、普段のルーチンPCRにおいて確実にPCR産物をプライマー配列：F primer:5 -TCCCGCTCCGTCTCCACCTCCGC-3
R primer:5 -CAGGGCGGTTTGCTTCTCAGCAATAGA-3

取得したい場合にも力を発揮します。
なお、伸長性に関しては、ヒトゲノムDNAを鋳型とした場合、KOD -Plus- の最大増幅鎖長が約

鋳型：ヒトcDNA（HeLa Total RNA50ng相当 ）/ 50μl反応系
PCRサイクル：94℃ 2min.

12kbに対して、KOD FXでは、最大約24kbと、約2

98℃ 10sec.

倍の鎖長を増幅できることを確認しています。

68℃ 8min.

30 cycles

一方、正確性（Fidelity）の点においては、KOD※他社酵素については、製品添付のプロトコールに従い
30サイクルにて実施しました。

-Plus-及びKOD -Plus- Ver.2の方がさらに高い正M1 1 2 3確性を示しますので、より正確性を必要とする用途には、KOD-Plus-もしくはKOD -Plus- Ver.2のご使用をお薦めします（⇒Q3参照）。

8.9kb※KOD -Plus- Ver.2は、正確性はKOD -Plus-の性能を保ちつつ 、さらに増幅成功率を高めた
PCR酵素ですが、増幅成功率はKOD FXが勝ります（表1）。

8915

4 5 6 7 M2

M1: 1kb DNA ラダー
1: KOD FX
2: A社汎用PCR酵素（Taqベース）
3: B社Long PCR酵素（Taqベース）
4: C社GCrich対応高正確性酵素
5: D社GCrich対応Long PCR酵素Ⅰ
6: E社GCrich対応Long PCR酵素Ⅱ
7: F社高効率Long PCR酵素
M2: λ/ Hin dⅢ digest

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 1622細胞培養液などのクルードサンプルを直接鋳型として使用することはできますか？
可能です。サンプル適応力の高いKOD FXは、夾雑物を含むサンプルに対しても高い増幅成功率を示します。実験2は、Jurkat細胞の細胞懸濁液を直接PCR反応液に添加して増幅を試みた例ですが、8.5kbまでの増幅が確認できました。
また、
ここではお示ししておりませんが、培養細胞以外のさまざまなクルードサンプルから、直接増幅可能であることを確かめています。
クルードサンプルの場合、最大2μlを50μlのPCR反応系に添加して実施すると良い結果が得られます。

◆実験2◆ 培養細胞を鋳型とした直接PCR

1 2 3 4 5 6 M

ターゲット：ヒトβ-globin 領域1.3kb、3.6kb、8.5kb
プライマー配列：
1.3kb F primer: 5'-TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC-3
1.3kb R primer: 5'-CCAGGATTTTTGATGGGACACG-3
3.6kb F primer: 5'-GGTGTTCCCTTGATGTAGCACA-3
3.6kb R primer: 5'-ACATGTATTTGCATGGAAAACAACTC-3
8.5kb F primer: 5'-TGATAGGCACTGACTCTCTGTCCCTTGGGCTGTTT-3
8.5kb R primer: 5'-ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA-3

8.5kb
3.6kb
1.3kb

鋳型：Jurkat細胞 2×104cells/50μl反応系（RPMI/10%FCSに懸濁した1×104/μlの細胞を2μl使用）

1, 2: ヒトβ-globin 1.3kb
3, 4: ヒトβ-globin 3.6kb
5, 6: ヒトβ-globin 8.5kb
M: λ/Hin d Ⅲ digest

