厚生省「神経疾患研究委託費」

筋ジストロフィー新発磯好に関する臨床的研究

三好班

昭和56年度研究報告書

昭和57年3月

研究報告書の作成にあたって
厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究」班として，昭和56年度の研究報告書を作成する運びとなりました。
本研究班は過去3年間の同じく研究委託費「筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究」班を改装・して本年度に新しく3年計画をもって発足したものであります。
これまでの「病因に関する研究」を「発症機序に関する研究」と幅をもたせて改め，研究論理的には，現象論ともいうべき病状，所見の把握，ついで実態論としての病態の解明，そして，これらを通しての本質論である病因の究明の3段階を意識していますこ勿論，ここにいう研究は医の本質である病める人々の苦しみを除き，病気を治すことを目指すものであります。
本年度は初年度であり，本報告書た集録された業績は従来の研究の発展であります。いずれも貴重なものでありますが，総体としてみるときそこに上述の各段階における研究の着実な進展を読みとることができます。
昨年から本年へと研究班の組織の上での転換期にもかかわらず，研究者の責務としての研究を中断することなく業績をあげられた本研究班の班員，並びに共同研究者の各位の絶大な努力に班長として心からの敬意を表します。
なお，本研究班は同じく筋ジストロフィー症に関する研究班，基礎班，実験
動物姓，疫学・臨床班，そして療護班と緊密な連繋のもとに研究の成果をあげているものであります。
本研究班の形成と維持に賜った，厚生省当局，国立神経センター，日本筋ジストロフィー協会の御蓋九 御支援そして御理解に深く感謝致します。
昭和57年3月〈班長〉 三 好 和 夫

目次

分担研究報告Ⅰ．筋ジストロフィーチキンの研究

Ⅱ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病態生理

13

39

a）遺 伝

41

b）臨 床

49

c）形 態

74

d）生 理

129

e）赤血球など

157f）生化・代謝など

177

Distal Myopathy241

外国における文献（1902−1981．12）243

日本における症例報告，その他（1951−1981．12）247

昭和56年度研究班名簿

251

究

分

担

研

報

』ヒ
ロ

目

次

Ⅰ．筋ジストロフィーチキンの研究

1）骨格筋の再生に関する組織化学的研究
国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

15

埜

中

征

哉

中

村

晴

臣

2）筋ジストロフィーチキン骨格筋の修復能20

鳥取大学医学部脳研神経病理

3）培養鶏胚骨格筋と交感神経の相互関係−電顕的および組織化学的検討−
東京医科歯科大学医学部神経内科

25

塚 越

廣

4）培養ジストロフィーチキン筋細胞のCPKアイソザイム
新潟大学脳研究所神経内科

宮

31

武

正

5）筋ジストロフィー症の発症機序に関する研究−ジストロフィーチキンのSuperoxide dismutaseについて−

34

自治医科大学神経内科 水 野 美 邦

Ⅱ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病態生理

6）Duchenne型筋ジストロフィー症の遺伝と発生予防
東京都神経科学総合研究所臨床神経学研究部

41

近藤 喜代太郎

7）筋萎縮性疾患の遺伝分析−Duchenne型ジストロフィー症について−

鹿児島大学医学部衛生

45

古

庄

敏

行

8）興味ある所見を呈したFSH型筋ジストロフィー症の1卵性双生児について
宮崎医科大学医学部第3内科

49

荒

木

淑

郎

9）筋ジストロフィーに類似したunusual caseについてのfollow−up study−特に3症例を中心として−

54

虎の門病院神経内科

田

辺

古

川

等
59

10）Gowers型Distal Myopathyの再評価
東京医科歯科大学医学部神経内科

哲雄11）特異な屈筋優位の脱力分布を示すVacuolar myopathyの位置づけについて北海道大学医学部脳神経外科

田

代

61

邦

雄

12）Rigid spine syndromeについての検討
九州大学医学部脳研神経内科

67

後

藤

幾

生

13）Syndrome of continuous muscle‑fiber activity(Isaacs)についての検討

九州大学医学部脳研神経内科

後

藤

幾

生

14）Neostigmine myopathyの発生機序におけるCa＋＋の役割に関する研究
鹿児島大学医学部第三内科

納

光

74

弘

15）実験的ミトコンドリアミオパチー
ミトコンドリアの形態変化と呼吸機能に関する研究
順天堂大学医学部脳神経内科

72

79

佐

藤

木

下

猛

16）筋萎縮の発現機序に関する研究（1）ステロイドの影響

83

東邦大学医学部第四内科

真男17）ヌードマウスへ移植されたDuchenneジストロフィー症生検筋の形態学的検討87

昭和大学藤が丘病院神経内科

若

山

吉

弘

18）進行性筋ジストロフィー症のfreeze‑fractureによる筋内部膜系の形態学的研究信州大学医学部第三内科 小 口 喜三夫

9219）筋疾患におけるsatellite cellの検討

95

九州大学医学部脳研神経内科

黒 岩 義五郎20）遠位型ミオパチーの5例−筋萎縮の分布とその筋病変について−
筑波大学臨床医学系神経内科

97

中

西

孝

雄

21）Oculopharyngeal muscular dystrophyとdistal myopathy

をつなぐもの104

新潟大学脳研究所神経内科

福

原

信

義

22）ミオパチーとライソゾーム・システム（2）109−とくに摘出筋のprotamin添加による形態学的変化について−新潟大学脳研究所神経内科

福

原

信

義

23）筋病変の再生現象に関する臨床病理学的検討
虎の門病院神経内科

113

田

辺

等

24）筋鞘核内に封入体を有するquadriceps myopathy：
119

筋炎との関連について
順天堂大学医学部脳神経内科

佐

藤

猛

123

25）いわゆるhypothyroid myopathyの臨床と筋組織像

東京大学医学部脳研神経内科

豊

倉

康

夫

26）筋ジストロフィー症における誘発筋電位（M波）の研究
宮崎医科大学第三内科

栗

129

原

照

幸

27）筋ジストロフィーと悪性高熱
カフェイン感受性テスト（in vitro）による検討
国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

135

高

木

昭

夫

28）筋強直性ジストロフィー症の中枢神経病変について（特に睡眠脳波および眼球運動について）
京都大学医学部第二内科

140

井

村

裕

夫

29）筋細胞内過剰カルシウムと収縮弛緩に関する生理学的研究−硝酸イオン処理筋を中心として
金沢大学医学部神経内科

144

高

守

正

治

30）甲状腺中毒性周期性四肢麻痺のエピネフリン負荷による薬理学的検討
金沢大学医学部神経内科

高

守

正

148

治

31）猫のGolgi腱受容器の反応

152

国立療養所宇多野病院臨床研究部

深

見

安

32）Duchenne型筋ジストロフィー症患者の赤血球のカルシュウム
国立武蔵療養所神経センター

吉

田

157

端

子

33）Duchenne型進行性筋ジストロフィー症の赤血球カルシュウムに

関する研究

160

信州大学医学部第三内科

庄

司

進

一

34）筋強直性ジストロフィー症赤血球膜のレクチン結合
都立神経病院神経内科

162

宇尾野 公 義35）細胞電気泳動法によるMyotonic Dystrophy患者
赤血球膜荷電の研究
東北大学医学部脳研脳神経内科

167

高

瀬

貞

夫

36）筋緊張性ジストロフィー症における赤血球膜および血漿の脂質分析
国立赤坂療養所神経内科

馬

渡

志

37）Myotonic Muscular Dystrophyにおける末梢血Tリンパ球のsubpopulationの検討
九州大学医学部脳研神経内科

174

黒 岩 義五郎38）Duchenne dystrophyおよび糖原病における尿中オリゴ糖の分析
鹿児島大学医学部第三内科

171

郎

納

光

177

弘

39）筋におけるクレアチン代謝−1‑14C標識クレアチンを用いる方法の検討−

182

沖中記念成人病研究所

三

好

和

夫

40）人の各種組織Mb，各種疾患の血清Mbならびに各種動物Mbの抗原性−ラジオイムノアッセイによる成績

186

徳島大学医学部第一内科

川

井

尚

臣

41）筋肉酵素の漏出機構について

191

愛媛大学保健管理センター

植

田

啓

嗣

42）全身疾患における筋障害の研究（第1報）−Hypoparathyroidism症例における血清CPK上昇に関する研究
大阪医科大学第一内科

茂

在

敏

井

清一郎

43）筋糖原病の病態代謝−特にⅤ型とⅦ型の対比分析
大阪大学医学部第二内科

201垂44）Duchenne型筋ジストロフィー症の線維芽細胞の生化学的研究
国立赤坂療養所神経内科

馬

渡

206

志

郎

45）LDH（M型）欠損症の培養皮膚線維芽細胞中のLDH活性の検討
浜松医科大学第一内科

西

村

嘉

209

郎

46）筋ジストロフィー症におけるRNA activityについて

東北大学医学部脳研脳神経内科

196

司

214

高

瀬

貞

夫

英

紀

47）チキン骨格筋のロイシル−β−ナフチルアミド水解酵素の精製，諸性質と筋タンパクの分解218

徳島大学医学部附属酵素研究施設酵素化学部門

木南48）筋線維変性機構におけるCa＋＋の役割について−Ca＋＋イオノフォアによる実験的研究−
熊本大学保健管理センター

222

出

田

杉

田

透

49）Plasmocidによる実験的ミオパチーの生化学的研究
東京大学医学部脳研神経内科

227

秀

夫

50）Streptozotocin induced diabetic myopathyにおける筋構造タンパク質の電気泳動学的検索
名古屋大学医学部第一内科

232

飯

田

光

男

51）Enzyme Immunoassay法による筋ジストロフィーマウス組織中のNGFレベルの測定

236

京都大学薬学部生物化学

林

恭 三

Ⅰ．筋ジストロフィーチキンの研究

1）骨格筋の再生に関する組織化学的研究

埜

研究協力者

小

征

中

林

繁

哉＊

一書＊

岡

田

理

美＊

骨格筋が何らかの傷害をうけ壊死に陥った後に30日後にラット5匹ずつ（計30匹），ニワトリ5羽

再生することはよく知られている．病的過程，例ずつ（計30羽）より筋を採取し，直に凍結し，凍えば進行性筋ジストロフィーでも活発な再生がみ

結切片を作成した．連続凍結切片にhematoxylin

られる．活発な再生の事実があるにもかかわらず

and eosin（HE），mOdified Gomori trichrome，

病気が進行することは再生に何らかの欠陥がある

NADH−TR，PAS，Oil red O，ATPase（routine，

可能性が考えられている．このように色々な神経

pH 4．5，pH 4．3），aCetylcholinesterase，nOnS−

筋疾患の病因を考える上で再生が重要な意味を持

pecific esterase，aCridine orange蛍光染色，Ca
染色（GBHA）を行った．

つことに疑いはない．
再生筋は組織学的，組織化学的特徴より判断できる．しかし何れの染色法が優れているか，筋が結

果

1．筋線経の壊死

壊死に陥って再生する時経時的にみて染色性がどのように変化していくのか，未だ基礎的な仕事が注射後30分後にはラット，ニワトリの赤筋，白なされていない．そこで我々は，筋線経を壊死さ

筋ともに強い変化がみられた．すなわちmyofi−

せる塩酸プビバカイン（Marcaine）1〉2）をラット

brilが一部で断裂し，他の部では筋線経の過収縮と鶏の自筋，赤筋各々に注入し，壊死をおこさせ，（opaque線維）がみられた．細胞膜は局所的に消失していたが基底膜はよく保たれていた．4時間

その後の再生の状態を組織化学的に追求し，そのも経つとGBHA染色で陽性の物質が壊死線維内特徴を経時的に数量化することを試みた．

に染出されるようになり，電子顕微鏡的にはZ線対象・方法からの崩壊がみられるようになった．注射後12時

約250gのウイスター系雄ラットの赤筋である

間日頃より貪食細胞が壊死線経の周囲に集合しはヒラメ筋，自筋である長足止伸筋を無菌的に露出し，じめ，24時間目には多くの筋線維内に貪食細胞の各々の筋の遠位端より，0．5％塩酸ブビバカイン液

侵入をみるようになった（図1）．その後3Ⅰ］日頃が筋腹まで十分渉透するよう0．3〜0．5ml注入しまで多くの単核細胞と一部多核球が壊死部を埋めた．また8膵化後約1月の鶏の赤筋である前広背筋ていた．

（ALD），自筋である後広背筋（PLD）を同じよう

この壊死過程で特記すべきことは電子顕微鏡的に露出し，同液を0．3〜0．5mlずつ注入した．何れには筋衛星細胞がよく保たれていること（図2），

も動物の右側の筋に注入し，反対側（左側）を対壊死部内でも末梢神経は侵されていないこと，aC−

照とした．注射後の壊死の状態をみるため，30分，

etylcholinesterase活性は壊死線経にもよく残っていたことなどであった．

1，2，4，6，12，24時間，2，3日後に筋を検索した．

注射後4H目には何れの掛こも，HE染色で好再生の状態をみるために，4，7，10，15，20，

塩基性の胞体をもち，大型の核，明瞭な核小体を＊国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部＊＊自治医科大学小児科

ようになった．

もつ再生線経としての組織学的特徴が認められる

一15−

図1

塩酸ブビバカイン注射後24時間目のラットヒラメ筋．右上方に壊孔に陥らぬ線経が存在する．壊死線経は会食細胞の侵入をうけている．HE染色，×220．

図2

筋線経は著明な破壊をうけているのに形態学的によく保たれた筋衛星細胞（S）．×8500．

−16−

2．ラット骨格筋の再生像

3．鶏骨格筋の再生像

壊死後7日目には再生線椎は好塩基性で青味を鶏（ニューハンプシャー，line412）骨格筋のlり■．

おびた胞体，中心核などの特徴をもち，その直径

生はラットと共通点はあっても異なるところもみは3叫にも達していて再生は非常に早い速度で進られた．注射後3〜4E】目に再生筋として認めらんでいることが分った（図3）．Acridineorange
蛍光染色では4〜7日目に強い橙色の蛍光を胞体れるようになり，15日日頃までにその線維径が対内に認めたが15日目にはほとんど消失していた．
ていた．ATPase染色でみると，再生筋は初期に色で胞体が橙色の蛍光を10日日頃まで発すること，胞体の好塩基性、赤筋における中心核などは共通であった．

は未分化なタイプ2C反応を示すが，分化の開始

筋線経の分化の状態は異なっていた．正常白筋

このことは再生初期にRNAが多いことを裏づけ

照とほぼ同じくなること，アタリジンオレンジ染

は白筋の方が先行していた．長址伸筋では10E】日（PLD）はATPase染色でタイプ2A反応を示

頃には未分化なタイプ2Cと分化したタイプ2

すが，再生筋も最初からタイプ2A反応を示し哨A，2B線経が混在し，15日目には筋線維径も筋乳動物のようなタイプ2C反応は示さなかった．
NADH−TR染色でみると鶏のPLD筋は多数の線維タイプの分布もほぼ対照と等しくなった．赤筋では分化はやや遅く，15日日頃にタイプ1とタαWと少数のαR線経よりなっているが3），再生

イプ2C線経が混在するようになり，30日目には筋は密に存在する大粒のdiformazan頼粒をもつ

完全に分化したタイプ1となっていた．

αR線椎であった（図4）．αR線椎の特徴は時を赤筋，白筋とも30日日まで核は中心にあり，ま経るに従いうすれ，30日目にはほぼαW線経と少だやや好塩基性の胞体があり，再生線経との同定

数のαR線経に分化していた．PLDは正常でも中は可能であった．アルカリフオスファターゼ染色

心核の多い筋であるので他の筋のように中心核ははヒトと異なり再生線経をみるのには役立たなか再生の指標とはなり得なかった．赤筋（ALD）はった．

晴乳動物と同じく，再生筋はATPase染色でタイ

図3

注射後7日目のラット再生筋．好塩基性の胞体，大型の核，核小体が著明・筋線維径は右端の正常筋の半分位まで回復している．HE染色，×440．

ー17−図4 注射後7日目鶏後広背筋（白筋）．再生筋は大型のdifor−
mazan頼粒がありαR線経である．NADH−TR染色．
× 220・

プ2C反応を示し，30El日頃にはほぼ分化したタ壊，Z線からはじまる筋蛋白の崩壊，それに続く会

イプ1線維（NADH−TR染色でβR線維）となっていたが，まだ少数のタイプ2C線経があり，ラ

食反応，再生である．塩酸ブビバカインによる実ット赤筋より分化は遅かった．鶏の自筋と赤筋のに広く利用しうるよい方法と思われた．

験的ミオパテーの作成は治療実験，再生実験など
筋線経の壊死に続いて塩酸ブビバカイン注では再生線経の特徴を図5に示した．

よい再生像が得られた．これは筋線経が壊死に陥考る時，筋衛星細胞，末梢神経，多分神経筋接合部

察

塩酸ブビバカインによる筋崩壊過程は筋ジストに損傷が加わらないため，速で均一な個体差のほ

ロフィーのそれと相似ている点が多い．すなわち

とんどない再現性ある再生像が得られるのであろ

注射後まもなくみられる過収縮の状態（opaqueうと考えられた．これは筋挫滅，切断，冷却，加fiber），Ca＋＋染色陽性線経の出現，筋形質膜の破熱など物理的傷害による再生実験と大きく異なる点である．

且♪（W柑to）

筋再生の速さは驚くべきものがある．壊死後7ALD（rod）

日目には筋線維径は対照の半分近くにもなり，15

B a SOP hilia

日目では筋線維径に関してはほぼ対照と等しくな

C e ntra l N

−
−
−
嘘
2A

4

7

図5

1015

20

30D

A crid in0 0

る．筋線経の分化も自筋では15日目，赤筋でも−20〜30日目には完了する．すなわち形態学的には

AchE
』−
NADH−
TR 「
lJ
ATPaSe
− 全
く
4

7

101さ

1月以内にほぼ完全に再生が完成するといえる．
再生筋は種々の組織学的，組織化学的特徴があ20｝OPる．再生筋を同定することはHE染色でもそり特

鶏骨格筋の再生線経の組織化学的特徴．下の数字は注射後の日数．

徴をつかめばあまり困難ではない．すなわち好塩−18−

基性の胞体，中心核，明瞭な核小体などである．

今回の実験では筋線推径がほぼ対照と等しくなっ

ment with alocal anesthetic，bupivacaine

た時点でも前記の特徴はみられた．ラットなど哺（Marcaine）．J．Anat．，107：547，1970．

乳動物ではヒト再生筋をみるのと同じく4），AT P

2）Schultz，E．＆Lipton，B．H．：The effect ofase染色でタイ702C線維からの分イヒを追求する

Marcaine of muscle and non−muSCle cellsin

ことが，また鶏では白筋はNADHLTRによる

vitro．Anat．Rec．，191：351，1978．

αRとαW線経の関係を，赤筋ではATPase染色3）Nonaka，Ⅰ．＆Sugita，H．：Intracytoplasmic

が，再生筋の同定および分化の状態を数量化する

VaCuOlesinαW fibersofdystrophicchicken

ことに役立つと思われた．

muscle以上のような基礎的資料が今後筋ジストロフィ−Probable early pathologic event

initiates massive fiber necrosis．Acta Neu−

ー症における再生の問題点についての研究の一助にでもなればと報告した．

ropathol．（Berl．），55：173，1981．
4）Nonaka，L Takagi，A．＆Sugita，H．：The
Significance of type文

献

2c muscle fibersin

Duchenne muscular dystrophy．Muscle

1）Benoit，P．W．＆Belt，W．D．：Destructionand
regeneration of skeletal muscle after treat・ー19−

Nerve，4二326，1981．

2）筋ジストロフィーチキン骨格筋の修復能
中 村 晴 臣1
研究協力着

日

金 藤 大 三＊

高

田

邦

安＊

田

中

順

一＊

3日目には健常部に近く縦に断裂した細い筋線経

的

発育期の筋ジストロフィーチキン（Dyチキン）
骨格筋では，筋線椎の変性に伴って衛星細胞の増が明瞭になり，明るい筋核が増加し，線維間に線殖，その活性化，myOblast形成などがみられ，筋のspindle cellが線維方向に配列し，明るい核と線経の再生を示唆する所見がえられた（Yoritaet

2〜3ケの核小体とが明瞭であり，その間に貪食alリ1980）1）．本研究に於ては，受傷後の筋線経，細胞が散在する．電顕的にみれば，軽度の変性に陥った筋線経を取巻き，衛星細胞が増加している．

特に衛星細胞の変化を検索し，Dyチキンにおける筋再生能を検討することを目的とする．

維芽細胞が増殖する．壊死部に近い所では，多数

4〜5日目の中間部では，光顕的に明るい筋核が多数連なる小径線椎が明らかとなり，線維方向

ふ化後3週日のDyチキン，対照チキン夫々21に走る細線経もみられ，myOtubeと考えられる像を認める．電顕的には傷害筋，幼君筋，あるいは羽を用い両側の後広背筋（PLD）を露出し，その健常筋線経に接して衛星細胞が増加すると共に，

筋腹に2分間ドライアイスを当ててcoldinjury
を加え，術後1E1−7日間に亙って，連日夫々3

衛星細月包，myOblast，あるいはmyotubeが互いに重なり合ってbasement membrane下に認めら

方法羽ずつのPLDを摘出した．右側PLDはSusa氏

れる（図1，2）．それらの細胞間，あるいはmyo−

液固定の後にH−E及びtrichrome染色標本を作り，光顕的検索に供し，左側PLDは0．1M caco−

tubeと幼君筋線推相互の間には向い合ったunit

dylate緩衝液加2．5％glutaraldehyde（pH7．3）固のbridge形成など，細胞の融合を示唆する如き像

定の後にlantanum染色（Revel＆ Karnovsky法）を施し，超薄切片に酢酸ウラン・鉛塩の重染がみられる（図3）．これらの衛星細胞，myOblast

色を加え，電顕的に検索した．

membraneの不明瞭化，またはその消失，月包体間及びmyotubeの核は明るく核小体は明瞭で，胞体はribosome，小胞体，mitochondriaなどの微小器官に富む．衛星細胞，myOblastのなかには100A

結filamentの著しく増加したものもみられた．明ら果

Dyチキンについて述べると，初日の壊死部はかな横紋をもつ幼若な小径線経も少なからずみら多数の組織球を含む単核細胞，多形核白血球，好れ，筋核は明るく核周囲の胞体にはpolysomeも少なくない（図4）．小径線維間には線維芽細胞が酸球と，少数の線維芽細胞で満され2日目には硝子化した填死線経と健常筋との問（中間部）に多い．

合食細胞と多数のspindle cellがみられ，健首筋

6日及び7日目では，光顕で横紋を有する小径
線経が増加し，核小体の目立つ筋核を含む．幼若に近い部では縦に断裂した細い筋線経がみられ，明瞭な核小体をもつ明るい筋核が含まれている．
＊鳥取大学医学部脳研究施設手中経病理

筋線推，小径筋線経は多くの衛星細胞を伴う（図●5）．
以上のDyチキンに関する所見には，対照チキンと比較して明確な差はみられなかった．
−20−

図1

図2

受像後5日目．変性した筋線維（M）の基底膜（矢頭）下に多数の衛星細胞（S）とmyotube（T）をみる．ma
会食細胞，f：線維芽細胞，ランタナム染色，×2，000．

受傷後4日目．幼君筋線経にそってみられるmyotube（T）と衛星細胞（S）．矢頭：基底膜，f：線推芽細胞．×4，000．
−21−

図3

受傷後4日目．幼若筋線推（M）とmyotube胞体（T）の向い合った細胞膜は，所々不明瞭となり，胞体のbrid，ge形成（矢頭）をみる．Myotubeと衛星細胞（S）の境は明瞭．×10，000．

図4

受傷後4日目．幼若筋線経の筋核には核小体とinterchr−
omatinが目立ち，heterochromatinは乏しい．胞体にはribosome，pOlysomeが多い．f：線維芽細胞．×6，000・
−22−

図5

考

受傷後7日目．中央の小径筋線経には多数の衛星細胞胞体（S）をみる．ランタナム染色，×4，000．

察

activatedsatellitecellの形態をとる．NichoIsら筋線経の再生が衛星細胞の増殖，分化によるも（1979）3）の示すような100Afilamentに富む衛星のであり，そのpotentialcellが局所組織の構成成分に由来することは，Reznik（1970）2）の筋損傷実細胞も認められている．衛星細胞の分裂像は，今験からも知られている．Dyチキンに筋線維再生

傷後1〜2日目の電顕検索が不充分であった為と像の認められることはすでに明らかであるが，微考えられる．

細構造の面からは，myOblastあるいはmyotube
形成の段階までであり，次の段階，即ち細胞融合，

myoblast，myOtube及び幼若筋線推間の融合像で回の検討では全く見出しえなかったが，恐らく受

本実験に於いて明らかにされた点の一つは，幼君筋線維形成の証明は必ずしも明確にはされてある．Myogeneticcells間の融ノ飢こついては，in

いない．また，再生された筋線経が如何なる経過

vityvの実験（Shimada，19714）；Liptonら，19725））を示すかも，充分には判明していない．

で明示されているが，今回の玩∴正和の像では，今回の実験で，受傷後早期にみられる変化の一主としてunit membraneの不明瞭化と胞体間のつは衛星細胞の増加であり，変性線維のみならず，

bridge形成が認められ，junction形成はみられな
かった．Unitmembrane消失に次いで塵ずると考比較的健常な筋線経に於ても認められた．Dryiceによるcoldinjuryでは，受傷部と健常部とを画然と分けることは出来ない．比較的良く横紋が残っている筋線椎にもmildな傷害が及び，衛星細胞

えられる胞体内客の移動を示す像も，認めえなかった．
幼若筋線経の形成は，受傷4日目以降には認め増殖を来したものと思われる．増加した衛星細胞

られ，heterochromatinの少ない明るい核，胞体内はいずれも明るい核をもち，胞体はribsomeに富polysomeの存在など，活発な代謝が存在することを示す像が明らかである．幼若筋線経のbaseTみ，細胞膜縁にはvesiclesが増加し，いわゆる−23一

ment membraneの下には，活性化した衛星細胞期のDyチキン骨格筋には，筋再生能が存在する

あるいはmyoblastがみられ，以後の細胞分化，融ものと考えられる．

合の過程と，筋線経の発育とを想像させるものではあるが，7日以降の変化は今後の問題である．

文

この幼君筋線経が正常筋同様に成長を続けうるか

献1）Yorita，T．，Nakamura，H．＆Nonaka，Ⅰ．：

否かは，ジストロフィー筋と正常筋とを分ける点

Satellitecellsandmuscleregenerationinthe

であろう．

developing dystrophic chicken．Exper．Neu・

今回示した変化は，受傷に基づく変化のうち，

ro1．，70：567，1980．

中間部にみられたものであるが，中間部の病変に

2）Reznik，M．：Satellite cells，myOblasts，andは，光顕で容易に判明する如く，部位によってか

Skeletalmuscleregeneration，inRegeneration

なりの程度の差がみられる．特に健常部に近い部

Of Striated Muscle，and Myogenesis ed．by

位では，横紋の消失，筋核の増加と，筋線経の縦Mauro，A．，Shafiq，S．A．＆Milhorat，A．T．，

裂であり，特に細く縦裂された筋線経の快復は，

ExcerptaMedica，Amsterdam，1970，p．133．

再生というよりもむしろ修復と考えるべきもので

3）NichoIs，J．R．＆Shafiq，S．A．：Morphological

ある．今回の実験は再生像を把握すべく努力した

Changesin satellite cellsin regeneratingのであるが，真の再生像と修復像とを完全に分馳

pectoralis muscle of the chicken，in Muscle

することは，必ずしも容易ではなく，多数の検索

Regenerationed．byMauro，A．，RavenPress，部位を選び，比較する必要があると思われる．

New York，1979，p．239．
4）Shimada，Y．：Electron microscope obser・

総括Vations on the fusion of chick myoblastsin

Coldinjury後7日までのPLDの所見においては，活性化した衛星細胞の増加，myOblast，myO−tubeと小径線雄二の明らかな出現などが認められると共に，細胞間融合を示唆する所見もみられ，

Viln．J．Cell Bio1．，48：128，1971．
5）Lipton，B．H．＆Konigsberg，Ⅰ．R．：A fine・
StruCturalanalysisofthefusionofmyogenic
Cells．J．Cell Bio1．，53：348，1972．

その変化には対照との間に差はない．従って発育ー24−

3）培養鶏胚骨格筋と交感神経の相互関係−電顕的および組織化学的検討一一・．一一

≠家

研究協力者

小

麿＊

趨

林

高

義＊

松

本

答

秋＊

我々は，正常及び筋ジストロフィー鶏胚培養骨鉛・酢酸ウラニール二重染色し，日立HS・9型電格筋に対し交感神経線経がcholinergiCの終末を持つことをすでに報告しているが1）2），今回は，骨顕で観察した．CA染色は中村らのFGS法を用格筋に接触している交感神経線経の終末の微細構いた．CA及びAChE染色の単独及び同時染色をい，AChE染色は中村らのルベアン酸増強法を用造をみる目的で走査及び透過電顕的観察を行った．

2−4Hごとに4週まで連続的に行い，その後9更に，骨格筋と交感神経との相互関係をみる目的

週まで1週ごとに染色し，継続的に蛍光及び可視で，CateCholamine（CAと略），aChetylcholineste−

光にて観察（Nikon Fluophot，Fアーム，VD鏡基セット）を行った．

rase（AChEと略）の単独及び同時染色を継時的に行い，CA及びAChE含有細胞，CA陽性線維及び結筋腹上のAChE活性部位との関係を検討した．

果

Ⅰ 走査電顕による観察
実験材料および方法

培養2週目の走査電昆引こよる観察では，交感神正常鶏胚（WhiteLeghorn）11〜12Ⅰ］目大胸筋を無菌的に取り出し，培養液中で細切し，三ラー経線経が，筋の上を乗り越えている像，筋細胞にゲン塗布カバース））ップにexplant L，2日後
13−14日日頸部交感神経節を同様にとり出し，周の神経終末が膨みを持っておわっている像（図1

密着し伴走している像と共に，筋細胞に接触しそ−A），あるいは，筋細胞に接触した終末からいくつ

囲の結合織を充分とり除き単独培養の場合は1枚のカバースリップに1つずつ，併置培養の場合はか枝分かれして筋細胞上に扇状に終っている像

大胸筋より約2〜3mm離してexplantした．培ⅠⅠ透過電顕による観察

養液は，Eagle，sMEMwithHank
馬血清15％，embryo extract（図1−B）も認められた．

ssalts80％，

培養3週目の透過電顕による観察では，図2の5％，7S，NGF

如く筋細胞に接して，直径約330〜460Aのclear

20−25JLg／dl，penicillin G200il／ml（glucose6

vesicleを有する交感神経終末が認められた．

g／1含有，NaHC03でpHを調整）を使用し，週2−3回培養液を交換した．培養約2週日の標本

ⅠlI 組織化学的所見を3％グルタールアルデヒドで5分間固定，1％（1）交感神経節単独培養〈交感神経節細胞〉交感神経節をexplant後，オスミウム酸で後国定，脱水処理後，臨界点乾燥，CAの極めて強レナ蛍光を発する神経細月包（図3−B

白金パラジウム蒸着，日立S430型走査電顕で観察の▼印，IF neuronと略）は，神経節のexplantを行った．また，培養約3週目の標本を同様に固中に散在性，あるいはところどころ小集団となっ

定，脱水処理後epon−aralditeに包埋し，ク土ン酸て存在し，数本の強い蛍光を有するaxonを出す．
このIFneuronは，7週以上の培養でも，培養初期と同様に極めて強い蛍光を発し，培養の全過程＊東京医科歯科大学医学部神経内科

一25−

図1

走査電顕写真骨格筋14日目．交感神経節12日日併置培養．
A 交感神経線経が筋細胞に接触し，神経終末は膨みを持っておわっている．右下は，左の神経終末の拡大写真（barは各々，5JLm，1JLm）
B 交感神経線経が，筋細胞に接触し，いくつか枝分かれして，筋細胞上に扇状に終っている．bar＝1JLm・

図2

透過電顕写真骨格筋21日呂．交感神経節19日目併置培養．
筋細胞に】要して，直径約330−460Åのclearvesicleを有する交感神経終末を認める．bar＝1ノ′m．

−26−

を通じて，明らかなAChE活性は認められなかっに減弱し，4週目の培養で淡い蛍光を有する細胞

た．また，一部に，このIF neuronから出るCA
陽性線経が，AChE強活性を示す神経細胞集団をが認められることもあるが，多くは1カ月以上の長期培養では，はっきりした蛍光が認められなく取り囲むようにして終っている像も観察された．

なった．一方，AChE強活性を示す細胞が，培養

これは筋との併置培養の場合も同様であった（図1週頃より集団として認められるようになり，43−C）．一方，AChE活性は，培養初期には細胞質

週以上の培養では，残存する交感神経細胞の多くに極めて強い活性を有する細胞から，軽度〜中等がAChE強活性を示すようになった．

度の活性を有する細胞が，eXplant内に多数散在性に存在する．そのうちAChE強活性を有する細神経線経は，eXplantより放射状に伸び出すが，2く交感神経線維〉explant後，24時間以内に交感胞（図3−Aの｛印）は，CA陽性のはっきりし日目のCA染色では，交感神経線経の蛍光は比較た蛍光を認めなかった（図3−B）．一方，培養初期には，淡い蛍光を有し，軽度〜中等度のAChE活的弱い．しかし，3〜4日日頃より，神経線経の性を示す神経細胞が多く存在する（図3の↑印）

強い蛍光を示すようになる．その後，交感神経線が，この神経細胞の蛍光は培養の経過と共に次第

経は放射」犬，網目状に伸び続け，7週目の培養で

図3

末端及び途中でvaricoseを有する部分を中心にCA，AChE同時染色による顕微鏡写真
A，B．交感神経節単独培養10日目．A．AChE染色．B．
同一部位のCA染色の螢光顕微鏡写真．▼：強い螢光を発する神経細胞で，AChE染色陰性．■：AChE強活性を示す神経細胞で，CA染色陰性．↑：弱いCAの螢光を発し，中程度〜軽度にAChE活性を示す神経細胞．A，
B．×190．

C．筋9日員，交感神経節7日目併置培養．AChE強活性を示す神経細胞集団を取り囲むように，CA陽性神経
細胞，神経線経が存在する．CA−AChE同時染色を可視光と螢光を同時に照射して撮影．×180．
一27−も，末梢のvaricose部ではかなり強い蛍光を認

explantに向かって伸び出し，1週後には，ht．直め，また，強拡大でよく観察すると，網目状に伸explant内にCA陽性線経が観察される．史にlび出している神経線経にも，はっきりした蛍光が〜2週目には，筋のexplantより放射状に伸びてかなり認められるが，培養1〜2週目に比べ，全いる筋細胞に沿ってCA陽性線経が伸び続ける作も観察された．

体としては蛍光は減弱していく．
（2）交感神経節と骨格筋との併置培養

一方，CA陽性の神経線経は，筋細胞に接触し，〈交感神経節細胞〉 交感神経節単独培養と同様

Varicoseを作り更にのび続けるもの，全く vari−に，IF neuronは7週以上の培養でも，いくつか小集団となり存在し，はっきりしたAChE活性を

COSeをつくらず横走，斜走するものなど様々な像認めなかった．AChE強活性を示す細胞は，培養

養約1週頃より観察されるが，CA，AChE同時染
色によりCA陽性神経線経と筋腹のAChE活性

初期にも存在し，それは明らかなCA蛍光を示さない．培養初期に淡い蛍光を有する神経細胞は，が観察された（図4）．筋腹上のAChE活性は，培培養の経過と共に蛍光を減じAChE活性が強くとの関係をみると，神経節と筋のexplantの間に形成されるbridge部で，CA陽性線推がからみつなった．しかし，4週の培養でも淡い蛍光を有す

くように走っている筋細胞には全くる細胞が存在する場合もあり，交感神経節単独培のない筋細胞が多く，一方，AChE活性が筋腹上養の場合と明らかな差は認めなかった．

にmultipleに認められる筋細胞ではCA陽性神

く交感神経線維〉 筋との併置培養側以外の交感

AChE活性

神経線経は，その末梢に強い蛍光を有し，神経線

経線経が全く存在しない傾向があった（図5）．また，極めて少数であるが，AChE活性部位におわ

経もはっきりした蛍光を示す．7週以上の長期培っていると思われるCA陽性線経も観察された

養では，CA陽性線経は，全体としては蛍光を減弱（図5．C，D）．Bridge部のCA陽性神経線経は，するが，fineなCA陽性線経がかなり認められる．

交感神経節のexplantの他の部分から伸びている

一方，筋との併置培養側では，両explantの伸び

神経線経に比べ蛍光は弱い傾向がある．しかし，出した細胞が接触した部分では，一時的に神経線

1カ月以上の長期培養でも，弱いCA蛍光を持つ経と，筋管細胞の伸長が抑制される像がみられる

fineな交感神経線経は，主としてAChE活性のなが，その後，CAの蛍光を有する神経線経が，筋のい筋線経に沿ってかなり存在しており，時にvari−

図4

CA−AChE同時染色による顕微鏡写真
筋培養9日目，交感神経節7日目併置培養．
A．CA染色螢光顕微鏡写真．筋細胞（M）に接触し，Varicoseをつく りのび続ける線維あるいは横走，斜走するCA陽性交感神経線経を認める．×400．
B．同一部位のAChE染色の可視光による観察．全くAChE活性を認めない．×400．

−28一

図5

CA−AChE同時染色による顕微鏡写真
A，B．筋46日目，交感神経節44日日併置培養．A．CA
染色・B．AChE染色・Bで筋腹にAChE活性をmultipleに認めるが，Aの同一部位の螢光顕微鏡による観察では，CAは陰性である．A，B．×340．
C，D．筋30日目，交感神経節28日日併置培養．A．CA染色，B．AChE染色．CでCA陽性神経線維（▽印）の走っている筋細胞には，DでみるとAChE陰性である．
DでAChE活性を有する筋腹の部位に終わっていると思われるCA陽性神経線経を認める（⇒印）C，D．
×360．

coseをつくっている像も観察された．また，筋のており同様に筋側に分化した構造を認めていない．

explantより放射状に伸びている筋細胞に沿って
CA陽性神経線経が走り，その筋細胞の端より更

今回の我々の観察でも，交感神経終末と筋との間に先に伸び続けていく像も観察された．

にpreまたはpost synaptic thickening，pOSt
Synapticinfoldingを認めていないが，これが交感神経終末と骨格筋のinnervationの特徴であるの考察培養下で，Landis（1976）3），Hillら（1976）4）

か，まだ未熟のためであるのか更に長期培養により検討中である．

は，交感神経と心筋あるいは毛様体筋とのinner−

Pattersonは，ある種の非神経細胞の存在によvationを電顕的に検討しているが，今まで骨格筋って，交感神経細胞の神経伝達物質の生成に可塑とのinnervationを電顕的に観察した報告はない．

性が生じると考えている5）が，我々の実験では，強Landisは，心筋細胞に接しあるいは多少艶れて，い蛍光を有し，明らかなAChE活性を有しない細synaptic vesicleを有する神経終末を認めているが，心筋細胞に特異に分化した構造を認めず，Hill

胞，はっきりした蛍光を認めずAChE強活性の神らの毛様体筋では，神経と筋とは300mm以上離れの初期及び長期培養でも存在し，環境による変化−29−

経細胞（おそらくcholinergic neuron）は，培養

を受けず，その中間の神経細胞がCA蛍光を減じ，

AChE活性が強くなる傾向を認めた．

AChE活性が強くなることから，この細胞群が変文

献化を生じると思われるが，今回のexplantによる実験では，神経細胞のCA，AChE染色で，神経節

1）小林高義：培養鶏胚骨格筋に対する交感神経のの単独と筋との併置培養で明らかな相違を認めな影響に関する実験的研究．信州医誌，28：620，

かった．しかし，神経節と筋のexplantの間に形1980．

成されるbridge部では，初期に無数のCA陽性線2）小林高義，栢招勝彦，柳沢信夫，ほか：正常及経が存在するにもかかわらず，長期培養では，び筋ジストロフィーチキン培養骨格筋に対する

AChE活性を示す筋細胞上にはCA陽性線経はほ交感神経の影響．自律神経，18：160，1981．

とんど認められず，CA陽性線経がcholine作動

3）Landis，S．C．：Ratsympatheticneuronsand

性線経に変換したことが考えられるが，培養初期

Cardiacmyocytesdeveloplnginmicroculture−にもcholinergicneuronはあり，それより出てい

S：Correlationofthefinestructureofendings

るcholine作動性線椎がinnervateしている可能性も考えられる．更に分敵培養などの方法で検討

With neurotransmitter functionin single

を加えていきたいと思う．

4220，1976．

neurons．Proc．Natl．Acad．Sci．USA，73：

4）Hill，C．E．，Purves，R．D．，et al．：Specificity

結論

Ofinnervation ofiris musculature by sym−1．培養下で，交感神経線経が骨格筋にcholiner−

pathetic nerve fibers

intissue culture．

gicterminalを持つことを組織化学的，電顕的に示した．

5）patterson，P．H．：Environmental deter−

2．単独及び筋との併置培養のいずれでも，交感

mination of automatic neurotransmitter

神経節内に極めて強い蛍光を有するneuron，

functions．Ann．Rev．Neurosci．，1：1，

AChE強活性を示すneuronは長期培養でも変1978．

化しないが，その中間のneuronは，蛍光を減じ−30−

Pflugers Arch．，361：127，1976．

4）培養ジストロフィーチキン筋細胞のCPKアイソザイム

宮 武
研究協力者

富

谷

正＊

信

行＊

湯

浅

龍

彦＊

は じ め にいSomerらのfluorescence法1）に準じておこな

筋ジストロフィー鶏胸筋は，組織化学的，さらった．即ち，酵素液を氷水による濯流下で，0．8％に生化学的に，胎児型の特徴を示すことが知られアガロース電気泳動（250mV，25分間）した後，ている．我々は，このような変化が筋細胞国有のCPKの基質を含むアガロースを重層し，37℃40分

異常によるのか否かを明らかにする目的で，ジス間静置して反応をおこなわせた．反応の結果生じトロフィー鶏胸筋の組織培養を行ない，筋発生初

たNADHの蛍光による泳動像を，島津二波長ク

期におけるmaturationの過程について，対照とロマトスキャナーCS910にてスキャンし，クロマ比較検討した．CPKのアイソザイムは培養下におトパックCRIAにて処理し，各分画の割合（％）

けるmyogenesisの際に，BB型からMB型，さらにMM型へと分化することが知られている．そこを求めた．基質液は，フジサワメディカルサプラ

で筋のmaturationの過程をこの酵素のアイソザ液からクレアチンリン酸のみ除いた液を作製し，イムを指標として観察した．

同様の手順にて泳動，発色をおこなったが，蛍光イ社のUV用CPK測定試薬を用いた．なお，基質はほとんど得られず，ミオキナーゼによる影響は，
方

ほとんど無視しうる程度と考えられた．

法

培養：筋ジス鶏，および1吋照鶏12−13日胚の胸結筋を実体顕微鏡下に無菌的にとり出し，細切，果

培養期間中に，実体顕微鏡下の観察では，形態0．25％トリプシンにて370C20分間消化後，ガーゼ6
枚を重ねたフィルターにてろ過し，細胞塊を除い学的に，筋芽細胞のfusionの開始時期，およびそて，浮遊単核細胞を得た．細胞数調整後，0．1％ゼの後の筋管細胞の発育には，筋ジス鶏筋と対照鶏ラチン塗布culture dish（60mm）に2×106個ず筋の問に差は認められなかった．CPK総括性の推つまき，培養を行なった．培養液（Eagle，sMEM

移では，培養3日，および5日目で，筋ジス鶏筋
でやや低値の傾向がみられたが，推計学上有意のwith Hanks

salts80％，馬血清15％，Embryonic

Extruct（鶏胚9日日）5％，PenicillinG200units／

差は認められなかった．
CPKアイソザイムのBB型の％は，培養3日目ml）は正確に2mlずつ加え，2日に1回培養液交から漸減する傾向にあったが，筋ジス鶏筋では，換をおこなった．
CPKアイソザイム：培養3日，5日，7日，14

3日，5日に，対照と比べて有意の高値を示した．

日目にrubber policemanにて細胞を10mMl）ン

MB型の％は，5日以降に筋ジス鶏筋にて有意の酸緩衝液（pH7．2）1ml中にかき取り，homo・

高値を示した．逆にMM型の％は，5日，7日にgenate，SOnicateしたものを酵素液とした．CPKて，筋ジス鶏筋は，有意の低値を示した（表1）．
培養7日目，および14日目に培養上清中のCPK

はWakoのCPKキット，たん白量はLowry法
により測定した．CPKアイソザイムは，感度の高を測定した．14日日筋ジス鶏筋培養上清にて，対照に比べ，CPKが有意の高値を示した．

＊新潟大学脳研究所神経内科

−31−

表1

B B 型
筋ジス
3 日
n ＝4
5 日

れのある可能性を示唆している．なお，堀田らは，

培養筋ジス鶏筋のCPKアイソザイム

％

対

M B 型
筋 ジス

照

対

照

M M 型
靖 ジス

％

対

42土 5

％
％
29 土6 ● 28 ± 5

27 土15％36土 7

26 ±8 ‥ 37 土 5

29土 7 ●● 26 土 8

44 士11●‥27土 622 土 633 ± 625土 6 ●暮 40 土10

53± 6 ●●

24± 6

30 土113 1土 1

19± 6 ● 44 土 6

52 ± 829 士 1

筋ジス鶏myotome培養をおこない，静止膜電位が培養初期から対照より浅く，かつその後の発達

照％も遅れると報告しており，maturationの遅れは細42 土18

胞膜にも及んでいる可能性がある．また，Ionas−
escuら6），Youngら7）は，筋ジス鶏培養筋細胞に

n ＝11
7 日
n ＝10
14 日
n ＝5

て，たん白代謝の高まっていることを指摘しており，今後，細胞全体のmaturationが遅れているの●●●●か否か，更に筋崩壊との関連などについて検討する必要がある．

p＜0．05p＜0．01p＜0．001

ま

考

と

め

筋ジストロフィーチキン培養筋細胞では，対照察

Weinstockら2）は，培養筋ジス鶏筋細胞のCPK筋に比べて，培養初期にBB型が，その後はMB

アイソザイムの検索をおこない，3週から7過に型が多く，筋管細胞のmaturationに遅れのある

かけて，対照筋に比べてMB型の割合が高いと報ことが示唆された．

告している．人Duchenne型筋ジス培養筋においても，Ionasescuら3）が14日

文

目に，MB，BB型

献が，またFranklinら4）も，十分に筋管細胞の発育1）Somer，H．＆Konttinen，A．：Demonstration

した段階で，BB型の割合が高いと報告している．

of creatine kinaseisoenzymes by fluore−

しかし，myOgeneSisのどの時点から異常が出現

scencetechnique．Clin．Chim．Acta，40：133，

してくるかについては，未だ十分な検討がなされていない．我々は，培養の比較的初期におけるア

1972．

2）Weinstock，I．M．，Jones，K．B．，et al．：

イソザイムの推移を検討し，筋ジス鶏培養筋では，Developmentofnormalanddystrophicchick

すでに培養3日から5日目までBB型が，また5musclein tissue culture；Production and日目以降にMB型の割合が高値を示し，MM型のrelease of creatine kinase and acetylcholin−

少ないことを見出した．この時点では，少なくとesterase．J．Neurol．Sci．，39：71，1978．

も位相差顕微鏡下の観察では，形態学上，筋の変性を示す所見のみられないことから，我々は，培

3）Ionasescu，V．，Ionasescu，R．etal．：Alteration

養筋ジス鶏筋では，そのmyogenesisの過程で，CPKのB型からM型への移行に遅れがあると考えた．、

in creatine kinasein fresh muscle and cell
culturesin Duchenne dystrophy．Ann．
Neuro1．，9：394，1981．
4）Franklin，G．Ⅰ．，Cavanagh，N．P．C・，et al・：埜中らは，筋ジス鶏胸筋を組織化学的に検索し，Creatine kinaseisoenzymesin cultured

αR線経からαW線経への変換の遅れを指摘しhuman muscle cells；Ⅰ．Comparison ofており，また，筋構造たん白に関しても，武田がDuchenne muscular dystrophy

トロポミオシン，大日方らがトロポニンなどが，myopathic and neurogenic diseases・Clin・with other

Chim．Acta，115：179，1981．

筋ジス鶏胸筋では胎児型を示すと報告している．
Kubyら5）は，Duchenne型筋ジストロフィー症の生化学的異常は，胎児型たん白のswitchoffの異5）Jacobs，H．K．＆Kuby，S・A・：Studies on

常という仮説を提唱しており，我々の検討結果は，

steady state kinetics ofthe normal human

筋ジス鶏培養筋細胞においても，maturationの遅ATP−Creatine−32−

muscular dystrophy；A comparison of thetransphosphorylaseisoenzy一mes（Creatinekinase）withthosefromtissues
Of Duchenne muscular dystrophy．J．Biol．
Chem．，255：8477，1980．

1eupeptine，pepStatineanddiphenylhydantoin．

J．Neurol．Sci．，46：157，1980．
7）Young，R．B．，McConnell，D．G．，et al．：

6）Ionasescu，Ⅴ．，Ionasescu，R．，et al．：Altered

Normal and dystrophic embryonic chicken

protein synthesis and creatine kinasein

pectoralis muscle cultures；I．Celldifferen−breast muscle cell cultures from dystrophic

tiation，prOteinsynthesis，andenzymelevels．

Chick embryos；Correctiveinfluence of

Muscle＆Nerve，4：117，1981．

一33−

5）筋ジストロフィー症の発症機序に関する研究
一丁ジストロフィーチキンのSuperoxide
dismutaseについて−

水

研究協力者

野

美

城 下

邦＊
裕＊

金

子

仁＊

近年筋ジストロフィー症に関する知見の集積に週目，2週目，4週目，4ケ月目に4羽宛断頭屠

は目ざましいものがあるが，筋細胞変性の発症機序には尚不明の点が少なくない．Parkら1）は4ケ

殺，浅胸筋をとりだし，その一部をDounece型ホ

月齢のジストロフィーチキンにて，胸筋筋菜のpH7・8にてホモジュナイズし，その30，000g上清

モジュナイザ一にて10倍量の0．05M燐酸緩衝液，SuperOXide dismutase，perOXidase，Catalase活を酵素源として用いた．Superoxidedismutaseの性が上昇している一万，0Xidantsに敏感なglyce−

測定法はMisra ＆ Fridovich3）の方法に従い，raldehyde3−phosphatedehydrogenaseが著明にSODが，02￣によるepinephrineのautoxidation

低下している点から，radicalやperoxideによる障害を筋細胞変性の発症機序のひとつにあげていを阻害する事を利用した方法を用いた．反応はる．Superoxide dismutase（以下SODと略）は0．05M燐酸緩衝液pH7．8の中で行い，02−の発生源としてⅩanthine−Xanthineoxidase系を用いた．

20㌻＋2H＋→H202＋02の反応を触媒する酵素で，Epinephrineのautoxidationによるadrenoch−02￣は酸素分子が一電子還元を受けて生ずるrad●romの産生はSun and Zigman4）の変法に基づき，320nmの吸光度をキュベット中で追跡する方法

icalで，非常に反応性に富み，細胞成分を非特異的に酸化して細胞障害をおこす．SODはこの反応性によった．本法による酵素活性の表示法はepine−phrineのautoxidationを50％抑制する酵素量をの高いradicalを代謝する酵素で細胞を02−の毒性から守る上で重要な酵素である2）．一方この反応により生ずる過酸化水素（H202）も反応性の高1単位と定め，蛋白1mg当り又は組織1g当り
何単位の酵素が含まれているという表示法を行う．

いradicalのひとつで，細胞障害をおこし得る．そ又哺乳類のSODには銅亜鉛を含むCu−Zn SOD

こで我々はまずこの02−のジストロフィー症の細（SOD−1）とマンガンを含むMnSOD（SOD−2）

胞変性過程への関与の有無を検討しようと考え，と最低2つのisozymeのある事が知られている．

ジストロフィーチキンを用い，SODの発育に伴うそしてSOD−1はcyanideにより不活化を受ける

経時的変化を検討した．02−は寿命がきわめて短のに対し，SOD−2はcyanideに抵抗性を示す事がくこれを直接測定する事は困雉であるので，通常SODが測定される．

知られているので4），最初KCNを含まないmedi＿
umでtotal SODを測定し，次いでKCNを含む
mediumにてSOD−2を測定し，●その差を以って方法

SOD−1とした．即ちtotalSOD測定時のmedium

ジストロフィーチキン（1ine413）及びその対照

は酵素源50〜200人，（line412）の受精卵を入手，醇化後第1日目，1

O．2mM，epinephrineO．3mMおよび適当に稀釈し＊自治医科大学神経内科

0．05M燐酸緩衝液pH7．8にて2．Omlに揃えた．尚全

EDTAo．1mM，Ⅹanthine

たXanthine−0Xidaseを含み，tOtal volume

−34−

は

ての試薬は同じ緩衝液に溶解した．Xanthine−0Ⅹ−

ジストロフィーの方が重く，上清成分の総蛋白濃

idaseは酵素源を含まないサンプルでのepineph−

度はジストロフィーの方が有意に低い．そこでrineのautoxidationによる320nmの吸光度の変SODの活性表示は，蛋白当りの比活性と，湿重量化が0．02D．0．／分になる様に稀釈した．SOD−2

当りの稔活性を併記して比較検討する事にした．

を測定する時はKCNを2mMになる様に加えた．

図2はtotalSOD活性の経時的変化を，左に湿重測定は恒温セル付H立分光光度計−139にて行い，量当りの総活性，右に蛋白当りの比活性を併せて温度は300に設定し，Xanthine−OXidaseを含まな示した．それによると湿重量当りの総括性は対照

いmixtureを300に4分間，preincubateした後，では1週目に低いピークを示して以後漸減するの

Xanthine−0Xidaseを加えて反応を開始させ，最初に対し，ジストロフィーチキンでは4週目迄著増の4分間の吸光度の変化を測定した．この条件にし，4ケ月には減少するが，それでも対月別こ比して，吸光度の変化は5分以上直線を示した．Blankて2倍近い活性を示し，2週日，4週目，4ケ月

としては，酵素壬原を1000に5分煮沸したものを30，目の値は対照に比し有意に活性が高い．これに対000gにて10分間遠心した上清を用いて同様に吸し蛋白当りの比活性で見ると，対照では1週目以光度の変化を測定し，このblankに対しepineph・rineのautoxidationが何％抑制されていたかを

後急速に比活性は低下するのに対し，ジストロフ

計算した．蛋白はLowyらの方法により定量した．

られない事が特徴である．又どちらの表示法にてィーチキンでは，この様な比活性の低下が殆ど見も，対照は標準偏差がきわめて小さいのに対し，ジストロフィーチキンではこれが可成大きい事も結特徴である．しかし，推計学的には，比活性でみ果

ると，1週目以後のデータは全てジストロフィー区11に浅胸筋の体重に対する割合および上清分

チキンの方が有意に高い．

画の総蛋白の発育に伴う変化を示した．これは，次にこのジストロフィーチキンにおけるSOD

これ迄の報告の如く，浅胸筋の体重当りの重量はTbtal protein

0

1

2

4W

4日

0

＊＊Pく0．01

＊

回1
−35−

1

2

Pく0．05

4W

r

l

4日

1btar SOD jn Dystrophy Chickenl旭 tissue

u／んg PrOtein＊＊

Pく0．01＊

Pく0．05匡】2
考察の活性増加の原因が2つのisozymeのどちらに問題があるかを検討したものを示す．図3には，ジストロフィーチキンのSODに関しては，

SOD−1とSOD−2の経時的変化を，蛋白当りの比Parkら1）が4ケ月齢のConnecticut系ジストロ活性で示してあるが（第1日目は組織量が少なく

フィーチキンにて，対照に比し，約3倍の活性増

SOD−1，SOD−2わけて測定する事が困辻でtotal

多が見られた事を報告している．SOD−1，SOD−2のデータしかない），SOD−1，SOD−2何れもジストにはわけていないのでおそらく，tOtalSODにつロフィーチキンでは，対照に比し比活性が有意にいて見たものと考えられる．Parkら1）はジストロ

高いが，経時的変化を見ると，SOD−2の方は高い

フィーチキンにおける筋細胞の変性過程にpero−

なりに，対照と平行した経時的変化を示している

Xidesやfree radicalによる重要な酵素や構造蛋のに対し，SOD−1の方は，対照は成長と共に比活

白のsulfhydryl groupの酸化による障害がある

性が漸減するのに対し，ジストロフィーチキンでのではないかと述べ，その根拠としてSulfhydryl

は，4週目迄逆に増加し，以後減少している．図inhibitorと0Xidantsに対して最も敏感なglyce−1に示した如く，ジストロフィーチキンでは，総raldehyde3−phosphate dehydrogenaseが筋ジ蛋白が対照に比し有意に低いので，その影響をのストロフィー症で著明に低下している事をあげてぞくため，組織1g当りの綺活性の経時的変化

いる1）．Radicalの中でも細月包毒性の極めて強いを，図4に示したが，やはり比活性と同様のカーSuperOXide radical（02￣）を代謝するSODはフ●を描きSOD−1の成長に伴う変化が，対照に比Parkらの成績によるとジストロフィーチキンにし，はっきりとした異常を見せた．

おいて4ケ月齢で対照の3倍に上昇していると報告され，我々の今回の検討でもそれに近い上昇が見られ，形態上の変化がまだ現れない僻化後1週−36−

Cu−Zn A Mn SODin Dystrophy Chickenu／mg protein
Mn SOD（SOD−2）＊＊ P・く0．01
＊

0

1

2

4W

Pく0．05

4M
匡13

Cu−Zn＆

Mn SODin Dystrophy Chicken
uノ旬

目より既に上昇が見られ4ケ月でも対照に比し約Wet tissue

2倍の上昇の見られる事は，これがジストロフィ

な代謝冗進のためsuperoxide radiとalの生成が増加していて，それに対する反応性変化がひとつーチキンの発症に関連した所見である事を示唆すの可能性として考えられる．ジストロフィーチキ

るが，問題はその機序である．対照でも卵字化直後

ンの筋に於ては，これ迄蛋白の合成，異化の冗進，

はSOD活性が高い事を考えると，細胞の全体的

lyzozomalenzyme活性の上昇など，代謝の冗進−37−を示す報告がなされており5）6），卯芋化後4ケ月を経に比し有意の活性増加のある事が確認された．

てもSODが対照より高いのは，SuperOXideradi・Calの産生冗進を示唆する．Superoxide radicalの産生がもし冗進していたとしても，それに見合ったSODの活性増加があれば，SuperOXideradi−
Calの組織濃度の上昇はないかも知れない．しかし，02−からはSODの作用により，過酸化水素が生成し，これも細胞障害をおこし得る．過酸化水
素はcatalase又はperoxidaseにより2H202→2
H20＋02の如く代謝されるので，次に問題となる

文

献1）park，J．H．，Hi11，E．J．，Chou，T．・H．，et at．：
Mechanismofactionofpenicillamineinthe
treatmentofavianmusCulardystrophy．Ann．
N．Y．Acad．Sci．，317：356−369，1979．
2）Fridovich，I．：Superoxidedismutase，Advanc．
Enzym．，41：35−97，1974．
3）Misra，H．P．＆Fridovich，Ⅰ．：The r。Ie。fのはcatalase，perOXidaseで，我々はまだ検討しSuperOXide anionていないが，文献的には，glutathione peroxi−
dasel）およびcatalase3）の活性も上昇していると

epinephrineandasimpleassayforsuperoxideの報告があり，我々は今後これらの酵素を発育段
階を追って調べたいと考えている．Free radical

inthe autoxidation of

dismutase．J．Biol．Chem．，247：3170−3175，
1972．

4）sun，M・＆Zigman，S・：Animprrovedの関与する反応にもうひとつH202十02−＋H＋→

SpeCtrOphotometric assay for superoxide

HO・＋H20＋102が知られているが，これはHar−

dismutasebasedonepinephrineautoxidation．

ber−Weiss反応として知られているもので02￣がAnal．Biochem．，90：8ト89，1978．

H202の還元剤として作用する．この式で生ずる
5）Iodice，A．A．，Chin，J．，Perker，S．，et

HO・はハイドロキシルラジカルと呼ばれ，02−よ

al．＝

CathepsinsA，B，C，D andautolysisduring

り更に酸化力が強く，102は一重項酸素分子でやはdevelopmentofbreastmuscleofnormaland

り酸素毒性を生ずる可能性がある．この様に02一

dystrophic chickens．Arch．Biochem．Bio．

やH202を代謝する酵素の活性上昇があっても，

phys．，152：166−174，1972．

02￣やH202の産生が増加している事は，上記Ha−
6）Owens，K・‥BiochemicalstudiesofdystrophyrberrWeiss反応により更に酸化力の強いハイド
ロキンラジカルの産生増加を生じている可能性も否定できず，今後この点迄含めて検討する事が重要と考えられた．最後に人のジストロフィーにてSODを調べた報告はまだ少ないが最近Burriら7）がDuchenne型ジストロフィー赤血球SODが対照に比し19％低下しているとの報告を行い，又10−nasescuら8）はSOD作用をもつOrgOteinを

in the young chickenlysosomal and sarc0−
1emmalenzymes・Ann・N・Y．Acad．Sci．，317：
247−262，・1979．

7）Burri，B・J・，Chen，S．G．，Berry，A．J．，etal．：
Bloodlevels of superoxide dismutase andglutathioneperoxidaseinDuchennemuscular
dystrophy．Clin．Chim．Acta，105：249L255，
1980．

Duchenne型ジストロフィー培養筋細胞に作用させた所，低下していた蛋白合成能が50％上昇した

8）Ionasescu，ⅤリStem，L．Z．，Ionasescu，R．，etとの報告を行っており，ジストロフィーの発症機

Synthesisonmusclece11culturesinDuchenne

序に関Lfree radicalの研究は今後重要なテーマと考えられた．

dystrophy．Ann．Neuro1．，5：107−110，

結論ジストロフィーチキン浅胸筋におけるsuper0−
Ⅹidedismutase活性を発育を追って測定し，対照−38−

al・：Stimulatoryeffect ofdrugsforprotein

1979．

ⅠⅠ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病態生理

a）遺

伝

b）臨

床

C）形

態

d）生

理

e）赤血球など
f）生化・代謝など

6）Duchenne型筋ジストロフィー症の遺伝と発生予防

近藤 喜代太郎＊

研究協力者

安

田

徳

一＊＊

筋ジストロフィー症に対する我国の対策は，療（2u＋Ⅴ）Ⅹ＝mu

育面では高い水準にあるが，遺伝面ではまだ充分

ただLmは淘汰率でDMDは子を持たないかでない．そのため，患家，医師の希望，意識を把ら1となる．u＝ⅤならⅩ＝1／3である．この場合，

握し，1）保因者検査，とくに前向的検査率の向発生率Ⅰはu／X，uはⅩⅠとなる．

上，2）Atrisk registry，3）遺伝相談の充実，

b）確認の確率．確認とは家系が発見され，資などを計り，国療筋ジス施設の活動にとりいれる料に取り入れられることである．今回の家系資料必要がある．現在，第3班（祖父江逸郎班長）では不完全確認（息児を通ずる確認）によっており，は，そのプロジェクトⅠとしてこの問題を検討し有病率をP，発端者総数をA，確認の確率を万，そているが，本研究ではそれとは別の資料で，Duch−の標準誤差をS，集団の大きさをNとすると，enne型筋ジストロフィー症（DMD）について，主P＝去〔含±訝

にその遺伝機構を検討した．

C）分散比．致死ⅩRでは正常夫×保国母の息材料と方法分析に用いた資料は国立下志津病院，束大病院

子の1／2が発病するので，分艶比をpとすると男児ではp＝1／2，女児では0となる．しかし，流死

神経内科の234例と，国立八雲，西多賀，新潟，下志津，西別府病院（療養所）の433例から重複を除

産，遅発，誤診などによるpの変動は湊透率によいた514例（うち女性16）を発端者とする家系資料と観察倍の対比，検定はMorton（1959）の方法をである．診断は病歴に従い，家族情報はその記載を戸籍で確認した．

分析センターに赴いて電算機で計算を行った．

って補正しなければならない．方，X，pの期待値
用い，研究協力者安田がハワイ大学のWHO遺伝

つぎの諸前提のもとに遺伝分析を行った．
a）突然変異率．精子はおよそ12歳から生涯結にわたって形成されるが，卵子は出生前に減数分裂を終るので，もし突然変異が，1）親の年齢に果

詳細はYasudaとKondo（1980）が原著として報告したので，要点をのべる．

依存するだけなら突然変異率の性差はない．2）a）確認の確率．方の推定値は0．686±0．059であ

細胞分裂時に起こるなら男が高い．3）その後にり，この資料では集団内の約7割の患者が収集さ起こるなら女が高い，はずである．そこで，DMDれていたことになる．

はすべて伴性劣性（XR）とし，卵子，精子形成でb）遺伝仮設の検定．穆透率で補正した分離比発生する突然変異率をu，Ⅴ，孤発例の割合をXとすると，DMD遺伝子は突然変異による新生と死

pは0・46であった．そこで，方＝0．686，p＝0．46，
Ⅹ＝1／3という仮設を資料における同胞数の分布

亡による消失とが釣り合ってで検定した結果，よく適合し，表1に示すように
x＝0．291±0．046であった．これは1／3とよく一致
し，突然変異率には性差がないと結論された．

＊東京都神経科学総合研究所臨床神経学研究部＊＊放射線医学総合研究所遺伝部

なお，16例の女性患者を含む資料では両親の近ー41−

親婚を1／4に認め，単劣性遺伝（AR）が疑われる

もっとも完全と考えられた千葉県では，A＝46，

ので，方＝0．686，p＝0．25，Ⅹ＝0という仮設を検万＝0．686±0．059，N（昭和40年の男子県民数）＝

定し，Ⅹ＝0．081±0．214を待たが，表2に示すよう

1，343，167なので，P＝（4．99±0．034）×10−5，まにこれは0と有意差がなく，この群はARと判断たP／Ⅰ＝0．230なのでⅠ＝（21．7±1．5）×10￣5となされた．

る．この値を日本全体に単純外挿すると，同年の男子人口は48，692，138なので，男子のDMD患者

以上から，Du型はXRであるが一部にARと総数は2，430±17人となる．

考えるべき症例があることが示された．後者の割

また，突然変異率は0．291×217×10−6，すなわ

合は正確には不明であるが，DMD全体の数％程

ち，1世代1坐位当り6．3×10￣5となる．

度と推定された．
C）有病率，発生率，突然変異率．患者発見が

表1男子患者とその男子同胞におけるDuchenne型筋ジストロフィー症の分散
∫上山力か
〟oq／
〃○
∫JJで
ゆrJd o山〜ryrrJ r．wrrJpJくり．xこjりコ．∬エロ・R6・（ユ）‖ypo両sis：P乙；0・46．；＝0・201．丁ユ＝0・6軋

U

〝
J T
♪
：21・015 −27・227 −7・879 一ユ・三拝ユ●Signincantal

3・37
柑・42

％kヽ・el（dr…＝1）．

0・03
422・26J T
0・0（氾 −0・00リ−pP

ガ七U2／K l・50
4・脚●K
295．06 18ト34

420
川鋸●mのり14564076的1822日︶・−0000000 一011・q′（1日lypotlleSis：Pニ0・4

14・46

一′
〇0
u7
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J5
8つ
q一
′5
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一75だ19日1J′b4200001

206

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2044糾把的⁝t■1qOOO︵UOnUOへJ〇八UO

0000736引邦氾
紬424は氾1288
一26182292さ32100tO

74∬272112275つ−01020

S一
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亡l
h
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ll 一−▲■つ︼ヽJllつ一つJ4つ−nlO

