岩獣会報 (Iwate Vet.), Vol. 35 (№ 4), 133−138 (2009).

原著

SPF鶏におけるブロイラー盲腸由来およびヒト食中毒事例由来
Campylobacter jejuni の実験的感染佐々木要淳

御領政信

岡田幸助

約

野外例のブロイラー盲腸由来および岩手県内で発生したヒト食中毒事例由来 Campylobacter

jejuni (C. jejuni) をSPF鶏に接種し, 特異的な病変形成の有無および盲腸内における菌の動態について病理学的および細菌学的に検索した. 両菌株の初生ヒナ接種群では, 特異的な臨床症状および病変の形成は認められなかった. ２週齢時および15週齢時接種群でも病変の形成は認められず, サイクロフォスファミドの投与により免疫抑制状態を作出した実験群でもC.jejuni による病変はみられなかった. 初生ヒナ接種群では, 接種後１日目以降の剖検例すべての盲腸内容物より C.jejuni が再分離されたが, ２週齢時および15週齢時接種群では接種後１日目の盲腸内容物から C.jejuni が再分離されなかった. すべての実験群の盲腸内容物より, 接種後数週間にわたって C.jejuni が再分離された.
キーワード： Campylobacter jejuni, 盲腸内容物, 食中毒, SPF鶏Campylobacter jejuni/coli (C.jejuni) を原

オ肝炎などが知られているが, いずれもその病因とするヒトのカンピロバクター食中毒は, 厚理発生については不明な点が多い [4,5]. 今回,

生労働省によると1997年頃より発生例の増加が野外のブロイラー盲腸由来ならびに岩手県で発みられ, 平成20年度の原因種別発生状況では細生したヒト食中毒事例由来 C.jejuni を用い,菌性食中毒の中で事件数, 患者数ともに一番多P２系SPF鶏に対する病原性の有無を病理学的く, 早急な対策が切望されている. カンピロバに検索し, さらに感染後の C.jejuni の動態を明

クター食中毒の原因食材としては, 本菌に汚染らかにする目的で接種鶏の盲腸内におけるされた生乳や食肉などの食品が挙げられるが,C.jejuni の消長を検討した.

特に鶏肉および鶏レバーが強く疑われており[1,2], ヒトでは少量の菌数でも感染・発症す材料および方法ることが実験的に証明されているため [3], 他

接種菌株：野外ブロイラーの盲腸内容物より分の食品への二次汚染源としても重要視されてい離した C.jejuni と, 岩手県内で発生したヒト食る. 一方, ヒト以外の動物における C.jejuni 感中毒事例由来 C.jejuni の２株を接種菌株として染症は, 犬のカンピロバクター腸炎や鳥ビブリ用いた.

岩手大学支会

岩手大学農学部獣医病理学研究室― 133 ―

実験１ (ブロイラー盲腸由来 C.jejuni の病原性た.の検討)：初生のP２系白色レグホン種ヒナを病理組織学的検査：採材した全身諸臓器は, 10用いた. ブロイラー盲腸由来 C.jejuni をBHI平％中性緩衝ホルマリン液にて固定し, 常法に従板培地にて40℃, 微好気性条件下で48時間培養

いパラフィン包埋ブロックを作製した. これを８９を行い, 滅菌PBSにて10 〜10 cfu/mlの菌液を４μmに薄切した後, ヘマトキシリン・エオジ調製した. 実験群は, 0.1ml経口投与群 (A群,ン (HE) 染色の他, カルボールチオニン染色,20羽) と0.1ml右側大腿部筋肉内接種群 (B群,グラム染色ならびに抗C.jejuni マウスモノクロー22羽) の２群をそれぞれ設定した. 観察期間はナル抗体 (Biogenesis, UK) を用いた免疫組５週までとし, 各群ともに接種後１日目, ３日

織化学的染色 (IHC) を施し, 光学顕微鏡にて目, １週目, ２週目, ３週目, ４週目および５病理組織学的に検索した. なお, 本実験は ｢岩週目にそれぞれ剖検し, 主要臓器を採材した.

