厚生

省

神経疾患研究委託費

筋ジストロフィー症モデル動物の開発に関する研究

野

村班

昭和．61年度研究報告書

昭和 62 年 3 月

研究報告書作成にあたり
この報告書は、昭和60年度より発足した厚生省神経疾患研究委託費による「崩ジストロフィー症モデル動物の開発」に関する研究の2年目の報告書であります。
モデル動物の開発には異常形質の発見、特性の分析、遺伝的背景の均一化など」橡めて長い年月を要するものであります。また、飼育・維持方法によっては疾病感染により実験に供することができなくなるなどの問題点もあり、モデル動物の飼育・管理の方法も併せて開発する必要があります。従って、この研究班では、筋ジストロフィー症モデル動物の生産・供給、新しい崩ジストロフィー症モデル動物の開発・改良、筋ジストロフィー症動物の飼育管理方法の検討等の研究を継続すると共に、新しい技術、例えば発生工学の手法をもちいてのモデル動物の開発丁改良に「層の重点をおいて研究が行われました。 昭和
61年度の研究成果をここにまとめました。
私共は、今後とも、崩ジストロフィー症研究の進展のため、より良いモデル動物の開発・改良を目指すとともに、大量の実験動物を供給できるよう努力いたす所存でありますので、諸班の先生方の御協力をお節い申しあげます。

おわりに、御協力下さった丑員各位、ならびに本研究費の取り扱いに種々お世話頂いた
厚生省当局、国立精神評経センター神経研究所、日本筋ジストロフィー協会の万々に心から感謝いたします。

昭和62年3月

野

村

達

次

目

次

筋ジストロフィー症に関する文献調査（1985）

1

野

村

達

次

筋ジストロフィー（mdx，dy）マウス骨格筋における血管変化

7

埜

研究協力者

中

征

禹

哉
満

横

山

峯

介

江

崎

孝三郎

キメラマウス（C57BL/10−mdx←→C3H/He）による筋ジストロフィー

症の研究

15

研究協力者

勝

木

元

也

横

山

峯

介

日下部 守 昭体外受精による筋ジストロフィー（C57BL／6−dy）マウス受精卵の作出と

凍結保存

25

研究協力者

横

山

峯

介

小

島

博

子

ミエリンwolfgramタンパクのcDNAクローニング

31

高

松

研

Shaking rat Kawasake（SRK）の臨床・神経病理学的研究

研究協力者

39

埜

中

征

哉

江

崎

孝三郎

相

川

久

志

津

金

隆

夫

49

GAD（gracile axonal dystrophy）マウスの遺伝育種学的研究

研究協力者

富

田

武

山

崎

若

杉

菊

池

建

機

向

山

昌

邦

安

藤

一

也

一

斗
昇

軸索ジストロフィーのモデル動物としてのGAD（gracile axonal
59

dystrophy）

研究協力者

菊

池

建

機

向

山

昌

邦

山

崎

一

斗

富

田

武

糖原病Ⅱ型系（RWE系）と正常系（AWE系）との交配からのF1に出現
65した翼の挙上不能個体

研究協力者

水

谷

布

谷

誠

鉄

夫

75

(財)実中研における最近の筋ジストロフィー症モデル動物の維持と繁殖状況

研究協力者

斉

藤

田

中

日

置

宗

雄
亨

恭

司

昭和61年度厚生省研究報告乱1−6，1987

筋ジストロフィー症に関する文献調査（1986）
野 村 達 次＊筋ジストロフィー症モデル動物の開発研究の関する動物実鹸」についての文献調査をおこな「環として「疾患モデル動物」、「哺乳類、トった。それらの中から、海外における筋ジスト

リ頬における助ジストロフィーとその近縁疾患」

ロフィーに関する文献（1986年分）を以下にならびに「筋ジストロフィーとその近縁疾患に紹介する。

CHICKENS

Cauvenbergs，P・，Butler，J・and Cosmos，E・：Ⅰntraspecific
Chick／chick chimaeras：Dystrophic nesoderm亡ranspiantedt0．a
normalhos亡formsmuscleswithadystrophic phenotype・Nerosci．
let・，68（2），149−154，1986．

Narayana，P・A・：Delyre，J・L・andMisra，L・Ⅹ・‥Invivo31PNn
S亡udies of avlandystrophicmuscles・Magn・Reson・Med．，3（4），549−553，1986．

McLean，B・，Mazen−Lynch，L・and Sho亡亡On，D・M・：Quan亡itative

freeze−fracture studies ofmembrane changesinchickenmuscular
dystrophy・Muscle Nerve，9（6），501−514，1986．

Demichele，S・J・，Atallah，M・T・，SweenyP・R・andBrovn■．R・G．：

Connective tissuemetabolisninmusculardystrophy・earlyaminoacid changesincollagentypesisolated frotnthegastrocnetnius
TnuSCleofdevelopingdystrophic chickenembryos・Comp・Biochem．
Physiol・（B），84（2），225−233，1986．

Howlett，S・E・，Triggie，C・R・and Hoeknan∫ T．B．：EffectS Of
noradrenaline，SerOtOnin，and seiected an亡agonistS On the
VaSCular smoo亡hmuscle ofnomaland dys亡rophic chickens．can．

J・physiol・Pharmaco1．，64（5），545−549，1986．
Hudecki，M・S・，Kibler，P・K・，et al・：Al）nOrmalexpressionof亡he

Calmodulingeneinmuscle fronthe dystrophic chicken．Biochetn．

Blophys・Res・Comun．，137（1），507−512，1986．
Allen，E・R・andMay，J・F・：AdelayintheappearanCeOftnydsin

i；86号yStrophic chicken embryos・Anat・AnZ・，161（3），239−242，●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●■●●●●●●●●●●■●●●●

・（財）実験動物中央研究所

ー1−

Hitkowski，Part 2．

J．A．：

Tissue culture s亡udies on nuscle disorders：

Biochemicai studies，nerVe−muSCle culture，metabolic

myopathies，
1986．

and animal models・Muscle Nerve，9（4），283−298，

Zezza，I）・J・and Heywood，S．M．：Analysis of tcRNAlO2associatedWith myosin heavy chain−nNPSin control and dys亡rJ）Phic chickrectOraiis muscle・J・Biol．Chem．，261（16），7461−7465，1986．

Zezza，D．J．and Heyvood，S．M．：Thelocalization of a tcRNAlO2
Gene

near

the310H

terminus

of

a

fast

nyosin

heavy

chain

gene●

A comparison betveen normal and dystrophic chickens．J．Biol．
Chem．，261（16），7455−7460，1986．

Hollands・K・G・J

Grunder∫

A・A・andGavora∫J・S・；Divergent＝Seiec亡ion forincidence of degenera亡ive nyopa亡hy of the musculus
SupraCOraCOideus of mea仁一亡ype chickens．

Poui亡．Sci．，65（3），417−425，1986．
Kawamoto，

R．M．and Baskin，R．J．：工solation and characteriza亡ion

Of sarcoplasmic reticulum fron nornai and dys仁rophic chicken−

Huscle Nerve，9（3），248−256，1986．
Murphy，M・E・and KehrerJJ・P・：Activities of antioxidant enZymeS
in muscie，liver andlung of chickens withinherited muscular
dystropy・ Biochem．Biophys．Res．Commun．，134（2），550−556，
1986．
Repasky，E．A．，Pollina，C．M．，et ai．：Increased concentration of
SPeCtrin is observedin avian dystrophic muscle．
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Leskava，

K・C・，Ervin事

R・E・and

Hogan∫

Proc．Natl．

E・L・：Phosphoiipid

biosynthesis during normal and dystrophic avian muscie ce11
differentia亡ionin cui亡ure．Life Sci．，38（2），147」153，1986．

Perry，G・∫WibleJ L・and Brinkley∫

B・R・：Microtubules are notaltered in the dys亡rophic chicken．
266−272，1986．

Exp．Ce11Res．，163（1），

IIICE
Fink，R．H．，

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−

2

−

MandaJ

P・and

Kakulas，B・A・‥Theeffectofthemyotoxicagent

iodoaceta亡e ondys仁rophicmice129／Re・J・Neurol・Sci．，75（1），23−32，1986．

Semple，・J・W・and Szewczuk，M・R・：Na亡uralkiller cellsintnurine
muscular dystrophy・

工Ⅴ・

Characteriza亡ion of percoll

fractiona亡edsplenicandthymicnaturalkillercelisandnaturai

慧：話芸岩Ⅴ；1（誤認；9，；；諾：tS・Clin・血unol・
Setnpie，J・W・andSzevczuk，M・R・：Naturalkiilercellactivityin
murine muscular dystrophy・ⅠⅠⅠ・NK−SenSitivemyoblastcells

霊。n黒；吉。昔，；C；吉：三円；8‡：ige／dystrophichybridmice・CellFong，C・N・，AtVOOd，H・L・and Charlton■

H・P．：工n亡racellular

SOdium−aCtivitya亡restandaftertetanics亡imulationinmuscles

冨…。r：；：a；3（；；？，詰三話芸？hf；86fdy2J′dy2J）C57BL／6Jmice・Exp・
Cossu・G・，Adamo，S・Jetal・：Altereddistributionofprotein
kinasecin

dys亡rophic

musclecells

anditsmodulationby

さ慧三Ty鍔；；e；，2＿豊誓豊lds・Biochem・Biophys・Res・
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elec亡rical activityinmusclesofdystrophic（dy／dy）tnice．J．
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On亡ell，M・：血scular dys亡rophyandtnuscle regeneration．Hutn．
Pathol・，17（7），673−682，1986．

Johnson，M・工・and Ova11e，W・K・‥Acomparativestudyofnuscle
SPindlesin

slov

and

fast

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Butcher，L・A・and Tomkins，J・K・：Protein profiles of
SarCOplastnic re亡iculumfromnormalanddys亡rophic・mOuSemuscle．

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Bridges，L・R・：The associa亡ionofcardiacmuscienecrosisandinflammation vith the degenerativeandpersistentmyopathyof
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−

3

−

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InfanteJ J・P・：

Defective symthesis of poiyunsaturated

Phosphatidylcholines as the primary lesion in duchenne andmurinedy

musculardys亡rophies．

＿Med．Hypotheses，19（2），OresaJ0，e亡

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Enrichtnent ofdys亡rophy−aSSOCiated antigen from erythrocyte membranes of mice
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Kang，

E・S・，

Capaci，M．

T．，

e亡

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Eusebi∫

F・J

Cossu∫

G・タ

et

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Liposome−delivered

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motOr

nuCieus■of・nOrmal

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MSTERSl）avis，E

C・and ShiversI R・R・：Freeze−frac亡ure analysis of

in亡ramembrane
dystrophic

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Sigurdsonタ

L・＞

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−

4

−

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Of

cold

acclimationin

記；霊でチC2詣；笥：2誓㌫三；；4，雪謡art necrosis・血・J・
OTHERS

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Witkowski，J・A・‥

Part

2・

Tissuecui亡urestudiesofmuscledisorders：

Biochenicalstudies∫nerVe−muSCle culture，tnetabolic

謁；冨：thies，and aninal nodels・MuscieNerve，9（4），283−298，
Roneus，B・and Essen−Gustavsson，B・：仙scle fibre types andenZymeaC亡ivitiesin

heal亡hy

foals

and

foals

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文

献1）野村達次：筋ジストロフィー症に関する文

献調査（1979），厚生省神経疾患研究委

献調査（1978），厚生省神経疾患研究委

託費「筋ジストロフィー症動物の生産・開託費「筋ジストロフィー症動物の生産・開発に関する研究」乱昭和55年度研究報

発に関する研究」班．昭和54年度研究報

告書，1−15，1981．

告書．1−7，1980．

3）野村達次：崩ジストロフィー症に関する文

2）野村達次：筋ジストロフィー症に関する文−

献調査（1980，1981），厚生省神経疾5−

告書，1−9，1984．

患研究委託費「筋ジストロフィー症動物の6）野村達次：崩ジストロフィー症に関する文生産・開発に関する研究班，昭和56年度

献調査（1984），厚生省神経疾患研究委

研究報告書，1−12，1982．
4）野村達次：筋ジストロフィー症に関する文

託費「筋ジストロフィー症動物の開発・供献調査（1982），厚生省神経疾患研究委

給に関する研究」班，昭和59年度研究報

託費「筋ジストロフィー症動物の開発・供告書，5−12，1985．
7）野村達次：筋ジストロフィー症に関する文

給に関する研究」班，昭和57年度研究報

献調査（1985），厚生省神経疾患研究委

告書，1−5，1983．
5）野村達次：筋ジストロフィー症に関する文

託費「筋ジストロフィー症動物の開発供給

献調査（1983），厚生省神経疾患研究委に関する研究」班，昭和60年度研究報告

託費「筋ジストロフィー症動物の開発・供書，1−9，1986．

給に関する研究」班，昭和58年度研究報

−

6

−

昭和61年度厚生省研究報告書，7−14，1987
筋ジストロフィー（mdx，dy）マウス

骨格筋における血管変化
埜 中 征 哉●
研究鱒力者 馬 満：横山峯介●■
江崎孝三郎…
＜はじめに＞

く対象・方法＞

前回、筋ジストロフィーのモデル動物である

対象は、m血マウスおよび体外受精法によっdyマウス（C57BL／6J−iy／軸）とmdxて作出されたdyマウス2）の生後15日目のもスウス（C57月L／10SeSn一m血）における筋の各4匹と、対照としてC578L／10SeSn

線雄の発育分化と壊死線経との関連について述

ウス4匹である。

マべたま）すなわち、dyマウスでは生後10日

それぞれのマウスからヒラメ筋を採取し1．5

日頃より墳死線経が散見されるが、その後の再界グルタールアルデヒドで前固定ののち1．3界

生過程が壊死を完全には代償し得ず、進行性の四酸化オスミウムで後固定した。エタノール脱経過をたどる。これに対してmdxマウスでは、

水ののちエポキシ樹脂（Epon812）で包埋」

生後15日日頃より群を成して壊死線経が現わ

超薄切片作製後に酢酸鉛とウラニールで二重染れ、そのほとんど全てが中心核線経として再生色を施こして電顕観察（H−600）を行なった。

し、壊死を再生がほぼ完全に代償する。壊死線

最終倍率3，000倍の電顔写真を作製し、その経が出現するまでの生後早期には、dy，mdx

写真中の筋線維敷くMF）とそれを取り囲む毛細マウスともにその発育分化に遅れは認められず．

血管数（Cp）をかぞえ、筋線維当たりの毛細血両者ともいったんある程度まで脱線経が成熟し管数（Cp／／MF）を算出した。さらに、壊死あたのちに壊死に陥ることがわかった。この壊死

るいは再生線経に接している毛細血管（壊死部）

発現の成田を考えるうえで筋肉内血管の変化にと、非壊死線経に接している毛細血管（非壊死ついて検討する必要がある。特にmdxマウスで部）とに分けて、それぞれの毛細血管の面積は、大きな群を成して放線経が数十本の単位で（CA）、内腰の面積（LA）、短径が1jLm以上

一度に壊死に陥るのであるが、これが血管の閉の核をもつ内皮細胞1個の面積（ENA）を塞等による虚血性の変化が関与しているか否か

Semiautomaticimage analyzer

を確認せねばならない。今臥我々は、dyお（Kontron）を用いて計測した。また、毛細よびmdxマウスの筋線経の壊死再生がはじまち

血管を構成している内皮細胞が占めている部分てくる生後15日目に重点を置き、その筋肉内の面積（EA＝CA−LA）および、EAのCA

毛細血管について形態学的定量的分析を行なっに対する面積比（界E＝EA／作AxlO09も）をた。

算出した。なお、今回対象とした毛細血管はCAが60劇扉以下のものに限った。
HH−■●■●●●●●●●■●●●■●●●●●■●●■●●■●●●●●●■●■●●●●●●●●■●●●●●●●●●◆●■●●●●●■●●●●●●●国立精神神経センター神経研究所教細構造研究部…財）実験動物中央研究所
−