Tola1

〃o x王
〃o xZ
r即でrルイ（2）0・00
204・090・（氾20・34

U，lhefirstderiYaljveortheIog−likel抽00dorobservat；on．
X．r亡CiproCalorvarhnce．Fordctails，SC￠htorton・（1959）

下志津病院〜東大神経内科の206同胞群の分析結果を示す．他病院の280同胞群を合わせて，孤先例の場合を推定すると，妄＝0．291±0．046で，〟＝Vの場合の理論値0・333と有意差はない（p＜0．05）．

−42−

表2

両親が正常で，女子患者がふくまれる同胞群
内におけるDuchenne型筋ジストロフィー症
の分社．

∫心力か
〃oq／
〃0
〃o xZ
〃o xZ
∫fgg
（の・rJrd oム∫〝l・d gJprCJで。（1）で．wgrJ〜胡2）

4

5

3

5

0ther〜

62

6

01hers72

70tllerS

烏

1

8

0them

Tota1

17

15・71

（1）HypollleSiS：p三二り4，X E0，甘＝0・郎6．
（2）Hypolhesis：p＝り4，X＝0・413，T30・686．
♪
U−2・蕊30
ガ三U2／K O・04
K
199・46

2540
75
12
7個
5別
6似
85
96
37
95
7祁404602
010000307020 一〇〇〇 一
234

一川㍑㍑㍑㍑川㍑㍑㍑

2

4

06
31
糾860
38
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37
58
1
957氾
97
2の54糾
0000001030000040

4

一相川㍑川㍑0︒
・3㍑㍑0
4・
︒川㍑

01hers1

24220111010101010

3
4

ズ
ー
ク
．r T
3・l柑 0・110 1ト386 −7・544・▼2・559
0・38 0・01 1・60
2・97
2・98
25・82 2・38
81・03
19・19
2・19

U，thefirslderivativeorIog・1ikelihoodorobserYaliorl．
K．陀CiprocalorYariance．

孤先例の割合は妄＝0．081±0．214で0と有意差がなく（p＜0．05），この群は単劣性遺伝で説明できる．

考察問の平衡転坐をもつDMD女性の既知5例とも，DMDの遺伝についてはすでに多大の文献があ転坐した常染色体が不定であるのに反し，Ⅹではる．DMDにⅩR例が多いことの根拠を要約する

つねにⅩp21であり，この部にDMD坐位があると，1）見掛け上，正常な女性の兄弟と息子が罷ことを示唆した．またこの部はきわめて不安定で，患する，2）正常女性と2人の夫との間の息子がDMDの突然変異率が高いこととの関連が示唆さそれぞれ罷思した例がある，3）男子の分散比はれた．

1／2である，4）息児の母や姉妹にLyon仮設で説明すべき軽い症状をみるが，父方にはみられない，

示すが，AR例も，1）有名なKloepferとTalley5）Turner症候群との合併例がある，6）Thomp−
SOn（1978）は保因母から生まれたⅩR型の患者がる，2）家系図上，ⅩRでありえない場合，とくに正常女性との間に1男1女を得，男児のCPKは同胞に羅息女性がある場合，両親の近親婚が多い，正常，女児では高値であった例を報じたが，これ

3）統計レベルではⅩR息児と臨床的差異があもXRでの理論的期待に沿っている，7）小長谷

る，などからその存在には疑いがない．

と高柳（1981）は血友病Aとの連鎖を報じた，な

XR例とAR例には軽い量的差異があるが，平均的には両型を区別できても，それによって1例

どの傍証に加え，近年つぎのようなほぼ決定的なこれらの知見は本症がXRであることを強く（1952）の家系など，他に説明できない事例があ証明が得られ，その遺伝子坐位はⅩ染色体の短腕

1例を識別できない．三好ら3）（1975）によると，の中央部附近（Xp21）にあることが示された．すなわち，

先祖からの変異遺伝子によるⅩR例：母の卵細胞突然変異によるXR例：AR例の比は68：29：

Jacobsら1）（1981）によれば，Ⅹと常染色体との10または68：22：17であり，AR例は9．3−15．9％−43−に当たる．しかし近親婚の激減とともにAR例のlocusisatXp21．Amer．J．hum．Genet．，33：

割合も，最近はこれよりはるかに小さいと考える

513−518，1981．

べきである．

2）小長谷正明，高柳哲也：Duchenne型筋ジスト

DMDの発生率については米国で27．9×10￣5，ロフィー症と血友病Aの合併をみた一家系，Ⅹ

英国で26．5×10−5などの報告があるが，千葉県で染色体上における連鎖性の検討．臨床神経，21：の27．7×10−5はこれらとよく一致する．

885−888，1981．

突然変異率は，淘汰との平衡を仮定して43）三好和夫，多田嘉明，佐々木尚子，岩朝勝，川〜7×10−5の値が欧米で報じられているが，千葉井尚臣：筋ジストロフィー症の遺伝．神経内科，

県での6．3×10￣5はこの範囲にある．

3：113−122，1975．

このように我国のDMDは臨床的に欧米と一致

4）Morton，N．E．：Genetic tests underin−

する上，遺伝機構，集団レベルのパラメータにもcomplete ascertainment．Amer．J．hum．

本質的な差が認められない．

Genet，11：1−16，1959．
5）Thompson，C．E．：ReproductioninDuchenne

文

musculardystrophy．Neurology（Minneap．），

献1）Jacobs，P．A．，Hunt，P．A．，Mayer，M．，Bart，

28：1045−1047，1978．

R．D．：Duchennemusculardystrophy（DMD）

6）Yasuda，N．，Kondo，K．：Nosexdifferencein

in a female with an X／autosome trans−

mutation rates of Duchenne muscular dys−

location：further evidence that the DMD

trophy．J．med．Gent．，17：106rlll，1980．

−44−7）筋萎縮性疾患の遺伝分析−Duchenne型ジストロフィー症について

古
研究協力者

中
納

里

輿

庄

敏

行＊

文＊＊

中

島

洋

明日

金

久

禎

秀＊＊＊

光 弘＊＊＊ 井 形 昭 弘＊＊＊の資料について検査が完了した時に，分析を試み

昨年来，Duchenne型ジストロフィー症（DMD）の遺伝機構の解明とDMD，Ⅹ盲血液型，色盲のⅩ
づ垂関遺伝の解析を行なうため，鹿児島地区と徳島る予定である．
B．DMDの分離比の検定

地区を対象に調査を計画し，昨年にひきつづき鹿DMDの家系調査も昨年示した資料と若干異な児島地区について調査を行なったのでその結果をるので改めて分散比（p）および標準誤差（S．E．）の推定を行なったところ

報告する．
資

p＝監禁＝諾＝0・3421

料0．3421×0．6579

鹿児島地区のDMDの家系は48家系である．こ38のうち，昨年10家系，本年度19家系について，
DMD，Ⅹ芸血液型および色盲について調査を試み
た．

0．0770が得られた．
分離比の推定値（0．3421）とその期待値（0．5）

しかし，片親と子供あるいは同胞の一部といっとの差（0．1579）はS．丘．（0．0770）の2．05倍で，た例があり，必ずしも家系全員を完全調査したも5％水準で有意である．したがって伴性劣性遺伝ののみではない．したがって，まだ調査の過程での仮説に適合しない．

あるから，調査結果を報告するにとどめたい．なお，未調査の分については来年度調査を行なう予考察

最近の分子遺伝学の進歩は著しく，遺伝性疾患

定である．

の病因解明に貢献しつつあり，また治療の上でも調査結果

遺伝子治療が期待されている．しかし，現在の分

A．X一連関遺伝調査について

子遺伝学の殆んどは半数体，Mendel遺伝は倍数

DMD，Ⅹ盲血液型，色盲について調査・検査を完体を対象としていることである．今後，分子遺伝学・生化学の進歩は遺伝子の化学的解明や遺伝機了したのは図1に示した如く，19家系である．
なお，2年間の調査成績を示すと表1の如く，構の解明にさらに大きく貢献することは疑いない

父は47％，母は49％，その子供は48％である．調が，遺伝子型と表現型との関係については，特に査例数が少ないので，Ⅹ」垂関遺伝の検定は現時点

人の場合，個々の環境も異なるので，むしろ統計では不可能であり，これらの分析は来年度すべて

遺伝学的手法によって遺伝子型の発現を解明する方が，現時点ではより現実的で，予防医学上にも＊鹿児島大学医学部衛生＊＊国立療養所南九州病院神経内科

寄与するところ大きいと思われる．

＊＊＊鹿児島大学医学部第三内科

DMDの遺伝様式やDMDとのⅩ一連関遺伝に−45−

No．11

No．17

No．14

□

○

□

〇

十

十

＋

＋

ロ

○

」再J L帝
No．12

□

＋

ロ

［コ

＋

′＿

No．18

Ⅳ0．15

○

〇

＋

＿

勺

No．13

No．16

」盲竜一
′＋

＿

0

□

・￣￣『七一一で■
′十

十
No19

○

」市

＋

二〇〇？，！丁 寺
No．20

No．24

0

□

No．28

○

＋

′＋

＋

＋

L百

＋

′＿

【コ

＋

＋

○［］

＋

′＋

＋

No．22

首

〇

口

○

＋

＋

′：prOpOSis「FiJ

一6−−号−1￣￣1
＋

′＋

N．D．

No．26

口

＋

○
＋

LFうー笥
ー

＿

0ノ

′ ＋

○

2

No．25

□

＋

0
N

No．21

＋

′＋

＿

＋：Ⅹg（a＋）′＋−：Xg（a−）

No．23

□

No．27

〇

七iJ
＋ ′＋

0

口

○

甘オーさ−1＋＋′＿

図11981年度におけるDMDの家系のⅩ昌血液型および色盲検査

ー46−

表11980および1981年度におけるDMDの血液型（Ⅹ量），色盲検査結果
D 敬

1

2

3

同 昭 軒数

同胞 総数

D、
tD 敬

＿＿ ＿ 旦 」 L

同 胞

1

5

4

4

4

遥

父

粕am 硬型

色 盲

3

3

17

5

22

44

2 7

2 4

24
（
54．
5）

10

3

10

3

13

39

16

22

23
（
56．
4）

7

8

2

2

6

2ノ
1

8

8

4

1

6

5

1

1

25

6

10

10
（
40 ．
0）

1

3

6

3

142

64

68

69

男 ：8 9

64

（
47．
9）

（
4 8 ．6）

2
（
50．
0）

10
（
45 ．
5）

12

7

8

12
（
5 4 ．5）8（
6 1．2）

2

2

（
33．
3）

2

色胃

2

（
54 ．
0）

（
33，
0）

5

粕 am 惰型

（
75 ．
0）

2

4

色 盲

3

（
75．
0）

4

f迂

X ga 血 夜 型

2（3 3 ．3）

2

1

（
40 ．
0）

1
（
20．
0）

（
16．
7） 1

7

合計

51

24

，

24

25

（
4 7 ．1）25（
4 9 ．0）（）：％

関する研究は比較的多く報告されているが，問題d）淘汰：多くの遺伝性疾患は淘汰（受精前，点が多く残されている．この点について若干考察

胎児期，出生後）をうける．したがって分艶比はを試みたい．

期待値より低い値が得られる可能性が強い．
2）X一道伝連関の分析に当って

1）分離比の推定に当ってa）家系資料の収集法：同一規定の下に抽出す

Ⅹ−連関遺伝子，例えばDMD，色盲，血友病なることが第一の条件であり，さらに資料の精度をどは一般集団中の頻度が著しく低い．したがって高めるため戸籍などを用いて，家族全員をチェッ

相当数の調査例数が得られなければ精度の高い推クする．

定値は得られない．往々にして二つの形質を同一b）家系の捕捉法（ascertainment）：完全確

個体が同時に有する家系などが発現されると，そ認，打切り確認，単独確認，多重確認などによっれを用いて連関値などを推定した報告がみられるて分析法も異なるのでこの点充分考慮する必要がが，これは資料自身が偏っている為，真の推定値ある．

とはいえない．また，DMDのように淘汰や近親婚

C）発病年齢の変異と浸透率：DMDのCPKはの影響がみられる場合，推定値に及ぼす効果は大すでに胎児の時から高いという報告もあるが，実きい．これらの点を考慮しないととんでもない推定値が得られるであろう．

際にDMDと診断されるのは経験的には3−7に至っている．したがって少なくとも7歳以下の資料であれば見落しもあるかもしれないが，現実には不完全浸透とされるであろう．人の遺伝形質で本研究は調査が極めて困難であり，短期間にす

血液型を除いては多くの疾患でその遺伝子型を有べてを完了することは不可能であり，ここでは調しながらその形質を発現したりしなかったりする．

査結果の報告と今後の資料分析に関する方法論な

すなわち，程度の差はあれ不完全浸透である．しどについて考察を試みた．

ま

と

め

たがって分離比の推定に当っては発病完了時期の資料を用いるべきである．この点補正などの方法もあるが，問題点が多い．

文

献1）古庄敏行，ほか：筋萎縮性疾患の遺伝分析−−47−

Duchenne型ジストロフィー症について−．厚症の病因に関する臨床的研究第二珪（三好虹）生省「神経疾患研究委託費」筋ジストロフィー

昭和55年度研究報告書，1981，pp．5㌢づ2．

ー48−8）興味ある所見を呈したFSH型筋ジストロフィー症の
1卯性双生児について

荒 木 豆叔 郎＊
研究協力者

山

村

菩

俵
は

じ

め

教＊

近

藤

哲＊

杉

田

晃＊
宏

海＊＊

筋・口輪筋の軽度の筋力低下がみられ開眼してもに顔面屑甲上腕型筋ジストロフィー症（FSH型筋

まつ毛が充分かくれず，口笛が吹けない．舌の萎ジス）は罷患筋の分布により6型に分類され，同縮・線維束性攣縞は認めない．両側胸鎖乳突筋の一家系内においても異なる型がみられることがあ

軽度の筋力低下，僧帽筋の中等度の筋力低下を認る1）．また，神経原性のFSH型筋萎縮症の報告2）

める．両上肢近位部に中等度の筋力低下を認めたも最近散見され鑑別上重要である．

が両下肢筋力は正常で起立歩行障害は認めなかっ

我々は筋生検所見からFSH型筋ジスと診断した．筋萎縮は筋力低下の部に一致してみられた（図た1卵性双生児を経験し2症例間に著明な羅息筋2）．深部随反射は四肢で全て減弱しており病的反の分布の差を認め，更に雨例に低LDH血症と低K血症を認めたので報告する．

射は認めなかった．感覚は表在・深部共に正常であった．
症例2：23歳，女性（症例1の妹）．

症

例

主訴：両上肢挙上田雉，歩行障害．

症例1：23歳，女性．
主訴：両上肢挙上困難，意識消失発作．

現病歴：16歳頃より両上肢の筋力低下を自覚し，
17歳頃より起立困難を認め，22歳頃より左下肢の現病歴：15歳頃より両上肢の筋力低下を自覚し，披行を認めるようになった．

その後，顔面屑甲上腕部に筋萎縮を認めるように

既往歴：特記すべきことなし．

なった．22歳の頃意識消失発作を認め，以後発作

入院時現症が頻発するようになった為，精査入院となった．

一般身体所見：体格中等，栄養良．脈拍74／分で既往歴：特記すべきことなし．

整．血圧110／80mmHgと正常．他，特記すべきこ

家族歴：図1に示す如く父方の家系に同様の筋となし．

萎縮患者を認め，父親は筋電図・筋生検所見から
FSH型筋ジスと確診されている．

神経学的所見：知能正常．顔面屑甲上腕部の筋
力低下・筋萎縮はほぼ症例1と同様の所見だが，入院時現症

本例はさらに左大腿四頭筋に高度の筋力低下，右一般身体所見：体格中等，栄養良．脈拍76／分で大腿屈筋群及び右前脛骨筋に中等度の筋力低下が整．血圧118／80mmHgと正常．他，特記すべきことなし．

みられ筋萎縮も同部に一致してみられた（図2）．

神経学的所見：知能正常．脳神経系では日長輪あった．深部腱反射は左膝蓋腱反射が消失してい＊宮崎医科大学医学部第3内科＊＊宮崎医科大学医学部法医学教室

は表在・深部共に正常であった．筋線維束性攣縞はいずれの筋にも認めなかった．

歩行は左下肢の披行がみられGowers徴候陽性でる以外は正常で，病的反射は認めなかった．感覚−49−

に正常反応を示した．両親の血清カリウムは正常であった．
1卵性双生児であるか否かについては9項目の血液・血清型（A B O，M N，Rh，LewisDuffy，Kidd，Hp，Gc，Ap）全てが2症例問で一致し99・48％の確率で1卵性であると考えられた．また
HLAではAlocus，Blocus，で一致し，中でもA26（10），B15は同病の父親にも陽性であった．
心電図では両例共U波がみられたが，他には著

CdSel Case2

変認めなかった．症例1では脳波上両側中心・頭／頂誘導に陽性秩波を認めた．

図1 家系図腎生検所見：症例1ではHE染色標本で傍糸球体装置の軽度の過形成がみられ，Bowie染色にて同部の陽性顆粒の増加を認めた．症例2では
HE染色標本で傍糸球体装置の極く軽度の過形成がみられ，Bowie染色で陽性顆粒を認めた．
筋電図：症例1の左線上筋，左三角筋，左二頭筋でいずれもlowvoltage，Shortdurationが主体
であるが一部にpolyphasicwaveが混在し，左三角筋，左二頭筋では安静時放電もみられた．全体
的には筋原性変化に一部神経原性変化が混在した
Case

Case l2所見と考えた．
症例2の左三角筋，左大腿四頭筋でもlowvol−

図2

罷息筋の分布tage，Short durationが主体で一部にpolyphasic
waveが混在しているが安静時放電はみられず筋

検査成績：両例共に末梢血，検尿，肝機能，血清蛋白，腎機能，CRP，RA，STSは正常であった．
血清CPKは症例1は正常であったが症例2は原性変化に神経原性変化の混在した所見と考えた．
筋生検所見：筋生検は両例共に左三角筋で行ない凍結切片を作成しHE染色，Gomori trich−

持続して高値を示した．血清LDHは両例共に低rome変法染色，NADH染色，pH9．4でのAT
Pase染色を行なった．また，症例2では筋萎縮の値を示し，母親の血清LDHも低値であった．両例

著明な左外側広筋の生検を行ないホルマリン固定

並びに両親共にH／M比は低値であった．尿中ク

後HE染色を行なって観察した．

レアチンは両例共増加していたが症例1の方がよ左三角筋のHE染色では症例1は短く軽度のり高値を示す傾向があった．尿中クレアチニンは両例共減少していた（表1）．

大小不同，問質増生がみられ稀にangularfiberが血i青カリウムは両例共低下していたが症例1の性，炎症細胞浸潤並びに群集萎縮は認めなかった．

方がその傾向は著明で，また，血柴レニン活性症例2では症例1に比Lより強い大小不同がみら（PRA），血焚アルドステロン，アンジオテンシン

れ，わずかにfiber splittingも認めたが他はほぼ症例1と同様の所見であった．症例2の左外側広I（AngI），アンジオテンシンII（AngII）等は症例1の方がより高値であった（表1）．Nore・
pinephrine昇庄試験，AngII昇庄試験では両例共みられたが中心核増多，fiber splitting，空胞変筋のHE染色では著明な月旨肪浸潤と筋線経の大小不同がみられ，中心核も軽度増加していたが群

−50−

表1
C a s el

検査成績

C a s e

2

父

母

正 常 鐘

G

O

T

（IU ／ L ）

1 6

2 1

0

− 3 8

G

P T

（IU ／ L ）

1 6

1 6

0

− 30

C

P K

（lU ／ L ）

1 1 3

3 3 3

A ld o la s e （IU ／ L ）L DH（エリ／ L ）H ／ M

1 ．2 ．

5 − 1 20

2 ．4

0 ．6 − 3 ．1

3 3 〜 1 1 7

6 8 − 16 4

3 1 7

7 6

1 ．1 0

1 ．0 3

1 ．3 8

1 ．3 9

4 ．2

4 ．0

1 60

、 3 6 5

2 ．0 2K（m E q ／ L ）2 ．6 〜 3 ．2

2 ．7 − 3 ．3

P R A

（n g ／h l／ h ）3 ．8 1

3 ．7 7

0 ．6 − 2 ．
0

1 7 6 ．6

1 1 3 ．1

4 7 − 1 3 1

1 ．0 6 0

2 3 4

一一2 6 0

9 2

3 4

一
一2 5

A ld o s t e ro n e

3 ．3 一一 4 ．9（P g ／h l ）Ang I（P g ／何 日

A n g Ⅱ （P ＆ 巾 11 ）尿 中 クレアチ ン

9 5 〜2 3 2

6 6 一
一8 0

6 一
一6 0

（m g ／ d a y ）尿 中 クレアチニ ン

4 7 0− 7 204 0 2 〜 6 ∞1 ．
0 ：X ）〜 1 ，7 ∞（m g ／ d a y ）集萎縮は認めなかった（図3a，b，C）．
NADH染色では両例共軽度にmoth eaten fi−
berなど筋構築異常がみられ稀にSmall dark

typeとnon jump typeがみられることを報告している．また，三好ら3）はFSH型筋ジスの1卵性双生児について両者の症状に軽度の差がみられ，同一人にも左右差がみられうると述べている．

angulated fiberも認めた．
Routine ATPase染色では症例1はモザイク

我々の例はHLA・血液型・血清型から1卵性双構造を呈し，typelfiber48％，type2fiber52

生児であることはほぼ確実であり，筋生検所見か％でありfibertypepredominanceはみられず，ら筋ジスであることも確定的と考えられ，Kaza−

症例2ではtype162％，type238％とtypel
fiber predominanceがみられた．両例共にfiber

kovの分類では症例1と父親は第1群，症例2はtype grouping，type SpeCific atrophyもしくはる．このことは症例2において，筋力低下の著明

hypertrophyの所見はみられなかった．ヒストグ
ラム（図4）では症例2に大小不同の傾向がよりな左四頭筋はもとより三角筋においても筋生検上強くみられ，症例1はむしろ正常に近いヒストグが症例1に比して持続して高値を示していること

ラムであった．

などにも反映していると考えられる．しかし，こ第4群に相当し後者の進行がやや速いと考えられ明らかに筋変性は症例1より強いこと，血清CPK

れ程の差が出現する原因については不明であり今考案

後のfollowupを行なって検討していく必要があ

我々の症例は1卵性双生児でありながら罷息筋の分布に著明な差がみられ，両例に低LDH血症，る．なお，両例の羅息筋の分布についてはいわゆる鏡像関係はみられなかった．
次に低LDH血症については1980年Kannoら4）

低K血症が合併している点に特徴がある．
まず罷息筋の分布に差がみられる点についてはがM型欠損症で易疲労性・ミオグロビン尿症を示

Kazakovら1）が1974年FSH型筋ジスはその羅息すことを報告しているがH型欠損症としては筋の分布から6群に分類出来，同じ家系内でも異1971年Kitamuraら5）が無症候性の家系を報告しなる分布を呈しうることを報告し，1979年古川ている．我々の例はH／M比よりみてH型サブユ

ら2）もFSH型脊髄性筋萎縮症の同胞例でjump

ニット低形成と考えられ，FSH型筋ジスとの直接

−51−

図3

a．症例1の左三角筋凍結切片，HE染色，×60．
b．症例2の左三角筋凍結切片，HE染色，×60．
C．症例2の左外側広筋ホルマリン固定HE染色標本，×150．

−52−

的

3．低LDH血症は母方の家系由来のH型サ知ブユニット低形成症と考えられた．

光犯
旧ご受≡⁚t L占∈nZ

昭

4．低K血症は家族性低K血症の孤発例と考えられた．
稿を終えるにあたり，腎生検所見につき御教示
10

20

力

め

知

的

70

即■

頂きました宮崎医大病理の住吉昭信教技，筋生検■氾】叩′所見につき御教示頂きました川崎医大病理の調輝男助教授に感謝致します．

治
郎
知

献

わ

1）Kazakov，Ⅴ．M．，Bogorodinsky，D．K．，etal．：■0

ご童三一t L占∈コ2

文

The facioscapul0−1imb（Or the faciosca−
pulohumeral）type of muscular dystrophy，
10

図4

20

刀

咄

知

的

70

即l

■叩l00

Clinical and genetic study of200cases．Eur．

〃

Neuro1．，11：236，1974．

症例1，2の左三角筋routineATPase
染色によるヒストグラム．

2）古川哲雄：顔面眉甲上院型筋萎縮症にみられる関係はなく，母方の家系に由来する低形成症と考

3）三好和夫，川井尚臣：進行性筋ジストロフィー

臨床的異種性．神経内科，11：595，1979．
症の遺伝．神経・筋疾患の遺伝．八瀬喜郎，荒えた．
低K血症については1963年Blahdら6）が

木豆叔郎編，医学書院，東京，1978，p．232．

Duchenne型並びにLimb」Girdle型筋ジスにお4）Kanno，T．，Sudo，K．，et al．：Hereditary

いて全身のカリウム量が減少していることを報告

deficiency oflactate dehydrogenase M−Sub−

しているが低K血症と筋ジスとの関係について

unit．Clin．Chim．Acta，108：267，1980．

は調べ得た限りでは報告がない．我々の症例にみ5）Kitamura，M．，Iijima，N．，etal．：Hereditary

られる低K血症はAngII昇圧試験・腎生検所見などからBartter症候群は否定され，1976年工藤

deficiencyofsubunitHoflactatedehydroge−ら7）が報告した家族性低カリウム血症に類似した

6）Blahd，W．H．，Lederer，M．，et al．：The

孤発例と考えた．

nase．Clin．Chim．Acta，34：419，1971．
Significance of decreased body potassium
concentrations

ま

と

in

patient with muscular

dystrophy and non dystrophic relatives．N．

め

1．低LDH血症，低K血症を呈し罷息筋の分
布に著明な差を認めたFSH型筋ジスの1卵性双生児について報告した．

Engl．J．Med．，276：1349，1967．
7）工藤信一，有我由紀夫ら：家族性低K血症の2例とその病因にかんする考察．日内会誌，65：

2．筋ジスは父方の家系由来であった．

158，1976．

−53−9）筋ジストロフィーに類似したunusual caseについてのfollow−uP Study−特に3症例を中心として−

田

研究協力者

日

辺

等＊

内

潟

雅

信＝

野

勝

木

俊

文＝

矢 野 久 子＊＊

沢

胤

美日

金：坂

明

美＊＊

反射は上腕三頭筋反射とアキレス腱反射のみが陽性

的

近位型進行性筋萎縮症（成人型）の診断・病型
分類は，症例により必ずしも容易でない場合があであった．なお，病的反射，脳神経症状，線維束攣縞などはみられない．

る．この場合，音昆在・移行・特殊型などとして取検査所見：血清CPK値が818mIU／ml（正常扱うべき症例も稀ならず経験され，筋ジストロフ

18〜86）と高値を示すほか，神経伝導速度およびィー（DMP）の診断上にも重要な問題の1つとな

一般検査に著変を認めない．筋電図は筋原性変化っている．著者らは，昭和47年度本姓会議で，肢を示した．

帯型進行性筋ジストロフィー（LG）と成人型
Kugelberg−Welander病（KW）との鑑別が困難で

症例2：T．K．，54歳，女性（症例1の叔母で今回追加）」あった4症例について報告したが，このうち長期

主訴：四肢・体幹の筋力低下．

follow−up Lえた2例に，新たに1例（前記2例のうち1例と同家系）を追加して報告する．

家族歴（表1）：症例1・2とほぼ同様な症状を呈した人が家系内に2名みられた．また，本例の両親はいとこ同志で，症例1の父親の先祖も同一症

家系に属す．

例

既往歴：特記事項なし．

症例1：Y．E．，29歳，女性．
主訴：歩行障害，上肢挙上障害．
家族歴：同症（∋（表1）．
既往歴：特記事項なし．

現病歴：14〜15歳頃，かけ足の遅いことに気づき，16歳にはつまづきやすさ・動揺性歩行もみられるようになった．21歳には階段昇降が困難とな

現病歴：15歳頃，歩行障害で発症，以後，徐々に進行し，20歳には階段昇降に手すりを必要とし，また転倒しやすくなった．25歳頃から上肢の挙上も困難となる．
現症：一般理学的所見には著変なし．神経学的には，筋萎縮（図1a）は上下肢の近位部に認められ，筋力も相当部位で低下していた（眉甲・上肢
帯：2−3grade，腰帯：2−3，下肢：4）．登はん性起立，動揺性歩行，異状肩甲を示し，深部＊虎の門病院神経内科．沖中記念成人病研究所＊＊虎の門病院神経内科

り，20代後半には，坐位からの起立と上肢の挙上も困難となった．また，35歳頃歩行に杖を必要とした．筋力低下は以後も緩徐に進行し，52歳には，立位保持が辛うじての程度となり，54歳には，これも不可能で車椅子主体の生活となる．
現症：筋萎縮・筋力低下は高度かつぴまん性（近位優位）で，辛うじて坐位保持が行える．深部反射は全て消失．病的反射，知覚障害，脳神経麻痺，筋痛，線維束攣縞などはみられず，一般理学的にも特に異常を認めない．
検査所見：血清CPK値（173mIU／ml，正常＜−54−

a：症例1の全身像

b：症例3の顔面および全身図1
表1

症例1・2の家系図
症例1の父親の先祖も同一家系に属する．

100）の軽度上昇，軽度鉄欠乏性貧血，脳波異常（側頭株）のほかは，血液生化学，尿，心電図，髄液などに異常なし．筋電図は筋原性変化を示したが，下肢の遠位筋では，持続の長くない高振幅電位も一部に認められた．
症例3：K．N．，39歳，男性．
主訴：上下肢の筋力低下．
家族歴：類症なく，血族結婚もない．
既往歴：特記事項なし．
現病歴：16歳頃，左上腕の筋萎縮で発症，ついで，左下肢の筋力低下が出現し，21歳には，坐位からの起立が困難となった．32歳には，右下肢の筋力低下も明らかとなり，精査を目的に入院した．
−55−

諸検査，臨床症状および経過から，KWないしはられ，深部反射は槙骨反射．アキレく批J小1・巨へニ′鼻LGが最も疑われたが，確定診断には至らなかっ陽性である．線維束攣縮，知党障′．1 脳Hl緑川l

た．なお，機能訓練と減量により症状は若干改善などなく，また，一般理学的にも搾′なないした．しかしながら，その後も筋力低下は徐々に

検査所見：血清CPK値は92mIU／1111（llt． l．

進行し，一時，慢性多発性筋炎を疑い，副腎皮質18〜86）．心電図で洞性頻脈を呈するはかい，lrll

ホルモンを試みるも明らかな効果はみられなかっ算，血液生化学，尿，髄液，神経伝導過度にソlこじ

た．35歳からさらに右上肢の筋力低下も加わった．

を認めない．筋電図では，上下肢の近位筋に∴現症：筋萎縮の分布は特異で，顔面は右側に，筋原性変化を記ま録した．その後，反覆して検．1日

上肢は左側に強く認められるが，全体として近位

ると，下肢の遠位筋で，神経原性変化を示唆すろ

筋優位である（図1b）．膵腹筋の仮性肥大が認め持続の比較的長い高振幅電位も記録された．

図2 症例1の筋生検所見a（左大腿四頭筋）：筋線経の著明な大小不同，肥大線経，問質結合組織増加，脂肪浸潤および萎縮線経の散在・群集を示す．HE染色×100．

b（左三角筋）：fiber splittingを示す．HE染色，×100．
C（同）：fiber typeの分別不良，mOth−eaten様の筋構築異常を示す．DPNH−TR活性×400．
−56−

縮像は認められなかった．

筋生検所見
症例1の左大腿四頭筋（図2a）では，筋線経の症例3の左上腕二頭筋では，筋線経の著明な大

著明な大小不同，肥大線経，問質の結合組織増加，小不同，肥大線経，中心核，問質の結合組織増加，

脂肪浸潤などのミオパテー性変化に加えて，萎縮

脂肪浸潤などのミオバナー性変化（図3a）のみな

線経の散在・群集が認められた．変化の比較的軽らず，一部に明らかな群集萎縮（図3b）も認めらい左三角筋では，fibersplitting（図2b），mOth−

れた．DPNH−TR活性像では，fibertypeの分別

eaten様の筋構築異常（図2C）および

typeI

は不良で，筋構築の乱れ，ringfiber（図3C）がpredominanceも認められた．
症例2の左大腿四頭筋では，症例1とほぼ同様観察された．なお，myOSin ATPase染色には著
変なし．

なミオパテー性変化を示したが，明らかな群集萎

図3 症例3の筋生検所見（左上腕二頭筋）
a：筋線経の大小不同，肥大線推，中心核，問質の結合組織増加，脂肪浸潤などを示す．HE染色，100．
b：一部に明らかな群集萎縮も認められる．HE染色，×100．
C：fiber typeの分別は不良で，ring 丘berも認められる．
DPNH−TR活性，×400．
−57−

考察・結語

臨床的事項および検査所見の総括（表2）
症例1と症例2の遺伝形式に関しては，前記の家系図から常染色体劣性遺伝と推測した．
筋萎縮は3例とも近位筋優位であるが，症例3

症例1，2に関しては，神経原性変化を示唆する所見の混在から，KWとの類似性も問題となるが，臨床経過および症例2の特徴（より筋原性）

は特異で，顔面を含む左右差を示した点が特筆さと考え合わせ，基本的にはLG型DMPに近い病

れる．

態と考えられた．ちなみに，若干のdenervation

筋病変については，全体としてミオパテー性変化が主体であるが，LGの典型的所見に比し異な

ChangeはLGにも認められるとの報告2）がある．
症例3については，顔面を含む筋萎縮に著明なる一方，KWのそれにも類似する．

左右差・部位差を示す点が特異で，DMPのほか，KW，慢性多発性筋炎，進行性顔面半側萎縮症3）な

表2 症例総括（D Y ．
E
年

齢

家

・ 性

族

29

♀

（
参T ．
K
54

♀

ども鑑別の対象となったが，前回報告以降の経過などをふまえ，DMPの範ちゅう（Kazakovの

③K ．
N
39

facio−SCapul0−1imb type4））に属すると考えた．
このような非定型例の解析・蓄積はDMPの発

含

性

＋

＋

血

族

結 婚

＋

＋

初

発

年 齢

15 歳 頃

14 〜1 5歳

16 歳 頃

初

発

症 状

歩行障害

歩行 障害

左上腕萎縮

性

＋ （緩 徐 ）＋ （緩 徐 ）＋ （緩 徐 ）近近位優位

近 位 （上 腕 右 ＜ 左 ）顔 面 （右 ＞ 左 ）＋進行

皮下脂肪低下位症機序に関する臨床研究上有意義と考える．

≠

−
≠〜ヰ什・

土

−

文

1）沖中重雄，田辺等，野沢胤美，ほか：厚生省「筋

≠

知 覚

障

C PK
EM G
筋
訓 練

生
効

沖中班，昭和47年度姓会議．

In

低 下 〜消 失害

ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究」，
2）Bradley，W．G．：Thelimb・girdlesyndromes．

±

F a sc icu latio n
D T R

消

失

−

低 下 〜消 失

1 73

92

M

M （＋ n ）M （十n ）

検

M ＋n

M

M ＋n

果

＋

＋

＋

Handbookofclinicalneurology（editedbyVinken，P．J．＆Bruyn，G．W．），North−

−

8 18

献

Holland，Amsterdam，1979，Vol．40，p．433．
3）古川哲雄：進行性顔面半側萎縮症．神経進歩，
18：1105，1974．

4）Kazakov，Ⅴ．M．，Bogorodinsky，D．K．，
Znoyko，Z・Ⅴ・，etal・：Thefacio−SCapur0−1imb

M：筋原性，n：一部神経原性混在
CPK：Rosalki変法（or the facioscapulohumeral）type ofmuscular dystrophy．Clinical and genetic
Study of200cases．Europ．Neuro1．，11：236，
1974．

−58−

10）Gowers型Distal Myopathyの再評価

古

研究協力者
は

じ

川

小田鳴 奈 津＊
め

哲

雄＊

綿

引

走

清＊

塚

越

贋＊

径骨筋では筋線経の大小不同，核の中心化，一部に

1902年，Gowersl）は筋ジストロフィー症の1型としてdistalmyopathyを提唱したが，彼の症例の筋線経に空砲を認めた．炎症所見はみられなかった．

は筋緊張性ジストロフィー症であったろうとの見考方が一般的である2）3）．しかし，この考え方は再検討の必要があるのではなかろうか？最初に自験例を呈示する．

察

1902年7月12日号のBritish medicalJournalには，Sir William R．GowersがNational
HospitalfortheParalysedandEpilepticで行な症った講演が掲載されている1）．彼は筋ジストロフ

例

ィー症を3型に分類し，従来のpseudo−hypertro−

33歳，男性．既往歴，家族歴に特記すべきこと

phicform，facioTSCapularformに加えて，distalはない．両親は血族結婚ではない．
30歳頃，ロープを握る時，握力の低下に気づいた．タオルをしぼる時，力が入りにくいことも感じていた．同じ頃，尖足位となり，歩く時に足をバタンパタンとさせることを他人から指摘されていた．階段を登る時につまづきやすく，スリッパ

form（distal myopathy）として18歳の男子例について述べている．10〜12歳頃の発症で，上下月支
遠位筋の萎縮があるが，彼が特異な点として強調しているのは，両側胸鎖乳突筋の高度の萎縮である．

が脱げ，疲れやすくなった．これらの症状はごく

His

わずかずつ進行性である．

neckmusclesarenormal，Withone

noteworthyexception−thestern0−maStOids．Of

現在，筋萎縮は四肢遠位部にみられ，上肢ではthese only a trace remains；Only a small

上腕部にまで及んでいる．顔面筋は異常を認めな

fasciculusofthesternalpartcanputinaction

いが，胸鎖乳突筋は左右ともほとんど痕跡をとど

by

the

willorelectricity．

1）は3−2／5，上腕二頭筋，三頭筋は4／5，下肢では前さらに顔面筋も罷息しており，限瞼下垂がみられる．

径骨筋1／5，俳腹筋，大腿四頭筋は4／5．腱反射はこのGowersの症例について，1940年Wilson2）

めない．握力は左右とも0kg．筋力は上肢遠位筋

上肢で消失，膝反射は低下，アキレス腱反射は消は次のように述べている．

失，病的反射は認めない．知覚は正常．筋の線維

MinuteaswereGowers，clinicalobser＿

束性攣縮，ミオトニー現象は認めない．血清CPK

Vations，SOmedatathatmightbeaskedfornow

値は968単位（正常＜170）．筋電図は近位筋は正are not supplied，anditis just pOSSible the常，総指伸筋，前径骨筋で筋原性変化を認めた．

COrreCt diagnosis may have been an aberrant

末梢神経伝導速度は上下肢とも正常．筋生検では，

form of dystrophia myotonicaM．

左上腕三頸筋には異常はみられなかったが，左前その後1951年にはWelander4）が，myOpathia
distalis tarda hereditariaを報告し，Gowersの＊東京医科歯科大学医学部神経内科

症例はこれと明らかに異なり，Wilsonの考え方は−59−現在広く受け入れられている．

と一般に考えられている．しかし，彼の症例と類Manyobserversnowfeelthatthepatienthe（Gowers）describedmayhavebeensufferingfrommyotonic

dystrophy．

3）

フィー症ではないmyopathyの存在することを指摘した．これはWelander型のdistal myo−pathyとは異なり，Gowers型distal myopathy
として別の疾患と考えるべきであろう．

Gowersの講演が出版された1902年頃には，筋緊張性ジストロフィー症はまだはっきりと独立疾
患と似の筋萎縮分布を示しながら，筋緊張性ジストロ

しては確立されてはいず，Hoffmann

詳細は「神経内科」に投稿，印刷中．

（1900）5），Rossolimo（1902）6）らの報告が出てき文た時代である．しかし，ミオトニー現象について

献は知られていた．Gowersの症例にミオトニー現1）Gowers，W．R．：Alectureonmyopathyand

象の記載はないが，彼の慧且且がミオトニー現象を

a distal form．Br．Med．J．，2：89，1902．

はじめとする筋緊張性ジストロフィー症にみられる多彩な症状を見落としていたと考えるべきであろうか？

2）wilson，S．A．K．：

Neurology．

3）Walton，J．N．＆

Gowers以後，distalmyopathyとして報告されButterworth，

London，1940，p．982．
Gardner・Medwin，D．：

Progressive muscular dystrophy and the

た症例の中には，胸鎖乳突筋の高度の萎縮を示す

myotonic

ものがみられる．1923年，Navilleら7）により報告

tarymuscle

disorders．In

Disordersofvolun・（editedbyWalton，J．N．），4thed．，

された6症例中，第ⅠⅠ，Ⅴ，ⅤⅠ例は胸鎖乳突筋のChurchill Livingstone，Edinburgh，1981，p．

ほとんど消失に近い萎縮があり，第ⅠⅠ例ではさら481．

に顔面筋の萎縮も加わっている．1960年のMoya8）の報告の第1例は，顔面，頸部の筋の障害がみられる．1963年の奥村ら9）の姉妹例も胸鎖乳突筋を4）welander，L．：Myopathia distalis tarda
hereditaria．Acta Med．Scand．，141〔Suppl．
265〕：1，1951．

ほとんど触れない．同年黒岩ら10）によって報告され

5）Hoffmann，J．：ZurLehrevonderThomsen，

た第2例は，筋緊張性ジストロフィー症の可能性

schen

Krankheit

mit

besonderer

BerGck＿も考えて詳しく検索されたが，結局はdistalmyo−

SichtigungdesdabeivorkommendenMuskel・

pathyと結論されている．Welander型のdi亨tal
myopathyは常染色体性優性遺伝であるが，Go−

SChwundes．Dtsch．Z．Nervenlleilkd．，18：198，

wersの報告例に顆似の症例は，奥村ら9）の姉妹例

6）Rossolimo，G．：Dela myotonie atrophique．

1900．

を除いていずれも孤発である．奥村らの症例は多Contribution

発筋炎の可能性がある9）．

Nouv．Iconogr．Salpetriさre，15：63，1902．

Gowersの症例と類似の筋萎縮分布を示しながら，筋緊張性ジストロフィー症ではない疾患が存在することは確実である．Gowersの症例を筋緊急Ia theorie des myopathies．

7）Naville，F．，Christin，E．＆Frommel，E．：Les
myopathies

distalestardives．L′Encephale，

18：182，1923．

張性ジストロフィー症として簡単に片づけてしま

8）Moya，G．：Ausujetdedeuxcasdemyopathie

うのは早計で1まなかろうか？Gowersの名誉のた

distaletardive．Rev．Neurol．（Paris），103：431，

めにも，とりあえず

1960．

Gowers型distalmyopathyと呼んでおきたい．

9）奥村二舌，寺尾章，松田清，ほか：姉妹に現われた末梢型筋ジストロフィー症．脳と神経，15：
まと948，1963．

め

1902年Gowersが報告したdistalmyopathyの症例は，筋緊張性ジストロフィー症であったろう−60−10）黒岩義五郎，宮崎募，武谷溶，ほか：興味ある筋萎縮症の2例．脳と神経，15：1131，1963．

11）特異な屈筋優位の脱力分布を示すVacuolar
myopathyの位置づけについて

田

研究協力者

島

功

代

二＊

邦

雄＊

浜

田

毅＊

松

本

昭

久＊

症例2：41歳，男性．

は じ め に

主訴：歩行障害．

最近われわれは若年成人に孤発し，進行性に四肢屈筋群優位の脱力分布を示す臨床的に酷似した

家族歴，既往歴：特記すべきことなし．

3症例を経験し，その臨床所見の特徴および筋生

現病歴：28歳頃より症例1と同様にギターのコ

検所見につき検討した．その結果，近年相次いでードをおさえにくいことで発症した．同じ頃より報告されている distal myopathyの亜型 と近似しているが，筋脱力分布に関しては，近位筋もっまずさやすくなり緩徐進行．36歳頃には首の坐屈筋優位に早期より高度におかされる点で必ずしている．

りが悪くなり，38歳，発症10年で歩行不能となっ現症：一般内科的には異常なし．神経学的にはも一致せず，その位置づけについて興味がもたれ知能正常，脳神経系では胸鎖乳突筋の高度萎縮を認める他に異常はない．起立，歩行不能でwheel

たので報告する．
症

chair boundの状態であり，筋萎縮，脱力分布は例、′症例1：30歳，女性．

症例1とほぼ同じであり雨下垂足をとり，屈筋優

主訴：歩行障害．

位のおかされかたを示すが，注目すべきことは罷

家族歴，既往歴：特記すべきことなし．

病期間のわりには，大腿四頭筋，排腹筋は良く保

現病歴：23歳頃より歩行がおかしいと言われた

たれていることである（図lb，2b）．陸反射はすべことがある．26歳頃に腰のふらつきを指摘され，て消失，病的反射なく，小脳，知覚系も正常であ

自分でも転倒しやすいのに気づいた．また同じ頃る．

よりギターのコードをおさえられなくなったとい

症例3：26歳，男性．
主訴：歩行障害．
家族歴，既往歴：特記すべきことなし．
現病歴：24歳頃より膝がもちあがりにくく，歩きづらいのに気づき漸次進行．手指脱力も認めてう．その翌年には階段の昇降が困難となり，また座位よりの起立に手の介助が必要となった．昭和53年精査のため当科入院．
現症：一般内科的に異常なし．神経学的には知能正常，脳神経系では胸鎖乳突筋の脱力を認める．

いる．

I建反射はすべて消失，歩行は鶏状かつ動揺性で現症：一般内科的に異常なし．神経学的には，

Gower徴候陽性．下垂足を呈する．Myotoniaや
fasciculationは認めない．特徴的なのは筋脱力分

膝蓋腱反射を除き深部反射はすべて消失．歩行は布で，全体に屈筋優位に近位筋も高度におかされ

骨筋萎縮と下垂足を認め，筋脱力分布は症例1，ている．大腿四頭筋はむしろ肥大傾向を示す（図2−とほぼ同じであるが，3症例中1番軽度である．

la，2a）．小脳，知覚系に異常なし．

しかし下肢近位部屈筋はすでに高度におかされて鶏状かつ動揺性でGower徴候陽性である．前脛いる（図lc，2C）．
＊北海道大学医学部脳神経外科

ー61−

a

図1 患者全身像
a．症例1，b．症例2，C．症例3

CASEl・30岬・■川▲L■

cASE2−out▲▼lOHWllL−川．7▼t▲t▲

ノ

a

■

ト量

■

□四m慮『■

■◆

●

一r

b
図2

3．

26■0．−▲Lt■l■▲TlO■ ■▲一札 2▼t▲トヽ ＝
鵬Y川HWm

日￣

臨頗胤即

Ⅴ冊′

□四m臼｝■
日C▲引E

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一′往一・日川根

け い ∴ り ／ − ■ ︑ ＼ ㌧

転調机上−．

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41岬−▲L■■∪■▲▼嘲−■▲■■●■．13Ⅵ膿■l●ト■

口四m騙1■
■

■●

●

r

C

各症例の筋脱力分布図
British Medical Councilの筋力スケール1−5を使用した．
−62−

●

1卜暮

検査所見

り筋生検施行され，光顕所見は，症例1と酷似し血液検査所見：CPKが仝例軽度上昇しているていたので，mOdifiedGomoritrichrome染色のみを示した（図3b，C）．電顕では，3症例ともに，他に異常なし．
神経伝導速度：症例1，3で施行．正中，尺骨，深俳骨神経で正常範囲であった．

境界膜をもたないvacuole内に無数のmyeloid
body，membranous bodyの集積を認めた（図4）．Rod bodyは検索範囲内には認めなかった．

筋電図所見：3症例ともmyogenic patternが主体であるが，一部にhigh amplitude complex

考

NMUを混ずる混合性のpatternを示した．

察

筋生検所見：生検筋に対し以下の如き組織化学

本報告3症例は，distalmyopathy，もしくはそ的染色法を施行した（modified Gomori trich−の亜型として報告された三好1），水沢2），吉良3），井rome，myOSinATPase，pH9．4，4・6，4・2，NADH−

上4）等の報告例と発症年齢，孤発例であること，

TR，Acid＆Alkaline phosphatase，phosphory−

CPK軽度上昇，筋生検で，VaCuOleを認める等，

lase，nOnSpeCificEsterase，PAS，OilRedO）．

類似点も多い（表1）．これら報告例は，distal

その一部はglutaraldehyde，Os04にて二重固定し，

dominantにおかされているという点で，distal

シリーズアルコールによる脱水後Epon Araldite

myopathyと称して報告されている．従来distal

包埋して電顕的に検討した．症例1では，昭和53年4月大腿二頭筋より，昭和55年5月，上腕二頭myopathyの名のもとに種々の異なった病態が報告されている5）−10）．その唯一の共通点はdistal筋より施行された．両筋とも結果は同様なので上dominantの筋脱力，萎縮を示すという点にある．

腕二頭筋よりの所見の詳細をのべる．光顕ではところが，本報告3症例の筋脱力分布は，遠位筋

modified Gomori trichrome染色で，fiber size

も屈筋優位に（ankle dorsiflexionを生理的屈筋の大小不同は5〜7叫径にまたがり結合織の軽度と考えて）おかされ近位筋も屈筋群優位に早期よ〜中等度増生および軽度中心核増加を認めた．こり高度に障害されており決してdistal dominant

れに加えて特徴的なのは，多数の空胞変性を種々だけではない．したがってdistalmyopathyとしの径の線経に認め，空胞内には種々の色あいに染てしまうのは妥当ではないと考えている．これら

まるamorphousmaterialを含むもの，辺縁が濃の症例の如く，特異な屈筋群優位の脱力分布を示染するもの等を認めた（図3a）．MyosinATPase

す若年発症，緩徐進行性の孤発例は臨床より筋生

では，fiber typeのmosaic状は保たれており，検所見を充分予知しうる程特徴的である．実際，

fiber type predominanceの所見は示さなかった

症例2，3は臨床的に本報告病型と診断し，筋生（図3d）．Atrophicfiberは両typeにまたがり，

検結果はまさにそのとおりであった．本報告例がVacuoleも両fiber typeに存在しfiber type一疾患単位をなすことを示唆するゆえんである．

susceptibilityは示さなかった（図3e）．NADH−

一方，VaCuOlar myopathyの名称は，Denny−

TR，nOn−SpeCificEsterase染色に潰染するangu−

Brownll），Engel12），Rewcastle13）等が用いておlated atrophic fiberがかなり存在し一部は集合

り，pOlymyositis，periodic paralysis，SLE，傾向を示した．End・plateは異常に筋膜に長く存在するもの，またdoubletを形成するもの等の異Chloroquine myopathy等に空胞変性を伴うもの
一般に使用されており，現在まだひとつのまとま常を示した（図3f）．Alkaline phosphatase染色では，かなりの数の陽性線経が散在して認められ

cuoleが筋病理の中で特徴的なものに使用されてた．VacuoleはPAS陽性に染まるものが多く，いる．従って本報告例のように，特異な臨床所見

Oil Red Oでは染色されずAcid phosphataseでをもちあわせて筋生検上空胞変性を特徴とするもは活性の強いvacuoleとそうでないものとの両のには，使用して差しつかえないと思われる．む

者を認めた．症例2および3では，上腕二頭筋よしろ現時点では，distal myopathyという不適当った疾患群を意味するわけではない．むしろva−

ー63−

図3

e

筋生検所見
a．症例1，trichrome染色，×100（上腕二頭筋）
b
症例2，trichrome染色，×100（上腕二頭筋）
C．症例3，trichrome染色，×100（上腕二頭筋）
d
症例1，Myosin ATPase（pH9．4），×100（上腕二頭筋）
症例1，Myosin ATPase（pH9．4），×200（上腕二頭筋）
症例1，nOn−SpeCific Esterase，×100（上腕二頭筋）
f

−64−

図4

症例1の上腕二頭筋電顕横断像．萎縮線姓の空胞内に無数のmyelo−
id body，membranous bodyを認める．（×2，3000riginal mag−nification）

表1

本症例と類似報告例との比較（
1970 ）
三好（正 ）報告 例

（1980）
水 沢（英 ）
報 告例

（
1981）
井上 （
雄 ）報告 例

年齢，性

31歳，女

29歳，￣
女

遺伝 彗■！

孤

孤

症

例

発

発

本

報

告

第1例

第2 例

48歳．￣
女

30歳，女

4 1歳，男

孤

孤

孤

発

発

発

発症年齢

27歳頃

26 歳頃

31歳頃

24 歳頃

28歳頃

初発症状

歩行障害

歩行障害

歩行障害

歩行障害
手の脱力

歩行障害
手の脱力

筋脱力と
萎縮の分布

CPK

軽度上昇

EMG

筋原性

踊踊騨
rヽ
rl
三
二
椚
秦
軽
度
上
昇軽
度
上
昇
軽度上昇

軽度上昇

筋原性

筋原性に
神経仮性混 入筋原性 に
神経仮性混入筋原性に
神経原性i昆入

≠

≠

≠

≠

筋原性所見

≠

璧萎蔚撒鍼合

り

7

7

＋

＋

一
川−

11ト

1杵

≠

」
十
卜

覧空胞変性
そ

の

他

ro d lik e bo dy

例rim m edvacu ole−65−m yeloidb od ym yeloidbody文

な名称を用いるより好ましいと考えられる．従っ献て本報告例は，特異な屈筋優位の筋脱力を示す

1）三好正堂，他：臨床神経，10：111，1970．

vacuolar myopathyの一型として報告した．今2）水沢英洋，他：神経内科，12：40，1980．

後，本報告例と類似の症例には，特に筋脱力分布とその推移を詳細に検討する必要があると思われ

3）吉良潤一，他：臨床神経，21：913，1981（会）．

る．尚，本報告例は，筋電図上，highamplitude

5）welander，L．：ActaMed．Scand．，141，Supple

complex NMUの混在を認める点，また筋生検
上，angulated atrophic fiberの散在と一部にそ

4）井上雄吉，他：臨床神経，21：921，1981（会）．

265：1，1951．

6）Biemond，A．：ActaPsychiat．Neurol．Scand．，の集積像を認める点，end・plateの異常を示唆する

30：25，1955．

所見等があり，病因に神経原性の因子の関与の可

7）Kratz，R．：In：P．J．Vinken and G．W．

能性もあると思われ，現在，俳腹神経生検標本をBruyn（Eds．），Handbook ofClinicalNeuro10−

検討中であり次回，報告する予定である．

gy，Vol．40，North−Holland，Amsterdam，pp．
471−483．

結8）黒岩義五郎，他：脳と神経，15：1131，1963．

論

特異な屈筋群優位の脱力分布を示すvacuolar9）佐々木清博，他：臨床神経，9：627，1969．

myopathyを報告した．あわせて本疾患群の名称について私見をのべた．

10）Nonaka，Ⅰ．，et al：J．Neurol．Sci．，51：141，

本報告のvacuolar myopathyの特徴は以下の11）Denny−Brown，D．：Trans．Assoc．Amer．

1981．

如くである．

Physicians，28：14，1960．

12）Engel，A．G．：In：Pearson，C．M．，andMostofi，（D孤発型で若年成人期発病（診下月支屈筋および手指屈筋群の脱力で発症し緩F．K．（Eds．），The Striated Muscle，The

徐進行，漸次上腕，肩帯筋，頸部屈筋におよWilliams＆Wilkins，Baltimore，1973，pp．301

び，全体的に屈筋群優位におかされる．

−341．

（∋筋電図は筋原性変化に一部神経原性変化を加味する．

13）Rewcastle，N．B．，etal：Arch．Neuro1．，
12：570，1965．

④CPKは軽度上昇にとどまる．
⑤筋生検で高度空胞変性を有する筋原性変化に一部，angulated atrophic fiberの集積像も
認める．

ー66−

12）Rigid spine syndromeについての検討

後

研究協力者

幾 生＊

藤

藤 井

直

樹＊

村

岡

重

信＊書

Rigid spine syndromeは，1970年Dubowitzl）の大小不同，中心核の軽度増加，問質結合織の軽により報告され，幼年期に脊椎の屈曲制限と関節度増生を認めたが，炎症所見は認めなかった．

の可動制限で初発し，筋力低下と筋萎縮が停止性ないし緩徐進行性経過をとる良性筋疾患とされてATPase染色で，fiber typeの分布に異常はなかった．

いる．我々は，本症と考えられた2症例を経験し，症例2：15歳男子．乳児期に異常なし．6歳頃
首の前屈制限と肘関節の伸展障害に気づく．10歳

その経過観察を行ったので報告する．

頃より下肢に，11歳頃より上肢に筋脱力を生じた．
症例

脱力は緩徐進行性で，精査のため13歳の時当科へ

症例1：21歳男子．乳児期の発達に異常なかっ

入院し，第1回目の筋の組織学的検索を行った．

たが，6歳頃より首の前屈制限と軽度の四肢筋力

その後，2年間，経過観察したところ，比較的急低下に気付く．その後病状に進行はなく，16歳の速に全身の筋脱力と萎縮が進行した．15歳の時，時精査のため当科へ入院し筋生検を施行した．以後，5年間にわたり経過を迫ったが症状に進行は2回目の筋の組織学的検索を行った．家族歴はな

みられていない．家族歴は，両親がいとこ結婚で13歳，初回入院時の神経学的検査では，知能正あるが同胞に神経筋疾患はみられない．

常，頸部及び躯幹の著明な屈曲制限，肘及び膝関

16歳の当科入院時の神経学的所見では，知能正節の可動制限を認め，筋脱力と萎縮は肢帯筋を中常，頸部と躯幹の前屈制限，肘関節の軽度の伸展

心に中等度みられたが，遠位筋は正常であった．

障害，胸鎖乳突筋で著明，上肢帯で軽度の筋脱力

Gowers徴候陰性．深部反射は低下していた．

と萎縮を認めた．筋の仮性肥大はみられなかった．

2年後には，頸部の可動性は全く消失し，肘及深部反射は低下していた．5年後の状態では，上び膝関節の可動制限も増悪し，側管や前攣などの肢帯に筋萎縮なく筋力もほぼ正常であった（図脊椎の変形も著明となった．筋脱力と萎縮も進行し，Gowers徴候陽性，歩行はかろうじて可能な程

1）．

脊椎の屈曲制限はあるが，レ線上，椎体自体及びその配列には異常なかった．

度で著明なwaddlingを示した．アキレス腱の短縮も明らかであった（図2）．

検査成績では，5年間の経過を通じ血清CPK

脊椎のレ線学的検査では，症例1と同様に，椎は軽度から中等度の増加がみられた．筋電図では，体自体に異常はなかった．経過観察中，血清CPK

低振幅でshortdurationのmotorunitpotentialが出現し，筋原性変化であった．心電図で伝導障は中等度上昇し，筋電図は筋原性変化を示した．

害はみられなかった．

心電図では伝導障害はみられなかった．
第1回目の筋の組織学的検索は上腕二頭筋より

上腕二頭筋の組織学的検索では，軽度の筋線維なされた．H．E．染色では，筋線経は著明な大小不同，中心核の増加を示し，多数のsarcoplasmic
massの出現，壊死線経，fiber splitting，問質結合織の増生もみられた（図3）．

＊九州大学医学部脳研神経内科＊＊国立赤坂療養所神経内科

ー67−a）16歳図1 症例1b）21歳
前屈時全身像

第2回日の筋の組織学的検索は2年後に，上腕Spinesyndromeと考えられた．その後の経過観察

三頭筋よりなされた．ここでは，軽度の筋線経のを行ったところ，筋脱力と萎縮が症例1では，非大小不同と，問質結合織の増生がみられたが，第進行性良性経過をとったのに対し，症例2では，1回目のものほど強い変性所見はみられなかった．

比較的急速に増悪経過をたどった．しかし，両症

図4は，両症例の生検筋より得られた筋線維径例とも現在のところ心臓の伝導障害は認めていなのヒストグラムである．症例1は，ほぼ正常パターンであるが，症例2は，typel fiberの小径化

Rigid spine syndromeと同様に，小児期早期と相対的な数の増加がみられる．Type2fiberも軽度小径化の傾向を示している．

より筋力低下に先行して，頸部や肘関節の可動制
限や拘縞がおこり，筋萎縮と脱力が緩徐進行性経
過をとる筋疾患にEmery−Dreifuss型筋ジストロ

考

按

フィー症がある．Rigid spine syndromeでは，以上，2症例は，幼児期より頸椎前屈制限・肘遺伝歴を欠くのに対し，Emery−Dreifuss型筋ジス

関節伸展障害で初発し，当初，停止性ないし緩徐トロフィー症は，伴性劣性遺伝性で，早期より心進行性経過をと り，Dubowitzl）2）のいうrigid

伝導障害をきたすとされている．1979年Rowland−68−

国凱■■淵臼b）15歳
前屈時全身像a）13歳
図2 症例2Spine syndromeはEmery−Dreifussに抱指されSplittingによる結果と考えられ，typel fiberの選択的な萎縮化より，むしろ変性過程を示唆してるものであるとしている．一万，1981年Hopkinsいると考えられる．

ら4）は，Emery−Dreifussの2家系を報告し，rigid

以上より，rigidspinesyndromeと考えられる症例でも，臨床的また筋病理組織学的にいくつか

ら3）は，Emery−Dreifussの一例を報告し，rigid

spinesyndromeは，遺伝歴と心伝導障害を欠き，両者は区別されるものとしている．このように，の問題があり，今後，同様な症例の集積を行い，現在の時点では，Emery−Dreifuss型筋ジストロフ

検討する必要があると考えられた．

ィー症とrigid spine syndromeとの異同につい

なお，症例1は文献7）で，症例2は文献8）で各々詳述している．

ては，意見の一致をみていない．
Dubowitzらは，rigid spine syndromeにおける筋病理所見として特異的なものはないとしてい文

献るが，Seayら5），Goebelら6）は，本症の症例で

1）Dubowitz，Ⅴ．：Someunusualneuromuscular

typelfiberatrophyを認めた．我々の症例2で，disorders．Ⅰn WaltonJN，Canal N，Scarlato

typel fiberの小径化を示したが，これはfiberG．（eds）Muscle diseases．Proceeding ofan−69−

図3 症例2 前腕二頭筋 H．E．染色International Congress（May19−21，1969，
0

Milan）．ExcerptaMedica，Amsterdam，1970，0S∝﹈凸568−573．

0Syndrome．In：Muscle biopsy．A modern
0LO∝山凸芝コZ

2）Dubowitz，Ⅴ．＆Brooke，M．H．：Rigidspine
approach．WB SaundersCo，London，1973，

0368−371．

20

40

60

80

3）Rowland，LP．，Fetell，M．，01arte，M．，etal：

100ノ〟

0
0

Emery−Dreifuss muscular dystrophy．Ann．
Neuro1．，5：111−117，1979．

0
8
0
6

Emery−Dreifuss humeroperoneal muscular

04S∝山口こ し0∝﹈由三つZ

4）Hopkins，L．C．，Jackson，J．A．＆Elas，LJ∴

dystrophy：An X−linked myopathy

with

0
2

unusual contractures and bradycardia．Ann．
Neuro1．，10二230−237，1981．

20
図4

40

60F触S…Ze5）seay，A．R．，Ziter，F．A．＆Petajan，J．H．：−0シ

Rigid splne Syndrome．A typel fiber

Histogram offiber sizes

myopathy．Arch．Neuro1．，34：119¶122，1977．
6）Goebel，H．H．，Lenard，H．G．，GOrke，W．＆Kunze，K・＝Fiber

ー70−

type

disproportionintherigid spine syndrome．Neuropadiatrie，8：Psychiatry，42：276−279，1979．

467−477，1977．

8）Goto，Ⅰ．，Muraokn，S．，Fujii，N．，etal：Rigid

7）Goto，I．，Nagasaka，S．，Nagara，H．，et al：
Rigidspinesyndrome．J．Neurol．Neurosurg．

−71−

Spine syndrome：Clinical and histologicalproblems．J．Neuro1．，226：143−148，1981．

13）Syndrome of continuous muscle−fiber

activity（Isaacs）についての検討

後 藤 幾 生＊
研究協力者

酒

井

徹

雄＊

細

川

晋

一事

持続性筋線維活動症候群（以下本症候群と略）示した．髄液中の5−hydroxyindoleacetic acidは1961年，Isaacsにより報告され，1981年迄に欧（5−HIAA），homovanillic acid（HVA），α

米で30数例，本邦で2例の報告があり極めて稀な

Laminobutyric acid（GABA），アミノ酸測定で症候群である．本症候群は臨床的には筋肉収縮後GABAのみ700，1200pmole／ml（N±SD：144±

弛緩困難，fasciculation，myOkymia，深部反射低57）と著明増加を示した．

下ないし消失，筋トーヌス冗進，筋肉硬直などの特徴を有し，また筋電図学的には安静時や睡眠中

筋電図学的検索にも持続性の筋活動電位が記録される．

運動感覚神経伝導速度は正常下限ないし軽度遅我々は本症候群の筋電図と髄液neurotrans一
mitterについて検討した．

延を認めた．右正中神経に対するsupramaximalの反復刺激を与えても有意のM波変化を認めなかった．H波誘発後に約100msecのsilentperiodを症例認めた．針筋電図学的には安静時，睡眠中に持続症例は18歳女性．1980年3月，右手掌開排困難

性の筋活動電位を認め，これは振幅，持続時間，に気付き，3カ月後，安静時でも右手が固く手指形状の点で正常のmotorunitpotentialに一致しの軽度屈曲に気付いた．7月，他生徒に比較してていた．臨床的にmyokymiaを認める筋肉で発汗が著明であった．1981年2月，顔面筋の不随

doubletやtripletが記録された．Myopathy，

意運動に気付き，翌月，母親より睡眠中にも手がneuropathyを示唆する所見やmyotonic dis−

固く，つった様な恰好のままであると指摘された．
全身理学的には骨格系は筋肉質で，四肢先端は変chargeは認められなかった．マンシェットによる前晩虚血負荷検査ではTrousseau散候は認めら形を示し，発汗過多を手掌，足底などに認めた．

れず筋活動電位は振幅・頻度が減少した．末梢神

神経学的には，顔面・匹＝技のfasciculation，

経ブロックにより自発放電は完全に消失した．更myokyrnia，筋肉収縮後弛緩の著明遅延，四肢違位部における筋トーヌス克進を認めた．Percussionに硬膜外ブロックにより大腿四頭筋を不完全ながmyotonia，筋萎縮，筋力低下はなく深部反射は全て消失していた．
臨床検査所見では，一般検血，尿，便，心電図，ら麻痺させたところ，自発放電は著明に減少した．
治療薬剤に関してはdantrolene sodium125mgの投与により4日目より著明な改善を示し，上肢脳波，頭部CTスキャンは異常なかった．基礎代の．myokymia，fasciculationは殆ど消失し，筋トーヌス冗進は減じ，また手掌開排遅延が著明に改

謝率（BMR）は＋53％と上昇し，血清creatine

善した．Diphenylhydantoin150mg，Carbama−

kinase（CK）は97mU／mL（n＜50）と軽度増加を

zepine 400mgの投与によっても翌日より著明な改善を示した．

＊九州大学医学部脳研神経内科

−72−

考

察

本症候群では従来，diphenylhydantoinやIsaacsは本症候群における異常興奮部位は，自発放電が末梢神経ブロックにより消失せず

Curare SuCCinylcholineにより初めてブロックさ

Carbamazepineが著効を奏することが知られていたが，本症例ではこれらに加えてdantrOleneも奏効した．

れることから，mOtOr nerve terminalにあると唱え，以後，同様の報告が相次いだ．最近，Irani

文献ら1），Ochoaら2）は末梢神経7 ロックにより自発

1）Irani，P．F．，Purhodit，A．Ⅴ．＆Wadia，N．H．：

放電が消失したことより近位部説を唱えている．
本症例では前根あるいは脊髄前角細胞レベルがThe syndrome of continuous muscle−fiber

