岩獣会報 (Iwate Vet.), Vol. 40 (№ 2), 46−48 (2014).

原著

牛白血病ウイルス感染母牛における子宮内感染の発生状況

千葉由純

要鈴木千尋

小笠原房恵

村井知恵

約

牛白血病ウイルス (BLV) 感染母牛のECの鍵による分類及びBLV遺伝子量と産子への子宮内感染との関連を調査した. BLV抗体陽性母牛67頭をリンパ球数に基づきECの鍵により分類し, 白血球中BLV遺伝子コピー数をリアルタイムPCRにより測定した. それらの産子67頭から12時間以内に採血し, nestedまたはリアルタイ
ムPCRによりBLV遺伝子検査を実施した. 子宮内感染率は, 母牛のECの鍵による分類別に, 陽性・疑陽性群が正常群に比べて有意に高率だった. 感染産子の母牛のBLV遺伝子コピー数は, 非感染産子の母牛のそれと比べて有意に多かった. リンパ球数およびBLV遺伝子量が多い母牛は子宮内感染のリスクが高いことが示唆された.
キーワード：牛白血病, BLV, 子宮内感染, リアルタイムPCR, ECの鍵緒言材料及び方法

地方病性牛白血病は, レトロウイルス科デルタレト

平成22年７月〜平成25年11月に採血した４農場のロウイルス属に属するBovine Leukemia Virus (BLV)

BLV抗体陽性母牛67頭 (１〜13歳齢, ホルスタイン種の感染によって引き起こされる. BLVの伝播経路とし46頭, 黒毛和種21頭) 及びその産子67頭の血液を調査て, 吸血昆虫や人為的感染等による水平感染のほか,に供した.

感染母牛から胎子への子宮内感染, 産道及び乳汁感染

母牛の血液は, 分娩35日前から分娩日の間に採血しを含めた垂直感染が知られている [1-3]. 未発症BLVた. リンパ球数を, 白血球数測定 (セルタックMEK-

感染母牛における子宮内感染の発生率は10％未満と考5200, 日本光電) 及び血液塗抹のヘモグラムにより計えられている [1] が, その中でも持続性リンパ球増測し, その成績からECの鍵に基づき, 陽性・疑陽性・多症 (PL) 及びリンパ肉腫発症の母牛においては確正常に分類した (表１). また, 全血は0.2％食塩水に率が高いことが報告されている [4, 5]. 現在, 本病より赤血球を溶血させ, 遠心分離して得た白血球からの防疫対策として, 主に水平感染の防除対策が行われDNAを抽出 (QIAamp DNA Mini Kit, ㈱キアゲン)ているが, 垂直感染による若齢感染牛の存在は, 農場

し, 分光吸光光度計 (レシオビームU-1800, ㈱日立における清浄化を遅らせる要因となると考えられる.

ハイテクサイエンス) により波長260nmで濃度を定量

しかし, 国内における子宮内感染の実態についての報

後, リアルタイムPCR (CycleavePCR ウシ白血病ウ告は少ない. 本病の清浄化対策に資するため, BLV感

イルス検出キット, タカラバイオ㈱) を用い, DNA

染母牛のリンパ球数及びBLV遺伝子量とその産子へ100ngあたりのBLV遺伝子コピー数を測定した. 得らの子宮内感染発生率について関連を調査した.

れたBLV遺伝子コピー数は, DNA 10ngあたりの値に

表１年

齢

陽0〜1

ECの鍵に基づく年齢及びリンパ球数 (×10３個/μl) の対比表
〜2〜3〜4〜5〜67〜性13＜12＜10.5＜

9.5＜

8.5＜8＜7.5

疑陽性

11〜13

10〜12

8.5〜10.5

7.5〜9.5

6.5〜8.56〜8

5.5〜7.5

正＜11＜10＜8.5＜7.5＜6.5＜6＜5.5岩手支会

常岩手県中央家畜保健衛生所― 46 ―

標準化し, BLV遺伝子量とした.

