ごあいさつ
このたび、当財団として第 17 巻の研究報告書を刊行いたしました。小林孝三
郎が 1990 年にコスメトロジー財団を設立して以来、化粧品科学に貢献する多くの研究に対する助成活動等を行ってまいりました。私たちの財団の活動がきっかけとなって、人の美しさや、健康の面でも、また精神的な面でも人間の豊かさが実現されていくこととなれば、これほど嬉しいことはありません。多くの関係者の皆様のご理解とご協力に改めて感謝申し上げる次第でございます。
今回の報告書では平成 18 ～ 19 年度に助成を受けられた方の中から 26 名の方の研究成果を掲載いたしました。
ご一読いただければわかりますように、先端素材開発、老化メカニズムの解明、素材分野と生体作用分野の連携テーマ、ヒトのこころと化粧の関係などの優れた研究が数多くみられ、コスメトロジーの進化が明らかにみえるようです。特に有用性に関わるテーマにおきましては、皮膚科学、工学、心理学、社会学の観点か
ら多くのアプローチがなされ、化粧に関わる現象の解明に向け独創性のある知見が得られております。
今後も老化防止や QOL などをキーワードとして複数分野の融合研究が盛んになってくるかと予測されます。ひとつひとつの研究が科学技術の潮流においてもライフサイエンスの進化や生活向上、健康増進に寄与する可能性があるのではな
いかと考えております。当財団は分野の枠にとらわれることなく、化粧品学のさらなる発展に今後とも深く関わってまいりたいと考えております。
皆様方のますますのご協力とご支援をお願い申し上げます。

平成 21 年 7 月
財団法人

コスメトロジー研究振興財団
理事長

小林

礼次郎

目

次

■ごあいさつ
■研究報告
Ⅰ．素材、物性に関する分野
・光照射による分子集合体の構造変換及びその機能化に関する研究 ………………………………………… 2
大阪大学大学院工学研究科
・ツバキ油に含まれるトリテルペンの生合成研究

水

上

進

……………………………………………………………… 7
東京大学大学院薬学系研究科 渋 谷

雅 明・紫外線カット機能材料の開発と化粧品関連素材（ヘアカラーおよび UV カット用品）への利用に向けての基礎研究…………………………………… 12

大阪教育大学教育学部
・地中海アロマ植物からの白髪予防生理活性物質の探索およびその機能探索

博 則……………………………… 18

筑波大学大学院生命環境科学研究科
・肌の質感を容易に評価するシステムの開発

織 田
礒 田

博 子

…………………………………………………………………… 23
木更津工業高等専門学校機械工学科

小・アニオン性の多糖で被覆したキトサン微粒子へのタンパク質のカプセル化と機能評価
慶應義塾大学理工学部
・新しい生体親和性材料としてのペプチド性人工コラーゲンゲル

功………………… 27

佐 藤

智 典

…………………………………………… 30

早稲田大学理工学術院
・Wnt シグナルを標的とした育毛促進作用をもつ天然成分の探索

田

小 出

隆 規

…………………………………………… 33

千葉大学大学院薬学研究院

大

槻

崇

Ⅱ．生体作用、安全性に関する分野
・表皮細胞接着因子のバイオイメージング法の開発…………………………………………………………… 40
慶應義塾大学医学部皮膚科学教室

天 谷

雅 行

・毛形成におけるホスフォリパーゼ Cδ1 の機能解析 …………………………………………………………… 45
東京薬科大学生命科学部

深見・皮膚線維化過程における骨髄由来細胞の動員とそのコラーゲン産生能に関する研究
東海大学医学部臓器線維症研究ユニット
・化粧品素材の皮膚アレルギーにおける新規スクリーニング法の開発………………… 50

稲

垣

豊

……………………………………… 53

京都大学医学研究科皮膚科学
・再構築培養表皮モデルを用いた遺伝毒性の評価

希代子

椛 島

健 治

……………………………………………………………… 57

国立医薬品食品衛生研究所 安全性生物試験研究センター 薬理部新規試験法評価室 小 島
・老人性色素斑ダーモスコピー画像の自動定量ならびに治療と化粧による QOL 評価改善
東京女子医科大学東医療センター皮膚科田肇 夫……………… 63中勝

目・各種有効成分の効率的な皮膚内送達方法の開発

次……………………………………………………………… 68
大阪大学大学院薬学研究科

・慢性掻痒性皮膚疾患における表皮内末梢神経伸展因子の探索

近 藤

昌 夫

…………………………………………… 74

富山大学大学院医学薬学研究部応用薬理学

安 東・リン脂質代謝酵素ホスホリパーゼ A2 群の皮膚における発現・機能と脂質メタボロミクス
東京都臨床医学総合研究所

村嗣 修……………… 78

上誠・紫外線の皮膚慢性毒性に対するサンスクリーン剤の防御効果を高速・高感度に評価する方法の開発
東北大学大学院医学系研究科ゲノム生物学分野
・細胞内シグナル PTEN/PI3 キナーゼ経路による白髪化やメラノーマの制御

池 畑

… 85

広 伸

…………………………… 91

九州大学生体防御医学研究所 / 秋田大学医学部

鈴

木

聡

・非線形光学現象を利用した真皮コラーゲン分布 in vivo 可視化法の開発 ………………………………… 95
大阪大学大学院基礎工学研究科 荒・低分子量 G 蛋白質 Rab27A によるメラノソーム輸送制御メカニズムの解明

木勉…………………………… 100

東北大学大学院生命科学研究科

伊

藤

敬

・遺伝子改変マウスを用いたヒスタミンの接触性皮膚炎に与える影響の研究 …………………………… 106
東北大学大学院工学研究科応用量子医工学

大

津

浩

Ⅲ．精神、文化に関する分野
・生きるための呼吸、感じる呼吸－香りと慣れ現象－…………………………………………………… 112

昭和大学医学部第二生理学教室
・化粧品のリスク認知に関する心理学的研究－安全とリスクのバランス－

政 岡

ゆ り

…………………………… 117

名古屋大学大学院教育発達科学研究科

元 吉

忠 寛

・化粧による高齢者の行動変容：
高齢夫婦の女性配偶者の化粧により男性配偶者の quality of life の向上は図れるか？
大分大学医学部神経生理学講座

徳……………… 121

丸

治

・経済開放政策以降のインドにおける中間層の増加と化粧品の消費動向の変化に関する研究 ………… 129
東北大学大学院文学研究科 岡 光

信 子

■記念講演
平成 20 年度記念講演 『見た目を磨く、内面を磨く』 ………………………………………………………… 135
比較社会文化博士■コスメトロジー研究雑感■付

劇作家・演出家

竹 内

一 郎……………………………………………………………………………………………… 147

録
平成 20 年度事業報告
役員一覧…………………………………………………………………………………………… 165…………………………………………………………………………………………………………… 168

Ⅰ.
Ⅱ.
Ⅲ.

●
素材、物性に関する分野
生体作用、安全性に関する分野
精神、文化に関する分野●

光照射による分子集合体の構造変換及びその機能化に関する研究
大阪大学大学院工学研究科

水 上進Controlled release systems induced by external stimulation have attracted great attention, because these systems enablespatiotemporal regulation of active drugs in target organs. Furthermore, the drug efficacy could be enhanced, and thus
the dosage could be reduced. Until now, several strategies for controlled release have been proposed. As the external
stimulation, temperature, pH, light, etc. have been used. Especially, controlled release by light is very promising, becauselight irradiation does not need complex instruments and can be concentrated on the small area. Additionally, laser devices
are clinically used in photodynamic therapy. However, there are almost no practical photo-controlled drug release systems.
Therefore, we started to develop a novel drug release system triggered by light irradiation. We focused on the membranedamaging properties of antimicrobial peptides (AMPs) such as magainin. AMPs are attracting increased attention as
novel types of antibiotics. Their target is the lipid bilayer of bacterial membrane, and they kill bacteria by disrupting theirmembranes. We synthesized an AMP mimic foldamer modified with (6-Bromo-7-hydroxycoumarin-4-yl)methoxycarbonyl(Bhc) groups, which are photocleavable protective groups. The caged group is deprotected by irradiation UV light around365 nm. When the caged molecule was treated, the AMP mimic foldamer was reproduced. Then, we applied the caged
compound to the controlled drug release system. After several kinds of liposomes containing fluorescence dyes were treatedwith the caged compound. Only when the samples were treated with UV light, fluorescence dyes were released.

１．緒た。リポソームは、脂質二分子膜が殻のようになった構造

言を持つ小胞である。内部に水を含み水中で安定に分散する。

ドラッグデリバリーシステム（Drug Delivery System:

作成方法を変えることで大きさを制御でき、直径が 100

DDS）は、薬物の投与を量的・時間的・空間的に制御すnm ～ 1 µm のものを Large Unilamellar Vesicles（LUVs）

る手法であり、副作用の低減や薬効の増強などを可能とすと 呼 び、10µm 以 上 の も の を Giant Unilamellar Vesicles

るため、近年盛んに研究されており、実用化されているも（GUVs）と呼ぶ。近年では、化学修飾などによって安定性のも存在する。近年、外部刺激によってキャリアに内包さが向上したため、様々な分野への応用が期待されている 。

れた薬物の放出を制御する研究は大きな注目を集めている。

一方、薬物を放出させるスイッチについては、これまで

これまでに行われた研究例において、用いられた外部刺激の研究ではリポソームを構成するリン脂質に光応答性官能としては、温度変化、pH 変化、酵素活性、あるいは金属基を修飾するものがほとんどであった。今回我々は、リポイオンなどが挙げられるが、近年では非侵襲的な刺激

ソームを破壊して内包薬物を放出させる機能性分子を光応が大きな注目されている。消化管や血管内に答性官能基で修飾し、その薬物放出活性を光によって制御

として光

２）

１）

おける内視鏡技術の発達により、体内の局所で光を照射す

３）するシステムを考案した。

ることも不可能ではない。それゆえ、光によって薬物放出

まず、リポソームを破壊する機能性分子として、抗菌をコントロールすることができれば、多くの疾患においてペ プ チ ド （Antimicrobial Peptides: AMPs） に 注 目 し

幅広い応用が期待できる。しかしながら、光照射によってた。抗菌ペプチドは、1920 年代からグラム陰性菌などの薬物放出を引き起こす手法の中で、臨床で用いられているバクテリアに対して原核生物が分泌するものとして研究さものはまだ無い。そこで、本研究において、新規メカニズ

れてきたが、1979 年に蛾のさなぎ由来の抗微生物作用たムに基づく光誘導薬物放出システムの開発に取り組んだ。

んぱく質セクロピンが、1987 年にはアフリカツメガエル

２．実
２．
１

４）

Xenopus laevis の皮膚からマガイニン（図１(a)）が単離され、

験

抗菌ペプチドの研究は一気に進展した。

光応答薬物放出システムの開発コンセプト

抗菌ペプチドの性質は、１．ウイルスや微生物にのみ作

本研究では、薬物キャリアとしてはリポソームを選択し用し、ホスト生物には無害である（選択毒性）、２．即効Structural conversion and functionalizationof self-assembled structures induced byphotoirradiation

性がある、３．広い抗菌スペクトルを持つ、の３つが挙げられる。特に１．の選択毒性は抗菌ペプチドの医療への応用にとって重要である。選択毒性の理由として考えられShin Mizukamiているのが、原核生物と真核生物の細胞膜表面の構成リン

Graduate School of Engineering, Osaka
University

脂質の違いである。微生物の細胞膜表面にはフォスファチ
ジルグリセロール、フォスファチジルセリン、カルジオピ
リン等の酸性リン脂質が存在するのに対し、健康な動物細−2−

光照射による分子集合体の構造変換及びその機能化に関する研究

胞膜表面には酸性リン脂質は露出していない。また、微生基と呼ばれ、これまでに多くの種類の保護基が報告されて物膜には存在しないコレステロールが豊富に存在し、そのいる。本研究においては、1999 年に古田らによって開発

他の構成脂質もフォスファチジルコリンなどの中性脂質でされ、その後の生理学研究において多くの応用例が見られある。抗菌ペプチドは正電荷を多く持つので、負電荷を帯る Bhc（（6-bromo-7-hydroxycoumarin-4-yl）methyl）基

びた膜には静電相互作用によって吸着するが、電気的に中を選択した。Bhc 基は光反応の量子収率、水溶性などの性の膜には作用しない。そこで、薬物キャリアとなるリポ面で優れた性質を有しており、特にヌクレオチドや mRNA

ソームを微生物の細胞表面を構成する酸性の脂質成分で作のケージに応用されており、ニューロン等の情報伝達分子の製することにより、抗菌ペプチドが真核細胞に影響を与え挙動を光制御するツールとしても幅広く利用されている 。

６）

７）

ることなくリポソームのみを選択的に破壊できると考えられる。本研究では、マガイニン２の構造および機能アナロ

２・２

５）

光感受性膜傷害性分子 BBhcPT の合成

グとして、Tew らによって報告された PT （Pyrimidine

抗菌ペプチドアナログ PT および光感受性保護基 MOM-

Trimer; 図１（b））を用いることにした。このとき、PT の

Bhc-ONp をそれぞれ合成し、それらを縮合させた後、脱殺菌作用に重要なカチオン性官能基を光応答性保護基でブ保護を行い、光応答性膜傷害性分子 BBhcPT を合成した

ロックすることで、抗菌ペプチドのリポソーム破壊能を光（図３）。合成した化合物は NMR スペクトルおよび質量分制御できると考えた（図２）。

析により同定を行った。

光応答性保護基は、生理学の分野ではケージド（Caged）

図１ （a）マガイニン２、（b）膜傷害性分子 PT、および（c）光応答性膜傷害性分子 BBhcPT の構造

図２

光応答性薬物放出システムの概要−3−

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

２・３ 紫外光照射による BBhc-PT における Bhc 基
脱離の確認

２・４ リポソームの調製および光照射によるリポソーム破壊実験

紫外光（360 nm）を照射することで、化合物 BBhcPT

水溶性蛍光物質カルセインを含むリポソーム（Giantから Bhc 基が脱離して PT が生成する過程を以下のプロ

Unilamellar Vesicles; GUVs）を作成した。調製したリポ

トコルで確認した。まず、１mM BBhcPT の DMSO 溶液

ソームをポリリジンコートガラスボトムディッシュに移し、を、10 mM MOPS 緩衝液（pH 7.1）により 100 倍希釈し、静電相互作用によりカバーグラスに沈着させた。蛍光顕微

10 µM とした。続いて、この溶液 100 µl を石英セルに入鏡下、カルセインの蛍光を観測することで、リポソーム

れ、レオネット社製の光照射装置を用いて紫外光（360 nm）の形態変化を追跡した。ここに、BBhcPT を添加し、360を当てた。その後、各サンプルを逆相 HPLC により測定した。

nm の UV 光を照射しながら、リポソームの形態変化を蛍光顕微鏡により観察した。
BocHN

OH
O2N

OTs

NO2

NO2

O2N

TsCl, DIEACH2Cl2SH

BocHN

DIEA, CH2Cl2

BocHN

BocHN
HO

S

O

NH2

H2N

N

N

S

, WSCD, HOBt
DMF

N

H
N

H 2N

N

S

H
N

OMOM

Br
O O
H2N
S
H2N

N

H
N
O

N

O2N

H
N

NH2

OMOM

Br

O

O

Br

O

OMOM

O
Pyridine
DMF

S

50% TFA in CH2Cl2

NH2

O

O

H2 N

SnCl2・2H2O
NaOAc・3H 2O
EtOH

NO2

BocHN

OH
O

S

O2N

O
O

O

O

O

O

O

HN

HN

O
S
H 2N

PT

O
OH

Br

OH

Br

O

O
O
O
TMS bromide
CH2Cl2

N

H
N

O

HN

HN
S

H2N

O

O

O

N

H
N
O

N

H
N

S
NH2

O

BBhcPT
図３

BBhcPT の合成スキーム

−4−

N

H
N
O

S
NH2

光照射による分子集合体の構造変換及びその機能化に関する研究

３．結除前の BBhcPT によって影響を受けないことを確認した。

果

GUVs に DMSO を添加した後 360nm の紫外光を照射した。

図４に示すように、BBhcPT は 360 nm の紫外光を照射したところ、経時的に HPLC ピークが減少し、1800 秒後

また、BBhcPT を 10mM の最終濃度で添加し、490 nm の励起光で挙動の観察を行った。

には完全に消失した。この結果より、BBhcPT は紫外光

最終濃度 5 µM の光感受性抗菌ペプチドアナログ 2 をガ照射によって、脱保護を受け、膜傷害活性を回復すること

ラスボトムディッシュ上のリポソームに添加し、6 分間静が示唆された。

置した。蛍光顕微鏡システムによる 488 nm の励起光照射

次に、蛍光物質カルセインを内包させた LUVs を用いて、ではリポソームの形態にほとんど影響を与えないことを

BBhcPT を添加した後、紫外光を照射することで、カル確認した。次に、励起光の波長を 350 nm に変更し、リポ

セインの放出を定量的に測定した（図５）。照射時間に対ソームの観察を行った。紫外光による励起開始の数十秒後するカルセインの流出と BBhcPT の残存率を比較するこからリポソーム膜の形態変化が観察され始め、２分半後にとで、BBhcPT は光照射によってケージ解除されることは内部のカルセインが完全に流出するのが確認された（図で膜傷害能を発現し、リポソームを破壊することが示され

６）。また、BBhcPT の濃度を増やすことによって、素早た。

いカルセインの放出が起こることも明らかとなった。低濃

最後に、光照射によるリポソームに内包された化合物の度の BBhcPT の添加では、図６のようなダイナミックな放出を蛍光顕微鏡によって観察した。蛍光物質カルセイ

リポソーム破壊は観測されず、リポソーム内の蛍光強度がンを封入した GUVs を作製し、ポリリジンコートガラスボ

徐々に消光していく傾向が見られた。この場合は、リポソ

トムディッシュに沈着させた。その後、BBhcPT を添加しーム上に細孔を形成し、カルセインが徐々に漏出した為とて静置した後、蛍光顕微鏡を用いて紫外光を照射しながら、思われる。

GUVs の挙動を観察した。
まずコントロールとして、GUVs が紫外光及びケージ解

BBhcPT濃度：5μM
BBhcPT remaining
Relative leakage

80

80

60

60

40

40

20

20

Relative leakage (%)

1000

図４．紫外光照射による BBhcPT の HPLC チャートの時間変化

UV 照射前0500 1000 1500 2000 2500 3000
Irradiation time (s)Remained BBhcPT (%)

100

0
3500

図５．BBhcPT の光解除効率（◆）
、および流出したカルセインの割合（●）の経時変化

10s
20s
30s
40s
60s
80s
100s
図６．紫外光照射によって引き起こされた、リポソームに内包されたカルセインの放出

−5−

150s

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009４．考

（参考文献）

察

１）(a) A. Chilkoti, M. R. Dreher, D. E. Meyer, D.

本研究において、抗菌ペプチドの細菌膜傷害活性に着目

Raucher, Adv. Drug Deliv. Rev. 2002, 54, 613–630. (b) D.

し、脂質集合体ドラッグキャリアであるリポソーム内に内Schmaljohann, Adv. Drug Deliv. Rev. 2008, 58, 1655–1670.
(c) N. Rapoport, Prog. Polym. Sci. 2007, 32, 962–990.

包された薬物を光刺激によって放出させるシステムの構築に成功した。抗菌ペプチドアナログの膜傷害活性に重要な

２）P. Shum, J. -M. Kim, D. H. Thompson, Adv. Drug Deliv.
Rev. 2001, 53, 273–284.

官能基を光感受性保護基で保護することで、紫外光照射のときのみ膜傷害活性を発現させることができた。また、リ

３）V. P. Torchilin, Nat. Rev. Drug Discov. 2005, 4, 145–160.

ポソームの組成は最近の細胞膜に近い組成を選択すること

４）M. Zasloff, Nature 2002, 415, 389–395.

で、選択性を出すようにデザインされている。現段階は、

５）G. N. Tew, D. Liu, B. Chen, R. J. Doerksen, J. Kaplan,

まだシステムの基本原理を開発したところであるが、今後

P. J. Carrol, M. L. Klein, W. F. DeGrado, Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 2002, 99, 5110-5114.

ドラッグキャリア内に光感受性分子を組み込み、より汎用性が高い光感受性ドラッグキャリアへと発展させる予定で

６）T. Furuta, S. S. Wang, J. L. Dantzker, T. M. Dore, W.

ある。本研究で用いる薬物キャリアはリポソームであり、J. Bybee, E. M. Callaway, W. Denk, R. Y. Tsien, Proc.

このような脂質からなる自己集合体は化粧品にも馴染みのNatl. Acad. Sci. U.S.A. 1999, 96, 1193–1200.

深い成分である。すなわち本研究の応用例としては、医療

７）H. Ando, T. Furuta, R. Y. Tsien, H. Okamoto, Nat.

応用のみならず、紫外線に暴露された場合の皮膚の保護能を有する機能性化粧品の開発などコスメトロジーへと発展する可能性を持つ。

−6−

Genet. 2001, 28, 317–325.

ツバキ油に含まれるトリテルペンの生合成研究

東京大学大学院薬学系研究科

渋 谷

雅 明

Camellia oil is used as a base material in oil-based cosmetics, and rates high quality oil due to high composition of oleate
glycerides. In addition to fatty acid glycerides, camellia oil contains triterpenes as minor constituents. Although effectivenessof triterpenes in camellia oil is uncovered yet, triterpenes specific for camellia oil likely characterize camellia oil as a goodmaterial in cosmetics, which are seco-triterpenes, camelliol A, B, sasanquol, etc. Biosynthesis of these seco-triterpenes was
unknown. Recent study on Arabidopsis thaliana oxidosqualene cyclase (OSC), however, revealed that seco-triterpenes are
directly biosynthesized by OSC. In order to clarify the biosynthesis of triterpenes in Camellia japonica, cDNA cloning of
OSC from seeds of C. japonica was carried out by homology-based PCR in this study. Presence of eleven OSC homologues(named as cj-01, -02, ---- and -11) was revealed by analysis of the sequence of core DNA fragments. Sequences of three fulllength OSCs (cj-01, 08, 11) were obtained by RACE, although none of the other eight OSCs was unfortunately obtained.
Three full-length OSCs (cj-01, 08, 11) were obtained by PCR, and ligated into yeast expression vector pYES2. Resulting
expression vectors were transferred into ERG7 (lanosterol synthase gene) deficient yeast strain GIL77. After cell lysis andextraction with hexane, extracts were subjected to GC-MS analysis, which revealed that extract from cj-01 transformant
contained b-amyrin as a sole product, that of cj-08 a-amyrin and b-amyrin, and that of cj-11 also a-amyrin and b-amyrin.
Minor products by these three transformants were extensively surveyed, but no trace of camelliol A, B and sasanquol was
detected. From these result, it is concluded that none of the obtained OSCs (cj-01, 08, 11) in this study was involved in thebiosynthesis of camelliol A, B and sasanquol.

１．緒
1-1

肪酸のグリセライドを含むが、数パーセントの含量でトリ言

テルペンを含んでいる。オレイン酸が高含量であることがツバキ油

髪油としての有用性の高さと考えられてきたが、それ以外

ツ バ キ（Camellia japonica） は 日 本 原 産 の 樹 木 で あ る。

に微量に含まれるトリテルペンが、ツバキ油の髪油として

古事記や万葉集にツバキの記載があり、観賞用として古くの有用性（安定性、吸収性、弾力性の向上など）を高めてから日本人に親しまれてきた。また、ツバキの種子を圧搾いる可能性も十分考えられる。実際、近年の研究から、ツして得られるツバキ油は、毛髪への吸収が優れていること

バキ油やサザンカ油には、β −アミリン（1）、α −アミリや毛髪へ弾力性を与える長所のゆえ、奈良時代の頃から宮ン（2）、ルペオール（3）などの植物界に広く分布するトリ

中の女性たちの黒い垂髪を整える髪油として使用され始め、テルペンに加えて、カメリオール A（4）、カメリオール B

その後、大衆にも普及した。化粧品の油性基剤として用い（5）、カメリオール C（6）、サザンクオール（7）などのツられている植物性不乾性油の中でも、植物性油脂としてのバキ油特有のトリテルペンが含まれていることが判明した

安定性や品質の高さを示す指標に用いられるオレイン酸含（引用文献 1）。

量は 85 − 90% であり、オリーブ油（オレイン酸の含有量
文明の導入、さらに、戦後の石油化学技術を基盤とした工

1-3 トリテルペンの生合成、オキシドスクアレン閉
環酵素

業製品の汎用は、化粧品にも及び、一時期、ツバキ油へのトリテルペンは植物ステロール生合成の中間体であるオ

関心は薄らいでいたが、近年の国民の自然志向、環境問題

キシドスクアレン（8）から分岐して生合成される。トリへの配慮からツバキ油への関心が高まり始めている。

テルペンの骨格はこの分岐反応を触媒する酵素（オキシドは 54 − 83％）を大きく引き離している。明治時代の西洋

スクアレン閉環酵素（oxidosqualene cyclase, OSC）
、ある

1-2

ツバキ油の成分

いは、トリテルペン合成酵素と呼ぶ）によってつくり出さ

ツバキ油、オリーブ油などの植物油は、主成分として脂Studies on the Biosynthesis of Triterpenes
in Camellia Oil
Masaaki Shibuya
Graduate School of Pharmaceutica l
Sciences, The University of Tokyoれる。これまで β −アミリン合成酵素をはじめとして、複数の高等植物から 20 種を超える OSC がクローニングされている。近年、我々によってシロイヌナズナ（Arabidopsis
thaliana）からセコアミリン合成酵素が同定された（引用文献 2）。この酵素は、「OSC は直線状の基質から環構造をつくり出す酵素である。
」というこれまでの概念に反し、開裂反応により一旦構築した環構造を破壊し、新骨格を創出する酵素であった。もし、このような OSC が普遍的に−7−

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

図１

ツバキ油に含まれるトリテルペン

図２

セコトリテルペンの生合成機構

分布するならば、ツバキ油に含まれる開裂型トリテルペン

1-4であるカメリオール A、B などは、OSC により直接生合

本研究の目的ツバキのトリテルペンの生合成機構を明らかにできれば、成されるものと考えられる（図 2）。すなわち、ツバキ種

生合成酵素遺伝子の高発現、あるいは抑制により、従来の子には、シロイヌナズナ由来のセコアミリン合成酵素と類ものとはトリテルペンの種類と含量が異なったツバキ油を似した反応を触媒する OSC が存在していると考えられる。

調製することが可能となる。本研究においては、ツバキのしかし、これまでツバキの OSC に関する研究はなされて形質転換による品種改良を視野にいれ、ツバキ種子からトいないため、ツバキにおけるトリテルペン生合成機構は全リテルペン合成酵素のクローニングを行う。

く不明である。

−8−

ツバキ油に含まれるトリテルペンの生合成研究

2.
2-1

2-5

実験、結果

生成物の同定GIL77 は、ラノステロール合成酵素が欠損しているためツバキ種子の収穫に、ラノステロール合成酵素の基質となるオキシドスクア

平成 18 年７月に、東京大学本郷キャンパスに植樹されレンを酵母内に蓄積させる。GIL77 内で発現した OSC は、ているツバキから種子を収穫した。種皮を剥皮後、直ちにこの蓄積したオキシドスクアレンと反応し生成物を与える

液体窒素で凍結し、− 80℃にて保存した。

ので、酵母に蓄積する生成物の構造を決定することにより、
導入 OSC の機能を同定することができる。

2-2 ツバキ種子から RNA の調製、及び、逆転写反応
による cDNA の調製（20 ㎖の培養）を遠心により集菌し、アルカリ添加後加熱

凍結保存されていたツバキ種子を、液体窒素を加えなにより容菌した。ヘキサンで抽出し、抽出物を GCMS で

がら乳鉢 ･ 乳棒を用いて粉砕した。破砕物からフェノール

ガラクトース添加で導入遺伝子の発現を誘導した酵母解析した。

クロロフォルム法で Total RNA を調製した。さらに、GE

cj-01 は単一生成物を与え、GC の保持時間と MS の開裂

社の RNA purification kit を使用して精製し、mRNA を様式が標品の β −アミリンと完全に一致したことから、
生

調製した。

成物を β −アミリンと同定した。一方、cj-08 は、複数の

この mRNA を鋳型とし、dT primer と superscript Ⅱ

生成物を与えた。GCMS で最も強度の大きかった生成物を用いて逆転写反応を行った。得られた産物を以下のは、GC の保持時間と MS の開裂様式が標品の α −アミリ

PCR の鋳型として用いた。

ンと完全に一致した。また次に強度が強かったものは、同様に標品との比較から β −アミリンと同定した。cj-11 の

2-3

Nested PCR による中央部の増幅

生 成 物 は、cj-08 の 生 成 物 と 同 一 で あ っ た。cj-08、 及 び

既知 OSC に保存されているアミノ酸配列に基づいて 10

cj-11 の生成物の組成は、これまで報告のある混合アミリン合成酵素のものと一致していた。

種のオリゴ DNA を合成した。

以上の結果から、cj-01 を β−アミリン合成酵素、cj-08、これらプライマーを組み合わせて上記 cDNA を鋳型に
PCR を行なった。PCR 生成物をプラスミドベクターにサ及び cj-11 を混合アミリン合成酵素と同定した。

ブクローニングし、総数 72 個のクローンの塩基配列を決定した。その結果、11 種にグループ分けすることができ、2-5各クローンを CJ-01, 02, 03, 04, 05, 06, 07, 08, 09, 10, 11 と命名した。

cj-01, -08, -11 の Minor 成分の検索

本研究においてツバキには少なくても 11 種の OSC クローンが存在することが明らかになった。これまでのところ、3 種の OSC（cj-01：β −アミリン合成酵素、cj-08、及び

2-4

RACE 法による塩基配列の決定

cj-11：混合アミリン合成酵素）を同定したが、残りの 8 種

各クローンについて RACE 法（引用文献 3）による塩の OSC は得られていない。これら得られていない 8 種の基配列の決定を試みた。11 種のうち、8 種については何ら

OSC のいずれかがカメリオール A、及び B などのセコトかの理由により PCR の産物が全く得られなかった。PCR

リテルペンを生産する可能性が高いが、ツバキ油に含まれ産物が得られた cj-01, 08, 11 の 3 種のクローンについてるセコトリテルペンの含量はごく微量（引用文献 1）であRACE 法 よ る 塩 基 配 列 の 決 定 を 進 め た。 そ の 結 果、 全

るので、cj-01、cj-08、及び cj-11 が、微量ながらカメリオ

ORF の塩基配列を決定することができた。

ール A、及び B を生産する可能性も否定できない。そこで、酵母で発現した cj-01、cj-08、及び cj-11 の生成物の微量成

2-4

全長クローンの取得、及び酵母での発現分中にカメリオール A、及び B が含まれているかどうか

cj-01, 08, 11 の 3 種のクローンの N 末、及び C 末に対応を調べることにした。

するオリゴ DNA を合成し、それらを用いて PCR を行い、各形質転換酵母を 1L 培養し、同様にアルカリ添加後加３種の OSC の全長クローンの DNA 断片を得た。それら熱により容菌した。ヘキサンで抽出し、生成物を抽出した。

を酵母発現ベクター pYES2（Invitrogen）に組み込んだ。

抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラムで分離し、β −得られたプラスミドをラノステロール合成酵素欠損酵母株

アミリンを major に含むフラクションの前後のフラクシ

GIL77 に導入した。

ョンを GCMS で解析した。カメリオール A、及び B の標

各プラスミドで形質転換した GIL77 を培養し、ガラク
トース添加で導入遺伝子の発現を誘導した。

品を入手することが困難であったため、MS の開裂様式の文献値と比較して、カメリオール A、及び B が存在するかどうかを調べた。しかしながら、カメリオール A、及びB に相当するトリテルペンは検出できなかった。以上の結−9−

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

果から、cj-01、cj-08、及び cj-11 はカメリオール A、及び含量は少なく、もしこれら 8 種の中に目的の OSC が含ま

B の生合成に関与していないことが強く示唆された。

れているとしたならば、そのツバキでの発現量は含量に3.

比例して極めて少ないと予想される。発現量の少なさがまとめと考察RACE 法による DNA 断片の増幅を困難にしている可能性

ツバキ油に含まれるトリテルペン、特にセコ型トリテルが高いと思われる。本研究期間の後半では、そのようなペンの骨格生成に関与する OSC のクローニングをめざし

視点に立ち、微量 RNA を効率的に増幅可能な改良 RACEて、ツバキ種子から OSC のクローニングを行なった。既法（Clontech 社の SMART RACE cDNA 増幅キットなど）

知 OSC に保存されているアミノ酸配列を利用して合成を用いて未クローニングの 8 種の OSC のクローニングをしたプライマーを用いて PCR を行なったところ、11 種

試みたが、成功することができなかった。
考えられるクローニング未成功のもう一つの理由として、の OSC クローンの存在が明らかとなった。これらのうち、
cj-01, cj-08, cj-11 の３種のクローンについて、RACE 法に種子の収穫時期とカメリオール A、及び B の生合成時期

より全長配列の決定に成功した。これら３種の全長クロの相違、あるいは RNA 調製に用いた部位と生合成の場所

ーンを PCR により得、酵母酵母発現ベクターに組み込み、との相違が考えられる。種子の収穫時期の変更、葉など種

ラノステロール合成酵素欠損酵母株 GIL77 で異種発現さ子以外からの RNA の調製などの試行が必要と思われる。

せた。生成物を GCMS で解析し、cj-01 を β −アミリン合カメリオール A、及び B を生成物として与える OSC の成酵素、cj-08 と cj-11 を混合アミリン合成酵素と同定した。

クローニングの未成功は、「OSC はセコトリテルペンに関

cj-01、cj-08、及び cj-11 の酵母における微量生成物を調べ与しないのでは？」という疑念を生じさせる。すなわち、

たが、カメリオール A、及び B に相当するトリテルペン

β −アミリンなどの閉環産物を基質として、その二重結合は検出できず、cj-01、cj-08、及び cj-11 はカメリオール A、にプロトネーションしカルボカチオンを生じさせて反応を及び B の生合成に関与していないと思われる。

進行させる異性化酵素が存在し、その異性化酵素がカメリ

クローニングが成功しなかった８種の OSC の中にカメ
リオール A、及び B の生合成に関与する OSC が含まれオール A、及び B の生合成に寄与している可能性を考慮する必要性が生じる。

る可能性が高い。ツバキ油のカメリオール A、及び B の図３

本研究と独立して、セコトリテルペンであるヘリアノ

へリアノールおよびバッカリスオキサイドの生合成− 10 −

ツバキ油に含まれるトリテルペンの生合成研究ール（12）の単離が報告されているヒマワリ（Helianthus

る OSC が存在しているものと思われる。早期にクローニ

annuus） の 管 状 花、 及 び B 環 開 裂 型 オ レ ア ナ ン 骨 格 のングを成功させ、ツバキの形質転換の足場を築きたいと考

トリテルペンが報告されている Stevia viscida 及び Stevia

えている。

eupatoria（引用文献 4）の同族植物 Stevia rebaudiana の根から、本研究と同様の手法によりセコテルペン合成酵素の（引用文献）

クローングを試みた。

１）T. Akihisa, K. Koike, Y. Kimura, et. al., Lipids, 34,

その結果、S. rebaudiana からはバッカリスオキシド合成
酵素（引用文献 5）、ヒマワリからはヘリアナール合成酵
素のクローニングに成功した。バッカリスオキシド（11）はセコトリテルペンではないが、ヘリアナールは標的としたセコトリテルペンである。ヒマワリ由来ヘリアナール合
成酵素は、セコトリテルペンを生成物として与えるシロイ
ヌナズナ由来以外 OSC の初めての例である。このことか

1151-1157（1999）．
２）M. Shibuya, T. Xiang, Y. Katsube, et.al., J. Am. Chem.
Soc, 129, 1450-1455（2007）．
３）M.A. Frohman, M.K. Dush, et. al., Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 85, 8998-9002（1988）．
４）L.U.Roman, D.Guerra-Ramirez, et. al. Org. Lett. 6,
173-176（2004）．

ら、セコトリテルペンを生成物として与える OSC は、セ

５）M. Shibuya, A. Sagara, et. al., Org. Lett., 10, 5071-5074

コトリテルペン生産植物に存在することが強く示唆され（2008）．

る。ツバキにおいても、セコトリテルペンの生産に関与す− 11 −

紫外線カット機能材料の開発と化粧品関連素材（ヘアカラーおよび UV カット用品）への利用に向けての基礎研究
大阪教育大学教育学部

織 田

博 則

While the contribution of singlet oxygen quenchers to synthetic colors has been studied previously by several workers,
there have been few studies pertaining to the use of singlet oxygen quenchers as a means of improving the light fastness of
cosmetic colors (e.g. hair colors). Nickel complexes of arylsulfonic acids were preliminary prepared, and the protecting
effect of these compounds towards the photochemical stability of natural and synthetic colors was examined in polymer
substrate. It was proposed that nickel salts of benzenesulfonic acid and its derivatives can be applied as effective stabilizers
against the photofading of synthetic or natural colors.
In this paper, the photofading behaviors of some colors were investigated in polymer substrate. The contribution of
singlet oxygen to those fading was suggested. Various phenyl ester type UV absorbers were prepared, and the protecting
effect of these compounds towards the photofading of colors was in cellulose acetate film. The application of simple
UV absorbing compounds is not necessarily useful for improving the light fastness of colors. However, phenyl ester UVabsorbers bearing a singlet oxygen quencher, nickel sulfonate group, almost perfectly suppress the photofading rate of thesecolors. It was proposed that nickel complexes of 4-benzoyloxybenzenesulfonic acid and its derivatives can be applied as
effective stabilizers against the fading of colors.
Antibacterial activity against Staphylococcus aureus and Eschrichia coli of six phenyl ester type UV absorbers containing
nickel sulfonate group was investigated a mean of JIS test method (JIS L 1992). The antibacterial activity was not observed about
six compounds. It was suggested that these nickel compounds were environmental safety chemical compounds.

１．緒れているが、天然素材含有色素を染毛用色素として用いる

言

場合には、色素の光不安定性が問題になり、その利用を阻

フロンによる成層圏オゾン濃度の減少は地表に到達するんでいる。

太陽紫外線の増大を招き、地球上の生物に多大な悪影響を本研究は優れた紫外線カット機能と日光堅ろう度改善効及ぼすことが予測される。そのため近年、紫外線による皮果を併せ持つ機能性材料の開発に関する基礎研究として、

膚障害を防御する意識が高まってきた。ＵＶカット剤は日可視光照射による退色を効率よく抑制するニッケルスルホ

焼けを防止することから、化粧品分野では古くから取り上ン酸基げられている。

導入し、紫外・可視両域での色素の日光堅ろう度改善機能

１）をフェニルエステル系紫外線吸収剤の分子内に又、化粧品分野の中では、昨今パーマやヘヤーカラーのを有する化合物の合成を行い、その効果について検討した。

需要が高くなっているが、染毛剤は単に髪が傷むというだ

天然色素を用いて安定化剤の効果を検討する場合、現在未けでなく、強い毒性を持つ物質が多数含まれており、健康だ化学構造がハッキリしていない天然色素が多く、異性体に重大な影響を与えている。染毛剤使用によるアナフィラ

や不純物の混在による純度の低さが問題となるため、ここ

キシーの症状は、激しい呼吸困難症状、顔、唇、喉粘膜・では合成色素をモデル化合物に選び、機能性紫外線カット

喉の激しい痛み、咳、舌・喉・首のむくみによる呼吸困難、剤の安定化効果を検討した。

目に入ったり、眉毛やまつげに使用した時に、目が焼け付
くような感じ、結膜の充血や白内障の報告もある。その原

さらに、これらの添加物が化粧品関連材料に適用された
場合の環境毒性についても検討した。

因は、酸化染料の原料である p-フェニレンジアミン誘導体

２．実に対するアレルギー反応や毒性に起因する。この現状下、
最近天然素材に含有されている色素への関心が高まって来

２．１

材

験

料

た。植物に由来する色素としてはクチナシ、紅花、うこん、

この実験で使用した染料クリスタルバイオレット（C.

動物に由来する色素はコチニール、ラック色素などが知ら

I. Basic Violet ３）（dye 1;λmax 560, 595nm）とローズベ

Developments of UV Cutting Materials
and the Utilization for Cosmetics（HairColors or UV Cutting Articles）

和光純薬 kk から購入した。化学構造式を図 1 に示す。ベ

Hironori Oda（HBP）（λmax 260, 335 nm）は東京化成 kk から購入した

Faculty of Education, Osaka Kyoiku
University

ものを精製して用いた。各種タイプの異なる新規なフェニ

ンガル（C. I. Acid Red 94）（dye 2;λmax 521, 562 nm）はンゾフェノン系紫外線収剤 2- ヒドロキシベンゾフェノン

ルエステル系紫外線吸収剤は文献
ッケルスルホン酸類の合成も文献− 12 −

２）
１）

に従い合成した。ニに従い、合成し精製

紫外線カット機能材料の開発と化粧品関連素材（ヘアカラーおよび UV カット用品）への利用に向けての基礎研究した。本研究で新たに合成された紫外線吸収機能を有する
安定化剤の化学構造式を図 2 に示す。

２．
２

Me 2 NNMe 2
Cl

ロ ー ズ ベ ン ガ ル（5×10

I
O

I

フィルム中での光退色
−4

I
KO

mol dm ） を ア セ ト ン とDMF（1:1v/v）の混合溶液 40 ㎤に溶解し、各種スルホン酸の金属塩や HBP などの添加物（１×10−2

ICO 2 KCl−3−3

mol dm ）をNMe 2含んだ溶液と含まない溶液を調整し、酢酸セルロース（4g）dye１

を加え、ガラス板にキャスティングし 150℃で１時間乾燥

Figure 1

した後、減圧下１週間室温で乾燥して、着色フィルムを作

Cl

Cl
Cl

dye２

Dyes used in the present study

成した。
得られたフィルム（厚さ：30 ㎛）に 38℃、湿度 30％で6kW カーボンフェードメータ（須賀試験機 kk、FAL-5）を用い光照射した。その吸収スペクトルを分光光度計によNaO3 S

り測定し、光退色挙動を追求した。

２．
３

OCOPh

Ni 1/2 O3 SUVS1-Na

OCOPh

UVS1-Ni

添加物の抗菌活性評価

黄色ブドウ球菌と大腸菌に対する新規添加物の抗菌活性

OCOPh

OCOPh

SO3 NaSO 3 Ni1/2を検討した。試験した添加物は図２に示した新規合成添加物のうちエステルのニッケル塩類６種であった。さらに比較のため、抗菌活性についてすでに検討されている染料４種（メチレンブルー、フクシン、クリスタルバイオレッド

UVS2-Naおよびアシッドフクシン）について同時に検討した。
抗菌活性試験は、日本工業規格（JIS）の「繊維製品のOCOPh

抗菌性試験法（L 1992）に準じた定性試験を行った。検査用細菌は黄色ブドウ球菌 Staphylococcus aureus（グラム陽性球菌）保存菌：NBRC12732

および大腸菌 Escherichia

UVS2-Ni

NaO3 S

OCOPh
Ni1/2 O3 SUVS3-Nacoli（ グ ラ ム 陰 性 桿 菌 ） 保 存 菌：ATCC25922 で あ っ た。

UVS3-Ni

6試験培地は菌ごとに、菌濃度が１㎖ あたり 10 個のオーダーになるように調整した普通寒天培地を準備し、内径90 ㎜の滅菌済みシャーレに約 15 ㎖ずつ分注し凝固させた。

NaO3 S

OCOPh

Ni1/2 O3 S

OCOPh

抗菌活性試験に使用した検体は、羊毛モスリン（10× ５㎝）
を用い、３％ owf、浴比（１：30）、90℃、30 分の条件でUVS4-Na

染料あるいはエステルのニッケル塩を染着または吸着させ

UVS4-Ni

たものを、一辺 28 ㎜の正方形に切った布片である。これ
を高圧蒸気滅菌（２気圧、121℃、15 分）後、前述の培地の中央に貼付した。24 時間後に観察し、布の周りの菌がNaO3 S

OCOPh

繁殖していないハローと呼ばれる部分の有無で抗菌活性を

OCOPh

UVS5-Ni

UVS5-Na

3.

OCOPh

OCOPh

判定した。

３．１

Ni1/2 O3 S

結果および考察

フェニルエステル系紫外線吸収剤の耐光性改

善効果

OCOPh
PhOCO

OCOPh
PhOCO

染料の光退色過程は、染料の化学構造のみならず、染料SO3 Naの染着状態、基質の性質、外的条件、共存物の性質など多SO3 Ni 1/2

くの因子によって決定される非常に複雑な系であるとされ

UVS6-Naている。それは多くの光反応が競争的に起こるからであり、

Figure 2 Stabilizers used in the present study− 13 −

UVS6-Niコスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

それぞれの反応が退色に寄与する程度、つまりいずれの反するのに対し、UVS1-Na 存在下では 18％および 38％の退応因子が特に優先するかは、その状態によって異なり、優色が見られ、市販紫外線吸収剤である 2 -ヒドロキシベン

先する因子が光退色過程を決定するものと思われる。

ゾフェノン（HBP）とその効果はよく似ている。同様な抑制効果は、他のナフタレン誘導体（UVS2-Na 〜 UVS6-

染料の化学構造と日光堅ろう度との関係は、以前から数Na）についても見られる。

多くの経験的事実が集積されており、光退色は一般に酸化反応に起因して起こり、基質が染料より酸化されやすい場

次にローズベンガル（dye 2）についても同様、酢酸セ合には還元反応が起こり、一部の染料によっては異性化やルロースフィルム中カーボンアーク灯照射により検討した。

二量化の寄与を受けるものもある 。

その結果を表 2 に示す。大半のフェニルエステル系化合物

３）は、先と同様、dye 2 の光退色をほとんど抑制せず、その染料の光退色における酸化反応については、自動酸化、効果は HBP と同様であった。

一重項酸素酸化およびスーパーオキシドイオン酸化の寄与が見出されている。自動酸化は基底状態の酸素が酸化剤と機構で進行する。それゆえ、紫外線照射などで退色が促進

３．２ 機能性フェニルエステル系紫外線吸収剤の耐光性改善効果され、自動酸化防止剤や紫外線吸収剤がそれを抑制する 。

４）

一重項酸素酸化は染料の励起三重項エネルギーを、基底状

このコンセプトに基づき、まずフェニルエステル系紫外態の酸素分子に移行することにより生成した、一重項状態

線吸収剤の効果をクリスタルバイオレット（dye 1）を用い、の酸素活性種が酸化剤となる。この反応の特徴は可視光照

酢酸セルロースフィルム中、カーボンアーク灯照射によ射によっても退色が進むことであり、自動酸化防止剤ではり検討した。その結果を表 1 に示す。フィルム中での dye

効果がないが、一重項酸素脱活性化剤が退色を抑制する 。

1 は、5 時間の光照射で 46％、15 時間の照射で 75％退色

ところが、現在知られている一重項酸素脱活性化剤を、なり、ラジカル生成により退色が開始され、ラジカル連鎖

５）

Table1 Eﬀect of various uv absorbers on the photofading of dye１
UV Absorber

Photofading % after light exposure, hours
1

2

3

5

7

10

15

None

12

25

30

46

55

65

75

UVS1-Na

1

8

13

18

26

31

38

UVS2-Na

2

8

13

21

27

40

53

UVS3-Na

1

5

7

13

17

26

38

UVS4-Na

2

6

11

20

28

38

57

UVS5-Na

1

5

10

18

24

31

44

UVS6-Na

2

6

10

18

25

33

47

HBP

2

7

12

17

23

35

47

Table 2UV Absorber

Eﬀect of various uv absorbers on the photofading of dye２
Photofading % after light exposure, hours
1

2

3

4

5

6

7

None

70

90

95

100

UVS1-Na

35

56

65

70

73

75

77

UVS2-Na

40

61

70

74

77

79

80

UVS3-Na

45

62

68

73

75

79

80

UVS4-Na

50

62

70

74

78

81

83

UVS5-Na

44

58

65

68

73

77

80

UVS6-Na

47

63

70

74

78

81

84

HBP

44

61

69

73

78

81

84

− 14 −

紫外線カット機能材料の開発と化粧品関連素材（ヘアカラーおよび UV カット用品）への利用に向けての基礎研究

そのまま染料の日光堅ろう度改善剤として使用するには、 （UVS2-Ni 〜 UVS6-Ni）についても見られ、先に検討したやや問題が残されている。例えば、β-カロチンは光に弱フェニルエステル系紫外線吸収剤のナトリウム塩（UVS1-

く 、ニッケル錯体は有色性であるため、染色布の色Na 〜 UVS6-Na）や市販紫外線吸収剤（HBP）より、遥かを変えてしまう。第三級アミン類は強塩基性でラジカル酸に優れた効果を有していた。事実、UVS1-Ni や UVS3-Ni化を誘発する５）４）５）などの問題を抱えている。ところが、我々添加の系では、dye 1 の退色をほぼ完全に抑制した。このが見出したニッケル p-トルエンスルホン酸塩は無色性（λことは、一重項酸素脱活性基を分子内に有する紫外線吸収

233 nm）で、有効な一重項酸素脱活性化効果を有して剤はトリフェニルメタン系染料の光退色抑制には重要ないた 。そのため、一重項酸素脱活性化効果を発現してい役割を演じていることが明らかになった。一方、UVS5-Ni

ると考えられるニッケルスルホン酸基を、フェニルエステ

や UVS6-Ni による抑制効果は他のモノベンゾエート誘導

ル系紫外線吸収剤の分子内に導入し、紫外 ･ 可視領域での体と同様な抑制効果を示していることから、紫外線吸収剤

日光堅ろう度改善が期待される化合物を合成した。新規にへの更なるバルキーな置換基（例えば、ベンゾエート基）合成された一重項酸素脱活性化機能を有するフェニルエス

の導入は、染料の日光堅ろう度改善には、必ずしも有効な

テル系紫外線吸収剤の光退色抑制効果を、dye 1 を用いて構造改変でないことを示唆している。

max

１）

同様な添加剤の効果を dye 2 を用いて、同様な条件下

酢酸セルロースフィルム中、カーボンアーク灯照射下検討行った。その結果を表 4 に示す。dye 2 はカーボンアーク

した。その結果を表 3 に示す。

灯を 1 および 4 時間照射することにより、70 および 100

カーボンアーク灯照射により dye 1 は著しく退色するが、その系に UVS1-Ni を添加した場合には殆ど dye 1 の退色％退色する。しかし、UVS1-Ni 添加の系では、その退色は抑制され、15 時間の光照射後も、dye 1 の退色は２％では 7 および 28％に抑制される。この効果は HBP 添加の系あった。また、同様な安定化効果は、ナフタレン誘導体

より遥かに優れており、ナフタレン誘導体（UVS2-Ni 〜

Table 3UV Absorber

Eﬀect of various uv absorbers on the photofading of dye １
Photofading % after light exposure, hours
1

2

3

5

7

10

15

None

12

25

30

46

55

65

75

UVS1-Ni

0

0

0

0

0

1

2

UVS2-Ni

0

0

0

0

1

3

7

UVS3-Ni

0

0

0

0

0

1

2

UVS4-Ni

0

0

0

0

1

3

7

UVS5-Ni

0

0

0

1

2

3

7

UVS6-Ni

0

0

0

0

1

2

7

HBP

2

7

12

17

23

35

47

Table 4UV Absorber

Eﬀect of various uv absorbers on the photofading of dye２
Photofading % after light exposure, hours

1

2

3

4

5

6

7

None

70

90

95

100

UVS1-Ni

7

15

22

28

31

34

37

UVS2-Ni

10

21

28

36

41

45

47

UVS3-Ni

8

14

19

23

27

30

32

UVS4-Ni

12

19

24

27

30

32

34

UVS5-Ni

12

19

24

29

33

36

40

UVS6-Ni

14

20

23

27

30

32

34

HBP

44

61

69

73

78

81

84

− 15 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

UVS6-Ni）添加の系においても、同様な優れた抑制効果がとが明らかになった。

見られた。
以上の結果より、本研究で新規に開発された、ニッケル

３．３

新規合成紫外線カット材料の抗菌活性評価

スルホン酸基を分子内に有するフェニルエステル系紫外線

黄色ブドウ球菌と大腸菌に対する染料と添加物の抗菌活吸収剤は、従来の安定化剤（紫外線吸収剤など）に比べ、性試験写真の一部を図 3 と 4 に示し、全結果を表 5 に示し遥かに優れた色素の日光堅ろう度改善効果を有しているこ

た。試用菌数は黄色ブドウ球菌：5. 2×10 / ㎖、大腸菌：

Methylene Blue

Figure 3

Fig. 4

Crystal Violet

6

Fuchsine

Elution test by JIS testing method with Basic Dyes against Sutaphylococcus aureus

UVS1-Ni

UVS2-Ni

UVS4-Ni

UVS5-Ni

UVS3-Ni

UVS6-Ni

Elution test by JIS testing method with Phenyl ester nickel salts against Sutaphylococcus aureus− 16 −

紫外線カット機能材料の開発と化粧品関連素材（ヘアカラーおよび UV カット用品）への利用に向けての基礎研究

Table 5

及ぼすことが予測される。そのため近年、紫外線による皮Elution test by JIS testing method（JIS L 1902）

for phenyl ester uv absorbers and dyes
sample膚障害を防御する意識が高まってきた。ＵＶカット剤は日焼けを防止することから、化粧品分野では古くから取り上

check of halo
S.aureusb)E.coli

げられている。しかし、一重項酸素脱活性基を有する紫外-線カット剤の合成は全く見られていない。ここでは、可視-光照射による化粧品用色素の自己増感性一重項酸素の脱活

a)

Free

-

UVS1-Ni-

UVS2-Ni--

性化と、有害紫外線 A 波、B 波からの肌の保護、ならび

UVS3-Ni--

UVS4-Ni--に化粧品用色素の光安定化を目的として、一重項酸素脱活

UVS5-Ni--

UVS6-Ni--

Methylene Blue+-

Fuchsine+-

Crystal Vioret+-

Acid Fuchsine

-

-

c)

性基を有するフェニルエステル系紫外線カット剤を新規に合成し、その効果を高分子基質中で検討した。
その結果、紫外線カット剤のみの添加は、さほど安定化
効果を発現しなかったが、一重項酸素脱活性基を有する紫外線カット剤はいずれも顕著な安定化効果を具備していた。
また、それら化合物は地球環境に優しい化合物である事も明らかとなった。

a) with out uv absorbs and dyes, b) no halo, c) halo

謝6

7. 2×10 / ㎖であった。すぐれた光退色効果がみられたニッケルスルホン酸塩基を有するフェニルエステル系紫外線

辞

本研究にご助成頂きました財団法人コスメトロジー研究振興財団に深謝申し上げます。

吸収剤 6 種では、大腸菌と黄色ブドウ球菌のいずれに対してもハローは見られず、抗菌作用は認められなかった。し（参考文献）

たがって、これらの添加物は化粧品などの生活関連製品に

１）Oda, H., and Kitao, T., Intramolecular Quenching of

使用されても、人体や環境にほとんど影響がないものと考Photofading of Some Dyes, J. Soc. Dyers Colour.,101, 177-

えられる。このように環境毒性が低いことはスルホン酸塩

179 (1985).

6）

基の効果と考えられる 。比較のため同時に試験した染料

２）Finnegan, R.A. and Mattice, J.J., Photochemicalのうちメチレンブルー、フクシンおよびクリスタルバイオ

Studies II: The Photo-rearrangement of Aryl Esters,

レットの 3 種では黄色ブドウ球菌に対しハローが見られ抗Tetrahedron, 21, 1015-1026（1965）．

菌性が認められた。アシッドフクシンには抗菌性は認めら

３）Allen, A., and Mckellar, J., Photochemistry of Dyed and

れなかった。これらの染料の抗菌性については既に検討さPigmented Polymers, Applied Science Publishers, London,

れた結果と同様であり、試験に使用した培地が正常に機能
6）

1980.

したことが検証された 。したがって、新規開発されたニ

４）Griffiths, J., Developments in the Chemistry and Technology

ッケルスルホン酸塩基を有するフェニルエステル系紫外線

of Organic Dyes, Society of Chemical Industry, London,

吸収剤は、環境保全の面からも実用性が高いと思われる。

1984.

４．総

５）Wasserman, H.H., and Murry, R.W., Singlet Oxygen,括

Academic Press, London, 1979.

フロンによる成層圏オゾン濃度の減少は地表に到達する
太陽紫外線の増大を招き、地球上の生物に多大な悪影響を

６）杉山章、浅野梨紗、織田博則．大阪教育大学紀要．55（1）33 − 41（2006）− 17 −

地中海アロマ植物からの白髪予防生理活性物質の探索
およびその機能探索筑波大学大学院生命環境科学研究科

礒 田

博 子

Recently, people are experiencing more stress and some have problems regarding hair growth as a part of the aging
process. Resolving this hair growth problem is important for the aging society in the future. This is because not only bodily
health but also mental health is important for a healthy life. Thus, we attempted to find plants having hair growth regulation
activity. We collected plant extracts from Tunisia for bioprospecting purposes. Among them, we investigated the Erica
multiflora extract to evaluate the hair growth promotion activity. MTT (3-(4,5-dimethyl-2-thyazolyl)-2,5-diphenyl-2Htetrazolium bromide) assay and cell cycle assay on human dermal papilla cells in vitro and administration assay on mousedorsal skin in vivo were performed. As a result, the Erica multiflora extract promote the dermal papilla cell growth and cell
cycle, and induced hair growth in vivo. We show that the Erica multiflora extract has a high activity for promotion of hair
growth cycle, or induction of anagen phase from telogen phase.

１．緒

ー効果を評価するという三段階に分かれた評価系の構築を

言

目指した。

毛の成長周期の制御に関する研究は、現在世界中で盛ん

２．実に行われており、年々分子生物学的手法を取り入れたものが数多く見られるようになってきた。しかしながら、ごく

２．１

験

地中海アロマ植物

最近までは医学系の研究者が主に研究を行っていた背景も本研究において実験に使用したサンプルとして、環あり、分子生物学的コントロール下のデータは少ない。ま地中海半乾燥地域に生育するアロマ植物である、Erica

た逆に分子生物学者が行っているデータを眺めると、皮膚multiflora、Thymelaea hirsuta、Pistacia lentiscus、Lycium

科学としてのコントロールが正確になされていないものもeuropeum、Thapsia garganica の５種を用いた少なくない。したがって、現在までに報告されているもの

ジアにおいて、これらの植物の乾燥重量 10g を 100 ㎖ののうち、分子生物学的・皮膚科学的信頼性の高いものはご

70％エタノールに 7 − 10 日間浸して抽出したもの、またく限られた研究室から出た報告に限定されると言わざるを

植物の乾燥体は生物多様性条約に基づいて、北アフリカ研

得ない。

究センターを通じて入手した。その抽出液を 0.22 ㎛フィ

また、白髪の改善にも注目した毛成長周期制御に関する

２）
−４）

。チュニ

ルター（Millipore, USA）で濾過したものをサンプルとした。

研究についてはほとんど進んでおらず、本研究課題が皮膚科学分野へ与える影響は大きいと言える。これまでは、実

２．２

E. multiflora の分配・分離際に皮膚に発現している分子をターゲットとして研究が行

葉 の 乾 燥 体（100g） を 100 ％ メ タ ノ ー ル（500 ㎖ 及 び

われてきており、毛成長に関与するもの、白髪の抑制に関

800 ㎖）に浸して暗所で 1 週間静置した。この抽出液を吸与するものを分けて考えざるを得ず、白髪を抑制し尚且つ引濾過後、濾液をロータリーエバポレーターにて減圧下発毛も促進するようなものへの期待が高いことが明らかで30℃で濃縮・乾固し、メタノール抽出物（22.68 g）を得た。

あったにも関わらず、その実験系の構築までは至っていな得られたメタノール抽出物を、酢酸エチル（400 ㎖ × ３）

１）と水（400 ㎖ × ３）で２層分配し、酢酸エチル層・水層をい 。
本研究では、北アフリカ乾燥地域原産生物資源をターゲ得た。酢酸エチル層をロータリーエバポレーターで濃縮・ットし毛成長促進・メラニン合成促進を探索する。その後、乾固し酢酸エチル層（EMEA）を得た。その後水層を n-

正常皮膚の色素沈着へ貢献しないものをさらにスクリーニ

ブタノール（500 ㎖ × ３）で２層分配し、ブタノール層・ング、毛成長促進作用とメラニン合成促進作用とのシナジ水層を得た。それぞれをロータリーエバポレーターで濃縮・Hair growth regulation by the extract of
aromatic plant Erica multiflora
Hiroko Isoda
Alliance for Research on North Africa(ARENA), Graduate School of Life andEnvironmental Sciences, University ofTsukuba,

乾固させ、ブタノール層（EMBU）
・水層（EMWA）を得た。
酢酸エチル層をシリカゲルクロマトグラフィー（φ2.2×30 ㎝、n-hexane：EtOAc ＝ 5：1 → 3：1 → 1：
2 → CHCl3：MeOH ＝ 8：2 → 5：5 → 2：8 → 0：10）で分離を行い、酢酸エチル層を 15 画分（EMEA1 〜 15）に分離した（図 1）。

− 18 −

地中海アロマ植物からの白髪予防生理活性物質の探索およびその機能探索

２．
３

毛乳頭細胞増殖率測定実験

３．結果と考察

ヒト毛乳頭細胞（human dermal papilla cell）を播種し、37℃、５% CO2 インキュベーターで一晩培養した後、サ

３．１

毛乳頭細胞増殖率測定実験

ンプルを含む培地と交換し、96 時間培養した。そのあと、毛 乳 頭 細 胞 を 用 い て、 ア ロ マ 植 物 Erica multiflora、

細胞生存率を調べるため、MTT 手法を用いて測定した。

Thymelaea hirsuta、Pistacia lentiscus、Lycium europeum、
Thapsia garganica の毛乳頭細胞増殖率に及ぼす影響を調べ

２．
４

細胞周期測定た。その結果、Erica multiflora に最も毛乳頭細胞増殖活性

Erica multiflora で 処 理 し た 細 胞 に Cell Cycle Reagentが見られた（表１）。

（Millipore, USA）を加える。フローサイトメトリー（Guava
PCA; Millipore, USA）を用いて、細胞周期測定用ソフト
ウエア Guava CellCycle により、細胞周期を測定した。

３．２

毛乳頭細胞周期測定実験

Erica multiflora で 12、24、36、48 時間処理した毛乳頭細胞の細胞周期を調べた。その結果、24、36、48 時間処

２．
５

メラニン産生量測定実験

理において弱いが細胞周期進行の停止が見られたが、12B16 メラノーマ細胞を播種し、37℃、５％ CO2 インキ

時間処理においては細胞周期促進が見られた（表２）。以ュベーターで一晩培養した後、サンプルを含む培地と交換

上のことは Erica multiflora の成分が毛乳頭細胞の細胞周期し、72 時間培養し、メラニン産生量を測定した。培地をを制御することを示唆する。

除去した後、トリプシン処理により細胞を採取した。0.1％ Triton X-100 を用いて細胞の膜タンパク質を可溶化し、３．３

マウスの毛髪成長促進効果

10％トリクロロ酢酸を用いて産生されたメラニンを沈殿

C3H ／ He マウスにおける Erica multiflora の毛髪成長促させ精製を行った。その後 8N 水酸化ナトリウムを添加し、進効果を調べた。Erica multiflora を毎日皮下注射して３週80℃設定のヒートブロック中で 2 時間処理することでメラ間後マウスの毛を剃った皮膚から毛の成長が確認でき、血ニンを溶解させ、410 nm の波長で吸光度を測定した。産管拡張も確認した（図２）。Erica multiflora によるマウス

生されたメラニンの量は濃度既知のメラニンで作製した検毛髪成長促進効果は血管拡張効果による毛根までの血流が量線を用いて算出し、さらに細胞数で除法することで１細増加したことによると思われる。

５）胞あたりのメラニン産生量とした 。

２．
６

３．４ E. multiflora メタノール抽出物分配成分が B16
メラノーマ細胞のメラニン産生量に与える影響

動物実験

C3H ／ He マウス（16 週齢、雄）の背部を剃毛し、１

B16 メラノーマ細胞に、E. multiflora メタノール抽出物、日に１回、500 ㎍ /㎖の Erica multiflora 抽出物を含む PBS

またメタノール抽出物を分配して得られた酢酸エチル層、溶液、PBS をそれぞれ 0.1 ㎖ずつ、21 日間皮下注射した。

ブタノール層、水層を 1 ㎍ / ㎖の濃度で添加し 72 時間後のメラニン産生量を測定した結果、酢酸エチル層においてメ

Figure 1.

E. multiflora の分離スキーム− 19 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

ラニン産生を促進する活性が示された（図３）。酢酸エチが促進された。またメラニン産生量測定時と同条件で E.