示唆され，また前角細胞への抑制系メカニズムは

neurogenic causation．Acta Neurol．Scand．，

ある程度は保たれていることが示唆された．髄液55：273−288，1977．

activity：Evidence to suggest proximal

neurotransmitterについては本報告が初めてで

2）ochoa，J．J．，Castilla，J．M．，Bautista，J．，

ありGABA増加が一次的変化か否かは不明のまAlberca，R・＆Segtlra，D．I．：Neuromyotonia．

まであるが，後角の一次知覚ニューロンに対するOrigen periferico proximal dela actividad

抑制性介在ニューロンが，GABAergiCであるとmuscularcontinua．ArchNeurobiol．（Madr．），

考えられていることを考慮すると興味深い所見である．

42：309−320，1979．

ー73−14）Neostigmine myopathyの発生機序におけるCa＋＋の役割に関する研究

光 弘＊

納

研究協力者
目

川

渕

優＊＊

金

関

毅＊＊

井

形

昭

弘＊

トのnemaline myopathyの実験モデルとしても的

我々は可逆性抗cholinesterase剤であるneo−

重要であること3）をこれまで報告した．このneo−

stigmine（Ne．）の投与後，ただちに図1に示すよsti邸nline myopathyの発生機序に関して，最近

うな骨格筋の運動終板部位に限局するfocal

Leonardlesion（FL）が出現すること1）2）ならびに，連日投

agonistを使用する遊離筋実験によ与でこの部に多数のnemalinerodsが出現し，ヒjunctional sarcoplasmへのCa十＋の過剰の

図1＆

Salpeter（1979）4）はacetylcholine

光顕トルイジンブルー染色（ネオスチグミン投与2時間後）．一束の運動神経線維（N）が近接する横紋筋線経に限局性の変化（空胞形成，COntraCtion band形成など）がみられる．390×＊鹿児島大学医学部第3内科＊＊九州大学医学部第3解剖

ー74−

りpost−

図2 新鮮凍結末固定切片のalizarin red染色．
横紋筋線経に限局性に認められる陽性反応部位は図1に示す変性部
位と同様の形態を示す・N：nervefiberbundle．400×

図3 アンチモン酸処理後の対照筋．
陽性反応は筋線推間問質，Schwan−aXOninterspace，筋鞘隈（シナプス隙），T管，筋鞘核，および筋原線経に認められる．2500×−75−

influxによりNe．myopathyがひきおこされるこ

示し，12時間後には完全に消失した．

とを示唆した．我々の今回の報告は，Ne．myoTB）Pyroantimonate法7）（2％pyroantimollitlt・

pathyでpostjunctional sarcoplasmに過剰の水溶液，pH9．4）．FLの部位のミトコンドリアJJ

Ca十十が存在するか否かを組織化学的に検討する

よび筋小胞体に非処置筋（図3）と比較してよりことによりLeonardらの説を新しい方面から確

粗大な顆粒沈着物が多数認められた（図4，5）．

認しようとするものである．

この沈着物についてⅩ−raymicroanalysisにより検索したところ非処置筋およびNe．処置筋の沈着方法および結果

物にK，Ca（Sb）線を検出した．

ラットにNe．を0・625mg／kg投与したNe処置

C）Ne．処置筋をEGTA音容液に浸漬することに筋，および非処置筋において次の組織化学的検索を行った．

よりalizarin red法およびpyroantimonate法により出現するべき沈着物はほとんど認められなかA）Alizarin red染色5）およびglyoxal bis染
色6）（新鮮凍結未固定切片）．Ne．投与20分後，FL

EGTA溶液に浸潰した場合沈着物は完全に消失に相当する部位に赤色の陽性反応が強度に認めらした．一方bufferをEGTAのかわりに使用するれた（図2）．この反応は投与6時間後槌色傾向をと沈殿物は消失しなかった．

図4った．上記の2方法により作成された組織切片をネオスチグミン投与のアンチモン酸処理筋．
運動終根に限局する筋線維変化部位（L；図1にみられるlesionに相当する）に，図3の対照筋に比して多数の微細および粗大顆粒の集積がみられる．3250×

−76−

図5

結

ネオスチグミン投与後のアンチモン酸処理筋．多数の粗大顆粒の集積がpost−junctionalsarcoplasm（J）に認められ，これらの大部分
はミトコンドリア内部に存在する．5800×論

neostigminemethylsulfate．Experientia，32：
623−625，1976．

Ne．myopathyにおいては，pOStjunctional
SarCOplasmに過剰なCa＋＋が存在することを組

3）osame，Mリ

Kawabuchi，M．，Igata，Aリ

織化学的に確認した．このことは，Ne．myopathy

Kanaseki，T．＆Sugita，H．：Experimental

は運動終板でのCa＋＋の過剰なinfluxによりひきnemaline rodsinduced by anticholinesterase

おこされるという考えを組織化学的方面から支持

drug（neostigmine methlsulfate）．Proc．Jap．

するものである．

Acadリ51：598，1975．

4）Leonard，J．P．＆Salpeter，M．M．：Agonist一文

献

induced myopathy at the neuromuscular

1）Kawabuchi，MリKanaseki，TリOsame，M．＆Igata，A．：Experimental myopathyinducedby neostigmine methylsulfate．The Lancet，
27：1313，1975．

junctionismediatedbycalcium．J．CellBiolリ

82：811−819，1979．

5）Dahl，L K．：A simple

and sensitive

histochemicalmethodforcalcium．Proc．Soc．

2）Kawabuchi，M．，Osame，M．，Watanabe，S．，

Exp．Biol．Med．，80：474−479，1952．

Igata，A．＆KanaSeki，T．：Myopathicchanges

6）Kashiwa，H．K．＆Atkinson，W．B∴The

at the end−plate region induced byapplicability ofnew Schiffbase，glyoxalbis−77一（2−hydroxy−anil），forthecytochemicallocali・

localization of calcium in normal andzation ofionic calcium．J．Histochem．

abnormalskeletal muscle．LabInvest．，36：

Cytochem．，11：258−264，1963．

566−577，1977．

7）Oberc，M．A．＆Engel，W．K．：Ultrastructural．

ー78−15）実験的ミトコンドリアミオパテー
ミトコンドリアの形態変化と呼吸機能に関する研究

佐

藤

研究協力者

猛＊
安

野

みどり＊

いわゆるミトコンドリアミオパテーでは，骨格度ホモジネートし，pH7．4に調整．筋線推・細胞成筋内のミトコンドリアに多数の結晶状封入体が認分を除去後，冷却遠心機で3回遠心しミトコンド

められる．近年，これらの症例の骨格筋ミトコン））7分画を得た．0．25MSucroseに約10mgミトコ

ドリアを分画し，その呼吸機能やチトクロームのンドリア蛋白／mlになるように懸濁し，ミトコンド

測定がなされ，電子伝達系の障害部位によるミト

リア浮遊液とした．

コンドリアミオパテーの分類がなされてきている．

呼吸機能（図1）：Rank Oxygen Electrode

われわれは，ラット下肢駆血による急性阻血後24時間で，骨格筋内ミトコンドリアに多数の線推状（RankBrothers）の酸素電極を用い，25℃にて呼吸機能を測定した．基質としてSuccinate＋Roten−

封入体を有する実験的ミトコンドリアミオパテーを作成し報告した．今回は急性阻血後24時間以内

on，Pyruvate＋Malate，Glutamate＋Malateを用い，40mM ADP添加による呼吸調節率（Re−の骨格筋形態の初期変化を，電子顕微鏡で観察し，さらにその骨格筋内ミトコンドリアを分画し，呼spiratoryControIRatio：RCR）酸化的リtン酸化能（ADP／0）をPolarographyより求めた．

吸機能を測定し，形態変化との関連性を検討した

光学顕微鏡：採取した筋肉の一部を凍結切片とので報告する．

し，HE，rOutineATPase，Gomori−Trichrome変方法，NADH，SDH染色を行なった．
電子顕微鏡：採取した筋肉の一部を，グルター

法

ルアルデヒド・オスミウム酸で固定後脱水し，エ

成熟ウイスター系ラット（雄）を用い，以下のボンアラルダイト包埋した．ミトコンドリア浮遊3群にわけて実験をおこなった．
正常対照群：正常対照としてⅠ群の左下肢を液は再度遠心後，3％グルタールアルデヒドで一用いた．

晩，4％オスミウム酸で2時間固定後脱水し，エⅠ群：エーテル麻酔下で右下肢をゴムバンド

ボン包理を行なった．超薄切片を酢酸ウラン・ク

で結紫し，1，3，5，10．5，12，16，24時

ェン酸鉛で二重染色し，電昆削こて観察した．

間後に断頭し，下肢筋を検索に供した．
ⅠⅠ群：断頭後，Ⅰ群の駆血と同時間室温放置

結果

呼吸機能：（図2）：RCR，ADP／0は正常対照をし，死後変化の影響を検索した．
Lee100％とし，Ⅰ・ⅠⅠ群の経時的変化を％で示した．

19681））：結合織・脂肪を除去後細切し秤量した．

RCRは，Ⅰ・ⅠⅠ群とも1時間では変化なく，3時ワー））ングブレンダーでホモジネート後Nagase

間目より低下し始め，Succinate−を基質とした時を7分間作用させ，テフロンホモジナイザーで再は12時間で，PyruVateとGlutamateを基質とした時は16時間で，添加したADPに対する反応が＊順天堂大学医学部脳神経内科

失われた．ADP／0は，Ⅰ・ⅠⅠ群と、も3時間まではミトコンドリア分画法（Makinen

＆

−79−

後再び強くなる傾向を認めたが，mOth・eatOn様の変化は目立たなかった．ⅠⅠ群もⅠ群と同様の所見を呈した．
電子顕微鏡（図3）：骨格筋内のミトコンドリア
は，正常対照群ではクリステが整然と配列しているが，Ⅰ群3時間でミトコンドリアの膨化・透過′性冗進著明となり，クリステは減少・膨化・断裂を示した．これらの変化はⅠ群5時間でさらに増強し，クリステ間隙に少数の線維状封入体が出現
し，これはⅠ群12，24時間で増加していった．ⅠⅠ

図1PyruVateを基質とした時のミトコンドリアの呼吸機敗 左より正常対照・駆血5時間・駆血10．5時間群でも同様の変化を認めたが，線維状封入体出現の程度は，Ⅰ群よりやや目立った．
分画したミトコンドリア（図4）は，正常対顔群に比べ，Ⅰ群3，5時間で基質の膨化・透過性
冗進，クリステの節状膨化・断裂がみられ，Ⅰ群
10．5，12，16，24時間では崩壊したミトコンドリ
アが増加してきた．しかし，線維状封入体は，正常対照群，Ⅰ群1，3時間で少数認めたが，形態変化の強いものでは認められなかった．
考案
実験的ミトコンドリア・ミオバナーの動物モデ
ルとしては，実験動物の腹部大動脈結数や大腿部をゴムバンドで結数する方法，酸化的リン酸化の脱共役剤の投与が知られている．
Karpatiら2）は，腹部大動脈結数後2時間で線維状封入体が出現するが，phagocytosisや再生現象が出現する48時間後にはミトコンドリアが著減し，封入体もみられなくなることから，線維状封入体

山l tH0Il011氾〜hOrl亡h

図2はミトコンドリアの機能障害を反映するものであ

呼吸機能（RCR，ADP／0）の経時的変化
上段 駆血による変化
下段 死後変化

ろうと考えている．しかし組織化学で0Ⅹidative
enzyme活性が陽性なことから，このミトコンド
リアは酸化的リン酸化がloose coupled又はun−COupledな状態であろうとしている．

変化なく，以後徐々に低下し，Succinateで12時間，他では16時間で反応が失われた．
光学顕微鏡：Gomori・Trichrome変法染色でSahgalら3りま，脱共役剤投与15分で線維状封入体出現を認め，呼吸機能を抑制するAntimycinやOligomycin投与では同様の変化がおこらないこは，正常対照群でも筋鞘下に軽度赤染がみられるとから，線維状封入体は酸化的リン酸化のun．

が，Ⅰ群1時間より赤染は増加していった．
NADH，SDHでは，正常対照群に認められる筋鞘

COupledな状態を反映するものであろうとしている．

下の浪染が，Ⅰ群3，5，10．5時間で減少し，以Heffnerら4）は，大腿部をゴムバンドで結紫し，

−80−

図3

骨格筋内ミトコンドリアの形態変化死後10．5時間で多数の線維状封入体を認める．×16，200

図4分画したミトコンドリアの電子顕微鏡所見
左 正常対照×21，600
右 駆血5時間 ×18，000−81一6時間で線維状封入体が，24時間で結晶二状封入体ることを指摘した．

が多数出現することを報告し，これらは変性によりつくられたものであろうとした．

結論

われわれは，この線維状封入体を有するミトコ1．ラット下肢筋の駆血あるいは死後変化のみでンドリアの出現機序解明を目的に，ラット下肢駆もragged−redfiberとミトコンド））ア内に線推状血による急性阻血下のミトコンドリアの呼吸機能

封入体の形成が認められた．

を測定した．

2．これらの骨格筋内ミトコンドリアをMakin−

ミトコンドリアの呼吸機能の測定で得られる

en，＆Leeら1）の方法で分画した・

RCRとは，ミトコンドリア・リン酸・基質存在下

3．ミトコンドリア呼吸機能（呼吸調節率・酸化にADPを添加し，ATP合成に伴う呼吸の促進

的リン酸化能）を酸素電極を用いて測定した．

State3と，ADP消費による呼吸の抑制State4

4．その結果，駆血・死後変化群の何れにても経の比で，ミトコンドリアの無傷性・完全性を示す

時的な呼吸機能の低下を確かめた．

指標とされている．
文

ADP／0は，））ン酸存在下で添加したADPか献ら，ATPが合成される時のADPの量と，ATP合1）Makinen，M．W．＆Lee，C．P．：Biochemical

成に要した酸素原子の比で，酸化的リン酸化能をstudies of skeletalmuscle mitochondria：1．

示す指標とされている．

MicroanalysIS Of cytochrome content・0Xi−

駆血および死後の時間経過に伴い，3時間目よdative and phosphorylative activities of

りRCRが，5時間目よりADP／0が低下していmammalian skeletal muscle mitochondria．

った．一方駆血および死後5時間以降，ミトコン

Arch．Biochem．Biophysiol・，126：75，1968・

ドリア内に線維状封入体が出現し，ADPに対する

2）Karpati，G．，Carpenter，S・，Melmed，C・＆反応が低下・消失する12，16，24時間では多数認

Eisen，A．A．：Experimentalischemic myo−

められた．

pathy．：J．Neurol．Sci・，23：129，1974・

駈血あるいは死後変化の何れの条件でも，rag−

3）Sahgal，Ⅴ．，Subramani，ⅤHughes，R・，Shah，

ged−redfiberは形成され，電顕で多数のミトコン

A．＆Singh，H．：On the Pathogenesis of

ドリアの集積・基質透過性冗進・クリステの断裂・

mitochondrialmyopathies．Anexperimental

線維状封入体形成などの形態異常が観察される．

study．：ActaNeuropathol．（Berl）・46：177，

この状態下のミトコンドリアは呼吸機能が著明に1979．

低下していることを明らかにした．

4）Heffner，R．R．＆Barron，S．A．：The early

また，ミトコンドリア内の線維状封入体は，大effects ofischemia upon skeletal muscle

動脈結繋・大月退部結紫・脱共役剤投与等で実験的

mitochondria．：J．Neurol．Sci．，38：295，に作成されることが報告されているが，単なる死

1978．

後変化でも，同様なミトコンドリアの変化がおこ−82−16）筋萎縮の発現機序に関する研究（1）ステロイドの影響

木 下 真 男＊研究協力老

若 田 宣 雄＊荒 木洋＊

河 村 裕 子＊山 田 信 輿＊筋ジストロフィー症の病像の主体をなすのは筋

坐骨神経はエボン包埋標本を作製するとともにの進行性の萎縮であるが，その本態は未だ不明で

凍結切片をLFB，Masson−trichrome，HE染色をある．筋の萎縮は種々の病態で出現し，それらはおこない，更にホルマリン固定後，オスミウム酸

必ずしも単一の機序によるものではない．しかしで染色し，ときほぐし標本を作製し観察した．

それら筋萎縮の機序を正しく把握することは筋線
結経の持つ特性を正しく理解することになり，それ

果はまた筋ジストロフィー症の本態を解明する上で排腹筋組織化学的標本では対照，ステロイド群

何らかの有用な手がかりを得る端緒ともなり得る

共にタイ70Ⅰ，ⅠⅠの区別は明瞭であり，対照ではものである．こうした考えから，我々は種々の筋

タイ711線経の平均直径は82ミクロンであるのに萎縮の病態に関して検討をすすめることとしたが，その第一歩としてステロイド筋萎縮を実験的に作

対し，タイプⅠ線経は54ミクロンで有意にタイプ
ⅠⅠが大きかった．それに対してステロイド群では，成し，その本態の追求を試みた．

タイプⅠの直径には大きな変化はないのに対してタイプⅠⅠは45ミクロンと減少し，両者の間の有意方差は消失し，タイプⅠⅠに関しては対照群，実験群

法

体重2600g前後の雄家兎6羽の背筋にcorti・

問に有意の差を認めた．また，坐骨神経に関して

SOneaCetate20mg／kg〝ay，4週間筋注し，終了

は，実験群では大径有髄線経の若干の数の減少と後エーテル麻酔下に屠殺し，俳腹筋および1坐骨神共に，図2に示すような髄鞘の破壊，部分的変性経を採取し実験に供した．対照群10羽も同じ部位を示すものが見られた．また，小径線経の分布がを採取した．

若干増加していた．

俳腹筋はGomori−trichrome，ATPase，

生化学的には，筋の総蛋白量は対照群の26．99±

NADH，PAS，Phosphorylase染色で観察した．
更に一部は生化学的検索をおこない，Lowry法に1．94mg／g．wet weightに対して実験群23・92±
4．09mg／g．wet weightと減少を示し（表1），一より総蛋白を，Zak−Henly変法により総choles−

方各中性脂肪を見ると，Cholesterol，triglyceride

terolを，また，FoIchの方法により，総脂質を抽共に実験群で有意の増加を示した．これらの脂酸

出後，薄層クロマトグラフィーで個々の中性脂肪構成を検討すると，triglycerideC16，C18：1，

を分馳し，triglyceride（TG）およびcholesterol

C18：2などが主成分であるが，これらのうちで

ester（CE）をガスクロマトグラフィーにより定量

はC16で実験群に軽度の変化があり，またそのほし，TGの月旨酸構成も測定した．

かではC14，C20：2，C24などでも軽度の差を認めた．

＊東邦大学医学部第4内科

−83−

図1

ステロイド群俳腹筋（myosinATPase，pH9・4）タイプⅠⅠ（漉染）線経がタイプⅠとほぼ同じかやや小径化し，対照のようなⅠ，ⅠⅠの差が消失してしまっている．

図2 ステロイド群坐骨神経（エボン包埋標本）
大径有髄線経の髄鞘がしばしば部分的破壊，脱髄を示している．
−84−

表1

り，筋線経のいわゆる変性所見が不可欠であるが，筋中蛋白と中性脂肪

ConIenI0−prote盲nqnd

ステロイドの筋障害はそうした点で異なるものがneutrqllip7dある．また，通常，ミオパテーでは血清CPKの上昇をきたすものが多いが，ステロイド筋障害にはそれらも見られず，この点も本症の特異な点である．本症におけるタイプⅠⅠ線経の選択的萎縮の機序に関しては種々の可能性が考えられるが，嫌気表2蛋白当りの中性脂肪量

性解析代謝の障害が可能性のひとつに考えられ⊂0nIenIoIe∝h neuImllTp；d per proIe；∩る2）．末梢神経に反復電気刺激を加えてもタイプ

conIm lC ho esIerol／
proIeT
n
0．
1三
辻
0．
Ol
eroles−eり／proteTn 8．
55辻
2．
85
C ho es†

SIeroT
d一
什
eo†
d
0．
1匪0 ．
03 ∩
唱
／
∩
唱PrOIein t

ⅠⅠのPAS陽性顆粒が消失しないことからその可

8．
3仕1．
58 増／
m9 PrOIein
0．
17土
0．
08 叩／
n唱PrOIe7nH

能性も充分考えられるが，一方，末梢神経の障害

proIe7∩
0．
07土
0．
03
TrTq ycerTde／★ Pく0 ．
05
・
★P こ
U．
Ul

によりタイプⅠⅠ線経に充分な刺激が到達しないための筋線維収縮不完全さにより，グリコーゲンが

表3

充分消費されない可能性もある．今回の実験ではTriglyceride脂酸構成

坐骨神経に形態学的異常を示す神経線経の存在がFdIyoc；dcomposiH0nOrTri91yceride
ConIrolS†eroTd−†reoted

2．58土0．84

3．81士1．03★★

確認され，前述の可能性がある程度裏づけされたが．今後，タイプⅠ，ⅠⅠに達する神経鱒経を別個に検討して，両者の変化を比較することで更に充0．83土0．49

0．76土0，09

31．89土2．22

38．59士1．45★

5．朗土1．73
8．3（杜1．37

4．35土2．08

また，生化学的研究では筋蛋白の減少と中性月旨

8．28土1．02

24．35土6．00

肪の増加が確認されたが，これらは多くの筋障害

20．05士0．89

10．40土1．22

13．78土3．22

分な情報が得られることが期待される．

に共通の所見である．しかし，これを他の報告と3．29土0．81

3．52土0．89

比較すると，中性脂肪の増加はヒト筋ジストロフ

0．3と辻0．14

0．21土0．07★

ィー症3）や，ジストロフィー鶏4）におけるよりも

2．01土1．84

1．05土0．22

0．ム5士0．88

軽度であり，高木らの除神経後の変化の値5）に近0．16土0．01

1．1（泣0．80

1．04土0．71

1．1古土1．12

0．53土0．38

討する必要があり，いわゆる赤筋，白筋について

0．47土0．25

0．41土0．44

それぞれの値を比較する予定である．

い．これについても今後タイプⅠ，ⅠⅠ，別々に検0．55土0．48★

0．70士0．47

0．18土0．12★★

1．25土0．80

2．21士1．480．8αと0．45

0．37土0．32

5．14土3．92

0．83士0．08

Pく0．01

Pく0．05★★

結語

実験的にステロイド筋萎縮を作成し，形態学的，生化学的な検討を加えた．
筋の変化は一部除神経後の変化と共通の性質を示し，末梢神経にも異常を認めた．
タイプⅠⅠ線経の選択的萎縮の本態に関して，更考に神経の要素を検討する必要性を指摘した．

察ステロイドによる筋萎縮は従来からステロイド
ミオバナーという名称で呼ばれているが，その病態としてはタイプⅠⅠ線経の選択的萎縮がたしかめ

文献1）木下真男：ミオパテーの筋微細構造と生化学．

られている1）．通常のミオバナーと呼ばれる病態

第18回日本医学会総会会誌，p．1394，1971．

では，進行性筋ジストロフィー症で代表される通2）sATOYOSHI，E．，KINOSHITA，M．：Some−85−

aspectsofthyrotoxic andsteroidmyopathy．
In

Musclediseases

Excerpta

MedicaActa．，29：455，1970．
4）君田宣雄，ほか：ジストロフィー鶏骨格筋の中InternationalCongressSeriesNo．199．1969，

性脂肪に関する研究．臨床神経，21：429，

p．455．

1981．

3）Kunze，D．＆01thoff，D．：Derlipidgehalt
menschlicherskelettmuskulaturbeiprimaren

und sekundare Myopathien．Clin．Chim．

ー86−5）高木昭夫：進行性筋ジストロフィー症の脂質化学的研究．臨床神経，7：665，1967．

17）ヌードマウスへ移植されたDuchenneジストロフィー症
生検筋の形態学的検討

若

山

書

弘＊

筋ジストロフィー症における筋再生が正常であ結果るかどうかの問題は本症の治療，予後に関して重裸甘艮的には正常筋およびDMD筋の移植筋組織要な課題でありながらまだ一定の結論は得られて切はヌードマウスの皮下組織の中で1週後には移いない．本年度も昨年度にひき続き，先天的に胸植片のなかの血管新生のために赤くはっきりと識腺のないヌードマウスの皮下に本症生検筋を移植別できた．そして移植片は時とともに小さくなっし，その再生筋を対照筋の移植片のそれと形態学てゆく様に思われた．移植片の割面は周辺部がよ的に比較検討した．

り赤く密で，中央部はやや白っぽく疎であった．
材料と方法

光顕的には正常筋・DMD筋の移植片にて，1週後には移植片の周辺部で核小体をもち明るい核を

ヌードマウスをネンブタールにて麻酔し，2つもつ細胞質が多く微細なmyoblast，myOtubeをの小さな切開を左右の背部に加え，ここへ組織学認めた．他方移植片の中央部には核が消失し硝子的に正常な整形外科手術患者9例，Duchenneジ

様筋原線経をもつ変性筋線経が存在し，その周辺

ストロフィー患者（DMD）8例からの生検筋を小部にはいくつかの紡名垂形細胞が随伴していた（図さく細切（約2×5mm）したものを周囲の筋に

1A，lB）．2，3週後にはmyotubeの生育があり，それらのいくらかには月包体内に空胞を有す

直接触れない様に挿入し縫合した．
移植片は移植後1，2，3，4週目でそれぞれ

るものもみられた．また移植後2週以降には正常

正常対照筋とDMD筋からの再生筋の形態学的比

筋移植片にも問質結合織の著しい増加が認められ較をした．まずヌードマウスをエーテル麻酔後屠

（図1C），DMD筋移植片の問質結合織の増加の

殺し背部の皮膚を切開した．移植片は通常血管新程度（図1D）と区別が困難なほどであった．こ生により赤く，線維組織の被膜により覆われ，周のような状況のなかで最も興味ある所見として囲の組織からは容易に識別可能であった．

DMD再生筋は移植後2週以降には正常筋移植片

移植片のついた皮膚をピンで伸ばし，2．5％クやルの再生筋より直径が細い傾向がみられた．そして

タールアルデヒドをここへ注ぎ，約10分間固定し4週後迄には周辺核と横紋をもつ筋線経や，横紋

た．これは移植片における再生筋線経のcontrac−

形成と中心核をもつもの，更に横紋のみられない

tion artifactを避けるために行なった．その後移myotubeなどが正常筋，DMD筋の移植片に認め植片をヌードマウスの皮膚から除去し，まわりにられた．

付着している結合組織を除去し，小さなblockに

正常筋，DMD筋の移植片の電顕所見に関して締切した．この標本を固定脱水後プラスチックには移植2週後迄は昨年度の報告書の記載l）を参照

包埋した．Thick sectionはトルイジン青にて染されたい．3週後には電顕的に正常筋および色後光昆引こて検索した．また超薄切片をウラニー

DMD筋移植片ともそのmyotubeにはmyofila−

ルと鉛で2重染色後電昆引こて観察した．

mentsは更に密に存在し，dyadsやtriadsもしば
しば観察された．Peripheralcouplingはsubsar−＊昭和大学藤が丘病院神経内科

colemmal regionに位置し，他のsubsarcolem−
−87−

図1A

正常対照筋移植1週後の光顕所見．移植片の周辺部（写真上方）には明るい核と核小体をもった再生筋線経がみられ，移植片中央部には核のない顆粒状の細胞質をもつ変性筋線経がみられ，このような筋線経には数個の紡名垂形細胞が随伴しているのがみられる．
（トルイジン青染色，×175）
図1B DMD筋移植1週後には，その周辺部に明るい核と微細な細胞質をもつ再生筋線経がみられる．中央部には脂肪滴や変性筋線維（写真右下）がみられる．（トルイジン青染色，×175）
図1C 正常対照筋移植3週後には明るい核と核小体をもつ再生筋線経がみられ，そのまわりには著しい問質結合織の増加がみられる．
（トルイジン青染色，×175）
図1D DMD筋移植3週後には再生筋線経はみられるが，正常対照筋移植片のそれと比べ細い傾向がみられる．また著しい問質結合織の増加もみられる．（トルイジン青染色，×175）

mal vesicleとはその内部に微細な顆粒状物質を分もみられた（図3，4）．まれにmyotubeに嚢有し，細胞膜との間にjunctionalfeetがみられる状に拡大したそのなかに微細頼粒状物質をもつことから鑑別された（図2）．この形態はsarco−

SarCOplasmicreticulumがみられ，これがtrans−

plasmic reticulumとtransverse tubulesとの問

VerSe tubulesとjunctional contactを作っていでみられるinteriorcouplingと同じであった．4

たりもしていた．更に1−4週までにみられる筋

週後には周辺核と横紋などを有する再生筋線経が細胞の胞体内には，しばしば特に核の周辺にGol−観察されたが，tranSVerSe tubulesは縦走する部

gi装置やprimaryないLsecondarylysosome

一88一

図2

DMD筋移植3週後にみられたmyotubeの電顕像・矢尻はperiphe−
ral couplingを示す．（×38，000）

図3

DMD筋移植4週後にみられた周辺核と横紋を有する筋線経．Mit。＿
ChondriaやSRがみられ，tranSVerSetubuleは縦走するものが多い（矢印）．（×13，700）
−89−

図4

正常筋移植4週後にみられた周辺核と横紋を有する筋線経．多くのmitochondriaがみられ，tranSVerSe tubuleは縦走するものが多い（矢印）．（×13，800）

れる．

なども観察された．
なおDMD筋の移植片にみられたmyoblast，

今迄の各種方法を用いての本症再生筋の形態学

myotube，regeneratingmusclefiberなどの細胞膜は透過電顕的にはすべて正常（連続）であった．

的検討では，横紋形成の欠如，脂肪滴の増加などが指摘されてきたが，最近の研究では正常筋からの再生筋と本症再生筋との形態学的差異はないと考いう報告が多く，まだ本症における筋再生が不完

察DMD生検筋にみられる活発な筋再生現象が正全であるという形態学的な確証はみられない．本

常か否かは重要な課題でありながら，現在まだ一研究では光顕および電顕的に本症生検筋の移植4定の結論には至っていない．例えば本症生検筋で週後までには形態学的に両者の差異をみつけるこは電顕的に筋再生のstem cellと考えられるsatTとは困難であったが，光顕的に移植2週以降にellitecellが定量的に増加しており，この増加は本DMD筋移植片の再生筋線経の直径が細い傾向が症患者の臨床症状が急速に悪化するintermedi−

みられたことと，DMD筋移植片のmyotubeに

ate stageに黄も著しく，また細胞形態やconca−
navalin Aなどのレクチンに対する細胞化学的態

transversetubulesから成るtangleの形成がみられたことは特に興味深い．後者は本症の膜異常説

度2）もactivateされている3）．しかしこのようなと関連して重要である．本症生検筋の変性過程の活発な筋再生活動が臨床的な筋力回復に結びつか

初期変化として筋細胞膜の変化が電顕的にとらえず，本症の筋再生はineffectiveであろうと推測さられており4）5）6），本症ではmembranebiogenesis−90−において何らかの異常のある可能性が示唆される

文

献が，本実験では本症再生筋のmyotubeにも著しい

1）若山吉弘：Duchenneジストロフィー症生検筋

膜系の増殖がみられ，活発なmembranebiogene−のヌードマウスへの移植実験．筋ジストロフィ

Sisの存在が示唆された．また本症myotubeなどの直径の問題はDMD生検筋組織にみられる結合ー症の病因に関する臨床的研究（三好班），昭和

織の移植後の増加による2次的な現象とも考えら

2）wakayama，Y・，Bonilla，E．＆Schotland，D．

れようが，上述したように正常筋の移植片でも移55年度研究報告書，1981，p．114．

L・：Ultrastructurallocalizationofconca●

植後2週以降は活発な問質の増殖がみられ，結合

navalin A−bindingsitesin satellite cells of

織の増加という点ではDMD筋の移植片のそれと

humqn skeletal muscle・Cell Tissue Res．，

大差はなくなる．そのうえDMD筋移植片の再生

210：79，1980．

筋の直径が正常のそれに比し細くなるのは，正常

3）若山書弘：進行性筋ジストロフィー症の成因を筋移植片の問質の増柏がみられる移植後2週以降めぐって，シンポジウムⅠⅠ．再生現象よりのアであるので，この現象は2次的というより病因とプローチ．臨床神経，21：1083−1086，1981．

関連したprimaryのものの可能性が大きいと考4）Mokri，B．＆Engel，A．G．：Duchenne

えられる．今後DMD再生筋線経と対照再生筋線

dystrophy‥Electronmicroscopic

経の直径を定量的に検討し，更に本症筋再生の問

pointingto a basic orearlyabnormalityin

題を研究してゆきたい．

the plasma membrane of the muscle fiber．

findings

Neurology（Minneap．），25：1111，1975．

本研究に際し，標本の1部の提供をして頂いた

5）Bonilla・E・，Schotland，D・L・＆Wakayama，

Univ・OfPennaのD．LSchotland教授，愛知県

Y・：Duchennedystrophy：Focalalterations

コロニー中央病院小児神経科，熊谷俊幸先生，昭inthedistributionofconcanavalinAbinding

和大藤が丘病院整形外科の諸先生，標本作製にた

Sitesatthemusclecellsurface．Ann．Neuro1．，

ずさわって頂いた鬼木弘明，日野哲也，鈴木孝人

4：117，1978．

の各技師に深謝します．

6）schotland，D・L・，Bonilla，E．＆Wakayama，
Y・：Freezefracturestudiesofmuscleplasma
membranein human muscular dystrophy．
Acta Neuropatho1．，54：189，1981．

ー91−18）進行性筋ジストロフィー症のfreeze−fractureによる筋内部膜系の形態学的研究

小

口

研究協力者

喜三夫■

柳

沢

信

夫書

筋ジストロフィー症の筋膜病変の研究は，で，筋線経の位置を調整し，割断面が筋原線経とMokriらの原形質膜の異常の報告に始まり，Sch−平行になるようにした．レプリカを筋組織から艶malbruchら，Bradleyら，Carpenterらの報告が続いた．一方筋内部膜系の形態異常も我々やす操作，すなわち，市販のハイター中で筋組織をChouらにより指摘された．

るのを防ぐため，筋組織をハイターに浮す前にレ

解かし，水洗いの過程でレプリカがバラバラにな

今回我々は，従来のmarkerを使用した電顕にプリカ面に2％コロジオンをつけた．レプリカかよる観察，あるいは1／Jm以上の厚さの標本の高圧電塁引こよる観察とはことなるfreeze−fracture

ら筋組織を取り去り，水洗い後レプリカをイソア

により，筋内部膜系，すなわちT−SyStemとsar−

本をメッシュ上にのせた．日立HS9型電顕によcoplasmic reticulum（SR）の形態学的異常を観察することを目的とした．

り観察，写真撮影を行った．

ミル中に浸し，コロジオンを融解除去した後，標

結

方

果

コントロール：筋内部膜系のうち，T−SyStem

法は殆んどが，筋原線経に対し直角に位置していた．

Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）4
例，正常コントロール1例を検索した．DMDは（》

少数ながら，longitudinal T−SyStem（LTSyS−

K．F．3歳，男．CPK：7390，Gowers徽候，仮tem）も観察された．T−SyStemの管径は，triad性肥大あり．（診K．Y．5歳，男．Gowers徽候，の部位で，1．5〜2倍となっていた（図1）．SRは仮性肥大あり．（診H．S．6歳，男．CPK：737，
Gowers徽候，仮性肥大あり．⑥S．Ⅰ．9歳，男．

T−SyStemの間に全体として網状構造を形成していた（図1）．Triadの部位のSR（junctional

Gowers徽候，仮性肥大あり．コントロールは，

SR）は他の部位のSR（freeSR）の数倍に拡大しBasedow病によるミオバナーを疑われ，生検の結ていた．T−SyStem，junctionalSR，freeSR共果，光顕，電顕所見共に正常であったものである．

にPF face，EF faceが観察された（図1）．

筋標本は，筋生検後2．8％グルタールアルデヒドでDMD：T−SyStemの位置が不規則となってい4〜5時間固定，カコジレート緩衝液中に保有さた．平行2重・3重のT−SyStemがみられ，コンれたものを40％グリセリン中で18時間〜24時間処

トロールに比較して，LTSyStemの増加が観察さ

理．日立HFZ−1型凍結割断装置を使用し，日立

れた．T−SyStemの管径の変化はコントロールとHUS−5型蒸着装置で真空度2×10￣STorr，試差がなかった．T−SyStemからなるhoney−COmb

料台−105℃の条件で割断，白金・カーボン蒸着

構造もよく観察された．JunctionalSR，free SRの形態はコントロールと明らかな違いは観察され後，割断面レプリカを作製した．レプリカは全面一定でなく，筋線経の割断も種々の方向になるのなかった．さらにTriadの部位で，T−SyStemとjunctional SRのanaStOmOSisの所見は観察されなかった（図2）．

＊信州大学医学部第3内科
−92−

図1

コントロール．Freeze−fractureによる筋内部膜系．t：T−SyStem（EFface），t＊：T．system（PFface），Sr：SarCOplasmicreticulum（EFface），
Sr＊：SarCOplasmic

考

reticulum（PFface）．mit：mitochondria．

察

intramembranous particlesを観察，計測できる

DMDにおいて，我々が先に報告したmarker

ことであるが，従来の研究では，Brayら3）はニワを使用しての超薄切片1），および1／Jm以上の厚ト））の筋において，SRのintramembranouspar−

さの標本の観察2）で認められた筋内部膜系の異常，

ticlesはslow twitch fiberより

すなわちTLJSyStemの走行異常，LLSyStemのの方が多いと報告している．さらにCroweら4）

fast twitch fiber

増加，honey−COmb構造などをfreeze−fracture

は，dystrophic chickenの大胸筋の観察で，freeで確認できた．SRについては，コントロールとSR，junctional SRのPF faceのintramembra・

DMDの間に明らかな形態学的な違いは観察でき

nous particlesが，コントロールに比較して，減なかった．Triadの部位で，T−SyStemとSRの少し，T−SyStemではPF face，EF face共に

anastomosisを形態学的に観察し得なかったが，intramembranous particlesは減少していたと報

markerがT−SyStemからSR中に入っている
ので1）2），今後同部の形態学上の観察が問題とし告している．今後ヒトDMDについても，T−て残る．一方freeze−fractureの特徴のひとつはintramembranous particlesの検索は重要な課題−93−

SyStem，SRの膜構造異常を検討する意味で，

図2

DMD．コントロールに比較して，TTSyStemの走行の不規則が観察される．t：T−SyStem，＊sarcoplasmic reticulum．

である．

フィー症における電子顕微鏡および高圧電子顕DMDの資料の提供をいただきました国立神経センター，埜中征哉博士に深謝致します．

微鏡によるT−SyStemの研究．神経進歩，24：
742−749，1980．

3）Bray，D．F．＆Rayns，D．G∴Acomparative文献freeze−etChstudy ofthesarcoplasmicreticu−

1）Oguchi，K＆Tsukagoshi，H．：Anelectron−
microscoplCStudyoftheT．systeminprogres−Sive muscular dystrophy（Duchenne）usinglanthanum．J．Neurol．Sciリ

lum of avian fast and slow muscle fibers．J．
Ultrastr．Res．，57：251−259，1976．
4）crowe，L．M．＆Baskin，R．J．：Freeze−fracture
Ofintact sarcotubular membranes．J．Ultra−

44：161−168，

1980．

Str．Res．，62：147−154，1978．

2）小口喜三夫，塚越広：Duchenne型筋ジストロ−94−19）筋疾患におけるsatellite cellの検討

黒 岩 義五郎＊
研究協力者
日

石

本

進

士＊

後

藤

幾

生＊

するため，各症例より10個ずつのsatellitecell核的進行性筋ジストロフィー症においては，病因と共に筋再生能の異常の有無が重要と考えられるが，内のeuchromatinの面積の割合の平均値を算出した．

筋再生に関する本態は，いまだ明らかでない．筋結再生におけるstem cellについての記載は，1961

果

年Maurol）によりなされ，以後satellitecellが筋Satellitecell核の仝筋鞘下枝に対する割合は，再生のstem cellである可能性が強くなっている．

対照4．32±1．29％（mean±S．D．）及び筋萎縮性又，若山ら2）はDuchenne型筋ジストロフィー症

側索硬化症3．69±2．47に対して，強直性筋ジスト

でsatellitecell数の増加を報告している．そこでロフィー症11．6±4．40（p＜0．05），多発性筋炎

今回私達は各種神経筋疾患のsatellite cellに着

14・88±6．31（p＜0．05），Duchenne型28．10±

日し，筋ジストロフィー症の再生能について検討

7・03（p＜0．005）と有意の増加を認めた（図した．

1）．又筋線維一本当りのsatellite cell核数も，筋萎縮性側索硬化症0．087±0．055％，対照0．094±
対0・032に対して，強直性筋ジストロフィー症

象

進行性筋ジストロフィー症の中では進行の速い

0・333±0．131（p＜0．02），多発性筋炎0．391±

Duchenne型と，進行の比較的遅い強直性筋ジス
トロフィー症を選んだ．又筋再生の盛んと考えら

0・202（p＜0・05），Duchenne型0．494±0．131（p＜0・005）に有意の増加を認めた．又，Satellitecell

れる多発性筋炎，再生の盛んでないと考えられる

核内のeuchromatinの面積の割合は対照49．95±

筋萎縮性側索硬化症および対照の生検筋各々5例

2・10％に対して，多発性筋炎61．44±7．57（p＜ずつ計25例について検索した．

0．05），Duchenne型54．38±1．86（p＜0．01），筋萎

方縮性側索硬化症55．82±4．61（p＜0．01）に有意の増加を認めた（図2）．

法

Satellitecell数の変化をみるため，電顕にて各考

症例毎に200個以上のsatellite ce11核を含む仝筋

察

翰下枝の写真を撮り，Satellite cell核の全筋鞘下筋原性疾患で筋再生が盛んと考えられる多発性核に対する割合を算出した．又，以上のデーター

筋炎においてsatellitecellが増加し，又神経原性より筋線維1本当りのsatellite cell数を出すた疾患で筋再生の盛んでないと考えられる筋萎縮性め，epOn包埋標本のToluidine blue染色標本にて，各症例毎に200本以上の筋線椎に存在する側索硬化症で対照と差異を認めなかった事より，satellite cell核を含む全筋鞘下核数を光顕写真よSatellite cellの増加は，筋ジストロフィー症におり算出した．又satellitecell自体の活性度を検討いてもstem cellの段階での再生能が保たれていDuchenne型及び強直性筋ジストロフィー症でのる可音別生が示唆された．又筋萎縮性側索硬化症の＊九州大学医学部脳研神経内科

如く，神経原性筋萎縮でsatellite cellが増加せ−95−

PERCENTAGEOFSArELLIT【CELL NUCLEHN SUBSARCOLEM肌AL
NUCLEI AND SATELLITE CELL NUCLEICONT

札S MTD

mean土S・D・＝！5I●p＜0・防川

DMD●●p＜0．別

図2

CONT．

ALS

NtTD

PM

DNtD

のeuchromatinの面積の割合において，DuchT

mea∩土S．D．＝三51

enne型，多発性筋炎，筋萎縮性側索硬化症で増加区llしている事は，その意義付けは難しいが，これら

CONT∴controIの症例においてsatellite cell自体が何らかの活

ALS：amyotrophiclateral sclerosis
MTD：myotonic dystrophy
PM：polymyositis
DMD：Duchenne muscular dystrophy

性冗進状態を示している可能性もあり，今後sate−
11itecell内部の小器管，細胞質と核の面積の割合
等をさらに詳しく検討していきたい．
文ず，筋原性疾患で全て増加した事より，Satellite
Cellの増加因子として，筋線経の崩壊が重要と考献1）Mauro，A．：Satellite cellofskeletalmuscle
fibers．J．Biophys．Biochem．，9：493−495，、1961．

えられた．ただしHoelstら3）はWerdnig−
Hoffmann病においてもsatellite cellの増加を

2）wakayama，Y．＆Schotland，0．L．：Muscle

認めている点は同じ神経原性疾患でも発病時の年

Satellite cell populationin Duchenne dyst−

齢が若ければsatellite cellが増加し易い

rophy．Muscle regeneration，edited by A．

（Werdnig−Hoffmann病は乳幼児期発症）事，及び筋原性疾患でも筋崩壊の進行が速いものがMauro etal，New York，121−129，1979．

Satellite cell数を増加させ易い（Duchenne型は3）Haelst，U．V．：Anelectronmicroscopicstudy
Ofmusclein

Werdnig・Hoffmannsdisease．

強直性筋ジストロフィー症より病像の進行が速Virchows Arch．Abt．A Path．Anat．，351：

い）事等，種々の因子も考えられ，今後さらに詳291−305，1970．

しく検討する必要がある．又，Satellite cell核内−96−20）遠位型ミオパチーの5例−筋萎縮の分布とその筋病変について

中

西

研究協力者

孝

雄＊

葛

原

茂

達位型ミオバナーはWelanderl）によって確立

寺封＊
結

果

された疾患概念であるが，我が国では遺伝形式や

1）初発部位：全例が下肢遠位筋から始まって臨床像の点でWelanderの報告例とは異なる型のいる．最初の自覚症状は，歩行時脱力感，垂れ足，遠位型ミオバナーが，近年，注目されるようにな

スリッパが脱げ易い，などであった．筋力低下にった2ト4）．我々は，このような遠位型ミオバナーの気づく数年前に，運動時の筋肉痛が出現した症例

臨床像と筋病理所見を明らかにすることを目的ともあった．

して，当施設で経験した病期の異なる5症例につ2）筋萎縮の分布と進行型式：下肢遠位筋の萎

いて，筋萎縮の分布を比較すると共に，生検筋の縮と筋力低下に気づいた直後に，下肢近位筋の障

組織学的・電顕的検索を実施し，かつ障害度の異害が全例で出現してし†る．下肢に比較すると程度なる筋の病理所見を比較検討した．

は軽いが上肢の筋力低下も始まっている．5症例
を罷病期間の順に並べて，筋障害の分布を図示す

対象と方法

ると図1のようになり，筋障害の分布と進行には

検索対象は，1978年以降に当科に入院した患者

一定の傾向があることが分る．すなわち，筋力低のうち，遠位筋初発あるいは遠位筋優位の障害を下は，下腿部では前月至骨筋などの伸筋群に強く，示すミオパテ一息者5名，8生検筋である（表）．

これに対して排腹筋などの屈筋群は筋萎縮はあっ

症例1は両親が従兄妹婚であるが，血縁に同病者ても筋力はよく保たれている．大腿部では逆に，はいない．症例4は両親が従兄妹婚で，かつ母親膝屈筋群の方が強く障害され，伸筋群の方が筋力に類似症状が認められたといい，同月包6名中，男は保たれている．下肢帯の筋も同時に障害される1名と女2名が発症しているがそれ以前の世代にために，下肢の筋障害の分布は，遠位型とも近位発症者はいない．症例5は，血族婚はなくて患者型とも言い難い独得のものとなる．上肢の障害はの世代だけに発病者があり，同胞7名中，男2名

下肢に較べると遅れて出現し，程度も軽く，小手と女1名が罷息している．

筋と上腕筋が好んで障害される傾向がある．上肢

筋生検は全例に実施し，組織学的検査，組織化学的検査，電顕的検索を行なった．初回の生検で帯の筋力は長期羅息例でも比較的よく保たれていた．

病変が強すぎたり軽すぎたりして，特異的変化を

3）筋の組織病理：仝例に共通した所見は，認めなかったものについては複数回の生検を行な

rimmedvacuolesS），neCrOSis，phagocytosisなどの筋原性病変（図2A）と，一見，神経原性萎縮った．

を示唆するsmalldark angulated fibersの集合像であった（図2B）．これらの典型的所見が認められたのは，臨床的に中等度の障害を示す筋にお＊筑波大学臨床医学系神経内科

いてであり，萎縮が高度な筋で1ま細い萎縮線経が
ー97−

表
症例 1

・
症例 2

症例 3

症例 4

症例 5

女

男

女

女

男

性
年

5症例の要約

齢

21 歳

38 歳

47 歳

44 歳

44 歳

発症年 齢

18 歳

33 歳

4 1歳

34 歳

16 歳

初発 部位

下肢遠 位

同

同

同

同

C

P

K

93

527

60

69

1560

家

族

歴

従兄妹婚

なし

なし

常 ・劣性

常 ・劣性

筋生 検部 位

大 腿四豆
員筋

俳腹 筋

前月
至骨 筋
上 腕三 頭 筋

大腿 四頭 筋
俳 腹筋
上 腕二 頭 筋

上腕 二頭 筋

CqSe No；1

Durcltion：

2
5y

5
5y

句

．5

6y lO y28y

Grclde：Very severe−，SeVere囲，mOderqte∈喜∋，mild（≡≡≡∋
図1

5症例の罷病期間と筋障害の分布

脂肪組織の中に散見されるのみであり，逆に萎縮見に加えて，症例1，2，4では周期が7−9mmのも筋力低下も軽微な筋では，全く正常な組織像が層状構造物（Fukuharaら6）の報告したtubul0−

見られた．すなわち，本症の筋病変は全身に同時

membranous structureに酷似する）が筋形質内に始まるものではなく，かなり選択的・散在性にに散見された（図3B）．症例2では筋核内に15−20

障害されることを示唆する．

nm径のfilamentより成る封入体（図3C）や，

4）電顕所見：筋線椎を切片中に見出し得なかった症例5を除く全例に，光頚的rimmed vacu−

約40nm径のtubuleの集合（図3D）を，症例101esに対応して，多数のmyeloid body，dense

認めた．

では筋形質内に15−20nm径のfilamentの集合をbody，遊経の，あるいは膜で囲まれたグリコーゲ
ン顆粒などを内包するautophagic vacuoles5）を認めた（図3A）．筋原線経の変化は軽い．光顕的考察Welanderl）の報告した違位型ミオパテーは，常Smalldarkangulatedfibersに対応して，萎縮筋ではミトコンドリアの増加が認められたが，異常

染色体優性遺伝で，中年期に手指脱力で発症し，ミトコンドリアは認められなかった．これらの所も障害されることがある．我が国では，三好ら2）3）−98−

四月支遠位筋，特に伸筋群が優位に侵され，近位筋

図2

生検筋の光顕像（症例2，×400）
2A：Modified Gomori−trichrome染色．多数のrimmed vacu−
olesと壊死線経を示す．
2B：NADH−TR染色．Smalldarkangulated負bersにはvacu−
0leを伴うものが多い．
−99−

一100−

図3

生検筋の電鏡像
3A：Autophagic vacuoles．内部に多数のmyeloid body，dense
body，membrane，boundglycogenを認める（症例1，×4，600）・
3B：一部を境界膜に囲まれたtubulomembranousstructure（症例4，×36，000）．
3C：筋核内のfilamentousinclusion（矢印で囲まれた部分）と空胞（症例2，×16，000）．
3D二変性線維内に認められたtubular aggregatesとdense
chromatinを有する異常な筋核（症例2，×14，000）．
−101−

が本邦に特異的な病型として，常染色体劣性遺伝

トリクローム染色で認められるrimmed vacu．

で，若年期に下月支遠位筋力低下で発症し，屈筋優

01esとNADH−TR染色で認められるsmal1dark

位に障害され，下肢近位筋も早期におかされる亜型を報告した．更に，水沢ら4）は，孤発性で比較的

angulated fibersの集合像が挙げられる．両者ともそれ自体としては非特異的所見であるが，本症

若年期に下肢遠位筋障害で発症し，伸筋優位に障の報告例でしばしば記載されており7）8），診断上極害され，かつ下肢近位筋も比較的早期に障害され，筋生検で高度の空胞変性を示す一病型を報告した．

めて重要な所見である．これらは，パラフィン包
埋切片では見出し狂い所見であるので，筋の組織

従って，遠位型ミオバナーにはその遺伝形式，発化学的検索実施の重要性も併せて強調しておきた症年齢，臨床像，筋病理などを異にするいくつか

い．なお後者は，神経原性筋萎縮の際に認められの亜型が存在すると考えられる．

る所見i；酷似しているので，本症には神経性因子

さて，ここに報告した5症例のうち，症例1，も関与している可能性は否定できない二2，3は孤発例，症例4，5は常染色体劣性の家筋生検で認められたもう1つの特徴は，同一患族性発症例と考えられ，初発年齢も10代後半から者でも臨床的な障害の差に対応して，筋病変の程

40歳初めにまで及び一定していない．しかし初発度も多様であったことで，典型的な空胞変性の認年齢に関して注目されるのは症例4の家系で，発められる部位，筋ジストロフィー症の末期のよう端者は34歳頃に筋力低下に気づいているのに対し，な強い脂肪変性を示す部位，逆に組織学的に正常

その姉は14歳頃，兄は25歳頃に筋力低下に気づいな部位が，同一患者において認められた．本症のている．すなわち，本症では同一遺伝子によって従来の報告例では，筋ジストロフィー症類似の筋発症する場合でも，初発年齢が思春期から中年期

病変が強調されたり2）3），空砲変性が強調されたりまでにわたりうることを示しているわけで，このしている4）が，筋病変が生検部位によって異なっている点も留意する必要がある．

発症年齢の多様性は，本症を亜型に分類する際に考慮すべきことのように思われる．

電顕的検索では，組織学的なrimmedvacuoles

このような遺伝歴や発症年齢の差があるにもかの所見に対応して，多数のmyeloid body，dense

かわらず，筋障害の分布についてはこれら5症例の間には，結果の項で述べたような一定の傾向がbody，グリコーゲン顆粒を内包するautophagic
VaCuOles5）が認められた．この他に特異な所見と認められたことは興味深い．本症はその名が示す

して，封入体筋炎9日0）に認められるような，核内あように，下肢遠位筋に初発し，かつ最も強く侵さるいは形質内のfilament様封入体の認められたれるものではあるが，殆んど同時に下肢近位筋や症例や，Fukuharaら6）によって新しいミオバナ

下肢帯筋も障害される全身性の筋萎縮症である．
しかし，他のミオパテーと比較して特異な点は，ーとして報告されたtubulomembranous myo−pathyに認められたと同じ層状毒茸造物tubulo＿

筋障害が近位と遠位で異なるだけでなく，伸筋群

membranous structureの見られた症例もあった．

と屈筋群でも顕著な差が認められたことである．

しかし，自験例の臨床像は封入体筋炎や，顔面筋

自験5例では仝例で前月至骨筋の脱力が極めて強かったのに対し，月非腹筋は萎縮があるにもかかわら障害を特徴とするtubulomembranousmyopathyとは異なっていた．Filament様封入体はNonaka

ず筋力はよく保たれており，近位筋の屈筋群より

ら8）の報告した遠位型ミオバナーでも認められてはむしろ強い筋力を示した．伸筋群と屈筋群の差異については，三好ら2）3），水沢ら4）も強調していいる．封入体筋炎とtubulomembranous myo−pathyは，組織学的には遠位型ミオバナーと同じるが，前者らの例では屈筋群の方の障害が強いとくrimmed vacuolesの出現を特徴とする疾患でしており，自験例の遠位筋については，水沢ら4）の症例の特徴に似る．

あることも考慮すると，これらの3疾患は病因的

次に筋生検の特徴としては，凍結切片のHEやに極めて近い疾患である可能性があり，今後の症例の蓄積が望まれる．

一102−

要約と結論

染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症Auto−

1．遠位型ミオバナーの3孤発例，2家族性発症例を報告した．罷病期間は3年から28年の問にあった．

somalrecessive

distalmuscular

dystrophy一一わが国にとくにみられる新しい末梢型筋ジス
トロフィー症−．日本臨林，35：3922，1977．

2．筋障害の分布は極めて特異で，遠位筋に加4）水沢英洋，中野今治，井上聖啓，高木昭夫，萬えて近位筋，下肢帯筋も早期から障害され，かつ年徹，豊倉康夫：筋線経に高度の空胞変性を伴伸筋群と屈筋群の間に顕著な差が認められた．

ったdistalmyopathyの一病型．神経内科，12：3．筋生検では，rimmedvacuolesによって特徴づけられる空胞変性とsmall dark angulated
fibersの集合像が，共通して認められた．

40，1980．

5）Fukuhara，N．，Kumamoto，T．＆Tsubaki，T．：
Rimmedvacuoles．Acta．Neuropathol．（Berl．），

4．同一患者に複数回の生検をした例では，生検部位ごとに組織学的病変が大きく異なった．

51：229，1980．
6）Fukuhara，NリKumamoto，T．，Hirahara，H．＆

5．電顕的にはautophagicvacuolesの出現が特徴的であったが，その他に，封入体筋炎に認められるようなfilamentous inclusionやtubul0−

Tsubaki，T．：Anewmyopathy withtubu10−
membranousinclusions．J．Neurol．Sci．，50：
95，1981．

membranous myopathyに特異的とされる層状7）Markesbery，W．R．，Griggs，R．C．＆Herr，B．：

構造物が認められた症例があり，これらの疾患とDistalmyopathy：electron microscopic and遠位型ミオバナーとの関連性が示唆された．

histochemicalstudies．Neu号0logy（Minneap．），
27：727，1977．

文献8）Nonaka，I．，Sunohara，N．，Ishiura，S．＆

1）welander，L．：Myopathia distalis tarda
hereditaria．249

examined cases in72

pedigrees．Acta．Med．Scand．，141（Supp1

Satoyoshi，E．：Familialdistalmyopathywith
rimmed vacuole andlamellar（myeloid）
formation．J．Neurol．Sci．，51：141，1981．
9）Yunis，E．J．＆Samaha，F．J．：Ⅰnclusionbody

265）：1，1951．

2）三好和夫，多田義明，岩朝勝，川井尚臣，中野myositis．Lab．Invest．，25：240，1971．

益弘：Distalmyopathyの遺伝・臨床型．白験
7家系14症例とわが国文献例についての成績．

10）Carpenter，S．，Karpati，G．，Heller，Ⅰ．＆Eisen，

臨床神経，14：963，1974．
3）三好和夫，岩朝勝，川井尚臣，佐々木尚子，日variety ofidiopathicinflammatory myo−

下香苗，八木田正聖，日浅光春，多田嘉明：常−103−

A．：Ⅰnclusion body myositis：a distinct

pathy．Neurology（Minneap．），28：8，1978．

21）Oculopharyngealmuscular dystrophyとdistalmyopathyをつなぐもの

福 原 信 義＊
研究協力者

熊

本

俊

秀＊

椿

忠

雄…

下垂（＋）．眼球運動は正常だが，水平性注視眼振は じ め に近年，distal myopathy（DM）の筋病理所見で（＋）．咽頭反射やや低下，上肢に筋萎縮，筋力低は，rimmed vacuoles（RV）が重要であることが下が見られたが，Gowers徽候（，）・ミオトニー

注目され1）2），その病変機序とも関連して論じられ現象（一）．血清CK：68．9U（正常20以下），37歳てきている．しかし，RVはもともと，OCulophary−

時，構語障害が生じてきたため，精査を目的とし

ngealmusculardystrophy（OPMD）に特徴的なものとして報告された3）ものである．この両疾患は，て入院した．

筋萎縮，筋力低下の分布は異なるが，類似点が多常．視力・視野：正常．眼険下垂はあるが，眼球い（表1）．一方，両者の中間型と考えられるocu−

運動は正常で，複視（−），瞳孔：正常．顔筋の筋

lopharyngodistalmyopathyの障害は，還位筋優位であり，OPMDでは近位筋優位であることによ

力は軽度低下しているが，噴筋は正常．軟口蓋，り鑑別される．我々は，OCulopharyngodistal

軽度の喋下障害（＋），胸鎖乳突筋の筋力は右側で

myopathyとは別に，父はOPMD，子はDMと考軽度に低下．四肢筋は近位筋，特に上肢で筋萎縮・えられる家系を経験した．この症例は，別の意味
でOPMDとDM−との関連を示唆する重要な家系

筋力低下がみられ，異状屑甲（＋），ミオトニー現と思われるので報告する．

消失，下肢では正常．病的反射（一）．小脳失調や感覚障害はみられない．

症

入院時現症：一般理学的所見：正常，知能：正舌の動きは正常で，萎縮もみられないが，鼻声で，象（−），線維束性攣縮（−），深部反射は上肢で検査成績：血清CK89．8Uのほか，血清化学，な

例

40歳男

らびに免疫学的な異常はみられない．髄液：正常．

家族歴：血族結婚（−）

心電図：正常．テンシロン・テスト陰性．食道Ⅹ

既往歴：特別のことはない．

線透視：バリウムはrecessuspiriformiSのvalle−

現病歴：23歳までは草野球の選手として活躍しculaに停滞し，一部，気管の方に誤飲されていていたが，23歳時より徐々に眼瞼下垂が生じ，近た．筋電図：ほとんどの筋で，200〜300／JV，Short

位筋のやせにも気づくようになった．26歳頃より，

durationのNMUがみられ，ミオパテーと考えら

水を飲む時むせて，せき込むようになった．同じ

れた．ミオトニー現象（一）．運動神経伝導速度（左頃，階段の昇降に際し，腰部の筋力低下に気づいた．29歳時，眼瞼下垂と筋萎縮を主訴として新潟

脛骨神経）：44m／sec．筋生検（左三角筋）：後述．

大学神経内科受診．当時，眼底：正常．両側眼瞼

（40mg／日）の投与を受けたが，無効であった・この後，数年の間に徐々に歩行障害，言語障害が悪症例1■新潟大学脳研究所神経内科■都立神経病院

経過：一時，多発生筋炎の疑診で，prednisolone

化し，特に上肢の筋萎縮は著明になってきた．しかし，ガソリン・スタンドで何とか働いているこ一104−

表10culopharyngealmusculardystrophyとdistalmyopathyとの比較
Oculopharyngeal
Muscular Dystrophy

Distal Myopathy

FamHyHistory（＋）orト）（＋）orト）Age at Onset

25−70y．

ChHdhood
20−70γ．

Distr沌utjon of Ocular，Pharyngeal
Muscle Weakness

Arms a Legs＿→Ljmb Muscles（Distal＞

Proximal）（Proximal〉Distal）【MG

町OPathic（mjxjn9SOme Myopathlc（mixjng someneuropathic features）

Noml
Serum CKorneuropathic features）

Non鳩l

or

Slightlyincreased slightlyincreased

Muscle Biopsy
Rimd Vacuoles（＋）

Small Angular Fibers（＋）

TypeI FiberAtrophy（＋）in40−50鴛

（＋）in50‡〜peIIH諾‰両（・）jn40−7…

（＋）軸00鴛（◆）（＋）とができた．喋下障害が強くなり，食物がしばし

筋力は軽度低下し−ていた．筋電図：ミオバナーのば鼻に逆流するようになった．咳も弱々しくなり，
この間に2〜3回気管支肺炎を生じている．37歳

所見．血清CK：128mU／ml（正常80mU／ml以

時，39歳時の診察では，つかまって数歩歩けたが，がはっきりしてき，8歳時には，つま先き立ちが上肢は水平位よりは上には挙上できなかった．眼出来なくなり，peS equinovarusとなっている．

瞼下垂はあるが，外眼筋の働きは正常であった．

9歳時に左大腿四頭筋より生検．

症例2下）．その後，深部反射も徐々に消失し，筋力低下

9歳男（症例1の子）

現病歴：両親は2歳頃より，歩行がおかしいの

筋生検所見ではないかと疑っていたという．6歳時，右足をわずかにひきずり，走るのが遅いということで新経は著明に脱落し，残存線経の大部分は直径

潟大学神経内科受診．
初診時現症：一般理学的所見：正常．知能：正症例1結合織の増加，脂肪浸潤が強く，筋線200〜250JLmと肥大していた．Fiber−Splittingもみられたが，ringfiber，SarCOplasmicmassはみ常，眼底：正常，眼瞼下垂や囁下障害はなく，脳られなかった．Gomori trichrome染色で，一部神経系に異常はみられない．四肢の筋力はほぼ正の筋線経に暗赤色の顆粒状物質がみられ，酸性フ常で，筋萎縮もみられない．深部反射はアキレス

オスファターゼ陽性であった．

騰反射のみ低下．小脳失調や感覚障害はない．

症例2

筋線経の著明な大小不同があり，結合検査成績ならびに経過：歩行障害は徐々にはっ

織線経の増加，脂肪浸潤がみられた．小角化線経

きりしてき，3か月後には右下腿は左に比べわずも少数みられたが，萎縮線経の大部分は円形であかに細くなり，右大腿屈筋群，排腹筋，膵骨筋のった．直径150〟mまでの肥大線経がかなりみられー105−図1 症例2の大腿四頭筋，H−E染色，×80

図2

症例2，異常線維（13−19nm径）の集積よりなる封入
体，×37，000

たが，それらはtypeII線経であった．RVl）3）がgicvacuoleのほか，それに接して，直径13−19nm

多数みられ（図1），VaCuOleには酸性フオスファの線維状物質の集合しているのがみられたが，方ターゼ陽性顆粒を入れていた．電顕では，グリコ−ゲン顆粒，膜様へ頼粒状物質の集ったautopha−

向により管状にみえるところもあった（図2，
3）．

−106−

図3

考

図2の拡大・管状にみえる部分（矢印）がある．×96，000

察

何らかの異常があると考えられ，他の進行性筋ジ症例1，症例2とも筋電図所見はミオバナーとストロフィー症とはその変性過程が異なると報告考えられ，筋萎縮の分布より，症例1はOPMD，
症例2はDMと診断された．緊張性筋ジストロフに筋障害の分布以外の点では極めて類似していィーでは，しばしば嚇下障害をきたし，OPMDとる5）．すなわち，血清CKは正常か軽度上昇．筋電の鑑別が問題になるが，症例1，2とも，臨床的図は，ミオバナー所見が主体だが，軽度のニューにも，筋電図学的にもミオトニー現象は認められなかった．

ロパテ一様の変化を混在することがあるのも，他の進行性筋ジストロフィー症とは異なる点である．

一般に，神経筋疾患が同一家系に生じた場合，

筋生検所見では，RVが高頻度にみられるほか，小その発症年齢，初発症状，症状分布，進行の速さ

角化線経も多くみられ，typeI線維萎縮，typeII
線維肥大も多数の症例でみられ，軽度の細胞浸潤などの点でほぼ類似しているのが普通である．しかし，症例2では6歳には歩行障害が出現し，そしている1）2）が，OPMDとDMとは，表1のようの進行も速いのに，症例1は23歳までは異常なく，のみられる症例もまれにある．このように，
OPMDとDMとは，その病因機序に共通のもの

発症17年後の現在も支えれば何とか歩行可能であがあると考えられるが，本報告のような家系の存るように，進行が遅い．また，症例1が眼瞼下垂，
囁下障害で始っているのに，症例2では下腿筋萎

在も，OCulopharyngodistal myopathyの症例とともにそのことを示唆していると思われる，

縮で始まっていることも興味のもたれる点である．

一方，症例2の筋生検でみられた異常線推状

さきに，我々は，DMではその変性過程がライ〜管状物質は，今まで封入体筋炎に特徴的な所見

ソゾーム・システム中心に行われ，かつその系にとして報告されてきた6）．しかし，DMと封入体筋

−107−

表2

Distalmyopathyとinclusionbodymyositisとの比較
Ⅰnclusion body

Distal Myopathy

Myositjs

FamHy Hjstory（＋）or（−）（−）

MuscularAtrophy Djstal＞proxirnal Distal＞Proximal
町SPhagiaト）（＋）jn50％

町algiaト）（−）

Myopathic（mjxing some qyopathic（mixing some
EMG

neuropathic features）
Normalorneuropathic features）
NormalorSerum CK

Slightlyincreased sljghtlyincreased

ESR，CRP，Y−globuljn

Nomal

Nomal

Muscle Biopsy
RinlTled Vacuoles
Angular Fjbers
CellInfiltratjon

Rarely（＋）

炎とは表2のように，臨床的にも，筋病理学的に

2）Kumamoto，T．，Fukuhara，N．，Nagashima，

も瞳めて類似していることが指摘されてきた1）．

M．，etal．：Distalmyopathy：Histochemical

症例2のように，家族性の筋ジストロフィーでも

andultrastructuralstudies．Arch．Neurol．，in

同一の封入体がみられたことは封入体筋炎の疾患

preSS．

特異性に疑問をもたせるものである．今まで封入体筋炎として報告されたものの病変分布は，2〜3の報告を除くとほぼDMのそれに一致する．
従って，今まで封入体筋炎として報告されたものの大部分はDMと同一のものと考えられる．
結3）Dubowitz，Ⅴ．＆

