岩獣会報 (Iwate Vet.), Vol. 34 (№ 3), 88−91 (2008).

技術講座

群編成による子牛の免疫機能の変化

阿部憲章

木戸口勝彰

菊池文也

牛群編成は, 発育を斉一化するために月齢や㈱, 大阪) により測定した. 白血球数を動物用体重に基づいて行われる飼養管理法であり [１−

血球計算器 (MEK-5254, 日本光電㈱, 東京)

４], EUの動物飼養管理基準では８週齢以上のにより, ヘモグラムをメイギムザ染色を施した個体に制限されている. 群編成ではしばしば順血液塗抹標本上で計測した. リンパ球幼若化能

位付け行動や闘争が起こり, これらが牛にストをPHA, ConAおよびLPS刺激を用いたMTTレスを与えることが一般に知られている [３](３− [４, ５-dimethylthiazol-２-yl]-２, ５-が, 免疫機能に及ぼす影響を詳細に検討した報

diphenyltetrazolium bromide) 法により測定

告は少ない. 今回, 群編成時の飼養管理に関すし, 対照群に対する移動群の刺激指数 (SI値)る留意点を検討する目的で, 子牛の免疫機能をの割合で表した.

評価した.

試験２

群編成による液性免疫機能：2007年７月から11月に, 試験１と同じ農場の乳用子牛材料および方法を対照群 (計5頭, 7.2±0.7カ月齢) と移動群(計４頭, 8.8±0.8カ月齢) に分けた. 両群に牛試験１

群編成によるストレス反応および細呼吸器病混合生ワクチン (牛伝染性鼻気管炎；胞性免疫機能：2007年３月から９月に, １農場

IBR, 牛ウイルス性下痢症；BVD, パラインフの乳用子牛を各２〜３頭の対照群 (計８頭,ルエンザ３型；PI−３及びアデノ７型；Ad−6.1±2.3カ月齢) と移動群 (計８頭, 6.4±0.9カ７の各ウイルス, 京都微研) を接種した当日に,月齢) に分けた. 群編成は対照と移動の両群を試験１と同様に移動群を高月齢の他群 (４頭,３週間以上同居させた後, 移動群を高月齢の他11.5±0.7カ月齢) に移動させ, 21日後まで継続群 (３頭, 7.6±2.4カ月齢) へ移動させ, 両群的に追跡し, 同試験を２回実施した. 移動後０を14日後まで継続的に追跡した. 同試験を子牛日, 14日及び21日時に得た血清を用いて, 前述を替えて３回実施した. 行動観察に加え, ストの４種のウイルス中和抗体価を求めた. リンパレス反応の指標として, 血漿コルチゾル濃度を球サブセットをフローサイトメトリー法で解析

市販キット (血液検査用コルチゾールキット,した. 特異抗原としてCD４ (ヘルパーＴ細胞),㈱ARKLAY, 東京) を用いて酵素免疫測定法

CD８ (キラー・サプレッサーＴ細胞), CD21により, 血清遊離脂肪酸 (NEFA) 濃度を市販(Ｂ細胞) 及びWC１ (γδ型Ｔ細胞) を用いキット (NEFAC-テストワコー, 和光純薬工業

た.

岩手県中央家畜保健衛生所― 88 ―

統計処理：両群の各採材時の値をstudentの後, ７日後に低下した. 対照群との比較では,ｔ検定で比較し, ｐ＝0.05を統計学的有意点と移動１日後 (0.3±0.2, 0.1±0.1) および3日後した. 抗体価の比較は, 抗体価に１を加えた値(0.5±0.2, 0.1±0.0) に有意差が得られた.の常用対数を二元配置分散分析法で行った.

図２に示すように移動群のPHA, ConAおよびLPS刺激による各リンパ球幼若化能は移動１成績

日後に有意に低下した (PHA：0.76±0.18, 1.00±0.19；ConA：0.67±0.29, 1.00±0.24；LPS：

試験１：移動直後から移動群と高月齢群の間

0.79±0.14, 1.00±0.21). その後上昇し, ７日で頭突き, 押し合いおよび追い出しなどの順位後までに対照群のそれと同水準まで回復した.

決め行動が起こり, 移動群は低い序列となり,

試験２：図３に示すようにワクチン接種前の起立時間が長く, 採食や飲水時には劣勢になる両群の子牛血清中に各ウイルス抗体は認められ傾向を示した. これらの行動は移動７日後までなかった. 移動時のワクチン接種により, 両群持続した. 図１に示すように, 対照群では, いの移動14日および21日後の各ウイルス抗体価のずれの検査項目も検査期間中ほぼ同水準で推移上昇の程度は同様であり, 両群間で有意差はみした. 移動群の血漿コルチゾル濃度は移動２時られなかった.