ル層にて処理した細胞ではコントロールと比較して 138.5

multiflora の分離・分配成分による細胞生存率を評価した％とメラニン産生が促進された。

（図４B、５B）。その結果、E. multiflora の分離・分配成分による処理は B16 メラノーマ細胞の生存率に影響を与え

３．５ E. multiflora メタノール抽出物酢酸エチル層の分離成分が B16 メラノーマ細胞に与える影響ないことが明らかとなった。

４．総

E. multiflora のメタノール抽出物分配画分である酢酸エ括

チル層にメラニン産生促進活性があることが明らかとな

北アフリカのチュニジアのアロマ植物から、発毛制御ったので、この画分をさらに 15 の画分に分離し、同様の活性がある植物の探索を試みた。その植物抽出物の中か方法で、メラニン産生に与える影響を評価した。その結ら、発毛促進活動を評価するためにアロマ植物を選び、in

果、画分 2 において最も強いメラニン産生促進活性を示

vitro 系ではヒト毛乳頭細胞（human dermal papilla cell）

した（図４A）。図３より E. multiflora 酢酸エチル層画分 2を用いて MTT アッセイ及び細胞周期分析を、in vivo 系

はメラニン産生促進活性を示したので、同様の実験を３

ではマウスの背側の皮膚における発毛促進実験を行った。

回行い、結果を平均値 ±SD にて表した（図５A）。そのその結果、Erica multiflora 抽出物はヒト毛乳頭細胞にお結果 E. multiflora 酢酸エチル層画分２にて処理した細胞でいて細胞増殖促進効果と細胞周期促進効果が、マウスにはコントロールと比較して 172.7% と有意にメラニン産生

おいては発毛促進効果が見られた。このような結果から、Table 1. Growth promotion activity of the Erica multiflora extract on humanfollicular dermal papilla cells (HFDPCs). Symbols represent means±SD
of n=4 samples. Asterisks (* and **) indicate statistically significant
difference (p<0.05 and p<0.01, respectively) between the extract-treatedand control cells.
Plant name
Erica multiflora
Thymelaea hirsta
Pistacia lentiscus
Lycium europeum
Thapsia garganica
Gloria alypum

Growth promotion activity（% of control）
Concentration（㎍ / ㎖）
5
50
500
5000
103±18106±11109±8*
144±9**
81±16
90±17
88±13
105±9
92±22
98±7
97±15
112±6*
97±11
102±9
101±13
93±18
78±3
81±9
78±10
83±5
96±17
93±15
85±11
91±13

Table 2. Human dermal papilla cell cycle promotion activity of the Erica
multiflora extract. Human follicular dermal papilla cells (HFDPCs) were
subcultured at density of 4 x 105 cells in collagen type I-coated 100 mm
dish. After overnight culture, HFDPCs were starved for 48 h, and thenthe cells were treated with the Erica multiflora (500 ㎍ / ㎖ ) for 12, 24,
36 and 48 h. The treated cells were harvested and washed with PBS,
and then fixed in 75% Ethanol. The fixed cells were evaluated about cell
cycle status using Guava cell cycle system according to the
manufacture's instructions. Cont. means control.

12h
24h
36h
48h

Cont.
Extract
Cont.
Extract
Cont.
Extract
Cont.
Extract

G0/G1
72.6%
68.5%
69.2%
77.7%
74.4%
76.2%
75.6%
79.7%

− 20 −

S
4.9%
4.8%
6.8%
3.1%
6.0%
4.7%
4.4%
4.3%

G2/M
8.2%
10.0%
7.8%
7.2%
6.0%
7.3%
8.9%
5.4%

地中海アロマ植物からの白髪予防生理活性物質の探索およびその機能探索

Figure 2. Hair growth effect of the Erica multiflora extract. A, Skin surface hair growth was detectedon the dorsal skin of mice injected with the Erica multiflora extract. Seven-seek-old male C3H/He
mice were anesthetized with an intraperitoneal injection of pentobarbital and dorsal hair shafts
were trimmed to maintain the telogen phase. Erica multiflora extract (+sample) or PBS (control)
was injected subcutaneously into the trimmed telogen phase skin (n=5 in each group). B, On thereverse side of the skin. After gray color skin was detected, their skin was isolated and the reverse
side was photographed to evaluate anagen induction. C, Hair growth score. The hair growth wasevaluated by the skin reverse side gray or black colored area (%).

Figure 3. E. multiflora の画分成分が B16 メラノーマ細胞のメラニン産生量に与える
影響
B16 メラノーマ細胞を 100-mm ディッシュに 5.0×105 cells/dish の濃度で播種し、一晩培養後、E. multiflora メタノール抽出物を酢酸エチル層、ブタノール層また水層に分配したサンプルを 1 ㎍ / ㎖の濃度で添加し、72 時間後のメラニン産生量を測定した。

− 21 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

（A）

（B）

Figure 4. E. multiflora の分離成分が B16 メラノーマ細胞のメラニン産生量に与える影響（A）メラニン産生量（B）細胞生存率
B16 メラノーマ細胞を 100-mm ディッシュに 5.0×105 cells/dish の濃度で播種し、一晩培養後、E.
multiflora メタノール抽出物の酢酸エチル層を分離した 15 画分をそれぞれ 1 ㎍ / ㎖の濃度で添加し、72 時間後のメラニン産生量及び細胞生存率を測定した。
（A）

（B）

Figure 5. E. multiflora メタノール抽出物の酢酸エチル層分離画分 2 が B16 メラノーマ細胞のメラニン産生量に与える影響（A）メラニン産生量（B）細胞生存率
B16 メラノーマ細胞を 100-mm ディッシュに 5.0×105 cells/dish の濃度で播種し、一晩培養後、E.
multiflora メタノール抽出物を酢酸エチル層、ブタノール層また水層に分配したサンプルを 1 ㎍ /㎖の濃度で添加し、72 時間後のメラニン産生量を測定した。n=3、**P ＜ 0.01 vs control

Erica multiflora 抽出物による発毛促進効果は発毛周期の促

２）Sassi AB, Harzallah-Skhiri F, Bourgougnon N, et al.:

進、或いは発毛周期の休止期（telogen phase）から成長

Antiviral activity of some Tunisian medicinal plants

期（anagen phase）への誘導によるものだと思われる。

against Herpes simplex virus type 1. Nat Prod Res., 22(1): 53-65, 2008

E. multiflora はメラニン産生促進物質を含むと示唆されたことから、その活性物質を同定するために E. multiflora３）Harnafi H, Bouanani Nel H AM, Serghini CH, etをメタノールにて抽出、さらに分配・分離して得られた画

al.: The hypolipidaemic activity of aqueous Erica

分についてメラニン産生促進活性を評価した。その結果、

multiflora flowers extract in Triton WR-1339 induced

活性物質は E. multiflora メタノール抽出物の酢酸エチル層

hyperlipidaemic rats: a comparison with fenofibrate. J.
Ethanopharmacol., 109 (1): 150-160, 2007から分離された画分にあることが明らかとなった。この画
分による細胞生存率への影響は見られなかった。従って、

４）Bnouham M, Merhfour FZ, Legssyer A, et al.:

この画分にメラニン産生を顕著に促進する活性物質が含まAntihyperglycemic activity of Arbutus unedo,れると示唆された。

Ammoides pusilla and Thymelaea hirsute, Pharmazie.,
62 (8): 630-632, 2007

（参考文献）

５）Ohguchi K, Akao Y, Nozawa Y: Stimulation of

１）Kawano M, Imamura T, Isoda H: Methods formelanogenesis by the citrus flavonoid naringenin

searching and evaluating effective hair growth

in mouse B16 melanoma cells. Biosci. Biotechnol.

regulation factors from Tunisian samples. Journal of

Biochem., 70 (6): 1499-1501, 2006

Arid Land Studies 15: 443-446, 2006

− 22 −

肌の質感を容易に評価するシステムの開発

木更津工業高等専門学校機械工学科

小 田功

Youthfulness of a human appearance is considerably affected by youthfulness of skin. Now, youthfulness of skin ismainly evaluated by measurement of the skin age. Skin age is measured by a water quantity of skin, a smoothness of skin,an elasticity of skin, and so on. However, an appearance of skin may be able to be evaluated by the index that is different
from the skin age. We paid attention to a transparency of skin as the element which affected the appearance of skin. It seems
that beauty of skin have some relation to transparency of skin, because there is expression of "transparent white skin" fromold days. However, a measurement method and an evaluation method of transparency of human skin are not established yet.
In this report, we suggest one method for evaluation of skin transparency. In this method, we project a grating pattern onto
an object and measure its contrast. We measured the contrast of projected pattern onto some samples, such as diffusers andhuman skin. As a result of the experiment, it was shown that the evaluation of transparency of an object was possible by our
method.

１．緒測定の概要を図１に示す．大きさ 25×25［㎜］，空間言

周波数 50［本ペア / インチ］の振幅型の格子に，光源であ人間の見た目を左右する重要な要素として，肌の若々しるハロゲンライトからの光を照射し，焦点距離 50［㎜］のさが挙げられる．現在，肌の若々しさは，主に肌年齢を測投影レンズを用いて格子パターンの像を測定サンプルに定することで評価されている．肌年齢は，肌の水分量，き投影する．測定サンプル表面に現れた格子像を正面からめの細かさ，弾力などから算出されている．ところが，肌CCD カメラで撮影し，画像入力ボードを介してパソコン

年齢以外の指標を用いて，肌の見た目を評価することがでに取り込み，そのコントラストを解析する．ここで，格子きる可能性もある．我々は，肌の見た目を左右する要素とが横向きに設置されているのは，光を斜め方向から照射しして，肌の透明度に着目した．肌の透明度と肌の美しさとているために生じる光強度分布の不均一さが，コントラスの関係は，昔から“透き通るような白い肌”という表現がトに与える影響を小さくするためである．

あることからも，何らかの関係があると考えたからである．

この手法の大きな特徴は，光を用いているので軟質な測

ところでこれまで我々は，樹脂面に着目し，ある格子パ定サンプルでも非接触での測定が可能なことである．さらターンの影を樹脂表面に投影したときのコントラストを測に，格子パターンの影を可視光で測定サンプルに投影し，定することで，樹脂面の透明感が測定できる可能性がある

その影を正面から撮影するだけなので，非侵襲であり測定ことを報告してきた ．今回，これと同様な手法を用いて，の危険性もない．これらの点から，本手法は人間の肌の測

肌の透明度を測定することが可能であったので報告する．

定に好都合である．

１）

図２（a）は半透明のアクリル板に格子パターンを投影し２．測定の方法

たときの画像である．図２（b）は（a）の画像の中心付近に人間の肌は，血管が透けて見えることから分かるようにおける，x 方向の光強度変化の一部を表した図である．コ

半透明である．これと同様に，一般的な樹脂やいわゆる曇ントラストを定量的に測定するために，光強度変調の大りガラスも半透明である．このことは，樹脂や曇りガラス

きさを次のように定義する．図２（b）に示すように，投影に光を照射したとき，裏面から観察すると光が透けて見えされた格子パターンの明るい部分（I1max, I2max, I3max, …）と，ることからも想像できる．このような半透明物体の透明度

暗い部分（I1min, I2min, I3min, …）の光強度の値を数個取り出し，を測定するために，格子パターンの像を表面に投影し，そ隣り合うもの同士の差を求める．さらにそれぞれの差の平のコントラストにより透明度を測定することにした．

均を求め，その値をコントラスト値 C とする．光強度をDevelopment of an evaluation system foran appearance of human skin

取り出す測定点は，格子パターンの明るい部分と暗い部分，
それぞれ５点ずつ設けることにした．

３．透明度とコントラストとの関係

Isao Oda
Dept. of Mechanical Engineering, Kisarazu
National College of Technology

表面状態が異なった数種類の透明な測定サンプルに格子パターンの影を投影し，そのコントラストを測定してみた．
本実験で使用した測定サンプルは，透明ガラスの片面が砂− 23 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

面となった，厚さ２［㎜］のフロスト型拡散板である．砂の透明度は関係しており，砂番が大きいほど見た目の透明面 の 砂 番 は，#240，#400，#600，#800，#1000，#1500

度は高いと言える．

の６種類であり，数値が小さいほど面が粗くなっている．

図５は，６種類の拡散板の砂面に格子パターンを投影し，拡散板の砂面の砂番と見た目の透明度との関係を調べる

そのとき現れる格子の影の光強度変化を比較したものであため，印刷面の上に拡散板を置き，拡散板を通して見る印

る．図５から砂番の違いにより，光強度変化の大きさ，す

刷面の見え方を観察した．拡散板の砂面と印刷面が接触しなわちコントラストが異なっていることが分かる．さらにていると，砂面による光の拡散の影響が現れにくいので，砂番が小さいほどノイズ成分が大きく現れている．これは印刷面と砂面を適度に離す必要がある．そこで格子を印刷

表面粗さが粗いほど，光の散乱の影響を受けるためである

した紙面の上に厚さ５［㎜］のガラス板を置き，その上にと考えられる．

砂面を下向きにした拡散板を置いて観察した．代表的な拡拡散板の砂番と光強度変調の大きさ C との関係を表し散板として #240，#600，#1500 の３種類の拡散板を選びたものを，図６に示す．砂番が大きくなるにしたがい，光比較した結果を，図３に示す．図３から，砂番が大きいほ

強度変調の大きさが小さくなっていく，すなわちコントラ

ど透過して見える印刷面がはっきり見えることが分かる．

ストが低くなっていくことが分かる．図４と図６を比較す

図３の状態で，拡散板を透過した格子模様を正面かると明らかなように，透明度が高いほど，格子パターンを

ら CCD カ メ ラ で 撮 影 し た．#240，#400，#600，#800，

投影したときのコントラストが低くなっている．以上のこ#1000，#1500 の６種類の拡散板において，格子模様の光とより，拡散板の見た目の透明度が，本手法により測定で強度変調の大きさを比較した結果を，図４に示す．砂番がきることが確認できた．

大きくなるにしたがい，光強度変調，すなわち明暗が大きくなっていることが分かる．このことより，砂番と見た目

図２

図１

図３

半透明アクリル板への格子パターンの投影

測定の概要

拡散板の見た目の透明度の比較

図４− 24 −

拡散板の砂番と透明度との関係

肌の質感を容易に評価するシステムの開発

図５

拡散板の砂糖と光強度変化

図７

図６

図８

拡散板の砂番とコントラストとの関係

ファウンデーションの塗布方向

手のひらへの格子パターンの投影像− 25 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

比較すると，（g）のコントラストが高いことが分かる．しか４．肌の透明度の測定

し（b）〜（g）の画像の比較からは，各々のコントラストの差異

これまでの実験結果から，透明物体の場合は表面状態とを判断することは困難である．
そこで図８の各画像からコントラスト値 C を算出した．

見た目の透明度との間に関係があることと，格子パターンの影を透明物体に投影し，そのコントラストを測定するこ

この結果を図９に示す．図９から，ファウンデーションのとで，透明物体の透明度が測定可能であることが確認でき塗布回数が増す，すなわち肌の透明度が低くなるにしたがた．そこで本手法を用いて，実際に人間の肌の透明度を測って，投影された格子パターンのコントラストが向上して定してみた．

いることが分かる．この実験結果から，本手法を用いて見測定サンプルは人間の手のひらである．肌の透明度を変化させるために，パウダーファウンデーションを塗布し，た目では判断が難しい肌の透明度の差異が，測定できることが示された．

その濃さを変化させることにした．ファウンデーションを

５．結

濃く塗布するほど，肌の表面にファウンデーションが厚く付着し，透明度が低くなると考えたからである．パフに付言

本報告では，人間の肌の透明度を評価する手法として，けたファウンデーションを，図７に示すように，縦方向と肌に格子パターンを投影し，そのコントラストを測定する

横方向に交互に塗布する．これを 3 回繰り返すことを 1 セことを提案した．表面状態の異なる拡散板および人間の肌ットとした．

を測定サンプルとして用い，格子パターンを投影したとき

肌に何も塗布していない 0 セットから，ファウンデーシのコントラストを測定する実験をおこなった結果，以下のョンが厚く付着していると考えられる 6 セットまで，格子点が明らかとなった．

パターンを投影したときの画像の比較を図８に示す．ファ（1）拡散板の砂番が大きくなると，見た目の透明度が高く

ウンデーションを塗布していない（a）と，最も濃い（g）をなること．
（2）本手法を用いると，透明物体の透明度の測定が可能であること．
（3）見た目では判断が難しい肌の透明度の差異も，判定できること．
今後の課題は，人間の肌の透明度と肌の見た目の質感との関係を，定量的に評価する方法を模索し，新たな評価方
法の確立を目指すことである．その上で，肌の質感を人間の見た目に基づいて容易に測定することが可能な，新規的な測定システムを装置化したいと考えている．

（参考文献）
１）有松大志，小田功：「パターンを投影した際のコントラストを用いた樹脂面の質感評価」，2003 年度精密工図９

学会春季大会学術講演会講演論文集，（2003）421.

肌の透明度とコントラストとの関係− 26 −

アニオン性の多糖で被覆したキトサン微粒子へのタンパク質のカプセル化と機能評価
慶應義塾大学理工学部

佐 藤

智 典

In this study, chitosan particles were employed as a protein carrier. Glucose oxidase (GOD) was encapsulated in chitosan
particle coated with anionic polysaccharides such as hyaluronic acid and pectin. Encapsulation efficiency of GOD, size ofthe particles, and controlled release of GOD from the particles were investigated. Water-soluble chitosan was employed
to encapsulate proteins (BSA and GOD) at neutral pH condition. Protein-encapsulated chitosan particles were preparedby using cross-linker such as citric acid triacetate. Compared to other cross-linkers, citric acid was showed the higher
encapsulation efficiency for BSA (30-40%). However, the stability of ionic cross-linked chitosan particle was significantly
decreased by the addition of salt. Therefore, the chitosan particle was covalently cross-linked. Encapsulation efficiency wassignificantly increased (>80%), and the release of GOD from the covalently cross-linked chitosan particles was significantly
suppressed at neutral pH. Next, coating of the chitosan particles with anionic polysaccharides were carried out. Hyaluronic
acid-coated chitosan particles showed the aggregation. Pectin-coated chitosan particles showed high encapsulation efficiency
for GOD (60-90%), the particle size was submicron order. The aggregation of the particle coated with pectin was also
suppressed. The release of GOD from the pectin-coated chitosan particles was significantly suppressed in the absence ofNaCl, and increased depending on the concentration of NaCl. The controlled release of proteins from chitosan particle wasachieved by using cross-linker and coating with anionic polysaccharide.

１

緒することによって得られるカチオン性の多糖である。キ言

トサンは生体毒性が低く（マウスの経口 LD50 = 16 g/kg）、

近年遺伝子組み換えタンパク質に代表されるバイオ医薬

生体適合性および生分解性に優れており、タンパク質キャ品の開発が進み、有効な治療法が存在しなかった各種疾病

リアーの開発に適した長所を有している 。また、粘膜吸の治療薬として大きな期待が寄せられている。しかし、臨着性、抗菌・制菌性、免疫賦活作用など多様な生物活性を床応用にはまだまだ多くの課題が残されている。タンパク有する事から、タブレットやビーズ、マイクロスフェア、質の医薬品化に際しての主な問題点は、熱や酸、有機溶媒

ナノパーティクルなど様々な剤形で、工業、農業、医薬ななどに不安定で、容易に変性・失活する、消化管や粘膜組

ど様々な分野に応用されている。本研究者らはキトサンを織中のプロテアーゼによる分解・失活する、分子量が大き遺伝子のデリバリーとして利用してきた

く生体への吸収効率が低い等である。例えば、タンパク質

遺伝子と安定な複合体を形成し、遺伝子の分解酵素からのをカプセル化した粒子でも、塩存在下や酵素により速やか保護能力、細胞内において遺伝子発現活性に優れているこに放出や分解が起きる。体内への吸収効率が低く、期待通とを見出している。

りの治療効果が得られない。従来の低分子化合物ならば誘

[1]

[2−7]

。キトサンは

本研究の目的は、タンパク質製剤の設計・開発を行い、導体化によって、化合物の安定性・吸収性などを解決できタンパク質の安定性や特異性を改善し、その治療効果を高る事も多いが、タンパク質の誘導体化は容易ではない。そめる事である。キトサンを用いてプロテインキャリアーをのため、タンパク質の臨床応用には DDS による吸収や体設計するに当たって、以下の点に留意した。

内動態の制御が不可欠であり、「プロテインデリバリーシ①生体適合性・生分解性のあるマテリアルのみで微粒子をステム」の重要性が高まっている。

調製する。

本研究では、キトサン微粒子をタンパク質のキャリアーとして用いることにした。キトサンは、甲殻類や昆虫、微生物などの細胞壁など天然に豊富に存在するキチン（β-1,4- ポリ -N- アセチル -D- グルコサミン）を脱アセチル化
Encapsulation of proteins in chitosan
particles coated with anionic polysaccharides
and analyses of their functions②タンパク質が変性・失活しない緩和な条件でタンパク質をカプセル化する。
③タンパク質の保持能の高い微粒子を作製する。
本研究ではキトサンとタンパク質の複合体を作製し、さらにキトサン微粒子の安定性を向上させるために、ヒアルロン酸やペクチンのようなアニオン性多糖での被覆を行った。

Toshinori Sato
Department of Biosciences and Informatics,
Keio University

２

実験方法

水溶性キトサンは焼津水産化学㈱より入手した。ヒアル
ロン酸ナトリウムとペクチンは Wako から購入した。カ− 27 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

プセル化するタンパク質であるグルコースオキシダーゼ− 40% 程度のカプセル化効率を持つ微粒子が調製された。

（GOD、Aspergillus niger）は ICN から購入した。

フマル酸やマレイン酸を架橋剤として用いた場合には、微タンパク質をカプセル化したキトサン粒子の作製プロセ粒子の形成は確認できなかった。よってクエン酸がキトサ

スは図１に示した。まず、BSA や GOD をカプセル化しン粒子の作製には有効であることが示された。またカプ

たキトサン粒子を作製した。キトサン溶液は 20 mM MES

セル化効率は、本研究では BSA や GOD を用いているが、

buffer（pH6.0）に溶解した。架橋化剤として用いたトリタンパク質の種類により影響されることが示された。

ポリリン酸（TTP）やデキストラン硫酸（DS）およびク

次に、調製したキトサン微粒子懸濁液の塩強度を変化さ

エン酸三ナトリウム（TC）は Milli-Q 水に溶解した。BSA、せた際の、懸濁液の濁度の変化を測定した。低分子である

グルコースオキシダーゼ（GOD）は Milli-Q 水に溶解した。

クエン酸は高分子であるデキストラン硫酸ナトリウムと比共有結合架橋を形成するには、縮合剤である EDC を 20較して、塩強度の変化に非常に脆弱であった。塩強度にmM MES Buffer（pH 5.8）に溶解して用いた。

依存して濁度が経時的に減少し、30mM NaCl でもわずかカプセル化効率は次のようして求めた。GOD をカプセ

1 分程で粒子が崩壊してしまう事が示された。一方、デキル化した被覆化キトサン微粒子懸濁液を、遠心分離機を用

ストラン硫酸の場合では、塩強度を変化させても濁度に大いて 10000 rpm, 20 min, 4 ℃の条件で遠心処理を行い、微きな変化は見られず、NaCl の濃度が 150mM でも微粒子粒子を沈殿させた。遠心後上清を回収し、上清中のタンパが崩壊しなかった。高分子－高分子間のコンプレックスは、

ク質濃度をプロテインアッセイにより決定した。

ある位置で高分子同士の官能基が結合すると、近傍に存在

カプセル化効率（%）＝（タンパク質仕込み濃度

する官能基間で次々と結合が進行するため、安定性が高い−上清のタンパク質濃度）/（タンパク質仕込み濃度）×100と考えられる。

この微粒子懸濁液の NaCl 溶液、異なる pH 中での安定

次に、溶液の pH におけるキトサン微粒子懸濁液の濁性を評価した。被覆化キトサン粒子を塩溶液と混合した。

度を測定した。酸性の pH ではクエン酸の荷電率の低下、一定時間後、微粒子懸濁液を上記と同様の条件で遠心処理

pH6.5 以上ではキトサンの荷電率の低下に対応して濁度がを行い、微粒子を沈殿させた。遠心後上清を回収し、上清低下し、粒子が崩壊していた。つまり、官能基の荷電率のをプロテインアッセイした。

低下に対応して濁度が減少し、荷電率が濁度の変化（粒子３の膨張や崩壊）に密接に関わっている事が示唆された。こ

実験結果の結果は、官能基の荷電率の低下に伴い、微粒子形成の駆キトサン微粒子の作製における、架橋化剤の違いによる動力である粒子内のイオン架橋点が減少するため微粒子が影響を検討した。トリポリリン酸を用いた場合、カプセル

徐々に膨張し、イオン架橋点がある一定以下の数になると化効率が高いナノサイズの粒子を調製できる条件は見つか

微粒子は完全に崩壊すると考察される。

らなかった。カプセル化効率は、10％前後であったが、粒そこで、より安定なキトサン粒子を得るために EDC に

子径とゼータ電位はキトサン／トリポリリン酸比に依存しよる共有結合架橋の形成を行ったところ、塩存在下での微た変化が見られた。キトサンを増やすと粒子径は小さくな粒子の安定性が改善された。またタンパク質のカプセル化

り、ゼータ電位は増加した。

効率は 80％かそれ以上となり、大幅に改善されることがデキストラン硫酸をクロスリンカーとした場合にはキトわかった。キトサンの架橋化によりタンパク質の放出が抑

サン／デキストラン硫酸比が大きくなるにつれて粒子径お制されていることが示された。粒子サイズとしては、動よびカプセル化効率ともに大きくなり、ナノサイズの粒子

的光散乱法および走査型電子顕微鏡での観察により 4 − 5

径と高いカプセル化効率を持つ微粒子が調製される条件は㎛程度であることが示された。
共有結合されたキトサン粒子からの内包された GOD の見つからなかった。
クエン酸を用いて調製したキトサン微粒子では、キトサ放出挙動を測定した。イオン架橋化キトサン微粒子では、

ン／クエン酸の組成により、ナノサイズの粒径を有し、30pH 7.4 の緩衝液中において GOD が 10 分で 80% 以上放出

タンパク質

キトサン

架橋剤

4℃ , 200rpm, 24h

安定化剤としての高分子
反応開始剤

4℃ , 200rpm, 24h

4℃ , 200rpm, 24h
被覆化キトサン粒子

図１

タンパク質をカプセル化した微粒子の作製方法の概略図− 28 −

アニオン性の多糖で被覆したキトサン微粒子へのタンパク質のカプセル化と機能評価されてしまった。一方、共有結合架橋化キトサン微粒子でも可能であった。アニオン性の多糖としてヒアルロン酸は

は、GOD の放出が大幅に抑制され、数時間後でも 10％程

粘性が高く安定な粒子を得ることができなかったが、ペク度であった（図２）。共有結合架橋により微粒子が膨張・チンを用いることで安定な粒子を得ることができた。この崩壊しなくなった事でタンパク質を粒子内に安定に保持でようなタンパク質をカプセル化した微粒子の作製を達成しきるようになり、放出が抑制されたと考えられる。

たが、用途によっては、溶液中での凝集の抑制や、塩溶液

次に、キトサン粒子をアニオン性の高分子により被覆を中での安定性を高める工夫を更に行なう必要性が示され行った。このような３元複合体の作製では、キトサンのアた。キトサン微粒子の安定性を向上と、タンパク質の徐放ミノ基とアニオン性高分子のカルボキシル基の比率 (N/C性が示されたことで、今後は細胞特異性を高めるための工比 ) によって調製される粒子の粒子径やカプセル化効率な夫、および細胞を活性化するタンパク質などをカプセル化

どの物性が変化すると考えられる。そこで複数の N/C 比

して、その機能を解析する予定である。

でキトサン粒子を被覆し、そのキャラクタリゼーションを行なった。ヒアルロン酸で被覆した粒子では凝集の度合い（引用文献）が高く正確な測定が出来なかったので、ペクチンでの測定

１）M. Morimoto et al, Trends. Glycosci. Glycotechnol., 14,を行なった。

205-222,（2002）

ペクチン被覆化キトサン粒子のカプセル化効率と粒子径２）T. Sato, T. Ishii, and Y. Okahata, Biomaterials, 22,の測定を行なった。カプセル化効率に関しては全体的に2075-2080（2001）

60 〜 90％の高い値を示していた。粒子径に関しては、N/

３）T. Ishii, Y. Okahata, T. Sato, Biochim. Biophys.

C 比の増加によりミクロンオーダーからナノオーダーへのActa,1514, 51-64（2001）

粒子サイズの減少が観察された。N/C 比が増加するにつ

４）M. Hashimoto, Z. Yang, Y. Koya, Non-viral Gene

れて粒子の凝集が抑制された。次に、ペクチン被覆キトサ

Therapy: Gene Design and Delivery, Springer, 63-74

ン粒子からの GOD の放出挙動における塩濃度の影響につ（2005）

いて検討した。その結果、塩濃度が高くなると GOD の放５）M. Hashimoto, M. Morimoto, H. Saimoto, Y.

出がみられた（図３）。

Shigemasa, T. Sato, Bioconjugate Chemistry, 17, 309-

３

316（2006）

結言６）M. Hashimoto, M. Morimoto, H. Saimoto, Y.
Shigemasa, H. Yanagie, M. Eriguchi and T. Sato,

キトサン粒子中にタンパク質 GOD をカプセル化するこ

Biotechnology Letters, 28,815-821（2006）とができた。水溶性のキトサンを用いることで、タンパク

７）M. Hashimoto, Y. Koyama, and T. Sato, Chem Lett.

質の変性のない中性の pH でのカプセル化が可能であった。

37266-267（2008）

しかしながら、タンパク質とキトサンを混合するだけでは、溶液中でタンパク質を保持する事はできなかった。そこで、クエン酸を用いてキトサンをイオン架橋さらには共有結合
架橋する事でタンパク質の保持効率を向上することができ20mM MES Buffer（pH6.0, 150mM Nacl）

た。さらに、その表面をアニオン性の多糖で被覆すること20mM MES Buffer（pH6.0, 10mM Nacl）
20mM MES Buffer（pH6.0）100

イオン架橋キトサン粒子

80

Cumulative Release（％）

Cumulative Release（％）

100

60
40
20
0

共有結合架橋粒子
0

50

100

150

200

80
60
40
20
0

0

Incubation Time（ｍｉｎ）

図２ イオン架橋および共有結合架橋したキトサン粒子からの GOD の放出

2

4

6

Incubation Time（h）

図３ ペクチン被覆化キトサン微粒子からの GOD の放出の塩濃度依
存性− 29 −

新しい生体親和性材料としてのペプチド性人工コラーゲンゲル

早稲田大学理工学術院

小 出

隆 規

We have developed a peptide-based collagen-like gel utilizing the self-assembling property of collagen-like peptides,
i.e. (Pro-Hyp-Gly)n. In order to functionalize the hydrogel, we incorporated Gly-Phe-Hyp-Gly-Glu-Arg sequence, whichis recognized by integrin, to the peptide building blocks. When human fibroblasts are cultured on the material, integrindependent cell attachment and spreading are observed.

１．緒

用いた人工コラーゲンは、デザイン・合成したヘテロ３

言

量体コラーゲンペプチドの自発的な分子間フォールディン

これまでの多くの研究から、数十種におよぶタンパク質

グを利用して作製した。採用したペプチドは、コラーゲン

が、長さ 300 nm におよぶコラーゲン３重らせん領域に多様 Gly-Pro-Hyp（Hyp, 4-Hydroxyproline） 繰 り 返 し 配 列

数結合していることが知られている。その中には、直接コを持つ３本のペプチド鎖を、ジスルフィド結合によってラーゲン３重らせんを認識して細胞内に直接シグナルを入

相互にずらせて架橋した３量体ペプチドである。このペ力するインテグリン、Discoidin domain reseptor（DDR）

プチドは、自発的な分子間フォールディングにより、３のような膜レセプターや、コラーゲンに結合して機能が重らせん構造が長軸方向に伸長し、コラーゲン様超分子制御されるコラーゲン結合タンパク質（例えば、Pigmentとなる（Yamazaki CM, Asada S, Kitagawa K, Koide T.

epithelium-derived factor（PEDF） な ど ） が 含 ま れ る。

Biopolymers. 2008 ; 9（6）:816-23）。

それぞれのコラーゲン結合タンパク質は、３重らせん上に２．実提示された特異な配列（コラーゲンの機能エピトープ）に結合し、その機能を発揮する。したがって、天然のコラー

2-1験

３量体ペプチドのデザイン

ゲンは、多数の機能エピトープと多数のコラーゲン結合タ

細胞表面に存在するコラーゲンレセプターのひとつでンパク質との結合によって惹起される多様なシグナルを、ある a2b1 インテグリンは、コラーゲン３重らせん構造

様々なターゲット細胞に入力している。また、個々のター

上 の Gly-Phe-Hyp-Gly-Glu-Arg（GFOGER） 配 列 を 認 識

ゲット細胞は、コラーゲンより直接的・間接的に複数のシして結合することがすでに知られている。この GFOGER

グナル入力を受け、それらシグナルの総和としてのレスポ

配列を含む３量体ペプチドをデザインした。しかし、こンスを示す。

の GFOGER 配列を３量体ペプチドのコラーゲン様 Gly-

しかし現状において、コラーゲンは常に「バルク材料」

Pro-Hyp 繰り返し配列中に組み込むことで、そのペプチとして利用されており、コラーゲンが分離可能な多数の機ドが形成する３重らせん構造の熱安定性の低下が懸念され能的アミノ酸配列を内包した多機能タンパク質であるといる。そこでまず、経験的パラメータをもちいたコンピューう認識は、生命科学に携わる研究者においても低い。また、タプログラムを利用して、コラーゲン様配列中の一部を天然のコラーゲンをソースとしている限り、コラーゲンのGFOGER 配列に置換することで３重らせん構造の熱安定

個々の機能を分離して利用することは原理的に困難である。

性をどれくらい変化させるかについて解析した。この結果

そこで本研究では、細胞膜上のレセプターを活性化するを基に、３量体ペプチド中のどの位置に GFOGER 配列を

特定のアミノ酸配列を組み込んだ人工コラーゲンを作成し、組込むか、また、３量体ペプチドを構成する３本のペプチ

これを新規な機能性生体材料として応用するための技術基

ド鎖の長さを決定し、機能化人工コラーゲンの原料となる盤を築くことを目的として研究を行った。

３量体ペプチドを考案した。

A peptide-based collagen-like gel as anovel biomaterial

2-2

a2b1 インテグリンの結合配列を組込んだ３量体
ペプチドの合成

Takaki Koide
Faculty of Science and Engineering,
Waseda University

３ 量 体 ペ プ チ ド を 構 成 す る ３ 本 の 各 ペ プ チ ド 鎖 は、Fmoc 固相法により合成した。次いで、分子中に導入したシステインのチオール基を利用した段階的かつ位置選択的なジスルフィド結合形成反応を用いることで、各ペプチド− 30 −

新しい生体親和性材料としてのペプチド性人工コラーゲンゲル鎖を３量体化した（Figure 1）。合成したペプチドは、逆相 HPLC 分
析 お よ び MALDI-TOF MS 測 定 により同定した。合成した３量体ペプ
チドの３重らせん構造の形成およ
びその熱安定性を、円二色性（CD）
測定により確認した。

2-3 機能性人工コラーゲンへの細胞接着の顕微鏡観察
３量体ペプチドをコーティングした 96 well dish-plate 上でヒト皮膚
繊維芽細胞（HDF）を培養し、細胞接着の有無を顕微鏡で観察した。
ペ プ チ ド 水 溶 液（10 µg/ ㎖ ） を
各 well に入れ４℃で 12 時間静置
し、ペプチドをプレートにコーティングした。BSA で各 well をブロッキングした後、ヒト皮膚繊維芽細胞（HDF） を 播 種し、37℃でイン
キュベートした。２時間後、細胞を４％ p-formaldehyde で固定、２％
crystalviolet で染色し、細胞接着の有無を顕微鏡にて観察した。

３．結果と考察3-1

デザインと合成

デザインした３量体ペプチドを純度良く得た。CD スペクトル測定の結果、合成した３量体ペプチドがコ
ラーゲン様３重らせん構造を形成す
ることを確認した。また、３重らせん構造の変性温度を測定したところ、細胞培養温度である 37℃においてその３重らせん構造を安定に維持できることを確認した。

3-2

人工コラーゲンの機能化

３量体ペプチドでコーティング
したプレート上での HDF の接着を、
コラーゲン、または BSA をコーティングしたプレート上での接着と比較した。
GFOGER 配列を組み込んだ３量体ペプチドをコーティングしてある
プレート上では、コラーゲンの場
合と同様に HDF は接着した。一方、

Figure 1 位置選択的なジスルフィド結合形成反応を利用したペプチドの３量体化
矢印は、コラーゲン様 Gly-Pro-Hyp の単純繰り返し配列を示す。
ⅰ）固相合成用ビーズからの切り出し、脱保護、およびチオール基のピリジルスルフェ
ニル化（活性化）反応。
ⅱ）ジスルフィド結合形成反応（２量体化）。
ⅲ）アセトアミドメチル基（保護基）からニトロピリジルスルフェニル基（活性化基）への変換反応。
ⅳ）ジスルフィド結合形成反応（３量体化）− 31 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

Figure 2 プレートにコーティングした基質依存的な HDF の接着
プレートのコーティングに要した Collagen I, BSA, ３量体ペプチド、各水溶液の濃度は、いずれも 10µg/㎖。

GFOGER 配列をもたない３量体ペプチドでは接着が見ら

a2b1 インテグリンの認識配列であるが、今回確認したれなかった。本実験で示した細胞接着が、GFOGER 配列

HDF の接着が a2b1 インテグリンによるものかどうかを依存的に起こるものであることを明らかにした。

示すには至っていない。今後解析していく必要がある。

コラーゲンの３重らせん上における GFOGER 配列は、

− 32 −

Wnt シグナルを標的とした育毛促進作用をもつ天然成分の探索

千葉大学大学院薬学研究院

大 槻

崇

Wnt signaling maintains hair inducing activity including regeneration of hair follicle. On the basis of our screening
program targeting activation of TCF/b-catenin transcriptional activity, a plant extract of Excoecaria indica was selected
as a positive sample. Activity-guided fractionations led to the isolation of a-sapinine (1) as active compound. Also, two
flavonoid glycosides, myricetin 3-O-b-D-galactopyranoside (2) and myricetin 3-O-a-L-rhamnopyranoside (3) were isolated
from Erythrophleum succirubrum as active compounds. Compound 1 led to more than 20-fold increase in TCF/b-catenintranscriptional activity at 1.4 or 2.9 μM．

１．緒

言

２． 実

古来より加齢に伴う男性型脱毛が多くの男性を悩ませてきたが，最近では脱毛の発症メカニズムについても分子レ

2・1験

TCF/b-catenin 転写誘導活性試験

対数増殖期にある 293T/STF 細胞

3）を 96 穴白色平底マ
4ベルで解明されてきている．退縮に向かう分子機構につイクロプレートに各ウェル中 200µL あたり 3×10 cells

いてはアポトーシスによるものであることが明確になっの密度で細胞を播種し，10%FBS 含有 D-MEM 培地中でてきたが，休止していた毛包の発毛段階へのスイッチング

24 時間培養した．培地の除去後，種々の濃度の試料（植に関しては，以前から指摘されていた男性ホルモン ( アン物エキス，分画後の画分，単離した化合物）を含有す

ドロゲン ) の関与に加え，最近では，毛包上皮幹細胞の存る 200µL の培地を添加し 24 時間培養した．その後培地在，この幹細胞にシグナルを送る毛乳頭細胞の重要性，及を取り除き，PBS で細胞を１回洗浄後，細胞溶解剤 Cell

びこれら 2 種の細胞間に作用する分泌性のシグナル因子のCulture Lysis Reagent（プロメガ社製）を 20µL 加え 30

関与することがトランスジェニックマウスやコンディショ

分間振とうした．その後プレートと発光基質液（発光基

ナルノックアウトの研究で明らかになりつつある．ま質 Luciferase Assay Substrate ＋緩衝液 Luciferase Assay

た，動物の発生過程で，体軸形成や陥入運動など形づくり

Buffer, ともにプロメガ社製）をマイクロプレートルミノの基盤となる初期の重要なプロセスから，その後の種々のメーター（サーモ社製ルミノスキャンアセント）へセット

組織・器官の形成に関与する Wnt シグナル伝達経路の活しルシフェラーゼ活性を測定した．なお，試料添加時のル性化（b-catenin/LEF/Tcf タンパクの複合体形成→複合体

シフェラーゼ遺伝子の発現量（化学発光量）を指標として，の TCF 結合領域への結合それに伴う転写活性化）が，毛TCF/b-catenin 転写誘導活性を評価した． 293T/STF 細

包形成，毛髪生成に重要な役割を果たしていることが明胞は，John hopkins 大学の Jeremy Nathans 教授よりごらかにされている．当研究室では，最近，Wnt シグナル

恵与頂いた．

1, 2）

伝達経路における最下流の TCF/LEF 転写因子の転写活性を評価するレポーターアッセイを確立した．本研究では，

2・2

スクリーニング検体

Wnt シグナルを活性化する天然物（小分子化合物）を探

スクリーニングは，当研究室で独自に採集，構築したタ

索し，見出した活性成分の中から，有効な育毛促進作用をイ，インドネシア，バングラデシュ産の植物エキス群を対有する化合物を発見し，育毛剤原材料としての利用に貢献

象とし，良好な活性を示す検体を選別する．

することを目的とする．

2・3

Excoecaria indica からの活性成分の探索

Excoecaria indica の葉部（42 g）をメタノールで室温にSearch for natural product for promoting
hair growth based on Wnt signaling
Takashi Ohtsuki
Graduate School of Pharmaceutica l
Sciences, Chiba Universityて 24 時間抽出した．その後，ホモジナイズし，遠心分離及び濾過により抽出液を濾別した．残渣にメタノールを加えて再抽出し，これらの抽出液を併せて減圧濃縮し，抽出物（16 g）を得た．次に，この抽出物についてヘキサン，
酢酸エチル，ブタノールを用い溶媒分配を行い，ヘキサン
可溶部（0.7 g）, 酢酸エチル可溶部（3.9 g）, ブタノール可溶部（3.3 g）, 水可溶部（3.9 g）をそれぞれ得た．ヘキサ− 33 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

ン可溶部をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（分離用

心分離及び濾過により抽出液を濾別した．残渣にメタノ

担体：Silica gel PSQ100（28 ㎜ ×260 ㎜）；移動相：クロールを加えて再抽出し，これらの抽出液を併せて減圧濃縮

ロホルム / メタノール）に付し Fr．1A ～ 1R を得た． 次

し，抽出物 56 g を得た．この抽出物のうち 37 g をヘキサに，Fr．1E（53.6 ㎎）についてゲルろ過カラムクロマト

ン，酢酸エチル及びブタノールで溶媒分配を行い，ヘキ

グラフィー（分離用担体：Sephadex LH-20（20 ㎜ ×550

サン可溶部（10.9 g），酢酸エチル可溶部（4.3 g），ブタノ㎜）；移動相：メタノール）に付し Fr．2A ～ 2O を得た．

ール可溶部（9.3 g），水可溶部（13.4 g）をそれぞれ得た．

次に Fr. 2D について，逆相 HPLC（カラム：CAPCELL

ブタノール可溶部をシリカゲルカラムクロマトグラフィー

PAK ACR C18（4.6 ㎜ ×250 ㎜）；移動相：75% メタノール；（分離用担体：Silica gel PSQ100B（44 ㎜ ×600 ㎜）；移動

流速 , 1.0 mL/min；検出 UV（254 nm））による精製を行

相：クロロホルム / メタノール）に付し Fr.1A ～ 1I を得た．

い化合物 1（1.4 ㎎）を単離した．

このうち Fr．1E について逆相 HPLC（カラム：Mightysil
RP-18（10 ㎜ ×250 ㎜）；移動相：35% メタノール；流速：

2・4 Erythrophleum succirubrum か ら の 活 性 成 分の探索

2.0 mL/min；検出：UV（254 nm）and RI）による分画をErythrophleum succirubrum の葉部 330 g をメタノールで

2E について，C30 カラムを用いた逆相 HPLC（カラム：

室温にて 24 時間静置した．その後，ホモジナイズし，遠Develosil C30 UG5（8 ㎜ ×250 ㎜）；移動相：45％メタノ

行い，Fr.2A-2F を得た．得られた画分のうち Fr.2C 及びFig.1 Isolation chart of Excoecaria indica− 34 −

Wnt シグナルを標的とした育毛促進作用をもつ天然成分の探索

Fig.2 Isolation chart of Erythrophleum succirubrumール；流速： 1.5 mL/min；検出：UV（254 nm）and RI）

succirubrum（マメ科）より転写活性を上昇させる化合物を行い，Fr.2C からは化合物 2（6.1 ㎎）を，Fr.2E からはを単離したので併せて報告する．

化合物 3（9.3 ㎎）をそれぞれ単離した．

3・2

３．結果及び考察
3・1

Excoecaria indica からの活性成分の探索

Excoecaria indica の葉部より得られたメタノール抽出物

スクリーニングの TCF/b-catenin 転写活性について検討を行ったところ，

当研究室の天然物資源ライブラリー（天然抽出物）の25µg/mL で未処理群と比較して 9.5 倍 TCF/b-catenin 転

う ち， 植 物 エ キ ス 250 種 に つ い て ス ク リ ー ニ ン グ を 行

写活性を上昇させることが判明した．次に，本抽出物につったところ，2 種に TCF/b-catenin 転写活性を上昇させいてヘキサン，酢酸エチル，ブタノールを用い溶媒分配ることが判明した．このうち，強い活性が認められたを行い，各可溶部をそれぞれ得た．得られた各可溶部のExcoecaria indica（トウダイグサ科）を試料として選択しTCF/b-catenin 転写活性について検討を行ったところ，ヘ活性成分の探索を行った．また，本スクリーニングにてキサン可溶部，酢酸エチル可溶部，ブタノール可溶部に活TCF/b-catenin 転写阻害作用を示した植物 Erythrophleum性が認められた．そこで，ヘキサン可溶部について分画を− 35 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

ラフィーに付し Fr.1A ～ 1R を得た．得られた画分のうち3・3 Erythrophleum succirubrum か ら の 活 性 成 分の探索

Fr．1E, 1F, 1H, 1K, 1L, 及び 1M に TCF/b-catenin 転写活Erythrophleum 属の植物は西アフリカ，アーストライア性の上昇が認められた．単離量並びに TLC 分析の結果をやフィリピンなどに広く分布しており，葉部，種子に強い考えあわせ，Fr.1E を次の分画の対象とした．そこでまず，毒性を示し，子供や家畜を致死させた報告が多数ある．マ

Fr.1E（53.6 ㎎）について , Sephadex LH-20 カラムクロマ

メ科植物 Erythrophleum succirubrum はタイでは「Saat」とトグラフィーを行い Fr．2A ～ 2O を得た．主成分が Fr．

の慣用名で知られ，その葉部，種子の急性毒性作用，心2C 及び 2D に移行したことが TLC 分析より明らかになっ

臓停止及び神経筋遮断作用が報告されている ．これまたため，この 2 つの画分について，逆相 HPLC による精でに Erythrophleum 属の成分研究に関しては，アルカロイ

製を行い化合物 1（1.4 ㎎）を単離した．

ド類化合物の cassaine, cassaidine, acetyl cassaidine の単行った．ヘキサン可溶部をシリカゲルカラムクロマトグ

化合物 1 は，各種スペクトル分析及び文献値

４）

との比

較より，a-sapinine と同定した．

５）

６）

離 報 告 例 が あ る ． な お，Erythrophleum succirubrum の
メタノールエキスは，上記のスクリーニングにおいてTCF/b-catenin 転写阻害活性を示したものの，本植物に化 合 物 1: a-sapinine. White solid; C30H37NO7, MW: 523.

ついて詳細な成分解析を行ったところ，驚くことに TCF/[a] = -63.6 (c 0.4, CHCl3); EIMS m/z 523 [M ], H NMR

b-catenin の転写を活性化する成分の単離に至ったので報[measured at 600 MHz, CDCl3)]: d 7.08 (s, H-1), 2.80 (m,

告する．

26
D

+

1

H-4), 3.45 (brd, J=15.6, H-5), 5.14 (brs, H-7), 2.02 (m, H-8), 3.52

Erythrophleum succirubrum の葉部 330g をメタノールで(m, H-10), 1.87 (m, H-11), 5.72 (d, J=10.2, H-12), 0.83 (d, J=4.8,

抽出し抽出物 56g を得た．このうち 37g をヘキサン，酢H-14), 1.17 (s, H-16), 1.33 (s, H-17), 1.12 (d, J=6.0, H-18), 1.80

酸エチル及びブタノールで溶媒分配を行い，各可溶部を(s, H-19), 3.91 (d, J=12.0, H-20), 4.01 (d, J=12.0, H-20), 6.70

それぞれ得た．得られた各可溶部のうちブタノール可溶(d, J=9.0, H-3’), 7.42 (t, J=7.2, H-4’), 6.61 (t, J=7.2, H-5’),

部を選択し以下の分画を行った．まず，本可溶部につい

7.88 (d, J=7.8, H-6’), 2.92 (d, J=4.8, NH-CH3), 2.08 (s, CO-てシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い Fr.1A ～CH3), C NMR [measured at 150 MHz, CDCl3]: d 156.1 (C-

1I を得た．このうち，Fr.1E について逆相 HPLC による分

1), 137.1 (C-2), 214.3 (C-3), 49.6 (C-4), 25.1 (C-5), 143.4 (C-6),

画を行い，Fr.2A-2F を得た．得られた画分のうち Fr.2C

126.4 (C-7), 40.7 (C-8), 78.1 (C-9), 47.4 (C-10), 43.5 (C-11), 74.9

及び 2E について，C30 カラムを用いた逆相 HPLC を行い，(C-12), 65.3 (C-13), 37.1 (C-14), 25.2 (C-15), 24.1 (C-16), 16.5

Fr.2C からは化合物 2 を（6.1 ㎎），Fr.2E からは化合物 3(C-17), 11.8 (C-18), 10.4 (C-19), 69.3 (C-20), 173.5 (C-21), 169.1（9.3 ㎎）をそれぞれ単離した． 単離した化合物 2 及び 3

(C-22), 152.3 (C-1’), 110.8 (C-2’), 110.8 (C-3’), 134.9 (C-4’),

は， H NMR スペクトルにおいて特徴的なシグナルとし114.3 (C-5’), 134.9 (C-6’), 29.5 (NH-CH3), 21.2 (CO-CH3).

て，6-8 ppm 付近でフラボノイド骨格由来するシグナル並

13

1

Fig.3 TCF/b-catenin transcriptional activity of each soluble fractions of Excoecaria indica− 36 −

Wnt シグナルを標的とした育毛促進作用をもつ天然成分の探索

びに 3-5 ppm 付近に一分子の糖に由来するシグナルが観2’’), 72.1 (C-3’’), 73.4 (C-4’’), 72.0 (C-5’’), 17.7 (C-6’’).

測されたことより，2 及び 3 はフラボノイド配糖体と推定された．各種スペクトル分析及び文献値との比較より，2

3・4

は myricetin 3-O-b-D-galactopyranoside

単離した 3 種の化合物について TCF/b-catenin 転写活3-O-a-L-rhamnopyranoside８）

７），3 は myricetin

単離した化合物の TCF/b-catenin 転写活性性について検討を行った．その結果，a-sapinine（1）は，と同定した．

293T/STF 細 胞 の 生 存 率 を 維 持 し な が ら 1.4 µM で 22.5
化 合 物 2: Myricetin 3-O-b-D-galactopyranoside. Yellow

倍（Viability: 86%），2.9 µM で 46.6 倍（Viability: 88%）

powder; C21H20O3, MW: 480.; FABMS m/z 481 [M+H] , Hと比較的低濃度で顕著に TCF/b-catenin の転写を活性化

NMR [measured at 500 MHz, CD3OD)]: d 6.19 (d, J=2.0,

することが判明した．また，フラボノイド配糖体である

H-6), 6.39 (d, J=2.0, H-8), 7.37 (s, H-2’and H-6’), 5.18 (d,myricetin 3-O-b-D-galactopyranoside（2） 及 び myricetin

J=8.0, H-1’’), 3.82 (dd, J=8.0 and 9.0, H-2’’), 3.56-3.59

3-O-a-L-rhamnopyranoside（3） は，293T/STF 細 胞 の 生(overlapped, H-3’’), 3.86 (brd, J=3.0, H-4’’), 3.49 (brt,

存率を維持しながら 50 µM 及び 100 µM で TCF/b-catenin

J=6.5, H-5’’), 3.65 (dd, J=6.5 and 11.5, H-6’’), and 3.56-の転写を活性化することが判明した．

+

3.59 (overlapped, H-6’’),

13

1

C NMR [measured at 125

４． 結

MHz, CD3OD]: d 158.7 (C-2), 136.0 (C-3), 179.4 (C-4), 163.0

語(C-5), 99.9 (C-6), 166.1 (C-7), 94.7 (C-8), 158.4 (C-9), 105.6 (C-Wnt シグナルと毛髪生成に関しては 2007 年 5 月に成10), 121.7 (C-1’), 110.0 (C-2’), 146.3 (C-3’), 138.1 (C-4’),体における毛包形成と Wnt シグナル経路の関与につい

146.3 (C-5’), 110.0 (C-6’), 105.6 (C-1’’), 73.3 (C-2’’), 75.1て Nature 誌(C-3’’), 70.1 (C-4’’), 77.2 (C-5’’), 62.0 (C-6’’).

告されている９）で報告されるなど，その新知見が多く報

10）．一方，小分子を用いたアプローチで
11）は，Wnt シグナルを活性化させる化合物として，QS11
12）

12）

や

化 合 物 3: Myricetin 3-O-a-L-rhamnopyranoside. Yellow

SB-216763

powder; C21H20O3, MW: 464.; FABMS m/z 465 [M+H] , H

シグナルに作用する小分子を育毛作用に結びつけた研究は

NMR [measured at 500 MHz, CD3OD)]: d 6.19 (d, J=2.1,

あまり知られていない

H-6), 6.35 (d, J=2.1, H-8), 6.94 (s, H-2’and H-6’), 5.31 (d,に，有効な育毛促進作用を有する化合物を発見を目指し，

J=1.5, H-1’’), 4.21 (dd, J=1.5 and 3.2, H-2’’), 3.78 (dd,

当研究室保有の植物エキス 250 種について TCF/b-catenin

J=3.2 and 9.5, H-3’’), 3.33 (t, J=9.5, H-4’’), 3.51 (dq, J=6.1

転写活性を指標としたスクリーニングを行った．その

+

1

13

, SB-415286などが報告されているが，Wnt

13）．本研究では，上記の知見を基

and 9.5, H-5’’), 0.95 (d, J=6.1, H-6’’), C NMR [measured

結果，活性が認められた Excoecaria indica より a-sapinine

at 125 MHz, CD3OD]: d 159.4 (C-2), 136.3 (C-3), 179.7 (C-を，Erythrophleum succirubrum よ り myricetin 3-O-b-D-4), 163.2 (C-5), 99.8 (C-6), 165.9 (C-7), 94.7 (C-8), 158.5 (C-9),

galactopyranoside 及 び myricetin 3-O-a-L-rhamnopyranoside

105.9 (C-10), 122.0 (C-1’), 109.6 (C-2’), 146.9 (C-3’), 137.9の単離に成功した．今後，特に Excoecaria indica の活性画

(C-4’), 146.9 (C-5’), 109.6 (C-6’), 103.6 (C-1’’), 71.9 (C-分について，更に成分探索を行い，得られた活性成分の化

Fig.4 Chemical structure of compounds 1-3− 37 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

Fig.5 TCF/ b -catenin transcriptional activity ofValues are mean±S.D. (n=3)
compound 1

Fig.6 TCF/b-catenin transcriptional activity of compound 2 and 3

Values are mean±S.D. (n=3)

Phytochemistry 1971, 10, 2793-2797.

学構造を明らかにする予定である．また，得られた活性成分について，種々の生化学的手法（Western blotting 法な７）Foo, L.Y.; Lu, Y; Molan, A.L. et al., Phytochemistry
2000, 54, 539-548.

ど）を用いてその作用機構の詳細な解析を行い，有望な作用を示した成分について，in vivo 実験等により育毛作用に

８）Chung, S.; Kim, Y.; Takaya, Y. et al., J. Agric. Food
Chem. 2004, 52, 4664-4668.

関する有用性を評価し，育毛剤原材料としての利用を検討していきたい．

９）Ito, M.; Yang, Z.; Andl, T. et al., Nature 2007, 447, 316-

（引用文献）

10）Gerard M. J. Beaudoin III, G. M. J.; Sisk, J. M.;

320.
１）岸本治郎 , 日本農芸化学会誌 2003, 77, 566-569.

Coulombe, P. A. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 2005, 102,２）岸本治郎 , 実験医学 2000, 18, 1817-1820.

14653-14658.

３）Xu, Q.; Wang, Y.; Dabdoub, A. et al., 2004, 116, 883-

11）Zhang, Q.; Major, M.B.; Takanashi, S. et al., Proc. Nat.
Acad. Sci. USA, 2007, 102, 7444-7448.

895.
４）Chumkaew, P.; Karalai, C.; Ponglimanont, C. et al, J.

12）Coghlan, M.P.; Culbert, A.A.; Cross, D.AE. et al.,Chem. boil., 2000, 7, 794-803.

Nat. Prod. 2003, 66, 540-543.
５）Sattayasai, J.; Sattayasai, N.; Laupattarakasem, P. et

13）河﨑綾，鳥居宏右，西沢幸二

年会講演要旨集

al., J. Sci. Coc. Thailand 1983, 9, 47-52.
６）Griffin, W.J.; Phippard, J.H.; Culvenor, C. C. J.et al.,

− 38 −

2007, 2, 117．

他，日本薬学会第 127

表皮細胞接着因子のバイオイメージング法の開発

慶應義塾大学医学部皮膚科学教室

天 谷

雅 行

In this study we attempted to develop a bioimaging analysis for epidermal cell-cell adhesion molecules, desmoglein (Dsg),
as well as intermediate keratin cyteskeleton network. We used Dsg3, which is an autoimmune target antigen of pemphigus
vulgaris, and keratin 14 and fused them with green fluorescence protein (GFP) or red fluorescence protein (RFP). When thesechimeric molecules were introduced into cultured keratinocytes, we could observe time-lapse changes of Dsg3 and keratin aslive images without killing or fixing cells. This approach has allowed us to overcome the limitations inherent in establishinga temporal sequence of events from fixed specimens, and to study the assembly and fate of desmosome precursors in living
cells during junction assembly. We demonstrated the fate of Dsg3 and keratin after binding of AK23 pathogenic monolconal
IgG antibody. After binding of AK23 IgG, Dsg3 diminished on the cell surface and tended to be internalized into cytoplasma.
The insertion of keratin filaments was also obscured and its retraction into cytoplasma was also observed. We are under way
to generate transgenic mice with Dsg3-GFP to perform in vivo bioimaging analyses. These new technique for live image of
epidermal cell adhesion molecules will provide a valuable tool to understand molecular mechanisms of normal skin, that willin turn contribute to cosmetic science.