7

−

く結

果＞

ウスと同様の毛細血管がみられ、内皮細胞の鹿（1）電車所見（図1−6）

大や内腱の閉塞といった所見はみられなかった

非壊死部では、dy，m血マウスともに対照マ（図1，2，3）。壊死部では、過収縮線経や

図1．対照マウス、15日日
矢印：巌衛星細胞
bar＝10βm

図2．m血マウス、15日日、非壊死部
P：pericyte、矢印：薪衛星細胞
内腔の閉塞はみられない
br＝1伽一一8−

図3・dyマウス、15日日、非壊死部
内皮細胞の鷹大や基底膜の変化はみられない
bar＝1伽

図4・m血マウス、15日目、壊死部
壌死線経に捜する毛細血管の内脛はよく開いている
bar＝10〟れ−

9−

図5．㊥マウス、15日目、壊死部
星印：過収縮線経、＊印：empty salcolemmal tube
壊死線経に接する毛細血管の内皮細胞の慶大はなく、基底膜の変化も認めない。 bar＝10β釈

図6．むマウス、15日目、壊死部
S：肪衛星細胞、R：再生線維大型の活動化した肪衛星細胞と再生線錐に凄する毛細血管に閉塞はみられない。 br＝10削れ
一10−いわゆるempty sarcolemmal tube

特に変化は認めなかった（図4，5）。またといった壊死・変性に陥った筋線経がみられたが、activateされた筋衛星細胞をいくつか含む

これらの線経を取り囲む毛細血管では、伽mdx

再生途上にある線経や、中心核線経に接する毛

マウスともに、内皮細胞の顕著な塵大や内陸の細血管でも、特に対照のそれとは形態的な差を

閉塞はみられず、さらに毛細血管の基底膜にも見出し得なかった（図6）。

表1．

毛細血管の分布QUANTJTATJVE ANALYSlS OF CAPJLLARY POPULATlONSJN MURJNE DYSTROPHY
nurnberofMFnumber of nurnberof
Cp
C pN

C p／
MF

C pN ／
Cp （
％）

2 7．
6 ± 5．
5 ●m dx （
∩
＝
4）
＿

55 5

4 99

14 9

0．
9 2 ±0．
45

dy

（
n＝
4）

10 7 9

70 8

27 9

●
●
●
0．
66 ± 0．
33
3 9．
3 ± 5．
6

COntrOI
（
n＝
5）

6 15

5 85

22 4

0．
9 6 ±0．
07

3 7．
7 ±4 ．
7moan

MF：mU5C10Hber＄

土SD■：P＜0．05

Cp：CaPmarie＄●●●：P＜0．005

CpN：CaP‖arieS Withnucle暮（2）毛細血管の分布（表1）

量的に分析した。

対照マウスでは、MF615本に対してCpは対照マウスのENAは、13．2±3．7／lJであ585本で、Cp／MFは0．96士0．07と、ほった。非壊死部におけるmdxマウスのENAはぼ1本の崩線経に対して1本の毛細血管が対応

11．1士3．0〟がで、 対照に比して小さかった

していた。mdx∵マウスではMT555本当たり

くPく0．01＞。dyマウスのENAは、11．9

499本の毛細血管があり、Cp／MFは0．92

士3．9劇才で、mdxマウスとは差をみなかった士0．45で、対照マウスとは特は統計学的有意が、対照と比べると小さかったくPく0．05）。

差はみなかった。これに対して、dyマウスで界Eについてみると、対照は74．8±13．0界

は1，079本のMF当たり708本の毛細血管がで、dyマウスは77．1±16．9界と若干大きい

分布しており、Cp／MFは0．66±0．33と、傾向があるが有意差はなかった。mdxマウス

対照およびmdxマウスに比べて約2／3 の値での界Eは、67．4±13．39ちと対照に比して小あった（Pく0．005）。

さかった（Pく0．001）。

（3）内皮細胞の面積（図7，8，表2）

壊死部と非壊死部での毛細血管の内皮細胞を短径が1／lm以上の核をもつ内皮細胞のみら

比較してみると、mdxマウスでは、界Eは壊れる毛細血管につき、その内皮細胞の面積を定

死部・非壊死部間で差はないものの、ENAで−11−

SCHEMA OF CAPILLARIESIN DYSTROPHIC MICE

げ1
︒6
1
4・
︒
・
1
21
︒
・
︒8
・
︒・

AREA OF ENDOTHERlAL
CELL WlTH NUCLEUS

COntrOl●：P＜0．05

mdx

dy●●●：p＜0．005

図9．対照、mdx，dyマウスの⊂】：nOnneCrOtlc・8rea

悶 necrolicaroa

毛細血管の模式図

COnlrol mdx dy

図7．内皮細胞の面積（ENA）

は壊死部で9．5±1．7J ガと非壊死部に比して有意に低値をとっており（Pく0・05）、mdx
マウスでは、内皮細胞はかえって小さい傾向にあることが示唆された。dyマウスでは、壊死三三％90 80 70 60．L．上土1部での内皮細胞は非壊死部のそれに比してやや

ENDOTHELtALFRACTlON

OFCAPJLLARYAREA

大きい傾向があり、特に界Eは壊死部で83・5±12．9界と有意に高値であった（Pく0．01）。

●：P＜0．05・●：P＜0．01

ロ：。。ふe。．。t∫日．ea
contrOI mdx dy
％【

＜考 察＞

悶：neCrOtlcarea Duchenne型筋ジスト。フィーの極めて早期の生検筋では、しばしば数本．−10数本の壊

図8．内皮細胞の占替る部分の面積町（界E）
表2．内皮細胞の面積の定量的分析
AREAOFENDOTHEuALCELLS OF
CAPILLARlEStNMURINEDYSTROPHY
no crou c aro a

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n．●．；nO抽両日caneO−12−死線維あるいは再生繰経が小群を成しているのといったもので引き起こされるのではないといがみられる。筋ジストロフィーでは、筋肉内血える。この定量的分析上の内皮細胞の面積の微管に変化がありそれによって壊死が引き起こさ

細な変化がみられた原田としては、固定の条件、￣れるのではないかと考えられ、いわゆる血管説

結合織の増生、放線経の壊死再生に伴なう二次が唱えられた。血管の変化をきたして崩肉の変的な変化を考慮に入れる必要はある。

化をもたらす疾患としては、代表的なものに多血管分布に関してはこ対照マウスでは筋線経発性筋炎が知られている。多発性筋炎では、病と毛細血管がほぼ1：1の割合で分布しており、初期より筋肉内毛細血管の変化がみられ、内皮

mdxマウスでも同様にほぼ1：1の分布をし細胞の歴大およびそれに伴なう内原の閉塞、基ていた。しかしながらdyマウスでは、対照に底膜の肥厚、内皮細胞内の管状構造物（undu−

比して血管数が約2／3と少なくなっていた。血

lating tubules）などがみられるミ）・6）・7）

管数の減少が壊死の二次的な変化のみによるとしばしば崩線経は数10本一筋東単位で虚血かするならば、mdxマウスにおいても減少してら壊死に陥いる。mdxマウスでは、生後15然るべきであるが、しかしながら今回の結果で−20日日頃より壊死に陥いるのであるが？諏）

はmdxでは減少していない。著者らはmdx

何故このような大きな群を成して壊死が発現しマウスとdyマウスでは、壊死にひきつづく再てくるのかを考えるにあたって血管の検討を避生過程た差があり、すなわちmdxマウスではけることはできない。

ほぼ完全な再生がみられるのに対してdyマウ

今回の電頭観察では、毛細血管の内腔を閉塞

スでは不完全であることを述べたま）dyマウスするほどの顕著な内皮細胞の屈大、さらには基で血管数が少ないことは、局所での血液供給が底峡の変化や内皮細胞内の異常構造物等は、少ないことを意味し、これは、再生が不良であ

mdx，dyマウスともに認めなかった。内皮細ることの一国となっている可能性があると考え胞の面積の定量的分析の結果からは、mdxマられる。今回の検討は生後15日目に的を絞っ

ウスでは、界E、ENAともに対照に比して小たが、このような点をさらに明確にするために

さく、すなわち内腔は相対的に広くなっている。

は、もっと早期および30日日ないしそれ以後これに対してdyマウスでは界Eが大きい傾向のマウスについても検討をする必要があると思にあるがENAでは対照と差を認めなかった。

われる。

これらの結果を模式図で措くと図7のようになる。このような定量的分析上の変化は、実際の＜結語＞

電顛観察上の所見と合わせて考えてみても、壊（lJ mdxマウス：血管数／筋線維数比の値に死を引き起こしてくるほどの大きな変化ではな差はみられず、内皮細胞腫大傾向はなく、い。特にmdxマウスでは、群を成して発現しまた血管閉塞の所見もなかった。

てくる壊死をこれらの微細な血管の変化からは（2）dyマウス：血管数／筋線維数比は対照に説明することはできず、逆に内腰がよく開いて・

比し小さく、内皮細胞塵大傾向はみられず、いることを示竣することから、この大きな群をさらに血管閉塞の所見はなかった。

成す壊死は、内皮細胞の歴大による血管の閉塞（3）上記血管変化は、壊死発現を説明できるほ−13−

ど強いものではなかった。
5）Banker，B．Q．（1975）：Derma一（4）微細な血管変化は、固定の条件、結合織増生、筋線経の壊死再生に伴う二次的変化の七〇myositis of childhoodI
ultrastructural alterations

可能性が強いと考えられた。

Of muscle andintramuscular

く文献＞1）埜中征読，南blood vessels．J．NeurOpathol．

満，横山峯介，江崎孝三

郎（1986）：筋ジストロフィー筋の発育
分化と壊死発現に関する組織学的，組織化学的研究，厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー症動物の開発・供給に関する研究」野村乱 昭和60年度研究報告書，Exp．Neurol．34，46−75．
6）Carpenter，S．，Karpati，G．，
RothmsnIS・and Watters，G（1976）ノ：The childhood typeOf dermatomyositis・−Neurology，
26，952−962．

11−31．

2）江崎孝三郎，横山峯介（1985）：体外受精法による筋ジストロフィーマウス（C577）Jerusalem，F．，Rakusa，M．，
EngelIA・G・and

MacDonaldIR●D●

BL／6−dy／毎）の作出，厚生省神経疾患（1974）：Morphometric analysis

研究委託費「筋ジストロフィー症動物の開Of skeletal muscle capillary

発・供給に関する研究」野村班，昭和59
年度研究報告書，119−122．

ultrastructureinimflammatOry
myopathies・J・Neurol・Sci．I

3）Tanabe，Y．，Esaki，K．and

23，391−402．

Nomura，T．（1986）：Skeletal
muscle patholgyin X chromo−SOme−1inked muscular
dystrophy（mdx）mouse．Acta
Neuropathol（Berl），69，91−
95．
4）Bulfield，G．，Siller，W．G．，
Wight，P．A．I．．and Moore，
K．J．（1984）：X chromosome−linked muscular dystrophy（mdx）in the mouse．Proc．
Nat1．Acad．Sci．USA，81，
1189−1192．

ー14−昭和61年度厚生省研究報告書，15−23，1987
キメラマウス（C57HJ／10−mdか→C3H／He）

による筋ジストロフィー症の研究
膠 木 元 也1）・2）
研究協力者 横山 峯介2）
日下部守昭3）
はじめに3回洗浄t＾PHA（Phytohemagglutinin−P）

キメラマウスは、1個体内に遺伝的に起源のを含む培養液内で両系統の胚を1個づつ接着・ことなる細胞を合わせ持っており、この特性を集合させた。さらに20−24時間培養して、利用することによって、発生ならびに分化の過

単一の集合胚に発生した胚を、精管結染オスと程における遺伝子発現の校構や細胞間の相互作の不妊交配で偽妊娠を誘起した3日目のレシピ

用等を調べることができる。

エントメスの子宮内に移植した。得られた産仔

我々は、このキメラマウスを用いて、筋ジス

は、成体へと育成し、被毛色を指標としてキメトロフィー症の病田を解析するための検討を進ラ個体であるか否かを判定した。

めてきた。本研究ではさらに、崩ジストロフィー症のモデル動物として使用されているC57

2）筋の免疫組織学的観察

8L／10−m血（以下810−m血）マウスと正常

被毛からキメラと判定された個体は、エーテ

なC3H／Heマウスとの間でキメラ個体の作出

ルで麻酔し、開腹ならびに開胸して心臓からのを行ない、さらに骨格筋を免疫組織化学的な手濯流によって固定を行なった。固定液としては、法で観察した。

95界エタノール・1界酢酸を冷やして用いた。
清流固定後に骨格肋を切り出し、さらに新鮮な方法

冷固定液に約1時間保持した後、95界エタノ

1）キメラマウスの作出

ールならびに100界エタノールで脱水した。

810−m血とC3H／Heの成熟メスマウスに、これをポリエステルワックスに包埋後、4／lm

5IUのPMSG（Pregnant mare serumの連続切片とした。さらに脱ワックスの後、gonadotropin）とhCG（human chorio−

C3札／He組織に特異的に反応する抗体で処理

nic gonadotropin）を48時間間隔で腹腔内注射し、それぞれ同系のオスと交配させた。

し、蛍光原敬鏡下で観察した。

交尾の確認されたメスは、妊娠3日目（膣栓確結果および考轟認日を妊娠第1日とする）に殺処分し、卵管と1）キメラマウスの作出

子宮を少量の培養液で濯流して胚を回収した。

Bl0−7n血とC3H／HeのメスにPMSGと形態的に正常な8細胞期胚を0．5界プロナーゼ

hCGを投与した後、それぞれ同系のオスと1で処理して透明帯を除去した後、新鮮培養液で：1同居させたさいの交配成投は、16．7界

1）東海大学医学部
2）肘実験動物中央研究所
3）名古屋大学医学部
一15−

（2／12）と100界（10／10）であった。交尾しからキメラタイプ3匹（19：28）（図1）、

たBl0−m血2匹からは合計21個、C3H／He

810−m血タイプ1匹（19：08）ならびにlO匹からは165個の8細胞期胚が回収され

C3H／Heタイプ5匹（49：18）に分探された。したがって、21ペアのBl0−m血とC3H／Heの接着胚を作ることができた。これらは表1．810−m血㌻←一十C3H／Heキメラマウスの作出成績培養により16個（76．2降）が単一集合胚へと発生し、レシピェントメスの子宮内への移植

集合胚数 移植胚数 産仔数

によって9匹（56．3界）の産仔が得られた

810−m血く表1）。離乳された9匹の個体は、その被毛

表2．
動物仙

性別

21

16

◆→C3H／He

9（59：48）

得られた個体の外見

被毛の割合殉黒茶

キメラの判定

▲0

7

▲0

8

▲0

9

▲0

0
0

○†

6

0
7

n手

5

0
0

U

〇†

4

ハ

0十

3

0

9

2

3

1

キメラタイプC3Hタイプ

O

0 0
0 0

O

C3Hタイプ

O

0

O

0 0 0
1 8 0

O

0 9 2
1

C3IIタイプ
C3Hタイプ810−m血タイプ

O

キメラタイプキメラタイプO

C3Hタイプた（表2）。キメラタイプの個体は全体の％に2）筋の免疫組織学的観察

すぎず、C3H／He単独のタイプのものが半数以

C3H／He の組織に特異的に反応する抗体で上であった。集合法によってキメラを作出する処理したキメラタイプの個体、脇ll釦の骨格筋

場合、胚発生速度の速い系統の細胞が内部細胞の螢光染色像を図2に示した。抗体に染り、塊の形成に優位に働くことが知られており、そ明るくグリーンにみえる部分がC3H／He由来の結果として生まれてくる仔の形質も発生速度の組織、染まらずに暗くみえる部分が810−m血の速い胚の系統の万に偏る傾向があると考えら由来の組織を示している。両者の細胞はかなりれている。本実験の組み合せでも、C3H／He

複雑にモザイク状に混っており、1本の筋線経

胚の万が810−m血胚よりも発生速度が速いこでも810−m血とCⅡⅠ／He両者の細胞で構成とから、C3H／Heタイプに偏ったことが窺われされているものも認められた。これらの励線経た。今後より効率よくキメラ個体を得るためにには細化等の現象もみられず、安定したかたち

