厚生

省

神経疾患研究委託費

筋ジストロフィー症動物の開発・供給に関する研究野村班

昭和57年度研究報告書

昭 和 58 年 3 月

研究報告書作成にあたり
厚生省神経疾患研究依託費による「筋ジストロフィー症動物の生産・開発に関する研究」班は昨
昭和57年度をもって3年間の研究期間を終了し、一応の成果をあげることができました0しかし、ヒト疾属のモデルとなる動物の開発は一朝一夕にできるものではなく、また、モデル動物の生産・供給は研究がおこなわれている限り続けねばなりません。そこで今年度より「筋ジストロフィー症
動物の開発・供給」班が発足することになりました。
モデル動物の開発には異常形質の発見、特性の分析、遺伝的背景の均一化など、極めて長い年月を要するものであります。また、飼育・維持方法によっては疾病感染により実験に供することができなくなるなどの問題点もあり、モデル動物の飼育・管理の方法も併せて実施する必要があります。
従って、この班の目的は、前の班での日的、1）筋ジストロフィー症モデル動物の生産・供給、
2）新しい筋ジストロフィー症モデル動物の開発・改良、および

3）筋ジストロフィー症動物の飼育管理方法の検討、をそのまゝ引きつぐことになりましたが、本研究班では哺乳動物におけるモデル動物の開発・改良に一層の重点をおくために、一部班員の交代が行なわれました。
本研究班では、筋ジストロフィー症研究の進展のため、より良いモデル動物の開発・改良を目指すとともに、大量の実験動物を供給できるよう努力を致す所存であります。そのために、新しい技術、例えば発生工学の手法をもちいてモデル動物を開発するなど、の検討も進めております。
今後も、諸班の先生方のご協力をお飼い申しあげる次第であります。
おわりに、ご協力下さった班員各位、ならびに本研究委託費の取扱いに種々お世話いただいた厚生省当局、国立神経センター、日太筋ジストロフィー協会の方々に心から感謝いたします。

昭和58年3月

野

村

達

次

目

Ⅰ

次

筋ジストロフィー症に関する文献調査

1

野

Ⅱ

村

達

次

筋ジストロフィー症モデル動物の開発

1．新らしい筋ジストロフィー症マウスの一般症状並びにdyマウスおよびmydマウスとの比較

7

辻

繁

勝

17

2．筋ジストロフィーハムスターの繁殖ならびに改良について

斉

藤

宗

雄

江

崎

孝三郎

3，筋ジストロフィー鶏骨格筋の再生能

23

杉

田

秀

夫

45

4．筋ジストロフィー鶏の骨および鰓後体C細胞
菊

池

建

機

5．Fayoumi鶏に出現した遺伝性の神経疾患

55

水

谷

誠

6．ニワトリの行動異常トレンブラー（trembler）に

関する研究

65

若

杉

昇

Ⅰ．二 筋ジストロフィー症に関する文献調査（1982）
野 村 達 次■研究協力者 大 田佑■
筋ジストロフィー症モデル動物の開発研究の一環として「疾患モデル動物」、「哺乳類、トリ類
における筋ジストロフィーとその近縁疾患」ならびに「筋ジストロフィーとその近縁疾患に関する動物実験」についての文献調査をおこなった。それらの中から、筋ジストロフィーに関する文献（1982年分）を以下に紹介する1〜3三
m

工

C E

（StudY Of membrane proteinsin skeletai muscle of normal
or dYStrOPhic mice．Effects ofisaxonine phosphate・）I・uCaS−
Heron，B．and Guiheneuc，P． Nouv．Presse．Med・，ll（16），1250−3．1982．
GlucagonimmunoreactivitYin plasma from normal and dystrophic
mice．Ahren，B．andI．undquist，Z．Diabetoiogia，22（4）′258−63′1982．

X−raY diffraction from striated muscles and nervesin normal
anddYStrOphic

B．M．

mice・Kurgt

T・′Stinson，R・H・and

Miilman，Muscie Nerve．5（3），238−46．1982．

Calcium−mediated myopathy at neuromuscularコunCtions ofnormal and dYStrOPhic muscle・Leonard，J・P・and Salpeter，

M．H．Exp．Neuro1．．76（1）．12ト38．1982・

Normal functionin sarcoplasmic reticulum from mice withmusculardYStrOPhY・Mrak′

R・E・and

Fleischer，S・mISCle

Nerve．5（2），143−51，1982．
Purine nucieotide cYCie enzYmeSin dystrophic and normai
mouse muscle． Fitt，P．S．and Parliament，M．B． Biosci・Rep・，2（3）．177−83．1982．
Successfui treatment of murine muscular dystrophy with theproteinaseinhibitorleupeptin・Sher，J・H・′
Shafiqt

S．A・and

Stracher，A・，

HardY−StashintJ・Proc・Natl・Acad・Sci・′

U．S．A． 78日2），7742−4，1981．
0bservations on the effects oflow frequency eiectricai
stimulation on fast muscles of dYStrOPhic mice．
Vrbova，G．
and Ward．X．J．Neurol．Neurosurg．Psychiatry，44日1），
1002−6，1981．

・（財）実験動物中央研究所

ー1−The number and size of motoneurons in the soieus motor nucieusOfthenormaland￣dystrophic（C57BL／6J

DY2J／DY2J）mouse．

Parry．D．J．，McHanve11，S．and Haas，N．
743−54．1982．

Exp．Neuro1．．75（3），Thyroxine reverses deficits of nerve growth factor andepidermal growth factorin submandibular giands of mice withmuscular dYStrOPhy．Watson，A．Y．，Radie，K．，HcCarthY，皿．．
Larsen，P．R．and HurphY，R．A． Endocrin01ogY，110（4）．1392−
401，1982．
Adenylate cyclasesin vertebrate retina：EnzYmatic characteristics
in normal and dYStrOPhic mouse retina． Ferrendelli，J．A．，
Campau，K・M・and De Vries，9・W・J．Neurochem．，38（3），753−
8．1982．
The purine nucleotide profilein mouse，Chicken and humandystrophic muscie：An abnormal ratio ofinosine plus adenine
nucieotides to guanine nucleotides．
Shuttiewood，R．J．and

Griffiths，J．R．

Clin．Sci．，62日），113−5，1982．

Plasma membrane changesin murine cardiomyopathy．
比OnCkton，
G・，Chisholm．S．A．and Pehowich，E．J．Comp．Patho1．，91（3），447−50．1981．
Endocytosis

andiYSOSOmai

en2＝YmeaCtivitiesin

dYStrOphic

muscle：The effect of denervation・Libeiiusr R・t Lundquistt
Z・，Tagerud，S・and Thesleff，S． Acta PhYSiol．Scand．，113（2），259−61．1981．

Zntracellular activitY Of potassiumin normal and dYStrOPhic
Skeletai muscie from C57BL／6J mice．Shaiton，P．朗．．and
Wareham．A．C． Exp．Neurol‥ 74（3），673−87，1981．
Creatinine excretion as anindex of mYOfibrillar protein
massin dYStrOPhic mice・朗urraYt C．E●′

F・J．and Tomas，F．比．

Warnest D．出●′

Bailardt

Clin．Sci．，6116），737−41．1981．

Zn vivo morphometric analysis of muscle microcircuiationin dystrophic mice． Ziurch，T．G．，Prewitt，R．L．and Law P．X．
比uscle Nerve．4（5）．420−4．1981．
Abnormal distribution of skeletal muscle acetYIchoiinesterase
m01ecular formsin dYStrOPhic mice．Skau．R．A．and Brimijoin．

SH Exp．Neuro1．，74日）．111−21．1981．

Myelination−dependent axonai membrane speciali2：ations
demonstratedininsufficiently myelinated nerves of．thedystrophic

mouse・Wiley−Livingstont

Braln Res．．224日）．55−67．1981．
Effects

oflow

frequency

C●A●electricai

andEllismant

stimulation

on

朗．H．

enZ＝ymeandisozyme patterns of dYStrOPhic mouse muscle．Reichmann，

H・，Pette，D・and Vrbova，G．
1981．

Febs．Lett．，128日）．55−8，

一2−

CH工CXENS

Lipid composition of transverse tubular membranes frdm normal
and dystrophic skeletal muscle・Sumnichtt G．E．and Sabbadini，
R・A・Arch・Blochem・Biophys・．′215（2）・628−37′1982・

Stereoscopic view岳of a dystrophic sarcotubular system：
SeiectiveenhancementbY

amOdifiedgolgi■stain．Scalesr

D・J・and Yasunura，T．J．Ultrastruct．Res．，78（2），193−
205．1982．
Stretch−induced growthin chicken wing muscles：Effects on
hereditary muscuiar dystrophy・Ashmorer C・R・Am・J．Physiol．t242（3）．C178−83，1982．
Comparison of the m01ecular forms of the cholinesterasesintissuesofSilman，＝・r

normalDi

E・A・J．Neurochem‥

The

chickenandchickens．LYlestJ．班●′

L・′

CouraudtJ●Y．and

Barnard，38（4）．1007−21．1982．

dystrophic

glucocorticoids

dYStrOPhic

Giamberardinot

cause

model…Does

hypersensitivity

atrophY？Duboist

D．C．andto

Almon′

R．R．

Exp．Neuro1．，75（3）．555−65，1982．
Hechanics and energetics of muscie contractionin normal
and dystrophic chickens． Polinski，W．J．and Rail．J．A．Am．
J．physlol‥ 242日）．C19−24．1982．
Demonstration of a ceilular defectin the thymus of hereditary
musculardystrophic

chickens．Xlinet

X●

and

Sanders，B．G．

Thymus，4（1）．9−18，1982．
The purine mucleotide profilein mouser chicken and humandystrophic muscle：an abnormal ratio ofinosine plus adenine
nucleotides

toguaninenucleotides．

Shuttlewood′

R．J．and

Grlfflths．J．R． Clln．Sc1．，62（日，113−5．1982．
ThYmic mast cell deficiencyin avian muscular dystrophy・Befus，A・D・′Johnstonr
Butler′J・and

N・′Nielsenr

L．t

Bienenstock′J．，

Cosmos．E．Thymus．3（6），369−76．1981．

Biochemical and cYtOChemical comparison of surface membranes
from normal and dystrophlc chlckens●

Halouf′N．軋り

Samsa′

D・，Allen，R．and Heissner，G．Am．J．Patho1．，105（3），223−
31′1981．

Zs01ation of multiple genomic sequences coding for chicken
mYOSinheavY

Chisholm′
56．1982．

Chainprotein・RobbinstJ・′

FreyertG．A．r

D・and Giliiam，T．C．J．Biol．Chem．，257日），549−

Evidence that the actin siteisimpaired by CA2＋−aCtivateddegradation

S・班・′

of

the

heavY

Chain

of

dystrophic

myosin．Penrick′

Blochem．Biophys．Res．Commun‥102（3）．877−94，1981．

一3一

Rate of axoplasmic transportin the dystrophic chicken・Stromska，D．，Ochs，S．andJ4uller−．J． Exp．Neuro1．．74（2），530−47．1981．．
Erythrocyte alloantigensin the storrs strain of hereditary
muscular dystrophic chlckens and Se9re9atlng teStCrOSSPrOgenY・Sanderst B・G・t Klinet R・and Brilest W・E・J・
Herdd‥ 72（4）．279−81．1981．
Baclofen．Procainamide，VeraPamil．and prenylaminein
hereditary

musculardYStrOphy

of

R．R．．Patterson，G．T．and Wilson′

thechicken・Entrikin′

B．W．

Exp．Neurol．′

74日）′

86−92′1981．

机01ecuiar forms of the ch01inesterasesinside and outside
muscleendplates・Jedr2：e〕CZYk′J・r

Silman′＝・，Lyies，J・Z4・

and Barnard，E．A．Biosci．Rep．，1日）．45−51′1981・
MSでERS

Tracer and marker techniquesin the microscopIC Study ofskeletal
Hethods

muscies●Achiev

Karpatit

G・lCarpentert

S・and

Pena，S・Exp・path01・110′101−37′1981・

3−hYdroxy−3−methylgiutarYl−COenZYme a reductasein normal
and dystrophic hamsters・Greenough／M・C・and Boegman，R・J・Biochem．J‥ 201（3）．501−4．1982．
Zmpaired muscie differentiationin hamster hereditary
poIYmyOPathY：A studyin explant cultures・Tautu，C・and
Jasmin，G．J．Neuropathol．Exp．Neuro1．，41（1）′87−103，

1982．
ParathYrOid abiationin dYStrOPhic hamsters・Effects on
Ca content and histologY Of heart／diaphragmt and rectus
femoris． Palmieri，G．肌．．Nutting，D．F．，Bhattacharya，S・K・，
Bertorini，T．E．and Williams，J．C．J．Clin．Znvest・，68（3），646−54′1981．

OTHERS

Collagenievelsin tissues from seienium deficient ducks・
Brownt

R●G．t

Sweeny′P・R・and

Noranr

E・T・lJr・Comp・Biochem・

physlol．（A）．72（2）．383−9．1982・（Glutathione peroxidase activitYin sheep erYthrocytes as
dependent on the selenium supply and seleniumlevel of theblood．） Wiesner，E．，Berschneider，F．，Hubner，B．，Wilier，
H．and Willer，S． Arch．Exp．Veterinarmed． 36（2），211−
9，1982．
Comparative effects of sodium selenite and selenomethionine
upon nutritional muscular dYStrOPhYr Selenium−dependentglutathione peroxidase，and tissue selenium concentrations
Of turkey poults・Cantort A・H・′ 机00rheadr P・D・and Musser，

出．A．

Poult．Sc1．．61（3）．478−84．1982．
−4−

Effect of vitanin E deficiencY On rabbitintramuscular
c011agen・Chizzolinir R・t Bracchi，P・，Cabassi，E・and
Ha991．E．Am．J．Clln．Nutr・．35（5）′1018−22′1982・

文

献1）野村達次：筋ジストロフィー症に関する文献調査（1978），厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー症動物の生産・開発に関する研究」班，昭和54年度研究報告書，1−7．
1979．

°2）野村達次：筋ジストロフィー症に関する文献調査（1979），厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー症動物の生産・開発に関する研究」班，昭和55年度研究報告書，1−15，
1980．

3）野村達次：筋ジストロフィー症に関する文献調査（1980，1981），厚生省神経疾患研究
委託費「筋ジストロフィー症動物の生産・開発に関する研究」班、昭和56年度研究報告書，
1−12，1981．