１．緒Dsg3 は重層扁平上皮における角化細胞間の接着に重要な言役割を示すと考えられている。

本研究では、組換え蛍光蛋白質を用いて、表皮細胞間接

天疱瘡は、Dsg1 および Dsg3 に対する自己抗体が体内着において重要な役割をするデスモゾーム関連蛋白のリアで産生された結果、重層扁平上皮のデスモソーム同士の接ルタイムイメージング法を開発することである。細胞間接着が障害されて表皮や口腔粘膜などに水疱やびらんを生じ着に関与する蛋白の空間的情報（細胞内局在）及び時間的る自己免疫疾患である。自己抗体の標的となる Dsg の組

情報（経時変化）を解析し、全く新しい観点からデスモ

織内分布と天疱瘡の表現形との関連についてはこれまでにゾーム関連蛋白の機能解析を行うことである。正常な細胞

詳細に解析されてきた。これに対し、自己抗体結合後にど間接着を保つことは、皮膚を健康に保つ基礎となっており、のような機序で表皮細胞間の接着が障害され水疱が形成さその分子基盤を解析するリアルタイムイメージング法は、れるのかは未だ不明である。天疱瘡の病態を詳細に解明す化粧品学の進歩に大きく貢献するものと考えられる。

る上で、表皮細胞に自己抗体が結合する際、抗原蛋白を含

2．実

め周囲のデスモゾーム関連蛋白がどのような挙動を示すか

験

を、空間的情報（細胞内局在）ならびに時間的情報（経時デスモソームは、全身の上皮組織、心筋、肝臓などに分的変動）の両面から解析することが現在求められている。

布する主要な細胞間接着装置の一つであり、隣接する細胞

従来まで細胞内の蛋白質の局在を解析する方法として同士を強固に接着させるとともに、ケラチンなどの中間径は、特異的な抗体を用いた免疫染色が主体であった。しか線維と結合することで各組織の形態を安定化させる役割をし、免疫染色は、ホルマリン、アセトンなどの種々の固定もつ。デスモソームの構成蛋白には、膜貫通蛋白であるデ剤により組織、細胞を固定した後に蛋白の局在を検討する

スモグレイン（Dsg）およびデスモコリン（Dsc）、ならびため、細胞が生きている状態での蛋白の局在を反映していに細胞内の裏打ち蛋白であるプラコグロビン（PG）、デス

るかは不明である。また、細胞を固定してしまうため同じ

モプラキン（DP）、プラコフィリン（PKP）などの蛋白が細胞内での蛋白の経時的変化を観察することは不可能であある。これらの蛋白のうち、Dsg には Dsg1-Dsg4 の４種った。近年、蛍光蛋白質（Greenのアイソフォームが存在するが、その中でも Dsg1 およびGFP など）を目的の蛋白と融合させた融合蛋白を作製し、Development of bioimaging analysis for
epidermal cell adhesion molecules
Amagai Masayuki
D epa r t ment of D er mat olog y, Keio
University School of Medicine

FluorescenceProtein、

それを機能プローブとして用いることで、生きた状態での細胞内局在を可視化する技術が可能となり、従来とは全く異なる視点で分子の細胞内動態を観察することができるよ
うになった。
本研究では、デスモソーム関連蛋白のリアルタイムイメ
ージング法を開発し、細胞間接着におけるそれぞれの蛋白の挙動をリアルタイムで解析すると共に、天疱瘡の自己抗− 40 −

表皮細胞接着因子のバイオイメージング法の開発

体が結合してから水疱形成に至るまでの分子メカニズムに

結果それぞれの融合蛋白が導入細胞の細胞質に発現して認関する基礎的知見を得ることにある。デスモソーム関連

められたものの、Dsg3 が本来発現する場所となる細胞膜

蛋白ならびに表皮角化細胞の中間径線維であるケラチンに表面での発現は認められなかった。

蛍光蛋白質を融合した発現ベクターを作製し、それぞれを培養角化細胞に導入して融合蛋白の発現を試みた。続いて

３）リアルタイムイメージング法による動態解析

細胞接着における発現蛋白の細胞内動態を経時的固定後の過去に我々は、単独でマウス表皮に水疱を誘導する抗観察ならびにリアルタイムイメージング法により解析した。

Dsg3 マウスモノクローナル抗体（AK23 mAb）を単離しさらに培養角化細胞に抗 Dsg3 IgG 抗体を反応させ、抗体た。EGFP-K14 導入 KU8 細胞株を、ガラスベースディッと Dsg3 とが結合した後の発現蛋白の細胞内動態を経時的シュでコンフルエントになるまで培養した後、100 ㎍ / ㎖

固定後の観察ならびにリアルタイムイメージング法によりの AK23 mAb を反応させ、その後 AxioVision 社の Delta

試みた。

Vision 撮影装置を用いて EGFP-K14 の細胞内動態を 12 時

３．結間まで観察した。その結果、AK23 mAb 反応後 0.5 時間よ果り EGFP-K14 のごく一部で接着面の細胞膜への insertion１）蛍光蛋白質融合ケラチン 14（K14）およびケラチ
ン 5（K5）の発現が消失し、ケラチン線維が細胞の中心へと retract している像が見られたが、ほとんどのケラチン線維は反応後

ヒ ト K14 お よ び K5 翻 訳 領 域 全 長 の cDNA を PCR 法

12 時間においてもそのまま膜に insertion した状態で認により増幅し、これを Clontech 社の蛍光蛋白質発現ベク

められ、keratin retraction は認められなかった。その理

ター pEGFP-C1 ( 緑 ) に挿入して２種類の発現ベクター

由として、株化された角化細胞が単層培養下で Dsg2 を（pEGFP-K14, pEGFP-K5）を作製した。またヒト K14 の発現するため、Dsg2 を裏打ちする部分で EGFP-K14 の

cDNA については、同じく Clontech 社の GFP 変異蛋白

retraction が認められなかった可能性が示唆された。そこ

質発現ベクターである pEYFP-C1（黄）、pECFP-C1（シで細胞培養下で Dsg2 を発現しない正常ヒト表皮角化細胞アン）にも挿入して２種類の発現ベクター（pEYFP-K14,（NHEK）を今後の実験に用いた。

pECFP-K14）を作製した。
を発現しない細胞株である CHO 細胞にそれぞれ FuGENE

４）NHEK 細 胞 に お け る 抗 Dsg3 IgG 抗 体 結 合 後 のK14、Dsg3 の動態解析（Roche Applied Science）を用いて遺伝子導入したところ、

pEGFP-K14 を FuGENE（Roche）を用いて NHEK 細胞に遺発現した蛋白は細胞内で核周囲に凝集して認められ、正常伝子導入し、GFP 融合 K14 の発現を試みたが、融合蛋白

なケラチンと同様の網状の構築を形成することはなかっの発現は遺伝子導入後 72 時間まで認められなかった。そた。そこで４種類のベクターを培養ヒト表皮細胞株である

こで NHEK 細胞をガラスベースディッシュでコンフルエ

KU8 細胞に遺伝子導入したところ、発現した蛋白は細胞ントになるまで培養し、その後培養液を高 Ca 培地（1.2mM内で網状の構築を形成するとともに、一部では隣接する細Ca 含培地）に変更してさらに 12 時間培養した。培養後胞にむかってネットワーク状に伸張する像が認められ、この NHEK 細胞に対し、10 0 ㎍/ ㎖の AK23 mAb を0. 5 ～ 24の部位におけるデスモソームの裏打ち蛋白との結合が示唆

時間反応した。固定後、ケラチン線維をウサギ抗ケラチンされた。これらの発現蛋白のうち EGFP-K14 については、

抗体ならびに緑色蛍光色素（Alexor Fluor 488）で標識し安定形質導入 KU8 細胞株をネオマイシンで選択し、細胞た抗ウサギ IgG 抗血清（Molecular Probes 社）を用いて間接着におけるケラチンの細胞内動態の解析に用いた。

染色すると共に、膜状に結合した AK23 mAb を Alexor

作製した４種類の発現ベクターについて、デスモソーム

Fluor 546 標識抗マウス IgG 抗血清（Molecular Probes 社）

２）蛍光蛋白質融合 Dsg3 の発現を用いて染色した。その結果ケラチン線維の retraction 像

ヒト Dsg3 翻訳領域全長の cDNA を pEGFP-N1 に挿入

は、EGFP-K14 発現 KU8 細胞を使用したときよりも明瞭して発現ベクター pEGFP-hDsg3 を作製した。作製した発に観察された。しかしこの方法では、ケラチン線維が点状

現ベクターを KU8 細胞ならびに培養マウスケラチノサイの蛍光として認められたこと、ならびに一部のケラチン線

ト細胞株 Pam212 細胞に遺伝子導入したが、２種類の細胞

維では AK23 mAb 反応後 24 時間が経過しても細胞膜かにおいて融合蛋白の発現は全く認められなかった。

らの retraction が認められなかったことなどの問題を伴っ続いてマウス Dsg3 翻訳領域全長の cDNA を pEGFP-N1、ていた。

pEYFP-N1、pECFP-N1、ならびに赤色変異蛋白質発現ベ

後者については Ca シフトにより重層化した NHEK 細クターである pDsRed（Clontech 社）に挿入し、これらを胞が Dsg1 を発現するため、Dsg1 を裏打ちする部分でケ

KU8 細胞ならびに Pam212 細胞に遺伝子導入した。そのラチン線維の retraction が認められなかった可能性が考え− 41 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009られた。そこで NHEK 細胞を AK23 mAb と反応する直を用いて作製した。すなわち pEGFP-K14 より EGFP-K14

前に、Dsg1 の細胞外を切断することでその接着機能を障の cDNA を制限酵素を用いて切断し、末端を平滑末端処

害する黄色ブドウ球菌産生表皮剥脱毒素（ETA）1 ㎍ / ㎖

理した後にコスミドベクター pAxcw に挿入した。作製しを反応させ、その後 AK23 mAb 反応後のケラチン線維おた cDNA 挿入コスミドベクターを STRATAGENE 社のよび AK23 mAb の細胞内動態を経時的に観察した。そのGIGAPACK III XL を用いて Lambda Phage にパッケー

結果、AK23 mAb 反応後 6 時間より、角化細胞同士の接ジングし、コスミドベクターを増幅した。増幅したコス

着面においてケラチン線維の細胞膜からの retraction なら

ミドベクターを制限酵素処理済み DNA-TPC とともに 293

びに AK23 mAb の internalization が明瞭に観察された（図細胞に co-transfect し、出現した組換えアデノウイルスを１）。

回収した。ウイルス液を４回以上継代して高力価ウイルス

以上の結果より、AK23 mAb との反応によってケラチ液を作製し、これを NHEK 細胞に感染させて EGFP-K14

ンの retraction および Dsg3 の internalization が生じるこの発現の有無を観察した。その結果、感染後 24 時間よりとが示唆された。しかしケラチン線維が点状の蛍光としてEGFP-K14 が NHEK 細胞質内で高率に発現し、かつ線維認められる問題については解決が得られないため、アデノ状の蛍光パターンとして観察された（図２）。

ウイルス発現系を用いた EGFP-K14 cDNA の NHEK 細胞

低濃度のカルシウムの培養液中で角化細胞を培養するへの遺伝子導入、ならびにその融合蛋白の発現を試みた。

と、デスモゾーム蛋白は産生されるものの、デスモゾームは形成されない。しかし、培養液中のカルシウムの濃度を

５）アデノウイルス発現系による EGFP-K14 の NHEK細胞での発現上昇させると、比較的短時間で、細胞と細胞が接着し、デEGFP-K14 の cDNA を挿入した組換えアデノウイルス

養液中の Ca 濃度を高濃度へシフトし、角化細胞表面にを、TAKARA 社 の Adenovirus Expression Vector Kit

デスモゾームが形成されたときに EGFP-K14 の接着面にスモゾームが形成されることが知られている。そこで培向かっての insertion に変化が見られるか解析した。まず
NHEK 細胞を無 Ca 培地で培養したときには、EGFP-K14が細胞質内に網状の構造を形成して認められたが、接着面に向かってネットワーク状に伸張する像は認められず、細胞膜への insertion は認められなかった。これに対し培養液を高 Ca 培地（1.2 mM Ca 含培地）に変更したときには、
EGFP-K14 が接着面に向かって insertion する像が観察された（図７）。さらに培養液を再び無 Ca 培地に変更した
ところ、EGFP-K14 が接着面に向かって insertion する像が再び認められなくなった。
以上の結果より、アデノウイルス発現系を用いて発現させた EGFP-K14 は、NHEK 細胞において高率に発現する

図１ AK23 mAb 反応前後の NHEK 細胞におけるケラチン線
維および AK23 mAb の細胞内動態。
AK23 mAb 反応前の NHEK 細胞では、ケラチン線維の染色が細胞質全体および接着面の細胞膜表面において点状に認められ（A）、また AK23 mAb の染色も接着面の細胞膜上に点状に配列して認められた（B）。AK23 mAb 反応６時間後より、ケラチ
ン線維の膜表面からの retraction（C）、ならびに AK23 mAbの細胞質内への internalization（D）が認められ、これらの反
応は AK23 mAb の反応後 12 時間後でより顕著となった。（E,F）
。

− 42 −

図２ Adenovirus 発現系で NHEK 細胞に発現した
EGFP-K14。
EGFP-K14 が NHEK 細胞の細胞質内で明瞭な線
維状の蛍光パターンとして観察された。

表皮細胞接着因子のバイオイメージング法の開発

とともに、正常なケラチンと同様、高 Ca 条件下ではデス

その後 0.5 ㎎ / ㎖ の ETA を 37℃、2 時間反応し、さらにモソームの形成に伴いデスモソームの裏打ち蛋白と結合す

Dispase（Roche Diagnostics）を15 分間反応して NHEK 細る可能性が示唆された。

胞をディッシュから剥離した。剥離後、角化細胞のシートに対しピペッティングで物理的刺激を加え、固定後断片化

６）水疱形成能の異なる抗 Dsg3 IgG 抗体結合後のK14、Dsg3 の動態解析

した角化細胞のシート数を計数した。その結果断片化した

過 去 に 天 疱 瘡 モ デ ル マ ウ ス よ り 単 離 し た 複 数 の AKに対し、AK7 mAb、AK20 mAb を反応したときには断mAb の中で、マウスへの投与により明らかな水疱形成

片化は顕著ではなかった。さらに NHEK 細胞を異なる濃を誘導する AK23 mAb と、水疱形成を誘導しない AK7

度の AK23 mAb と反応して Dissociation assay を行った

mAb、AK18 mAb、AK20 mAb に つ い て、 そ れ ぞ れ のところ、断片化したシート数は AK23 mAb が増加するに

NHEK 細胞に対する接着障害活性の違いを Dissociation

つれ用量依存性に増加した（図３）。

シート数は、AK23 mAb 反応後に最も多く認められたの

assay を 用 い て 解 析 し た。 さ ら に EGFP-K14 を 発 現

続いてアデノウイルス発現系により EGFP-K14 を発現さ せ た NHEK 細 胞 に そ れ ぞ れ の mAb を 反 応 し た 後

さ せ た NHEK 細 胞 を、 あ ら か じ め 1 ㎎ / ㎖ の ETA での、EGFP-K14 および Dsg3 の挙動について解析を行っ

処 理 し た 後、100 ㎎ / ㎖ の Alexor Fluor 546 で 標 識 した。NHEK 細胞をコンフルエントになるまで培養した後、た AK23 mAb、ならびに新生仔マウスへの投与で明らか培養液を高 Ca 培地へシフトして重層化し、そこに AK7

な水疱形成を認めない AK18 mAb と反応させ、その後

mAb、AK20 mAb、AK23 mAb を 37℃、24 時間反応した。

Axio 社の Delta Vision を用いて EGFP-K14 ならびに AK

図３ Dissociation assay による AK mAb の接着障害活性の比較。
断片化したシート数は NHEK 細胞を AK23 mAb と反応したとき最も多く認められた（A, B）。また AK23 mAb 反応後の断片化したシート数は、反応に用いた AK23
mAb の濃度を増加することで用量依存性に増加した。

− 43 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

mAb の細胞内動態の違いを 8 時間まで観察した。その正常な細胞間接着を保つことは、皮膚を健康に保つ基礎

結果 AK23 mAb を反応させた NHEK 細胞では、反応後となっており、その分子基盤を解析するリアルタイムイメ

0.5 時間より EGFP-K14 の細胞内への retraction ならびにージング法は、化粧品学の進歩に大きく貢献するものと考AK23 mAb の細胞内への internalization が認められたのえられる。

に対し、AK18 mAb を反応させた細胞では、EGFP-K14

５．総の retraction および AK18 mAb の internalization ともに
反応後 8 時間まで明瞭ではなかった（図４）。

括

本研究では、表皮細胞間接着において重要な役割をする
デスモゾーム関連蛋白のリアルタイムイメージング法を開７）EGFP- K14 トランスジェニックマウスの作製

発するとともに、抗 Dsg3 IgG 抗体反応後の細胞間接着にアデノウイルス発現系にて導入に成功した EGFP-K14

おけるそれぞれの蛋白の空間的情報（細胞内局在）及び時の cDNA を、K5 プロモーター（13 kb）の下流に挿入し間的情報（経時変化）を解析し、デスモゾーム関連蛋白のた cDNA コンストラクト pGEM-K5pro-EGFP-K14 を作製

機能解析を行った。その結果抗 Dsg3 IgG 抗体の反応後に、した。この cDNA コンストラクトを、マウス角化細胞株

角化細胞同士の接着障害が見られると共に、Dsg3 の細胞

Pam212 細胞に前述の FuGENE（Roche Applied Science）

内への internalization およびケラチン線維の細胞膜からのを用いて遺伝子導入したところ、発現した蛋白は細胞内でretraction が生じることが明らかとなった。またマウス表

網状の構築を形成するとともに、一部では隣接する細胞に皮での水疱形成能の異なる AK mAb を角化細胞に反応さむかってネットワーク状に伸張する像が認められた。

せた際、Dsg3 とケラチンの挙動に違いが見られることを

４．考

細胞レベルで明らかにした。本研究の成果は、天疱瘡にお察ける水疱形成機序を分子レベルで解明する上での新しい所

本研究は、従来不可能であったデスモゾーム関連蛋白の見を得ただけでなく、表皮細胞間接着の分子機構について

生細胞における分子動態を、リアルタイム解析という新しも新しい視点を導入するものと考えられた。また本研究でい観点から解析するものである。その成果は in vivo におは達成できなかったものの、Dsg3、PG、DP 等のデスモ

ける細胞間接着機構を理解する上で新しい視点を導入する

ソーム関連蛋白を蛍光色素により可視化することで、デスものであり、皮膚科学のみならず、細胞生物学を含めた基モソームにおけるこれらの蛋白の動態をリアルタイムで解礎医学に対する多大な貢献が期待される。また本研究にお析することが可能となると考えられた。さらに本研究における解析の結果、天疱瘡の水疱形成のメカニズムが分子動

いてその開発に着手した EGFP-K14 トランスジェニック

態の観点から明らかにされることで、ステロイド、免疫抑マウスは、in vivo における天疱瘡の分子病態メカニズム

制剤などの副作用の多い現行の治療法とは全く異なる新しならびに細胞間接着の分子機構を理解する上で重要なツーい治療法の開発が可能となるかもしれない。

ルとなると考えられた。

図４ AK18 mAb(A) ならびに AK23 mAb(B) を反応させた NHEK 細胞における EGFP-K14 およびDsg3 の細胞内動態。
AK18 mAb を反応させた細胞では、AK23 mAb を反応させた細胞と比べ、EGFP-K14（矢印）およびAK mAb（矢頭）の細胞内への移動は明瞭ではなかった。

− 44 −

毛形成におけるホスフォリパーゼ Cδ1 の機能解析

東京薬科大学生命科学部

深 見

希代子

Nude mice exhibit athymia and hairlessness by a loss-of-function mutation in the transcription factor Foxn1 gene.
Although the immunologic functions of Foxn1 have been studied intensively, there have been relatively few studies of its
functions in skin. Foxn1 regulates expression of hair keratins, which is essential for normal hair structure; however, it waslargely unknown how Foxn1 regulates hair keratin expression and hair formation. In the present study, we found that micelacking phospholipase C (PLC)-d1, a key molecule in the phosphoinositide signaling pathway, and nude mice show similar
hair abnormalities, such as lack of cuticle and bending. We also found that expression of hair keratins was remarkably
decreased in skin of PLCd1 knockout mice. Furthermore, expression of PLCd1 was induced in Foxn1-transfected
U2OS cells. In addition, we showed that PLCd1 expression was remarkably decreased in skin of nude mice. In skin andkeratinocytes of nude mice, activation of PLC downstream effectors, such as PKC and NFAT, was impaired as well as
those of PLCd1 KO mice. These results indicate that PLCd1 is an essential molecule downstream of Foxn1 in normal hairformation, and strongly suggest that hairlessness in nude mice is caused by insufficient expression of PLCd1.

1．緒体（Chemicon, USA）は市販品を使用した。

言

毛は美容の対象として、非常に多くの人々に関心を持た

２−２．in situ ハイブリダイゼーション

れている器官でありながら、毛の形成についての詳細なメ

皮膚を 4％パラホルムアルデヒドで固定後、8-mm の厚カニズムは未解明な部分が多い。申請者らは、イノシト

さの切片を作製した。PLCd1、Foxn1、mHa3 の検出はジールリン脂質代謝系の要となる酵素、ホスフォリパーゼ

ゴキシゲンラベルのリボプローブを用いて行なった。

C（PLC）の一つである PLCd1 のノックアウト（KO）マ
ウスを作製し、このマウスが顕著な体毛減少を示すこと

２−３．ノザンブロット解析を報告している。最近、PLCd1KO マウスの体毛減少のメ

RNA は RNeasy Mini Kit（QIAGEN） を 用 い て 皮 膚カニズムを詳細に検討したところ、ヌードマウスと外見のか ら 調 整 し た。mHa3 お よ び GAPDH は DIG Northern

みならず、毛の詳細な形状等がよく似ていることが判明しStarter kit（Roche, Germany）によるジゴキシゲンラベてきている。ヌードマウスは転写因子 Foxn1 が先天的にルのリボプローブを用いて行なった。

変異し、その結果、毛の形成に必要なヘアケラチンである

3．結

mHa3 が減少することが無毛の原因と考えられている。
そこで本研究では、ヌードマウスと PLCd1KO マウスの果

３−１．PLCδ1KO マウスはヌードマウスと非常に類類似性と相違点を種々の解析法により検討し、ヌードマウ

似した表現型を示す

スと PLCd1KO マウス間のシグナル伝達の共通性を明らか

PLCd1KO マウスはヌードマウスと同様に無毛となるにすることにした。

（図１B, C）が、電子顕微鏡で皮膚構造を観察した場合に2．実も、コントロールマウスでは毛が存在しているのに対し、

験

両マウスではほとんど毛が見られないこと（図１D, E, F）、

２−１．PLCδ1KO マウスの作製および抗体等

また存在している毛も折れ曲がっている（図１H, I）など、

PLCd1KO マウス作製についてはすでに報告している

非常に類似していることが判明した。更にコントロールマ（EMBO J.2003）。PLCd1 抗 体（BD Pharmingen, USA），

ウスの毛で観察されるキューティクルが両マウスでは見らFoxn1 抗体（Santa Cruz Biotechnology, USA）, b-actin 抗れないなどの事実が判明した（図１G, H, I）。

The roles of phospholipase C
δ1 in theformation of hair follicles

３−２．ヌードマウス同様、PLCδ1KO マウスは皮膚でのヘアケラチンが減少している

Kiyoko FukamiLaboratory of Genome and Biosignal,
Tokyo University of Pharmacy and Life
Science

ヌードマウスでは転写因子 Foxn1 が先天的に変異し、毛の形成に必要なヘアケラチンである mHa3 が減少している。そこで PLCd11KO マウスの皮膚における mHa3 のmRNA 量をノザンブロットで検討した所、ヌードマウス− 45 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009と同様に mHa3 の mRNA 量が顕著に減少していた（図２）。

て、毛の形成や毛を保持するために重要な部位である
precortex 部分に発現していることが判明した（図３）。

３ − ３. PLCδ1、Foxn1、mHa3 は 毛 包 に お い て 同
局在する

３−４ Foxn1 の過剰発現は PLCδ1 の発現を誘導する

PLCd1KO マウスとヌードマウスの類似性が観察されPLCd1 及び mHa3 の mRNA が毛包において同じ部位にたことから、ヌードマウスの原因遺伝子である Foxn1 と発現していることが明らかになり、これらのタンパク質がPLCd1 の関連性を検討することにした。

機能的に関連している可能性が強く示唆された。またヌー

Foxn1 は毛包に発現が多いことが報告されている。そドマウスおよび PLCd1KO マウスの両マウスで mHa3 のこ で、in situ hybridization に よ り、Foxn1、PLCd1、 及mRNA の発現量が減少していることから、シグナル伝達

び mHa3 の 発 現 を 検 討 し た。 図 ３ に 示 す 様 に、Foxn1、

において、Foxn1 と PLCd1 は mHa3 の上流にあると考え

PLCd1、 及 び mHa3 の mRNA は い ず れ も、 毛 包 に お いられた。そこで Foxn1 と PLCd1 のシグナルの伝達経路での関連性を次に検討することにした。
骨肉腫細胞である USOS 細胞に Foxn1 を強制発現した場合には、PLCd1 の発現が mRNA およびタンパク質の両方で誘導されることが判明した（図４）。逆に PLCd1 を
USOS 細胞に強制発現した場合には、Foxn1 の発現は誘導されなかった。このことから、Foxn1 は PLCd1 の上流に

図 １. A-C: PLCδ1KO マ ウ ス と ヌ ー ド マ ウ ス の 外 観、D − I：
マウス皮膚の走査香型電子顕微鏡像。コントロールマウスでは多くの毛が存在するのに対し、PLCδ1KO マウスとヌードでは毛がほとんど観察されず (D-F)、折れ曲がっている (G-I)。

図 ２. ノ ザ ン ブ ロ ッ ト に よ る PLCδ1KO マ ウ ス 皮 膚 で の
mHa3 の mRNA の発現。PLCδ1KO マウス皮膚ではヘアケ
ラチンの mHa3 の mRNA 量がヌードマウスと同様に減少している。

図３. in situ hybridization による毛包における Foxn1、PLCδ1、及び mHa3 の mRNA の発現。毛の形成に重要な precortex 部
位に、これらの mRNA がいずれも発現している。

図４. Foxn1 の強制発現は PLCδ1 の発現を誘導する。USOS細胞に Foxn1 を強制発現した場合、PLCδ1 タンパク質の発
現 が 誘 導 さ れ る（A）
。 一 方、PLCδ1 を USOS 細 胞 に 強 制発現した場合には、Foxn1 の発現は誘導されなかった（B）。

− 46 −

毛形成におけるホスフォリパーゼ Cδ1 の機能解析

位置し、PLCd1 の発現を調節していると考えられた。

で TG マ ウ ス を 作 製 し た（Foxn1:: PLCd1TG/PLCd1KOマウス）。PLCd1KO マウスでは、表皮の肥厚、皮膚の炎

３−５．ヌードマウス毛包では PLCδ1 の発現が低下している症、cyst の形成、毛包形成異常、ヘアケラチンの減少が観察されるが、これらの異常は Foxn1:: PLCd1TG/PLCd1

毛包の形成においては、Foxn1 → PLCd1 → mHa3 といマウスではすべて回復した。このことから PLCd1 がこううシグナルの流れが存在することが示唆されたので、ヌーした組織では Foxn1 下流分子として生体内で機能していドマウスにおいて PLCd1 の発現が低下しているかを調べることが強く示唆された。一方脂腺では、このトランスジてみることにした。

ーンで脂腺拡大が回復しないことから、脂腺では PLCd1

第一に毛包での PLCd1 の発現を in situ hybridization により検討した。図５A、B に示す様に、野生型のコント

は Foxn1 と独立したシグナルを経由していると考えられる（図６）。

ロールマウスの毛包では PLCd1 の発現が強く観察される

次 に、 ヌ ー ド マ ウ ス で TG マ ウ ス を 作 製（Foxn1::のに対し、ヌードマウスの毛包では、PLCd1 の発現がほ

PLCd1TG/nude マウス）した所、外見上は毛の形成が回

とんど見られなかった。またウエスタンブロット法によ復しなかった。またヌードマウスの無胸腺、表皮の肥厚り、皮膚における PLCd1 タンパク質の発現を比較した所、は全く回復しなかったので、これらの組織では Foxn1 とヌードマウス皮膚において PLCd1 タンパク質の発現量

PLCd1 の関連性は薄いと考えられる。しかしながら、毛が著しく減少していることが判明した（図５C）。同様に

包形成やヘアケラチンの発現は部分的ではあるものの回復

PLCd1mRNA の減少も RT-PCR により明らかになった（デし、cyst の形成も激減した。こうした事実は、PLCd1 がータ示さず）。これらの事実は、Foxn1 → PLCd1 → mHa3毛の形成においては Foxn1 の下流分子として重要な役割というシグナルの流れが毛包において存在していることをを担っていることを示している（図７）。

示している。

4．考察

３−６.「ヌードマウスの体毛減少は PLCδ1 欠損が原因である」ことの検証の変異が原因であるヌードマウスと形態的に酷似しヌードマウスの体毛減少が PLCd1 の発現低下のみで説て い る こ と、 ヌ ー ド マ ウ ス で PLCd1 の 発 現 が 低 下 し、明できるのであれば、ヌードマウスに PLCd1 を発現させFoxn1 → PLCd1 → mHa3 というシグナルの流れが存在することにより、体毛が正常に形成されるようになることることを明らかにした。また Foxn1 の欠損による無毛とが期待される。そこで、ヌードマウスの原因遺伝子であいうヌードマウスの表現型を PLCd1 の強制発現で補完する Foxn1 プ ロ モ ー タ ー 制 御 下 で PLCd1cDNA を 発 現 することができるのかを明らかにするために、TG マウスをる TG マウスを作製した。第一に、Foxn1 の発現部位で作製した。現在、回復する異常と回復しにくい異常が判明の PLCd1 発現の影響を検討するため、PLCd1KO マウス

しつつあり、Foxn1 と PLCd1 の関連性がわかってきている。

今 回 我 々 は、PLCd1KO マ ウ ス が、 転 写 因 子 Foxn1

図５. ヌードマウスでは PLCδ1 の発現が低下している。A、B ; in situ hybridization による毛包における PLCδ1 mRNA の発現。コントロールマウスでは強い PLCδ1 mRNA のシグナルが見られるのに対し（A）、ヌードマウス毛包では、PLCδ1 の発現がほとんど見られない（B）。C ; ウエス
タンブロット法による皮膚における PLCδ1 タンパク質の発現比較。ヌードマウス皮膚で PLCδ1の発現が激減している。

− 47 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

図６. Foxn1::PLCδ1TG/PLCδ1KO マウスでの皮膚構造。Foxn1::PLCδ1TG/PLCδ1KO マウスでは、
PLCδ1KO マウスで観察される無毛の回復（A）、毛包形成の回復（B）、Cyst の形成（矢印）の正
常化（C）が確認できる。一方、脂腺の拡大は回復しない（D、矢印）。

図 ７. Foxn1::PLCδ1TG/ ヌ ー ド マ ウ ス で の 皮 膚 構 造。Foxn1::PLCδ1TG/ ヌ ー ド マ ウ ス で は、
PLCδ1KO マウスで観察される無毛は回復しない（A）。一方、毛包形成（B）や Cyst の異常形成（C）
は部分的であるが回復した。

− 48 −

毛形成におけるホスフォリパーゼ Cδ1 の機能解析

今後、より詳細にマウスの表現型を解析し、毛包形成のメによるものです。コスメトロジー研究振興財団からは多大カニズムを明らかにしていきたい。毛の形成メカニズムはな研究資金の御支援をいただきました。心よりお礼申し上

不明な点が多く PLCd1 が関与するという事実は興味深い。

げます。

育毛、脱毛など毛の形成に関わる研究は一般社会の関心も高いので今後は応用的な点からも解析する必要があると思

（文

われる。

１）Ichinohe M., Nakamura Y., Sai K., Nakahara M.,

献）

また最近、Foxn1 がメラニン色素の表皮細胞への輸送

Yamaguchi H., and Fukami K.: Lack of phospholipaseにも関与していることが明らかになってきている。今後皮C-d1 induces skin inflammation. Biochem. Biophys. Res.

膚において PLCd1 が Foxn1 と同様に美白などに応用できる可能性についても検討していきたい。

Comm., 356: 912-8, 2007.
２）Nakamura Y., Ichinohe M., Hirata M., Matsuura H.,
Fujiwara T., Igarashi T., Nakahara M., Yamaguchi H.,

謝辞

Yasugi S., Takenawa T. and Fukami K.：Phospholipase

以上の研究は、東京薬科大学生命科学部ゲノム情報学研

C-d1 is an essential molecule downstream of Foxn1, the究室の中村由和助教をはじめとして、大学院生の一戸学、gene responsible for the nude mutation, in normal hair

平田真之、松浦宏和らとの共同研究によるものです。また

development. FASEB J. 22, 841-849,2008.

電子顕微鏡像の解析は愛媛大学の藤原隆先生との共同研究− 49 −

皮膚線維化過程における骨髄由来細胞の動員とそのコラーゲン産生能に関する研究
東海大学医学部臓器線維症研究ユニット

稲 垣豊Skin fibrosis is characterized by an excessive deposition of type I collagen and other components of extracellular matrix.
Several recent studies have shown that bone marrow (BM)-derived cells migrating into wounded skin produce type I collagenand may contribute to accelerating wound healing. It is unknown, however, whether BM-derived cells also participate in the
progression of pathological skin fibrosis. In the present study, we utilized a transgenic mouse strain that harbors a tissuespecific strong enhancer sequence of a2(I) collagen gene (COL1A2) linked to its proximal promoter and an enhanced green
fluorescence protein (EGFP) reporter gene (COL/EGFP). Following a subcutaneous bleomycin injection, there were a large
number of EGFP-expressing mesenchymal cells observed in the thickened dermis. BM cells obtained from COL/EGFP
transgenic mice were transplanted into lethally irradiated syngeneic animals to replace their BM with COL/EGFP-positive
cells. In those recipient mice, only a limited number of EGFP-positive BM-derived collagen-producing cells were observedin the fibrotic skin tissue following a bleomycin injection. These results therefore indicate that skin resident cells, but not
BM-derived cells, are the major players producing collagen during skin fibrogenesis.

１．緒化進展に骨髄由来細胞がどの程度に関わっているかは全く言解明されておらず、そのメカニズムも不明であった。
そこで今回、Ｉ型コラーゲン a2 鎖遺伝子（COL1A2）

コラーゲンをはじめとする細胞外マトリックスの発現は、組織や臓器形態の保持に必須であるのみならず、創傷治癒の組織特異的エンハンサー・プロモーターと EGFP（緑色や組織の修復過程などの生理的条件下において重要な役割

蛍光タンパク）を連結した融合遺伝子を組み込んだトランを演じている。しかしながら、慢性炎症の結果この産生調

スジェニックマウス（COL/EGFP Tg）を用いて、皮膚線節機構が破綻をきたすと、コラーゲンが組織に過剰沈着し、維化過程における骨髄由来細胞の線維化組織への動員とコ

皮膚・肝・肺・腎など諸臓器の線維化を引き起こす。これ

ラーゲン産生能を検討した。

ら臓器線維症のうち、強皮症は皮膚をはじめとする全身諸２．実臓器へのコラーゲンの過剰沈着を特徴とする、原因も未だ験に不明の難治性疾患である。また、手術後瘢痕や熱傷後の線維化組織において増加する細胞外マトリックスの主要

皮膚のケロイド形成もコラーゲンの過剰産生によってもた成分である I 型コラーゲンの a2 鎖をコードする COL1A2

らされ、美容上また精神面で患者に与える影響は深刻であ遺伝子の転写開始部位の上流−17.0 から−15.5 kb 間には、る。したがって、これら皮膚のコラーゲン産生過剰をきた胎児の発生過程を含めて I 型コラーゲンの産生細胞においす病態を系統的に研究して、その予防と治療法を確立するてのみ活性が見られ、強い組織特異性を示すエンハンサー

ことは、医学的にまたコスメトロジー上も重要な研究課題

配列が存在する 。このエンハンサーを近位部プロモータと言える。

ー、さらに EGFP に連結した融合遺伝子を組み込んだト

近年、骨髄から皮膚の創傷部位に動員されて生着した細胞が、I 型コラーゲンを産生することで創傷治癒の促進に関与する可能性が報告された

１，２）

３）

ランスジェニックマウス（COL/EGFP Tg）が、本研究者
らにより樹立・継代されている（図１）。

。しかしながら、これら

こ の COL/EGFP Tg の 背 部 皮 下 に、 ブ レ オ マ イ シ ンの研究における骨髄由来細胞の同定方法やコラーゲン産生

含有ポリ乳酸マイクロスフェアを単回注射して皮膚のの評価方法は報告によりまちまちで、感度および特異性に線維化を誘導した。注射 21 日目に皮膚組織を採取して、乏しいため、骨髄由来細胞がどの程度創傷治癒に寄与してCOL1A2 プロモーターの活性化を EGFP 蛍光の共焦点レ

いるかは充分に解明されていない。また、病的な皮膚線維ーザー顕微鏡観察により検出した。次に、COL/EGFP Tg

Migration of Bone Marrow-Derived
Cells and their Contribution to Collagen
Production during Skin Fibrogenesis

6の骨髄細胞 5×10 個を、致死的照射を行った同系マウスの静脈内に投与して、骨髄を置換した。骨髄置換後８週を経過したこれらレシピエントマウスの背部に、同様にブレ

Yutaka Inagaki

オマイシン含有ポリ乳酸マイクロスフェアの単回注射を行Research Unit for Tissue Remodelingand Regeneration, Tokai University
School of Medicine

い、COL1A2 プロモーターの活性化を COL/EGFP Tg の場合と比較することで、骨髄由来細胞のコラーゲン産生への関与の程度を評価した。さらに、コラーゲン産生細− 50 −

皮膚線維化過程における骨髄由来細胞の動員とそのコラーゲン産生能に関する研究した間葉系細胞が多数認められ（図２Ｂ）、その約半数がaSMA 陽性の myofibroblasts であった。

3．2 COL/EGFP レ シ ピ エ ン ト マ ウ ス に お け る
COL1A2 プロモーターの活性化
次に、COL/EGFP レシピエントマウスの背部皮下にブレオマイシン注射を行うと、COL/EGFP Tg の場合と同程度の皮膚線維化が誘導された。この際に、線維性に肥厚
図１ COL1A2 エンハンサー・プロモーター／ EGFP 融合遺伝子
COL1A2 遺伝子の転写開始部位の上流 -17.0 kb から -15.5
kb 間に存在する組織特異的エンハンサーを近位部プロモー
ター、さらに EGFP に連結した融合遺伝子を組み込んだトラ
ンスジェニックマウス (COL/EGFP Tg) を用いることで、共焦点レーザー顕微鏡下にコラーゲン産生細胞を高感度かつ特異的に検出することが可能である。+1：転写開始部位。

した真皮内にごく少数の EGFP 陽性細胞、すなわち骨髄由来のコラーゲン産生細胞が検出され間葉系細胞の形態を示していたが、aSMA との共発現は認められなかった。
また、骨髄由来のコラーゲン産生細胞数は COL/EGFP
Tg で認められた皮膚組織に存在する全コラーゲン産生細胞数の１％以下と、きわめて少数であった。

４．考胞の筋線維芽細胞への分化の有無を、抗 a-smooth muscle

察

actin（aSMA）抗体ならびに Alexa660 結合ストレプトア

骨髄には、高い自己複製能とともに全血球細胞への多分ビジンを用いた免疫蛍光染色により検討した。この際に共化能を有する幹細胞が存在する。加えて近年では、血球以焦点レーザー顕微鏡観察の妨げとなる線維化組織内の自家外の細胞への分化能も証明され、再生医学の分野で注目さ蛍光は、EGFP と Alexa660 の蛍光波長を特異的に検出すれるに至った。実際、移植された骨髄細胞が様々な皮膚のる Emission Fingerprinting 法

構成細胞に分化することで、欠損した皮膚組織が再生する

４）

３．結

を用いて除外した。

ことが実験的に証明されている

果

５，６）

。加えて最近では、骨髄由来細胞が皮膚の創傷部位に生着し、I 型コラーゲンを

3．1 ブレオマイシン投与による皮膚線維化の誘導とCOL1A2 プロモーターの活性化

産生することで創傷治癒の促進にも関与する可能性が報告

ブレオマイシン含有ポリ乳酸マイクロスフェアを皮下注

来細胞の同定は FACS・Y-FISH・骨髄細胞の遺伝的ラベ

射した COL/EGFP Tg では、投与 21 日目において局所のリングなど、研究者により様々な方法が用いられており、真皮に線維性の肥厚が認められた（図２Ａ）。この真皮内コラーゲン産生の評価にも感度および特異性に優れた方法に EGFP 陽性、すなわち COL1A2 プロモーターが活性化がないのが大きな欠点となっていた。また、病的な皮膚の

された

１，２）

。しかしながら、これらの研究における骨髄由

図２：ブレオマイシン皮下投与による皮膚線維症の誘導と I 型コラーゲンプロモーターの活性化
COL/EGFP Tg の背部にブレオマイシンを含有したポリ乳酸マイクロスフェアを単回皮下注射すると真皮が線維性に肥厚し（Ａ、両矢印）、同部に EGFP 陽性、すなわち COL1A2 プロモーターが活性化した間葉系細胞が多数認められた（Ｂ、矢印）。

− 51 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

図３ 皮膚線維化過程におけるコラーゲン産生細胞の解析
COL/EGFP Tg に実験的皮膚線維症を誘導すると、線維化組織における全てのコラーゲン産生細胞が、その起源とは無関係に、EGFP 発現細胞として検出される（Ａ）。これに対して、COL/EGFP Tg の細胞により骨髄置換されたレシピエントマウスでは、コラーゲンを産生する骨髄由来細胞のみが肝組織内でEGFP を発現する（Ｂ）ため、両者を比較することで皮膚組織固有細胞と骨髄由来細胞のコラーゲン産生への関与を比較することが可能になった。

線維化過程に骨髄由来細胞がどの程度に関わっているかは

ンスジェニックマウス、もしくはその骨髄細胞を移植した

全く不明で、骨髄由来細胞が果たす生理的あるいは病因的

レシピエントマウスを用いることで、皮膚組織固有あるい

役割は充分に解明されていなかった。

は骨髄由来コラーゲン産生細胞を特異的に検出することが今回、Ｉ型コラーゲン遺伝子の組織特異的エンハンサー・可能となり、皮膚線維化の進展や骨髄由来細胞によるコラ

プロモーターと EGFP を連結した融合遺伝子を組み込んーゲン産生の機序を解明する上で有用な手段になりうるとだトランスジェニックマウス（COL/EGFP Tg）を樹立し、考えられた。

個々の細胞におけるコラーゲン産生を高感度かつ特異的に検出することが可能となった。この COL/EGFP Tg なら（引用文献）

びにその骨髄細胞を移植されたレシピエントマウスの背部

１）Direkze NC, Forbes SJ, Brittan M, et al: Multiple

皮下にブレオマイシン注射による皮膚線維症を誘導して、

organ engraftment by bone marrow-derived

両者における EGFP 発現細胞を比較したところ、皮膚線

myofibroblasts and fibroblasts in bone marrow

維化の進展には皮膚組織固有の（myo）fibroblasts が重要

transplanted mice. Stem Cells 21: 514-520, 2003

な役割を果たし、骨髄由来細胞の関与はあってもきわめて

２）Ishii G, Sangai T, Sugiyama K, et al: In vivo

限定的であることが初めて明らかにされた（図３）。

characterization of bone marrow-derived fibroblasts

皮膚は全身諸臓器の中でも、コラーゲン含量が最も多い

recruited into fibrous lesions. Stem Cells 23: 699-706,

組織のひとつである。その適切な発現制御は皮膚の生理機2005能の維持や創傷治癒過程において重要であるが、過剰な発

３）Bou-Gharios G, Garrett LA, Rossert J, et al: A

現はケロイド形成や皮膚の線維化・硬化を引き起こす。コ

potent far-upstream enhancer in the mouse proa2(I)ラーゲン発現の調節機序を解明する上で、骨髄由来細胞のcollagen gene regulates expression of reporter genes

創傷治癒や線維化進展への関与を詳細に研究することは、

in transgenic mice. J Cell Biol 134: 1333-1344, 1996

生理的・病的条件下における皮膚の病態を明らかにし、創４）H iga s hiya ma R , I na ga ki Y , H o ng Y Y , et al:

傷治癒の促進や皮膚線維症の新たな治療戦略の構築に直接

Bone marrow-derived cells express matrix

的に結びつくものである。健康な皮膚を維持する上でも多metalloproteinases and contribute to regression of liver

くの情報を与え、コスメトロジーの進歩にも寄与するところが大きいと考えられる。

５．総

fibrosis in mice. Hepatology 45: 213-222, 2007５）K a t a o k a K , M e d i n a R J , K a g e y a m a T , e t a l :Participation of adult mouse bone marrow cells in括reconstitution of skin. Am J Pathol 163: 1227-1231, 2003

I 型コラーゲン a2 鎖遺伝子上の組織特異的エンハンサ

６）Badiavas EV, Abedi M, Butmarc J, et al: Participation

ー・プロモーターと EGFP とを連結した融合遺伝子を組of bone marrow derived cells in cutaneous wound

み込んだトランスジェニックマウスを樹立した。このトラ

healing. J Cell Physiol 196: 245-250, 2003

− 52 −

化粧品素材の皮膚アレルギーにおける新規スクリーニング法の開発
京都大学医学研究科皮膚科学

椛島健治

Allergic contact dermatitis, one of the most common occupational and environmental diseases, is caused by foreign
antigen exposed to the skin. The contactant diverges into wide range of materials, such as meta1, chemica1, and resin. Photocontact dermatitis is caused by ultraviolet exposure in addition to exogenous materials, such as NSAIDs.
For evaluating the safety of each materia1, it has been requested to use in vitro systems instead of using animal models
these days. Since contact dermatitis and photo contact dermatitis are based on the chain reaction of immune cells, it is notsatisfactory to assess these issues only using single cell line. Therefore, we sought use several cell lines in combination andestimate the safety and effect on each immunological step in contact and photo-contact dermatitis.

1．緒アレルギーにはプロハプテン（prohapten）と光ハプテン

言（photohapten）の 2 種類のメカニズムが存在する（図 1）2）。

接触皮膚炎（いわゆるかぶれ）は皮膚に外因性抗原物質が塗布されて起こる職業性・環境性疾患全体の中でも最も頻各物質の光アレルギーにおける両者の関与を検討することも重要な課題である。

度の多い疾患であり、化粧品を原因とすることもまれでは

一方、免疫学の進歩に伴い、接触過敏症あるいは光接触ない。接触皮膚炎は一次刺激性あるいは単に刺激性と呼ば過敏症のメカニズムが明らかになり、その各ステップを in

れる接触皮膚炎と、アレルギー性接触皮膚炎とに分けられvitro で検証することが可能となりつつある。そこで、アる。一方、アレルギー性接触皮膚炎は免疫学的機序を介す

レルギー反応という多くの細胞・液性因子の関わる反応にる反応であり、感作・惹起の複雑な各ステップの解明は免おいては、in vitro 試験で評価しうるステップをいくつか

1, 2）

駆使し、統括的に行うことが理想的と考えられ、その実現

疫学の大きなテーマである。

光接触皮膚炎は外因性物質塗布に紫外線（UV とくにを図ることが当研究の目的である。

UVA）照射が加わって生じる反応で、光毒性と光アレルギ

2．実ー性がある。現在頻度が高いものは、非ステロイド系消炎

験

外用薬、サンスクリーン製剤などであり、ほとんどが光ア

接触過敏症のメカニズムは、外因性物質に対する抗原異レルギー性である。化粧品などを原因とする光接触皮膚炎

的な T 細胞を生み出す相（感作相）と、再び侵入した当該もまれではなく、化粧品に含まれる物質の光アレルギー誘

外因性物質に T 細胞が反応し皮膚炎を形成する相（惹起相）

導能の評価は重要な課題であると思われる。

とに分かれる。特に感作相は、外因性物質が過敏症を起こ

ところがこれらのスクリーニング方法としては、皮膚炎

しうるかを決定する最も重要な段階であると考えられる。

反応がそもそも生体反応であるため、ある物質が毒性、ア

そこで 化学物質の抗原提示細胞に対する成熟化誘導

レルギー性があるかを評価するのは歴史的には動物モデ

をヒト単球細胞株である THP-1 細胞を用いて検討する。

ルが用いられることが多かった。しかし近年、動物を用

THP-1 細胞はヒト単球性白血病由来の細胞株であり、単いない in vitro 実験を用いた代替法による評価が望まれて球としての性格を有する。そこで被検物質とのインキいる。これまで毒性・光毒性の in vitro 評価は、細胞毒性ュベーションの後、フローサイトメーターにより CD54，

評価など多くの方法があり、ある程度満足を与えるものと

CD86 などの発現を測定することにより評価する。この際 、なっている。それに比較し、アレルギー性・光アレルギー

prohapten の検討の際には UVA（l J/ ㎠）を披険物質に直性の反応は、免疫担当細胞の連鎖反応を基礎としているた接照射し、その後 THP-l と混合する。一方、photohapten

めに、in vitro の評価を困難なものとしている。また、光の 検 討 の 際 に は 被 検 物 質 を THP-l と 混 合 培 養 し た 後 に
UVA を照 射する（図 2）。

3．結The development of screening method
for evaluating safety on materials used
for cosmetics
Kenji Kabashima
Kyoto University Graduate School of
Medicine, Department of Dermatology

果

光接触皮膚炎を誘発させる代表的な物質であるketoprefen3, 4），
3, 3, 4, 5-tetrachlorosalicylanilide（TCSA）5, 6），
sparfloxacin7, 8）を 各 濃 度 で 混 合 培 養 し、 細 胞 表 面 上 の CD54，CD86，
HLA-DR の発現を flowcytometry にて解析した。すると− 53 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

図 3 か ら 図 5 の よ う に ketoprofen で は photohapten 刺 激

photohapten 刺激による HLA-DR の上昇（図 5）が認められによる CD54 の上昇（図 3）、TCSA では photohapten 刺激た。

に よ る CD86, HLA-DR の 上 昇（ 図 4）
、sparfloxacin で は

図1

prohaptetn と photohapten の違い

prohapten
UVA

photohapten

1 J/cm2

Apply UVA-irradiated chemical

UVA

1 J/cm 2

Incubate for 24 hours
FACS analyses: CD86, CD54, HLA - DR

図2

図4

THP-1 と UVA 照射による prohaptetn と photohapten 誘導方法

Ketoprofen による prohaptetn と photohapten 誘導に対する CD86、CD54 発現− 54 −

化粧品素材の皮膚アレルギーにおける新規スクリーニング法の開発

図４ TCSA による prohapten と photohapten 誘導に対する
CD86, CD54, HLA-DR 発現

図５ Sparfloxacin による prohapten と photohapten 誘導に対する CD86, CD54, HLA-DR 発現

−
−55
55−
−

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

4．考

plus UVA in murine photocontact dermatitis to察

ketoprofen. J Dermatol Sci 47: 151-9

光アレルギーがあることの知られている ketoprofen，

４）I m a i S , A t a r a s h i K , I k e s u e K , A k i y a m a K .

TCSA，sparfloxacin に よ る 光 ア レ ル ギ ー 誘 導 能 をTokura Y. 2 0 0 6. Establishment of murine model ofprohapten，photohapten 刺激により検証した。すると 3

allergic photocontact dermatitis to ketoprofen and剤 全 て に お い て THP-l の co-stimulatory molecule で あ るcharacterization of pathogenic T cells. J Dermatol Sci

CD86、接着因子である CD54、あるいは HLA-DR の上昇

41: 127-36が認められた。ところが、これらの上昇を示すパターンは

５）Nishijima T. Tokura Y, Imokawa G, Takigawa

各物質によって異なることが判明した。ここには記さなか

M. 1 9 9 9. Photohapten TCSA painting plus UVA

ったが、photohapten 刺激によるこれらの因子の誘導は他

irradiation of murine skin augments the expression ofの photoallergy を起こさない物質では認められなかった。

MHC class II molecules and CD86 on Langerhans cells.
J Dermatol Sci 19: 202-7以上より、THP-l を川いた in vitro の検査により、物質の

６）Tokura Y, Yagi H, Ihda H, Takigawa M. 1 9 9 4.

光アレルギー誘導能を評価できる可能性が示唆された。
今後はさらに被検物質を増やし、光アレルギー誘導能のEvaluation of ultraviolet-A protection by sunscreen

定量 化を図ること、各光接触アレルギーの臨床型と CD86，

agents using a mouse model of contact photoallergy. J
Dermatol Sci 7: 39-44

CD54，HLA-DR の発現パターンにおける相関の有無の検

７）Neumann NJ, Blotz A, Wasinska-Kempka G,

討を行いたいと考えている。

Rosenbruch M, Lehmann P, Ahr HJ, Vohr HW. 2 0 0 5.
（文献）

Evaluation of phototoxic and photoallergic potentials
of 1 3 compounds by different in vitro and in vivo

１）Lankerani L, Baron ED. 2 0 0 4. Photosensitivity tomethods. J Photochem Pholohiol B 79: 25-34

exogenous agents. J Cutan Med Surg 8: 424-31
2） Tokura Y. 2000. Immune responses to photohaptens:８）Tokura Y, Seo N, Ohshima A, Yagi H. Furukawa F,

implications for the mechanisms of photosensitivity to

Takigawa M. 1999. Lymphocyte stimulation test withexogenous agents. J Dermatol Sci 23 Suppi 1: S6-9

drug-photomodified cells in patients with quinolone

３) Atarashi K. Kabashima K, Akiyama K, Tokura Y.
2007. Stimulation of Langerhans cells with ketoprofen− 56 −

photosensitivity. J Dermatol Sci 21: 34-41

再構築培養表皮モデルを用いた遺伝毒性の評価

国立医薬品食品衛生研究所

小 島

安全性生物試験研究センター

肇 夫、新 井薬理部新規試験法評価室

晶 子、北 條麻 紀

【Objective】 To evaluate a risk assessment of genotoxicity when human skin is affected by chemicals, we tried to performa Comet assay using a 3-dimensional human epidermal model (LabCyte EPI-MODEL, Japan).
【Materials & Methods】 Mitomycin C, methylmethanesulfonate (MMS) and 4-NQO (4-Nitroquinoline 1-Oxide) were
utilized as test chemicals. Each test chemical solution was applied directly to the surface of the models and treated for
4 hours, then washed off and incubated for 20 hours after the treatment and maximal dosage was calculated according
to the cytotoxicity. As to the Comet assay, each test chemical solution refer to the cytotoxicity was applied to them andtreated for 4hr. Cells were detached by Liberase solution (Roche) or Trypsin solution (GIBCO), and an adequate cellsuspension was obtained.
【Results】More single cells could be efficiently retrieved using Trypsin solution, especially with treatment for 25min, thanusing Liberase solution. Comet signals mediated by Mitomycin C (150μM<) and 4-NQO were shown by our protocol.
However, those by MMS were not clear response.
【Discussion】We established a practical, rapid and easy Comet assay protocol using a 3-dimensional human epidermal
model. To define the difference in genotoxical action between the epidermal model and in vivo, it is necessary to perform
additional researches for minimal dosage of unknown chemicals that show genotoxicity to the human epidermis.

１．緒

試験法は 2009 年以降、化粧品原料の開発に実験動物を持言いた小核試験が利用できなくなる。その場合、多数検出さ安全性試験の中でも大きな比重を占める遺伝毒性試験にれる in vitro 試験の結果を受け入れ、新成分の開発を断念

は、遺伝子突然変異を評価する微生物を用いるエイムス試するならともかく、その検証を行うには、より実験動物に

験や哺乳類の培養細胞を用いるマウスリンフォーマアッセ

近いモデルを用いてリスクを評価する必要がある。

イがある。また、染色体突然変異の評価には、分裂中期のそこで、より実験動物に近いモデルとして化粧品の安全

染色体構造を観察する哺乳類の培養細胞や実験動物を用い性を考慮した場合、成分が皮膚に直接暴露した際の遺伝毒る染色体異常試験や小核試験がある。これらの試験の中か性の検出を、3 次元培養表皮モデルを用いて調べられれば、

ら、医薬品の安全性評価には、微生物を用いる復帰突然変リスクを評価できると考えた。評価系としては、作用機構

異試験、哺乳類の培養細胞を用いる染色体異常試験やマウが明確なコメットアッセイを用いることとした。コメット

スリンフォーマ試験ならびにげっ歯類を用いる小核試験のアッセイとは、培養細胞や動物組織をシングルセルに分散三試験が必須と定められている 。

し、アガロースゲルに包埋してアルカリ電気泳動にかける１）

一方、医薬部外品の有効成分又は添加剤については、遺ことにより、個々の細胞が受けた DNA 初期傷害を検出す

伝子突然変異および染色体異常の有無の確認を目的としたる手法である。図１に示すように、障害を受けた DNA の

微生物および哺乳類の培養細胞を用いる in vitro 試験が求電気泳動像によりすい星が流れるように見えることから、められる。ただし、これらの試験で遺伝毒性が疑われた場

コメットアッセイと名づけられた。この試験法では、非分合には、各々の目的に応じ動物の個体を用いる in vivo 試

裂細胞に対する遺伝毒性が評価できることや、感受性の異験の提出が求められるとされているなる細胞が混在する細胞集団でも細胞レベルで評価可能

2, 3）。しかし、in vitro

６）

試験の中で特に、哺乳類の培養細胞を用いるマウスリンフ

なこと、また、近年では、Honma ら

ォーマ試験および染色体異常試験は発がん性試験と比較し用いた簡便な in vitro コメットアッセイが考案されるなど、により培養細胞を４）て疑陽性が検出されやすい 。今後、 EU における化粧５）品規制第 7 次改正により 、動物実験代替法が開発された
Ev a lu at i o n o f g e n o t ox i c it y u s i ng
3-dimensional human epidermal model
Hajime Kojima, Ph.D.
Japanese Center for the Va lidationof A lternat ive Met hods（ JaCVA M），
National Center for Biological Safety andResearch National Institute of Health
Sciences（NIHS）− 57 −

図１

細胞に生じたコメット

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

% Tail Intensity の値が高いほど遺伝毒性が強いことにな

有用な遺伝毒性試験として注目を集めている。
本研究では、3 次元培養ヒト表皮モデルを用いたコメッ

る。
２・２・２

トアッセイの試験法開発を目的として、実験を行った。

２・２・２・１

２．材料および方法
２・１

細胞解離条件の検討

培養皮膚モデルにリベラーゼ（Roche）で 30 分間処理
７）

材料

２・１・１

条件検討

すればコメットを検出できるとの報告がある 。
3 次元培養表皮モデル

一方、培養皮膚モデルからの小核誘発の検出にはトリプ
８）ジャパン・ティッシュ・エンジニアリング（J-TEC）

シンが使われている 。どちらの条件がラボサイトに適し株式会社が製造販売している 3 次元培養ヒト表皮モデルているのか、リベラーゼ（0.28 Wunch Unit/HBSS）およ

LabCyteEPI-MODEL12 または 24 を実験に用いた。図

びトリプシン（0.25%/0.02%EDTA リン酸緩衝液：PBS）

2 に示すように、本モデルは表皮構造を呈しており、培養溶液で 30 ～ 50 分処理後の①得られる細胞数 , ②解離溶液

液と合わせキットとなっている。

が細胞に及ぼす遺伝毒性の有無を調べた。

本キット到着日あるいはその翌日から実験を開始した。
２・１・２

被験物質

次に、それぞれの解離条件から得られた細胞を用いてコ
メットアッセイを行い、解離溶液がモデルに及ぼすコメッ

マイトマイシン C（和光純薬株式会社）、メチルメタン

ト出現頻度を調べた。

スルフォネート（MMS: 和光純薬株式会社）および 4 ニト

２・２・２・２

ロキノリン N オキシド（４-NQO：和光純薬株式会社）を

非水溶性物質の溶媒として用いるエタノールの細胞毒性

溶媒に溶解してモデルに供した。

溶媒濃度の検討

およびコメットアッセイに及ぼす影響を検討した。細胞毒

MMC および MMS の溶媒としては蒸留水、4-NQO の溶媒としてはエタノール溶液を用いた。

性試験の条件を２・３・３に示す。エタノール溶液の濃度
３、６、12.5 および 25% で４時間処理した場合の条件を
検討した。

２・２

試験法

２・２・１

２・２・３

コメットアッセイ基本操作

LabCyte６ウェルプレート（Falcon）の各ウェルの中に、キットに付いている培養液を加え、LabCyte EPI-MODEL12

被験物質を用いた細胞毒性の検出

EPI-MODEL24 を 37 ℃ の CO2 イ ン キ ュ ベ ー

ター中で 1 時間培養した後、溶媒および被験物質溶液 100
μL を加え、4 時間処理後さらに 20 時間培養した。

を置いた後、37℃の CO2 インキュベーター中で１時間培

マイトマイシン C においては、限界溶解度である 1500養した。培養後、すぐに酵素処理してセルストレイナー

μM を最高濃度として、10 倍希釈系列を調整して細胞毒（Falcon）を通して単一細胞を得た。1×10 細胞 /mL に性 を 検 出 し た。MMS に お い て は、1800μM を 最 高 濃 度

PBS で調整した細胞懸濁液 10μL を寒天 0.5％液 80μL ととして、10 倍希釈系列を調整した。４-NQO においては、ともに、スライドグラス（マツナミ）にのせ、Lysis 緩衝

100％エタノールに溶解した 10 mM 溶液をエタノールの最液中で 1 時間処理後に電気泳動を行った。電気泳動条件は、終濃度が２％になるように加え（最高処理濃度 200μM）、

pH 13 の泳動液（４℃）で 15 分放置した後、300 mA/90V

10 倍希釈系列を調整した。

6

PBS で LabCyte

で 15 分間とした。得られた細胞を 70％エタノール溶液でEPI-MODEL24 を 4 回 洗 浄 し、MTT洗浄し、乾燥後、SYBR gold（1 : 10000）で染色し、スラ（sigma）0.5mg/mL を含む培養液で 3 時間処理した後、モ

イド当り 100 個観察した。コメットシグナルの検出には、デルをイソプロパノールで抽出した。溶媒および被験物『COMET ASSAY Ⅳ（PERCEPTIVE, UK）』という解析

質 の 抽 出 液 0.2 mL を 96 ウ ェ ル に 移 し、OD570 お よ び

ソフトを使用し、% Tail Intensity（コメット部分の蛍光OD650 における吸光度を測定し、以下の式から細胞生存強度／ 1 細胞あたりの DNA 蛍光強度）を求めた。つまり、率を求めた。
OD =［570nm OD 被験物質 – 570nm OD ブランク］−［650nm OD 被験物質 – 650nm OD ブランク］
細胞生存率（%）＝
２・２・４

OD 被験物質
×100
OD 溶媒

被験物質を用いたコメットの検出

図３に試験法の概略を示す。LabCyte EPI-MODEL12に溶媒および被験物質溶液 200μL ウェルを加え、4 時間
図２

LabcyteEPI-MODEL24 の HE 染色

処理した後、PBS で 3 回洗浄した。細胞毒性で得られた− 58 −

再構築培養表皮モデルを用いた遺伝毒性の評価

図３

試験方法概略結果から最高適用濃度を決定し、それぞれ 10 倍希釈系列

様々なタイプの確率分布に従うわけだが、箱ひげ図はそのを調整してコメットアッセイを実施した。

ような仮定に関係なく、データの分布を表現している。箱

３．結
３・１

の各部分の間隔から分散や歪度の程度、また外れ値を示し

果

ている。

解離条件の検討

それぞれの解離条件でラボサイトを処理し、１ウェルか

３・３

被験物質を用いた細胞毒性の検出ら回収することのできた細胞数をカウントした。その結果、

図７～９に３物質の細胞生存率の結果を示した。

図４に示すように、トリプシン処理によりリベラーゼよ図７に示すように、マイトマイシン C の限界溶解度はりも 20 倍以上多くの単一細胞を得ることができた。また、

1500μM であり、4 時間暴露後、20 時間培養しても細胞毒

トリプシンの処理時間を 35 分、50 分と延長しても得られ性は全く検出されなかった。よって、コメットアッセイでる細胞数に差はなかった。また、リベラーゼ , トリプシン

は 1500μM を最高濃度として、10 倍希釈系列を調整して共に細胞毒性を誘導することはなかった。しかし、図５に検出することにした。

示すように、トリプシンの処理時間を 50 分に延長するとコメットシグナルが検出されるようになった。

MMS は 180μM 以上の濃度において、図 8 に示すように強い細胞毒性を認めた。よって、18μM を最高濃度とし以上の結果から、ラボサイトの細胞解離には、トリプシ
ンの短時間（25 分）処理が適していることが明らかとなて、10 倍希釈系列を調整してコメットアッセイを行うこ
とにした。

った。

４-NQO は最高濃度 200μM のみにおいて、図 9 に示す
ように細胞毒性を認めた。よって、20μM を最高濃度とし

３・２

溶媒濃度の検討て、10 倍希釈系列を調整してコメットアッセイを行うこエタノールの細胞毒性は 25％まで検出されなかった（デとにした。

ータは示していない）。しかし、図６に示すように、12.5%以上の濃度で中央値に変化はないものの、コメットを引き起こす細胞を認めた。以上の結果から、溶媒の最適濃度は６３・４

被験物質を用いたコメットの検出試験

コメットアッセイを実施する被験物質の最高処理濃度は、％以下、
可能な限り薄くすることを目指し、２％と設定した。

４時間処理後、さらに 20 時間培養した場合、細胞が 50％

ちなみに、箱ひげ図は、最小値、第 1 四分位点、中央値、以上生存している濃度でなければいけないと設定した。そ第 3 四分位点と最大値を示している。母集団は実際にはの最高濃度から公比 10 で希釈して得られた 3 被験物質に− 59 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

おけるコメットアッセイの結果を求めた。その結果、図た。一方、図 11 に示すように、MMS のコメット出現頻

10 に示すようにマイトマイシン C では 150μM 以上の濃度の増加は検出されなかった。また、図 12 に示すように、度で濃度依存的なコメット出現頻度の増加が明らかとなっ

４-NQO のコメット出現頻度は 20μM でわずかに増加した。

図４

解離条件の検討

酵素処理による単一細胞出現頻度

図５

解離条件の検討

酵素処理によるコメット出現頻度

120

100

Intensity (%)

80

60

40

20

0
0

6

3

12.5

Conc. (%)

図６

エタノールのコメット出現頻度− 60 −

25

再構築培養表皮モデルを用いた遺伝毒性の評価

マイトマイシン C の細胞毒性試験結果

MMS の細胞毒性試験結果

図９4-NQO の細胞毒性試験結果

100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0

0

1.5

15

150

Conc. (μM)

図 10 マイトマイシンＣによるコメット出現頻度
90
80
70
60
Intensity (%)

Intensity (%)

図８

図７

50
40
30
20
10
0

0

1.8

18
Conc.（μM）

図 11

MMS によるコメット出現頻度− 61 −

1500

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

70
60

Intensity (%)

50
40
30
20
10
0

0

0.2

2

20

Conc.（μM）

図 12

４．考

４-NQO によるコメット出現頻度

Maurici D, Meunier JR, Müller L, Nohynek G, Parry J,

察Parry E, Thybaud V, Tice R, van Benthem J, Vanparys

酵素処理条件、最適な溶媒濃度を決定でき、3 次元培養

P, White P.
（2007）How to reduce false positive results

表皮モデルを用いたコメットアッセイの試験法開発というwhen undertaking in vitro genotoxicity testing and

目的を達成できた。マイトマイシン C は DNA のクロスリ

thus avoid unnecessary follow-up animal tests: Report of

ンカーとして遺伝毒性を起こし、MMS や 4-NQO は DNA

an ECVAM Workshop. Mutat Res. 628（1）: 31-55

をアルキル化して遺伝毒性を引き起こす著名な遺伝毒性

５）Commission Staff Working Documents（2004） ;物質である。しかし、得られた結果からマイトマイシン CTime Tables for the phasing-out of animal testing in

および 4-NQO はコメット出現頻度を増加させるが、MMS

the framework of the 7 Amendment to the Cosmetics

はその強い細胞毒性からコメットを明確に引き起こさない

Directive（Council Directive 76/768/EEC）; EN, SECと判断した。

（2004）1210

th

以上の結果から、遺伝毒性物質の検出感度における課

６）Honma M.（2007） A Multi-endpoints in vitro

題も明らかになった。今後は、マイトマイシン C、MMS、

Genotoxicity Test SAYstem Consisting of Comet,

４-NQO 以外の遺伝毒性物質についても、同様の検討を行

Micronuclei and Gene Mutation Test, 6

うとともに、小核の検出を行う予定である。得られたデー

Congress on Alternatives & Animal Use in the Life

タベースからを他の in vitro および in vivo データと比較しSciences, abstract pp.88.

て、遺伝毒性に対する感受性にどの程度違いがあるのかを

th

World

７）Flamand N, Marrot L, Belaidi JP, Bourouf L,

明らかにする予定である。

Dourille E, Feltes M, Meunier JR.（2006）Development

なお、これらの成果の一部は日本環境変異原学会第 36

of genotoxicity test procedures with Episkin, a

９）回年次大会（2007 年 11 月、北九州）にて発表した 。

reconstructed human skin model: towards new tools
for in vitro risk assessment of dermally applied（参考文献）

compounds? Mutat Res. 606（1-2）: 39-51.

１）医薬品非臨床試験研究会監修（2002）医薬品非臨床試

８）C u r r e n R D , M u n G C , G i b s o n D P , A a r d e m a
MJ.（2006）Development of a method for assessing験ガイドライン解説、薬事日報社

micronucleus induction in a 3D human skin model

２）化粧品・医薬部外品製造販売ガイドブック 2008、薬（EpiDerm）．Mutat Res. 607（2）: 192-204.

事日報社
３）厚生労働省医薬食品局審査管理課（2006）医薬部外品

９）Arai S, Saitoh M, Tajashima Y, Honma M, Kojimaの製造販売承認申請及び化粧品基準改正要請に添付する

H（2007）A new trial for in vitro Comet assay using

資料に関する質疑応答集（Ｑ＆Ａ）について

3-dimensional human epidermal model, 36４）Kirkland D, Pfuhler S, Tweats D, Aardema M,
Corvi R, Darroudi F, Elhajouji A, Glatt H, Hastwell P,
Hayashi M, Kasper P, Kirchner S, Lynch A, Marzin D,− 62 −

thAnnualMeeting of the Japanese Environmental Mutagen
Society, Abstracts, p111.

