岩獣会報 (Iwate Vet.), Vol. 38 (№ 2), 49−53 (2012).

原著

岩手県における肉用牛のヨーネ病対策の成果と課題

要

井戸徳子, 佐藤裕夫, 佐々木大山貴行, 熊谷芳浩, 高橋幸治, 長山玲子, 昆野勝,真紀, 八重樫岳司, 千葉伸

約平成20年度から23年度にかけて, 家畜伝染病予防法に基づき6,652戸39,346頭の本県肉用繁殖牛についてヨーネ病検査を実施し, 27戸40頭の患畜及び23戸34頭の自主淘汰牛を診断した. 患畜40頭中33頭 (82.5%), 自主淘汰牛34頭中24頭 (70.5%) では, PCR, 細菌分離, 病理検査などELISA以外のいずれかの検査により本病の感染を示す所見が認められた. 病変を有する患畜及び自主淘汰牛には, 糞便のリアルタイムPCRにより, 淘汰基準値に近い10−３pg/well以上の遺伝子量が認められた. 以上より, 患畜及び淘汰対象牛が的確に診断及び淘汰され, 本県の肉用牛における本病清浄化が確実に推進されたものと思われた.
キーワード：肉用牛, ヨーネ病, リアルタイムPCR, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis

ヨーネ病はMycobacterium avium subsp. paratuber-了したことから, 本病の今後の防疫対策に資すること

culosis (Map) の感染によって起こる数年の長い潜伏を目的に, 患畜及び自主淘汰牛の病性鑑定成績並びに期と難治性の下痢及び削痩を特徴とする反芻獣の慢発生農場での追跡検査成績を整理したので報告する.

性消耗性疾患である [1, 2]. 牛では泌乳量の低下,増体率の低下及び淘汰等により多大な経済的損害がも材料及び方法たらされる [2−4]. 特に和牛では, 感染母牛からの患畜：平成20年度から23年度の間に, 岩手県内で本病長期哺乳と接触によって重度に感染し, 乳牛と比較しと診断された肉用牛27戸40頭を検査に用いた.て進行が早く, 生産性への影響が大きいことが知られ自主淘汰牛：患畜が摘発された農場の検査において,ている [3]. 高橋ら [3] は, 肉用一貫経営農場にお患畜産子, 糞便中Map遺伝子量が基準値 (5.0×10−３ける発生事例から, １頭あたりの損失額を増体減少がpg/well) 以上の牛 (基準値以上牛) 及び疫学的に強98,200円, 早期淘汰が383,000円と算出している.
岩手県では乳用牛を対象に, 家畜伝染病予防法 (法)第５条に基づく検査と防疫対策により, 平成10年度から清浄化を進めてきたが, 平成16年度以降, 肉用牛での本症の発生事例が増加した (図１). 畜産県を標榜する本県では, 肉用牛のブランドイメージを死守し,安定生産及び供給を維持するため, 早急に本症の防疫対策を確立する必要に迫られた. そこで, 平成20年度から肉用牛を対象とした法５条に基づくヨーネ病検査(５条検査) を開始し, 平成23年度までに 6,652戸39,346頭を検査し, １クール目を終了した. 平成24年度以降は, ５年間隔で第２クール目の本検査を継続している.
今回, 肉用牛繁殖農場における県内一巡の検査が終岩手支会, 岩手県中央家畜保健衛生所― 49 ―

図１

岩手県のヨーネ病発生状況 (H16-H18)

表１

患畜及び自主淘汰牛の検査項目及び摘発頭数

患畜
検 査 項 目培

患 畜 区 分養病理５

rPCR＋＋＋＋

16112

29 (72.5)

＋＋＋

−

0

20

2 ( 5.0)

＋

−−＋

1

00

1 ( 2.5)

＋＋

−

−

100

1 ( 2.5)

＋−

−

−

700

7 (17.5)

25

13240

計条

51条

病

鑑計 (％)

ELISA

自主淘汰牛
検 査 項 目培自主淘汰区分

ELISArPCR

養−＋＋−＋−＋−＋−−

病

理計 (％)

患畜産子

基準値以上

その他＋

54211 (32.4)＋−

3126 (17.6)

−

−

0

10

1 ( 2.9)−＋−100

1 ( 2.9)

＋＋

−

500

5 (14.7)

−−

計

1000

10 (29.0)246434

成く感染が疑われる牛 (その他疫学関連牛) の計23戸34績

頭を自主淘汰牛として検査に用いた.

