ごあいさつ
この度コスメトロジー研究振興財団として、25 冊目の研究報告書を刊行いたしました。
設立以来 25 年以上にわたって、化粧品科学及び関連分野に貢献する研究テー
マに対し助成活動を滞りなく継続できたことは、多くの関係者の皆様のご理解ご協力によるものと、改めて感謝申し上げる次第でございます。
当財団の助成領域につきましては、医学、化学、薬学、生理学、心理学、文学、社会学など多岐にわたる分野の研究者のお力添えにより、コスメトロジーという分野が発展してきたといっても過言ではありません。助成させていただいた研究
テーマは、新素材設計、ライフサイエンス、化粧心理、文化論など多種多様であり、化粧品学の発展に有用な貢献ができたと考えております。また当財団の活動がその社会貢献の一助になっていることを幸いに思っております。
今回の報告書では、平成 26 ～ 27 年度に助成を受けられた方の中から 29 名の方の研究成果を掲載いたしました。
素材、物性に関する分野では、抗酸化、抗老化等の視点での機能性素材開発に関するテーマと、特に安全性の高い製剤化研究が顕著であったと思われます。
生体作用、安全性に関する分野では、皮膚のバリア機能、恒常性維持などにおける新たなメカニズムに関わる研究と、例年のように皮膚の老化に関する研究が中心であったと思われます。
精神、文化に関する分野の研究につきましては、世界各国の化粧品ニーズに関する研究や化粧のもたらす心理や行動への影響などの研究が大変興味深い内容であったと考えています。
この研究報告書 COSMETOLOGY 誌がより幅広く活用されることを祈念します。
当財団は分野の枠や研究機関の属性などにとらわれることなく、化粧品学の発展のために、優れた研究に対して積極的に助成を行っていきたいと考えております。
今後とも、皆さまのますますのご協力とご支援をお願い申し上げます。

平成 29 年 7 月
公益財団法人 コスメトロジー研究振興財団
理事長

小林

保清

目

次

■ごあいさつ
■研究報告
Ⅰ．素材、物性に関する分野
・･天然を超える抗酸化＆抗菌活性の発現をめざしたポリフェノール模倣高分子の精密重合･･････････････ 4
東京大学大学院工学系研究科 マテリアル工学専攻 江島 広貴・･アーユルヴェータ生薬および熱帯植物からのアンチエイジングを志向した
抗糖化および美肌薬の創薬研究･････････････････9
広島大学大学院医歯薬保健学研究科 杉本 幸子
・･エラスチン類似ポリペプチドの合理的設計による温度応答性ゲルの創製･･･････････････････････････ 16
名古屋大学大学院工学研究科 応用物質化学専攻 鳴瀧 彩絵
・･高分子ナノゲル粒子の短距離秩序に基づく色彩の研究･･･････････････････････････････････････････ 21
九州大学大学院工学研究院 化学工学部門 三浦 佳子
・･水溶性フラーレンの設計とそれらを用いた抗酸化作用に関する研究･･･････････････････････････････ 27
東京工業大学物質理工学院 道信 剛志
・･安全性に優れた化学合成コラーゲンによるドラッグデリバリー用球状微粒子の創成 ･･･････････････ 30
九州工業大学大学院生命体工学研究科 宮崎 敏樹
・･バイオベースマテリアルを用いた人体により安全な染毛法の開発 ･･･････････････････････････････ 34
京都工芸繊維大学大学院工芸科学研究科 繊維学系 安永 秀計
Ⅱ．生体作用、安全性に関する分野
・･タイトジャンクションの形成を促進するシグナル伝達経路の解明･････････････････････････････････ 42
九州大学理学研究院 生物科学部門 池ノ内順一
・･酸化ストレスの生体分子イメージングから迫る対紫外線スキンケア分子の新規探索と機能評価･･･････ 46
群馬大学大学院医学研究科 教育研究支援センター岩脇研究室 岩脇 隆夫
・･慢性皮膚炎モデルにおける HDC 遺伝子レポーターマウスを用いたヒスタミン産生細胞の同定････････ 50
浩
東北大学大学院工学研究科 大津・･レチノイン酸の皮膚内濃度モニタリングと新規アンチエイジング分子の同定への応用･･･････････････ 56
滋賀医科大学 解剖学講座生体機能形態学部門 岡野 純子
・･光線過敏症リスク予測方法の確立と国際協調活動の戦略的推進･･･････････････････････････････････ 60
静岡県立大学薬学部 薬物動態学分野 尾上 誠良・･炎症時における細胞動態と酵素活性を in vivo で可視化する機能性 MRI プローブ･･･････････････････ 68
大阪大学大学院工学研究科 菊地 和也
・･皮膚顆粒細胞の活性化とタイトジャンクション修復による皮膚バリア機能増強とアトピー・アレルギーの発症予防･･････････････72
博
徳島大学先端酵素学研究所 木戸・･皮膚組織のコラーゲンが体の温度適応に与える影響 ･･･････････････････････････････････････････ 78
篤
甲南大学理工学部 統合ニューロバイオロジー研究所 久原・･新規ナノ粒子を用いた皮内 siRNA デリバリーによる皮膚の恒常性維持･････････････････････････････ 83
長崎大学病院 薬剤部 佐々木 均

・･創傷をより綺麗に修復させる皮膚再生促進薬の開発･････････････････････････････････････････････ 89
東海大学医学部 基盤診療系再生医療科学 住吉 秀明
・･経皮吸収物質の体内動態のイメージング質量分析による解析･････････････････････････････････････ 96
修
福井県立大学生物資源学部 生物資源学科 平・･皮膚バリア機能障害を伴う皮膚疾患を対象としたラマン分光装置を用いた
角層天然保湿因子の解析････････････････････ 103
大阪医科大学 皮膚科 谷崎 英昭
・･極長鎖脂肪酸含有セラミドの表皮バリア形成における機能と分子機構の解明 ････････････････････ 108
大阪市立大学 複合先端研究機構 中台（鹿毛）枝里子
・･創傷治癒機構における小胞体ストレス応答の関与･･････････････････････････････････････････････ 113
和歌山県立医科大学 薬理学講座 松﨑 伸介
Ⅲ．精神、文化に関する分野
・「･ 香り」の社会言語学：人はどのように「香り」の言語化を行うのか･････････････････････････････ 120
照二
ユタ大学言語文化学部 東・･ムスリム女性の「美」と消費─中東におけるハラール化粧品の可能性─････････････････････････ 126
神奈川大学外国語学部 大川真由子

・･患者や家族と看護者の化粧に対する認識の比較に関する研究････････････････････････････････････ 130
愛知県立大学看護学部 看護学研究科 荻 あや子
・･女子青年における容姿に対する劣等感への化粧効果の認識に関する発達心理学的研究･･････････････ 138
和光大学現代人間学部 髙坂 康雅
・･消費者ニーズの変化と化粧品流通チャネルに関する研究 ─日本・中国・イギリスの３か国比較─････ 152
同志社大学商学部 佐々木一郎
・･バイオミメティック触覚センシングシステムによる化粧料の使用感評価 ････････････････････････ 158
山形大学大学院理工学研究科 野々村美宗・･女性の美における訴求表現に関する研究 ･･ ･･･････････････････････････････････････････････････ 162
静岡文化芸術大学文化政策学部 国際文化学科 広瀬 英史
・･化粧がもたらす自己の価値および社会行動における価値の変化 ─行動学的検討････････････････････ 170
福島県立医科大学医学部 システム神経科学講座 藤原 寿理■記念講演・第 27 回表彰・贈呈式記念講演「顔 ─その魅力の内側 美術解剖学的視点から」････････････････････････････････････････････････ 179
東京藝術大学美術学部 宮永 美知代■コスメトロジー研究雑感・･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 187
■付

録

事業報告書

････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 205

2016 年度

研究助成を受けられた方々 ････････････････････････････････････････････････････････････ 207

役員一覧･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 210

●Ⅰ．素材、物性に関する分野
Ⅱ．生体作用、安全性に関する分野
Ⅲ．精神、文化に関する分野●

天然を超える抗酸化＆抗菌活性の発現をめざした
ポリフェノール模倣高分子の精密重合東京大学大学院工学系研究科マテリアル工学専攻

江島広貴

Polyphenols are plant-derived chemicals with more than or equal to two phenolic hydroxy groups by the Quideau
definition. These molecules usually have both catechol and gallol groups in their chemical structures, that play key roles intheir antioxidant and antibacterial activities. Inspired by this, I synthesized gallol-functionalized polymers via controlled
radical polymerization for the first time. The reversible addition–fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization of
3 , 4 , 5 -trimethoxystyrene was carried out using cyanomethyl dodecyl trithiocarbonate as the chain transfer agent. Thismethod produces well-defined polymers with a wide range of molecular weight (from 5 . 4 to 53 . 4 kg mol – 1 ) and low
polydispersity index (Mw/Mn < 1 . 3 ). Subsequent demethylation of poly( 3 , 4 , 5 -trimethoxystyrene) yields poly( 3 , 4 , 5 trihydroxystyrene) (polyvinylgallol, PVGal). These newly synthesized polymers exhibit greater antioxidant activities thanwidely used catechol-functionalized polymers based on the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical (DPPH), 2,2’-azinobis(3ethylbenzothiazoline- 6 -sulfonic acid) (ABTS), and oxygen radical absorbance capacity (ORAC) methods. Given this highantioxidant property, the effective use of gallol-functionalized polymers in biomaterials is expected.

1. 緒

クであるフェノール性官能基（ガロール基）に着目し、これ言を側鎖に持つ新規ポリマー、ポリビニルガロール（PVGal）

持続型社会への転換要請から、バイオマス由来の素材ををリビングラジカル重合によって合成した（Fig. 1b）。こ用いた機能性材料開発が求められている。ポリフェノール

れまで、有機低分子化合物として用いられてきた ‘ポリ’ フは植物の葉、茎、樹皮、果皮、種子などに多く含まれていェノールをポリマー化することによって、優れた加工性、るバイオマス由来の化合物である。Quideau の定義

1）

では、

多価効果、隣接効果、分子量効果などが期待でき、天然のポリフェノールとは分子内に 2 つ以上のフェノール性ヒド

ポリフェノールより優れた抗酸化 or 抗菌素材開発が可能

ロキシ基を持つ植物成分の総称である。抗酸化作用、抗炎になるものと期待される。

症性、抗菌作用といった優れた生理活性を持つものが多く、人類はその長い歴史の上で、伝統的にポリフェノールを活

2. 方

法

く、革なめし工程におけるタンニン、ワインにおけるタン

2. 1. Wittig 反応による 3,4,5-トリメトキシスチレン（TMS）の合成

パク質系澱下げ剤、漆（ポリフェノールの一種）
塗りやお歯

窒素雰囲気下でメチルトリフェニルホスホニウムブ

黒における利用など、枚挙にいとまがない。ポリフェノー

ロミド（26.2g，74.9 mmol）を無水 THF（180 mL）に懸濁

ルの抗菌作用は抗生物質と比べると弱いものの、環境と生し、− 78 ℃に冷却して n- ブチルリチウム（1.6 M ヘキサン

体に優しい抗菌物質として近年再び注目を集めている。ま溶液を 47 mL，75.2 mmol）を加えた。反応混合物を室温た、没食子酸プロピル（ポリフェノールの一種）
は化粧品にまで昇温させた後、3,4,5 - トリメトキシベンズアルデヒド

抗酸化物質として既に配合されている。ところで、有機化（TMB，11.0g，55.3mmol）を加え、一晩攪拌した。反応溶学で用いられる ‘ポリ’ は 2 コ以上をさすため、フェノール

液を 100 mL の蒸留水に注ぎ、ジエチルエーテルで抽出し性水酸基を 2 コ以上分子内に持てば ‘ポリ’ フェノールであた。硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過後、溶媒を減圧留去る。一方、高分子科学で用いられる‘ポリ’は通常 10 コ以上した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサ

をさし、‘ポリ’フェノールはいわゆる‘ポリ’マーではない。

ン / 酢酸エチル =4/1）で精製し、目的物を得た（収率 64%）。

用してきた。例えば、薬や食品添加物としての例は数多

本研究ではポリフェノールの化学構造（Fig. 1a）から着想を得て、そのシンプルかつ普遍的なビルディングブロッ

1

H NMR（4 0 0 MHz，CDCl3）：（δ，ppm）6.7（2H，s，Ar-

H），6.7–6.6（1H，m，CH=CH2），5.7–5.1（2H，m，CH2=CH），
3.9（6H，s，OCH3），3.8（3H，s，OCH3）．13C NMR（400 MHz,CDCl3）：（δ，ppm）152.7，135.5，104.4，60.7，55.8，31.9．

Controlled Radical Polymerization of
Polyphenol-Inspired Polymers with HighAntioxidant and Antibacterial Properties
Hirotaka Ejima
Department of Materials Engineering,
The University of Tokyo2. 2. RAFT 重合 によるポリトリメトキシスチレン（PTMS）の合成
シ ュ レ ン ク 管 に TMS（2 g，10.3 mmol）、cyanomethyl
dodecyl trithiocarbonate（CDTTC）、 重 合 開 始 剤−4−天然を超える抗酸化＆抗菌活性の発現をめざしたポリフェノール模倣高分子の精密重合

Fig. 1 Polyphenols and polyphenol-inspired polymers.
(a) Chemical structures of gallic acid found in strawberry, myricetin in apple,
epigallocatechin in tea leaf, lignin in wood.
(b) Synthetic route for the preparation of poly(3,4,5-trihydroxystyrene), PVGal.

azobisisobutyronitrile（AIBN）、THF（4mL）を入れ、凍結脱気を 3 回繰り返した後、窒素を充填した。オイルバ
ス中で 60 ℃に加熱することで RAFT 重合を開始した。この時のモノマー TMS に対する CDTTC と AIBN のモル比（［TMS］：［CDTTC］：［AIBN］）を変えることで、様々な分子量の PTMS を合成した。重合後、反応溶液を 0 ℃に冷却した。THF（10 mL）を添加することでポリマーをよく溶解させ、これをヘキサンで再沈殿することで PTMSを得た（収率 90%、Fig. 2）。1H NMR（400MHz, CDCl3）：（δ，ppm）6.3–5.5（Ar-H），4.0–3.4（OCH3），3.3–3.1（CH2-S），
2.4–2.2（CH2-CN），1.2-0.7（C1 0H2 0-CH 3），2.1–1.0（CH（Ar）-CH2）．1 3C NMR（4 0 0 MHz, CDCl 3）：（δ, ppm）1 5 2.7，
135.5，104.4，60.7，55.8，41.2，31.7，29.7，22.9，14.4．
Fig. 2 1H NMR spectra of (a) PTMS and (b) PVGal.

2. 3. ポリビニルガロール（PVGal）の合成
100 mL ナス型フラスコ中で PTMS（0.96g，5mmol）を法（DPPH アッセイ）、2,2’ -azinobis（3-ethylbenzothiazoline-

ジクロロメタン 20mL に溶かし、15 分間窒素でパージした。

6-sulfonic acid）カチオンラジカル消去活性法（ABTS アッ

溶液を 0 ℃まで冷却し、10 分間攪拌した後、三臭化ホウセイ）、oxygen radical absorbance capacity 法（ORAC ア

素（1 M，15 mL，15mmol）を 10 分間かけて滴下した。30ッセイ）の 3 種の方法を併用して評価した。

分後に反応溶液を室温まで昇温し、一晩攪拌した。1% 塩

2. 4. 1. DPPH アッセイ

酸水溶液を加え、生じた沈殿を濾過によって回収した。こ36 mg の DPPH を 100 mL のメタノールに溶かしてスト

れをメタノールに溶かして濾過した。瀘液をエバポレータ

ック溶液とした。このストック溶液と抗酸化物質のメタノーによって濃縮し、THF に再び溶解した。これをヘキサール溶液を適切な量希釈し混ぜることで、DPPH の終濃度

ンで再沈殿し、瀘過で回収することで目的物を得た（収率が 91μM、抗酸化物の終濃度が 250，100，50，25，10，5，

160%）。 H NMR（400MHz，DMSO-d6）：（δ，ppm）9.1–

2.5，1，0.5，0.25 mM となるように溶液を調製した。その8.0（OH），6.2 –5.4（Ar-H），2.2–0.8（CH（Ar）-CH2）．13C

後すぐに、515 nm における吸光度を 0.2 秒ごとに 12 分にNMR（400 MHz，CD3OD）：144.8，131.1，106.7，67.9，

わたって測定した。抗酸化能は以下の式より計算した。

40.3，31.7，25.2，22.3，13.3．

Radical scavenging effect（%）=［（Control Abs.）– Sample Abs. / Control Abs.］× 100

2. 4. 抗酸化能の測定

2. 4. 2. ABTS アッセイ

抗酸化能は2,2-diphenyl-1-picrylhydrazylラジカル消去活性−5−ABTS と硫酸カリウムの混合水溶液（終濃度はそれぞコスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

れ 7.0, 2.5 mM）を 20 時間暗所で静置した。これを λ=734

分子量を求める際はポリスチレンを標準物質として作成しnm における吸光度が約 1.0 になるように希釈し、所定のた検量線を使用した。絶対分子量を求める際に必要な屈折濃度の抗酸化物質と混ぜ、吸光度の退色を追跡した。抗率濃度増分（dn/dc）は 0.104 mL g-1 であった。

酸 化 能 は 以 下 の 式 に よ り 標 準 物 質 6-hydroxy-2,5,7,8-

3. 結果と考察

tetramethylchroman-2-carboxylic acid（Trolox）換 算 値（Trolox equivalent antioxidant capacity, TEAC）として計RAFT 重合（可逆的付加開裂連鎖移動重合）の際に使用算した。ただし、A12 は 12 分後の λ=734 nm における吸光

する連鎖移動剤（CTA）は、分子量の制御に重要である。

度を表す。

CTA は成長ポリマー鎖からラジカルを受け取り、ポリマ
ーの伸長を止めるが、ラジカルを受け取った CTA はモノ

TEAC =［A12 − A0］antioxidant /［A12 − A0］
trolox2. 4. 3. ORAC アッセイ

マーを攻撃して再び重合を開始させる。この平衡反応の存

フルオレセインのリン酸緩衝溶液（70nM，pH7.4）と在によりラジカル活性種の濃度が反応溶液中で低く抑え

抗酸化ポリマー（モノマー単位の濃度で 10 μM）のメタられるため停止反応などの副反応が起こりにくい。そのた

ノール溶液（0.3 mL）を石英セル中で混合した。次に、2,2’

め RAFT 重合では通常のラジカル重合と比べて分子量分-azobis（2-methylpropionamidine）dihydrochloride（AAPH）

布の狭いポリマーを合成することができる。しかしながら、のリン酸緩衝溶液（18mM，pH 7.4）を添加し、蛍光強度用いるモノマー種によって適する CTA と適さない CTA が（Ex：468 nm，Em：520nm）を 60 分にわたって 2 秒ごと存在するため、最適な CTA を探索する必要がある。

に測定した。蛍光強度を時間に対してプロットし、その曲本研究では、まず 4 種類の CTA、2 （- dodecylthiocarbono

線の下部の面積（Area Under the Curve, AUC）を計算しthioylthio）-2-methylpropionic acid（DDMAT）、た。対照実験として、メタノールのみを加えた（サンプルcyanomethyl dodecyl trithiocarbonate （CDTTC）、

濃度 0 μM）ものと Trolox のメタノール溶液（濃度：1，3，5，2-cyano-2-propyl dodecyl trithiocarbonate（CPDTTC）、

7 μM）を加えたものでも測定して AUC を求め、検量線を4-cyano-4-［（dodecylsulfanyl-thiocarbonyl）sulfanyl］

作成した。この検量線を用いることで、抗酸化能は TEAC

pentanoic acid（CDSPA） を用いて、RAFT 重合 条 件 の値として算出した。

最適化を行った。
［TMS］：［CTA］=30：1 の条件で（標的
重合度 30）重合したところ、得られたポリマーの重合度は

2. 5. 測定機器
1

DDMAT，CDTTC，CPDTTC，CDSPAの場 合、 それぞ

13

H-， C-NMR 測定は、日本電子社製の NMR 分光測定

れ 16，29，18，18 であった。また多分散度（Mw/Mn）は 1.4，装置（JNM–AL400）を用いた。紫外可視分光光度計は日1.2，1.2，1.6 であった。CTAを用いないフリーラジカル重立社製の U-3010 を使用した。フーリエ変換赤外分光装置

合では、得られたポリマーの重合度は 80 でMw/Mn は 2.3 では Thermo Scientific 社 製 の Nicolet iS10 FT-IR に Smartあった。最も標的重合度に近く、分子量分布も狭いポリマー

iTR attenuated total reflectance apparatus を装着したもが得られた CDTTCを CTAとして用いることに決定した。

のを用いた。数平均分子量（Mn）、重量平均分子量（Mw）は次に CTA と重合開始剤の比を［CDTTC］：［AIBN］=1：

絶対分子量測定マルチ検出器システム（示唆屈折計検出器，

1 に固定し、モノマーと CTA の比を［TMS］：［CDTTC］

粘度検出器，光散乱検出器）を備えた東ソー社製の GPC=20：1，30：1，50：1，100：1，200：1，300：1 で 重 合（HLC-8320）に TSKgel GMHHR-M カラムを装着したもの

し た と こ ろ、26，35，53，115，185，276 量 体 の PTMS

を用いて求めた。クロロホルムの流速は 1mL min‒1、相対が得られた（Fig. 3）。すなわち Mn にすると 5 – 50 kg mol-1

Fig. 3 (a) Plots of molecular weight (Mn) and polydispersity (M w/Mn) against RAFT polymerization time.
(b) GPC traces of PTMS with various molecular weight.

−6−

天然を超える抗酸化＆抗菌活性の発現をめざしたポリフェノール模倣高分子の精密重合

Fig. 4 Reaction of the DPPH radical and a phenolic molecule.

Fig. 5 (a) Decoloration of the DPPH radicals in methanol reacting with polyphenolinspired polymers. (b) The antioxidant activity of polyphenol-inspired polymers andthe corresponding monomers after 2 min with the tested antioxidant in thepresence of DPPH.

の範囲で分子量を良好に調節できた。どの分子量の PTMS
も Mw/Mn は < 1.3 であり、分子量が揃ったポリマーが得られた。最後に、PTMS のメトキシ基を三臭化ホウ素によって脱保護することで PVGal を得た。脱保護反応の進行は
1

H NMR，13C NMR，FT-IR によって、メトキシ基ピークの消失およびヒドロキシ基ピークの出現から確認した。
DPPH は 安 定 な ラ ジ カ ル を 持 ち、 紫 色 を 呈 色 す る。
DPPH ラジカルが Fig. 4 のような反応を経て抗酸化物質によって消去されると、色が黄色に変化するため、比色分
析によって抗酸化活性を評価することができる 2）。フェノール性水酸基をそれぞれ１つ、２つ、３つ持つ、PVPh、Fig. 6 DPPH decoloration kinetics for the tested antioxidant
polymers.

PVCat、PVGal の抗酸化活性を Fig. 5 に示した。フェノール性水酸基の数が多くなるほど高い抗酸化活性を示しでは退色はほとんどみられなかった。使用したポリマーのた。PVGal は PVPh と比べると 60 倍以上、PVCat と比べ重合度は約 110 量体で揃えてあるため、溶液中での拡散速ても 2 倍程度の高い抗酸化活性を示した。この際、用いた度に大きな差はない。そのため PVGal の高い DPPH ラジ

フェノール性ポリマーの重合度は約 100 に揃えてある。低カル消去活性はその化学構造に由来すると考えられる。
ガロール基の 3 つのヒドロキシ基の酸化還元電位は 1.16，分子のピロガロールとピロカテコールは、ポリマーである
PVGal と PVCat よりも同じ重量濃度で比べると高い抗酸

1.40，1.92 V（vs. Ag/AgCl）である。一方で、カテコール化活性を示したが、モル濃度で比べるとポリマーの方が高基の 2 つのヒドロキシ基の還元電位は 1.18，1.35V（vs.

い抗酸化活性を示した。

Ag/AgCl）である 3）。1 つ目の酸化還元電位はガロールのFig. 6 に DPPH の紫色（Abs. = 515 nm）の退色過程を時方が若干低いため、酸化されやすい。すなわち抗酸化活性間に対してプロットしたものを示す。DPPH ラジカルのは高い。それに加えて、ガロール基は Fig. 7 に示すように、消去速度は PVGal>PVCat>PVPh という順番であり、Fig.

発生したラジカルは隣接する 2 つのヒドロキシ基と水素結

5b の抗酸化活性と同様の順番であった。PVGal は約 2 分

合して、カテコール基の場合よりもさらに安定化される。

で DPPH をほぼ全て退色させたが、PVCat は 10 分以上をこの効果は密度汎関数理論（DFT）による計算から、ガロ要した。また測定した 12 分という時間内において PVPh

ール基では 50 kJ mol-1、カテコール基では 33 kJ mol-1 と−7−

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

4. 総

括

市販の化合物である TMB からポリフェノール模倣高分
Fig. 7 Stabilization of phenoxy radicals via hydrogenbondings in gallol and catechol groups.

子 PVGal を合成する 4 ステップの合成ルートを確立した。
さらにリビングラジカル重合の一種である RAFT 重合の条件を最適化し、分子量を制御した PVGal を得ることがTable 1 Trolox equivalent antioxidant capacity ( TEAC)
values of the antioxidants calculated from the ABTS and
ORAC assays.
Antioxidant

ABTS

ORAC

Trolox1.0

1.0

PVPh1150.4

0.1

PVCat111

0.9

0.8

PVGal115

1.4

1.5

できた。今回合成した新規ポリマーである PVGal は他のフェノール性高分子と比べて特に高い抗酸化活性を示した。
謝

辞本研究の遂行にあたり、公益財団法人コスメトロジー研

究振興財団によりご援助いただきましたことに深謝いたします。
（総括引用文献）見積もられる。これにより、ガロール基を側鎖に多くもつ

1） Quideau S, Deffieux D, Douat-Casassus C, Pouysegu
L : Plant polyphenols: Chemical properties, biological

PVGal は高い抗酸化活性を示したと考えられる。

activities, and synthesis, Angew. Chem. Int. Ed., 5 0,

続いて、ABTS アッセイと ORAC アッセイから求めた

586–621, 2011.

TEAC 値を Table 1 に示す。TEAC 値とは、抗酸化物質の標準である Trolox の抗酸化能を 1 として、それに対し

2） Piras A M, Dessy A, Dinucci D, Chiellini F :て相対的に抗酸化能がどのくらいかを表した換算値であ2-Methoxy aniline grafted poly(maleic anhydride-alt-

り、値が大きい方が、抗酸化能が高い。ABTS/ORAC ア

butyl vinyl ether) hemiester: A new biocompatible

ッセイともほぼ同様の結果を与えた。PVGal の TEAC 値

polymeric free radical scavenger, Macromolecules, 4 4,は約 1.5 となり、Trolox よりも大きな値となった。一方で848−856, 2011.

天然のポリフェノールであるエピガロカテキンガレート

3） Carter M K: Correlation of electronic transitions and（EGCG）の TEAC 値を ABTS アッセイで求めたところ 4.2

redox potentials measured for pyrocatechol, resorcinol,

であり、PVGal はその値に及ばなかった。しかしながら、hydroquinone, pyrogallol, and gallic acid with results

分子量の違いを考慮にいれた IC50 値では EGCG の 3.5μM4）of semi-empirical molecular orbital computations–A

に対し、PVGal は 0.3μM と一桁低い値を示した。IC50 値はuseful interpretation tool, J. Mol. Str., 831, 26−36, 2007.

酸化を 50% 阻害する濃度であるから、その値は小さい方

4） Snijman P W, Joubert E, Ferreira D, Li X C, Ding Y,が少ない濃度で酸化を阻害できることを示しており、抗酸Green IR, Gelderblom W C : Antioxidant activity of the

化活性が高い。

dihydrochalcones aspalathin and nothofagin and theircorresponding flavones in relation to other rooibos(aspalathus linearis) flavonoids, epigallocatechin gallate,
and trolox, J. Agric. Food Chem., 57, 6678–6684, 2009.

−8−

アーユルヴェーダ生薬および熱帯植物からのアンチエイジングを志向した抗糖化および美肌薬の創薬研究
広島大学大学院医歯薬保健学研究科

杉本幸子

Advanced glycation endproducts (AGEs), which readily form and accumulate with sustained hyperglycemia, contributeto the development of diabetic complications and, as such, are considered a potential therapeutic target. Some isolated
compounds from two plants showed strong inhibitory activity toward AGEs formation, the inhibitory activity of a positive
control, aminoguanidine, being 1 . 29 mM. The current results ndicate that, in comparison with the reference compound,)aminoguanidine, which once entered phase II clinical trials, but was withdrawn because of its side effects 1 , flavonoid
glycosides were clearly more efficient in inhibiting the formation of AGEs. Thus, these compounds seem to be worthy of
consideration as potential therapeutic agents for diabetic complications and related diseases though additional biologicalevaluation. Among the isolated compounds, isolinariins C, D and E ( 1 , 2 and 3 ) showed inhibition toward AGE formation(IC 50 values of 34 . 8 , 35 . 0 and 19 . 5 µM, respectively). Collagenase is an enzyme that is known to be a member of matrix
metalloproteinase (MMP) family. The agents that inhibit collagenase may have beneﬁcial effects for maintaining healthyskin by preventing dermal matrix degradation. Therefore, the isolated compounds were evaluated the collagenase inhibitory
activity. The results showed that linariin ( 4 ) and pectolinarin ( 5 ) exhibited weak inhibition with IC 50 values of 79 . 4 and78 . 6 µM, respectively. Luteolin ( 8 , 40 . 5 µM) showed stronger inhibitory activity than that of a positive control, caffeic acid)(an IC 50 value of 120 µM) as reported previously 2 .

1. 緒や動脈硬化症などの発症に関与することが知られている

言

Advanced glycation end-products（AGEs）の生成阻害活

機能性食品や飲料、健康食品、サプリメント、医薬品な性を有する化合物を天然物素材より探索する。AGE はタ

ど幅広い産業へと美白・アンチエイジング市場が拡大してンパク質と糖によりメイラード反応や褐変反応といった非おり、
特に医療と美容が融合したコスメシューティカル（機酵素反応で形成される。簡潔に書くとメイラード反応は二能性化粧品）が注目されている。その中でも特に美白機能段階で起こり、最初のグリケーションは可逆的で、還元糖を中心とした機能性化粧品が近年大きな市場となり、また、のカルボニルからのシッフ塩基の保護、タンパク質（リジ

若年層をターゲットとした初期段階からの美白・老化症状

ン、アルギニン）の第一級アミノ基の保護を含んだ反応での予防なども求められており、日本のみならず海外でも活あり、イミン付加体は再転位して HbA1c のようなアマド発に研究がなされている。

リ化合物を形成する。アマドリ化合物は糖尿病のコントロ本研究では、探索対象の植物が未利用植物、もしくはアールマーカーとして広く使われている。後の反応では複合ーユルヴェーダ生薬であってもその含有成分や、薬理活性体は不可逆的酸化反応、縮合と環化を起こし分子内外で架が未解明の植物が主であるため、Entada 属植物で得られ橋形成をして、AGE を形成する 6）。

た含硫含窒素化合物のような 3-5）、既存のものとは異なる

また、皮膚の老化や骨粗しょう症などの代謝性疾患、関新しいタイプの美容薬のリード化合物が期待できる。近年、節炎などの緩和に有効とされるコラゲナーゼ阻害化合物に活発に美白に関する研究は行われているが、実際の市場調ついても合わせて探索している。コラーゲンは動物の結合査などによると、それら美白薬を使用して効果があると実組織を構成する皮膚の弾力性やハリを保つ真皮の大部分を感しているのは少数例である。そこで、遺伝的多様性に富占める主要タンパク質であり、コラーゲンの減少・変性にむ亜熱帯、熱帯地域産の未利用植物資源から抽出・単離を

よってシワ、シミ、タルミなどの皮膚の老化現象が引き起行い、美容薬の医薬シード化合物を見出すことを研究目的こされる。種々の組織においてⅠ型～ⅩⅢ型の 13 種類のとする。

存在が知られている。コラゲナーゼは、コラーゲンタンパ

特に、皮膚の老化にかかわるだけでなく、糖尿病合併症

ク質を特異的に切断する酵素であり、加齢や紫外線による皮膚のシワの発生や粘弾性の低下、骨粗しょう症等の代謝性疾患、炎症性疾患、リウマチなどの関節性疾患など多くの疾患に関与する。このコラゲナーゼ活性を阻害すること

Search for anti-aging drugs from ayurbedic
and tropical plants
Sachiko Sugimoto
Graduate School of Biomedical & Health
Sciences, Hiroshima University

により、上述した疾患の改善につながると考えられる。このような背景のもと、我々は美容薬として有効な化合物を
天然物素材から探索している。

−9−コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

2. 実

2. 3. コラゲナーゼ阻害活性試験

験96 ウ ェ ル に サ ン プ ル、50mM Tricine 緩 衝 液、20µg/

2. 1. 植物抽出エキスおよび各溶出画分からの化合物の精製・解析

mL コラゲナーゼを加えて、37 度で 10 分間培養後、40µg/
mL の基質を加える。すぐに蛍光光度計で Ex（測定励起波

本研究で用いた植物サンプルはいずれも乾燥物を室温で長）=320nm、Em（測定蛍光波長）=405nm で測定し、こ

1 週間メタノールに浸し、得られた抽出液はエバポレータの時を 0 分後とし、15 分後、30 分後に測定をする。なお、ーを用いて溶媒を留去させ、エキスを得た。そのエキスを測定するまでの間は常に 37 度にキープした。この活性試

ヘキサン、酢酸エチル、ブタノール、水を用いて溶媒分配

験の原理は、基質 MOCAc - PRO - Leu -Gly - Leu - A2pr（Dnp）

を行い、各移行部について、順相カラムシリカゲルクロマ-Ala-Arg-NH2 の Leu-Gly の結合を特異的にコラゲナーゼがトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、および高切断し、切断された部分構造が蛍光光度計では Ex 320nm、

速液体クロマトグラフィーを用いて化合物を単離した。単Em 405nm で測定されることより、阻害化合物を添加する

離した化合物については、薄層クロマトグラフィーで確ことによって、コントロールに比べどの程度阻害されたの認後、化学構造を決定するために、まず核磁気共鳴装置

かが判断できる。

（NMR）を用いて化学構造を推定し、質量分析装置（MS）でポジティブコントロールはカフェイン酸（IC50=2.91mg/

その分子式を決定した。さらに、不斉炭素のある化合物に

mL、東京化成工業株式会社、CAS 番号：331-39-5）
を用いた

ついてはその旋光度測定や分解反応を行い立体配置を決定（Fig. 2）。コラゲナーゼは Collagenase from Clostridium

した。

histolyticum（Sigma Aldrich Japan、C9263）を使用し、基測定機器に関しては、NMR は Bruker Avance III 600

質はMOCAc-PRO-Leu-Gly-Leu-A2pr（Dnp）-Ala-Arg-NH（ペ2spectrometer、MS は LTQ Orbitrap XL、 赤 外 吸 収 ス

プチド研究所、Code：3163-v Lot：630316）を、Tricine は（東

ペ ク ト ル は HORIBA FT-710、UV ス ペ ク ト ル は JASCO

京化成工業株式会社、CAS 番号：5704-04-1）を用いた。

V-520 UV/Vis spectrophotometer を用い、旋光度測定には JASCO P-1030 digital polarimeter、CD スペクトルには

2. 4. 細胞増殖抑制試験

JASCO J-720 spectropolarimeter を用いた。

ヒト肺がん上皮細胞（A549）を用いて化合物の細胞増
殖 抑 制 活 性 を 検 討 し た。10 %FBS Dulbecco’ s modified

2. 2. AGEs 形成阻害活性試験

Eagle’ s medium に 100 µg/mL の kanamycin および 0.5µg/

96 ウェルプレートに、10mg/mL ウシ血清アルブミン

mL の amphotericin B で培養した A549 細胞を、96 ウェル

BSA（0.02% アジ化ナトリウムを添加した 50mM リン酸

プレートに 5 × 103cells/well になるように播種し、サンプ

緩衝液）に、0.5 M リボース溶液を加えたのち、サンプル

ルを添加後二酸化炭素存在下 37 度 72 時間培養した。ポを添加した。24 時間 37 度で培養後、その蛍光を測定した

ジティブコントロールは doxorubicin を用いた。培地を（EnSpire，PerkinElmer Japan；Ex：370nm，Em：440 nm）。

吸引後 MTT 溶液を加え、1.5 時間さらに同様に培養した。

ポジティブコントロールとして、アミノグアニジン塩酸

MTT 溶液を吸引し、DMSO を添加し、マイクロプレート

塩（東京化成工業株式会社、CAS 番号：1937-19-5）を用いリーダー（Abs：540 nm）でその吸光度を測定した。

た（Fig. 1）。

3. 結阻害の程度については以下の式で算出した。

果 7-9）

3. 1. ウンランからの化合物の単離・構造解析
ゴマノハグサ科ウンラン属 Linaria japonica、和名：ウ
ンラン（海蘭）は海岸の砂地を這うように自生する多年草で、

sample：試料添加
blank of sample：試料添加、リボースを添加せずに、BSA

高さは 10 〜 15 cm 程度であり、葉は対生か 3~4 枚の輪生を代わりに添加で楕円形をしている。花は黄白色の地上部の大きさに比べ、

control：試料添加なし

大きな花を咲かせる。近年は自然海岸が減少していること

blank of control：試料添加なし、リボースを添加せずに、から、それに伴い、ウンランの自生地も減少していると言BSA を代わりに添加

Fig. 1 Aminoguanidine Hydrochloride

Fig. 2 Caffeic acid− 10 −

アーユルヴェーダ生薬および熱帯植物からのアンチエイジングを志向した抗糖化および美肌薬の創薬研究

Fig. 3 Isolated compounds from Linaria japonica

われている。利尿作用や、緩下作用があり、乾燥した全草

ピーク δH 6.68（s）および 6.89（s）、そして AA’ BB’ のカッ5 〜 10 g を煎じて服用する。

プリングパターンを示したピーク δH 7.08（d, J = 8.1 Hz）おウンランの全草をメタノールで抽出し、溶媒分配後、各

よび 7.95（d, J= 8.1 Hz）が観測された。
13

種カラムクロマトを用いて含有化合物の単離を行ったとこ

C NMR スペクトルでは計 33 本の炭素が確認され、ろ、いずれもフラボノイド骨格を有する化合物が単離さHSQC スペクトルから ラムノースの 6 位のメチル（δC

れた（Fig. 3）。化合物 1~5 はフラボノイドの配糖体であり、18.0）、2 個のアセチル基に由来するピーク（δC 20.6，171.5

そのうち 1 〜 3 は新規化合物であったことから、各化合物

および δC 20.8，172.1）、2 個のメトキシ基由来のピーク（δCをそれぞれ 5mg 秤量し、1M の塩酸を用いて酸加水分解後、

56.2，61.7）、酸素官能基に結合したメチレン（δC 67.5）、糖

amberlite IRA-400 を用いて中和後、溶媒を留去した。残部分の 8 個の酸素官能基に結合したメチン（δC 70.0，71.1，

渣および糖の標品をそれぞれ 0.2mL ピリジンに溶解させ

71.3，
71.6，
73.3，
74.8，
77.3，
77.9）、4 個の二重結合のメチン（δC

L-cysteine methyl ester（15 mg/mL）を加えて 60 度で一95.5，104.5，115.8，129.8）、2 個のアノメリックカーボン

時間反応させた10）

由来のピーク（δC 99.3，101.6）、2 個の四級炭素（δC 108.0，。

標品との比較の HPLC 条件

124.7）、6 個の二重結合の四級炭素由来のピーク（δC 134.0，［Cosmosil 5C1 8 AR II（2 5 0 × 4.6 mm i.d., Nacalai Tes-

154.3，154.3，158.0，164.5，166.9）、およびカルボニルカー

que）；溶出溶媒 25% CH3CN 50mM H3PO4；流速 0.8 mL/

ボン δC 184.6 が観測された。
糖鎖構造のうち、グルコースのアノマーカーボン δCmin；カラム温度 35 ℃；検出波長 250nm］
サンプル誘導化合物および標品の誘導化合物の保持時間

101.6 に対応するプロトンは HSQC より（δH 5.19）であり、は D-glucose が 18 分、L-rhamnose は 30 分であり、相違な

そのカップリング定数は（J = 7.2 Hz）であったことから、グいことを確認した。

ルコースは β 結合していることが明らかとなった。さらに、

化合物 1 は負の旋光性（-4.81、MeOH）を示す淡黄色のラムノースは同様に、アノマーカーボン（δC 99.3）に対応す粉末として得られ、高分解能マススペクトルから、そのるプロトンは（δH 4.72）に観測され、これは brs に観測され分子式が C33H38O17 であると分かった。IR スペクトルより、たことから、ラムノースは α 結合していることが判明した。

-1-1ヒドロキシ基（3437cm ）、メチレン（2933cm ）、エステル

これらの NMR データは 2"' と 3"' 位の値を除いて linariin（1746 cm-1）、α , β - 不飽和結合（1653 および 1606 cm-1）、芳と非常に類似していた（Fig. 4）９）。低磁場に観測されたプ

香環（1566 および 1509cm-1）およびエーテル結合（1251cm-1）

ロトンおよび δH 5.15、カーボン δC 71.1 の値から、アセチ

1を有することが示唆された。 H NMR スペクトルより、ラル基の一つは 2"' に結合していると推測された。また、同

ムノースの 6 位のメチル基に由来するピーク δH 1.17（d,様に δH 5.01 に観測されたプロトン、δC 73.3 に観測された

J= 6.2 Hz）、2 個のアセチル基のメチル部分に由来するピーク δH 1.75（s）および 1.93（s）、グルコースの酸素官能基に結合した 2 つのピーク δH 3.76（m）、4.05（d, J = 9.9 Hz）、
6H 分に積分値で観測された 2 個のメトキシ基由来のピー
ク δH 3.89（s）、2 個のアノメリックプロトン由来のピーク
δH 4.72（br s）および 5.19（d, J=7.2 Hz）、2 個の芳香環の− 11 −

Fig. 4 Linariin

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

カーボンから 3"' 位にもう一つのアセチル基が結合していったのに対し、得られた新規化合物 1 から 3 の IC50 値はそることも推測された。これらはいずれも、二次元 NMR のれぞれ 34.8 μM、35.0 μM、19.5 μM であり、ポジティブコ

測定方法の一つである HMBC 相関から区別され、結合位ントロールよりもかなり 36 ～ 60 倍程度強い阻害活性を示置が決定できた。すなわち、H-2'''（δH 5.15）と 3'''（δH 5.01）

した。また既知化合物である化合物 8 の IC50 は 85.8 μM ではそれぞれ δC 171.5（2'''OAc）と 172.1（3'''OAc）に相関があり、こちらも中程度の阻害活性を示した。なお、活性試観測された。また、グルコースのアノマープロトンから

験の回数は 3 回行っている（Fig. 5）。

7 位の δC 158.0（C-7）に HMBC 相関がみられ、ラムノース
δC 67.5（C-6''）に HMBC 相関が観測されたことから、それ

3. 3. ウンランから単離された化合物のコラゲナーゼ
阻害活性

ぞれ糖鎖の結合位置の決定をした。以上のように、各種物単離した化合物に対して、活性試験を検討した結果、化理化学データの解析および酸加水分解を行い、化合物 1 を合物 4 と化合物 5 の IC50 は 79.4 および 78.6 μM であり、単pectolinarigenin-7-O-β-D-glucopyranoside- （1 → 6）

離した化合物のうち一番活性が強かったのは luteolin（化-2''',3'''-O-diacetyl-α-L-rhamnopyranosideであると決定した。

合物 8, 40.5 μM）であった。ポジティブコントロールのカ

他の化合物も同様の手法を用いて、その構造解析を行っフェイン酸の IC50 は 0.12 mM であったので、有意な阻害た。また既知化合物については報告のある文献をもとに、活性を示すことを明らかとした。しかしながら、新規化合同定を行った。

物 1~3 には有意な活性が認められなかった（Fig. 6）。

3. 2. ウンランから単離された化合物のAGEs 形成阻
害活性3. 4. ウンランから単離された化合物の細胞増殖抑制
活性単離した全化合物について AGEs 形成阻害活性試験を行得られた化合物について細胞増殖抑制試験を行っった結果、ポジティブコントロールとして用いたアミノグ

た。その結果、ポジティブコントロールとして用いた

アニジン塩酸塩（図中は AG と表記）は IC50 が 1.29 mM であdoxorubicin の IC50 は 0.70 μM で あ り、 化 合 物 6 お よ び 8のアノマープロトンからはグルコースの 6 位である 6'' 位

Fig. 5 AGEs formation inhibitory activity of compounds 1-8

Fig. 6 Collagenase inhibitory activity of compounds 1-8− 12 −

アーユルヴェーダ生薬および熱帯植物からのアンチエイジングを志向した抗糖化および美肌薬の創薬研究の IC50 は 91.1 および 82.6 μM であり、ポジティブコントロ

円形で細鋸歯があり、三出複葉で対生する。山斜面の道端ールに比べて弱いものであった。

などに生え、新芽や若葉は山菜として食されてきた。果実に鎮咳去痰作用、根に活血作用がある。本植物の葉部に関3. 5. Ixora undulataからの化合物の単離して当研究室から新規メガスティグマン配糖体等を報告し

アカネ科イクソラ属 Ixora undulata は東南アジアでは寺ているが 11）、機能性についての詳細な検討はこれまであ院への参拝の際に用いられる植物であり、赤やピンクなどまり行われていない。そこで、ミツバウツギ葉部の成分分の花を咲かせる。同属植物の Ixora chinensis はイリドイド

析および各種活性評価試験を通して、本植物の機能性成分化合物などがこれまでに、単離報告があるが、本植物につについての研究を行うこととした。

いては未詳であった。また、本植物は日本には自生しておミ ツ バ ウ ツ ギ 乾 燥 葉 5.71 kg の MeOH 抽 出 物 をらず、今回使用したものはエジプトで採取したものである。

n-Hexane、EtOAc、1-BuOH、H2O で順次分配後、これら本植物も同様に化合物を探索し、その化学構造を決定したの画分について各種生物活性試験を行った結果、EtOAc（Fig. 7）。

可溶画分にコラゲナーゼ阻害活性を見出し EtOAc 可溶画分について、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに

3. 6. Ixora undulataから単離された化合物のAGEs
形成阻害活性
得られた化合物に活性試験を行った結果、化合物 9、10、より 11 フラクションに分画し、活性試験を行った（Fig. 8）。
そのうち、活性の比較的強かった fr. 2、3 は、TLC および
HPLC 分析を詳細に行った結果、脂肪酸類、クロロフィル、

12 それぞれの IC50 は 76.6 μM、98.6 μM および 86.0 μM でカロテノイドなどを主に含むことが示唆された。これらのあった。ウンランから得られた化合物ほどではないが、本成分は植物には普遍的な成分であることから、これ以上の植物からも抗糖化抑制化合物が単離された。また、いずれ

解析は行わなかった。
そこで、残る fr. 4~11 について、活性を指標に逆相シリの化合物にも細胞毒性は認められなかった。

カゲルカラムクロマトグラフィー、HPLC を用いて分離・

3. 7. ミツバウツギからの化合物の単離およびコラゲナー
ゼ阻害活性精製を行った結果、12 種の化合物を単離することに成功

ミツバウツギ（Staphylea bumalda DC.）は山菜としての活性試験を行った結果、終濃度 100 μg/mL において化合

食経験を有する植物であり、アジアに分布する落葉低木でした（Fig. 9）。単離した化合物についてコラゲナーゼ阻害
物 14、16~18 に阻害活性が見られた（Fig. 10）。

樹高は約 3 ～ 5 m、5 ～ 6 月に白い花を咲かせる。葉は楕

Fig. 7 Isolated compounds from Ixora undulata

Fig. 8 Collagenase inhibitory activity of EtOAc layer after silica gel cc− 13 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

Fig. 9 Isolated compounds from Staphylea bumalda DC.

源の有効活用と創薬の両観点から重要である。
今後は、当研究室に保有するメガスティグマン化合物群について、抗糖化抑制試験を行い、その構造活性相関研究を行いたい。
謝辞本研究を行うにあたり、多大なるご援助を賜りました公益財団法人コスメトロジー研究振興財団に深く感謝いたし
Fig. 10 Collagenase inhibitory activity of compounds 14-21

4. 考

ます。
（参考文献）

察

1） Reddy V. Prakash, Beyaz Ayse: Inhibitors of the

天然物素材は研究をやり尽くせないほどの数が存在し、Maillard reaction and AGE breakers as therapeutics

まずは植物の選定が非常に重要となる。そこで特に含有成for multiple diseases. Drug Discov. Today 11, 646‒654(2006).

分や薬理活性が未詳の植物に限定して研究を行ったとこ
ろ、ウンラン、Ixora の抽出エキスが抗糖化抑制活性を有し、

2） Fumihiro Teramachi, Takashi Koyano, Thaworn

ウンラン、ミツバウツギの抽出エキスがコラゲナーゼ阻害

Kowithayakorn, Masahiko Hayashi, Kanki Komiyama,

活性を有することを見出した。続いてこれらの有効成分のMasami Ishibashi: Collagenase Inhibitory Quinic Acid

単離構造解析を行ったところ、いずれもフラボノイド骨格

Esters from Ipomoea pes-caprae. J. Nat. Prod., 6 8,を有する化合物が主な活性物質として得られた。一方、3．

794‒796 (2005).

5. で示した Ixora 属から単離されたメガスティグマン配糖

3） Sachiko Sugimoto, Katsuyoshi Matsunami, Hideaki

体は、天然物化学の分野ではあまり有用な活性が認められ

Otsuka: Medicinal plants of Thailand. I: structuresていなかった化合物群であり、今回、このメガスティグマ

of rheedeiosides A-D and cis-entadamide A β-D-ンに強い活性が認められたことは大変に重要な知見となる。

glucopyranoside from the seed kernels of Entada

さらに、抗糖化抑制活性のポジティブコントロールである、

rheedei Sprengel. Chem. Pharm. Bull., 5 9, 4 6 6‒4 7 1(2011).

アミノグアニジンは緒言にも書いたが、臨床試験にまで進んだ化合物でありながら、その副作用の為に薬となること

4） Y o s h i h i r o I w a m o t o , S a c h i k o S u g i m o t o , L i v aはなかった。そういった背景から、今回の研究で抗糖化抑Harinantenaina, Katsuyoshi Matsunammi, Hideaki

止活性を示しながら細胞毒性のない化合物が得られたこと

Otsuka: Entadosides A-D, triterpene saponins and a

は重要な知見である。未利用植物の成分分析を通してその

glucoside of the sulphur-containing amide

有用性を検証することや、様々な構造、薬効を持つ天然物

5） from the kernel nuts of Entada phaseoloides (L.)

を見出し、構造と薬効の情報を蓄積していくことが天然資− 14 −

Merrill. J. Nat. Med., 66, 321‒328 (2012).

アーユルヴェーダ生薬および熱帯植物からのアンチエイジングを志向した抗糖化および美肌薬の創薬研究

6） Sachiko Sugimoto, Katsuyoshi Matsunami, Hideaki

New isolinariins C, D and E, flavonoid glycosides from

Otsuka: Medicinal plants of Thailand. II: chemical

Linaria japonica, Chem. Pharm. Bull., 6 4, 5 1 7‒5 2 1

studies on the seed kernels of Entada rheedei(2016).
10）Sachiko Sugimoto, Samir Wanas Amira, Tsutomu

Sprengel. J. Nat. Med., 66, 552‒557 (2012).
7） Luc Séro, Lionel Sanguinet, Patricia Blanchard,

Mizuta, Katsuyoshi Matsunami, Hideaki Otsuka:

Bach Tai Dang, Sylvie Morel, Pascal Richomm,

Structure elucidation of secondary metabolites isolated

Denis Séraphin, Séverine Derbré: Tuning a 9 6-wellfrom the leaves of Ixora undulate and their inhibitory

microtiter plate fluorescence-based assay to identify

activity toward advanced glycation end-products
formation, Phytochemistry, 108, 189‒195 (2014).

AGE inhibitors in crude plant extracts. Molecules 1 8,11）Takashi Tanaka, Tatsuya Nakashima, Toshihisa

14320‒14339 (2013).

Ueda, Kenji Tomii, and Isao Kouno: Facile8） Retno Widyowati, Sachiko Sugimoto, Yoshi Yamano,
Sukardiman, Hideaki Otsuka, Katsuyoshi Matsunami:

Discrimination of Aldose Enantiomers by Reversed-

New cis-ent-clerodanes from Linaria japonica,

Phase HPLC, Chem. Pharm. Bull., 55, 899‒901 (2007).
12）Hideaki Otsuka, Yu Qian, Katsuyoshi Matsunami:

Phytochemistry Letters, 14, 56‒62 (2015).
9） Retno Widyowati, Sachiko Sugimoto, Yoshi Yamano,
Sukardiman, Hideaki Otsuka, Katsuyoshi Matsunami:− 15 −

Bumaldosides A, B and C from the leaves of Staphylea
bumalda, Heterocycles, 80, 339-348 (2010).

エラスチン類似ポリペプチドの合理的設計による
温度応答性ゲルの創製
名古屋大学大学院工学研究科応用物質化学専攻

鳴瀧

彩絵

Elastin-like polypeptides (ELPs) are functional polymers that show elasticity and lower critical solution temperature(LCST) as native elastin. We have developed a novel class of “double-hydrophobic” block ELPs named GPG and its
derivatives with added functional motifs. A series of GPG comprises proline-rich (VPGXG) 25 and glycine-rich (VGGVG) 5 ,both of which dehydrate at higher temperature but form distinct secondary structures, β-turn and β-sheet respectively. GPG
initially assembles into nanoparticles, which further connect into beaded nanofibers. In this study, a new derivative GPPG,
where (VPGXG) 25 is repeated twice via a short linker sequence, has been constructed for the purpose of obtaining a physicalgel of ELP. The longer proline-rich sequence of GPPG might bent more freely than that of GPG, resulting in the formation of
branching nanofibers. GPPG ( 20 μM, 0 . 034 wt%) assembled into nanoparticles and aggregates of nanoparticles while GPG( 20 μM, 0 . 055 wt%) organized into nanofibers in water at 37 ºC. When the concentration of polypeptides was increased
to 0 . 3 wt%, both GPG and GPPG precipitated from aqueous solution. However, when GPG and GPPG was mixed at 9 : 1
weight ratio the mixture formed a physical gel at the polypeptide concentration of 0 . 3 wt%. The gel formation at such a low
concentration is unprecedented in the field of ELP. The homogeneous nanofiber formation with suitable branching might
be responsible for the gelation. This work will open up the possibility of ELPs for use in the cosmetology and biomedical
research fields.

1. 緒

告した（図 1 ⒝）4-8）。ナノファイバーは粒子が数珠状に連言結したユニークな構造を持ち、分岐をほとんど持たない。

エラスチンは、その名のとおり elasticity（弾性）に関与

GPG は、プロリンに富む P 配列を分子中央部に、グリシする細胞外マトリクスタンパク質であり、皮膚・血管・靭ンに富む G 配列を分子両末端に有する。20 ℃付近に LCST

帯などにおいて線維状の弾性組織を形成し、組織に伸縮を持つ P 配列が疎水的に凝集してナノ粒子を形成したのち、性を与える 1）。そのユニークな力学特性や生体適合性から、

G 配列が粒子間で β-sheet 構造を形成して数珠状ファイバ

エラスチンは化粧品や医療材料への応用が期待されるが、ーを形成するモデルをこれまでに提案している（図 1 ⒞）1）。

他の細胞外マトリクス成分であるコラーゲンやヒアルロン

ナノファイバーが分岐を生じない理由は、P 部位の剛直性2）酸に比べ、その利用は大幅に遅れている 。これは、生体にあると考えられる。つまり、P 部位は β - turn 構造が集積由来エラスチンが高度に架橋され不溶化しており、均質でした β -spiral というらせん構造をとりやすく、ランダムコ

扱いやすい素材を得るのが困難なためである。

イル状の分子鎖と比較して長い持続長を持つ。このため P

本研究は、使いやすく、制御性のよいエラスチン材料を部位に連結した G 部位は粒子の両極に位置しやすくなる。

生み出すことでコスメトロジーの発展に寄与することを大ナノファイバーに適切な絡み合いを持たせて自立性のあきな目的とする。エラスチン由来のアミノ酸配列を含み、るゲルへと展開できれば、エラスチンの粘弾性特性を活か

人工的に作製されるエラスチン類似ポリペプチド（Elastin-

した細胞培養基材や創傷治療剤の開発につながる。本研究Like Polypeptide；ELP）は、天然エラスチンの特色である

では、ELP 配列の合理的なデザインを通じて自己集合性

エントロピー弾性と下限臨界共溶温度（LCST）を再現でき

ナノファイバーに分岐構造を導入することを目的とした。

3）

る機能性高分子として注目されている 。筆者らはこれま本研究で新しく作製するポリペプチドである GPPG のアミ

でに、エラスチン由来の 2 種類の配列モチーフを組み合ノ酸配列を図 1 ⒜に示す。GPPG は GPG にさらに P 配列をわせた新規なブロック ELP である GPG（図 1 ⒜）を作製し、挿入し、P 配列間をフレキシブルなリンカー配列（KLGSG）

これが水中で温度刺激によって自己集合し、生体エラスチで連結している。リンカーの効果により、GPPG では P 配

ンのような線維構造（ナノファイバー）を形成することを報列の接続部分で分子鎖の柔軟な折れ曲がりが可能となり、分岐構造を生じると予想した。

Development of temperature-responsivegels through the rational design ofelastin-like polypeptides
Ayae Sugawara-Narutaki
Department of Materials Chemistry,
Graduate School of Engineering, Nagoya
University

2. 実

験

2. 1. GPPG の合成と精製
GPG をコードするプラスミド DNA である pET22b（+）- GPG4） の BamHI 制限酵素サイトに P 配列をコードする
DNA 断片をライゲーションし、pET22b（+）-GPPG を得た。

− 16 −

エラスチン類似ポリペプチドの合理的設計による温度応答性ゲルの創製（アメリカ化学会より許可を得て
図 1 ⒜ GPG および GPPG のアミノ酸配列，⒝ GPG ナノファイバーの原子間力顕微鏡（AFM）像 1）
転載），⒞予想される GPG 自己集合のモデル図．

図2

GPPG の ⒜ SDS-PAGE および ⒝ MALDI-TOF-MS の結果．

DNA シーケンサーを用いた配列解析により GPPG をコー

3. 結

ドする遺伝子の存在を確認した。pET22b（+）-GPPG を用
いて大腸菌 BLR 株を形質転換し、GPPG タンパク質を発果

3. 1. GPPG の合成と精製現させた。タンパク質を金属アフィニティークロマトグラ

DNA シーケンサーを用いた配列解析の結果、pET22b

フィーにより回収し、純水に対して透析して塩類を除去し（+）-GPPG には GPPG をコードする遺伝子が正しく挿入さたのち、凍結乾燥して試料粉末を得た。ドデシル硫酸ナト

れていた。発現したポリペプチドについての SDS-PAGE

リウム－ポリアクリルアミド電気泳動（SDS -PAGE）とマ

および MALDI - TOF - MS の結果を図 2 に示す。GPPG の理

トリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析

論分子量は 27,700 Da である。SDS-PAGE において分子量（MALDI- TOF - MS）
により精製を確認した。

27 kDa のマーカー付近に最も濃いバンドが出現し、そのほかに複数本の薄いバンドが観察された。MALDI-TOF-

2. 2. 自己集合体の形成

MS で観測された生成物の分子量は 27,732 Da であった。

GPG と GPPG をそれぞれ 20 µM（それぞれ 0.034 および
0.055 wt%）となるように冷水に溶解させたのち、37 ℃で以上のことより、GPPG を主成分とする生成物が得られたと言える。

7 日間インキュベートした。この間、円二色性（CD）分散計で 190 〜 260 nm の吸光度を測定することにより、タン

3. 2. 自己集合体の形成

パク質二次構造の変化を調べた。7 日後の試料溶液をマイ

GPG および GPPG を、濃度が 20 µM となるように冷水

カ基板に滴下し、37 ℃で自然乾燥したのちに、原子間力に溶解させた。15 ℃の条件で CD スペクトルを測定したと

顕微鏡
（AFM）
で形態を観察した。

ころ、どちらのポリペプチドにおいても 200 nm に負のバ

さらに、ポリペプチド濃度を 0.3 あるいは 0.4 wt% に増

ンド、224 nm 付近に負のショルダーが現れた（図 3）。これ加させて 37 ℃に昇温し、1 日後に溶液の外観の変化を観らはそれぞれ、ランダムコイル構造および ㌼ -turn 構造に由察した。総ポリペプチド濃度を 0.3 wt% に固定し、GPG と来しており、（VPGXG）n 配列を有する ELP に特徴的なスGPPG を所定量混合した試料についても観察を行った。

ペクトルである 4，9）。この溶液を 37 ℃に加温すると、スペ− 17 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

図3⒜ GPG および ⒝ GPPG の CD スペクトル．

クトルは経時的に変化した。どちらの場合にも、198 nmの楕円率が正の方向へ増大する一方、218 nm の楕円率は負の方向に増大した。これらは、㌼ -sheet 構造の割合が 1
週間にわたり増加し続けていることを示している。1 モル残基当たりの楕円率を比較すると、㌼ -sheet 構造に由来す
る楕円率の強度は GPG のほうが GPPG よりも大きかった。
37 ℃で 1 週間静置したサンプルをマイカ基板に滴下したのち乾燥させ、AFM で観察した結果を図 4 に示す。
GPG はナノファイバーへと組織化しており、ファイバー
径は 42.3 ± 7.5 nmであった。45 ℃で自己集合させた場合 4）

図4⒜ GPG および ⒝ GPPG が形成する集合体の AFM 像．

と比較するとやや不明瞭ではあるが、数珠状のモルフォロ
ジーを有していた。これに対し、GPPG は直径 25.6 ± 7.4nmのナノ粒子を形成しており、その凝集体も多く見られた。
ポリペプチド濃度を 0.4 wt% に上昇させ、37 ºC で 1 日間
インキュベートすると、GPG は半透明のハイドロゲルを形成した。一方、GPPG は同じ条件で沈殿を生じた。ポリペプチド濃度を 0.3 wt% として 37 ºC に昇温すると、GPG、
GPPG の両方において沈殿を生じた。これに対し、総ポリペプチド濃度を 0.3 wt% に固定した条件で GPG と GPPG を
9：1（w/w）の割合で混合すると、1 日後に半透明のハイドロゲルを形成した（図 5）。GPG と GPPG を 8：2，7：3

図 5 GPG と GPPG を 9：1（w/w）
で混合して得られるハイド
ロゲルの写真（ポリペプチド濃度 0.3 wt%）．

で混合した場合には、粘調な液体が得られた。

4. 考た（図 4）。GPG においては、分子中央の P 配列が㌼ -turn の察集積構造である㌼ - spiral 構造をとるため、棒状分子としてポリペプチド濃度が 20µM の条件における CD スぺク

振る舞うと推測される。疎水的な P 配列は水中で集合してトル測定の結果から、GPG と GPPG はともに 37 ℃の水中

ナノ粒子を形成するとともに、棒状の形態により互いに配で、経時的に㌼ - sheet 構造を形成することがわかった（図 3）。

列する。P 配列に結合した G 配列は粒子の両極に位置する

GPPG において 1 モル残基当たりの㌼ -sheet 構造形成割合

ようになり、他の粒子と㌼ - sheet 構造を形成して数珠状ナが低いのは、㌼ -sheet 構造を形成しうる G 配列が分子中でノファイバーへと組織化すると考えられる。一方、GPPG

占める割合が、GPG（26 %）> GPPG（15 %）であること

においては P 配列がフレキシブルなリンカー配列で接続さに起因すると考えられる。両ポリペプチドが、生理学的温れており、容易に曲がることができる。このため、G 配列度に応答して分子間自己集合の駆動力となる㌼ -sheet 構造

は粒子中でよりランダムに配置し、粒子内部で㌼ - sheet 構を形成したものの、GPG はナノファイバーへと組織化し、造を完結させたり、あらゆる方向に粒子間㌼ - sheet 構造を

GPPG はナノ粒子およびナノ粒子の凝集体へと自己集合し形成することが可能となる。この結果、GPPG はナノ粒子− 18 −

エラスチン類似ポリペプチドの合理的設計による温度応答性ゲルの創製状、あるいはナノ粒子の凝集体へと自己集合したと考えら

助的に利用されているにすぎない。シルクエラスチンの場れる。今回検討を行った 20 µM の濃度において、GPPG は合、ゲル形成に必要な濃度は 4 wt% と報告されている 15）。

当初の狙いであった分岐を持つナノファイバーへと組織化

いずれにしても、1 wt% 以下での物理ゲル形成は ELP 研究

することはなかったが、高度に分岐した極端な状態として

では報告されておらず、本研究にて達成された 0.3 wt% でナノ粒子の凝集体を形成したとも言える。

のゲル化は画期的であると言える。本 ELP ゲルは、均一

GPG が分岐の少ない数珠状ナノファイバーへ、GPPG がなナノファイバーであり、水との接触界面積が大きい数珠

ナノ粒子凝集体へと集合するのであれば、両者を適切な割状のモルフォロジーを持つことが、低濃度でのゲル化につ合で混合することにより、分岐構造を持つナノファイバーながったと考えられる。本研究で開発した ELP は制限酵が得られるのではないかと考えた。ファイバーの分岐構造

素サイトや精製用タグ配列を除けば、all-elastin 由来であは、マクロスコピックな溶液の粘弾性に影響を与えると予るため、エラスチンが本来有する力学特性を最大限に再現想し、ポリペプチド濃度を増加させて溶液のゲル化の有できる材料となることが期待される。今後、GPG と GPPG無を調べた。ポリペプチド濃度を 0.4 wt%（GPG：238µM,の混合比を変化させることで、粘弾性特性を連続的に変化

GPPG：144 µM）とし、37 ℃で 1 日インキュベートしたとさせることを試みる予定である。

ころ、GPG を含有する水溶液は流動性を失って半透明の5. 総ゲルを形成した。GPPG は同じ条件で沈殿を生じた。濃度

括20 µM のときの結果から類推すると、GPG ではナノファ

本研究では、新規な ELP である GPPG を遺伝子工学のイバーの絡み合いによってゲルを生じ、GPPG は凝集体を手法を用いて合成した。GPPG は、GPG がナノファイバー生じたと考えられる。ポリペプチド濃度を 0.3 wt% に低下化する温度条件においてナノ粒子状およびナノ粒子の凝させた場合、GPG でも沈殿を生じ、水溶液のゲル化には集体へと自己集合し、当初予想した分岐ナノファイバーは至らなかった。しかし、GPG と GPPG を重量比が 9：1 と得られなかった。しかし、凝集体は数珠状ナノファイバー

なるように混合した場合、ゲルを形成した（図 5）。8：2，7：3

が多数の分岐を生じた極端な状態であると考え、GPG とで混合した場合には粘調な液体となり、いずれも GPG ま

GPPG を混合することにより GPG ナノファイバーへ分岐を

たは GPPG 単独の場合と異なる結果が得られた。GPG と導入することを試みた結果、GPG と GPPG を 9：1（w/w）

GPPG の混合により、GPG が単独で形成するナノファイバ

で混合することで、0.3 wt% という低濃度でハイドロゲル

ーと比較して分岐構造が導入されてネットワーク構造を構を得ることができた。筆者らはこれまでに、GPG の C 末

築し、より低濃度でのゲル化が達成された可能性を考えて端に様々な機能性モチーフを付加することより、化学架橋いる。

可能なナノファイバー 6）、あるいは抗菌性 7）や細胞接着性

これまでに、架橋剤を用いて化学架橋されたエラスチ
ン ELP ゲルは報告されているものの10-12）を有するナノファイバーの創製に成功してきた。これらの、疎水性が高く

GPG 誘導体を適宜混合したり、さらに新しい GPG 誘導体

不均一に凝集しやすいエラスチンを均一なゲルとすることと組み合わせることで、様々な機能性ゲルが得られるであは根本的に難しく、報告例は少ない。また、化学架橋ゲル

ろう。生理食塩水やリン酸緩衝液等を溶媒とするハイドロ

では刺激に対するゾル－ゲル転移を示さない。エラスチン

ゲル形成など、まだ課題は残されているものの、本研究での LCST を利用して温度応答性の物理ゲルを作製するアイ得られた温度応答性 ELP ゲルは、体温でゲル化する創傷

ディアは以前より存在していたが、実現は容易ではなか被覆材や、各種細胞の 3 次元培養の担体、幹細胞の分化制った。エラスチンや ELP を LCST 以上に加熱すると、ゲ

御、人工血管の構成要素をはじめとする幅広い応用展開がル化ではなく相分離を起こして沈殿してしまうからであ期待される。

る。Conticello らは、ELP ゲルの創製に向けて親水性を高めたブロックポリペプチドを合成したが、ゲル形成には
25 wt% もの高濃度の ELP が必要であった

謝13）

AFM 観察でご協力をいただいた名古屋大学関隆広先生、。近年ではOlsen らが、（
［I0.6V0.4］PAVG）n の配列を持つ ELP が相分

辞

永野修作先生、北村一晟氏に深く感謝申し上げます。

離せずに均一なゲルを形成することを報告しているが、この場合にもゲル化には 10 wt% 以上のポリペプチドを要する14）。エラスチン配列に、シルク由来配列

ン結合配列

16）

15）

や金属イオ

（引用文献）
1） Mithieux SM, Weiss AS,: Elastin, Adv. Protein Chem.,
70, 437-461, 2005.

などの機能性配列を結合させた融合ペプチ

ドからなる刺激応答性の物理ゲルも作製されている。この

2） Rnjak J, Wise SG, Mithieux SM, Weiss AS,: Severe

場合、架橋点となるのはエラスチン以外の配列であり、エburn injuries and the role of elastin in the design of

ラスチンの LCST は分子の局所的な濃度を高めるために補dermal substitutes, Tissue Eng. B Rev. 17, 81-91, 2011.

− 19 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

Biomacromolecules, 8, 1463-1470, 2007.

3） Urry DW,: Molecular machines: How motion andother functions of living organisms can result from

11）T r a b b i c - C a r l s o n K , S e t t o n L A , C h i l k o t i A , :reversible chemical changes, Angew. Chem. Int. Ed.

Swelling and mechanical behaviors of chemicallyEngl., 32, 819-841, 1993.

cross-linked hydrogels of elastin-like polypeptides,
Biomacromolecules, 4, 572-580, 2003.

4） D. H. T. Le, R. Hanamura, D.-H. Pham, M. Kato,
D. A. Tirrell, T. Okubo, A. Sugawara-Narutaki,12）Z h a n g Y N , A v e r y R K , V a l l m a j o - M a r t i n Q ,Assmann A, Vegh A, Memic A, Olsen BD, Annabi

Biomacromolecules, 14, 1028-1034, 2013.
5） Le DHT, Okubo T, Sugawara-Narutaki A,: “Beaded

N, Khademhosseini A,: A highly elastic and rapidly

nanofibers assembled from double-hydrophobic elastin-crosslinkable elastin-like polypeptide-based hydrogel

like block polypeptides: Effects of trifluoroethanol,

for biomedical applications. Adv. Funct. Mater., 2 5,

Biopolymers, 103, 175-185, 2015.

4814-4826, 2015.

6） Le DHT, Kawakami R, Teraoka Y, Okubo T,13）Wright ER, McMillan RA, Cooper A, Apkarian RP,

Sugawara-Narutaki A,: Cross-linking assisted

Conticello VP,: Thermoplastic elastomer hydrogels via

stabilization of beaded nanofibers from elastin-likeself-assembly of an elastin-mimetic triblock polypeptide,

double hydrophobic polypeptides, Chem. Lett., 44, 530-

Adv. Funct. Mater., 12, 149-154, 2002.
14）Glassman MJ, Olsen BD,: Arrested phase separation

532, 2015.
7） Anh TTH, Xing M, Le DHT, Sugawara-Narutakiof elastin-like polypeptide solutions yields stiff,

A, Fong E,: Elastin-based silver-binding proteins withthermoresponsive gels, Biomacromolecules, 1 6, 3 7 6 23773, 2015.

antibacterial capabilities, Nanomedicine, 8, 5 6 7-5 7 5,15）Dandu R, Von Cresce A, Briberb R, Dowell P,2013.
8） 鳴瀧彩絵 ,: 生体模倣ブロックポリペプチドの段階的自Cappello J, Ghandehari H,: Silk–elastinlike protein

己集合 , Colloid & Interface Commun., 40(2), 12-14, 2015.

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physicochemical properties, Polymer, 50, 366-374, 2009.

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correlation with elastomeric force, Biochem. Biophys.

X, Chilkoti A,: Bioinspired reversibly cross-linked
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Res. Commun., 130, 50-57, 1985.
10）Lim DW, Nettles DL, Setton LA, Chilkoti A,:
Rapid cross-linking of elastin-like polypeptides with(hydroxymethyl)phosphines in aqueous solution,− 20 −

enhanced mechanical properties, Adv. Funct. Mater.,
25, 3122-3130, 2015.

高分子ナノゲル粒子の短距離秩序に基づく色彩の研究
九州大学大学院工学研究院化学工学部門

三浦佳子

Synthetic polymer nanogels were investigated in view of structural color component and molecular recognition units.
Synthetic nanogels with molecular recognition ability were prepared by addition of acrylamide derivative of sugar ligand.
The polymer nanogel showed the blue color based on the short distance order. The structural color was changed by raising
the temperature and molecular recognition of specific proteins.

1. 緒

れを利用したバイオセンサーの開発も含めて検討した。ま言た、癌関連タンパク質である、細胞成長因子に対して結合色彩は生活の上で欠かせないものであり、鮮やかな色彩する、ナノゲル粒子についても新たに調製を行った。

は古代以来人類の興味の一つであった。色彩をどのように発現させるかは化合物の探索も含めて長い間研究されてきた。色を出す素材、色素については有機化合物、無機化合物、

2. 方

法

2. 1. ヒドロゲルナノ粒子の合成

7）

錯体など多くの化合物の研究が行われてきた。また、近年

N- イソプロピルアクリルアミド（NIPAAm）、ビスア

ではナノテクノロジーについても、光学技術の一つとしてクリルアミド（BIS）、開始剤（V-501）を加えて重合を行っ注目されている。有機化合物でも無機化合物でも、色素化た。界面活性剤として、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）

合物は特殊な電子バンドを有していることが多く、望んだを用いて重合系に加えた。多くの高分子の組成としては、色を発現させようとする研究には多くの困難が伴う。また、

NIPAAm 95%、BIS 5%、SDS を用いた。ナノゲル粒子の色素化合物は特殊な電子系を満足することが最重要である

粒径は SDS の濃度に大きく依存しており、SDS を減らしため、生体毒性が強い化合物であることがしばしばである。

た系についても検討した。ナノゲル粒子の直径は、動的光化合物の電子特性に依存せずに色彩を発現させる方法

散乱（DLS、マルバーン社、ゼータサイザーナノ）を用いてとして、物質の構造特性を利用した、“構造色” の利用が考
えられる

測定した。
また、生体分子認識製のモノマーとしては、生理活性糖

1, 2）。構造色では、物質の周期構造に基づく光の干渉を利用しているため、特殊な電子構造を必要としない。

を持つアクリルアミドを用いた（Figure 1）。糖鎖を側鎖に周期構造を持つ分子には種々の有機、無機化合物があるが、持つアクリルアミドについては、過去の文献と同じ方法で均一な構造が必要とされている。私の研究グループでは、調製を行った。生体分子である糖の分子を円滑に行わせる

Poly（N-isopropylacrylamide）
を主体とする高分子ナノゲル

ために、適宜疎水性のモノマーである、N-tert- ブチルア

粒子を各種合成してきている

3,4）。このナノゲル粒子は粒

クリルアミドを適宜加えている。例えば、マンノースを含径が均一に調製することが可能であるため、構造色の研究

み、コンカナバリン A と結合する高分子モノマーの組成は、に適切であると予想された。高分子ナノゲル粒子の径を中NIPAAm 63 %、t-BAM 20%、BIS 10 %、アクリル酸（AAc）

心として、構造色を中心とした光学性質の検討を行った。

5%、マンノース 2 ％のモル比とした。タンパク質の分子

高分子ナノゲル粒子では、均一な微細粒子であるばかり認識については、下記に示す構造色センサーで調べるほか、ではなく、その内部が柔軟であることから、タンパク質な水晶発振子（QCM、Affinix Q4 イニシアム）によって測定どの物質を包摂することができる

5,6）。特に、ナノゲル組を行った。

成を選ぶことによって、特異的にタンパク質を認識する。

その外に癌関連のタンパク質を認識するナノゲル粒子に本研究では、タンパク質に対して結合する、ナノゲルとそ

ついても合成を行った。ナノゲル粒子を認識するためのモノマーとして、硫酸基を有するアセチルグルコサミンを加えて、Figure 1 と同様に合成を行った。

Structural Color of Short Distance Orderof Polymer Nanogel
Yoshiko Miura
Department of Chemical Engineering,
Graduate School of Engineering, Kyushu
University

2. 2. ナノゲルを認識要素とした構造色の発現とバイ
3）
オセンサーの開発
Figure 1 に示す、糖鎖認識ナノゲルを用いて、特異的なタンパク質センサーとしての機能を調べた。糖鎖認識ナ− 21 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

Figure 1 分子認識性を持つナノゲル粒子の合成。メインとなるモノマーとして NIPAAm を選び、架橋剤、疎水性部位、電荷、糖を持つ各種のモノマーを加えた。

ノゲルはナノゲルの径からの短距離秩序による構造色の変スに対する in vivo 試験は外注（静岡県立大学、カリフォル

化を UV スペクトルによって調べた。また、構造色を補足

ニア大学アーバイン校）によって行った。

する機材として、230 nm の微細構造を持つ基盤を用いた。

3. 結

ナノゲル粒子を微細構造基盤にスクシイミド基を介して固定化した。このナノゲルに対して、垂直方向にファイバー果

3. 1. 構造色によるバイオセンシング

式の UV 分光光度計（USB-4000-UV-Vis、オーシャンオプ

Figure 1 に示す組成の分子を用いて、ナノゲル粒子のティクス）によって、スペクトルを測定し、タンパク質の合成を行った。ナノゲル粒子は、PolyNIPAAm を主体と分子認識に伴う構造色の変化を調べた。UV スペクトルはしているため、高温で収縮し、偽沈殿重合によってナノ粒

360-800nm まで測定した。また、タンパク質としては標子を形成した。タンパク質認識部位である、糖ユニット（マ的タンパク質としてコンカナバリン A、リファレンスタン

ンノース）を加えてナノゲル粒子を合成した。

パク質として牛血清アルブミンを用いた。

ナノゲル粒子については、マンノースを有するナノゲ
ルで約 200 nm の直径を持つ粒子を用いた。この粒子を2. 3. PolyNIPAAm ナノゲル粒子による構造色の発現を介して固定化した（Figure 2）。基材は微細孔に基づく色

230 nm の微細構造を持つ基材に対して、スクシイミド基

PolyNIPAAm ナノゲルを 2. 1. にしたがって調製した。

調を発して、500 nm 付近に UV ピークを示した。この基材

ナノゲル粒子で多様な色調を発現させるためには、種々のに対して、タンパク質を付与して、マンノースに特異的に

短距離秩序（粒径の大きさ）を実現する必要がある。モノマ

結合するコンカナバリンＡ（ConA）を添加したところ、ス

ー濃度、架橋剤、界面活性剤の濃度、種類を変化させてナペクトル強度が減少した。一方で、マンノースと結合しなノゲルの合成を行った。ナノゲルの大きさは 100-2000 nm

い、牛血清アルブミン（BSA）を添加した場合には、UV ピ程度までとした。これに伴う、構造色の発現について検討

ークの変化は見られなかった。ピーク強度の変化をタンパした。ナノ粒子の溶液の色は、希薄水溶液のスペクトルを

ク質の濃度に対してプロットして、Langmuir 式によって

UV 分光光度計（cary8453、アジレント）または、ナノゲル

フィッティングを行って、結合定数を算出した。タンパク溶液をガラス基板に析出させた上で、ナノファイバー分光

質との解離定数（Kd）は 10-6 M オーダーで抗体に匹敵する光度計によっても測定を行った。また、ナノゲル溶液につような強さと特異性を示すことがわかった（Figure 3）。

いては温度を変化させて測定を行った。

このナノゲルを塗布した材料については、自然蒸発を用いて、ナノゲルを集積させたところ、青色のフィルムへと

2. 4. ナノゲル粒子によるタンパク質の捕捉と生体材料としての展開8）変化した。ナノゲル自体の構造色と考えられた。一方で、このゲルフィルムに対して、タンパク質溶液を添加したとナノゲル粒子のいくつかは 2. 1. に示すようにタンパク

ころ、色調は消失した。水自体の添加でも色が消失したた質のリガンドを含んでおり、タンパク質に対して分子認

め、ナノゲル構造体の自己組織化が弱いことが考えられた。

識性を示す。in vitro でのタンパク質の分子認識実験は、

自己組織体の材料特性を強くするために、ナノゲル集積体

QCM にナノゲル粒子を固定化した上で、タンパク質を定に対して、PEG ジアクリレートを用いて架橋構造を作ら

量的に添加して周波数変化を測定し、Langmuir 解析によせることとした。しかしながら、PEG ジアクリレートでって結合定数の解析を行った。また、一部のナノゲル粒子の架橋反応を行うときに色が消失することがわかった。

については、マウスに対する in vivo 試験を行った。マウ− 22 −

高分子ナノゲル粒子の短距離秩序に基づく色彩の研究

Figure 2 スクシイミド基を介した、ナノゲル粒子の固定化。凹凸基材が構造色を発揮する基板。

Figure 3 ⒜ ナノゲル粒子と構造色を組み合わせた基板によるタンパク質のセンシング。⒝ 構
造色基板のスペクトルの代表例。

3. 2. ヒドロゲル粒子による構造色の発現
ナノゲルの溶液は短距離秩序と散乱光に基づく青色を呈している（Figure 4）。ナノゲルについては、PNIPAAm が温度応答性高分子であることから、33 度付近で疎水性に変化して、収縮する。ナノゲル溶液についても、温度を上昇させると相転移に基づいて、青色の光を呈さなくなった。また、マンノースを有するナノゲルについては濃厚溶液については青白い散乱光を呈しているが、ConA を添加することによって、色調が見られなくなることがわかった。

− 23 −

Figure 4
ナノゲル粒子溶液

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

また、ヒドロゲル粒子の分散液については、分散光が大3. 3. 癌関連タンパク質を認識するナノゲルの開発とセンシングきく影響しているため、輝度とコントラストの改善のため、

3. 1. では、ConA を認識するナノゲル粒子について報告

カーボンブラックを複合したナノ粒子の合成を行った。カした。ナノゲル粒子については、内部に分子認識空間を調ーボンブラック（和光純薬）
分散液を調製し、通常のヒドロ

製することで、抗体のような分子認識要素として用いるこゲル粒子と同様に PNIPAAm の合成を行った。ヒドロゲとができる。3. 1. では ConA を認識するナノゲルについて

ル粒子については、粒径の分散性（PDI）が大きくなり、明報告したが、ConA は豆由来のタンパク質で一種のモデル

確な色を示さなくなった。

タンパク質である。そこで、疾病などに関係する重要なタ

BSA の添加によっては変化が見られなかった。

ナノゲル分散液の構造色については安定な分散が必要でンパク質を認識するナノゲルの開発を行った。

あることが示唆された。そこで、静電相互作用を導入し

N- アセチルグルコサミンに硫酸基を導入し、アクリル

た。正電荷を持つモノマーとして、ジメチルアミノ基を持アミド化したモノマーを各種合成した。硫酸基について位つモノマー（ジメチルプロピルアミノメタクリルアミド

置選択的に導入した。その上で、種々の硫酸化糖鎖高分（DMAPM）を加えて重合を行った。DMAPM を含むポリ子ナノゲルを合成した（Figure 5）。硫酸化糖のうち、3、4、

マーについては、室温では安定的に青い発色を示した。ナ

6 位に硫酸基を導入したナノゲルでは、細胞成長因子であノゲル粒子については、中性（DMAPM、アクリル酸非含

る、血管内皮細胞成長因子（VEGF）と結合することがわか

有）、イオン性に限らず、ゲル粒子の分散と発色には界面った。他の硫酸化糖（3 位硫酸化、４位硫酸化、６位硫酸活性剤の添加が必要であった。

化のモノ硫酸化の GlcNAc アクリルアミド）を含むナノゲ

ナノゲル粒子については、界面活性剤を 20 mM からルについては、VEGF との結合が弱かった。疎水性のモノ

2 µM まで変化させることによって、ナノゲルの粒径を変マーである、TBAm を加えることによって、VEGF の結化させることができた。界面活性剤が多いと 50 nm 程度ま合を最大化することができた。硫酸化糖鎖高分子ナノゲル

で小さくなり、µM オーダーまで減らすことによって、ゲについては、濃厚溶液は負電荷の導入によってよく分散し、ル粒子の粒径は 2 µｍ程度まで増大させることができた。

青い色調を呈した。また、温度の上昇や VEGF の添加に一方で、界面活性剤が多くなると径の均一性が失われる。

よって、青い色調は観察されなくなった。3. 1. の構造色基

粒度分布は粒径が 1 µm 以上では、1.5 以上（動的光散乱測板に固定化することで、VEGF のセンサーを開発する予定定による）であった。均一なナノゲル粒子（PDI 1.5 以下）でである。

は、濃厚溶液及び、ガラス基板上で乾燥して調製したナノ

また、VEGF の結合を利用して、癌の阻害効果について

ゲル集積体が青色を発色した。バックグラウンドとして、検討した。VEGF は癌細胞による血管新生に深く関わって黒色ガラス（マツナミガラス）を使うと発色性が向上した。

いることが知られている。腫瘍を移植したマウスに対して、硫酸化糖鎖高分子ナノゲルを断続的に投与したところ、癌

Figure 5 VEGF に結合するナノゲル粒子の合成スキーム。左に示す硫酸化グルコサミンのアクリルアミドモノ
マーを含むナノゲル粒子は、VEGF と特異的に結合する。

− 24 −

高分子ナノゲル粒子の短距離秩序に基づく色彩の研究には向上せず、透析後は構造色が失われた。硫酸化糖をモ

腫瘍体積の減少が見られた。

4. 考

ノマーとして加えた場合が最も分散性が保たれた。

察

界面活性剤を加えた状態では、構造色を安定的に発現し4. 1. 構造色によるバイオセンシング

た。温度を上昇させると、PNIPAm は温度応答性高分子

ナノゲル粒子は分子認識素子としてターゲットに対するであることから収縮して、粒径が変化した。その場合には強い結合と大きな容量を有している。そのため、ナノゲル

青色の構造色が鋭敏に失われた。ナノゲル粒子の構造色で粒子を用いて抗体を用いたときと同じようなバイオセンシ

は、均一な粒子の分散が重要であり、温度変化によって粒ングが可能である。構造色では、規則正しい基材の性質を

径の均一性が失われると、構造色が発現されなくなった。

用いて、色を発現させることができた。ナノゲル粒子と構造色基板を用いることで、構造色を用いたバイオセンシン
グを行った。構造色基板では、規則的な孔間の光干渉によ4. 3. 癌関連タンパク質を認識するナノゲルの開発とセンシング

り構造色を生じる。ナノゲルを固定化しても、規則構造は

VEGF や線維芽細胞増殖因子（FGF）などは細胞の成長に失われずに UV スペクトルが強く発現された。ナノゲルの関係するとともに、癌細胞での血管新生による癌細胞の異固定化、タンパク質の添加によって、反射率、規則構造が常増殖に関係することが知られている。そのため、これら低下するため、ピーク位置は 500nm 程度で変化しないもを免疫した抗体医薬が実際に治療に使われている。VEGF、のの、強度が変化した。ナノゲル粒子の分子認識能は抗体

FGF は細胞表面の硫酸化多糖（ヘパリン、ヘパラン硫酸

107（M-1）オーダー）ことなど）に結合していることがわかっている。そこで、硫酸から、分子認識素子として適当であった。ナノゲル粒子を化多糖をベースにした、糖モノマーを合成することによ

一層固定化することで、ターゲットタンパク質（ConA）をって、ナノゲル粒子の開発を行った。硫酸化度が高いグ

よく捕捉して高感度にタンパク質を検出することができた。

ルコサミンモノマーに疎水性を適宜加えることによって、ナノゲルをゆっくり乾燥させて積層させた構造を作製す

VEGF を効率的に捉える、ヒドロゲル粒子の合成に成功しることによって、青色の構造色を発する材料を調製するこた。QCM 解析によって、結合力が抗体と同様に高いこととができた。この青色素材はナノゲル粒子の複合体によるを確認した。ナノゲル粒子をマウスに対して投与すること

長距離秩序の構造色と散乱光によるものと考えられる。こで、in vivo 試験を行った。ナノゲルが VEGF を捕捉するの積層構造はもろく崩れやすかった。PEG ジアクリレー

ことにより癌細胞の細胞増殖が抑えられることが実際に確

トを架橋剤として加えたが、逆に規則構造が失われたため、かめられた。

と匹敵するほど強い（結合定数色調が発揮されなくなった。また、ナノゲルの構造色を発得られた硫酸化糖ナノゲル粒子については、濃厚溶液で揮する積層構造は、種々の刺激による構造体の変化に鋭敏

は構造色に基づく青色色調を呈していた。硫酸基によってに反応して色調が変化するため、環境のセンシングには適一定の分散性が保たれ、アミノ基を導入した場合よりも安した性質であると考えられた。

定的に青色色調を呈した。この性質を利用することによって、癌関連の細胞成長因子の色調センシングが可能である

4. 2. ヒドロゲル粒子による構造色の発現ことを示唆した。また、3. 1. で示した構造色基板と組み合

ナノゲル粒子の分散液では粒子の短距離秩序をベースとした干渉光と散乱光によって青色に発色した。この青色のわせた構造色センシングを行うことが近々の課題と考えられる。

構造色は分散状態が安定であれば恒常的に色を安定に発現5. 総する。短距離秩序をベースにするために、より粒径の大き括な粒子も種々調製することができれば種々の色調のナノゲ

ナノゲル粒子を構成要素として構造色を基礎とした検討

ル構造色を実現できると考えられた。しかしながら、各種を行った。ナノゲル粒子としては、NIPAAm を主モノマのナノゲルを調製したが、青色以外は発現させることがでーとして用いた。PNIPAAm は高温では収縮することかきなかった。これは、ナノゲルの大きさをセミミクロオー

ら偽沈殿重合によって各種のナノゲルを均一に合成するこダーから変化させると粒径の均一性（PDI）が低下して、効とができた。界面活性剤存在下で、均一なナノゲル粒子の果的に構造色を発現させることができないためであった。

場合には青色を効率よく発色した。ナノゲル粒子の粒径が、また、構造色の発現については、界面活性剤による安定分子認識（タンパク質の包摂）、温度の上昇などの各種刺激な分散が不可欠だった。重合時には界面活性剤を大量に加によって変化することによって色が消失した。また、ナノえるため、必ず青色色調の構造色を得ることができた。一ゲル自体の開発については順調に進めることができた。モ

方で、透析によって界面活性剤を取り除くと青色の色調がノマーの開発によって、ConA, VEGF といったタンパク質失われた。ナノゲル自体にアミンを加えても分散性は完全に特異的に強く結合するナノゲルを開発することができた。

− 25 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

ナノゲルについては種々の粒径の高分子ゲルの開発を行Environment, Angewante Chemie 2014, 126, 2692-2695.