は、使用系統の排卵や受精の時期、胚の接着・が保たれていることが知られた。
また、被毛では軋1（釦と同じような形態を示

集合の時期等を調節するなどの検討も必要と考えられる。

すぬ8は）の組織像は、図2の撤1（釘とほぼ同様

ー16−

であることが知られた。

中心核から新たに再生したC3H／He由来の筋810−m血由来の黒色の被毛を90珍の値で線経の存在を考えれば説明できる。このことは、持つ撤7（8）の組織像を図3に示した。他1

図3にみられるように中心核が抗体に染まったならびに他8の個体と同様に、810−m血と810−m血由来の線維からも示唆される。しかC3H／He両者の細胞は複雑に混り合っている。

しながら、810−m血でみられる壊死巣と、こしかし、予想に反して、抗体に強く染まり、グのC3H／He由来の細胞の存在とが一致するかリーンにみえる．C3H／He由来の筋線経には、どうかについては、現在HE染色との対応を進紐化がみられ、変性の可能性が示唆された。こめており、決定的な結論を下すに至ってはいなのことは、810−m血由来の筋線経が崩壊し、

い。

−17−

「￣−

図1．集合法によって作出された810−m血←→C3H／′Heキノラマウスの1匹（旭11引j図2．キメラマウス他1（引 骨格筋の蛍光染色像
上：横断面、 下：縦断面

図3．キメラマウス撤7（8）骨格筋の螢光染色像
上：弱拡、 下：強拡

昭和61年度厚生省研究報告書，公一29，1987

体外受精による筋ジストロフィー（C57BL／6−d〝句）マウス受精卵の作出と凍結保存
横

山

峯

介1）

研究協力者 小 島 博 子1）
はじめに里子するための里親には、Jcl：MCH（ICR）

ヒトの進行性筋ジストロフィー症のモデル動

マウスを用いた。

物として使用されるC578L／6−dy／如マウス

動物の飼育条件は、6時点灯、20時消灯のは、常染色体劣性遺伝のホモ型で発症する。

14時間明：10時間暗、温度24±2℃、湿dyホモマウスは、生後2−3適齢で発症しはじ

度60−709もとした。飼料は同型飼料（CA−めるが、その後の成長が不良で性成熟時に達し

1；日本クレア）ならびに飲水は水道水を不断給ても体重は15グ前後にしかならず、正常系の与した。ケージはポリプロピレン製で、床数は半分位である。また、メス・オスとも交尾が不カンナクズとした。

能なために、通常とられる交配という方法ではメディウム

その仔を得ることはできない。このため、dy

精子懸濁ならびに体外受精から前核期までのホモマウスを得るためには、勾遺伝子をヘテロ培養には・TYHメディウム2）を使用した。まで持つメスとオスを交配するのが従来とられてた、前核期以降の培養にはmodified Whi一いる方法である。

七ten（附）メディウム4）を、凍結保存の基準

筆者らは、これまで繁殖不能なC57月L／6−

液としてはP月Ⅰメディウム5）を使用した。

d〝旬γ マウスの卵子と精子を使って体外受精

体外受精と培養を行ない、得られた受精卵を移植することによ

体外受精は豊田ら2，3）の方法に準じて行なっって産仔へと発生させることが可能なことを報た0卵子はメスに5IUのPMSG（Pregnant

告したま）今年度は、さらに筋ジスト。フィ＿

mare serum gonadotropin）とhCG

句マウスの生産ならびに系統保存への応用を目（human chorionic gonadotropin）

的に、体外受精による受精卵の作出と、胚の凍を48時間間隔で腹腔内注射し、排卵を誘起し結保存を検討したので報告する。

たo hCG注射後14−17時間にメスを殺処分
して卵管を摘出し、メディウムを配したプラス

材料および方法

チックシャーレ（35×10m；Falcon）内動物と飼育条件のパラフィンオイル中に入れた。実体顕微鏡下

体外受精には、筋ジストロフィー症のC57

で解剖針を用いて卵管膨大部を切開し、卵丘

月L／6一郎／みマウスとその正常系であるC57

細胞に包まれた卵の集塊を得、0．4mgの受精用

BL／6マウスを使用した。また、胚移植を行TYHメディウム中に導入した。精子は十分になうためのレシピェントと、帝王切開した仔を成熟（3ケ月齢以上）したオスを殺処分し、精●●●●●●●●●●●●●●●●●●●■●●●●■●■●●●■●●■●●■●●

1）糊突鼓動物中央研究所−25−

巣上体尾部から採取した。 これを0．4mgの（1−3時）の培養を行ない、精管結架オスとTYHメディウムに懸濁し、1時間インキュベの不妊交尾によって偽妊娠を誘起したDaylのーション（37℃●59らCQ）して受精能獲得

レシピェントメスの卵管内に筆者らの方法8）にを誘起した後、媒精に供した。媒精は卵子の入従って移植した。移植胚数は、片側の卵管当りった0．4mgのメディウムに、約10／止の精子5−7個で、合計10−14個とした。妊娠が懸濁液を添加して行なった。体外受精時の最終精成立したレシピェントは、自然分娩させたが、子濃度は100−150精子／〟且と推定された。

Day20になっても分娩しないものについては

卵子は、媒精後約6時間に検査し、極体の放出帝王切開を行ない、得られた仔を里子に出す方と雌雄前核形成の有無をもって受精の判定を行法をとった。

なった。受精卵と判定したものは、MWメディ

育成と交配実験

ウムに移し換え、20−24時間の培養（37℃

得られた仔は、その発育過程を観察するとと・59らCO2・5界02・909もN2）を行ない、もに、体外受精における卵子と精子の組み合せ

2細胞期胚への発生を調べた。

がdyXか群の個体については、戯ジストロフ

胚の凍結保存ィーの発症時期を調べた。

胚の凍結保存はWhittinghamら6）の方法

また、体外受精の卵子と精子の組み合せが、に修正を加えた筆者らの手法7）により行なった。

正常の＋×dy群ならびに＋×＋群の個体の一体外受精後の培養によって2細胞期に発生した部は、生後8適齢でそれぞれメス1：オス1で胚は、PBⅠメディウムで洗浄し、凍結用ヌン同居させ、その繁殖成績を調べた。

クチューブ（1．8瓜β；ヌンク、鳳363401）に20−30個の割合で移した。DMSOが最終結果および考案

濃度lMになるように添加し、−7℃まで冷却

体外受梼成績

して植氷（seeding）を行なった。その後の

C578L／6−dy／わならびにC57BL／6の体

冷却は、−7−−50℃間を0．3℃／分、−50

外受精成績と2細胞期胚への発生成績を表1に−−70℃間を0．5℃／分の速度で行なった。

示した。体外受精における卵子と精子の組み合−70℃まで冷却したサンプルは、液体窒素内

せは、dyXdy群、正常の＋×dy群（−196℃）に浸潰して一定期間保存した。

＋×＋群である。すなわち、dyXdy群の受精

融解は、凍結チューブを液体窒素内から取り出卵の遺伝子型はdyパlyのホモ型、＋Xdyはし、室温に静匿する方法で行なった。この際の十／dyのヘテロ型さらに＋×十は＋／Iの正常−70℃から−10℃までの温度上昇速度は約となる。受精率は、dyXdy群では57．59あ、10℃／分であった。完全に融解後、新鮮なP8Ⅰ＋×dy群では63．39ちと、＋×＋群の92．4界

メディウムを加えてDMSOを希釈・除去したよりも有意に低い値であった。dyホモマウス

後、胚をMWメディウム内に回収し、形態的なの精子は、正常系に比べて運動性が低く、奇形観察を行なった。

精子の率も高かったことから、これが受精率に胚の移植影響を及ぼしているものと推察された。受精卵

形態的に正常と判定されたものは、短時間と判定された卵の、培養20−24時間における

ー26−

ならびに

表1・崩ジストロフィー（dyパIy）ならびに正常系（＋／＋）の各マウスにおける体外受精成績と2細胞期胚への発生成績

卵子 精子 完芸 芸霊が 孟霊欝・
dy dy

931

535（57・5）522（97．6）796（63・3）780（98．0）745（92・4）742（99．6）

＋

dy

1258

十

十

806

＊検査卵数に対する割合＝受精卵数に対する割合

表2・体外受精に由来する2細胞期胚の凍結融解後の生存成揖

卵子

精子

凍

胚

結

数

回 収
胚 数（殉◆

形態的正常
胚敷物■■

dy
dy

62（72．9）209（99・5）

182（87．1）

117（97・5）

116（99．1）＋85（100）●凍結胚に対する割合●●回収胚に対する割合

表3・凍結融解した体外受精に由来する2細胞期胚の移植成績

離乳
仔数（殉・仔数例・●卵子 精子 碧空．＿．J．空テント

甲生

dy dy

19（30・6）18（94．7）

胚数

妊娠成立数／使用数

62

6／6

9：8
9：

9

＋

dy

143

11／13

68（47．6）

59（86．8）

30：29

十

十

116

8／9

62（53．4）

57（91．9）

33：24

・移植胚に対する割合…出生仔数に対する割合

2細胞期胚への発生率は、97．6−99．6界と高回収率は各群とも高く、97．5−100界であっ率で各群間に差は認められなかった。

た○回収された胚に対する形腰的正常胚の割合

凍結融解胚の生存成績

は・dyXdy群では72．9界、＋×dy群では体外受精に由来する2細胞期胚の凍結融解後87・1浄さらに＋×＋群では99．1界という高の生存成績を表2に示した。凍結融解した胚のい値であった。これらの値は、筆者らが体内受−27−

精卵に由来するC57BL／6の8細胞期胚で行な

2遇齢ごろから筋ジストロフィーを発症し、本った成績7）と比較しても差のないものであった。

来のdyホモマウスと変らないことが確認され移植成績た。また、得られた仔には、体外受精ならびに凍結融解処理した体外受精に由来する2細胞

凍結融解の処理によって生じたと考えられる異期胚の移植成績を表3に示した。胚移植を行な

常はとくに観察されなかった。

ったレシピェントの妊娠成立率は、dyXdy群

繁殖成績では100界（6／6）であったが、＋×dy群で成体まで育成した＋×dy群と＋×＋群の一は84．6界（11／13）、＋×＋群では88．99も部の個体の繁殖成績を表4に示した。＋X dy（8／9）であった。移植された胚に対する出生群では交配させた30匹のうちの28匹（93．3

仔の割合は、dyXdy群では30．69も（19／62）、

界）、＋×＋群では15匹のうちの13匹（86．7

十×dy群では47．6界（68／143）さらに＋×野）で正常な分娩が確認された。その後の哺青＋群では53．49も（6乙／116）という値であった。

等にはとくに異常はなく、離乳率も生産の場に

凍結融解処理をしていない2細胞期胚を移植しおける成績と比較しても差のないものであった。

た際の成績は、dyXdy群では約409乙、＋×

また、＋×dy群のメスとオスを交配して得ら＋群では約80界であるので、これに比較する

れた離乳仔の中には、その219あに筋ジストロと低い値であった。離乳まで至った仔の値は非フィーの発症が認められた。この値は、＋／dy

常に高く、86．8−94．79もであった。なお、のヘテロ個体を交配した際にdy／dyのホモがこの値は帝王切開によって得た産仔を里子した出現する理論値25ヲもに近いものであった。こ

成績を含めたものである。離乳された仔の性比のことから、dyのミュータント遺伝子の保存には、とくに偏よりは認められなかった。なお、も正確に行なわれていたことが示唆された。

得られたdyXdy群の18匹は、全例とも生後約

表4．凍結融解胚由来の個体における繁殖成続

系

統

芸配メス

C57BL／6一十／dypeICR

C57BL／6peICR

30

15

分娩‰

警驚）酪篭

♀‥8

28（93．3）172（6．1）143（83．1）

13（86．7）89（6．8）67（75．3）

81：62

35：32

以上の結果から、筋ジストロフィーのdyマに数100個の受精卵を作出することも容易で

ウスのような繁殖障害を呈する系統でも、正常ある。このことは、特殊なミュータント個体をな卵子と精子を得ることができれば、体外受精量産したり、系統を保存しておく際には非常にによって受精卵を作出し、凍結保存を行なって有効な方法になり得ると考えられる。

系統保存もできることが明らかとなった。とくに、体外受精では、精子の有効利用が可能であ

文るので、1匹のオスから得た精子を用いて1回

1）江崎孝三郎、横山峯介：体外受精法によ

−28−

献

る筋ジストロフィーマウス（C578L／6−

developmental genetics．

dy／旬y）の作出．厚生省神経疾患研究委託

GeneticsI Suppl・78・395−402，

費「筋ジストロフィー症動物の開発・供給

・1974．

に関する研究」野村斑 昭和59年度研究■6）Whittingham，D．G．，Leibo，

報告書Pl19−122，1985．

S・P．and Mazur，P．：Survival2）豊田 裕，横山峯介，星冬四郎：マウス
卵子の体外受精に関する研究Ⅰ．精巣上体

Of rnouse embryos fro2；en t0

精子による受精成績．家畜繁殖誌，16，−196℃

147−151，1971．

178．411−414，1972．

3）豊田 裕，横山峯介，星冬四郎：マウス

and−269℃．Science，

7）Yokoyama，M．，Wakasugi，N．

卵子の体外受精に関する研究Ⅱ．精子侵入and NomuraI T・：Amattempt

時期に及ぼす精子体外培養の効果．家畜繁tO StOreinbred mouse strains．

殖誌．16，152−157，1971．
Frozen storage of Laboratory4）Whitten，W．K．：Nutrient

Animals，113−117．Gustav

requirements for the culture

Fischer Verlag・StuttgartI

Of preimplantation embryo

1981．

in vitro．Advan．Biosei．，

8）勝木元也，横山峯介：哺乳類（マウス）

6，129−139，1971．

胚を用いた発生学実験法．243−266．

5）Whittingham，D．G．：Embryo

実験生物学講座（金谷晴夫，山上健次郎撮），

banksin the future of

丸善，東京，1985．

−29−

昭和61年度厚生省研究報告乱 31−訂，1987
ミエリンWblfgramタンパクのCDNAクローニング
高

2一，3，−CyCiic

nucleotide

松研に重層して同様に遠心し、中間層にくるミェリ

3一一

phosphodiesterase（CNP）は、2㌧3．−ン分画を得た。中間層を脱イオン水で3回洗い

CyClic nucleotideを3，の位置で加水分（10000rpm、15分）、ミエリン標晶とした。

解するという特異な活性を持った酵素であるが、神経系とくに中枢神経系の髄鞘組織（ミェリン）

2・SDS−ポリアクリルアミドゲ㌧レ電気泳動に局在することが知られている三）しかし、少（SDS−PAGE）は、Laemmliの方法4）量ではあるが、広く生体内の細胞膜上に分布しに準じ、10−20ヲら1inear gradientていることも知られており、その生理的意義が平板ゲルを用いた。サンプルは、69らSDS、検討されている。本酵素に対する抗体を用いた