患畜及び自主淘汰牛の摘発と防疫対策の状況：患畜お細菌学的検査：法５条及び51条に基づく発生農場の追よび自主淘汰牛の検査項目および摘発数を表１に示し

跡検査 (51条検査) における抗体検査は, 家畜伝染病

た. ４年間で27戸40頭の患畜を摘発した. 患畜の摘発

予防法施行規則別表第１に基づき, 血清を用いてヨー根拠の内訳は, ５条検査が25頭, 51条検査が13頭, 病

ネスクリーニング・プルキエ (㈱京都微研) によるス性鑑定が２頭であった. ５条検査における摘発率は,クリーニングELISA検査を実施後, 陽性を示した検戸数ベースで0.3%, 頭数ベースで0.06%であった. 発体についてヨーネライザⅡ (共立製薬㈱) による確定

生農場のうち, 23戸34頭を自主淘汰牛として処分した.

ELISA検査を行った. 51条検査における糞便中ヨーその内訳は, 患畜の産子が24頭, 基準値以上を示した

ネ菌遺伝子量は, (独) 動物衛生研究所が示すヨーネ牛が６頭, その他疫学的に関連があった牛として４頭病検査マニュアル (マニュアル) に基づきリアルタイを淘汰処分した. その結果, 発生農場27戸のうち, 18

ムPCR法 (rPCR) により測定した. 本検査は, 発生戸は平成24年３月までに岩手県牛ヨーネ病防疫対策要から１年以内は３カ月間隔で実施し, 続発がない場合,領に基づき清浄化が達成された.

２年目以降は６カ月間隔で実施した. 患畜及び自主淘

患畜及び自主淘汰牛の病性鑑定成績：患畜は, 40頭中汰牛の精密検査は, 剖検後, マニュアルに基づき空腸33頭 (82.5％) でELISA以外のrPCR, 培養又は病理から回盲部にわたる腸粘膜及び付属リンパ節並びに乳検査のいずれかに陽性を示す所見が認められた. その房リンパ節, 盲腸及び直腸内容について, rPCR及びうち, 29頭 (72.5%) が全ての検査項目で陽性, ２頭分離培養を行った.

(５%) がrPCR及び培養のみ陽性, １頭 (2.5%) が病理組織学的検査：患畜及び自主淘汰牛は, マニュアrPCRのみ陽性､ １頭 (2.5%) が病理検査のみ陽性であっルに基づき, 空腸から回盲部にわたる腸粘膜及び付属た. 病理検査で病変が認められなかったもののうち､リンパ節から得た検査材料を10%緩衝ホルマリン液で３頭がrPCR又は培養で陽性, ７頭 (17.5%) がELISA固定し, 定法に従いヘマトキシリン・エオジン染色及のみ陽性であった.

び抗酸菌染色標本を作製した. 病変の程度により, 重自主淘汰牛では, 34頭中24頭 (70.5%) がrPCR, 培度 (空腸から結腸に至る広範な病変), 中等度 (空腸養又は病理検査のいずれかで陽性の所見が認められた.

から回盲部に至る病変), 軽度 (空腸または回腸の一そのうち, 11頭 (32.4%) がrPCR, 培養及び病理検査部に限局した病変), 無病巣 (病変が全く認められなで陽性, ６頭 (17.6%) がrPCR及び培養で陽性, １頭かったもの) に分類した.