手大学動物実験に関する指針｣ に基づいて行っ剖検時, 盲腸の片側を無菌的に採材してた.

C.jejuni の定量的な再分離を試みた.
実験２ (ヒト食中毒事例由来 C.jejuni の病原性成績の検討)：P２系白色レグホン種を用い, １日

実験１ (ブロイラー盲腸由来 C.jejuni の病原性

齢時接種群 (C群, 32羽), ２週齢時接種群 (Dの検討)群, 17羽), 15週齢時接種群 (E群, ７羽), １

病理学的所見：両接種群において特異的な臨床週齢時cyclophosphamide (CY) 投与・２週齢症状は認められなかった. 肉眼所見として, 両時接種群 (F群, 12羽) の４群をそれぞれ設定

接種群ともに接種後１週目までの盲腸内容物はした. CYは右側大腿部内側皮下 (20㎎/羽) に重度に水様, 泡沫状であったが (図１), ２週投与した. 実験１と同様に C.jejuni の菌液を準目以降は褐色泥状を呈していた. 病理組織学的備し, 0.1ml (C, D, F群) あるいは1.0mlには, 両接種群のほぼ全例の盲腸において, グ(E群) を経口投与した. 観察期間はC群が９週

ラム陽性, 陰性菌が多数認められた. 両接種群まで, D群が４週まで, EおよびF群が２週まともに一部のヒナでは卵黄嚢の遺残がみられ,でとし, 各群ともに接種後１日目, ３日目およ

組織学的には中心部が壊死に陥っており, 壊死び１週目以降はそれぞれの観察期間終了までの領域には多数のグラム陽性, 陰性菌が認められ毎週にそれぞれ剖検し, 主要臓器を採材した.

た. B群の接種部位では, 接種後１日目と３日剖検時, 盲腸の片側を無菌的に採材してC.jejuni の定量的な再分離を試みた.
細菌検査：実験鶏の盲腸内容物を滅菌PBSにて段階希釈し, カンピロバクター選択剤バツラー(ニッスイ) と10％に馬脱線維血液を加えたブ
レインハートインフュジョン (BHI) 寒天培地(栄研) に塗沫し, 40℃にて市販のガス発生袋を用いた微好気性条件下で48時間培養を行った.
再分離した菌株については, グラム染色を行い鏡検後に生化学的検査として, オキシダーゼ試
験 (ポアメディア○オキシダーゼテスト, 栄研),R

カタラーゼ試験, 馬尿酸分解試験をそれぞれ行っ

図１ 実験１, A群, No.4
盲腸 (矢印) の内容物は高度に泡沫状を呈している.

― 134 ―

図２ 実験２, F群, No.5, 盲腸, HE染色
盲腸粘膜上部および陰窩領域において, 多数のフィラメント状桿菌が認められる.

実験２, F群, No.5, 盲腸, 抗 C.jejuni
モノクローナル抗体を用いたIHC
図４でみられた多数の桿菌が抗C.jejuni モノクローナル抗体に陽性を示している.

目の剖検例において, 接種反応と思われる巨大内容物より, C.jejuni が再分離された (表１).

図３

異物肉芽腫の形成および間質における炎症性細胞浸潤が認められた.

実験２ (ヒト食中毒事例由来 C.jejuni の病原性

細菌検査結果：両接種群ともに接種後１日目かの検討)

ら５週目までのすべての観察期間における盲腸病理学的所見：すべての接種群において特異的な臨床症状は認められなかった. 肉眼所見とし

表１ブロイラー盲腸由来 C.jejuni 接種群における盲腸内容物からの再分離成績 (実験１)

接種後
日数
１日目

３日目

１週目

２週目

３週目

４週目

５週目ａ)