5％8−merCaptOethanolに溶解後、イムノプロットにより、CNPは中枢神経系の100℃、15分処理した。

ミエリンにおいではWolfgram protein（WP）Ia及びIbに相当することが示唆されて

3．イムノブロッティング

いる三）そこで、W。1fgrampr。teinのSDS−PAGEよりニトロセルロース膜へのタ

単離及び構造解析を行い、WPに対応したeDNA

ン′くクの転写は、セミドライ方式で行った。陽

クローンの解析を行うことによって、CNPと極側に0・3MTris・HCl、20界メタノーへ

WPIa及びWPIbとの異同を明らかにするとpHl0．4に浸したP紙2枚と25mM Tris・ともに既に明らかとなっているミエリンタンバ

HCl、20界メタノール、pHl0．4に浸した

ク、8P，PCPとを合せたミエリン形成過程

ロ統2枚を重ね、その上にニトロセルロース膜、における遺伝子の発現調節機構を明らかにする

ゲルを重ねた。陰極側には、25mM Tris・ことを目的としている。

HC1、40mM6−amino￣7t

hexanOic

acid、209もメタノール、pH9．4に浸した

実験方法

ロ紙2枚を置き、0．8mA／扇の定電流で、室

1．ミエリン分画の調整

温、1時間、転写を行った。転写後ニトロセル

ウシ脳自質及びマウス（BALB／c AuCrj）
全脳よ

ロースフィルターを0．5界スキムミルク、50Whittakerら3）の方法に準じて調

mM Tris・HCl、0．9界NaClで37℃、1整した。脳鼠織を10倍量の0．8MSucrose

時間インキュべ−トした後、抗体と反応させた。

でホモダナイズし、ホモジネートに0．32M

染色は、HRP−COnjugated anti rat

Sucroseを重層して22500rpm（Beckman

ZgG，Galactosidase−COnJugatedSW28でi）、60分遠心した。中間層を0．32

anti rabbit ZgG及びGalactosidase

MSucroseにSuspendL、0．72MSucrose

COnjugatedanti mouse ZgGを用い

HH…●◆●●●●●●●●●●●●●●●●●●■●●■■●●●●●●●●

慶応大学医学部生理学教室ー31−

た間接法で行った。

SyStemS Mode1470A）にかけ、EdJnann分解を行った。生成するPTHアミノ酸は、PTH

4．SDS−PAGEゲルよりタンパクの回収SI）S−PAGE後

7ミノ酸分析機（Applied Biosystems

ゲルをクマジーブリリアン

PTH analyzer）にて分析した。

トブル（CBB）にて染色し、目的のタンパクバ
ンドを切り出した。ゲルをホモゲナイズ後、約8．cDNAバンクの作成

20倍量の709b Formic Acidで4℃、3生後18日日Balb／CAmCrj

マウス脳時間、3回抽出を繰り返した。抽出液を濃縮後、より、グアニジン・セシウム法でRNAを抽出

Bio Gel P＿10にてCBB及び遊離SDSした。脳組織を10倍量の6M GTC，5mMを除去した。タンバク分画を濃縮後、逆相分配カ

Sodium Citrate，0．5％Sodium

ラム（Toyosoda ODS−120で，溶出液0．1

Sarcosy1，

界Tf、A、10−90界アセトニトリル）にかけ

ethanol

単一ピークを得た。

を5．7M CsCl、100mM EDTA

0．1MP一merCaptO

でホモゲナイズし、ホモジネートに重層して、22500rpm、25℃、14時間遠心した。

5．アミノ酸組成分析

沈査をクロロホルム・ブクノールで洗浄した後、6N HCl（定沸点塩酸）中で、減圧下120

エタノール沈殿LRNAを得た。RNAを℃、20時間、加水分解を行った。アミノ酸分

01igo dTカラムにかけpoly（A）RNA析にはBeckman Amino acid analyzer

精製した。CDNAは、Gubbler

SyStem7300を用いた。

の方法5）に従い作成したoT4DNApoly−＆を

HoffmanmeraseでcDNAをCOhesive endとし、6．限定分解Eco R工IinkerによってIgtllのEco

プロムシアン分解は、サンプルを709もFor−

RZ siteに組み込んだ。IgtllDNAを

mic acidに溶解後、推定Met残基数の250

in vitr．o packagingにより77qジと−300倍のプロムシアンを添加し、25℃、し、E．coli YlO88に感染させたeDNA

14時間反応を行った。反応後、直ちに減圧乾バンクを作製した。

固した。
Ⅴ一8 プロテアーゼによる分解は、サンプル

9．cDNAバンクのイムノスクリーニングを50mM Ammonium Acetate pH4．0

Igtllにより産生される6−galacto−に溶解後、モル比50：1のⅤ−8protease

Sidaseとの融合タンパクを、抗CNPモノクと37℃、18時間反応させた。反応後、直ち

ローン抗体及びポリクローン抗体を用いてスクに減圧乾固した。

リーニングした。

lPTGにて融合タンバクの産生を誘導し、7．N末端アミノ酸配列

プラーク内に産生される融合タンバクをニトロ

サンプルを1009もTFAに溶解し、気相式

セルロース膜に転写した。ニトロセルロース膜

プロテインシーケンサー（Applied Bio−に転写されたタンバクは、イムノブpットの場−32−

合と同様にHRP conjugated antirat

試みた。作製されたモノクローン抗体（TFX−

ZgG及びJ8−galactosidase conjuga−

1）も、CNP活性を免疫沈降させるが活性に

ted anti rabbit ZgGを用いた間接法
により染色した。

体を用いたイムノプロットでも、ポリクローン

は作用を及ぼさなかった。このモノクローン抗抗体の場合と同様にWPIa及びWPIbに反応

結果及び考察することが示された。また、ウシ末梢神経（坐CNPは、広く生体膜上に分布するがとくに骨神経）ミエリン分画、ウシ網膜ホモジネート

中枢神経系のミエリンに高濃度に分布することを用いたイムノプロットでは、TFK−1は末梢が知られているご）一万、CNPの生理的役割

神経ミニリンとは全く反応せず、網膜では分子については、特異な酵素活性を持つことから多量30kdの単一バンドと反応した。一方、抗くの議論がなされているが、いまだ明らかとな

CNPポリクローン抗体は、末梢神経ミエリンっていない0また、CNPの構造と活性の関連の分子量約45kdの2本のバンドと反応し、を追求する目的で精製が試みられているが、酵

網膜では分子量約30kdのバンドと反応する

素活性を保持した完全な形での精製は行われてことからCNPは、中枢神経系、末梢神経系及いない現状である0当研究室のSudaら6）は、

び網膜の間でその構造に差異があることが明ら

ウシ脳ミエリン分画よりAmmonium ace＿

かとなった。これら抗体の反応性は、免疫組織

tate，Triton x−100によりCNP活性を

化学染色においても同様の結果であった。さら可溶化し、phenyl sepharose CL4B，に以上の結果は、マウスを用いた実験でも同様

CM Sepharose CL4B等で精製を行ない、であった。

比活性で約200倍の部分精製標品を得、分子そこで、WPIa及びWPIbの構造解析を行

量約50kdのミエリンタン′くクがCNPであないCNP活性と構造との関連、WPIa及びることを示した○その後Kohsakaら2）は、こWPIbの免疫学的類似性を明らかとするため、の部分精製標晶をウサギに免疫し、CNP活性及びこれらタンバクの組殿特異的発現機構を探を免疫沈降させるが活性には影響を及ぼさないる目的で、マウス脳ミェリン分画よりWPIa

ポリクP一一ン抗体を作製した。この抗体を用い

及びWPIbの単離を試みた。これらは、分子たイムノプロットで、ウシ脳ミェリン分画のタ

量、等電点とも近似していることから、両者をン′くクを検索したところ、分子量47kd

SDS−PAGEで分離後、ゲルより抽出精製を行と45kdに相当する2つのタンノミクが抗体と反った070ヲ♭Formic acid抽出後、Bio応することを兄い出した。これら2つのタンパ

gel P−10かけ、CBBと遊離のSDSを除

クは、ミエリン分画の構成タンノミクの内、いた後、逆相クロマトグラフィーにかけると図Wolfgram proteinIa及びIb（WPIa，1に示した如く、40−50界

WPIb）と呼ばれているものに相当していた。

付近に単一ピークとして溶出された。この分画

この抗体は、抗原が部分精製標晶であること及を回収し、SDS−PAGEにてノミターンを調べる

びポリクローン抗体であることから、Fujishiroと図2に示した如く、WPIa及びWPIbが単

ら7ちまCNPに対するモノク。−ン抗体の作製を一標晶として得られた。そこで、これらのアミー33−

アセトニトリル

図2．精製WPIa及びWPIbのSDS−PAGE
lanel．分子量マーカー
93kd，45kd，21kd

図1．WPIaの逆相クロマトグラフィー
溶出パターン

lane2．WPIa
lane3．WPIb

表1・The amino acid composition of mouse
2一，3．−CyClic nucleotide3㌧phosphohydr・Olase（CNP）

Amino

WPia

WPlb

acid

●
●
●

6

●

●

●

●

●

●

4

0

4

●
●

●

■

7

7

3

●

●

ュ

7

5
ュ

2

●
●
●

●

7

9

⊥

0

●

●

●

⊥

2

7

4

●

●

●

⊥

0

7

6

●

●

■
●

⊥

7

3

9

●

●

●

●

6

7

6

●

■

2

●

●

●

4

3
●

●

●

●

4

6

工

7

4

●

ュ

9

3

●

●

■

●

0 0 0 0 0 0 0 0 0

4

0

0 0 0 0 0 ⊥ ⊥ 0 0 0 0 0 0 0 0 ⊥

●

7

2
⊥

6

4 2 6 5 4 0 0 6 2 6 3 2 4 4 2 2

9

●

1．3
0．6

●

ュ

0
ュ

0．2

9

●

0．1

●

6

4

0．3
0

5

●

8 4 6 2 5 0 7 4 ⊥ 3 0 3 4 2 8 5
工
⊥
⊥

0

9

AShTSeGIPrGlI鴨AMe⊥1Le町PhHi相加

0．7

●

●

●

7

n＝3

Data

are

expressed

as

moles

amino acid perlOO mole．
−34−

of

cach

MW

93

Q

b

、確

67

45

磯盛

31

噌廟弼帝

紳左

′●▼

21

鞠鞠融

14

−■■■
1転

図3．WPIa及びWPIbのプロムシアン
分解パターンlane a．WPIa

図4．WPIa及びWPIbのV8−プロテアーゼ分解パターンlane a．WPIa
lane b．WPIb

lane b．WPIもノ酸組成分析を行ったところ、表1に示した如Aia−Lys−…であり、WPIbはAsp−Arg−

く、両者は掻めてよく似ていた。なお、Met残

Gly−Lys−Ala−Lys−Ser．−Zle−Leu−Pro

基数はWPIbが6−7、WPIaが3−4と推定−…であり、臭っていた。次にWPIa及びWPされた。次に、WPIa及びWP王b

Ib

のプロムシ

をプロムシアン分解して得られるペプチド

アン及びⅤ−8pr・0teaseによる限定分解をの単離を行った。ゲルP過及び図5に示した逆行なへペプチドマップパターンを比較した。

相クロマトグラフィーの組み合せで、分子量

図3及び4に示した如く、両者はいずれの限定35

分解によっても掻めて長く一致したペプチドマを分離した。各々のSDS−PAGEの泳動パター

ップパターンを示した。このことから、WPIa

ンを図6に示した。現在、これらペプチドフラ

及びWPIbは、趣く一部の構造が異なる基本的

グメソトのN末端アミノ酸配列を検討中である。

には同一のタンパクである可能性が示された。

既に得られているアミノ酸配列の中には、合そこで次に両者のN末端アミノ酸配列を調べて成DNAプローブによるWPIa及びWPIbに対見ると、WPlaはPro−Leu−Lys−Lys−

応したeDNAのスクリーニングに適した配列は−35−kdのピーク2と分子量37kdのピーク3認められていない。そこで、ポリクローン抗体
及びモノクローン抗体を用いたイムノスクリー
ニングを行った。ミエリン形成期（生後12日
より20日）に当るマウス脳より、GTC／CsCl
法によりRNAを抽出し、01igo dT
Cellu10Seカラムでpoly（A）RNAとし、Gubbler・＿Hoffmanの方法5㌔こ準じてcI）NAを合成した。合成したDNAは、Eco R工
Iinkerを用いてIgtllのEco RZ siteに組み込み、E．coli Y．1088
たeDNAバンクを作成した。

に感染させ

eDNAパンクの独立クローンは約1×105個であった。このIgt77−ジをE．coli YlO90に感染させ
琴

等

軍

霊

℡

m

買

い

IPTGで融合タンパクの産生を誘導し、プラーク内に生じる融合タンパクをイムノスクリーニ

図5．WPIaプロムシアン分解ペプチドの逆相クロマトグラフィー溶出′くターン
Peak 2． 35kd
Peak

12

二．■−．￣■．￣■

ングした。約30万個の右かファージをスクリーニングし、6個の陽性クローンを得た（図7）。

3．37kd

3

4

5

一一一、
図7．抗CNPポリクローン抗体によるイムノスクリーニング∴二一＿二二一■ ■ ■′−

矢印
図6．精製されたWPIa及びWPIもプロムシア
ン分解ペプチドのSDS−PAGE
lanel．分子量マーカー、93kd，67kd，45
kd，31kd，21kd，14kd
lane2．WPIaより得られた35kdペプチド
lane3．WPIaより得られた37kdペプチド
lane4．WPIbより得られた35kdペプチド
lane5．WPIbより得られた37kdペプチド

陽性クローン

この内抗体と強く反応した2個の77−ジよりDNAを抽出し、insertを調べると図8に示した如く1．7kbと2．3kbであった。現在このDNAフラグメソトの塩基配列の決定を行っ
ている。

−36−

3）Whittaker V．P．and Barker
1

2

3

4

5

L．A．，Zn R．Fried（Ed．），

6

Methods of NeurOChemistry，
Vol．2，Marcel Dekker，neW York，
1972，pp．1−52．

4）Laemii U．K．（1970）：CleavageOf

3−7

1ane5．

3−6

1ane

陽性クローン

6．

head of bacteriophage T4．
Nature227，680−685．

5）Gubler U．and Hoffman B．J．

コントロール（1983）：Gene

文

p工、Oteinsduring the assembly of the図8．イムノスクリーニング陽性クローンのイ ンサート
1ane1． 1／HindⅡ
lane2−4．陽性クローン

structural献

25，263．

6）Suda H．and Tsukada Y．
（1980）：Zmproved method

1）Kurihara T．and Tsukada Y．
（1967）：The regional andfor purification of21，31−

Subcellular distribution

CyClic nucleotide

Of2t，3LCyClic nucleotide

phodiesterase from bovine

3．−phos−

White matter．J．Neurochem．

3㌧phosphohydrolasein the34，941−949．

Centrai nervous system．

J．NeurOChem．14，1167−1174．

7）Fujishiro M．，Kohsaka S．，

2）Kohsaka S．，Nishimura Y．，

Nagaike K．and Tsukada Y．

Takamatsu K．，Shimai K．

（1986）：Production of

and Tsukada Y．（1983）：

monoclonal antibody to

ZmmunOhistochemical locali−

21，37−CyClic nucleotide

Zation of2−，3−−CyClic

3㌧Phosphodiesterase from

nucleotide

bovine cerebral white matter．

3㌧phosphodiesterase

and myelin basic proteinin

J．Neurochem．47，191−195．

the chick r・etina．J．．Neurochem．
41，434−439．

−37−

昭和61年度厚生省研究報告書，39−47，1987

Shaking rat Kawasaki（SRK）の臨床・神経病理学的研究
埜中征哉：江崎孝三郎●■研究協力者 相川久志：津金隆夫…
はじめに

結

本報告書の主題は江崎らにより実験動物中央

1．臨床・行動学的観察研究所で新たに発見された先天異常ラット、

果

SRKラットは体重減少、発毛の遅れに加えShaking rat Kavasaki（SRK）の病理学

生後10日日より体幹振戦、四肢失調症状、後的検索結果に関するものである。

肢麻痺などの神経症状を重し、生後4週間以内に死亡した。

昨年の報告書では、SRKラットは常染色体劣性遺伝様式を示すこと、末梢神経・筋肉系に

2．体重及び臓器別重量は発育・分化の遅れが見られる以外異常を認め

表1に示す様に、生後20−24日のSRX

ないことが明らかにされたご）ラットの体重は対照群のそれに比べて著しく軽本年度はSRXラットの全身諸臓器並びに中く、正常群の約半分の値を呈した。

枢神経を形態学的に検索し、主病変が中枢神経

内臓諸器官も外見上、半分の大きさであった系における神経細胞の位置異常であることを確が、体重比を計算すると、表2の様に心臓、肺、認したので報告する。

腎は正常であり、肝、膵臓、胸腺が小さかった。
全脳重量は湿重量では幾分軽い傾向が見られ対象と方法

たが、体重比になおすと正常群よりも大きな値

実験動物中央研究所にて発見・維持されていを示し、異常を認めなかった。しかし、小脳はるSRK6匹（生後20−24日）及び対照とし著明に小さく、湿重量・脳重比共に正常の約5て、同腹の正常ラット4匹を検索した。体重測分の1であった（表3）。

