SPL-M100 Application
Application Note
SGI-P100
Note

No. AS211104

高速GC/MS【Intuvo9000GC-5977MSD】とオンライン固相誘導体化を用いたメタボローム分析の最適化(4)アミノ酸・有機酸・糖
はじめに

SPL-M100
SGI-P100for SPE-GC system

従来GC/MSにおけるメタボローム分析は、サンプルの抽出後、乾固に4時間～1晩、誘導体化に2時間を要していましたが、オンライン固相誘導体化を使うことで前処理時間が飛躍的に短縮でき、誘導体化からGC/MSの分析Sampleまでの時間が一定化され、安定したデータ取得が期待されます。
また、GC/MSにおいては、前処理の高速化に合わせ、高速分析が可能かつ初心者でも扱いやすい装置が望まれます。今回、オンライン固相誘導体化装置SPL-M100と高速分析が可能なIntuvo 9000GCとシングル四重極

マウス血清
野菜ジュース

5977B MSDを接続したシステムでアミノ酸、有機酸、糖の分析条件の最適化を行いました。

分析装置
Informationメリット

高速GC/MS・
オンライン固相誘導体化システム【Intuvo9000GC】
・高速分析可能・取扱が容易【SPL-M100】
・前処理時間は飛躍的に短縮・誘導体化から分析までの時間が一定化

Intuvo 9000GCと5977B MSおよびSPL-M100

オンライン固相誘導体化SPE-GC：SPL-M100

前処理フロー

添加 水 150 µL
添加 ACN 800 µL

Flash-SPE ACXs

コンディショニング
ACN-水(1/1)
ACN

負荷[保持] 抽出上澄液 50 µL＋3µL※２分取振とう 37 ℃, 30 min

洗浄 ACN-水(1/1)
遠心分離 14,000 rpm, 5 min

含侵 10%メトキシアミン塩酸塩/ピリジン(脱水)固相誘導体化反応 オキシム化, 10 min※１血清のみ抽出上澄液※2 アミノ酸、有機酸として50µL負荷、糖として3µL負荷

脱水 ACN分取 上澄液※１ 250 µL
添加※１ 水 250 µL

杉立久仁代1,佐々野僚
一2,佐久井徳広1,大塚剛史1,中村貞夫1
1アジレント・テクノロジー
株式会社、2株式会社
アイスティサイエンス

Automation
前処理：25.3分

バイアル
試料採取 50 µL

第15回 メタボロ―ムシ
ンポジウム「高速GC/MSとオンライン固相誘導体化を用いたメタボローム分析の最適化」

含侵 MSTFA-Toluene(3/1)

AiSTI SCIENCE

固相誘導体化反応 TMS化, 1 min
溶出 トルエン
GC-MS

測定条件

オンラインSPE-GC

SPL-M100

GC Intuvo9000C
カラム
オーブン温度注入口(MMI)温度
ライナー
注入方法
ガードチップ温度
キャリアガス流量
トランスファーライン温度

DB-5MS, 15m×0.25mm I.D. , 膜厚0.25µm
80 ℃(1 min)-20 ℃ /min-160 ℃ -10 ℃ /min-220 ℃ -20 ℃ /min-310 ℃ (3 min) (total 18.5min）
220℃(0.5min)-70℃/min-290℃
ウルトライナートライナー、シングルテーパ、低圧力損失、 ガラスウール入り
スプリット (50:1)
220 ℃(0.5 min)-70 ℃ /min-290 ℃
1.0 mL/min (コンスタントフロー)
290℃

MS 5977B
測定モード
イオン源温度
四重極温度

Product

固相カートリッジ

Flash-SPE
GC大量注入装置

LVI-S250

株式会社アイスティサイエンス
TEL: 073-475-0033

スキャン (m/z 70-470)
250℃
150℃

E-mail：as@aisti.co.jp

www.aisti.co.jp

AiSTI Application Note

No. AS211104

結果と考察
アミノ酸、有機酸、糖の標準溶液とマウス血清及び野菜ジュースを本システムで分析を行ったTICクロマトグラムを下記に示します。
糖の固相への負荷量は3µLですが野菜ジュースでは高い強度で検出されていることがわかります。

×10６

×107

1. Pyruvic acid TMS

11. Ethanolamine 3TMS

21.

31. Phenylalanine 2TMS

41. Quinic acid 5TMS

2. Lactic acid 2TMS

12. Phosphoric acid 3TMS

22. Homoserine 3TMS

β-Alanine 3TMS

32. Tartaric acid 4TMS

42. Thyramine 3TMS

3. Glycolic acid 2TMS

13. Leucine 2TMS

23. Nicotinamide TMS

33. Asparagine 3TMS

43. Histidine 3TMS

4. Alanine 2TMS

14. Isoleucine 2TMS

24. Malic acid 2TMS

34. Putrescine 4TMS

44. Lysine 4TMS

5. Oxalic acid 2TMS

15. Proline 2TMS

25. Methionine 2TMS

35. cis-Aconitic acid 3TMS

45. Tyrosine 3TMS

6. Sarcosine 2TMS

16. Glycine 3TMS

26. Aspartic acid 3TMS

36. Glutamine 3TMS

46. Indole-3-acetic acid 2TMS

7. 3-Hydroxypropionic acid 2TMS

17.

Succinic acid 2TMS

27. Pyroglutamic acid 2TMS

37. Citric acid 4TMS

47. Gluconic acid 6TMS

8. 4-Hydroxypyridine TMS

18.

Norleucine 2TMS

28. γ-Aminobutyric acid (GABA) 3TMS

38. Ornithine 4TMS

48. Spermidine 5TMS

9. Valine 2TMS

19.

Serine 3TMS

29. 2-Ketoglutaric acid 2TMS

39. Methioninesulfone 3TMS

49. Cysteine 4TMS

10. Benzoic acid TMS

20.

Threonine 3TMS

30. Glutamic acid 3TMS

40. Cadaverine 4TMS

50. Spermine 6TMS

アミノ酸、有機酸、糖の標準溶液とマウス血清及び野菜ジュースのTICクロマトグラム

アミノ酸、有機酸、糖の標準溶液とマウス血清及び野菜ジュースのn=4の再現性(RSD)を下記に示します。標準溶液、マウス血清、野菜ジュースともにほとんどの成分でRSD10％未満の良好な再現性が得られ、高速分析の実用が可能と考えます。
標準溶液とマウス血清の再現性(RSD) 分布
標準溶液0.02mM

マウス血清

野菜ジュース(糖：0.2mM)
2成分
5成分

65成分

1成分
5成分
36成分

2成分
3成分
46成分

10％未満
10-15％
15％以上