岩獣会報（Iwate Vet.）,Vol. 47（№ 1）,22 － 24（2021）.

家畜衛生レポート

アフリカ豚熱の感染試験に参加して多田成克

国内唯一の海外伝染病研究機関と台湾定期便が就航している．2019 年に行われた探私は 2020 年 7 月から 12 月までの 5 か月間，東京都

知犬による検疫キャンペーンでは当日入国した約 60

小平市にある農研機構 動物衛生部門の海外病研究拠

名の旅客から 3 点の豚肉製品が発見され，ウイルス侵点で，ウイルスの精密検査に係る技術や知識を学ぶ入の門戸になり得ることが明らかになった．観光統計

病性鑑定特殊講習会に参加した．海外病研究拠点はによる 2019 年の本県への外国人観光客の入込客数は国内で唯一，口蹄疫，豚熱（CSF）及びアフリカ豚熱464,197 人であり，入込客数の上位には ASF 発生地域（ASF）ウイルスを扱った研究を行う．さらに海外伝である中国，香港，韓国が含まれ［3］，ASF ウイル

染病の侵入に備えて，常時確定検査ができる体制を整スの侵入リスクが高まっている．

えている．研修では研究者の方々に指導して頂き，貴重な経験を得ることができた．なかでも，強く印象にASF 感染試験
ASF ウイルスに感染した豚に由来する試料の病原残った ASF の感染試験について紹介する．

性を確認するため，豚 3 頭を用いて接種試験を実施し迫るアフリカ豚熱た．

ASF は，高い致死率と伝染性を特徴とする豚及びASF ウイルスを含む豚肉製品の乳剤を臀部筋肉内イノシシの海外悪性伝染病で，臨床症状は発熱・元気に接種した豚では，接種後 3 日目から 40℃を超える消失・食欲不振など現在国内で流行する CSF と類似発熱がみられ，元気消失，食欲不振を伴う急性症状がの症状を示すほか，出血性病変を呈して急死し，豚群観察され，その後，出血傾向の症状も認められた（図内で急速にまん延する．現時点では有効なワクチンが1，2）．6 日目には体温は 42℃前後まで上昇，7 日目ないため決定的な予防策が確立されていない．本来，までに 3 頭中 2 頭が死亡し，残る 1 頭を安楽殺した．

ASF はアフリカに常在する伝染病であるが，2007 年死亡豚の外貌には著変はみられなかった．剖検では 3頃にアフリカ大陸からコーカサス地方へ船舶の食品残頭に共通して脾臓の腫大（図 3），胃周囲のリンパ節渣に含まれる豚肉を介して侵入し［1］，その後ユーラの暗赤色化と腫大が観察された．また，胃粘膜の出血

シア大陸全域に感染地域を拡げ，日本に近い韓国や中や扁桃の赤色化が特徴的に観察された．

国でも発生が確認されている．アジア地域から国内へ観察された症状の中では，特に発熱と出血傾向が印の国際旅客の携帯品検査では，2018 年 10 月に農林水象的だった．感染試験に立ち会う際には，ウイルスの産省動物検疫所によりソーセージから初めて ASF ウ拡散防止のため防護服とカッパを重ね着するのである

イルスの遺伝子が検出され，その後 2021 年 3 月までが，その厚い生地を通しても豚が熱いと感じられた．に 94 例の携帯品で遺伝子が検出，内 4 例からは ASF

出血傾向も重篤であり，体温測定や鼻汁の採材時に不ウイルスが分離されている［2］．このように生きたウ用意に粘膜を傷つけた場合や採血時には出血が止まらイルスが発見されていることを鑑みれば，国際旅客がず，翌日には感染実験室の床や壁が血まみれになって不法に持ち込む豚肉加工品はリスクの高い侵入経路のいた（図 2）．ASF ウイルスは血液中に大量に含まれ一つである．

るため，このように飛び散った血液を介して，豚群間本県の空の玄関口を担う，いわて花巻空港には上海岩手支会に容易に感染が拡がってしまうことが想像された．採岩手県県南家畜保健衛生所― 22 ―

図1 接
 種後 6 日目の豚．41～42℃の発熱を呈し，元気消失，食欲廃絶．

図2

接種後 7 日目に死亡した豚．重篤な出血傾向を呈し死亡豚の周辺は血液で汚染されている．

図3

図4

ASF ウイルス感染豚の血液．血液凝固不全を起こし，血清が赤く濁る．

接種後 7 日目に死亡した豚の剖検所見．脾臓が腫大している．

材した血液を遠心分離すると血清は赤く濁り，凝固不ら特定家畜伝染病に指定されており，都道府県で実施全が確認されることから（図 4），病性鑑定に際してする ASF のウイルス学的検査は，「アフリカ豚熱には血液性状にも注意を払う必要がある．