定ののち、両群のラットをネンブタール麻酔下3．中枢神経系の肉眼的所見に2．59もグルタール溶液で清流固定した。脳・最も頗著な異常は小脳に認められた。SRK

脊髄・肺りb臓・肝・膵臓・胸腺．・腎臓など、ラットの小脳は著しく小さいばかりでなく、脳全身諸臓器を摘出し、臓器重量を測定した。こ回の数も少なく、小脳虫部と片葉は多くの場合、れら臓器は一部パラフィン包埋し、光顕的に観痕跡程度にしか認められなかった。その為、四察し、残りをオスミウム酸で後固定したのち、

丘体や小脳・延髄槽は彦星していた（Fig．1）。

走査型及び透過型篭原にて検索した。神経系の矢状断面で小脳はクローバー薫の形を皇し、皮バラフィン切片はH＆E，LF8，．及びNissel

質一自質境界部は不鮮明であった。

染色をほどこして検鏡した。

4．肝、膵臓、胸腺の光顕的観察
筋肉と同様、発育・分化の遅れが肝、膵臓、●●◆■●●●●●●●●●●●●●■■■●■●■●●●■●●●●●■●←●●●●●●●●●●●●●●●●国立精神神経センター神経研究所＝肘）実験動物中央研究所
ー39−

表1． 体 重（生後24日日）け）
SRK（n＝6）

Control（n＝4）

15．05士0．75

41．13±2．87

p

p＜0．005

表2． 臓 器 重 量（体重比）
SRK（n＝6）

Controi（n＝4）

p

Liver

35．02士2．74

54．91士4．22

Kidney18．93±3．74

19．48士0．80

（−）

Heart

8．23士0．19

7．69士0．44

ト）

Lung

50．85±0．9730．31士4．78（−）

Spieen1．68±0．29

3．95士0．28

pく0．01Thymus

0．51±0．19

2．54±0．33

p＜0．01

pく0．025

表3． 脳重量及び小脳重量§脳重量及び体重比
SRK（n＝6）

control（n＝4）

pwet weight（mg）

1025士651440±41・6

pく0・01

brain weight（mg）
body weight（mg）

68．49士7．73

35．24士1．68

p＜0．01SRK（n＝6）

control（n＝4）

p§小脳重量及び脳重比

wet weight（mg）

wet weight（mg）
brain weight（mg）

38．5士2．5

3．76士0．01

200士3・61

p＜0・005

13．90士0．22

p＜0．005

胸腺に僅かに認められたのみで、細胞構築に異大脳皮質、海馬、小脳皮質など神経細胞が層構

常を認めなかった。

造を呈する部位に認められた。

5．中枢神経系の光顕的観察

大脳皮質では皮質第1居である分子層が欠落

SRKラットの最も特故的な病理学的変化はし、多数の神経細胞が同部に存在していた。ま−40−

髄膜、上衣細胞、血管に異常は認められなかった。
小脳では、外額粒細胞層が生後24日のSRK
ラットにおいても依然として存在し、顆粒細胞の移行が遅延していた。その為、顆粒細胞の数は正常に比較して減少していた。また分子層は厚みがなく、場所により欠如している部分もあった（Fig．3）。プルキンエ細胞とおもわれる
大型神経細胞は大部分が顆粒細胞層又は中心部の白質に存在し、正常の位置には認められなかった。自質内では小脳深部核と一緒になり大型神経細胞の塊（central mass）を形成していた（Fig．4）。
脊髄では神経細胞、特に前角細胞の位置異常は認められなかった。しかし中心灰自質では髄鞘の染色性が正常に比べ高まっていた（Fig．
5）。

6．小脳の電顔的観察

図1．SRX及び対照ラットの脳の肉眼的所見（生後24日）（A）背面（別底面
左：SRXラット、右：対照 Ⅹ4

Central massを構成する大型神経細胞

は電顧的にプルキンエ細胞の特徴をよく兼ね備

1A：背面より観察すると、SRXラットの小脳が著しく小さく、小脳虫部と半球の境が不明瞭であり、小脳虫部が欠失している。そのため、
下丘（大矢印）や小脳・延髄槽（
小矢印）が露呈してみえる。
1月：底面よりみると、対席ラットに認められる小脳片葉がSRXラットに欠落していることが分かる（矢印）。

えていた（Fig．6）。細胞内小夢官は正常であり、軸索一樹状突起結合、軸勇一胸体結合などのシナプス結合にも異常は認められなかった（Fig．7）。顆粒細胞も正常であった。唯一の電願学的異常はCentral Massの部分に認められた鹿大した樹状突起である（Fig．8）。
しかしながら、この鹿大した樹状突起がどの細胞のものかは同定し得なかった。

た、正常では見られない髄鞘も分子層に散在し7．大脳皮質の走査電願所見ていた。大脳皮質を構築している神経細胞の層

SRXラット大脳皮質を走査電願フラクトグ

構造は乱れ、通常、第5層に見られる錐体細胞

ラフイ一により観察した結果、分子層の欠落、と思われる大型神経細胞は第2、3層に散在し神経細胞の層構造の配列異常など、光顕上見らていた。海馬の錐体細胞も大脳皮質と同様著しれた異常を確認した（Fig．9）。

く層構造の乱れを呈していた（Fig．2）。グリ
ア細胞の増殖性変化や炎症性変化はみとめず、

−41−

††

図2・SRK及び対照ラットの大脳横断面、パラフィン切片、LFB＆Nissel染色（A）SRK t8）対照Ⅹ15対照ラット（2B）に見られる大脳皮質第1層（分子層）（矢印）はSRXラット（2A）に見られず、大脳皮質神経細胞の層構造が判然としない。海馬においでも同様に神経細胞の配列異常がみられる。

図3・SRK及び対ラットの小脳矢状断面、′くラフイン切片、LFB＆Nissel染色（A）SRX fB）対照
Ⅹ15
SRKラットの小脳はクローバー薫の形を示し、分子層、顆粒細胞層及び自質の境が不明瞭であり、場所により分子層が欠落している。分子層と顆粒細胞層の厚みは著しく減少している。
中心部に神経細胞の塊がみられる。
−42−

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ー45−

考

神経発生は神経生物学の分野において最も重案

SRXラットは常染色体劣性遺伝形式を示し、要な基本命題であり、種々の対立した問題が多臨床的に体幹振軌、小脳失調を主症状とする先数残されている。例えば、ノ神経芽細胞の移動は

天異常ラットであるご）

放射状ダリ7線経に誘導されるというRakic

病変の王座は中枢神経系に存在し、神経細胞

らの説7）とマトリックス細胞の脚の束に誘導さが層構造を示す部位、すなわち、大脳皮質、海れるとする藤田らの説8）は、今日迄依然として

馬、小脳などの皮質構造部位に最も顕著にみら対立したままで結着が付いていない。また、小れる。病理学的には、小脳の低形成、神経細胞

脳皮質の細胞構築において先導的な役割を果たの位置異常、層構造の配列異常を特散とする。

すものは、バーグマン線経であ早とするRakic

中枢神経系の神経発生は形態学的に大別してらの説9）と平行線維であるとするAltmanら

3段階の過程を経るとされているg）すなわち、の説10）も意見の一致をみていない。更に、化学

上衣下の胚芽層において神経芽細胞が分裂・増親和説などの神経回路網の形成理論についても殖するproliferation stage、分裂し検証されねばならぬ問題が数多くのこされていた神経細胞が皮質の定位置へ移動する＿migra一る。SRKラットの研究はこれら神経科学の基七ion stage、そして定められた位置におい本的問題を解く貴重な鍵を提供してくれるであて他の神経細胞の軸索突起とシナプス結合を行ろう。

い神経機能を発現するSynapSe formation

加えて、SRKラットは疾患モデル動物としstageの3段階である。光顕上、神経細胞のて医学的側面からも利用することができるであ数は小脳の顆粒細胞を除いて減少しているとはろう。ヒトで神経芽細胞の移動障害を特散とす

思われず、電顕上、シナプス結合も正常に認める先天性脳奇形には、無脳回、厚脳回、小多脳られる事を考える七、SRKラットの異常は神回、孔脳症などが知られており、ダウン症候群

経細胞の移動障害によるものと考えられる。

や福山型筋ジストロフィー症でよくみうけられ

先天性脳奇形を呈する異常動物は、特にマウ
3）る三1）従って、SRKラットの病態を究明する

スにおいで、今日までいくつか報告されている。

ことにより、上記の先天性脳奇形の病困・病態

しかしながら、神経細胞の移動障害を示すも一のを解明する糸口を見付けることができるかもしはReeler．mutant mouseを除いて報告されない。以上の様に、SRKラットはヒト先天れていない三）Reel。r mutant mOuSeも性脳形成不全の格好の疾患モデル動物になり得

小脳の低形成と、神経細胞の位置異常を主病変るに違いない。

とし、病理学的にSRKラットと酷似しているとおもわれる。
筆者の知る限り、実験動物として最も頻繁に文

献使用されているウィスク一系ラットでは、髄鞘1）江崎孝三郎（1986）：新たに発見された形成不全ラット5）と水頭症ラット6）の2種類の後肢麻痺ラット，厚生省神経疾患研究委託

先天異常ラットが報告されているのみで、神経費「筋ジストロフィー症モデル動物の開発

細胞の移動障害を示すものは知られていない。

に関する研究」野村班 昭和60年度報告ー46−

書，p45−61．

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SpeCial reference tO develop−

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reorganization of the cerebe−

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llar cortex．ZV．Parallel（1979）：叫yelin deficiency

fiber re−Orientation（md）：A neurologic mutant

following regerenation of thein the Wistar rat，Am．J．

external germinailayer．

Pathol．95：215−223．

J．Comp．Neuro1．149：191−192．

6）Van Eden，C．G．＆Mullink，11）Takada，K et al（1984）：

J．W．M．A．（1986）：工nternai

Cortical dysplasiainhydrocephalus，Optic nerve

COngenital muscular dystro−aplasia，and microphthaimia

phy with central nervousin CPB−WE（Wezob）and Cpb：

SySteminvolvement

WU（Wistar）rats，Lab．Animals（Fukuyama Type）．J．NeurOpathol．

20：257−265．

Exp．Neurol．43：395−407．

−47−

昭和61年度厚生省研究報告書，49−57，1987

GAD（gracile axonal dystrophy）
マウスの遺伝育種学的研究
富
研究協力者

田

武●

山崎一斗：若杉昇●

菊池建機：● 向山昌邦榊
安藤一也…
はじめに

について報告する。

ヒトの崩ジストロフィー症のモデルマウスとしては、すでにC57月L／6J一旬1）ぉよびC57

発

8L／10−m血わが開発されていて、わが国で1984年1月、名古屋大学農学部において、

見も病態解析や治療法研究のため盛んに用いられ

RFM／／I屯aとCBA／N弾とを交配したF2世代ている。しかし、筋ジストロフィー症およびこの2匹の雌と1匹の雄が約80日齢において後れと密接に関連する脳・神経系の異常による筋肢を引きずって歩くのが認められた。このうち疾患は、ヒトにおいて数多く知られており、こ雌雄各1匹は解剖に付され臓器と骨格の異常のれらの病願や遺伝に関する研究を必要としてい検索にもちいられたが、1匹の雌が同腹の正常る。したがって、実験動物において、さらに多な雄と交配されて1匹の正常雄を生んだ。このくのモデル動物が開発されると同時に、既知の雄がGADマウスの基となった貴重なマウスで、疾患遺伝子同士を複合させた合併症モデル動物

母系の1つであるRFM／N脚に戻し交配されたの開発も疾患の病態解析や治療法研究のため必C8A／N9a†

要である。

RFM／NgaJ；コ⇒

われわれは、このような認識のもとに、新し0

口い脳・神経・崩の疾患モデル動物の開発を目指し、病態解析と遺伝解析を同時に、 しかも迅速0

lコ

⊂l Il

し」

に進めるためにもっとも適当と考えられるマウ

ロ

RFH

N9at

スを対象動物として、検索と開発を准めた。

占享

その結果、RFM／NaとC8A／N四の交配のR世代において、生後約80日齢より後肢をひきずって歩く個体3匹を発見した。これらのマウスは生後約200日齢で死亡したが、これらの後代より、これと同じ症状を皇するマウス系
統を確立しつつある。今回は、このマウスについて病理学的および遺伝学的検討を進めた結果

第1回

□

0

【】

0

GAD（gracile axonai dys一
trophy）マウスの家系図．
黒円および黒角はGADマウスの雌および雌、白円および白角は正常マウスの雌および雄をそれぞれ示す。

●名古屋大学農学部●●国立精神・神経センター神経研究所モデル動物開発部
・・・国立精神・神経センター神経研究所疾病研究第四部−49−

り、さらにその後代と交配されたりした結果、んではいるが両親はともに正常個体であった交多くの後肢異常のマウスを残した。この経過を配（Carrier X Carrier）、および両親

第1回に示した。

はともに異常個体であったが幸運にも仔を残した交配（Affected X Affected）の結果

病を第1表にまとめてみた。この表により、前者

態異常個体は、80日齢までは外見上は正常個の交配より生まれた309匹の仔マウスは、正体とまったく区別が付かない。しかし、その後常個体が227匹と異常個体82匹に分散した。

の観察で判明したのは、生後1か月齢頃に尾を仔マウスにおける異常個体中での雄と雌の出現

もってつりさげると、後肢を垂直上方に突っ張には特に大きな差違を認めなかった。また、異る動作、あるいは腹側に折り曲げる動作がみら

常親同士の交配よりはすべて異常仔マウスが生れ、これにより正常個体と区別が可能である。

まれた。
前者の交配、すなわち（CarrierxCarrier）

80日齢より後肢を引きずり始めるが、その様子を第2図に示した。その頃より体重が次第によりの仔マウスにおける分離比は、異常個体の減少して、振戦、排泄障害および後肢の筋萎縮出現には常染色体性劣性遺伝子が関与しているが認められるようになり、また雄では陰茎強直と仮定した3：1の分離比と、よく一致していをしめすことがある。症状は進行性で、5−6た。

か月齢で衰弱死する。雄雌ともに80日齢頃ま

このことを確認するために、GADマウスのでは繁殖が可能であり、雌は1産または2産ま異常個体とC57月L／6Ngaとを正道交配して、で仔を生むことができる。

そのFl、nおよび戻し交配（Nl）の各世代における正常個体と異常個体の分離比を検討した。

遺これらの交配に先立って、GADマウスについ伝

遺伝子解析を行うに先立って、まずGADマては前に述べたように尾をもってつりさげた場

ウスのコロニー内において、異常仔マウスを生合の後肢の動作で、異常個体をあらかじめ選抜

第1表

Results of test crosses vithiri Gad／Nga．

No．

Ha亡ln9phenotypes of progeny Expected

se9regatlon xl
Dam

Slre

progenycarrler X carrler

tgdd／りNormalAffected

227

309

82

ratlo

3：1

tgdd／り0．389
0．50くpく0．70−■■●一一一一■一一一一一一一一一一一一一一一一一■一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一●●●●一●一■■■aHected X affected
1gdd／g■dI

50tgdd／gddI

一50−

5

0：1

第2表

Results of test croSSeS between Gad川ga and C57BIJ6．

MatlngNo・

Phenotypes of pro9eny Expecヒed

segre9auon x2
Dam

Slre

progeny

Normalaffecヒedb（gdd／g8dI

20

H／りaffecヒ申b x

normalanormalaX

tgdd／gddI

20

15

い／り

で0ta1

Affected

0

15

35

0

35

raと10

1：0

1：0

0

1：0

−−−■−■■■一一−■■■−■■・■●●■■−一一−・一一・一■一一一一一一−一一・一・一一一−・■■一一■一一■−−−■■一・一・一一一・一一一一■−■■一−・一一・一一一一−・一・一一・一−■−−−■●−●−一●●■■−−−●●−■■

carrlerC x carrlerC
tgdd／り（gdd／り

66

52

14

3：1

0．505
0．30くpく0．50●−■■■−・■■−■・■●●●■■・■■●●−・一一−−−■一一■一■−■一一−−−−・−■−一一一●−●−−−・−−・一一一−−・一一一一一■一一一一・一・一一一一一一−−一一■−■一一■●−−−●■一一−●−●●●●■■

carrlerC x affectedb
tgdd／り81

affectedb x carrlerC
1gdd／g8dI fg8d／り

31

Toヒal

112

a

38
43
tg8d／gddI
18

1；1
0．309
o．50くPく0．70

13
56

1；1
56

1：1

0．806
0．30くPく0．50
0p＞0．99Gad／Nga■used．

b c578L／6Used．
C Fl between Gad／Nga and C57BL／6used．

した。これらの選抜個体は、すべて80日齢以の形質を支配する遺伝子を∫αdと命名したご）後には発症をみた。第2表に示した結果は、前

そして、この遺伝子を有するミュータント系を述のGADマウス内での交配結果より得られた

Gad／Nga、通称GADマウスと呼ぶことにし結論と矛盾するものではなかった。すなわち、た。このマウスは、前に後肢麻痔を示したこと

異常個体とC578L／6Ngaとの正道交配によるから、仮にhindlimb par・alysis（hh，）

Flは共に正常であり、これらのF．同士を交配と呼んだこともあったが、病理所見の確定したしたFZでは、正常個体52匹に対して異常個体ことにより、ここにGADマウスの呼称が与えが14匹出現し、異常個体の出現率は21．29♭