Brooke，M．H．：Muscle

biopsy−Amodern approach．W．B．Saun・
ders，1973．

4）里吉首二郎，木下英男，鈴木薙人，中島利子：
Oculo−pharyngo−distalmyopathyの1剖検例，
臨床神経，11：380，1971．

論5）Fukuhara，N．，Kumamoto，T．，Tsubaki，T．，et

1）OPMDとDMとは，その病因機序に共通のものがあると考えられる．

al．：Oculopharyngealmusculardystrophyand
distalmyopathy．Intrafamilialdifferencesjn

2）大部分の封入体筋炎は，DMと同一のものと考えられる．

the onset and distribution of muscular
invoIvement．Acta Neurol．Scand．，in press．
6）Carpenter，S．，Karpati，G．，Heller，Ⅰ．etal．：

文

献Inclusionbodymyositis：Adistinctivevariety1）Fukuhara，N．，Kumamoto，T．＆Tsubaki，T．：
Rimmedvacuoles．ActaNeuropathol．（Berl．），
51：229，1980．

−108−

Ofidiopathicinflammatory myopathy．Neu−
rology（Minneap．），28：9，1978．

22）ミオパテーとライソゾーム・システム（2）−とくに，摘出筋のprotamin添加による形態学的変化について−

福 原 信 義＊
研究協力者

熊ライソゾームおよびそのシステムは，細胞内および細胞外の蛋白質分解や細胞膜の代謝回転に重

本

俊

秀＊

めた．以下，各々の異常線経の形態的特徴について述べる．
1）Mitochondrial aggregation：Mitochon−

要な役割を演じているばかりで、なく，細胞傷害やdria（MT）は，対照の1時間incubate筋でも，変性にも関係が深いことが示唆されている．
我々は，ミオパテーとの関連で，ライソゾーム・

すでに筋鞘下あるいは筋原線維間月空に出現する．

システムの各ステップの障害が，筋にいかなる形

MTは，しばしば肥大，癒合，クリスタの増加を態学的変化を起こし得るかを明らかにすべく，今認め，また，一方でマトリックスは明調となり，

回はその予備的研究として，medium中に入れた腫大，膨化するものもみられる．しかし，こうし

無処理摘出筋の乃〝frPでの形態学的変化と共にたMTのaggregationは，2時間目で最も著明でendocytosisを冗進させるprotamin sulfate添加

多くのMT内には，rOd−like elements，para−

による変化について検討した．

CryStallineinclusion，顆粒状封入体が多数出現す
る．以後，これらの封入体をもつMTは，漸次減

方

少し，incubate6時間目では，膨化，腫大したMT

法を多く認める．

．成熟マウスの前脛骨筋を下腿骨と共に摘出し，直ちにEagle，EME，Nissui（CaC12200JLg／ml）

2）Intracellularedematouschanges：筋鞘膜のmedium中に入れ，混合ガス95％02＋5％

下腔は，著明に腫大し，その部位には，拡大した

CO2，37℃の条件下でincubateした．Medium中筋小胞体，T一管，膨化したMTをわずかに認めるに，予めprotaminsulfate（200JLg／ml）を加えたものを実験筋とし，加えないものを対照とした．

のみで，いわゆるedematousの像を示す．これら

1，2，3，6時間後に，各々の筋について一般

形質膜はところどころ切断されている．

の部位の細胞耳莫は，基底膜はよく保たれているが，
3）Focaldegradation：トルイジンブルー染色

光踵，組織化学および電顕的観察を行なった．

標本で，一部の筋原線経が斑状に崩壊，消失し，結部分的な筋線経の変性像を示す．こうした変性部

果

凍結標本によるGomoritrichrome染色では，位の電昆引象では，筋原線経は完全に変性，消失し，対照および実験筋共に筋線維周囲が赤染するra−

わずかにamorphousな筋原線経の変性した小断片を認めるのみである．また，周辺には，変性しggedTred fiberを認める他，著変はない．
Epon包埋トルイジンブルー染色標本では，両筋において程度の差はあるが多数の異常線経を認

無構造となった筋原線経の断端がみられる．変性部位には，多数のamorphousなsubstanceがみられ，拡大，増加した筋小胞体，T一管，MT，ま＊新潟大学脳研究所神経内科

た，autOphagic vacuoleやsecondarylysosomeー109−が認められる．これらの部位に連続する細胞膜は，基底膜はよく保たれているが，形質膜はところど空胞を有する線経が17．5％と，対照の1．4％に比し

ころ切断されている．また，崩壊消失のみられな

各々4．2％，6．7％と対照の各々1．0％，2．6％に比い部位の筋原線経は，配列，基本構造に異常ない

し，高率に認められた．

高率に出現した．また，neCrOSisも1・3時間で，実験筋の電顕では，すでに述べた以外の特異なが，ときに過収縮し，いわゆ るopaque線経の像によく類似した．
4）Degeneratingintermyofibrillarnetworks：筋原線経のnetworkの異常に伴い，トルイジ
ンブルー染色標本で筋線経はlooseな虫くい像を示す．電顕では，筋原線経の走向および眉己列の乱所見は認められない．しかし，筋小胞体，T−管の増加，拡大および空胞が対照に比し，初期より高率に認められた．
表2

Frequency（％）ofnormalandabnormalfibers

れ，また，基本構築は消失し，とくに，Z帯は消失

innon−treatedandprotaminesulfate−treatedmuscles

し，しばしば筋原線経のfragmentationがみられる．ときに粗しよう化も認められる．

non−treated5）Necrosis

lncubation time l hr．

6）Vacuolation：筋線維内に多数の空胞を認めるが，線維内に3個以上の空胞をもつものを有意の線経とした．電顕的にこれらの空胞は，大小様々で，多くは，空砲内に何も入れずemptyであるが，ときにhlembranousstructureやgranular
Substanceを認めた．

treated

3hrs．

1hr．

86．8

73．8

6

2．8

2．2

2．9

1．3

Forcal degradation

4．2

12．3

6．3

11．0

Degeneraいng
jntenwofibrj11ar

3．8

4．3

4．7

16．9

Necrosjs

1．0

4．2

2．6

6．7

Vacuolatjon

1．4

3，4

考

察

NonmalMjtochondrja
aggregation

networks

表1は，以上述べた各々の異常線経の出現頻度を対照筋について，経時的に示したものである．
表1Frequency（％）ofnormalandabnormalfibers
in nonTtreated muscles

Incubatjon tjme

1hr．

2

hrs．

3

hrs．

Nonmal

（罵）
は）
（鴛
86．8
65．8
73．6

6

hrs．

＿＿」長
55．7

15．7

5．1

我々は，種々の薬剤を用い，ライソゾーム・シ
ステムにおける各ステップの障害が，筋にいかなる形態的変化を起こすかを明らかにすることを目的としている．その予備的研究として，まずマウ

Mjtochondrla

2．8

29．5

2．2

0．5

Focal血gradatjon

4，2

3．4

12．3

18．5

加㌍neraいng
jnternwofjbrHlar
net川）rks

3．8

4．3

14．6

Necrosis

1．0

4．2

6．3

3．4

4．4

ス摘出筋を用いた玩J融和での実験モテサルの有用

aggregatjon

Vacuolatjon

1．4

1．3

性を検討した．CaC12200JLg／mlを含むmedium

中に摘出筋を入れ，混合ガス95％02＋5％CO2，
37℃でincubateしたが，対照筋でも処理時間と共に形態的に種々の特徴をもつ多彩な異常線経がみられた．従って．本実験モテリレは，Caイオノフォ
ア添加実験などで広く用いられているが，その超異常線経は，対照の1時間incubate筋でも，すで微形態学的検索のみでの実験筋についての評価にに13．2％にみられ，2，3，6時間とincubate時

ついては十分に慎重でなければならないと思われ間の延長と共に，各々34．2％，26．4％，44．3％とた．しかし，こうした異常線経の形態には，一定増加した．実験筋では，表2に示す通り，1・3のパターンがあり，ある程度は分類可能で，本実時間での異常線経の出現頻度は，各々32．5％，41．0

験のように定量化し，対照と実験筋を比較するこ％と対照に比し高率であった．とくに，1時間でとにより，有用な方法であると思われた．

−110−

なお，本実験で認められたmitochondrialaggr−を添加した．その結果，対照に比し，高率に筋小egationを有する線経は，MTの肥九癒合，クI）
スタの増加に加え，rOd−like elements，parT

胞体およびT一管の増加，拡大を認め，さらに，

acrystallineinclusions，顆粒状封入体を認め，いわゆる実験的ミトコンドリアミオバナー類似の形にgranularやmembranousな構造物を入れるが種々の大きさの空胞を認めた．空砲内には，まれ態的変化を示した1）．また，focaldegradationを

大部分は何も入れずemptyである．しかし，こうした変化が，筋線経の変性，壊死に関連をもつか

示す線経は，超微形態的にもopaque線経のdeltaという点については，focaldegradationやnecro−

lesionに類似した．Opaque線経は筋ジストロフ

tic fiberなどの異常線経は，確かにprotamin処ィー症で高率に認められるが2），しばしば人工産理筋で多くみられるが，今回は，検索筋が少なく，物として認められる．しかし，人工産物としても，従って，その評価については，さらに検索例を増

形質膜の傷害など何らかの機序で，細胞外液中のやし慎重に検討しなければならないと思われた．

Caが，筋線維内に流入し，例えばCa依存性中性
プロテアーゼ（CANP）などが活性化され，部分

ま

と

め

的なZ帯さらに筋原線椎の崩壊をひきおこすこと（1）対照筋でも処理時間と共にmitochondrialは十分に考えられる3㌧ しかし，本実験の対照筋でaggregation，intracellular edematous change，

も時間経過と共に多数のopaque fiber様のfocal

focal degradation，degeneratingintermyofi−

degradationが認められる真の機序は，不明である．

brillarnetworks，neCrOSisおよびvacuolationな

従来，endocytosisの冗進が筋の形態，とりわけ（2）Protamin sulfate処理筋でもほぼ同様の変性，壊死にいかなる影響を及ぼすかという点に所見がみられたが，筋小胞体，T一管の増加・拡大

ついては十分に検討されていない．一方，dystro−および空胞は，対照に比し初期より高率に認めら

phicmouseやchickenの筋細胞においては，end−

れ，これはendocytosisによる変化と思われた．

どの多彩な異常線経を認めた．

ocytosisが著しく克進していることが示されてい文る4）5）．とくに，dystrophicchicken筋では，ヒトのそれとは異なり，しばしば空砲を認める．この

1）Hanzlikova，V．＆

献
Schiaffino，S．：Mito−

空胞の意義について，埜中らは6），空胞は，筋細胞

Chondrialchangesinishemicskeletalmuscle．

外腔と交通し，細胞外液で「満されているが，このJ．Ultrastruct．Res．，60：121，1977．

膜に一部欠壬員がおこるとCaが筋細胞内に流入し，

2）Boxler，K．＆Jerusalem，F．：Hyperreactive

CANPの活性化，作用により，筋の変性，壊死を（hyaline，Opaque，dark）muscle fibers

起こすのではないかと推測している．しかし，こDuchenne dystrophy．A biopsy study of16

うした形態的事実が一次性の現象なのかあるいは

dystrophy and

二次性の現象なのかについては全く不明である．

diseasecases and controIs．J．Neuro1．，219：

従って，実験的にendocytosisの冗進によって引63，1978．

き起されると思われる筋の形態的変化の特徴を明

205

in

0ther neuromuscular3）埜中征哉，杉田秀夫：進行性筋ジストロフィー症の筋病理−Opaque線経を中心として−らかにすることは極めて重要なことと思われる．
細胞のendocytosisを冗進させ得る物質は，い神経進歩，24：718，1980．

くつか知られているが，prOtaminsulfateが筋細4）Libelius，R．，Jirmanova，I．，Lundquist，I・，et

胞内のendocytosisを克進させ得ることは，すで

al．：Increased endocytosis withlysosomalに，Libeliusらのgroupによって明らかにされてactivationin skeletal muscle of dystrophic

いる7）．今回，Libeliusらが用いた60JLg／mlよりもmouse．J．Neuropathol．exp．Neuro1．，37：387，

はるかに高濃度の250JLg／mlのprotamin sulfate

1978．

−111−

5）Libelius，R．，Jirmanova，Ⅰ．，Lundquist，I．，et「筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研

al．：T−tubule endocytosisin dystrophic

究」（三好珪），昭和55年度研究報告書，1981，

chicken muscle andits relation to muscle

p・24．

丘berdegeneration．ActaNeuropathol．（Berl．），

7）Libelius，R・＆Lundquist，I．：Lysosomal
activationinmouseskeletalmuscleinduced

48：31，1979．

6）埜中征戒，岡田理芙：筋ジストロフィー鶏骨格筋の組織学的研究−αW線経における横管系の増殖性変化と空胞出現の意義一一一「 厚生省

ー112−

by

protamininvitro・CellTiss．Res．，186‥

1，1978．

23）筋病変の再生現象に関する臨床病理学的検言寸

田

研究協力者
目

辺

内 渇 雅 信＊＊
的

等＊
野

沢

胤

美＊＊

原

満＊H

各方法を併用して総合的に検討した．

神経筋疾患の診療において，筋病変の適切な解析は，診断のみならず，経過・予後・治療効果の結果

判定上有用であり，その業績の蓄積は，筋ジスト

症例内訳の検討

ロフィー症の発症機序に関する臨床的研究として

本研究の目的上適切な症例として，経過・病態も，その貢献度の高い分野の一つである．我々はを検討した上で，母集団1134例中より750例を選択

本姓研究の一環として，筋ジストロフィーを含む

し，さらに筋再生現象との対比上の便宜から次の諸種神経筋疾患の筋病変に対し，種々の角度からような内訳分類をおこなった（表1）：Ⅰ群，即ち検討を重ね逐次発表してきたが，今回は，筋病変明らかな軽快を示した370例のうち，（i）神経原性病

上の再生現象に関し，従来の知見に加え，とくに態を主体とするGuillain−Barre症候群，諸種筋fibertype異常と筋中心部病変に関する知見補
遺につき報告する．

neuropathy，その他：（ii）筋原性病態を主体とする多発性筋炎症候群，内分泌性代謝性myopathyその他．ⅠⅠ群，即ち筋病変検索後も経過ほぼ不変で対象および方法

あった65例のうち，（i）神経原性病態を主体とする

直接の対象として，臨床病態と筋病態とを充分検討し得た虎の門病院入院精査例（1970以降）母

表1 疾患群の内訳

集団約1134例のうち，臨床経過上，軽快群・不変（i ）群・進行群に大別し得た計750例（男424，女326；

くn 〉

3〜68歳）を選び，臨床症状・経過・一般検査所

Ⅰ

見等と，筋病変とを対比検討した．筋生検は適応（軽 快 群 ）を充分考慮して施行，のベ821検体（上腕二頭筋

群

37 0

134，上腕三頭筋171，大腿四頭筋205，脾骨筋140，

1 15（
宣長 u H la in −B a r r 色症 候 群（9 ）（卦諸 種 p o ly n e u ro p a th y

（82 ）（反 応 性 ・炎症 性 ，内 分 泌 性 ・代 謝性 ）
③ その他

（24 ）

∋多 発 性 筋 炎 症 候 群（ii ） （（175 ）

診内 分 泌 性 ・代 謝 性 ミオ バ チ ーくm 〉 （（5 1 ）

25 5

③ その他

（29 ）

その他171）につき，筋病変をとくに再生現象との（j ） ① 諸 種p o ly n eu ro p a th y ・後 遺（20 ）関連に着目して検索した．標本作製上，1）パラフ

卦 若年 一 例 上肢 筋 萎 縮 症
くn 〉 （（3 ）ィン切片による一般病理組織学的（HE，Azan，
PAS，KB；Bodian鍍銀法など），2）クリオスタッ

ⅠⅠ 群
（
不 変群）
65

ト切片による組織学的・組織化学的（HE，trich・ATPase，phosphorylase，Cholinesteraseなど），
ⅢⅠ 群（進 行 群 ）31 5＊虎の門病院神経内科，沖中吉己念成人病研究所＊＊虎の門病院神経内科＊＊＊虎の門病院病理学科

（12 ）
（15 ）

〈m 〉 ② 先 天性 ミオ バ ナ ー

（4 ）

③ その他

（1 1 ）∋A L S ．S P M A（i ） （（67 ）参W H ，K W ，C M Tくn 〉 （

（
45）

（
参その他

（56 ）

16 8

D D M P 諸型
（ii ） （（82 ）くm 〉 （む先 天性 ミオ バ ナ ー （一 部 ）

（18 ）

14 7

ー113−

（
参その他

（ii ） ① 多発性 筋 炎症 候 群 ・後 遺30rome変法，PAS；DPNH−TR，SDH，myOSin
3）電顕的（グルタール・オスミウム酸二重固走法）

35（
彰そ の 他（47 ）表2 再生現象に関する着目筋病変と疾患群との対比
Ⅰ（軽快 ）筋病

Ⅰ
Ⅰ（不 変 ）Ⅲ （進 行 ）変（i ）n （ii）m

（i ）
n

（ii）
m

（i ）
n

（ii）m

A ．
従来のいわゆる

69

82

20

嬰

24

54

76

24

嬰

20

11

3

67

5

坐

6

7

2

4

20

2

6

2

再生 現象
① fib er ty pe 分 別 異 常【
D → R （過程 ））② fibe r ty pe〔
D → R （終 了）〕

B ．
fib e r ty p e
異常g rO u p ing③ fib er ty p e g ro u p ed a tro ph y 〔D → R → D 〕
乱 ta rg et（ta rg eto id ）
fik r

（鞄

）

C．
筋線維
中心 部
病

変

j

D＝denervation R＝re．innervation；数字＝各疾患群中，各所見を認めた症例塀度（％）（太字：各所見中の第1位，下線：同第2位）

諸種polyneuropathy後遺状態，若年一側上肢筋萎縮症，その他：（ii）筋原性病態を主体とする多発着目した筋病変のうち，A群は従来のいわゆる性筋炎症候群後遺状態，先天性ミオパテ一，その合判断により評価されている．症例群別には，各他．ⅠⅠⅠ群，即ち明らかな進行を示した315例のう群に意外に高率に出現しているが，Ⅰ群（（ii）），即ち，（i）神経原性病態としてのALS・SPMA，WH・KW・CMT，その他；（ii）筋原性病態としてのち軽快した筋原性病態群に多く，次いでⅠⅠ群（ii），
Ⅰ群（i）の順となっている．

再生現象 で，表中に示した諸項目を含めた総DMP諸型，一部の先天性ミオバナー，その他．

次にB群のfiber type異常のうち，fiber type以上の分類中の諸症例には，治療（原疾患により対症的に試みられたsteroid療法・ビタミン療の（D分別異常，②grouping，③groupedatrophy
は，それぞれ，この順に①re−innervationの過法，原疾患とくに内分泌疾患の治療，リハビリテ

程，③re−innervationの終了，（診re・innervation

ーションプログラムの実施など）を施行した例も後の再denervationの反映と考えられている所見含まれる．また，上記の内訳分類は，対照的に試で，明らかにⅠ群の神経原性病態群に高率に認めみた他の内訳分類（経過を加味しない形での，神られている（図1）．
またC群はいくつかの筋中心部病変をまとめた

経原性・筋原性の別や，治療実施の有無・治療種別などによる）より，明らかに筋病変上の再生現象との対比をおこなう上にヰ目関が捉えられ易く適切であると考えられた．

ものである．C群（a）としてtarget（targetoid）
fiberをあげたが，この所見は既に報告したように，神経原性病態中，前角細胞障害の場合よりも，筋病変の検討前根ないし末梢神経障害の場合に極めて高率に出次に，再生現象との関連で着目した筋病変と，現する．また，Ⅰ群（i），次いでⅠⅠ群（ii）に高頻度で

前記各症例群ごとに当該病変がみられた症例数あることからも，再生現象と関連づけて評価し得（％）とを比較検討した（表2）が，当然のことる所見としてこの項に取り入れた（図2）．
C群（b）としてあげた，中心部のdensearea即ちながら各症例（群）にこれらの所見は重複している．

高活性部と，中心核周囲にみられるcleararea即ー114−出現頻度は低いものの，やはりⅠ群（ii）即ち的帰日
軽快群の症例，特に多発性筋炎の場合に目＿、ン：さノ．
11Ⅰ群（ii）の筋強直性ジストロフィーの一部にも少イ⊥・∵からず認められる．さらに，Ⅰ群（i）に分類した・・
側下肢筋萎縮症の1例で，このdenseareaの所見∵■が特に著明であった（図3）．
なお，同時に検索した電顕所見上，上記A，B，C（a）に関しては，それぞれ従来の知見に相当し，諸報告に一致する内容が得られた．C（b）のうち，
dense areaは構築の乱れは著明ではあるが，

宣教ハ∵

■■■圭∴

mitochondria，lipid，glycogenに富み，miofila−
mentも走行異常は目立ってはいるもののその量的な変動は著明ではなかった．一方，Clear areaにおいてはmyofilamentもOrganellaもその密度が明らかに減少していた．これらの特徴はdense areaとclear areaとの組織学的・組織化
学的所見に一致し，また前者はcentral sarcop−
lasmicmassに，後者はtarget（targetoid）fiber㍉逐

十二十十㍉′轡︒十■■−︒言㍉■三㍉妄ぎ

卑㌍二一十・

手鼻＋∵・■∴j賢二．￥■∴

ち低活性部とは，myOtube様，あるいは tnlⅠ・ill
mass様に見える所見である．また，全体とLI，し′・やcentralcoreにそれぞれ類似性が見出された．
以上を小括すると，これらABCの所見のいずれかが認められた症例は，Ⅰ群の94％，ⅠⅠ群の70％，ⅠⅠⅠ群の54％に上るが，性状・程度の判断基準
をしぼり特に著明なもののみを抽出すると，Ⅰ群の比率は変らないが，ⅠⅠ群は38％，ⅠⅠⅠ群は29％と，ⅠⅠ・ⅠⅠⅠ群の比率は著減した．
考

察

神経筋疾患における再生現象の検討は，いわゆるtreatable myopathyなどのように臨床的軽快を示す疾患の病態把握のみならず，筋ジストロフ
ィーを含む進行性疾患の発症機序解明にも極めて重要な分野である．その観点からも再生現象に関

図1 筋病変B（∋②③（本文および表2）の例：［上］fibertype分別異常（re−innervationの過程），pOlyneuritis，俳骨鼠DPNH−TR，100×．［中］fibertypegrouping（re−inner−vationの終了），KW，上腕二頭筋，DPNH−
TR，40×．［下］fibertypegroupedatrophy（re−innervation後のdenervation），
polymyositis，俳骨筋，myOSinATPase，する業績は近来特に増加の傾向にある．
然し臨床例についてのこの方面の検索は，実験的研究に比し，変性・再生所見が時間的・空間的に混在するのがむしろ本質的な姿であるため，再生現象の評価は，より困難である．したがって，今後とも更に，筋病変検索上の染色法・酵素反応
等の組合せを検討し，また臨床病態・経過との対

100×．
一115−

比を充分おこなって進展させてゆくべき課題が少の組合せ所見の他，Bとして示したfibertypeのなからず残されている．

分別異常，grOuping，grOuped atrophy，Cとし今回の我々の報告は，前述の病変提示中のAとて示した筋線維中心部病変（a．target〜targe・

して示した従来のいわゆる再生現象（中心核，toidfiber；b．中心部denseareaとcleararea）とを再生現象に関連深い所見として提示したもの

basophilicfiber，小胞体拡大，SarCOtube，Golgi
装置・ribosome・衛星細胞などの増加，その他）である．これらの各所見は，臨床経過との対比上，

図2 筋病変C（a），target（targetoid）fiber（本文および表2）の例：［上（左・右）］種々相．群集萎縮像とfibertypegrouping（一部grouped atrophy）を伴う．
polyneuropathy，排骨筋，DPNH−TR，100×．［下］fiber
type分別異常（reTinnervationの過程）に伴って認められたtarget（targetoid）fiberの形成中の状態，aCute
polyradiculoneuropathy，俳骨筋，DPNH−TR，
100×．

一116−

図3 筋病変C（b）（本文および表2）の例：〔左（上・下）〕中心部densearea，一側下肢筋萎縮症（後天発症），俳骨筋，DPNH−TR，100×および400×．（HE染色等で，中心核はほとんど認められない）．
［右上］中心部clear area（中心核周囲），pOlymyositis，大腿四頭筋，HE，200×．［右中］中心部clear areaと周辺の輪状配列の核（phagocytosis様），pOlymyositis，上腕三頭筋，trichrome 変法，400×．［右下］前項と同一筋線経のClear area部のPAS反応陽性
所見，PAS，400×．

−117−

BおよびC（a）は神経原性，C（b）は筋原性病態とのA．T．（Ed．）：Exploratory concepts

関連，またCは全体として筋線維発生分化に関す

muscular dystrophy and related disorders．

る広義の神経因子の関与も考えられる．

Int．Cong．Ser．No．149，pp．255−267，Amste−
rdam，Excerpta Medica，1967．

筋ジストロフィー諸型についての再生の問題はすでに前2年度にわたって本姓研究報告として発in2）Jersalem，F．＆Schick，G．：Diefriihphaseder

表した．その主体はA群に属するものではあるがRegeneration der denervierten Muskels．

一部にC（b）の所見も混在している．また先天性筋

Tierexperimentalle elektronrnmikroskopi・

ジストロフィーのように，本質的に胎生期構築がSChe und autoradiographische Befunde．

未分化のままで残存している場ノ斜こは，再生現象の過程にみられる未分化性と所見の竜監別が困難な

Proc．6thInt．Congr．Neuropath．pp，1068−
1069，Paris，Masson，1970．
3）Mauro，A．，Shafiq，S．A．＆Milhorat，A．T．：

場合が多く注意を要するものと考えられる．

Regeneration of striated muscle，and
まとmyogenesis．Excerpta Medica，Amsterdam，め1）表題の趣旨により，諸種神経筋疾患における経過を筋病変と対比し，とくに再生現象に関す

1970．

4）Reznik，M．：Current concepts of skeletal
muscle regeneration．In Pearson，C．M．＆

る検討をおこなった．
2）従来の一般病理学的・電顕的着日艮点（中心Mostofi，F．K．（Ed．）：The striated muscle，核，basophilic fiber，小胞体拡大，Golgi装置・
ribosome・衛星細胞増加など）の他に，組織化学

Williams＆Wilkins，Baltimore，pp．185−225，

的にfiber type異常（とくにfiber typeのgrou−

1973．

5）

田辺等：諸種神経筋疾患の筋病変における

ping，TOuped atrophy）に関し原疾患の内訳・

fiber type異常とmotor unit内局在病態との経過と対比考察した．

関連について．厚生省「神経疾患研究委託費」

3）また，target（targetoid）fiberおよびその筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究，

他の筋線推中心部病変（dense areaおよびclear

第二班（三好班）昭和53年度研究報告書，pp．

area）についてまとめ，再生現象と筋線維発生分102−107，1979．

6） a．田辺等：筋ジストロフィー症諸病型におけ化過程（胎生期構築）とを対比考察した．
4）上記のfiber typeのgrouping，grOuped

る筋病変の特徴について．厚生省「神経疾atroptyおよびtarget（targetoid）fiberは主として神経原性再生病態，また中心部dense area，

患研究委託費」筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究，第二班（三好址）昭clear areaは主として筋原性再生病態との関連が

和53年度研究報告書，pp．97−101，1979：

強く示唆され，さらに 筋中心部病変 は全体とb．田辺等：筋ジストロフィーの筋病変に関す

して筋線維発生分化に関する広義の神経因子の関る検討（続報）−各病変における筋線維与も考えられた．

病変と血管・問質病変との対比．同・昭和

5）筋ジストロフィーの場合の位置づけにつき考察した．

54年度研究報告書，pp．11ト117，1980：
C．田辺等：筋ジストロフィーの筋病変に関する検討−各病型における筋線維病変と血文

管問質病変についての知見補遺．同・昭和

献1）Resnick，J．S．＆Engel，W．K．：Targetfibers
一一一StruCtural

andcytochemical

55年度研究報告書，pp．132−135，1981．

characte−

ristics and their relationship to neurogenic

muscle disease and fiber types．In Milhorat，
ー118−（本研究は昭和56年度厚生省神経疾患研究委託費
No．81−08によって行われた．）

24）筋鞘核内に封入体を有するQuadriceps myopathy：
筋炎との関連について

佐

研究協力者

安

藤

野

猛＊

みどり＊

森

本

啓

介＊

Quadricepsmyopathy（QM）は大腿四頭筋だけが主として萎縮する慢性進行性疾患であるが，そ少数の単核球浸潤がみられた．

の疾患概念はまだ確立されておらず多発性筋炎，

脱力と筋萎縮に気づいた．2年後に初診，両大腿肢帯型筋ジストロフィー症や神経原性筋萎縮症な直筋に最も強く，腸腰筋と大腿屈筋群に軽度の筋

どとの関連が示唆されている．われわれはQM3

脱力と萎縮を認めた．下肢深部騰反射は減弱して症例2．43歳男性．30歳頃から次第に両下肢の例すべての筋鞘核内に微小な細管状封入体を認めいた．血清CPKは80単位と軽度に上昇，膠原病にた．この封入体は従来封入体筋炎と呼ばれていた関係した検査成績は正常であった．筋電図は筋原

非定型的多発性筋炎に記載されていたものと同一性変化を示した．ステロイド投与により血清CPKであるので，QMと封入体筋炎との関連については正常化したが，筋萎縮は慢性進行性であった．

報告する．

筋生検（1970年）の光学顕微鏡所見は症例1と同様に散在性に筋線経の変性が強く，多数の空胞症

例を伴っていた．少数の筋翰核内に封入体が認めら

症例1．56歳白人男性．41歳より徐々に大腿四れた．問質の膠原線椎は増加し，少数の浸潤細胞

頭筋の脱力，萎縮が進行し，階段昇降の際などにがみられた．またragged−redfiberも散見された．

困難を感ずるようになった．2年後ウィスコンシ

症例3．39歳男性．37歳より階段下降時やしゃン大学を受診，同部の筋萎縮を指摘された．他のがみ立ちの際に左下肢の脱力に気づいた．2年後筋力は正常，膝蓋腱反射のみ低下していた．血清には右下肢大腿部にも同様の脱力と筋萎縮を認め

CPKは軽度上昇していた．血沈，免疫グロブリンた．他の筋群には異常なかった．血清CPKは228などの検査には異常なく．皮膚，関節症状などの膠原病症状もみられなかった．プレドニゾロン50

単位，筋電図では低電位NMUの混入がみられた

mgを隔日投与したが効果はみられなかった．

が，神経原性変化の所見はなかった．プレドニゾ
ロン50mg連日投与により血清CPKは75単位に下筋生検は三角筋と大腿直筋で施行した（1968

降，筋力もやや増強した．3か月後ステロイド投年）．光学顕微鏡および電子顕微鏡所見の詳細は，

与が中止され，CPK230単位と再び軽度上昇した

myxovirus様封入体を有する慢性多発性筋炎とが，筋萎縮はほぼ不変である．

してすでに報告した1）．大腿直筋では散在性の筋筋生検（1981年）の光学顕微鏡所見は他の2例

線経の変性が著明で，多数の塩基性顆粒を周辺にと同様の空胞を伴う筋線経の変性がみられ，主と伴う自家融解空胞と筋鞘核内に封入体が認められしてtypeII線経が侵されていた．少数の筋鞘核内た．また大食細胞が侵入している壊死性筋線経もに封入体が認められた．またphagocytosisに陥っ散見された．問質には膠原線経が増加しており，ている筋線経もみられた．問質や血管周囲には細胞浸潤は認められなかった．

＊順天堂大学医学部脳神経内科−119−電子靂筑微鏡所見候群とされてきた．われわれはQMの臨床像を呈

筋鞘核内の封入体の超微形態は，症例17はすする封入体筋炎の1例を報告したが1），QMと封でに詳しく報告した1）．他の2例でも全く同一の入体筋炎との関連については不明のままであった．

微小な網管状封入体が見出された．短い直線状，あるいはゆるやかな波状のものが筋報核の核質内

QMの自験例3例の生検筋を電子顕微鏡で詳細に再検討したところ，3例共に筋鞘核内に微細なにはじめは散在性に存在しているが，数が増加し細管状封入体を見出した．さらに筋線維内の自家たものでは，集束性にみられた（図1，2）．直径

融解空胞やmembranousbodyが多数認められるは130−160Åで，内径は50−60Åであった．長軸にことなど，3例の生検筋の光学顕微鏡と電子顕微

沿って50−60Å間隔の周期的な横縞がみられた．断鏡所見での共通点が多い．この空胞はCarpenter
ら5）が封入体筋炎においてlinedvacuoles，あるい

面では管状で中空がみられることからこの細管状構造は2・本のフィラメントがdouble helixをな

はDubowitzとBrooke6）がoculopharyngeal

しているのではないかと考えられる．
封入体の数が少ない場合，核膜には断裂はみら

dystrophyにてrimmed vacuolesと呼んだものと同一である．またdistalmyopathyにおいて最れなかった．しかし，核内部が封入体で充満され近問題になっているrimmed vacuolesの超微形ているような場合，核膜の重横，クロマチンの核態7）とも等しい．特にdistalmyopathyの1例において筋鞘核内にフィラメント状封入体が認められ周辺への圧迫，さらに核膜の断裂などがみられた
この核膜の断裂部を通じ，細管状封入体は筋形質

たこと8）はQM，distalmyopathyおよび封入体筋

内へもあふれ出たようになっていた．

炎との間における超微形態的，臨床的な類似性の重要なことは核内の封入体がごく少数の場合には，この筋鞘核周辺の筋形質や筋原線経の構造は比較的よく保たれているが，上述のように核内が有無の問題を提起する．
QMと封入体筋炎とは，いずれも生検筋内に細胞浸潤がみられることがあるが，極めて軽度であ封入体で充満しているような場合，その周辺にはる．両者共に膠原病としての臨床的，血清学的所

空胞やミエリン様膜構造などの変性産物，筋原線

見はほとんどみられない．さらに皮膚筋炎にみら経の著明な崩壊などがみられることが多かった．

れるような筋肉内の小血管病変もみあたらない9）．

3例共に認められた筋形質内の自家融解空胞は臨床的にステロイド治療は血清CPK低下だけに空砲内やその周辺に多数のmembranousbodyあ

効果がみられるに過ぎず，慢性進行性である．

るいはミエリン膜様構造と称されている変性産物を伴っていた．

前述のごとく，筋線経の自家融解空胞を主体とする変性像も共通している．

その他，結晶状封入体を有するミトコンドリア

一方，封入体筋炎での筋萎縮の分布は遠位型を（症例1，2），Cylindricalbody（症例3），fila−

とる症例が多い5日0）．換言すれば封入体筋炎とし

mentous body（症例3），nemaline rod（症例1），筋形質全体がT−tube由来と思われる異常なmyopathyと考えてよい症例が含まれている．封管状の膜構造物で充満されている所見（症例3）

入体筋炎における筋鞘核内封入体は，はじめなどを認めた．

Choull），次いでわれわれが1）myxovirus様封入体と考えたが，後に報告したようにウイルスのnu−

考案
Quadricep myopathy（QM）は1891年Erbの記て記載された症例の中にQM，あるいはdistal

Cleocapsidの超微形態とは異なる点が多く，筋鞘載以来，10数例の報告があり，家族発症のみられ核の特異な変性産物と考えた9）．しかし，筋鞘核内に封入体を有する筋炎からインフルエンザBウイる症例なども含め筋ジストロフィー症の亜型と考ルスが分艶されており12㌧ 封入体筋炎の病因につえるものや2），慢性多発性筋炎とみなすもの■な

いては未解決である．

ど3）4）その疾患の本態はまだ確立されておらず症
ー120−

図1 症例2の筋鞠核内封入体．×15，000

図2 症例3の筋鞘核内の微細細管状封入体の集束．×20，000
−121一

結

語

Variety ofidiopathicinflammatory myo−pathy．Neurology（Minneap．），28：8，

Quadriceps myopathy3例の筋鞘核内に微細な細管状封入体を認めた．筋線経にはいわゆるri−

1978．

mmed vacuolesと呼ばれる自家融解空胞を伴う

6）Dubowitz，Ⅴ．，Brooke，M．H．：Muscle

変性が多く，封入体筋炎とquadricepsmyopathy

Biopsy：A modern approach．Saunders，との間には臨床的，超微形態的な共通点が多いことを指摘した．

Philadelphia，1973．

7）Fuknhara，N．，Kumanoto，T．，Tsubaki，T．，
et al．：Rimmed vacuoles．Acta Neu−文

ropathol．（Berl．），51：229，1980．

献1）Sato，T．，Walker，D．L．，Peters，H．A．，et

8）中西孝雄，葛原茂樹：遠位型ミオバナーの5

al．：ChronicpolymyositisandmyxoviruS−

例，筋萎縮の分布とその筋病変について．昭

likeinclusions．Arch．Neuro1．，24：409，

和56年度厚生省「神経疾患研究委託費」「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床

1971．

的研究」三好班滋会議，東京，1981．

2）Espir，M．L．＆Matthews，W．B．：Heredi−9）佐藤tary quadriceps myopathy．J．Neurol．

猛：皮膚筋炎とウイルス様封入体．臨

床皮膚科，28：805，1974．

Neurosurg．Psychiatry，36：1041，1973．
Heathfield，K．W．G．：

10）Sato，T．，＆Tsubaki，T．：Characteristics

Quadricepsmyopathyoccurringinmiddle

Of virus−like structuresinpolymyositis．

age．J．Neurol．Neurosurg．Psychiatry，Clinical studies in Myology，Excerpta，

24：18，1961．

Medica，Amsterdam，1971，pp・22−26．

3）Turner，J．W．A．＆

4）里青首二郎：慢性筋炎の問題点．クリニカ，
2：712，1975．

11）Gamboa，E．T．，Hays，A．P．，Maxwell，J．，etal．：Isolation ofinfluenza virus from

5）Carpenter，S．，Karpati，G．，Heller，Ⅰ．，etal．：

Inclusion body myositis：A distinct−122−

musclein myoglobinuric polymyositis．
Neurology（Minneap．），29：1323，1979．

25）いわゆるhypothyroid myopathyの臨床と筋組織像

豊 倉 康 夫＊
研究協力者

水

沢

英

洋＝

栗

崎

博

司＊＊＊高

津

成

美＊

杉 田 秀 夫＊ 高 木 昭 夫＊＝＊埜 中 征 哉＊＊＊＊はじめ

筋組織所見に何らかの特徴はないものか調べるたに

いわゆるhypothyroidmyopathyは，Weakness

めに，甲状腺機能低下症により筋症状を呈した臨の他，CrampS・painS・Stiffness，myOedemaなど

床例及び実験的甲状腺機能低下症における筋病変のmyotonoid featuresさらにhypertrophyを伴い，甲状腺機能低下症におけるその頻度は，Ram＿を検討した．

Say（1974）2）によれば，47％，32％，25％および臨床例の検討0．8％であり，かなり特徴ある臨床像を形づくって入院精査する機会の得られた3臨床例の臨床症いる．逆に一般にmyopathyにはつきものとされ状および検査所見は，表1にまとめてある．症例

る，いわゆるmuscle atrophyはきわめてまれでは，58歳から65歳までの男性で，第1例（MK）

ある．そのため幼小児にみられ，CrampSかpainsと，第3例（TT）は，甲状腺機能低下症状発現よは目立たずhypertrophyが顕著であるような一り1年以内に筋症状が出現し，約2年で筋生検を群は，特にKocher−Debr6−Semelaigne症候群と行ったが，第2例（HO）は糖尿病，低アルドステ

よばれ，成人にみられるcramps，painsあるいはロン血症なども合併しており，正確な罷病期間はStiffnessも目立つ場合には特にHoffmann症候群と呼ばれている．

不明であった．

しかしながら，その筋組織所見については，fo−

また第2例は，知覚障害，運動神経伝導速度のCal necrosis（61％），increasein sarolemmal低下などを伴っておりhypothyroid neuropathyが合併していると考えられたが，全例とも特徴的

nuclei（45％），focalbasophilia of fibers（42な筋症状を呈していた．なおその程度はさまざま％），Central positioning of nuclei（39％），で，第1例で強く，第2例と第3例では軽度で，mucoproteinsdemonstrated（33％），preSenCeOf

CPKなどの血清酵素値およびTSH値などと相hyperplasticnuclei（27％），Iymphocyticinfilt−

関するように思われたが，・単純な罷病期間あるいration（18％），Variationinfibersize（15％），

はT3，T4，RSU値などとは関連しないように思VaCuOlationoffibers（15％），fatinconnective

われた．

tissue（6％），perinuclear haloes（3％）と筋生検所見

種々の変化が記載されているが（Ramsay，
1974）2），多くは通常の手技にて，全例bicepsとgastrocnemius

non−SpeCificmyopathicchangeと片付けられている（Engel，1981）1）ように思わ

muscleで，更に第1例では治療開始後反対側のれる．そこでこのような特徴ある臨床像に対して，

gastrocnemiusmuscleでも生検を行った．電顕用に2．5％glutaraldehydeと2％osmium tetroxi−＊東京大学医学部脳研神経内科＊＊浜松医科大学第1内科＊＊＊国立療養所東京病院＊＊＊＊国立武蔵療養所神経センター

deの2重国定を行い，epOnに包埋し，一部は液体
窒素中で冷却したisopenthane中で直ちに凍結し，HE，Gomori trichrome，PAS NADH−TR，
一123一

表1 症例の臨床像および検査所見
l … K 6 5M （2 。2 60 ）C ase

H O 58M （26420）

巨

T 60 M （州

O n se t ofC o ld in to le r即1C e ．＿ A c ro p d r e S th es ia． D y s a r t h r i■．

h yp o l h y r o jd is 巾

63y （
7 7）

O n set o f

l m y ■l如 ．

5ty

（
74）

58 y （■79）

W eakne ss

W e akneSS￣m y o p a th y ￣

6 11 （7 8）

5 7y （■80 ）59 y （■80）

B io p s y

1 9 ．S e p t ．●
79

2 1．J a n ．8 1

5 ．A u g ．
●
8】

m r▲tion t日日〉
iop Sy・−2 1 叶〜 6 y．
（？）

H y p ●r t rO P h y

檜P ■in S≠W ●■k n ●S S

4

G 巾 匹巾 r（
R L）

22

22

＋

＋

＋

で，10週齢の成熟Wistar系のラットに外科的甲

4 ◆
〜 5 ￣

4 ◆

32

28

D ●●P r 〇日o x↓〜 1 ↓↓↓

S ●n S O ry lo s iー‖7

1 4 （L ）
■
＋
N ・
・
−▲
S lo ★ r●l■
日直on （＋）≠ （函 V ●▲s to抽 鴫）−

M y o ．（±）

N 餌 r O ．（
±ト

56 ．
0

10 ．
7

17．
9

t7 ．0

52．
9

M y0 ．
（±）．M u r0．
（±）（m ／S ●C ）

T ．（
5，
3−川 ．
毎甘u ）

1．
0

1．
3

＜ 1．
0

T ）（
‖0一皿 咤 用 ）

25

32

＜2 5

RSU

19 ．0

23．
7

（2 5− 3 5 ％）19 ．
9

T S H くく S J−
U ／■）

2引

55

18

BM R

ト lト＋15 ％）

− 32

−2 2

−3 1

CPK

．
（
2 日 70 U ／り

5 50 2 1諾 ；招 ｝

小9

10川

LDH

（
川H 里 U 川

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324

28 2

G OT

（
10−
33 ∪／り

50 0

42

小

G PT

（H O U ／l）

25 3

33
ひ●
b ●t●S m t m tu S

C o m p lic ▲t io n s

臨床例での検討だけでは，例数が少なく不充分＋＋

P O rO n ●さl

実験的甲状腺機能低下症における検討であるため前述の各所見を実験的に確認する目的

槍

M C V u ln ■r月旨肪染色では，明瞭な異常は認められなかった．

〜 21m ．

M y ○○d 〇m ■

E MG

）

（Dinternalnucleiなどもよく見られた．なおPAS染色では，部分的に浪染する線経が見られたが，状腺摘除を行い，実験的甲状腺機能低下症を作製し，12週後にひらめ筋および長址伸筋を臨床例の生検標本と同様の方法で，組織化学的，電顕的に検索した．なお甲状腺機能低下症は，血中T4濃度の測定により確認した．
その結果，最も顕著な所見は図3，4（A），（B）に示す如く，①fibertypeatrophyおよび②fiber
type predominanceであった．
Fibertypeatrophyについては，typel，type2ともにatrophyをきたしているが，ひらめ筋と
長址伸筋の重量比をとると，甲状腺機能低下症群

56では0．96±0．10，対照群では0．86±0．13と有意に差

S y p h H isがあり，両筋とも萎縮するが，その中では主にty−

H y po ■l血S t●rOn はm
H y p●rt 打5加

pe2fiberからなる長址伸筋の方がより程度が強いことがわかる．すなわち，type2fiberatrophy
ATPase，Oil red Oなどの各種染色を行った．

の方が強いということである．またtypel fiber

その結果を表2にまとめ，更に図1に各所見のpredominanceについては，正常ではほとんど程度と頻度を示した．まず種々の所見のうちでもtype2fiberより成る長址伸筋においても認めら

degenerative changeの程度は，臨床症状の程度れたが，正常ではtypel fiberが大部分を占めとよく一致して，第1例で強く，第2，第3例でるひらめ筋においては特に顕著で，type 2 fiberは軽度であった．

は1％のtype

次に各所見の中で頻度の多いものに注目すると，

2C fiberをのこすのみとなり，

99％はtypelとなっていた（図3）．

が，type2により著明である．（診fiber type

その他の変化については，一部でintermyOfi−
brillar networkの乱れを示す所見はあったが，predominance：typelに目立つが，第3例ではfibersplitting，VaCuOlationあるいはnecrosis等

type2Bに認められた．③fiber splitting，①
VaCuOlation：VaCuOlationは図2のように，SubTのdegenerativechangeは明らかではなかった．

（》fiber type atrophy：typelにも認められる

SarCOlemmalによく見られ，Gomori trichrome
やNADH−TRでははっきり とは膿染せず，
PAS陽性のものも一部認められたが，Oil red O
では染まらず，電顕ではelectron−lucentでgly−
COgenL depositは目立たなかった．⑤Moth−eatenが挙げられ，ついで⑥smallangularfiber，
一124−

またphosphorylase染色では，甲状腺機能低下症
群で明らかな活性の低下を認め，PAS染色では，
対昂＝こ比し，ごくわずかにi農染していたが，Oil
red O染色では著明な差は認められなかった．

表2 生検筋の組織所見．
≠：高度，＋：中等度，＋−：軽度．
C A S E

M K

8 10 P S Y

F IN D tN G S ＼ 8 10 P S Y

639

S P E C IM E N

1

65M
l

B ic 叩 S（2 1 2 60 ）

H O

64 0
711
G a S t r O C ． G aS trO t ．
R ．

（2 8 4 20 ）

T T

79 6
B k ep s

58M

79 5
G a s t ro c ．

891
B H Ce P S

60M

約 2
G ∂ S t rO C．

（2 74 0 1 ）

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十 一

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F r18 tE ibR e．Srs IZ E
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2 人
2 8

F ib e r Th y p eや tr O lP h y
T ype
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2

2 人
2 8

：C H S Al¶a
N Gll E g rけo 1u p D aIS t TrOR p IBh y U T 】O N
L arge grou p atroph y
F ib e r t y p e g ro u p in g
F ib e r t y p e p re d o nl in a n C e
F ib e r t y p e 加 †ic ie n c y

3

1：N U C L E l
ln t e r n a l
P y k n o t iC

C lu m p s

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：D EN Ge cE ro
N E s isR A T l0 N
F ib e r S P lit t in g
B a S O P h ili．
P h i g O C y tO S ■S
V a c u o te
R a g g e d −r 8 d t ib e r s‡

5： C Eh L t Ll8U m Lm AさRtく〉rR y E S P O N C E

6： A RT C a Hr郎IT tE Cf ib
T eU rA S L

F ib ro s is
C H A N G E

T a rか t O id t ib e r s
M o th 一〇さ tO n
R in g t ib e r S

HYPOTHYROlD−．MYOPATHYCH▲HGEIM F18ER SIZES■【■ll■ntuI■r tlb●ri
Flb●r■trOphy

囲島田甲山呵由一幽l三組い塑巴軸跡

Typ●

l

Typ●

2▲

Typ●

28

F●btr hyp■rtrOPhy
Typ●

l

Typ●

2▲

Typ●

28

氷÷出−
0
0

CHANGE：lN E）lSTRIJ3UTlON
S■¶■l18ro岬■lrophy
L■rg●trOUP■trOPhy
F・btrlyp●lroup…亡F・btr tyP●Pr■domln■nC●
Flb●r tyP●dt†■C■tnCy

NUCLEllnttrlヽ■lPykn0llC Clu・叩〜

DEGEHERATl飢N●CrOili
F・btr SPhttlnib■SOPh■ll■
Ph■tOtytOS一〜∨■CU01●
R■■ヱ●dィod tlbors

CELLUL▲R RESPONSE）

ln¶■Mm●tOry
Flbro〜li■■

AFtCHITECTURAL CHANGE
T■ri●tl・b●r〜
丁■rl●tO・d t・b●r〜
Hoth・08tOn
R・叫†・−r〜

0

川

20
30
10
50
60
PERCENTAGE OF B10PSIES

図1生検筋の組織所見の頻度−：高度，団：中等度，［コ：軽度・
−125−

70

80

†O l00図2

第1例のgastrocnemius muscleのGomoritrichrome染色．
SubsarcolemmalのVaCuOlationがE］立つ．

図3

実験的甲状腺機能低下ラットのひらめ筋のroutine
ATPase染色．
右：甲状腺機能低下症ラット
左：正常対照ラット

一126−

M

l】S C lefib er

ty匹

1

T X
M

ea n d lameter 土 S ．
D ん ）

o f

f ih

2 C

2 B

T o talno ．

M u ∝ l e f ib e r t y p e

封．
2 土4 ．
6

T X
M

C o n tro I59．
4 ‡9 ．
6

5 ．6 土9 ．1

99 ．
0

0

T X
P e rce n tag e

2 A

45．
0 土9 ．
，e a r l d ia m e t e r ± S D

封．
1 ±7 ．
0

0

1 ．0

r s

2 A

2 B

2 C

詔 ．4 ± 6 ．
6

山 ．
3 ±8 ．
8

刀 ．＄± 1 1 ．
3

T o ta I n o ．

（ ）

・ ・〝

98 5

1

訂 ．
＄ ±6 ．
1

C o n tro I

罪 ．
7 ±5 ．

3 7 ．1 士 6 ．
4

訓 ．
l i l O ．6

霊 ，7 土 6 ．7

T X

1 5 ．23 7 ．
0

4 7 ，7

0 ．1

18 02

C o n tro l

3 ．7

30 ．
7

6 4 ．7

0 ．9

12 62

P er cet ag e o f fibe rs
C o ntr ol

6 4 ＿83 3 ．5

0

1 ．7

1 129

−HYPOTHYROIDtTX）
日日‥‥CONTROL

S虚︼望−︼0 ︼UくトZ︼UEl
IC
J●一一●●●−■■●●■■■一一◆●●■一一■

11

10

11

71

11

01AM【T【R tIり

OIAM（T即日lり

（B）

（A）

図4 実験的甲状腺機能低下症ラットひらめ筋（SOL）（A）．
長址伸筋（EDL）（B）の筋線維径および筋線維タイプ．

考案

による病変の程度の差，羅病期間の差あるいは動臨床例で高頻度に認められた，G）fiber type

物種間の差による可能性があると考えられる．事

atrophy（特にtype2），②fibertypepredomi−

実，den HartogJagerらは，家兎での実験で前nance（特にtype l），③fiber splitting，①

述のいわゆるmyopathicchangeをはっきりと認

vacuolation，⑤moth−eatenのうち，①②は，ラットにおける実験的甲状腺機能低下症でもはっきめているが，それらの筋病変は甲状腺摘除後4ヶりと再現された．この点はさらに文献上の臨床例

程度が随分異なることを報告している4）．

月以後に明らかとなり，かつ被検筋により病変のでも認められている3）．また③，⑥，⑤およびsmall

甲状腺ホルモンは，詳細な機序は不明であるが，

angular fiber，internalnucleiなどは，実験でははっきりしなかったが，他のdegenerativechan−

蛋白代謝，糖代謝，脂質代謝などに対する広範なgeの比較的軽い生検標本にも認められている．したがって①，（卦とあわせ③，（彰，（9およびこれら維持に関与している．中でもミトコンドリアにはの組み合わせは甲状腺機能低下症にかなり特徴的きな影響を及ぼしていることが知られてきた．

作用を介して動物の発達，成熟および基礎代謝のT3レセプターが確認され，その各種酵素活性に大な所見ではないかと推定される．

甲状腺ホルモンがslow，0Ⅹidative type l

ラットの実験において，neCrOSis，VaCuOlation，
fiber splitting，internal nuclei等のmyopathic

fiberとfast，glycolytictype2fiberという収縮およびエネルギー代謝機構の異なった筋線経に対changeが見られなかったことについては，被検筋して，それぞれ異なった作用を及ぼし，欠乏時に−127−fiber typeにかなり選択的な変化を与えることも

roidism・In

充分想像できる．Moth−eatenなどのintermyo−

4th ed．（editedbySirWalton，J．），Churchill

fibrillarnetworkの変化，phosphorylase活性のLivingstone，Edinburgh，1981，p．695．

低下，PAS陽性物質の沈着なども，臨床例での生

2）Ramsay，I．：Thyroid disease and muscle

検所見と動物実験の結果がよく一致し，甲状腺ホdysfunction．William Heinemann Medical

ルモンの作用機序から考えてよく理解できる変化

Books，London，1974，pp．125−171．

である．

Disordersofvoluntarymuscle，

3）Mckeran，R．0．，Slavin，G．，Ward，P．，Paul，

しかしながら，VaCuOlationの発生機序，Smal1

E・＆Mair，W・G・P・：Hypothyroidmyopathy．

angularfiberの出現機序，あるいはfibertypeのAclinicalandpathologicalstudy．J．Patho1．，

変化に対する神経支配の影響などは，今後解明すべく残された問題といえる．

132：35−54，1980．

4）Den HartogJager，W．A．，Meijer，A．E．F．
H・＆DeJong，J．M．B．Ⅴ．：Adystrophy−1ike文献myopathy in thyroidectomiZed rabbits．J．

1）Engel，A．G．：Musculardisordersinhypothy−

ー128−

Neurol．Sci．，6：301−314，1968．

26）筋ジストロフィー症における誘発筋電位（M波）
の研究

栗

原

研究協力者
目

照 幸＊
田

中

政

幸H

は，Deviら，著者ら4）によって記載された近位側的筋疾患の主症状である筋力低下は徒手筋力テス

俳骨神経伝導速度の測定方法を利用してM波を前トで筋力低下軽度（−1），中等度（−2），高度

腰骨筋より記録した．その他下肢遠位筋として月井（一3），完全麻痺（−4）と段階をつければ病気

骨神経刺激で短指伸筋よりM波を記録した．記録の進行や改善の指標となるが，ほかに客観的指標

はMedelec MS6−1型筋電計と表面電極E／REとなるものがあれば，病気の経過をみる上では，−K2個を用い，電気刺激は0．2msの持続で閤上よりすぐれた方法と思われる．

刺激となる電圧を用いた．M波はデーターレコー

末梢神経障害の場合には末梢神経伝導速度

ダーに記録した後，三栄7TO8シグナルプロセッ（NCV）に加えてM波の振幅低下や波形の複雑化

サーを用いて，M波を5回平均加算した後，M波や不規則性について注目すべきであることが，村の潜時，振幅，持続，面積の4項目を計測し，Ⅹ

井ら1），満留2），及び著者ら3）により報告されてい一Yプロッターに記載した．

る．周知の如く表面電極で導出されるM波は多数の神経筋単位放電の合成波であり，M波発現には

結

果下位運動ニューロン，運動神経線経，神経筋接合部，筋線椎の各要素が関係している．従ってNCV

ついて表1に年齢の順に上から下へ表示すると有の様に最大伝導速度を表示するだけでなく，M波

病年数が3年以下の症例9−11までは独歩可能では種々の神経筋疾患に応用し得る可能性がある．

あるが，8年以上の症例1−8は歩行不能であり，Duchenne型筋ジストロフィー症11名の男子に

私共は今回M波の潜時，振幅，持続，面積を数

これらの8症例は足関節の拘縞を認めた．下腿の量的に表示するために，コンピューターを用いて皮膚温度をサーミスターで計測すると11症例みなM波の分析ができるようなプログラムを開発し，低いが，特に有病期間の長い症例1，2では夫々

Duchenne型の進行性筋ジストロフィー症につい

23・8℃，24．3℃と健常者の平均値33．5±0．6（S．

てM波の分析を行ったので，その成績を中心に報告し，診断上の有用性につき論じる．

速度は症例1，2で39．9m／S，37．1m／Sと遅延があD．）℃に比し著明な低下を認めた．俳骨神経伝導るが，これらの症例では皮膚温も上記の様に低下対象と方法していたので，1℃低下すると約1m／sNCVがM波の記録をDuchenne型DMPll名（平均年遅延するということを考慮に入れるとMCVの遅齢12．4±3．8（1S．D．）歳），健常者16名の計27

延は本病ではないと考えてよい．症例3−11の名を対象に行った．近位筋群のM波としては，Erb

MCVはすべて正常範囲にあった．

点の刺激により三角筋からM波を記録し，下肢でM波の記録を行った左肩，左下腿の皮膚温については，屑の皮膚温は正常者で34．0±0．7℃，＊宮崎医科大学第3内科＊＊国立療養所宮崎東病院

Duchenneで平均32．1±1．9℃と統計的にも有意差がないが，下腿では有病期間と相関して（r＝−ー129−

表l Duchenne型筋ジストロフィー症（11例）
症例1から11まで年齢の順に上から表示した．
性

年令

1

M

2

M

有病年数

CPK（IU／hり

耶骨神経
皮 膚 温
MCV（れ／S）肩（OC） 下腿（OC）

足関節拘緒

歩行

18歳15．0年

（＋）

不可

865

39．9

34．2

23．8

17

15．5

（十）

不可

1∞5

37．1

29．0

24．3

3

M

17

14．0

（＋）

不可

1196

49．1

32．5

23．8

4

M

14

8．0

（十）

不可

2334

50．2

32．9

27．2

13

11．5

（＋）

不可

2358

59．5

34．3

31．4

12

10．0

（＋）

不可

1961

49．4

29．5

26．3

11

9．0

（＋）

不可

1976

52．7

30．1

26．9

M

11

8．0

（＋）

不可

2328

50．2

30・8

26．2

9 M
10 M
11 M

10

3．0
2．0
2．0

（−）
（−）
（−）

可
可
可

3572
175CO
6127

53・1
51・2
53・2

33・1
33・8
33・1

32・4
31．2
31・9

5

M

6

M

7
8

M

7
6

1COIU／h152．2両 34．0
以下

±3．8

33．5

±0．7

1ID01toidm．

LATENCY±0．6＝1，8TTISAMPLITUDE

1．8日8mVヨ
CAL

＝1／1

＝

6．8mV

DURATION＝

AREA

69．7mS．mVl＝・

44．2rnS

一一▼▼■■

28．8mSec

2）EDBm．

LATENCY

1．888MV打
C∧L

＝

8．2mS

AMPLITUDE＝

2，5rTlV

DURATION＝

48．8mS

＝1／1
∧REA

l

＝13．5mS．mV

＿

＿

−

■

28．8mSec
37Tib．ant．m．

LATENCY

1．飢犯hV8CAL＝AMPLITUDE＝1／1

3．回，T．S＝＝∧RE∧

22．8mS．mV＝

28．8mSeC
図1

Duchenne型筋ジストロフィー症（6歳，男子，症例11）のM波の記
録1）は左三角筋のM波（Erb点の刺激），2）は左短指伸筋のM波（左肺骨神経を俳骨骨頭の下で刺激），3）は左前脛骨筋のM波（左豚骨
神経を膝需外側部で刺激）．M波の面積（area）は斜線で「示した部分の総和を計測した．

−130−

3．5mV

DURATION

59．2mS

0．823）低下することが明らかになった．

M−WQVe□nOlysis of Duchenne Type（ll CclSeS）

M波の実際の記録を図1に示す．M波の面積の計算は斜線で示した部分の総和で表わし，単位はms．mvである．

l．LQtenCy

Sm

図2はM波の潜時，振幅，持続，面積について

A U

11名のDuchenne型筋ジストロフィー症と正常者の平均値及び標準偏差を図示した．

8

EDBでは排骨骨頭の2cm下で豚骨神経を刺6激したM波について，Tib，ant．muSCleについてh ヽ

は膝寓部外側で俳骨神経を刺激して得たM波につ

2

いて，DeltoidmuscleではErb点の刺激でErb点
より18cm艶れたDeltoidmuscle筋腹上に近位記

0

O
O

︐ ヽ ノ

O
2
1

n U

ついて有病期間を横軸にとって表示するとEDB

h ﹁

図2の様にM波の振幅と面積が統計的に有意な低下を示した（p＜0．01）．
図3にはM波の振幅（上図），と面積（下図）に

Vm

録電極を置いて記録したM波の分析結果を示した．

O

muscleでは有病期間が長くなってもそれにつれて低下を見ることはないが，Tib．ant．muscleとmS

Deltoidmuscleでは振幅及び面積の両者共，有病期間が長くなるにつれ低下し，負の相関があることが明らかである．相関係数（r）は各グラフに

60
50
句0

示した様に高い相関を示した．

50

図4には正常者（A）及びDhchenne型筋ジスト
ロフィー症（B）について夫々M波の振幅を横軸にとり，M波の面積を縦軸にとると振幅と面積は，

20
10
0

EDB，Tib．ant．，Deltoid muscleについて夫々高い相関を示し，振幅（Ⅹ）から，面積（Y）を計算することも可能である．上記三つの筋肉につい

ms・mV
500

て夫々振幅から面積を算出する方程式を各々のグラフ中に示した．
考按

M波は末梢神経に閥上刺激を加えた時に，その支配する筋肉から生じる活動電位の合成波を表面電極で記録したものである．神経筋疾患において

図2

は，疾病によって障害されながらも検査をした時点において残存していたmotor unitのすべての力を複合筋電位という形で表現するものである．
Duchenne型の筋ジストロフィー症でM波を記録した成績では病気の進行と共にM波の振幅及び−131−

Duchenne型筋ジストロフィー症とControlのM波
M波の潜時，振幅，持続，面積について平均値と標準偏差を示した・

叩Plltudeof M一岬型哩

mV
8EI）B muscle
7
mV
6

6

6
⊂ ノ

5

勺

q

︐ ︶

5

2

2

1

1

0

0

仁

5
q

5

2

1

0

51015
20y
51015
20y
Duratjon of Hlness Duratjon of Hlness

ms●mV

Areo Of M−WqYe

EDB muscle

51015
20
y
Duratjon of jllness

図3

Tlb．Ont．muSCle

51015
20y
Duratjon ofi11neSS

51015

20

Durat†on of jllness

M波の振幅及び面積と有病期間との関係
振幅（上図），面積（下図）とも有病期間が長くなるにつ
れ低下を認めた．相関係数を各グラフに記した．

面積が，三角筋や前脛骨筋では有病期間と相関しM波からmotorunitの数を計算する際には，すべて低下することが示された．又下腿の皮膚温も有てのmotor unitが同じ持続時間を有している訳

病期間が長くなるとそれに相関して低くなる点も，で1まなく，又同じ潜時で発火する訳でもなく，最筋肉による熟産生が病気の進行と共に少なくなる

大振幅が起る時間が同一でないという三つの理由ためと考えられた．

から，M波の振幅より面積から計算した方が正確

M波の振幅は，M波の面積と互いに高い相関を示すので，mOtOrunitの総和的指標としては振幅である5）．従ってM波の面積を計測しておくこと
は基礎的データーとして重要である．Motorunitと面積のどちらでもよい指標となり得るが，更にの数の計算を行なうことにより，種々の神経筋疾−132−

Are（】Of M−WOVe
ms・mV

B Corre10t10n betwee【O eClCInd cmDlltude of M−NQVe（Duchenne TyDe）

120

100

80
A「eo of M−W（】Ve

60

句0

20

0

12

5

q

5

6

7mV

細目tude of M−WOVe

図4

12

5

q

5

6

7mV

旭日tude of M州qVe

12

5

q

5

M波の振幅と面積の関係
AはCOntrOl，BはDuchenne型筋ジストロフィー症について，M波の振幅（Ⅹ）と面積（Y）との関係を3つの筋から記録したM波について示した．M波の振幅と面積は高い相関を示した．rは相関係
数．

ー133−

6

7

加lltude of M−WqVe

8mV

息においてmotorunitの数が減少していれば，神経原性の要因がその疾患の成因として役割を演じ

4）有病期間が長くなると，三筋の内，前脛骨筋とていること，数が正常なら神経ではなく筋肉そのした．相関係数は前脛骨筋ではr二一0．833，三三角筋で有病期間に相関してM波の面積が低下

ものに病因を求める等の検索方法が近年Ballan−

角筋ではr＝−0．823である．
5）M波の面積（Y）と振幅（Ⅹ）は本病でも正常tyneら5）によりM波の面積からなされていることは注目すべきことである．

者でも高い相関を示し，Duchenne型では各筋肉により以下の関係式が成立する．

各筋肉によって運動ニューロン1個が支配する
筋線経の数は，5〜6本から大きな骨格筋では千短指伸筋：Y＝2．2＋4．2Ⅹ（r＝0．79）

数百本にも及ぶものもあり，M波の面積について

前腰骨筋：Y＝0．1＋4．8Ⅹ（r＝0．95）

も各筋肉による特徴が認められ，図4の様に振幅

三角筋：Y＝−1．5＋13．2Ⅹ（r＝0．96）（横軸）から面積（縦軸）を計算する式では近位筋ほど勾配が大となる傾向をみた．

謝

M波分析の臨床的応用として，重要な情報を提供する場合を列挙すると，ミオパテーや重症筋無辞

宮崎医科大学第3内科・荒木淑郎教授の御校閲を感謝します．

力症の経過観察，aXOnalneuropathyの早期診断や，脊髄前角細胞の障害等である．進行性筋ジストロフィー症に関するM波の分析の意義は，そのnatural historyを数量的に表現する指標として

文献1）村井由之，志田堅四郎：Neuropathyの電気生理学的研究−M波振幅と運動神経伝導速度につの価値があるが，将来治療法の開発に際しては，いて−．神経学トピック，2：29−33，1969．

その効果判定のための客観的指標の一つとなり得2）満留昭久：小児末梢運動神経伝導速度および誘ると考えられる．

発筋電位の発達に関する研究．福岡医誌，68：
449−458，1977．
まと3）実庶照幸，鶴田和仁，荒木淑郎：末梢神経伝導

め1）Duchenne型筋ジストロフィー症11名について

速度とM波の検討：家族性アミロイドポリニュ

短指伸筋，前脛骨筋，三角筋よりM波を記録し，ーロバナーと糖尿病性ニューロパテーへの適応．

潜時，振幅，持続，面積の4項目について計測した．

臨床神経，20：241−247，1980．
4）栗原照幸，荒木淑郎：近位側排骨神経伝導速度2）Duchenne型筋ジストロフィー症では下腿皮膚一日本人正常値と家族性アミロイドポリニュー

温が正常値33．5±0．6℃に比して低く32．4℃か

ロバナーへの適応．臨床神経，19：119−124，

ら23．8℃に及び，最も低い者では正常平均値よ1979．

り10℃も低い．下腿皮膚温は有病期間と負の相

5）Ballantyne，J．P．＆Hansen，S．：A new関がある（r＝−0．823）．俳骨神経MCVは2method for the estimation of the number of