った。しかし一方で、粒径自体の構造色、短距離秩序に基

4）Hoshino, Y., Ohashi, R., Miura, Y., Rational Design of

づく構造色については色調を制御することは研究期間内でSynthetic Nanoparticles with a Large Reversible Shift

は達成することができなかった。特にナノゲル粒子の分散

of Acid Dissociation Constants: Proton Imprinting in性を制御すること、濃厚溶液を調製することが鍵であるとStimuli Responsive Nanogel Particles., Adv. Mat. 2014,

考えられた。

26, 3718-3723.

構造色を持つ基板を用いてタンパク質のセンシングを行

5） Hoshino, Y., Nakamoto, M., Miura, Y., Control

った。構造色を容易に発揮する基材を用いることで、ナノof Protein-Binding Kinetics on Synthetic Polymer

ゲルの持つ分子認識能と構造を生かすことができた。構造

Nanoparticles by Tuning Flexibility and Inducing

色を生かすことで鋭敏なバイオセンシングを開発すること

Conformation Changes of Polymer Chains., J. Am.

ができた。

Chem. Soc., 2012, 134, 15209-15212.

今回の研究では、ナノゲルを新しい構造色の要素として

6） Nakamoto, M., Hoshino, Y., Miura, Y., Effect of

種々の検討を行った。ナノゲルを構造色の発現には分散性

Physical Properties of Nanogel Particles on the Kineticが大きな鍵になることが示唆された。また、種々の粒径をConstants of Multiple Protein Recognition Process.,

つくることができたが多様な色を発現させることには未だ

Biomacromolecules, 2014, 15, 541-547.
7） Terada, Y., Hashimoto, W., Endo, T., Seto, H.,

検討が必要と考えられた。

Murakami, T., Hisamoto, H., Hoshino, Y., Miura, Y.,（引用文献）

Signal Amplified Two-Dimensional Photonic Crystal
Biosensor Immobilized with Glyco-Nanoparticles., J.

1） 吉岡伸也、木下修一、日本物理学会誌、64、619-623、Mater. Chem. B, 2014, 2, 3324-332.

20092） 木下修一、吉岡伸也、繊維学会誌、59、35-39、2003.

8） Koide, H., Yoshimatsu, K., Hoshino, Y., Lee, S.I.,

3） Yue, M., Hoshino, Y., Ohshiro, Y., Imamura, K.,

Okajima, A., Ariizumi, S., Narita, Y., Yonamine, Y.,

Miura, Y., Temperature-Responsive Microgel Films

Weisman, A. C., Nishimura, Y., Oku, N., Miura, Y., Shea,

as Reversible Carbon Dioxide Absorbents in Wet

K. J., Nature Chem. 2017. Doi:10.1038/nchem.2749.

− 26 −

水溶性フラーレンの設計とそれらを用いた抗酸化作用に関する研究
東京工業大学物質理工学院

道信

剛志

The radical scavenging properties of fullerene (C 60 ) have attracted much attention with a view to commercialization.
However, a hydrophobic feature of C 60 made it difficult to homogeneously distribute in an aqueous solution. In order toincrease the water solubility, chemical modification was often adopted. Alkyne-appended C 60 derivative was synthesized
by a Bingel method. The alkyne moiety of this C 60 derivative was further functionalized by the Cu(I)-catalyzed azidealkyne cycloaddition (CuAAC) reaction. Azide-substituted poly(ethylene glycol) (PEG) was attached to the C 60 derivativeby CuAAC, yielding PEGylated C 60 . Although sufficiently long PEG with the molecular weight of 5000 was employed, thePEGylated C 60 was not soluble in water but soluble in methanol. The high solubility in methanol allowed for the evaluationof radical scavenging properties. When a solution of PEGylated C 60 in methanol was added to a mixed aqueous solution ofβ-carotene and linoleic acid, the peroxide attack to β-carotene was clearly suppressed. This was due to the radical scavenging
property of the C 60 derivative. This suppression effect became stronger when the concentration of PEGylated C 60 increased.
This result again supports the radical scavenging property of PEGylated C 60 derivative and poses the potential use as anantioxidant.

1. 緒

溶解性を付与することに成功した。また、PEG 鎖の長さ

言が溶解性を大きく左右することを明らかにした。得られたフラーレン（C60）は優れたラジカル補足能を有している
1）

ため抗酸化剤としての応用が期待されている 。しかし、PEG - フラーレン誘導体の抗酸化作用を評価することを目的とした。

水への溶解性が極めて低いため、生体高分子との複合化は困難であった。表面に多数の水酸基を導入した水溶性フラーレンは「ラジカル・スポンジ」という商標名が与えられて

2. 方
2. 1. 試法

薬おり、優れたラジカル補足能を有することが実証済みでフラーレン誘導体 1 は文献に従い、合成した 4）。そのある 2）。そのため、水溶性フラーレンを配合した化粧品は

他の試薬は関東化学、東京化成工業、Aldrich より購入し、既に市販されており、肌の老化防止と美白効果を増進する

そのまま使用した。

と謳われている。水溶性フラーレンは一般的にビタミン Cの 172 倍の抗酸化作用、プラセンタの 800 倍のコラーゲ

2. 2. 合成ン生成促進能を有すると言われている。しかし、「ラジカ

50 mL ナス型フラスコにフラーレン誘導体 1（24 mg,

ル・スポンジ」の化学構造では C60 の π 共役系はほとんど完

0.022 mmol）と THF（7.2 mL）を加えた後、0 ℃で撹拌し全に断絶されており、それにともない抗酸化作用に代表さた。テトラ -n- ブチルアンモニウムフルオリドの THF 溶液

れるフラーレンの特性が失われていると考えられる。この（1 M，0.055 mL）を加え、0 ℃のままで 1.5 時間撹拌した。

問題を解決するために、フラーレンを希望の置換基で化学室温に戻した後、塩水（200 mL）を加え、有機層のみをク修飾する道筋がしばしば採用される 3）。例えば、巨大な水

ロロホルム（400 mL）で抽出した。抽出した有機層はさら

溶性（高）
分子鎖をフラーレンに置換することで水溶性の問に塩水（200 mL）で 2 回洗浄した後、硫酸ナトリウムを加題は解決できることが知られているが、置換基の分子量がえて乾燥した。ろ過して硫酸ナトリウムを除去した後、エ大きくなるとフラーレン密度が低下するという新たな問題

バポレーションによりろ液を約 15 mL に濃縮した。ここが生じる。本研究では、C60 に水溶性高分子であるポリエ

へメトキシポリエチレングリコールアジド 5000（111 mg，チレングリコール（PEG）を連結することでメタノールへの0.0222 mmol）と Cu（PPh3）3Br（2.06 mg，0.00221 mmol）を加えた後、窒素雰囲気下、60 ℃で 22 時間撹拌した。室温に冷却した後、クロロホルムと水を加え、有機層を水で洗Design and Antioxidative Effects ofWater Soluble Fullerenes
Tsuyoshi Michinobu
D epa r t ment of M at er i a l s S c ienc e
and Engineering, Tokyo Institute ofTechnology Tsuyoshi Michinobu

浄、硫酸ナトリウムで乾燥させた。ろ過により硫酸ナトリ
ウムを除去した後、エバポレーションして溶媒を留去した。
最後にカラム精製（Bio-Beads S-X1，クロロホルム）により精製し、目的化合物を得た（89 mg，68 %）。得られたフラーレン誘導体はメタノールに可溶であったが、20 〜 37 ℃

− 27 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017の温度範囲で水には不溶であった。
1

3. 結

H NMR（3 0 0 MHz, CDCl3）：δ = 1.4 4-2.2 9（m, 7 H），

果

3.37（s, 3 H）
，3.44 -3.80（m, 4（n+1）H），4.29（br s, 4 H），

Bingel 反応を用いて C60 誘導体 1 を合成した。1 のトリ

7.68 ppm（br s, 1 H）
；IR（neat）：3243.7，2884.0，2130.0，

メチルシリル基を脱保護した後、銅触媒存在下で 1 当量の1717.3，1591.0，1483.0，1466.6，1451.2，1358.6，1342.2，

メトキシポリエチレングリコールアジドを加えて付加環化

1280.5，1241.0，1144.6，1105.0，1060.7，1006.7，962.3，

反応（クリック反応）させた（Scheme 1）。カラム精製によ-1879.4，841.8，717.4，700.0，664.4 cm .

り未反応原料を取り除き、目的物を単離した。ポリエチ
レングリコール（PEG）鎖の分子量によってフラーレン誘

2. 3. 抗酸化作用の評価

導体の溶解性に大きな差が現れた。PEG2000 を用いた場

フラーレン誘導体の抗酸化作用は既報の方法に従い、評5，6）

合はクロロホルムやトルエンのような有機溶媒に可溶で。まず、フラーレン誘導体のメタノール溶液

あったがアルコールには不溶であった。一方、PEG5000（0.0023 M）を作製した（A 液）。次に、㌼ - カロテンのクロを用いた場合はメタノールに可溶となった。本研究ではロホルム溶液（1 g/L）
（B 液）
、リノール酸のクロロホルム

PEG5000 を連結した C60 誘導体について詳細に述べる。

価した溶液（0.1 g/mL）（C 液）、Tween 40 のクロロホルム溶液得られた PEG5000-C60 誘導体は 1H NMR、IR、MALDI-（0.2 g/mL）（D 液）を調整した。B 液 0.25 mL、C 液 0.1 mL、

TOF MS より構造を確認した。1H NMR では、PEG 鎖、

D 液 0.5 mL をサンプル瓶に量り取り、窒素ガスを噴きつ

末端アルキンおよびトリアゾール環のピークが新たに検けてクロロホルムを蒸発させた。そこに、超純水（50 mL）、

出 さ れ た。IR で は、 末 端 ア ル キ ン の C ≡ C 伸 縮 振 動 が0.2 M phosphate buffer（4.45 mL）を加え、遮光して 30 分

2130.0 cm-1 に観測された。さらに MALDI - TOF MS を測間撹拌した。この溶液を E 液とした。UV セルに E 液 2.85

定したところ、PEG5000 ではピークトップ分子量（Mass/

mL と一定量の A 液を加え、50 ℃で均一撹拌しながら㌼ -Charge）約 5000 で分子量分布を有するスペクトルが得ら

カロテンの吸収 470 nm の時間変化を追跡した。比較試料

れたのに対し（Fig. 1 ⒜）、PEG5000-C60 誘導体ではピーク

として A 液と同量の超純水を用いて同様の測定を行った。

トップ分子量が若干高分子量側にずれるとともに positive

470 nm 吸収の相対強度は以下の（1）
式に従い、算出した。

mode ではピーク全体がブロード化する様子が見られた

100 ｛–（Atest at 0min – Atest at t min）

（Fig. 1 ⒝）。これは n 型半導体特性を有する C60 誘導体の（Acontrol at 0 min – Acontrol at 180 min）/｝
× 100 （1）

MALDI - TOF MS の特徴であり、確かに目的物が得られたことを示している。

Scheme 1 Synthesis of PEGylated C60 derivative by CuAAC.

Fig. 1 MALDI-TOF MS spectra of ⒜ PEG 5000 and ⒝ PEGylated C60（matrix: dithranol）．

− 28 −

水溶性フラーレンの設計とそれらを用いた抗酸化作用に関する研究

PEG5000 - C60 誘導体の抗酸化能を評価した。リノール酸の酸化により生成した過酸化ラジカルが㌼ - カロテンを攻撃すると㌼ - カロテンの 470 nm の吸収強度が減少する
ことが知られている 7，8）。ここにラジカル補足能がある抗酸化剤を添加しておくと㌼ - カロテンへの攻撃が妨げられる。470 nm の吸収強度変化が抗酸化能と直接関連すると仮定し、評価した。C60 誘導体を添加していない時は㌼ - カ
ロテン溶液にリノール酸添加後 10 分程度で 470 nm 吸収強度の急激な減少が起きたのに対し、PEG5000 -C60 誘導体
を 4.79 mM 添加した場合は減少が穏やかになった（Fig. 2）。
さらに、PEG5000-C60 誘導体の濃度を 9.96 mM へ増やすとさらに吸収強度の減少は緩和したことより、PEG5000-C60
誘導体に明確な抗酸化作用があることが示唆された。水への溶解性が限られているためこれ以上高濃度での実験がでFig. 2 Time-dependent absorbance change of ㌼- carotene at
470 nm.

きていないが、既報値と同等の抗酸化能を有していると考えられる。

ものと考えられる。分子量 5000 の PEG 鎖を導入すること

4. 考でメタノールへ可溶な C60 誘導体とすることができた。完察

全に水溶性とするにはさらに長い PEG 鎖を導入する必要

アルコールに溶解する PEG5000-C60 誘導体を新たに合があることが分かった。得られた PEG5000 - C60 誘導体の成し、その抗酸化作用を実証した。完全に水に溶解する

メタノール溶液を用いて C60 誘導体の抗酸化作用を評価し

C60 誘導体を得るにはさらに長い PEG 鎖を導入するか、2た。PEG5000 - C60 誘導体を少量（4.79 〜 9.96 mM）添加する

本の PEG 鎖を C60 に付加させる必要がある。そうするとさと、リノール酸過酸化ラジカルの㌼ - カロテンへの攻撃を抑らに高濃度溶液が調整できるため、ラジカル補足能および制することが示された。このことより PEG5000-C60 誘導

抗酸化能の向上を実現できるはずである。

体には抗酸化作用があることが明らかとなった。

今後の予定として、抗酸化作用を既存の抗酸化剤と比較する。また、それによって今回新規に合成した PEG -C60
誘導体の抗酸化作用を定量的に評価する。さらに、C60 誘（引用文献）
1） E. Choe and D. B. Min, Compr. Rev. Food Sci. Food
Saf. 2009, 8, 345-358.

導体によるラジカル補足能を実証するため、スピントラッ
プ試薬を用いてラジカル濃度を定量し、議論する。そのた

2） L. Xiao, H. Takada, X. H. Gan, and N. Miwa, Bioorg.
Med. Chem. Lett. 2006, 16, 1590-1595.

めに水溶液用ガラスセル中で電子スピン共鳴（ESR）により

3） Y.-G. Ko, S. G. Hahm, K. Murata, Y. Y. Kim, B. J. Ree,

ラジカルを検出する。

S. Song, T. Michinobu, and M. Ree, Macromolecules

また、今回合成した PEG-C60 誘導体は未反応の末端ア

2014, 47, 8154-8163.

ルキンがもう一つ残っている。分子量 5000 の PEG を置換することでアルコールへの溶解性が確保できているため、

4） J. Iehl and J.-F. Nierengarten, Chem. Eur. J. 2 0 0 9,
15, 7306-7309.

再度 CuAAC 反応を利用することでアジド化タンパク質へ
C60 を連結できると考えている。新規なバイオナノ構造体

5） S. Kato, H. Aoshima, Y. Saitoh, and H. Miwa, Bioorg.
Med. Chem. Lett. 2009, 19, 5293-5296.

の創製が可能になる道筋を確立する。

5. 総

6） M. Horie, A. Fukuhara, Y. Saito, Y. Yoshida, H. Sato,括

H. Ohi, M. Obata, Y. Mikata, S. Yano, and E. Niki,
Bioorg. Med. Chem. Lett. 2009, 19, 5902-5904.

フラーレンの π 電子系を損なうことなく、水溶性置換基を導入する方法論を確立した。アジド基はフラーレンと

7） H. Tsuchihashi, M. Kigoshi, M. Iwatsuki, and E. Niki,

反応することが知られているが、CuAAC 反応の方がはる

Arch. Biochem. Biophys. 1995, 323, 137-147.

かに速く進行するため、目的化合物が優先的に得られた

8） R. Farhoosh, Food Chem. 2005, 93, 633-639.

− 29 −

安全性に優れた化学合成コラーゲンによるドラッグデリバリー用球状微粒子の創成
九州工業大学大学院生命体工学研究科

宮崎敏樹

Polymer microspheres are expected as novel drug delivery career for medical treatment. In addition, if hydrophilic/hydrophobic control is appropriately achieved on the microspheres, the incorporated drug can slowly release into body.
Among the component of the microspheres, chemically synthesized collagen with amino acid sequence of prolinhydroxyprolin-glycin is promised material because they have no risk of contamination with external pathogens. In the present
study, microspheres of chemically synthesized collagen were prepared by cross-linking in water-in-oil emulsion. Water-inoil emulsion was prepared from synthetic collagen solution as water phase and paraffin solution of surfactant Span 80 as
oil phase by ultrasonic emulsification. Microparticles were prepared by addition of cross-linking agents into the emulsion.
Surface structural changes were characterized by Fourier-transform infrared spectroscopy, scanning electron microscope andcontact angle measurement. Microspheres with 5 to 10 µm in size were obtained. although some particles were peanut-likeshape. It was found from model experiment on surface modification on natural collagen films that treatment with biphenyl4 -carboxylic acid was effective for fabrication of hydrophobic surface, suggesting that control in drug delivery properties ispossible by this type of surface modification. Drug delivery from the microspheres should be examined in future study.

1. 緒を発揮できるインテリジェントな生体吸収性高分子の開発

言も進んでいる 2）。

1. 1. ドラッグデリバリーについて
薬剤を必要な部位に必要な量だけ到達させるドラッグデ

1. 2. 化学合成コラーゲンについて

リバリーシステム（DDS）の構築や高機能化は，薬効を最コラーゲンは動物の皮膚や結合組織を構成する主要なタ大限に発揮させる上できわめて重要である。特に抗がん剤

ンパク質であり，生物学的親和性に優れることから，ハイなどの副作用の高い薬剤においては，患者に対する負担をブリッド型人工骨の構成成分や人工皮膚，歯の抜歯部分の低減する意味でもこれらの技術確立が求められている。

回復を助けるための充填材などさまざまな生体材料として

DDS に向けた材料設計としては生体吸収性高分子など用いられている 3）。但し，コラーゲンは主にブタなどの動から微小球を作製しておき，これらに薬剤を担持させ徐放物由来製品が用いられており，最近では海洋生物などからさせる方法が一般的である 1）。一般に薬剤放出初期におい抽出した製品も見られられるものの，病因物質の混入を完ては，急激に薬剤放出を起こすバーストと呼ばれる現象が全に排除することが困難である。また，抗原作用を回避す

現れ，薬剤の過剰投与につながりかねない。このバースト

るために分子鎖の末端改質などの前処理が必要である。こをいかに抑制するかが，高機能の DDS 用材料を得る上でれらの点を解決するため，コラーゲンの基本アミノ酸配列の鍵となる。そこで，薬剤分子を微小球表面に予め化学結であるプロリン - ヒドロキシプロリン - グリシン（PHG）に合させておいたり，バリアー層となる物質を微小球表面に倣った三重らせんモデルペプチドの合成が国内外で行われコーティングしておけば，薬剤徐放速度を制御することもてきた 4）。但し，このペプチドは分子量が小さいため溶解できる。生体吸収性高分子を DDS 担体として適用するに性が高く，生体内で一定期間留まり骨格を維持することがあたっては，薬効の持続性能や望ましい薬剤放出タイミン

求められる医用材料や再生医療スキャフォールドとしてのグに合わせた生体吸収性制御が必須である。しかし，薬剤応用には難があった。

と高分子マトリックスとの親水性の相違による制御の難し

これに対して，岸本らは脱水重縮合条件を精密に制御すさなどの課題が残されている。最近では酵素や温度，pHることで，分子量を 1 万程度にまで高めた化学合成コラー

変化，電場，磁場など外部刺激に応答しながら薬剤徐放能ゲンを開発した 5）。これらは，化粧品の保湿成分として国内企業で量産化に成功し実用化されるとともに，生体材料

Preparation of spherical microparticles
for drug deliver y f rom chemica l ly
synthesized collagen with high biosafety
Toshiki Miyazaki
Graduate School of Life Science andSystems Engineering, Kyushu Institute ofTechnologyへの応用が期待されている。化学合成コラーゲンは安全性に優れており生体吸収性を示すとともに，反応性に優れた
ヒドロキシル基を持つので，適当な化学修飾をすることで薬剤を適度な相互作用により固定化して生体内での徐放を達成できると期待される。このように化学合成コラーゲン
はドラッグデリバリー担体としても有用と考えられる。これ− 30 −

安全性に優れた化学合成コラーゲンによるドラッグデリバリー用球状微粒子の創成までに天然コラーゲンの微小球化については種々報告がなされているが6，7），このような適用例や最適化は未だ例を布し，15 W 殺菌用紫外線ランプ（東芝製）を用いて紫外線
を 1 時間照射し架橋反応させた。その後，未架橋のコラー
ゲンを水洗除去した後，4 - フェニル安息香酸と EDC を含見ない。

む水 / アセトン混合溶液に 1 時間浸漬した。

1. 3. 本研究の目的
本研究では，安全性の高い DDS 用担体を得るための基2. 3. 試料の分析

礎的指針の解明を目的とした。具体的には，化学合成コラ

試料の化学状態をフーリエ変換赤外分光分析（FT-IR，ーゲンを基材とした微小球微粒子をエマルションなどを用

日本分光 FT/IR - 6100）により調べた。同測定では全反射

いた方法により合成するとともに，疎水性 / 親水性制御に（ATR）法を用いた。試料の形態を走査型電子顕微鏡（SEM，より薬剤徐放制御を実現するための表面化学修飾の有効性

日立製作所 S - 3500N）にて観察した。観察に際し，試料表についてモデル系により検討する。エマルションを用いた

面にはイオンスパッタ装置（日立製作所 E - 101）により予め方法であれば，有機高分子にとどまらずセラミックスや複金 - パラジウム合金薄膜をコーティングした。また水に対合材料などさまざまな微小球を望みの粒径で簡便に合成でする基板の接触角を接触角計（協和界面科学 DMe-200）にきることが明らかになっている。

より測定した。

2. 実験方法

3. 結

2. 1. 化学合成コラーゲン微小球の作製

果

図 1 に得られた化学合成コラーゲン粒子の走査電子顕微

以下の記述において，特記なき場合は和光純薬工業製の鏡写真を示す。5 〜 20 ミクロンの球状粒子が形成されて試薬を用いた。本研究では，油中水型エマルション中でのいる様子が観察された。その多くは真球状であったものの，架橋反応を利用して微小球を合成した。水相は 0.5 % 化学

一部球同士が結合したピーナツ状の形態を取っていた。こ合成コラーゲン（株式会社 PHG 製）水溶液 2 mL とした。油れは水相と油相界面の界面張力が低く，エマルション中に相として界面活性剤 Span 80 の 1.3 % 流動パラフィン溶液

分散している水相が変形しやすくなり，変形したままの状

3 mL とした。これらを混合した後超音波ホモジナイザを態で架橋凝固したためと考えられる。今後は界面活性剤濃用いて出力 188 W にて 30 秒間乳化した。こうして得られ度を低減させることにより，界面でのすべり変形を抑制し，たエマルションに，0.2 % の N- ヒドロキシコハク酸イミド

真球度の高い微小球が得られると考えられる。

（NHS）と 0.05 % の 1-（3- ジメチルアミノプロピル）-3 - エチ

図 2 に試料の FT - IR スペクトルを示す。未処理のポリス

ルカルボジイミド塩酸塩（EDC，東京化成製）を含む水溶チレン基板では，700 cm-1 付近にベンゼン環 CH 面外変角

液 2 mL を添加し，1 時間攪拌した。生成した微粒子を定振動，1400 及び 1500 cm-1 付近にベンゼン環由来の C=C

量濾紙（アドバンテック東洋，No. 5C）を用いて分離した。

結合，2800 及び 2900 cm-1 付近ベンゼン環由来の CH2 基，
3000 cm-1 付近にベンゼン環の CH 伸縮振動に帰属される

2. 2. 表面の疎水化

ピークが認められた。コラーゲン水溶液処理した試料では，

DDS 担体としての表面修飾の可能性を探るべく，コラ

基板のポリスチレン由来のピークに加えて 1700 cm-1 付近

ーゲン系材料の親水 / 疎水性の制御を試みた。濡れ性評価にアミド I，1600 cm-1 付近にアミド II，3400 cm-1 付近になどに際して大きな試料を要するため，本研究では，基礎

水酸基に由来するピークが認められた。これらはコラーゲ

的アプローチとしてブタ由来コラーゲン（新田ゼラチン製）

ンのペプチド結合特有のピークであり，上記処理によりコを用いた。1 % コラーゲン溶液をポリスチレン基板上に塗ラーゲンが表面に固定化されていることが分かる。しかし，

図1

化学合成コラーゲン粒子の走査電子顕微鏡写真− 31 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

引き続く 4 - フェニル安息香酸溶液処理後もスペクトルにンからなる微小球が作製できた。化学合成コラーゲンの側

大きな変化は見られなかった。

鎖にある水酸基が脱水重縮合により架橋して微小球を形

水に対する接触角を測定した結果，コラーゲン固定化基成したと考えられる。サイズは 5 から 10 ミクロンであり，

板では 50.0 °，4 -フェニル安息香酸溶液処理後は 66.1 °であっ生分解性高分子から得られている DDS 用微小球と同程度た（n=3）。これは 4 - フェニル安息香酸溶液処理により，表のサイズであるので，本研究の目的に適ったサイズになっ面が疎水化していることを示している。

ている。

4. 考

また，天然コラーゲンを用いたモデル実験により，4- フ察ェニル安息香酸溶液処理することで表面の疎水化ができる

エマルションを用いたプロセスにより化学合成コラーゲ

図2

ことが明らかになった。FT - IR では大きな変化は認めら

試料の FT-IR ATR スペクトル

図 3 4-フェニル安息香酸によるコラーゲンの疎水化メカニズム− 32 −

安全性に優れた化学合成コラーゲンによるドラッグデリバリー用球状微粒子の創成れなかったものの，親水性の観点では変化が認められた。

3） 谷原正夫監修，コラーゲンの製造と応用展開，シーエ
ムシー出版（2009）．

これは 4 - フェニル安息香酸溶液処理による表面改質が表面のごく近傍のみで生じたためと考えられる。具体的には，

4） R. Berisio, L. Vitagliano, L. Mazzarella and A. Zagari,

図 3 に模式的に示すように，4- フェニル安息香酸がコラー

Crystal structure of the collagen triple helix model[(ProProGly)10]3, Protein Science, 11, 262–270 (2002).

ゲン中の水酸基と結合して表面に疎水性のベンゼン環が固定化され，疎水化に寄与していると考えられる。この結果

5） T. Kishimoto, Y. Morihara, M. Osanai, S. Ogata, M.

は，担持させる薬剤の親水性にあわせて化学合成コラーゲ

Kamitakahara, C. Ohtsuki, M. Tanihara, Synthesis of

ン微小球の表面を改質すれば，薬剤徐放性能を制御しうる

poly(pro-hyp-gly)n by direct polycondensation of (pro-ことを示している。

hyp-gly)n, where n = 1, 5, and 10, and stability of the

今回は，得られた微小球がきわめて少量であったため，

triple-helical structure, Biopolymers, 79, 163-172 (2005).

微小球そのものへの表面改質は行えなかったが，今後微小

6） N. Nagai, N. Kumasaka, T. Kawashima, H. Kaji, M.

球の量産方法の確立も含めて，この点を明らかにしていく

Nishizawa, T. Abe, Preparation and characterization of

必要がある。

collagen microspheres for sustained release of VEGF,
J. Mater. Sci. Mater. Med., 21, 1891-1898 (2010).

（引用文献）

7） L. Yao, F. Phan, Y. Li, Collagen microsphere serving1） 竹本喜一，砂本順三，明石満編，高分子と医療，三田出版会（1989）．
2） 石原一彦，塙

as a cell carrier supports oligodendrocyte progenitor
cell growth and differentiation for neurite myelination

隆夫，前田瑞夫編，バイオマテリアルの基礎，日本医学館（2010）．

− 33 −

in vitro, Stem Cell Res. Ther., 4, 109 (2013).

バイオベースマテリアルを用いた人体により安全な染毛法の開発
京都工芸繊維大学大学院工芸科学研究科繊維学系

安永秀計

The author has studied the invention of novel human hair dyeing techniques, which are milder and safer for a human
body, in order to decrease the risks accompanying hair dyeing. In the paper, the results on a variety of hair dyeing
techniques by using biobased materials are reported. The dyeing technique uses flavonoids such as (+)-catechin (Cat) as
the dyestuff precursors. The precursors are oxidised and dyeing hair is performed by three kinds of methods as follows:i) dyeing hair by a redissolved catechinone dyestuff, which is preliminarily obtained by the oxidation of Cat enzymaticallyor chemically, “redissolution dyeing,” ii) dyeing hair with Cat solution during enzymatic or chemical oxidation reaction,“simultaneous oxidation dyeing” and iii) dyeing the hair by oxidising enzymatically or chemically, which is treatedpreviously with Cat, “post-oxidation dyeing.” The resulting colours of hair samples were compared in order to find a better
technique showing higher dyeability.
Next, the biocatechol materials, such as (-)-epicatechin, L- 3 , 4 -dihydroxyphenylalanine, hematoxylin, brazilin,rosmarinic acid, caffeic acid and chlorogenic acid were used to dye hair by the enzymatic simultaneous oxidation or postoxidation dyeing method and their dyeability was estimated. It was found that the bio-catechols containing chroman( 3 , 4 -dihydro- 2 H- 1 -benzopyran) structure such as Cat, EC, HX and BZ are useful for hair colouring and a variety ofcolours are obtained.
On the other hand, dyeing hair by using saccharides and amino acids was tried. Yellowish brown and brown hairs are
obtained by heating the dyeing solution, in which they are involved. The colour fastness to ultraviolet light and washingfor hair dyed by the technique is very high. It was revealed that the dyeing temperature is decreased and dyeing time isshortened by the addition of bio-polybasic acids.

1. 緒の研究を行なってきた。そして、天然由来物質を原料とし言て得られるバイオベースマテリアルを用いて、いくつかの

現在、人毛の染色（染毛・ヘアカラーリング）には、天然アプローチによる染毛法の開発を試みた。本稿ではこれま由来の原料を用いた染料に比べて安価で多様な毛髪色が得でに実施した以下の研究結果について報告する。

られる合成染料が多く用いられている。そして、合成染料（1）①染料前駆体として利用可能なフラボノイド物質の内、を用いた染毛法の中では、染色性や堅ろう性が高く、比較（+）- カテキンから得られるカテキノン染料を再溶解さ的短時間で染色可能で、濃色の毛髪でもより明るい色に染せて染毛する「再溶解染色法」、②（+）-カテキンを酸化色できる酸化染毛剤が最も多く利用されている。しかしなさせながら染色を行なう「同時酸化法」、③（+）-カテキ

がら、発生率は高くはないものの、酸化染毛剤などによっンを毛髪に先に吸着させた後に酸化処理を行なう「後酸て染毛した後に皮膚にかぶれが生じたり、他の疾病が発生化法」でそれぞれ毛髪を染色し、その染色性を調べた研究。

1- 4）

したりする問題がある。そこで、より身体に影響を与え（2）カテコール基を有する物質（バイオカテコール）を用いた染毛における染色性の研究。

ないような安全性を高めた染毛法が希求されている。
染毛時にはどうしても染色液は皮膚に触れ、染毛料や染毛（3）糖とアミノ酸を用いた染毛の研究。

剤に含まれる物質が体内に侵入することは避けられない 5）。
したがって、適当な期間をおいて繰り返し体内に若干量が浸透したとしても、健康上の害を与えないような物質を用

2. 実

験

2. 1. カテキノンによる染毛①（+）-カテキン（Cat）／チロシナーゼ／ O2 系の酵素酸化

いて染毛しなければならない。
このような背景のもとで、筆者らは人体への負荷のより法、あるいは Cat ／塩基／ O2 系の化学酸化法によってカ

少ない染毛法の創製を目的として、新しい染毛料と染毛法

テキノンを合成し、それぞれから得られたカテキノン粉末のリン酸緩衝液（pH = 7.0）を調製した。その水溶液に脱色された白髪人毛（マタイ社）を投入して 30 ℃で 40 分間染色
した（再溶解染色法）。② Cat ／チロシナーゼ／リン酸緩衝

Development of Sa fer Ha ir Dyeing
Technique by Using Biobased Materials
Hidekazu Yasunaga
Kyoto Institute of Technology Departmentof Fibre Science and Engineering

液（pH = 7.0）、あるいは Cat ／ 0.1 M 炭酸ナトリウム水溶液を調製し、それぞれの水溶液に白髪人毛を投入して O2
ガス供給下、30 ℃で 40 分間染色をした（同時酸化法）。③
Cat 水溶液に人毛を 40 分間浸漬した後、チロシナーゼ／− 34 −

バイオベースマテリアルを用いた人体により安全な染毛法の開発

0.1 M リン酸緩衝液、あるいは 0.1 M 炭酸ナトリウム水溶

クエン酸または DL- リンゴ酸などのバイオ酸を添加し、そ液に浸漬し、O2 ガス供給下、30 ℃で 40 分間酸化処理をしこにビューラックス社白髪人毛を浸漬し、染色温度や染色た（後酸化法）。以上の各方法で毛髪試料を処理し、ドデシ

時間を系統的に変えながら上記と同様な条件下で染色した。

ルポリオキシエチレン硫酸ナトリウムを主剤とする洗浄剤

その後、得られた毛髪の洗浄・乾燥を行ない、測色して染による洗浄・蒸留水によるすすぎ・自然乾燥をそれぞれ行

色性を評価した。

なった。得られた試料を分光測色計（コニカミノルタ CM2600d）で測色し、L*a*b* 表色系（CIE 1976）で毛髪の色を3. 結果と考察数値化した。L* は明度、a* は赤－緑色度、b* は黄－青色度、

3. 1. カテキノンによる染毛

C* は彩度を示す。

6-7）

まず、酵素酸化系・化学酸化系の両方で再溶解染色・同2. 2. バイオカテコールマテリアルを用いた染毛

時酸化・後酸化の各方法のいずれによっても、カテキノン（‒）- エピカテキン（EC）、L -3, 4- ジヒドロキシフェニルア

染料で毛髪が染色されることが明らかとなった。各染色方

ラニン（DOPA）、ヘマトキシリン（HX）、ブラジリン（BZ）、法で染色した毛髪は黄～黄赤～赤茶色となる。染色した毛ロスマリン酸（RA）、カフェー酸（CA）、クロロゲン酸

髪の写真を図 1、測色結果を色度図・色調図でまとめて図（ChA）、エラグ酸（EA）を用いて、酵素酸化による同時酸

2 に示す。図 1 からわかるように、全体的には酵素酸化系

化法と後酸化法でそれぞれ染毛実験を行なった。染色条件

よりも化学酸化系で染色した毛髪の方が暗い色調に染色さと測色法は 2. 1. と同様である。

れる。酵素酸化系では、再溶解染色法よりも同時酸化法と後酸化法による染色で毛髪の a* 値が高く L* 値が低くなり、

2. 3. 糖とアミノ酸を用いた染毛と堅ろう度の評価

同時酸化法でさらに b * 値が高くなる（図 2）。化学酸化系に

D - キシロースと各アミノ酸（グリシン・β- アラニン・L-

おいても後酸化法による染毛でa* 値が高くL* 値が低くなる。

バリン・L - グルタミン酸ナトリウム・L（+）- リシン・L - メ

酵素系と化学系酸化法での染色性の差は、①酵素の活性

チオニン・L - トリプトファン・L - セリン・L - チロシン・L-とその変化、②酸化種の寿命、③系の中での酸化種・活性アルギニン）をそれぞれ溶解した炭酸水素ナトリウム水溶化された Cat・カテキノン染料の発生場所の違いなどによ液に白髪人毛（ビューラックス社）を浸漬し（浴比：1：62.5）、って生まれると予想される。

70 ℃で 4.0 h 振とうして染色した。得られた毛髪を蒸留水

また、後酸化法では全体で 80 分間の処理をしていて、で 2 回洗浄後に自然乾燥し、2. 1. と同様の方法で測色した。

他の 2 方法よりも処理時間が長い。染色では一般に染料前

他方、染色毛髪に、高圧水銀ランプ（石井商店 UV -HT

駆体分子や染料分子の拡散が律速となるので、後酸化法で型）を用いた紫外線照射（強度は 15.1mWcm-2 at 254 nm、拡散する時間が長くなることが毛髪色をより濃くした主な-2

6.3 mWcm-2

at 310 nm、2.88 mWcm

at 365 nm）、ま た

要因ではないかと考えられる。

はドデシルポリオキシエチレン硫酸ナトリウム水溶液（3.0

これまでの研究によりカテキノン染料は皮膚刺激性を示wt%）を用いた洗髪を行ない、試料毛の色の変化を追跡しさないことがわかっているので 8）、再溶解染色法での皮膚た。その際に、酸化染毛剤（花王ブローネシャイニングヘ

刺激性は極めて低いと考えられる。一方、同時酸化法・後アカラー C1A ＋花王クリームヘアカラー KT）または塩基

酸化法では染色時に化学反応が伴うので、実用化にあたっ性染料（C. I. Basic Brown 16）を用いて染色した毛髪試料ては、この方法での安全性試験が必要である。特に化学酸にも同様の実験を行ない、比較した。

化法では、中性で反応を行なう酵素酸化法と異なり、塩基さらに、D - キシロース／β- アラニン系の処理水溶液に
染色法

未染色

酸化法

─

写

性で反応させるので、この pH での皮膚への刺激その他を

再溶解染色法
酵素

化学

同時酸化法
酵素

後酸化法
化学

酵素

化学

真

図 1 酵素酸化系または化学酸化系で、再溶解染色法・同時酸化法・後酸化法のそれぞれによってカテキノンで染色した毛髪の写真。反応温度：30 ℃。

− 35 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

染料前駆体

写

Cat

EC

DOPA

HX

BZ

RA

CA

ChA

58.4
16.9
53.9
56.5

58.3
16.9
45.7
48.8

38.6
0.89
6.27
6.33

35.1
6.22
21.3
22.2

49.4
12.1
25.9
28.5

65.0
3.89
21.4
21.7

65.8
3.85
22.9
23.2

70.5
4.18
25.7
26.1

真

L*
a*
b*
C*

図 3 酵素酸化系同時酸化法で各バイオカテコールマテリアルを用いて染色した毛髪の写真と測色結果。染料前駆体としてのバイオカテ
コールマテリアルは、（+）- カテキン（Cat）、（−）- エピカテキン（EC）、L-3,4- ジヒドロキシフェニルアラニン（DOPA）、ヘマトキシリン
（HX）
、
ブラジリン
（BZ）、ロスマリン酸（RA）、カフェー酸（CA）、クロロゲン酸（ChA）である。

RA または CA または ChA または EA を用いた染色系では評価する必要がある。
また、カテキノン染料は主要成分の 4-（3, 4- ジヒドロ - 3α,

ほとんど染まらない。染色した各試料毛髪の写真と測色

5, 7- トリヒドロキシ -2H-1- ベンゾ -2α- イル）-1, 2- ベンゾキ

結果を図 3 に示す。EA 系では染色前後の毛髪の色と測色

ノンの他に少量の他の色素も含んでいる（染料から副成物

値が変化しないので図 3 からは除いてある。DOPA と HXを除いて 4（3, 4- ジヒドロ -3α, 5, 7- トリヒドロキシ -2H -の染色系は L* が低く、毛髪は濃色に染まる。Cat と EC で

1 - ベンゾ - 2α- イル）-1, 2- ベンゾキノンを単離して精製するは a* と b* が高く、その結果彩度 C* が高い。DOPA では a*、のは極めて困難で、現時点では精製法を確立していない）。

b*、C* が低く、ほとんど無彩色といえる。HX と BZ では

酵素酸化系と化学酸化系の染色毛髪の色の違いに、染料分

茶系の色が測色結果にも反映されている。

子の組成の相違も要因として考えられる。特に特異性を示

チロシナーゼを作用させた各反応溶液は EA 系を除きす酵素反応に対し、化学酸化系では副成物の種類や量も多Cat と同様にいずれも発色し、EC は赤色、DOPA・RA・

いことが予想される。実用化に当たっては、その副成物のCA・ChA は黒褐色、HX は紫色、BX は濃い赤色と変化す作用も考慮し、安全性を評価する必要もある。

る。したがって、これらの染料前駆体物質でカテコール基3. 2. バイオカテコールマテリアルによる染毛が酵素反応によって酸化し、色素が生成しているといえる。

9-12）しかし、毛髪を濃色に染色するのは Cat・EC・DOPA・

Cat に加え、8 種のバイオカテコールマテリアルを用い

HX・BZ の系である。染色可能な系で用いられる前駆体は、て、それぞれ酵素酸化系で同時酸化法による染毛を試み

DOPA を除き、カテコールと共にクロマン（3, 4 - ジヒドロたところ、EC では Cat と同様に黄赤色に、DOPA では彩-2H -1 - ベンゾピラン）構造を有する。したがって、毛髪へ度の低い灰色に、HX ではくすんだ暗黄赤色に、BZ ではの染着にはクロマン構造が重要な役割を演じていることが黄味がかった茶色に毛髪が染まることがわかった。一方、示唆される。DOPA は人体においてメラニン色素が合成− 36 −

バイオベースマテリアルを用いた人体により安全な染毛法の開発される際の原料の一つで主要物質であり、その合成過程でがある。
染毛において染色毛髪の色の堅ろう性は重要な性質であ

チロシナーゼが働く。本研究の DOPA の系では、生成す

るので、この染色法で染めた毛髪の紫外線に対する耐光堅る色素が毛髪への吸着能を有しているといえる。

ろう度と洗髪堅ろう度を調べた。ここでは、D- キシロース／

3. 3. 糖とアミノ酸による染毛結果と堅ろう度評価

13-15）

まず、D- キシロースとグリシンを用いて毛髪の染色をグリシン系・D- キシロース／β- アラニン系で染色した試料を酸化染毛剤系・塩基性染料系の試料と比較した。
各系で染色した毛髪の染色直後の色と各紫外線照射時試みたところ、毛髪が茶色に染まることがわかった。そしてこの系では、より高濃度のグリシン、より長い染色時間、

2
2
2 1/2
間
（t）
における色の色差（ΔE*=｛（ΔL*）+（Δa*）+（Δb*）｝、

より高温の染色条件でより濃色に染色されることを明らか

ΔL*、Δa*、Δb* はそれぞれ染色直後と所定処理後の毛髪にした。次に、D- キシロースと他の各アミノ酸を反応さの L*、a*、b* の差）の変化を図 4 に示す。ΔE* が小さいほせて毛髪の染色処理を行なった。得られた毛髪試料の測色

ど色の変化が小さいことを示す。紫外線照射下での D- キ

結果を表 1 に示す。アミノ酸の種類によっては水に対する

シロース／グリシン系または D- キシロース／β- アラニン

溶解度が低いものがあり、4.0 M の濃度にならないものは系染色毛髪のΔE* は最初の 6.0 h までは上昇するが、それ飽和濃度まで溶解させて染色した。アミノ酸を添加せずに以降は 4 程度でほとんど一定である。そして、24 h 紫外線

D- キシロースのみでも毛髪は染色されるが、アミノ酸を照射時では、酸化染毛剤系または塩基性染料系で染色した添加した系ではいずれの毛髪の L* 値もより低くなる。し毛髪の値と比較すると、糖／アミノ酸染色系のΔE* 値はたがって、アミノ酸を添加することによって染色性が向上

半分以下となっている。この結果より、D- キシロース／グ

するといえる。最も高い a* 値を示すのはグリシン添加系で、リシン系と D- キシロース／β- アラニン系で染色した毛髪

最も高い b* 値を示すのは L- バリン添加系である。最も低の耐光堅ろう度は非常に高いといえる。毛髪が紫外線に曝い L* 値を示すのはβ- アラニン添加系である。これは、添されて空気中の酸素による酸化が促進されたり他の反応が加するアミノ酸の種類によって生成する色素の種類・組成・起こる場合に、毛髪に吸着しているメラノイジン物質には量が変化するためであると考えられる。

さらに反応の進行とともに色素を形成するものがあること

還元性の糖とアミノ酸を加熱するとメイラード反応が起が予想される。このことと、染料物質が酸化反応も経て生こり、メラノイジンという一群の色素物質が生成すること成した安定な化合物を含むことが高い耐光堅ろう度に寄与が知られている16）。本研究の系でもこのメイラード反応

しているのではないかと考えられる。

によって茶褐色の色素が生成し、これが吸着して毛髪が染図 5 は各系の染色毛のΔE* を洗髪回数（n）に対してプロ色されていると考えられる。さらに、アミノ酸を添加しなットした結果である。酸化染毛剤系または塩基性染料系でい系でも毛髪が染色されていることから、添加アミノ酸だ

はΔE* が大きく上昇していくのに対して、糖／アミノ酸

けではなく、毛髪を構成するケラチンの一部も反応に関与

染色系の色変化はとても小さい。D- キシロース／グリシン

し、色素物質がケラチンと共有結合を形成している可能性

系または D- キシロース／β- アラニン系において、ΔE* は
5 回目まで緩やかに増加し、それ以降は 4 または 3 程度で表 1 D - キシロースとそれぞれのアミノ酸によって染色した毛髪の
測色結果。
試料

c /M

L*

a*

b*

―

70.7

4.32

23.8

A

Initial hair
No amino acids

0

62.7

8.56

35.4

Glycine

4.0

41.7

20.9

36.5

β- Alanine

4.0

37.9

19.9

32.2

L-Valine

4.0

50.6

17.3

43.2

4.0

58.0

12.7

41.8

L（
- +）-Lysine

4.0

58.3

8.35

29.2

L - Methionine

0.32

60.9

11.1

39.2

L - Tryptophan

0.10

54.1

7.21

36.0

L - Serine

2.4

L-Glutamic acidmonosodium salt

L - Tirosine
L - Arginine

44.8

17.1

35.7

2.5×10

58.3

8.85

32.0

0.85

45.9

12.4

29.2

-3

D- キシロース濃度：2.0M, アミノ酸濃度：0-4.0 M。
（cA）

ほとんど一定である。この結果から、D- キシロース／グ
リシン系と D- キシロース／β- アラニン系で染色した毛髪

図 4 D - キシロース／グリシン系（■）・D - キシロース／β-アラニン系（●）
・酸化染毛剤系（□）
・塩基性染料系（○）で染色した毛
髪の紫外線照射時間（t）
に対する色差（ΔE*）の変化。

− 37 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

図 5 D - キシロース／グリシン系（■）
・D - キシロース／β-アラニン系（●）
・酸化染毛剤系（□）
・塩基性染料系（○）
で染色した毛髪の洗髪回数（n）に対するΔE* の変化。

は洗髪堅ろう度も非常に高いといえる。先に述べたように、

図 6 染色時間（t）と染色毛の K/S450 の関係。記号は、未染色毛（○）、D - キシロース／β-アラニンのみで染色した毛髪（◆）、D キシロース／β-アラニン＋クエン酸で染色した毛髪（●）、D - キ
シロース／β- アラニン＋ DL- リンゴ酸で染色した毛髪
（▲）を表
す。

これは染料物質が毛髪ケラチンと共有結合を形成して強固得られる毛髪の色の堅ろう度は高いといえる。

に染着していることに起因している可能性がある。

今後の課題として、①染色機構の解明、②染色性の向上、

この染毛法においては、濃色に染めるために 70 ˚C での加熱と 4 時間の染色時間を必要としていて、実用化のため③安全性の評価が挙げられる。

に、より低温・短時間で染色することが求められる。そこ
で、染料生成反応を促進し、染色温度を下げたり染色時間謝を短縮できるような添加物質を検討した。

辞本研究の遂行にあたり、公益財団法人コスメトロジー研

D- キシロース／β- アラニン系に様々な化合物を添加し究振興財団から助成を戴いたことに感謝致します。

て染毛した結果、クエン酸または DL- リンゴ酸を添加する
ことで、毛髪はより濃色に染色されることがわかった 17）。 （引用文献）
図 6 に各染色系における染色時間（t）と染色毛の 450 nm に

1） Søsted, H.; Agner, T.; Andersen, K. E.; Menné, T., 55

おける K/S 値（K/S450）の関係を示す。K/S は、Kubelka-

Cases of allergic reactions to hair dye: a descriptive,

Munk の理論により定義され、［K/S］λ=（1-Rλ）2/2Rλ によconsumer complaint-based study, Contact Dermatitis,

り算出される。K は吸光係数、S は散乱係数、Rλ は着色

47, 299-303 (2002).

物の波長 λ の光の反射率である。K/S 値が高い程、より濃

2） Ishida, W.; Makino, T.; Shimizu, T., Severe hair

色に着色されていることを示す。染色時間が 1.0 h までのloss of the scalp due to a hair dye containing para

処理ではいずれの系もほとんど同じ色調を示すが、1.25

phenylenediamine, ISRN Dermatol., 2 0 1 1, 9 4 7 2 8 4から 2.0 h の間で K/S 値に大きな差が生じる。そして例え(2011).   doi: 10.5402/2011/947284

ば、1.5 h 処理をしたクエン酸添加染色系の毛髪（L* = 36.4）

3） 消費者庁消費者安全調査委員会 , 毛染めによる皮膚は、4.0 h 処理をした無添加系の毛髪（L* = 37.6）よりも濃い

障 害， 報 告 2015 年 10 月 23 日 , URL: http://www.caa.

色を示す。また、DL- リンゴ酸添加系でも濃色効果が観察

go.jp/csic/action/pdf/8_houkoku_honbun.pdf (2015).

される。この結果より、クエン酸または DL- リンゴ酸を添4） Gupta, M.; Mahajan, V. K.; Mehta, K. S.; Chauhan,

加することで染色時間の短縮が可能だといえる。一方、各

P. S., Hair Dye Dermatitis and p-Phenylenediamine

染色系の染色温度について L* = 40 付近の値で比較すると、Contact Sensitivity: A Preliminary Report, Indian

クエン酸の添加系では 15 ℃、DL- リンゴ酸の添加系では

Dermatology Online Journal, 6(4), 241-246 (2015).   doi:
10.4103/2229-5178.160253  

12 ℃染色温度が下がる。

4. 総

5） Goetz, N.; Lasserre, P.; Roré, P.; Kalopissis, G.,括

Percutaneous absorption of p-phenylene diamine during
an actual hair dyeing procedure, Int. J. Cosmetic Sci.,

本研究によって、バイオベースマテリアルを染料前駆体

10, 63-73, (1988).

として用いる酵素酸化法・化学酸化法・メイラード反応法などにより、毛髪を様々な色に染色できることを明らかに

6） 積智奈美；松原孝典；綿岡勲；浦川宏；安永秀計，（+）-カした。バイオベースマテリアルを用いた本研究の染色法で− 38 −

テキンを用いた染毛法

Ⅰ．酸化・染色条件と染色性，

バイオベースマテリアルを用いた人体により安全な染毛法の開発

繊維学会秋季研究発表会 ，70，27（2015）．

Conference on Fiber and Polymer Biotechnology, 3 9(2016).

7） Takanori Matsubara; Chinami Seki; Hidekazu
Yasunaga, The Relationships between Dyeing12）Takanori Matsubara; Chinami Seki; Hidekazu

Methods and Dyeability in Hair Colouring by Utilising

Yasunaga, Relationships between Species of Dyestuff

Enzymatic Oxidation of (+)-Catechin, American Journal

Precursor and Dyeability in Hair Colouring Made byof Plant Sciences, 7, 1058-1066 (2016).    doi: 10.4236/

Enzymatic Oxidation Technique Using Bio-Catechols,  

ajps. 2016. 77101

American Journal of Plant Sciences, 8, 1471-1483 (2017).   
doi: 10.4236/ajps. 2017. 86101

8） Yasunaga, H.; Takahashi, A.; Ito, K.; Ueda, M.;
Urakawa, H., Hair Dyeing by Using Catechinone

13）安永秀計 ; 大﨑洋 ; 綿岡勲 ; 浦川宏 , 糖とアミノ酸を用

Obtained from (+)-Catechin, Journal of Cosmetics,

いた染毛

Dermatological Sciences and Applications, 2(3), 158-163

毛髪の堅ろう性の評価 , 日本繊維機械学会年次大会 , 68,(2012).   doi: 10.4236/jcdsa.2012.23031

II. 染色性に及ぼすアミノ酸種依存性と染色98-99（2015）．

9） T. Matsubara; C. Seki; I. Wataoka; H. Urakawa; H.

14）YASUNAGA, H.; OSAKI, H., Wool and Hair Dyeing

Yasunaga, Novel Oxidation Hair Dyeing by Using Bio-by Using Saccharides and Amino Acids I. Dyeing

Catechol Materials, The 13th Asian Textile Conference,

Conditions and Dyeability, The 1 3th Asian Textile

3(c), 1061-1064 (2015).

Conference, 3(c), 1106-1108 (2015).

10）松原孝典 ; 積智奈美 ; 安永秀計 , バイオカテコールの酵

15）YASUNAGA, Hidekazu; OSAKI, Hiroshi, Hair

素酸化反応を活用した染毛法 , 毛髪科学技術者協会第 7

Dyeing by Using Saccharides and Amino Acids

回研究発表会（2016）．

I. Relationships between Dyeing Conditions andDyeability, tekstilec, in preparation.

11）YASUNAGA, Hidekazu; TAKAHASHI, Akiko; ITO,
Kazue; UEDA, Masahisa; TANIGUCHI, Saina; YANO,16）Maillard, L. C., Ann. Chim. Sér. 9(5), 258-317 (1916).

Asami; SEKI, Chinami; MATSUBARA, Takanori,17）木田智康 ; 安永秀計 , 糖とアミノ酸を用いた染毛Hair Dyeing Using Biobased Materials Prepared by

Ⅲ . 染色性に対する酸添加の効果 , 染色化学討論会 , 53,

Enzymatic and Chemical Reactions, 9th International

25-27（2016）．

− 39 −

タイトジャンクションの形成を促進するシグナル伝達経路の解明
九州大学理学研究院生物科学部門

池ノ内

順一

Epithelial cells define the boundary between the outside and the inside of our body by constructing the diffusion barrier.
Tight junctions (TJs) of epithelial cells function as barriers against invasion of harmful microorganisms into the humanbody and free diffusion of water or ions from the body. Therefore, formation of TJs has to be strictly controlled in epithelial
cells. However, the molecular mechanisms governing this regulation are largely unknown. In this study, we identified Ca 2 +/calmodulin-dependent protein kinase II (CaMKII) as a regulator of the barrier function of TJs. CaMKII inhibition led toenlargement of TJ-areas and up-regulation of the barrier function. CaMKII inhibition induced excess TJ formation in partby the activation of AMP-activated protein kinase (AMPK) and subsequent phosphorylation of claudin- 1 . As up-regulationof epithelial barriers is essential for the prevention of chronic inflammatory diseases, the identification of CaMKII as amodulator of TJ function paves the way for the development of new drugs to treat these diseases.

1. 緒

また Claudin-1 の発現が低下したマウスでは、アトピー性言

皮膚炎に類似した症状を示すことが近年明らかになった 2）。

私たち多細胞生物のからだは、数兆個の細胞から構成さ

このことは、皮膚顆粒層に存在するタイトジャンクション

れており、細胞同士はタイトジャンクションと呼ばれる細が外来抗原に対するバリアとして機能し、タイトジャンク

胞接着装置によって密に結合している。タイトジャンクシションの破綻が慢性炎症の原因になっていることを示唆す

ョンを構成する細胞接着分子として、4 回膜貫通タンパクる。

質の Claudin が同定された。しかしながら一方で、タイトこのようにタイトジャンクションやその主たる構成因子

ジャンクションの形成がどのような仕組みで制御されていである Claudin が生理的なバリアとして機能し、その破綻

るかについては、殆ど明らかになっていない。

が病態発症につながることが明らかになった。しかしなが本研究では、タイトジャンクション形成の分子メカニズ

ら、タイトジャンクションの形成がどのように制御されるムを明らかにすることにより、皮膚のタイトジャンクショ

かはこれまで全く明らかになってこなかった。タイトジャンの形成促進を可能とする化粧品・外用薬・医薬品の開発

ンクションの機能を人為的に制御することは医学的に重要の基礎となる知見を得ることを目的としている。

な試みであるが、Claudin タンパク質の発現量を人為的にタイトジャンクションは、上皮細胞や血管内皮細胞など制御するだけでは不十分である。Claudin-1 を過剰に発現の細胞が持つ細胞接着装置であり、特に皮膚においては、しても余剰のタイトジャンクションは形成されない。私は、タイトジャンクションは、体内からの水分の蒸散を防ぐ上タイトジャンクションの形成に関わる分子機構を明らかにで必須の構造である。皮膚の上皮細胞が持つタイトジャンする目的で、小分子化合物ライブラリーのスクリーニング

クションを構成する膜タンパク質 Claudin-1 をノックアウを行い、タイトジャンクションの形成を促し、上皮細胞のトしたマウスでは、水分が蒸散して、生後すぐに脱水を呈バリア機能を亢進させるシグナル伝達経路の解明を試み

する 1）。これまで皮膚において保湿を担うのは、角質のセた。

ラミド層であるとされていたが、上記の知見は、タイトジャンクションもセラミド層と同様に皮膚の保湿において重要な役割を果たすことを意味している。従って、タイトジ

2. 方

法

2. 1. 細胞培養実験に用いたマウス唾液腺由来培養上皮細胞である

ャンクションのバリア機能を強化することは、保湿効果を

CSG1 細胞は、最終濃度 10 ％ Fetal Bovine Serum（FCS）

高めることが期待できる。

を添加した DMEM を用いて 37 ℃、5 ％ CO2 で培養した。
Elucidation of molecular mechanisms
involved in t he for mat ion of t ight
junction
Junichi Ikenouchi
Kyushu University Faculty of Science
Department of Biology

2. 2. 蛍光抗体染色
顕微鏡観察に用いる細胞は ϕ35 mm glass-base dishes ま
たは ϕ15 mm カバーガラス上でコンフルエントになるまで培養した。これを 2 ％ PFA/PBS（-）で 10 分間固定処理を行い、続いて 50 μg/mL Digitonin/PBS（-）を用いて 10 分

− 42 −

タイトジャンクションの形成を促進するシグナル伝達経路の解明

間透過処理を行った。次いで、1 ％ BSA/PBS（-）
を加え 15
分間ブロッキング処理を行った。一次抗体を 1 ％ BSA/
PBS（-）に適切な濃度で希釈したものを加え 1 時間、その後、同様に希釈した二次抗体を加え 30 分間静置し、よく洗浄を行ってから観察した。

2. 3. Western Blotting
ウエスタンブロッティング用に作製したサンプルを
SDS-PAGE により分離後、ウェット法によりニトロセルロース膜に転写した。転写した膜を5％スキムミルク/PBS（-）に浸し、室温で 30 分間振盪しブロッキングした。続いて

図１ GFP-Claudin-1 を安定発 現する L 線 維芽細胞に KN-93
を最終濃度が 10 µ M になるように添加した。DMSO を培地に添加した対照群に比べて KN-93 を培地に添加した細胞では
GFP-Claudin-1 が顕著に細胞間接着部位に集積している。スケールバーは、5 µm。

一次抗体を 5 ％スキムミルク /PBS（-）に適切な濃度で希釈したものを加え 1 時間、その後、5 ％スキムミルク /PBS（-）に 1/2000 に希釈した二次抗体を加え 30 分間室温で振盪した。その後 PBS（-）で 30 分間振盪洗浄し、Super Signal
west Dura 発色試薬を用いて検出した。

2. 4. 経上皮電気抵抗値（TER）の測定
CSG1 細胞を 12 well のトランスウエル（Corning）に細胞数が 1 × 106 個になるように播種し、2 日ほど培地を交換してコンフルエントになるまで培養した。培養後、電気抵抗値を測定した。

3. 結果

3. 1. タイトジャンクションの形成を促進する化合物の同定
タイトジャンクションの形成を促進するシグナル伝達経路を同定する目的で、標的の明らかになった小分子化合物のライブラリーを用いて、上皮細胞のタイトジャンクシ
ョン領域を拡大する化合物を探索した。具体的には、タイトジャンクションの構成分子である Claudin-1 に GFP を融合させた GFP-Claudin-1 遺伝子を安定的に発現する L 線

図２ マウス唾液腺由来の培養上皮細胞に KN-93 を最終濃度
が 10µM になるように添加し、固定後、抗 Claudin-1 抗体と抗 ZO-1 抗体で二重染色した。DMSO を培地に添加した対照群に比べて KN-93 を培地に添加した細胞では Claudin-1 の細胞間接着部位への集積がラテラル膜まで拡大している（白矢印）。
Claudin-1 に結合する裏打ちタンパク質の ZO1 の染色は拡大していない。

維芽細胞を樹立し、化合物の添加によって、細胞間接着部
位に Claudin-1 の集積を促す化合物をスクリーニングした。

た。その結果、ラテラル膜に余剰なタイトジャンクション

その結果、カルシウム - カルモジュリン依存性キナーゼ II

ストランドが形成されていることを確かめた（図３）。
このことから、KN-93 処理によってタイトジャンクショ（CaMKII）の阻害剤である KN-93 で処理すると、Claudin1-GFPの細胞接着部位への集積が顕著に促進されることをンの形成量が拡大するということが明らかになった。
KN-93 の効果について、上記の形態学的な評価に次いで、

見出した
（図１）
。
次に、KN-93 によるタイトジャンクションの形成促進効

上皮細胞のバリア機能に対する評価を行った。経上皮電気

果が、上皮細胞でも観察されるか検討を行った。マウスの抵抗測定（Trans-epithelial electrical resistance：TER）は、

唾液腺由来の培養上皮細胞である CSG1 細胞に KN-93 を添

上皮細胞シートに一定の電圧をかけた際に流れる電流を測加し Claudin-1 に対する抗体で固定染色を行った。その結ることにより、タイトジャンクションを介して上皮細胞の果、培養上皮細胞においても Claudin-1 が細胞接着部位の間隙を通るイオンの通しやすさを測定する。TER が高い

ラテラル膜に過剰に集積する様子が観察された（図２）。

ほど、イオンを通しにくく、したがって上皮細胞のバリア

さらにこのような Claudin-1 のラテラル膜の集積がタイ機能が高い状態であると言える。KN-93 を培地に添加した

トジャンクション構造の拡大を反映しているかを確かめる

上皮細胞では対照群に比べて高い TER 値を示すことから、ために、凍結割断レプリカ法による電子顕微鏡観察を行っ

KN-93 の添加によってタイトジャンクションのバリア機能− 43 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

図３ マウス唾液腺由来の培養上皮細胞に KN-93 を最終濃度が 10 µM になるように添加し、凍結割断レプリカ法による電子顕微鏡観察を行った。DMSO を処理した群に比べて、タイトジャンクションの形成領域が拡大している様子が観察された。
スケールバーは、200 nm。

図４ マウス唾液腺由来の培養上皮細胞に
KN-93 を最 終濃 度になるように添 加し、TER の測定を行った。KN-93 で処理した細胞では TER が有意に上昇した。

KN-93 で処理した細胞では、Claudin-1 の 191 番目のスが増加していることが明らかになった（図４）。

レオニンがリン酸化されることによって、モノユビキチ

3. 2. KN-93 処理によるClaudin の翻訳後修飾

ン化される Claudin-1 が減少することによって、余剰のKN-93 は細胞質に存在する CaMKII キナーゼの阻害剤でClaudin-1 が形質膜に蓄積した結果、過剰なタイトジャン

あるが、これまでタイトジャンクションとの形成についてクションが形成されると考えられる。上記の内容は全く新研究されたことはなく、図に示したような効果をもたらすしいタイトジャンクション形成の制御機構であるため、論機序は全く不明である。タイトジャンクションが体内から文報告を行った 3）。

の水分の蒸散を防ぎ皮膚の保湿に重要な構造であること、このように Claudin-1 のユビキチン化による制御が、タ

また外界からのアレルゲンや病原菌の侵入に対するバリア

イトジャンクションの動的な制御に関わることを明らかにであることを考えると、CaMKII によるタイトジャンクシ

することができた。現在は、Claudin-1 のユビキチン化にョンの形成が促進される分子メカニズムの詳細を解明する

関わる酵素の探索を進めている。

ことは重要であると考え、分子メカニズムに関する検討を

4. 考

行った。

察

ま ず、KN-93 で CSG1 細 胞 を 処 理 し た 際 に Claudin-1

皮膚の上皮細胞が持つタイトジャンクションは水分の恒のタンパク量が増加するか否か検討をウエスタンブロッ

常性を維持する必須の細胞膜構造である。保湿は皮膚の質

トにより行った。しかしながら KN-93 の処理によって感に大きな影響を与える要素である。一方で、皮膚のタイ

Claudin-1 のタンパク量は変化していなかった。しかしな

トジャンクションは、我々の体と外界を分け隔てる構造のがら、GFP-Claudin-1 を発現する L 細胞を用いて KN-93 で実体であり、皮膚からの薬剤の吸収を障害する。このよう処理したときに、GFP-Claudin-1 のバンドが 2 本に分離し、なタイトジャンクションの機能を強化もしくは減弱させる

特に高分子量側のバンドが顕著に減弱していることを見出シグナル情報伝達経路を同定し、人体への安全性の高い阻した。

害剤や機能増強剤を開発することに成功すれば、それらをそこで、高分子量側のバンドに相当する Claudin-1 のバ

化粧品に添加することによってタイトジャンクションのバ

ンドは、何らかの翻訳後修飾を受けたものである可能性を

リア機能を制御することが可能となり、新しい化粧品の機考えて、Claudin-1 の細胞質領域に存在するすべてのセリ

能性成分に利用可能であると考えている。本研究で同定しン・スレオニンをアラニンに置換した変異体を作製した。

た CaMKII 阻害剤はそのまま化粧品など人体に使用するこ

191 番目のスレオニンをアラニンに置換した変異体 GFP-とはできないが、CaMKII 阻害によるタイトジャンクショ

Claudin-1（T191A）では、高分子量側のバンドしか出現しンの形成促進の分子機構をさらに詳細に解析することによないことを見出した。さらに、T191A の非リン酸化型のって、薬剤によって人為的に上皮バリア機能を強化させる

変異株が高分子量側に移動する原因として、189 番目のリことができるのではないかと考えられる。近年、ヒトにおジンが恒常的にモノユビキチン化を受けていることがわかいて、皮膚の Claudin-1 の遺伝子多型（SNP）とアトピー性った。すなわち 191 番目のスレオニンのリン酸化状態によ皮膚炎の発症の関連に関する論文報告が為された４）。上皮って、189 番目のリジンのユビキチン化状態が変化しておバリアの破綻を原因とする慢性炎症の治療に向けて、さらり、KN-93 で処理した細胞では、191 番目のスレオニンのに上皮バリアの制御に関わる分子機構の解明を引き続き目

リン酸化が亢進することによって、モノユビキチン化され指していきたい。

る量が減少することが明らかになった。

− 44 −

タイトジャンクションの形成を促進するシグナル伝達経路の解明（引用文献）SI, Jung YH, Hong K, Kim YJ, Lee SH, Kim HJ, Kim

1） Furuse M, Hata M, Furuse K, Yoshida Y, Haratake

HY, Seo JH, Kim BJ, Kim HB, Hong SJ. : Claudin-1

A, Sugitani Y, Noda T, Kubo A, Tsukita S. : Claudin-

polymorphism modifies the effect of mold exposure on

based tight junctions are crucial for the mammalian

the development of atopic dermatitis and production of
IgE. J Allergy Clin Immunol. 135, 827-30. 2015

epidermal barrier: a lesson from claudin-1-deficient4） Tokumasu R, Yamaga K, Yamazaki Y, Murota H,

mice. J Cell Biol. 156, 1099-111., 2001
2） Shiomi R, Shigetomi K, Inai T, Sakai M, Ikenouchi J, :Suzuki K, Tamura A, Bando K, Furuta Y, Katayama I,

CaMKII regulates the strength of the epithelial barrier.

Tsukita S. : Dose-dependent role of claudin-1 in vivo in

Sci Rep., 5, 13262, 2015

orchestrating features of atopic dermatitis. Proc Natl3） Yu HS, Kang MJ, Kwon JW, Lee SY, Lee E, Yang

− 45 −

Acad Sci U S A. 113, E4061-8. 2016

酸化ストレスの生体分子イメージングから迫る
対紫外線スキンケア分子の新規探索と機能評価
群馬大学大学院医学系研究科教育研究支援センター岩脇研究室

岩脇隆夫

Oxidative stress has recently gotten a great deal of attention, because it is reported to be responsible for a variety of
diseases and health concern and to be associated with fatigue and aging. Although oxidative stress is subject to occur
everywhere of the body, skin cells are more exposed with oxidative stress by ultraviolet radiation, especially UV-A. The
UV-related oxidative stress causes the protein degradation and accelerates the aging process in the skin cells. Thus, wellcontrolled oxidative stress needs for anti-aging of the skin cells. We have previously developed the gene constructs andmodel mice for visualizing oxidative stress in vivo. Here we also introduced the gene constructs into human-derived skincells, and established experimental tools to easily measure oxidative stress in vitro. By using these tools, we discovered andevaluated the function of crocetin for anti-aging of the skin cells. Crocetin, is a carotenoid found in fruits of gardenia andsaffron. We confirmed that crocetin mitigated oxidative stress and damage of the skin cells exposed to UV-A irradiation.
These results indicate that crocetin might be potentially useful for protection against shin damage induced by UV-A.

1. 緒の細胞ストレスについて研究を行ってきており、最近では酸言化ストレス可視化モデルマウスの開発に成功している 1）。こストレスというと多くの人は心的なものを連想するが、のマウスは酸化ストレス応答反応で重要な働きを担う生物の構成単位である細胞も外的および内的環境から様々

Nrf2 の機能を巧妙に利用している。具体的には酸化スト

なストレスに曝されている。それゆえに細胞はそれらスト

レスレポーター遺伝子は Nrf 2 の分解に関わるドメインとレスに対して順応できる分子メカニズムを発達させてきルシフェラーゼや GFP 遺伝子の融合体が抗酸化応答エレ

た。細胞レベルで感じとられるストレスの一種に「酸化ス

メントで活性化されるように構成されている。このようなトレス」というものがあり、これは主に細胞内に発生する遺伝子を持つマウスでは酸化ストレスに曝されると転写レ

活性酸素が原因で生じるストレスである。この酸化ストレ

ベルでその酸化ストレスレポーター遺伝子が活性化される。

スは様々な疾患や健康問題の原因であることや、また疲労

さらに、その翻訳産物（酸化ストレスレポータータンパク

や老化とも密接に関連することが報告されるようになって、質）は内在性 Keap1 の分解抑制から免れ、安定化すること近年大きな注目を浴びている。さらには研究の世界だけで光るようになるのである（図 1）。

でなく、美容の世界でも「酸化ストレス」
は関心を集めていて、女性雑誌などでは酸化ストレスを解消する「抗酸化力」
や「アンチエイジング」という言葉とともに特集が組まれるほどになっている。体のいたる所で酸化ストレスは発生する可能性を含んでいるのであるが、肌細胞ではとりわけ紫外線（特に UV-A 波）が原因で酸化ストレスが生じやすい。
この酸化ストレスは肌細胞内のタンパク質の酸化を引き起こし、肌の老化を進めてしまう。ゆえに肌細胞の老化を食い止めるには、酸化ストレスを上手くコントロールできることが重要である。そこで本研究では肌細胞で有用な抗酸化物質の新規探索および機能評価を行う。
私たちはこれまで主に小胞体ストレスや酸化ストレスなど

Screening and functional evaluation ofmolecules for anti-UV skin-care by using
in vivo imaging of oxidative stressTakao Iwawaki
Iwawaki Laboratory, Education andResearch Support Center Graduate
School of Medicine, Gunma University

図１ 上パネルはマウスに導入された遺伝子コンストラクトとその産物の酸化ストレス応答を模式的に表している。下のパネルはモデルマウスが UV-A 紫外線照射された際のイメージング結果を示している。

− 46 −

酸化ストレスの生体分子イメージングから迫る対紫外線スキンケア分子の新規探索と機能評価

2. 方

し、細胞の生存性を確認した。また、HO-1 遺伝子の発現法

応答性も確認した。10 µM の亜ヒ酸ナトリウムを 8 時間処

株化肌細胞および試験管内再構成皮膚に先述の酸化ス

理したとき、HO-1 mRNA 発現レベルは非ストレス条件下

トレスレポーターを導入し、それらを用いて低分子化合の 70 〜 120 倍に上昇する（図 2）。一方、100 µM のジエチ

物ライブラリーの中から紫外線誘導性酸化ストレスを軽ルマレイン酸を 8 時間処理する場合や 200 µM の過酸化水減するものを探し出すこと、そしてその効果を評価する

素を 8 時間処理する場合でも HO-1 mRNA 発現レベルは非ことを目指した。具体的に使用した細胞は HEK001 細胞

ストレス条件より上昇するが、亜ヒ酸ナトリウムに比べ（ATCC#CRL-2404）と NHEK-Ad 細胞（Lonza#00192627）て、その程度は小さかった。したがって、安定導入細胞株である。遺伝子導入方法としては一般的なリン酸カルシウの品質確認には 10 µM 亜ヒ酸ナトリウムの 8 時間を採用

ム法、Effectene 法（Qiagen#301425）、および Amaxa 法をする。ちなみに HO-1 遺伝子は酸化ストレスにより活性化順次試した。安定的な遺伝子導入株を選択する際の薬剤にされる Nrf2 を介して転写誘導されることが知られている。

はネオマイシン（シグマ #G8168）またはハイグロマイシン

酸化ストレス可視化用レポーター遺伝子の安定導入細胞株（InvivoGen#ant-hm-1）を使用した。ゆえにレポーター遺を得るための遺伝子導入方法について GFP 発現プラスミ

伝子はネオマイシン耐性遺伝子またはハイグロマイシン耐ドを用いて検討を行った。始めに最も安価に行うことが性遺伝子と共導入された。各遺伝子およびタンパク質の発できるリン酸カルシウム法を HEK001 細胞に試してみた

現レベルはそれぞれ ABI 社の TaqMan プローブを用いたが、GFP 陽性は全細胞あたり 1 % 程度でしかなかった。続

リアルタイム PCR 法および一般的に行われるウエスタン

いて Effectene 法を試してみたが、GFP 陽性は全細胞あた

ブロット解析または ELISA 解析により調べられた。レポ

り 2 〜 3 % 程度でしかなかった。そこで Amaxa 法を試しーター（ルシフェラーゼ）活性の測定には Dual luc assayてみたところ、GFP 陽性は全細胞あたり 60 〜 70 % であっ

キット（プロメガ #E1910）とルミノメーター（ベルトール

た。酸化ストレス可視化用レポーター遺伝子の安定導入細

ド #LB9507）を用いた。レポーター（ルシフェラーゼ）活胞株を作成するにあたっては Amaxa 法を採用した。

性のライブイメージングには IVIS（Xenogen）を用いた。

HEK001 細胞へ酸化ストレス可視化用レポータープラス

また活性酸素種の発生量を評価するために CM-H2DCFDA

ミドと内部標準用レポータープラスミドとネオマイシン耐（Life Technologies#C6827）を用いた。

性遺伝子発現プラスミドを 2：2：1 の割合（質量比）で共3. 結導入した。15 日後、細胞からゲノム DNA を抽出し、PCR

果法で導入遺伝子が保持されていることを確認した。また亜肌細胞を用いた研究は今回が初めてであったので、各ヒ酸ナトリウムで酸化ストレス処理を行い、その 8 時間後

HEK001 細胞および NHEK-Ad 細胞の特徴をつかむところにライブイメージング解析を行い、細胞溶解液のルシフェから実験をスタートさせた。HEK001 細胞を ATCC の推

ラーゼ活性を測定した。その結果、酸化ストレス可視化用

奨する条件で培養したところ、正常な増殖（10 継代以上）

レポーターの活性は亜ヒ酸ナトリウム処理した方がしなかを確認できた。NHEK-Ad 細胞も Lonza の推奨する条件で培養したところ、正常な増殖を確認できた。ただし、7 継代ぐらいで増殖が停止した。レポーター遺伝子の導入は低経代数で行うベきと考えた。安定的な遺伝子導入ではネオ
マイシン耐性遺伝子およびハイグロマイシン耐性遺伝子を選択マーカーとして用いることを考えたため、各細胞のネオマイシンおよびハイグロマイシンに対する感受性を確認することとした。その結果、1 週間の培養で完全に細胞を死滅させる濃度は、ネオマイシンが 50 µg/mL、ハイグロ
マイシンが 50 µg/mL であった。酸化ストレス可視化用レポーター遺伝子の安定導入細胞株が得られた後、その品質確認を酸化ストレス誘導剤処理により行う予定であるため、各細胞の酸化ストレス誘導剤処理に対する反応性を確認しておく必要性がある。そこで３種類の代表的な酸化ストレス誘導剤である亜ヒ酸ナトリウム（メルク #1.06277.1000）、ジエチルマレイン酸（シグマ #D97703）、および過酸化水素（ナカライ #18411-25）を様々な濃度で培地に加えて培養

図２ 各種濃度の亜ヒ酸ナトリウム（ASN）により処理された細胞における HO-1 遺伝子発現レベルを示す。上のヒストグラムは
HEK001 細胞、下のヒストグラムは NHEK-Ad 細胞から得られたデータである。

− 47 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

図３ 酸化ストレスレポーター遺伝子を安定導入された
HEK001 細胞におけるレポーター（ルシフェラーゼ）活性のライブイメージング像を示す。亜ヒ酸ナトリウム（ASN）処理により期待通り高レポーター活性が得られていることがわかる。

図４ UV-A 紫外線照射およびクロセチン添加の影響を酸化ストレスレポー
ター遺伝子により評価している。各ヒストグラムで用いられた細胞は、（左）酸化ストレスレポーター遺伝子を安定導入された HEK001 細胞、（中）酸化ストレスレポーター遺伝子を一過的に導入された HEK001 細胞、および（右）酸化ストレスレポーター遺伝子を一過的に導入された NHEK-Ad 細胞。

った方より 3.5 倍高かった（図 3）。一方、NHEK-Ad 細胞
へもレポーター遺伝子を安定導入しようと試みたが、遺伝子導入後、細胞が十分な数に達する前に増殖が停止するため、これを諦めた。
2 種類の肌細胞のうち NHEK-Ad 細胞へのレポーター遺伝子安定導入はできなかったが、HEK001 細胞へは計画
通り実行できた。ただ、この細胞の増殖速度が極めて遅かったため、また色々な条件検討が必要だったため、薬剤ス
クリーニングにずいぶん時間を取られたが漸く完了した。
しかし結果はテストした低分子化合物ライブラリーの中には酸化ストレスを軽減するものが見出せなかった。一方

図５ UV-A 紫外線照射およびクロセチン添加の影響を HO-1
mRNA レベルと Nrf2 タンパク質レベルにより評 価している。
各ヒストグラムで用いられた細胞は、（左）HEK001 細胞と（右）NHEK-Ad 細胞。

で、本研究提案にはなかったが、国内で行っていた共同研
究からクロセチンに紫外線誘導性酸化ストレスを軽減する
2）化ストレス応答性分子である HO-1 mRNA および Nrf2 タ

効果 が見出されたので本研究で樹立されたレポーター遺

ンパク質の発現レベルを UV-A 紫外線照射と非照射間で比伝子安定導入細胞を用いて同効果の評価を行った。クロセ

較したところ、UV-A 紫外線は両分子の発現レベルを顕著

チンはクチナシの実やサフランなどに含まれている黄色のに高めた（図 5）。しかしながら UV-A 紫外線照射の１時間

天然色素で、カロテノイドカルボン酸の一つである。カロ

前にクロセチン（最終濃度 1 µM）を培地中へ加えると、上テノイドのうち㌼カロテンやリコピンには優れた抗酸化効

記のレポーターの活性上昇および酸化ストレス応答性分子

果がよく知られているが、クロセチンはそれらメジャーなの発現レベル上昇は幾分低く抑えられた（図４と５）。次カロテノイドとは異なり両親媒性低分子化合物であり、体に活性酸素種の発生量についても UV-A 紫外線照射と非照内へ取り込まれやすい性質を持つ。また抗酸化効果につい

射間およびクロセチン添加と非添加間で比較したところ、ても多くの報告があり、疲労回復や抗老化を謳った市販サ

UV-A 紫外線は活性酸素種の発生量を顕著に高めるが、そプリメントなどに含まれて（特に眼の）
健康を気にする人々

れはクロセチン添加によって部分的に軽減される結果が得からは注目を浴びている。しかしながら肌細胞におけるクられた（図 6）。

ロセチンの紫外線誘導性酸化ストレス軽減効果は不明であ

4. 考り、その効果は今回の研究で以下の通り示された。酸化ス
トレスレポーター遺伝子安定導入 HEK001 細胞へ UV-A 紫2察

私たちは今日までにイメージング技術を用いて簡便に酸外線（365nm 5mW/cm ）を 40 分間照射したところ、レポ

化ストレスの評価ができる実験系を構築しており、それをーター活性は非照射コントロール細胞に比べて 4.5 倍高かヒトに由来するケラチノサイトへ導入することで肌細胞にった（図４）。また同様の実験を酸化ストレスレポーター遺特化した酸化ストレス評価を可能にした。これは抗酸化機

伝子一過的導入 HEK001 細胞と NHEK-Ad 細胞で行ったと能を有した低分子化合物のハイスループットな解析に適し

ころ、レポーター活性は UV-A 紫外線によって 4 〜 4.5 倍ており、有用な実験ツールとなることが期待される。実際、

上昇した
（図４）
。さらにレポーター遺伝子を導入していな

本研究では、以前より抗酸化機能性面で注目されていたク

い HEK001 細胞と NHEK-Ad 細胞で同様の実験を行い、酸ロセチンについてケラチノサイトでの UV-A 紫外線誘導性− 48 −

酸化ストレスの生体分子イメージングから迫る対紫外線スキンケア分子の新規探索と機能評価

このクロセチンによる抗酸化効果は他の細胞種では知られていたが、今回ヒトの肌細胞においても同効果を初めて確認できた。先にも述べた通り、クロセチンは既にサプリメントとして多くの人が口にしており、その安全性は高いと考えることができる。ゆえに本研究は今後のスキンケア商品開発において有意義な成果となるはずである。
（引用文献）
図６ UV-A 紫外線照射およびクロセチン添加の影響を活性酸素種の産生レベルにより評価している。各ヒストグラムで用いられた細胞は、（左）HEK001 細胞と（右）NHEK-Ad 細胞。

1） Oikawa D, Akai R, Tokuda M, Iwawaki T: A
transgenic mouse model for monitoring oxidative
stress, Sci. Rep., vol. 2, no. 229, 2012.
2） O h b a T , I s h i s a k a M , T s u j i i S , T s u r u m a K ,酸化ストレスに対する抗酸化性能を明らかにした。UV-A

Shimazawa M, Kubo K, Umigai N, Iwawaki T, Hara

紫外線照射に先立ってクロセチン処理を行うと、細胞内でH: Crocetin protects ultraviolet A-induced oxidative

発生する活性酸素種の量は抑えられ、これに伴って酸化ス

stress and cell death in skin in vitro and in vivo, Eur.

トレスにより活性化される応答分子の発現量も低下した。

J. Pharmacol., vol. 789, 244-253, 2016.

− 49 −

慢性皮膚炎モデルにおける HDC 遺伝子レポーターマウスを用いたヒスタミン産生細胞の同定
東北大学大学院工学研究科

大津浩

Reducing the rate for contact dermatitis caused by cosmetic materials is crucial in cosmetology. Histamine is one ofthe physiological substances which produce itching sensation in contact dermatitis. We generated histamine-deficient miceby knocking out the gene for histamine producing enzyme, histidine decarboxylase (HDC), to be used for the analysis ofhistamine activity in vivo. The mechanisms of histamine activity in contact dermatitis were analyzed in mouse model which
was produced by the repeated ointment of trinitro-chlorobenzene (TNCB) on their back skin. The inflammation of histidine
decarboxylasae knock out (HDC-KO) mice were milder compared to their wild type counterpart. The number of regulatory
T cells (Tregs) in the dermis was found to be reduced by the existence of histamine. This control mechanism appeared to betransmitted by TGF-β 1 for its positive effect on the number of Tregs. The action of histamine is known to be transmitted
through 4 types of histamine receptors (H 1 to H 4 ). H 1 and H 4 receptors among these receptors were pharmacologicallyfound to transmit the signal of inflammation in this contact dermatitis model 1 ). Including these information histamine is a
key substance for producing noxious symptom in dermatological diseases e.g. chronic inflammation, would healing andcontact dermatitis. The regulatory mechanisms of histamine synthesis, however, in their pathological contexts have notbeen completely clarified because of lack of experimental materials. We lately produced the reporter mice which produce
fluorescent signal according to their expression of histidine decarboxylase gene. Since these gene-manipulated mice emit
fluorescent signal when they are active in transcription of histamine-synthesizing gene, we could analyze the timing andsource of cells for histamine production in disease model through observation of fluorescence using this reporter mice.
Previously we generated plasmid-based reporter mice to this purpose, however, the mice were prove to be useless, since
the emission of fluorescence was not limited to histamine producing cells. We produced lately a BAC (bacterial artificial
chromosome)-based transgenic mice to dodge this problem. We will produce a model of contact dermatitis in the newtransgenic mice and discuss the role of histamine producing cells in contact dermatitis.

