岩獣会報 (Iwate Vet.), Vol. 39 (№ 2), 57−60 (2013).

原著

豚増殖性腸炎ワクチンの効果検証

佐藤裕夫

要井戸徳子

平間ちが約

岩手県内の養豚農場で飼養される黒色便を呈して死亡した繁殖豚１頭が, 病性鑑定により増殖性腸炎と診断されたことにより, 哺乳豚〜繁殖豚計69頭の糞便及び血清について Lawsonia intracellularis の遺伝子及び抗体検査を実施した. ６週齢及び９週齢の豚から L. intracellularis 遺伝子が検出され, ９週齢以降の抗体陽性率も高かった. 対策としてワクチン接種したところ, 接種豚には排菌頭数の有意な減少及び１日増体量の増加による肥育日数の短縮が認められた. 適切なワクチン接種により, 本病の排菌率低減と生産成績の向上が図られた.
キーワード：豚増殖性腸炎, Lawsonia intracellularis, リアルタイムPCR, ワクチン, 豚緒

言において, rPCR法及び抗体検査による浸潤状況調査

豚増殖性腸炎 (Porcine Proliferative Enteropathy：並びにワクチン接種を主体とした発生予防対策を実施

PPE) は Lawsonia intracellularis ( L. intracellularis )し, その効果を検証したので, その成績を報告する.

を原因菌とする離乳後肥育期の豚に発生する感染症で,材料及び方法

臨床所見により急性型 (増殖性出血性腸炎) と慢性型(腸腺腫症) に区別される. 急性型では粘膜からの出供試材料

血を伴う下痢便を主徴とし, 急性経過で発症豚の50%飼養頭数200頭 (母豚35頭, 種雄豚15頭, 肥育豚150が死亡することもある. 慢性型は発育不良, 食欲不振,頭) の一貫経営養豚場において, 平成23年11月に母豚軽度の下痢がみられ, 小腸及び一部大腸の肥厚を特徴

2頭が発熱, 食欲不振及び黒色タール便を呈し, うちとする [1]. 細胞内寄生性細菌で分離が困難であるこ死亡した１頭を病性鑑定した. L. intracellularis 浸潤とから, 遺伝子検査として糞便のnested PCR (nPCR)

状況調査には同農場で飼養される哺乳豚 (２, ４, ６,

検査 [7] が一般的に行われるが, 慢性型の発症が疑９週齢), 育成豚 (４, ７カ月齢) 及び１歳以上の繁われる場合, 病理組織学的検査及び病変部のnPCR検

殖母豚各10頭 (２週齢の哺乳豚は９頭), 計69頭の糞査を行わないと確定診断は困難であった. 近年, 木口

便及び血清を用いた. rPCR検査には, 対照群としてら [8] は本病にリアルタイムPCR (rPCR) 法を応用

浸潤状況調査に用いた４及び６週齢の哺乳豚, 各10頭,し, 病理組織学的検査の病変の程度と直腸内容rPCRワクチン接種群として同週齢の各30頭の糞便を用いた.

による病原体遺伝子のコピー数に強い相関があり,生産成績の比較には, バークシャー種 (B種) の対照

PPEの診断への応用が可能であることを報告している.

群 (ワクチン未接種豚42頭, 平成23年４〜７月生まれ)

本病の治療にはタイロシン製剤やチアムリン製剤が及びワクチン接種群 (39頭, 平成24年４〜７月生まれ)

豚のローソニア イントラセルラ

並びにランドレース種及び交雑種 (L種等) の対照群

リス感染症 (急性出血性腸炎型を除く) による増体重(ワクチン未接種豚19頭, 平成23年４〜７月生まれ)

低下の軽減

及びワクチン接種豚 (44頭, 平成24年４〜７月生まれ)

選択されていたが,を効能・効果とする生ワクチンが国内でも承認され [2], 国内外でその接種効果が報告されての生産成績を用いた.