№
12345678910111213141516171819202122

A群(経口接種群)10８ａ)
10８10８10７10８10８10６10８＜10８＜0010７010８10８10８010８10８
10８−−

B群
(大腿部筋肉内接種群)
10４10８
10８
10８＜10８＜10８＜10８10８＜10７010６010８10８
10８10８＜10６10８
10７
10８
10６
10８て, C群の盲腸内容物は接種後１週目まで重度に水様, 泡沫状であったが, ２週目以降は褐色泥状を呈していた. 病理組織学的には, すべての接種群のほぼ全例の盲腸において, グラム陽性, 陰性菌が多数認められ, D, E, F群の盲腸粘膜上皮あるいは陰窩領域におけるグラム陰性フィラメント状桿菌は, 抗C.jejuni モノクローナル抗体に陽性を示した (図２, ３). C群の接種後３日目, １週目, ５〜９週目では卵黄嚢の遺残がみられ, 卵黄嚢内では組織学的にグラム陽性, 陰性の多数の細菌塊が認められた (図４, ５, 表２). F群のファブリキウス嚢は,全例で高度に萎縮していた.
細菌検査結果：C群では, 接種後１日目から９週目までのすべての観察期間における盲腸内容物より, C.jejuni が再分離された (表２). D,E, F群では, 接種後１日目を除くすべての観察期間においてC.jejuni が再分離された (表３).

菌数 (個／g)― 135 ―

図４ 実験２, C群, No.7, 卵黄嚢, HE染色
卵黄嚢の中心部が強好酸性を呈し, 壊死に陥っている (卵黄嚢炎).

表２考

ヒト食中毒事例由来 C.jejuni 接種群における盲腸内容物からの再分離成績 (実験２)

接種後日数
１日目

３日目

１週目

２週目

３週目

４週目

５週目

６週目

７週目

８週目
９週目ａ)

図５ 実験２, C群, No.7, 卵黄嚢, グラム染色
卵黄嚢の壊死領域において, 多数のグラム陽性(矢印) および陰性菌 (矢頭) が認められる.

№1234567891011121314151617181920212223242526272829303132

C群(経口接種群)10８ａ)
10８＜10８＜10８＜10８＜10８＜10８
10８＜10８＜10８＜010７
10８＜10８＜010７
10８＜10８
10８＜10８
10８＜10８＜10６010８＜10８＜10８＜
10７
010７
10８
10８＜

菌数 (個／g)ｂ)

卵黄嚢内細菌塊−−−＋＋＋＋NEｂ)＋NE
NENENENENENENE
NE＋＋＋NE＋NE
NE＋NE
NENE＋NE＋NE (検索せず)

察

鳥類ではカンピロバクター感染に起因した疾患として, 鳥ビブリオ肝炎が知られており [4],
実験的には膵十二指腸静脈内に C.jejuni を接種したウズラにおいて壊死性の肝炎が再現されたとの報告もあるが [5], 最近のブロイラーおよび採卵鶏を用いた鳥類, 犬およびヒト由来

C.jejuni による感染実験では, 病変形成は報告されていない [6-10]. 今回の実験では初生ヒナ, ２週齢および15週齢のSPF鶏を用いたが,近年の報告と同様にいずれの日齢でも臨床症状の発現や全身諸臓器における特異的な病変形成は認められなかった. これらの結果より, 今回用いたブロイラー盲腸由来およびヒト食中毒事
例由来 C.jejuni は鶏に対して病原性を示さず,経口あるいは筋肉内接種による感染経路ではこれまで鳥類で報告されている鳥ビブリオ肝炎の病変再現は困難であることが示唆された.
小 野 ら [ 10 ] は , 鶏 肉 お よ び ヒ ト 由 来

C.jejuni を鶏に投与し, 初生ヒナでは二つの株ともに消化管内への高い定着性がみられたが,35日齢鶏では定着性の弱い菌株も認められたと報告している. 本実験では初生ヒナを用いたA,B, C群において, すべての観察期間を通してC.jejuni が再分離されたことから, 今回の実験に用いた C.jejuni の二株はいずれの接種経路によっても初生ヒナの盲腸内に長期間にわたって― 136 ―