例を除き正常．

motorunitsin amuscle：1．ControIsubjects3）M波の振幅と面積は正常者に比し計測した三筋and patients with myasthenia graviS．J．

ですべて低下し，潜時，及び持続は有意差を認

Neurol．Neurosurg．Psychiatry，37：907−915，

めなかった．

1974．

−134−

27）筋ジストロフィーと悪性高熱−カフェイン感季性テスト的日劇旬
による検討

高

研究協力者

木

埜

中

宮

沢

昭

夫＊

征 哉＊ 水 沢 英 洋＊
寛＊

石

原

伝

幸＊

各種の神経筋疾患で全身麻酔の副作用が比較的徴候陽性，しかしそれ以外には筋脱力，筋萎縮，発生しやすいことは従来より注目されてきた1）2）．

筋肥大や歩行異常は認められない．2歳時に筋生

近年Duchenne型筋ジストロフィー（DMD）にも検などの検査が行なわれた．血清CPKlO，043，血副作用の発生が知られた3）7ト10）．我々は生検筋を清ミオグロビン420ng／ml，Creatinel．06mg／dl．

使用したカフェイン感受性テストの結果から，こ大腿四頭筋の生検による検査では，筋径の大小不の副作用はいわゆる悪性高熱と同一機序に由来す

同，散在性壊死線推，結合組織の増加などが観察された．血清CPKの著増，Gowers徽候，母親のるものと推論した．

CPK異常などの点で，本症はDMDと診断され
症

た．

例

症例1：1年9ヶ月男児．家族歴に関して，父お症例2：6ヶ月男児．痙攣発作を主訴とした．細

よび兄には異常なし．母の血清CPK484IUと増加

菌性髄膜炎と診断された．硬膜下貯留液の排液をしていることが後刻判明した．息児は舌癒着の外目的とした手術が行なわれた．サクンニルコリン

科治療を目的として入院した．硫酸アトロピン

投与後，筋硬直が出現し，体温は37．8℃に上昇し0．2mg，Jlydroxyzine pamoate10mg経口投与後，ハロセン，笑気および酸素による麻酔が導入された．次いで心停止が出現したが，心マッサージにた．サクンニルコリン10mg静注後，徐脈に次いでビン1．57／Jg／ml．その後の経過において，血清CPKは1，760IUと高値が続いた．筋緊張低下と筋心室粗動が出現した．麻酔は中断され体外心マッサージにより心リズムは回復した．30分後に意識より致命した．血清CPK4，928IU，尿中ミオグロ

脱力が認められたため，筋生検が施行された．筋が出現した．経過中体温は38℃まで上昇した．筋径の大小不同，著明な結合織の増加が観察された：

拘縞は認められていない．尿は赤褐色となった．

福山型先天性筋ジストロフィーと診断された．

血清電解質はNa135mEq／L，K5．3，CllOO．血方清CPKは183，678IU（正常域25−115），血清ミオ法

グロビンは12．毎g／ml（正常30mg／ml以下）．動脈

症例1を含めて7例のDMDの生検筋につき血分析（100％02吸入時），pH7．406，pO2496・4

わ 。わ℃におけるカフェイン感受性テストを行っ

mmHg，pCO228．6，baseexcess−5・OEq／L．
術後2ヶ月に亘って血清CPK値は10，164，17，

た．

182と高値であった．神経学的診察では，Gowers

あるいは3−4本の筋線経よりなる中筋束を作製

カフェイン感受性テスト：生検筋より単一筋線維し，スキンドファイバー法にて検索を行った5）．ス＊国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

キンドファイバーを3×10￣7MCaイオンを含む−135−

Ca−EGTA溶液中で2分間incubateして，筋小以下を異常値，5mMを境界値とした．

胞体にCaを取込ませた．その後，外液のカフェイ
ン濃度を0．5mMから20mMまで段階的に増加さ結果せ，筋拘縞の生ずる間借を決定した（図1）．最大症例1のカフェイン拘縞の間借は2．5−5mM

張力の10％以上の拘縞の発生を．もってカフェインに分布した（図2）．DMDにおいては，閉値は症聞値の判定の基準とした．成人対照例の白筋線経

例により異なっている．正常のもの1例，境界4ではこの間値は10mM以上であった．赤筋線経で例，異常2例であった．福山型に関して，症例2は閤値は筋線椎によるばらつきが多く，白筋よりでは感受性冗進（2．5mM，5mM）を認めた．他

はやや低値であった．悪性高熱の回復者2名の自の1例の福山型では，7．5，15，15（mM）と感受筋線経では間借は5mM以下であった．成人では性の低下した筋線経も存在した．生後2ヶ月から5mM以下を異常値，7．5mMを境界値，10mM

2年7ヶ月までの筋緊張低下を主徴とする症例でを正常値と設定した．若年対照者の間借は未だ充

同様な検索を行った（図3）．1例では問値は15分に検索されていない．そのため筋緊張低下を主mM以上と増加していた．他の3例では5−10徴とする幼児の結果を参考にした（図2）．また筋

mMであった．幼年期には成人に比して閉値が低線維束を使用した検索の場合には，自筋と赤筋の下している可能性も考慮されるが，正常児のデー

音昆合のことが多いため，一応の基準として2．5mM

タがないので結論は控えたい．

Thre8hold for Caffefne Contracture

ー−

−

−

」与。mg
20■●C

1．0mM

2．5

Cさl

図1加われクカフェイン感受性テストの記録の実例を示した．A：対照例，B：症例1（DMD）．スキンドファイバーの筋小胞体に一定量のCaイオンを取り込ませた後で，EGTAO．1mMを含む弛緩溶液中
でカフェイン浪度を段階的に増加させた．Aでは7．5mMにてわず
かな，10mMで明瞭な拘縞が出現した．Bでは2．5mMにて明瞭な筋
拘縮か出現した．
−136−

Threshold for Caffeine Contracture

Threshord for Caffeine Contracture

DMD

15

rnfantile ControJs

●
●

○

10

●

●●●

10

●●＿＿＿■ト■＿●■．・・・一一一一一一一■・・・・一一一●一一一一一一一

義暮t

X

OX

OX

・1−−−−−−−・ヾ■一一一九・ヽ九一一一一一

Ortt

y■■●

2Y
図2

t

4Y SY

5Y

■

Xt

∫1

5Y BY eY

7例のDMDのカフェイン感受性テストの結果を図示した．縦軸はカフェインの閥濃度（mM），横軸は7例の検査時の年齢を示している．2Yは症例1に相当する．×印：筋線
維束で赤筋と白筋の音昆合したものの分析値．
●：赤筋線経，○：白筋線経，㊥：intermedi・
atefibers（未分化筋線維）．2Yと5Yのうちの1症例が感受性冗進と判定された．

図3

2M IY IY

2Y

7M OM

6M

筋緊張低下を主徴とする4症例のカフェイン
感受性テストの結果を表示した．表示は図2と同一である．（×）は15mM以上の問値を意
味する．

ハロセンとサクンニルコリンの併用が多い．しか表

しハロセンやサクンニルコリン単独使用のこともDuchenne型筋ジストロフィー13症例における全身麻酔の副作用をまとめた．3）17）〜10）ある．症候学的には心停止や急性筋融解が頻回に記載されている．これに比して，筋拘縮，高熱や酸血症の記載は少ない．それ故，DMDにみられる使用薬剤
ハロセン＋サクシン

7／13

ハロセン

4／13

サクシン

2／13

心障害

11／13

急性筋融解

11／11

筋拘綿

3／10

体温上昇

2／7

酸血症

1／2＊

麻酔の副作用は悪性高熱とは呼ばれていない8）9〉
副作用の機序として，サクンニルコリンによる高カリウム血症のための心臓障害，あるいは同薬剤による副交感神経機能冗進のための心停止が推定されている．しかしこれではほぼ全例にみとめられる急性筋融解の出現は説明できないであろう．
全身麻酔の重篤な副作用として，悪性高熱が知＊記載のあるもののうち陽性の比を表わしている．

られている．これは高熱，心障害，酸血症や筋拘縞を主徴としている．悪性高熱の定義や発症機序はまだ完全に明確になっているとはいいがたい．
Kalowらは悪性高熱の骨格筋はより低濃度のカ

考案

DMD患児の全身麻酔による副作用は症例1をフェインにより拘縞をきたすことを報告した6）．
我々は悪性高熱よりの回復者の骨格筋スキンドフ

含めて13例の報告がある（表）3）7ト10）薬剤としてァイバーを使用して，ハロセンやカフェインに対

一137−

た．

する感受性が元進していることを示した4）5）．
DMDや他の小児の神経筋疾病では筋線維直径（3）他のDMD6例中の一例においてもカフェイが細いため成人の場合のような単一筋線経のスキン感受性は冗進していた．このような現象から類

ンドファイバーによる実験は困艶である．我々は推してDMDにみられる麻酔の副作用は悪性高熱

今回3−4本の筋線維束からなるEGTAによると同一機序により発現するものと推定している．

化学的スキンドファイバーを作製してカフェイン（4）DMDにおける筋変性の一段階において筋小拘縞を分析した．3×10￣7MCaイオンに2分間

胞体の機能異常が出現し，悪性高熱を出現しやす
くするものと考えられる．

接触させることにより，筋小胞体に一定量のCaを負荷した．この条件では小胞体中のCa量はほぼ静止筋の生理的Ca量に近いものと推定してい謝辞：症例1および2の検索の機会を提供いただ

る．この状態でカフェイン拘縞が生ずる問濃度をきました岡成寛先生（浜松医大小児葎斗）および竃吉測定した．筋線維束を使用した分析では，自筋と岡啓一先生（埼玉医大小児科）に感謝いたします．

赤筋の混合であることが多く判定は複雑となる．
文

暫定的に2．5mM以下を異常値とした．筋緊張低￣

献下症例の分析はこの仮定を支持するものと思われ

1）Boba，A．：Fatalpostanestheticcomplications

る．症例1と症例2ではカフェイン感受性は冗進

in two muscular dystrophic patients，J．

しており，これは悪性高熱の場合と同様である．

Pediat，Surg．，5：71−75，1970．

またDMD症例の全てで急性筋融解は共通の症候であった．このような事実はDMDにおいても悪性高熱に近似する病的機序が存在するという推論を支持するものであろう．
DMDにおいて何故悪性高熱が発症するのであ2）高木昭夫：悪性高体温症と筋疾患．神経内科，
2：489−495，1975．

3）Karpati，G．，Watters，G．Ⅴ．：Adverse
anaestheticreactionsinDuchennedystrophy．
In

Muscular

Dystrophy

Research（ed，C．

ろうか．カフェイン感受性冗進の機序として，以Angeliniet al），Excerpta Medica，1980，pp・

下の可能性が考慮される．（i）小胞体膜のカフェ

206−217．

イン感受性が増加している．（ii）Ca−inducedCa

4）Takagi，A．，Sugita，H．，Toyokura，Y．，et al：−releaseの機序が作勤しやすい．（iii）（ii）の一

Malignanthyperpyrexia．Effectofhalothane

因として小胞体のCa貯留量が増加している．いOn Single skinned fibers．Proc，Japan Acad．，

ずれの場／飢こしろ，筋小月包体膜のCa輸送の異常

52：603−606，1976．

か，筋小胞体の増生などを推定する必要があろう．

5）高木昭夫，春原経彦，埜中征哉：Skinnedfiber

今回の結果はDMDの全例にカフェイン感受性の法によるハロセンまたはカフェイン感受性テス

克進が認められたわけではない．したがって，

ト．麻酔と蘇生，16（別冊）：183−187，1980．

DMDにおける筋細胞変性か再生の一段階で，カ6）Kalow，W．，Britt，B．A

Terreau，M．E．，et

フェイン感受性の冗進，ひいては悪性高熱の発症

al：Metabolic error of muscle metabolism

しやすい状態が招来されるのであろう．

afterrecoveryfrommalignanthyperthermia．
Lancet，2：895−898，1970．

結7）Genever，E．E．：Suxamethonium−induced

論（1）悪性高熱に類似した全身麻酔の副作用がcardiac arrestin unsuspected pseudohyper−

DMDと福山型先天性筋ジストロフィーに出現しtrophicmusculardystrophy．Brit．J．Anaesth．

た．

43：984−986，1971．

（2）スキンドファイバー法による検索から，これ

8）Schaer，H．，Steinmann，B．，Jerusalem，S．，etらの症例ではカフェイン感受性の冗進が認められ

al：Rhabdomyolysisinducedby anaesthesia−138−

withintraoperative cardiac arrest．Br．J．
Anaesth．，49：495−499，1977．

1978．

10）Seay，A．R．，Ziter，F．A．，Thompson，J．A．：

9）Miller，E．D．，Sanders，D．B．，Rowlingson，J．

Cardiacarrestduringinductionofanesthesia

C・，etal：Anesthesia−inducedrhabdomyoly・in Duchenne muscular dystrophy，J．Pediat．，

Sisin a patient with Duchenne，s muscular

93：88−90，1978．

dystrophy．Anesthesiology，48：146−148，

ー139−28）筋強直性ジストロフィー症の中枢神経病変について（特に睡眠脳波および眼球運動について）

井 村 裕 夫＊

研究協力者
は

じ

大 井 長 和＊
め

加

藤

議書

三

好

豊

二＊＊

目を検査日として，両耳を不関電極とする単極誘に筋強直性ジストロフィー症（以下，MD）は，筋

導にて脳波を記録した．活性電極はFpl，Fp2，

力低下や萎縮，ミオトニー現象，白内障および内F3，F4，C3，C。，P。，P4，01，02に固定し分泌機能異常などを示すmultiLSyStemdisorder

た．採血は一側の肘静脈に留置した針より行ない，として知られている．これらに加えて，知能低下，

その開始は午後10時で，終了は翌日の午前6時を脳波異常，hypersomnia，1ight−neardissociationと視床の封入体の存在などの中枢神経異常も報告原則とした．血清中のGHとPRLの測定は，ラジされている．そこで，眼球運動および欄垂眼中の血choffer＆Kalesの分頬による睡眠深度と対応さ

清中の成長ホルモン（以下，GH）とプロラクテン

せて検討した．

オイムノアッセイにて行ない，その結果をRechts−（以下，PRL）の動態を知ることにより，MDにおける中枢神経病変について検討した．

結果

1．眼球運動について

対象と方法

SPMが3症例とも，視標速度0．5Hzで異常を認MD患者の軽度重症例の51歳男性（56−482−

めた．SMの潜時は，3症例ともいずれの視標振幅030），中等度重症例の33歳（07−953−050）と49歳でも正常範囲であった（表1）．SMの最大速度

男性（23−003−132）の3症例を対象とした．罷息は，100の指標振幅では3症例とも正常者と有意歴は第1例6年，第2例6年，第3例30年で，い差を示さないが，指標振幅が200と300では，いずずれの症例ともlightTnear dissociationと軽度れの症例とも有意な低下を認めた（表1）．また，の知能低下を認めた．また，成人の正常者6名をOKNの急速相の速度は，第1例と第2例では対照とした．

SMの最大速度と有意差を示さないが，第3例で眼球運動は，各眼ずつDCおよび時定数0．03秒

はより遅かった（表1）．

で記録した．水平性滑動性眼球運動（以下，SPM）

2．睡眠中のGHとPRLについて

は，指標振幅200と300にて指標速度を0．1Hz，0．3

対照者では，睡眠初期の徐波睡眠期に著明な一

Hz，0．5Hz，0．8Hz．1．0Hzと変化させて記録し過性のGHの増加を認めた．第1例，第2例および第3例とも徐波睡眠初期におけるGHの一過た．水平性衝動性眼球運動（以下SM）は，指標振幅を100，200．，300と変化させて記録した．また，
水平性視運動性眼振（以下OKN）を指標速度10ソ

性増加を認めなかった（図1，図2，図3）．第1

secと30．／secにて記録した．

上で覚醒期であることから，何らかのストレスに各患者を睡眠脳波室にて2日間過させ，第2日＊京都大学医学部第2内科＊＊京都大学医学部耳鼻咽喉科例（56−482−030）に見られるGHの頂値は，脳波よるものと考えられた．いずれの症例も，アルギ
ニン負荷試験で，正常のGH応答を認めた．また，3症例ともGHの分泌動態はREM期と有意

−140−

表1

3症例ともi替時は異常なく，最大衝動性E艮球
運動速度が視標振幅200と300で有意な低下を
認める．

∞

2＝00

3＝00

4：伽

5：00

6二M T：伽W
R
1

HORIZONTAL SM

2

VOluntary S8ccado

3

OKN

max．
veI
oc巾

mi
IX．
Vel
ocl
ty

10

175．
2土
19．
2

t33．
3士
28．
3

柑
9．
0±
43．
5

20

180．
0土
23．
2

171．
8±
25．
8 ＼

一

tatenCy．

07−
953−
050

30

180．
0土
16．
4
10 ＼

198．
0±
18．
0

192．
3士
47．
0

220．
6±
14．
2

＼＼
＼＼
2
0
3
0＼
2
3
0
．
4
±
3
8
．
4
肌伸

56→
482−
030

207．
5±
24，
5

GH両

症 例 deg，（
M士
S【ms8C）（
M±
S【
degノ
sec）
rM±
S【
degノ
sec）

10

163．
0±
35．
0

273．
6±
40．
0

23−
003−
132 20

240．
0±
16．
4

191．
3土
15．
8 ＼

30

196．
7±
38．
0

283．
2±
23．
6

185．
t±
31．
3

（音大2内 07・953−050）

277．
5±
14．
2

図2
‡3：α）糾：α）

t：00

2：00

3：00

1：00

5：00

徐披睡眠初期にGHの増加を認めない．

6：∝l

W

23：00i 21：00 l：の

2：00

3：∞ l：00

5：00

6：∝I

R
W

1
R

2
1

3
2

1
3
1

（叩／叫1

8
PRL

6

（叩／mり1

ハト＼／へ、♪√人／＼2

t京大2内 23−083・132I

t京大2円 56182・03（‖

図1

図3

徐波睡眠初期にGHの増加を認めるが，脳波では覚醒期であり，ストレスによる増加と考えられる．

徐波睡眠初期にGHの増加を認めない．

な関係を示さなかった．対照者の各REM期の開るかまたはその後に発現する傾向を認めた（図始の前後60分間のPRLの測定値から各対照者の4）．

全睡眠中の平均PRL値に対する割合（％表示）を計算し，M±SEで表現すると，PRLの増加は

考

REM期またはREM期に続く時期に認められた察

1．眼球運動について（図4）．MDの3症例の計10REM期の開始前後

対照者では，SPMは0．8Hzまで円滑な追従が可

60分間のPRL値を上記の方法で表現すると，能であるが，今回検索した3症例ともに0．5HzでPRLの増加は対照者と同様にREM期と一致す

SPMは異常を示した．また，SMは視標振幅に対−141−

態は対照者と同様にREM期またはその後で増加

sERUM PRL LEVELS RELATED W汀H REM SLEEP

傾向を示した．即ち，GHとPRLの分泌動態に解経を認めた．いずれの症例も，GHの分泌機構として下垂体機能を調べるアルギニン負荷試験でGHの正常応答があることから，徐披睡眠期のGH増
加消失の責任病巣は視床下部またはより高位と想定されるが，部位の特定は困難である．今回の検索対象の3症例はいずれも脳のCTにて，天幕上の脳室系に拡大を認め，とりわけ第3脳室の拡大がより著明であることは視床下部の萎縮を示唆し，
GH分泌異常の所見と考え合せると興味深いと思．われる．
MDにおけるGHの分泌異常として，既にいく
つかの報告がみられる．Culebrasら4）は，徐波睡眠期のGH増加を報告し，しかもMDの軽症例で

R【M

ー80

図4

−15

−30

−柑
0 15
MINUTES3015はGH増加があることから，重症度と対応すると

60考えている．これに対して，Barrecaら5）は，7例

対照者のPRLの変動を陰影をした部分に示す．本症患者のPRLの変動は，対照者と同じ傾向を認めた．

のMDの内の4例で徐波睡眠期でGH増加の消失を認めたが，これと重症度との対応はないと報告をしている．今回の3症例で得られた結果は，
上記の報告例と合致するが，脳波上で徐披睡眠期

応して最大衝動性速度の増加1）が認められず，その速度も対照者に比較して有意に低値であった．

が短い傾向にあり，患者の年齢が51歳とやや高いこともあるので，重症度との対応についてはまだ

反射性眼球運動を見る為に行ったOKNの急速相検討が必要である．Finkelsteinら6）の報告では，の速度も貴大衝動性目艮球運動速度と有意差がない

47−62歳の5名の正常人（平均年齢55歳）の内で，ことから，核上性病変により衝動性眼球運動の緩4名が睡眠中にGH増加を欠如している．この様徐化をきたした可能性はないと考えられる．

に，高年齢になるに従って，睡眠中のGH分泌がSPM，SMおよび反射性眼球運動のいずれにも異低下するので，第1例の51歳男性における徐披睡

常を認めることから，これらの眼球運動障害の責

眠時のGH増加の消失は本疾患による障害に加

任病巣は核下性病変，神経筋接合部病変と筋病変

えて，加齢の影響を除外困難と思われる．

が想定されるが，light−neardissociationの存在

MDにおける夜間睡眠中のPRLの動態についから核下性病変と考えることは困難であり，MDての報告は少なく，著者らの調べえた範囲ではでは眼筋にも病変2）が及ぶことから，筋病変によFerrariら7）の報告のみである．Ferrariらによれると考えられる．既に，VOrNoorderらによりMD

ば，MDll例のPRLの口内リズムを調べたとこ

ではSPMの選択的障害の存在から，本症におけろ，それは正常人と有意差を認めないと報告してる首艮球運動異常は中枢神経病変に起因3）すると報いる．正常者では，血中のPRLは夜間睡眠期に増告されているが，今回の3症例の眼球運動異常か

加する日内リズムを示すことが知られている．

らは中枢神経病変の存在は考えられなかった．

MDでも同様な日内リズムを示し，しかも夜間睡2．睡眠中のGHとPRLについて
3症例とも，対照者に認められた睡眠初期の徐波睡眠期のGHの増加がないが，PRLの分泌動

眠中におけるepisodicな分泌増加はREM期に一致するかまたはこの後に発現するという対照者と同じ傾向を認めた．

−142−

ま

と

め

1964．

筋強直性ジストロフィー症の3症例の眼球運動異常の責任病巣は外日艮筋と考えられた．

4）culebras，A．，PodoIsky，S．，etal．：Absenceof
Sleep−related growth hormone elevationsin

3症例とも徐波睡眠期におけるGHの一過性増加が消失し，この責任病巣は視床下部またはよmyotonicdystrophy．Neurology（Minneap．），
27：165，1977．

り上位の中枢神経系と考えられた．これに対して，

5）Barreca，T．，Muratorio，A．，etal．：Elevation

睡眠期のPRLの分泌動態は対照者と差異を認め

Of twenty・four・hour secretory pattemS Of

なかった．

growthhormoneandinsulininpatientswith
myotonic dystrophy．J．Clin．Endocrin01．

文

献Metab．，51：1089，1980．

1） 木村 洋，加藤 功，ほか：衝動性眼球運動の6）Finkelstein，J．W．，Roffwarg，H．P．，et al．：

定量的分析：正常所見について（その1）．日耳

Age・related changesinthetwenty−four・hour

鼻会誌，82：647，1979．

SpOntaneOuSSeCretionofgrowthhormone．J．

2）BurnS，C．A．：Ocular histopathology of
myotonic dystrophy．Am．J．Ophthalmo1．，

Clin．Eidocrin01．Metab．，35：665，1972．
7）Ferrari，E．，Nappi，G．，et al．：Circadianperiodicity of plasma prolactin

68：416，1969．

3）Gunter，K．VonNoorden，H．StanleyThomp−
SOn，et al．：Eye movementsin myotonic
dystrophy．Invest．Ophthalmo1．，3：314，

−143−

in

some

neurologicaldiseases．Int．J．Chronobio1．，6：
231，1979．

29）筋細胞内過剰カルシウムと収縮弛緩に関する
生理学的研究−硝酸イオン処理筋を中心として−

高 守 正 治＊日

カフェイン負荷試験では，カフェイン3mMlO分的筋ジストロフィー症の発症にかかわる挟異常，

間処理後の張力曲線変化を調べた．筋収縮・弛緩Ca＋＋の病因的役割1）にかんがみ，われわれは，前の解析には，前報同様， Active state の概念8）報までにカルシウム・イオノフォアA23187で処理を導入，単収縮張力発生最大加速度d2Pt／dt2，最した骨格筋の膜特性2）および収縮性3）を調べたが，大強縮張力Poで本処理筋はヒト・ジストロフィー筋4）の完全な疾力発生からそのピークを経て1／2の張力にまで弛患モデルとはなり得ない事実を明らかにして来た．

緩する時間Tl′2R，刺激時から単収縮張力の貴大速本報では，Tsystemを含む膜に作用してtrigger
Ca＋＋influxを促し，一方筋小胞体のCa＋＋とり込度に達するまでの時間T。Pt′。い 最大強縮張力誘発のための刺激終了から静止張力にもどるまでの時

みを抑制する可能性も考えられている硝酸イオ

間TR（P。）などで 時間 要素を表現した．最大強
縮張力の微分値dPo／dtでブコ一速度関係を表わし

ン5）〜7）処理に加え，このNOieffectの促進と，筋小胞体Ca十十遊離促進の目的で，反復電気刺激負

つよさ

要素を表現，単収縮張た（図1）．

荷を行った骨格筋について，その収縮・弛緩機構
変化，カフェイン反応性の生理学的解析を試み，

結

ジストロフィー筋と比較検討した．

果

横隔膜30筋について，NO言一一リンゲル液による5分間処理は，aCtive stateの方

法

ウイスター系雄ラット（210〜250g）から横隔膜筋をとり出し，その切除片（乾燥重量11−14mg）

つよさ

要素

（d2Pt／dt2）の増大， 時間 要素（T。Pt／。t，Tl′2R）の延長に伴って単収縮力（Pt）の上昇をもたらしを，ガス負荷中（02：CO2＝95：5）のリンゲル液（図2，3），既報6）に矛盾しないものであった．
ところが，これに1Hz反復電気刺激を20分間加内（30℃）で等尺性筋張力計にセット（最大単収えたところ，単（Pt），強縮（Po）張力とも低下

縮張力が得られる静止時張力にセット），白金板電し，分析の結果は，aCtive stateの極でmassive stimulationにて筋直接刺激（d−素（d2Pt／dt2）の低下， 時間 要素（TdPt／。t，TC，6JLg／ml添加）し，誘発張力曲線を記録してコントロールとした．次に同筋を，リンケリレ液構

Tl′2R，TR（P。））の延長を示し，カー速度関係を表現

成のNaClをNaNO3（122mM）に全置換したの低下度は後者にややつよく，Pt／Poは本処理にNO言リンケリレ液中で処理し，5分後誘発張力曲より増加した（図2，3）．

つよさ

要するdPo／dtの低下もみとめられた．単，強縮張力線を記録した．ひきつづき，同液中で1Hz反復電

ひきつづき，本処理筋の単収縮力Ptは，カフェ

気刺激20分間処理後，再び張力曲線記録を行い，イン3mM添加によって，aCtivestateの以上3条件下の張力曲線解析結果を比較検討した．

さ 要素（d2Pt／dt2）， 時間 要素（T。Pt／。t，Tl′2R）の増大に伴い上昇した（図3，4）．対照として正＊金沢大学医学部神経内科および長崎大学医学部第1内科

常14筋について同様のカフェイン処理を行い，同
−144−

つよ

ActiveStateProperties

P−：慧蒜慧蒜慧認諾ぎedl翫t2：Ac血stateintensityofshorteninE・
AJTt山川＝鷹Ca¶rekasedfromSRintheinitiation
Ofexcitation・COntlaCtioncoupling．

10．1恥，Se。
：

：

職P掩t：

90m9eC

DurationoractiⅦState
AmountofCareleasedfromSRandrateofthe
帽aCtionbetweenCdtarKltroponin．

d2円仇こ」しIo・00御、郵2T佗R‥

D∝町OraCtilでState・品

TR（叫禁謁宅島忠箭忠霊還霊箭
troponinarKIATP・bindingtNnVOSin；Series・eLastic
etement．

払： ActiYeStateintensityoHoad・tKaring．

−￣＝二三

Numb訂endstrengthofactin・m叩Sincross・brkbes・d勒：‡窓認諾浣豊忘加i鹿（Series・elasticeIement）

二工」了よ一・＝
図1
Conbd．．．、＿し．、こ＿‖＿▲＿

糎r＆

曲al

Ca打ehe3mM

虻九rル＿

TdPt／dt

血′劇24

Active state諸指標の測定方法と生理学的解釈．

−−

ーレ−

JLノ

土1g′m〜eC
90nlSeC

い土02g′ms∝〜
90msecTR（Po）と9400msecdPo／dt人Ⅴ人Ⅴ

0・2g／msec」＼一一一ヽ′一」＼一一V一 500mseC

図2 ラット横隔膜筋から，諸条件下で記録した等尺性単収縮張力，強縮
張力と微分曲線．
−145−

；

：

（Hoan土SD）

図3

Activestateの概念にもとづき，単，強縮張力を微分分析して得た諸指標の，NOi処理，NOi＋反復電気刺激処理，カフェイン添加による変化．

様の分析を行ったところ，Pt増大率平均は133％dt2）増大，弛緩を含む時間要素（T。，t／。t，Tl′2R）

で，これに対して本処理筋のそれは170％を示し，延長に伴い単収縮力（Pt）上昇がみとめられ（図カフェインに対する過敏反応性がみとめられた．
考2，3），この考えに矛盾しないものであった．ところが，これに筋直接反復刺激を加えて，NOi
effect促進，筋小胞体Ca＋＋遊馳促進をはかった

按

前報において，plasma membraneを介した外ところ，20分間の処理で，単収縮力は反転低下し，液からのCa＋＋influxで惹起される筋細胞壊死を

強縮張力も著減を示すに至り，aCtive stateの概期待したA23187処理筋は，強縮張力の著変に比べ念（図1）に基づいて分析すると（図2，3），A

単収縮張力の変化に乏しく3），われわれが，先にヒ23187処理筋3）に比べ，単収縮力およびその発生加

ト・ジストロフィー筋から得ている事実4）とは必速度（Pt，d2Pt／dt2）も低下値を示すなど，よりジずしも一致するものではなかった．本報でとりあ
げたNOiは，E一c couplin女における収縮の閥

ストロフィー筋4）近似の変化を見出すことが出来た．本処理筋でみとめたカフェインに対する反応

脱分極低下によるtwitchpotentiator（typeA）

性冗進（図3，4）も，ジストロフィー筋で報告として古くから知られている因子であり，その作されているところである9日0）．従って，われわれの用機序は，T systemを含む膜を介したCa＋＋in・

生理学的指標でみるかぎり，T systemを含む膜

nux促進，筋小胞体Ca＋＋とり込み抑制にあるとを介したCa＋＋influxに加え，筋小胞体Ca十十の出推察されている5）−7）．われわれのナット横隔膜筋

納に変化をもたらす処置を施すとき，A23187で処を用いた実験でも，確かに張力発生加速度（d2Pt／

理した場合よりも，よりジストロフィー筋に近い−146−

Musckbeated wi廿INO＆ee c廿廿

aal

Conbdnwsck
伽血七〇nbetore Caft由103mM

botore Ca¶ehe3mM

Ⅰ49
40msec一二二．r…

TdPl／dt

血／仇2JL Jレ
図4

トgノmSeC
90msec虹4′＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿空2g／msec2
90msecコントロール（右）およびNOi＋反復電気刺激処理筋（左）の対カフェイン反応性分析．

病態を成立させうると推察された．しかし，本処

5）Bianchi，C．P．＆Shanes，A．M．：Calcium

理で単，強縮張力とも著減するものの，両者の程influxin skeletal murcle at rest，during

度にはなお差があり，Pt／Poはジストロフィー

activity，andduringpotassiumcontracture．J．

筋4）のような低下を示さなかった（図2）．

gen．Physiol．，42：803−815，1959．
6）Taylor，S．R．，Preiser，H．＆Sandow，A．：

文

献

Mechanical threshold as a factorin ex−1）Duncan，C．J．：Role ofintracellularcalcium
inpromotingmuscledamage：Astrategyfor
COntrOlling the dystrophic condition．Ex−
perientia，34：1531−1672，1978．
2）Takamori，M．，Ide，Y．，＆

Citation−COntraCtioncoupling．J．gen．Physio1．，
54：352−368，1969．

7）Frank，G．B．：Thecurrentviewofthesource
Of trigger calciumin excitation−COntraCtion

Tsujihata，M．：

PharTnaCOlogical study on muscle treatedWith calciumionophore A23187．J．Neurol．
Sci．，50：89−94，1981．

couplingin vertebrate skeletal muscle．
Biochem．Pharmaco1．，29：2399−2406，1980．
8）Takamori，M．，Hazama，R．＆Tsujihata，

M．：Activestatepropertiesofdenervatedand

3）Takamori，M．，Mori，K．，Ide，Y．，＆Tsujihata，

immobilized muscle：Comparison with

M．：Contractile and chemosensitive pro・

dystrophic muscle．Neurology（Ny），28：603

perties of muscle treated−608，1978．

with calciumwith dys−

9）Brust，M．：Agents which affect excitation−

trophicmuscle．J．Neurol．Sci．，51：207，215，

contraction couplingin normal and dys−

1981．

trophicmuscle．Fed．Proc．，28：1649−1656，

ionophore A23187：COmparison4）Takamori，M．：Contractility and super・

1969．

SenSitivitytoadrenalineindystrophicmuscle．

10）高木昭夫：筋ジストロフィーと悪性高熱−

J．Neurol．Neurosurg．Psychiatry，38：483−

カフェイン感受性テスト（in vitro）による検492，1975．

討．昭和56年度本報告書，1982，pp．135−139．
−147−30）甲状腺中毒性周期性四肢麻痺のエビネフリン
負荷による薬理学的検討

高 守 正 治＊・＊＊
研究協力者
目

森

正

孝＊■

的

低K血性周期性四肢麻痺の発現には，低K血に表ノl

加えてhyperinsulinismの役割が大きいとされている．われわれは，甲状腺中毒症の本病患者にエThyroid Function

ビネフリン負荷による麻痺誘発試験を行い，またC as0 1

C as0 2T 4 小9／
dl）

14 ．
1

17 ．
5

T3（
ng／
dけ

33 1

T 3R S U （
％
）

46．
2

46．
6

T S H qJlU／
rnl）

UD

UD

ラットの甲状腺中毒症モデルの分析を行い，麻痺の発生機序につき検討を行った．
方法

甲状腺中毒性周期性四肢麻痺の2症例につき，エビネフリン負荷試験を施行した．症例は22歳，26歳のいずれも男性．発汗過多，暑がりなどの甲状腺中毒症としての症状発現に数ヶ月遅れて四肢131I up ta k e （
％）
9帥一
五Thyr
UP ta
oi
dk （
e
％
）

麻痺発作をみるようになり，発作時の低K血が確認されて入院となった．2症例の甲状腺機能検査

Thb h （％）

の結果を表1に示す．T4，T3，T。レジンスポンジ
摂取率はいずれも高く，TSHは測定感度以下，131Ⅰ

−

−

54．
0 ￣

14 ．
7
1．
7

（UD：undetectable）

摂取率または99mTc摂取率も高く，甲状腺機能冗結進状態を示している．エビネフリン負荷は，微量

果

エビネフリン負荷試験

持続注入器を用いて，1叫g／分で30分間静脈内投与を行った．電気生理学的には，尺骨神経連続最電気生理学的には，図1（casel），図2（case2）の上段に示すように，エビネフリン負荷開始

大刺激（20Hz）で誘発した拇指内転筋活動電位を記録した．同時に，経時的に血清電解質（Na，30分後には，連続誘発筋活動電位振幅の進行性減K，Cl），血糖，IRIを測定した．動物実験では，衰がきわめて著明となり，臨床的にも四肢に中等

雄ウイスター系ラットにtriiodothyronine（500度の脱力が出現した．図1，図2の下段は血清電〟gIP／日，7〜9日間）を投与した甲状腺中毒症
モデル1）から，横隔膜神経筋標本をつく り，微小電解質，血糖値，血中IRIの経時的測定結果を示

極による分析を行った．

ネフリン負荷開始30分後には，血清K低下（2．4，す．筋i舌動電位の著明な振幅減衰が出現するエビ2・1mEq／1），血糖上昇（135，127mg／dl）がみられ＊金沢大学医学部神経内科＊＊長崎大学医学部第1内科

るが，血中IRIは負荷前に比べこの時期や低値（20，20J U／ml）を示した．血中IRI上昇はエビ−148−

ネフリン負荷開始1時間以降になって認められた．
ThyrotoxicPeriodic Paralysts

ラットの甲状腺中毒症モデル（Casel）

表2にラット横隔膜神経筋標本から得た電気生理学的分析結果を，正常対照とT。負荷の場合を対ProvocationbyEpinephrine

比して示している．T3投与ラットには静止膜電位（101−g／mintor30min）
20Hz

約4mVの脱分極化と，約35％のMEPP振幅低下があり，有意（p＜0．001）であった．MEPP放
15mv

電頻度・EPP quantum content，クラーレに対する感受性（EPP振幅1．5〜4mVを得るに要す
るd−TCの量）は，正常対照ラットと差がなかった．

bet0−e30min l hr

Na（mEq川145：144：145

K tmEq／n

3．6‡2．4：3・0

3

hrS

146
3．7

系に影響を与える薬剤に対する静止膜電位の反応

109

態度を調べたものである．正常ラットでは，ウア70

パイン（上段右）に対して脱分極化反応，エビネ

1

CltmEq′り

108・106：108
1

BLoodsugar
tmg／dり68・135：105

図3は，正常（各欄の左）およびT3投与（各欄の右）ラットの横隔膜神経筋標本で，Na能動輸送

1

23：

旧l（〃U′mlI

20：

74

19

7リン（上段左），インシュリン（上段中央）に対し過分極化反応がみられた．インシュリンに対する過分極化反応は細胞外液K濃度正常の場合に観図1

察されるもので，細胞外液K低値の場合（下段）には，逆に脱分極化反応を認めた．図3各欄右はThyrotoxic Periodic ParalysIS

T。投与ラット横隔膜静止電位の各薬剤に対する（Case2）

反応を調べたものである．ウアパイン（上段右）による脱分極化反応は正常対照同様にみとめられ

PTOVOCationbyEpinephrine（1011g／mintor30min）
20Hz

るが，エビネフリン（上段左），インシュリン（上段中央）による過分極化反応は欠除していた．低K外液下でのインシュリンに対する脱分極化反応
は，なお存在していた（下段）．
考

betore

30min

3hrs

NatmEq川150：147：143

K（mEq川3．6：2．1i

Cl（mEq／り

106

3．1−104：106

即00dsugar（m9／dn

旧luU mt）

68i127！

85

201127

25

＿

▼

＿

按

低K血性周期性四肢麻樺の発作時に血中インシュリンが高値を呈する2）ことから，麻痺の発現には，低K血症に加えてインシュリンが一役を演ずるという説がある3）．われわれのラット横隔膜筋を用いた実験結果も，その静止膜電位は，低K外液下では，インシュリンに対し，過分極化ではな
く脱分極化反応を示した事実は，この説に矛盾し＿lない．しかし，われわれの臨床例でエビネフリン
2

負荷を行った結果では，麻痔は低K値，血中IRI
低下時（のちに上昇）に発現をみた．一方，ラットの甲状腺中毒症モデル横隔膜を用いた電気生理−149−

CO ntrOl rats

rats in jected w ith T；

75 士 5．4（∩享120I

7 1土 5．6
tn 芋17 1）

N tE P P am p litu de （m V ）0．75 土 0．139
（
∩＝
40）

0．
4 9 土 0．2t9
ln ≡65）M E P P frequ e ncy t H z ）4．2 士 l．85
ln ≡
4 0）

4．8 土 l．36（
n ＝65IS en s itiv ity to d −tu boc u rarin e LLLg Im l）

0．9 −・l．2

0．9 −L 0

EP P．q ua n tu m co n te n t at ＝1Z

2 85 土 70．5
ln 壬
4 0）

2 66 士 砧．3
ln 三
4 0）

R esting m em b ra n e poten tia H

mV ）SeVentO ninedailyintraperitonealinjectionsof5∞JLgOf
L−3．3

＋

刷湖

帥rho（軸帥）
Contr01Il，5−triiodothyronine

dissoIvedin

O．005N

NaOH．

【f触d血騨mr噂−hlm血陶ttdh則伽（85L仙）

仙1（L7ズmlH）

Co仙01

Con的l

−】

−】

恥

わ

⁚
﹂

∵

70

70

的

的

﹂
折々
州nl

卯瑚
油川

血糊

が∩

⁝ル
附加

klO相
加ttr Mor亡がt亡rln・3 ＝い】〜l ln・1〜l Uい一秒

申は加細川ぢIl1匹鵬鵬d ad川乱
れ画れl血相di凱伽10．5L叫dIControITl﹂■止．■け川．

1 ∩

州法

8 −

⁚帰心

lnt2，I 小円一両：帯r−1∩

州も沖
日代仙

ゝ甘口仙l・ml n血l【L〜m州

図3
学的分析では，静止院電位脱分極とともに，エビ文

献

ネフリン4），インシュリン5）に対する膜の過分極化

1）Denys，E．H．＆Hoffmann，W．W．：Aninvitro

反応欠除がみちれ，一部cyclicAMP介在のNa−
K能動輸送系異常の存在が示唆される結果を得た．

StudyofbiomechanicalChangesproducedby
hypermetabolism and hypometabolism

inSkeletalmuscle．Neurology（Ny），22：22−31，
1972．

2）Shishiba，Y．，Shimizu，T．，Hisano，N．＆ー150−

Shizume，K．：Study onimmunoreactive4）clausen，T．＆Flatman，J．A．：Theeffectof

insulinconcentration onthyrotoxicperiodic

CateCholamines on Na−K transport andparalysis．FoliaEndocrinol．Japon．，45：384−

membrane potentialin rat soleusmuscle．J．

385，1969．

Physiolリ270：383−414，1977．

3）Otsuka，M．＆Ohtsuki，Ⅰ．：Mechanism of5）clausen，T．＆Kohn，P．G．：The effect ofmuscular paralysis byinsulinwith special

insulinreference to periodic paralysis．Am．J．

potassiumin rat soleus muscle．J．Physio1．，

Physio1．，219：1178−1182，1970．

265：19−42，1977．

−151−

On the transport of sodium and31）猫のGolgi腱受容器の反応

深

安＊

見

本研究の背景と日的の筋は一層乃至数層よりなる薄い筋で，GTOのGolgi腱受容器（GTO）は筋紡錘と並んで骨格

みならず筋紡錘も実体顕微鏡下で＼見出すことが可

筋の反射性及び中枢性別禦機構におけるフィード

能なので，これら筋受容器を生体外に単艶するのバックループとしての重要な役割を果している3）．

に最も通した材料である1）．GTOと単離する方法

特に個々のGTOに直接接続している筋線維（平及び本実験に用いたロック氏液の組成については

均10本）を支配している運動単位（MU）の活動には敏感に反応を示し，2，3の仮定に基づいて，

文献1，2を参照されたい．単馳したGTOはロッ
ク氏液を満たしたbathに入れその一端は梯形波

生体内GTOについて計算された求心性放電に対伸長器にナイロン線経を用いて連結し，他端は同する閥値はstatic放電に対しては28mg（文献3

様にしてストレーンゲージに連結した．GTOに参照），dynamic放電に対する値は4mg3）という値が報告されている．しかしながらこれまでの直接終っている筋線維群を受容器と共に取出した

GTOに関する研究は入力（筋収縮又は筋伸長）とに固定し他端即ちGTOの陸側端をストレンゲー

出力（求心性放電）との記録解析に止り，それにジに連結した．これら筋線経に対しては一対の鎖基づいたGTOのModelも考案されているもの

線電極を用いて細胞外刺戟を行うか又は3MのGTOそのものは所謂ブラックボックスとしてKClを満たした細胞内電極で個々の線経の刺鞍

間接的に取扱われてきた．

を行った．求心性神経放電は他の一対の放線電極

我々は筋紡錘並びにGTOのSensory trans−
ductionに興味を抱きここ数年来その研究を行っ

標本については筋の起始部（尾骨骨膜）をbath底を用いて記録した．実験はすべて室温（25℃）で行った．

て釆たが今回はGTOについて得られた最近の知結見を報告する．さて一般に機械的感覚受容器にお果けるtransductionには次の如き一連の反応段階

GTOの伸長（又は張力）がある一定の問倍以上が考えられる．それは機械的刺戟一→感覚神経終末の変形→終末のイオン透過性の変化一→受容器電位

放電頻度は増加する（図1の各記実録における上段の発生→神経放電の発生である．今回の報告はこのトレース）．StaticforceとStatic放電との関係

れら段階の中で特に刺戟及び活動電位発生に関すは図1のグラフで示した様に最初は直線的な関係

るもので，GTOにおけるtransduction機構をよ（図1のグラフのA，B，C）を示すが力の増大に達すると求心性放電が起り，伸長の増大と共にり直接的な方法で解明せんとするのがその目的でと共に飽和する傾向がみられる．この直線部分のある．

勾配はこのGTOの感度（Sensitivity，S）を示すものであり，直線がⅩ軸と交わる点は放電の閥値を示している．又図1の如き一連の記録より伸長度

材料と方法
猫の尾筋の1つであるdorsolateral muscleよと張力との関係を求めそれぞれのGTOのり生体外に単放したGTO標本を材料とした．こYoungの弾性率（Y）を計算することができる．
図2はこの様にして得られた感度とGTOの機械＊国立療養所宇多野病院臨床研究部

的性質を3例のGTOについてグラフで示したも
−152−

A

0

TSSぶつdE一

0
0
′

0
0

0

TS⁝ぶつd∈︻
0

2

4

6

8

10

︒了501︒

丁：ぷ⊃d∈一

L
L
O

Stress，Unitsot108dynくm￣2

図2

3例の腱受容器について得られたStress−St．
rain及びStressと活動電位放電頻度（上段のグラフ）の関係．

のであり弾性率の低いもの程感度が高いことがわ
かる．11例のGTOについて得られた求心性放電に対する閥値は8−170mg，感度（S）は4．2×10■7〜2．8×10−5impulsesS￣1／dynecm2，弾性率（Y）
は9．8×107−1．1×108dyne cm，2という値が得られた．ところで，S＝Af／△F／A（△f：求心性放電の変化，△F：張力の変化，A：GTOの単位断100mg

図1単維したGolgi陣受容器の感覚神経活動電位（A−Dの上段の記録）．A−Dの記録で中段は張力，下段は伸張の記録である．下部のグ
ラフは平均活動電位頻度と張力の関係．Dに示してある時間のキャリブレーションは1S，張力（A）のそれは100mgである・

面積cm2）と定義されるのでもし△fが張力の変化に比例するものとするとS■は張力の変化に無関係な定数となる．逆にもLAfが長さの変化に比例するとすると，△f＝K△1／1（Kは比例定数，△1＝
長さの変化，1＝もとの長さ）となるから両辺を△F／Aで割ると△f／△f／A＝KAl／1／△F／Aとなり−153−

左辺はSであり，右辺はK／Y，即ちS＝K／Y又は
logS＝K

rlogY（K′：定数）となる．図3は11例のGTOについて測定したSとYの値を両対数軸グラフに示したもので，測定点を通る直線の勾配は−1．29であり理論値の−1に近い．このことはGTOに対して刺戟となっているのは張力そのものではなく，それによって生じたGTOの長さの変化である事を示している．図4はGTOに終っている筋を細胞外電極で刺戟した時の結果を示したものでありA区lの上から下に向って次第に刺戟強度が増している．各記録の上段には求心性放電（点で示してある）を下段には筋張力が示してある．筋収縮による張力が増大するにつれて求心放電頻度も上昇しているが，その上昇の勾配（即107

ちS）は筋の静止時の長さに対し比較的に一定で10■
γ．dyn⊂m￣2あるが，（グラフの実線と破線）10即ち最大筋張力を発生する筋の静止時長以上になるとSは低下す

図3る傾向がみられる（グラフ上の点線）．図4Cは11例の腱受容器について得られたYoung弾性率（Y）と感度（S）の関係．Regressionline
はlog S＝−1．29logY＋4．83．

この様な一連の結果より得られた平均求心放電間隔とその変動係数（C．Ⅴ）を示したものであり，全体として両者の関係はスムーズに上昇し特に目考案

立った急変はみられない（相関係数rs＝0．98，p＜

筋の張力受容器といわれているGolgi腱受容器

0．001）．このことは少なくともこれらの実験条件
下では神経放電は神経終末の1ヶ所から起っていは筋の張力そのものではなく，主にcollagen線経から構成されている受容器そのものの長さの変化ることを暗示しているものと解釈出来る（文献2に応じて反応していることが本研究により明らかにされた．又腱受容器のSの値は各受容器の機械参照）．
次に細胞内電極とブリッジ法を用いて各筋線を的性質に依存し，伸長性の高い（Yの低い）受容1本ずつ刺戟し，その収縮によるdynamic問値の測定を行った．15例中のGTO中8例において，一器程Sの値が高いが，このことは理論的に当然の本の筋線維収縮による求心放電の発生をみたが，容器の機械的性質のバラツキを反映しているもの

その中の数例が図5に示してある．この図のA，と考えられる．

ことと考えられSの値の広いバラツキは結局各受

D，E，Fでは上段が求心性放電，中段が筋張力，

GTOを支配している求心神経は感覚器内で数下段が細胞内電位を示している．B，Cでは細胞本の有髄線椎に分枝し，その先端は無髄終末とな

内電位は略してある．この様な実験からdynamicってCollagen線経に沿って分布している．本研
究の結果（図4）ではこれら有髄線経の分枝にも間借を測定した結果は1mg〜8mg（2．6±2・8mg，n＝9）という低い値であった．これらの値
はわZがfわ竹で室温25℃で測定したものだが，Sに拘らず神経の活動電位は恐らく1ヶ所のランビエ

対するQl。が2．5〜3．5という高い値を持っているので1）生体内における閥値は更に低くなる可能性

末のどのランビエ絞輪かということは不明であるがある．

私は考えている．

絞輪から発生するものと考えられる．具体的に終が，恐らく最初に枝分れをする部分ではないかと
他の機械的感覚受容器と同様にGTOにおいて

−154−

0

50

100

150

Tension（mg）

40

80

120

160

msec

TimefmsecI

図4

A：筋の収縮（各記録の下段）と求心性神経放電（各記
録上段で点で示してある．それ以外のスパイクは刺戦によるアーチファクト）．

B：筋張力と放電頻度の関係．
C：神経放電間隔とcoefhcient ofvariation（C．Ⅴ．）

も絞輪間隔は受容器に近づくにつれ短くなり，受GTOは本研究でも明らかにした如く求心性放容器内の分枝では0．5mm以下にもなる．分枝の電に対する張力の閉値が低く，動物及び1人の骨格多い事は感覚受容部と考えられる無駄終末の数，筋の正常活動時にも放電していることがわかって従ってその表面積を増大させそれによってSも増いる（文献3，4参照）．種々の筋神経疾患におい大するものと考えられるが，同時に上記の絞輪間て，GTOの形態的，機能的変化の起ることが予想

隔の短縮を考え合せると無髄終末部と有髄終末部され，その面での今後の研究は重要な課題ではなとのインピーダンスマッチングが考えられ，これいかと思われる．

により終末（無髄）部で起った受容電位が有効に有髄部の活動電位発生部位へ伝達されると推測さ
れる2）．

結

論

（a）GTOは加えられた張力そのものに反応する
−155−

A

図5

単一の腱受容器に直接連結している筋細胞の細胞内電極による刺戟とそれに対する受容器の反応（A−F）．
各記録の上段は求心性活動電位，中段は筋張力，下段は細胞内電位を示す．B，Cでは細胞内記録は略してある．
又下では中段が細胞内電位，下段が筋張力の記録である．

のではなく，その結果生じた受容器そのものの長さの変化に反応するものである．

2）Fukami，Y．：Responses ofisolated Golgi
tendon organs to muscle contraction and（b）Static放電に対する問値は8〜170mgであelectricalstimulation．J．Physio1．，318：429−

りdynamic放電に対する値は1〜8mgであっ
た．

3）Matthews，P．B．C．：Mammalian muscle（C）求心性神経終末での活動電位発生部位は1ヶreceptors and their central actions．Edward

所のランビエ絞論であると推論される．

443，1981．

Am0ld，London，1972．

（d）以上の知見に基づいてGTOの機能的形態的面の考察を行った．

4）Stuart，D．G．Mosher，C．G．＆Gerlach，R．L．：
Properties and centralconnections ofGolgi

文献1）Fukami，Y．＆Wilkinson，R．S．：Responses
Ofisolated Golgitendonorgansofthecat．J．
Physio1．，265：673−689，1977．
−156−

tendon organs

with special reference tolocomotion．In

ResearchinMuscleDevelop−

ment

and

the

MuscleSpindle．Excerpta

Medica，Amsterdam，1972，pp．439−462．

32）Duchenne型筋ジストロフィー症患者の赤血球のカルシュウム

吉
研究協力者

多

田

田

嘉

日
的
Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）の原
因がいろいろ考えられる中で， 筋細胞膜に異常が

瑞

子書
春日

安

藤

一

也＊

た．3回洗條後，赤血球をPBSD（−）中に，約10％ヘマトクリット倍になるよう浮遊し，40Cで3日間保有した．保有中1日に2回授拝した．
Ca量，ATP量および形態観察の試料調整のたあり，異常量のCaイオンが筋細胞内へ妻充入し壊という仮説が有力である．この仮説にめ，保有した赤血球浮遊液を，洗源時の遠心条件

もとづき，著者らは筋細胞膜内で，Caイオンの細で遠心し，上清を吸引してPBSD（−）を加え，ヘ胞内への流入を調整している機構に異常があるの

マトクリット値42％になるよう調整した．

死を招くではないかと考える．その異常がDMD患者の赤Ca量測定試料は赤血球浮遊液の5．5mlを平底血球膜にも存在すれば，赤血球膜からも遠心管に入れ，2600×g，40C，30分の遠心条件でDuchenne型筋ジストロフィー症の原因の手ヨ卦り遠心し，paCkedred cellsを作成した．上清をポが得られるであろう．この予測のもとに，著者らはDMD患者の赤血球の性質を，Caイオンの存在））プロピレン管に採取し，paCkedred cellsの上層を約0．3ml吸引して除いた．Packed red cells

下と非存在下で比較検討を続けている．

を室温に放置し，温度が室温に平衡になったとこ

昨年，Caイオンを含む緩循液中に保有したろで撹拝し，SMIペッターで1mlをポリプロピ

DMD患者の赤血球のCa量が，対照者のそれより

レン管に採取した．上清とpacked red cellsは約2．5倍高かったことを報告した．今回はDMD患

Ca測定まで−350Cに保有した．測定直前に，pa−者の赤血球を，Caイオンを含まない緩衝液書に，

cked red cellsは0．1N−HCl（HCl：Merck

40Cで3日間保有し，その赤血球のCa量を検索

Suprapur）で10倍に稀釈し，上清はそのままCa
測定用の試料とした．

した．

Caの測定は高周波アルゴンプラズマ分光分析
実 験 法

装置（ICAP−500：日本ジャーレル・アッシュ社，

緩衝液はCaイオンを含まず暮，5mMのブドCa検出限界0．02ng／ml）で測定した．
赤血球のCa量は永木2）およびVettoer等3）にウ糖を含む，リン酸緩衝食塩液（PBSD（−），pH
7．4）を使用した．

従い，indocyanine greenを用いてtrapped pla・

赤血球はDMD患者7名（18−22歳，平均年齢20歳）と健康男子対照者11名（18〜22歳，平均年

Smaを測定し，外液のCa量を除き算出した．
ATPの測定は酵素法を利用したATP−teSt

齢20歳）のヘパリン処理新鮮血液より得た．

（Boehringer Co）を用いて，＿42％ヘマトクリッ

血液の処理は採血後，血液を氷冷し，約4時間

ト値赤血球浮遊液のATPを測定した．ヘモグロ

後に開始した．血柴分絶後，赤血球をPBSD（−）

ビンはazide一methemoglobin法を利用したへで，170×g，40C，10分の遠心条件で3回洗i條しモキットS（日本商事）を用いて，ATPを測定し＊国立武蔵療養所神経センター＊＊日本ジャーレル・アッシュ社

た同一試料で測定した．
赤血球の形態は1％グルタールアルデハイド・
ー157−

PBSD（−）音容液で赤血球を固定し，光学顕微鏡で観察，写真撮影後検索した．

赤血球膜あるいは膜表面からCaがはずれたとき，DMD患者の赤血球のCa量は，対照者のそれと差がないということから，私達はDMD患者の結赤血球がその膜あるいは表面に，対照者のそれに

果

Caイオンが含まれない緩衝液■中で，赤血球を比べ，より多くのCaが存在していると考える．

40C，3日間保有したとき，DMD患者赤血球のDMD患者の赤血球の形態変化5）やリン脂質のCa量は，8．9×10￣7±0．7×10−7mol／1．cells，健康

脂肪酸の取り込み6）が，Ca存在下では対照者と差男子対照者のそれは，8．4×10￣7±0．7×10−7mol／1．
cellsであった．この時の赤血球内のATP量は両があり，非存在下では差がない，またghost作成

者共約3×10￣6mol／gHbで赤血球内のATPの酸化に差があり，EDTAを使用すると差がない7）のとき，EDTAを使用しないとタンパク質の））ン

枯渇，あるいはCaの蓄積などによって生じるec−という報告を考えあわせて，DMD患者の赤血球

hinocyte型赤血球は約13％であった．

膜あるいはその表面に，Caが関係するある物質あるいはその代謝に異常があり，Caが存在すると異考

常性を発現すると考える．

察

一般に赤血球のCa量は1．5×10−5mol／1．cells
である（正常値）．DMD患者赤血球を，Caイオン

ま

と

め

を含むリン酸緩衝食塩i容液（PBSD（＋））に浮遊

Caイオンが含まれない緩衝液中のDMD患者のし，40Cで3日間保有したとき，赤血球のCa量は対照者より2．5倍高いイ直5．1×10￣5mol／1．cellsであ赤血球のCa量は，健康男子対照者のそれと差がない．

った．この値は正常値の3．7倍である．一方対照者

患者の血液を提供下さった，国立療養所東埼玉病の赤血球のCa量は，2．0×10LSmol／1．cellsで正常院 石原伝幸先生に感謝します．

値に近い倍であった．
文

今回，DMD患者と健康男子対照者の赤血球を，献

Caイオンを含まないPBSD（−）中に，40Cで3

1）吉田瑞子，安藤一也：筋ジストロフィー症患者

日間保有した結果，その赤血球のCa量は，両者間に差がなく，その値は正常値よりひと桁以上少なの赤血球のATPとカルシュウム含量．筋ジス

い．この値は正常者の赤血球を，Caのキレート剤珪），昭和55年度研究報告書，1981，p．179．

であるEGTAを含む緩衝液で洗濯し，赤血球の2） 永木譲治：赤血球内ナトリウム，カリウム測定

表面からCaをはずしたときの赤血球のCa量約の基礎的検討とその臨床的意義．臨床病理，24：

1×10￣6mol／1．cellsに近い．一方リン脂質に結合トロフィー症の病因に関する臨床的研究（三好89，1976．

したCaは，過剰のNaあるいはKイオンによっ

3）vettore，L，Falezza，G．，etal：Anewmethodて置換される現象が報告されている4）．著者のひfor the determination of sodium and potas−

とりはこの現象を確認している．この現象と，

Siuminhumanredbloodcells，uSingindocya−

PBSD（−）中に保有した赤血球のほとんどが正常

nine green as a marker fortrapped plasma．

形態を保ち，ATP量も枯渇していなかったこと

Clinica，Chimica Acta．，55：345，1974．

から，3日間の保存の問に赤血球膜あるいはその

4）Hauser，H．＆Dawson，R．M．C．：Thebinding

表面のCaが，外液に過剰にあるNaあるいはK

Ofcalcium atlipid・Waterinterfaces．Europe−

イオンと置換したと考える．

an，J．Biochem．，1：61，1967．
5）吉田瑞子，岩崎祐三，安藤一也：筋ジストロフ
ィー症の細胞膜の物理化学的研究．筋ジストロ

事不純物として10−6M以下のCaイオンが存在する．
−158−

フィー症の病因に関する臨床的研究（三好姓），

昭和54年度研究報告書，1980，p．195．

7）Roses，A．D：Erythrocyte membrane auto−6）Sherblom，A．P．，McA11isteister，D．J．，etal：

phosphorylation in Duchenne muscular

Incorporation of fatty acidsinto phospholi・

dystrophy：Effect of two methods ofpids of erythrocytes from humans witherythrocyte ghost preparation on results．

muscular dystrophy．Neuroscience Letters，

Clinica Chimica Acta，95：69，1979．

20：115，1980．

ー159−33）Duchenne型進行性筋ジストロフィー症の赤血球
カルシュウムに関する研究

庄

司

進

Duchenne型進行性筋ジストロフィー症におい一＊は一般に用いられている診断法により診断し，8て赤血球の形態的・流動学的・生化学的異常が多歳より13歳までの年齢であった．

数報告されている．そのうち変形した赤血球が多対照：同年齢の対照児を小児科外来及び喘息病
棟入院児より選んだ．

いというMorse，etal．1973，Lumb，etal．1975，

Howells，1976，Korczyn，etal．1977の報告や変採血：外来児及び入院児共に同一日に著者が真形能が低下しているというPercy，etal．1975の報

空採血器を用い静脈よりヘパリン採血した．入院児の場合は朝食前に行なった．

告，さらに〔Na＋，K＋〕−ATPaseのouabainによ1976，Siddiqui，et al．1977，Souweine，et al．

採血より洗浄までは0〜40C又は室温に保った．

1978の報告，及びK＋のeffluxが増加していると洗浄の前に1500×g2分の遠心でplasmaというHowland，1974，Sha，afi，etal．1975の報告
等はカルシュウムを赤血球にloadした際に認めpacked red cellsに分馳Lbuffy coatを除いた．
洗浄：Packed red cellsの5倍量以上の10mMられる現象としてWeed，et

る抑制が減少しているというMawatari，et al．

al．1973，Dunn，

phosphatebuffersaline（pH7．5）を加え混和後

1974，Blum，etal．1972，Weed，etal．1969が1500×g2分で遠心し，paCkedredcellsをとり報告した所見より考えて，本症の赤血球にはカル同様に計5回洗浄した．Buffycoatは認められた
場合その都度これを取り除くよう努めた．

シュウムが異常にaccumulateしている可能性を示唆していると考えられる．
もし細胞内カルシュウムが増加しているとした

最後の洗浄の上清の一部とpackedredcellsのら，これはinfluxの増加又はeffluxの減少ない

1部はカルシュウム測定用aliquotとしてfreeze
L保有した．Packedredcellsの一部はただちにしその両者によるものと考えられる。今までの研hematocritを測定した．

究ではこのinfluxとeffluxを45Caを用いて細胞

カルシュウム測定：原子吸光法を用いた．Cha−

内外及び膜分画での動きで測定した．その結果37。

rringは12000C．Atomizationは26000Cを用いた．

Cで3時間ではinfluxには本症と対照の問に差実験1：外来の患者5pairsで行なった．採血は認められなかった．又effluxは370Cで12分間で直後より0−40Cに保有し，40Cで洗浄した．洗測定し，これも本症と対照の間に差を認めなかった1）。

浄したpackedredcellsの一部を0．9mM CaCl2，

今回は生体内での赤血球のカルシュウム含量を

phosphatebuffersaline（pH7．5）にhematocrit

知るため原子吸光法を用いて測定した．

0．49mMMgC12，5mMDextroseを含む10mM
lO〜15％になるように加え40Cで72時間incuba−
teした．Incubation後赤血球を採血後の洗浄と同材料と方法

様に40Cで洗浄した．

患者：Duchenne型進行性筋ジストロフィー症

実験2：入院患者8pairsで行なった．採血直後室温のまま，室温のbufferで洗浄した．

＊信州大学医学部第3内科

−160−

結

果

ムの結合又はinfluxなのか，in viuoでの赤血球実験1：採血後洗浄した赤血球のカルシュウム

カルシュウム含量の差を反映したものかを追求す

含量は，息児（DMD）で0．27±0．13mg／l cell

るため，低温にせず採血直後に室i且で洗浄した実（6．75±3．25jL mOles／lcell），対照児で0．17±

験2を行なった．これは本症の赤血球カルンユウ

0・02mg／lcell（4・25±0．50jL mOles／lcell）
で0．10＜p＜0．25．

ム含量が九㌧正和でも有意に高いことを示した．
これらの結果はDuchenne型進行性筋ジストロ

40C，72時間のincubation後洗浄した赤血球のフィー症の赤血球の異常の原因にカルシュウムがカルシュウム含量は，息児（DMD）で1．8±1．3mg／

重要であることを示すのみでなく，本症のⅩ染色l cell（45．0±32．5JJ mOles／l cell），対照児で体異常によって表われるprimary defectが赤血

0．41±0．13mgパcell（10・3±3．25JL mOles／lcell）

球に於て膜のカルシュウムinfluxの増加又はカでp＜0．05．

ルシュウム結合の増加という現象に連なっている

実験2：患児（DMD）で赤血球のカルシュウム

可能性を示唆している．

含量は0・196±0・040mg／lcell（4．9±1．OjLmOles／
結l cell），対照児で0．120±0．039mg／l cell（3．0±

論

Duchenne型進行性筋ジストロフィー症の赤血

1・OJL mOles／lcell）でp＜0．005．

球は低温（40C）で72時間，0．9mMのカルシュウ

考ムを含むmedium中でincubateすると，有意に案

Duchenne型進行性筋ジストロフィー症の赤血カルシュウム含量が対照に比べ高値を示した．本

球を0．9mMという血菜中より低いカルシュウム症赤血球を採血直後より室温で洗浄すると，カル

浪度のbuffer中で40C72時間incubateすると有シュウム含量が対照に比べ有意に高値を示した．

意にカルシュウム含量が増加した．これはbuffer

これらより本症赤血球はJ犯

mediumより赤血球F莫にカルシュウムが結合した

in vivoにおいてもカルシュウムのinfluxの増加〝才かPにおいても又ためか細胞内へinflux Lたためであろう．Efflux

又は膜へのカルシュウムの結合の増加が示唆されは低温のためほぼ停止しているのでpassive in−fluxがそのままaccumulateしていると考えられた．これは本症赤血球の異常として報告されている多くの現象の原因と考えられる．

る．本症ではinfluxが増加又は膜への結合が増加していると言える．実験1では採血後洗浄した場

文

献

合は有意には達していないが本症で赤血球カルシ1）Shoji，S：Calcium flux of erythrocytesin

ュウム含量が高い傾向が認められた．これが低温

Duchenne muscular dystrophy．J，Neurol，にして洗浄している間の如びgfrPでのカルシュウ

Sci．，51：427−435，1981．

ー161−

34）筋強直性ジストロフィー症赤血球膜のレクチン結合

宇尾野 公 義＊

研究協力者

別 府 宏 囲＊

西

山

文

朗…

平

野

寛H

我々は，これ迄の一連の研究により，ジストロに従った3）．洗i條した赤血球をFer−Con A（0．5フィー鶏，およびヒトDuchenne型筋ジストロフ

mg／ml）と370C，30分間反応させたのち，PBSでィー症において，赤血球膜表面のconcanavalinA

3回洗i條し，等量のPBSにて浮遊液を作製した．

（ConA）結合部位数が減少していることを示し

この浮遊液を蒸溜水の表面に滴下すると，その一

た1）▼2）．一方，筋強直性ジストロフィー症（MD）部は浸透圧により破裂して，赤血球打英は表面張力

は，Duchenne型筋ジストロフィー症と同様に進により伸展されて水面上に浮かぶ．支持膜を張っ

行性の筋萎縮を来たすが，これとは異なる病態を示す．そこで，今回はMDを対象として検索し，たグリッド上にこれらの赤血球膜をひろい，蒸治
水で洗i條したのち，透過型電顕で観察した．二次