1. 緒

膚炎の程度が軽快することを示している 1）。ヒスタミンは言

マウス皮膚において慢性炎症、皮膚創傷治癒、接触性皮膚化粧品学において、皮膚の炎症は化粧品を開発していく上において重要な問題点である。皮膚の炎症を動物レベル炎など多岐に渡り影響を与えることが報告されており、化粧品学的にも重要であることがわかっている。

で解析していくために、私たちは、trinitro-chlorobenzene

ところがヒスタミンの生体内での産生調節機構について（TNCB）などのハプテンを繰り返してマウス背部皮膚に塗は不十分な点が多い。本研究ではヒスタミン産生源を明ら布して慢性の接触皮膚炎を誘導し、表皮肥厚を起こすことかにすべく HDC 遺伝子の発現をモニターするレポーターを観察している。ヒスタミンは炎症において皮膚反応をマウスを作製した。このマウスを使うことによって、産起こす重要な生体内アミンである。ヒスタミンの合成酵

生細胞および産生の調節機構を明らかにしようとしてい素であるヒスチジン脱炭酸酵素（histidine decarboxylase

る。そのために HDC 遺伝子のレポーター遺伝子を工夫し、HDC）をノックアウトさせた HDC-KO マウスを作製して、今回は BAC（Bacterial Artificial Chromosome）を利用し、この接触性皮膚炎モデルを誘導し、野生型マウスと比較す

プロモーター領域に蛍光色素のレポーター遺伝子を繋いだ

ることによって、モデルにおけるヒスタミンの役割につい

HDC 遺伝子全体を含むような DNA でトランスジェニックて検討している。その結果、HDC-KO マウスに接触皮膚マウスを作製し、上述した皮膚疾患モデルを再現する。ヒ

炎を起こすと炎症の度合いが野生型に比較して弱く、ヒススタミンは必須アミノ酸の一種であるヒスチジンから生体タミンが接触皮膚炎を悪化させていることが判明している。

内では唯一の酵素であるヒスチジン脱炭酸酵素（HDC）を

その後、４種類のヒスタミン受容体（H1-H4 受容体）のうち、介して産生されるため、この遺伝子の発現をモニターする

特に、H1 受容体とともに H4 受容体もこのモデルにおいことによりヒスタミンの産生について考察することが可能て重要であり、H1 受容体阻害薬や H4 受容体阻害薬で皮

である。

2. 実

験

Identification of the histamine-producing cells in chronic
allergic contact dermatitis model using HDC-gene reporter
mice.

マウス皮膚炎モデルでの実験

Hiroshi Ohtsu
School of Engineering, Tohoku University

によって皮膚炎を起こし、HDC - KO マウスと野生型マウ

私たちはマウス皮膚にハプテンを繰り返し塗布すること− 50 −

慢性皮膚炎モデルにおける HDC 遺伝子レポーターマウスを用いたヒスタミン産生細胞の同定

スの反応と比較することにより、皮膚炎におけるヒスタミ
ンの役割について検討している

1-3）

プラスミッドを用意する。そのためには、HDC gene の入った BAC（bacterial artificial chromosome）クローンを購。

以前にはプラスミッドを用いた HDC 遺伝子発現のレポ

入し、HDC 遺伝子の転写開始点より 637 番目の塩基より、ーターマウスを用意したが、このマウスはヒスタミン産

1777 番目の塩基まで PCR を用いて増幅する。増幅され生細胞以外にも非特異的に蛍光発光をするため、その後た DNA を pGEM-T Easy に挿入し、クローン化する。こBAC を用いたトランスジェニックマウスを作製することの TA vector を、multiple cloning site にある２種類の制に予定を変更した。

限酵素配列部位 Sal I と ApaI で消化すると、HDC 遺伝子

計画は、接触皮膚炎モデルをトランスジェニックマウスの PCR 増幅部位を含む断片が切り出される。切り出されで作製し、蛍光色素の強度と部位を病変部位で観察するこた断片を予めクローン化していた HDC 遺伝子のプロモーとである。近年Ｔ細胞、中でも制御性Ｔ細胞の皮膚アレル

ター約 1kb を含む pBlue Script の HDC プロモーターの下4）ギー反応における重要性が明らかになってきており 、ヒ流にある SalI および ApaI site に挿入し、クローン化する

スタミンはアレルギー反応の惹起相ばかりではなく、炎症（plasmid 1 と命名）。GFP（green fluorescence protein）
をの感作相にも重要であることが明らかにされつつある。しmultiple cloning site に含んだ 7.1 IS GFP 3rd Version より、たがって、このアレルギー反応モデルにおいて感作相から

XhoI と XbaI にて double digestion し切り出した GFP 遺伝

惹起相に至る反応全体の中で、ヒスタミンの産生細胞は複子を、pBlue Script の同様の制限酵素部位に挿入し、クロ

数回、複数の種類の細胞に陽性にでることが予想でき、どーン化する。このプラスミッドの XbaI site で再度酵素処の細胞のどの時相にでているかが興味深いと考えられる。

理し、直鎖上にしたプラスミッドを Klenow によって平端

その反応において、細胞特異的な表面マーカーを染色し、化しておく。pBS-FRT-Neo-FRT より KpnI と EcoRV で切FACS にて解析し、蛍光の発光細胞の種類とその数についり出しKpnI siteをT4 DNA polymeraseしてこちらも平端て同定する。

化した Neo 遺伝子断片を、予め平坦化しておいた GFP を

さらに、ヒスタミンの反応経路において、その受容体で含むプラスミッドに blunt end ligation し、GFP の下流にある H1 ～ H4 のうち、どの受容体を経由して皮膚疾患のNew 遺伝子が挿入されたプラスミッドを用意する。この増悪がみられるのかについて、それぞれの受容体のアゴニ

プラスミッドを XhoI と NotI で消化し、Klenow 処理をしストとアンタゴニストをもちいることにより明らかにする。

て、NotI site を平端化しておく。この DNA 断片は GFP のこれによって、どのような薬剤が皮膚のアレルギー反応の下流に Neo 遺伝子が繋がった断片である。plasmid1 を SalI

どの時相に効果があるのかについて推測する。そして、そ

お よ び HincII site で 消 化 し た HDC promoter と HDC 1stの後化粧品を塗布して同様の実験を行なうことにより、化

Intron が入った断片と、GFP ＋ Neo 断片を ligation すると、

粧品によってヒスタミン産生細胞が出現するかどうかにつ

XhoI site と Sal I site がコンカテマーであるために繋がり、いての検討も進める。

HDC promoter と HDC 1st Intron の 間 に GFP と Neo を 含

3. 結む pBlue Script ができ上がる。このプラスミッドを NotI

果

site で切り出すと、HDC promoter と HDC 1st Intron の間

3. a. BAC を用いた HDC 遺伝子トランスジェニック
マウスについてに GFP および Neo を含む断片ができて、その断片と HDCを含む BAC DNA との間で homologous recombination を

トランスジェニックマウスの作製起こさせる。その結果、HDC promoter と 1st Intron の間

ヒスタミン合成酵素であるヒスチジン脱炭酸酵素（HDC）に GFP および Neo 遺伝子の入った BAC が完成する。この遺伝子はマウスの Chromosome 2 に存在する全長約 23kb

BAC clone の入った大腸菌を Arabinose 存在下で培養するの遺伝子である。この遺伝子は 12 エクソンからなる遺伝と Neo 遺伝子の両端に存在下 CRE が互いに反応して Neo

子で、エクソン 1 に既に翻訳開始点が存在するため、そ遺伝子のない BAC が完成する。完成した BAC clone の簡の翻訳開始点直前より GFP 遺伝子が入るように工夫した単な構造を示す（Fig. 1）。

Fig. 1 完成した HDC-GFP BAC clone− 51 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

この、BAC クローンを mouse 受精卵に打ち込みその個確認する。その結果、HDC 遺伝子が発現する細胞群（脳：体を発生させることにより、レポーターマウスが完成する。

TMN（結節乳頭核）細胞、胃：ECL 細胞など）で、GFP が発生してきた個体の尾からゲノム DNA を抽出し、PCR 法

染色されていた（Fig. 3：TMN cells 結節乳頭核、ECL エに て 個 体 に GFP gene や Chloramphenicol resistant gene

ンテロクロマフィン様）。
さらにここで、脳視床下部や胃体部における GFP 発の存在の有無を確かめたところ、高率に BAC クローンが現は免疫染色で確認しているが HDC 産生細胞と一致し存在するマウスが発生してきた（Fig. 2）。

ているかどうかについて確認が必要であった。レポータ

3. b. トランスジェニックマウスの確認

ーマウスから摘出した胃における GFP と HDC の免疫染

3. b. 1. 遺伝子の確認

色を遂行した。近接する切片を使って GFP の一次抗体

受精卵への打ち込みにより発生した７個体の内、No（Cell Signaling Technology） と HCD の 一 次 抗 体（Acris

569 と No572 の２個体のマウスに BAC DNA が挿入されAntibody）を反応させ、その後、ペルオキシダーゼを標識ていることが確認された。

した二次抗体と反応させ、DAB 染色キットを用いて二次

3. b. 2. 蛍光の確認

抗体が結合した部位を褐色に発色させた。染色パターンは次に、このレポーターマウスの各臓器の切片を用意して、HDC 産生細胞が蛍光を発するかどうかを蛍光顕微鏡にて

GFP と HDC で一致していることが判明した。また小腸壁での細胞においては、肥満細胞の他に、好酸球や好塩基球

Fig. 2. 初代マウスの遺伝子解析
挿入遺伝子内 GFP gene, Cam r gene の PCR による確認

Fig. 3 GFP の免疫染色− 52 −

慢性皮膚炎モデルにおける HDC 遺伝子レポーターマウスを用いたヒスタミン産生細胞の同定にも蛍光の発光がみられ、現在まで考えられていた以上にである。

多種類の血液細胞にヒスタミンが存在する可能性が出てき

4. 考ている。このため、今後様々な病態モデルを使った実験においても新たなヒスタミン産生細胞を認める可能性が高いと考えている。

察

ヒスタミンはアナフィラキシー様の反応を示す物質として約１世紀前に発見され，研究史が長いものの、最近まで知られているヒスタミン受容体は H1 と H2 の 2 種類のみ

3. c. 皮膚アレルギー実験であった。神経節前線維に H3 受容体が存在することは提私たちは、TNCB を繰り返し塗布する実験系において、唱されていたが、cDNA のクローニングが発表されたのは通常鱗屑をともなう紅斑が起こり、皮膚の生検をすると表1999 年である。更に H4 受容体が末梢白血球から見つか

皮の増殖と細胞間の浮腫および真皮の線維化および細胞浸り cDNA のクローニングの報告は 2000 年である。このよ

潤が起きていることを確認しているが、ヒスタミンを欠く

うにヒスタミンは長い研究史があるものの、近年、分子生

HDC（-/-）マウスではその程度が減弱することを確認して物学の手法がとられるようになってから新しい機能が次々いる（Fig. 4、参考論文より改変）。トルイジンブルーで染と発見されている。皮膚の炎症において、ヒスタミンはそ色すると、肥満細胞数が減少しており、また、IL-4 の皮膚の進展に重要な影響を与え、発赤、腫脹、痒みなどを促す

内での濃度も優位に抑制されていた。

起炎物質である。私たちはヒスタミン合成酵素であるヒス

また、組織中の制御性 T 細胞の数も CTLA-4 や Foxp3

チジン脱炭酸酵素遺伝子をクローンニングし、ノックアウに対する免疫染色で染色することによって計測すると、トマウスを作製することによって、ヒスタミンを合成不能

HDC（-/-）マウスに優位に増加していることが明らかとななマウスを得て実験を行ない、血管新生、肉芽種の形成にった。次に TGF- ㌼ 1 のレベルを、制御性Ｔ細胞の遊走にはヒスタミンの存在が重要であることと、その反応は H2およぼすサイトカインの代表として測定した。その結果、受容体を介することを明らかにした 5）。従来までは皮膚炎

HDC（-/-）マウスでは TGF- ㌼ 1 の組織内での濃度はノック

は H1 受容体を介すると考えられていたが H4 受容体も重アウトマウスでは増えており、TGF- ㌼ 1 が制御性Ｔ細胞の要であることが報告された 1，6）。このように皮膚炎には３遊走を促している可能性が出てきた。TGF- ㌼ 1 の直接的な種類のヒスタミン受容体すなわち H1、H2 および H4 受容

影響について調べるために、毎日の TNCB の塗布の直前に、体が重要であることがわかる。従って、皮膚炎におけるヒ

TGF- ㌼ 1 やその抗体を直接マウスの背部真皮に注射して制スタミンの作用は単純ではなく、今後、新しいトランスジ

御性 T 細胞の数を測定してみた。その結果は、TGF- ㌼ 1 をェニックマウスを使った実験をすることにより、ヒスタミ

注射することにより制御性 T 細胞の指標となる Foxp3 陽ンの接触性皮膚炎における役割は、より詳細な解析が行な性細胞や CTLA-4 陽性細胞が増え、逆に、高 TGF- ㌼ 1 抗体える。

を注射することによりこれらの陽性細胞数が減弱した。ま皮膚アレルギーの実験系において、ハプテンを繰り返した BALB/c を用いた実験では、H1 受容体拮抗剤であるオ

塗布することによって、皮膚疾患を慢性化させて、CACD

ロパタジン、H4 受容体拮抗剤である JNJ7777120 の作用で、 （chronic allergic contact dermatitis）のモデルとなる 7）。
ともに TGF- ㌼ 1 や Foxp3 陽性細胞が上昇していることが制御性 T 細胞は免疫の恒常性維持や自己免疫反応の予防に分かった（Fig. 4）。

必要であるとともに、エフェクターＴ細胞を抑えて接触皮これらの基礎的な実験を踏まえて来年度はトランスジェ

膚炎を改善させることが証明されている 8）。ところが、制ニックマウスを用いた皮膚アレルギー実験を試行する予定

御性Ｔ細胞はCACDにおける働きがよくわかってはいない。

Fig. 4 HDC-KO マウスの慢性接触皮膚炎におけるサイトカインや制御性Ｔ細胞数の増強作用（引用文献 11 より改編）− 53 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

今回の実験によって、ヒスタミンは制御性Ｔ細胞の皮膚組織への遊走をおそらく TGF - ㌼ 1 を介してコントロール

皮膚アレルギーモデルを作製し、ヒスタミンの産生源となる細胞の同定を行なっていく予定である。

することが分かった。制御性Ｔ細胞における Foxp3 は炎症の制御に重要であることはこの遺伝子の機能を無くさせ（引用文献）

る変異をいれたマウスでは多臓器における炎症反応が起き

1） Seike M, Furuya K, Ohmura M, Watanabe K andることが示されているからである 9）。制御性Ｔ細胞を動物

Ohtsu H. Histamine H4 receptor antagonist amelioratesに外部から加えると接触性皮膚炎におけるマスト細胞の遊chronic allergic contact dermatitis induced by repeated

走や活性を抑え、炎症性サイトカインの産生を抑制するこ

challenge. Allergy 65, 319-326, 2010.

10）。このことは、CACD でもどうよう

2） Seike M, Ikeda M, Kodama H, Terui T and Ohtsuに考えられ、わたしたちの今回の報告でもマスト細胞の遊H. Inhibition of scratching behavior caused by contactとが知られている

走や IL-4 のレベルが抑えられていた

11）

dermatitis in histidine-decarboxylase gene knockout。制御性 T 細胞のmice.  Exp Dermatol 14, 169-75, 2005.

抑制効果は CTLA - 4 を経由している可能性があることがCTLA- 4 への抗体を使った実験で示されている 12）。気管

3） Hamada R, Seike M, Kamijima R, Ikeda M, Kodama

支喘息のモデルにおいて、制御性 T 細胞は IL-10 の産生をH and Ohtsu H. Neuronal conditions of spinal cord

介して Th2 細胞主体のアレルギー反応を抑えることが報

in dermatitis are improved by olopatadine. Eur J

告されているが

13）

Pharmacol 547, 45-51, 2006.

、私たちも HDC（-/-）マウスでは IL-10が組織で上昇してきたことを考えると、もし同様の機構

4） Gomez de Agüero M, Vocanson M, Hacini-Rachinelが起きているとすると CACD の皮膚肥厚反応の抑制がF, Taillardet M, Sparwasser T, Kissenpfennig A,

IL-10 を介して起きている可能性があると考えている。まMalissen B, Kaiserlian D, Dubois B. Langerhans cells

た、TGF - ㌼ 1 が制御性 T 細胞を誘導してくる際に IL-2 がprotect from allergic contact dermatitis in mice by、TGF- ㌼ 1 を加えたマ

tolerizing CD8(+) T cells and activating Foxp3(+)

必要であることが示されており

14）

ウスが IL - 2 が上昇してきた結果を鑑みるに、これらのサ

regulatory T cells. J Clin Invest 122, 1700-11, 2012.

イトカインが相乗的に制御性Ｔ細胞を増やし、それによっ

5） Ghosh AK, Hirasawa N, Ohtsu H, Watanabe T andて CACD においてはエフェクターＴ細胞をコンロトール

Ohuchi K: Defective angiogenesis in the inflammation

する機構も考えられる。

granulation tissue in histidine decarboxylase-deficient
mice but not mast cell-deficient mice. J Exp Med 195,

本研究の中心課題は遺伝子改変マウスを用いたヒスタミ

973-982, 2002

ンの接触皮膚炎に与える影響の研究である。これは化粧品
を皮膚に塗布した際に起こりがちな接触皮膚炎をコントロ

6） Dunford PJ, Williams KN, Desai PJ, Karlsson L,ールするために重要な情報を提供する。私たちが作製した

McQueen D and Thurmond RL. Histamine H4 receptor

新しいトランスジェニックマウスはヒスタミン合成が転写

antagonists are superior to traditional antihistamines

レベルで活性化したときに蛍光を発するためこのマウスでin the attenuation of experimental pruritus. J Allergy

接触皮膚炎を起こし、蛍光顕微鏡を用いて観察すれば１）

Clin Immunol 119, 176-83, 2007.

ヒスタミン合成細胞、２）ヒスタミン合成の時期がわかる。

7） Wang G, Savinko T, Wolff H, Dieu-Nosjean MC,

最近の研究によると従来知られているマスト細胞、マクロKemeny L, Homey B, Lauerma AI and Alenius H.

ファージ、神経細胞に加え、好中球、好塩基球もヒスタミ

Repeated epicutaneous exposures to ovalbumin

ンを産生し、皮膚ケラチノサイト、樹状細胞からの産生報

progressively induce atopic dermatitis-like skin lesions
in mice. Clin Exp Allergy. 37, 151-61, 2007

告もある。化粧品によっては、ヒスタミン合成促進あるいは合成抑制に働く可能性があり、基本的に合成抑制の基材

8） Tomura M, Honda T, Tanizaki H, Otsuka A,

を使うように開発を進めるための動物モデルの指標になる。

Egawa G, Tokura Y, Waldmann H, Hori S, Cyster JG,

以上のように、本研究課題の成果は医学的基礎知識を拡充

Watanabe T, Miyachi Y, Kanagawa O and Kabashima

させるとともに、コスメトロジーにおける基材の選択に役

K. Activated regulatory T cells are the major T cell

立たせる上でも重要な情報を提供すると考えている。

type emigrating from the skin during a cutaneous

5. 総

immune response in mice. J Clin Invest. 1 2 0, 8 8 3-9 3,

括

2010

本報告ではトランスジェニックマウスの作製とその評価

9） Lin W, Truong N, Grossman WJ, Haribhai D,

および現在までの皮膚アレルギー実験の結果をまとめた。

Williams CB, Wang J, Martín MG and Chatila TA.

今後、実際用意したトランスジェニックマウスを用いて、Allergic dysregulation and hyperimmunoglobulinemia− 54 −

慢性皮膚炎モデルにおける HDC 遺伝子レポーターマウスを用いたヒスタミン産生細胞の同定

E in Foxp3 mutant mice. J Allergy Clin Immunol.  116,

12）Thornton AM, Piccirillo CA, Shevach EM. Activation
requirements for the induction of CD4+CD2 5+ T cell1106-15, 2005.
10）Su W, Fan H, Chen M, Wang J, Brand D, He X,

suppressor function. Eur J Immunol. 34, 366-76, 2004.

Quesniaux V, Ryffel B, Zhu L, Liang D and Zheng

13）Kearley J, Barker JE, Robinson DS and Lloyd CM.

SG. Induced CD4+ forkhead box protein-positive T

Resolution of airway inflammation and hyperreactivity

cells inhibit mast cell function and established contact

after in vivo transfer of CD4+CD2 5+ regulatory T

hypersensitivity through TGF- ㌼ 1. J Allergy Clincells is interleukin 10 dependent. J Exp Med. 202, 1539-

Immunol. 130, 444-52, 2012

47, 2005.

11）Tamaka K, Seike M, Hagiwara T, Sato A and Ohtsu

14）Davidson TS, DiPaolo RJ, Andersson J and Shevach

H. Histamine suppresses regulatory T cells mediated

EM. Cutting Edge: IL-2 is essential for TGF-beta-

by TGF-㌼ in murine chronic allergic contact dermatitis.

mediated induction of Foxp3+ T regulatory cells. J

Exp Dermatol. 24, 280-4, 2015.

Immunol. 178, 4022-6, 2007.
（財団事務局追記）
著者は本助成研究の期中に所属異動となり、採択課題の継続が困難になったため、中間時の報告を研究完了報告として掲載します。

− 55 −

レチノイン酸の皮膚内濃度モニタリングと新規アンチエイジング分子の同定への応用
滋賀医科大学解剖学講座生体機能形態学部門

岡野純子

It has been noted that retinoic acid (RA) is effective for the anti-aging action in the skin. Topical treatment with RA on
the skin improves tension and elasticity by decreasing wrinkles, however, its mechanism has not been fully determined. The
one of impediments in this research field is that we cannot visualize endogenous RA level in the skin. Since RA is not amolecule but a compound, it is impossible to establish a mouse model by delete directly RA. Thus, we aimed to determine
key molecule(s) associated with RA signaling in the skin and then attempted to establish mice in which we can visualize
endogenous RA level by making use of the molecule(s). Targeting vector was designed and homologous recombination was
performed in zygotes. As a result, chimera mice were delivered. This mouse model will be a powerful tool to analyze antiaging actions of RA as well as effects of other anti-aging products on the skin.

1. 緒膚において RA 濃度を可視化することを目標とし、現在こ言の課題に取り組んでいる。

レチノイン酸（Retinoic acid：RA）は表皮細胞においてターンオーバーを促進し、真皮細胞においてコラーゲン生成を増加させるため、小皺、ハリ改善作用がある。従って
1）

昔からアンチエイジング物質として注目されてきた 。し2. 方法および結果
2. 1.
2. 1. 1. レチノイン酸シグナリングに関わる分子の、皮膚かし、レチノイン酸の皮膚におけるアンチエイジングのメ

における遺伝子発現解析

カニズムは依然不明である。分子生物学の進歩により、レレチノイン酸が皮膚においてアンチエイジング作用を持

チノイン酸セレプターが次々クローニングされた。またそつということは、皮膚をレチノイン酸で処理するとレチノの後、トランスジェニックマウス作成技術が発展し、次々

イン酸シグナリングに関わる分子の発現変化があると予想とレセプターノックアウトマウスが作られたが、１つあるできる。そこで、どの分子が皮膚の正常発生において豊富

いは２つのレチノイン酸レセプターをノックアウトしても、に発現しているかを検討した。まずレチノインレセプタ

予想した如く皮膚に著明な表現型は現れず、RA の皮膚にー（Retinoic acid receptor：RAR，Retinoid X receptor：

おける機能解析は困難であった。これは、レチノイン酸

RXR）の発現を免疫染色および in situ hybridization を用いレセプターは大きく２種類（Retinoic acid receptor：RAR、て調べたが、はっきりとした特異的発現パターンは見られRetinoid X receptor：RXR）に分けられるが、それぞれアなかった。これは、レチノインレセプターに対する抗体はイソタイプ（−α，−β，−γ）を持ち、さらにそれぞれのアイソ

RAR および RXR のサブタイプを判別することはできないタイプにサブタイプ（-1，-2，-3）が存在し、それぞれが相補ことが原因と考えられた。次に、RARあるいはRXRの個々的な働きをするため、標的レセプターをノックアウトとしのアイソタイプの RNA in situ hybridization の probe を合ても他のレセプターが失われた分子の働きを補ってしまう

成し、in situ hybridization を試みた。しかし調べたレセためであると考えられている。一方、レチノイン酸シグナ

プターのうちで、皮膚に特異的に発現するものを見つける

リングに関わるレセプター以外の分子の皮膚における解析ことはできなかった。

は未だ十分とはいえない。そこで、本研究においては、まよって、従来の活性リガンド（RA）が存在する部位にレず RA シグナリングに関わる分子のうち、皮膚において豊セプターがありき、という概念では解析が難しいと考え、富に発現している分子を探索した。次に、皮膚におけるRA は、合成酵素（retinaldehyde dehydrogenase：Raldh1，

RA 濃度を RA レセプターを用いて再検証した。最後に皮-2，-3）と分解酵素（Cyp26：Cyp26a1，-b1，-c1）のバランスによってその局在が決定される、という観点から解析を行うことにした（図 1）。そこで Raldh1，-2，-3，Cyp26a1，-b1，

Monitoring of endogenous retinoic acidlevels in the skin to elucidate the antiaging role of retinoic acid
Junko Okano
Department of Anatomy and Cell Biology,
Shiga University of Medical Science-c1 の in situ probe を作成し、in situ hybridization を行ったところ、Cyp26b1 のみに真皮および毛乳頭細胞に特異的な発現パターンが観察された（図 2）。

− 56 −

レチノイン酸の皮膚内濃度モニタリングと新規アンチエイジング分子の同定への応用

図１ レチノイン酸シグナリングのシェーマ 3）
RA 標 的細胞（左）において、レチノール /RBP ４複合 体はSTRA6 から細 胞 質 内 に入る。 細 胞 内 に入ったレチノール は
CRBP(cellular retinol-binding protein) に結合し、LRAT（lecithin
retinol acyltransferase）によってエステル化されて、細胞質内に貯 蔵 される。 あ るい は、RDH/ADH（retinol dehydrogenase/alcohol dehydrogenase) によって Retinaldehyde に酸化される。
さらに Retinaldehyde は Raldh1-3 によって RA に変 換される。
CABP（cellular retinoic acid binding protein）と結合した RA は核に移行し、ダイマーを形成する転写因子 RAR/RXR と結合する。
RA-RAR/RXR は RA 応答配列（RA responsive element）に結合して標的分子の活性化および抑制化を行う。
RA の非標的細胞（右）においては、RA は Cyp26s に分解されてしまう。

図３ 皮膚発生・分化における RAR ㌼の発現を示す。青：野生型 マ ウス から 採 取した 皮 膚 に お ける RAR ㌼ の 発 現、 赤：Cyp26b1-/- マウスから採取した皮膚における RAR㌼の発現。

比較して８− 10 倍ほど発現が上昇していた（図３、赤）。
Cyp26b1-/- マウスの皮膚は野生型マウスと比べて表皮の肥厚、毛包の分化停止が見られたことから、これは RA を分解する Cyp26b1 が皮膚組織で欠損しているために起こったと考えられる。すなわち、適切な RA 濃度は正常皮膚および毛包発生に必要であり、その調節は Cyp26b1 が担っていることが判った。

2. 2. レチノイン酸濃度の可視化
2. 2. 1. レチノイン酸シグナリングに関わる分子の、皮膚における遺伝子発現解析
皮膚においてレチノイン酸を可視化するために、まず2. 1. に倣って RARβ の RARE を３回リピートした上流に
hsp68 プロモーターおよび LacZ 配列をつないだ配列をゲノム内に持つトランスジェニックマウスの利用を試みた（以下 RARE-lacZ マウスと称する）。このマウスは、個体
図２ 皮膚発生および分化における Cyp26b1 の発現
Cyp26b1 の発現（赤）を示す。皮膚発生が開始する胎生 14.5 から毛包周囲の間葉細胞に発現し、発生が進むに従い真皮、毛乳頭に強い発現を認める。

発生早期のマウスで、Raldh が発現する領域に LacZ が重複し、Cyp26s が発現する領域には決して重複しないことから、組織内の RA 濃度を反映することが過去の文献から判っている 4）。皮膚は、個体発生の後期から発生・分化を始めることから、RARE -lacZ マウスの使用は今まで検証

2. 1. 2. 皮膚のレチノイン酸の濃度の検証がなされていなかった。そこで RARE-lacZ マウスをを用

レチノイン酸は分子ではなく化合物であり、分子量 300

いて胎生 15.5 -18.5 日の皮膚を用いて LacZ 染色を行った。

と非常に小さいので、直接可視化するのは非常に困難であ

また、RARE - lacZ マウスと Cyp26b1+/- マウスを交配させる。多くは、レチノイン酸の direct target である RARβ のて RARE - lacZ；Cyp26b1-/- マウスを作成し、Cyp26b1 を遺伝子発現をレチノイン酸の濃度とみなしている。そこで、欠損することで体内 RA 濃度をあげた場合の皮膚 RA 濃度

マウスの胎児皮膚を経時的に採取し、正常発生および出生を検証した。その結果、正常皮膚では、胎生 15.5 日では後の皮膚分化におけるレチノイン酸の発現を検証した。そ皮内筋、胎生 16.5 日では皮内筋および periderm（周上皮）、の結果、皮膚が発生・分化を開始する胎生 15.5 日から皮胎生 18.5 日では皮内筋および真皮に強い LacZ の局在が観膚が成熟する胎生 18.5 日まで持続的に有意な RARβ の発察された。また、RARE-lacZ；Cyp26b1-/- マウスの皮膚現を認めた（図３、青）。次に皮膚において特異的発現が観の発現パターンは胎生 15.5，16.5 日は野生型と比べて同様察された Cyp26b1 を全身で欠損させたマウス（Cyp26b1-/-な染色パターンを示し、胎生 18.5 日においては、真皮内マウス）の RARβ の発現を調べたところ、正常マウスとに LacZ 発現が見られなかった（図４）。

− 57 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

これは、2. 1. の in situ hybridization に相反する結果で

RARβ ではなく、真皮に豊富に発現していた Cyp26b1 をある。すなわち、Cyp26b1 の発現する部位は RA が分解

可視化すれば、皮膚における RA 濃度を正確に観察できる

されているので RA は存在しないことが大原則だからであと考えた。まず、技術的に操作しやすい Cyp26b1 レポーる。従って、Cyp26b1 を欠損させたマウスでは基本的にタートランスジェニックマウスの作製を試みた。Cyp26b1

RA 濃度が上昇するため、RARE-lacZ；Cyp26b1-/- マウス

を含む BAC clone を購入し、LacZ を下流に持つ targeting

では LacZ 染色が Cyp26b1 の発現領域に観察されることがvector を作製した。これをマウス受精卵にインジェクショ

他の臓器・組織で既に発表されている。試しに正常皮膚ンし、偽妊娠マウスに移植して数種類のラインを作製した。

を用いて表皮と真皮とを分けた後、Cyp26b1 のリアルタ

４ラインが得られ、発現を確認するため LacZ 染色を行っ

イム PCR を行ってみたが、真皮に優位な発現を認め、inた。このうち、１ラインにおいて皮膚に強い発現が見られsitu hybridization の結果を支持するものであった。従ったため、詳細に検討した。しかし、LacZ 発現は真皮よりて、RARE-lacZ マウスは少なくとも皮膚においては、RA

表皮に強く発現しており、これは Cyp26b1 の発現パター

濃度を正確に反映していないことが判り、当マウスを用いンと矛盾する。従って、この方法では Cyp26b1 の発現をて RA 濃度を可視化することはできないと結論した。

再現することはできないと考え、次の 2. 2. 3 の実験に移2. 2. 2. Cyp26b1レポータートランスジェニックマウスの行した。
2. 2. 3. Cyp26b1レポーターノックインマウスの作製

作製
そこで、免疫染色にても曖昧な結果しか出なかった

図４

よ っ て、 今 度 は 蛍 光 タ ン パ ク に IRES（Internal

RARE-lacZ マウスを用いた皮膚の RA 濃度可視化の試み

ライン＃ 31トランスジェニック＋

ライン＃ 31トランスジェニック -図５ 左の Cyp26b1 に LacZ が入った胎児個体（胎生 16.5）では、真皮より表皮に強い LcaZ の発現を認めた。
さらに右の Cyp26b1 に LacZ が入っていない個体（同じ偽妊娠マウスから産まれた対照群の個体）においても真皮に LacZ の発現を認めた。この発現強度は、左の真皮における LacZ 発現と強度が類似しており、従って左の真皮における LacZ 発現は非特異的と考えられる。

− 58 −

レチノイン酸の皮膚内濃度モニタリングと新規アンチエイジング分子の同定への応用

Ribosome Entry Sites）をつけ、Cyp26b1 の 3’ UTR にノッ的に発現していることを明らかにすることができた。

クインしてレポーターマウスを作製することにした。こ次に、皮膚発生および分化における RA 濃度を明らかにの方法を用いると確実に Cyp26b1 の発現を蛍光タンパクするため、再度レセプターを利用した解析を行ったが、こにて再現することができる。DT、Ires-Venus、pgk-neo、の実験は上手くいき、RA は皮膚発生が始まる時期から一FRT のカセットが入った標的ベクターと、ポジティブコ

定の濃度で安定して皮膚に存在していることが判った。

ントロールベクターを作成した。ポジティブコントロール

さらに RA 濃度を可視化するため、まずすでに発表されベクターを ES 細胞に導入し、薬剤選択したコロニーからたマウスを用いたが、皮膚の RA 濃度を正確に反映していスクリーニングプライマー検定用ゲノム DNA を調整した。

るとは言いがたいことが上記の実験から判断することがで

次に短腕側プライマーを３種類デザインして PCR による

きた。よって、BAC（人工染色体）を用いたノックインレ

スクリーニングの条件を最適化した。

ポーターマウスを作成する戦略に切り換えた。最初の仮親

標的ベクターを ES 細胞に導入して、ネオマイシンで選からはキメラマウスが産まれなかったので、もう一度同じ択後、100 クローンを取り出して増殖させ、スクリーニン

工程を繰り返すことになり結局非常に時間がかかってしま

グ用ゲノム DNA を調整した。これに PCR を施行して相同ったが、次の試みで産まれたので、現在世界初のレチノイ組換え体をスクリーニングした。相同組換え体が６クローン酸可視化マウスを作るべく努力している段階である。

ン採取できたので、さらに長腕側のサザンブロットを行い、短腕と長腕の両側で正しく相同組換えが起こっていること（引用文献）

を確認した。このうちの２クローンの ES 細胞を胚細胞期

1） Darienski R, Surber C, Fluhr JW: Topical retinoids inにインジェクションし、仮親に移植した。1 回目の移植で

the management of photodamaged skin: from theory toはキメラマウスが得られなかったので、もう一度クローン

evidence-based practical approach, Br J Dermatol. 163

を取り直して移植した。今回はキメラマウスが生まれたの(6), 1157-65, 2010.
2） Ross S, McCaffery P, Drager U et al.: Retinoids in

で、現在交配して生殖細胞への寄与を確認中である。

3. 考

embryonal development, Physiol. Reviews. 80 (3), 1021-

察54, 2000.

レチノイン酸はリガンドなので、そのレセプターを解析

3） Okano J, Shiota K: Roles of retinoic acid signaling in

するのが王道であり、本研究もそこから着手したが、免疫

normal and abnormal development of the palate andtongue, Congenial Anom. 54 (2), 69-76, 2014.

染色や in situ hybridization ではどのレセプターも皮膚におけるクリアカットな発現を得ることができなかった。レ

4） Rossant J, Zirngibl D, Cado M et al.: Expression of

チノイン酸シグナリングの場合非常にレセプターが多くか

a retinoic acid response element-hsplacZ transgene

つ機能的に重複していることが、解析の大きな壁になって

defines specific domains of transcriptional activity

いると考えられた。そこで視点を変え、レチノイン酸合成

during mouse embryogenesis. Genes & Dev. 5 (8), 1333-- 分解の観点から発現解析を行い、合成または分解酵素の344, 1991.

中で皮膚においては分解酵素である Cyp26b1 のみが特異− 59 −

光線過敏症リスク予測方法の確立と国際協調活動の戦略的推進
静岡県立大学薬学部薬物動態学分野

尾上誠良

Photoreactivity and dermal/ocular deposition of compounds have been recognized as key considerations for evaluating
the phototoxic risk of compounds. Because some drugs are known to cause phototoxic reactions via generation of potent
phototoxic metabolites, photosafety assessments on parent drugs alone may lead to false predictions about their photosafety.
This study aimed to establish a new photosafety assessment strategy for evaluating the in vivo phototoxic potential of both aparent substance and its metabolites. The in vivo phototoxic risk of fenofibrate (FF) and its metabolites, fenofibric acid (FA)and reduced fenofibric acid, were evaluated based on photochemical and pharmacokinetic analyses. FF and FA exhibited
intensive UV absorption, with molar extinction coefficient values of 17 , 000 ( 290 nm) and 14 , 000 M- 1 cm- 1 ( 295 nm),respectively. Superoxide generation from FA was significantly higher than from FF, and a marked increase in superoxide
generation from FF was observed after incubation with rat hepatic S 9 fractions, suggesting enhanced photoreactivity of
FF after metabolism. FA showed high dermal/ocular deposition after oral administration ( 5 mg/kg, p.o.) although theconcentration of FF was negligible, suggesting high exposure risk from FA. On the basis of these findings, FA was deduced
to be a major contributor to phototoxicity induced by FF taken orally, and this prediction was in accordance with theresults from in vitro/in vivo phototoxicity tests. Results from this study suggest that this new screening strategy for parent
substances and their metabolites provides reliable photosafety information on drug candidates and would be useful for drug
development with wide safety margins.

1. 緒

産生された singlet oxygen や superoxide 等の活性酸素種

言（Reactive oxygen species；ROS）による生体内物質の酸

薬剤性光線過敏症は特定の薬剤投与後の露光により引き化反応が薬剤性光線過敏症の発症原因の一つとして考えら起こされる皮膚および眼の異常反応であるが，近年，オゾれている．これらの光化学反応の標的が細胞膜上の各種生ン層の破壊によって太陽から地表に到達する紫外線（UV）

体成分である場合には光刺激性を誘発し，また DNA の酸

1）

量が増加していることから，本症の懸念が増大している ．

化あるいは塩基修飾によって光遺伝毒性や光がん原性が発体内に取り込まれた光毒性物質はまず皮膚組織に到達し，現する（Fig. 1B）．励起された薬物がハプテンとなりタン

薬剤の分子内 chromophore，あるいは代謝によって獲得

パク質と光付加物を形成した際には，免疫原性を示すことされた chromophore が皮膚深部まで到達した光によってになり，最終的に光アレルギー反応を惹起するものと考え照射されると，基底状態の S0 から励起一重項状態 S1 に励られる．いずれにせよ，薬剤性光線過敏症の機序を考える

起される（Fig. 1A）．励起一重項状態の寿命は極めて短く，とき，最も重要なトリガーとなるのは太陽光の吸収，そしすなわち蛍光を発して直ちに基底状態 S0 に戻るか，項間てそれに伴う化合物の励起であろう4）．

交差により励起三重項状態 T1 に遷移する．励起三重項状
2）

多くの場合，薬剤性光線過敏症は薬物本体によって引き態にある化合物はりん光を発して基底状態 S0 に戻る ．基起こされるが，一部の薬剤においては代謝物の関与が報告

底状態ではまったく化学反応をしない条件でも，高い光エされている．これらのケースにおいては，親薬物も光反応

ネルギーを獲得した励起分子は，そのエネルギーを駆動力性を有しているため，代謝によって薬物の光感受性が増強として結合の解裂や生成または組み換えなどの化学反応されたこと，あるいは生体内，特に露光組織において代謝

1，3）．そのような過程を光化学過程

物の存在比率が高いことに起因するものである．また，現といい，ラジカル反応である Type I 反応と，一重項酸素

在までのところ 5-aminolevulic acid を除き，代謝によって反応である Type II 反応とに分けられる．酸素分子は励

新たに chromophore が形成される薬物は報告されておら起エネルギーのアクセプターとして機能し，それに伴いず，親薬物が光反応性を有していなければ，その代謝物もを起こすことができる

光反応性を有していないと考える 5）．一方で，親薬物が光Development of photosafety testing
strategy and its strategic harmonization
Satomi Onoue
D ep a r t m e nt o f P h a r m a c o k i net i c s
a nd Ph a r m a c o dy n a m ic s , S c ho o l of
Pharmaceutical Sciences, University of
Shizuoka

反応性を有している場合には，代謝による光化学的反応性の増強が生じる可能性を否定できず，親薬物のみに着目していると in vivo における光毒性リスクを見誤る可能性があると考える．実際に我々は，薬物本体のみの光化学的および薬物動態学的特性に着目して光安全性評価を行った結果，代謝物が光毒性に寄与することが知られているクロル− 60 −

光線過敏症リスク予測方法の確立と国際協調活動の戦略的推進

Fig. 1 Possible mechanisms for drug-induced phototoxicity.
A Jablonski diagram. S: singlet state; T: triplet state; IC: internal conversion; and ISC: intersystemcrossing. Each line among singlet states indicates the excited vibrational states, and excited rotational
states were not shown. B Several phototoxic responses caused by photo-activated drugs.

プロマジンにおいて予測の過誤を生じた．従って，親薬物が光反応性を有している限り，創薬において代謝物の光安
全性評価も実施するべきであると考えるが，一方で ICH
S10 では代謝物に関する評価の必要性について述べられていない．さて，Fenofibrate（FF）は経口高脂血症治療薬として汎用されている薬物であり，その副作用として光線過敏症が報告されている．FF の光毒性においてはその代
謝物や光分解物が関与する可能性が報告されているが，invivo におけるそれらの寄与は明らかとなっていない．また FF は，経口投与後速やかに carboxylesterase（CES）
1A1 によって活性代謝物である fenofibric acid（FA）に代謝され，FA はさらに CYP 3A4 により reduced fenofibricacid（RFA）へと代謝されることが知られており（Fig. 2），
これらが FF の主要代謝物であることが知られている 6，7）．
従って，FF の光線過敏症に対する主要代謝物の寄与を明らかにすることが，代謝物の光毒性リスク評価系の構築につながると考える．そこで，本研究では代謝物を含めた包括的光安全性評価系の構築を目的とし，FF とその主要代謝物である FA および RFA に対して，光化学的 / 光生物学
的特性および体内動態の面から光安全性評価を実施した．

2. 実

験

Fig. 2 Chemical structures of each test compound andmetabolic pathways.

2. 1. 試薬類
Acetic acid，DMSO，ethanol（EtOH），formic acid，FF，
imidazole，ketoprofen，NBT，p-nitosodimethylaniline，

Ontario，Canada）より購入した．10% fetal bovine serum

quinine HCl 2H2O，NaH2PO4 2H2O，Na2HPO4 1 2H2O は（FBS），dulbecco's modified eagle medium（DMEM），

和光純薬工業（大阪，日本）より購入した．ACN（HPLC

earle's balanced salt solution（EBSS），neutral red（NR），

grade）は Honeywell Japan（東京，日本）より購入した．

sulisobenzone は Sigma-Aldrich Japan（東京，日本）
より購

FA は AK Scientific Inc.（Union City，CA，USA）より購入

入した．Pooled IGS Sprague-Dawley rat liver S9 fraction，

した．RFA は Toronto Research Chemicals Inc.（Toronto，

pooled IGS Sprague-Dawley rat intestinal S9 fraction，− 61 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

nicotinamide adenine dinucleotide phosphate（NADPH）

S9 fractions で 処 理 し た FF が 30 µM と な る よ う NBT-regenerating system は積水メディカル（東京，日本）より（50 µM）を含む 20 mM NaPB（pH7.4）と混合した．その購入した．その他のすべての試薬は市販品を用いた．ROS

混合液 200 µL を 96-well microplate（旭硝子，東京，日

assay 用 reaction container は Ozawa Science（愛知，日本）

本；code number：3 8 8 1-0 9 6；clear，untreated，flat-より提供された．

bottom）に分注し，析出物の有無を確認後，560 nm の吸光値を SAFIRE microplate spectrophotometer（TECAN，

2. 2. ROS アッセイ

Mannedorf，Switzerland）を用いて測定した．その後，プ

擬 似 太 陽 光 の 照 射 に は Xe arc lamp を 備 え た Atlas

レートを reaction container に入れ石英の蓋を装着し，擬Suntest CPS+（Atlas Material Technologies LCC，

似太陽光を 1 h 照射した．照射後のプレートは，振盪後，Chicago，IL，USA）を用いた．Atlas Suntest CPS+ では短

再び 560 nm の吸光値を測定した．

波長の UV をカットし実際の太陽光を模すためのフィルターを用いて CIE85/1989 daylight simulation requirement

2. 3. 動物実験に良好に対応した擬似太陽光を照射している．照射は2

雄性 Sprague-Dawley ラット（11–12 週齢，体重約 300–

28 ℃，250 W/cm , で 1h 行 っ た． 被 検 物 質 は DMSO に

350 g）は日本 SLC（浜松，日本）より購入した．実験まで

溶 解 し（10 mM），stock solution と し て 用 い た．Singletの間，ラットは動物飼育施設において自由に摂餌，飲水がoxygen は imidazole を singlet oxygen の acceptor に用い可能な環境で適切な気温（ 24 ± 1 ℃）および湿度（55 ± 5%）て，p-nitrosodimethylaniline 水溶液の 440 nm における吸管理の下，飼育した．薬物動態学的評価に用いるラットは光値をモニタリングすることで測定した

3，8，9）．測定原理

薬物経口投与前 18 h から絶食した．In vivo 光毒性試験に用いるラットは，試験開始 18 h 前に pentobarbital（50 mg/を以下に示した．
1

kg，i.p.）麻酔下のラット腹部を剃毛した．全ての動物実験

O2 + A →［AO2］→ AO2

は静岡県立大学内の動物愛護倫理委員会の承認を得たガイ［AO2］+ RNO → -RNO + Products
1

ドラインに準じて実施した．

A： O2 acceptor，imidazole

絶食したラットに FF（5 mg/kg）を投与後，血液サンプ

RNO：nitroso compounds
mROS assay に お い て は 被 検 物 質 の 最 終 濃 度 がル（約 300 µL）を 0.5，1，2，3，4，6，8，12，24，48 h において200 µM と な る よ う に 被 検 物 質 の stock solution を，

尾静脈より採取した．血液サンプルを遠心分離（10,000 × g，

p-nitrosodimethylaniline（50 µM） お よ び imidazole（50

10 min，4 ℃）して得られた血漿サンプルは，2.5 倍量（v/v）µM） を 含 む 20 mM NaPB（pH7.4）with 0.5% Tweenの ACN を加え，振盪後，遠心分離（10,000 × g，5 min，4 ℃）
し，20 と 混 合 し た 10）． 酵 素 処 理 後 の ROS assay に お い て

上 清 を 0.20 µm membrane filter（Milex®–LG，Millipore

は rat S9 fractions で 処 理 し た FF が 30 µM と な る よ う

Co., Ltd., Billerica, MA，USA）を通すことでろ過した．得

p-nitrosodimethylaniline（50 µM）
および imidazole（50 µM）

られたろ液に internal standard である ketoprofen（1 µg/

を含む 20 mM NaPB（pH7.4）と混合した．その混合液mL）を含む 50 % ACN と 1：1 で混合し，UPLC/ESI-MS 分

200 µL を 96-well microplate（旭硝子，東京，日本；code

析による定量を行った．皮膚および眼組織は経口投与後

number：3881-096；clear，untreated，flat-bottom）に分注し，

2，4，6，8，10，12，24，48 h 後において，ジエチルエーテ

析 出 物 の 有 無 を 確 認 後，440 nm の 吸 光 値 を SAFIRE

ル麻酔下，下降大動脈より脱血，および氷冷生理食塩水にmicroplate spectrophotometer（TECAN，Mannedorf，

よって還流したラットから採取した．採取した組織サンプ

Switzerland） を 用 い て 測 定 し た． そ の 後， プ レ ー ト をルは重量測定後，ハサミでミンスし，4 mL の ACN を加えreaction container に 入 れ 石 英 の 蓋 を 装 着 し， 擬 似 太 陽

Physcotron（Microtech Co. Ltd., 千葉，日本）によりホモ

光を 1 h 照射した．照射後のプレートは，振盪後，再びジナイズした．得られたサンプルに，振盪および超音波処

440 nm の 吸 光 値 を 測 定 し た．Superoxide anion は NBT

理を 10 分間行い，遠心分離（1,300 × g，10 min）した．この還元によって生成する nitroblue diformazan の 560 nmの抽出操作を 2 回行い，上清はガラスチューブに分取しにおける吸光値をモニタリングすることで測定した．測定

たのち，40 ℃で窒素乾固した．残渣を ketoprofen 500 ng/

原理を以下に示した．

mL を含む 50 % ACN で溶解し，0.20 µm membrane filter（Milex ®–LG，Millipore Co., Ltd., Billerica，MA，USA）-

O2 + NBT → O2 + Nitroblue diformazan
mROS assay においては被検物質の最終濃度が 200 µM

を 用 い て ろ 過 し た の ち，UPLC/ESI-MS 分 析 に よ る 定となるように被検物質の stock solution を，NBT（50 µM）

量 を 行 っ た．UPLC/ESI-MS シ ス テ ム は binary solventをむ 2 0 mM NaPB（pH7.4）with 0.5% Tween 2 0

manager，column compartment， お よ び Micromass SQと 混 合 し た．酵 素 処 理 後 の ROS assay に お い て は rat

detector connected with Waters Masslynx v 4.1. を 含 む

含− 62 −

光線過敏症リスク予測方法の確立と国際協調活動の戦略的推進

Waters Acquity UPLC™ system（Waters，Milford，MA,たラットに pentobarbital にて麻酔し（50 mg/kg，i.p.），1.5USA）から構成されており，カラムには Waters Acquity

cm × 1.5 cm サイズ中を切り取ったビニルテープを貼り付

UPLC ™ BEH C18（particle size ：1.7 µm，column size：

け，そこへ被検物質の DMSO 溶液 100 µL を塗布した．塗ϕ 2.1 × 50 mm；Waters）を用いた．カラム温度は 40 ℃

付後 4 h において薬液を除去し，水で湿らせたコットンに保った．スタンダードおよびサンプルは Mili-Q waterで洗浄した．ラットは black light（FL15BL-B，National，

containing 0.1% formic acid（A）と ACN（B）から成るグラ

東京，日本）を用いて UVA 照射量が 30 J/cm2 となるまで

ジエント移動相によって分離し , 各化合物の保持時間は

照 射 し た． 照 射 強 度 は UV-Meter（Dr. Hönle AG，UV-

1.1 min（IS）；1.2 min（RFA）；2.0 min（FA）；4.2 min（FF）

Technology，Munich，Germany）を用いた．UV 非照射部であった．グラジエントコンディションは，0 - ­1.0 min，

位はアルミホイルで遮光した．照射終了後 24 h において50% B；1.0­­-5.0 min，50-95% B（linear gradient curve）；

色差計（NF333，日本電色工業，東京，日本）を用いて皮膚5-5.5 min，95% B；and 5.5-6 min，50% B とし，流速は表面の色調を計測した．色差計は皮膚表面 3 次元色反射率

0.25 mL/min とした．MS による検出では化合物に特異的を L*a*b* system（CIE 推奨）により記録する．輝度（L*）は+なイオンの m/z（361.2［M+H］+ for FF；319.2［M+H］
for

黒（L* = 0）から白（L* =100）までの間で明るさを表し，色++FA；3 0 3.0［M-OH］ for RFA；and 2 5 5.5［M+H］ for

相（a*）は赤（a* =100）および緑（a* = -100）間のバランスを表

ketoprofen）
を用いた．

し，彩度（b*）は黄色（b* = 100）および青（b* = -100）間のバランスを表す．UV 照射前後の皮膚表面の色差（ΔE）を以下

2. 4. 3T3 NRU PTのように算出し，光毒性の指標とした 11）．

マウス由来不死化線維芽細胞である Balb/c 3T3 cells

ΔE ＝｛√（ΔL* ）2 +（Δa* ）2 +（Δb* ）2｝（CloneA -31）を DMEM に 10 % FBS を添加した培地を用いて継代し，20 継代未満のものを試験に用いた．培養は

3. 結

37 ℃，5 % CO2 に 保 っ た CO2 incubator を 用 い，2 -3 日
おきに継代した．試験は OECD Test Guideline 432 に準果

3. 1. 光化学的特性評価

4

一般的に，薬物の光毒性反応においては，薬物分子がcells/well と な る よ う 細 胞 を 播 種 し，CO2 incubator に て

UV/VIS（290 - 700 nm）を吸収し励起状態となることが引

24 h 培養した．培養液をデカントにより除去し，EBSS

き金になり，励起状態となった薬物分子の光化学反応がを 用 い て 希 釈， 調 整 し た 被 検 物 質（FF，FA，quinine：

直接的な原因であると認識されている．そこで FF とそ

positive control，sulisobenzone：negative control）

じて行った．2 枚の 96 well マイクロプレートに 2.0 × 10をの主要代謝物である FA および RFA の光化学的特性につ100 µL 添 加 後，CO2 incubator 内 で 1 h 曝 露 さ せ た． 曝

いて UV 吸収特性と擬似太陽光曝露時の ROS 産生能に着露後，metal halide lamp および UVB を減弱させるため

目して評価した．FF および FA は強い UVA/B 吸収を示の H1 フィルターを搭載した SOL 500 Sun Simulator（Drし，MEC 値はそれぞれ 17,000，14,000（M-1cm-1）と高い

2

Hönle，Munich，Germany）にて UVA 照射量が 5 J/cm値であった（Fig. 3A）．従って FF および FA は高い光励となるよう照射した．非照射群はアルミホイルで遮光起性を有することが明らかとなった．一方で RFA におい

し，静置した．照射後，試験液を除去し，EBSS で洗浄ては弱い UVB 吸収のみを認め，RFA の光励起性は弱いこ

した後，培養液を添加して 24 h 培養した．培養液を除去とが明らかとなった．Henry らは過去に，MEC 値が 1,000

し，NR 液（50 µg/mL in DMEM）を添加後 3 h 静置し，NR（M-1cm-1）を超えない薬物は光毒性を示さない傾向にある液を除去，洗浄（PBS，150 µL）した．NR 抽出液（Acetic

こ と を 報 告 し て い る． 従 っ て，RFA の MEC 値 が 1,000

acid：EtOH：water=1：50：49）を添加し，10 分後に攪（M-1cm-1）を下回っていることから，RFA の光毒性リスク

拌 し た の ち 540 nm に お け る 吸 光 度 を Benchmark Plus

は低いと考える．各化合物の実際の光反応性について精microplate spectrophotometer（BioRad，Hercules，CA，

査すべく，擬似太陽光照射下における化合物からの ROSUSA）を用いて測定した．UV 照射群および非照射群におの産生能を評価した（Fig. 3B）．FF および FA は擬似太陽

ける concentration-response curve に基づいて mean photo

光照射下において強力な ROS 産生を示し，高い光反応性

effect（MEC）values を算出し，光毒性判定に用いた．

を示唆した．一方で，RFA からの ROS 産生は FF および
FA と比較して有意に低値を示し，RFA の低い光反応性を

2. 5. ラットin vivo 光毒性試験示唆した．興味深いことに，FA からの ROS 産生能は FF

   皮膚へ塗布する被検物質（FF，FA，quinine：positiveと比較して有意に高く（P ＜ 0.05），FA の光反応性が FF

control，sulisobenzone：negative control）は 100 mg/mLよりも高いことを示唆した．特に FA からの superoxideとなるよう DMSO に溶解した．あらかじめ腹部を剃毛しanion の産生は FF の約 2 倍高値を示し，FA の顕著に高− 63 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

い superoxide anion 産生能を示唆した．これらの結果か
ら，各化合物の光反応性の高さは以下のような順序となった：FA ＞ FF ≫ RFA．FA が FF よりも高い ROS 産生を示したため，FF が生体内での代謝を経て光反応性が変わる可能性について精査すべく，ラット肝 / 小腸 S9 画分で処理した FF からの ROS 産生を評価した（Fig. 3C）．ラット小腸 S9 画分で処理した FF から産生された ROS は熱失活させたもので処理した FF から産生された ROS と比較して有意な差は認めなかった．一方で，ラット肝 S9 画分で処理した FF から産生された superoxide anion は失活させたもので処理した FF の場合と比較して有意に高い値を示
し，すなわち，FF の光反応性は肝代謝を経て増大する可能性を示唆した．

3. 2. 薬物動態学的評価
一般的に光毒性反応は皮膚や眼において生じるものであることから，薬物の全身曝露と同様に皮膚 / 目への曝露も in vivo 光毒性を予測する上で重要な指標となる．そこ
で各化合物の薬物動態学的特性について，全身および皮膚/ 眼への曝露に着目して精査した（Table 1）．FF をラットに経口投与後，FF は全ての組織において検出限界（10 ng/
mL，7.1 ng/g tissue）以下であり，ラット体内における FFの速やかな消失を示唆した．FA の血漿中および各組織中濃度は速やかかつ持続的に上昇し，Tmax は 6.0 ‒ 13 h であった．FA の血漿および皮膚における Cmax および AUC0 - ∞ は
RFA と比較し，約 3 ‒ 4 倍高く，RFA と比較して FA の生成速度は速く，また，全身および皮膚曝露量も高いことを示唆した．一方で，RFA の血漿中および各組織中濃度はゆるやかに上昇し，Tmax は 12 ‒ 16 h となり，FA と比較して RFA の生成は遅いことを示唆した．RFA は血漿中および皮膚中からの消失半減期が FA と比較して約 1.5 ­‒ 2.0 倍
長く，RFA は FA と比較して緩やかな消失を示した．よって，RFA は FA と比較して長く皮膚に保持される可能性がある．眼においては FA のみが検出でき，Cmax および
AUC0- ∞ はそれぞれ 100 ng/g tissue，2.6 h･ng/g tissue であった．得られた結果に基づき，各化合物の皮膚および眼Fig. 3 Photochemical properties of FF, FA and RFA. UVabsorption spectra of test compounds (20 µM) in ethanol(A). Solid line, FF; dashed line, RFA; dotted line, FA.
Generation of ROS from FF, FA and RFA (B) and from FF
after incubation with active and denatured rat hepatic/
intestinal S9 fractions (C). Filled columns, generation of
singlet oxygen; Open columns, generation of superoxide.
*P＜0.05, with respect to singlet oxygen of FF; †P ＜ 0.05,
with respect to singlet oxygen of FA; # P ＜ 0.05, withrespect to superoxide of FF; ‡ P ＜ 0.05, with respect tosuperoxide of FA (B). *P ＜ 0.0 5, with respect tosuperoxide in denatured rat hepatic S9 fractions (C). Data
represent the mean ± SD (n=3).

への曝露を次のように順位づけた：FA ＞ RFA ≫ FF．

3. 3. in vitro/in vivo 光毒性試験
FA の光安全性について，光安全性試験代替法としてバ
リデートされ，汎用されている試験法である 3T3 neutral
red uptake phototoxicity test（3T3 NRU PT）， お よ び
ラット in vivo 光毒性試験によって評価した．比較対象
として親薬物である FF に対しても同様の光安全性試験
を 実 施 し た．3T3 NRU PT に お い て， 陰 性 対 照 で あ る
sulisobenzone を曝露した群では UV 照射群と非照射群の間で濃度 – 細胞生存率曲線の有意な変化は認めなかった．

− 64 −

光線過敏症リスク予測方法の確立と国際協調活動の戦略的推進

Table 1

PK parameters in plasma, skin and eyes after oral administration of FF in rats
t1/2（h）

Cmax（µg/mL）or
Cmax（ng/g tissue）

Tmax（h）∞
AUC0-（h･µg/mL）or∞
AUC0-（h･µg/g
tissue）

MRT0- ∞（h）FF

Plasma
Skin
Eye

N.A.
N.A.
N.A.

N.A.
N.A.
N.A.

N.A.
N.A.
N.A.

N.A.
N.A.
N.A.

N.A.
N.A.
N.A.

FA

PlasmaSkin
Eye

6.4 ± 0.40
11 ± 1.5
22 ± 6.9

6.3 ± 1.1
340 ± 17100 ± 5.5

9.7 ± 1.1
13 ± 3.9
6.0 ± 1.4

97 ± 148.5 ± 1.3
2.6 ± 0.33

13 ± 0.70
20 ± 2.1
34 ± 10

RFA

PlasmaSkin
Eye

12 ± 1.0
17 ± 3.3
N.A.

1.6 ± 0.10
80 ± 6.7
N.A.

12 ± 0.0
16 ± 4.7
N.A.

33 ± 3.2
2.0 ± 0.60
N.A.

21 ± 1.530 ± 4.2
N.A.

Each value represents the mean ± SEM for 4 -7 rats.  N.A., not available due to concentrations below the limit of detection.

一方で，陽性対照である quinine を曝露した群では UV 照

ことが明らかとなり，さらに，3T3 NRU PT の結果と一射により濃度 – 細胞生存率曲線が低濃度側へ大きくシフト

致していた．従って，FA の in vitro/in vivo 光毒性は FF

し，すなわち quinine の 3T3 細胞に対する強力な光毒性をよりも強いことが明らかとなった．

示唆した（Fig. 4A）．Quinine と同様に FF および FA にお4. 考

いても UV 照射による大きな濃度－­細胞生存率曲線の低濃察度側へのシフトを認め，両化合物の強い光毒性を示唆した

光毒性において化合物が太陽光を吸収し，励起される（Fig. 4B）．得られた濃度 – 細胞生存率曲線をもとに mean

過程は光毒性発症メカニズムの第一段階であり，それゆ

photo effect（MPE）値を算出したところ FF で 0.40，FA

え，UV 吸収スペクトルが光毒性リスクの一つの指標となで 0.54 となった．MPE 値は光毒性の有無を判定する基準

りうる．一般的に，化合物の UV 吸収スペクトルは薬物分として用いられており，MPE 値が 0.1 以上であれば光毒子内の π 電子共役系の長さに比例することが知られてい性陽性，0.1 を下回れば光毒性陰性となる．この判定基準

る．FF，FA および RFA の構造に着目すると，カルボニに準ずると，FF と FA はともに光毒性陽性であると判明

ル基を有する FF と FA は強い UV 吸収を示している一方した．また，FA の MPE 値が FF の MPE 値を上回ったこ

で，カルボニル基を欠いた RFA は極めて低い UV 吸収特とから，FA の 3T3 細胞に対する光毒性は F よりも強力で性を示している．従って，カルボニル基は FF および FA

あることが明らかとなった．

の強い UV 吸収特性において重要な役割を担っているといIn vivo における各化合物の光毒性について，ラット皮膚える．それは，カルボニル基が 2 つのベンゼン環の π 電への薬物塗布および UV 照射前後の皮膚色調変化量（ΔE）

子共役系の広がりに寄与しているからであろう．UV/VISを指標として評価した（Fig. 4C）．予備検討において FF おの吸収により励起状態となった化合物は，type I/type II

よび FA 塗布後の皮膚内濃度は 2 – 6 h において増減を認め

光化学反応（e.g. ROS 産生）を起こし，光毒性反応を誘発す

ず，定常状態となっていると想定できるため，皮膚へのる．そのため，光照射下における化合物の ROS 産生能に塗布時間を 4 h と定めた（data not shown）．Sulisobenzone

基づいた光反応性評価は光安全性評価において信頼性の塗布群では，UV 照射 / 非照射群間において皮膚表面の有ある指標として用いることができる．以前の報告によれ

意な色調変化は認めなかった．一方で，quinine は，以前

ば，光励起されたベンゾフェノン類は，type I 光化学反応の報告と同様に UV 照射によって顕著なΔb* の増大を伴う（e.g. superoxide の産生）を介して脂質過酸化を引き起こ

有意なΔE* の増大を示した（P ＜ 0.05）．FF および FA 塗し，光刺激性反応を惹起する．FA の superoxide anion の布群において，Δb* が 6.4（FF）および 5.9（FA）増大した産生能は FF よりも高く，FA は FF よりも高い光刺激性リことによる非照射群に比した UV 照射群におけるΔE の有スクを有しているであろう．また，本知見はラット肝 S9

意な増大を認めた（P ＜ 0.05）．さらに，FA 塗布群では UV

画分処理により FF からの superoxide anion 産生が増大し照射によってΔa* も 4.7 増大し，顕著な炎症反応を示唆した．

たことと良好に対応し，すなわち，FF が肝臓で FA に変

ま た，sulisobenzone 塗 布，UV 照 射 群 と，FF 塗 布，UV

換され，より強い光刺激性を惹起する可能性がある．皮膚照射群のΔE には有意な差を認めなかった一方で，FA 塗および眼への曝露量に着目すると，FA が顕著に高い曝露

布，UV 照射群のΔE は sulisobenzone 塗布，UV 照射群と量を示したことから，FA は極めて高い光毒性リスクを有比較し有意に増大していた（P ＜ 0.05）．本知見から，FAすると考える．一方で RFA の皮膚曝露は比較的低く，そはラット皮膚に対し FF よりも強い光毒性反応を惹起するの光毒性リスクは FA よりも低いと考える．これらの PK− 65 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

特性は FF の CES 1A1 による速やかな加水分解，さらには FA の CYP 3A4 による比較的緩やかな RFA への代謝によるものであると考える．FA は CYP 3A4 阻害活性を有することが報告されており，FA の代謝による RFA の生
成は FA 自身の CYP 3A4 阻害によって緩やかになっているかもしれない．RFA の皮膚曝露は比較的低いものであるが，RFA も光毒性リスクを有していると考える．なぜなら，RFA の長い皮膚滞留性が慢性投与時の皮膚への蓄積につながり，光毒性を誘発しうるからである．薬物の光毒性リスクは，薬物の光化学的反応性の強さはと露光部位である皮膚 / 眼への到達量の両者を考慮することによって，比較的良好に予測することができる．複数のデータを考慮し，系統的評価を行うことができる手法として
matrix decision approach が用いられており，本研究においても，光化学的特性および薬物動態学的特性のデータを統合し，decision matrix を作成し，光毒性リスク評価に用いた（Table 2）．
Decision matrix においては，光反応性および皮膚 / 眼
曝露量の両データとも高い値であればその光毒性リスクは極めて高く，光反応性あるいは皮膚 / 眼曝露量の一方のみが高いか，どちらも中程度であれば，その光毒性リスクも中程度，光反応性および皮膚 / 眼曝露量どちらも低ければその光毒性リスクは低いことがわかる．FA は光反応性および皮膚曝露の両データにおいて高い値を示していることから，最も高い光毒性リスクを有しているだろう．FF は強力な光反応性を有する一方で，皮膚曝露が極めて低く，FF の光毒性リスクはそれほど高くないと考える．RFA は
光反応性が弱く皮膚曝露も比較的低いが，皮膚滞留性が高いことから FF と同程度の光毒性リスクを有するだろう．
従って，各化合物の光毒性リスクは以下のような順序となった：FA ≫ FF ≒ RFA．この光毒性リスクの高さは invitro/in vivo 光毒性試験の結果とも良好に対応し，代謝物の光安全性評価における本評価系の妥当性を示唆した．また，本知見から FF の光毒性に FA が大きく寄与している
ことが明らかとなった．本研究において提示した包括的光
Fig. 4 I n v i t r o/i n v i v o phototoxicity of compounds.
Photodynamic cytotoxicity of QN: positive control and SB:
negative control (A), FF and FA (B) in 3T3 NRU PT, andcolorimetrical evaluation of phototoxic skin responses inrats treated with FF, FA, quinine (QN) and sulisobenzone(SB) (C). Open symbols and open columns, UVA-irradiatedgroups; filled symbols and filled columns, non-irradiatedgroups. Each value represents the mean of duplicate
measurements (A, and B) and the mean ± SEM of 4
experiments (C). *P ＜ 0.05 with respect to the nonirradiated group of each compound; #P ＜ 0.05 with respect
to UV-irradiated groups of SB.

安全性評価は，信頼性のある医薬品候補化合物の光安全性情報を提供するものと考えられる．
謝

辞本研究を遂行するにあたり，公益財団法人コスメトロジ

ー研究振興財団よりご援助頂きましたことに深く感謝申し上げます．
（引用文献）
1） Onoue S, Seto Y, Gandy G, Yamada S: Druginduced phototoxicity; an early in vitro identificationof phototoxic potential of new drug entities in drug

− 66 −

光線過敏症リスク予測方法の確立と国際協調活動の戦略的推進

Table 2

Decision matrix

Each crucial factor was divided into three levels. Black, gray and white cells represent high, moderate andlow levels, respectively. N.A., not available due to concentrations below the limit of detection.

discovery and development, Curr Drug Saf, 4, 123-136,

Matsuoka N, Nakamura K, Toda T, Takagi H, Osaki N,

2009.

Matsumoto Y, Kawakami S, Seto Y, Kato M, Yamada
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phototoxicity characterization of fluoroquinolones,8） Onoue S, Hosoi K, Wakuri S, Iwase Y, Yamamoto T,− 67 −AAPS J, 13, 482-492, 2011.

炎症時における細胞動態と酵素活性を in vivo で可視化する
機能性 MRI プローブ
大阪大学大学院工学研究科

菊地和也

Highly sensitive imaging of enzymatic activities in deep region of living organisms have been a difficult challenge forbioimaging materials. Among them, 19 F magnetic resonance imaging (MRI) probes are suitable for noninvasively visualizing
enzymatic activities in vivo due to zero background signal. Although various enzyme-responsive 19 F MRI probes have beendeveloped, most of them have not been applicable to in vivo imaging because of their low sensitivity. Recently, we developed
perfluorocarbons-encapsulated nanoparticles and demonstrated that they showed outstanding sensitivity in vivo. Here, wedeveloped enzyme-responsive 19 F MRI nanoprobes (FLAME-DEVD 2 ) for detecting caspase- 3 / 7 activity by employing
the paramagnetic relaxation enhancement effect as the OFF/ON switch of 19 F MRI signals. After intravenous injectionof FLAME-DEVD 2 and apoptosis-inducing reagents, caspase- 3 / 7 activity in a living mouse spleen was successfully
imaged by 19 F MRI. The results demonstrated that this imaging platform has great potential for highly sensitive detection of
enzymatic activities in vivo.

1. 緒

言

生命活動は、生体分子が複雑に相互作用することでその恒常性が保たれている。その中でも酵素は生命機能の維持と同時に癌やアルツハイマー病などの様々な疾患を引き起こすメディエーターとしての働きを持っている。生きた動物個体で酵素活性をイメージングすることは、その機能や動態の解析から、疾病の検出や薬効評価などの応用研究に

Fig. 1 (a) Structure and TEM image of FLAME., (b) In vivo
MR image of FLAME in tumor bearing mouse.

繋がる。Magnetic Resonance Imaging（MRI）は核磁気共鳴現象を利用した三次元断層画像法であり、核磁化の励起物をベースとする 19F MRI プローブは、in vivo においてにラジオ波を用いているので、放射線被爆の危険性がない。

低感度という問題点があった。
これまでに、上記の問題点を解決するために高感度なまた空間分解能や組織コントラストが優れているため、生体内における酵素活性を検出するのに非常に優れている手19法と言える。特に 19F MRI は内在性バックグラウンドシグ

nanoparticle for 19F MRI Enhancement） の 開 発 に 成 功

ナルがほとんど存在しないため、生体に投与した 19F MRI

し て い る。FLAME は 一 分 子 内 に フ ッ 素 を 20 個 有 す る

造影剤のみを選択的にイメージングすることが可能であ

perfluoro 15-crown-5 ether（PFCE）を脂質により内包し、る。これまでにいくつかの小分子化合物をベースとした酵

その周りをシリカで被覆した構造をしている（Fig. 1a）。そF MRI 造 影 剤 FLAME（FLuorine Accumulated silica

素活性検出 F MRI プローブが報告されており、本研究室のため、生体内においても安定かつ非常に高感度な 19F

も常磁性緩和促進（PRE）効果に基づいた酵素活性検出 19F

MRI シグナルを示すことがわかっている（Fig. 1b）。

19

MRI プローブを開発してきた。PRE 効果とは、常磁性種

本研究では、PRE 効果による OFF/ON スイッチング機が持つ不対電子スピンの影響で、その近傍に存在する観構に基づき、生体内における酵素活性を検出する高感度な測核の横緩和時間 T2 が著しく減少する現象のことである。

19

F MRI 造影剤の開発を目的として取り組んだ。

T2 は、MRI シグナル強度と相関があるパラメーターであり、T2 を制御することで MRI シグナルの OFF/ON のスイ
ッチング原理を確立可能である。しかしながら小分子化合

2. 方

法

2. 1. カスパーゼ-1 活性検出用

19

F MRI 造影剤

デザインした FLAME-WEHD X は、FLAME、Gd3+ 錯体、Functional in vivo Imaging of Cellular
Dynamics and Enzyme Activity after
Inf lammation Using Chemica l M R I
ProbesKazuya Kikuchi
Graduate School of Engineering, Osaka
University

カスパーゼ -1 基質から構成される（Fig. 2）。カスパーゼ -1は基質配列 WEHD における D の C 末端を切断することが知られているので、この基質を介して FLAME と 19F MRI
シグナルを抑制する Gd3+ 錯体を連結させた。FLAME の19

F MRI シグナルは、Gd3+ が持つ PRE 効果により FLAME

内部のフッ素化合物の T2 が短縮されており、一時的に消− 68 −

炎症時における細胞動態と酵素活性を in vivo で可視化する機能性 MRI プローブ

失している。カスパーゼ -1 が基質を切断して、Gd3+ 錯体

MRI シグナル増大を示したので、これをマウス実験に用が FLAME 表面から解離することで、PRE 効果が解消さいた。マウスは Black 6 を使用した。FLAME-WEHD 3

れ、19F MRI シグナルが回復する。また FLAME と Gd3+ 錯のみを生理食塩水中に分散させ、Black 6 マウスに皮下注

体が立体障害となってカスパーゼ -1 が基質部位にアクセ射した。コントロールとして同じ PFCE 濃度の FLAME-

スしにくいことが考えられる。そこで基質配列を 2, 3 個とCOOH を反対側に皮下注射した。コントロール側では非常繰り返すことで、FLAME と Gd3+ 錯体間の距離が離れてに強い 19F MRI シグナルが観測された。FLAME-WEHD

カスパーゼ -1 がアクセスし易くなるとともに、酵素が基3 を打ち込んだ側においては冠状断と水平断の両方で 3 時

質を断する確率が増えると期待した。

間後から 19F MRI シグナルが観測され始めた。この原因と3. 結して皮膚への注射による果

刺激に対する免疫応答、血清中の酵素による基質の切3. 1. FLAME-WEHD X（X = 1–3）の酵素反応

断が考えられる。しかし、ポジティブコントロールの作製した FLAME-WEHD X とカスパーゼ -1 の酵素反応19を行い、 F MRI 測定を行った。FLAME-WEHD 1, 2 でalways ON の FLMAE-COOH と比べて 19F MRI シグナルが非常に抑制されていることが確認された（Fig. 4）。

19はカスパーゼ -1 存在下、非存在下において F MRI シグ
ナルの増大がほとんど見られなかったのに対し、FLAME19

WEHD 3 では酵素反応開始後 6 時間から F MRI シグナ

3. 3. FLAME-WEHD 3 を用いた生体における免疫応答の可視化

ルの増大が確認された（Fig. 3）。

最 後 に 人 為 的 に 免 疫 応 答 を 起 こ す た め に、FLAMEWEHD 3（1.67 mM, 120 µL）を刺激物である IL-6 と同時

19

3. 2. FLAME-WEHD 3 のマウス体内における F
MRIシグナル評価に皮下注射した。コントロール側では投与後 7 時間後か

FLAME-WEHD 3 がカスパーゼ -1 存在下において 19F

IL-6 を加えた側では投与後 30 分で非常に強い 19F MRI シ

ら 19F MRI シグナルが少ししか観測されなかったのに対し、Fig. 2 Design principle of FLAME-WEHD X (X = 1–3).

Fig. 3 (a) 19F MRI phantom images of FLAME-WEHD X with or without caspase-1.
(b) Time course of 19F MRI signal intensity.

− 69 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

グナルが観測された。これは IL-6 によって引き起こされ19より検出した初めての例であり、今後この造影剤を用いてた免疫応答に対して FLAME-WEHD 3 が応答し、 F MRI

痛風関節炎などの様々な炎症性疾患の検出、評価を行うこシグナルが増大したことを示唆する結果である（Fig. 5）。

とで、19F MRI を用いた新たな検出法として免疫学への貢4. 考献が期待される。

察

5. 総

PRE 効果を利用した OFF/ON スイッチング機構に基括づ い た 分 子 設 計 を FLAME に 施 し、in vivo 応 用 可 能 な本研究で、カスパーゼ -1 活性検出用 19F MRI 造影剤と酵素活性検出 19F MRI 造影剤の開発を行った。作製したカスパーゼ -3 活性検出用 19F MRI 造影剤の開発をそれぞ19

FLAME-WEHD 3 はマウス体内の免疫応答を F MRI にれ行った。カスパーゼ -1 活性検出用 19F MRI 造影剤であFig. 4 In vivo 1H/19F MRI measurement of FLAME-COOH and FLAME-WEHD 3
in black 6 mouse at 15 min, 3 h, 6 h, 9 h after subcutaneously injection.

Fig. 5 In vivo 1H/19F MRI measurement of FLAME-WEHD 3 in black 6 mouse at 30 min, 7 h, 2days after subcutaneously injection with or without IL-6（1µg）．Total administered volume is 120µL（C PFCE = 1.67 mM）．19F MRI RAREVTR method: coronal plane; the matrix size was 128 × 64
and the slice thickness was 40 mm. T E, eff was 16 ms. T R was 1500 ms. The NEX was 128.

− 70 −

炎症時における細胞動態と酵素活性を in vivo で可視化する機能性 MRI プローブ

る FLAME-WEHD 3 は、カスパーゼ -1 の添加に伴いファ

3） Okada S, Mizukami S, Sakata T, Matsumura Y,

19

ントム像で F MRI シグナルの増大が確認された。さらに

Yoshioka Y, Kikuchi K,: Ratiometric MRI Sensors

マウスへの応用において、IL -6 と皮下注射することによ

Based on Core-Shell Nanoparticles for Quantitative pH

りコントロールと比べて、非常に高感度にマウス体内の免Imaging, Adv. Mater., 19, 2989-2992, 2014.

19

疫応答を F MRI 検出していることを示唆する結果が得ら

4） Okada S, Mizukami S, Sakata T, Matsumura Y,

れた。これはマウス体内の免疫応答を 19F MRI により検出

Yoshioka Y, Kikuchi K,: Ratiometric MRI Contrast

した世界で初めての例である。今後、細胞実験などを行う

Agents Based on Core-Shell Nanoparticles for

ことに FLAME-WEHD 3 がどの程度カスパーゼ -1 に対しQuantitative pH Imaging, Dalton Trans., 4 2, 1 5 8 6 4-15867, 2013.

て選択性を持っているか、そして FLAME-WEHD 3 のマ
ウス体内の動態を詳しく調べていくことで、特定の炎症性

5） Matsushita H, Mizukami S, Mori Y, Sugihara

疾患の 19F MRI 検出も期待される。

F, Shirakawa M, Yoshioka Y, Kikuchi K,:

19

19

F MRI

カ ス パ ー ゼ -3 活 性 検 出 用 F MRI 造 影 剤 で あ る

Monitoring of Gene Expression in Living Cells via Cell

FLAME-DEVD 1，2 は両者とも、ファントム像においてSurface beta-Lactamase Activity, ChemBioChem, 1 3,

非常に高コントラストにカスパーゼ -3 活性を検出できる

1579-1583, 2012.

ことが確認された。特に高コントラストにカスパーゼ -36） Mizukami S, Matsushita H, Takikawa R, Sugihara
19

活性を検出できた FLAME-DEVD 2 に関しては、マウス

F, Shirakawa M, Kikuchi K,:

体内のアポトーシスの 19F MRI 検出を行うことにより、本-Galactosidase Activity for Imaging of Gene Expression,

研究で行ったプローブデザインが様々なプロテアーゼに応Chem. Sci., 2, 1151-1155, 2011.

F MRI Detection of㌼7） Okada S, Mizukami S, Kikuchi K,: Application of

用可能であると考えられる。

Stimuli-Responsive Polymer for Development of Novel（引用文献）MRI Probes, ChemBioChem, 11, 785-787, 2010.

1） Nakamura T, Matsushita H, Sugihara F, Yoshioka
Y, Mizukami S, Kikuchi K.: Activatable198） Mizukami S, Takikawa R, Sugihara F, Shirakawa M,
Kikuchi K,: Dual Functional Probe to Detect Protease

F MRI

Nanoparticle Probes for the Detection of Reducing

Activity for Fluorescence Measurement andEnvironments, Angew. Chem. Int. Ed., 5 4, 1 0 0 7-1 0 1 0,

Angew. Chem. Int. Ed., 48, 3641-3643, 2009.

2015.

19

F MRI,

9） Mizukami S, Takikawa R, Sugihara F, Hori Y, Tochio

2） Matsushita H, Mizukami S, Sugihara F, Nakanishi

H, Wälchli M, Shirakawa M, Kikuchi K,: Paramagnetic
19

Y, Yoshioka Y, Kikuchi K,: Multifunctional Core-shell

Relaxation-based

Silica Nanoparticles for Highly Sensitive

Activity, J. Am. Chem. Soc., 130, 794-795, 2008.

19

F MRI,

Angew. Chem. Int. Ed., 53, 1008-1011, 2014.

− 71 −F MRI Probe to Detect Protease皮膚顆粒細胞の活性化とタイトジャンクション修復による皮膚バリア機能増強とアトピー・アレルギーの発症予防
徳島大学先端酵素学研究所

木戸博

Enhancement of skin barrier function by activation of granular layer cells and restoration of tight junction are important
for the prevention of atopic and allergic dermatitis. We recently established a highly sensitive method for detection ofallergen specific immunoglobulin class switching by the densely carboxylated protein (DCP) chip microarray. DCP chipprovides sensitive quantitative measurement of allergen-specific IgGs, IgA and IgE by using limited amount of serum
and also provides allergen-affinity of each immunoglobulins. By using the DCP chip, we measured the enhancement ofskin barrier function after sensitization of allergen from skin. We analyzed the effects of pyruvate dehydrogenase kinase 4(PDK 4 ) inhibitor on activation of mitochondria in the granular layer cells of skin. Treatment of PDK 4 inhibitor from theskin effectively inhibited dinitrochlorobenzene-induced skin inflammation and proliferated granular layer cells. Treatmentof PDK 4 inhibitor also block skin sensitization of ovomucoid. These results suggest that PDK 4 inhibitor plays a role forprevention and/or treatment of allergy induced by skin-sensitization.