は, 各々７頭 (63.6％), ３頭 (37.5％) 及び３頭 (6.3

産子の血液は, 出生後12時間以内に採血し, 初乳摂％) であり, 陽性及び疑陽性群は, 正常群と比較して取の有無は聴き取り調査及び血清GGT活性値の測定

産子の感染率が有意に高かった (陽性：p<0.001, 疑(富士ドライケム, 富士フィルムメディカル㈱) によ

陽性：p<0.05) (表２). また, 各群の平均BLV遺伝子り判断 (100 IU/L以上を初乳摂取) した. BLV遺伝量は, 陽性3.3×10３, 疑陽性2.4×10３及び正常5.4×10２

子検査は, 母牛のそれと同様のリアルタイムPCR又はであり, 陽性群及び疑陽性群が正常群と比較して有意

nestedPCRで行った. NestedPCRは, Licursiら [6](p<0.01) に多かった (図１). 母牛のリンパ球数とのプライマー及び増幅条件方法により, AmpliTaq

BLV遺伝子量との間には, 正の相関 (R＝0.60) が認Gold 360 Master Mix (アプライドバイオシステムズ

められた (図２). 品種及び産子の初乳摂取と産子感㈱) を用い実施した. BLV遺伝子陽性の産子をBLV感染との間に, 有意差は認められなかった.

染と判定した. 抗体検査はELISA法 (牛白血病ELISA

母牛のBLV遺伝子量と産子の感染との関連の比較キット, JNC㈱) により実施した. 出生時にBLV遺伝において, 産子に感染が認められた母牛のBLV平均遺子が検出された３頭は, １カ月後又は３カ月後に再度伝子量は3.5×10３であり, 産子に感染が認められなかっ検査を実施した.

た母牛の6.6×10２と比較して有意に多かった (p<0.001).

母牛の品種, ECの鍵に基づく分類及び産子の初乳産子に感染が認められなかった母牛には遺伝子量の多摂取と産子感染の有無との関係はフィッシャーの正確い個体も認められたが, 65％は感染が認められた母牛

確率検定により, 母牛のBLV遺伝子量のLog10対数値の最小値よりも低い値であった (図３).と産子感染の有無及び母牛のECの鍵に基づく分類とBLV感染産子13頭中９頭が抗体を保有していた. その関係はマン・ホイットニーのU検定により統計処理のうち３頭は, 初乳未摂取であったにもかかわらず抗した.

体が検出されたことから, 子宮内感染抗体と判定された. 他の６頭は, 初乳摂取後のため, 感染抗体と移行成績

抗体との判別は不能であった (表３).
出生時にBLV遺伝子陽性であった13頭のうち３頭

BLV感染母牛の産子67頭中13頭 (19.4％) からBLVの再検査では, 全頭にBLV遺伝子量の増加が認められ,遺伝子が検出された.
母牛はECの鍵により, 陽性11頭, 疑陽性８頭, 正た (表４).

常48頭に分類された. その産子の感染頭数 (感染率)表２

そのうち出生時に抗体陰性であった１頭が抗体陽転し母牛のECの鍵による分類別の産子のBLV感染
頭数及び感染率
母牛

産子BLV感染ECの鍵頭数陽性陰性

感染率陽性

117463.6％ａ

疑陽性83537.5％ｂ

正常483456.3％ａ, ｂ合計

67135419.4％

同符号間に有意差あり (a：p<0.001b：p<0.05)

表３

初乳摂取の有無とBLV感染産子の出生直後の抗体保有状況

抗体陽陰

初乳摂取

計あり

性

369性

2245813計なし

図１― 47 ―母牛のECの鍵による分類別BLV遺伝子量表４
産子

出生時BLV遺伝子陽性産子の追跡調査結果

BLV遺伝子量 (copies/10ngDNA)
出生時
０Ａ

1.0×10−１Ｂ

7×10０Ｃ

4.3×10抗体

※

出生時

１−

１＋

１＋

２回目

3.4×10
2.9×10
3.4×10

２回目※＋＋＋※産子Ａ及びＣ：３カ月後, 産子Ｂ：１カ月後考察

びその産子の感染状況を確認することは, 本病清浄化

BLV抗体陽性母牛約19％の産子からBLV遺伝子が対策の一助となると考えられた.

