タカラバイオ マンスリーフォーカス
vol.1032024年4月号（4月1日発行）

一冊丸ごと BioViewブログ 特集
耳より

BioViewブログ 週間アクセスランキング “TOP 5” 発表 !
★ 今さら聞けない ! 「In-Fusionクローニング」ってなに？
★ 迅速簡便なシリカカラムの原理とは？ －NucleoSpinシリーズ－
次世代シーケンス解析受託サービスの短納期プラン

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今月のマンスリーフォーカスは、BioViewブログのアクセスランキングや人気記事の一部を抜粋してご紹介します。もっとブログを見たい方は、タカラバイオウェブのブログサイトにぜひ一度アクセスしてください !

★ BioViewブログ 週間アクセスランキング※ TOP 5 ★
※2024年3月1日時点

今さら聞けない ! 「In-Fusionクローニング」ってなに？
1

p.2で詳しくご紹介

入門者のためのPCRの原理
2

迅速簡便なシリカカラムの原理とは？ －NucleoSpinシリーズ－
3

p.3で詳しくご紹介

カラム法？ 磁性ビーズ法？ 核酸抽出手法についてご紹介 !
4

5

タカラバイオ株式会社 公式

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アクセスランキング第1位

今さら聞けない ! 「In-Fusionクローニング」ってなに？
・In-Fusionってなに？
私が学生のときの遺伝子クローニングといえば、まず、PCR産物とプラスミドベクターを制限酵素で処理した後、ライゲーション・形質転換を行い、得られた組換え大腸菌コロニーをスクリーニングして、、、目的クローンを取得するまでに合計3日かけていました。100%成功するわけではないので、取得まで1ヵ月以上かかったこともあり、「もっと手軽にクローニングできればなあ・・」と悩みながら実験していました。実は、そのようなお悩みを解決する製品こそが In-Fusionなのです !
In-Fusionは、PCR断片と線状化ベクターの両末端15塩基の相同配列を利用して効率よくクローニングする技術です。制限酵素やライゲーションキットによる切り貼りが一切必要なく、In-Fusion反応自体もわずか15分で完了するため、制限酵素／ライゲーションを使った手法に比べると、実験時間をなんと約1日短縮することができます ! また、一挙に複数の断片を挿入するマルチクローニングも可能なので、作業を大幅にカットできます。
さらに、クローニングの成功率も高く、短鎖から長鎖（50 bp～15 kb）のDNA断片を95%以上の高効率でプラスミドにクローニングできます。
クローニングしたい場所を起点にインバースPCRで任意のベクターの線状化を行い、そのベクターの両末端15塩基の配列を利用して目的断片の挿入ができるため、制限酵素などが一切要りません。

・他社同タイプ製品との違いは？
In-Fusionのアドバンテージはどこでしょうか？ それはズバリ 「正確性」 です !
他社製品ではクローニングの際にエラーを生じる場合がしばしばありますが、原理の違いから In-Fusion は非常にエラーが起こりにくく、その結果、目的クローンの取得効率が高くなります。

★ 他社同タイプによるクローニングでは…

★ In-Fusionクローニングでは…

ポリメラーゼDNAリガーゼ

ベクターとインサートをつなぐために、ポリメラーゼとDNAリガーゼを使います。そのときにMutationが入ると考えられます。

ベクターとインサートをつなぐために、ポリメラーゼもDNAリガーゼも使用しません（ギャップが生じても大腸菌形質転換後に自動的に埋まります）。
このため、Mutationが入らず、より正確性の高いクローニングが可能となります。

In-Fusionは結合時にポリメラーゼもDNAリガーゼも使いません。
だから余計なエラーが入らず、正確性が高いのです !
クローニングの成功率を少しでも上げたい方やクローニングにかかる時間を少しでも減らしたいという方は、ぜひ一度「In-Fusionクローニング」をお試しください !
製 品 名容 量

