厚生省「神経疾患研究委託費」

筋ジストロ7イ⊥症の病因に関する臨床的研究

第二堆（三好堆）
昭和54年度研究報告書

昭和55年3月

研究報告書の作成にあたって
厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究」
姓として，昭和54年度の研究報告書を作成する運びとなりました。
本研究班は昨年度に発足し，本年度は第2年目であります。本研究班の目的は筋ジストロフィー症を遺伝，臨床，病態生理，および生化学的見地から追求し，本症の原因を究明し，治療法の開発を目ざすものであります。
本研究班では，各自班月の個性を活かすとともに班全体としての研究を推進するために予めいくつかのプロジェクトを組み組織化を意図しました。本年度の研究成果については，既に昨年12月に研究班会議を開きこれを発表いたしま
したが，本報告書はその後のものを加えて完成を得たものであります。
本報告書に集録された成果は，いずれも国際水準のものでありますが，とくに，今回は筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病因究明に関して，新しく核心に迫るいくつかの問題が明らかにされました。内外研究者の今後の研究に大きく影響するところがあるものと思います。このことは，本研究班の班員，並びに共同研究者各位の絶大な努力に負うものであり，班長として心からの敬意を表します。
筋ジストロフィー症の病因の究明と治療法の開発を目ざして，今後も不断の研究を続けることが，まず，この病気に苦しむ人々のために，そして，社会的にも，学問的にも私達に課せられた義務であることに変りなく，今後の精進を念じております。
本研究の推進に，厚生省当局，国立神経センター，日本筋ジストロフィー協会の御努九御支援そして御理解に深く感謝致します。
昭和55年3月

く班長〉 三 好 和 夫

目次

分担研究報告Ⅰ．筋ジストロフィーチキン，マウスの研究

15a）筋ジストロフィーチキン，マウス

17

Ⅱ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病態生理

61

a）遺 伝

63

b）臨 床

66

c）形

態

107

d）生 理

152

e）赤血球など

180f）生化・治療206

昭和54年度研究班機構図及名簿

247

担

研

報

告

究

分

目

次

Ⅰ．筋ジストロフィーチキン，マウスの研究

1）ジストロフィーチキン骨格筋の組織学的，組織化学的研究−筋線維の発達分化と筋病変出現の関連について−
国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

埜

17

中

征

哉

2）筋ジストロフィーチキンの発達過程における形態学的初期変化
九州大学医学部脳研神経内科 黒 岩 義五郎

223）外眼筋の組織学的，組織化学的研究

27

東邦大学医学部第四内科

木

下

真

男

4）ジストロフィーチキン骨格筋の変化と再生−空胞形成およびaberrant myofibrill形成について−
鳥取大学医学部脳研脳神経病理

中

村

31

晴

臣

5）ジストロフィーチキンにおけるactivated statellite cellについて−光顕ラジオオートグラフィーによる検討−
信州大学医学部第三内科

37

小

口

喜三夫

6）正常及び筋ジストロフィーチキン培養骨格筋に対する交感神経の影響
信州大学医学部第三内科

41

塚 越

廣
48

7）筋ジストロフィー筋における糖および脂質代謝
国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

高

木

昭

夫

8）筋ジストロフィーチキンdorsal root gangliaのnerve
growth factorに対する反応性ならびに筋肉中の51

nerve growth factor‑like immunoreactivityレベル

京都大学薬学部生物化学

林

恭

三

9）ジストロフィー実験動物モデルにおける神経成長促進因子の研究（Ⅲ）除神経の筋NGF‑L1への影響

57

京都大学医学部第二内科

9

井

村

裕

夫

Ⅱ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病態生理

10）筋萎縮性疾患の遺伝分析−筋緊張性ジストロフィー症について−
鹿児島大学医学部衛生

63

古

庄

敏

行

11）Kennedy‑Alter‑Sung‑Syndromeの2例−臨床病態に関する検討−

66

大阪医科大学第一内科

茂

在

敏

司

12）特異な臨床型を呈したinfantile SPMAの1例
愛媛大学保健管理センター

71

植

田

啓

嗣

13）Distal Dystrophyの二家系

76

神戸大学医学部第三内科

高

橋

桂

一

14）知覚障害を伴わない緩徐進行性遠位型筋萎縮症について−神経原性病態を主とする5症例の検討を中心として
虎の門病院神経内科

81

田

辺

等

15）筋萎縮症の症候発現部位特異性に関する検討−一側下肢に限局する筋萎縮症9症例を中心として
虎の門病院神経内科

85

田

辺

等

16）脊椎運動制限，TypeⅠ筋線維萎縮中心核を呈する
先天性ミオパチー

91

東京大学医学部脳研神経内科

豊

倉

康

夫

17）Ragged red fiberとvacuolar changeを認めた

distal myopathyの1孤発例

95

筑波大学臨床医学系神経内科

中

西

孝

雄

古

川

哲

雄

18）胃切除後に有痛性筋痙攣を呈した1成人例
日赤医療センター神経内科

10019）筋緊張性ジストロフィー症における瞳孔異常について
京都大学医学部第二内科

103

井

村

裕

夫

20）神経筋疾患におけるFrezz‑fracture法による筋細胞膜の形態学的研究宮崎医科大学第三内科

107

荒

木

淑

郎

21）筋ジストロフィーの筋病変に関する検討（続報）−各病型における筋線維病変と血管・間質病変との対比
虎の門病院神経内科

10

田

111

辺

等

22）先天性ミオパチーの臨床的・筋病理学的検討
鹿児島大学医学部第三内科

118

納

光

弘

23）進行性外眼筋麻痺のミトコンドリア異常について
自治医科大学神経内科

124

宮

武

正

24）ジストロフィーチキンの病態に関する研究−飼料の影響−東邦大学医学部第四内科

129

木

下

真

男

敏

司

25）実験的ミオパチー（Ⅱ）−Vinblastin，Colchicineによるラット骨格筋の形態学的変化

133

大阪医科大学第一内科

茂在26）アカバネウイルスによる先天性関節拘縮症：
特に筋病変について
順天堂大学医学部脳神経内科

139

佐

藤

猛

27）虚血による実験的ミトコンドリア・ミオパチー：
143

神経切断の影響
順天堂大学医学部脳神経内科

佐

藤

猛
147

28）Rimmed vacuole の組織学的・電顕的研究
新潟大学脳研究所神経内科

福

原

信

義
152

29）Duchenne型筋ジストロフィーにおける未分化筋線維の出現
国立武蔵療養所神経センター

高

木

昭

夫
157

30）筋ジストロフィー症の単一筋線維筋電図（第2報）
国立療養所字多野病院神経内科

西

谷

裕
162

31）哺乳動物の骨格筋に対するE‑C Uncoupling

宮崎医科大学第三内科

栗

原

照

幸
167

32）微小電極法によるミオトニーの研究
宮崎医科大学第三内科

栗

原

照

幸
172

33）実験的excessive〔Ca＋＋〕i‑induced myopathyに関する研究

長崎大学医学部第一内科

高

守

正

治
177

34）甲状腺機能低下症にみられるmounding現象の問題点
東京大学医学部脳研神経内科

豊

倉

康

夫

35）アルミナバッチ法とアセチル化を組合わせたラジオイムノアッセイによるデュシャンヌ型筋ジストロフィーの赤血球膜アデニレート
サイクレースの測定
神戸大学医学部第三内科
11

高

橋

桂

180

一

36）Duchenne型筋ジストロフィー症赤血球膜のNa＋KATPase
九州工業大学保健管理センター

馬

渡

184

志

郎

37）Duchenne型筋ジストロフィー症の赤血球膜について
愛媛大学保健管理センター

187

植

田

啓

嗣

38）Duchenne型筋ジストロフィー症赤血球膜アセチルコリン
エステラーゼ活性についての検討
九州大学医学部脳研神経内科

192

黒 岩 義五郎39）筋ジストロフィー症の細胞膜の物理化学的研究
Ⅱ．赤血球形態の経時変化及びカルシウムの影響
国立武蔵療養所神経センター

195

吉

田

瑞

子

40）筋緊張性ジストロフィー症における赤血球膜
Lipid vesiclesの異常

199

新潟大学脳研究所神経内科

近藤 喜代太郎41）ジストロフィー鶏赤血球膜のレクチン結合200

都立府中病院神経内科

字尾野42）筋ジストロフィー症における筋膜脂質に関する研究

公義

−続報−

−筋ジストロフィーチキンの筋ガングリオシドについて−
自治医科大学神経内科

宮

206

武

正

43）Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）におけるクレアチン代謝異常

210

Ⅰ．creatinaseおよびsarcosine dehydrogenaseの
人骨格筋における存在−creatine‑urea

経路の提唱

Ⅱ．Duchenne型筋ジストロフィー症骨格筋中のcreatinase異常徳島大学医学部第一内科

三

好

和

夫

44）各種神経筋疾患罹患筋のCANP活性215

東京大学医学部脳研神経内科

杉

田

秀

夫

45）トリプトファン代謝異常を認めた小脳失調症−キヌレニンフオルムアミダーゼ欠損症と思われる1家系−
徳島大学医学部第一内科

八木田

218

正聖

46）筋・赤血球PFK欠損症に関する最近の知見
大阪大学医学部第二内科

222

垂

井

清一郎

井

尚

47）各種スポーツにおける血中ミオグロビンの変動パターン
徳島大学医学部第一内科

12

川

226

臣

48）赤筋と白筋に於けるSteroid cytosol receptorと231

そのnuclear binding

信州大学医学部第三内科

庄

司

進

一

飯

田

光

男

236

49）Serotonin myopathyにおける筋膜の生化学的検索

名古屋大学医学部第一内科

23950）Compound 48/80の筋蛋白代謝におよぼす影響
徳島大学医学部附属酵素研究施設酵素化学部門

真

田

幸

弘

51）膵エキスの作用機序と精製法の現状および筋ジス患者への臨床応用について

242

長崎大学医学部第三内科

13

高

岡

善

人

Ⅰ．筋ジストロフィーチキン，マウスの研究
a）筋ジストロフィーチキン，マウス

1）ジストロフィーチキン骨格筋の組織学的，組織化学的検討
一筋線椎の発達分化と筋病変出現の関連について−

埜

研究協力者

中

征

哉

春 原 経 彦石 浦 章

ジストロフィーチキン（Dy一チキン）では自筋

鶏骨格筋の組織化学的特徴（図l）が主として侵されることがよく知られている．白鶏の骨格筋は哨乳動物と同じくアルカリ側の筋の中でも，筋により侵される程度が異なり，胸routine ATPase（Dubowitz＆．Brooke

筋は四肢の筋よりより強く侵される．このことははpreincubation pHlO．0〜10．3）でj舌性が低くの方法で白筋の中での筋線椎タイプの分布が異なるためと染出されない赤筋（βR）と，活性が高く濃染する思われる．本研究は自筋である浅胸筋と後広背筋

自筋（α）線経の2種類に分けられる．酸性側AT−

posteriorlatissimusdorsi（PLD）を用い，白筋

Pase疫色（preincubation4．6−4．2）では逆にの亜型（subtype）の分布の月犬態と筋ジストロフィ

赤筋は濃く自筋は淡く染まる．白筋（α）線経はー病変の出現との関連につき検討することを目的

NAI）H−TR，SDHなど酸化酵素染色で顆粒（fo−とした．

rmazan顆粒）が大型で密に分布するαRと，逆に顆粒が小さく粗に分布するαWの2種に分けられ対象と方法

る1）．すなわち鶏骨格筋には赤筋（βR）と自筋でDy−チキン（line413）と対照（line412）各々あるαR，αW線経の3種類が存在する．ただdif−

18羽，計36羽をふ化直後からふ化後4月目まで経OrmaZan顆粒の大きさや分布のみで3種と分類す

時的に浅胸筋，PLDより筋を採取し，−1600Cでることは判別困雉なことが多い．浅胸筋，PLDの凍結し，連続切片を作成した．切片にはHE，PAS染色ではaRはαW線経に比べ染色性が低く，
この2つの筋線経は比較的よく分別されるのでmodified

GomoriS

trichrome，NADH−TR，me−nadione−linked alphaglycerophosphate dehyd−

NADH−TR染色と併用すると線維型の分類はよrogenase（MAG），PAS，Oilred O，ATPase

り容易となる2）．

（preincubationpHlO．3，4．6，4．2），aCidphos−
phatase，alkaline phosphatase，nOnSpeCific

各種自筋における筋線維タイプの分布と成長

esterase，aCetylcholinesterase，phosphorylase

過程における変化

染色を行った．個々の例より最低200本の筋線経をATPase，NADHトTR，PAS染色でAshmore

浅胸筋：Dy一チキン，対照ともふ化直後では筋線経は細くαWとαR線経の分別は困難であり何ら1）の定義に従いαW，αR，βRの3種に分け，れとも云い難かった．5日目になると対照ではN−

その分布を検討した．

ADHLTRでdiformazan頼粒の大きさ，分布はほとんど全ての線経で同じ程度で，またPAS染色で軽度陽性でαW線経的となりつつあった．しかしDy−チキンでは筋線維あたりの顆粒は多く，し＊国立武蔵療妻所手中経センター疾病研究第一部

かも大型でPAS染色でよく染出されないαR
−17−

的

図l

50

ふ化後4月の正常後広背筋r。。tin。ATPase（pHlO．3）（A）では浪染する白筋と淡染する赤筋であるOR線維（星印）に分けられ，
酸化側ATPase（pH4．5）（B）では逆の染色性を示す．白筋はさらにNADH−TR染色（C）でdiforma・
zan頼粒が大きく密に存在し，PAS染色（D）で染色性の低いやや小型のαR線維（R）と，逆の染色性を示すαW線維（W）に分けられる．×300．

図3

ふ化後4月のジストロフィー鶏後広背筋

routine ATPase（pHlO．3）（A）ではαW線維（W）はαR線維（R）に比べ若干淡く染まるが酸性側
ATPase（B）では区別がない．NADH−TR染色（C）でdiformazan頼粒が大きく，PAS染色（D）
で染色性の低いαR線経が対照に比較しより多数存在する．赤筋であるβR線維（矢印）は数，大きさとも対照と比べ変化がない．
×110．

線経のものが多くみられた．ふ化後10日昌頃にな

後広背衝（PLD）：浅胸筋に比べ後広背筋では，ると対照ではほとんど全ての線経がαW線経の特同じ自筋でも筋病変が多少軽いことが知られてい徴を備え，この時期までにαRからαW線経へのる．対照成鶏でみるとPLDが浅胸筋と最も異な変換がほぼ完了することを表していた．

る所はPLDでは少数の赤筋（βR）をもつことと，
多数のαR線経が存在し，αRからαW線経への変一方Dy−チキンでは大型のdiformazan頼粒をもち，PAS染色でほとんど染出されないαR線経

換が浅胸筋より少ないことであった．
ふ化後10日日頃よりがふ化後60日を経ても約30−40％みられ，αRか

PLDを経時的に検索した

らαW線経への変換が遅れていることを示していが，10日目にはDy−チキンでdiformazan頼粒がた．それ以後もNADH−TRで顆粒の大きなαR線

大型で密に分布する線椎が多くみられ，またPAS経は多く認められたが，90日日頃になると

αR線染色でも対照と比べ明らかに差が出ていた．その経でもPASの染色性は次第に高くなりαRとαW

後もDy−チキンの方にαW線経が少なく，浅胸筋

線経とはっきり分別することが困難な線経が多くと同じようにαRからαW線椎への交換がDy−チ存在した．浅胸筋におけるαRからαW線経の変キンで遅れていることを示していた（図3）．
ほぼ成鶏となったふ化後4月呂の時点でαWと換の経時的分布を図2に示した．
ー19−

表i

ふ化後4月目白筋におけるαWとαR線経の頻度
αW

線維

αR 線 維浅胸 筋

では成鶏となっても完全に変換しない．この分布の差が上記のように病変出現の差ともなって表われていると思われる．Dy−チキンでは今回の研究からも明らかになったようにαRからαW線経へ

対照 （lin e 4 12 ）

99．
2％

0．
8 ％

D y −チキ ン （lin e 4 13 ）

73．
5

26 ．
5

の変換が遅れる．Dy−チキンでは筋線経が壊死に陥り再生線経が出現していると考えられるので，
Dy−チキンに多くみられるαR線経は幼君な再生

後広 背筋
対照

78 ．
2％ ￣

D y−
チキン

67．
2

線維をも一部含んでいると思われる．しかし，ふ21．
8％

化後5−10日目で壊死線経がほとんどなく病変の32 ．
8

余り強くない時の浅胸筋でもαR線経が多いこと
は，αR線経が全て再生線経とは考え難く，多くは筋線経の変換の遅れを反映していると考えられる．

αR線椎の比率を対照5羽，Dy−チキン5羽を使用

筋線経の変換の遅れは筋線維自体に何らかの原し，浅胸筋とPLDで比較した（表J）．PLDで因があるためか，神経に原因があるためか不明ではαW線経への変換が少なく4月の時点でも78．2ある．Acetylcholinesterase染色をするとDyLチ％がαW線経で21．8％がαR線経であった．一方

キンでは運動終板より遠隔の所でも活性が高く，

Dy−チキンではさらに変換は遅く67．2％がαW線全体に対照より活性が高く染出される．この所見

経で32，8％がαR線経であった．

は脱神経時にもみられるが，胎生筋も同じように広く活性があり，神経の要因が加味しているのか，

考察

発達の遅れなのか決め難い．Dy−チキンの筋を対Dy−チキンはヒト筋ジストロフィーと異なり自筋のみが選択的に侵される．白筋の中でも胸筋が韓チキンに移植し，その筋が対照チキンの神経支配をうけてもなおacetylcholinesteraseの活性が最も強く，次いで後広背筋が侵され，下肢筋は末高くみられることは筋線維自体に何らかの原因が期になるまでほとんど侵されない．このことは自あるとの報告もある5）．もしそれが事実ならば筋筋の中でのSubtypeであるαWとaR線経の分布

ジストロフィー症では筋線維自体に何らかの欠陥の違いによることが推定される．今回の結果からがあるため筋の分化が遅れているということにな

明らかとなったように成鶏浅胸筋ではほとんど全る．

ての線経はαW線経であった．一方下肢筋である

ヒト筋ジストロフィー症では活発な再生がある

前肢骨筋ではふ化後1年日でもαWとαR線経のにもかかわらず病状が進行することは筋が完全に頻度は約％ずつでαW線経がやや多い程度であっ再生しないためとも考えられている．筋ジストロ

た．すなわちDy−チキンでは白筋の中でもより自フィー症においては胎生からの筋，あるいは再生筋的なαW線経の方に，赤筋的なαR線経より筋した幼君な筋が何故に遅れた分化をするのか，このことを明らかにすることは重要な課題であるとジストロフィー病変が出現し易いことを物語っている．αW線経の線維内小器官の異常がより高度であるという電子顕微鏡的所見はやはりαW線経に病変が強く出現することを裏付けている3）．

考えられる．
文

献

鶏の骨格筋の分化は赤筋タイプから白筋タイプ

1）Ashmore，C．R．＆Doerr，L．：Postnatal deTへと分化するといわれている1・4）．白筋はより赤筋

Velopment of fiber typesin normal and的であるαRからより自筋的であるαW線経へと

dystrophicskeletalmuscleofthechick．Exp．

変換する．この変換は浅胸筋ではふ化後10日日頃

Neuro1．，30：431，1971．

には少数の筋を除いてはほぼ完成するが下肢の筋
ー20−2）埜中征哉，春原経彦，杉田秀夫，ほか：筋ジス

トロフィー鶏骨格筋の組織学的，組織化学的研CalstudyoftheontogenyofmuscleenzymeS．

究−Duchenne型筋ジストロフィー症との対比

In−．神経内科，11：259，1979．

phyandrelateddisorders（editedbyMilhorat，
A．T．），ExcerptaMedicaFoundation，Amster−3）Beringer，T．：StereologiCanalysisofnormal
and dystrophic avian

Exploratoryconceptsinmusculardystro−dam，1967，p．197．

αW myofibers．Exp．

5）Linkhart，T．A．，Yee，G．W．＆Wilson，B．W．：

Neuro1．，61：380，1978．
4）Cムsmos，E．＆Butler，J．：Differentiation of

Myogenicdefectinacetylcholinesteraseregu−

fiber typesin muscle of normal and dystro−

lationinmusculardystrophyofthechicken．

phicchickens．AqtIantitativeandhistochemi−

Science，197：549，1975．

−21−2）筋ジストロフィーチキンの発達過程における形態学的初期変化

黒

研究協力者

目

岩

石 本 進 士

義五郎
後

藤

幾

生

大

田

典

也

intermediateDPNHfiber，low DPNHfiberに的

昨年，dystrophy chickenの発達過程におけ分類し，その百分率を各週毎に示した．又，ふ化る形態学的初期変化がふ化後，1週間目以内に1r日日の自筋において，freeze−fracture法及び白筋に生じる事を酵素組織化学的方法を用いてepon包埋標本の電顕写真にて，筋形質巧莫のCaV・報告した．今回，動物数を増して再検討するとeolae数，形，配列等を観察した．

ともに，freeze−fracture法及び電顔による筋形
結質膜の変化を観察した．

果J）morphometry：white fiberであるPLD筋は，
方

ふ化1日目には明らかな差は認めなかったが（図法

実験動物はdystrophy chicken（line413）とJ），1週間目より徐々にfiber sizeに広がりがCOntrOIchicken（line412）を各々5羽ずつを使生じ，3週間目にはdystrophy群でfiber size

用した．ふ化後，1日日，1週間目，2週間目，

distributionが広くなり，大径線経の増加が認めら3週間目，及び6週間目にエーテル麻酔下にて頸れた（図2）．一方red fiberであるALD筋は，ふ動脈を切断，脱血し，red fiberである前広背筋

化後3週間削こ於てやや大径線経の割合が増加す（ALD）とwhite fiberである後広背筋（PLD）のるが，fiber sizedistributionの広がりは認めな

凍結切片標本を作製した．染色はHE，DPNH

かった．

diaphorase，SDH，MDH，α−GPDH，LDH，

2）DPNH diaphorase染色による各fiber type

phosphorylase，aCetylcholinesterase等を施行の割合の経時的変化：PLD

した．morphometryはHE染色標本にて，ふ化

phorase染色の活性の程度に応じて，high DPN−

後，1日目から3週間目迄，各週毎に各々のALD

H fiber，intermediate DPNH fiber，low DP

筋を

DPNH dia−筋，PLD筋から筋線維100本ずつを計測し，5NH fiberに分類すると，ふ化後，1週間目では羽の平均値を百分率で棒グラフに示した．DPNH

dystrophy群，COntrOl群に著差を認めないが，

diaphorase標本では，ふ化後，1日目から3週間目

1週間目以後，COntrOl

迄各週毎にALD筋，PLD筋のほぼ同一の筋線維

fiberは漸減し，6週間目では大部分がlow DPN−

径毎に，横断面上のformazandepositの数を5本

H fiberで占められるのに反して，dystrophy群ずつ数えた．又，ふ化後，1週間目，2週間目，3週間

では，lowDPNHfiberの割合は増加せず，inter−目及び6週間目のPLD筋で，筋線維200本を数え，
DPNH活性の程度に応じてhigh DPNHfiber，

mediate DPNHfiber，highDPNH fiberの割合が高く保たれていた（図3）．

群ではhigh DPNH

3）DPNH diaphorase formazan deposjt数の経＊九州大学医学部脳研神経内科＊♯九州大学医学書β脳研神経病理

時的変化：

ほぼ同一筋線維径毎の筋線維1本あたりの横断面上のformazandeposit数は，ふ化−22−

S ZE DtSTRtBUTtON OF NVJSCLE FtB【RS

1日目ではdystrophy群，COntrOl群に差を認めないが，ふ化後1週間目より，dystrophy群のPLD筋に於て，数の増加を認め（図4），以後，2週間目，3週間目と，その増加の傾向が著明となり（図5），さらに個々のformazandepositの配列の乱れ，不明瞭化が認められた．一方ALD筋に於ては，両群に差異を認めなかった．
SIZE DLSTR柑UTLON OF MUSCLE FIB【RS祁0
劇

SL芸に空OSコ∈−○辞†伽r diameter
図l
CHANGES OF DPNH DIAPHORASE ACTIVlTY00

SL遥こ む一US⊃∈−○ 辞

3

l W

W

6

Weeks after hatch■申trOPhytn＝51【2ヨCOntrOl座51

日‥禦黒禦聖聖霊．「誓言聖l：lntermediate DPNH diaphorase fiber
L：LOWDPNHdiaphorase Fiber

図3
−23−

W

NU州8EROFFOR欄ZAN DEPOSITS（NADH DIAPHORASE）

NU桐BEROFFOR棚ZANDEPOSITSfNADHD，APHORASE）
l week after hatch

1由y aRer hatch

PLD

C

d

刃
Ⅶ仙
川

柑

0

S︸芯邑pu記空し丘−：uq∈⊃∪550 00 刃 刀 川睾岩音∪笥空し丘−：羞∈⊃u

0

10
15
誼仙
l加r diameter
C‥COntrOHn・5I d：呼StrOphy加5I
10fiber diameter
C：COntrOHn王5I d：吋StrOphytnⅠ51

的劇
卸

S−一芸首U巧空し丘−OL中音⊃U

釦

じ

加

古

C：00ntrO日直・別d：咄Slr叩吋tm51

刃

方ul 刃

l血汀d如wter

図5
−24−

方

劇

￠叫

4）筋形質膜の変化：ふ化1日目の大胸筋のmetryには変化を認めず，anaerObicmetabolism

freezeTfracture replicaの電定則こて筋形質膜上のに関与する

CaVeOlae数を集計面積100J12で単位面積あたl）

神経筋接合部のacetylcholinesterase等には明の数を計測すると，dystrophy群では7．34／FL2，
COntrOl群では11．33／FL2と，dystrophy群で減少しらかな変化がなく，NADH diaphorase以外のていた．又，dystrophy群では個々のCaVeOlaeの等の0Ⅹidative enzymeには同様の傾向を認め

配列の乱れ，形の不規則性もみとめられた．また，た．以上の結果から，dystrophic processの初

ふ化1日目のPLD筋のepon包埋標本の電昆頁写真

期変化としてmitochondrial oxidative enzyme

にても，freeze−fracture法によるCaVeOlaeに対系が何らかの関与をしていると考えられる．

phosphorylase，LDH，α−GPDH，

aerobic metabolismに関与するSDH，MDH

応すると思われるpinocytoticvesicleの形の不規

又freeze−fracture法にて，ふ化1日目の自筋に則性を認めた．

於て，筋形質膜のCaVeOlae数の減少，配列，形の乱れをみとめ，又epon包埋標本では，pinocy−

考察

toticvesicleの形に不規則性を認めた．Brain

前回，私達はdystrophy chicken筋では従来

ら5）は，ふ化後1週目に於て，CaVeOlae数がdys−

いわれている如く，White fiberであるPLD筋がtrophy群で増加している事を，Schotlandら6）は，

red fiberであるALD筋より早期に1！ふ化後1週

Duchenne型dystropyで筋形質隈粒子の減少を報間以内にdystrophicな変化が生じる事を報告し告しており，筋形質膜の変化は今後検討すべき課題と考える．

た．今回，動物数を増して再検討した結果，HE染色によるmorphometry，DPNH diaphorase
deposit数共にPLD筋に早期に変化が発現し，前回と同一の結果を得た．又dystrophychicken

1）Holliday，T．A．，Julian，L．M．，＆Asmundson，筋ではembryo期のSDH活性等，0ⅩidativeenTV．S．：Muscle growthin selectedlines of

Zyme活性が高いまま持続する傾向があり，ふmuscular dystrophic chickens．Anat．Rec．，

化後のmaturationの遅延が示唆されている2，3）．

160：207−216，1968．

文献今回，私達はDPNHdiaphorase活性からhigh，

2）Cosmos，E．：Enzymatic activity ofdifferen−intermediate，lowDPNHfiberに分けて，そのtiatingmusclefibers．Develop．Bio1．，13：163

百分率を経時的にみると，COntrOl群では，しだ−181，1966．

いにlowDPNHfiberが増加するが，dystrophy3）Cosmos，E．，＆Butler，J．：Differentiation of

群では，lowDPNHfiberは変化せず，intermedi●

fiber typesin muscle of normal and dystro−ate，highDPNHfiberの比率の高い事がわかっphicchickens．Exploratoryconceptsinmus−

た．以上の結果より，何らかのふ化後のmaturation

Culardystrophyandrelateddisorders．ed．A．

の異常4）が考えられた．又PLD筋のlowDPNH

T．Milhorat．Excerpta MedicaFoundation，

fiberに於て，同一筋緑維径毎に対応する横断

197−204，1967．

面上のDPNH formazandeposit数の計測から

4）Ashmore，C．R．，＆

Doerr，L．：Oxidative

dystrophy群では，ふ化後1日目は差異は認めな

metabolisminskeletalmuscleofnormaland

いが，1週間目から増加する傾向を認めた．

dystrophicchickens．Biochem．Med．，4：246

すなわち酵素組織化学的方法では，dystrophic−259，1970．

processの初期変化は少なく

ともふ化後から1

5）Brain，R．，Costello，B．S．，＆Shafiq，S．A．：

週間以内にOXidativeenzyme活性の変化として

Freeze−Fracturestudy ofmuscle plasmalem・

現われている事が明らかとなった．又この時期でmain normal and dystrophic chickens．

は，HE染色標本による筋変性所見やゝ

Muscle＆Nerve，2：191−201，1979．

mOrpho−一25−6）Schotland，D．L．，Bonilla，E．，＆VanMeteF，M．：Duchenne dystrophy：Alterationinmuscle plasma membrane structure．Sci・
ence，196：1005−1007，1977．

ー26−

3）外眼筋の組織学的，組織化学的研究
木
研究協力者

下

真．男

君

田

宣

雄

川

崎

石

塚

洋

二

山

田

研J
信

亀

井

敦

行

興

外眼筋は長さ40−60mm，巾約10mmの小さな

phosphorylase，NADH，ATPase，PAS染色を

6コの横紋筋よりなり，精巧な眼球運動に関与し，行い，組織化学的検索ならびに四肢筋との比較を機能的にも四肢骨格筋とは，かなり異なっている．

行った．

例えば同じ筋ジストロフィー症でもDuchenne，
limb一girdle，facioscapulohumeraltype

結

などで

果

l．外眼筋のセンイ直径

は全身の筋が侵される末期になっても，ほとんど外眼筋が侵されることはないが，OCular myop−

図lに示すように5歳，7歳，36歳例について

athy，descending ocular myopathy，OCulopha−

測定した結果，5歳例では12．5〃，7歳例では15ryngeal muscular dystrophy
高度に侵される．

〃，36歳例では25′ の筋センイが最も多数存在しなどでは外眼筋はていた．

これらの事実は，外眼筋およびこれらを支配す

また，外眼筋を染色標本でみると，眼球例ではる神経系を含めた，神経筋系が，他の骨格筋とは筋センイ直径が大きく，眼窟例では筋センイ直径異なる特異性を持っていることを推定させるもの

が小さいことがわかる．これを数量的に測定してである．

みると，いずれの例でも，図2（7歳例）に示す

我々は外眼筋の特異性を明らかにするため組織化学をもちい，基磯的研究を行った．
材

ように眼球側筋センイ直径の方が，眼嵩側筋セン
イ直径より大きいことが明らかであった．
2．筋センイ直径とfibertype
外眼筋のfiber typeについては次ぎに触れる料

当院眼科で斜視および下斜筋過勤症の手術の際，が，とりあえずphosphorylase染色で，四肢骨格

採取した眼筋，すなわち内直筋5，外直筋3，下筋と同じように淡染するセンイをtypeI，濃染す

斜筋2，計10検体について検索を行った．患者年

るものをtypeIIとして，筋センイ直径を検討した．

齢は5〜36歳．男女比は7：3であった．採取部

7歳例で筋センイ分布は17．5′上のものがピーク

位は内直筋，外直筋では付着部より5mm前後ので，fiber typeにより，センイの分布にはあまり部位，下斜筋では筋腹である．

変化がなかった．

動物実験では3−4kgの雄家兎の外直筋，内直眼球側と眼寓側のfiber typeを比べてみると筋について検索を行った．

7歳側で眼球側でtypeIIがtypeIに比べ多く，
眼宿例ではほとんど差がなかった．

検索方法

次ぎに，この2つのtypeのセンイ直径を眼球

これらの検体を，それぞれGomori−trichrome，

側とF艮罵側で比べてみると，typeI，II共に眼球側の筋センイ直径が大きい傾向を示した．
3・外眼筋のfiber type＊東邦大学医学部第四内科

骨格筋のfiber typeについては周知のごとくー27−DkけibuHono†恥はClonb〇円

0︵ポ︶亡父≡hOLOJE⊃Z

0

10

20

30

D盲omeIer（「）010

図日 各年齢層の筋センイ直径

2030

DiomeIer（ド）図2 眼球側と眼窟側の筋センイ直径（7歳例）

Dubowitzの分類ではtypeIおよびtypeIIセン

HistochemicoIclossificく】†ion ofhum（】n eXrrCIOCUIclrmUSCle

イはA B，Cの計4つの型に分類されている．
外眼筋を各染色標本でみると，NADH染色で濃ATP−QSe ATP−CISe ATP−OSe

染するセンイは四肢筋でいえばtypeIであるが，この同じセンイをpH4．2のATPase染色でみると淡染し，四肢筋のtypeIIの性質を示し，染色性の上からは四肢筋とは異なっている．
これらをもとに，下斜筋の連続切片をもちい，
pH4．2，4．6，9．4のATPase染色で，個々の筋セ

PH4・2

pH4・6

pH9・4

1

0

0

〇

2

●

0

〇

3

●

●

〇

4

0

0

●

5

0

●

●

る

●

●

●

ンイについて検討した結果，図3に示す6つの型に分類するのが妥当と考えられた．
次に家兎の内直筋をみると，左上の大きな筋センイはphosphorylaseでもNADH染色でも淡染
し，四肢筋のfiber typeを応用できないことが明らかであった（図4）．
図3

一28−

人外眼筋のfiber type

…￣：−E＼＿二二＿三召
図4 家兎内直筋の連続切片
左 Gomori−trichrome染色C：COarSe fiber，G：glanular fiber，F：fine fiber．
中 NADH染色
右 phosphorylase染色考案

た3ミその後は生理学的，あるいは生化学的検討も

外眼筋は精巧な日艮球運動に関与しており，これらの筋は脳神経支配であり，血流も心筋に次いで加わり5ないし7つのfiber typeに分類が試みられている．

多い，など多くの外眼筋の特異性が知られている．
外眼筋の組織化学的耳肝究は動物ではカエル，ラ

従来から行われている四肢筋のfibertypeのット，家鬼，ネコ，サル，ヒヒ1）2）3）などでみられ分類では0Ⅹidative enzyIT把による染色とphosp−
horylase染色では，同一センイで全く逆の染色るが，人外眼筋ではごく僅かしかみられない4）5！

性を示すにもかかわらず，外眼筋では同じ染色性

今回の我々の行った実験では外眼筋は加齢と共を示すものもあり，四肢筋と同じ分類を外眼筋にに筋センイ直径は増大し，同年齢の四肢骨格筋と応用することは不可能であった．また，一部の報

比べると1／4−1／2の直径で，これは重量の軽告にみられるようにCOarSe fiber，granular fi−

い眼球を動かす点に関連しているかも知れない．

ber，fine fiberを匹川支筋の分類にあてはめること

また，眼球側と眼裔側の筋センイ直径に差があも困難と考えられた．

ることは明らかで，ネコなどの動物実験でも，同様な所見が観察されている6三これは運動神経終末

結語の差によるものと考えられ，一般にen plaque型

今回，我々が検索し得た外眼筋は斜視および下筋センイの直径は大きく，en grappe型の筋セン

斜筋過勤症という特殊な状態であり，正常外眼筋

イは直径が小さいといわれている．

との比較を行うことはできなかった．

外眼筋のfiber typeは初めFelderstruktur fi−

1．人外眼筋センイは加齢と共に直径を増すが，berとFibrillenstruktur fiberに分類されたが7；四肢筋と比べると1／2〜1／4の太さであった．

1960年代になり組織化学が導入されFibrillensト
rukturはfine fiberとgranular fiberに分けら

2．眼球側と眼裔側で筋センイ直径を比べてみると，眼球側の筋センイ直径の方が大きいことがれ，Felder声trukturはCOarSe fiberに分類され明らかであった．

−29−

3．人外眼筋のfiber typeは四肢筋と同じ方

extraocularmuscles and the change of den−法で分類することは困雉であり，6つのタイプに

ervation．Brit．J．Ophthal．58：193−216，1974．

分類するのが妥当と考えられた．これは家兎外眼4）Ringel，S．P．：Histochemistry of human ex−筋においても確められた．

traocular muscle．Arch．Ophthalmol．96：
1067−1072，1978．

文

献5）Ringel，S．P．，Wilson，W．B．＆Barden，M．T．：

1）Kern，D．：Acomparativephamacologichist−

Extraocularmusclebiopsyinchronicprogre−

010gicstudy ofslowandtwitch fibersinthe

ssiveextemalophthalmoplegia．Ann．Neurol．

Superior rectus muscle of the rabbit．Inv

6：326−339，1979．

est．Ophthal．4：901r910，1965．

6）Minoda，K．C．：FinestruCtureOfextraocular2）Peachey，L．：Thestructureoftheextraocular

muscles．：Adv．Neuro1．19：829−844，1975．

musclefibersofmammals．In Thecontrolof7）Krtlger，P．：Uber den Zusammenhang voneyemovements

Strukturund FunktionbeiSaergetiermuske−

ed．Bach−y−Rita，P．，pp・47−

ln．Anat．Anz．104：193−200，1957．

66，Academic Press，NewYork，1971．
3）Durston，J．H．J．：Histochemistryofprimate−30−4）ジストロフィーチキン骨格筋の変性と再生−空胞形成およびabbrrant myofibrill
形成について−

＊

中

研究協力者

頼

村

田

晴
孝

ジストロフィー鶏（Dyチキン）の骨格筋をふ化

臣
男

今

岡

健

次

による後固定，あるいはランタン染色を加え，型

後経時的に観察すると，ふ化後約3週日頃より，の如くEpon包埋超薄切片を作り，酢酸ウラニウ

多数の変性筋線経が急速に出現してくる．それとムと鉛塩による重染色を施し，電顕的検索を行っほぼ同時に，多くd）myoblast，あるいはmyotube

た．

が認められるようになる．かかるmyoblastやmy−
Otubeをもって，筋線経の再生像とみなすか，あ結果

るいはまた，未熟筋線経の持続的存在と考えるか

1．空胞形成：筋線経の空胞化は，少数ながら

は，ジストロフィー筋の本質に関係する事項であ

ふ化後5日目には出現するが，26日日以降は多数

る．著者らは，ジストロフィー筋の機能を規定するものは，筋線経の変性と再生とのバランスであの線経に認められるようになる．空胞には，従来指摘されているように膜構造がみられ，空胞内部るとする作業仮説に基づき，Dyチキン骨格筋のには細顆粒状物質，並びに剥離収縮したような膜変性と再生の形態学的特徴を追究してきた．筋線様物が認められた．小空胞壁には小陥凹が散見さ経に出現する空胞形成は，Dyチキンの筋変性をれ，T−SyStem形成の初期像である小謡（caveol−

特徴づける所見の一つであるが，一空砲の起源につae）に極めて類似している．小空胞の辺綾部を追いては．なお実証に乏しいので，今回はその微細ってみると，全体として馬蹄形ないし蟹鋏形を呈構造上の所見を記載する．他方，Dyチキンにみし，それが管状構造に連なっているのが認められられるmyoblastは．大部分のものが正常の形態をた（区＝）．かかる空胞は一般に筋線経の中心部示すのであるが，時にはmyofibrilの配列に異常に存在するため，ランタン金属の浸入はみられなのあるmyoblastも認められるので，Dyチキンのかった．ランタン金属の浸入し易い筋線維周辺部

筋線経に認められるaberrantmyofibrilの成因を，をみると，DyチキンのT−SyStemは馬蹄形走行

筋線経の再生と関係づけて考察する．

を示している（図2）．従って，上記の空胞に連なっている管状構造は，Trsystemと考えるのが妥方

法当であろう．更に，直線状の管状構造の末端部がDyチキン（1ine413）及び対照チキン（line412）
夫々18羽を使用，いずれも3羽ずつ6群に分け，拡大し，細顆粒状物質を満たす所見も認められた．

ふ化後5日から40日に亘り，1週間隔にて浅胸筋

これらの所見は，いずれもDyチキンの筋線維空胞の起因として，Trsystemの拡大を示唆するもを摘出し，0．1M燐酸緩衝液加2．5％glutaraldeh−のである．

yde（pH7．3）にて固定した．更にオスミウム酸

しかしながら他方では，前述の馬蹄形あるいは蟹鋏形に拡大した管状構造に近接して，小楕円形＊鳥取大学医学部脳研究施設神経病理の構造物が認められる．これは管状構造との位置
ー31−

区＝ a：蟹鋏状ないし馬蹄状に拡大した管状構造（arrow head）．b：空胞辺綾部では半島状の細胞質が，蟹鋏状に拡大した管状構造（a汀OWheads）に取囲まれている．33日EjDyチキン．

図2

馬蹄形走行を示すTTSyStem（arrow heads）．33日日Dyチキン．

−32−

関係から推察すると，筋小胞体の拡大したものと少数のmyotubeにおいては，筋線経の長・ltll‖：‥IlJするのが妥当と考えられる．すなわち，TASyStem

して配列するmyofibrilが認められた．かかる川‖′のみでなく，筋小胞体もまた空胞の起源となりう

Otubeにおいても，胞体辺縁部にゆくほど小律のる可能性がある．

myofibrilがみられた．図4では，このような再′卜

空胞を有する筋線経を・みると，myOfibrilが巣状筋細胞と，それに相対する筋線経の双方の細胞膜に変性崩壊し，それが筋線経の所々に散在して認が部分的に密着し，それに治って無数の小寓の発められる．かかるmyofibrilの変性巣のうち，空胞達が認められる．これらの発達した小寓は，培養に隣接した部位に生じたものは（図3），空胞の拡

筋細胞の融合に際して報告されている所見（Shi一

大の一因となるものと推定される．

mada，197110；Lipton＆Konigsberg，19725））と同

2．aberrant myofibril形成：ふ化後4週目以じ意義をもつものと考えられる．同一標本を連続降のDyチキンにおいては，対照チキンに比し，切片で検索すると，二つの細胞の境界の一部が消myoblastあるいはmyotubeが多く認められる．

失しているのが確認された．

それらに含まれる幼若なmyofibrilは，Allbrook

このような方向性を失ったmyofibrilは，一見（19621））が指摘するように，筋細胞胞体の辺緑部

正常とみなされる成熟線経のSubsarcolemmalにゆくほど細く，胞体中心部に近づくほど太い．

regionにも観察され，いわゆるaberrantmyofibril

myofibrilを構成するmyofilamentは，多くのmy−として認められた（図5）．

Otubeでほぼ正常の形態を示した．しかし，極めて

図3

空胞隣接部にみられたmyofibrilの崩壊（arrow）．33日日Dyチキン．

−33−

図4

Myotube（Mt）にみられたmyofibrilの異常配列・Myotubeとparentfiberの相対する細胞膜面に多数のCaVeOlaeが増生し，一部では両者の細胞間隊が認められない（arrow）・Myotube辺綾部には′ト
径のmyOfibri1がみられる（arrowheads）．33日目Dyチキン・

図5

筋線維辺綾部に認められるaberrantmyofibril（arrow）．33日目Dyチキン・

一34−

考

察

その周辺部にfilamentが集積することによって行

従来，ジストロフィー筋の形態学的異常所見となわれ，ある一定の太さになると停止するものとして，筋線経の空胞化，壊死，fiber splitting，筋考えられている．これについては，autOradiogra−

線維ならびに周囲組織における脂肪浸潤や線維化

phyによるMorkin（1970）7）の報告がある，このよなどが報告されており，いくつかの微細形態学的うな一連のmyofibril形成過程は，筋線経の辺緑

変化も明らかにされてきた．しかしこれらの個々部において観察され，その結果として，筋根絶のの所見は，いずれをとってみても特定の筋疾患，

中心部から辺緑部に亘って，myOfibril直径の勾配

神経筋疾患，あるいは動物種に限定されるものでが出来上る（Allbrook，1962）1）．

はない．すなわち，実験的ミオバナーを含む幾多

今回著者らが観察しえた点は，myOfibrilの異常の筋疾患に共通して認められるものである．これ配列を示すmyotubeが，成熟筋線経と融合しうるらのうち，膜系の微細形態的変化としては，1）ことである．かかる事実は，Dyチキンにみられる

筋小胞体の拡大および瑠生（Banker，1967）2；2）

aberrant myofibrilの原因の一つとして，異常なT−SyStemの拡大およびT−SyStemの増生による

myotubeの融合による可能性を示唆するものであtubular networksの形成 （Schotland1970）9）が指る．aberrant myofibrilと所謂ring fiberと呼ば摘されてきた．

れるものとの異同については，確実な見解を述べ

Dyチキンにみられる空胞壁には膜様構造物がる所見をえていない．

存在するため，その空胞の起源を上記の膜系の異総常と関連づけようとする試みが行われ，Baskin括（1970）3）は筋小胞体の拡大を示唆する報告をしていDyチキン（line413）の浅胸筋を用い，筋線経る．′トロら（1978）8）はMg−dependent ATPaseの空胞および再生筋線経の電顕的検索を行い，以染色を駆使して，筋小胞体の拡大を証明している．

下の結果をえた．

一方，Malouf及びSommer（1976）6）はhorseradish
peroxidaseをtracerとして用い，Dyチキンにお1）空胞の起源としてT−SyStemの関与が明らかとなったが，筋小胞体の関与も否定できなかった．

けるTLSyStemの拡大を主張している．今回の著

2）myofibrilの巣状変性壊死は，空胞の伸展助長

者らの観察では，空胞壁における小寓の存在，特の一因となりうる．3）いわゆるaberrant myo−

異な空胞形態および管状構造との連結所見などがfibrilの形成の一因は，myOfibrilの異常配列をも認められ，空胞の起源としてT，SyStemの拡大をった幼若筋細胞と筋線経との融合であると推定される．

強調したい．しかし，同時に筋小胞体の拡大も，軽度ながら存在するため，筋小胞体の関与を完全に否定しえなかった．種々のtracerを使用しての文

献

今後の検討が必要と思われる．空胞近接部のmy−1）Allbrook，D．：Anelectronmicroscopicstudy

Ofibrilの変性壊死は，形成された空胞の伸展助長

Of regenerating skeletal muscle．J．Anat．，の一因となりうると考えられるが，空胞そのもの

96：137，1962．

の原因とは思えない．

2）Banker，B．Q．：A phaseandelettronmicroT

Myofilamentおよびmyofibrilの配列方向を決定づける因子に関しては，未だ確定した見解はえられていない．Cytoplasmic streaming

SCOpicstudyofdystrophicmuscle．J．Neuro−
pathol．Exp．Neuro1．，26：259，1967．

の関与

3）Baskin，R．J．：Ultrastructure and calcium（Fischman，1967）4！あるいは発育途上の筋線経がtransportin dystrophic chicken muscle mic−

管状形を呈していることそれ自体が，これらのfi−rosomes．Lab．Invest．，23：581，1970．

lamentおよびfibrilの配列を整える役割を果して

4）Fischman，D．A．：An electronmicroscope

いるものと想像されている．myofibrilの成長は，Study ofmyOfibri1formationin embryonic−35−8）小口喜三夫，加買谷蚤．井上憲昭：ジストロフ

chickskeletalmuscle．J．CellBiol・，32：557，

ィーチキンにおける筋微細構造の電顕的研究．

1967．

筋ジストロフィー症の病因の究明に関する研究

5）Lipton，B．H．＆Konigsberg，I・R・：A fine−（沖中班），昭和52年度報告書，1978，p・86．

Structuralanalysisofthefusionofmyogenic
cells．J．CellBiolリ

9）Schotland，D．L．：An electronmiCroscopic

53：348，1972．

investigation of myotonic dystrophy・J・

6）Malouf，N．N．＆Sommer，J・R・：Chicken

Neuropathol．Exp．Neuro1，，29：241，1970．

dystrophy・The geometry ofthetransverse10）Shimada，Y．：ElectronmicroscopicobservaTtubules．Am．J．Patho1．，84：299，1976．

tions on the fusion of chick myoblastsin

7）Morkin，E．：Postnatalmusclefiberassembly：

vitro．J．CellBio1．，48：128，1971．

Localizationofnewlysynthesizedmyofibri1−
1arproteins．Science，167：1499，1970．

−36−5）ジストロフィーチキンにおけるactivatedsatellite cellについて−光顕ラジオオート
グラフィーに、よる検討−

小

口

喜三夫
＊＊

研究協力者
目

永

田

哲

士

標本はすべて筋線経のCOrOnal sectionとし数個を的Cellの存在が報告されて以来，この細胞が種々の1枚のスライドガラス上に載せた．
Dipping2）法によりSakuraNRrM2の乳剤を蒸

ミオバナーにおいて増加していることが明らかと溜水で2倍に希釈したものの中に標本を2−3秒なって来た．又satellite cellの電昆酎こよる形態

間浸した後，余計な乳剤をおとし，温度280C，湿学的研究から，Satellite cellがmyoblastに移行

度70〜80％のふ卵器内で乾燥，次いで40Cの冷蔵することが推定され，筋線経の再生に重要な役割

庫内で30日間露出した．SDX−1現像液200C，を果していることが明らかとなった．

4分間現像，定着後トルイジンブルー染色液にてMaurol）によって初めて筋組織におけるSatellite

淡い染色を行った．

今回私達は，dystrophic chicken（DC）とCOntrOI

標本は池浸レンズで観察し，1資料につき100視

chicken（cc）に3H−Thymidine（3H−TdR）を授与しDNA合成能を持つSatellite cell即ちacti−

野を観察した．次のIabelingindexを定め，aCti−

vated satellite cellを光顕radicIautOgraphyによvated satellite cellの出現頻度を算出した．

り観察し，DCにおいてactivatedsatellitecellのLabelingindex＝増加とその時期を検討することを目的とした．

1視野中の3H，TdRによってlabelされた核数、，．ハ＜

方

1視野中に観察された総ての核数

法

さらに3H−TdRによってlabelされた核の光顕

ふ化後1日と21日のDC，ccそれぞれ2羽，合計8羽のpectoralis muscleを用いた．ふ化後1日

的形態学的観察を行った．

のDC，ccに6時間毎に4回，合計60〜67JLCi／g，
結

ふ化後21E］のDC，ccには合計22−25FLCi／gの3H

果−TdRを腹腔内注射し，最終注射6時間後に屠殺

定量的解析：DC，ccのふ化後1日，21日のla−した．屠殺後直ちにpectoralis muscleの表在筋

belingindexは表lに示す．ふ化後1日ではDCを採取し，3％グルタールアルデヒドで20分間固のIabelingindex＝4．19，ccのlabelingindex＝定，カコジレイト緩衝液中にて24時間洗i條後1％
オスミウム酸で1時間30分間固定．シリーズアル

4．54で両者の間にactivated satellite cellの出現

コールおよびプロピレンオキサイドで脱水後epon−

ふ化後21日ではDCのlabelingindex＝5．68，

aralditeに包埋した．厚さ1FLmの標本を作製し，ccのlabelingindex＝3．86でDCの方がactivat−

ブ原皮に明らかな差はなかった．

ed satellite cellの出現頻度が多い傾向を示した．
＊信州大学医学部第三内科

形態学的観察：ふ化後1日ではDC，cc共に3H−＊‥＊信州大学医学部第一解剖

TdRの取り込まれている核はChromatinの比較−37−

的少ない球形の核であった（図l）．

3H−TdRの取り込みは殆んどがChromatin仁∴烏ll■・

ふ化後21日では，DCにおいては3H−TdRの取

梓状形の核であった．なお観察した限りでは，aCli

り込まれた核の大部分は，Chromatinに富む梓状

vated satellite cellと変性線経，空胞線経との川l形の核であった（図2）．他にChromatinの少な

らかな関係は見出し得なかった．

い球形の核への取り込みも認められた．ccでは

図I DC1日．矢印の核に3H−TdRの取り込みがあるため銀粒子として観察される．（×1，000）

図2

cc21日．矢印のChromatinに富む梓状の核に3H−TdRの取り込みがみられる．（×1，000）
−38−

表l

ふ化後1日と21日のdystrophic chicken（DC）

がmyoblastまで分化していることが推定される．

とcontroI chicken（cc）の1abelingindex．

DCではふ化後2週〜3週間でfliptestが陽性

Chickenmean＆となり，大胸筋の筋力低下が明らかで，形態学的SDにも空胞線経，変性線経が出現してDCではほぼ
cc（1d）

4．54＋0．17

DC（1d）

4．19＋2．24

cc（21d）

3．86 士 2．02

DC（21d）

5．68士

この時期から筋線経の変化が始まるものと思われる．この時期（ふ化後21日）におけるDCとccのactivated satellite cellの出現頻度はDCの方が多くなっている．形態学的にはccでは殆んどがchromatinに富む梓状核であったが，DCでは梓状4．54

核以外にChromatinの少ない球状核が出現していた．従ってふ化後21日では筋組織の変化と共にSa−
tellite cellの活性化があり，一部ではmyoblast

考察に移行しているものと思われた．

1961年Mauroがカエルの筋の電顕的観察で，Satellite cellが活性化され，myOblastに発達筋核よりも数が少なく，基底膜と形質腰間に存在するためにはparent細胞の障害がひとつの原因

し，CytOplasmaの乏しい核を見出LSatellitecellと考えられているが，今回観察した限りでは，3H−と名づけた．その後の報告3）4）5）6）でこのSatellite

TdRを取り込んだ核が変性線経，空砲線経の附Cellは胎生期と筋の再生時に増加し，形態学的に

近に多くはなかった．、しかし今回の観察は総て筋

はfree ribosome，rOugh ER，Goldi装置，mito−

線経のCOrOnal sectionの標本であるので今後筋

Chondria，の増加やactinfilament，myOSin

線経に対しlongitudinal section標本により変性

filament，T−SyStemの存在などが明らかとなり，線経，空胞緑経とactivated satellite cellの関連

Satellite cellはmyoblastに変化し得る能力を持を検索すること，さらに電顕radioautographyによった細胞であることが形態学的面から推定される

り3H−TdRの取り込まれる核（activatedsatelliteに至った．

Ce11）とその胞体の微細構造の観察が必要である．

一万3H−TdRをChickの腹月空内に注射すると直結ちにDNA合成を行っているS期の核に取り込ま語れるので，radioautographyにより核の上に銀粒

1．3H−TdRによるactivated satellite cellの子として検出される（図l，2）．24時間内に6時

出現頻度の検討で，DC1日labelingindex＝4．19，

間おきに4回3H−TdRを注射するとDNAを合成

cc1日Iabelingindex＝4．54差はなかった．ふ化

している核をほぼ完全に検出できるので，この方後21日ではDClabelingindex＝5．68，cclabel−

法により実際にDNAを合成している

ingindex＝3．86であり，DCにおけるactivatedSatellite

Cell即ちactivated satellite cellを確実に認定でSatellite cellの出現頻度が多かった．

きた．DCとccとの比較検討では，ふ化後1日で2．形態学的にはふ化後1日ではDC，cc共には，3H−TdR の取り込む核（activated satellite

Chromatinの少ない球形の核が大部分であったが，

Cell）の出現頻度は両者に差はなく，又形態学的ふ化後21日ではDCはChromatinの少ない球形のにはChromatinの少ない球形の核が殆んどであっ核とChromatinに富む梓状の核がみられ，ccではた．ふ化後1日ではDCとccにactivated sate−
llite cellの出現頻度および形態学的面からも差の殆んどがChromatinに富む梓状の核であった．

なかったことは，ふ化直後では両者の間に Sate−

文

献11ite cellの活性化の面で違いがないことを示して

1）Mauro，G．：Satellite cell of skeletalmuscle

いる．核の形態からしてこの時期のものは殆んど

fibers．J．Biophys，Biochem．Cytol．9：493，

一39−

先天性筋ジストロフィー生検筋にみられるSat−

1961．

ellite細胞の電子顕微鏡的研究．脳と発達，5：2）永田哲士，柴田治，名和橙黄雄：ラジオオート
グラフ量作製のための簡便法．解剖学雑誌，42

520，1973．

5）Wakayama，Y．：Electronmicroscopic study：162，1967．

3）Ishikawa，H．：Electronmicroscopicobserva・

onthesatellitecellsinthemuscleofDuchen−tions ofsatellitecells with specialreference

ne muscular dystrophy．J．Neuropath．exp．

to the development of mammalian skeletal

Neurolりmuscles．Z．Anat．Entwicklungsgesch．，125：

35：532，1976．

6）Chou，S．M．＆I．Nonaka：Sate11itecellsand

43，1966．

muscleregenerationindiseasedhumanSkele−4）埜中征哉，三池輝久，上野留夫，三吉野産治：

talmuscles．J．Neurol．Sci．34：131，1977．

−40−6）正常及び筋ジストロフィーチキン培養骨格筋に対する交感神経の影響

≠家

研究協力者

越

小 林 高 義

栢

沼

勝

彦

志

水

義

房

＊＊

小

松

繁

＊＊

我々は正常鶏肱（White Leghorn）を使用し，置培養の場合は，大胸筋より約2−3mm離して培養骨格筋が，交感神経節の併置培養で，骨格筋

explantした．骨格筋及び交感神経節の単独及び単独培養に比し長期に維持され，両explant部に相互に併置した組み合せを以下の如く作成，A正交感神経線維及び偏細胞からなる太い

bridgeが常筋のみ，B筋ジス筋のみ，C正常交感神経節の形成され，交感神経が骨格筋に対し直接的なtro−

み，D筋ジス交感神経節のみ，E正常筋＋正常交

phicな影響を与えることを示し，更にその筋細胞

感神経節，F正常筋＋筋ジス交感神経節，G筋ジ

上にボタンメ犬あるいは珠子状の膨みをもった神経終末を認め，その部位に相当すると思われる部位

ス筋＋正常交感神経節，H筋ジス筋＋筋ジス交感
神経節．培養液は，Eagles MEM with Hank sに限局した点状あるいは線状のAChE高活性を認

Salts80％，馬血清15％，Embryonic juice（鶏胚め，交感神経が骨格筋に対しinnervationしてい

9日目）5％，penicillin200u／ml，（glucose5g／1，

る可能性を指摘した1）．

NaHC03でpH調整）を使用し，週3回培養液を一方，筋ジストロフィー症（以下筋ジスと略す）

交換．倒立位相差顕微鏡で経時的観察を行い，同の成因に交感神経が関与している可能性は，呉，時に，Jenner−Giemsa染色，Gomori−Trichrome

沖中らの幼犬交感神経節削除による支配筋のジス染色，Bodian鍍銀染色，Karnovsky−Roots変法

トロフィー様変化の出現の報告2）以来問題とされ（buffer pH5．0）によるAChE染色を行い神経線てきており，我々は筋ジス骨格筋に対する交感神経の走行，AChE活性の有無の検索をあわせて行経の影響を直接みる目的で，正常及び筋ジスチキった．

ン交感神経節及び骨格筋の単独あるいは種々の併置培養を作成し，検討を行った．

実験結果
Ⅰ．筋単独培養

実験方法

筋単独培養では，正常，筋ジスチキンとも筋芽

正常及び筋ジス鶏胚11日日（Line412及び413）

細胞は24時間以内に融合を始め合胞細胞となる．

の大胸筋を実体顕微鏡下に無菌的にとり出し，培

2〜3日目にexplantを中・山こ筋管細胞はほぼ放養液中で締切し，コラーゲン塗布カバースリップ

射状に伸び出し，両者の筋細胞の融合，筋管細胞にexplant L，2日後13日日頸部交感神経節を同の形成に明らかな差を認めないが，筋ジス筋の方様にとり出し，周囲の結合織を充分とり除き，併が正常筋に比し筋細胞径の大小不同が目立つ傾向がある．筋管細胞の中央に多数の核が配列した後，＊信州大学医学部第三内科

両者とも筋細胞は3〜7日に自発収縮が始まり，＊＊信州大学医学部第二解剖

核は次第に偏在していく．6〜11日に両者とも横−41−

認められない．その後，筋ジス筋は16〜19日頃よⅠⅠ．交感神経節単独培養
交感神経節単独培養では，eXplant後24時間以り空胞変性，横紋が消失し核が集族，筋細胞が膨内にexplantより無髄神経が網目状，放射状に伸紋を形成し，2週までは両者にはっきりした差は化断裂，変性する細胞が増し，3週以降には横紋

び，図lに示す如くexplantより小型神経細胞がを形成した筋細胞は殆ど消失するが，横紋形成の遊走し．大里神経細胞はexplant部によく維持さ

はっきりしない細い筋細胞はその後もわずか残存れており，両者とも交感神経線経は放射状に伸びする．それに対し，正常筋は，4週まで維持され，その後次第に変性崩壊を始める．

続け長期に維持され，その神経線経の伸び，密度に明らかな差は認められなかった．

図l 上段：筋ジス交感神経節単独培養3日目，位相差顕微鏡100倍．無髄神経が網目状をなし，小型神経細胞（J矢印）がmigrateしてきている．
下段：筋ジス交感神経節単独培養10日目，位相差顕微鏡100倍．explant部に残存している大型神経細胞を示す．

一42−

ⅠⅠⅠ．骨格筋＋交感神経節併置培養る（図3，右下）．3〜4週以降は，併置培養の筋併置培養では，それぞれのexplantより筋管細細胞の収縮は，単独培養に比し良好で，時にex−胞，交感神経線経がそれぞれほぼ放射状に伸び始

plant，bridge部を中心に肉眼的にもわかる激しいめ，筋培養3−5日頃には図2の如く，神経線経

収紬を．認めた．収縮の程度は正常，筋ジス筋にはは筋管細胞に接触，更にその上を横走あるいは伴っきりした差は．認められなかった．正常筋と正常走していく．筋細胞の自発収縮，樺紋形成の時期

または筋ジス交感神経の仰苫培養では6週以上筋は筋単独培養の場合と明らかな差を認めないが，の維持が可能であった．一一・ノ∴ 筋ジス筋と正常ま交感神経との併置培養の方がより収縮は強く，持たは筋ジス筋交感神経の朝常圧■Ⅰ義では，筋ジス筋

続的で早い収縮を認めた．併置培養の場合，いず単独培養より，筋細胞はよく維持されたが，23−

れの組み合せでも図3，5の如く両explant間に26日頃から筋ジス筋は変性を始めた．図4に示す

筋細胞が密に配列その間に神経線経が走るbridgeが形成される．Bodian鍍鋭染色で神経線経の走如く，交感神経の接触している筋のノブが，同じ培行をみると，神経線経は筋細胞に接触しながら伴養カバースリップ中でもよく維持される仰向があった．

走，時に横走し，ボタン状あるいは数珠状の膨み（AChE染色）筋と交感神経の併置培養では約2週をもった神経終末と思われるものを認める．更ににはbridgeを形成した交感神経のexplant側の筋

神経線経は筋のexplantに達した後，そのexplant細胞の筋腹に数〃一十数〃の点状あるいは線状のより放射状に伸びている筋細胞に沿って伸び続け

AChE高活性がmultipleに認められた．その後3

図2 正常筋培養4日目，正常交感神経節2日目併置培養初期像，位相差顕微鏡100倍．
神経線経は，筋管細胞に接触，更に，横走，斜「走していく．

−43−

図3

筋ジス筋培養30日目，正常交感神経節28日目，Bodian鍍銀染色
上段：弱拡写真．左，交感神経節explant部．右，筋explant部．両explant
間に太いbridgeが形成されている．

の左下：bridge部（上矢印）の拡大写真，200倍．交感神経線経が密に走っている．
右下：筋のexplant部より上方（ト矢印）の拡大写真，200倍．explant部に到達した神経線経は更にexplant部i：リ放射状に伸び出している筋細胞に接触しながら伴走している．

ー44−週位にはbridge部全体の筋細胞の筋腹に点状，半月状，連鎖二伏，線：伏のAChE高活性がmultipleにもみられた．

認められ（図5，上段）3〜4週頃には，eXplant内，の筋細胞に接触，併走，斜走，横走している交感

更にexplantより放射状に伸び出している筋細胞

神経線経がみられ，図5下段に示すごとくのexplant側を中心にしてAChE高活性をmultiple

高活性部位に終る神経終末を認めた．時に交感神に認めた．長期培養で，筋のexplantより伸びてい経が筋細胞に接触する前に枝ヰ犬に分枝し筋細胞にる変性の始まった筋細胞の筋腹に数十〃以上にわ

接触，不規則な珠子二状の終末を形成，更に一部はたって線状に拡散したAChE高活性を認め，また斜走していく神経も認められ，その終末部位にも膨隆変性した筋細胞に点状の拡散したAChE活性

AChE高相件を認めた．

（AChE＋Bodian鍍銀，重染色）AChE高活性図4 筋ジス筋培養23日目，正常交感神経節21日臥 位相差顕微鏡100倍．横紋形成のはっきりした筋細胞に，斜め上万から交感神経が走り接触，更に斜走している（▼矢印）．一方，隣り下の筋細胞の下半分は，横紋が消失，筋細胞の膨化，変性が始まっ
ている．

−45−

AChE

図5

上段：正常筋培養21日目，正常交感神経節19日目，AChE染色，200倍．横紋を形成した筋細胞の筋腹に点状あるいは線状のAChE高活性部位をmultipleに認める．
下段：正常筋培養23日目，筋ジス交感神経節21日目，AChE，Bodian鍍銀重染色，500倍．筋腹上のAChE高活性部位（▼矢印）に，筋細胞に伴走してきた交感神経
線推（1矢印）がおわっている像を示す．

−46−

考

察

格筋が交感神経の維持に役割を果しているかどう

筋ジストロフイ■−症に対する神経因子の関与はかは今後に残された問題と思われる．

古くより問題とされてきたが，米沢ら3）は，下月支筋と脊髄の併置培養及び1こ肢筋のみの単独培養を行ない，筋ジス筋は正常筋に比し早く変性崩壊し，

結語

1．筋ジス筋単独培養は正常筋単独培養に比し脊髄との併置培養でも，単独培養より長く維持されるが，筋ジス筋が早く変性崩壊することを示し，
筋ジスチキン筋の変性は筋原性因子が大であると考えた．今回の我々の実験では，交感神経単独培
養では，両者に明らかな差はなく，筋単独培養で早く変性崩壊する．
2．交感神経節単独培養では正常，筋ジスの間に明らかな差を認めない．
3．正常筋に交感神経節を併置培養すると筋細胞単独培養より長期間維持される．

は筋ジス筋は早く変性崩壊し，併置培養の場合，

4．筋ジス筋と交感神経節の場合は，筋ジス筋

正常あるいは筋ジス交感神経節のいずれの組み合

単独培養に比し，筋ジス筋はより長く維持される

せでも，正常筋がより長く維持され，筋ジス筋はが，正常筋単独培養の場合より早く崩壊する．

単独培養より長く維持されるが，正常筋単独培養

5．3，4，とも併置した交感神経節が正常，より早く変性崩壊し，脊髄との併置培養所見と同筋ジスのいずれでも差を認めない．従って筋ジス

じ傾向を示した．以上の所見から，脊髄及び交感チキン筋の変性は筋自身の問題が大きいと推察さ神経には，一般的に骨格筋の維持に関与するtro−

れる．

phicな因子が存在すると思われるが，筋ジスチキ
ンのジストロフィー変化は，神経性因子の関与より，筋自身の問題が大きいと推察される．

文献1）小林高嵐 栢沼勝彦，塚越康ほか：培養骨格筋

一方，骨格筋と交感神経のいずれの併置培養でも，骨格筋単独培養に比し，長期間維持され，かつ両者のexplant間に，筋細胞と交感神経からなるbridgeが形成され，trOphic effectが考えられた．Crain4），Nurseら5）は，培養ラット骨格筋とに対する交感神経の影響に関する実験的研究（会），第32回日本自律神経学会総会プログラ
ムおよび講演抄録，26，1979．
2）呉建，沖中重雄：自律神経各論．改訂6版，金原出版，東京，京都，p．250，1956．

交感神経の併置培養で，a−tubocurarine，a−bunga−3）米沢猛，有薗直臥 岡部英俊ほか：invitroでのrotoxinでblockされるnicotiniccholinergicsyn−