PCRサイクル：94℃ 2min.
98℃ 10sec.
68℃ 3min./kb

3
3

30 cycles

PCR増幅時の正確性はどのくらいですか？また、クローニング目的に使用できますか？
KOD FXのPCRエラーによるミス塩基の取り込み頻度（エラー

PCRエラー率率）は、実際にシーケンシングにて解析した結果、144,535塩基
KOD -Plus-

中、わずか19塩基でした。この正確性は、Taqや他社Long PCR
用酵素の約10倍優れている値です（右図）。従って、クローニング

KOD FX
Pfu DNA Polymerase
A社Long PCR用試薬

目的にも十分使用することが可能です。

Taq DNA Polymerase

実験3は、実際に、真核細胞における最も長いmRNAの一つで020あるヒトジストロフィン（DMD）遺伝子をクローニングすべく、遺伝子の全長13.5kbのPCR増幅を試みた例です。ここでのPCR産物
をplasmidにクローニングし、配列の確認を行ったところ、5クロー

40

100
120
60
80
Mutation Frequency（×10-5）

140

160

〈PCRエラー率の測定方法〉各酵素にてヒトゲノムDNAを鋳型にβ-globin領
域2.4kbの増幅を行い、PCR産物をTAクローニング後、96クローンをピックしてシーケンシングを行い、配列の確認を行いました。

ン中の1クローンでPCRエラーのないクローンを取得することができました。
また、KOD FXを用いて増幅したPCR産物は、KOD -Plus-などと同様に末端が平滑化されていることに注意する必要があります。そのままではTAクローニングすることはできません。専用のTAクローニングキット「TArget Clone™ -Plus-」を用いることによりKOD
FXのPCR産物を直接TAクローニングすることが可能です。
M1 1 2 3 M2

◆実験3◆ ヒトジストロフィン（DMD）遺伝子13.5kbの増幅ターゲット：ヒトジストロフィン（DMD）遺伝子[ NM̲004006.1]

13.5kb

13.5kb

プライマー配列：F primer:5'-GTCGGCCTTGTTGGCCTACTGGAGCAATAAAGTTTGAAGAACTTTTACCAGG-3'
R primer:5'-GACGGCCTATGTGGCCACAACACGAAATAATGTCCAAATTAATTATGC-3'（下線部はplasmidへのクローニングの際に使用したSfi Iサイト）
鋳型：ヒトcDNA（Human Adult Skeletal Muscle total RNA 50ng相当 ）/ 50μl反応系

M1: 1kb DNA ラダー
1: 30サイクル
2: 35サイクル
3: 40サイクル
M2: λ/Hin d Ⅲ digest

PCRサイクル：94℃ 2min.
98℃ 10sec.
68℃ 14min.

30 or 35 or 40 cycles

以上、ここでご紹介しましたように、KOD FXはとにかく高い増幅成功率を示しますので、PCR増幅で問題を抱えれられている方はもちろん、PCRに安心感を得たい方は、是非一度お試しください。
品名および内容
KOD FX
KOD FX（1U/μl）
2×PCR Buffer for KOD FX
2mM dNTPs
高効率TAクローニングキット

TArget Clone™ -Plus-

保存温度

Code No.

価200U×1本［200回用＊］-20℃

KFX-101￥35,000（200U×1本）
×5［1,000回用＊］-20℃

KFX-101X5

10回用

-20℃

TAK-201

包装

格￥140,000￥16,000＊50μl反応を行った時の反応回数を表示しています。
※KOD FXで増幅されたDNA断片は平滑化されているため、通常のTAクローニングはできません。TArget Clone™ -Plus-をお使いください。

