岩獣会報（Iwate Vet.）,Vol. 47（№ 2）, 57 － 61（2021）.

原著

岩手県南地域において分離された Mycoplasma bovis の薬剤感受性調査戸塚知恵 1），大山貴行 1），秦要英司 2）約2015 年度から 2020 年度までに岩手県南地域 13 戸 27 頭から分離された Mycoplasma bovis 計 28 株の薬剤感受性及び感受性低下に関わる点突然変異を調査した．16 員環マクロライド系及びテトラサイクリン系抗菌剤には全株が低感受性を示し，これに関連する点突然変異が認められた．加えて，15 員環マクロライド系抗菌剤には 2 戸 2 株，フルオロキノロン系抗菌剤には 1 戸 4 株，フェニコール系抗菌剤には 1 戸 3 株が低感受性を示し，関連する点突然変異はフルオロキノロン系抗菌剤の低感受性株にのみ認められた．背景には抗菌剤使用による選択圧があったと考えられ，M. bovis 感染牛の治療の際は，原因菌の特定と感受性試験結果に基づく適切な薬剤選択が治癒率の向上及び薬剤耐性化を防ぐために重要である．
キーワード：Mycoplasma bovis，薬剤感受性，抗菌剤，点突然変異

Mycoplasma bovis は，牛呼吸器病症候群（BRDC）

る M. bovis 野外株が広く浸潤している．また，フルの原因菌の一つであり，牛に重篤な呼吸器病を引き起オロキノロン系抗菌剤に対する低感受性 M. bovis 野こすほか，中耳炎，関節炎，乳房炎等様々な疾病の原外株も散見される［3］．治療に用いる抗菌剤の選択に因となる．これらの疾病は短期間にまん延し難治性症は各地域における薬剤感受性傾向の把握が不可欠であ例が多いため，経済的被害が大きい．M. bovis 感染予るが，県南地域における M. bovis 野外株の薬剤感受防を目的としたワクチンは存在するが，安定した効果性傾向は未だ知られていない．そこで，薬剤感受性及は期待できない．そのため，感染牛の摘発と隔離・淘び感受性低下に関わる点突然変異調査を実施し，既報

汰が主な対応策となるが，抗菌剤による治療が施され［3］の国内調査結果と比較するとともに，管内家畜診る場合もある［1, 2］．

療所で用いられる抗菌剤の使用実態との関連性を検討

マイコプラズマにおける薬剤感受性低下は，抗菌剤した．

が作用するリボソーム及び各種蛋白質遺伝子の突然変異による変化が主な原因となる．これら遺伝子変異と材料と方法影響を受ける抗菌剤の種類の相関関係は一部特定さ供試株：2015 年度から 2020 年度までに県南地域の 13

れ，当該遺伝子変異の検出により，病原菌株の薬剤感

戸 27 頭（黒毛和種 13 頭，ホルスタイン種 10 頭，交受性を概ね把握できる［3, 4］．1999 年以降わが国では，雑種 4 頭）から分離された M. bovis 計 28 株を用いた．

マイコプラズマ疾病の主な治療薬である 16 員環マク

これら野外株の由来は，何らかの臨床症状（呼吸器症

ロライド系やテトラサイクリン系抗菌剤に対し，これ状，中耳炎，乳房炎等）を呈した際に採取された鼻腔

ら抗菌剤の低感受性化に関わる点突然変異を保有す

スワブ（7 株），肺（10 株），耳管洗浄液（4 株）及び

1）岩手支会

岩手県県南家畜保健衛生所〒 023-0003

奥州市水沢佐倉河字東舘 41-1

連絡担当者（E-mail）：戸塚知恵（murai-c@pref.iwate.jp）
2）国立研究開発法人

農業・食品産業技術総合研究機構

動物衛生研究部門

疾病対策部生物学的製剤製造室製造科兼動物感染症研究領域細菌グループ― 57 ―

乳汁（7 株）であった．

ニルアラニンへの変異及びトポイソメラーゼ（ParC）

薬剤感受性試験：微量液体希釈法により最小発育阻の 80 番目セリンのイソロイシンへの変異が確認され，止濃度（MIC）を測定した［5］．本試験には，タイ

MIC の結果とも一致した．一方，B 農場及び C 農場

ロシン（TS），チルミコシン（TMS），ガミスロマイの 2 株では GyrA の 87 番目グルタミン酸のバリンへシン（GAM），オキシテトラサイクリン（OTC），エの変異が認められ，ParC については A 農場由来株とン ロ フ ロ キ サ シ ン（ERFX）， マ ル ボ フ ロ キ サ シ ン