間後に著しく上昇した後, 徐々に低下した. 対

図４に示すように, 移動群のCD４陽性細胞照群との比較では, 移動１日後に有意差が得ら数は対照群のそれより低値に推移し, 移動７日れた (対照群1.1±0.3, 移動群7.0±4.0ng/ml).

後に両群間で有意差が得られた (1,187±129,移動群のNEFA濃度も移動１日後に著しく増加

884±157/μl). 移動群のCD21陽性細胞数も移した後, 移動７日後まで徐々に低下した. 対照

動後低値に推移し, 対照群のそれと比べて移動群との比較では, 移動１日後 (316±184, 113±

１日後 (1,546±854, 2,997±1158), ３日後

81μEq/l), ３日後 (175±138, 51±10μEq/l)(1,364±996, 3,386±1,282), ７日後 (1,486±

および７日後 (93±24, 56±18μEq/l) に有884, 2,193±1187) および21日後 (539±827,意に増加した. 移動群のリンパ球数は移動３日2,740±1,228) に有意な低値を示した. 両群の後に一過性に有意に低下した (7,200±994,CD８およびWC１陽性細胞数は, 対照群のそ8,790±997/μl). 移動群の好中球数とリンパ球れらとほぼ同水準で推移した.

数の比 (Ｎ/Ｌ比) は移動３日後まで増加した㪋㪇㪇㱘㪜㫈㪆㫃㫅㪾㪆㫄㫃㪉㪌㪉㪇㪊㪇㪇㪈㪌㪉㪇㪇㪈㪇㪈㪇㪇㪌㪇㪇㪈㪈㪃㪇㪇㪇㪇㪇㪉ᤨ㑆࡝ࡦࡄ⃿ᢙ㪈㪊㪎㩿ᣣ㪀㪇㪅㪏㪈㪊㪎ᅢਛ⃿࡝ࡦࡄ⃿ᢙᲧ㪇㪅㪋㪏㪃㪇㪇㪇㪇㪅㪊㪎㪃㪇㪇㪇㪇㪅㪉㪇㪅㪈㪇㪍㪃㪇㪇㪇㪇

図１㪈㪊㪎㪈㪋㩿ᣣ㪀㪇㪈㪊㪎

2*#㪇㪇㪅㪍㪇㪅㪌㪐㪃㪇㪇㪇㪈 㪅㪋㪈 㪅㪊㪈 㪅㪉㪈 㪅㪈㪈 㪅㪇㪇 㪅㪐㪇 㪅㪏㪇 㪅㪎㪇 㪅㪍㪇 㪅㪌㪇 㪅㪋㪈㪋㩿ᣣ㪀㪇㪅㪎㪈㪇㪃㪇㪇㪇㪆㱘㫃ኻᾖ⟲䈮ኻ䈜䉎㪪㪠୯䈱Ყ

ⴊᷡ0'(#Ớᐲ㪌㪇㪇㪈㪅 㪋㪈㪅 㪊㪈㪅 㪉㪈㪅 㪈㪈㪅 㪇㪇㪅 㪐㪇㪅 㪏㪇㪅 㪎㪇㪅 㪍㪇㪅 㪌㪇㪅 㪋群編成後の移動群 (●) および対照群 (○)の各成分の推移

図２平均値±標準偏差.
２群間の有意差 (＊ｐ＜0.05, ＊＊ｐ＜0.01).
― 89 ―

㪈㪊㪎㪈㪋㩿 ᣣ㪀㪈㪊㪎㪈㪋㩿ᣣ㪀㪈 㪅㪋.25㪈 㪅㪉㪈 㪅㪇㪇 㪅㪏㪇 㪅㪍㪇 㪅㪋㪇 㪅㪉㪇㪈㪊㪎㪈㪋㩿 ᣣ㪀

%QP#㪇㪈㪋㩿ᣣ㪀ኻᾖ⟲䈮ኻ䈜䉎㪪㪠୯䈱Ყ㪍㪇㪇ⴊẏࠦ࡞࠴࠱࡞Ớᐲ㪊㪇ኻᾖ⟲䈮ኻ䈜䉎㪪㪠୯䈱Ყ㪊㪌

群編成後の移動群 (●) および対照群 (○)のリンパ球幼若化能の推移
平均値±標準偏差.
２群間の有意差 (＊ｐ＜0.05).