1689No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 17

MultiReporter Assay System -Tripluc®を用いた転写因子AP1、NFκB活性化の同時解析
東洋紡績（株） 敦賀バイオ研究所 浅井 友実
はじめ にMultiReporter Assay System -Tripluc®- (以下Tripluc®システム）は、緑色（SLG）、橙色（SLO）、及び赤色（SLR）の3色のルシフェ
ラーゼを用いるマルチリポーターアッセイシステムです。1色を内部標準として、残りの2色を用いて、2種の被験配列（プロモーターなど）の転写活性の評価を同時に行うことができます。このアッセイ系を用いることにより、2種の被験配列の活性に関する厳密な比較が可能になります。
転写因子AP-1、NFκBは、ともに広範な生命現象に重要な役割を果たすことが知られています。そのため、炎症性刺激や酸化ストレス応
答、発ガン、分化、アポトーシスなどにおいて、これら転写因子の活性化を並行して評価することが多く行われています。
本稿では、MultiReporter Assay System -Tripluc®-を用いて、これら転写因子の活性化、あるいは阻害剤の効果を同時にモニターした例をご紹介いたします。

®

図2．Tripluc®システムを用いた遺伝子発現解析のフロー
図1．SLG、SLO、SLRの発光と発光スペクトル方法
2. トランスフェクション

1. リポーターコンストラクトの構築
pSLO-test（Code No. MRV-102）、pSLR-test （Code96ウェル白色不透明プレート（ナルジェ・ヌンク社、Code No.

No. MRV-103）の各ルシフェラーゼ遺伝子の上流にHSVtkプ

136101）にHeLa S3細胞を1ウェルあたり2×10 4 cells

ロモーターを 挿 入し、そ のさらに上 流にA P 1 結 合 配 列（ 5 ' -（100μl DMEM+10% FBS）播種し、24時間培養しました。翌

A T G A G T C A A - 3 ' 、6 コ ピ ー ）、N FκB 結 合 配 列（ 5 ' -日、1ウェルあたり、0.09μg pAP1-SLO、0.02μg pNFκB-

CGGAAAGTCCA-3'、6コピー）をそれぞれ挿入した、pAP1-

SLR、及びインターナルコントロールとして0.09μg pSLG-

SLO、pNFκB-SLRを構築しました。

HSVtk control（Code No. MRV-301）を混合し、さらに0.5μl LipofectamineTM 2000 （インビトロジェン社）と混合した後、細胞に添加しました。また、各ルシフェラーゼのフィルター透過率を設定するために、pSLG-SV40 control （Code No.
MRV-201）、pSLO-SV40 control（Code No. MRV-202）、
pSLR-SV40 control （Code No. MRV-203）をそれぞれ0.2μgトランスフェクションしました。この細胞を37℃、5%CO2下で24時間インキュベートしました。
3. アッセイ

図3．AP1、NFκBのモニターに用いたリポーターコンストラクト

PMAによる活性化試験では、トランスフェクションを行った細胞の培養液を除去し、0、1、10、100nMのPMAを含む培地

8917

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 18

10分間インキュベートした後、パーキンエルマー社ARVOMXに100μlを加え、5時間インキュベートしました。
阻害剤アッセイでは、
トランスフェクションを行った細胞の培養セットし、光学フィルター①660nm:半値幅100nm （Filter3）、液を除去し、グラフに示された濃度の化合物を含む培地100μl②595nm：60nm （Filter2）、③波長510nm：半値幅60nmを加え、10分間インキュベートした後、さらに1mMのPMAを含（Filter1）存在下でそれぞれ、2sec/ウェルで測定しました。透過む培地10μlを加え、5時間インキュベートしました。

率設定用のサンプルについてはさらに、フィルター非存在下で全ルシフェラーゼアッセイは、細胞培養液をそのままで、等量光を測定しました。

（100μl）のTripluc® Luciferase Assay Reagentを加えて結果及び考察
透過率設定サンプルから、それぞれのルシフェラーゼのフィルター透過率（例えばFilter1透過率は、Filter1測定値／Filter非存在下測定値）を決定しA．PMA濃度依存性ました。続いて、試験ウェルの測定値から各ルシフェラーゼの活性値を算出し4
relative activity

ました。SLO、SLRの活性値をインターナルコントロールとしたSLGの活性値で割り返し（SLO/SLG、SLR/SLG）、サンプル間の標準化を行いました。
N=3の平均値を算出し、SLO/SLG、SLR/SLGについて、それぞれPMAによる刺激処理や阻害剤処理のないサンプルの値を1として相対活性をグラフにプロットしました。