表３
接種後
日数
１日目

３日目

１週目

２週目
３週目
４週目ａ)

ヒト食中毒事例由来 C.jejuni 接種群における盲腸内容物からの再分離成績 (実験２)№
1234567891011121314151617

D群(２週齢経口接種群)
0ａ)
00
8×10６
0
4×10６
3×10４
1×10８
4×10８
2×10４
1×10８
8×10８
2.4×10７
6×10４
0
1×10６
5.4×10５

接種後
E群
№
日数
(15週齢経口接種群)
１日目 1027×10８
３日目
31.4×10７
46×10６
１週目
54×10８68×10８
２週目
71×10６

接種後
日数
１日目

３日目

１週目

２週目

№
123456789101112

F群(CY前投与群)
00
3×10６
１×10４
1×10４
1×10６
1×10９
1.1×10７
1.2×10８
2×10８
1.4×10７
1×10８

菌数 (個／g)

定着・増殖する可能性が示された. 一方, D,

Sublerら [9] は伝染性ファブリキウス嚢病

E, F群における２週齢および15週齢鶏でも接ウイルス感染による免疫抑制状態が, C.jejuni

種後１日目を除いて長期間にわたり C.jejuni がの消化管内における感染範囲を広め, さらに消再分離されたことから, 高日齢鶏においても本化管内容物より再分離される C.jejuni の菌数も菌株は盲腸内に定着・増殖することが示唆され増加させると報告している. 本実験のF群では,た.

CYの投与によってファブリキウス嚢が重度に本実験において初生ヒナに C.jejuni を接種し萎縮していたことから, F群の実験鶏はすべてたA, B, C群では, 接種後１日目より C.jejuni

免疫抑制状態であったことが明らかであったが,が盲腸内容物より再分離されたが, Coxら [6]他群との間に盲腸内容物から再分離されるは初生ヒナに C.jejuni を経口接種し, 接種１時C.jejuni の菌数などに差異は認められなかった.

間後より肝臓, 脾臓などの諸臓器から C.jejuni

この結果より, CYは盲腸における C.jejuni のを再分離し, 初生ヒナにおける C.jejuni の体内定着性あるいは増殖性に影響を及ぼさないこと動態が速やかであることを報告している. 本実が示唆された.

験でも初生ヒナ接種群では接種後１日目より最後に, カンピロバクターによる食中毒予防C.jejuni が再分離されたことより, 初生ヒナで対策として, 生産現場ではプロバイオティクス

は接種後における C.jejuni の体内動態は比較的など様々な資材の応用も検討されているが [11],早いことが示唆された. それに対して, ２週齢カンピロバクター食中毒を予防するためには,以上の日齢で投与したD, E, F群では, 接種養鶏場や食鳥処理場などにおける衛生対策の他,後１日目には C.jejuni が再分離されなかったこ

消費段階における衛生的な取り扱いや加熱調理とから, ２週齢以降の鶏では C.jejuni の盲腸への徹底など, 農場から食卓にいたるまでの全ての定着に数日の時間が必要であることが示唆さにわたる総合的な衛生対策が重要であると思われた.

れる.
― 137 ―

謝辞[ ６ ] Cox NA , Hofacre CL , Bailey JS ,本実験で用いたヒト食中毒事例由来Campylo-Buhr RJ , Wilson JL , Hiett KL ,bacter jejuni は, 岩手県環境保健研究センター

Richardson LJ, Musgrove MT, Cosby

保健科学部上席専門研究員の故藤井伸一郎先生

DE, Tankson JD, Vizzier YL, Cray

より分与していただきました. ここに心より感

PF, Vaughn LE, Holt PS, Bourassa

謝の意を表すとともに, 謹んでご冥福をお祈り

DV：Presence of Campylobacter jejuni

いたします.

in various organs one hour, one day,and one week following oral or
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