1. 緒

消える生後 4 ヶ月以後に、湿疹を介して抗原が経皮感作さ

言れると、乳児の食物アレルギーの発症に繋がることを明ら

アレルギー・アトピーの発症病理学的研究の中で、抗かにした（Manuscript in preparation）。このように微量抗原経皮感作の重要性に関する目覚ましい研究成果が近年

原の経皮感作によって、体内免疫系が大きく影響されるこ相次いで発表され、これまで有効な予防と治療法のなとから、これを高感度に感知して予防と対策を講ずる必要

かったアレルギー・アトピー領域が注目されている。そがある。本プロジェクトでは、食物アレルギーの予防との発端となった日本の研究者グループによる２報の論文

治療のために、１）低侵襲性にしかも高感度に抗原特異的が注目される。１つは、国立成育医療センターグルー

IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA を測定する検査シス

プ の Horimukai 等 に よ る “Application of moisturizer toテムを開発するとともに、２）抗原の経皮感作を防ぐ皮膚neonates prevents development of atopic dermatitis”

1）

で、のバリア機能を増加させる方法の一つとして、細胞間を繋生後 32 週間保湿剤によるスキンケアをすることで、アトぐタイトジャンクションがミトコンドリア機能に密接に依ピーの発症が 32 % 抑制されたことを記載した画期的な論存していることに注目して、ミトコンドリア機能活性化剤

文である。他は、慶応大学医学部皮膚科学教室のグループ

を皮膚に塗布した場合の抗原感作抑制効果を検討した。なによる “ Distinct behavior of human Langerhans cells andお、申請者等のグループは、血管内皮細胞の透過性をコン

inflammatory dendritic epidermal cells at tight junctions

トロールするタイトジャンクションの修復の重要性をこれ

in patients with atopic dermatitis”

2）

で、アトピー性皮膚炎では抗原提示細胞の突起がタイトジャンクションの隙間までに明らかにしており 3）、これらの研究を遂行する基盤を有している。

を介して伸展して、抗原提示に関与する機序についての論文である。この２報は、アトピーの発症とタイトジャンク
ション崩壊、保湿剤による角質層とタイトジャンクション
保護との関係を示唆している。

2. 実験方法
2. 1. 高感度抗原特異的 IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA 測定システム

我々は、国立成育医療センターグループとの前記の共同

高感度抗原特異的 IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA研究論文において、各種抗原特異的抗体価を測定して発測定システムとして、我々はこれまでに開発してきた表してきたが、続いて行った最近の乳児コホート研究かDensely carboxylated Protein（DCP）-chip を用いた 4，5）。

ら、胎盤を介して母子移行した IgG 抗体が乳児の体内から

このデバイスは、僅か 20 - 50 µL の血清で、10 ～ 33 種類の抗原特異的抗体のクラススイッチパターンと、約 100 µL

Enhancement of skin barrier function
by activation of granular layer cells
a nd re st or at ion of t ig ht ju nct ion ,and prevention of atopic and allergic
dermatitis
Hiroshi Kido
I nst itute for Enzy me Resea rch ,Tokushima Universityの血清で抗原親和性の測定が可能なデバイスである。図1 に、抗原蛋白質を共有結合で高密度に固定化する DCP
チップの概要を示す。DCP チップは、シリコン基板に
Diamond-like carbon（DLC）コート後、静電層カルボキシル基修飾を施したチップと、ガラススライドに静電層カ
ルボキシル基修飾を施したチップ（IgSensor AMERIC®）− 72 −

皮膚顆粒細胞の活性化とタイトジャンクション修復による皮膚バリア機能増強とアトピー・アレルギーの発症予防

量が可能である。さらにアレルギーの発症と予防の観点か
ら抗原特異的抗体の抗原親和性が注目されている 6）が、抗原親和性を抗原の IC50 値で測定可能な唯一のデバイスとなっている。

2. 2. 抗原経皮感作をモニターするモデルシステム
実験動物としてマウスを使用して抗原経皮感作をモニタ

測定原理ーするモデルシステムとして、これまで広く使用されてきた Dinitrochlorobenzene（DNBC、Sigma-Aldrich）で誘導したアトピー・皮膚炎モデル 9）と、皮膚を金ブラシで機械的に掻破することで比較的自然に近い穏やかな皮膚炎を起こす２系統のモデルを用いて、抗原感作とミトコンドリア
活性化剤による感作ブロックを検討した。DNBC は皮膚
蛋白質と共有結合する比較的強力な化学修飾薬剤で短時間に激しい皮膚炎を生じる。6 週齢の BALB/C 雌マウスを脱小児に負担の少ない微量測定の実施例

毛した後、エタノールに溶解した 2 % DNBC を朝、夕の１

図 1 DCP チップを用いた高感度、低侵襲性抗原特異的抗体価
定量の概要

日２回、３日間塗布して皮膚炎を誘発した。その後皮膚顆
粒細胞のミトコンドリアを標的にした Pyruvate Kinase 4（PDK4）阻害剤を皮膚ローションに溶解して１日２回の塗があり、性能はほぼ同等で現在 10-36 種類のアレルゲン

布を７日間実施し、実験開始から 11 日目にマウスを屠殺を搭載したチップが汎用されている。本研究では DCP チ

して、皮膚組織の状態を観察した。
一方、皮膚を機械的に掻破した群では、初日に金ブラシップとして、当研究室で開発したガラススライド基板の®

で 30 回掻破した後、翌日より PDK4 阻害剤添加（+、−）IgSensor AMERIC が使用された。
図２にこのアレルゲンチップの特色を示す。このアレル®

の皮膚ローションを１日２回、７日間塗布し皮膚の治療をゲンチップ IgSensor AMERIC は、これまでにない極微実施した。１週間の治療後、卵白抗原のOvomucoid（OVM）

量検体で、抗原特異的各種抗体価を定量測定が可能である。

1 mg/60µL 4% SDS 溶液を１日 1 回、10 日間塗布するこ

そのため低侵襲的に乳児の抗体価の測定が可能となった。

とで、抗原の経皮感作を実施した。金ブラシでの皮膚掻破

このシステムでは、1 人分の枠内に各種食物抗原や環境中

から３週後、即ち経皮抗原感作の 4 日後に、OVM の経口の経気道感作抗原、各種リコンビナント単一抗原が搭載さブースト感作を実施して、血液中の OVM 抗原特異的 IgEれており、同時に 33 種類の抗原に対する特異抗体価の定抗体誘導を２週間モニターした。

図 2 高感度 DCP チップの特徴− 73 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017ってきたことから 11，12）、今後本研究課題と密接に関係し

3. 結果と考察

た解析研究が望まれている。人工乳と混合栄養児の場合、

3. 1. 高感度抗原特異的 IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA 測定システムの開発®

IgSensor AMERIC を用いた出生時の母体血、臍帯血、

乳児は牛ミルクの特異的抗原、Beta-lactoglobulin（BLG）
に対する抗体を産生する。しかも乳児にとっては唯一の食物栄養源であることから、大量のミルク抗原に経口感

新生児血の鶏卵、ミルク抗原、杉抗原（Cedar pollen）、ハ

作されることになる。一方、母乳栄養児の場合は、BLG

ウスダストと２種類のダニ抗原（Dp, Df）に対する抗原特に対する抗体産生は見られなかった。図４に示すよう

異的 IgE の感作パターンを図３に示す。胎盤を通過できるに、乳児はイムノグラブリンクラススイッチのルール

IgG、IgG4 は、母体血、臍帯血、新生児血間で相違は見らに従って、出生後 0 ヶ月から 6 ヶ月までの間に経時的に、れず、同一の感作パターンを示した。一方で胎盤を通過でIgG3 → IgG1 → IgG2 → IgG4 と IgG1 → IgE へ の ク ラ ス ス

きない IgA と IgE では、母体血と臍帯血、新生児血間に大イッチの順番で進んでいることが判る。IgM から最初にきな違いが観察された。胎児及び新生児では IgA 産生ができる抗体が IgG3 であるが、IgG3 は速やかに IgG1 にク見られないことから、臍帯血、新生児血では抗原特異的抗ラススイッチされ、乳児は異物反応として大量の IgG1 抗体は全く観察されない。しかし抗原特異的 IgE の場合、母体を産生する。その後、アレルギー発症抑制に関与する

体血と臍帯血、新生児血間で違いのあることが観察され

IgG1 → IgG2 → IgG4 へのクラススイッチが進む（この図でた。胎児期より胎児は抗原特異的 IgE を産生するが、そのは IgG2 が省略されている）とともに、アレルギーの発症に抗原の由来は、胎盤を通過して胎児にもたらされる母体関与する IgG1 → IgE へのクラススイッチが進む。

の IgG・抗原複合体に由来する主に食物抗原で、この抗原

上記の高感度イムノグラブリンクラススイッチの測定系に対する IgE 抗体が産生される。食物抗原以外の環境抗原ができたことから、今後経皮感作による IgG1 → IgE へク

によって感作される頻度の高い母体血との違いが生じるとラススイッチの高感度モニターが期待される。

推定している。以上の結果は、胎児と臍帯血で見られる見られる IgE ではないことが明らかになった。一方、胎児

3. 2. 抗原経皮感作をモニターするモデルシステムの開発

は IgE を産生しているが、胎児期にアレルギーの発症がな

上記のように高感度イムノグラブリンクラススイッチのい理由として、胎児と臍帯血で見られる抗原特異的 IgE は、測定系ができたことから、抗原経皮感作をブロックする薬

抗原との親和性が低くヒスタミン遊離を誘発しない低親和剤のスクリーニングが可能になった。本研究は、これまで

性 IgE 抗体であることが判明している 10）。

に我々が実施してきた研究からの仮説、「細胞間のタイト

抗原特異的 IgE は胎児由来であり、母体血が混入した結果

出生後 0 - 6 ヶ月までの乳児期の乳児を対象として、ミジャンクション機能がミトコンドリア機能に密接に関係しルク抗原特異的イムノグラブリンクラススイッチのモニており、ミトコンドリア機能の低下がタイトジャンクショ

ターが行われた。特に乳児期の湿疹、アトピー性皮膚炎

ン機能の低下や、皮膚バリア機能の低下を引き起こし、逆が食物アレルギーの発症の原因になることが明らかになにミトコンドリア機能の上昇がタイトジャンクション機能

図 3 母体血と臍帯血、新生児血間の抗原特異的各種イムノグロブリンの比較− 74 −

皮膚顆粒細胞の活性化とタイトジャンクション修復による皮膚バリア機能増強とアトピー・アレルギーの発症予防

図 4 母体血と出生後の 0 ヶ月から６ヶ月までのミルク抗原の経口感作とイム
ノグロブリンクラススイッチを増加させる」に基づいて実施された。図５は、この仮説の基になったこれまでの研究成果である 4, 13）。種々の病原体は体内の防御システムを活性化して各種サイトカインの産生を促す。サイトカインは生体防御系の発動に不可欠であるが、過剰のサイトカインの産生（サイトカインストーム）は、体内の各臓器が微量産生している trypsin（異所性trypsin）の発現を増加させ、そのレセプターの PAR-2 を介して細胞内の Ca2+ の異常増加とそれに伴うタイトジャンクションの崩壊を導く。サイトカインの増加は、体内代謝の中でもミトコンドリアのエネルギー代謝に深く関係しており、ミトコンドリア機能の低下と ATP クライシス、細胞機能の低下を引き起こす。この一連のシグナル伝達の中でサイトカインの増加は、エネルギー代謝の主役を担う糖代謝の調節因子、PDK4 の著しい増加を誘導することが判明した 13）。PDK4 の増加は、その基質であるPDH（Pyruvate
dehydrogenase）をリン酸化して、PDH 活性を低下させる。
PDH は、Glucose 代謝の key enzyme で、ミトコンドリア
への糖代謝の流れを調節している酵素である。即ち PDHの活性低下は Glucose のミトコンドリアへの輸送量の低下を招き、その結果 ATP 産生の低下、ミトコンドリア機能の低下と細胞機能の低下を引き起こす。このような観点から、PDK4 阻害剤の開発研究が進んでいる。
図６は、2% DNBC を 3 日間塗布することによって誘発

図５ 細胞間タイトジャンクションの機能に関与するミトコンドリ
アのエネルギー代謝と、これに影響を与える病原体―サイトカ
インー代謝不全サイクル
PPARs, peroxisome proliferator-activated receptors; PDH,
pyruvate dehydrogenase; PDK4, pyruvate dehydrogenasekinase 4; PAR-2, protease activated receptor 2; CPT,
carnitine palmitoyltransferase; CF T R , cystic fibrosis
transmembrane conductance regulator; KCNN4, potassiumintermediate/small conductance calcium-activated channel,
subfamily N, member 4; KCNQ1, potassium channel, voltage
dependent, KCNQ1(IPR005827) ; ZO-1, zonular occludens-1.

されたアトピー・皮膚炎モデルの結果である。DNBC 塗布による皮膚炎を通常のローション基材のみで１週間治療した。これに対して、PDK4 阻害剤を添加したローションでた群では、DNBC を塗布しなかったマウスの皮膚に比べて、治療した群では、明らかに皮膚顆粒層の肥厚が抑制される

皮膚顆粒層が厚くなるとともに、角質層が薄く変化していと共に、角質層の厚みが比較的良く保たれていた。これら− 75 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

発してモニターした。この実験系では、初回の経皮感作（10のことは、PDK4 阻害剤の有効性を示唆している。
一方、皮膚を機械的に掻破した温和な経皮感作実験系で日間の経皮感作）のみでは、OVM 特異的 IgE 抗体産生は観は、高感度 IgSensor AMERIC® を使用することで、OVM察されず、その後の比較的大量の経口抗原ブースト感作す抗原特異的 IgE 抗体の産生がモニターされた。実験系を図ることで、図８に示すように IgE 抗体は 14 日目に急速な７に示す。初回の皮膚掻破の後、１週間皮膚の治療が行増加を見た。一方、機械的掻破後に PDK4 阻害剤を添加しわれたが、その皮膚治療の効果を OVM の抗原経皮感作と、たローションで１週間治療した群では、その後の経皮抗原

抗原の経口ブースト感作で OVM 特異的 IgE 産生を増幅誘

感作によっても IgE 抗体産生の程度は弱く、経口抗原ブー

図 6 DNBC 皮膚炎モデルにおける PDK4 阻害剤の皮膚顆粒層と角質層の保
全効果
皮膚顆粒層
（←→）と顆粒層の上部に位置する角質層（➡）を示す。

図 7 皮膚掻破とその治療、これに続く経皮抗原感作スケジュール

図 8 OVM 経皮感作による OVM 特異的 IgE 抗体の産生と、これを抑制する PDK4 阻
害剤添加皮膚ローションの効果− 76 −

皮膚顆粒細胞の活性化とタイトジャンクション修復による皮膚バリア機能増強とアトピー・アレルギーの発症予防

5） Kido H, Okumura Y, Takahashi E, Pan H-Y, Wang

スト感作による IgE 産生が抑制されていた。

4. 総

S, Yao D, Yao M, Chida J and Yano M. Role of host括cellular proteases in the pathogenesis of influenza
and influenza-induced multiple organ failure. Biochim「皮膚顆粒細胞の活性化とタイトジャンクション修復に

Biophys Acta 1824(1): 186-194,2011.

よる皮膚バリア機能増強とアトピー・アレルギー皮膚炎の発症予防」を目指して研究が行われた。そのため、高感度6） Suzuki K, Hiyoshia M, Tada H, Bando M, Ichioka

抗原特異的抗体のクラススイッチモニター系の確立と、こT, Kamemura N, and Kido H. Allergen diagnosisのシステムを用いたタイトジャンクション修復による皮膚microarray with high-density immobilization capacity

バリア機能増強効果の検証が、PDK4 阻害剤を候補薬剤とusing diamond-like carbon-coated chips for profiling

して検討された。その結果、PDK4 阻害剤は、タイトジャ

allergen-specific IgE and other immunoglobulins. Anal

ンクション修復に効果のあることが証明された。今後皮膚Chim Acta 706(2): 321-327, 2011.

顆粒細胞の活性化とタイトジャンクション修復に適したさ

7）Kamemura N, Tada H, Shimojo N, Morita Y, Kohno

らなる PDK4 阻害剤のスクリーニングが求められる。また

Y, Ichioka T, Suzuki K, Kubota K, Hiyoshi M and

今後イムノグラブリンクラススイッチを高感度にモニター

Kido H. Intrauterine sensitization of allergen-specificすることで、経皮感作を効果的に防止する最適な薬剤使用

IgE analyzed by a highly-sensitive new allergenmicroarray. J Allergy Clin Immunol130:113-121, 2012.

の時期を示すバイオマーカーが見いだされると期待してい8） Kamemura N, Kawamoto N, Nakamura R, Teshima

る。

R, Fukao T, and Kido H. Low-affinity allergen-specific（引用文献）

IgE in cord blood and affinity maturation after birth. J
Allergy Clin Immunol 133(3): 904-905, 2014.

1） Horimukai K, Morita K, Narita M, Kondo M,
Kitagawa H, Nozaki M, Shigematsu Y, Yoshida K,

9） Zhang EY, Chen AY, Zhu BT. Mechanism ofNiizeki H, Motomura K, Sago H, Takimoto T, Inoue E,

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Kamemura N, Kido H, Hisatsune J, Sugai M, Murota H,of specific antibodies in pathogenesis. PLoS one 4,

Katayama I, Sasaki T, Amagai M, Morita H, Matsuda

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atopic dermatitis. J Allergy Clin Immunol 134(4): 824-

in cord blood and affinity maturation after birth. J

830, 2014.

Allergy Clin Immunol 133(3): 904-905, 2014.

2） Yoshida K, Kubo A, Fujita H, Yokouchi M, Ishii

11）Flohr C, Perkin M, Logan K, Marrs T, Radulovic

K, Kawasaki H, Nomura T, Shimizu H, Kouyama K,

S, Campbell LE, et al. atopic dermatitis and disease

Ebihara T, Nagao K, Amagai, M. Distinct behavior ofseverity are the main rsik factors for food sensitization

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12）Lack G. Update on risk factors for food allergy. J
Allergy Clin Immunol 129: 1187-1197, 2012.

83064, 2014.
3） Wang S, Le TQ, Kurihara N, Chida J, Cissé Y, Yano

13）Yamane K, Indalao IL, Chida J, Yomamoto Y,

M, and Kido H. Influenza virus-cytokine-protease cycle

Hanawa M, Kido H. Diisopropylamine dichloroacetate,in the pathogenesis of vascular hyperpermeability ina novel pyruvate dehydrogenase kinase 4 inhibitor, as

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− 77 −

9(5):e98032 ,2014.

皮下組織のコラーゲンが体の温度適応に与える影響
甲南大学理工学部／統合ニューロバイオロジー研究所

久原

篤、太 田

茜

Temperature is important environmental information. Animals therefore have acclimation and habituation mechanisms
for changing environmental temperature. In this study, we used nematode Caenorhabditis elegans for studying temperatureacclimation mechanisms. We found that a collagen known as a essential cortical component in many animsls involved incold acclimation, implying that our experimental system is useful for studying fundamental cosmetology research.

1. 緒

約 1mmの土壌中に生育する非寄生性の線虫である 1）。また、

言

全塩基配列が決定されており、ゲノムサイズはモデル動物

温度は生物にとって重要な環境情報であるため、生物はの中でも特に小さい約 100Mb である。全遺伝子の約 36%

環境温度の変化に適応し、生存するメカニズムをもっていがヒトの相同遺伝子であるため、線虫で機能する遺伝子をる。その中において、皮膚を構築する皮下組織の状態とそ

ヒトと対応付けしやすい。C. elegans の生活環は短く（野の変化は、表皮の乾燥状態や柔軟性およびそれらによって

生型では 20 ℃で約 3.5 日）、通常は雌雄同体で系統維持が起きる変化にとって重要なものである。本研究では、シン

簡単なことに加え、0.1% の頻度で出現する雄を利用してプルな実験動物である線虫 C. elegans を用いて、低温適応交配が可能であるため、遺伝的解析にも適している。

を介した温度適応メカニズムに関わる分子をスクリーニン

C. elegans の高温に対する耐性のひとつとして、耐性幼グしたところ、皮質成分として知られているコラーゲンを虫形成機構があげられる。C. elegans の生育温度は約 13コードする遺伝子が多数単離されたため、その解析の現状〜 27 ℃で、それよりも高温になると大多数の個体が耐性を記載する。

幼虫になる 2）。耐性幼虫では体は細く、活動が鈍くなり生物の環境への適応として、高温環境や低温環境に対すエネルギー状態も低くなる。一方、ある温度で飼育される適応があげられる。そのうち、低温環境に対する適応た C. elegans は低温でも生育できることが最近見つかっ（低温適応）の研究は、高等動物だけでなく、植物や昆虫等てきた 3-5）。具体的には、15 ℃で飼育した C. elegans は 2

においても行われている。低温適応とは、通常の生育温度℃で 48 時間の低温にも耐えられるが、25 ℃で飼育した C.

よりも低温の環境でも生存できる性質のことであり、植物

elegans は低温に耐えられず、死滅してしまう（図 1）。低にも昆虫にも共通してみられる低温に対する耐性機構とし温適応の分子生理機構がこれまでに解析されてきており、て、生体膜の不飽和脂肪酸含有量が多いことや、細胞内に頭部に存在する ASJ 感覚ニューロンが温度を受容すると、アミノ酸などの凍結しにくい物質をもつことなどがあげら

ASJ からインスリンが分泌され、腸や神経系がインスリンれる。温度適応に関して、温度受容とアウトプットの代謝を受容し、低温適応が制御されていることが明らかとな等についての解析は進んできたが、皮下組織のコラーゲンっている（図 2）3）。一方で、他の組織や分子機構についての観点からは未開拓であった。その理由は、個体を構成すは未知の点が多い。そこで、C. elegans の低温適応の実験

る細胞数が多い場合、特定の組織の一部と体全体との関係系を利用して、新規の分子の同定を目指した。本研究では、性を明らかにするためには時間を要するためであった。そその最新のスクリーニングのなかで、コラーゲンをコード

こで、本研究では、シンプルな実験系を使い、温度適応にする遺伝子が多数見つかってきた。

関わる新規分子の同定を行った。その中で、皮下組織の重要因子として知られているコラーゲンが単離された。
線虫 C. elegans は、959 個の体細胞で構成され、体長が

2. 実

験

2. 1. 低温適応テスト
20 ℃で飼育した野生型の C. elegans を、４個体ずつ新しい NGM プレートに植え継ぎ（P0）、各飼育温度（15、20、Collagen in hypodermis affects temperatureacclimation of animal
Atsushi Kuhara, Akane Ohta
Faculty of Science and Engineering, &Institute for Integrative Neurobiology,
Konan University

25 ℃）で 5 時間飼育し産卵させる。P0 を除去し、卵（F1）を各飼育温度で飼育する。F1 が adult まで成長したら、NGM プレートの蓋を上に向けた状態で、氷上に 20 分間置
く。NGM プレートをタッパーに入れ、メディカルキャビ
ネット内で 48 時間、低温刺激温度（2 ℃）で飼育する（cold− 78 −

皮下組織のコラーゲンが体の温度適応に与える影響

低温刺激（2℃48 時間）

25℃飼育

低温適応

死滅

3 時間

低温刺激
（2℃48 時間）

15℃飼育

生存
図 1 線虫の低温適応
15℃で飼育した C. elegans は 2℃で 48 時間の低温にも耐えられるが、25℃で飼育した C. elegans は低温に耐えられず、死滅する。

RNAseq 用 の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー 作 製。SMARTseq
v4 Ultra Low Input（タカラバイオ）にて cDNA 合成後、Agencourt AMPure XP kit（Beckman）にて cDNA 断片を精製した。

図 2 線虫の低温適応の分子組織ネットワーク
頭 部に存 在する ASJ 感 覚ニューロンが 温 度を受容すると、ASJ からインスリンが分泌され、腸や神経系がインスリンを受容し、低温適応が制御されている。

2. 4. 多段階温度シフト解析（例 :15 ℃→ 25 ℃（3 時間）→ 2 ℃）
実 験 で 使 用 す る adult の C. elegans を、 １ 個 体 ず つ 新
しい NGM プレートに植え継ぎ（P0）、飼育温度（15 ℃）で24 〜 30 時間飼育し産卵させた。P0 を除去し、卵（F1）がadult になるまで、各飼育温度で飼育し続けた（15 ℃ではshock）。cold shock 後、キャビネットからタッパーを取り

約 6 日）。F1 が adult まで成長したら、25 ℃インキュベー

出し、15 ℃で一晩置き、翌日生存個体と死滅個体を数え、ター内で 3 時間静置した。その後、NGM プレートの寒天

6）側を下にして、氷上に 20 分間おいた。NGM プレートをメ

生存率を算出する 。
変異体を使用したテストでも同様の条件で行った。

ディカルキャビネット内で 48 時間、各低温刺激温度（2 ℃）

1 回のテストに、3 枚の NGM プレートを用意し、これで静置した（cold shock）。48 時間後、メディカルキャビネ
ットから取り出し、15 ℃インキュベーター内で 1 日静置

を 3 回試行した。

した後、生存個体と死個体を数え、生存率を算出した。

2. 2. 温度適応細胞のトランスクリプトーム解析

3. 結

温度受容に関わる細胞と温度を受容しない細胞それぞれ

果に関わる細胞特異的に発現している遺伝子を同定する。

3. 1. コラーゲン遺伝子の変異体が低温適応に異常をもつ

2. 3. Single cell mRNA 解析の方法

個体を用いて、温度受容に関わる細胞と、温度を受容しから、mRNA を単離し、量を比較することで、温度受容7 つのパターンの温度刺激や飼育温度の条件で飼育した
1 細胞からの mRNA 取得法の大部分は、杉らの方法に
7）ない細胞のそれぞれから採取した mRNA サンプルを単離し、比較解析を行った。具体的な温度刺激のパターンとし従った 。
温度受容に関わる細胞と、温度を受容しない細胞に遺伝ては、① 15 ℃飼育、② 20 ℃飼育、③ 25 ℃飼育、④ 25 ℃

子導入した個体を集収。成虫 4 個体を 6 〜 8 時間産卵させを 3 時間経験後 15 ℃に温度シフト、⑤ 25 ℃を 18 時間経てその後取り除き、各温度で飼育して成虫になった時点で

験後 15 ℃に温度シフトし、⑥ 15 ℃を 3 時間経験後 25 ℃

M9 緩衝液で回収した。6cm NGM 1 プレートあたり 100に温度シフト、⑦ 15 ℃を 18 時間経験後 25 ℃に温度シフト、〜 200 個体の成虫を回収した。

の 7 つの条件である。これらのmRNAをcDNAに逆転写し、ホモジナイズ。回収して洗浄した線虫を固定後、液体窒

次世代シークエンサー解析に用いる cDNA ライブラリー
を作製し、それらの cDNA ライブラリーを用いて、次世素で凍結させてからホモジナイズした。
anti-FLAGの つ いたbeads（anti-Flag M2 beads：SIGMA）

代 DNA シークエンサーにより解析した（図 3）。その結果、で 免 疫 沈 降 後、mRNA を 採 取（RNeasy Min Elute Kit：

20 ℃飼育個体の温度受容に関わる細胞と、温度を受容し

QIAGEN）。

ない細胞を比較解析し、温度受容に関わる細胞で特異的− 79 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

図 3 Single cell mRNA 解析方法
細胞特異的プロモーターを使い、mRNA のポリ A に結合するタンパク質である PAB-1（polyA binding protein）を発現させた。この PAB-1 には、FLAG タグを３つ つないだ。この系統に様々な温度刺激を与え、固定した後に、ホモジェナイズし、FLAG タグを用いて免疫沈降によって mRNA を単離した。それを基に、RNA-seq 用の cDNA ライブラリを作成し、次世代シークエンサーで解析した。

図 4 RNA-sequencing の比較解析
20℃飼育個体の温度受容に関わる細胞と、温度を受容しない細胞を比較解析し、温度受容に関わる細胞で特異的に発現変動の高い遺伝子として、約 613 個の遺伝子が単離された。

に発現変動の高い遺伝子として、約 300 個の遺伝子が単離させるタイムコース解析を行った。その結果、この条件でされた（図 4）
。他の温度刺激条件においても多数の遺伝子

温度刺激を与えた場合には、野生株は、ほぼ全ての個体がの発現変動が観察された。これらの遺伝子には、コラーゲ

死滅したのに対して、bli-6 変異体は、大多数の個体が生ン、神経ペプチド様タンパク質、インスリンなどをコード存する異常が観察された（図 5）。

する遺伝子が含まれていた。そこで、コラーゲンをコードする bli-6 変異体について低温適応を測定したところ、15

3. 2. 低温適応時の脂質構成率の変化℃で卵から成虫まで飼育後に 2 ℃で 48 時間の低温刺激を

低温適応の制御に関して、神経系と腸以外に関与する組

与えると、野生株と同様にほぼ全ての個体が生存した。ま織が分かっていなかったため、DNA マイクロアレイ解析

た、25 ℃で卵から成虫まで飼育後に 2 ℃で 48 時間の低温

でインスリン経路の下流ではたらく遺伝子を同定し発現領刺激を与えると、野生株と同様にほぼ全ての個体が死滅し域を調べた。その結果、生殖組織、特に精子で発現する遺た。これらの結果からは顕著な異常が観察されなかったた

伝子が多いことが明らかとなった。精子変異体の解析で低め、15 ℃で卵から成虫まで飼育後に、25 ℃を 3 時間経験

温適応異常が見られたことから、精子が低温適応に影響を− 80 −

皮下組織のコラーゲンが体の温度適応に与える影響の関与が示唆される。この bli-6 遺伝子は、感覚ニューロ
ンだけでなく、他の多くの細胞でも発現しているため、今回見つかった低温適応の異常がどの細胞の異常によるかについては、今後の細胞特異的な回復実験などで明らかになると考えられる。さらに、bli-6 以外のコラーゲンの遺伝
子の変異体や RNAi 処理系統において、低温適応を測定し
図 5 コラーゼン bli-6 変異体の低温適応
bli-6 変異体は、15℃で飼育後に 2℃で 48 時間の低温刺激を与えると、野生株と同様に生存した。25℃飼育後に低温刺激を与えると、野生株と同様に死滅した。15℃で飼育後に、25℃を
3 時間経験させた場合には、野生株は死滅したのに対して、bli-6
変異体は生存する異常が観察された。縦軸は生存率（%）。

たところ、生存率がコントロールである野生株や、RNAi
用の plasmid vector をもつ大腸菌株 HT115 よりも上昇した。遺伝子発現量の増減と低温適応との相関性は、現在解析中である。
今回の解析から、線虫 C. elegans において、精子が低温適応に関わることが見つかった。さらに、他の解析から、与えることが明らかとなった 8）。

最近、精子が頭部の温度受容ニューロン ASJ に影響を与線虫を含む多くの生物において、体を構成する様々な脂えることで低温適応が調節されることを見つかってきた。

肪酸の比率は低温適応に大きく影響することが知られていこれらの結果から、低温適応の組織ネットワークのメカニたため、野生株と精子特異的プロテインフォスファター

ズムの一端が見えてきたと考えられる。

ゼ PP1 を欠損する gsp-4 変異体の脂肪酸の脂質割合を測定5. 総した。野生株と gsp-4 変異体の脂肪酸組成を比較した結果、

括

18：2n-6 や 18：3n-3 などの幾つかの脂肪酸において、野生

コスメトロジーにおいて、皮膚および皮下組織の状態変株と gsp-4 変異体の間で弱いながらも優位な差が観察され化は、表皮の乾燥や柔軟性の状態やそれに伴う恒久的な変た 8）。つまり、精子の異常により、体内の膜脂質の構成が化にも繋がる重要なファクターである。その中において、変化し、低温適応に影響を与えている可能性が考えられる。

皮下組織のコラーゲンは、真皮などを構成するタンパクで4. 考あり、その状態は細胞外基質の状態を変化させ、皮膚およ察

び皮下組織に大きな影響を与える重要分子である。コラー

温度シフトにおいてのコラーゲンをコードする複数の遺ゲンは、複数のコラーゲン分子同士が、縄を作るようにお伝子の発現量が変化していた。コラーゲンをコードする

互いに巻き付き、それらが集合することで繊維状構造を作

bli-6 変異体について低温適応を測定したところ、温度適

り、皮下組織を構築している。そのため、コラーゲンの状応の異常が観察されたことから、コラーゲンの低温適応へ態を制御する分子を見つけることで、コスメトロジーにお図 6 野生型と精子変異体 gsp-4 との脂肪酸組成の比較解析
野生株と gsp-4 変異体の総脂質を比較。18：2n-6 や 18：3n-3 などにおいて、野生株と gsp-4 変異体の間で優位差。 文献 8）より引用一部改変。

− 81 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 20174） P. Murray, S. A. Hayward, G. G. Govan, A. Y. Gracey,

いて大きな波及効果がある。
皮膚は温度に過敏であり、環境温度の状態により、表皮A. R. Cossins, An explicit test of the phospholipid

および皮下組織の状態は大きく変化する。その際にはコラsaturation hypothesis of acquired cold tolerance inーゲンの構成パターンの変化が必要であることは知られてCaenorhabditis elegans. Proc Natl Acad Sci USA 1 0 4,
5489 (Mar 27, 2007).

いるが、これまでにコラーゲンと個体全体の温度の適応に関与することは知られていない。そのため、本研究から皮5） F. R. Savory, S. M. Sait, I. A. Hope, DAF-1 6 and下組織のコラーゲンと温度適応の関係を明らかにすること

Delta9 desaturase genes promote cold tolerance in

で、将来的に、例えば、化粧品含有化学物質と皮下組織と

long-lived Caenorhabditis elegans age-1 mutants. PLoS
One 6, e24550 (2011).

体感温度との関係などが明らかになり、体に良い影響を与えながら、より快適に使用できる化粧品や皮膚薬成分の検6） T. Ujisawa, A. Ohta, O. M., S. S., A. Kuhara, Cold

証などに繋がることが期待される。

tolerance assay for studying cultivation-temperature-（引用文献）

Exchange,  (2014).

dependent cold habituation in C. elegans. Protocol
1） S. Brenner, The genetics of Caenorhabditis elegans.

7） T. Sugi, Y. Ohtani, Simplified method for cell-specificgene expression analysis in Caenorhabditis elegans.

Genetics 77, 71 (1974).

Biochemical and biophysical research communications

2） N. Fielenbach, A. Antebi, C. elegans dauer formation

450, 330 (Jul 18, 2014).

and the molecular basis of plasticity. Genes Dev 2 2,

8） S. Sonoda, A. Ohta, A. Maruo, T. Ujisawa, A. Kuhara,2149 (Aug 15, 2008).
3） A. Ohta, T. Ujisawa, S. Sonoda, A. Kuhara, Light andSperm affects head sensory neuron in temperature

pheromone-sensing neurons regulates cold habituation

tolerance of Caenorhabditis elegans. Cell Reports,  through insulin signalling in Caenorhabditis elegans.

(2016).

Nature communications 5, 4412 (2014).

− 82 −

新規ナノ粒子を用いた皮内 siRNA デリバリーによる皮膚の恒常性維持
長崎大学病院薬剤部

佐々木均

To advance the therapeutic outcome of the skin disease, small interfering RNA (siRNA) is expected. However, thetherapeutic use of siRNA requires a drug-delivery system because unmodified naked siRNA is immediately degraded by
nucleases, it penetrates poorly through the plasma membrane, and it induces interferon responses after systemic injection.
For safe and effective delivery of siRNA, we developed binary complex based on dendrigraft poly-L-lysine (DGL) andternary complex which was constructed by addition of γ-polyglutamic acid (γ-PGA) to binary complex. The siRNA which
could knock down the firefly luciferase gene was used as a model siRNA. The complexes were approximately 50 - 140 nm inparticle size. The binary complex showed a cationic surface charge although an anionic surface charge was observed in the
ternary complex. The binary complex and the ternary complex showed a significant silencing effect in the mouse melanoma
B 16 -F 10 cell expressing luciferase regularly (B 16 -F 10 /Luc cells). The binary complex showed significant cytotoxicity andblood agglutination although the ternary complex decreased these toxicities. Furthermore, the ternary complexes showedsignificantly silencing effects in the tumor-metastasized mice in vivo. Thus, we developed the siRNA vector having a
potential to become a new nucleic medicine in skin disease therapy.

1. 緒

化には至っていない。この背景には、不十分な遺伝子発現

言

効率や、血中投与後の細胞毒性や血液毒性などの問題点が

皮膚は人体最大の臓器であり、絶え間ない異化同化を繰挙げられる。

り返し、恒常性を保っている。しかし、外来抗原や紫外線

我々は、核酸物質と様々な電荷を持った高分子とを静電などの刺激、表皮の細菌増殖、老化などにより、恒常性が的に自己組織化させることで、安全性が高く、高効率に破綻すると、しみ・そばかす、にきび、アレルギー疾患、遺伝子を発現できるナノ粒子の構築に成功した（特願 2012-

感染症、膠原病、悪性腫瘍など、様々な疾患が引き起こさ

501869、PCT/JP2011/054195）。このナノ粒子は表面が負れる。

電荷であり、細胞毒性を示さない 1，2）。また、サプリメン

近年、これらの疾患の理解が進み、治療標的として遺伝トや医薬品に使用されている既知の成分により構築してい子やタンパク質が同定されている。特に遺伝子量やタンパるため、生体適合性および安全性が高く、迅速な臨床応用

ク量を制御できる small interfering RNA（siRNA）への期が可能である。

待は大きい。しかし、核酸物質は生体内での安定性や持続本研究では、我々が開発した画期的ナノ粒子を用いて、性に劣り、皮膚透過性や細胞内取り込みが低い。このため、核酸物質を皮膚の標的部位へ安全かつ高効率に送達させる

核酸物質を皮膚の標的細胞内へ安全に高効率に導入できる

ことで、RNA 干渉を引き起こすことを目的とする。皮膚Drug Delivery System（DDS）技術との組み合わせが有用モデルとして、マウスメラノーマ細胞株 B16 -F10 細胞をである。現在、核酸医薬の DDS を目的とした微粒子、高用い、遺伝子発現抑制を評価するために、ルシフェラーゼ

分子および多機能性キャリアなどのベクター開発が活発にを恒常発現させた細胞株 B16 -F10/Luc を作製した。核酸行われ、世界的な競争が展開されている。国内外において、物質のモデルとして、核酸物質の DDS 研究で汎用される導入効率の高いウイルスベクターを用いた研究が主流に行

ルシフェラーゼを抑制する siRNA を用い、ナノ粒子を作われてきたが、安全性や標的指向性の欠如が問題となって製した。作製したナノ粒子の細胞取り込み、遺伝子発現

おり、臨床応用には至っていない。導入効率の低い非ウイ抑制および細胞毒性を B16 - F10/Luc 細胞を用いて評価しルスベクターにおいては、カチオン性成分が広く用いられた。さらに、メラノーマ肺転移モデルマウスを作製し、inてきたが、永年にわたる研究にもかかわらず、未だに実用

vivo における有用性についても評価した。

2. 方
Maintenance of skin homeostasis byintradermal siRNA delivery using novel  
nano particles
Hitoshi Sasaki
Depa rtment of Hospita l Pha rmacy,
Nagasaki University Hospital法

2. 1. ナノ粒子の作製
siRNA と し て、 ホ タ ル ル シ フ ェ ラ ー ゼ を 抑 制 す る
siRNA（センス鎖：5’ -CUUACGCUGAGUACUUCGAdTdT-3’、
アンチセンス鎖：5’ -UCGAAGUACUCAGCGUAAGdTdT-3’）
および scramble siRNA（センス鎖：5’ -CUUACGCUGUCAU− 83 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

GAUCGAdTdT-3’、アンチセンス鎖：5’ -UCGAUCAUGACAGC

さ れ た。 一 方、siRNA -DGL 複 合 体 に お い て は、siRNA-GUAAGdTdT-3’）を用いた。siRNA と第 5 世代の dendrigraft

DGL2 複合体でわずかな siRNA の流出が観察されたが、そpoly-L-lysine（DGL）
を様々な電荷比で組み合わせ、siRNAの他の siRNA-DGL 複合体ではバンドは確認されなかっ- DGL 複合体を調製した。さらに、siRNA-DGL 複合体にた（図 1）。siRNA-DGL 複合体の siRNA 封入率を評価した。

γ-PGA を様々な電荷比で添加し、siRNA-DGL- γ-PGA 複

siRNA - DGL2 複合体の封入率は 89.2% であったが、電荷合体を構築した。ポジティブコントロールとして siRNA-

比が増加するにつれて封入率は上昇し、siRNA - DGL4, 6,

invivofectamine 複合体も作製した。

8, 10, 12 複合体においてはほぼ 100%の封入率であった（図2）。さらに、siRNA-DGL6 複合体の形状を観察した結果、

2. 2. ナノ粒子の製剤学的評価

ゆがんだ球状であることが明らかとなった（図 3）。

作製したナノ粒子の粒子径および表面電荷を Zetasizer
価するために、アガロース電気泳動を行った。泳動後のゲ

3. 2. in vitro における siRNA-DGL複合体の遺伝
子抑制効果

ルは、Gel Doc EZ System を用いて観察した。また、透過siRNA- DGL 複合体の遺伝子抑制効果を B16-F10/Luc 細型電子顕微鏡 JEM-1230（日本電子株式会社）を用いてナ胞を用いて評価した。ルシフェラーゼを抑制する siRNA

Nano ZS（Malvern 社）で測定した。複合体の安定性を評

ノ粒子の形状を観察した。

表 1 siRNA-DGL 複合体の粒子径と表面電荷

2. 3. in vitro における遺伝子発現抑制の評価
細胞はルシフェラーゼを恒常発現しているマウスメラ
ノーマ細胞株 B16 - F10/Luc 細胞を用いた。B16-F10/Luc
細胞を 1 × 104 個播種し、24 時間前培養した。その後、
siRNA の濃度が 1 µg/mL となるように OPTIMEMI 培地で希釈した各ナノ粒子を細胞に添加し、2 時間インキュベートした。インキュベート後の細胞を、RPMI1640 でさらに 22 時間培養した。培養後に細胞を lysis buffer で溶解し、細胞中のルシフェラーゼ活性を測定した。

2. 4. in vitro における細胞毒性
B16-F10/Luc 細胞を 3 × 103 個播種し、24 時間前培養し た。 そ の 後、siRNA の 濃 度 が 1 µg/mL と な る よ う に
OPTIMEMI 培地で希釈した各ナノ粒子を細胞に添加し、2 時間インキュベートした。インキュベート後の細胞をRPMI1640 でさらに 22 時間培養し、WST-1 assay により細胞毒性を評価した。

図 1 siRNA - DGL 複合体の電気泳動

2. 5. メラノーマ肺転移に対する遺伝子抑制効果
C57BL/6N マウスに B16-F10/Luc 細胞を 1 × 105 個静脈内投与し、メラノーマ肺転移マウスを作製した。細胞投与後 14 日目に、siRNA-DGL6-γ-PGA10 複合体（siRNA40µg）を尾静脈内投与した。複合体投与 24 時間後（細胞投与後 15 日目）に肺を摘出し、ルシフェラーゼ活性を測定した。

3. 結

果

3. 1. siRNA-DGL複合体の製剤学的評価
siRNA- DGL 複合体の粒子径と表面電荷を測定した。
siRNA-DGL 複 合 体 は 51-90 nm の 粒 子 径、24 -44 mV の表面電荷を示した（表 1）。複合体の安定性を評価するた
めに電気泳動を行った。Naked siRNA ではバンドが確認− 84 −

図 2 siRNA - DGL 複合体の封入率

新規ナノ粒子を用いた皮内 siRNA デリバリーによる皮膚の恒常性維持

図 3 siRNA - DGL 複合体の TEM image

図 4 siRNA - DGL 複合体の遺伝子抑制効果を内包した siRNA-DGL6, 8, 10, 12 複合体は細胞中のルシフェラーゼ活性を有意に抑制した。一方、スクランブル
siRNA を内包した siRNA-DGL 複合体では遺伝子抑制効果を示さなかった（図 4）。

3. 3. in vitro における siRNA-DGL複合体の細胞
毒性
siRNA- DGL 複 合 体 を B16-F10/Luc 細 胞 に 添 加 し、 細胞生存率を WST- 1 assay により測定した。電荷比が 2 お
よび 4 の siRNA - DGL 複合体は細胞毒性を示さなかったが、電荷比が 6 以上の siRNA-DGL6，8，10，12 複合体では有意な細胞毒性が認められた（図 5）。

3. 4. siRNA-DGL6-γ-PGA 複合体の製剤学的評価
siRNA-DGL6 複合体に様々な電荷比で γ -PGA を添加し、siRNA- DGL6 - γ - PGA 複合体を調製し、粒子径と表面電荷を測定した（表 2）。その結果、siRNA-DGL6-γ -PGA6 では

図 5 siRNA - DGL 複合体の細胞毒性
表 2 siRNA-DGL-γ- PGA 複合体の粒子径と表面電荷凝集がみられ粒子径の測定ができなかったが、その他のsiRNA-DGL6 -γ -PGA 複合体は 64-140 nm の粒子径を示した。また、γ - PGA の添加量に比例して、表面電荷は低下し、電荷比が 6 以上で負電荷となった。複合体の安定性を評価するために電気泳動を行った。siRNA-DGL6 - γ -PGA12 複合体でわずかな siRNA の流出が観察されたが、その他のsiRNA-DGL6 -γ -PGA 複合体ではバンドは確認されなかった（図 6）。次に siRNA-DGL6-γ-PGA 複合体の siRNA 封入率を評価した。siRNA-DGL6-γ-PGA12 複合体の封入率は76.8% とやや低かったが、その他の siRNA-DGL6 -γ -PGA
複合体は 85% 以上の高い封入率を示した（図 7）。また、
siRNA-DGL6 -γ - PGA10 複合体の形状を観察した結果、約100 nm の球状のナノ粒子が観察された（図 8）。

3. 5. in vitro における siRNA-DGL6-γ-PGA 複合体の遺伝子抑制効果
siRNA-DGL6 - γ -PGA 複 合 体 の 遺 伝 子 抑 制 効 果 を− 85 −

図 6 siRNA-DGL-γ- PGA 複合体の電気泳動

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

図 7 siRNA - DGL-γ- PGA 複合体の封入率
図 9 siRNA - DGL-γ- PGA 複合体の遺伝子抑制効果

図 8 siRNA - DGL-γ- PGA 複合体の TEM image

B16-F10/Luc 細胞を用いて評価した。ルシフェラーゼを抑 制 す る siRNA を 内 包 し た siRNA-DGL6-γ-PGA 複 合 体の遺伝子抑制効果は siRNA-DGL6 複合体と同程度であり、B16-F10/Luc 細胞中のルシフェラーゼ活性を有意に抑制した（図 9）。
図 10 siRNA - DGL-γ- PGA 複合体の細胞毒性

3. 6. in vitro における siRNA-DGL6-γ-PGA 複合体の細胞毒性
siRNA- DGL6 - γ -PGA 複合体を B16-F10/Luc 細胞に添加

ルマウスに尾静脈内投与し、in vivo における遺伝子抑制

し、細胞生存率を WST-1 assay により測定した。siRNA-

効果を評価した。コントロールとして 5% 糖液を投与し、DGL6- γ -PGA4 複 合 体 と siRNA-DGL6-γ -PGA12 複 合 体 で

ポ ジ テ ィ ブ コ ン ト ロ ー ル と し て siRNA-invivofectamine

は siRNA - DGL6 複合体と同様にコントロールと比較して有意

複 合 体 を 投 与 し た。Naked siRNA お よ び ス ク ラ ン ブ ル

な細胞毒性を示した。一方、siRNA-DGL6-γ -PGA6，8，10 複

siRNA を内包した siRNA-DGL6 - γ -PGA10 複合体では、遺合体においては、高い細胞生存率が認められた（図 10）。

伝子抑制効果を示さなかった。一方、ルシフェラーゼを抑制する siRNA を内包した siRNA-DGL6 - γ - PGA10 複合体は

3. 7. 赤血球凝集試験

siRNA-invivofectamine 複合体に匹敵する高い遺伝子抑制

siRNA-DGL6 複合体と siRNA-DGL6-γ -PGA10 複合体の効果を示した（図 12）。

血液毒性を赤血球凝集試験により評価した。siRNA-DGL6

4. 考

複合体は凝集を示したが、siRNA-DGL6- γ-PGA10 複合体
は凝集を示さなかった（図 11）。

察

デンドリマーは、中心から規則的に分枝した構造を持つ
樹状高分子であり、分岐度が高い、対称性が良い、分子構

3. 8. メラノーマ肺転移に対する siRNA- DGL6 -γ-PGA10 複合体の遺伝子抑制効果

造と分子量の分布を持たないといったユニークな特徴を有siRNA-DGL6 -γ - PGA10 複合体をメラノーマ肺転移モデる 3-5）。今回使用した DGL はアミノ酸であるリジンだけでしており、遺伝子ベクターとしての有用性が報告されてい− 86 −

新規ナノ粒子を用いた皮内 siRNA デリバリーによる皮膚の恒常性維持

図 11 siRNA-DGL-γ- PGA 複合体の赤血球凝集内において負電荷を帯びている血清タンパクや赤血球と結合し、凝集することも知られている。したがって、遺伝子ベクターを臨床応用するためには、このようなカチオン性
由来の毒性を排除することが重要である。
カチオン性複合体の細胞毒性を克服するための有用な手
段の 1 つとして、カチオン性化合物にアニオン性化合物を添加することが挙げられる。アニオン性化合物はカチオン性化合物と比較して、細胞膜の破壊が少なく、ミトコンド
リアやリソソームへの損傷が弱いことが報告されている 7）。
我々は以前、様々なアニオン性化合物をスクリーニングした結果、γ-PGA がカチオン性化合物の毒性を軽減できる
図 12 メラノーマ肺移転に対する siRNA-DGL-γ-PGA 複合体の遺伝子抑制効果

ことを見出した 1，2）。γ- PGA は非免疫原性で炎症反応を引き起こさない生体適合性に優れた生体分解型の高分子である 8）。そこで、高い遺伝子抑制効果と比較的低い細胞毒性構築されたデンドリマー構造を有する新規カチオン性高分を示した siRNA-DGL6 複合体に様々な量の γ- PGA を添加子であるため、生体適合性に優れており、臨床使用も期待

し、siRNA-DGL6 -γ - PGA 複合体の調製を試みた。
γ- PGA の 濃 度 依 存 的 に siRNA-DGL6 -γ-PGA 複 合 体 のできる。そこで本研究では DGL をコアとした siRNA ベク

表面電荷は低下し、siRNA に対する γ -PGA の電荷比が 6ターの開発を行った。
ま ず、siRNA-DGL 複 合 体 の 製 剤 学 的 評 価 を 行 っ た。

以上で siRNA-DGL6 - γ - PGA 複合体の表面電荷はアニオン

DGL の直径は 16 nm であり、siRNA と様々な電荷比で自性を示した。一方、siRNA-DGL6 - γ-PGA 複合体の粒子径

己組織化することで粒子径 100 nm 以下のナノ粒子を形成は siRNA-DGL 複合体とほぼ同じであった。また、siRNA-した。また、粒子からの siRNA の流出がほとんどなかっ

DGL6 - γ-PGA 複合体からの siRNA の流出はほとんどなく、たことから、siRNA がナノ粒子に内包されていることがsiRNA が安定に内包されていることが示唆された。し示唆された。さらに、siRNA-DGL6 複合体の TEM におい

かしながら、siRNA-DGL6 - γ -PGA12 複合体においては、ても 100 nm 程度のナノ粒子であることが確認できた。

siRNA の放出が確認された。硫酸ヘパリンなどの一部の

DGL の電荷比が 6 以上の複合体で B16-F10/Luc のルシ

アニオン性高分子はカチオン性複合体の静電的結合を崩壊

フェラーゼ活性を抑制することができた。カチオン性複合し、siRNA の安定性を損なうことが知られている。その体はアニオン性に帯電している細胞表面との相互作用によため、siRNA-DGL6 -γ-PGA12 複合体では、大量の γ-PGA

り細胞取り込みが促進される。また、DGL は高い pH 緩衝と DGL との静電的相互作用により siRNA が部分的に放出2）能を有することが報告されている 。そのため、エンドソされたと考えられる。

ーム脱出が促進されたことも高い遺伝子抑制効果を示した

一般に、アニオン性複合体は細胞表面との相互作用が減一因であると考えられる。一方で、カチオン性化合物はこ

少することによって、細胞取り込みが低下する。しかしの細胞表面との直接的な相互作用、あるいはカチオン性化ながら、siRNA-DGL6- γ -PGA 複合体は表面電荷がアニオ合物の存在下で形成される活性酸素種（ROS）
によって、間ン性にも関わらず、カチオン性の siRNA-DGL6 複合体に接的に細胞傷害を引き起こすことが報告されている 6）。実匹敵する高い遺伝子抑制効果を示した。これらの結果は

際、siRNA に対する DGL の電荷比が増加するにつれて細γ-PGA 被膜型複合体が γ -PGA に特異的な受容体を介して胞毒性も大きくなった。さらに、カチオン性化合物は生体エネルギー依存的に取り込まれたという以前の報告に一致− 87 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

するものであった。また、siRNA-DGL6-γ -PGA 複合体は

（引用文献）

siRNA-DGL6 複合体で認められた細胞毒性および血液毒性

1） Kurosaki T, Kitahara T, Fumoto S, Nishida K,を軽減することができた。したがって、生体内へ投与後にNakamura J, Niidome T, Kodama Y,   Nakagawa

血栓や塞栓を生じる可能性がなく、in vivo においても安H, To H, Sasaki H, : Ternary complexes of pDNA,
polyethylenimine, and gamma-polyglutamic acid for

全に投与できる可能性が示された。

gene delivery systems, Biomaterials., 3 0, 2 8 4 6-2 8 5 3,

そこで、siRNA-DGL6- γ-PGA 複合体の in vivo における2009.

有用性を、メラノーマ肺転移モデルマウスを用いて評価した。その結果、siRNA-DGL6-γ-PGA10 複合体は siRNA-2） Kodama Y, Nakamura T, Kurosaki T, Egashira K,

invivofectamine 複 合 体 に 匹 敵 す る 遺 伝 子 抑 制 効 果 を 示

Mine T, Nakagawa H, Muro T, Kitahara T, Higuchi

した。一方で、スクランブル siRNA を内包した siRNA-

N, Sasaki H, : Biodegradable nanoparticles composed

DGL6- γ - PGA10 複合体では遺伝子抑制効果を示さなかっof dendrigraft poly-L-lysine for gene delivery, Eur J
Pharm Biopharm., 87, 472-479, 2014.

たことから、siRNA-DGL6-γ-PGA10 複合体の効果は毒性によるものや off-target によるものではなく、複合体によ3） Petit MW, Griffiths P, Ferruti P, Richardson SC, :り効率的に siRNA をメラノーマ細胞へ導入できた結果でPoly(amidoamine) polymers: soluable linear amphiphilic

あることが示唆された。

drug-delivery systems for genes, proteins, and5. 総

oligonucleotides, Ther Deliv., 2, 907-917, 2011.

括4） Wang M, Hu H, Sun Y, Qiu L, Zhang J, Guan G, Zhao
X, Qiao M, Cheng L, Cheng L, Chen D, : A pH-sensitive

本研究では、siRNA と DGL および γ -PGA を自己組織化させることで siRNA-DGL- γ-PGA 複合体を作製することにgene delivery system based on folic acid-PEG-chitosan成功した。siRNA-DGL- γ-PGA 複合体は皮膚がんであるメ- PAMAM-plasmid DNA complexes for cancer cell

ラノーマ細胞株において、細胞毒性を示すことなく、高い

targeting, Biomaterials., 34, 10120-10132, 2013.

遺伝子抑制効果を示した。さらに、メラノーマ肺転移モデ

5） Zhou J, Wu J, Hafdi N, Behr JP, Erbacher P, Peng L,

ルマウスに siRNA-DGL- γ-PGA 複合体を静脈内投与した結: PAMAM dendrimers for efficient siRNA delivery and

果、in vivo においても遺伝子抑制効果を示した。したがpotent gene silencing, Chem Commun., 22, 2362-2364,って、siRNA-DGL -γ- PGA 複合体は皮膚に対して安全かつ2006.

高効率に siRNA を送達させることで、RNA 干渉を制御で

6） H u i Y i X u e , S h i m e n g L i u , H o L u n W o n g , :Nanotoxicity: a key obstacle to clinical translation of

きる可能性が示唆された。

siRNA-based nanomedicine, Nanomedicine (Lond)., 9,
謝辞

295–312, 2014.

本研究を遂行するに当たり、公益財団法人コスメトロジ

7） Fröhlich E, : The role of surface charge in cellularー研究振興財団よりご援助いただきましたことを深く感謝

uptake and cytotoxicity of medical nanoparticles, Int J

申し上げます。

Nanomedicine., 7, 5577-5591, 2012.
8） Ye H, Jin L, Hu R, Yi Z, Li J, Wu Y, Xi X, Wu Z,:
Poly(gamma, L-glutamic acid)-cisplatin conjugate
effectively inhibits human brast tumor xenografted innude mice, Biomaterials., 27, 5958-5965, 2006.

− 88 −

創傷をより綺麗に修復させる皮膚再生促進薬の開発
東海大学医学部基盤診療学系再生医療科学

住吉秀明

It is generally known that a serious dermal injury causes scar formation. The cleaner dermal restoration, that is scarless regeneration, is an important theme in the next stage of regenerative medicine for keeping the quality of life of patients.
Our previous study indicated that the scar tissue made a different composition of collagen fiber from that in normal dermal
tissue. Artificial dermis has been utilized clinically for accelerating wound healing in the field of skin regenerative medicine.
However, because of the inefficient re-epithelialization, conventional artificial dermis requires the subsequent epidermal
auto-transplantation.
In the present study, we have developed a novel artificial dermis containing “jellyfish” collagen that accelerates skinregeneration through both re-epithelialization and granulation tissue formation. Since the jellyfish (Aurelia aurita) collagenis water soluble, the artificial dermis was prepared as a mixture of porcine type I collagen and jellyfish collagen. The
effect was evaluated in vivo using the skin full-thickness wound mouse model. The results indicated that, the collagen filmwith jellyfish promoted epidermal cell migration. On the other hand, collagen sponge with jellyfish enhanced fibroblast
infiltration into the granulation tissue. Subsequently we determined the most effective content ratio of the porcine andjellyfish collagens, and further examined the combinatorial effect of collagen film and sponge materials. Additionally wetried the freeze and drying procedure under t-butyl alcohol solvent, to mimic native dermal collagen fiber structure.
We developing new artificial dermis could also call “artificial skin” because more physiological infiltration both ofdonor keratinocytes and fibroblasts like native wound restoration. Experiments are in progress to demonstrate that acceleratecleaner dermal healing without scar formation when used with additional time span. It provides a novel devise that can beused in the variety range of skin diseases instead of the conventional manners.

1. 緒に二次的な線維化として生じたコラーゲン線維がどのように言走行しており、正常真皮と異なっているかを観察した。観

これまで重篤な創傷の後に「傷跡」が残ってしまうことは、

察結果を基に、一般的な人工真皮に用いられているブタ I

止むを得ないこととされてきた。傷跡をいかに自然に近い型コラーゲンを基本成分とし、自然な真皮の線維構造をで状態で修復できるかというテーマは、美容面と精神面におきるだけ模倣した細胞が進入し易い構造物の作製を試みた。

ける受傷者の QOL を維持する上で重要な要素であるにも研究目的のもう一つは、早く綺麗に傷を治癒させるため関わらず、未だ再生医療の主題にはなっていない。しかしの付加的な成分の探索である。当初は V 型コラーゲン α3今後の皮膚再生医療は損傷を回復させるだけでなく、より

鎖等、創傷治癒過程で発現する微量 ECM 成分に着目した

自然に綺麗に再生させることを実現させる段階に進むべきが、微量成分を充分量確保するのが困難であった。その進であると考える。

化の過程で V 型コラーゲンと似ているといわれるミズク

我々は本研究の目標として、傷跡と健常皮膚を構成する

ラゲ（Aurelia aurita）由来のコラーゲン 4）を配合した結果、細胞外基質（Extracellular matrix : ECM）の微細構造の相

従来の人工真皮にはない、再上皮化と肉芽形成両方を促進

違点の解析と、健常皮膚構造を模倣し更に再生を促進する

するはたらきが見出された。クラゲコラーゲンは安価で大コラーゲンをベースとした新しい人工皮膚の開発を行なった。

量に確保できる新しい資源であり、細胞の接着性の評価 5）、マウスを用いた皮膚の創傷治癒における我々の先行研究

免疫の賦活化 6，7）、軟骨組織の足場グラフトとしての利用

では、創傷時に新生されるコラーゲンは組成や微細線維例 8）などがこれまで報告されているが、人工皮膚としての構造が正常真皮組織と異なることを報告している

1 − 3）。再応用例はない。我々はこの表皮細胞と肉芽形成細胞に対す

生肉芽組織は瘢痕となり傷跡を形成する。本研究において、る遊走促進効果を最大限発揮できるように最適化した人

更に長期（9 ヶ月）にわたって傷跡の微細構造を解析し、特工真皮を作製し、さらに創傷モデルマウスへの移植実験を行ない、in-vivo における生着と皮膚再生の評価を行なった。

Development of regenerating compounds
for cleaner dermal restoration
Hideaki Sumiyoshi
Regenerative Medicine, Division Basic
Clinical Science, Tokai University Schoolof Medicine

2. 方

法

2. 1. マウスの創傷モデルの作製と瘢痕組織の観察・
正常真皮との比較− 89 −

マウスの創傷モデルは、6 mm の生検用トレパンを用いコスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017て背部両側に表皮、真皮、皮下組織全層を欠損させるもの

細胞と組織の観察をすると同時に、宿主マウスの表皮角化を採用した。受傷後 6 日目と 9 ヶ月後の傷跡の組織の外観

細胞の創傷辺縁部から人工真皮上への伸長距離と、肉芽形を撮影した後、マウスを安楽死させ、創面を横断する検体

成細胞の人工真皮内への遊走数を計測した。全ての移植マを採材し、パラフィン標本と電子顕微鏡用樹脂包埋標本を

ウスの表皮角化細胞の伸長距離、肉芽形成細胞の遊走数を作製した。標本は HE 染色、透過型電子顕微鏡による観察

集計し、統計処理を行なった。有意差の検定は t 検定を用を行ない、細胞と組織形態、コラーゲン線維束の走行、密いた。

度、直径の計測を行ない、正常真皮と瘢痕組織の組織構築
における相違点についての比較を行なった。本研究の実験で用いたマウスは、東海大学内に設置される「東海大学動2. 4. フィルム･スポンジ ハイブリッド型、J.C. 混合人工皮膚の開発物実験委員会」の審査・承認を得た上で実施された。

フィルム材とスポンジ材の特性を併せ持つハイブリッド
型人工真皮の成型を行なった。最終的には t -BA 凍結乾燥

2. 2. コラーゲンを基礎材料とした人工真皮用フィル
ム材･スポンジ材の作製法を基本とし、酸性可溶化したコラーゲン溶液を液体のま

ブタ I 型コラーゲンはブタ胎児皮膚組織より既成の方法

換し凍結乾燥する方法を開発し、フィルム構造を表面にも9）を用い、アテロコラーゲンとして抽出 ･ 精製を行なった 。

つ二層性の人工真皮が作製された。このハイブリッド型人ミズクラゲコラーゲンは株式会社海月研究所より購入した。

工真皮を上記と同じく全層欠損モデルマウスへの移植を行

2. 2. 1. コラーゲンフィルムの作製

ない、短期の創傷治癒に対する寄与について従来の人工真コラーゲンフィルムは 500 µg/ml のコラーゲン 5mM 酢

ま薄くコラーゲンゲル上にコーティングした後、t -BA 置

皮と比較した。

酸可溶化液を 1 X PBS による中性化を行ない、線維形成

3. 結させた後ラップフィルム上に薄く進展させ風乾することで作製した。ミズクラゲ混合コラーゲンフィルムはミズクラ
ゲコラーゲン（以下 J.C.）がブタ I 型コラーゲン（以下 P.C.）果

3. 1. 正常真皮組織と受傷後の瘢痕組織（傷跡）のコラ
ーゲン超微細組織構築の比較に対し含まれる量が各 0、20、40、45、50、55、60、65、

皮膚を全層欠損する深い創傷から治癒した瘢痕組織の特80、100 各 % で混合したものを作製し、総コラーゲン量

徴を、電子顕微鏡を用いて超微細構造レベルで解析した。

が 500 µg/ml となるようにした。風乾後 85 ％エタノール

受傷後 6 日目に形成されるコラーゲン線維は細くて方向性で洗浄し脱塩を行なった。作製したコラーゲンフィルムはが一定でないコラーゲン細線維 ①（破線内）と、中間径の走査電子顕微鏡によって超微細構造を確認した。

コラーゲン線維 ② が共に存在し（図 1）、細線維は直径 15.1

2. 2. 2. コラーゲンスポンジの作製± 1.1 nm（n 100）、中間径線維は 40.6 ± 5.6 nm（n 100）でコラーゲンスポンジは 1 mg/ml コラーゲン 5 mM 酢酸可あった。9 ヶ月後の瘢痕組織の外見は正常部位と色調、質溶化液を 1 X PBS によって中性化し 37 ℃に加温すること感も異なり明瞭に見分けることが可能であった（図 1）。コ

で、コラーゲンゲルを作製し、そのまま凍結乾燥させるもラーゲン線維径は直径 39.2 ± 4.6nm（n 100）であり、受傷のと、エタノールから t- ブチルアルコール（t-BA）に溶媒

後 6 日目の中間径線維と同じであった。これに対し正常真転換して凍結乾燥させたものを作製した。ミズクラゲ混合

皮のコラーゲン線維は直径 94.7 ± 7.1nm（n 100）と明らか

コラーゲンスポンジは J.C. が P.C. に対し、各 0、20、50 各に太い上に、綺麗な流紋状の走行を持つこと、線維の間隙% で混合したものを作製し、総コラーゲン量が 1 mg/ml

が密であり線維の表面も滑らかである等、構造上の明らかとなるようにした。コラーゲンスポンジは走査電子顕微鏡

な違いがみられた（図 1）。本実験から、創傷治癒後の再生にて超微細構造を確認した。

組織はコラーゲン分子構造のレベルで異なる組織として構築されることが確認された。

2. 3. 創傷モデルマウスへのコラーゲン生体デバイス
2. 1. の全層欠損モデルに上記の人工真皮候補である、

3. 2. ブタ/ミズクラゲコラーゲンを用いた新しい人工真皮の開発

ミズクラゲコラーゲンを含有するフィルム材とスポンジ材

広く臨床応用されている、ブタの I 型コラーゲン（P.C.）

をそれぞれ移植し、短期の創傷治癒に対する寄与を観察しを基本素材とし、新素材であるミズクラゲコラーゲン

た。人工真皮デバイスを創部に密着させ、ドレッシング（J.C.）を組み込んだ新しい人工真皮の試作例を示す。SDS -テープで被覆し創部の保護と保湿を行なった。移植後 6 日

PAGE によるタンパク質電気泳動像から J.C. は P.C. に匹敵

後にマウスを安楽死させ、人工真皮デバイスと創傷中心部する分子量を持つことが示されている（図 2A）。J.C. は水を横断する面が表面に出るように HE 染色標本を作製した。

溶性であり、また中性下で加温してもゲル化しない性質が移植− 90 −

創傷をより綺麗に修復させる皮膚再生促進薬の開発

図 1 正常真皮組織と瘢痕組織のコラーゲン超微細組織構築の比較

図 2 ブタ・ミズクラゲ配合コラーゲンを素材とする人工皮膚デバイスあるため、基本的に P.C. と混合することで新しい人工真皮

コラーゲンスポンジの作製の成型が行なわれた。走査型電子顕微鏡（以下 SEM）のよ

コラーゲンをゲル化させた後、凍結乾燥することでコラり確認された超微細構造を示す。

ーゲンスポンジを作製した。この方法では J.C. 濃度は 50%

コラーゲンフィルムの作製まで作製できた。ゲル化コラーゲンをそのまま凍結乾燥

フィルム形状なら、J.C. が 100% でも作製が可能であった。

すると ､ 一般的なハニカム構造の発泡スポンジとなり、そ図 2B 上段に SEM による超微細構造を示す。P.C. のみからこに線維構造は認められなかった。J.C. の混合による形状

作製したコラーゲンフィルムは直径 100 nm に及ぶ線維構的な差も認められなかった（図 2B 中段）。我々は SEM で造を有していた。J.C. 濃度を高めるほどコラーゲンの線維

コラーゲン分子を観察する際に用いられる t - ブチルアルコ

量は少なくなり、50 % より高濃度になるとほぼ無構造にール（以下 t - BA）溶媒置換と凍結乾燥によるスポンジ成型なった。

を試みた。その結果、天然のコラーゲンと同等の直径約− 91 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

100 nm の緻密な線維構造を再現したコラーゲンスポンジ

ものであり、人工真皮内部への細胞の遊走 ･ 生着を調べを作製することができた（2B 下段）。このサンプルで J.C. をたものである。J.C. を混合しないもの（左端）に比べ、20%、

含むスポンジは線維量が減少するものの線維径には影響を

50% J.C. 混合スポンジの方が明らかに多くの細胞が遊走し与えず、J.C. は P.C. の線維束形成過程に干渉しないと考えていることが示されている。人工真皮内部への細胞の遊走られた。また粗になった P.C. 線維の隙間に J.C. を混合したは図 3B に示されるとおり、フィルム材にはみられていな

ときのみ無構造の固形物が沈着しているのが観察された。

い。このことより、ミズクラゲコラーゲン（J.C.）の成分はフィルム形状では表皮角化細胞による再上皮化を、スポン

3. 3. 創傷モデルマウスへのコラーゲン埋め込みデバイス（人工真皮）の移植

ジ形状では肉芽形成を促進し、創傷治癒を著しく促進する

皮膚全層欠損による創傷モデルマウスに実験 3. 2. で作

図 4 は図 3B、3C の全実験データを数値化しグラフに示製したコラーゲンフィルムとスポンジを人工真皮として移ことが示された。
したものである。
図 4A は表皮角化細胞の伸長距離を表す。J.C. が 40 ％以植する手術を行なった。移植手術行程を図 3A に示す。
①フィルム材移植例、②スポンジ材移植例、③シールと上のフィルム材において有意な伸長促進効果が示された。

縫合による創部の保護、④⑤ 移植後 6 日経過時の外観でまた 45 ％以上で一定化し、60 ％以上になると人工皮膚がある。④は 100% P.C. フィルム材で上皮化が完全ではなく、融解し、データが得られなかった。図 4B は単位面積あた滲出液のため光沢がある。⑤は 50% J.C. 混合フィルム材、りの、スポンジ内への細胞遊走数を示したもので、E は辺既に上皮が被覆している。

縁部、C は中央部である。J.C. を 20 ％、50 ％含むスポンジ

図 3B は 6 日経過後の人工真皮組織サンプルにおいて HE
染色像を行ない、表皮角化細胞の人工真皮上での伸長距離で有意に多くの細胞が遊走しており、J.C. が肉芽を形成す
る細胞を人工皮膚内に誘引する効果が示された。

を測定した図であり、数字の単位は µm である。上段はフィルム材、下段はスポンジ材の代表例を示す。表皮角化細胞の伸長はおよそ 500 µm 前後であったが、J.C. を 50 % 含

3. 4. フィルム･スポンジ ハイブリッド型、J.C. 混合人
工真皮の開発むフィルム材では伸長距離が突出して伸びていた。同様の

これまでの実験結果を受け、フィルムとスポンジの特性

効果は下段に示しているスポンジ材にはみられなかった。

を併せ持ったハイブリッド型人工真皮の成型を試みた。図

図 3C は同じスポンジ材のサンプルを高倍率で観察した

5A に示すように最薄 5 µm のフィルムを表面に持つ二層性

図 3 創傷モデルマウスへの新型人工皮膚デバイスの移植と 6 日後組織の解析− 92 −

創傷をより綺麗に修復させる皮膚再生促進薬の開発

図 4 人工皮膚への表皮角化細胞の伸長と肉芽組織細胞の遊走生着効果

図 5 フィルム／スポンジハイブリッド型人工皮膚 J.C. 複合・非複合タイプの作製の人工真皮が作製された。45% J.C. 混合（左側）と、P.C. の

4. 考

みで作製したもの
（右側）
を示す。

察

図 5B はこれらのハイブリッド型人工真皮を創傷モデル

皮膚は人間の最外部のバリアであり、環境からの様々なマウスに移植し、6 日後の組織回復を観察したものである。

刺激 ･ 衝撃に曝され、しばしば損傷するが直ぐ修復される

ねらい通り 45% J.C. を混合したもの（左端）はフィルム表面

ことから皮膚の再生能力はかなり高いという認識がある。

において、表皮角化細胞の伸長（黒矢頭）、人工真皮内部（星しかしながら、実験結果 3. 1. に示されるように、治癒後印）への肉芽細胞の遊走（矢印）両方に優れており、P.C. のの瘢痕（傷跡）の組織は構築が全く異なり線維芽細胞の形態みで作製したもの（5B 中央）や市販人工真皮（同右端）と比やコラーゲン線維の直径や走行も異なることから、創傷

べ、ミズクラゲコラーゲンの持つ治癒促進効果を最大限に治癒は真皮線維芽細胞とは性質の異なる線維芽細胞により引き出せる素材に仕上がった。

なる異形の再生といえる。さらに瘢痕は後に拘縮し、引き攣れが起こってくる。つまり欠損による大規模な創傷では− 93 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

真皮は再生しないのが現実である。真皮のコラーゲンは直5. 総

径 100 nm 程の太くて密な線維が、規則的で綺麗な流紋を括形成するがこれは他の組織にない独特の構造である。創傷

創傷部分の治癒 ･ 再生においては表皮角化細胞よる再上治癒時に動員される線維芽細胞はこの構造を造れないため、皮化と線維芽細胞による肉芽形成が同時に速やかに進行す

創傷を綺麗に修復させるために真皮の構造を模したコラーることが、予後の改善に繋がる重要な要素となる 10）。広

ゲン線維の足場を人工的に作製し、迅速に足場へ細胞を生範囲の欠損を従う重度外傷の治療法として人工真皮が用い着させる構造体を考えた。一般的な人工真皮にも用いられられてきたが 11，12）、従来の人工真皮は人工物の足場上にている、精製ブタ I 型コラーゲンを試験管の中で自己会合

対する表皮角化細胞の生着が悪く、再上皮化が起こらない

させると、直径 100 nm の真皮に近いコラーゲン線維を構ため、後日に表皮の再移植が必要となる点に課題があった。

築できるが、凍結乾燥を行なうと線維構造は失われハニカ

表皮の細胞が生着するには、コラーゲンスポンジ内に自身

ム構造となる。私達は走査電子顕微鏡のサンプル調整で用の細胞が侵入し自己組織化するのを待たなければならず、

いる t- ブチルアルコール（t-BA）による凍結乾燥法を用いこの間体液の漏出と感染を防がねばならない。我々は今回、て線維束構造を保持したコラーゲンスポンジを独自に開発

人工真皮への直接的な自己表皮による再上皮化と、肉芽組した。コラーゲンは加工性に優れており、風乾によりフィ織による自己組織化が同時に起こることだけでなく、肉芽

ルム状、凍結乾燥によりスポンジ状の成形を行える。傷を由来の線維芽細胞は真皮を模したコラーゲン線維構造の型

綺麗に修復しうる構造材の理想的な形状の検討にこれを応枠に鋤き込まれ、拘縮の起こらない真皮様組織を再現する用した。

というこれまでにない要素を持った「人工皮膚」を目指すも

本実験のもう一つねらいである創傷を早く治すための皮のを開発した。この人工皮膚は乾燥体として常備すること

膚再生促進薬の探索について、V 型コラーゲンなどの創傷が可能で ､ 従来品通りに開封して直ぐ使うことができる上、治癒時に特異的に発現してくる微量コラーゲン成分は mg

自家培養細胞、幹細胞、増殖因子を必要としない安価で汎単位のコラーゲンスポンジに混合できる量の確保ができな

用性の高いデバイスとしての利用が可能であり ､ 数多くのかった。その一方でサンプルとして試験されたミズクラゲ

事例に対処できることを期待している。長期経過について

コラーゲン（J.C.）に予想外の表皮角化細胞の伸長促進と肉の検討がこれからであり、ミズクラゲコラーゲンの生体反芽組織細胞の遊走促進効果が見出されたため、J.C. の皮膚

応性の評価等、今後の課題として残されている面も多いが、再生医療への応用と可能性の開拓を目的とする新規人工真本助成研究から生まれた新規のシーズとして、実用化を目

皮構造体の開発を行なった。

指し育てていきたいと考えている。

結果として、J.C. が加えられることによる効果は、表皮角化細胞の伸長はフィルム材に、肉芽組織細胞の遊走はスポンジ材に特異的に見られる現象であり、統計的に優位で（引用文献）
1） Sumiyoshi H, Kitamura H, Matsuo N, Tatsukawa

あることが確認された。その効果は 45%以上で一定となり、S, Ishikawa K, Okamoto O, Fujikura Y, Fujiwara S,

J.C. の量比が多くなると構造体が脆くなることから、最適

Yoshioka H, Transient expression of mouse pro-α3(V)

混合比を 45% とした。無脊椎動物の原始的線維性コラー

collagen gene in wound healing, Connect. Tissue Res,ゲンは V 型コラーゲンに構造的に近いとされるが、この

53, 4, 313-317, 2012.

効果の由来は現時点で不明である。J.C. はブタ I 型コラー

2） 住吉秀明，稲垣 豊，マウス皮膚創傷治癒モデルにおゲンの線維形成を阻害せず、I 型コラーゲンは直径 100 nm

ける筋膜由来線維芽細胞と希少コラーゲンのはたらき，の線維を形成し、隙間に J.C. に由来する固形物が充填され日本食品 ･ 機械研究会，：食品加工技術，33，3，2013，

る構造となること、また中性溶液で水溶性を示すことなど、

22-28 頁哺乳類のコラーゲンと異なる性質を有していた。最終的に

3） 住吉秀明，稲垣 豊，コラーゲン分子種と線維症形成

J.C. の効果を最大現に引き出せるよう、実験結果 図 5A にへのかかわり，医歯薬出版，：医学のあゆみ，244，6，

示される上面がフィルム、下面がスポンジの二層性ハイブ

2013，515-520 頁

リッド人工真皮を開発した。創傷モデルマウスへの移植に

4） Miki A, Inaba S, Baba T, Kihira K, Fukada H, Oda

より、この人工真皮が真皮の構造を模倣したコラーゲン線

M, Structural and physical properties of collagen維を持ち、かつ、表皮角化細胞の伸長と、肉芽を形成する

extracted from moon jellyfish under neutral pH

線維芽細胞の遊走 ･ 生着の両方を促進できる新しい機能を

conditions, Biosci. Biotethnol. Biochem., 7 9, 1 0, 1 6 0 3-

持っていることを確認した。

1607, 2015.
5） Addad S, Exposito J Y, Faye C, Blum S R, Lethias
C, Isolation, characterization and biological evaluation− 94 −

創傷をより綺麗に修復させる皮膚再生促進薬の開発

ン技術研究会，14-20，1998.

of jellyfish collagen for use in biomedical applications,10）Yamaoka H, Sumiyoshi H, Higashi K, Nakao S,

Marine Drugs, 9, 967-983, 2011.  
6） Nishimoto S, Goto Y, Morishige H, Shiraishi R, Doi

Sumida K, Saito K, Ikoma N, Mabuchi T, Ozawa A,

M, Akiyama K, Yamaguchi S, Sugahara T, Mode of

Inagaki Y, :A novel small compound accelerates dermal

action of the immunostimulatory effect of collagen fromwound healing by modifying infiltration, proliferation

jellyfish, Biosci. Biotethnol. Biochem., 72, 11, 2806-2814,

and migration of distinct cellular components in mice,

2008.

J. Dermatol Sci, 74, 3, 204-213, 2014.

7） Morishige H, Sugahara T, Nishimoto S, Muranaka A,11）Yannas I V, Lee E, Orgill D P, Skrabut E M, Murphy

Ohni F, Shiraishi R, Doi M, Immunostimulatory effect

G F, Synthesis and characterization of a modelof collagen from jellyfish in vivo, Cytotechnology, 6 3,

extracellular matrix that induces partial regeneration

481-492, 2011.

of adult mammalian skin, Proc. Natl. Acad. Sci USA, 86,
933-937, 1989.

8） Hoyer B, Bernhardt A, Lode A, Heinemann S,
Sewing J, Klinger M, Notbohm H, Gelinsky M, Jellyfish12）Akita S, Tanaka K, Hirano A, Lower extremity

collagen scaffolds for cartilage tissue engineering, Acta

reconstruction after necrotizing faciitis and necrotic

Biomaterialia, 10, 883-892, 2014.

skin lesions using a porcine-derived skin substitute, J.

9） 蛯原哲也，服部俊治，: 型別コラーゲンの精製 ･ 同定
法  I 型，III 型コラーゲン，：細胞外マトリックス研究法，
畑隆一郎，服部俊治，新井克彦，（編）1 巻，コラーゲ− 95 −

Plastic, Reconstructive and Aesthetic Surgery, 59, 759763, 2006.

経皮吸収物質の体内動態のイメージング質量分析による解析
福井県立大学生物資源学部生物資源学科

平修This research should be of interest to a broad readership, particularly those whose research involves the mass
spectrometric analysis of localization of xenobiotics. Because the present study describes emerging evidence suggested
environmental factors as causative agent such as methyl 2 -octynoate ( 2 -OAm). Not only does 2 -OAm have potential tocause visceral disease but importantly is used in environment such as lipsticks, hair dye, perfumes and food flavorings.
However, its disposition after percutaneous application is not revealed. We report the disposition and effect, visually, by
nano-PALDI-based imaging mass spectrometry. Generally, small molecule like 2 -OAm cannot be detected by LDI-basedmass spectrometry (MS) due to the interference of organic matrix signal. Previously, we have reported nano-PALDI MS
realize detection of small and high molecules (Anal. Chem. 2008 , 2011 . Analyst 2012 , 2015 ).
The ionization ability of the nano-PALDI for 2 -OAm was confirmed. 2 -OAm was applied to mice skin and it permeatedthrough the skin and accumulated in the liver. In livers of single dose mice, 2 -OAm was delivered to the liver for 6 hours
and excreted from the liver for 24 hours. On the other hand, in livers of long apply mice, 2 -OAm was retained in the liver.
Furthermore, we could be revealed that 2 -OAm was accumulated in bile ducts by analyzing at a high resolution. In addition,
CD 8 staining indicated that an inflamed bile duct was observed. 2 -OAm triggered the inflammation due to a coincident
localization of 2 -OAm and bile duct. This imaging approach is a promising technique for rapid quality evaluation ofxenobiotics 1）.

1. 緒のような」形で移動し生体に影響を及ぼすのか視覚的に表言すことができれば、安全性の知見を与えることができる。

我々は、日常より多くの生体異物（Xenobiotics）に囲まして使用される薬剤もあるが、それ以外に意図せずに摂食・

1. 1. 化粧品類に含まれる化学物質の体内動態の可視化と生体への影響摂取している物質、Xenobiotics がある。その中には「毒物」

最近、食品添加物や化粧品などに含まれる成分の中に自「薬」といった扱いをされていない物質も多い。個々の物質

己免疫疾患に関与していることが報告され、Xenobiotics

は厳密な安全性試験をクリアしているが、それらが体内のとして注目されている。例えば、中年女性に好発する自どこに蓄積され、種々の代謝を受けた場合、どのような影

己免疫性の肝臓の炎症では、ミトコンドリアに対する自響を受けるのかについては十分に分かっていない。

己抗体が 100% の症例に出現するが、その対応抗原（ミトれて生活している。もちろん、病気になった際に治療薬と通常、こういった分析は生検材料、外科手術で摘出されコンドリア内膜の呼吸酵素である PDC-E2）と極めて類似た種々の臓器を用いて、ヘマトキシリン＆エオジン（HE）する構造を有する Xenobiotics が複数存在し、患者血清の染色などによる形態診断が基本である。しかし、多くがそれら Xenobiotics と反応することが報告されてい１. 経皮吸収後の標的物質自体の体内動態を視覚的に表る。共同研究者の常山らは、これらの Xenobiotics の１つである、２オクチン酸メチル（2-OAm: 分子量 154）をマウ

すのは困難。
２．標的物質と疾病との直接の因果関係を科学的に見る

スの腹腔内に連続投与し、抗ミトコンドリア抗体の出現とともに、PBC に特異的な胆管障害像が出現したことから、のは困難。
以上のことから、検査に 3 日以上を要することになる。そ

2-OAm への持続的な曝露が PBC 発症のトリガーとなって

こで、新しい技術や手法の導入が求められている（図１）。

いる可能性を報告している 2）。2-OAm は化粧品や食品添もし、肌に直接塗布する化粧品類に含まれる化学物質が、経皮吸収されているのか、吸収されたならば「どこ」の「ど加物に含有されており、2-OAm の皮膚から肝臓への移行、
蓄積と、それを標的にした免疫異常が起きている可能性が示唆されるが、2-OAm などの低分子 Xenobiotics は、特異抗体が存在しないため、その体内での局在についてはこれ

Liver disease risk of xenobiotics due topercutaneous absorption revealed by
Nano-PALDI imaging mass spectrometry1）
Shu TairaFukui Prefectural University, Departmentof Bioscience

までまったく解析がなされていないのが現状である。
本報告では、マウスを用いて 2-OAm を Xenobiotics として経皮的に投与し、臓器中への移行と蓄積の有無について検討する。また、臓器移行が確認された際には、長期経皮曝露を行い、Xenobiotics の蓄積の有無を検討した。

− 96 −

経皮吸収物質の体内動態のイメージング質量分析による解析

経皮的に曝露された Xenobiotics が、どの細胞に蓄積し、に、ナノ微粒子をイオン化支援剤とするナノ微粒子支援型

周囲にどのような炎症が惹起されているか、という二次元

レーザー脱離イオン化（Nano-Particle Laser Desorption/

情報が極めて重要である。これまで経皮吸収の評価は投与

Ionization: Nano - PALDI）MS 法 3-6）が開発されている。本

皮膚、内臓サンプルを磨りつぶした後、クロマト手法で得法は、直径数ナノメートルの金属酸化物粒子に表面修飾なた結果と併せて、浸透イメージを想像してきた。本研究でどを施した物質で、レーザーエネルギーを受け取ると、ナ

は、2 つの技術をハイブリッドすることで、組織標本上のノ微粒子自体はイオン化せず、近接する物質のみをイオン

Xenobiotics の経皮吸収による体内動態の解析を目指した。

化する特性を示す。例として、農薬（カルベンダジム：分

以下に、その本研究の核となる技術を簡単に記述した。

子量：191）をイオン化した場合の両者の MS スペクトルを
図 2 に示す。Nano - PALDI 法（図 2a）ではサンプルのみイ

1. 2. Xenobiotics（低分子物質）の新規検出法

オン化しているのが分かる。ナノ微粒子自体はイオン化

一般的にガスクロマトグラフィー（GC）や、液体クロ

せず（図 2b）、サンプルも自己イオン化していない条件（図マトグラフィー（LC）を組み合わせた質量分析法（GC - MS、2c）である。MALDI 法では（この場合、有機マトリクスとLC- MS）は、定量性に優れていることから、化学物質のして CHCA（Mw：189）を使用）、有機マトリクス自体が分析法として頻用される。通常、生体物質は複数の物質イオン化し、様々な付加体としてシグナルが低分子領域にから構成されており、検出する際には、標的物質である

現れ、目的物質が検出できない（図 2d）。従来、MALDI 法

Xenobiotics を抽出するための前処理を行う必要がある。

は高分子解析に用いる手法であり、Nano -PALDI 法と使物質毎の特性によって前処理条件も異なり、複数の処理工

い分けることで低～高分子までの広範囲な検出が可能に程を要するため煩雑である。マトリクス支援型レーザー脱なる。 さて、Xenobiotics は低分子量（>500）のものが多く、

離イオン化（MALDI）
質量分析（MS）
法は、混合物でも高率

今回の標的物質の 2 - OAm（分子量：154）も例外ではないに検出が行えるため本研究に適している。ここで、一つ問ため、検出法として Nano - PALDI 法を採用した。

題がある。MALDI で用いるイオン化支援剤は、一般的に有機物が多用される。この有機物マトリクス自身がイオン

7，8）

1. 3. イメージング質量分析（IMS）

化することで、低分子領域にシグナルとして検出され、標イメージング技術は、生物（例：免疫染色による神経細的物質がバックグラウンドに埋もれてしまい解析が困難に胞成長観察）、化学（赤外分光イメージングによる基板上のなる場合が多い。近年、低分子検出、イメージングを目的

異物検出）、物理学（トンネル顕微鏡による薄膜解析）と多図 1 本研究の概要

図 2 Nano-PALDI 質量分析

− 97 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

くの分野で用いられる手法である。

（東京化成）を混合し、室温にて 60 分間攪拌した。遠心近年、組織切片上を 2 次元的に MS し、多数の MS スペ

分離操作により未反応物を除去したのち、超純水で洗浄

クトルか注目するシグナル（標的物質）のみを抽出し、2 次し、沈殿物をナノ微粒子サンプルとして回収した。得られ元画像とすることで標的物質の局在解析を行う、「IMS」法

たナノ微粒子について、赤外分光法（IR：Spectrum One;  

（図３）が開発された。利点として、一度の測定で、一枚のPerkin Elmer, USA）、透過型電子顕微鏡（TEM：H-7100；

切片から抗体や染色材を必要とせず、複数の標的物質の局

Hitachi, Japan）と X 線回折（XRD：MiniFlex II；Rigaku,

在を解析できることが挙げられる。また、特に特殊な MSJapan）を用いて評価を行った。

装置を必要とせず、MALDI MS 装置と専用ソフトがあればよい。主に、医学、生理学分野での研究例 9 -12）が多いが、

2. 4. Nano - PALDI MS

最近では工、農学分野でも注目されている技術である 13-18）。

2 - OAm（10 pmol）と酸化鉄ナノ微粒子（1 mg/mL：メ

IMS 法で農産物内の農薬の解析することは特殊な前処理タノール）と混合し、ターゲットプレートに滴下、乾燥さも必要とせず、得られた MS スペクトルから標的物質の質せてから MS 測定を行った。検出イオンはポジティブイオ

量を選択するだけで、局在情報も得られることから簡便で、ンとした。

有用である。今回、標的物質である Xenobiotics、2-OAm は、
低分子イメージングに相当するため、Nano-PALDI IMS

2. 5. Nano - PALDI IMS法を採用した。

マウスの肝臓の凍結切片（厚さ：25 µm）を導電性透明電2. 実極であるインジウムチンオキサイド（ITO）ガラス上に作験

成後、イオン化支援剤として、酸化鉄ナノ微粒子（1 mg/

2. 1. 2- OAm 単回塗布マウスの作成

mL：メタノール、8 mL）をスプレーヤーで塗布した。ポ

4 週齢の ICR（♀）マウスの背中に、2-OAm（0.1%）を

ジティブモードで IMS を行った。切片上から 2 -OAm が検出できるかを確認するために、コントロールマウスの切片

単回塗布し、1, 3, 6, 24 時間後に肝臓を採取した。

に 2 -OAm を滴下し、その部位をイメージングした。レー

2. 2. 2- OAm 長期塗布マウスの作成

ザー照射間隔は 70 µm とした。

4 週齢の ICR（♀）マウスの背中に、2-OAm（0.1%）を、イメージング MS の画像解像度は、レーザー照射間隔に1 週間に 1 回のペースで塗布、これを 19 週連続で行った。

依存しており、照射間隔が狭いほど画像が鮮明になる。通その後、肝臓を採取した。

常の MALDI では有機マトリクスを使用する。有機マトリ
クスが切片上で標的物質を抽出、共結晶（結晶の大きさ：

2. 3. Nano - PALDI 法で用いるナノ微粒子の合成

30 - 50 µm）を形成する。そのために共結晶以下のレーザ

本研究で用いるナノ微粒子は金属酸化物をコアとし、そー照射間隔を用いてイメージングしても正しい局在解析がの表層を Si - O が覆い、表面より水酸基とアミノ基が露出できない場合がある。Nano - PALDI 法は、標的物質と共している構造である。以下、調製法を示す。3 - アミノプ

結晶を形成せずにイオン化を行う方法であり、高解像度イ

ロピルトリエトキシシラン（APTES）（信越化学）溶液（22メージングが可能になる（図４）。

M）と、8 種類の金属塩化物溶液（FeCl2・4H2O）（0.1 M）

図 3 イメージング質量分析− 98 −

経皮吸収物質の体内動態のイメージング質量分析による解析

2. 6. 高解像度 Nano - PALDI IMS

した結果、酸化鉄をコアとすることが分かった。また、鉱マウスの肝臓の凍結切片（厚さ：25 µm）を導電性透明電物に見られる、コランダム構造を単位とするマコーレート

極であるインジウムチンオキサイド（ITO）ガラス上に作様構造であると決定した（図５a）。IR スペクトル測定では、

成後、イオン化支援剤として、酸化鉄ナノ微粒子（1 mg/

O - H（3,400 - 3,100 cm-1）、C - H（3,000 - 2,830 cm-1）、N-H

mL：メタノール、8mL）をスプレーヤーで塗布した。ポジ（1,640 - 1,560 cm-1）および、Si - O（1,000 - 800 cm-1：デーティブモードで IMS を行った。レーザー照射間隔は 25 µm

タ非表示）の伸縮振動ピークが検出され、表面に水酸基、アとした。

ミノ基および Si - O 層が存在することが確認された（図５b）。
TEM 観察の結果、粒径は 3.6±0.1 nm であり、単分散にナ3. 結果と考察

ノ微粒子が合成されていることが分かった（図５c）。これ

3. 1. ナノ微粒子の特性評価

らの結果より、Fe ナノ微粒子は、鉄酸化物をコア成分とし、合成したナノ微粒子の物理化学的性質を調べた。

その周りを水酸基およびアミノ基、シラノール基で被覆さFe をコアとして合成したナノ微粒子（以下、Fe ナノ微

れたナノ微粒子であることが示された。

粒子）のデータを図４に示す。X 線回折（XRD）により構造解析を行った結果、
2θ= 35 °と、63 °に、
ミラー指数（hkl）、（1

3. 2. 2- OAm の質量分析実験

3 0）、（3 3 0）、（0 6 0）が観測され、データベースと照合

標的物質が Nano -PALDI MS 法で検出されることを確

図 4 Comparison of spatial resolution between MALDI and Nano-PALDI

図 5 The XRD pattern (a), the FT-IR spectrum (b) of and TEM image (c) of the iron oxide based nano-particle.