いる [3−6]. 本報告ではPPEの急性型が発生した農場
岩手支会

岩手県中央家畜保健衛生所― 57 ―

ワクチン接種

blocking ELISA法 (Jacobsonら [10]) ：ベーリン

エンテリゾールイリアイティスワクチン (ベーリンガーインゲルハイムベトメディカジャパン社) を生後ガーインゲルハイムベトメディカジャパン社に依頼した.
生産成績

３週齢時の豚に経口接種した.

B種及びL種等に品種を区分し, 生産成績は１日増

遺伝子検査

体量 (DG) 及び肥育日数を比較した. いずれの群も

DNAテンプレートの作成：nPCRには回腸及び結腸育成豚が30㎏に達した時点で肥育豚舎に移動した日をの内容からInstaGene Matrix (BioRad社) を用いて起点 (肥育０日目) にDG及び肥育日数を算出した.

DNA抽出を行った. rPCRにはQIAamp DNA Stool
成Mini Kit (Qiagen社) によりDNAを抽出した.
nPCR検査：AmpliTaq Gold (ABI社) を用い, プ

績

病性鑑定

ライマー及び増幅条件はJonesら [7] の報告と同様に

剖検所見では空腸から回腸末端部に至る粘膜の著しい実施し, アガロースゲル電気泳動後, 紫外線下で増幅肥厚及び結腸における暗赤色血様〜泥状内容物を伴う産物の確認を行った.

粘膜のうっ血・出血が認められ, 病理組織学的所見では,

rPCR検査：Pasterla ら [9] のプライマーセットを空腸から回腸に至る鍍銀染色にて染色される小桿菌を伴用い, QuantiTect SYBR Green PCR Kit (Qiagen

う腸粘膜上皮の腺腫様過形成が確認された. 遺伝子検社) によりインターカレーター法で実施した. 解析は査において回腸及び結腸内容からL. intracellularis 遺伝

ABI7500 Real Time System (ABI社) により行った.

子が検出され, 細菌検査では豚赤痢菌等, その他有意スタンダード系列はnPCRで増幅した産物を精製し,菌は分離されなかった.

分光光度計 (GeneQuant 100, GEヘルスケアジャパ

L. intracellularis 浸潤状況調査ン株式会社) でDNA濃度を測定後, コピー数 (copies

遺伝子検査において６及び９週齢の育成豚のそれぞ/μl) は以下の計算式で算出した. コピー数＝濃度

れ10頭中６頭 (60％) 及び10頭中４頭 (40％) から(g/ml) / 分子量 (660×PCR産物サイズ/6.02×1023 )L. intracellularis 遺伝子が検出された. 抗体検査では４６で本試験では2.5×10 〜2.5×10 コピー/2.5μlで使用２週齢, ４週齢及び６週齢時の豚にはIFAでのみ陽性した.

が認められたが, 以降の９週齢, ４カ月, ７カ月齢及抗体検査

び繁殖豚では, IFA及びblocking ELISAともに高い

間接蛍光抗体法 (IFA) ：日清丸紅飼料株式会社から分与されたPPE-IFA抗原スライドを用い, 30倍希抗体陽性率を示した (図１).
ワクチン効果検証

釈の被検血清10μlを４℃18時間, 30倍希釈のFITC標

rPCRにより, ６週齢の対照群及びワクチン接種群

識抗豚IgGウサギ抗体 (ZYMED LAB社) ５μlを37℃

では, それぞれ７頭 (70％) 及び２頭 (6.7％) から１時間反応させ, 洗浄, グリセリン封入後, 蛍光顕微遺伝子が検出され, 有意な減少が認められた. 遺伝子

鏡下で観察, 判定した.