先に報告した結果と比較して，その意義を検討し

元展開標本による検査はMD群，対照群ともに1た．

例ずつを減じ，各6例につき行なった．
結対象と方法
29歳〜59歳のMD患者7名（男7，女3）と，

果（1）Con A凝集試験：

これに年齢・性を対応させた健康な成人7名を対正常対照及びMD患者の凝集試験の結果を表象とした．MD患者は1例を除きすべて外来患者

1に示す．両群とも凝集活性の高いものから順に，

で，いずれも日常生活を介助なしに行ない得る軽上から下へと並べて表示した．対照群（N）は，MD

症例である．被検赤血球を遠心分社し，燐酸緩衝群と年齢・性を対応させて選んだのであるが，凝生理食塩水（PBS：pH7．2）にて3回洗濯し，マイクロプレート法によるConA凝集能の測定と，フ集活性と年齢との間には両群とも一定の関係を見出すことは出来なかった．対照群の凝集活性はェ））テン標識Con A（Fer−Con A）を用いた二2，4−2−9mg／ml，MD群のそれは2￣5−2r9

i欠元展開8実の電顕的観察を行なった．

mg／mlであり，両者の間に有意の差はなかった．

（1）Con Aによる凝集活性：（2）＝次元展開標本におけるFer−Con A結合：
ジストロフィー鶏，ヒトDuchenne型筋ジスト

PBSによりCon Aの倍数稀釈系列をマイクロプレート上に作製し，これに等量の被検赤血球浮ロフィー症の赤血球で用いたと同じ方法により，遊液（1volume％）を加えて振塗し，密閉した赤血球膜の二次元展開標本を電顕的に観察し，そのち，370C，60分間静置し凝集活性を判定し，（＋）の電顕写真（20，000×）からランダムに3視野を選を示す最低Con A濃度をもって凝集活性を表現

び（1，000nmXl，000nm），これを10×10のunit

した．

Square（100runXlOOnm）に区画して，各unit（2）二次元展開標本におけるFer−Con Aの結合：

square中に含まれる7ェリナン粒子の数をかぞCon Aのフェリテン標識はIrimuraらの方法

えた．算定結果の一部を図1に例示する．1unit＊都立神経病院神経内科＊＊杏林大学医学部解剖

Square中のフェリテン粒子数を縦軸に，その度数分布を横軸に百分率で示してある．上段は正常者の1例を，下段はMD患者の1例を示している．
ー162−

表1 赤血球のCon A凝集活性左は正常対照，右はMD患者の結果を示す．いずれも中央から両端へ倍数稀釈系列で示してありnが大きい程Con A濃度は低下する（2￣nmg／mi）．凝集活性は凝集反応を示す最小Con A
濃度をもってあらわされる．MDと対照群の間にCon A凝集活性の差は認められない．

nn

2 ●n m g c o 血 ／m l

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

1 1

1 2

＋

N

I

H D

l

＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋

十

十

十

一

一

＋

＋

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2

M D

2

＋

＋

＋

＋

＋

＋

十

＋

一

一

一

一

＋

＋

N

3

H D

3

十

＋

＋

＋

＋

＋

一

一

一

一

一

一

4

M D

4

12

1 1

10

9

8

7

6

5

4

3

2

1

＿

＿

＿

＋

＋

＋

十

十

十

十

＋

一

一

一

一

＋

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＋

＋

＋

一

一

一

一

一

十

十

＋

＋

＋

＿

＿

一

一

一

一

十

十

十

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＋

＋

N

＋

＋

＋

＋

十

十

一

一

一

一

一

一

一

一

一

一

一

一

＋

＋

＋

＋

＋

＋

N

5

M D

5

＋

＋

＋

＋

＋

＋

一

一

一

一

一

一

一

一

一

一

一

一

十

十

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＋

＋

＋

N

6

H D

6

＋

＋

＋

＋

＋

十

一

一

一

一

一

一

一

一

一

一

一

一

一

十

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＋

十

十

N

7

H D

7

＋

十

十

十

＋

一

一

一

一

一

一

一

Ol

7

40

50

％

2
1

一 一 5 4 7 一

図1

3

一 7 8 9 0 1 ︑−−− ■0 1 エ コ ー ■ J 一 5

MD

4

30

5

ヽJ一

20

8

u∝毒一dSヒZ⊃＼SUJU︻ト∝宣 言ヒ∝已﹂−聖雪訂−モ⊃＼芯でモ邑 亡≡LLと−O Lむq∈コu

J一l二〇■′■○▲▼∧

0

図2

Unit square中に含まれるフェリナン粒子数のヒストグラム．

上段は正常者．下段はMD患者の1例を示す．

7ェリナン粒子の分布密度
Unitsquare（100nmXlOOnm）中に含まれる
フェリナン粒子数．正常者6例MD患者6例につき，いずれも3視野ずつを検索し，その各々につき平均値（黒点）と標準偏差（縦の線分）を示した．

両者とも，1unit square中に0万至1個のフェD．を求めると，それぞれ2．0±2．6，2．1±2．8であり，リナン粒子を含む場合が最も多く，10個以上の粒子を含むことは極めて稀である．l unit square
あたりに含まれるフェリナン粒子数のmean±S．

分布密度，分布パターンともに両者間に差はみられない．全例につきこのようなヒストグラムを作製し，1unit square中に含まれる7ェリテン粒ー163−

3個のサンプルを選び（1個のサンプルについて100個のunit squareをかぞえた），別々に表示してある．各々のmean±S．D．は対照群で1．0±2．1〜2．6±2．7，MD群では1．5±2．2〜2．7±3．5で両群●は，乱数表により完全にランダムな分布パターンを作製した時，一辺250kAのunit square中に含まれる粒子数のS．D．を意味し，J（k）は実際の標●を算出して両群を比較した3）．ここで￠a。。。m（k）と●muraらによって考案された0・（k）／oland。m（k）比●2−2MD群と対照群との間でCon A結合部位の分布パターンに差があるか否かを検討すべく，Iri−MD（4）Con A結合部位の分布パターン：1

った（図3）．

2

MD群では両者間にそのような対応は見られなか

3

正常対照群では，凝集活性の高い例ほどフェリテン粒子の分布密度も高くなる傾向を示したが，0

問には差がない．
（3）凝集活性とFer−Con A結合との関係：

1

SuJUト∝d∝N−ヒ∝∝山﹂﹂0∝山山王⊃N UOく∝︼＞く算出すると，図2のごとくなる．各ケースにつき3
2．OSヒN⊃＼

子数の平均値とその標準偏差（mean±S．D．）を

2−4

2−6

r8

210mW仙AGGLUTINAT10N TlTER

図3

Con A凝集活性とCon A結合部位の分布密度
フェリナン粒子数は3視野の平均値で表示した．正常対照群ではConA凝集活性の高いほど，ConA結合部位（フェリテン粒子）の分
布密度も高い傾向を示す．

本において一辺250kAのunit square中に含まれる粒子数のS．D．をあらわす．クラスター形成の多

⁚÷享・

0
0

考
察
筋強直性ジストロフィー症は，Duchemme型進0は10パーセントの危険率でも有意ではなかった．

0ると，図4のようになり，正常群は21．2〜37．1，MD群は18．8−32．6と後者がやや低値を示すが，その差︵ゴ∈︒Puq6＼︵寸︶b

今回のデータにつきJ（4）／￠a。。。m（4）を算出す

・
﹂
÷
十
・

い標本ほどJ（k）／￠an。。m（k）比は高いことになる．

行性筋ジストロフィー症と同様に進行性の筋萎縮を示すが，発病年齢，遺伝様式を異にし，筋強直現象を示すなど，Duchenne型のそれとは異なる病態を示す．本疾患に関してもsystemic mem−brane diseaseと云う観点から赤血球膜の異常が疑われ，様々な検討がなされて来た．
Rosesら4）は〔γ一32P〕ATPを用いて赤血球膜のband2及びband3蛋白のPhosphorylation
を検索し，Duchenne型筋ジストロフィー症ではこれが増大し，MD患者では逆に減少していることを示した．しかし，Iyerら5）は，これと逆に，MD
−164−

N

MD

図4 J（4）／￠and。m（4）比MD群が対照に比し僅かに低値を示すが，有意の差ではない．説明，本文参照．

患者赤血球でband3のPhosphorylationの増大て，赤血球のConA凝集活性の測定，二次元展開

を認め，これが温度によって左右されるところか

標本におけるFer−ConA結合の観察を行ない両ら，膜内在性酵素の周辺を構成する脂質環境に異常がある可能性を推論している．Luthraら6）は群を比較した．Duchenne型筋ジストロフィー症（Ca2＋＋Mg2＋）−ATPase活性がMD患者赤血

意の差を見出し得なかった．

の場合とは異なり，MDと正常対照との間には有球では低下していることを示し，これが膜構造の文異常に関連するものであろうと述べている．また
Butterfieldら7）は，5−nitroxide methyl stea−

献1）宇尾野公義，別府宏園，中島元夫，西山文朗，

rateによる電子スピン共鳴法を用いて，MD患者

平野寛：ジストロフィー鶏赤血球膜のレクチン

赤血球膜の流動性をしらべ，対照に比し，これが結合．厚生省「神経疾患研究委託費」筋ジスト

増大していることを示した．さらに，SH基と共有ロフィー症の病因に関する臨床的研究，第二姓結合する2，2，6，6−tetramethylpiperidin，1−
0Xy−4−maleimide（MAL−6）を用いて，MD
患者赤血球膜蛋白のconformationalな変化を示（三好班），昭和54年度研究報告書，1980，200−205．

2）宇尾野公義，別府宏囲，中島元夫，西山文朗，症の場合には正常対照と差がないことを報告して

平野寛：筋ジストロフィー症患者赤血球膜のレクチン結合．厚生省「神経疾患研究委託費」筋いる8）．Wakayamaら9）は凍結割断法による赤血球膜の観察から，Duchenne型筋ジストロフィー

第二姓（三好班）．昭和55年度研究報告書，す所見を得たが，筋萎縮を伴わない先天性筋緊張症の赤血球で膜内粒子の減少を認めたが，MD患

ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究，
1981，171−175．

者赤血球では正常対照との間に有意差がなかったと述べている．

3）Irimura，T．，Nakajima，M．，Hirano，H．＆
Osawa，T．：Distribution of ferritin−COnju−

我々は昨年度，Duchenne型筋ジストロフィー

gatedlectinsonsialidase−treatedmembranes症患者の赤血球膜でCon A結合部位が減少して

of human erythrocytes．Biochim．Biophys・いることを示したが2），今回検索したMD患者赤Acta，413：192L201，1975．

血球ではCon A結合部位の減少はみられなかっ4）Roses，A．D．，Herbstreith，M．H．＆Appel，S．

た．ConA結合部位は主として膜内粒子を構成す

H．：Membrane proteinkinase alterationinるband3．蛋白にあることを考えるならば，これDuchennemusculardystrophy．Nature，254：

らの所見はWakayamaらの報告とよく一致する結果であると云えよう．

5）Iyer，S．L，Hoenig，P．A．，Sherblom，A・P・＆

また，正常者ではConA凝集活性の高いものほHowland，J．L．：Membranefunction affected

ど，ConA結合部位の分布密度も高い傾向がみらby genetic muscular dystrophy・1・Eryth−

れたが，MD患者ではこのような対応はみられな

rocyteghostproteinkinase．Biochem・Med・，

かった．このことはConA凝集活性が単にConA

18：384−391，1977．

350−351，1975．

結合部位数のみで決まるものではなく，脂質を含6）Luthra，M．G．，Stem，L Z．＆Kim，H．D．：

めほかに何らかの仔莫構成要素の異常があり，これ（Ca＋＋＋Mg＋＋）−ATPase of red ce11sin

らの因子もまた凝集活性の大小に関与するためか

Duchenneandmyotonicdystrophy：Effectofも知れない．

SOluble cytoplasmic activator．Neurology（Minneap．），29：835−841，1979．

結7）Butterfield，D．A．，Chesnut，D．B．，Appel，S．

論

筋強直性ジストロフィー症（MD）患者とこれに年齢，性を対応させた正常対照各7名を対象とし
−165−

H．＆

Roses，A．D．：Spinlabel study oferythrocyte membrane fluidityin myotonic

and Duchenne muscular dystrophy andCOngenital myotonia．Biochim．Biophys．

COngenitalmyotonia．Nature，263：159−161，

Acta，470：1−7，1977．
9）wakayama，Y．，Hodson，A．，Bonilla，E．，

1976．

8）Butterfield，D．A．：Electron spin resonance

Pleasure，D．＆ Schotland，D．L．：Freeze−

investigations of membrane proteins in

fracture studies of erythrocyte plasma

erythrocytes

membraneinhumanneurOmuSCulardiseases．

inmusclediseases−Duchenne

and myotonic muscular dystrophy and−166−

Neurology（Minneap．），29：670−675，1979．

35）細胞電気泳動法によるMyotonic Dystrophy
患者赤血球膜荷電の研究

高 瀬 貞 夫＊
研究協力者

市

川

信

通＊

関

沢

剛＊

小

暮

久

也＊

佐

藤

元＊＊

遠

藤

名

取

実＊
徳

彦H

従来より，筋ジストロフィー症では，糸田月包膜のの電気泳動の速さを言い，単位はJL／sec／V／cm

異常が指摘され，系統的疾患として考えられてきで，EPM＝Ⅴ／E（速度Ⅴ：JL／sec，電位勾配E：

た．赤血球膜の異常についても，実験上扱い易いⅤ／cm）の関係式で示される．b）泳動装置：分析ことから，多くの報告がある．しかし，一定の実用細胞電気泳動装置，LaserSystem3000の原理

験条件を設定することが難しいため，赤血球膜のは，直径1mmの石英管に細河包浮遊液を充たし，異常に関して決定的な報告がなされたわけではな

両端の電極により電位勾配をかけると細胞は動き

く，まだ賛否両論があり，議論の余地を残してい始める．ここに，Helium−Neonレーザー光線をる．我々は，本症における赤血球膜の荷電につい

あて，細胞からの散乱光を一定方向に回転する格て，細胞電気泳動法により，正常者赤血球と比較

子を通して，Signaldetectorで検出する，というものである．これは，格子と同じ方向へ細胞が移検討を行った．従来の細胞電気泳動法は，一個一十個の測定値を平均するというもので，時間を要

動すれば散乱光の点滅回数は，Signaldetectorから見て少なくなり，反対方向へ移動すれば，散乱すること，および，精度の点で客観的データを得

光の点滅回数が増えることから，このデータをコることが難しいとされていた．今回，我々は，測ンピュータ処理することによって，細胞の電気泳定標準誤差1％以下という分析用細胞電気泳動装

動度を計算することができる．本装置では，およ

置：Laser System3000（Pem Kem社製）を用
い，正常者と筋ジストロフィー患者の赤血球膜荷そ4分間で，約700個の赤血球の泳動度の平均値を得ることが可能である．C）赤血球浮遊液の調整：

電状態の検討を試みたので報告する．

浮遊液として，表1に示す如き，ModifiedZeiller

個の泳動細胞の移動臣巨艶を塁頁微鏡下に測定し，数

方

表1

法

a）細胞電気泳動法の概略；細胞電気泳動法と1Modified Zeiller−Hannig払edium t1980Shimi2ru）
15mM tris（hydroxymethyl）amlnomethane・は，細胞が電解質液中に浮遊する際，荷電（主に陰性荷電）を帯びるが，そこに電位勾配をかけた

10nl glucose
4mM potasslum acetate・時，細胞が荷電の大きさに従って移動する速度を240mM glycine
30mM sucrose

測定する方法である．測定値は，電気泳動度（Elec・p王1

trophoreticmobility：EPM）として示される．
EPMは，細胞が単位の強さの電場におかれた時

2

0．0145H

7．2

NaCl−SorbltoI

Medltユm．

0．014封I NaCl
0．6mM NaHCO3．

4・5日㌦）Sorbltol＊東北大学医学部脳研脳神経内科＊：＊国立療養所西多賀病院内科

pH

一167−

7．2

−Hannig Medium（mZ−H Med），および，
0，0145M NaCl−SorbitoI Medium（S−Med）をは，日を改めて，繰り返し測定されている．f）

作製した．mZ−H Medは，清水lL2）らの報告に者の肘静脈より，抗凝固剤としてHeparinを用い採血した．採血は，空腹時としたが，時刻は一定

従い，S−Medは，Bosmann3）らの報告に従った．赤血球浮遊液は，mZ−HMedでは，同液で採血方法；正常健康人および筋ジストロフィー患

赤血球を3−4回洗浄後，およそ2×107個／mlではない．採血後40Cに冷却保有し，測定は24時
間以内に行われた．g）測定値：mZqHMedのに調整した．S−Medでは，Bosmannらの報告の場合，調整後2時間半〜4時間で2−3回測定し如く，まず，0．145M NaCl＋0．6mM NaHCO3

平均値を求めた．時間が経過してからの値を採用（pH7．2）で1回洗浄後，S−Medで2回洗浄し，したのは，図2に示す如く，EPMの時間経過をみやはり・，2×107個／mlに調整した．d）Neura−

ると，調整後2時間までは，測定値が比較的急速

minidase処理および処理赤血球浮遊液の調整；に低下しており，比較検討する上で，誤差が大き

Neuraminidaseは，VibriO Cholerae由来のBe−

く出ると考えられたため，変動の少ない2時間半

hringwerke製を用いた．Neuraminidase処理は，〜4時間のEPMを採用した．mZ−H Medを使

Tenforde4）らの報告に準じ，図1の如く行われ用した理由はLaserSystem3000を使用した赤血た．e）検査対象；正常健康人：13人（平均年齢：

球EPMの報告が，清水らの報告だけであったの

29，7歳，男10人，女3人），Myotonic Dystrophy（MD）患者：12人（平均年齢：40．5歳，男10人，で比較検討するためであった．しかし，我々は，

女2人），Duchenne型のDMP（DMD）患者：5

S−Medを検討したところ，調整後1時間前後で人（平均年齢：18．6歳，男5人）．数人について

は，ほぼ一定の値を示すことを確認した．従って時間的影響の少ないEPMの測定が必要と考え，

S−Medの場合には，調整後1時間以内に2−3回測定し，その平均値を採用した．また，S−Med

ヘパリン採血にて，Neuraminidase処理後，EPMの減少率を測
140C保存160gで遠心 buffy coatを除く

定した．尚，人工液保存のEPMに対する影響をみるために，PBS（pH7．2）に，4°C，5日間保存

Ⅰ

マイクロピペットで1 00111づつ分注、−i0．145M NaCl
lmg／／／hl CaC12
Neurominidase
pH；5．5した後，EPMの測定を行ってみた．

0．14と丸t NaC1

1mg／／五1CaC12結

pHi5．5

果

表2に，mZ−H MedによるEPMを示した．
正常健康人（Control）：−2．250±0．010（±SE），0．145M NaCl
O．6nlM NaHCO3
pH7．2

←

MD：−2．262（±0．014）（±SE）で有意差を認めな

370C，30分〜60分
incubation

い．PBS保存によっても両群間に有意差はなかっ

1回洗浄た．表3に，S−MedでのEPMを示した．Cont−J

rol：−2．361±0．011（±SE），MD：−2．347±0．

0．0145M NaCl−SorbitoI Med

028（±SE），DMD：−2．351±0．014（±SE）
で，いずれの群の間でも有意差を認めなかった．
Neuraminidase（100unit／ml，37°C，30分）処理

2ま，。7個／ml浮遊液によるEPM減少率は，いずれの群でも72％前後

J

測定
図1

であり，差を認めなかった．酵素活性を5倍，あ0．0145M NaC1−SorbitoI Mediumでの赤血球

るいは，反応時間を60分として，EPM減少率を測

浮遊液の調整定したが，各群の問に差を認めなかった．

ー168−

Epm
p／S∝ゾV／cm
ー2．42

−2．40

−2．38

−2．36
−2．34

−2．32

−2．30
−2．28

−2．26

−2．24

−2．22

−2．20

20

図2

表2

40

60

80■100

120

140

180

200

220

240

Modified Zeiller−Hanning MediumでのEPMの経時変化

EPMinModi丘edZeiller−HanningMedium．
C o n t ro l

N o ．

160

1 1

表3

EPMin0．0145M NaCl−SorbitoI Medium

M ．D

Co ntro l9M ．D

D u c Im

e

N o．

1 1

4

5

A qe

29 ．
7

」
日 ．8

18 ．
6

採 血後
i：
0 仁r e d b re n t

24時間− 2 ．2 5 0 士 0 ． 0 1 0−2 ．2 6 2 士 0．0 14

以内
P B S （p H

ホb ．

4 0 C 5 日間
保存

−2 ．3 2 8 士 0 ．0 0 6−2 ．3 3 3 士 0 ．0 1 7−0 ．
67 4 士 6 ．
0 24

l＼
b ．

竃0 ．
028

士 0 ．0 3 8（
7 2 ．5 1 ）1

2

N as e10 仇1／m l
60 m ⊥n ．

− 0 ．
5 53

N a se50 Cb ／m l
3α l止n ．

− 0 ．
4 53

Na se
50 仇1／r止
6山
．

− 0 ．
32 1

2
− 0 ．6 6 0

士0 ．
00 1

（
7 2 ．5 1 ）

1
−0 ．
6 54

17 6 ．
8 1）（
7 1 ．6 1 ）
−0 ．
4 12

（
81 ．
41 ）

（
8 6 ．5 1 ）−2 ．
3 51 士 0 ．
0 14

3−0 ．6 4 0（
7 1 ．5 1 ）（ ）：l 肋Ctlon−169−−2 ．3 4 7

6

Nase
100
3仙
l

7．
2

−2 ．
36 1 士 0 ．
0 11（
8 2 ．7 1 ）− 0 ．】7 2（
8 4 ．5 1 ）

−0 ．
3 21
（
8 6 ．2 1 ）考おける赤血球EPMの増加は，赤血球膜表面のシ

案

筋ジストロフィー患者の赤血球膜の異常が従来

ァル酸の量，あるいは，ごく少量であるが，シァより指摘されていたが，赤血球膜荷電については，ル酸以外の陰性荷電（リン脂質，アミノ酸等）がほとんど報告がなく，わずかに，1976年，Bosm−ann3）らが手動によるEPM測定を行い報告してコントロールよりも多いか，量的には同等でも構
造上表面荷電に関与する陰性荷電基が多いことをいるのみである．これは，前にも述べた如く，従意味する．我々は，Bosmannらの報告を追試する

来の方法が時間を要し，しかも精度が悪い点から，意味も含めて検索を行ったが，結果で示した如く，多くの症例を検索することが難しく，また，細胞各群の間に有意差を認めなかった．Neuramini・

電気泳動法そのものが，赤血球荷電の総和として

dase処理後の泳動度の減少率が各群で同等であは評価できるが，荷電の構成を分析するには，何ったことは，筋ジストロフィー患者の赤血球でもらかの処理をして比較検討せねばならぬことから，陰性荷電の大部分をシァル酸が担っており酵素に研究がなされなかったと思われる．この点，我々対する感受性にも差がないことを意味する．我々の使用した機器は，精度に秀れ，短時間で測定での結果からは，正常者との間に荷電に関して本質

きることから，比較検討することが容易である．

的に差異があるとは考えられない．Bosmannらの結果との相違について説明することは雉しいが，従って今後，種々の処理をして膜表面の反応性の違いを検討することが可能と思われる．さて，
Bosmannらは，手動により，ジストロフィー動物

今後，赤血球膜の処理の方法によっては，何らかの差異が出て来る可能性は否定できない．

および筋ジストロフィー患者の赤血球のEPMの測定を行い，コントロールと比較して，有意に大であったと報告している．しかし，その差の原因が何であり，何を意味するかまで検索していない
し，また，充分な論議もなされていない．従来より，人赤血球の陰性荷電の大部分は，糖蛋白に結合しているシァル酸のカルポキシル基に由来すると言われており，Eyler5）らによれば，Neuramini−
dase処理により，シァル酸を遊馳させると，EPMは94％減少するという．そして，EPMとシァル酸の量は一次的に相関すると報告している．従って，
Bosmannらの報告した，筋ジストロフィー症に

−170−

文

献

1）清水本式：医学のあゆみ，115：44−47，1980．
2）Zeiller，K．，Hannig，K．，Hoppe・Seyler

S，Z・：

Physiol・Chem・，352：1162，1971・
3）Bosmann B．H．：Arch．Neuro1．，33：135−138，
1976．

4）Tenforde，T．：Adv．Biol．Med．Phys・，13：43−105，1970．
5）EylerE．H．：J．Biol．Chem・，237：1992▲2000・1962．

36）筋緊張性ジストロフィー症における赤血球膜
および血菜の脂質分析

馬 渡 志 郎＊

研究協力者
は

じ

め

安 徳 恭 演＊トリル＋エタノール＋水，流量1．Oml／min，カラムにMyotonic dystrophyにおいてもDuchenne型
dystrophyと同様に赤血球膜の異常の報告がなさ

温度500C，206nm）によりphospholipidの分画を分析した．ピーク面積計算には液タロ用データ処れている．私共はmyotonic dystrophyにおける赤血球膜および血菜の脂質成分を分析し，対照と理装置を使った．リン脂質の同定はSoybeanの比較した．

myelin（SM），Phosphatidylserine（PS），pig
liverから抽出したPhosphatidylcholine（PC）と対象および方法

Phosphatidylinositol（PI），pigbrainのSphing0−

Phosphatidylethanolamine（PE）を用い，reten−

同一施設入院中の同一食事を摂取している

Sion timeによりおこなった．

myotonicdystrophy患者（8人）と同年齢層の肺

さらに赤血球膜からFoIchらの方法により抽結核患者（8人）を対照として，同日同時刻ごろ出したクロロホルム屑の脂質を真空遠沈乾国後，採血し，血柴分散後，赤血球膜の調製，脂質抽出，5％KOH・50％メタノール溶液に溶解し98。C20

分析などすべて同時におこなった．ヘパリン採血

分でけん化した．HCl添加後クロロホルムで脂肪し血菜を分散し，buffycoatを除いた後，赤血球は8．5％NaCl液で3回洗浄し，10mM Tris−HCl

酸を抽出し真空遠心乾国後，蛍光ラベル剤9−an＿thryl diazomethaneを溶解したメタノールを加（pH7．4）で溶血後，同液で4回膜を洗い白色の赤

え，室温にて1時間以上放置した．その後は高速血球膜を得た．血柴および赤血球膜は分析まで−800Cに保有した．

液クロマトグラフィー（島津LC−4A，自動試料

血簗および赤血球膜からFoIchらの方法により月旨質を抽出し，クロロホルム層の脂質を分析し移動相：アセトニトリル＋水，流量1．2ml／min，
Ex．365nm，Em．412nm）により分析した．ピー

た．

ク面積計算はクロマト用データ処理装置（島津C

注入器装備，Zorbax C8カラム，カラム温度45。C，−RIA）によりおこなった．

まずクロロホルム屑の半量を真空遠心乾回し，
少量のクロロホルムに音容解し，ヤトロン社製クロ溶媒は液タロ用の有機溶媒と水を使用した．有マトロッドーSIIに移動相（n一ヘキサン：エチル

機溶媒にはすべて酸化防止剤butylated hydro−
ⅩytOlueneを入れた（5mg／dl）．

エーテル＝90：10）で展開後，FID法により月旨質
分画を分析した．残りの半量のクロロホルム層は
真空遠心乾拭後，エタノールに洛解し高速液クロ脂肪酸分析はさらにmyotonic dystrophy患者（6人）に対して，同世代，同一食事の遺伝性のマトグラフィー（島津LC−4A，自動試料注入器

ない代謝疾患でも変性疾患でもない患者（6人）

装備，Zorbax NH2カラム，移動相；アセトニと正常健康人（4人）を非結核対照群（10人）として再検した．

＊国立赤坂療養所神経内科

一171−

結

果

血梁のcholesterol ester，triglyceride，free
Cholesterol phospholipidの構成比に有意の差はなかった．

表2Totalfattyacidcompositionoferythrocy・tes（HPLC）
PEAK MYOTONIC DYSTROPHY CoNTROL（TBC）

1g：5±22：6

12．1q±0．ql

CoNTROL（NON TBC）

12．07±1．5皇12．糾土1．18

赤血球膜のfreecholesterolとphospholipidの1句：0比にも有意差は認めなかった．

12．2g±0．62

0．58±0．16

0．29土0．10

0．5q±0．10

0．2q±0．10◆

血梁のphospholipidの構成比にも有意差は認20：q

めなかった．赤血球膜のphsopholipidの分析は構成比の他に，SMでは2種の分子種の比も比較し16：1

たがいずれも有意差は認めなかった（表1）．

18：2

7．79±0．57

16：02勺．勺2土1．52日●

18：1

15．52±0．71

18：0

17．Oq土1．叫

15．86±1．62

川．25土1．22

12．87±1．1915．55土1．10

5．1q±0．56

2．88！D．q5

5．15±0．50

2．88±0．35
8．12±1．19

8．81±1．07

月旨肪酸分画ではmyotonic dystrophyで16：0（p＜0．025），18：1（p＜0．05）が多く，18：0

9．07±0．78
22．75土1．05●●

2句．27±0．q5日■（p＜0．05），22：1（p＜0．025），22：0（p＜0．01）

25．51土0．80−

1叫．60土0．哺H●

18．65±1．岨…

15．71土0．58

表l Phospholipid composition of erythrocytes
22：0

0．28±0．11●●●−17．71±0．82●−◆
0．嶋±0．1㌢…■

﹁L M
P
S
E 11
P
P
S
P

22；1

0．22±0．1q…

18．67±1．65

18．05土0．6q

2q：1

0．52±0．16

0一埴土0．25

6．71±0．86

6．85±0．97

2q：0

0．26±0．05

0，2q土0．肌

的．28±0．82

句7．95±2．55

0．55±0．25●…

2．98±0．79

5．16±0．65

20．95±1．25

21．99±2．46

0．25±0．02

0．25±0．05

・Values；Area％（meanS±SD）●0・1＞p＞0・05
日0．05＞p＞0．025■＝0．025＞p＞0．01

VALUES；AREA Z（11EANS±St））

SMl／SM2

15．55土0．98

16．75±0．50…

（HPLC）■

日日日0．01＞p＞0．005

2．昭±0．叫認めていない．今回私共は高速液クロマトグラフ

VALUESj RATIO（MEANS土SD）ィーという新しい方法で，phospholipidの構成

2．70土0．56

比，脂肪酸構成比を分析した．対照群も同世代，が少ない結果がえられた．また非結核対照群

同一食事であり，同日の同時刻に採血し，その後との比較ではmyotonicdystrophyで16：0（p＜0．025）が多く，18：0（p＜0．025）が少なかった（表2）．

の資料の処理もすべて同時におこなったものである．Phospholipidの構成の高速液タロによる分析
ではSMが2つの分子種に分艶する鋭敏な分析法であるが，対照群との差は認めなかった．脂肪考

案

酸の分析では対照群を変えた2回の分析をおこな

私共はMyotonic dystrophyの赤血球膜の種々

い，いずれも16：0の増加および18：0の低下をのATPasel）あるいはacetylcholineesteraseを認めた．したがって16：0，18：0以外の脂肪酸用いた分析2）を肺結核患者を対照としておこなっ
たが，いずれも有意の差を認めなかった．しかし（18：1など）におけるmyotonic dystrophyと肺結核における有意差は肺結核患者の異常を示すながら，今回の月旨質分析では月旨肪酸分画で有意差ものかもしれない．

を認めた．

対照群の異なった2回の脂肪酸分析でいずれもMyotonic dystrophyの赤血球の脂質分析は同様の有意差を認めた16：0，18：0は赤血球膜

McLaugh1inら3）によってなされており，phosph・
01ipidの構成にも脂肪酸構成にも対照と有意差をの脂肪酸の2大構成成分であり，しかも比較的安定な飽和脂肪酸である．今回私共はコンピューター172−

一利禁の自動試料注入器を用いたため脂質抽出や成比には有意の差を認めなかった．赤血球膜の脂処理を全検体同時におこないえたことと，面積計
算にはクロマト用データ処理装置を使用したため

肪酸構成ではmyotonic dystrophyで16：0が多く18：0が少なかった．

精度の高い分析ができたものと考えられる．
文

私共の分析においてmyotonic dystrophyでは

献

赤血球膜脂質構成でcholesterolとphospholipid

1）Mawatari，S．，etal：Erythrocytemembraneの構成比および各phospholipidの構成比には異常がなく脂肪酸の構成比に対照と有意差が認めら

Cation・Stimulated ATPase activities in

れたことから赤血球膜の脂肪酸のとりこみの異常

Myotonicmusculardystrophy．J．Neurol．Sci．，（in press）．

あるいは全般的な脂肪酸そのものの代謝異常の存

2）Igisu，H．，et al：Erythrocyte Membranein

在などの可能性も考えられ，さらに追求していく

Myotonic Dystrophy：a StudywithAcetyl・必要があると思われる．

Cholineesterase．J．Neurol．Sci．，51：199，
1981．

結

語

3）McLaugh1in，J．，etal：LipidCompositionof

Myotonic dystrophyの赤血球膜および血柴のErythrocytes：Findingsin Duchenne，S

脂質成分について高速液クロマトグラフィーなど

MuscularDystrophyandMyotonicAtrophy．

を用い分析し，対照群と比較した．

Arch．Neuro1．，36：351，1979．

赤血球膜，血梁の脂質分画，phospholipidの構一173−37）Myotonic Muscular Dystrophyにおける末棺血
Tリンパ球のsubpopulationの検討

研究協力者
目

黒

黒

岩

義五郎＊

田

康

夫＊＊

森

良

一＊＊

方

的

法

筋緊張性筋ジストロフィー症（MyotonicMus−

T細胞の分離およびTM細胞・TG細胞の同定はcularDystrophy，以下MyD）は筋肉のみならず，Morettaらの方法3）を修正した方法を用いた（表内分泌・神経・骨格・心・呼吸器・消化器など多1，2）．すなわち，ヘパリン加静脈血からFicoll

系統にわたって機能が障害される全身性疾患であ−Conray比重遠沈法で単核細胞を分放し，卓球をる．MyDでは免疫系も障害され，とくに血清IgGの低下は多くのMyDで認められ，これはIgGの異化能の元進によるものと報告されている1）．近年，KuroiwaらによってMyDに細胞性免疫の異表1Heparinized Peripheralblood（15ml）
lFicoll−Conray（一550rpm．30min）

常も報告され2），MyDの免疫能は再評価されねばならないと思われる．
ヒトTリンパ球（以下T細胞）は免疫グロブリ
ンのFc部分に対するレセプターで亜分画に分類

Separation of T cells

fincubatedinplasticPetridish
l at370C・45min
PeripheralLymphocyteS（plasticnonadherentcells）＋Sheep Erythrocytes（SRBC）

できる．IgMのFc部分に対するレセ70ターを有するT細胞（TM細胞）群には抗体産生を増強する
ヘルパーT細胞が含まれ，IgGのFc部分に対するレセプターを有するT細胞（TG細胞）群には逆に抗体産生を抑制するサブレッサーT細胞が含まれる．今回，我々はMyDの免疫能の再評価の一環としてMyDの末梢血T細月包の亜分画について検討したので報告する．

塵監視勘。i。）

E−rOSette Forming Cells（pellet）

麿慰環。㌍㌦min，

E−rOSette FormingCells（pellFt）

llysi50fSRBCwithO・83％NH・CI
PeripheralTCells
表2

Characterization of T cell subsets
Peripheral T cells

対象

7例のMyDを対象とした．検索時の年齢は27
歳から52歳（平均44±11歳）で，羅病期間は13年から40年に亙り平均23±11年であった．健康成人
9例（平均年齢29±2歳）を正常対照群として比較した．

F culturedin20％FCS−MEM
J at370C・OVernight
Cultured peripheralT cells＋Tg M−COated
十Ig G−COated
boYine RBC boYine RBC←

1000rpm，10min→←incubated at40C
60min

→

Tg M−Fc receptor（＋）IgG−Fc receptor（＋）

TcelIs（1万Cells）．gM．．．．．．Rabbitanti＿b。Yine孟諾JTq．cells）（Separation with DEAE cellulose）＊九州大学医学部脳研神経内科＊＊九州大学医学部ウイルス学

IgG……Rabbitanti−bovine

RBCIgG（Separation with Sephadex G200）
ー174−

考

プラスチック吸着法で除去した．得られたリンパ察

球を羊赤血球浮遊液と等量混合して低速遠沈し，末梢血T細胞の亜分画の異常は免疫異常がそのそのまま40C，60分間放置した．沈漆を静かに再病因，病態に深く関っていると考えられる免疫不浮遊してロゼット形成細胞（3個以上赤血球を附

全症や自己免疫疾患において報告が多い2）．我々

着したリンパ球）をT細胞として数えた後，Ficoll

も多発性硬化症の急性期や重症筋無力症でTM細−Conrayに重層して比重遠心法で分匪した．この方法で95％以上の純度でT細胞を得た．TM細胞，胞，TG細胞の割合の異常を認めている4）．TG細胞

T。細胞の検出はT細胞を一晩培養した後，家兎抗ウシ赤血球IgMまたはIgG抗体で感作したウシ

含まれ，血清IgGの低下を伴うことが多いMyD
でTG細胞の有意な増加を認めたことは興味深い．

赤血球とロゼット形成させ，顕微鏡下で数えてMyDにおける血清IgGの低下はIgGの異化の冗Th．細胞，T。細胞の割合を算出した．

進によると報告されているが，今回の我々の成績

群には抗体産生を抑制するサブレッサーT糸田胞がはMyDではIgGの生成の段階でも障害されてい結る可能性を示唆している．しかし，今回検索した

果

結果は表3に示す．正常対照群（9例）の末梢MyDは羅病期間が平均23年と長く，TG細胞の増

血T細胞の割合は68±6％，TM細胞，TG細胞の加がMyDに一義的に伴う現象か否かは今後罷病割合は各々48±9％，16±6％であった．MyD7

期間の短いMyDでの検討が必要と思われる．血例におけるT細胞，TM細胞，TG細胞の割合は

清IgGの低下については今回検索したMyD7例

各々62±9％，40±14％，34±12％であり，正常中4例に認めているが，血清IgG値とT。細胞の対照群と比較するとp＜0．01でMyDにTG細胞割合との相関についても今後症例を増した上で結の有意な増加を認めた．内訳においてもMyD7論づけたい．

例中6例にTG細胞の増加を認め，うち2例では
結

TM／TG比の逆転を認めた．同時に検索した他の論

非免疫学的神経疾患（頸椎症2例，舞踏病1例，MyD7例において末梢血T細胞の亜分画を検

非急性期の脳血管障害2例，Leukodystrophyl
例）ではTM細胞，TG細胞の割ノ飢こ異常を認めな討した結果，正常対照群と比較してMyDでTG細かった．

ける免疫異常が免疫応答の段階でも障害されてい胞の有意な増加を認めた．この成績はMyDにおる可能性を示唆している．

表3 T ce11subsets in myotonic muscular
文

dystrophy
CqSeS

TCells

TMCells1）wochner，R．D．，Drews，G．，Strober，W．＆

TGCells

Waldmann，T．A．：Acceleratedbreakdownof

Myotonlc MusculC「Dyst「OPhy
用亡U︐⊃

immunoglobulin G（IgG）inmyotonic dystro−

2

T J
⊂ノ

5

⊂ノ一てノ・山．

入 U
7
6

q

h﹁ ︻b hr hu 7
1 rつ︐・J︐ヽノ 2︐lノ

7ノ︐︶

7
0 ひ
亡U
⊂ノ

t ノ

▼▲
﹁つ︐ヽノ 0 nU ▲‖﹀ 亡ノ h−．

6

2

▼ル
2
7
7
山﹁

e

nu
C

1

phy．−Ahereditaryerrorofimmunoglobulin
Catabolism．J．Clin．Invest．，45：32］卜329，

6

6

1966．

6

7

62土9

qO土Iq

献

列＋12−
2）Kuroiwa，Y．，Sugita，H．，Toyokura，YりNorml ControIs（n＝9）

68土6

咽土

9

16土

6

Mizoguchi，M．，Matsuo，H．＆Nonaka，Y．：●p＜0．01

Immunologic derangement in myotonic
dystrophy．Abnormalcontactsensitizationto
dinitrochlorobenzene，J．Neurol．Sci．，47：231−239，1980．

ー175−3）Moretta，L．，Mingari，M．C．，Webb，S．R．，

4）森良一，黒岩義五郎，黒田康夫，青木知信，田Pearl，E．R．，Lydyard，P．M．，Grossi，C．E．，

平武：多発性硬化症患者及び実験的アレルギー

Lawton，A．R．＆Cooper，M．D∴Imbalances

性脳脊髄炎モルモットにおけるT細胞のサブセin

T cell subpopulations associated withimmunodeficiency and autoimmune syndro・
mes．Eur．J．Immuno1．，7：696−700，1977．

ー176−

ット．厚生省特定疾患・脱髄疾患調査研究姓1978
年度研究報告書，1979，pp．110−113．

38）Duchenne dystrophyおよび糖原病における
尿中オリゴ糖の分析

研究協力者

目

納

光 弘＊

樋

渡

良

一＊

栗

山

中

川

正

法＊

井

形

勝＊
昭

中

島

洋

明＊

弘＊

フィー（TLC）にて定性を行った．溶媒はn−ブタ

的進行性筋ジストロフィー症の病因については，
近年膜異常を示唆する報告が多くみられ種々の方

ノール／酢酸／水（3／3／2，by volume）の系を用いた．シアリルオリゴ糖は，レゾルシノールー塩

向からの形態的，機能的検討がなされている．一酸法によりシァル酸を測定することにより定量し，方尿中には膜構成成分である糖蛋白をはじめ，ムTLCはn−ブタノール／酢酸／水（2／1／1，by
volume）を用いた．中性オリゴ糖に関しては，さコ多糖，グリコーゲン等に起因する代謝産物が反映されている事は良く知られており各種代謝疾患

らにBio−Gel P−2カラムクロマトグラフィーにその異常が報告されている．今回Duchenne型

にて詳細に検討した．

筋ジストロフィー症（DMD），及び糖尿病（GSD）
結

ⅠⅠ型，ⅠⅠⅠ型における尿中オリゴ糖分画に関し検討を行い，従来の報告1）2）とは異なる結果を得たので報告する．

果

シアリルオリゴ糖分画はDMDのみについて検討を行った．コントロール2例とDMD8例のTLC分析を行ったが，図1に示すごとく正常との対

象

間には明らかな差異は認められなかった．定量で入院中のDMD患者14名，GSDII型1名，III型

はDMDで正常の2倍程度の値を得ているが，コ2名，さらにコントロールとして健常者14名の24ントロール数が不充分なために結論的には言えな

時間尿を用いた．

■中性オリゴ糖について定量の結果は表1のごと
方法

くで，コントロール8例の平均は71．9mg／day，Streckerらの方法3）を一部改変して尿中オリゴ糖分析を行った4）．すなわち24時間尿を濾過のDMD14例の平均は57．0mg／dayであった．DMD
は症例によって低値をとるものもあるが平均では後活性炭カラムに通し尿中オリゴ糖を吸着し，50差はないと思われる．また，年齢及び重症度との％エタノール3．6gで溶出した．溶出液を150ml程

相関関係もみられなかった．GSD II型の症例で度に濃縮し，イオン交換カラムクロマトグラフィ

は366mg／dayと明らかな高値を示した．GSDIII
型2例において症例1は正常値であったが，症例ーにて，中性オリゴ糖とシアリルオリゴ糖を分画2では高値を示した．GSD TLCパターンは図2した．それぞれの分画について定性定量を行った．
中性オリゴ糖は全へキソースとしてアンスロンーに示すごとくで，正常コントロールとは明らかに硫酸法にて定量し，シリカゲル薄層クロマトグラ

異なっていた．GSDII型ではスタンダードサンプ
ルRf値からGlucoseの4糖に一致する部分に明＊鹿児島大学医学部第3内科

瞭な異常バンドを認め，以下基線に近い部分にも−177−

図1DMD患者におけるシアリルオリゴ糖
NANA；シァル酸，3SL；2→3sialyllactose
DMD患者と正常コントロールで明らかな差は認めなかった．

表1

Total hexose of neutralfraction from the

多数の異常なバンドが認められた．GSDIII型の症

urine of DMD patients．

例1では正常とほぼ同様のパターンであったが，症例2ではGSDII型に類似したパターンであっlevel urlne
Subject 8監S，AB…墨Od Severitymg′24￣hCOntrol

71．9
±19．6

24−34

（n＝8）

た．DMD患者のTLCパターンについては，定量的にみてもGSDのような著明な異常はない事は予想されたが，症例を重ねるにつれ，血液型で異

DMD
′

′

q

b

7
O

′

3

q

O

3
7

0

そこで，我々はABO式血液型，Lewis式血液型の

′

ノ
′

4

q

0

5

5

4

3

′

′

q

b

′

・

一致する症例と正常者との比較検討を行った．Le−

8

6

wis（a−，b＋）は型物質を分泌するSeCretOr，Lewis（a十，b一）は型物質を分泌しないnon−

4

0
4

′

′

secretor，と言われているが，DMD患者の中性オqq

BOBOOOAAAAO

l1222′ 0 3 8 ′ 0 3 ′ b 6 ′ q ′ 0 4 ′ 0 5 ′ ヰ ′ b

AO

lll

l

3

3 3 ′ 埠 5 ′ 0 ′ 0 7 8 0 ノ q ノ 0 ノ 0 1 3

11⊥lllHNHHOT DTTKKTIY
K H K T K K T THh K T H ST

なる特有なバンドがTLC上に認められ，定性的検討には血液型物質は無視できないと考えられた．

7（n＝14）

リゴ糖について，A型secretor，nOnLSeCretOrのAve．57．0±S．D．±17．4

患者のTLCを行ったものが，図3である．SecTGSI）typeI工23

retorコントロール3例ではほぼ同一のパターン

GSD押工Ⅰ工
Ib．1 32bb．2
34を示したが，DMD4例で普遍的所見ではないが，正常者とは明らかに異なるバンドが認められた．

重症度は上田式重症度レベルを示す．

Non−SeCretOrについては今回は1例ずつの比較であり，明らかな差異は認められなかった．さ
−178−

図2

GDSII，ⅠⅠⅠ型患者の中性オリゴ糖
C；コントロール

GDSIIおよびⅠⅠⅠ型の1症例で著明な中性オリゴ糖の異常排泄を認めた．

らに詳細に検討するために中性オリゴ糖分画をている．

Bio−Gel P−2カラムクロマトグラフィーを行
結いTLC分析を行った（図4）．正常者とDMD患者についてこの方法にて比較を行ったが，いくつ論（1）尿中オリゴ糖分画にはTLC上に血液型物質とかの差異が認められるものの，症例数が少なく意考えられる明瞭なバンドが認められた．

義については不明である．しかしこの方法を用い（2）GSDII型では正常の約5倍の中性オリゴ糖のると，仝中性オリゴ糖のTLCでは不明瞭だったバンドが分離して認められ，異常物質の有無につ排泄があり，glucoseの重合体と思われる分画

いての検討に有用と思われる．又同様の方法を用（3）GSDIII型では2症例問に明らかに異なる排i世が多数認められた．
パターンがみられた．

いてGSDII型の中性オリゴ糖の検討を行ったが正常パターンとは異なり，直線的に並ぶ濃厚なバ（4）DMDのシアリルオリゴ糖には，特有な異常はンドが認められた．最も濃厚なオリゴ糖に関して認めなかった．

は，単馳して構造解析を行いガスクロマトグラフ（5）DMDの中性オリゴ糖は定量的に正常と差は認ィーにてglucoseのみから成っており，スタンダ

めなかったが，TLC上でいくつかの異常を認め

pドサンプルRf値からglucose4糖と推定された．

た．他のオリゴ糖に関しても現在構造解析を進め

以上尿中オリゴ糖の検討は，DMD・GSDの病態

−179一

図3

Asecretor，nOnTSeCretOrDMD患者及び正常者の中性オリゴ糖
Lac；lactose，C：コントロール，D；DMD

SecretorDMD患者に正常とは異なるいくつかのバンドが認められる．

図4

Asecretor正常者の中性オリゴ糖のBio−GelP−2カラムクロマトグ
ラフィー

ー180−

生理の重要な一側面をなすものと思われる．

patientswithDuchennemusculardystrophy，
FEBS

文

献

Lettリ97：249，1979．

3）Strecker，G．，Peers，M．C．，Michalsky，J．C．，

1）Lennarton，G．，Lundblad，A．，Lundsten，．J．，

Hondi−Assah，T．，Fournet，B．，Spik，G．，

Svensson，S．＆Hager，A．：Glucose−COntain・Montruil，J．，Farriaux，J．P．，Maroteaux，P．＆

lngOligosaccharidesintheurineofpatients

Durand，P．Eur．J．Biochem．，75：391，1977．

With glycogen storage disease typeII and4）Kuriyama，M．，Ariga，T．，Ando，S．，Suzuki，

typeIII．Eur．J．Biochem．，83：325，1978．

M．，Yamada，T．＆

Miyatake，T．：Four2）Lundblad，A．，Svenson，S．，Yamashina，I．＆

positionalisomers of sialyloligosaccharides

Ohta，M．：Increased urinary excretion of aisolated from the urine of a Patients withglucose L COntaining tatrasaccharides

Sialidosis．J．Biol．Chem．，256：12316，1981．

in

ー181−

39）筋におけるクレアチン代謝−1−14C標識クレアチンを用いる方法の検討

＊

＊

＊

夫

一木・

口

好

三

＊

明 幸 次

＊

＊

＊

＊

信

■

＊

岡 良 橋

＊

松 平 三

＊

克

田

＊

＊

三

子 仕 也

つ
な 元

北

＊

正

田

槻 村 村

大

＊

昌

山

良 年 俸

芝

紫 中 書

研究協力者

さきに私達（三好ら）1），2）は人骨格筋中にcreat−

品であって1mg約10Uの活性を有するものであine代謝経路としてcreatine−glycine pathwayのあることを提唱し，筋ジストロフィー症ではこる脚註）．このcreatin？Seを0・05M phosphatebufferpH6．2を用いて溶解し，8U／mgの溶液をの経路のCreatinaseのkineticsが異常であると作製し，冷蔵した．Creatineは特級試薬を10mg／の報告を行った．しかしながら，それらの成績は筋のcrudematerialを使用し，また，基質や生成mlになるように0．05M phosphate bufferで溶解して用いた．

物の測定に呈色反応を用いてえたもので，いくつ反応液はtubeあたり1mgのcreatineに，結かの問題点を残している．新しく研究方法を確立

果の項に記載した量のCreatinaseを加え，最終液

して，これまでの成績を検討し，確認するための量は1．Omlとした．酵素反応は空気を気相とし，370
Cの温度下で結果の項に記載した時間インキュベ研究を進めている．
今回は，基質として1−14C標識クレアチンをートすることにより行った．
上記の酵素反応の反応生成物を以下の三つの方用いる方法の確立を目的として行った実験の成績をのべる．なお，実験過程で用いたpseudomonas
からえた精製Creatinaseに対する家兎抗血清を法により分別定量した．

作製し，これを用いて人骨格筋homogenateの抗原性を検索したのでその成績をも併せてのべる．

量：Creatineはdiacetyl a−naphthol法で発色させ，波長500nmにおける吸光度を測定し，urea

1）Creatineおよび生成されるureaの化学的定はDABによるエールリッヒ反応呈色を波長435nmにおいて定量した．

資料と方法
Creatineを基質として，これに，pSeudomonas
からえた精製Creatinase（pseudomonas creati−nase）を反応させ，その生成物を検出し，また定量を試みた．基質にはcreatineと1−14C標識cr−
eatineを用いた．

2）Thinlayer法によるcreatineとSarcosineの検出：上記の反応液をシ））カゲル薄眉根Behring
Manl1eim社製TLC−plateに添加し，フェノー
ル75：H2025の混合液にて2時間展開し，ニンヒド））ン反応によりSarcosineのspotを同定した．

Pseudomonas creatinase（creatine amidi−

nohydrolase）3）・4）は長崎大学薬学部鶴大典教授並に東洋紡敦賀研究所安藤実氏より提供をうけた純Creatine spotは極めて早期に退色するので位置の同定は発色直後に行った．

脚註）lUとは，Creatine14mgとincubateすることにより1分間に1JLmOleのSarcosineを生ずる
Creatinaseの量と定義されている．

＊沖中三己念成人病研究所＊＊徳島大学医学部第1内科

ー182−3）14C−Creatineを用いての定量：上記酵素反・⁝・I︵：﹂三雲ヾ○○

応を起させる前に14C−Creatine（New−Eng
Nuclear社製，13・3mCi／mg）耶註）1JLCiを反応液に添加して酵素反応を起きしめた．反応終了後，反応液を2）と同様シリカゲル薄層板に塗布し，フェノール及び水混合液にて展開後，2．5mm間隔で

一一〇一一一￣

薄層を掻き取り，蒸留水で2回抽出し，抽出液を＿一イ■

シンナレーター剤（ACSII）と混合し，液体シン10

チレーションカウンターでカウントし，クエンテ

20

30

40

50

Time（min）

ングを補正してdpnとして表示した．
Pseudomonas creatinaseに対する抗体を家兎

図1

Effectoftimeontheproductionofureaandon the reduction of creatineで作製するにあたっては，標品1mg／mlをFreu・

induced bypseudomonas creatinasend complete adjuvantl mlと完全に混合して
emulsionとし，家兎の皮内数10ヶ所に注射して免疫した．3回の免疫後，boosterとして100JLgのCreatinaseを静注し，1週間後に全採血して血清ーーー1︵巾と⊃︶宍占〇
〇0
一0
8▲
6u
4O
．O
2
1

を得た．免疫の全過程において家兎の行動に異常はみとめられなかった．家兎血清中の抗体はOu−
Chterlony plateで検定した．
成績
＿一一一一一r一一

図1にpseudomonas creatinaseによるcreaT＿一一イー￣tine減少及びurea産生を示した．
0

図は，800U／tubeのCreatinaseを1mg／tube

2∝I
Dos0

400

600

8α）

0t Crealinase（mUJtube）のcreatineとincubateしたもので，incubation
時間とともにcreatineが消費され，ureaが産生

図2

されて40分以降でplateauに達している．Creat−

Effect ofdose of pseudomonascreatinaseon the decrease ofcreatine andincreasein
urea

ine減少量とurea産生量のモル濃度は，反応開始
後60分においてcreatineの減少と産生されたur−
eaはともに約2JLmOleで，ほぼ等モルであった．
すなわち，Creatineから特異的にureaとsarco−
図2に，反応時間60分間とし，Creatinaseの量による反応をみた成績を示した．
100mUから800mUまで用量反応関係があるが，この条件下（1mg／1mlのcreatine存在下）では，検出下限は100mU／tubeであることがわかる．
図3（下段）に上記反応液の薄層クロマトグラ

70；∈d勺．喜三U三石空−U一︻sineのみが生じていることが推定された．

Controlincubationlncubation lVith
PSeUdomonas
Creatinase（400mU日ube）

OC
8S

O C

O S

脚註）純度に関しては結果の項に示したように約96．5％の純度を示した．

図3
−183−

Distribution ofl−C−radioactivity on TLC

U膚 妄言U3石空・Uごl

反応液をフェノール：水，75：25で展開すると，0．48に相当する位置にCreatineのSpOtを認めた．

U写P空・Uご

ただし，Creatine spotは極めて早期に退色した．
この反応液ではcreatine及びsarcosineの位置にのみspotを認め，他の位置には何らのspotを認めなかった．

︼Ods むu；巾とU

U− を＞

RfO．38に相当する位置にSarcosineのspotを，ー・・・ふ ；ds む∪芯OUL勺S

フィーによる成績を示した．

＿＿一一一一㌢￣㌻／ 0．08

6．25

50

Creaいnase（mUJtube）

図3の縦軸に，基質に1−14C−Creatineを使用
図4

した場合の各spotの14C−radioactivityを示した．

Conversionof14C−Creatineto14C−SarCOSineby pseudomonas creatinase r

Control incubationでは14C−radioactivityは，Creatine spot（Rf O．48）に96．5％が認められ，SarCOSine spot（Rf O．38）には1．8％，そして，
Creatinine spot（Rf O．64）には約1．5％がみとめられた．これに対して，400mUのpseudomonas
creatinaseを加えてincubateすると，14C−radi−
oactivityの75％がcreatine spotに，21％がsar−cosinespotにみとめられ，他の部分にはみとめられなかった．
図4にcreatinaseのdoseと14C−radioactivi−
tyのcreatine，SarCOSine spotへの分布の関係を示した．
図にみるごとくCreatinaseの量の増加に伴ってSarcosineのspotへの14C−radioactivityが

図5

Precipitinline between rabbit seraimmu−nizeddose−dependentに増加した．14C−Creatineの減少と14C−SarCOSineの増加はほぼ等モルにみられwith pseudomonas creatinase andpseudomonas creatinase on the Oucht，erlony plate

た．この方法によるcreatinaseの検出限界は図にみられるごとく，6．25mU／tubeであって，検討した三つの方法のうち最も敏感であった．

考察と結論

図5にpseudomonas creatinaseで「免疫した家

Pseudomonas creatinaseを1−14C−Creatine

兎血清とpseudomonas creatinaseのOuchterlo−に反応させて，radioactive sarcosineが6．25mU／

nyplate上の沈降線を示した．Centerwell（APC）

tubeまで検出された．この検出感度は，Creatineには免疫した家兎血清をwellA，B，Cにpseud0−

呈色法の約20倍，薄層クロマト板でのsarcosine

monas creatinaseの各種の浪度液（A：1mg／

spot検出限界の約10倍であった．

ml，B：0．5mg／ml，C：0．25mg／ml）を，そしてさきに三好らが人骨格筋中におけるcreatinase

WellD，E，Fには人剖検筋homogenate（D：原液，E：2倍希釈，F：4倍希釈）が加えてある．

活性について発表した成績は，はじめにも述べた

Center we11とA，B，Cの間には共通した1本の沈降線がみられ，D，E，Fとcenterwellの間には沈降線が認められなかった．

ように，筋homogenate，あるいは筋のgelfiltrateを使用し，また，基質や生成物の測定に呈色反応を用いてえられたものであり，なお問題点を残している．1−14CTCreatineを用いる方法でこれま一184−

での成績を検討してゆきたい．

上では，人筋組織中に交叉反応を示す抗原物質をこの方法によれば，基質や生成物を高感度に検認めえなかったが，さらに微量の抗原の検出を出できることの他に，反応物質と資料中の混在物

ehzymelinkedimmunoassayを用いて試みる予質との識別が可能であり，また，生成物のその後定である．

の転換を追跡することができる．
ただし，筋中のcreatinaseの酵素反応について
は，本文での成績は精製Creatinaseを用いてえられたものであるが，Crudeな資料において同じ反応成績がえられるか否かの問題が残されている．
Pseudomonas creatinaseに対しては，家兎で抗血清を作ることができた．この抗血清は，酵素活性を1／2程度にしか減少させず（著者らの実験結
果による），抗体は酵素活性部位以外の部位に対するものであることを思わせる．Ouchterlonyplate

ー185−

文

献

1）Miyoshi，K・，Taira，A・，etal：Proc．Japan
Acad．，56B：95，1980．Ibid56B：99，1980．
2）三好和夫，平良章，他：厚生省「筋ジストロフ
ィー症の病因に関する臨床的研究」（三好班）昭
和55年度研究報告書，1981，p．207．
3）Tsuru，D．，etal：Agr．Biol．Chem．，40：1011，
1976．

4）鴇大典：臨床検査，22：1311，1978．

40）人の各種組織Mb，各種疾患の血清Mbならびに各種動物Mbの抗原性−ラジオノムノアッセイによる成績二一一一一

＊

臣

尚

井

田

増 水 三

口

＊

好

＊

田

＊

下

書

三 苗 典

井

日

幸 香 恭

今

研究協力者

健二郎＊

西

野

潤＊

藤

本

洋＊
浩

史書

和 夫＊・…

筋，心筋のほかに甲状腺，胸腺にも存在することを検討し，また，各種動物Mbについては，それぞれのMbの抗人骨格筋Mb家兎抗体に対するを明らかにしており，また，各種の筋疾患，心筋

交差反応率を人Mbのものを100％として求めた．

著者らの教室では，ミオグロビン（Mb）が骨格疾患などの血中，尿中Mbの上昇や，変動につい

なお，組織よりのMbの抽出分離はSinger法ても明らかにしてきた．今回は，人の骨格筋Mbとゲルろ過法（SephadexG−75を使用）を併用しと各種組織中Mbならびに各種疾患の血中Mbて行なった．抽出Mbの同定は主として可視部吸との抗劉生の異同を明らかにし，加えて，各種動物の骨格筋Mbと人Mbとの抗原性の違いにつ収曲線（580〜610m〟のplateau）と電気泳動（易動度とbenzidine染色）で行ない，一部Ouchter−

いても検索し，Mbの抗原性と動物の系統発生とlony法も用いた．また，抽出Mb量の測定は主との関係を明らかにしたい．

してLowry法によった．
成

対象と方法

績

対象は成人の骨格筋，心筋，甲状腺，胸腺，胎1．人の骨格筋Mb，心筋Mbおよび＼各種組織

児骨格筋などの各種組織ならびに心筋梗塞，Duc−

homogenate上清によるinhibition curve
人骨格筋，心筋より精製したMbと甲状腺，胸henne型筋ジストロフィー症（DMD）など症例の血清Mb，そして，カニクイザル，ブタ，ウシ，ウサギ，イヌなどの動物の骨格筋である．

腺homogenate上清とのinhibitioncurveを図1に示した．心筋Mbによるinhibition curvCは骨方法は，当教室開発の人Mbのラジオイムノア

格筋Mbと同量の心筋Mbによって描いたもの

ッセイ（RIA）1）系を用いた．具体的にはこのRIAであるが，人骨格筋Mbによるinhibition curve

系で人各種組織のhomogenate上清（10，000rpm，（標準曲線）と完全に重なっていた．そして，甲60分），臨床例の血清，そして人骨格筋，人心筋お状腺，胸腺のhomogenateのinhibition curveは，ともに骨格筋Mbのものとほぼ平行であった．

よび各種動物骨格筋より抽出分馳したMbなど
によるinllibition curveを描き，人各種組織試料と臨床例の血清については，これらによるinhibi−

2．人胎児骨格筋homogenate上i青によるin・
hibition curve

tioncurveと人骨格筋Mbの標準曲線との平行性＊徳島大学医学部第1内科＊＊沖中記念成人病研究所

胎生5ヶ月，7ヶ月，9ヶ月の人胎児骨格筋
homogenate上清によるinhibition curveを図2に示した．図に示すごとく，いずれも成人骨格筋
Mbのものと平行であった．

一186−

上房のdHution l＝旧24

t．256

l＝64

l：16

l：4

図1人の骨格筋Mb，心筋Mbおよび各種組織（甲状腺，胸腺）hom。．
genate上清によるinhibition curve

図2

人胎児骨格筋homogenate上清によるinhibition curve−187−3．各種臨床例の血清によるinl1ibition curve

また，同じ骨格筋でも胎児筋には，従来より成Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）や急人のMbと異なった胎児型Mb（fetalMb）の存性心筋梗塞例では血清Mbが高値を示すが，これら症例の血清によるinhibition curveを図3に示

在の有無が問題にされてきた．例えば，Benoit3），
Perkoffら4）はfetal Mbが存在するとの報告をした．DMD，急性心筋梗塞例ともinl1ibitioncurve

しており，これに対して当教室では，可視部吸収曲線，電気泳動，Ouchterlony法などによって胎児は骨格筋Mbのものとほぼ平行であった．
4．各種動物の骨格筋Mbによるinhibition

骨格筋Mbを検索して5），いわゆる胎児型Mbという．特別なMbは見出し待ないとしてきた．今回の骨格筋Mbによるinhibition curveを図4に示の検索では胎児骨格筋homogenateによるinhi−
bition curveが成人骨格筋Mbのものと平行してした．これら動物のinhibition curveはいずれもおり，胎児骨格筋Mbは抗原性においても成人骨

人Mbのものと明らかに異なっていた．これらの格筋Mbと同一であることが明らかになった．

カニクイザル，ブタ，ウシ，ウサギ，イヌなど

中でも，人のものに比較的近いものはカニクイザ

臨床例の血中Mbについては，DMDと心筋梗

ルとブタのものであった．抗人Mb家兎抗体に対塞をとりあげ，ともに骨格筋中のMbと抗原性でする人Mbの交差反応率を100％とし，他の動物

差のないことが示された．DMDのMbの成績はMbの，同じく抗人Mb家兎抗体に対する交差反本症の病因論の上でMbの異常や産生不良と関応率をRIA系のB／B。50％でみると，カニクイ

連づけて意味がある．心筋梗塞については，このザルMbと，ブタMbの交差率は約1．3％である

結果からは血清に流出するMbが心筋由来か骨が，ウシ，ウサギ，イヌでは，1％以下でこの順

格筋由来かの問題を解決することができない．
各種動物の骨格筋Mbについて，それぞれのin−に低値であった．

hibition curveを人骨格筋Mbのそれと対比して考示した．相互関係を免疫学的交差率で表わすと，

察

当教室にて開発した人MbのRIA系を用いて，人の各種の組織中Mb，各種疾患の血中Mbの抗人Mbに対してサル，ブタでは1．3％前後であり，

原性の異同を明らかにし，加えて，各種動物骨格値であった．この交差率は，動物の系統発生上の筋Mbの人Mbとの抗原性の違いを明らかにし遠近と必ずしも一致していないが，その理由とした．

ては人Mbに対する家兎の抗体を使用して検索

ウシ，ウサギ，イヌなどは1％以下でこの順に低人においてMbは主として骨格筋，心筋に存在していることや，Mb分子の抗原部分（抗原決定するが，著者らの教室では，これらの他に甲華腺，胸腺にも存在することを見出している2）．骨格筋基）のみについて検索した結果であることなどが以外の組織に存在するMbが，骨格筋のものと同考えられる．

じであるかどうかは興味あるところである．とく

文献的には，Kagenら6）・7）の免疫沈降反応を用いて各種動物Mbが抗人Mb家兎血清とかなりに，心筋のMbについては，心筋梗塞時に上昇すの交差反応性を示すとの報告がある．私達の研究るMbをRIAで測定するため骨格筋Mbとの免とは方法が異なり，また，動物の種類も同じでな

疫学的異同が問題になる．本文に示したごとく，く，データを直接比較検討することはできない．
さらに，研究をすすめMbの抗原性と動物の系

骨格筋Mbと心筋Mbによるinl1ibition curveは全く一致しており両者の抗原性は同じであること

統発生との関連をつきとめたい．

が示された．また，甲状腺，胸腺についてもinhi−

結

bitioncurveは骨格筋Mbのものと平行であり，1．人骨格筋以外の各種組織（心筋，甲状腺，これらの組織中に存在するMbの抗原性はやはり骨格筋と同一であることが示された．