同様の変異が認められた．しかしながら，これらは（MAR），チアンフェニコール（TP），フロルフェニ

高度感受性低下に関与する組み合わせでなく，MICコール（FFC）の 8 薬剤を用いた．それぞれの MICはわずかな高値を示すのみであった（B 農場由来株

を M. bovis 基準株（PG45）と既報［3］の国内野外

MIC ERFX：8μg/ml，MAR： ≦ 0.125μg/ml，C 農株 MIC 分布と比較し，明らかに高値の MIC を低感受場由来株 MIC ERFX，MAR それぞれ 4μg/ml）．

性と判定した．薬剤感受性低下に関与する点突然変異

15 員環マクロライド系（GAM）及びフェニコール

調査は，各農場から抽出した計 15 株について既報［3］系抗菌剤（TP，FFC）に対する明らかな低感受性株に従い実施した．

は， そ れ ぞ れ 2 戸（D 農 場，E 農 場 ）2 株 及 び 1 戸

抗菌剤の使用実態調査：管内 4 診療所に所属する獣医（F 農場）3 株で認められた（D 農場及び E 農場由来

師 6 名を対象に聴き取り調査を実施した．

株 MIC GAM：それぞれ 128<μg/ml，F 農場由来株
MIC TP，FFC：32〜64μg/m）．これらに関連する成績

点突然変異は確認されなかった．

薬 剤 感 受 性：16 員 環 マ ク ロ ラ イ ド 系 抗 菌 剤（TS，抗菌剤の使用実態：管内では，抗菌剤の使用指針を定TMS） 及 び テ ト ラ サ イ ク リ ン 系 抗 菌 剤（OTC） のめている診療所はなく，獣医師個人の裁量で抗菌剤のMIC はいずれも全株が高値を示し，既報［3］と同使用が決定されていた．様々な臨床症状の発現は，獣等の値であった（表 1，図 1）．16 員環マクロライド

医師が抗菌剤治療を実施する契機となっていたが，と系抗菌剤の低感受性化に関わる 23S リボゾーム RNA

りわけ発熱は抗菌剤治療の実施を決断する臨床症状と

遺 伝 子（rrl） の 748 番 目 の グ ア ニ ン（rrlG748） にして最も多く挙げられた．他にも呼吸器症状（気管雑おける点突然変異及びテトラサイクリン系抗菌剤音，肺雑音，呼吸速迫）や食欲低下などの全身状態のの低感受性化に関わる 16S リボゾーム RNA 遺伝子悪化も抗菌剤治療実施の契機となっていた．中耳炎（rrs）の 965 番目及び 967 番目のアデニン（rrsA965，（耳漏，耳下垂）はマイコプラズマ感染を疑う主症状

rrsA967）における点突然変異が全株に確認された．

であるが，原因菌が他の一般細菌であっても，マイコ

フ ル オ ロ キ ノ ロ ン 系 抗 菌 剤（ERFX，MAR） のプラズマ感染の場合と同様に第一選択薬としてフェニ

MIC 分布は二峰性であり，1 戸（A 農場）4 株の MIC

コール系抗菌剤，第二選択薬としてフルオロキノロンが 明 ら か な 高 値 を 示 し た（ERFX：16〜64μg/ml，系抗菌剤が多く使用されていた．獣医師によっては，MAR：64μg/ml）．加えて，これら A 農場由来株で16 員環マクロライド系抗菌剤の使用も認められ，第は，高度感受性低下に関与する変異の組み合わせであ一選択薬及び第二選択薬に同系統の抗菌剤を用いている DNA ジャイレース（GyrA）の 83 番目セリンのフェる場合もあった（表 2）．