筋ジスチキンの神経・筋結合について．筋ジス

apseを認めたが，組織化学的，電顕的検索は行な

トロフィー症の基礎的研究，江橋班，昭和52年

われていない．我々は，筋細胞上に膨みをもった神経終末が存在し，AChE染色で筋腹にmultipleに高活性を認め，AChE，Bodian鍍銀重染色で，度研究報告書，77，1977．
4）Crain，S・E・＆Peterson，E．R．：Development
Ofneur

AChE高活性部位におわる神経終末を認め，正常，
筋ジスチキン骨格筋に対し，交感神経がinnerva−
tionしている可能性が推察された．この点に関し

alconnectionsinculture．Ann．N．Y．

Acad．Sci．，28：6．1974．
5）Nurse，C．A．＆0

Lague，P．H．：Formationof

CholinergiCsynapsesbetweendissociatedsy一ては，更に電気生理学的，電顕的に検索中である．

mpatheticneuronsandskeletalmyotubesof

交感神経のtrophicな因子がinnervationによるもtheratin cell culture，Proc．Nat．Acad．Sci．

のか，また液性因子が存在するのか，更に逆に骨USA，72：1955，1975．

ー47−

7）鶏ジストロフィー筋における糖および脂質代謝

高

研究協力者

木

昭

夫

村 上 博 彦石 浦 章
結は じ め に

果

進行性筋ジストロフィー症の成因に関連して，

筋グリコーゲン含量は湿重量当り正常鶏7．6mg／g

筋ジストロフィー鶏をその疾患モデルとした検討に対し，筋ジス鶏6．2mg／gである．noncollagenが種々なされている．今回，我々は筋ジストロフ

protein（NCP）当りに換算すると，正常鶏39mg／g

ィー鶏の筋組織にPAS染色で濃染する筋緑経がNCP，筋ジス鶏52mg／gNCPと筋ジス鶏で高値を多数存在する点に注目し，筋ジストロフィー鶏に示した（表トーA）．グリコーゲンを抽出し測定しおける糖代謝の検討を行なった．又，従来よりそた値も同様の傾向を示した（表l−B）．次に，グの本質が問題にされている脂質異常に関して，成鶏及び鶏胚期の変化を観察し比較検討を行なった．

表I Glycogencontent
ControI

方法

筋ジストロフィー鶏（line413，筋ジス鶏），正Dystrophy

A・

7・64mg／9

6．18mg／g

B．

6．55

5．40

常対韓鶏（line412，正常鶏）及び20日日鶏胚（筋ジス鶏胚，正常鶏胚）の浅胸筋を分析に用いた．

リコーゲン利用を見るために，嫌気性解糖を検討し糖代謝に関しては，Keppler＆Deckerl）の方法にた．湿重量当りの乳酸生成は，正常鶏18．2／∠mOle／

より，Amyloglucosidaseを用いグリコーゲン含g・30minに対し，筋ジス鶏8．6FLmOle／g・30minと量を測定した．一部は筋よりグリコーゲンを抽出

筋ジス鶏で約1／2に低下していた．又，基質であし，同様の方法で定量した．又，嫌気性解糖能をるグリコーゲンを反応系に加え，同様に実験を行検討する目的で，Sclmid＆Mahler2）の方法に従なった．これでは正常鶏52FLmOle／g・30min，筋い，才犯かJroで嫌気性の乳酸生成を行なわせた．

ジス鶏18FLmOle／g・30minと筋ジス鶏で低下していた．NCP当りでも，1／2−1／3に低下してい脂質の分析はFoIchの方法により脂質を抽出し，た（表2）．

絵脂質，リン脂質，コレステロールを定量した．

脂質の分析では，総脂質は正常鶏11．2±5．4

リン脂質の定量はBartlett法により，コレステロールの定量はSearcyら3）の方法によった．））ン脂質は薄屑クロマトグラフィーにより，クロロホル

表2Anaerobic glycolysisin viγP

ム：メタノール：水＝65：25：4の条件で一次元（pmolelactate／g／30min．）

展開により分画し，上記の方法でリン定量を行な
ControIった．
＊国立武蔵療彗所神経センター疾病研究第一苦β

一48−

no additlon

18．15

Vith91yc09en

52．26

DystrophY
8．64
18．38

mg／g（6・4〜22．1mg／g），筋ジス鶏24．5±11，7mg／

テロールは正常鶏胚4．5mg／g，筋ジス鶏胚4．0mg

g（11．6〜33．．5mg／g），リン脂質は，正常鶏隻．1±／gと筋ジス鶏胚で，軽度のリン月旨質の増加を認め

0・5mg／g（3．5−5．0mg／g），筋ジス鶏6．2±1．3

る以外，両者に著明な差は見られなかった（表5）．

mg／g（5．0〜7，5mg／g），コレステロールは，正鶏胚のリン脂質亜分画では，正常鶏胚および筋

常鶏1・35±0．41mg／g（0．74〜2．10mg／g），筋ジジス鶏胚の間に有意の差は認められなかった（表4）．

ス鶏3・36±0．74mg／g（1．31−4．19mg／g）とすべて筋ジス鶏で増加を示した（表3）．両者の差は総表5

Musclelipidcontent（20days embryo）

脂質においては危険率2％，リン脂質及びコレス
テロールにおいては危険率0．1％で統計学的に有意であった．

Totallipid

Con亡r01

Dystrophy

20．0mg／9

20．3mg′9

Phosphollpld

表3

Cholestero1

Musclelipidcontent（adult）
Control（9）Totallipid ll・2士5．4m9／9

7・8

10・O

4．5

4．0

Dystrophy（5）24．5士11．7mg／9

Phospholipid

4．1士0．5

6．2士1．3

Cholestero1

1．35土0．41

3．36士0．74

考察

組織化学的に，PAS陽性の物質としては，グリコーゲン，ムコ多糖類，糖脂質，リン脂質などが（Hean士SD）

知られている．筋ジストロフィー鶏における糖質

リン脂質の亜分画に関しては，スフィンゴミエ

代謝に関しては，あまり報告が見られない．今回リン（Sph）は，正常鶏11．7％，筋ジス鶏18．2％のグリコーゲン含量の検討では，筋ジス鶏でグリと筋ジス鶏で増加し，レシチンは，正常鶏71．1％，

コーゲン含量（湿重量当り）の軽度の低下が認め

筋ジス鶏60．5％と筋ジス鶏で低下を示した（表られた．しかし，蛋白量当りのグリコーゲンに換4）．又，Rouserらに従って二次元展開を行なっ算すると逆に筋ジス鶏では増加していた．このよても，同様の傾向を認めている．

うに，ジストロフィー筋のグリコーゲン量の増減の判定はまだ問題がある．

表4 リン脂質亜分画成

鶏′乃ひどかβでの嘩気性解糖による乳酸生成が，筋鶏

ジス鶏で低下しており，基質であるグリコーゲン

胚を充分量添加しても，正常鶏の約1／3にとどまっ対照（5）筋ジス（5） 対照（4）筋ジス（4）DPG o．3％
0．3％
PE
9．9
11．1
PC

Sph

71．1

ll．7

PS＋PI

60．5事

18．2■

7．0

9．9

2、5％
27．6
60．1

た．蛋白量による補正を考慮してもなお筋ジス鶏

2．0％
27．1

9．6

11．9

0．2

0．2

では，乳酸生成は低下していると推定される．文
献的には，筋ジス鶏の筋Aldolase活性が，40〜5058．3％に低下していると報告された4三筋ジス鶏の病初期にはphosphorylase＊P≒0．02

活性が増加し，筋症状の進行に伴って低下を示した5！我々の予備的な実験（略語）
DPG：カルジオ））ピン，PE：ユタノルアミン燐脂質，では，筋ジス鶏でLDH活性が約1／3に低下していた．ジストロフィー筋でこの様に乳酸生成や葎重PC：コリン燐脂質， Sph：スフィンゴミエリン，
PS＋PI：セリンおよびイノシトール燐脂質その他

種の酵素活性の低下が認められる事実は，酵素生合成の調節異常が直接病因と関連する可能性を考20日日鶏胚の脂質分析では，総脂質は正常鶏
胚20．0mg／g，筋ジス鶏胚20．3mg／g，リン脂質はえさせる．この問題は更に検討を続ける予定である．

正常鶏胚7．8mg／g，筋ジス鶏胚10．0mg／g，コレス
ー49−

ジストロフィー筋における脂質異常に関しては，

種々検討されてきた．脂質の増加に病因的意義を

ゲン含量が軽度に減少していた．J乃〃か0での嫌認めるもの，単なる脂肪組織による置き換りとす

気性解糖による乳酸生成は対照の1／2〜1／3にるものなど，現在のところまだ病因的意義は確定減少していた．

されていない．我々の検討では，筋ジス鶏で総脂

2）ジストロフィー筋の脂質組成に関しては，質，リン脂質，コレステロールはすべて増加を示

総脂質，リン脂質，コレステロールのいずれも増し，諸家の報告と一致している．リン脂質亜分画加している．リン脂質亜分画では，スフィンゴミの分析結果では，Sphの増加とレシチンの低下を

エリンの増加，レシチンの減少が認められた．
3）鶏胚期の筋の脂質組成は，対照と筋ジスの認めている．これらは，Duchenne型ジストロフ
ィー症における変動と同一傾向である．

間に差異は認められない．したがって，成鶏での鶏胚の浅胸筋における分析では，筋ジス鶏胚で軽度のリン脂質の増加を認める以外，両者に著明

変化は二次的現象である可能性が大きい．

な差は見られなかった．しかし，これを成鶏と比文

献1）Keppler，D．＆Decker，K：GlycogenDetermi・較すると，正常成鶏に比して正常鶏胚では，総脂質，リン脂質，コレステロールとも，すべて高値

nationwith amyloglucosidase．Methods ofを示した．又，筋ジス鶏の脂質組成は，正常鶏胚

Enzymatic Analysis．Vol．3，p．1127．Verlagに類似しており，より鶏胚に近い状態と考えられ

ChemieWeinheimAcademicPress，Inc．，New
York＆London．

る．鶏胚のリン脂質亜分画では，正常鶏胚と筋ジ2）Schmid，R．＆Mahler，R∴Chronicprogres−

ス鶏胚の間で差異は認められなかった．しかし，正常成鶏と比べPEが高値を示したが，この理由

sivemyopathy withmyoglobinuria：demon−

は不明である．

Stration of a glycogenolytic defectinthe

このように，成鶏に見られるジストロフィー筋

muscle．J．Clin．Invest．38：2044，1959．

の脂質組成は，鶏胚期のそれに一部類似してい

3）Searcy，R．L＆Bergquist，L．M．：Anewcolor

た．20日目の鶏胚筋の脂質組成は，正常と筋ジス

reactionforthequantitationofserumchole−の間に差異はなかった．したがって，成鶏のジス

sterol．Clin．Chim．Acta，5：192，1960．

トロフィー筋脂質の変化はいずれも二次的なもの

4）Petell，J．K．＆Lebherz，H．G．：Regulationof

であり，その一部は，筋細胞の成育遅延に由来する可能性が示唆された．

in skeletal muscles of normal and dystro−

今後は，麒化後のいかなる時期に両者の差異がphic chickens．J．Biol．Chem．，254：7411，

fructosediphosphatealdolaseconcentrations

1979．

出現するか検討してゆきたい．又，筋ジストロフ
ィー鶏における脂質異常は膜系の異常と関連して論じられており，この面でも検討を加えたい．

5）Ashmore，C．R．＆Doerr，L．：Phosphorylasein
skeletalmuscle of normaland selectedlines
ofdystrophicchickens．Proc．Soc．Exp．Biol．

結Med．，137：1066，1971．

論1）筋ジストロフィー鶏の浅胸筋ではグリコー

一50一8）筋ジストロフィーチキンdorsal root gangliaのnerve growth factor

に対する反応性ならびに筋肉中のnerve growthfactor−likeimmunore−
activityレベル

林

研究協力者

古

恭

川

昭

栄

井

村

西

谷

裕

夫

＊＊

大

井

長

和

＊＊＊

裕

神経成長促進因子（nerve growth factor：N

ウス顎下腹から精製したβNGFを含む生理食塩GF）は胎生期の知覚神経節，交感神経節神経細水液とから成るmedium中で摘出したDRGを培胞の分化，成長に必須の一群のポリペプチドであ養する．培養は370Cで行い20時間後に顕微鏡下でり，特に交感神経系の機能維持に重要な役割を担

神経節周囲から伸びた神経線経を観察し，その密っている1）．

度を主な判定基準として0，＋1，＋2，＋3，

著者らはすでに筋ジストロフィーマウスの顎下＋4，＋5のランクにより神経節のNGFに対する反応性を評価した．

腺，後肢筋肉中のNGFレベルが正常マウスより低いことを明らかにしている2）3）6）．今回はNGF

マウス顎下腹βNGFの精製：生後80日齢のDDと本症の関連性をさらに検討するため筋ジストロ
フィーチキンと正常チキンを用いて胚の脊髄後根系オスマウス顎下腹よりVaronら4）の方法で精製した7S NGFをCM−Sephadex C−50カラムク

神経節（dorsalroot ganglia：DRG）のNGFにロマトグラフィーにより各サブユニットに分推し，対する反応性および幼君期から成熟期に至る期間

均一なβNGF（βサブユニ，ツト）を得た・
βNGF特異抗体の調製：Vaitukaitisら5）の方法の骨格筋中のNGF様免疫活性（NGF−likeim−munoreactivity：NGFLLI）を測定した．

でウサギに対してマウスβNGF抗血清を調整し，この抗血清からマウス7SNGFを結合させたN

材料と方法
筋ジストロフィーチキン：筋ジストロフィーチ

GF−Sepharose4Bカラムを用いてマウスβNG
F特異抗体を精製した．

キンはニューハンプシャー種413系，正常チキンは125卜βNGFの調製：βNGFlOFLg（10FLl），0．4

ニューハン70シャ一種412系を用いた．

Mリン酸緩衝液，pH7．4（50／∠1），125トNalm

DRGのNGFに対する反応性の測定：筋ジスト
ロフィーチキン，正常チキンの8日および14日齢Ci（10／∠1）を混合し，タロラミンTlO／Jg（10′ 1）を加え30秒間反応後，SephadexG−50カラムにより遊胚からDRGを摘出する．Varonら4）の方法に従離の125Ⅰを除去した．125Ⅰ一βNGFの比活性は30−60

い正常チキン血柴とEagle〃Ci／〟gであり，特異抗体との免疫学的結合は80％以上であった．

S MEMmediumとマ

固相＊京都大学薬学部生物化学書＊京都大学医学部第二内科＊＊＊国立療養所宇多野病院神経内科

radioimmunoassay法：βNGFの特異抗体を0・05Mトリスー塩酸緩衝液pH8．5で1／増〜5／Jg／mlの濃度に調製し，ポリスチレンチューブ−51−

に500〟1ずつ分注する．40Cで一夜放置した後抗のある筋肉は33％または25％で用いた．NGF量は体溶液を除き0．05Mトリスー塩酸緩循液pH8．0

単位湿重量筋肉あたりで算出した．

（0．075M塩化ナトリウム，0．1％ウシ血清アルブミ
結ン，0．02％アジ化ナトリウム）で2回洗浄する．
このチューブに測定試料を500／∠1ずつ加え40Cで果

8日齢の筋ジストロフィーチキン胚，正常チキ

24時間放置する．試料を除き上記緩衝液で2回洗ン胚各々1個体ずつからdorsal root ganglia

浄する．つぎに125ⅠβNGFを500〃1（約20，000

摘出し，種々の濃度のマウスβNGF存在下で培cpm）加え40Cで24時間放置した後同じ緩衝液で養した．たて軸に神経節の反応を，横軸にβNGF2回洗浄し，チューブに残った放射活性をダイナ

濃度をとり，各NGF濃度での反応をプロットし

ポットAutoLLOGICγカウンターで測定した．

たのが区Ilである．培養前の神経節の大きさ，外をradioimmunoassay用試料の調製：採取したチ

観には両チキン群で差を認めなかったが正常チキ

キンの筋肉は冷却した0．05Mリン酸緩衝液pH7．2

ンDRGはβNGF54ng／mlで最大反応を示すが（0．1mM PMSF，0・1mM EDTA，0．1％ウシ血筋ジストロフィーチキンDRGは162ng／ml

清アルブミン）中でホモジナイズした．筋肉と緩大反応を示した．筋ジストロフィーチキンDRG

衝液の重量／体積比は50％とし，一方使用量に限りは正常チキンDRGより反応性が低く，正常チキ

COMPARISON BETWEEN THE NERVE FIBER OUTGROWTH FROM DORSAL ROOT GANGLIADISSECTED

FROM8

DAY

NORMAL−AND

DYSTROPHY＿CHICKEMBRYOS

＋4
肖
り
▼1コ
C
H

ぷ＋3
●H

h

pE芯云

0．2

0．6

2

6

18

54

162

800

4000

mouseβNGF（ng／ml）
Tissue cultures vere perfortnedin the presence of various
amounts of mouse■βNGF at370c for24hr．

図l
−52−

で最

ンDRGは同程度の反応をひき出すためには3倍用いて行ったものである．反応の分布を筋ジスト

高濃度のNGFが必要であることを示唆している．
この点をさらに詳しく検討するためにNGF濃度

ロフィーチキンと正常チキンDRGで比較すると正常では＋2を示す神経節が約60％で＋3を示すを一定（18ng／ml）にして 20個〜40個の神経節をものも約10％みられた．しかし3例の筋ジストロ

培養し，その反応性を比較したのが図2と図3でフィーチキンでは十3を示す神経節は全く見られある．図2は8日齢胚の筋ジストロフィーチキン

ず，＋1しか示さない神経節の比率が最も高い．

と正常チキンのDRGの反応の分布を示したもの

すなわち14日胚でも筋ジスチキンDRGは正常チである．正常DRGでは培養した34個の神経節のキンのそれより

うち，62％が＋3を，38％が＋4を示したが筋ジスチキンのDRGは＋2の反応しか示さない神経定される．一般にDRGのNGFに対する反応性

節がdyslで18％，dys

このため14日胚DRGは全体に反応性が低く図3にNGFに対する反応性が弱いと推は8日胚DRGが最も高く以後徐々に低下する．

2で3％みられた．また最大反応である＋4を示す神経節の割合も正常よ示す通り最大反応は＋3しか示さない．この反応り低下していた．図3は同様の実験を14日齢胚を性の日齢変化はDRG中の知覚神経節神経細胞表

COMPARISON BETWEEN THE RESPONSIBILITIES TO MOUSEβNGF OF DORSAL
ROOT GANLIA FROM

0

0

＋1

＋1

＋2

＋2

8DAY NORMAL AND DYSTROPHY CHICK EMBRYOS

＋3

＋3

＋4

＋4

0

＋1

＋2

＋3

＋4

Nerve FlberIndex
TisSue Cultures Were performedltl the pre8enCe Of nouse
βNGT（18mg／ml）at370c tOr24hr．

図2

−53−

COMPARISON BETWEEN THE RESPONSIBILITIES TOMOUSEβNGF OF DORSAL
ROOT GANGLIA FROM14DAY NORMAL−AND DYSTROPHY−CHICK EMBRYOS

0

＋1＋2

0

＋1

＋3

十2

＋1

＋3

0

＋4

＋1

0

Nerve Flber

＋2

＋3

＋4

＋1＋2

＋3

＋4

工ndex

Tissue cultures vere performedln the presence of mouseβNGF（18ng／ml）at370c for24hr．

図3

面膜上のNGF受容体の密度の日齢変化とほぼ相筋（M・biceps femoris），内転筋（M．adducto−

関関係にあり，受容体密度が高い程NGFに対すres）の3種類である．この方法でマウスβNGF

る反応性が高い7とこの観点に立てば上記の結果はを標準品として用いた場合の標準曲線は図4の実筋ジストロフィーチキンDRG神経細胞のNGF
受容体に何らかの障害があるかまたは密度の低下線で示した．ほぼ5ng／mlまで定量が可能である．
今回測定した筋ジストロフィーチキンの3種類のをきたしていることが示唆される．

筋肉ホモジネート上清の希釈曲線を破線または一

すでに著者ら3）6）により，筋ジストロフィーホモ

点鎖線で示した．これらの希釈曲線はほぼβNG

マウス後肢筋肉中のNGFレベルが正常マウスにFの標準曲線と平行となり，この方法でチキン筋較べ低下していることが見出されている．この現肉中のNGF−LIレベルの測定が可能と考えられる．

象をチキンで検討するため，発症前後の日齢の胸筋のNGF−LIレベルを示したのが図5であ筋ジストロフィーチキンと正常チキン骨格筋中る．生後1日から70日に至る期間に徐々にレベルのNGF−LIレベルを測定し比較した．測定はマウ
ス顎下腹βNGFの特異抗体を被覆したポリスチの上昇がみられるが筋ジストロフィーチキンと正常チキンの間に有意差は認めなかった．内転筋とレンチューブを用いる固相RIA法で行った．測定

大腿二頭筋についても生後月齢15日から70日までに用いた筋肉は胸筋（M．pectoralis），大腿二頭測定したが筋ジストロフィーチキンと正常チキン−54−

CALIBRATION CURVE USING A VARYING CONCENTRATION OF UNLABELED
MOUSEβNGF AND OF THE MUSCLE EXTRACTS OF DYSTROPHY CHICKEN
16Ⅹ

8Ⅹ

4Ⅹ

2Ⅹ

1Ⅹ

dllut10n Of the nuscle extracts

●．−●

一一〇一一

里．pectoralls

一・一△・−

旦・blcepS femorls

・一一日Q一・一一ヽヽ「▼、、ゝたぎ喪里・adductores

＼

＼0

＼

＼
ヽ
●

＼
●一一一・−．．・．＿．．●

0．6

1．25

2．5

5

10

19

38

76

312

mouseβ−NGF ng／nl

図4

一方，胎生期のチキンにおけるNGFの動態を知群の間に有意差は認めなかった．以上の結果より，
レるためにDRGのNGFに対する反応性を検討しベルは罷息部位の胸筋をはじめ大腿二頭筋，内転た．その結果，筋ジストロフィーチキンのDRGは正筋とも正常チキンのNGF−LI

常チキンのDRGにくらベマウスNGFに対する反筋ジストロフィーチキン骨格筋中のNGF−LI

レベルと差がない

ことが結論される．

応性が低下していることが明らかとなった．125ト
NGFを用いた定量的な検討が必要であるがNGF
考

受容体に何らかの異常もしくは細胞膜上での受容案

著者らはすでに筋ジストロフィーマウス顎下腹2）体の密度に変化をきたしている可能性がある．

および後肢筋肉中3）のNGFレベルの低下を報告

以上の結果から，筋ジストロフィーチキンではしたが今回，筋ジストロフィーチキン骨格筋中の胎生期にNGF動態の何らかの異常をきたしていNGF−LIレベルと正常チキンのそれとの間に有意ることが示唆される．今後，筋ジストロフィーチ

差は見出せなかった．チキンとマウスの筋ジスト

キン，マウスの胎生期のDRGおよびSympathetic

ロフィー症の違いを反映しているものと思われる

gangliaにおけるNGF受容体とNGFの相互作用が，特にマウスでは神経系に異常があるとする多を動力学的，定量的に検討する予定である．

くの報告8）9）が提出されている．
ー55−

LEVELOFTHE NERVE GROWTH FACTOR，LIKEIMMUNOREACTIVITY（NGF−Lり
川THE旦・PeCtOralls OF DYSTROPHY AND NORMAL CHICKEN
d a Y ）：

1

6

15

23

39

70

‥；
‡
：
．
ヨ
里
王●
● ：≡
●
：≡
壬：ヨ
● ●
●

dys・COnt・

dy8・COnt・

dys●

COnt・

dyS・COnt・

dys・COn亡・dy8・

COnt．

図5

文

献

MarcelDekker，NewYork，1972．

1）Levi−Montalcini，R．＆Angeletti，P．U．：Physi−
01．Revリ

5）Vaitukaitis，J．，Robbins，J．B．，Nishlag，E．＆Ross，G．T．：J．Clin．Endocrin01．，33：988，

48：534，1968．

2）Furukawa，S．，Nishitani，H．＆Hayashi，K．：
Biochem・Biophys・Res・Commun．，76：1202，

1971．

6）古川昭栄，大井長和，井村裕夫，林恭三：医学のあゆみ，110：402，1979．

1977．

3）Furukawa，S・，Hayashi，K．，Ohi，T．＆Imura，
H・：Biochem．Biophys．Res．Commun．，90：

7）Frazier，W．A．，Boyd，L．F．，＆Bradshaw，R．
A．：J．Biol．Chem．，249：5513，1974．

130，1979．

8）Huizar，PリKuno，M．＆Miyata，Y．，J．Physi・4）Varon，S・，Nomura，J．，Perez・Polo，J．R．，
Shooter，E．M．＆Kennedy，J．P．Jr．：Methods
inNeurochemistry（ed．Fried，R．）Vol．IlI，203，

ー56−

01リ

248：231，1975．

9）Komiya，Y．＆Austin，L．：Exp．Neuro1．，43：
1，1974．

9）ジストロフィー実験動物モデルにおける神経成長促進因子の研究（ⅠⅠⅠ）除神経の筋NGF−Uへの影響

井

研究協力者

大

井

長

村

和

裕

夫

鈴

木

賂

夫

古

川

昭

栄

＊＊＊

林

恭

三

西

谷

裕

は じ め により，ニュージランドホワイト種のウサギの皮内

神経成長促進因子（nerve growth factor，N
GF）は，交感神経ニューロンの分化と機能維持及に免疫を3週間毎に4回反復し，その耳静脈より

び感覚神経ニューロンの分化に必要な蛋白質であ3．β一NGFの特異抗体の作製

る．このNGFは，軸索内を逆行性に流れる1）こ

上記の方法で得た抗血清を，33％飽和硫安にてとが知られている．また，ラットの培養骨格筋細塩析し，得た沈澱を0．05Mリン酸緩衝液で透析し胞系でNGF様の物質が産生2）されることが示された．NBr−Sepharose4Bに7S−NGFを結合させた．私達は，髄鞘形成異常をともなうジストロフ

たNGF−Sepharose4Bカラムに透析液をアプラィーマウスの筋NGF−1ikeimmunoreactivity（Nイし，Stoeckelらの方法9）に従ってβ−NGF 特異

GF−LI）が，ヘテロ群に比しホモ群で低値3）で抗体を精製した．

採血することによって抗血清を得た．

あることを報告した．ジストロフィーマウスの発

4．one−Site法によるラジオイムノアッセイ法

症機序の1つの可能性として，髄鞘形成異常による神経原性変化4）5）も考えられている．そこで，運動神経と筋NGF−LI の関係を明らかにする目的で，除神経マウス筋肉のNGF−LI

をOne−Si−

te法によるラジオイムノアッセイ法6）で測定した．

β−NGF特異抗体溶液を0．05Mトリス塩酸緩衝液（pH8．5）で0．5〜10〟g／200〃1の濃度に調整し，ポリスチレンチューブに200〃1ずつ分注した．4℃24時間静置した後に，過剰の抗体を回収した．
次に0．05Mトリス緩衝液（0．075M塩化ナトリウム，
0．1％BSA，0．02％アジ化ナトリウム）で洗浄し，材料と方法

4℃にて保有した．このβ−NGF特異抗体被覆チ

t．β−NGFの分離

ューブにサンプルを20恥1ずつ加え，4℃で24時間

オス成熟マウス顎下腹からVaronら7）の方法で精製した7S−NGFをCM−Sephadex G−50のカ
ラムクロマトグラフィーにてα，β，γの各サブユ
ニットに分離した．

静置した後に，上記の緩衝液で洗浄して抗体と結合した物質以外を洗い落した．続いて，125トβNGF
200FLl（2×104CPM，β−NGFo．5ng）を加え，4℃にて一晩静置後に125トβNGFを吸収除去した．

2．β−NGF抗血清の作製

これを上記の緩衝液で洗浄後にポリスチレンチュ

β−NGFの100FLgをVaitukaitus8）らの方法にーブに残った放射活性を測定した．

＊京都大学医学部第二内科＊＊京都大学薬学部生物化学

5．除神経マウス筋の作製
正常オスマウス（ddk）の4週齢12匹及び8週齢

書＊＊匡l立療萱所宇多野病院手中経内科−57−

10匹の各個体の右坐骨神経をベントパルビタール

くNGF−Ll桐MUSCLE〉

麻酔下で外科的に除神経した．村側の左下肢をコントロールとして用いた．この2過後に両側の下肢筋を採取し，リン酸緩衝液（25％W／V）中で粉砕した．この後40C30分間3300rpm遠心して得た上澄みを検体として用いた．
結果t．マウス筋NGF−」工と標準曲線
マウス筋抽出物を倍数希釈して得られた曲線は，
マウスβ一NGFによる標準曲線と平行した（図l）．

4W
8W／意：et．weigごOrma■DenervatedNorma川enervated

図2 除神経筋NGF・LIは，正常筋のそれに比較して
低値である

考

察

ジストロフィーマウスは，生後2〜3週から臨床症状が発現し，以後進行性である．私達が観察したホモ群とヘテロ群の筋NGF−LIの差は，週齢が小さい程大きく過齢が増加するにつれて小さくなっていた．このことは，胎生期におけるNGF

102

101

動態異常と本症の発症機序との関連を示唆した．

％ β−SUbunit

しかし，除神経筋でも筋NGF−LIられたことから，筋NGF−LI
図l

マウス筋抽出物の希釈曲線がマウスβ一NGFによる標準曲線と平行であるの減少が認めは運動神経にも何

らかの関連をもつのではないかと推測される．従って，ジストロフィーマウスの筋

NGF−LIの低値は，髄鞘形成異常による機能的除神経の状態を示

2．マウス筋NGF−」工の値している可能性も考えられ，この点今後の検討が必

4週齢マウスの場合，正常筋0．037±0．001，除神経筋0．030±0．001であり，8週齢マウスの場合，要である．また，CaSt fixationによる療用性筋萎
縮でも筋重量の減少10）が，すでに4週で著明に認正常筋0．037±0．003，除神経筋0．027±0．002（単められること及び骨ピンによる固定の第1日目か

位：ng／mg．wet weight，M±SD）．除神経筋Nらミトコンドリアの機能低下11）が発現するとの報

GF−LI

告から，NGF−LI

は，正常筋NGFLLIに比して低値で，その差は8週齢でより大であった（図2）．

の低値の機序については，療用性筋萎縮の関与の有無の検討も必要と考えられる．

−58−

ま

と

inmicewithmotorneurondisease and musTめ

マウス除神経筋の筋NGF−LI

レベルは，正常筋に比して低値であり，これは運動神経が筋NG
F−LIに関与していることを示唆した．

Culardystrophy．Brain，96：247，1973．
6）Suda，K．，Barde，Y，A．＆Thoenen，H．：Nerve

growth factorin mouse and rat serum．
Correlation betweenbioassayandradioim−

文

献munoassaydeterminations．Proc．Natl．Ac−

1）Stoeckel，K．＆Thoenen，H．：Retrograde
axonaltransport

of

nerve

grOWthfactor．

ad．Sci．USA，75：4042，1978．
7）Varon，S．，Nomura，J．，PerezTPolo，J．R．，etSpecificityandbiologicalimportance．Brain

al．：Methods of neurochemistry（edited byRes．，85：337，1975．

Fried，R．）Marcel Dekker，New York，1972，

2）Murphy，R．・A．，Singer，R．T．，Saide，J．D．，et

Vol．3，p．203．

al．：Synthesisandsecretionofahighmolecu−8）Vaitukaitus，J．，Robbins，J．B．，Nieschlag，E．，

1ar weight form of nerve growth factor by

et al．：A method for producing specificSkeletalmuscle cellsin culture．Proc．Natl．

antiserumWithsmalldosesofimmunogen．J．

Acad．Sci．USA，74：4496，1977．

Clin．Endocr．，33：988，1971．

3）Shoei，F．，Kyozo，H．，Takekazu，0．，et al．：

9）Stoeckel，K．，Gagnon，C．，Guroff，G．，et al．：

Levels of nerve growth factor−1ikeimmuno−

Purification of nervegrOWth factor antibo−

reactivityinthelowerlimbmusclesofmus−

dies by affinity chromatography．J．Neu−

Cular dystrophicmice．B．B．R．C．，90：130．

rochem．，26二1207，1976．

10）Booth，F．W．＆Kelso，J．R．：Productionofrat

1979．

4）Madrid，R．E．，Taros，E．，Cullen，M．J．，etal．：
Genetically determined defect of Schwannmuscle atrophy by cast fixation．J．Appl．
Physio1．，34：404，1973．

Cellbasement membraneindystrophicmou−

11）Max，S．R．：Disuseatrophyofskeletalmus−
cle．Lossoffunctionalactivityofmitochon−

Se．Nature，257：319，1975．

dria．B．B．R C．，46：1394，1972．

5）Bradley，W．G．＆Taros，E．：Axoplasmicflow
inaxonalneuropathies．ⅠIAxoplasmic flow−59−

ⅠⅠ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病態生理

a）遺

伝

b）臨

床

C）形

態

d）生

理

e）赤血球など
f）生化・治療10）筋萎縮性疾患の遺伝分析−筋緊張性ジストロフィー症について

古

庄

敏

行
＊＊

研究協力着

金 久 禎 秀中▼ 島 洋 明
＊＊＊

納

光

弘

＊＊＊

井

形

昭

弘

著者らは1977年来進行性筋ジストロフィー症おMy．Dy．の年齢分布についてよびその類縁疾患6種について遺伝分析を試みた．

年齢群によってMy．Dy．の頻度が異なれば，遺本年度は筋緊張性ジストロフィー症（以下My．

伝分析の際もこの点を考慮に入れる必要がある．

Dy．と略）について，その遺伝形式の分析を行っ

そこで両親の組合せ別，すなわち両親ともに正常たので報告する．

の家系と，両親の一方は正常で他方はMy・Dy・の本症の資料収集にあたっては，昭和47年より54

家系に分けてMy．Dy．の頻度について，ズ2−検定を

年8月までの8年間に，難病検診，主要病院病歴

行ったところ，いずれも統計的有意差は認められ調査，身体障害手帳調査，全学級担任アンケート

なかった．

調査，在宅訪問検診，戸籍調査，逐次情報など可能な限りの方法を用いて，鹿児島県内全域のMy．

My．Dy．の頻度の性差について

Dy．の家系調査および疫学調査を行った．

本資料のMy．Dy．の頻度をみると，数字の上かMy．Dy．の診断に際しては，その特有な臨床症

らは男の方が多いようである．そこで，まず両親状及び電気生理学的検査，限科学的検査を用いての組合せ別に性差を検定したところ，正常×正常

慎重に診断し，とくに生存中の両親，同胞に対しではズ2＝1．895，自由度1で統計的には0．2−0．1のては臨床所見の他に，可能な限りSlitlampなど有意水準であり，統計的有意差は認められない．

による検査を併せて実施した．本資料からは，先つぎに正常×My．Dy．についても同様な検定を行

天性筋硬直症，パラミオトニ7，Chondro dys−ったところ，ズ2＝7，203，自由度1で有意水準0．01〜

trophic myotonia，Schwartz−Jampel症候群，

0．001，統計的に有意差が認められる．両組合せを

acquired myotonia，いわゆるpseudo myot0−

合計した場合には，ズ2＝8．217で自由度1，有意水

niaなどは除外した．その結果，収集した自験例は56家系，386名となり，両親の組合せ別では正常

準0．01〜0．001で有意差が認められる．これら一連の結果から，両親の組合せによって性差が異な×正常家系32家系224名，正常×My．Dy．は24家

るのか，あるいは調査例が少ないために結果が異系162名であった．収集した資料を下記の点につなるのか，この点は現在のところ明確な結論を得

いて分析を試みた．

ないため，今後更に検討する余地があると思われ
る．
分離比の検定まず正常×正常の分馳比は表lに示す如く，男＊鹿児島大学医学部衛生＊＊国立療警所南九州病院神経内科＊＊＊鹿児島大学医学部第三内科

では0．2698±0．0559，女では0．1692±0．0465の推定値が得られた．平均をとると，0．2188土0．0365−63−

で，劣性遺伝の期待値0．25との差は誤差より小さがある．この点については今後さらに資料を収集く，したがって本研究資料では劣性遺伝の仮説にし分析することとし，ここでは一応この性差を無適合する．つぎに正常×My．Dy．の分離比は表2

視して両分馳比の平均をとると，0．3667±0．0598に示す如く，男では0．5000±0．0737，女では0．2273

で，期待値0．5との差は5％水準で統計的有意差が±0．0632の推定値が得られた．この場合，前節でみられる．つぎに，正常×正常と正常×My．Dy．

述べた如く，男女の差は統計的有意水準0．01〜の分離比を比較すると有意水準0．05〜0．02で有意0．001で有意差がみられる．もしこれが遺伝的なも差が認められる．このことは本症が遺伝性を示すのであれば，すなわち伴性劣性的なものであれば，1つの証拠といえる．

父正常×母My．Dy．の組合せの方が母正常×父My．Dy．の組合せに比べて多いことが期待されるが，表2に示した如く，前者の組合せは10家系，

My．Dy．の遺伝的異質性について
本症は従来の報告1）によると概ね常染色体性優性

後者の組合せは14家系であることから，直ちに伴遺伝とされている．しかし，すでに本研究資料に性劣性的なものとは言えない．したがって，男女示した如く，発端者の両親について調査を行ったの頻度の違いは従性的なものか，あるいは偶然にところ，正常×正常32家系，正常×My．Dy．24家よる資料の偏りが影響しているのか検討する必要

系で，全家系のうち前者家系の占める割合は，

表l 正常×正常の組合せ（32家系）における子の分離比
いとこ結婚率＝6．25±4．28％
年

齢

（歳 ）

男
総数

M y．
D y．

女
分

離 比

総数

0 − 19

M

y．
D y．

計
分 維 比

総数

M y．
D y ．

分

柾 比

2

0

0

2

0

0

20 − 29

92

0 ．2 2 2 2 ± 0 ．13 8 6

101

0 ．1 0 0 0 ± 0 ．0 9 4 919

3

0 ．15 7 9 ± 0 ．0 8 3 7

30 − 3972

0 ．2 8 5 7 ± 0 ．17 0 7

15

1

0 ．0 6 6 7 ± 0 ．0 6 4 4

22

3

0 ．0 1 3 6 ± 0 ．0 2 4 7

3

0 ．1 6 6 7 ± 0 ．0 8 7 840 − 4914

2

0 ．14 2 9 ± 0 ．0 9 3 5

41

0 ．2 5 0 0 ± 0 ．2 16 5

18

50 −

31

11

0 ．3 5 4 8 土 0 ．0 8 5 930

80 ．2 6 6 7 ± 0 ．0 8 0 761

19

0 ．3 1 1 5 ± 0 ．0 5 9 3

2

0

0

4

0

0

6

0

0

63

17

0 ．2 6 9 8 ± 0 ．0 5 5 965

110 ．1 6 9 2 ± 0 ．0 4 6 5

128

28

0 ．2 18 8 ± 0 ．0 3 6 5

不明
計

表2 正常×My．Dy．の組合せ（24家系）における子の分艶比
近親婚なし
年

齢

（歳 ）

女

男
総 数

M y．
D y．

分 雅

比

0 − 19

総 数

M

y．
D y．

計
分 推 比

総 数

M y．
D y ．

分

艶 比

1

0

0

1

0

0

20 − 29

95

0 ．5 5 5 6 ± 0 ．16 5 6

8

5

0 ．6 2 5 0 ± 0 ．17 1 2

17

10

0 ．5 8 8 2 ± 0 ．1 19 4

30 − 3910

6

0 ．6 0 0 0 ± 0 ．15 4 9

103

0 ．3 0 0 0 ± 0 ．14 4 920

9

0 ．4 5 0 0 ± 0 ．1 1 1 2

40 − 49

94

0 ．4 4 4 4 ± 0 ．16 5 6

6

0

0

15

4

0 ，2 6 6 7 ± 0 ．1 14 2

50 −

14

8

0 ．5 7 1 4 ± 0 ．1 3 2 3

13

2

0 ．1 5 3 8 ± 0 ．10 0 027

10

0 ．3 7 0 4 ± 0 ．0 9 2 9

4

0

0

6

0

0

10

0

0

46

23

0 ．5 0 0 0 ± 0 ．0 7 3 744

10

0 ．2 2 7 3 ± 0 ．0 6 3 2

90

33

0 ．3 6 6 7 ± 0 ．0 5 9 8

不

明
計

ー64−

32／56＝0．57，すなわち57％も占めている．もしこ

離比は50％になることが期待される．もし本症がれが事実であれば，My．Dy．をすべて常染色体性

すべて優性型であるとすれば両親の組合せ家系数

優性遺伝とする仮説に問題もあると考えられる．
ここでもし，本症をすべて常染色体性優性遺伝とは常識的に正常×My．Dy．＞正常×正常が期待さすれば，正常×正常の場合，（1）不完全浸透が考えせ家系数は正常×正常＞正常×My．Dy．が期待さられる．家系組合せから本症を優性として浸透率れる．しかし，（1）正常×正常の家系，正常×My．

を計算すると，豊×100＝42．86％である．しかし，浸透率70％以下の場合は他の要因を考慮する必要

Dy・の家系がほぼ1：1であること，（2）すでに述があるとされている．（2）突然変異（3）本症が環境適合し，（3）近親婚率も正常×My．Dy．に比べ正常

れ，逆に本症がすべて劣性型とすれば両親の組合

べた如く，正常×正常の分離比が劣性遺伝仮説に要因のみによって発生するなどが考えられる．しか×正常の方が高いことを考慮すると，本症には劣し，分駈比がほぼ25％であることを考えれば，今述

性型と優性型があり，したがって正常×My．Dy．

べた（1）（2）（3）は考慮に入れる必要はほぼないものとの家系には劣性型と優性型の家系が混合している思われる．また，正常×My．Dy．のいとこ結婚率

ことが考えられ，全体からみて本資料の家系は劣は0であるのに対して，正常×正常は6．25％であ性型が多いことを示している．しかし，いずれにることなどを併せて考えると，本症の中に劣性型しても今後さらに資料を増やして，この点については詳細な遺伝分析を行う予定である．

が存在することを全く否定することに問題があると思われる．つぎに，正常× My．Dy．の分離比について検討する．この場合，分離比が期待値0．5

文献に適合したとしても優性型，劣性型と一方的に決1）的光弘，川平稔，大勝洋袖，井形昭弘：My．Dy．

定することはできない．というのは正常が優性で，の遺伝形式に関する検討一南九州地区の疫学調

My・Dy．が劣性と仮定しても，あるいは正常が劣査結果の分析一．厚生省心身障害研究費補肋金性でMy．Dy．が優性と仮定しても，My．Dy．の分

昭和49年度．沖中王圧研究報告書，5〜8，1974．

−65−11）Kennedy−Alter−Sung−Syndromeの2例−臨床病態に関する検討−

茂

研究協力者

在

敏

司

小

西

慎

吾

増

井

山

本

隆

二

島

田

義

竹

冤

中

正

純

紘」

も加わり，昭和54年10月入院した．
入院時所見：身長163cm，体重55kg．顔面，前胸部に毛細血管拡張があり，両側胸部に乳腺嫡除術の疲痕を認める．胸部打聴診上異常なく．腹部では肝を2横指触知した．

1968年，Kennedyらは，特異な下位運動ニューロン疾患の2家系11症例を報告した1ミその臨床的特徴は，1）中年での発症，2）伴性劣性遺伝，3）近位性脊髄性ならびに球性筋萎縮と筋力低下，4）全身性の筋線維束性れん縮，5）錐体路，知覚ならび神経学的所見：顔面特に眼輪筋および口輪筋，舌，胸鎖乳突筋に線椎束性れん縞を認め・手指にに小脳症状の欠如，6）緩徐進行性，7）乳房肥大，
手指振戦，有痛性痙れんなどの随伴症状が高頻度にみられるといった点である．最近私共は，これらの特徴と顔面，前胸部に毛細血管拡張を有した
2家系2症例を経験し，肝脂肪変性，筋線維内脂肪沈着を認めたので報告する．
症例

症例l：39歳 男 事務員（図l）．
家族歴：母方従兄弟に，本例と同様の筋萎縮，女性化乳房，手指振戦などを呈する者がある．血族結婚はない．タバコ20本／日．ビール1本／日．
既往歴：特記すべきことはない．
現病歴：昭和35年，19歳乳房肥大に気づき，某大学病院受診し，そこで両側乳腺摘除術を受けた．
またこの頃より手指振戦を自覚．27歳頃より，安静時に，下腿，大腿，時には腹筋に，こむらがえり様の有痛性けいれんが起こるようになった（多い時は，1日5〜6回出現）．33歳頃より歩行時下肢の脱力を覚えるようになり，また走ることが次第に困難となってきた．その後症状は，緩徐ながら次第に進行し，37歳頃には，階段の昇降に際して，手すりを必要とするようになった．38歳上肢脱力

図l＊大阪医科大学第一内科

一66一

症例1の全身像
両側乳腺摘除術の療痕を認める

は姿勢時に増強する接戦をみる．筋萎縮は，舌筋に中等度，上下肢帯，大腿および下腿に軽度みらおよび脂肪織の増加が目立ち，神経原性萎縮が主れる．筋力低下は，躯幹部および下肢近位部優位縮筋線経のmyophagiaの像もみられ軽度の筋原体であるが，一部には中心核を示す線経や，非萎で，臥位より上半身を起すことや，蹄鋸よりの起性変化が加わった所見であった．Oilred O染色立が困難である．上肢の筋力低下は軽度であり，握力は右26kg，左23kgである．深部反射は上肢減では（図3A），筋線維内に脂肪滴の沈着が多く認

弱，下肢は消失している．病的反射なく，知覚障
害や小脳症状を認めなかった．

た，同部位のRoutine ATPasc染色pH9，4（図められた．図3Bは，Oilred O染色と対比させ3B）で，脂肪の沈着は，fiber tyl）eと関係なく，

検査所見：検尿，検便，血液一般，血液像異骨

各筋線維内にほぼびまん性に認め▲▲）れた．本症なし．CRP，RA，抗核抗体，梅毒反応すべて陰例では，軽度のGOT，GPTの上昇があり．肝生性．血清電解質，Ca，P，BUN，Creat．血清蛋

検により，肝細胞の脂肪変性が明らかにみられた（図4）．

自分画正常．GOT47mU／ml，GPT42mU／mlと軽度上昇．Al−p，LDHは正常．CPK741U／1（正常100以下）と上昇．血清脂質では，T．chol185

症例2：51歳，男，会社役員
家族歴：患者は同胞5人中の末弟である．次兄

mg／dlと正常であるが，T．G．432mg／dl，リボ蛋に本例と同様の筋萎縮が認められ，発症より約10

白分画でpreβリボ蛋白46．6％と増加がみられⅠⅤ

年後59歳の時，突然死している．血族結婚はない．

型高脂血症の型をとっている．50g経口糖負荷試

既往歴：幼児期，尋常性魚鱗癖を指摘された．
35歳より，気管支喘息で治療を受ける．

験は正常型．髄液検査異常なし．内分泌機能は，下垂体，副腎，甲状腺すべて正常．心電図は正常．

現病歴：昭和20年，17歳頃より，手指振戦が出

筋電図では，検査したすべての筋に，典型的な神

現．43歳頃より下腿特にふくらはぎに，有痛性痺

経原性変化がみられた．運動神経伝導速度は，尺れんを認めた（週1回程度）．44歳海外旅行中，バ

骨神経53．8m／sec，腰骨神経45．5m／sec．三角筋

スから降りる時，下肢に力が入らず転倒，以後歩筋生検H．E．染色では（図2），萎縮した小径線椎群

行時下肢筋力低下を自覚するようになった．51歳

図2

症例1の筋生検像
萎縮した小径線維群，中心核を有する筋線経が認められる（三角筋 H．E．染色×200）
−67一

図3

症例1の筋生検像
A：Oil redO染色（×200）．筋線稚内に多数の脂肪滴を認める・
B：ルーティンATPase染色（×200）

図4 症例1の肝生検像（H・E・染色 ×100）
肝脂肪変性が認められる

一68−

図5

症例2の筋生検像
大腿四頭筋Oil red O染色（×200）． 筋線維内に，多数の脂肪滴を認める

筋力低下は上肢にもみられるようになり，昭和54

加わっているものと考えられた．Oil red Oによ

年5月入院．この前後軽い梼普障害も認めた．

る脂肪染色では，脂肪滴の沈着が多く認められた

入院時所見：身長168cm，体重68kg．血圧140／90．

（図5）．肝生検では，肝脂肪変性の所見であった．

皮膚は角化傾向強く魚鱗癖に一致した所見．顔面，考

前胸部に毛細血管拡張がみられ，また女性化乳察

以上報告した2症例の臨床的特徴は以下の点で房を認め，圧痛を伴う乳腺組織を触知した．胸部聴診にて，乾性ラ音聴取．腹部では，肝を1横指ある．

触知した．手指振戦，頭部に振戟様の動きがみら（∋発症年齢：筋力低下の発症は，それぞれ33歳，44歳といずれも中年である．

れる．顔面では，眼輪筋，口端筋，および舌に線
維束性れん縞が認められ，筋萎縮は舌筋，四肢近（∋筋萎縮及び筋力低下：四肢近位優位であり，位部に軽度みられた．深部反射は消失しており，発症は下肢より始まっている．また舌萎縮などの病的反射は認めない．

球性筋萎縮が認められるが，球症状は比較的軽度

検査所見：GOT49mU／ml，GPT51mU／ml

である．

と

軽度上昇．CPK923U／lと中等度の上昇．脂質で（∋全身性の線維束性れん縮：全身性にみられるは，T．cho1277mg／dlと正常であるが，T．G．165

が，特に眼輪筋，口端筋，舌に明瞭である．症例mg／dl，pre−βリボ蛋白分画34．28％と軽度の増加

2では，項部筋の線維束性れん縞に伴い頭部の振を認めた．その他の血液生化学的所見には特別な戟様の動きがみられる．

異常は認められなかった．内分泌学的検査正常．

（彰錐体路，知覚路，および小脳症状の欠如．

心電図は左室肥大．筋電図は，典型的な神経原性（9緩徐進行性：筋力低下は発症より，症例1で変化がみられた．左大脇四豆員筋生検では，萎縮しは6年，症例2では7年が経過しているが，日常た小径線維群が散在し，神経原性の異常を呈した生活に著しい問題はなく，仕事も可能である．
⑥手指振戦，女性化乳房，下肢有病性痙れんなが，一部の筋線経では，中心核を有する線経や，横紋が消失した線経が認められ，筋原性の変化がどの合併症が共通してみられ，これらの症状は，ー69−

筋力低下の発症よりずっと早期にみられ，ことにれんなどに加えて，肝脂肪変性，毛細血管拡張な

前2者は思春期に始まっている．

どが重要な所見としてみられることを指摘した．

以上述べた臨床的特徴は，Kennedy

らの報告した例にほぼ一致する．但し遺伝歴については，
Kennedyらの例では，伴性劣性遺伝が明らかであ②筋生検所見，肝生検所見においては，脂質代
謝異常がなんらかの役割を演ずる可能性を推測した．

るが，私共の2家系については，伴性劣性遺伝を十分疑えるが，確定し得ず，今後なお検討すべきは心筋生検所見を含めて心筋症の合併がみられた．

点と考えられる．Marsdenは，遺伝性のMotor

この点に関しては本報告では省略した．）（2症例ともに，既往に心惇冗進があり，1例でNeuropathyを，筋萎縮の部位及び遺伝型により分類しているが，Kennedyらの例は，近位性脊髄文

献性筋萎縮症のTypeIIIに分類され，極めて稀な例

1）Kennedy，W．R．，Alter，M．1and Sung，J．H．：としている2！実際Kennedyらの症例と同様な報（1968）Progressiveproximalspinalandbulbar

告は，塚越3；Stefanis4！Schoenen5）などがみ

muscularatrophyoflateonset．asex−1inked

られるにすぎない．

recessivetrait．Neurology（Minneap．）．18：

私共の症例で注目すべき点で，従来の報告にみ671−680．

られなかった点は，肝脂肪変性，毛細血管拡張で2）Marsden，C．D．：（1975）Inherited neuronal

ある．ただ肝脂肪変性については，Kennedyらの

atrophy and degeneration predominantly of

報告した，唯一の剖検例の副所見として，肝脂肪lowermoterneurons．In：P．K．ThomasetE．

変性の記載がみられることを考えると，今後注目

H．Lambert（Red．），Peripheral Neuropathy，

していく必要があると思われる．

Saunders，Philadelphia，London，Toronto，Ch，

本症例における筋生検像では，神経原性変化が39：771−790．

主体であるが，両例共にKennedyらの報告と同

3）Tsukagoshi，H．，Shoji，H．andFurukawa，T．：

様に軽度の筋原性変化が加わってみられたのみで（1970）Proximalneurogenicmuscularatrophy

なく，Oilred O染色により，筋線維内に数多く

inadolescence and adulthoodlwith X−1inkedの脂肪滴の沈着が証明されたことが，肝脂肪変性

recessive inl1eritance・Kugelberg−Welanderの存在とともに重要な所見として指摘される．

disease andits variant oflate onsetinone

本例におけるCPKの増加など，筋障害を示唆

pedigree．Neurology（Minneap．），20：1188−

する所見の成り立ちに関して，Oilred O染色における脂肪滴の沈着か，何らかの役割を果してい4）Stefanis，C．，Papapetropoulos，Th．，Scarpale・る可能性は，十分推測しうる．また本症例の肝細ZOS，S．，LygidakisG．etPanayiotopoulos，C．

胞の変化と，筋線維内脂肪の沈着の増加を考え合

R：（1975）Ⅹ−1inkedspinalandbulbarmuscular

わせると，本症のBaseには，何らかの脂質代謝

atrophyoflateonset．J．Neurol．Sci．，24：493

異常の存在の可能性が疑われ，今後この点についての十分な検討が必要と思われる．

1193．

−503．

5）Schoenen，J．，Delwaide，P．J．，Legros，J．J．etFranchimont，P．：（1979）Motoneuropathieher6−

結論

ditaire：laformproximaledel（DKennedyらの報告した症例にほぼ一致した

adultelieeau

SeXe（OuMaladiedeKennedy）．J．Neurol．Sci．，

2例を呈示し， 女性化乳房，手指振戦，有病性痙ー70−

41：343−357．

12）特異な臨床型を呈したinfantile SPMAの1例

植

研究協力者

田

啓

嗣

畑

中

良

夫

山

下

正

郎

井

上

正

史

野

島

元

雄

は じ め に子も類似の神経症状を呈しているとのことである．

筋原性の筋萎縮である筋ジストロフィー症では，既往歴：16オの時，左脛骨を骨折し，2ケ月間ギ発症時期の違いで，先天型，幼児型，成人型と大プス固定をしていた．
現病歴：妊娠，出産は正常であったが，頸定は別され，それに筋萎縮型，進行度や遺伝様式が加生後1年と遅延し，独歩も2才で可能となり，脳味されて，現在6病型に分類されている．
一方，脊髄性の筋萎縮症にあっても，乳幼児期に性麻痺と診断されていた．そして，その後尖足，発症するWerdnig−Hoffmann病，成人型のDu・排腹筋の仮性肥大を来しながらも，10才頃まで成Chenne−Aran型，Vulpian−Vernhard型などは古

長し，学校は小学校6年生まで通学している．

くから知られているが，幼児期と思春期に発症す

しかし10才頃より，頸の前屈困難，上肢挙上困るKugelberg−Welander病が提示されて1），、また難，登撃性起立，動揺性歩行が現われ，16才の時，これら各病型相互間に関連のある整理分類の必要

左脛骨を骨折し，ギプス固定した時から歩行が不性が叫ばれるようになり2），また病因論的にも，能となっている．そして肥満が著明となり，また治療的並びに社会的な対策上でも，ある種の病型

頸部のほかに，肘，膝，足関節にも拘縮か現われ，は筋ジストロフィー症と関連性を持って考察が進

車椅子の生活を続けていたが，30才，項筋及び項められるようになっている．

敬帯の切維術のため愛媛大学整形外科に入院となった．

私どもは，乳児期に発症し，知能低下を伴ない，

入院時現症：身長160cm，体重72kgで肥満度33

近位筋優位の筋萎縮を来し，良性の経過をたどり，
四肢拘縮とともに強度の頸部拘縮を来した特異な％の肥満体である（図2）．泳柏は110／分でやや頻泳臨床型を呈したSPMAを経験したので，ここで報気味であるが，不整陳は認めない．血圧156−98mm−

告する．

Hg．肺肝境界は第4肋骨で横隔膜も少し挙上している．心雑音は聴取しない．腹部は膨満している症

ものの，肝臓，脾臓，腎臓は触知しない．

例

症例：30才の男．無職．

精神・神経学的所見：意識清明．知音削ま九・九が主訴：歩行不能と頸部の前屈障害

やっと，2ケタの足し算や引き算が不能で，読み家族歴：両親と曽祖父母が従兄妹結攻昏をしている

書きも仮名がやっとの状態である．感情はやや（図l）．また本症例の長兄は1オ6ケ月で感染症

euphorishである．

で死亡しているが，その時点でも首は坐らず，歩眼瞼下垂を認めず，瞳孔は正円同大で，光反射行が出来ていなかったという． 又，従兄弟の息は迅速，眼球運動，顔面筋運動も正常であった．
舌では挺出は直，萎縮を認めず，線維束性描手弱は認めなかった．

＊愛媛大学保健管理センター

上肢挙上は両側とも30度がやっとの状態である＊＊愛媛大学医学部整形外科

一71−

家

系

図

が，握力は両側とも20kg以上で，手の機能は保持されていた．そして起立並びに歩行が不能であった．
筋萎縮は肥満のために外見上目立たないが，筋力低下は類臥墳筋，肩甲筋，腰帯筋で著明であり，特に下腿部では仮性肥大は既に消失していて，筋萎縮は大腿部より顕著であった．また筋線維束性指摘は認めなかった．深部腱反射は上下肢で減弱ないしは消失し，病的反射は認められなかった．
知覚障害，運動失調，異常運動，膀胱直腸障害なども認めなかった．
関節拘縮は頚部，肘，隙，足関節で左右対称性に認められた．
検査成績：末梢血一般で赤血球581万，ヘモグロ
ビン16．0g／dlとややpolycythemiaの傾向を示す
以外，検尿，血清電解質，肝機能，血清学的検査に異常を認めなかった．なお血清CPK値が166u（正常＜90u），尿中クレアチンは607mg／日と軽度上昇していた．
内分泌検査ではTSH，T4，T3，尿中17−OHCS，
17−KSは全て正常域値を示した．しかし糖負荷試験
で50gブドー糖負荷後30分には血糖値が201mg／
dl，2時間値が198mg／dlと上昇していたが，インスリンも213u，320uとそれぞれ上昇し，肥満による糖尿病型を示した．
心電図は，洞性頻晩の上に，両室負荷の所見を呈したが，心筋変性の所見は認められなかった．

区12
図3 T．R．，30Y．0，Male Rt・M・TibialisAnterior−72−

ていた．peronealnerveの運動神経伝導速度は5こう

肺機能検査では肺活量1890m1，％vitalcapaci−

m／SeCで正常域値を示した．

ty48％と低値を示したが，時間肺活量は97・9％

筋生検所見：項筋拘縮整形術施行時採取せる頭で，典型的な拘束性換気障害の所見であった．
筋電図：左前腰骨筋の筋電図では（図3），安静

半妹筋のGomoritrichrome染色の200倍（図4，

時放電は認めず，最小随意収縮時に6mVのgiant

上）と100倍（図4，下）の新鮮凍結切片の組織像

spikeが出現して，最大収縮時のNMUが減少しでは脂肪とfibrosisの層の間に，比較的基本構築ていた．しかし一部lowvoltageの部分も混入しの保持された筋線維束が認められ，神経原性変化

図4 頭半妓筋
新鮮凍結切片Gomori trichrome染色上段×200，下段×100−73−

が伺えたが，強拡大にすると，筋線経の大小不同

報告し，生後8ケ月でなお頸走のみられないA群，や，型，染色性にも不揃が認められた．pH9．4の頸定，坐位保持，つかまり立ちまでは，ほぼ正常

ATPase染色ではtypel，type2ともに障害されに発育し，その後に独歩をしたことのないB群，独ていて，type特異性を認めなかった．

歩はしたものの，その後に発症しているC群の3型に分け，それぞれの特徴を挙げた（図5）5）．

考察

いま，ここで本症例で問題となる点を挙げてみ

本症例は知能低下を伴っている点，また仮性肥ると，大を伴っていたことや経過からみると，先天型や第1はその発症時期とその後の経過である．すDuchenne型の筋ジストロフィー症と似ていると

なわち頸定，歩行とも遅れているが，一応ある期ころがあるが，下肢遠位部の筋萎縮や四肢にみら間，歩行が可能であったこと，そして30才の現在れた冷感，軽度の血清CPKの上昇，それに筋電尚生存している点である．先の私どもの分類中の図や筋生検の所見からみて，乳幼児期に発症したC群のなかにはこの種症例も含まれている可能とみなされるSPMAかKugelberg−Welander病性もあるが，本症例の異常はすでに乳児期で気づとするのが妥当なものと考える．
SPMA，特に乳児期のSPMAはいくつかに分かれており，一応C群とは区別されるべきものと考える．

類されているが，Emeryらは，新生児期から発症

第2は家族歴である．経過は良性で，筋電図，するWerdnig−Hoffmann型のI型，歩行前に発筋生検や血清CPK値の態度からみると，Kugel−

症する中間型のⅠⅠ型，歩行以後に発症するKugel−berg−Welander病として矛盾するものではないが，．

berg−Welander病型のIII型に分類している3）4）．

本症例の兄をWerdnig−Hoffmann型と考えると，同胞内に悪性型と良性型が含まれていることにな

また私どもも1976年にinfantile SPMAll例を

図5Infantile SPMAll症例の臨床像
年

預

独

性
齢
A

B

C

′
」
ス
EL一 歩

発
症
年
齢
／

筋 萎 縮 部 位
上

肢

下

肢

P

D

P

D

Ⅰ 8M

女＿ −

Ⅰ
Ⅰ

6

男

十

＋

＋

ITI

10

男

＋

−

＋

Ⅳ

12

女

一
十

−

＋

Ⅴ

14

女

ー
ト

一
十

Ⅵ

20

男

＋

Ⅶ

8

女

＋

＋

Ⅷ

12

女

＋

一
十

Ⅰ
Ⅹ

15

女

＋

＋

2

Ⅹ

18

女

＋

＋

20

女

＋

＋

ⅩⅠ

−

仮
性
肥
大

（
＋） （
−） （
＋
） （
一） −

＋

舌

高

措

口

捕

蓋

＋■ ＋

登
撃
性
起
立
／

過

拘

展

縮

脊
柱
攣
曲

＋

−

＋

伸

同
胞
発
症
−

筋
電
図

十

ー

十

＋

＋

＋

N

＋

−

＋

＋

＋

＋

−

N

十

十

十

＋

−

N

＋

−

＋

十

≠

十

＋

＋

＋

−

N

−

≠

＋

＋

＋

十

＋

N

2

＋

≠

＋

＋

十

−

＋

＋

N

4

＋

≠

＋

＋

＋

＋

十

−

N

＋

＋

＋

十

＋

＋

一
十

＋

＋

＋

＋

3

＋

十

≠

8

＋

−

＋

−

＋

＋

＋

N：neurOgenic

−74−

＋

N

＋

N
N

るだろう．

策が必要である．

第3は私どもの過去の報告例11例は全例知能は正常であったが，本症例の知能は低く，この点，

文等しく知能低下のみられる先天型筋ジストロフィ

献1）Kugelberg，E．＆Welander，L．：Heredofamili−ー症との比較で興味のあるところである．

ar muscular atrophy simulating muscular

その他，肥滴傾向，拘縮傾向の強いことなども，従来のinfantileSPMAの報告例とは，また趣きを異にしている．

dystrophy・ArchNeuroIPsychiat，75：500，
1956．

2）Pearn，J．H．，Carter，C．0．＆Wilson，J．：The
geneticidentity of acuteinfantile spinal
まとmuscularatrophy．Brain，96：463，1974．

め

1．歩行不能と頸部前屈不能を主訴とした特異な
SPMAの男子症例を報告した．

3）Fried，K＆Emery，A．E．H．：Spinalmuscularatrophytype2，aSeparategeneticandclinical2．両親と曽祖父母は従兄妹結婚で，同胞と家系

entityfromtypel（Werdnig−HoffmanndiseaT

内に一人ずつ顆症者や盲いた．
3．頸定と処女歩行が生後12ケ月，2才とそれぞSe）and type3（Kugelberg−Welander disease）．
ClinicalGenetics，2：1971．

れ遅延していたが，10才頃まで成長し，16才でま4）Kloepfer，H．W．＆Emery，E．H．：Genetic

た歩行不能となった．進行は緩徐で，30才の現在

aspects of neuromusCular disease（spinalも生存している．

muscularatrophy）．

4．知能低下を伴ない，筋萎縮は上肢では近位部に，下肢で遠位部が優位であった．筋電図，筋生
検所見は神経原性を主としていたが，血清CPK値
は軽度上昇していた．

muscle．

Disordersofvolantary

3rded．，Walton，J．N．，London，1974，

p．870．

5）植田啓嗣，畑中良夫，西川光夫ほか：Infantile
SPMAll症例の検討．大阪神経・筋疾患難病研

5．SPMAでも筋ジストロフィー症類似の病型が存在しており，したがってそれぞれに適合した対ー75−

究会51年度報告書，大阪府，大阪，1976，p．61．

13）Distal Dystrophyの二家系

高

研究協力者

橋

桂」

後 藤 和 子

陣

内

研二

小

藤

田

拓

嶺

幸

弘

二

春

藤

文

子

男

肢にて消失，知覚障害なし．かなり全身的な筋萎は じ め にDistal myopathyは1902年Gowersによってこ縮を示し筋力テストの結果は左右革なく握力5kg，の名称が用いられて以来l），神経原性筋萎縮をも三角筋3十，上腕二頭筋4，上腕三頭筋3＋，手関

ふくめた種々の症例が報告されている．Gowersの節屈曲3＋，同伸展3＋，腸腰筋2，大腿四頭筋

報告例はmyotonic dystrophyの可能性があるが，2，大腿屈筋2，前脛骨筋2，排腹筋2，ヒラメ

1951年スエーデンのWelanderにより72家系249

筋2であった．
症例2：25歳女性．症例1の妹でう羊裁学校の教例の検討より，この病名が1つのentityとして確師．

立された．彼女の症例は常染色体優性遺伝で，40−60歳に手と足の小筋と指及び址の伸展筋の萎縮

現病歴は小学生の時には走るのが苦手であった．

にはじまり次いで手及び足の伸展筋群が侵され進

高校生の時には垂直跳躍が出来ず，18歳でつま先行の緩徐な疾患で2），血清CPKはあまり上昇しな

歩行が不能になった．23歳で下腿筋の萎縮が明らい．これに比し三好らは本邦例7家系14症例の検かになって階段昇降にも手摺を必要とするように討より常染色体劣性遺伝をとり，10−20歳台に下なった．52年8月当科受診．既往歴に特記するこ

肢末梢に初発し，進行性で，血清CPKは中等度とはない．現症は身長163cm，体重60．8kg，血圧に上昇を示すdistalmyopathyの存在を1974年に135／52，脈拍84／分整，胸部腹部異常なし，脳神経

報告し3），これをautosomal recessive distal dis−

異常なし．腱反射上肢低下，下肢で消失．知覚障

trophyとして位置づけている．ここでは三好らの害なし．筋萎縮は下腿屈側のみにみられ，握力は報告に一致する二家系を報告する．

右21kg，左23kg．上肢躯幹及び腸腰筋は筋力5，
大腿四豆自筋は4，大腿屈筋3，前脛骨筋5，俳腹筋2，ヒラメ筋2で左右差はなかった．

症例及び家系

図lに家系図を示す．父親と母方の祖母がいと症例1：28歳男性，無職．
主訴は上下肢の筋萎縮と脱力．現病歴は19歳よこ同士である．母親と弟達のCPKは正常であっ

り幅飛びが出来なくなり，22歳で階段昇降に手摺

た．表lに症例1及び2の検査結果を示す．兄にを必要とするようになった．23歳で下腿の筋萎縮

軽度の貧血がある．両者でtransaminaseの上昇に気付いた．24歳には上肢の筋力低下も加わり，がみられるが筋由来と考えられ，LDH

52年6月当科を受診した．既往歴では5歳でジフて，そのアイソザイムではⅤ分画が上昇している．

テリヤ，8歳で下顎の骨髄炎があり，15歳より精血清CPKは両者とも極めて高値で妹のCPKアイも上昇し神分裂症として薬物治療を受けている．現症は身ソザイム分析ではMM92．5％，MB4．1％，