老人性色素斑ダーモスコピー画像の自動定量ならびに治療と化粧による QOL 評価改善
東京女子医科大学東医療センター皮膚科

田 中

勝

A computer assisted area of involvement measurement of skin pigmentations would be useful for the assessment of senile
lentigo. It is, however, sometimes difficult when lesions cannot simply be separated using the photographs taken under normal
condition. Because of the skin curvature and the glare due to sebum, brightness of the pictures would not be equal.
We used a novel cross-polarized flash system, which enables to take a wide range of dermoscopy picture. An image froma patient with senile lentigo was taken by a single-lens reflex digital camera equipped with the flash system. The area of thelesions were semi-automatically extracted and sum of the darkness score "z" compared with normal skin, was calculated anddefined as QPI (quantified pigment index) after color correction using Casmatch system and size correction. The darknessof the senile lentigo was also assessed by two dermatologists. The QOL index was evaluated by patients before and after
treatment or makeup. Skindex 16 and Dermatological Life Quality Index, Japanese version, were used for the assessment of
the QOL of the patients.
Images were collected from 40 patients for at least 3 months every 4 weeks. Total of 160 images were assessed. Somedifficulty of image analysis were pointed out, including a variation of image brightness which could not be corrected even with
the Casmatch system, different camera settings, lighting condition affected by natural light or room light. There were somepatients who experienced a worsening of skin lesion due to seasonal and accidental ultraviolet irradiations.
The method of image analysis of pigmentation might be of use if the photographing conditions were appropriately
standardized and assessed carefully comparing with subjective evaluation by dermatologists and with QOL index by patients.
The establishment of these objective methods would be desirable to measure the area of pigmentations for an assessment oftreatment efficacy.

１．緒

治療と化粧の効果を同時に判定する．

言

２．実

女性の顔面に生じる色素斑は，わずかな病変であっても QOL を大きく損なうものであり，治療や化粧によって，

2．1

験

症例集積

その QOL の回復を図ることは社会的なニーズの高い重要東京女子医科大学東医療センター皮膚科を受診し，臨床な課題である．本研究では，主として老人性色素斑をできおよびダーモスコピーにより老人性色素斑と診断した患者

るだけ正確に定量するため，無反射の画像を得るための新に文書で同意を得たのち，治療前・中・後で広範囲弱拡大

しいデジタル偏光フラッシュシステムを用いて広範囲の色

ダーモスコピー撮影（新しい無反射デジタルフラッシュシ

素斑の弱拡大ダーモスコピー画像を撮影し，コンピュータ

ステムを使用）を行い，デジタル画像としてコンピュータ

で自動定量を行うことにより，客観的な評価を可能とし治に保存，データベースとする．患者は初診時と治療終了

療効果の治療方法による違いを判定する．また，皮膚疾患

時に，アンケート形式の皮膚科学的 QOL 評価指標である，

特異的 QOL の指標として日本語版 Skindex16 ）およびSkindex16 日本語版および DLQI 日本語版を用いて，色素１

２）

DLQI（dermatological life quality index） を用いて，患斑が患者の症状，感情，機能などに与える影響を評価され者サイドの主観的病変評価を併せて行い，両者を比較検る．さらに化粧を日常的に行う一部の患者においては，化討する．QOL 評価値については治療による改善を定量評

粧の前後でもこれらの評価が変わる可能性があるため，可価するのみならず，一部の患者では，化粧による効果も同能な限り，並行して評価する．色素斑は臨床症状に応じて時に判定し，治療補助としての化粧が重要な位置づけにあ

皮膚科学的に診断され，治療方針が決定される．治療は患ることを再確認することも目的とする．つまり，治療の前者の希望も考慮し，ケミカルピーリング，液体窒素，ハイ後および化粧の前後で QOL 評価を行って比較することで，ドロキノン，レーザーなどから選択することとする．治療

Image analysis on senile lentigo byd e r m o s c o py a nd i mp r ove m e nt o fquality of life index after treatment andmakeup.
Masaru Tanaka
Department of Dermatology, Tokyo
Women’s Medical University Medical
Center East

期間は，３ヵ月程度とし，効果の判定は治療による炎症反応などが消退した時点で行うものとする．ダーモスコピー
画像のデータベースは色素斑切り出しプログラムを用いて自動的に（または手動で）抽出し，面積と色素斑の濃度を自動処理で定量評価する．治療効果はコンピュータにより自動評価すると同時に QOL 評価指標により，患者自身によって主観的にも評価してもらう．比較指標として，２名− 63 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009の皮膚科医により，印刷した色素斑の画像を色見本と比較

濃さを Z 値で示した．図１の色見本１ではちょうど間にして，肉眼的に効果判定を行う．

ある色合いをどちらに選ぶかで迷いが生じたが，図 2 の色
見本２では，逆に，色の近いものが並ぶため，複数の色が2．2

色見本の作成いずれも当てはまるように見えてしまい，両者の差よりも線型近似と主成分分析により，3 種類の色見本を作成し色合いの違いを強く感じてしまうという欠点が見られた．

た．色見本 1 と 2 では線型近似を行い，スコア Z で肌の色合いのバリエーションをどの程度までの間隔で使用する

明るさを表した．色見本 3 では主成分分析を行い，スコアのが適切か，より多くの画像を用いた検討を要すると判断

Z でシミの濃さを表した．さらに，シミの大きさと濃さをされた．色素斑の色合いは不均一なところもあるため，面表す指標として，QPI（quantified pigment index）を絶積と色の濃さを反映する色素インデックス（PI）を考慮す

対値および周囲の健常皮膚との差分によって定義した．

る必要がある．PI は Σ（Zr-Zi）（Zr は色素斑と健常皮膚の

３．結
3．1

ちょうど境目となるように設定，i は注目する色素斑内の果画素）で計算される．

色見本１と２の作成
3．2

17 枚の老人性色素斑の無反射ダーモスコピー画像から線型近似を行うことにより，２種類の色見本を作成した（図色見本３の作成

シミの濃さを Z 値で表したほうが，直感的に理解しやす

１および図２）．これらの色素斑の色相（Hue）はおよそ

いため，新たな指標として，シミの濃さを，主成分分析

143±4°であった． 色素斑の色は RGB 色空間の値を用（PCA，principal component analysis） を 用 い て 計 算 し，いて，

新たな色見本を作成した（図３）．すなわち，数式Z=（R−120）＊ 0.523+（G −73.8）＊ 0.578+（B− 60.5）＊ 0.626

Z ＝ 150−{（R−120）
×0.523＋（G−73.8）
×0.578で定義される．スコア Z は肌の明るさを表すと考えられる．
撮影した色素斑の画像と，上記の色見本は同じプリンタ（キャノン，Selphy CP-710）を用いて印刷し，２名の皮膚＋（B−60.5）×0.626}で定義した．スコア Z はシミの濃さを表し，健常皮膚は 8≦ Z ≦ 60 程度に分布した．

科専門医が両者の画像を比べることにより，色素斑の色の

図 1 色見本 1
Z 値を -100 から +100 まで 20 刻みで作成したもの．
Z 値は肌の色の明るさを表す．

図２ 色見本２Z 値を細かく分け，60 から 140 まで 5 刻みで作成したもの．Z 値は肌の色の明るさを表す．

図3

色見本 3

− 64 −

Z 値がシミの濃さを表すように改訂した．
8 から 60 ぐらいが健常部の色合い．

老人性色素斑ダーモスコピー画像の自動定量ならびに治療と化粧による QOL 評価改善

3．3

シミの濃さと大きさの定義ずれも改善しており，患者サイドのアウトカムが満足する

さらに，シミの濃さと大きさを定量するため，絶対値結果であることを示した．症例１の Skindex16 でのわずおよび健常部との差分により QPI を定義した．すなわち，

かなスコア悪化は乾燥敏感肌による灼熱感が原因と思われ微小領域 ds における Z 値を Z（s）とするとき，QPI の絶た．症例３は改善により，化粧をしなくても満足している

対値は，が，症例２は化粧をすることで満足しており，両者間でシ

QPI ＝ ΣZ（s）≒シミの面積 × シミ領域内の平均 Z 値

ミに対する感じ方が異なるという結果が示されており興味で計算することができる．また，QPI の健常皮膚との差分深い．また，化粧に対する考え方にも差があるようである．

定義は，健常部の平均 Z 値を Zn とすると，
QPI ＝ ΣZ（s）− Zn・ds≒シミの面積 ×（シミ領域の平均 Z −健常部の平均 Z）
で計算できる．

3．4

ケミカルピーリング治療例の結果まとめ

色素斑をケミカルピーリングで治療し，定期的に観察した症例を示す（図４）．色素斑が改善していることが PI 値の減少として客観的に示されている．DLQI では，治療前にはアンケートの項目があてはまらないという評価をしていたものが，治療後は化粧により DLQI 値の改善が示されるようになった（表１）．
全症例，治療により改善したことは担当医判定により確認されたが，症例２では，写真に影が入ったため，客観判

図 4 ケミカルピーリングによる色素斑の経過
PI 値の改善とともに色素斑は明るく改善している．

定では悪化している．しかし，DLQI と Skindex16 ではい
表１

ケミカルピーリング３症例のまとめ

症例 1N

症例 2S

症例 3U

診断名

老人性色素斑

老人性色素斑

老人性色素斑

治療内容

50% グリコール酸でケミ
カルピーリング

30% グリコール酸でケミ
カルピーリング

50% グリコール酸でケミ
カルピーリング

治療前 DR 判定 Z
治療後

100

70

60

〃

185（改善）100（改善）100（改善）

157

62

97

〃

40（改善）

148（悪化，影）57（改善）

治療前 PI
治療後

治療前化粧前 DLQI〃

化粧後

治療後化粧前〃化粧後〃

8（N/A）36

8

8（N/A）36

8〃

8（N/A）

38

24〃

32（改善）

38（改善）

24（改善）

治療前化粧前 SD16

3

32

9

化粧後

〃

4

32

7

治療後化粧前

〃

4

15

0

〃

4（悪化？）

0（改善）

0（改善）

改善

やや改善

改善

やや満足

やや満足

満足

〃
〃

化粧後

総合的判定
総合的満足度コメント

当初，DLQI の項目自体に わずかな改善でも化粧によ 本人の改善したという自覚
当てはまらないという拒否 り気にならなくなる可能性 が強いと化粧をしなくても気にならなくなる．
がみられた．しかし，治療 が示された．
に満足した結果，拒否傾向も改善した．

− 65 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

したがって，化粧にかかわらずきれいになることを求める

での撮影を心がけた．距離を一定にするため，撮影位置（患

人と，化粧によって改善できればかなりの満足を得られる

者の位置と撮影者の位置）を決め，撮影範囲をどこからど

化粧好きの人で，判定が大きく変わるということも示されこまでにするか決めた．角度については垂直に構えるようた．

に注意深く撮影した．（2）カメラの設定は，マニュアルモ
ードで，シャッタースピード 1/125，F 値８という決まり

3．5

ハイドロキノン治療例の結果まとめで撮ることにした．
季節変動の影響をできるだけ避けるため，紫外線の影響

40 例中 17 例で QPI の２割以上の改善を認め，これらは有効例と判断された．５例では２割以上の悪化を認め，18が少なくなる 10 月から１月にかけて症例を集積した．

例は ± ２割の範囲内であり，これらは無効例と判断され色素斑などの皮膚病変を正確に客観的に評価することはた．Skindex16 では，
感情面の QOL 低下が見られていたが，難しいが，我々はすでにさまざまな皮膚病変を自動的に定治療後に有意に改善した
（図５）
．しかし，
DLQI では，症状・量するコンピュータプログラムを開発し，多数の成果を国

感情面でわずかな改善はあったが，有意の変化はなかった

内外の学会および論文にて発表を重ねている（図６）．QPI の改善と QOL の改善の間に明らかな相関は回の研究の目的はなかでも，女性の顔面の色素斑を定量評なかった．すなわち，客観的な改善がない症例においても価の対象としており，女性の QOL に与える顔面色素斑の

QOL の改善が見られている．

影響を客観的および主観的に判定するものである．したが４．考3）, 4）, 5）, 6）．今って，コスメトロジーの発展に大きく寄与する可能性があ察

る．

色素斑の撮影方法により，客観的定量性が弱くなる傾向

本研究は治療効果の QOL に与える影響を評価すると同がみられた．すなわち，治療によって改善したと思われる

時に，化粧による同等の治療補助効果をも併せて判定する症例がある一方で，悪化しているようにみられる症例も存ことを目的に含んでおり，化粧が女性の行動や精神的な安在する．これにはいくつかのあきらかな理由が考えられた定に及ぼす効果やストレスの改善に多大な効果を上げるこため，特に（1）撮影条件，（2）カメラの設定，には注意とを証明するというねらいもある．客観的な改善と QOLを払った．また，実際の患者の色素斑の経過と比較すると，の改善には人によって異なる微妙なギャップがあることがシミの主要な色調が改善した時点で，周囲の目立たなかっ

わかったが，まだ症例数が少ないため，今後の蓄積と統計たシミとの境界が不明瞭になり，改善後に面積が広くなっ的解析が期待される．ある患者では，治療後には化粧をしてしまう現象がみられた．
（1）撮影条件としては，①室内なくても QOL が改善されているが，別の患者では治療だ

光の影響，②窓からの自然光の影響，③皮膚との距離，④

けでは QOL に変化はなくとも，化粧により QOL が改善

皮膚とカメラの角度，などが一定となるよう考慮した．室するという微妙な意識の違いを治療がもたらした可能性が内光の影響を減らすため，電灯の真下での撮影を避け，自示唆され興味深い．

然光の影響を最小限にするため，少なくとも横から光が当

今回の研究で，色素斑の治療による客観的な改善とたらないよう窓側を向いてもらい撮影を行った．撮影時刻

QOL の改善は必ずしも関係しないという可能性が示唆さは午後 3 時から 4 時頃になるべく揃えた．また，可能な限れた．すなわち，たとえ客観的には改善がわずかであってり，天候の影響をなくすため，自然光の影響が少ない位置も，治療するということが気分的に QOL を改善するとい

図5

ハイドロキノン治療前後の Skindex16 の変化
特に感情面の有意な改善が見られる．

図 6 ハイドロキノン治療前後の DLQI の変化
初めから低値であるため，治療前後の変化が少ない．治療による有意な改善は見られない．

− 66 −

老人性色素斑ダーモスコピー画像の自動定量ならびに治療と化粧による QOL 評価改善

う可能性が考えられた．これはあらゆる疾患の治療にも共効率よく切り出すためのプログラムを作成することが重要通する概念である可能性もある．すなわち，治療効果がわと考えられる．

ずかでも治療に対して満足するということである．したが当研究を継続することが，今後のコスメトロジーにおけって，治療のプロセスが不快なものでなければ，患者サイる客観的定量手段の１つになるよう，方法の精度を向上さ

ドのアウトカムはよい結果となるわけである．

せ，さらに症例を集積してデータ解析をおこなっていきた

５．総

いと思う．

括

人間の目では変化をとらえにくい色素斑の画像定量方法（文献）を開発した．治療効果のわかりにくい変化も客観的にとら

１）檜垣祐子 : 臨床皮膚科 , 58: 164-166, 2004

えることが可能となり，他のさまざまのデータとの比較が２）福原俊一，鈴鴨よしみ : アレルギーの臨床 , 27: 267-

可能となった．しかし，色素斑の客観的な改善と QOL の改善には明らかな相関は見られなかった．その理由としては，治りにくく変化の少ない治療であっても，何かをしてもらったこと（施術）に対する満足感の表れである可能性

271, 2007
３）小 林 誠 一 郎 : 日 本 皮 膚 科 学 会 雑 誌 , 114: 1769-1776,
2004４）Tanaka M, Gaskell S, Edwards C et al: Clin Exp
Dermatol, 25: 323-6, 2000が示唆された．
今後はコンピュータの画像切り出しが皮膚科医の判断と差がないことを証明することも必要と考えている．医師判定とコンピュータ判定の違いを定量し、統計学的に解析する。その結果を元に，色素沈着性皮膚病変を自動的により

５）Iyatomi H, Oka H, Saito M et al: Melanoma Res, 16:
183-190, 2006６）Iyatomi H, Oka H, Celebi ME et al: J Invest
Dermatol, 128: 2049-2054, 2008

− 67 −

各種有効成分の効率的な皮膚内送達方法の開発

大阪大学大学院薬学研究科

近 藤

昌 夫

Claudin, a 24-kDa integral membrane protein with four transmembrane domains, plays a pivotal role in barrier-functionof epithelial cell sheets. There are more than 20 members of the claudin family with different tissue-specific expression
and barrier-function. The epidermis consists of several cell layers of strata corneum, granulosum and spinosum. Recently,
Tsukita’s group found that claudin-1 is expressed in the strata granulosum and is responsible for epidermal barrier. Thisfinding indicates that a claudin-1 modulator may be a promising candidate for trans-epidermal delivery of cosmetics, such as
anti-aging compounds and radical scavengers. However, a method to modulate claudin-1-barrier has never been developed.
A C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotoxin (C-CPE) is the only claudin modulator, and C-CPE
disrupts barrier-function of claudin-4 in epithelial cells. We previously showed that modulation of claudin-4 is a novel
strategy for intestinal absorption of drugs using C-CPE as a claudin modulator, and we also found that deletion of the
C-terminal 16 amino acids of C-CPE lost its ability to modulate claudin-4. Taken together, we started to develop a claudin-1
modulator using C-CPE as a prototype. Previously, substitution of Tyr310 with Cys reduced binding of Clostridium
perfringens enterotoxin to its receptor. Until now, we investigated roles of the tyrosines (Tyr306, Tyr310, and Tyr312) of the
C-terminal 16 amino acids of C-CPE in claudin-4 binding and modulation of epithelial barrier by site-directed mutagenesis.
Single mutations of Tyr306, Tyr310 and Tyr312 to alanine resulted in partial reduction of claudin-4-binding. Double mutants
Tyr306Ala/Tyr310Ala and Tyr306Ala/Tyr312Ala lost the ability to bind to claudin-4 and to modulate epithelial barrier.
These data provide us useful information in the development of claudin-1 modulator based on C-CPE.

細胞層透過を亢進できる可能性を示唆しているものの、未１．はじめにだ claudin を利用した皮膚内物質透過方法の開発研究は皆最近、皮膚の生理学が進展し、しみやそばかすの要因や無である。

老化に伴うしわなどの生成メカニズムが明らかになりつつClaudin のバリア機能を阻害する分子としては、ウェルあり、色素沈着を阻害する物質、抗酸化活性物質、コラーシュ菌が産生する Clostridium perfringens enterotoxin（CPE）

ゲン合成促進物質などが美白成分やアンチエージング成分の C 末ペプチド断片（C-CPE）が claudin-4 阻害分子としてとして注目されている。

唯一知られていた 。そこで当グループでは、claudin-4 阻

２）

これらの美白成分やアンチエージング成分の作用部位

害分子である C-CPE を用いて、claudin の薬物送達におけは、皮下に存在するメラノサイト細胞や真皮領域などである標的分子としての有用性について解析を試み、C-CPE がり、単に皮膚表面にこれら成分を塗布しただけではメラノ

ラット腸管においてカプリン酸の 400 倍もの吸収促進作用

サイト細胞や真皮に到達する成分は極めて少なく各種有を示すこと、この吸収促進作用には C-CPE と claudin-4 と効成分の効果を期待することができない。皮膚内への物質の相互作用が関与していることを見出し、claudin が薬物送透過は、角層ばかりでなく表皮下部に位置する重層上皮細達の標的分子として有用であることを見出した 。さらに、胞層により制御されており通常外部からの物質の侵入は抑C-CPE の C 末端側 16 アミノ酸領域を欠損させることによ

制されている。この重層上皮細胞層の物質透過抑制機構

り、claudin-4 結合性および吸収促進作用が完全に消失しては長年不明であったが、2002 年に京都大月田グループにいたことから、これら C 末 16 アミノ酸中に機能ドメイン

より細胞と細胞の間隙に存在する claudin-1 蛋白質によっが存在するものと推察されたて細胞間隙がシールされ重層上皮細胞層の物質の漏れ（移において、Tyr310 を Cys に置換することにより CPE の受動）が阻害されていることが明らかにされた 。この報告

容体結合活性が著しく低下するとの報告がなされていた 。

は、claudin-1 を制御することにより美白成分の重層上皮

これらの CPE 研究および当研究グループの研究成果を

１）

Development of a novel method fortrans-epidermal delivery of cosmetics
Masuo Kondoh
Graduate School of Pharmaceutica l
Sciences, Osaka University

３）

3, 4）

。また、過去の CPE 研究
５）

踏まえ、本研究では、C-CPE の機能解析を試み（Fig. 1）、
ファージライブラリを作製し、claudin-1 binder のスクリーニングを試みた。

２．材料と方法
２−１．変異型 C-CPE の作成
C-CPE 遺伝子（大阪大学微生物病研究所− 68 −

堀口安彦博

各種有効成分の効率的な皮膚内送達方法の開発

C-CPE
184

C-CPE303
184

Binding
to claudin-4289

Decreasein TER

319aa

a)
289

303

319aa

b)

Figure 1 Diagram of C-CPE structure.
C-CPE is the C-terminal fragment of CPE. C-CPE binds toclaudin-4 and decreases TJ barrier function as indicated by adecrease in TER (2). The C-terminal 30 amino acids of CPE
and C-CPE mediate interaction with the CPE receptor andclaudin, respectively a)(6). Further analysis shows that the
C-terminal 16 amino acids are responsible for the interactionof C-CPE with claudin and for its ability to decrease the TJ
barrier function b)(4).

Ser Ser 305 Tyr Ser Gly Asn Tyr310 Pro Tyr Ser Ile Leu 315 Phe Gln Lys Phe 319

Table 1 Primers used for site-directed mutagenesis.
The underline in forward primer and in reverse primer is NdeI site and BamHIsite,
respectively. The italic letters in the reverse primer indicated the site of mutation.

士より供与）を鋳型とし、Table 1 に示した各種 primer発現細胞）を播種し、一昼夜培養した。変異型 C-CPE 添を用いて PCR 法により目的のアミノ酸をアラニンに置

加 1 時間後に claudin-4 指向性のタンパク質合成阻害タン

換した変異型 C-CPE をクローニングした。変異型 C-CPE

パク質 C-CPE-PSIF（7）（0.2 ㎍ /㎖）を加え、C-CPE-PSIF

DNA 断片を His タグ融合タンパク質発現プラスミド pET-

添加 36 時間後に CytoTox96®
（Promega）
を用いて培地中に

16b に挿入することにより変異型 C-CPE 発現プラスミド

放出された乳酸脱水素酵素（LDH）量を測定した。各種を作製した。大腸菌 BL21（DE3）（Novagen）を用いて各変異体の細胞傷害性抑制作用は、C-CPE による LDH 放出

種タンパク質を発現・産生させた後、HisTrap

抑制率を 100% とした各種変異体の阻害率（%）として算TM

Kit（GE

Healthcare）を用いたアフィニティークロマトグラフィー

出した。

により各種変異型 C-CPE を精製した。

２−２．変異型 C-CPE による C-CPE-PSIF 拮抗阻害
作用
Claudin-4 を強制発現させたマウス線維芽細胞（claudin-4２−３．変異型 C-CPE と claudin-4 との結合性評価（pull down assay）
Caco-2 細胞を回収し、lysis buffer（１% Triton X-100,
１% protease inhibitor cocktail 含有 PBS）を用いて細胞− 69 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

TMを溶解させ、予め Ni-NTA Agarose（Invitrogen ）に作

３−２．変異型 C-CPE と claudin-4 との相互作用

用させることで非特異的な吸着物質を除去した。Caco-2

C-CPE-PSIF 拮抗阻害実験において claudin-4 結合性の細胞溶解液と各種変異型 C-CPE を 37℃で 30 分間反応さ低下が観察された変異体について、Caco-2 細胞溶解液をせた後、Ni-NTA Agarose を加え４℃、３時間反応させ用いた pull down assay により claudin-4 結合性を評価した。遠心分離した沈澱画分を lysis buffer で洗浄した後、たところ、Y306A，Y310A の claudin-4 結合性は低下してウェスタンブロッティングにより claudin-4 および変異型

いたものの、Y312A では C-CPE と同程度の結合性が認め

C-CPE を検出し、変異型 C-CPE の claudin-4 結合性を評価られた（Fig. 2B）。

した。

３−３．変異型 C-CPE の膜電気抵抗値に及ぼす影響
２−４．変異型 C-CPE の膜電気抵抗値に及ぼす影響

次に、Caco-2 細胞の単層膜培養系を用いて各種アラニ

ヒト結腸癌由来 Caco-2 細胞を Transwell®
（Corning）にン置換体の TER 低下作用（バリア機能低下作用）を検討

播種し、Transwell 上に単層膜を形成させた。一定期間培した結果、Y306A でのみ TER 低下作用の有意な減弱が観養後、各種変異型 C-CPE を作用させ、TJ のバリア機能の察された（Fig. 3A）。

指標である膜電気抵抗値（TER）を測定した。添加 18 時
間後の C-CPE の TER 低下作用を 100% として、各種変異

３−４．変異型 C-CPE の吸収促進作用

体の TER 低下率（%）を算出した。

ラット腸管 in situ loop assay により吸収促進活性を評
価 し た と こ ろ、Fig. 3BC に 示 す よ う に Y306A、Y312A

２−５．変異型 C-CPE の吸収促進作用

では C-CPE と比較して吸収促進作用は著しく低下していモ デ ル 薬 物 と し て FITC-dextran（FD-4, Mw:4000,

た。C-CPE-PSIF および pull down assay の結果を考え合Sigma）を用いて、吸収促進剤の評価法として汎用されてわせると、Y306A では claudin-4 結合性の低下に伴い吸いるラット in situ loop assay により変異型 C-CPE の吸収収促進作用が減弱したと考えられる。Y312A では C-CPE

促進作用を評価した。

と同程度の claudin-4 結合性が認められているにも関わら変異型 C-CPE（0.2 ㎎ / ㎖）および FD-4（10 ㎎ / ㎖）をず、吸収促進作用の低下が観察されていた。ラット小腸

空腸（5 ㎝）に投与し、頸静脈より経時的に採血した。その上皮細胞層溶解液を用いた pull down assay を行ったとの後、血漿中 FD- 4 濃度を蛍光光度計（励起波長；485 nm,

ころ、claudin-4 との結合が観察されたことから（data not

蛍光波長；538 nm）を用いて測定し、投与後 4 時間目までshown）、Tyr312 は claudin-4 との結合には必須ではなくの濃度−時間曲線下面積（AUC

吸収促進活性に関与しているものと考えられる。

0→4）を算出した。

２−６．C-CPE 誘導体ファージライブラリの作成および claudin-1 binder のスクリーニング

３−５．２、３アミノ酸変異型 C-CPE の吸収促進作用

過 去 の 報 告 に 準 じ て pCantab5E を 用 い て C-CPE のTyr310，Tyr312 が関与している可能性が示された。そclaudin-4 結 合 残 基 を ラ ン ダ ム な ア ミ ノ 酸 に 置 換 し た

こで次に、これらアミノ酸残基の 2 アミノ酸アラニン置

C-CPE 誘導体ファージライブラリを作成し、claudin-1

換体を作成し各種活性を評価した。Pull down assay およ

発現 L 細胞を用いて claudin-1 binder のスクリーニングを

び C-CPE-PSIF 拮抗阻害実験ではいずれの変異体におい試みた。

ても相加的な結合性の低下が観察された（Fig. 4AB）
。さ

7, 8）

Alanine scan に よ っ て C-CPE の 各 種 活 性 に Tyr306，

らに in situ loop assay により吸収促進効果を評価したと

３．結果および考察

ころ、Fig. 3BC に示してあるようにいずれの変異体にお３−１．C-CPE-PSIF の細胞傷害性に及ぼす変異型
C-CPE の阻害作用

いても著しい吸収促進作用の低下が観察された。さらに、

当研究室では、C-CPE にタンパク質合成阻害因子 PSIF

置換体では、claudin-4 結合性、TER 低下作用、吸収促進を 融 合 さ せ た C-CPE-PSIF を 作 製 し、C-CPE-PSIF がTyr306, Tyr310, Tyr312 をいずれもアラニンに置換した 3作用が消失していた（Fig. 5A-E）。

C-CPE を介して claudin-4 発現細胞に特異的に結合するこ７）とにより細胞傷害作用を示すことを見出している 。そ３−６．Claudin-1 binder のスクリーニング

こで、C-CPE-PSIF を用いた拮抗阻害実験により各種ア

C-CPE の claudin-4 結合領域をランダムなアミノ酸に置

ラニン置換体と claudin-4 との結合性を評価したところ、換 し た C-CPE 誘 導 体 ラ イ ブ ラ リ を 作 製 し、claudin-1 発

Y306A，Y310A、Y312A いずれの変異体でも C-CPE と比現 L 細胞を用いて claudin-1 binder のスクリーニングを試較して claudin-4 結合性が顕著に低下していた（Fig. 2A）。

みたところ、得られたクローンはいずれも天然型 C-CPE− 70 −

各種有効成分の効率的な皮膚内送達方法の開発

Figure 2 Effects of Tyr306, Tyr310 and Tyr312 on the interaction of C-CPE with claudin-4.
A) Competitive inhibition of C-CPE-PSIF-induced cytotoxicity by mutants of C-CPE. Claudin-4-expressing L (CL4/L) cells werepretreated with the indicated concentrations of C-CPE or C-CPE mutants for 1 h. The cells were then incubated with 0.2 ㎍ /㎖
of C-CPE-PSIF. After 36 h, LDH release was assessed using a commercially available kit. The results are representative of three
independent experiments, and the values are means ± SD (n=3).
B) Pull-down assay. Confluent Caco-2 cells were harvested and lysed in lysis buffer. The lysate (10 ㎍ ) was incubated with vehicle,
C-CPE, or mutants of C-CPE for 30 min at 37℃ . After addition of Ni-resin, the lysate was incubated for 3 h at 4℃ . The resin wasthen precipitated, and the bound proteins were analyzed by SDS-PAGE followed by Western blotting using anti-claudin-4 or anti-Histag antibodies. The lanes containing Caco-2 lysates (10 ㎍ ), C-CPE (1 ㎍ ), and mutants of C-CPE (1 ㎍ ) were positive controls forclaudin-4, C-CPE, and mutants of C-CPE, respectively. The results are representative of three independent experiments.

Figure 3 Effects of mutants of C-CPE on the TJ barrier function
and jejunal absorption.
A) Effects of mutants on the TJ barrier function of Caco-2 monolayercells. Confluent Caco-2 cells were cultured in Transwell chambers
for 10-14 days. When TER values stabilized, C-CPEs were added
to the basal side of the Transwell chamber at the indicatedconcentrations. TER values were measured after 0 and 18 h.
Values are means±SD (n=4). The results are representative of three
independent experiments.
B) Effects of mutants on jejunal absorption of FD-4 in rat. Rat jejunum
was treated with FD-4 (10 ㎎/㎖ ) in the presence of vehicle, C-CPE(0.2 ㎎/㎖), or mutant C-CPEs (0.2㎎/㎖ ). The FD-4 levels in plasmacollected from the cervical vein were determined at the indicatedtimes. Values are means ± SEM (n=4).
C) The AUC0-4h values were calculated from (B) and are means±
SEM (n=4). The results shown in (B) and (C) are representative of
three independent experiments.

− 71 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

で あ っ た（data not shown）。C-CPE は claudin-1 結 合 性Mizuguchi, H., Tsunoda, S., Horiguchi, Y., Yagi, K.,を有していないことから、claudin-1 発現細胞は claudin-1

and Watanabe, Y. Role of Tyr306 in the C-terminal

binder スクリーニング系として不適であると推察された。

fragment of Clostridium perfringens enterotoxin for４．考

modulation of tight junction. Biochem Pharmacol, 73:察824-830, 2007.

以 上、 本 研 究 に よ り、C-CPE と claudin-4 と の 結 合 に２）Harada, M., Kondoh, M., Ebihara, C., Takahashi,

は Tyr306，Tyr310， 吸 収 促 進 作 用 に は Tyr312 が 関 与

A., Komiya, E., Fujii, M., Mizuguchi, H., Tsunoda,

していることが明らかにされ、機能ドメインをランダ

S., Horiguchi, Y., Yagi, K., and Watanabe, Y. Role

ムなアミノ酸に置換した C-CPE 誘導体ライブラリを作

of tyrosine residues in modulation of claudin-4 by

製し、claudin-1 binder のスクリーニングを試みたもの

the C-terminal fragment of Clostridium perfringensの、claudin-1 binder の取得には至らなかった。現在のとenterotoxin. Biochem Pharmacol, 73: 206-214, 2007.

ころ、claudin のバリア機能を制御する分子は C-CPE 以

３）Takahashi, A., Komiya, E., Kakutani, H., Yoshida, T.,

外には報告されておらず、C-CPE を prototype として用Fujii, M., Horiguchi, Y., Mizuguchi, H., Tsutsumi, Y.,

いた claudin modulator 創製には新たな claudin binder ス

Tsunoda, S., Koizumi, N., Isoda, K., Yagi, K., Watanabe,

クリーニング系構築の必要性が示唆された。現在までに

Y. Domain mapping of a claudin-4 modulator, the

当グループでは、claudin 発現細胞に代わる新規 claudin

C-terminal region of C-terminal fragment of Clostridium

binder スクリーニング系を作製し、本系が claudin binder

perfringens enterotoxin, by site-directed mutagenesis.

探索系として機能することを確認している。今後は、本Biochem Pharmacol, 75: 1639-1648, 2008.

検討で構築した C-CPE 誘導体ライブラリ、および新たに構築した claudin binder スクリーニングシステムを用いて、

謝

claudin-1 modulator 創製を図る予定である。

辞

当該研究テーマの実施に際して、グラントサポートを賜

尚、当該研究成果は以下の論文に掲載された。

りました財団法人コスメトロジー研究振興財団に深謝

１）Ebihara, C., Kondoh, M., Harada, M., Fujii, M.,致します。

Figure 4 Interaction of double mutants at residues 306, 310, and 312 of C-CPE with claudin-4A) Competition assay. CL4/L cells were incubated with double mutants at the indicated concentration for 1h and then mixed
with C-CPE-PSIF (0.2 ㎍ /㎖ ). After 36h, LDH release was assessed using a commercially available kit. The results are
representative of three independent experiments. Values are means±SD (n=3).
B) Pull-down assay. Caco-2 lysates (10 ㎍) were incubated with double mutants (Y306A/Y310A, Y306A/Y312A, or Y310A/
Y312A) for 30 min at 37 ℃ . Ni-resin was then added, and the lysate was incubated for 3h at 4 ℃ . Next, the resin was
precipitated, and the bound proteins were analyzed by SDS-PAGE followed by Western blotting.

− 72 −

各種有効成分の効率的な皮膚内送達方法の開発（参考文献）

with claudin-4. J Control Release, 108: 56-62, 2005.

１）Furuse, M., Hata, M., Furuse, K., et al. Claudin-５）Kokai-Kun, J. F., Benton, K., Wieckowski, E. U., andbased tight junctions are crucial for the mammalian

McClane, B. A. Identification of a Clostridium perfringens

epidermal barrier: a lesson from claudin-1-deficiententerotoxin region required for large complex

mice. J Cell Biol, 156: 1099-1111, 2002.

formation and cytotoxicity by random mutagenesis.

２）Sonoda, N., Furuse, M., Sasaki, H., et al. Clostridium

Infect Immun, 67: 5634-5641, 1999.

perfringens enterotoxin fragment removes specific

６）McClane, B. A., Chakrabarti, G. New insights into

claudins from tight junction strands: Evidence forthe cytotoxic mechanisms of Clostridium perfringens

direct involvement of claudins in tight junction barrier.

enterotoxin. Anaerobe, 10:107-114, 2004.
７）E b i h a r a , C . , K o n d o h , M . , H a s u i k e , N . , e t a l .

J Cell Biol, 147: 195-204, 1999.
３）Kondoh, M., Masuyama, A., Takahashi, A., et al. A novel

Preparation of a claudin-targeting molecule using

strategy for the enhancement of drug absorption using aa C-terminal fragment of Clostridium perfringens

claudin modulator. Mol Pharmacol, 67: 749-756, 2005.

enterotoxin. J Pharmacol Exp Ther, 316: 255-260, 2006.

４）Takahashi, A., Kondoh, M., Masuyama, A., et al.

８）Yamamoto, Y., Tsutsumi, Y., Yoshioka, Y., et al. Site-

Role of C-terminal regions of the C-terminal fragment

specific PEGylation of a lysine-deficient TNF-alphaof Clostridium perfringens enterotoxin in its interaction

with full bioactivity. Nat Biotechnol, 21: 546-552, 2003.

Figure 5 Effect of triple mutation on the activities of C-CPE.
Interaction of the triple mutant with claudin-4 was examinedusing competitive assay with C-CPE-PSIF (A) and a pulldown assay (B) as described in Figs. 2A and 2B,
respectively. Effects of the triple mutant on the TJ barrier inCaco-2 monolayer cells (C) and jejunal absorption in rat (D,E) were assayed as described in Fig. 3. The values in (C)are means ± SD (n=4), and those in (D) and (E) are means± SEM (n=4). The results are representative of three
independent experiments.

− 73 −

慢性掻痒性皮膚疾患における表皮内末梢神経伸展因子の探索

富山大学大学院医学薬学研究部応用薬理学

安 東

嗣 修

In addition to epidermal hyperplasia, chronic pruritic skin diseases (e.g., atopic dermatitis, dry skin) show theincreased number of nerve fibers in epidermis. However, the characteristics and the mechanisms of sprout of nerve fibers
are still unknown. In the present study, we investigated the characteristics of the nerve fibers in epidermis by using theimmunohistochemical analysis and proteomics analysis of epidermal protein for identification of the factor for sprouting
in the dry skin mouse model with itch. For preparing the mouse model, the rostral back was treated daily with cutaneous
application of acetone/ether (1:1) mixture (AE), water following AE (AEW). The stratum corneum hydration decreased in
AE- and AEW-treated mouse skin, but not non-treated skin. The treatment with AEW induced the spontaneous scratching as
an itch-associated response, and increased the number of protein gene product 9.5-positive nerve fibers, which were calcitonin
gene-related peptide-positive C-fiber neurons. However, these alterations were not shown in non- and AE-treated mice. The
proteomics analysis showed a lot of epidermal proteins that the expression altered by treatment with AE and AEW, comparedwith non-treatment. We are doing the identification of these proteins by using MALDI-TOF/MS.

１．緒

２. ２

言

乾燥性皮膚掻痒症モデルマウスの作製

乾燥性皮膚掻痒症モデルマウスは，Miyamoto ら

7）の方「痒み」は，皮膚と一部の粘膜において認められ，掻き法により作製した。実験開始 5 日前に，ジエチルエーテル

たいという衝動を引き起こす不快な感覚である。痒みの発

麻酔下，マウス吻側背部を 2 ㎝四方にバリカンで除毛後，生は，皮膚内における痒みのメディエーターの産生に起因さらにシェーバーで剃毛した。角質細胞間脂質を抽出するするものだけでなく，特に乾皮症やアトピー性皮膚炎患者目的でアセトンとジエチルエーテルの 1：1 混液を 2 ㎝四では，皮膚が痒覚過敏（痒み刺激に対する反応の増大）あ方の脱脂綿に染み込ませ，これをジエチルエーテル麻酔下，るいはアロネーシス（通常は痒みを生じない刺激で痒みが剃毛部位に 15 秒間適用した（AE 処置），直後に蒸留水を起こる状態）の状態になっていることが報告されている

２㎝四方の脱脂綿に染み込ませ，30 秒間適用した（AEW

1, 2）

。

この様な病態では，痒みのシグナルを伝える一次感覚神

処置）。この操作を 1 日 2 回 8 時間以上の間隔をあけ，5経の表皮内への伸展が報告されている日間行った。

3−6）。しがしながら，この様な病理学的変化は観察されるものの，その伸展神経の特徴や痒み発生との関連に関して明らかになっていな

２. ３

い。そこで，本研究では，乾燥性皮膚掻痒症マウスモデル

7）

角質水分量の測定

毎朝の皮膚バリア破壊処置前，および行動実験開始前に，を用いて，表皮内伸展神経の特徴を免疫組織学的に解析

Moisture Checker®MY707S（SCALAR Corporation，東し，表皮における変化タンパクのプロテオミクス解析を行京）を用いて測定した。電気伝導率を指標として測定されない，末梢神経伸展因子の同定を試みた。

た角質水分量は，測定値として表示される単位（%）で示

２．実
２. １

した。

験

実験動物

２. ４

8）

実験には，
雄性 ICR 系マウス
（7 ～ 8 週齢，
日本 SLC，
静岡）
を用いた。

行動実験

5 日間の AEW 処置の翌日に Kuraishi ら の方法でマウスの自発的掻き動作数を計測した。すなわち，動物の行動
を無人環境下で８㎜ビデオカメラにて撮影した。行動観察
はビデオの再生により行い，後肢による皮膚バリア破壊処

Identification of sprouting factor for
peripheral nerve fibers in the epidermis
with chronic pruritic skin disease
Tsugunobu Andoh
Department of Applied Pharmacology,
G r adu at e S cho o l of Med ic i ne a nd
Pharmaceutical Sciences, University of
Toyama

置部位（剃毛部位）に対する自発的な掻き動作回数を数えた。マウスは，1 秒間に数回掻くので後肢を挙げてから降ろすまでの一連の動作を１回として数えた。

２. ５

免疫組織化学染色5 日間の AEW 処置の翌日に，マウスを４% パラホルム
アルデヒド溶液にて灌流固定後，バリア破壊した吻側背− 74 −

慢性掻痒性皮膚疾患における表皮内末梢神経伸展因子の探索

部皮膚を採取した。続いて厚さ 30 ㎛の凍結切片を作製後，一方，自発的掻き動作数は，AE 処置群では無処置群と定法により抗 protein gene product 9.5（PGP9.5）および

比較して有意な差は認められなかったが，AEW 処置群は抗カルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）抗体を用い無処置群および AE 処置群のいずれに対しても有意に自発て免疫染色を行なった。染色した皮膚切片は共焦点レー

的掻き動作回数が増加した（Fig. 2B）。

ザー顕微鏡（Bio-Rad，Radiance 2100）を用いて観察した。
一部の実験では，マウス 1 匹当り 5 ヶ所の表皮内伸展末梢
神経終末数を数え，幅 1 ㎜当りの本数の平均値を個体値とした。

３. ３ AE 処置及び AEW 処置による表皮内伸展末梢神経の変化
PGP9.5 は， 神 経 の マ ー カ ー で あ る。AE 処 置 お よ び
AEW 処置を 5 日間行った部位の表皮における，PGP9.5

２. ６

二次元電気泳動

陽性神経線維の分布を Fig. 3A-C に示した。無処置マウス

無処置，AE 処置及び AEW 処置マウス皮膚を摘出後， （Fig. 3A）および AE 処置（Fig. 3B）マウスの皮膚では表皮を剥離し，
タンパク質を抽出した。IPG ストリップ（pH末梢神経終末のほとんどが表皮−真皮接合部までしか達し

３− 10）を用た等電点電気泳動に続いて，SDS-PAGE にておらず，表皮内への伸展は少なかった。一方，AEW 処

よる電気泳動を行なった。ゲルをクマシーブリリアントブ

置マウスの皮膚では無処置マウスの皮膚に比べ，多くの末

ルー染色後，画像解析を行なった。変化したスポットに対梢神経終末が表皮内へ伸展しているのが観察された（Fig.

して MALDI-TOF/MS によるタンパクの同定を試みた。

3C）。

３．結
３. １

また，無髄 C 線維が痒みの伝達に関与していることが果知られている。また，その C 線維のほとんどがカルシト
9）

AEW 処置マウスにおける皮膚症状

ニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）含有神経である 。そ剃毛した無処置マウスの皮膚は鱗屑等の乾皮症に類似す

こで，AEW 処置を行った皮膚部位における CGRP 含有神

る症状は認められなかた（Fig. 1A）。一方，1 日 2 回 5 日

経線維の分布を Fig. 4 に示した。AEW 処置マウスの皮膚

間 AE 処置（data not shown）あるいは AEW 処置（Fig.

では，数多くの CGRP 含有神経終末が表皮内へと伸展し1B）を行ったマウスでは，顕著な鱗屑を認める典型的なていた。

角化亢進を伴う乾皮症に類似する皮膚症状が観察された。
本モデル皮膚の病理組織学的変化として，無処置マウス皮
膚と比較して，AEW 処置マウス皮膚では明らかな表皮の肥厚，顕著な角化亢進の像が観察され，炎症性細胞の顕著な浸潤は認められなかった（data not shown）。

３. ４ AE 処置及び AEW 処置による表皮内タンパク
質のプロテオミクス解析
無処置，AE 処置及び AEW 処置マウス皮膚より表皮を剥離し，抽出したタンパクを用いて二次元電気泳動を行っ

３. ２ AE 処置および AEW 処置による角質水分量と自発的掻き動作数の変化
角質水分量は，無処置群では変化しなかったが，AE 処
置群において処置開始後 2 日目から，AEW 処置群においては処置開始後 1 日目から有意に減少した（Fig. 2A）。また，AEW 処置群はどの時点においても AE 処置群よりも有意に低い値を示した（Fig. 2A）。

Fig. 1 Skin condition of AEW-treated mouse skin. The skinconditions in non-treated mouse skin (A) and in AEWtreated mouse skin (B).

Fig. 2 Time-dependent changes in stratum corneum (SC)hydration and scratching behavior in mice treated with AE
or AEW. (A) SC hydration was measured daily before AE
or AEW treatment. (B) The number of scratching for 2h wasmeasured the day after 5-days AE or AEW treatment.
Values represent the mean±SEM for 8 animals. *p < 0.05
and #p < 0.05 compared with control and AE-treatment,
respectively (Dunnett’s multiple comparisons).

− 75 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

た。それぞれの処置により発現が増加，減少したタンパクが多く見つかった。現在，それぞれスポットを抽出して解析している。現在までに同定できたタンパクで，機能がわかっているものの一つで filaggrin あり，無処置，AE 処置
及び AEW 処置と発現が減少していった。

4．考察

本研究において，AE 処置では皮膚は乾燥するものの自発的掻き動作や末梢神経の表皮内伸展は観察されず，AEW 処置マウスにおいてのみ自発的掻き動作の有意な増加や表皮内伸展神経線維数の増加が認められた。これらのことから，AEW 処置マウスにおける痒みが表皮内伸展末
梢神経の増加に付随して誘導されていることが示唆される。皮膚の乾燥を伴うようなアトピー性皮膚炎などの掻痒性皮膚疾患の皮膚でも，表皮内に一次感覚神経が伸展している

3 − 6）。この様な皮膚疾患の皮膚は，痒覚過敏あるいはアロネーシスの状態になっていることが報告されている

1, 2）

。

したがって，表皮内に伸展した末梢神経は，痒みの伝達に重要な役割を担っていると考えられる。
と こ ろ で，AEW 処 置 マ ウ ス 皮 膚 の 表 皮 内 伸 展 神 経
Fig. 3 PGP9.5-immunoreactive nerve fibers in the mouseskin. The skin sections obtained from non-treated (A), AEtreated (B) and AEW-treated (C) mice were immunostainedwith anti-PGP9.5 antibody. The dashed line in each panel
indicates the border between the epidermis and the dermis.
Arrows indicate nerve fibers in epidermis. Scale bar=50 ㎛ .

9）が， 主 に CGRP を 含 有 す る 無 髄 神 経 で あ っ た。CGRP

は，無髄の C 線維に加え，有髄の A 線維にも発現している。しかしながら，有髄の A 線維のマーカーである
neurofilament 200 陽 性 神 経 の 伸 展 は 観 察 さ れ な か っ た（data not shown）。このことから，伸展神経線維は，主にC 線維であることが示唆される。
表皮内への末梢神経伸展には，表皮の大部分を占めるケ
ラチノサイトからの遊離因子が関与している可能性がある。
そこで，表皮を剥離してプロテオミクス解析を試みている。
その中で，AEW 処置により filaggrin の減少が認められた。

Fig. 4 CGRP-immunoreactive nerve fibers in AEW-treatedmouse skin. The skin sections obtained from AEW-treatedmouse mice was immunostained with anti-CGRP antibody.
The dashed line in each panel indicates the border
between the epidermis and the dermis. Arrow heads
indicate CGRP-immunoreactive nerve fibers in epidermis.
Scale bar = 25 ㎛ .

Fig. 5. Comparative analysis of differentially expressed
protein spots in control and AE- or AEW-treatment
epidermis. Zoom of the 2-DE gel on the spot of filaggrin.

− 76 −

慢性掻痒性皮膚疾患における表皮内末梢神経伸展因子の探索

Filaggrin は，脂質成分のセラミドと伴に皮膚の保湿やバ

fine structure of peripheral nerves in various skin

リア機能に関与している因子である。Filaggrin の遺伝子

lesions of atopic dermatitis, Arch. Dermatol. Res., 289,

変異が魚鱗癬の発症の原因に関係していることが示唆され125-131, 1997.

ており，その患者の多くがアトピー性皮膚炎を伴っている
11, 12）５）Urashima R，Mihara M,: Cutaneous nerves in atopic。このように皮膚バリア機能がdermatitis. A histological，immunohistochemical and

破壊されることにより外部からの刺激を受けやすくなって

electron microscopic study, Virchows Arch., 432, 363-

おり，しかもこのことがケラチノサイト活性化に重要であ370, 1998.

ことが報告されている

るかもしれない。現在，AEW 処置によって変化するタン６）Kinkelin I，Motzing S，Koltzenburg M,: Increase

パク質の同定を行っており，直接神経伸展に関与する因子

in NGF content and nerve fiber sprouting in humanと細胞間接着因子など神経伸展に当り細胞間の隙間形成と

allergic contact eczema, Cell Tissue Res,. 302, 31–37,

表皮環境に関与するもの，更には，神経因子だけでなく痒

2000.
７）Miyamoto T，Nojima H，Shinkado T，et al,: Itch-

みに関与する因子も見出されることが期待される。

associated response induced by experimental dry skin謝辞in mice, Jpn. J. Phamacol., 88, 285–292, 2002.

本研究を遂行するに当たり、ご支援を頂きました財団法

８）Kuraishi Y， Nagasawa T， Hayashi K， et al,:人コスメトロジー研究振興財団に深く感謝いたします。まScratching behavior induced by pruritogenic but not

た、本研究にご協力くださいました当研究室 倉石泰教授、

algesiogenic agents in mice, Eur. J. Phrmacol., 275, 229-

並びに浅川優太、桑園 崇両氏に感謝いたします。

233, 1995.
９）L a w s o n S N , M c C a r t h y P W , P r a b h a k a r E , :（引用文献）

Electrophysiological properties of neurons with CGRP-

１）Heyer G，Ulmer FJ，Schmitz J，et al,: Histamine-like immunoreactivity in rat dorsal root ganglia, J.

induced itch and alloknesis (itchy skin) in atopic
eczema patients and controls, Acta Derm. Venereol.,Comp. Neurol., 365, 355-366, 1996.
10）Palmer CN, Irvine AD, Terron-Kwiatkowski A, etal,: Common loss-of-function variants of the epidermal

75, 348-352, 1995.
２）Simone DA，Alreja M，LaMotte RH,: Psychophysicalbarrier protein filaggrin are a major predisposing

studies of the itch sensation and itchy skin ("alloknesis")factor for atopic dermatitis. Nat. Genet., 38, 441-446,

produced by intracutaneous injection of histamine,

2006.
11）Smith FJ, Irvine AD, Terron-Kwiatkowski A, et

Somatosens Mot. Res., 8, 271-279, 1991.
３）Tobin D，Nabarro G，Willem A，et al,: Increased

al,: Loss-of-function mutations in the gene encoding

number of immunoreactive nerve fibers in atopic

filaggrin cause ichthyosis vulgaris. Nat. Genet., 38, 337-

dermatitis, J. Allergy Clin. Immunol., 90, 613-622, 1992.

342, 2006.

４）Sugiura H, Omoto M，Hirata Y，et al,: Density and− 77 −

リン脂質代謝酵素ホスホリパーゼ A2 群の皮膚における発現・機能と脂質メタボロミクス
東京都臨床医学総合研究所

村 上誠

Phospholipase A2 (PLA2) enzymes catalyze the hydrolysis of glycerophospholipids to fatty acids and lysophospholipids
and have been implicated in a wide variety of biological events. Of more than 30 PLA2 enzymes identified in mammals,
the secreted PLA2 (sPLA2) family contains 10 catalytically active enzymes (IB, IIA, IIC, IID, IIE, IIF, III, V, X, and
XIIA). Although sPLA2s have been implicated in various biological events such as gastrointestinal phospholipid digestion,
inflammation, host defense and atherosclerosis, precise functions of individual sPLA2s remain largely unknown. In an effort
to elucidate the possible in vivo functions of sPLA2s, we generated transgenic mice that overexpressed individual sPLA2
isozymes. We found that transgenic mice overexpressing group X sPLA2 under the control of the b-actin promoter displayed
notable skin abnormalities characterized by alopecia, epidermal hyperplasia, hyperkeratosis and sebaceous gland hyperplasia
during a period corresponding to the late stage of the initial hair cycle. However, endogenous expression of group X sPLA2
was rather low and confined only to hair follicles entering the anagen phase in wild-type mouse skin. Moreover, K14
promoter-directed, skin-specific transgenic overexpression of group X sPLA2 did not cause skin defects, suggesting thatthe epidermal abnormality resulting from overexpression of group X transgenic mice in the whole body might result from asecondary effect and not reflect the intrinsic function of this enzyme. We found that another sPLA2 with unknown function,group IIF sPLA2, was highly expressed in the epidermis of wild-type mice and that its expression was markedly elevatedin the thickened epidermis of group X sPLA2 transgenic mice, of TPA-treated wild-type mice, and of patients with skindisorders harboring epidermal hyperplasia. Notably, transgenic overexpression of group IIF sPLA 2 under either the b-actin or
the K14 promoter led to marked skin abnormalities. The alopecic skins of group IIF and X sPLA2 transgenic mice displayed
an identical gene expression profile, with increased expression of genes related to terminal differentiation of epidermis andsebaceous glands as well as reduced expression of genes related to hair development. Lipid mass spectrometry revealed thatgroup IIF sPLA2 hydrolyzed particular phosphatidylethanolamine molecular species containing docosahexaenoic acid, which
was further converted to the docosanoid protectin D1, in the transgenic skin. These results underscore an unexplored aspectof group IIF sPLA2 as an epidermal sPLA2 participating in skin biology and also suggest that protectin D1, a major group IIF
sPLA2 product, is a novel regulator of epidermal homeostasis and pathogenesis.

１．緒

ザイム、sPLA2-IIF の皮膚における機能について報告する。

言

２．実

2 sPLA2）分泌性ホスホリパーゼ A（
は細胞外に分泌される

験物では 10 種類の活性型アイソザイムが同定されている 。

2 ｰ 1．全身性および皮膚特異的 sPLA2 トランスジェ
ニックマウスの作出

しかしながら、各アイソザイムの生体内における機能と各 sPLA2 アイソザイムの全長 cDNA をトランスジェニ

その標的基質については、古典的なアイソザイムであるックマウス作出用のベクター pCLANL5 に導入した。こsPLA2-IB（膵液の消化酵素）と sPLA2-IIA（炎症刺激によれを常法にしたがってマウス受精卵に注入し、不活性型り誘導される抗細菌酵素）以外は十分に理解されていない。

2 LNL-sPLA2）
sPLA（
を全身に発現するトランスジェニッ

我々は、sPLA2 の生体内機能を解明する方策のひとつとしクマウスを作出したて、sPLA2 群の各アイソザイムを過剰発現したトランスジ

b-actin promoter）プロモーターまたは K14 プロモーター

ェニックマウスを作出し、その表現型の解析を進めているの制御下に Cre recombinase を発現するトランスジェニ。本稿では、脱毛・表皮肥厚の表現型を示す sPLA2-X

ックマウスと交配し、活性型 sPLA2 を全身性（以下 CAG-

全身性トランスジェニックマウスの解析、ならびにこれをTg）または皮膚特異的（以下 K14-Tg）に発現するトラン

通じて新たに浮上してきた新規皮膚特異的 sPLA2 アイソ

スジェニックマウスをそれぞれ得た。

グリセロリン脂質脱アシル化酵素の一群であり、哺乳動

１）

２，３）

Expres sion , f u nct ions , a nd l ipid
met abolom ics of pho sphol ipa se A 2
enzymes in the skin.