一5一

Ⅰ．筋ジストロフィー症モデル動物の開発
1．．新らしい筋ジストロフィー症マウスの一般症状並びにdyマウスおよびmydマウスとの比較
辻

繁

勝■

研究協力者 早 川 純一郎…
はじめにヒトの進行性筋ジストロフィー症の病因解明のための研究手段の一つとして塀似の症状を自然発症する疾患モデル動物の存在が近年その重要性を増している。然し、その十方では既に幾つか開発されている所謂「疾患モデル動物」の示す発現症状がかならずLもヒトの筋ジストロフィー症のそれと一致しない例が多いことから、これら動物モデルを用いての病因追求研究の有用性を疑問視する研究者も叉少なくない。
ヒト以外の動物に見られる筋ジストロフィー症がたとえ同一の病因によって発現され、且巨視的に観て煩似の症状を皇したとしても、元来種の異なる、従って体制や生理機構の違うヒトの筋ジス
トロフィー症の発現症状とは微細な点で差異があることは至極当然なことであり、これによって病因そのものの相違を論ずることは、両者の病因遺伝子そのものの相同性を確認する手段の困難な現段階では時期尚早と考えなければならない。むしろ疾患モデル動物を用いた研究の本来目的とする所は、ヒトを含めて各種動物の間に見られる煩似の筋ジストロフィー症に共通な発現症状を追求することに依って疾患に対する一瀬的理解を深め、個々の動物での病因解明を行うことであり、又、このことによって始めてヒトの疾患の持つ特殊性、或いは複雑性も理解出来、病因解明への手掛りともなるものと期待される。この様な意味からも動物における自然発症筋ジストロフィー症をより多く作り出し、疾患モデル動物としてその有用性を開発することは、ヒトの筋ジストロフィー症の病因解明にとって緊急且重要な課題の一つであると考えられる。我々は最近金沢大学動物実験施設
で飼育中のSM／J系マウス・コロニー中に発見された突然変異体が進行性筋ジストロフィー症状を発現することを知ったので、この変異体マウスの疾患モデル動物としての有用性を開発する試みを行なっている。叉十方、既に知られている自然発症筋疾患マウスのうち発現症状が互に煩似していると思われるdyマウス（dystrophia muscularis）1）ぉよびmydマウス（myodystro−phy）2）と新らしい変異体マウスの発現症状を比較検討することによって、3者に共通な症状および、それぞれの持つ特徴点を追求し、病因解明に一歩近付こうと計画している○本年度は新らしい
変異体マウスの示す一般症状、組織像変化、骨格筋中血清中および脳中でのマーカー酵素群の活性変動などを測定し、dyマウス或いはmydマウスのそれに就いて比較検討を行なった0●和歌山医科大学 第二生理学教室
書・金沢大学医学部 動物実験施設

一7一

材料と方法新らしく見出された筋ジスト。フィー症マウス（SM／J−mut系、mutマウスと仮称）は金沢大学、医学部動物実験施設より提供された保田マウスを、又dyマウスはC57BL＾J−dy系、
mydマウスはMYDカーmyd系ヘテロベアーをJackson研究所より輸入しJ当教室で自家繁殖して得たマウスをそれぞれ8−12遇齢で実験に使用した。
血活は断頭採血後、30分間室温放置後2，000rpmlO間遠心分離して取出し、直ちに酵素標品として使用した0後肢筋は断頭潟血後、すみやかに採出し、10倍容の0．32M薦糖液に入れ、テフロンホモジナイザーでホモジナイズし、通常のSchneider法に従って可容性分画を分離し、酵
素活性測定に使用した0脳中のミェリン局在酵素の活性測定には断頭潟血後採出した脳から嗅脳を除いたものを20倍容の0・32M無糖液に入れ、ホモジナイズする。以下Norton法3）に従って
Purified myelin分画を分離し、更に0・3勅のTritonX−100液を加えて1時間放置して膜構造の破壊を行ない、ホモジナイズしたものをCNP酵素（2 ，3′−CyClic n。Cle。tide3，−
phosphohydrolase）活性測定用原品として使用した。叉CEH酵素（cholesterol esterhydrolase）活性測定用標晶にはpurified myelin分画をタウロコール酸2JL moles／戒を含むリン酸緩衝液中に浮遊させ、1時間放置後ホモジナイズしたものを使用した。
酵素活性測定は以下の諸法に準じて行なった。即ちCreatine phospho kinase（CPK）は
HessらのUV法4〜Glutamate−0Ⅹal。aC。tat。t，anSaminase（GOT）は払，men法5）、
Lactate dehydrogenase（LDH）はWroblewski法6）、PyruvateKinase（PK）はTanakaらの方法7）・正しdependentneutralproteAse（CANP）はDayton法8）、CNPはSogin
法9）、CEHは遊離したコレステロールをコレステロールオキシダーゼ法10）によって定量する方葺）がそれぞれ用いられた0又尿中のクレアチンおよびクレアチニン量測定はJaffもの方法12）、酵素
原品中の蛋白含量はLowry法によってそれぞれ測定した。

結 果
新らしい変異休マウスの示す「般症状：新たに見出された突然変異体（mutマウス、仮称）に始
めて明確な症状が発現するのは生後3週間頃でまず後肢の引き摺りが現われる。次に後肢に痙攣発作が頻繁に見られる様になり、次第に症状が進行し、5週齢を過ぎると後肢の完全な麻痺および固直状態が認められ、終には身体全体に著しいるい疫を釆たすのが主徴である。又後肢筋の症状進行に並行して眼脇筋の著しい萎縮状態および白内障がしばしば発現するがdyマウスの特徴的症状の一つである脊椎の著しい琴曲（Kyphosis）は、このmutマウスではそれ程顕著ではない。症状の進行は他の筋ジストロフィー症マウスに比較してかなり速く、大体4ケ月齢迄には殆んどの疾病
マウスが全身のるい疫および四肢の固直を釆たして死亡する。死国は主として摂食不能および呼吸筋の麻痺によるものと思われる。
新らしい変異体マウス後肢筋での組織像変化：mutマウスの萎縮骨格筋における組織像の変化に就いては・8遇齢の疾病マウスからga8trOCnemius筋およびtibialisanterior筋を採出し、H．

一8一・

E．染色並びにマロリー・アザン染色による標本を作製し、光顕的観察によって検査を行なった。
H．E．染色標本で得られた特徴的変化としては、（1）筋線経の太さにバラ付きが認められる。（2）部
分的に壊症を起している筋線経がしばしば見られ、その間辺郡に食細胞などの著しい侵嚢が認められる0又壊症を起している筋線経と一見正常な筋線経が隣接して混在している状態が見られる。
（3）核の数が増加し、膨脹して大型になり、しばしば空胞化している核が認められる。（41核は連鎖状に並んで筋線経の中央部に移動している状態が見られる。（5状型化した核の内部に核小体の存在が明瞭に認められる（図1）。叉、マロリー・アザソ染色標本では、（6）筋隙或いは筋線経の壊症を起Figurel Gastrocnemius muscle showing necrotizing myopathy
in a new mutant mouse．

Figure2

H．a E．stain．

Gastrocnemius muscle showing necrotizin9myOPathy
in a new mutant mouse．Ma110ry aZan Stain．

−9−

した部分への膠原線経の著しい浸潤および食細胞の集合が認められるnl71出芽細胞及茎は再生myo−tubeと思われる像が壊痘部分近縁に多数認められる（図2）。以上の如く、mutマウスの後肢筋
における組織像変化は典型的なnecrotizingmyopathyの状態を示していることが判明したが、全体的な変化像はdyマウスの萎縮筋における組織変化によく煩似しているという印象が得られた0尿中クレアチンおよびクレアチニン排泄量の変化：尿中に排泄されるクレアチンおよびクレアチ
ニン量の変化に就いてmutマウスで測定を行な．うと同時にdyマウスおよびmydマウスでの値との比較を行なった。マウスの場合は正常状態でもかなりの量のクレアチンが尿中に排泄されることが知られているが、mutマウスの尿中では対照マウスに比較して著しいクレアチン量の増加が在ることが判った（表1）。一方クレアチニソ量は、わずかではあるが減少傾向を示しており、従ってクレアチン対クTablel Creatine and creatinine concentratjonsin urjne L／7チニソ比
of murine muscular dystrophies

は正常対照のCreatine CrealHnine Ratjo Pr．

2倍以上を示し、典型的なdy／dy
り−myd／mydり−14．0士2．6
6．0士0．4

12．7

士2．5

6．0

土1．1

mut／mut ll．4士1．4

6．5士2・2

2・15

7．4士0．5

0．81

8．8士1・5

1・44

9．8

0．61

土1．1

8．2士1．0

Pく0．01症を示していpく0．01

6．5士

0．8

10．2士1．5

ることが認められた。全く

1．39
P＜0．01＋／−

クレアチン尿0．64

Unjt：mg／dl

同じ傾向がdy
マウスおよびmydマウスの尿においても認められたが、クレアチン対クt／アチニン比はdyマウスで最も大きく、mutマウスとmydマウス
ではやや低く、ほぼ同程度の値を示していた。
血清中および骨格筋中でのマーカー酵素活性の変化：次に筋ジストロフィー症の症状進行に伴って活性変化をすることが知られている幾つかのマーカー酵素に就いて、3つの筋ジストロフィー症
マウスそれぞれの血清中への退出量変化および骨格筋中での活性変化を測定した。
表2はCPK活性の変化を示したものであるが、いずれの筋ジストロフィー症マウスの場合も骨格筋中で活性が低下し、血清中に遊出する酵素量が増加するという共通の変化を示したが、中でもrnydマウスで最も顕著な変化が認められた。mydマウスは症状の進行が比較的遅いことから、所謂仮性肥大型の筋ジス．トロフィー症としての特徴を持っているものと考えられる。「方mutマウスでの活性変化はdyマウスの変化に煩似した傾向を示していたo
PK活性の変動は表3の如く、骨格筋中での酵素活性はいずれの筋ジストロフィー症マウスでも減少しているが、血清中への退出量増加はdyマウスとmydマウスに認められたのみで、mutマウスの場合は全く増加が見られなかった。この結果は、3つの筋ジストロフィー症マウスの間で骨格

一10−

筋から血清中への遊
Table2

CPk actlvity changesin muscles and s？ra Of murlne

出に関してCPKとmuscular dystrophies

PKで差異が在るこ
Muscle

D／N

xlOO

Serum

D／N

xlOO

とを示唆しているが、
dy／dy
＋／−

myd／myd

り−

23．4

土5．6

42．5

士

27．9士

★
55．1

4．4

4．8

士

士1．3

PK酵素活性の筋ジ

士0．9

ストロフィー症に於

5．1士1．4
102．5

27．2士 2．4

25．0

6．3

143．2

6．6

mut／mut ln．3土2．4
＋／−

二

★
41．2
2．6

ける血清中マーカ．−

255．0

2．0 ±0．2

酵素としての意義或いは骨格筋の梧代謝．

3．0士0．5
157．9

1．9に於けるPK酵素の

士0．4

Unit：Ag Pりmg protejn or ml serum／mjn

役割などを考える上★；P＜0．01★★；Pく0．001

で興味ある変化と思われる。

LDH酵素の活性変動に就いては表4の如く、mydマウスに於ては骨格筋中で減少し、血清中への遊出が増加するという、ヒトの筋ジストロフィー症に一般に見られるバターンを示しているが、dyマウスでは骨格筋中での減少は見られるが血清中への遠出増加は認められなかった。更にmut
マウスの場合は骨格筋中でも血清中でも有意な活性変化は認められず、3着3様の傾向を示していた。
GOT酵素の場合も、ヒトの筋ジスト

able

3

PK actlvity changesin muscles and sera of−nurine
muscular dystrophjes

ロフィー症で症状進Muscle D／N xl00

行に伴って活性変動

Serum D／N xlOOすることが知られてdy／dy

いるが、dyマウスとmydマウスではいず＿れも骨格筋中およびり−

3・8土0・3

14．6

26．0★★

士0．4

myd／myd

7．3士2．4＋／−

11．8土1．0

3・2士0・9

290．9★

1．1士0．1★
61．0

8．0土1．6
615．3

1．3±

0．3

血清中で活性増加の慣向を示していた。

mut／mut

り−然しmutマウスでは骨格筋中で著しく活

7・2士0・6

14．4士

2．1

50．0★

2・8士0・8

1．6

175．0★

士0．1

Unjt：△E／rng protein or ml serun／min★；P＜0．01★★；P＜0．001

性が低下し、血清中への遊出量も減少するという、他のマウスとは違った変化を示していることが注目される（蓑5）。
骨格筋中のCalナ依存性中性プT］チアーゼ（CANP）の活性変化に就いてはdyマウスとmutマ
ウスで測定を行なったが、結果は表6の如くいずれの筋ジストロフィー症マウスでも著しい活性増加を示していることが判明した。