られたのであるg）を示した。また、F．を異常個体へ戻し交配したNl世代では正常個体56匹に対して、異常個体

考

56匹で異常個体の出現率は50界であった。

マウスにおいては、延髄のgoll核や脊髄の察

そこで、病理学的所見においてGoll核および

goll索の背側％の部位は上向感覚神経系の存

Goll索の軸索に限局して変成が認められる常在する部位であるので、臨床的に認められた後染色体性の劣性形質であることから、graCile

肢のひきずりと、全身のふるえは、この部位のaxonal dystrophyの頭文字をとって、こ障害に起因すると考えられる。

−51−

マウスにおいて、神経軸索に萎縮を伴う突然行性のextrapyramidal syndromeを示

変異はいくつか知られている。ataxis（ax）ミ）し、rigidityとdementiaを伴う。発症

shambling（shm）6），ducky（dy）7）など

は7−9歳で、それまでの発育は正常である。

が代表的ミュータント系統である。しかし、ここの病気は常染色体性劣性遺伝子によるといわれらのミュータントは、GADマウスにみられれている。また、神経軸索の萎縮軋pa11idum

るように限局した神経軸索の萎縮を示すものでに限局して現れることと、色素沈着がglobusはない。

pailidusおよびSubstantia nlgra

GADマウスは80日齢頃までは雄雌ともにに認められる三1【43）繁殖が可能であるので、遺伝的にホモ接合体のVitamin E Deficiencyに関しては、確認できる胎仔や発症前の幼い動物を用意して、

cystic fibrosisやCOngenitai

発症時期や、発症前後の病理学的検索が可能で

biliary atresiaの場合に、神経軸索にある。また、異常個体同士の交配よりの受精卵萎縮が認められることがあるが、Vitamine

旺Bと、正常個体同士の交配よりの受精夕願を試Eの投与により症状が改善されるとの報告もあ験管内で融合させたのちに、着床条件を整えた

る三4〜17）仮雌親の子宮へ移植することにより、異常個体

老化の過程では、体の各部位に変性がみられ細胞と正常個体細胞がキメラ状に混った成体をるが、ラットを用いた実験において、神経軸索つくることが可能である。このようなキメラ動の物における神経症状の発現の有無や、神経軸索

nucl。uSに変性が認められている㌘）

graCiie nucleusとCuniateにおける病変の有無を検索することにより、其このように、GADマウスの神経軸索の萎縮の病因に迫る研究の進展が期待されるのである。

は、全く同じではないにしろ、上述のヒトの神

ヒトにおいて、神経軸索に萎縮を生じる疾患

経疾患において認められる症状と頬似してレ、る。

としては、

マウス以外の動物では、Suffolk sheep

Znfan七ile Neuroaxonal

Dystr。p肯て）Hallerv。rden−Spatze

において、遺臣的な神経軸索の萎縮が報告されDisea蓑

1Pvitamine E Deficiency，ておりぞ）またネ。でも同様な萎縮が、被毛の老化誓咽）薬物中毒21 瑠）などが知られている。

色素が異常に薄くなる形質と関連して出現する＝nfantile NeurOaXOnal Dystrophyの場合には、進行性の神経および知能の障害をことが知られておりぞ6）いずれの場合も常染色体性劣性遺伝子による。
GADマウスの常染色体性劣性遺伝子の、連ともない、hyperkinesia，bulbar
paralyses，rigidity，dementia

関群に関する解析も進行中であり、またC57などを引き起こすことにより臨床的に特徴付け

BL／6N辞やられている。発症は2歳前後であり、それまでして、コンジェニック系統を作成する育種操作の発育は、正常児と変わらない㌘）この病気のも進行している。さらに、isozymeを支配し場合、神経軸索の萎縮は中枢神経系の全体に及ている遺伝子座位を標識にして曹d遺伝子と伴ぶ。

性劣性遺伝子で筋ジストロフィー症をひきおこ

Hailervorden−Spatz Diseaseは進C3H／Ngaへ∫αd遺伝子を導入す血遺伝子との複合による、神経軸索の萎縮−52−

と筋萎縮の合併症マウスの作出も夢では無くな

7）Meier，H．The neuropathology

りつつある。

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−53−

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called axonal dystrophy）

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as seenin Goll．s nucleus of14）Pentschew，A．and schwarz，K・277

Systemic axonal dystrophy

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nucleusin children and

ParkI

S●

H・Axonal16）Sung，J．H．and Staslan，E・M・

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Neurodystrophyin congenitaltheincidence and associatedbiliary atresia・IJ・Neuropa−

diseases．Neuropathol．Exp・

thol．Exp■

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Neurol・I25：341−

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Mastri，A●

R・and

WarwickI

W．J．Axonal dystrophyin the−54−

occurringin an experimental
dying back processin rats・

BrainI

Pathology of the neurOpil of

92：789−804I1969・

2）Chou，S．M．and Hartman，H・A・

the gracile and cuneate nuclei

Axona11esions and waltzing

in aging and old rats：A

Syndrome after ZDPN administ−

stereological study・Neuro−

rationin rats．with a concept

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Changesin the dorsal column

tho1．，8：113−140，1967．

nuclei of aging mice．Lack of26）

Woodard，J．C．，Co11ins，G．

protection by vitamin E・J・

H．and Hessler，J．R．

Geront01．，30：395−411，1975・

hereditary neurOaXOnal dystro−24）Fujisawa，K．and Shiraki，H・Study of axonal dystrophy・＝・−55−

Acta Neupa−

Felinephy．Am．J．Pathol・，74：551−
560，1974．

図2

GADマウス雄 生後 101日齢昭和61年度厚生省研究報告書，59−63，1987

軸索ジストロフィーのモデル動物としてのQID（gracile axonal dystrophy）マウス
菊

池

建

機●

研究協力者 向山昌邦： 山崎一斗…
富田 武…
はじめに
昭和60年度の報告で、我々はRf

法どうりパラフィンに包埋し、光田原本とした。
研屯aと切片はH−E，Kliiver−Barrera，Boodian

C8A／Ngaの交配より得られたマウスに、後肢染色を施し観察した。電子原敬鏡学的検索は、

麻痔を主散とする常染色体劣性遺伝様式に従う

同様に、2．0界バラホルムアルデヒド、2．5界

ミュータントマウスを発見し、その経過およびグルタールアルデヒド、0．1Mリン酸緩衝液

退伝解析の結果を報告したご）発見当初、異常（PH7．4）で清流固定し、1．0界オスミウム酸

マウスが後肢を引きずり、前肢を使ってほふくで後固定後エボン樹脂に包埋した標本を用いた。

前進する顕著な歩行障害を呈したため、仮に後固定後、大脳、小脳、脳幹などを部位別に切出肢麻痔マウス（hindlimb paralyses：

し、脊髄は頚髄、胸髄、腰髄に分けて病理標本

人中）と遺伝記号を命名した三）を作製した。脊髄根、後板神経節も出来るだけ

本報告は、異常マウスの中枢神経系の神経病採取し検討した。筋組織はヒラメ崩、前頚骨崩

理形態学的所見から、個体の示す歩行異常は上においてパラフィンおよび凍結切片で観察した。

行性の知覚神経錆である延髄の薄束核（れ仰山払J
gJαeHiJ）、およびそれに続く脊髄の背索（ヒ結果および考察

トの後索に当たる）に在る薄束（′α∫Ci比丘払∫

GADマウスは全て同様の病理所見を示す。

grαei㍍∫）に限局する変性病変に起因すること

肉眼的には脳、脊髄、末梢神経において異常をを明らかにし、さらにこの異常マウスを脊髄薄・認めない。光学原敬鏡学的観察では、筋組織に東に於ける軸索ジストロフィー（gracile

おいてそれを構成する筋線経に廃用性の萎縮を

axonal dystrophy）という神経病理学的認めるが、壊死および再生や、それに続く結合側面からGADマウスと改めて命名■し、その疾

織増生は見られず、その他の心、肺、肝、膵、

患モデル動物としての評価を行ったものである。

腸管などの組織にも特に異常は生じていない。
大脳および小脳に目立った形態学的異常はない

材料および方法

が、GADマウスの延髄薄束核およびそれに続

130−137日齢のGADマウス、8匹と対照

く脊髄の薄束を構成する神経軸索の局所的塵大正常マウス4匹を供試した。マウスは麻酔下でを主徴とする変性所見を見出した（図一a，b：

胸部を開き、心臓より10浄ホルマリン、0．1

矢印）。

Mリン励緩衝液（PH7．4）にて清流固定し、常・国立精神・神経センター、モデル動物開発部…同，疾病研究第四部
・・・名古屋大学農学部家畜育種学教室−59−

薄束の旗位を占める下行性脊髄用である錐体

Q
図一a

対照正常マウスの頸髄。背索を矢印で示す。KrGver−Barrera染色

Ⅹ60

図−b GADマウスの頚髄。背索の背側（矢印）約％の薄束（fasciculus gracilis）部の染色性が悪く、変性所見あり。 KrGver−Barrer・a染色 Ⅹ60−60−

＿＿■2−品・こ，．∵−′、・．二凛に拇㌍・．・靂 ㌧鶉

譲範が竿柔

亘㌔曳▲J繁ヽ．
∴．．．﹂．h一ヽ∵Jl︑JJ
︑一1

▲

準範頼

、」

︑ナ

■

∵ ・

↓■▲

− ■ ・ れ．
1一

図−e GADマウスの延髄、再来核。グリア細胞増生、神経線経の消失および局部的慶大を認める。大型のスフェロイド小体（矢頭印）が散在する。Bodian染色 Ⅹ1，050

図−d 延髄、薄東核に見られる鹿大した有髄神経線維とその形質小器官の教細構造
Ⅹ11，200−61−

路に異常はない。変性の程度は延髄の薄束核に

ベ、ヒトに見られる成人発症の変性神経疾患に最も強く、次いで頚髄、胸髄、腰髄の薄束の順類似する面が多い。

である。この部位では有髄神経線経が消失し、グリア細胞の増生がある（図−e）。軸索形質の変性腫張した球状構造物は、いわゆるスフェ

引用文献

ロイド小体（spheroid body）に類似し、

1）富田 武，菊池建税．埜中征歳，若杉 昇，

薄東核に最も頻繁に出現するが、薄東の各部位

山崎一斗：後肢麻痺マウス島中の病態とにも散見する（図−C、矢頭印）。

遺伝について，昭和60年度厚生省研究報

球状構造物は、電子顕微鏡で観察すると、井告書（野村班），63，1986

薄化した髄鞘を有する有髄神経線経や無髄神経

2）Lampeヮ七，P・and A・Pentschew

線経の軸索が異常に腫大しており、内部には種：An electron microscopiC々の軸索形質小器官、すなわち糸粒体、神経細Study of spheroid and

線経、変性した模様構造物等を多数含んでいる（図−d）。
延髄薄東核は第一次知覚神経の中継核で、続く脊髄の薄束は上行性の知覚神経路であるたや、
GADマウスの示す後肢の引きずりや、微細なCOnVOluted bodiesin dystro−
phic terminal axons．Acta
Neuropatho1．，4：158，1964
3）Davis，R．L．and D．M．

振戦はこの部位の障害によるものと推察される。

Robertson：Textbook of

このような神経軸索の塵大は、いわゆる軸索

neuropathology．Williams

ジストロフィー（axonal dystrophy）の一般的な病理所見として知られているご）ヒトのHa11ervorden−Spatz病、infantile
neuroaxonal dystrophy等はこの典型
である3，4）かかる病変は、薬物中毒や実験的ビ
タミンE欠乏症などでも延髄や、脊髄の同じ部＆

Wilkins，1985
4）Shiraki，H：Some unusuai
neuropathologic featuresin Guam casesin comparison
With thoseinJapanese．with

位に、同様に出現することが報告されているご）

SpeCial reference to

また最近この神経系の軸索腫大部に神経ぺブタ

Hallervorden−Spatz disease−イド（コレシストキニン）が証明され神経伝達1ikeiesions．Proc．of the

物質の軸索流との関連で注目されf）さらにそ

5thlnternat・COngreSS Ofの出現頻度がヒトを含めた広範な動物種において、加齢（aging）と深く結びついていること

Neuropathol・I ZurickI201，
1965が指摘されている三，8）GADマウスは生後約80
日齢迄は殆ど臨床的異常を示さず、ある時期に突然障害を示す。この点で、生後極めて早期より先天的異常を示す他の疾患モデルマウスた比−62−5）Matsuda，T．et al：Dystrophic
axonsin the nucleus gracilis
Of normal rat containingCholecystokinin−likepatho1．，8：255，1967

immunOreaCtivity・Acta

7）Fujisawa，K．and H．shiraki：

Neuropathol・65：22411985
Study6）Fujisawa，K：Aniiniqueofaxonaldystrophy●

1・Pathology of the neuropil

type of axonal alteration

Of the gracile and the cuneate（so−Ca11ed axonal dystrophy）

nucleiin aging and old rats：

as seenin Gollls nucleus ofA

277

stereologicalstudy●

cases of controIs．A
NeuropathoL

COntribution to the pathology
Of aglng prOCeSS．Acta Neur0−−63−

4：1，1978Appl・Neurobiol●，昭和61年度厚生省研究報告乱 65−73，1987

糖原病‡型系（m系）と正常系（AWE）との交配からのF！に出現した翼の挙上不能個体

研究協力者

水

谷

布

谷

誠
鉄

夫

前年度は白色卵殻卵を産卵し、ノミンダ羽装、異の挙上状態の調査結果を表1に示した。表かYellow羽装、Dilution羽装および野生型

らも明らかなように挙上不能個体と挙上可能個

羽裳の分離している梼原病Ⅱ塾の系統RWE系

体は19：20と1：1の分離比を示した。しかを確立したご）しかし、上述の4種の羽裳はいし、挙上不能個体は堆6雌13と雌に多発し、ずれも胚において黒色の色素が沈着する。これ

挙上可能個体は雄15雌5となった。すなわち、は胚を実験に使用する際の障害になると思われ

挙上不能個体の出現には性差が観察された。まる。そこで、今年度は黒色色素の沈着しないア

た、雄における挙上不能の発症遇齢は雌のそれ

ルビノ形質をRWE系に導入することを計画しより高齢の傾向を示した。アルビノ形質は性染

AWE系（アルビノで自卵を産卵する系統、図

色体性の劣性遺伝子により支配されている。こ1）の雄とRWE系の雌を交配した。その結果．

のためAWF的XRWE雌の交配からの雌はす

机において筋肉に梼原の蓄積はみられないが、べてアルビノとなり、アルビノに巽の挙上不能

梼原病皿型の主散である異の挙上不能となる個個体が多発した。図2に異の挙上不能の雌（ア体が出現した。本報告はこの吊における異の挙ルビノ）および雄を示した。

上不能個体の出現頻度および異の挙上不能、可能両個体の組織学的な検索結果である。

昭和58年度の本報告書において筆者らは栃原病Ⅱ型形質が常染色体性の単一劣性遺伝子にょり支配されていることを報告したご）その時

Ⅰ．AWE系とRWE系のFlにおける翼の挙上不能個体の出現頻度

遺伝子分析に用いた系統は、梼原病丑型系としてRW系を、正常系としてMWE系を用いた。

AWE雌）×RWE雌の交配から得られた子のそして、RW宅的XMWE雌）およびMWE㈱×fW

表1．AWE（87×RWE（？）の交配から得られた子の巽の挙上状態

調査年月日

挙上不能
8

間
9

挙上可能
8

9

3

1

4
1

5

1

0

5
1

5

0

0

5
1

5

6

肘）日本生物科学研究所

1

87

3

1．9．

1

86

8

3

11．11．

5

86

9
2
1

3

9．18．

中

雌の両交配から得られた56個体の巽はいずれ抑制する。このためメラニンが合成されずアル

も挙上可能であった。今回の交配において吊のビノとなることが報告されているご）この移送雌（アルビノ）に巽の挙上不能個体が多数出現の抑制が梼原病町型の原因酵素である酸性マル