表 1．8 抗菌剤に対する管内 M. bovis 野外株の MIC 範囲，MIC50 及び MIC90

MIC（μg/ml）

抗菌剤名

範囲

MIC50

MIC90

MICPG45TS2-12832640.5TMS32-128<128 ＜128<1OTC2-328320.5GAM0.25-128<86432ERFX≦ 0.125-160.5161MAR≦ 0.125-640.5640.5TP2-648164FFC≦ 0.125-64484― 58 ―

TS
MIC90: 64μg/ml

菌株数（205MIC90: 32μg/ml

72=n128

128<64321684215

各グラフの縦軸は菌株数、横軸は最⼩発育阻⽌濃度 MIC(μg/ml)
：⾁⽤⽜

：乳⽤⽜
図1：PG45 の MIC

各抗菌剤の MIC 分布と分離株の由来― 59 ―128<12864128<128643216842128<1286432

168402128128<6432168425182=n）

82=n82=n）0MIC90: 8μg/ml

0.55

1

MIC50: 4μg/ml

0.25

MIC90: 16μg/ml

0.5FFC

10

菌株数（

菌株 数 （MIC50: 8μg/ml

1128<128643216842

10.50.25

TP00.582=n））0≦0.125

50.25

20.25

MIC90:64μg/ml

104≦0.125

32

1684210.50.25

128<128

6432

1684210.5

MIC90: 16μg/ml

菌株数（

菌株数（

MIC50:0.5μg/ml≦0.12582=n≦0.125

MIC50: 0.5μg/ml≦0.12582=n0.25MAR156100≦0.125））

ERFX

8150.52020

MIC90: 64μg/ml

4410MIC50: 8μg/ml

6

菌株数（菌株数（26GAM

8MIC50: 8μg/ml

10OTC

8MIC90: 128μg/ml<0.25128<12864328164210.50.25≦0.125））010

MIC50: 128μg/ml<

1082=n

菌株数（

10MIC50: 32μg/ml≦0.125

15TMS30

表 2．管内診療所における抗菌剤選択実態

獣医師

呼吸器病治療の薬剤

マイコプラズマ治療の薬剤

第一選択

第二選択

第一選択

第二選択

AFFC

ERFX, MARERFX, MAR

ERFX, MAR

B

TMS

TS

MAR, ORFX

FFC

C

FFC

ERFX

TP

ERFX

D

FFC

ERFX

FFC

ERFX

E

TPFFC

TP

FFC

F

FFC

ERFX

FFC

OTC, TMS

考察

る低感受性株では rrlA2062 における点突然変異の出わが国では，16 員環マクロライド系及びテトラサ

現が報告されている［11］．本調査において，これらイクリン系抗菌剤に対する低感受性株が蔓延している

点突然変異は確認されなかった．15 員環マクロライが，県南地域においても同様であった．

ド系抗菌剤に対する低感受性株が分離された D 農場

フルオロキノロン系抗菌剤の MIC 分布は既報［3］及び E 農場では，同抗菌剤の使用歴は確認できなかっと異なり二峰性であったが，本調査では少数の高度低たが，いずれも複数農場から牛の導入がある肥育農場感受性株が存在したためであり，MIC50 値は既報と同であった．導入元における抗菌剤使用実態は不明であ等であったことからも概ね同抗菌剤に対する感受性はるが，今回の検索領域とは別領域において点突然変異良好と思われた．M. bovis のフルオロキノロン系抗菌の影響があった可能性も考えられた．フェニコール系剤の感受性低下には，GyrA 及び ParC のキノロン耐抗菌剤に対する低感受性株が分離された F 農場では性決定領域におけるミスセンス変異の共存が関与し，毎年呼吸器病が流行しており，治療に伴う抗菌剤の選両者の組み合わせにより感受性低下の度合いが異な択圧があった可能性が高いと思われた．