製品コード価 格In-Fusion Snap Assembly Master Mix

10回638947¥25,000In-Fusion® Snap Assembly Master Mix with Competent Cells

10回

638951¥45,000®

-2-｜ タカラバイオマンスリーフォーカス

表示価格はすべて税別です。

★ BioViewブログ 週間アクセスランキング上位記事
アクセスランキング第3位

迅速簡便なシリカカラムの原理とは？ －NucleoSpinシリーズ－
カラムを使用した核酸抽出・精製キットにおいて、どのような仕組みでカラムへ核酸を吸着／溶出させているのか疑問に思ったことはありませんか？ 本ブログでは、マッハライ・ナーゲル社のNucleoSpinシリーズなどに代表されるシリカメンブレンを使用した核酸精製について、その原理を詳しく解説いたします。
＜高塩濃度条件下のイメージ＞＜低塩濃度条件下のイメージ＞

まずは吸着の仕組みです。シリカメンブレンは-OH基を持つため、核酸と水素結合しやすい構造をとっています。しかし、通常は核酸溶液中の水分子がシリカメンブレンの-OH基と核酸との間に入り込んでいるため、シリカメンブレンと核酸は結合しません。カオト
ロピック塩を添加することで核酸溶液を高塩濃度にすると、水分子は塩に結合するため、水分子と結合できなくなった核酸はシリカ-OH基との間で水素結合を作ります。
このような仕組みで核酸は高塩濃度下でシリカメンブレンに結合します。

溶出時はその真逆です。核酸溶液を低塩濃度にすることで、水分子は塩から遊離し、核酸とシリカ-OH基との間に入り込み、核酸はシリカメンブレンから離れます。

シリカカラムを使用した核酸抽出キットのメリットは、以下の2点があげられます。
✔ 迅速・簡便かつ容易に核酸精製が可能✔ 低塩濃度のバッファーで溶出できるため、そのまま次の実験に使用できる。
ただし、シリカカラムを使用した核酸抽出キットは一部の酵素阻害物質や夾雑物の除去が困難です。特に大腸菌の膜成分由来のエンドトキシンは除去しづらく、細胞への遺伝子導入実験などへの使用はお勧めいたしません※。
また、遠心操作により核酸がせん断を受けやすく、長鎖のDNAを必要とするBACなどのライブラリー作製やロングリードシーケンサーでの配列決定には適していません。実験の目的や手法によって、使用するキットを検討・選択していただくことをお勧めします。
※遺伝子導入で使用するプラスミドの精製には、イオン交換カラムを使用した「NucleoBond・NucleoBond EFシリーズ」をお勧めします。

製 品 名説 明

製品コード

NucleoSpin Plasmid EasyPure

簡単操作なのに高性能なプラスミドミニプレップキット

740727.10/.50/.250

NucleoSpin® Tissue

スピンカラムタイプの汎用ゲノムDNA抽出キット

740952.10/.50/.250

NucleoSpin® RNA

スピンカラムタイプの汎用total RNA精製キット

740955.10/.50/.250

NucleoSpin® Gel and PCR Clean-up

PCR産物の精製、ゲルからのDNAクリーンアップ

740609.10/.50/.250®

※価格は弊社ウェブカタログでご確認ください。

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タカラバイオ BioViewブログ-2-検索｜ タカラバイオマンスリーフォーカス - 3 -vol.103

タカラバイオマンスリーフォーカス vol.103

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サービス内容ライブラリー受入
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混合済みライブラリー（1～16インデックス混合可能）
濃度：10 nM 以上（20 μl 以上）

データ量目安
100 Gbaseまたは6.6億リード

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納期¥277,000／一式

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300 Gbaseまたは20億リード¥427,000／一式

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約2週間～※49検体以上はお問い合わせください。

NovaSeq（150 baseペアエンドシーケンス）を用いたシーケンスです。
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・本パンフレットで紹介した製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
・タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
・ライセンスなどに関する最新の情報は弊社ウェブサイトをご覧ください。
・本パンフレットに記載されている会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
・本パンフレット記載の価格は2024年4月1日現在の希望小売価格です。価格に消費税は含まれておりません。

2024年3月作成G

取扱店
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