関する特定家畜伝染病防疫指針（令和 2 年 7 月 1 日公

リアルタイム PCR による遺伝子検査では接種後 2表）」に沿ってコンベンショナル PCR と制限酵素処理日目に全血から，また 3 日目に血清，4 日目以降には（RFLP）の二段階の検査によって行われる．検査に唾液及び鼻汁から順次 ASF ウイルス遺伝子が検出さ使用する陽性対照試料には ASF ウイルスにはない制れた．ASF ウイルスは豚の単球やマクロファージな限酵素認識配列が挿入されているため，陽性対照試料

ど細網内皮系の細胞でよく増殖するため［4］，これらは 231bp，ASF 罹患豚由来の材料では 250bp と異なに富む全血で比較的早く遺伝子が検出されたと考えらるサイズの増副産物が得られる．さらに制限酵素処理れた．特に全血からは症状が現れる 1 日前から ASF

により陽性対照由来の増幅産物では 135bp 及び 96bp

ウイルス遺伝子が検出されたため，早期発見には全血に切断されるのに対し ASF 罹患豚由来の材料では同の遺伝子検査が重要であることが確認された．

様の切断はみられないことから，実際の ASF ウイルスに由来する増幅と陽性対照試料の混入による増幅を（すべての写真は動物衛生研究部門から提供頂いたも区別することが可能になっている．研修ではこれら検のです．）

査技術についても訓練する機会を与えられ，技能を高めることができた．この検査法は研修先の海外病研究ASF の侵入に備えて拠点が開発したものである．その開発行程で検出効率ASF は治療法や予防法がなくその病原性の高さかを高めたり，所要時間の短縮を図る取り組みを目の当― 23 ―

たりにすることができ，県に戻って検査する際の参考謝辞になった．

本稿を準備するにあたり，御指導してくださった農感染試験を通じて ASF を体感したことで，遠い海研機構動物衛生部門・アフリカ豚熱ユニット各位に深外の伝染病ではなく，実際に国内で発生しかねない伝くお礼申し上げます．また，有意義な研修になるよう染病であることや侵入リスクを考えると本県が初発に準備し，貴重な経験を積ませてくださった同部門・海なりかねない危険性を痛感した．ASF がロシア及び外病研究拠点の研究者及び職員の皆様に感謝いたしま

東欧諸国で拡がった際には，ASF が人獣共通感染症す．

でなく，鳥インフルエンザや牛海綿状脳症（BSE）に比べて社会的に十分認知されていなかったことから，引用文献

初動において効果的な対策が取られなかった点に問題［1］舛甚賢太郎，他：ロシア及び東欧諸国におけるア点があったと報告されている［1］．これらの反省から

フリカ豚コレラ（ASF）の発生とその現状につ学び，本県では養豚関係者や獣医師に本病に関する新いて，日本豚病研究会報，72, 1-7（2018）

しく正しい知識を伝達し，ASF のリスクを理解して［2］農林水産省動物検疫所：中国等アジア地域からのもらうとともに，防疫対策に重要な発生予防，早期発旅客携帯品の豚肉等におけるアフリカ豚熱ウイル

見，初動における迅速かつ的確な対応が行えるよう，ス遺伝子検査陽性例について（2021）

この研修で得たものを今後の岩手県の畜産振興に役立［3］岩手県商工労働観光部観光・プロモーション室：てていきたい．

令和元年版岩手県観光統計概要（2020）［4］山川睦，山田学：アフリカ豚コレラ，日獣会誌，
69, 240-242（2016）

Inter-laboratory comparison of six real time事務局）の 3 つのレファレンス研究室および 3 つpolymerase chain reaction assays for detectionのコラボレーティング研究室において，既に開発

of bovine leukemia virus proviral DNA

されて入手可能な 6 つの qPCR 法について，研究室間でのばらつきを測定した．この目的のために，

Jaworski J. P. , Pluta A., Rola-Luszczak M.,

qPCR 法の測定範囲をカバーするような 58 の DNA

McGowan S. L., Finnegan C., Heenemann K.,

サンプルが国際的に集められ，6 つの研究室に配布

Carignano H. A., Alvarez I., Murakami K.,された．定性的な試験結果に基づくと，6 つの研究

Willems L., Vahlenkamp T. W., Trono K. G.,

室間での全体的な一致度は中程度であった．しかChoudhury B., Kuzmak J.

し，BLV プロウイルス DNA のコピー数の測定では，有意なばらつきが研究室間で観察された．qPCR 法（Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria

は，経験豊富なスタッフが実施した場合でも，国際（INTA）, CICVyA, Instituto de Virología, Argentina）

的なハーモナイゼーションがなければ，BLV プロJ Clin Microbiol Jun 25；56（2018）

ウイルス DNA のコピー数に大きなばらつきを生じる可能性がある．種々の因子のさらなる標準化（す定量的リアルタイム PCR（qPCR）法は，牛白血

なわち統一されたプロトコルおよび校正物質の使病ウイルス（BLV）プロウイルス DNA の検出によ用）は，研究室間での実験結果の一致を増加させるく使用されている．それにもかかわらず，qPCR 法はずである．の検証および標準化の品質管理は，現在まで行われていない．そのため，本研究では，OIE（国際獣疫― 24 ―（岩手大学獣医微生物学研究室）