2018.03.30

ESI-Ion Trap-MS(Burker・HCT/HCT)
一般ユーザーマニュアル
分析計測分野kikibun@okayama-u.ac.jp

目 次〇分析開始の前準備

1〇試料の測定

4〇測定結果の解析

5〇終了操作

7〇参考資料

9〇トラブル発生時の連絡先

12＜設置場所＞
自然科学研究科棟 4 階 405 号室 （内線 8633）＜試料調製について＞(1) 溶媒にはメタノールやアセトニトリルを用いるが、水が 5%以上含まれていた方がイオン化しやすい。
★ベンゼンやトルエンやクロロホルムは PEEK チューブを溶かすので、使用する場合は SUS 配管への付け替えが必要。
★ペプチドなどの両性イオンの試料の場合、pH3（ギ酸，アセニト系）などとし、positive モードで測定することが多い。
(2) 試料濃度は 10 ug/mL を最高濃度として、10 倍希釈系列で３つほど調製（0.1, 1, 10 µg/mL）し、低濃度のものから測定する。

＜持参するもの＞(1) 試料（上記各濃度品；200-1000 uL。MS 室で希釈するなら最高濃度品 100 uL だけでも可）(2) 希釈用溶媒及び細バイアル（希釈用。MS 室で希釈するなら，１試料あたり３本ほど）(3) 装置洗浄用アセトニトリル or メタノール （HPLC グレード以上）(80%メタノール（洗浄用）は測定室に共同利用品あり)

分析開始の前準備
本体電源投入前の「使用申込書・使用報告書」記入

使用簿に、使用者・開始時刻など、必要事項を記入し、以下の「使用前の確認事項」を確認する。

1. 【稼働前のチェック】★ 下記の項目（チェック表 4）をチェックすること。
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

室内空調のエアコンは正常に作動しているか（設定 23～25℃）
部屋隅の温度計は正常な範囲(23～28℃)にあるか？
Esquire Control は起動しているか
Esquire Control 内の「Standby」（黄色）が選択されているか
Esquire Control 内の「Neb Gas」「Dry Gas」の欄にチェックが入っているか
メソッドファイルとして Dry-2L-Standby.m が呼び出されているか
Dry-2L-Standby.m の設定値通り「Neb Gas 5.0 psi,Dry Gas 2.0 L/min, Dry
Temp 180℃」となっているか
8. 窒素ガス発生装置の Flow 値は正常(2.2～5.0 L/min)か
9. 窒素ガス発生装置の Pressure 値は正常(0.550-0.603 Mpa)か
10. 真空度は正常か（Fore: 2 mbar 程度、High: 9×10^-6mbar 程度）

3896
窒 素 ガ ス 発 生 装 置 の Flow 値 はmicrOTOF 測定時には、その測定条件の値が加算された値になります。

4751012. 【測定前状態の確認】
Method メニュー → open をクリック

基本 Method (DEF_MS.m)を呼び出す。
シリンジを洗浄し、ESI 用 TuningMix (20 倍アセトニトリル希釈液)をセットする。
Operate をクリックし、MS スペクトルが表示されることを確認する。
（Operate が緑色になる）

シリンジ流速：180μl/h
DEF_MS.m はドライガス温度の設定値が 300℃と高めの設定になっています。（測定時は 250～300℃での設定が通常です。）

しばらくして、DryGas が 300℃になり、クロマトが安定したら、Acc Time の測定前の値を利用ノートに記録する。 (正常範囲： 2-3ms)

2

3. 【測定用 Method の呼び出し】
以下に示した標準 Method を呼び出し、選択した Method をコピーして研究室用の Method として名前を付けて保存する。

2 回目以降、同じ条件の Method を使用する際は、コピーした研究室用のMethod を読み込んで使用する。

★ 標準Methodそのものは使用しない。
それをコピーしたもの、あるいはコピーを自分用にカスタマイズしたものをMethodフォルダ内に自分の名前のフォルダを作って格納し、それを使うように注意：
・Default Method の上書き禁止！
・使用 Method は、各研究室フォルダに save しておくことする。