一11−

脳中ミエリン分画局
Table

4

LDH activjty changesin muscles and sera of murjne

在酵素の活性変化：

muscular dystrophjes

dyマウスに於てはMuscle
dy／dy

64．3

D／N

xlOO

士3．4

Serum

★

D／N

士10．5

り−

83．7

士

mut／mut llO．0
り−

士

58．3

★

9．1

士3．9

110．5

士1．6

のCNP酵素および8．3士1．2

CEH酵素の活性が3．4低下の傾向を示すこ

3．5

48．8

脳のミエリソ分画中

108．5

88．1士9．0

myd／myd

症状進行に並行して

3．8士1．3

72．9
＋／−

xlOO

★
99．5

3．7

士0．5

とが知られている13と

士0．6
69．8

3．7

5．3

士

そこで他の筋ジスト

0．7

ロフィー症マウスにUnit：urOblewski U／J・g PrOtein or．JLI serum／min★；P＜0．01

就いても活性測定を行ない、変化のバク−ソを比較検討した。
表7は結果を示した

Table5

GOT activity changeSin muscles and sera of murine

ものであるが、mydmuscular dystrophies

マウスの場合はCNP

Muscle D川

xlOO Serum D川

xlOO

活性のみが有意に低dy′dy下しており、CEH

23・5士1・3＋／−

207．9★

6・2土0・1

11．3士1．1

5・5±1・1

myd′myd

14・1土0・9

111．910・7士0・5り−

12．6士0．6

mut／mut

10．2士1．1

112．7

活性には変化が見られなかったのに対して、mutマウスでは逆にCEH活性のみ＋／−が著しく低下しており、CNP活性には

22．1±

★
46．1

3．2

Unjt：Karmen

201．8★

5・8士1・0

U／J・＿g

5・2

士1・2

5．8

士1．0

PrOtein

orJtl

89．6

serum／min★；Pく0．01

有意の変化が見られないことが判った。
Table6CANP acthパty changesin nuscles of murine

考

muscular dystrophles

新らしく見出された行動異Muscle D川XlOO Pr・察

常を示す突然変異体（mutマウス）は幼弱期に歩行異常を

dy／dy

12・0土5・2＋／−

3．8±0．5

myd／myd＋／−

13．4土3・6
7．0

315．8

発現し、その後次第に骨格筋の萎縮症状が進行した結果、

191．4

士1．7

Unjt：△E／g protein／2

P＜0．01

P＜0．01

全身的なるい疫によって4ケ
月齢迄に殆んどの個体が死亡

hrs

一12一

Table7

Myelin C【H and CNP actjvity changesin brains ofする。
この変異体マウス

murlne muscular dystrophies

CEH O／N xlOO CNP D川xlOO

は後肢筋の組織学的検索から、筋線経に

dy′dy

り−

myd′myd

14・3士0・7

52．3★11・5士0・925．7士3．4

47・6土12・5125．4

り−

37．9士12．6

mut′mut

32・5士2・9

り−79．8土10．3

66．7★

17・3士1・6

14・8土3・2

ing myopathy
72．3

30・9士11■9に特徴的な諸変化が認められることなどか

20・4士2・4

40．8★

いわゆるnecrotiz−

94．2

32・8士8・6ら、骨格筋の進行性萎縮を主症状とする

Units：CEH；PM oleate／total myelin／min

筋ジストロフィー症

CNP；．PmOles NADP／total myelin／min★；Pく0．01を発現する形質であることが判明した。

そこでこの新らしい変異体マウスの尿中クレアチン排泄量或いは疾病進行と強い相関を示す幾つかのマーカー酵素の骨格筋中および血清中での活性変動を測定し、ヒト筋ジストロフィー症の疾患モデルとして既に多方面で利用されているdyマウス並びにmydマウスでの変化との相違を比較検討した。その結果、3つの筋ジストロフィー症マウスはいずれも筋ジストロフィー症に特徴的な症状を多数発現していることが認められたが、一方個々のマーカー酵素の活性変動パターンに関しては
各マウスそれぞれ独得な違いを見せていることが判った。その中でmydマウスでの酵素活性変動が他のマウスとはやや異なったパターンを示し、仮性肥大型の変化を示していることが注目される0
又薪らしい変異体マウスでは他の2形質マウスとは異って血清中へのPK酵素の退出が減少傾向を示していたが、これはもう一つのマーカー酵素であるCPKの血清中への遊出が3形質マウスに共通して増加していたこと、叉、PK酵素の分子量がCPK酵素のそれより3倍位大きいことなどの事実と合せて考えると、膜透過性の異常に関して、新らしい変異体は他の2形質マウスとは相違している可能性を示唆しているものと思われる。更に新しい変異体マウスの骨格筋でのLDH或いはPKなどの解糖系酵素の活性変化が他の2形質マウスのそれとは異ったパターンを示したことから、この形質では糖代謝に関して独得な変化を起している可能性も考えられる0
中枢神経系のミエリソ分画中に局在する2酵素（CNPおよびCEH）の活性変化に就いては3っの筋ジストロフィー症マウスでそれぞれ違ったパターンを示していた。mydマウスに認められた
CNP活性の低下に就いては、mydマウスでもdyマウスの場合と同じく背広根部にミエリン鞘を欠落した神経軸索が束になって多数存在することが既に電頭的観察によって認められていること14）から、今回の結果は恐らく中枢神経系に於ける総ミエリン量の減少を反映したものと理解することが出来る。一斉新らしい変異体マウスに認められたCEH活性の低下は、このマウスの中枢神経系に於けるコレステロール代謝の異常を示唆しているものと考えられ、同様の変化を示しているdy
マウスとの比較研究によって、マウス筋ジストロフィー症に見られる膜構造の異常を更に詳細に追一13一

求する手掛りが得られるものと期待される。
マウスでは既に幾つかの筋ジストロフィー症の動物モデルとして有用な突然変異形質が見出されてい■るが、更に新らしい筋ジストロフィー症形質が加わったことにより、相享の発現症状のより詳
細な比較研究が可能になったここのことは、マウス筋ジス■トロフィー症の本態を解明するためにも、
又ヒ◆トの筋ジストロフィー症の病因追求のためのより良い疾患モデル動物の開発をはかる上にも、大きな手掛りを与えるものと期待される。

文

献

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一15−

2．筋ジストロフィーハムスターの繁殖ならびに改良について
斉藤宗雄二江崎孝三即事
研究協力者 松崎哲也二田中 辛＊筋ジストPフィー症研究の進展に伴ない、この研究に用いられる実験動物は筋ジストロフィーマ
ゥス、筋ジストロフィーチキンに続いて、最近では筋ジストロフィーハムスターへの要望が増加している0筋ジストロフィーハムスターは、1962年、・米国のBIO Research consultantsでI）r・
whitoneyが維持していたBIOl・50系より発見されたものであるOその主な特性については昭
和57年1月の班会議で野々村によって紹介された01）当研究班では、昨年度から筋ジスハムスタ
ーをBIO Res。arCh c。nSultantsより輸入し、筋ジスト。フィー症研究者へ供給している0しかし、輸入できる筋ジスハムスターは5遇齢以上のオスにかぎられ、研究への利用価値は極めて制限されている。そこで、胎仔期あるいは幼君期の動物を使用可能にするために、筋ジスハムスターの繁殖群の確立ならびに、これらの実験動物学的検討をおこなっている01．筋ジスハムスターの維持、ならびに繁殖群の確立
現在、我国で実験に使用できる筋ジスハムスターは、米国から輸入されているBIO14・6系の5
遇齢以上のオスに限られている。したがって、メス動物、妊娠動物ならびに君命動物を実験に使うことはできない。また、輸入手続きに比較的時間がかかるなどの問題がある0このような問題を解決すべく、筋ジスハムスター繁殖群を確立するための開発研究を行なっている〇

材料と方法
動物：起源とした筋ジスハムスターは、1981年12月、米国のBIO Research consal−
tantsから輸入したBIO14．6系オス50匹（11月3日生）と、これに混入していたメス2匹・ならびに国立神経センター杉田博士が、カナダのDr．G．Jasminより、1982年5月と9月に導入したUM一Ⅹ7．1系のオス20匹メス20匹計40匹である0
飼育室2）：筋ジスハムスターの飼育には、マウス、ラット用飼育室の1室を▼あてた0飼育室の温度は24±1℃、湿度は54−609あ、換気回数は全新鮮外気で10−15回／／時である。照明は
午前8時から午後8時迄の12時間明とした。飼育室の微生物グレードは、コンベンショナルである。
飼料・水：主な飼料としては、3Mradr線照射滅菌済の日應クレア製CA−1飼料を与えたロ補充食として、時々野菜、トウモロコシを与えた。水は、水道水を給水瓶で与えた〇・（財）実験動物中央研究所−17−ケージ等：ラット用プラスチックケージ（20m×37．5m×22m）を用い、床敦には電気カンナクズを用いた。これらの飼育器材ならびに床敷はすべて121℃30分オートクレーブ滅菌して用いた∩

日常の飼育管理：飼料と水は不断給与であるが、給餌器、給水瓶は毎日点検し、小量な場合は、飼料を加えるか、給水瓶を交換した。床敦の交換は1週間2回、ケージ交換と同時に行なった。ヒトの飼育室への入室に当っては、下足の交換ならびに作業衣の交換を行なった。飼育担当者も少数に限定し、飼育室内は常時衛生管理に努めた。
繁殖方法：繁殖適期2．5ケ月令以上のメス、オスを同居飼育し、メスの腹部の膨らみによって妊娠を診断した。妊娠したメスはオスと分離させ、別のケージで出産哺育させた。

筋ジスハムスターの繁殖状況
1）BIO14．6由来ハムスター
1981年11月から1982年11月の1ヶ年問の、繁殖途中も含めたメス9匹の繁殖状況は、延12回出産し、平均出産回数1．3回、総産仔数65匹で、平均産仔数は5．4匹であった。総離乳
仔数は33匹（オス18、メス15）で、離乳率は50．7界であった。
繁殖終了したメス3匹の成績についてみると、平均出産回数は2回、平均産仔数は5匹、離乳率
は509もである。この繁殖成績が維持されれば、近い将来、筋ジスハムスター繁殖群の確立は可能である。なお、この筋ジスハムスターの生存日数は約200日と推察された。

2）UM−Ⅹ7．1系ハムスター3）
UM−Ⅹ7．1系オス20匹、メス20匹の繁殖状況は次のようである。延17回出産し、104匹の仔を得たが、離乳したのは13匹であった。そして、ほとんどの動物が1回の繁殖で死亡した。
繁殖率をみると、平均出産回数0．85回、平均産仔数6．1匹、離乳率12．59もで、メス1匹が生涯に得られる仔数が0．65匹にしか過ぎなかった。
Dr．G．Jasminによれば、UM−Ⅹ7．1系の生存日数は180−200日としていることから、
この繁殖の経過日令を検討してみた。
カナダから輸入した時点で、すでにオスは130日令、メスは100日令であった。交配はメス
110日令で行ない、出産は120−150日令にかけておこなわれた。離乳は150−180日
令に行なわれることになるが、親仔共に、140日令頃から死に始め、離乳率は著しく低くなっている○

このようなことから、この繁殖において、繁殖に用いた日令の要因が大きいと予想された。
今後、少数ではあるが育成できた動物を基に、早期に繁殖に用いるなどして、その繁殖群の確立
に努める。

一18−

今後の方向筋ジスハムスターの繁殖を、BIO14．6由来ハムスター、ならびにUM−Ⅹ7．1系ハムスターについて試みた。BIO14．6由来ハムスターは、今年度、基礎となる動物が確保でき、その繁殖成績からみて、繁殖群が確立できる見通しが立った。UM−Ⅹ7．1系については、▼輸入した、比較的多数の動物を用いたが、導入動物の週令が高かったためか、充分な繁殖性を得ることができなかった。今後、検討すべき問題である。

2．筋ジスハムスターの改良
筋ジスハムスターを用いた研究には、筋ジス系統81014．6のコントロール動物として、BIO
FIB系が使われる。BIO FIB系は、BIO14．6とは異なる2つの系統間？Fl動物で、遺伝的背景が81014．6と全く異なり、コントロール動物として使うことは、実験動物学的にみて適切でない。5）
そこで、我々は、実験動物としての筋ジスハムスター改良の一環として、遺伝的背景を均一にした筋ジスならびにコン1トロールハムスターの育成を実施した。

1）筋ジスハムスターの由来6）7）8）筋ジスハムスターは、BIO Research consultantsにおいて、1960年代NIH，USAから導入したハムスターを基に、各種近交系や、ミューータント系を育成する過程で発見されたものである。
発見された系統は、Dr．Whitoneyが維持していたBIOl・50系である。この系統はLa Casseの維持していたalbinoのオスとSchwentkerの維持していたbrownのメスを起源とするもので．

毎世代オスalbino、メスbrownの交配で維持していた。現在は絶えている。筋ジストロフィーの発症したハムスターの生存日数は220〜360日令であった。
現在、広く使われている筋ジスハムスターBIO14．6系は、1964年BIOl．50系のオス他
14とBIO89．9系のメス他6の交雑から育成した系統である。このような交雑から育成した、筋
ジスハムスターの系統にBIO40．50，BIO53．58，BIO82．62，などの系統がある。これらはBIO14．6より早く発症し死亡する。
BIO14．6系のコン1トT］−ルとして用いられるBIO FIB系は、BIO87．20のメスとBIO1．5のオスのFl動物である。BIO87．20系は、Inghan，tulf，Toolanらが維持しているハムス
ターを起源とし、毛色は鉄サビ色（bb）でBenign prostatic hypertrophyが多発することを特徴とする系統である。BIOl．5系はNIH，USAのハムスターコ。ニーを起源とし、毛色はalbino（cdcd）で、dental cariesが多発することを特徴としている。従って、BIOFIB

系ハムスタ

ーは、BIO14．6系ハムスターに筋ジストロフィーのみならず、遺伝的背景が全く異なっている。
一方、カナダのモントリオール大学のDr．G．Jasminは、UM−X7．1糸筋ジスハムスターを育成している。この系統は1972年カナダに導入したBIO14．6系を起源として育成したもので−19−

ある。BIO14．6に比べ、筋ジスが早く発症し死亡する。

2）筋ジスハムスターの育撞遺伝的改良
既存の筋ジスハムスターを基に、実験に使用するコントロール動物等の遺伝的背景を均一にするには、①

筋ジス遺伝子my〝を既存の正常ハムスター系統に導入すること、このことによって、新らたに育成された系統を筋ジスとして、
図1．筋ジスハムスターの由来

既存の系統をコン1トロールとして（NYAS．1979参照，実中研1％2．）㊥

使うことができる。

既存の筋ジスハムスターからttmy〝遺伝子を省くこと、このことによって、既存の筋ジス系∴銃をジストロフィーとして、新らたに育成される系統をコントロールとして使うことができる〇
その方法は以下のようである0（1）正常ハムスター系統へmy遺伝子を導入した筋ジスハムスター系の育成
ハムスターにおける、筋ジストロフィーは、劣性my遺伝子で遺伝し、そのホモ型IT明nyで発症する。my田子を正常ハムスター系統に導入するには、図2に示すような戻し交配がとられる。
すなわち、まず、筋ジス系統myノ五yと既存の正常近交系ハムスターセキを交配し、Fl動物セinyを得る0このFl動物間の交配

冤yx￣‰yにより、叩右y，施，七与のいずれかの因子を持つ仔動物群を得る。この中から、筋ジスの場合、舌端に白斑を生ずることから、舌端の観察により、
mx右yを選ぶ・このn略yに再び上述の
正常ハムスター坊を交配し七もy動物を得る。以後、同様にして世代を重ねることにより、my田子を徐々に既存の近交系ハムスターに導入することができる。

図2．既存ハムスター系統への my 遺伝子の導入 （実中研1982．11）−20−

この方法は、既存の近交系ハムスターをコントロールとして使用するため、その丁、ムスターの従来の生理的特性を参考とすることができる。この育成は、現在、遺伝子を導入する近交系ハムスターの選定を行なっている。
この方法により、遺伝的背景が近似した、筋ジスハムスターを育成するには、戻し交配7回以上
期間は最短でも3−4年必要である。

（2）筋ジスハムスターBIO14．6に正常遺伝子を導入した系統（コントロール）の育成
筋ジスハムスターのコントロールとしては、既存の筋ジス系統から、my因子を除く■ことによっても、遺伝的背景の均一な系統を育成することができる。