２，３）。 こ の マ ウ ス を CAG（chiken

2 ｰ 2．皮膚の表現型の解析
2 ｰ 2 ｰ 1．組織学的所見
トランスジェニックマウスならびにその対照マウスの皮

Makoto Murakami
The Tokyo Metropolitan Institute ofMedical Science

膚を採取し、パラフィン包埋切片を作成した。脱パラフィ
ン後、切片をヘマトキシリン・エオジンで染色し、組織学的所見を観察した。

− 78 −

リン脂質代謝酵素ホスホリパーゼ A 2 群の皮膚における発現・機能と脂質メタボロミクス

2 ｰ 2 ｰ 2．免疫染色

Biosystems）により脂質成分の網羅的な質量分析を行っ

上記皮膚切片をパラホルムアルデヒドで固定した後、各

た 。

３）

種 抗 体 と 反 応 さ せ た。 更 に Alexa Fluor 645 標 識 二 次

３．結

抗 体 と イ ン キ ュ ベ ー ト し た 後、DAPI で 核 染 色 を 行 い、果

画像を観察した。また、別の切片については、HRP 標識

3 ｰ 1．sPLA2-X 全身性トランスジェニックマウスは皮膚異常を発症する二次抗体と反応させた後、DAB 染色（Dako）を行った。

sPLA2-X を全身に過剰発現するトランスジェニック

LSM510 META 共焦点レーザー顕微鏡（Zeiss）にて蛍光

マウスは正常に生まれたが、生後２週目から脱毛が始ま
2 ｰ 2 ｰ 3．遺伝子発現解析

り、生後３−４週にかけて無毛状態となった（図１）。こ皮 膚 よ り RNA を 抽 出・ 精 製 し、 電 気 泳 動 を 行 っ たの時期はマウスの第一毛周期に相当し、これに先立って後、ニトロセルロース膜に転写した。この膜を各種 P 標

sPLA2-X は何らかのプロテアーゼの作用により N 末端の32

識プローブと反応させ、X 線フィルムに感光させて特異プロペプチドが解裂して活性型に変換していた。sPLA2-X

的バンドを検出した。また別の RNA プールについては、

トランスジェニックマウスの出生直後から無毛期にかけHigh Capacity cDNA Reverse Transcription kit（Appliedての皮膚切片を組織学的に解析した結果、本マウスではBiosystems）を用いて逆転写反応を行った後、7300 Real

初期毛周期（embryonic hair cycle）における体毛の増殖

Time PCR System（Applied Biosystems） を 用 い て 定期（anagen）が短く、それに続く退行期（catagen）と休

量的 RT-PCR 反応を行った。更に、上記 RNA を用いて止期（telogen）が長くなっていることがわかった。また

Whole Mouse Genome Oligo Microarray（Agilent）によsPLA2-X トランスジェニックマウスでは脱毛に加えて表る遺伝子プロファイリング解析を行った。

皮肥厚、皮脂腺肥大、嚢胞形成（Cyst）が顕著であり、表皮分化のホメオスタシスに著しい異常が生じるものと考え

2 ｰ 2 ｰ 4．脂質質量分析

られた（図２）。生後 25 日の皮膚におけるリン脂質の変化

皮 膚 よ り 総 脂 質 を 抽 出 し、4000Q-TRAP quadrupole-について脂質質量分析の手法により調べた結果、sPLA2 -X

linear ion trap hybrid mass spectrometer（Applied

トランスジェニックマウスでは高度不飽和脂肪酸（アラキ

図１ 各 sPLA 2 アイソザイムの全身性 A および皮膚特異的 B トランスジェニックマウスの外観
A 全身性の過剰発現では、sPLA2-X (X-Tg) と sPLA2-IIF (IIF-Tg) のトランスジェニックマウスが皮膚異常の表現型を示す。sPLA2-V の過剰発現は肺障害による呼吸困難により新生児期に死亡する。B 皮膚特異的な過剰発現では、sPLA2-IIF (K14-IIF-Tg) のみが皮膚異常を発症する。

− 79 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

ドン酸、ドコサヘキサエン酸）を含むホスファチジルエ

（LPE）が増加していた（図３）。また、皮膚の主要アラキ

タノールアミン（PE）が WT マウスと比べて有意に減少

ドン酸代謝産物である PGE2 ならびにドコサヘキサエン酸

し、これに対応してリゾホスファチジルエタノールアミン

代謝物である Protectin D1 が sPLA2-X トランスジェニッ

図２ sPLA2-IIF（IIF-Tg）および sPLA2-X（X-Tg）トランスジェニックマウスの皮膚組織所見
野生型マウスと比べて、両トランスジェニックマウスでは表皮肥厚、角質化、毛胞形成異常、皮脂腺肥大が顕著である。

図３ sPLA2-IIF (IIF-Tg) および sPLA2-X (X-Tg) トランスジェニックマウスの皮膚より抽出した脂質の質量分析
A ESI-MS 法によるリン脂質の分析。両トランスジェニックマウスにおいてホスファチジルエタノールアミンの組成に変化が見られ、ドコサヘキサエン酸（C22:6）を含む分子種が共通して減少している。sPLA2-X トランスジェニックマウス
では加えてアラキドン酸（C20:4）を含む分子種の減少も見られる。B 脂肪酸酸化代謝産物の網羅的解析。sPLA2-X トラ
ンスジェニックマウスではアラキドン酸代謝物（AA metabolites）として PGE2 と 6-keto-PGF1α（PGI2）の増加が見られるが、この変化は sPLA2-IIF トランスジェニックマウスでは観察されない。両トランスジェニックマウスにおいて、ドコ
サペンタエン酸代謝産物（DHA metabolites）である Protectin D1（PD1）が顕著に増加している。

− 80 −

リン脂質代謝酵素ホスホリパーゼ A 2 群の皮膚における発現・機能と脂質メタボロミクス

クマウスで増加していた（図３）。この時の皮膚についてっている可能性は現段階で否定はできないが、本質的に表マイクロアレイによる遺伝子プロファイリング解析を行っ

皮や皮脂腺で何らかの機能を担っている可能性は低いもの

た結果、sPLA2-X トランスジェニックマウスでは表皮上と考えられた。それでは、上述の sPLA2-X トランスジェ

層部の顆粒層および角質層に特有の遺伝子群の発現が顕著

ニックマウスに発症する皮膚異常は何を意味しているのでに増加しており、表皮基底層から有棘層に分布する遺伝子あろうか？

群の発現に大きな変化は認められなかった。また皮脂腺の肥大に対応して、脂肪酸の生合成や代謝に関わる遺伝子群の発現が sPLA2-X トランスジェニックマウスでは増加し

3 ｰ 3．sPLA2-IIF は皮膚特異的に発現している sPLA2であるていた。一方、毛鞘を構成するケラチン群やケラチン結合

対照マウスと sPLA2-X トランスジェニックマウスの皮タンパク群、およびその発現を制御する転写因子群の発現

膚の間でマイクロアレイ解析を行った結果、トランスジ

は sPLA2-X Tg マウスで著しく減少していた（図４）。以ェニックマウスの皮膚において別の sPLA2 アイソザイム

上の結果から、sPLA2-X トランスジェニックマウスの皮である sPLA2-IIF の内因性発現が顕著に上昇していること

膚ではリン脂質代謝の過度の進行により皮膚幹細胞の分化を発見した（図５）。Northern

バランスが崩れ、分化の方向性が毛胞ではなく表皮・皮脂

色 お よ び in situ hybridization の 結 果、sPLA2-IIF は 他 の腺に偏っているものと推察された。

sPLA2 アイソザイムよりも圧倒的に皮膚での発現が高く、

blotting, 免疫組織化学染

表皮の上層（顆粒層から角質層）に分布している主要なア

3 ｰ 2．内因性 sPLA2-X の発現は体毛増殖期の毛胞に限局している

イソザイムであることが判明した。また、本酵素の発現は皮膚以外の組織では非常に弱いことから、皮膚特異的な

しかしながら、野生型マウスの皮膚における内在性

sPLA2 であると考えられた。更に、表皮肥厚を伴う TPA

sPLA2-X の発現を皮膚全体で評価すると、sPLA2 群の中誘導マウス皮膚炎モデル、更には様々なヒト皮膚疾患におで最も発現が低いアイソザイムであることが判明した。免いて sPLA2-IIF の発現が顕著に増加することがわかった。

疫組織染色により sPLA2-X の発現を検討した結果、本酵
おり、表皮や皮脂腺などのトランスジェニックマウスで顕3 ｰ 4．sPLA2-IIF の全身性および皮膚特異的トランス
ジェニックマウスは皮膚異常を発症する

著な異常が見られた部位には全く検出されなかった。した

全種類の sPLA2 の全身性トランスジェニックマウスをがって、内在性 sPLA2-X が体毛の増殖分化の制御に関わ樹立したところ、先述の sPLA2-X に加えて、sPLA2-IIF

素は体毛増殖期に相関して毛胞外根鞘に限局して発現して

図４ sPLA2-IIF（IIF-Tg）および sPLA2-X（X-Tg）トランスジェニックマウスの皮膚における遺伝子発現のマイクロアレイ解析
数字は野生型マウス皮膚における各遺伝子の発現と比較した値（fold increase）を示す。両トランスジェニックマウスは同じ傾向の遺伝子発現変化を示しており、表皮では顆粒層、角質層の遺伝子発現が相対的に増加し、基底層の遺伝子が減少している。
また、毛を構成する遺伝子群のうち、髄質を除く毛皮質、毛小皮、内毛鞘、コンパニオン層の遺伝子発現の減少は顕著である。
これらの遺伝子発現変化は、表皮肥厚、角質化、脱毛などの組織学的な所見とほぼ合致している。

− 81 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009のトランスジェニックマウスが皮膚異常を発症することがける sPLA2-IIF の発現が二次的に増幅されたのではないか判明した（図１）。sPLA -V の全身性トランスジェニックと推測している。

2

マウスは肺障害により新生児期に死亡するため、皮膚に対sPLA2-X および sPLA2-IIF それぞれの全身性 Tg マウス

する影響を評価できない 。そこで、sPLA2-IIF, -V, -X のの皮膚についてマイクロアレイ遺伝子プロファイリングの３種類のアイソザイムについて、K14 プロモーター制御

結果を比較すると、両者はほぼ同一の遺伝子発現パター

下に皮膚特異的なトランスジェニックマウスを樹立した

ンを示し、表皮顆粒層から角質層の遺伝子発現の増加とところ、K14-sPLA2-IIF トランスジェニックマウスのみが体毛関連遺伝子の発現低下が顕著であった（図４）。また、皮膚異常を発症した（図１）。これらの結果と、先述した

sPLA2-IIF トランスジェニックマウスの皮膚ではドコサヘように全身性 sPLA2-X トランスジェニックマウスの皮膚

キサエン酸を含む PE が選択的に減少し、Protectin D1 のでは内因性 sPLA2-IIF の発現が大きく増加していることを産生が亢進していた（図３）。一方、PGE2 などのアラキド

考え合わせると、皮膚の表現型を直接引き起こしているアン酸代謝物の増加は sPLA2-IIF トランスジェニックマウ

２）

イソザイムは sPLA2-IIF であると考えられた。なぜ全身性スでは認められなかった。したがって、sPLA2-IIF は皮膚

sPLA2-X トランスジェニックマウスの皮膚において内因の PE からドコサヘキサエン酸を選択的に遊離しているも性 sPLA2-IIF の発現が上昇するのかについての原因は定かのと考えられた。また sPLA2-X トランスジェニックマウ

ではないが、過剰発現した sPLA2-X が全身性に誘発したス（＋内因性 sPLA2-IIF の発現増加）ならびに sPLA2-IIF

何らかのリン脂質代謝異常がトリガーとなって、皮膚におトランスジェニックマウスの共通の所見から、両者で顕

図５ sPLA2-IIF は皮膚の主要な sPLA2 アイソザイムである
A)sPLA2-X トランスジェニックマウス（X-Tg）とその対照マウス（WT）における sPLA2 群の発現のマイクロアレイ解析。
各酵素のうち sPLA2-IIF が突出して発現が高く、さらに X-Tg マウスにおいて発現が更に増加していることがわかる。
（なお、
ここで用いている X-Tg マウスはヒト sPLA2-X を発現させており、マイクロアレイではマウスの内因性 sPLA2-X を検出している。）（B & C）野生型マウスの皮膚（P0）における sPLA2-IIF の免疫組織化学染色 B と in situ hybridization C。表皮における陽性シグナルが顕著である。D 野生型マウスの全身臓器（５週齢、雌）における sPLA2-IIF mRNA の発現をNorthern blotting により調べた結果、皮膚に非常に強いシグナルが検出され、他の臓器では腸に弱い発現が検出されるのみである。

− 82 −

リン脂質代謝酵素ホスホリパーゼ A 2 群の皮膚における発現・機能と脂質メタボロミクス

著に増加していたドコサヘキサエン酸代謝物 Protectin D1

質層）で特に際立っており、表皮肥厚・角質化との関わり

は皮膚ホメオスタシスを制御する新しい脂質メディエータに興味が持たれる。
全身性の sPLA2-X トランスジェニックマウス（内因性ーである可能性がある。

４．考

sPLA2-IIF の発現上昇を伴う）ならびに sPLA2-IIF トラン

察

スジェニックマウスの双方の皮膚において、ドコサヘキサ

本研究では、機能未知の sPLA2 アイソザイム全種のトエン酸を有する PE 分子種が選択的に減少していた。一方、ランスジェニックマウスを作出し、皮膚の表現型を中心

前者のマウスではこれに加えてアラキドン酸含有 PE も減に解析を行った。sPLA2-X の全身性トランスジェニック

少していたが、後者ではこの変化は観察されなかった。しマウスは脱毛、表皮肥厚、皮脂腺肥大を伴う激しい皮膚

たがって、sPLA2-IIF は皮膚においてドコサヘキサエン酸

症状を発症した。このことは、sPLA2 によるリン脂質代

含有 PE 分子種に選択的に作用しており、全身性 sPLA2-X

謝反応の過度の進行が皮膚異常を誘発することを示して

トランスジェニックマウスのみに認められたアラキドン酸

いるが、内在性 sPLA2-X の皮膚における発現は極めて低含有 PE の減少とそれに付随する PGE2 の増加は、人為的

く、かつ毛胞に限られていたことから、本酵素が生体内でに過剰発現した sPLA2-X の付加的作用を反映しているも皮膚の病態に本質的に関わっている可能性は低いものと考のと思われる。sPLA2 ファミリーは本質的に細胞外に存えられる。この点については、本来マウスの皮膚に発現し在するリン脂質に作用すると思われるので、sPLA2-IIF がていない sPLA2-IIA のトランスジェニックマウスも類似分布する表皮の顆粒層から角質層に細胞外 PE のプールがの皮膚異常を発症することが報告されている 。興味深い

存在する可能性がある。皮膚におけるドコサヘキサエン酸

ことに、皮膚特異的な sPLA2-X トランスジェニックマウ

代謝物の一斉解析を試みた結果、検出された複数の代謝物

スでは目立った皮膚の異常所見は観察されなかったことかの中で Protectin D1 の量が全身性の sPLA2-X、sPLA2-IIF

ら、sPLA2-X の全身性トランスジェニックマウスで見ら双方のトランスジェニックマウスで顕著に増加していた。

れる皮膚異常は sPLA2-X が皮膚のリン脂質を分解するこ

このことから、sPLA2-IIF は皮膚において PE →ドコサヘとに直接起因しているのではなく、皮膚以外の組織で起こ

キサエン酸→ Protectin D1 の代謝経路を制御している可

っているリン脂質代謝異常（例えばリポタンパク質の過剰能性を想定している。Protectin D1 は最近注目を集めてい分解）の二次的結果を見ている可能性が高い。

る抗炎症性脂質メディエーターのひとつであり、皮膚にお4）

sPLA2-X 全身性トランスジェニックマウスの皮膚を解ける機能に関する知見はないが、網膜上皮細胞の細胞死を析している過程で、sPLA2-IIF が本来皮膚に発現してい抑制して生存を延長する活性が報告されていることから 、る主要アイソザイムであることを見出した。これまでに

表皮ケラチノサイトにも類似の効果を及ぼしている可能性

sPLA2-IIF に関する情報は極めて限られておりがある。この点については今後の検討課題である。

５，６）

、皮膚

7）

における発現は見過ごされていた。その意味で、「sPLA2-

表皮角質は細胞間に脂質フィルムが存在し、これが水分

IIF = epidermal sPLA2」の発見は重要であるといえる。

透過性バリアを形成している。このバリア脂質の主成分は

sPLA2-IIF の発現は全身性 sPLA2-X トランスジェニック

セラミドであるが、遊離脂肪酸も 20% 程度存在しており、マウスの皮膚で顕著に増加しており、また TPA 誘導マ

この存在比の乱れは水分透過性バリアに障害を起こすこと

ウス皮膚炎モデル、更には表皮肥厚を伴うヒト皮膚疾患が知られている。実際、バリア脂質の合成、輸送、代謝にでも発現が増加していることが分かった。全身性 sPLA2-関わる分子の遺伝子変異（ノックアウトを含む）は表皮にIIF トランスジェニックマウスは全身性 sPLA2-X トランス

著しい表現型を生じる

ジェニックマウスと類似の皮膚異常を発症した。全身性ス皮膚に塗布すると皮膚のバリア機能が損なわれ、脂肪酸

sPLA2-X トランスジェニックマウスの皮膚で上昇した内塗布により回復することが報告されている

因性 sPLA2-IIF の発現レベルは、全身性 sPLA2-IIF トラン

から、sPLA2-IIF の作用機序のひとつとして、バリア脂質

スジェニックマウスの皮膚における本酵素の発現レベルにを形成する脂肪酸の供給に関わっている可能性を考慮する

匹敵していた。皮膚のマイクロアレイ解析の結果、両トラ必要がある。今後、sPLA2-IIF ノックアウトマウスの解析

ンスジェニックマウスで生じる遺伝子発現変化はほぼ同一を通じて本酵素の皮膚における役割を更に検証する必要がであり、組織学的所見（表皮角質化・皮脂腺異常・脱毛）あるが、予備的結果として、sPLA2-IIF KO マウスの皮膚を説明するものであった。更に、皮膚特異的な sPLA2-IIF

はパサパサした触感があり、その超微細構造を電子顕微鏡

トランスジェニックマウスを作出したところ、これも皮膚で観察した結果、表皮角質層の表面が鱗状になる異常を認異常を発症した。これらの結果から、sPLA2-IIF は皮膚のめている。この所見は角質を満たす脂質バリアに異常があ

ホメオスタシスや病態生理に関わる新しい分子であると考ることを示唆しており、sPLA2-IIF が皮膚の病態生理に関えている。sPLA2-IIF の発現は表皮の上層部（顆粒層と角わることを更に支持するものである。

− 83 −

８，９）。sPLA2 の古典的阻害剤をマウ
10）

。このこと

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009謝辞M., and Lambeau, G. (1999) On the diversity of secreted

本研究を遂行するにあたり、ご支援をいただきました財

phospholipases A 2. Cloning, tissue distribution, and団法人コスメトロジー研究振興財団に深く感謝致します。

functional expression of two novel mouse group II
enzymes. J. Biol. Chem. 274, 31195-31202（引用文献）

６）Murakami, M., Yoshihara, K., Shimbara, S., Lambeau,

１）Kudo, I., and Murakami, M. (2002) Phospholipase A2

G., Gelb, M. H., Singer, A. G., Sawada, M., Inagaki,

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group III secreted phospholipase A2 transgenic miceacid chain length in development of hair and skinreveals potential participation of this enzyme infunction. J. Biol. Chem. 279, 5621-5629

plasma lipoprotein modification, macrophage foam cell

９）Zheng, Y., Eilertsen, K. J., Ge, L., Zhang, L., Sundberg,

formation, and atherosclerosis. J. Biol. Chem. 283, 33483-

J. P., Prouty, S. M., Stenn, K. S., and Parimoo, S. (1999)

33497

Scd1 is expressed in sebaceous glands and is disrupted
in the asebia mouse. Nat. Genet. 23, 268-270

４）Grass, D. S., Felkner, R. H., Chiang, M.-Y., Wallace,
R. E., Nevalainen, T. J., Bennett, C. F., and Swanson,10）Elias, P. M., Menon, G. K., Grayson, S., and Brown, B.

M. E. (1996) Expression of human group II PLA in

E. (1988) Membrane structural alterations in murine

transgenic mice results in epidermal hyperplasia instratum corneum: Relationship to the localization of

the absence of inflammatory infiltrate. J. Clin. Invest. 97,

polar lipids and phospholipases. J. Invest. Dermatol. 91,

2233-2241

3-102５）Valentin, E., Ghomashchi, F., Gelb, M. H., Lazdunski,− 84 −

紫外線の皮膚慢性毒性に対するサンスクリーン剤の防御効果を高速・高感度に評価する方法の開発
東北大学大学院医学系研究科ゲノム生物学分野

池 畑

広 伸

Sunscreens are widely used to protect our skin from harmful chronic effects of the sunlight such as photoaging andcancer induction, which are known to result from oxidative and genotoxic effects of the ultraviolet light (UV) included in
the sunlight. The ability of sunscreens to prevent those chronic UV toxicities has been assessed using their capacities tosuppress sunburn (erythema) after sunlight or UV irradiation, and is evaluated by indices such as sun protection factor (SPF).
However, any direct correlation has not been established between the skin inflammation (erythema) and those chronic UVskin toxicities. We developed a rapid and sensitive method to evaluate the protecting ability of sunscreens for those chronic
UV effects by assaying mutation and/or DNA damage induction in the skin after UV irradiation, using a transgenic mouseline, Muta Mouse, developed specifically for mutation analysis. Here, we show that the newly developed method is highly
useful to evaluate the protection ability of sunscreens against the skin genotoxicity of UV by assaying mutation induction,and can assess their capacity to prevent the photoaging by quantifying oxidative DNA damage. Moreover, we found aninconsistency between the SPF and the mutation-suppressing ability for some of the sunscreens we tested, and thosesunscreens had formulations that UV scatterers, instead of absorbers, were main components of their UV protectors. Thesefindings indicate that SPF is not the index appropriate to evaluate the ability of sunscreens to prevent the genotoxicity of UV.
We introduced a new index of mutation protection factor (MPF), which can be determined by the method developed here, forthe appropriate evaluation of sunscreen’s protecting ability against the UV skin genotoxicity.

１．緒

DNA を傷つけ突然変異を高頻度で誘発することが多くの言生物で証明されている。そこでこの突然変異を指標として

日光紫外線の有害作用を防ぐためにサンスクリーン剤は

紫外線の皮膚慢性毒性を高感度で検出できるアッセイ系を日常的に一般に広く使用されているが、その性能は主にマウスで開発し、その有効性を実際のサンスクリーン剤を

皮膚の日焼け（紅斑反応 burning と黒化反応 tanning）に用いて検証した。通常、慢性毒性の検証には長い試験期間基づく SPF や PA といった指数によって評価されている。

を必要とするが、突然変異を指標とすることにより短期間

SPF や PA が高いほど日焼けを防ぐ効果が高いわけだが、に検出することが可能となる。また評価用の検体に突然変紫外線の有害作用には日焼けのような急性のものの他に、異検出用トランスジェニックマウスを用いることにより検皮膚癌（ゲノム毒性）やシミ・しわ（光老化）のような慢出法そのものも効率化・迅速化を図った。

性のものもあり、こちらの方が不可逆的で美容・医学的に

２．実

より深刻な影響を皮膚に与える。紅斑・黒化反応と皮膚の癌化・光老化の間には直接的因果関係は認められておらず、

2・1

験

紫外線源

SPF や PA が高いからといって、そのサンスクリーン剤

紫外線源としてナローバンド UVB（NB-UVB; Philipsが皮膚癌や光老化の予防にも有効と判断できる科学的根拠

TL/01, 308-313 nm, 312 nm peak）と UVA1 レーザ（364は乏しい。本研究では個々のサンスクリーン剤についてこnm）を利用した。それぞれ約 25-28 W/㎡ , 300 W/ ㎡の線のような紫外線の皮膚への慢性毒性に対する抑止性能を直量率で照射した。UVA1 レーザは自然科学研究機構基礎接評価できる指数の開発を試みた。

生物学研究所に設置されている装置を利用した。線量計と皮膚癌や光老化は紫外線の皮膚のゲノムや構造に対するし て NB-UVB に は UVP 社（ 米 国 ） の UVX Radiometer

直接的（生体高分子の光化学反応）
・間接的（活性酸素生と UVX-31 Sensor を、UVA1 レーザにはシリコンフォト

成を介した反応）な毒性によることが多くの研究から示

ダイオード（浜松ホトニクス）を使用した。

されている。紫外線のこうした直接・間接作用はゲノム
Development of a rapid and sensitive
met ho d t o eva lu at e t he abi l it y ofsunscreens for protection of the chronicskin genotoxicity by ultraviolet lights.
Hironobu Ikehata
Department of Cell Biology, Graduate
School of Medicine, Tohoku University

2・2

トランスジェニックマウスによる紫外線誘発突

然変異頻度の解析
突然変異検出用トランスジェニックマウスとして Muta
１）

マウスを用いた 。このマウスはトランスジーンとして大腸菌 lacZ 遺伝子を有し、この遺伝子を突然変異検出マー
カとして利用する。lacZ トランスジーンは λ ファージベク
タに組み込まれているので、容易にゲノム DNA からファ− 85 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

2・3

ージ粒子として回収できる。
Muta マウスを用いた皮膚における紫外線誘発突然変異の解析法は既に発表済みである

２，３）。簡単に紹介すると、サンスクリーン剤

３社（甲・乙・丙）から発売されている５種のサンスク
リーン剤（A 〜 E）を使用した。甲社からは SPF 値の異Muta マウスの背中をバリカンと脱毛クリームを用いて麻なる３種類のサンスクリーン剤（A, D, E）を選んだ。各

酔下で除毛する（除毛範囲：約 3 × 6 ㎠）
。３日後、麻酔サンスクリーン剤の性能及び成分表示を表１に示す。
サンスクリーン剤は照射 15 分前に、皮膚脱毛部にマウ

下で除毛部皮膚に紫外線照射する。皮膚の突然変異を十分発現させるため照射マウスの飼育を４週間続けた後、照ス１頭あたり約 0.2 ㎖を均一に塗布した。

射部皮膚を採取する。酵素処理により表皮と真皮に分離後、各組織からゲノム DNA を抽出する。ゲノム DNA か

2・4

DNA 損傷の検出・定量

ら lacZ トランスジーンをファージ粒子として回収し、大紫外線により誘発される DNA 損傷の検出・定量法は既腸菌に感染させて、lacZ 遺伝子の突然変異を検出する。総

に発表済み 。簡単に説明すると、マウスに紫外線を照射

ファージ数と変異ファージ数より突然変異頻度を計算する。

後、直ちに照射部皮膚を採取する。組織内の酵素反応を

表１

４）

使用サンスクリーン剤

サンスクリーン

A

B

C

D

E

メーカー

甲

乙

丙

甲

甲

SPF

23

24

32

35

50+

PA

++

++

++

++

+++

剤型

クリーム

乳液

乳液（2 層型）

乳液

乳液（2 層型）

水，エタノール , メ 水，メトキシケイヒ 水，エチルヘキサン 水，シクロメチコン， シクロメチコン，酸
トキシケイヒ酸エチ 酸エチルヘキシル， 酸セチル，イソノナ 酸化亜鉛，ジメチコ 化亜鉛，水，メトキ
ル ヘ キ シ ル，DPG， BG，エ チ ル ヘ キ シ ン 酸 エ チ ル ヘ キ シ ン，酸化チタン，エ シケイヒ酸エチルヘイソノナン酸イソト ルトリアゾン，シク ル，酸 化 亜 鉛， タ ノ ー ル，DPG， キシル，セチルジメ
リ デ シ ル，BG，オ ロ メ チ コ ン， DPG，シ ク ロ ペ ン PEG-9 ポ リ ジ メ チ チコン，ジメチコン，
クチルトリアゾン， PEG-60 水添ひまし タシロキサン，ミリ ルシロキシエチルジ エタノール，ミネラ
セテアリルアルコー 油，ヒ ア ル ロ ン 酸 スチン酸オクチルド メチコン，セイヨウ ルオイル，セスキイ
ル，シクロペンタシ Na，加水分解コラー デシル，メトキシケ ハッカ葉エキス，ハ ソステアリン酸ソル
ロキサン，トリメチ ゲ ン，ア ル ギ ニ ン， イヒ酸エチルヘキシ トムギエキス，BG， ビタン，ポリメチル
ルシロキシケイ酸， スクワラン，ポリク ル，セ テ ス リ ン 酸 PEG/PPG-19/19 シ ル セ ス キ オ キ サ
セイヨウハッカ葉エ オタニウム -51，ト Na，ベ ヘ ニ ル ア ル ジ メ チ コ ン，
（ジ メ ン，エチルヘキサン
キス，ハトムギエキ リエチルヘキサノイ コール，テトラヘキ チコン／メチコン） 酸セチル，フェニル
ス，ブドウ葉エキス， ン，1,2- ヘキサンジ シルデカン酸アスコ コポリマー，シリカ， ベンズイミダゾール
BHT，（ア ク リ ル 酸 オール，セタノール， ルビル，カンゾウ根 ステアリン酸，塩化 スルホン酸，イソノ／アクリル酸アルキ （アクリレーツ／ア エキス，ペンタステ Na，メ チ ル パ ラ ベ ナン酸イソトリデシ
表示配合成分
）コポ ク リ ル 酸 ア ル キ ル アリン酸ポリグリセ ン，香 料，酸 化 ル，TEA，オウゴン（下線は紫外線吸収剤、 ル（C10-30）
太字は紫外線散乱剤を リマー，カルボマー，（C10-30））ク ロ ス リル -10，ジメチコ （Ca/ セ リ ウ ム）
， エ キ ス，ト コ フ ェ示す。
）
ジエチルアミノヒド ポリマー，キサンタ ン，PPG-8 セ テ ス 水酸化 Al
ロール，白金，BG，ロキシベンゾイル安 ンガム，ジエチルア -20，ス テ ア ロ イ ル
BHT，グ リ セ リ ン，
息香酸ヘキシル，ジ ミノヒドロキシベン 乳酸 Na，ポリシリポリアクリル酸 Na，
メチコン，ステアロ ゾイル安息香酸ヘキ コーン -14，酢酸ト
メチコン，ラウリル
イルメチルタウリン シル，フェノキシエ コフェロール，キサ
ポ リ グ リ セ リ ル -3
Na，セ テ ア リ ル グ タ ノ ー ル，TEA, ンタンガム，セテア
ポリジメチルシロキ
ルコシド，ヒドロキ EDTA-2Na, プ ロ ピ リルアルコール，ミシエチルジメチコ
シプロピルメチルセ ルパラベン，メチル リ ス チ ン 酸，BG，ン，メチルパラベン，
ルロース，ポリイソ パラベン
エ チ ド ロ ン 酸，
香 料，酸 化（Ca/プ レ ン，ポ リ ソ ル
BHT，メチルパラベ
セリウム）
ベート 80，メタク
ン，プロピルパラベ
リル酸メチルクロス
ン，フェノキシエタ
ポ リ マ ー，水 酸 化
ノール，香料
Na，メ チ ル パ ラ ベン，香料− 86 −

紫外線の皮膚慢性毒性に対するサンスクリーン剤の防御効果を高速・高感度に評価する方法の開発止めるため 55℃で５分間熱処理した後、表皮・真皮に分る変異誘発の影響は認められなかった（図２、黒棒）。

離してそれぞれからゲノム DNA を抽出する。この DNA

次に NB-UVB 10 kJ/㎡照射に対する効果（照射時間はについて、シクロブタン型ピリミジンダイマー（CPD）

約６分）を調べた。まず皮膚の急性反応であるが、サンスと 6-4 型光産物（64PP）はモノクローナル抗体を利用しクリーン未塗布のものでは照射２日後より皮膚全体の発赤

た ELISA 法により、８ヒドロキシグアニン（8OHdG）はが出現し、３日目には炎症・むくみが強く現れ、痒みによHPLC/ECD 法により検出・定量する。

る掻き傷と思われるものが局所的に認められた。傷の一部

３．結
3・1

は後に潰瘍化し、完治するのに３週間程度を要した。一方、

果

サンスクリーン塗布群では E を除き、炎症などの変化は

NB-UVB による突然変異の誘発動態

照射後４週目まで全く認められなかった。E では照射後３サンスクリーン剤の紫外線慢性毒性に対する防御効果の評価を突然変異検出用トランスジェニックマウス実験系

日目に皮膚の一部分で軽い炎症が認められたが、照射４日後には消えた。

（Muta マウス）で試みる前に、紫外線誘発突然変異に対突然変異誘発に対するサンスクリーンの抑制効果を図２するこの実験系の感度を確認した。サンスクリーン剤の評（白棒）に示す。サンスクリーン未塗布のものでは非照射価に使用する紫外線としては UVB を利用したが、自然の群と比較して表皮で 34 倍、真皮で 20 倍の変異誘発が認め

日光には含まれない短波長 UVB 成分を出さない NB-UVBられた。塗布群ではいずれのサンスクリーン剤でも UVB

ランプを光源として用いることにし、NB-UVB ランプにによる変異誘発の抑制効果が表皮・真皮ともに認められた。

よってマウス皮膚に誘発される突然変異頻度の線量依存性

しかしその結果は必ずしも表示 SPF 値とは対応しなかっを解析した。結果は図１に示すとおりになり、真皮では調た。最も SPF 値の高いサンスクリーン E（SPF50+）ではべた範囲の紫外線量に対しほぼ直線的に突然変異頻度が上表皮・真皮ともにほぼバックグラウンドレベルまで変異誘昇した。表皮では低線量域（3 kJ/㎡まで）では線量依存発が抑制された。
SPF 値の低いサンスクリーン A, B
（SPF23的に直線的な変異頻度増加が見られ、その傾きは真皮の４〜 24）でも表皮で 80 〜 90% の抑制効果を示し、真皮では倍程度を示したが、それより大きい線量域では変異頻度のほぼバックグラウンドレベルまで抑制された。ところが中上昇が止まり一定値を示した。こうした表皮・真皮各々に程度の SPF 値を持つサンスクリーン C, D（SPF32 〜 35）

特有の変異誘発動態はブロードバンド UVB ランプでも既では A, B よりも成績が悪く、表皮で 70 〜 80％、真皮でに報告している 。また 3 kJ/㎡以上では皮膚に炎症の誘80 〜 90％程度の抑制効果であった。特にサンスクリーン発が見られ、3 kJ/㎡が NB-UVB に対するマウス皮膚の最C の成績の悪さが目立った。また同じメーカの製品である

小紅斑線量（minimal erythema dose, MED）と見積もら

A と D の間でも SPF が低い方の変異抑制効果が高いといれた。

う逆転現象が認められた。

２）

誘発変異頻度を見ると、3 kJ/㎡で表皮では非照射群（約-4サンスクリーン剤の突然変異誘発に対する抑制効果を

1.2×10 ）の 30 倍以上、真皮で７倍以上の変異誘発が見られた。10 kJ/㎡では真皮でも 20 倍以上の誘発が見られた。以上の結果より、我々の使用する実験系はサンスクリーンの性能評価に十分な感度を有すると判断し、最小紅斑
線量よりも大きく真皮でも十分な変異誘発の見られる 10
kJ/㎡（約３MED）でサンスクリーン剤の評価を行うことにした。

3・2 サンスクリーン剤の紫外線誘発突然変異の抑制
効果
SPF 表示の異なる３社（甲、乙、丙）５種（A, B, C, D,
E）のサンスクリーン剤（詳細は表１参照）について、紫外線による皮膚突然変異誘発に対する防御効果を、Muta
マウスを用いて評価した。結果を図２に示す。サンスクリーン剤は SPF の低いもの２種（A, SPF23; B, 同 24）、中程度のもの２種（C, 同 32; D, 同 35）、高いもの１種（E,
同 50+）を選んだ。まずサンスクリーン単独の影響について調べたところ、いずれのサンスクリーン剤も皮膚に対す

図１ ナローバンド UVB によるマウス皮膚における突然変異
誘発動態：
NB-UVB によってマウス皮膚表皮（●）及び真皮（○）で誘発される突然変異頻度の紫外線量依存性を示す。各データポイ
ントはマウス２〜３個体の平均。但し 15 kJ/ ㎡のポイントは１個体からのデータ。

− 87 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

図２ NB-UVB による皮膚突然変異誘発に対するサンスクリーンの抑制効果：
サンスクリーンを塗布したマウス皮膚に NB-UVB 10 kJ/ ㎡を照射し、誘発される突然変異の頻度を表皮⒜と真皮⒝で調べた。各
サンスクリーンの紫外線非照射（黒棒）・照射（白棒）のデータはそれぞれマウス１個体に由来する。サンスクリーンを塗布しない
対照群は３個体のデータの平均。
表2

使用サンスクリーン剤の MPF（突然変異防御係数）の見積もり

Sunscreen

SPF

A
B
C
D
E

23
24
32
35
50+

Epidermis
Repressed Eﬀective
UV doseMFa（×10-4） （kJ/ ㎡）

4.18
7.68
13.33
7.03
1.65

0.26
0.55
1.04
0.50
0.04

Dermis
MPFb

39
18
10
20
250

Repressed Eﬀective
UV doseMFa（×10-4） （kJ/ ㎡）

2.22
1.85
6.17
3.52
2.22

0.29
0.16
1.66
0.74
0.29

MPFb

34
61
6
13
34

a）MF, mutant frequency.
b）MPF, mutation protection factor; MPF =（Irradiated UV dose）/（Eﬀective UV dose ）.
The irradiated UV dose in the present study is 10 kJ/㎡ .

数値化するため、突然変異防御係数（mutation protection

線非照射群とあまり差のない表皮のサンスクリーン E、真factor, MPF）という新たな指数を導入した。MPF の定義

皮のサンスクリーン A, B, E の MPF 値は「極めて大きい」は以下のとおり。

という程度に解釈し、計算値を使用しての相互比較はあまり意味がないと思われる。この点に注意して表２の MPF

MPF =（照射紫外線量）/（実効紫外線量）

値を比較しても、やはりサンスクリーン C, D の変異抑制

定義により計算した MPF 値を表２に示す。ここで「照射紫外線量」
は本実験では 10 kJ/㎡になる。
「実効紫外線量」

に関する成績がその表示 SPF 値の割に低いことが、表皮・真皮ともに明らかに看て取れる。

（effective UV dose, 表２）は紫外線照射したサンスクリー
ン剤塗布群で観測された突然変異頻度を未塗布群で誘発す

3・3

酸化ストレスによる影響の検出法の検討るのに必要な紫外線量のことで、図２の白棒で示される

我々が今回使用したトランスジェニックマウスの検出系

塗布群の変異頻度（repressed MF, 表２）と同じ変異頻度

で紫外線による酸化ストレスの影響を検出できるか確認すを誘発するのに必要な紫外線量を図１の線量効果曲線を用るため、主に酸化ストレスを誘発すると思われる UVA1

いて求める。MPF 値が大きいほどサンスクリーン剤の突を Muta マウス皮膚に照射し、誘発される突然変異を解析

然変異防御能が高いことになるが、今回の実験は各観測値した。UVA1 光源として 364 nm レーザを用い、最大 2.56

がマウス１個体からのデータであるので、統計的ばらつき

MJ/㎡まで照射した。図３c に示すように、表皮・真皮との影響に注意する必要がある。図２の結果から考えて紫外もにバックグランドレベルの最大３〜４倍程度の変異誘発− 88 −

紫外線の皮膚慢性毒性に対するサンスクリーン剤の防御効果を高速・高感度に評価する方法の開発が認められた。回収された変異トランスジーンの DNA 塩
基配列変化を解析したところ、誘発された突然変異はほとんどが紫外線型の突然変異で、ピリミジン塩基が連続して並ぶ配列中でのシトシンからチミンへの塩基置換が主であった。酸化ストレスで誘発されるといわれるグアニンからチミンへの塩基置換の誘発は認められず、Muta マウスによる突然変異アッセイ法では紫外線による酸化ストレスの影響を評価するのは困難であることが明らかとなった。
そこで代替法として UVA1 照射により皮膚ゲノム DNAに生成する酸化型 DNA 損傷の検出・定量を試みた。その結果、図３a に示すとおり代表的酸化型 DNA 損傷である
8OHdG の照射線量に応じた直線的な生成量増加が表皮・真皮の両方で認められた。生成量に表皮と真皮で差は認められなかった。比較として CPD, 64PP の生成も解析した
ところ、CPD のみ照射線量に依存した生成の誘発が表皮・真皮で認められた。この結果より、DNA 損傷誘発量を指標とすることにより、紫外線による酸化ストレスに対するサンスクリーン剤の防護効果を評価することが可能である
ことが示唆された。

４．考
4・1

察

皮膚癌防止効果の評価法の開発

突然変異を指標として、紫外線の慢性毒性のひとつである皮膚癌誘発に対するサンスクリーン剤の防護効果を評価するアッセイ法の開発を、トランスジェニックマウスを利用して行った。その結果、図２のとおり高い感度でサンス
クリーンの効果を検出・評価できるアッセイ系であることが確認できた。しかもここで開発した方法で得られた各サ
ンスクリーンの紫外線突然変異誘発の防御能（MPF 値で示される）は、表示 SPF 値とは必ずしも対応しない場合があることが明らかとなった（サンスクリーン C, D）。この結果はサンスクリーンの皮膚癌防御能を正しく評価するには、従来の紅斑反応に基づく方法では不十分であり、今回開発したような方法で直接ゲノム毒性をアッセイする必要があることを示唆している。紫外線の皮膚慢性毒性、特にそのゲノム毒性に対するサンスクリーン剤の防御能を示す新たな評価指数として、突然変異アッセイ法に基づくMPF の導入を提案したい。

4・2

光老化防止効果の評価法の開発

図３ UVA1 レーザによる DNA 損傷及び突然変異の誘発動態：
364 nm レーザ光によりマウス皮膚表皮（●▲）及び真皮（○△）に生成する DNA 損傷の誘発動態（a, b）と突然変異誘発動態（c）の線量依存性を示す。a: ８ヒドロキシグアニンの誘発動態。b: シクロブタン型ピリミジンダイマー（●○）と 6-4型光産物（▲△）の誘発動態。DNA 損傷誘発動態の各データ
ポイントはマウス２個体の平均値、突然変異誘発動態の各デー
タポイントはマウス１個体からの実測値を示す。

紫外線のもうひとつの慢性毒性である光老化は酸化ストレスの誘発にあるとされているが、今回の研究で突然変異修復されて突然変異になりにくいことなどが影響しているを指標にしてこの酸化ストレスを直接皮膚で検出する試みと推測される。しかしながら本研究により紫外線で酸化型

は成功しなかった。これには、紫外線による突然変異誘発

DNA 損傷が生成することは確認された（図３a 参照）。こでは CPD などの紫外線特異的 DNA 損傷によるものの影のことは突然変異ではなく、DNA 損傷を指標とすること

響が大き過ぎて酸化ストレスによるものはマスクされ検出により、紫外線の酸化ストレスを評価することが可能であされにくいこと、酸化ストレスによる DNA 損傷はすぐにることを示している。紫外線照射直後の皮膚 DNA 中の酸− 89 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

化型 DNA 損傷を検出・定量することにより、サンスクリ

直接評価できるアッセイ系の開発を試みた。紫外線の慢性

ーンの酸化ストレス防御能、即ち光老化防御能をマウス皮

毒性のうち、将来の皮膚癌発生につながる突然変異の抑制

膚で評価することが可能と考えられる。

効果については、本研究で検討した方法で鋭敏に評価できることを明らかにした。一方もうひとつの慢性毒性である

4・3 紫 外 線 の 皮 膚 慢 性 毒 性 防 御 能 指 数 と し て の
SPF 表示の限界

光老化については、酸化ストレスの検出を意図して突然変今回使用したサンスクリーン剤の表示 SPF 値から、突はほとんど誘発されず、うまく行かなかった。しかしなが然変異誘発抑制能は、（数値的には必ずしも一致しないと

ら照射直後の皮膚ゲノム DNA を利用することにより酸化しても）少なくとも A, B, C, D, E の順番で高くなると予型 DNA 損傷を検出・定量できることが明らかとなり、こ想していた。しかし実際には SPF 値の低いものの方（サれを指標にすれば光老化抑制効果の評価が可能であること

ンスクリーン A, B）が、それより高い SPF 値を有するもを示した。

異の解析を行ったが、酸化ストレスによると思われる変異の（サンスクリーン C）より高い変異誘発防御能を示した。

サンスクリーン剤の有する SPF 値と本研究で開発したこうした逆転は同じメーカの製品間でも認められた（甲社

アッセイ法で得られる突然変異誘発防御係数（MPF）はA, D）。成績の悪かった中程度の SPF 値を持つサンスクリ

必ずしも対応しないことを明らかにした。実際に各サンーン C, D は、紫外線防御剤として散乱剤を主とした組成

スクリーンは表示どおりに紫外線誘発炎症（紅斑）に対となっており、他のサンスクリーン剤に比べ紫外線吸収剤

する抑制効果を示したが、完全な炎症防御を示していてもの配合が少ない（表１参照）。散乱剤は凝集を起こしやすく、

SPF50+ のもの以外は突然変異を完全に抑え込むことはでサンスクリーン皮膜内で紫外線防御効果のムラができやすきなかった。このように紫外線の皮膚慢性毒性に対する防いと言われており、これらのサンスクリーン剤が期待どお御能を評価するには、少なくとも皮膚癌防御能に関しては、りの成績を示さなかったことに影響しているかもしれない。

従来の紅斑反応を指標とした方法では不十分であり、本研

またサンスクリーン C は散乱剤として酸化亜鉛の１種類

究で開発したような皮膚ゲノム毒性（突然変異、DNA 損

しか配合されておらず、吸収剤はメトキシケイヒ酸エチル

傷など）を直接指標とする評価法が必要であることが示さ

ヘキシルの１種類だけでしかもカプセルコーティングされれた。またサンスクリーン剤の配合成分によっては、SPFて配合されており、こうした点が特に悪かった実験成績に値と MPF 値のあいだで紫外線毒性防御能の評価に逆転が影響している可能性がある。

起こる可能性があり、特に散乱剤中心の配合の場合は注意

その一方で、これら C, D を含む今回テストしたサンスする必要があることも示唆された。紫外線の皮膚慢性毒性、クリーン剤のいずれも、UVB による皮膚炎症の誘発はほ特にそのゲノム毒性に対するサンスクリーン剤の防御能をぼ完全に抑え込んでおり、突然変異抑制効果の評価結果

示す新たな評価指数として、突然変異アッセイ法に基づくとは必ずしも一致しなかった。照射した UVB 量はほぼ３

MPF の導入を提案したい。

MED に相当するので、炎症抑制効果の結果は使用したサンスクリーン剤の表示 SPF 値（23 〜 50+）とよく一致し（参考文献）ている。しかし突然変異について完全に抑えることができ

１）Gossen JA, De Leeuw WJF, Tan CHT, et al. Efficient

たのはサンスクリーン E だけであり、A 〜 D のサンスク

rescue of integrated shuttle vectors from transgenic

リーンは表皮で多少の変異誘発が認められた。紅斑反応を

mice: a model for studying mutations in vivo. Proc Natl

誘発する紫外線量には閾値があり、それが一般には MED

Acad Sci USA 86: 7971-7975, 1989.

として知られている訳だが、突然変異や癌などの誘発に必２）Ikehata H, Ono T. Mutation induction with UVB in

要な紫外線量には閾値はないと考えられている。こうしたmouse skin epidermis is suppressed in acute high-dose

違いが今回の評価結果の不一致の背後にあると考えられる。

exposure. Mutat Res 508: 41-47, 2002.

皮膚炎症と突然変異に対する防御効果が必ずしも一致しな

３）Ikehata H, Saito Y, Yanase F, et al. Frequent

いという結果は、ひとつの重要な事実を明らかにしている。

recovery of triplet mutations in UVB-exposed skin

即ち皮膚に炎症（紅斑）は認められなくても、突然変異のepidermis of Xpc-knockout mice. DNA Repair 6: 82-93,

誘発は起きていること、即ち将来の皮膚癌発生への変化が2007.
４）Ikehata H, Kawai K, Komura J, et al. UVA1

蓄積されているということである。

５．総

genotoxicity is mediated not by oxidative damage but

括by cyclobutane pyrimidine dimers in normal mouse

紫外線の皮膚慢性毒性に対するサンスクリーン剤の防御効果を評価するため、突然変異を指標にし、マウス皮膚で− 90 −

skin. J Invest Dermatol 128: 2289-2296, 2008.

細胞内シグナル PTEN/PI3 キナーゼ経路による白髪化やメラノーマの制御
九州大学生体防御医学研究所 / 秋田大学医学部

鈴 木

聡

PTEN is a tumor suppressor gene inactivated in numerous sporadic cancers, including melanomas. To analyze Ptenfunctions in melanocytes, we used the Cre-loxP system to delete Pten specifically in murine pigment-producing cells andflox/flox
flox/flox
generated DctCrePten
mice. Half of DctCrePten
mice died shortly after birth with enlargements of the cerebral
flox/flox
cortex and hippocampus. Melanocytes were increased in the dermis of perinatal DctCrePten
mice. When the mutants
were subjected to repeated depilations, melanocyte stem cells in the bulge of the hair follicle resisted exhaustion andflox/flox
the mice were protected against hair graying. Although spontaneous melanomas did not form in DctCrePten
mice,flox/flox
melanomas developed after carcinogen exposure. DctCrePten
melanocytes were increased in size and exhibited
Kip1
heightened activation of Akt and Erks, increased expression of Bcl-2, and decreased expression of p27 . Our results showthat Pten is important for the maintenance of melanocyte stem cells and the suppression of melanomagenesis.

１．緒と、また化学発がんによるメラノーマ形成を加速すること言５）を見出した 。

白髪化は老化現象の１つであり、コスメトロジーの分

２．実野においては、大きな関心事の１つであることは疑いな験

子機序の多くはいまだ不明で、Bcl-2、Mitf、Pax3、Notch、

2 ｰ 1 メラノサイト特異的 PTEN 欠損マウスの作製とメラノサイトの培養：

c-Kit、Rab27A が欠損したマウスが白髪になることから、我々の作製した PTENflox マウスと DCT-Cre Tg マウ

メラノサイト幹細胞の細胞死やメラノサイト分化、メラニスとを交配し、メラノサイト特異的 PTEN 欠損マウスをン色素の産生・輸送機構が白髪形成に関与する可能性があ作製した。メラノサイト培養細胞はディスパーゼによってると考えられている。

採取した皮膚上皮細胞をタイプ I コラーゲン上で、0.5mMい。白髪形成は遺伝的要素が強いとされるものの、その分

PI3 キナーゼ（PI3K）は、EGF、FGF、SCF をはじめとする種々の成長因子やサイトカインによって活性化されDB-cAMP や 10nM endothelin-1 を 含 有 す る melanocytedefined medium（MDM）を用いて 14 日間培養した。

る。活性化された PI3K は、ホスホイノシチド - 4,5 - 二燐酸（PIP2）をホスホイノシチド -3,4,5- 三燐酸（PIP3）に変換し、さらに PIP3 は主に下流の PKB/Akt を活性化す

2 ｰ 2 マウスの頻回脱毛とメラノサイト幹細胞の可視化：ることによって、アポトーシス抵抗性・細胞増殖亢進・細毛髪周期が第二休止期にあるマウスを麻酔して背中の毛

胞遊走亢進に働く。PTEN は、PIP3 を主な基質とするホを刈り、さらにその後テープを用いて脱毛した。その後約スファターゼで、PI3K 経路を負に制御する。

４週後に背中の毛が休止期に入っていることを確かめ、さ

我々は、PTEN 欠損マウスが胎生早期に致死であることを示し、次に PTEN の組織特異的な欠損マウス（PTENfloxマウス）を作成することによって、種々の臓器における
１），２）

PTEN/PI3K 経路の機能を解析してきた本研究で我々は PTENflox マウス
スジェニックマウス

４）

３）

らに脱毛を５回繰り返した。マウスの皮膚は最後の脱毛後８日目で観察した。
メラノサイト幹細胞の可視化には、c-kit 抗体をマウス
６）の腹腔に投与後 、Dct 抗体で染色する方法を用いた。

。

と DCT-Cre トランとを交配することにより、メラノ

2－3

発がん剤投与によるメラノーマの発症：

サイト特異的 PTEN 欠損マウスを作成し、このマウスが3 週 齢 の マ ウ ス の 背 中 の 毛 を 剃 り、0.5 ㎎ のメラノサイト幹細胞の枯渇抵抗性から白髪抵抗性に働くこ

7,12-dimethylbenz[a]anthrcene（DMBA）塗 布 ２ 週 後、 ５

Pten/PI3-kinase pathway in melanocytes
governs hair graying and melanomagenesisµg phorbol-12-myristate 13-acetate（TPA）を週２回、合計
24 週間塗布した。

３．結

Akira Suzuki
Medica l I nst itute of Bioreg ulat ion ,Kyushu University / Akita University
School of Medicine

3ｰ1

果メラノサイト特異的 PTEN 欠損マウスの作製：

我々は PTEN

flox/+

マウスと Dct-Cre Tg マウスを用いてメラノサイト特異的 PTEN 欠損マウスを作製した。この− 91 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

マウスでは約 70％のメラノサイトで PTEN が欠損していウスでは頻回脱毛とともに、白髪になるのに対し、PTENた。しかしながら、Dct は胎生期においてメラノサイトの欠損マウスでは頻回脱毛後の白髪形成に抵抗性であった

みならず終脳などの神経組織にも発現するために、50％の（図１）。

マウスは脳細胞の膨化による巨脳を呈し、生後２か月以内に死亡した。また生後２か月を超えた残りのマウスも種々の神経症状を呈し、短命であった。

3 ｰ 3 PTEN 欠損による頻回脱毛による皮膚メラノサ
イト幹細胞の枯渇抵抗性：
メラノサイト幹細胞が維持されないと白髪となることが７）

3 ｰ 2 PTEN 欠損による周産期皮膚真皮メラノサイト数の増加と白髪抵抗性：分化したメラノサイトやメラノブラストは個体から消失し、

メラノサイト特異的 PTEN 欠損マウスでは、周産期にメラノサイト幹細胞だけとなって DCT 抗体で可視化できる

おける真皮メラノサイトの数が野生型マウスに比し約２倍

６）。また PTEN はこれまでに前立腺細胞、神経細胞、肺増えていたが、毛髪色・皮膚色素量・網膜上皮や虹彩の色

胞細気管支細胞、始原生殖細胞などにおいて幹細胞数を制素量には変化がなく、成体における真皮メラノサイト数に御することが報告されている 。そこで我々は c-kit 抗体も変化がみられなかった。

を投与して可視化したメラノサイト幹細胞が、頻回脱毛にヒトにおいては約 10 回の毛髪周期のあと（約 40 歳相当）、白髪が生じることが知られている。しかしながら一般にマ知られている 。また c-kit 抗体（ACK2）を投与すると8）よってどのように変化するかを、野生型マウスと PTEN
欠損マウスで検討した。

ウスはヒトと異なり毛髪周期が終了後も毛髪が毛嚢に残り

まずメラノサイト幹細胞数は野生型マウスと PTEN 欠

続けることから、マウスの毛嚢には常時複数の毛髪が存在損マウスで有意な差は認めない。しかしながら野生型マウ

して白髪が明瞭とはならず、これがマウスを用いた白髪研

スでは頻回脱毛によって皮膚メラノサイト幹細胞数が枯渇

究を困難にしてきた。

してくるのに対して、PTEN 欠損マウスでは頻回に脱毛

我々はメラノサイト特異的 PTEN 欠損マウスを用いて、しても、いつまでもメラノサイト幹細胞数が保たれること

頻回脱毛による毛髪色変化を検討したところ、野生型マを見出した（図２）。

図１ メラノサイト特異的 PTEN 欠損マウスにみられた白髪
抵抗性

図２ PTEN 欠損マウスにみられる、頻回脱毛によるメラノサ
イト幹細胞の枯渇抵抗性− 92 −

細胞内シグナル PTEN/PI3 キナーゼ経路による白髪化やメラノーマの制御

3ｰ4

PTEN 欠損による発がん剤感受性の亢進：

多くの組織において、PTEN 欠損によってがんが自然発症することから、このマウスを経過観察して自然発症メ
ラノーマがみられるかどうかを検討したが、発症は認められなかった。そこで DMBA+TPA による化学発がんを検討することにした。メラノサイト特異的 PTEN 欠損マウ
スでは発がん剤投与後、野生型マウスと同様の頻度でケラ
チノサイト由来の乳頭腫が認められ、その頻度に差はなかった。しかしながら PTEN 欠損マウスでは発がん剤投与
後 15 週間の観察期間中約 26％に Spindle cell melanomaが認められたのに対し、野生型では２％にメラノーマを認めるのみであった（図３）。

図３ PTEN 欠損マウスにみられる、発がん剤投与によるメラノーマ発症の加速

3ｰ5

PTEN 欠損による細胞学的・生化学的変化：

ら PTEN 欠損マウスにメラノーマが発症するには DMBA

我々は次にこれらマウスの皮膚から作製した培養メラノによる Ras 変異によってさらに ERK を活性化する必要がサイトを用いて PTEN 欠損によっておこる細胞学的・生あるのであろう。実際 PTEN 欠損マウスにおこった化学

化学的変化を検討した。PTEN 欠損培養メラノサイトは発がんメラノーマではさらなる ERK の活性化を認めるが、細胞の個々のサイズが、野生型に比し、有意に増加していた。

Akt の活性化は化学発がんが見られない PTEN 欠損マウ

また、これまでメラノサイトの分化やメラニン合成に重スと同様であった。

要であることが報告されている９分子の発現を比較検討し我々の研究はメラノサイトにおける PTEN の機能をはたところ、PTEN 欠損メラノサイトでは Bcl-2 の発現が著じめて解析したものである。また、これまで白髪になる遺しく高値であった。

伝子改変動物は数多く存在するが、メラノサイト特異的

さらにこの他にも PTEN 欠損メラノサイトでは Akt やERK の活性亢進、p27 の発現低下が認められた。さらにPTEN 欠損マウスに DMBA+TPA を投与して引き起こさPTEN 欠損マウスは、はじめての白髪抵抗性モデルマウ
スであると思われる。
ヒトにおいて白髪は最も容易にわかる加齢現象であり、れたメラノーマにおいては、ERK の活性化がさらに増加

メラノーマもまた加齢に伴う紫外線や化学物質への暴露にしていたが、Akt の活性化は癌化していない PTEN 欠損

よっておこる腫瘍である。本研究は、PTEN やその下流

メラノサイトと同様であった。

分子は白髪や腫瘍を研究するコスメトロジーやオンコロジ

４．考ー研究者にとって魅力的な分子標的であることを示した。

察

またメラノサイト特異的 PTEN 欠損マウスはヒトの白髪

PTEN 欠損マウスでは、PTEN の下流の Akt や Erk の活性化、またその下流の p27 の発現低下、Bcl-2 の発現亢やメラノーマへの新規治療を考えるにあたって優れた動物モデルとなろう。

進をひきおこすことによってメラノサイト幹細胞は枯渇
抵抗性となり、白髪抵抗性になったものと考えられる。実

（引用文献）

際これらの分子の内 Bcl-2 の欠損マウスはメラノサイト幹１）Suzuki A, Nakano T, Mak TW ほか：Portrait of PTEN

細胞が維持されず、マウスは第二毛髪周期から白髪を呈し、:Messages from Mutant Mice. Cancer Science, 9, 209-

７）

PTEN 欠損マウスとちょうど反対の発現形を示している 。

213, 2008

PTEN 欠損マウスでは自然発症メラノーマは認められ

２）Knobbe CB, Lapin V, Suzuki A ほか：The role of PTEN

なかったが、発がん物質に対して感受性が亢進していた。

in development, physiology and tumorigenesis in

これまでにメラノーマ形成に関わるシグナル経路としては

mouse models: a tissue-by-tissue survey. Oncogene, 27,

Ras-ERK 経路、p16-Rb 経路、p19-p53 経路、PI3K-Akt 経

5398-5415, 2008

路などがある。しかしながらこれらのどの経路も１つの

３） Suzuki A, Yamaguchi MT, Ohteki T ほか：T Cell-Specific

シグナル経路ではメラノーマ形成はおきず、２つあるいLoss of Pten Leads to Defects in Central and Peripheral

は３つの経路の変異によってはじめてメラノーマ形成がTolerance. Immunity, 14, 523-534, 2001

おきると考えられている。PTEN 欠損マウスでは Akt と４）Guyonneau L, Rossier A, Richard C ほか： Expression

ERK の活性化が認められ、これら２つの経路は皮膚発がof Cre recombinase in pigment cells. Pigment Cell

んにおいて相乗的に働くことが示されている。しかしながResearch, 15, 305-309, 2002

− 93 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009５）Inoue-Narita T, Hamada K, Sasaki T ほか：Pten deficiency

７）Nishimura EK, Granter SR, Fisher DE ほか：Mechanisms

in melanocytes results in resistance to hair graying andof hair graying: incomplete melanocyte stem cellsusceptibility to carcinogen-induced melanomagenesis.

maintenance in the niche. Science 307, 720-724, 2005
８）Yanagi S, Kishimoto H, Kawahara K ほか：Pten controls

Cancer Research 68, 5760-5768, 2008６）Botchkareva NV, Khlgatian M, Longley BJ ほか：SCF/

lung morphogenesis, bronchioalveolar stem cells, andc-kit signaling is required for cyclic regeneration of theonset of lung adenocarcinomas. Journal of Clinicalhair pigmentation unit. Faseb Journal, 15, 645-658, 2001

Investigation, 117, 2929, 2007

− 94 −

非線形光学現象を利用した
真皮コラーゲン分布 in vivo 可視化法の開発
大阪大学大学院基礎工学研究科

荒 木勉

Second-harmonic-generation (SHG) microscopy has been applied to observe collagen fiber structure in porcine dermis.
Collagen fiber structure in the samples is clearly visualized as high contrast SHG images using a sample-scanning SHG
microscope based on a transmission configuration equipped with a mode-locked Ti:sapphire laser. From comparison of
the SHG images between the transmission detection mode and reflection one, we have confirmed that the reflection-mode
SHG imaging is also applicable to observation of the collagen fiber structure in the porcine dermis. In order to apply the
SHG measurement to human skin, we have used a mode-locked Cr:forsterite laser with a long wavelength and compared its
imaging characteristics with that of the Ti: sapphire laser-based microscope for the measurement of dermal collagen fiber.
The results indicate that the applicability of the Cr:forsterite laser-based SHG microscope for in vivo imaging of human skin.

１．緒が提案されているが、真皮コラーゲンの詳細な構造分布測

言

定ついてはほとんど報告されていない。またレーザー光の真皮は皮膚の張り・弾性・水分保有の機能に深く関与しヒト皮膚への影響についての検討も皆無である。そこで本ており、その主成分はコラーゲンである。したがって、皮研究では、はじめにブタ真皮コラーゲンの詳細な構造分布

膚の形態的及び機能的特性を決定する上でコラーゲンが重測定を行い、その結果をもとにヒト皮膚測定への応用の可要な役割を果たしているといえる。日常生活においても化能性について考察する。

粧過や過度の日照によって光老化が引きおこされるなど皮２．実

膚は様々な刺激にさらされており、これら刺激によって真験皮性状は変化すると思われる。このような真皮コラーゲン

コラーゲンの基本構造はトロポコラーゲン（コラーゲンの構造異常や構造的変化を観察することは、皮膚性状を探分子）であり、これが規則的に順次集合して階層的に太くるだけでなく皮膚疾患に関する情報を得る上でもきわめてなっていく。トロポコラーゲンは光波長オーダーで非中心重要と考えられることから、真皮コラーゲンの変化を迅速

対称性構造をとり、２次の非線形光学特性を有している。

にモニターするための診断技術が皮膚科学の分野で強くそのため、非常に高い瞬時ピークパワーを有するフェムト

望まれている。そこで我々はこれまで生体計測ではほとん

秒パルスレーザー光をコラーゲンに照射すると、非位相整ど用いられることの無かった非線形光学現象と超高速光技

合型 SHG 発生過程を介して 、SHG 光が特異的に発生す術を積極的に導入することで、真皮コラーゲン分布の inる。特にコラーゲンは真皮のみに局在しているので SHG

vivo 可視化を試みる。

光を用いることにより真皮コラーゲン構造の選択的計測が

-15

５）

フェムト秒（10 秒）オーダーの超短パルスレーザー光可能になる。また、その後方散乱光を検出することで表皮を生体組織に照射すると、光電場とコラーゲン分子の非線越しに生体 SHG 光を取得し、in situ 観察が可能となる。

形相互作用によって、入射レーザー光の半波長（あるい

図１に実験装置を示す。光源にはモード同期チタン・サは２倍の周波数）の光が第２高調波発生光（生体 SHG 光）

ファイアレーザー（Ti:S レーザー、中心波長 800nm、パとして発生する 。皮膚組織の場合、コラーゲンは真皮のルス幅 100fs、繰り返し周波数 80MHz）を用いた。レーザ

みに豊富に含まれ（含有量 70％）
、表皮および皮下組織にービームは、ガルバノミラー（GM）とリレーレンズ光学

はほとんど含まれないことに注目すると、真皮コラーゲン

系（RL1, RL2）を経た後、対物レンズ（OL）でサンプルの分布情報を特異的に抽出する手段として、生体 SHG 光

照射することにより生体 SHG 光（中心波長 400nm）を発が有効であると考えられる 。これまでにも、生体 SHG生させる。反射配置計測とするため、生体 SHG 光の後方光を用いた皮膚疾病診断

散乱成分を同じ対物レンズで集光し、ハーモニックセパ

１）

２）

３）

や真皮コラーゲン配向計測

４）Visualization of in vivo dermal collagenfiber distribution by non-linear opticaleffectレータ（HS, 反射波長 400nm）と青色透過フィルター（F,
透過波長 =300-500nm）で抽出した後、光電子増倍管（PMT）
で検出を行う。なお、基本は反射光学配置であるが、透過Tsutomu Araki

型の光学配置へも随時転換できるようにしている。さらにGraduate School of Engineering Science,
Osaka University, Machikaneyama ,Toyonaka, Osaka 560-8531

自動ステージによるサンプル走査あるいはガルバノミラー
によるビーム走査を用いて、SHG イメージング計測を行った。本システムの面内分解能と深さ分解能はそれぞれ− 95 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009の変化しないステージスキャンにより切片サンプルの透過 SHG イメー
ジングを行った。ここでは、真皮上層（乳頭層付近）、真皮中層（網状層上部）及び真皮下層（網状層下部）をそれぞれ測定した。得られた
SHG イ メ ー ジ（400µm×400µm）を図２に示す。この結果を見るとコラーゲン線維分布が高コントラスト
な SHG イメージとして可視化できていることが分かる。特に真皮上層部では、非常にキメの細かいコラー
ゲン線維が密に分布している様子が
図１ 実験装M：ミラー、ND：減光フィルター、BF：ブルーパスフィルター、HS：ハーモニックセ
パレーター、GM：ガルバノミラー、L：レンズ、RL：リレーレンズ、OL：対物レンズ、
PM：光電子増倍管分かる。これらの像を HE 染色光顕像と比較し考察した。図２⒜で表皮が真皮に落ち込んだ表皮突起部分は、表皮がコラーゲンを含有していない
ため、SHG 光の全く検出されない

丸い領域として現われている。真皮中層部では、比較的太1.5µm と 14µm である。
サンプルには、様々な動物の中で比較的ヒト皮膚に類似いコラーゲン線維が直交方向にゆるやかに交叉した網状分した構造を有する市販ブタ皮膚（Yucatan Micropig、米布が部分的に確認できた。しかし真皮下層部では、網状の国チャールズ・リバー社）の背中部分を用いた。採取されコラーゲン線維分布は確認できなかった。また、真皮各層た皮膚組織は表皮剥離後 OCT コンパウンド（サクラファ

で SHG イメージを比較すると、乳頭層と網状層ではコラ

インテックジャパン社）で包埋された後、液体窒素で凍結

ーゲン線維分布の相違が確認できたが、網状層上部と下部され保存される。このような凍結豚真皮組織ブロック（厚では明確な相違は確認できなかった。

さ 3 ㎜）を解凍しサンプルとして用いた。透過型光学系でin vivo 計測への拡張を考慮した場合、反射配置が現実

測定する場合、凍結皮膚組織ブロックをミクロトームによ的であるが、信号強度が小さくなり SN 比の劣化が懸念さって皮膚表面と平行方向に連続スライスすることにより、れる。そこで実用性を検討するため、反射配置に光学系を

各皮膚深さでの切片サンプル（厚さ 16µm）を作成した。

アレンジし、豚真皮組織ブロックの深さ分解 SHG イメー

３.
3. １

ジング計測を行った。ここでは皮膚の非接触リモート計測

結果と考察という観点からドライの対物レンズを用い、入射レーザー

組織切片の SHG イメージング

パワーを 30mW に固定して測定を行った。さらに in vivo

組織の詳細を知るため、はじめに空間的、時間的に焦点（a）

計測を目指す点から、測定時間の短縮は必須であり、今回（b）
図２

ブタ皮膚切片試料の SHG 画像（画像サイズ： 400µm× 400µm）⒜真皮上層、⒝真皮中層、⒞真皮下層− 96 −（c）非線形光学現象を利用した真皮コラーゲン分布 in vivo 可視化法の開発

3．2長波長レーザーによる測定深度の向上

以上実施した測定においては 800nm のレーザーを用い、400nm の青色 SHG 光を得ていた。このような青色光は生体内多重散乱を受けやすい波長帯に位置しており、散乱
0µm

20µm

40µm

による信号減衰が測定可能深度を制限している。したが60µmって 150µm より深部の画像は極めて不明瞭であった。一般に多重散乱効果は波長の 4 乗に反比例するため、レーザ
ー波長を長波長化することで得られる赤色 SHG 光が測定可能深度の向上に有効である。このような点を踏まえて波
80µm

100µm

120µm

長 800nm の Ti:S レーザーの代わりに、フェムト秒モード

140µm

図３ 豚真皮ブロック試料の反射 SHG 画像（画像サイズ：
100µm×100µm）

同期クロム・フォルステライトレーザー（Cr:F レーザー、
中心波長 1250nm）と油浸対物レンズを用いたシステムを使用し、両レーザーの測定能を比較した。ここでは豚皮をの測定はビームスキャンモードで計測を行った。図３は各測定資料として、表面から 50µm ごとに深さ 350µm まで

測定深度（20µm 毎）で得られた SHG イメージ（100µmの SHG 画像を取得した。レーザーパワーは試料面上でい×100µm）を示している。反射配置における測定 SN 比のずれも 40mW に設定した。1 画面にあたりの試料の大き低下によりイメージが若干ぼけているが、オプティカル・

さは 400×400µm であり、1 画面あたりの取得時間を 10

セクショニングされた SHG イメージが連続的に変化して秒にした。図４に測定結果を示す。この図からも明らかないる様子が確認できる。しかしながら、実際の応用計測をように Cr:F レーザーを使用することで 300µm まで鮮明な考慮した場合、現在の測定可能深度ではまだ十分とは言え画像が得られており、レーザーの長波長化の有効性が確認

ない。

できた。

図４ 深さ方向に 20µm ステップで分解した豚真皮ブロックの反射 SHG 画像（画像サイズ ：100µm×100µm）.

− 97 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

図６ Ti:S レーザーと Cr:F レーザーによる SHG 画像の比較⑵
深さ 140µm における豚真皮ブロックの反射 SHG 画像（画像サイズ：200µm×200µm）.Ti:S レーザーによる画像（a：10 秒で取得、
b：1 秒で取得）、Cr:F レーザーによる画像（c：10 秒で取得、d：1 秒で取得）

７）

3．3 ヒトを対象とする in vivo

幼魚に成長したとする報告 、150mW の光をハムスター

測定への可能性の口腔部へ 3 時間照射しても細胞の壊死は観測されないとヒトに対する測定で必要なことは安全性の確保と迅速性

した報告

８）

などがある。我々が提唱する装置では Cr:F レである。Cr:F レーザーを用いた計測では 1 画面あたり 10

ーザー照射光を 40mW に設定し、照射時間も 10 秒程度で秒を要しており、数画面の取得には 1 分程度必要となる。

あるため、測定時における被験者への光照射エネルギーは体動の影響をなくするにはさらなる時間短縮が望まれるが、上記報告例における場合に比べて格段に小さい。したがっそれに伴う SN 比の劣化が懸念される。そこで実用性を検て皮膚へのダメージは無視できると思われる。

討するため、200µm×200µm の画面を 1 秒で取得し、10４.