− 99 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

認するために、標準品を用いて実験を行った。
［M+H］++が確認され、24 時間後にはほぼ排出されていることが分と［M+Na］ である m/z 155.1，177.1 が検出された。次に、かった（図 2A）。強度比は、コントロール：投与後 1 時間：

肝臓切片上に 2 - OAm を滴下し、その部位を MS、IMS し

3 時間：6 時間：24 時間＝ 1：2：４：12：1

たところ、滴下していない肝臓と比較すると、2-OAm 滴

2- OAm 長期塗布マウスの IMSであった（図 6）。

2 -OAm を皮膚に長期間塗布したマウスの肝臓を用いて、下肝臓からは m/z 155.1，177.1 が検出された。強度比は 1：

2 -OAm の蓄積部位を検討した。その結果、2 -OAm が単

10 であった。
組織上の 2-OAm が Nano-PALDI MS 法で検出可能なこ

回塗布と違い、体外へ排出されず肝臓に蓄積していることとを示した。また、Nano-PALDI 法ではナトリウム付加

が視覚的に分かった（図 7）。これは、化粧品や染毛剤など

6）体を優先的にイオン化することが分かっている のでイメ

長期に渡り使用している患者が肝臓疾患（炎症）を起こしてージする標的シグナルを m/z 177.1 とした。

いることに関係があることを示している。
2- OAm 長期塗布マウスの高解像度 IMS

3. 3. 2- OAm 単回塗布マウスの IMS

2 -OAm を皮膚に長期間塗布したマウスの肝臓をヘマト

マウスの皮膚に 2-OAm を塗布後、肝臓の Nano-PALDI

キシリン - エオジン（HE）染色したところ、コントロールでイメージング MS を行った。標的シグナルは 2-OAm のは胆管が観察できるのに対し、2 - OAm 群では胆管が潰れナトリウム付加体である m/z 177.1 である。その結果、ており観察が困難であった（図 8）。

2 - OAm を皮膚に塗布してから 6 時間後に肝臓に 2-OAm

そこで、連続切片を用いて、炎症の有無を確認するため

図 6 単回塗布のマウスの肝臓イメージング MS 像

図 7 長期塗布のマウスの肝臓イメージング MS 像

− 100 −

経皮吸収物質の体内動態のイメージング質量分析による解析

それにより炎症が引き起こされることを初めて視覚的に明らかにした。

4. 2. 間接的から直接的なデータ表示へ
これまでの薬剤の経皮吸収の浸透具合、体内動態は、標本サンプルから抽出した溶液を HPLC などクロマトグラフ
ィカルなデータを基に浸透イメージ（想像）をコンピュータ
ーグラフィックに直すことで表す間接的な手法とも言える。
イメージング質量分析で表すイメージはサンプル切片上にある標的物質の局在を直接表した物であり、経皮吸収の

図 8 HE staining of liver without (a) and with 2-OAm(b)有無、浸透性、安全性の確保を一般消費者へ科学的根拠をに CD8 染色を行った。その結果、胆管付近は CD8 陽性を視覚的にアピールすることができる。

示し、炎症が強く引き起こされていることが分かった。その同一部分に対して IMS（レーザー照射間隔 25µm）を行った。炎症を起こしている部分に 2-OAm が局在していることが明らかになった（図 9）。

4. 3. 基礎 -、応用コスメトロジー両面の貢献へ
薬剤の経皮暴露による 2 - OA の肝臓へのダメージを視覚的に表すことを通して、安全性、有効性を示すことを目指

別途、液体クロマトグラフィにより定量したところ、長す。得られた化粧品とはその殆どが皮膚への塗布であるか期塗布群のマウス肝臓からは 8.32 µg/g-liver の 2 - OAm がら、本研究で得られた知見はコスメトロジー分野において蓄積していた。

基礎的な情報（浸透性）と、生体への影響（応用）の両面に貢

4. 総

献できる。

括

4. 1. 薬剤送達・炎症の機序の視覚的解明

4. 4. 新規評価法の提示

本結果は非常に興味深い。2 -OAm はミトコンドリア内

イメージング質量分析の化粧品学への応用は例が少なく、膜の呼吸酵素（mitochondrial intima respiratory enzyme）

今回の研究は特許取得可能であり、その普及は、国際競争の抗原として反応し、炎症を引き起こすことが知られてい力を高めるだけでなく、国際標準化策定にも、一つの方

るが

19）

、2 - OAm が経皮吸収により内臓（肝臓）に送達されること、それが長期塗布により胆管付近に蓄積すること、向性を示すことになる。また、本評価技術が確立できれば、生物全般の幅広い分野に利用でき、イノベーションの創出

図 9 7 High-spatial resolution nano-PALDI IMS of 2-OAm from mouse liver for long period of application.
HE (a) and CD8 (b) stained images of liver tissues of 2-OAm-apppled; MS spectra reconstructed as ion
images of 2-OAm at 25 µm in mouse liver (c); merged CD8 and ion image(d). Scale bar is 200 µm.

− 101 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

Saito; K. Inami; I. Makita; Y. Angata; T. Suzuki; M.

につながる。

Yamashita; N. Sato; S. Nakamura; D. Yuki; Y. Sugiura;
謝辞N. Zaima; N. Goto-Inoue; T. Hayasaka; Y. Shimomura;M.

本研究を遂行するにあたり、適切なご助言をしていただ
いた徳島大学（医）、常山幸一先生、帝京大学（医）
菊池先生に心から感謝申し上げます。イメージング質量分析を行う

Setou  PLoS ONE, 6, e26721. (2011)10）Sugiura, Y.; R. Taguchi;M. Setou   PLoS One, 6,e17952. (2011)に辺り、装置を使用させていただいた北陸先端科学技術大11）Morita, Y.; K. Ikegami; N. Goto-Inoue; T. Hayasaka;

学院大学・ナノテクプラットホーム事業とご担当いただい

N. Zaima; H. Tanaka; T. Uehara; T. Setoguchi; T.

た宮里明夫先生に感謝いたします。

Sakaguchi; H. Igarashi; H. Sugimura; M. Setou;H. Konno  Cancer Science, 101, 267-273. (2010)（引用文献）

12）Taira, S.; M. Hashimoto; K. Saito;O. Shido  J. Biophys.

1） Taira, S.; N. Yamaguchi; S. Morimoto; Y. Tatsuta;

Chem., 3, 221-226. (2012)

H. Katano; Y. Ichiyanagi; K. Tsuneyama;K. Kikuchi  13）Zaima, N.; T. Hayasaka; N. Goto-Inoue;M. Setou  International Journal of Recent Scientific Research, 7,International Journal of Molecular Sciences, 1 1, 5 0 4 0-12589-12592. (2016)

5055. (2010)

2） Wakabayashi, K.; Z.-X. Lian; P. S. C. Leung; Y.

14）Zaima, N.; N. Goto-Inoue; T. Hayasaka;M. Setou  Moritoki; K. Tsuneyama; M. J. Kurth; K. S. Lam; K.

Rapid Commun. Mass Spectrom., 24, 2723-2729. (2010)

Yoshida; G.-X. Yang; T. Hibi; A. A. Ansari; W. M.

15）Suzuki, T.; H. Fujiwake;K. Iwai   Plant Cell Physiol.,Ridgway; R. L. Coppel; I. R. Mackay;M. E. Gershwin  

21, 839-853. (1980)16）Yoshimura, Y.; H. Enomoto; T. Moriyama; Y.

Hepatology, 48, 531-540. (2008)
3） Komori, H.; R. Hashizaki; I. Osaka; T. Hibi; H.

Kawamura; M. Setou;N. Zaima   Analytical andBioanalytical Chemistry, 1-11.

Katano;S. Taira  Analyst, 140, 8134-8137. (2015)
4） Taira, S.; I. Osaka; S. Shimma; D. Kaneko; T. Hiroki;17）Taira, S.; D. Kaneko; K. Onuma; A. Miyazato;

Y. Kawamura-Konishi;Y. Ichiyanagi  Analyst, 137, 2006-

T. Hiroki; Y. Kawamura-Konishi;Y. Ichiyanagi  

2010. (2012)

International Journal of Inorganic Chemistry, 2 0 1 2, 7.

5） Taira, S.; Y. Sahashi; S. Shimma; T. Hiroki;Y.

(2012)18）Taira, S.; R. Ikeda; N. Yokota; I. Osaka; M. Sakamoto;

Ichiyanagi  Anal. Chem., 83, 1370-1374. (2011)
6） Taira, S.; Y. Sugiura; S. Moritake; S. Shimma; Y.
Ichiyanagi;M. Setou  Anal. Chem., 80, 4761-4766. (2008)
7） Stoeckli, M.; P. Chaurand; D. E. Hallahan;R. M.

M. Kato;Y. Sahashi   Am. J. Chin. Med., 3 8, 4 8 5-4 9 3.
(2010)
19）Amano, K.; P. S. C. Leung; R. Rieger; C. Quan; X.
Wang; J. Marik; Y. F. Suen; M. J. Kurth; M. H. Nantz;

Caprioli  Nat. Med., 7, 493-496. (2001)
8） Caprioli, R. M.; T. B. Farmer;J. Gile  Anal. Chem., 69,

A. A. Ansari; K. S. Lam; M. Zeniya; E. Matsuura; R. L.
Coppel;M. E. Gershwin   The Journal of Immunology,

4751-4760. (1997)
9） Waki, M. L.; K. Onoue; T. Takahashi; K. Goto; Y.

174, 5874-5883. (2005)− 102 −

皮膚バリア機能障害を伴う皮膚疾患を対象としたラマン分光装置を用いた角層天然保湿因子の解析
大阪医科大学皮膚科

谷崎英昭

Stratum corneum (SC) is important to maintain the skin surface humidity and barrier function. Recent progress inconfocal Raman spectrometer has enabled us to noninvasively assess the concentration of water, natural moisturizing
factor (NMF) and lipids of the SC in vivo. Topical steroid has been widely used for a variety of skin inflammatory diseases
including atopic dermatitis, but the effect on the SC compositions has not been elucidated yet. We sought to evaluate theeffect of topical steroid on the profiles of SC of mouse and human skin. We evaluated the SC components of the skin ofhealthy donors, atopic dermatitis (AD) patients, C 57 BL/ 6 mice, and filaggrin knockout mice in the presence or absenceof topical steroid treatments using a confocal Raman spectrometer. The depth-dependent profiles of SC were calculated
from the respective spectra. Ceramide, pyrrolidone carboxylic acid, urea, and lactic acid, of AD patients were significantly
decreased compared to healthy donors. In addition, long-term topical steroid treatment decreased the profiles of SC
components in human Consistently, SC components were lower in Filaggrin knockout mice when compared to C 57 BL/ 6
mice, and even after by topical steroid treatment. In addition, the recovery of SC components after degreasing treatment
was markedly delayed in the steroid application group. We have demonstrated that topical steroid treatment decreased thecomponents of SC of the skin in mice and humans. Although topical steroids are beneficial for controlling skin inflammation,
we need to consider the risk of barrier disruption.

1. 緒

な解析が可能となった 2-4）。今回、皮膚の重要な機能であ言る「バリア機能」と「水分保持機能」において中心的な役割を

表皮は、厚さが 0.2 mm 程度の人体の最外層に位置す担っている NMF に注目し、共焦点ラマン分光装置を用いる膜であり、角化プロセスによって細胞分裂と分化をて、角質層における NMF 含有量と皮膚表面から内部にか

日々繰り返している。その中でも角質層は外界と体内とけての分布について非侵襲かつ無標識に詳細な解析を行の境界部に位置して、皮脂膜と天然保湿因子：Natural

った。加齢や気候による生理的な変化に加え、強い乾燥やMoisturizing Factor（NMF）、細胞間脂質をバランスよくかゆみをともなうアトピー性皮膚炎、難治性の掌蹠角化症、保持することによって、「バリア機能」と「水分保持機能」と

慢性皮膚粘膜カンジダ症など何らかの皮膚免疫異常を呈す

いう皮膚の機能における中心的な役割を担っている。フィる状態、更には外用剤治療前後の比較などさまざまな皮膚

ラグリン蛋白は角層 NMF の産生源として重要であり皮膚状態を対象とし、ヒト臨床検体と各モデルマウスを用いてのバリア機能に必須の蛋白である。アトピー性皮膚炎は、

NMF の機能解析・経皮水分蒸散量・pH などの測定を通し遺伝的要因として乾燥肌を有し環境中の多様な因子が絡んて、バリア機能障害の成因に総合的に迫りたいと考えていで発症するが、フィラグリン遺伝子変異の有無がアトピーる。

性皮膚炎の発症因子の中で最も頻度の高い因子であると近2. 方

年報告されている 1）。
皮膚における水分・アミノ酸・脂質など各成分ごとの測定方法は、光工学による計測技術の進歩によって著しく発法

2. 1. 長期間ステロイド外用加療を継続したアトピー性皮膚炎 10 名の皮膚の菲薄化を確認展している。従来、テープストリッピングなどによる皮膚アトピー性皮膚炎の治療の第一選択は、かゆみや炎症を剥離を行った後に蛋白量などを測定していたのに対し、共速やかに抑制するためのステロイド外用剤である 5）。症状

焦点ラマン分光装置の出現によって角層内の深さ分布やや病変部位に応じて各レベルのステロイド外用を使用し、薬剤の皮膚への浸透性を非侵襲かつ無標識に高感度で詳細

適宜タクロリムス軟膏や保湿剤への変更が望ましいとされるが、長期間のステロイド外用によって生じる皮膚萎縮、毛細血管拡張、潮紅、酒皶様皮膚炎、ステロイド紫斑、痤瘡、Effect of topical steroid on the stratum
corneum compositions by using confocal
Raman microscopy
Hideaki Tanizaki
Department of Dermatology, Osaka
Medical College

多毛、感染症の増悪などについても日常診療においてしば
しば経験する。今回、長期間ステロイド外用患者ならびに健常人各10名の前腕皮膚厚について、超音波を用いて測定・比較し皮膚萎縮について評価した。

− 103 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

2. 2. 長期間ステロイド外用を行った皮膚局所の pHや経皮水分蒸散量について解析

3. 2. 長期間ステロイド外用を行った皮膚局所の pHや経皮水分蒸散量について解析

外 用 剤 塗 布 時 は チ ュ ー ブ よ り 薬 剤 を 一 定 量（ 例 え ば

はじめに、ステロイド外用を日常的に行っていない同年

1FTU 量）出し、両手を用いることが多い。今回 30 年以代の健常者の左右の指腹の臨床像を示す（図 2 A）。両側に

上両手を用いて外用を継続しているアトピー性皮膚炎患

おいて、指紋がはっきりと認められ乾燥の所見なども認め者（39 歳男性）と右示指のみを用いて外用を十数年以上継られない。一方、30 年以上両手を用いて外用を継続して続しているアトピー性皮膚炎患者（35 歳男性）の指腹についるアトピー性皮膚炎患者（39 歳男性）においては、両側

いて、pH や経皮水分蒸散量（transepidermal water loss：の指紋が不明瞭となり、皮膚の乾燥による粗造が顕著に認TEWL）について解析を行った。pH は堀場製作所製ポーめられた（図 2 B）。右示指のみを用いて外用を十数年以上

タブル pH メーターを用いて、TEWL は室温 23 度、湿継続しているアトピー性皮膚炎患者（35 歳男性）において度 40 - 50 ％ に 保 た れ た 部 屋 に 入 室 後 VAPOSCAN AS-

は、外用を継続していた右側の指紋が不明瞭であり、左側

VT100RS（Asahi Biomed 社製）
を用いて測定した。

と比較して皮膚の乾燥による粗造が顕著に認められた（図2. 3. 長期間ステロイド外用を行った皮膚局所の天然
保湿因子について解析

右側で pH の低下と TEWL の増加を認め、いずれも皮膚バ

2 C）。さらに、図 2 C 患者における pH と TEWL においても、リア障害の結果差が生じたと考えられた。

2. 2. と同患者を用い、River Diagnostics 社製ラマン分
然保湿因子とその関連分子について測定・解析を行った。

3. 3. 長期間ステロイド外用を行った皮膚局所の天然
保湿因子 NMFについて解析

測定は、左右の指腹を用いて任意の 5 点について各点の角最後に、長期間のステロイド外用によって生じたと考え質表層から 4 µm 間隔で 160 µm まで測定し、解析は Riverられた皮膚バリア障害 NMF について図 2 C 患者を中心に

Diagnostics 社製ソフトウェア SkinTools を使用した。

評価を行った。天然保湿因子全体においては、外用を行っ光光度計 confocal Raman microspectroscopy を用いて天3. 結ていなかった左側において表層から 30 µm にかけて増加果を認め、以後角層の深層にむかって低下する健常者（結果3. 1. 長期間ステロイド外用加療を継続したアトピー性皮膚炎 10 名の皮膚の菲薄化を確認は示さず）と同様のパターンを示したのに対し、外用を行測定部位については、いずれの患者も軽度乾燥と苔癬化ら 104 µm においてほとんど測定限界値以下を示した（図っていた右側では、角層の最外層から低下を示し表層かをともなっていたが、明らかな掻破痕などを認めない部

3 A）。その中でも天然保湿因子における主要構成成分で位で測定した。長期間ステロイド外用患者ならびに健常あるピロリドンカルボン酸（pyrrolidone carboxylic acid:

人各 10 名の前腕皮膚厚について超音波像を示す（図 1 A）。

Pca）と尿素（urea）についても解析を行ったところ、天然

健常人（Healthy）では 1.22 ± 0.8 mm の皮膚厚であったの

保湿因子全体の結果を裏付ける変化を伴っていたことが判に対し、アトピー性皮膚炎患者（AD）の平均値は 0.83 ±明した（図 3 B）。さらに水分保持量（water content）につい

2.2 mm と有意差をもって低下していた（図 1 B）。

ても外用していた右側で優位に低下しており、角層直下の

図 1 長期間ステロイド外用加療を継続したアトピー性皮膚炎 10 名の皮膚の菲薄化を確認（A, B）長期間ステロイド外用患者ならびに健常人各 10 名の前腕皮膚厚について、超音波を用いて測定・比較した。

− 104 −

皮膚バリア機能障害を伴う皮膚疾患を対象としたラマン分光装置を用いた角層天然保湿因子の解析

図 2 長期間ステロイド外用を行った皮膚局所の pH や経皮水分蒸散量について解析
左右の指腹の臨床像を示す（A：健常者、B：アトピー性皮膚炎患者。両手を用いて外用を継続。C：アトピー性皮膚炎患者。右手のみを用いて外用を継続）。D：図 2 C 患者における pH と TEWL の手指の左右差を示す。

顆粒層を位置する部位からも角層厚の低下を示す結果であ作用は皮膚萎縮をはじめとして毛細血管拡張、潮紅、酒皶った（図 3 C）。

様皮膚炎、ステロイド紫斑、痤瘡、多毛、感染症の増悪な4. 考

どが従来知られており、図 1 のとおり今回超音波検査を併察用することで再認識できた。さらに、比較的皮膚構造の厚皮膚のバリア機能は、天然保湿因子の含有量、角層水分

い手指を用いて同一個体内で長期間のステロイド外用剤使量、経皮的角質水分蒸散量などで総合的に評価する必要が用における評価を行えたことは貴重な機会であり、ステロある。また、皮膚における水分・アミノ酸・脂質など各成

イド外用によって皮膚の菲薄と天然保湿因子が低下してい分の測定は、光工学による計測技術の進歩によって著しくることが判明したことは、生体の最外層の重要な役割の一発展している。従来、テープストリッピングなどによるつである皮膚バリア障害がいかに低下し、感染症の増悪の皮膚剥離を行った後に蛋白量などを測定していたのに対し、一因となっているかが示されていると考えている。アトピ

共焦点ラマン分光装置の出現によって角層内の深さ分布やー性皮膚炎患者における皮膚免疫バランスは、フィラグリ

薬剤の皮膚への浸透性を非侵襲かつ無標識に高感度で詳細

ン蛋白の発現低下にともなって生じる pH の低下、続発すな解析が可能となった。特にヒト検体においては、症状にる皮膚バリア機能異常、付随して生じる Th2 よりにシフ苦しんでいる皮膚の状態そのままを短時間で測定できるこ

トすると考えられる各種サイトカインなどのアレルギー反とに加え、皮膚生検や皮膚剥離などの検体採取時の影響を応が複雑にからみあっている（図 4）6，7）。ステロイド外用

ほぼ受けることなく評価できるように進歩してきている。

剤の使用は上記における炎症反応を抑制する効果的な治療

長期間のステロイド外用剤使用においては、皮膚の局所副法であることは間違いないが、長期使用や誤った乱用によ− 105 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

図 3 長期間ステロイド外用を行った皮膚局所の天然保湿因子について解析（A-C）ラマン分光光度計を用いて図 2 C 患者における NMF、pyrrolidone carboxylic acid：Pca、Urea、water content の左右差を示す。

− 106 −

皮膚バリア機能障害を伴う皮膚疾患を対象としたラマン分光装置を用いた角層天然保湿因子の解析

図 4 アトピー性皮膚炎患者における皮膚免疫バランス
皮膚免疫応答を中心としたバリア機能異常、アレルギー性炎症、pH などのサイクル図を示す。

って皮膚の菲薄と天然保湿因子が低下につながり、図 4 のサイクルをより悪化させる可能性があることが今回の研究

667-677, 2015.
4） Egawa M, Tagami H. Comparison of the depth

によってより鮮明になった。今回の研究で更に詳細な解明

profiles of water and water-binding substances inを行うことによって新たな側面で迫れたのみならず、健常

the stratum corneum determined in vivo by Raman

皮膚をもつヒトの経時的な変化についても迫っていきたい

spectroscopy between the cheek and volar forearm
skin: effects of age, seasonal changes and artificialと考えている。

forced hydration: Br J Dermatol., 158, 251-260, 2008.
（引用文献）

5） 古江増隆，佐伯秀久，古川福実，他６名：アトピー

1） Osawa R, Konno S, Akiyama M, et al. Japanesespecific filaggrin gene mutations in Japanese patients
suffering from atopic eczema and asthma: JID, 1 3 0,性皮膚炎診療ガイドライン : 日皮会誌 , 119, 1515-1534,
20096） Demerjian M, Choi EH, Man MQ et al. Activatorsof PPARs and LXR decrease the adverse effects of2834-2836, 2010.
2） Tanizaki H, Nakashima C, Shimizuhira C et al.
Performance comparison of a novel intradermal
injection system with the Mantoux technique: J

exogenous glucocorticoids on the epidermis: Exp
Dermatol., 18, 643-649, 2009.
7） Stojadinovic O, Lee B, Vouthounis C et al. Novel
genomic effects of glucocorticoids in epidermal

Dermatol Sci., 79, 310-313, 2015.
3） Amano W, Nakajima S, Kunugi H, et al. The Janus

keratinocytes: inhibition of apoptosis, interferon-gamma

kinase inhibitor JTE-052 improves skin barrier function

pathway, and wound healing along with promotion ofthrough suppressing signal transducer and activator of

terminal differentiation: J Biol Chem., 2 8 2, 4 0 2 1-4 0 3 2,transcription 3 signaling: J Allergy Clin Immunol., 136,

2007.

− 107 −

極長鎖脂肪酸含有セラミドの表皮バリア形成における機能と分子機構の解明
大阪市立大学複合先端研究機構

中台（鹿毛） 枝里子
In multicellular organisms, the surface barrier is essential for maintaining the internal environment. In mammals, thebarrier is the stratum corneum. Fatty acid transport protein 4 (FATP 4 ) is a key factor involved in forming the stratum
corneum barrier. Mice lacking Fatp 4 display early neonatal lethality with features such as tight, thick, and shiny skin,and a defective skin barrier. FATP 4 is a member of the FATP family that possesses acyl-CoA synthetase activity for very
long chain fatty acids. How Fatp 4 contributes to skin barrier function, however, remains to be elucidated. In the previous
study, we characterized two Caenorhabditis elegans genes, acs- 20 and acs- 22 , that are homologous to mammalian FATPs.
Animals with mutant acs- 20 exhibited defects in the cuticle barrier, which normally prevents the penetration of small
molecules. We demonstrated that the incorporation of exogenous very long chain fatty acids into sphingomyelin was reducedin acs- 20 and acs- 22 mutants. In the present study, we further analyzed the skin barrier of acs- 20 and acs- 22 mutants. We
also developed C. elegans infection models against human skin flora such as Propionibacterium and Malassezia.

1. 緒

言

セラミドは表皮の細胞間脂質として表皮バリア形成に重要な役割を果たすと考えられている。実際に、ゴーシ
ェ病やアトピー性皮膚炎患者では皮膚のセラミド含有量が減少し、易感染性や水分保持能低下が起こる。2003 年、
Herrmann らのグループにより、角質細胞において機能する極長鎖アシル CoA シンテターゼ FATP4 のノックアウト
マウスでは、低分子化合物の皮膚透過性が異常な高値を示すこと 1）（図 1）、表皮のセラミドに含まれる極長鎖脂肪酸量が有意に低下することがわかり（極長鎖脂肪酸：一般に炭素数 24 以上の脂肪酸）、セラミドのなかでも極長鎖脂肪

図 1 表皮バリア異常により X-gal で真っ青に染まった FATP4 ノックアウトマウス

酸を含むものが表皮バリア形成に重要な役割を果たす可能性が示唆された。しかし、マウス研究は遺伝学的手法が煩雑であり、研究コストも高いことなどから、表皮バリアと記知見に立脚し、線虫をモデル動物として用いて極長鎖脂脂質に関する分子遺伝学的基盤の全体像は未だ明らかにな肪酸含有セラミドの表皮バリア形成／機能における役割とっていない。

分子的基盤を明らかにすることを目的とする。また線虫をそこで申請者は表皮バリア形成の解析のためのモデル動

代替モデル宿主とした、ヒトの皮膚フローラを構成する細物として線虫 Caenorhabditis elegans（C. elegans）を用い

菌、真菌の感染実験系を構築し、脂質や表皮バリアの役割ることを着想し、FATP4 ホモログ遺伝子 acs-20 のノックについて明らかにすることを目指した。

アウト線虫の作製および解析を行った。その結果、ノック
アウト線虫では Hoechst をはじめとする種々の化合物の表
皮透過性が顕著に上昇していた 2）（図 2）。また極長鎖脂肪
2）酸含有スフィンゴ糖脂質量が低下していた 。本研究は上

2. 方

法

2. 1. 実験動物（線虫）
野生型Caenorhabtidis elegans としてN2株（Caenorhabditis
Genetics Center（CGC）より分与）を使用した。acs-20 変

The role of very long chain fatty acidcontaining ceramides in the epidermal
barrier and the underlying molecularmechanisms

異体として、tm3232 株または tm3278 株 2）を使用した。

Eriko Kage-Nakadai
The OCU Advanced Research Instituteof Natural Science and Technology, Osaka
City University

クロインジェクションにより導入し、株化したものを使用

acs-22 変異体として、tm3236 株 2）を使用した。レスキュ
ー実験には、tm3232 株に acs-20 プラスミド DNA をマイした。線虫の飼育は Brenner（1974）に準じて行った。線虫は、餌となる大腸菌 OP50 株を培養した NGM プレー− 108 −

極長鎖脂肪酸含有セラミドの表皮バリア形成における機能と分子機構の解明

図 2 acs-20 ノックアウト線虫の表皮バリア破綻
Hoechst バイタル染色により核が簡単に染まってしまう（線虫尾部の写真。白破線で縁をかたどっている）。

ト上で飼育した。飼育温度は、通常の維持では 20 ℃とし、間 37 ℃嫌気培養を行った。寒天上のコロニーをかきとり

生存分析および感染実験においては 25 ℃にて行った。

M9 バッファーに懸濁、調整し、10 mg/plate となるように 5 cm NGM プレートに塗布した。他は 2. 3. の方法に準2. 2. 1% SDS 感受性試験

じて行った。

耐性幼虫を得るため、液体培養にて餌枯渇状態となって

3. 結から、さらに 4 日間 20 ℃飼育を行った線虫を用いた。線果

mM potassium phosphate，1 mM CaCl2，1 mM MgSO4，

3. 1. acs-20 ノックアウト線虫は 1% SDS 高感受性である

and 0.5 g/L gelatin）を用いて３回洗い、餌のない NGM プ

線虫は餌の枯渇した環境や高温度環境において耐性幼虫

レート上に置いた。20 ℃ 24 時間培養後、生存する虫の数化することが知られている。耐性幼虫では体表のクチクラをカウントした。

層が口まで覆っており、高温、乾燥、界面活性剤などの薬

虫は 1% SDS 溶液に 15 分間浸した後、M9 バッファー（5剤に耐性となる。そこで、野生型線虫、acs-20 ノックア

2. 3. マラセチア真菌感染実験

ウト線虫、acs-20 のパラログであり主に腸において機能

産卵期にある成虫より卵を回収し、孵化同調させた後、する acs-22 遺伝子のノックアウト線虫について耐性幼虫

25 ℃ 3 日間培養し、1 日齢成虫を得た。マラセチア真菌株化条件における 1 % SDS 感受性試験を行った。その結果、として Malassezia furfur NBRC0656 株を用いた。培養は

acs-20 ノックアウト線虫は 1% SDS に対し感受性を示すこ

クロモアガーを用い 28 ℃にて行った。寒天上のコロニーとがわかった。一方、野生型線虫と acs-22 ノックアウト

をかきとり M9 バッファーに懸濁、調整、10 mg/plate と線虫においては耐性を示す虫が出現した。acs-20 ノック

なるように 5 cm NGM プレートに塗布した。対照群とし

アウト線虫の 1 % SDS 耐性は、acs-20 の導入により回復して、OP50 株を TSA 培地で 37 ℃一晩培養後、M9 バッフ

た（図３、図４）。

ァーで調整し、10 mg/plate となるように 5 cm NGM プレートに塗布した。同調した 1 日齢成虫を、各菌株を塗布した NGM プレート上に移し、25 ℃培養を行った。その後 2

3. 2. マラセチア真菌 M. furfur は線虫 C. elegansに対し病原性を示す

日毎に新しく菌を塗布したプレートに移しながら経日的にマラセチア真菌はヒトや動物の皮膚に常在する担子菌系

観察し、ピッカーで軽く触れて反応のない個体を死亡としの不完全酵母である。Malassezia 属のほとんどの種は増殖た。観察により得られた結果は Kaplan-Meier 法により生に脂質を要求することから皮脂の多い部位に定着しやす存率を計算後、Log-rank test により各群間の生存率の差

く、癜風や脂漏性皮膚炎等の原因となる。これまでにマラを比較した。

セチア真菌のモデル宿主として線虫 C. elegans が用いられた報告はないため、本研究において実験系の確立を行った。

2. 4. アクネ菌感染実験

25 ℃において Malassezia furfur NBRC0656 接種群は２日アクネ菌株としてPropionibacterium acnes NBRC107605

ほどで死滅した（図 5）。20 ℃においても同様の結果が得ら

株を用いた。液体培養は GAM ブイヨンを用い、アネロパ

れた（data not shown）。標準的な餌である大腸菌 OP50 株

ックおよびアネロパックジャーを用いて 37 ℃嫌気培養をの接種では寿命は 2 〜 3 週間であることから、M. furfur

行った。培養液を GAM 寒天培地上にコンラージし、2 日は線虫 C. elegans に対し強い病原性を示すことが示唆され− 109 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

図 3 1％ SDS 感受性試験
白い矢印は１％ SDS に対し耐性を示し、生存している線虫を示す。

図 4 1％ SDS 耐性率（耐性幼虫化率）
Mean ± SE（n=3）

た。acs-20 ノックアウト線虫においては野生型線虫と比acnes NBRC107605 を用いた。その結果、標準的な餌であ較し、生存率が高い傾向はあったが、両者の間に有意な差る大腸菌 OP50 株の接種に比較し、生存率が有意に減少しはみとめられなかった（図 5）。

た（p<0.01）（図 6）。P. acnes は嫌気性細菌であるが、実験
環境（好気条件）において少なくとも 2 日間は生菌が回収さ3. 3. アクネ菌 P. acnes は線虫 C. elegans に対し病原性を示すアクネ菌 Propionibacterium acnes はヒトの皮膚に常在れることも確認した。P. acnes 接種群の生存個体は OP50
接種群と比較し、体が小さく透明度が高かった（data notshown）。

するグラム陽性桿菌である。プロピオン酸を産生することから、寝たきりの高齢者などにみられる悪臭の原因となる。

3. 4. アクネ菌接種による生存曲線は acs-20 ノック菌の特定の株がニキビ発症に関連している可能性が指摘

アウト線虫と野生型線虫とでは異なるキネティクスを示すされはじめた 4）。これまでにアクネ菌のモデル宿主としてアクネ菌接種に対する感受性について野生型線虫と acs-

線虫 C. elegans が用いられた報告はないため、本研究にお20 ノックアウト線虫を比較したところ、両者において有いて実験系の確立を行った。実験には Propionibacterium

意な生存率の差はみとめられなかった。しかしながら、両

また近年、ディープシークエンス法の適用により、アクネ− 110 −

極長鎖脂肪酸含有セラミドの表皮バリア形成における機能と分子機構の解明

図 5 マラセチア真菌感染実験
1 日齢線虫に標準餌である大腸菌 OP50 またはマラセチア真菌 M. furfur を接種した。
1 群あたりの個体数 n >50

図 6 アクネ菌感染実験
1 日齢野生型線虫 N2 株に標準餌である大腸菌 OP50 またはアクネ菌 P. acnes を接種した。1 群あたりの個体数 n >50

者の生存曲線は異なるキネティクスを示した。acs-20 ノ動物が存在せず、宿主との相互作用について未解決の課題

ックアウト線虫は野生型線虫と比較し観察期間 10 日ころが多く残されている。

までは生存率が高い傾向を示し、10 日以降は逆に低い傾線虫はわずか 1,000 細胞の単純な多細胞生物であるが、筋肉系、神経系、消化管系など多様な組織から構成されヒ

向を示した
（図７）
。

4. 考

トと本質的には共通の生物学的特性を持っており、体表の察

構造もヒトの皮膚と類似点が多い。体表面には、ヒトの皮

皮膚の角質層に存在する細胞間脂質は感染防御に重要な脂と同様に中性脂肪やリン脂質、スフィンゴ糖脂質などで役割を果たすと考えられている。一方でヒトの皮膚の常在構成される脂質層を有する。これまでに、哺乳類において菌には好脂質性、脂質要求性の細菌、真菌が少なくない。

皮膚バリアに重要な役割を果たす極長鎖アシル CoA シン

Propionibacterium acnes（アクネ菌）は皮脂を好み、皮脂

テターゼに着目し、その線虫ホモログである acs-20 遺伝

腺において増殖する性質を有する。Malassezia 属（マラセ

子のノックアウト線虫の作製・表現型解析を行ってきた。

チア真菌）の多くは脂質存在下においてのみ増殖が可能で本研究においては、acs-20 ノックアウト線虫が耐性幼ある。このような菌、真菌については、有効な感染モデル

虫化条件において 1 % SDS 高感受性を示すことを明らかに− 111 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

図 7 acs-20 ノックアウト線虫に対するアクネ菌感染実験
1 日齢 acs-20 ノックアウト線虫に標準餌である大腸菌 OP50 またはアクネ菌 P.acnes を接種した。1 群あたりの個体数 n >50した。この結果は acs-20 ノックアウト線虫の表皮バリア（引用文献）が低下するというこれまでの知見を支持する。また、線虫

1） Herrmann T1, van der Hoeven F, Grone HJ,

C. elegans がヒト皮膚常在菌、真菌の感染モデルとなる可Stewart AF, Langbein L, Kaiser I, Liebisch G, Gosch

能性を考え、種々の細菌、真菌の線虫への感染実験を行っ

I, Buchkremer F, Drobnik W, Schmitz G, Stremmel

た。その結果、マラセチア真菌やアクネ菌が線虫に対して

W. Mice with targeted disruption of the fatty acid

顕著な病原性を発揮することが明らかとなった。また acs-

transport protein 4 (Fatp 4, Slc2 7a4) gene show

20 ノックアウト線虫は、アクネ菌に対して野生型線虫とfeatures of lethal restrictive dermopathy. J Cell Biol.

異なる生存キネティクスを示した。アクネ菌やマラセチア

161,1105-1115, 2003

真菌は様々な脂質を基質とするリパーゼを分泌し、加水分

2） Kage-Nakadai E, Kobuna H, Kimura M, Gengyo-

解により生じた脂肪酸が炎症を誘発、増悪する可能性が指Ando K, Inoue T, Arai H, Mitani S. Two very long

摘されている。以上のことから、acs-20 ノックアウト線

chain fatty acid acyl-CoA synthetase genes, acs-2 0

虫は、リパーゼの基質となる体表面脂質の変化により、アand acs-22, have roles in the cuticle surface barrier in

クネ菌やマラセチア真菌に対し野生型線虫と異なる反応を

Caenorhabditis elegans. PLoS One 5, e8857, 2010

示す可能性が考えられた。

3） Tomida S, Nguyen L, Chiu BH, Liu J, Sodergren E,
Weinstock GM, Li H. Pan-genome and comparative
genome analyses of propionibacterium acnes reveal its
genomic diversity in the healthy and diseased humanskin microbiome. MBio 4, e00003-13, 2013

− 112 −

創傷治癒機構における小胞体ストレス応答の関与
和歌山県立医科大学薬理学講座

松﨑伸介

Recently, accumulating reports have suggested the importance of endoplasmic reticulum (ER) stress signaling in the
differentiation of several tissues and cells, including myoblasts and osteoblasts. Secretory cells are easily subjected to ER
stress during maturation of their secreted proteins. Skin fibroblasts produce and release several proteins, such as collagens,matrix metalloproteinases (MMPs), the tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) and glycosaminoglycans (GAGs),
and the production of these proteins is increased at wound sites. It is well known that differentiation of fibroblasts intomyofibroblasts is one of the key factors for wound healing. In this study, we examined the effects of ER stress signalingon the differentiation of fibroblasts, which is required for wound healing, using constitutively ER stress-activated primarycultured fibroblasts. The cells expressed positive α-smooth muscle actin signals without TGF-β stimulation compared with
control fibroblasts. Gel-contraction assays suggested that ER stress-treated primary fibroblasts caused stronger shrinkage
of collagen gels than control cells. These results suggest that ER stress signaling could accelerate the differentiation offibroblasts to myofibroblasts at injured sites. The present findings may provide important insights for developing therapies toimprove wound healing.

目的で、ER ストレスの１つである tunicamycin （糖鎖修

1. 実験背景飾阻害剤）の反復投与を行った。最終的には、細胞死の促

小胞体ストレス（以下 ER ストレス）による細胞死機構に進はなしに ER ストレス応答が亢進している状態を示す条

ついての多くの研究がなされ、変性疾患発症過程における

件を絞り込み、それら条件に合致する実験条件を今後の方

ER ストレスの重要性は多数報告されている

1 - 7）。一方、より強い筋組織の形成を行う過程で ER ストレスによる筋芽8）法として採用した。
細胞分化への影響については Fibroblast からmyofibroblast

細胞の選択が行われていること 、骨芽細胞の分化においへの分化をもとに検討した。その分化の指標としてはて ER ストレス応答経路が重要であること 9、10）が報告され

α - SMA 発現レベルの変化（上昇）を用いた。また、機能的た。このことは、ER ストレスが細胞死を誘導するだけでな分化であったか否かを検討するためゲルコントラクショ

はなく、成体の恒常性維持に重要であることを示唆している。

ンアッセイを用い、分化した fibroblasts の有する収縮能力膵臓などの内分泌器官においては大量の分泌タンパク質の合成過程において生理的 ER ストレス状態にあると考えられている。我々は創傷皮膚においては多くの分泌タンパを評価した。
詳細な方法と結果については下記の「3．実験方法」、「4．
実験結果」の項目に記載する。

ク質の合成が行われることから、膵臓などの内分泌器官

3. 実験方法

同様生理的 ER ストレス状態にあると想定し、創傷治癒機構における ER ストレスの重要性に着目した。一方で、創3. 1. Fibroblast の準備と培養

傷治癒機構では fibroblast から myofibroblast への分化が重要であることが知られている

11、12）。そこで、創傷皮膚領

2−4 日齢の C57B6 マウスの皮膚を切除し培養ディッ
シ ュ に 貼 付 け、10 % fetal bovine serum（FBS） を 含 む

域における ER ストレスの意義を検討する目的で、生理的Dulbecco's modified Eagle's medium（DMEM）を添加し、ER ストレスが fibroblast 分化に及ぼす影響を検討すること

酸素 5 %、二酸化炭素 95 %、37 ℃の条件で培養した。そのとした。

後、2 度の播きかえを行い、各実験に用いる細胞培養用ディッシュにて培養。必要に応じて 1µg/ml tunicamycin（an2. 実験概要

inhibitor of N-glycosylation in the ER）、又は溶媒である

in vitro 実験系において生理的 ER ストレスを再現する

dimethyl sulfoxide（DMSO）による刺激を 1 日 5 分間、3
日連続で実施した。この連続刺激が修了した後、3 度目の播きかえ作業を実施し、血清を含まない DMEM へと変更、
24 時 間 経 過 し た 後、10ng/ml TGF -β1（R&D Systems

Involvement of ER Stress in the woundhealing of skin
Shinsuke Matsuzaki
Department of Pharmacology, Wakayama
Medical UniversityInc.）を含む又は含まない DMEM へと変更した。これらの実験は、大阪大学動物実験規定に基づき作成・承認を得た
計画書に則り実施した。

− 113 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

3. 2. 細胞死アッセイ

membrane（Millipore, Bedford, MA）に転写、5 %（w/v）skim

Primary fibroblasts は 96-well plates に 1× 10 ／well に

milk によるブ ロッキング作 業を行った後、GRP78/Bip 又て播かれ 36 時間血清入り DMEM で培養された後、DMSO

は β - actin 抗 体 に て 免 疫 反 応 を 実 施 し た。 抗 体 と し て又は TM による負荷が行われた。負荷時間は下図の通りでは、mouse anti-BiP/GRP7 8 antibody（BD Transductionある。負荷が終了した後 phosphate buffered saline（PBS）

Laboratories）/ HRP - conjugated anti-mouse IgG

にて 2 度洗い流し、DMEM（D1145，SIGMA）と WST -1 試

antibody（Cell Signaling Technology）、又は anti -β -Actin

薬を混合した液にて 3 時間培養し、WST -1 試薬の反応を

HRP - DirecT（MBL Co., Nagoya, Japan）を使用。発色に吸光光度計にて測定した（λ 450 nm−λ650 nm）。3 回以上は Luminata Classico Western HRP substrate（MERCK

同等の実験を実施し、得られた結果を標準誤差付して表示

MILLIPORE）を用いた。結果を数値化するため得られたバした。

ンドを Image J にて数値化した。独立した 3 回以上の施行

4

結果を平均化し、標準偏差を付して示した。

3. 3. Western blot analysis
各刺激・負荷を受けた細胞は PBS 洗浄を 2 度行った後に

3. 4. Collagen Gel Contraction Assay

回 収 さ れ、protease inhibitor cocktail（Roche, Sydney,

各 負 荷 を 受 け た fibroblasts に 対 し て Collagen Gel

Australia）を含むRIPA bufferにて溶解された。同量のタンパ

Culturing Kit（Nitta Gelatin, Inc.）を用いたゲル収縮能

ク質 サンプル を 5 ‒ 20 % gradient SDS-PAGE，e-PAGELの評価を行った。2 × 105 cells が 0.5 ml の培養用ゲル内に（ATTO CO., Tokyo, Japan）にて電気泳動した後、PVDF

均一になるよう培養された。均一化された培養用ゲルはFig. 1 Condition setteing for physiological ER stressed fibroblast(a) (upper panels) Primary cultured fibroblasts were treated with 1µg/ml TM. The cells were observed each time points. (middle
and bottom panels) Primary cultured fibroblasts were transiently treated with 1µg/ml TM for 24 h or 30 min and the medium
were changed to the culture medium. The cells were observed each time points after the medium change. (b-d) The effect ofeach ER stress methods on cell viability was measured by WST-1 assay. (b) 24h or 5 min of transient 2µg/ml TM stimulation,(c) 5 min of repeated 2µg/ml TM stimulation and (d) 1h or 5 min of repeated 1µg/ml TM stimulation were adopted for theseassays. Same amount of DMSO were used as controls. The P value was compared with the control and calculated by Student's
T test.

− 114 −

創傷治癒機構における小胞体ストレス応答の関与

4- well culture plates にて固められ、固まった後はゲルとIgG antibody を用い反応させた後、共焦点顕微鏡 LSM-の接地面を剥離、その状態での血清を含まない DMEM に

510 laser scanning microscope（Carl Zeiss, Oberkochen,て培養された。必要に応じて TGF -β1 の添加も行っている。

Germany）を用いて観察を行った。

各タイムコースでのゲルの大きさは Image J にて数値化し

4. 実験結果た。独立した 3 回以上の施行結果を平均化し、標準偏差を付して示した。

近年、生理的小胞体（ER）ストレスが細胞の分化に重要な働きをしていることが多数報告されるようになってき3. 5. Immunocytochemistryた。そこで、皮膚 fibroblast の分化における ER ストレス

各負荷を受けた fibroblasts に対して 2 度の PBS 洗浄を行について検討することとした。生理的 ER ストレスを培養った後、4 % paraformaldehyde による固定を行った。そ細胞レベルで再現する目的で、細胞死が誘導されず ER スの後、5% BSA and 0.1% triton-X 処理を行い、一次抗体とトレス応答（本研究では GRP78 発現にて確認）が誘導されし て rabbit monoclonal antibody for α -SMA（Epitomics,

る条件を検討することとした（図 1・2）
。先ず、1µg/ml

Inc., CA, USA）
又はrabbit polyclonal antibody for Bip（Celltunicamycin（TM）負荷を行い 24・48・72・96 時間後にSignaling Technology, Beverly, MA）、二次抗体として観察した。その結果として 24 時間負荷では僅かな細胞死

fluorescein isothiocyanate（FITC）-conjugated anti - rabbitが確認された（図 1a）。本結果をもとに、30 分、24 時間のFig. 2 Effects of repeated TM stimulation on fibroblasts’ morphology and GRP78/BiP expression
Primary cultured fibroblasts were treated with 1µg/ml TM or DMSO for 5 minutes per day 3 days in series. After this repeated
TM or DMSO stimulation, medium was changed to DMEM with 2% horse serum (Basal medium condition) and incubated for 12h
to induce differentiation. Primary cultured fibroblasts were treated with 1µg/ml TM or DMSO for 5 minutes per day 3 days inseries.
(a) Just after this repeated TM or DMSO stimulation, the cells were observed (upper panels) and stained by anti-Bip antibody(bottom panels).
(b) The cells treated with TM (Rep-TM) or DMSO (Rep-DM/Rep-DMSO) cultured in the culture condition medium (C.C.) or in
the Basal medium condition for differentiation (M.C.) were collected and lysed. Western blot analysis was performed using
an anti-Bip or anti- ㌼ -actin primary antibody (upper panels). Quantitative data were obtained by densitometry of the bands.
Data are expressed as the mean ± SEM for at least three independent experiments (shown as a ratio of the Rep-DM C.C.).
The P value was compared with the control and calculated by Student's T test.
(c) Left and middle panels show the cells treated with TM (Rep-TM) or DMSO (Rep-DMSO) cultured at Basal medium
condition. Right panel shows the cells treated with TGF- ㌼ 1 after the incubation at the basal medium condition.

− 115 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

TM 単回負荷を行い、培養用メディウムに戻して 24・48・

変化しているか否かを確認するため、α - SMA による免疫72・96 時間後に細胞の観察を行ったところ、24 時間負荷

染色を行った。その結果、basal medium において TM 反細胞ではかなりの細胞死の促進が確認された（図 1a）。

復負荷細胞では DMSO 反復負荷細胞に比して α - SMA の一方で、30 分負荷細胞も軽度の細胞死誘導が確認された。

発現が上昇していることが明らかとなった（図 3）。さらに、

そこで、5 分間単発 TM 負荷を実施したところ細胞死は確

TGF - β1 刺激後の各 fibroblasts においても TM 反復負荷細認されなかった（図 1b）。次に、24 時間毎 TM 5 分、30 分、胞においてα - SMAの発現上昇を認めた（図 3）。このことは、

1 時間負荷を 3 度繰り返した細胞に対して細胞死アッセイ

ER ストレス反復刺激が fibroblast の分化を促進しているこ（WST - 1 アッセイ）を実施した。その結果、1µg/ml TM 負とを示唆している。

荷では連続的 5 分間負荷細胞では細胞死の誘導が確認されそ こ で、Collagen Gel Culturing Kit を 用 い た ゲ ル コ ン

なかったが、30 分、1 時間連続負荷細胞では細胞死の促進

ト ラ ク シ ョ ン ア ッ セ イ を 実 施 し、TM 反 復 負 荷 に よ るが確認された（図 1d 及び data not shown）。一方で、2µg/

fibroblast の分化促進はゲル収縮力に影響するのか否かを

ml TM 負荷では連続的 5 分間負荷細胞が細胞死の促進を検討することとした。TGF- β1 刺激なしの場合、TM 反復示した。この結果より、生理的 ER ストレスを培養細胞で負荷細胞では DMSO 反復負荷細胞に比して有為なゲル収模倣する方法として 1µg/ml TM 連続的 5 分間負荷（以下、縮能を示すことが明らかとなった。一方、TGF- β1 刺激

TM 反復刺激）を用いることとした。

では両者ともに強いゲル収縮能を示したものの TM 反復

上記方法にて fibroblasts への負荷条件を決定した上で、負荷細胞ではより強い収縮傾向を示した（図 4）。本結果よER ストレス応答への影響を観察したところ、免疫染色法

り、fibroblast は ER ストレス反復刺激により分化誘導されにおいてもウェスタンブロット法においても GRP78 発現

α - SMA 陽性細胞（myofibroblast）に変化し、ゲル収縮能をが促進していることが確認された（図 2a, b）。次に細胞形有するようになることを明らかとした。

態を確認したところ、通常培養メディウム下では TM 反5. 考復負荷細胞とコントロールとして用いた DMSO 反復負荷

察細胞の間に大きな差を認めなかったが、分化誘導前に用本研究結果は生理的 ER ストレスが皮膚由来 fibroblast

いる血清なし DMEM（basal medium）に変更後 24 時間での分化に重要な役割を果たす可能性を示している。創傷部

TM 反復負荷細胞は扁平な形態を示すことを見出した（図領域では創傷治癒に必要となる多くの分泌因子の合成が促2c）。一方で、TGF - β1 刺激が fibroblasts の分化を誘導す進しており、過剰な蛋白質合成状態にある。すなわち生ることが知られていることから、fibroblasts に TGF- β1 刺

理的 ER ストレス状態にあることが予想され、創傷部では激を行い形態観察したところ、扁平な形態変化を示すこと

ER ストレスを介した分化が誘導されていることが予想さから、TM 反復負荷により分化が誘導されていることが予れる。一方で、fibroblast の分化が促進状態にあり、強い想された。そこで、fibroblasts が分化し myofibroblast に収縮能を示す状態にあると考えられるケロイド領域におい

Fig. 3 The repeated TM treated fibroblasts showed ɑ-SMA induction.
Rep-TM and Rep-DMSO cells were cultured at basal medium for 12 h (upper panels) andeach cells were treated with TGF-㌼1 after basal medium condition for 48 h. The cells were fixedand immunocytochemistry was performed with anti - α - SMA antibody.

− 116 −

創傷治癒機構における小胞体ストレス応答の関与

Fig. 4 The repeated TM treated fibroblasts showed accelerated collagen gel contraction.
Rep-TM and Rep-DMSO cells were embedded in collagen gels. After gel formation, the rims of the gels were detached andgels were overlaid with basal medium or TGF-β1 containing medium. (a) these pictures show one of the experimental results ofgel contraction. (b and c) Gel size of each conditions were measured at 48 and 72 h. Gel size containing Rep-DMSO cells
treated with basal medium were used as control. Each bars show the ratio to control at 48 h (b) and 72 h (c). The P value wascompared with the control and calculated by Student's T test.

て ER ストレス応答の亢進が報告されている 13）。この報告

doi : 10. 1126/science. 281. 5381. 1312

は、皮膚 fibroblast の分化に ER ストレスが関与している

2） Glücksmann A (1 9 5 1) Cell deaths in normal

ことを示しており、本研究結果を支持するものである。

vertebrate ontogeny. Biol. Rev. 2 6: 5 9–8 6 pmid:
24540363 doi: 10. 1111/j. 1469-185x. 1951. tb00774. x

追記3） Kerr JFR, Wyllie AH, Currie A (1 9 7 2) Apoptosis:
a basic biological phenomenon with wide-ranging

本報告内容は以下の雑誌に受理され掲載された。
・Matsuzaki S, Hiratsuka T, et. al., Physiological ER
Stress Mediates the Differentiation of Fibroblasts.

implications in tissue kinetics. Br. J. Cancer. 2 6: 2 3 9–257 pmid: 4561027
4） Nakagawa T, Zhu H, Morishima N, Li E, Xu J,

PLoS One. 10(4) : e0123578. 2015.

Yankner BA, et al. (2 0 0 0) Caspase-1 2 mediates（引用文献）

endoplasmic-reticulum-specific apoptosis and

1） Thornberry NA, Lazebnik Y (1 9 9 8) Caspases:
enemies within. Science 281: 1312–1316 pmid : 9721091

cytotoxicity by amyloid-beta. Nature. 403 (6765) : 98–
103. pmid: 10638761 doi: 10. 1038/47513− 117 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 20175） Hitomi J, Katayama T, Eguchi Y, Kudo T, Taniguchi
M, Koyama Y, et al. (2 0 0 4) Involvement of caspase-4

involved in bone formation. Nat Cell Biol. 1 1 (1 0) :1205–11. doi: 10. 1038/ncb1963. pmid: 19767743

in endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis and10）S a i t o A , O c h i a i K , K o n d o S , T s u m a g a r i K ,Abeta-induced cell death. J Cell Biol. 165 (3) : 347–56.

Murakami T, Cavener DR, et al (2 0 0 9) Endoplasmic
Reticulum Stress Response Mediated by the PERK-

pmid: 15123740 doi: 10. 1083/jcb. 200310015
6） Katayama T, Imaizumi K, Sato N, Miyoshi K,

eIF2arufa-ATF4 Pathway Is Involved in Osteoblast

Kudo T, Hitomi J, et al. (1 9 9 9) Presenilin-1 mutations

Differentiation Induced by BMP2. J Biol Chem. 286 (6) :downregulate the signalling pathway of the unfolded-

4809–4818. doi: 10. 1074/jbc. m110. 152900

protein response. Nat Cell Biol. 1 (8) : 4 7 9–8 5. pmid:11）Garner WL, Rittenberg T, Ehrlich HP, Karmiol S,
Rodriguez JL, Smith DJ, et al (1995). Hypertrophic scar

10587643
7） Lindholm D, Wootz H, Korhonen L (2006) ER stressfibroblasts accelerate collagen gel contraction. Woundand neurodegenerative diseases. Cell Death Differ.

Rep. Reg. 3, 1 8 5–1 9 1. doi: 1 0.1 0 4 6/j.1 5 2 4-4 7 5x. 1 9 9 5.

13 (3) : 385–92. pmid: 16397584 doi: 10. 1038/sj. cdd.

30210. x12）Hinz B (2 0 0 7) Formation and Function of the4401778
8） Nakanishi K, Dohmae N, Morishima N (2 0 0 7)

Myofibroblast during Tissue Repair. Journal of

Endoplasmic reticulum stress increases myofiber

Investigative Dermatology 1 2 7, 5 2 6–5 3 7. pmid:

formation in vitro. FASEB J.21 (11) : 2994–3003. pmid:

17299435 doi: 10. 1038/sj. jid. 5700613
13）Butler PD, Wang Z, Ly DP, Longaker MT, Koong

17435177 doi: 10.1096/fj. 06-6408com
9） Murakami T, Saito A, Hino S, Kondo S, Kanemoto

AC, Yang GP (2 0 1 1) Unfolded Protein Response

S, Chihara K, et al (2 0 0 9) Signalling mediated by theRegulation in Keloid Cells. J Surg Res. 167 (1) : 151–157.

endoplasmic reticulum stress transducer OASIS is

doi: 10. 1016/j. jss. 2009. 04. 036. pmid: 1963134− 118 −

「香り」の社会言語学：人はどのように「香り」の言語化を行うのか
ユタ大学言語文化学部

東照二

Human olfaction or the sense of smell is considered very difficult to verbalize in words. Ackerman ( 1991 ) rightly statesthat the sense of smell is a “mute sense.” Nevertheless, we talk about smells all the time. For example, the perfume industry
heavily relies on our ability to express certain smells in words. How do we accomplish the challenging task of putting smell
into words? The present study is a sociolinguistic analysis of the language pertaining to perfumes in Japanese and English.
One of the findings is that we use other senses (e.g., taste) to put smell into words. Furthermore, a story-telling strategy lets
the addressee be involved in making sense of the smell. This suggests that the language of smell is a “joint production” ofmeaning between a sender and an addressee.

１．緒

選び、台所用洗剤では、黄色（レモンやオレンジなどとの言関連）を選んだという。櫻井（2000）は、香りと触覚語（「や私たちは「香り」から逃れることはできない。電車、オフ

わらかい」、「さらりとした」、「ふんわりとした」など）の強ィス、学校、店、病院、街、食堂、植物園などいたるとこい結びつきを指摘している 6）。雨宮・光田・宮原（2008）は、

ろで、香りは私たちの日常生活に深く入り込んでいる。し被験者への理解度調査などを通じて、味覚を示す形容詞がかしながら、私たちの周りに豊富にある香りという五感の匂いを表現するために使われていることを指摘している 7）。

一つを、どうことばで表現し、他者に伝え、コミュニケー

たとえば、「甘い匂い」、「すっぱい匂い」、「美味しい匂い」

ションをとるかという観点から考えてみると、他の感覚（味といった表現である。こういった研究成果は、私たちは香覚、触覚など）と違い、香りは独特な位置を占めているとりを香り以外の感覚語（視覚、触覚、味覚など）を使って表いえる。端的にいうと、アッカーマンの『感覚の自然史』（A現しており、香りそのものに限定したことばはないという

Natural History of the Senses） が指摘するように、香り確証を与えてくれる。つまり、嗅覚を原義とする形容詞やは「ことばにできない感覚」（mute sense）といえる。つま名詞などはないということになる。

1）

もっとも、こういった研究は、主に実験的手法を用いたり、言語化が難しい感覚だということになる。
特に、アッカーマンのいうところの「ことばにできないもので、それはたとえば被験者に香水を嗅がせて、あらか

感覚」、つまり香りを表現する香り専用のことば（原義）がじめ用意された単語群（名詞や形容詞など）を提示し、適切存在しない、ということを考えてみると、香りを表現するな単語を選んでもらうというものであった。では、単語のためには他の感覚を表わすことばで代用しないといけない

レベルを超えて、どういう表現形式で、なおかつ実験ではということになる 。これは、「共感覚」といわれるもので、なく、現実の場面で言語化しているのであろうか。そこで、「何かの感覚刺激を、本来の感覚以外の、別の感覚刺激が本研究では「香り」は私たちの日常生活の中でどのように言2）

連動して感受する感覚」 のことだといえる。春原（2010：

語化されているのか、そこにはどういうディスコース（談109）は、香りに関する先行研究について、「香りを、香り話）、特徴があるのか、そして「香り」の言語化は私たちの以外の感覚（視覚、聴覚、触覚、味覚）
で表現する可能性を経験を語る（narrative）という文化にどう貢献しているの

3）4）

示唆している」 としているが、実際、香り以外の感覚でしかを、社会言語学の観点から解明しようとするものである。

か表現できないのが、香りだといえるだろう。では、香り２．方以外のどういう感覚で香りを表現しているのであろうか。

法

春原（2010）は、香りと色（視覚）の共感性を報告している 5）。

本研究では、日本語と英語について、インターネットの

たとえば、ヘアケア製品では、被験者は濃い目のピンクを様々なホームページに掲載されている香水に関する記述をもとに質的調査を行った。日本語では、香水を紹介するホームページ（shiawase-kousui.com, cosme.net など）、さら

Putting smell into words: A sociolinguistic
study of how we verbalize the sense of
smell
Shoji Azuma
Department of World Languages andCultures, University of Utahに一般市民がネットを使って香水に関する質問をし、それに 一 般 の 閲 覧 者 が 答 え る と い う ホ ー ム ペ ー ジ（detail.
chiebukuro.yahoo.co.jp など）を調査対象とした。さらに英語については、様々香水に関するホームページのほかに、
Fragrantica や Basenotes というウェブサイトを調査した。

− 120 −

「香り」の社会言語学：人はどのように「香り」の言語化を行うのか

こういったサイトは、香水の専門家ばかりでなく、一般市

だことがありそうな物であるため、その経験をもとにある民、消費者の視点から香りに関して投稿がなされている人程度想像することが可能となる。具体的な例としては次の気サイトである。これらに掲載された香りの表現について、ような表現があげられる。

その内容、特徴などを探ってみた。

３．結⑼「爽やかなレモンティーのような柑橘系の香り」（matome-果

naver.jp）

３．
１．共感覚

⑽「ムスクやジャスミンを効かせた香り」（shiawase-kousui.

予想されたように、香りを表現するためには他の感覚語を使って香りを言語化している様子がうかがえた。日本語
から、この
「共感覚」
の用例をあげてみると、次のようなもcom）⑾「チャイニーズピオニーなどエキゾチックな香り」（shiawasekousui.com）のがある。

⑿「グリーンティーを基調としたピュアな香り」（shiawase-⑴ 味覚：「柑橘系やストロベリーの甘酸っぱい香りに、ス⒀「ジンジャーリリーの甘露な香り」（item.rakuten.co.jp）

kousui.com）
パイスの隠し味がキリッ」（siawase-kousui.com）⑵ 聴覚：「ライブジャズの音楽のように即興リズムを刻む

レモンなどは、その香りについて、かなり容易に類推、かのようなグループ感あふれる香り（item.rakuten.co.jp）

想像できるケースといえるだろう。しかし、「チャイニー⑶ 視覚：「清楚なお姉さんをイメージできる爽やかさを強ズピオニー」や「ジンジャーリリー」などはその植物名が指調したフローラル & フルーティの香り」（siawase-kousui.

す物がどういうものであり、一般的にどういう香りを発す

com）

るのか、またそれらを嗅いだ経験があるかとなると、その⑷ 視覚：「洗練されたしなやかでスリムな香り」（siawase-

知識や経験もない人も多いかもしれない。したがって、こういった比喩は、どの程度、効果的かは不明だ。しかしな

kousui.com）⑸ 触覚・視覚：「香水のボトルのように全体的に丸みのあがら、相手の想像力を刺激し、経験の外にある非現実的ともいえる世界へ引き込むことには成功しているといえるだる香り」（family-neta.com）

ろう。英語からの例もみておこう。
香りそのものを示すことば（原義）はなく、ほかの感覚を借用して香りを表現している様子がわかる。
「甘酸っぱい」、⒁ Blending notes of orange blossom, pink pepper, iris,「即興リズム」、「清楚なお姉さん」、「スリム」、「丸み」といlilac, wisteria, hyacinth, heliotrope, powdery musk, talc,

った香り以外の感覚（味覚や聴覚など）から香りを類推、連and rice（fragrantica.com）

想させる手法である。英語でも似たようなケースが観察さ⒂ boxing glove with humid, hot and leather tones

れた。以下に、いくつかの例をあげておく。

（dmarge.com）⑹ 味覚：It is sweet from berries and vanilla (fragrantica.

上記以外にも、様々な植物、野菜、木、動物（合成物）、
嗜好品（チョコレートなど）、ハーブなどが使われている。

com)⑺ 触覚・視覚：It is heavy and dark (fragrantica.com)⒂ では、ボクシングのグローブ（革製品）が使われている⑻ 聴覚：Fragrance notes, directly smelling from fragrantが、香水として魅力的な香りになるかどうか、個人的な嗜好によるだろう。しかしながら、こういった比喩は、私た

blossoms（fragrantica.com）

ちに（嗅いだことのないものも含めて）様々な物から香りの
特に、⑻ では音楽の用語である note（
「音色」
）が香りを

イメージを想起させる。この想像という行為を通じて相手表現するために使われている。香りが時間を追って変化しを引き込むストラテジーについては、後で考察の項でさらていく際にもこの note が使われている。あたかも交響曲に触れてみたい。

のように香りを表現する方法である。

３．３．周囲と自己

３．
２．実在する物からの類推

母語、およびその背景文化という観点から「香り」の表現

上記にみられるように、ほかの感覚に頼り、香りを表現

を日英語で比較してみると、一つの興味深い違いは、社会するというストラテジー（共感覚）以外に、自然界に実存への受け入れに対し、どの程度、意識し過敏であるかといする植物などを比喩として使うことにより、香りを表現すう点である。概して、日本語のケースでは、自分の周囲、る方法も頻繁にみられた。相手にとって実際に香りを嗅い属する集団を意識し、あまり突出して目立つことのないよ− 121 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

うにし、社会的な受け入れに大きな関心を払っているよう語のケースをみてみると、日本語とは違い、個人が自信をな表現が多いことが観察された。具体的な例として、次のもって、自己を主張していくことばで香りを表現する傾向

ような表現をあげることができる。

がうかがえる。それは、たとえば次のようなケースだ。

⒃「仕事場や私生活オール OK 的な香りです」（amazon.

 perfect for the modern woman who is confident enoughco.jp）

to let herself – not her fragrance – command attention⒄「万人ウケする香り」（migoro.jp）（m.sephora.com）
 Sassy. Fearless. Feminine. Step into a bright new

自己を主張し、突出するのではなく、むしろその逆に、world, one that is larger than life. Jump on this ride

自分の周りの環境、社会に自分を溶け込ませ、受け入れらand get your world spinning.（www.amazon.com）

れることを目的とする表現である。
「万人ウケ」する香りと Old Spice enhances confidence and commands female

いうのは実際には存在しないであろう。しかしながら、社

attention（oldspice.com）

会、集団に属する大多数の人たちが受け入れてくれると願 an explosion of, not only a powerful floral scent, but

いたいような香り、つまり個性的というよりは社会的な通also burning passion and depth.（fragrantica.com）

念にマッチするような香りを求めていることがわかる。消費者の一人は、オンラインショップで、次のようなコメン
トを載せている。

日本語の場合は、周囲に細心の注意を払い、控えめに振る舞い、自分の周りの集団、社会に受け入れられることに価値をおくようなことばであった。しかし、英語では、⒅「いかにも香水をつけているのが分かるような強い香り

confident, fearless, new world, confidence, commands,

が苦手なのですが、これはちょうどよい香り具合で、匂explosion, powerful, passion といったことばが象徴するよ

いもさわやかで癒されます」（matome-naver.jp）

うに、恐れず、大胆に、自信を持って力強く、情熱的に自分を表現し、新しい世界を切り拓いていくという態度を示

次の「〜らしい」という表現は、こうあるべきだという社

すことばが見受けられた。日英語で、周囲に注目するか、

会的通念、要請、期待に応え、自分をそれに近づけること自己に注目するかによって表現に差が出てくるといえる。

を意図したものだといえる。

４．考⒆「女の子らしい香り」（www.cosme.）

察

嗅覚を原義とすることばはなく、「香り」はまさに「こと⒇「上品で女性らしい香り」（realworld.jp）

ばにできない感覚」（mute sense）であるとはいえ、「香り」

「全てを包み込むような男らしい香り」（beauty.pintoru.

をことばで表現し、相手に伝え、何らかの影響を相手に与com）えることが全くできないというわけではない。特に、様々な香水を商品として消費者に薦め、興味を持ってもらい、

これ以外にも、自分をあまり強く出さず、抑制気味に表

最終的には購買という行為にまで進んでもらいたいと考え現することばとして、「ふんわり」「ちょっぴり」「かるく」

る香水の売り手たち、さらには一般の人で、香水についてといった控えめ、謙虚さを示すことばも頻繁に観察された。

の自分の感想、評価などを他の人たちに伝え、何らかの貢その具体的な例をみてみよう。

献をしたいと考える人たち、こういった人たちは、どうい
うふうにことばを使い、相手とコミュニケーションをとっ「甘いけど、ふんわり嫌味がなくて爽やかに香ります」ているのであろうか。オースチン（1962）の発話理論 8）にあ

（おすすめの香水 .net）てはめて考えてみると、香りをことばで表現する、つまり

「香りが主張しすぎず、ふんわりと自然に香る」（kracie.

「発話」する、そして香りについて相手に報告するという「発

co.jp）

話内行為」を行う、そしてここで終わるのではなく、さら「チャーミングでちょっと野性的」（pure-la.net）に進んで、相手に何らかの行動を起こさせる、例えば特定「ちょっぴりクールな色気」（pure-la.net）の香水を購買してもらうといった「発話媒介行為」まで誘発

「 ふ わ っ と か る く 香 水 の 香 り が し て く る 」（matome.

することばとは、一体どういうものであろうか。

naver.jp）

４．
１．想

像

これらは、社会的通念を優先させ、自己を抑え、わきま

一般的には、具体的で証明可能な情報を相手に伝えるこえや謙虚さを良しとする価値観の表明である。しかし、英とにより相手を説得し、賛同を勝ち取ることができるとい− 122 −

「香り」の社会言語学：人はどのように「香り」の言語化を行うのかえる。つまり、ことばの指示機能を最大限に活用するような例として、アメリカの有名ブランド「Old Spice」のテレな表現方法である。しかしながら、香りという「ことばにビ CM の一つをみてみよう。この CM では、上半身を露わできない感覚」となると抽象的で証明不可能な印象、イメにした体格のいい男性が、視聴者に語りかけながら、美しージを中心とせざるをえない。実際、香水などの広告には、い場所に連れていく。興味深いことに、商品の具体的な香同じ匂いに関する商品である消臭剤や脱臭剤と違い、具体りは一切説明されていない。物語は次のように始まる。

的で証明可能な情報性が低く、曖昧な婉曲表現や誇張表現が多くみられるという指摘もある 9）。抽象度の極めて高い

 Hello, Ladies. Where can you go when your man

表現だが、何らかのイメージを相手に呼び起こさせる例とsmells like me? Close your eyes and I’ ll show you. Do
you feel it? The sand between your toe tips? I do.（old

して次のようなものがある。

spice youtube commercial）
「思わず女性が振り向いてしまう香り」（store.shopping.

（淑女の皆さん。皆さんの相手が私のように香るなら、どこへ行けると思いますか？目を閉じてください、お見yahoo.co.jp）
「イノセントな香り」（asiakirei.com）

せしましょう。今、感じることができますか？あなたの smells like ice, wind and freedom (news.oldspice.com)

指の間の砂を？私は感じますよ。）

 when I apply on me I feel like I’ m dancing in the
男性がハワイの浜辺（らしき所）に立っている。ビーチでdark! (boisedejasmin.com)のバケーションである。すると、今度はスイスの雄大なア「イノセントな香り」とは一体どういう香りなのであろう

ルプスが背景に見える山に登っている。かと思うと、そこか。また、氷、風、そして自由を感じる香りとは、どういから、いつの間にか、水中で熱帯魚とともにゆったりと泳うものであろうか。具体的にコレだという香りではない。

いでいる。そして、男性は次のように語りかけてくる。

むしろ抽象度が高く、具体的でないがゆえに、際限ないといってもいいくらいに、人々に何らかの香りを想像させる

 You see. When your man smells like the fresh scents

刺激表現だといえる。抽象的なことばが、人々を想像の世

of Old Spice, you can go anywhere.（old spice youtube

界に巻き込んでいき、各人がことばの受け手という範疇をcommercial）

はるかに超えて、意味作りの積極的な参加者、また主役と（おわかりいただけたと思います。皆さんの相手がオーなる。

ルドスパイスの新鮮な香りのように匂うなら、皆さんはどこへでも行けますよ。）

４．
２．関

与

ここで、ことばの機能を考えてみよう。それは、とかくそして、最後は暖炉の火がゆったりと燃えているリビン

送り手から受け手への意味の伝達という一方向的で静的なグルームが映し出される。部屋には、隅に魚が泳ぐ水槽がものを想定しがちだ。しかし、実際は送り手と受け手が相あり、男性はあたかもそこから抜け出してきたかのように互に関係し影響を与えながら二人で意味を作り上げる、つして、その隣に置かれた真っ赤なグランドピアノの上にゆまり「共同産出」（joint production）であるというダイナミったりと横たわっている。そして、次のように語りかけて

10）

ックな言語観も考えられる 。送り手が一人で意味を作りくる：「もちろん、自分の家にいたければいてもいいんで上げ確定するのではなく、受け手がその意味作りに積極的すけど」（Unless, of course, you prefer to stay in.）
。海辺、に関わり、受け手の参加、関与（involvement）を得て初め

美しい山、水中、そして暖炉のある家などが映し出され、て意味が作り上げられていくとする考え方だ。香りの表現

それとともに受け手は自分なりのバケーションを楽しむは、まさにこの受け手の関わり、関与というものが極めて（と想像する）。送り手が作った物語の中に入り込み、受け

大きく、ダイナミックな言語観を象徴したものといえない

手も物語の参加者、主役になり、物語に自分なりの意味づだろうか。

けをしていく。ここまで来た時、受け手はすっかり物語の

社会言語学者のタネンは、この受け手の関与という点に着目し、関与を生み出す普遍的な言語的方略として、スト

一 部 に な っ て し ま っ て い る。 完 全 な 引 き 込 み、 関 与（involvement）が達成される。

ーリー・物語（narratives）を語ることをあげている 11）。ス

上記の例は、いくつかの場所を巡る物語であるが、時間トーリーを語る方略では、受け手は知らず知らずのうちに軸を巡る物語も多く観察された。香水はつけた瞬間から時物語の中に入り込み、物語の参加者となり、送り手と一体

系列で香りが微妙に変化していくといわれている。大まかになって、その物語に意味づけをし、気がついてみると、に、最初の 10 分ぐらいまでの香りをトップノート、それ

自分なりの物語を作り上げていくことになる。その代表的から２時間ぐらいまでをミドルノート、そこから香りが消− 123 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

えてしまうまでをラストノートと区分けされている（英語it becomes a great signature.

では、fragrance pyramid と呼ばれている）。この時間を This is a very unique smell. I believe it belongs to the

追った香りの変化を物語として表現することによって、受category love-it-or-hate-it.

け手を引きつけていく手法である。例を日本語からみてみ I have read that most say that this smells like aよう。

powdery soap but to me it smells quite lovely.（fragrantica.
com）〈トップ〉ラム酒の芳醇な香りが弾け、パッションフルーツがトロピカルな甘酸っぱさでパンチを効かせます。

最初の一人が  で古い石鹸のような香りがしてあまり〈ミドル〉
熟したガーデニア（くちなし）の旨味のある甘さ

薦められないと述べる。続く人たちも  や  で古い石に、ムスクが柔らかなパウダリー感で奥行きを出します。

鹸という比喩を受けて、それを自分の言葉で膨らませなが〈ラスト〉
トンカ・ビーンの杏仁を桜の葉で包んだような、

ら他者に繋げて述べていく。それを受けて、 で別の視

ほろ苦い香ばしさがとろけだし、バニラが華やかな甘さ

点が提供されていく。少し時間を置いてみるととてもいいを添えます。
（kousuijyouhou.blog.fc2.com）

香りになると言う。 ではそれを受けて、異なった視点も尊重して考えてみると、好き嫌いがはっきり出てくる香

ラム酒の香り、そしてパッションフルーツの甘酸っぱい

りなのかもしれないと述べる。 では、自分にとっては香りから、くちなしの花の甘い香りが広がり、そこから、

素晴らしい香りだという意見が展開されていく。

桜の葉やバニラを思わせるような甘さへと変化していく。

「石鹸」のような香りを起点、テーマとして、それぞれのそれぞれの時間帯での香りの変化を受け手も想像し、その参加者が「石鹸」を飛び石のようにリンクして繋げていくか

変化のプロセスに自分も引き込まれ、参加、体験、意味作のように、一種の対話が発生、持続、そして変貌していく

りをしていく。そうすることによって、与えられた香りの様子がみえてくる。全く面識のない人たちが、香水の香り

表現を自分の世界で再構築していくことになる。このことを言語化するという行為の中で、繋がっていく。香りは、は、香りの表現・言語化とは、表現者である送り手だけが人を巻き込み、お互いに意味作りの参加者にしてしまう効作り、それを受け手が単に受け取るというのではなく、受力があるといえるだろう。

け手の関与、参加を得て、初めて意味が構築（あるいは再５．総構築）されるものだということになる。

括

香りとはそもそも何であろうか。その実態は、空気中に

４．
３．コミュニティー

存在する何かしらの物理的なものであり、それに人間の脳

次の英語の例では、ある香水の香りについて、一般の人が反応しているということであろうか。さまざまな学説をたちが自分の経験、評価、考え、価値観などを、「石鹸」と検証する中で、ケラーとヤング（Keller & Young 2014,1）

いう比喩を通じてお互いに述べ合う。そして、そこから相は、香りの対象物は物理的な物ではなく、心理的な範疇に手との繋がり、関与、「対話」
を通じて、一種のコミュニテ

属するものであるという説を紹介している（the objects of

ィーが形成されていく様子がうかがえる。興味深いことに、

olfactory perception are not objective physical entities,

対話が進むに連れて、「石鹸」の意味、価値も変貌していく。

but affective categories）12）。ここから少なくともいえることは、香りとはただ単純に物理的な反応だけではなく、た Disappointment for me. I was expecting a classic but

ぶんに心理的、社会的、文化的な反応であるということでdynamic fragrance. All I get is old soap, may be aある。たとえば、香りへの反応として、日本語では文化的leftover from the 80’ . Old orange blossom and dustyに周囲に配慮することばが用いられる一方、英語では自己、

talc. Try before you buy.

自信を示すことばが用いられている。

 I was so expecting to love this. Instead I agree with

さらに、香りは、「ことばにできない感覚」であるからこothers that I smell old soap. I also detect a hint of

そ、他の感覚を用いて（共感覚）、送り手と受け手相互の想sweet pickles due to a chemical base that emerges at

像力を拠り所として表現されるものだといえる。香りを表

the end.

現するには、具体性が低く、抽象度の高いことばが使われ Old soap with a hint of celery. This smells nothing
like I thought it would based on the notes.

ることになるが、それは見方を変えれば、ことばの持つ可能性をより豊かに引き出すことのできる分野だと考えるこ At first it smells nice but soapy. By the time, you canともできる。ヘレン・ケラーは「香りとは時空を超えて人

feel the base notes and I really love it!! Maybe at firstを別な世界に導いていく効果的な魔術師のようなものであyou don’ t like it but wait for 40 min or 1 hour … thenる」（Smell is a potent wizard that transports you across− 124 −

「香り」の社会言語学：人はどのように「香り」の言語化を行うのか

thousands miles and all the years you have lived.）と述べ
ている

13）

。まさに、香りは、ことばに魔術師の力を与えているといってもいいのではなかろうか。それは、ことばの使い手たち個人の文化、社会を反映し、当事者たちが意

4） Ibid.
5） Ibid.
6） 櫻井洋之 . 化粧水の香りの共感的表現 . 日本官能評価学
会誌 , 4, 1, 45-51, 2000.

味を共同で構築し、改変し、また再構築する、こういった

7） 雨宮俊彦 , 光田愛 , 宮原朋子 . 共感的形容詞の理解可能プロセスの中で、その姿を徐々に見せてくれる（と想像す

性と使用頻度の対応について . 関西大学社会学部紀要 ,る）のが「香り」ではないだろうか。
「香り」はことばの機能

39, 3, 167-200, 2008.

を考える際に、私たちに重要な「窓」を提供してくれている

8） Austin, John L. How to do things with words. London:
Oxford University Press. 1962.

といえる。

9） 有光奈美 . 広告とネーミングにおける婉曲表現と誇張
謝辞

表現 . 東洋大学経営論集 , 72, 113-125, 2008.

本研究を進めるにあたり、立命館大学、ユタ大学の学生

10）Duranti, Alessandro. Intentionality and truth.
Cultural Anthropology, 8, 214-245. 1993.

諸氏に協力をいただいた。深く感謝したい。

11）Tannen, Deborah. Talking Voices: Repetition,（引用文献）

dialogue, and imagery in conversational discourse.

1） Ackerman, Diane. A Natural History of the Senses.
2） Williams, Joseph, M. Synaesthetic adjectives: A
possible law of semantic change. Language, 52, 2, 461-

consciousness across disciplines. Frontiers in
Psychology, 5, 931, 1-2, 2014.
13）Helen Keller. BrainyQuote.com, Xplore Inc, 2 0 1 7.

478, 1976.
3） 春原吉美 . 香りと色の共感覚性 . 日本官能評価学会誌 ,14, 2, 109-113, 2010.

Cambridge: Cambridge University Press. 2007.
12）Keller, Andreas & Benjamin D.Young. Olfactory

New York: Vintage Books. 1995.

https:/www.brainyquote.com/quotes/quotes/h/helenkeller130587.html, accessed on April 28, 2017.

− 125 −

ムスリム女性の「美」と消費─中東におけるハラール化粧品の可能性─
神奈川大学外国語学部

大川

真由子

This study explores the women’s attitude and consciousness towards beauty and health through the acceptance of halalcosmetics in the Middle East, particularly, in the Gulf States (Saudi Arabia, United Arab Emirates, Kuwait, Qatar, Bahrain
and Oman) which have the strongest purchasing power in 1.6 billion Muslim residence. “Halal” means “permitted” or “lawful”
in Islam. Halal cosmetics are the products made of ingredients that are permissible to use according to Islamic law. Islamalso does not recommend Muslim women to beautify themselves for somebody other than their husband.
Halal products have long got much attention in both business scene and Islamic area studies, and its interest has beenheavily on only halal food. Halal cosmetics, on the other hand, are new business but expected to grow by 13 . 4 % annuallyfrom 2013 to 2018 . Halal cosmetics are already popular in Malaysia but they are almost unknown in the Middle East.
I conducted fieldwork for 6 weeks from 2014 to 2016 for market survey and interviews in Oman, one of the oil rich Gulf
states. However, I could not find any halal cosmetics on sale in any shops in Muscat, the capital of Oman. My interview
result reveals that while Omani women are interested in and can afford to buy western natural and organic cosmetics, they do
not recognize halal cosmetics. Many Omani women do not care of the ingredients of cosmetics whether they contain alcohol
or not, and they interpret Islam to their advantage when it comes to beauty care. I expect that they will accept halal cosmetics
in the near future because halal cosmetics have a certain similarity to natural, organic and even ethical cosmetics and thathalal cosmetics have already gained attention in their wealthier neighbor, UAE.