(2.9%) がrPCRのみ陽性, １頭 (2.9%) が培養のみ陽― 50 ―

表２

各検査項目の陽性頭数

患畜
患清５条
n=2525

畜 区51条
n=1313臓器

17糞便16臓

器

糞便

臓

材

検査項目

材料

ELISA

血rPCR
培

養病

理分計 (％)
n=40

病鑑
n=２240 ( 100)

13232 (80.0)6224 (60.0)

1613231 (77.5)

168226 (65.0)器

1711230 (75.0)

料

自主淘汰区分
基準値以上
n=６0

その他
n=４0

64

自主淘汰牛
検査項目
ELISA
rPCR
培

養病

理

血清患畜産子n=245

臓

器

13計 (％)
n=345 (14.7)
23 (67.6)

糞便74213 (38.2)

臓器145423 (67.6)

糞便104014 (41.2)

臓器54211 (32.4)

計 (％)

糞便中のrPCR値

表３

病変の程度と糞便中のrPCR値 (pg/well)

患畜
患 畜 区 分病

変重度

82212 (30.0)

1.6×10１

中 等 度

89017 (42.5)

8.6×10−３

軽５条

51条

病

鑑度

1001 ( 2.5)

検出されず

無 病 巣

82010 (25.0)

検出されず

計

2513240

自主淘汰牛自主淘汰区分

計 (％)

糞便中のrPCR値

12 ( 5.9)

4.8×10−２

2

16 (17.6)

6.5×10−３

210

3 ( 8.8)

1.1×10−３

無 病 巣

192223 (67.6)

1.5×10−２

計246434病

変重患畜産子

基準値以上

その他

度

01

中 等 度3軽度性であった. ５頭 (14.7%) がELISA, rPCR及び培ぞれ23頭 (67.6%) が陽性を示した. 次いで糞便の分養が陽性であった. 全ての検査で陰性であったのは10離培養が14頭 (41.2%), 糞便のrPCRが13頭 (38.2%),

頭 (29.4%) あった.

病理検査が11頭 (32.4%) で陽性となった.

各検査項目の陽性頭数：患畜は, 32頭 (80%) が臓器病変程度と糞便中のMap平均遺伝子量 (rPCR値) ：のrPCRで陽性を示した (表２). 次いで, 臓器の分離患畜40頭のうち, 12頭 (30%) が重度病変を, 17頭培養が31頭 (77.5%), 病理検査が30頭 (75%), 糞便(42.5%) が中等度, １頭 (2.5%) が軽度病変を示したの分離培養が26頭 (65%) で陽性となった. 近年, 患(表３). 10頭 (25%) は病変が認められない無病巣牛

畜の確定基準として検討されている糞便のrPCRは24であった. これらの糞便のrPCR値は, 重度病変では頭 (60%) と最も低い陽性率を示した.

1.6×10１pg/well, 中等度では8.6×10−３pg/wellであり,自主淘汰牛では, 臓器のrPCR及び分離培養でそれ軽度及び病変なしでは検出限界以下であった.

― 51 ―

表４

51条検査における患畜及び自主淘汰牛の糞便中rPCR値の推移
追跡検査回数 (回目)個体
№１
１ 1.4×10−５

患畜 ２ 9.0×10

２

自主淘汰牛
(基準値＊＊以上の牛)

５６７８−９1011−14

7.1×10−５−−３

剖検時

9.6×10−３

3.9×10−2.8×10−５ 2.1×10−４ 3.8×10−３2.45
6.2×10−４2.18

4.24

６ 1.6×10−２７ 2.4×10−４８ 1.8×10−３９４−−４−＊３４ 2.2×10−２５３

3.2×10−２
6.9×10−３−

6.8×10−３3.0×10−３−−−３10 6.25×10−＊ −：検出限界以下＊＊ 基準値：5.0×10−３pg/well

1.4×10−４ 5.0×10−４−−−−
7.1×10−５−

8.3×10−３−

3.0×10−３−−４1.3×10−

1.7×10−３

自主淘汰牛34頭のうち, 重度の病変を有していたの今回, 積極的な自主淘汰が可能となった背景には,は２頭 (5.9%), 中等度病変は６頭 (17.6%), 軽度病

農場の負担を軽減しつつ早期の清浄化を推進するため,

変は３頭 (8.8%), 無病巣が23頭 (67.6%) であった.