㪙㪭㪛㪉㪅 㪇㪉㪅 㪌㪈㪅 㪇㪈㪅 㪇㪇㪅 㪌᛫૕ଔ䇭㫃㫆㪾㪈㪇䋨㫏䋫㪈㪀㪈㪅 㪉㪈㪅 㪌㪉㪅 㪇㪈㪅 㪌㪈㪅 㪇㪇㪅 㪌㪈㪋㪇㪉㪈映し, 低栄養時に増加する [６]. 移動７日後㪇㪅 㪏まで続いたNEFA濃度の増加は, ストレスや低㪇㪅 㪍㪇㪅 㪋㪇㪅 㪉

い序列により飼料の摂取量が不足し [１], 体㪇㪅 㪇㪇㪅 㪇㪇㪅 㪇

NEFAは脂肪組織からの血中への脂質動員を反㪠㪙㪩㪊㪅 㪇᛫૕ଔ䇭㫃㫆㪾㪈㪇䋨㫏䋫㪈㪀᛫૕ଔ䇭㫃㫆㪾㪈㪇䋨㫏䋫㪈㪀㪘㪻㪄㪎㪉㪅 㪌ᣣ㪇㪈㪋ᣣ㪉㪈㪇㪈㪋㪉㪈ᣣ

脂肪が動員されたことによると思われた.

㪧㪠㪄 䋳㪈㪅 㪋

Ｔ細胞を活性化するPHAおよびConAならび᛫૕ଔ䇭㫃㫆㪾㪈㪇䋨㫏䋫㪈㪀㪈㪅 㪉㪈㪅 㪇㪇㪅 㪏にＢ細胞を活性化するLPSの各刺激によるリン㪇㪅 㪍㪇㪅 㪋

パ球幼若化能は, いずれも移動１日後に一過性㪇㪅 㪉㪇㪅 㪇㪈㪋

㪇

図３㪉㪈

ᣣ

群編成後の移動群 (●) および対照群 (○)の各ウイルス血清抗体価の推移に低下し, その後上昇した. 移動群のCD４およびCD21陽性細胞数も影響され, 前者は移動%&㪆㱘㫃㪆㱘㫃

７日後に, 後者は移動７日から21日後まで低下㪉㪃㪇㪇㪇㪈㪃㪏㪇㪇㪈㪃㪍㪇㪇㪈㪃㪋㪇㪇㪈㪃㪉㪇㪇㪈㪃㪇㪇㪇㪏㪇㪇㪍㪇㪇㪋㪇㪇㪉㪇㪇㪇㪇㪈㪃㪉㪇㪇㪈㪊㪎㪈㪋㪍㪇㪇㪆㱘㫃㪆㱘㫃㪏㪇㪇㪋㪇㪇㪉㪇㪇

図４㪈㪊㪎㪈㪋

した. 得られた成績は移動直後に細胞性および液性免疫機能の低下を招いたことを示唆している.
㪇㪈㪃㪇㪇㪇

㪇%&㪉㪈 (ᣣ)%&㪇㪋㪃㪌㪇㪇㪋㪃㪇㪇㪇㪊㪃㪌㪇㪇㪊㪃㪇㪇㪇㪉㪃㪌㪇㪇㪉㪃㪇㪇㪇㪈㪃㪌㪇㪇㪈㪃㪇㪇㪇㪌㪇㪇㪇㪉㪈 (ᣣ)

㪌㪃㪇㪇㪇㪋㪃㪌㪇㪇㪋㪃㪇㪇㪇㪊㪃㪌㪇㪇㪊㪃㪇㪇㪇㪉㪃㪌㪇㪇㪉㪃㪇㪇㪇㪈㪃㪌㪇㪇㪈㪃㪇㪇㪇
㪌㪇㪇㪇㪈

㪊

㪎

㪈㪋㪉㪈

(ᣣ)

ワクチン接種直後に移動させた群の抗体価は9%

移動させなかった対照群のそれと同様であった.
この事実は, 過密飼養に伴うストレスにより,ワクチン接種後の抗体上昇が抑制されたという㪇㪈㪊㪎㪈㪋

㪉㪈(ᣣ)

既報 [７] の結果と相違した. この正確な理由

群編成後の移動群 (●) および対照群 (○)のリンパ球サブセットの陽性細胞数の推移
平均値±標準偏差.
２群間の有意差 (＊ｐ＜0.05, ＊＊ｐ＜0.01).