秒で取得したものと比較した。この結果を図５に示すが、1 秒の取得時間でも SN 比の大きな劣化はなく、実用性に問題はないことを確認した。

総括

本報告では、生体 SHG イメージングが真皮コラーゲン
分布を抽出する手段として有効であることを示した。高コ

次に、Cr:F レーザー光が皮膚へ及ぼすダメージにつントラスト・高空間分解な透過型 SHG イメージをもとに、

い て 検 討 す る。Cr:F レ ー ザ ー 光 に 関 し て こ れ ま で に、真皮各層の切片サンプルにおけるコラーゲン線維の詳細な120mW の光をタマネギ切片の細胞壁に 10 分間照射しても2 次元分布が調査できた。また、反射型深さ分解 SHG イ

細胞壁の破壊は認められなかったとする報告 、100mW

メージングによってコラーゲン線維分布のオプティカル・の光をゼブラフィッシュの胚へ 12 時間照射しても正常なセクショニング像が得られ、本法が 3 次元的コラーゲン構

６）− 98 −

非線形光学現象を利用した真皮コラーゲン分布 in vivo 可視化法の開発

造の in vivo 計測に有効な手法であることを確認した。こof collagen orientation in human dermis by two-のような計測手法を利用することにより基礎研究だけでな

dimensional second-harmonic-generation polarimetry, J.

く、臨床応用にも耐えうる真皮コラーゲン診断法が可能とBiomed. Opt., 9, 259-264, 2004.
５）B. M. Kim, J. Eichler, and L. B. Da Silva: Frequency

なり、様々な皮膚科学分野への応用が期待できる。

doubling of ultrashort laser pulses in biological tissues,

謝辞Appl. Opt., 38, 7145-7150, 1999.

本研究に対して助成を賜ったコスメトロジー研究振興財

６）I.-H. Chen, S.-W. Chu, C.-K. Sun, P.-C. Cheng, and B.-L.
Lin: Wavelength dependent damage in biological multi-

団に深く感謝いたします。

photon confocal microscopy: a micro-spectroscopic（参考文献）

comparison between femtosecond Ti:sapphire and１）S. Roth and I. Freund: Optical second-harmonic

Cr:forsterite laser sources, Opt. Quantum. Electron, 34,

scattering in rat-tail tendon, Biopolymers 20,1271-1290,

1251-1266, 2002.
７）S.-W. Chu, S.-Y. Chen, T.-H. Tsai, T.-M. Liu, C.-Y. Lin,

1981.
２）伊藤誠啓，安井武史，荒木勉，山下豊信，國澤直美，

H.-J. Tsai, and C.-K. Sun, In vivo developmental biology

高橋元次：SHG（第２高調波発生光）顕微鏡を用いた真study using noninvasive multi-harmonic generation
microscopy, Opt. Express, 11, 3093-3099, 2003.

皮コラーゲン線維分布の観察、光学、１ 35-40, 2007.
３）
K. König and I. Riemann: High-resolution multiphoton

８）S.-P. Tai, W.-J. Lee, D.-B. Shieh, P.-C. Wu, H.-Y. Huang,tomography of human skin with subcellular spatial

C.-H. Yu, and C.-K. Sun: In vivo optical biopsy ofresolution and picosecond time resolution, J. Biomed.

hamster oral cavity with epi-third-harmonic-generation

Opt., 8, 432-439, 2003.

microscopy, Opt. Express, 14, 6178-6187, 2006.

４）T. Yasui, Y. Tohno, and T. Araki: Characterization− 99 −

低分子量 G 蛋白質 Rab27A による
メラノソーム輸送制御メカニズムの解明
東北大学大学院生命科学研究科

伊 藤敬

Rab27A is responsible for melanosome transport in melanocytes tethering melanosome to myosin Va, an actindependent motor protein, through Slac2-a/Melanophilin. For understanding the precise mechanism of melanosome transport,
it is important to clarify how Rab27A is activated/inactivated. Furthermore, the regulatory mechanism of Rab27A is also
important based on the clinical standpoint, since mutation in Rab27A causes an inherited disease of human "Griscelli
syndrome". Exhaustive screening among TBC domain containing proteins revealed that EPI64 is the GAP (GTPase
activating protein; inactivator) of Rab27A. EPI64 inactivates Rab27A in vivo and in vitro and overexpression of EPI64
results in melanosome aggregation in melan-a cells probably through intactivation of Rab27A. Interestingly, there are two
close homologues of EPI64, FLJ13130 and mFLJ00332, in mammalian genome including human. Therefore, I investigatedfunctional difference among these three TBC proteins.
As a consequence, I found that FLJ13130 and mFLJ00332 have other functions than EPI64. FLJ13130 inactivatedand mislocalized Rab3A in PC12 cells. mFLJ00332 was involved in formation of immunological synapse in T cells.
Furthermore, in vitro GAP assay revealed that FLJ13130 exhibited somewhat broad specificity and that mFLJ00332 showed
specific GAP activity toward Rab35. These data indicate that there are significant differences even in the closest members
among TBC proteins. These basic data will be useful for application to medical care like a drug discovery against EPI64.

１．緒

オルガネラの中で合成され、貯蔵される。メラノソームは

言

核周辺で作られ、その成熟とともにメラニン色素を蓄え黒日本人の女性に対する美意識の中では、黒い髪、白い肌

色化し、細胞周辺部に輸送される。輸送されたメラノソーというものが古来より重要であった。現代女性にとってもムはそのまま角質化細胞へ受け渡されると考えられている。

シミのない白い肌を保つことが美容の中でもっとも重要な

逆にこの輸送が行なわれないと、メラニン色素は角質化細ことであると言っても過言ではないだろう。また男女問わ胞に受け渡されない 。現在、この輸送の過程には低分子ず、白髪は老化を感じさせるために敬遠される傾向が強い。

量 G タンパク質である Rab27A が関与することが明らか

このように日本人の美的感覚の中で重要な役割を担っていになっており、実際、Rab27A 変異マウスや、Rab27A にる「黒」という色はメラニンと呼ばれる色素がもとになっ変異を持つヒト遺伝病 Griscelli 症候群の患者から単離したている（実際にはメラニン色素は黒色一種類ではないが）。

色素細胞では、メラノソームが核周辺に凝集するという表

このメラニン色素の合成や、いかに肌や髪を黒くするかの現型が観察され、その結果、毛髪の白色化が起こると考えメカニズムの解明はコスメトロジーの観点から非常に重要られているなテーマであると考えられる。

によるメラノソーム輸送制御メカニズムを明らかにするこ肌であれ、髪の毛であれ、メラニン色素は色素細胞とい

１）

２，３）

。以上のような背景から、筆者は Rab27Aとで、コスメトロジーに貢献できると考えた。

う特殊化された細胞によって産生されている。例えば皮膚一 般 的 に、 低 分 子 量 G 蛋 白 質 の 不 活 性 化 は GAP

では、肌を構成している角質化細胞へ色素細胞からメラニ（GTPase-activating potein）が GTP の加水分解を促進す

ン色素が受け渡されることで皮膚全体が黒色化する。実は、る こ と で、 活 性 化 は GEF（guanine nucleotide exchang

皮膚における色素細胞は、数としては少なく表皮全体の 2

factor）が結合している GDP を GTP に変換することで行〜 3％のみであるため、角質化細胞へのメラニン色素の受うと考えられているが、Rab27A に関してはそのどちらもけ渡しという過程は肌の色を決めるのに重要な役割を果た

これまで同定されていなかった（図１）。筆者は、色素細している。

胞内での Rab27A の不活性化がメラノソーム輸送を阻害

色素細胞中でメラニン色素は、メラノソームと呼ばれる
Ana lysis of mela nosome t ra nsportmechanism by small GTPase Rab27A
Takashi Itoh
Department of Developmental Biology
and Neurosciences, Graduated School ofLife Sciences, Tohoku University

することに着目し、メラノソーム輸送阻害を指標にヒトゲ
ノム上に存在する Rab-GAP/TBC タンパク質の網羅的ス
クリーニングを行った。そして、このスクリーニングで同定された TBC タンパク質の一つ（TBC1D10A/EPI64、以下 EPI64 と表記）が、実際に Rab27A を不活性化していることを明らかにし、Rab27A の GAP を世界で初めて同４）定することに成功した 。
ヒトを含むほ乳類では EPI64 と極めて相同性の高いタ− 100 −

低分子量 G 蛋白質 Rab27A によるメラノソーム輸送制御メカニズムの解明

GAP = TBC タンパク質
不活性化型

ファミリーのそれぞれのタンパク質に関して機能解析を行なった。それぞれ独立した仕事なっているが、興味深いデ

活性化型

Rab GDPRab GTPータが得られたので報告したい。

２．実
2．1

結合

験

免疫沈降

T7 タグや FLAG タグを融合した目的タンパク質を発現

エフェクターするベクターを構築、アカゲザル由来の COS-7 細胞に導入することでタンパク質を発現させた。細胞抽出液から、GEF

T7 タグを認識する抗体が付加されたアガロースビーズに

図１ Rab の機能メカニズムと活性サイクル
Rab の活性化サイクルをその制御因子を含めて示した。多くの低分子量 G 蛋白質に共通するメカニズムであるが、Rab は
GTP 型と GDP 型をサイクルする事で膜輸送を制御している。
GEF によって活性化した Rab はエフェクターと結合する事により機能を果たす。機能を果たした Rab は適切なタイミング
で GAP により不活性化を受ける。現在、Rab-GAP は TBC タ
ンパク質によって担われていると考えられている。

より T7 タグ付きタンパク質を沈降させ、同時に FLAG
タグ付きタンパク質が沈降してくるかどうかでタンパク質同士の結合の有無を評価した。

2．2

細胞観察

EGFP や mRFP を融合した目的タンパク質を発現するベクターを構築、melan-a、PC12、Jurkat 細胞に導入した。

ン パ ク 質 TBC1D10B/FLJ13130（ 以 下 FLJ13130 と 表 記 ）、細胞をパラフォルムアルデヒドで固定後、Rab3、Rab27

TBC1D10C/mFLJ00332（ 以 下 mFLJ00332 と 表 記 ） が 存への特異的抗体で染色を行ない、共焦点顕微鏡にて観察を在し、TBC1D10 ファミリーを形成している（図２）
。こ

行なった。

の 3 者は TBC ドメインにおいて非常に高い相同性を持ち、2．3全体の構造も良く似ているため、機能的な相関の可能性

in vitro GAP assayが示唆された。実際、筆者は FLJ13130 が Rab27A を不活

大腸菌用発現ベクターに Rab 遺伝子を導入したベクタ性化し、メラノソーム輸送を負に制御していることを示しーを構築。Rab タンパク質を大腸菌から精製して用いた。

ている 。しかしながら、最近他のグループから、複数のTBC タンパク質は COS-7 細胞に発現させたものを精製

Rab に対して活性を持つ TBC タンパク質が報告されておして用いた。Rab タンパク質に放射性ラベルされた GTP

り 、EPI64, FLJ13130、mFLJ00332 が Rab27A の不活性（
［a-32P］GTP）を結合させ、その後 TBC タンパク質と反化という共通の機能のみならず、それぞれが更に個別の機応させた。反応後の GTP/GDP の量比を TLC 展開を行な能を持つという可能性が考えられた。そこで、TBC1D10

うことで定量し、GAP 活性の有無を評価した。

４）

５）

A

EPI64
FLJ13130mFLJ00332

508

DTYL

TBC

533

60 %

DAYF

TBC
TBC

81 %

447

59 %

DTRF

B

図２ TBC1D10 ファミリーの構造と配列の比較
A. それぞれのタンパク質の構造と同一のアミノ酸の割合を示している。
B. TBC ドメインの配列のアライメント。活性中心であることが明らかになっているア
ルギニンとグルタミンを矢印で示してある。

− 101 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

３．結
3．1

（図３Ｂ）。これらのデータは、過剰発現された EPI64 と果

FLJ13130 は Rab27A を不活性化する事によってメラノソ

TBC1D10A/EPI64

ーム凝集を引き起こしていると考えられる。EPI64 は実際

メ ラ ノ ソ ー ム の 核 周 辺 へ の 凝 集 と い う Rab27A の 機に melan-a 細胞に発現していることが確認されたため、実能 不 全 に よ る 表 現 型 を 指 標 に、TBC タ ン パ ク 質 の 中際の細胞内での輸送にも EPI64 が機能している可能性はで Rab27A を不活性化するものを探索した結果、EPI64、高いと考えている 。

４）

FLJ13130 を含む 5 種類の TBC タンパク質の過剰発現によってメラノソームの凝集が引き起こされた（図３Ａ）。

3．2

TBC1D10B/FLJ13130

この中から実際に Rab27A に活性を示すものを明らかに

Rab3A は Rab27A と 近 縁 の Rab で あ り、 一 次 構 造 やするために、共発現させた時に活性化型の Rab27A の量

局在などが他の Rab と比べて非常に似ている。しかしなを減少させるものを調べてみると、EPI64 と FLJ13130 をがら、Rab3A に関しては TBC タンパク質に属する GAP

共発現している時のみ活性型 Rab27A の量が顕著に減少しが同定されていなかった。そこで、EPI64 を同定したもていることが明らかになった。実際、EPI64 と FLJ13130のと同様の手法を用いて、Rab3A に対する GAP の同定を用いて in vitro GAP assay を行なうと in vitro においを試みた。副腎髄質クロマフィン細胞由来の PC12 細胞ても EPI64 と FLJ13130 は Rab27A に GAP 活性を示した

では、Rab3A は細胞突起先端の小胞上に局在し（図４Ａ）、ホルモン分泌を制御している。Rab3A に活性を持A

つ TBC タンパク質を過剰発現させることで、この Rab3Aの局在が失われるものがあれば、その TBC タンパク質はRab3A の GAP であると考えられる。実際にスクリーニン
グを行なった結果、FLJ13130 の発現により Rab3A の局
在が失われることが明らかになった（図４Ａ）
。興味深い

GFP

ことに mFLJ00332 は若干の活性を持つものの、EPI64 の発現では Rab3A の局在は全く影響を受けなかった（図４Ａ ）。In vitro GAP assay の 結 果、FLJ13130 は 弱 い も のの Rab3A への GAP 活性を示した（図４Ｂ）。しかしながら 他 の Rab（Rab22A、Rab27A、Rab35） に も 活 性 を 示

GFP-EPI64

B

し、上記したように Rab27A への活性がもっとも強かった。

GTP-Rab27A (%)

FLJ13130 は EPI64 や mFLJ00332（ 後 述 ） と 異 な り、 か
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0

*

なり緩い特異性を持った酵素であると考えられ、更に色素*６）細胞とは異なる細胞でも機能していることが示唆された 。

3．3

TBC1D10C/mFLJ00332

ヒトを病気から守る免疫システムのなかで、T 細胞と抗原提示細胞とが形成する免疫シナプスは T 細胞が抗原を認識する過程で重要な役割を果たしている。この免疫シナプスを形成するためには極性に従った膜輸送が必要

BS

A

EP

I6

4

BS

A

FL

となるが、それに関わる Rab や Rab-GAP はまだ同定されJ1ていなかった。mFLJ00332 は末梢血 T 細胞に豊富に発現3130しており、その候補と考えられた。また、mFLJ00332 の

図３ TBC1D10A/EPI64
A. GFP（上）もしくは GFP-EPI64（下）を発現させた melan-a細胞を示している。GFP を発現させた細胞では何も発現させていない細胞と同様に、メラノソームは細胞辺縁部に輸送されているが、GFP-EPI64 を発現した細胞では核周辺に凝集しているメラノソームが観察される。
B. In vitro GAP assay の結果。コントロール（白）に対し、TBC
タンパク質を加えることで（黒）GTP 型の Rab の量がどのよう に 変 化 す る か を 調 べ て い る。EPI64 と FLJ13130 は
Rab27A に GAP 活性を示した。

標的を同定するため、mFLJ00332 と共局在を示す Rab を探索したところ、Rab35 がもっとも強く共局在する Rab
だ と 同 定 さ れ、 実 際、mFLJ00332 が Rab35 に GAP 活
性を持つことを明らかにすることが出来た。またこの時、
mFLJ00332 は Rab3A や Rab27A には GAP 活性を示さなかった（図５）。更に、mFLJ00332 やドミナントネガティ
ブ型の Rab35 の発現や mFLJ00332 のノックダウンによって、免疫シナプスの形成が著しく阻害され、同時に、リサ− 102 −

低分子量 G 蛋白質 Rab27A によるメラノソーム輸送制御メカニズムの解明

イクリング経路の機能障害、極性を持った TCR（T Cell
Receptor）の輸送に異常を示したことなどから、Rab35

以上のデータから TBC1D10 ファミリーのメンバーがそれぞれに固有の機能を持つということが示された。

と mFLJ00332 は T 細胞においてリサイクリング経路を制T 細胞で機能することが明らかになった mFLJ00332

御することで免疫シナプスの形成に寄与していると考えらは、Rab27A に GAP 活 性 を 持 た な か っ た が、 実 際、れた 。

mFLJ00332 を Melan-a 細胞に発現させてもメラノソーム

７）

４．考

の凝集は起こらず、EPI64 と機能的に離れていることが示察唆された。一方、FLJ13130 は EPI64 と同様メラノソーム輸送にも関与するが、ホルモン分泌を制御する Rab3A の局在の制御という EPI64 には無い機能も持つことが明らかになった（図６Ａ）。構造の極めて良く似た TBC タン
パク質間でこのような機能のバリエーションが存在するこ

mFLJ00332

BSA

EPI64

A

FLJ13130とは想像しておらず、非常に驚く結果となった。

GDP
GTP
time (min) 0 12 24 48 0 12 24 48 0 12 24 48 0 12 24 48

GST-Rab35

B

0.8

*

0.7

GTP/GTP + GDP

0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
mFLJ00332
図４ TBC1D10B/FLJ13130
A. GFP（上）、GFP-EPI64（中）、GFP-FLJ13130（下）を発
現 さ せ た PC12 細 胞 を 示 し て い る。 細 胞 は 固 定 後、 抗Rab3A 抗 体 を 用 い て 染 色 し て い る。GFP も し く は GFPEPI64 が発現している細胞では、Rab3A の突起先端における局在は影響を受けていないが（矢頭）、GFP-FLJ13130が発現している細胞では、突起先端の Rab3A のシグナルが有為に減少していることが観察される（矢印）。
B. In vitro GAP assay の結果。コントロール（白）に対し、TBC タンパク質を加えることで（黒）GTP 型の Rab の量がどのように変化するかを調べている。FLJ13130 は複数の Rab に対し GAP 活性を示した。

+

Rab3A

+

+

Rab27A GST-Rab35

図５ TBC1D10C/mFLJ00332
A. Rab35 に結合していたグアニンヌクレオチドを TLC 展開したもの。下のドットが GTP、上のドットが GDP の量を示している。時間経過とともに GDP の量が増えて行くが、
mFLJ00332 が存在している場合の方がその速度が速い。つまり、mFLJ00332 は Rab35 に対して GAP 活性を示している。
B. In vitro GAP assay の 結 果。 コ ン ト ロ ー ル ( 白 ) に対し、TBC タンパク質を加えることで ( 黒 ) GTP 型の Rab の量がど の よ う に 変 化 す る か を 調 べ て い る。mFLJ13130 は
Rab3A, Rab27A には GAP 活性を示さなかった。

− 103 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009A

この結果はどのようなことを意味しているのであろうか。上記した T 細胞や PC12 細胞、色素細胞での機能はRab27A

かなりかけ離れているため、TBC1D10 ファミリーがどのEPI64ように機能分化してきたのかは現在のところ全く明らかでRab3Aない。しかし、想像の域を出ないが、以下のようなモデル

FLJ13130も考えられるのでないだろうか。Rab3A、Rab27A は色素

Rab22A細胞では細胞膜付近のメラノソームに局在するが、神経細mFLJ00332

胞ではシナプス小胞、特に細胞膜直下で放出を待つ小胞に

Rab35

B

局在している。Rab22A は細胞膜からエンドサイトーシス
により形成されるリサイクリングエンドソームに局在することが明らかになっている。Rab35 は数多く存在する Rab

Rab5A
Rab5C
Rab5B
Rab22A
Rab22B
Rab21
Rab24
Rab17
Rab20
Rab2A
Rab2B
Rab4A
Rab4B
Rab14
Rab11A
Rab11B
Rab25
Rab39A
Rab39B
Rab42
Rab19
Rab41
Rab30
Rab1A
Rab1B
Rab35
Rab8A
Rab8B
Rab10
Rab13
Rab15
hRab40A
Rab40B
Rab40C
Rab12
Rab26
Rab37
Rab3A
Rab3C
Rab3B
Rab3D
Rab27A
Rab27B
Rab33A
Rab33B
Rab18
Rab9A
Rab9B
Rab7
Rab41
Rab32
Rab38
Rab29
Rab34
Rab36
Rab23
Rab28
Rab6A
hRab6C
Rab6Bの中で唯一細胞膜に局在するという特徴を持つ。アミノ酸
配列上はかなり異なる Rab 達であるが、細胞膜付近で機能すると言う共通項が存在する。TBC1D10 ファミリーは細胞膜付近の Rab を不活性化するように進化してきており、その後それぞれの Rab への特異性を獲得したのかもしれない。
Rab3A、Rab27A は Rab の中でも非常に配列も似ているが、Rab22A や Rab35 に関しては離れたサブファミリーに属している（図６Ｂ）。TBC ドメインの配列によって分類された TBC1D10 ファミリーのメンバーがこれほど広い範囲の Rab に対して活性を示すのは生化学的観点から非常に興味深く、TBC ドメインにおけるわずかな塩基の違いが、その基質特異性に大きな違いをもたらしている可能性がある。TBC ドメイン -Rab 複合体の立体構造を解き明かすことでその基質認識への普遍的なメカニズムが明らかになるかもしれない。

５．総括

本研究成果のコスメトロジーへの応用の一つは、EPI64を標的とした創薬であろう。EPI64 を活性化することで、
メラノソームの輸送を阻害し、美白へとつなげることが出来る。EPI64 を標的にするような薬剤の作成を行なう場合、極めて相同性の高い分子である FLJ13130 や mFLJ00332の機能を同様に活性化、または不活性化する可能性が十分に考えられる。今回示したデータの通り、FLJ13130 や
mFLJ00332 は EPI64 にはない Rab3A、Rab35 を標的とするような機能を持つ。そのため、FLJ13130 や mFLJ00332の活性に影響を与えないと言うセカンドスクリーニングを行なう事によって、事前に副作用の危険性を回避することが出来るようになるのではないだろうか。本研究がコスメ
トロジーに応用されることを期待したい。

図６ まとめA. TBC1D10 ファミリーと Rab の関係図。EPI64 と mFLJ00332
は強い特異性を持つが、FLJ13130 は緩い特異性を示した。
B. Rab の系 統 樹。Rab3A、Rab22A、Rab27A、Rab35 を反転して示してある。Rab3A と Rab27A は近縁だが、Rab22A、Rab35 はかなり離れたところに位置する。

（参考文献）
１）Raposo, G. and Marks, M. S. : Melanosomes — darkorganelles enlighten endosomal membrane transport,
Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 8, 786-797, 2007

− 104 −

低分子量 G 蛋白質 Rab27A によるメラノソーム輸送制御メカニズムの解明

２）Ménasché, G., Pastural, E., Feldmann, J., et al. :Akt substrate regulating GLUT4 translocation, has

Mutations in RAB27A cause Griscelli syndromea functional Rab GTPase-activating protein domain,

associated with haemophagocytic syndrome, Nat.

Biochem. J., 391, 87-93, 2005
６）Ishibashi, K., Kanno, E., Itoh, T., et al. : Identification

Genet., 25, 173-176, 2000
３）Wilson, S. M., Yip, R., Swing, D. A., et al. : A mutationand characterization of a novel Tre-2/Bub2/Cdc16

in Rab27a causes the vesicle transport defects（TBC）protein that possesses Rab3A-GAP activity,

observed in ashen mice, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97,

Genes Cells, 14, 41-52, 2008
７）Genaro Patino-Lopez, Xiaoyun Dong, Khadija Ben-

7933-7938, 2000
４）Itoh, T., and Fukuda, M. : Identification of EPI64 as a

Aissa, et al. : Rab35 and Its GAP EPI64C in T Cells

GTPase-activating Protein Specific for Rab27A, J. Biol.

Regulate Receptor Recycling and Immunological

Chem., 281, 31823-31831, 2006

Synapse Formation, J. Biol. Chem., 283, 18323-18330,

５）Mîinea, C. P., Sano, H., Kane, S., et al. : AS160, the2008− 105 −

遺伝子改変マウスを用いたヒスタミンの接触性皮膚炎に与える影響の研究
東北大学大学院工学研究科応用量子医工学

大 津浩

Since its discovery in 1910, histamine has been regarded as one of the most important biogenic amines in medical andbiological field. Histamine regulate smooth muscle contraction, immune response, vascular permeability, neurotransmission,and stimulation of gastric acid secrestion. Histamine is synthesized from histidine through oxidative decarboxylation byhistidine decarboxylase (HDC; EC 4.1.1.22), a pyridoxal 5'-phosphate (PLP)-dependent enzyme. We generated histidne
decarboxylase gene-knockout (HDC-/-) mice and previously revealed that scratching behavior was exclusively inducedin HDC+/+ mice whereas it was barely observed in HDC-/- mice. Histological examination revealed that both HDC+/+and HDC-/- mice displayed similar extent of inflammatory cell infiltration, hyperplastic epidermis and newly spreadingof neuronal processes in the skin tissue. Since several metal are ingredient of cosmetic material we started to consider
that metal allergy is important for the cosmetics. The first step for the metal allergy is elution of metal ion into the skin.
Therefore it is important to establish the measuring system of trace ionized metal in the skin. In this study we assessed metalallergy in mice using nickel wire implantation in their back skin and revealed that the amount of nickel ion in the tissue
seems to be paralleled with the extent of inflammation. The amount of ionized metal in the skin tissue was measured using
inductively coupled plasma atomic emission spectrometry (ICP-AES) and the surface of the metal wire was analyzed with
X-ray diffraction (XRD) and scanning electron microscopy/energy dispersed X-ray analysis (SEM-EDX) method. To assess
the extent of allergic reaction we generated HDC-promoter (1.1Kb) plus ZsGreen gene transgenic mice. It was shown that
peritoneal macrophages in these mice were positively glittered under the fluorescent microscopy but we found that othercells which do not express HDC gene also glittered non-specifically. In this regards, we started to generate BAC based
reporter mice to attain the accurate reflection of HDC expression in mice.

１．緒に塗布して誘導した接触性皮膚炎のモデルにおいて，2 週

言

目から 4 週目に表皮肥厚を起こすがノックアウトマウス

化粧品学において，皮膚の炎症は重要な問題点である．

や H1 拮抗剤によってその程度が抑制され，ヒスタミンは

私たちは，先にヒスタミンを欠くヒスチジン脱炭酸酵素遺痒みの発症に不可欠であり，痒みのシグナルは脊髄後角を伝子ノックアウトマウスを作製し（Ohtsu, Tanaka et al.

伝達していくことを明らかにしている（Seike, Ikeda et al.

2001），皮膚の炎症反応におけるヒスタミンの役割につい2005; Seike, Takata et al. 2005）．また H1 受容体拮抗剤をて研究を続けている．例えば，皮下に木綿糸を植え込ん使った実験から，少なくとも H1 受容体を介する経路はこだ慢性炎症モデルでは，ヒスタミンによって肉芽種が形成の接触性皮膚炎の発病に重要であることを報告している

され，血管新生にヒスタミンが必須であり，マクロファー（Hamada, Seike et al. 2006）．このようにヒスタミンはマジ由来のヒスタミンによって VEGF が誘導され，それにウス皮膚において，慢性炎症，皮膚創傷治癒，接触性皮膚

よって血管新生が誘導されることを明らかにした（Ghosh,炎など多岐に渡り重要な影響を与え化粧品学的に重要であHirasawa et al. 2002）．また，皮膚に創傷を作製し，ヒスると考えられる．

タミンの影響を見る実験系において，ヒスタミンの存在はそこで，本研究においてヒスタミンの合成を触媒するヒ

創傷治癒過程に重要であり，ヒスタミンが存在しないと創スチジン脱炭酸酵素遺伝子のプロモーター領域に蛍光色素

傷の治癒過程に遅れることが判明している．この過程でものレポーター遺伝子を繋いだトランスジェニックマウスを血管新生が重要であるものの，この血管新生においては作製し，上述した皮膚疾患モデルのどの細胞にどういう時

bFGF の作用がヒスタミンによってコントロールされ，創期にヒスタミン産生の遺伝子の発現が起きるのかについて

傷の治癒を促していることを明らかにしている（Numata,の検討を進めようと考えた．

Terui et al. 2006）．また，ハプテンを繰り返して背部皮膚
The effect of histamine on contact
dermatitis using gene manipulated mice
Hiroshi Ohtsu
Applied Quantum Medical Engineering,Tohoku University School of Engineering

また，装飾品などの含まれているニッケル，コバルトなどを考えてみると美容と金属アレルギーの関連は非常に重要な課題である．実際に金属によって起きるアレルギー性
接触性皮膚炎（ACD）は多くの皮膚反応が起き，この病態は皮膚や全身性に化粧品や，タトゥー，洗剤，装飾品，ピアス，皮のなめし，人工関節，歯科インプラントなどに暴露されることによって引き起こされる．ニッケルによって ACD が起きることはよく知られているが，その他にア− 106 −

遺伝子改変マウスを用いたヒスタミンの接触性皮膚炎に与える影響の研究

ルミニウム，ベリリウム，クロミウム，コバルト，銅，金，変化する場合とがある．入射 X 線と同じ場合を Rayleigh

イリジウム，水銀，パラジウム，白金，ロジウム，チタン

散乱と呼び，互いに干渉しあって回折（diffraction）現象

が皮膚過敏を起こすことが知られている．このことにアプを生じる．結晶面の格子間隔を d，X 線の入射角を θ とす

ローチするため，生体内に溶け出す金属イオンの測定でき

ると，X 線が回折を起こす条件は，nλ=2d sinθ で表わさるシステムがあると診断や重症度および治療効果，予後のれる．ここで n は任意の整数で回折の次数を表す．この判定などに大いに役立つ．そこで工学的な機器開発の現状

式は Bragg の式と呼ばれる．この解析によって，元素のと問題点に関して検討した．

化合状態の分析が可能となる．従って，この分析法を用い

２．実
2．1

てプレートの表面の酸化状態の解析を行った．

験

マウスの金属ワイアーの植え込み実験

４種類のマウス C57Bl/6, BALB/c, C3H/He, DBA/2 マ

2．4 走査型電子顕微鏡Scanning electron microscopy/
energy dispersed X-ray analysis（SEM-EDX）によ

ウスの背部皮下に 13G の implant needle を用いて麻酔下る金属プレート表面の解析

で金属ワイアーを打ち込む．金属ワイアーは Ni, Co, Fe,

金属を植え込んだ実験系ではマウスの生体反応を起こし

Al で直径 0.8 ㎜であり，長さは 5 ㎜とする．植え込み後８た Ni wire のみが黒く変色していた。走査型電子顕微鏡と時間，24 時間，3 日後にマウスを処理して，組織学的な観エネルギー分散型 X 線分光法を用いて Ni wire および Ni

察や血管透過性について検討する．また，RT-PCR 法にて

plate の表面の組成について分析した。走査型電子顕微鏡

HDC や COX-2 の発現を検討する．

は電子を標本の表面に当て，散乱および放出してくる電子を検出器でとらえて，微細な表面の変化を観測できるため，

2．2

ICP-AES 法による組織内金属イオンの測定

生体内で影響を受けた後の金属プレートの変化を観察でき

ICP-AES 法（誘導結合プラズマ発光分光法）は，三重る．

管の石英トーチを用い，その中にアルゴンガスを通して，最外周管にはアルゴンガスをプラズマを形成するべく通す．

2．5

レポーターマウスの作製

またこのガスはトーチの冷却も兼ねる．また中間の管のア

ヒスチジン脱炭酸酵素（Histidine decarboxylase: HDC）

ルゴンガスは補助ガスと呼ばれ，プラズマを上方に浮かはヒスチジンからヒスタミンを合成する生体内で唯一のせてトーチの中央と中間の管が溶けるのを防ぐ役割をする．

酵素である．私たちはこの遺伝子をクローン化後，この遺トーチの外側上部に巻いた誘導コイルに高周波電流を流す

伝子における転写調節機構について研究してきた．そのと，高周波がトーチ内のガス中に誘導されてプラズマを発後，遺伝子ノックアウトマウスを作製し，ヒスタミン関与

生するようになっている．中心管からアルゴンキャリアーの種々の病態を明らかにしている（Ohtsu, Tanaka et al.

ガスとともに試料溶液を霧状にして送ると，プラズマ中を2001）．その中で接触性皮膚炎についての実験ではヒスタ通る間に試料は原子化，一部はイオン化されて，さらに励ミンの有無に関わらず，病理像は大きな変化はないものの，起される．励起状態となった原子から放電によって発光ス

痒みの対してはヒスタミンの役割が大きいことを明らかにペクトルが得られて，スペクトルを分析することによって，している（Seike, Ikeda et al. 2005）．その後，ヒスタミン

各元素のスペクトル線の波長が各元素固有のものであるこの産生細胞を判断できるように，HDC 遺伝子プロモータとを利用して元素の存在を確認するとともに，スペクトル

ーに蛍光色素遺伝子をプラスミッド上で繋ぎ，トランスジ

線の強度を測定することによって，試料中の定量成分元素ェニックマウスを作製した．当初 HDC 遺伝子のプロモーの濃度を計算する．

ター 1.0kb に市販されているうちで最強の蛍光色素遺伝子と言われている pZsGreen1.1 を繋いだプラスミッドよりト

2．3 XRD（X-ray diffraction） 法による Ni プレートの表面の性状分析

ランスジェニックマウスを作製したが，思ったほど蛍光発

Ni ワイアーを埋め込み，その表面を観察すると，植えは bacterial artificial chromosome（BAC）を用いたトラ込み後数日経過すると黒ずんでくることが観察され，実験

光が強くないこと，非特異的な発光がみえることから現在
ンスジェニックマウスを作製中である．

当初表面が酸化するものと考えた．そこで，X 線回折法を用いて，表面性状について検討した．Ni ワイアーでは X

2．6

レポーターフィッシュの作製

線回折法によっての観察が困難であるため，Ni のプレー

緑色の蛍光はゼブラフィッシュの場合，色素細胞の自トを代わりに植え込み，黒ずんだ部分と光っている部分を

家発光と重なってしまい，特異的な発光と非常に区別し解析した．X 線回折分析法は，X 線が物質に当たって散乱にくいことがわかった．そのため，赤色の蛍光である

されたとき，その波長は入射 X 線と同じ場合と長波長にmCherry という遺伝子を HDC promoter に繋いだプラス− 107 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

ミッドをトランスジェニックしたフィッシュを作製した．
このフィッシュでは脳の深部まで見えるものの，躯間部の筋組織も発光し特異性に乏しかった．現在は，フィッシュ
においては考えられる negative enhancer 部位を除いたレポーターフィッシュの作製を目指しており，それで期待される結果が得られない場合はマウス同様に BAC を用いたトランスジェニックフィッシュを用意する予定である．

３．結
3．1

果

溶出金属イオンの測定法の開発

マウスの背部皮下に種々の金属を植え込み炎症反応を惹起させると、ニッケルに特異的に血漿成分の漏出や組織の壊死などがおきる。植え込んだニッケルの周辺組織中におけるニッケル濃度を Newport Green を用いた蛍光法および ICP-AES 法で測定した（図１）。両方法の結果を比較するために，横軸に蛍光法縦軸に ICP-AES 法の測定値をとり，Ni 濃度の測定結果を比較した。その結果両方法は良く相関し、ともに正確な測定法であると考えられた。また、
Newport Green による測定では特異性がなかったニッケ
ルと亜鉛を ICP-AES 法では分離して測定できることがわかった。測定の感度はほぼ同程度であった。また、Ni ionの周囲組織内への溶出経過の結果と、周囲組織における血漿成分の溶出反応をエバンスブルーという色素を用いて測定した結果を比較してみた（図２）。Ni イオンは Ni wireを植え込んでから８時間で溶出を開始し、その時間経過はエバンスブルーによる血漿漏出反応の時間経過とよく一致

図２ Ni wire を植え込んだマウスの植え込み周囲の Ni イオ
ンの濃度とエバンスブルーの組織内濃度
植え込み後の周囲組織内における Ni の濃度の経時変化 A と組織内への血漿成分の漏出反応をエバンスブルーを静脈内注射して測定した結果 Bしていた。この結果、Ni ion が組織に溶け出すことが、血漿成分の血管外漏出にとって必要なことであろうと推察さ

3．2

金属表面の分析

SEM-EDX（Scanning electron microscopy /energyれる。

dispersed X-ray analysis）による解析
走査型電子顕微鏡で、マウスの背部に植え込んだあとの Ni プレートを観察すると、黒く変色している部分⒜と金属本来の部分⒝が同時に存在していた（図３）。変色のあった部分⒜を EDX 法にて分析すると、Ni のピークを検出した他に C、N、O、Cl、Na、P、S、K などの元素のピークも検出し、Ni プレートに生体内成分が付着あるいは浸潤していることがわかった。その中ではとくに C 元素のピークが高く、炭素元素が多量にプレートに付着あるいは浸潤していることがわかった。プレートは測定前に念入りに洗浄しているため、これらの生体内成分は恐らく金属表面よりやや内側に浸潤していっているものと考えられるが、今後はさらに別の実験系を組みその点を明らかにする必要
図１ Ni wire を植え込んだマウスの植え込み周囲の皮膚からのサンプル中における Ni ion の濃度
ICP-AES 法と New Port Green を使った蛍光法を用いた時の検出値の比較

があるのかも知れない。
XRD（X-ray diffraction）法による解析
マウスに Ni ワイアーやプレートを植え込み、X 線回折法にて Ni の化合状態の分析をおこなった（図４）。その結− 108 −

遺伝子改変マウスを用いたヒスタミンの接触性皮膚炎に与える影響の研究

量は少なく、植え込み前のプレートとしての性状と変化がなかった。従って黒く変色した金属プレートは酸化による変化ではないことが判明した。

3．3

レポーター動物の作製について

トランスジェニックマウス
HDC promoter+ZsGreen1.1 マウスは肥満細胞が発光するものの、その発光強度は弱く、非特異的な部位における発光も見られるため、金属アレルギー反応において使用に耐えうるものであるかどうかには疑問がある．おそらく、使用した promoter 部分が 1kb と短いため発現の特異性を担うのに充分な領域を持たず、発現特異性に問題のあるト図３ Ni 板の SEM-EDX による解析
Ni プレートについて、黒くなった部分⒜と金属光沢を残している部分⒝の表面性状を SEM-EDX 法にて解析した。

ランスジェニックマウスができた可能性が高い。そこで、実験のアプローチの方法を変えて、現在は HDC 遺伝子を含む BAC を入手して、プロモーター直後に GFP 遺伝子を挿入して HDC 遺伝子近傍 100kb の DNA を丸ごとつかったトランスジェニックマウスを作製するべく実験を開始した。これによって、本来 HDC 遺伝子がもつ近傍の情報を充分に含んだ DNA を導入できるため、本来の遺伝子の発現パターンを表すレポーターマウスが作製できると考えている。
トランスジェニックフィッシュ
緑色の蛍光はゼブラフィッシュの場合、色素細胞の自家発光と重なってしまい、特異的な発光と非常に区別しにくいことがわかった。このため、赤色の蛍光である
mCherry 遺伝子を HDC promoter に繋いだプラスミッド
をトランスジェニックしたフィッシュを作製した。このフィッシュでは脳の深部まで見えるものの、躯間部の筋組織も発光し特異性に乏しかった。現在は、コンストラク
ト内に Negative Enhancer がある可能性を考えて、全長
300bp 程度の短いプロモーターによってコントロールされるレポーター遺伝子をもつトランスジェニックフィッシュを作製中である。

４．考4．1
図４ Ni 板の XRD による解析
上段から、植え込み前の Ni プレートの一部分、植え込んだ
ものの Ni プレートに変色を認めなかった部分、変色を認めた部分、それぞれの XRD 解析を示している。

察

溶出金属イオンの測定法の開発

Ni wire を使った系では、今まで行われている Newport
Green を用いた蛍光色素を用いた解析でも Ni の量を定量可能であると思われる。今回、生体内のしばしば用いられるステンレス鋼である SUS316 を植え込んだ周囲に Ni の溶出が測定され、臨床的には問題がないと考えられている

果、Ni ワイアーにおいて Ni のピーク以外に高いピークがステンレス鋼からも Ni の溶出があることが明らかになっ認められない（上段）ことから、Ni の酸化物などの化合た。このことは、臨床的に問題となってくる Ni の溶出に物は少ないことがわかった。また Ni プレートを植え込んは閾値があるか、あるいは、臨床的には問題にならない程だ後で、黒く変色していた部分（下段）も、金属の光沢の度でも組織において反応している可能性があると考えられあった部分（中断）と同様に Ni の酸化物などの化合物のる。したがって、動物体内でのニッケルの溶出を正確に評− 109 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

（文価する必要性が確認された。

献）

今後、生体にしばしば用いられる金属を対象に、感度の１）Ghosh, A. K., N. Hirasawa, H. Ohtsu, T Watanabe

より高い測定法を見つけ、どのような金属がイオン化しに

and K Ohuchi. (2002). "Defective angiogenesis in

くいかについて検討を進めていきたいと考えている。

the inflammatory granulation tissue in histidine
decarboxylase-deficient mice but not in mast cell-

4．2

HDC promoter-reporter 動物の作製

deficient mice." J Exp Med 195(8): 973-82.

作成したマウスにおいては、ZsGreen1.1 の発光の特異２）Hamada, R., M. Seike, R. Kamijima, M. Ikeda, H.

性に問題があり、プロモーター内にすべての制御領域がは

Kodama, H. Ohtsu (2006). "Neuronal conditions of spinal

いっているかどうか問題がある。

cord in dermatitis are improved by olopatadine." Eur J

今 後、 マ ウ ス で は BAC を 用 い た レ ポ ー タ ー マ ウ ス

Pharmacol 547(1-3): 45-51.

の 作 成 を、 フ ィ ッ シ ュ に お い て は 考 え ら れ る negative

３）Numata, Y., T. Terui, R. Okuyama, N. Hirasawa, Y.

enhancer 部位を除いたレポーターフィッシュの作製を目

Sugiura, I. Miyoshi, T. Watanabe, A. Kuramasu, H.

指す。

Tagami, and H. Ohtsu (2006). "The accelerating effect

５．総of histamine on the cutaneous wound-healing process括

through the action of basic fibroblast growth factor." J

Ni の金属アレルギーに対して、組織内で Ni イオンの量を測定することが可能になっている。また、金属表面の性Invest Dermatol 126(6): 1403-9.
４）Ohtsu, H., S. Tanaka, T. Terui, Y. Hori, Y. Makabe-

状変化についても、２種類の方法で解析できる。

Kobayashi G. Pejler, E. Tchougounova, L. Hellman,

HDC promoter によるレポーター動物の作製は非特異的なM. Gertsenstein, N. Hirasawa, E. Sakurai, E. Buzás, P.

発光を示していたため、方法を変えて再度作製を開始して

Kovács, G. Csaba, Á. Kittel, M. Okada, M. Hara, L. Marいる。

, K. Numayama-Tsuruta, S. Ishigaki-Suzuki, K. Ohuchi,
A. Ichikawa, A. Falus, T. Watanabe and A. Nagy (2001).

謝辞"Mice lacking histidine decarboxylase exhibit abnormal

本研究を遂行するに当たり，ご支援を頂きました㈶コスmast cells." FEBS Lett 502(1-2): 53-6.

メトロジー研究振興財団および共同研究者に深く感謝いた５）Seike, M., M. Ikeda, H. Kodama, T. Terui, and H.

します。また、本研究をすい行するにあたり東北大学大学

Ohtsu. (2005). "Inhibition of scratching behaviour

院薬学研究科平澤典保教授、東北大学工学研究科成島尚之

caused by contact dermatitis in histidine decarboxylase

教授およびヘルシンキ大学ペルティ・パヌラ教授にじん大gene knockout mice." Exp Dermatol 14(3): 169-75.

なる支えんをいただいた事を報告し、深く御礼申し上げます。

６）Seike, M., T. Takata, M. Ikeda, H. Kodama, T. Teruiand H. Ohtsu. (2005). "Histamine helps development ofeczematous lesions in experimental contact dermatitis
in mice." Arch Dermatol Res 297(2): 68-74.

− 110 −

生きるための呼吸、感じる呼吸－香りと慣れ現象－

昭和大学医学部第二生理学教室

政 岡

ゆ り

Previously we tested simultaneous recordings of electroencephalograms and respiration in normal subjects during
threshold and recognition levels of olfaction. The study identified changes of respiratory pattern during odor stimuli andfound that inspiratory phase-locked alpha oscillation (I-a) from the averaged potentials were triggered by inspiration onset.
We performed dipole analysis of I-a and found the dipoles were located in the olfactory-related areas: the entorhinal cortex,
hippocampus, amygdala, and the orbitofrontal cortex. As we often experienced that olfaction is habituated with constant
exposure of odor presentation, we compared the respiratory patterns, I-a, and dipole localizations of I-a during recognitionof odor with those of adaptation in odor. We found that changes in tidal volume and respiratory rate returned to the normal
breathing level during the adaptation period. From averaging EEGs triggered as the inspiration onset, I-a was observedin all electrodes positions during perception of odor; on the other hand, power spectra of frontal areas decreased during
the adaptation period. During the adaptation period, dipoles were not estimated in the orbitofrontal cortex, but sustained
activations in the entorhinal cortex and hippocampus were observed.

１．目

ベルは香りに対する個人の嗜好、記憶などの要素が大きい的と予測される。香りの慣れ現象は末梢レベルのみではなく２）呼吸の役割は酸素を取り入れ二酸化炭素を排出すること中枢においても起こるという報告があり 、中枢の賦活をであり、またエネルギー代謝に伴い算出される二酸化炭素低減させることがわかってきた。本研究では香りの慣れ現量を一定にする為に呼吸の深さと速さで調節することであ

象時の呼吸と脳活動を記録し、香りの慣れにより呼吸がどる。呼吸のリズム産出とそれらの調節はすべて無意識になのように変化するのか、または前研究で観察された I-α

され延髄がその役割を担っている。この生命の維持に不可は観察されるか、また慣れにおける脳内の活動部位はどの欠である呼吸にもうひとつの重要な役割がある。それは息ように変化するのかを検討した。ヒトにとって香りの慣れを吸うという行為が嗅覚と深く密接しているということでとはどのような意味をもつのかを考察する。

ある。息を吸いこんで香りを感じることができ、息を止め

２．実験方法れば香ることはできない。
これまでに香りによる呼吸変化と、香り刺激時の吸息に

健常成人７例（平均年齢：29.5 利き手：右）は実験前、３）一致した脳内の活動を観察してきた。心地よい香りでは呼Spielberger の State Trait Anxiety Inventory（STAI） を施

吸はゆっくりと深くなり、不快な香りでは浅く、早い呼吸行し、オルファクトメーター（高砂香料）を用い嗅覚テスのパターンとなることを報告してきた 。また香り刺激時トを行った。香り５種ＡからＥまで（odor A, β-phenylに脳波を同時に記録し、吸息に一致させて脳波を加算する

ethyl alcohol; odor B, methyl cyclopentenolone; odor C,とアルファ帯域の律動波（I-α）が観察され、脳波から脳iso-valeric acid; odor D, γ-undecalactone; odor E, skatole）

内の電源を探る方法である双極子追跡法により律動波の電を濃度が薄い順－２から＋４までを順に嗅がせ、匂いがす

源が嗅内野皮質、海馬、扁桃体を中心とした辺縁系である

ると分かった時点（だが何の香りが特定できない）を検知ことを示した 。嗅覚は他の感覚と異なり、嗅球から直接（threshold）とし、匂いの種類を特定できた時点を認知

１）

１）

情動の中心である辺縁系に投射をする唯一の感覚であり、 （recognition）レベルとし、両者とも正常範囲であること
香り分子を含んだ１呼吸 1 呼吸が脳内のリズムを変化させ、を確認した。今回の実験では前研究で用いたもっとも心地

情動の中枢である辺縁系を刺激することが示唆された。

よいとされた香りＡ（バラの香り）の各被験者の認知レベ

しかし香りには慣れ現象（adaptation）があり、そのレルを用いた。脳波 19 チャンネルを国際 10－20 法に従い電極を装着し、不関電極を右耳朶に設置した。記録は脳波計

Adaptation toward odor stimuli in humans :investigating into respiratory rhythm
and the limbic activations.

（EEG-1100, 日本光電社）を用いた。

Yuri Masaoka

装置（Odor stimulator, 特許出願番号：特願 2005-151437）

D epa r t ment of Phys iolog y, S howa
University School of Medicineを用いた。呼吸は呼気ガス分析計（CPX, アルコシステム）

香り刺激はパソコンから駆動させる吸息同期香り刺激により分時換気量（VE）、一回換気量（VT）、呼吸数（RR)、
酸素消費量（VO2）、呼気炭酸ガス濃度（ETCO2）を測定した。

− 112 −

生きるための呼吸、感じる呼吸－香りと慣れ現象－

脳波加算の為、呼吸の流量をアナログにて出力し脳波計に電源推定にあたり最大の問題である脳・骨・皮膚の導電率

同時記録した。

の違いを加味し、より正確な位置推定が可能となってきた。

匂い刺激開始時からの呼吸の吸息に一致させて脳波を加算した。加算作業は Nihon Koden 社の Focus を用い、香双極子追跡法の利点として時間分解能に優れていることがあげられる。

り 刺 激 時（odor stimulation） と 慣 れ 現 象（adaptation）

双極子追跡法の妥当性は、術前検査のために硬膜外電極とに分けて加算作業を行った（図１）。各加算回数は 50 －を留置したてんかん患者において間欠発作波の起源を推定

60 回とした。香り刺激装置に装着したバルブの吸息側にしている。また Homma らは（2001） やはり術前のてん香りを浸したリトマス紙を貼付し、パソコン制御によりバかん患者において、深部電極による間欠発作波の出現部位

ルブを開閉させた。香りは被験者の吸息時に香り、呼息はが表面電極による EEG からの３層実形状頭蓋モデルによ呼息バルブへ流れる仕組みである。香りに対する認知の度

る推定位置と一致していることが示されている。これまで合いは感情測定ソフト（こころのものさし , ブレインリサに嗅覚 、視覚 、運動準備電位

ーチアンドデベロップメント）を使用した。タッチパネル

ている。

５）

１）

PC の画面上に提示される visual analogue scale（VAS）（右３．結側を最大限とし左側をまったく匂わないとする）に 15 秒
ごとに右示指で触れ、adaptaion しているか否かを確認し６）７）の電源推定に応用され

果

表１に安静時（rest）、香り刺激時（odor stimulation）、

た。スケールが０（まったく分からない）になった時間を慣 れ（adaptation） 時 の 呼 吸 測 定 結 果 を 示 し た。odor

adaptation とし、さらに香りを投与した。加算脳波は双極

stimulation で は VT（P<0.01）、RR（P ＜ 0.05） の 変 化

子追跡法（BS-navi, ブレインリサーチアンドデベロップメが認められた。VO2 に変化が認められないことから、VTント）により電源の推定を行った。

と RR の変化は代謝によるものではないことが示された。
ETCO2 はどのタスクにおいても変化は認められなかった。

双極子追跡法

adaptation において odor stimulation 時にみられた呼吸の脳波から脳内の電源を推定する方法として双極子追跡法
４）がある 。脳波の特徴として、電位測定を各サンプリング

変化は持続せず、安静時（baseline）と同呼吸パターンとなった。

あたりでの双極子の位置を推定できるため、時間分解能が

図 2 に odor stimulation 時の吸息に一致させて脳波を高く、また簡便で非拘束的であることがあげられる。また加算したもの（左）、adaptation 時の吸息に一致させて

図１ 香り刺激時（odor stimulation) と香りの慣れ（adaptation) の際の呼吸流量（下向き：吸息、
上向き：呼息）。Visual analogue scale (VAS) により香りを感じるか否かを確認し、その後を
adaptation とした。

表１ 安静時（Baseline），香り刺激時（Odor stimulation），香りの慣れ（adaptation）における分時換気量（Minutes ventilation），一回換気量（Tidal volume），呼吸数（RR），呼気終末炭酸
ガス濃度（ETCO2），酸素消費量（VO2）．

− 113 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

図 2 Odor stimulation 時の吸息に一致させて脳波を加算したもの（左）、adaptation 時の吸息に一致させて脳波を加算したもの（右）を示した。それぞれの電極のパワースペクトル解析を行ったものを示した。

図３ （上）健常者における吸息に同期した加算脳波。左：香り刺激時（慣れ：adaptation 前）。右：adaptation 時 RMS: 平均二乗誤差（下）双極子推定を時間を追って追跡したもの。双極子の位置を白丸で示す。吸息開始からの活動部
位の変動を示す− 114 −

生きるための呼吸、感じる呼吸－香りと慣れ現象－

脳波を加算したもの（右）を示した。またそれぞれの電が顕著に表れず、また脳活動部位もさまざまな部位が賦活

極のパワースペクトル解析を行ったものを示した。odor

する。しかし言い換えれば様々な脳部位が賦活するという

stimulation では香り刺激時の吸息に同期して I -α が認めことは快の感情がより高度な脳機能であることを意味する。

られた。adaptation においては脳波電極すべてのチャンネ

他の生理反応と比べ呼吸では心地よい香りによって大きく

ルでの α 帯域の律動波は認めず、後頭葉（P3, P4, O1, O2）、変化することが特徴である。
本研究では慣れ現象を心地よい香りのみで検討した。そ

側頭葉領域（T5, T6）のみ律動波を認めた。
odor stimulation では I -α の電源は吸息開始後から嗅内の香りが心地よいと判断されれば、その香りを吸いたい、野皮質、扁桃体、海馬、眼窩前頭葉に認められ（図３左）、

何かを知りたいという意思が働く。それらは不快な香りに

200ms から 300ms で眼窩前頭葉に最も双極子が収束した。

対する反応よりもより高次なものである。よって扁桃体、

odor adaptation（図３右）においては吸息開始後、嗅内海馬の辺縁系の活動とともに前頭葉の賦活、つまり皮質か野皮質、扁桃体、海馬に活動を認めるが眼窩前頭葉賦活がら辺縁系への抑制が働くこととなる。良い香りでみられる認められないことがわかった。

深く、ゆっくりとした呼吸は無意識の変化であるが辺縁系

４．考及び眼窩前頭葉の両部位の賦活の統合と調整によって出力察される結果であろう。慣れによる眼窩前頭葉の賦活が認め本研究では香りの慣れ現象を呼吸のパターンと脳内の活動部位から検討した。香りの情報は他の感覚と異なり、視られないのは、この抑制の過程が消え、辺縁系のみの賦活が持続すると考えられる。

床を介さず直接扁桃体、嗅内野皮質海馬など情動の中枢へ

それではなぜ海馬や扁桃体のみの賦活が持続するのだろ投射する。香りを含む一呼吸一呼吸がこの嗅覚に関連したうか。恐らくこれらの部位の活動レベル上昇、維持は新し

辺縁系を賦活させることとなる。これまでにこれらの部位

い匂いに対して敏感に反応するものなのではないだろうか。

を刺激することにより呼吸の変化が認められることが明ら

動物においては敵の識別、食物のありか、性行動など嗅覚かにされてきたは重要な情報入力であり、情動を起こさせる主情報である。

8, 9）。香り分子を含んだ空気が吸息とともに嗅覚に関連する部位を刺激し、香りを感じることと呼吸

新たな情報にすばやく反応するためのひとつの防御反応との変化はほぼ同時であると考えられる。

も考えられるであろう。

本結果から、香りに慣れることにより香りによって変化した呼吸のパターンが安静時レベルに戻ることが認められた。香りの慣れは本人の主観によるものであるが、呼吸のパターンからこれらの変化を客観的に捉えることができ、

謝

辞本研究の遂行にあたり、ご支援いただきましたコスメト
ロジー研究振興財団に厚く御礼申し上げます。

また I － α の有無、脳内の電源推定からも観察されること（参考文献）がわかった。
香りの慣れによる脳内推定部位は側頭極内部にとどまり、

１）Masaoka Y, Koiwa N, Homma I, : Inspiratory phase-

眼窩前頭葉では認められない。これまでヒトにおいて眼窩

locked alpha oscillation in human olfaction: source

前頭葉は香りの認知・識別に関わっていることが示されてgenerators estimated by a dipole tracing method, J

きた

Physiol., 566 (3), 979-97, 2005.

10, 11）。またパーキンソン病患者において香りの認知障
12）、香２）Poellinger A, Thomas R, Lio P, et al., : Activation andりの認知は嗅内野皮質、扁桃体、海馬から前頭葉への投射

habituation in olfaction –An fMRI study, Neuroimage,によりなされることが確認されてきた。本研究結果からは

13, 547-560, 2001.

害が眼窩前頭葉賦活の減衰によるという報告から

香りの慣れでは眼窩前頭葉の活動が減衰することがわかっ

３）Spielberger CD, : Manual for the State-Trait Anxiety
Inventory (STAI), Consulting Psychologists Press, Polo

た。
しかし香りに慣れ、自分の意識として認知されていないのにも関わらず嗅内野皮質、扁桃体、海馬の活動は持続する。この部位が活動を持続するなら香りによる呼吸の変化は持続すると考えられるが、呼吸のパターンは安静時と同Alto, 1983.
４）本間生夫 , 政岡ゆり ,：EEG からの双極子追跡法 , 臨
床脳波 12, 46,761-769,2004.
５）H o m m a I , M a s a o k a Y , H i r a s a w a K , e t a l . , :Comparison of source localization of interictal epileptic

レベルにもどる結果となった。
この点について考察したい。これまでの動物、ヒトにおspike potentials in patients estimated by the dipole

いて不快な刺激における脳反応は顕著であり、特に扁桃体

tracing method with the focus directly recorded byの賦活は強く、生理的反応も大きいことが示されてきた。

the depth electrodes, Neurosci Lett., 304, 1-4, 2001.

それと比較し快の刺激は生理反応（発汗、心拍増加など）

６）Yoshimura N, Kawamura M, Masaoka Y, et al., : The− 115 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

amygdala of patients with Parkinson’s disease is silent

perspectives in modeling and control of breathing.

in response to fearful facial expressions, Neuroscience,

Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York, 2004,

131, 523-534, 2005.

vol.551, 9-14.

７）I n o u e M , M a s a o k a Y , K a w a m u r a M , e t a l . ,10）Gottfried JA, Deichmann R, Winston JS, et al., ::Differences in areas of human frontal medial wall

Functional heterogeneity in human olfactory cortex: anactivated by left and right motor execution: Dipole-

event-related functional magnetic resonance imaging

tracing analysis of grand-averaged potentials

study. J Neurosci., 22, 10819-10828, 2002.

incorporated with MNI three-layer head model.

11）Rolls ET, Kringelbach ML, de Araujo IE, : Different
representations of pleasant and unpleasant odours in

Neurosci Lett., 437, 82-87, 2008.
８）Harper RM, Frysinger RC, Trelease RB et al., :the human brain. Eur J Neurosci., 18, 695-703, 2003.

State-dependent alteration of respiratory cycle timing

12）Masaoka Y, Yoshimura N, Kawamura M, et al., :by stimulation of the central nucleus of the amygdala.

Impairment of odor recognition in Parkinson’s disease

Brain Res., 306, 1-8, 1984.

caused by weak activations of the orbitofrotal cortex.

９）Masaoka Y, Homma I, : Amygdala and emotional

Neurosci Lett., 412, 45-50, 2006.

breathing, In: Champagnat J (eds): Post-genomic− 116 −

化粧品のリスク認知に関する心理学的研究－安全とリスクのバランス－名古屋大学大学院教育発達科学研究科

元 吉

忠 寛

The aim of the present study was to examine consumers’ risk perception on cosmetics, and the effects of perceived riskon their selection of cosmetics. A questionnaire survey was conducted on a total of 178 female undergraduates. Findingsof the present study clarified that 65.1% of the participants have experienced skin troubles caused by cosmetics. Skin careproducts were the most common cause of skin troubles. Risk information on base and lips makeup products were examined
more precisely by consumers prior to purchase compared to eye and lips makeup products. Consumers tend to actually try
new cosmetics to check if a product causes skin troubles without looking at the risk information. Consumers showed thesame levels of interest in risk information as the effects information and trusts towards manufacturers. Although consumers
show high levels of interest in risk information, they do not study the information well on their own. Further researches oncommunication techniques are needed to enhance the risk communication between manufacturers and consumers.