<標準 Method>
ポジティブイオンモード： 20160113_Mw50-1000_pos.m
ネガティブイオンモード： 20160113_Mw15-1000_neg.m3

試

【試料測定】 MS 測定
Sample Info のタブにサンプル情報を入力する。

（MSMS 測定の設定については、参考資料に記載）

kikibun

1. Data File の Filename, Subdirectory（保存先）を入力、選択する。
各自研究室フォルダに保存する。（Path は D:/DATA/のまま変更しない。）
2. Sample Parameter に試料情報を入力することも可能。

3. 測定時間を入力する。
クロマト内で右クリックし、「Edit Segment Limit」をクリックし、測定時間を入力して、「OK」をクリックする。

4.

ボタンをクリックして、測定をスタートする。
（「Operate」「PC」「MS」が青色になる）

5. 設定時間が経過すると自動的に取り込みが終了する。
(設定時間前に中断する時は、 ボタンをクリックする。)

4測定

【データ解析】（解析例）

解析中は溶媒を流して洗浄する。
MS は Standby にしておく（HV は消え、Nebulizer はついている）。
1. 画面下に最小化してある解析ソフト（Compass Data Analysis）をクリックして画面を開く。
2. 解析したいファイルを開く。

3. MS スペクトルの確認
矢印のあるアイコンをクリックし、クロマト上で、クリックすると中段に MS スペクトルが表示される。（右ドラッグで範囲指定することも可能）

4. MS スペクトルの保存表示させた中段の MS スペクトル上で右クリックし、「copy to compound」で下段にコピーされる。

5. 印刷

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Print 設定で、印刷（Canon LBP3300）か PDF(PrimoPDF)を選択し、希望の Layout 形式があれば選択して、印刷または、PDF で保存する。
（Layout 例）
General Display Report （Display で表示させている内容）
Mass Spectrum SmartFormula Report （組成式推定結果）
Auquisition Parameter Report （測定条件）

6. ソフトウエアの最小化
解析終了後、ソフトウエアは画面下に最小化しておく。

6終了操作【終了前状態の確認とイオン源の洗浄】1. 基本 Method (DEF_MS.m)を呼び出す。
シリンジを洗浄し、ESI 用 TuningMix (20 倍アセトニトリル希釈液)をセットする。
Operate をクリックし、しばらくして、DryGas が 300℃になり、クロマトが安定した
ら、Acc Time の測定後の値を利用ノートに記録する。 (正常範囲： 2-3ms)
記録した後、シリンジを洗浄し、洗浄用溶媒を流して TuningMix 由来のピークが消え、イオン量が低い値で落ち着くのを TIC で確認する。
送液を止めて、standby をクリックする。
2. スタンバイ method の読み込み
esquire Control 画面で Method → open → 「Dry2L-Standby.m」を開く。
（MS は standby 状態。「Neb Gas」「Dry Gas」は on で「HV」は off）

3. イオン源の洗浄
イオン源右側面のレバーを奥方向に倒し、イオン源を開ける。
ネブライザーニードルの下にキムワイプを置き、洗浄したシリンジを用いて、洗浄用溶媒をイオン源に手押しで送液する。この操作を 2 回程行う。
溶媒を湿らせたキムワイプでスプレーシールド表面を拭き、イオン源を閉じる。
スプレーシードルの表面に汚れが残るようなら、監守者に連絡する。

