岩獣会報 (Iwate Vet.), Vol. 39 (№ 1), 16−19 (2013).

原著

岩手県における牛トロウイルスの初分離事例と浸潤状況

八重樫岳司

要福成和博

佐々木家治

約2010年11月, 肉用繁殖農場の下痢症状を呈した４〜８カ月齢の育成牛の糞便から牛トロウイルス (BoTV)が分離され, 県内で初めてBoTVの下痢症への関与が確認された. 88農場455頭の血清を用いたBoTVの浸潤状
況及び農場内動態調査の結果, 県内全域への高度な浸潤 (農場陽性率98.9％) が確認された. また, 加齢に伴う抗体価の上昇が認められ, 経時的に追跡した５農場では, 野外ウイルスの再感染を示す抗体価の有意上昇が認められた. 他の18農場の育成牛を追跡した検査では, 移行抗体価は４カ月齢で低下し, 10カ月齢以降に感染抗体が認められた. 下痢又は呼吸器病を呈した症例の材料を用いた回顧的検索において, 同ウイルスは検出されなかった. 初確認事例の症状の顕性化の要因として, 寒冷などのストレス及び他の病原体の複合的な関与が推察された.
キーワード：牛トロウイルス, 下痢症

牛トロウイルス (BoTV) は, コロナウイルス科に週間で終息した. 畜主が家畜商である当該農場では牛属するウイルスで, 下痢や呼吸器病を引き起こすことの移出入が頻繁に行われていた. 病性鑑定は, 発症牛が知られているが [1−4], 牛のコロナウイルスとはの下痢便及び経過血清を検査に用いた. ウイルス遺伝免疫原性が異なる. 従来はウイルス分離が困難であっ子の検索はTRIzol LS (INVITROGEN) により下痢たが, 2004年, 愛知県において初めて分離されたのち便からRNAを抽出し, BoTV [7], 牛A群ロタウイル[5], 同ウイルスは日本に広く浸潤し [5, 6], 子牛,ス (GARV) [8], 牛B群ロタウイルス (GBRV), 牛

特に２週齢以下の子牛下痢の原因の一つであることがC群ロタウイルス (GCRV) [9] 及び牛コロナウイル報告されている [3]. しかし野外における発生例やウス (BCV) [10] の各ウイルス遺伝子特異プライマー

イルス分離例の報告はいまだ少なく, 同ウイルスの県を用いたRT-PCR (OneStep RT-PCR Kit, QIAGEN)

内への浸潤状況及び関与した下痢の発症の実態は不明を行った. 検出されたBoTVのS遺伝子領域のRT-PCRであり, 発生に至る要因についても十分に検討されて産物は, ダイレクトシーケンスを実施し, 得られた塩いない.

基配列を解析した. BoTVの分離は, 愛知県から分与

2010年11月に県内においてBoTVが関与した症例にされたHRT18細胞を用い [5], 牛ウイルス性下痢ウ初めて遭遇したことから, 県内の浸潤状況及び農場内イルス (BVDV) の分離は牛胎子筋肉細胞及びBVDV実態について調査し, その成績から発症要因についてNose株を用いた干渉法 [11] で実施した. 抗体検査

検討した.

は, BoTV (Aichi/2004株), BCV, BVDVの１型及び２型並びにアデノウイルス７型 (Ad7) を用いた中和材料および方法試験又はGARVを用いた赤血球凝集抑制試験により実病性鑑定：2010年11月, 黒毛和種20頭を飼養する繁殖施した. 細菌及び寄生虫の検索は定法により実施した.

農場において, ４〜８カ月齢の育成牛６頭が一斉に茶BoTVの浸潤状況及び動態調査：浸潤状況調査は, 平

褐色の泥状ないし水様の下痢を発症した. ３日後には,成22年８月から平成23年12月にかけて県内全市町村88成牛１頭にも下痢が認められた. 対症療法により約１農場で飼養される牛455頭 (実頭数) から採取された

岩手支会

岩手県中央家畜保健衛生所病性鑑定課 (〒020-0173― 16 ―

滝沢村字砂込390-5)

血清を材料とした. 動態調査は, 平成21年９月から平上昇が確認された. 他の病原体は検出されず, 抗体価

成22年10月にかけて酪農５農場の成牛各10頭から経時の有意な上昇や生化学的な異常値も確認されなかった.

的 (５回) に採取した血清及び平成23年６月から11月分離されたBoTVのＳ遺伝子 (665bp) の解析の結果,にかけて酪農18農場の１〜12カ月齢までの育成牛各３国内の牛から検出された既知株と95.9〜97.0％の相同頭から経時的 (４回) に採取した血清を材料とした.

性を有し, 2004年に愛知県で分離された株 [5] と最抗体価の測定はBoTV及びHRT-18愛知細胞 [5] を使も近似 (97.0％) した (図１).

用したウイルス中和試験 (マイクロタイター法) で行った.