1．諸ハラール化粧品だけに限定してみると、世界全体の経済

言

規模は 244 億ドル（2015 年）で、2020 年までに 450 億ドル

筆者が長年調査をおこなっている中東のアラビア半島オまで拡大すると予測されている。そのうちの大半は中東でマーンはじめ湾岸諸国（サウジアラビア、クウェート、アの消費で、とくに湾岸諸国では 2015 年から 2020 年まで

ラブ首長国連邦［UAE］、カタル、バハレーン、オマーン）には年率 15 ％の増加が見込まれている 3）。とはいうものの、

では、近年ダイエットや歯のホワイトニング、レーザー脱中東において化粧品全体の売り上げのうちハラール化粧品

毛などに関心を示し、またそれらを実践する女性が増えての占める割合はまだ小さく、以下でみるように、湾岸発のいる。「美」に対する意識や実践が刻々と変化するなか、新ハラール化粧品ブランドも少なく、浸透度は低い。そもそ

しい現象・概念としてのハラール化粧品を湾岸諸国の女性

も中東ではとくに明記されていない限りはハラールであるがどのように受容する（あるいはしない）のだろうか。本研という認識が一般的であるから、わざわざハラール認証を究は、今後成長が期待されるハラール化粧品を題材として、つけなくてもハラールなのだと人々は考えている。

ムスリム女性の美に対する意識や消費行動の一端をあきらかにすることを目的としている。

ハラール食品と同様、ハラール化粧品にもグローバルな認証機関や基準は存在しない（現在審議中）。2014 年末時点

まず、ハラール化粧品とは何かについて説明しておきたでハラール化粧品の基準が存在しているのはマレーシアとい。中東の化粧品市場規模は 166 億ドル（2011 年）
で、1 人

ブルネイのみである。ここではマレーシア規格（MS2200：

あたりの購買力が大きいのはサウジアラビアや UAE など

2008）を挙げておく 4）。

湾岸諸国が上位を占める。湾岸諸国は人口約 4000 万人を・人間の身体の一部またはそれに由来する成分を包含また有し、そのうち半分は外国人が占めるが、国民の平均年齢は含有していない。

が 30 歳という若さと高い購買力が魅力的な市場である 1）。

・イスラーム法によりムスリムが使用または摂取すること

中東の化粧品購入の特徴としては香水の売り上げが大きいを禁じられている動物、またはイスラーム法に従って食2）

肉処理されていないハラール動物に由来する肉体の一部（全体の約 4 割）
ことが挙げられる 。

または物質を包含または含有していない。
・イスラーム法により「不浄（najs）」と定められている材料
Beauty for Muslim women and theirconsumption: Halal Cosmetics in the
Middle East
Mayuko Okawa
Faculty of Foreign Languages, Kanagawa
University

または遺伝子組み換え生物を含有していない。
・イスラーム法による不浄なものに汚染されていない設備
機器を使用して調合・調理、加工、製造、または貯蔵していない。
・調合・調理、加工または製造中に、上記の要件を満たし− 126 −

ムスリム女性の「美」と消費 ─中東におけるハラール化粧品の可能性─

ていない材料と接触しておらず、物理的に隔離されていではない眉毛を手入れしようか悩んでいる女性などさまざる。

まである。オマーン人女性に普段化粧をするかと問うと、ほとんどが 「していない」と答える。実際、インタビュー

・消費者や使用者に害を与えない。
アルコールやブタ由来の成分のほか、ミネラルやケミに応じてくれた女性はアイラインとリップだけの簡単なメ

カル、遺伝子組み換え物質や放射線照射物質もハラーム

イクしか施していない人がほとんどである。彼女たちにと（禁忌）
でそれ以外がハラールであるということを考えると、って「化粧（makiyāj）」とはファンデーションを塗り、アイ

認証プロセスに厳密には伝統的イスラームの規範とは別のシャドウやアイライン、マスカラをしっかりと施すいわゆ5）るフルメイクを意味するため、自分たちは「化粧はしてい論理や視点が導入されていることがわかる 。
ハラール化粧品は、その存在自体が新しく、主要な研究ない」という認識をもっている。1 日 5 回の礼拝前に顔をはハラール化粧品の「先進国」
であるマレーシアでの量的研洗浄するため、ファンデーションをしっかりと塗ることは究がほとんどである。本研究では、先行研究がほとんど存

あまり実用的ではないからである。「化粧」は結婚式あるい在しない湾岸諸国のなかでも、筆者がフィールドとしていは礼拝ができない生理中など特別な機会に限られている。

るオマーンでの人類学的調査から、オマーン人女性の美にとはいえ、筆者が 2000 ～ 2002 年初頭に所属していた
国立スルターン・カーブース大学では、当時と比べて化粧関する意識を考察する。

2．調をしている学生が 2010 年代になって増加しているという

査印象を受ける。現役のカーブース大学の女子学生に聞くと本報告で提示するデータは、筆者が 2014 年から 2016

「大学生が化粧するのは当たり前」と述べていたが、彼女は年にかけて断続的に合計 6 週間、オマーンの首都マスカッマスカットで生まれ育ち、普段からメイクをし、ネイルサ

トで実施した聞き取り調査や参与観察、および市場調査の

ロンにも行ってペディキュアをしているなど、おしゃれに

データに基づいている。対象としたのは 10 代から 30 代のは敏感な女性である。他方で同大学は国内トップの大学でオマーン人女性約 30 人（未婚、既婚含む）で、その多くに地方出身者も多いため、化粧をまったくしていない学生もは繰り返しインタビューをおこなっている。

多い。

オマーンは人口約 400 万人、うち約半分を外国人が占め

メイク肯定派から聞かれるハディースが「まことにアッる。今回対象としているのは国籍をもつオマーン人であラーは美しく、美を愛する（inna allāh jamīlun yuh
ibb al・る。民族的には、多数派のアラブ人のほか、インド系、アjamāl）」というものである。ここでいう「美」とは外見と内フリカ系、ペルシア系など多様だが、ほぼイスラーム教徒

面の 2 つを意味する。逆にフルメイクに対する罪悪感や忌（ムスリム）である。湾岸諸国と呼ばれるアラビア半島の産避感をもっている女性が多い。エジプトの化粧に関する

油国は中東のなかでも経済的に裕福だが、世銀の統計に

論考のなかで、人類学者の鳥山は「化粧は女性の道徳的価

よると、国民 1 人あたりの GNI で日本（38840 米ドル）をは値を否定的に表象するアイコン」であると述べているが 9）、

るかにしのぐカタル（83990 米ドル）に対して、オマーンはオマーンでも同様で、軽いメイクは許容範囲であるが、濃2015 年の GNI は 16910 米ドルと、比較的貧しい 6）。

い化粧は男女問わず否定的なニュアンスで語られる。結婚

オマーンは中東のなかでも国家規模が小さく、化粧品

式出席のためにフルメイクをするときは、自宅から会場へ

販売市場規模としては 3 億 2900 万米ドル（2012 年）と、トの移動中ニカーブで顔を隠す女性もいるほどである。これ

ルコ（約 38 億米ドル）やイラン（約 36 億米ドル）など中東

は濃い化粧が女性だけしかいない結婚式場という閉ざされの大国には遠く及ばない。しかしオマーンの化粧品販売

た空間でなら許されるが、たとえ自家用車での移動であっは 2007 年から 2012 年までの成長率が 166 ％で、毎年 9 ～てもホテルの受付や駐車場で不特定多数の異性と接触する

7）

12 ％の割合で急成長している産業のひとつである 。国可能性を考えてのことである。ある 30 代の女性は化粧の

民 1 人あたりの購入金額は UAE、サウジに次いでオマ濃い代表例としてレバノン人女性を挙げ、「レバノン人女ーンは第 3 位である。売り上げの内訳は、ヘアケア（18

性（Lubnānīyāt）みたいなのはやりすぎだ」という言葉で語％）、香水（18 ％）、スキンケア（16 ％）、メイク化粧品（colorっていた。オマーンではむしろトレンドの最先端はクウェ8）cosmetics, 14%）となっている 。マスカット市内のショッートだと認識されている。若い女性はクウェートの人気ブピングモールには、ヨーロッパ系の高級ブランド化粧品店

ロガーやインスタグラマーをフォローし、彼女たちが使っが建ち並び、そのなかには自然派化粧品店も目立つ。

ている化粧品の情報を集める。ただし、こうしたメイク肯

筆者がインタビューした 10 ～ 30 代の女性の多くは化粧に対しては肯定的で、美容や化粧に関心をもっている。に定派であってもラマダーン中は化粧を控えめにしているという点では一致している。

きびや美白を気にする女性、髪の毛にボリュームを出した

自宅でメイクアップ・アーティストをしている 20 代の

いと試行錯誤している女性、本来なら結婚前は整えるべき女性は、「宗教的な理由でつけまつ毛を避ける客もいる」と− 127 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

語る。イスラーム法はいかようにも解釈が可能である一方

すべてハラールであるという信念や思い込みに起因する。

で、一般信徒にはその正確な解釈が難しい。したがって解2014 年にハラール化粧品の規格を発表した UAE の規格検釈をイスラーム法学者にゆだねることになる。とはいえ、量庁 ESMA の幹部が「美容製品の原料はすべてハラールで

つけまつ毛やまつ毛のエクステなど、近年の事象についてあるべきだが、UAE ではすべての製品がそもそもハラー

は、確立し、浸透している解釈があるわけではない。イスルだ」と述べているように 10）、外国人の割合が高い湾岸諸ラーム法を厳格に解釈するのであれば、つけまつ毛やまつ国においても商品がハラールではないということを疑う消毛のエクステ、髪の毛のエクステはハラーム（禁止＝ハラ

費者はほとんどいないだろう。だから香水にアルコールがールの対義語）だとする法学者は多い。しかし、多くのオ入っていることを知って驚く者もいる。東南アジアでは浸マーン人女性はその基準で解釈はしないのである。

透しつつあるハラール化粧品ではあるが、オマーンでは都インタビューに応じた女性は、化粧に関心があっても大市部であってもほとんど知られていないのが現状である。

半はハラール化粧品の存在を知らなかった。筆者もマスカ3．結果および総括

ット市内のモール内や薬局、スーパーなど複数軒で探してみたがハラール認証のついた化粧品をみかけることはなか

このように、オマーンではまだハラール化粧品の認知度

ったし、店員にハラール化粧品を置いているかと尋ねるとが低く、2016 年初頭の段階でハラール化粧品購入者の声「ハラール？」と怪訝そうな顔で逆に尋ねられた。また、オを聞くことはできなかった。ハラール化粧品に関する限り、マーンではマニキュアを塗っている女性を数年前まであま

消費者はその基準を正しく理解しているわけではない。飲りみかけることはなかった。マニキュアは爪に膜を張るた用目的でなければアルコールの使用はハラールであること

め、礼拝前の洗浄が無効になる（膜が邪魔をして水が爪まや、動物性原料のなかにもハラールなものはたくさんあるで届かない）
からである。ところが近年は、イスラミック・という知識が十分共有されていないために、アルコールやマニキュアという水が浸透する特別なマニキュアや、塗っ

動物性原料の使用が嫌悪されている。だから生産者側もアたあとシールのようにはがせるタイプのマニキュアが発売

ルコールや動物性原料のような「疑わしき」成分を使用してされ、ムスリム女性のあいだで話題となっている。30 代

いない。こうした事態が続くと、化粧品に使用されているの女性は「ようは解釈の問題。美容に関してはみんないい

いかなるアルコールもハラームであるという「誤解」を誘発ように解釈している」と述べているし、香水の使用についすることにつながらないだろうか。

て 20 代の女性は「香水なんてアルコールだらけ。飲まなけ

さいごにハラール化粧品の消費から浮かび上がるイスラ

れば問題ない」と語る。マスカット市中心地にある最新のーム性について述べたい。ハラール化粧品を使用すること

モール内の化粧品店で販売員に話を聞いたところ、オマー

はイスラーム的消費行為といえるが、化粧行為自体は必ずン人女性のあいだではアンチエイジングとホワイトニング

しもイスラーム的とはいえず、「誰に対して」という問題が商品が人気で、コラーゲンとビタミン C の美容液がよく売常につきまとう。この点において、その商品や行為のもつれるが原料を気にする客はいないし、質問されたこともなイスラーム性が直接的ではない。夫以外の異性に美を見せいと語っていた。その化粧品店は高級志向であるため、顧ること、あるいは公的な場に出るための化粧であるならば客は中流から上流階級だと推測されるが、美容にある程度

本来それはイスラーム的たりえない。しかしながらハラーの投資することをいとわない層であってもハラール意識がル化粧品を使用することで、化粧行為の社会的妥当性や合希薄であることがわかる。

法性がブラックボックスに入れられる。化粧が社会的に肯それでもオマーン人女性のあいだではナチュラル化粧品

定的に受けいれられていなくても、化粧品のハラール性がの人気は高く、使用者も多いことから、動物性か植物性か

前面に出されることで、それを実践する女性にとっては化といったある程度の原料への関心はあることがわかる。た粧行為への罪悪感が軽減されるという免罪符的な面をもつだし、たとえハラール化粧品の存在を知っていたとしても、のである。

ハラール性をめぐる複雑な知識や議論に否定的な見解を述

今回の調査でオマーンにおけるハラール化粧品は確認

べたり、ハラール商品化する傾向に懐疑的な人がいることできなかった。だが、隣国の UAE では商品のハラール性もまた事実である。昨今のハラールブームについて、「なに対する関心が高まりつつある。2011 年の研究では、食んでもハラールにすればいいというものではない。
『アッ

品だけでなく化粧品のハラール性（不浄物やブタ由来成分、

ラーはあなたがたに易きを求め困難を求めない』」と、クル

香水に含まれるアルコールなど）に関心を寄せる人が 18 ％アーンの章句（第 2 章 185 節）を引用しながら昨今の傾向をいるという結果がでている 11）。また、より新しい 2016 年

嘆く者もいた。

の研究では、化粧品の購入時、ハラール認証の有無を重視

ハラールのビジネス化に対するこうした違和感は、自する回答者が 29.5 ％で、実際ハラール認証マークがある

分たちの住む地域（中東）で売られている商品は原則的に化粧品やトイレタリー製品を使っている回答者が 41.4 ％− 128 −

ムスリム女性の「美」と消費 ─中東におけるハラール化粧品の可能性─

にのぼるというデータもある 12）。湾岸随一の都市ドバイを抱える UAE は、マレーシアに代わって世界のハラール・ハブになるべく、ハラール認証の規格化を急ピッチで進めている。人口の 8 割を外国人が占めるという特殊な社会的背景から、ハラール意識が湾岸のなかでも比較的高いのに30-43、2013.
6） http://data.worldbank.org/indicator/NY.GNP.PCAP.
CD7） Euromonitor International 2013 Consumer Middle Eastand North Africa 2014. Euromonitor International.

加え、高価格のハラール化粧品を購入するだけの経済力も

8） 前掲書 .

ある。今後は UAE を中心として湾岸諸国にハラール化粧

9） 鳥山純子：「化粧の消費と身体規範の転換 ── 現代カ
イロの化粧をめぐる世代間の衝突」『コスメトロジー研品が普及する可能性はあるだろう。

究報告』20: 148-151、2012.
（引用文献）

10）Abbas, Waheed：“All cosmetics sold in UAE are ‘halal’

1） ジェトロ海外調査部：『中東・北アフリカの化粧品市

by default: Esma” Emirates24/7, 2015/5/20.
http://www.emirates2 4 7.com/business/corporate/

場調査概要』ジェトロ、2011.
2） Euromonitor International,：Passport: Global

all-cosmetics-sold-in-uae-are-halal-by-defaultesma-2015-05-20-1.591298（2016 年 2 月 5 日閲覧）

Marketing Information Database（GMID）．
3） “Halal make-up shines in UAE” Khaleej Times,

11）Ireland, J. & S. A. Rajabzadeh：“UAE consumer

2 0 1 6/6/2 8. http://www.khaleejtimes.com/nation/

concerns about halal products” Journal of Islamic

general/halal-make-up-shines-in-uae（2016 年 12 月 3 日

Marketing. 2 (3) : 274-283, 2011.
12）埼玉県・三菱 UFJ リサーチ＆コンサルティング株式閲覧）
4） ジェトロ海外調査部：『マレーシアにおける化粧品お会社：『イスラム諸国における化粧品市場調査結果（アラ
ブ首長国連邦）』2016.

よび美容関連商品の市場調査』ジェトロ、2012.
5） 八木久美子：「イスラーム的に消費するということ─
ハラール概念の変容とその意味」『総合文化研究』16:https://www.pref.saitama.lg.jp/a0 7 0 7/halalcosmetics/
documents/uae.pdf（2016 年 10 月 23 日閲覧）

− 129 −

患者や家族と看護師の化粧に対する認識の比較に関する研究
愛知県立大学看護学部看護学研究科

荻あや子

The purpose of this study was to examine perceived makeup of nurses in patients, family members and nurses. A
questionnaire survey was conducted at two general hospitals with more than 400 beds, and 395 nurses, 118 patients and 85
family members returned a completed questionnaire. As a result, the majority of the patients, family members and nurses
reported that nurses with heavy makeup seemed to be hard to speak to, unapproachable or scary, while nurses with lightmakeup were easy to speak to, upright, trustworthy or gentle. Then, out of five classes of makeup, A (very light) to E (veryheavy), makeup B received the highest rating in each group of the patients, family members and nurses, who reported
that makeup B was most highly associated with each of five sorts of impressions: a feeling of cleanliness, tenderness,cheerfulness, a feeling of trust and honesty. Moreover, there was no significant difference between the three groups in A andC, while the patients and family members rated D and E lower than the nurses. The findings suggest that three classes of
makeup: A, B and C give a pleasant impression on patients and family members, and also that heavy makeup is likely to givean unpleasant impression on patients and family members.

1．緒ている。つまり、看護師は患者の看護ケアにおいて直接的

言にかかわるために自分本位の化粧の好みや価値観で判断す1）

日本看護協会は、2003 年に「看護者の倫理綱領」 を定め、看護師などを対象とした行動指針を発表している。その中るのではなく、他の人がどのように感じているかを常に意識して化粧を施す必要がある。

で、「看護者は、社会の人々の信頼を得るように、個人と先行研究では、化粧は身だしなみやマナーの一部としてしての品行を常に高く維持する」と明示され、「看護に対す位置づけられており、患者が捉える看護師の印象には言葉る信頼は、専門的な知識や技術のみならず、誠実さ、礼節、遣いや態度、髪型や白衣などさまざまな要素を取り上げて品性、清潔さ、謙虚さなどに支えられた行動によるところ

調査をしている。しかし、看護師の化粧を主題にした文献が大きい」と述べられている。しかし、近年看護観や価値観、は少なく、患者や家族を対象に看護師の化粧に対する認識

倫理観などの多様化により、医療現場の看護師の化粧が華について報告した研究はほとんど見当たらない。化粧は個美になる現状がある。

人の価値観や生き方、生活環境により変化すると考えられ看護師の身だしなみにおいて化粧に着目すると、看護師

るが、医療現場や教育現場において明確な基準は示されて自身は化粧を身だしなみの一部として捉えているとの報告いない。患者やその家族によい印象を与え、信頼関係を構2）がある 。看護学生は華美でなければ化粧は顔色をよく見築するためにも化粧の基準を見出すことが求められている。

せることができるためのマナーの一部であり、マスカラのそこで、看護師の化粧に対する患者や家族の認識と、看護使用については約 8 割、アイライナーの使用は約 7 割、つ師との認識の違いを明らかにすることで、看護師にふさわけ睫毛の使用は約 3 割が賛成であると化粧を肯定的に捉えしい化粧の基準を作成し、看護師の化粧に対する意識を高3）ている 。また、若い看護師や患者ほど化粧の程度を「本めるとともに、医療現場の管理者や看護学教育での指導の人の自由でよい」と回答していることや 4）、患者や看護師一助にしたいと考える。

は薄化粧や自然な化粧を望む記述もあるが、各々 6 割が化

2．方粧は「自由でよい」と捉えているとの報告がある 5）。さらに、医療従事者の身だしなみに関する研究 6）では、清潔な身だ
しなみは院内感染の予防のみならず、患者やその家族が医療機関の印象を決定づける一つの要因となり得ると指摘し

2. 1.

法

調査対象

看護師 700 名、患者 350 名とその家族 350 名を対象とした。
対象の条件として、看護師は手術室や外来を除く病棟の看護師とし、患者は日帰り入院以外で、退院が決定した時に病棟の看護師長が、調査依頼が可能であると判断し、コミPerceived makeup of nurses in patients,
family members and nurses
Ayako Ogi
School of Nursing & Health Graduate
School of Nursing & Hea lt h , Aichi
Prefectural Universityュニケーションが可能で意思疎通ができる者とした。また、家族については、入院中に患者のところに何度か訪室して、退院時に患者とともに調査依頼の説明を受けることができる者とした。

− 130 −

患者や家族と看護師の化粧に対する認識の比較に関する研究

2. 2.

調査期間

差（ｐ＜ .05）を検定したのち、最も化粧が薄く素顔に近い

201X 年 2 ～ 4 月上旬

化粧モデル A をコントロール群とし、他の化粧 B から E の4 群と比較した。多重比較検定には Fisher の最小有意差

2. 3. データ収集方法

法を使用し、有意水準 5 ％未満として評価得点を比較した。

調査は A 県内と B 県内にある 400 床以上の一般病院 4 施

看護師、患者、家族間の認識の違いを検討するために化粧設の院長または看護部長に研究依頼を行い、2 病院より承モデル A から E の評価得点を 3 者間で比較した。Ⅳの自由諾を得た。その後、看護部長と連絡調整し、師長会議にお記述については内容分析を行い、看護師の化粧に対する考

いて、研究概要や倫理的配慮などについて文書と口頭で説えを記述している部分をコード化（< >）し、内容が類似し明をし、調査協力への依頼を行った。各病棟の看護師長のているものでまとめてサブカテゴリ化（『 』）、さらに、内協力のもとに患者および家族への調査依頼と、看護師への容が類似しているものをまとめてカテゴリ化（【 】）し、名調査協力を依頼し承諾を得た。

前を付けた。

調査内容は、Ⅰ基本情報と看護師の化粧に関する項目ⅡからⅤで構成した。Ⅰ基本情報は年齢や性別などの項目を、

2. 5. 倫理的配慮

Ⅱ化粧の必要性については、した方がよいとノーメイクが所属機関の倫理委員会で承認後、院長または看護部長に

よい、どちらでもよいの 3 択とした。Ⅲ化粧の「濃い・派手」

研究依頼を行い、承諾を得た。その後、師長会議においてと「薄い・地味」に対する印象については、1. 清潔、2. 不研究概要や倫理的配慮などについて文書と口頭で説明を行潔、3. 安心・信頼できる、4. 安心・信頼できない、5. 健康、い、承諾を得た。研究への参加は自由意思によるものであ6. 不健康、7. 元気がでる、8. 元気が出ない、9. 怖い、10. 優り、研究対象者である看護師や患者とその家族が不利益やしそう、11. 話しかけやすい、12. 話しかけにくい、13. 近づ

強制力を受けることがないように十分な説明を行った。看きやすい、14. 近づきにくい、15. 相手のことを真剣に考え

護師は、看護業務が終了し落ち着いた時間帯に、患者や家ている、16. 相手のことを真剣に考えていない、17. 相手の族も退院が決定し体調の安定した時期に実施できるよう依ことを大切に思っている、18. 相手のことを大切に思って頼した。調査票の回答時間は約 15 分で、対象者の負担がいない、19. 本人の自由である、20. その他の 20 項目の印最小になるよう努めるとともに、調査は無記名で行い、個象から複数回答とし、Ⅳ看護師の化粧に対する意見や感想人が特定されないよう十分に配慮することや、調査への協は自由記述とした。Ⅴ化粧のイメージでは、独自に作成し力は自由意思によるもので、調査への参加を取り止めたくた調査票 を使用し化粧の薄いもの（A）から濃いもの（E）

なった場合はいつでも参加を止めることができ、それによの 5 段階で化粧モデルを作成し、清潔感、優しさ、明るさ、って不利益を被らないことを伝えた。また、データは厳重

信頼感、真面目さの 5 項目について調査した。評価基準は、に保管し、調査以外の目的で使用しないこと、調査票は結全く感じない 1 点、どちらかといえば感じない 2 点、どち果をまとめ、研究発表後は直ちに破棄すること、調査につらかといえば感じる 3 点、すごく感じる 4 点の 4 段階で評いて疑問や質問があれば速やかに対応すること、調査票は価した。5 段階の化粧モデルは、化粧 A から E に向かい順

回答と返送によって調査の同意が得られたこととする旨をに濃くなっており、化粧 A はファンデーションと眉ずみ

文書と口頭で説明した。

7）のみを使用し、化粧 B は化粧 A にチークと口紅を加えてい3．結る。化粧 C は化粧 B にアイラインとマスカラを追加し、化粧 D は化粧 C にアイシャドウを加え、化粧 E は化粧 D で使用したマスカラとアイシャドウを濃く塗っている。なお、

果

3. 1. 基本情報
調査票は、2 病院の看護師 700 名、患者 350 名、家族

髪型は、山田ら の研究から得られた好感のもてる看護師

350 名の 1400 名に郵送した。回答数（率）は、看護師 407の髪型に整えている。

名（58.1 ％）、患者 140 名（40.0 ％）、家族 95 名（27.1 ％）で、

8）

有効回答数（率）は看護師 395 名（56.4 ％）、患者 118 名（33.7

2. 4. 分析方法％）、家族 85 名（24.3 ％）であった。基本情報は表 1 のとお統計解析ソフトはエクセル統計を用い、ⅠからⅢの結果

りで、総数 598 名のうち、男性は 100 名（16.7 ％）、女性がは調査票の各項目で単純集計をした。Ⅴは、まず化粧モデ

498 名（83.3 ％）であった。年齢別では、看護師は 20 歳代

ル A から E において、看護師、患者、家族別に 5 項目の評が最も多く 31.1 ％で、次に、40 歳代 30.1 ％、30 歳代 22.0

価を合計し平均評価得点（以下評価得点）を算出した。次に、％であった。患者は 60 歳代が最も多く 27.1 ％で、次に 40

看護師、患者、家族別に清潔感、優しさ、明るさ、信頼感、

歳代 22.0 ％、70 歳代 17.8 ％であった。家族は、40 歳代が真面目さの各項目で化粧モデル A から E の評価得点を算出

22.4 ％で最も多く、次に 50 歳代と 60 歳代が 18.8 ％であっした。一元配置分散分析を用い、全体として群間で有意

た
（表 1）
。

− 131 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

表1

基本情報

看護師 n=395

59（50.0）59（50.0）

16（18.8）
69（81.2）

100（16.7）498（83.3）

20 歳未満20 歳以上 30 歳未満
30 歳以上 40 歳未満
40 歳以上 50 歳未満
50 歳以上 60 歳未満
60 歳以上 70 歳未満
70 歳以上 80 歳未満
80 歳以上 90 歳未満

0（0.0）
123（31.1）
87（22.0）119（30.1）
57（14.4）9（2.3）
0（0.0）
0（0.0）

4（3.4）
10（8.5）12（10.2）
6（22.0）7（5.9）
32（27.1）
21（17.8）6（5.1）

1（1.2）
9（10.6）
11（12.9）19（22.4）
16（18.8）
16（18.8）
12（14.1）1（1.2）

5（0.8）
142（23.7）
110（18.4）
164（27.4）80（13.4）57（9.5）33（5.5）7（1.2）

看護師の化粧の有無

看護師 n=395
男性

1. 化粧をした方がよい

総数

25（6.3）370（93.7）

表2
項目

家族 n=85

男性
女性

性別

年齢

人数
（％）

患者 n=118

女性

人数（％）

患者 n=118
合計

男性

女性

家族 n=85
合計

男性

女性

合計

総数

11（44.0） 230（62.2） 241（61.0） 36（61.0） 28（47.5） 64（53.8） 12（75.0） 43（62.3） 55（64.7） 360（60.2）

2. ノーメイクがよい

1（4.0）

3. どちらでもよい

1（0.3）

2（0.5）

2（3.4）

1（1.7）

3（2.5）

13（52.0） 139（37.6） 152（38.5） 21（35.6） 30（50.8） 51（43.7）0（0.0）

0（0.0）

0（0.0）

5（0.8）

4（25.0） 26（37.7） 30（35.3） 233（39.0）

（%）
50
40

看護師

30

患

者

家

族

20
10
0

18.

いる
大切に思って相手のことを

6.

不健康

7.

元気がでる

不潔

16.

いる
真剣に考えて相手のことを

2.

19.

である
本人の自由

図1

4.

できない
安心・信頼

9.

怖い

14.

近づきにくい

にくい
話しかけ

12.

濃い・派手な化粧に対する印象

3. 2. 看護師の化粧の必要性

潔」が上位を占めた。そのなかで「話しかけにくい」、「近づ

看護師の化粧の有無について看護師、患者、家族に 3 択

きにくい」、「怖い」印象は、患者や家族よりも看護師の回で回答を求めたところ、看護師は化粧をした方がよいと答の割合が高く、家族では「不潔」と回答した割合が、他に回答した者は 61.0 ％で、どちらでもよいは 38.5 ％であっ比べて高かった（図 1）。  

た。患者は、看護師が化粧をした方がよいと回答した者は化粧が「薄い・地味」と感じる看護師に対する印象では、

53.8 ％で、家族の 64.7 ％よりも少なく、どちらでもよい「話しかけやすい」、「清潔」、「安心・信頼できる」、「優しと回答した者が 43.7 ％と 3 者のなかで最も多かった。また、

そう」が上位を占めた。また、上位の回答は看護師や家族

ノーメイクがよいと回答した者は、全体で 5 名と 1 割に満に比べて患者の割合が高く、患者の回答で最も割合が高かたなかった。さらに、家族の場合は、化粧をした方がよい

ったのは「清潔」で約 5 割であった。また「薄い・地味」な化と回答した者は男女ともに割合が高かった。しかし、患者粧に対して、看護師は 28.6 ％の者が「不健康」と回答したが、では看護師が化粧をした方がよいと回答した者は、男性

患者は 25.2 ％が「健康」と回答していた（図 2）。

61.0 ％と高かったが、女性は 47.5 ％と 5 割に達しておらず、

3. 4. 看護師の化粧に対する意見や感想どちらでもよいと回答した者の割合が高かった（表 2）。

看護師の化粧に対する考えについて、患者、家族、看護3. 3. 看護師の化粧の濃淡に対する印象

師別に自由記述を分析した結果、患者の回答は 114 コー

化粧が「濃い・派手」と感じる看護師に対する印象は、看ドと 30 サブカテゴリ、13 カテゴリ（表 3）になり、家族の護師、患者、家族ともに「話しかけにくい」、「近づきにくい」、

回答は 93 コードと 27 サブカテゴリ、11 カテゴリ（表 4）で、「怖い」、
「安心・信頼できない」、「本人の自由である」、「不看護師の回答は、318 コードと 39 サブカテゴリ、14 カテ− 132 −

患者や家族と看護師の化粧に対する認識の比較に関する研究

（%）
50
看護師

40
30
20

患

者

家

族

10
10.

図2

薄い・地味な化粧に対する印象

清潔感のある化粧が第一である
その人らしい化粧がよい
ノーメイクは疲れが
顔に現れる

カテゴリ
社会人としてのマナーであるナチュラルメイクは好印象である
健康的な化粧は元気が出る
清潔感のある化粧が第一である
その人らしい化粧が
よい

8.

17.

化粧に対する患者の考え方の内容分析

サブカテゴリカテゴリ

社会人としての身だしなみである
化粧はマナーのひとつである
適度な化粧は必要である
ナチュラルな化粧に好感をもつ
薄い化粧は安心できる
化粧は少しした方が明るく感じる
仕事に対する意欲が上がる
化粧は患者に元気を与える
清潔感が第一である
化粧の成分と微生物が反応する
人それぞれの個性でよい
その人に合った化粧がよい
顔の劣等感をカバーする
不健康な化粧は元気が出ない
ノーメイクは疲労感が出る

表4

5.

健康

化粧は元気を与える

13.

近づきやすいナチュラルメイクは好印象である

19.

である
本人の自由

社会人としてのマナ
ーである

不健康

カテゴリ

優しそう

表3

6.

元気がでない

3.

できる
安心・信頼

1.

清潔

やすい
話しかけ

11.

いる
大切に思って相手のことを

0

サブカテゴリ

派手な化粧は看護に 派手な化粧は病院に合わない
合わない
濃い派手な化粧は好ましくない
濃い化粧は抵抗を感 目のメイクは抵抗を感じる
じる
化粧が濃いと緊張する
個別で化粧の感じ方 年齢や性別で化粧の感じ方が変わる
は異なる
外科系は化粧をしてほしくない
化粧を気にする余裕がない
化粧を気にしたこと
化粧に関心がないがない
化粧を意識したことがない
本人の自由でよい
個人の自由である
看護の仕事には尊敬の念しかない
マスクの下の表情が メイクはマスクで気にならない
大事である
化粧より表情や話し方が大事である
香料のにおいは不快 香水や柔軟剤のにおいは避けるである
化粧の香料のにおいはきつい

化粧に対する家族の考え方の内容分析

サブカテゴリカテゴリ

社会人としての身だしなみである
化粧はマナーのひとつである
常識のある範囲で必要である
適度な化粧は印象がよい
ナチュラルメイクは印象がよい
薄化粧は近づきやすい
明るく見える化粧がよい
化粧に元気が出る
健康的な化粧は安心感がある
清潔感のある化粧が一番大切である
清潔に見えることが大切である
人柄が活きる化粧がよい
その人に合った化粧がよい
化粧は自分の欠点をカバーできる

ノーメイクは疲れが顔に現れる
派手な化粧は看護に合わない
濃い化粧は近づきに
くい
個人の自由である
化粧を気にしたことがない
香料のにおいは不快である

ゴリ（表 5）に分類できた。共通していたものは【社会人としてのマナーである】【ナチュラルメイクは好印象である】

サブカテゴリノーメイクは元気なく見える
ノーメイクは疲れて見える
疲れが見えない化粧がよい
派手な化粧は職場にふさわしくない
派手な化粧の看護師によい印象がもてない
目元が派手になりすぎない
濃い化粧は話しかけにくい
本人の自由である
ノーメイクも選択肢のひとつである
化粧を気にしたことはない
化粧よりも笑顔や話し方が一番である
化粧を意識したことがない
濃い化粧はにおいが気になる
香料の強いものは近づきにくい

3. 5. 看護師の化粧モデルA からEのイメージ調査
化粧 A から E の 5 段階で、看護師、患者、家族別に、清潔感、【化粧は元気を与える】【清潔感のある化粧が第一である】

優しさ、明るさ、信頼感、真面目さの 5 項目を 4 段階の評

【その人らしい化粧がよい】【ノーメイクは疲れが顔に現れ価基準で評価し、評価得点± SD を算出した。看護師の化

る】【派手な化粧は看護に合わない】【濃い化粧は近づきに

粧 5 群に対する評価得点は、A が 14.6 ± 2.9 点、B が 16.0 ±くい】【個人の自由である】【化粧を気にしたことがない】【香

2.7 点、C が 14.6 ± 2.7 点、D は 12.9 ± 2.9 点、E が 9.6 ± 3.1

料のにおいは不快である】の 11 カテゴリであった。

点であった。化粧 A をコントロール群として、他の 4 群と比較した結果、化粧 B の評価得点が有意に高く、化粧 D、− 133 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

表5
カテゴリ

サブカテゴリ

社会人としてのマナーであるナチュラルメイクは好印
象である
健康的な化粧は元気を与える
清潔感のある化粧が第一である
その人らしい化粧がよい
ノーメイクは疲れが顔に現れる
派手な化粧は看護に合わない

濃い化粧は近づきにくい20

化粧に対する看護師の考え方の内容分析**

化粧について学ぶ機会がほしい
髪型や髪の色などで顔の印象が変わる
化粧は気にならない
香料のにおいは不快である

マスカラやアイライナーは印象がよくない
カラーコンタクトは雰囲気が変わる
つけ睫毛は不要である
睫毛のエクステは必要ない
本人の自由である
人や状況でノーメイクでもよい
相手に不快感を与えなければ自由でよい
メイクの基準がはっきりしない
メイクが相手に与える影響を学ぶ機会がほしい
顔のつくりに影響する
化粧がマスクに付き不潔に見える
髪型や髪の色で印象が変わる
化粧より言動や態度が大切であるマスクのため気にならない
特に何も思わない
香水などにおいのあるものは不快である
化粧品のにおいが強いものは避ける

**

**

*

20
15

10

10

5
0

個人の自由である**

15

サブカテゴリ

目元の濃い化粧は印象が
よくない

評価得点

評価得点

**

カテゴリ

社会人としての身だしなみである
化粧はマナーのひとつである
適度な化粧は印象がよい
ナチュラルメイクは印象がよい
自然な化粧に好感を抱く
健康的で明るい感じがよい
化粧は他者に元気を与える
清潔感のある化粧が第一である
清潔なイメージを心がける
つけ睫毛は清潔野に落下し不潔である
年齢に合わせたメイクをする
自分の欠点をカバーする
ノーメイクは疲れて見える
ノーメイクは顔色が悪く見える
派手なメイクの看護師には相談しにくい
濃い化粧は職業的品格を下げる
看護師は相手に不快感を与えない
真っ赤な口紅は印象が悪い
派手な化粧は好ましくない
濃い化粧は怖い感じがする
濃い化粧は清潔感がない
濃い化粧は近寄りにくい

5

A

B

C

D

化粧モデル

図3

0

E
** p

A

B

看護師の化粧 5 群に対する評価得点の比較

図4

患者の化粧 5 群に対する評価得点は、A が 14.9 ± 3.4 点、の4群と比較した結果は、化粧Bの評価得点が有意に高く（p評価得点

は 9.3 ± 3.7 点であった。化粧 A をコントロール群として他

20

.05

** p .01

**

10
5
A

図5

B が 16.6 ± 2.5 点、C が 14.5 ± 3.1 点、D は 12.2 ± 3.5 点、E

E
*p

15

4）
。
家族の化粧 5 群に対する評価得点は、A が 14.6 ± 3.1 点、

**

**

0

＜ .05）、
化粧 D、
E の評価得点は有意に低かった（p ＜ .01）（図D

患者の化粧 5 群に対する評価得点の比較

E の評価得点が有意に低かった（p ＜ .01）（図 3）。
B が 16.1 ± 3.2 点、C が 14.2 ± 3.7 点、D は 12.1 ± 3.6 点、E

C
化粧モデル

.01

B

C
化粧モデル

D

E
** p

.01

家族の化粧 5 群に対する評価得点の比較

は 8.6 ± 3.1 点であった。化粧 A をコントロール群として他の 4 群と比較した結果、化粧 B の評価得点が有意に高く、面目さでは化粧 C、D、E（p ＜ .01）の評価得点が有意に低化粧 D、E は評価得点が有意に低かった（p ＜ .01）（図 5）。

かった。明るさは、化粧 B、C、D で評価得点が有意に高く（p

次に、看護師、患者、家族別に清潔感、優しさ、明るさ、＜ .01）、化粧 E で有意に低かった（p ＜ .01）。患者では化粧

信頼感、真面目さの 5 項目の評価得点を、化粧 A をコント

B が 5 項目で評価得点が高い傾向にあったが有意差が認めロール群として他の 4 群で比較した（表 6-8）
。看護師では、られたのは明るさのみであった（p ＜ .01）。また、明るさで化粧 B の評価得点が真面目さ以外の項目で有意に高かったは評価得点が有意に低かったのは化粧 E であった（p ＜ .01）。

（p ＜ .01）。清潔感では化粧 C（p ＜ .05）と、化粧 D、E（p清潔感と真面目さでは、化粧 C（p ＜ .05）と化粧 D、E（p＜ .01）が、優しさと信頼感では化粧 D、E（p ＜ .01）が、真＜ .01）で、優しさと信頼感は、化粧 D と E で評価得点が有− 134 −

患者や家族と看護師の化粧に対する認識の比較に関する研究

表6

5 項目別評価得点の比較（看護師の場合）

清潔感

優しさ

明るさ

信頼感

真面目さ

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

化粧 A

3.0 ± 0.7

2.9 ± 0.7

2.6 ± 0.8

2.9 ± 0.6

化粧 B

3.2 ± 0.6**

3.2 ± 0.6**

3.2 ± 0.6**

3.1 ± 0.6**

3.1 ± 0.6
3.1 ± 0.6

n.s

化粧 C

2.9 ± 0.6*

2.9 ± 0.6n.s

3.0 ± 0.6**

2.9 ± 0.6n.s

2.8 ± 0.6

**

化粧 D

2.6 ± 0.6**

2.6 ± 0.6**

2.8 ± 0.7**

2.5 ± 0.6**

2.4 ± 0.6

**

化粧 E

1.8 ± 0.7**

1.9 ± 0.7**

2.3 ± 0.9**

1.8 ± 0.7**

1.7 ± 0.7**

注：化粧 A をコントロール群として化粧 B,C,D,E 群間で比較した
p 値：Fisher の最小有意差法* p ＜ .05**p ＜ .01
n.s = not significant

表7

5 項目別評価得点の比較（患者の場合）

清潔感

優しさ

明るさ

信頼感

真面目さ

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

化粧 A

3.0 ± 0.7

3.0 ± 0.7

2.8 ± 0.8

3.0 ± 0.8

3.1 ± 0.8

化粧 B

3.2 ± 0.7n.s

3.2 ± 0.7n.s

3.2 ± 0.7**

3.2 ± 0.7n.s

3.2 ± 0.7

n.s

化粧 C

2.8 ± 0.7*

2.9 ± 0.8n.s

3.0 ± 0.8n.s

2.8 ± 0.8n.s

2.8 ± 0.8*

化粧 D

2.4 ± 0.7**

2.4 ± 0.8**

2.6 ± 0.8n.s

2.4 ± 0.8**

2.4 ± 0.8

**

化粧 E

1.7 ± 0.8**

1.8 ± 0.8**

2.2 ± 1.0**

1.8 ± 0.8**

1.8 ± 0.8**

注：化粧 A をコントロール群として化粧 B,C,D,E 群間で比較した
p 値：Fisher の最小有意差法* p ＜ .05**p ＜ .01
n.s = not significant

表8

5 項目別評価得点の比較（家族の場合）

清潔感

優しさ

明るさ

信頼感

真面目さ

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

評価得点± SD p 値

化粧 A

3.0 ± 0.7

2.9 ± 0.7

2.5 ± 0.8

3.0 ± 0.7

化粧 B

3.3 ± 0.6**

3.3 ± 0.6**

3.3 ± 0.6**

3.3 ± 0.5**

3.2 ± 0.7
3.3 ± 0.6

n.s

化粧 C

2.9 ± 0.7n.s

2.9 ± 0.7n.s

3.1 ± 0.6*

2.9 ± 0.7n.s

2.8 ± 0.7

**

化粧 D

2.3 ± 0.8**

2.5 ± 0.8**

2.7 ± 0.7*

2.4 ± 0.8**

2.3 ± 0.7

**

化粧 E

1.5 ± 0.6**

1.7 ± 0.7**

2.1 ± 0.9**

1.7 ± 0.7**

1.6 ± 0.7**

注：化粧 A をコントロール群として化粧 B,C,D,E 群間で比較した
p 値：Fisher の最小有意差法* p ＜ .05**p ＜ .01 n.s = not significant

表9

看護師と患者と家族間の認識の違い

化粧 A
評価得点± SD

化粧 B
評価得点± SD

化粧 C
評価得点± SD

化粧 D
評価得点± SD

看護師

14.6 ± 2.9

16.0 ± 2.7

14.6 ± 2.7

12.9 ± 2.9

患 者

14.9 ± 3.4

16.1 ± 3.2

14.2 ± 3.7

12.1 ± 3.6

家 族

14.6 ± 3.1

16.6 ± 2.5

14.5 ± 3.1

12.2 ± 3.5

p 値：Fisher の最小有意差法

化粧 E
評価得点± SD**

9.6 ± 3.1
9.2 ± 3.6
8.6 ± 3.1*

*p ＜ .05 **p ＜ .01

意に低かった（p ＜ .01）
。家族では、真面目さ以外の項目

師と患者間に有意差が認められた（ｐ＜ .01）
。また、化粧

で化粧 B の評価得点が高かった（p ＜ .01）
。清潔感と優しさ、E は看護師が 9.6 ± 3.1 点、患者が 9.2 ± 3.6 点、家族が 8.6 ±信頼感は化粧 D、E で、真面目さは化粧 C、D、E で評価

3.1 点で、看護師と家族間に有意差が認められた（ｐ＜ .05）。

得点が有意に低かった（p ＜ .01）
。明るさは、化粧 C、D で

4. 考

評価得点が有意に高く（p ＜ .05）
、化粧 E は評価得点が有意に低かった（p ＜ .01）。

察

大坊は、化粧の効用として、①直接的な創造的行為を介最後に、看護師の化粧 A から E に対する看護師、患者、しての自己効用、②満足感と対人的な効用といえる役割遂

家族間の認識の違いを検討した（表 9）。化粧 A から C の評

行、③自己呈示を通じての自尊心の向上、④他者からの評

価得点に有意差はなかったが、化粧 D は看護師が 12.9 ±価の向上による満足感を挙げており、化粧が自分の価値を

2.9 点、患者が 12.1 ± 3.6 点、家族が 12.2 ± 3.5 点で、看護高め、社会的な適応にある 9）ということを述べている。医− 135 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

療現場で看護師は、患者との人間関係を基盤において看くする原因になっていることが推察される。茂木は「化粧護実践するために、看護師の化粧を含む外観や立ち居振るを通して、他者の視線を自分の中に取り込み、その他者の舞いがどのように受け止められているかや、他者にどのよ

視線を意識しながら自分の姿を確認し、社会に開かれた自うな影響を齎しているかについて関心を向ける必要がある。

己の姿を構築している」10）と述べている。つまり、看護師

つまり、看護師は他者の認識を知り、自分自身の行動を振の化粧では、個人が感じる化粧の濃淡が自分の好みや価値り返ったうえで常に看護師としての意識を高めていくこと観だけで判断するのではなく、他者の視線にどのように映が重要であると考える。本調査では、化粧が「濃い・派手」っているかやどのように感じているかを常に意識して自分と感じる看護師に対して、看護師、患者、家族は共通して、自身の化粧を見直していく必要があると考えられる。

「話しかけにくい」、「近づきにくい」
、
「怖い」
、
「安心・信

看護師の 5 段階の化粧モデルでは、看護師、患者、家族

頼できない」、「不潔」という印象をもっていることが分かに共通して、化粧 B の評価得点が最も高いことから（p ＜った。特に、看護師では「話しかけにくい」「近づきにくい」、、.01）、化粧 B が看護師の化粧として支持されていると言え「怖い」の項目が患者や家族よりも高値で約 5 割を示している。また、化粧 B の評価については、筆者がこれまでに実ることが特徴である。これは、看護師という職業が社会の施してきた看護学生の調査結果とも一致している 11, 12）。こ人々から注目され見られているということや、看護師自身の化粧 B は、化粧 A のファンデーションと眉ずみに、チーも患者に寄り添い、心のケアを看護の役割としているとい

クと口紅を加えたものであり、チークと口紅を追加するこう強い意識の現れであると考えられる。これに対して、患とで、顔に明るさや表情を与えることに繋がり、優しさや者では「話しかけにくい」や「近づきにくい」とともに「本人

明るさや信頼感など項目別の評価にも好影響を与えた可能の自由である」が上位であり、看護師との違いが浮き彫り性が考えられる。また、5 段階の化粧モデルの評価得点は、になった。患者の印象には、「濃い・派手」と感じる化粧に看護師、患者、家族に共通して、化粧 C に有意差が認めら対する率直な印象と、本来の入院目的が達成され健康が回れないことから、化粧 A と同等程度の評価と捉えることが復されれば化粧には拘らないという思いの現れであると考できる。よって、化粧 C までを看護師に好ましい化粧としえられる。化粧に対する患者の考えの内容分析には、【個て推奨できると言える。化粧 C は化粧 B にアイラインとマ

人の自由である】のなかに、『看護師の仕事には尊敬の念しスカラを追加したものであるが、それらは薄く自然な形でかない』
や、【化粧を気にしたことがない】に『化粧を気にす使用されていることによって、特に目元を強調した化粧にる余裕がない』などが含まれており、病気を治療する目的はなっていない。化粧 A から C の特徴は、素顔を意識したで入院している患者の状況や看護師に対する感謝の気持ち

化粧法であり、ファンデーションで肌を整え、チークや口が反映されていると言える。
家族では「安心・信頼できない」

紅によって明るい表情にし、眉毛や目尻の輪郭を整える程と「不潔」が 3 位で、「不潔」が上位にあることが特徴であり、度の化粧であり、それが支持されたと言える。石田は、広それは【清潔感のある化粧が第一である】と、化粧に対して義の化粧について「人体の表面に手を加えて加飾・加工す

清潔感を重要視する考え方に基づくものと推察される。次る行為すべて」13）と表現しているが、メイクアップを施せに、化粧が「薄い・地味」と感じる看護師に対して、看護師、

ば施すほど自然体からは遠くなり人工的に作られた印象は患者、家族は共通して、「話しかけやすい」
、
「清潔」
、
「安心・

距離感を作り出すことに繋がるのではないかと考えられる。

信頼できる」、「優しそう」という印象をもっていることが看護師、患者、家族間の比較では、化粧 D は看護師の評分かった。これらの項目では、患者が家族や看護師よりも価得点が最も高く、患者の評価得点が最も低く、看護師と高値を示しており、特に「清潔」が約 5 割を示し患者の関心

患者間で有意差が（p ＜ .01）認められ、化粧 E は看護師の評の高さが窺える。
家族が「濃い・派手」と感じる化粧に「不潔」

価得点が最も低く看護師と家族間で有意差が（p ＜ .05）あという印象をもつのと同様に、患者もまた、清潔感があるったことから、濃い化粧に対する認識に違いが生じており、化粧を重視していることが推察される。
「薄い・地味」と感看護師の評価より患者や家族の評価が厳しいことが示唆さじる化粧に、素顔やありのままに近い看護師の姿がイメーれた。

ジされ、飾らないで自然体に接する看護師を求める患者の石田は、「目と口を強調するメイクアップは、人間の顔心理の現れではないかと考えられる。また、患者は「薄い・のなかで最も表情を表す部分を強調したもので（中略）意図地味」な化粧に対して「健康」の回答が 25.2 ％で、看護師は的で人工的な感じを与える」14）と述べている。つまり、人「不健康」
が 28.6 ％で相反する印象をもち、家族は「不健康」

間対人間の看護のかかわりにおいて、濃い化粧や目を強調

より「健康」の割合がわずかに高く、患者と同様の傾向であした化粧には、表情やその人らしさが見えにくく、「濃い・ることが明らかになった。一方、看護師は「薄い・地味」と派手」な化粧に「話しかけにくい」「近づきにくい」「怖い」

感じる化粧に対して「不健康」
な印象を抱くことにより、そ「安心・信頼できない」という印象があるため威圧感や不安の印象を払拭させて健康的に見せようとするため化粧を濃

感を強く感じていることが推察される。患者や家族は、看− 136 −

患者や家族と看護師の化粧に対する認識の比較に関する研究

護師の化粧に対して【個人の自由である】とする一方で、看（引用文献）

護師以上に【ナチュラルメイクが好印象である】と考えてお

1） 日本看護協会：看護者の倫理綱領 , 1-6．2003.

り、患者や家族が濃い化粧に対して評価が低い裏付けとな

2） 松本じゅん子：入院患者の化粧行動に対する看護師の認識 , 日本教育心理学会総会発表論文集 (50), 55, 2008.

る結果であると言える。

5. 総

3） 野中浩幸 , 加納みなみ：臨地実習における看護学生

括の身だしなみに関する意識調査 , 医学と生物学 , 155(6),

看護師の化粧に対する患者や家族と看護師の認識の違いを明らかにする目的で質問紙調査を実施し、看護師 395

346-350, 2011.
4） 廣瀬規代美 , 奥村亮子 , 秋山恵 , 内田真理子 , 斎藤悦子 ,名、患者 118 名、家族 85 名から有効回答を得た。化粧が佐俣愛里 , 樋口郭子 , 武藤麻衣子 , 森本知子 , 林陸郎：看「濃い・派手」と感じる看護師の印象は、看護師、患者、家護婦の身だしなみに関する研究 , 看護管理 11(6), 445-451,

族ともに「話しかけにくい」「近づきにくい」「怖い」が、ま2001.

た、化粧が「薄い・地味」と感じる看護師の印象は、「話し5） 佐谷戸優子 , 久保田香 , 山岸晃子：身だしなみに関す

かけやすい」「清潔」「安心・信頼できる」「優しそう」の割る研究－看護婦と患者の意識の違いについて－ , 長野赤合が高かった。また、化粧の薄いもの（A）
から濃いもの（E）

十字病院医誌 16, 113-116, 2002.

の 5 段階で化粧モデルを作成し、清潔感、優しさ、明るさ、
信頼感、真面目さを評価した結果、看護師、患者、家族と

6） 佐藤法仁 , 渡辺朱理 , 苔口進：医療従事者の身だしなみに関する研究 , 日本医事新報 , 4498, 95-98, 2010.

もに化粧 B の評価得点が最も高く、5 項目すべてにおいて

7） 荻あや子 , 玉谷奈都美 , 岡山加奈：大学生が患者の視評価が高いことから推奨できる化粧であると言える。また、点で捉えた看護師の化粧に対する評価 , 岡山県立大学保

看護師、患者、家族間では化粧 A と C の評価得点に有意差

健福祉学部紀要 , 21(1), 131-139, 2014.

がないことから、化粧 C までを看護師の好ましい化粧とし8） 山田眞佐美 , 米谷陽子 , 久保恵子 , 青木厚子 , 佐藤眞一 ,て提案したい。化粧 D と E は、患者と家族の評価得点が看田久浩志： 一般市民から見た看護師への茶髪許容度 , 第護師の評価得点よりも低いことから濃い化粧に対する認識

39 回日本看護学会論文集看護総合 , 230-232, 2008.
9） 大坊郁夫：化粧と顔の美意識 , 高木修監修 , シリーズに違いが生じていることが示唆された。

21 世紀の社会心理学 9 化粧行動の社会心理学所収（1-9）
謝辞. 京都 . 北大路書房 , 2001.

本調査の実施にあたり、ご協力いただきました皆様に心10）茂木健一郎：化粧をする脳 , 集英社新書 , 2009. 58.

より感謝申し上げます。また、共同研究者である大阪市立

11）前掲書 7)

大学大学院看護学研究科の岡山加奈准教授に深謝申し上げ

12）荻あや子：看護学生の化粧の現状と認識に関する研究，ます。なお、本研究は公益財団法人コスメトロジー研究振コスメトロジー研究振興財団研究業績 中間報告集 25,
175-184, 2016.

興財団の平成 26 年度研究助成費を受けて実施することができましたことに深く御礼申し上げます。

13）石田かおり：化粧と人間 - 規格化荒れた身体からの脱出 -. 法政大学出版局 , 2009. 6.
14）石田かおり：[ 現象学的化粧論 ] おしゃれの哲学 . 理想社 , 1995．25.

− 137 −

女子青年における容姿に対する劣等感への化粧効果の認識に関する発達心理学的研究
和光大学現代人間学部

髙坂康雅

The purpose of this study is to examine the effect of make-up on reduce inferiority feelings in appearance amongfemale adolescents. In study 1 , 288 university students completed a questionnaire about reasons to make-up, frequency
of using cosmetics and make-up sets, feelings after make-up, and inferiority feelings in appearance. Structural Equation
Modeling (SEM) indicated that inferiority feelings were enhanced directly and indirectly by “For covering up their defects
in appearance”, but were weakened by “For becoming their spirits aloft”.
In Study2, 1,000 females (age 16–30) completed a questionnaire of the same contents in study 1 on web. SEM indicatedthat inferiority feelings were enhanced directly and indirectly by “For enhancing the evaluations from others” among 16 – 18
females and “For manners” among 19 – 30 females, but were weakened by “For becoming their spirits aloft”, too.

1. 緒

言

化粧をする
理由

化粧品・化粧
道具の使用

青年期は生涯の中で最も劣等感を感じやすい時期であり，

化粧をした
ときの気分

容姿に対する
劣等感

化粧行動

特に女子青年は，青年期を通して，容姿・容貌に対する劣Fig. 1

等感を抱いていることが明らかにされている 1）。劣等感を本研究の仮説モデル低減させる方法のひとつとして，劣っていると感じられる部分・側面に対して直接的に働きかけ，その部分・側面をを「ふだんの時」と「デートなどの時」で比較検討している。

改善・向上させようとする「補償」が用いられることが指摘③化粧の効果に関する研究では，松井ら 4）のほかに，宇山・されており，髙坂 2）は，成人を対象とした調査で，劣等感鈴木・互 7）が 20 ～ 50 代の女性を対象とした調査から，「積が解消した方法として「直接的努力（補償）」が用いられてい極性の向上」，「リラクゼーション」，「気分の高揚（対外）」，3）たことを明らかにしている。また，宮城 は，化粧は自我の主張や虚栄に役立つため，劣等感の克服に用いられるの4）「気分の高揚（対自）」，「安心」の 5 因子を抽出している。
このように化粧に関する心理学的な研究は，主に 3 つのは当然であると述べている。松井・山本・岩男 も，化粧領域でその知見を蓄積してきている。しかし，化粧をするの効果のひとつとして「外見的欠点の補償」
をあげており，

ことが容姿に対する劣等感に及ぼす影響・効果について直また，化粧が外見的な欠点の補償のような即時的な効用だ

接的に検討した研究は行われていない。また，調査ごとにけではなく，対人的な積極性や自信というような持続的な対象者の年齢範囲や属性が異なっているため，単純に結果効用をもつことも指摘している。

を比較検討することが困難である。さらに，研究によってこれまでの化粧に関する心理学的な研究は，①化粧行動“化粧” の定義（何をもって “化粧” とするか）が異なっていたの動機・理由・意識に関する研究，②化粧品の消費行動・

り，化粧の定義が明確にされていないものも少なくない。

使用頻度に関する研究，③化粧の効果に関する研究，の 3

これらの問題意識のもと，本研究では，女子青年におい

領域にまとめられる。①化粧行動の動機・理由・意識に関て化粧行動が容姿に対する劣等感に及ぼす影響を明らかにする研究としては，上方・田頭 5）は，大学生女子が化粧をすることを目的とする。なお，本研究における化粧とは，“顔する理由として，「変わる楽しさ」，「魅力の呈示」，「積極の全体，または一部に，『つける』，『塗る』，『描く』という性の向上」，「リラクゼーション」，「肌の美しさ」の 5 因子

行為によって，見た目の変化が生じる行為” とした。また，を抽出している。また②化粧品の消費行動・使用頻度に関化粧行動には，①化粧をする理由，②化粧品・化粧道具のする研究としては，飛田

6）

が 12 種類の化粧品の使用頻度

使用，③化粧をしたときの気分，が含まれるものとする（Fig. 1）。

Developmental Psychological Studyof Effects of Make-Up for Inferiority
Feelings in Appearance among Female
Adolescents
Yasumasa Kosaka
Wako University, Faculty of Human
Sciences

2. 研究 1
2. 1. 目的研究 1 では，大学生を対象に，大学生の化粧行動が容姿に対する劣等感に及ぼす影響を明らかにすることを目的とした。

− 138 −

女子青年における容姿に対する劣等感への化粧効果の認識に関する発達心理学的研究

2. 2. 方法

「全くあてはまらない」（1 点）から「とてもあてはまる」（5

2. 2. 1. 調査対象者

点）の 5 件法で回答を求めた。

東京都内の大学生 288 名（男子 143 名，女子 143 名，不2. 2. 3. 調査時期・手続き・倫理的配慮2015 年 7 月に，講義時間の一部を用いて，集団で調査

明 2 名；平均年齢 19.6 歳，標準偏差 2.9 歳）を調査対象者とした。

を実施し，その場で調査用紙を回収した。その際，無記名

2. 2. 2. 調査内容であるため誰がどのように回答したか把握されないこと，

年齢，性別，学年に続き，以下の⑴～⑷への回答を求め

調査への協力は任意であり，拒否することができること，た。

調査を拒否しても一切の不利益は生じないこと，などを紙⑴容姿に対する劣等感項目

面および口頭で伝え，そのうえで回答した場合，調査への髙坂 8, 9）を参考に独自に 5 項目を作成した。
「あなたにど協力に同意したとみなした。

の程度あてはまりますか」という教示のもと，「全くあて
はまらない」（1 点）から「とてもあてはまる」（5 点）の 5

2. 3. 結件法で回答を求めた。

2. 3. 1. 化粧品・化粧道具の使用頻度と分析対象者の選定⑵化粧品・化粧道具の使用頻度項目

果

18 種類の化粧品・化粧道具の使用頻度への回答の和を大学生が一般的に使用していると考えられる 18 種類の算出し，男女別の分布を Table 1 に示した。その結果，1

化粧品・化粧道具について，1 週間の使用頻度を「使用週間で 18 種類の化粧品・化粧道具を 1 日以上使用していしない」（1 点）から「毎日」（5 点）の 5 件法で回答を求める者（使用頻度への回答の和≧ 19）は，男性 5 名，女性

た。

111 名であった。

⑶化粧をする理由項目

対象者全体のうち，化粧をしている男性が少数であった

事前に行った予備調査で得られた 7 カテゴリーについて

ため，これ以降は，化粧品・化粧道具を使用している女性

5 項目ずつを独自に作成した。
「あなたが普段，化粧を111 名のみを分析対象者とすることとした。

する理由に，どの程度あてはまりますか」という教示の2. 3. 2. 容姿に対する劣等感の主成分分析と得点化

もと，「全くあてはまらない」（1 点）から「とてもあては
まる」
（5 点）
で回答を求めた。

容姿に対する劣等感項目 5 項目について主成分分析を行ったところ，5 項目すべてが第 1 成分に高い負荷量を示し⑷化粧をしたときの気分た（Table 2）。次に α 係数を算出したところ，.94 と高い内事前に行った予備調査で得られた 6 カテゴリーについて
5 項目ずつを独自に作成した。
「あなたは，化粧を行った後，どのような気分になりますか」という教示のもと，的一貫性が確認された。
そこで，5 項目の平均を算出し，「容姿に対する劣等感」
得点（以下，劣等感得点）とした。

Table 1

化粧品・化粧道具の使用頻度の男女別分布

Table 2

容姿に対する劣等感項目の主成分分析結果− 139 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

2. 3. 3. 化粧をする理由項目の因子分析と得点化

めに化粧をしていると解釈されたため，「他者評価の上昇」

化粧をする理由項目 35 項目について重みづけのない最と命名した。第 2 因子は「化粧をすることが，日常化して小 2 乗法による因子分析を行ったところ，固有値 1.0 以上いるから」など，毎日の習慣や他者と会うときのマナーとで 8 因子が抽出された。そこで，因子数を 8 から減らしなして化粧をしていると解釈されたため，「習慣・マナー」とがら，重みづけのない最小 2 乗法・promax 回転による因命名した。第 3 因子は「化粧をすると，気合が入る」など，

子分析を繰り返し行ったところ，因子の解釈可能性などか気持ちを高めるために化粧をしていると解釈されたため，

ら 5 因子解が最適であると判断された（Table 3）。

「気分の高揚」と命名した。第 4 因子は「友人がいつも化粧第 1 因子は「化粧をすることで，人にかわいい / かっこをしているから」など，周りの人が化粧をしているため，いいと思われたいから」など，他者からの評価をあげるた

自分も化粧をしていると解釈されたため，「周囲からの影

Table 3

化粧をする理由項目の因子パターン− 140 −

女子青年における容姿に対する劣等感への化粧効果の認識に関する発達心理学的研究

響」と命名した。第 5 因子は「素顔に自信がないから」など，

ら減らしながら，重みづけのない最小 2 乗法・promax 回

自分の容姿の欠点やコンプレックスを感じている箇所を隠転による因子分析を繰り返し行ったところ，因子の解釈可すために化粧をしていると解釈されたため，「欠点の隠匿」

能性などから，3 因子解が最適であると判断された（Tableと命名した。

4）。

各因子に .40 以上の負荷量を示した項目について α 係数

第 1 因子は「化粧下地」など基礎的な化粧品・化粧道具がを算出したところ，「他者評価の上昇」が .93，
「習慣・マナ

高い負荷量を示したことから，「デイリーメイク」と命名しー」が .91，「周囲からの影響」が .66，
「欠点の隠匿」が .76 とた。第 2 因子は「ハイライト」など，陰影をつけたり強調しある程度の内的一貫性が確認された。そこで，それぞれにたりする化粧品・化粧道具が高い負荷量を示したことから，.40 以上の負荷量を示した項目の平均を算出し，各得点と「陰影メイク」と命名した。第 3 因子は「アイライナー」などした。
「気分の高揚」については，項目番号 7「周りの人が目元を強調する化粧品・化粧道具が高い負荷量を示したこ

化粧をしているから」の負荷量が第 4 因子「周囲からの影響」とから，「目強調メイク」と命名した。

と僅差であり，この項目を含めた 5 項目で算出した α 係数

各因子に .40 以上の負荷量を示した項目の α 係数を算出（.81）よりも，この項目を除いた 4 項目（項目番号 24, 17,したところ，「デイリーメイク」が .78，「陰影メイク」が .80，

10, 3）で算出した α 係数（.91）を算出した方が，高い値を示「目強調メイク」が .65 とある程度の内的一貫性が確認されしたことから，項目番号 7 を除いた 4 項目の平均を算出し，た。
そこで，各因子に .40 以上の負荷量を示した項目の平均得点とした。
2. 3. 4. 化粧品・化粧道具の使用頻度の因子分析と得点化
化粧品・化粧道具の使用頻度 18 項目について，重みづを算出し，各得点とした。
2. 3. 5. 化粧をしたときの気分項目の因子分析と得点化

けのない最小 2 乗法による因子分析を行ったところ，固有化粧をしたときの気分項目 30 項目について，重みづけ

値 1.0 以上で 5 因子が抽出された。そこで，因子数を 5 かのない最小 2 乗法による因子分析を行ったところ，固有値

Table 4

化粧品・化粧道具の使用頻度項目の因子パターン− 141 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

1.0 以上で 5 因子が抽出された。そこで，因子数を 5 からを表していると考えられるため，「自信」と命名した。第 3

減らしながら，重みづけのない最小 2 乗法・promax 回転

因子は「変ではないか気になる」など，化粧が自分に合ってによる因子分析を行ったところ，因子の解釈可能性などかいるかを気にしていることを表していると考えられるため，ら，4 因子解が最適であると判断された（Table 5）。

「不安・懸念」と命名した。第 4 因子は「落ち着く」など，化

第 1 因子は，「楽しい気分になる」など，化粧をすること
でポジティブで活力に満ちた気分になることを表している

粧をすることで気持ちが安定することを表していると考えられるため，「安心」と命名した。

と考えられるため，「快活的気分」と命名した。第 2 因子は各因子に .40 以上の負荷量を示している項目の α 係数を「かわいく / かっこよくなった気がする」など，化粧をする算出したところ，「快活的気分」が .95，
「自信」が .93，
「不安・ことで，自分の容姿に自信がもてたように感じられること懸念」が .87，「安心」が .76 と十分な内的一貫性を示したこ

Table 5

化粧をしたときの気分項目の因子パターン− 142 −

女子青年における容姿に対する劣等感への化粧効果の認識に関する発達心理学的研究とから，各因子に .40 以上の負荷量を示した項目の平均をであった。なお，それぞれの得点における劣等感得点への算出し，各得点とした。

総合効果を Table 6 に示した。

2. 3. 6. 化粧行動が容姿に対する劣等感に及ぼす影響

まず，「欠点の隠匿」得点は，直接的に劣等感得点に正の化粧行動が容姿に対する劣等感に及ぼす影響を検討す

影響を示し，また，「不安・懸念」得点を媒介として正の影るため，仮説モデル（Fig. 1）に従って，化粧をする理由 5

響を示しており，最も容姿に対する劣等感を高めている理

得点を第 1 水準に，化粧品・化粧道具の使用頻度 3 得点を由であった。「他者評価の上昇」得点と「周囲からの影響」
得第 2 水準に，化粧をしたときの気分 4 得点を第 3 水準に，点は，媒介する得点によって，劣等感得点に正の影響も負

劣等感得点を第 4 水準としたモデルを作成し，それぞれにの影響も与えていたが，Table 2 より，それらの影響が相対して直接効果を設定して，共分散構造分析を行った。そ殺され，これらの理由は劣等感得点にはほとんど影響を及の後，有意にならなかったパス・共変動を削除しながら，繰

ぼしていないことが示された。「習慣・マナー」得点は，「不り返し共分散構造分析を行い，すべてのパス・共変動が有安・懸念」得点を媒介として，劣等感得点に負の影響を示意になったモデルを採用した（Fig. 2）。このモデルの適合した。

度指標は GFI=.934，AGFI=.853，CFI=.978，RMSEA=.060「気分の高揚」得点は，「自信」得点を媒介として，劣等感

Fig. 2
Table 6

化粧行動が容姿に対する劣等感に及ぼす影響
各得点の劣等感得点に対する総合効果（標準化済）− 143 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

得点に負の影響を示した。

調査内容は，年齢，性別，職業，婚姻経験，結婚の有無に加え，研究 1 で用いた⑴容姿に対する劣等感項目 5 項目，

3．研究 2
3. 1. 目⑵化粧品・化粧道具の使用頻度項目 18 項目，⑶化粧をす

的る理由項目 35 項目，⑷化粧をしたときの気分項目 30 項目

研究 1 では大学生が対象であったため，より年齢範囲をを使用した。教示文，選択肢も同様であった。

広げて検討することにより，各年代の特徴が明らかになると考えられる。そこで，研究 2 では，16 歳から 30 歳の未

3. 3. 結婚女性を対象として，再度，化粧行動が容姿に対する劣等3. 3. 1. 容姿に対する劣等感項目の主成分分析と得点化感に及ぼす影響を明らかにすることを目的とする。

果

容姿に対する劣等感項目 5 項目について主成分分析を行ったところ，5 項目すべてが第 1 成分に高い負荷量を示し

3. 2. 方法た（Table 8）。また，5 項目で α 係数を算出したところ，

3. 2. 1. 調査対象者・実施方法.94 と十分な内的一貫性も確認された。

16 歳から 30 歳の未婚で子どもがおらず，化粧品・化粧

そこで，5 項目の平均を算出し，「容姿に対する劣等感」

道具の使用頻度 18 項目のうち，少なくとも 1 項目に 1「使得点（以下，劣等感得点）をとした。

用しない」以外の回答をした女性 1,000 名を調査対象者と

3. 3. 2. 化粧をする理由項目の因子分析と得点化
化粧をする理由項目 35 項目について，最尤法による因した。
調査は，株式会社クロス・マーケティングに依頼をして，子分析を行ったところ，固有値 1.0 以上で 6 因子が抽出さ2015 年 8 月に web 調査を実施した。対象者は 16 ～ 18 歳，れた。そこで，因子数を 6 から減らしながら，最尤法・19 ～ 22 歳，23 ～ 27 歳，28 ～ 30 歳の 4 年齢群について

promax 回転による因子分析を行ったところ，5 因子が最それぞれ 250 名を割り付けた。それぞれの年齢群の職業分適であると判断された（Table 9）。
第 1 因子は，「人に綺麗だと思われたいから」など，他者

布を Table 7 に示す。
3. 2. 2. 調査内容

からの評価をあげるために化粧をしていると解釈され，研Table 7

研究 2 の調査対象者の年齢群ごとの職業分布− 144 −

女子青年における容姿に対する劣等感への化粧効果の認識に関する発達心理学的研究

究1での第1因子と同様の内容であると考えられるため，「他ーすることができるから」，「化粧をすることで，コンプレ

者評価の上昇」と命名した。ただし，研究 2 の場合，「他者ックスを隠すため」など，研究 1 の第 5 因子「欠点の隠匿」

評価の上昇」のなかには，「化粧をすることで，欠点をカバに関わる内容が含まれていた。第 2 因子は，
「化粧をする

Table 8

容姿に対する劣等感項目の主成分分析結果

Table 9

化粧をする理由項目の因子パターン− 145 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

ことが習慣になっているから」など，日常的な習慣として

そこで，各因子に以上の負荷量を示した項目の平均を算

化粧をしていると解釈され，研究 1 の第 2 因子のうち，「習出し，各得点とした。

慣」に関わる項目だけで独立した因子を構成したと考えら

3. 3. 3. 化粧品・化粧道具の使用頻度の因子分析と得点化れるため，「習慣」と命名した。第 3 因子は「化粧をすると化粧品・化粧道具の使用頻度 18 項目について最尤法にモチベーションが上がるから」など，気持ちを高めるため

よる因子分析を行ったところ，固有値 1.0 以上で 4 因子がに化粧をしていると解釈され，研究 1 の第 3 因子と同様の

抽 出 さ れ た。 そ こ で 因 子 数 を 4 に 指 定 し て 最 尤 法・

内容であると考えられるため，「気分の高揚」と命名した。

promax 回転による因子分析を行ったところ，解釈可能な

第 4 因子は，「身だしなみのため」など，他者と会う際のマ4 因子が抽出された（Table 10）。

ナーとして化粧をしていると考えられ，研究 1 の第 2 因子

第 1 因子は「アイライナー」など，比較的使用頻度の高い

のうち，
「マナー」
に関わる項目だけで独立した因子を構成目元に用いる化粧品・化粧道具が高い負荷量を示したことしたと考えられるため，「マナー」と命名した。第 5 因子は，から，「デイリー目元メイク」と命名した。第 2 因子は「ノ「友人がいつも化粧をしているから」など，周りの人が化粧ーズシャドウ」など，陰影をつけたり強調したりする化粧をしているため，自分も化粧をしていると解釈され，研究品・化粧道具が高い負荷量を示したことから，「陰影メイク」

1 の第 4 因子と同様の内容であると考えられるため，「周と命名した。第 3 因子は「化粧下地」など，基礎的な化粧品・

囲からの影響」と命名した。

化粧道具が高い負荷量を示したことから，「デイリーメイ

各因子に .40 以上の負荷量を示した項目のα係数を算出ク」と命名した。第 4 因子は「二重まぶた化粧品」など，目したところ，「他者評価の上昇」が .95，
「習慣」が .94，「気元を強調する化粧品・化粧道具が高い負荷量を示したこと

分の高揚」
が .91，「マナー」
が .83，「周囲からの影響」
が .73 と，から，「目元強調メイク」と命名した。

十分な内的一貫性が確認された。
Table 10

各因子に .40 以上の負荷量を示した項目の α 係数を算出
化粧品・化粧道具の使用頻度項目の因子パターン− 146 −

女子青年における容姿に対する劣等感への化粧効果の認識に関する発達心理学的研究したところ，「デイリー目元メイク」が .84，
「陰影メイク」
が .82，「デイリーメイク」
が .74，「目元強調メイク」が .60 と，4 因子が抽出された（Table 11）。
第 1 因子は「明るい気分になる」など，化粧をすることでポジティブで活力に満ちた気分になることを表しているとある程度の内的一貫性が確認された。
そこで，各因子に .40 以上の負荷量を示した項目の平均考えられるため，「快活的気分」と命名した。第 2 因子は「性を算出し，各得点とした。

格が変わった気がする」など，普段とは異なる自分になれ

3. 3. 4. 化粧をしたときの気分項目の因子分析と得点化た気持ちになれることを表していると考えられるため，「変化粧をしたときの気分項目 30 項目について，最尤法に化の実感」と命名した。第 3 因子は「上手くいっているかど

よる因子分析を行ったところ，固有値 1.0 以上で 4 因子がうか不安になる」など，化粧が自分に合っているかを気に抽出された。そこで，因子数を 4 に指定して，最尤法・していることを表していると考えられるため，「不安・懸念」

promax 回転による因子分析を行ったところ，解釈可能なと命名した。第 4 因子は「落ち着く」など，化粧をすること

Table 11

化粧をしたときの気分項目の因子パターン− 147 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

で気持ちが安定することを表していると考えられるため，

3. 3. 6. 年齢群ごとの諸変数間の相関
4 つの年齢群ごとに，化粧をする理由 5 得点，化粧品・「安心」と命名した。
各項目に .40 以上の負荷量を示している項目の α 係数を算出したところ，「快活的気分」が .97，
「変化の実感」が .86，
「不安・懸念」が .86，
「安心」が .89 と，十分な内的一貫性を化粧道具の使用頻度 4 得点，化粧をしたときの気分 4 得点，劣等感得点の相関を算出した（Table 13）。
その結果，4 年齢群のうち 1 群のみが有意になっていた，あるいは，有意になっていなかった箇所をカウントしたと示した。
そこで，各項目に .40 以上の負荷量を示した項目の平均

こ ろ，16 ～ 18 歳 は 9 ヶ 所，19 ～ 22 歳 は 3 ヶ 所，23 ～27 歳は 2 ヶ所，28 ～ 30 歳は 2 ヶ所となっており，16 ～を算出し，各得点とした。
3. 3. 5. 年齢群による諸得点の比較

18 歳の諸変数の関連は，他の年齢群とは異なる可能性が化粧をする理由 5 得点，化粧品・化粧道具の使用頻度 4
得点，化粧をしたときの気分 4 得点，劣等感得点について，示唆された。
3. 3. 7. 化粧行動が容姿に対する劣等感に及ぼす影響

年齢群（4；16 ～ 18 歳，19 ～ 22 歳，23 ～ 27 歳，28 ～ 30

化粧行動が容姿に対する劣等感に及ぼす影響を検討する

歳）を要因とした 1 要因分散分析を行った。その結果，化ため，研究 1 と同様のモデルを作成し，16 ～ 18 歳と 19

粧をする理由の「習慣」得点，「気分の高揚」
得点，「マナー」～ 30 歳の 2 群における多母集団同時分析を行った。2 群

得点，化粧品・化粧道具の使用頻度の「デイリー目元メイク」

双方のモデルにおいて有意にならなかったパス・共変動を得点，「デイリーメイク」
得点，「目元強調メイク」
得点，化

削除し，繰り返し共分散構造分析を行い，すべてのパス・粧をしたときの気分の「安心」
得点，「不安・懸念」
得点，劣共変動がいずれかのモデルにおいて有意になった時点で，等感得点において，要因の効果が有意であった（Table 12）。

そのモデルを採用した（Fig. 3，Fig. 4）。採用したモデル

そこで，多重比較（Tukey 法）を行ったところ，「習慣」の 適 合 度 指 標 は，GFI=.986，AGFI=.959，CFI=.996，

得点，「マナー」得点，「デイリー目元メイク」得点では，

RMSEA=.020 であった。なお，各モデルにおけるそれぞ

16 ～ 18 歳が他の年齢群よりも得点が低かった。
「気分のれの得点の劣等感得点への総合効果を Table 14 に示した。

高揚」得点では 16 ～ 18 歳よりも 19 ～ 22 歳の方が高かった。

まず，「他者評価の上昇」得点は，「快活的気分」得点を媒「デイリーメイク」得点では，16 ～ 18 歳は他の年齢群より介として劣等感得点に負の影響を及ぼしていた一方，「不も得点が低く，また，19 ～ 22 歳は 28 ～ 30 歳よりも得点

安・懸念」得点を媒介として劣等感得点に正の影響を及ぼが低かった。
「目元強調メイク」得点では，16 ～ 18 歳，19していた。特に 16 歳～ 18 歳については，直接的に正の影～ 22 歳が他の 2 つの年齢群よりも得点が高かった。
「安心」

響がみられ，また，「安心」得点を媒介として劣等感得点に

得点では 16 ～ 18 歳よりも 23 ～ 27 歳や 28 ～ 30 歳の方が正の影響を及ぼしており，全体として劣等感得点に正の影

得点が高かった。
「不安・懸念」得点では，16 ～ 18 歳が他響を示していた。

の年齢群よりも得点が高かった。劣等感得点では，16 ～「習慣」得点は，「不安・懸念」得点を媒介として劣等感得

18 歳の方が 28 ～ 30 歳よりも得点が高かった。

点に正の影響を示し，また，「周囲からの影響」得点は「快Table 12

年齢群を要因とした諸変数の 1 要因分散分析結果− 148 −

女子青年における容姿に対する劣等感への化粧効果の認識に関する発達心理学的研究

活的気分」得点を媒介として劣等感得点に負の影響を示し

なお，化粧品・化粧道具の使用頻度は，化粧をする理由

たが，いずれも劣等感得点に及ぼす全体的な影響は極めてや化粧をしたときの気分，劣等感とはいずれも関連を示さ小さかった。
「気分の高揚」
得点は，「快活的気分」得点を媒なかった。

介として劣等感得点に負の影響を及ぼしていた。

4．考

「マナー」
得点は，
「快活的気分」
得点や「不安・懸念」得点察を媒介として劣等感得点に正の影響を及ぼしていた。特に本研究の目的は，化粧行動が容姿に対する劣等感に及ぼ

19 ～ 30 歳では，「マナー」得点の劣等感得点に及ぼす全体

す影響を明らかにすることであった。研究 1 では大学生女的な影響が大きかった。

子を対象として調査を実施し，「欠点の隠匿」を理由としてTable 13

年齢群ごとの諸変数の関連− 149 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

Fig. 3

化粧行動が容姿に対する劣等感に及ぼす影響（16 ～ 18 歳）

Fig.4

化粧行動が容姿に対する劣等感に及ぼす影響（19 ～ 22 歳）− 150 −

女子青年における容姿に対する劣等感への化粧効果の認識に関する発達心理学的研究

Table 142 年齢群における劣等感得点に対する総合効果（標準化済）

Fig. 5

化粧による劣等感増加ループと劣等感減少ループ

ツールとして化粧をすることで，他者と積極的に関われるようになり，自信がもてる ( 劣等感が低減する ) ようになると考えられる（Fig. 5）。
（引用文献）
化粧をすることで，容姿に対する劣等感は強まる一方，「気1） 髙坂康雅，：自己の重要領域からみた青年期における分の高揚」を理由として化粧をすることで，容姿に対する劣等感の発達的変化，教育心理学研究，56，218-229，

劣等感は低減することが明らかにされた。また，研究 2 で2008．

は，16 ～ 30 歳の女性を対象として調査を実施し，「他者2） 髙坂康雅，：青年期における容姿・容貌に対する劣等評価の上昇」（内容としては「欠点の隠匿」も含む；特に 16感の解決に関する検討，日本青年心理学会第 16 回大会～ 18 歳）や「マナー」（特に 19 ～ 30 歳）を理由として化粧発表論文集，58-61，2008．

をすることで，容姿に対する劣等感は強まる一方，「気分の高揚」を理由として化粧をすることで，容姿に対する劣その本体と克服，東京書籍，

1979．
4） 松井

等感は低減することが明らかにされた。
10）3） 宮城音弥，：劣等感

豊，山本真理子，岩男寿美子，：化粧の心理的は，気分を高めたいと思って化粧をすると，実効用，マーケティング・リサーチ，21，30-41，1983．

際に気分が高まったように思える “自己の社会的アイデン

5） 上方美紀，田頭穂積，：女子大学生の化粧行動と自己菅原

ティティの自覚” について論じている。研究 1 においても意識との関連性，教育相談センター年報，10，121-132，

研究 2 においても，「気分の高揚」が容姿に対する劣等感を2002．

低減させていたことから，他者の目を意識せずに，まずは

6） 飛田

操，
：化粧の個人的効果と対人的効果に関する

自分が化粧を楽しむ，化粧をすることで気持ちを高揚させ実証的研究，コスメトロジー研究報告，3，145-150，

ようという思いが，結果として劣等感を低減させることに1996．
7） 宇山侊男，鈴木ゆかり，互つながると考えられる。
一方，
研究 1 の「欠点の隠匿」
や研究 2 の
「他者評価の上昇」，

恵子：メーキャップの心

理的有効性，日本香粧品科学会誌，14，163-168，1990．

「マナー」
は，他者を意識した化粧をする理由であると考え

8） 髙坂康雅，青年期における容姿・容貌に対する劣性をられる。髙坂・佐藤 11）は，青年期における劣等感の規定認知したときに生じる感情の発達的変化，青年心理学研因モデルを提唱している。そのうち，対自的側面にあたる

究，20，41-53，2008．

自己評価の基準について，他者視点優位な自己評価を行う

9） 髙坂康雅，青年期における容姿・容貌に対する劣性をほど，劣等感が強まるとしている。本研究で劣等感を強め認知したときに生じる感情と反応行動との関連，教育心る理由となっていた「欠点の隠匿」
や「他者評価の上昇」，「マ

理学研究 , 57，1-12，2009．

ナー」はいずれも他者からの視点を意識した理由であり，
髙坂・佐藤 11）の他者視点優位に該当すると考えられる。

10）菅原健介，化粧による自己表現，高木修監，大坊郁夫編，：化粧行動の社会心理学，北大路書房，102-113，
2001．

以上から，化粧をすることによって，容姿の欠点をなくす・隠すという“一次補償”はほとんど生じることなく，“一11）髙坂康雅，佐藤有耕，：青年期における劣等感の規定

次補償” のツールとして化粧を用いると，かえって劣等感因モデルの構築，筑波大学心理学研究，37，77-86，

は強くなってしまう可能性が示唆された。むしろ，気分を2009．

高める，気持ちを明るくするなど気分を高揚させるための− 151 −

消費者ニーズの変化と化粧品流通チャネルに関する研究
─日本・中国・イギリスの 3 か国比較─
同志社大学商学部

佐々木一郎

Currently, cosmetic marketing channels via the internet or mail orders are steadily increasing. But, little study has
been done to investigate the factors affecting the internet or mail order sales channels, especially after controlling forsocioeconomic status.
In this study, we analyzed the determinants of cosmetic marketing channels after controlling for socioeconomic variables
by using internet survey data, which included 1500 women participants from Japan, China, and England.
We found that age and information source of cosmetic advice were associated with internet or mail order selection
in cosmetic sales channels. Further research should examine the association between information source and cosmetic
marketing channels for more details.

1.