この方法は、図3に示すように、筋ジ
スハムスター叩危yと正常ハムスター
叫一を交配し、n動物1危yを得る0こ

81011．6（近交系）． 810れ8（′イブ9yr）

M拓yxm拓yxの％yに筋ジスハムスターm晦を交配し、梅とm‡危yのいずれかの因子を持つ仔動物を得る。筋ジスハムスター

m瑞y

、

m‰

叩右yは舌端に白斑を生ずることから、

れ−x tんγ＼xよ零細欄舌端を観察し、1右yを選ぶ、土の冤yにまたmX右yを交配する0このような交配により世代を重ねることによって、正m拓y一・、−、んy

常田子をBIO14．6へ導入、すなわち、−れ冤y

数代快ウ㌫yxウ乙γの交配で持た仔と実験に使用する

BIO14．6からmy因子を除くことができる。
昨年度より、この方法により育成を行なっている。現在、2回目の交配を行な

図3．筋ジスハムスター（BIO14．6）と近似した正常動物（コントロール）の育成（実中研1982）っている。
前述の正常ハムスターへのmy因子の導入に比べ、世代は約倍の早さで進めることが可能である0

今後の方向
単一遺伝子で遺伝する形質又は因子を、他の正常動物に導入する戻し交配は、マウス等で通常行
なわれている。しかし、ハムスターで行なった例は少ない。今後、前述の戻し交配の過程でどのような障害があるか不明である。たとえば、筋ジス因子が他の系統に導入されることによって、その表現型が変わり、筋ジスの発症の程度、舌端の白斑の状態、ならびに繁殖力等に影響することが考えられる。
．これらは、今後、育成の過程で解決しなければならない問題である0

ー21−

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3．筋ジストロフィー鶏骨格筋の再生能
杉 田 秀 夫■
研究協力者 埜中征哉ご 岡田理美＊
進行性筋ジストロフィーの病理像で最も特徴的な所見は筋線経の壊死である。壊死した筋はそのまゝ消失するのでなく再生する1〜5ま壊死が最も多くみられる筋ジスト。フィー若年者の筋に、最も活発な再生現象を認める。活発な再生現象があるにもかゝわらず進行性筋ジストロフィーは名の如
く「進行」し、症状の停止をみない。再生が壊死を十分代位しない理由として次のようなことが考えられている。すなわちG）再生筋が完全に再生を完了しないその途上で壊死に陥る、（参筋衛星細胞の老化あるいは枯渇、（参結合織の増加により血管が変化し、ために虚血が起って再生緑経に十分な栄養が届かず再生が遅れる、などである。
もし筋ジストロフィーで再生か壊死を代償するならば症状の悪化はあり得ないことになる。筋ジ
ストロフィーで筋線経がなぜ壊死に陥るかということは解決すべき最も重要な課題であるが、次に再生に関する問題を解決することはさわめて重要なことである。
今回の実験は筋ジストロフィー筋の再生能について検索することを目的とした。実験に使用したのは筋ジスト戸フィー鶏である。筋ジストロフィー鶏は筋線経の崩壊過程がヒト筋ジストロフィーのそれと多少異る点はあるが、主な病理所見が筋線経の壊死、再生であることは共通である6㌔ い
ま筋ジストロフィーと対照正常鶏の骨格筋を同時に壊死に陥らやるとする0もし筋ジストロフィー
鶏の再生能に何らかの欠陥があるとするならば、対照との問に筋線維径、筋線維タイプの分化の速度などに何らかの差が出てくるはずである。
骨格筋を壊死に陥らせる方法として外傷（挫減、加熱、冷却など）、筋切断、移植など数多くの方法がとられてきた。しかしこのような物理的条件では、その強さの程度により、再生の状態が変化する。例えば軽い挫減では速な再生が得られるが、神経、血管にも影響を与えるような強い挫減
では再生も遅れる。再現性のある再生を得るためには血管、神経などに影響が少く筋線維のみ破壊する方法が理想的である。その日的をかなえるものとして局所麻酔剤である塩酸プビバカインが最も優れていることを予備実験で確め定・8㌔今回の実験は塩酸プビバカインを筋ジスト。フィー鶏の骨格筋に注射しその再生を対照と組織化学的に、また直径計測により数量的に比較検討したもので
ある○

対

象

・

方

法

対象としたのは筋ジスト。フィー鶏（line413）とその正常対照（line412）である。ふ化後1月日の筋ジストロフィー鶏40羽、対照40羽を選びェーテル麻酔下に無菌的に右後広背筋を霹出し、0．5界塩酸プビバカイン0．5戚ヲを筋肉に注射した。左側は対照とした。注射後24時間、●国立武蔵療養所神経センター

一23一

4，7，10，15，20，30日目に多くの再生線経を認めた4羽ずつを選び後広背筋を取り出し以下にのべる組織化学的染色を行った。
第2群の実験としてふ化後4月目の同じく筋ジストロフィー鶏10羽、対照10羽の右後広背筋に塩酸プビバカインを注射、注射後7日、15日目に5羽ずつから後広背筋をとり出した。
筋は採取後直に液体窒素で冷却したイソベンタン中で凍結し、10／l厚の連続切片を作成した。
凍結切片は室温にて乾燥後へマトキシリンエオジン（HE）、ゴモリトリクローム変法、NADH−
TR、アセチールコリンエステラーゼ（AchE）、非特異性エステラーゼ（NSE）、ATPase（pHlO・3，4・6，4・2，の前処理）、酸フオス77クーゼ染色、アクリジンオレンジ染色を行った。
各々の個体より組織化学的に再生線経の特徴をもつ線経を200本無差別に選び、その直径を計測した。また左後広背筋（無処置筋）の筋直径も各個体で200本計測した。

結果（1）正常対照鶏再生線経の組織化学的特徴
塩酸プビバカインを後広背筋に注射すると鶏でもラットの時と同じく広範囲に壊死を認めた。24
時間目にはこの壊死線経は酸フオス77クーゼ陽性の貪食細胞をいれていた。注射後3日日頃は塩
基好性の胞体をもつ再生線経に近いものが出現するが、再生線経を一本一本同定することは困難であった（図1）。
4日目になると再生線経は一本一本明瞭に同定できた。それは塩基好性の胞体をもち、大型の核中心部に多く存在した。筋線経にはわずかの大小不同はあるがほゞ同じ径であり、結合識の増生はほとんど認められなかった（図2A）。再生線経はNADH−TR染色で活性高く、大型のdi−formazan顆粒を入れるいわゆるaR線経の特徴を示していた（図2B）。この時期にはAchEの活性は胞体内にも高くまたNSEの活性も胞体全体に高かった。アクリジンオレンジ染色後螢光顕
徴鏡下で観察すると再生線経は橙色の螢光を発する胞体の存在で特徴づけられた。再生緑経はアルカリフオス77クーゼでは活性なく、酸フオス77クーゼに若干の活性を有し、PAS，Oil red
O陽性物質に乏しかった。ATPase染色ではpH10．3で活性あり、pH4．6，4．2で活性を失い、この反応は非再生筋と同じで、哺乳動物のタイプ2A線経の染色性と一致した。
注射後7日目には再生筋線経は急速にその径を増し、胞体の塩基好性は薄れはじめた。また核も縮小し非再生筋の大きさに近似した。再生線経の大小不同は小さく結合織の増生はなかった（図3A）。NADH−TR染色ではまだ全ての再生線経は大型のdiformazan顆粒があり、aR線経の特徴を示していた（図3B）。再生線経はアクリジンオレンジ染色で明瞭にとらえられ、4日目の時と同じように橙色の螢光を示していた（図4）。
10日日、15日目になるとHE染色では再生線経の特徴はとらえ難く、塩基好性もほとんどなくなっていた。アクリジンオレンジ染色では10日目までは多くの線経が螢光を示していたが15日目にはそれもほとんど失われていた。NADH−TR染色では15日日までは再生線経はdifor−

一24−

maZan顆粒は大きく明らかにdR線経の特徴を示していた。
20−30日目になるとdR線経が群をなして存在することから、まだかなりの再生線経はdR反応を示すと考えられたが、残りはdW線経へと分化したと思われた。
以上ふ化後1月日の自筋である後広背筋に塩酸ブビバカインを注射した時の再生筋の組織化学的特徴を模式化したのが図5である。
ふ化後4月目のものも7日日、Ba80Phtlia

15日目の再生CentralNtJC．

筋の形態は1月
目のものと同じ

Acr雷dhe Or．

であった。

AchE，NSE（2）筋ジスト
NADH一TR

ロフィー鶏再生ATPase線経の組織化学
的特徴

0

4

7

10

15

20

30D

図5．正常鶏白筋（後広背筋）再生線経の組織化学的特徴

ふ化後1月目には筋ジストロフィー鶏は対照（line 412）と比べ明らかな病理学的異常所見を示していた。著明な大小不同、散在性の壊死線経、それに再生緑経の存在である（図6A）。この時期には後に著明となる結合織の増加、脂肪織の増加の所見はほとんどみられなかったoNADH−TR染色ではdifomazan顆粒の大き寧aR線
経が多く（図6B）、またAchE染色で神経終板以外の胞体にも活性の高い線経が増加していた。
アクリジンオレンジ染色では散在性に橙色に染る線経があり、再生途上筋の存在をうらづけていた。
この筋ジストロフィーの所見のある後広背筋に塩酸プビバカインを注射したところ、対照の時と同じく広汎な壊死を認めた。
4日目には対照と同じように塩基好性の胞体をもつ再生線経として認められた。組織化学上の特徴は対照と同じであった。
7日目には対照の時と同じく急速にその径を増し、塩基好性の特徴はとれ（図7A）、核も縮小していた。再生線経はアクリジンオレンジ螢光染色で橙色の螢光を発し、NADH−TR染色でaR
線経の染色性を示した（図7B）。
10日目には再生線経は大小不同が著しく、また染色性にも差が出てきたが、dR線経の集団として存在したので再生線経であることが確められた（図8）。またアクリジンオレンジでわずかに橙色を発し、再生線経であることが確認された。このような再生線経の所には壊死線経は存在しなかった。
15日目にはどの個体をみても再生途上筋であると確認されるような筋群は同定できなかった。

一25−すなわちどの部をみても、大小不同、壊死線経の存在、NADH−TRで著しく木型のdiformazan
額粒をもつdR線経が存在した。またアクリジンオレンジ染色でも、橙色の螢光を発する線経が散在したが、どれが塩酸ブビバカイン投与後の再生線経か、筋ジストロフィーの本来の壊死後再生筋
か、もはや鑑別は不可能であった。
ふ化後4月目の筋ジストロフィー鶏には筋ジストロフィーの所見が一段と著明であった。すなわ
ち筋線経の大小不同、填鱒・再生線経の存在、結合織の増加などが進んでいた0塩酸プビバカイン
注では1月目の筋ジストロフィー鶏と同じように壊死再生をみたが、1月目の時のような広汎な病変をみることは少なかった。
7日目には再生線経はアク・．リジンオレンジ螢光染色（図9）、NADH−TR染色で明らかな再生
線経として確認できた。しかし多くの例で注射部位に著明な結合織の増生を伴い、そのような場所
では15日目にもアクリジンオレンジで橙色の螢光を発する細い再生線経が群をなして存在していた。
（3）筋線維径の分布
正常対照鶏と筋ジストロフィー鶏における再生筋の筋線維径をグラフ化したのが図10である。

静かへユ︶詮F︼王≦q∝適正

0

4

7

10

15mWS

図10．対照正常鶏、筋ジストロフィー鶏の再生線維直径分布。ふ化1月鶏後広背筋
正常対照では注射後4日日頃は再生筋径は非再生筋のろろ程度であるが10日日頃にはほゞ非再生筋と同じ径、同程度の偏差値を示した。筋ジストロフィー鶏でも4，7日日頃までは対照とあまり再生筋の大きさ染色性は変らなかった。10日目には再生筋は非再生筋に直径は近づくが偏差値が大きく、大小不同が著明であることが特記すべき所見であった。

一26一

ll
t J

考

■

察

ヒト進行性筋ジストロフィーには活発な再生があることはよく知られている1〜5）。buchenne型
筋ジストロフィーの息著の若年者の生検筋中、多い時はその筋線経の約レ1は再生途上筋であり、平均15−16和こも達する5）。進行性筋ジストロフィーではこのように活発な再生があるのに筋
線経は細くなり、また次第にその数を減じていくことはよく知られている。再生現象が壊死の進行を十分に代償しない理由として筋線維自体に問題があるのか、それをとりまく環境に問題があるのかそれを解決することを試みて本実験を行った。
使用した実験動物は筋ジストロフィー鶏である。組織学的、組織化学的にヒト筋ジストロフィーと異る所はかなりあるが筋線経の壊死、再生を主病変とするところは変りない。筋ジストロフィー
鶏では浅胸筋、後広背筋など自筋が好んで侵され、赤筋ばほとんど侵されない。そこで今回の実験
は筋が小さくて容易に壊死に陥り易い自筋である後広背筋を選んだ。
筋線経の再生をみるためにはまず筋線経を壊死に陥らせる必要がある。筋線経を壊死させる方法
として物理的方法（筋挫滅、切断、虚血、加温、冷却）、薬物による方法（蛇毒、局所麻酔剤、プ
ラスモシッド）、移植などの方法が過去採用されてきた。これらの方法は筋線経への選択的傷害を起すのみでなく、神経、血管なども共に損傷するため、均一で再現性のある再生が得られない欠点があった。また線維化も起り易く、再生の状態を数量的に検討することは到底無理であった。最近
塩酸プビバカイン（マーカイン）（局所麻酔剤）が筋線経を壊死させ非常に速かな再生筋を出現させるので注目を集めるようになった7・8㌔ 塩酸ブビバカインの作用をみるためラット骨格筋を使用した実験では本剤は多分筋線経の外膜系（形質膜）を壊すが基底院は侵さなかった。また筋衛星細胞、末梢神経にも形態学的に何ら変化はなかった。また神経筋接合部のAehE酵素活性も壊死線経でほとんど変化しなかったことより神経系へ？影響はきわめて少いと思われた8㌔このように筋線経は壊死させるが、筋衛星細胞を侵さないことは連な再生を起させる大きな要田と考えられた。というのは筋衛星細胞は筋の発生の時の筋芽細胞とはゞ同じ働きがあり、筋線経が崩壊する時直に分裂を開始し、次に融合して再生線経へとなるからである。また塩酸プビバカインは血流を遮断せず、神経支配にも影響をほとんど与えないと考えられるので、再生筋は速に大きくなり、また速に分化する。結合織の増生もないため、再生筋線経はほとんど同じ大きさで、繰り返しての実験で再現性のある所見を星する。このような基礎実験の結果を土台として鶏の実験に入った。
鶏の自筋を壊死に陥らせその後の再生筋をみると、多くの組織化学染色でその存在が確められた。
初期にはHE染色でも同定できたが10日日以後はNADHqTR染色による方法が最も優れていた。
鶏自筋はNADH−TR染色によりaWとdR線経に分けられるが、dR線経はaW線経より未分化
でctR→dW線経へと分化する9・1聖再生線経はNADH染色で大型のdif。rmaZan顆粒をもつ未分化なdR線経であり、その特徴は再生15日日頃にも明らかであった。
筋ジストロフィー鶏でも塩酸プビバカイン注後に筋線経の壊死、再生は速で正常対照と7日日頃まではほとんど差がなかった。しかし10日日頃より、大小不同が著明となり、また染色性にも筋ジストロフィー筋にみられるような特徴（酸化酵素活性の高い、大型のdiform？Zan顆粒のある線