長176cm，体重67kg，血圧140／84，脈拍96／分整，
胸部腹部異常なし．脳神経異常なし．腱反射上下3．4％であった．プレドニソロンテスト4）にてCPK

BB

は両者で上昇を示しdystrophic patternを示した．
クレアチン尿を認め尿中クレアチニンはやや減少＊神戸大学医学部第三内相している．筋電図ではlow amplitude，Shot dura−
−76−

表l
症
検 尿 ・検 便例・1

症例1と2の入院時検査所見症

異常 な し例症

2

異 常な し

例

1

症

例

2

C P K

31 90 m U ／m

3 0 10R BC

38 1 万 ／m m3

4 25 万血 清 ク レア チ ン

1．
4 喝 ／d ￡1．
4Hb

1 2 ．3 g ／d 月

13 ．
6

血 清 ク レア チ 二 ン

0．
6 喝 ／d 月

0．
6

6 2 2 咽 ／d a y

8 75

8 6 4 mg ／d a y

6 53

16 m 9／d 月

9Ht

3 5 ．4 ％39 ．2

一 日尿 中 ク レ ア チ ン量P La t e le ts

1 8 ．8 万 ／m m3

20 ．9

一 日尿 中 ク レア チ二 ン量6 80 0

B UN

W B C

4 60 0 ／mm 3

丁．P

7 ．0 g ／d 月

6 ．7

Na

13 6 m E q ／月

141

0．
46 （
0．
0 7 ）m 9 ／d 月

0 ．5 7 （0 ．1 3）

K

4．
2

4．
2

B iliru b in （直 接 ）
TT T

0．
8 ∪

1 ．0

C 月

73

蛋 白分画

10 2

95

A b

58．
5 ％

68 ．
3

G OT

106 K ．U

G PT

115 K ．U

63

α1

3．
3

1．
5

C hE

0 ．6 6 △p H

0 ．6 1

α之

7．
6

5．
7

A βp

1 ．O m M U

1 ．2

β

11 ．
5

10 ．
4

8 1 4 w u 一m戚

7 11

γ

17 ．
7

13 ．
8

A ／G

L DH

22 ．1 ％

18 ．5

1．
4

2 ．16

Ⅰ
＿Ⅱ

27 ．8

3 6 ．5lg A

3 36 m g ／
d J！

29 8

27 ．8

25 ．
7

lg G

14 49

1 3 02

Ⅳ

13 ．0

10 ．
5

tg M

1 24

2 10

Ⅴ

9 ．1

8．
7

Ⅰ

tionの混入，interferenceの減少を認めmyoge−
nicであった．心電図も両者共正常範囲にあった．
く家族歴〉

図2に症例2の左大腿四頭筋の生検の結果を示す．

血族結婚（＋） 父親と母方祖母がいとこ同士

図2のAはHE染色で筋線経の大小不同，硝子様痛く＋） 精神疾患（＋） 脳卒中（＋）

変性，脂肪変性がみられる．
modified Gomori trichrome染色では（写真略）
nemaline rod，ragged red fiberなどを認めなかった．図2のBはNADH染色でtypeI，typeIIの両線経の萎縮と変性がみられた．phosphoryla−
se染色でもfber typeに関して同様の所見がみられた（写真略）．
pH9．4，4．6，4．3におけるmyosin ATPase染
色でもtype atrophyは明らかでなかった．図2（00） （63）（）血清CPK償図l

症例1と2の家系図のCにpH4．6でのATPase染色のみを示す．図2のDに電星引象を示す．myofibrilの消失部位に
mitochondriaの増生と変形を認めるがその構造や封入体などの異常なくmitochondria myopathyは否定された．
−77−

図2 症例2の左大腿直筋の生検
A：HE染色，×160

B：NADH染色，×160

二；

C：ATPase染色，pH4．6

D：電蹟

症例1の左三角筋の生検でも略同様の所見がみ
Pedigreeられた．
症例3：図3に第二の家系を示す．発端者は35歳の女性で看護婦．両親がいとこ結婚である．姉と兄が幼時に感染症のため死亡している．現病歴は27歳よりつま先歩行が不能になり，漸次大腿筋の萎縮と弱力も現われ，歩行困難のため51年3月
当科へ入院した．上肢筋は概ね5，下肢筋力は大腿屈曲，伸展，外転いずれも左右共3＋，外転は2，膝関節屈曲は3＋，伸展は3−，足の底屈は2で左右差なく排腹筋，ヒラメ筋共に極めて萎縮していた．月井骨短筋及び豚骨長筋は3＋と低下，
後脛骨筋も2と低下を示した．これに比し前脛筋は5と正常であった．足長止の屈筋及びイ中筋群共5

図3で正常．短母址屈筋5．短及び長母址伸筋は4，
一78−

症例3と4の家系図

図4 症例4の右大腿直筋の生検
NADH染色，×100
ATPase染色，pH4．6

諾…

B：ATPase染色，pH9・4，×200
D：ATPase染色，pH4・3

血清CPKは1，349IU（MM98．4％MBl．6％，

値は興味がもたれる．40歳の姉は症状を欠くも259
IUと明らかな高値であり，母方の伯母（80歳）もBB O）．尿クレアチンは479mg／日．尿中クレア

87IUのやや高値（正常女性のCPKは5〜50IU）を

チニンは624mg／日．筋電図はmyogenic pattern．

示し，これらは保因者と考えられた．この伯母の心電図正常．大腿四頭筋生検で極めて著明な脂肪筋力は全身概ね4であったが下腿の筋萎縮は認め

変性像を認め細胞浸潤なし．

なかった．父方の伯母は56IUを示し，筋力は全身

長母址屈筋は3と低下していた．

概ね4であったが下腿筋の萎縮は認めなかった．

症例4：症例3の弟．52年1月診察時（29歳）
自覚症状はないが，つま先歩行不能，踵歩行は可考能で下腿屈側筋群の萎縮が認められた．血清CPK

察は3000IU以上．尿中クレアチンは10mg／dl，尿中以上の家系の検討よりこの疾患は常染色体劣性

クレアチニンは57．3mg／dl．筋電図は myogenic

遺伝をとり，男女ともに発症し，10−20歳台で下

pattern．右大腿直筋で行なった生検ではHE染色

肢遠位筋特に屈側筋群より発症して上肢に及ぶ及びtrichrome染色で筋線経の大小不同がみられ，

myopathyで，CPKはは相当に高値を示し，プレNADH，ATPase染色でtypeI，typeII共に萎

ドニソロンテストでもdystrophic patternを示す

縮変性像がみられた（図4A−D）．

ことが明らかになった．はじめにも述べた如く，

図3の家系図に併記した如く家族の血清CPK

この疾患はWelanderの報告によるdistal

−79−

myo−

pathyとは遺伝形式や臨床像で全く異なるもので臨床経過をみると下腿より発症するが病変は全身あり，三好らのいうautosomal recessive distalに及ぶ例もあり，これをdistal myopathyあるいdystrophyに一致するもので一つの独立したen−はdistal dystrophyと称ばない方がよいという意

tityと考えられた．遺伝性のdistalmyopathyは見もある．1945年Milhoratらは下腿よりはじま

常染色体優性遺伝をとり幼児期に発症する型と晩り大腿に萎縮の及んだ症例の報告にprogressive

発型（Welander型）が知られている．最近Mi1−

muscular dystrophy of atrophic distaltype

1erらはearly adult onsetのdistalmyopathyのる表現を用いている．遠位筋よりはじまる常染色孤先例を報告した5）．26−33歳で発症し，徐々に進

体劣性の進行性筋ジストロフィーであることは間

行し最初下肢を侵し，のち上肢を侵す点は我々の

違いない．

な

例によく似ている．その上血i青CPKも著しく高値を示す．筋電図ではfibrillationとpositivesha−

文献

rp waveがみられたが彼等はmyopathyに伴なう

1）Gowers，W．R．：Alectureonmyopathy and

二次的なものと解釈している．しかし彼等の例のadistalform．Br．Med．J．2：89，1902．

筋萎縮の分布は我々の例と異なり，遺伝歴も勿論

2）Welander，L．：Myopathiadistalisfardahere・ない．Markesberyらは同様血清CPKの高い

earlyadultonsetのdistalmyopathyの孤発例2例

ditaria． Acta Med．Scand．141：（Suppl．
265）：1，1951．

を報告し6），電顕と組織化学による検討を行なって

2）三好和夫，多田嘉明，岩朝 勝，ほか：Distal

いる．同時に家族歴のある一例も比較している．

myopathyの遺伝・臨床型．自験7家系14症例

その第一例は27歳男．20歳で発症し26歳頃には大とわが国文献例についての成績．臨床神経学，

腿の萎縮に気付いている（CPKl，178IU）．前脛筋

14：963，1974．

は4＋，月非腹筋は3＋で弱力の分布においても我

4）Takahashi，K．，Oimomi，M．，Shinko，T．，et々の症例に似ている．第二例は27歳男．19歳で発al．：Responseofserum creatine phosphokin−症Lsteppagegaitを示し（CPK5，415IU），足の背

ase tosteroidhormone．Prednisolone testfor

屈は3＋，底屈は3−である．これらの組織化学

musclediseases．Arch．Neurol．32：89，1975．

的検索では我々の症例でみられた如くtypeI，
typeII両線経の病変がみられている．これらはい

5）Miller，R．G

Blank，N．K．＆Layzer，R．B．：

Sporadic distal myopathywith early adult

ずれも孤発例として報告されているが常染色体劣onset．Ann．Neurol．5：220，1979．

性遺伝の完全な否定がなされねばならないであろ6）Markesbery，W．R．，Griggs，R．C．＆Herr，B．：

う．1ate onsetのWelander型のdistalmyopathy

Distalmyopathy：Electronmicroscopic andの組織化学的検索ではtypeIfiber atrophyが報

histochemicalstudies．Neurology

告されている7）．この点も我々の症例と相違するも1977．

のである．現在のところ類似の遺伝歴をもつ報告
例は欧米になく，上述の所見より

myopathy

27：727，

7）EdstrGm，L．：Histochemicaland histopath0−は10gical changesin skeletal muscleinlate−dystrophyと考えられ，三好らのいうautosomal

onsethereditarydistalmyopathy（Welander）．

recessive muscular dystrophyに一致する．但しJ．neurol．Sci．26：147，1975．

ー80−14）知覚障害を伴わない緩徐進行性遠位型
筋萎縮症について−神経原性病態を主とする5症例の検討を中心として

田 辺
研究協力者

松

原

四

＊

郎

尋 †
内

潟

雅

＊

信

は じ め に

野

沢

胤

美

表 臨床的車頂の要約

神経筋疾患の病態解明上，一般に症状発現部位症の特徴や進行度などは重要な要素となっている．

例病（KW）で遠位部の筋萎縮のめだつ少数の報告

年例があり1）2）3）4），一方Charcot−Marie−Tooth 病

発CV）がほぼ正常な例が知られている51これらの例は知覚障害を伴わない緩徐進行性遠位型筋萎縮

2

3

4

5

女

女

男

女

男

齢

43

22

26

28

29

齢

26

21

25

25

10

歴

（
−）

（
−）

（
＋）

（
＋）

（
＋）

害

（
−）

軽 度

（
−）

（
−）

軽度

70

155

209

10 6

265

80

40

52

50

46

50

測 定
せ ず

66

52

55

性

慢性脊髄性筋萎縮あるいはKugelberg−Welander（CMT）に知覚障害を欠き，末梢神経伝導速度（N

1

症

家

年
族

知

能

障

を呈する点で鑑別上問題となると共に，KWとC

C PK

MTの二病態についても何らかの関係を知る手掛（R o s a lk i 変 法 ）りともなりうるので，我々は実験例5例を報告した．

神 経伝導 速度（m ／se c ）ト m o to r

症

例

（N ．
t ib ia lis ）（表参照）（4 4 − 5 2 ）症例I N．Ⅰ．，43才，女性，無職．

ト S e n SO r y

主訴：四肢筋力低下．家族歴：特記事項なし．

（N ．
s u r a lis ）既往歴：24オ時に肋骨カリエスに曜患．現病歴：（5 3 − 6 3 ）26才頃より下肢がだるく，前に出にく く感じ，1
年後に指の力が入りにく くなった．31才で階段で手摺り使用，35才で杖歩行，37才でいざりとなった．入院時現症：一般所見；体格中等，るいそうあり．脈拍72／分，整．血圧140／90mmHg．貧血や黄痘なく，胸腹部異常なし．神経学的所見；意識清明，知能正常，脳神経に異常なし．四肢，躯
幹に筋萎縮があり（図l），四肢で近位より遠位に，上肢より下肢で障害が強い．巽メ犬肩甲を認めた．
＊虎の門病院神経内科

図l 症例1†沖中記念成人病研究所−81−線維束性攣縮なし．坐位保持に支持具を要し，寝Pedigree charts

返り不能．四肢の腱反射は総て消失し，病的反射

Case3

Case4．5

はなかった．知覚障害や明瞭な失調は無し．検査
成績：血算，血液生化学は血清CPK活性（Rosal−
ki変法・正常18−86単位）を含めて正常・その他の血液，尿，糞の諸検査も正常であった．髄液は水様透明で，圧，細胞数，蛋白，糖は正常．心電図および領椎レ線上著変を示さなかった．筋電図
では安静時放電なく，随意収縮でunit数の減少が

量叩t替
O Female．mt atfe⊂ted．4 5■ ● AHeCted．

あり，近位筋では筋原性の，遠位筋では神経原性

屈2rndIesiblings．
8 5sibL．ngS．nuleand ferTute．

の変化をそれぞれ示唆する所見を得た．NCVは上下肢で，運動性伝導速度（MCV）は正常，知覚性

図2

伝導速度（SCV）はやや遅延の傾向を示した．生
検を左上腕二頭筋，左排骨筋と左肺腹神経で行ったが，それらの所見は他の症例と一括して後述す筋と左脾腹神経の生検を行った．6年後の現在まる．

で，症状は緩徐進行性で，最近は杖歩行している．

症例2 M．Ⅰ．，22才，女性，店員．

症例4 Y．Kリ28才（昭47年入院時），女性，無職．

家族歴，既往歴に特記事項なし．約1年前より

家族歴：（図2）両親はいとこどうLで，弟（症

つまずきやすく，時に下月支が痛んだ．6ヶ月前より

例5）は同病に罷恩．既往歴：特記事項なし．現病

階段で手摺り使用．入院時現症：四肢，特に手内歴：25才頃爪先立ち困難に気づき，27才よりつま筋と下腿筋に萎縮と筋力低下があり，爪先立ち不ずきやすくなった．その後歩行が徐々に遅く不安定

能で，動揺性歩行を示した．知覚障害なし．軽度になった．入院時現症：四肢遠位部に比較的限局の知能障害が疑がわれた．検査成績：血液ではCした筋萎縮と筋力低下があり，症状は下肢に強い．

PKが軽度上昇を示した以外著変なし．筋電図は大J建反射はアキレス腱反射が消失している以外正常

腎筋と前月里骨筋で神経原性変化を示した．右脛骨に保たれており，病的反射なし．知覚障害は認め

神経のMCVはやや低下の傾向を示した，WAISなかった．検査成績：血i青CPK活性が軽度に上知能検査で言語性IQ68，動作性74，全検査で63と昇している以外血液検査上異常なし．筋電図は上魯金屯であった．左排腹筋と左上腕二頭筋で生検を肢の一部の筋で筋原性変化がみられたが，前脛骨行った．

筋等の下肢筋では神経原性変化を示した．NCVは症例3 M．S．，26才，男性，会社員．

右膝腹神経のSCVが正常下限を示したが，その他の家族歴：（図2）長兄が類似の疾患に罷息して上下肢のMCV，SCVは正常であった．左大腿外いる．既往歴に特記事項なし．現病歴：約1年前

側広筋，左膝骨筋と左肺腹神経を生検した．7年

から脚がはった感じで，左脚をひきずるようにな

後の現在，患者は短下肢装具と杖を使用して歩いり，また左下腿が細くなったことに気づいた．入ている．

院時現症：四肢特に遠位部の筋萎縮と筋力低下があり，上肢より下肢の障害が強かった．知覚障害

症例5 R．H．，29才（昭54年入院時），男性，会社員．
家族歴：症例4の弟．既往歴：特記事項なし．

なし．検査成績：血算，血液生化学的検査はCPK

現病歴：子供の頃（10オ頃）から転倒しやすく，が軽度に増加を示す以外は正常範囲内．筋電図上，

体育は不得意だった．28才頃から歩行が遅くなり，大多数の筋で神経原性変化を示したが，右手の第周囲から歩き方が変だと指摘された．入院時現症

一背側骨間筋で筋原性変化を認めた．NCVは上：軽度の知能障害が推定された．筋萎縮の分布と下肢で運動，知覚とも正常．右前頸骨筋，左肺骨

1建反射は症例4と同様で，知覚障害なし．検査成−82−

続：血算，血液生化学ではCPK活性が265単位

類似していたが，程度には大きな差があり，症例（isoenzymeはMMlO0％，MB，BBはみられな

1では中等度，3と4では軽度だった．有髄線経かった）と軽度増加を示した以外正常．筋電図はの数は減少し（図4・ノI三），問質は開大して線維化

随意収縮でunit数の減少を示し，神経原性変化ががみられたが，Onion bulb formationはみられな

膵骨筋などで，筋原性変化が腕榛骨筋で，両方の変化が前脛骨筋でみられた．NCVは上下肢で．運かった．髄革削は脱落と膨化を示し，症例1では明動性，知覚性ともに正常であった．WAIS知能検

断裂，内部の空胞形成が畦々の程度に認められた

査では言責吾性73，動作性74で，全得点73と魯鈍で（図4・右）．

瞭なmyelin球が形成されていた．軸索には膨化，あった．左前腰骨筋より生検した．
病理組織学的検索方法

筋生検標本はParaffin切片と凍結切片を作製し，前者はHE染色，後者はHE染色に加えて，trichrome変法，PAS反応，DPNH−TR活性，phosporylase活性，LDH活性，SuCCinic de−hydrogenase活性，myOSin ATPase活性（pH9．4）の組織化学的検索を行った．症例1，2，5で電顕的に観察した．神経生検材料はparaffin切片で，HE，髄鞘染色と塗銀染色を行った．症例1は電顕的にも観察した．
結果

5例の生検筋における変化はその程度に差異がみられたが，性質は互いに類似していた．
仝例で筋線経の横径は著しい大小不同を呈した（図図33）．萎縮線経の一部は小角化線経で，小型から中型の規模の群集を形成するが，一方，一部の線経

症例4 左豚骨筋trichrome変法
撮影倍率 ×200

は円形化した輪郭を有していた．これらに伴いendomysiumの関大がみられ，問質に線維化と脂肪浸潤を認めたが，血管に著変をみなかった．個々の線経には，中心核の増加，空胞変性，Split fi−
breが高頻度にみられた．trichrome染色で紫色に染るmyelin様物質が一般的にみられた．DPNH−
TR活性像では萎縮線推内の濃縮現象があり，他の線経の一部で軽度のSubsarcolemmalhypera−
Ctivityがみられた．fibre typeについて特異的な変化はなかった．電顕では筋線維内の種々の変性所見が観察されたが，中でも空胞形成は高頻度かつ大規模で，しばしば内部にmyelin figureを含んでいた．mitochondriaの筋斡下での集積が一般的にみられ，症例5の一部の筋線維内では長方形の結晶様封入体を含むものがあった．

図4

末梢神経の変化の性質は生検を施行した3例で−83−

症例1 左肺腹神経
左はKB標本（×100）右はBodian（×400）

考察性のi昆在に加えて種々の特異な変性像を認めた．

NCVが一部で軽度の遅延を示すことは本シリー

末梢神経の病理変化は症例によって程度に差があズの症例が，CMTに近い病態を含んでいる可能

ったが，軸索と髄鞘の両者の変化が観察された．

性を示唆する．DyckとLambert5）によるCMTCMTやKWと比較して若干の考察を加えた．

の分類中，知覚障害のめだたない病型としては，
文

neurOnal typeと脊髄性進行性筋萎縮症のCMT
typeの2つがあるが，前者は優性遺伝，後者は非

献1）Magee，K．R．：Fami1ialprogressivebulbar−

家族性であり，この点発現形式から常染色体性劣Spinal muscular atrophy．Neurology（Min−性遺伝が最も考えられる本シリーズの症例と必ず

neap．），10：295，1960．

しも一致しない．末梢神経の病理学的変化はCM

2）Meadows，J．C．＆Marsden，C．D．：A distal

Tのみでなく，KWでも記載されている1）6）．本シ

form of chronic spinal

リーズにおける各症例は，これらにみられた末梢Neurology（Minneap．），19：53，1969．

muscular atrophy．

神経伝導速度および病理学的変化をCMTとKW

3）Meadow，J・C・，Marsden，C．D．＆Harriman，の中間的な所見と解釈すれば，或種の変性疾患のD・G・F・：Chronicspinalmuscularatrophyin

SpeCtrumの一部，例えばCMTとKWの移行的な

adults・Part2．Otherforms．J．Neurol．Sci．，

病態として把握されることも可能だと思われる．

9：551，1969．

今後も同様の症例の検索を通じて，これらの病態が明らかにされることが望まれる．

4）塚越 腐：Kugelberg−Welander病．筋肉病学（豊倉康夫，里吉骨二郎編），南江堂，東京，
1973，p．643．

まと5）Dyck，P．J．＆Lambert，E．H．：Lowermotor

め知覚障害を伴わない緩徐進行性遠位型筋萎縮でand primary sensory neuron diseaseswith

神経J京性病態を主に示した5例（女3，男2；年

peronealmuscularatrophy．II．Neurologic，

令22〜43才）を報告した．3例は家族性で，常染

genetic，and electrophysiologic findingsin

色体性劣性遺伝が示唆された．10〜26才時に下肢Variousneuronaldegenerations．Arch．Neu−

より発症し，2例に軽度の知能障害を伴った．血rolり18：619，1968．

清CPKは正常ないし軽度上昇，筋電図上は神経
J京性と筋原性の混在を示した．NCVは運動性，

6）山本耕平，武上俊彦，伊藤不二夫，ほか：Kugeト
berg−Welander syndromeの2症例にみられ知覚性とも大多数の測定で〔正常であったが，一部

た，いくつかの稀な徽候について．神経研究のに軽微な遅延を示した．筋生検で神経原性と筋原進歩，19：172，1975．

ー84−

15）筋萎縮症の症候発現部位特異性に関する検討
一一側下肢に限局する筋萎縮症9症例を中心として−

田

研究協力者

日

、予†

辺

内

渇

雅

信

松

原

野

沢

胤

美

塩

沢

四

郎

瞭」

脱力が加わり，2年後には遂に車椅子生活を余儀

的筋ジストロフィー症を含む神経筋疾患の病態解なくされるに至った．筋萎縮・筋力低下は一側下

釈上，症ノ院発現部位特異性は1つの重要な要素で月支のみで，区日に一部の症例を示したが，他例もある．その検討の一環として，筋萎縮の分布に注

ほとんど同様であり，またその分布には一定の傾

目し，表題の如き特異な症例群を経験したので報向がない．凹足は2例にみられた．深部反射につ告する．このような検討は筋ジストロフィー症のいては，患側下肢のPTR・ATRが7例で低下な病態を解明する上で貴重な示唆を与えるものと考いし消失し，残る2例は正常範囲にあった．一方，えられる．

息側の上肢および他側の上下肢の深部反射にはい
ずれも著変を認めなかった．知覚については，1
対象・方法

例（症例7）の恩側下肢外側に軽度の異常知覚・

最近5年間に経験した−側下肢にほぼ限局して知覚鈍麻を認めた以外異常なく，全体として知覚筋萎縮のみられた9例につき，臨床的検討ならび障害に乏しいといえる．特異な所見として，症例に息側下肢における生検筋の組織学的・組織化学8で患側の膝宿動脈の閉塞が認められた．この原的検索を行い，合わせて他疾患と対比した．

因として，動脈硬化性，Buerger病などを疑い検討したが不明であった．なお遺伝性はなく全例孤結果発性と考えられ，またポリオの既往もない．

臨床所見（表t）検査所見（表l）

年令は29オより60才（平均43才），性別は男6例，患側下肢で行った筋電図については，症例9で

女3例で男性にやや多い．患側については右4例，

軽度筋原性パターンを示す以外他の8例は全て神左5例でほとんど差がなく，また利き手（足）と経原性変化で，かつそのうち4例では他側下肢にの関連もない．発病様式に関しては，歩行中の突然の脱力に始まる症例8を除く他の7例はいずれ性と考えられるも，筋電図上一部に両側性障害をも同様な傾向を示した．つまり，臨床的には一側も潜行性に発症し，その症状は表lに示す通りで示す例の存在することが指摘される．この神経原ある．以後の経過は前述の症例8のみが進行性で，性所見は，放電数減少，多相性電位，持続時間の他の8例については長くて4年間観察しているカミ

延長および高振巾電位よりなり，その程度は症例

ほとんど変化がなく停止性と考えられる．症例8

によって種々である．末梢神経伝導速度（患側下は例外的で初診1年後に他側下肢，衰いで上肢の月支）は7例に行われた．脛骨神経のMCVが2例で明らかに低下し，別の2例は正常下限にあり，＊虎の門病院神経内科

そのうち1例で排骨神経の活動電位を得ることが†沖中記念成人病研究所

できなかった．血清CPK値は5例で明らかな高
一85−

表l
症

年

患

息

側

下

臨床所見のまとめ肢伝 導 速 度 m ／父 C

（下 肢 ）

腰神神 経 仮性48 ．
7

神 経 原性51

骨経

初 発症 状筋 蔑 乳 左下

P T R
A T R

左

下 腿 のや せ下 肢 全 体

正

低下

−

29男

左

妓

行

下腿に強 い

低下 消失

−

3

60女

右

垂

足

下 肢 全 体低下

正−H ltl】
佃Ij）

4

33 男

左

下肢のやせ

下

正

正

−

神経原性
（両 側 ）

39

5

56男

左

脆

行

下 肢 全 体低下 低下−

神 経 原性

44

6

36男

右

脱

力

下 肢 全 体正−神 経 原性（両 側 ）

736 男

右下 肢 外 側し び
れ

下（下 肢 外低 下 消 失 十 側知 覚
低下 ）

神経凰性

45

8

4 9女

右

脱

力

下 肢 全 体低 下 低下−神経原性（両 側 ）

37

9

50女

左

下 肢のやせ下 腿 に強 い

正

−

筋 原 性

例

性

側

1

38 男

2

腿

腿

・ 知見 障＃消失

正血清C P K髄
活性腹 （R o sa lk i 細 胞 数
経 変法）

筋 電 図

神経原性

排
神
／

48

蛋 白
m g ／d l

3 ／3

34

OPLL
（L 1−2 ）

107

1／3

84

正

1 18

4 ／3

86

L巨5
棺狭少

81

上
l／3

37

90

2／3

24

正

496

1 ／3

38

正

87

29 ／3

43

正

176

1 2／3

68

正

42

5 ／3

77

／
∫
12

46
導

出
不能

ミエ ロ
ク ラ
フ ィー

10 4

／

撃

︑＋一書一11tltt⁝言■1．．一．．．．一一−−1−LF㌃苧婆あ∴仁∴︑∵H十善等

ノ・図l 各症例の筋萎縮部位を示す
a：症例1（左），b：症例5（左），C：症例2（左），d：症例8（右）．
−86−

液値を示したが，その多くは軽度である．髄液所見展性変化を主とする症例1−7，神経原性変化＋筋では軽度の細胞増多1例，蛋白増加4例を示した．

炎像を示す症例8，およびtypeIIatrophyを示す

ミエログラフイーを含むレ線学的検索では，2例

症例9に区分した．
まず，症例1−7については，ほぼ共通した所に表lの如く軽い異常を認めたが，程度は軽く，また障害レベルに一致しない．なお，血液，尿そ見として，大小の群集萎縮（図2a，b，症例2，の他の一般検査には特記すべき異常は認められな

3，4，6，8），小角化線経の散在（図2a，症例

かった．

1，2，3，5，6，7，8）などが認められた．

筋生検所見

一部には，非萎縮線椎田＝こ点々と散在もしくは群筋病変から9例を便宜上3群，すなわち，神経集して存在する極度の萎縮線維（図2a，症例2，

図2 神経原性変化主体（症例1〜7）の排骨筋生検像a（症例2）：群集萎縮，′ト角化線経の散在，非萎縮線経の肥大・Splitting，中心核および非萎縮線維間に点在する極度の萎縮線維（一部群集）を示す．（HE xlOO）
b（症例3）：大小の群集萎縮を示す．非萎縮線経の一部は横断面円形化し肥大傾向にある．（HE xlOO）
C（症例1）：DPNH−TR活性像でfiber type groupingを示す．（×200）d（症例3）：DPNH−TR活性像でtargetoidfiberを示す，なおfiber type分別は不良．（×200）−87−

図3 症例8の筋生検像（a，bは大腿四頭筋，Cは排腹筋）
a：著明な大群集萎縮を示す．（HE xlOO）
b：DPNH−TR活性像でtypeI atrophy（一部群集）を示す．（×100）
C：筋線経の変性・壊死，問質の線維化 血管壁の肥厚，血管周囲の円形細胞浸潤などが認められる．
（HE x200）

図4

症例9の排骨筋生検像
a：筋線経の著明な大小不同を示す．（HE xlOO）
b：typeII atrophyを示す．（myosinATPase染色×100）

一88一5）も観察された．その他，中心核（図2a，症例ができる．筋萎縮性側索硬化症，脊髄性進行性筋

1，2，6），肥大線維（図2a，b，症例1，2，萎縮症などの運動ニューロン疾患については，臨3，6，9），横断面の円形化した線維（図2b，床経過，病変分布，筋病変よりこれも鑑別可能で

症例1，2，3，6，8），筋線経のSplitting（図ある．運動ニューロン疾患のなかでも特殊な例と2a，症例2）などの所見が症例によっては明瞭にして著しい非対称性を示す例の報告2）があるが，認められた．これらは上述の神経原性所見に混在

この場合下肢のみならず同側上肢にも病変が及んした筋原性所見である．組織化学検索では，種々でおり著者らの症例とは異なるようである．また，の変化を示し，例えばtargetoid fiber（図2d，症

ポリオに関連した運動ニューロン疾患類似の病態

例3，6），fiber type grouping（図2d，症例1，に関しては，ポリオの既往のないことだけでは完

2，4，5，8）などであり，いずれも神経原性全に否定し得ないにしても，臨床症状，経過など
よりほぼ鑑別されると考えられる．Kugelberg−

所見とみなされる．
症例8では，先に述べた動脈の閉塞部位の近位

Welander病については，一側下肢にこれほど特筋（大腿四頭筋）は症例1−7とほぼ同様な所見

異な分布を示す例の報告は著者らの調べ得た限り（図3a，b）を示すのに対し，その遠位筋（排腹筋）みられない．しかし臨床経過および筋病変（筋原はこれとは全く異なり，筋線経の変性・壊死，問性所見の混在など）は本症例群と共通するところ質の線維化，血管の肥厚およびその周囲の円形細がある．CharcoトMarie−Tooth病については，発胞浸潤など筋炎に一致する像（図30）を呈した．

病初期の一時期，−側下肢のみに留まることも稀

症例9は，HE染色で筋線経の著明な大小不同（図ならずあるという記載3）もあるが，引用文献がな

4a）を示したが，組織化学的検索から，この所見

く詳細は不明である．その他，文献的には著者ら

はtypeIIatrophy（図4b）によるものと判断さの症例に類似したものとして安藤らの報告4）があれた．なお，炎症および神経原性変化を示唆する

る．彼らはその報告で血管運動神経障害の徽候（皮フ温低下など）を特徴の1つにあげCharcot−

所見は認められなかった．

Marie−Tooth病との関連を論じているが，我々のシ考

リーズではこれらの症状はみられなかった．しか案

以上呈示した9症例のうち，最初の症例1〜7し，その他の点では極めてよく類似している．以は臨床的にもかなり共通しており，次のようにそ上の如く，この7例は既知疾患とは病像のかなりの特徴を述べることができる．すなわち，成人に異なる特異な症例群であり，独立した疾患の可能

発症し，緩徐進行性ないしは非進行性の経過を示性もあるが，それについては今後なお症例を蓄積す，一側下肢に限局した神経原性筋萎縮症の孤発例群である．なお，臨床的には一側性であるが，し検討しなければならない．なお，上肢，下肢の違いはあるが，平山の筋電図検査から両側性障害を示す例も一部にみら

前腕に限局する筋萎縮症5） の病像とは共通するれた．筋病変は神経原性変化を示したが，そのう

ところが多く興味深い．

若年性，非進行性の手・ち大群集萎縮あるいは極度の萎縮線経の散在（一次に，症例8は種々の点で先の7例とは異なっ部群集）などの所見は特異であり，先に著者の1ている．例えば，経過は明らかに進行性で，かつ人が報告1）した如く，これらの所見は前根を中心

神経原性とは別の筋病変（筋炎像）を示した点なとした神経病変（radiculopathy）を示唆するもの

どである．しかし，動脈閉塞の近位で再検した筋と考えられる．

生検所見はこれら（症例1−7）と非常によく類さて，この7例の神経筋疾患における位置づけ似しており，上述の筋炎病態の共有はこの血管病および既知疾患との鑑別について考察すると，ま変に関連したものとみなす事も可能である．従っず脊椎を中心とした整形外科的疾患は，臨床症状，て，進行性の経過を示したことについては，血管筋病変およびレ線学的検査などから除外すること

病変に関連した病態が更に加わったためと解されー89−

得るが，それとは別に本質的に症例1−7とは異生省「神経疾患研究委託費」筋ジストロフィー

なる進行性の神経原性筋萎縮症である可能性も残病の病因に関する臨床的研究，第二珪（三好班）

されている．

昭和53年度研究報告書，p．102，1979．

第3の症例9については，臨床像が前述の7例

2）古川哲雄，井原康夫，高須健次，豊倉康夫：著に類似するにも拘わらず筋電図はこれらとは異なしい非対称性を示し，経過の緩徐な非定型的運る筋J京性所見を示した．この筋原性変化の病因と動ニューロン疾患．神経内科，1：555，1974．

して，既往に慢性関節リウマチを有し，筋生検上3）De．Recondo，J．：Hereditary neurogenic

typeIIatrophyを示したことから慢性多発性筋炎

muscular atrophies（Charcot−Marie−Toothの可能性をあげることもできよう．

disease）．In Handbook ofclinicalneurology（edited by Vinken，P．J．＆Bruyn，G．W．），

結語

NorthTHolland，Amsterdam，1975，Vol．21，p．

以上，9例は必ずしも同一病態とはいえないが，

271．

既知疾患との鑑別は困難であり，特異な筋萎縮分布を示す示唆に富む症例群として提示した．

4）安藤一也，飯田光男，高城晋，渡辺英夫，祖父
江逸郎：主として若年者にみられる手袋状及び長靴下状の筋萎縮症．日本医事新報，No．1981，

文

献p．21，1962．

1）田辺等，野沢胤美，内潟雅信，塩沢瞭一，原満：

5）平山恵造：若年性，非進行性の手・前腕に限局

諸孝重神経筋疾患の筋病変におけるfibertype異する筋萎縮症−38症例の観察−．臨床神経学，

常とmotorunit内局在病態との関連について．厚12：313，1972．

一90−16）脊椎運動制限，TypeI筋線維萎縮中心核を呈する先天性ミオパテー
＊

pll
．∈≡三．

研究協力者

倉

康

夫

北

村

久美子

高

津

成

美

清

水

輝

杉

田

秀

夫

夫

栗

崎

博

司

Rigid spine syndromeは，脊椎前屈制限を伴なく，又fasciculation，myOtOniaも認められず，ったミオパテーとして，Dubowitzl）〜4）が報告した

腱反射はすべて著明に低下していた．脊椎についが，我々は脊椎運動制限を呈し，本疾患と思われては，生理的攣曲の消失，軽度の側腎を示し，高る症例を経験した．しかも本症例は，筋生検上，度の前屈制限，中等度の側屈制限を認めた．後屈中心核を伴ったTypeI筋線維萎縮を示したので，制限はない．又他の関節の運動制限は認められな

本疾患とTypeI筋線維萎縮について，検討を加

かった．

えた．

検査所見：血清CPKは1048IU／L（正常値24−

症例 24歳，女性．

140）と高値だが，CRP，RA等は陰性であった．

主訴：歩行障害，脊椎運動制限．

糖負荷試験，筋阻血試験，内分泌学的諸検査はす

家族歴：神経筋疾患なし．

べて正常であった．骨Ⅹ線では，先に述べた脊現病歴：出産および処女歩行等の乳児期の発育

椎の攣曲異常の他に異常を認めず，髄液所見はは正常．幼児期に，歩行が不安定で，よく転倒し正常であった．筋電図では，全体にlow amplitu−

た．その後歩行は安定したが，7歳頃から，やせde，Short duration，pOlyphasic NMUを認めた．

が目立ちはじめ，又走るのがきわめて遅くなった．

大腿四頭筋の筋生検では，HE染色（区＝）で，学業成績は普通．14歳頃，全身倦怠感，易疲労感，小径化した筋線経が目立ち，その多くは中心核を筋痛出現し，階段の昇降が困難となる．16歳頃，呈していたが，myOtube様構造は認められなかっ

動揺性歩行，頸部前屈筋力の低下がみられ，脊椎た．Gomori−Trichrome染色で，Opaque様fib−

前屈制限を指摘された．17歳頃，登撃性起立出現

erが散在性に認められたが，問質の増生はみられ

し，CPKの軽度上昇を認めた．20歳頃，爪先立ちず，nemaline rodもみられなかった．ATPase染不能となり，CPKの高値を呈したが，ステロイド

色では，TypeI筋線維萎縮が見られた（図2）．

治療は無効であった．

筋線維直径のヒスト

グラムでは，TypeIIBはほ

入院時現症：一般内科的には特に異常を認めず，

ぼ正常範囲にあるが，TypeIはIIBに比べ小径

神経学的には，知能は正常で，上肢帯筋を主とす化が著明であった．TypeIIAは軽度肥大傾向をる上肢近位筋，及び骨盤帯筋をはじめとする下肢示した．TypeI筋線経は全体の32％，TypeIIA，
JIBはそれぞれ31％，37％で比率はほほ正常であっ全体の，軽度から中等度の萎縮を認めた．筋力は，頸部前屈筋群，胸鎖乳突筋，上肢近位筋，特に三た（図3）．尚，筋線経の壊死，細胞浸潤等はみら角筋の軽度筋力低下，又下肢近位筋，特に大腎筋，れず，Oil−redO，PAS染色で，沈着物質は認め

大腿屈筋の中等度筋力低下を認め，Gowers sign

られなかった．電顕的には，筋原線経の変性が，が陽性であった．外眼筋，顔面筋，球筋は異常が萎縮線経に少数みられたが，glycogen，lipidの増加は特にみられなかった．

＊東京大学医学部脳研神経内科

ー91−

図l

大腿四頭筋生検所見 HE染色×100
小径化した筋線経が目立ち，さらにその多くは中心核を呈している．

図2

大腿四頭筋生検所見 ATPase染色×100
左pH9．4，右pH4．6
TypeI 筋線経の萎縮が認められる．

−92一

これらの報告の中で，組織化学的記載のあるのはHistogram of Fiber Diameterの報告した2例が，本例と同様のTypeI筋線維萎縮を示している．このことから，本疾患と，Ty−peI筋線維萎縮との関連が示唆され，きわめて興味深いと考える．

0302︵盲∈＼♯︶Sαu巴L LO∝山口≡⊃Z

3例で5）〜7），そのうちSeayら5），及びGoebel ら6）
K．Ⅰ．24yrs．F B642

表I
DifferentialDlagnOSisofTypelFiberHypotrophyl．MyotorHC dystrophy

20

40

60

2．Nemaline myopamy

80

3．Myotubdar myopathy

FIBER DIAMETER

4．Typel nerhypctrophyvnthcentralrucreI

1−

3
2
■

4

・

﹂●■▲T
3 9 3 1
4 8 0 4−

B
H3755862727

2
3

図3

A
J
†
軒別6645035

1

Fiber Proportion（％）
Mean Diameter（FL）
Variability Coefficient
At「ophic Factor
Hypertrophic Factor

5．Congemtal¶ber typedspropomon
6．R・g厄sp・ne Synかome
7．P01ymyos拍S
さ．RheLmnatOld即thHtis
9．Prolonged汀nmO出目zat・0n due to contractwe

lO．qycogen orlipd StOrage dlSeaSe
日．Cereb釧ardseaSe．Werd川g−Hof†mamdseaSeetC・Histogram of fiber sizesin amuscle
biopsy（Quadricepsfemoris muscle）
TypeII Bfiberの径はほぼ正常範囲であるが，TypeI fiberの著明な小径化，TypeII A
fiberの軽度肥大傾向を示す．比率はほぼ正常である．

表2【RigidSpine Syndromeの報告例）
A uthorD u b o w itZ

璧竺 巴廷 吏考A g e S ex
（19 6 9 ） 2 0 y

M

8 y

M

同

上

10 y

M

同

上

（19 7 7 ） 18 yM

1 （19 7 7 ） 16 y

M

（19 7 8 ） 15 y

M察

R ig id S p in e S y n d ro m e

R ig id S p in e S y n d ro m e
A ty p e l fLb e r m y o p a th y

旦廻

TypeI筋線維萎縮は，一部の筋疾患，腰原病，

F ib e r t y p e d iSP rO P O rt io n
ln th e r■g■
d sp■
n e S y n d ro m e

D u b o w jtz

筋拘縮，神経疾患等に認められる（表l）．しかし，

7
G oto et at

本例においては，myOtOniaもなく，筋生検にて（19 7 9 ） 16 yFM

R ig id S p in e S y n d ro m e
同
上
同

上

nemalinebody，myOtube様所見もない．脊椎前屈制限を示す本例の特徴的な臨床像からは，COnge−
結

nitalfiber type disproportionあるいはtypel

論

我々は，臨床的に，脊椎前屈制限，近位筋優位

fiberhypotrophywithcentralnucleiも考えにく
く，又腰原病を思わす所見もなく，筋拘縞もない．

の筋萎縮，筋力低下，CPK高値を呈し，筋生検従って，我々はrigid spine syndrome

上，中心核を伴ったTypeI筋線維萎縮を示す，に伴った

rigid spine syndromeと考えられる症例を経験しTypeI筋線維萎縮を考えた．
Dubowitzが，脊椎運動制限，側攣，肘関節拘絹た．さらに，本疾患の報告例8例中，組織化学的記載のある3例のうち2例に本例と同様のType等を伴う，比較的進行の遅いmyopathyをrigid
Spine syndromeとして報告して以来，これまで

I筋繰維萎縮がみとめられることから，本疾患と8例の報告があるlト7）（表2）．本例も，関節拘絹TypeI筋線維萎縮との関連が示唆されると思わを除き，臨床的にきわめてよく似ている．さらに，

れる．
ー93−

文

献

pp．368−371．

1）Dubowitz V：Some unusual neuromuscular4）DubowitzV：RigidSpine Syndrome．Major

disorders，inWaltonJN，CanalN，ScarlatoG

Problemsin ClinicalPediatrics，1978，VOl．

（ed）：Muscle Diseases．Proceedings of anInternationalCongress（May19−21，1969，5）SeayAR，Ziter FA，PetajanJIJ：Rigid

Milan）InternationalCongressSeriesNo．199，
Amsterdam，ExcerptaMedica，1970，pp．233

SpineSyndrome．A Typel Fiber MyopathY
ArchNeurol，34：119−122，1977．
6）Goebel HH，Lenard HG，G6rke W et al：−238．

2）Dubowitz V：Recent advances

16，pp．239−243．

inneur0−

muscular disorders．RheumatoI Phys Med
ll：126−330．1971．

Fiber type disproportionin the rigid spine
Syndrome．Neurop畠diatrie，8：467−476，
1977．

3）Dubowitz V，Brooke MH：Rigid spine7）GotoI，NagasakaS，NagaraH，KuroiwaY：

Syndrome，inMuscle Biopsy：A Modern

Rigid spine syndrome．J NeuroI Neurosurg

Approach．London，WBSaundersCo，1973．

Psychiatry−94−

42：276L279，1979．

17）Ragged red fiberとVaCuOlar cIlangeを認めた
distal myopathyの1孤発例

中

研究協力者

西

孝

雄

尾 崎 行

金

澤

一

郎

出

吉

田

妃

明

水

干

は じ め に練にもかかわらず，下肢の脱力が進行してきたた末梢型の筋原性筋萎縮症はdistalmyopathyとめ，昭和53年10月，精査・治療のため入院した．

総括されており，家系例については，すでにいく
つかのまとまった報告がある．欧米ではWelan−

入院時現症：一般身体所見には特記すべきものは

der（1951）の例に代表される常染色体優性遺伝を

能正常，眼瞼下垂・眼球運動障害なく，視力・視示すものが1つのClinicalentityとしてあげられ野・眼底ともに正常だった．顔面筋や胸鎖乳突筋ているが，本邦では三好ら（1974）が常染色体劣の萎縮はなく，囁下障害・舌萎縮もなかった．筋性遺伝型式を示し，従来の欧米例と異なる病型を力低下が，上肢では上腕二頭筋・上腕三頭筋にご報告している．

く軽度みられ，下肢では遠位筋群に強く認められ

今回，我々は，下肢遠位部の筋力低下・筋萎縮なかった．神経学的には，意識清明，大脳高次機た．筋萎縮は上肢にはほとんどなく，下肢で遠位を呈し筋生検にて空胞変性とragged red fiber

部優位に中等度みられた．線維束攣縮・感覚障害とを認めたdistal myopathyの1孤先例を経験しなく，深部反射は四肢でほとんど消失していた．

たが，家系例に比して孤先例の報告は数が少なく，錐体路障害・小脳症状・膀胱直腸障害は認めなか

さらに組織学的に空胞変性とragged red fiberった．

を有する症例は稀であるので，ここに報告する．

入院時検査成績：血算・生化・血清・血糖・検尿・検便・胸部Ⅹ線・心電図などの一般検査には異常症

例なし．甲状腺機能・尿中170HCS・17KS正常．

患者：36才，男性．自動車販売．

抗核抗体・抗DNA抗体陰性・血中の鉛・亜鉛定量正

家族歴：血族結婚（−）．家系内発症（−）．
既往歴：昭和45年から約6年間，亜鉛・クロムな

常．クロム・鋼・ニッケル・水銀・批素・コバルトを用いたpatch testによる皮膚反応は全て陰性．CP

どの重金属を扱う仕事に従事していた．アルコー

K207．7U（正常0〜90U）．尿中クレアチン334

ル少量．糖尿病（一）．

mg／日．脳脊髄液；初圧125mm H20，採液6ml

現病歴：昭和51年11月（33才），検診でCPK高値

后，終庄100mm H20．Queckenstedt現象陰性．

を指摘され，この頃より徐々に四肢の筋力低下を

水様透明で蛋白60mg／dl，糖48mg／dl，細胞数7／3／

自覚しはじめた．筋力低下は歩行時の脱力感が主

mm3単核球のみ．筋電図；上肢では正常，下肢で体やあり，下肢に初発したものと思われた．昭和は前脛骨筋・排腹筋に著明な筋原性変化．末梢神

52年1月，フォークリフトに接触転倒し，骨盤骨

経伝導速度は，MCV；尺骨神経59．4m／sec，膵

折にて約6カ月入院した．以来，リハビリによる訓

骨神経42．5m／SeC．SCV；排腹神経46，8m／sec．
左肺腹筋で施行した筋生検では，HE染色で著＊筑波大学臨床医学系神経内科

明な筋線経の大小不同・中心核が見られ，fiber
ー95−

えた．

Splitting，phagocytosis，neCrOtic fiber などのほか結合織の増生も見られたが，炎症所見は認め

distalmyopathyの家系例は，1951年Weland−

られなかった．これらの中に空胞を有する小径線
経が散在性あるいは小群をなして存在し，空胞周erl）が72家系249例の詳細な報告を行って以来，常染色体優性遺伝を示す1群としてとらえられてい囲にbasophilicgranuleの集合が認められた．こるが，本邦ではこれに対して三好ら（1974，19772））

れをGomori−Trichrome染色で見ると，赤紫色が常染色体努性末梢型筋ジストロフィー症なる新の顆粒ないし糸屑様に見えるところから，これら

しい病型を提唱した．Welanderの例が常染色体の線経はいわゆるragged red fiberの範噂に入る

優性遺伝をとり，主な筋萎縮が手にあり，その小ものと考えられた．NADH−TR染色像では，こ手筋に初発し，発病年令が40−60才と高令であるれらの異常線経は全体に浪染し，空胞の部分に酵のに対し，三好らの例では，遺伝型式が常染色体素活性は認められなかった．ATPase染色でも同劣性で，筋萎縮が下肢末梢に始まり下腿に強い点様の空胞として認められたが，これらはtypeI，で異なり，多くは10代後半〜20オ代と若年発症でtypeIIの両者に見られ，わずかにtypeI fiber

ありCPK上昇例が多い．三好らの示した病型は，に多かった．PAS染色は陰性であった．電顕では従来の欧米例にはない本邦独特の臨床病型である

筋原線維内にfilamentousな構造物は見られず，と考えられている．
孤先例の報告（表1，表2）は欧米では25例みミトコンドリアの形態ならびに量的な異常はなかとられ，発病年令は3−59才で20才台党症例が多い．

顆粒

初発症刃犬の部位は下肢に始まるものが若干多いがったが，空胞内には，いわゆるmyeloid body呼ばれる膜様構造物が見られた．glycogenの集積はなかった．

Gowers，Navi1le，Moyaの例では，顔面筋・舌の萎縮，胸鎖乳突筋欠損を伴っている．またMi−考

ller3）の例は，若年発症で下肢脱力で始まりCPK察

本症例を特徴づける所見をまとめてみると，1）の著明な上昇を伴っており，孤先例であることを33才頃，下肢の脱力で発症．2）緩徐な進行．3）

除けば，三好らの報告した症例と臨床像がきわめ

上肢にほとんど障害なく，下肢遠位部の筋力低下・て類似している．

筋萎縮が主体．4）CPK高値．5）筋電図で筋原

本邦における孤先例の報告は自験例を含めて19

性変化．6）筋生検上，著明な筋原性変化に加え

例（男13例女6例）で発病年令は15〜45才で20才て空胞変性を有するいわゆるragged red fiber

代に多く，下肢に初発するものが圧倒的に多い．

を多数認め，電顕で空胞内にmyeloid bodyがみ

CPK値は正常2例のほかは全て軽度〜中等度の上られる．7）孤発例．が，あげられる．すなわち

昇を示している．胸鎖乳突筋欠損が黒岩ら，鬼頭

本症例は，若年発症で進行が緩徐な下肢遠位部優らの例にみられるほか，眼瞼下垂を伴うものが佐位のmyopathyである．

々木らの1イ札 森脇ら，角田らの例にみられる．
空胞変性は，Moyaの1例，Millerの1例，室遠位部優位のmyopathyとしてはmyotonic dy−
StrOphy・distal typeのpolymyositis・distal

根ら4三佐々木らの2例，三好ら5；水沢らの2イ札

myopathyがあげられるが，myOtOniaを欠く点でそして自験例にみられ，本邦家系例の報告でも鹿myotonic dystrophyは否定される．また血沈冗進

井ら（1971），森ら（1972），出田ら（1973）の1例，がなく，囁下障害や顔面・預吾に・近位筋の障害を山口ら（1974）に記載がある．ragged red fiberの伴わず，組織学的に炎症所見を欠くなど，いわゆ

記載は我々の調べえた限り，1例もみられなかっるdistaltypeのpolymyositisとも異なっている．

た．

さらに限瞼下垂・眼筋麻痺などもみられず，Kea−

空胞変性は，周期性四肢麻痺，SLE，タロロキ

rnsrShy症候群とも臨床像を異にしている．最終ン・ビンクリスチンなどによるtoxic myopathy，的には，distalmyopathyの範疇に入るものと考

SterOid myopathy，glycogen storage disease−96−

表I distal myopathy孤先例（欧米例）報

告G ow e rs者症（190 2 ）例男

発病 年 齢

初発 部位

空胞変 性

1 2歳

足→ 手

7

下

7

S p i11er（190 7 ）24 歳

B a tten（19 10 ）3歳

N a v ille

（1923 ）

W a lto n（1954 ）

M oya

（1960 ）

6例

男 ＜ 30 歳

男 1

女 5

女 ＞ 4 0歳

男

2例

2 1， 23歳

男

22 歳

女

50 歳

肢

下 肢→ 手

7

下肢

7

前腕

足

下

肢

手

男

59歳

H uhn

（196 6 ）H a llen（196 6 ）

男

2 2歳

手

（
−）

C eron i（196 6 ）

女

17 歳

？

7

M a rk esb ery（1977 ）

M iller（1979 ）

19 〜 46 歳

2例
3例男

−

手

胸 鎖乳 突筋 欠損

近 位筋罷 息（19 62 ）女

顔 面 ・舌 の 筋 萎 縮（−）

B a rrow s

男麻 疹后 発病

顔 面 ・舌 ・頸 部 の 筋 萎 縮

57歳

3例

胸鎖乳 突 筋欠損

（
＋）

女

足

顔 面 ・舌 の 筋 萎 縮

近 位筋 罷息（19 60 ）指考？

D a h lg a a rd

手

備

（
−）

（
−）

指

19 ， 20 歳

下肢26，29 ，33 歳

下

肢

ト）

C P K 高値

1 例（＋）

C P K 高値などの疾患でもみられることが知られているが，

1ike filaments を認めた例も，臨床像は本症例に

本症例ではこれらの原因疾患は考えられない．De−

類似しているがCytOplasmicinclusionがみられ

nny−Brown（1960）の提唱したVaCuOlar myopa−

ない点で否定的である．本症例の電顕でみられた

thyは多発性筋炎の1型と考えられており予后不

myeloid bodyは一般にミトコンドリアの破壊産良の進行性疾患で，本症例とは異なる形であると物，小胞体よりの産生，SeCOndarylysosome

な思われる．また，Carpenters（1970）の示した著

ど，さまざまな解釈があるが，いずれにしても非明な空胞化と燐脂質の沈着，筋原線維内のVirus−

特異的変化と考えられている．

ー97−

表2 distal myopathy孤先例（本邦例）
報

告

者

症

例

発病 年 齢

初発 部位

空 胞変 性備考室

根（19 63 ）

男

20歳

下肢→ 手

（
＋）

C P K 正常黒岩

（19 63 ）

男

21歳

足

（
−）

胸鎖 乳突 筋欠損

平山

（1968 ）

男

15歳

上下 肢

（
−）

近位 筋罷 息友松

（19 69 ）

男

38歳

下肢→ 手

（
−）

C P K 正常土屋

（19 69 ）男

20 代 後 半

足→ 手

（
−）

佐 々木

（19 69 ）

男 3例

35歳

手 ・足

（
−）

26歳

下

（
≠）

肢

（
＋）
4 5歳

眼 瞼 下 垂 ・囁 下 障 害
顔面 筋力 J

M CV l村井（19 70 ）

男

32歳

下

肢

（
−）

三

好

（1970 ）

女

27歳

下肢→ 手

（
≠）

R o d lik e b o d y （
＋）

鬼

頭

（1972 ）

男

21歳

下

肢

（
−）

胸鎖 乳突 筋欠 損

村

上（1975 ）

女

19歳

下

肢

（
−）

下肢 仮性 肥大′ト

田（1976 ）

男

16歳

足

（
一）

森

脇

（1977 ）

女

30歳

限瞼 下垂

（
−）

眼 瞼 下 垂 ・顔 面 筋 力 J

皆内（1977 ）

男

30歳

足

（
−）

心拡 大

水

沢

（1978 ）

女 2例

26 ， 26 歳

角田（1979 ）

女自験 例（1979 ）

男

下

肢

（
≠）

21歳

上下 肢

ト）

眼瞼 下垂

33歳

下

（
＋）

ra g g ed red fib e r ∈）肢

ragged red fiberは，元来Kearns−Shy症候群

結にみられる異常な筋線経をさすもので，ミトコン

語

33才頃，下肢の脱力で発症し経過が緩慢な下肢

ドリアの形態・数の異常によって生ずると考えら

遠位部主体のmyopathyの1例を呈示し，孤党型れていたが，最近ではこのほかに，筋線維内の脂distalmyopathyとして文献的考察を行なった．

肪の増加，筋小胞体の異常などでも生じうるとさ本症例でみられたragged red fiber・空胞変性はれており，非特異的変化であると考えられている．

いずれも非特異的変化ではあるが，両者の共存は

以上のように本症例で認めたraggedredfiber，
空胞変性はともに疾患特異ノ性に乏しいと言わざる

きわめて稀であり，今后症例の集積により検討を加える必要がある．

を得ない現状ではあるが，これらの変化がdistal
myopathy

文の症例に共存していた点はきわめて稀であり，本症例の特徴と考えられる．両者の共存の意義については今后症例を集め検討する予定で

献1）Welander，L．：Myopathiadistalistardahere−
ditaria．249examinedcasesin72pedigrees．

Acta Med．Scand．，141：（Suppl．265）：1，

ある．

1951．

ー98−

distalmyopathyの1例．臨床神経学，3：387，

2）三好和夫：常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症Autosomal recessive distal muscular
dystrophy．日本臨床，35：3922，1977．

1963．

5）三好正堂：筋線維内に著明な空胞変性および梓

3）Miller，R．etal．：Sporadicdistalmyopathywith状体（Rod・like Body）を認めた孤莞性Distal

earlyadultonset．Ann．Neuro1．，5：220，1979．

myopathyの1例．臨床神経学，10：111，1970．

4）室根郁男：Distal myopathy−Non−hereditary−99−18）胃切除後に有病性筋痙撃を呈した1成人例
古

研究協力者
症

川

哲

雄

黒 岩 義 之例

56歳男性，右きき（日赤医療センター

神 宝 知 行

すなわち両上下肢，下顎筋，腹筋すべてを含んだ
79−

194−24）

家族歴：高血圧症，脳卒中で死亡した者が少なくない．

既往歴：第2次世界大戦後，シベリアで捕虜として2年間の飢餓生活をおくり，夜盲症を伴う著しい栄養失調症を経験した．長い飲酒歴があるが，1969年（46歳）胃十二指腸潰瘍に対してBillroth
II法の胃切除術を受けた．それ以来，甘い食べ物
や脂肪の多い食品，乳製品を食べるとすぐ強い嘔気が生じ，それらを見るだけでも嘔気をもよおす

有痛性筋収縮発作が起り，約3時間持続したため，
当センターに入院の運びとなった．
入院時現症：脈拍数84／分整．血圧180／90．両下
腿や両前腕の軽度脱毛と前頭部脱毛．骨格筋の発達は良好で筋肉質の体格．左大胸筋や両側上腕三頭筋，大腿四頭筋など近位部を中心として筋線維束攣縮を認める．左上肢近位筋に軽度の筋萎縮と筋力低下．四肢深部反射の冗進．知覚正常．頸部運動制限なく，頸部の運動痛を認めず．腹部に胃切術時手術創．
入院時検査所見：ようになった．この傾向は最近，特に著しく，こ1）血液検査：血清総蛋白 5．8g／dl（正常6．5−の5−6年間，それらをほとんど食べていない．

8．0g／dl）血清Mg2．3mg／dl（正常2．5−3．5mg／dl）安静時の血清CPK15mU／ml（正常20〜75）
運動負荷後の血清CPK1771mU／ml．
以下に挙げる諸項目はすべて正常であった．血清Ca，P，副甲状腺ホルモン，Cu，Fe，血算，血沈，甲状腺機能検査，肝機能検査，腎機能検査，
血清IgG，IgA，IgM，IgD，IgE．血清vitamin
Bl，B12，E．葉酸．血清Na，K，Cl．

このような事は胃切除以前にはなかったことである．下痢はない．なお1975年以降，高血圧症を指摘されている．
現病歴：鉄筋組立工として肩に鉄材をかついだ
りする筋肉労働に従事していたが，胃切除4年後にあたる1973年頃から，6月から10月にかけての
暑い時期になると，力仕事をしている最中に左上肢の筋肉が緊くつっぱ1）痛くなる現象に気づいた．次第にこれは両上肢に起るようになり，一旦，
これが起ると有痛性筋けいれんは1−3時間持続し，仕事を中断せざるを得なくなった．この時には筋肉の膨隆が実際に外から見られ手で感じることができた．1976年頃から，筋肉労働に従事すると毎日のように有病性筋痙攣が起き，両上肢のみ
ならず両下肢にも起るようになった．時には腹部の筋肉に起ることもあった．1979年7月21日の早朝，仕事をしていなかったにもかかわらず全身に，＊日赤医療センター神経内科

2）血清学的検査：CRP（−），RA（−），STS（−）
抗核抗体（−）．
3）尿・便検査：尿Creatine排泄75mg／day（正常10−50mg／day）以外は正常．
4）髄液検査：正常．
5）消化吸収試験：D−Ⅹylose排泄試験正常．
I131−Trioleneテスト；2時間0．8％，4時間9．6％，
6時間9．3％（正常：3〜6時間値が約15％）50
gm−ブドウ糖負荷試験；FBS84mg／dl，30分値
169，60分値106，90分値82，120分値58，150分値
65，180分値78（図I）．
6）放射線学的検査：頭蓋骨レ線正常，頸椎レ線−100−

でOSteOpOrOSis，上部消化管造影及び小腸追跡検
査でBillrothII法のanastomosisが証明され，小腸像は粘膜の萎縮を示唆する所見を呈した．大腸
造影正常．CTスキャン正常．
7）内視鏡検査：食道；正常．胃；残胃粘膜の萎
縮．大腸；正常．
8）阻血前腕運動負荷試験：血中乳酸値の上昇が正常に認められた．
9）筋電図：随意筋収縮時に四肢の全被検筋で多相性高振幅電位が記録され，特に左上下肢では最
50

60

90

でIHEIⅣ120150

大収縮にてdischargeの数の減少を認めた．運動
神経伝導速度は正常．

180

HIⅣUTES10）筋生検：正常組織像．

図150グラムブドウ糖経口負荷試験

NEUROセⅣSCⅥAR D工SORDER f−0Ⅰ一10W工NG

OUR CASE

甜IF田村，J・C・＆qU工CK，D．T．
CASEI CASE2

AGE／SEX51凹

65万■ANASTOHOS工S

B．Ⅰ工．

B．工工．

ONSET Of− SY肝TOHSGASでRECTO附

CASE3

CASE4

75モー
B．工工．

0．5Y．13．5Y．18Y．

cASE5

60F

53T

B．工Ⅰ．

B．工．

14Y．

0．5Y．

AFTER SURGERYFASCICULATIONS

＋十

十十

十

＋十

十

＋

十

十

十

十

＋

＋

十

十

十

十

mJSCLE WE脳ESS＆ATROPHY

DENERVAT工ON

AT E．H．G．
冨USCLE CRAMPS
BULBAR SIGNS十十WEIGIiT LOSS＋DIARRHEASTEATORRHEAREDUCT工ONIN
SERtm HAGNESIUM＋

REDUCTIONIN
SERtm 工RON
REDUCTIONⅠNXYLOSE EXCREで工ON

表I Neuromuscular disorder followinggastrectomy

ー101−

十

＋

考

察

た．著者らは，最近，前述の自験例とは別に，64

胃の主要な部分を切除する事が術後に様々の代

歳男性で52歳の時，胃切除術を受け，その後に下謝性変容をきたすことが知られている．dumping

痢と体重減少をきたし，58歳頃から四肢の有痛性筋痙攣を呈している症例を経験した．自験例2例

症候群，OSteOpOrOSis，OSteOmalacia，などが胃切後におこることが諸家により記載されている1）における有痛性筋妻室撃の原因は不明であるが，脊しかし，胃切後に生じる神経学的合併症の記載

髄前角細胞群の異常な興奮によるものであることは稀である．1950年にAsk−Upmark2）は胃切後が推察され，何らかの代謝異常が根底にあるものに遠位筋の萎縮と深部反射の冗進を呈した症例と考えられる．

を報告し，1964年にはEkbomら3）は胃切後に近位筋の萎縮とOSteOpOrOSisを呈した症例を記載している．1969年にはKniffen and Quick4）が筋萎

文献

1）Haubrich，W．S．：Sequelaeofgastricsurgery

縮，筋力低下，体重減少を呈する5例の胃切後患

forpepticulcer．In

者を報告しているが，表lに示すごとく，自験例

edと共通点が少なからず認められる．すなわち，全

Philadelphia．1963，Vo1．1，p．702．

例に筋線維束攣縮，筋電EqでのDenervationの所見が見られるが，なかんずくKniffen and Quick4）の5例のうち3例に，

muSCle cramps〟

が記載

by

Gastroenterology，（edit−Bockus，H．L．），W．B．Saunders

Coリ2）Ask−Upmark，E．：Amyotrophiclateralsclero−
Sisobservedinfivepersons after gastric re・
SeCtion．Gastroenterology，15：257，1950．

されている点が注目に値する．舌の筋線維束攣縮，3）Ekbom，K．，Hed，R．，Kirstein，L．et al．：

言語障害，えん下障害などの延髄症．状がKniffen

Weakness of proximallimb muscles，prOba−

and Quickの5例中2例にみられるが自験例には

bly due to myopathy afterpartialgastrecto・

認められなかった．消化吸収機能に関しては，体my．Acta．Med．Scand．，176：493，1964．

重減少，下痢，脂肪便，血清Mg低下，血清Fe4）Kniffen，J．CリQuick，D．T．：Neuromuscular

低下，D−Xylose排泄低下などが表lの如くみらdisorder following gastric resection．Arch．

れる．自験例における血清Mgの低下は興味あるIntern．Med．，124：336，1969．

所見であり，消化吸収障害の重要な証拠と考えら

5）Vallee，B．L，Wacker，W．E．C．，Ulmer，D．D．：

れる．Ⅴalleeら5）は，5例のMg欠乏に起因する

Themagnesium−deficiencytetany syndrome

テタニーを報告している．全例とも小腸吸収障害

inman．N．Engl．J．Med．，262：155，1960．

や慢性アルコール中毒による栄養障害を伴ってい−102−19）筋緊張性ジストロフィー症における
睦子L異常について

井

村

裕

夫

西

谷

＊＊＊

＊＊

研究協力者

大 井 長 和
北

真

裕

岡

本

佳

子

奥

田

隆

幸

＊＊＊

＊＊＊

森

行

弘

＊＊＊＊

は じ め にの距錐に指標を．提示して単眼にて固視させた非対筋緊張性ジストロフィー症（以下本症と略す）

称性幅鞍を行なわせて，固視眼の瞳孔運動を記録

は，常染色体優性遺伝で発現するmultisystem

した．分析項巨＝ま，潜時，1／2縮瞳時間，光刺激後disorderとして知られている．また，本症は横紋の変化面手引直及び最大縮瞳速度の計4項目とした．

筋のみならず平滑筋1）も障害部位として含まれる．

また，本症患者に認められた瞳孔運動異常に対し

白内障，網膜変性及び追従運動異常などの多彩なての薬剤効果を知る目的で，diphenylhydantion

神経眼科的所見2）−3）・4）をも示す．私達は，本症患者（DPH）6）を1日150mgを7日間投与し，その前後の瞳孔運動機能を赤外線電子瞳孔計5）を使用してで計測した．

計測するとともに，瞳孔運動異常を定量化することによって，本症の薬剤応答性を調べた．

結

果

l）潜時
対

象

30代以降の正常人の値は，261．29±17・．16nlSeC

正常人19名（10代7名，20代7名，30代以上5であり，本症患者の値は252．40±12．60Ⅰ鴨eCであ名）及び中等度から高度の重症度の本症患者5名った（M土SD）．両者間に有意の差が認められなかった．