１．緒

言

２．調

化粧をすることには多くの効用があり、自分らしさを他

2.1

査

調査対象

者に伝え、自信を持って日々の生活を過ごしたいというコ

東海地方の私立大学に在籍する女子学生 178 名が質問紙

ミュニケーションとしての役割を持っている。これまで、調査に参加した。回答者の平均年齢は 19.8 歳（SD=0.75）

社会心理学の分野では、化粧と対人魅力の関連や化粧がもであった。

たらすさまざまな効用に関する多くの研究が行われてきた（大坊 ,2000

１））。その一方で、化粧品は直接皮膚につけるため、その作用は緩和ではあるものの、選択を誤れば、自

2.2

調査内容

調査用紙では、まず、⑴スキンケア製品（化粧水、乳液、らの皮膚を痛めてしまうという危険性を持つ。近年、BSE

洗顔料）、⑵ベースメイク製品（化粧下地、ファンデーシ

問題やさまざまな食料品の偽装事件などを受け、食料品に

ョン、コンシーラー）、⑶アイメイク製品（眉墨、マスカ

対するリスクの問題が一般消費者の関心を集めている。まラ、アイシャドウ）、⑷リップ製品（口紅、リップグロス）、

た、薬事法の改正により、全成分表示や製造販売後安全管の計 11 種類の化粧品の使用実態（「1. 全く使わない」から

理基準の作成など、化粧品に対する安全性にも社会的な関「5. よく使う」）およびそれぞれの化粧品による肌トラブル

心が高まってきた。化粧品は、多くの女性が日常的に使用の過去経験（「あり」、「なし」）についてたずねた。その後、しているため、その安全性やリスクに対する認識は、今後⑴から⑷までの各化粧品を選ぶときに、どのようなことをますます重要になっていくことが予想される。

重視しているかについて、約 20 項目の観点から回答を求

本研究の目的は、化粧品のように、日々の生活で使用し、めた（具体的な項目については、表３参照）。さらに、公２）

選択を誤れば自らの皮膚を傷めてしまうという危険性を併的自己意識尺度（菅原 , 1984

せ持つ商品、日々の生活で使用するものに付随する危険性

意識についての質問への回答を求めた。

認知について、消費者がどのような認識を抱いているのか、

３．結

また、抱かれた危険性の印象が、商品選択にどのように影響しているのかを検証することである。

）と化粧に対する一般的な

果

表１に各化粧品の使用実態と肌トラブルの過去経験について示した。コンシーラー、口紅をのぞくとほとんどの化
粧品は平均で 4 点を超えており、比較的よく使用されていRisk perception of cosmetics among
undergraduates:
Balancing risk and safety

た。肌トラブルについては、65.1％の者が、何らかのトラブルを経験していた。製品別に見ると、化粧水、乳液、洗顔料などスキンケア製品において、経験率がもっとも高く

Tadahiro Motoyoshi

30％程度となっている。化粧下地やファンデーションなど

Graduate School of Education and Human
Development , Nagoya University

ベースメイク製品における経験率も 20％程度と高くなっている。また、口紅やグロスなどリップ製品のトラブル経験率も 20％程度と高く、アイメイク製品のトラブル経験− 117 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

表１て、それぞれどのような点を重視しているかを検討する

普段使っている化粧とトラブル経験率

スキンケア製品
化粧水
乳 液
洗顔料
ベースメイク製品
化粧下地
ファンデーションコンシーラー
アイメイク製品
眉 墨
マスカラ
アイシャドウ
リップ製品
口 紅
リップグロス

M

SD

トラブル
経験率

4.81
4.24
4.92

0.64
1.28
0.42

35.7%
22.9%
33.7%

4.39
4.42
2.72

1.22
1.19
1.63

20.0%
27.3%
9.3%

4.41
4.60
4.43

1.21
0.97
1.16

0.6%
5.5%
9.1%

2.81
3.69

1.57
1.27

21.6%
21.0%

ために、もっともリスク認知の高かったスキンケア製品を対象として、重視すること 20 項目について、主成分分
析・バリマックス回転を行い 6 主成分を解釈した（表３）。
第 1 主成分は「リスク認知」、第 2 主成分は「ベネフィッ
ト認知」、第 3 主成分は「評判」、第 4 主成分は「ブランド」、第 5 因子は「高価格」、第 6 因子は「製品」と解釈した。各成分に負荷の高かった項目の得点の平均を図１に示した。もっとも高かったのは「ブランド」であり、信頼できる、有名メーカーの製品を重視していることが示された。
また、「評判」、「ベネフィット認知」とならび、「リスク認知」の重視は高く、化粧品の選択において、リスクに対する関心が高いことが示された。
さらに、スキンケア製品、ベースメイク製品、アイメイ
ク製品、リップ製品それぞれについて、トラブル経験数別に、リスクの重視度を比較した（図２）。その結果、スキンケア製品（F（3,162）=5.18, p<.01）とリップ製品（F（2,154）=6.47, p<.001）において、リスクの重視度に有意差が確認

率は 10％以下と低かった。
スキンケア、ベースメイク、リップ、アイメイクの 4 種された。すなわち、トラブル経験者は未経験者に比べてリ類の化粧品を選ぶときに、肌トラブルなど化粧品リスクとスク要因を重視していた。トラブルを経験しない人はリス

関連する側面を、どの程度重視しているかについてたずね

ク要因にあまり目を向けず、予防的にはリスク要因を重視た項目の平均を表２に示した。スキンケア製品やベースしないことが示唆された。
最後に、公的自己意識と、選好重視成分との関連についメイク製品において、使われている成分の中身や肌へのて検討したが、ほとんど関連は確認されなかった。

刺激、自分の肌に合っているかどうかなどリスクの観点を重視するが、リップメイクではそれほど重視せず、アイ

４．考

メイクではもっともリスクについて重視していなかった。

察

また、スキンケアでも、「自分の肌に合っているかどうか

本研究の結果から、女子大生の 6 割以上が過去に肌トラ（M=4.63）」や「肌への刺激が低いかどうか（M=3.83）」はブルを経験していることが明らかになった。そして、化粧強く重視しているが、「使われている成分の中身（M=2.96）」

品に関するリスクについては、特にスキンケア製品に対しや「肌トラブルの原因となる成分が使用されているかどうて高い関心を持っていることが示された。しかし、その判か（M=3.08）」を重視している程度は中程度であった。つ断は、事前に成分表示などを確認したり、自分にあわない

まり、使用前に成分などを確認するというよりも、実際に成分について使う前に判断したりするというよりは、使っ使用してみて、問題があれば、使用を中止するというようてみて合わなければ使用を止めるという消極的な対応であに、体験的にリスクを判断するというリスク対処行動を取ることが推察された。化粧品の人体への影響は緩和であるっていることが明らかになった。

ため、このようなリスク認識の実態が明らかになったと思

次に、化粧品を選択する際に、リスク以外の側面も含め
表２われる。しかし、リスク・コミュニケーションでは、十分製品別に見た化粧品に対するリスク認知の重視度
スキンケア

ベースメイクリップ

アイメイク

使われている成分の中身

2.96

a

2.79

a

2.52

b

2.07

c

31.83

***

肌トラブルの原因となる成分が使用されているか

3.08

ab

3.09

a

2.84

b

2.26

c

35.03

***

肌への刺激が低いかどうか

3.83

a

3.70

a

3.21

b

2.51

c

63.74

***

肌に負担をかける成分が使用されているかどうか

3.23

a

3.21

a

2.92

b

2.41

c

30.97

***

自分の肌にあっているかどうか

4.63

a

4.51

a

4.00

b

3.35

c

59.4

***

F

*** p<.001、得点が高いほど、重視していることを示し、異なるアルファベット間には下位検定の結果有意差があったことを示す。

− 118 −

化粧品のリスク認知に関する心理学的研究－安全とリスクのバランス－

表３

スキンケア製品の選択重視内容の因子分析結果
I

II

III

IV

V

VI

h2

肌に負担をかける成分が使用されているかどうか

.89

.01

.00

.06

.00

.08

.80

肌トラブルの原因となる成分が使用されているか

.88

.01

.03

-.04

.07

.06

.79

使われている成分の中身

.84

.01

.05

-.01

.06

.07

.71

肌への刺激が低いかどうか

.77

.02

-.12

.19

.14

-.11

.67

無添加の化粧品であること

.66

.03

.21

.30

.10

.24

.64

自分の肌にあっているかどうか

.52

.17

.08

.16

.21

-.46

.59

保湿効果があること

.18

.69

-.03

.09

.07

-.14

.54

美白（ホワイトニング）効果があること

-.07

.68

.10

.03

-.04

.00

.49

手に入りやすい販売形態であること

-.01

.57

.19

.14

-.25

.16

.46

雑誌で評判がよいこと

.00

.12

.80

.18

.10

-.02

.71

WEB サイトで評判がよいこと

.07

.20

.74

.05

.02

.08

.60

国内の製品であること

.21

.05

-.04

.76

-.09

.19

.66

信頼できるメーカーの製品であること

.23

.00

.20

.66

.28

-.15

.62

有名なメーカーの製品であること

-.14

.37

.29

.63

.13

-.01

.65

高級な製品であること

.09

-.01

.22

-.03

.72

.19

.61

価格が安いこと

.09

.24

.24

-.22

-.68

.13

.66

店員の説明に納得できること

.24

.38

.22

.10

.49

.05

.51

海外の製品であること

.08

.13

-.29

.33

.18

.68

.72

家族や友人など身近な人が使っていること

.20

-.11

.31

-.01

-.02

.53

.43

新しく発売された製品であること

.00

.52

.23

-.14

.17

.53

.64

3.85

1.98

1.83

1.81

1.55

1.48

12.51

二 乗 和

製品
高価格
ブランド
評判
ベネフィット認知
リスク認知
1

2
図１

3

スキンケア製品の選択重視度− 119 −

45

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

25
24
23
22
21
20
19
18
17
16
15
なし
１つ
２つ
３つ
なし
１つ
２つ
３つ
なし
１つ
２つ
（n=86）（n=31）（n=24）（n=25）（n=95）（n=28）（n=15）（n=8）（n=112）（n=22）（n=23）
スキンケア製品

ベースメイク製品
図２

リップ製品

トラブル経験とリスクの重視度

なリスク情報の提供と、一般の人々のリスクに対する関心・意見の表明が重要な要素として位置づけられており、化粧品に関するリスク・コミュニケーションは、このような側

謝辞本研究を実施するにあたりご支援をいただいた㈶コスメ

トロジー研究振興財団に感謝いたします。

面が十分に機能していないことが示唆された。化粧品の製造販売業者は、単なる情報の提供で終わるのではなく、消（引用文献）

費者が理解しやすく関心を持つようなリスク情報、安全情

１）大坊郁夫，：顔の魅力と認知−社会心理学的展望 , 日報の提示や提供を行い、利害関係者間に信頼を構築していくことが必要である。

本化粧品技術者会誌 , 34, 241-248, 2000.
２）菅原健介，：自意識尺度（self-consciousness）日本語
版作成の試み , 心理学研究 , 55, 184-188, 1984.

− 120 −

化粧による高齢者の行動変容：高齢夫婦の女性配偶者の化粧により男性配偶者の quality of life の向上は図れるか？
大分大学医学部神経生理学講座

徳 丸

治

Introduction: Aging significantly affects the quality of life (QOL) of the elderly partly because of the affected perceptionof their body image. It is reported that makeup improves the QOL of the elderly females (wives), but little is known about its
impact on their husbands. The author hypothesized that makeup of elderly wives improve not only their own QOL but also thatof their husbands. Impact of makeup on QOL in senior couples was investigated.
Methods: Twelve senior couples over 60 years participated in the present study as volunteer subjects. Wives received a
1-hour session of individual cosmetic counseling, and performed the instructed makeup for the following study period of one
month at home. A validated QOL questionnaire, WHOQOL-BREF, was administered to the wives and their husbands before
and after the one-month study period.
Results: The mean scores of psychological QOL (p = 0.003), social relationship QOL (p = 0.02), environmental QOL (p= 0.03) and general QOL (p = 0.008) of the WHOQOL-BREF were significantly improved in the wives, while no change in
QOL was observed in the husbands. QOL scores were positively correlated between physical and environmental domains,
psychological and social relationship domains, and social relationship and environmental domains (p < 0.05). No correlation
was observed between the QOL scores of the wives and those of husbands in either domain.
Conclusion: Cosmetic counseling and the following practice of makeup significantly improved QOL of the elderly
females. But no impact of makeup was observed on that of their husbands.

１

緒

研究は，筆者の知る限り報告されていない。従来の研究で言は，何らかの皮膚疾患をもつ女性が化粧をする（あるいは加齢に伴うさまざまな身体の変化は，高齢者の生活の施される）ことによる女性本人の QOL の改善に着目され10）質（quality of life，以下 QOL）に影響を与える。高齢者は，ているのみである

加齢に伴う皮膚のシワや色素沈着，色素脱失，あるいは疾とによって，男性配偶者（男性パートナー）の QOL にど病による変形等の皮膚の問題を抱えている。このことから，のような影響を与えるか検討した報告は見当たらない。皮

自信を喪失したり，自己のボディイメージが悪化したり，

膚疾患患者と家族の QOL に相関がある

あるいは社会から隔絶されたりすることにより，QOL がな高齢女性の化粧が健康な男性配偶者の QOL にも影響を低下する 。

与える可能性が考えられる。

１）

一方，皮膚疾患の患者が化粧によるカムフラージュを行。また，女性配偶者が化粧をするこ

8, 9）

ならば，健康本研究は，以下の仮説を検証することを目的として実施

うことによって，自己のボディイメージの改善や自信の回した。

復が図られ，社会との結びつきが回復し，QOL が改善さ

（1）化粧は，健康な高齢女性の QOL を改善する。

れることが報告されている（2）健康な高齢女性配偶者の化粧は，健康な男性配偶者の2−5）。化粧により化学療法およ６）

び放射線療法中の乳癌患者の QOL が改善した 。美容外QOL を改善する。

科手術後の患者の不安状態が，カモフラージュメイクア

２

７）

ップにより改善した 。また，皮膚疾患をもつ患者本人のQOL とその家族の QOL との間の強い相関が示唆されて
いる

8, 9）

2. 1

実

験

被験者

妻・夫のいずれも 60 歳以上の健康な高齢者夫婦 12 組
（い。

近年，高齢者に対する訪問美容室などの活動が行われ，
１）

ずれもボランティアでの参加）を対象とした（以下，それ化粧による高齢者の QOL 向上が試みられている 。しかぞれ女性配偶者，男性配偶者という）。これらのうち，４

し，健康な高齢女性の化粧が QOL に与える影響に関する組の夫婦は大分市内在住，残り８組は郡部在住であった。

Behavioral changes in the elderly by
makeup: Does makeup improve thequality of life of a husband as well asthat of his wife?
Osamu Tokumaru
Department of Neurophysiology, Oita
University Faculty of Medicine

また，化粧実施期間中およびその前後に人生上の大きな出来事（身近な人の死など）が起こっていないことを確認した。
本研究計画は実験に先立って大分大学医学部倫理委員会の審査を受け，承認を受けた。被験者には本研究の目的、手順、予想される危険などを文書により説明し、書面で参加の同意を得た。

− 121 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

2. 2

実験手順（図１）2. 2. 1することができる。個々の質問は１点から５点の得点で評

化粧習慣の調査

価され，得点が高いほど QOL が高いとされる。

化粧開始に先立ち，女性配偶者に対して現在の化粧行為

2. 2. 6

統計的検討は統計ソフト R ver.2.7.0 にて解析しおよび理想とする化粧について質問紙による調査を行った。

た。有意水準は５% とした。得られたデータは平均 ± 標

その結果に基づいて，個々の被験者に対して理想的な化粧

準偏差で示す。

像（化粧品の種類，方法）を作成した。
2. 2. 2

3

化粧指導

結

果

その化粧像に基いて，女性配偶者に対し，化粧品の選び

3. 1 化粧実施期間中に 1 回以上，研究者または共同研究

方やその使い方について約１時間にわたって個別に化粧指者が不定期に（抜き打ちで）被験者宅を訪問したが，全て導を行った（図２）。指導は化粧品メーカーにて開発研究の女性被験者は指導を受けた化粧を行っていた。

に従事した実務経験をもつ共同研究者（M. A.）を中心に

3. 2 大分市内在住者と郡部在住者との間で，現在の年齢，行った。
2. 2. 3

化粧実施期間初めて化粧をした年齢や化粧品にかける費用等，現在の化必要な化粧品・道具一式（表１）を被験者に無償で提供
し，指導された化粧を自宅にて 1 ヶ月間にわたって実施す

粧行為に有意な差は認められなかった（表 2）。そこで以降の解析は両者を合併して行った。

るよう要請した（化粧実施期間）。その間，研究者が被験者の自宅を不定期に訪問し，化粧が適切に行われているかどうかをチェックした。
2. 2. 4

化粧指導前後の気分の変化

化粧指導の前後で，女性配偶者は調査した９項目中６項

化粧指導前後の気分の変化

目で有意な改善が認められた：「元気さ」，「うれしさ」，「自1 時間の化粧指導の直前直後に，女性配偶者と男性配偶者それぞれについて，質問紙により気分を評価した。
2. 2. 5

3. 3信」「（自分は）きれい」「（自分は）若くみえる」，「（自分は）
化粧をすべきだ」（表 3，p < 0.05）。

化粧指導期間の前後での QOL の変化

男性配偶者では改善は２項目に止まった：
「緊張感」
，
「妻

1 ヶ月間の化粧実施期間の前後で，女性配偶者と男性
配 偶 者 そ れ ぞ れ に つ い て，World Health Organization
Quality of Life（WHOQOL）-BREF（WHOQOL-BREF）
11）

を用いて主観的な QOL の評価を行った。WHOQOL-BREF は 26 項 目 の 質 問 か ら 構 成 さ れ，physical QOL（Domain 1），psychological QOL（Domain 2），social
relationship QOL（Domain 3），environmental QOL（Domain 4），General QOL， 及 び Overall health を 測 定

WHOQOL-BREF 化粧実施期間前

気分（質問紙）前

化粧実施期間後

後

化粧指導
（１時間）
1

図１
表1

化粧実施期間（自宅にて1ヶ月間）
2

30

[日]

実験プロトコール

自宅での化粧のために提供した化粧品

洗顔料
化粧水
化粧下地
ファンデーション
口紅
チーク
アイカラー
アイブロウ
その他（ブラシ類， 容器等一式

乳液

図２ 化粧指導の様子。A：女性配偶者に個別の化粧指導を行った。B：化粧指導を終えて，微笑がこぼれた。

− 122 −

化粧による高齢者の行動変容：高齢夫婦の女性配偶者の化粧により男性配偶者の quality of life の向上は図れるか？

way mixed design ANOVA（主効果：1 ヶ月間の化粧実

はきれい」（p < 0.05）。

施期間と化粧習慣）により解析した（表３）。化粧実施期

3. 4

化粧実施期間の前後での QOL の変化

間の主効果は，Domain 2, Domain 3, Domain 4, General

女性配偶者では，1 ヶ月間にわたる化粧実施期間の前後

QOL において有意であった。しかし，化粧習慣の主効果

で WHOQOL-BREF の点数を比較すると，全ての Domainはどの領域においても有意ではなかった。General QOL

で改善を認めた（Fig. 3）。WHOQOL-BREF の点数を two-

では化粧実施期間と化粧習慣との交互作用効果が有意であ

表２

表3

被験者の特性化粧指導前後における気分の変化− 123 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009った。即ち，毎日化粧をする習慣のある女性は，化粧習

Domain 1 と Domain 4（r = 0.84），Domain 2 と Domain

慣のない女性よりも化粧指導により有意に大きな General3（r = 0.65），Domain3 と Domain4（r = 0.57）の３組のQOL の点数の改善が認められた（p < 0.022, 図４）。

間に有意な正の相関が認められた（図５左）。一方男性被一方，男性配偶者の QOL に対しては，化粧実施期間も

験者では，図５右に示すように８つの Domain の組に有意

化粧習慣も有意な主効果は認められなかった（表４下段）。

な相関が認められた。

3. 5 化 粧 実 施 期 間 の 前 後 に お け る QOL の 変 化 のdomain 間の相関3. 6

女性および男性被験者それぞれにおいて，QOL の点数の変化の各 domain 間の相関を調べた（図５）。女性では，

図３

夫婦間の QOL スコアの相関

QOL の点数の変化の夫婦間の相関を検討したところ，全ての Domain において，夫婦の QOL には相関が認められなかった（図 6）。

1 ヶ月の化粧実施期間の前後における QOL スコア（WHOQOL-BREF）

図４ WHOQOL-BREF の General QOL の化粧実施期間の前後での変化は，
化粧習慣によって異なる。化粧を毎日する女性配偶者（左）の方が，毎日しない女性配偶者（右）よりも QOL が有意に改善した（p = 0.022）。

− 124 −

化粧による高齢者の行動変容：高齢夫婦の女性配偶者の化粧により男性配偶者の quality of life の向上は図れるか？

表4

WHOQOL-BREF による化粧実施期間前後での QOL の評価：分散分析表（Two-way mixed design ANOVA）

図５ WHOQOL-BREF スコアの領域間の散布図（左は女性配偶者，右は男性配偶者）。各々，右上の数字はピアソンの相関係数である（下線は有意な相関を示す）。
domain.1： Domain 1 の ス コ ア の 変 化；domain.2： Domain 2 の ス コ ア の 変 化；domain.3： Domain 3 の ス コ ア の 変 化；
domain.4： Domain 4 のスコアの変化；gen.QOL： General QOL のスコアの変化；gen.Health： General health のスコアの変化；− 125 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

4
4. 1

考

告よりも多くの領域において QOL の改善を示した理由で察ある可能性が考えられる。

化粧指導前後の気分の変化

女性被験者において、化粧習慣の主効果はどの領域にお女性配偶者が化粧指導を受けると，その直後の気分は９いても有意ではなかった。しかし、General QOL のスコ

項目中６項目で有意な改善が認められた（表３）。しかし，

アに対して、化粧実施期間と化粧習慣との交互作用効果が男性配偶者ではその改善は 2 項目に止まった。化粧指導を有意であった。我々は当初、普段化粧する習慣のない高齢直接受けたのは女性配偶者であり、その間、男性配偶者は女性ほど化粧をすることによって、彼女のボディイメージ

隣室で待機していた。このため、化粧指導を受けた女性のの改善や自信の回復が図られ、また社会との結びつきが回気分が多くの面で短期的に改善したのに対し、男性配偶者復し，その結果 QOL が改善するであろう

ではそれが限定的にしか認められなかったのではないかとっていた。しかし、実験の結果はその逆で、化粧習慣のあ考えられる。

る人ほど General QOL のスコアは有意に大きな上昇を示

2−5）との仮説をもした。一つの解釈として、普段から化粧をする習慣のある4. 2 女性配偶者の化粧実施期間の前後でのQOLの変化

女性とない女性では，化粧に対する興味の度合いに元々差

化粧実施期間の主効果は，Domain 2, Domain 3, Domainがある可能性を挙げることができる。普段から化粧をする

4, General QOL に対して有意であった（表４）。1 ヶ月間習慣のある女性は、正しい化粧品の使い方を教示され、普にわたって化粧を実施することにより高齢女性の QOL が段とは違った化粧品を使用することを楽しんでいたのに対改善したことを示している。皮膚疾患患者が皮膚科医の指し、普段化粧する習慣のない女性は元来化粧に対する興味

導下で化粧を実施することにより QOL の改善が認められが薄く化粧実施期間を楽しめなかったのかもしれない。

たが，それは Domain 2（心理的 QOL）に限られていたと５）

報告されている 。今回の実験では，Domain 2 のみでな

4. 3 男性配偶者の化粧実施期間の前後でのQOLの変化

く、Domain 3（社会的関係）、Domain 4（環境）、および男性配偶者の QOL に対しては，化粧実施期間も化粧習

General QOL でも改善が認められた。これまでの研究は慣も有意な主効果は認められなかった（表４）。皮膚疾患

皮膚疾患などの異常をもった女性が対象に行われてきたのをもつ患者本人の QOL とその家族の QOL との間に相関に対し、本研究は健常な女性を対象としたことが従来の報

がある

8, 9）

ことから推論して、化粧による女性の QOL の

図６ WHOQOL-BREF スコアの夫婦間の散布図を示す。横軸は女性配偶者のスコアの変化［点］，縦軸は男性配偶者のス
コアの変化［点］である。

− 126 −

化粧による高齢者の行動変容：高齢夫婦の女性配偶者の化粧により男性配偶者の quality of life の向上は図れるか？

改善に伴いその男性配偶者の QOL も改善するであろうとの仮説を立てた。しかし、本研究では 1 ヶ月間にわたる化

響を受けない。
（2）男性配偶者の QOL は女性配偶者の化粧によって影響

粧実施期間の前後で男性配偶者の QOL に差は認められず、を受けている。しかし、今回使用した QOL 評価バッテ

その仮説は否定的であった。

リーではその変化を捉えることができなかった。
化粧指導の間，隣室で待機していた男性配偶者は、指導4. 4 女性配偶者における QOL の変化の domain 間の相関

終了後にきれいに化粧した妻と対面した。非定量的な観察

女性配偶者の化粧実施期間の前後の QOL スコアの変化

多くの男性配偶者は笑顔をみせていた。この観察と化粧指に つ い て，Domain 1 と Domain 4，Domain 2 と Domain

導後の男性配偶者の気分に少数項目ではあるものの改善が

3，Domain3 と Domain4 の 3 組の間に有意な正の相関がみられた（表２）ことから考えて、男性配偶者が妻の化粧認められた（図５左）。Domain 2 と Domain 3 の間の相関に全く関心がない訳ではないと考えられる。また，皮膚疾は、例えば「あなたは自分の身体的見た目を受け入れるこ

患の患者の QOL とその家族の QOL との間に相関がみらとができますか？」といった心理的因子の改善が、対人関れたように、化粧実施期間後における高齢女性の QOL の係の改善につながっていることを示唆していると考えられ改善に伴い、その男性配偶者の QOL も改善する可能性がる。Domain 1 は Domain 4 と相関していた。現実的に考推察され，今回の実験ではその変化をよく評価できなかっ

えると、化粧を行うことのみによって身体的な状態が変化たとする仮説（2）の可能性が示唆される。

所見であるが、普段とは違った化粧をした妻と対面して，するとは考えにくい。同様に、化粧をすることによって環

しかし、WHOQOL-BREF は国際的に広く使われている

境要因を変化させることも物理的に不可能である。女性被汎用の QOL バッテリーであり、本実験において高齢女性

験者は、化粧を行うことによって心理的および社会的関係の QOL の変化はよく検出されている。そのバッテリーが性が改善する（表４，図５）。それらの改善によって，本同時に評価した男性配偶者の QOL の変化を全く検出でき

来化粧によって変化するとは考えられない身体的 QOL のないできないと仮定することは，極めて不合理である。化

因子や環境的 QOL の因子がよりよい方向に変化したと感粧指導の直後の男性配偶者の気分の変化が女性と比較するじるようになるために、QOL のスコアが改善した可能性と限定的であったことも、男性の QOL が変化しなかったが推察される。

可能性と矛盾しないと考えられ、これは仮説（1）を支持する。

4. 5 男性配偶者における QOL の変化の domain 間の相関影響については否定的であると推察する。しかし，化粧が一方，男性被験者では，8 つもの Domain の組に有意な

男性配偶者の QOL に影響を与えるか否か、さらに研究を相関が認められた（図 5 右）。化粧実施期間の前後で QOL

進めて検証していく必要がある。また，本研究では女性配のスコアが変化しなかったにもかかわらず、多数の領域の偶者と男性配偶者それぞれの QOL を評価したが，夫婦とスコアどうしが相関したのは不可解である。この多数の領しての QOL の評価は行っていない。化粧が，夫婦として域間の相関の理由は不明である。

の QOL を高めることができるかどうか，今後の研究の中従って，現時点では化粧の男性配偶者の QOL に与えるで検討していく必要がある。

4. 6

夫婦間の QOL スコアの相関

５

QOL の点数の変化の夫婦間での相関を検討したところ，

総括

全ての Domain において，夫婦の QOL には相関が認めら

5. 1 高齢女性配偶者の化粧は、女性本人に対して気分のれなかった（図 6）。皮膚疾患をもつ患者本人の QOL とそ

改善をもたらしたが，男性配偶者の気分に対する影響は限の家族の QOL との間に相関がある

定的であった。

8, 9）

ことから、夫婦間でその QOL には何らかの相関があると予想したのである

5. 2 高齢女性配偶者の 1 ヶ月間にわたる化粧実施は、本が、この仮説も誤っていた。

人の QOL の改善をもたらした。

4. 7

今後の課題

本研究では，化粧実施期間の後に男性配偶者の QOL の改善が認められなかった。また，
その QOL スコアの変化は，

5. 3

しかし、その男性配偶者には化粧実施期間後のQOL の変化は認められなかった。

女性配偶者のそれとは相関がみられなかった。その理由として，以下の仮説を考えることができよう。

5. 4（1）男性配偶者の QOL は、女性配偶者の化粧によって影配偶者の QOL の変化とは全く相関がなかった。

− 127 −

化粧実施期間前後の高齢女性の QOL の変化は男性コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

5. 5

化粧が男性配偶者の QOL に影響を与えるか否か、

４）Hayashi N, Imori M, Yanagisawa M, et al.: Make-up

また夫婦としての QOL にどのような影響を与えているか，

improves the quality of life of acne patients without

さらに研究を進めて検証していく必要がある。

aggravating acne eruptions during treatments, Eur J
Dermatol, 15, 284-7, 2005.

謝辞５）Matsuoka Y, Yoneda K, Sadahira C, et al.: Effects

本研究を行うに当たり助成を頂いたコスメトロジー研究

of skin care and makeup under instructions fromdermatologists on the quality of life of female patients推進財団に深く感謝申し上げます。
共同研究者の横井功，黒木千尋，尾方和枝（大分大学医with acne vulgaris, J Dermatol, 33, 745–52, 2006.

学部神経生理学講座），山田和廣（大分医科大学名誉教授），

６）Titeca G, Poot F, Cassart D, et al.: Impact of cosmetic

丸野綾子，路昭暉，江原千尋（大分大学医学部医学科学生）

care on quality of life in breast cancer patients during

各氏に深謝申し上げます。

chemotherapy and radiotherapy: an initial randomized

また，被験者を募集するに当たりご協力いただいた鶴山
恒教（池中山安祥院蓮華寺住職・大分県国東市），首藤孝

controlled study, J Eur Acad Dermatol Venereol, 21,
771–6, 2007.

宏（大分大学医学部附属病院）
両氏に篤く御礼申し上げます。

７）Aydogdu E, Misirlioglu A, Eker G, et al. : Postoperative

本研究の一部は 10th International Congress of Behavioral

camouflage therapy in facial aesthetic surgery. Aesth

Medicine（2008 年８月，東京）および第 14 回日本行動医

Plast Surg, 29, 190–4, 2005.
８）Basra MKA, Sue-Ho R, Finlay AY: The Family

学会学術総会（2008 年 3 月，津市）にて発表した。
共同研究者である丸野綾子氏は上記学会での発表により，Dermatology Life Quality Index: measuring the

日本学生支援機構の平成 20 年度優秀学生顕彰事業優秀賞

secondary impact of skin disease, Br J Dermatol, 156,を受賞した。

528–38, 2007.
９）B a s r a M K A , E d m u n d s O , S a l e k M S , e t a l . :（引用文献）

Measurement of family impact of skin disease: further

１）Kligman AM: Psychological aspects of skin disorders

validation of the Family Dermatology Life Quality
Index (FDLQI), J Eur Acad Dermatol Venereol, 22,in the elderly, Cutis, 43, 498-501, 1989.
２）Boehncke WH, Ochsendorf F, Paeslack I, et al.:813–21, 2008.

Decorative cosmetics improve the quality of life in10）Finlay AY, Khan GK: Dermatology Life Quality

patients with disfiguring skin diseases, Eur J Dermatol,

Index (DLQI) – a simple practical measure for routine

12, 577–80, 2002.

clinical use, Clin Exp Dermatol, 19, 210-6, 1994.

３）Holme SA, Beattie PE, Fleming CJ: Cosmetic11）WHOQOL Group: Development of the World

camouflage advice improves quality of life, Br J

Health Organization WHOQOL-BREF quality of life

Dermatol, 147, 946–9, 2002.

assessment. Psychol Med, 28, 551-8, 1998.

− 128 −

経済開放政策以降のインドにおける中間層の増加と化粧品の消費動向の変化に関する研究
東北大学大学院文学研究科

岡 光

信 子

This study focuses on the Indian economic growth and the variation of commodities, especially cosmetics. After Gulf
war, the remittance abroad reduced, so India suffered from a shortage of foreign currencies. Indian government set up theopen policy economy and welcomed foreign investments in 1991.
After that, the worldwide companies regard India as the giant market. Both inter and international cosmetic companies
target Indian market. The consumers have many choices in cosmetics, as a result they prefer industrial cosmetics to naturalcosmetics. On the other hand, the natural ingredients cosmetics are revalued and more popular in advanced countries. Indian
consumers have experienced both industrial cosmetics and natural cosmetics. Their next choice would be the unique example
to know the future of cosmetic culture.

１．緒経済開放以前、インドで入手できる化粧品の種類は非常

言に限定されており、粗雑な国産化粧品または高品質だが高本研究は、経済政策の転換による中間層の増大という社

額な外国製品という極端な品揃えであった。そのため、ほ会変化とそれによりもたらされた消費財の多様化に着目し、とんどの女性は、髪や素肌に栄養を与えるココナッツ油、

インドの消費動向の変化に関する研究として立案されたも水に溶かしたターメリックを日焼け止めとして使用する程のである。90 年代の開放経済以降、インドは巨大な市場度に過ぎなかった。これら伝統的な化粧品は、香りや見たとして世界的に注目されている。本研究の目的は、購買力目は悪くとも、安価で優れた効用があることから所得の上のある中間層が種類と価格帯が豊富になった化粧品を取捨

下に関わらず多くの人が愛用していた。

選択していることに注目し、消費者の化粧品に対する意識

経済開放以降、有名外国ブランドだけでなく大小の国内の変容、消耗品としての化粧品の行方について考察を行う

製薬会社が化粧品市場に参入する状況になった。国産化粧ものである。

品会社は、ブランドイメージの高い外国化粧品および新規

インドの製造業は、閉鎖的な経済体制のもと、長期間に参入社への対抗措置として、従来のメーキャップ用品中心

わたる中央政府の国内産業保護政策によって、粗雑な製品の方針を切り替え、基礎化粧品からヘヤケア製品に至るまでも国内市場で販路を確保することができた。インド製品

でラインナップを増やし、ミニサイズや多様な価格帯のシは、外国企業との競争にさらされずにいたため国際競争力

リーズを導入するなど、消費者が自社製品を選択する対策

を欠き、国外市場ではほとんど見向きもされなかった。産と努力を惜しまなかった。このような状況の下、インド国

業不振にあえぎ国際収支が悪化し、湾岸戦争が起こり（1990

内で購入できる化粧品は、基礎化粧品からメーキャップ用〜 91 年）、外国からの送金が途絶え、インドは未曾有の外品に至るまで多様な種類と価格帯が揃ってきた。現在、消貨不足に陥った。1991 年、インド政府は、経済を立て直費者は、自分のニーズに応じた化粧品を購入することが可すために国内産業保護政策から経済開放政策に大きく転換

能になっている。

した。

２．考経済開放以降、インド経済は IT 産業や医薬品の分野で高い業績を上げ、年率 8％の経済成長を続けるまでになっ2．1

察

インドの伝統的コスメティック

た。
現在、年収 9 万ルピー以上の中間層が全人口（約 11 億人）

美しくありたいというのは、洋の東西を問わず、女性のの約 20 〜 30％にまで膨らみ、世界中の企業がインドを巨

永遠の願望である。女性のファッションと化粧とは、切っ大なマーケットして注目するようになった。

ても切り離せない。工業製品が出回る以前、インドでは化

The Growth of the Middle Class andthe Change in Cosmetic Comsumption
in India after the Intrudoction of Open
Policy Economy
Nobuko Okamitsu
Graduate School of Arts and Letters,
Tohoku University

粧品を生活の身近なところから調達し使用していた。古来
インドの女性たちは、オイルやハーブなどの自然素材を使って、肌や髪の美しさを引き出していた。例えば、ココナ
ッツ油は髪と地肌を健康にするために老若男女を問わずに用いられていた。また、ハーブエキスを加えた油は、肌をなめらかにするのと皮膚を保護する作用があるために、沐
浴する前のマッサージに用いられていた。

− 129 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

伝統的な化粧品は、日常生活の中で自然に使われていた

むこともあるという。歯磨き粉にクローヴのエキス入りをものである。特に、ココナッツ油は、安価であることも手売り物にしているものも存在する。ココナッツ油、ターメ

伝って多目的に使われている。例えば、髪や素肌に栄養をリック、クローヴは、料理の味を調えるために不可欠な与える作用に加え、男女を問わず整髪料にも、強い日差し

食用油やスパイスであり、どの家庭にも切らさずに置いてによる皮膚の乾燥を保護するためにも用いられている。コある。また、インディアン・グースベリーは、ビタミン C

コナッツ油は、単独で用いられるだけでなくハーブと併用が多く含まれるため生食にもピクルス加工にも用いられ、される場合もある。ニーム（インドセンダン）という植物は、成長すれば大木となり木陰を提供する。

アザディラクチンという抗菌作用の強い成分が含まれておヘナ（和名では指甲花またはツマクレナイノキ）・パウ

り、その葉や実は、アーユル・ヴェーダという古代インド

ダーを水で溶かしたペーストは、昔から爪を染めたり、手医学でも内服薬・外服薬として用いられていた。それゆえ、に文様を書くのに使われ、また髪につやと栄養を与えるもニームの葉を漬けてそのエキスを抽出したココナッツ油は、のとしても重宝されてきた。ヘナは、古代から、殺菌効果

髪と地肌にたっぷりと刷り込んで２〜３時間置いてからシや体温を下げる効果があることも知られており、薬剤、防ャンプーすると、地肌を清潔にするだけでなく、オイルの腐剤としても用いられていた。

栄養が髪と地肌にいきわり髪を艶やかにすると言われていこれら天然素材の化粧品は「かぶれ」などの副作用も少る。2000 年代に入り、インドが豊かな様相を見せてきても、なく、人々の経験によって安全性と効用とが証明されてきリンスやヘヤー・コンディショナーは、シャンプーに比べた、いわば「生活の知恵」の結晶である。現代科学は、伝

まだ高嶺の花の感が強く、シャンプーだけを使っての洗髪統的に用いられてきたこれら天然素材の化粧品の薬効を立となることも多い。したがって、ココナッツ油は、今も女証している。たとえば、ターメリックの主成分クルクミン

性たちの洗髪の際の必需品となっている。

（クルミン）の効用として、メラニン色素の生成抑制作用

インディアン・グースベリーの実を乾燥させて粉状にしのような美容に関わるもののほかに、肝臓の働きの活性化

たものは、アムラーと呼ばれ、古来からシャンプーの代わ（胆汁分泌やアルコール分解の促進）、抗酸化による老化防りに使われていた。シャンプーは、髪に付着した汚れだけ止、動脈硬化の防止、利尿作用、ガン抑制効果、殺菌・抗でなく油分も奪うため、髪はどうしてもぱさぱさになる。

菌作用などが指摘されている。日本でも、同様の効用を掲

アムラーは、シャンプーに比べると洗浄力が落ちるが、髪げてターメリックを宣伝している会社もあるほどである。

と地肌の汚れを吸収するだけでなく適当に油分を補ってく

ほんの一昔前まで、農村だけでなく都会でも、女性たちれるため髪が傷まないという。しかし、シャンプーが普及はせいぜい伝統的な化粧品を用いる程度であった。都市部

するにつれて徐々に使われなくなってきた。2006 年の現に住む中産階級の主婦であっても、髪にココナッツ油をつ

地調査では、アムラーは化粧品と衛生用品を扱う薬局の目けるくらいが関の山で、特別なスキンケアなどはせずに立たない片隅で細々と売られていた。

日々の暮らしを送ってきたものである。当時国内で売られターメリック（うこん）
・パウダーを水で溶かしてペーていた「商品」としての化粧品は、種類が少なく価格も低スト状にしたものは、顔に塗ると気化熱で涼しく、日焼け

廉かつ品質にも問題あるものが主流を占めていた。それだ

止めにも利用されてきた。現在でも田舎に行くと、ターメけ需要が伴わっていなかったのである。そもそも汗のにじリックのペーストで顔を黄色にした女性たちを目にするこむインドの気候風土で、成人女性が日常的にメーキャップとができる。ターメリックは、もともと殺菌作用が強く、を施すこと自体、あまり現実的なことではない。大きな需肌に塗ると吹き出物や湿疹等の肌のトラブルを未然に防ぎ、要がなかったのも当然といえば当然である。それでも、富肌荒れなどの症状を鎮める作用があるとされている。

裕で美的好奇心の旺盛な女性たちは、自ら渡航先で購入しインド人は概して多毛な民族である。うら若い女性とい
えども、その鼻の下に、口ヒゲと見まがうような立派な産たり外国在住の友人に頼むなど、涙ぐましい努力を傾けて舶来の化粧品を調達していたものである。

毛が見られることがある。ターメリックには発毛を抑える
効果があると考えられている。親は、産毛が濃くならない

2．2

経済開放政策以降の化粧品をめぐる動き

よう、幼い娘の鼻の下にたっぷりとターメリック・ペース

経済開放政策が功を奏し始める 1990 年代の後半になる

トを塗ってやったものである。いま日本で流行のインドエと、世界的な化粧品会社であるレブロン（Revlon）やエステでも、色素沈着を防いだり脱毛・除毛に効果があるもイボン（Avon）、スウェーデンの化粧品会社であるオリのとして、ターメリックを粉にした「アンバハルディ」がフレーム（Oriflame）などがインドに進出してきた。特注目されている。

に 2000 年から 2001 年にかけ、海外の有名な化粧品会社がスパイスでもあるクローヴ（丁字）は、口に含むと口臭

続々とインドに参入するなど、インドの化粧品業界はにを消す作用がある。口臭対策として、奥歯にクローヴを挟わかに活況を呈するようになった。この時期、ロクシタ− 130 −

経済開放政策以降のインドにおける中間層の増加と化粧品の消費動向の変化に関する研究

ン（L’Occitance）、クリスチャン・ディオール（Chiristian

イでもっともトレンディーなショッピング・コンプレック

Dior）などの高級化粧品会社が高所得者層に的を絞って販スとされるシティー・センターを訪れた。そこの化粧品売売を開始し、日本の資生堂もムンバイーに進出を果たしてり場では、資生堂、クラランス、レブロン、イブサンロー

いる。資生堂は、富裕層をターゲットに、1,000 ルピー以

ラン、ブルジョアなどの外国の化粧品会社だけでなく国産上の価格帯の高級品を投入して市場の開拓を試みている。

の化粧品会社ラクミーが出店しており、日本のデパートの子会社を動員するなどしながら販売戦略の強化をはかって化粧品売り場と見間違うようなしゃれたディスプレーをしいる。

て販売していた。資生堂の売り場では、1,000 ルピー以上

これは 2006 年の調査時点での話だが、インドに進出しの買い物をした人には、無料でお肌のカウンセリングを行たある欧米の化粧品会社（ロレアル）は、カラーリングしうというサービスを売りにしていた。販売を担当する美容た髪専用に特化したシャンプーとコンディショナーを販売

部員は、自らモダンに化粧を施し、英語で顧客に接してくしていた。それらは 200 ㏄入りのボトルでインド製である

る。化粧水が 1 本 1,000 ルピー以上する商品を買いに来るが、ショッピング・モールに出店している某チェーン店で層は、日常的に英語を用いるような富裕層に限られており、

219 ルピーで売られていた。同じ容量のタイ製輸入シャン

そうした階層の女性たちが販売のターゲットになっている

プーが、同じ店で 79 ルピーで売られていることからすれことは一目瞭然である。

ば、こうした特化した商品は富裕層をターゲットにしてい2003 年に筆者が南インドの村に長期滞在していた折にることは明白である。2000 年ころには、チェンナイのよは、1,000 ルピーというお金があれば、田舎で四人家族がうな都会でも化粧水とヘヤー・コンディショナーを探すの

1 ヶ月の食費を十分にまかなえたものである。輸入化粧品に一苦労したのに、ここ数年の商品の多様化には目を見張

は、おおかたの庶民にとっては手の届かない代物であり、るものがある。

かなりの贅沢品である。1,000 ルピー以上する輸入化粧品

国内外の化粧品会社は、テレビや雑誌などで新しい商品を買えるような富裕層は、仕事や休暇で海外渡航する機会のコマーシャルを積極的に行い、化粧品市場の開拓に余念も十分にあるが、化粧品を買うために海外渡航する訳にもがない。購買力のある層は、多様な商品ラインナップの中いかない。かといって慣れない国産化粧品を使うことにもから自分の好みにあった高品質のものを国内で購入するこ気が引けるので、価格が高くとも輸入化粧品をインド国内とができるようになっている。さらに、インターネットので買うことにならざるを得ないのだという。

普及により、日本の中小の化粧品会社の商品すら知られるようになっている。商品の多様化は、高価格化に傾斜して

2．3

伝統的な化粧品離れいるのでなく、ミニサイズなどの導入により手頃な価格のほんの数年前まで、インドでは、長期間の保護経済政策

化粧品も販売されるようになり、これまで化粧品の購入をゆえに、粗雑な国産品もしくは高額な輸入化粧品しか流通控えていた層にも販売路を見いだしている。

しておらず、一部の富裕層を例外として伝統的な化粧品以

こうして国内外の化粧品ブランドが市場拡大をねらって外に選択の余地がなかった。さらに、熱い気候にも関わら鎬を削った結果、現在のインドの化粧品市場は、口紅やフず冷房設備の普及率が低く、汗で直ぐに流されるメーキャァンデーションをはじめとするメーキャップ用品、スキンアップも普及しなかった。化粧をするという行為だけでな

ケア用品からヘヤケア用品に至るまで、さまざまな価格帯

く、スキンケアすら一般的ではなかったのである。

の商品が見られるようになっている。このことは化粧品を現在、多種多様な消耗品としての化粧品を選択できる状

日常的に使う女性がそれだけ増えたことを意味する。老舗

況になったことで、伝統的な化粧品離れの現象も見られるの国産化粧品メーカーであるラクミー（LAKMÉ）は、豊ようになっている。以前ならスキンケアやヘヤケアは、工富な製品ラインナップと価格帯の多様さを武器に業界トッ

業製品ではなく、オイルやスパイスなど身近にあるものでプの地位にある。しかし、大小さまざまな国産製薬・化粧済まされていた。しかし、安価な製品が市場に供給される品会社も積極的に展開を図っており、自然素材やインドのようになると、手軽さなども手伝って、伝統的なものから伝統医術であるアーユル・ヴェーダを売り物にした化粧品

規格化した化粧品に切り替える女性が増えているのである。

なども生産・販売されている。このように化粧品の品揃え

例えば、ヘナの代わりに欧米のメーカーのカラーリングが豊富になったおかげで、消費者は自分の好みや予算に応剤を使う女性が着実に増えている。ヘナの粉を水で溶いたじた商品を自由に選べるようになっている。安価な美白ク

ペーストは、髪に塗って色を定着させ、洗い落とすまで時

リームやシャンプーが田舎でも手に入るようになり、都会間と手間がかかる。しかし、その割に退色が早い。インドに比べて保守的な村落部でも愛用する女性が珍しくなくなで売られている天然素材のヘナは、白髪だけが赤く染まるった。

ため、白髪染めをしていることが一目瞭然となる。それを2008 年の現地調査時、最近できたばかりの、チェンナ

嫌がる女性も少なくないという。

− 131 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

それに比べカラーリング剤の方は、色も豊富な上に染め化していること、ハーブや香油を用いた天然素材のものか上がりも自然で、簡単に染められ色も長持ちするというの

ら国内外の製薬・化粧品メーカーによる工業製品に消費動である。インドの人は、カラーリング剤による髪の痛みや向がシフトしていることが確認された。このこと自体、中染める際の刺激臭をあまり気にせず、染め上がりの良さと間層が急増するインド社会における化粧品の消費動向の顕

退色の少なさのほうを重視する傾向が強い。日本でヘナがれのひとつとして捉えることが可能である。また、近年の髪にも地肌にも優しい天然素材のカラーリング剤として人化粧品の消費傾向は、インドにおいて化粧品が髪や素肌を気を集めているのときわめて対照的である。

健康に保つ補助品であるのか、または美を追究する手段とかつて、化粧品といえば、いわゆる髪や素肌を健やかになるのか、ステータスシンボルのような別の意義を有して保つ自然素材の基礎化粧品が一般的であった。ココナッツ

いくのかについて一定の予見を提示できる可能性も秘めて

油、ヘナ、インディアン・グースベリー、ターメリックやいる。

クローヴなどのオイルやハーブが用いられていた。これら

一方、欧米を中心に、化学物質に対するアレルギー反応

伝統的な化粧品は、日常的な食品であることから安全性はの増加や代替医療としてのアロマセラピーなどへの関心の長い間の使用で証明されており、入手も簡単で安価である

高まりから、ハーブ、泥や植物の香油などの天然素材を原という特徴がある。

料にした化粧品に対するニーズが増加している。日本にお自然素材の化粧品は、工業製品と比較してアレルギーや

いても、こうした自然派化粧品への再評価は、安全な原料

副作用が少ないため、欧米を中心に人気が高まり、世界的を使って添加物を含まない化粧品を自分で作る指南書が複な基準で考えれば消費人口が減少しているわけではない。

数刊行されていることからも理解できる。

欧米における自然派化粧品への再評価がある一方、インド

一般的に、化粧品市場は、世界的に消費者マインドの変では工業製品化した化粧品の消費が伸びているのである。

化が激しく、間をおかずに新しいものへとトレンドは移っ

特に、経済政策の転換以降、国内外の化粧品メーカーがしていく。商品のサイクルも速い。このような業種が、何かのぎを削り、購買力のある層が増加したことも重なり、自につけてテンポの緩慢なインドという土地柄で、どのよう然派の化粧品離れがすすみ、工業製品化した化粧品の消費な展開を見せていくのか注目されるところである。伝統的が急増している。伝統的な化粧品から規格化した化粧品に化粧品と工業製品化した化粧品の双方を経験した消費者が、乗り換える傾向は、都市部だけでなく村落部でも目立って

今後何を選択するのかインドの化粧品の消費動向は化粧品いる。

文化の行方を考察する上で貴重な事例といえる。

工業製品化した化粧品が一般化するにつれ、天然素材の伝統的な化粧品離れが進み、以前では考えられなかった化（主要参考文献）

粧品による湿疹などのトラブルを耳にするようになった。

１）Cunningham Scott, : The Magical Power of Herbs, New

伝統的な化粧品では起こらなかった化粧品が原因となるア

Age Books, New Delhi, 2007.

レルギーが報告されるようになっているのである。例え

２）Farrer-Halls Gill, : The Aromatherapy Bible: The Definitive

ば、美白クリームを使って湿疹が出たという話も珍しくな

Guide to Using Essential Oils, Godsfield Press, London,い。
「化粧する」という行為が一般化するにつれて、伝統2005.

的なものにはあまりなかった「副作用」という予期せぬ出来事に遭遇する事態となっているのである。しかし、現時点では消費者が自然派化粧品に回帰する動きは見られない。

３．総

３）Mathew A.G., : Indian Spices, DEE BEE Publications,Kottayam, n.d.
４）宮野博司，宮野ちひろ，:『心と体に効く

ハーブ栽培

78 種』，成美堂出版，東京，2001.

括５）Mukherjee Pippa, : Nature Guides Common Trees of

人文科学における化粧に関する研究は、化粧の変遷に関India, Oxford University Press, Bombay, 1990.

する歴史的な研究、化粧を文化的表象として位置づける文

６）Pengelly Andrew, : The Constituents of Medical Plants:

化史的な研究が主流となっている。本研究は、経済開放政

An Introduction to the Chemistry and Therapeutic Herbal

策以降、インド社会が巨大な化粧品市場として注目される

Medicine, Allen & Unwin, Crows Nest, 2006.

状況を鑑み、消費者の嗜好が伝統的な化粧品から工業製品化した化粧品に移行する現象を捉えた。さらに、経済・社
会環境の変化における消耗品としての化粧品の位置づけを分析し、インドにおける商品としての化粧品の可能性につ

７）鮫島浩二，:『女性によく効くアロマセラピー』，株式
会社主婦の友社，東京，2003.
８）Sharma Rajeev, : Herbal Home Remedies, Lotus Press,
New Delhi, 2006.
９）山下博司 ,いて考察を行った。
現地調査を通じて、インド国内で入手できる化粧が多様

出版 ,− 132 −

岡光信子 , :『インドを知る事典』, 東京堂

東京 , 2007.

●
平成20年度記念講演
●

竹内 一郎

㈶コスメトロジー研究振興財団
第 19 回表彰・贈呈式記念講演概要

見た目を磨く、内面を磨く
比較社会文化博士

竹 内

劇作家・演出家一 郎
場所：コーセー王子研修センター
日時：平成 20 年 11 月 12 日（水）私は演劇をやったり漫画の原作をやったりしております。
そうすると、私が書いた言語、言葉はすばらしい役者さんのほうが相手を落ち着かせる傾向があるということなんです。

がしゃべれば伝達力は上がるんです。下手な演出家が演出逆に高いからだめということはありません。八代目の桂をすると伝達力は下がる。あるいは漫画もすばらしい漫画

文楽のように声の高いはなし家もいらっしゃいますから、家が漫画にしてくれると、伝達力は上がる。で、そういう自分のパーソナリティーに合っていればいいと思うんです。

ことを考えると、私が書いた言語というものは、実は非言声の大きさもそうですね。自信がある時は大きい声でし語的なメディアに大きく左右されて伝達力が変わるんだとゃべる傾向がありますが、自信がなくなりますと声が小さいうふうに思うようになりました。

くなります。これも十分にコミュニケーションですね。声

そこで、非言語コミュニケーションの重要性というのをの質、語調、抑揚なんかもコミュニケーションですね。た考えるようになりました。日本で長いことコミュニケーシ

め息、このあたりも「ため息は命を削るかんなかな」と言ョンといえば、話し方の本と書き方の本しかございません

いまして、余りため息をつく人を見ると、こっちも元気がでした。しかし、考えてみますと、話し方や書き方以外になくなるということがございます。

も、表情とかしゃべり方、衣服、今日身近なところで言う

身体的特徴、動きですね。この身ぶりとか姿勢、表情、ならばメイク、ヘアースタイル、いろんなメディアが我々

目の動き、このあたりもやはり十分にコミュニケーションのパーソナリティーを伝達しております。つまりそれもひなんですね。

っくるめて非言語的なコミュニケーションは非常に大きい

アイコンタクト、日本人は目を見てしゃべるのが苦手です。とりわけ今の若い方たちはモニターばっかり見て育っんだというふうに考えるようになりました。
私が「人は見た目が９割」を書いたのは３年前ですけど、ていますから、相手の目を見ることがなかなかできませそこから少しずつ日本でも選挙の場合にはアクションが大ん。日本人の平均的なアイコンタクトの時間ですけど、目事、しゃべり方が大事であるとか、裁判の中でもその被を見て話しなさいと言っても、ジーッと目を見て話すとち

告はどう言ったかだけではなくて、どのように言ったのか、

ょっと具合が悪いんですね。やはりどのぐらい見ればいい

あるいは学校の教育の現場でも、先生がこう言ったのではのかというと、二者間の対話で一般的には 0.3 から 0.6 ぐ

なくて、どのくらい魂を込めて相手の胸を揺さぶったのか、らいです。たくさん見る方で 0.6 ぐらいです、黒目と黒目

それが大事だというふうな世論が少しずつ広がってきたかが合っている時間が。したがって、0.6 掛ける 0.6 ですから、と思います。

両方の黒目が合っている時間は 0.36 ぐらい、つまり３割

非言語コミュニケーションにはどのようなものがあるんぐらいしか黒目は合っていないんですね。このようにアイコンタクトの時間も十分にその人に自信があるか、ないか。

でしょうか。
これは伊藤進さんという方が分類されたんですが、このくらいたくさんメディアがあるんですね。パラランゲージ、

そういうようなことを伝達するコミュニケーションのメデ
ィアになっております。

たとえば声の高さですね。これも十分にコミュニケーショ

身体接触、これも日本人は握手は少ないんですが、アメンのツールです。一般的にアナウンサーの試験に受かりま

リカ人だと握手すると、おまえのこの本を絶対翻訳させてすと、低い声を出すようにトレーニングをします。低い声

くれみたいな、アメリカ人のエージェントと話すと、「ナ
イス・トゥー・ミート・ユー」と言いながら、ぎゅっとこ
う握ってきますね。「ノー」とは言わせないぞと。これも十分にコミュニケーションだと思うんです。
身体的特徴、最近は人権問題もありますから余り強くは

Ichiro Takeuchi, Ph. D.
playwright, Director

言いませんが、ただ余りにも不摂生で飲み過ぎて、体型がどうかなと思う方の場合は、意志が少し弱いのかなというメッセージを伝えたりします。

− 135 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

これが今日のメーンテーマですけど、衣服、化粧、めがと見て、ああ、仲よくなれそうだな。我々の脳の処理能力

ね、このあたりもその方のどういう服を着ているかによっというのは非常に高いんだということがわかります。もちて十分伝達をいたします。メイクもそうなんですね。私はろん当たっていないこともあるんですよ。

昭和 31 年生まれなんですが、私たちのころはナチュラル

アメリカの 16 代大統領リンカーンは、40 歳にもなれば、メイクだったんですね。だから、私が若いころは、同級生

自分の顔に責任を持たなければなりません。これも日本人たちのしゃれた女子たちはみんなナチュラルメイクをしてもいろんな手を変え品を変え、いろんな言葉で言っておりおりました。いつしか大学を出て 30 年もたちますと、みますが、やはり若いころは少し美人であったり、少しイケ

んなおばさんになっている。ナチュラルメイクをしているメンであったりすれば得をする傾向があります。

と、おばさんだということがわかる。今の若い人はそのナ

しかし、社会に出て 20 年か 30 年たちますと、もう化けチュラルメイクの人はいませんので。それも十分に、ああ、の皮がはがれていきます。ちょっとぐらい知的なふりをしこの人は結構年取っているんだなということがわかったりていても、ああ、普段からやっぱり切磋琢磨しておられなします。

い方と接しても、何となく見当がつきます。これは人生が空間行動、これも相手との距離とか着席行動とか、これ50 年のころの 40 歳ですから、今でいうと 50 歳ぐらいとも一つの十分に情報を伝達いたします。宴会の席で入り口考えてもいいのではないでしょうか。おおよそこの方は信のほうにいますと、何となく控えめな方なのかなという情

頼できる方だ、信頼できない方だというのは見当がついて報を伝達したりもします。

いくのではないでしょうか。

このように一言も言葉を発さなくても、やはり情報は随

私、非言語コミュニケーションというのを提案いたしま

分伝達する傾向があろうかと思います。こういうことをした。なぜこんなに非言語コミュニケーションが大切なん

我々は演劇であったり、漫画であったりする時に考えながだろう。本がたまたま売れたんでしょうけど、これは恐ららー生懸命作っているんですね。相手との距離、どこに座

く 15 世紀に活版印刷機が生まれました。活字というのがるか、どの角度で相手を見ているか、どういう目で相手を18 世紀の産業革命以降情報伝達の非常に主要な手段とし見るか、そういうようなことを一生懸命考えるんです。科て、私は非常に偏った形で世界に広がったと思っておりま学ではありませんが、経験則の中で舞台を見たり、漫画をす。

読んだりする人が納得する形で、この人とこの人のコミュ

その後、1960 年ごろからテレビが広がっていきました。

ニケーション、関係を作っているんですね。こういうとき

今はインターネットで世界の画像情報を摂取することがでは私は非常に科学的な考え方ではなくて、経験則になってきます。そうすると、画像情報は意外にも信用できるといいきます。

うことがわかってきました。

しかし、いくら経験則と言っても、観客ないしは読者がそうすると、画像情報が、言語情報よりも非言語情報にそれを納得しないのでは、おおよそ受け手が納得するよう非常に中心が移ってきたということが言えると思います。

な演出を考えるんですね。こういうことをずっと考えながそれからもう一つは、メールが社会的に浸透しました。大

ら生きております。そうすると、人間は言葉を発しなくて企業の方、メールが浸透してきた時に、東京本社と大阪支も随分多くのことを伝達しているなということがよくわか社でわざわざ会議をやらなくてもいいではないか、新幹線ります。

を利用しなくてもメールで情報を共有すればいいではない

我々、人を外見で判断してはならないというふうによくかという時期がしばらくありました。

教えられましたが、倫理観の階層ではやはり外見で判断し今はそれでは難しい。なぜかというと、その情報はどれてはならないだろうと思います。幾らいい身なりの方でも、だけ信頼できるのか。その情報の緊急度はどのくらい高い

心の中にはやましいことを考えていらっしゃる方もあるし、のかというのは、その情報の発信人の表情とかアクション

ぼろは着てても心は錦、すばらしい方もいらっしゃるだろとか、言い方によって弁別できるのではないかということ

うと思います。

なんです。メールではその情報の信頼性が非常に薄い。しただ、フロリダ州立大学のジョン・マナー、心理学の先たがって、非言語的な情報でバックアップされていない情

生ですけど、この人は実験で友達になれそうだとか、魅力報はうまく伝わりにくいということに気がつきました。

的かなというようなことをパッと判断する時に必要な所要あるいは少子化、ここでは表情を学ぶ機会が減ってきま

時間は 0.5 秒ぐらいだと言っているんですね。これを 0.5した。昔は兄弟が何人もおりましたから、表情をミラーリ

秒写真で見せたのと、あるいはゆっくりたっぷり見せたの

ング、姿勢反響と申しまして、表情を兄弟から学んでおりと比較すると、そう違わない。0.5 秒で、私たちの目といましたが、今は表情を学ぶ相手がモニターです。モニター

うのは非常に多くの情報を脳が処理しますために、言語では表情がありませんから、表情を学ぶ相手が余りいないん

本１冊分、この人は信頼できる人間だと書くよりも、パッですね。母親から学んだ表情がかつてはたっぷり時間があ− 136 −

見た目を磨く、内面を磨くりましたが、今は母親が働きますから、その時間が減ってをやはり大事にしないと、どうなのでしょう。私は少し危まいりました。

機を感じているんです。

あと、東京におりますと、日本人以外の方がたくさんお

大学の演劇科で教えておりますと、やはり体を使って表ります。アメリカやヨーロッパほどまではいきませんが、現する、あるいは非言語的なことが、自分の体全体で表現

日本もかなり多民族化しつつあります。したがって、言語したり伝えたり、伝え合ったりすることが大事だなというだけでは通用しない方が実はたくさんいらっしゃるんです

ことを、今の若い人たちも気がついていきます。そうじゃね。したがって、非言語コミュニケーションは、だんだんないと、どうしても頭でっかちになる傾向がございます。

重要になりつつあるのではないでしょうか。

やはり頭だけで考えるんじゃなくて、体を使っていろいろ

私が、これは私がやった調査ですが、一部上場企業で調査をやりました。初対面の相手について何を判断しますか考える。こういうことが大事なんじゃないかなと思うんです。

というと、もう人柄、年齢、個性、かなり多くの方が実はフィリップ・ジンパルドというアメリカの心理学者によ

外見で判断していらっしゃる。これはもう社会人としてきりますと、外見と内面の問題なんですが、新聞で公募した

ちんとやっておられる方も実際はそうなんですね。そこか人を無作為に囚人役と看守役に分けました。それは囚人とら何を判断することが多いかというと、表情、服装、身ぶ看守になりなさいとサジェスチョンする必要はなく、衣服

り・しぐさ、体型、目つき、こういうもので相手の方をいだけを着せたんです。そうすると、やがて看守役は看守っ

ろいろ察しながら生きております。

ぽい口調でしゃべるようになり、囚人役は囚人っぽい口調

見た目が原因で他人に誤解された経験がありますか？こでしゃべるようになった。つまり私たちの心は、意外にもれは３人に１人の方がやっぱりあるんです。それを実感し外側に左右されながら生きているということです。私たちておられる。その誤解の程度は人によってまちまちなんでは役者に、実際に医者の役を当てて、ジャージで稽古をしすが、それでもこの人は大酒飲みかなと思ったり、あるいている時と、白衣を着せて稽古する時では、全然気持ちがは女性には申しわけないんですけど、この女性だとこのく違うんです。やはり白衣を着せる瞬間に医者になる。あるらいの言葉は傷つかないのかなと思いきや、やはり人によいは軍人の役を当てます。軍服を着せるとやはり手荒なこってデリケートなポイントが違いますから、失礼だなといとがしやすくなります。
ということは、私たちの内面というのはそんなに堅牢なうようなポイントが随分違います。
そういうことで、外見で判断してはならないと言いながものではなくて、外の刺激に非常にナイーブに反応しながらも、外見で判断しないと、やはりコミュニケーションのら生きているのではないかということを、我々演劇をやり

潤滑油というのは、崩れてくる傾向がございます。

ながら思います。ということは、ここにいらっしゃる方々

自分の見た目について日ごろ気をつけていることはありの例でいくならば、メイク一つでも随分心の持ちようが変ますかと、やはり８割の方がある。つまり誤解を招かないわる。ヘアースタイル一つでも心の持ちようが変わるといようにしないとだめだということですね。二者間の会話

うことなんです。

で、日本人というのは非常にプラットフォームが安定して恐らくこの中にも免疫系の方がいらっしゃって、免疫がおります。何しろ日本語をしゃべればいいし、民族が１種

単純に免疫系だけで動くだけではない。つまりいろんなも類、恐らく飛鳥時代のころには大陸の連中と混ざったんでのが多岐にわたって協調し合いながら、我々の免疫が左右しょうけれども、しかし非常にプラットフォームが安定しされながら私たちは生きているということがあるから、多ておりますから、認知しやすいんですね。アメリカに行き

分今日の専門の方は皮膚科学であったり、化学であったり、

ますと、この人が信用できるか、信用できないかというの

サイコロジーであったりするのだろうと思うのです。恐らに、時間がかかりますからね。日本の場合はそこまで時間

くそういうふうにまだまだ解明され得ない部分があろうかがかかりません。そういう意味では非常にプラットフォーと思いますが、我々は経験則的にこういうのは何となく見ムがいいということは、文化が発展しやすい土壌がありま

当がついているんです。

す。したがって、化粧品もこれほど化粧品が発展するといこれは「人は見た目が９割」のタイトルの根拠になった

うのは、化粧品とか衣服が発展するというのは、文化がそ研究ですけど、アメリカの心理学者にアルバート・マレー

れだけ高いということなんだと思うんです。

ビアンさんという方がいらっしゃいます。この人は心理学

そこに気をつけるというのが当たり前になっているんで者の割には MIT の出身で、割に数字にするのが好きな方すね。
清潔であるとか、笑顔とか愛きょう、
このあたり、我々なんです。私自身は演劇とか漫画なんで、すべて数字には非常に重要だと思いますが、実は今の若い人たちはモニするのはどうかなと思うんですけど、この方はこういう数ターを見る時間のために減っておりますので、少しずつ退字を作ったんです。実験室の中に、仮に例えば言いますと、

行しつつあるのではないでしょうか。コミュニケーション

好きという情報をここに置きます。言い方を嫌そうな感じ− 137 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

で「好き」と言います。言葉の意味は好きです。言い方は下肢信号、脳から遠いところですね。一番手の先とか足嫌そうに好き。ここに止まった写真で怒った写真を仮に置の先、脳の支配を受けにくいところは、むしろ本心があらくとします。言葉は好き、言い方は嫌そう、表情は怒ってわれやすい。体幹信号、大きな部分ですね。あとはちっちいる、この矛盾する情報が３つ与えられた時に、人間はどゃなしぐさ、この辺もだんだん信用できなくなってくる。

の情報を享受するのかという実験なんです。

見分けられる手のジェスチャー、これはもう明らかに計算

そうすると、言葉の意味を取った人が７％、言い方を取った人が 38％、表情を取った人が 55％だったということ

して嘘のアクションができますから、だんだん信頼できなくなっていきます。

なんですね。人は見た目が９割というのは、話す言葉の意

表情、これは我々が飛行機に乗りますと、スチュワーデ

味は矛盾した情報に邪魔されてしまうと、人は 10％以下

スの方が笑顔で我々を迎えてくれます。あのスチュワーデ

しか取ってくれませんよということなんです。

スの方は、我々に好意を持っているということはないんでこれは私たちわかりやすいと思うんです。代議士の方がすね。実は営業用のスマイル。本心かどうかはわかりませ

金銭をもらって、証人喚問がテレビで映ります。秘書がやんで、表情というのはもう随分作りやすい嘘の情報が混じった、私は知らなかったというようなことを言います。活

ってしまいます。

字で言うならば、｢ 秘書がやった、私は知らない」ですから、

そして、一番信頼できないのが言語なんです。言語というのは脳の指示どおりに嘘をついてくれます。したがって、その方は潔白なんです。
ところが、我々は非言語情報をテレビを通じて見て知っ脳の指示どおりに嘘をつくということは、私たちは自分がております。その人は自信なくしゃべる、うつむく、そわ