したことは以下の3点が考えられる。

ターゼにおいてもおこっていると仮定すれば、

1．糖原病Ⅱ型形質は常染色体性の劣性遺伝
子には支配されていない。

梼原病Ⅱ型遺伝子がヘテロで酸性マルターゼの合成量が少いことに加えて移送に若干の抑制が2．倍原の蓄積と巽の挙上不能状態は異なる遺伝子により支配されている。

おこったためリソブーム内の酸性マルターゼ活性が低下し、糖原病皿塾の主役である異の挙上3．梼原病Ⅱ型遺伝子とともに未知の因子が不能状態のみが発現したとも考えられる。また、存在すると梼原の蓄積がなくて異の挙上不能状
態のみが発現する。そして、今回用いたAWE

昭和56年度？報告書に記載したごとく、これまで梼原病Ⅱ型ウズラが出現したことのない系の雄はこの未知の田子を保有していた。

AWE系の酸性マルターゼ活性値は正常系のAWE系の標識遺伝子の1つであるアルビノ形

AMRP系あるいは糖原病Ⅱ型形質に関して国質もこの未知の田子である可能性が考えられる。

定前（選抜前）のRW系のそれらより低い傾向

すなわち、AWE系のアルビノ形質を支配するがみられた（図3）ご）このことは酸性マル・ク

遺伝子は色素細胞においてメラニン合成のkeyーゼのリソゾームへの移送が若干抑制されていenZymeであるチロシナーゼをゴルジ・ER・

るためとも考えられる。

リンゾーム系からメラニン合成部位への移送を

図3・AWE系、AMRP系および糖原病Ⅱ型形質に関して選抜前のRW系の血清中酸性
マルターゼ活性値
−66−

言
十
㌧
十
∴
∵
一
⁚
∵
卜
1
．
■
ハ
∵
鴇
志
し
卜
転
け
吏
図4・Flにおいて出現した巽の挙上不能個体と正常個体の胸筋（PAS染色）
−67−

68

表2・正常個体および異の挙上不能個体における単位面積あたりの節線維数とそれらの平均直径

Case No・

筋線維数／単位面積（864♪〟）

平均直径（物）

1288−1（正常）15．8± 6．8

1288−2（〝）17．1±9．6

1288−5（♯7408）

23．1±6．924．2±4．0

1288−6（＃7229）

14p

14pm

25Jm

191血

29J皿

201m

29p

29〉皿

図5． 放線経の直径と筋線維数の関係
Ⅱ．Flにおいて出現した葉の挙上不能個体の病理組織学的検索

成されているのに対し（図4；1，2）、挙上
不能ウズラの筋線維束ではそのような規則性は異の挙上不能個体（アルビノ）2例（♯7408、

みられず放線経はいずれも大型でPASに汲染7229）と対応する日齢の正常ウズラの浅胸崩し、横断面が円形化を示す肥大性線経と中心性を検索した。PAS反応で糖原の蓄積程度を調の多核線維とが混在した（図4；3，4）もまべたが異常は認められず、梼原病とは思われなた、挙上不能ウズラでは細胸反応を伴った筋線

かった。しかし、正常ウズラでは一筋線維束の経の壊死が散在性に認められた（図4；5，6）。

周辺がPASに濃染する大型の筋線経から成り、単位面積あたりの筋線維数とそれらの線経の中心部がPASに反応しない小型の筋線経で梼

平均直径を計測した結果、異常ウズラでは線維−69−

数が正常ウズラの％一月で、平均直径は正常ウ

3．RW系を酸性マルターゼ活性値に関してズラのそれの約1．5倍であった（表2）。また、

高、低2方向に選抜し、異の挙上状態との関連

筋線経の直径を横軸に、それぞれの個数を縦軸を検索する。

にとって両者の関係をヒストグラムで示すと、4．糖尿病Ⅱ型系（RW，m）およびAWE

図5に示したように正常ウズラでは14ノImに

不RWEから得られたnにおいでみられた巽のピークを持つ2蜂性のバターンを示したのに対挙上不能の原田を探索するとともに巽の挙上不

し、挙上不能ウズラでは19／lm

能が糖原病Ⅱ型の主徴であるか否かを検索する。

と29′lmあるいは29／lmにピークを持つ2蜂性のバター
文ンが得られた。
以上の所見はニワトリでみられている筋ジス

献

1）水谷

誠：桧原病皿型ウズラの改良．筋トロフィーのそれらに類似する点が多い。

ジストロフィー症モデル動物の胸先に関す

今後、F．において異の挙上不能個体が出現しる研究．昭和60年度研究報告書．77−

た原因を解明するため以下の4項目について検

87．

1986．

2）水谷 誠：糖原病Ⅱ型ウズラの遺伝子分索する予定である。
1．正常系としては、AWE，AMRPおよび

析．筋ジストロフィー症動物の生産・開発

MWE系を、槙原病Ⅱ型系としてはRW系およに関する研究．昭和58年度研究報告書．

びRWE系を用い、正常系と糖尿病Ⅱ型系の種47−56．1984．

々の交配を行い、F．における異の挙上不能個体

3）山本博幸，伊藤一男，石黒誠一，竹内栄，の出現頻度を調査するとともに、胸崩の糖尿の竹内拓司：白色ウズラ色素細胞の培養．

蓄積の有無を検索し、未知の因子の存否を検索

日本遺伝学会第57回大会講演要旨．

する。

4）水谷 誠：糖原病Ⅱ型ウズラの育成．筋

2．AWE系を酸性マルターゼ活性値に関しジストロフィー症動物の生産・開発に関すて高・低2方向に選抜し、それぞれの系統とる研究．昭和56年度研究報告書．35−

RW系あるいはRWE系との交配を行い、F．に

52．1982．

おける巽の挙上不能個体の出現頻度を調査する。

ー70−

図1

AWE系の雌雄図2

AWE（答）×RWE（♀）の交配からの即こおいて出現した
巽の挙上不能個体（上：♀、下：古）昭和61年度厚生省研究報告書，75−84，1987（財）実中研における、最近の筋ジストロ
フィー症モデル動物の維持と繁殖状況
斉

藤

宗

雄

研究協力者 田中 亨，日置恭司
ヒト筋ジストロフィー症研究には、筋ジスト始めた。ほゞ期を一にして、徽生物的にコンベ

ロフィーマウスを始め、各種のモデル動物が使ンショナル（以下Convと略）であった。筋ジ

われている。

スマウスを

SPF（Specific Pathogen

当実験動物中央研究所は、筋ジストロフィー

free）レベルとする、いわゆる微生物的清浄症研究班に参画して以釆、1969年には筋ジ化に着手した。これは、次のような手順で行な

スマウス＝C57月L／6−如、1982年には筋われた。

ジスハムスター、1983年には筋ジスマウス＝C578L／10−m血まず、オスへテロ（＋／旬y）とメス正常（十／を導入し、これらを維持・＋又は＋／dy）の交配で妊娠したメスの出産直繁殖し、研究班貝に配布する業務を行っている。

前に、無菌的帝王切開手術により胎仔を摘出し、これらモデル動物は、実験動物技術の向上に伴

SPFの里親マウスに里仔し育成する。育成さない、遺伝的、微生物的改良が加えられている。

れたメス・オスを無作為に交配し、仔に歩行異ここでは、当研究所で維持・繁殖している崩

常（如／dy）が生まれて来るペアを1ン旬γのペジストロフィー症モデル動物の現状を紹介し、アとして綴代するものである。このような、清研究者各位の参考に供したい∩

浄化には、長期間を要したが、1983年から
は、SPf

1．筋ジストロフィー症マウス：

C57BL／のC578L／6−dyが一般に配布されるようになった。
以下に、C578L／6−dyの飼育・繁殖の現状6−dyを紹介する。

経過C578L／6一旬マウスは、野村・江崎らによ飼育・繋殖方法

り1969年米国のJackon Labから導入さ

C578L／6−和の系統維持はビニールアイソれたものである。当時江崎らは卵巣移植技術等レータで、繁殖はSPF動物室で行なわれていの繁殖方法を検討し、月産100匹程の繁殖コる。（写真1）

ロニーを確立し、繁殖した筋ジスマウスを研究

系統維持；

軌こ配布した。この業務は、1976年研究所

120m×60dⅥ×50cm高の日本クレア製鳳10の川崎市移転に伴ない斉藤らが担当することに型を用いた。飼育ケージはマウス用PPケージなった。1980年からは筋ジス研究の発展と、（175×245×125m日本クレア製）を用い、このモデル動物普及のために、一般への配布を

床敦には電気カンナクズを用いた。飼料はγ線・財）実験動物中央研究所−75−

ビニールアイソレータは、外寸

写真1．ビニールアイ ソレーク飼育室
3Mrad照射滅菌済同型飼料（日本クレア製の動物室へはいる時は必ず滅菌した無菌作業衣

CA−1）を給餌バスケットで、水は水道水を絵を着用した。シャワー浴は行なわなかった。動

水瓶で自由に与えた。これら飼育資材は全て物室の環境は、温度23±2℃、湿度50−60（飼料は省く）アイソレータ専用滅菌缶に収容

界、換気は新鮮外気をγ3導入した15回／時

し、高圧蒸気滅菌してから搬入した。飼育操作とした、凧明時間は、12時簡明12時間暗には、従来行なわれている無菌動物飼育手技であ

調節した。

る。

繁殖方法は、コロニーをヘテロ確認群と繁殖

世代交代は、ヘテロのメス・オス間の交配か群とに別け、ヘテロ確認群は、系統維持群からら生まれる同腹の正常仔（十／7）メス1：オス

導入されるメス・オス（十／7）を無作為に1：1のペアで交配し、仔に歩行異常を示す個体が1のペアとし、仔に歩行異常が出現するか否か

1匹でも出現すれば、そのペアを＋／旬のペア

で、十／dyのペアを選び、＋／軸のメス・オス

として次の世代とした。

を繁殖群に移すものである。繁殖群は導入され繁殖；

SPF動物室の飼育方法は、従来のる＋／毎メス・オスを用いて、いわゆる妊娠分

SPf 動物飼育方法に準じて行った。飼育ケー

離法による繁殖を行った。それは、オスのケージはマウスPPケージを用い、床敦には電気カジに複数のメスを同居させておき、腹部が膨らンナクズを用いた。飼料はr線3池・ad照射滅んだ妊娠メスを個別ケージに移し、出産・哺育

菌済CA−1を給餌バスケットで、水は水道水をさせ、哺育仔は約3適齢で離乳し、メス親は再拾水瓶で自由給与した。また、これら飼育資材

び元のオスと同居させる方法である。この方法

は高圧蒸気滅菌してから用いた。なお、飼育者

は、メスのオスとの同居を計画的・定期的に行−76−

なうことにより、出生日のある程度揃った動物

繁殖成績を得ることが可能である。（図1）

C578L／6−dyの繁殖性について、1980
年当時のConv′の成績と最近のSPf，の成績を比較した。交配は、各々メス・オスヘテロのものである。
出産率はConv86．8界、SPF81．0界、平均産仔数はConv7．2匹、SPF6．6匹、離乳率（総和離乳数／総塵仔数×100）はConv20．6
界、SPF17．1界で、生産指数（メス1匹から1回の交配で得られる仔数）はConvl．3、SPF0．9で、SPFはConvより低値であった。
（表1）
一般的に清浄度の高いSPFは、低いConvに♀

♂

● ■血／旬

比べ繁殖性が良好であると言われている。C57−

8臼 ＋／／血□ ＋／て8L／6−dyの今回の成績は逆の値を示していた。

図1．C578L／6−dyマウスの維持・生産方式
表1．

コンベンショナルSPF

これは、SPF動物室へのヒトの出入は、CoⅣ

C578L／6−dyマウスの繁殖成績

？親数

出産率

平均産仔数

離乳率＊

匹
133

界
86．8

7．2

浄
20．6

．1．3

79

81．0

6．6

17．1

0．9

匹

生産指数■■

・絵離乳dy仔／総塵仔数×100●●〝／延交配回数×100

動物室に比べ厳重であり、dyマウス繁殖作業いる。最近（1986．9）の検査では、系統維持の樋めて重要な、動物の観察作業が総体的に減コロニーは全項目陰性であった。しかしながら、り、このことが、繁殖成続に影響していると考繁殖コロニーでは、培養でP∫亡Udomonα∫αCru−

えられる。今後、さらに検討すべき問題である。

gi伽∫α が検出された。
ちなみに、1980年当時（Conv）の微生物

品質検査くモニタリング）

検査ではMouse adeno virus，Pceudo一

微生物；C578L／6−dyの系統維持・繁殖

m07的∫αコロニーは、当研究所徴生物モニタリングセン

γ叩れ0飽，Ciαrdiαm払ri∫，5y〆αeiα

叩Pらが検出されていた。（表2）

ターにおいて、血清反応8項目、培養6項目、退転；C578L／6一句の系統維持コロニー

鏡検3項目の微生物検査が定期的に行なわれては、当研究所通年的モニタリングセンターにお

−77−

表2．
検

査

C57BL／6−如マウス微生物検査成績

項

S P F

C on v目（1 9 8 0 ）血C Oり 几 ムαe ∠er i払m g 仏土
∫eA ri5yTαヱzm zo几
e r 損ls 亡oッ
r由g aふ打
nis
払mm

活

．
勘 叫 画 肌 用 鮮血 摘 心反E ct r o m e l i a

v ir
u

応

諾；：…； ≡慧；諾 ：S v i r 。S

アイ ソ レ ー タ室

生産室 内

−
−
ー
−

S

−
＋
−

S en d a i培

v i ru s−

月∫C最 r ie A α C Oわ

−

♪α∫ β
u r e〃 α クルβ払仇0 γ叩 ieα−＋

タ∫gM b m onα∫ α m g M ∫α
5 αよ
れの ￠
〃 α ∫p P
5極 巾 偏 … 那 皿 γ 払∫−

〟 ye O〆 α∫m α ク比丘
m o几i∫−

鏡

G iαγd iα m 仏r i∫＋

検5〆 叩 几仏e ム 払∫ 爪払r i∫
5 y 〆 αe iα 叩 p

−
＋

養

＋

−

（実中研モニタリングセンター、微生物検査部

いて、11染色体上の19Locusの遺伝生化

1986．9）

表3．C578L／6−如マウスの遺伝的モニタリング成絞学的検査を定期的に行っている。最近（1986．9）の検査では、全項目ホモ型で、かつ、遺伝的背景となるC578L／6と一致していた。従って、
C57月L／6−軸は遺伝的に信頼がおけるものと思われる。（表3）

供給実績
最近のC578L／6−dyの使用状況を知るために、当研究所における過去6ケ年間の動物生産数ならびに供給数を調べた。動物生産数は、1981年515匹、1982年695匹、1983年
785匹、1984年392匹、1985年493匹、そして1986年は140匹であった。（表4）
供給数は1981年395匹、1982年408匹、1983年602匹、1984年314匹、1985年