BoTVの浸潤状況及び動態調査成績：県内全域の88農病性鑑定材料の回顧調査：2009年〜2011年までに呼場455頭のうち, BoTVに対する抗体保有率は, 農場

吸器病及び下痢の病性鑑定を行った24農場の131頭かレベルで98.9％, 頭数レベルで94.3％であり極めて高ら採取された牛の鼻腔スワブ又は糞便をBoTVの検索

い浸潤状況を示した (表１). 抗体が陰性であったのに用いた. また, これらの症例から得た経過血清につは１農場のみであった. 年齢別では０−５カ月齢 (110

いて前述の方法により抗体検査を行った.

頭) で陽性率97.3％ (幾何平均抗体価GM29), ６−10
カ月齢 (128頭) で陽性率89.1％ (GM18), １歳齢

成績(60頭) で陽性率86.7％ (GM54), ２歳齢 (56頭) で初発事例の病性鑑定成績：成牛１頭を除く, ６頭の糞陽性率98.2％ (GM73), ３歳齢 (51頭) で陽性率100

便からBoTV及びGARVの遺伝子が検出され, うち２％ (GM113), ４歳齢以上 (50頭) で陽性率100％

頭からはBoTVが分離された. 血清からBVDVは検出(GM182) といずれも高値の陽性率で, GM値は加齢されなかった. ウイルス抗体検査では, BoTV (５頭),に伴い上昇する傾向を示した (表２).

BVDV (４頭) 及びGARV (２頭) に抗体価の有意な

図１

分離株及び参照株の分子系統樹
表１

検５農場の成牛各10頭を一年間追跡した抗体検査成績

浸潤状況

査

陽性陽性率

地域

中

央

36

217

36

209

100.0%

96.3%

県

南

32

148

31

134

96.9%

90.5%

県

北

20

90

20

86

100.0%

95.6%

全

県

88455

87

429

98.9%

94.3%

戸数

表２頭数

戸

数

頭数

戸数

頭

月年齢別の陽性頭数, 陽性率､ 幾何平均 (GM) 値

月年齢区分

検査頭数

陽性頭数

陽性率

GM値

０-５カ月齢

110

107

97.3%

29

６-10カ月齢

128

114

89.1%

18１歳齢

60

52

86.7%

54

２歳齢

56

55

98.2%

73

３歳齢

51

51

100.0%

113

４歳齢以上4949100.0%

18245442894.3%

44

全体― 17 ―数

表３
農場区分

５農場の成牛の抗体価 (ＧＭ値) の推移
平 成 21 年

平 成 22 年

９月９日

10月９日

10月31日

３月17日

Ａ

355424431

Ｂ3891

21235

70Ｃ12855870215

91

Ｄ7083

32215

45Ｅ

76995948

図2

10月26日

移行抗体及び感染抗体の推移

では, 全農場の各２頭から10頭に有意な抗体上昇が認抗体の上昇は4頭に認められたが, 検索した範囲ではめられた. とりわけ３月に採取された血液に高い抗体

牛群内にBVDV持続感染牛の存在は確認できなかった.

価が認められる傾向があった (表３). 追跡期間中こ

近年, 新潟県において成牛の下痢へのBoTVの関与もれらの牛に下痢は認められなかった.

報告されている. 今回の事例の成牛からはウイルスが18農場の育成牛を追跡した結果, およそ４カ月齢で検出されず, 成牛が呈した下痢症状への関与は特定で移行抗体価の低下が認められた. また, 10農場 (陽転きなかったが, 下痢を呈する育成牛からBoTVが分離群) で抗体価の有意な上昇が認められたが, ８農場されたことから, BoTVが強く関与した下痢症の県内(陰転群) では確認されなかった. 前者では初期の移初の事例と考えられた.

行抗体価が高く, 後者と比較して移行抗体価の低下月BoTVの県内全域への高度な浸潤が確認された. 年

齢が延長し, およそ約８カ月齢時に抗体価の有意な上齢別に, 加齢に伴う抗体価の上昇傾向が認められ, 追昇が認められた (図２).

跡した５農場の成牛においても, 野外ウイルスの再感病性鑑定材料の回顧調査：過去の病性鑑定例24農場

染を示す抗体価の有意上昇が認められた. これらの成131頭の材料からBoTVは検出されなかった. 呼吸器

績は, 既報 [1, 5] と一致していた. 抗体が低下した又は下痢症状を主徴としたRSウイルス感染症 (１例),

牛は, 農場内に常在する又は新たに侵入したBoTVのコロナウイルス感染症 (２例), 原因特定に至らなかっ

感染を受け, 不顕性感染を繰り返し, 追加免疫を獲得た２例の計５農場7頭の経過血清に抗体価の有意な上していることを示唆していた.

昇が確認された.