4. シリンジポンプの電源を OFF にする。

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【装置状態の確認】★ 下記の項目（チェック表 4）をチェックする。
1. 配管チューブ・イオン源の洗浄は行ったか
2. メソッドファイルとして Dry-2L-Standby.m を呼び出したか3. 2.の設定通り「Neb Gas 5.0 psi,Dry Gas 2.0 L/min, Dry Temp 180℃」となっているか
4. Esquire Control 内の「Standby」(黄色)が選択されているか
5. Esquire Control 内の「Neb Gas」「Dry Gas」の欄にチェックが入っているか
6. 真空度は正常か
7. 窒素ガス発生装置の Flow 値は正常（2.2～5.0 L/min）か
8. 窒素ガス発生装置の Pressure 値は正常(0.550-0.603 Mpa)か
9. シリンジ（or LC カラム）・溶媒類は適切に片付けたか
10. インフュージョンポンプ（or LC システム）は OFF にしたか
11. プリンター・PC ディスプレイは OFF にしたか
異常な点・気がついた点等あればメモをする

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参考資料
MS (n)測定の条件設定について、以下に詳細を示した。
「MS(n)」のタブをひらく。
【 AutoMS(n) 】
1. 左側で AutoMS(n)を選択する
2. チェックを入れたら動作開始3. Include: 親イオンとして認識する質量範囲の指定
Exclude: 除外する質量範囲の指定
MS List: 親イオンを指定、もしくは質量範囲を指定（例；740、300-1500）
4. No. of Precursor Ions: 一つの MS から選択する親イオンの個数
Threshold Abs: MS 縦軸の強度より親イオンとする閾値を設定
Threshold Rel: デフォルト「5%」のまま
5. 自動削除の設定
Active Exclusion: 一定回数、親イオンを MS(n)測定したら、再び MS(n)測定を行わない
Excluded after ■ Spectra: ■回数を測定
Release after ● min: ●分後以降は再測定
6. SPS: 親イオンの質量に最適化
Max Res Scan: 親イオン選択後、高分解能モードで測定
次のページへ２
１３４６５9Advanced をクリックすると、以下の項目が設定できる。
1. 同位体の質量差から一価と判断したピークに対して MS/MS を行わない場
合はチェックを入れる。

１2. MS(n) Avg.: MS(n)の積算回数の設定
MS(n) Isol Width: Isolation したい質量に対して質量幅を設定
3. MS/MS のみの設定
Use values from MS Scan: チェックを入れると前頁の設定値を使用
ICC: 前頁と同様
Scan: 前頁と同様
Use Ultra Scan: チェックを入れると MS/MS 測定のみ対応
4. Max Res Scan Avg.: Max Res Scan の積算回数２3４

5. MS3 以降の設定
No. of Precursor Ions: 一つの MS から選択する親イオンの個数
Threshold Abs: MS 縦軸の強度より親イオンとする閾値を設定
Threshold Rel: デフォルト「5%」のまま

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【 Manual MS(n) 】
1. 左側で Manual MS(n)を選択する
2. チェックを入れたら動作開始
3. 「Isolation」
On: Isolation を実行するためにチェックを入れる
Mass: Isolation をしたい質量を入力
Width: Isolation したい質量に対して質量幅を入力する （通常は「4.0」を設定）
4. 「Fragmentation」
On: Fragmentation を実行するためにチェックを入れる
CutOff: CutOff の設定（自動的に親イオンに依存して決定）
Ampl: Fragmentation のエネルギー （通常は「1.0」を入力）

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【 MRM 】
「MRM」測定モードでは、MS/MS または MS3 での測定が可能になります。
Manual MS(n)では一つの親イオンに対して MS(n)測定を行いましたが、MRM 測定では、複数の親イオンに対して MS3 までの測定が可能になります。
1. 左側で MRM を選択する
2. チェックを入れたら動作開始
3. 「Isolation」、「Fragmentation」
Manual MS(n)と同様

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トラブル発生時の連絡先
故障時には、機器管理責任者 と所属研究室の指導教員へまず連絡して下さい。
装置の不具合、ご不明な点等ございましたら以下にご連絡をお願い致します。

機器管理責任者 ： 仁戸田 照彦 （内 8291）
岡山大学大学院環境生命科学研究科（農学系）

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