染 色体番号
及び L O C U S

C 578 L ／6

C 578 L ／6 −dy

工d h −1
1 P e p −3
A k p −1
2 Hc
3 C a r −2
4 M u p −1
G p d −1
5 P g m −1
6 L d r −1
7 G p 1−1
Hbb
8 E 5 −1
E 5 −29 T h y −1
M o d −1Tr r
1 1 E 8 −3
1 7 H −2 k
H −2 8

a
a
a
1
a
b

a．
a
a
1
a
b

a
a
a
b

a
a
a
b

a
a
b
b
b
b

S
a
b
b
b
b

a
b
b

a
b
b

￣

（未申研モニタリングセンター遺伝検査部
1986．3）−78−

表4・C578L／6−dyマウスの生産・供給状況

究、あるいは、これらを用いた研究も可能とな

供給数

る。

6
7

1

3

1

4

1

1

1

5 8 2 4 93
9 00 1 08
3 4 6 3 1

51

1 23 4 5 6
8 8 8 8 8 8
9 9 9 9 9 9

生産数
5 5 5 23 0
1 98 9 94

度

1

年

で、C578L／6−軸の発症前ならびに初期の研

私共は、今後、このような技術をC578L／
6−dyの系統維持・繁殖に応用したいと考えている。

109匹、そして1986年は83匹であった。

2．筋ジストロフィー症ハムスター

生産数は前年の供給実績を参考にして決められているが、生産・供給数共に1983年をピー

経クに下降している。特に1985・1986年の筋ジストロフィー症シリアンハムスターは、供給数の低下は著しい。

過1962年Dr Humburgerらによって育成

これは、近年の崩ジストロフィー症研究は宣伝された、心掛こ異常を起こすモデル動物である。

子DNAレベルでの研究が行なわれるようになっ

当研究班では、筋ジストロフィーハムスターていること、また、当研究所横山らの卵巣移植、BIO14．6系、ならびにコントロールハムスタ

体外授精技術は、発生当初からdy／dy と予測

ーBIOFIB系を米国のBIO Research

されるマウスを育成することが可能で、従来方ConsultantsInc・から輸入し、研究班員

式により繁殖されるdy／dyマウスの必要性がに配布する業務を1982年から1984年にわ減少したためと思われる。

たって行った。輸入できるハムスターはオスのみであったが、輸入総数は約1000匹に遷した。

・今後の方向

1982年、送られて来た81014．6系オス

C578L／6一句は、筋ジストロフィー症研究の中に2匹のメスを発見した。私共はこのメスに古くから使われているモデル動物である。常と他の81014．6系オスとを基に筋ジストロフ

染色体上劣性遺伝子dyがホモ型で発現しィーハムスターMYH（81014．6）系の維持を

ホモ型は2−3適齢頃より歩行異常を示し、特始めた。一万、1982年杉田博士のはからい

別な飼育を行なわない限り8−9掴齢で死亡すにより、カナダのDrJasminから筋ジスト

る。ホモ型では繁殖不能である。従って継代あロフィーシリアンハムスターUM−Ⅹ7．1系を導るいは繁殖は、ヘテロのメス・オス問の交配に入した。

より得られる仔マウスの中から、臨床的に歩行1983年、私共は、これら2つの筋ジスハ

異常を示す個体を抽出するものである。抽出さムスター系統の繁殖能力を検討し、出産・供給れた異常マウスを筋ジスマウスとして実験に使の見通しをたてた。

用している現状である。

ここでは、MYH（81014．6）泉UM一Ⅹ7ユ

横山らによって研究されている卵巣移植・体系の飼育・繁殖の現状を紹介する。

外授精技術による筋ジスマウスの繁殖方法は、出産するすべての仔をホモ型とすることが可能−79−

飼育・繁殖方法

5．9匹で差が小さかった。離乳率はMYH61」9

飼育には、小動物用飼育室をあて、温度23

診、UMrX7ユ73．3界であるのに対し、N：±2℃、湿度50−60界、換気は全新鮮外気

Syrianは55．7界に過ぎなかった。これらので1時間に15回行った。照明時間は12時間成績を生産指数でみると、正常のN：Syrian

明12時間暗に統御した。飼育ケージは、ラッは3．0であったが、筋ジスのMYHは1．6、UM−

ト用クリンケージ（265×425×150m

日本ク

Ⅹ7．1は1．8と約2．巧の値であった。これは、レア製）を用い、床敦には電気カンナクズを用い出産率が低いことが影響しているものと思わた。飼料は、r線3Mrad照射滅菌した固型飼れる。（衰5）

料CA−1を給餌′ミスケットで、水は水道水を給水瓶で自由に与えた。特に、崩ジスハムスター

品質検査においては、Wet＿tail発症を防止するために、

微生物：維持・育成中のMYHならびに飲水中にフラジオマイシン2呼／ヱ溶かして与N：Syrian系については、当研究所微生物モ

えた。飼育資材は洗倣後、薬液噴霧消毒し、乾ニタリングセンターにおいて、血清反応4項目、燥してから用いた。伝l育室へのヒトの出入に当培養8項目、検鏡2項目の致生物検査を定期的っては下足の交換を行ったが、着衣の交換は行に行っている。最近（1986．9）の成績ではなわなかった。傲生物的にはコンベンショナル
レベルの飼育である。

MYHならびにN：Syrian共に鏡検で5〆γ〇一
打払ごわ払∫m払γわが検出されたが、他の項目では

繁殖は、3ケ月齢以上に達したメス1：オス

すべて陰性であった。飼育室ならびに飼育方法

1のペアとし、そのまゝ妊娠・出産・哺育させはCoⅣであるが、清浄度は比較的高く保たれる方法をとった。哺育仔は3遇齢で離乳した。

ている。
退転的モニタリ：／クについては、現在、ハム

繁殖成績

スターについての方法が確立していないので、筋ジスMYH（8IO14．6）系、UM−Ⅹ7．1糸行なわなかった。（表6）の繁殖成続を正常のN：Syr−ian系と比較した。
出産率はMYH41．69も、UM−Ⅹ7．137．7界

今後の方向であるのに対しN：Syrianは91．5界で、約現在、当研究所で維持している筋ジスハムス

30界高い値いを示している。平均産仔数はターには、実験動物学的にみて次のような問題

MYH6．2匹、UM・ズ7．16．4匹、N：Syrian

が残されている。その第1は、散生物的にConY

表5．

筋ジストPフィーハムスターの繁殖成揆（1985．1−12）

生産指数

7

3

0

匹

離乳率

1

平均産仔数

6

出産率

1

交配？数
MYH（81014．6）

408

界
41．6

6．2

界
61．9

UM−Ⅹ7．1

392

37．7

6．4

73．3

N：Syrian

59

91・5

5．9

55．7

−80−

匹

表6．

筋ジストロフィーハムスターの微生物検査成績
M YH

血
清
反
応

（
B 工0 1 4 ．
6 ） Control

S en d a i v i ru s
L C M v lr u s
T y z z e r −s o r g a n i s m
5 扇m Oル 〃α 如 んim r i乱れ
P α∫わ乱丁β〃α m 址 わ亡血

弓言二二二三5 汁 岬 と0 e O e C 祐∫ f m 一弘m O n i αβ
5 α 仇 の 亡〃 α 叩 P

義 慧慧慧 笠芸霊 前dermatophytes
鏡 5如γ0m∽ 甲∫mW ∫検 all ectoparasites＋（実中研モニタリングセンター＋

微生物検査部1986．9）

レベルで、継代繁殖に常時フラジオマイシンをCenter U．KよりC57BL／10−血9585

飲ませなければならないことである。その第2を導入した。以後、無菌動物用ビニールアイソ

は、遺伝的に適切なコントロール系がないこと

レータ内で維持している。1983年からは研である。従来使われているBIOF．B系はBIO

究班員に限りタネ動物の配布を行っている。

87．20系と8IOl．5系問のF．動物である。私共は、現在、筋ジス遺伝子my を既存の系統に飼育・繁殖方法

導入し、新しい筋ジス系統を作ると共に、既存

C578L／10−7血のビニールアイソレータ内の崩ジス系統をコントロール系として使うことでの飼育は、前述のC578L／6一郎系統維持にを考え、新しい筋ジス系統の育成を試みている。

準じて行った。繁殖は、m血pオス（γ／方血）
メス（Jndンr血）共に繁殖が可能であるので通3．第ジストロフィー症マウス

C57BL／10−

mdJF

接常の系統維持に準じて行った。すなわち、兄妹間ペアによる常時同居交配である。

遇

繁殖成績
維持・継代中のC578L／10−m血（以下n血C57BL／10−m血は、Grahame Bulfield
らにより育成されたⅩ染色体上の血因子によと略す）の繁殖成槙を、同様な方法で維持してり、崩ジストロフィー症となるモデル動物であいるC578L／10（以下810と略す）の成績とる0当研究所は、1983年11月Agricultural

比較した。（表7）

ResearchCouncilis Poultry Reseachー81−

平均出産回数はm血4．1回であるのに対し

表7．

C578L／10−m血マウスの繁殖成績（1984．1−85．1）？親数

平均出産回数

匹

810

平均塵仔数

離乳率

匹

C578L／10−m血

6

4．1

回
5．6

界
85．O

C578L／10

6

4．0

6．3

94．7

品質検査

4．0回で差がみられなかった。平均産仔数はm血5．6匹であるのに対し810は6．3匹

微生物： アイソレータで系統維持しているとやゝ多い値であった。離乳率はm血85．0界

れ血ならびに810については、当研究所微生

であるのに対し810は94．79あと、やゝ高い値

物モニタリングセンターにおいて、血清反応8であった。生産指数（メス1匹から生蛙に得ら項目、培養6項目、鏡検3項目の微生物検査がれる仔数）でみるとm血19．5、810

21．3で定期的に行なわれている。最近（1986．11）のBlOがやゝ高いものの差は小さかった。この成績をみると、BlOではP∫〜domo几払∫ α 和一ように、爪血の繁殖性は比較的良好なものであ

gh0∫αが陽性で、m血ではそのほか♪α∫わ払一る。

丁〃α卯紬mO如picαが陽性であった。このように、微生物的清浄度は比較的高く維持されているが、ヱα8mg川0∫αAp伽umO行叩icα

表8．C578L／10−m血マウス傲生物検査成続
検

査

項

目

C 5 7 B L ／1 0と5 7 B L ／1 0 −m 血＋＋＋C 打y 几βムαCfe ri払m 瓜 と∫eA ￠ri

血㌫霊鳥等謡霊
清
反
応

培
養

的叩 エ
α爪α 押 上m oルi∫
E c t r・Omelia virus
M ou se a d en o v i r u s
M ou s e h ep at it is v ir u s
S en d a i v i ru sβ∫eAgrid iα C O l i O l 1 5」
払 両 肌 肋 ㌧卵 価 由 叩 厄
P ∫血の花0ルα∫ α￠
rlリlM ∫
α
≡慧 ；；
三
三。慧 α
払，払
∫
〟ye叩ヱ
α．
m α J‰血のi∫

鏡
検

C iα
d iα m 払
ri∫
慧 ：
：ニ霊
m払
γi∫
（実中研モニタリングセンター−82−

故生物検査部1986．11）

が陽性であるので、施設への導入に当って留意

表10．C578L／101九血マウスの供給実技されたい。（表8）遺伝：m血ならびに810については、当C578Ⅰ一／10−m血研究所遺伝的モニタリングセンターにおいて、年 度

11染色体上の19Locusの退転生化学的検

1984

140

1985

224

査を定期的に行っている。最近（1986．3）の成1986

損では、m血，810共に全Locusホモ型で、

匹数

2

1
10

（26）（4）（32）

（4）

390

12

匹数 件数
49

計

かつ、m血，810は一致していた。（表9）

件数

C57月Ⅰ．／10

23

39

83

15

今後の方向

表9．C578L／10−m血マウスの遺伝的モニタリング成揖
染色体番号及 びL O C U S
1
2
3
4
5
6
7
8
9

11
17

工d h −1
P e p −3
故 p −1
He
C a r −2
H u p −1
G p d −1
P g m −1
L d r −1
G p 1 −1
打b b
E 8 −1E 8 −2T h y −1
H o d −1Tr r
E 8 −3
H −2 kH ＿2 8このようにm血マウスはC578L／6−dyに比べ繁殖が容易であることから、扱い易い筋ジス

C 5 7 8 L ／10

C 5 7 8 L ／1 0 「九血

a
a
a
1
a
b
a
a
a
b■
a
a
b
b
b
b

a．
a
a
1
a
b
a
a
a
b
B
a
b
b
b
b

a
b
b

a
b
b

モデル動物である。実験動物学的にみると、次のような改良点があげられる。その1は、微生
物的清浄度をより高いものとすること、その2は、実験用m血マウス繁殖コロニーを確立し供給すること。その3は、遺伝的背景となる810系へ定期的な戻し交配を行うことなどである。
今後、これらの点を検討し改良する予定であ
る。

ま と め

以上、当研究所における筋ジストPフィー症
モデル動物の維持、繁殖、供給の現状をまとめた。
現在、C57月Ⅰノ6−dyはSPF化され清浄なマ（実中研モニタリングセンター遺伝検査部
1粥6．3）
供給実績

ーはMYH（BIO14．6）とUM−Ⅹ7．1の2つの1984年以後、研究班員への仇血マウス系

系統が維持されている。C57BL′′10−m血はビ

統分与を行っている。分与数は、1984年140

ニールアイソレータ内で系統維持され、研究班

匹（12件）、1985年224匹（23件）、員に限りタネ動物を配布している。

ウスが維持・供給されている。崩ジスハムスタ

1986年26匹（4件）で合計390匹（39件）であった。（表10）
想される。

今後多くなるものと予

今後、C578L／6−dyは卵巣移植・体外授精
技術での繁殖を図り、筋ジスハムスターは微生
物的清浄化とコントロール系の育成を行う。そして、
C578L／10−m血は供試用繁殖コロニーの確立を図るなどを行う予定である。

−83−

最後に、ヒト崩ジストロフィー症の研究は、れるようになった。このような筋ジストロフィ

近年遺伝子DNAを対象とするようになり、こーの研究には、各種系統のいろいろな繁殖．段階

れに関連して、受精卵にDNAを注入してマウのマウスが必要となる。私共は、今後、このよスとして育成する「Trans genic mouse

うな研究の支援も行っていきたいと考えている。

：トランスジェニックマウス」の研究が行なわー84−

昭和61年度第5班（野村班）名簿
区

分

宜

長

運営幹事

氏

野

江

所

名

相 違

崎

所
次

孝三郎

事

野 々村

禎

昭

中

征

哉

員

勝

木

元

也

松

研

財 団法人

富

山

峯

田

介

武

実験 動物 中央研究所

池

連

続

国立武蔵療養所神経 セ ンター

斉

谷

藤

誠

宗

堆

0 4 4 −7 5 5 −5 4 4 1

0 3 −8 1 2 −−2 1 1 1

0 4 2 3 −4 1 −2 7 1 1

東京都小平 市小川東町 4 −1 −1

東海大学 医学部細胞生物学教室

0 4 6 3 −9 3 −1 2 1 1

伊勢原市望星台

産応義塾大学医学部生理学教皇

0 3 −3 5 3 −1 2 1 1

東京都新宿区信濃町 3 5

財団法人

実験動物中央研究所〒2 13

川崎市宮 前区野川 1 4 3 0

名古畳大学 農学部家畜育種学教室

0 4 4 −7 5 5 −5 4 4 1

0 5 2 −7 8 1 −5 1 1 1

名古屋市千種区不老町 1

国立武蔵療養所神経セ ンター
〒18 7

水

0 4 4 −7 5 5 −5 4 4 1

東京都文京区本郷 7 −3 − 1〒4朗

菊

電 話 番 号

川崎市宮 前区野川 1 4 3 0

東京大学 医学部薬理学教室

〒16 0

横

地

川崎市宮 前区野川 1 4 3 0

〒2 13

高

在

名

〒2 13

〒18 7

正

関

実験動物 中央研究所

〒1 13

埜

機

財団法人

〒21 3

幹

属

0 4 2 3 −4 1 −2 7 1 1

東京 都小平市小川東町 4 −1 −1

財団法人

日未生物科学 研究所〒40 9 −
16

山梨県北巨摩郡小渕沢町上笹尾

財 団法人

実験動物中央研究所〒2 13

川崎市宮 前区野川 1 4 3 0

0 5 5 1 3 6 −2 3 3 3

0 4 4 −7 5 5 −5 4 4 1