が検出された個体の幾何平均遺伝子量はそれぞれ,

図１

浸潤状況調査：抗体陽性率及び遺伝子検出成績― 58 ―

表１ ワクチン接種効果検証：リアルタイムPCR
週齢

６ 週 齢

ワクチン

排菌

９ 週 齢

対照群
n=10

接種群
n=30

対照群
n=10

接種群
n=30

有7ａ2ａ4

7

無3

28

623

7.99×10５

7.98×10４

5.08×10４

7.63×10３

陽性個体の平均遺伝子量 (copy/well)※同符号間で有意差あり (p＜0.001：Fisher's exact test)
表２品

ワクチン接種効果検証：生産成績 (DG及び肥育日数)

種

Ｂ

種

Ｌ種等

ワクチン
ｎ

対照群
42

接種群
29対照群
19接種群
44

ＤＧ
肥育日数0.71±0.13ａ0.80±0.10ａ102ｃ

1.03±0.20ｂ81ｄ1.17±0.11ｂ70ｄｃ115※同符号間で有意差あり (p＜0.01：T-test), DG：１日増体量 (㎏/day)
Ｂ種：バークシャー種, Ｌ種等：ランドレース種及び交雑種
7.99×10５ (2.48×10３〜4.53×10７) copy/well及び7.98

この結果は, 顕在化していないものの, 慢性型のPPE×10４ (2.50×10４ , 2.55×10５ ) copy/wellであった.の関与を示していた [8]. IFAによる抗体陽性率は,９週齢ではそれぞれ４(40％) 頭及び７(23.3％) 頭か２週齢時に母豚に由来する移行抗体が認められ, ４週４齢時には低下した. ６週齢時以降は暫時増加する傾向

ら遺伝子が検出され, 遺伝子量はそれぞれ5.08×10
３６３(3.73×10 〜1.53×10 ) copy/well及び7.63×10 (8.60を示した. 他方, blocking ELISA法では9週齢以降で×10１〜1.84×10６) copy/wellであった (表１). 生産抗体陽性であった. blocking ELISA法はPCRの結果

成績は, B種の対照群及びワクチン接種群のそれぞれと良好に一致するとの報告があることから [10], L.

において, DGは0.71±0.10㎏及び0.80±0.10㎏, 肥育intracellularis が６週齢以前に感染している実態が示

日数は115日及び102日, L種等ではDGは1.03±0.20㎏唆された. IFA及びblocking ELISAの感度及び特異及び1.17±0.11㎏, 肥育日数は81日及び70日となり,度は, IFAがいずれも高いことが報告されている [11].

いずれも向上が認められた (表２).

今回の試験においても, 得られた抗体陽性率は既報[11] と同様の結果を示し, ２週齢から６週齢までに考察認められたIFAの陽性は移行抗体を検出している可能

繁殖母豚２頭で発熱, 食欲不振, 黒色便等の症状が認められ, 死亡した１頭の病性鑑定によりPPE様病変性が推察され, blocking ELISAの陽性が感染抗体の実態を示唆していると考えられた.

及び L. intracellularis 遺伝子が認められたことから,以上の結果を踏まえ, ワクチン接種による免疫付与を急性型のPPEと診断した. 急性型は肥育中期から後期３週齢時に実施した. Riberら [12] はL. intracellularis

あるいは繁殖豚での発生が多く, 離乳後の肥育豚 (６フリーのSPF豚で感染実験を行い, 糞便中の排菌量を〜24週齢) では, 発育不良, 食欲不振, 軽度の下痢をrPCR検査により追跡し, 再感染時には排菌量が抑え呈する程度で, 豚群に蔓延していても発見が困難であられたことを報告している. 検証試験において, ワクる [1]. 本事例において繁殖母豚に認められた急性型

チン接種群から検出された L. intracellularis の平均遺のPPE発生は, 既に L. intracellularis が農場内に蔓延

伝子量は, ワクチン未接種のそれと比較して低位に留している可能性を示唆していた.

まり, 既報と同様の効果が得られたと推察された. し浸 潤 状 況 調 査 に よ り ６ 及 び ９ 週 齢 の 豚 か ら L.