（30代1名，40代3名，50代1名）の瞳孔運動を調
べた．

2）l／2絹睦時間
方30代以降の正常人の値は294．63±37．801TBeC法

で，本症患者の値は316．64±29．05IlちeCであった

浜松テレビ製の双眼イリスコーダ（HTV−C831）を用いて，暗順応15分後に，午後1時〜4時の間（M±SD）．両者間に有意の差を認めなかった．

に測定した．直接対光反射の瞳孔運動は，角膜受3）光刺激後の変化面積値
30代以降の正常人の値は23．66±4．85mm2であ

光面1401uxの照度で1秒間の光刺激を与え，各眼5回ずつ施行した．相接は，単眼の眼前約10cm

り，本症患者の値は14．15土2．19mm2であった（M土SD）．両者間の差は有意であった（図I，P＜0．05）．

＊京都大学医学部第二内科＊＊国立療蚕所宇多野病院神経内科

4）最大絹瞳速度
30代以降の正常人の値は52．80±6．50mm2／sec＊＊＊大阪北野病院耳鼻咽喉科＊＊＊＊大阪北野病院眼科

で，本症患者の値は29．78±2．14mm2／secであっー103−

く絹瞳量（直接反射）〉

た（M±SD）．本症患者の最大縮瞳速度は，有意に遅かった（図2，P＜0．05）．1／2縮瞳時間は，正常人と本症患者で有意差を認めないことから，最大縮瞳速度の減少は，変化面積値の減少によると考えられた．
5）DPH投与前後の最大縮瞳速度
DPH経口投与1．50mg／day7日間を試みた4例
中1例のみが有意な最大縮瞳速度の改善を示した（図3，P＜0．05）．最大縮瞳速度の改善を示さなかった3例も，手指のミオトニーは，改善傾向を認めた．
6）非対称性福車奏時の最大絹睦速度本症患者5例とも，セミダークルームでの理学的検査にてlight−near dissociationを示した．非対称性編棒と直接対光反射の最大縮瞳速度の解離を認め，上記の理学的所見を支持した（図4）．

10−

20−

正常人

30−

A B C D E

筋緊張性
ジストロフィー症

くDPH投与と最大相瞳速度〉

図l 本症患者の絹瞳量は，正常人より有意に小さい

く最大縮瞳速度（直接反射）〉

B

C

D

E

筋緊張性ジストロフィー症患者
10−

20−

正常人

30−

図3

A B C D E

筋緊張性
ジストロフィー症

図2 本症患者の最大縮瞳速度は，正常人より有意に
遅い
ー104−

DPH投与にて症例Bのみが，最大縮瞳速度の改善を示したことが知られている．性格変化，知能低下9）を示

く対光反射と轄按反射の解離〉す症例が多く，軽度の脳波異常10）を認める症例も（直接対光反射）ある．また剖検例の視床の神経細胞内に好酸性の

左Il孔
一﹂

封入体11）を多数認められた症例もある．双眼イリスコーダーを使用した瞳孔運動の定量化は，本症の中枢神経系の病変の把握と経過観察に便利な方法であると考えられる．
まとめ

筋緊張性ジストロフィー症患者の瞳孔運動異常（非対称性轄懐）は，紹瞳量の減少による最大縮瞳速度の低下であり，DPHは一部の症例にしかこれの改善を示さなかった．本症では中脳病変によると思われるlight−near dissociationを認めるが，脳のCT−SCanでは中脳に異常所見を認めなかった．

・＿・∴

…

■￣￣￣￣一文献1）Harvey，J．C．，Sherbourne，D．H．＆Siegel，C・

図41ight−near dissociationを示す

I．：Smooth muscleinvoIvementin myotonic
dystrophy−Am．J．Medリ

考

39：81，1965．

2）Harper，P．S．：Myotonic dystrophy．W．B．

察

今回検査した本症患者の全例で，瞳孔は正円形

Saunders，Philadelphia，London，Toronto，

で極めて軽度の瞳孔不同しかなく，コカイン点眼

1979，p．150．

で両眼とも同程度の散瞳を示したので，括約筋固3）Thompson，H．S，，Van Allen，M．W．＆Von

有病変と毛様神経節病変は考えるのが困難である．

Noorden，G．K．：The pupilin myotonic

また視力視野に著変がなく，潜時の延長がなくか

dystrophy．Int．Ophth．，3：325，1964．

つ1／2縮瞳時間の短縮を示さなかったことから，

4）Von

透光体異常7）や網膜病変が，light−near dissocia−

Noorden，G．K．，Thompson，H．SリVan

Allen，M．W．：Eye movementsin myotonic

tionの原因とは想定しにくい．以上から，本症患

dystrophy．Int．Ophth．，3：314，1964．

者に見られた1ight−near dissociationの責任病巣8）5）東野差世子，平田英差子，木村 徹ほか：双日艮は中脳と推定された．しかし，CT−SCanにて全例とも異常所見を中脳に認めなかった．

赤外線電子瞳孔計，双眼イリスコーダーについて．日限会誌，80：946，1976．

DPHは中枢神経系に作用するので，中脳病変に6）Roses，A．DリButterfield，D．A．，Appel，S・H・，

基づくと思われる最大縮瞳速度の改善を期待して

et al．：Phenytoin and membrane fluidityin

使用したが，4例中1例しか有効ではなかった．

myotonicdystrophy．Arch．Neurol・，32：535，

無効例でも，手指のミオトニーの改善が見られた

1975．

ことは，最大縮瞳速度の低下の発現機序が，ミオ7）Lowenstein，0．：Clinical・pupillarysymptoms

トニーと異なるとの考えを支持する．私達も，瞳inlesionsoftheopticnerve，Opticとhiasm，and

孔に反復光刺激を施行したが，ミオトニー様現象

optictract．A．M．A．Arch．Ophth．，52：385，

を瞳孔運動に認めなかった．

1954．

本症はその障害部位として，中枢神経系を含む−105−8）WoIsh，F．B．＆Hogt，W．F．：Clinicalneuro一Ophthalmology．3rded．，Williams＆Wilkins，

ditary myopathy．J．Neurol．Neurosurg．

Baltimore，1969，p．507．

Psychiatry．，28：109，1965．

9）Adie，W．J．＆Greenfield，J．G．：Dystrophia

11）Wisniewski，H．M．，Berry，K．＆Spiro，A．J．：
UltrastruCture Of thalamic neuronalinclusi−

myotonia．Brain，46：73，1923．
10）Barwich，D．D．，Osselton，J．W．＆Walton，J．
M．：Electroeneephalographicstudiesinhere−−106−

onsinmyotonic dystrophy．J．Neurol．，Sci．，
24：321．1975．

20）神経筋疾患におけるFreeze−fracture法
による筋細胞膜の形態学的研究

荒

木

研究協力者

豆叔

郎

岡 本 定 昭進行性筋ジストロフィー症（以下PMDと略）の病因の1つとして患者赤血球及び筋肉の膜異常が形態学的及び生化学的面から注目され，本症がsystemicmembranediseaseである可能性が示唆されるようになってきた．
私共も昭和52年の班会議総会において患者赤血球を走査型電顕で観察し，対照群に比して患者赤血球が変化しやすいことを報告し，険異常の可能性を論じた1）．さらに細胞膜の変化をより詳細に検索する目的で昭和53年より神経筋疾患患者より得られた生検筋を対象にFreeze−fracture法を用いた電顕で形態学的に検索し，同年の姓会議総会におい

図l上Duchenne型のparticle

図l下Controlのparticleてその一部を報告したが，その後さらに症例を増やし検討し，若干の知見を得たので報告する．
対象

すべて生検筋を用い，その内訳はPMD群5例（Duchenne型2イ軋

肢帯型3例），運動ニューロン疾患（MND）5例，筋疾患のない患者8例（小児2例，成人6例）より外科手術中に得られた筋を対照とした．すべての筋はできるだけ同一条件下で採取を行った．
方法

生検筋を2．5％グルタールアルデヒドで固定後，30％グリセリンで処理し，真空蒸着装置を用い，液体窒素で約−1100C，2−8×10JJJTorrの真空下で割断を行い，白金パラジウム，カーボンを用

Duchenne型ではCOntrOlに比Lparticleの減い蒸着し，ブリーチを用い処理し，400

少がみられるメッシュ＊宮崎医科大学第三内科

一107−

に切片をのせ，乾燥後通過型電顕を用い検索した．
検索方法としてはprotoplasmicsurface（P面），
extracellular surface（E面）をat randomに

10〜20ヶ所ずつ1p平方あたりのparticleの数を数え，PMD群，MND群，対照群で比較検討した．
結果

1）Duchenne型PMD2例のP面の平均pa−
rticle densityは61±17／pm2で2例の小児対照群
では268±19／pm2であった．E面のparticle den−sityはDuchenne型PMD27±12／pm2，小児対照

図2上Control

図2中

MND

図2下

し−G型

群169±12／〃m2であった（図1，表日．
2）肢帯型PMD，MND，成人対照群で比較すると，P面の平均particle densityは肢帯型PM
D258±22／FLm2，MND268±20／pm2，成人対照群
272±16／FLm2，E面の平均particle densityは肢帯型PMD151±14／pmZ，MND176±21／pm2，成人対照群171±15／〟m2であった（図2，表2）．
3）各病型群と正常対照群とを比較すると，
Duchenne型PMD群では小児対照群，成人対照群，肢帯型PMD群，MND群に比し，明らかにP面，E面共に平均particle densityの減少がみられた（表3）．

表l Particle Density per Square Micron on
Muscle Plasma Membrane

RESULTS（1）DUCHENNE

CONTROL

Age P face E face Age P face E face6
73土18
（N＝20）31土13

15
249土19（N可3）

184土11547土15（N＝20）

23土15

7
（附6）

2糾土19

154土14268土19169土12

Mean

61土17

27土12

肢帯型（．L−G）PMD，MNDおよび対照群間に
particle の数の差は見られない

一108−

表2

ParticleDensityperSquareMicrononMusclePlasmaMembrance

RESULTS（2）LIMB−GIRDLE

TYPE

MOTOR

NEURONAge P face E face Age P face18
270土20（N可2）

160土1645294ゼ2（N＝18）

28
243±23（N；10）

144土1052249土23（N＝20）

36

149土13

55

261土9

（NH6）

DISEASECONTROL【face Age P face E face
190土1950
269土15（N可3）

174土11

192士2451（炬15）280土18173土10277土19160土1634（N；10）

272土16167土10272土15

184土22

41（N；20）

282土16169土26250土19158土1551

276土20197土18264土17155土18272土16171土15（N＝20）

46（M三10）

60（N＝14）（N＝18）

43（N＝15）

Mean

258±22

表3

151土14268土20176±21

MeanParticIeDensityperSquareMicronon P and Efaces．

之）（小m 2 ）

P f ace

E fa ce

2 00
00
150
00
10 0
00

50
l
D uc hen ne

考

I
L−
G

MND

D uc hen ne

C on tro Is

按

L−
G

MND

Con tro Isことである．

進行性筋ジストロフィー症の病因は末だ不明で

最近，細胞膜を観察する最適の方法としてFre−

あるが，最近，生化学および形態学的研究より細ezerfracture法があげられている．Freeze−fra−

胞膜の異常が指摘されている．

Cture法は1966年Branton2）がこの方法を用いると私共も走査型電顕を用い，患者赤血球が対照に比し容易に変化しやすいことを昭和52年の］旺会議に

細胞単位膜の内面がリビッド2重層間で破断されて露出し，その表面が観察可能であることを報告

おいて報告した1）が，これには反論もあり必ずしして以来注目されるようになり，各方面の研究にも一定の結果が得られていないのも事実である．

応用されつつある．

しかしながら，PMDでは，はたして筋細胞何莫に異神経筋疾患へのFreeze−fracture法の応用とし常があるのか否かを証明することは極めて重要なてはKetelson，Schotlandら3），Wakayamaら4）5）−109−

の文献が散見されるにすぎない．

結語

1977年Schotlandら3）は8例のDuchenne型P

私共は，神経筋疾患患者より得られた生検骨格

MD患者より得られた骨格筋をFreezeLfractu−

筋をFreeze−fracture法を用い検索し，Duchermere法を用い検索し，muSCle membraneのP面，E面のparticleのdistributionの乱れと減少を報型PMDでは対照群に比し，P，E両面のparti−
Cleの減少がみられ，本症ではmuscle surface

告し，Duchenne型PMDではrmlSCle surface

Il℃rI血raneの異常があり，その変化は膜の内部分

membraneの異常があり，その異常はrrembra−子構造にある可能性を示唆した．

neの内部分子構造に存在することを強調した．
次に1978年Wakayama ら4）は8例のDuchenne

E両面共particleに差を兄いだしえなかった．

一方，肢帯型PMD，MND，対照群間にはP，型PMDと8例のage−rrntChed controlの赤血球

文についてFreezerfracture法で検討し，Duche−

献

のP，E両

1）荒木淑郎，岡本定昭，北野正二郎：進行性筋ジ面でのparticleの減少を認め，Duchenne型PM

ストロフィー症患者の赤血球膜に関する形態学

Dがgeneralized rrembrane abnormality

であ的異常．筋ジストロフィー症の病因の究明に関る可能性を示唆する報告をした．さらにWaka−

する研究．沖中姓．昭和52年度研究報告書．p．

nne型で明らかにplasma rr紀rhbrane

yamaら5）は1979年Duchenne型PMD8例，age一311．

adult controIs3例，他2）Branton，D．：Fracture faces offrozenmem−の神経筋疾患36例を対象に検索を行い，前報告とbranes．Proc．Natl．Acad．Sci．U．S．A．55：

matChed controIs8イ札

同様にDuchenne型PMDでの膜内粒子の著明な1048，1966．

3）Schotland，D．L，Bonilla，E．＆Van Meter，

減少を再確認する報告をした．
一方岩崎6）は末固定新鮮血の赤血球膜をFree−
ZeLfracture法で観察し，従来のグルタールアルデ
ヒドによる固定が，膜内粒子の大きさと分布，特にE面のそれに影響をおよぼしている可能性を報

M．：Duchenne Dystrophy：AlterationinMuscle Plasma Membrane Structure．Science
196：1005，1977．

4）Wakayama，Y．，Hodson，A．，Pleasure，D．，

告し，さらに人およびChickenのPMDの赤血球

Bonilla，E．＆Schotland，D．L．：Alterationin

膜について検討した結果では対照群との問に差がErythrocyteMembraneStructureinDuchen−

ないことを報告している．

ne Muscular Dystrophy．Ann．Neuro1．4：

私共の生検筋を対象にした結果では明らかに

253，1978．

Duchenne型PMDではP，E両面共に減少がみ

5）Wakayama，Y．，Hodson，A．，Bonilla，E．，Plea−

られ，さらに肢帯型PMD，MND群，対照群3Sure，D．＆Schotland，D．L．：Freeze−fracture者間には差がないことを示した．

Studies of erythrocyte plasma membranein

これらImSCle n℃mbraneの異常がDuchenne
型PMDに特異的なものであるのか，あるいは

human neuromuscular disease．Neurology
29：670，1979．

priIaryの変化であるのか否か，Carrierではどう

6）岩崎祐三：筋細月包膜の微細形態学．1．凍結割断であるのか，各病期別による変動はないかなどい法による赤血球膜の超微形態の研究．筋ジスト

くつかの問題が残されているが，今後個体数を増やロフィー症の基礎的研究．江橋班．昭和53年度

すと共に同一患者で赤血球と筋での対比を検討す

研究報告書．p．145．

る必要があると思われる．

−110−21）筋ジストロフィーの筋病変に関する検討（続報）−各病型における筋線維病変と血管・問質病変との対比−

田

研究協力者

員

尋・†

辺

内 潟 雅 信

松

野

原

沢

胤

美

原

四

郎

＊事，†
満

て，諸種先天性ミオバナー8，筋萎縮性側索硬化

的筋ジストロフィーは，遺伝・変性・進行性・ミ症20，多発性筋炎20，糖尿病性neuropathyおよ

オバナーという点で，本質的な共通点をもちながびamyotrophylO，正常所見を呈した4例についらも，一方では臨床的に，遺伝形式・発症時期とても同様に検索した．

経過・症状発現部位などから，疾患単位に近いよ筋生検部位はすべて四肢近位筋で，組織学的・うな諸病型が区別される点も，また一つの特徴で組織化学的・電顕的検討をおこない2）・3），その所ある．しかし諸病態の基礎的な検討結果は，概し見と，臨床症状・経過・他検査所見と対比した．

て病型特異性に乏しく，筋病変についても，全体筋病変は，パラフィン切片による一般病理組織学に共通な特徴の方が強調される傾向をこある．
我々はこの観点から，むしろ各病型ごとの差異

的染色法，クリオスタット切片による一般染色おに着目して検討し，その一部は昨年度の本会議で反応；ITⅣOSin ATPase，DPNH−TR，phosphory−

よび組織化学的方法（HE，trichroIT把変法，PASも報告した1）が，今回はその続報として，主としlase，Cholinesteraseなどの活性像），グルタールて問質および血管の病態につき報告し，考察を加アルデヒド・オスミウム酸二重固走法による電顕える．

的検索を総合して解析した2）・3）．
問質および血管病変に関する検索についても上対象および方法

記の方法によったが，それらの計測については，

対象は，虎の門病院における自験例（1970年以

種々の方法を検討した結果，共通に，クリオスタ

降，355例）のうち，適応を考慮した筋生検施行

ット切片（厚さ8／J）のHE染色像により施行し例で病型が確定されたもの50例（年齢3〜51歳；

た．計測法の実際については以下の「結果」の項

男36，女14）で，内訳は，Duchenne型13（男），に検索成績の一部として示す．

Becker型3（男），肢帯型17（男11，女6），顔面
肩甲上腕型6（男4，女2），先天（福山）型11（男結果5，女6）であった．なお，筋緊張性ジストロフ

前回（第1報）までに検討した主な内容1）・2）は，

ィー31例（男18，女13）についても同様に検討対

1）筋線維大小関係パターンに関する¶negahi−

比した．また血管・問質病変についての対照としStOgramの所見では，筋ジストロフィー各病型とも，baseの広いSpeCtrum型を示しながらも，各＊虎の門病院手中経内科＊＊虎の門病院病理学科†沖中記念成人病研究所

病型にある程度の差異を認めた．すなわち，（DDu−
Chenne型は約55FLを中心としたほぼ典型的な
SpeCtrum型を示すが，（卦肢帯型では肥大線経の比一111−

率が高く右方への延長を認め，（∋顔面肩甲上腕型（未分化性）：先天型に特有であること，などであでは平均直径は前2者よりもやや多いが，萎縮線る．今回は，以上のうち，2）（丑に示したfibrosis

経としての左方推移が目立っている．（彰先天（福や小動泳肥厚など，血管・問質病変について，より客観的な解析を試みた．

山）型では平均直径が全体として低く，前3者に比して全般的な左方偏位を特徴とすること．
2）一方筋痛変個々について，病型別差異の比

問質病変とくにfjbrosisの検討

較的著明なものは，①fibrosisおよび小動泳壁肥

問質病変の検討の一環として，我々は従来筋病

厚：とくにDuchenne型（他型にも種々の程度に），変解析の都度，図Iに示した方法を併用した測定（参反応性変化，neCrObiosis：各型にみられるが，結果を蓄積している．すなわち，筋組織標本（ク

顔面肩甲上腕型・肢帯型に優位，（卦splitting，mO−

リオスタット切片，厚さ8〟，HE染色）の横断

th eaten状変化，mitochondria異常，ring fiber：

面に，1辺200〟の正方形の区画を連続した状態とくに肢帯型・顔面肩甲上院型に著明，（むtypeで20個仮設し（配列は横断面の形により適宜），そI predominance，typeII deficiency：DucheT

れぞれの区画を含む100倍像の写真を撮影（20個），
それぞれを手札版大に焼付けた後，方眼紙にトレme型・肢帯型に著明，（9胎生期構築の一部遺残の 1 横 断面 〕

〔2 0 0 〟 、
ヽ
200 ／
ノ
ノ

＿＿一一一一一320〃一一一一一一一、、

＿
′
■
r
′
J
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l
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ト
止
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l ロ 針
別
布
ヽ
ヽ
、
−
′
、
ヽ
」
一
′
ヽ
■
′

ヽ
（各区画面積
より，血管
・（脂肪）
○
・神経束・
筋紡錘の面
積を除く）

（100×）

1区画筋線維13−17（平均15個）
図l 筋組織横断面の筋線維・問質面積の比率測定（本文参照）．
〔筋線経の面積／筋線維＋問質の面積；（％）〕−112−

ースし，区画ごとの筋線維部分の面積と問質部分

す．正常4例の筋線維面積比は平均約94％であの面積とを測定し，再合成的に合計値を求める．

った．また，各病型ごとに筋線経と問質結合組織

その際，脂肪・血管・神経束・筋紡錘等の面積をとの比率を同様に測定した．図2（B）〜（D）は，除去すると，ほぼ筋組織と問質結合組織のみの比率が得られる．

それぞれDuchenne型（筋線維面積67％の部分），
肢苛彗■三（筋線維面積78％の部分），先天型（筋線維

図2（A）は200／∠平行の例示で，正常所見を示

面損32％の部分）を示す〔図は種々の染色像につ

図2 筋線維面積比率に関する例示④200p平方区画の正常所見（myosinATPase，100×），脂肪・血管・神経束・筋紡錘などを除く全面
積に対する筋線維面積約96％の部分（HE像でも同結果），㊥Duchenne型筋ジストロフィー（HE，100×），
筋線維比率（同一条件）約67％の部分，（参肢帯型筋ジストロフィー（HE，200×），約78％の部
分，（診先天（福山）型筋ジストロフィー（trichrome変法，100×），約32％の部分（HE像でも同結果）．〔いずれも大腿四頭筋；倍率は撮影倍率を示す（引伸倍率は（みのみが，㊥（参⑧（それぞれ同率）の2倍となっている〕−113−

き例示したが，上記それぞれの数字（％）は連続切
片Ⅰ｛E染色像における測定値〕．

Duchenne型に最もfibrosisが著明，次に肢帯型，さらにBecker型と顔面肩甲上腕型の順となる．

図3はこの方法により測定した各病型ごとの，筋緊張性ジストロフィーや；他の対照疾患につい症例全体の平均値をグラフに示したもので，病型ては，先天型・DuchennC型ジストロフィー以外

内訳の（）内の数字はその例数を示し，最上段はの病型とほぼ同程度の平均値を示す．なお，平均正常所見，最下段の4項巨＝ま比較のため例示した

値でない個々の症例の病変の程度には当然差異が他の対照疾患の一部を示す．各項目ごとの棒グラあるが，本シリーズでは同一病型で5〜10％程度

フを2本ずつのうち，それぞれ上段は筋線維（左のばらつきを示すに止まっている．

方の黒い部分）と問質（右方の白い部分）との，またそれぞれの下段は，これに脂肪浸潤部（中央血管とくに動月永病変の検討の点の部分）を加えた比率を，％で表わしたもので

筋ジストロフィーの血管とくに小動肱には種々ある．その結果，筋ジストロフィー群では先天型・の変化が見られ，血管周囲のfibrosis，血管壁肥厚
50％

100％

図3 正常，筋ジストロフィー各型，対照疾患（4校）における筋組織横断面の筋線維面積比率〔筋線維面積／
筋線維＋問質（結合組織，または／および，脂肪）；（％）〕〔LG：肢帯型，FSH：顔面肩甲上腕型，COng．：先天（福山）型，MD：筋緊張性ジストロフィー，ALS：筋萎縮性側索硬化症〕

ー114−

（中暇筋層の肥大または血管壁内のfibrosis），一次に本シリーズの症例で検索した筋組織内血管部の内陛狭窄・閉塞（稀に血栓形成），血管周囲ののうち，筋彗■川、動陳の肥厚度を，図5の下部に示小円形細胞浸潤などが主な所見である．その一部したノブ法で測定した．すなわち，表現の便宜上，は図4（A）（D）に例示した．

血管壁の厚さJと，外縁の半径Rとの比率J／Rを

図4 筋ジストロフィーにおける血管変化の例示④Duchenne型にみられた小動駄壁肥厚（l／R約70％），㊥同，外陣に連続する高度の線維化，⑥脾帯型にみられた小動敵中・外膜の線雄化，㊥顔面肩甲上腕型にみられた血管周囲小円形細胞の小浸潤巣．〔いずれも大腿四頭筋，④㊥⑨はHE染色，（参はAzan染色；撮影倍率はいずれも400×（引伸倍率も各同比）〕
一115−

年齢

0−9歳
10

−19

20

−

29

30

−

39

40

−

49

50

〜

59

60

−

69

図5 正常，筋ジストロフィー各型，対掃疾患（4校）における筋組織内筋型小動脱の肥厚度〔匠詔J／R（％）），
上段：疾患病型別平均値分布．下段：これら仝例の年齢別平均値分布．（本文参照）〔LG：肢帯型，FSH：顔面肩甲上院型，COng．：先天（福山）型，
MD：筋緊張性ジストロフィー，ALS：筋萎縮性側索硬化症〕

＠宝％で表わしたものである．個々の数値は，一般に小さい動腺の方が高値となる傾向があり，また筋の別には前述のfibrosisの強いDuchenne型・肢帯型・先天型（福山型）ジストロフィーに，低年齢

部位別差・年齢差の要素も含めたやや複雑な表現にも拘わらず壁の肥厚傾向を認め，且つ年齢別にも可能であるが，ここでは簡便な表現として，平は加齢漸増傾向以外に低年齢層にもピークを認め，均値のみを示し，病型・疾患別と，同一母集団の2峰性分布を示しており，fibrosis特に血管周囲

年齢別分布とを対比した（図5の棒グラフ）．病型の腰原線維増生との関連が示唆される．また血管ー116−

壁の肥厚の主体は中E莫平i骨筋層の肥大とその線維の筋病変でしばしば問題となる所見，例えば局所化で，また一部の外臆には周囲のfibrosisのため的な群集萎縮状所見（必ずしも神経原性変化とは構築の破壊がしばしば見られる．

いえない），小角化線維散在状の変化，筋終板の変化など2）・3）・4），また筋電図上の神経原性様所見の説

考察

明に，一部の根拠を与え得る病態と考えられる．

1）筋ジストロフィーの問質結合組織の増生は，Duchenne以来最も本質的な病態であるという考結語え方が示唆されていたが，筋病変を伴う他の変性

以上我々は筋ジストロフィーにおける筋病変の疾患の場合と同様，一つの共存病態にすぎない可病型別検討を行い，問質結合組織・血管系の変化，能性も少なくない．いずれにしても筋ジストロフ

およびこれが全体の筋病変におよぼす影響などを

ィーの各病型における程度の差，特にDuchenne

中心に考察した．また正常所見，他の対照疾患に型において特に著明なfibrosisが認められるといついても比較検討し，筋ジストロフィーと他疾患

う事実に対する直接的な説明は困難である2）14）．然との間の相違，筋ジストロフィー諸病型相互の相し結果的には，fibrosis は筋線椎病変や血管・神違について若干の知見を報告した．形態学的な吟経束・筋紡錘などにも逆に影響を与え，これらの味の上に，計測法を導入し，更に客観性を含め得たものと考える．

病態を更に修飾している重要な因子の一つであると考えられる1）・2）
2）一方血管については，壁の肥厚などの病変

文

献に関し，Engelら5）がそれを重視して筋ジストロ1）田辺 等，野沢胤美，内潟雅信，塩沢瞭一，原フィー特にDuchenne−型の成因と関連づけてはい

満：筋ジストロフィー諸病型における筋病変のるものの，それを直接的に証明するに足る資料にはなお乏しい．むしろ，筋線経の破壊に対する反特徴について．厚生省「神経疾患研究委託費」
筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研

応性変化や，前述のfibrosisによる力学的影響

究，第二班（三好班）昭和53年度研究報告書，（血管周囲の抵抗・圧迫などによる血管中膜筋層のpp．97−101，1979．

疹作性肥大など）その他により結果的に生じた二2）田辺

次的変化である可能性が強いように思われる．本症の匹川支血流量は測定上必ずしも減少していない

3）田辺 等：筋生検．綜合臨床，24：845−867，ともいわれるが，実際に筋内血管の内月空の総和は減少しているとはかざらない．本シリーズに関す

等：筋ジストロフィー症における筋生検．神経内科，3：209−219，1975．

1975．

4）Dubowitz，Ⅴ．＆

Brooke，M．H．：Muscle

る上記の血管壁肥厚の測定結果は相対的な値で，biopsy：Amodernapproach．Saunders，Lon−

動静泳系全体を通じての絶対的な内月空の大きさはdon，Philadelphia，Toronto，pp．168−252，

示されてはいない．静泳系についての病変も動陳1973．

とほぼ同質ではあるが，計測上の困雉さより今回
はその結果の数量化は保留した．

5）Engel，W．K．：Duchennemusculardystrophy．
AhistochemiCallybasedischemiahypothesis

3）以上，臨床的に重要なことは，これらの血管・問質病変が，（手筋血流の部分的障害，（D筋の疹作によるhypoxia，（萱M莫透過性の障害，④筋束
内末梢神経障害などと関係し，本来の筋病態を修飾している可能性が強く疑われる点である．本症−117−

and comparisonwithexperimentalischemia
myopathy．In

ttThe

striated

muscle（eds．：

Pearson，C．M．andMostofi，F．K．），Williams＆Wilkins，Baltimore，pp．453−472，1973．

22）先天性ミオパテーの臨床的・筋病理学的検討

光

納

研究協力者

弘
＊

福 永 秀 敏中 里 輿 文

大

井

月券

洋

祐

形

昭

弘

は じ め に病はほぼ全例眼瞼下垂や眼球運動障害で発病して近年，組級化学と電子顕微鏡的研究法の進歩におり，次第に咽頭，頸部，貴肢特に近位筋の筋力伴い，筋組織形態学的特徴をもとに種々の新しい低下，筋萎縮へと進行している．そのため経過がミオバナーが報告されてきた．これらの先天性ミ長くなると，鼻声や岨囁障害の出現をみている．

オバナーのうち主なものは，mitochondrialmy−

進行は全例極めて緩徐に進行している．現在，難Opathy，nemaline myopathy，Central core

聴や網膜色素変性などは認めなかった．

disease，myOtubular myopathyなどである．

検査成績では，症例2でBMR−16％と若干低しかし最近，例えば同一の患者でまた同一の筋下，また症例1では心電図異常を認める以外には

組織中に，いくつかの異った筋の形態異常を共有

特に異常を認めなかった．血清CPK値は正常のする症例も報告されるに至り，筋の形態異常に基ものから軽度上昇するものまであった．糖負荷テづく先天性ミオバナーの疾患特異性も問題になり

ストでは，2例で負荷後の血糖の上昇がみられず，つつある．

いわゆるflat patternであり，1例では糖尿病型

そこで我々は現在まで経験した種々の先天性ミパタンを示していたのが注目された．筋電図ではオバナーをもとに，その臨床的並びに筋病理学的

1例にのみ神経原性変化の混在を認めるが，他の特徴と疾患特異性について検討を加えた．

症例では筋原性変化を示唆する所見であった．
筋生検は症例2と症例5は上院三東筋で行い，症例と方法

他は大腿四頭筋で施行した．

症例は15例で，その内訳はmitochondrial my−

組織化学的には全例でGomori−Trichrome染Opathy7例，nemaline myopathy4例，Cen−

色でragged−red fiberを認めた（図l−A）．またN

tralcore diseaseと思われる一家系，myOtub−

ADH染色では，主にtype1線経で筋柿下を中心

ular myopathyl例である．

にミトコンドリア酵素活性の増加がみられたが，おのおのの症例について，臨床的，並びに筋電症

4例では限局性に酵素活性の欠如した，いわゆるmoth−eaten様線経やmulti−COre様の筋線経もみ図，筋生検等の諸検査を施行した．

られた（図日，B）．ATPase染色では全般的にty−

例（1）mitochondrial myopathy（表l）pe1線経が小さい傾向にあった．

男性3イ軋 女性4例で，年齢は13歳から57歳ま

電買戻的には，筋鞘下を中心に多くの異常ミトコ

でと多岐にわたり，臨床的な発病年齢は1例が47

ンドリアが観察され，種々の形態の結晶様封入体

歳とおそいが，多くは30歳までに発病している．

が認められた1）．

家族歴では，1例のみ血族結婚が認められる．発（2）nemaline myopathy（表））男性3例，女性1例で年齢は20歳から35歳まで＊鹿児島大学医学部第三内科で，発病年齢はmitochondrialmyopathy
−118−

より

図I mitochondrialmyopathy（症例4）
A：ragged−redfiber（トリクローム染色×200）
B：虫くい像やmulticore録の変化（NADH染色×200）

もやや早く全例15歳までに発病している．また家
族歴では4例中3例がいとこ結婚であり，症例2

組織化学的には，GomorトTrichrome

染色で全例でrodの赤色の頼粒を認め，NADH染色での母親と姉では共にCPK値が上昇しており，または，rOdの部分では酵素活性の低下がみられた．

症例4では同胞内発症もみられる．臨床症状は症

ATPase染色では，症例2，4ではtype1線経

例2を除いて，特徴的な顔貌とSlenderな体型がの萎縮がみられた．

特徴的で，全身のdiffuseな筋萎縮がみられ，まここで我々の症例でみられた筋病理学的特徴をた症例2で内反尖足，症例3と4では高口蓋，SC−

要約すると，（∋rodの長さが，1Sarcomere

01iosisが認められた．一方症例2では，顔貌はほ内と小径のものが多いこと，（∋症例3と4では核ぼ正常であり，一時期仮性肥大がみられ，また筋

内rodを認めたこと，（∋rodの形態を電顕的に力低下，筋萎縮の分布も肢帯型筋ジストロフィー

みると，横断像で140A，縦断像で180Aと140Aま症に類似していた．また症例3，4では眼瞼下垂

たは100Aのperiodicityを有していたこと，④症と眼球運動障害があり，これはOCulogramでも

例3，4では，分乗化した多数の筋断裂を認め，確認されている．

この部位に多数のrodを認めたこと（図2−A），（9以血清CPK値は，症例2では200単位と上昇して

症例3，4では同一筋線維内に結晶様封入体を含いるが，他の例ではほぼ正常の値を示した．筋電む異常ミトコンドリアを多数認めたこと（図2−

図では，神経原性と筋原性の混在を示唆する所見B），⑥症例2では，NADH染色でtarget fiberが得られた．

など多数の筋構築の異常を認めたことなどがあげ

筋生検は，症例4で排腹筋で行ったが他の例では大腿四頭筋で施行した．

られる．特に臨床的に眼瞼下垂，眼球運動障害を認めた症例3，4で筋病理学的に，rOdと共にミ

−119−

表l

（［）mitochondrialmyopathy

発
病
症
例
年
齢
性
家
族
歴
年
齢

臨
床
症
状

C
P
K 筋
電
図

1 1
3 M

6

眼
f
瞼
下
垂
眼
球
運
動
障
害
（
一
）
顔
咽
預
個
肢
筋
萎
縮

5
2 m
y
O
．

2 3
2 M

1
7

眼
瞼
下
垂
眼
球
運
動
障
害
（
−
）
顔
咽
頸
四
肢
筋
萎
縮

6 m
y
O
．

34
0 F

2
5

眼
瞼
下
垂
眼
球
運
動
障
害
（
一
）
顔
咽
頸
四
肢
筋
萎
縮

6
8 m
y
O
・

4 5
0 F

2
3

眼
瞼
下
垂
眼
球
運
動
障
害
鼻
声
m
y
O
・
（
−
）
3
8 n
e
u
r
O
．
顔
咽
頸
四
肢
筋
萎
縮

55
1 F

3
2

65
3 M

2
0

眼
瞼
下
垂
眼
球
運
動
障
害
鼻
声
ト
）
2
9 m
y
O
，
顔
咽
頸
四
肢
筋
萎
縮

75
7 F

4
7

顔
瞼
下
垂
眼
球
運
動
障
害
鼻
声
（
−
）
7
8 m
y
O
．
顔
咽
頸
四
肢
筋
萎
縮

眼
瞼
下
垂
眼
球
運
動
障
害
鼻
声
い
と
こ
3
2 m
y
O
．

結
妻
昏
顔
咽
頸
四
肢
筋
萎
縮

（2）nemalinemyopathy

dysmorphic face
（一）

全身の筋萎縮婚

四肢近位筋萎縮 内反せん足
仮性肥大

いとこ

眼球運動障害 全身の筋萎縮

結dysmorphic face

いとこ
結

婚

いとこ

眼瞼下垂 眼球運動障害 全身結の筋萎縮dysmorphic face

婚（3）myotubular myopathy

1

24

F

6

いとこ 眼瞼下垂結婚

眼球運動障害四肢近位筋萎縮

仮性肥大

6

m yO・

26

m yO．
ne urO ．

65

m yO．

81

m yO ．

（4）central core disease

1

55

F

15

母

鼻 声 囁下 障害 渥 斗胸 股関 節
脱 凹 顔 面肩 甲 四肢筋萎縮

2

17

F

13

姉

漏斗 的
顔 面肩 甲上腕 筋 萎縮

3

13

M

10

弟

顔面 肩 甲上 院 筋萎縮

ー120−

図2

nemaline myopathy（症例4）
A：筋断裂と多数のrod（トリクローム染色×200）
B：異常ミトコンドリア（×43200）−121一

トコンドリアの異常を認めたことは興味ある事実

が，他はすべて筋原性変化であった．
筋生検は，母親と息子では大腿四頭筋

である2三

娘で＝

（3）myotubular myopathy（表l）

上月宛二頭筋で施行した．母親では，光も舶Iびにル：

24歳の女性で，両親はいとこ結婚であり，臨床顕的にCentral core（図3−A）とnemaline ro（1的には三角筋，排腹筋に仮性肥大を認め，外眼筋（図3−B）を認めたが，子供2人ではCOrを含む顔面及び全身の筋力低下，筋萎縮があり，も見出し得なかった．また母親ではtypel fiber

また手指に著明な筋萎縮がみられた．CPKは正常

predominancy，子供2人では共にtype2fiberで，筋電図も正常の所見であった．
筋生検は上腕三頭筋で行い，組織化学的にすべ

predminancyであった4）．

ての筋線経で中心核と共に，NADH染色で中心部に活性の上昇をみる線経や，空胞のある筋線経も認められた3）．
（4）central core disease（表L）

考

Cもrod

察

従来，筋疾患の分類は，多く・の場合基礎にある真の原因が不明なため主に遺伝形式や発病年齢，
臨床像などに基づいた分類がなされてきた．しか症例は56歳の母親，17歳の娘，13歳の息子の3し1960年以降，組織化学的染色法と電子顕微鏡が例で，3例とも10歳をすぎて筋力低下が始まり，筋疾患の研究に応用される様になってから，筋のその後程徐に進行し，現在筋萎縮の程度の差はあ

形態異常を伴なう多くの先天性ミオバナーが新しるが，その分布は顔面肩甲上腕型の筋ジストロフ

く分類されてきている．

ィー症にもっとも近い．また高口蓋，漏斗胸，骨格の変形を認めた．CPKは3例とも軽度上昇し，いくつかの共通点もあるが，それぞれに特異性も筋電図では母親の骨間筋で神経原性変化を認めたあり臨床的にもある程度診断可能である．しかし，先天性ミオパテーは，臨床的には疾患相互間に

図3 central core disease（症例1）
A：多数のCOre（NADH染色，×250）
B：nemaline rod（×6750）−122−

慢性進行性で外眼筋麻痺と眼瞼下垂を主役とする

ま

と

め

先天性ミオバナーの臨床的，筋病理学的諸問題

OCular myopathyで，筋生検ではミトコンド））
ア異常を有しない非特異的な筋病理所見を示す症について検討を加えた．

例や，また臨床的には肢帯型筋ジストロフィー症に類似し，筋生検ではnemalnie rodを認める症文例もあり，必ずしも診断が容易でない症例もある．

献1）福永秀敏，浜田陸三，井形昭弘：組織化学的に一方，筋病理学的には結晶様封入体を含むミト

多彩な筋構築異常を伴うmitochondrial myo−コンド））アの異常や，rOd，COre，中心核など極pathyの1例．神経内科，10：182，1979．

めて特異的な形態異常を示す場合もあるが，例え

2）福永秀敏，納 光弘，有村由美子ほか：眼筋麻ば同一の筋線維内にrodとミトコンドリア異常の痺とミトコンドリアの異常を伴ったネマリンミ

合併や，COreとrodの合併，またミトコンドリア

オバナーの1例．臨床神経学，18：35，1978．

異常と局所性酵素活性欠如を示す症例などいくつ

3）中里輿文，永松啓爾，福永秀敏ほか：Myotu−

かの形態異常を合併する症例もある．さらに，臨
床的にはほぼ同一の疾患と考えられる親子例で，bularmyopathyの1イ札

神経内科，9：495，

1978．

筋生検では母親にのみCOreやrOdを認めるが，子

4）福永秀敏，北野治男，徳永秀次ほか：「Central

供では特徴的な形態異常を示さない症例もある．

core diseaseの一家系」の臨床的研究．臨床神

このため，これらの形態異常のもつ疾患特異性，またその位置づけについては新しい問題も提起さ

経学，1980，inpress．
5）Bethlem，J．，Arts，W．F．＆Dingemans，K．P．：

れつつある5）．

Commonoriginofrods，COreS，miniaturecores，

今後，これらの症例の蓄積と，何らかの共通の

andfocallossofcross−Striations．Arch．
Neurol．35：555，1978．

代謝異常ないし病態追求へのアプローチが必要と考えられる．

−123−23）進行性外眼筋麻痺のミトコンドリア
異常について
＊

宮

研究協力者

武

＊
コ三
二ヒ．

渥 美 哲

正
新

島

健

司

吉

田

充

男

者に共通するミトコンドリア異常について若干

筋線維内ミトコンドリア異常を伴った進行性外の知見を得たので報告する．

甘艮筋麻痺症例については，Oculo−Cranio−SOma−tic neuromuscular diseasel）あるいはKearns・
Sayre syndrome2）などとして報告されている．

症例報告

著者らは家族例を含む4例について筋の組織学

4例の臨床像を表Iに示す．年齢は25−42歳に的検索を行い，家族例と孤発例との比較および両わたる．第1例は図1に示す如き3代にわたる累表l

症例のまとめCASEI CASE2

AGE．SEXFAM．HIST．

CASE5

CASE q岨M q2M

25M

22F

AuT．DOMINANT Sp．

Sp．

Sp．

20Y．0．

12Y．0．

AGE AT ONSET lO Y．0」

28Y．0．

1NITIAL SYMPTOM PTOSIS PTOSISPTOSIS PTOSISINVOLVEMENTS
E．0．M．

＋＋

十FACIAL M．

＋＋

十B〕LBAR M．

＋

土

PROXIMAL LIMB M．

＋

＋

十

十

十

±INCOORI）川ATIONOTHERS
O．F．

CHANGES OF
PIG．EPITHEL

N

N

N

112

EMG

M

N

N
N

＊自治医科大学神経内科

−124−

M

N

ECG INC．R．B．B．B．

M

N

N

C．S．F．pROTEIN

92

M

C．P．K．（Ⅰ．U．）

椚巨去設丁

皿

Ⅶ品2
50

48

1V

47

38

34

40

31 29 27 24 29

品品∴姑占鶴丸
19

15

11

7

12

10

15

13

11

5

2

二：．：；′て∴て亡一．＝1＋：死

亡●：服瞼卜・匠を ′j：！■車で肺．．g

Ⅲ丁的ミ111図l 症例1の家系図

代発現を示し，常染色体優性遺伝を有している．

認め，筋線経内にグリコーゲン顆粒，脂肪滴の増

2，3，4例は孤先例である．発症年齢は10−28

加を伴っていた（図2A）．異常ミトコンドリアに歳，経過は第1例が31年，その他は4〜14年にわはクリステの増加，巨大化，脂肪封入体を伴うなたる．筋障害分布では眼筋，四肢近位筋障害は全どの変化を認め，最も特徴的なことは内膜クリス例に共通し，1，2，3例で顔面筋，1，2例でタ問または，内外膜閏月空に連続する月空に層状の構球部筋におよんでいる．その他に第2例で眼底の造よりなる結晶様封入体を伴うミトコンドリアの色素上皮の変化，第3例で軽い四肢の共同運動障存在であった（図2B）．またこれら筋好莫下の異常

害を伴う．

ミトコンドリアの集積に随伴してfine filament

血i青CPKは1，2例で軽度上昇，筋電図は筋の集合をいずれの例においても認めた（図2C）．

原性変化に加え一部で神経原性変化の混在を認め

家族発症例と孤先例を比較すると，前者では異常る．

ミトコンドリアはほとんど結晶様封入体を有する
ミトコンドリアのみよりなり，筋線経の表層に多筋組織所見

いが，深部においても認められる（図3A）のに比筋の生検は大腿四頭筋又は僧帽筋で行った．全し，後者では結晶様封入体を伴うミトコンドリア

例にragged red fiberに相当するGomori tri−もあるが，巨大化，クリステの増加，脂質封入体

Chrome染色で筋膜下に赤染部を有する線経を認め，NADH−TR染色で同部は活性増強および低下の随伴など多様な形態を示し比較的筋線維表層に存在し，筋線維深部では正常形態を示すミトコンドの混在を認めた．

リアが主であった（図3B）．

筋の電顕観察ではragged red fiberの赤染部に相当して筋膜下に異常ミトコンドリアの集積をー125−

これらの所見のまとめを表2に示す．

表2

電顕所見のまとめCASEI cASE2

cASE5

cASEq

l．TYPES OF ABNORMAL MITOCHONDRIAcRYSTALLINE−LIKEINCLUSIONS＋

pROLIFERATION OF CRISTAE

＋
±

＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋

≠

廿

廿

1十

＋

±

±

±

＋

＋

HUGE MITOCHONDRIALIPID−LIKEINCLUSIONS

2．I）ISTRIBUTION OF ABNORMAL MITOCHONDRIASUPERFICIAL
DEEP

5．AGGREGATION OF FILAMENTS
NEAR ABNORMAL MITOCilONDRIA

図2

EM．A：3，240×＋＋

症例1B：66，000×症例1C：7・920×症例1
−126−

図3
考

EM．

Ax13，200

症例1

Bx13，200

症例2性外眼筋麻痺の本態との関連は不明である．rag一案

四肢近位筋障害を伴った進行性外眼筋麻痺例の

ged red fiberの筋線維表層におけるミトコンド

筋組織所見ではragged red fiberの存在が特徴

リアの集積は，きわだった特徴的所見であるが，とされている1）．又網膜色素変化，心伝導障害やそ今迄その意義づけはされていない．最近Kuroiwaの他の神経症状を伴った進行性外眼筋麻痺例におらは粘菌を好気性培養から嫌気性培養へ移すとミ

いてもraggedredfiberの存在が報告されている2ミ

トコンドリアが細胞表層へ移動すると報告していragged red fiberはミトコンドリア代謝の異常をる．ミトコンドリアの酵素関知機構つまりは電子

伴ったhypermetabolic myopathyにおいても認伝達機能と関連し，その移動の際に細胞内の細線

められ3），さらにその他の筋組織所見に随伴して練糸の関与を想定している6）．粘菌におけるミト多発性筋炎などにおいても報告されている4）．一般

コンドリア移動の所見はragged red fiberにおにⅠ型線椎に出現しているが，疾患特異性はなく，ける筋膜下のミトコンドリアの集積ときわめて類

その発現機序は不明である．

似している．同様の機序がragged red fiberに

現在までragged red fiberを伴った進行性外も存在すると仮定するとミトコンドリアの筋線維

眼筋麻痺の報告例はほとんど孤発例であり，家族

表層への集積の機序として2つの可能性が考えられ性発症例の報告は少ない5）

る．1つはragged red fiberにおける低酸素状

今回報告したミトコンドリア異常の所見と進行態の存在であり，他の1つはミトコンドリア自体−127−

における酸素要求性の冗進状態である．ミトコン

3）Luft，R．，Ikkons，D．，Palmieiri，Gリetal．：A

ドリアの代謝と密接に関連する病態が報告されて

CaSeOfseverehypermetabolismofnonthyroid

いるのはhypermetabolic myopathy3），実験的Origin with a defectin the maintenance of

阻血性ミオバナーでのミトコンドリアの集積1），

mitochondrialrespiratorycontrol：Acorrela・

DNP投与下培養筋細胞でのミトコンドリアの変tedchemical，biochemicalandmorphologiCal

化8）などがあげられる．低酸素状態の存在は阻血性ミオバナーに，酸素要求性の克進はhyperme−

Study．J．clin．Invest．，41：1776−1804，1962．
4）Chou，S．M．：t

Megaconial

mitochondria

tabolic myopathy，DNP投与などの際のミト

Observedin a case of chronic polymyositis．

コンドリア異常の存在と一致する．その他の疾患，

Actaneuropath．（Berl．），12：68r69，1960．

例えば多発性筋炎などにおいてもその筋線維内に5）Barron，S．A．，Heffner，R．R．Jr．，Zwirecki，R：

おいては同様の病態の存在が想定できる．

Afamilialmitochondrialmyopathywithcen−fine filamentの集合はミトコンドリアの筋表層への移動に関与しているものかも知れない．

tral defectin neural tr・anSmission．Arch．
Neuro1．，36：553−556，1979．

結晶様封入体を伴ったミトコンドリアは，家族例，

6）Kuroiwa，T．，Takahashi，K．：Induction of

孤先例いずれにおいても見出されたが，経過の長mitochondrial migrationin the slime moldい家族例では，異常ミトコンドリアのほとんどをしPhysarum polycephalum．Plant＆Ce11Phy−

めており，家族例又は経過の長い例により伴いやすいと考えられる．

Sio1．，19（8）：1561−1564，1978．

7）Reznik，M．，Hansen，J．L．：Mitochondriain

結晶様封入体がミトコンドリア内外股間腔に存在することは，今後ミトコンドリアの代謝障害の場を考える際に重要と考えられる．

degeneratingand regeneratingskeletalmus−
Cle．Arch．Path．，57：601−608，1969．
8）Askanas，V．，Engel，W．K．：Diseasedhumanmuscleintissueculture−Anewapproachto

文献the pathogenesis of human neuromuscular1）OIson，W．，Engel，W．K．，Walsh，G．0．，et al．：

disorders．In L P．Rowland（Ed．），PathogeT

Oculocranio−SOmatic neuromuscular diseasenesisofHumanMuscularDystrophies，Exce−With

ragged−red

fibres．Arch．Neurol．

rptaMedica，Amsterdam，856L871，1977．
9）Bonilla，E．，Schotland，D．L．，DiMauro，S．，et（Chic．），26：193−211，1972＿

2）Berenberg，R．A．，Pollock，J．M，，DiMauro，Sリ

al．：Electron cytochemistry of crystalline

etal・：Lumpingorsplitting？−Ophthalmople一

inclusionsinhuman skeletal muscle mitoch−

gia plus or Kearns−Sayresyndrome．Ann．

Ondria．J．UltrastructureResearch，51：404−

Neuro1．，1二37L54，1977．

408，1975．

−128−24）ジストロフィーチキンの病態に関する研究
一一一飼料の影響−

木

研究協力者

石

下

塚

真

洋

男

子

山

田

信

興

我々は，ジストロフィーチキン1）に飼料がどのの3種類を使用した（表】）．また，小麦胚芽はカような影響を及ぼすか，前回にひきつづき検索しナダ産のマニトパ種の種子を加熱処理し，胚芽をてみたが以下のような結果であった．

分離したものを用い，発芽小麦は水栽培で15度から25度に保温し，発芽させたものを使用した．

対象及び方法
ジストロフィーチキンの印字化後直ちに実験食を結

果与え，従来の飼料によるジストロフィーチキンの

卯芋化後7週目に施行したfliptest，10回の成績

発症状態と比較検討した．また実験食投与後7週を比較すると（区＝），実験食1群，14羽のチキン目の各々の胸筋の変化を光顕を用いて観察した．

においては成績は3回から10回であり，平均は8．1

今回の実験食としては，回であった．また実験食2群，8羽のチキンでは

実験食1：日生研の飼料に発芽直後の小麦

成績は2回から10回で，平均は5．9回であった．これに対して実験食3群と普通食群は両者とも全く起き上がり不能のものが多く，僅かの個体で1回

実験食2：日生研の飼料÷と小麦胚芽与を混合したものから2回可能であった．以上のことから実験食群

実験食3：日生研の飼料に小麦胚芽油を混では1，2とも普通食群に比較して，同一週令に合したもの

おいては運動機能は比較的良く保たれていると判

表l 普通食と実験食の成分の比較
O rd in o ヮ fo o d∨けo m in E

W he ot 9e rm O il

w h e q†9 e rm
∨汗o m in E

32 2 h 9 ）n ic o t in iC O C id

30 ・
0 （m g ）
39 ．
09

57 ・
7 8 （m 9 ）34 ．
47

SO †u ro Id⊂ru d e p ro Ie in
c ru d e fく】†
c ru d e fib e r
C ru d e く
さh

20 ．
48（
％）
3 ．19
3 ．
03
8 ．
88

3 2 ．13 （％）
9 ．
75
3 ．15
4．
88

Un SO Iu ro †d k H y Q C id
lin o 】e k ∝ Fdo le k ∝ idtino le n ic o c Fdv FI ．8
P On t0 †h en O Iev iL B【o li．
C 。C idfq 什y q c id

叩 n I0 Ih en q Ie
experimenIqlfo∝ll：Ordinqγf∞d＋germinq−dwheQI
experimentol【00d2＝Ordinmγ†00dl／つ＋whed・geml／つe叩er■me両日00d3‥0rdin即Yf∝d＋wheo†9emOH＊東邦大学医学部第四内科

−129−

15 ．
5 1％ 184 ．
4 （％ ）
52 ．
8
25 ，
5
8 ．
3

仙bculorfuncH0nqndbdyweighIindy山0〆HcchickenS

number ofiUCCe∬inrl引ngOffqfktsurfQCe
whenlo；donIheirbeqks

Ofedwhhex四日menIolf∞dl
10

000

0く｝

000

0

Ofedw汀hexper；menfc＝ood2
X redw汁hexperimenId−00d3（■●fedw汗hordinqryfood
0

0

00
0
0
0
●

0
0
0

0

X X●●X Oxx●●X

bodyweighI

5009

10∞9

図l 普通食群と実験魚群におけるfliptestの成績と体重の関係断できた．実験食1，2群ではやや体重の増加は群，中心核，変性線経が同様にみられたが，ジス

少ないが，普通食群で体重の少ないものと比較しトロフィーチキンよりは程度が軽いという印象をても明らかに差があり，運動機能の保持は低体重得た．またジストロフィーチキン，対照チキン，とは関係ないと考えられた．又実験食1群の方が実験食群すべてにおいて血管壁の軽度の肥厚が2群よりもより機能が良好であったとの印象を得認められた．実験食1，2群とも線維束によりたが，統計学的な有意差はなかった．しかし実験多少の差が存在するが，実験食1群では，flocc−

食3群においては機能の改善はほとんど認められular change with phagocytosisが対照チキンよなかった．実験食の大まかな内容は表Ⅰの通りでリやや多く散在する．しかしphosphorylase染

あるが，発芽小麦の成分の詳細に関しては現在検色では明瞭に3種類に判別可能で，またPAS

索中である．

染色でも同様であり，染色性や全体のpatternはまた各実験食投与群の媚化後7週目における胸普通食群に比して良好であった（図2）．実験食2筋の変化を光顕を用いて観察した．ジストロフィーチキンでは筋線経の大小不同が著しく，一部小群においては萎縮筋線経が対照チキンより多く認められたが，程度，頻度の差は個休差のため

径線経のgroupingを思わせる所見がみられた．

明らかではなかった．phosphorylase染色では

又中心核や散在した変性線経が認められた．対実験食1群同様，明瞭に3種類に分別され，PAS

照チキンにおいてはやはり大小不同，小径線維染色でも良好であった（図3）．

一130−

図2

実験食1群の胸筋
PAS染色，3種顆に分別され，全体のpatternは普通食群に比して良好であった．

図3

実験食2群の胸筋
PAS染色，3種類に分別可能だが，萎縮筋線経が対照チキンよりやや多く散在する．
−131−

考

肪酸の分解の促進，トリグリセライドの減少，ホ

接筋ジストロフィー症の原因は現在のところ不明

スホリピドの合成なども報告されている．またリであるが，蛋白分解酵素の増加や，RNA異常をンの含量は発芽初期に最高値を示すが，ビタミン中心とする蛋白合成系の障害2）などが多くの報告者により証明されている．又骨格筋内のATP量

A，B，C，D，Eなども発芽に際して生成され，小麦では発芽時のビタミンCの含量は乾燥重量のの減少，トリグリセライドの増加やホスホリピド

0．022％にも達している．以上のことをふまえて今の減少，また不飽和脂肪酸による酸化作用なども回のflip testの結果を考えると，発芽期の植物の報告されており，膜構造の異常ないしは機能の異摂取がジストロフィー動物の筋に，多方面にわた常も指摘されている．我々は今回発芽小麦を利用

り有効な作用を及ぼしていることが想定できるが，したが，種子の発芽は周知の通り，複雑な生理化学

形態学的には現在までのところ明らかな相違は確的な変化が首なまれる現象で，既存のミトコンド

認されておらず，発芽小麦が生体内にどのような機

リア，リポゾーム，核などの小器官や，酵素，R序で作用しているかは現在のところ不明である．

NAなどの高分子物質の活性化，呼吸の賦括，A

単に栄養の改善による非特異的な効果か，何らかのTPの生産を経て，蛋白質の合成が進行する．発

特異的な意味を有する作用があるのか，今後充分

芽期の小麦における核酸の量的変動が報告されてな数で慎重に検討する必要のある問題と考えた．

いるが，DNA及びRNAは発芽とともに漸次増文加しており，発芽の初期にはかなり多くのRNA

献が生産されていることが証明されている．また，

1）杉田秀夫，埜中征哉，石浦章一：筋ジストロフ

小麦の胚からとりだしたリボゾームの蛋白質合成

ィーモデル（ニワトリ），神経進歩 23：979，

能，胚の吸水，ポリゾーム量の発芽期における変動の様相が確かめられているが，浸漬期にポリゾー

1979．

2）Ross，K．F．A．，Jones，K．W．，John，H・A・：ムの形成に先立ち，リポゾームの活性化がおこる．

Tissue

その他，発芽に際しては発芽ホルモン，細胞分裂

dersofvoluntarymuscle

ホルモンなどを含む植物成長ホルモンの生成と活

ChurchillLivingstone，Edinburgh＆London，性化が起こり，また，植物によっては，不飽和脂1974，p．443．

−132−

cultureinmuscle

disease，inDisor−（ed．Walton，J．N．），

25）実験的ミオパテー（II）−Vinblastin，CoIchicine
によるラット骨格筋の形態学的変化

茂

研究協力者
日

在

小 西 懐

敏

司

増

井

義

竹

中

NADH−TR染色，Sudan Black B

的

正

純

染色，Oil筋疾患の病因に関連して，種々の毒物による筋Red O染色，Cholinestelase染色を施し，行なっ

障害のなりたちを実験的に比較検討する目的で，た．電顕観察は，燐酸緩衝2．6％グルタールアルデ

S52年度に報告したVincristine（VCR）にVinbl−

ヒド及び燐酸緩衝1％オスミウム酸で固定し，エastine（VBL），CoIchicine（CLH），を加えて検タノール系列脱水を行って，Epon樹脂に包埋し討した．これらの毒物はいずれも植物のアルカロ

た後l FLの光顕用切片を作製し，Toluidin Blueイドであるが，microtublesの蛋白成分と結合す染色にて光顕観察を行い，次いで超薄切片を作製，ることにより有糸分裂阻害等の種々の作用を持っ酢酸ウラン，鉛の重染色を行い，日立H500型電ことが知られている．しかし生体内での代謝等に子顕微鏡で観察した．

関して，いまだ不明の点が多い薬剤である．また結

VCR，CLHは，動物に大量投与する事により骨果格筋に短期間の内に電顕的にいわゆるmembra−

1．一般状態：VBL，CLHいずれの群でも1−nous bodyを形成する事が知られている．VBL
においても同様の結果が予想されるがいまだその下痢と体重減少を認めた．VBL群の運動障害

記載はみられない．

2回投与後に種々の程度の後脚優位の四肢麻痺，は，他の群に比し軽度のものが多かった．その他，VBL群では，鼻，肛門出血の多発が認められ

方法

た．2．光顕所見：VBL群の3例（1mg／kg2

毒物としてVBLとCLHを注射用生食水にV

回1匹，2mg／kg2回1匹，2mg／kg1回1匹）

BLは1mg／ml，CLHは0．5mg／mlに溶解し使用のみに，Trichrome染色Gomori変法で暗緑色した．動物は，Wister系ラット，オス，体重100に濃染し，ATP−aSe（pH9．4）染色でいわゆる〜200gを使用，VBLは1−4mg／kg／日1〜2

Type2線維より高活性に染まる筋線経がわずか回を計38匹，CLHは，1．5及び2mg／kg／日1回

ではあるが認められた．またVBL，CLHの両群

計20匹をそれぞれ腹腔内投与し，投与終了後の24時間目に断頭，ただちに脾腹筋を採取し，左脚ににNADH−TR染色，Sudan Black B染色で多くはないが筋原線維問網状構造のみだれあるいはて光顕的，右脚にて電顕的観察を行った．対照と破綻などが認められた（図り．この変化は，VBL群

しては生食水1mlを1−2回腹腔内投与した動内では投与量に比例してやや変化が強くなる傾向が物を用いた．光顕観察は，凍結切片にてHE染色，うかがえ，CLH群内では特定の傾向は認められなかった．また対照群には筋原線維間網状構造の変化はTrichrome染色Gomori変法，ATP−aSe染色，

まったく認められなかった．Cholinestelase染色＊大阪医科大学第一内科

による神経筋接合部の光顕的観察では，毒物投与
ー133−図I A VBL3mg／kg／day1日投与Rat排腹筋 SudanBlack B染色×200
筋原線維間網状構造の破綻を認める．（■）
B CLH1．5mg／kg／day1日投与Rat排腹筋Sudan Black B染色×100
筋原線絶間網状構造の破綻を認める．（■）

図2

VBL 3mg／kg／day2日投与Rat排腹筋
変性したmitochondriaと思われる構造物の膜構造の一部がmembranous
bodyへの進展をうかがわしめる．（■）
M．membranous body
V．小空胞

一134−

図3

A VBLlmg／kg／day2日投与Rat俳腹筋
T−SyStem（T）に隣接して種々の大きさの小空胞（Ⅴ）が認められる．
B VBL4mg／kg／day1日投与Rat排腹筋
membranous body（M）とT−SyStem（T）に連続性が有るがごとき像を呈し
ている．

図4

A CLH2mg／kg／day1日投与Rat排腹筋
SRに由来すると思われる多数の小空胞（Ⅴ）が認められる．membranous
bodyの形成もうかがえる．
B CLH2mg／kg／day1日投与Rat月井腹筋
membranousbody（M）と小空胞（Ⅴ）が一体となって認められる．Triad部のSRの小空胞化が認められる．（■）−135−

群と対照群との間に特に差を認めなかった．その0IT巴染色Gomori変法でわずかに認められた変化

他の染色でも前記以外の特記すべき所見は認めら

は，VCR群に同様の染色でみられた変化に類似しれなかった．またEpon包埋試料の1〃切片のたものであり，筋線経の障害を示す1つの所見とToluidin Blue染色による光顕観察でVBL，CLH

思われるが同様の所見が対照の1例にも．わずかではあるが認められ，必ずしも投与毒物の影響のみによるものとは断定しきれないものであった．

両群の全例に高倍率観察で，凍結切片では認められなかった微小空胞が認められた．3．電顕所見：

電顕観察で両群に認められた多数の小空胞は，VBL群では，筋鞘膜下，筋原線絶間に多数のいわゆるmembranous bodyの形成が認められた．

両群とも形としては類似した形態を呈し，ほとんmembranous bodyのあるものは中心部に変性しどがmitochondriaより小さく，その大きさ形態かたmitochondria，あるいはglycogen様顆粒をらすると，その由来はSRあるいはT−SyStemが持っていた．また破綻したmitochondria，種々の考えられるが，たとえばVBL群で変化の比較的形の小空胞が認められた．他，変性したmitoch−

軽い部位をみると，T−SyStemの変化は認められ

ondriaと思われる構造物の膜構造のmembra−

ず，それに隣接する形で小空胞が酉汐IJL（図3A），

nous bodyへの進展をうかがわしめる像が認め

またtriad部でもSRのみが膨化，小空胞化してられた（図2）．さらにある部位では，T−SyStem

いる事などよりSR由来とする方が妥当と考えらに隣接してSRに由来すると思われる種々の大きれた．しかしmembranous bodyの形成像には，さの小空胞が観察され，またT−SyStemがmem−

両者間にやや異なる点があった．VBL群では変branous bodyと連続性を有するがごとき像が観性したmitochondriaの膜構造の一部がmemb−

察された（図3）．また，ところどころのtriad部

ranous bodyへの進展をうかがわしめる像がみらのSRの膨化，ノJ、空胞化が認められた．membr−

れたが（図2），これはVCL群で観察されたme一

anous bodyの形成は，VBLの投与量に比例しmbranous bodyが，その中心部に存在する変性
したmitochondriaの膜構造と連続性を示す像とて強くなる傾向が認められた．
CLH群では筋革朋莫下，筋瞭線維間に多数の種々（図5）同質のものと思われ，VBL群のmembr−の大きさの小空胞が認められ，これらの′ト空胞と一体となってmembranous bodyの形成が認め

anous bodyの一部のものは，VCR群と同様に，
mitochondriaに由来すると考えられた．しかしられた．またところどころのtriad部のSRの膨

またSR由来，あるいはSRが膨化した小空胞が化，小空胞化も認められた（図4）．小空胞の形成

membranous bodyへと進展してゆく事も推測さ

はCLH群では他の群より強い傾向が認められ，れた．一部でmembranous bodyがT−SyStemの膜

また1．5mg／kg投与群に比し2mg／kg投与群にmembranous bodyの形成が強く認められた．な構造と連続するがごとき像が観察されたが，先にものお今回は，neurOmuSCular junction部の電顕観造には特に変化は認められず，それに隣接する形

察はおこなっていない．

でSR由来と思われる小空胞が存在することより，

べたごとく変化の軽い部位ではT−SyStemの膜構

SRがmembranous bodyへと進展する過程で
考

T−SyStemをまきこんだものと推測された（図3

案

今回，S52年度当社会議で報告のVCRにVBLとCLHを加えそれら毒物によるラット骨格筋の主AB）．したがってVBL群では，我々の観察も含めとして形態学的変化を比較検討した．光景頁的変化は，

Slotwiner（1966）1）以来の諸家の報告しているV
CR群のものと同様に，membranous bodyは

VBL，CLH両群に共通して認められた筋原線維

mitochondria，SRの両者に由来するものと考え

間網状構造の変化で，VCR群のものと同質のものでられた．一方CLH群では，VCR群，VBL群とやあるが出現頻度，程度ともはるかに軽いのもであっや異なりmembranous bodyとmitochondria

た．一方，VBL群の3例にATP−aSe染色・Trichr−との関連を推測させる像は認められず，VBL群と

ー136−

図5

VCRo．4mg／kg／day3日投与Rat俳腹筋
membranousbodyとその中心に存在する変性したmitochondriaの膜構造に明らかに連続性が認められる．（■）

同様の′ト空胞の形成がより強く認められ，これらるこれらの骨格筋変化は，それぞれ非常に顆似しとmembranous bodyとが一体となって認めらたものであるが，membranous bodyれる点が特徴的であり，membranousbodyはSR

関して，VCR，VBL群とCLH群のものにやや異の由来にに由来することが推測された．またmembranor

なる点があると思われた．この相違点は毒物の作用のus bodyの形成は，両群とも投与量に比例して多く認められた．CLHの骨格筋におよぼす影響につ異なる点に基づくことも考えられるが，それがいかいては，1952年Fargerson，F．C．2）がその四肢筋のよく知られている作用は，3着に共通してmi−におよぼす影響に注目して以来，1971年Marka−

crotublesの溶解と消失であり，この作用に基づ

nd，0．N．3），1972年Hsu，L．ら4），1976年小口ら5）く筋への影響としては，支配神経のaxonalflow

なる作用かはまったく不明である．これらの毒物が骨格筋に電顕的に小空胞，及びmembranousの停止に基づく

bodyの形成が認められる事を記載している．特にHsuらと小口らは，mOrter endplateにも同すると前記の形態学的変化の差は，すくなくともものが考えられる．この点から様の変化が強く起る事を指摘し，特に小口らは，される．