本病検査と同時に岩手県牛ヨーネ病発生農場清浄化促−２進対策事業 (事業) を創設したことがあげられる. 本pg/well, 軽度が1.1×

事業は, 県, 生産者団体及び自衛防疫団体で構成する

これらの糞便の平均rPCR値は, 重度病変は4.8×10−３pg/well, 中等度が6.5×1010−３pg/well, 無病巣が1.5×10−２pg/wellであった.

岩手県ヨーネ病発生農場清浄化促進対策協議会が, 感51条検査における患畜及び自主淘汰牛の糞便中rPCR

染牛及び疫学関連牛の淘汰に対し評価額の９割までを値の経時的変化：51条検査で３頭 (No.１〜３) が患助成するものであり, 本事業は円滑な自主淘汰の推進−３pgに多大な貢献を果たした. 摘発淘汰及び農場支援の両/well) 以上を示し自主淘汰となった (表４). これら輪の対策が, 早期清浄化を大きく促進したものと推察の牛の糞便中rPCR値より, No.２, ３, ７, ８, ９のされた.

畜となり, ７頭 (No.４〜10) が基準値 (5.0×10

５頭は３カ月から１年半の間に遺伝子量の漸増が認め

自主淘汰基準値である糞便中のMap遺伝子量5.0×−３pg/wellは, 国のヨーネ病検査マニュアルにより,られ, 患畜又は自主淘汰対象となった. No.10は, 初10回検査時に基準値を超えていたものの, その後３年半分離培養によりMapが１〜10２ CFU/tube分離されるの間, 微量かつ間欠的な排菌を続けた. No.４, ５,場合の遺伝子量, すなわち患畜となる遺伝子量とされ６の３頭は初回検査の時点で基準値を超えていた.ている. 患畜及び自主淘汰牛のうち, 重度及び中等度の病変を有する牛は, いずれも10−３pg/well以上の値考察を示していた. とりわけ, 重度病変を有する患畜では,平成20年度から開始された肉用牛ヨーネ病防疫対策平均で10１pg/wellの遺伝子量 (菌数に換算して10６CFUにおいて, 27戸40頭の患畜を摘発し23戸34頭を自主淘/gの排菌量) が認められ, 既報 [4] における感染末汰した. 今回実施した５条検査開始前の時点では, 国期牛の排菌量と同等であった. Bradyら [5] は, 腸内の発生状況から摘発率を戸数ベースで１％と見込ん管における肉眼病変の有無と同部位のMapの分離成でいたが, 最終的には0.3％で第１クールを終了した.

績は一致することを報告している. 以上より, 糞便中患畜40頭中33頭 (82.5%) 及び自主淘汰牛34頭中24からMap遺伝子が10−３pg/well以上検出される場合は,頭 (70.5%) には, ELISA以外でも本病の感染を示す

すでに腸管に病変が形成されている可能性が示唆され所見が認められ, 感染牛が適切に摘発・淘汰されたこた.とを裏付ける成績と思われた. 自主淘汰牛の多くが明無病巣の自主淘汰牛で, 1.5×10−２pg/wellと基準値

らかな感染の所見を有したことは, ELISAのみでの以上のrPCR値が認められた. これらの牛は全て３カ早期摘発と清浄化の難しさを裏付けるものであり, 抗月齢未満の患畜産子又は同居牛であった. 感染母牛か体検査では摘発できない感染牛がやがて汚染源又は患ら哺乳した子牛は, 生後２〜６カ月にわたり一過性の畜となり, 農場の清浄化を遅延させる可能性を示して排菌を示すことが報告されている [4]. 無病巣にも関いる.