緒

近年、大きな変化をみせている。化粧品は、多くの国々で、

言インターネットや通販のチャネルのウェイトが大きくなっ

1. 1. 化粧品のネット通販選択の決定要因に注目する
ことの重要性てきている。
なぜ、インターネット・通販は増えているのか、その増化粧品は、人々が美しくなるうえで主要な手段の 1 つで加にはどのような利点と問題点があるのか、どのような特ある。そして、美しさと社会経済的要因との関連を分析し徴をもつ人々が選択しているのか、化粧品を非対面販売でた先行研究から、美しさが増すことは、高い収入や幸福度

購入する際の知覚リスクをどのように工夫して処理していと顕著な関連があることが定量的に示されている

1-3）

。化

るのか。

粧品行動や美しさは、経済的な豊かさや幸福度の点からも、化粧品は、実際に当該商品を購入・使用して効果を実感

重要なファクターの 1 つであることが考えられる。家計のするまで、商品の内容や機能、安全性の商品情報がわかり経済力の高低にかかわらず、より安価により多くの種類のにくいことに関する知覚リスクが大きい。特に、色などでなかから最適な化粧品を消費者が選択できるためには、化

内容や効果を把握しやすいメイクアップ化粧品よりも、す粧品流通チャネルの充実は、重要である。

ぐには効果がみえにくいスキンケア化粧品のほうが、初め化粧品を購入するサイドの消費者の経済環境に目を向けると、厳しさを増している。長引く経済不況、低収入の非正規雇用・フリーターの増加、経済格差拡大などに多くのて購入して使用する場合には、知覚リスクが大きいと考えられる。
そのため、店頭などでの対面販売でなければ、消費者は、消費者が直面している。低所得者が増加する中で、消費者

当該商品情報の詳細を知ることは難しく、知覚リスクが顕にとって、化粧品の流通チャネルが増えることは、より良在化しやすい。にもかかわらず、知覚リスクが高い化粧品

い化粧品を、より安価で購入できる可能性が高まることがについて、インターネット通販チャネルを選択する人々が期待できる。

増加している。なぜであろうか。どのような要因が、イン化粧品メーカーから消費者の手元へ化粧が届けられるまでの流通チャネルは、届けるための流通コストや、人々のターネット通販チャネル選択に影響を及ぼしているのであろうか。

ライフスタイルの変化などにあわせて、時代を反映して変ネット通販チャネルを選択している人々は、ネット通販化していく。低所得要因の他にも、少子高齢化、ライフスという非対面販売による知覚リスクをどのように処理してタイル、働き方、結婚観、格差拡大など、女性を取り巻くいるのか、また、化粧品のチャネル選択の影響要因を明ら

社会経済環境は、大きな変化し、化粧品の購入チャネルも、

かにすることは、社会経済環境が大きく変化するなか、重要な研究課題の 1 つであると考えられる。

1. 2. 先行研究
生産メーカーから消費者へ商品・サービスが届けられる

Determinants of cosmetic marketing
channels in Japan, China and  Englandまでの流通チャネルには、スーパーやデパートなどの対面

Ichiro Sasaki
Faculty of Commerce, Doshisha Universityなどの非対面販売チャネルがある。非対面販売チャネルの販売チャネルと、インターネットショッピングや通信販売− 152 −

消費者ニーズの変化と化粧品流通チャネルに関する研究 ─日本・中国・イギリスの 3 か国比較─

代表格であるインターネットショッピングや通信販売は、を用いて分析を行う、クロスセクショナルな研究である。

書籍やアパレルなどをはじめ、様々な商品・サービス領域

調査票は筆者が作成し、調査実施は外部の調査会社へ委託

でチャネル全体に占める割合を大きく伸ばしてきている。

した。調査対象は、20 ～ 69 歳の日本、イギリス、中国のインターネットショッピングについては、利便性や低価

女性、各 500 サンプル、合計 1500 サンプルである。学生

格などのプラス面と、非対面販売であることによる知覚リ

は調査対象から除外している。

スクが高いというマイナス面の両面がある。そのため、消費者のタイプや特徴、購入対象商品の知覚リスクの高低等

2. 2. アウトカム変数

により、インターネットショッピングでの買い物に積極的

本研究のベースとなる Web アンケート調査では、スキな消費者と、消極的な消費者に大きく分かれることが先行

ンケア化粧品の購入チャネルとして、ドラッグストア、イ

研究から指摘されている。

ンターネット・通信販売、デパート、専門店、コンビニエ

Al-Debei et al.［2015］は、消費者がインターネットショ
ッピングを利用するかどうかは、2 つの要因によって大きンス・ストア、スーパーマーケット、訪問販売、その他のチャネルを回答選択肢とした。

く影響されることを指摘している4）。1 つは、信頼である5, 6）。

後述する本研究のロジットモデルのアウトカム変数につ

買い物行動・取引における信頼とは、消費者が自ら期待しいては、これらのチャネルのうち、最も多く利用するチャ

た内容・性能等をもつ商品を、生産者や流通業者がきちん

ネルとして、インターネット・通信販売を選択した場合はと届けることを、能力と意図の両面において信じることが1、それ以外のチャネルを選択した場合は 0 を設定した。

できることであり、この信頼の有無がインターネットショ
ッピング利用の有無に影響することを示した。いま 1 つは、

2. 3. 説明変数

知覚された利益であり、インターネットショッピングの利

説明変数については、大きく 3 つあり、人口統計学的要用により、時間や物理的な流通コストがどれだけ節約でき

因、社会経済的要因、化粧行動関連要因である。第 1 に、たか、利便性が増したかが、その利用度合いに大きく影響

人口統計学的要因については、年齢は、20 ～ 29 歳、30することを指摘している。

～ 39 歳、40 ～ 49 歳、50 ～ 59 歳、60 ～ 69 歳に分類した。

また、Chang et al.［2016］は、知覚リスクはインターネ

社会経済的要因については、経済的余裕は、余裕があると、ットショッピング利用を顕著に抑制するように作用するこ

余裕がないに区分した。雇用形態は、正社員、非正規雇用・7）とを明らかにしている 。知覚リスクとは、消費者が実際

パート、自営業・会社経営、無職に区分した。第 3 に、化に商品を手に取り使用するまでの当初予想していた性能等

粧行動関連要因については、スキンケア化粧品購入の参考について、実際の性能等との乖離の可能性や、様々な諸コ

情報源は、母親、姉・妹、友人、雑誌、インターネットのストである。知覚リスクには、商品に不具合があり消費者情報サイト、ビューティアドバイザーに分類した。スキンが予想・期待していた効果・効能が得られない性能リスク

ケアの 1 か月の購入金額は、日本は、1000 円未満、1000等があり、とりわけ、非対面販売チャネルであるインター～ 3000 円未満、3000 ～ 5000 円未満、5000 円以上に、中ネットショッピングにはこの知覚リスクが非常に大きいこ国は、20 元未満、20 ～ 50 元未満、50 ～ 100 元未満、100と、さらに、知覚リスクはインターネットショッピングの元以上に、イギリスは、5 ポンド未満、5 ～ 10 ポンド未満、利用にマイナスの影響が生じやすいことが定量的に明らか

10 ～ 20 ポンド未満、20 ポンド以上に分類した。スキンになっている7-9）

ケア化粧品購入時のお店・チャネル比較については、よく。

化粧品領域の流通チャネルにおいては、先行研究では、

比較する、やや比較する、あまり比較しない、比較しない

化粧品チャネル選択の影響要因を様々な要因を同時に考慮に分類した。主観的な美しさは、非常に美しいとやや美ししたうえで分析した研究蓄積は非常に少ない。さらに、ネいは美しい、あまり美しくないと全く美しくないは美しく

ット通販チャネルに注目してそのチャネル選択理由に焦点ないの 2 つに分類した。

を当てた研究も非常に少ない。
そこで本研究では、知覚リスクが大きいスキンケア化粧2. 4. 統計分析

品に焦点を当て、日本、中国、イギリスの 3 か国の独自の本研究では、様々な諸要因を同時に考慮したうえで、ス

調査データを用いて、ネット通信販売チャネル選択の決定

キンケア化粧品チャネル選択に関して、2 項ロジットモデ

要因は何かを明らかにすることを研究目的とする。

ルを用いた分析を行う。被説明変数は、スキンケア化粧品のネット・通販チャネル選択の有無であり、最も多く利用

2. Methods

するチャネルとして、ネット・通販チャネルが該当する場

2. 1. データ

合は 1、それ以外のチャネルが該当する場合は 0 をとる。

本研究は、筆者が収集した Web アンケート調査データ

また、スキンケア化粧品を購入していないサンプルは、統− 153 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

計 分 析 か ら 除 外 し て い る。 本 研 究 の 分 析 に は、SPSS

バイザーを基準にする場合、インターネットの情報サイト

V.24.0 ソフトウェアを用いた。

は、それぞれ、日本では 16.1 倍、中国では 5.4 倍、イギリ

3. 結

スでは 2.5 倍高い。日本では、雑誌は 6.6 倍、友人は 6.4 倍果高い。中国では、母親のケースでは 5.2 倍高い。スキンケ

表 1 は、記述統計量を示している。回答者の平均年齢は、

アの 1 か月の購入金額については、日本では、1000 円未

日本は 44.8 歳（SD=13.4）、中国は 44.3 歳（SD=13.0）、イギ

満を基準にすると、1000 ～ 3000 円未満は 2.6 倍、3000 ～リスは 44.4 歳（SD=13.7）である。スキンケア化粧品の購入

5000 円未満は 3.2 倍、5000 円以上は 7.5 倍であり、購入

チャネルは、日本では、ドラッグストアは 43.0 ％、イン金額が高い人々ほど、ネット・通販チャネルを選択する傾ターネット・通信販売は 30.6 ％、デパートは 6.0 ％、専門向は顕著であった。スキンケア化粧品購入時のお店・チャ

店は 5.8 ％、コンビニエンス・ストアは 0.4 ％、スーパー

ネル比較については、有意な差はみられなかった。

マーケットは 6.4 ％、訪問販売は 1.2 ％、その他のチャネ

4. 考

ルは 3.0 ％、購入していないは 3.6 ％である。中国では、イ察

ンターネット・通信販売は 34.2 ％、デパートは 21.0 ％、本研究の分析の結果、日本、中国、イギリスの女性サン

イギリスでは、スーパーマーケットは 33.8 ％、インタープルを用いて、様々な要因を考慮したうえで、化粧品のネ

ネット・通信販売は 15.0 ％などとなっている。スキンケット・通信販売チャネル選択は、年齢面については、日本アを購入するときに一番よく参考にする情報源については、

ではより高年齢であること、中国とイギリスでは逆に低年

日本では、母親は 3.6 ％、姉・妹は 3.6 ％、友人 11.8 ％、齢であること、また、スキンケアを購入するときに一番よ

雑誌 10.8 ％、インターネットの情報サイト 57.6 ％、ビュ

く参考にする情報源がインターネットの情報サイトであるーティアドバイザー 12.6 ％である。中国では、友人 40.0 ％、こと、日本では雑誌や友人、中国では母親のケースで、高インターネットの情報サイト 31.0 ％、イギリスでは、イ

い傾向があることが示された。いっぽう、購入時のチャネ

ンターネットの情報サイト 33.0 ％、友人 17.8 ％などとな

ル比較については、有意な関連はみられなかった。

っている。
スキンケア化粧品を購入するときに、1つのお店・

日本において購入金額が大きい人々ほどネット・通販チチャネルだけでなく、複数のお店・チャネルを比較するか

ャネルの割合が顕著に高い理由は、購買経験が豊富である

どうかについては、日本では、よく比較するは 12.4 ％、やこと、購入の絶対的規模が大きいことからより割安のネッや比較するは 33.0 ％、あまり比較しないは 32.2 ％、比較

ト・通販チャネル購入のメリットもより大きくなることのしないは 22.4 ％である。よく比較する、やや比較するは、

インセンティブが働いていることなどが考えられる。

それぞれ、中国では、29.2 ％、52.4 ％、イギリスでは、
26.0 ％、36.2 ％である。

本研究のオリジナルな点は、2 点ある。第１は、これまで、諸要因を同時に考慮したうえで、スキンケア化粧品のネッ

表 2 は、ネット・通販チャネル選択に関するロジット推

ト・通販チャネルの関連要因を明らかにしたことである。

定結果を表示している。オッズ比が 1 よりも大きい場合、第 2 に、その影響要因の影響の程度を、調査データから定当該説明変数は、ネット・通販チャネル選択の確率が高い

量的に測定したことである。

ことを示している。第 1 に、人口統計学的要因については、

本研究の限界点としては、クロスセクショナルなデータ

ネット・通販チャネルを選択する確率は、20 ～ 29 歳を基を用いているため、スキンケア化粧品のネット・通販チャ

準とした場合、日本では、30 ～ 39 歳は 4.0 倍、40 ～ 49 歳

ネルの関連要因について、その因果関係についてまでは明は 5.8 倍、50 ～ 59 歳は 13.9 倍、60 ～ 69 歳は 9.2 倍である。

らかにできていない点である。

ネット・通販チャネルの利用は、20 代が最も低く、年齢が5. 総高くなるほど高くなり、60 代では少し落ち込む傾向がある。
中国、イギリスでは、逆に、20 代、30 代の若年層で、ネット・通販チャネルを選択する傾向がある。

括

近年、化粧品の購入チャネルについて、インターネット・
通信販売の占める割合は増加している。だが、化粧品のネ

第 2 に、社会経済的要因については、ネット・通販チャット・通信販売チャネル選択の影響要因について、諸要因

ネルを選択する確率は、経済的余裕がない場合を基準としを考慮した国際比較分析の先行研究は、研究蓄積が少ない。

た場合、経済的余裕がある場合は、日本では 0.74 倍、中そこで、本研究では、筆者が収集したデータを用いて、国では 0.77 倍、イギリスでは 0.90 倍であり、統計的には

スキンケア化粧品購入のネット・通信販売チャネル選択に有意ではないものの、経済的余裕がある場合低い傾向があ

関する、クロスセクショナルな分析を行った。日本、中国、る。第 3 に、化粧行動要因については、ネット・通販チャ

イギリスの女性 1500 サンプルのデータを用いて、諸要因

ネルを選択する確率は、スキンケア化粧品を購入するときを考慮したうえで、ロジットモデルによる分析を行った。

に一番よく参考にする情報源については、ビューティアド

化粧品のネット・通信販売チャネル選択については、様々− 154 −

消費者ニーズの変化と化粧品流通チャネルに関する研究 ─日本・中国・イギリスの 3 か国比較─

表1

回答者の記述統計量

日本（N=500）
N=500％

中国（N=500）
N=500％

イギリス（N=500）
N=500％

20－29歳
30－39歳40－49歳50－59歳
60－69歳
経済的余裕

100
100
100
100
100

20.0
20.0
20.0
20.0
20.0

100
100
100
100
100

20.0
20.0
20.0
20.0
20.0

100
100
100
100
100

20.0
20.0
20.0
20.0
20.0

余裕がある
余裕がない
雇用形態

231
269

46.2
53.8

358
142

71.6
28.4

265
235

53.0
47.0

正社員
非正規雇用・パート
自営業・会社経営
無職
主な化粧品購入チャネル選択（スキンケア）

102
146
23
229

20.4
29.2
4.6
45.8

309
41
27
123

61.8
8.2
5.4
24.6

202
119
28
151

40.4
23.8
5.6
30.2

ドラッグストア
インターネット・通信販売
デパート
専門店
コンビニエンス・ストア
スーパーマーケット
訪問販売
その他のチャネル
購入していない
化粧品購入の参考情報源（スキンケア）

215
153
30
29
2
32
6
15
18

43.0
30.6
6.0
5.8
0.4
6.4
1.2
3.0
3.6

40
171
105
74
13
59
0
21
17

8.0
34.2
21.0
14.8
2.6
11.8
0.0
4.2
3.4

111
75
72
32
7
169
11
12
11

22.2
15.0
14.4
6.4
1.4
33.8
2.2
2.4
2.2

母親
姉・妹
友人
雑誌
インターネットの情報サイト
ビューティアドバイザー
化粧品購入金額／月々（スキンケア）

18
18
59
54
288
63

3.6
3.6
11.8
10.8
57.6
12.6

15
66
200
23
155
41

3.0
13.2
40.0
4.6
31.0
8.2

74
28
89
50
165
94

14.8
5.6
17.8
10.0
33.0
18.8

1000円未満
1000～3000円未満
3000～5000円未満5000円以上購入していない中国：
20元未満
20～50元未満
50～100元未満
100元以上購入していない
イギリス：5ポンド未満
5～10ポンド未満
10～20ポンド未満
20ポンド以上購入していない
複数の実店舗・ネット通販の比較

167
190
66
59
18
-

33.4
38.0
13.2
11.8
3.6
-

29
82
100
272
17
-

5.8
16.4
20.0
54.4
3.4
-

142
140
130
77
11

28.4
28.0
26.0
15.4
2.2

よく比較する
やや比較するあまり比較しない
比較しない
主観的な美しさ

62
165
161
112

12.4
33.0
32.2
22.4

146
262
66
26

29.2
52.4
13.2
3.2

130
181
108
81

26.0
36.2
21.6
16.2

非常に美しいやや美しいあまり美しくない
全く美しくない

8
149
261
82

1.6
29.8
52.2
16.4

19
300
166
15

3.8
60.0
33.2
3.0

23
186
224
67

4.6
37.2
44.8
13.4

年齢

日本：

− 155 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

表2

スキンケア化粧品のネット通販チャネル選択のロジット推定結果
日本（N=482）

中国（N=483）

イギリス（N=489）

オッズ比95 ％ CI

オッズ比

95 ％ CI

オッズ比

95 ％ CI

4.00

1.62 － 9.89

0.75

0.41 － 1.39

0.52

0.23 － 1.15

40 － 49 歳

5.84

2.38 － 14.33

0.76

0.41 － 1.41

0.56

0.25 － 1.24

50 － 59 歳

13.93

5.63 － 34.45

0.43

0.21 － 0.88

0.66

0.30 － 1.45

60 － 69 歳

9.17

3.61 － 23.32

0.22

0.09 － 0.54

0.42

0.17 － 1.04

0.74

0.47 － 1.18

0.77

0.48 － 1.23

0.90

0.53 － 1.55

非正規雇用・パート

1.27

0.64 － 2.51

1.13

0.51 － 2.47

1.16

0.59 － 2.30

自営業・会社経営

0.61

0.16 － 2.28

0.47

0.17 － 1.27

0.73

0.19 － 2.81

無職

1.15

0.61 － 2.20

1.21

0.61 － 2.40

1.53

0.78 － 2.99

年齢（参照：20-29 歳）
30 － 39 歳

経済的余裕（参照：余裕がない）
余裕がある
雇用形態（参照：正社員）

化粧品購入の参考情報源（参照：ビューティアドバイザー）
母親

2.65

0.24 － 29.27

5.17

1.18 － 22.65

1.16

0.43 － 3.13

姉・妹

3.29

0.61 － 17.83

1.47

0.48 － 4.48

0.67

0.13 － 3.38

友人

6.36

1.94 － 20.78

2.07

0.79 － 5.42

1.12

0.43 － 2.88

雑誌

6.60

1.96 － 22.22

1.91

0.50 － 7.25

0.56

0.14 － 2.20

インターネットの情報サイト

16.10

5.51 － 47.07

5.37

2.04 － 14.14

2.48

1.14 － 5.39

5 ～ 10 ポンド未満

1.91

0.93 － 3.92

10 ～ 20 ポンド未満

0.99

0.45 － 2.17

20 ポンド以上

1.66

0.72 － 3.82

化粧品購入金額／月平均
日本：（参照：1000 円未満）
1000 ～ 3000 円未満

2.59

1.51 ー 4.45

3000 ～ 5000 円未満

3.15

1.56 ー 6.37

5000 円以上

7.52

3.31 ー 17.07

中国：（参照：20 元未満）
20 ～ 50 元未満

2.26

0.78 － 6.59

50 ～ 100 元未満

2.76

0.97 － 7.88

100 元以上

1.29

0.48 － 3.48

イギリス：（参照：5 ポンド未満）

複数チャネルの比較検討（参照：よく比較する）
やや比較する

0.92

0.42 － 2.02

0.66

0.42 － 1.05

0.50

0.25 － 0.96

あまり比較しない

1.01

0.46 － 2.22

0.40

0.20 － 0.82

0.76

0.35 － 1.61

比較しない

1.00

0.43 － 2.34

0.32

0.08 － 1.32

0.62

0.26 － 1.49

0.65 － 1.74

0.92

0.59 － 1.44

0.76

0.42 － 1.36

主観的な美しさ（参照：美しくない）
美しい

1.06

− 156 −

消費者ニーズの変化と化粧品流通チャネルに関する研究 ─日本・中国・イギリスの 3 か国比較─

な要因を考慮したうえで、年齢要因、スキンケア購入時の“Developing and validating trust measures for

一番よく参考にする情報源などの要因が顕著に関連していe-commerce: An integrative typology” , Information

ることが明らかになった。購入時のチャネル比較について

Systems Research, Vol. 13, Issue 3, pp.334-359, 2002.
6） Gefen, D., Karahanna, E. and Straub, D.W., “Trustは、有意な関連はみられなかった。

and tam in online shopping: AN integrated model” ,（引用文献）MIS Quarterly: Management Information Systems,

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Issue 5, pp.1757-1773, 2016.
8） Faroughian, F.F.,Kalafatis, S.P.,Ledden, L.,Samouel, P.

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business e-banking” ,Industrial Marketing Management,
Vol.41, Issue 1, pp. 68-81, 2012.

Issue 1, pp.222-235, 2006.
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the drivers and role of online trust the same for all

effects of trust, perceived benefits, and perceived web

web sites and consumers? A large-scale exploratory

quality” ,Internet Research, Vol.25,Issue 5, pp. 707-733,

empirical study” ,Journal of Marketing, Vol.69, Issue 4,

2015.

pp.133-152, 2005.

5） McKnight, D.H., Choudhury, V., and Kacmar, C.,− 157 −

バイオミメティック触覚センシングシステムによる化粧料の使用感評価
山形大学大学院理工学研究科

野々村

美宗

Nonlinear phenomena on the soft material surface are one of the most exciting topics of chemical physics. However,
only a few reports exist on the friction phenomena under accelerated movement, because friction between two solid surfaces
is considered a linear phenomenon in many cases. We aim to investigate how nonlinear accelerated motion affects friction
on solid surfaces. In the present study, we evaluate the frictional forces between two polytetrafluoroethylene (PTFE) resinsusing an advanced friction evaluation system. On PTFE surfaces, the normalized delay time δ, which is the time lag in
the response of the friction force to the accelerated movement, is observed in the pre-sliding friction process. Under highvelocity conditions, kinetic friction increases with velocity. Based on these experimental results, we propose a two-phasenonlinear model including a pre-sliding process (from the beginning of sliding of a contact probe to the establishment ofstatic friction) and a kinetic friction process. The present model consists of several factors including velocity, acceleration,
stiffness, viscosity, and vertical force. The findings reflecting the viscoelastic properties of soft material is useful for various
fields such as in the fabrication of clothes, cosmetics, automotive materials, and virtual reality systems as well as forunderstanding friction phenomena on soft material surfaces.

1．緒化する。本研究では、まず、触行動の非線形性を模倣する

言ために、正弦運動を行う往復摩擦評価装置を用いて、2 枚

触覚による物質認知や感情喚起のプロセスは、ヒトとののポリテトラフルオロエチレン（PTFE）樹脂間で起こるコミュニケーションが求められるロボットや情報端末、バ摩擦を系統的に評価し、非線形運動が固体表面における摩ーチャルリアリティーの開発に欠くことができないが、こ擦現象に及ぼす影響を考察した。これらの検討によって正れまでは、皮膚に加わる力学・熱刺激を摩擦計や熱量計を弦運動における速度や垂直力が摩擦力に及ぼす影響を系統用いて解析するに止まっていた。しかし、これらの方法で的に解析し、ソフトマテリアル表面における摩擦現象の基は、「なめらか感」「しっとり感」などの繊細で多様な感覚

本モデルを提案することができた。次に、ファンデーショが生まれるメカニズムを説明することはできなかった。

ンを肌に塗る際に用いられる化粧用スポンジに着目し、市われわれは、ヒトが持つ触覚増強の仕組みを模倣しきれ

販の化粧用スポンジでウレタン製人工皮膚を擦った時の摩なかったことがその一因と考える。第 1 の仕組みは皮膚の擦特性を評価した。また、市販の化粧用スポンジで前腕を階層構造である。指先の皮膚表面は、指紋のような数百擦った時の触感と好感度を官能評価によって明らかにし、

μm スケールの凸凹の中に数十 μm スケールの角質細胞がスポンジの摩擦特性と触感の関係を明らかにした。

存在、汗や皮脂も介在して皮膚に加わる振動刺激を増強す

2. 方る。第 2 の仕組みは触行動の非線形性である。ヒトが触れ法た瞬間から、運動速度や垂直力が緩やかに増大、ある極大正弦運動を行う往復摩擦評価装置を用いて摩擦力を評価を経て減少する、正弦波で近似できるダイナミックな刺激した。Fig. 1 に装置の写真及び概要を示す。正弦運動は、が皮膚に加わり続けることで、短時間に多様な力学情報の偏芯した円板を回転させてヨークを往復運動させる機構に収集が可能になっている。

より実現した。さらに、接触子の内部に小型 3 軸加速度セ

そこで、これらのヒトの感覚増強の仕組みを取り入れたンサが装着されており、接触子に加わる接線方向及び法線『バイオミメティック触覚センシングシステム』を開発、方向の加速度を評価できる。下側に加わる力学刺激は、2触覚という心理現象を物理的観点から理解したうえで、化個のロードセルにより接線方向及び法線方向の応力をセン粧品およびその関連材料を評価、化粧品の塗り心地を定量シングする。2 枚のポリテトラフルオロエチレンテープ（以
後 PTFE）間の摩擦力を評価した。正弦運動時の速度 V は、
振幅 A、角速度ω、時間 T を用いて以下の ⑴ 式で表される。
V=A ω cos ω T（1）

A は 14 . 5 mm、ωは 0 . 01、0 . 1、1 . 0、2 . 1 rad s- 1、 垂 直

Tactile evaluation of cosmetic products
using biomimetic tactile evaluation
system

荷重 W は 0 . 98、1 . 47、1 . 96、2 . 45 N とした。

Yoshimune Nonomura
Yamagata Universityに、5 種類の化粧用スポンジを用いてウレタン製人工皮膚

一方、ファンデーションの塗布プロセスの再現するため− 158 −

バイオミメティック触覚センシングシステムによる化粧料の使用感評価

後 V= 0 mm s- 1 で 0 . 04 N まで減少した。つまり、速度の速い条件では、動摩擦係数が速度に伴って増加する依存性が観察された。
この滑り前摩擦過程で接触子の動きに対して摩擦力が遅れる位相差 δ を Fig. 4 に示す。δ は摩擦速度に依存し、速度が速い時に小さくなった。すなわち、速度V= 0 . 01 ~ 1 . 0
rad s- 1 の時、δ = 0 . 012 ~ 0 . 016 だったのに対し、V= 2 . 1
rad s- 1 の時、0 . 008 ~ 0 . 011 だった。さらに、δ は垂直荷重 に も 依 存 し た。V= 0 . 1 rad s- 1、W= 0 . 98 N の 時 δ= 0 . 012 だったが、2 . 45 N では δ = 0 . 016 だった。

3 . 2 . ストライベック曲線
運動条件が摩擦力に及ぼす影響を俯瞰的に解析するために、摩擦係数とゾンマーフェルト数（S =η × V/W、η = 粘
Fig. 1 Sinusoidal-movement sliding system. (a) Overall view,(b) contact probe of acrylic resin covered with PTFE tape,(c) conceptual diagram.

度、V = 速度、W = 垂直荷重）の関係をストライベック曲線に示す（Fig. 5）。この時、粘度は空気（25 ℃）の粘度
η = 18 . 2 × 10 - 6 Pa s とした。速度・垂直荷重によって、動摩擦過程に変化が現れた。S= 1 . 0 × 10 - 11 ～ 10 - 6 m- 1の時、動摩擦係数は約 0 . 07 で一定だったが、S が 1. 0 ×を擦った。5 種類のスポンジのうち、a、b、d はポリウレ

10 - 6 m- 1 以上になると S の増加と共に動摩擦係数も大きく

タン製、c はニトリルブタジエンゴム製、e はスチレンブ

なり、S = 2 . 2 × 10 - 4 m- 1 では 0 . 14 に達した。すなわち、タジエンゴム製である。

速度の遅い条件では、動摩擦の過程で摩擦係数はほとんど変化しないが、速度の速い条件では、流体潤滑のような速３．結果と考察度に依存した摩擦係数の増加が観察された。

3 .1 . 摩擦プロファイル
Fig. 2 に正弦運動摩擦評価装置で 2 枚の PTFE テープをT 0 は接触子の往復にかかる時間である。試料を角速度

3 . 3 . ソフトマテリアル表面における摩擦現象の粘弾性モデル

0 . 1 rad s- 1、垂直荷重 0 . 98 N で擦った時、摩擦力は運動本研究で行った正弦運動下における摩擦評価によって、開始直後から急激に上昇し、T/T 0 = 0 . 02 で 0 . 10 N の静粘弾性を持つソフトマテリアルに特徴的な 2 つの現象が観

摩擦力のピークを示した後、一定の動摩擦力（0 . 07 N）を察された。1 つ目は、接触子の動きに対して摩擦力が遅れ示した。Fig. 3 に摩擦係数と速度の関係を示す。角速度て現れる位相差 δ の発生、2 つ目はゾンマーフェルト数 S

擦った時の典型的な摩擦パターンを示す。ここで T は時間、

-1

0 . 01 ~ 2 . 1 rad s のすべての条件において、接触子が滑の増加にともなう動摩擦係数の増加である。金属や金属酸

り出し直後に速度の上昇とともに一気に摩擦力が上昇する

化物のような弾性的なハードマテリアル表面では接触子がすべり前摩擦過程を経て静摩擦力に達した後、緩やかに速滑り出すと同時に摩擦力が発生するが、PTFE のような粘度依存性の小さい動摩擦過程に移行した。往復運動を行う

弾性のソフトマテリアルは、滑り出す時に変形するため、と、逆方向に同程度の摩擦力が発生し、閉じたループが描

摩擦力が運動に対して遅れて発生する。また、粘弾性体のかれた。この滑り前摩擦過程においては、往路と復路の間

ずり応力のうち粘性抵抗の因子はずり速度に比例して増加でずれが生じるヒステリシスが観察された。このヒステリすることが、S の増加にともなう動摩擦係数の増加に対応

シスはテフロン表面では接触子の運動に対して摩擦力が遅している。

れて応答することを意味している。動摩擦過程のプロファ

これらの特性に基づいて粘弾性体表面における摩擦のモ

イルは、角速度が 0 . 01、0 . 1 rad s- 1 の時、摩擦係数は速デルを構築した（Fig. 6）。ここでは、質量 M の物体を垂度に依存せず一定だったが（Fig. 3 ⒜ , ⒝）、角速度が 1 . 0、直荷重 N を加えながら速度 V = dx/dt（x= 位置、t= 時間）-1

2 . 1 rad s の時、摩擦係数は速度に依存し、大きくなっで動かした時に発生する摩擦力を Ff 、z をひずみ距離とすた（Fig. 3 ⒞ , ⒟）。すなわち、2 . 1 rad s- 1 の時、静摩擦直る。従来のモデルでは、基盤は弾性率 ks のばねによって固後 V= 5 . 78 mm s- 1 で 0 . 10 N の動摩擦力が観察された後、定されており、基盤上の物体が運動すると ks に対応した摩-1

速度の最大値（30 . 3 mm s ）で 0 . 12 N まで上昇し、その擦力が発生するものと考えられてきた 18）。本研究では、さ− 159 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

Fig. 2 Temporal change in the friction force, the velocity, thevertical force and the acceleration at an angular velocity ω= 0 . 1 rad s- 1 , and the vertical force W = 0 . 98 N.

Fig. 3 The relation between the friction coefficient and the velocity based on typicalexperimental results（gray line）and the proposed model（black line）: (a) ω= 0 . 01 rad s- 1 ,W= 0 . 98 N, (b) ω= 0 . 1 rad s- 1 , W= 0 . 98 N. (c) ω= 1 . 0 rad s- 1 , W= 0 . 98 N, (d) ω= 2 . 1 rads- 1 , W= 0 . 98 N.

− 160 −

バイオミメティック触覚センシングシステムによる化粧料の使用感評価

Fig. 5 Dependence of the friction coefficient on theSommerfeld number S. ω= 0 . 01 rad s- 1（●），0 . 1 rad - 1（◆），1 . 0 rad s- 1（■），2 . 1 rad s- 1（▲）．

Fig. 6

Friction model of a soft material.

らに粘性率 η（粘性摩擦係数 C）のダッシュポットを加えはそれぞれ 85 ％、70 ％だった。e の特徴的な触感は Rough

ることで、位相差 δ の発生などの粘性的応答を考慮するこ

感、Dry 感で、発現率はそれぞれ 20 ％、40 ％だった。ことを可能にした。

の結果に基づいて、「すべすべ」、「ふわふわ」する Soft-

本研究で得られた摩擦パラメーターの幾つかの特徴的なSlippery group（a、d）、「ざらざら」、「ぱさぱさ」する

挙動は、この粘性的なダッシュポットの存在によって説明

Rough-Dry group（c、e）、 突 出 し た 特 徴 が み ら れ な いできる。ソフトマテリアル表面で現れた位相差 δ は、摩擦group の 3 グループに分類した。これらのグループごとの速度が速いと小さく、垂直荷重が大きいと大きくなった。

触感の違いは、セル壁の厚さと表面張力、摩擦変化量によ

この速度依存性は、接触面における凝着の切れ方が速度にって説明できた。セル壁が厚く、表面張力・摩擦変化量がよって変化するために起こる

16）。すなわち、速度が速い時

大きい時、Slippery 感が弱く、Rough 感が強く感じることは弾性的に振る舞い、力の応答が素早く、速度が遅い時はが示された。また Rough 感が強い時は Soft 感が弱くなった。

粘性的に振る舞い、力の応答が遅くなる。また、垂直荷重

Dry 感の強いスポンジに触れた時は多くの場合「滑らかでが大きくなると真実接触面積はそれに比例して大きくなる。

ない」という Rough 感と関係の深い言葉が選ばれたこと

接触面積が大きくなるにつれ、粘弾性体の粘性の影響が強から、Rough 感の強さが Dry 感を強めたものと考える。

く現れるため、摩擦力の応答が遅くなったと思われる。ス

4. 総

トライベック曲線において、速度の速い範囲で摩擦係数が増加したのも、粘性に起因し速度に依存して粘性摩擦力が
生じる

17）

括

我々は、ソフトマテリアルの動的運動下における摩擦現。従って、速度の速い範囲では、粘性摩擦が顕著

象を理解するために、PTFE 間の非線形運動下における摩に現れたため、動摩擦係数が速度に依存して増加したと思

擦実験を行い、すべり前摩擦過程では速度と摩擦力の応答われる。

の差 δ を、動摩擦過程では粘性抵抗由来の摩擦係数の増加を見出した。これらの特性は摩擦の基盤がばねとダッシュ

3 . 4 . ファンデーション塗布過程における触感と摩擦

ポットで固定された粘弾性摩擦モデルを用いて定性的に説5 種類の化粧用スポンジ a~e について、女性 20 名を被明することができた。さらに、この評価システムを化粧料験者として好感度と触感に関する官能評価を行った。各ス

スポンジの触感の評価に応用展開した。本研究で提案されポンジの好感度に有意な差は見られなかったが、触感に関たソフトマテリアルの動的摩擦現象のモデルは皮膚表面にしてクラスター分析をしたところ幾つかのグループに分類おけるヒトや動物の触覚認知 ･ 歩行プロセスから活断層にできた。全てのスポンジは Moist 感が強く、しっとりしておける地震の発生プロセスまで様々な摩擦現象を理解するいた。a の特徴的な触感は Soft 感、Slippery 感で、発現率うえで有用である。

− 161 −

女性の美における訴求表現に関する研究
静岡文化芸術大学文化政策学部国際文化学科

広瀬英史

There are two purposes of this study. The first is to analyze the appeal expressions of commercials advertising cosmetics.
The second purpose is to describe the expressions used to convey the "beauty" of women historically. "Beauty" has been
evaluated in various ways such as features, figure, clothes, make-up and hairstyles. Over time, these methods of evaluation
have been recognized as important and valuable. The sense of values of each time period has been reflected in the "beauty"of women and has formed a part of the culture. Similarly, the schema of a language affects our world view and cognition.
The appeal of advertising expressions is that it uses this schema very well. However, it will became a new  appealing whenadvertising expressions depart from schema.
This study investigated about 8 . The first purpose achievements by creating the Database.
In this report,it further progress on my interim report. It nalyzes "buauty" of Women a from the viewpoint of Vocabulary,
Idiomatic Expressions, Collocation, WAkA in "KOKA TAIKAN", SALES COPY and ADVERTISEMENT EXPRESSION.
The result indicates one of image schema of "buauty" of Women.

１. 緒2015 年度調査（①に同じ）

言③『日本国語大辞典』（小学館）
2016 年度調査

本研究の目的は２点ある。１点目は化粧品の CM・広告の訴求表現を分析すること、２点目は女性の
「美」
に関する

「眉」「目」「睫」「頬」「頬」「鼻」「口」「唇」「顔」「容貌

表現を歴史的に記述することである。

（かたち）」といった顔に関する語と句の収集

女性の「美」
は、顔立ち、体型、衣服、化粧、髪型等、様々④『化粧史文献資料年表』（ポーラ文化研究所）の資料デーな側面から評価され、価値付けられてきた。女性の
「美」に

タベース化

はその時代の価値観が反映され、一つの文化が形成されて2016 年度調査（現在作業中）⑤『資生堂宣伝史 TV・CM 篇（1960-1991）』（資生堂）

きたと言える。

2016 年度調査

ことばのスキーマは我々の世界観やものの見方に影響を与える。CM 表現の魅力は、このスキーマを上手く利用す

全 TV・CM のセリフ・テロップを文字化・データベーるところにある。しかし、一方で、既存のスキーマを打ちス化

破ることができたときに、新たな魅力ある表現が生まれる。

⑥『資生堂宣伝史 総合篇（1979 − 1991）』
2016 年度調査

2. 調査（資料調査の報告）

ポスター記載の文字（キャッチコピー・タグライン等）
を
データベース化

以下の資料から用例を収集した。
1）⑦ KOSE の TVCM（株式会社コーセーからの DVD 貸出に① DVD-ROM『国歌大観』 からの用例収集より閲覧）

2015 年度調査
「眉」
「目」
「睫」
「頬」
「頬」
「鼻」
「口」
「唇」といった顔2016 年度調査のパーツ

1970-1998、2005-2006、2006-2008、2010、2011、2012、

「顔」
「容貌
（かたち）
」
といった顔そのもの

2013、2014 の CM（1999-2004、2009 は欠）のセリフ・

「化粧
（けはひ）
」
「白粉」

テロップを文字化・データベース化②「JapanKnowledge」2）を利用した小学館『新編 日本古典

⑧その他
これまでにネット検索により TVCM、ポスター等のキ文学全集』（全 88 巻）からの用例収集。

ャッチコピーを収集
Studies on advertisement expressions
with high appeal power for the beautyof women
Eishi Hirose
Department of International Culture,
Faculty of Culuture policy and Management,
Shizuoka University of Art and Culture⑤⑦に関しては以下のように語彙分析も行い、語彙表をつくった（図１）。語彙分析に際しては、形態素解析 Mecab、
KHCoder、そして、解析が上手くいかなかった語の点検と修正はエディタを使って手作業した。

− 162 −

女性の美における訴求表現に関する研究

図1

語彙表（一部）

3. 結果及び考察

図2

形容詞・形容動詞・サ変可能

以下は、語彙表を KHCoder によって分析した結果である。図２は形容詞・形容動詞・サ変可能語の 10 例以上出現した語を取り上げ、対応分析表にしたものである。カタ
カナ語の出現の多さ、そして、各時代による語の偏りが見てとれる。ただ、用例数や対象商品 CM 数に偏りが大きい
ため、この結果をもってすぐに時代差と結論づけられないことが欠点である。この利用法は客観的データにもとづいて語を抽出し（テキストマイニング）、それをもとに分析のきっかけとする手段である。図３は『分類語彙表』3）の分類
番号（中項目別）
を利用して、意味分類したものを使って、KHCoder でコーディングによる分析を行った結果の例である。
以下、詳細に報告
（分析）
するのは
「眉」
と
「口」
に限る。

3. 1. 眉に関する表現
眉は、唇や頬、肌と違い、色よりも形が重視される部位

図3

コーディングである。切ったり剃ったりして形を整えられるためであろ
表1う。現代でも
「太眉」
「細眉」
「並行眉」
「アーチ眉」など、様々な形がトレンドになっている。また時代によっては、成人

柳

15 例

の儀式として、あるいは結婚したときに眉を剃るという風

月・三日月

14 例

習もあった。

山

17 例

一方で、色についてはあまり重視されていない。2016
年頃に「カラー眉」「眉カラー」が流行したが、歴史的に眉げまとめる 4）。

の色が継続して注目を浴びてきた記述は見当たらなかった。
3. 1. 1. 1. 柳

では、「美しい」眉の形はどのように表現されてきたのか。

〈1〉君去りて我は留まる別離の心
えくぼいづ

桂の靨何れの年ぞ一たび往きて見む
3. 1. 1. 『国歌大観』の用例から

柳糸の眉は何の時にか還らざらむ『国歌大観』
で「眉」の用例として分析可能なものは 141 例

別様に帳前に来たらしめむ（新撰万葉 5））あった。共起語に着目して、特徴的なものを表 1 に取り上

かんばせ

よろ

〈2〉任氏の顔貌彷彿として宜し− 163 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

ふんたい〈9〉眉のごと雲居に見ゆる阿波の山

粉黛無にあらず眉柳に似たりにかけて漕ぐ船泊まり知らずも（万葉）朱砂企てざれども唇丹のごとし
つ「山眉」は「山の端のほのかなさまを眉墨に、また、美し心に思ひ肝に属けて猶胸焦がる（新撰万葉）〈3〉桃の花紅色に
青柳の

にほひたる

細き眉根を

い眉を山の稜線に見立てていう語。」（『日本国語大辞典』
よ

面輪のうちに6）り）。ただし『日本国語大辞典』には「山まゆ 遠山をながめ

笑み曲がり……（万葉 ）15 例中 13 例が眉の形を「柳」と表現したものであった。

て眉に似たるをいふ也」という『匠材集』の言葉も引かれて〈1〉〈2〉の『新撰万葉集』漢詩の例からわかるように、中おり、〈8〉はこの用法と思われる。
〈9〉は明らかに「阿波の山」

国から入ってきた表現と思われる。
「柳眉」という漢語もあを「眉のようだ」とたとえている例。この他にも、山（の稜線）り、「柳の葉のように細くて美しい眉。美人の眉にたとえを眉でたとえる用例が複数ある。

ていう語。柳の眉。
」（『日本国語大辞典』より）という意味

また、「柳」「月（とくに三日月）」と「眉」の共通のスキーである。

マは「細い」だが、「山」と「眉」の場合、「山」には太い・細い〈2〉「顔貌彷彿として宜し」といった表現からも、「柳」はという概念はあてはまらないため、共通概念は「なだらか美しい眉、美人の眉を表していることがわかる。また、「柳な曲線」であろう。「美しい眉」は「細い」だけでなく、山の眉」の語義や
〈1〉
「柳糸」
〈3〉
「細き」
から、美しい眉とは細稜線のように曲線を描いた眉であったことがわかる。
細く曲線的な眉を美しいとする、眉（の形）に関する美意

い眉と思われる。
7）

ただし、ポーラ研究所『眉の文化史』 では、『万葉集』か識が近代まで続いてきたことは中間報告で述べた通りである。

ら柳葉や三日月の例を引いたうえで、薬師寺の「吉祥天像」

後述するが、近代までの表現は自然物をメタファー化しと正倉院宝物の「鳥毛立女屏風」を取り上げ「唐代においてた表現であり、これが現在にも残っている。

の眉（蛾眉）
はこのように太く濃い眉であったことは想像で
3. 1. 1. 4. 眉根掻ききる」としている。実際これらの絵像の眉は太く描かれているが、言語表現上は細い眉と捉えられる点が興味深い。

「眉」との共起語として他に目立ったものは「眉根掻き（眉根掻く）」。万葉の時代から（いつ頃までかは不明であるが）、3. 1. 1. 2. 月・三日月「眉がかゆくて掻くのは恋人に逢える前兆」と信じられておさ〈4〉振り放けて三日月見れば一目見しり、反対に自ら眉を掻くことで恋人が逢いに来てくれると人の眉引き思ほゆるかも（万葉）

いった考え方もあった。「眉根掻き」の用例には男性が主体〈5〉あはずしてけふ三日月の眉引くをのものもあり、美しい（または美しい眉をもつ）女性に限定した表現ではないようだ。

妹がおもわにみんよしもがな（うけら）〈6〉太公望の周文に遇へる
き

り

き

たす

綺里季の漢恵を輔くる

い ひん

また、「眉引き」「眉づくり」など眉化粧に関わる言葉も渭浜の波面に畳めり見られた。

商山の月 眉に垂れたり
8）（和漢朗 ）「柳眉」同様「月眉」という漢語があり、意味は「⑴三日月の細さを眉にたとえていう。眉月。⑵ 女性の細くひいた
眉を月にたとえていう。
」（『日本国語大辞典』より）。細い

3. 1. 2. 「眉」を使った慣用句から
weblio で「眉」を使った慣用句は 19 例あった。その意味特徴に注目し、分類した結果を下の表 2 にまとめた。

眉＝美しい眉という認識があったならば、
「月」
もやはり美

感情（「不安」「不快」「安心」「怒り」など）に集中する。
『眉

しい眉の表現であったと考えられる。とくに「三日月」は、の文化史』では、『青眉抄』9）を引用しながら、「確かに、眉その細く弓なりの形から美しい眉のたとえであった。

は人間の喜怒哀楽を最も端的に表す部分であり」とある。

ただし、
「月」
は
「柳」
と違って美しい眉を表現しない例も慣用句から見た言語生活史の結論と一致する。また、『眉ある。〈6〉は「商山の月のように白い眉」という意味で「月」の文化史』では、「化粧するとき形を最も変化させやすく、は年老いて白くなった眉のたとえ、歌の中で
「月」
と
「眉」が
共起する場合、必ずしも美しい眉に関する表現にはなっていない点が着目される。
3. 1. 1. 3. 山
〈7〉山眉のてかけもせぬにとをだちて日数のふればくる人もなし（他阿）〈8〉今朝はまづそなたにうすき山眉の遠きや霞む色をみすらん（後水尾）

表 2 weblio に見られる「眉」を使った慣用句
感 情
恋愛・結婚
眉に唾をつける，眉を集める，
眉を落とす，
眉を曇らす，眉を寄せる，
眉根掻く
愁眉を開く，眉を開く，眉を伸べる，
柳眉を逆立てる，眉を吊り上げる，
焦眉の急，眉に火がつく，
眉一つ動かさない，眉を読む，
眉毛を読まれる
152− 164 −

化 粧
眉を書く，
眉を引く

2

女性の美における訴求表現に関する研究変化させたことで、顔の印象が大きく変わる部分でもある」〈11〉KOSE エスプリーク「W アイブロウ（リキッド & パウと続けている。

ダー）」2016CM より

眉化粧については、山村博美（2016）に「大陸の影響をうけた化粧が、日本独自の化粧へと変化するのは平安中期の

女：繊細に描く〈12〉KOSE エルシア「鉛筆アイブロウ」2017 CCことである。宮廷文化が洗練される過程で、支配階級である貴族たちによって、白粉・紅・お歯黒・眉化粧などの、

ナチュラルに仕上げる

やわらかな芯で自然な仕上がり〈13〉資生堂マキアージュ「ダブルブロークリエーター」

日本の伝統化粧の基礎が築かれた。
」とあり、「平安中期か2017 CCら」そして「眉化粧」が「日本の伝統化粧の基礎」のひとつでペンシルとパウダーで自然な美眉にあったことを述べている。

〈14〉資生堂 インテグレート「アイブローペンシル N」

これらの眉に関する文化論・資料等から眉と美の関連が2017 CC

明確に示されている。この文化論に、さらに言語学的な解

やさしく描けて、自然な仕上がり。髪色で選べるア

釈を加える。

イブロー

眉には
「眉
（愁眉）
を開く」
のように
「安心」
を伝える表現が〈15〉カネボウ ケイト「ラスティングデザインアイブロウW」

あるが、これらの慣用句には背景的なデフォルトとなる意

2017 CC

味として、「不安や心配ごとがある状態」が存在する。「眉自然な眉が簡単に仕上がる。落ちにくい W タイプの一つ動かさない」もデフォルトとなる状態は美しさを感じ

アイブロウ。

る表情とはほど遠い。改めて、「感情」に含まれる慣用句を〈16〉ちふれ「まゆずみ

見ると（「眉を曇らす」「眉を吊り上げる」
等）
「不安」
、
「不快」

ブラシ付」2017 CC

描きやすく、ナチュラルな仕上がりのアイブロー。

「怒り」
等を表し、顔を見た他者にも不快な感情を抱かせて収集した用例の中では「自然」「ナチュラル」という表現

しまうものが目につく。こうした感情を表す眉を「化粧」にをうたい文句にしたものが多く見られた。〈10〉～〈16〉よって隠す必要がある。

の例からわかるように、「自然」「ナチュラル」は、様々なメーカー、ブランドで使われている。

3. 1. 3. 『日本国語大辞典』の語・語句の用例から

また、本章冒頭で述べた近年トレンドの「眉カラー」につ『日本国語大辞典』
で眉を使った慣用句（語句含）は 295 語

いても、髪や目の色と異なる極端な色味ではなく、「自然」

あった。そのうち、18 語は人名地名等なので除いた。先とな色であることがポイントとなっているようだ。

同じように意味特徴に分類した結果を下の表 3 にまとめた。

〈17〉KOSE ファシオ「カラーラスティングアイブロウマス
カラ」2017 CC

眉そのもの（顔を指し示すことも）を表すものが中心であひと塗りで、染めたように 自然な眉色にチェンジ！

る。それを除くと、weblio の結果に一致する。ここに眉における日本人の意識がうかがえる。その詳細は既に『国歌〈18〉カネボウ 「アイブロウカラー」2017 CC
自然な眉色に簡単チェンジ

大観』における和歌の分析で述べたとおりである。

ふんわり上品眉マス

カラ
3. 1. 4. CM・キャッチコピーの用例から

日本では、自然に生えている眉毛を抜き、眉墨で描く文

眉の化粧品に関する CM・キャッチコピーはあまり入手化が長かったが、現代社会では反対に「自然」さが重視されできなかったが、ここでは入手できた 63 用例から特徴的ていることが、化粧品に関する表現からも浮かび上がってな表現をピックアップしていく
（表 4）
。

くる。
3. 1. 4. 2. ふんわり

3. 1. 4. 1. 自然（ナチュラル）〈10〉KOSE エスプリーク「MAKE DRAMATIC」2011 CM より〈19〉カネボウ コフレドール「ブロウデザイナー」2013 CM

Tp：ひと塗りで自然なライン、ぼかしいらずアイブ

より

  ロウ。

Na/ 男：パウダーならNa/ 男：あとは感情 化粧 比喩 人形 結婚・恋愛 その他 総計
61 59 40846277

〈20〉KOSE エスプリーク「W アイブロウ（リキッド＆パウダー）」2017 CC
眉尻が夜まで消えないのに、ふんわり自然に仕上がる

表4
自然（ナチュラル）
ふんわり

22 例
12 例

すっとペンシルで

Tp：簡単！ふんわりきれい眉

表 3 『日本国語大辞典』に見られる「眉」を使った慣用句
意味分類 眉・顔語 数99

ふわっと簡単にぼかせる

リキッド＆パウダーアイブロウ。
〈21〉KOSE ファシオ「パウダーアイブロウペンシル」2017− 165 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

CC入りするところ」であり、日常生活におけるその頻度も非

簡単！ふんわりナチュラル眉常に高いため、古い時代から意味の抽象化が進んでいった〈22〉資生堂 マジョリカマジョルカ「ブローカスタマイズ（ソードカット）n」2017 CC
ふんわり描けてピタッときまる「川口」「水口」「滝口」「江口」「岸口」「渡口」と水辺にパウダータッチの関する言葉が多い点も着目される。水の摂取が人間の生命維持に欠かせないためかとも思われるが、この点は本稿でアイブロー〈23〉カネボウ メディア「W アイブロウ

ペンシル & パウは掘り下げないこととする。
以下、「口」54 例に絞って、共起語に着目して分析する。

ダー」2017 CC
これ 1 本で簡単ものと考えられる。

「口」は眉のように、美しさを示す共起語として特徴的な言

自然なふんわり美眉「ふんわり」を使った用例の中には、
〈20〉
〈21〉
〈23〉の

葉を見出すことができなかった。では、どのような語と共ように「自然」「ナチュラル」と同時に使われている例も見起しているのか。

られた。つまり、ここでの「ふんわり」とはいかにも眉墨で
3. 2. 1. 1. 「発話」に関する言葉

描いたような眉ではない自然な眉を表現した言葉である。
また、「ふんわり」
もさまざまなメーカー、ブランドのキャッチコピーになっている。

端（口の端）（5） 慣る（5） 閉づ（2） 言ふ（2） 聞こゆ（2）
聞く（1） たたく（1）「自然」「ナチュラル」「ふんわり」
ともに、キャッチコピ

〈24〉手にむすび心におもひ口にいふー等に使われている商品・ブランドの対象年齢層が様々ある点も着目される。どの年齢層においても、「自然な眉」が御法のかひはけふぞみえぬる（玉葉）〈25〉終りまつ心は声に出でにけり美しいとされていることがうかがえる。

口に仏の名こそ聞ゆれ（他阿）

CM 表現では、「眉」をメタファーとして表現するのでは〈26〉恋ひかねてことのなぐさに世の中をなく、形状的かつ直接的表現で示している。ただし、語のうしといふをぞ口なれにける（六帖詠）

中で抽象度の高い、擬音語・擬態語による表現であること
3. 2. 1. 2. 「飲食」に関する言葉がうかがえる。

食ふ（1） すする（1） 含む（1） ささぐ（1）よ3. 2. 口に関する表現

す〈27〉松樹に倚つて以て腰を摩れば

3. 2. 1. 『国歌大観』の用例から

風霜の犯し難きことを習ふ

さいかう

菜羹を和して口に啜れば『国歌大観』で「口」の用例として分析可能なものは 57 例、

よ「口びる」が 1 例、「口走る」などの動詞の一部となっている例や、「水口」「口なし」など身体の一部としての「口」の意

気味の克く調ほらんことを期す（和漢朗）〈28〉老いし妻の飯匕とりて盛りたるを

味からは離れた言葉も含むと全体で 270 例あった。

一口君にささげ見まほし（志濃夫）

まず、「口」を含む言葉全体を見ていきたい（表 5）。

当然といえば当然であるが、「口」の機能である「発話」
「飲

「戸口」
「水口」
「袖口」
など、何かの「出入りするところ」

食」に関わる動作が多く見られる。他には特徴として取りを表す言葉が多いことがわかる。なお、「口」54 例の中に上げられるような動作はとくになかった。

も「道の口」「山の口」「釜の口」「氷室の口」
など、
「口」
が「出

なお、
「口の端」あるいは次の用例のように「口」自体が「発入りするところ」という意味で使われている用例が見受け話」を意味することもある。

られた。身体としての「口」
が、呼吸、声、食べ物などが「出〈29〉さとりえて猶いかばかりとく法の人に越えたる口のさかしき（黄葉）表 5 『国歌大観』に見られる「口」の用例
口
クチナシ
戸口
川口
山口
水口
隠口（こもりく）

54 例
43 例
31 例
28 例
25 例
24 例
14 例

口惜し
袖口
滝口
野口
大口
江口
みしま江口 *

6例
5例
4例
3例
3例
3例
3例
*「みしま江」で地名（各 2 例）口業、岸口、渡口（各 1 例）唇、下口、妻戸口、坂口、門口、河口、渓口、矢口、堀口、枝口、虎口、利口、隠国、口走る、口ずから、口清し、口振り、口籠もる

身体の一部としての「口」ではなく「口から出た言葉」
を表しているシネクドキーである。
まとめると以下の図 4 のようになる。
3. 2. 2. KHCoder による語彙表分析から
ここでは、資生堂・KOSE の CM 表現からリップ CM を
【具体】

【抽象】
（「口」の機能）
身体としての「口」─ 呼吸・発話・飲食 （何かが）出入りするところ（口から出た）言葉− 166 −

図4

女性の美における訴求表現に関する研究

表6

リップ CM

年代と意味分野のクロス表

関わる化粧品の CM・キャッチコピーについて分析する。
「眉」同様、共起語に着目しつつ、3. 1. 1. で見た「口」の意
味的な広がりもふまえて考察していく。
中間報告においても、〈飲食行為〉と〈発話行為〉を参照点（reference point）とした口紅 CM について取り上げた。今
回は、より多くの用例を取り上げて確かめる。
3. 2. 3. 1. 〈飲食行為〉に関する表現
資生堂の CM 等で特によく見られた表現をもとに分析する。
1960 年代には、「キャンディトーン口紅」（1961）「シャーベットトーン口紅」（1962）「フルーツカラー口紅」（1963）「チェリーピンク口紅」（1965）など商品名自体に食べ物の名前を含むものもあった。
CM 中にも様々な食べ物や、食べ物に関する表現が用い
図5

リップ CMられている。

コーディング対応分析■フルーツ色のメタファー
取り出し、KHCoder による分析を行った。表 6 は年代と〈30〉資生堂「キャンディトーン口紅」1963 CM より
Na/ 女：スポーティーな洋服には、人参色のキャロ

意味分野のクロス表である。年代による偏りが見られる。
図５は対応分析を行った結果である。青で丸が示してあットオレンジを。

るのはカイ二乗検定で有意差が生じたコードで、かつ、対Na/ 女：そして、オレンジ系のお召し物には、アー

応分析を行った結果としてもかなり外れたところに位置す

モンド色の口紅、アーモンドブラウンで美しく描いる意味分野である。ここに含まれる語は年代差による偏りてください。

がある。緑で示した丸はカイ二乗検定で有意差は見られな〈31〉資生堂「フルーツカラー口紅」1963 CM より

いのに、対応分析を行った結果としてもかなり外れたとこ

Sg：フルーツカラー

ろに位置する意味分野である。今回は紙幅の都合上これ以

ハネデュー

マンゴー

ママ

マ、あ、アップル ウォータメロン ラズベリー

上の分析は行わない。

フルーツカラー
色合いの鮮やかさや見た目のかわいらしさ、甘い、おい3. 2. 3. CM・キャッチコピーの用例から

しいイメージのあるキャンディやフルーツ、新鮮、フレッ「口紅」「リップスティック」「リップペンシル」など口にシュなイメージのある野菜にたとえられる。つまりメタフ− 167 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

ァー化している。このメタファーによって、「口にして快これらはフルーツが口の比喩としてではなく、対象物
（元

いもの」
と
「口紅」
の結び付きが人々に認知されてくる。

の食物）の役割に戻る。しかし、食物としての役割ではなく、■フルーツへのメトニミー

唇を美しく見せるための役割を担う。

〈32〉資生堂「ナチュラルグロウ

リップスティック」■属性（形容的）表現――より直接的

1975 CM より〈36〉資生堂   INTEGRATE「ジューシーバームグロス」

Tp：彼女はフレッシュジュース

2017 CC〈33〉資生堂 ベネフィークグレイシィ「リップスチック」

うるぷるジューシーな唇が続く、リップグロス

1980 CM より

近年ではメッセージが直接的な表現が多くなってきた。

Tp：春の唇が、ピーチになりました。クリーミィで回りくどくせず直接消費者に訴えた方が、美しさを伝えやソフトな感触。

すい場合もある。伝えるべき点は「潤い（乾燥を嫌う）」「丸
み」「機能性（色が落ちることを嫌う）」「つや」である。

〈34〉資生堂 ルア「リップスチック」1980 CM より〈37〉資生堂 マキアージュ「トゥルールージュ」2017 CC

Na/ 男：美しいものは、おいしいのです。

発色・つや・うるおいが持続〈35〉資生堂 フェアネス「ベジタブルスティック」1985
CM より〈37〉の資生堂の例は直接的である。

Na/ 男：この春は、野菜感覚がいっぱい。

さらに〈飲食行為〉については、それらの行為をしても「落

これらは実際に「口にして快さを感じ取ること」と「口紅」

ちない」口紅というのは訴求の大きな柱になっている。美の結び付きが見られる。
〈34〉
など直接
「おいしい」と言い切しく装うだけでなく、その美しさを「保つ」ことも化粧品にっている。これらのイメージと唇のイメージを近づけるこ求められる要素といえる。特に「口」は〈飲食行為〉と〈発話とによって、（該当化粧品を使った）唇そのものに「きれい」

行為〉を日々幾度となく繰り返すだけに、化粧が落ちやす「おいしそう」「触れてみたい」といった魅力が付与されるい部分でもある。最新の CC では「保つ」ことを強調した表効果が考えられる。

現が各メーカーで多く見られた。

■メトニミーを離れ、客観化・対象化〈38〉KOSE エスプリーク「ルージュグラッセ」2017 CC
ツヤがとろけて、うるんだ唇つづく、贅沢オイルイ

直接的な言語表現がなくても、ソフィーナ オーブ「ルーンルージュ。

ジュアクアブルーム」2004CM――「思わず触れてみたくなる」という Na とともに眠っている女性（片瀬那奈）の唇に〈39〉KOSE ファシオ「カラーフィットルージュ」2017 CC
つけたての美発色が持続して落ちにくい！

フルーツを押し当てるもの、資生堂マキアージュ「ドラマティックルージュ」（「女っぽい唇」篇）2016CM――砂糖〈40〉カネボウ

菓子や果物を女性（水原希子）
が口にするシーンを印象的に

2017 CC

メディア「ウェアリングキープルージュ」

写したものなどもある（図 6、7）。

ワンストロークで鮮やか発色、スリムな落ちにくい

図6

リップＣＭ

花王ソフィーナ オーブ 2004

図7

リップＣＭ

資生堂マキアージュ 2016

− 168 −

女性の美における訴求表現に関する研究

口紅。
〈41〉カネボウ

4. 総

コフレドール「エレガントジュエリールー

ジュ」2017 CC括

このレポートでは、中間報告の結果を更に進展させた。

ぷるんとキレイな唇続く

特に、CM 表現の語彙論的考察、慣用表現、コロケーション、
国歌大観、そして、キャッチコピーの分析を行った。まだ3. 2. 3. 2. 〈発話行為〉に関する表現

まだ、試行錯誤の段階である。その原因は、著作権の問題■発話内容＝「口」との関係性＝メトニミー的も関わり CM 資料等の収集の困難さがあげられる。閲覧を〈42〉資生堂 エリクシール「リップトレーニング」1985

お願いすることでさえ難しいのが現状である。資料が揃わCM よりないことが一番の原因といえるが、その上、CM 表現分析

女：あえいうえおあお かけきくけこかこ させしすせの研究方法が確立されていない点が、研究を困難なものとそさそしている。こうした中で、CM 表現分析に挑戦し、新しい

あえいうえおあお  あえいうえアプローチからの分析方法を試み、美のスキーマの一端を示せたことは、大きな一歩であるといえよう。

〈43〉資生堂「ラブ・インカラー口紅」1970 CM より
Sg：電話なんて信じない

信じない言葉なんて信じ
謝

ない
（略）
Na：今年の資生堂口紅は、あなたの選んだ色・信じた本研究の遂行にあたり、コスメトロジー研究振興財団より支援いただきましたことを心から感謝いたします。本研

い色。
〈44〉資生堂マキアージュ「エッセンスグラマラスルージュ」

究のデータベース作成のために、コーセーの CM 集
（DVD）を閲覧させていただきました。特に、株式会社コーセー

2011 CM より
Tp, Sg：うるるるん

辞宣伝部 宣伝制作課 青木瞳氏、研究企画室 研究企画 U 石

ぷるるるん

〈42〉
は女性たちが発声トレーニングをしている場面。引

塚由紀子氏をはじめ、株式会社コーセーの皆様にはお世話用した部分以降も様々な発声をする口元に着目させる構成になりました。また、資生堂アートハウス・資生堂企業資となっている。
〈43〉
は何度も鳴る恋人からの電話をクッシ

料館関係者の皆様や、アド・ミュージアム東京の図書館のョンで押さえたりカバンに入れたりして聞こえないように皆様には、CM や広告資料に関してご助言いただきました。

しながら口紅を塗るという場面で、引用した歌が流れている。そして口紅を塗り終わると、女の子から電話をかける。 （注記および参考文献）「信じたい色」の口紅をつけて「信じたい」
恋人と電話をする、という〈発話行為〉に恋愛をからめたCM。
〈44〉
は、
「う」
「ぷ」
と両唇を合わせて発音する音を効果的に用いて、音楽のリ
ズムと合わせて繰り返している。 セリフそのものを工夫して〈発話行為〉と「口」の関係を際立てている CM もあった。

1） 新編

国歌大観

DVD − ROM【通常版】，角川学芸

出版，20122） J a p a n K n o w l e d g e P e r s o n a l （ U R L h t t p : / /japanknowledge.com /personal/）
3） 分類語彙表−増補改訂版データベース，国立国語研究所，大日本図書，2004■客観化
以上のような例もあるが、〈発話行為〉
は行動のみで表現されるケースが多く見受けられた。たとえば前掲の「キャ4） 共起語等の表記は代表表記（以下同）。
5）『新撰万葉集』はそれぞれの和歌に漢詩が一首付加されンディトーン口紅」は、4 人の女性が電話ボックスでそれている。本研究では漢詩部分の用例も採用した。用例は、ぞれ話している映像が使われている。

読みやすさを優先し書き下して表す。

そもそも、出演する女優がしゃべったり笑ったりするだ

6）『万葉集』の用例は『国歌大観』では万葉仮名であるが、けで、〈発話行為〉の表現となるため、セリフやテロップで読みやすさを優先し、『新編日本文学全集』の和文表記を発話を意識させる必要性は低い。口元をクローズアップす

用いる。

るだけでも
〈発話行為〉
を強く印象付けられる。これについての詳細は中間報告で述べたので割愛する。

7）『眉の文化史（眉化粧研究報告書）』，ポーラ文化研究所，
19858）『和漢朗詠集』には漢詩・漢文も含まれる。本研究では漢詩の用例も採用した。また、表記は『新編日本文学全集』の書き下しを用いる。
9） 7）
に同じ

− 169 −

化粧がもたらす自己の価値および社会行動における価値の変化── 行動学的検討
福島県立医科大学医学部システム神経科学講座

藤原寿理

Cosmetic studies have drawn many attentions not only in beauty business but in social psychology field. We used
several questionnaires to measure the change in both explicit and implicit value of self by makeup. Forty-three healthy
female university students who wear makeup usually participated in the study. They filled out the questionnaires twice on the
different day, once after spending almost the whole day with makeup and once without it. They were also asked to rate theconfidence on their answer of binary choice task with facial and house pictures or random dot motion coherence. We thencompared the score of questionnaires and metacognitive confidence in two conditions within subject, and found that both
explicit (one’s mood, quality of life, mental health) and implicit (confidence on one’s behavior) value increased significantly
by makeup.

1. 緒

自己の意思決定に対する自信度を客観的に評価させ、化粧言をすることで自らの行動に対する自信が変化するかどうか

近年、美容や服飾業界のみならず社会心理学の分野におを定量的に計測した。

いて、女性の体型や化粧などの美意識に関する研究が数多

2. 方く行われている。これは多くの女性が自己の体型や外見に対して低い価値を抱いており、美の向上に強い関心を持つ法

2. 1. 被験者ためと考えられる。特に質問紙を用いた行動学的研究では、

福島県立医科大学医学部 / 看護学部の学生のうち、日常

化粧という行為が外見的な審美性だけではなく、内面的な的に化粧をする習慣のある健常女子学生 43 名（平均年齢

自信を与えるといった効果や、社会的コミュニケーション

21.1 ± 1.4 歳）を対象に実験を行った。被験者の日頃の化粧能力にも影響を与えることが報告されている 1-3）。一方、に対する意識を調べるために、事前に簡単な意識調査を行

医療の現場でも、リハビリメイクといった事故や手術等でった。

外観に損傷を負った人に化粧を施すことで生活の質（QOL）の向上や社会性行動に自信を与える手法が知られており、化粧がもたらす効用が実際に患者の生活に影響を4）

2. 2. 実験手順
実験は 2 日間に分けて行った。実験内容は同じであるが、与えることが示さている 。本研究では、このような化粧

1 日目と 2 日目の間を 1 週間あけ、片方は 1 日中化粧をしの効用に着目し、日常的に化粧をする習慣のある健常の成た状態、もう片方は 1 日中化粧をしていない状態で過ごし

人女性を対象に、質問紙とコンピュータを用いた行動学的

たのちに実験を遂行してもらった。被験者 43 名を 4 グル実験により比較検討した。

ープに分け、実験日時および化粧あり・なしの順番をグル

これまでに行われた先行研究では、化粧を施した自己や
5, 6）

ープごとに入れ替えた。実験当日は朝から化粧あり・なし、

いずれかの条件で過ごしてもらい、必ず午前中に一度実験

実験環境下での被験者の化粧の有無に関しては着目されて者と対面し確認を受けさせた。さらにその場で鏡を見て自こなかった。これに対し本研究では、被験者自身が化粧を己の外見と向き合う時間を約 1 分間設けた。夕方に実験室した状態あるいはしていない状態で実験を行い、心の健康に集合し、再び鏡を見て自己の外見を確認させた。その後、

度や自信の度合いが両者でどのように異なるのかを直接比

数種類の質問紙への記入およびコンピュータを用いた二者

較し明らかにする新しい手法を試みた。また質問紙による択一弁別課題とそれに続く自信度評価を行わせた。質問紙

評価だけでなく、コンピュータを用いた認知課題を通してと弁別課題の順番は被験者ごとにランダムにした。用いた

他者の顔写真に対する顔認知についての研究が多く

質問紙および課題は以下の通りである。
〈気分チェック用質問紙〉
Value change in self and social behavior
by makeup --Behavioral study
Juri Fujiwara
Fukushima Medical University Schoolof Medicine, Department of Systems
Neuroscience

・POMS2；気分プロフィール検査〈生活の質チェック用質問紙〉
・WHO QOL26；生活の質を計測
・WHO SUBI；心の健康度および心の疲労度を計測〈二者択一弁別課題と自信度評価〉− 170 −

化粧がもたらす自己の価値および社会行動における価値の変化── 行動学的検討番にした。

質問紙とは別にコンピュータを用いた二者択一弁別課題を行わせた。弁別課題への解答直後に、一問ごとに対する得られたデータを各人につき化粧あり・なしの条件に分

自信度を評価させた。これにより被験者の解答に対する自け、課題ごとに比較検討した。グラフ中に示したエラーバ

信度を計測した。弁別課題はコンピュータ上で作動する

ーは被験者 43 名の標準偏差である。統計解析には市販のPresentation ソフトウエア（Neurobehavioral Systems Inc.）

ソフトウエア（GraphPad Prism5, GraphPad Software, Inc.）をを用いて作成した。課題内容は人物や家屋の写真を用いた使用し、被験者内で対応のある両側 t 検定を行った。なお、

濃淡の弁別およびランダムドットを用いた左右の動き弁別

公正を期すため、後日被験者には謝金が正答数にはよらなを含む全 70 問であり、いずれも難易度を高く設定した（図いことを説明し、全員に一律の謝金を支払った。

1）。被験者の課題に対する意欲を高めるため、被験者に

3. 結は正答数に応じて謝金額が異なると教示し、なるべく早く果

3. 1. 日頃の化粧に対する意識調査

正確に答えるよう指示した。解答はセルフペースでキーボードのボタン押しによって行わせ、解答および反応時間を実験に参加するにあたり、事前に全被験者に質問紙形式

コンピュータに記録した。1 日目と 2 日目の弁別課題は同にて日頃の化粧に対する意識調査を行った。その結果を図様の難易度になるように用意し、被験者間でランダムな順

2 に示す。

図1

4

課題の流れ

***

***

***

3
2
1
0

***p<.0001

図2

化粧に対する意識調査− 171 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

まず始めに化粧をすることは自分の生活にとってどのく点が有意に高い（ネガティブな気分状態である）ことが示さらい重要であるか？および化粧のある・なしで自分の生活れた（t（42）= 5.5, p< .0001）。さらにその気分状態の詳細の質がどのくらい変わるか？という一般的な化粧への意識を見てみると、混乱・当惑（t（42）= 3.0, p< .01）、抑うつ・について質問した。それに対し、平均で中間（ある程度重落ち込み（t（42）= 4.2, p< .0001）、疲労・無気力（t（42）=

要だ、ある程度変化する）より高い意識を持つ被験者群で4.8, p< .0001）、緊張・不安（t（42）= 3.9, p< .001）項目が化あることが示された。また化粧あり・なしを直接比較する

粧なし状態で有意に高くなることが分かった。一方で活気質問に対しては、被験者内で気持ちの明るさ（t（42）=･ 活力項目については化粧あり状態で有意に高くなること

22.6, p< .0001）、人と会う楽しさ（t（42）= 15.3, p< .0001）、が示された（t（42）= 5.5, p< .0001）。

自分への自信度（t（42）= 20.7, p< .0001）のいずれの質問に

3. 3. 生活の質、心の健康度および心の疲労度検査

対しても有意に高い回答を得た。

被験者の実験当日を通しての生活の質ならびに心の健康

3. 2. 気分プロフィール検査

度・疲労度を質問紙（WHO QOL26、WHO SUBI）を用い被験者が 1 日中化粧をした状態あるいは化粧をしていない状態で過ごした実験当日の夕方の気分を質問紙て計測し、化粧あり・なし条件間で違いがみられるかについて比較検討した。その結果を図 4、5 に示す。

（POMS2；気分プロフィール検査）を用いて計測し、条件

生活の質（QOL26）項目の内、日常的生活動作や活力と間で気分状態に違いがみられるかについて比較検討した。

疲労を含むⅠ. 身体的領域（t（42）= 3.6, p< .001）、ボディイ

その結果を図 3 に示す。

メージや自己評価を含むⅡ. 心理的領域（t（42）= 4.4, p<

化粧なしの状態で 1 日を過ごすことにより、化粧ありの.0001）、人間関係などを含む Ⅲ. 社会的関係（t（42）=2.9,

状態で 1 日を過ごすことに比較して総合的な気分状態の得

p< .01）においていずれも化粧なしに比較して化粧あり条件

図3

POMS2 気分プロフィール

図4

生活の質 QOL26− 172 −

化粧がもたらす自己の価値および社会行動における価値の変化── 行動学的検討

で評価値が高くなることが示された。さらに、Ⅱ. 心理的れくらい自信があるかを聞いた。その正答率（左軸）と自信

領域の細分項目である、ボディイメージ（自分の外見を受度（右軸）について図 6 に示す。また、化粧あり・なし条件

け入れることができますか？）および自己評価（自分自身にごとの正答と誤答別の自信度もあわせて示す。

満足していますか？）に対する評価値に注目して比較する

正答率に関して条件間の差は見られなかった。一方、自と、化粧あり条件での評価値が有意に高いことが示された分の解答に対する自信の度合いは正答、誤答に関わらず化（t（42）= 4.5, p< .0001）。

粧なし条件に比較して化粧あり条件で有意に高くなること

心の健康度・疲労度（WHO SUBI）は、化粧あり条件がが示された（t（42）= 2.2, p< .05）。また、両条件ともに誤なし条件に比較して心の健康度が有意に高い（図 5 左 , 左答に比べて正答だった場合には自信度も有意に高いことが軸 :（t（42）= 5.2, p< .0001）
一方で、疲労度は有意に低い（右示された（化粧なし : t（42）= 4.0, p< .001、化粧あり : t（42）軸 :（t（42）= 3.7, p< .001）ことが示された。心の健康度に= 2.1, p< .05）。弁別課題に解答するまでの反応時間および

ついて、その下位尺度を詳細に比較したところ、人生に対自信度を答えるまでの反応時間に条件間での有意な差はみする満足度（t（42）= 3.6, p< .001）、達成感（t（42）= 3.5, p<

られなかった。

.001）、自信（t（42）= 3.3, p< .001）、至福感（t（42）= 4.4, p<

弁別課題の正答率と正答した解答への自信度の関係を詳.0001）のいずれにおいても化粧あり条件の方がなし条件にしくみてみると（図 7 参照）、化粧あり・なしの両条件で、比較して有意に高くなることが示された（図 5 右）。

正答率と自信度に正の相関がみられた（化粧なし（左上）: r= 0.4, p< .05、化粧あり（左下）: r = 0.4, p< .01）。一方、誤3. 4. 二者択一弁別課題と自信度評価

答率と誤答した解答への自信度の関係をみると、化粧あり

コンピュータを用いて、自分の外見とは直接関係のない
二者択一の弁別課題を行わせ、各問に対し自分の解答にど

図5

条件でのみ、誤答率と自信度の間に負の相関が示された（化
粧あり（右下）: r = −0.5, p< .01）。

心の健康度 SUBI

図6

弁別課題

− 173 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

図7

4.

考

正答率と自信度の関係

誤答に対する自信が低くなる傾向がみられた。このことか

察

ら、化粧をして過ごすことで自分の意思決定の結果（正答

本研究により、日常的に化粧をする習慣のある健常の成あるいは誤答）に対する自信の認知が高まる、すなわち自人女性では、化粧をしている状態としていない状態で気分

己のメタ認知能力が高くなる可能性が示唆された。これら状態、生活の質、心の健康度や自信といった内面に対するの結果から化粧という行為が意識的にも無意識的にも外見価値が異なることが示された。直接的に自己の外見や自分の審美性だけではなく、QOL の向上や意思決定への自信

自身に対する自信の度合いを尋ねる質問紙においては、化を高めるといった効用を与え、社会性行動にポジティブな粧をすることであらゆる価値が有意にポジティブな方向へ影響を与えることが示唆された。

変化することが示された。また本研究では、自己の外見に本研究は、これまで漠然と受け入れられてきた、化粧をは直接関係のない二者択一の弁別課題を用いて自分の意思することで自分に自信が持てるという心理的現象を実証科決定に対する潜在的な自信を計測することを試みた。弁別学の対象として扱い、その根拠となる行動データを示すと課題には、2 枚の写真の濃淡や動きの方向を弁別させるという点で、社会的に意義がある。また臨床医学の現場にもいう難易度の高い課題を用意した。したがって解答に対す

リハビリメイクの意義を科学的に明らかにする点で発展性る自信を認知することは課題同様に難しいことが予想されに富んでいる。女性に限らず全ての人々にとって髪型や服た。結果、正答率はチャンスレベルである 50 ％よりもや装など外見的に変化を加えることは、日々の生活の中に潤や高い値であったが、化粧あり・なしの条件間では差がないを与えてくれるものである。本研究が提案するように、く、いずれの条件でも難しい弁別課題であり、正答かどう

外見的変化が自らに与える効用をより意識的に捉えるようかを予期することは困難であったことが示された。それにに働きかけることは、外見だけではなく内面の心の健康度

対して自信の度合いは、化粧あり条件の方がなし条件に比や QOL を上げ、生き方そのものにまで影響を与えること

較して有意に高く、化粧をして過ごすことが判断の難しいが予想される。

問題に対して自信を持って解答することにつながる可能性が示唆された。また、化粧ありの場合、正答率が高い人ほど正答に対する自信度が高く、一方で誤答率が高い人ほど

謝

辞本研究の遂行にあたり、助成をして下さいましたコスメ− 174 −

化粧がもたらす自己の価値および社会行動における価値の変化── 行動学的検討

トロジー研究財団に深く感謝いたします。助成金により遂

pediatric patients before and after cosmetic camouflage

行された研究成果は今後国内外の学会で発表させていただ

of visible skin conditions. J Am Acad Dermatol. Nov; 71

くとともに、速やかに論文として国際学術雑誌に投稿し、(5) : 935-40 (2014).
4） Holme SA, Beattie PE, Fleming CJ. Cosmetic

科学の発展に寄与することを目指します。

camouflage advice improves quality of life. Br J
（参考文献）

Dermatol. Nov; 147 (5):946-9 (2002).

1） Miller, L. C., & Cox, C. L. For appearances’ sake:5） Ueno A, Ito A, Kawasaki I, Kawachi Y, Yoshida K,

Public self-consciousness and makeup use. Pers Soc

Murakami Y, Sakai S, Iijima T, Matsue Y, Fujii T.

Psychol Bull, 8, 748-751 (1982).

Neural activity associated with enhanced facial

2） Korichi R, Pelle-de-Queral D, Gazano G, Aubert A.
Why women use makeup: implication of psychologicaltraits in makeup functions. J Cosmet Sci. Mar-Apr; 5 9

attractiveness by cosmetics use. Neurosci Lett. Apr 30;
566: 142-6 (2014).
6） Tagai K, Ohtaka H, Nittono H. Faces with Light
Makeup Are Better Recognized than Faces with(2) : 127-37 (2008).
3） Ramien ML, Ondrejchak S, Gendron R, Hatami A,

Heavy Makeup. Front Psychol. Mar 1; 7: 226 (2016).

McCuaig CC, Powell J, Marcoux D. Quality of life in− 175 −

●
第 27 回表彰・贈呈式記念講演●

宮永 美知代

第27回表彰・贈呈式

記念講演（ステーションコンファレンス東京・平成 28 年 11 月 22 日）

顔─その魅力の内側
美術解剖学的観点から
東京藝術大学美術学部 助教

宮永

美知代

みやなが・みちよ
1981年女子美術大学芸術学部絵画科を卒業、83年東京藝術大学大学院美術研究科修士課程を修了後博士課程に進学、同年９月から
東京大学理学部人類学教室研究生に、1998年には医学博士号を取得。86年から東京藝術大学大学院美術教育美術解剖学の助教に就任、現在に至る。
・専門分野：美術解剖学（特に顔をテーマとした構造解析、絵画等の表現法）
・その他：美術解剖学会、日本顔学会理事、他多数参画

ただいま紹介いただきました宮永でございます。このた

いただきましたが、この瞳孔の大きさの微かな変化に対しびはコスメトロジー研究振興財団の受賞を、おめでとうごて私たちはほとんど無意識のうちに違いを見出しています。

ざいます。また、このような晴れがましい舞台で私が講演

心理学の実験では、興味のあるものに対して私たちは瞳孔させていただけますことを、小林理事長さま、その他、多を開きます。探していたものが見つかったとき、その部分

くの財団の先生方に御礼申し上げます。

が少しクリアに輝いて見える場合があります。それはつま今日、お話しさせていただきますのは、美術を通して、り、よく見ようとして瞳孔を拡大し、光をたくさん取り込

皆さんにはとても身近な顔の魅力について考えていただく、もうとするのだと思います。そのような反応が、眼をカメ

そのような内容となっております。

ラに例えられる、瞳孔反射という側面以外に眼にはあるとでは、最初に出てくる 2 つの写真、皆さんはどちらを感じがいいと思われるか、ちょっとお伺いしてみたいと思います。

いうことですね。
私たち日本人は、瞳孔と光彩を含めて、一口に黒目というふうに言ってしまいますけれども、このように虹彩と瞳

まず、1 枚目の写真。もう 1 枚出てまいります。どちら

孔のコントラストがある、いわゆるヨーロッパ系では非常が印象として良くお感じになるでしょうか。2 枚目です。

にこの瞳孔の大きさというものが古来より問題になってきいかがでしょうか。

ました。興味のある対象に対して瞳孔が開くということで1 枚目のほうが印象が良かったと思われる方は、手を挙すから、瞳孔が大きいほうが魅力的という、そういう判断げていただけますか。はい、ありがとうございます。では、です。古代エジプトや中世のスペインでは、ベラドンナと2 枚目のほう。はい、ありがとうございます。1 枚目のほいう薬草を目薬にして、それを差したと言います。それはうが少し多かったようですが、ほんのわずかな差のような神経毒で、瞳孔反射を奪うものですので。当然、明るい光

気がします。

の下でもまぶししくとも瞳孔が大きくなったままで、失明

でも、とにかく手を挙げていただいたということは、この危険さえあるものでした。しかし、魅力的とするその美の 2 つに差を見つけておられるわけです。それはもちろんに対してかける執念のようなものが、そのことにはあった

顔の中にあります。違いはどこにあるかということをお気と思います。

付きになられた方はいらっしゃいますか。

この瞳孔の大きさに対して、どちらを魅力的に感じるか

では、もう一度 1 枚目に戻します。今、私は大変、印象というのがほぼ半々でしたけれども、私が調べた結果では、

深く思いましたのは、多くの方が手を挙げてくださったとナチュラルに大きくしないほうがいいというほうが、むしいうことです。実は私が行っております大学で同じようにろ多いという、そういう結果でもありました。

聞いてみますと、同じじゃないかというふうに言う人が半顔というものについて、私たちは非常に敏感です。野山

分ぐらいおります。つまり、この差異がなかなか見分けらを歩いていると、リラックスしているときにはこういう顔れないですね。でも、両者には歴然とした差異があるんでが立ち上がってきたりします。しかし日常、私たちの忙しす。それはどこかお答え下さる方、どなたかいらしゃいま

い毎日では、これはただ木の芽であり、冬芽であり、といすか。

うものにすぎないわけですね。

いいですか。実は、こちらのほうを私が少し点描で大ここでは子どもの絵本から取りましたけれども、このおきくしているんですね。瞳孔の部分なのです。2 枚目にし2 人の写真家の非常に優しいまなざしというものが、カメてみます。これがオリジナルの写真です。メーキャップ

ラのファインダーを通して顔として立ち上がってまいりまの CM の写真で、ちょうど良い正面顔でしたので使わせてす。ウサギのような、あるいは鹿のような、そういう顔で− 179 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

すね。このような顔を発見するのは、本当に心が伸び伸び

くり付けて晩年にたくさんの絵を描きました。この中に見とした、リラックスした状態で、頭の中に煩わしいことがえている顔は、いずれもとてもちょっといぶかし気という何もない、そういう状態でないとなかなか立ち上がってきか、困ったというか、不機嫌な顔ばかりです。2 つの目とません。

鼻と口と、この要素さえあれば顔なんですね。多少、目が自然物の中だけではなく、人工物の中にもこのような顔

このようにずれていても顔として私たちは認知します。クはあります。この線路の脇にある石の中に去年のツタの跡

レーはこのとき、ナチスドイツの迫害を受け、スイスに亡を、根の跡がちょっとゆがんだ口になっているところが、命していました。戦争の終わりを知らずにクレーは亡くな

非常に哲学的な瞑想をしている、そういう符号にも見えてってしまいます。
これはパントマイムの教本から抜いた顔です。さまざま

まいります。
アルチンボルドという 16 世紀の画家は、王様に仕えたな表情をしているんですけれども、とても怒ったり驚いた

のですけれども、その王がとてもこういう不思議な絵を好り、笑ったりしています。しかし、どことなく人工的なとんだので、たくさんのダブルイメージの絵を描いています。

いうか、やはり自然な感じじゃないですね。それはなぜか

これは春という、春の花で、たくさん描かれているんですということです。

が、もうすぐにパンジーが見えて、このバラが頬ではない表情というものは、必ず時間の経過とともに現れて、そか、このユリのつぼみは鼻ではないかと思った瞬間に、顔の表情のピークがあり、そして消えていきます。つまり動が立ち上がってまいります。

的表情と言われるものは、必ず時間の中で移ろっていくもこれは夏ですね。ズッキーニが鼻として、そしてエンドのなんですね。それがここでは、そのピークがちょうどもウ豆がにっと笑った口からのぞく歯に見えた瞬間に、私たう切り取ったようにピンナップされて並んでいます。東ちはこれを顔として認知します。

京駅でこのような顔をした人が前から歩いてきたら、多分、

これは冬ですね。このような四季の連作をアルチンボル

少し大きめにすれ違うときには距離を空けるんじゃないか

ドはたくさん描きましたが、こういうものもあります。陸と思うんですね。また、こういう人でもちょっと怖いかもの動物たち。ここに何か……草食獣ではない獣の背があり、しれません。

そしてここに見えにくいですけれども、ちょっとトカゲがとにかく、私たちは表情というものを普段からよく読みのぞいているのがまるで舌のように見えます。この獣の開取っています。そう考えてみると、空間芸術である絵画のいた口が目に見えた瞬間に、私たちはこれを横顔であると中に表情を自然に盛り込むということが、いかに難しいこいうふうに認識します。

とかということがお分かりいただけると思います。

これは水の生物で構成されています。このようなダブル

17 世紀の画家、フランス・ハルスの「ジプシーの少女」

イメージというのは、江戸時代には恐らく出島などを通しというルーブル美術館の小品です。ここでは、ハルスはほて日本にも入ってまいりまして、これは歌川国芳の──江

ほ笑む少女の顔を捉えながら、非常に自然に表しています。

戸末期の画家ですね。
この「みかけはこまわゐがとんだいゝ

私の師匠の美術解剖学の中尾喜保は、この少女の目がもう人だ」という、同様に絵の中に、組み合った人物で構成さ

ほほ笑んでおり、こちらの目はもう笑いが通り過ぎている

れているんですが、ダブルイメージが生かされています。

と。そしてこの口角はほほ笑みであり、こちらの口角は強顔は発見されやすい性質を持っています。そして、いっく引き上がっている。つまり、笑いという動的な変化を 1

たん発見されますと、その形は顔以外には見えてこない非つの顔の中に有機的に表現している、そういうふうに説明

常に強固な枠組みを持っています。

をしました。それは本当に的を射ているなと、私もここででは、顔の要素とは何でしょうか。

使わせていただくんですが、これは瞬間の微笑、数秒の微ちょっとひねったレバーですけれども、ウサギのような笑ですね。数秒間の笑いというものがここにあります。午顔が私たちには見えます。2 つの目と口、これさえあれば前中の光でしょうか。そういう高い位置から射す光とそれ顔のようですね。何もマンホールの蓋にしか見えませんが、によってできる影というものが、この少女の数秒間の笑い

しかしここにはにっと笑った顔があります。

というものをつくり上げています。

つまり顔を構成する要素とは、このような目、鼻、口、

恐らく中尾の講義を受け、自ら画家である福田美蘭は、眉などの顔面の諸器官であり、また、その形と配置でありその表情の時間性というものを彼女なりのやり方で表現します。そして私たちは、先ほど来の全ての顔の中に表情をました。真珠のネックレスをもらってうれしいという、そ読み取っています。困っている、笑っている、そういう表

ういう女性の笑い、喜びというものを、ちょうど写真の多情ですね。

重露光のような表現でストロボを焚いたものを 1 枚に重合

これは、晩年のクレーの絵になります。クレーは皮膚硬化症で腕が動かなくなったのですけれども、手に鉛筆をくしたような、そういう顔として表現しました。
一方、私たちはさまざまな名画の中でも、この光と影と− 180 −

第 27 回表彰・贈呈式記念講演 「顔─その魅力の内側

美術解剖学的観点から」いうものの中に表情をアルカイックスマイルで表した名画

は破産宣告も受け、妻や子どもにも先立たれ、客観的に見として「モナ・リザ」
を知っています。光と影が顔の中に描れば非常に寂しい晩年だったんですが、しかし穏やかなほかれた最初の絵と言ってもいいと思います。

ほ笑みを浮かべているような、そういうスポットが当たっ

この中に、8 枚の絵の中に唯一、正しい「モナ・リザ」とたような形で光と影の中に自分を描いています。レンブラいう言い方は変なんですが、本物の「モナ・リザ」の絵がントは先ほどの顔の中にある頭蓋を見る見方、陰影の中にありますが、どれだかお分かりいただけますでしょうか。

ある顔、立体として顔を捉えています。

これは 1 つ以外は全て私が顔面器官を少しずつ動かして作

これは 2 つ目の見方です。フリーダ・カーロの自画像でったものです。これなどはちょっと舌を出したり、これはす。時代も場所も性別も違いますが、カーロはたくさんの不機嫌そうで、まずこれは違うなというのは、外れてしま

自画像をレンブラント同様残しましたが、ここには意志的うと思うんですが、どれが本物の「モナ・リザ」でしょうか。

なつながった眉、はっきりとしたまなざし、濃いひげ、はでは、またお伺いしてみたいと思います。この絵だと思っきりとした唇、もうこの耳もしっかり描くんですね。しわれる方。はい、ありがとうございます。この絵だと思わかし、私たちの耳というのは、この鼻や目と比べるとかなれる方。はい、ありがとうございます。この絵だと思われり奥まった位置にあります。この顔をクローズアップしたる方。はい、ありがとうございます。これだと思われる方。

中では耳というのはすごく奥にあるはずですけれども、すはい、ありがとうございます。これだと思われる方。はい、

ごく細かく見るのでぐっと手前に立ち上がってきています。

多いですね。これだと思われる方。はい、ありがとうご

これは顔面の器官、その配置、色、形、質感、そういうもざいます。私が今、手を挙げた方々の多い順はこれ、これ、

のにこだわった見方です。

これ。この 3 つは同じように手が挙がりました。ありがと

レンブラントの若い頃の自画像ですが、もうこの頃に彼は光と影の扱い方を自家薬籠中の物としておりました。

うございます。

フリーダ・カーロの別の自画像です。少女の時代に負っ正解を申し上げます。これです。
これはちょっと目が笑っていないような感じに作りました事故により、彼女はもともと悪かった足と反対の足も失た。これはその当時のアイドルのような感じに作ったものってしまう。もう生涯、人前では自分の足を見せない、長が、これとこれです。ちょっと鼻と口の間の距離を短くしいスカートをはいていました。このときに事故で負った傷、たり、あるいは口角をより強く上げたりというような、そ痛み、そういうものをそのときにどんなふうに自分の心がういうことをしてみました。そうして、この正しい「モナ・

悲しかったか、そういうことを草木のない風景で表象してリザ」と比べていただきますと、いずれも少しずつ違っています。また非常に説明的ですけれども、釘によって刺さいるということにお気付きいただけるんですが、でも同時れた自分の体を描いて痛みを伝えようとしています。顔はに、この絵を本当の「モナ・リザ」と言った方は多かったんといえば、涙の粒、顔面器官、この形、配意、そういうもですけれども、でも半分にも満たない感じです。

のに意識がある顔であります。

つまり、私たちは「モナ・リザ」というものを自分の心の実を言うと、この光と影の中で描くという第 1 の見方は、中に温めて、そして自分の理想のように昇華させているんヨーロッパ美術の中でレオナルド以来の、つまりルネサン

ではないでしょうか。つまり、「モナ・リザ」
は今日もはやス期以来の、つまり美術解剖学が画家によって学ばれる、アイコンです。アイコン化した「モナ・リザ」というものを、そのような時代の中で、光と影のこのような描き方がスタ

私たちはそれぞれの心の中に抱えている。よく知っている

ンダードになっていきます。

と思っているはずの「モナ・リザ」の表情が外れてしまうの

これは、ロシアの画家レーピンの、エスキースというのは、つまり、表情というものが移ろうものだからです。大は本制作に至る前の習作のことなんですけれども、ささっ

好きでお別れしてしまった過去の恋人の面影は、やはり美と筆で大きな筆致で描かれたこの立体的な顔立ちは骨格がしい表情でよみがえるのではないでしょうか。

透けて見えます。特にこれなどは本当に頭蓋を真正面から絵画の中における顔の 2 つの見方ということについてお描いたんではないかと思えます。レーピンは頭蓋を描いたんでしょうか。いえ、そんなことはないんですね。本当に話をします。
それは、1 つは顔の内部にある頭蓋を見る見方です。そ

痩せた人物、年取った人物、自然に見えてくる光と影を描

れは陰影の中にある顔であり、立体として顔を捉えていまいているとそういう人の中に骨が見えてくるという、そうす。

いう状況なんだと思います。

2 つ目は顔面の諸器官を見る見方です。目、鼻、口、眉

これに象徴されるようなものです。例えばレーピンの完の形や色、質感、そして配置です。それは取りも直さず表成作を見ても、このトルストイの骨格が立ち上がってくる情でもあります。

ような、そういう表現です。

第 1 の例ですね。レンブラントの自画像です。晩年の彼では、2 つ目の見方。これはルネサンス期にもありまし− 181 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