毒物の筋への直接作用によるものである事が推測

endplate附近の筋原線維間に大きな空胞の形
結成が認められることを指摘している．そしていずれの報告者もmembranousbody，空胞の由来

語

VCR，VBL，CLHの3種のアルカロイドによはSRと推測している．今回の我々の実験ではり起る筋の形態学的変化の主体は，筋原線維間の構neuromuscular junction部の電顕的観察を行っ造の変化であり，その内客は，多数の中空胞とme−ていないので，この点に関する所見をのぞけば，そのmbranous bodyの形成であった．その小空胞は，結果は，諸家の報告に一致するものであった．以上のごとくVCR，VBL，CLHによってひきおこされSRに由来するものと考えられ，特にCLH群に強れ137−く認められた．membranous bodyの形成は，VBL

群では

VCR群と同様にmitochondriaとSRの両者に，CLH群ではSRに由来するものと考え

261，1952．
3）Markand，0．N．，D

Agostino，A．N．：Ultrast−

ructualchangesinskeltalmuscleinducedby

られた．

ChoIchicine．Arch．Neuro1．，24：72，1971．

文献4）Hsu，L．，Lentz，T．L．：EffectofcoIchicineon

1）Slotwiner，P．，Song，S．K．，Anderson，P．J．：
Spheromembranousdegeneration of muscle

thefinestruCtureOftheneuromuscularjunc−
tion．Z．Ze11forsch．，135：439，1972．
5）小口喜三夫，S．M．Chou：バキュオラーミオバ

induced by vincristine．Arch．Neuro1．，15：

ナーーコルヒチンによる実験的Segmental

172，1966．

2）Ferguson，F．C．：CoIchicine，1．Generalphar−macology．J．Pharmacol．Exp．Ther．，106：

Vacuolar Myopathyについて−．神経研究の進歩，20：59，1976．．

一138−26）アカバネウイルスによる先天性関節拘縮症：
特に筋病変について

佐

藤

猛
＊

研究協力者

目

荒

畑

喜

三

森

秀

生

を0．3ml接種した．

的

神経筋組織培養：（1）11日令ラット胎児の脊髄昭和47年から50年にかけ日本各地に流行した異常産仔牛は先天性四肢関節拘縞や大脳欠損を主症とその近傍の筋組織（myotom）を状とし，arthrogryposis−hydroanencephaly（AH）

double coverslip法にて培養，8日目にウイルス

Maximows症候群と呼ばれている．

（10￣3，0．02ml）を接種し，8日後に電子顕微鏡

この異常仔牛の脳組織からアルポウイルスに属で観察した．（2）新生ラットの後肢筋を細切後，するアカバネウイルスが分離された1）．また仔午とトリプシン処理し，単離細胞浮遊液をMaximow

母牛の血清中にこのウイルスに対する抗体の上昇

double coverslip法にて培養した．2日後ではほが証明され，AH症候群の病因はアカバネウイルス

とんど全てがまだ筋芽細胞の時期であったが，この胎内感染によることが明らかにされた．

れにウイルス（10−3，0．02ml）を接種した．

s

AH症候群では大脳欠損と中枢神経系の炎症所結見に加え，脊髄前角細胞の脱落，骨格筋萎縮など

果が記載されている2）．筋病変の成立機序として胎生

I．乳のみハムスターの脳内接種：昭和52年度

期の神経原性変化と同時に筋炎が合併しているの本研究班で既に報告したが，大脳，脊髄，骨格筋ではないかと考えられている．

からウイルスが分維された3）．電子顕微鏡では脊髄ウイルスによる先天性関節拘縮症の動物モテリレ

前角細胞の胞体内に多数のウイルス粒子が認めら作成と筋線経におけるウイルスの侵襲形態を明られた．螢光抗体法では脊髄前角細胞（＋Hり，大脳かにするため，乳のみハムスターや妊娠ハムスタ

皮質（＋），髄膜（十日，骨格筋内神経終末（ヰ十），ー，あるいは培養筋組織にウイルスを接種し，電筋線維（±）とウイルスに対する特異螢光が認め

子顕微鏡で観察したので報告する．

られた．
2．乳のみハムスターの筋肉内接種：骨格筋の散在性筋線維壊死，問質の細胞浸潤などがみられ

材料と方法
ウイルス：アカバネウイルス（NB45株）は尾た．電子顕微鏡では筋原線経の膿縮，糸屑状の変

田進博士から分与された．Vero細胞でよく増殖性などが認められたが，明らかなウイルス粒子はし，titerは104TID50／mlであった．

見出し難かった．

動物：（1）乳のみハムスター（生後3日目）の

3．妊娠ハムスターへの投与：生まれたハムス

脳内あるいは腹腔内に10▲4倍に稀釈したウイルス

ターは四肢の運動が，対照ハムスターに比して弱原液0．02mlを接種した．（2）妊娠ハムスター（妊く，生後3日以内にほとんどが死亡した．骨格筋

娠9−15日）の皮下に10￣2〜10￣3倍稀釈ウイルス

では変性に陥っているものも散見された．End0−
mysiumには反応細胞がやや増加していたが，筋＊順天堂大学医学部脳神経内科

芽細胞との区別が難しく，炎症反応と断定出来な−139−

図】Myotomの組織培養．アカバネウイルス接種後8日目の神経接合部．神経終末部には多数のウイルス粒子が認められるが，筋線稚内には見出されない．（A：×15，000，Bは強拡大×38，000）

かった．また電子顕微鏡でもウイルス粒子は見出

ではなお内部の筋原線経や横紋構造はよく保たれてされなかった．

おり，ウイルス粒子も見出されなかった（図l）．

4．筋線経の組織培養：（1）Myotom培養では培養中に混在している筋芽細胞内にはウイルス粒

脊髄内の前角細胞と軸索突起，髄膜細胞，神経筋子に類似した中空胞が見出されることがあったが，接合部，Schwann細胞，筋線経などが発育してい少数であり，完全な形態のものはほとんどみられた．筋線経では筋原線経がよく発達し，横紋が形なかった．

成されていた．

（2）筋芽細胞の培養では数個の細胞が融合し，ウイルス接種8日後の培養組織では神経細胞の初期の汀ⅣOtubeを形成しているものもあったが，胞体には多数のウイルス粒子が見出された．異常大半のものはまだ筋芽細胞の時期のままで，胞体に発達したゴルジ装置内や空胞内に存在し，COre

内にはわずかであるが筋フィラメントが形成されとenvelopeていた．

より成る完全なウイルス粒子や小空胞のみのものなどが認められた．髄膜細胞やSch−

これらの筋芽細胞内には多数のウイルス様粒子がWann 細胞の中にもウイルス粒子はみられ，また神経筋接合部の神経終末内にも多数見出された．

存在していた．胞体内の異常に発達したゴルジ装

なかには完全に壊死に陥って，細胞膜が融解し，ス粒子が多数見出された．また壊死に陥っている

ウイルス粒子が細胞外に散在している神経終末な細胞もみられた．大半の細胞内には大きな空胞がどもみられた．しかるにこれに接している筋線維形成されていた（図2）．

置や空胞内に完全型あるいは小空胞だけのウイル

一140一

図2

筋芽細胞にアカバネウイルスを接種，8日後のもの．細胞質内のゴルジ装置にウイルス様粒子（矢印）が認められる．（A：×5，400，B：×9，700，C：×45，000）

考察と結論

筋線経に散在性の壊死が起こることを認めている．

異常産仔牛のAH症候群の病因はアカバネウイ

仔牛のAH症候群の筋病変は，以上の種々の研

ルスの胎内感染であることが解明されている．妊究成果から胎生期の脊髄前角細胞の病変による神娠ハムスター4）や卯芋化鶏卵5）へのウイルス接種実

経原性萎縮と多発性筋炎による直接的な筋線経の験によl），胎盤を通過して胎児へ感染することが傷害，さらに神経支配の欠落に起因する再生ある実証されている．

いは発達障害が加わっているものと考えられる．

仔牛のAH症候群の筋病変は神経原性変化に加

次に組織培養の結果から，神経筋接合が成立し，え，筋線維自体の変化が加わったものと解される．

神経支配が完成した筋線経ではウイルスに対する

比較的直径の太い筋線経における筋原線経の架二伏

感受性が低く，筋芽細胞ではウイルスが容易に増変性やマクロファージの侵入などの所見が筋原性殖することが分かった．この実験から筋線経の発病変を示唆しているためである．

達が未熟で，神経支配の完成していない胎生初期紺野2）は妊娠母牛の静脈内あるいは妊娠山羊のでは，筋組織へのウイルス侵聾が起こり易いこと

胎児に直接アカバネウイルスを接種し，胎児に多が示唆される．また神経支配が成立した後にも，発性筋炎を発症させている．

前角細胞へのウイルス感染により二次的に脱神経本研究においても乳のみハムスターの筋肉内接
種，あるいは妊娠ハムスターへの接種実験の結果，を受け，ウイルス感染への感受性が増大することも考えられる．

−141−

ヒトの先天性関節拘縮症では骨格筋萎縮と中枢2）紺野悟：昭和47年以降本邦に多発した牛神経異常が知られている．筋萎縮の原因として胎の異常産−アカバネ病の病理一．家畜繁殖誌．

生期前半の関節形成期あるいはその直後に起った

22：39，1977．

骨格筋の筋炎，あるいは下位，上位運動ノイロンの障害のためと考えられる．アカバネウイルスの

3）佐藤

猛，尾田

進，鍋谷政広：神経研究の進歩，23：461，1979．

感染実験より得られた結果は，ヒトの先天性関節4）Anderson，A．A．＆Cambell，C．H．＆Experi−

拘縮症の成因を研究する上に多くの示唆を与えてくれるものである．

mentalplacentaltransferofAkabaneviruSin
thehamsterAm．J．Vet．Res．39：301，1978．
5）Ikeda，S．＆Yonaiyama，K．：Deformities of

文

献ChickembryosinexperimentalAkabanevir−1）尾田 進，鍋谷政広，安原敏治ほか：新潟県内に発生した牛の異常産とアカバネウイルスの分離について．新医会誌，90：614，1976．

ー142−

usinfection．Nat．Inst．Anim．Hlth．Quart．
18：89，1978．

27）虚血による実験的ミトコンドリア・ミオパチー
神経切断の影響

佐

藤
＊

研究協力者
目

西

的

克

典

一時間固定後，2％Os04で国定し，エボン

ミトコンドリア・ミオバナーあるいはKearns−

アラ

ルタイト包埋し観察した．

Shy症候群などにおいては，巨大ミトコンドリア
やミトコンドリア内結晶状封入体などが特徴的で

結

ある．

果

神経切断のみの第3群では，48時間後，光田上実験的ミトコンドリア・ミオパテーの動物モデ
ルとしては腹部大動脈を結紫する方法や大腿部をExper抽ental Mitochondrlal

ゴムバンドなどで結紫する方法が報告されている．
Group H

われわれはミトコンドリア内結晶状封入体の形

Ⅰ（Denervation＋

成過程を明らかにするため，ゴムバンドで大腿部（Tournjquet）

を結紫する方法を追試すると共に．支配神経切断の影響の有無を検索したので報告する．
l

方一・・‥一・一・法

Wistar系成熟雄ラットをもちい，次の3群にわ

1 0− 〇 ・ 〇 三

し，光顕，電顕で検索した．
第2群；あらかじめ大腿基部にて両側坐骨神経を切断し，24時間後1側大腿部をゴムバンドにて∩ⅥJUqサー第l群；1側大腿部をゴムバンドにて強く結紫し，24時間後エーテル麻酔下にて前脛骨筋を採取

02 0

けて実験をおこなった．各群は5匹ずつとした．

Moderate to

強く結染し，更に24時間後エーテル麻酔下で前脛骨筋を採取し，第1群と同様に検索した．
第3群；第2群の対側の前腰骨筋を，神経切断

2030 40unsta血2030 4050 6㌦

のみの対照群として，同様に検索した．
光顕：採取した筋組織の一部を直ちに凍結して厚さ8FLの切片を作製し，HE染色，ATPase染色，

図l Gomori Trichrome変法による赤染の程度を

Gomori Trichrome変法，SDH染色を行った．

3段階に分けヒストグラムで示してある．

電顕：各筋の一部を2％グルタルアルデヒドで

縦軸は筋線経の数で横軸は直径（〃）．
第2群でragged red fiberが著明に増加している．

＊順天堂大学医学部脳神経内科−143−

直線状のいわゆるtrilaminar plateや顆粒状封入は殆ど差を認めなかった（図2A）．
電顕による観察では，筋小胞体の大小様々な空体を多数認めた（図3A）．

胞状膨化や，ミトコンドリアのクリステの数の増

trilaminar plateと称されているものは，異常に加を認めたが，虚血をほどこした第1群と第2群延にしたクリステから新しい直線状構造が形成さにおけるような結晶状封入体は全く見出されなかれたものであるが，このような構造はミトコンドった．

リアの内膜と外膜との間にも形成されていた（図虚血を24時間おこなった第1群では，従来報告3B）．

されているごとく，Gomori Trichrome変法で若このtrilaminar plateを強拡大で観察した．ミ干のragged red fiberを認めた（図2B）．他方，

トコンドリアのクリステ膜は内外2枚のunitmem−

24時間前に支配神経を切断し，24時間虚血した第branei：り成っているが，異常な直線状構造物の2群では，ragged red fiberの数が著しく増加し一端はこの内側unit membraneと連続していた．

たばかりでなく，筋線経の内部迄濃赤染したfiber

この新生された直線状構造は，よく観察するとが目立ち，著明なミトコンドリア異常を示唆する

さらに2本の細いフィラメント状のものから成っ所見が得られた（図2C）．

ており，周期性を有する規則的な配列をしている

図lに第1群と第2群のragged red fiberのようである．

出現頻度を比較してあるが虚血のみの第1群で9すなわち細い2本のフィラメントがらせん状に％なのに比し，あらかじめ神経切断を加えた第2組み合わされ，このものがさらに綱目状の膜構造

群では22％と著明な増加を示している．

を形成しているようにみえる．

ragged red fiberを電顕で観察すると，膨大化したミトコンドリアが無数に集積しており，ミト

たがいに接しているものがあり，さらにこの隣接

コンドリア内部ではクリステの数が著しく増加し，のものが癒合している場合もある．

図2

このtrilaminar plateは隣接のものどうLが，GomoriTrichrome変法で図2Aは第3群（神経切断のみの対照群）．2Bは第1群（虚血のみ）．2C
は第2群（あらかじめ神経切断を加えた後虚血したもの）．
2Cでは筋線経の内部迄著明に赤染している．

一144−

図3

3A（×16，000） ragged red fiberの一部；ミトコンドリアの著明を集積とtrilaminarplate，頼粒状封入体及び結晶状封入体を認める．
3B（×55，000） ミトコンドリアの内膜と外膜の間にもtri1aminarplateが形成されている．（矢印）3C（×200，000） 2本のtrilaminar plateが癒合している．
直線状構造にみえたものは両側の内膜が合わさって形成されていることが判る（矢印）．また，2本の細いフィラメント状のものがらせん状に組み合わさっているようにみえる．
癒合した内部は網目状構造を呈している．
−145−

考

察

plateに関してHeffner（1978）等は前者はragged

虚血によりragged red fiberが出現し，ミトコ

red fiberに認められ，後者は主にnecrotic fiber

ンドリア封入体が生ずることは，Karpati（1974）に存在し，両者は別個のものであるとしているが，等が，ラットの腹部大動脈を結紫した後，Soleus，

われわれの観察では両者は向じ性格のものであり，

gastrocnemiusの筋について検索，報告している．

単に発達のStageの違いによるものと考えられる．

Heffner等（1978）は直接大腿部をrubber band

trilaminar plateの形成過程に関しては，Han−で結紫する方法により同じ現象をみている．rub−

ZlikovまとSchiaffino（1977）は，形成された膜状

ber bandによる方法は当然支配神経もある程度構造物はペ7pシンで消化され，また，pH6．0でジ

blockしていると考えられるが，われわれの第3アミノベンチジンにより変化を受けないことから，群（神経切断のみの対照）でみたように，坐骨神

ミトコンドリアクリステ招莫に存在する酵素が異常

経を48時間前に切断しておいても除神経のみの操に重合したものではないかと推量している．

作では決して今回認めたような封入体は出現しな

われわれの観察でも形成された直線状構造物は，い．従ってこの封入体出現には虚血によるHypo−
Xiaが大きく関与していると思われる．

こまかいfilamentがらせん状に組みあわされ，さ又，虚血を生ぜしめる操作としては，大動脈結らに網目状構造をつくっているのではないかと考えられる．

紫では，側副路による血行の存在する可能性を否定
結し得ず（Karpati等），rubber bandによる結紫の方がより完全であると考えられる．

論

1．ラットの大腿部を結紫し，24時間後に前脛

今回われわれが行った，除神経により ragged
red fiber の形成が加速化されるという事に関し骨筋を採取し光顕及び電顕で観察したところrag−
ged red fiber即ち異常ミトコンドリアを認めた．
2．支配神経をあらかじめ切断しておくては今迄に検索されていない．

と異常Karpati（1974）等は腹部大動脈結数時に同時にミトコンドリアはさらに形成されやすくなった．

坐骨神経切断を加えた場合，われわれと反対に虚3．ミトコンドリア内結晶状封入体の形成過程

血による変化は少なくなり，それを不動化によるについて考察を行った．

energy需要の減少による為と考えている．われわ
れの行ったのはこれと異なり24時間前に支配神経

文

献

切断を加えており，このように除神経を先行させ1）Hanzlikov畠，V．＆Schiaffino，S．：Mitochon−

ることがmuscleの側に何らかの準備状態を形成

drialchangesinischemic skeletalmuscle，J．

しているのではないかと考えられる．実際支配神

OfUltras．Res．60：121−133，1977．

経を切断しておくと小胞体H莫の異常やミトコンド

2）Heffner，R．R．＆Barron，S．A．：The early

リア内クリステの増加等が認められ，このようにeffects ofischemia upon skeletal muscle

神経支配を断たれたことによる膜の異常があらか

mitochondria，J．of Neurol．Sci．38：295−

じめ生じていることが結紫によるミトコンドリア
内封入体をさらに生じやすくしているとおもわれる．

315，1978．

3）Karpati，G．，Carpenter，S．，Melmed，C．＆Eisen，
A．A．：Experimentalischemic Myopathy，J．

Paracrystal1ineinclusionbody及びtrilaminar

一146−

of Neurol．Sci．23：129−161，1974．

28）Rimmed vacuoleの組織学的・電顕的研究
＊

福

信

原

義
＊

＊

研究協力者

熊

本

俊

は じ め に

1973年，Dubowitz＆Brookeは，OCulophary−

秀

椿

忠

雄

棺神経伝導速度：正常．筋電図：眼輪筋で低電位（＋）．血清CPK：正常．診断：Oculopharyngeal

ngeal dystrophyの筋生検で，9例中8例（89％）

dystrophy．

に筋肉の一部が打ちぬかれたようにはっきりとし

症例2

たVaCuOleがあり，周囲がGomori trichrome染

家族歴：血族結婚（＋）．現病歴：小さい頃より色で赤く，hematoxylin−eOSin染色で好塩基性に歩行は遅く，走ることはずばぬけて遅かった．27

染まる線維状の物質で囲まれていることを見出し，

才時の第2子の妊娠後より，特に歩行が悪くなり．

rimmed vacuoleと名づけた．しかし，このrimmed
VaCuOleの本態・微細構造についての報告はみら

買物かごも持てないなど上肢の筋力低下にも気づ

28才，女れない．我々は，今までに新潟大学神経内科およく．50年7月入院．入院時所見：筋萎縮は肥満のためはっきりしないが，4程度の筋力低下がみらびその関連施設において行われた約300例の筋生

れ，Gowers徴候（＋），感覚障害（−）．筋電図：混検中9例の筋生検でrimmed vacuoleを観察し，合型．CPK：32−36．診断：Kugelberg−Welander

組織化学的および電顕的に検討を行ったので報告

病．

する．

症例6

36才，女

既往歴・家族歴：特別のことなし．現病歴：12症

例

才頃より起立困難に気づく．次第に階段の昇降が用いた症例のうち代表的なものを簡単に記すと，困難になり，自転車をまたげなくなった．27才頃

症例1からは上肢の挙上も困難となってくる．診断：進70才，男

既往歴・家族歴：特別のことなし．現病歴：

行性筋ジストロフィー症（肢帯型）．

56才頃より限瞼下垂が出現，綾々に悪化す．57才

方時，風船をふくらませないことに気づく．62オ時，

法

左眼瞼挙上術をうけたが，その頃より格語障害出

通常の手技にて筋生検を行い，電顕用に2．5％

現．64才頃より，歩行障害出現，次第に悪化し，

グルタールアルデヒドと1％オスミュウム酸の二特に階段の昇降が困難となってきた．囁下・岨囁

重固定を行い，アラルタイトに包埋したが，一部はイソペンタン中で直ちに凍結し，凍結切片につい力も次第に低下し，その頃，囁下性肺炎を生じた
こともある．68才頃より，複視に気づく．51年9月新潟大学神経内科に入院．入院時所見：眼底：てGomori trichrome染色，hematoxylin−eOSin染
色，PAS，reduceddiphosphopyridinenucleotide

乳頭・網膜は正常．眼瞼下垂・外眼筋麻痺のほか，

diaphorase（DPNH），ATPase，Oil red O，Su−囁下障害（＋）．全身，特に鼻匡幹部に筋萎縮がみら

dan black B，Luxolfast blue，AIcian blue，t0−

れ，翼状肩肝（＋），Gowers徴候（＋），深部反射1uidineblue，aCidphosphatase（Barka＆Ander−
SOn法）などの染色を行った．

消失．テンシロン・テスト（−）．髄液：正常．末＊新潟大学脳研究所神経内科

−147−

表】

Rirruned vacuoleのみられた症例
durltlon oflllness（years）

M
r l

14

Kugelkrg一触lander dlsease

3

M

−●

2

M

日

3

Pol州OSltls

F

洲P（し1mb一g汗dle ty匹）

14

SPl帆＋optjc atrophy

4

Unclassjfjed heredjtary neuropathy

7

M

F
M

70 28 45 16 29 鎚 53 29

Oculophさけngeal dystrophy

両th ophthall昭Plegia
‖

結

10

typeI線経で8例中4例に，typeII線経で8例

果l）臨床的検討
Rimmed vacuoleのみいだされた9症例の臨床中3例にみられ，萎縮は，typeI線経で8例中6診断は表Iのごとく，16〜70オ，男5例女4例で，例に， typeII線経で8例中4例にみられたが，rimmed vacuoleの出現率との関係はみいださ−れ

臨床診断はOCulopharyngeal dystrophyl例のほなかった．Rimmed vacuoleを有する線経は，type

か，Kugelberg−Welander病3例，分類不定の遺I線経に多かったが，typeII線経にもまれにみら

伝性ニューロバナー2例，多発性筋炎，進行性筋れた．

ジストロフィー症，進行性脊髄性筋萎縮症が各1
例とさまざまであり，臨床経過も2年〜14年と一定しておらなかった．
2）組織学的検討
Rimmed vacuoleは，Gomori trichrome染色で周囲が赤い線維状物質でぶちどりされたVaCuOle
としてみられる（国l）が，筋線経の中心部にあるもの，はじに偏在するものとさまざま．1本の筋線維中に数個みられるものから1個だけのものとさまざまであった．Rimmed vacuoleを有する
線経は，症例1（oculopharyngeal dystrophy）では0．9％の筋線経でみられたが，他の疾患でも7．9％，5．6％（症例2，4：KugelbergrWelander病），8．2％（症例8：分類不定のニューロバナー）と多数みられるものもあった（表2）．ATPase染

図1Rirrmed vacuole，Gomoritrichrome染色

色標本による形態計測分析（表2）では，肥大が
−148−

×600

表2 組織化学的所見
Atrophy FdCtOr Rjm¶ed Acjd Pase

case Musc−e‡膿r三Ⅰ‖

222 164

ノ

76

0

317

7

344
2310

打力

271

9

墾塑

56．4

H vacuoles★posjtjve fjbers
0

18．3％

Ⅰ

0
2

5
6

2
4

2
1

1
0

8

66憲壷還

2

0

0
4

9

埋哩90壁38哩

62

427981狸14140577一

7
4

9

3
2

8
3

8

7
3

8
3

9

0
2

6

2︒37讐憲一

8
3

5

Q‥quadriceps★

図2

gomorjfemoris，G：gaStrOCnemius，B：biceps

trjchrW1e

brachH

Stajn

A（Gomoritrichrome染色），B（DPNH染色），C（ATPase染色）は連続切片

一149一

×350

図3

Rirrmed vacuoleの電顔写真

×17，400

3） Rimmed vacuoIeの組織化学的検討
Rimmed vacuoleは，DPNH，ATPaseでは全れないものが多かったが，オスミュウム酸固定，

く染まらず（図2），PAS染色では染まるものと染する物質を多数入れていた．それらの物質は電染まらないものとがあった．OilredO，S血black

顕では多層性隈状構造物（図3）から主になってBでは全く染まらなかった．AIcian blue，Luxol

いることが判った．この膜状構造物の間には，多fast blueではVaCuOleの辺緑のみわずかに染色されたが，VaCuOleの内部は染まらないものがほ

数のグリコーゲン様顆粒に加えて，小さなmye−
lin figures，dense bodiesや頼粒状，線維状の種

とんどであった．酸性フオスファターゼ染色では，種の構造物がつまっていた．しかし，それらの周大部分のVaCuOleは染まらないが，一部のVaCuOle

囲のmyofilamentsは，比較的きちんと配列しての辺綾部が軽度に染まっていた．しかし，rimmed
vacuoleのみられた症例では，VaCuOleの部位とはおり，．VaCuOleの内部の著明な異常構造とはきわ無関係に酸性フオス77ターゼが顆粒状に陽性とろでは，ほぼ正常に配列しているmyofilaments

なる筋線経が多く，症例4のように62．1％の筋線椎で陽性頼粒のみられるものもあり，リソゾームの間に，小さな膜状物質で囲まれたグリコーゲン頼
粒や，いわゆるmyelinfiguresが数珠状に出現の活性克進がうかがわれた．一方，症例8のようしており，いわゆるmyelinfiguresがこのに，筋線椎の8．2％にrimmedvacuoleがみられ

med vacuoleのでき始めと推定された．

アラルデイト包埋標本では，tOluidine blue

で濃だった対照をなしていた．変化の非常に軽いとこ

rim−

たにもかかわらず，酸性フオスファターゼ染色で考陽性顆粒のみられないものもあった．

案

Rimmed vacuoleは，DPNH，ATPaseなどで

4） Rlmmed vacuoleの電顕的検討
Rimmed vacuoleの凍結切片による標本では全染まらないことから筋肉の普通の構成成分とは異

くのVaCuOleとなり，VaCuOleの中には何もみらるか，または変質したものと考えられる．AIcian−150−

blue，Luxolfast blue，PASで染まることから，となっているものは，リソゾーム活性のほとんど

酸性ムコ多糖体，リン脂質，グリコーゲンなどを失われた残余小体であって，筋肉外へ排泄される有すると考えられるが，電顕でみられた多層性膜

前段F皆にあるものと考えられる．

状物質をはじめとする所見とも矛盾しないと思われる．このVaCuOleは，光昆頁標本作製時に内容物

結論が流出するが，その構成成分が多層性の膜メ犬構造

Rimmed vacuoleは，autOphagic vacuoleの一物のために，周囲に線維状にはみ出したままつな

種であり，OCulopharyngealdystrophy以外にもがって残り，rimmed vacuoleとしての特徴的な

種々の疾患でみられる．その構成成分は主に多層形態を示すにいたると考えられる．Carpenterら

性膜状構造物よりなり，光量削票本作製時にそれら（1978）は，慢性筋炎で同じようなVaCuOleと膜状がVaCuOleの周囲に線維状にはみ出して，rimmed

構造物が多数みられた症例を

VaCuOleに特徴的な形態を示すようになる．

封入体筋炎て集めているが，光顕では 1ined vacuoleとしが特徴的であるとしている．この lined vacuole は，

文

rimmed vacuoleと非常によく似ており，恐らく

1）Dubowitz，V．＆

献
Brooke，M．H．：Muscle

同じものと思われる．Rimmed vacuoleのみられ

biopsy：A modem apprOaCh．Saunders，た症例の筋肉の多くが，リソゾームのマーカーとLondon−Philadelphia−Toronto，1973，p．231．

される酸性フオスファターゼ陽性顆粒を有してい

2）Carpenter，S．，Karpati，G．，Heller，I．et al．：

たことから，これらの症例ではリソゾームの活性

Inclusionbodymyositis：Adistinctvarietyofが高まっていることが判る．しかし，rimmed va−

idiopathic

CuOle自体にはまれにVaCuOleの辺綾部でのみ軽logy（Minneap．），28：8，1978．

度に染まっていただけであり，rimmed vacuole

ー151−

inflammatory myopathy．Neuro−29）Duchenne型筋ジストロフィーにおける未分化筋線経の出現
高

木

研究協力者

昭

夫

埜 中 征 哉

スキンドファイバー標本は，骨格筋細胞の収縮

typ01

系やノト胞体の機能の解析に通している．我々はDu・J一一一一￣￣「了￣「

二L上皿『Chenne型ジストロフィーを中心に各種の神経筋疾
患の生検筋に本方法を応用した．Duchenne型ジSr

ストロフィーでは，筋収縮蛋白分化の不完全な細

Gl

Caf

type2

胞が多数観察された．

√、

対象および方法

丁＼しサbt

対象とした神経筋疾患は，Duchenne型ジスト
ロフィー6名，その他の小児期の神経筋疾患7名，成人型のもの9名である（図3，4）．診断を目的とした筋生検に際して，上腕二頭筋より小切片を採取し，直ちに氷冷した弛緩溶液（G−5）に移した．実験法や試薬の組成は既報に準じた1乙化学的Sr

スキンドファイバーの作製や筋切片の保存はWoodらの方法にしたがった2）．
結

Gl

rP
」

図I Duchenne型ジストロフィーよりの3校頬の筋

果A）Duohenne型ジストロフィーの収縮系
3×10￣5Mのfree strontiumion を含むi容液

線経のストロンチウムとカルシウムによる活性化，およびカフェイン拘絹について実例を呈示した．タイプ1では3×10￣5Mストロンチウム（pSr4．5）中でスキンドファイバーの発生する相イオン（Sr）により3×10￣5Mカルシウムイオ

対張力（P／Po，Poは3×10￣5M free calcium
ionにより発生する最大張力）を検討した．対照

ン（Ca）と同程度の張力を発生した．タイプ2
ではSrにより殆んど張力を発生しない．タイプのスキンドファイバーはpSr4．5の溶液中での相ⅩではSrによりCaによる最大張力（Po）の58

対張力の程度により2群に分類される．タイ791％の張力を呈した．カフェイン拘絹はカルシウ

線経ではP／Poは0．98土0．08であり，タイプ2線

ムを負荷したスキンドファイバーに40mMカフ
ェイン（Caf）をG−0．1の溶液中で投与して発経では0．02±0．014である1）．この方法によるとDu・Chenne型の筋線経はおおよそ3群に分類された生させた．筋小胞体にカルシウムを負荷するた（匡＝）．対照筋にみられる通常のタイプ1と2のめに，スキンドファイバーを10▲6Mカルシウム

他に，P／Poが0．5前後を呈する第3のタイプが観

イオンを含む溶液中にて2分間incubateした．
カフェイン拘露のpeak tensionとPo の比を♯国立武蔵療葦所神経センター疾病研究第一部

縦棒18mg（上，下）と36mg（中）である．

カルシウム摂取の指標とした．較正は横棒20秒，

一152−

7

図2

6

5

4

PCa

6

5

4

3

pSr

タイプⅩ筋線経の各種濃度のカルシウムやストロンチウムイオンによる活性化の程度をタイプ1や2のそれと比較した．タイプⅩ（Ⅹ）はpCa6 で張力を発生し，pCa4．5でPoに達する．活性化の程度は，タイプ1（●）やタイプ2（○）と差違はない．ストロンチウムイオンに関しては，タイプⅩ
は，タイプ2とタイプ1の丁度中間的な活性化のパターンを呈した．タイプ
Xに関しては1本の線経についての結果を，タイプ1と2については，5本の結果の平均と標準誤差を提示した．

察された．この群の筋線経をタイプⅩと仮称した．

C）タイプ×線経の特長

各種のカルシウムやストロンチウム濃度によるタタイプⅩの筋線維直径，最大張力（Po），筋小胞休

イプⅩの活性化の程度を通常のタイプ1や2のそのカルシウム摂取容量について，Duchenne型のれと比較した（図2）．カルシウムによる活性化のタイプ1や2のそれらと比較した．まず筋直径は，程度は，タイプ1，2やⅩの問に著明な差はみら

タイプ1（n＝18）：42±2（〟m），タイプ2（n＝れない．タイプXは，pSr5の溶液中で収縮を開20）：45±2，タイプⅩ（n＝22）：37±2とタイプX

始し，pSr4．2の中で最大張力を発生した．タイ70

で有意に小さい（0．01＜p＜0．05）．しかしタイプⅩ

1や2との比較では，丁度中間的反応を呈した．

線経には例外的に60／Jmと直径の大きな線経も存B）タイプX緑経の出現頻度（図3，4）
pSr4．5の溶液による相対張力は，0から1．1

在した．Poはタイプ1：0．8±0．1（kg／cm2），の広範囲に分布したが，0．5前後に分布する一群がプⅩで若干低値であった（p＝0．05，図5）．しか

タイプ2：0．8±0．1，タイプⅩ：0．5±0．3とタイ存在すると推定される（図3）．0．3から0．7の相対

しいずれの筋線維タイプにおいても，Poが0．5kg

張力を呈するものをタイプⅩ線経と便宜的に分類／cm2にみたない筋線経が多量に存在した．

した．Duchenne型では，49本中の20本の筋線経

筋小胞体のカルシウム摂取指数は，タイ701：

がタイプXと分類された．小児期の他の神経筋疾

0．5±0．1（n＝12，範囲0．1〜0．7），タイプ2：0．6

患では，タイプⅩ線経は観察されなかった（図5）．

±0．1（n＝13，0．2−1．0），タイプⅩ：0．6±0．1（n成人の神経筋疾患では，ALSや近位型脊髄性筋萎縮症で少数のタイプⅩが出現したのみであった．

＝14，0．2−0．8）であり，各群の問に有意差はな
かった．カルシウム摂取指数が0．5に満たない筋

その頻度は成人では58本中の5本であった．

線経は，タイプ1では4／12，タイプ2では3／13，

一一一、一一−153−

P／Poin pSr4．5

0

7

0

5

図3

6例のDuchenne型ジストロフィーから作製したスキンドファイバーにつき，pSr4．5の溶液中での相対張力（P／Po）を測定した．タイプ1
線経ではP／Poは1．0に近く，タイプ2線経ではP／Poは0に近い．Duchenne型ではP／Po
が0．3から0．7に分布する線経が多い．黒丸は

45最大張力が0．5kg／cm2以下に低下していた筋線経を意味する．

6

P／Poin pSr4．5

1

2

3

4

5

6

7

8

Childhood

図4

主として小児期の神経筋疾患につき，図3と同様の測定を行った．各症例の診断と年齢は，1．（4歳男）と2．（1．5歳男）；脊髄性筋萎縮症，3．（12歳男）と4・（5歳男）；多発性筋炎，5．Becker型ジストロフィー，10歳男，6．訟−Cker型ジストロフィーの疑い，27歳男，7．ネマリンミオバナー3歳男，8．眼瞼下垂と筋緊張低下，（14歳女）．黒丸は図3と同じく，Poが0．5kg／cm2以下の筋線経を示す．上記の疾病では，タイプXと分類される筋線経は検出され
ない．

−154−

とタイプ2の中間型を呈した．我々は生後第1日のラットのひらめ筋と長址伸筋のストロンチウム

タイプⅩでは4／14である．カルシウム摂取容量が，特定の線維タイプで低下している事実はないと推による活性化を検討した．それによると，この時定した．

期のひらめ筋や長址伸筋はともにタイプⅩに類似P。（kg／cm2）

した反応を呈した（未発表）．なおこの時期のラットの筋肉はデ阻織化学的ミオシンATPase染色＿L
全てタイプ2Cの反応を呈するという4ミこれらの観察から推論すると，タイプⅩ筋線経の反応は未分化筋線経のそれではないかと考えられる．他方，
Duchenne型の骨格筋は組織化学的にタイプ2C
線経を含むことが知られている5ミタイプ2Cは，
いわゆる再生筋線経である可能性が指摘されている5ミしかし我々はタイプⅩは組織化学上のタイプ
2Cの一部にすぎないのではないかと考えている．
何故なら，多量のタイプ2Cが証明される筋標本
からでも，時として殆んどタイプⅩ型の反応の筋線経が検出されないからである．Duchenne型のタイプⅩ線経のpSr4．5溶液中での相対張力は0．5近辺に分布している（pSr4．5の中での相対張力は，
筋線維分化の指標になりうると考えられる）．またタイプⅩ筋線経の中には，直径が60／Jmと大きな

typeI type2ものもある．このような諸事実から，Duchenne型

type Xのある種の筋線椎では，筋蛋白の分化が，非常に
図5

Duchenne型における各タイプの筋線経が発生した最大張力（Po）を提示した．各タイプにおいて，Poは広範囲に分布した．統計的にはタイプⅩで，有意にPoが減少していた（P＝遅延あるいは停止している可能性が推定される．
収縮系のカルシウムやストロンチウム感受性は，調節蛋白としてのトロポニンにより規定されるといわれる．分化や再生途上のトロポニンの化学的性状に関してはまだ知見が乏しいようだ．今後こ0，05）．

考の分野での追求が望まれる．

案

Duchenne型ジストロフィーには，ストロンチ

結

ウムイオンによる活性化に関して，通常とは異な論

Duchenne型ジストロフイVやその他の神経筋った態度をとる一群の筋線経が存在した．このグループの筋線経をタイプXと仮称した．タイプⅩ疾患の生検筋よりスキンドファイバーを作製し，線経は直径がやや細く，断面積当りの最大張力は収縮系や筋小胞体の機能につき分析した．Duche−

やや低下している．しかし筋小胞体のカルシウムnne型ではストロンチウムによる活性化のパター

摂取能に変化はない．このタイプⅩ線経は筋萎縮

ンが，タイプ1とタイプ2筋線経の中間を呈する性側索硬化症などに少数ながらみとめられたが，ものが多数観察された．この群では，筋径はややDuchenne型ジストロフィーで圧倒的に多数観察

細く，最大張力の値は低下していた．出生直後の動物の骨格筋でのデータtから推論すると，このされた．
Kerrickら3）によると，生後5日目の家兎のひらめ筋のストロンチウムによる活性化はタイプ1

中間型の筋線経は分化の遅延したもの，あるいは
不完全な再生線椎の可能性が考慮された．

−155−

文

献

S．：Development ofdifference between red

1）Takagi，A．，Yonemoto，K．，Sugita，H．：Single

andwhitemusclesinsensitivitytoCaonthe

Skiruledhumanmuscle丘bers：Activationby

rabbitfromembryo to adult，Nature

Calciumandstrontium，Neurology28：497，

440，1976．

4）埜中征哉，Chou，S．M．：Werdnig−Hoffmann

1978．

2）Wood，D．S．，Sorenson，M．M．，Eastwood，A．
B．et al．：Duchenne dystrophy：Abnormal
generation of tension and Ca regulationin
single skinnedfibers，Neurology

260：

28：447，

病罷患筋の組織化学的検討．臨床神経学18：
491，1978．

5）Brooke，M．H．，Kaiser，K．K．：The use andabuseof muscle histochemistry，Ann New
YorkAcadSci．228：121，1974．

1978．
3）Kerrick，W．G．L．，Secrist，DリCoby，R．，Lucas，−156−30）筋ジストロフィー症の単一筋線推筋電図

（第2報）
西

研究協力者

目

小

谷

西

哲

的

郎

野

口

貞

子

捉し，このpairと相同的な活動電位を他方の列の個々の単一筋線経の活動電位を捕捉できる単一電極（電極No1−6）より電極選択器により適筋線維筋電図針を用いて各種筋ジストロフィー症

宜選び，最も近似した波形の得られる電極を捜す．

での筋線維由来のjitter現象をより詳細に分析す

即ちこの対立した2つの電極に平行に筋線経が走る事を試みた．昨年度は同−pairの筋線経の反射

行するような状態を選ぶ．この2つの対立した電間隔（筋収縮の強弱）と互いの煉波間距離との関極が筋線経の走行に平行に位置すれば2つの電極連を検討し，長い妹波間臣巨雛を示すpairのjitter

由来の同一pairの活動電位は針のわずかな浅深運

現象は反射間隔と密嶺な関係にあり，反射間隔が動で波形の振幅が同じような変動を示すので確認短くなる（筋収縮が強くなる）と煉波間距柾は短できる．

縮することを報告した．これは遅れて活動電位が対立した2つの電極が筋線経の走行に平行に位出現する筋線経では筋線維伝導時問が反射間隔に依置すると，図2Bのように相同的な2つの活動電存するVelocity recovery function（VRF）が大き

位が2つの電極の電極間距艶に相応した波形のいためと予想された．そこで今年度は多極型単一筋

ずれをもって出現する．2つの電極より得られる

線維筋電図針を用いて，放波間距経の変動と同時波形は，互いのSWeepの基線を一致させ（図2A）にpairの各々の筋線経の筋線維伝導時間の変動

先行する筋線経の活動電位でtriggerも観察し，筋ジストロフィー症での筋収縮の強さ

SWeep Speedで観察する（図2B）．互いの筋線経と両者との関連を検討した．

の伝導速度（propagationvelocity）はElとE2 の電極間距経を互いの活動電位のずれ（PVl，PV2）

させて早い

方法と対象

で徐した倦となる．正確な伝導速度の測定には電各種筋ジストロフィー症の一側総指伸筋で不均極が筋線経に一番近接した位置（活動電位の振幅

一な随意的収縮下で多極型単一筋線維筋電図針（多がmaximumになる位置）になるようにしなけれ極針）を用いて単一筋線維由来の活動電位を観察ばならないが，今回はpairの互いの筋線経の伝導した．多極針は図lのように約25／Jの直径を有す

時問の変動を検討するので若干不正確な伝導速度が得られている．

る電極が3個と6個が約20恥の間隔で1対立して針の横に埋め込まれた約D．65mmの太さを持つ筋電

互いの筋線経の筋線維伝導時問のわずかな変動

図針である．対立する互いの電極間距経は図の如を観察するために，互いに早いSWeep Speed（40く計測されている．多極針を筋線経の走行に垂直FL／cm）で検索できるようにdualsweep methodに近い穿刺で総指伸筋に穿入させる．まず一方のを用い2channelのdata recorder（TEAC R−410）

列の一つの電極（例えば電極No8）でpairを捕に収録された波形を1／5のSpeedで再生して分析を行った．

＊国立療養所宇多野病院手中経内科

−157−

区＝

結

間が短いとIPIは短縮する．同程度の筋収縮で反果分析方法を具体的な例で示す．Duchenne型筋

射間隔がほぼ一定でもIPIは短縮傾向を示す．図ジストロフィー症（18歳男性）の総指伸筋より得ら3の左側にプロットしてある各々の筋線経の伝導れた1つのpairの妹波間距離（interpotentialinte−

時間（PVl，PV2）もIPIと同様な延長・短縮傾向

rval：IPI）と1st component及び2nd component

を示し，この変動はPV2（2nd componentの筋線維伝導時間をそれぞれPVl，PV2として横線維伝導時間）においてより著明であった．次に軸にプロットする．図3は筋収縮の強弱を変えながら下方から上方へ連続的に記録した時の同一同一pairでのIPI，PVl，PV2の分析方法を変えて任意の記録部位より直前に出現した同一pairからpairのIPI，PVl，PV2をプロットしたものであの時間（反射間隔interdischargeinterval：IDI）

る．このpairのIPIの変動は図中の右半分のプロを縦軸にとりIPI，PVl，PV2の変動をみる（図4）．

ットでわかるように，直前に出現した同一pairとこのようにすると図3で認められた直前に出現しの時間的間隔と密接な関連を示し，直前のpairかた同一pairからの時間との関係がより明らかとなの筋らの時間が長いと（筋収縮が弱くなると）IPIはり，直前に出現した同一pairからの時間が短い（I長くなり，逆に筋収縮が強く直前のpairからの時

DIが小さく−158−なる）と，IPI，PVl，PV2は共に短Propaqat10n Veiocity（PV）
A．Continuous modeb Raster mOde・〟ltrl行唱er
te仁卜niqUe

慮鱒噂蚊

図2
∝
S
（N＝52）

7
． ●

●

6

1
●

■ ● ●

● ● − ●PMD（Duchenne type：●：

PVl＝ん3

：

m／SeC

■

ん

∞

PV．＝6ムm／sec

J● ● ⁚ 一 ⁚ ● ● ● ●5●t ． ． ︐ ︐ ： ● ⁚ ： ： ・ ． ヽ ●H．K．18MaLe

●

： ㌧

■

⁚

3

∞

● ● ■ ● − ●H．K．18帖Ie
●■′

⁚

・r

一

′
．l

．
：

︐●・ヽ

㌧
；

●／・︐ヽ■■ヽ

⁚

︐ヽ・・そ

・

PMD（Duchenne type）
PVF4．3m／SeC（ム鞘＝17％）
Puニ m／sec（A咋35％）

t●●●

0
∩︶

・

：⁚●

・

．・ヽ′；
t■
●●

■●

−′

● ● − ● ■ ■

∵・・．・
●■●■−

0

mseG

図3
−159−

0
4

4．5

弥

3．9 48

9
3

勒

→t−∃e
50〟SeC

iPl
ん5ms点て

縞を示し，IPIはIDIが200msec以内（筋収縮る．

が1秒間5発以上の強い収縮）ではIPIの変動の

図4の方法に従って各種筋ジストロフィー症よ巾が大きくなる．IPIの変動はIDIが小さくなる
につれて扇状の広がりを示す．PVl，PV2の変動

I）得られたpairでの分析結果をまとめたのが図5である．それぞれの1st component

を横軸のの程度を示すために，IDIが500msec以上の時の0の位置にとり横軸は2nd component

までの平それぞれの伝導時間に対して，IDIが充分小さい

均妓波間距柾を示す．縦軸にそれぞれの筋線経の時の伝導時間の短縮を短縮率として△PV（％表

伝導速度を計算して，同一pairは実線で結んであ示）で表わした．このpairでの△PVl及び△PV2

る．（）内にそれぞれの筋線経の△PVを％ではそれぞれ17％と35％で，遅れて出現する2nd示した．この5つのpairでのそれぞれの筋線維伝

componentの短縮率が先行する1st component

導速度は2−6m／SeCで，2nd componentの方のそれを上まわり，IDIが短くなるとそれだけ2ndが先行する1st componentより遅い傾向にある．

componentの伝導速度が早くなって結果として2つの筋線経の練波間距柾が短くなると考えられ△PVは先述のpairを除き他のpairではlst c0−
mponentの方が大きい傾向を示した．

Propagation VeLocity and APV oflst and

0

1

2

3

1st

4

5

2nd Component

6

msec
lPI

COmPOnent

図5

ー160−

考

察

よる記録電極のわずかな位置のずれがPV測定に

Velocityrecoveryfunction（VRF）はStalberg

大きく影響し，真のPVの変動が把握できにくい，が同一の単一筋線経の伝導速度が直前に興奮して（∋神経筋接合部（筋腹中央部）より記録電極までからの時間と密接な関係にある事を，同一の筋線には数cmの筋練経があるが，そのうちわずか2∝）〃経の間隔を変えた電気刺激により見出した現象での長さの筋線経の状態をみているにすぎないため，

ある1）．興奮直後は筋線経のrefractory rhase

残りの筋線経の状態が把握できていない，③△PVのため刺激が来ても興奮は起こらないが約SeCにpeakをもって10msec〜1000msecにわたを算出するのに用手的解析法では限界がある，などが考えられた．

り伝導速度が速くなる現象である．このことは電気

総指伸筋における筋線維伝導速度はStalberg50m−

刺激によらず随意的収縮の強さを変えてもみられによれば平均3．5m／SeCで2），我々の計測とほぼ同

正常筋でも16％の筋線経に明らかなVRFが認め一であり，筋線維伝導速度の測定方法は我々の多られ，筋ジストロフィー症ではVRFの著明な筋線経が増加し約50％にも及ぶ2）．このVRFの成因

極針で充分であると考える．又，2nd componetの伝導速度が1st componentに比べて遅い傾向は不明であるが筋線維膜の一つの特性を表わす指にあることも一致しており，形態的に細い筋線維標としてとらえられているが，筋ジストロフィー

又は筋線維膜に障害のある（Tsystemの異常が強症で著明になることは，筋ジストロフィー症のTい？）筋緑経が2ndcomponentとして出現すると思われる．

SyStemの形態上の異常を考えると興味ある現象
である．一方同一pairの赦波間距離が時間的経過で変動する現象がjitter現象であるが，神経筋接合部のtransmission timeのVariability由来の文
1）Eric

献

Stalberg：Propagation

velocityinhu一junctionaljitterの他に互いの筋線経のVRFの程manmusclefibersinsitu．Acta Physiologica

度の差によるVRF由来のjitter（myogenic jit−

Scandinavica，70［Suppl．287］：1−112，1966．

ter）が筋ジストロフィー症で大きく関与する事が

2）EricStalberg：Electrogenesisinhumandyst−

予想される．昨年度は各種筋ジストロフィー症でrophic musclein ttPathogenesis of human

このmyogenic jitterを示すpairが多い事を示し，

muscular

特にlatecomponentとの間では著明であった3）．
VRFの大きさを示す一つの指標として△PVを

dystrophies，Excerpta

Medica．，

Amsterdam，1977，p570−587．
3）西谷裕，小西哲郎，他：筋ジストロフィー症

それぞれの筋線経で検索したが，今回は1つのpairの単一筋線維筋電図，筋ジストロフィー症の病を除き他は1st componentの方が△PVが大き因の究明に関する研究，第二班（三好班）昭和

い傾向を示し予想とは反する結果が得られた．そ53年度報告書，1979，p．134−138．

の理由としては（∋PVの測定には筋収縮の強弱にー161−

31）晴乳動物の骨格筋に対するE−C Uncoupling

原

栗

照

幸

移す時osmotic shockでt−SyStem

は じ め にの選択的破壊骨格筋の活動する状態を微小電極法によって細が起ることを目的としたが，Washing Solution

胞内記録する際に最も困難なことは筋活動電位に伴って起る筋肉の収縮のために筋細胞の同一部には5mMのCaとMgを哺乳動物用リンガー液に加えることによって膜電位の低下を防いだ4）．

位に微小電極を保持し切れないことである．膜電Dantroleneと高張グリセロールの筋収縮阻止能位や微小終板電位は静止時に記録できるが，神経力を夫々検討した後に，両者の作用を総合して利反復刺激によって神経筋伝達の状況を連続記録し用すると目的に合う結果が得られるか否かについたり，ミオトニーの記録等は筋肉の活動中に記録て更に検索した．又E−C Uncouplingを行った上しなければ，十分解明できない問題があり，そので神経反復刺激を行い，微小電板を同一部位に保ような筋細胞膜における変化を捕えるためにExc−

持できるか否か，又膜電位や微小終板電位に本法

itation−Contraction（E−C）Uncoupling（興奮収縮が悪影響を与えないか否か，対照筋群と比較した．

連関阻止）は重要であり，カエルではEisenberg
ら1）によりこの方法は考えられているが，ここで結果は特にヒトの筋病変へ適応できる可能性を考えて，l）DantroJene sodiumの効果

哺乳動物の骨格筋について行った結果を述べる．

図Iに示すようにTyrode液のみに標本を浸し神経筋伝達に障害を与えず，又膜電位の低下もさた対照筋では初めの等尺性張力を100％とすると40分後にも100％で張力は減少しない．これに対してDantroleneを 0．1mg／L，0．5mg／L，5．0

せずに筋収縮を阻止し，筋活動時の生理学的変化
を微小電極により連続記録できるような方法の解

mg／L，30mg／Lの濃度でTyrode液中に加えた夫々の実験結果をまとめると，Dantroleneの明が本研究の目的である．
方

濃度に応じて浪いものほど等尺性張力は減少し，法

対象は体重150−250gのウィスター系ラットを薬の効果は15−20分後に最大となりそれ以後は同り，標本は常じ程度の筋収縮阻止が続く．薬の作用前の状態

時95％02と5％C02の混合ガスを溶液中に通じに比し，濃度30mg／Lの実験でも80％の張力をて酸素化した．筋細胞内記録は，ガラス管微小電取り除くのが限度で，完全に筋収縮を阻止する用いた．横隔膜一神経標本2）をつく

極を自作し，抵抗5−15megohmのものを選んでことはできなかった．またDantrolene sodium

用いた．E・C UncouplingについてはDantrolene

は水に雉音容性で長時間撹拝器を用いても60mg／L

sodium3）の筋収縮阻止能力を種々の濃度で計測す以上はTyrode液に溶解させることは困雉であっるため等尺性張力を計り，高張グリセロールにつた．

いてはEisenberg4）がカエルに用いた400mM／

2）高張グリセロールとWashing SoJutionの効果

Lの濃度でラットに試みた．400mMのグリセロ

400mM／Lの高張グリセロール溶液に標本を60ールを1月の晴乳動物用リンガー液に溶解し，標分間，次にWashing Solutionに20分間酸素化し本を60分i受し，次に等張のWashing Solutionにながら等尺性張力を経時的に計測してみるとこの方法により98％の張力を取り除くことができるが＊宮崎医科大学第三内科

2％の筋収縮は残り，この程度の筋収縮でも微小−162−

4）本法によるE−C Uncouplingの膜電位に対する影響

Isometric Twitch Tension

以上のように3）で記載した方法では蕾重々の溶Cont「01

液に長時間筋肉標本を浸すが，この間酸素化を続けて膜電位を保持するよう努めている．薬剤が膜（in Tyrode Sol for L10min）
40min exposure to

電位に悪影響を及ぼさないか否か検討するため対」）mtrolene Solution

照筋糸田胞100個，Dantrolene溶液で濃度5mg／Lと60mg／Lに筋標本を浸した時の膜電位を筋細胞500．1mq／Liter

個よr）夫々測定し，更に400mM Glycerol，Wash−ing Solution，5mg／LのDantrolene 音容液に3）の方法で浸した筋細胞50個より膜電位を測定して・0．5mg／Liter

5．0mg／Lite「区12に示すと，対照で一83．8mV，Dantrolene

溶

国

50mg／Liter

図l 濃度の異る溶液における等尺性張力
対照筋と種々の濃度でDantroleneを Tyro−
de液に加えた溶液に筋標本を浸して40分後の等尺性張力を示す．Dantrolene の濃度に応じて等尺性張力は減少するが最も濃い30mg／Lの溶液でも，80％の張力を取り除く程度で，完全に筋収縮を阻止することはできない．
電極を機械的に動かし得るので不完全である．カエルではこの方法で十分な筋収縮阻止ができるが，哺乳動物の骨格筋ではこの方法のみでは不完全であることが明らかとなった．

了二㌔三㌔■、

3）高張グリセロールとWashing Solution に加えてDantrolene sodiumの作用を追加した方法5）6）以上1），2）で述べたようにDantrolene

勺■

のみ
図2

でも又グリセロールのみでも不完全であるから，更に完全なE−C Uncouplingを行うためまず2）の方法で98％の等尺性張力を除いておいてから
Dantroleneを

5mg／Lの濃度でTyrode液中に溶解した淡黄色の溶液に浸し本薬剤が最も効果を現わす20分後に等尺性張力を計測すると99．7％の収縮は阻止された．残りの0．3％の筋収縮力は等尺性張力としては記録できるが顕微鏡下でも筋収縮は神経刺激をしても認められずこの方法では完全にE−C Uncouplingを行うことができた．
一163−

静止膜電位の比較
対照筋細胞100個，Dantrolene溶液5mg／Lと60mg／Lに筋標本を浸した時の膜電位，及び
グ1）セロール，WashingSolution，Dantrolene
5mg／Lの溶液に夫々60分，20分，20分間筋標本を浸した時の膜電位を夫々50個より計測し，平均値を棒グラフで示し，標準偏差を縦の棒で夫々示した．
対照筋に比し，Dantroleneも又E−CUncoup−
lingをした標本も膜電位に有意差を認めなかった．

液ではr84．4mV（5mg／L），r82．7mV（60mg／L）と対照筋に比して統計的有意差なく，又400mM

400mM Glycerol，Washing Solution，5mg／L
Dantrolene溶液に浸してE−C Uncouplingを行っ

Glycerol，Washing Solution，5mg／LDantrolene

た標本でも0．63mVで統計的に対照筋群に比し有溶液に浸してE−C Uncoupling を作った標本でも−81．3mVと対照筋に比し有意な膜電位の変化は意差を認めなかった．又meppの頻度についても起らなかった（p＜0．05）．

行った標本では0．90〜3．75回／秒と有意差を認め

5）本法によるE−C Uncouplingのmepp
る影響

に対す

対照筋群で0．76〜2．73回／秒，E−C Uncouplingをなかった．

神経筋伝達に関しては，重要な指標である mepp

6）本法によるE−C UncoupLingによって筋収縮を阻止し細胞内連続記妄責を実地に行った結果に対してquantal sizeに本法が何ら悪影響を与えないことを確認するため10ヶ所の終板部より夫々時において筋収縮をほぼ完全に阻止し，微小電極

上記の方法で行ったE−C Uncouplingが筋活動100個ずつmePpを記録し，quantal sizeを計算しを同一部位に保持して連続記録を可能とするか否

図3に結果をまとめた．対照筋群では平均値としかを実地に行ってみたところ，顕微鏡下で神経終て0．52mV，5％Dantrolene溶液では0．49mV，

板部位の馴莫に微小電極を挿入し，毎秒20回の神経刺激を連続し，筋活動電位を12，000回以上も続けて記録することに成功した．神経反復刺激を

州EPP qu抑tal Size

20〜30Hzで続けると終板電位が漸減して，活動電位を生ずるには問値以下となった終板電位
subthresholdeppが認められる．この間の連続記
録を図4に示した．
神経刺激中に筋活動電位を高増幅で記録すると
筋活動電位の出現している最中にも図5のようにmeppが記録でき，終板部に微小電極を保持できていることが明らかとなった．
考察

現在まで，筋肉の静止時における生理学的現象
は膜電位，meppの電位差及び1秒間の頻度等を記録することにより観察され，又筋収縮に関して
10endpl（】teSはtransducerを応用して記録され数学的にも精細

10endp10teS lO erdpl【lteS

な分析がなされている．筋活動時においては筋活

図3 微小終板電位（mepp）の素量（quantalsize）の比較
対照筋群，Dantrolene 5mg／L溶液，及びグ

動電位を1個記録することはE−C Uncouplingを））セロール，WashingSolution，Dantrolene5

胞内記録することはほとんど不可能である．これ

mg／L溶液に夫々60分，20分，20分浸してE−C
Uncouplingをした標本のmeppを10の異る終板部位より100個ずつ記録して素量と標準偏差を示したもの．

しなくても可能であるが第1回目の筋活動電位出現に続く筋収縮のため2個以上の筋活動電位を細を可能とする方法は，筋肉の収縮と共に動く微小電極を用いるか，又は筋肉の収縮を筋細胞膜より末梢で完全に阻止するかのどちらかの方法で行う

対照筋群のmeppに比して，Dantrolene単独
でも，又グリセロpル等でE−CUncouplingを以外にはない．本論文では後者の方法を哺乳動物した後でもmeppの素量には有意差はない．

し，結果で述べたようにその目的を達成したと考の骨格筋に適応できる形で開発することを目的とー164−

・Repetitive nervestim・」＝⊥＿止＿＿＿＿ユ＿軋＿
15川
50

msoC

図4 神経反復刺激時における筋活動電位の連続記録
E−CUncouplingを行った後に，神経終板部位の筋膜に徴′ト電極を挿入し，神経反復刺激を行って筋活動電位を連続記録したもの．神経刺激は20Hz．
上段は，神経刺激開始時の活動電位．
下段は，神経刺激を12，000回以上続けた後eppが次第に減少し，閉値以下となって来た状態で，従来1〜2個しか筋活動電位を記録できないのに比し，本法によってE−C Uncouplingをすれば筋活動時に連続記録が，可能である
ことを示す．

ActionPbtentials

andmepp

Sエ」」」」」」」」」」正し・」止＿」」」」」」」」」」」

llmv
l00msec

図5

神経反復刺激中の筋活動電位とmeppの高増幅記録
神経刺激は，30Hz．
ErC Uncouplingを行った上で，終板部位に微小電極を挿入して，筋活動電位の出現している最中にもmeppが記録でき，終板部に微小電極を保持できていることが明らかである．上図にはmeppが13個あるが，代表的なもの3
つに矢印を附した．
−165−

謝 辞：御校閲をいただいた宮崎医科大学第三

えられる．
カエルではEisenbergら4）により高張グリセロ

内科・荒木淑郎教授に感謝致します．

ールと等張のWashing Solutionによって十分な
E−C Uncouplingができるが哺乳動物の骨格筋で文

献は上述のように98％の等尺性張力を阻止する程度

1）Eisenberg，R．S．＆Gage，P．W．：Frogskeletal

で完全ではなく，これにDantrolene溶液を用い

musclefibers：Changesin electrical proper−て更に残りの2％の張力をできるだけ取り除くよties after disruption of transverse tubular

うに努めたところ99．7％の筋収縮を阻止しほぼ完
全に微小電極記録を可能とした．

2）KrnjeviC，K．＆Miledi，R∴Adrenaline and

本法は膜電位，meppには影響を及ぼさないこ

failure of neuromuscular transmission．Na−とが結果において示したように明らかになったの

SyStem．Science，158：1700，1967．

ture，180：814，1957．

で，神経筋伝達及び筋細胞膜の活動時における連

3）Heald，D．E．＆Matsumoto，Y．：Theeffectof

続記録が可能となり，筋肉病学への応用としては

dantrolene sodium on striated muscle．Phar−

重症筋無力症，筋無力症様症候群，ミオトニーを

macology，13：264，1971．

来す疾患群をはじめ，近年筋ジストロフィー症に

4）Eisenberg，R．S．，Howell，J．N．＆Vaughan，P．

おいても筋細胞膜の異常が注目されていることか

C．：Themaintenanceofrestingpotentialsin

ら後者への微小電極法による研究の一助となり得

glycerol−treated muscle

るのではないかと考える．

215：95，1971．

fibers．J．Physio1．，5）Kurihara，T．＆Brooks，J．E．：Excitation−
まとContractionUncoupling：Theeffectofhyper−

め筋肉が反復活動している際にも微小電極法によosmolarglyceroI solution and dantrolene

る細胞内連続記録を可能とするために，哺乳動物

sodium onmammalianmuscleinvitro．Arch．

の骨格筋において高張グリセロール溶液，

Neurolリ

Was−

32：92，1975．

hing Solution及びDantroleneを用いてE−C Un−

6）Kurihara，T．，Araki，S．＆Shirabe，T．：Elec−

COuplingを行い等尺性張力の99．7％を阻止するこ

tronmicroscopicstudiesoftheTTSyStem：Theとが可能となり，単一筋細胞内連続記録が行える

effectsofhyperosmolarglycer

01anddantr0−

ようになった．本法は膜電位やmeppには影響を

1ene sodium on marnmalian muscles．Folia

及ぼさずに筋収縮を阻止するので，特に筋活動時

Psychiatr．Neurol．Jpn．，30：179，1976．

における筋細胞膜の生理的及び病態の研究に役立つと考えられる．

−166−32）微小電極法によるミオトニーの研究
＊

栗

原

照

幸
ガラス管微小電極は直径1．5mmのガラス管中には じ め にミオトニーでは筋肉のpercussionやneedlein−glass fiberを2本入れてから加熟して作成し，先Sertion等の機械的刺激でmyotonic burstが起り

端は0．5FL，電気抵抗5〜15megohmのものを選んやすい原因を明らかにする目的で，ラットの横隔で用いた．ガラス管内には3M KClを満たした．

膜一神経標本を用いて微小電極法により実験を行った．今回は以下に述べる4点を明らかにする目筋活動時の細胞内記録は，前論文で述べた方法
でE−CUncouplingを行い，筋収縮を阻止してか的で検索した．

ら行った．

（1）対照筋においてaction potential（AP）を生じ

ミオトニーはアントラセンー9−カルボン酸をTyrode液中に10￣4M／Lの濃度で用い，drug−

る終板電位（epp）の閉値を実測すること．
（2）化学薬品によって作成した実験的ミオトニー

induced myotonicを作成した1）・2）．
ミオトニー標本に対する対照筋群の発火閤値をにおいて，myOtOnic burstを細胞内記録して筋活実測することはdrtubocurarine等の薬物の影響

動電位の分析をすること．
（3）ミオトニー標本にみられる筋活動電位の初期をうけない状態で行おうと試みたため，

E−Cに認められるinitial depolarizationを記録して計

Uncoupling

測すること．

極を挿入して神経反復刺激を30Hzで行いSub−（4）Myotonic microoscillationの電位差を測定を用いて10ヶ所の終板部位に微小電thresholdとなったeppを各々100個ずつ実測した．

し，筋活動電位に移行するものの問値を実測すること．以上4点を明らかにしてミオトニー標本が結対照筋標本に比して筋活動電位の発火同値が低下

果（り対照筋群における終板電位の闇値しているか否か検討することが本論文の主な研究目的である．

ErC Uncouplingをした上で終板部位に微小電極を保持し神経反復刺激中の筋活動電位を連続記録すると図lの様にeppが閥倍以上の時には上図

方法のようにeppは活動電位に隠れて認められない．

対象はウィスター系ラットで体重150〜250gの哺乳動物ではeppから筋活動電位への移行が速く，ものを用い，左横隔膜とそれに附着する左横隔神

カエルの骨格筋のようにeppによるnotching

経をできるだけ長く取り出すため，エーテル麻酔認められない．神経反復刺激を続けeppが漸減し下で開胴，開腹して標本をとり，直ちに95％02，て筋活動電位を生じるには問値以下となるとepp

5％C02を通じて持続的に酸素化しながらTyro−
をのみ残って活動電位は生じないため，Subthresh−
0ldとなった瞬間のeppを記録でき．これを実測し行い，微小電極法による記録のできる形に整えた．

て電位差を100個の計測から平均値を求め，実験

標本は筋線経の全長にわたって筋腹に傷害を与えないようにとり，傷害電流によって隈電位の低下を10回行って10個の異なる終板部位での記録を集計した．これを表Iにまとめると，大きなものでが起らないよう細心の注意を払って取り扱った．

Subthreshold eppは24．45mV，小さなもので11．14

de液中に標本を入れ，顕微鏡下でdissection

mV，総平均は16．22mVであった．
＊宮崎医科大学第三内科

ー167−

が

Actlon PotentiQl

Repetitive nervestim．

」二」⊥」OmV−80mV
After repetltlve nerve Stlm．
No Act10n PotentlOl

Subthreshold epps
／

／

＿＿＿＿
」
50 mSOC

桑
；●

eppis
subthreshold

5川

図l 神経反復刺激による筋活動電位の連続記録．
E・CUncouplingを行った上で，終板部位より，神経反復刺激（20Hz）中の筋活動電位を連続記録したもので，上図は刺激開始時，下図は12，000回以上神経刺激をした後に eppが閥値以下となった状態を記録できた．右側にeppとaction potential との関係を模式図を用いて説明した．
Subthreshold Epps

No ．

Inltlol depoIqrlzc）tion

epps ！ S ．
D ．（
mv）

Of myotonlc flbers

1．

2上
Ⅰ
．
q5 ± 2 ．
的

2．

22 ．
67 ± 1 −
67

5．

20 ．
79 ± 0 ．
62

1．

5．65±0．22（S．D．）mV

句暮

15 ．
79 ± 5 ．
162．

5．61±0．75

5．

15 ．
7q ± 0 ．
51

5．

6．00±0．60

6．

1上
1．
88 ± 1 ．
句
8

句．

6．57±0．50

7．

12 ．
55 ± 1．
ql

5．

6．59±0．60

8．

12 ．
18 ± 1．
72

6．

7．65±0．q8

9．

11 ．
97 ± 1．
567．

7．68±0．51

10 ．

11 ．
14 ±2 ．
0句

me（】n6．25±1．58（S．I）．）mV
16 ．
22 mv
m e（
】
n￣

（
Rqnge ：
2上
I．
q5−
11 ．
1上
l）

（Ronge：5．65−−7．68mV）

表l 筋活動電位の問値．
対照筋群における筋活動電位の問値を実測する
ため，10ヶ所の異なる終板部位からそれぞれ100
個ずつeppを測定し，平均値と標準偏差を表にまとめた．
神経反復刺激（20〜30Hz）を続けて間借以下となった瞬間のeppを計測した．