わらず基準値以上の遺伝子が検出された原因として,― 52 ―

感染牛からの哺乳及び接触により, 一過性に大量の菌況にある. 本県では, 今後も肉用牛及び乳用牛の両者が摂取された可能性が考えられた. 一般的な和牛農家で, ５年間隔での県内全域の検査と防疫対策を進めるでは, このような３カ月齢未満の子牛は繋留されず,予定であるが, 県内全域の清浄化には少なくとも数クー牛舎内を自由に動き回ることが多い. このことは, 哺ルの実施が必要と思われる. 引き続き本病対策を継続

乳中の患畜産子が, 病変の形成前に患畜と同程度に排し, 清浄化を推進する.

菌し, Mapの牛舎内汚染を拡大させる可能性を示し
引用文献ている. 患畜産子又は感染が強く疑われる子牛については, 早期に淘汰する本病防疫対策の重要性を示す成[１] Harris NB, Barletta RG: Mycobacterium

績と思われた.

avium subsp. paratuberculosis in Veterinary

法51条に基づく追跡検査では, 患畜及び自主淘汰対Medicine, Clin Microbiol Rev, 14, 489-512

象牛の的確な発見と淘汰が進み, 早期清浄化に貢献し(2001)たものと思われた. 一方, 排菌期間や遺伝子量に一定[２] Tiwari A, John A. VanLeeuwen, Shawn L.B.のパターンは認められなかった. 本病は不定期に排菌McKenna, Greg P. Keefe, and Herman W.と休眠を繰り返す感染症であり [6], 経時的モニタリ

Barkema： Johne's disease in Canada: Partングにより排菌や患畜となる時期を推定することは困

I： Clinical symptoms, pathophysiology,難と思われた. １頭は初回のみ基準値以上の排菌を示

diagnosis, and prevalence in dairy herds,

し, 以降は ３年半もの間, 微量で間欠的な排菌を続Can Vet J, 47, 874-882 (2006)

けた. 基準値未満であっても長期間の排菌が認められ[３] 高橋修, 伊藤格郎, 横溝祐一：ヨーネ病によるるなど, 明らかに感染が疑われる牛は, 可能な限り淘経済的損害, 臨床獣医, 7, 59-64 (1989)

汰することが早期清浄化には望ましいと考えられた.

[４] 横溝祐一：牛のヨーネ病について, 日獣会誌,

ELISA以外に本病の所見が認められない無病巣反38, 489-495 (1985)

応牛が, 17.5%認められた. このような事例は旧来か[５] Brady C, O'Grady D, O'Meara F, Egan J, Bassettら報告されているが [4, 7], 多くは原因が明らかに

H： Relationships between clinical signs,されていない. 現在, この対応案として農林水産省でpathological changes and tissue distribution

は, 確定検査の診断基準をELISAに替えて糞便rPCRof Mycobacterium avium subspeciesとするよう検討している. これは, ヨーネ菌以外の抗paratuberculosis in 21 cows from herds

酸菌によるELISA非特異反応を回避するためである

affected by Johne's disease, Vet Rec, 162,
147-152 (2008)

が, 今回得られた成績では, ELISA以外の検査で陽性が確認された患畜33頭中９頭 (27.3%) が糞便rPCR[６] 横溝祐一：ヨーネ菌とヨーネ病の特性について,
山口獣医学雑誌, 17, 1-26 (1990)

陰性であり, 新たな診断基準では見逃されることになる. 従って, 単一の検査方法で本病を診断することは,[７] 矢部静, 本間裕一, 篠川有理, 会田恒彦, 太田

患畜の見逃しを招く恐れがあることから, 本病の診断

洋一, 渡邊大成, 本間穂積：ヨーネ病多発大規は複数の検査方法により総合的に行うことが必要と思

模酪農場における細菌学的考察, 平成21年度新われた.

潟県家畜保健衛生業績発表会集録, 52-55 (2010)

わが国における本病のサーベイランスは, 乳用牛に

[８] 小林創太, 筒井俊之：わが国の牛ヨーネ病の発おいてはほぼ全国で実施されているが, 肉用牛につい生動向と防疫体制の現状, 日獣会誌, 60, 853-857ては未実施の都道府県が多数を占め [8], 依然として(2007)

県外からの侵入に対して警戒を解くことのできない状― 53 ―