一27一

経の増加）が出現しはじめた。15日日以後にはもはや壊死後の再生線経、筋ジストロフィーの病変の一つとしての再生線経か同定不能であった。
以上のような今回の実験で得たことは∈）鶏骨格筋の自筋における再生線経をみるにはNADH−
TR染色によるdR線経の追求が優れていること、㊥塩酸プビバカイン注後には、再生線経は15
日日頃にはゞその径、筋線経の分化とも完了すること、（参筋ジストロフィー鶏も正常対照と変らぬ再生能をみるか、早期より大小不同、染色性の相違をみること、④筋ジストロフィー筋でも再生途
上筋は壊死線経となりにくいこと、㊥筋ジストロフィー筋ではしばしば結合織の増生を伴い、その部では再生が遅く、特に進行した筋ジストロフィーでその傾向が強いこと、などである。すなわち
筋ジストロフィー筋そのもの挿再生能があるが、環境因子である結合織の増生などが、再生を遅らせる大きな原田と考えられた。また筋ジストロフィー筋にみられる大小不同、染色性の相違などは
筋線経が壊死と再生をくり返すうちに生じた結果でなく、遺伝によって規制された筋線維そのものの発育異常を表わしていると思われた。
以上の所見は筋ジストロフィーマウスにおける筋挫滅後の再生をみたSusheelaら11）の所見と一致し、種差なく筋ジストロフィーでは普遍的な事実と推定される。

文

献1）Baloh，R・，Cancilla，P・A・，Kalyanaraman，K・，Munsat，T・，Pearson，C・M・＆Rich，R．：Regeneration of human muscle．A morpho10glC and histochemical study ofnornlal and dystrophic muscle afterinjury．Lab．Invest．，26：319−328，1972．

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一29一

図1．ふ化後1月目正常後広背筋。塩酸ブビバカイン注後3日目。広汎な壊死部に塩基好性の胞体をもつ再生線経が出現しはじめている。HE染色。

図2．注射後4日目には明らかな1本1本の再生線経の群として認められる。再生線経はHE染色（A）では塩基好性の胞体と大型の核の存在、NADH−TR染色（B）では大型のdiforma21an
顆粒のあるαR線経として特徴づけられる。

図3．再生線経は7日目になるとHE染色（A）ではもはや同定できないが、NADH−TR（B）染色ではdR線経の群（図の右半分）として容易に同定できる。

図4．1週目の再生線経はアクリジンオレンジ染色後螢光顕微鏡でみると中央にあるように橙色の蛍光を発する。

図6．ふ化後1月目筋ジストロフィー鶏後広背筋。筋線経の大小不同、壊死線維（中央）が存在す
るが結合織の増加はない（A）。NADH−TR（B）染色では0：R，aW線経が混在し・染色性の相違が強い。

図7．7日目の再生線経の集団はHE染色（A）でははっきりしないが、NADH−TR（B）ではdR
線経の集合で明らかである。この時期には染色性の相違はない。ふ化後1月目筋ジストロフ
ィー鶏。

図8．10日目の再生線経は大小不同が著明で染色性に相違がでているが、まだ全てdR線経の集合である。ふ化後1月目筋ジストロフィー鶏。NADH−TR染色。

図9．筋ジストロフィー鶏では塩酸ブビバカイン往により結合組織の増生を認め易くその部では再生線経は分化が遅れる。15日目にもアクリジンオレンジで螢光を出す小径の再生線経がみられている。ふ化後4月筋ジストロフィー鶏。

4．筋ジストロフィー鶏の骨および鯉後体C細胞
菊 池 建 機●研究協力者 加 藤 正 己書
研究目的
筋ジストロフィー症鶏（以下筋ジス鶏と略）の前肢の肘関節は、軟骨や靭帯の異常により屈曲拘縞を示す1・警この拘縮により、筋ジス鶏の前肢の伸展は不可能となる。このような関節部にみられる変形に加え、16−18週齢の筋ジス鶏の骨相系には、形態変形、骨重量の減少、骨長や径の減少が認められる3ま骨はその正常な揆能や代謝を維持するためには、一定の物理的刺激を必要とする。この中でも、筋の収縮による張力は重要な要素である。もし、筋の力が消失すると、骨は不用性萎縮（disuse
atrophy）と粗髭化（Osteoporosis）をおこし、さらに、不均衡な力が加わると、変形や屈曲拘縞をひきおこす。筋ジス鶏にみられる骨格系の種々の異常は、筋の摸能障害に伴う二次性の変化にょるところが大である。しかし、筋ジス鶏のほぼ全身におよぶ骨を調べると、筋機能悪化の少ない部位の骨、例えば、頭蓋、下肢の骨および脊柱の椎骨にも早期から異常が認められる点については説明できない。本論文では、下肢の骨、特に脛骨の組綴学的変化についていくつかの興味ある所見が得られたので報告する。
一方、鉱質（ミネラル）代謝に関与するCa調節ホルモンは、副甲状腺ホルモン（PTH）、カル
チトニソ（CT）、副腎ステロイドホルモン、そして最近、一種のホルモンとして注目されている活性型ビタミンDなどが挙げられる。この中で、鶏のカルチトニンは、蛇後体に含まれるC細胞（calcitoninproducing cell）で分泌され、血中のCa濃度の異常な上昇に際しては、骨からの骨質の吸収を抑制し、Ca濃度を低下させる作用を示す。哺乳類の鮫後体は、鶏の場合と同様に、第5鰹褒上皮から発生するが、その経過中に、甲状睨原基の中に取り込まれ、C細胞は、甲状曝炉
胸の近傍に位置し、穿炉胸細胞と呼ばれる。
われわれは、骨代謝に関わ る内分泌器管を組織学的に検索する問に、筋ジス鶏C細胞に著しい変化を見出した。本論文のもう一つの目的は、C細胞のカルチトニン分泌と、骨代謝との関連を考察する点にある。

材料および方法
東北大学農学部で、白色t／グホン種（IwAYA Eline）とニューハンプシャー種筋ジス鶏（4131ine）との戻し交配により作出した白色t／グホン種筋ジス鶏、および正常鶏を用いた4 嫡糾ヒ後、2、4、8、10、14、16、18週齢で各々3−5羽ずつ供試した。光顕レベルの成績は、4遇
齢以前は雌雄の別なく、8週齢以後は雄鶏から得られた。鶏を放血屠殺し、銃後体を採取し、プア■東北大学農学部

一45一

ンまたはオルト液で国定した。
組織は常法により3／りnパラフィン切片とし、へマトキシリン・エオジン（H−E）染色を施した。
これらの標本について、100倍で写真撮映し、4．7倍に引き伸した写真に方眼目盛を措いた透明紙でおおい、打点法により、単位面積当りのC細胞索の面積比を求めた。
電顕試料作製のため、4週齢の正常および筋ジス鶏の雄、各2羽を供した。ベントパルビタール（30喝／／鞄）静江で麻酔後、胸部を切開し、右心耳より放血し、同時に左心室より2浄グルター
ルアルデヒド、0・05Mカコジル酸緩衝液（pH7・4）で約30分間輝流固定を行った。この後、
館後体を採取し、同じ固定液で4℃、1時間半、細切片を再固定した。0．2Mカコジル酸緩衝液（pH7．4）で洗浄後、19あ・オスミック酸で後固定し、エボン樹脂包埋後、ウルトラミクロトーム
で電顕用超薄切片を作製した。切片は、酢酸ウランとクェソ酸鈴の二重染色を施し、JEM−100B
型透過型電子顕微鏡で観察した。
4、8、10適齢の正常および筋ジス鶏4、5羽から脛骨を採取した。骨幹中央部を10界緩衝
ホルマリン液で14日間程国定し、ブランク・リチユロ（Plank−Ryeblo）液で2日間化学脱灰後、5野硫酸ナトリウム水溶液に1晩浸潰した。水洗後、常法によりノミラフイン包埋し、5ノ m横断切片とし、H−E染色を施した。
2、4、8、10、14週齢の正常および筋ジス鶏の血菜中のCa，P，Mg濃度を測定した。CaはMTB法で比色定量し（ミドリ十字）、Pはモリブデンブルー直接法により比色定量し（Wako，
Phosphor−B−Test），Mgはキシリジルブルー法（Wako）により測定した。CaとMgはmEq／
且，Pは曙／加で表わす。血液採取前1日は絶食した。

榊▲ギYヲ▼こ
H才もレ〆﹂． ﹁︑・・一

図1・16適齢正常（a）および筋ジス鞄bの鯉後体C細胞。小矢印：C細胞索を示す。矢頭印：核濃縮を伴う変性C細胞。 H−E染色、×750
結果

1．紙後体C細胞
絶後体は、複雑な組織で、毛細血管に接して索状または房状に配列するC細胞群と、これらを囲む疎線雄性結合組織や上皮小体小節、炉胞構造を認める。体の表層にはしばしば太い神経線経が走一46一行する。また、リン㌧べ様組織や胸腺の一部、小リンパ球、好酸球などが組織中に浸潤しているo C細胞の核はH−E染色で濃く染まり、細胞質は乏しい（図1，a）0
筋ジス鶏の蛇後体C細胞は、2−4週齢で一部にC細胞の肥大がみられ、細胞質はエオジンに濃染する傾向がみられる。これらの肥大細胞はエオジン好染の小額粒を多数含んでいる0また、少数ではあるが、細胞質内に多数の小胞を有する細胞もみられる。正常鶏に比べて核そのものも明るくなり、径を増大する。8−10遇齢では、大部分のC細胞に肥大が認められ、細胞質はエオジンに濃染して、小顆粒を含んでいる。この時期には、細胞質内に小型の空胞を含む、泡沫状を呈するC細胞が目立ってくる。C細胞の核は、以前と同様に、大型で明るいが、中には、核濃縮によってへ
マトキシリンに濃染するものも散見される。この時期にみられるC細胞の所見は、以後の週齢でもほぼ同様である（図1，も）。

筋ジス鶏鰹後体組織中に占めるC細胞索の面積比は遇齢を追って増大する。この傾向は、2週齢ですでに認められるが、8−10退齢では一層蹟著になる。正常鶏C細胞索の占める面積比は各週齢ともほぼ一定である（図2）。10遇齢筋ジス鶏での面積比の低下は、C細胞索周辺の著しい結合
織増生による。
電子顕微鏡によるC細胞の微細構造は、4週齢の正常および筋ジス鶏雄で検討した。
光顕で観察されたように、C細胞索はC細胞の小グループで構成され、索の近傍には毛細血管が走行する（図3，a）。C細胞とC細胞の間隙には、星細胞（Stellate
ce115）またはensheathingcell6））の突起がみられる（図3，a：矢印）。時に、C細胞索の間辺に無舐神経線経がみられ、これらの中のある軸索はC細胞に終って、

図2．正常および筋ジス鶏の鯉後体C斉田胞索の面積比（浄）の経時的変化（＊pく0．05，＊＊pく0．01）

直接終末部を形成する。C細胞は卵円型の核を有し、明るく、比較的細胞質に富む細胞と、小型で暗調の細胞に分類できる。いずれの細胞も、小型で、電子密度の高い分泌層粒を含む0ミトコンド
リアの形態は不規則で、クリスタの配列に不整を認める。ゴルジ装置はしばしば発達し、核の近傍に位置する。
筋ジス鶏のC細胞は、同様に索を構成するが、核に比して細胞質の占める割合が大きく、細胞全体は肥大する。正常鶏の細胞との極立った差は、細胞質に2−3の発達したゴルジ装置を有し、その周辺に多数の大小不同の額粒をみることである。肥大したC紐胞の細胞質にはこの分泌顆粒が充一47一

図3．4週齢正常（a）および筋ジス鞄b）の絶後体C細胞の微細構造。C細胞は分泌顆粒を含み、星細胞（小矢印）で包まれている。筋ジス鶏C細胞は肥大し、多数の大型の分泌顆粒を含む。Gはゴルジ装置。
a：×13，000，b：×15210
満している。細胞の表層には、しばしば層状配列を示す粗面小胞体を認める。これらの小器官の間隙は、遊離リボゾームやボリゾームで占められ、細胞全体を暗詞にする。分泌顆粒とゴルジ装置の発達は密接な関連があり、装置の濃縮胞内には電子密度の高い顆粒がある（図3，bと図4，8）○大型の分泌顆粒の電子密度は変動があり、いずれも、一枚の単位瞑により包まれる。分泌顆粒の少ない細胞の中には、粒面小胞体が拡張して褒状を呈するものもあり、この間隙には多数のポリゾー
ムが分布している（図4，も）。

図4．4適齢筋ジス鶏の絶後体C細胞の分泌額粗a）と顆粒の少ない細胞（b）を示す。分泌顆粒は比較的電子密度の低いもの（矢頭印）と高いものがあり、単位膜で包まれる。顆粒の少ない細胞の粗面小胞体は拡張している。
a：×42，500，b：×15，400
2．骨組．織骨の直径は、直接骨化によってできた新しい骨層が、骨膜下に付け加えられ、積み重ねられて大きくなる。4適齢の正常鶏の脛骨横断面では、大部分の骨を形成する細胞は骨陸側（図5，a：図一48−中P）にあるため、この側に常に新しい骨質が付加され、骨小柱の格子を形成しながら骨幹の壁を厚くしてゆくのが観察される。このようにして形成された緻密骨の骨質には多数の骨細胞（osteいeyte）が埋め込まれていく。骨芽細胞（osteoblast）は集団で骨小柱間に取り残され、骨小柱に基質を付加して、骨を緻密にする。このため、骨膜から骨の中心へむかって、血管周囲のハヴ7一ス睦（図中H）はしだいに狭くなる。この遇齢では、骨内面（髄陸側：国中M）での、破骨細胞（osteoelast）による骨の吸収はあまり進行していないが、時に細胞により溶解されたと思われる陥凹をみる場合がある。