は不明であるが, 移動群に負荷されたストレスの程度が既報 [７] のそれと比べて軽度であり,液性免疫の低下が軽度に留まった結果であろうと推察された. 今後, より強いストレスを負荷考察した際の影響を調査する必要がある.
群編成により細胞性および液性免疫機能が抑群編成のため他群へ移動した群は低い序列を制されたが, その程度や抑制期間はPHA刺激示し, 血漿コルチゾル濃度は移動１日後に,によるリンパ球幼若化能, CD21陽性細胞数なＮ/Ｌ比は移動１日から３日後まで対照群と比どの検査指標により移動１日後から21日後まで較し上昇した. 今回の試験対象牛の月齢は, 序さまざまであった. 得られた成績から, 移動後列形成が認められる３カ月齢以上であり [１,の飼養管理として１週間程度は注意深い観察や

３, ４], 移動群が受入群に比べ低月齢であっ感染症を防ぐ衛生管理が求められ, ワクチン接たことから, 体格的に劣ったことも序列を低位

種は基本的に移動前に行うべきであるが, 移動にする要因であったと推察された [３]. 血漿後に接種する際は移動１週間後以降の接種によコルチゾル濃度の増加は移動によるストレス負り, より高い効果が期待できるように思われた.

荷に伴い視床下部−下垂体−副腎軸 (HPA軸)

稿を終えるにあたり, 試験牛の提供を得た岩が刺激された結果 [５] と思われた. 移動３日

手県農業研究センター畜産研究所の諸先生方,後まで観察されたリンパ球数の減少と好中球数また, リンパ球サブセット解析のご指導を賜っの増加によるＮ/Ｌ比の上昇は, ストレス状態た独立行政法人 農業・食品産業技術総合研究が移動３日後まで継続したことを示唆している.

機構― 90 ―動物衛生研究所

生産病研究チーム高橋秀之チーム長, 菊佳男研究員に深謝する.

[４] Veissier I, Boissy A, dePassille AM,
et al：Calves' responses to repeated

引用文献

social regrouping and relocation, J
Anim Sci, 79, 2580-2593 (2001)[１] Gupta S, Earley B, Ting ST, et al：[５] Minton JE：Function of the hypothal-

Effect of repeated regrouping andamic-pituitary-adrenal axis and therelocation

on

the

physiological,sympathetic nervous system in models

immunological,

andhematologicalof acute stress in domestic farmvariables and performance of steers,

animals, J Anim Sci, 72, 1891-1898

J Anim Sci, 83, 1948-1958 (2005)(1994)[２] Sevi A, Taibi L, Albenzio M,et al：
Behavioral,adrenal,immune,[６] Jack C. Bartley：脂質の代謝とこれにand関連する疾患, 獣医臨床生化学, 久保周

productive responses of lactating ewes

一郎, 友田勇監訳, 第４版, 108-164,

to regrouping and relocation, J Anim

近代出版, 東京 (1991)

Sci, 79：1457-1465 (2001)[７] Grasso F, Napolitano F, De Rosa G, et[３] 鈴木省三：家畜の社会環境,畜産大辞典,

al：Effect of pen size on behavioral,

田崎威和夫編, 第２版, 736-741, 養賢

endocrine, and immune responses of堂, 東京 (1979)

water buffalo (Bubalus bubalis) calves,
J Anim Sci, 77, 2039-2046 (1999)

Ｈ５Ｎ１高病原性鳥インフルエンザウイルスに自然感染した白鳥の病理
Teifke JP, Klopfleisch R, Globic A, StarickE, Hoffmann B, Wolf PU, Beer M, Mettenleiter TC, Harder (ドイツ国立家畜衛生研究所, Vet Pathol , 44, 137-143, 2007)
高病原性鳥インフルエンザ (HPAI) ウイ
ルス感染による水禽類の死亡はまれであるが,近年, 白鳥が同ウイルスに高い感受性を示すことが指摘されている. Ｈ５Ｎ１ HPAIウ
イルスに自然感染した白鳥を病理学的に検索した. 剖検により, 膵臓に多発巣状の出血性壊死, 肺にうっ血・水腫, 心外膜に出血がみられた. 主要な組織学的病変は膵臓および肝臓の多発巣状壊死, 神経細胞の壊死を伴う非化膿性脳炎であり, 副腎実質の散発性巣状壊死, 脾臓およびパイエル板におけるリンパ球の軽度な壊死を伴っていた. これらの病巣内にはHPAIウイルス抗原が存在した. 同抗原はプルキンエ細胞を含む多数の神経細胞とグリア細胞に認められ, 同ウイルスの神経親和性が示唆された. 同抗原は肺の上皮細胞にはみられなかった. 観察された循環障害, 肺水腫および急性死の機序についてさらに検討を要する.

― 91 ―(岩手県中央家畜保健衛生所病性鑑定課)