検出された. それは, 産子の抗体検査成績を指標とし謝た既報 [5, 8, 9] のそれ (４〜７％) と比較して高辞かった. BLV実験感染において, ウイルス接種後,稿を終えるにあたり, 本調査に御助言頂いた岩手大

PCR法でBLV遺伝子が検出され始めた時期は接種後学農学部共同獣医学科の村上賢二先生に深謝いたしま

２週間後以降であったとの報告があり [7], 本調査です.

は, 出生後12時間以内に採取した白血球を用いたことから, 産子は, 産道又は乳汁を介した感染ではなく,引用文献子宮内感染を示すものと考えられた. さらに, 初乳未[１] 村上賢二, 小林創太, 筒井俊之：日獣会誌, 62,摂取のBLV感染産子５頭中３頭が出生直後に感染抗体を保有していたことも, これを裏付けていた.

499-502 (2009)[２] O. M. Radostits：Veterinary Medicine, Vol.

BLV抗体の産生には, 感染から４〜14週間を有する[2, 10] ことから, 出生直後産子については, 抗体検査のみでは感染を正確に把握できないことが知られている. 本調査のBLV感染産子のうち, 初乳未摂取の５頭中２頭は, 出生直後には抗体陰性であったが, ３か10, 1209〜1221, Saunders, (2007)[３] 小沼操, メアスソティ：家畜診療, 47, 163173 (2000)[４] Agresti A, Ponti W, Rocchi M et al.：AmJ Vet Res, 54, 373-378 (1993)

月後に再検査を実施した１頭は陽転が確認された.

[５] Lassauzet ML, Thurmond MC, Johnson

Agresti らは, PCR法により感染が確認された産子５

WO et al.：Can J Vet Res, 55, 264-268,

頭中２頭が, 出生時には抗体が検出されず, ６か月齢時には陽転したことを報告している [4]. これらのことから, 産子の感染の把握には, 遺伝子検査が必要であり, 本調査で得られた成績はより正確に産子の感染(1991)[６] Licursi M. et al.：Virus Res, 86, 101-110(2002)[７] Dusty W. Nagy et al.：Am J Vet Res, 68,72-75 (2007)

状況を把握したと考えられた.
産子の感染率は, 母牛のECの鍵が陽性及び疑陽性[８] Thurmond MC, Cater RL, Puhr DM et al.：の場合に, 正常群よりも有意に高く, リンパ球数が増

Can J Comp Med, 47, 316-319 (1983)

多したPL牛において高い成績を示した既報 [4, 5][９] Van der Maaten MJ, Miller JM, Schmerrと同様の成績であった. さらに母牛のBLV遺伝子量は,

MJ et al.：Am J Vet Res, 42, 1052-1054

産子に感染が認められた場合に有意に多い結果が得ら(1981)れるとともに, 母牛のBLV遺伝子量と母牛のリンパ球数との間には正の相関が認められた. これらの成績か
ら, 産子のBLV感染率は母牛の感染状況に大きく影響されると考えられ, ECの鍵に基づくリンパ球数の評価に加え, リアルタイムPCRによるBLV遺伝子量の測定は, PL牛等の子宮内感染の可能性が高い母牛の特定に有用であると考えられた.
本研究により, PL牛及びウイルス量の多い感染ハイリスク牛の割合が高い農場では, 子宮内感染の発生率が高いことが示唆されたことから, これらの把握及― 48 ―[10] Burridge MJ, Thurmond MC, Miller JM etal：Can J Comp Med, 46, 270-271 (1982)