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図5．4週齢正常（a）および筋ジス鶏㈲の脛骨横断組織像。骨膜（P）と縫腱（M）側の間は緻密骨であり、筋ジス鶏のハヴ7−ス鮭は拡張している。
H−E染色，×99
4遇齢での筋ジス鶏の組織所見には、個体差がみられる。一般に骨幹での緻密骨の巾は厚くなる
が、正常鶏の場合と差のない個体もある。膜内骨化による骨小柱の付加はみられるが、骨芽細胞による骨基質の付加は不充分であり．ハヴ7−ス腔は拡大する傾向がある。謎陸側の骨質の吸収は、正常鶏と同程度なため、緻密骨の巾は厚くなる。骨細胞の周囲の中庭は拡張している（図5，b）。
8−10適齢にかけての骨の組織学的特徴は、髄胚側からの骨吸収が活発になる点が挙げられる。
菰膣には侵食されてできた、骨梁が緻密骨より伸長し、骨内にも大きなはこらを形成している（図6，a：矢印）。一一⊥方、筋ジス鶏の骨の緻密骨は、4週齢にみられたハヴ7−ス隆の拡張がこの時期でもみられる。私産側での骨吸収は遅延し、緻密骨の巾は厚い（図6，b）。

3．血中Ca，PおよびMg濃度
血中Ca濃度は、正常および筋ジス鶏間で比較しても差はみられない。適齢間や試験区の間で、測定値に変動がみられるが、その主な原因は、絶食開始時刻や、餌の切り換え時期を吟味しなかったためと思われる。血中Mg濃度も、ほぼ一定であり．正常と筋ジス鶏間に差を認めない。血中P
濃度は、4適齢での2度の試験で、いずれも筋ジス鶏の血中濃度に低下を認め、8遇齢の2度の試
験のうち、羽数を多くした試験区で同様な低下を記録した。他の週齢での血中P濃度には、差をみない（表1）。

一49一

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図6・10週齢正常a）および筋ジス鶏（b）の脛骨横断組織像。骨膜（P）と誌腔（M）側の間は緻密骨であり、髄膝側より骨吸収が進んで、大きな吸収腱（天頭印）が形成されている。
H−E染色，×40．
表1・正常および筋ジス鶏の血中Ca，P，Mg濃度の比較と経時的変化
A ge（w e e k s ）T ria l

2

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8 ± 0．
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1 （5 ）N ．S ．

Ca

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2 ± 0．
3 （3 ）

4．
5 ± 0．
4 （3 ）N ．S ．

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8 ± 0．
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M g

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2．
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Ca

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6 ± 0．
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2 ± 0．
7 （8 ）N ．S ．

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0 ± 0．
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1 ± 0．
7 （8 ）＜二0 ．0 1

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Ca

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0 ± 0．
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4 （5 ）N ．S ．

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6 ± 0．
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N ．S ．

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1 ± 0．
2 （5 ）N ．S ．

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8 ± 0．
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5．
0 ± 0．
3 （9 ）N ．S ．

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7 （9 ）N ．S ．

M g

1．
7 ± 0．
1 （3 ）

1．
8 ± 0．
1 （9 ）N ．S ．

1）血中CaとMg濃度はmEq／k，血中P濃度は呵／融で示す。
2）平均値±標準偏差、括弧内に羽数を示す。
3）t一検定により正常および筋ジス鶏間の有意差を検討した。

一50一

考

案

筋ジス鶏鰹後体のC細胞で観察された組織学的、微細構造学的特徴は、膵化後2週齢という、かなり早期からはじまる細胞肥大である。肥大細胞内のゴルジ装置の発達、粗面小胞体の層状配列や拡張、遊離リポゾームの密な分布、多数の大小の分泌顆粒等は、この細胞が著しい校能克進の状態にあったことを示している。8遇齢以後、目立って出現してくる核濃縮を伴う細胞変性は、この細胞が長期間にわたってカルチトニンの合成、放出を負荷され、ついには疲弊していく所見と解釈される。
これらの所見は、高カルシウム食で飼育された鶏のC細胞の変化と類似している。血中のCa濃度上昇により、カルチトニンの分泌や合成を負荷されたC細胞は肥大し、細胞の増生や、核濃縮を伴う細胞変性を示す一連の疲弊現象が観察される18）。肥大したC細胞は、放出と合成を同時に示すため、ゴルジ装置の発達、粗面小胞体の層状配列、大小の多数の分泌顆粒を含んでいる。SwARUPとDAS（1974）8）はムクドリに毎日1浄CaC12溶液を飲ませ、高Ca血によりカルチトニン分泌を促進させた。C細胞は肥大と同時に、核そのものも著しく径を増す。同様な条件で、ラットの甲状腺C細胞も肥大し、核の径を増すことが知られている9）。彼等は、このような一連の変化を、C細胞の校能克進による所見と考えている。犬の甲状睨C細胞は、高カルシウム食で飼育されると、有糸分裂によ。、次第に増生する10）。しかし、筋ジス鶏紀後体C細胞では、正常鶏に比べて有糸分裂により特に増生している所見は得られない。
鶏胚の血中カルチトニンは、発生17日目で測定可能となり、以後辟化時にかけて急激に血中に放出される。カルチトニン濃度は、酵化後再び急峻に低下し、2日目の雛の血中では測定不能となる11㌔この変化は、鶏胚の骨形成と、膵化時に卵殻を破りやすくするため、大量のCaが、卵殻から胚や卵黄へ移動する過程で、胚の血中Ca濃度が急激に上昇するのを抑制するための反応と考えられている12レ柳ヒした雛のその後の成長、特に骨形成に際し、カルチトニンのはたす役割は少ないとされている13㌔したがって、何らかの条件により、高Ca血に傾むき、Ca濃度が正常域を越えた時に、はじめて、カルシトニンは合成され、分泌されるとする解釈が一般的である。
HUD班Klら（1981）14）は、日齢は明確ではないが、正常および筋ジス鶏の血中Ca濃度を測定し、差を見出さなかった。われわれも、2−14週齢にかけて、血中Ca濃度を測定したが同様に差がみられなかった。イオン化Caが骨代謝に関係が深いため、より詳細な分析が必要と思われるが、一般に高カルシウム食の条件下でみられる高Ca血にはなっていないことを示している。正常域に維持された血中Ca濃度において、何故、筋ジス鶏のC細胞に揆能克進像が得られたかは、明らかではない。
骨の組織学的所見や、血中P濃度の4−8週目にかけての低下などから、いくつかの可能性が指摘できる。第一は、C細胞によるカルチトニソ産生が冗進していると同時に、副甲状睨からのPTH
産生も促進していたとするものである。現在、カルチトニソが骨吸収抑制作用を有することは明らかとなっているが、骨形成を積極的に促進するか否かについては、一定の決論を得るに致っていない。また、甲状睨舐様癌のごとき過量のカルチトニソが、長期間血中にあるときは、骨吸収および一51一

骨形成ともに著しく減弱するが、これは、カル亨トニソによる骨舐内の問菓系細胞の活性化が抑制されるためと考えられている15と筋ジス鶏骨の膜内骨化不全や、ハヴ7−ス胚の拡張を伴う、骨質の付加の遅延は、PTHの作用により骨吸収が骨形成より大きいため、骨平衡が負となっていたことが考えられる。また、血中のP濃度の低下は、カルチトニンやPTHの作用により惹起される。
第二は、C細胞はβ−アドレナリン作動性神経線経の支配下にある点が挙げられる。HoDOES（1970）16）は、哺乳類甲状腺内のC細胞に比べて、鶏のC細胞では、その表面に直接終る神経線
経の数が多く、より神経側の支配をうけていることを指摘している。事実、神経のレセプターを阻害すると、カルチトニンの分泌、合成は抑制され、この抑制はis。Pr。nalin。によ。防止される12と筋ジス鶏C細胞を支配する神経側の反応に異常があった可能性は否定できない。
第三は、筋ジス鶏の血中セロトニン濃度が、フリップテストによる揆能悪化とほぼ平行して上昇する17）点にある。このセロトニンは、C細胞のカルチトニンの分泌を促進することが知られている。

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一53−

Muscle＆Nerve・．

5．Fayoumi鶏に出現した遺伝性の神経嘆患
水 谷
研究協力若

誠■

布谷鉄夫：田島正典■

岡崎種畜牧場より導入したフアヨウミ種を起源として当研究所において作出したPNP系、Fs
系およびGSP系に腹側をのぞくように頭を内側にまげ、後ずさるあるいはうずくまる発作をくりかえす異常鶏（図1）が少数出現した。これら3系統からの異常鶏を用いた交配より出現した異常
鶏の堆4、雌8を起源として異常鶏の系統作出を試みたところ、発症時期は不定であるがすべての個体が神経異常を発症する系統（AN系）の作出に成功した。本報告はAN系の作出過程およびAN系を用いて行った異常形質の臨床症状、病理学的検索、遺伝的分析に関する結果である。

1．AN系の作出過程㌧

異常形質の固定化の前段階として、異常個体数をふやす目的と遺伝性の検索をかねて、異常個体（8）×正常個体（？）および異常個体同士の交配を行った。異常×正常の交配からは異常個体10、正常個体13が得られ、異常同士の交配からは異常個体29、正常個体14が得られた。これらの結果は、異常形質が常染色体性の優性遺伝子により支配され、ホモ致死である可能性を示唆していた。しかし、これは異常か否かの判定を10適齢までに判定したためであることがその後の発症時期の調査結果（後述）により判明した。上述の2交配から得られた39羽の異常個体は羽装に関して2type、すなわちdarktype（遺伝子型：ePep）とIight type（遺伝子型：eyey）が混在した（darktypeはlight typeに対して優性に退転する）。light typeの雄4、雌8を用い、原則として雄1、雌2の4交配によるrotation systemによりAN系の継代を開始した。その後現在まで約7年間pairの数は4−8と変動はあったが、Closed colonyとして維持されている0この間、症状のひどい個体をできるかぎり後代に残すようにしたが、いまだ発症時期は一定ではない。
AN系は異常形質の保存を第1の目的としているため、組織適合性遺伝子座（MHS）を含む種々の血液型の座位については無選抜のため固定していない。しかし、MHSに関しては2つの座位が混在していることはわかっている。固定している座位は羽装の座位（♂ey）と羽の成長を支配する
brdy座位（t t）など77ヨウミの品種としてのマーカーとなる遺伝子についてのみである。

2．臨床症状異常鶏は外的な聴覚および視覚刺激により突然、頭部および頭部を前内方に折り曲げてうずくま
るかあるいは後ずさりする。このような発作は15−30秒間継続する。回復すれば一丁見正常にみえるが、頚を少し内側に曲げているので経験をつめば容易に判別可能である。個体別の臨床経過の調査結果を図2に示した。異常鶏わ多くのものは30−80日齢で発症するが、発症時期は個体に・（財）日本生物科学研究所

一55−

罰19川7116151一13は日用987●S一321
個体暮号
那

加

40

50

図2．個体別臨床経過

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70

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％

100

110

1か

−ロー：発症を示す。

より異なり、個体番号3の個体のようにふ化時にすでに発症している個体もあれば、個体番号16の個体のように110日齢ではじめて発症する個体もある。発症時期についての選抜は今後の課題である。
発作は成長の激しい時期にひどく、成鶏になるにしたがい軽くなる傾向がある。しかし、完全に治ゆすることはなく、AN系の成鶏の頚部は内側に少し曲がっている（図3）。若齢時発作のため死亡する個体は少ないが、軽症になった成鶏において突然激しい発作におそわれ、食臥飲水ができず死亡する個体が少数出現する。

3．病理学的検索
検索例は約1．2−15カ月齢の雄9例である。臨床的にこれらはいずれも頭部および頭部の特徴
的神経症状を示した。
異常鶏を放血殺し、病理学的検索を行った結果、肉眼的には神経系、骨および骨格筋を始め、内臓諸器官に特異変化は認められなかったが、組織学的に大・小脳ならびに脊舐神経に主要病変が認められた。、大・小脳における主要変化は血管系、とくに脳内細一小動脈で顕著であった。すなわち、
内膜下空隙形成、中膜および外膜の水腫性疎開・膨化による血管内睦の狭小化、血管壁の疎開・膨化および液性物質の珍出と外膜細胞の腫大あるいは大単核細胞の増加に伴う管艦の閉塞、中膜の変性・断裂（図4−1）あるいはリンパ球浸潤に伴う血管壁の疎開・肥厚および管膣の狭小化（図4−2）などが多発性に観察された。このような変化を示す血管壁では、時折赤血球の明らかな漏出があり、またへキジデリン色素沈着が比較的正常と思われる血管壁をも含め、頻繁に認められた

一56一

（図4−3）。これら血管病変は異常鶏全例の、特に大脳において広域にわたり分布していたが、大脳皮質領域やstriatal centersで比較的多発する傾向にあった。中枢神経の血管系以外の脳実質においては特異性変化に乏しく、大脳皮質神経細胞の核内空胞形成および腫大（図4−4）が9
例中3例に、核の消失を伴った神経細胞同質化（図4−5）が最高齢1例の大脳乳頭、小脳前庭神
経核で認められたにすぎなかった。その地軸索の蛇行および限局性腫大が9例中4例の視菓中間表層線維層あるいは痛論において認められた。このような中枢神経病変の病変性状および強さと異常

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図−4．説明図4−1・腸9の大脳前部fbrerstriatwn dorsoventrale付近の小動脈。中膜は変性、断裂、疎開し、壁の肥厚および管胚の狭小化が顕著である。血管周囲には細胞質に富む大型細胞の増殖がある。
H＆E染色，×400。
図4−2・他6の大脳前部Hyperstriatum付近の小動脈。血管壁内にリンパ球およびプラズマ細胞の浸潤があり、壁の肥厚および管膣の狭小化が見られる。H＆E染色，×400。
図4−3．他3の大脳Paleostriatum付近の小動脈。ベルリン青法により証明されたへそジデリン
沈着（矢印）。×400。

−58一

図4−4．愉3の大脳皮質で見られた神経細胞の核内空腹形成および塵大o H＆E染色，×4000
図4−5．鳳9の小脳前庭神経核。核の消失を伯った神経細胞の同質化（矢印）を示すo H＆E・
×4000

図4−6．旭9の第8頸神経。神経線経の脱誌ならびに部分脱落と水腫を示すo LFB−H＆E
染色，×100。
図4−7．撤8の第6頸神経。神経線経の完全な脱落・消失とシュワン細胞の増殖を示すo LFB−H＆E染色，×￣100。