論胸腺）中に存在するMbと臨床例（DMD，心筋梗−188−

血清Mb（ng／tube）3・0

1030

血清のdilutionl：256

l：64

図3

100
l：16

300
l：4

臨床例（DMD，心筋梗塞）の血清によるinhibition curve

図4

各種動物の骨格筋Mbによるinhibition curve

−189−

11

塞）の血中Mbの抗原性を抗人Mb家兎抗体によ3）Benoit，F．L．，Theil，G．B．＆Watten，R．H．：

るRIAのinhibitioncurveで示し，すべて骨格筋

Foetal myoglobinin the urine of an adult．

Mbのものと同じであることを明らかにした．

Nature，199：387，1963．

2．各種動物の骨格筋Mbの抗原性を同様にin−4）Perkoff，G．T．：Evidenceforaspecifichumanhibition curveで表示し，人のMbに対する交差

fetalmusclehemeprotein．J．Lab．Clin．Med．，

反応率で示した．

67：585，1966．

5） 中野益弘：人胎児骨格筋ミオグロビン，特にそ文の個体発生について．四国医誌，24：715，

献1）Miyoshi，K．，Saito，S．，Kawai，H．，Kondo，A・，
Iwasa，M．，Hayashi，T．＆Yagita，M・：

1968．

6）Kagen，L．J．＆

Gurevich，R．：Precipitin

Radioimmunoassay for human myoglobin：reactions of anti−human myoglobin serum

methodsandresultsinpatientswithskeletal

with several human and animal

muscleormyocardialdisorders．J．Lab．Clin・

extracts．Immunology，12：667，1967．

Med．，92：341，1978．
2）三好和夫，川井尚臣，日涜光春，岩朝勝：ミオ7）Kagen，L．J．＆

muscleGurevich，R．：Immune

precipitinreactions between an antihuman

グロビンと筋疾患並びに心筋疾患．筋の構造とmyoglobin antiserum and several purified

機能（酒井敏夫・遠藤実・杉田秀夫編），医学書

primatemyoglobins．Immunology，13：201，

院，東京，1977，p．581．

1967．

ー190−

41）筋肉酵素の漏出機構について
植 田 啓 嗣＊
研究協力者

畑

中

良

夫＊

野

久保田 道 子＊
は

じ

め

田

温

子＊

谷 垣 朋 子＊2，運動直後の男女大学生の血清CPK値（表に筋ジストロフィー症，とりわけそのDuchenne

2）

駅伝マラソン参加を前提に健康診断書を求めに型に高血清CPK値が認められることが，江橋・杉田らによって見出されて，既に20余年の月日が経来た男女大学生について，まず600mを走らせ，そ過している．

の後10分・して採血し，その血清CPK値を方法

その後，CPKを含む主要臓器は，脳，心臓，骨（a）を用いて測定した．

格筋の3臓器に限られており，Duchenne型早期

その結果は，男性154名の平均値が158±95単位，の血清CPKの大半が骨格筋由来であることも明

女性35名の平均値は103±67単位であった．このうらかにされた．しかし，では如何なる仕組みのもち200単位以上の値を示した者は男性32名（20％），とに，骨格筋からCPKが漏出しているのかは，発

女性2名（5％）となり，やはり女性が低値低率症機構を紐解く上で重要な示唆となるものと思わを示した．
3，男子学生の血清CPK値とβ−blocker（表れるが，まだ治療に結びつく成績は得られていな

3）
そのため，ここで改めてDuchenne型の高血清CPK値の成因に検討を加えてみることとした．

alprenolo125mg／E］を連日3Ⅰ］間，またはpin−
dolo15mg／日を連日3日間投与し，その前後の血清CPK値を方法（a）を用いて測定した．

方

採血の都合上，投与前の値は，1例を除き，600

法

CPK活性値の測定は，（a）Anon法を用いl）ケm走行後10分した値を用いているが，投与後の値では全例運動負荷は行っていない．

ムテック式自動分析器を使用して，または（b）

非投与群5例では，1例（20％）で血清酵素値

江橋・杉田法を用い日立式分光光度計を使用して測定した．

が上昇していた．alprenolol投与群7例では，2例

1，男女大学生の血清CPK値（表1）（29％）・が上昇していた．pindolol投与群9例で就職を前提に健康診断書を求めに来た男女学生

は，1例が等値，5例（56％）で上昇がみられた．

について，血清CPK値を方法（a）を用いて測定した．

4，Duchenne型血清CPK値とβ−bl0Cker

その結果は，男性25名の平均値が129±56単位，＿
女性10名の平均値は65±21単位であった．このう（表4）
息児，並びに息児の母親にalprenolo125mg／El
を連日経口投与し，その前後のCPKイ直を方法

ち200単位以上の値を示した者は男性2名（8％），
女性0名（0％）であった．

（b）を用いて測定してみた．
息児3例の投与1週間前後でみた血清酵素値の動きは262→266単位，788→592単位，777→747単位となり，1例は上昇，他の2例は下降を示した．
しかし息児の母親5例について，同量の上記の＊愛媛大学保健管理センター一191−

表l Serum CPK activities
Male

β−blockerを1週間または2週間投与し，その前後で血清酵素値をみると，その仝例に上昇が認め

Female

表3

Serum CPK activities andβ−blocker
Berore

e
e
e
e
e
e
O

1 2 9 0 0 8 ュ
ュ2
222

Alpェ■enOlol．別当叫．列董重量童

CPK activities of normal individuals were shown・Two of25males as shown with underline had the

After

3ア
9兄
エ由飢 拍 ⊥ 01
卵0
02
80 0 3
ュュ2ュつノ21111ュ

067拘男岨匂埠97ガ68叫ュ81︒9些7︒湧遺跡

頂69甥9︒沼助等

1くノn7
ュ
7

沼等9

790

られた．

Increase＋1／5−（20声）：2／7：（29声）＋

activitiesofover200U．Theaveragewas129±56U
in males and 65±21Uin females．

表2

Serum CPK activities（after exercise）
Hale

Female785672
6ュ
5
6男9
7わ男

76記9︒完墨毒望8

tration were shown．（e）shows the values after

表4

Serum CPK activities andβ−blocker

m chenne
Kaiko
FuruyaT akatani

uⅥ
つ
（
11＼
）
（
lW ）

BeioreA lter

262

2伍

788
m

592
747

J
9
12

36

9
46

14
1（
泊

M olher

8霊6789

62

76
99
2璽豊山1
62

6震わ72ぷ轟7瑚162等湖山76瑠豊沼明199瑠甥等還旭1

12
1︒
拐1
12
36瑠誓一崇減収預班還描出179葛篭

5掩崇l印1
68根等誓諾頂79

篇一叢一哉諾駕謡曲示捕還琵舛叩1ぷ頂諾89瑠題等1︒

弼召墨199明叢は8 6神霊監減瑠湖1︒9蔑還1︒1

即諾甥199霊一買蛸11︒瑠湯里葛篭彊17︒肇Twenty−fivemgofalprenolol，Or5mgofpindololper
daywasorallyadministeredtonomalindividualsfor
3days．The CPK activitiesbefore and after adminis−

Yam ane
Fur叫・
a

（
lW I
llW ）

W atanabe
K oyam a

（
2W ）
（
2W ）

T akalani

l2W ）

48
40

TwentyTfive・mg Ofbeta blocker（alprenolol）wereorally administered to patientswith Duchenne typemuscular dystrophy（upper row）and their

CPK activities of normalindividuals after exercise
were shown．Thirty two of154males and20f35
femalesasshownwithunderlinehadtheactivitiesof

mothers（lower row）．

over200U．Theaveragewas158±95Uinmalesand
lO3±67 Uin females．

−192−（lW）：Daily，for one week（2W）：Daily，for two weeks

5，Duchenne型血清CPK値とβ−StimuIator（図）
血清CPK値は方法（b）を用いて測定した．

ってその傾向は増強される．しかし低下した酵素
値をmestranolのみで維持させることは難しい（症例3）．

小児喘息にはephedrineが常用されている．そ考のためephedrineによるβ系優位への体質転換案を期待し，ephedrine40mg／日をDuchenne型息筋ジストロフィー症発症の引き金には，筋原性，児に連日経口投与してみたが，血清CPK倍には神経原性，膜原性，体液原性などの因子が関与し低下傾向は認められなかった（症例1，症例2のているものと想定されている．

左端）．しかし，それにmestranol O．02mg／日の連日投与を併用してみると，血清酵素値は著明にDuchenne型の高血清CPK値が低下を釆たすこ

三好ら，高橋らは糖質ステロイドを投与すると，低下し，その中断で逆に上昇が認められた．そしとを報じている．sarcolemmaの透過性に異常がてその再上昇を示した酵素値もまた両剤を投与す認められることを示唆しているものと考えられよ

ると再低下を釆たしてくることが確認された（症う．

例1，2，3，4）．

では，何故膜透過性の異常がみられるのか，

この場合，meStranOlのみの単独投与でも低下

Duchenne型では，加齢と共に筋萎縮が進行，拡大傾向が起こる（症例4）が，ephedrineの併用によするが，同時に骨をはじめ，脳を除いた殆んど全

ト前J

8コ等こじ巾滅▲−UFヨヒ勇一1−−−

L
J
lOW

E巾drne⊂＝＝：：：コ
Mestranol

Ephdrine【ここコに＝こ＝＝＝！

Meまranol⊂＝コ

ト拓豆
図SerumCPKactivities ofpatientswithDuchenne type musculardystrophy・Casel：5years old Initial，daily dosis
Case2：9years old Ephedrine：40mg
Case3：8years old Mestranol：0・02mg
Case4：7years old Metaproterenol：10mg−193−

orally administered￣

臓器にも萎縮が波及している．したがって，たとである．そのため，β，blockerを投与して相対的え初発部位が骨格筋であるとは云え，罷息臓器はにα優位の状態を作ってみた．採血の関係上，運殆んど全身ともみなされることから，私どもは全身性の因子，とりわけ自律神経因子の関与に注目

動非負荷時の状態のもとに統一させてその効果をみることは出来なかったが，負荷時の値と投与3を払ってきた．

日後の非負荷時の値とを対比してみる（表3）と，そのため，家兎の視床下部のb交感帯を電気刺

β一blockerによる血清CPK値の上昇効果は激してみたが，その結果は刺激により筋肉から筋
肉内の酵素（CPK，LI）H，aldolase）が血清へ漏

pindolol＞alprenololの順序で認められた・今腐らは，高血圧の治療中，pindololが特異的に血清出してくることが判った．そして同じ条件下で，

CPK値の上昇をもたらすことを見出しているが，

C副交感帯を刺激した家兎では上記の3酵素の漏

alprenololではその効果が少なかったと報じている3）．それはまた正常大学生でみた表4の成績に出は認められなかった．ところでこの場合，交感神経のα系が関与しているのか，β系が関与しているのかについてであるが，雄性家兎にそれぞれ矛盾するものではない．

のStimulatorを投与し検討してみたところ，α−には，正常者や高血圧者とで多少の違いが認めら

Stimulatorに上昇効果のあることが認められた2）．

れた（表4）．すなわち正常者では上昇効果の弱か

Duchenne型恩児の家系を調べると，伴性劣性ったalprenololを投与してみると，Duchenne型

しかし，Duchenne型で得られたこの種の成績

遺伝をとる者が12．5％に見出される．また，その3例では高値のままの値を示したものの，Duch−

発症者は男性に偏在している．そして，これと関enne型患児の母親5例では全例上昇が認められ連して興味のあることは，上記の家兎でのα−Sti−

た．Duchenne型患児，Duchenne型息児の母親，

mulatorによる血清CPK値の上昇効果が雄性家

運動負荷者，高血圧者は，この順序である種の交兎のみに見出されることであろう．加えて，雄性感神経が緊張状態にあるものなのか，それとも家兎に女性ホルモンを投与して1週間乃至は2週間経過した個体では，α−Stimulatorによる上昇

alprenololに対する反応性の違いがDuchenne型
素因者に付加されているものか，今後の問題であ効果は認められなかった2）．

ると考える．

したがってこれらの知見からみると，男性個体

逆に高血清CPK値を低下させるものとして，のα系優位の状態が血清CPK値を高め，女性個

女性ホルモン，P−Stimulatorがある．Cohenら

体のβ系優位の状態が血清CPK値を低める性質

も，女性ホルモンの誘導体であるdiethylstilbes−を有しているものと考えられよう．

terolやpiperazine esterone sulfateの単独の投

表1の成績をみると，正常人の大学生の血清与で，Duchenne型息児の血清CPK値が著明に低CPK値の平均値は，男性129±56単位，女性65±21単位を示して男性が高い．他面，血清CPK値は運下したと報じている4）が，図で示したように女性ホルモンのみでは低下作用は弱く，P−Stimula−動によっても上昇を来たすことが指摘されているt。rの併用が必要である．しかし，このようにしてが，表2の運動後の血清CPK値の値でも，男性

血清酵素値を低下させても，その患者の筋力に回158±95単位，女性103±67単位を示して，男性が高い．この場合，運動が交感神経緊張状態のもと復を求めることは出来なかった．
これらの一連の知見から，発症には神経原性一で行われていることを考えると，表1，表2の成一自律神経性，ひいてはneurotransmitterを含め

績はさきの家兎の成績ともまた矛盾するものではた体液原性因子が問題との印象を強く受けるが，ない．

遊駈細胞である赤血球を用いて，Ca−ATPase活

そこで自律神経剤をヒトに投与してその影響を調べてみたいと考えたが，直接α−Stimulatorそ性を指標に，問題は膜にあるのか，体液にあるのかを検討した成績からは，g莫もさることながら，のものを用いることは血圧上昇を釆たすため危険問題はやはり体液にあるものと推測された．

ー194−

最近Akaikeは，白鼠に低K食を与えると，低K血症に続いて骨格筋中のK濃度も低下を来た
すが，この場合，末梢神経切断，脊髄切断，α−blockerの投与などの操作により，筋肉のK濃度は上昇し，その上昇をouabainが阻止することか
ら，α系のもので（Na＋K＋Mg）ATPaseが抑制されていると報じている5）．
今後，α系と骨格筋との連がりのより詳細な把握が，Duchenne型のCPK漏出機構と併行して検討されるべきものと期待される．

文献1）Anon：Z．Klin．Chem．u．Klin．Biochem．，8：
658，1970，10：182，1972．

2）植田啓嗣：血清酵素．脳と発達，13：249−254，
1981．

3）今鷹耕二，関鼠

高橋伸夫，ほか：β遮断薬

pindolol投与患者にみられた血清Creatineph・
osphokinase活性の上昇．E］内会誌，70：580−
585，1981．

4）Cohen，L．＆Morgan，J．：Diethylstilbesterol
effects on serum enzymes andisozymesin

おわ り にmusculardystrophy．ArchNeuro1．，33：480−

血清CPK値は，女性ホルモン，β系優位のもの

484，1976．

では低下し，男性個体でα系優位のもとで上昇が5）Akaike，N．：Sodium pumpin skeletal

みられる．その際，β−blockerによる効果からみmuscle：Central nervOuS SyStem・induced

ると，Duchenne型の家系者は正常者とは異なっ

SuppreSSion by alpha−adrenoreceptors．Sci−ているように思われる．

ence，213：1252−1254．1981．

ー195−42）全身疾患における筋障害の研究（第1報）−Hypoparathyoidism症例における
血清CPK上昇に関する研究

茂 在 敏 司＊
研究協力者

篠

田

恵

一＊

竹

中

正

純＊

小 西 慎 吾＊

福

田

市

蔵＊

副甲状腺機能低下症においてはCPKの上昇が

増

井

義

一＊

学的には異常は認めなかった．

見られることが知られている1）．この塊序に関し

検査所見：検尿・検便・血沈・検血には異常をては，従来，一部筋原性変化が見られたものもあ認めず．GOT 60 mU／ml，GPT 39 mU／ml，

るが2）3）4），多くは組織学的に異常が見られないこ

LDH420mU／ml，AL・P74mU／ml，CPK544とより，CPKの上昇は膜透過性の冗進ということ

U／1，無機P7．1mg／dl，Ca4．5mg／dl，筋内Caで説明されてきた5）．今回，我々はこの点に関し副
甲状腺機能低下症の2例について臨床的・形態学

濃度164・7／Jg／g（正常値700／Jg／g），血清蛋白・
腎機能・Na・K・Cl・甲状腺機能は正常，心電図的検討を行なった．対象は特発性副甲状腺機能低ではQT時間延長．胸部Ⅹ−Pは異常なし．脳波上下症の2例で，血清Ca，P，CPKの変動を臨床経

Diffuse slow waveで，頭部CT像では大脳皮質

過とともに観察し，筋生検を右大腿四頭筋にて施

下自質・基底核・小脳歯状核の石灰沈着が見られ行し，光顕的（組織化学を含む）・電顕的に検討した．筋電図・運動神経伝導速度には異常は見られた．

なかった．Ellithworth−Howard testにて，副甲状腺ホルモンの投与により尿中へのP，CAMP排症

泄の明らかな増加が見られ，特発性副甲状腺機能例

症例1：38歳，男性
主訴：意識喪失発作
家族歴：父・脳卒中低下症と診断された．

既往歴：11歳頃 前額部火傷，25歳 高血圧
現病歴：11歳頃より時々両手がひきつることが副甲状腺機能低下症に対してビタミンD製剤（α

経過（図1）：CPKは痙攣発作後に上昇する傾向を示したが，発作消退後も高値は持続していた．

あった．1980年5月25日（37歳）はじめて意識喪失と全身の強直性痙攣をきたし，本学脳外科受診
し頭部CT像にて広汎な脳内の石灰沈着を指摘され，当科へ紹介・入院となった．
現症：下顎〜前頸部に火傷後癒痕あり．Chvo−
stek徴候，Trousseau徽候ともに陽性．左眼に白内障を認める．深部腱反射は全体に低下しているが，筋力低下・筋萎縮は認められず，その他神経−D3）を投与し，Ca値は次第に上昇し，それとともにCPKは下降し，Caが正常化するとともにCPKも正常化した．
症例2：60歳，女性
主訴：手・足の強直発作
家族歴・既往歴：特記すべきものなし
現病歴：40歳頃より，年に1〜2回，口唇のしびれ感，手の強直，足のこむら返りが生ずることがあった．56歳時，頸部の腫大を指摘され精査を受けるも異常なしと言われた．1980年1月頃（59＊大阪医科大学第1内科

歳）より，ロ渇・多欽・多汗・食欲冗進・体重減−196−症例1．日．K． 38才男性．
⁝MH‰P⁝⁚2．7P剛〝Ⅷ
CU

55年
6月．
7月．
8月．
9月．
10月

11月

12月

S 56年
1月
〝g

〇一D，
巨遍

症例2． 日．0．00才 女性■2 月 ．】月 ．4 月 ，5 月 16月
一絹笥芸S58年
1 月．‡月， 】月
I l月 ■
5 月．6 月．7 月．
8 月．9 月
緑
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方言 古宇方 劣焔
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1．遜＃ 迄盗董盗迄乏盗
盗盗盗宏宏文安曇彩芳究宏之繋杉 茅須方㌘ 茅方方
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8．
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▲ ▲
隻 t
檜 鴎

図1

図2

少があった．同年2月には手の強直，足のこむら低下症に対してα−D。を投与し，Caは次第に上返りが頻回に生ずるようになった．同年3月9日，

昇し，Caが7．9mg／dlの段階でCPKは正常範囲に入った．

四肢の強直性痙攣をきたし近医に入院し，Graves
病・副甲状腺機能低下症の診断をうけた．以後
Graves病はMethimazoleにてコントロール良筋生検所見好であったが，低Ca血症の改善が不良のため，両例ともに筋生検は右大腿四頭筋にて施行し，1981年3月11日当科入院となった．

痙攣発作後2週間以上経過した後に行なった．光

現症：弾性硬のびまん性甲状腺艦を触知．Tro−
usseau徴候は陽性だが，Chvostek徽候は陰性で顕的には両例とも，組織化学的所見も含めて異常を認めなかった．

あった．筋力低下・筋萎縮を認めず．他にも神経

電顕的には，症例1では（写真1），Subsarco＿

学的には異常を認めなかった．

lemmal spaceに小空胞とともにmembranous

検査所見：検尿・検便・血沈・検血には異常を認めず．GOT21mU／ml，

GPT16mU／ml，

body及びその形成をうかがわせる像が認められ，

LDH235mU／ml，AL−P187mU／ml，CPK同様の変化がsarcolemmaに近いintermyofi−
brillarspaceにも認められた．またTriad部と思269U／1，無機P6，4mg／dl，Ca6．0mg／dl，血われる部位にも同質の変化が見られた．症例2で清蛋白・腎機能・Na・K・Clは正常．T。123ng／

も（写真2，3）症例1と同様にSubsarcolemmal

dl，T49．2JLg／dl，TSHO．3JLU／ml．心電図では
QT時間延長．胸部Ⅹ−P異常なし．脳波・頭部

SpaCeにmembranous bodyの形成が認められ，CT像異常なし．筋電図・運動神経伝導速度にも異成が見られ，更にT−tubuleの関大が認められた．

常は見られなかった．Ellithworth−Howard test

しかし，両症例とも，筋原線維構築には異常を認めなかった．以上の如く電顕変化はintracellularでは副甲状腺ホルモンの投与により尿中へのP，
cAMPの排泄増加が見られ，特発性副甲状腺機能低下症と診断された．

Triad部にも異常なmembranousstructureの形

membranous struCtureの異常にもとづくものであった．

経過（図2）：当科入院時には甲状腺機能はMethimazoleにて正常範囲にコントロールされ考案ていた．しかし，低Ca血症，高P血症が見られ，副甲状腺機能低下症におけるCPK上昇の機序

CPKも症例1と同様上昇していた．副甲状腺機能については現在まで，形態学的立場からの検索で

ー197−

写真1

症例1の電顕像
A Subsarcolemmal spaceに小空砲とともにmem−branous body及びその形成をうかがわせる像が認められる．
B Sarcolemmaに近いintermyofibrillar spaceに
membranous bodyの形成をうかがわせるabn。rmal
membranous structureが認められる．
CintermyO丘brillar spaceにelectron dense ma−
terialをとりかこむかたちでmembranousbodyc7）形成がみられる．

写真2

症例2の電顕像
A Subsarcolemmalspaceにmembranousbodyの形成が認められる．
B Triad部にabnormalmembranous structureの形成（こ）及びTTt。b。1。の軽度関大（◆）が認められ
る．

−198−

写真3

症例2の電鏡像
T−tubuleの関大が認められる．（◆）

は特に手がかりとなるような所見の報告は見あたされている．また我々の症例では症例1においらない．過去の報告例でも，臨床的にmyopathyて筋内のCaの定量を行なったがかなり低下してをきたしたものもあるが，臨床的に全くmyopaTおり，血清Caのみを一過性に正常化したのみでthyの所見を認めず，ただCPKなどの血清酵素のはCPKは変化しないことを考え合わせると，
CPK上昇には組織のCaが大きな役割を果たしていることが考えられる．

上昇が見られるのみの例も多く，このことより
CPK上昇は膜透過性の冗進によると推測されてきた5）．こうした副甲状腺機能低下症における

このような低Ca血症が組織学的にいかなる変CPK上昇は，その原因のいかんをとわず，すなわ

化を筋組織にもたらすかは非常に大きな問題であち特発性副甲状腺機能低下症，術後副甲状腺機能低下症，偽性副甲状腺機能低下症いずれにおいて

る・過去に報告されているものでは，myOpathyを伴っているものを除くと，光顕的には全く変化がも同様に見られ，しかも低Ca血症が改善されれなく，電顕的にも非特異的変化のみということでばCPKも下降している．したがって，この病態にあった．今回，我々の2例において認められた電顕的形態変化も，ひとつひとつは非特異的なもの

は低Ca血症が大きな役割を演じていると考えられる．我々の2症例とも臨床的にmyopathyの所
見を示していないにもかかわらずCPKが上昇し，であるが，問題はその出現量が健常者に比し異常

低Ca血症の改善に伴いCPKも正常範囲に復は健常者の筋の電顕試料を持たないので確たる事帰している．ただこの場合，低Ca血症がいかなるは言えないが，健常ラット筋との比較ではその出形で筋の膜透過性に影響を及ぼしているかという現量は多いものであった．これらの所見はいずれ問題についてはまだ記載が見当たらない．しかし，もintracellularmembranousstructureの異常にに多いかどうかである．残念ながら現在の所我々

低Ca血症の状態でCa剤を静注し，一過性に血清もとづくものであり，特に症例2ではTriad部にCa値を正常範囲内に維持しCPKの変動を観察

おいてabnormalmembranousstructureとTLした報告があるが5），このような方法ではCPKはtubuleの関大が認められ，Caが生理的に筋細胞変化せず慢性の影響が組織に加わっていると推測の膜系に深く関係していることを考えると，興味一199−

深い所見と思われる．以上の所見を総合すると，にCPKも正常化した．組織学的には，光顕上異常

電顕的に軽度ではあるが，筋細胞内の微細膜構造

なく，電顕にてintracellularmembranousstruC−の異常の存在が示されていると考えられる．従来

tureの異常が散見された．電顕的に見られた所見

言われている副甲状腺機能低下症における膜透過が低Ca血症時の月莫の変化を示すものかどうかは性の冗進については過去推測の城を出ていなかっ今後の検討を得たねばならない．

たが，我々が電顕的に観察した膜構造の異常は形態学的にこれを示している可能性がある．この間

文

献題に関しては今後，症例の積み重ね，他の原因に

1）Hower，J．，Struck，H．，Tackmann，W．，etal．：

よる低Ca血症，たとえば吸収不良症候群などに

CPKactivityinhypoparathyroidism．N．Engl．

おける検索，freezefracture法などの他の方法の導入，など検討しなければならないことが多い．

J．Med．，287：1098，1972．
2）Wolf，S．M．＆

Lusk，W．：Hypocalcemic

更に低Ca血症では痙攣を伴うことが多く，我々の例でも症例1は痙攣を主訴とし，痙攣発作

myopathy．Bull．Los Angeles Neurol．Soc．，

毎にCPKの上昇をきたしている．これが筋組織

3）Hower，J．，Struck，H．，Tackmann，W．，etal．：

37：167−177，1972．

に対してどの程度影響を与えてくるかも大きな問

MyopathyandelevatedserumenZymeSin a

題である．いずれにしても今回我々が観察した電CaSe Ofhypoparathyroidism．Z．Kinderheilk．，

顕的な膜構造の異常がいかなる意味を持つかは今

116：193−196，1974．

後充分な検討が必要である．

4）Snowdon，J．A．，Macfie，A．C．＆Pearce，J．
B．：Hypocalcemic myopathywith paranoid

ま

と

め

psychosis．J．Neurol．Neurosurg．Psychiatry，

特発性副甲状腺機能低下症の2例について臨床

39：48−52，1976．

的・形態学的に筋病変の検討を行なった．2例と5）shane，E．，McClane，K．A．，et al．：Hypopara・も，CPKの持続的高値を示し，活性ビタミンD製

thyroidism and elevated muscle enzymes．

剤（α−D3）の投与により血清Caの正常化とともNeurology（N．Y．），30：192−195，1980．

ー200−

43）筋糖原病の病態代謝−−特にⅤ型とⅦ型の対比分析

垂

研究協力者

井

清一郎＊

河

野

典

夫＊

嶺

鷺

見

誠

一＊

美

尾

郁

夫＊

清

水

孝

郎＊

進＊

代表的な筋糖原病である糖J京病Ⅴ型はグリコケ

人と歩行の際，下肢筋の疲労感と∂客痛に耐えて遅れまいとついて行くうちに，筋症状が軽減してた

ンを直接分解するホスホリラーゼの欠損症であり，やすく歩行できることも何度か経験している．筋一方糖原病ⅥⅠ型は解糖の律速酵素ホスホフルクト

症状は夏季よりも冬季につよいが，増悪傾向はな

キナーゼ（PFK）の欠損症である（図1）．両疾患

く，日常生活にも支障を来さなかったので放置しは，嫌気的解糖の主要基質であるグリコゲンを分ていた．たまたま25歳の健診時に血清クレアチン

日的解してATPを産生する代謝過程が障害されるとキナーゼの高値を指摘され，精査を勧められた．

いう点において共通しており，この代謝系に依存

運動後の着色尿には気づいていない．

する筋運動に際しても共通した筋症状を呈する．

現症：156cm，51kg，握力など安静時筋力は正したがって両型は従来同一視される傾向にあった．

常．筋萎縮なく，肝牌渡を認めない．知覚異常な

これまでⅤ型は少なく とも60例1），ⅥI型は10家系

し．その他理学的に異常所見なし．

以上2）が報告されているが，最近私共は本邦第4検査成績：検尿検便異常なし．RBC425×104，

番目の家系に当るⅤ型を診断し，またⅥⅠ型の第2家系（横須賀共済病院）を確定診断する機会を得

Hb13・9g／dl，Ht39・1％，Reticulocyte15％0，
WBC 5700 血清電解質異常なし，総ビリルビン

た．今後両疾患の診断機会は日本においても多く

0．7mg／dl（直接型0．3），GOT32u／1，GPT19，

なると予想される．そこで両疾患の鑑別点を明ら

γ−GTPかにする目的でⅤ型とⅥⅠ型を対比して病態分析を

LDH 352，空腹時ブドウ糖72mg／dl，OGTT正常，血清学的および内分泌学的検査異常なし，肺・行った．

6，AIP136，クレアチンキナーゼ1675，

心のレ線像異常なし，心電図および脳波異常なし，症
症例 糖原病Ⅴ型3）4〉
主訴：運動時の筋脱力例
26歳女性，全社事務月

筋電図：安静時筋原性変化あり，運動によりele−
Ctricalsilence所見あり．
生検大腎筋のホスホリラーゼa，b活性はとも

家族歴：母方祖母に同症状あり
現病歴：4〜5歳頃から，運動時例えば運動場に0（対照14．2u／gwwt），ホスホリラーゼbキナ
ーゼ活性は245（対照264），PFK活性は39．4（対照を一周走った時，鉄棒懸垂の時，階段を昇る時に，

47．4），α−グルコンターゼ活性は47．9（対照60．7）

運動筋が疲れ易くやがて脱力に陥るのに気づいてであった．グ））コゲン含量は39mg／gwwt（対照9）．

いた．無理に運動をつづけると筋痛も出現するが，しばらく休むとこれらの症状は消追する．また友

臨床症状
本症例はⅤ型の典型的な症状を呈している．筋＊大阪大学医学部第2内科−201−

勿論本症例には溶血冗進を示唆する所見もなく，赤血球PFK部分欠損と2，3−DPGの減少（図2），解糖障害に基づく溶血克進症状を示すⅥⅠ
型5）6）とはことごとく対照的である．Ⅴ型とⅥⅠ型の重要な鑑別点となる．
安静時の筋の解糖中間体
患者より採取した筋を速やかに凍結し，酸抽出して測定したグリコゲンは正常対照の3倍以上に増加していた．一方GIP以下の解糖中間体はほぼ10％に過ぎない．仮りにこの系を純粋にホスホリラーゼのみが障害された実験モデルであると見放すと，安静時の正常筋のhexose・mOnOphosphate
量つまり解糖全般の基質量はほとんどグリコゲンに依存している事が明らかになった（図3）．
一方，Ⅶ型においてはF6Pより上位の中間体が増加し，FDP以下が減少している．グリコゲン
量はhexose−mOnOphosphateの増量を介してV
図1筋のグリコケン代謝と糖原病
concentration ratiotothe control

運動持続能の低下，筋運動時の筋硬直と筋痛は従来のⅤ型患者の90％以上の症例に認められている．
安静時の筋力低下や筋萎縮は若年層の患者には通常認められない．また筋運動をつづけると筋症状が軽減する現象（Second wind）はⅤ型のほぼ40％の症例に認められているが，ⅥⅠ型患者には稀である．したがってsecondwindはⅤ型に特徴的な症状といえる．運動後のミオグロビン尿はⅤ型の半数以上の症例に報告されているが，本症例はこれを経験していない．一般にⅤ型の筋症状はⅥ1型に比し軽症であるとの印象をうける．
赤血球解糖中間体
本症例の赤血球2，3−ビスホスホグリセリン酸（2，3−DPG）濃度は5120mJLmOl／mlrbc（正常対照4884±292，mean±SEM）とやや増加傾向にあり，減少していない．また赤血球解糖中間体濃度を測定してクロスオーバー・プロット法にて解析したところ解糖代謝には異常は見出せず（図2），mean±SE
図2

糖原病Ⅴ型とⅥⅠ型の患者赤血球解糖中間体濃度・正常人赤血球の中間体膿度との比を対数目盛にプロットした．

鉄欠乏性の軽度の貧血を反映したイ象がえられた．
−202−

したためと考えられる．その他血中の遊維月旨酸，

metab。Iiteconcentration（ratiotonorrT．alcontroF）

ビルビン酸，Ca，無機リンはほぼ正常人と同じ変動を示した．
筋運動に対するグルカゴンの効果
本症例にグルカゴンを1USP単位皮下注射す
ると血糖は45分後に頂値171mg／dlまで上昇し，乳酸は6．6mg／dlから60分後に14．0まで，インス
リンは12ノ′U／mlから60分後に83まで上昇した．この結果グルカゴンに対する肝のグリコゲン分解系の反応とインスリン分泌反応は正常と判断された．
グルカゴン注射30分後に阻血下前腕運動試験を行わせたところ，明らかに運動持続時間が増加し，
図3

糖原病Ⅴ型とⅥt型患者の筋解糖中間体濃度とグリコケ ン含量

運動直後の手指の伸展も可能となり，運動後の前腕部腫脹も認めなかった．さらに運動側肘静脈血中に有意の乳酸上昇反応が認められ，グルカゴンの運動能増強効果の発現に際して確かに解糖代謝型に匹敵しうるほど増加している．この成績から，の働いたことが証明された（図4）．一方筋電図

正常筋におけるグリコゲン合成と分解に対する上，グルカゴン注射後に行った20Hz2分間の連

hexose−mOnOphosphateの影響力の大きさとその続刺戟に対して明らかにM波の減衰が軽減し，強限界を窺い知ることができる．

縮後のM波の回復も促進されるという観察結果を

2

阻血下前腕運動試験︵SOE∈︶むl80の一POO一qu二品u空U

手首（200mmHg）と上腕部（貴高血圧＋最低血圧／2）を圧迫して前腕部を部分的阻血下におき，ゴム球を握る運動を2分間行わせたところ，正常人では運動側の肘静脈血中の乳酸は上昇したが，本症例では上昇しなかった．本条件下ではグリコゲンのみならずグルコースも利用されなかったことを示している．一方ⅥⅠ型においても当然ながら乳酸は上昇しなかった．
乳酸以外の血中物質についても分析した．正常人において前腕運動に伴うグリコゲン分解の際

normaIcontroIwithoutglucagon
月

debranching enzymeの作用によってグルコースが遊匪するので運動側肘静脈血中のグルコース濃度の上昇することがあるが，本症例においては上昇しなかった．運動に伴い血中のアンモニア，K，−32

クレアチンキナーゼは正常人においても変動する

0

2

4

6

Time（min）

が，本症例においては著しく増加した．運動によって惹起されたある種の筋障害の結果筋から漏出

−2

図4

−203−

糖尿病Ⅴ型患者の阻血下前脱運動試験に対するグルカゴンの効果表1 糖庶病Ⅴ型とⅥl型の鑑別診断法

得た．
ブドウ糖とインスリンの静脈内への注入によってもグルカゴンと同様の運動増強効果と運動後の

Type

V

効果はグルカゴンの筋に対する直接効果ではなく，ブドウ糖かインスリンの単独あるいは両方を介する効果であろうと考えられる．
日常生活においても例えば出勤前にグルカゴン

Vコ

十lncre∂Sed hem01ysis

乳酸上昇反応が観察されており，このグルカゴン

Typcretic山ocytosis廿erythroid hyperpZasia
of bone marrow」トshortened r・Cd cell survIV∂l＋

etevatedindirect blllrUbin

十一±を注射して出掛けると，歩行がたやすくなり，地
仕事がはかどるなどその効果は劇的である．今日，SecondvH1d■■durlng

eXertiontncreased exercISe tOlerancc
by elevation of b100d gIucoseとが通念化しているが，Ⅴ型に対するグルカゴン

breakdoWn Ofhcxose−menOr）hosPh∂teS
by mUSCle homogen3teS治療法が確立すれば，この通念を破る突破口とな

muscle phosphorylasc

ろう．

muscle phoSPhofructokinasc＼

erytIvocyte phosphof「uctokinase

筋運動をつづけているうちに筋症状が軽減する＼

muscle pyruvate kinase

ヾ・／muscle hexose−mOnOPh05Phates

±一一

八︑一ヽ

酵素欠損に基づくミオバナーは治療法に乏しいこ

Second windの発現機構

甘−±

一ク

下鉄などの階段も苦痛なく昇りきれる，出社後もerythrocyte2．3・DPG

Second wind現象の発現機構として，
1） グルコース利用の促進
2）遊敵月旨酸の利用促進

Publishing Co．，Amsterdam，1979，Vol・41，pp・

3）運動筋の血流量の増加

185−190．

が挙げられているがまだ確定されていない．本研

2）Tarui，S．，Sumi，S．，Kuwajima，M．，Ichihara，

究において得られた

K．，＆Kono，N．：Further studies onmuscle

1）筋収縮をくり返すことによって，Ⅴ型患者のphosphofruCtOkinase deficiency．12thWorld筋強縮後のM波の回復が促進されるが，グルカ

Congress of Neurology，September，Kyoto，

ゴン注射の前処置によってこの回復がさらに促Japan，Abstr．，p．163，1981．
3）河野典夫，嶺尾郁夫．驚見誠一，清水孝郎，山進されること
2）解糖系をへてグルコースが利用されるのに伴田研太郎，野中共平，垂井清一郎：筋糖原病のい，Ⅴ型患者の運動持続能が改善すること

病態代謝−Ⅴ型とⅥl型の対比．生化学，53：などの観察結果から，SeCOndwindはおそらくグルコースの利用促進によるものであろうと考えて

605，1981．

4）嶺尾郁夫，山田研太郎，清水孝郎，鷺見誠一，
妾進，河野典夫，野中共平，垂井清一郎，田村いる．

信司，東本好文：糖尿病Ⅴ型（McArdle病）のまと1症例．第18回日本糖尿病学会近畿地方会，大め

以上の分析によりⅤ型とⅥⅠ型の鑑別診断法を確

阪，1981．
5）Tarui，S．，Kono，N．，Kuwajima，M．，＆Ikura，

立した（表1）．
文

Y．：TypeⅥI glycogenosis．Monogr．Hum・

献

Genetり1）DiMauro，S．：Metabolic

myopathies．In

9：42−47，1978．

Ha−6）Tarui，S．，Kono，N．，Kuwajima，M．＆Kitani，ndbookofclinicalneurology：（editedbyVin・

T．：Hereditary and acquired abnormalities

ken，P．J．＆ Bruyn，G．W），North−Hollandー204−inerythrocytephosphofruCtOkinaseactivity：
The close association withaltered

2．3−

ー205−

diphosphoglyceratelevels．Hemoglobin，4（5＆6）：581−592，1980．

44）Duchenme型筋ジストロフィー症の線推芽細胞の生化学的研究

馬

研究協力者

渡

安 徳 恭 演＊

志

郎＊

竹

下

岩

男＊＊

黒

岩

義五郎H

Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）におは各標準月旨質のretentiontimeから行った．脂肪

いては，線維芽細胞にも異常があるという報告が酸の分析においては，脂質を5％KOHおよび50ある．遺伝性の疾患であるDMDにおいて，もし％メタノール中で鹸化（980C，20分間）を行い，塩培養した線維芽細胞に異常があるなら，それは酸を添加後，クロロホルムで抽出し，9−anthryl−

DMDの原発的な異常を示唆している可能性が少

diazomethaneでラベルして高速液クロマトグラ

なくないと思われる．私共はDMDの線維芽細胞

フィーで分画した（カラム；ZorpaxC8，移動相；の生化学的研究として，今回は培養皮膚線維芽細

アセトニトリルと水の濃度勾配88％−100％，カラ

胞の脂質およびⅦ旨肪酸を分析して対照と比較した．

ム温度500C）．各分画は螢光検出器（Ex．365nm，Em．412mm）で検出し，面積をデータ処理器で解対象および方法

析した．なお使用したすべての有機i容煤には酸化DMD患者（3人）の皮膚は大腿部から生検によ防止剤としてButylated hydroxytoluen（BHT）

り得た．対照（4人）は筋疾患のない患者の外科を添加した．

的手術時に得た皮膚を用いた．皮膚は細断後，培結養して線維芽細胞を得た．培地はEagle，s MEM

果培地に10％のFBSなどを加え，5％CO2下で育DMDの線維芽細胞の培養時における増芦直の速成した．分析に用いた線維芽細胞はすべて3回目

さや，光顕による形態観察においては対照と明らのsubcultureで培養フラスコ底にfull sheetsに

かな差は認めなかった．上記のリン脂質の分析法なった後，培地の交換後3日目に採取したものででは，phosphatidylcholine（PC），Sphingomyelin

ある．線維芽細胞は生食水で3回洗い遠沈して採（SM），phosphatidylethanolamine（PE），phospha−

取し，分析時まで一800Cに保有した．FoIchらの方法で脂質を抽出し，クロロホルム層（下層）をtidylserine（PS），phosphatidylinositol（PI）は明瞭に分画し，Cerefrosideも分画した．その他に今回

月旨質分析に用いた．冷凍乾燥器で月旨質を乾回した．

は同定し得なかった分画が3つ以上認められた．

リン脂の分析の場合，エタノールに再i容解した脂しかも，SMは2つの分子種に分画して認められ質を高速液体クロマトグラフィー（島津LC4A，

た．再現性も良好であった．線維芽細胞のリン脂

自動注入器装備，カラム：ZorpaxNH2，移動相：
アセトニトリル，エタノールおよび水，流量1ml／

質構成でPIは明らかに存在したが，PSはtrace

min，カラム温度50°C）でリン脂質を分画し，206
mmで検出したものをクロマトグラフィー用デー

程度の分画しか認められなかった．リン月旨質構成
比（表1）およびⅥ旨肪酸構成比（表2）にDMDと対照との間に有意差を認めなかった．

タ処理器（島津C−RIA）で解析した．脂質の同定考＊国立赤1反療養所神経内科＊＊九州大学医学部脳研神経内科

察

DMDの線維芽細胞について，蛋白合成の異常1），Ca代謝の異常2），あるいは細胞間の按合性−206−

質の分析も対照資料と交互に行ったものである．

表l Lipid profile of fibroblasts of Duchenne
dystrophy（by HPLC）

私共が用いた月旨質の分析方法は，いずれも高速液体クロマトグラフィーを用いたものであるが，デPeak

DMD（n：3）

control（n＝3）

ータの解析（分画の面積の計算，および1相対比な
l．Cerebroside

5．0士1．4

2．

16．5士4．3

PC

3＋4．SM

18．0士

5．
6．

2．7

18．7

のリン脂質や月旨肪酸の分画方法より，手順および

5．7士2．5

3．3士1．0

操作も少なく，再現性もすぐれていると思われた．

4．8士1．8

6．3‡∩．R

しかし，リン脂質の構成比および月旨肪酸の構成比

10．

5．7

2．5

7．0

2．7士1．2
PSしたものであり，私共の経験では薄層クロマトグ

士1．8
士0．9

士1．0

7．0士

11．

ど）はクロマトグラム用データ処理器で自動分析

3．9

37．7 士 6．4

PI

9．

21．1士

34．3士4．9

7．
8．

士l．2

ラフィーやガスクロマトグラフィーを用いた場合

5．7
PE

5．3

±1．1

ともにDMDと対照との間に明らかな差は認めな

2．2 ＋ 0．6

trace

かった．線維細胞のリン月旨質構成は，個々の対象

trace

でかなりの差が認められたので症例を増やして異Values；Area％（mean±SD）

常の有無の結論をすべきだと思われる．
DMDにおいては，骨格筋のみでなく，赤血球，
表2Fatty acid composition of fibroblasts ofDuchenne dystrophy（by HPLC）

白血球あるいは線維芽細月包においても細胞膜の異常を示唆する報告が多い．今回の私共の脂質の分析は線練芽細胞全体からの月旨質を分析したもので

DMD（n＝3）

ZZ：6＋18：3

control（n＝4）

3．8i o．2

あり，したがって，細胞膜の脂質構成の異常の存

3．0士0．5

20：4＋14：0

12．4壬1．3

11．9士2．0

在を否定出来るものではない．DMDにおける線

16：1

6．4士

0．6

6．9±1．2

推芽細胞の生化学的な研究の必要性は残されてい18：2

5．7±3．1

3．7‡1．1

ると考えられる．

16：0

19．7士1．5

21．3‡0．6

18：1

25．4士1．5

25．1‡3．1

18：0

18．3士

0．7

21．1士5．3

0．7

0．2

0．6‡0．1

Duchenne型筋ジストロフィー症の培養皮膚線

22：0＋24．1

0．5士0．1

0．5 士0．1

維芽細胞のリン脂質構成および月旨肪酸構成を高速

24；0

0．3士0．1

0．3士0．1

液体クロマトグラフィーを用いて行った．脂質の

20：0＋

22：1

士

結

語

分析に要する操作や手順も比較的に少なく，鋭敏Values；Area％（mean±SD）＋Un−identified

peaks

were

で再現性も良い分析法であると思われた．しかし，
omittedDuchenne型筋ジストロフィー症の線維芽細胞のリン月旨質構成比およびⅥ旨肪酸構成比に対照と明ら（adhesiveness）の異常3），などの報告がなされてかな差を認めなかった．

いる．しかし，これらのDMDの線維芽細胞の異文

常も，それぞれ迫試され確認されてはいないよう

献に思われる．線維芽細月包を用いた研究においても，

1）Ionasescu，Ⅴ．，Lara−Braud，C．，Zellweger，H．，

対照との条件を厳しく整えて行うことが必要と考et al．：Fibroblast culturesin Duchenne

えられる．私共は，同一条件で育成し，すべて3musculardystrophy．Alterationsinsynthesis

回目のsubcultureでfullsheetになったものを，and secretion of collagen and noncollagen

培地の交換後3日目に採取した細胞を比較した．

proteins．Acta Neurol．Scandinav．，55：407，

採取時の方法，および細胞の保存条件も同一にし1977．

た上で，脂質の抽出は対照と共に同時に行い，脂−207−2）Statham，H．E．＆Dubiwitz，V．：Duchenne

musculardystrophy：Ca45exchangeincultur・

adhesiveness between skin fibroblasts fromedskinfibroblastsandtheeffectofionophore

patientswithDuchennemusculardystrophy．

A23187．Clin．Chim．Acta，96：225，1979．

J．Neurol．Sci．，43：465，1979．

3）Jones，G．E．＆Witkowski，J．A．：Reducedー208−45）LDH（M型）欠損症の培養皮膚線維芽細胞中のLDH活性の検討

西 村 嘉 郎＊
研究協力者

大

山

邦

雄＊

本

田

西

男＊

須 藤 加代子＊＊ 菅 野 剛 史＊＊Myophosphorylase欠損によるMcArdle病の発見以来，いくつかの解糖系酵素異常によるミオ抑制を惹起，その結果筋運動エネルギー産生に必要なATP産生低下となって症状発現したものとバナーが報告されているが，これらの疾患研究に結論した2）．

おいて現在大きな問題の一つは骨格筋組織培養や皮膚線維芽細胞，その他の筋以外の組織における材料及び方法

遺伝子異常の発現様式と酵素活性の関連であろう

皮膚線維芽細胞培養は患者の前胸部皮膚を生検と思われる．

し，細切後シャーレに単層を形成する迄約3週間

我々が初めて報告したLDH M−Subunit欠壬員

培養した．培養液は牛胎児血清およびEagle症については既に血球系においてもMrsubunitの欠損がみられることを報告した1）．今回行った

MEM，1：4混合液である．単層培養細胞は生理的食塩水で3回洗〜條後，剥放し毎分7，000回転，10

本症患者皮膚線推芽細胞培養は培養筋細胞中にお分間遠沈した（上清（診）．沈漆を1mlNa−リン酸

けるLDHisozymeの検討への予備実験とも考えているが本症における酵素欠壬員の個体における発緩衝液中で5秒間10回超音波処理し更に12，000回

現様式をより明らかにする目的で行なわれた．

更に同様の処理を行った（上清く彰）．培養液および転，30分間遠心した（上浦③）．このときの沈着査は上清（彰一⑥についてLDH活性を測定した．

症

例

LDH活性測定はJEOL6チャンネル反応速度

皮膚生検を行った患者は20歳，男性．10歳頃より激しい運動の開始まもなく有癌性筋拘縞を生じ分析器を用い連続分光測光法で行った．分析条件
はWroblewskiの方法3）に準じて行った．

運動持続困難となること，血清CPK高値を示す

LDHisozymeは塩谷らの方法4）によりセロゲこと，症状が高度な場合myoglobin尿を呈するこル膜を用いて電気泳動により行った．活性は乳酸と等糖原病Ⅴ型，ⅥⅠ型と類似の臨床症状を有する．

を基質として用いNAD，MTTを最終水素受容本症における嫌気性解糖の病態については虚血運体として発色させた．

動負荷後の筋組織内解糖系中間代謝産物測定およUin viiroでの解糖実験からLDH M−Subunitの欠損によりglyceraldehyde3−phosphateの酸化により生じたNADHをpyruVateからlactateの過程で利用できないために，三炭糖代謝過程に＊浜松医科大学第1内科＊＊浜松医科大学附属病院検査部

−209−

結

果

LDH活性測定（IU／L）
培養液

110

上清②

35

〝

（∋

530

〝

径）

69

皮膚線維芽細胞中のLDH活性は上清③，④に含まれている．培養液中の活性は培養液中の牛胎児血清由来のものが大部分でありそれに線維芽細胞より音容出したものが加わっていると考えられる．
上清③，①についてLDHおよびその他の酵素活性を表1に示した．LDHは蛋白（mg）当り量
では395mIU／mg proteinであった．したがって患者の皮膚線維芽細胞中のLDH活性はGOT等の酵素活性レベルから比較すると，骨格筋と同様に減少していると考えられる．
表1 皮膚線維芽細胞中の酵素活性

図1

皮膚線維芽細胞のLDHisozyme patternとが確認された．
また同胞においても血清，血球で同様のisozy−
皮膚線維芽細胞中のLDHisozyme（図1，2）
上段が患者線維芽細胞のものでありLDHI型

mepatternを示すものはすべて血清CPK値は異常を呈し特に長兄は患者とほぼ同様の筋症状を示した．他の同胞ではLDHisozymeはI型からⅤのみ発色しておりH，SubunitlO0％であることを型までを示したが，H−および、M−Subunitの比示している．中段は培養液中のもので左端に線維（M／H）が減少しているものがありこれらは遺伝

芽細胞より音容出したLDHI型がわずかに認めら的にヘテロ接合と考えられた．この所見は特に血れるが，他の5本が培養液中に含まれた牛胎児血球のisozymepatternで顕著であった．これらの同胞では血清CPK値は正常値を示した．ヒトの清由来のLDHであると考えられる．下段に対照として正常人血清のLDHisozyme patternを示した．

LDH M−Subunitの座は11番染色体にあること

なお培養のための皮膚生検は正常部位で㌧行なっって支配されている．したがって本症の遺伝異常が判っており，H−Subunitとは別個の遺伝子によたが，患者およびミオバナーを有する長兄では広は両親がともにへテロ接合であることから体性劣汎に皮膚病変が認められた．病理組織学的にはIc−性遺伝によることが結論された．

hythyosislinearis circumflexと診断された．

患者およびホモ接合の長兄の皮膚病変（Ichyth−yosislinearis circumflex）の培養細胞における考案

本症患者およびその家族におけるLDHisozy−

M−Subunit完全欠損との因果関係は不明である．
Kitamuraら（1971）が報告したLDHH−Subunit

mepatternについては筋，血清，赤血球および白欠損症では溶血性貧血は認められていないしこれ血球等を検索し報告した1）2）（図3，4）．いずれにおいても患者ではLDHI型のみを示しておりこ

おける解糖系酵素異常はi容血性貧血を生じるとさのLDHについては反応速度およびPyruvateの濃度による抑制効果からもH−Subunitであるこ−210−は本症患者でも同様である．一般的に赤血球系にれている．糖原病ⅥⅠ型（PFK欠損症）では赤血球でも酵素活性は部分的低下を示し，盲容血がみられ

土上長二二−ても同様に欠壬員している可敵性も充分考えられる．

t

遺伝性代謝性ミオパテ一における遺伝子異常発現

二二
：−
：
「

・

に巨rL巨

−
・
−
●
・
1

ll lI

t

4

l

については酵素欠損が筋以外の組織にも認められ

1るものと筋のみに限局し他の組織では正常の活性−●を示すものがある．前者のものに糖原病ⅠⅠ型，ⅠⅠⅠ

I

づ
l二
封

守 」
⊥ ⊥

型，CPT欠損症があり後者として糖原病Ⅴ型，ⅥI㍗！

上型がある．この問題は1972年Roelofsが糖原病Ⅴ
巨

￣
ト

∴十
丁・

l

−
ト

型の骨格筋組織培養において組織化学的にphos−
phorylase活性を証明したことにより特に注目されるようになった．この酵素活性は胎児型又は肝！
】ーいる．糖原病ⅥⅠ型においても組織培養細胞中の酵素活性についてはV型と同様にisozymeの問題がとりあげられている．

1 − て

㌻十

−﹂・−卜⁚・−︼﹂1トや脳等に特有なisozymeに類似性を示す未熟型のものであって筋型のものではないと報告されて． ﹁しかしⅠⅠ型，ⅠⅠⅠ型では筋組織培養中にも酵素活

一一・一十一〇Cutturemed言um性は認められず電顕でmyotubeやmonocyte中（FetaL calf seruにglycogen顆粒の蓄積像が認められている．Mi−
randa（1980）5）はこの違いを「組織特異性isozy−me」の有無で説明し，後者の培養筋細胞中の酵素活性の出現は筋発達段階での一過性の現象であっ十﹂・主上・・・て，それぞれのisozymeは別個の遺伝子支配を受けるため成長によって消去されると述べた．
本症は骨格筋以外に血球系および線維芽細胞の両者でM−Subunit活性の完全欠損があり，糖原病ⅠⅠ型，ⅠⅠⅠ型に近いものである．しかし本症についての結果の呈示する重要な問題点はまず第一にNormalLDHのisozymeMおよびHが独立した別の遺伝子によって支配されていることが明らかである点，第二に皮膚組織培養という発生の未成熟な時点でM−Subunit欠損が認められた点である．この二点から糖尿病Ⅴ型の筋組織培養の結果について考図2

察され，またMirandaらも推論している，酵素が皮膚線維芽細胞のLDHisozymepattern

組織の成熟過程において，isozymeが変化し成熟型に近づく点 に遺伝子異常が関与しているのではている．本症では培養線維芽細胞における糖代謝の検討は皮膚病変の存在を考えるとき今後の課題

なく，遺伝子は分化された組織の酵素のisozyme
構成を規定しているという考えを立証しているもの一つと考えられる．

のであると考えられる．

培養線椎芽細胞にみられた酵素異常は本症にお

本症では皮膚線維芽細胞および筋培養細胞のいて筋以外の多くの月蔵器にも同様の異常のある可cel1−1ineの確立が現在最も必要とされるもので能性を強く示唆している．また培養筋細月包においあり，これにより酵素の成熟性およびisozymeの−211−

ERYTHROCYTE

∧＝日日‖
＝

Lrノ」十
Homozygotes

ne亡erozygotes

Ⅵ 日 日 日 日 √几日月巨しい日日∴≒ ： † − 主 1 二 ﹁ 1 1 ︑∧＝‖＝＝・・∴・！・l●．．：一Normal COntrOlI

図3

血清および赤血球のLDHisozyme pattem

ー212−

∴
二
十

A

二「

Homozygotes

l
l
I
l
t

二
＿
．
L＿
丁
＿
」
■
−
￣
l
＿
．
．
し
．
．
1

u ・
・

＝
−・
−

Heterozygo亡es

≡

l

−
−
−

≡

・
ヰ
ト
・
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一
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ト
▲
ー −
l
l
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＝
＝
三
三
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一
一
l ト
ー
→・
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t

4＿
二
二
＿ −
一
ト
◆
一
一
・
−一
・
十
− ￣
亡r ∵
＝
▲
＿
− ＿
−
＿
一
■
一
一
−
・
一
一

Normal control

図4

白血球のLDHisozyme pattern

関連，および各組織における代謝障害の問題を検3）wroblewski，F．＆

LaDue，J．S．：Lactic

dehydrogenase activityinblood．Proc．Soc．

討することが期待される．

Exp．Biol．Med．，90：210，1955．
文4）Shioya，M．，Yanagisawa，M．，etal．：Sepa・

献1）Kanno，T．，Sudo，K．，et al．：Hereditary

ration oflactate dehydrogenaseisoenzymes

deficiency oflactate dehydrogenase M−

OnCelluloseacetate（Cellogel）．Jap．J．Clin．
Path．，19：469，1971．

Subunit．Clin．Chim．Acta，108：267，1980．
2）Nishimura，Y．，Ohyama，K．，et al．：Car・
bohydratemetabolisminlactatedehydrogen・
aseM−Subunitdeficiency．In

World

Congressof

Neurology

Abstracts12th，Excerpta

Medica，Amsterdam−0Xford−Princeton，
1981，p．237．

−213−5）Miranda，A．，Trevisan，C．，et al．：The
expression of genetic defects

inmuscleCultures：Now you seeit，nOW yOu don，t．
Neurology（N．Y．），30：367，1980．

46）筋ジストロフィー症におけるRNA activityについて

高 瀬 貞 夫＊
研究協力者
は

じ

め

小

林

和

夫＊

に

小

暮

久

也＊

結

果

最近Duchenne型筋ジストロフィー症（以下HE染色（図1）にて空胞状の核を有し，細胞質DMDと略）において，再生筋線経としてのtypeがbasophilicな再生筋線経は，methyl green

2C線経の増加，Satellitecellの増加が指摘され

pyronine染色（図2）にて細胞質がpyronine陽性に赤く染色され，より明確に識別される．特に核ている1）2）．従来再生筋はHE染色にて空胞状の核をもつbasophilicfiberとされ，RNAの増加が指摘されている．しかしHE染色においてbasophi−

周囲の細胞質，核小体がより膿染される．一万0・02

lic fiberの判別は必ずしも容易ではない．今回
我々はDMDの再生過程を検討する目的で，種々

pyronine染色を行なうと，pyrOnine陽性の部分が消化され，RNAである事が確認された．Pyro−の神経筋疾患における生検筋についてRNA染色

nine陽性を示すRNA増加筋線経は一般に小さを行い，RNA増加筋線経について検討した．

く，円形で，散在性又は数個の群をなして存在す％ribonucleaseに60分間前処理後methyl green

る事が多い．しかしDMDの1例において，RNA

対象および方法

増加筋線経が大きな群をなして存在していた（図検索対象は罷病期間4年以内のDMD5例，肢3）．又筋強直性ジストロフィー症の1例におい

帯型ジストロフィー症3例，筋強直性ジストロフて，まれではあるがsmall angulated fiberがィー症4例，多発性筋炎6例，筋萎縮性側索硬化

pyronine陽性を呈した．
RNA増加筋線経を各種神経筋疾患について定症4例，多発性神経炎3例の計25例である．
生検筋より厚さ10JJmの新鮮凍結切片を作製し，量的に算出すると（表1−），DMD5例全例で増加

2％pyronine溶液2m1，2％methylgreen溶液
1．5m1，0．1M酢酸緩衝液（pH4．4）5mlの混合液

しており，平均14．0±6．6／103fibers（3・9−20・4）でにて30分間室温で染色した．Nプチルアルコールしていた．多発性筋炎においては長期経過例の1に浸漬し（30秒ずつ2回），キシレン透徹し，1時

例でRNA増加筋線経はみられなかったが，その間以内にHE染色と対比し，一観察した．又0．02％

他の5例にて認められその値は平均15・2±16・9あった．肢帯型でも13．3±11．0（5．0−15・0）と増加

ribonucleaseにて消化試験を行ないRNAの確認（0−47）であった．一方筋強直性ジストロフィーを行なった．

症，筋萎縮性側索硬化症，多発性神経炎にてはまRNA増加筋線経として胞体がpyronine陽性

ったく認められなかった．

であり，核内にも大きなpyronine陽性の核小体
考を有するものを算定した．隣接する筋線経を

再生筋線経はHE染色で識別が困難な場合が1000〜2000個数え，1000個当りのRNA増加筋線経を算出した．

察

少なくない．再生筋にはRNAが増加している事
より，RNA染色により明確に識別が可能とな
る3）．RNA染色であるacridineorange染色では＊東北大学医学部脳研脳神経内科

再生筋のみならず，しばしば変性線経である
smallangulated fiberも染色される欠点がある4）．
一214−

図1 多発性筋炎case2の大腿四頭筋（HE染色，×200）．矢印は細胞質がbasophilicな再生筋線経．図2のRNA増加筋線経に対応する．

図2

多発性筋炎case2の大腿四頭筋（methylgreenpyronine染色，×200）．矢印はRNA増加筋線推．

−215−

図3

Duchenne型筋ジストロフィー症casel（methyl green pyronine
染色，×100）．RNA増加筋線経が大きな群をなしている・

表1各種神経筋疾患におけるRNA増加筋線維数・
D…b‥

多発性筋炎

nnO型ノストロフィー山

催！ん別冊（咋）

人

5

7

0

1

人
U

U

2

3

4
2

1

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F

▲ q

0

∩

5

︶

F

■ ヽ −

10．9

M

︼ ■

20．4

H

人 ノ ー

3．9
17．6

損

1

1 1 0 9 3 7
2 2 4 4 5 5

3

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2

11．17

5
7

6．75

5

2

4

0

5．33

3
﹁J

】

17．2
2

4．92

0

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2

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2

1

0

Case

Case

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年

… 性 催刷岬ト）R訪釣票数

﹁

8

J

0

H

′ ○

14．0 士 6．6

肢招型ジストロフィー†．i
Case

CaSe

0

2

30

M

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0

3

40

M

35．0

0

4

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2．0

1．8

−216−

4

61

M

多発性神鮭矢
Case

1

25

F

2

27

F

j

52

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2，0

M

n

F

54

2

26

M

3

O

CdSe1

M

51

′

孤鳳11作ノストUフィーI．l

45

2

2

13．3 士11．0

1

﹁−

F

O

30

6

3

筋萎縮性側索硬化症
J

F

⊂

F

24

0 7

20

2

﹁J

1

RNA染色であるmethylgreen pyronine染色ではRNA増加筋線経がHE染色での再生筋とよ的差異はないかどうか，今後光顕，電顕，組織化
学的に詳細に研究する事が重要な課題であろう．

く対応し，再生筋をみる簡便でよい染色法である
ため今回我々はmethylgreenpyronine染色を施行した．

（1）再生筋線経はmethylgreenpyronine染色によその結果DMDについて，RNA増加筋線経はりRNA増加筋線経として，より明確に示された．

14．0±6．6／103fibersと増加していた．Neerunjun
らも同様の染色で‥増加している事を報告してい（2）RNA増加筋線経は，Duchenne型，肢帯型筋ジ

ま

と

め

ストロフィー症，多発性筋炎の筋線経の1−2％る3）．従来DMDにおいては筋再生はみられないにみられた．

とされていたが，その後筋再生のstem cellと考（3）しかし筋強直性ジストロフィー症，筋萎縮性側えられるsatellite cellが増加している事2），AT

索硬化症，多発性神経炎ではほとんどみられなか

Pase染色で再生筋としてのtype2C線経が増加している事が指摘され1），明らかに筋再生がみった．
（4）RNA増加筋線経は疾患により形態的な差異はられるという報告がなされている．今回のRNA

みられなかった．

染色の結果からも同様の事実が明らかにされた．
再生筋の増加はDMDに特徴的なものではなくて，肢帯型筋ジストロフィー症，多発性筋炎でも文

献1）Nonaka，I．，Takagi，A．＆Sugita，H．：The

同様の増加が認められた．これら疾患の筋再生をSignificance of type

ひきおこす因子についてはいまだ不明であるが，Duchenne muscular dystrophy．Muscle

変性筋線維からの崩壊産物が非特異的に筋再生を

Nerve，4：326，1981．

2C hluSCle fibersin＆

ひきおこしている可能性は充分考えられる．すな

2）wakayama，Y．：Electronmicroscopic study

わちCPKが高値で，筋変性がさかんなDMDのOnthesatellitecellinthemuscleofDuchenne

early stageでは筋再生がさかんである事4）5），

muscular dystrophy．J．Neuropathol．Exp．

CPKの上昇の少ない筋強直性ジストロフィー症
では再生が少ない事，筋萎縮を主体とし，変性，

Neuro1．，35：532，1976．
3）Neerunjun，J．S．一＆

Dubowitz，Ⅴ．：

崩壊を伴わない神経原性筋萎縮では筋再生はみら

Concomitanceofbasophilia，ribonucleicacid

れない事などより，筋再生は筋変性の21欠的現象

andacidphosphataseactivityinregenerating

としても説明可能であろう．今後DMDのみならず種々の筋疾患にとっても，筋再生をひきおこす

muscle fibers．J．Neurol．Sci．，33：95，1977．
4）perl，D．P．＆Little，B．W．：Acridine

因子についてさらに明確にする事が必要であろう．

OrangenuCleic acid fluorescence．Its usein

疾患による再生筋の形態的差異については，今routine diagnostic muscle biopsies．Arch．

回のRNA染色では明らかにされなかった．現在

Neuro1．，37：641，1980．

でもDMDにおける再生筋の形態的異常は明確に

5）wakayama，Y．，Schotland，D．L．，et al．：

されていない．再生筋が発育過程で変性に移行しQuantitativeultrastructuralstudy ofmuscleてしまうとされているDMDと，正常の筋線経にSatellitecellsinDuchennedystrophy．Neur0−

成長してゆく多発性筋炎の再生筋において，形態

logy（Minneap．），29：401，1979．

−217−47）チキン骨格筋のロイシルーβ−ナフチルアミド
水解酵素の精製，諸性質と筋タンパクの分解
t 木 南
研究協力者
は

じ

勝
め

沼

信

英 紀＊
磯

彦＊

貝

和

秀＊

野

田

隆＊

諸活性の比較をした．カテプシンB，H及びDのに筋ジストロフィー症における筋原線経の萎縮即ジストロフィー症における活性上昇と共に，LNA

ち崩壊には，多くのプロテアーゼが協同的に作用活性の上昇も認められる．プロテアーゼの活性上していると考えられる．我々は，筋ジストロフィ

昇が直ちに，ジストロフィー症における筋原線経ーマウスでカテプシンB活性が上昇しているこの分解促進に結びつくかどうかは，プロテアーゼと1〉及び精製カテプシンB2），H3）の筋構成タンパの細胞内局在性や内因性のプロテアーゼ阻害剤のクの分解様式について報告してきた．これらエン作用など非常に多くの因子がこれに関与している

ドペプチダーゼによる筋タンパクの分解に続いて，ので，直ちには結論づけられないが，一つの大きェクソペプチダニゼの筋タンパクへの攻撃も始まな要因であることは疑いの余地がない．さて，骨ると推定される．本報では，筋ジストロフィーチ

格筋のプロテアーゼは純化され性格化づけられたキンでその活性上昇がみられるArylamidaseのものは少ない．そこで，ジストロフィーチキン浅一種（ロイシルーβ−ナフテルアミド水解酵素）のチキン胸筋からの精製とその諸性質について報告

胸筋よりLNA水解酵素を純化し，諸性質を明らする．

塩を含む5mM））ン酸バッファーpH7．2でホモかにすることを試みた．浅胸筋を4倍量の0．7％食
ゲナイズし，4，000×g上清分画を出発材料とし

材料と方法て，DEAEセ77デックス，CMセファデックス

精製に用いたDEAEセファデックス，CMセ7

及びセファデックスG−200のクロマトグラフィ

7テーックス，．セ77デックスはPharmaciaから，ーーを用いて精製した．図2は，最初のDEAEセ7

BANA，ロイシルーP−ナフテルアミド（シグマ）

7デックスクロマトグラフィーのパターンである．

以外のβ−ナ7テルアミド基質は，BegaBioche−

3つの活性ピークが認められるが，0．2MNaClでmicalsより得た．β−ナフテルアミド水解活性は流出され，全活性の大部分を占める第2の分画にBarrettの方法4）に従った．

つき精製を進めた．第1のi舌性ピークは基質特異性等から，ロイシンアミノぺプチダーゼと考えら

結果及び考察れる．収率21％で精製された最終酵素標品は，比筋ジストロフィーチキン（楷化後80日）の浅胸筋における各種カテプシン活性及びロイシルーβ

活性6．2U／mgでSDS電気泳動及びpH9．5でのSDSを含まない電気泳動上で，共に単一のバンド−ナフテルアミド水解活性（以下LNA活性と表現を示した．分子量はSDS電気泳動及びセファデする）が図1に示されている．筋ジストロフィー