かし, ワクチン接種群から平均7.98×10４copy/wellのintracellularis 遺伝子が検出され, ワクチン効果検証

L. intracellularis 遺伝子が検出された. 今回用いられの際に実施したrPCRで平均7.99×10５ copy/wellの遺たワクチンは弱毒生菌ワクチン株であるため, 投与さ伝子が検出された. 病変が認められる直腸内容の遺伝れた個体からワクチン株が排菌された可能性を否定で

5.15

5.15

子量 (10 ±10copy/well) とほぼ同等の値を示す

きない [2]. 今後, ワクチン接種群で確認された L.

― 59 ―intracellularis 遺伝子の詳細な検索が必要と考えられ

intracellular organism of swine proliferative

た.

enteritis, ileal symbiont intracellularis, in fecesby polymerase chain reaction, J Clin Microbiol,

本試験ではワクチン接種群において明らかな生産成31, 2611-2615 (1993)

績の向上が認められた. B種ではDGが0.09㎏増加し,肥育日数が13日短縮された. L種等においてもDGに[８] 木口陽介, 水戸部俊治：リアルタイムPCRを用0.14㎏の増加がみられ, 肥育日数が11日短縮された.

いた豚増殖性腸炎に対する診断のアプローチ,

本試験では, 両群の哺育〜育成期間のDG及び日数は獣医畜産新報, 64, 121-125 (2011)

比較していない. ワクチン効果の検証には, 同期間の[ ９ ] Pasterla N et al ： Ditection of Lawsonia

生産成績を比較することも有用だと考えられる.

intracellularis by real-time PCR in the feces

病性鑑定の結果に基づき, 適切なワクチン接種時期を

of free-living animals from equine farms with検討し, 確実にワクチン接種を行ったことで, L.

documented occurrenece of equine proliferative

intracellularis の６週齢時の排菌割合が減少し, 生産

enteropathy, Wildlife Dis, 44, 992-998 (2008)

成績に大きな改善が認められた. L. intracellularis の[10] Collins A et al：Comparison of a commercial

蔓延により, 生産成績が悪化している農場においては,

ELISA with an indirect fluorescent antibody test

ワクチン接種による対策は, ワクチン接種費用に見合っ

to detect antibodies to Lawsonia intracellularis
in experimentally challenged pigs, Aust Vet

た生産性の大きな向上が期待できると考えられた.

J, 90, 97-99 (2012)
謝辞[11] Jacobson M et al：Evaluation of blocking

稿を終えるにあたり, PPE-IFA抗原スライド及びELISA for the detection of antibodies against

陽性対照野外血清を分与いただいた日清丸紅飼料株式

Lawsonia intracellularis in pig sera, Acta Vet

会社の中野満恵先生, blocking ELISA試験を実施しScan, 53, (2011)ていただいたベーリンガーインゲルハイムベトメディ[12] Riber U et al：Primary infection protects pigs

カジャパン株式会社の下島博之様に深謝いたします.

against re-infection with Lawsonia intracellularis
in experimental challenge studies, Vet Microbiol,

引用文献

149, 406-414 (2011)[１] 大宅辰夫：特集 豚増殖性腸炎 総論, 臨床獣医,22, 10-12 (2004)[２] 内山万利子：豚増殖性腸炎生ワクチン, 日獣会誌, 65, 323-324 (2012)[３] 佐々田純他：豚増殖性腸炎 (PPE) 経口生ワクチンの効果と経済評価, 家畜衛生学雑誌, 38,118-119 (2012)[４] Roberto MC et al：Onset and duration of fecal
shedding, cell-mediated and humoral immune
responses in pigs after challenge with apathogenic isolate or attenuated vaccine strainof Lawsonia intracellularis, Vet Microbiol, 91,
135-145 (2003)[５] McOrist S et al：Field evaluation of an oral
attenuated Lawsonia intracellularis vaccine for
porcin proliferative enterpathy (ileitis), VetRec, 161, 26-28 (2007)[６] Bak H et al：Reduced use of antimicrobials
after vaccination of pigs against porcine
proliferative enteropathy in a Danish SPF herd,
Acta Vet Scan, 51,(2009)[ ７ ] Jones GF et al ： Enhanced detection of― 60 ―