育成牛の移行抗体は, およそ４カ月齢時までに低下し, 野外感染により10カ月齢以降には抗体を獲得する
考察実態が確認された. 特に高い移行抗体を保有していた

2010年11月に４〜８カ月齢の育成牛６頭及び成牛１10農場では, 後に抗体価の有意な上昇が認められ, 農頭が呈した下痢症例において, 育成牛の糞便からBoTV場内に高度にウイルスが浸潤していることが示唆され及びGARVの遺伝子が検出され, うち２頭からBoTVた. これらの農場では移行抗体価が消失する前にウイが分離された. また, BoTV及びGARVのそれぞれ５頭

ルス感染が起こっているように思われた. BoTV抗原及び２頭に抗体価の有意な上昇が認められた. BVDVの検出は３週齢以前に多く [1], 移行抗体では完全に― 18 ―

感染防御できないことが報告されている [7]. しかし,

引用文献

本調査の10農場では, 移行抗体が一定の程度まで低下[１] Hoet AE, Nielsen PR, Hasoksuz M, Thomas

した後に抗体価の陽転が確認されたことから, 移行抗C, Wittum TE, Saif LJ：J Vet Diagn Invest,

体はウイルスの初感染に少なからず防御の役割を果た

15, 205-212 (2003)

しているように思われた. 野外において子牛がBoTV[２] Scott FMM, Holliman A, Jones GW, Gray EW,の感染を受ける時期は, 移行抗体価のレベル及び農場

Fitton J：Vet Rec, 138, 284-285 (1996)

内ウイルスの汚染の程度が深く関連しているように考[３] Kirisawa R, Takeyama A, Koiwa M, Iwai H：えられた.

J Vet Med Sci, 69, 471-476 (2007)

野外の牛の多くがBoTVに感染していながらも, ほ[４] Vanopdenbosch et al：Vet Rec, 129, 203

とんどが不顕性を示す一方で, 少数が下痢を発症する
要因については十分に検討されていない [3]. Hoet

(1991)[５] Kuwabara M, Wada K, Maeda Y, Miyazaki

らは, 他の病原体と混合感染した場合に症状が重度化

A, Tsunemitsu H：Clin. Vaccine Immunol,することを述べるとともに, 寒さが感染リスクの増加

14, 998-1004につながる可能性を報告している [1]. また, 本調査[６] Woode GN, Saif LJ, Quesada M, Winand NJ,

においても, 牛の移出入が頻繁に行われていた農場のPohlenz JF, Gourley NK：Am J Vet Res, 46,

背景から, 今回の下痢にBoTV及びGARVの感染が複1003-1010 (1985)

雑に関与したことが疑われた. 県内の初確認事例の発[７] Hoet AE, Smiley J, Thomas C, Nielsen PR,

生時期は11月下旬であり, 寒暖差が激しかったこ

Wittum TE：Am J Vet Res, 64, 485-490とを気象データにより確認できている. これらのこと(2003)

より, １症例の成績ではあるが, BoTVによる下痢の[８] Chinsangarm Vet Diagn Invest, 6, 302-307

発症には, 寒冷などのストレス及びGARV及びBVDVなどの他の病原体の感染が複合的に関与したのかもし(1994)[９] Tsunemitsu H, Jaing B, Saif LJ：Arch Virol,141, 705-713 (1996)

れない. BoTVが症状を発現する要因については, 今[10] Tsunemitsu H, Smith DR, Saif LJ：Arch Virol,後, 引き続き検討する必要があると考えられた.

144 (1), 167-175 (1999)
謝辞[11] Shimizu M, Satou K：Jpn J Vet Sci, 49,104551 (1987)

BoTV (Aichi/2004) 及びHRT18細胞 (愛知株) を分与していただいた愛知県中央家畜保健衛生所の皆様に深謝する.

サスカチュワン州で発生した封入体肝炎と関連する
鶏アデノウイルスの病型的および分子生物学的特徴
Dar A , Gomis S , Shirley I , Mutwiri G , Brownlie
R , Potter A , Gerdts V, Tikoo SK(サスカチュワン州立大学, カナダ)
Avian Dis, 56, 73-81 (2012)
封入体肝炎 (IBH) は, カナダとアメリカにおける養鶏産業において重大な経済的損失を引き起こす,主要な世界的疾病問題の一つである. 疾病は, 突然の発症と高致死率に特徴づけられる. IBHに関連する鶏アデノウイルス (FAdVs) の異なる血清型の中では, グループ1のFAdV血清型８が多くのIBHの症例から分離されている. この研究では, 私たちはFAdVをサスカチュワン州農場の17日齢ブロイラーの肝臓から分離した. 新しく分離されたウイルスは,IBHV (SK) と名付けられた. しかし, ヘキソン遺伝子のL1部位の配列解析に基づくと, IBHV (SK)はFAdV血清型８bの764株に分類される. これらの研究は, FAdV血清型８bの完全なヘキソン遺伝子配列を初めて解析したものである. ２日齢 (n=48)と２週齢 (n=56) の雛における実験的感染では,83％と43％の致死率であった. 鶏における疾病モデルの確立に伴うIBHV (SK) の完全なヘキソン遺伝子の決定は, 型特異的な診断試薬の進展と病原性F
AdV感染に対する実験的ワクチンの評価のための分析を容易にするであろう.
(岩手大学獣医病理学研究室)― 19 ―