ックスG−200のケリレ濾過共に，約10万という値がチキンの骨格筋では正常チキン筋に比し，g組織得られ，酵素はモノメリックなタンパクで，分子当りの蛋白量が少ないので，比活性及び全活性で量10万と考えられた．至適pHは6．5〜7であっ＊徳島大学医学部附属酵素研究施設酵素化学部門

た．次に各種のナフテルア▲ミド基質に対する水解活性を調べたのが表1に示されている．LNA活
−218−

1

1

0

0

∽

︒HUS⊃∈ u＞

3

Total

⊂コNORMAL
DYSTROPHY︵S．〇二こCathepsin D

0．02

0．5

0

0

TotaI S．A

Total S．A

図l Proteinase activities

indystrophic chicken．

−219−

muscles of normal and叫∈ゝ ＜・s

FOLこ︵寸．OLエTotal

2

︵−ミ・盲＼一〇⁝ユ︶ ゝ三三U＜

50

FRACT10N NUMBER
図2

DEAE−Sephadex A−50chromatography

表l Substratespecificityofleu・β・naphtylamide

性を100％とすると，Arg，Lysのような塩基性ア

hydrolase
Substrate2
1

Lys−8−NA

一 b

Gly−8−NA

一︳

1
1

5

Arg−β−NA001

Leu−β−NA

ミノ酸の他，Ala，Met，Phe・P−NAをも水解し，
ロイシンアミノペプチターゼと異なり，広い特異Relative activity

性をもつことが明らかになった．又，Gly−Arg，l

Gly−Pheのようなジペプチドナフテルアミドに対する水解活性は低く，N末端がブロックされているエンドペ70チターゼ及びカルポキシペプチター

4
r J

1

Ala−8−NA

一 J

Va1−6−NA4

Ile−8−NA0

Ser−8−NA′ 0

つ1

Met−8−NA

ゼ基質は全く水解しなかった．各種プロテアーゼ
インヒビターの本酵素に対する影響をみた結果が表2に示されている．アミノペプチダーゼのインヒビターであるアマスタテン，ベスタテンによっ

1
■ 5

3

3

J

Trp−β−NA′ ○Tyr−8−NA3

Phe−6−NA

Pr0−8−NA2

Gly−β・NAて強く阻害され，本酵素がアミノペプチダーゼの︐ J一種であることを示唆している．又，EDTA，0−7ェナントロリンによって強く阻害を受けること
から金属プロテアーゼと考えられる．PCMBを除Gly−Phe−8−NA
U

2

A U

BZ−Arg−β−NA

3

N−BZ−Phe−β−NA

O

N−CBZ−Leu−8−NA

S

Ala−Ala−8−NA

いては，チオールプロテアーゼ阻害剤によって影響を受けないので，チオール性酵素とは考えにく
い．EDTAで処理後，セファデックスを通した酵
素につき，金属の影響をみたところ，Co＋＋のみが強い活性化効果をもつことがわかった．現在までに，骨格筋に何種頬のアミノペプチダーゼがある
−220−

表2

Effect of variousinhibitors onleu・β−NAhydrolase

る分解様式を調べるため，分離したウサギミオシンあるいはアクチンと本酵素をincubateして，一定時間毎に，サンプルをとり出し，SDS電気泳動

lnhibitor

ConCentration

Relative
activity
︶

lt

（トり

ンパクや，カテプシンによって一次的な分解を受

0

︵U

None
x

lO

けた分解中間体の分解能を調べ，筋タンパク分解

︐J

Z

8

＿6

Amastatin

におけるカテフ○シン等のエンドペプチダーゼとの

8

4xlO

q

4

Bestatin7

協同作用につき検索を加える．

＿S

l

xlO

4

Puromycin

でミオシン及びアクチンの分解を調べたところ，
殆ど分解は受けなかった．今後変性した筋構成タ

0

●S

2

xlO

8

Chymostatin

文

0Antipain

xl0−5

9

l

Serine Protease

0

l

Mice

with HereditaryMuscular Dystrophy．J．Biochem．，83：27，

8

pcHB

in

9

l x lO

0

＿S

E−64

献

1）sanada，YりYasogawa，N．＆Katunuma，N：4lxl0−50

Leupeptin

1978．

xl0−5
＿ヽ

0

MonoiodoaCetate l x lO2）Noda，T．，Isogai，K．，Hayashi，H．＆

0
0

xl0−5

I

xlO一ヽ

Katunuma，N．：Susceptibilities of Various

8

I

9

NEM

8

TPCK

Myofibrillar Proteins to Cathepsin B and

5

I

x

lO

7

TLCK

MorphologicalAlterationofIsolatedMyofi−′

brils by this Enzyme．J．Biochem．，90：371，

5

1981．

0

9

I

xl0−】

EDTA

l

xl0−5

1

pMSF

3）真田幸弘，勝沼信彦，野田隆：カテプシンHに

′

l

xlO一】

O

0−Phenanthroline

対する筋原線維構成蛋白質の分解様式．厚生省
筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究のか，十分に精製されておらず判然とはしないが，ロイシンアミノペプチダーゼ，Penningtonら5）がいうナフナルアミド基質を水解する酵素の総称としてのアリルアミダーゼ及びOkitaniら6）のHy−
drolase Hが存在することは間違いない．今回（三好珪），1981．p．27．
4）Barrett，A．J．：A NewAssay ofCathepsin
Bl and Other ThioI Proteinases．Anal．
Biochem．，47：280，1981．
5）Bury，A．F．＆Pennington，R．J．：Ary−lamidasesin Human Muscle．Biochem．Soc．

我々の報告したものは，広い基質特異性をもち，Mn＋＋ではなく，Co＋＋で活性化される金属酵素であること，又分子量が10万で，至適pHが中性附近

Transリ1：1306，1973．

6）okitani，A．，Nishimura，T．＆

Kato，H．：にあることからロイシンアミノペプチダーゼやCharacterization of Hydrolase H，A New

HydrolaseHではなく，アリルアミダーゼと考え

MuscleProteaseProcessingAminoendopept−

られる．次に本酵素の骨格筋での細胞内分布であidase Activity，Eur．J．Biochem．，115：269，

るが，Birdらの方法7）に従って細胞内分画を行な

1981．

い，各種の標識酵素の分布からみると，少なくと7）Bird，J．W．C．：SkeletalMuscleLysosomes，も大部分は細胞質分画に存在することが明らかに

LysosomesIn

なった．又本酵素に対する抗体を用いた螢光抗体（editedbyDingle，J．T．＆Dean，R．T．），North−法でも，骨格筋組織に広く分布することが明確にHollandPublishingCo．，Amsterdam，1975，

なっている．さて，各種筋構成タンパク質に対す

Vol．4，p・75．

−221−

BiologyandPathology，48）筋線維変性機構におけるCa＋十の役割について
一一一Ca＋＋イオノフォアによる実験的研究−

出

研究協力者

透＊

田

内

野

誠＊＊ 植 川 和 利＊＊

吉

田

理＝

徳

臣

晴比古＝

は じ め に

実験結果

進行性筋ジストロフィー症（PMD）の成因に関Control筋では1〜16時間のincubationの範して，最近筋形質膜やT管系などの膜異常が注目

囲では筋原線椎はほぼ正常に保たれており，筋構されており，更に膜異常に伴う細胞内Ca十十濃度の上昇がPMDの中核をなす筋線経の変性・壊死

造蛋白にも変化を認めなかった．Ionophore処理
筋ではincubation1時間以内に肉眼的に著明なに重要な役割を演じる可能性があることが示唆さ

COntraCtionの状態を呈し，3時間目には光顕的れている1卜3）．そこで我々は加 わかpの実験にてに散在性の変性・壊死筋線椎の出現を認め，電顕Ca＋＋ionophore（A23187）を用いて人工的に細胞的には散在性のZ帯の崩壊・消失，筋原線経の断内Ca十十レベルを高め，それによって惹起される裂，粗書孟化，ミトコンドリアの浪縮像等が観察さ

筋微細構造及び儲構造蛋白の変化を検索し，かつPMDにみられる筋の変化と比較検討することにれた．Z帯の変化は時間経過とともに顕著になり，
incubation16時間では大部分の筋線経でZ帯の完より，PMDの筋線推変性に果すCa＋＋の役割を追

全な消失を示した．一方筋構造蛋白のSDSケリレ

求することを試みたので報告する．

電気泳動では，ionophore処理筋でincubation3
時間日頃よりZ帯の構成蛋白であるα−aCtininの

実験材料及び方法

軽度減少が認められ，時間経過とともに筋構造蛋

ラツテ骨格筋（横隔膜，ヒラメ筋，長址伸筋）

白の変化は著明になった．Ionophore処理16時間を用い，0295％とCO25％の混合ガスを通気しての筋ではα−aCtininの著明な減少に加えて，myO−

pH7・4に調整した300CのKrebs−Ringer液中にて
1〜16時間のincubationを行なった．Incubation

Sinheavychain，trOpOnin−Tも減少を示した．まの方法は1）contTOl，2）ionophore処理（25JLg／ml
saline），3）EGTAにてCa＋＋freeにしたmedium

Ebashiらの方法でtroponin−trOpOmyOSin comp−lexのnative tropomyosinとして抽出して泳動

中でのionophore処理，4）Calcium activated

してみると，ionophore処理筋では全般的にnati・

neutral protease（CANP）阻害剤のE−64あるい

VetrOpOmyOSinが減少しているが，その中でも特はleupeptinを含むmedium中でのionophore
処理の4通りについて行ない形態学的観察並びににtroponin−I及びCの減少が著しかった（図1）．
一方mediumにEGTAを加えてCa＋＋freeの状

SDSゲル電気泳動による筋構造蛋白の分析を行

態でionophoreの効果をみると，16時間のincu−

なった．

bationにおいても電顕的に筋J京線経はよく保たたtroponin psubunitsの変化を詳細にみるためにれており，SDSゲル電気泳動上も筋構造蛋白には全く変化がみられなかった（図2）．
＊熊本大学保健管理センター＊＊熊本大学医学部第1内科

CANP阻害剤のE−64あるいはIeupeptinを
medium中に加えておくと，ionophore処理によ−222−

MyofibritAα−Actinin

NativeActin

Tropomyosin

A

C

A

C

C

Ca（＋）16h
図l SDSgelelectrophoreticpattemOfmyofibri1，α一aCtinin

andactin，andnativetropomyosinextractedfromthe
16 hr incubated soleus with（A）Or without（C）
ionophore．Note the prominent decrease（arrows）of
α−aCtininandnativetropomyosin，eSpeCiallytroponin

I，C．

る筋構造蛋白の変化は明らかに抑制された．またCa十十の透過性を選択的に克進させることが知らヒラメ筋を16時間incubation後medium中に遊れているが4），今回のA23187を用いた実験ではヒ離してくる蛋白を集めてSDSゲル電気泳動を行トPMDでみられる筋構造蛋白の変化と極めて類なった場合，ionophore処理筋のmedium中には似した成績が得られた．すなわちionophore処理

αraCtininに相当するbandの出現がみられたが，によってみられたα−aCtinin，myOSin heavy

control及びCa＋＋freeのmedium中で処理した

chain，trOpOnin−Ⅰ，Cなどの減少はSugitaらによものではmedium中にα−aCtininに相当するってDuchenne型PMDで報告されている変化5）6）

bandの出現はみられず，CANP阻害剤もincu−と本質的に同一のものである．またionophore

bateした筋からのα−aCtininの遊離を抑制した処理による筋構造蛋白の変化には細胞外Ca＋十が重要な役割を果していることは，Ca＋＋freeの（図3）．

mediumでは全く筋構造蛋白の変化がみられない考ことからも明らかである．このことに関連し，

案

A23187は放線菌から分離された抗生物質の一種であり，生体膜に作用して2価陽イオン特に

Publicover，Duncanら7）〜9）はカルシウム剤の添加を省略したmediumを用いるこ

一223−

とによ

り

、一・α一Act／

Act

一一一TN一丁

＼TM
−Ll
−L2

図2

SDSgelelectrophoreticpatternofmyofibrillarproteinspreparphore

from16hrincubatedsoleusA23187（A），A23187and（A＋EGTA），and

with

Ca＋＋iono−

Ca＋＋chelator

EGTA

withoutionophore（C）．Note thegreat reduction（arrows）ofα−aCtinin，myOSinheavy
Chain．H：myOSinheavy chain．α−Act：α−aCtinin．Act：

actin．TN−T：trOpOnin−T．TM：trOpOmyOSin．Ll，L2：
myosinlight chain1，2．

A23187が主として筋小胞体（SR）に働いて，SR

ま内のCa＋＋をsarcoplasm中へ遊牡することにより筋微細構造の変化がおこることを報告している

1）Ca＋＋ionophore処理筋ではmyosin

が，彼らの実験系ではミトコンドリアの変化を除

と

め

heavy

Chain，α−aCtinin，native tropomyosinとくに

いて筋微細構造の変化に乏しく，また筋構造蛋白

troponin−I，Cの減少を示した．
2）これらの変化はincubation3時間日頃より認には変化がみられておらず，我々の行なった追試

められ，時間経過とともに顕著になったが，Ca十十実験でも筋構造蛋白に何らの変化もみられなかっfreeの場合は長時間のincubationでも全く変化た．これらのことから我々はIonophoreによる筋構造蛋白の変化には細胞外Ca＋＋の果す役割がよがみられなかった．

り重要であると考えたが，更にCa十十と筋構造蛋
白の変化を結びつけるものとしてはCANPに代表されるCa＋＋dependentproteaseの関与が推定された．

3）CANP阻害剤のE−64あるいはleupeptinはこれらの筋構造蛋白の変化を抑制した．
以上の所見はCaイオンの流入によるCANPの活性化がα−aCtininやその他の筋構造蛋白の遊離，分解を惹起し，筋線経の変性・壊死へ進展するという最近のPMD筋変性機構に関する仮説を

▼224−

Mf

α−Act

図3

A

A

＋

＋

C

A
＋

E−64

Leu

EGTA

SDS gel electrophoretic pattem Of the released
myofibrillarproteinsof16hrincubatedsoleusintothe
medium．Note the presence（A）and absence（C，A＋EGTA）ofα−aCtinin band（arrow）．CANPinhibitors

SuppreSSthereleaseofLr−aCtinin（A＋E−64，A＋Leu）．
Mf：myOfibril．

initiates muscle cell necrosis unlessitis

支持するものと思われる．

repaired．Brain，102：147，1979．

文献4）pressman，B．C．：Biologicalapplicationsof

1）Sugita，H．＆Toyokura，Y．：Alteration of
troponin subunitsin progressive muscular

ionophores．Ann．Rev．Biochemリ45：501，

1976．

dystrophy（DMP）．II．Mechanism of the5）sugita，HリKatagiri，T．，etal：Studiesonthe

alterationoftroponinsubunitsinDMP，Proc．

StruCturalproteinsinvariousneuromuscularJapan

diseases．In

Acadリ52：260，1976．

2）Bodensteiner，J．B．＆Engel，A．G．：Intracel，lular calcium accumulation in Duchenne
dystrophy and other myopathies．A study of
567，000

muscle fibersin114

biopsies．

Neurology（Minneap．），28：439，1978．
3）Carpenter，S．＆

Basic

researchin

myology，（editedbyKakulas，B．A．），ExcerptaMedica，
Amsterdam，1974，p．291．
6）Sugita，H．＆Toyokura，Y．：Alteration of
troponin subunitsin progressive muscular

dystrophy（DMP）．I Pattern of troponin

Karpati，G．：Duchenne

muscular dystrophy．Plasma membraneloss−225−

SubunitsinDMP．Proc．JapanAcad．，52：256，
1976．

7）Publicover，S．J．，Duncan，C．J．＆Smith，J．

role ofintracellular calCiumin causing

L．：Ultrastructural changesin muscle

ultrastructural damagein mammalian mus−mitochondriain situ，includingthe apparent

Cle．J．Neuropath．Exp．JNeuro1．，37：544，

development ofintemal septa，aSSOCiated1978．

Withtheuptake and release ofcalcium．Ce11
Tiss．Res．，185：373，1977．
8）Publicover，S．J．，Duncan，C．J．＆

9）Duncan，C．J．：Role ofintracellularcalcium
inpromotingmuscledamage：aStrategyfor

Smith，

J．L．：The use ofA23187todemonstratethe−226−

COntrOlling the dystrophic condition．Ex・
perientia，34：1531，1978．

49）Plasmocidによる実験的ミオパテーの生化学的研究杉 田 秀 夫＊・■■
研究協力者

中

瀬

浩

史＊＊
方

は じ め に法

筋ジストロフィー症においては筋線経は壊死再ウイスター系ラットの腹腔内にplasmocid

生を繰り返していると考えられるが，このようなmg／kgを投与し，心筋，横隔膜，赤筋であるひらわz Z扇形における筋線経の崩壊機序を考察する一め筋，自筋である長指伸筋を採取し，各種の組織手段としてplasmocid（8−（3−diethylamino−

化学的方法を用いて検討した．次に皮膚切開下に30

propylamino）−6−methoxy quin01ine）を用い

ひらめ筋に直接0．5％plasmocid生食溶解液を投て実験的，ミオパテーを作成し，組織学的，生化与し，その経時的変化を組織化学，電顕，SDS電学的に検討を加えた．

気泳動を用いて検討を加えた．SDS電気泳動にはPlasmocidは抗マラ））ア剤として開発された

可音容性蛋白をできるだけ除くためにグリセリン処

8−aminOquinoline誘導体であり，primaquine
類似の構造を持っている（図1）．筋毒性が強力な理筋を用い，各バンドはIEF−SDS二次元電気泳動を用いて同定した．

ために臨床的には用いられていないが，逆にミオバナーに関しては，Adamsl），Price2）らによって

Ⅲ〔H20Ⅰ20Ⅰ2N（0‡2CH3）2

検討が加えられている．特徴点としてまず，筋線経に対して強力な壊死作用を示すが，その後ほぼ完全な再生を示すことがあげられる．おそらくは∈≡；拡三

筋線経に選択的に毒性を示し，血管，神経，基底膜，Sate11ite細胞は侵さないためであろうと思わ

図1

Plasmocidの構造れる．次に損傷を受ける筋肉はその頻度でいえば，横隔膜，心筋，舌筋，四肢筋の順であるという特徴的な分布を示す．この点の説明として，常に動結果く筋肉が傷害を受けやすいこと3），mitochondria

Plasn70Cidを腹腔内投与した場合，心筋，横隔膜，ひらめ筋には高頻度に変化を認めたが，長指の多い筋肉であることと関連付ける立場がある

伸筋には変化を認めなかった．横隔膜，ひらめ筋が4），いずれも決定的なものではない．最後にでは散在性に壌死線経を認め，会食細胞の浸潤もPriceらが電顕像の初期変化として，Ⅰ帯及びZ認めた．Gomori trichrome染色にて浪染する

帯の変化をあげている．この筋原線経の変性過程

Opaque線経を認め，GBHA染色陽性であった．まを解明することを一つの目標として検討を加えた．

た変性した筋線経はNADH染色，CytOChromec
oxidase染色においても膿染した．壊死像は横隔＊東京大学医学部脳研神経内科＊＊国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

膜，ひらめ筋内のtypeI，typeII線経の両者に認められた（図2）．
直接ひらめ筋内に授与した場合，emptySarCO−
−227−

導

図2

A

H E染色

B

M o d ified G om o ri
trich rom e染 色C

N A D H −T R 染 色

D

G B H A 染色

E

C ytoch ro m e c
0 X id a se染 色

Plasmocid腹腔内投与時のひらめ筋の変化．変性した
筋線経はNADH−TR染色，CytOChromecoxidase染
色において濃染する．Opaque線維（矢印）も散在し，
GBHA染色陽性である．

−228−

lemmaltubeと過収縮線経を認め，他の組織化学の構成蛋白であるactin，trOpOmyOSinには早期的方法においても腹腔内投与と同様の染色性を示の減少や崩壊像は認められない．MyosinH鎖，Lした．6時間以降，食食細胞の浸潤を認め，3日
目には最も著明となる．Satellite細胞の増殖も認鎖，trOpOmyOSinはともに徐々に減少し，3日目にはほぼ消失する．しかし，aCtill、55K蛋白は比め，5日目には幼若な再生線維となる（図3）．こ較的良く残存し，3日目にもバンドを認める．この変化は殆ど個体差はなく高い再現性を示し，まれらの筋蛋白は再び急速に出現し，511日にはほた各筋線経はよく同期した変化を示す．

ぼ正常に近い組成を示す（図4，図5）．

2時間後の電鏡像では，Ⅰ帯の断裂像を認める部分もあるが，Z帯の電子密度もやや低下してい考察

る．6時間後にはZ帯はほぼ消失する．Ⅰ帯の変Plasmocid投与により従来より報告されてい化はZ帯に比べて比較的軽い．また，SRの拡大像

た壊死，再生像を観察し得た．腹腔内投与によりは認めるが，mitochondriaに変化はない．

傷害された筋の分布は従来の報告とほぼ一定する

グリセリン処理筋を用いたSDS電気泳動ではが，四肢筋のうちひらめ筋に高頻度に変化を認め

各構造蛋白の変性速度に差があるかどうかを見る

たことは特徴的である．白筋である長持伸筋に変ためにactinをほぼ一定となるように泳動する蛋

化のないことから，赤筋が侵されやすいと考えら

白量を調整した．筋線経の変性に伴い筋原線経のれるが，同一筋肉内ではtypeI線維とともに構成蛋白量は急速に減少するため，泳動したグリ

typeII線経も相当強く傷害を受けており，単純にセリン筋量は3日目まで増加していった．その経

筋線経のtypeで傷害を受けやすいかどうか決定

時的変化を見ると，Z帯の構成蛋白であるα−aC−されるわけではないと思われる．また，mitochon−tininは数時間で著明に減少してバンドを同定でdriaを作用部位と考えるには，電量削こてmito−

きなくなる．660nm Gel scanningにてactinとの相対比を半定量的に測定したが，これにおいてchondriaに形態的変化の乏しいこと，NADH染

もα一aCtininは数時間でactin比0．01以下となり，色，CytOChrome c oxidase染色において濃染することは説明しにくいと思われる．

ピークの同定が不可能となる．これに対してⅠ帯

むしろ，壊死線維とともにopaque線経を高頻

1引ト

3d
図3

5d

Plasmocid 生食溶解液を直接筋肉内に注射した場合の経時的変化．各筋線経がよく同期した変化を示し，3日目には会食細胞のほかmyoblastの増殖を認め，5日
員には幼君な再生筋となる．（ひらめ筋，HE染色）
−229−

図4

グリセリン処理筋を用いたSDS−PAGEによるplas・
mocid生食溶解液注射後のひらめ筋構造蛋白の経時的変化．

myosin HC

度に認めたこと，GBHA染色で陽性線経を認めた
ことはDuchenne型筋ジストロフィー症と類似の組織像を呈し，両者の間に何らかの共通の筋崩壊機序の存在することを示唆している5）．
また筋原線経の崩壊機転を考えると，α−aCti−
ninの早期の消失はZ帯の消失と形態的に一致し，また石浦らによるCa＋Lionophoreを用いたin−
Cubation実験とも一致する結果である6）．石浦らはincubation medium中に遊離するαraCtinin
がEGTAあるいはE−64−Cにて阻害されることを示しており，この早期の変化はあ〝ね巧み＝東和とも共通していると考えられる．
Plasmocidの作用部位を決定することは困難であるが，以上のように組織学的あるいは生化学
的特徴は筋ジストロフィー症あるいはそのモデルとしてのCa＋＋Lionophore処理筋と共通している．このようにplasmocidmyopathyは筋ジスト
ロフィー症の玩∴正和でのモデルと考えられる側面を持っているが，逆にこのような筋線経の崩壊
1

図5

2

3

days

機転が種々の状況で認めうる非特異的なものである可能性を示唆している．

660nm Gel−SCanningによる構造蛋白の経時的変化．Actinとの相対比を半定量的に測定した（1／actin）．／印はactin比0．01以下の
点を示す．
−230一

ま

と

め

3）Bajusz，E．，Jasmin，G．＆

Plasmocidによる骨格筋病変はDuchenne型

Mongeau，A．：

Dissociation by forced muscular exercise of筋ジストロフィー症と類似の病変を示し，壊死，

thecardiotoxicfromthemyotoxicactionsof

再生のモデルとなる．また生化学的にもCa＋＋

plasmocid．Rev．Can．Bio1．，23：1，1964．

ionophore処理筋と一致する結果を得た．これらに共通する筋線経の崩壊機序が示唆された．

4）Balogh，K．，Pragay，D．＆

Hoyt，R．F．：

Myocardialenzymesinplasmocid−pOisoned
rabbits．．A correlative histochemical and文献biochemical

1）Adams，R．D．，Denny−Brown，D．＆Pearson，
C．M．：DiseaseofMuscle．NewYork，PoulB
hoeber，Inc．，1953．

study．Lab．Invest．，16：211，

1967．

5）埜中征哉，杉田秀夫：進行性筋ジストロフィー症の筋病理．神経進歩，24：719，1980．

2）price，H．M．Pearse，D．C．＆Pearson，C．M．：

6）Ishiura，S．，Nonaka，I．＆Sugita，H．：SuppresT

SelectiveactinfilamentandZ−banddegene−

Sion of calcium−induced removal of the Z

rationinduced by plasmocid．Lab．Invest．，

11：549，1962．

￣1inebyathiol−prOteaSeinhibitor，E−64−C．

J．Biochem．，90：283，1981．

−231−50）Streptozotocininduced diabetic myopathy

における筋構造タンパク質の電気泳動学的検索

飯 田 光 男＊
研究協力者

水

野

恵

介＊

祖父江

逸

郎＊

足

立

自告

答＊＊ 満 開 照 典＊＊

糖尿病性筋萎縮症は臨床的には比較的よく知ら

10mMβ−merCaptOethanol液にてホモゲナイズ
し，1，000×g．10分間遠心分維後，沈i査を同液にれた糖尿病の合併症でありながら，その筋崩壊機浮遊させた．同操作を4〜5回繰り返し得られた構は不明な点が多い．

沈法から2mMMg．ATPを含むGuba−Straub

Streptozotocinはラットに特異的に糖尿病発症作用がある事が知られている．そこで我々は糖液にてmyosinを抽出した．

尿病性筋萎縮症における筋崩壊の解析を目的にの一部を変更して行った．Myosinを抽出後，沈法に2mM NaHCO。を加え40Cにて抽出後，遠心

は

じ

め

に

streptozotocinにてラットに糖尿病を作製し，電気泳動法による筋構造タンパク質の分析を行った．

NativetropomyosinはEbashiandEbashil〉法

分離して得た上清に硫安を加えて得た沈i査を2mM NaHCO。にて透析してnative tropomyosinとした．

材料および方法
糖尿病は体重約100g雄ウイスターラットの腹3．Sarcoplasmic reticu］umの調整
Sarcoplasmic reticulumはHarigaya2）の方法

腔内に65mg／kg・体重のstreptozotocinを1回注射して作製した．投与1ヶ月後の筋組織を検索しに従って得た．タンパク質の定量はLowry3）法にた．その時点での血糖値は1000mg／dlであった．

て行った．
4．電気泳動筋病変の確認にはH・E染色を行った．

SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動の方法

1．筋構造タンパク質の調製
後肢筋を9倍量の0．1MKCl＋5mMNaHCO3はWeber−Osborn4）に従った．試料を10mMTri

液にてホモゲナイズ後，1，000×g．20分間遠心分−HCl（pH8．0），8M urea，1％SDS，1％β一推し，沈漆を同液に浮遊させ再度遠心分離した．
同操作を3−4【司繰り返して得た沈i査を筋構造タ

mercaptoethanol，1mMEDTA，10％sucrose
液に入れ800C，20分にて可i容化した．ディスクゲ

ンパク質試料とした．

ル膿度は5．6％，ケリレの長さは15cmであった．泳動

2．Myosin，natjve tropomyosinの調製は1ゲル当り4mAの定電流にて行った．添加し後肢筋を50％glycerol，0．1M NaHCO3，20た試料のタンパク質量は筋構造タンパク質および

mMTris−HCl（pH7．0），1mM EGTA液に入

myosinが30FEg，nativetropomyosinが20JLg，SR

れ−200Cにて保有した．Glycerin筋を20mM

タンパクが25／Jgであった．泳動したゲルはクーマ
ジブルー染色を行った．

Tris−HCl（pH7．0），0．1MNaCl，5mMEDTA，＊名古屋大学医学部第1内科＊＊愛知医科大学第4内科

ー232−

結

果

myosimのheavy chain，バンド4はα−aCtinin

1．病理学的検索と推定したがバンド5は同定出来ていない．

非常に軽度に障害された筋線椎が正常筋線維間に散在してみられた．同時に軽度な結合織の増生，筋核の出現，筋断裂がみられた．
2．泳動結果（2）抽出myosin
Myosinにおける泳動の結果（図3），heavy
Chainの増ii3：，断裂を示す泳動変化が糖尿病ラット筋に確認出来た．Light chainl，2，3には有意な変化はなかった．

（1）筋構造タンパク
図1にみられるように，正常筋組織の泳動にお（3）Troponin，trOpOmyOSin

いては13本のバンドが得られた．推定分子量は18

図4にnative tropomyosinの泳動パターンを万5千から1万5千であった．糖尿病ラット筋の示す．糖尿病ラット筋のtroponin T，I，C成分お泳動パターンは正常と比べバンド1，4，5におよびtropomyosinに有意な変化は認められなか

いて変化がみられた（図2）．即ち推定分子量18万

った．

5千，9万5千，6万8千のバンドであった．バ（4）Sarcoplasmic reticulum

ンド1の増量，断裂とバンド4の減量およびバンド5の消失がみられた．分子量からバンド1は

図5にみられるように，SRタンパクには有意な差異はみられなかった．

図1 筋構造タンパク質の泳動パターン．
左が正常，右が糖尿病筋．

図2

ー233−

図1の拡大図矢印がバンド4，5の変化部位を示す．

図3

抽出myosinの泳動パターン
H．Cはheavy chain，L−1，L−2，L−3はlightchainl，2，3を示す．Heavy chainの変化を矢印にて示す．

考

察

図4

Native tropomyosinの泳動パタpン
TN−T，TN−Ⅰ，TN−Cはtroponinの各成分を示す．
TN−TとTN−Ⅰとの間のバンドはtropomyo−
sinである．

告したように実験的serotonin myopathyにおい

今回の我々が行ったstreptozotocininduced
diabetic myopathyにおける筋構造タンパクの電てはα−aCtininとmyosinのheavy chainの変化が認められている．

気泳動からみた変化は，myOSinのheavy chain

Streptozotocininduceddiabeticmyopathyにの変化，α−aCtininの減少および推定分子量6万8千のバンドの消失であった．

おける筋崩壊の内容はDuchenne dystrophyや
experimentalserotoninmyopathyとは異なって

従来から報告5〉されているように，Duchenne

いる事が推測された．Streptozotocininduced

dystrophyにおける筋構造タンパクの初期変化とdiabetic myopathyの筋崩壊を解析する上で推定してtroponin特にⅠ，C成分の減少とα−aCti−
ninの減少が指摘されている．また前回我々6）が報

分子量6万8千前後のタンパク分子の同定が重要だと思われた．

−234−

文1）Ebashi，S．＆

献

Ebashi，F，：A new protein

COmpOnent participitatingin the superpreT
cipitationofmyosin B．J．Biochem．（Tokyo），
55：604，1964．

2）Takagi，A．：Lipid compositio11（）f sarco−
plasmicreticulumofhumanskeletal muscle・
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3）Lowry，etal：Protein measuremeIlt With

Folinphenol reagent．J．Biol．Chem．，193：
265，1951．

4）Fairbanks，G．，Theodore，L．，Wallach，S．＆
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majorpolypeptidesofthehumanerythrocyte
membrane．Biochemistry，10：2906，1971．

5）Sugita，H．，Ishiura，S．，Suzuki，K，，et al・：Ca−aCtivated neutral protease anditsinhibi−
tors：in vitro effect onintact myofibrils．
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二335，1980．

6）Iida，MリAdachi，K．，Mizuno，K．，etal：Studies

on the structural proteinsin experimental
serotonin myopathy．Current Researchin
MuscularDystrophy，Japan，Tokyo，1981．p．
102．

図5

Sarcoplasmic reticulumの泳動パターン−235−51）EnzymeImmunoassay法による筋ジストロフィー
マウス組織中のNGFレベルの測定
林
＊

書

＊

＊

口

去り

P

＊

け

白い

二
栄 長

＊

司

吉 井

里 大

＊

■

功
偵

＊

茂 野

加 浅

＊

＊

栄司夫

＊

＊

＊

村

昭 孝 裕

藤

日

川

古 伊 井

研究協力者

的

方

著者らはすでに；筋ジストロフィーマウス顎下法

加藤らの方法3）に基づいて，E．coliのβ−gala・
CtOSidaseを標識酵素とするtwo−Site法に従った．

腹中の神経成長促進因子（nervegrowthfactor；
NGF）レベルが正常マウスに比べ，著しく低下していることを報告した1）．また，後脚骨格筋中の抗マウスβ

NGF杭血清の調製：マウス顎下腹NGFレベルも正常マウスの約1／2−1／4に減少しから精製したPNGF（100JLg）を0．5mlの生理食ていることを見出している2）．筋ジストロフィー
マウスははじめて見出されたNGF異常を示す実

塩水に溶解し，等容量のFreund，s Complete
Adjuvandと乳濁させたのち，ウサギ（NewZea＿

験モデル動物であり，NGFの生理機能や，本症とland White）頸部皮下に50〜100ヶ所にわたり注NGFの相関性を検討するための良いモテリレと考射した．約1ヶ月に1度，同じ方法で追加免疫し，18ヶ月後に採血した．

えられる．
NGFは知覚神経，交感神経系の発達，機能維持

抗マウスβNGF抗体IgGの精製：P NGF抗に不可欠な栄養因子と考えられており，特に，交血清1mlをprotein A−Sepharose

感神経系は個体の成熟後もNGFを必要としてい（0・1Mphosphatebuffer，pH7．0で平衡化）に通4Bカラム

る．これらの事実から，交感神経支配を受けていしたのち，同bufferでカラムを洗浄し，結合したる臓器や組織はNGFを産生し，神経末端のNGF

IgGは1％酢酸（0．2MNaClを含む）でカラムか受容体を介してNGF分子を細胞体に送り，神経ら溶出した．抗体IgGは5−10mg／mlに濃縮

支配を維持していると考えられる．この仮説を証し，−800Cで保有した．

明し，さらに，筋ジストロフィーマウスと正常マ
ウスについて，末梢臓器におけるNGF産生を比較するためには従来から用いられているradio−β

NGF抗体Fab−β−garaCtOSidase複合体の調製3）：βNGF抗体IgGlOmg（0．1Macetatebuffer，
pH4．5中）にペプシン0．2mgを加え，370Cで一夜放

immunoassay（RIA）法よりさらに高感度の測定

置する．その後，0．1Mboratebuffer，pH8．0で平法が必要である．この目的のために著者らはβ−衡化したSephadexG−100でのゲル濾過によりF

galactosidaseを標識酵素とするenzymeimmun−
OaSSay（EIA）法を検討した．

（ab ）2fragmentを得た．抗体F（ab，）2fragment
は0．01MFab＊京都大学薬学部生物化学＊＊国立武蔵療養所神経センター＊＊＊京都大学医学部第2内科

2−merCaptOethyl amineで還元し，fragmentとした．Fab

fragment溶液を0．05Macetatebuffer，pH5．0中で飽和したphe−nylenedimaleimide溶液中に滴下し，反応させた．
得られたmaleimide−Fab−236−

2〜3mgを100JLgのβ−galactosidaseと0．05M acetate buffer，pH5．0中で混合した後，buffer A（0．3M NaCl，0．5％ウ−ブに残ったβ−galactosidase活性を測定した．

シ血清アルブミン，0．1％NaN3，1mM MgC12

酵素反応は60分間行い，1．25mlの0．1M glycine−
NaOHbuffer，pH10．3を加えて反応を止めた後，を含む0．1M phosphatebuffer，pH7．0）で平衡化

360nm（Excitation），450nm（Emission）での蛍したSepharose CL−6Bカラムによりゲル濾過
し，活性ピーク部分を集めてFab −β一galactosi−

光強度を測定した．

dase標品とした．

齢）から，種々の臓器，組織を摘出した．．組織は測定試料の調製：ICR系の正常マウス（80日Enzymeimmunoassay（EIA）法：抗マウスβ5％〜20％W／Vでphosphatebufferedsaline中NGF抗体IgGを0．05M Tris−HClbuffer；pH8．5

でホモジナイズし，100，000gで30分間遠心分放しで50〜100Jg／mlに調製し，200／Jlずつ，ポリスチて得た上清をEIAに供した．筋ジストロフィーマ

レンチューブ（栄研2号）に分注した．約30分後，ウス顎下腹も同様の方法で処理し，EIAに供し抗体液を回収し，bufferAで2回，チューブを洗浄た．

した．抗体被覆チューブに150JLlのbufferAと測定試料を加え，ゆっく り振盟させながら40Cで結果と考察

18〜24時間インキュベートした．次に，bufferAでチューブを洗浄し，適当な倍数に希釈したFab−

図1に測定法の原理を示す．抗原をはさむ形で抗体が結合するため，サンドイッチ法またはtwo

β−D−galactosidase複合体（250JLl）を加え，さ■らに18〜24時間振三菱した．チューブをbufferAで−Site法と呼ばれる．

洗浄した後，L基質として60JLMの4−methylum・−β一galactosidase複合体を用いて作製したP

belliferyl−P一galactoside（250JLl）を加え，チュNGFの標準曲線を図2に示す．縦軸にβ−gala−

測定系に異なる量（130，260，640FLunits）のFab，

PRTNCIPLE OF THE TWO一別TEIENZYMEMMUNOABgAY OF NERVE qROWTH FACTOR

1．PoTy8tyren●tUbe cMt●d・Wlth8TlllbodlM tO mOtJ8P nNQF

2．Unknown●8mPI○○r e8日br8110∩●t■n由一d tdd●d8．AnHbody F鵬■ィHト甘抽Mt…−dHO
eomplox8ddod

4．β−D−88IdetOetd830tCthIty boundldも‥dyOd wlth
4−mOthylumbo川lorylf）−D−gAfELCtOJlde aBthoJLlb8tr且le

図1
−237−

定には130JLunits／チューブずつ加えた．2〜3
pg／チューブという感度は従来から用いられてき
たRIAより100倍以上高感度である．
同一のマウスPNGF標準液を用いてEIAとbioassayとを比較した（図3）．Bioassayは，8日ニワトリ胚のdorsal root gangliaをplasma0lClot法で培養し，神経線経の増生度（0，＋1，＋
2，＋3，＋4，＋5と評価）を観察する方法を用いた．横軸は両法の比較のため，測定系に加える前のβNGF濃度を表示した．生物活性は，約60ng／
mlで＋4がみられ，以降，βNGF濃度が3倍ず

月l︵Uq⊃ミS︼雲三︶ pu⊃Oqさてこじ巾US苫芯〇℃ヱa占∴galactosidase量でも同じであったため，以降の測つ低くなるに従い，ほぼ＋1ずつ反応が減少して
おり，従来から報告されているNGFのdose−re−sponseと一致している．この結果から，今回得ら
0．1

1．0

10

1．0

100

pg／亡ube101（Dれた高検出感度は，βNGFの希釈の際のチュー

ng／亡ubeβブへの吸着等の人工的なものではなく，真に微量NGF

NGFの定量が可能となったものと考えられた．
図2

著者らが開発したEIA系がβNGFに特異的であるかどうかを調べるため，マウス血清，マウStandardcurveSOftwo−SiteEIAformouse
βNGFusingthreedifferentconcentrationsofantibodyFab−P・D−galactosidase

ス顎下腹抽出物，マウス7S NGF，マウスβ

com−

plex．

NGFをそれぞれpH4．3系のポリアクリルアミド
ケリレで電気泳動した．2mm厚に細断したゲルか

βNGF antibodyIgG purified from anti−
serumI（describedin
proceduresof FabtheExperimentalら抽出した成分についてEIAを行ったところ，血）wasusedforthepreparation−β−D−galactosidase complex and清中には全くNGF様交叉活性は認めず，マウス

coating of assay tubes．StandardβNGF
to assay tubes coatedwithantibodyIgG

顎下腺抽出物，7S NGFとも，βNGFの移動度と同一の位置に単一ピークとしてNGF様免疫

andgentlyshakedfor24hat40C．Afterthe

交叉活性が見出された．これらの結果は，本EIA

tubes were washed with buffer A（see the系がマウスβNGFに特異的であることを示してsolutions（3pgto53ngperml）wereaddedExperimentalProcedures

amounts of Fab），threedifferent

いる．

−β・D−galactosidase comp−lex，130JJunits（→■−），260FLunits（」コー）and

次に，実際の試料を測定する場合についての検640JJunits（−▲−），Wereaddedtotheassay

討を行った．マウス（ICR系，80日齢）の後肢骨

tubes andincubated ovemight at40Cwith

格筋，脳，心臓，顎下腹を10−20％wet weight／

shaking．The tubes were washed with
β・galactosidase activity

volumでphosphate buffered saline中でホモジ

bountothetubeswasmeasuredbyfluoro・

ナイズし，100，000gで30分間，遠心分維して得た

metrically

上清と，マウス血清についてNGF様免疫交叉活

buffer A andmentalasdescribedin

Procedures

theExperi−．

性を調べたと土ろ，顎下腹中にはオスで2，100±

CtOSidase活性，横軸にPNGF量をとり，それぞ

670ng／mg wet weight（n＝9），メスで52±20れ対数目盛で表わした．Backgroundの2倍の蛍

ng／mg wet weight（n＝9）の交叉活性が見出

光強度を与えるβNGF量を検出限界とすると，されたが，他の3種の組織または血清中には全く

2〜3pg／チューブであり，いずれのFab，−β一

検出されなかった．図4は，血清100ノJlと，骨格

−238−

q

＋
3

＋
2

10

100

pg／ml

1

10

00uOdの凸こ−dO盲○■01m′＋︵Oqコl︑呈uコユ︶

でuコOqと−＞宅￠0OdP●芸10d−dOt凸−q

1

100

ng／ml

Concentration ofβNGF

jn standard soluHons
図3

Correlationshipbetweentwo・SiteEIA andbiologicalaSSay．

Thedifferenceofthesensitivitybetweenconventional
ganglion assay（L一〇一一）and two−Site EIA（＋）was
COmparedinstandardβNGF．
StandardsolutionsofβNGF（3pgto530ngperml）
Were prepared by three times serially dilutions withphosphate buffered saline containing bovine serum
albumin（1mg per ml）．

筋，脳，心臓のホモジネート上清100JJlをβNGFの標準液を含むassay系に加え，これらを加えてこれらの値はこれまで主にRIA法を用いて報告された結果2）・4）・5）より著しく低い．これまでの報告いない標準曲線と比較したものである．その結果，は，測定系の感度が低くしかも特異性が充分に検上述したように，内因性NGFの存在は認められ討されないまま，用いられたためNGF量を過大ないのに加えて，勾配曲線が高濃度側へシフトしに算出したものと思われる．

ており，組織抽出物がassay系に存在するとβNGF量が実際の量より低く算出されることを示ベルが著しく低いことが判明したため，筋ジストしている．しかし，このような妨害因子が存在しロフィーマウスでは，7〜8週齢マウスの顎下腺ても，著者らの開発したEIA系は，これまで報告のみについて，NGFレベルを測定した．結果を表されていたRIA系よりはるかに高感度である．各
組織抽出物および血清存在下でのβNGFの検出

1に示す．今回，著者らが開発した高感度EIA系
による結果はこれまでに報告した結果1）とよく一限界は，図4より，心臓で2．7pg，脳で8．1pg，骨格致しており，オス，メスとも発症群は正常群に比筋で8．1pg，血清では24pg／assay tubeであった．

べ，有意に低値を示した．

従ってこれらの組織中βNGF量は0．2pg（心臓），Harperら6）はマウスの心臓および副腎の組織片を神経節と並置培養すると，神経節の，臓器片

0．4pg（脳），0．4pg（骨格筋）／mg wet weight以下であり，また，血清では240pg／ml以下である．

上述したごとく，正常マウス組織中のNGFレに近い側から神経線椎の伸長が認められることか−239−

︵Oq三︑芸uココ︶▲PUコOq主三〇一〇冨P−313一■？占1q

βNGF
図4

Doseresponsecurvebytwo−SiteEIAofstandardβNGFl（＋）
and the curve ofstandardβNGF added with supematants oftheheart（・・○‥），brain（−TA−−），Skeletalmuscle（−Tロr−）homogenatesand serum（−∇−）of mouse．The supematantS Of the tissue
homogenates and serum were prepared as describedin theExperimental

Procedures．

表1Level of NGF−1ikeimmunoreactivity（NGF・LI）in the submaxillary glands ofdystrophicmice（C57BL／6J）．

NGF産生能の比較を試みたいと考えている．
文

genOtype

HGF−
L I （vg／叩

rOte h）dy／◆．◆／◆

5．
9 士 2．2 （n 1 9 ）

dy／dy

0．
24 士0 ．
29 （ n t 5 ）genotype

NGF−LI （ng／
咽 prQteln ）dy／◆．＋／◆

0．47 士 0 ．
25 （n I 9 ）S†
gnlflcance

献1）Furukawa，S．，Nishitani，H．＆Hayashi，K．：
Biochem．Biophys．Res．Commun．，76：1202，

P く0 ．
01

1977．
2）Furukawa，SリOhi，T．，Imura，H．＆Hayashi，dy／dy

SlgnlflcancE

K．：Biochem．Biophys．Res．Commun．，90：
130，1979．

P く 0．05 ￣
0．16 士 0 ．
08 （れ ・ 6 ）3）Kato，K．，Fukui，H．，Hamaguchi，Y．＆Ishikawa，E．：J．lmmuno1．，116：1554，1976．
4）Johnson，D．G．，Gordon，P．＆Kopin，I．J．：J．

ら，これらの臓器は乃

びわrPの系では，NGFを産生すると報告している．著者らは，乃

びわrP系

でのNGFの産生をEIA系を用いて確認した後，筋ジストロフィーマウスと正常マウスについて−240−

Neurochem．，18：2355，1971．
5）Hendry，Ⅰ．A．：Biochem．J．，128：1265，1972．

6）Harper，G．P．，Pearce，F．L．＆Vernon，C．A．：
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Distal Myopathy
外国における文献（1902−1981．12）
日本における症例報告，その他（1951−1981．12）

（編者）豊 倉 康 夫（東京大学神経内科）
三 好 和 夫（沖中記念成人病研究所）
本研究班の研究テーマの一つとしてdistalmyopathyがとりあげられ，従来のこの方面における文献を集めて問題点を整理することが計画された．その予報的なreview
が1982年1月24日筋ジス総合班会議において豊倉によってなされた．ここに，参考資料としてdistalmyopathyに関する内外の主要文献をリストしておくことにした．

Distal Myopathy
外国における文献（発表年代順）（1902−1981．12）

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2）Dejerine，J．，Andre−Thomas：Un casdemyopathie畠topographietypeAran・Duchenne
Suividautopsie．Rev．Neurol．（Paris），12：1187−1190，1904．

3）Spiller，W．G．：Myopathy ofthe distaltype andits relation to the neuralformOf
muscularatrophy（Charcot−Marie−Toothtype）．J．Nerv．Ment．Dis．，34：14−30，1907．
4）Batten，F．E．：Distaltypeofmyopathy．Proc．R．Soc．Med．，3：92，1909−1910．
5）Batten，F・E．：Distaltypeofmyopathyinseveralmembersoffamily．Ibid．，p．93．
6）Cockayne，E．A．：Distalmyopathy．Proc．R．Soc．Med．，6：184−185，1912−1913．
7）Rimbaud，L．，Giraud，G．：Myopathiefamilialedutypeperonieroudistal．Rev．Neurol．
（Paris），28：1004，1921．
8）Curschmann，H．：Dystrophiamyotonicasinemyotonia．Dtsch．Z．Nervenl1eilkd．，74：
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9）Naville，F・，Christin，E．，Frommel，E．：Lesmyopathiesdistalestardives．Encgphale，
18：182−195，1923．

10）VanBogaert，L．：Myopathietardivedetypedistal．Zentralbl．Neurol．Psychiatr．，26：414−418，1926．．

11）VanBogaert，L．：Myopathienonfamilialepostinfectieuseoutypedistal．Rev．Neurol．
（PariS），33：1275，1926．

12）Krabbe，K・H・：Lateformsoffamilialprogressivemyopathy．J．NeuroLPsychopatho1．，
10：289−294，1930．
13）Barnes，S・‥Amyopathicfamily，Withhypertrophic，pSeudohypertrophic，atrOphicand

terminal（distalin upper extremities）stages．Brain，55：1−46，1932．
14）Worster−Drought，C．：Unusualformoffamilialmyopathyinamotherandtwochildren．
Proc．R．Soc．Med．，25：1540−1542，1932．
15）Ley，J・，Titeca，J．：Etudephysiopathologiquededeuxcasfamiliauxdemyopathiedistaletardive．J．Belg．Neurol．Psychiatr．，33：231−252，1933．
16）Ley，J・，Titeca，J．：Deuxcasfamiliauxdemyopathiedistaletardive．Scalpel，86：
595，1933．

17）Milhorat，A．T．，Wolff，H．G．：Studiesindiseasesofmuscle．XIII．Progressivemuscular
dystrophyofatrophicdistaltype；repOrtOnafami1y；repOrtOfautopsy．Arch．Neurol．
Psychiatry，49：655−664，1943．

一243−18）welander，L∴Myopathiadistalistardahereditaria．ActaMed．Scandリ141〔Suppl．

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19）walton，J．N．，Nattrass，F．J．：Ontheclassification，naturalhistoryandtreatmentof
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20）Biemond，A．：Myopathiadistalisjuvenilishereditaria．ActaPsychiatr．Neurol．Scand．，
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21）welander，L．：Homozygousappearanceofdistalmyopathy．ActaGenet．，7：321−325，
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24）Moya，G．：Ausujetdedeuxcasdemyopathiedistaletardive．Rev．Neurol．（Paris），
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25）Barrows，H．S．，Duemler，L．P．：Latedistalmyopathy．Reportofacase．Neurology（Minneap．），12：547−550，1962．
26）Ciani，N．，Gherardi，D．：Duo casidimyopathia distalisjuvenilis hereditaria・Riv・
Neuro1．，33：731−741，1963．
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ー246−

Distal Myopathy
日本における症例報告，その他（発表年代順）（1951−1981．12）

1）岡本重一：進行性筋デストロフィー症の末梢型に就いて．脳と神経，3（3）：157−159，1951．
2）里吉骨二郎，古和久幸，青木いく子，小松文子，佐伯誠也，木下真男，村上慶郎，阿部ケイ子，鳥居順三，樋川英子：Myopathia distalis tarda hereditariaにprogressive total
ophthalmoplegiaを合併した2症例（会）．臨床神経，2：285−286，1962．
3）室根郁男，佐藤 猛，即日健一，山田克浩，神林敬一郎：Distalmyopathy．Non−hereditary
distalmyopathyの1例．臨床神経，3：387−393，1963．
4）奥村二吉，寺尾 章，松田 清，池田久男：姉妹に現われた末梢型筋ジストロフィー症．脳と神経，15：948−954，1963．
5）里吉営二郎，古和久幸，村上慶郎，鳥居順三，篠崎有三，松田 実，桜井可知子：Ocularmyopathyにmyopathia distalis tardaの合併した2症例．脳と神経，15：1044−1050，
1963．

6）黒岩義五郎，宮崎 募，武谷 溶，鵜沢春生：興味ある筋萎縮症の2例．Ⅰ脊髄性進行性筋萎縮症の片麻痺型，ⅠⅠ末梢型を示した進行性筋ジストロフィー症．脳と神経，15：1131−1136，1963．

7）三好和夫，西条一夫，粟生陽次郎，多田嘉明，大塚義剛，大島康男，中野益広，川井尚臣，
三宅正夫，岡沢敏夫，小浜貴良，国重昭郎：Distal myopathyと考えられる2家系4症例（会）．人道誌，12：113，1967．
8）平山牧彦，綱島康博，清水 亨：Distal typeを示した進行性筋異栄養症の1例（会）．臨床
神経，8：64，1968．
9）江幡広太郎，後藤文男，北村 昭，佐島敬清，厚東篤生：Distal myopathyの2症例（会）．臨床神経，9：355，1969．
10）土屋雅之，内田健三，大西晃生：Distal myopathyと思われる1例（会）．臨床神経，9：481，1969．

11）佐々木清博，森 浩郎，高橋和郎，中村晴臣：Distalmyopathy．4症例の検討．臨床神経，9：627−637，1969．

12）三好正堂，三田曹司，大田典也，荒木淑郎：筋線経に著明な空胞変性および棒状体（rod−likebody）をみとめた弧発性distalmyopathyの1例．臨床神経，10：111−120，1970．
13）村井由之，三吉野産治：Distalmyopathyの1例（会）．臨床神経，10：373，1970．
14）里青首二郎，木下真男，鈴木薙人，中島利子：Oculo・pharyngo−distalmyopathyの1剖検
例．臨床神経，11：380−385，1971．
15）森 一毅，辻畑光宏，倉重洋二郎，森 正孝，石井伸子，渋谷統寿：Distal myopathyとdegeneratiopigmentosaretinaeを認めた1家系（会）．臨床神経，12：254−255，1972．
16）小田桐恵美，鬼頭昭三，久保島和子，山本みゆき，小坂樹徳：特異なdistalmyopathyの1−247−

例（会）．臨床神経，13：407，1973．
17）後藤幾生，早川 享，三好 甫，飯野耕三，楠 亮二：Cardiopathyを伴ったoculopharyngo−
distalmyopathyの1例．臨床神経，13：529−536，1973．
18）出田 透，鹿井禎二，内野 誠，岡嶋 透，赤塚 護：Distalmyopathy．2家系4症例の検討．臨床神経，13：579−586，1973．
19）畑中良夫，中田俊士，伊藤友昭，大原俊樹，植田啓嗣：末梢性筋萎縮症の13例（会）．臨床
神経，14：699，1974．
20）山口恭平，島田信男，結城武彦，堀井良佑：Distalmyopathyの1例（会）．臨床神経，14：
699，1974．

21）三好和夫，多田義明，岩朝 勝，川井尚臣，中野益弘：Distalmyopathyの遺伝・臨床型・
自験7家系14症例とわが国文献例についての成績（会）．臨床神経，14：963，1974．
22）村上俊一：両下肢遠位部に限局したミオバナーの1例．内科，36：513−516，1975．
23）川崎研一，木下真男，里青首二郎，中里 厚：Oculo・pharyngo・distal myopathyの1例（会）．臨床神経，15：382−383，1975．
24）沼尾嘉時，富田崇敏，目黒雅俊，高宮将子，渡辺晴雄：Distalmyopathyの1症例（会）．
臨床神経，15：383，1975．
25）三好和夫，川井尚臣，多田嘉明，日浅光春，八木田正聖，岩朝 勝，住友辰次，小阪昌明，
佐々木尚子，宮本 弘，米沢正文，勝瀬 烈，大音康郎，H下香苗，小松光一，原田武彦：進行性筋ジストロフィー症の臨床，遺伝ならびに生化学的研究．1．わが国に特異な常染色体
劣性の末梢性ミオバナー（autosomalrecessivedistalmyopathy）．厚生省「進行性筋ジストロフィー症の成因と治療に関する研究」班昭和49年度研究報告書，1975・pp・63￣64・26）Miyoshi，K．，Tada，Y．，Iwasa，M．，Kawai，H．，Sumitomo，T・，Kosaka，M・，Sasaki，N・，
Miyamoto，H．，Hiasa，M・：Autosomalrecessivedistalmyopathyobservedcharacter−isticallyinJapan．Jpn．J．Hum．Genet・，20：62−63，1975・
27）三田哲司，田平 武，上原美津子，田村 潔：筋ジストロフィー症：非定型例．神経内科，
3：221−227，1975．

28）森松光紀，平井俊策，江藤文夫，吉川政己，朝長正徳：Oculo−pharyngo−distal myopathyの1家系．臨床神経，16：434−442，1976．
29）Goto，Ⅰ．，Kanazawa，Y．，Kobayashi，T．，Murai，Y・，Kuroiwa，Y・：Oculopharyngeal

myopathywithdistalandcardiomyopathy．J．Neurol・Neurosurg・Psychiatry，40：600−607，1977．

30）三好和夫，岩朝 勝，Jll井尚臣，佐々木尚子，日下香百，八木田正聖，日浅光春，多田義明：常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症．わが国にとくにみられる新しい末梢型筋ジストロ
フィー症．日本臨林，35：3922−3928，1977．
31）三好和夫：内科学の展望（第4回），筋疾患を中心として．（5）筋ジストロフィー症の遺伝・
臨床型．日内会誌，66：769−775，1977．
32）Satoyoshi，E．，Kinoshita，M．：Oculopharyngodistalmyopathy・Reportoffourfamilies・Arch．Neuro1．，34：89−92，1977．
33）一渡辺常之，宮城 隆，宗行 彪，石橋浩明，吉田忠義：Distalmyopathyの1症例（会）．
臨床神経，17：244，1977．
34）内野 誠，山村善教，川崎渉一郎，植川和利，徳臣晴比古：筋線経に著明な空胞変性とミュー248−

リン様構造物（myelinfigure）の増加を認めたoculo・pharyngo・distaltype myopathyの1例．臨床神経，19：602−608，1979．

、35）岩朝 勝：常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症の遺伝・臨床の特徴．四国医誌，36：525−542，1980．

36）Fukuhara，N．，Kumamoto，T．，Tsubaki，T．：Rimmed vacuoles．Acta Neuropathol．
（Berl．），51：229−235，1980．

37）水沢英洋，中野今治，井上聖啓，高木昭夫，萬年 徹，豊倉康夫：筋線経に高度の空胞変性を伴ったdistalmyopathyの一病型．神経内科，12：40−47，1980．
38）目黒雅俊，富田崇敏，原田健司，林 泰，渡辺晴雄：Distalmyopathyの1例．東女医大誌，50：286−289，1980．
39）高橋桂一，後藤和子，陣内研三，春藤文子，小嶺幸弘，藤田拓男：Distalmyopathyの二家系．厚生省「筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究」昭和54年度研究報告書，
1980，pp．76−80．

40）古川哲雄：Gowers型distalmyopathyの再評価（会）．厚生省「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究」昭和56年度班会議，1981．
41）Nonaka，Ⅰ．，Sunohara，N．，Ishiura，SリSatoyoshi，E．：Familialdistalmyopathywith

rimmedvacuoleandlamellar（myeloid）bodyformation．J．Neurol．Sci．，51：141−155，
1981．

42）中西孝雄，葛原茂樹：遠位型ミオバナーの5例．筋萎縮の分布とその筋病変について（会）．
厚生省「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究」昭和56年度班会議，1981．
43）福原信義，熊本俊秀，椿 忠雄：Oculopharyngealmusculardystrophyとdistalmyopathy
を結ぶもの（会）．厚生省「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究」昭和56年
度班会議，1981．
44）三好和夫，岩朝 勝，川井尚臣：常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症．Medico，12：4888−4889，1981．

45）日下香苗，岩朝 勝，川井尚臣，西野 洋，末広 正，三好和夫：常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症の筋組織学的所見（会）．第22回日本神経学会総会，1981年5月，熊本．
46）Miyoshi，K．，Iwasa，M．，Kawai，H．，Kusaka，K．，Nishino，H．：Genetico−Clinicalfeatures
Ofautosomalrecessivedistalmusculardystrophy．12thWorldCongressofNeurology，September，1981，Kyoto，Japan（Abstract）．

−249−

昭和56年度研究班名簿

昭和56年度 三好珪 名簿
区
：
旺

分

氏
長

三

名
好

和

夫

所
所

属

施

設

在

名
地

虎の 門 病 院 沖 中記 念成 人病 研究 所

所属 にお
け る地 位連 絡 の際 の 電 話

所

長

03− 583− 68 71

教

授092− 641− 115 1

教

授

03− 815−54 11

助 教 授

03−8 13−3 111

教

授

06−4 51−0051

教授09858− 5− 15 10

助 教 授

03−8 15−5411

副 院 長

0423− 23−5111

教授03−8 13−6111

教授03−4 68− 1251

室

長0423−4 1− 2711

助 教 授

0958−47− 2111

教

授0762−6 2− 8151

宣

長0423−4 1− 2711

教授0298−5 3− 3500

教

授0726−8 3− 1221

副 院 長

09425− 2− 2195

教授0252−23− 6161

教

授075−75 1− 3111

〒 105 東京 都 港 区赤 坂 虎 の 門 2−
2−2
幹

事

黒

岩

義五郎

九州 大 学 医学 部 脳 神経 病 研 究施 設神 経 内科

豊

倉

康

東 京 大 学 医学 部 脳 研究 施 設神 経 内科

〒 812 福 岡市 来 区 馬 出 3−1−1
夫〒 113 東京 都 文 京 区本郷 7−3−1
佐藤猛

順 天 堂 大 学医 学 部脳 神 経 内科
〒 113 東京 都文 京 区本郷 2−1−1

垂

井

清 一郎

大 阪 大 学 医学 部 第 二 内科

荒

木

淑

宮 崎 医科 大学 第 三 内科

〒 553 大 阪 市福 島 区福 島 1−1−50
郎〒8 89−16 宮崎 県 宮崎 郡 清武 町 木 原 5200
運 営 幹 事

杉

田

秀

夫

東 京 大学 医学 部 脳研 究 施 設神 経 内科
〒 113 東 京 都文 京 区 本郷 7−3−1

監

事

字尾野

公

義

東 京都 立神 経 病 院神 経 内 科〒 182 東 京 都府 中市 武 蔵 台 2−
6−2

班

員

塚

越

木

下

贋

東 京 医科 歯 科 大学 医学 部 神経 内 科男

東 邦 大学 医学 部 第 四内 科

〒 113 東 京 都文 京 区 湯 島 1−5−45
真〒 153 東 京 都 目黒 区 大橋 2−17−
6
埜

中

征

哉

国 立 武蔵 療 養 所神 経 セ ンター 疾 病研 究 第 一部
〒 187 東 京都 小 平 市 小 川東 町 2620

高

守

正

治

長 崎大 学 医 学 部 第一 内 科〒852 長 崎 市坂 本 町 7 −1
現 ：金 沢 大 学 医学 部 神 経 内科
〒920 金 沢 市 宝町 13−1

高

木

昭

夫

置 立武 蔵 療 養所 神 経 セ ンター 疾 病研 究 第 一部
〒 187 東 京都 小 平 市 小 川東 町 2620

中

西

孝

雄

筑 波大 学 臨 床 医学 系 神 経 内科
〒305 茨 城 県新 治 郡 桜村 天 王 台 1−1−1

茂

在

敬

司

大 阪 医科 大 学 第一 内 科

馬

渡

志

郎

国 立赤 坂 療 養所 神 経 内科〒569 高 槻 市大 学 町 2−7〒833 福 岡 県筑 後 市 大字 蔵 数 515
吉武正

新 潟大 学 脳 研 究所 神 経 内科
〒951 新 潟市 旭 町 通 一番 町 754

井

村

裕

夫

京都 大 学 医 学部 内科 第 二講 座
〒606 京 都市 左 京 区聖 護 院 川 原町 54

−253−

区

班

分

氏

員

川

名
井

尚

臣

所

属

所

施

設

在

名

所属にお

地

け る地 位

徳 島大 学 医 学部 第一 内 科

連結 の 際 の電 話

講師

0886− 31− 31 11

教

授0859− 33− 1111

教授

0899−24− 7111

助 教 授

075−75 1−−
2111

部

長

0423−25− 3881

助 教 授

03−8 13− 6111

講師

052−741− 2111

研 究 員

0423−41− 2711

助 教 授

0992− 64− 22 11部

長

03 −583− 68 71

助 教 授

045 −971− 115 1

助 教 授

0263− 35−4600

部

長

075 −461−5 121

助 教 授

0992− 64−22 11〒770 徳 島 市蔵 本 町 3−18−15
中

村

晴

臣

鳥取 大 学 医 学部 脳 幹 性疾 患 研 究施 設
神経病理部門〒683 米 子市 西 町86 番地

植

田

啓

嗣

愛媛 大 学 保健 管 理 セ ンター

林

恭

三

京都 大 学 薬学 部 生 物 化学

近藤

喜代太郎

〒790 松 山市 道 後 樋 又 10−13〒606 京都 市 左 京 区吉 田下 阿達 町
東 京 都 神 経科 学 総 合研 究所 疫 学研 究 室〒 182 東京 都 府 中 市武 蔵 台 2−6
古

川

哲

雄

東 京 医 科 歯科 大 学 医学 部 神 経 内科
〒 113 東京 都 文 京 区湯 島 1−
5−45

飯

田

光

男

名 古 屋 大 学医 学 部 第一 内科

吉

田

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子

国立 武 蔵療 養 所 神 経 セ ン ター疾 病 研 究 第四 部光弘

鹿 児島 大学 医 学 部 第三 内科〒 466 名 古 屋 市 昭 和 区鶴 舞 町 65

〒 187 東京 都 小平 市 小 川 東町 2620
納〒 890 鹿 児 島市宇 宿 的 1208−1
田辺等

虎 の 門病 院神 経 内科
〒 107 東 京 都 港 区赤 坂 虎 の 門 2−2−
2

若

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喜 三夫

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昭 和 大学 藤 が 丘 病院 神 経 内 科〒 227 横 浜 市 緑 区藤 が 丘 1−30
信 州 大学 医 学 部 第三 内科〒 390 松 本 市 旭 3−ト 1
国 立療 養 所 宇 多野病 院 臨 床研 究 部〒 616 京 都 市 右京 区 鳴 滝 音戸 山町 8

古

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鹿 児 島大 学 医 学 部衛 生 学〒8 90 鹿 児島 市宇 宿 町 1208−1

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徳 島 大学 医 学 部 附属 酵 素 研 究施 設

講師

0886−3二卜3 111

助

手0252−23−
6 161

助 教 授

09858− 5− 15 10

講師

0263− 35−4600

講師

0 11− 711− 1161

酵 素 化学 部 門〒 770 徳 島 市 蔵本 町 3−18 −
15
福

原

信

義

新 潟 大学 脳 研 究 所神 経 内 科

栗

原

照

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宮 崎 医科 大 学 第 三 内科

〒95 1 新 潟 市 旭町 通 一 番町 754〒889−16 宮 崎 県宮 崎 郡 清武 町 木 原 5200
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信 州 大学 医 学 部 第三 内 科〒390 松 本 市 旭 3−1−1

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北 海道 大 学 医 学 吾郎還神 経 外科
〒060 札 幌 市 北区 北 14 条西 5 丁 目

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自治 医 科 大学 神 経 内 科

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所属にお
け る地 位連 絡 の際 の 電 話

助 教 授

02854− 4−2 111

講師

0534− 35−2261

助 教 授

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教授0963−4 4−2111

助 教 授

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理

03−203− 1211

〒329−
04 栃 木 県河 内郡 南 河 内 町 大 字
薬 師寺 3311−1
西

村

嘉

郎

浜 松 医科 大 学 第 一 内科
〒 431−
31 浜 松 市半 田町 3600

後

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九 州 大学 医 学 部 脳神 経 病 研 究施 設 神 経 内科
〒 812 福 岡 市 東 区 馬出 3 −1−1

出

田

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瀬

透

熊 本 大学 保 健 管理 セ ン ター夫

東 北 大学 医 学部 脳 疾 患 研 究施 設 脳 神経 内科〒 860 熊 本 市 黒髪 2−40−1
貞〒980 仙 台市 星 陵 町 ト 1
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