3
2
1
0

0

1

その結果、AP-1、NFκBの活性化において、PMAに対する濃度依存性が10
PMA（nM）

100

B．阻害剤の影響認められました（図4A）。阻害剤に対しては、AP-1、NFκBの活性化いずれ

5relative activity

も プ ロ テ イン キ ナ ー ゼ C の 阻 害 剤 で あ る R o - 3 2 - 0 4 3 2 、B D M I（Bisindolylmaleimide I）については濃度依存的な阻害が認められましたが、チロシンキナーゼ阻害剤であるAG1478については有意な阻害は認められませんでした（図4B上）。PMAによる活性化はプロテインキナーゼCを介して成立しますので、その効果を適切に評価できたといえます。
また、APDC（Ammonium Pyrrolidinedithiocarbamate）はNFκB活

4
3
2
1
0

性化の選択的な阻害剤として知られる化合物ですが、実際に特異的な阻害を

(-)

(-)

0.5

1

5

0.5

Ro-32-0432 (μM)

観察することができました（図4B下）
。

(-)

1

5

BDMI (μM)

0.5

1

5

AG1478 (μM)

100nM PMA

relative activity

5

まとめ
®

このたびMultiReporter Assay System -Tripluc -に1液アッセイ試薬
Tripluc® Luciferase Assay Reagentが加わり、マルチウェルフォーマット

4

AP1-SLO
NFκB-SLR3
2
1

による多検体アッセイが簡便になりました。Tripluc®システムではインターナ
0

ルコントロール用とは別に2つのリポーター評価が可能ですので、2つのター

(-)

(-)

50

100

500

APDC(μM)

ゲットを、全く同じタイミング、同じ細胞条件下で比較することができます。こ(-)

100nM PMAのため、特に細胞内におけるクロストークやネットワーク解析などを目的としたご研究、あるいはそれらをベースにした化合物スクリーニングにおいて、よ

図4．AP1、NFκBによる転写活性化、及び阻害剤の効果り厳密な測定・評価を行っていただけるツールであるといえます。
この他、多色分離のための演算については、Upload vol.83 p.7（弊社ウェブサイトでご覧いただけます）にご紹介しておりますので、あわせてご参照ください。また、Microsoft® Excelを用いた演算シートを弊社ウェブサイト（www.toyobo.co.jp/bio）に掲載しておりますので、ご活用ください。
品 名 及 び 内 容

包

保存温度

Code No.

Tripluc® Luciferase Assay Reagent

10ml
10ml×5-80℃

MRA-301
MRA-301X5￥23,000￥97,000

プロモーター挿入用ベクター pSLG-test

20μg

-20℃

MRV-101¥80,000

プロモーター挿入用ベクター pSLO-test

20μg

-20℃

MRV-102¥80,000

プロモーター挿入用ベクター pSLR-test

20μg

-20℃

MRV-103¥80,000

SV40コントロールベクター pSLG-SV40 control

20μg

-20℃

MRV-201¥80,000

SV40コントロールベクター pSLO-SV40 control

20μg

-20℃

MRV-202¥80,000

SV40コントロールベクター pSLR-SV40 control

20μg

-20℃

MRV-203¥80,000

HSVtkコントロールベクター pSLG-HSVtk control

20μg

-20℃

MRV-301¥80,000

MultiReporter Assay System -Tripluc®-発光試薬

装

価

格

※ベクターに関しては別途セット販売をしております。詳しくは、弊社までお問い合わせください。
上記の商品につきましては、特許の関係上、ご購入の際には別途申込書を提出していただきます。企業の方のご購入に関しては、別途ライセンスが必要です。詳しくは弊社までお問い合わせください。