表2 Myotonic burst時のinitial depolarization．
Myotonicburstにおいて図2に示した活動電位を生じる前の脱分極を7回の実験で実測し，平均値と標準偏差をまとめて表示する．

一168−

MYOtOnie bu帽t

ふ．触i。nf6．00±0．60nWI

llOnW
I s

図2

Myotonic burstの微小電極による細胞内記録．
E−C Uncouplingをした上でミオトニーを作成し，myOtOnicburstを細胞内に微小電極を挿入してオシロペーパーに連続記録したもの．
ミオトニーでは，活動電位の始まりの部分に脱分極が認められ，これを実測することができた．

MYOtOnic bur＄t

lSOmV
I S

Mieroosc川ation‥′ル示二∴毎払 ソ‥●血亘り′ル云・±＼㈹仙mtlⅦ■m画it血
叫岬伽血 bur椚OC￠url●d■hy■●諷03汀〟

図3

【SmV

Myotonic burstとmicrooscillationの記録．
E−CUncoupling後，myOtOnicburstを細胞内記録すると，筋収縮が阻止してあるにもかかわらず，基線の動揺が認められたので（A），更に詳細に観察するためBにdualoscilloscopeで上に高増幅，下に低増幅で同時にmyo−tonicburstを記録したところ高増幅記録で明らかにmicrooscillationをみた．この電位差を測定すると5．03±0．28mV以上のmicrooscillationがあると筋活動電位の発火を認めた．
−169一

（2）Myotonio burstに認められるinitial

では，微小電極を挿入するとinsertion myotonia

depoFarizationの実測が起り，myOtOnic burstに伴って膜電位も低下す

E−C Uncouplingをした上でミオトニーをアンるので，対照群のように終板部位での神経反復刺トラセンー9Lカルポン酸で作成し，myOtOnic burst

激による記録は技術的に安定した結果を得ること

をオシロペーパーに細胞内連続記録をした結果，は不可能であった．しかし幸いなことにmyotonic

図2に示すようにミオトニーで認められる活動電burstには活動電位の生じる前に脱分極が認め位の形は図l上図と異なり（対照筋と対比のこと），

られE−C Uncouplingを行った上でburstを連続

初めに脱分極があって活動電位に移行している．

記録することによって，initialdepolarizationを

そこでこの脱分極の電位差を実測することが可能

多数計測することができ，ミオトニー標本の発火であった．表2に結果をまとめると，7回の実験

閥値を実測することが可能となった．

結果より，initial depolarizationの電位差は3．65

Myotonic burstを高増幅記録をしてmicroos−mVから7．68mV，総平均6．25mVのdepolariza−
tionに引き続いて筋活動電位が起っていることがCillationが記録できたので更にこの電位差を計測

明らかになった．

し，上述の方法とは別の現象からミオトニー標本の発火閥値を検索し対比したところ5．03±0．28mV（3）Myotonic microoscillationからの発火闇値の実測以上のmicrooscillationがあるときにはミオトニ

Myotonic burstを図3に低増幅（上図）で記録ある11．14−24．45mVと比し低下していることがしたところ基線のOSCillationが認められ，更に詳ーの発火が起っており，これも対照筋群の閉値で明らかとなった．

細に検討するため高増幅（下図）をして記録した本研究で実験的に作成したミオトニーは，アンところmicrooscillationが明らかに認められ，そトラセンー9−カルポン酸によってラットの骨格筋の振幅を計測すると5．03土0．28mV以上では引きにinvitroでつくったものであるが，この薬品は続いてmyotoniaの発火を認めた．Microoscilla・筋細胞膜におけるクロールイオンに対する透過性

tionに伴って筋活動電位が生じていない時の振幅はを減少させる作用がある4）．Lipicky等5）F）研究で3．46±0．42mVであった．

ヒトのミオトニーにおいてもクロールイオンに対する透過性が減少していることが明らかにされ，

考察

ミオトニーは筋細胞膜の異常で起ることに関して

ミオトニーではわずかの機械的刺激で筋活動電は両者とも近似しているが，全く同じであると断位の連続発火が起るが，その原因として発火問値

言することはできない．本報告は，ミオトニーにが低下しているであろうことは想像できるが実測伴う種々の現象を研究する方法論の一つを動物モするとなると多くの難問が残っている．第一に正デルにおいてまず確立し，更にヒトのミオトニー

常筋において発火閥値は何mVであるかという点

へ検索を進めて行く上で一助となると考えられる．

に関しても，これを哨乳動物の骨格筋で計測する
ことは容易ではない3）．しかしまずその測定を行わ

ま

と

め

なければ，ミオトニーにおいて発火間借が正常筋

1．ラットの横隔膜一神経標本に，アントラセ

群に比して下っているかどうかは比較できない．
そこでまず対照筋群においてE−C Uncouplingを行

ン￣9−カルポン酸を用いて実験的ミオトニーを作成した．

い神経反復刺激によって終板部からの細胞内連続2．Myotonic burstの細胞内連続記録は，E，C記録を行いeppが漸減して問値以下となった瞬間

Uncouplingをして筋収縮を阻止することによって可能とした．

のeppの値を正常筋群における発火問値とした．
神経終板によってその間他の違いがあるので，10ヶ所の終板部位で計測を行った．ミオトニー標本

3・対照筋群では11．14−24．45mVの脱分極が，筋活動電位の発火問値となる．

−170−

4．ミオトニー標本では筋活動電位の形が対照

生理学的研究．臨床神経，18：332，1978．

筋群と異なり，筋活動電位の始まりの部分に脱分極2）Kurihara，T．：ExperimentalMyotonia．Foliaが認められ，その振幅を実測すると，3．65〜7・68

Pschiatr．Neurol．Jpn．，31：1977．
3）Kurihara，T．＆Brooks，J．E．：The mechani−

mVが発火閥値となっている．
5．Myotonic microoscillationについても，
5．03±0．28mV以上では引き続き発火を認めてい

Sm Of neuromuscular fatigue：A study ofる．

tion uncoupling．Arch．Neuro1．，32：168，

6．ミオトニー標本ではinitialdepolarization
から計測しても，myOtOnic microoscillation

より計測しても約4−8mVの脱分極があれば筋活
動電位を生じることから，対照筋群の11〜24mVの閏値に比し有意に発火問値が低下しており，わずかな脱分極で筋肉の発火が起りやすい状態にあmamma】ianmuscleusingexcitation−COntl：aC−

1975．

4）Bryant，S．H．＆Morales−Aguilera，A．：Chlo−ride conductanceinnormal and myotonic

muSClefibersandtheactionofmonocarboxy−

lic aromatic acids．J．Physio1．，219：367，
1971．

5）Lipicky，R．J．，Bryant，S．H．et al．：Cable

ることが明らかとなった．

parameters，SOdium，pOtaSSium，Chloride，and

謝辞：御校閲をいただいた宮崎医科大学第三内科，荒木淑郎教授に感謝致します．

Water COntent，andisolated externalinter−
C（一Stalmuscleofnormalvolunteers

and

pa−

tientswith myotonia congenita．J．Clin．In−

文

献

VeSt．，50：2091，1971．

1）栗原照幸：ミオトニーの発生機序に関する電気

一171−33）実験的excessive〔Ca≠〕i−induced myopathy
に関する研究
＊

高

研究協力者
目

守

辻 畑

正
光

治
宏

迫

竜

EPP振幅を1．5〜3．5mVの間に維持するに要する

的筋ジストロフィー症について，筋細胞膜Ca≠透

クラーレ濃度をもって表現した．薬理学的指標に

過性変化1），2），Ca廿に反応する細胞機構の変化3…筋
小胞体Ca≠結合の異常4）などによる細胞内Ca≠のは，Ouabainl．7×10L4M，Epinephrine

病因的役割が問題とされ，本病の比較的早期からnent；Novo）0．5i．u．／mlを用いた．薬理学的ミオ

病理組織学的に壊死像や過剰収縮筋線経が見出さ

バナーは，Duncan＆Smithの方法8）を修飾し，れることや5）・6ミ蛋白分解酵素活性上昇，遊離7）が30分間8mMカフェイン濯流とともに，2Hz反証明されている事実は，これを示唆している．人

復電気刺激を与え10；細胞内freeCa≠濃度増加を工的に細胞内Ca≠レベルを高め筋細胞変性を招来期待して作製した．

ml，Theophylline

5FLg／

2mM，Insulin（monocompoTしうる薬理学的因子としては，カフェイン8）やA
231879）が知られている．本研究は玩＝〟か（）で骨結

果格筋にカフェインと反復電気刺激を与えて細胞内

1）正常横隔膜筋静止膜電位の薬理学的因子にCa≠濃度を高めた病的状態をつくり，これを生理，

対する反応を，各薬剤潅流開始20分目から35分目

薬理学的に検討して，ジストロフィー筋病態との関連を調べた．

までの間の記録平均を・，潅流前記録平均と対比して調べた．Ouabainに対しては，10mVの静止電位脱分極を示した．Epinephrineに対しては，5方法

mVの過分極を示し，これはphosphodiesterase

雄ウイスター系ラット（150−200g）から，pe−

inl1ibitor（Theophylline）添加により，さらに4ntobarbital麻酔下で横隔膜神経筋標本を取り出mV過分極化した．一方，Ouabainは，Epinephr−

し，正常リンゲル液（95％02十5％CO2，330C）

ine の過分極作用を阻止した（図日左上段）．静止

潅流下で容器に固定した．静止膜電位は無作意的電位の安定した単一筋線経について薬剤の影響を

穿刺で筋線維20本以上の平均を求めた．微小終板

みると，微小終板電位MEPPは，Epinephrine濯電位（MEPP）は顕微鏡下で神経終末の確認を行流，さらにこれにTheophylline添加によって，ないながら探し，電位のrise timeが0．6msec以

静止電位過分垣化にともない振幅増大を示し，同下のものだけを採取した．終板電位（EPP）は，
濯流液内にd−tubocurarineを加えて神経刺激に時に放電頻度の増加も観察された（図l右）．Insu−
linに対しては，5mVの静止膜電位過分極化がみ

よる筋収縮を妨げて記録した．quantum sizeられた．ところがOuabain底流で前処置したのちはEPP振幅の分散をEPP振幅の平均で除して求めこれにInsulin

た（各EPP振幅には，MEPPの非直線的加算のたが観察された（図l左下）．
2）めの補正を行→た）．クラーレ感受性は，単一誘発を添加すると逆に4mVの脱分極

2Hz反復電気刺激と8mMカフェイン濯

流で処理した横隔膜筋について電気生理学的分析＊長崎大学医学部第一内科を行った．静止膜電位は処理前に比べて3mV脱ー172−

Restingnembranepotential（nN）
一50

−60

MEPP

加血柁

【pinephrineかgかl【pi㈹Phrine叫甲111

beforeEpinephrne毎ghll Theophylline2mM

Ep血画lrine中断111¶1eOdlylline2mM
betoreouabin1．7人164M

監慧霊x紺beforelnsu仙0・5i・UかI
kfore

75

81

79

Re虞ir喝nt汁11血Ouabain1．7x佃4日

POtential（mV）

lnsulin O．5i．u
Ouabainl．7xl

図l

触ti咽間叩他州a1

8mMeaffeine

レ
〆
〆
ン
一
一
レ
イ
〆
喜
一
イ
山
叶
だ
仁

control electricatstimulation2Hz
30min．

−5p

bfore
Caffeine8mM
ELectricalstimulatbl12Hz
ouabh1．7x164M
n；35

beforeEpi■℃Phrine軸1l
nち35

ampHtude（汀Ⅳ）0ご75土0・別＄0ご花土0185

旭f・de呵tnle．7士0・05

3．6士0．54f欝；乳価4・2土0・63

17士1．49

beforeG椚eine＄mM
ElectrkaIstimutation2Hz
lnsulinO・5Lu小一l

R．M．Rくl¶V）

75士3．7

Qumhmskeくmd吼00610．002
incl朋血漑丹『濾・atbn
Sensitivityt0

CUrareレVml．）

1．5●1．56

72士3．9

吼0鵬lmOO1
1．5

nく15

一Tp

一叩

∈F

Cが賊ne8mM
Electricalstimulation2Hz

MEPP

−6中

分極を示し，MEPPは振幅には有意の変化をみと

ect18）による附加的所見と推察される．

めなかったが，減衰時間（halfrdecay time）の異（Na＋−K＋）−aCtivated ATPaseブロッカーであ常延長が観察された．放電頻度の増加も伴っているOuabain19）に対するわれわれの処理筋静止膜電たが，quantum Sizeは正常筋と比べ有意差をみとめなかった．クラーレ感受性も正常範囲内であ位の正常な脱分極反応は，ジストロフィー筋でも報告され，denervated muscleと異る重要な薬った（図2左）．

理学的特性の一つとされている20）．

同様の処理筋について薬理学的検討を行った．

筋細胞膜の薬理学的性質を調べる手段として用Ouabainには正常の脱分極反応を示し，一方，Ep・いたEpinephrineについて，われわれはすでに，

inephrine，Insulin に対する過分極反応は欠如な

presynapticにはα受容体を介しアセテルコ1）ン

いし減弱していた（図2右）．

quantal releaseを促してMEPP放電頻度を高め，postsynapticにはβ受容体を介しMEPP振幅増

考案

大を伴う静止膜電位過分極作用があることを示唆

本研究の薬理学的実験的ミオバナーは，カフェ

して来た21）・221後者は，CyClic AMP

を介してインによるCa≠−induced release of Ca」十fromtransport enzymeに作用し，Na＋−K＋能動輸送にSarCOplasmiC reticulum促進11）と，電気刺激によ関与する結果であるとされている231われわれのるdepolarization−induced release ofCa≠from

正常横隔膜筋を用いた電気生理学的実験も，Epi−

SarCOplasmicreticulumの組み合せによって，細nephrineに対する静止膜電位過分極化反応が，Theophyllinerpotentiated，Ouabain−SuppreSSive

胞内free Ca≠レベルを高め，high CaJH．による蛋白分解酵素の活性促進12），遊離13）によると思われる筋細胞変化を期待して作製したものである．病であることを示し，これを確認した．カフェイン，
反復電気刺激処理筋では，このEpinephrineに対

理組織学的立場からは，すでにこの実験系についするpostsynaptic反応が欠如しており，上述したて検討が加えられており，筋小胞体の膨化，Z−

対Epinephrine反応で表現されるNa十linesの不明瞭化，ミトコンド））アは膨化からCO−機構が障害されていることが示唆される．

能動輸送

ntractedの状態となり，やがてmyofilaIl℃nt de−InsulinもNa＋−K＋能動輸送に関与する因子とgradationに至るという机91本研究はこれを電気生されるが，OuabainはInsulinによるNa＋efflux

理，薬理学的見地から検討し，ジストロフィー筋の少なくとも一部とK＋influxをブロックするが，
Ouabain存在下では．InsulinはむしろNa＋influxとの顆似性を考察したものである．
カフェイン，反復電気刺激で処理した筋で，電を促進する（一定レベルのATPの存在または外気生理学的にわれわれがみとめた軽度の静止膜電液K＋低濃度を必須条件とする）241われわれの正位脱分極，MEPPの正常振幅とクラーレに対する

常横隔膜筋を用いた実験結果は，Insulinが静止膜

正常感受性から推定されるアセチルコリン受容体

電位を過分極化し，Ouabain存在下では逆に脱分の非侵襲などは，Duchenne型ジストロフィー筋

極化することを示し，これと子盾しない．カフェ

でもみとめられている141MEPP減衰時間延長は，イン，反復電気刺激処理筋は，この対Insulin反ジストロフィーチキン筋でも報告されている現象

応低下を示し，対Epinephrine反応とは異なる形

で151われわれの処理筋で同時に調べたアセチルコで表現されるNa十能劫輸送系障害の存在が示唆さ

リンquantumSizeは正常であったから，Syna−
ptic cleftの形態やアセチルコリンエステラーゼ

れた．

活性に異常が来ていないものと仮定すれば，股ion
Channel open tirrx：の異常を反映しているものと結語考えられる16），171処理筋で同時に記録したMEPP

人工的に細胞内free Ca≠レベルを高めることを期待してカフェインと反復電気刺激を与えて作製

放電頻度増加は，カフェイン？preSynaptic eff−

した実験的ミオバナーは，（訪細胞膜静止電位脱分ー174−

極，②微小終板電位減衰時間延長，（∋OuabainにCaffeineinpromotingultrastructuraldamage

対する正常反応性，を示し，ジストロフィー筋とinfrogskeletalmuscle6bers．Naunyn−Schmi−

類似ないし関連する所見を得た．また，Ouabain

edeberg

反応性だけでは明らかにし得ない月莫異常を，Na＋

sArch．Pharmaco1．，305：159，1978．

9）Publicover，S．J

Duncan，C．J．＆Smith，J．L．：

能動輸送に関与するEpinephrine，Insulinを用い，TheuseofA23187todemonstratetheroleof

これらに対する膜電位の反応欠如によって明らか

intracellular calciumin causlng ultrastruC−にした．

turaldamageinmammalianmuscle．J．Neu−
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12）Revi11e，W．JリGoll，D．E．，Stomer，M．H．，et

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phy．Inedinmyofibrillarproteinturnover−Subcellu−

Pathogenesis

dystrophies．

（edited

of

by

human

muscularlarlocalization of the proteasein porcine

Rowiand，LP．），

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13）McGowan，E．B．，Sha丘q，S．A．＆Stracher，A．：

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3）Dise，C．AリGoodman，D．B．P．，Lake，W．C．，etDelayed degradation of dystrophic and nor−al．：EnhancedsensitivitytocalciuminDuche−

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time

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course

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decay

of

end一・

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8）Duncan，C．J．＆Smith，J．L．：The action of−175−

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17）Cully−Candy，S．G．，Miledi，R．＆Trautmann，

21）Takamori，M．，Ishii，N．＆Mori，M．：Therole

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18）Elmqvist，D．＆cyclic315′−adenosine

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CateCholaminesonNa−Ktransportandmem−

stoffe ftir den aktivenKalium und Natrium−branepotentialinrat soleus muscle．J．Phy−

transport durchdieErythrocytenmembrane．

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24）Clausen，T．＆Helv．physiol．Acta，11：346，1953．

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265：19，1977．

353，1975．

ー176−34）甲状腺機能低下症にみられる
mounding現象の問題点
＊夫

康

倉

豊

＊夫＊夫

昭 輝

方

木 水

高 活

＊洋＊学

田

的

英

澤

水 作

瀬

＊夫＊美＊史

津

中

秀 成 浩

田

高

目

杉

研究協力者

法

Mounding現象は，myOedemaとも呼ばれ，筋まずmounding現象を容易に生ぜしめ得る，を叩打したときに生ずる持続的局所収縮であり甲Hoffmann症候群の症例にて電気生理学的ならび状腺機能低下症あるいは結核，悪液質などの消耗に上院二頭筋および脾腹筋の生検により，組織学性疾患で出現するといわれているが，健常人にも的，生化学的，生理学的検索を行った．

認められるものである．1846年Schiffが動物の死

次にKCl−Ringer，Dantrolene Na，Brij

58の筋を直接叩打したときに持続的な局所収縮を認め
idiomuskulareWulstbildung（idiomuscularcon−

各溶液で興奮収縮連関を種々の段階でブロックしtraction，特異性筋隆起）と呼んで以来，人間の筋におけるmounding現象を調べ，tranSVerSe tu−

でも生ずること（Bennet，B．，1846），赤筋あるいbule（Trtubule），筋小胞体（SR）の関与を検討

は遅筋で生じやすいこと（R6sner，A．，1900）正常

した．

たラットのヒラメ筋（soleus），長指伸筋（EDL）

筋でも生ずること（Auerbach，1900）などが明らかにされてきた！）その後特異性筋隆起には活動電Hoffmann症候群についての検索流がなく，電気刺激による単収縮とはお互いに影症例（東大神内A24260−79）は，65歳男子で約響しあわないこと2）や，COCaineなどで麻酔した

2年前寒さに弱くなり，その後徐々に毛髪の疎化，筋にても特異性筋隆起は出現すること3）などが明

体重増加，動作緩慢化，筋の硬化腫脹，筋痛，精らかになり，また臨床面でもmounding現象は電神症状などが出現し更に後頭部の鈍痛，硬直およ

気的活動をともなわず（electrically silent），随意収縮とは影響しあわないことが注目されてきび腫脹が進行し首が前に垂れて持ち上がらなくな

た4）・5と識は清明なるも精神的にはやや不安定で怒りやす

われわれは，このようなmounding現象の筋収ったため入院となった．顔貌は表情に乏しく，意く返答は時に的を得ない．体毛は疎で皮膚は乾燥し縮機構が，aCtion potentialを伴う普通の筋収縮

肥厚している．四肢筋には軽い筋力低下と，著明なとどのように異なるのか，また甲状腺機能低下症

肥大，硬直を認め，口唇や舌も同様の傾向を示した．

において何ゆえにmounding現象が発現しやすい

動作は緩慢で，言語は不明瞭，深部随反射は全てのか明らかにすることを試みた．

減弱しており弛緩の遅れははっきりしない．著明なmounding現象は認めたがmyotonia様の現象はなかった．検査では，甲状腺機能低下（131ト＊東京大学医学部脳研神経内科

T3RSU19・9％，T4＜1．Opg／dl，T3＜25pg／dl，TS＊＊国立武蔵療葦所神経センター

H251pU／mi）および筋障害（CPK5502IU／1正ー177−

（4）生検筋の常【24−170］）が明らかでありHoffmann症候群とSkinnedfiber法によるSRのCa−uptakeindexは，typeI fibersでは，6本の診断された．
（1）通常の同心型針電極によるEMGにては，刺入被検筋線維全てで，typeII fibersでも，4本の活動がやや増加しているがafterdischargeはなく，

被検筋線経のうち2本で低下していた（図2）．

安静時はSilentである．随意収縮時，わずかにShortduration，pOlyphasicNMU を混入するがほぼ正

HoffmannsSyndrome

65Y．0．M

常に近い．打腱槌にて上腕二頭筋においてmound−
ing現象を生じさせると，叩打部（ 隆起〝部）では，初期の筋全体の攣縞に相当すると思われる練波とtypelfibers≠隆起〟（mounding）に相当すると思われる大きな振れが記録されるが，後者にはいわゆるaction

type

fiberspotentialは認められない．また叩打部より少u弛れたところ（非 隆起〟部）では練波のみ記録され，この場合のmOunding現象は非伝播性で局所的な

Ca−uPtakeindexbySR現象であることを示している（区＝）．

図2
Hoffmann・S Syndrome

65y・〇・M

ラットのSOLeus．EDLにおける検索

EMG ofmoundingofbiceps

成熟した雄あるいは雌のラット（体重約15晦）鐙諾霊Of≠のSOleus，EDLをとり出し，張力トランスデュー
サー（日本光電FDピックアップSB17H）に固定し，落下槌で直接叩打したときのmounding現象を張力曲線としてレクチコーダーで記録した．

紳Irom（1）Mounding現象はfast whiteである
よりもSlowintermediateであるSOleus

EDL

の方で

より出現しやすい．

＿ 」 川、V
lOOmsec（2）Krebs−Ringer液のNaClを全てKClで置

図l換したKClrRinger液（［K十］＝122．7mM／1）に浸漬し，100V，1msec（2）上腕二頭筋，排腹筋の組織学的検索では，
平均直径約50／Jと小径化した円形の筋線経が目立
ち，組織化学的にはtypeI fibersが約50％とやや増加している．小径化しているにもかかわらずの実巨形波にて電気刺激しても単収縮が生じないことを確認し，表面膜を完
全に脱分極した状態でもmounding現象は充分に発現する．
（3）Dantrolene−NaはT−tubuleとSR

Splittingがみられ，大小不動，中心核，空胞変性，との連

虫喰いイ象，Opaque fiber，ヒアリン化緑経，問質結をブロックすることで知られているが，充分高濃の増加など非特異的なミオバナーの所見もみられ

度（40FLg／ml）のDantrolene Na溶液に，電気刺激による単収縮がほとんど生じなくなるまで浸漬しる．
（3）生検筋のSDSゲル電気泳動では，myOSin，

た後でも，mOunding現象は容易に発現する（図3）．
（4）強力なSurfactantであるBrij58を用いて

actinin，trOpOnin等の各構造蛋白の組成には著変を認めないが，myOSinのL2鎖において赤筋に相当SRを含めた内部H莫系の全てを破壊すると，電気する分画が明らかに大きく，typeI fibersの増加

刺激による単収縮はもちろんmounding現象も全が示唆された．

く生じない．
−178−

い収縮系のみの現象なのかは，不明である．われRatsoIeus

Kreb㌻R噛「

われの今回の実験はこの点を明らかにしたといえr＼＼二る．すなわちmounding現象の出現にはSRが関与しており，叩打によりSRが直接刺激されCa遊離が生じている可能性が大きい．また自筋より赤筋でmounding現象が出現しやすいことを再確認したが，その原因としてtypeI fiberとtype
II fiber

D慧eNal肌＿」′≠
2

4

5■

6−

7−

との種々の差異のうち，SRの差異による寄与が大きいと思われる．更にHoffmann症候
15一群でmounding現象が観察しやすいことには，SRによる遊推されたCa2＋のreLuptakeの低下が寄J・5mg与していると思われる．

＼、一一、−＿＿仙文献1）名取面豊二：筋生理学．丸善，東京，1951，p．131．
2）名取示豊二：特異性筋隆起二就テノ研究（5），筋隆
起部ノ興奮侍導性並二筋隆起ノ組織俊二就テ．
日生理詰，6：16，1941．

考察3）西谷喜肋，高橋達禰：特異性筋隆起二就テノ研

はじめに述べたように，mOunding現象はそのきわめて印象的な収縮の形態や電気的に†tsilent

究（3），麻酔筋二於ケル特異性筋隆起ノ生起卜其勢力消費二就テ．日生理詰，3：293，1938．

であるなどの特徴から，多くの臨床家の興味をひいてきた．また基礎の方面でも，麻酔筋でも生じ，

4）Denny−Brown，D．＆Pennybacker，J．B．：

Fibrillation and fasciculationinvoluntary

単収縮とは競合せず，乳酸消費もほとんどないな

muscle．Brain，61：311，1938．

ど，きわめて特異な筋収縮であるとされてきた．こ5）Salick，A．I．＆Pearson，C．M．：Electricalのような諸結果からは，表面膜の関与しないであSilence of myoedema・Neurology，17：899，

ろうことは推定できるが，内部膜系は関与する興奮収縮系の現象であるのか，膜系は一切関与しな

−179−

1967．

35）アルミナバッチ法とアセテル化を組合わせた
ラジオイムノアッセイによるデュシャンヌ型
筋ジストロフィーの赤血球膜アデニレート
サイクレースの測定

高

研究協力者

難

目

的

波

橋

桂
高

紀久子

尾

尚

藤

田

拓

男

395JJlの50mM酢酸緩衝液（pH6・2）を加えVor−

昨年度，Duchenne型筋ジストロフィー（DMP）

texにかける．遠沈後上清100〟1を用い通常のRI・の保因者の赤血球隈のadenylate cyclase活性（AAと同様に扱った．即ち同酢酸緩衝液にて適宜稀C）の基礎値が対照に比し高いことを報告したlと釈した125ⅠラベルのSuCCinylcAMPtyrosineme−

その方法は14C−ATPを基質として，テオフイ1）ン，

thylesterlOOFLlとCAMPの稀釈抗血清100FLl

cold cAMPの存在下にACを測定し，生成した40Cで1夜インキュベートし，0．5mlの1％牛γを14C−CAMPをアルミナカラムとギ酸型のDowexr

グロブリンを加えた後，1mlの20％polyethylenelカラムで分維するものであった．その後，テオ

glycolを加えVortexにかけ遠沈（40C）し沈法

フイリンが基礎値に対して抑制効果をもつことがをγ−カウンターにて計測した．

判ったので，endproductinhibition

も受けない
結

条件も考慮し，phosphodiesterase（PDE）抑制の目的で塩酸パパべリンを用い，COld ATPから生成したCAMPをradioimmunoassay（RIA）

図日に14C−ATP

果を基質に用いる前回の方法におけるテオフイリンの影響を示す．

にて測定する方法でDuchenne型筋ジストロフィー患者の赤血球膜ACを測定した結果をここに報Ettect ofTheophyLLineonAderlyLateCyClaseof
Human ErYthr∝yteS

告する．
方

法

今回の測定条件はATPlmM，MgC1210mM，クレアチンリン酸20mM，クレアチンキナーゼ100
u／ml，塩酸パパベリン0．25mM，トリス塩酸緩衝
液40mM（pH7．4），赤血球膜300〜600JLg蛋白で30分37℃でインキュベート後1000Cにて3分間煮
沸して反応を止め，遠沈上清100／上目こ5JJlのトリェテルアミンと無水酢酸混液（2：1）を急速に混じ，その上に乾燥アルミナ200mgを入れ，更に
図l

赤血球膜アデニレートサイクレースに及ぼす
テオフイリンの影響＊神戸大学医学部第三内科

一180−

以外のヌクレオチドを予め除く必要がある．そのNaF存在下での活性はCOld cAMPlmM，テ
オフイリン5mMの条件で最も高く，これは前回ため上述したアルミナバッチ法を開発した．図3

この条件を選んだ1つの理由でもあった．しかしはこの基礎となった0．5×2．0cmのアルミナカラ

DMP保因者では基礎値が問題となったのでテオム（約300mg）による3HLaCetylcAMPと14C−

フイリンの濃度を検討してみると基礎値やイソプ
ロテレノール存在下での活性値に対しては5mM

acetylATPの溶出パターンでacetyl cAMPのテオフイリンでも抑制がみられ，10mMのテオ

ルミナに吸着され，0．2MのNa2P04

フイリンではその上NaF存在下の活性値も5mMに比し抑制がみられた．従って基礎値を測定する

i容出されることを示している．

がカラムに吸着されずacetylATPは極めて強くア
で1まじめて目的ではテオフイリンを用いない方がよいと思わ

EIutionPatternsotAcetyL3H−CAMPaTd

れた．ヒト赤血球ゴーストにはCAMP結合能がAcetyLlAC−ATPtromALuminaCoLumn・

高く，PDE活性も高い．PDEの抑制の目的で塩弘nlMkebteBu〃er G2N Na2HPq
L tpH6．2） l酸パパベリンを用いることにし，end productin・
hibitionの少ない条件（cold cAMPを除いた条件）

5．000

CAMP

AATP
l

でヒト赤血球膜の如く低いAC活性値を測定するには2，3の工夫が必要であった．即ちATPより生成した微量のCAMPを検出するためには極めて高感度の且つ特異性の高い測定法が必要である．図2に今回我々の用いたCAMPの抗血清（最終稀釈濃度12万倍）のアセテル化ヌクレオチドの

1

5

10

15

20

25

FRACTION NUHBER

displacement curveを示す．アセテルADP，A
図3

MP，ATPの高濃度はSuCCinyl cAMP tyrosi−
ne methylester−125Ⅰと置換し，例えば10￣3M のアルミナカラム（0・5×2・0cm）のアセテルCA−
MPとアセナルATPの溶出パターン

アセナルATPは5×10▼9MのアセナルCAMPと

図4は方法で述べたバッチ法における乾燥アル

見かけ上同じ値を呈する如きである．従って基質に10r3MのATPを用いていることもありCAMP

ミナの量を検討した結果を示す．3HrcAMP及び
14C−ATPを上述の方法に従ってアセテル化しパッチ法での遠沈上清に回収される各々の放射能をアルミナ量に対してプロットした．150mgから

DispLaccmentCurvesof125tTME−ScAMPtyAcetyL
Nucleotides

300mgの間でacetylATPのアルミナへの98．8％以上の吸着と，一定のacetylcAMPの回収が得られることが判る．acety13H−CAMPはこのアルミナ量の間で84％前後の回収が得られた．通常
100／Jlのサンプルに200mgの乾燥アルミナを用いることにした．
表lには前回報告の方法1）に従って調整したD
MPの赤血球膜のACとジストロフィー以外の患者の赤血球膜のACをここに示した方法で測定し
0＿11

−10

−9

−8

−7

−6

−5

−4

−3

た結果である．DMPの赤血球膜ACの基礎値，−2

LOG（nu⊂leotl叫HM）

イソプロテレノール（0．1mM），EGTA（2mM），

図2

RIAにおけるアセナルヌクレオチドの交叉反応

イソプロテレノールとEGTA（0．1m及び2mM），ー181−

表I Adenylatecyclaseactivitiesoferythrocytesinpatientswith Duchennemusculardystrophy

Basal
DMP O．437＋0．172★

辞r紆enO一
0．643＋0．206（7）★★

Non−DMP O．227＋0．074（7）Student−t P＞0・05

言2T￡M） ぷ紆箭nOl（0・−叫 障叫0．588＋0．187（5）

0．237＋0．067

0．593＋0．214（5）

0．195＋0．052

27．220＋4．289

（6）

（7）

0．284十0．062

17．194◆5．914

（7）

（6）

（6）

（7）

pく0・05pく0・05p70・05p＞0・05＊：mean士S．E．，PrnOle cAMP／mg protein／30min．
＊＊：numbers of assayed samples．

NaF（10mM）のいずれも平均値では対照よりも高かった．しかし基礎値及びNaF存在下では推計学的に有意差はなかった．イソ70ロテレノール，
EGTAそれぞれ単独ではDMPと対照の間に推計学的に有意差がみられた．
考察

このRIAにおいて抗体をつくる際，抗原にSu一
ccinyl cAMPとアルブミンを結合させて用いる

ため，出来る抗体はSuCCinyl基の構造を含めたものに対して産生される．検体をアセテル化すると
SuCCinyl基との構造共通性より抗体に対する親和性を約100倍に高めることが出来る，アルミナバッ
チ法と併用することで極めて特異性の高い，高感度の測定法を確立することが出来た．これを用いてDMPと対照群の赤血球膜ACを測定した結果は上述の如くである．今回の方法で測定したAC
は前回の値（保因者3．14±0．43，対照1．49±0．44pmole／mg蛋白／20分に比し，約10分の1で低く，原因としてPDE抑制が不充分である可能性が考えられる．傾向としてはDMPで基礎値が高く，
図4

7セテル化とアルミナパッチ法を組合わせた方法での回収率とアルミナ量の関係

推計学的に有意差がみられたイソプロテレノーノh
EGTA存在下でのAC活性も，DMPでの基礎値の高い傾向と関連すると思われた．最近Wachol−tzらは〔a−32P〕ATPを基質に用い1mMcAM
Pの存在下で37℃2時間のインキュベーションで−182−

ACを測定しDMP及び保因者において赤血球AC

MP筋と赤血球膜に共通の病変が存在するか否かの基礎活性が高いことを報告した2ミ保因者に関しの問題は未だ解決されていない．

ては前回の方法で得た我々のデータと一致するが，今回の方法ではここに示した如く

DMP患者では

文

献

基礎値に関しては有意差が出なかった．Fischerら
はDMPと対照のACの問に差を認めなかったと

1）高橋桂一ほか：デュシャンヌ型ジストロフィー

報告している3！MawatariらはDMPの赤血球膜性及び測定における新しい試み．筋ジストロフ

ACは他の疾患や正常成人よりその基礎値は高く，
エビネフリンによる活性化はDMPで低いことをィー症の病因に関する臨床的研究（三好班）昭症保因者の赤血球アデニレートサイクレース活

和53年度研究報告書．

報告している4さ前回及び今回の我々の結果では正2）Wacholtz，M．C．，Raible，D，G．，Jackowski，S．，

常人の赤血球のACの少なくともイソプロテレノ

et al．：AdenylatecyclaseandATPaseactivi−ールによる活性化は明確でなかった．Rasmussen

tiesin red cell membranes of patients andらはヒト赤血球膜ACのホルモン感受性の存在を

genetic carriers ofDuchenne musculardyst−

疑っている5ミ各報告者により測定法が異なっておrophy．Clin．Chim．Acta，96：255，1979．

り，今回我々の方法も上述の如き問題点がある．
ヒト赤血球のACの研究の歴史は測定法の困難さ

3）Fischer，S．，Tortolero，M．，Piau，J．・P．et al．：

を物語っている．再現性の点では前回報告の方法

throcytemembranefrompatientswithDuch−

が優れており，感度の点でもほぼ満足すべきもの

enne muscular dystrophy．Clin．Chim．Acta，であった．この方法でDMPの赤血球ACを更に

88：437，1978．

検討する予定である．

Proteinkinaseandadenylatecyclaseofery−4）Mawatari，S．，Schonberg，M．＆01arte，M．：
Biochemicalabnormalities of erythrocyte

結論

membranein Duchenne dystrophy．Arch．

アルミナバッチ法とアセテル化を組合わせたRIAを開発し，ヒト赤血球膜AC測定に応用した．
DMPの赤血球膜ACは基礎値及びNaF

Neurolリ

33：489，1976．

5）Rasmussen，H．，Lake，W．＆Allen，J．：The

存在下

effect of catecholamines and prostaglan−では対照との間に有意差がなかったが，イソプロ

dinsuponhunanandraterythrocytes．Bio−

テレノールあるいはEGTA存在下ではDMPのA

Chim．Biophys．Acta，411：63，1975．

Cは有意に高かった．測定条件と方法の確立とD−183−36）Duchenme型筋ジストロフィー症赤血球膜のNa＋KATPase

馬

研究協力者

渡

伊規須

志

英

郎

輝

黒

岩

義五郎

Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）の赤

皮にbuffy coatを除いた後，10mM TrisrHCl

血球については，種々の異常の報告があるが，ウ（pH7．4）で溶血させ，膜を同液で4回遠沈（25，000

アパインがDMD赤血球膜のATPase活性を増加g）によって洗浄した．方法（∋；抗凝血剤としてEさせるという報告は異常の中でも最も昆頁著な現象

DTAを用い，上記と同様に，血清とbuffy coat

であろう1）・2ミ しかし，これに対して異論3卜6）や反を除き，さらに3回洗浄後，2mM Tris−HCl（p論7）・8）も少なくない．これらの多くの報告においH7．4）で溶血し，膜は2mM Tris−bufferに0．02て，赤血球膜の調製における方法や条件は必ずし

mM EDTAを加えた液で4回洗浄（25，000g）しも同じではない．本研究は，赤血球膜の調製の方た．その間2回Teflon−Pestleのホモジナイザーで法の差異によってDMD赤血球膜のNa＋KAT

homogenizeした．この方法はBrownらの方法とほPaseが対照と異なってくるかもしれないという

とんど同じである．方法（∋；方法②で調製した膜

仮定のもとに，いくつかの異なった調製法を試み，に10倍客の0．1mM EDTA（pH8．0）を加え，370C

ATPaseを測定した．

20分間incubateした後39，000×g，30分間遠沈して得た膜．方法（彰；白血球と血清の混入の影響をみ

対象および方法

るために，DMD患者のみを対象として，EDTA採DMD患者および対照群（脳性麻痺患者）は，血後，血清とbuffy coatsを一回除いた後．各々を同じ施設に入院中の同年代男子で，採血は常に同2つに等分し，一方はそのまま2mM Tris−HCl

日の同時刻ごろ行い，赤血球膜の調製およびAT（pH7．4）で溶血し，2mM Tris−HCl＋0．02mM

Paseの測定も，常に対照と同時に行った．本研究におけるATPase測定条件も次の如く統一した．

EDTA液で膜を4回洗浄し，洗浄毎にhomogeni−

反応液の構成は50mM Tris−HCl（pH7．4），2mM

さらに3回赤血球を洗い，その度にbuffy coats

ATP，lmM MgC12，100mM NaCl，15mM KCl，を除いた後，Membrane Aと同様にi容血および

赤血球膜300−400／Jg，ウアパインを使用した場合膜の洗浄を行ったが，homogenization．／は常に0．1mMであった．37℃，30分間反応させ，ATPaseによって遊馳したPiはTaussky

らの方

Zationを行った（Membrane A）．他方はその後は行わなかった（Membrane B）．方法6）；方法（∋で調製した膜を，一部は−850Cに，一部は一10℃に8ケ月保有した膜でATPaseを測定した．

法で測定した．
試みた方法あるいは条件：方法（∋；抗凝血剤としてヘパリンを用いた場合で，血清とbuffy coat

結を除き，その後赤血球は3回生食水で洗い，その果方法（丑のヘパリン採血の場合も（表り，方法②のEDTAで採血し，EDTAを含んだ液で膜を洗＊九州工業大学保健管理センター＊＊九州大学医学部脳研神経内科

浄およびhomogenizationを行った場合も（表2），
MgATPase，Na＋＋K＋ATPaseー184−の活性および表l 方法（丑の結果
D M

M

g

0 ．1 1 9 ± 0 ．0 1 8

0 ．1 3 5 ± 0 ．0 2 1

M g ＋ N a ＋K

0 ．18 5 ± 0 ．0 5 2

0 ．1 9 7 ± 0 ．0 3 1

O u a b a inO u a b a in に よ
る抑制

（％ ）

D

（
n＝5）

C o n t ro l （n＝5 ）A T P a se

M g ＋ N a ＋K ＋

表3 方法（参の結果

Control

A T P a se

D M D

M g

0 ．1 0 5 ± 0 ．0 2 2

0 ．1 1 2 ± 0 ．0 2 8

0 ．1 7 4 ± 0 ．0 2 5

0 ．1 6 7 ± 0 ．0 3 6

0 ．1 2 5 ± 5 ．0

0 ．1 3 0 ± 0 ．0 2 9− 2 8 ．4 ± 5 ．
0− 2 2 ．5 ± 3 ．
4

M g ＋ N a ＋K
M g ＋ N a ＋K 十

0 ．10 7 ± 0 ．1 0 3

0 ．1 1 5 ± 0 ．0 1 8− 3 9 ．8 ± 1 2 ．2

− 4 1 ．1 ± 8 ．3

O u a b a inO u a b a in に よ
る抑 制

（％ ）

（
。＝7 ）

C o n t ro l （。＝7 ）ATPase：FLmOles Pi／mg・prOtein／hr

ATPase：p mOles Pi／mg・prOtein／hr

表2 方法（むの結果

表4 方法④の結果（％）

A T P a se

D M D

M g

0 ．1 2 5 ± 0 ．0 1 2

0 ．1 2 7 ± 0 ．0 1 4

0 ．2 1 3 ± 0 ．0 2 4

0 ．2 15 ± 0 ．0 1 5

M g ＋N a＋K
M g ＋N a＋K ＋
O u a b a inO u a b a in に よ
る抑制

（％ ）

（
n ＝5 ）

0 ．12 3 ± 0 ．0 0 9− 4 1 ．7 ± 6 ．6

D M

C o n t ro l （
n＝5 ）

※

em bra n e B1− 3 1 ．1

− 3 0 ．02

− 2 6 ．6

− 2 9 ．4

− 4 6 ．0

− 3 9 ．04

− 1 7 ．6

− 2 3 ．25

− 3 8 ．5

− 3 4 ．4

6

− 2 8 ．6

− 4 3 ．4

平 均 ±S ．
D ．

− 3 1 ．4 ± 9 ．8

− 3 3 ．5 ± 7 ．3

− 40 ．
4 ± 5 ．9

ウアパインに対する反応はDMDと対照群で全くM

30 ．1 2 8 ± 0 ．0 1 6

ATPase：FL mOles Pi／mg・prOtein／hr

M em b ra n e A

D

Results：％inhibition of Na＋K ATPase by o．1mM
Ouabain

有意の差はなかった．
方法（∋においては，SDS−pOlyacrylamide gel

表5 膜の保存温度の影響※

電気泳動パターンにおける，BandI，IIおよび− 8 5 0C

Ⅳが選択的に殆ど除去されていた．しかし，DM

D M

8 ヶ月

− 10 0C

8 ヶ月

DC o n tr o l

D M D

C o n tr o l− 4 3 ．4

− 3 1 ．9

− 1 7 ．2

− 17 ．1− 3 2 ．8

− 4 7 ．3

− 1 4 ．2

− 2 0 ．1

− 3 7 ．1

− 4 1 ．2−

5 ．9

− 8 ．0− 4 7 ．8

− 3 8 ．1

− 2 4 ．8

− 0 ．5− 4 7 ．6

− 4 3 ．2−

3 ．0

− 19 ．4

平 均 一 4 1 ．7

− 40 ．
4− 1 3 ．2

− 1 3 ．0

Dと対照とでは電気泳動パターンに明らかな差はなかった．この方法における膜のATPase活性およびウアパインに対する反応性ともにDMDと対照群との間に差を認めなかった（表3）．方法④は白血球および血清混入の影響を検討したものである．MembraneAとBの間でSDS−pOlyacrylamide
gel電気泳動パターンにおいて明らかな差があった

諾（Membrane AでBandの数が増加していた）．
MembraneA（白血球混入）とBともにNa＋＋K＋
ATPaseのウアパインに対する反応に有意の差％inhibition of Na＋K ATPase by o．1mM Ouabain

考はなかった（表4）．

察

DMD赤血球膜Na＋K ATPaseについては，

方法⑤の結果は，−15℃に長期保有した場合，現在まで，1）ウアパインによって活性が増加すATPaseのウアパインに対する抑制率は，−85℃

る1）・2）．2）ウアパインによる抑制牢が低い3）・4）に保有した場ノ飢こ比べて著しく低下していた．し3）Na＋KATPase自体の活性が低い5），61といかし，いずれの保存においてもDMDと対照とのう3種類の異常が報告されている．最初のBro−間に有意の差を認めなかった（表5）．

wnらの報告において1；Na十十K＋ATPase反応液
ー185−

中のNa＋およびK＋の濃度が一般的に用いられて

2）PeterJ．B．，WorsfoldM，PearsonC．M．：Ery−

る濃度ではなかった点と42℃で反応を行っている

throcyteghostATPaseinDuchennedystro−

点が注呂されたが，その後一般的に用いられていphy．J．Lab．Clin．Med．，74：103，1969．

るNa十とK十の濃度の反応液でも，370Cの反応に

3）MawatariS．，SchonbergM．，01arteM．：Bio・

おいても異常の報告がなされている2）￣5ミしたがっChemicalabnormalitiesoferythrocytemem−て，種々の異った結果が報告されている原因は，

branesin Duchenne muscular dystrophy：

反応液の構成よりも，ATPase測定に至るまでの

Adenosinetriphosphataseandadenylcyclase．

赤血球膜調製の方法や条件が各報告において一致Arch．Neuro1．，33：489，1976．

していないことにあるかも知れない．私共は，こ4）Siddiqui P．Q．R．，Pennington R．J．T．：Effectofの点を追求する目的で，通常の赤血球日莫調製におOuabainuponerythrocytemembraneadeno−

いて起こり得ると思われるいくつかの条件や方法

Sine triphosphatasein Duchenne muscularについて，対照の条件を厳しく整え，さらにATP

dystrophy．J．Neurol．Sci．，34：365，1977．

ase測定条件も一定にして検討したが，Na＋K A

5）Niebroj−Doboszr．：Erythrocyteghosts（Na＋TPase活性自体にも，ウアパインに対する反応もK）ATPaseactivityinDuchenne

sdystrophy

対照との差を認めなかった．これらの結果からD

andmyotonia．J．Neuro1．，214：61，1976．

MD赤血球膜のNa＋K ATPaseおよびウアパイ

6）SouweinG．，BernardJ．C．，LasneY．，et al．：

ンに対する反応性には，元来異常がないのではな

ThesodiumpumpOferythrocytes from pa−

いかと推察される．DMD赤血球］莫のNa＋K AT

tientswithDuchennemusculardystrophy．J．

Paseのウアパインに対する反応の異常はDMDのNeuro1．，217：287，1978．

血清のある成分によって誘発されるのではないか

7）KlassenG．A．，BlosteinR：Adenosinetriphos・との意見がある2）・4）．それが事実だとしても，それ

phataseandmyopathy．Science．，163：492，

は膜の異常によるものではないと思われる．

1969．

8）HodsonA．，Pleasure D．：Erythrocyte cati−

文

献

On−aCtivated adenosine triphosphatasein

1）Brown H．D．，ChattopadhyayS．K．，PatelA．B．：
Erythrocyte abnormalityin human myopa−
thy．Science，157：1577，1967．

ー186−

Duchenne muscular dystrophy．J．Neurol．
Sciり

32：361，．1977．

37）Duchenne型筋ジストロフィー症の赤血球膜について
＊

植

研究協力者

目

啓

田

嗣
＊

畑 中 良

夫

佐々木

野

靂＊

Tyler，F．H．

島

元

的

重

雄

性は，3mMTris−ATP，3mMMgC12，80mM

筋ジストロフィー症の成因は末だ明らかではな

NaCl，15mMKCl，0．1mMCaC12，20mMhisti−

い．そこでは，神経（自律神経），筋肉，循環器系，

dine−imidazole−Trisbuffer（pH7．2）に試料を体液などの異常説と共に，近時膜異常の存在が，筋組織のみならず全身の組織にもまた認められると加えて，1．Omlとし，370C，1時間反応させて遊離する説が注目されてきた．
そのなかにあって，遊離した組織である赤血球

またOuabainの結合能には，nOnfrozen，frozenの音容血試料を，0．2mMEDTAを含む20mMhisti−

するpiをFiske法で求めた．

膜の実態は，体液や全身的な膜の異常の有無に決

dine−imidazoleLTrisbuffer（pH．7．2）で洗催し，着を与えることになるだろう．しかしDuchenne

Hbの色の消えた状態で，更に1．25mMMgC12，型筋ジストロフィー症についてみると，異常が認

40mMNaCl，0．25mMEDTA，20mMTris−gly−Cylglycinebuffer（pH7．4）で洗推した試料を用められたとする報告も多いが，また逆の成績も多いた．そしてその反応は上記bufferに2．OmM
そのため，私共は昨年度に引き続き1！その成績

ATP，50muCi（3×10￣9M）H30uabain，（0−10−4）

不一致の機構を解析しながら，Duchenne型筋ジMouabainを加えて，1．Omlとし，370C30分

ストロフィー症の赤血球膜の異常の有無に検討を反応させて2）膜と結合した放射活性を液体scinti1−

加えた．

1ationcounterで求めた．
洗ラ怪は，懸濁と25000g，20分の遠沈の操作によ
方

法

った．

血液1mlをヘパリンtubeに注入し，血清並びに白血球層を除いた赤血球の屑を，生理食塩水で結洗ラ怪し，次いで20mMhistidine−imidazole−Tris
buffer（pH7．2）を加え，溶血させた．そしてその試料の一部で，freezing−thawingの操作を行っ果l）指標としてのOUabalnの結合能の特性
H3のOuabainを用いて，赤血球膜の外層に局在するとされるOuabainの結合能を測定した．

た．

10分，20分，30分と370Cでincubateすると，図

Acetylcholineesterase活性はEllman法で1lのような曲線（。−。）を描いて膜と結合した．

aldolase活性はLelminger法で，CarATPase括

その際反応液中の放射活性値を一定にして放射活性を持たないOuabainを10−4Mの濃度に高めると，＊愛媛大学保健管理センター＊＊愛媛大学医学部整形外科＊＊＊ユタ大学内科

結合する放射活性（・−・）は10−20％程度減量
する．この量は，反応液中のATPを除いた場合の減量にほぼ等しい．
−187−

表J Distribution of membrane enzymes（％）

x10年cpm

A ce ty l c h ol i n ee s te ra s e

AldolaseC a −AT Pa s e（
1）
h e m ol y s a t e
S u p e r n a ta n t

26 − 30

56 − 66

10（2）
l s t v a s h in g
fluid

9 −10

17 − 26

0

（
3）
2ndui
vd
a s h in g

0

3

0

タ ー 5815

65 一 弘（4）
ppt

そしてその際，3回のfreezing−thawingの操作を加えても，aCetylcholineesteraseのtotalの活性値と分布像には大きな変化がみられなかった．
またaldolaseでもtotalの活性値に変化はなかっ
たが，分布像では（2）より（1）に，また（3）より（2）の分画に活性が片寄る傾向（但し10％以下）がみられた．
一方，Ca−ATPaseではfreezing−thawingによって活性値は約10倍に上昇し，そして（4）分画に集中した．
3）Duchenne型筋ジストロフィー症のOuabain
の結合能

10

20

30

一定量の放射活性を持つごく微量のOuabainの結合が，どの程度の放射活性を持たないOuabain
を反応系に更に添加することによって減量するか，
この最少濃度を求めたところ，その量は10￣7Mで

図I Binding activity of14C−Ouabain on red

あった．そしてこの値には恩児・正常児で差異はblood cell membrane

認められなかった．しかし40Cのもとで保存する

2）指標としての膜酵素の特性と，息児の試料で，希釈に要する最少浪度が増量

膜に局在が認められているacetylcholineeste−

し，結合曲線にも変化が認められた（図2，上段）．

rase，aldolase，Ca−ATPaseの3酵素3）が膜とど

一方，freezing−thawingをした試料についてのような親和性を保っているかを検討してみた．

も上記の検討を試みたが，希釈に要する最少濃度

溶血後遠心沈澱させた上清（1），その沈法をbuf−

は患児・正常児で共に増量し，結合曲線でも共にferに懸濁させ遠心沈澱させた上清（2），更にその変化が認められた．そしてこの点保存試料につい沈音歪を懸濁させ遠心沈澱させた上活（3）とその沈法てもまた同様の成績が得られた（図2，下段）．

（4）と，4区別に分けて，活性の分布 をみると，

4）Duchenne型筋ジストロフイ〜症と膜酵素

acetylcholine esteraseでは（4），次いで阜）に，ald0−

Acetylcholineesteraseとaldolaseでは，活性値1aseは（1），次いで（2）に，CaTATPaseは（4）に活性（total）並びに分布像は，思児と正常児との間でが集り，3酵素はそれぞれ特有の分布像を示した差異が認められなかった．

（表l）．

一方，Ca，ATPaseでは，溶血試料，その上清，ー188−

×103cph

Sでコ0∈く10−8

3xlO￣710−7

31拍￣さlど萄u面﹁1

r ouabain Conc．、呵
図2

Binding patternS Of ouabain on red blood cellmembrane−189−

とその沈法，並びに上清＋沈法について，それぞEI AcPtOrCorbomy）・P）

れの活性値を求めたが，溶血試料とその沈漬共，

l ■I更
▼

Duchenne型とその母親が低く，上清＋沈法の活E十ATP

性値で，Duchenne型のみが，溶血試料より低い値を示した（表2）．
表2

Total and membrane ATPase activities

E＋Pi

Dig・E−P

TOtal and Hemt）mne ATPaSもAetivitles

Schwartze′α了）
Ⅳ〇・

age tOtal sup ppt sup＋ppt

1．yormal

48

畑

2．汚H

16

4飴

男0

少0

20 上伽

男0

5

380

20

280

つ20

4．（Hotber）25

プ将

刃

280

つね

5．Duchenne13

380

20

280

つ20

3．Duchenne

由図3

Cardiacglycoside enzyme complex

な試料を提供する．
いま赤血球で結合能を求めると，hotのOuabT
ainがCOldのOuabainで希釈をうける量，それは勿論ATPを反応系から除外することで減量する量にほぼ均しいが，その量は極めて少なく，その点

J oD的

心筋，脳などの臓器が100％に近い値で減量を考

察

示す成績4）とは異っている．つまり赤血球膜は試

膜の（Na＋K）ATPaseはATPのエネルギー料としては容易に得られるものの，そこでは圧倒を消費しつつ，Na＋とK＋の転送を行っている．つまり的にnonspecificなbindingが多く，この種の実

この場合，本酵素蛋白を中心にみると，まずNaが験に適しているものとは言い難い．それだけにま触媒的に作動して酵素（carrier）蛋白体をリン酸化た得られる成績に対しても憤重な態度が要求されさせ，次いでKが脱リン酸化させて（図3），このリるものと考えたい．
Duchenne型筋ジストロフィー症で求めた成績

ン酸化，脱リン酸化に伴うcarrier蛋自体の3次構造の変化を利用して，NaとKの転送が起こるもは，hotのOuabainを希釈するに要するCOld oua−のと理解されている4）．この際ATPの立場から反bainの最少濃度（OuabainのbindingのKm値）

応系をみると，NaとKの転送に応じてATPの消は10￣7Mで，この点，恩児と正常児で差異は無かった．

費がもたらされるため，（Na＋K）ATPaseと呼称されている．

しかし，試料を保存すると，恩児では，結合曲一般に，膜ではこの系以外にもまた色々の機構

線が変化し，且つKm値も増加した．freezing−

によって，ATP→ADP＋Pの反応は起っている．

thawingを加えた試料ではまたその保存試料でも，

しかしリン酸化されたこのCarrier蛋白は，Oua−bainと結合すると，その型で反応がB］志される性

正常児は息児と同様に結合曲線が変化し，且つKm値も増加した．したがってこれらの成績からみる質をもつ．それ故この性質を利用してこの系のAと，息児の赤血球膜は容易に変化を受けやすい状

TPase活性が求められる．つまり態にあるものと考える．

Na／Kの濃度の変化に呼応して変動する活性値のうち，Ouabain

次に股酵素を指標にした成績であるが，外層にで阻害される部分が（Na＋K）ATPaseの活性値存在するとされるacetylcholine esterase，内層に存在するとされるaldolaseでは，膜への親和性とみなされている．
したがって，Ouabainの膜へのbindingも，まで両酵素間に多少の差異がみられたが，活性値た側面から，（Na＋K）ATPaseの動向を知る貴重（total）でも各分画への活性の分画像でも，息児と−190−

正常児の間に差異は認められなかった．この点
freezing−thawingを行ってもまた同様の成績が得の活性値が溶血試料の値より上廻っている点で㌧母親とも異った態度を示した．

られた．

5）1−4の結果から，Duchenne型筋ジストロ

しかし，Ca−ATPase活性は，溶血試料とそのフィー症にみられる赤血球膜異常は，存在してい沈盲室で，正常男子やFSH型筋ジストロフィー症（小ても，それは微純なものか，あるいは2次的な変児）より低い値を示した．そしてその上清＋沈i至化によっているものと考えたい．

の活性値が溶血試料の値を上廻っている点で母親とも態度を異にした．

文

最近私共の成績とは異なり，赤血球膜のCa−

献1）植田啓嗣，畑中良夫，佐々木重雄，野島元雄：ATPaseの活性値が，Duchenne型で高く，強直赤血球膜Ca−ATPase活性と筋ジストロフィ

性筋ジストロフィー症で低い値をとることが示さー症，昨年度本研究班報告書

れている5）．私共はそれを本活性値がCaの微妙

2）VanWinkle，W．B．，Allen，J．C．andSchwartz，な濃度に敏感に変動する性質を有しているための

A．：The nature of the transport ATPase−

違いと考えているが，目下その機構は究明中であdigitalis complex，rapid binding studies andる．

effectsofligandsontheformationandstabi−lity of magnesium plus phosphate−induced

結論

glycoside−enZymeCOmplex．Arch．Biochem．

1）正常児の赤血球膜のOuabainのbindingのKmは10￣7Mであったが，Duchenne型息児でもBiophys．，151：85，1972．
3）Steck，T．L．：Theorganizationofproteinsin

同程度の値が得られた．

thehumanred blood cell membrane．J．Cell

2）しかし，40Cで保有した膜試料では，患者のKmが増加し，且つ結合曲線にも変化がみられ

Biology，62：1，1974．
4）Schwartz，A．，Lindenmayer，G．E．，Allen，J．C．

た．

andMcCans，J．L．：Thenatureofthecardiac

3）膜の外層に存在するacetylcholine ester−

glycoside enzyme complex，meChanism andase と内層に存在するaldolaseは，全活性値でも，膜との親和性の点でも，正常児と恩児との間で差

kineticsof binding anddissociationuslnga
high activity heart．Ann．New York Acad．

異は認められなかった．

Sciリ4）freezing−thawingの操作で活性に上昇がみ

242：577，1974．

5）Luthra，M．GリStern，L．Z．and

Kim，H．D．：

られたCa−ATPaseの活性値は，溶血試料とその（Ca＋Mg）ATPaseofredcellsinDuchenne

沈i歪で正常男子やFSH型筋ジストロフィー（小児）より低い値を示した．そしてその上清＋沈法

and myotonic dystrophy，effect of soluble
CytOplasmicactivator．Neurology，29：835，
1979．

−191一

38）DucllennC型筋ジストロフィー症赤血球膜
アセチルコリンエステラーゼ活性について
の検討

黒

研究協力者

伊規須

英

岩

輝

義五郎
馬

は じ め に

渡

志

扁

後

藤

幾

二定

2回洗った後，0・1Mリン酸緩衝液（pH7．4）でDuchenne型筋ジストロフィー症（DMD）の赤1回洗い，同緩衝液に再浮遊させ，ヘモグロビン

血球については，多くの異常の報告がある．しか量が4・Og／dlとなるよう調整した．これを，ドラし，その「異常」の局在部位は明らかでない．更イアイス・アセトン中で溶血させた．

に，これらの報告に対する反論も少なくない．

AchE活性はほぼEllmanら2）に従って測定した．

そこで，我々は，赤血球膜表面に局在すること

すなわち，反応液組成は，0．25mM DTNBが明らかにされており，かつ，特にヒト赤血球において活性が高いアセチルコリンエステラーゼ（AchE）を用いて，膜の性質について検討した．

を含む0・1Mリン酸緩衝液（pH7．4）3mlに，40mM
acetylthiocholineiodideを50pl，更に20iLlの膜標品又は10〟1の溶血させた赤血球を加えたものとした．必要に応じて，5ないし35／∠1の240mM

対象と方法

NaFを加えた（なお，35FLlの水又は240mMNaCl

対象は仝例男子でほぼ同一年令．実験1，2共にDMD患者は5例，対照として実験1では脳性を加えても酵素活性の変化は認められなかった）．
412nmにおける吸光度変化を記録計（Beckn1an−

麻痺患者，実験2では気管支ぜんそく患者各6例
より検体を得た．

ToshibaU−125M）つきの分光光度計（日立200−

各実験において，DMD患者および対照より同一日のほぼ同一時刻に採血し，同時に検体の処理を行なった．
採血時には，EDTA（実験1）又はへパ））ン（実験2）を抗凝固剤として用いた．血液は採取後直ちに水中におき，5時間（実験1）又は2時間（実20）で観察した．セルホールターの温度は循環恒温槽（Lauda K2RD）により一定とした．
膜標品の蛋白量はLowry

法，赤血球浮遊液のヘモグロビンはCyanmethemoglobin法により測定した．
活性化エネルギーおよびNaFによる酵素活性抑制のHill係数は下記の式に従ってグラフより求

験2）後より処理を開始した．実験1では，Br−
0Ⅵ1ら1）の方法により膜標品を得，蛋白濃度が2mg／mlとなるように調整し，更に等量の0．1Mリン酸緩衝液（pH7．4）又はそれに2％Triton−Ⅹ100を含むものと混じ，最終蛋白浪度が1mg／mlと

lnK＝一品一十a
ここでKは反応定数，Rは気体定数，TlogV／Vo−Ⅴ＝logKo．5−nlog（Ⅰ）

なるようにした．実験2では，赤血球を生食水で＊九州大学医学部脳研神経内科＊＊九州工業大学保健管理センター

は絶対温度，aは定数，Eは活性化エネルギーである．
ここで，V，Voは各々NaF存在，非存在下の反応速度，Ko・5はⅤ／Vo一Ⅴが0となる時のNaF濃度，ⅠはNaF濃度，nはHill係数である．

−192−

結

果

考

案

250CにおけるAchE活性について，Triton−Ⅹ
100含有又は非含有の膜標品，或いは溶血赤血球いずの抑制剤に対するAchE活性の反応程度が異常でれにおいてもDMDと対照検体の間に有意差を認あると報告している．一方，赤血球AchE活性のめなかった（表日．25−430Cにおける活性化エ

フッ素による抑制に対するHill係数はきわめて鋭ネルギー（平均±SD）は，DMDで2．40±0．27Ca

敏に膜の状態を反映するという．そこで，我々はl／mol，対照で2．22±0．11Cal／molであり，両者

NaF濃度を変化させ，それに対するAchE

間に有意差を認めなかった．

の変化をHillプロットを行なって検討した．その表J

結果，DMD対照両群共にHill係数は1であり，赤血球AchE活性（250C）
DMD

対実験1（膜標品）
例数5
年齢
14．0±5．1
活性（U／mg蛋白）

Goeddeら3）は，DMD赤血球ではフッ素など

活性

両群共にアロステリックな抑制は見出されなかっ照た．ただし，K0．5は膜標品と溶血赤血球，又，膜標品でもTriton−Ⅹ100の有無により異なった．こ6
12．7±5．7のことは，検体処理法の相違がフッ素によるAc−
hE活性抑制の程度の差を来しうることを示すもの

Triton−Ⅹ100なし1．96±0．18と考えられる．

2．08±0．17
2．12±0．17

従来のDMD赤血球に関する研究では，対照の実験2（溶血赤血球）
例数
5
6
年齢
9．4±1．9 10．8±0．3
活性（U／gHb）30．2±2．5 30．5±1．6

中に成人を含めたものも少なくない．しかし．成〝あり1．94±0．19

人と小児の赤血球は色々の面で異なっている．更に膜標品作成法の相違は膜の性質に大きな相違をもたらすことが報告されている．これらのことが従来のDMD赤血球についての知見の矛盾の原因

250Cにおいて，NaF濃度とAchE活性の関係とも考えられる4）ので，今回我々は，（1）性，年令

をみると，DMD対照両群共において，S字状のを一致させた対照を用い，（2）患者と対照から同一曲線は得られず，Hill係数は1であった．K0．5に日のほぼ同一時刻に採血し，（3）両群から得た検体

ついては，瞳標品と溶血させた赤血球では異なり，を同時に処理し，同時に酵素活性測定を行ない，更に膜標品でもTriton−XlOOの有無により異なっ

更に，（4）膜標品だけでなく溶血させた赤血球につた（表2）．しかし，いずれの場合にもDMDと対いても検討した．

照の問に有意差は認めなかった。
表2

一方，膜酵素の活性化エネルギー，或いはAchE

赤血球AchE活性に対するNaFの影響
DMD

対

照

実験1
Hill係数状態をよく反映するとされている．しかし，我々は，これらについてDMDと対照の間に相違を見出し得なかった．このことは，、DMD赤血球膜のAchEそのもの，或いはその院内環境に著しい異Triton−XIOOなし〝

活性のフッ素による抑制に対するHill係数は膜のあり1．01±0．04

1．00±0．03

1．00±0．04

0．99±0．04

常はないことを示すものと考えられる．

Ko．5（mM）
Triton−XlO（）なし′rあり

0．91±0．02

Hill係数語

DMD患者および1司性，同一年令の対照から，0．91±0．02

同時に採血し，同時に膜標品又は溶血赤血球を作実験2
Ko・5（mM）

結

0．97±0．03 0．96±0．02

0．96±0．03 0‥97±0．04
0．67±0．04

0．67±0．03

製し，AchE活性測定を行なった．DMDと対照の間に25−430Cにおける活性エネルギー，或いは250CにおけるNaFによる活性抑制（Hill係数，
一193−

50％抑制に要するNaF量）について差を認めな

macol．7：88，1961．

かった．この結果は，DMD赤血球隈のAchEお3）Goedde，H．W．，Benkmann，H．G．，Das，P．K．，

よびその院内環境に著明な異常はないことを示す

etal．：Activityofcreatinekinaseisoenzyme

ものと思われる．

MBin serum and red cell acetylcholinester・
asevariantsinpatientswithDuchennemus・

文

献culardystrophy．Klin・Wochenschr．，55：215，

1）Brown，H．D．，Chattopadhyay，S．K．＆Patel，
A．B．：Erythrocyte

abnormalityin

human

1977．

4）Igisu，H．，Mawatari，S．＆

Kuroiwa，Y．：

Erythrocyte ATPin Duchennedystrophy：

myopathy．Science，157：1577，1967．
2）Ellman，G．L．，Courtney，KD．，Anders，Ⅴ．，etal．：Anewrapidcolorimetricdeterminationof
acetylcholinesterase activity．Biochem．Pha−