図4−8．鳩1の第4脊駐神経節。神経節細胞の逆行変性（矢印）を示す。LFB−H＆E染色，．×4000

鶏の日齢あるいは病変経過に特に関連性はなかった0
一方脊縫神経における主要病変は第2−第8頸神経に限局して認められた。すなわち、神経線経における神経輸および軸索の膨化、脱誌性変化、水腫およびシュワン細胞増殖を伴った神経線経の部分脱落（図4−6）ないし神経束におよぶ完全脱落（図4−7）が主に第6−第8頚神経の神経
板部から骨格筋内分布神経線経に至る広域において認められた。神経線経の変性・脱落を伴った脊誌神経節の多くのものでは、しばしば神経節細胞の逆行変性を伴っていた（図4−8）0このような脊舐神経病変は検索例9例のうちの7例に認められ、それらは臨床経過の長いもので強い傾向にあった（表1）。
表1．

神経系病変一覧

1
2
3
4
5
6
7
8
9

＋ ＋ ≠ ＋≠≠＋ ＋ 廿

大脳血管変性および細胞反応

脊舐神経（頸神経番号）
脱

硫

脱

落

＋（7）

＋（7）
＋（7）
＋（8）
＋（6）
＋（6）
榊（2，4，8）≠（6）≠（2，4，8）以上本疾患の主要組織学的変化は、中枢神経系、とくに大脳における血管変性ならびに頭部脊舐
神経の変性・脱落により特徴づけられ、それらはいずれも特徴的な臨床症状に密接に開通する所見と考えられた。このうち脳で認め＿られた血管変化は全例に共通して認められ、発作を起こす直接的
基因に何らかの関連性があるものと推察された。また背馳神経病変は病歴の古いものに多発し強い傾向があり、それら変化が頭部脊髄神経に集中していることなどから、発作の繰り返しに伴う二次

一59一

的変化とみなされた。

4．遺伝的分析
異常親同士の交配により異常形質が固定されたことにより、この形質が遺伝性と思われた。そこで、これまで異常鶏の出現していないBM−C系との交配を行い遺伝的分析を試みた。なお、異常か否かの判定は6カ月齢までに発作を1回でも起こした個体は異常個体とした。結果は表2に示したごとく、本異常は常染色体性の劣性遺伝子により支配されていることが判明した。すなわち、BM−C（8）XAN（？）のF17羽はすべて正常であり、もどし交配であるFl（8）×AN（？）およびAN（8）×Fl（？）から得られた子73羽中正常36、異常37となり1：1の比に適合した。
これだけの交配実験では常染色体性か、性染色体性かの判断は困難である。しかし、もし性染色体性の遺伝子により支配されているならば、AN（8）×Fl（BM−CxAN）から得られる異常鶏は雌のみとなるはずである0しかし、この交配からの異常鶏は雌雄ともに出現した。このことは間接的にではあるが、本異常が常染色体性の遺伝子により支配されていることを示している。今後、AN（8）×BM−C（？）およびFl（8）XF．（？）の各交配を行い退伝様式の確認をする予定である。

神経症状を示す家禽の遺伝表2． 神経異常形質の遺伝的分析

交

配

8

性疾患はニワトリ、ニホンウ

調査教

9BM−C x BM−C
AN x AN

子

正常
50
100

50

ズラ、七面鳥およびアヒルな

異常
0

0

100

どにおいて報告されている。
ニワトリにおいては、Conge−
nitalloco（Knowlton，

BM−C x AN

770

1929，常染色体性劣性遺伝

Fl（BM−CxAN）×AN

7

4

3

子）、Congenitaltremor

66

32

34

（Hutt and Child，1934，

AN X Fl（BM−CxAN）

常染色体性劣性遺伝子）、Shaker（Scottら、1950，性染色体性劣性遺伝子）、Sex−linl｛edlethal（G。。dwinら、
1950・性染色体性劣性遺伝子）、Jittery（Godfreyら、1953，性染色体性劣性遺伝子）、
Cerebellar degeneration（Marksanら、1959，性染色体性劣性遺伝子）、Paroxysm（Cole，
1961・性染色体性劣性遺伝子）、EpileptiformSeiZureS（Crawford，1970，常染色体性劣性遺伝子）、Tipsy（Hawkesら、1973，常染色体性劣性退伝子）、Pir。uette（McGibb。n，
1974，常染色体性劣性遺伝子）などが、ニホンウズ引こおいてはC。ng。nitall。C。（Sittmann
ら、1965，常染色体性劣性遺伝子）、Wry ned⊂（Savage andCollins，1971，常染色体性劣性遺伝子）、Star−gaZing（Savage and Collins，1972，常染色体性劣性遺伝子）、Dark
Feather NervousI）isorder（河原、1980，常染色体性劣性遺伝子）などがある。また七面鳥においてはCongenitalloco（Cole，1957，常染色体性劣性遺伝子）、Vibrator（Coleman，
1960，性染色体性劣性遺伝子）、Bobber（Harper and Bemier，1972，性染色体性劣性遣一60一伝子）の三種が、アヒルにおいてはHereditary tremor（Dyrendahl，1958，常染色体性劣性退伝子）がそれぞれ報告されている。
ニワトリのCongenitalloco・Tremor，Shal｛er，Sex−lirkedlethal，Jittery，Paroxysmなどのmutantは致死性である点で・PirouetteおよびTip中ま成鶏には生長するが人工授精でのみ繁殖可能である点で著者らの報告例と異なっている。EpileptiformSeizures はふ化後数日のヒナで初めて観察され、増体率、産卵率、受精率に異常なく生存し、■生涯を通して発作を繰り返すなどの点で著者らの報告例と類似する。しかし、臨床症状ならびに発作時間および回数において多少の差異がみられる。
AN系は発作時頚部を内側に曲げるが、このような症状を呈する異常はニホンウズラの散y neekと七面鳥のBobberの2種のみである。しかし、これらの異常に関しては病理組織学的検索の報告がないので類似性は不明であるが、Wry neckは、ふ化後4日以内に死亡する点で、Bobberは、性染色体性の劣性遺伝子により支配されている点でそれぞれAN系の異常と異なっている。
上述の種々の相違点から本報告例は新しい神経異常のmutantと思われる。
今後、詳細な退伝的分析を行なうとともに病理学的検索例数を重ね、異常の本態を検討し、疾患モデルとしての可能性を倹討する予定である。

文

献1）Knowlton，F・L・，Congenitailocoin chicks・Oregon Agric．
Exp．Sta．Bull．2うう：1929．
2）HuttI F・B・I and ChildI G・P・I Congenital tremorin
young chicks．J・Hered．25：5互フー550．195互．
3）Scott，fr・M．，Morrill，C．C．，Alberts，J．0．，andlモOberts

E・E・The HShakerII fowi，a SeX−linked semi−lethal nervous
disorder．J．Hered．互1：2うL1−257．1950．
4）Goodwin，K・I

HuttナF・B・】and

ColeI

P・K・I

A

sex−1inked

lethal genein the fowl．Sciencel12：互60461．1950．
5）Godfreyl

E・F・I

BohrenI

B・B・I

andJoapナR・G・I

一一Jitterya sex−linked nervous disorderin chick．J．Hered．仙：10弓−112．
19うう．

6）Markson，L・M・，Carnaghan，77・B・A・，and

Young■G・B・J

Familiai cerebeliar degeneration and atropy−a SeX−1inked

一61一disease affecting Light Sussex puiiets・J・Comp・Path・
Therapeutics

69：22うー2う0・19う9・7）Cole，p・K・I Paroxysm−A sex−linkediethal of the fowi・
J．Hered．52叫7−う2．1961・
8）crawford，72・D・1Epiieptiform SeiZurf／Sindomestic fowl・

J．Hered．61：185−1明．1970・
9）Hawkes，R・0・，寧・J・Etches・andR・B・Buckland，Tipsy：A
new mutantin the domestic fowi・J・Hered・6いう10−511・
197う．
10）McGibbon，W・H・I Pirouette：A behavioraimutantin thed。meStic fow1．J．tIered．6う：12L4−126．197Li・
11）Sittmann，K・W・I Richards C・P・I and Abpianaip，H・，Congenitaliocoin a third species of domestic fowi・
Can．J．Genet．Cytol．7：6う6−6L＋0．1965．
12）Savage，T・F・I and Coliins W・M・Wry neck，an abnormaiity
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1亭）Savage，T．F・，and Coliins，W・M・I工nheritance of Star−gazinginJapanese quail・J・Hered・6う：87−90・1972・
14）河原孝忠：家禽乳特にウズラにおける神経異常突然変異・実験動物・29：93−98・1980．

15）Cole，T？．K・，Congenita110COin turkeys・J・Hered・

互8：17うー175．1957．
16）Coleman，T・H・I R・K・RingerI W・J・Mathey，K・G・pOOd・and
C．W●

Pope，Vibrator事areCeSSivesex−1inked

mutationin turkeys．J．Hered．51：15弓−160．1960・
17）Harper，J．A．，and P．E．Bernier，HBobberH a cervicai
ataxia mutantin the domestic turkey．Pouitry Sci．
う1：181う．1972．

一62一

図1．発作を起こしているAN系の君雄

図3．AN系の成鶏の雌雄、ともに頸部が少しまがっている。

6．ニワトリの行動異常トレンブラー（trembler）に関する研究
若

杉

昇＊

体を小きざみに震動させる行動異常が散発的に出現する横斑プリマスロック種の集団を1981年5月に国立遺伝学研究所より導入し、この集団をクローストコロニーとして維持しながら異常形質に関する遺伝学的および生理学的研究を行った。
（1）飼育方法
雄1羽に対して雌1−3羽を成鶏ケージ内で交配し受精卵を得た。受精卵は12℃の冷蔵庫に保存し保存期間は2週間以内とした。酵卵槙（温度38℃∴湿度60〜709♭）に入卵し10日日および18日日に検卵を行い、2回目の検卵の際下段の発生座に移した∩入卵後23日目において初生雛の個体識別を行って育雛器に移した。育雛器の温度は14日齢まで35−40℃、28日齢までは30℃に調節しそれ以後は温度調節は行わなかった。飼付けは育雑器へ移動後すぐに行い、ゆで卵の卵黄を粉状につぶして与えた。4週齢までチックフードを与え、その後中雛用飼料、大難用
飼料そして成鶏用飼料へと順次切りかえた。水は新鮮なものを常時与えた。
（2）症状の観察
症状（体の震え）の出現時期には個体差があり、最も早いものでは利別ヒ時すでに発現を示し、最も遅いものは8週齢において発現したが5週齢までに発症したものが大部分であった。震動は頭の部分において最も強く、その震動が他の部分に伝わり全身が小きざみに震えると推測された0脚および指の異常（指全体が内側に曲がる）が4週齢頃より出現し、次第に立つことが不可能になり常時しゃがみこんだまゝになる（図1および2）。しかし瞬間的ではあるがまれに立つこともある0
周囲の環境が静かな状態に保たれていると次第に震えが鎮まり静止した状態を保つが、音あるいは他の鶏の動き等の刺激によって再び激しい震動を示しそれが長時間にわたって持続する。この行動異常を示す個体は体質的に弱く8−20遇齢にかけて順次死亡していくがまれに長時間生存するものも出現する。
（3）遺伝子分析
表1に三種煩の交配より得られた子孫における正常と行動異常との分離比を示した。両者の区別
は10週齢において行い、それまでに発症しなかったものを正常とみなした。なお交配に用いた親はすべて正常であった。雄（LXXX）と雌（91）および（92）の交配より行動異常鶏が得られたが、雄（LXXX）と雌（97）の交配からは得られなかったこと、および前著の交配より雌雄両方の行動
異常鶏が得られたことよりこの形質は常染色体性劣性遺伝子によって支配されていると結論できる∩
そしてすでに報告されている行動（神経）異常ミュータントの混合を避けてトレンブラー（trem−
bler：±γ）と命名した。

・名古屋大学農学部−65一

表1．三種煩の交配より得られた子孫における正常鶏と行動異常鶏の分離比＊
交

子

配

堆番号

観 察
雌番号

個体数

LXXX X（91，92）
L XXX X

LXXXlll X（94，95，96）

雄

異常

雌

雄

雌

25

20

6

2

22

10

12

0

0

59

26

33

0

0

53

（97）

孫

正常

＊交配に使用した親はすべて正常で子孫については10週齢まで観察し発症しなかった
ものは正常と判定した。
（4I 成 長図3および4にトレンプラー鶏の成長に伴う体重増加を示した。雄6羽のうち4例の体重増加は
正常鶏のそれより劣り12−20週齢で死亡した。他の2例は15遇齢まで正常鶏と同様の体重増加を示した。その後1例はケージの間隙に異を引っかけて飼および水の摂取が一時的に不可能となり、これが原因で衰弱し始め20適齢において死亡した。残りの1例はその後も正常な体重増加を示し現在11ケ月掛こ達している。脚が悪く常にしゃがみこんだ姿勢を取っているため自然交尾は不可能であるけれどもこの雄より精液を採取することができれば人工授精によりトレンプラー鶏の増殖を計ることができるであろう。雌では2羽のトレンプラー鶏が得られ、1例は1週齢時に発症し9週齢で死亡し、他の1例は5週齢で発症し12週齢で死亡したがその間の体重増加は正常鶏と比べて小さかった。

5
5

10

15

20

10

適齢

25

週齢
図3．トレンブラー鶏（実線）および正常鶏（破線）の成長に伴う体重増加（堆）。・印は発症時期、×印は死亡そして○印は生存を示す。
一一66一

図4．トレンブラー鶏（実線）および正常鶏（破線）の成長に伴う体重増加（雌．）。
・印は発症時期そして×印は死亡を示す。

l引 尺骨および脛骨の長さ
表2−4に正常鶏およびトレンプラー鶏の尺骨および脛骨の長さを示した。雄では12適齢において5例の測定値が得られた。正常鶏と比べ尺骨の長さは約0．5（謂短く、脛骨の長さは約0．7（謂短かかったが体重で補正した相対的長さでは差が認められなかった。雌では2個体（9週齢で1例と12週齢で1例）について計測したが、雄におけると同様、実測値は正常より小さかったが補正値では差が認められなかった。
表2．正常鶏およびトレンプラー鶏の尺骨および脛骨の長さ＊（雄：12遇齢）