1889

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 19

TAクローニング効率向上の検討
東洋紡績（株）

ライフサイエンス事業部 黒板 敏弘
はじめ にLigation high Ver.2は、ご好評いたいただいておりますLigation high120

（Code No.LGK-101）を、更に使いや100すく改良した高効率な1液タイプのライ

80

ゲーション試薬です。特に、TAクローニ

60

ング効率が向上しています（図1）。ま40

た、-20℃保存で凍結しないため、フリ20ーザーから取り出してそのままご使用

0いただける利点があります(図2)。本試
薬は、様々な末端を有するDNA断片の※Whiteは白コロニー数（インサートあり）を示しています。

ライゲーション反応に幅広く用いることができます。

図1．TAクローニング効率の比較（16℃、30min.反応）

図2．-20℃保存での試薬の状態（従来品（緑）、本製品（青））本製品は-20℃保存で凍結しません。

本稿では、TAクローニングの効率を向上させる方法をLigation high Ver.2を用いて検討しましたので、ご紹介いたします。
TAクローニングには、Taq DNA polymeraseなどで増幅したPCR産物を用います。一般的に、通常使用しているPCRプライマーの5'末端はリン酸化されていな
いため、PCR産物をTベクターとライゲーションした後も、2本鎖DNAの片側のみが連結されるだけで、片側にはニックが残ります(図3)。このニックは、形質転換後に大腸菌内で修復を受けますが、両鎖が連結されたものに比べ効率が低下する可能性があります。そこで本稿では、T4 Polynucleotide Kinaseを用いてリン酸化したプライマーを用いて増幅したPCR産物を用い、TAクローニングの効率が向上する否かを検討した結果をご報告いたします。

通常のPCR産物

Nickは形質転換した大腸菌内で修復される
図3．TAクローニングの原理

方法(1) プライマーのリン酸化
T4 Polynucleotide Kinase(Code No.PNK-111)とrATP(Code No.ATP-111)を用いて、以下のようにリン酸化を行いました。

Primer（50pmole/μl［50μM］）
14（μl）
10×Protruding End Kinase Buffer
2
10mM rATP＊＊2＊
T4 Polynucleotide Kinase（5〜20U/μl）
2
Total
20μl
↓
37℃、1h反応↓
95℃、5min（T4 Polynucleotide Kinaseを失活）↓ ← 50μl 滅菌ミリQ水を添加
10pmole/μl［10μM］primer溶液＊＊＊として使用します＊＊＊＊89＊ Kinaseは添加できる最大量を添加します（最終液量の10％）。
＊＊ 別途準備する必要があります。T4 Polynucleotide Kinase（Code No.PNK-111）には含まれません。
＊＊＊ このままPCR反応に使用します。
＊＊＊＊ 凍結して何度でも使用可能です。

19

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 20

結果及び考察結果を以下に示します。

プライマーのリン酸化、及びベクターの脱リン酸化などのコツは弊社ウェブサイト（www.toyobo.co.jp/bio）「実

相対コロニー数（％）

験お助けコーナー」の「実験ガイド：平滑末端クローニング」
にてご覧いただけます。

(2) 増幅産物の調製
TAクローニング用のDNA断片は、λDNAの約0.5kbの領域を
rTaq DNA polymerase（Code No.TAP-201）を用いて増幅

120
100
80
60
40
20
0

し調製しました。増幅には、全ページの方法でリン酸化したプライ
マー、及び未処理のプライマー（リン酸化なし）を用いました。増幅後、PCR産物はMagExtractorTM -PCR & Gel Clean up-

なし

あり（リン酸化）

図4．PCR産物の5'末端のリン酸基がTAクローニングに及ぼす影響（Code No.NPK-601）を用いて精製し、定量したものを使用し結果より、生じた白コロニー数（インサートあり）はリン酸化プライました。