ー194−

Effects ofouabainand propranolol．Neur0−logy（Minneap），29：992，1979．

39）筋ジストロフィー症の細胞膜の物理化学的研究
ⅠⅠ赤血球形態の経時変化及びカルシウムの影響
＊

富

田

精

子
＊

研究協力者

岩 崎 祐

私達はDuchenne型筋ジストロフィー症患者の

安

藤

一

也

として働くクエン酸が含まれている．pHは6．0

赤血球形態が，正常者のものとまったく差がない

で浸透圧は33／mOsmである．一方PBS（＋）にはことを，すでに報告した．

0．9mMのCa2十が含まれ，pHは7．4，浸透圧は281処で，筋ジストロフィー症患者の赤血球形態にmOsmである．これ等の緩衝溶液は使用する半日

関する今迄の研究報文は，その形態の多くがec−

前に調製し，その都度Advanced Osmometer，

hinocyte型，或いはStOmatOCyte型に変形してMode13Wで浸透圧を測定した．水は脱イオンいるというものや，また正常者との差が認められ

水をパイレックス容器で2回蒸溜したもので，2ない，などいろいろである．これ等の報文の赤血度目の蒸浩は使用する直前に行った．

球の処理方法を調べると，採血方法，赤血球洗椴に使用する緩衝溶液が異なり，赤血球形態観測ま表

での処理方法も異なっている．これ等のことより

Composition of AIsevers solution andphosphate buffer ed saline

患者の赤血球は，その処理条件，即ち外部環境条
件の影響によって形態変形を生じ易く，何か正常

AIsever■s

者の赤血球とは違った性質が有るように推測され（pH6．0

Phosphate Buffered Sal軸e

SolutjOn

331mOsm／1）

る．

（pH7．4281mOsm／1）

mM

今回私達は，患者の赤血球は実際に外部環境条

Sodlum Cjtrate

件の影響を受け易いかどうかを，赤血球形態に注

Cltric Acid

目して，対照者のそれと比較しながら調べた．即Dextrose

ち赤血球を浮遊させる緩衝溶液を2種類撰び，そNaC1の緩衝溶液中で赤血球がどのように変化するか，

27．2
2．62

Na2HPO4・12日20

mZPO4

1・47

113．9

NaC1

136．9

71．9

KC1
CaC12

6日間に亙って，その経時的変化を走査電子顕微鏡で観察した．

8・09

2．68
0・90

0．49
MgC12・6日20

実験方法

血液はDuchenne型筋ジストロフィー症患者7

緩衝溶液は，保有血に使用するアルスバ溶液と名，ほぼ同一年齢の正常男子対照者7名よりヘパ

リン酸緩衝食塩水（Ca2十とMg2＋を含む場合をP

リン採血した．採血直後5倍量のそれぞれの溶液

BS（十），含まない場合をPBS Hとする）を使に分注し，3回洗〜條を行った（PBSHの場合は4用した．その組成は表に示すように，アルスバ溶回）．赤血球と溶液は遠沈法（170×g，10分，4

液には，113．9mMのブドウ糖とCaのキレート剤0C）で分離した．その後ヘマトクリット値が，10＊国立武蔵療養所神経センター

から15％になるよう▲に浮遊させ，40Cに保有し毎日投拝した．
ー195−

赤血球の固定は浮遊に使用したものと同じ溶液で稀釈した，1％glutaraldehydeを用い，40Cで30分から2時間半行った．
固定液は使用する直前に窒素封入70％glutar−
aldehydeを使用して調製した．国定された赤血球を，IonLCoater（EikoIB・3）で親水処理を行ったplastic cover slipの上にのせ，再蒸溜水
で洗ラ條後，2，2Ldimethoxypropan，次いで100％Acetoneでリ捉水した．AcetoneをIsoamyl
acetateに置換後，液体炭酸ガスで置換して，臨界点乾燥を行った（日立，HCP−2）．Ion−COater
でPトPdをCOatingした後日立−S−430走査電子顕微鏡を用いて，試料台を傾斜して観察，写真撮影を行った．なお傾斜角皮は60度とした．電子顕0微鏡に用いた試料の一部を固定する直前に，光学︵JE山ト＞UON≡Uu d山ト＞UO−く三〇トS LO uUNく∝＜uddく

試料標本は24時間毎に，6日間に亙って作成した．

0

顕微鏡でも観察，走査電子顕微鏡との対比を行っ

24

48

72
HOURS

96

120

た．一試料1500個以上の赤血球を数え，赤血球異常形態は，Bessis，M．etall）の分類方法に従い，

図I ErythrocyteinAIseverssolution（pH6．0，331mOsm／lit．）

echinocyteI以上，StOmatOCyteI以上の変形を異常形態とした．
果の赤血球を浮遊し，40Cに保有して，6日間に亙って観察した赤血球形態の経時変化を示す．破線
が赤血球のStOmatOCyte型への変形出現率を示しているが，患者（○印）と対照者（△印）共に，
洗i條から48時間迄に約10％の増加を示したが，その後ほぼ一定値を示し，両者間に差が認められなかった．6日目におけるStOmatOCyte型の出現率は非常に低く約20％に過ぎなかった．
また実線でechinocyte型の出現率を示している．図から判るように患者と対照者の間に，その出現率，経時的変化に差は認められなかった．両者共その出現率は時間と共に僅か増加し，6日目で約10％に過ぎなかった．

︵岩山ト50Z≡Uu d uト＞UOEl三PS LO 山UNきくUdd＜

結図lはアルスバ溶液中に患者と対照者それぞれ

アルスバ溶液中に浮遊した患者と対照者赤血球0

図2

図2は患者と対照者のそれぞれの赤血球をCa2＋

48

72

96

HOURS

は，その異常形態の出現そして経時的変化に大きな差を示さなかった．

24

Erythrocytein PBS（＋）（pH7．4，281mOsm／lit．）

−196−

120

とMg2十を含むPBS（＋）に浮遊させ，40Cに保存し，なかったことは，Igisu，H．et a12）のDuchenne型

6日間に亙った赤血球形態の経時変化を示す．赤筋ジストロフィー症の患者赤血球のATP産生，血球のStOmatOCyte型の出現率は，両者共数パー

消費能力は正常者のそれと差がない，との報告とセント以下と非常に少なく，経時的に減少した．

一致すると考えられる．
一方Ca2＋とMg2＋を含むPBS（十）中の患者と対一方echinocyte型の出現率は，図に見る如く，
両者間に大きな差を生じた．両者共，時間と共に照者の赤血球形態の経時変化は，図2で示される

echinocyte型の変形が増加したが，患者の赤血ように，両者共echinocyte型が時間と共に増加

球の方が，より多くの変形出現率を示し，6日目

したが，その出現率に大きな差を生じた．

において約70％に達した．

患者と対照者の赤血球形態に，eChinocyte型

それに比べ対照者は45％に過ぎなかった．

が多く出現したことは，赤血球内にCaが蓄積すCa2＋が含まれるPBS（＋）中に浮遊した患者と対るとechinocyte型になると一般に認められてい照者赤血球は，eChinocyte型の経時的変化におることから，Ca2＋が含まれるPBS什）中で，赤血いて大きな差を示した．

球内のATPが消費されると共に，Caの蓄積が生Ca2十とMg2＋を含むPBS（＋）中で多くのechinT

じたものと考えられる．またこの考えは患者赤血

OCyte型の出現を生じ，さらに経時的変化におい球を用いて，PBS什）とCa2＋を含まないPBS中でて患者と対照者の間に大きな差を生じた原因は，のechinocyte型出現率の結果からも支持される．

Caイオンによると推測し，次の実験を行った．

対照者赤血球に比べて，経時的に患者の赤血球患者（3名）の赤血球を，①Ca2＋とMg2＋を含に多くのechinocyte型が出現したことは，Gr−む，②Ca2＋とMg2＋を含まない，（∋Ca2十のみを

assi，E．eta13）の結果と一致し，その原因は赤血球含まない，それぞれのリン酸緩衝食塩水に浮遊させ，上記の実験と同様に，40Cに6日間保有し，内にCa2＋が流入し，蓄積され易かったと考えられ6日目におけるechinocyte型の出現率を観察しStrOphy患者の赤血球内に，Caがより多く蓄積た．その結果，PBS（十）中では，Ca2十が含まれなされるというPlishker，G．A．eta14）の結果と一致

いPBSに比べ，約20数％も多くのechinocy−

する．またDuchenne型筋ジストロフィー症のte型の出現を示した．

一部の筋細胞内にCaが蓄積しているというBo−る．これは正常者の赤血球に比べMyotonic Dy−

densteiner，J．B．eta15）の報告と類似する現象と考察考えられる．

一般に赤血球内のATPレベルが，正常な赤血球形態，即ちdiscocyte型を保つことに，重要な

ま

と

め

患者の赤血球は外部環境条件の影響を受け易い役割を果していることが知られている．

ことが判った．

また赤血球内のATP量が減少するとechino−
Cyte型に変形し，増加するとStOmatOCyte型を

アルスバ溶液中で，患者の赤血球は対照者のも生ずる要因となることが知られている．

のと同様に正常形態を保つことができた．経時的図lで示されるように，アルスパ溶液中で，患者と対照者の赤血球に，eChinocyte型の変形出に観察した赤血球の形態変形の出現率は少なく対現率が非常に少なかったことは，アルスバ溶液にCa2＋を含むPBS什）中での，患者赤血球の経時

ブドウ糖が含まれているため，糖代謝系を持つ赤的形態変化は，多くのechinocyte型を生じ，対血球は，この溶液中でATP産生，消費か可能で，照者のものと大きな差を示した．

照者と差がなかった．

患者と対照者赤血球の多くが，6日間の保有中正常形を保つことができたと考えられる．また患者

今後この外部環境条件を受け易い庶因を，物理と対照者の赤血球異常変形出現率に差が認められ化学的手法を用いて調べて行く予定である．このー197−

ことは患者の細胞膜の性質を究明するひとつの手かかりとなると考えられる．

S．，Parma，M．，Reggiani，R．，Rossi，G．L．＆

患者の血液を提供下さった，国立療養所東埼玉病院

石原博幸先生，正常対照者の血液を提供下さった，東京女子医科大学

3）Grassi，EリLucci，B．，Marchini，C．，Ottonello，

金子行子先生に感謝する．

Tagliavini，J．：Deformed Erythrocytesin
Muscular Dystrophies．Neurology，28：842，
1978．

4）Plishker，G．A．，Gitelman，H．J．＆Appel，S．
H．：Myotonic MuscularDystrophy：Altered

文

献CalciumTransportin Erythrocytes．Scien−

1）Bessis，M．，Weed，R．Ⅰ．＆Leblond，P．F．：Red
Cell Shape．Springer−Verlag，New York，Heidelberg（1973）．
2）Igisu，H．，Mawatari，S．＆Ce，200：323，1978．

5）Bodensteiner，J．B．＆Engel，A．G．：Intrace1−
1ular Calcium Accumulationin Duchenne

Kuroiwa，Y．：

Erythrocyte ATPinDuchenne Dystrophy：
Effectsof Ouabain and Propranolol．Neur0−
logy，29：992，1979．

ー198−

DystrophyandotherMyopathies：AStudyof
567，000Muscle

Fiber

0logy，28：439，1978．

Sinl14Biopsies．Neur・40）筋緊張性ジストロフィー症における赤血球膜
Lipid vesiclesの異常

近 藤 喜代太郎
研究協力者

日

長

野

泰

甫

Allen D．Roses

用いてスペクトリン，および，Band5蛋白を抽的

筋緊張性ジストロフィー症（以下MMDと略す）

出した．上記の脂質を使用して作製したリポゾーにおいて，最近，赤血球膜蛋白のりん酸化の異常がムに，スペクトリン・Band5蛋白を混入し，カ指摘され，さらに，電子スピン共鳴法で，膜流動性

ルシウム存在下と非存在下におけるナトリウムのの増大が報告された．これらの変化は，MMDが，透過性を検索した．

筋肉のみならず，全身性に共通した膜異常を有するという仮説を支持している．しかし，上記の変結化を惹起する膜異常の局在は，なお不明であり，

果

カルシウムの存在下では，ナトリウムの取り込

その本態も明らかにされていない．そこで，筆者みが著しく低下する事実を兄い出した．MMD例

らは，MMDの赤血球膜異常が，膜蛋白，あるいと対照例において，カルシウムによるナトリウムは，膜脂質のいずれに起因するかを知る目的で，の取り込み低下を比較すると，前者において，1ナトリウムの透過性に関する実験を行なったので

mgりん脂質あたり，4148土1195C．p．m．，後者にお報告する．

いて，6449±877C・p・m・と有意な差（p＜0．005）を認めた．交叉実験を行なった所，MMD例から
方法

得た脂質を用いた時に変化が再現された．

MMD例（6例）と対照例（6例）から静脈採血により赤血球を得て，Dodgeらの方法で赤血球

結語

膜（ゴースト）を作製した．各ゴーストから，F0−

上記の結果は，MMD例の赤血球臆脂質分画に1chらの方法で脂質を抽出し，同時に，低張液をなんらかの異常が存在する可能性を示唆している．

＊新潟大学脳研究所手中経内科＊＊Duke University MedlCal Center．U・S．A．

一199−

41）ジストロフィー鶏赤血球膜のレクチン結合

宇尾野 公義＊
研究協力者

別

府

宏

囲＊

中

島

元

夫＊＊

＊＊＊

西

山

文

朗

進行性筋ジストロフィー症（PMD）をsystemic

＊＊＊

平

野

寛

Con AをタロラミンT法▲）により125Ⅰで標識し

membrane diseaseとしてとらえる立場から一連たのち，Kawaguchiら5）の方法により結合実験をの研究を行って来たl）2）3）．昨年度はジストロフィ

行った．0．25％のbovine serum albuminを含む

ー鶏（Dy鶏）3羽，正常対照鶏2羽を用いて，両PBS（PBS−BSA，10mM）を作製し，その0．25皿C者の間に赤血球細胞膜表面のConcanavalin A

中に1×106個の赤血球と3〜100pmolの125Ⅰ標識（ConA）結合の差が認められることを報告したがミ）Con Aを加え，40C60分反応させたのちPBS−BS

今回は実験対象の数を増すとともに，月令・性を厳密にmatchさせ，定量的な検討を加えた．またAにて洗擬し，結合した125IをAlloka autowell
SyStemにて測定した．

125Ⅰ標識Con Aを用いて結合実験を行った．

（iii）二次元展開標本におけるFer−ConAの結合：
ConAのferritin標識はIrimuraら6）の方法に材料と方法従った．洗i條した赤血球をFer−ConAと370C30分

Dy鶏8羽，正常対照鶏10羽を用い，麒化後1，間反応させたのち，PBSで洗i促し，等量のPBS

2，4ヶ月の時点で採血し，赤血球を分離，燐酸

にて浮遊液を作製した．この浮遊液を蒸溜水の表

緩衝生理食塩水（PBS，pH7．2）にて3回洗源し，面に滴下すると，その一部は渉透庄により破裂し，次の実験を行った．（1）ConAによる赤血球凝集活

赤血球膜は表面張力により伸展されて水表面に浮性の測定，（2）125Ⅰ標識ConAの結合実験，（3）二次かぶ．支持膜をはったグリッド上にこれらの赤血元展開標本におけるferritin標識ConA（Fer−

球膜を拾い，蒸溜水で洗i條したのち．透過電顕でConA）結合の電顕的観察．

観察した．

（i）Con Aによる凝集活性：
PBSによりCon Aの倍数稀釈系列をマイクロ

結

果プレート上に作製し，これに等量の被検赤血球の（i）ConAによる凝集活性：

浮遊液（1vol％）を加えて振近し，密閉したのち1ケ月及び4ヶ月の時点における赤血球のCon

370C，60分間静置し，凝集活性を判定した．判定

A凝集活性を表lに示す．凝集活性はジストロフ

は（−），（＋），（一汁），（≠）の四段階で表示し，判ィー，対照の両群間で多少の重なり合う部分を示

別の困難な例はその中間的表示を加えた．（＋）を示す最低Con A濃度で凝集活性を表現した．

すが，全体としては明らかに異なる凝集活性を示（ii）1251標識Con Aによる結合実験：

した・中央値で表示すると，月令1ケ月のDy鶏では2￣ mg／皿C，同じ月令の対照鶏では2▲2mg／me
であり，危険率5％以下で有意の差を示した．ま＊都立府中病院＝神経内科

た月令4ケ月においても両者の差は同様であり，＊＊東京大学薬学部生体異物

月令1ケ月の時点よりもむしろ一層顕著にその違＊＊＊杏林大学医学部解剖

いが認められた．月令2ケ月におけるConA凝集ー200−

表I Titration of agglutinability with ConA
Scores of−，士，＋，≠and≠Were assigned according to the degreeof agglutination．Titers were expressed as thelowest concentration ofConA（22￣nmg／me）togive

one

plus

agglutination．

∩

∩

判
り
5
迫
1
1
皿
9
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q
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＋
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・
旧
訂

■2
■2

1
0

2

●‥・‥‥・‥・‥・・・・●

2

1が確認された．また，全体としては，加令にとも

2

のちにも高値をとる傾向があり，測定値の恒常性

3したものはのちにも低値を，高値を示したものは＋グ

る．多少の例外はあるにせよ，はじめに低値を示

4ケ月における凝集活性を個別に表示したものであグ一打

図lは個々のトリにおいて血球凝集活性がどのように変化するかを検討するために，1ケ月と45照との差は同様に顕著であった．

■2の値と厳密な比較はできなかったが，Dy鶏と対

8

球濃度を0．5vo1％として行ったため，1，4ヶ月

一2

7︵＜uOU已︸已ヒトZ〇一妄Z喜JUU＜

反応は上記の2回の測定条件とは多少異なり赤血ない凝集活性の低下する傾向を示した．
（ii）1251標識ConAによる結合実験：
結合した125Ⅰの値はKawaguchiら即の方法に従1Mって図2のようにプロットした．ここで，［cell］：
赤血球濃度，［ConA］：ConAのモル濃度，n：細胞4M

図I Relationship between ConA agglutina−

1個あたりに結合したConA分子の数，Ka：結一201−

tion titer and maturation of chicken．

Binding of1251−1abeled ConA to normal
and dystrophic chicken erythrocytes．

ム﹁4mo n th sRa

N o rm a l3

D y5 tr O ph y

2 y e ar s
Ra

n

3．
5 Ⅹ 10 6

3．
4
5．
4

クー

︻ニ8︼

︿トT⁝盲長く卓

表2

3．
5

x

x

x

n
lOも

lOl

lO も

4．
8

3．
4

x

Ⅹ 10 6lOも4 ．
2 Ⅹ 10 6

3．
5

Ⅹ 106

−
Ka，apparent

aSSOCiation

constant（M￣l）for

major binding sites．
01

2n，number of major bhding sites．Average

1【CαIAfree】

図2（x10−6）

Value of triplicate experiments．

Binding of125I−labeled ConA to normal
and dystrophic chicken erythrocytes

る傾向を示しており，このことは先に述べた凝集試験の結果とも一致する．

The binding reactions were performed as（iii）二次元展開標本におけるFer−ConAの結合：

describedin the text．The datawere plo−

月令4ケ月における鶏赤血球膜のFer−ConA結

tted according to the method of Steckand Wallach with slight modification by
Kawaguchi et al．●，nOrmal chicken ery−throcytes；○，dystrophic chicken erythro−

合の透過型電顕写真を図3に示す．中央の弱拡大
写真が展開した血球の全体像であり，核の周囲に展開・伸展された細胞膜がひろがっている．左右CyteS・Both normalanddystrophicchickens

はその強拡大であり，（A）が正常対照鶏，（B）がDy

Were about2years old．

鶏の所見を示す．後者においては，前者に比し，
ferritin粒子の分布密度が少ないことが一見して明らかである．分布のパターンに関しては，分布合定数の間には次のような式が成立する．
［cell］

lConA bound］

11

密度の低い後者において，不規則性が目立つが，．1

十二

Ka・n lConA free］l n

実際に写真上でクラスターの数を数えてみると必
ずしもどちらかに優劣をつけることが困難な印象

プロットした点から求められる直線は2相性のパターンをとり，赤血球膜表面にはmajor，minor
二種類の結合部位があることを示している．緩徐な傾斜の直線を外挿して得られる縦軸との交点が，細胞1個あたりのmajor binding site数を逆数で表示しており，横軸との交点からその結合定数（Ka）が算出できる．このようにして得られた細胞
1個あたりのmajor binding site数（n）と結合定数（Ka）は表2に示してある．Kaに関してはDy
鶏と対照との間に差を認めないが，nに関してはをうける．そこで客観的な判断を得る為に次のような定量化をこころみた．Dy鶏，対照鶏からそれぞれ3羽ずつを選び，その二次元展開電星頁写真からランダムに三視野を選び100nmXlOOrLmのunit
Squareでこれを区画したのち，300個のunit squ−are 中に含まれるferritin粒子を数えヒストグラ
ムを作製した（図4）．unit squareあたりのfer−ritin粒子数のmean±S．D．は，Dy鶏で4．6±3．7，
5．4±4．0，6．0±3．9であり，対照では8．9士5．0，

Dy鶏で有意に減少していた．年令2才以上の鶏に関しても，両群の差は同様であったが，Dy鶏，対照鶏のいずれも年令とともに結合部位数は減少す
ー202−

図3

ElectronmiCroscopic photographs of chicken erythrocyte membranelabeled with ferritin−ConA（A）nomalchicken，（B）dystrophic chicken．（×37，000）

倍20柑201 0池10
l・
2
01
1一
0l
2一
010袖叩

白山トN⊃OUSuZくα山王く
︼≡≡SくJlL0uqくト之︼U虻ul

DYSTROPHY

一一し二

」t

＿
図4

Distribution frequency of ferritin particle
density per unit squarein dystrophic

0

5

10

15

20

25

30

35

versus normal erythrocyte plasma memb−

NUMBER OF FERRmN PARTICLES PER
UN汀 SOUAR【

rane．

−203−

9・3±4・3，9．3±5．3であった．両者の間にはp＜られる．freeze fractureによる観察では，この0．001で有意の差を認めた．一方分布のパターンに

ほかに，膜内粒子の分布が不均一であることもジ

関しては，クラスター形成の程度を示すindex

ストロフィー赤血球の特徴として指摘されているとしてIrimuraら6）によって提唱された：q（k）／

9）10）．しかしながらFer−ConAによる電顕的観察でのandom（烏）を用いて検討を行ってみた．ここで，のandom（ん）とは乱数表により作成したランダムな者間に分布パターンの差は見出し得なかった．こ

分布パターンから算出した値で，1辺250鬼ÅのれはおそらくConAの結合によって膜流動性の増

unitsquare中に含まれる粒子数のS．D．を意味し，粒子の総数をTNとすると加がおこり，これによって膜内粒子の移動，クラJra。d。m（鳥）＝0．029J〒両方

は，Irimuraら6）の方法に従って検討した結果，両スター形成が促され，両者間に本来あった膜内粒子の分布差をマスクしてしまったためであろう．

なる関係が理論的に成立する．またJ（鳥）は実結際の試料電昆頁写真を1辺250kAのmit square論で区切った時に，unit square中に含まれる粒子

月令，性をmatchさせたDy鶏と正常鶏の赤血数のS．D．である．これを今回のテ」タにあてはめ

球を用いて，（i）ConA凝集活性，（ii）125I標識Con

るとJ（鳥）／Jra。d。m（た）はDy鶏で13．3，13．1，12．1，

Aの結合実験（揖）二次元展開標本におけるFer−

対照では12．8，10．6，13．3であり両者ほぼ同じ値を示している．

ConA結合部位の電顕的観察，を行なった．Dy鶏ではCon A結合部位の減少と，これに伴うConA
凝集活性の低下が認められた．

考察
文

昨年度の報告において我々は，Dy鶏の赤血球が対照に比LConA凝集活性の低下を示し，これが献

1）福永秀敏，堀真一郎，佐橋功，宇尾野公義：

膜面のConA結合部位の減少にもとづく可能性をDuchenne型筋ジストロフィー症における血小指摘した3）．ある種のレクチンによる赤血球の凝集

板セロトニンの生化学的，組織化学的研究−

性は鶏の雌雄，産卵等の条件により変化すること保因者判定への新しい試み．臨床神経学．17：が知られているので7），今回の実験は鶏の月令，性316−321，1977．

を厳密にmatchさせて行ったが，Dy鶏と正常鶏と

2）宇尾野公義，別府宏E乱 八木陪一，山田克浩：の間には矢張明らかな差が見られた．また，今回ジストロフィーチキンにおける栓球セロトニン

新たに行った125Ⅰ標識ConAによる結合実験でも，の異常．厚生省心身障害研究「筋ジストロフィ

Dy鶏でConA結合部位の減少が確認された．

ー症の病因の究明に関する研究」沖中姓，昭和Schafiqら8）はDy鶏を用い，またWakayamaら，）はヒトDuchenne型筋ジストロフィー症を対象と52年度研究報告書，143−146，1978．
3）宇尾野公義，別府宏囲，八木陪一，平野寛，西して，freeze fractureの観察から，赤血球膜内粒

山文朗，中島元夫：筋ジストロフィーチキンの子の密度と分布様式が，ジストロフィーでは正常

赤血球，栓球の細胞化学的研究．厚生省「神経と異なることを報告している．Itoら10）は鶏赤血球疾患研究委託費」筋ジストロフィー症の病因に膜からConAレセプターを単離し，これが分子量関する臨床的研究（三好姓）昭和53年度研究報
告書，34−39，1979．

100K，45K，33Kの糖蛋白質であることを示し，更に膜の表面ラベル法を組合わせて解析した結果，これらがいずれも膜貫通蛋白であることを報告し

4）Hunter，W．M．：Radioimnunoassay．In
Handbookofexperimentalimmunology，ている．従ってDy鶏赤血球におけるConA結合部

3rd ed．（edited by Weir，D．M．），Black−

位の減少を示す今回の実験の結論は，Schafiqら＄）が観察した膜内粒子の減少と対応する所見と考え

well，London，1978，Vol．1，14．3．

ー204−5）Kawaguchi，T．，Matsumoto，Ⅰ．＆Osawa，

T．：Studies on competitive binding ofle・

ticlesin erythrocytes of dystrophic chi−ckens．J．Neurol．Sci．，30：299−302，1976．

ctins to human erythrocytes．Biochemistry，

9）Wakayama，Y．，Hodson，A．，Pleasure，D．，

13：3169−3173，1974．

6）Irimura，T．，Nakajima，M．，Hirano，H．＆Bonilla，E．＆Schotland，D．L．：Alteration

Osawa，T．：Distribution of ferTitin−COnju−

in erythrocyte membrane struCturein Du−

gatedlectins on sialidase−treatedmembra−

chenne muscular dystrophy．Ann．Neuro1．，

nes of human erythrocytes．Biochim．Bio・

4：253−256，1978．

phys．Acta，413：192−201，1975．

10）Ito，Y．，Yoshimoto，R．，Irimura，T・Setaka，

7）水谷誠，梅沢英彦，倉益茂美：タイズPHAによM．，Shimizu，H．＆Osawa，T．：Concanava−

り見出されたニホンウズラ赤血球凝集原に関す

lin A・inducedincrease of membrane flui−

る研究．日本畜産学会報48：227，1977．

dity of chicken erythrocytes．J．BiocherrL（Tokyo）86：1807−1815，1979．

8）Schafiq，S．A．，Leung，B．＆Schutta，H．S．
：Reduced density ofintramembrane par−ー205−42）筋ジストロフィー症における筋膜脂質に関する研究一続報−
一筋ジストロフィーチキンの筋ガングリオシド
について−

宮

研究協力者

正

武

＊＊＊

＊＊

渥 美 哲 至

有

賀

敏

夫

中

村

京

子

筋ジストロフィー症における筋線維崩壊の原因

2．筋ジスチキン筋組織のガングリオシド分析：

として膜異常の存在を示唆する数多くの研究がな

材料は対照，筋ジスチキンおよびCNPインヒ

されている．1）ガングリオシドは膜の脂質二重層のビター治療引を行った筋ジスチキン，各々7，8，

外表面に存在する糖脂質であり，免疫学的抗原，

8羽の前胸筋を用いた．筋をホモゲナイズLAn−

コレラ，テタヌストキンンなどの受容体として機doらの方法6）に従って粗ガングリオシドを待，薄能し，又黄近副腎髄質のタロマフィン顆粒の膜に

屑クロマトグラフィーを行ない，個々のガングリ

ガングリオシドが高濃度に存在することが明らか

オシドを分離し，島津二波長クロマトスキャナーにされその生理作用との関連が問題となっている．

を用いて定量した．

著者らは，筋ジストロフィー症における膜異常
研究213）の一つとして昨年度一）に引きつづき，今回は結果

未だ明らかにされていないチキン筋ガングリオシ

1．チキン筋組敵組ガングリオシドのDEAE

ドの構造解析を行うとともに，筋ジストロフィー

Sephadexによるelution patternはfractionI，

チキン筋と対照の差について再検討を行った．

ⅡおよびⅢに分けられ，Ⅰの薄層クロマトグラフ
ィーを行なったところ3のスポットが検出された．

方法

この分画のpreparative薄屑クロマトグラフィー

l・チキン筋組織ガングリオシドの構造解析：を行った．3つの主分画A，BおよびCのうちA

チキン前胸筋を用い，クロロホルムメタノール（1とBはおのおの薄層クロマトグラフ上GM。および：1，答比）および（1：2，容比）により総脂GD，ガングリオシドのRfと一致し，Cは既知のガ質を抽出し，DEAE Sephadexを行ないneutral

ングリオシドとは一致していなかった（図l）．そ

lipidとacidiclipidに分け，aCidiclipid分画を

れらのガスクロマトグラフィーによる糖組成を表l

アルカリ水解によりガングリオシドを得た．さらに示すClostridiumperfriugensのNeuramini−にDEAE Sephadexを行なって精製ガングリオシ

dace処理によりAとBはいずれもCeramid dihexo＿

ドを得たのち，薄層クロマトグラフィーで個々のSideとなった（図2）．しかしCは2つのbandより

ガングリオシドに分離し，ガスクロマトグラフィ

なり，単一物質でない可能性がでてきたため更に検ーにより，おのおのの糖組成を同定した．

討を行っている．これらの結果よりAは，GM3
ガングリオシドであり，BはGD3ガングリオシド＊自治医科大学神経内科＊＊都立臨床医学総合研究所中間代謝部門

であることが明らかとなった．Cは6糖よりなると考えられるが，その構造はさらに解析中である．
−206−

2．筋ジスチキン筋組織ガングリオシド分析結果を表2に示した．筋ジスチキン筋組織ガングリ
オシドの蛋白あたり，および湿重量あたりの含量
は，いずれも対照に比し明らかに増加し，CNPイ
ンヒビター治療筋ジスチキンでは，対照に比し増しているが，筋ジスチキンに比べると減少しており，いずれも有意な差を認めた．
筋ジスチキンのガングリオシド分画，GM3，GD3およびunknowIlXのいずれもが増しているが，最も増しているのはGM。ガングリオシドであった・
CNPインヒビター治療群では，筋ジスチキンに比べⅩガングリオシドの減少が明らかであった．

表I Sugar composition ofisolated ganglioT
sides

1
GIc

Gal

NAc−Gal

1．00

0．75

1．00

1．04

1．00

3．05

2

A

B

C

3

NAc−NA

図l Isolated gangliosides

0．92

表2

1．15

Gangliosidesin chick muscles
COntrOl

treateddystrophy

dystrophy
totalsialic

n＝12

n＝7

n＝9

tLg／g protein

26・0±3・4

75．0±22．5★

50．0±9．7★△

pg′g Wet Weight

6・1±0・7

14．2±

10．5±1．7★AAganglioside

GM3：

GD3：

Ⅹ

acid

；

n＝7

nE3

24．9±13．4★

20．3土5．2★

（25．2 ± 8．2宅）

（31．7

±

8．1亀）

（35．9 ± 7．9亀）

9．5±

22．9±

6．0★

27．2±6．7★

（39．0 ± 6．1号）（31．1±

3．6篭）…

（37．2 ± 7．2篭）

8．6±1・7

27．2±

6．7★

17．0±3．3★AA

（37．2

7．2亀）

（31．5

fractions

Ug／g protein

pg／g prOtein

Ug／g protein

3．9★

n＝7

6・3±2・6

2・0（35．8 ± 9．8亀）±＊：tく0．01．

★★：t＜0．05

for each sample to control・A；t＜0．01，

AA：t＜0．05

for each sample to dYStrOPhy．

−207−±1．7篭）

していた．またプロテアーゼインヒビター治療を行った筋ジストロフィーチキンでは，ガングリオ
シドが対照に比し増していたが，未治療のジスト
ロフィーチキンに比べると減少し，特にⅩガング
リオシドの減少が認められた．これらカ㌧／グリオ
ンドの変化は，ジストロフィー筋の膜成分の変化を示すと考えられるが，筋組織における筋線維以外の組織成分の変化の影響を検討する必要がある．
文

図2Isolated gangliosidesのNeuraminidase

献1）Rowland，L P．：Pathogenesis of muscular

処理

dystrophies．Arch．Neurol．33：315−321，
1976．

考

案

2）渥美哲至，宮武iE，大林民典ほか：Duchenne

チキン筋ガングリオシド含量は，ヒト（Svenne−
rholmら，1972）7㌧

型ジストロフィー症の赤血球の形態および生化

ラット，ウサギ，ブタ（Pur0

学的研究．筋ジストロフィー症の病因の究明にら，1960）8），ウサギ（Lassagaら，1972）9），ネコ，関する研究，沖中攻，昭和51年度研究報告書，ウサギ，ラット（Maxら，1970）10）の筋ガングリ
オシド含量とほぼ一致する．

173頁，1977．
3）富田充男．書屋美哲至，吉武正ほか：筋ジスチキ

チキン筋ガング1）オンド分画はGM3，GD，，Ⅹ

ン赤血球膜に関する研究．筋ジストロフィー症

ガングリオシドの3主分画よりなっていた．ヒトの病因の究明に関する研究，沖中波，昭和52年

筋ではGM3，GM2，GDl，GM．ガングリオシドが度研究報告書，141頁，1978．

主であり（Svennerholmら，1972）7），ウサギ筋で4）宮武正，渥美哲至，前沢政次ほか：筋ジストロ

はGM3，その他2種の構造未決定のガングリオシ

フィー症における筋膜脂質に関する研究．筋ジドからなる（Lassagaら，1972）ミ）また，ネコ，ウ

ストロフィー症の病因に関する臨床的研究（三サギ，ラットでは好班），昭和53年度研究報告書，186頁，1979．

hematoside

が主分画である（Maxら，1970）10）と報告されており，現在までの報

5）杉田秀夫，石浦章一：筋ジストロフィーチキン

告では，いずれの種についてもGM。ガングリオに対するproteaseinhibitor（E−64）の効果．

シドが主分画の一つであることは共通するが，そ筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究の他は，種によってガングリオシドを異にすると（三好吐），昭和53年度報告書，45頁，1979．

いう興味深い結果がでている．

6）Ando，S．，Chang，N．C．and Yu，R．：High

病的状態の筋享阻織ガングリオシドについては，

performance thinTlayer chromatography

ウサギ脱神経筋においてGM3を主とするガング

and densitometric determination of brain

リオシドの増加（Maxら，1970）10）および筋ジス

ganglioside compositions of several speci−

トロフィーラット筋では逆にガングリオシドの減

es．Anal Biochem．89：437−450，1978．

少が報告され（Maxら，1971）川，一方ビタミンE

7）Svennerholm，L．，Brace，A．，Mansson，J．，

欠乏によるウサギの実験的ジストロフィー症の筋et al．：Sphingolipids of human skeletalではガングリオシドが2倍に増加している（Alba−

muscle．Biochem．Biophys．Acta．280：6267

rracinら，1974）12）と報告されている．今回のジ636，1972．

ストロフィーチキン筋では，ガングリオシドが明8）Puro，K．，Maury，P．and Huttunen，J．K．：

らかに増加し，特にGM3ガングリオシドが増加

Qualitative and quantitative pattemS Of−208−

gangliosidesin extraneural tissues．Bio・

11）Max，S．R．and Brady，R．Q：Alteration

Chem．Biophys．Acta．187：230−235，1969．

Of the ganglioside composition of skele−9）Lassaga，F．E．，Ⅰ．Albarracin de Lassaga

tal musclein murine muscular dystrophy．

Nature233：55−56，1971．

and Caputto，R．：Rabbit muscle ganglio−
Sides．J．Lipid Res．13：810−815，1972．

12）AlbarTaCin，Ⅰ．，Lassaga，F．E．and Capu−

tto，R．：Changes of gangliosides and other10）Max，S．R．，Nelson，P．G．and Brady，R．
Q：The effect of denervation on the co−lipidsin skeletal muscle from rabbits

mposition of muscle gangliosides．J．Neu−

experimentaldystrophy．J．LipidRes．

rochem．17：1517−1520，1970．

15：89−93，1974．

ー209−

with

43）Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）におけるクレアチン代謝異常
I．CreatinaseおよびSarCOSine dehydrogenaseの
人骨格筋における存在−Creatine−urea経路の提唱
II．Duchenne型筋ジストロフィー症骨格筋中の．Creatinase異常三和夫♯敏＊治＊浩

茂 孝

正

尚

川

八木田

勢

下

沢

日

賀

川

宇 金 伊

田

＝ヒ
ロ

香

＝圭ご
ロ

三＊学＊苗＊聖健幸

今＊章＊也＊三＊臣克田

良 村 井 井

平

研究協力者

好

対象と方法

Ⅰ．Creatinaseおよびsarcosine dehydrogena−

資料は、22−69才（男性及び女性）の6例の非seの人骨格筋における存在−Creatine−urea
経路の提唱

ミオバナー患者から剖検により得た骨格筋（−600creatinase（creatine amidinohydIplase，EC

Cで凍結保存）である．骨格筋資料は5倍量の生

3，5，3，3）は，Creatine→SarCOSine＋

理的食塩水を加えて，Potter−EIvehjem型hom0−

ureaの反応を触媒する酵素であるが，Pseudomo・

genizerでhomogenizeした．筋homogenateは，nasのみでその存在が報告されている2）−3）・4）．私達

18，000gで30分間遠心分放し，上清を酵素液としては，人骨格筋のCreatine代謝研究の過程て人骨格用いた．また，この上清をSephadexG−150

C0−筋にCreatinase活性が存在することを見出した1）．

1umn（2．8×40cm）にapplyL，0．1Mリン酸ナト

私達は，また，SarCOSine→glycine＋forma−

リウム緩ノ衝液（pH6．2）で，各8mlのフラクショ

1dehydeの反応を触媒するsarcosinedehydrogenase

ンに分離溶出した．このうち活性の認められたフ（Sarcosine：0ⅩygenOXydoreductase，ECl，5，

ラクションを集め，酵素液として実験に供した．

3，1）の活性が人骨格筋中に存在することをも

資料の蛋白量はbiuret法で測定した．
Creatinase活性は，尿素の産生，およびCreati−

明らかにした．
本論文では，人骨格筋中にこの2つの酵素活性

neの消費によって測定した．尿素の産生でみる方が認められるとの成績を示し，Creatine・urea経路

法は，酵素反応を0．1Mリン酸ナトリウム緩衝液の存在することをのべる．creatine消費によるCreatinase活性の成績は今回新しく加えたものである．

（pH7．8）中で，300C，1時間行い，尿素の産生量＊徳島大学医学部第一内相

をdiacetylmonoxime−thiosemicarbazide法で測定した．creatineの消費でみる方法は，酵素反応を0．1Mリン酸ナトリウム緩衝液（pH6．2）中で，−210−

370C，30分間行い，残ったCreatine量をdiace−tyl a−naphthol法で測定した．

人骨格筋中のSarCOSine dehydrogenase活性の存在は，筋homogenate上浦を用い，時間に依存

SarCOSine dehydrogenase活性は，0．05Mリン

したDCIPの吸光度の減少により示された（図3）．

methosulfateと2，6−dichlorophenolindophenol（DCIP）を用いるHoskins and Mackenzie5）の果

人骨格筋中のCreatinase活性の存在を，筋抽出液を用いて，Creatineからの尿素の生成で確かめ

。′

丁．「「−

0
0
2

た1）．Creatinase活性はまた，Creatine消費量の

6
0
0

結

7
0
0

h二三︳0■ ●竹■uコ■OhU

方法で測定した．

︵亡盲Om＼勺〇日三吉0 0仁一︳■OJO ：tOEこ酸ナトリウム緩衝液（pH7．5）中で，phenazine

測定によっても確かめられた（区＝）．
Sephadex G−150のゲル濾過法では，Creati−nase活性のピーク

0は溶出液の144mlであり，分子

0．6

1．0

1．6

2．O

Cr●■tino cone●ntration（11）量は約5万と推定された．

図2 筋Creatinaseに対する基質creatineの飽和曲線

反応系中の0．1Mリン酸ナトリウム緩衝液のpHを4．3から9．0まで変化させてえた成績から筋cre−

骨格筋homogenate18，000g遠沈上清のSephadex G−150ゲル濾過物（蛋白量0．8mg），反応液1．2ml．

atinaseの至通pHは6．2であった．
Creatine濃度を増加させることによって見る
Creatinase活性は，hyperbolic curve（図2）を○／×10￣5Mと計算された．

√√︵のOtOEも︶示した．そして基質Creatineに対するKm値は8．0

／
︒／

︒／
︒

dHU凸

0

0
4

p3npE

0

0
5

／
○

O
3
0
C
2
0．

hJTコOd OSd已コdEU︵亡−∈OC＼pOEnの已00 0uコdOJO S〇一〇百斗︶

0

1

2

3

4

6

1neubation time（min）

図3
0

1

2

3

4

6

Enzyme amount

人骨格筋homogenateの18，000g遠沈上清のSarCOSinedehydrogenase活性反応液3mi中sarcosinelOmM，筋homo・
genateの18，000g遠沈上清（蛋白量16mg）（mg protoin）・

考察

図1人骨格筋homogenate18，000g遠沈上清のSephadex GL150ゲル濾過物のCreatinase
活性ているが2）・3）・4），哺乳動物におけるその存在は，ま反応液1．2ml中のCreatine濃度17mM．

だ報告されていない．すなわち，Creatineとph0−

Creatinaseは2，3のPseudomonasで知られ−211−

Sphocreatineの筋肉内での代謝の唯一の産生物は，

テン代謝異常IL Duchenne型筋ジストロフィ

Creatinineとされていた．私たちは，人骨格筋中ー症骨格筋中のCreatinase異常．本報告ⅠⅠ．

にCreatinaseが存在することから，人での尿素合成の新しい経路，すなわち，Creatine−urea 経路を提唱する．因みに，人骨格筋中での尿素の濃度は，0．4〜1．1mg／g wet wt．であるのに対し，肝ⅠⅠ．Duchenne型筋ジストロフィー症骨格筋中の中尿素は，0．8−0．9mg／g wet wt．（著者ら測定）

Creatinase異常であった．全体の尿素生成に対する骨格筋と肝との比率は，これからの研究課題である．

筋ジストロフィー症では，尿中Creatinineの減少，高クレアチン血症，クレアチン尿が特異的

creatinaseのもう一つの産生物であるSarCOSi−にみられる．また骨格筋中では一般にCreatine濃neは，私達が人骨格筋で見出した SarCOSine de−

度及びphosphocreatine濃度は減少している．こhydrogenaseによりglycineとformaldehydeの様なCreatine代謝異常の原因は生化学的にわかに変化するであろう．sarcosine dehydrogenaseはっていない．

哺乳動物の肝ミトコンドリアで見つかっているが，先に文献1）・2）において，我々は人骨格筋中に Cr−

本研究は，骨格筋中におけるその最初の発見であeatinase（creatine amidinohydrolase EC3，5，

る．

3，3）が存在する事を明らかにした．本文では，

Duchenne型筋ジストロフィー症骨格筋のCre−

中のCreatinase異常の成績を示す．

atinaseの性格異常については，別にのべる6）．
文1）三好和夫，平良Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）骨格筋

献

対象と方法

章，吉田健三ほか：筋ジスト

骨格筋は，臨床所見及び人類遺伝学的に診断さロフィー症におけるクレアチン代謝．厚生省筋れた14才と18才の男性Duchenne型筋ジストロフ

ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究（三ィー症患者の剖検より得た．対照健首筋としては，

好姓）昭和53年度研究報告書，1979．p175

文献2）と同じ資料を用いた．筋ホモジネートと2）Akamatsu，S．andKanai，Y．：Bacterial

SephadexG−150でのfractinaonは文献2）と同

deco一

mposition of creatine．Ⅰ．Creatinomutase．

様である．creatine減少によるCreatinase活性のEnzymologia，15：122，1951．

測定も文献2）と同様である．

3）Appleyard，G．andWoods，D．D．：Thepath−
結

WayOfcreatinecatabolismbyPseudomonas

果

DMD骨格筋ホモジネートの18，000g遠沈上清

OValis．J．Gen．Microbio1．，14：351，1956．
4）Yoshimoto，T．，Oka，Ⅰ．andTsuru．，D．：Purifi−

をSephadex G−150濾過にてCreatinase活性を

Cation，CryStalizationandsomepropertiesof

測定した2）．DMD骨格筋Creatinaseの分子量は，Creatine amidinohydrolase from Pseudomo−

健常骨格筋とほぼ同じ50，000である．DMD骨格

nasputida．J．Biochem．，79：1381，1976．

筋Creatinaseの至適pHも健首筋のそれと同じ

5）HoskinS，D．D．and Mackenzie，C．G．：Solu−bilization and electron transferflavoprotein（pH6．2）であった．しかし基質（creatine）濃度変化によるCreatinase活性を測定すると，健常筋

requirementofmitochondrialsarcosinedehyTとDMD筋では著しく異なっている．
図lに示す様に．健常骨格筋では，通常のMi−

drogenase and dimethylglycine dehydrogen−ase．J．Biol．Chem．，236：177，1961．

chaelis−Menten kineticsであり，Km値は8．0×

章，吉田健三ほか：Duchenne

10￣5Mであった2㌧一方DMD骨格筋では，クレア型筋ジストロフィー症（DMD）におけるクレア

チン濃度に対して酵素活性はSigmoid curveを呈

6）三好和夫，平良−212−

きてご30の2叫霊○占︵已竃OC＼p呂コ200呂コdOJO のOtOdミ︶
0．6

1・O l．5

2．0

Creatino concentration（mM）

図1−A

筋Creatinaseに対する基質Creatineの飽和曲線

健常人骨格筋のゲル濾過物（蛋白量0．8mg），DMD筋（0．3mg），反応液1．2mi．
−0−「 健常人骨格筋；一一●一一，DMD骨格臥察

本研究において，私たちは，DMD骨格筋cre−

●′／

釦約4

︵︒三言こ小考

atinaseが健常骨格筋のそれと分子量及び至適pHは同じであるが，kinetic behaviorが著しく異な︒

る事を示した．健常骨格筋Creatinaseは基質に対しhyperboliccurveを示し，Km値8・0×10￣5Mであるが，DMD骨格筋のそれはSigmoidでありVmaxの1／2を与えるCreatine濃度は3．6×10−4
Mである．今回使用した健常骨格筋中のCreatine〇一一一一一〇濃度は約3mg／gであり，DMD骨格筋では0．6
mg／gに減少していた（著者ら測定）．しかしなが与（XH戸打）らDMD骨格筋中のこのCreatine濃度は，なお今
図1−AのLineweaver−Burkプロット

回見出されたCreatinaseをsaturateするに十分−○−，健常人骨格筋：一一●一一，DMD骨格筋．

である．ただし，生体においては，DMD骨格筋

図1−B

中可溶蛋白質の割合は筋萎縮のため著しく減少しているので本症Creatinase活性を健常Creatinase
活性と安易に比較することはできない．

し，Vmaxの1／2を与えるクレアチン濃度は，3．6

DMDにおける高クレアチン血症，クレアチン

×10▲4Mである．なお同量の酵素資料（ゲル濾過尿を含むクレアチン代謝異常は，いますぐには説のfractionで酵素活性を持つものをあつめた）に明できないにしても，本文で述べた骨格筋中cre−

おけるVmaxはDMDで健常骨格筋Creatinaseの2．7倍であった．

atinaseの分子異常がDMDのprimaryな原因と密接に関係していることが十分に考えられる．

−213−

（DMD骨格筋中のCreatinase活性については，

トロフィー症（DMD）におけるクレアチン代

昨年の本研究報告1）でもふれたが，資料と方法の上

謝異常I．CreatinaseおよびSarCOSine dehy−から異常性までを明らかにすることができなかった．）

drogenaseの人骨格筋における存在−Creati−
ne−urea経路の提唱．本報告Ⅰ．

本報告（Ⅰ，ⅠⅠ）の要旨は別に英文3・4）（Proc．

3）Miyoshi，K，Taira，A，et al：P．resence ofCreatinase and sarcosine dehydrogenasein

Japan．Acad，1980）で発表の予定である．

human skeletal muscle．Proposal for cre−文

献atine−urea pathway．Proc．Japan Acad．56

1）三好和夫，平良 章，吉田健三ほか：筋ジスト

B：95，1980．

ロフィー症におけるクレアチン代謝．厚生省筋4）Miyoshi，KりTaira，A，etal：Abnormaliti−

ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究（三es of creatinasein skeletal muscle of pa−

好班）昭和53年度研究報告書，1979，p175

tients with Duchenne muscular dystrophy．

2）三好和夫，平良章ほか：Duchenne型筋ジス−214−

Proc．Japan Acad．56

B：99，1980．

44）各種神経筋疾患罷患筋のCANP活性
＊．＝＊＊

杉

田

研究協力者

秀

夫

石

浦

章

二＊

は じ め に

よって着古性化される酵素活性を測定しており必

進行性筋ジストロフィー症，特にデュシャン

ずしもCANP活性自身を測定しておらず特異

ヌ型（DMD）における筋構造蛋白の分解には特徴性に乏しく，且つ反応時間が長すぎる欠点があがあり，例えばミオシンH鎖の分解，トロポニン

る．

亜分画のうちⅠ，及びC分画の減少と相対的なT分

我々は2）1978年筋ホモジェネートの上清のpH画の残存などである．これらの変化は正常骨格筋に適当な蛋白分解酵素を加え一定時間反応させたを一旦4．9に低下させる所謂isoelectricprecipitati−onによりCANPを沈澱させpH7．5にもどしこの溶後抽出した場合でも同様の変化を再現する事が可

液を粗CANPとした．基質としてアルカリ変性カ能である．従ってDMDにおける筋構造蛋白の分ゼインを用い30℃30分間反応させ上清を280にお解には幾つかの蛋白分解酵素が段階的に関与する

ける吸光度の差で測定する方法を考案しこの方法と考えられる．最近DMDの成因として膜系の異を用いDMD及びBecker型DMPに於て高値を常が特に強調され，従ってこの事と合せ考えると示す事を報告した．この方法は反応時間が短い利蛋白分解の初期過程には細胞外から細胞内へ異常点はあるが材料が量的に少ないと一旦沈澱した後に高濃度のCaが浸入し，このCaイオンによって活充分に加洛化されない欠点があり従って再現性に性化されるCa依存性中性プロテアーゼ（CANP）

乏しく必ずしも満足すべき方法ではない．
1979年Daytonら3）は筋ホモジェネートの上清が重要な役割を果している事が想定される．このCANPを硫安分画し0−40％飽和で沈澱する分画を用い，活性を測定する事は意義のある事と思われる．しアルカリ変性カゼインを基質とし，ビタミンE欠

かし微量の生検材料を用いCANP活性を測定す

乏家兎筋肉に於て3．6倍に増加する事を報告している方法はまだ確立されていない．本研究の目的はCANP測定法の確立を目ぎし且つ各種神経筋疾患

る．又同年Neerunjun，Dubowitz4）は1，000×gの
上清そのものを用い基質として筋原線経を用い25について活性を測定する事にある．

℃，24時間反応させる方法を報告しているがこの意味で各種神経筋疾患における羅息筋の方法は反応時間が長すぎるし又基質である筋原線
経が常に一定のものを得る事が困難である．

結果及び考案以上今迄に記載された方法は何れも欠点があり

l．各種測定法の検討
文献的には1976年Kar．Pearsonl）は筋ホモジ

理想的方法に程遠いと思われる．
そこで我々はDaytonらの硫安分画法を検討しェネートを酵素源とし，基質としてイエローカゼ
インを用い370C，18時間反応させる方法を用いDた．

MD筋に於てコントロール筋の約4倍に増加して

2．硫安分画法の検討いる事を報告している．この方法はCa

正常ヒト骨格筋ホモジェネートの上清を用い硫

イオンに安を用い幾つかの分画に分け，各分画についてC＊東京大学医学部脳研神経内科＊＊国立武蔵療葦所神経センター疾病研究第一部

ANP活性を測定してみると区日に示される様に
CANP活性の最も高い分画は40−50％飽和でありー215−

粗＿CANPi容液とした．基質としてはサクシニー
3を280における吸光度の差で読む方法を考案した．

2︵S︸竃n︶．JUq dNdU

ル化カゼインを用いβメルカ70トエタノール，6mMCaイオン存在下で30℃，30分間反応させ上活
この方法を用いた場合測定可能最低骨格筋量は0．25gであり上活蛋白（mg）をreference baseとした場合正常範囲は0．015〜0．025である．
4．新しい方法を用いた各種神経筋疾患の
0
i

30

30

40

50

60

70

i

i

l

l

i

40

50

60

70

CA

NP活性

80

末だ予備段階であるかこの方法を用いた罷息筋

i

80100

のCANP活性は3例のDMD罷恩筋に於て1．5〜4．0倍に増加し，ALSでは2例のうち1例は正常（NH4）2SO。（％sat．）

値，他はわずかに増加した（図2）．
今後この方法を用い症例数を増してCANP

図1硫安分画による各分画のCANP活性比較

活性を測定すると共により安定な再現性の高い方法の検索と，良い基質の開発が今後の課題であると

表J

各種抽出法によるCANP活性のrecovery比較

考える．

Recovery of Ca2＋ractivated neutralprotease（CANP）fromhuman skeletalmuscle
Treatment Total CANP Activify Recovery（Units）（％）
2．42

208
125
28

Daytonらの家兎の場合と異なっている．ヒトの

2

3．02

0

（40−50％）
DEAErce11ulose o．68

（100）

3

5，02

0

Ammonium Sulfate（Total）︵知己＼n︶．︺UくdNdU

Isoelectric precipitation

場合40−50％分画に全活性の約60％が回収される事がわかった．
そこで我々がすでに行ったisoelectric precipit−
ationによる活性を100とし40−50％硫安分画による活性のreCOVeryをみると125でありDEAE

C

DMD

ALS

セ

ルローズカラムを用いた場合28である事がわかった（表I）．即ち硫安分画法はrecoveryもよく且
つ操作も容易であり又再現性も高い事がわかった・
3．，新しいCANP測定法
我々は生検材料に5倍量の20mM Tris−HC1，
0．1M NaCl，5mM EGTA（pH7．5）を加えてホモ
ジェナイズし上活をとり硫安40−50％飽和で得られる分画を同じ溶液に溶解し1晩透析したものを
−216−

図2

神経筋疾患曜息筋のCANP活性DMD：デュシャンヌ型筋ジストロフィー症

ALS：筋萎給性側索硬化症

文Medica，1979，p．73．

献1）Kar，N．C．，and Pearson，C．M．：A calcium3）Dayton，W．R．，et al．：Elevatedlevels of anormal andCalcium・aCtivatedmuscularproteaseinrapi−

dystrophichumanmuscle．Clin．Chim．Acta，

dly atrophyingmusclesfromvitaminE−defi−

activated neutral proteasein

Cientrabbits．Biochem．Biophys．Acta，584：

73：293−297，1976．
2）Ebashi，Sリ

andSugita，H．：The

role

of

Calciumin physiological and pathological

216−230，1979．

4）Neerunjun，J．S．，andDubowitz，V．：Increas¶

processesofskeletalmuscle．In

Currenttopi−

edcalcium−aCtivatedneutralproteaseactivity

csinnerveandmuscleresearch，（editedby

inmusclesofdystrophic hamsters andmice．

Aguago，A．J．，and Karfati，G．）Excerpta−217−

J．Neurol．Sci．，40：105，1979．

45）トリプトファン代謝異常を認めた小脳失調症−キヌレニンフォルムアミダーゼ欠損症と思われる1家系−間日下＊三＊央＊苗

田

詫

健 通 香

膏

克
和

＊仁＊也♯健＊天晴

平 村 内 好

三

尚

西

敬

井

田

口

川

中

川

井

＊章＊学﹂＊臣良吉著者らは，さきに，ネマリンミオバナーにトリ

＊聖

正

田
木
八

平

研究協力者

ミノ酸高圧電気泳動法によってもチェックした．

プトファンーキヌレニン経路の代謝異常のあることを見出し，発表した1）2）．その後，本症と類縁の

成

績

l．症例

ミオバナーにも同経路にそれぞれ若干異なる代謝異常のあることを認めた3）4）5）．本文では，この一症例l：Sin．，T．22歳M（弟例）

連の成績の一部として，同代謝経路上のキヌレニン

主訴：起立，歩行不能，四肢の筋力低下．

フォルムアミダーゼ（Kynurenine formamidase）

家族歴：兄が同病で，両親に近親婚がある．処女

欠損あるいは活性低下症と思われる小脳失調症の

歩行14ヶ月，8歳で徒競争遅く，学業成績下位，

一家系の成績をのべる．

15歳で転びやすいのに気付かれ，以後経過はゆるやかであったが，20歳で運動後四肢の脱力と起立

対象と方法

不能が起り，一時改善したが21歳で再び起立不能

対象症例は，幼少より知能低下と増悪寛解を示すとなり，当科入院．体格中等（身長158cm，体重

小脳失調症の兄弟例とその一見健常な両親であり，46kg），皮膚発疹なし．知能低下（IQ38）．限振，

これらについてトリプトファン代謝をしらべた．

企図振戦を認め，変換運動t 膝址試験拙劣．腱反トリプトファン代謝の検索法は，しトリプトフ

射消失．四肢の末梢部の筋萎縮，筋力低下を認め，

ァン100mg／kg（ただし体重50kg以上は5g）を経

Rombergsign陽性，振動覚，位置覚の低下を認めた．

口負荷し，その前と後の各24時間尿中のKynure−

アミノ酸尿（−），末梢血液像，血清コレステロー

nic acid（KA），Ⅹanthurenic acid（ⅩA）をSa−

ル，血中IgA量210mg／dl，CK値12単位，また

toh，Price法で測定した．同時に，Kynurenine

VB6，VB12等いずれも正常値，髄液正常．頭部Cなど数櫨の中間代謝産物を併せて測定した．また，

T像で小脳萎縮は明らかでなく，筋電図（俳腹筋，トリプトファン負荷前後のトリプトファンの血中

前腰骨筋）に神経原性変化（Spike数の減少）を濃度および尿中排出量を日立アミノ酸自動分析器

認め，月非腹筋生検組織像ではいわゆる神経原性変で測定した．なお尿中トリプトファン排出量につ化（small angulated fiber，target fiber）と筋原

いては，二次元薄屑クロマトグラフィーおよびア性変化（moth−eatenfit光r）の混在所見を認めた．
ネマリンロッドは認めなかった．入院経過中，小＊徳島大学医学部第一内科

脳失調症状と四肢筋力は，特別の治療なしに著明に−218−

改善し，6ヶ月の経過で走ることが可能になった．

（〃mOles／lレ′day）
0

症例2：Sin．，M．25歳（兄例）

5

10

15

20

／ン
′
／／／／ノ／

弟例と類似の症状，経過であるが，運動機能障

負荷 前害，小脳症メ犬の程度が軽く，走るとつまずく程度
で起立，歩行不能に至ったことはない．体格中等

弟

（病

者）

兄

（病

者）

父

皮（身長159cm，体重53kg）IQ39．胆振（＋），

X A

K

Q 2 −0 ．
6

8 2 −G 5

2 （
〕−5 0

0 7 ・
−

弟

0 ．2

0 ．2

0 ．1

0 ．

兄

0 ．
2

0 ．3

0 ．3

0 ，

−

0 ．6

∩．

−
一

一

〇 ．1

0 ．

父
l
q

母

企図振戟（−）．変換運動および膝址試験拙劣，膝

負荷 後

K A

症例

A

X

l

ネマリン三才バチー

差障反射減弱．下腿筋萎縮を軽微に認めた．検査／／ノン／／／／

l
I

匹

a

K

A

⊂ ＝］ x A

成績では，アミノ酸尿その他，弟例と同様所見であった．入院中も運動機能に明らかな変動は認め
なかった．

図2

父（Sin．，Y．51歳M）は一見健常であり，運動

キヌレン酸（KA），キサンツレン酸（XA）尿中排出量（L−トリプトファン100mg／kg経口負荷）機能障害および小脳症状はないが，低身長（148cm）でIQ 66と軽度低値であった．
母（Sin．，E．50歳F）も一見健常であるが，身長146cm，IQ 64であった．

は，負荷前1日尿中排出量はKA，XAともに
0．2−0．3FLmOles／kg／day と正常下限の値であっこの父と母は近親である（図l）．

たが，負荷後1日尿中排出量は弟病者KAo．1，

2．トリプトファン代謝の成績

ⅩAo．4，兄病者KAo．3，XAo．6JlmOles／kg／day

1）KA，ⅩA尿中排出量（図2）と2病者ともに負荷後の排出増加がほとんどみら

健常人では，負荷前1日排出量はKA，XAとれなかった．

もに0．5FLmOles／kg／day以下であった．負荷後は両親（近親）は，負荷後1日尿中排出量，父KA，XAとも排出が増加して，KA2．0〜5．0，

KAo．6，ⅩAo．4，母KAo．1，XAo．2FLmOles／kg

ⅩAo．7−2．0であった．

／dayでやはり異常低値であった．

これに対し，本症家系（Sin．家）の兄弟病者でなお，図2の棒グラフ最下段に示すネマリンミ
オパテーでは，負荷後，KAのみ著しい排出増加，ⅩA正常範囲で，両排出量の間に大きな格差がある．
2）トリプトファンの吸収（図3）
健常人では，負荷前血中トリプトファン濃度は1．0−2．0mg％であり，負荷後2時間8．1〜11．8とピークを示し，4時間4．6〜7．8，8時間1．5−4．1
mg％と下降した．
2病者および両親では，負荷前1．2−2．9，負荷後2時間7．8〜9．2，4時間7．5〜9．0，8時間1．2−5．6mg％と負荷後のL−トリプトファン血中濃度の上昇は健常人レベルにあり，消迫の遅延傾向′がみられた．

図I Sin家家系図
工病者国㊨一見接骨，トリプトファン代謝異常あり

3）トリプトファン尿中排出量（表1）トリプトファンの1日尿中排出量は，健常対招，負荷前17．2−20．9，負荷後72．4〜145．9mg／day
に対し，2病者および両親では，負荷前，後とも

一219一

トンドール酢叫．−一・・二フ車リフト77日一一→トⅧトニ」

臣≡壷ン／「＝

プトフアンビロラーゼ

U巾工nO︼nきl ∈コ﹂霊：蓼 叫∈

キヌレニンフォルム7三ダーせく本例）
キヌしこナーせ（VB6）lキ又レン醇（K項†一手ヌレニン（KYN）−Lアントラニ鳩キ又レニン・トランスアミナーゼ（VB6）ーー◆一幸ヌレニン 3−ヒドロキシラーゼ（ネマリン三才パテー）

囲みッレン酎￣x司と

0

2

図3

4

6

hours

8

トリプトファン血中濃度の変化

3−HAオキシゲナーゼ（Lqトリプトファン100mg／kg経口負荷）
表lトリプトファン尿中排出量（L−トリプトファン100Eg／毎負荷）

症

例

負

荷

前

負

荷

後

弟 （病 者 ）（S 九．T ．2 2 y ）l l ．05 9 ．8兄 （病 者 ）（S 九．M ．2 5 y ）1 7 ．73 5 ．5駿

父（S in ‥ Y ．5

1 y ）

1 9 ．I

6 l ．4

母（S in ‥ E ．5 0 y ）1 5 ．3−

1 7 ．2 0〜 ．9

7 2 ．4 〜
1 4 5 ．9

常対照（ 3 例 ）

［きコ
図4

トリプトファン代謝経路の血中への吸収が正常レベルにあり，トリプトフ（皿8／day）

ァン尿がなく，しかもKA，XAの尿中排出量がに排出の異常増加は認めなかった．アミノ酸の二異常低値であることである．別に確かめた尿中イ

次元滞層クロマトグラフィーおよび高圧電気泳動

ンドール酢酸排出量は正常レベルであった．

法でもトリプトファンの排出増加を認めなかった．

すなわち，本症では，トリプトファンは，フォルミルキヌレニンまで代謝されるが，これからキ考察

ヌレニンへの間が障害されていると考えられ，こ知能低下，増悪寛解を示す小脳失調症，および四肢末梢の筋萎縮を主徴とする兄弟病者とその一こに働くキヌレニンフォルムアミダーゼ異常が推定される．

見健常な近親婚の両親に，トリプトファン−キ

本症は，臨床症状で類似のHartnup病に対して

ヌレニン経路の代謝異常のあることを明らかにしはアミノ酸尿がなく，先天性トリプトファン尿症

た．

（多田ら）に対してはトリプトファン尿のないこ

トリプトファン代謝のキヌレニン経路を図4にとが異なり，特徴ある新しいトリプトファン代謝示し，本症をこの経路の酵素欠損あるいは活性低異常症と思われる．遺伝型は常染色体劣性と思わ下症とみなす立場から，推定される障害部位を本れる．

図に書きこんである．あわせて，比較のため，すしかしながらこの酵素異常が本症の発症にいかでに報告したネマリンミオパテーの障害部位を記入してある．

に結びついているかは，現時点では不明である．

本文でのべる兄弟病者とその両親に認めたトリ調症，また，著者らがさきに，同代謝経路に異常

プトファン代謝異常の特徴は，L−トリプトファンのあることを明らかにしたネマリンミオバナーな

しかし，以上の事実は，この種疾患や他の小脳失ー220−

どいくつかのミオバナー3）4）5）の本質的解明に意義あるものと思う．

文献1）三好和夫，八木田正聖，詫間通央，中平晴仁，
原田秀夫，上里隆信，日下香苗，川井尚臣：ネ
結論

マリン・ミオバナーのトリプトファン代謝．文

1．−見健常な近親婚の両親から生れ，知能低下，増悪と寛解のある小脳失調，および四肢末梢部省特定研究「難病」王軋 昭和52年度研究業績，
p・241−245，1978．

部の筋萎縮を認める兄弟例（25歳，22歳）を示し，

2）三好和夫，八木田正聖，詫間通失，中平晴仁，

この2病者と両親のトリプトファン−キヌレニ

原田秀夫，上里隆信，日下香苗，川井尚臣：ネン経路の代謝についてしらべた．

マリン・ミオバナーに認めたトリプトファン代

2．トリプトファン代謝は，L−トリプトファン

謝異常．臨床神経学，18：842，1978．

100mg／kgを経口負荷し，その前と後の24時間尿3）八木田正聖，平良章，中平晴仁，亀山和人，土中のKA，ⅩAを測定，あわせてトリプトファン

肥康仲，詫間通央，日下香苗，川井尚臣，三好の血中濃度と尿中排出量を測定した．

和夫：ネマリンミオバナーとその類縁疾患に認3．その結果，兄弟2病者および両親はともに，負荷後のKA，ⅩA両者の尿中排出量の著しい異めたトリプトファン代謝異常．筋ジストロフィ

常低値を認めた．しかし，トリプトファンの血中

53年度研究報告書，p．196〜200，1979．

ー症の病因に関する臨床的研究（三好珪）昭和への吸収，および尿中排出量はともに，正常レベ

4）三好和夫，八木田正聖，平良章ほか：トリプト

ルであった．また，別に確かめたインドール酢酸

ファン代謝異常からみるネマリンミオバナーとの尿中排出も正常レベルであった．

類縁ミオバナー．第76回日本内科学会講演会，4，以上の成績より，本症は，常染色体劣性，昭和54年4月，東京．

トリプトファン−キヌレニン経路のフォルミル

5）三好和夫，平良章，八木田正聖ほか：トリプト

キヌレニンからキヌレニンへの間，酵素異常症とファン代謝異常を認めた小脳失調症の1家系2みなす立場からキヌレニンフォルムアミダーゼ異症例．第24回日本人類遺伝学会，昭和54年11月