たが、「ルクレツィア」、クラナッハの女性のクローズアッ

口がどのように配置されるか、その色や形が重要なわけでプですね。平板な顔の中に、いかに眉や目、鼻、口、そうす。

いうものが配置されているか。また、その色や質感はどう

このようなことを考えていて、私たちは 2 つの見方をしかということがテーマになっています。ファン・デル・ワているということです。それは、実は私たちの持っている

イデンも同様です。

網膜の奥にある視細胞、コーンとロッドがありますけれど

実はこの 2 つの見方を、骨格を意識した見方、目、鼻、も、昼間、私たちはコーンセルを働かせて、そして明るい口の形を意識した見方を取って、縦軸に時代を取って見ま

光の中で顔面の器官、その配置、色、そういうものを見てすと、14 世紀ごろまでは、ほぼこちら（目、鼻、口の形をいます。それは実は第 2 の見方なんですね。で、夜になる意識した見方）ですね。そして、15 世紀、16 世紀とルネサと私たちのコーンは眠ってロッドセルが起きてきます。たンスになりますと、骨格を意識した見方、つまり光と影とそがれ時というのはものが見にくいですけれども、ちょういうものの中に顔を描く見方が現れてきます。ここには画

ど 40 分ぐらいかけてコーンセルからロッドセルにスイッ

家の名前がいろいろありますね。ラファエロや、そしてレチをしています。そのロッドが見るのは、立体的な光と影

ンブラント、ベラスケス、フェルメール、そして 19 世紀の中の顔なんですね。

のクールベなどもこのような骨格を意識した見方になりま

対応しているじゃないかというふうに思いました。これは証明はしていません。しかし、この 2 つの見方と── 顔す。
ヨーロッパでもまた同様に、このような顔面の器官を配置、色にこだわる見方も同様にありました。日本はというの 2 つの見方、それと私たちの視細胞、それが何か対応しているように思います。

と、後で出てまいりますがほとんどこちらですね。そして、日本の絵画で、顔はどのように表現されてきたのでしょ

円山応挙、鈴木春信、そういう浮世絵や名画もありますけ

うか。先ほどグラフが出ましたのでもうお分かりだと思いれども、この渡辺崋山の時代になりますと、幕末ですね、ます。2 つ目の見方です。

西洋画が少し入ってきて骨格というものの意識が、応挙もこの美しい ── 焼損して焼けてしまいましたけれども、そうですけれども出てまいります。そして本格的に光と影

法隆寺の金堂のこの顔の中には本当に壁面と同じフラットというものを学ぶというのは、19 世紀末、明治期に開国し、な顔面の中に、目、鼻、口、それがどのような形か色かとヨーロッパに画家たちが学びに行って、そしてそこから新いうことが重要になっております。これもそうです。私た

たな見方を持ち帰ってくるということですね。

ちは第 2 の見方を伝統的に持っております。そして、今日

ここにピカソの名が２つ書かれていますけれども、ピカの私たちも煌々と明るい蛍光灯の下で人の顔を見るほうがソの青の時代は非常にオーソドックスに光と影の中に慎ま大好きです。だから、ヨーロッパを旅するとどこもかしこ

しく暮らす人々を描いていました。一方、キュビズムのバもなんて暗いんだろうと思ったりします。

ラ色の時代。この時代には日本の浮世絵やアフリカの美術

そのようなことは、実は舞子さんのこのような化粧にもの影響を受け、顔面の器官、そういうものをもうばらばら現れていると思います。伝統的に歌舞伎の化粧もそうですに配置したりしていますので、顔面器官の配置にこだわっけれども真っ白に塗り込め、陰影を消してしまう。そして、た見方ということになります。

新たに目、鼻、口というものを描くということですね。

先ほど例に挙げた第 1 の見方のレンブラントとフリーダ・

これは歌麿の「寛政三美人」という図ですけれども、全くフラットで影がありません。目、鼻、口、その色、形、配カーロはこのような時代差があります。
このような見方は、写真においても同様です。

置が勝負というところです。明治になりましても、これは例えば、政治家のポートレートは大体、第 1 の見方で撮

上村松園の「蛍」という美人画ですけれども江戸から自然にられます。光と影の中で、陰影を持って捉えられます。メ繋がった同様の見方です。

ーキャップの写真は逆です。第 2 の見方、すなわち前から

そして、今日の私たちにとっても、やはり顔は平板なの

光が来、目、鼻、口、どれにも陰影は付かないような見方ですね。これはジブリの映画ですね。こっちは「トトロ」
でになります。フラットな平板な顔の中にどのように目 ──

すね。これは、タイトル何でしたっけ。あ、そうですね、

この場合は多分リップスティックだったと思いますが、そありがとうございます。「千と千尋の神隠し」でした。ここの発色の美しさ、艶やかさ、そういうものをプレゼンテーにちょっと影があるじゃないかと思われるかもしれませションする。そういう見方ですね。

んけれども、実は顔の立体を表すためにはありませんよね。

これは第 1 の見方です。ピカソの肖像写真です。ピカソ

私たちは、こういう、フラットな顔を好むんですね。光との骨格が現れてくるような見方。これも何かのメーキャッ

影の中ではなく、顔面の諸器官の形、色、配置。こちらはプの写真ですが、コーカソイド系の彫りの深い顔立ちです「魔女の宅急便」です。

が、ここではもう全くフラットです。平板な中に眉や目やそして、現代美術もそうです。この村上隆のこれらの絵− 182 −

第 27 回表彰・贈呈式記念講演 「顔─その魅力の内側

美術解剖学的観点から」も、先だって森美術館で大々的な回顧展もありましたけれ

ス語のムーブマンをそのまま日本の造形では使っています。

ども、彼ももともとは日本画の出身で、日本画はフラット

実はこれは、ここを固く結びまして、ヘアバンドをきつに対象を見ます。その日本独特のフラットな見方を彼の絵く巻いて、そして頭蓋が伸長する方向を後ろだけに限っての強みとしてアメリカに打って出て、国際的に活躍するよ

しまう。そのことによってこういう頭が出来上がったんでうになったわけです。

すね。とても素敵ですけれども、もう成人してしまうととまとめますと、顔の見方には、陰影の中で立体に見る見ても無理です。どのように作られたかというと、子ども方、そして顔面の諸器官の形、色、配置にこだわる、そうの頃から例えばこういうふうな板を当てます。そして、ずいう見方の 2 つに分けることができます。そして、網膜のっと張力をこのひもに掛け続けるわけですね。そうすると、視細胞も昼間視と夜間視で視細胞を使い分けていまして、

こことここは伸びることができませんので、頭はこういう陰影の中での見方は夜間視の桿体細胞との特性と、また昼ふうに伸びていきます。これはちょっと伸びている状態で間視、それは形、色、質感、配置の昼間視の錐体細胞の特すね。これはもっと強力な感じがします。痛かっただろう

性と対応しているように見えます。

なと思うかもしれませんけれども、そんなにすごい圧では

日本の伝統的な顔の見方は 2 つ目、つまりこの形、色、ないと思います。

質感、配置にこだわる見方であり、顔の平面性は今日のア

例えば別の方法としては、これはネフェルティティと同

ニメーションや現代美術にも見出すことができます。私たじような方法ですね。ぎゅっと頭を縛っている少女ですけ

ちの視文化の特徴、これは「視の型」、目がもうそういうふ

れども、大人になるとこのような頭になります。これは時うに見るようになっているというふうに言ってもいいかも

代も場所も多様に見いだすことができます。古代エジプト

しれません。

やこのようなフランスでも、場所によっては近世まで行わでは、私たちがあまり見ることをしていない、この頭蓋れていました。ただ、人間の体に行われるこのような身体変更は、その人が亡くなってしまいますと失われてしまいというものについて少し見ていきたいと思います。
これは解剖の教科書ですのでさっと見ていきますが、こますので、今はなかなか見ることができません。

れを見ると大人の頭蓋であるということが分かります。こそして、インカですね。中南米、ペルーやそういうとこ

れは子どもの頭蓋です。歯がないですものね。でも、同じろにもありました。これはネイティブアメリカンのお母さ

歯がなくても、これは子どもには見えません。これは無歯んですが、これは現代的な視点から見ると幼児虐待以外の顎、歯を失ってしまった高齢の方の頭蓋です。でも、どこ何ものでもないように思えますが、決してそうではなくて、となく子どもに似たところもあります。だから私たちは、

このお母さんは精いっぱいこの子をかわいがって育ててい老いて童顔に返る、なんていう、そういう比喩も持っています。
昔ですと、赤ちゃんがばたばた暴れるのは、これは良くます。
骨と生体、これはどのぐらい違うかというと、このぐらないと思ってぎゅっと固く縛ったりします。実はそれはス

い距離があります。頭や顔は大きく骨格の影響の受けていワドリングという育児法として東ヨーロッパなどにもあるるということです。これはかなり太った方なんですけれどんです。ひょっとしたら幼児キリストのイコンの像の中に、も、つまり私たちは、骨格というものを無視して顔面を考繭のようなものの中に巻き込まれたキリストを抱くマリア

えることはできないのだということです。

のような像をご覧になったことがあるかもしれません。

そして次には、骨格の可変性ということを見ます。これ

赤ちゃんは妊娠の最後の頃というのは、ものすごくお母は古代エジプトのアケナトンの娘と言われるネフェルティ

さんのおなかの中が狭いので、その子宮の狭さみたいなもティの像です。これは石像ですけれども王女の像ですね。

のを感じるのか、ぎゅっと抱っこすると泣きやんだりする

このフォルムは非常に美しいものです。古い美術史などをというのは事実でありますし、そのスワドリングには一定

ひも解きますと、これはエジプト彫刻のデフォルメであるの合理性があると考えられます。

なんていうふうに書かれているんですが、実はそうではあですけれども、この気を付けの姿勢でぎゅっとされていりません。これは人工的に作られた頭部で、それをそのまるのを見ると、かわいそうにってやっぱり思ってしまいま

ま写しているものです。

すね。それから、この頭に当たっている板ですけれども、この長い頭に、女性らしく前傾した首が、ムーブマンのこれもぎゅっとものすごく強い力でかかっているみたいで美しさをより高めていると思います。ムーブマンというのすけれども、これもお母さんのような格好いい頭にしてあは、その造形物に感じる動きのようなものですね。動きのげなきゃという、お母さんの愛情そのものですね。私たち

勢いと書きますけれども、高村光太郎がムーブマンを動勢は生きている今日の価値観、倫理観でどうしてもものを見というふうに訳しましたけれども、英語でムーブメントとてしまうんですけれども、こういう多様な美意識がありまいうとちょっと別の意味になってしまいますので、フランした。

− 183 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

これは本当に上顎以下が失われてしまっているので、こすね。

れが頬骨で、これが眼窩です。ですので、いかに頭が大きこのような平板な顔というものは ── 先ほど手を挙げてく後ろに高くそびえているかということがお分かりいただ

いただいたんですけれども、ほぼ 9 割ぐらいの方が「イザけると思いますが、このような Deformed skull というもベラ」の美を好みとして手を挙げてくださいました。私たのがありました。

ちはその昔、例えば安土桃山時代でしたら、南蛮人渡来図

私たちは、本当に簡単に過去は野蛮だとか野蛮な地域だ

屏風などがたくさん描かれました。南蛮人はポルトガル人、というふうに言ったりしてしまうんですけれども、実はそそして紅毛人というのはイギリス人だったようです。そうの地域によって時代によって、美意識も揺れてきているという西の野蛮な人というふうな捉え方をして描いていましいうことです。

た。

そして私たちは、例えばこのような 2 つのコントラスト

当時には、鼻が高くてとてもみっともない、なんていうを見ますと、顔の違い、どちらが美しいと思われるでしょ

記述もあったりしたんです。しかし時代が変わって、明治うか。すみません、これは絵画と彫刻で、本来比較しようの開国以降、私たちは欧米のものを無条件に取り入れましがないものかもしれませんけれども、この最後のスライドて、そして美においても今日の私たちの美的規範というのでも手を挙げていただきたいと思います。こちらが好きとはどうもヨーロッパにあるようです。でも、伝統的に持っおっしゃる方はどのくらいいらっしゃいますか。はい、あている私たちの今日的な美意識というものも、やはり大事

りがとうございます。こちらが好きとおっしゃる方。はい、

なのではないだろうかということです。

良かった。でも手を挙げてくださる方が 10 名ぐらいはい

私たちがこのように平板な顔立ち、そして張り出した頬骨や低めの鼻、そういうものを持つのは、実は寒冷地適用

らっしゃいました。
実はこれは、先ほどささっと流してしまいましたけれどと考えられています。それは日本人の二重構造モデルといも、最初のほうはゴヤですね。18 世紀の終わりから 19 世

うことをお話になった埴原和郎によれば、もともと縄文人

紀にかけてのゴヤ──スペインの画家ですね。その人の「イというのは南のスンダランドと言われる、今で言うとフィザベラ」という絵です。ここでは、ゴヤは同国人の美といリピンとかインドネシア、そういう土地にいた人たちだっうものをいかんなく、黒い衣装に身を包んだ本当に美しいたのではないか。そこに新たに北方適応した弥生人と言わ女性を表現していると思います。この顔は彫りが深いです。

れる人たちが、それは地図で言うと北のほうの大陸から来

非常に立体的な顔立ちを持ち、そしてはっきりとした二重た人たちということですね。それが入り込んで弥生時代、のまぶたを持ちます。そして唇はぽってりと重厚感ある厚そして古墳時代、そしてこのような奈良時代にもつながっみを持った存在感ある赤い唇です。これを現在の私たちもていると考えられます。
今でも私たちの顔の中に縄文型、弥生型というものを見美しいというふうに感じるんですね。
もう一つのほうは、実は浄瑠璃寺の吉祥天です。古色が出すことができるのは、やはりそういう二重構造モデルと付いて、顔の色がどうしても色が付いているものですから、いう、その理論があるからなのかもしれません。ですので、これはもう本当に美しい造形なんです。見事な造形なんで私たちはこのような顔というものを本当に仏像としてしかすけれども、それでちょっとモノクロにしてみます。

拝まないのですけれども、それは実は残念なことかもしれ

絵画と彫刻を比べるなんてちょっと無謀ではあるんですません。

が、ここには非常に東洋的な顔の美というものが表現され最初に顔の見方ということからお話をしてきましたけれています。平板な立体感のない顔立ち。そこにぐいっと引ども、私たちは目、鼻、口、そういうものの配置というもかれた長い眉と切れ長の細い目ですね。そしてその目は、のにものすごくとらわれる、そういう「視の型」を持ってお実際の目よりもずっと長く表現してあります。そして口元り、そしてこのような文化というものも、時代とともに移は小さくて、しかし花が開いたように美しい形を持っておろうものであるというふうに考えております。

ります。鼻筋は通っていますね。そんなに高くないんです
けれども、しっかりと通すというのがやはり美だったんでご清聴ありがとうございました。そして本日は本当におめでとうございます。

− 184 −

コスメトロジー研究雑感

平成 26 年度

研究助成

化粧品素材としてのポリフェノール
江島

広貴「天然を超える抗酸化＆抗菌活性の発現をめざしたポリ

は女性ホルモンであるエストロゲンに似た性質も持っていフェノール模倣高分子の精密重合」と題した研究を平成るため，過剰摂取によりホルモンバランスを崩す危険性が26 年度より 2 年間助成していただきました．本研究課題であります．よって，化粧品として使う場合にも過剰な摂取は植物性ポリフェノールに多く含まれているガロール基とには注意が必要でしょう．

いう化学構造に着目し，高い抗酸化 / 抗菌活性を持つ新規

天然の植物がポリフェノールを生合成することは，進化

機能性高分子材料の開発に取り組みました．これは自然にの上で適応してきた結果であり，植物自身にとって何か重学び，分子をデザインして，それを高付加価値な人工材料

要な意味があるはずです．それは植物自身を紫外線や病原の創製につなげようという試みですが，そもそも天然に存菌から守るためと主には考えられていますが，ポリフェノ在する植物性ポリフェノールは既に化粧品にも多く配合さールは植物界のみならず動物界にも多種多様なものが存在れております．

することが最近注目を集めています．厳密な定義では動物

市販されている化粧品で特に目にする機会が多いポリフ

界のポリフェノールはポリフェノールとは呼びませんが化ェノールはイソフラボンでしょう．大豆及び大豆胚軸から学構造的には似ています．一部の貝はポリフェノール性タ

水 / エタノールで抽出され，これを含有する商品が数多くンパク質を岩との接着に利用しており，きっとまだまだ多販売されています．大豆イソフラボンは in vitro でチロシ

彩な機能がポリフェノールには隠されているのではないか

ナーゼ阻害作用，動物実験で経口摂取によるメラニン生成と感じさせます．そのヒントは生物が長年をかけて最適化

抑制作用，コラーゲン生成促進作用，ヒアルロン酸生成促してきたポリフェノールの分子構造の中にあると思います．

進作用などがすでに認められています．また，キッコーマ

今後も自然の恩恵に感謝しながら，ポリフェノールにヒンン株式会社では，大豆イソフラボンのヒト経口摂取によるトを得た新規機能性素材の開発研究に取り組んで参ります．

美肌作用を検証しており，肌弾力性改善効果とシワ悪化抑（東京大学大学院工学系研究科マテリアル工学専攻）

制効果を確認していると聞きます．一方で，イソフラボン
平成 26 年度

研究助成

天然物化学と香粧品の関わり
杉本幸子

私は大学で薬用植物学と天然物化学の講義を受け持つ中ているジャコウジカの雄の分泌腺を使用するが、このジャで、いかに天然から得られるものが人類にとって有効であコウはその昔、良いにおいがするとして箪笥に入れて香りをったか、そしてこれからも有効であるようなことを教える

楽しんだとの伝えがあるが、実際に嗅いでみると、けして箪立場にある。もちろん今日ある医薬品のリード化合物とな

笥には入れたくない匂いである。昔の人はなぜこれをいい香った天然物は数知れず、現在も合成医薬品にも負けない天りとして扱ったのかはわからないけれども、今のような大然物由来の医薬品は多い。ミブヨモギは駆虫薬としてかつ気中にたくさんの化学物質が浮遊していない時代はもっとて一世を風靡した植物であり、ミブヨモギを産生するため香りに敏感だったのだろう。そしてその繊細な香りを楽に栽培場も広く作られたが、現在ではほとんど使われなくしめた時代があるのかと思うと、少々残念に思う。というなってしまった。もちろん駆虫薬を使わなくてもよくなっのも、薬草園の見学者にシナモンの香りやショウガの香り

た現在に不満があるわけではないが、時代とともに必要とを生で体験してもらうことをしているが、若い世代ほど匂されるものが変わってくる。

いに鈍感である傾向にある。今後も天然物素材からの香粧時代とともに変わってきたといえば、おそらく人間の香りセンサーも変わってきているのではないかと感じる。
生薬のジャコウはワシントン条約により取引が禁止され品に有効なものを探索するが、常々世界の流行や我々の体は周囲の環境によって変化していることを感じとりながら、社会に必要とされる研究を進めていきたい。 （広島大学）− 187 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017平成 27 年度

研究助成

自己組織化の魅力とコスメトロジー
鳴瀧

彩絵

無秩序な状態にある構成要素が、それらの相互作用を経役立てることはできないかと考えていたところ、貴財団のて自律的に秩序構造を生み出す現象である自己組織化に魅

研究助成事業が目に留まりました。コスメトロジーというせられ、15 年以上研究をしてきました。この間、合成高

言葉と初めて出会い、コスメトロジー学がカバーする領域

分子や無機イオン結晶、ナノ粒子などいろいろな素材を扱の広さに驚かされるとともに、研究のインスピレーションってきましたが、アミノ酸 1 残基からのシークエンス制御を得ることもできました。今回、研究助成金のご支援をいが可能な高分子であるタンパク質はやはり面白い、というただき、エラスチンタンパク質の分野ではこれまでに例の思いに至っています。遺伝子工学の技術を用いて人工タン

ない極低濃度で、ハイドロゲルを得ることができました。

パク質を合成し、それを水中で高次の構造へ組織化させる

再生医療や創傷治療のための細胞足場として展開していき基礎研究を進めるうち、「エラスチン」というタンパク質をたいと考えています。

模した人工タンパク質が、水中で人肌に温めることで、秩人体は自己組織化現象の宝庫であり、自己組織化の研究序立ったナノファイバーを形成することを見出しました。

はコスメトロジー学や医学・薬学と非常に相性の良いもの

エラスチンは、コラーゲンと並んで人体に欠かせない構造だと感じています。基礎研究が応用へとつながる道を拓いタンパク質ですが、生体から抽出して使おうとすると、そてくださった貴研究助成に深く感謝するとともに、今回得の高い疎水性のためハンドリングが難しく、利用が遅れてられた成果を大きく発展させるべく努力を続ける所存です。

いました。エラスチンのナノファイバー化の成果を社会に（名古屋大学大学院工学研究科応用物質化学専攻）

平成 26 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
三浦佳子

研究助成金はあちこちよく申し込んでいるため、“コスます。ここから発想して、ナノゲルに関する構造色の研究

メトロジー研究振興財団” という貴財団の名称はずっと以

課題について提案いたしまして、助成をいただくことにな

前から存じ上げていて、変わった研究の名前だなと思いなりました。その後、構造色に関するバイオセンサーの開発

がらずっと記憶していました。コスメトロジーという分野に成功しました。助成の課題申請書に申し込んだ内容に比については現在も完全に理解しているわけではありません

べて実際には色を制御したり、発色させることは難しくて、が、電気かバイオしか出口がないのに対して、化粧品に対申請したほど思った発色を示しませんでしたが、ゲルの粒する科学という新しく幅広い分野があるのは、とても面白

径制御や分子認識性の制御などに大きな成果を得ることがく感じました。

できました。発色の研究ということで提案したために、色我々の研究室ではナノゲルという 100 -500nm の小さなの研究としてはかなり苦戦し、報告書などの点で財団の皆粒子を用いた合成高分子の研究をしており、タンパク質を様には毎回大変ご迷惑をおかけしました。お詫び申し上げ

特異的に捉える材料の開発を最近はじめました。ナノゲル

ます。ナノゲルの提案としてはとても発展し、2017 年には様々な用途があり、私は物質の吸着材料として作用する

入って、Nature Chemistry にバイオテクノロジーの応用

ことを中心に検討を行っています。ある日、ナノゲル溶液に向けたナノゲルの開発を報告することができました。特を放置していたところ、自然とナノゲルが集積化して青いに財源にはいつも苦労しており、貴財団にはとても助けら色を呈することを見つけました。実際ナノゲルの溶液はいれました。

つもうっすらと青くて、構造に基づく色をいつも出してい− 188 −

（九州大学大学院工学研究院化学工学部門）

コスメトロジー研究雑感

平成 26 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
道信

剛志

今回は水溶性フラーレンを合成して抗酸化作用を評価す

また、その対称性の高さゆえラジカルを補足して安定に保る研究を行いました。まずはご支援に厚く御礼申し上げま持できるという特徴があります。本研究ではその特徴を活す。もともとは有機太陽電池のアクセプターとしてフラー

かして抗酸化剤として用いたわけです。研究自体は予想外

レン分子を用いていたのですが、その新しい応用を探索すの困難もありましたが一応計画通り進み、抗酸化作用の評るつもりでこの研究を始めました。そのため、過去の文価まで実施することができました。残念ながらまだ学術論

献検索から始まり、抗酸化作用の評価方法を修得するまで文として発表できていないので、これから時間を見つけて実に長い時間がかかりました。ただ、苦労した分だけ経験

まとめの作業をしていきたいと思っています。そんな状況

値が上がり、今後の研究や教育活動に活かせるような気がにもかかわらず、どういう伝手なのか分かりませんが、あしています。それこそまさに異分野研究の醍醐味だと思っる化粧品会社からこの研究内容について問い合わせがありています。さて、この研究を通じて今更ながらフラーレン

ました。もしかしたらコスメトロジー研究振興財団の助成

C60 の化学構造に興味がわきました。ご存じの通り C60 はリストを見ていただいたのかもしれません。うまく共同研

球状分子であり、通常の化学反応では収率よく合成するこ究に発展できるよう追加実験と打合せを重ねていきたいととが難しい分子です。宇宙空間に漂っていたりするそうで思っています。

（東京工業大学物質理工学院）

すが、どこでどのようにして作られたのか大変不思議です。

平成 27 年度

研究助成

生体材料とコスメトロジー
宮崎敏樹

私の研究グループでは無機材料，有機材料，金属材料やろ，コスメトロジー研究振興財団の研究助成公募を目にし，これらを組み合わせたハイブリッド材料などを使った医療応募するに至りました。本研究助成を契機として，研究の用材料の研究を行っております。骨や歯の修復，体内深部

対象をドラッグデリバリーにも向け，これらに関する基礎

がん治療などを主な研究ターゲットとしています。この種的な成果が得られただけでなく，科研費等のプロジェクトの材料設計では，微粒子の粒径や形態制御，材料表面の電応募に向けた新たなアイデア創出にもつなげることがで荷や化学構造制御が生体適合性を支配する主な因子となっきました。化粧品業界は学生の就職先としての関心も高く，ており，これらの最適化がきわめて重要です。生体材料に

最近大学の同級生が外資系化粧品メーカーに転職したとい関連する学会や研究会を拝聴していると，化粧品の開発者

う話も聞きました。今後もこれをご縁に，コスメトロジーが講演されることがしばしばあり，生体材料の設計思想はに関する研究動向にも注目していきたいと考えています。

まさに化粧品の目指すところと同じだなと感じていたとこ（九州工業大学大学院生命体工学研究科）− 189 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017平成 26 年度

研究助成

光を当ててくださった
安永

髪を染めていない人にとっては、「髪など染めなくても秀計

そこで、研究と同時に教育を生業としている身としては、生きていける。
」ということであろうが、髪を染める必要にこの分野の専門家の育成にも力を注がなければならないの

駈られる人にとっては、「何としても染めたい。
」のである。

であるが、自身の非力さを痛感するばかりである。

実際、世界的な染毛人口の多さを考えれば、人類にとってそして、研究の推進のためにさまざまな協力と努力が必

染毛は容易に放棄できない重要な習慣・技術であるといえ要であり、研究に必要な費用を工面することも重要である。

よう。

ところが、研究費を獲得するために、例えば科学研究費助

染毛とは染色する対象がヒトの毛髪であり、そこには他

成事業（科研費）に応募の申請書を作成する際に、「分科・の材料や製品の染色とは異なる独特の科学的世界と技術的細目」を記入しようとすると困ってしまうのである。
【染毛】

特徴がある。その基礎科学を探求する面白さがある一方で、はおろか【染色】もない。つまり、「染毛科学」が認知されて実際に人体に応用される染毛技術においても解決されるべいないのである。論文を投稿する先の適切な雑誌を探すのき課題が沢山ある。したがって、より多くの科学者や技術にも苦労しているのであるから、まず、この分野を確立せ者がこの分野に集って協力し合うことが求められる。

ねばならない。

しかしながら、私が専門としている染毛科学の分野に関そんな状況下にあって、コスメトロジー研究振興財団のして、現在の日本には「染毛学会」
なるものはない。その理存在はありがたい。この度助成して戴いたのは、染毛はコ

由の一つは染毛を研究している研究者、特に大学や公設のスメ（化粧）分野の一角を占めていることを認定し、私の専研究所に所属する人の数が少ないことである。そのために、門分野に光を当ててくださったことのように感じる。財団

自らの研究に関して他の専門家とじっくりと議論できる機のますますの発展を願う。
（京都工芸繊維大学大学院工芸科学研究科繊維学系）

会が少ない。

平成 26 年度

研究助成

タイトジャンクション研究の新展開
池ノ内

順一

私は、タイトジャンクションに関する研究課題に関して膚炎に類似した症状を示すことが明らかになっています。

研究助成を頂きました。皮膚におけるバリア機構としては

私は学部生と大学院生の間、クローディンを発見した月田

角質のセラミド層について、多くの先行研究が為されてい承一郎教授の研究室で、タイトジャンクション研究に従事ます。それに比べて、タイトジャンクションによるバリアさせていただきました。在籍当時はクローディン以外のタ機構については、あまり研究が為されておりません。タイイトジャンクションを構成するタンパク質を探すというプ

トジャンクションは、細胞同士の接着構造の一つで、細ロジェクトを行いました。見つかったのは 3 つの細胞の間胞同士を密着させる役割を担っています。皮膚においては、のタイトジャンクションにのみ存在するトリセルリンとい

顆粒層の細胞がタイトジャンクションを持ち、体内の水やうタンパク質です。その後、大学院を出て 10 年経ちまし

イオンが体外に漏出することを防いでいます。

たが、タイトジャンクションを構成する新規タンパク質のタイトジャンクションの主たる構成タンパク質はクロー同定に関する論文はあまり出ておらず、タイトジャンクシディンと呼ばれる膜タンパク質です。クローディンにはョンの分子構築に関する知見はほぼ出揃った感があります。

27 種類のアイソフォームがあり、その中でクローディン

2013 年に自分の研究室を立ち上げた際に、今後タイト１が皮膚バリアの形成に必須であることが明らかになってジャンクション研究の中心的な問題は何だろうかと考え、います。クローディン 1 を欠損したマウスは、顆粒層で機タイトジャンクションの形成量の制御機構の解明であろう

能的なタイトジャンクションが形成できず、アトピー性皮と思い至りました。クローディンを発現ベクターなどで大− 190 −

コスメトロジー研究雑感

過剰に細胞に発現させても、タイトジャンクションの形成

今回、貴財団より助成いただきました研究は、このタイ量は増加しません。一方で、細胞を高浸透圧の培地に曝す

トジャンクションの量の制御機構に関する論文で、独立後と、15 分程度でタイトジャンクションの形成量が増加しの最初の論文になりました。論文は現象の記載が中心で、ます。このとき、クローディンのタンパク量は変化してい分子メカニズムに関しては不明な点が多々残されています

ません。このように、何らかの方法で細胞は自分がどれくが、今後の研究で明らかにしていき、化粧品の開発に有用

らいタイトジャンクションを形成するべきかを知り、そのな知見につなげたいと考えています。
（九州大学理学研究院生物科学部門）

量を調節している可能性がありますが、そのメカニズムは全く不明です。

平成 26 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
岩脇隆夫

私はずっと主に小胞体ストレスについて研究を行っていの期待からである。そう期待するのには当時から今日に至る。その過程で小胞体ストレスの動物個体レベルでの解析るまで私自身の所属が医学系であることも大きく影響しての重要性を信じ、世界に先駆けて小胞体ストレス可視化モいる。ただ実際に技術開発に成功して意外だったのは、こデルマウスを作製した。このマウスを用いれば生きたままの技術に関する問い合わせが医学・薬学分野の研究者と同で小胞体ストレスが調べられる。それ故、このマウスの利

等に化粧品会社や食品会社などからも押し寄せたことであ

用価値は大きく、その広い普及を通じて世界の小胞体ストる。化粧品会社からの問い合わせがなかったら今回助成をレスが関連する疾患の研究に深く貢献してきた。小胞体ス受けた研究のアイデアは思いもつかなかったであろうし、

トレス可視化の研究成果を学会などで話すと他のストレス

財団より支援を受けることもなかったであろう。そういうでも同じように可視化技術ができないのか？と頻繁に質問意味で自身の研究に幅ができたし、実に良い経験をさせてを受けた。それがキッカケで本助成研究でも中心となってもらった。本成果がどれだけコスメトロジー分野やスキン

いる酸化ストレス可視化技術の開発に取り組んだ。酸化ス

ケア研究に貢献できたかは分からないが、少しでも次の研

トレスは小胞体ストレス以上に健康問題に大きく関わって究へ繋がれば嬉しく感じる次第である。

おり様々な疾患の原因究明や治療法開発に役立つだろうと（群馬大学大学院医学系研究科教育研究支援センター）

平成 26 年度

研究助成

基礎研究と臨床の橋渡し
岡野

橋渡し研究が盛んなようである。何が橋渡しかというと、純子

やしわに良いことは、数十年前から市井の人でも知ってい基礎研究を臨床に結びつけるということらしい。私は大学る。しかし、レチノールを塗布するだけではどの程度、ど院生時代、基礎研究室にお世話になったが、ボスは「基礎の深さの細胞にレチノイン酸が届いているかわからない。

研究は、臨床にただちに結びつくものではない、長時間のレチノイン酸は基底細胞全体に作用するのが良いのか、基研鑽を経てやっと臨床に結びつくものもある」と言ってい底細胞層にあるごく少数の幹細胞に直接作用すれば効果的た。もっともである。基礎分野でいくつもの知見が重なり、なのか、まだまだわからないことだらけである。基礎研究

それがやがて臨床に応用する基盤となるのであるから、時では、遡って 20 世紀の遺伝子が次々とクローニングされ間がかかるのは当然なことなのだとボスは言いたかったのた時代にレチノイン酸経路に関与する遺伝子は数多く見つだと思う。

かり様々な成果があがっているのに、未だにヒトが身近に

ビタミン A の誘導体であるレチノールが皮膚のたるみ接するレベルではレチノールがどうのこうのと言っている。

− 191 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

しかもレチノールやレチノイン酸は脂溶性であり、過剰摂る。思いの外時間がかかってしまっているが、貴財団に頂取では特に胎児催奇形が指摘されている。従って医薬品おいた研究助成金によって着手可能になったマウスが完成す

よび化粧品に応用する際は、きちんと標的細胞を定め、かれば、レチノールが皮膚のどの細胞を標的としているのか

つレチノイン酸が分布する濃度に関するデータを持ってい同定できる。さらに、レチノールより効果がありかつ安全

るべきである。

な医薬品が市井の人に届けられる可能性がある。それが実

これらの背景から、レチノイン酸を可視化するマウスを現すれば基礎とコスメトロジーの橋渡しができることにな

作製することは比較的臨床への橋渡しが近いのかと考え

り、ささやかながら世の中に貢献ができるかも、と希望をた。レチノイン酸自体は遺伝子ではないので、直接可視化

持って今日も大学に通っている。
（滋賀医科大学解剖学講座生体機能形態学部門）

できないという問題があったが、基礎研究の成果の恩恵から、可視化に適した遺伝子の見当をつけることが可能であ

平成 26 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
尾上誠良

この度は，コスメトロジー研究振興財団の研究助成に採及び光がん原性の評価方法はまだ充分な選択肢があるとは択して頂き，厚くお礼申し上げます．今回の助成対象とし言えない現状に起因していると考えます．それ故，光刺激て頂きましたのは薬剤性光線過敏症リスク予測に関するも性以外のリスクを評価可能な信頼性ある評価系の開発が未のです．医薬品売り上げ上位リストを見ますとその半数程だ残る重要かつ難解な課題であり，今後，特に経皮適用剤

度には光線過敏症が副作用の一つとして挙げられており，や化粧品素材の光安全性を担保していくためには必須であ

化学物質の安全性に関する近年の高い関心と相俟って，国りましょう．包括的な光安全性評価の為には in vitro 光毒

際的なレベルで標準化された光安全性評価方法の開発が急性反応とその機序に関する情報だけではなく，被験物質の務の課題の一つとなっています．光安全性評価方法に関す

光化学的反応性を中心とした物理化学的特性，皮膚移行性る ICH S10 ガイドラインが 2014 年に公示されたことにならびに皮膚滞留性などの薬物動態学的特性を深く精査す

よって，国際的に標準化されたストラテジーに従って光安ることも必要であると考えます．これら光安全性評価系の全性評価を実施できるようになりました．しかし，現状のさらなる充実とより詳細なメカニズム解明が光安全性に優ガイドラインで実質的にカバーされているのは光刺激性のれた新規物質の創製に結実するものと強く期待しつつ引きみであり，他のタイプの光毒性リスク予測はまだ完全には続き検討を続けて参りたいと考えております．

出来ていません．これは，現状では光刺激性に関しては評（静岡県立大学薬学部薬物動態学分野）

価系が充実しているものの，光アレルギー性，光遺伝毒性

平成 26 年度

研究助成

気分高揚していた香り菊地

私は２月に咲く沈丁花の匂いが大好きである。春が来た、

和也

えてきた。言い換えれば、香りと視覚が同期して春の喜びと体感できる気分が高揚する香りであると思っている。冬を感じてきたのである。しかし、今年の２月にはほとんどは苦手だが、苦手な理由は寒さより、鬱蒼とした夜が長沈丁花の香りがわからなかった。家族に同意を求めたが、いことである。しかし、２月に入ると、日に日に夜明けがどうやら今年も良い香りがしているらしい。そこで 32 年

早くなり、その冬の最終章において季節の移行を感じ、春前にパリの百貨店で購入した、沈丁花の香りのする香水

への胸のときめきを決定づけるのは沈丁花の香りだ、と考（Casaque）を取り出してみた。確かに、沈丁花の香りはす− 192 −

コスメトロジー研究雑感

るが以前ほどのパンチの効いた影響はなく、意気揚々な気なしの予算でこの香水を購入した。残念ながら香りは記憶持ちにはならなかった。家族は強く明るい気分になる匂いに留まっているが、当の本人の体は以前の感受性は持ってがする、と言っている。なんということか、気付かぬうち

いないらしい。激しい焦りを覚え、今後の自分の仕事や人に自分が老化していて嗅覚が鈍っていたのだ。ここ２－３

生への向き合いかたに警鐘を与えてくれる、貴重な経験で年で老眼が進行していることを実感していたが、それ以上あった。パリで香水を購入した頃の、自分の目標は達成さに衝撃を覚えた。思えば、この香水を買った日のことは昨れているだろうか？花や香水の香りは永遠に再現されるが、日のように覚えている。久しぶりにこの香水を開け、昔の

自分の人生はうつろいやすい。そのなかで、悔いのないよ

記憶がよみがえってきた。当時は１泊千円ぐらいの宿に泊

うに時間を使っていきたい。
（大阪大学大学院工学研究科）

まっていたため、パリでの滞在費全てと同じくらいのなけ

平成 27 年度

研究助成

コスメトロジー雑感木戸博2016 年の NHK スペシャルによる報道と、この報道を基性食物を乳児期の早期から食べさせる事は、むしろ食物アにした単行本、「アレルギー医療革命」（文藝春秋社）等にレルギーを予防することとして早期離乳食摂取が始まってよって、多くの国民は、従来のアレルギー治療の常識が大いる。本研究では、このアレルゲンの経皮感作を予防、治きく変化してきたことを認識し始めている。話題の中心は、療する取組として研究させていただいた。研究は始まった「乳児期に始まる食物アレルギーの原因が、未熟な消化管

ところであるが、今後重要な意味を持つ研究成果として期を持つ乳児がアレルゲン性食物を食べる事によって食物ア待している。

レルギーを起こすのではなく、湿疹等によるアレルゲンの最後に、本研究を遂行するに当たり研究助成の支援をい経皮感作で食物アレルギーが起きることが証明された」事

ただきましたこと、コスメトロジー研究振興財団と関係者である。これまで多くの研究者の間で、食物アレルギーとの皆様に心より感謝申し上げます。

経皮感作は直接関係するとは思っていなかったが、これが（徳島大学先端酵素学研究所生体防御感染症病態代謝分野）

直接関係することが明らかになったのである。アレルゲン

平成 27 年度

研究助成

コラーゲンや体内の脂質構成が体の温度適応に与える影響
久原篤

このたびは貴財団の第 26 回研究助成に採択いただきまや適応するのかを解き明かそうとしています。具体的には、して、深く感謝申し上げます。一昨年度に研究室が大きく

C. エレガンス の温度にたいする応答に着目して、動物がなりましたため、非常に勇気を頂き、天からの恵みとなり温度を感じるメカニズムや、温度環境に適応するメカニズ

ました。本助成研究のテーマは、皮下組織のコラーゲンがムを解き明かそうとしています。これまでに、線虫の研究

体の温度適応に与える影響を線虫をつかい解析するものでから、温度の感覚や記憶に関わる多数の遺伝子が見つかり、す。線虫の温度適応研究は、現象の発見から始めたゼロか

それらは人間の病気にも関わっていました。

らのテーマでしたので、採択されるとは思いませんでした

本研究助成では、皮下組織のコラーゲンや体内の脂質構ので、背中を押して頂いたと同時に、期待に応えられるよ

成が体の温度適応に与える影響を解析しました。その中で、う結果を出すために精進したいと思いました。

予想外の結果が一部得られ、精子の変異体において、体本研究室では、C. エレガンス とよばれるちいさな線虫を内の脂質構成が変化していること、さらに、精子が頭部のつかって、動物がどうやって周りの環境温度を感じ、記憶

温度感覚神経に影響を与えていることが見つかりました− 193 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

いですが、目指す先にはしっかりとした光が見えます。

（Sonoda, et al., Cell Reports, 2016）。また、コラーゲンとこれからも、本助成を受けられる多くの研究者の皆様の

温度適応の関係性も見つかりました。
今後はこれら現象をもとに、より実学に近い研究も進めご活躍と貴財団のさらなる御発展をお祈り申し上げます。

ていければと考えています。エレガントな動物のエレガン（甲南大学統合ニューロバイオロジー研究所）

トな応答のメカニズム、それを解き明かす研究は果てしな

平成 26 年度

研究助成

コスメトロジー雑感佐々木均

この度は、コスメトロジー研究振興財団の研究助成に採性や細胞内取り込みが低いため、核酸物質を皮膚の標的細択していただき、深く感謝申し上げます。本研究は、コス胞内へ安全に高効率に導入できる Drug Delivery System

メトロジーの観点から、皮膚の恒常性を RNA 干渉で制御（DDS）技術との組み合わせが必須となります。私はこれする方法論を開発することを目的として遂行しました。皮までに核酸物質と生体適合性の高い様々な高分子を組み合

膚は人体最大の臓器であり、絶え間ない異化同化を繰り返わせることで、様々な細胞へ核酸物質を効率よく安全に導し、恒常性を保っています。しかし、外来抗原や紫外線な入できる DDS を開発しました。本研究では、私が開発しどの刺激、表皮の細菌増殖、老化などにより、恒常性が破た DDS 技術で代表的な皮膚がんであるメラノーマに対し綻すると、しみ・そばかす、にきび、アレルギー疾患、感て安全かつ高効率に siRNA を導入させ、遺伝子を抑制す

染症、膠原病、悪性腫瘍など、様々な疾患が引き起こされることに成功しました。今後は、肌の黒色化やしみ・そばます。近年、皮膚疾患の理解が進み、治療の標的となる疾かすの原因となるメラニンの生成や輸送に関与する遺伝子

患原因遺伝子や疾患関連タンパク質等が同定されました。

に対する siRNA を用いた検討や、ナノ粒子の皮膚透過性

このような背景の中、遺伝子量やタンパク量を制御できるやマイクロニードルへの応用など研究を推進していき、コsmall interfering RNA（siRNA）が次世代の医薬品として

スメトロジー研究の発展に貢献できればと考えております。

大きな期待が寄せられています。しかし、siRNA のよう（長崎大学病院薬剤部）

な核酸物質は生体内での安定性や持続性に劣り、皮膚透過平成 26 年度

研究助成

コスメトロジーと再生医療（連携研究の重要性）
住吉秀明

この度はコスメトロジー研究振興財団の研究助成に採択

医療を考える新しい挑戦と考えて始めた次第でありました

して頂き、厚い御支援の下で本研究を遂行できましたこと、が、研究のテーマを通して予想外の新たな発見と人的な協厚く御礼申し上げます。私は再生医療の研究分野において、力関係 ･ 共同研究の機会を得る事が出来ました。特に、ミコラーゲンを軸に臓器線維症の治療法と再生を促すスキャ

ズクラゲコラーゲンの皮膚の細胞に対する再生促進効果がフォールドを研究テーマにしております。これまで皮膚に発見されたことには大変驚かされました。この事を起点とおける創傷治癒の過程で再生した「傷跡」の組織が元来のコ

して、クラゲ由来のコラーゲンとムチンの資源化に取り組

ラーゲンの構築と組成が異なっていることに注目し、このんでいるベンチャー企業である「株式会社海月研究所」と新ことは制御を外れた二次的な組織形成、つまり臓器の線維

しい人工皮膚の実現について、産学共同研究を実施するこ化やケロイドの形成とも結びつくのではないかと考えておとに至りましたことや、人工真皮の使用と改良に取り組んりました。それが助成金申請の動機につながっております。

でいる形成外科の先生方との意見を交換する機会を得、傷今回の機会を頂いたことでコスメトロジーの観点から再生を如何に拘縮させず綺麗な状態に保つ事にどれだけの御− 194 −

コスメトロジー研究雑感

苦労をされ、どのような人工真皮が望まれているかという改めて勉強致しました。今回の研究助成をきっかけとして、貴重な御意見を伺うことが出来ました。当然のことながら、新しい研究シーズがもたらされ、それ以上に共同研究を行

研究は個人で出来るものでないことはよく理解しているつうことができる新たな人間関係が構築できたことが何より

もりではありましたが、幾つもの専門領域にまたがる実用もの財産になったと考えております。
（東海大学医学部基盤診療学系再生医療科学）

化 ･ 事業化を目指した研究についての連携研究の重要性を

平成 26 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
平修

始めに、本研究を採択していただいた事に対しお礼申しという財団系のグラントの懐の深さを感じます。横並びに上げます。化粧品は世界で使用されるものでありこの先も様々な予算が削減され、研究が制限されつつある大学人と無くなることはないと思います。だからこそ安全性が非常しては非常に嬉しく、研究に打ち込めた 2 年間でした。理に大事であります。様々な安全性試験が既にあります。今

解も成果もない方々の心ない言葉に傷つき、成果を出せば回は、それに＋ α で「イメージング質量分析」という手法を妬まれる日もありますが、本研究のように世界初の発見が取り入れました。経皮吸収から臓器に送達され、塗布ができたことで明日も研究しようという気持ちが奮い立ちま

長期に渡ることで蓄積・炎症を引き起こすという非常に興す。最後に、本研究成果が今後の化粧品界の安全性という味深い結果を残すことができました。この様なチャレンジ

部分の一助になれればと思います。

ングなアイデアを採択いただくのは「なんのしがらみもな（福井県立大学生物資源学部生物資源学科）

いフラットな評価、失敗してもいいからやってもなさい」

平成 26 年度

研究助成

自分の皮膚を足がかりにした研究
谷崎

皮膚は、水分保持機能、体温保持機能、バリア機能など、

英昭

がわかってしまったが、皮膚そのものの天然保湿因子を新内的ならびに外的環境変化に適応してホメオスタシスの維

たな評価項目に加え、かゆみや QOL などと併せて評価す持を行うための様々な機能を担っている。自分自身がアトることで、コスメトロジーと特に近い関係にあると思われ

ピー性皮膚炎歴 40 年近くになるにつれ、見慣れているはる皮膚を、よりいい状態に保つことが出来るような時代がずの自分の皮膚をみながらふと気づくこともあり、自分の近い将来やってくるのではないかと期待している。アトピ

皮膚を足がかりにした研究テーマもなるべく取り組んでいー性皮膚炎である自分の利点は、「かゆみ」が解るのみなら

きたいと考えていた。

ず、治療薬の効果や使用感を自分の皮膚を通じて確認出来

今回採択していただいたテーマは、冬場の乾燥時期を中ることである。効果や工夫を患者に直接伝えることで、少心として指先に昔よりも亀裂が生じやすくなっているといしでも治療の向上につなげることが出来るのでは、と信じう「痛くつらい」
想いを起点としており、ステロイド外用剤

ながら今後も日々の診療と研究に取り組んでいきたい。

長期使用によって薄くなった皮膚をいかに評価するか，そ

最後になりましたが、本研究をご支援いただきましたコ

して潤っている皮膚がいかに素晴らしいかを再認識するいスメトロジー研究振興財団及び関係者の皆様に心からお礼

い機会となった。残念ながら、谷崎自身の皮膚は季節を問申し上げます。

わず乾燥し、薄く、現在の治療では容易に回復しないこと− 195 −

（大阪医科大学皮膚科）

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017平成 26 年度

研究助成

線虫と化粧品中台（鹿毛） 枝里子
この度は研究助成を頂きましたこと、心より感謝申し上腺において増殖する性質を持ち、Malassezia 属（マラセチ

げます。貴財団の研究助成に応募致しましたころは、ちょア真菌）の多くは脂質存在下においてのみ増殖が可能です。

うど新天地でテニュアトラック期間が始まったばかりでしこのような菌、真菌については、有効な感染モデル動物がた。少し落ち着いて、さあ研究をバリバリやるぞ、という存在せず、宿主との相互作用について未解決の課題が多く時に助成の決定通知を頂きました。その後新たな細菌感染

残されていました。

実験を開始するにあたり、実験室の改修と居室の分離が必

線虫はわずか 1,000 細胞の単純な多細胞生物ですが、筋要となったのですが、さあお金はどうしよう…。貴財団に肉系、神経系、消化管系など多様な組織から構成されヒト

問い合わせたところ、研究課題の遂行に必要であれば部屋と本質的には共通の生物学的特性を持っており、体表の構の整備費として使用しても良いとの有難いお返事を頂き、造もヒトの皮膚と類似点が多くあります。体表面には、ヒ

無事に研究を進め、成果を得ることができました。PI とし

トの皮脂と同様に中性脂肪やリン脂質、スフィンゴ糖脂質て独り立ちをし始めたばかりで少し心細さや不安もあったなどで構成される脂質層を有しています。本研究から、線頃でしたので、応援してくださる方たちがいることに大変

虫がアクネ菌やマラセチア真菌の代替モデル宿主となる可

励まされました。

能性が提示されました。近年、動物愛護の観点から、哺乳助成を頂きまして、極長鎖脂肪酸含有セラミドの表皮類を用いた動物実験に対するハードルが高くなってきておバリア形成における機能と分子機構の解明に取り組んでり、化粧品業界も例外ではないと思います。線虫は倫理上まいりました。研究のモデルとしては線虫 Caenorhabditisの制約がなく、飼育も簡便で低コスト、また前述のような

elegans（C. elegans）を用いています。ヒト皮膚の角質特徴を有していることからも、代替モデルとして有用であ層に存在する細胞間脂質は感染防御に重要な役割を果ると考えられます。今後、化粧品開発において、線虫研究たすと考えられています。一方でヒト皮膚の常在菌にはの重要性が増していくのではないかと期待しています。

好脂質性、脂質要求性の細菌、真菌が少なくありません。

（大阪市立大学複合先端研究機構）

Propionibacterium acnes（アクネ菌）は皮脂を好み、皮脂

平成 26 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
松﨑伸介

まず、コスメトロジー研究振興財団研究助成を頂きましうになり、我々が対象としていた症状のみならず、美容上たこと感謝申し上げます。本研究助成のおかげをもちましの問題から心の問題へと発展するなど、その重要性をよりて、我々がすすめて参りました『小胞体ストレスの創傷治

考えるようになりました。昨今、男女問わず美容に対する癒機構への影響』についての論文を国際誌 PLoSONE に掲

意識・重要性が高まっており、医療を進めていく中で美容載することが出来ましたことご報告申し上げます。

上の問題は切り離せないと考えております。今後は、本研

我々の研究グループは、以前より、創傷治癒機構につい究を通して得られた知見をもとに “皮膚創傷・損傷にいかての研究を進めて参りました。ケロイド・肥厚性瘢痕では、に傷跡を残さずに治癒させることができるのか”、とりわ

その領域の疼痛・掻痒、時には皮膚の硬化によるひきつれ

け美容上問題となる “ケロイド組織等をどの様に予防する感のため運動機能への問題が生じます。これまでは、これのか”、についての研究を推進し、コスメトロジー研究領ら症状を改善することを念頭に置いて研究を進めて参りま

域の発展に微力ながらご助力できるようつとめて参りたいした。これら研究の経緯で貴財団より研究助成頂き、創傷と考えております。

治癒研究が美容にもたらす影響についてより深く考えるよ− 196 −

（和歌山県立医科大学薬理学講座）

コスメトロジー研究雑感

平成 26 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
東照二

私たちは日常的に「香り」
をどのように言語化し、他者にき手が共同で行うものである、というダイナミックな言語

伝え、コミュニケーションを行っているのかというトピッ

観もあります。そして、特に、この後者の言語観を検証す

クには、ずっと前から興味を持っていました。一般的には、るために、「香り」のことばの研究はとても有効な分野にな話者が何かの物理的な「香り」と呼ばれるものに反応し、脳ると思いました。さらに、人間の香りへの反応は、物理的、を通じて、それをことばという信号に置き換えて、発話し、生理的なものであるだけでなく、極めて文化的、社会的な聞き手に伝え（ようとす）
るということになると思います。

ものでもあると考えると、今後ますます社会言語学的な研しかしながら、別な言語観として、発話されたことばが意究の宝庫になるのがコスメトロジーではないか、と考える

味を作るのは、聞き手の参加を得て初めてなされるものでに至りました。今回のコスメトロジー研究振興財団からのあること、さらに、そもそもことばの意味作りとは、話者

研究助成に深く感謝いたします。（ユタ大学言語文化学部）だけ、あるいは聞き手だけが行うものではなく、話者と聞

平成 26 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
大川真由子

これまで 20 年近く中東のオマーンをフィールドに人類ころが現地の女性は、イスラーム法を「柔軟に」解釈しつつ、学的調査をおこなってきたが、化粧品というテーマは数年こまめに眉毛を手入れし、まつ毛のエクステも一般的、最前に始めたばかりの新しいテーマである。もともと美容に

近はマニキュアをする女性も増えている。その様子は日本

は個人的な関心はあったものの、それを研究テーマにするの女性となんら変わりはない。

とは考えてもみなかった。中東・イスラーム研究という自

ただ、この研究を始めて以来、まだ一度も現地でハラー分の専門と、美容という個人的な趣味が合致したのが今回

ル化粧品を目にしていない。ハラール先進国であるマレー

取り上げた「ハラール化粧品」
である。折しも、イスラーム

シアでは認知されつつあることから、中東、とくに裕福な研究においては「ハラール」がブームとなっていたが、ハラ湾岸諸国にハラール化粧品が普及するのも時間の問題だとール製品のなかでもハラール化粧品研究は日本において手考えていた。「湾岸にもハラール化粧品が来る！」とさまざ付けずの状態だったのである。

まな研究会で豪語したのが 4 年ほど前。ところがわたしの

趣味と実益
（研究）
を兼ねている美容の調査は楽しかった。

予想に反して、オマーンにいまだその気配はない。わたし

オマーンは敬虔なイスラーム教徒が多く、女性は美容行為

は「狼少年」になってしまうのだろうか。そうならないよう、

1 つとってもそれがイスラーム的に合法か否かを気にする。

今後ともハラール化粧品の動向を見守っていきたい。

「結婚前に眉毛を整えるのは？」「まつ毛のエクステは？」最後に、本研究を遂行するために研究助成のご支援を頂「マニキュアを塗るのは？」などなど。厳格なイスラーム法

きましたコスメトロジー研究振興財団に心より感謝申し上

学者であれば、これらの美容行為はすべて禁止である。とげます。

− 197 −

（神奈川大学外国語学部）

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017平成 26 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
荻あや子

平成 26 年 12 月に，第 25 回公益財団法人コスメトロジ

ことが分かりました。また，同様のことが看護学教育の現ー研究振興財団研究助成費の採択のご連絡をいただき，約場にも見られましたので，改善するための方法を見出す手

2 年間をかけて研究課題を終えることができましたことにがかりにしたいと本研究に取り組みました。

心より感謝申し上げます。

本調査は，看護師だけでなく，患者やその家族の方々に

本研究の始まりは，大学生を対象に自分自身が患者であも協力依頼が必要になりましたので，倫理的な手続きも含めると想定し , 看護師にどのような化粧が好まれるかを，学て，本格的な調査を開始するまでに時間を要しました。2 施部生とともに調査をしたことでした。医療現場において看設の関係者には多大なご協力をいただき，貴重なデータを護師は常に人の生命と向き合っており，高度な専門知識や収集することができました。心より御礼申し上げます。今回

看護技術と，人間関係を確立するために看護実践能力を必の研究目的は，患者や家族，看護師の化粧に対する認識を要とされます。そのため，看護師の立ち居振る舞いが凛と明らかにすることでありましたが，医療現場で働く看護師が，して美しく，しなやかな物腰で対応することができれば ,好ましい化粧を施すことにより看護師自身の働く意識を高め，病に苦しむ患者やその家族の方々の健康の回復に何か影響

看護という仕事に自信をもって，質の高い看護ケアを提供すを及ぼすことができるのではないかと考えました。調査結ることができれば，患者や家族にもよりよい影響を齎すこと

果を学会で発表しましたところ，医療現場では，華美な化ができると考えます。真の看護専門職者としての品行を兼ね粧で働く看護師に対して，根拠をもって納得できる説明が備え，社会から期待される看護師の育成を目指していきたい

できないために，現状を改善することが困難な状況であると思います。

（愛知県立大学看護学部看護研究科）

平成 26 年度

研究助成

女子青年における化粧の意味髙坂康雅

普段化粧をすることのない私にとって，身近な女性であ

結果は研究報告書に示した通り，化粧をする理由によっる妻や女子学生が毎朝化粧をし，夜になると化粧を落とすて，劣等感を高める場合もあれば，低減させる場合もあるという一連の作業をしていることに，なんと労力がかかることが明らかとなった。単に化粧をすればよいというもの

作業をしているのだろう，なんのためにこのような作業をではなく，誰に向けて（何のために）化粧をするのかというしているのだろうと，漠然とした関心を抱いていた。確か

意識が重要であることを示すことができたと考えている。

に化粧をすることによって見た目は変化するが，それは見数量的には，確かにこのような結果が得られたのだが，こた目だけではなく，心理的なもの―本研究では劣等感―にの結果を学会や研究会で報告すると，女性から異論を出さも関わっているのではないかと思っていたが，なかなかそれることが少なくない。目を強調するメイクを一生懸命しれを検証した研究もなく，化粧とは縁遠い私が研究にとりている学生に対して，そのような目を強調するメイクをすかかるきっかけもなかった。

るとかえって劣等感は高まると伝えても，あまりピンとこ

今回，コスメトロジー研究振興財団に，この私の漠然とした関心にもとづいた研究計画を採択していただいたことない様子も見られる。ここが数量的な検討の限界なのかもしれない。

は，化粧をすることが容姿に対する劣等感にどのような効

化粧には多義的・複層的な意義・影響があると考えられ果をもたらしているのかについて，実証的な検討をする機る。今後は劣等感を中心に，そのような多義的・複層的な会となった。そのような機会をいただけたことを，改めて化粧の意義・影響をさらに検討していけたらと考えている。

心から感謝申し上げる。

（和光大学）− 198 −

コスメトロジー研究雑感

平成 26 年度

研究助成

経営学・マーケティングと化粧品販売チャネルの研究
佐々木一郎

このたびは、コスメトロジー研究振興財団より大変貴重

ネル選択の決定要因を定量的に分析することができました。

な研究助成を頂き、心より感謝申し上げます。私は現在、

今後は、消費者の化粧品購買行動に関する Web アンケ

経営学・マーケティングの視点から、化粧品販売チャネルート調査を引き続き実施し、ネット・通販チャネルとリアと消費者行動の研究を進めております。化粧品の販売チャ

ル店舗の相互作用の分析を深めていきたいと考えておりま

ネルには、ドラッグストア、デパート、インターネットシ

す。デパートなどのリアル店舗での購買経験や情報収集がョッピング、通信販売、専門店、訪問販売など、さまざま

ネット・通販チャネル購買に及ぼす影響や、逆に、通販チなチャネルがあります。便利なネット・通販や化粧品情報

ャネルでの購買経験がリアル店舗での購買に及ぼす影響のサイトの拡大、社会経済環境の大きな変化のもとで、化粧分析です。また、化粧品会社が、リアル店舗での消費者と、品の販売チャネルについては、ネット・通販チャネルの占ネット・通販チャネルでの消費者と、どのようにコミュニめる割合が増加してきています。

ケーションをはかり自社のブランドを確立していくべきか

なぜ、ネット・通販チャネルが増加しているのかをめぐり、社会経済的要因や化粧品購買要因や美の評価などを同時にコントロールした定量的研究の蓄積は、十分ではありません。今回の研究助成を頂くことで、調査データから、など、費用対効果分析も含めた最適な販売チャネル管理のあり方も研究していきたいと考えております。
末尾になりましたが、コスメトロジー研究振興財団のますますのご発展を心より祈念申し上げます。

日本、中国、イギリスの 3 か国におけるネット・通販チャ（同志社大学商学部）

平成 27 年度

研究助成

化粧と触覚

野々村

美宗

化粧品の研究を始めて 20 年たった。特に化粧に興味が今回は、ヒトの触覚をセンシングするシステムに関するあったわけではなく、会社に入って配属されたのが化粧品研究で採択していただき、心から感謝している。
「さらさら」の商品開発をする研究所だっただけなのだけれど、大学にとか「べたべた」とか「しっとり」とか、ヒトはがいろいろな移ってもまだ続けているということは、性に合っているの感覚を感じて生きていることは確実なのだけれど、これらだろう。最近は他の分野の企業や研究者とのコラボレーシの感覚がどのようにして生まれるのか、物理的な理解はまョンも多くなってきたけれど、化粧品業界には、根が明るだされていない。まだまだ先は長いけれど、ひとが世界をく楽観的なひとが多いようだ。ひとを清潔に、美しくし、鮮やかに感じ取るメカニズムを明らかにすることで、少し時に楽しませることを考えて過ごしていると、性格も前向

でもコスメの世界に役に立てるように、研究を続けていききになるのかもしれない。

たい。

− 199 −

（山形大学大学院理工学研究科）

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017平成 26 年度

研究助成

「美」
に関する表現の魅力、歴史、そして、研究
広瀬

英史

私は「ことばと文化」
や「ことばと人間」の関わりについてとりあげるのも 1 つの方法です。CF は、音楽、映像、そ興味を持ってきましたし、現在もそれは変わりません。言して言葉などによって複合的に解釈されます。それでも、語研究に携わる者として、私が目指すのは、日本語自体の流行のことばや魅惑的な言語表現は、CF から離れて、こ仕組み（特に語彙の構造）の解明と、言語分析による文化研とばだけで多くの人々へと拡散されていきます。

究です。前者は言語研究そのものです。一方、後者は、言今回、助成金を受け、何度もアド・ミュージアムに足を語研究の範疇を超え、言語研究でのアプローチに限界を感運び、引札をはじめ広告の発祥に触れ、また、KOSE と資じることもあります。文化研究とはそもそも複合的な視野

生堂の CF を何度も繰り返し見る機会に恵まれました。月

（多分野の視点）を必須とするのでしょう。ただ、それでも並みな表現ですが、美に歴史があり、それをどうにか表現文化研究をする上で、言語からのアプローチに拘るのは、しようとしてきたクリエーター達の苦心した業績を経年的

私が言語研究に携わる者であるという理由だけでなく、「こに見てきました。この歴史を何とか表現したいという気持

とばそのものも文化」だという事実があるからです。文化ちです。まだまだ、試行錯誤の段階ですが、「美に関するを研究するにあたって歴史の記述が必須です。文化研究＝表現」をはじめ、その他の訴求表現について引きつづき研

歴史研究だともいえます。そして、ことばの担い手は人間究していきたいと思います。

であるし、社会です。ことばを通じた文化研究の命題を具最後になりましたが、本研究をご支援いただきましたコ

体的に示すならば、ことばがどのように社会
（生活）
の中で

スメトロジー研究振興財団に心からお礼申し上げます。ま機能しているのか、また、ことばがたとえばある時代にどた、本研究に際し、コーセーの CM 集（DVD）を閲覧させのように人々に影響を与えていたのかです。

ていただきました。株式会社コーセー 宣伝部 宣伝制作課

私は訴求表現に目を付けたというより、従来から魅了

青木瞳氏、研究企画室 研究企画 U 石塚由紀子氏をはじめ、されておりました。特に、CM や広告の表現は魅力的です。

株式会社コーセーの皆様には大変お世話になりました。ま

これらの表現を、客観的に、どう位置付け、そこから、どた、資生堂アートハウス・資生堂企業資料館関係者の皆様のように表現史として記述するかといった研究方法の確立

や、アド・ミュージアム東京の図書館の皆様には、CM やは容易ではありません。ある CF をとりあげ評論すること

広告資料に関してご助言いただきました。心より感謝申しは可能です。好きな CF や記憶に残る CF などの調査から上げます。（静岡文化芸術大学文化政策学部国際文化学科）

平成 26 年度

研究助成

化粧をしていると自分に自信が持てる？
藤原寿理

このたびはコスメトロジー研究振興財団の研究助成に採はあります。一方で面倒という気持ちもあります。人前に択いただき、誠にありがとうございました。私はヒトの意

出る必要のない時は化粧をすることはありません。本研究

思決定、価値表現が非常に曖昧で揺らぎやすいことに興味を通して、20 代前半の女子学生にさまざまな意見を伺いがあります。テーマとしては日常生活で自らが感じることました。化粧は面倒だがしていないと人に会うことが恥ずについて扱いたいと考え、常に研究のアンテナを立てて過かしい。化粧をしていると華やかで楽しい気持ちになる。

ごしています。本研究テーマもそういった背景から生じま

雑誌等で化粧の勉強をすることが楽しい。マナーの一つでした。

ある。など、私と似た思いを抱いている方が多かった印象

私は日頃化粧をするように心がけておりますが、それはでした。このような意見からも、化粧という外的な刺激が、どうしてかと言われるとよく分かりません。自分の外見にヒトの内面にいかに影響を与えるかが伺えました。本研究

自信などありませんから少しでもよく見せたいという思いの結果から、予想通り化粧がその人の内面にポジティブな− 200 −

コスメトロジー研究雑感

影響を及ぼすことが示されました。直接的にアプローチしとで化粧の意義に説得力を与えることができたと感じます。

た質問紙法ではもちろんのこと、本研究で新しく試みた、本研究を遂行できたのも、コスメトロジー研究振興財団が自己の判断に対する自信度を計測するメタ認知的アプロー

化粧に関する研究を化学的・分子生物学的側面だけでなくチにおいても化粧によるポジティブな効果を示すことが出精神・文化的側面までサポートしてくださったおかげだと来たのは非常に重要な成果だったと思います。これまで漠強く思います。心より御礼申し上げます。
（福島県立医科大学医学部システム神経科学講座）

然と受け入れられてきた、化粧をすることで自分に自信が持てるという考えに対してその根拠となるデータを示すこ

平成 28 年度

国際交流助成国際交流とコスメトロジーとの結びつき
小島 秀明
肇
住吉

アジアにおける動物実験代替法の促進と連携強化、動という規制は世界各国に広がりつつある。日本においても、

物実験の３Rs の普及および推進をより確かなものにする

多くの化粧品企業が動物実験を中止しており、自主基準とために、2016 年 11 月 15 ～ 18 日に唐津市、福岡市で日本はいえ、化粧品の安全性確保への懸念が心配されている。

動物実験代替法学会第 29 回大会と合同で開催された The

一方で、医薬部外品の薬用化粧品の許認可の妨げになりつ

Asian Congress on Alternatives and Animal Use in the

つある。今回の会議が、国際交流の場となり、アジアでのLife Sciences  2016（Asian Congress 2016）には、国内外経済活動を活発にするとともに、日本の行政への情報発信から 450 名を超える参加者があった。海外だけでも、中国となり、日本の化粧品規制において動物実験代替法の利用や韓国等 18 の国と地域から約 70 名の参加があり、大変盛を促す切っ掛けになったと確信している。

会な会議となった。基調講演等に加え、参加者の専門性毎

なお、本会を開催するにあたり、多大なる支援を頂いたに、国際動向、化粧品、化学物質、生物材料（ワクチンなど）、

コスメトロジー研究振興財団、Humane Society International

若手研究者、将来展望などの６つのキーワードに準じたセ（HSI）およびジャパン・コスメティックセンター（JCC）を初ッションが開催されたが、その中でも、もっとも参加者のめとする賛助企業および団体の皆様に、この場をお借りし多かったセッションは「化粧品規制と動物実験代替法」であて感謝の意を表したい。

る。フランス、中国、韓国、インド、タイ、日本の演者が（日本動物実験代替法学会会長／国立医薬品食品衛生研究

各国の化粧品規制とそれに関係する動物実験代替法の状況

所生物試験研究センター安全性予測評価部室長／日本動物について講演し、実りあるセッションとなった。

実験代替法評価センター事務局長）

2013 年に欧州で始まった化粧品開発に動物を用いない− 201 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017平成 28 年度

国際交流助成第 67 回コロイドおよび界面化学討論会での国際シンポジウムを終えて石田

日本化学会・コロイドおよび界面化学部会では、以前か

尚之科大）とともに基調講演を務めていただきました。

らオーストララリアと強い研究上の結びつきがあります。

このようにほとんど手探りでの準備でしたので、海外かまた、近年台湾との研究交流も活発化しています。部会でらどのくらい人が集まるかは大変に不安でした。しかし幸はこのようなオセアニア・アジア地域の国際交流をさらにいにも、オーストラリア・台湾を中心としたアジアの国々、

発展することを目指して、第 67 回コロイドおよび界面化

さらにドイツなど欧州を含めた 10 カ国から、予想をはる

学討論会（平成 28 年 9 月 22 〜 24 日・北海道教育大学旭川校）

かに上回る申込みがありました。日本からも多数の参加がにおいて、海外から参加者を広く集めた国際シンポジウムあり、当初 1 会場の予定を 2 会場に分けなければならない

を開催しました。部会国際交流委員会の出口茂委員長（海ほどでした。これはオーガナイザーの熱意や上記のような洋機構）と米澤徹委員（北大）がオーガナイザーとなり、筆集客の工夫に加え、何より北海道、旭川という土地の魅力者を事務局として準備を行ないました。

のなせる業だったのではないでしょうか。3 日間を通して、

しかし、通常の討論会ではこのような国際シンポジウム

6 名の先生の基調講演はもとより、一般講演も素晴らしいを行うことはほとんどありませんので、専用 HP を独自に発表と熱のこもった討論が展開され、非常に活気のあるシ作成したり、国際学会並みに参加費のクレジットカード

ンポジウムになりました。

払いに対応したり、海外の学会に参加される先生方にフ学会が終わった 3 日目夜には国際シンポジウムの懇親会

ライヤーを配っていただくなど、普段と異なる様々な工夫が開かれ、参加者同士の交流が和やかに行われました。さが必要でした。また、前年にオーストラリアと台湾の主らにその翌日には旭岳へのエクスカーションも行い、晴天

催学会で日本人研究者を基調講演者として招待していたの中、紅葉の見頃を迎えた絶景を楽しむことができました。

だいた「返礼」に、気鋭の研究者として台湾から Tai-Chou

参加者からも多くの満足の声が聞かれ、お陰さまで成功とLee 先 生（National Central University）、Ling Chao 先 生

言えるシンポジウムとなったかと思います。

（National Taiwan University）、De-Hao Tsai 先生（National

最後になりますが、コスメトロジー研究振興財団の国際Tsing Hua University）、オーストラリアから Chiara Neto

交流助成をいただけましたことに、改めて深く感謝申し上

先 生（The University of Sydney）、Sally Gras 先 生（The

げたいと思います。

University of Melbourne）をコスメトロジー研究振興財団（第 67 回コロイドおよび界面化学討論会・国際シンポジウの国際交流助成にて招待し、日本の近藤行成先生（東京理ム事務局／岡山大学大学院自然科学研究科）

平成 28 年度

学術集会支援助成

第 21 回天然薬物の開発と応用シンポジウムを終えて石橋

正己

このたび，コスメトロジー研究振興財団の学術集会支援

年ごとに開催されてきた伝統あるシンポジウムであり，今助成を受け，平成 28 年 10 月 27 日・28 日の 2 日間にわた回で第 21 回目の開催となります．平成 18 年 4 月に日本薬って，千葉市の千葉大学薬学部 120 周年記念講堂において，学会に生薬天然物部会が新設されたのに伴い，部会主催シ

第 21 回天然薬物の開発と応用シンポジウムを開催させてンポジウム「天然薬物の開発と応用シンポジウム」として位いただきました．

置づけられ，同じく部会主催シンポジウムとなった「食品本シンポジウムは，日本薬学会の生薬・天然物化学関連

薬学シンポジウム」と交互に開催されているものです．

分野の先生方を中心に立ち上げられたもので，和漢生薬を

天然薬用資源からの美白効果等の香粧品（コスメトロジ

始め，薬用植物・微生物・海洋生物などから見出された医ー）や創薬に関する研究の歴史は古く，現在用いられてい薬シーズとしての生物活性物質からの創薬をめざして，隔る香粧品や医薬品の中には，天然物あるいはその誘導体，− 202 −

コスメトロジー研究雑感

または天然物関連の化学構造をもつ合成化合物など，天然

例年を上回る人数の参加があり，今回のシンポジウムが天物に関連しているものが大きな割合を占めています．今回

然薬物およびコスメトロジー関連分野の活性化と発展に寄のシンポジウムでは，「天然物ケミカルバイオロジー」お与する有意義な討論の機会となったことが実感され，2 日

よび「カティングエッジ生薬学」という 2 つのテーマを掲げ，間のシンポジウムを成功裏に終えることができました．

各々特別講演１題とシンポジウム講演 4 題が発表されまし

最後にご支援を賜ったコスメトロジー研究振興財団にあた．また一般講演およびポスター発表では，生薬シンイのらためて感謝申し上げます．

メラニン生成抑制成分などの美白剤に関する研究を始めと（千葉大学大学院薬学研究院活性構造化学／

して，種々の薬用資源から見出された香粧品および医薬シ

第 21 回天然薬物の開発と応用シンポジウム実行委員会委員長）

ーズ等に関する最先端の研究が発表されました．全国から平成 28 年度

学術集会支援助成

第 16 回美容口腔管理学会学術講演会を終えて金子潤

平成 28 年 11 月 5 ～ 6 日の 2 日間にわたり、幕張国際研しました。教育講演では、東京医科歯科大学大学院の大槻修センター（千葉市美浜区）において第 16 回美容口腔管理

昌幸先生に研究者の立場から、東京都中央区でご開業の北学会学術講演会が、公益財団法人コスメトロジー研究振興

原信也先生に臨床医の立場から、それぞれ歯科ホワイト財団の学術集会支援助成を受けて開催されました。無事にニングに関する最近のトピックスをご紹介いただきました。

学会が終了できましたことを、関係各位に感謝申し上げる

特別講演では、神奈川歯科大学大学院の飯塚純子先生に
「ホ

次第です。

ワイトニングを利用した審美的再石灰化へのアプローチ」

美容口腔管理学会（Academy of Cosmetic Oral Care）は、と題したご講演をいただきました。初期う蝕病巣体部に侵主に歯科医師、歯科衛生士、歯科関連企業、その他の歯科入してエナメル質の再石灰化の進行を妨げている唾液タン

医療関係者で構成される学術団体で、2001 年に設立されパク質を、ホワイトニング処置によって変性・除去し再石ました。永続的に美しくなりたいと願う患者／クライアン

灰化を亢進させる可能性について、一連の研究成果と今後トの要望にエビデンスをもってアプローチするために、年の展望とともにご紹介くださり、大変興味深い内容でした。

次学術大会や講習会、学会誌等を通じて多くの臨床的な調また、一般講演およびシンポジウムにおいても、参加者の査結果を整理・統合することを目的としています。なかで活発な討論の場を提供できたのではないかと思っておりまも、目に見える Cosmetic Oral Care である「歯のホワイト

す。

ニング（Tooth Whitening）」と、目には見えない Cosmetic

今回の学術講演会での成果を今後の歯科臨床に活かして

Oral Care である「口臭予防（Anti-halitosis）」を本学会の 2

いくとともに、学会開催に対してご支援賜った公益財団法

大テーマとして学術活動を展開してきました。

人コスメトロジー研究振興財団にあらためて感謝申し上げ

第 16 回を数える本学術講演会では、大会テーマを『ホワイトニング科学の新たな展開』とし、近年大きな進展を遂る次第です。
（千葉県立保健医療大学健康科学部歯科衛生学科／

げつつあるホワイトニングの歯および口腔への影響に着目− 203 −

第 16 回美容口腔管理学会学術講演会大会長）

●
事業報告書
役

員
●

事業報告書

事業報告書（自平成 28 年 4 月 1 日

至平成 29 年 3 月 31 日）《研究助成関連》
2016

2017

5

9

公募開始

全国 589 の大学、病院、研究機関等へ公募要領及び推薦書を送付、関連学術雑誌 7 誌、当財団 HP 他 3 機関 HP に掲載
7 11
公募締切り
応募総数104件
7/15 〜 8/26
各選考委員による個別審査
9
5
選考委員会
（第３分科会） 精神、文化に関する分野の選考
9
8
選考委員会
（第２分科会） 生体作用、安全性に関する分野の選考
9 13
選考委員会
（第１分科会） 素材、物性に関する分野の選考
9 29
本選考委員会
各分科会の結果を総合的に判断して研究助成32課題を選考
11 22
理事会
本選考委員会より答申、助成課題決定
第27回 表彰・贈呈式
研究助成対象32課題の代表者へ、助成金贈呈書、目録等を授与
記念講演
演題：顔 ── その魅力の内側 美術解剖学的視点から
講演者：宮永 美知代 先生 東京藝術大学美術学部 助教
12 11
助成金交付
採択課題に対し研究助成金を交付 総額3 , 0 0 0 万円
2 20
選考委員への承認（書面） 2017年度研究助成公募要領他《国際交流助成関連》
2016

6
7
8
8

22
25
8
25

審査
助成金交付
審査
助成金交付

国際交流（招聘）： アジア動物実験代替法会議2016の審査
国際交流助成金の交付 50万円
国際交流（招聘）： 第67回コロイドおよび界面化学討論会の審査
国際交流助成金の交付 50万円

《学術集会支援助成関連》
2016

4
4
5
5

6
25
18
31

審査
助成金交付
審査
助成金交付

学術集会支援 ： 第21回天然薬物の開発と応用シンポジウムの審査
学術集会支援助成金の交付 50万円
学術集会支援 ： 第16回美容口腔管理学会学術講演会の審査
学術集会支援助成金の交付 50万円

平成27年度事業報告及び収支決算報告の承認、任期満了に伴う選考委
員の選任、任期満了に伴う理事候補者の選出、経理規定の一部改定の承認、公印取扱内規策定の承認、選考委員会規則第12条（審査謝金等）の一部改定の承認、株主としての議決権行使の承認、報告事項
新理事体制における代表理事等の互選並びに関連事項の承認
平成28年 9 月29日開催の選考委員会決定内容の承認
平成28年度収支予算書の一部変更の承認、平成28年度（第27回）研究
助成者等の承認、平成29年度の事業計画及び予算案の承認、報告事項《理事会関連》
2016

5

26

第一回通常理事会

6
10
11

5
6
22

理事への承認（書面）
理事への承認（書面）
第二回通常理事会《評議員会関連》
2016

6

10

11

25

定時評議員会

平成27年度事業報告及び収支決算報告の承認、任期満了に伴う理事の選任、報告事項
評議員への報告（書面） 第二回通常理事会議決事項、第27回表彰･贈呈式の報告− 207 −

コスメトロジー研究報告Vol.25, 2017

《その他》
1）報告書発行
2016
5
1
中間報告書
9
1
完了報告書
2）情報公開（当財団HP）
2016
4
8
公募要領
6 30
事業報告及び収支決算
新役員
9
1
研究報告書

2017

11

24

2

1

予算書一部修正
研究助成者及び課題名
研究報告書

3

1

事業計画及び収支予算

研究業績 中間報告集 第25号
コスメトロジー研究報告 Vol. 24（2016）、CD版を作成
2016年度「コスメトロジー研究」公募要領を掲載
平成27年度事業報告書及び収支決算報告書を掲載
新役員等を掲載
コスメトロジー研究報告 Vol. 14（2006）から最新号までの全文pdfを掲載
平成28年度予算書の一部修正
平成28年度研究助成者名及び研究課題名を掲載
研究報告 Vol. 1（1993）からVol. 13（2005）までの全文pdfを追加掲載
研究報告書（創刊号～最新号）の全文検索システムを稼動
平成29年度事業計画及び収支予算書等を掲載− 208 −

事業報告書2016 年度助成を受けられた方々
１）研究助成（32 名）
第 1 分野：素材、物性に関する分野（13 名）
氏

名

所

朝倉

浩一

川下

属

職位

研究課題

慶應義塾大学理工学部応用化学科教授

サンスクリーン剤の紫外線防御能を普く正確に in vitro 評価する
測定方法の確立将一

東北大学大学院医工学研究科

准教授

抗菌性と生体適合性を併せ示す生糸織物の開発

黒岩崇

東京都市大学工学部
エネルギー化学科

准教授

リン脂質を主成分とする巨大分子集合体の構造発色性を利用した
新規化粧品素材の開発

小出隆規

早稲田大学先進理工学部教授

特異的に生体コラーゲンに結合するペプチドの分子設計・合成と
応用

相良

剛光

北海道大学電子科学研究所

助教

化粧品の評価・開発に資する微小な力を検知する水溶性の分子集
合体の開発

菅

恵嗣

大阪大学大学院基礎工学研究科
物質創成専攻助教

抗酸化物質から成るCubosomeの開発およびミクロ・メソ・マク
ロ特性の評価津田明彦

神戸大学大学院理学研究科

准教授

渦のねじれ流によるコラーゲンナノファイバーの形成制御と形態
変換

深水

啓朗

明治薬科大学教授

顕微ラマン分光法を用いた皮膚角質層の評価法および透過性スクリーニング法の構築

古海誓一

東京理科大学理学部第一部
応用化学科

准教授

カラフルな反射色を永続的に維持できるセルロース誘導体の創製

増原陽人

山形大学大学院理工学研究科准教授

アミノ化合物によるナノ結晶（粒子）の成長抑制技術の開発

森直

大阪大学大学院工学研究科

准教授

マイコスポリン様アミノ酸誘導体の電荷共鳴吸収を基盤とする新規天然由来サンスクリーン材料

森田洋行

富山大学和漢医薬学総合研究所
天然物科学分野

教授

ミャンマー産ハーブの美肌効果の検証と美肌成分の解析

山田

純

芝浦工業大学工学部機械工学科教授

メーキャップ化粧品の光学的機能評価に向けた人工皮膚の開発

職位

研究課題

第２分野：生体作用、安全性に関する分野（14 名）
氏

名

所

属

今江理恵子

東京大学大学院薬学系研究科

助教

ホスファチジルイノシトールの特徴的脂肪酸組成の皮膚恒常性における役割の解析

岩渕徳郎

東京工科大学応用生物学部
先端化粧品コース教授

女性頭髪における休止期－成長期移行シグナルメカニズムのinvitro 解析系の構築

近藤嘉高

東京都健康長寿医療センター
研究所

研究員

ヒト培養表皮におけるアスコルビン酸の経皮吸収および紫外線
UVBによる細胞障害に対する予防、回復効果の検討

神人正寿

熊本大学大学院生命科学研究部
皮膚病態治療再建学

准教授

皮膚老化におけるエキソソームの働きの解明と治療応用の可能性
の検討

高橋

勇人

慶應義塾大学医学部皮膚科

専任講師

皮膚における自己反応性CD4+T細胞による標的抗原認識機構の
解明

武富

芳隆

東京都医学総合研究所
生体分子先端研究分野

主席
研究員

皮膚制御に関わる新規機能性脂質の同定と脂質フローによる皮膚疾患調節機構の解明− 209 −

コスメトロジー研究報告Vol.25, 2017

氏

名

所

属

職位

研究課題

中山

文明

放射線医学総合研究所
放射線障害治療研究部

原雄二

京都大学大学院工学研究科

准教授

皮膚組織修復におけるリン脂質局在制御機構の役割

日沼

州司

千里金蘭大学生活科学部
食物栄養学科

教授

細胞生存促進効果を有する糖内包化リポソームのアンチエージン
グ化粧品への応用

廣明

秀一

名古屋大学大学院
創薬科学研究科教授

構造情報を利用したタイトジャンクション増強剤の実用的な化合物への骨格転換福田智一

岩手大学理工学部
化学・生命理工学科

教授

刺激性試験のための元の性質を維持しながら無限分裂するヒト角膜上皮細胞の作成

藤枝伸宇

大阪大学大学院工学研究科
生命先端工学専攻

助教

チロシナーゼと基質複合体結晶構造に基づいた反応機構の解明

柳輝希

北海道大学大学院医学研究科
皮膚科学分野

特任助教

紫外線曝露による皮膚老化・発癌においてミトコンドリア関連分子が果たす役割を解明する

渡利彰浩

大阪大学大学院薬学研究科
生体機能分子化学分野

助教

チーム
増殖因子による毛包休止期制御機構の解明
リーダー

表皮バリア機構に立脚した新規経皮吸収促進法の開発

第３分野：精神、文化に関する分野（５名）
氏

名

伊藤

文人

四角
谿

職位

研究課題

東北福祉大学感性福祉研究所

特任講師

他者からの評価を推論するメカニズムがその人物に対する選好の形成に与える影響

隆二

岡山市立オリエント美術館

副主査
学芸員

サーサーン・ガラス成立の背景～ユーフラテス川以東へ流入した
地中海周辺地域の化粧文化を探る雄祐

関西学院大学理工学部
人間システム工学科

西尾美登里

福岡大学医学部看護学科

助手

男性介護者の妻・母へのスキンケアと化粧意識と介護者役割受容に関する研究同志社大学研究開発推進機構

准教授

香りの記憶形成・固定化メカニズムの解明

眞部

寛之

所

属

研究特別
任期制 肌の魅力に関する意識構造の年代間、性別間比較
講師

２）国際交流助成（２件）
受入責任者

招聘者

目

的

国立医薬品食品 Founder and Managing Director, Orange アジア動物実験代替法会議2016
衛生研究所
House Partnership, Itary
基調講演
Herman B. W. M. Koetër
小島 肇（平成28年11月15日～ 18日、唐津市民会館および九州大学）
The University of Sydney, Australia
Chiara Neto
The University of Melbourne, Australia
岡山大学大学院 Sally Gras
自然科学研究科 National Taiwan University, Taiwan
Ling Chao
准教授
National Tsing Hua University, Taiwan
石田 尚之
De-Hao TsaiNational Central University, Taiwan
Tai-Chou Lee

第67回コロイドおよび界面化学討論会
国際シンポジウム
基調講演（平成28年9月22日～ 24日、北海道教育大学旭川校および旭川市民文化会館）− 210 −

事業報告書３）学術集会支援助成（１件）
実施責任者
石橋

正巳

金子

潤

所

属

職位

集会名

千葉大学大学院薬学研究院

教授

第21回天然薬物の開発と応用シンポジウム（平成28年10月27日～ 28日、千葉大学）

千葉県立保健医療大学准教授

第16回美容口腔管理学会学術講演会（平成28年11月5日～ 6日、幕張国際研修センター）− 211 −

コスメトロジー研究報告Vol.25, 2017

役

員2017 年 4 月 1 日現在

理事長

小林

保清

株式会社コーセー

名誉会長

副理事長

小林

一俊

株式会社コーセー

代表取締役社長

専務理事

土子

利明

（常勤）

理

事

宇佐美昭次

早稲田大学

理

事

関根

茂

日光ケミカルズ株式会社

理

事

二木

鋭雄

東京大学

理

事

西川

武二

慶應義塾大学

理

事

野呂

影勇

早稲田大学

理

事

廣部

雅昭

東京大学

理

事

山㟢

幹夫

元新潟薬科大学

監

事

小田倉正典

公認会計士

監

事

村上

實

弁護士

評議員会長

内藤

昇

株式会社コーセー

評議員

伊藤

正俊

評議員

齊藤

勲

元厚生省大臣官房審議官

評議員

仙名

保

慶應義塾大学

評議員

中村

陽子

評議員

西岡

清

評議員

花輪

隆昭

元昭和館

評議員

原田

敬之

東京女子医科大学

評議員

宮㟢

榮三

東京工業大学

東邦大学

名誉教授
取締役会長

名誉教授
名誉教授
名誉教授
名誉教授
学長

常務取締役

名誉教授
名誉教授

元厚生省医薬安全局安全対策課安全対策企画官
東京医科歯科大学

名誉教授

館長
名誉教授

名誉教授

− 212 −

＊本財団についてのお問い合わせは下記にお願いいたします。

公益財団法人 コスメトロジー研究振興財団〒 104 — 0032

東京都中央区八丁堀三丁目 11 番８号
ニチト八丁堀ビル五階
電話 03（3206）7721

コスメトロジー研究報告

Vol. 25／2017

非売品

2017年９月１日発行

編集責任者
発
行
制

作

印

刷

土子 利明
公益財団法人 コスメトロジー研究振興財団〒104−0032 東京都中央区八丁堀三丁目11番８号
電話 03（3206）7721
エイエム企画〒171−0014 東京都豊島区池袋四丁目24番７号
電話 03（3590）5375
太陽印刷工業

表紙デザイン監修：株式会社コーセーⒸ2017

商品デザイン部デザイン室不許複製

禁無断転載