マーを用いて増幅したPCR産物を用いた場合、通常のPCR産物を用いた場合に比べて約2倍となりました。青コロニーの比率は、両方(3) ライゲーション反応

ともに10％以下でほぼ同等でした。

Tベクター（50ng）とDNA断片をモル比で1:3となるように混合して5μlとした後、その溶液に5μlのLigation high Ver.2

このことは、
リン酸化されたPCR産物をTAクローニングに用いを添加し、16℃にて30分間ライゲーション反応を行いました。そることで、2本鎖DNAの両鎖が連結されるようになり、効率が向上

して、反 応 液 1 0μlを C o m p e t e n t h i g h D H 5α（ C o d e

したことに起因していると考えられました。

No.DNA-903）100μlに加え、形質転換を行いました。その後、その一部をLB/Ampプレートにプレーティングし、翌日、白コロニ

プライマーは簡単にリン酸化できますので、TAクローニングの効ー（インサートあり）の数をカウントしました。実験はn=3で行い率が低い場合の対策の一つとして有効であると考えられます。また、ました。

PCR産物を精製して用いる方が効率が向上する傾向にありますの
で、PCR産物のサイズが大きい場合などは、リン酸化と併用することで更に良い結果が期待できます。

おわりに
Ligation high Ver.2は、従来の一液系のライゲーション試薬と同等以上の効率を有し、さらに使い勝手も考慮した設計になっています。
是非一度お試しください。

品 名 及 び 内 容

包

装

保存温度

Ligation high Ver.2＊

750μl×1本

T4 Polynucleotide Kinase

1,500U×1本
50μmoles/0.5ml
200回用

rATP
MagExtractorTM -PCR & Gel Clean up-＊＊

Competent high DH5α

100μl×10本

Competent Quick DH5α

100μl×20本

Code No.

価

格

-20℃

LGK-201¥22,000-20℃

PNK-111¥15,000-20℃

ATP-111¥15,000

室温

NPK-601¥25,000液体窒素

DNA-903¥17,000-80℃

DNA-913¥29,000＊1反応に7.5μl使用する場合、100回用としてご使用いただけます。
＊＊他にSOC培地1ml×10本、及びPositive Control Plasmidを含みます。

Ligation high Ver.2、及びT4 Polynucleotide Kinaseは30%OFFキャンペーン（2007年12月
3日〜2008年2月29日[ご注文分]）を実施しております。詳しくはp9をご参照ください。

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No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 21●創薬支援カタログ発刊のお知らせ
創薬支援カタログを発刊いたしました。弊社ウェブサイト（www.toyobo.co.jp/bio）の、『お問い合わせ・ご請求』のコーナーからご請求いただけます。

●オンラインカタログでの在庫確認について
オ ン ラ イン カ タ ロ グ から 弊 社 に お け る 製 品 在 庫 を 確 認 で き る ように なりまし た 。弊 社 ウェブ サ イト
（www.toyobo.co.jp/bio）の「オンラインカタログ」のコーナーからご覧いただけます。

●SYBR® Green Realtime PCR Master
Mix -Plus-の仕様が変更になりました
SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-の仕様が変更になりました。従来は、マスターミックス試
薬のみをご提供しておりましたが、マスターミックス試薬とPlus solutionの2液でのご提供になりました。混合後は変更前の組成と全く同じ成分になりますので、試薬性能に変化はありません。

●販売中止品のお知らせ
PerfectHyb ® -Filter Array-（ Code No.HYB-201）、及びビスフェノールA測定ELISAキット（CodeNo.BEK-101）の販売を終了させていただきました。長い間ご愛用いただき、誠にありがとうございました。

●メールマガジン好評発信中
昨年の11月をもちまして、メールマガジン「TOYOBOバイオニュース」が1周年を迎えました。ご愛読いただきました皆様にお礼申し上げます。配信のご依頼は弊社ウェブサイト（www.toyobo.co.jp/bio）の「お問い合わ
せ・ご請求」のコーナーで承っております。メールマガジン会員のみの企画なども行っております。この機会に是
非ご登録ください。