常症と推定した．

4日，東京．

一221−46）筋・赤血球PFK欠損症に関する最近の知見
垂

研究協力者

井

河 野 典 夫清一郎
桑は じ め に

島

正

道

清

水

孝

郎

表I PFKdeficiency

筋・赤血球ホスホフルクトキナーゼ欠損症（Muscle and erythrocyte phosphofructokinase

S k e le ta l m u s c Je

deficiency；M−E PFKDと略）は筋糖尿病に属E ry t h ro c yt e

R e p o r ts
C lin ica l
PFK
C Hn ica l
PF K
sym p tonns activiu （％）sym ptom s activity（％）

する疾患単位であり，糖原病Ⅶ型として位置づけられている．本研究報告では，（1）まずM−E PFKD

T a ru i（
19 6 5 ）の自験例に関する最近の知見を1967年以後世界のCaSe l

十

1

＋

3 0

文献に現れた追加症例の記載と対比し，疾患単位

CaSe 2

十

2

＋

4 8

としての特徴について考察を加える．（2）更に骨格

CaSe 3

＋

3

＋

4 2

筋の症状がM−E PFKDに酷似している糖原病Ⅴ

L a y ze r（
19 6 7 ）

＋

1

＋

5 1

型（McArdle病）との童監別診断に関する最近の知S e rra tr （ic19
e 69 ）

＋

0

／

17

T o b in （19 73 ）

＋

6

／

／

5

＋

3 1

見を述べる．（3）先天的なPFKDは比較的珍らしい病態と考えられるが，PFKのアロステリック

D upo nd（19 7 7 ）な性格に基づき，後天的なPFK活性異常は，後天的な骨格筋および赤血球解糖異常の大きな部分を占めているに違いない．そこで，M−EPFKDの病態が後天的なPFK活性異常のモテリレとなり得ることを示す私共の成績を述べる．

CaSe l十c ase 2

＋

／

＋

56

W a t e rb u（
1ry
96 9 ）／＋

62

M iw a （19 7 2 ）／＋8

K a hn（19 7 5 ）

10 0

＋

6 1

／

＋

re d u c ed

T anak a（
19 7 7 ）疾患単位としてのM−E PFKDの特徴￣±

M−E PFKDは1965年私共1）が1家系3症例の報告をして以来，アメリカで2家系2症例，フラ附ける方向へ進んでいる3）．図lのサブユニット

ンスで2家系3症例の追加があり，これら8例は構造のモテリレの中（2）が私共の呈出しているモデルまったく同じ疾患単位に属すると考えられる（表であり，（1）のモデルは私共の赤血球PFKのカラムl 上段）．すなわち定型的な骨格筋の症状を示す

クロマトグラフイに関する成績2）により否定され，ほか，検索された限り，すべて赤血球にも異常が（3）の可能性も骨格筋PFKの今日までの分析結果認められた．なお私共は免疫化学的分析によってから否定的である．図l，（2）のモテリレにより，以赤血球PFKがハイフナリッド酵素であり，分子内上の世界の諸症例に関する所見はよく説明される．

に筋型PFK（またはその成分）がハイブリッドとこれらの報告以外に，骨格筋PFK活性に顕著して含まれているという証拠を得た2）が，PFK蛋

な異常がなく赤血球PFKに明らかな活性低下を

白に関する蛋白化学的研究の進歩はこの考えを裏認める4症例が記載された（表l，下段）．これらの中，Waterbury4）例およびKahn5）例では，酵素＊大阪大学医学部第二内科

異常の結果PFK蛋白の不安定化，崩壊冗進をき
一222−

たし，酵素の新生補給の可能な骨格筋では生成増たが（表l），Ⅶ型における赤血球PFK活性の加によりある程度代償され，新生補給の不可能な低下は，米国およびフランスの追加報告において赤血球においてのみ異常が発現していると看倣しうる根拠が示されている．また最後のTanaka6）例

も，赤血球に関する検索が行なわれた限り，表のごとくすべての症例に証明されている．

においても骨格筋の自覚症状には乏しいが血i青

しかし，この赤血球PFK活性の変動は，あくCPKおよびアルドラーゼの著増が見出されており，
これらはおそらく MLE PFKDの亜型と判断されまで最適の条件で測定された標準活性値に基づいた判断であり，患者赤血球において解糖の流れがる．ハイブリッド酵素である赤血球PFKにおい

PFKの段階でブロックされていることの実証には，て，1つのサブユニットは筋型であるが，もう1

他の手段も必要である．赤血球における解糖系中つのサブユニット（図l，（2））は一応赤血球型と間代謝物の測定および赤血球の乳酸形成能の観察呼ばれている3）．赤血球型のPFKのみの欠損をはこれにあたる．自験例における赤血球中間代謝確認した症例は末だ見出されていない．

物の分析には，6％過クロール酸を入れたプラス所が最近，尭天性筋ジストロフイ症例で筋PFK

チック注射器で駆血帯を用いることなく前肘静脈活性の極端な低値を認めたという報告がなされたより等量の血液を採取する方式（Niessner＆（Guibaudら7），1978）．この場合は赤血球PFKに

Beutler法8））を種々検討して危険のないことを確

異常がなく，PFKに関する現在までの知見から認した末に若干modificationを加えて採用し，作説明することは困難であり，私共も機会を得て，製した検休について分光あるいは蛍光測定を行なっ

先天性筋ジストロフイ症の筋PFK活性につき検た．正常対照を100としてPFKD患者赤血球にお討したい．

ける中間代謝物の変動をパーセントで表現したのが図2であり，グルコース ー6−リン酸（G6P），
フルクトースー6−リン酸（F6P）は増加してい糖原病Ⅴ型，Ⅶ型の膏濫別診断
私共は，Ⅶ型患者赤血球においてPFK活性が正常対照の30〜48％に低下していることを見出しるのに対してフルクトースー1，6−ジリン酸（FDP）は逆に著i成し，さらに下位の2，3−

ビスホ

スホグリセリン酸（2，3DPG）も50％に減少していた．このことはまさしくErythrocyte Muscle

PFKのステップで解糖が障害されたことを示しており，また患者赤（1）威1励

血球の乳酸形成能にも著しい低下が認められた．
その結果，図に明らかなように，ATPは正常対照の80％にとどまl），逆にADP，AMP

は3〜4倍に増加した．すなわち本症患者における溶血
完進の槻転は，PFK異常7解糖の障害7ATP（2）適し凰

生成低下であることが示されている．
さらに興味深いのは2，3DPGの変動であって3．06mMにまで減少していた．この2，3DPGの減少は患者赤血球浮遊液の酵素解維曲線においても明らかに反映されており，正常対照のP50が23．7mmHgであるのに対し，患者赤血球のP50は（3）18．8mmHgと著明な左方推移を示した．左方推移の大部分は2，3DPGの減少によるものであ
図Ⅰ骨格筋および赤血球PFKのサブユニット構造

り，一部分はATPの減少によるものと考えられ
る．

一223−

40

60

80

100

150

200

300

ホスホリラーゼとPFKはともに骨格筋のグリ460％

コーゲン分解の律速酵素であり，したがってそれらの欠損症の場合，骨格筋に関する臨床症状が酷似しているのは当然であろう．Ⅶ型の同定の過程
はいわばⅤ型を除外していく過程であった．しかし，上述した赤血球に関する諸所見はⅤ型ではまったく見られないⅦ型の特色であり，この点を骨格として現時点におけるⅤ型とⅦ型の鑑別を示したのが表2である．最近ルーチンでおこなわれている赤血球2，3DPGの測定（または赤血球浮遊

ATP

液の酸素解馳曲線の観察）によっても鑑別診断は

0−−−＿＿．一・．

ADP
AhlP

40

60

80

100

、、「＼
150

200

300

前進する．

400％

PFKの後天的な活性異常のモデルとしての
M−E PFKD

G−6−P：glucose−6−phosphate，F−6−P：fructose−6−
phosphate， FDP：fructose−l，6−bisphosphate，
DHAP：dihydroxyacetOne phoSPhate， GAP：
glyceraldehyde−3−Phosphate，

M−E PFKDの赤血球において2，3DPGが著

2，3−DPG：2，3−

減するという成績が強く示唆しているのは，赤血球PFK活性が2，3DPG 濃度を規定するという

dipllOSphoglycerate，3−PGA：3−Phosphoglycerate，
2−PGA：2−Phosphoglycerate，PEP：phosphoenol・
pyruvate，Pyr．：pyrul・ate，Lac．：lactate

図2

ことであろう．そこで2，3DPGが同様な低下を

M−E PFKDにおける赤血球の解糖系中間代謝示す病態について，赤血球解糖系中間代謝物の変動を前章の方法で測定し，M−E PFKDにおける物およびアデニンヌクレオタイドの濃度変動変動と比較してみた．糖尿病ケトアンドーシスにおいて赤血球の2，3DPGが著減することは40年も前にGuest＆Rapoport9）によって報告されて

表2 糖原病Ⅴ型，Ⅶ型の鑑別診断
Ⅴ型

いるが，そのメカニズムは必ずしも明らかにされⅦ 型ていない．図3に糖尿病ケトアンドーシスの赤血
溶 血克 進′＋網 状 赤血球 増 多

球の所見とM−E PFKDのそれを対比しているが，

廿

骨髄 の赤芽球 系 増 殖−

赤 血球 寿命 の短 縮

両者は驚くべき程一致することが認められた．同≠様な所見は尿毒症性アシドーンス，尿細管性アシ＋

間 接 ビ リル ビ ン 上 昇＋〜＋

ドーシス，呼吸性アンドーシスの患者についても得られた．このようなアシドーシスによるPFK

貧血
筋運 動持 続 中のSeCO n d活性阻害のメカニズムとしては，上昇した水素イ

w in d±血糖 上昇 に よる運 動耐 性 の増強±−

オンによるPFK活性のアロステリック阻害に基筋 6 炭糖 モ ノ リン酸

、
ヽ

ノ／

づいていると判断される．事実これらの後天性の筋 ホ モ ジ ネ ー トに よ る 6 炭 糖 モ ノ リ
ン酸 の分解→、＼＼赤血球PFK活性の低下は，体液成分の正常化に

筋 ホ ス ホ リラー セ＼＼→

筋 P FK一→、ヽ＼

溶血標本の標準アッセイによって求めると活性の筋 ピル ビ ン酸 キ ナ ー ゼ

・
→ ？
・

．
′

低下は見出し得ず，活性低下の証明はあくまで中よりたちまち回復し，また赤血球のPFK活性を

赤血球

P FK

→

ヽ
ヽ

間代謝物の測定によらねばならない．このように

赤血球

2 ，3 −D P G→ ？

＼MLE PFKDは後天性のPFK活性異常の病態モデルとしても重要である．
−224−

Res．Communリ19：517（1965）

2）Tarui，S．，Kono，N．，Nasu，T．，Nishikawa，M．・：
34：

77（1969）∞−OL盲OU IO掌りULむdBiochem．Biophys．Res．Communリ3）Karadsheh，N．S．，Uyeda，K．，01iver，R．M．：J
Biol．Chem．，252：3515（1977）

4）Waterbury，L．，Frenkel，E．P．：Clin，Res．，17，347（1969）：Blood，39：415（1972）
G6P F6P FDP DHAP

2．3DPG
＋
GAP

3PGA

2PGA

5）Kahn，A．，Etiemble，J．，Meienhofer，M．C．，
Bovin，P．：Clin．Chim．Acta，61：415（1975）

図3

赤血球の解糖系中間代謝物の濃度変動
一糖尿病ケトアシドーシスとPFKDの比較

6）Oda，S．，Oda，E．，Tanaka，K．R．：Clin．Sci．，
25：344A（1977）（本図では，糖尿病ケトアシドーシスの対照

7）Guibaud，P．，Carrier，H．，Mathieu，M．，Dor−（100％）は正常人であるが，PFKDの対照（100％）は同程度のreticulocytosis を有する
赤血球酵素異常を伴わぬ患者である）

Che，Cl．，Parchoux，B．，Bethenod，M．，Larbre，F．：Arch．franc．Pediat

35：1105（1978）8）Niessner，H．，Beutler，E，：Biochem．Med．，
文

献8：123（1973）

1）Tarui，S，，Okuno，G．，Ikura，Y．，Tanaka，T．，
Suda，MリNishikawa，M．：Biochem．Biophys．

−225−9）Guest，G．M．，Rapoport，S．：Amer．J．Dis．
Child．，58：1072（1939）

47）各種スポーツにおける血中ミオグロビンの変動パターン

＊彰＊苗

香

日

藤 下

近

和

三＊正＊夫

幸

井 広 好

今 末 三

私達は先に，人ミオグロビン（Mb）のラジオイ

＊臣

尚

井

＊勝＊徳＊正

光

朝 本

岩 虫 林

研究協力者

り上昇しているが，これらに対してフルバック，

ムノアッセイ（RIA）を開発し，各種筋疾患ならゴールキーパーは60，50と低値であった．比較のびに心筋疾患などの成績を発表してきた4）．本文でため血i青CK活性値（白丸点線）（正常値25u以下）

は，健常人のスポーツ時の血清Mbの上昇とそのを示したがMbに遅れて上昇し，その上昇もきわ

変動パターンを示す．いわゆるスポーツ医学に役めて軽度であった．
2）野球：野球の試合による血清Mbの成績を立てたいが併せて潜在性ミオパテーの発見に資し

図2に示した．当村教室貝が2手に分れて行ったたい．

intra野球の成績である．図には，ピッチャー，セ
対象と方法

ンター，レフト，セカンド，マネージャーなどポとり上げたスポーツは，サッカー，野球，長距ジションの異なった5人の成績を示した．試合時

馳（14km）競走，ゴルフ，剣道などである．これ間は約2時間である．Mbは試合終了直後に最高らスポーツの前および後に経時的に採血し，血i青値を示し，17−21時間では100以下一正常値近くMbを測定した．血清Mbの測定は当村開発のラまで下降した．最高値はピッチャーでは1000と著

ジオイムノアッセイ（感度l ng／ml，正常値は30ng／ml以下，以下数値はng／ml）によった．

しく高く，センター180，ついでレフト，マネー
ジャーおよびセカンドの順であった．
野球について，Mbの変動を一般人と当学部の成績

野球選手とで比較した（図3）．一般人は先（図l．各種スポーツにおける血清Mb2）に示した教室月である．ピッチャーで一般人l）サッカー：図lにサッカーの試合による血の最高値1000に対して選手では240，センターで

清Mbの上昇とその経時的変動を示した．当学部も一般人180にくらべ選手では70といずれも選手のサッカー部員についての成績である．試合時間の方が低値であった．

は約1時間である．図にはポジションの異なる4人の成績を示した．

3）長距雑（14km）競走：運動量の多いスポーツとしてとりあげた．当学部野球部員5人が14

血清Mb（黒丸実線）は試合終了直後には上昇しkmを競走した．

て最高値を示し，その後漸次下降し，試合開始18

血清Mbは上昇し，終了直後ないし6時間で最時間後にはほぼ前値に復した．最高値はフォワー

高値となり以後下降，20時間でほぼ前値に接した．

ド，ハーフバックでは，それぞれ160，150とかな

最高値は高い人で，1100，低い人でも300と高値を示した．
なお，Mb値と所要時間あるいは順位との関係＊徳島大学医学部第一内科

一226−

【選手）

こ

こ

血清Mb

O一一・〇 血清CK

0
5
0
0
0
5

二モ﹂叫∪︶ 咄q三嘆召ごモ⊃︶ 些型冊hゞU轄召

0
3

0

前

0

1

2

4

6

図l

サッカーによる血清ミオグロビン量の変動

図2

野球による血清ミオグロビン量の変動

−227−

16

Ⅰ8

試合l

●・・−●一般人●・−●野球選手

二﹁−ふ＼du︶ 咽ム三嘆8

前0

5

10

20

時

図3

28

前0

5

10
時

間

20

28

間

野球による血清ミオグロビン量の変動−一般人と野球選手との比較−は明らかでなかった．
4）ゴルフ：運動量の少ないスポーツとして選んだ．6人を検索したが競技後血i青Mbの上昇しない人が半数（3人）みられた．Mbの上昇がみられる人の中で高い人でも80程度しか上昇せず，24

rrくuu︶ 嘲q≡楳召

時間後には正常値に復した．
2．スポーツ別の血清Mbの最高値および経時的変動パターンの比重交
図4にスポーツの種類別の血清Mbの最高値を示した．Mbが最も上昇したのは長距離競走で1100〜300，つづいて野球（選手），サッカーの順であり，ゴルフでは最も低値であった．
経時的変動パターンでは，Mbは運動終了直後にすでに上昇しており，最高値は終了直後〜6時間にみられ，どのスポーツでもほぼ20時間前後でMb

当学部剣道部の7日間の合宿時の4人の成績をゴルフ

3．−定の運動を毎日繰返し行った場合の血清

サッカー

長距雑読走

正常値近くにまで下降した．

図5に示した．図上段に斜線で示した如く毎日ほぼ一定の練習（1日約4時間）を行った．いずれも練習の直後に採血しMbの測定を行ったものである．図4

各種スポーツによる血清ミオグロビン量（最高値）−228−

匝】r二日：二二二二：四二二二二二二四二二二二二二四二二二二二匹ヨ二二二二二四二二二

合宿前

1日

2日

38

4日

5日

6日

図5 スポーツ（剣道）による血清ミオグロビン量の変動−合宿時−

合宿開始1日目は図の如く1人は170であったが他の3人は35，40，60と上昇は軽度であった．

一二ング時に補体結合反応（感度0．1−0．3／g／ml）
によって血清Mbを測定し，14人に平均0．4JJg／ml

しかし，2日目の練習後では4人とも200−300とのMbがみられ，また，トレーニングによって上高値を示した．4日目には少し低値となり，6日

肢帯筋の筋痛や腫脹をきたし入院した別の11人で巨＝こはさらに低くなり正常値〜100となった．また，合宿の期間中に試合を行った場合の血清Mb

は平均20．8ng／mlものMbが検出されたと報告している．さらにRitterら7）（1979年）は16人の新兵の変動を当学部ラグビー部の部員について検索しが12週間のトレーニングを行った前と後に激しいた．合宿開始後5日目に試合を行ったところ，前運動を負荷した際RIA（感度5ng／ml）によって血日（4日目）の練習後の200が300，150が250，

清Mbを測定し，トレーニング前の運動負荷によなどと上昇を示した．

るMbが160±81ng／mlであるのに対し，後では76±60ng／mlと，トレーニングによってMbの上考昇が軽度になることを指摘している．

察

従来より，種々の筋疾患や健常人の激しい運動

本論文では，私達の開発した人MbのRIAを用後などにMb尿をきたすことが知られていた1）・2）．

いて健常人のスポーツによる血清Mbの上昇とそ

しかし，血中Mbに関する文献成績は最近まで殆の変動パターンの成績を示した．とりあげたスポ

んどみられなかった．これは，血中の微量Mbをーツはサッカー，野球，長距離競走，ゴルフ，剣特異的に捉える方法がなかったためといってよい．

道，ラグビーなどである．

最近，人Mbの免疫学的な微量測定法が開発さ

血清Mbはこれらのスポーツによって上昇（1000

れ3）・4），種々の筋疾患ならびに健常人のスポーツ

ng／mlレベルまで）し，運動量の多いと思われる

ないし運動負荷による血中Mbに関する報告5）・6）・7）

スポーツ（例えば長距離競走）ほど高値を示した．

もみられるようになった．
Demosら5）（1974年）は21人の海兵隊の新兵のトレ

同じスポーツでは（野球など）Mb値はポジションによって異なっており，当然のことながら運動−229−

量の多いと思われるポジションほど高値を示した．

3）一定の運動を毎日繰り返す場合には，血i青また，血清Mbの変動はほぼ一定のパターンを示

Mbは第2日日位の運動後が最高値となり，そのし，Mbは運動終了直後には上昇しており，終了

後上昇は漸次軽度になる．

直後〜6時間で最高値となり，その後下降し，24時間でう王常値近くになった．
一般人と選手とのMb値の比較では，前者に比4）スポーツにおける血j青Mbの上昇は，スポーツ医学や運動負荷による潜在性のミオバナーの発見に有用であると考える．

べ後者の方が明らかに低値であった．この機序の詳細は不明であるが，スポーツにおけるトレーニ
ングの効果を血清Mbの上昇を指標として捉えることができることがわかる．

文献1）Ono，I．：Studiesonmyoglobinuria．Tohoku，J．
Exp．Med．，57：273，1953．

また，一定の運動を毎日繰り返し行った場合，

2）Rowland，LP．，Fahn，S．，Hirschberg，E．et

運動直後のMb値の変化を示した．1日目のMbはal．：Myoglobinuria．Arch．Neuro1．，10：537，

軽度上昇し，2日目に最高値（200−300mg／ml）

1964．

となり，その後は上昇は漸次軽度になり，6日日3）Stone，M．J．，Willerson，J．T．，GomezTSanchez，には正常値近くになった．Demosら5）も，補体結C．E．etal．：Radioimmunoassayofmyoglobin

合反応によって海兵隊員のトレーニング時の血清

in human serum．Resultsin patients withMbを測定し，開始3日目にMbが最高値にな

acute myocardialinfarction．J．Clin．Invest，，り，その後上昇が軽くなっている成績を示してい

56：1334，1975．

る．同じ運動を毎日行っていると，漸次その運動

4）Miyoshi，K．，Saito，S．，Kawai，H．et al．：

を楽に行えるようになることとMb値の低下とのRadioimmunoassay for human myoglobin：

関連が考えられる．
本論文では健常人のスポーツによるMbの成績

methodsandresultsinpatientswithskeletalを述べたが，一見健常であり潜在性のミオバナー

muscleormyocardialdisorders．J．Lab．Clin．

Med．，92：341，1978．

を有する人では運動負荷によって健常人に比べ血5）Demos，M．A．，Gitin，E．L and Kagen，LJ．：

清Mbの著しい上昇をきたすことが考えられる．

Exercise myoglobinemia and acute exerti0−

前述の成績は，スポーツ医学にはいうまでもなく運動負荷による潜在性ミオバナーの発見に有用で

nal rhabdomyolysis．Arch．Intern．Med．，

あると思う．

134：669，1974．

6）岩朝 勝，川井尚臣，三好和夫，他：各種スポーツによる血清ミオグロビンの変動パターン．

結論

四国医誌，35：119，1979．

1）各章重スポーツにより血清Mbは上昇し，運7）Ritter，W．S．，Stone，M．J．and Willerson，J．

動量の多いスポーツほど高値を示す．また，一般

T．：Reductionin exertional myoglobinemia

人にくらべ選手ではMbの上昇は軽度である．

after physical conditioning．Arch．Intern．

2）血清Mbはスポーツ終了直後〜6時間で最高値となり，24時間でほぼ前値に復する．

−230−

Med．，139：644，1979．

48）赤筋と白筋に於けるSterOid cytosol receptorとそのnuclear binding

庄

司

進

過剰なグルココルチコイドは，ステロイドミオ

SOleus muscleをすみやかに得，ice−COld o．9％

バナーやクッシング症候群の際に認められる様な

NaCl

筋蛋白の減少を釆たす．この作用はステロイドのサミで細く切り，Potter−Elvehjem

筋細胞に対する直接作用であるのか，または他のイザーで6倍量の0．01M Tris−HClbuffer（pH晩器例えば肝臓等を介する二次的作用なのか？骨

は00でEDLには8．6，SOleusには7．5）に1．OmM

格筋の細胞液中にステロイドリセプターが存在しEDTAと12mM thioglycerolを含んだ液でホモジているという報告はステロイドの標的組織の一つ

ェナイズ（15秒を4回氷冷しながら）した．Be−として骨格筋が入ることを示している．

Ckman Type50rotorを用い00から40で27，（刀O

一般に自筋が赤筋より強く侵されることは認め

で洗浄後，脂肪・結合紙・腱を除いた．ハ
ホモジェナ

gで30分の遠心を行い，その上清を得，pHを7．5られている．従って，この日筋と赤筋の間にステat oOCロイドの細胞下レベルの機序の上でどのような差能が大きなため上清を同様なpHにするために異があるのかを知ることは大変興味深いことであhomogenizing bufferにはよりalkaliな液が必要る．このためratのextensor digitorumlongus

であった．これはリセプターに対するpHの効果（自筋）とSOleus（赤筋）を用いSterOid cyt0−を最小限にするために取られた方法である．上清SOl receptorとその結合体のnuclear bindingをにadjustした．EDLはSOleusより解糖はpH adjustの前には常に00Cで7．0から8．0の間にあった．

測定した．

Cortisolreceptorの測定：1mlのCytOSOlを3．3材料および方法

×10．8M〔3H〕cortisoI with（blank）orwitho−

ラジオケミカル：〔1（2）−3H〕Cortisol（40Ci／

ut（test）3×10￣5M unlabeled cortisolと00〜mmol）と〔1（2）−3H〕dexamethasone（26and

40Cで3hincubateした．過剰のunlabeled co−

28Ci／mmol）はThe Radiochemical Centre，

rtisolはCOrtisolのnon−SpeCific（lowraffinity）

Amersham，U．K．より得た．これらのpurityは98

bindingに影響するが，SpeCific（high「affinity）％でイ吏用は3ヶ月以内でイ吏用まで液体窒素内に保bindingには影響を与えない．生物学的に不活性な存した．

epicortisolをblankに用いても結果には変化がな

動物：メスWisterラット160〜180gをBantin

かった．

andKingman Ltd．，Hull，U．K．より得た．副腎Incubation後，freeとreceptor−bound corti−

別出は両側別出をエーテル麻酔下に行い実験は少SOlとをDEAE−Cellulose filter（DE81）のfil−

なくとも術後7日以後に行った．術後は1％Na−

trationで分けた．radioactivityは5mlのSCint−

Clを飲水させた．

illation fluid（250mlTriton X−114，3g PPO，筋CytosoIの精製：ratsはCerVical dislocation

5g benzoic acid，made up tolliter with

で殺し，eXtenSOr digitorumlongus（EDL）とXylene）で測定した．Specific activityは少なくと＊信州大学医学部第三内科も3回の測定の平均から算出した．

一231−

蛋白測定：蛋白はLowryの方法によった．nonT
COllagen proteinの測定はmuscle homogenateに9倍量の0．05NNaOH

80DYWI．

MUSCLt〜0〜−COLLAG【〜
PROT【lN

HUSCL【岬Tを混和一晩室温に放置

後，遠心し上清の蛋白量を測定した．
DNA測定：Burtonの方法によった．
Dexamethasone receptorの測定：0．5mlのCy−
tosolを〔3H〕dexamethasoneと00−40で一晩

incubate，blankには1×10L4M unlabeld dex−
lnitialFrndl

Soleu〜

E．dJ．

Soleu〜〔．。．1

amethasoneを加えた．
Freeとreceptor−bound dexamethasone

は

図I Effect of dexamethasone administration on

Sephadex G−25gelfiltrationをCOld roomで

body and muscle weightsand muscle

行い分けた．macromolecular fractionsを集め，noncollagen proteininrats．

その1mlのaliqustのradioactivityを10mlOpen bars−COntrOl，Shaded barsLSterOid−

scintillation fluid内で測定した．

treated．Differences were analysedbythe

筋核の精製：ratの背部および四肢の筋よりKu−

pairedehlの方法で筋核を精製した．但し，Triton X−100

extensor digitorumlongus muscle．

ttest：＊P＜0．05；HP＜0．005．E．d．1；

は0．5％の代わりに0．05％，Miraclothの代わりに
Stainless steel mesh（38FLm）を用いた．

ptorに対するbindingのtime courseはE．D．L．

Receptor−ステロイドの結合体の核への結合の測定：とSOleusで同様なパターンを示し，30分のincu−

CytOSOlを〔3H〕dexamethasone

60nM（final

bationでmaximumに達し，その後3日間そのCOnCentration）と00Cで2hincubate，blankにlevelを保った．soleusとE．D．L．のCOrtisolのは1000倍のunlabelled dexamethasone

CytOSOl receptorは11匹のadrenalectomy

を加えた．

を受

筋核のSuSpenSion50JLlを100〟1のincubated

けたratsで測定した．表Iに示した如くCytOSOl

cytosolに加え0．25Msucrose solution内で200C

protein当りbinding capacityはSOleusで有意にlhincubateまたは記載した時間のincubateをした．

高かった．5×10▼5M unlabeled dexametha−

この後，00Cに10分冷却後800g5分の遠心で核SOneまたはbethamethasoneをassay系に加えてを得，3mlのicercold o．25M sucrose solu−

もCOrtisolのbindingは有意に低下を示さなかっtionで3回洗浄．洗浄後の核を0．4mlのSoluene

た（5実験）．

350

で室温一晩で溶解，10mlのSCintillation

fluid内でradioactivity測定．testとblank

Dexamethasone receptor：20nMのdexam−の差

ethasoneで各々1〜3匹のadrenalectomy

を受けたratsを用いた14回の実験の結果は，表lの如よりspecific bindingを算出．

くSOleusで高値であった．色々な濃度で測定（各結膿皮につき3−4回の測定）LScatchard plots

果

Dexamethasoneのin vivo投与：体重で分けたで解析した（図2）．これよりE．D．L．とSOleus の16ペアーのratsの一群に6日間1mg／kgのde−それぞれの解離定数は7．13×10￣9と5．95×10￣9M

Xamethasoneを投与，対照群に生食を授与した．

でCapaCities of．the binding site（結合サイト

図1の如く体重は有意に減少した．筋の重量は数）はそれぞれ29．6と40，4fmol／mg cytosol

E．D．L．もSOleusも共に減少したが筋のnonc0−

proteinであった．
Homogenizing前の00C2hのStOrageはbi−

11agen proteinはE．D．L．でのみ有意な減少を示した．

ndingに影響を与えなかった．

Cortisol receptor：cortisolのCytOSOl rece−−232−

表I Bindingof cortisol anddexamethasone bycytosol from extensor
digitorumlongus andsoleus muscles

EDL

SoleusPC

Cortisol binding（11experiments）

121

Muscle wet weight（mg）

±

3d

123

：±

5

Cortisol bound：fmol／mg cytosol protein

775

±53

1033

±90

fmol／mg total noncollagen proteina

229

±15

350

±30

＜0．005pmol／mg DNAa

198

±13

174

±15

＞0．1

1．79± 0．12

fmol／Cellb＜0．0252．81± 0．25

＜0．005

Dexamethasone binding（14experiments）

116

Muscle wet weight（mg）

± 3

112

± 4

Dexamethasbne bound：fmol／mg cytosol protein

30．7 ± 4，545．6 ± 6．0

fmol／mg total noncollagen proteina

9．07±1．33

15．4 ± 2．0＜0．005pmol／mg DNAa

7．53±1．10

6．93±

＞0．25

amol／Cellb

68．2 ±10．0

113

±14．9

＜0．005

Noncollagen protein（mg／g wet weight）

227

197

±

＜0．025

Cytosol protein（mg／g wet weight）

67．0 ±1．366．4 ± 2．8＞0．5

DNA（FLg／gwet weight）

314

±11

485

7

＜0．005DNA（iLg／muscle）

31．7

±1．5

±1．8

＜0．005

＜0．01

0．91

Muscle parameters（6rats）
±1

5

±

48．8

aThe values for noncollagenproteinandDNA usedinthe calculationwere determinedina
Separate Series and are glVenat the bottom of the table．
bBased onestimates of3500and3000for the total number of fibersin EDL and soleus，
respectively．

CUsingpaireditest．
dValues are mean ± SEM．

了

王

三・

●

30

1eupeptin（20FLg／ml）等のprOteinaseinhibi−

70

torsを加えてhomogenizeしたがbindingに有意な変化を認めなかった．

1：邑「←「忘＿亮「＿孟Dexamethasoneのblood plasmaに対するbi−

stかPldcono■ntr抽OntMX10−9I捌trypsininhibitor（50FLg／ml），EGTA（1mM），鵬てj01かE︑−0∈こP■○−3−で⊃○∞40proteinasesの関与を調べるため，SOya bean

三∈︑−○∈こlLとて●￡○−dpE︑一〇∈−盲U⊃○凸

50

10

20

30

4C1

80Und（lnn01／MgPlOt■…I

ndingは小（0．83±0．11pmOl／ml）で，赤血球にはbindingは認めなかった．
AdrenaIectomy

図2を受けたratへの〔3H〕dexa−

methasone投与：〔3H〕dexamethasone（10mg

Dexamethasone bindingbycytosol fromextensor digitorumlongus（EDL）andsoleus muscles．A−Bound steroid versus／kg or25．5pmol／kg）を腹腔内に投与し，2時

concentration of steroid；B−Scatchard

間後に殺し，E．D．L．とSOleusと血液を得た．このplot of datainA．0，Soleus；●，EDL・
The standard errors are showninA．

時間内でのdexamethasoneからtritiumの解離や−233−

dexamethasoneの代謝がnegligibleと仮定して，nuclear bindingのtime courseは200C60分でradioactivityからdexamethasoneの濃度を測定

rrnximumに達しその後減少を示した．nuclear

した．心筋に於てはこの仮定が成立する報告があbindingを二筋で比較するためCOmplex量をte−

る．plasma，E．D．L．，SOleusではそれぞれ9．8n

St tube当り20fmol位にadjust L（表2），筋へ

mol／mg，9．7nmol／g wet weight，7．9nmolの結合を測定した．結合は19．9と32．7％でE．D．

／g wet weightであった．これはreceptorのbi−

Lよりsoleusで結合体当り有意に高く，CytOSOlnding capacityの約100倍のdexamethasone

protein当りでもSOleusで有意に高かった（表2）．

の濃度であった．
Dexamethasone−reCePtOr結合体のnucZear

Test tube当りの核のDNA量を30．2〜48．8JLgの間で変化させたが二筋共にこの条件下でnucト

binding：dexamethasone−reCeptOr結合体のear acceptorが飽和されていないことが示された
（表3）．

表2

CompariSonbetweenextensor digitorum longus andsoleus muscles：reCeptOr aCtivity
and nuclear bindingof complex
ExtensOr
digitorum
longusBinding actlVlty Of
CytOSOl receptor
for dexamethasone（R）

24．4±6，8日

36．0±7．3（T）

20．8±0．4

19．6±0．9（B）

4．14±0．72

6．42±0．53

＜0．01

（A）

4．81±0．80

11．74±0．81＜0．00519．9

32．7＜0．025fmol／mgcytosol
protein

Total amount of
dexamethasone−
receptor complex
fmol／tube

Nuclear bounddexamethasone−
receptor complex
fmol／tube

Nuclear binding
activity ofdexamethasone−
receptor complex
fmol／mg cytosol
protein

B／T（＝A／R）（％）■Probabilitywas

calculatedusingStudentspaired■■Mean±SEM from sixdifferent experiments．

−234−

t

analysis．

gen protein当りでも有意に高値であった．この差

Cytosolを8倍に稀釈した場合，二筋共にnuc−は赤筋に自筋より多いとされるplasmaのCOnta−

lear bindingは1／8以下に低下した．

minationでは説明できない．なぜならplasmaの表3

Non−Saturabilityof nuclear acceptor sites

corticosteroid bindingはmuscle cytosolより低いからである．
NuclearDNA

Nuclearbound（FLg／tube）

さらに筋核へのCOmplexのbindingも赤筋

complex■（fmol／mgDNA）

由来のreceptorで有意に高値であった．これはExtensor digitorum Soleus

complex数を一定にするため赤筋の方がより稀釈されたことにより説明されない．なぜなら稀釈にlongusよりnuclear bindingは稀釈倍数分の一以上に低
30．2

130

183

39．1

101

170

48．8

92

146

下するからである．
本研究の結果はCOrticosteroidがCytOSOl re−
ceptorsに結合，COrticoid−CytOSOl receptor
complexの核への結合等のStepSが赤筋と白筋の

■Mean

of

two

different

experiments．

corticosteroidに対する抵抗性を決めるStepSでConditions were as describedin Methods．

はないことを示している．

考察と結論

文

赤筋がCOrticosteroidに白筋より抵抗性があることを確認した（図日）．

献1）Shoji，S．＆Pennington，R．J．T．：Binding of
dexamethasoneandcortisoltocytosolrecep−

一方赤筋では自筋よりCOrticosteroid recept−

torsin rat extensor digitorumlongus andorsの濃度がCytOSOl protein当りでもnoncolla・soleusmuscles．Exp．Neuro1．，57：342，1977．

−235−

49）Serotonin myopathyにおける筋膜の生化学的検索

飯

研究協力者

足

田

立

光

暗

男

卑

高 柳 哲 也

水

野

恵

介

祖父江 逸 郎は じめ にM Tris−HClpH8．5at40Cにて洗浄後，10−15

Duchenne muscular dystrophyの病因は末だ不時間40Cにて抽出（3）濾過液を2500×g，10分間遠沈明であり，いくつかの仮説が提唱されている．そし上清液を10万×g，30分間遠沈し得た沈法を0．6

れらのうちには血管障害説1）やcatecholamine代

M KCl，10mM Tris−HClpH8．0にて40C下15分

謝障害説2），あるいは早期における筋膜障害に注目

間浮遊させ（4）浮遊液を5000×g，15分間遠沈し上清する説3）4）やserotonin代謝異常説5）etc．がある．

液を10万×g，30分間遠沈した．この操作を3回繰

そこで我々は血管障害説およびVaSOaCtiveag−

り返して行い得た沈法を脱イオン水に浮遊させた．

entであるserotonin代謝障害説との関連から，

タンパク質濃度をLowry7）法にて測定した．ATP

SerOtOninmyopathyを作製しそのmyopathyに

ase活性は100mM NaCl，20mM KCl，5mMMg

おける筋膜の役割を検索する事を目的に（Na＋＋C12，4mM Tris−ATP，lmM EDTA，50mMT−
ris−HCl pH7．2at420Cからなるmediumに0．4m

K＋）ATPaseを指標に筋膜の生化学的検索を行った．

M ouabain又は純水を添加して20分間incubation
L反応をトリタロル酢酸にて止め遊馳した無機リ材料および方法

ンをFiske−Subbarow法8）にて測定した．

材料は体重200g前後の雄Wistar rat7匹を使用し，myOpathyの作製は4匹に5−Hydroxy−try−結ptamine creatinine sulfateを生食水に洛解して（A）病理学的所見

果

体重1kg当り20mgを腹腔内へ連続5日間授与し筋肉病変は図lの如く小病変は比較的focalな

3週間後，後月支筋を採取し検索した．myopathy

分布を示し（2）筋線経は変性イ象（横紋の消失顆粒状の作製は病理学的検索および歩行異常にて確認し変性，空胞変性，硝子様変性）と壊死像が著明でた．残り3匹をCOntrOlとして同様検索した．

あったが，再生線経もみられた（3）筋核の増生，単筋膜の精製は概略Sulakhe etalP）の方法に従い（1）断頭後氷冷した筋肉をice coldbuffer（0．25M

核細胞を主体とした細胞浸潤が認められた（4）結合組織，脂肪組織の増生は認められなかった．

SuCrOSe，0．5mM EDTA，0．1M Tris−HCl pH（B）生化学的検索結果

7・4at40C）にて結合織，脂肪組織を除去し得た筋（1）両群のタンパク質収量（FLg／g．muscle）は表J

肉をhomogenate L濾過後，1000×g，10分間遠沈の如く，平均値でCOntrOl群（C群）で84．6±1．5，

し（2）沈壇を0・5M LiBr，0．05mM EGTA，16m

myopathy群（M群）で66．5±3．7でC群の方に若干収量の多い傾向がみられた．（2）ATPase活性＊名古屋大学医学部．第一内科＊＊愛知医科大学第四内科．

（FLg・Pi／FLg・prOtein）は平均値で表2の如く，C群で5・06±0．25，M群で4．78±0．93で両群間には大
ー236−

区＝

serotonin myopathy ratの後肢筋
H−E，Originalrmagnification，×100

表2
表l両群における各々のタンパク質収量

両群における各々のATPase活性とOuabainに対する反応RESULTSRESULTS＝症十Kt）ATPASEACTIV汀Y（MtCROGR肌Pl／ルpROTEIN／H）
YIELD（MICROGRAM／G．MUSCLE）
CoNTROL OuABAIN（−）

OuABA川（＋）

Y
H
T
A
P
AU
Y
M

CoNTROL

CHANGES8Y OUABA川（＿）25言（一）55冨

6

▼ l ▲

h u ﹁

（−）2q冨6

MEAHS士．sE

5．06土0．25

2

■ く ノ
8

7 ヽ ノ

⊂U

MYOPATIIY OuAもA川（一）

DuABA川（＋）

〔HANGES BY OUABA川

1

． q

7
（＋）52罵（◆）50害
︐へノ

7

＋一

︻．ヽノ

⊂U

糾．6土1．55

6

MEANS土SE（＋ 〉】5ま（十）q5言MEANS土SE q．78土0．93

きな差異は認められなかった．（3）ouabainに対するATPase活性の変化は表2の如く，C群では一様

考

察にinhibitされたのに対しM群では逆に一様にSti−

Duchenne muscular dystrophyにおける筋肉崩

mulateされ，両群間に明らかな差異がみられた．

壕の病因の一つの仮説として血管障害説があり，その物質的基礎としてVaSOaCtive agentであるSe−−237−

roto山n代謝障害説がある．

basic or early abnormality

SerotoninmyopathyはMunsat，T．etalP）に

membrane of the muscle

inthe p】asma

fiber．Neurology

よると（1）myopathyはTypeI，IIAに選択的に（Minneapolis），25：1111rl120，1975．

みられ，（2）capillary endotheliumに変性が認め

4）Schotland，D．L．，Bonilla，E．，Van Meter，M．：

られ，（3）48時間後には再生像がみられ，これら一

Duchenne dystrophy：Alteration

連の所見はischemiaに基づくものであると報告しplasma membranestructure．Science，196：

ている．

in

muscle1005−1007，1977．

今回の我々の設定した条件によって作られた

5）Murphy，D．L．，Mendell，J．R．，Engel，W．K．：

SerOtOnin myopathyには，筋肉崩壊と共に筋膜

Serotonin andplateletfunctioninDuchenneにも障害が存在している可能性が推測された．

musculardystrophy．Arch．Neurol，28：239−

この検索結果には，ATPaseのOuabainによる

242，1973．

stimulationのmechanismを始めいくつかの問題

6）Sulakhe，PV．，Fedelesova，M．，McNamara，D．

点があるが，SerOtOnin myopathyにおける筋膜異BリDhalla，N．S．：Isolationofskeletalmuscle

常の存在の可古訓生およびどのような条件下においmembrane fragments containing activeて筋膜障害が生ずるのかといった点を含め，SerO・

Na＋−K＋stimulated

tonin myopathyにおける筋肉崩壊過程における筋

normal and dystrophic muscle sarcolemma．

膜の役割について検索する必要性が推測された．

Biochem．Biophys．Res．Commun．42：793−

ATPase：COmparisonof

800，1971．

文

献7）Lowry，0．H．，Rosenbrough，N．J．，Farr，A．L．，

1）Duchenne，G．B．：Recherchessurlaparalysie

Randall，R．J．：ProteinmeasurementwithLthe

musculaivepseudohypertrophiqueouparaly・

folinphenoIveagent．J．Biol．Chem．193：265

Siemyosclerosique．Arch．Gen．Med．11：5−
10，1868．
2）Wright，TL．，0−275，1951．

8）Fiske，C．H．，Subbarow，Y．：Thecolorimetric
NeillJ．A．，01son

W．H．：Abnor−

malintrafibrillar monoaminesin sex−linked
muscular dystrophy．Neurology（Minneapolis）．

determination ofphosphorus．J．Biol．Chem．
66：375−400，1975．

9）Munsat，T．L．，Hudgson，P．，Johnson，M．A．：
Experimental serotonin

23：510，1973．

3）Mokri，B．，Engel，A．G．：Duchennedystrophy：
Electron microscopic findings pointing to a

−238−

logy．27：772−782，1977．

myopathy．Neur0−50）Compound48／80の筋蛋白代謝におよぼす影響

＊

真

田

幸

弘

野

田

＊

研究協力者

勝 沼 信 彦

＊＊

隆

遠

藤

文

夫

これら以外に同一条件下での生食投与群も作成しは じ め に

我々はラット骨格筋組織中の肥満細胞顆粒中に同様の実験を行い対照とした．

大量に含まれるセリン性プロテアーゼ1）を精製・骨格筋への取り込みは両側の大腿筋および■排腹結晶化し2），その酵素化学的性質3），ならびに筋線
維4）や個々の筋構成表白質5）に対する分解能につ筋を使用し筋構成蛋白質分画を調製した後に，0．3
NNaOHに溶解してINSTA−GELを用いて液体いて報告してきた．昨年度には肥満細胞の脱顆粒

シンチレーション計測を行い求めた．ミオシン等

因子Compound48／80を投与すると骨格筋中の本の個々の蛋白質の分解速度については上記の筋構

プロテアーゼ活性が著明に低下することを報告し

成蛋白質分画をさらに1％sodiumdodecylsul−

た6）．そこで今回は肥満細胞から脱雫頁粒をおこし

fate（SDS）に溶解し，Sepharose4Bのゲルろ過をた後に遊馳した本酵素が骨格筋の蛋白質代謝にお行った（1％SDS−50mM Na−リン酸緩衝液，pH

よぼす影響を筋構成蛋白質のターンオーバー速度を測定することによって検討した．

7．2を用いた）後に分放した各分画を同様の方法で計測した．
SDS−ポリアクリルアミド電気泳動は

実験材料および方法

Weber−

Osbornの方法8）を用いて平板法によって行った．

Compound48／80はSigma Chemical社製，3H一結

ロイシンはNEN社製，液体シンチレーション計
測にはPackardInstrument社製のINSTA−GEL果

表IにCompound48／80投与時における筋構成を使用した．

蛋白質および肝総蛋白質のターンオーバー速度のtompound48／80の投与方法は昨年度の報告6）通比較を示した．

りであり，筋構成蛋白質のターンオーバー速度測Compound48／80投与時には筋構成蛋白質のタ

定はAriasら7）の2重標識法を応用して行なった．

ーンオーバー速度は遅くなっており（この比が大18匹1群のラット9匹にはCompound48／80投与，である程ターンオーバー速度が速いと考えられて第1日目に3H−ロイシン，30′JCi／100g体重，を投いる），15日日には正常のターンオーバー速度に与し各3匹をCompound48／80投与後9日目，12日

回復していることがわかる．同条件下での肝総蛋

目，15日目に殺し，各分画への取り込みを長期標

白質についてもCompound48／80投与群で著しく識とした．残りの9匹は同一条件下で9日目，12

低下しており，その程度は筋構成蛋白質よりも大日目，15日目に同量の3H−ロイシンを授与し，そきい．これらの結果はCompound48／80を投与すの6時間後の取り込みを測定し短期標識とした．

ることにより細胞内蛋白質のターンオーバー速度が遅くなることを示している．
次にこれらの筋構成蛋白質中のミオシンの半i成＊徳島大学医学部附属酵素研究施設酵素化学部門＊＊熊本大学医学部小児科

期を追求するために筋構成蛋白質をー239−

SDS存在下

Tl−−︶∈UOdN石 山OZくg∝OSのく︵●l︶Z01ト0く∝ヒ∈爪︑∈nU

細いフィラメントの構成蛋白質とミオシンL紺から成っていることがわかる．対照群で行ったこれ
らの各分llt】jのk期標識（第1日に3H一ロイシンを投与した群）の9日目，12日目，15日目の取り込
み柏を図2に示した．図から明らかな様にミオシ
ンH鎖の分解は細いフィラメントの構成蛋白質にくらべて苦しく遅く，みかけ上の半減期は約40日，一方，細いフィラメントのそれは約8−12日と計算された．

10

20

30

40

50

FRACTl0N NUMBER

28

30

32

3

38

40

Fraction Number

図I Distributionof3H radioactivityinrat
myofibrillar proteins fromSDS−Sepharose

図2

4B columnchromatography

Decayof3H radioactivityinrat
myofibrillar proteins

考察Compound48／80が骨格筋肥満細胞のセリン性
プロテアーゼの比活性，全活性の著しい減少を起こすことを昨年報告している6）．この活性減少が筋蛋白質の代謝回転速度に影響をおよぼすかどうか
そのターンオーバー速度の変化を追求した．Com−EoHT船L
年a／昆0

2誹
LS6

3．95
2，9盲

年．！7

pound48／80投与群における筋構成蛋白質および2．89

肝稔蛋白質においてみかけ上のターンオーバー速
度の延長が認められた．肥満細胞は肝臓にも数少でSepharose4Bのゲルろ過を行った．図lの上ないながら存在することはすでに報告されている9㌧

図はそのゲルろ過パターンを示したもので，下図

一方我々はCompound48／80投与群のラットの体は各々の分画をSDS−ポリアクリルアミド電気泳重増加が認められない事をすでに報告している6）．

動を行ったものである．分画番号28〜32はミオシ

この事実からCompound48／80が筋構成蛋白質おンH鎖であり，特に30番は極めて精製度の高いミ

よび肝稔蛋白質の合成速度をも低下させている可オシンH鎖と考えられる．分画番号36〜40は主に能性が充分考えられる．したがって筋構成蛋白質−240一

や肝総蛋白質の代謝回転速度の低下が肥満細胞のSelective cleavage of peptide bonds by a

セリン性プロテアーゼ活性の減少のみによるか

Serine protease from rat skeletal muscle．J．

どうかはまだ問題として残っていると考えられる．
SDS−Sepharose4B

Biochem．，84：477，1978．

のゲルろ過によって求め

4）Sanada，YリYasogawa，N．＆Katunuma，N．：

た対照群のミオシンH鎖の半減期は約40日と計算

Effectofaserineproteaseonisolatedmyo丘−

されたが同時に測定した肝総蛋白質の半減期は4〜5日であり，この値は報告されている半減期2．5

brils．J．Biochemリ

85：481，1979．

5）Yasogawa，N．，Sanada，Y．＆Katunuma，N．：〜3日10），よりも長い．したがってこれらを測定

Susceptibilities of various myofibrillar

した時其射二は授与した3H−ロイシンの再利用が当

proteinstomuscleserine protease．J．Bioch−

然考えられ上記のミオシンH鎖の半減期も実際は

em．，83：1355，1978．

もっと短かいものと考えられる．しかしながら同

6）勝沼信彦：骨格筋組織肥満細胞セリンプロテア

条件下で測定した細いフィラメントの構成蛋白質

ーゼ，筋ジストロフィー症の基礎的研究（江葺喬の半減期は著しく短かく，これらはすでに報告さ班）昭和53年度研究報告書．

れている様に11），細いフィラメントの構成蛋白質

7）Arias，I．M．，Doyle，D．＆ Schimke，R．T．：の半減期がミオシンH鎖よりも著しく早いという

Studies on the synthesis and degradation of

事実と一致している．この方法は少量の材料から

proteinsoftheendoplasmicreticulum ofrat

ミオシンH鎖の様にかなり精製度の高い標品を簡liver．J．Biol．Chem．，244二3303，1969．

単に得られることから今後細いフィラメントの構

8）Weber，K．＆Osborn，M．：Thereliability of

成蛋白質も同様にして分維して各々の代謝回転速molecularweightdeterminationsbydodecyl

度を同時に比較検討しようと考えている．

Sulfate−pOlyacrylamide gel electrophore−
Sis．J．Biol．Chem．，244：4406，1969．

文

献

9）0

steen，W．K．＆Hrachovy，J．J．：Thedistri−

1）Woodbury，R．G．，Everitt，MリSanada，Y．，etbution ofmastcellsinmicewith hereditaryal．：Amajorserineproteasein rat skeletal

musculardystrophy．TexasRept．Biol．Med．，

muscle：Evidence forits mast cell origin．
Proc．Natl．Acad．Sci．U．S．A．，75：5311，

20：70，1962．
10）Schimke，R．T．：The▲importance

of

both

Synthesis and degradationin the control of1978．

arginaselevelsin ratliver．J．Biol．Chem．，

2）Sanada，Y．，Yasogawa，N．＆Katunuma，
N．：Crystallization and amino acid com−

239：3808，1964．

positionofaserineproteasefromratskeletal

11）Koizumi，T．：Turnover rates of struCturalmuscle．Biochem．Biophys．Res．Commun．

proteins of rabbit skeletal muscle．J．BioT

82：108，1978．

Chem．，76：431，1974．

3）Kobayashi，K．，Sanada，Y．＆Katunuma，N．：−241−51）膵エキスの作用機序と精製法の現状および筋ジス患者への臨床応用について
＊入

善

岡

高

＊

尾

孝 寿

田

松

＊允＊昭＊之瀬一福♯衛＊治＊毅
兵
活 文一

宅 辺

三 波 森

＊治＊彦＊人

正 忠 直

守 丸 野

目

高 石 南

研究協力者

（巾；病状の悪化が停止または症状が部分的に改的27年間抽出を続けてきた著者らの膵臓蛋白同化

善したもの

ホルモン（仮称膵エキス，PXと略）を精製単離（巾；病．状の悪化が緩徐になったもの

してその化学構造を決定する．同時にその生理，ト）；病状の悪化に変化がみられないものとした．

薬理作用を究明してPXの作用機序とその臨床応用の基礎を完結する．

成績

これまでのPX（protease活性0）検定には1

方法mg／kgを家兎に静注していたが，表Iに示す如く

フォタ膵臓のアセトン乾燥粉末から従来の方法でその半量の0．5mg／kgを静注するとカルシウムの抽出して得た粗製PXを家兄による生物学的検定

減少率は少なくなるか，または同じであるが．尿法（PXlmg／kg静往復の血清カルシウムと尿素窒

素窒素の減少率は著明であった．しかし増量して素の減少率による）で検査する．一定の力価に達3mg／kg静注するとカルシウムは著明に減少すしたPXの一部分を滅菌後1mgに分注して臨床るが，尿素窒素は逆に著明に上昇した．このためサンプルとし，残りの大部分は松尾，南野，渡辺

PXの臨床応用には成人にも増量せず小児と同じらが精製用に使用する．得た微量の精製PXの力

く一律に1mgを連用してきた．

価検定には生物学的検定法では間に合わないので，

しかるに南野のえた粗．製PX（protease61．0を最近開発した胎児皮膚の線維芽細胞による組織培含む）は5mg／kg静注しても1mg／kg注射時と養で3H−uridineのとりこみで判定する．

比較してカルシウム，尿素窒素とも減少傾向を示

一方PXの生理作用解明の一手段としてウイス

し，とくに後者は上昇しなかった．このようなこ

ター系ラット横隔膜神経筋標本を用い，細胞内電れまでと異なる粗製PXを精製できることは極法でPXlmg／ml濯流前後の平均静止膜電位おの量産化に直結するものであり，臨床応用にも明

よび自発性微小終板電位を観察する．

るい見通しをえたことになる．

PX

またこれまで5年以上PXを連用中の進行性筋

次に臨床用PXを最近ある方法で分画した2検

ジストロフィー（DMP）患者の臨床観察は今ま

体PBH2（W）（BioassayでPX注射前借に対すでと同じように実施する．その効果判定はるカルシウム減少率95．3±2．2％，尿素窒素減少率
103．7±3．4％），PBH4（W）（カルシウム減少率88＊長崎大学医学部第一内科＊＊国立療聾所川棚病院＊＊＊宮崎医科大学第二生化学．2±3．4，BUN減少率137．0±16．4）の力価をTiss−
uecultureで検定した．図Jの如く，カルシウム因子が強いがBUNを上昇させるPBH4（W）は
−242−

表l

膵エキスの投与量によるBioassayの変化
P ro te −L o t N o ． a Se
活性
（U n it ）54 00 ・H

0

家

投

兎

与

数

量

末 梢 白血 球（羽 ） m g／k g） 1 ．5h

3h 6 h

血清 総 蛋 白

血

3h

3h

6h

％

g％

清C a

尿

6 h

素

3h

％

5

0 ．5

4 6 114 23 5

− 0 ．8 − 0 ．5

96

97

96

80

5

1 ．0

33

54 18 5− 0 ．8 − 0 ．
8

98

99

1 10

10 8

6

3 ．0

16

3 8 1 17

− 1 ．2 − 1 ．1

81

87

12 5

13 7

1 ．
5h

4 ，5h

4 ．
5h

4 ．5h

7 （5 ）

日

時

6h

％

29 ／Ⅵ
70

18 ／Ⅵ
70
2 2／V
7 0

4 ．5h
※

7 9 103 1 −
13 5

−N

※

1．
0

1 83

30 6

− 0 ．896 ．
3 ± 4 ．3

10 8 ．6 ± 6 ．
8

5 ．
0

49

14 5

− 0 ．592 ．
9 ±3 ．
3

9 8 ．4 ± 6 ．
4

7 ／刀
79

61 ．
0
7 （5 ）

16 ／刀
7 9％：注射前値を100とする※：Mean±SD
家兎数7（5）●とはPXを静注された家兎7羽のうち，最大と最小の変動率を示した2羽を除外することを意味する♯10．T9．Fetal skin

100JLg／mlで3H−uridineのとりこみが著明に抑制された．この時のCOntrOlのRegularInsulin（R．Ⅰ．）の【Bioassay〕（家兎1mg／kgi．V．）
Ca
95．3±2．2％
BUN lO3．7±3．4％uridineのとりこみは124．8±4．3であった．しかるにPBH2（W）の如くカルシウム因子がPBH4（W）
ほど強くないが（95．3±2．2％），BUN

をほとん

ど上昇させない分画のuridineのとりこみはRIとほぼ同程度に強かった⊥ 以前組織培養にL−CeトlsやChangslivercellを使用したことがあるが，この場合にはこれほど忠実にBioassayと平行しなかった．従ってこの線維芽細胞を用いる組織培養法はBioassayに代りうる力価検定法であることを示している．微量の検体を検定できるこの組〔Bioassay）にNl；；：……；∴≡）

織培養法を用いて最近精製してえた一分画は0．1
JJg／mlで有意に（p＜0．01）uridineのとりこみを

p＜0．05

蒼p＜0．01

緊蒸増し，100／∠g／mlではさらにこれを増加させた（p＜0．001）．

一方高守は力価の高いPXを使って細胞内微小図1EffectofPXsontheincorporation

電極法によって（図2），骨格筋細胞膜に対し微小Of3H−URintothe HumanFibroblast

終板電位振幅増大（0．47±0．10mV→0．84±0．18mV）を伴った平均静止膜電位過分極（76±4．O
mV一→79±4．5mV n＝50

p＜0．001）を認めた．

実験はこの意義を解明するためなお続行中である．
ー243−

表2

PX5年以上連用のDMP患者に対する臨床効果PX
発症年齢
例数 （男．女） （開始年齢
P X 使用期間
平均 ） （平均）
名
4 （1 ， 3 ）

10 （6 ，4 ）

15 （15， 0 ）オオ

10 −1919 −37

（14 ．
8）

（28 ．
0）

4 −27

12 −42

（14 ．
2）

（28 ．
4）

1− 6

5 −17

（3 ．
6）

（10 ，
4）

年月

名

名

6 ，9 − 9 ，4

4

0

5 ，11 − 8 ，50

7

5 ，11 − 8 ，7

2

2

年月

（莱）効果 ≠；症状の一部が改善したか，進行が停止に近いもの．
＋；症状の悪化が遅くなったもの．
（S．54．11．）≡≦≡≡≡一一≡≡≡≡≡する．顔肩上肢筋型4例はすべて（軋 肢帯型10例
中7例が川，デュセンヌ型15例中2例が什）（24才

hb，t hl叩明，lmstinglTモmhanelIDte血bl（nW〉

男性の米国人1を含む），他の2例が（巾で病状の悪化が緩徐または停止している．毎年報告している
PX第1号患者のFSH型DMPのその後の経過は表3の如くで相変らず良好である．
結0．1FLg／mlの単位で3H−uridineのとりこみを検こ

査できる線維芽細胞による組織培養の開発で，Plll州：

Xの力価向上は飛躍的に進展している．このため

1∝lTlt9e亡

a叩仙khw）○仲川t瓢）2・4
RM．R（mu55

論

精製されたPXの純度は現時点でも昨年度の100

0脚仕切

2・S

倍以上に向上し完全単経も近いと考えられる．このPXを用いての電気生理学的研究もようやく軌

60

道にのりつつあり，PXの作用機序の解明も期待
図2

Restingmembrane potential（mv）

できる．
一方DMP患者29名が5年以上PXを連用中ですでに5年以上最高9年4カ月間PXを連用中のDMP患者は29名であり（表2），その臨床効果

その成績はほぼ昨年と同様であり，良い経過を示
す患者がいることも疑えない．

は昨年とほぼ同じである．効果のないものは脱落

ー244−

表3

水○明0

46歳女（FSH Dystrophy）1mg／day

52

下肢挙上時間03−245−

昭和54年度研究班機構図及名簿厚生省神経疾患研究委託費

筋ジストロフィー研究班
姓

名

研

究

課

題

姓

長

第 一 姓

筋ジス トロフィー症の基礎的研究

江 橋 節

郎

第 二 珪

筋ジス トロフィー症の病因に関する臨床的研究

三 好 和

夫

第 三 珪

筋ジス トロフィー症の臨床病態および疫学的研究

祖父江

第 四 班

筋ジス トロフィー症の痺護に関する臨床社会学的研究

中

島 敏

夫

第 五 班

筋ジス トロフィー症動物の生産 ・開発に関する研究

野

村 達

次

昭和54年度第二班（三好班）機構図
プロジェクトプロジェクトリーダー

1）遺伝・臨床
2）病態・生理
a．形態
b．生理
C．生化

黒

岩

豊 倉・佐 藤西谷杉田（i）代謝・酵素・その他（ii）プロテアーゼ（iii）膜系など
3）治療法の開発

好a．プロテアーゼインヒビター
b．ホルモン

C．筋成長因子d．神経成長因子など

ー249−

逸 郎

昭和54年度第二粧（三好班）名簿
区
珪

分

氏
長

三

所
所

名
好

和

夫

属

施
在

設

名
地

所 属 におけ る地 位連絡 の際 の電 話

教

授

08 86 −3 1−3 111

九州大学医学部脳神経病研究施設神経内科 教

授09 2−64 1− 1151

授

03 −8 15 −54 11

助 教 授

03 −813 −31 11

副 院 長

0 75 −46 1−512 1

助 教 授

03 −815 −54 11

助 教 授

09 92 −64 −22 11

助 教 授

02 52 −23 −616 1

徳 島大 学医 学部 第一 内科〒77 0 徳 島市蔵 本町 3 −18 −15

幹

事

黒

岩

義五 郎

〒81 2 福 岡市 東区馬 出3 −1 −1
豊

倉

佐

藤

康

夫

東京大学医学部脳研究施設神経 内科

教〒 11 3 東京都文京区本刹汀−3 − 1∃
孟 順 天堂大 学 医学吾郎還神経 内科〒 11 3 東京都文京区本郷2 −1−1
西谷裕

国 立療 養 所宇 多野病 院神 経 内科
〒616 京都 市右京区喝滝音戸山町8

運 営 幹 事

杉

田

秀

夫

東京大学医学部脳研究施設神経 内科〒 113 東京都文京区本券好一3 −1

班

月

古

庄

敏

行

鹿 児 島大学 医学 部衛 生学〒8 90 鹿 児 島市宇 宿町 1208 −1

近 藤 喜代 太郎

新 潟大 学脳 研 究所神 経 内科
〒9 5 1 新 潟 市旭 町 通一 番町7 54

古

川

塚

越

哲

雄

日赤医 療 セ ンター神経 内科〒150 東京都 渋谷区広尾4 −1 −22部

長

0 3 −4 00 −1311

康

信 州大 学医 学部 第三 内科

教授

02 63 −35−46 00〒3 90 松 本市旭 3 − 1 − 1
木

下

真

男

東 邦大 学医 学部 第 四内科教

授

0 3 −46 8− 12 51

埜

中

征

哉

国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部 室長

04 23 −4 1−27 11

助手

02 52 −23 −6 161

講師

02 63 −35−46 00

鳥取大学医学部脳幹性疾患研究施設神経病理射り 教

授

08 59 −33 −111 1

助 教 授

0 958 −47 −2 111〒153 東京都 目黒区大橋2 −17−6〒187 東京都小平市小川東町2620
福 、原

信

義

新 潟大 学脳 研 究所神経 内科〒9 51 新 潟市旭 町通 一 番町7 54

小

口 書 三夫

信 州大 学医 学部 第三 内科〒3 90 松 本 市旭 3 − 1 − 1

中

村

晴

臣

〒6 83 米 子 市西町 86番地
高

守

正

治

長 崎大 学医 学部 第一 内科〒8 52 長 崎 市坂本 町 7 − 1

高

木

昭

夫

国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部 室長

04 23 −41 −2711

中

西

孝

雄

筑 波大 学 臨床 医学系 神経 内科

授

02 98 −53 −3500

助 教 授

09 858 −5 −15 10

教

07 26 −83 −12 21〒187 東京者M 、
平市小川東町2620
教〒3∝ト31 茨城県新治郡桜村大字妻木字天久保
栗

原

照

幸

宮 崎医 科大 学 第三 内科〒8さ
9 −16 宮崎県宮崎郡清武町木碇5200

茂

在

敏

司

大 阪 医 科大 学第 一 内科
〒 569 高槻 市大 学町 2 − 7
ー250−

授

区
珪

分

氏
月

垂

所
所

名
井

清一 郎

属

施
在

設

名
地

大 阪大 学 医学部 第二 内科

所属 にお
け る地位

連 絡の 際の電 話

教

授

0 6 −451 −00 51

教授

0 899 −24 −7 111

副 院 長

0 423 −23 −5111

講師

0 263 −35 −4 600

助

手

0 886 −31 −3 111

講師

08 86 −31 −3 111

助 教 授

093 −871 −193 1

講師

078 −341 −74 51

講師

052 −74 1−21 11

教授

09 858 −5 − 15 10〒553 大 阪市福 島区福島1−1−50
植

田

啓

嗣

愛媛 大学保 健 管理 セ ン ター
〒7 90 松 山市 道後 樋又10 −13

宇尾野

公

義

東 京都 立 府 中病 院神 経 内科

庄

進

一

信州 大学 医学 部 第三 内科〒182 東京都肝中市武蔵台2 −9 −2司〒 390 松本 市旭 3 − 1 − 1
八木 田

正

聖

徳 島大学 医学 部 第一 内科〒 770 徳 島市歳 本町 3−18 −15

川

井

尚

臣

徳 島大学 医学 部 第一 内科〒770 徳 島市蔵 本町 3− 18 −15

馬

渡

志

郎

九州工業 大学 保健 管理 セ ン ター

高

橋

桂

一

神 戸大学 医 学部 第三 内科〒804 北九州市戸畑区仙水町 1 −1〒650 神戸市生田区楠町13 ・14合併地
田光

男

名 古屋 大学 医学部 第一 内科

荒 一
木

淑

郎

宮 崎 医科 大 学 第三 内科

正

自治医科大 学神 経 内科

助 教 授

02 854 −4 −2 111

子

国立武蔵療養所神経センター疾病研究第四訪 研 究 月

04 23 −4 1 −27 11

飯〒46 6 名 古屋 市昭 和区鶴 舞町6 5〒闘9−16 宮崎県宮崎郡清武町木原5200
宮

武

菅

田

〒329−04 栃木県河内郡南河内町大字葦師寺3別−1
瑞〒187 東京都小平市小川東町2620
高

岡

善

人

数

按

0 958 −47 −21 11

教

授

075 −751 −31 11

助 教 授

075 −75 1−2 111

助 教 授

08 86 −3 1−3 111

部長

0 3 −58 3 −6871

講師

09 92 −6 4 −2211

理
日本 筋 ジス トロ フィー協会〒162 東京都新宿区西早稲田2 −2−8

事

0 3 −20 3 −1211

長崎 大学 医学 部 第一 内科〒 852 長崎 市＝坂本町 7 − 1

井

村

裕

夫

京都 大学 医学 部 内科 第二講座
〒606 京都市左京区聖議院川原町54

林

恭

三

京 都大学 薬 学部生 物化 学
〒60 6 京都市左京区書田下阿達町

貴

田

寺

弘

徳 島大学 医学部附属酵素研究施 設
酵 素化 学部 門〒77 0 徳 島市 蔵本 町3 −18 −15

田

辺

等

虎の 門病 院 神経 内科

弘

鹿児 島大学 医学 部 第三 内科〒107 東京都港区赤坂虎の門2−2−2
納光〒 89 0 鹿 児 島市宇 宿町 1208 −1
経理事務担当者

小

川

秀

雄

−251−