観 察

平均

個体数

体重（g）

常

11

799

トレンプラー

5

688

正

右

左

右

左

7．57

7．40

10．49

10．60

（0．83）（0月1）
7．06

7．03

（0．82）（0．81）（1．15）（1．15）
9．86

9．88

（1．14）（1ユ4）＊平均値（単位（Ⅶ）。（）内は体重比
表3．正常鶏およびトレンプラー鶏の尺骨および脛骨の長さ＊（雌：9遇齢）

観

正

察

平均

尺

個体数

体重（g）

4

492

常

トレンプラー

1

骨

右

脛

左

6．25

6．13

（080）

（0．79）

5．9

5．8（0．78）（0．77）

430

骨

右

左

8．63

8．75

（1．11）（1．12）
8．5

8．4

（1．13）（1ユ1）＊平均値（単位C刀）。（）内は体重比
表4．正常鶏およびトレンプラー鶏の尺骨および脛骨の長さ＊（雌：12遇齢）

観

察

個体数
正

平均

尺

体重（g）

常

7

736

トレンプラー

1

560

骨

右

左

6．57

6．47

（0・74）（0・73）．
−6．1（0．74）＊平均値（単位の）。（）内は体重比

一67一

6．1
（0．74）

右

左

9．83

9．77

（1．10）（1ユ0）
8．8

8．7

（1．10）（1．10）

（6）血液性状
雄についてのみ調べたが13週齢における血疑蛋白量は正常鶏で3．80gノ〃β（N＝14）、トレン
プラー鶏で3．87gパ如（N＝6）であった。血球数は14遇齢において調べたが、赤血球数は正常
鶏で2．77×100／品3（N＝10）、トレンブラー鶏で2・79×106／㌫3（N∈5）であり、白血球数は正常鶏で2．94×104／肌3（N＝10）、トレンプラー鶏で3・04×104Jm3（N＝5）であった。これらの事項に閑し両老間に差異は認められなかった。
（7）筋電図電極は注射針（外径％または％m）を外套にした同心型針電極で中にエナメル被覆金属線（外径0．25または0．15m）を挿入し先端のみを露出したものを使用した。測定部位は横突問筋（頭部）と浅胸筋で電極を皮膚に固定しリード線を生体電気記録装置に入力した0
図5に上記2位板の筋より記録した筋電図を示した。筋肉の活動（震動）が即座に振幅の大きい
不規則な波形として記録され通常は長時間にわたってこの状態が続いた。前述の肉眼観察より予想されたように頭部の筋肉より大きな振幅の波形が記録された。図5に示されている筋肉活動の停止
は偶然記録されたのであるが、実験途中で活動がしばらく停止しその後再び活発な活動が観察された。この停止は被験体が睡眠状態になったためではないかと推測されたが、被験体を笑気ガスまた

図5．トレンプラー鶏の横突問筋（上段）および浅胸筋（下段）より記録した筋電図。最初の目盛は校正電圧（200J Ⅴ）を表し、タイムスケールは1日盛1秒を示す9一68一

はベントパルビタールで麻酔することによりこの現象を再現することができた。従ってこの行動異常は中枢神経系の異常に起因している可能性が示唆された。活動停止中も小さな電気的活動が観察されたがこれは心臓の樽動による電位変化が記録されたものであろう0（8）ニワトリの神経異常突然変異
これまでに発見されたニワトリの遺伝性神経異常を以下に示し、トレンプラー鶏と類似の異常を検索する。
常染色体性劣性形質
a）Crazy（ey）
初生雛においてみられる行動異常で激しく動き回って倒れ教秒間痙攣を起こす、その後静かにな
るが正常な姿勢で立つことはない。飲水、摂飼ができないために死亡するが強制的に飲水摂飼させた場合でも膵化後8日以内に死亡する。
b）Epileptiform seizures（epi）
初生雛においてすでに療腐発作が現れ、その後育雛期間においても性成熟後においても痙宿発作がみられる。発作の強さは周囲の状況によって異り、軽い場合は数砂でおさまり、強度の場合は30分以上痙攣が続く。一度発作を起こすと数時間は正常な状態が維持される0音、光等の外部からの刺激によって神経が疲労することによって発作が生ずると推測されている。刺激が加えられると警戒姿勢を取り頭部の羽毛が膨らみを失い、声を発して喝で周りをつゝき、次に激しく走り回って倒れ、頭をうしろに引き巽と脚をノミタバクさせる。その後しばらく昏睡状態が続くと回復し立ちあがる。2）また光刺激によって特徴的な脳波が現れることも観察されている03）発作を起こしている時に他の正常な雛より攻撃されることがあるので個別ケージで飼育する等の配慮をすれば正常に成長し性成熟に達する。
C）Congenitolloco（Lo）
頭を背中の方に引き喝を上に向け後づさりしぐらついて倒れる。貯化後1週間−10日において死亡する〇d）Congenitol tremer

大部分は卿ヒ後1週間以内に死亡するが、それ以上生存する場合は体の震えが次第に小さくなり最後には消失する。多数の退転子によって支配されている形質であるとも考えられている0．
e）pirovette（pir）

初生雛では小円を措いて回転するがこの行動を誘発する刺激は明確でない。この行動は10秒以内に終るが育成期間中の死亡率は正常鶏に比べて高い。この症状を示す鶏のいくつかはstargaz−
ing（頭を背中の方に引き上を見あげる）行動を示すが成長するにしたがってこの行動が多発する0性成熟に達したものは正常な繁殖力を有する。4）f）Shaker−2（∫ん一2）

聯化後4週齢頃に頭および頚を震動させる症状が発現し加齢に伴って症状が重くなる。14遇齢
頃立つことが不可能となりその後衰弱して死亡する○外部からの刺激によって雷動が激しくなる05）

一69一g）Tipsy（lip）
瞬化後3週齢−3ケ月齢において歩行異常を示すが早期に発症したものは3ケ月齢頃に死亡する。
発症の遅いものは性成熟に達し、雌は正常に産卵する。雄は交尾が不可能であるが精液採取を行って人工授精により子孫を得ることができる。腰部および後肢の筋肉に著るしい変性が認められるが発症直後のものでは正常である。したがってこの筋肉の変性は神経の異常によるものであろうと推測されている。6）
伴性劣性形質h）Cerebellar degeneration（cd）
約2ケ月齢で発症し軽度り運動失調を示し、頭部および頭部を震動させる症状を現わす。震動が激しくなると倒れないように両脚を広げて踏ん張る姿勢を取る。比較的順調に発育し性成熟に達す
るが産卵率が低く受精率も低い（、小脳の大きさが正常の％以下であるが小葉および小脳溝の外観は正常である。プルキンエ細胞の変性消失および樹状突起の減少が観察されている。7）i）Ceret光llar hypoplasia（ce）

約12週齢で発症し頭部と頚部を前後または左右に振動させ、重症な個体は動けなくなる。発育は正常で性成熟に達し産卵も正常である。小脳の大きさは将化時は正常の約％であるが6ケ月齢では正常の％一月になる。小脳皮質の小葉がはっきりしなく小脳溝が極端に浅い。組織学的観察では分子層および額粒層が極めて薄く、多数の神経細胞の変性、膨潤、ニッスル顆粒の消失、核の崩壊等の変性像を示している。この症状を示したのが雌のみであったことより伴性劣性遺伝子の支配下にあることが示唆された。

j）Jittery（j）
頭を背中の方に引き左右に震わせ、うしろに倒れる。しばらくの問倒れたまゝであるがその後立
ち上がりまた倒れるという動作を操り返えす。外部から刺激が加えられると症状が「段と強くなる。
この症状を示す雛の約90界が醇化後1週間以内に死亡する。性成熟に達するものが1−29も存在
するが、これらはしばしば喝で尾を追いかけるような回転運動を示す。組織学的検査では小脳のプ
ルキシエ細胞の著るしい変性が認められている。

k）Paroxysm（pJ）
醇化後2遇以後に発症し、音、光、その他の刺激によって興奮すると活発に動き回って倒れ硬直状態に入る。脚を後ろに伸ばし、巽をバクバクさせて頭を背側に反らせる。この状態が約10秒間続くと緊張が解けて目を閉じたまゝ静かに横たわる。その後しばらくすると回復し立ち上がり尾の羽を広げてよろよろ歩きを始める。この発作を示した後は30分以上経過しないと次の発作は生じない0成長が遅く14−15週齢で死亡する。小脳には組織学的異常は認められない。10）1）Shaker（∫ん）

僻化後2−6遇において発症し、頭部および頭部を小きざみに震動させる。年令が進むにつれで震動が激しくなる。また外部からの刺激も症状を強度にする。10適齢頃までは正常に歩行できるが14遇以後になると立てなくなり衰弱して死亡するがまれに性成熟に達する個体も出現する。小一一70一

脳のプルキンエ細胞の変性消失が観察されている。11）m）Sex−linked nervous disorder（sLn）

頭部および頚部が小さな速い振幅で震動する。辟化直後この症状を示すものもあるが1ケ月齢以上になって発症するものもある。性成熟に達するまでに約半数が死亡するが正常に発育したものはやゝ低めではあるが正常鶏と大差ない産卵率を示す。小脳においてプルキンエ細胞の変性消失が観察されている。上記のsh血erと同じまたは類似の神経異常である。12）n）gex−1inkedlethal（xl）
醇化後4−18遇において発症する。発症は急激で行動が不活発になり、胸と喝を床につけてう
ずくまり昏睡状態になり、時に呼吸困難または硬直状態になる。その後そのまゝ死亡するかまたは回復して生存する。生存したものもその後発作を繰返えして死亡する場合が多い。少数例ではあるが性成熟に達するものもある。死後の剖検では際立った特徴は認められなく、発作が特定の日に多発することより何らかの環境要因が引き金になっている可能性がある。13）以上の神経異常のうちshaker−2が今回発見されたtremblerに類似しているが、これら2つの神経異常が同一の遺伝子によって支配されているかどうかは交配実験によって確める必要があろう。

（9）ま と め
体を小きざみに震動させる行動異常鶏の一般的特徴を調べ次の結果を得た。（1にの異常形質は常染色体性劣性遺伝子によって支配され、異常行動は膵化時より8週齢まで長期間にわたって発現した。（2）この症状を示す鶏は成長が遅く大部分が9−12適齢において死亡したが正常に成長し10ケ月以上生存したものが1例あった亡（3にの異常鶏の筋電図を記録中、電気的活動がしばらく停止
しその後再び活発な活動が観察された例があった。麻酔によってこの現象を再現することができたため、この行動異常は中枢神経系の異常に起因している可能性が示唆された。

文

献1）McGibbon，W．H．
Cra2：Y−Anervous disorderin Ancona chicks・
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2）crawford，R．D．
Epileptiform sei2：ureSin domestic fowi．
J．

Hered．61．185−188．1970．

3）crichlow，E．C．and Crawford．R．D．
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Stimulation and the electroencephalogram．
CanadianJ．Physiol．Pharmり 52．424−429．1974．
4）HcGibbon．W．H．
Pirouette：A behaviorai mutant in the domestic fowi．
J．Hered．′

65′124−126′1974．

一71一5）somes．R．G．Jr．
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Storrs Agricultcultural Experiment Station，
The UniversitY Of Connecticut，Storrs，1981・
6）Hawkes，R．0‥

Etches，R・J・and Buchland′

R・B・

Tipsy；A new mutantln the domestic fowl・
J．Hered．′

64．310−311．1973．

7）Harkson．L．朗．ト

Carnaghan′

R・B・A・and Young′

G・B・

Familial cerebe11ar degeneration and atrophy−A sex−1inked
disease affecting Light Sussex pullets・
J．Comp．path．69，223−230．1959・
8）Winterfield．R・W・
Avian cerebellar hYPOplasia and degeneration・
J．Amer．Vet．．Hed．Assoc．．123′136−138．1953．

9）Godfrey，E・F・，Bohren，B・B・andJaap′

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J．Hered．，44′109−112．1953．

10）cole．R．R．
Paroxysm−A sex−1inkediethal of the fowl・
J．Heredり 52．47−52．1961．
11）scott，H．H．，Morriil，C．C．，Alberts，J．0．and Roberts，E・The．■．shaker．．fowl，A

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13）・GoOdwin′RH

Hutt・F・B・and

COle′R・K・

A8ek−iinkediethal genein the fowl・
sclence．112′

460−461，1950・

一72−

図1．行動異常鶏（左）と正常鶏（右）、2ケ月齢

図2．行動異常鶏（左）と正常鶏（右）、3ケ月齢昭和57年度第5班（野村班）名簿
区

分

班

長

氏

野

村

所
所

名

達

次

事

江

崎

孝三郎

橋

節

郎

田

秀

夫

員

辻

繁

勝

菊

池

建

揆

若

杉

昇

水

谷

斉 藤

誠

宗

雄

協 力 者

早

川

純 一郎

松

崎

哲

也

0 2 2 2 −7 2 −4 3 2 1

0 5 2 −7 8 1 −5 1 1 1

名 古屋 市 千種 区 不老 町

日本生 物 科学 研 究所
山 梨 県 小渕 沢町 上笹 尾

財 団法 人実 験動 物中央 研 究所

0 5 5 1 3 6 −2 3 3 3

0 4 4 −7 5 5 −5 4 4 1

川崎 市宮 前 区野 川 1 4 3 0 ・．

金 沢 大 学医 学 部動 物 実験 施 設

0 7 6 2 −6 2 −8 1 5 1

金沢 市室 町 1 3 − 1

財団法人〒 2 130 7 3 4 −3 1 −2 1 5 1

仙 台 市堤 通 雨宮 町 1 − 1〒 4 09 −16〒 92 00 4 2 3 −4 1 −2 7 1 1

和 歌 山 市九 番 丁 9

財 団法 人〒 2 130 3 −8 1 2 −2 1 1 1

東 京都 小平 市 小川 東町 2 6 2 0

名 古屋 大 学 農学 部家畜 育 種学
〒 46 40 4 4 −7 5 5 −5 4 4 1

東京 都 文京 区 本郷 7 −3 −1

東北 大学 農 学 部家 畜形 態 学〒 980

0 4 4 −7 5 5 −5 4 4 1

川崎 市宮 前 区野 川 1 4 3 0

和 歌 山 県立 医 科 大学 医学 部第 二生 理学〒 鋸0

電 話 番号

川崎 市宮 前 区野 川 1 4 3 0

国 立 武蔵 療 養 所神 経 セ ン タ ー〒 18 7

班

名地

東 京 大 学 医学 部薬 理 学
〒 113

杉

関

財 団法 人 実 験動 物 中央 研 究所
〒 2 13江揆
在財 団法 人 実 験動 物 中央 研 究所
〒 2 13幹属

実 験 動 物中 央研 究所

川崎 市 宮前 区野 川 1 4 3 0

0 4 4 −7 5 5 −5 4 4 1