過去に紹介した記事で、今号に関連のある記事をピックアップしてご紹介するコーナーです。

『rTaq DNA polymerase』（本誌p.4掲載）
Taq DNA polymeraseは1980年代に好熱細菌Thermus aquaticusよ因となることが知られています。そこで、開発されたのが中和活性（反応阻害活

り分離・精製された耐熱性DNAポリメラーゼであり、現在でもPCR酵素のスタ性）を有する抗Taq抗体を用いるホットスタート法です。弊社から販売されていンダードとして様々な用途に用いられています。3'→5'エキソヌクレアーゼ活るanti-Taq high（Code No.TCP-101）は、高い中和活性を有する抗Taq抗性（校正活性）を示さないため正確性はあまり良くありませんが、素直な増幅特体であり、あらかじめTaq DNA polymeraseと混合することで常温下でのポ性を示し、定量的なPCRや、SNP解析、
リアルタイムPCR解析など様々な用途

リメラーゼ活性をほぼ完全に抑制します。また、抗体は、最初のPCRサイクルでに利用されています。また、本酵素は5'→3'エキソヌクレアーゼ活性を示すた

高温にさらされた際に失活しますので、PCR自体には全く影響を及ぼしません。

め、TaqMan®アッセイに用いることができるのも特長のひとつです。

ホットスタート法を用いることで、感度や特異性、実験、再現性を飛躍的に向上させることができます。弊社のウェブサイトで是非「anti-Taq high」を検索し本酵素は抗体を用いるホットスタート法が最初に応用された酵素でもありまてみてください。

す。PCR酵素は常温でもある程度活性を示しますので、サンプルを混合して反89

応をスタートさせるまでの間にポリメラーゼがプライマーやサンプルに作用しまた余談になりますが、PubMedのサイトでPCR法の初期の報告［ Science

ます。低温下では、プライマーは非特異的に様々な位置にアニールし、そこを基

230:1350-4（1985）］を探して読んでみるのも良いかも知れません。

点としてポリメラーゼが作用することでプライマーダイマーや非特異増幅の原

PCR黎明期の苦労を知ることができるはずです。

21

No.89.qx 07.12.7 15:44 ページ 22

実験川柳特集 5
皆様、沢山のご投句ありがとうございます。ついに投句数が100を超えました！
ウェブサイトで最新の投句を確認いただけます。是非、「読者のコーナー」へアクセスください。

【句評】 数あるプロトコルの中で、今、私の一番欲しいプロトコルかも。
でも、それが無いのが人生です。

【句評】細胞って本当に弱いですよね。毎日、愛情を注いであげてください。

【句評】細胞の凍結って一種のタイムマシーンですよね。次に細胞が目覚める時、200年後の未来ということもありうる話だと思います。少しロマンを感じますね。

【句評】確かに。三食昼寝付きって、憧れますよね。
でも、忙しい時が華なのかも。

そのままにしてそっと帰るかも。たまには、TSさんも【句評】私だったら、話し相手になってあげてくださいネ。マウスではなく、
その同僚
の方の。
●TS さんのコメント： 飼う人が雑だとマウスが凶暴になり、穏やかな人が飼っているマウ
スはおとなしいと聞いたことがありますが、語りかけることも有効なんでしょうか。

⇒弊社ウェブサイト（読者のコーナー＞ご投稿コーナー）からご投稿、投句いただけます。
http://www.toyobo.co.jp/seihin/xr/lifescience/tech/reader/contribute/index.html
採用になった方には、￥2,000の図書カードをご進呈いたします（詳しくはサイ
トをご覧ください）。奮って投稿・投句ください。

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（www.toyobo.co.jp/bio）［PCR関連商品コーナー］をご覧ください。

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劇 印は毒物および劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
危 印は消防法に基づく危険物です。

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