る［3］．本調査においても，確認された変異の組み合マイコプラズマの場合，in vitro における薬剤感受わせと MIC 値の上昇度合いが一致する結果であった．

性の評価には，CLSI が規定するブレイクポイントの抗菌剤の使用量の増加は，薬剤耐性菌の選択圧を高め設定がないが，BRDC の起因菌であり呼吸器疾患のることが知られており，疫学的には抗菌剤の使用量と病原体である Pasteurella multocida のブレイクポイ

薬剤耐性菌の出現との間に正の相関関係がある［6］．

ントが参照される［8］．これに基づく場合，FFC のフルオロキノロン系抗菌剤に対する低感受性株は，全有効 MIC 値は 2μg/ml 以下であり，8μg/ml 以上のて肉用牛由来であった（図 1）．A 農場では同居牛の場合に耐性と推測される［9］．本調査の FFC（MIC90）治療に伴う抗菌剤の選択圧があったと推察され，感受は 8μg/ml であり，既報［3］の M. bovis 野外株にお性回復のため他の抗菌剤への転換が必要と考えられいても高い MIC90 値（16μg/ml）が報告されている．

た．動物用医薬品として承認されているフルオロキノ

in vitro の結果が必ずしも生体内での有効性と一致す

ロン系注射薬のうち，原末換算としての年間使用量るわけではないが，フェニコール系抗菌剤の有効性に（販売量）は，エンロフロキサシンは肉用牛（550kg）

ついては今後も動向を注視する必要があると思われと乳用牛（398kg）間において大きな差はないが，マた．

ルボフロキサシンは肉用牛（409kg）に対して乳用牛農林水産省が示す抗菌性物質の使用指針において，では使用されていなかった［7］．県内での使用実態もマイコプラズマによる呼吸器病，中耳炎及び乳房炎の同様の傾向があるとした場合，この使用量の差によ治療には，16 員環マクロライド系及びテトラサイクり，肉用牛では乳用牛と比較してフルオロキノロン系リン系抗菌剤が推奨されている［10］．本調査結果か抗菌剤に対する低感受性株が分離される頻度が高いとら，岩手県南地域に蔓延している野外株に対し，これ考えられるため，治療の際には原因菌株の感受性の確らの薬剤はほぼ無効であることが判明した．したがっ認が特に重要と思われた．て，第一選択薬にはフェニコール系抗菌剤，第二・三rrlA2058 及び rrlA2059 における点突然変異はマク

選択薬にはフルオロキノロン系抗菌剤及び 15 員環マロライド系抗菌剤及びリンコサミド系抗菌剤全般の低クロライド系抗菌剤が有効であると思われた．同じ系感受性化に関与し［3］，フェニコール系抗菌剤に対す統の薬剤は同様の感受性傾向を示すことから，第一選― 60 ―

択薬と第二選択薬は異なる系統を選択することがより［₅］Hannan PCT：Guidelines and recommnendations

効果的である．

for antimicrobial minimum inhibitory concentration

以上から，マイコプラズマの治癒率を向上させるた（MIC）testing against veterinary Mycoplasma

め，また，効果が期待できない抗生剤の不必要な使用

species：Vet Res, 31, 373-395（2000）を避けるため，原因菌の検索及び感受性試験結果に基［₆］田村豊：動物用抗菌剤の使用動向と薬剤耐性菌

づき適切に薬剤を選択することの重要性が改めて確認対策―特に診療獣医師の果たす役割について―，された．M. bovis は臨床症状のない牛の上部呼吸器や日獣会誌，56, 685-691（2003）

肺及び乳汁中からも分離される［2］．今後はそれらの［₇］農林水産省動物医薬品検査所：動物用医薬品，牛の鼻腔スワブ及びバルク乳を用いたモニタリング検

医薬部外品及び医療機器販売高年報（別冊），各

査により M. bovis 感染状況及び薬剤感受性動向の継種抗生物質・合成抗菌剤・駆虫剤・抗原虫剤続的な把握に努めていきたい．の販売高と販売量，令和元年（2019），動物医
薬品検査所 HP（オンライン），（https://www.

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