嘘をつくように人も嘘をつくと思っているから、言語情報

そわしている、手遊びをしている。ああ、この人の言語情は信頼しにくいということなんです。逆に言うならぱ、非報はどうも当てにならないなというふうに我々は考える。

言語情報でバックアップすることによって、その言語はいすると、矛盾した情報が与えられた時には、話す言葉のかようにも伝達力が上がることもあるということです。

内容は相手に伝達しないということなんです。したがって、

私たち、舞台をやっておりまして、いい役者がしゃべれ

私たちは戯曲、舞台の脚本を書く時に、いい役者さんが演

ばものすごく伝わる。だめな役者がやると伝わらない。そじれば、「あなたなんか大嫌い」という言葉で愛している

う言いながら、私はこうやって人前でお話しするという非という表現をやってくれます。つまりせりふは「あなたな常につらい立場におります。私の言葉がどのぐらい伝わる

んか大嫌い」でもいいんです。伝達できる情報は愛していかというのは非常に難しい、厳しい問題ですが、それでもるという情報だったりします。これが下手っぴな役者だと、伝達力を高めるためには、信頼していただくためには、表「愛している」と書かないとだめなんです。なぜならば「愛情とか言い方もひっくるめて情報だというように考えておしている」と言わないと愛しているということが通じなくります。

て、下手っぴな人が「あなたなんか大嫌い」と言うと、本「人は見た目が９割」という本が出た直後に、朝日新聞

当に嫌いに見えちゃうんですね。そうすると、私たちの演がアンケートを実施しました。それによりますと初対面で出意図と違った芝居になってしまう。伝わり方が違っちゃ

好印象を与える自信がありますかと言うと、やっぱり「はうんです。

い」は 43％で、「いいえ」は 57％おりました。自信がある

こうやって非言語情報というのは、これだけすごく我々に重要なファクターであるということが、演劇をやっていのは話し方、表情、笑顔でした。自信がないのも話し方、表情、顔立ち、笑顔、このあたりでした。
したがって、「はい」でも「いいえ」でもおおよそ同じるとわかります。
なぜこんなに言語情報は信頼できないのでしょうか。こ

ものなんです。同じものが「はい」なんです。ただ、自信

れはサイエンスじゃありません。デズモンド・モリスといというのはその人の心の持ちようが自信ですから、具体的う動物行動学者が観察によってつけた順位です。したがっにスキルがあるかどうかではないと思うんです。第一印象て、まだユニバーサルなものではないんですが、観察者のを重視しますかというのは、私の調査と同じで、80％ぐら

立場からいきますと、自律神経信号が一番信頼できる。こいがやはり第一印象は当たると思っているんですね。

れは手汗をかいたりとか、心臓のどきどき。これはうそ発

なぜ第一印象は当たるのかというと、私たちの脳はいろ見器ですね。日本はうそ発見器が警察の証拠になるんです

んな方と出会って裏切られたり、信じ合ったり、友人を作が、アメリカは証拠に使えないんです。うそ発見器は。日ったりしました。生まれてこの方、数千人、数万人の方の本は心理学の専門家がうそ発見器を触りますけど、アメリ情報がデータベース化されております。そのデータベース

カは心理学の専門家じゃないので、うそ発見器の情報は余と照らし合わせて見て、この人は信頼できる、友達になれ

り信用できない。ところが、デズモンド・モリス流に言うそうだ、話が合いそうだという情報を処理しているんだとならば、まだ自律神経信号が一番信頼できる。

思うんです。

− 138 −

見た目を磨く、内面を磨く

もう一つは山びこ効果という心理学でいうところの働きがあります。ある方と会います。ああ、この人いい人だな

んですけど、実は本屋に行って、コミュニケーション上手の本を読みますと、ほとんど話し方、書き方ですよ。

と思います。そうすると、次会う時にあの人、いい人だか

ところが、実際には相手の話をよく聞いてくれる人が大らといって気持ちが和みます。表情が柔らかくなりますか事だというふうにみんな知っているんです。なぜかというら、表情が柔らかくなると、ああ、この人、いい人だなとと、我々は私の話を間いてよ、おれの話を間いてくれない

相手が思ってくれる。ああ、この人いい人なんだ、好意をかと思っているんです。

寄せているんだと思うから、その人の表情が柔らかくなりということは、聞いてくれる人を欲しているんですよ。

ます。お互いの表情が柔らかくなって、第一印象は当たる。

話し上手ではなくて聞き上手の人がいてくれると非常にう

最初苦手だなと思うと、表情がパッとこわばります。逆れしい。こうやって先生たちもいろんなところで講義をなにこちらのこわばった表情を見て、相手の表情がこわばっさっていらっしゃると思いますけど、このくらいの教室にていきます。そうなってくると、これも山びこ効果で、第３人ぐらいうなずき上手の学生がいてくれると、ものすご

一印象は当たったということになります。

い講義をやりやすいですよね。みんながじっとしていると、第一印象というのは、その１つは、脳のセンサーがすば講義がものすごくしにくいんです。恐らくこうやって意味らしいということもありますけれども、もう一つは我々のもなくうなずいてくれると、ああ、その人の顔に合わせて関係性ですね。感情がその第一印象に呼応する傾向がある

リズムを取って話せば、いいリズムができていくんですけということも言えると思います。

ど、こうやってパソコンばっかりやっている学生の大学で外見の重みは何割ぐらいでしょうか。これはいろんな方がいらっしゃるでしょうけど、やはりその七、八割である

授業をやりますと、顔が止まっていますよね、ぴたっと。
そこで１時間半しゃべると、ものすごく疲れますよね。

とか半分ぐらい、やっぱり随分外見の重みを取っておられ

つまりうまく聞いてくれると、我々の授業は非常によくます。第一印象なんですが、これは母集団が少ない調査でなるんです。ところが、そうじゃないと、また我々授業がすけど、アメリカの電話インタビューですけど、1500 人

どんどん固くなって、かなりベテランの先生でも、ああ、にした一目ぼれの調査をしたデータがあります。一目ぼれ

今日の授業失敗したのかなと思ったりするんだそうです。

で、その人と出会って１時間以内に好きになった、恋をし聞き方もコミュニケーション、大学を私、作家業が忙した状態を一目ぼれと定義したんだそうです。一目ぼれとい

くて大学を辞めてしまったために、自分の実験が最近ない

うのは、約 30％の人が経験したことがあって、そのうちんですね。人の実験ばかり使ってお話を申し上げておりまの 55％は一目ぼれの人と結婚をしていると言うんですね。

す。会話に自信のある男性を被験者として赤、青のチーム、だから、一目ぼれというのは割に人間の行動を動かすん

２チームに分けて、初対面の女性と１対１で会話をしてもです。我々、結婚する時には理性的にしたほうがいいのからいました。女性の足元には会話がおもしろくないと感じなと思いきや、実は一目ぼれという非常に非論理的なもの

た時に点灯する赤ランプをつけました。Ａチームはランプに左右されて動いている傾向があります。

がつくのに、Ｂチームはランプがつかない。つまり女性に

その後追い調査なんですが、母集団が少ないためにどの

あえて表情をなく聞いてくれと言うと、男はだんだん自信

くらい信頼度があるかどうかわかりませんが、アメリカとがなくなっちゃうんですね、動揺するんですよ。私の、おいうのは離婚率が 50％の国なんですね。その中で一目ぼれのトークはうまいはずなのに、相手はこうやって表情をれと結婚した男性の離婚率は 20％しかないんですよ。女変えない。だんだん自信がなくなってきて、しゃべりがだ性に至っては一目ぼれと結婚した方の離婚率はわずか 10めになっていくんですね。

％なんですね。つまりフォール・イン・ラブした激しい勢ということは、ユニバーサルな話し上手はいないといういが余りにも強いために、性格の不一致や価値観の違いをことなんです。相手がこうやって聞いていたら、どんなに乗り越えてしまうんです。そのくらい一目ぼれの力というトークが上手な人でも、自信がなくなっていくんですよ、のは強いようなんです。人間というのは確かに理性的動物

動揺していくんですよ。つまりコミュニケーションというであり、社会的動物でありますが、一方では非常にもっとのは、相手の聞き方があって初めて話し上手が生まれるの動物的な、ないしは本能的な働きが非常に大きな力を持っであって、最初から話し上手がいるわけではない。キャッていると、まだまだ解明されていない力もあるんだなとい

チボールだということですね。
青の女性に、片方の女性にあえて表情を作らずに聞いてうように思います。
この調査で私はおもしろいなと思ったのは、コミュニケ

もらうように指示を出すと、聞き手の表情が変化しないと、ーション上手の中に、相手の話をよく聞くというのがある

話し手が動揺して、話し手の表情も硬くなるから、お互い

んです。
ここは
「朝日新聞」の読者の方というか、「朝日新聞」の表情が硬くなってしまうんだ。したがって、表情の変化の目のつけどころだと思ったので、これをわざわざ挙げたをつけてあげないと、どんなにイケメンであっても、どん− 139 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

なに美人であっても、楽しいコミュニケーションができなと若干ニュースを読み間違えても、アナウンサーでも、こいということですね。

の方がニュースを読み間違えてもしょうがないかなと思う

それから、オーディションという名目で集まってもらっんですけど、このあたりがニュースを読み違えるとちょった人に面接をしました。スタッフが無表情の時には、相手とおかしいなという気がしますね。そのようにメッセージも無表情になります。笑顔を作ると相手も笑顔になります。

であります。

感情と表情は伝染するということですね。したがって、私

これもコミュニケーション、髪の毛が余り長いと、日本も勤務する大学では、「おはよう」とか、もう大きい声での場合は縄張りを大きくしたいというメッセージがありま言うようにしているんです。すると、事務員の方も頑張っす。これ、傾向としては３代前の総理でしょうか、非常にて明るくなってくれます。でも事務員の方がみんなシラー

縄張りを広げられたですね。やっぱり縄張り、戦国の大名

ッとしていると、多分大学の体質が悪いんでしょうね。そというのは自分のパーソナルスペース、縄張りを大きくさ

ういうところに行きますと、もうだめですね。学生もまたれる方がよろい、かぶとをこうやって、おれは大きいぞと暗い。余裕がないんでしょうね、やっぱり学生募集とかいいう縄張りを広げますが、総じて前の前の総理は縄張りをろんなことがありまして。表情がだめですね。

狭める傾向があったような感じがある。

ただ、なるたけ研究室を明るくするためには、自らが進これは髭ですね。戦国大名の場合は髭を生やしておりまんで率先して、朝、「おはよう」と言ったり、表情をパッした。これもパーソナルスペース、縄張りを広げるというと明るくすることによって、その研究室、活気が出ていきメッセージでありました。日本はビジネス社会では髭を生ますので、研究成果も上がるのではないかと思うんです。

やしません。これは３代将軍、江戸時代に３代将軍徳川家

やっぱり締め切りに追われているとか、やらなければいけ

光が髭を禁止にしちやったんですね。つまりもう天下太平

ないことが多い。多分疲れることが多いと思うんです。

の御代であるから、レジスタンスは許さんということで、

しかし、やはり表情を減らしてしまうと職場が暗くなりそれ以降、日本のビジネス社会では髭は御法度になっています。無駄なことでも、無駄なおしゃべりでも、挨拶とかきます。髭を生やすのは自由業の方が多い。逆に言うと、表情をつけてコミュニケーションをするということで、よ会社でも営業マンたちは髭を生やしませんが、工場とか総

い潤滑、よい循環をするのではないでしょうか。

務とか、人に会わない職域の人は髭を生やす傾向がありま

これ、実際に人間の顔でやるとうまくいきませんので漫画家に描いてもらったんですね。どっちの女性が話しかけやすいですかというと、こっちのほうが話しかけやすいこす。つまりこれも十分にメッセージなんですね。このように印象が変わっていきます。
非言語情報を強化しましょうということなんですが、私、とになります。これは目と目を離して描いてもらったんでこうやって演劇をやっておりますと、作家の方が本を読んす。こっちのほうが話しかけやすいのはなぜかというと、だり、文章を書いたりすることで人間も磨かれていく、人顔の輪郭によって話しかけやすいのではなくて、私たちは格の陶冶があります。先生たちは大学の研究室ですばらし

余りにもきちきちっとした人とはつき合いにくいんですね。

い研究をなさることで、人格が陶冶されていくんだと思う

言葉とか生き方とかにも遊びのある方のほうがつき合いやんです。農民が田んぼや畑を耕すことで自分を耕すように、

すい。

自分の心を耕すように、我々役者を見ていると、表情、言僕は役者さんによくこう言います。人気が必要なんだ。

い方、アクションのプロなんですね。決して彼らはインテ人気というのは人の気持ちと書きます。人の気持ちはどこ

リジェンスが低くない。作家に比べて低いわけではない。

に入るのかというと、完璧な人のところには入りにくいで研究者に比べてインテリジェンスが低いとは言えないと思すね。やはり最高裁判所裁判官みたいな方とはなかなか友うんです。役者さんは確かに専門的知識を、本にするよう達になりたくないと恵うんです。やはりちょっと遊びがあな知識はないかもしれないけれども、膨大な知識を集積しる方のほうがいい。すき間に入りやすいんですね。そのすて、彼らの一生を生きております。

き間をちょっと作ってあげることによって、人の気持ちがアフリカにこういう諺があります。
「１人の老人が死ぬ
ことは、１個の図書館がなくなることと同じだ」という諺

入ってきやすくなるということですね。
これは同じ顔を、ヘアースタイルを変えて描いてもらいがあります。これはなぜかというと、その老人は一生涯にました。そうすると、前髪をおろすと３歳若く見えると言１冊の本も読んでおらなくても、目で見て、鼻でかいで、われております。逆に前髪を上げてくると、スチュワーデ

皮膚で触って、耳で聞いて、舌で味わった、五感で感じた

スみたいな方は、プロフェッショナルというイメージです

情報が膨大に体の中に集積されている、蓄積されているのね。つまり必ず額を上げてきますから、私はプロなんだ、だ。その知識の総和は図書館１個、１館分の本に、書物につまり若く見えるのではなくて、社会的にもスキルの高い匹敵するのだという、そういう諺なんですね。

人間だというメッセージになっていきます。このあたりだ

例えばリンゴという果物があります。これを言語で表現− 140 −

見た目を磨く、内面を磨くするならば、リンゴを見たことのない人に言葉だけでリンね。あのくらいの自信があると、ああ、この人ならみんな

ゴを伝えようとするならば、本１冊分描写してもリンゴのついていこうと、こう思うんでしょうね。

味とかリンゴの形状は言葉では伝わらないと思うんです。

何でしょうか、やっぱりバッとこう、非言語的なものも

ところが、リンゴというのは目で見て、手で触って、鼻で非常に大きいんじゃないでしょうか。しかもあの短いフレにおいをかいでがぶりとかじってみた時に、ああ、リンゴーズで言うというのは、大変自信がないと言えないんですというものはこういうものだなということがわかります。

ね。自信がない人というのは、もたもたもたもたした形容

膨大な情報を我々は五感で一瞬にして処理しているんだと詞が山ほどついて、いろんな例外のことをごちゃごちゃご

思うんです。

ちゃごちゃ言うんですけど、自信がある人というのは誤ということは、私たちの脳というのは、書物による知識解を恐れずにガッとこう言うんですね。オバマを見ながら、も大事ですが、書物以外による情報が膨大に詰まっているヒラリーとやっている時から、ガガガガッとこう変わってのだというふうに考える。そうすると、感受性の豊かな役きましたね。非言語的なものがものすごい勢いで変わって者は、仮に書物をそう読んでいなくても、研究室が本だらいきました。あれに耐え得る人じゃないと国のトップになけになっている研究者より知識量が劣っているというふう

れないという、非常にいいシステムだなと思います。我がにはならないのではないかと、私は思うんですね。

国もああいうシステムになってくれるといいなと思ってい我々は役者に比べると、はるかに書物は読んでおります。
しかし、役者さんが直感的にここはこう演じたらいいんじ

ました。
役者感覚、人が見ていても恥ずかしくない感覚でいると、ゃないのと言った時に、ああ、そうだなと感じることはた

やはり役者さんたちまで変わっていくんです。世阿弥といくさんあります。つまり知識量で劣っているとは感じられう能の創始者が「花鏡」という本の中で、「目前心後」とない瞬間がたくさんあります。言語になりにくい情報も実いう言葉を書いております。目前というのは目で前を見まは世の中には沢山ありますので。我々は経験則で、歌舞伎す。心を背中に置いて見ます。ちょっとやってみましょう

役者はもう３つのころから舞台を踏んでいますから、すばか。心、背中の後ろにある心で自分を見て、美しい背中をらしい方は本当にすばらしいですよ。

作りなさいというのを世阿弥は言ったんですね。目で前をそのように、人間というのは書物以外の情報を摂取することによっても、我々の脳というのはフル回転されていき見ながら、背中の後ろにある心で自分をちょっと見てみてください。そうすると、背中の線がよくなります。

ますから、人間的にも磨かれ、人格が陶冶されるケースは

こうやって世阿弥は、すごいですね、12 世紀の段階でたくさんあるというふうに実感しております。非言語情報

これに気づいた日本人がいる。それ、まだ日本は生かされを強化するだけでも、我々は非常に理性的な生き方をするていないんですね。世界で最初の演劇論の本が世阿弥なんことができるのではないかなと思ったりします。

ですけど「離見の見」。これは我見の見と離見の見と言い心を開く、これは相手にオープンな印象を与えるというまして、我見、自分の目で見ている社会がある。その自分ことですね。肩をちょっと開いてあげて立ちます。それかを離れて見ているもう一人の自分がいる、これが離見の見ら、足、よく女性の方、足をお見合い写真なんかこうやっなんですが、離見の見で自分を見なさいと言っているんでて閉じていますが、スーパーのチラシなんかを見ていただ

す。誰から見ても恥ずかしくない自分でいなさいというこ

けるとわかるんですが、女性のモデルさんは必ず開いてとなんでしょう。これ、すばらしい考え方だと思うんです。

立っています。閉じると相手の心が入っていきにくいので、声を豊かにモノトーンでしゃべらないと書いてあります

実際は開いてもおかしくない立ち方をすると、相手の気持が、私自身も演出家ですから、役者にはだめを出すんです

ちが入ってきやすいんですね。腰に力感がないとどうしてけど、自分はなかなかできません。声ののどの奥のところも不安定に見えますので、立ち方として、多分先生たち、を広げてあくびをした時の感覚でしゃべると、低くていい講義をなさる方、腰に力感のある立ち方をすることによっ

声になります。あくびを、「あー、あー、あー」としますと、て、ああ、地に足が着いているなというイメージを相手にのどの奥のところに空洞ができます。その空洞のできた感誘うことができます。

覚でしゃべってあげると、柔らかく相手を和ませる声にな

時々手のひらを見せます。ブッシュなんか、アメリカ大るんです。このトレーニングをしなさいと私は役者に言う統領になった直後はおどおどしていましたけど、やっぱりのですが、自分はなかなかできずにおります。難しいですね。

こうやって時々手を見せていきます。私に嘘はありません

声帯を満遍なく使う。声帯というのは使わないと退化しよという感じですね。こうバッとさらしても、もう自信のます。声帯というのは小さな筋肉ですから、使うことによある人というのは、バッとさらしてきますね。あのオバマって少しずつ強化されます。ということは、声帯は余りしは最初のころはさらしていませんでしたけど、最後のほうゃべらないと声帯が退化していきますので、やはりしゃべ

はもう堂々としたもので、全部見ろという感じだったですってあげないとだめなんです、筋肉ですから。したがって、− 141 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

「おはよう」と言うこととか「さよなら」とか「お疲れさま」、ている人を実験に使ったんですよ。それで、その人の前にこれも大きな声で言ってあげないと、声帯は退化していき

若い女性を置いてみたんですよ。そしたら、その人、自信ます。私たちは土・日にスポーツジムに行って体は鍛えてがなくてきょろきょろきょろきょろ相手の顔のところに目あげますが、声帯という筋肉は鍛えてあげません。

線を置いておけないんですね。要するに、自信がないんで我々、子供のころはあぜ道の向こうとこっちで、「おーい」

す。したがって外れていきます。

と、「５時になったらあそこで会おうな」と言っておりま

二者間の会話で初対面の方と目を合わせる時には、このした。今、東京でそんな大きい声でしゃべっている人は困あたりをこうやってグッと動かしてあげるといい。これをります。したがって声帯が退化しております。これ、使っ

社交ゾーンと言ったりします。ここをじっと見ていると、てあげないと伝わりにくくなります。伝達力が下がります。

３秒以上見ていると変な人と思われますから、それはだめ

言葉もイメージを持ちましょうということですね。言葉ですね。したがって、グーッと頑張りながら、粘りながらの意味だけではなくて、イメージを持ってしゃべりましょトレーニングする。実際にはうちの息子、長男坊は理科系

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で教えて、福岡と東京と二重生活がずっと続いておりまし

権力ゾーン、我々教師として教えたりしますと、上からた。東京に来るとみんな早口なんですよ。福岡に帰ります

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実験をやったんですけど、お見合いに何度も何度も失敗し章もちょっと格好つけると、余り格好をつけるとだめです− 142 −

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ちょっといい物を持ってあげると、立ち居振る舞いがよくなくて、一緒に生活するためにいや応なく似ていったんでなります。これはコーセーの方もいらっしゃるでしょうか

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せ似るとわかったら、もっと違う人と結婚しておけばよかとやはり違うんですよ。やっぱり自分の気持ちが変わってったなと思ったりもするんですが、やっぱりうなずき方とくるんですね。それが生活水準から離れ過ぎますと、やはか、感じ方とか生活がリズムを似させていかないと、一緒

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同じ職場の上司にある程度似ていかないと、そこの会社日々と違う、変われるんですね。
役者さんたちもメイクすると変われるんですよ。メイク、に適応することができませんので、実はその研究室のボス

やっぱり化粧というのは化けると書きますけど、メイクをにみんな似るんですよ。若い人、笑っていますけど、あなつけると違う自分になれるんですでね。自信がぐんとつくたの上司に似ますよ、何十年もいると。必ず似るんです。

んですよ。普段役者さんたちはこんな多くの前でしゃべれしたがって、研究室の主任の方は、みんなその方に似ます

ませんよ、怖くて。だけど、メイクをつけて、衣装をつけから、表情とかしゃべり方とかきちんと気をつけて、もうることによって、赤の他人になることによって、こんだけ

主任の先生がこうやっていつもこうしていると、その研究

バッと、自分じゃない人間になることによって人前へ出る

室みんなこうなりますからね。したがって、出世する方はことができるんですね。役者さんってすごいシャイな人がお手本となって、表情、挨拶、お願いいたします。そうし多くて、メイクなしで素っぴんで人前へ出ると、もう全然ないと、若い連中、みんな迷惑しますから。できることなだめな方がいらっしゃいます。やはりメイクというのは自らば、好きな人の真似をしましょう。そうすると似ます。

信をつけるためにも非常に重要なんです。したがって、そ

私自身、このしゃべり方、そんなにすばらしいと思いまれをオーデイナリーなものでなくて、いつもよりちょっとせんが、大学時代に尊敬できた先生がいらっしゃって、そ

高価なものをつけてあげると随分変わります。

の方に近づきたいなというしゃべり方ではあります。まだ信頼感は回数勝負と書いてありますけど、ザイアンスとまだ近づき方が足りませんが、その先生に近づきたいと思いう心理学者が調査研究したんですけど、接触の回数に比ったから、学位論文も書いたりすることができました。や

例して好意も増すんですね。したがって、会う回数、目のはり少しずつ尊敬できる方に近づいていけば、姿勢とか表処理能力というのは非常に高いので、１回 0.5 秒で相手を情とかアクション、そういうのも変わっていくんだと思いジャッジします。ということは、0.5 秒の回数を増やしてます。

あげることで、信頼感も増していくということなんです。

これは役者さんが成長するからそう思うんですが、これ

今、メール社会ですから、確かにメールは便利です。しは観世清和さんという能の本家といいましょうか、能の家

かし、メールの処理能力、メールを目で見て処理する能力

元の言葉なんですけど、能というのはもう観阿弥、世阿弥に比べるならば、私が今こうやってしゃべっておりますが、の時代、1200 年代に一つのスタイルが完成されて、同じ私という人間をどういう人間か弁別する処理能力ははるか

台本を８世紀も９世紀もやり続けているんですね。そうすに高い。私が書いた本を１冊読んでいただくよりも、このると、同じことだから飽きるのではないかと思うんですけ

男の言っていることは信頼に値するかどうかは、はるかにど、そうじゃなくて、型どおりのことをやればそれでよい処理されているのではないかと思うんです。

のだと惰性に流れてしまうと、そうなると型どおりの空虚

あと、数分後に、ああ、あいつはやっぱりだめだったな

な形式だけが残るということですね。単なる形式は心に訴というふうに思われるかもしれませんが、回数と比例する

えかけてこない。同じ言葉でも魂を揺さぶる言い方と揺さということになりますので、いろんな条件で機嫌のいい時、ぶらない言い方がある。

悪い時もひっくるめて、その方の条件、いろんな条件で回役者さんたちは同じせりふを東京公演だけだと 30 ステ− 143 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

ージ、全国ツアーなんかをやりますと 100 ステージぐらい

頑張らない。アメリカ、皮相ということではなくて、もの同じせりふをしゃべります。しかし、胸を打つしゃべり方

すごいパッションですね。もう鳥肌が立つそうですよ、オをするならば、新鮮な心を持ったしゃべり方をするならば、バマが演説をバーツとする時には。もう全くもって、この初めてしゃべるように、初めて聞く人に伝わるようにしゃぐらいの人数だったらみんな感動してしまうんだそうです

べれば、その言葉は伝達力が上がるということなんですね。

ね。だから、私はとてもじゃないけど大統領になれないん

そして、その感覚は気持ちとか心がけといった皮相なもですね。そのくらい停滞と惰性をぶち壊すぐらいしゃべるの、この皮相というところが大事だと思うんですけど、最んですね。

近ちょっと私、オバマがマイブームなんでオバマの例えが日本の歌舞伎社会だと市川猿之助さん、もうかなり体の多いんですが、あの人は動かしますよね、ガッ、ガッ、ガ具合が悪いですけど、ものすごいエネルギーでしゃべりまッとこう。もちろん敵も作ると思います、
あれでは。しかし、す。そうしないと人の胸を揺さぶらない、人の魂に火をつ

同じ言葉をどうしゃべったら相手に伝わるかということをけないんですね。恐らくすべてのコミュニケーションとい真剣に考え、恐らくヒラリーとやっているころから、側近

うのはそうではないかなと思うんです。そのくらい力強いが教えたんだと思うんですね。

生命力にほかならない。これがコミュニケーションなんだ

日本も私も随分あちこちに呼ばれて、政治家の方たちとかにレクチャーしたりしに行くんですよ。だけど、それでと思うんです。
私は演劇をやりながらこのようなことを考えております。

も効かないんですよね、日本って密室で総理が決まるから。

先生たちは研究ないしはいろんなことで新しい停滞とか惰

だめなんですよ。結局テレビというか、大衆に支持されな性を打ち破られて、新しい研究をなさって、社会の役に立ければリーダーになれないのだという社会を作らない限り

つ研究をなさっていただきたいと思います。

− 144 −

コスメトロジー研究雑感

平成 18 年度

研究助成

コスメトロジーからケミカルバイオロジー・次世代医薬品開発へ
水上進

私は現在工学部に所属しているが、もともとは薬学部のミカルバイオロジーの中にも色々あるが、「生体の機能を出身なので薬や化粧品について考えることが多い。「薬学」

化学的ツールを用いて非侵襲的に（周りに影響を与えずと「コスメトロジー」は一見近い学問分野に見えるが、「薬」に）解析する」研究がある。これは生体分子のネットワーと「化粧品」の製造において基礎となる学問は、薬が主に「生クを保った状態で、生体分子の機能を明らかにすることを

理活性を持つ低分子の化学」なのに対して、化粧品では主目的としている。生体を酵素反応など個々の生化学反応がに「生理活性を持たない高分子の化学」という点で、その組み合わさったシステムとして考えることで、生命をより出発点から大きく異なっているように感じる。現代のコス

本質的に理解できると考えられている。このような研究でメトロジーにおいては、「お肌に栄養」や「アンチエイジ

は、細胞や生体の応答を可視化するセンサー分子が多用さング」などの何らかの生理作用を持たせるような薬学的視れるが、それら自身の生理活性や毒性がしばしば問題とな点も大事だが、同時に本来の化粧品の特徴であった「生理る。そこで、化粧品開発の歴史で積み重ねられてきた「生活性を持たない」点を、薬学をはじめとする周辺分野へ利理活性を持たない」材料をこれらのセンサー分子と組み合用する視点も重要であろう。

わせることで、より生体に影響を与えない測定手法開発がその周辺学問分野の例を挙げるなら、「ケミカルバイオ今後ますます注目されると予想する。不必要な生理活性をロジー」がある。この言葉は、化学を用いて生命現象を解抑えるという点は、そのまま医薬品開発の副作用低減にもき明かす学問分野と定義されている。ここ数年にわかに注繋がり、コスメトロジーは次世代医薬品開発のキーテクノ

目されているが、その起源は古く、黎明期の有機化学も今

ロジーになるだろう。

（大阪大学大学院工学研究科）

で言うところのケミカルバイオロジーにあたるだろう。ケ平成 18 年度

研究助成

鏡よ鏡、かべの鏡。この国でいちばん美しいのはだれ？
渋谷

いつの世も女性は美しくなりたいと思う。それを助けよ

雅明

ながら、お化粧しているのだろうか。ひょっとして鏡に向うとするのがコスメトロジー研究であり、非常に応用に志かって、向した研究であると思っている。今回申請した私の研究は、「鏡よ鏡、かべの鏡。今日の私のお化粧の出来具合はどう

整髪料に用いるツバキ油に含まれる微量成分のトリテルペ

かしら？」

ンの生合成研究という極めて基礎的な研究である。コスメと聞いていたりして。

トロジー研究分野に含まれると判断していただけたのは、その時、鏡が、非常に光栄である。研究助成をしてくださったコスメトロ「今日の出来具合は 80 点。アイラインの引きかたがイマジー研究振興財団に、
ここであらためて深謝する次第である。

イチです。アイシャドウの色のチョイスがなっていません。
」

さて、多くの女性はコスメトロジー研究に何を求めるのとしゃべりだしたらどうだろうか。あるいは、カーナビのように、であろうか？

「まず、ファンデーションを盛って、……、目的地付近で

グリム童話の一節にある、「鏡よ鏡、かべの鏡。この国でいちばん美しいのはだれ？」す。ガイドを終了します。」と、たずねると、鏡が、と鏡がお化粧をガイドしたら女性は喜ぶだろうか？そばを「女王さま、この国でいちばん美しいのはあなたです。」

通りがかった女子学生に聞いてみた。答えは、と答え、女王さまが自己陶酔に陥るシーンを思い出した。

「そんなのあったらいいんじゃないですか。アイラインを女性がお化粧をするときに向かうのは鏡である。何を考え引く位置が、鏡に映った私の顔の上で点滅したら、とって− 147 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

も便利かも。ドラえもんの道具みたい。
」

野になるのかもしれない。あるいは私が知らないだけで、であった。

極秘裏にもう開発が進行しているのかもしれない。
（東京大学大学院薬学系研究科）

お化粧ナビの開発も幅広いコスメトロジーの研究の一分

平成 18 年度

研究助成

本研究成果のコスメトロジーに及ぼす影響
織田博則

フロンによる成層圏オゾン濃度の減少は地表に到達する期される。これら化合物を化粧品に使用した場合、肌や人

太陽紫外線の増大を招き、地球上の生物に多大な悪影響を体に対する影響は小さく、フェニルエステル系紫外線吸収剤

及ぼすことが予測される。そのため近年、紫外線による皮の紫外線カット機構は、当初紫外線 C 波を吸収し、光フ膚障害を防御する意識が高まってきた。ＵＶカット剤は日リース転移を起こし、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤を生焼けを防止することから、化粧品分野では古くから取り上成し、その紫外線カット剤が A 波、B 波を効率よく吸収する。

げられている。しかし、一重項酸素脱活性基を有する紫外また、化粧品に使用されている色素は可視光を吸収し、線カット剤の合成は全く見られていない。ここでは、可視活性酸素種である一重項酸素を生成し肌の劣化を促進して光照射による化粧品用色素の自己増感性一重項酸素の脱活いる事は以前から良く知られている。この活性酸素種（一性化と、有害紫外線 A 波、B 波からの肌の保護、ならび重項酸素）を効率よく不活性化するのが一重項酸素脱活性に化粧品用色素の光安定化を目的として、一重項酸素脱活化剤であり、ここに合成した一重項酸素脱活性基を有する

性基を有するフェニルエステル系紫外線カット剤を新規に

紫外線吸収剤は、肌の日焼けを防止するだけでなく、化粧合成した。

品用色素による色素増感性一重項酸素から肌を保護する機

新規化合物はフェニルエステル系であるため生体内分解能も兼ね備えている夢の化粧品添加剤になるかも知れない。

が可能で、人体に対して非常に優しい化合物である事が予（大阪教育大学教育学部）

平成 18 年度

研究助成

毛の成長周期の制御に関する研究について礒田博子

毛の成長周期の制御に関する研究は、現在世界中で盛ん

び脱毛部分の皮膚での発現量比較、④以上でピックアップに行われており、年々分子生物学的手法を取り入れたもの

した因子の培養細胞への添加による増殖活性評価、⑤マウが数多く見られるようになってきた。しかしながら、ごくス個体皮膚への投与による毛周期への影響評価、等が挙げ

最近までは医学系の研究者が主に研究を行っていた背景もられ、これらを組み合わせることにより毛周期制御機構解あり、分子生物学的コントロール下のデータは少ない。ま明への研究が行われている。この研究方法の結果明らかとた逆に分子生物学者が行っているデータを眺めると、皮膚されることは、もともと皮膚において発現の認められてい科学としてのコントロールがきちんとなされていないもの

る因子の作用機序等であり、未知の遺伝子産物による発毛も少なくない。したがって、現在までに報告されているも促進因子はターゲットに入っていない。すなわち生体内でののうち、分子生物学的・皮膚科学的信頼性の高いものはのよりマイルドな作用物質のみに絞られるため、画期的な

ごく限られた研究室から出た報告に限定されると言わざる発毛因子の特定は、現時点では未だなされていないのが現

を得ない。

状である。

また、現在主に用いられている研究方法としては、①各毛成長段階における網羅的遺伝子発現定量・比較、②各成

様々な皮膚機能科学研究が体系化され、コスメトロジー
が学問として深化していくことを期待している。

長段階で特徴的な発現を示す因子の特定、③正常皮膚およ− 148 −

（筑波大学大学院生命環境科学研究科）

コスメトロジー研究雑感

平成 18 年度

研究助成

使用感は個人により差があります小田功

化粧品の値段にはピンからキリまでありそうなことは，

こうして見ると，化粧品はオーディオ機器と同様，実用化粧品に興味のない私でも気づいていた．そこで妻に確認品というよりも嗜好品の要素が強いように思う．ひいきのしたところ，化粧水の例では数百円の物から高い物では数ブランドがある点も，オーディオ機器に似ている．確かに万円もするという．同種の製品で 100 倍以上も価格差があ

物を購入する際，男性は競合機種の諸元を比較してから購るというのは，驚きである．高価な化粧品も安価な化粧品

入するが，女性は感性で購入することが多そうだ．そんなも，原料にそれほど差はあるまい．おそらく，原価自体中，某フィルム会社が化粧品に進出したが，男性から見るは大差ないのではなかろうか．もっとも，高価な化粧品は，と技術を前面に押し出した説得力のある広告を展開していそれなりに研究開発費がかかっているとは思うが．

るように思う．果たして，このような広告が世の女性に受工業製品の中で価格差の大きい代表格は，オーディオ機

け入れられるか，大変興味深い．

器であろう．さすがに，安価な一体型ラジカセと 5 万円く計測を生業にしている身としては，化粧品の性能の定量

らいのミニ・コンポの音質の差は歴然としている．しかし的な評価をしてみたい．そのような装置を開発して，価格それ以上の価格になると，私には正直，あまり音質の違いの差がどの程度，性能に反映されているのかを，調べてみが分からない．もはや好みの問題である．ただ“音楽を聴たいものである．たとえ“使用感は個人により差”があっく”ということが目的の実用品であれば，高価なオーディ

たとしても，客観的な評価ができれば，化粧品を売る側とオ機器は売れるはずもない．しかしながら，高価格少量生しても説得力があろう．なお，妻の話では，高価な化粧品

産で商売が成り立っているのは，オーディオ機器がいわばは，やはり効果があるということである．
（木更津工業高等専門学校機械工学科）

嗜好品だからである．音作りが感性に合えば，たとえ高価であっても購入する人がいるのだろう．

平成 18 年度

研究助成

糖鎖の研究とコスメトロジー
佐藤智典

若い時には感じなかったのに、年を重ねる毎に感じるの

質中のオリゴ糖鎖の研究が面白くなってきている。メラニは体力の低下と皮膚の老化である。体力はウオーキングやンの様な糖タンパク質の糖鎖も機能発現に大きな役割を果

ジョギングを行なうことで維持できているが、皮膚の老化たしている。細胞が分化すると細胞に発現している糖鎖構を防ぐ手だては正直なところ何の努力もしていない。皮膚造が変わってくることも知られている。細胞の表面を覆っの老化を隠すために、化粧をすることも顔のエステをするている糖鎖は、まさしく細胞の顔であり、細胞の性質を反こともない。しかしながら、男女問わず、元気な肌を保ち映している。ヒアルロン酸以外にも、元気な肌を保つためたいと言う意識は高まっているようである。従来の化粧との秘密が細胞に発現する糖鎖が関与していても不思議ではいうことでなく、若々しい肌を保つために細胞の機能解析ない。細胞に異常があった時に改善してくれるタンパク質に基づいたコスメトロジーの考え方が今後は飛躍的に進歩や遺伝子などのバイオ医薬品を細胞内に送り込む DDS にして行くと思われる。

も糖鎖は非常に有用である。特にヒアルロン酸やキトサン

私が糖鎖の研究を始めてから約２５年になる。多糖を用といった多糖は、DDS において面白い素材であることがいたドラッグデリバリーシステム (DDS) の研究は２５年判ってきている。糖鎖の機能を理解し、さらにその生合成間も続いておりライフワークになりつつある。最近、細胞を制御する研究は、コスメトロジーの分野でも発展するとに発現している糖鎖の構造や機能に関する研究が飛躍的に考えられる。

進んできており、細胞に発現している糖脂質や糖タンパク− 149 −

（慶應義塾大学理工学部）

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009平成 19 年度

研究助成

コラーゲン…化粧品？ 健康食品？ はて、何？
小出

私はプロの研究者になってからずっとコラーゲンを中心

隆規

正直、昨今のコラーゲンブームにはちょいとやり過ぎの感があります。

にすえた研究をおこなってきました。
（以前どこかに書きましたが）コラーゲンの研究をしている、というとほとんどの場合「化粧品のご研究ですか？」とか「食べたら健康にいいんですか？」云々という話の展開になってしまいます。つい先日もある会合で「てっち曰く「天然だからからだに優しいコラーゲン」
人工コラーゲンがないだけでしょうが…
曰く「体の中からコラーゲンを補いましょう…コラーゲ
ンペプチド」

り」が出てきたとき、鍋をつくってくれているお店の女性

類似のパターンとして、筋肉増強ミオシンペプチド、とが「ふぐのコラーゲンがしみ出して、お肌しっとりぷり

か、受験勉強に海馬スライスとかいくらでもできるなあ…

ぷりになるんですよ…」としきりに説明をしてくれました。

曰く「植物性コラーゲン配合の化粧品…」

周りの連中は私がコラーゲンの研究をしているのをよく知

きわめて独創的で声もでない。

っていましたので、吹き出しそうになるのを皆こらえてい

まあ、いまのところ健康被害は出ていないようなのでべるようでしたが、私もムキになって反論しそうになるのをつにかまわなければいいのですが、まじめに研究している

やっとこらえて、その夜はにこにこ和やかにてっちり→ふものとしてはなんとなく寂しい気持ちもするのです。今回

ぐ雑炊を堪能しました。しかし、翌日になっても私の肌は

初めて化粧品に関連する財団から助成をいただきました。

しっとりにもぷりぷりにもなっていないのです（当たり前

こちらはかなりうれしいことでした。
（早稲田大学理工学術院）

だ！）。

平成 19 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
大槻崇

私は，大学院修士課程までは農学分野で，大学院博士課

はなく , 整容的な意味合いを持っていると言われています．

程から現在までは薬学分野で研究を行っています．特に，また男女共に脱毛症に罹患した人の喪失感，QOL の低下

薬学分野に移ってからは，主な研究テーマの一つとして「がは著しいものがあります．このような背景から，私は，育ん疾患関連シグナルを制御する天然物の探索とその作用機

毛促進に有効な天然素材，天然化合物の探索に興味を持ち，序の解析」を行っております．その研究の一環として，大育毛，発毛への関与が明らかにされてきている Wnt シグ

腸がんにおいて異常亢進している Wnt/b-catenin シグナル

ナル伝達機構に注目した研究を計画いたしました．幸運に伝達経路を標的として，本シグナル経路の転写因子であるも，貴財団の研究助成に採択され，計画した研究を遂行す

TCF/b-catenin の転写活性化を阻害する活性天然物の探る機会を賜りました．本研究では，2 種の植物より計 3 種索を行い，目的とする転写活性を阻害する植物エキスを発の活性化合物の単離に成功いたしました．助成期間は終了

見しています．一方，逆に転写を活性化するエキスも見いいたしますが，今後も本研究を継続し，得られた活性成分

だされました．このような転写を活性化するものを何とかの育毛作用に関する有用性を評価し，育毛剤原材料として利用できないものかと考え文献調査を行ったところ，Wntの利用を検討していきたいと考えています．最後に，本研シグナルが毛包形成（毛髪形成）に関連することに気付き

究に対し研究助成を賜りました財団法人コスメトロジー研ました．近年，高齢人口の増加や環境的ストレスなどによ究振興財団に深く感謝申し上げます．

り，薄毛，抜け毛に悩まれている方々が多くなっています．
ヒトの頭髪は単なる生理的機能を持った器官としてだけで− 150 −

（千葉大学大学院薬学研究院）

コスメトロジー研究雑感

平成 18 年度

研究助成

コスメトロジー研究振興財団研究助成金をいただいて
天谷

この度、コスメトロジー研究振興財団研究助成金をいただきましたことを心から御礼申し上げます。日本の公的な雅行はできません。研究は継続されているにも関わらずです。
これらの矛盾な点を、本研究助成金は埋めてくれます。

研究費は様々な制約があり、すべての研究、学術活動をサ

本研究課題は、GFP（Green Fluorescence Protein）をポートするのは困難であるのが現状です。例えば年度問題

用いて、細胞接着分子を可視化するものです。その GFP が、です。４，５月に海外で学会がある際に、少しでも安い航

昨年、ノーベル化学賞の受賞対象となり、日本人である下空券を購入するために、数ヶ月前に予約をします。ところ

村脩博士が見事受賞しました。日本人としては、本当に嬉が、安い航空券は、例えば３日以内に発券し、購入しなけしいことです。しかし、手放しで喜べないのは、日本で行

ればいけません。すると、前年度の 11 月、12 月に購入し、った研究でないからです。もちろんすべての研究がノーベ

受領書は前年度のものになります。領収書と実際に使用す

ル賞級な訳ではありませんが、独自性の高い、世界をあっる時期が年度をまたいで異なるという理由のため、この場と驚かすようなわくわくする研究成果が日本人により、日合公的資金では購入が困難になります。マウスの飼育費も本からでることを心から祈念しています。そして、できるそうです。マウスは、あたりまえですが、通年で飼育が必だけ多様性に富む研究成果をだせる集団が、強い集団と言要です。３月 31 日まで、マウス飼育費はかかります。とえると思います。コスメトロジー研究振興財団が、そのよころが、大学事務局に提出する伝票の締切は３月上旬です。

うな研究活動を今後も支えていただけることを願っていますると、３月中のマウスの飼育費は公的資金から出すことす。

（慶應義塾大学医学部皮膚科学教室）

平成 18 年度

研究助成

治療と美容のターゲット：皮膚を考える 〜コスメトロジーの重要さ〜
深見希代子

アンチエイジング、美白、シワ・シミが消える、などをを伴う免疫応答の異常が見られたりと今でも解析には事欠

キャッチコピーにした化粧品が多々売り出されている。そかない。特にコスメトロジー研究振興財団からの御支援で、れらの効果が如何程かはわからないものの、日々鏡に向か

我々の遺伝子欠損マウスとヌードマウスの毛形成におけるいため息をついている者としては、つい手が出て購入してシグナル伝達の共通性を明らかにできたことは、大きな成しまう。であるので、化粧品に対する興味は非常に強い。

果であると考えている。また免疫系についても、白血球数

我々が皮膚研究を始めたのは、細胞膜直下の情報伝達系が顕著に増加し、貪食能の低下が見られるなどの新たな知の１つであるリン脂質代謝に関する酵素の遺伝子欠損マウ

見を最近見出してきており、機会があれば是非その成果もスが毛のないマウスとして生まれたことに端を発する。約

報告したい。

８年前である。ヌードマウスと同様な外見はインパクトが毛のない方々の悩みを解決できるかという質問をよく受大きく、遺伝子解析をしなくとも遺伝子欠損マウスと判断けるが、ヒトとマウスとは大分毛の形成機構が異なることできることもあり、当初は非常にわかりやすいと喜んだが、もあり、すぐには難しい。しかし、現在市販されている育解析はどうしてどうして、手放しで喜べる程簡単ではなか毛剤のターゲットタンパク質との関連性もあることから期った。特にリン脂質代謝の異常が何故、無毛になるのかの待は大きい。また最近、メラニン色素の表皮細胞への輸送

関連性がわからないことから、成果を一流雑誌に投稿してにも関与することが示唆されており、美白をターゲットには蹴られ、と気落ちすることも多かった。それでもこの遺できる可能性も出てきている。仕事と興味が一致できる有伝子欠損マウスの表現型はとても面白く、毛がないこと

り難さを感じている。

以外に、体が小さくて痩せであったり、皮膚の炎症の亢進− 151 −

（東京薬科大学生命科学部）

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009平成 18 年度

研究助成

医学研究からコスメトロジーへの橋渡し
稲垣

豊

皮膚は全身諸臓器の中でも、コラーゲンをはじめとする改善に留まらず、コンプレックスの解消や自信の回復とい

細胞外マトリックスの含量が最も多い組織のひとつである。

った精神面に大きな影響を及ぼすことを再認識した。この

その適切な発現は、皮膚の生理機能の維持や創傷治癒にお点は、毎年の研究助成において「精神、文化に関する分野」

いて重要であるが、何事も過ぎたるは及ばざるがごとしでとして重要視されている。

あって、コラーゲンの過剰な発現はケロイド形成や皮膚の２点目は、冒頭に記載した点にも関連して、これからの線維化を引き起こす。若い瑞々しい肌を手に入れたいと望

コスメトロジーでは効果と安全性の両面において医学的裏

むのは、人類が誕生して以来の永遠の願いであり、新聞や付けが一層必要とされることを痛感した。医学において、雑誌の広告欄には「コラーゲン」や「ヒアルロン酸」といEBM（Evidence-based medicine）という言葉が重用されったマトリックス成分名が踊っている。筆者が専門とするて久しい。自然科学の１分野である医学には evidence が結合組織学あるいはマトリックス生物学の立場から見ると、あって当然だが、EBM という言葉が強調されたこと自体、にわかには信じがたいものや、時には眉をひそめたくなる

人間を相手にする医学の不確実性や、「医学」と「医療」

ようなものが存在するのもまた事実である。

の違いを物語っている。コスメトロジーの分野においても、

今回、コスメトロジー研究振興財団からの研究助成を受

化粧品を用いた人の主観が占める割合も大きいと思われる

けて、これまで縁がなかったコスメトロジーという学問にが、それと同時に客観的裏付けとなる科学的根拠が今後ま接して、新たな発見とともにいくつかの点について考えさすます重要視されると思われた。今回の助成を契機として、せられた。

皮膚の創傷治癒や線維化研究を通じて、医学からコスメト

１点目は、表彰贈呈式での記念講演を拝聴し、化粧が皮

ロジーへの橋渡しに少しでも貢献できることを願っている。

膚科疾患や手術後の傷を隠すことで、単なる見かけ上の（東海大学医学部臓器線維症研究ユニット）

平成 18 年度

研究助成

私のコスメトロジー観椛島健治

私個人は化粧品を用いるわけではないので、あくまで接触皮膚炎を併発してしまったのです。ぽりぽり掻いてい研究者側の立場でコスメトロジーを考えてきました。とこたら炎症が強く起こり、あわててステロイドを塗りました

ろが、最近になって、自分の頬にできたシミが徐々に拡大

が、その部分が色素沈着を起こしてまたシミが復活しつつしているのが気になり始め、ついに、ハイドロキノンクリあります。

ームを入手。早速試してみることにしました。確かに、徐々サイエンスに基づき化粧品を捉えていくコスメトロジにシミが薄くなり、ある意味初めて「美しくありたい」とー（化粧品学）は今後益々発展していかなければならない、願う乙女心を共感することができた訳です。しかしながら、ということを、身をもって体験した次第です。

話はこれで終わりません。徐々に、ハイドロキノンを塗った部分が痒くなり始めました。ついにうわさに聞いていた− 152 −

（京都大学医学研究科皮膚科学）

コスメトロジー研究雑感

平成 18 年度

研究助成

今研究成果のコスメトロジーに及ぼす影響小島肇夫

本研究は予想以上に培養表皮モデルに対する最適な酵素

ることになろう。国際市場の中で欧州の問題に対応しなが処理条件および溶媒濃度の決定に手間取り、度重なる検討

ら、どのように日本の化粧品の安全性を担保し、業界のスにより予算が底を突き、申請の際に提出した計画の１／４タンスを守っていくのか難しい時代となった。

程しか成果をあげることはできなかった。実験の見積もり

安全性試験の一分野である遺伝毒性試験において、本研究を参考に化粧品の安全性確保に取り組む研究者の奮起をの甘さを陳謝してお詫びしたい。
現在、化粧品業界は 2009 年の欧州における動物実験禁止問題に直面しているが、安全性試験についてはまだ動物実験を回避できる段階にない。今後、徐々に影響が出てく

期待したい。
（国立医薬品食品衛生研究所
安全性生物試験研究センター 薬理部新規試験法評価室）

平成 18 年度

研究助成

コスメトロジーに影響を及ぼす本研究の展開
田中勝

この研究は治療の QOL への影響を評価し，同時に，化ることがある．ゆえに，治療がつらいものでなければ，患粧による補助効果も併せて検討するという，今までにない者サイドとしては，結果以上によく感じることがある．

研究の方向性を探った．その結果，データは少ないが，化色調の淡い老人性色素斑の画像定量を目指したが，客観粧が女性の行動や精神に及ぼす効果やストレス改善に何ら的変化をとらえるということは重要な課題である．人間のかの効果を上げるという可能性が示唆された．しかし，こ記憶はあいまいであり，患者も医師も，主観的に惑わされ

れは個人差が大きいということも事実である．また，客観ている可能性が高い．また，他のさまざまのデータとの比的シミ改善と QOL 改善には，人によって異なる微妙なギ較もしやすいので，データには誤差があるものの，今後

ャップがあった．まだ症例が少ないため，この結論には，の実用性はかなり高いものではないかと考えている．今後，今後のデータ蓄積と統計解析が期待される．ある患者で自動的画像切り出しと皮膚科医の手動切り出しに差がない

は，治療後には化粧をしなくても QOL が改善されていることも検討しなければならない．皮膚科医の判定とコンピが，別の患者では治療では QOL に変化はなくとも，化粧ュータの判定を定量的に比較し、統計学的に解析することにより QOL が改善するという微妙な意識の違いを，治療が必要である．色素沈着性病変に最も合った自動抽出プロがもたらした可能性が示唆され，たいへんに興味深い．

グラムを完成する必要がある．当研究が発展し，今後のコ

今回の研究では，色素斑の治療による客観的な改善とスメトロジーにおいて，客観的定量手段の１つとして広く

QOL の改善は必ずしも関係しなかった．すなわち，シミ

実用的に用いられるようになることを願い，さまざまな分

改善がわずかでも，治療自体が気分的に QOL を改善した

野との共同研究を展開していきたい．

のかもしれない．これは皮膚疾患の治療にも共通する概念である．つまり，治療結果が不変でも治療に対して満足す− 153 −

（東京女子医科大学東医療センター皮膚科）

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009平成 18 年度

研究助成

コスメトロジー雑感近藤昌夫

昨今のコスメトロジー研究の進展に伴いしみ・そばかという旧概念から「皮膚バリア＝角層バリア＋重層上皮細す・しわなどの生成メカニズムの分子レベルでの理解が進

胞層バリア」という新概念が提唱された。しかしながら、み、ハイスループットスクリーニング技術およびコンビナ

claudin バリア制御技術開発に向けた試みは緒についたば

トリアルケミストリー等との融合と相俟って、多種多様なかりであり、未だほとんど進展していない。

美白成分やアンチエージング成分が開発されつつある。こ

本研究では、独自の生体バリア制御研究を有効活用し、れら各種成分の実用化に際しては皮膚内への侵入が不可欠

初めての重層上皮細胞層バリア制御法の確立を試みたもの

であるものの、元来皮膚は生体内外を隔てるバリアとしての、現時点で制御技術の創出には至っていない。本研究終

機能しており、ここにコスメトロジー基礎研究の実用化に盤に現状の課題が顕在化し、直ちに課題解決に向けた予備

向けた難しさがある。

検討を進め幸いにも改善策を構築することができた。今後

長年に渡り角層が皮膚バリア機能の本体であると考えられており、化学的手法のみならず物理的手法を含めて多方は、本研究成果を有効活用し、コスメトロジー基礎研究の実用化に資する基盤技術の創出を図る予定です。

面から角層バリア制御法の開発が進められてきた。2002

最後になりましたが、当該課題の推進に際して、グラン

年、京大月田グループにより皮膚の重層上皮細胞層もバ

トサポートを賜りました財団法人コスメトロジー研究振興

リア機能を担っていること、このバリア機能の本体が財団に衷心よりお礼申し上げます。
（大阪大学大学院薬学研究科）

claudin-1 であることが示され、「皮膚バリア＝角層バリア」

平成 18 年度

研究助成

コスメトロジーと掻痒性皮膚疾患
安東嗣修

近年，アトピー性皮膚炎などの皮膚疾患を抱える患者がく多大なストレスを導きだす。特に，顔面における掻破は，増加している。また，特に女性ではこの様な皮膚疾患に加寝ている合間にも気付かないうちに起こっており，外見え，化粧品による IV 型アレルギーを発症する場合も増え

上問題となるような状態（炎症等）を誘発する。この様なてきており，化粧品が使用できないあるいは，使用できる状態では，化粧品の使用は難しい。更に，皮膚疾患のみな化粧品に限りがあるといったような状態となっている。当らず，化粧品自体によっても同様な事態を生じることがあ

研究室配属女子学生の多くが，アトピー性皮膚炎を含むなる。そのため，国内はもちろん，海外の化粧品関連企業かんらかしらのアレルギー性皮膚疾患を伴っており，化粧品

らの共同研究依頼や痒みの評価法の技術指導依頼がある。

の使用に抵抗感をもっている。その為，アレルギーのこと，

最近では，機能性化粧品ということで，従来の美を追求し皮膚のことを研究したいとうことで，当研究室を希望するたものだけでなく，皮膚の保湿や健康も意識したものが多ようである。

く開発されてきている。このことは，掻痒性皮膚疾患患者

当研究室の研究テーマの一つに痒みの発生機序の解明がの使用する化粧品の選択範囲の拡大につながる。

ある。痒みは，上記皮膚疾患の主要な症状のひとつであり，今回，コスメトロジー研究振興財団の助成を受ける機会

痒みの抑制がこれら皮膚症状の改善につながることが臨床に恵まれ，コスメトロジーを当研究分野に生かす糸口をつで明らかとなっている。痒みは，皮膚に付いた異物を感知かめたことに感謝する。今後更に，コスメトロジーというし，掻き動作により除去するための警告信号のようなもの

学問分野は，皮膚という共通のターゲットを介して，医薬である。一方で，皮膚疾患の症状としての痒みによる掻破学分野と密接に関わっていくことを期待する。

は，皮膚の損傷ならびに皮膚炎の悪化を招く。したがって，
痒みの抑制は非常に重要である。痒みは，非常に耐えがた− 154 −

（富山大学大学院医学薬学研究部応用薬理学）

コスメトロジー研究雑感

平成 19 年度

研究助成

バリア？ シグナル？ それとも…?
村上誠

ホスホリパーゼ A2（PLA2）という単語を聞くと、生化

えなければならない。sPLA2 であるからにはリン脂質が学を少しかじっている者であればすぐに「炎症」とか「脂分解されることが引き金となって皮膚異常が発症するので質メディエーター」が頭に浮かぶであろう。しかしながらあろうし、実際に脱毛マウスの皮膚では特定のリン脂質の実際のところ、細胞外に分泌される sPLA2 と呼ばれるフ代謝に変化があることはわかったが、リン脂質分解のあとァミリーが体の中で何をやっているのか、全然わかっていで皮膚に何が起こっているのであろうか？

ないのである。何か新しい機能を見つけるにはどうしたら皮膚の脂質というと、表皮角質のバリア脂質を思い浮かいいのか…。単純な発想で sPLA2 群の各アイソザイムをべる。このバリアのおかげで、皮膚は水分の蒸発や外敵の片端からマウスに過剰発現させてみたら、思いも寄らない

侵入から守られている。この酵素はバリア脂質の成分のひことに、ある特定のアイソザイムを発現すると脱毛マウス

とつである脂肪酸の供給に関わっているのだろうか？それが誕生した。それまで皮膚のバイオロジーなど真剣に考え

とも、「PLA2 ＝脂質メディエーター」という既存概念にたことなどはなかったから、それ以来皮膚の病態生理学の沿って、皮膚ホメオスタシスを制御する新しい脂質メディ勉強を始めたが、その複雑かつ巧妙さを理解するのに頭をエーターのシグナルを調節しているのであろうか？はたま抱える毎日である。

た、環境から侵入してくる微生物の膜リン脂質を分解とし本研究を進めているうちに、sPLA2 − IIF という従来誰て感染防御に関わっているのであろうか？どの可能性が破も注目していなかった分子が皮膚に重要なアイソザイム本

綻しても、皮膚には相応の異常が生じるであろう。より視命らしいということがわかってきた。私が専門とする狭い野を広げてみると、実は脂質代謝酵素の変異が皮膚異常を基礎研究領域からの視点からすれば、大きな発見といえる。

生じる例は非常に多いのである。皮膚における脂質代謝のもしかしたら、この酵素の活性を調節する薬物が見つかれ

重要性を改めて認識するとともに、皮膚学の奥の深さを実ば皮膚の健康や美容にも役立つかもしれない、と夢が膨ら感している次第である。

（東京都臨床医学総合研究所）

む。しかし発想が先走りする前に、まずは面前の疑問に答

平成 19 年度

研究助成

コスメトロジーと動物実験
池畑広伸

今回助成頂いた研究では、紫外線の発癌性や光老化といの防護能を示す結果・数値が得られたとしても、問題はそう皮膚慢性毒性に対するサンスクリーンの防御性能を評価の防御剤が皮膚でもそのとおりの性能を発揮するとは限らするために、多数のマウスが犠牲となった。EU 域内ではない点にある。実際に皮膚に投与するとなると、防御剤を今年（2009 年）から化粧品のための動物実験は禁止され溶解・懸濁する溶媒の選択が重要であり、それが防御剤のると聞く。またある米国の化粧品会社では製品開発に動物

安定性や皮膚塗布時の分散性に影響し、サンスクリーンの実験を利用しないことをセールスポイントにしている。化

性能を左右する。他の化粧品との相性の問題もあるかもし粧品業界では動物実験代替法への移行が世界の潮流となっれない。また皮膚という特殊な構造を持つ組織の表面をコているようである。私が今回実施した研究も代替法で置きートして保護するというサンスクリーンの投与形態に基づ換えることが可能であろうか。突然変異アッセイ法にはバ

く問題も考慮しなければならない。したがってサンスクリ

クテリアや培養細胞を利用したものがいくつも開発されてーン個々の性能を評価するには実際に皮膚に塗って試すこいる。これらの方法で紫外線の突然変異を検出できることとがどうしても必要になる。

も実際に多くの研究で実証されている。しかし、である。

それでも近年では培養皮膚シートが販売されており、遺こうした代替法の実験系に紫外線防御剤を投与し、何らか

伝子工学で操作することにより突然変異研究用の培養皮膚− 155 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009も開発されるかもしれない。そうなれば今回開発したマウ

場合に起こるかもしれない副作用を見落としてしまう危険スを用いたアッセイ法もいらなくなるであろうか。しかし性が付きまとう。動物実験の優れたところは、こうしたこ

現時点ではまだそれは早計に過ぎると思われる。理由は紫ちらが予測していない生体側の反応まで、たとえそれがこ

外線に対する生体反応が単に皮膚という限られた薄い組織

れまで未知の現象であったとしても、検出し評価の対象との皮一枚に留まらないからである。皮膚は重要な免疫器官し得る点にある。紫外線による皮膚での突然変異誘発ひとのひとつであり、その機能は紫外線の影響を受けることがつにしても、細胞レベルの研究では知られていなかった組

知られている。また絶えず新陳代謝を繰り返す組織で、特織・個体レベルの反応により修飾を受けることを私たちはに紫外線でダメージを受けた後はそれが顕著になり角層が見出しつつある。炎症やかぶれのような急性反応について

一斉に落屑して新しい皮膚が再生する。紫外線量が多い場

は実験動物をとばして、直接人体皮膚でテストすればいい合は炎症を起こし火傷のようになる場合もある。炎症や免のかもしれない。しかし発癌性や酸化ストレス（光老化な疫に関わる細胞は身体の内奥から皮膚へ移動してくる訳だど）による慢性的皮膚毒性については人体を使う訳にはいし、皮膚再生には真皮の奥深くにある毛胞内の幹細胞が重かない。この場合はどうしても動物を使った安全性評価が要な役割を果たしている。こうした紫外線に対する生体反避けられないと考えられる。化粧品メーカーには、企業イ

応は現在の培養皮膚では再現できない。むしろ紫外線の生メージのために「動物実験撲滅」というイデオロジックで体反応は動物個体まるごとが関わる反応ととらえた方がよ

感性的な現在の潮流に迎合することなく、合理的・科学的い。

なコスメトロジーに基づく製品開発を目指して頂きたい。
（東北大学大学院医学系研究科ゲノム生物学分野）

代替法の利用は化粧品配合成分の特定の効能の評価には有効かもしれない。しかしその化粧品が生体に適用された

平成 19 年度

研究助成

本研究成果のコスメトロジーに及ぼす影響鈴木聡

今回メラノサイトにおける PTEN の欠損によって（たチノサイトにおける PTEN も抑制されて、角質層の増生

ぶん PI3 キナーゼ経路が活性化され）、白髪抵抗性となるや皮膚上皮の過形成から皮膚は、がさがさ・ごわごわ感がことを見出した。ロマンスグレイという言葉もあるものの、出てしまうであろう。さらに有棘細胞がんの危険性も高ま

白髪は外見から容易にわかる加齢現象であるために、コスる。

メトロジーの分野では重大なテーマである。さらに以前

コスメトロジーは、人の生活を豊かなものにし、生活の我々はケラチノサイトにおける PTEN 欠損が、角質層増質を高めることに大きく貢献することは間違いない。しか生、皮膚上皮過形成、毛髪の湾曲を認めることを報告してしながらコスメトロジーに基づいて市販される化粧品は危おり、これらもまたコスメトロジーの分野において非常に険性をもってはならない。
上述のように、我々の研究からすぐに白髪予防化粧品が興味ある現象であろう。
いつまでも黒髪を保つには PTEN の発現を抑制してメ生まれるというわけにはいかないが、今後 PTEN の下流

ラノサイトの細胞死ができるだけ回避されることが望まし分子を１つ１つ検索することにより、白髪形成のみに関与い。しかしながら、PTEN の発現を抑制すると発がん剤

し、腫瘍形成には全く関与しない標的分子を同定することに対する感受性が加速されてメラノーマ形成がおこりやすができれば、いつまでも黒髪であるという夢も可能となる

くなる。さらに現在メラノサイトだけで PTEN を抑制す

日がくるかもしれない。

ることは困難であり、外用剤で PTEN を抑制するとケラ− 156 −

（九州大学生体防御医学研究所／秋田大学医学部）

コスメトロジー研究雑感

平成 19 年度

研究助成

光計測とコスメトロジー
荒木

私の専門は光計測である。大学院の時代には、紫外線を勉

だ頑張らねばと思うこのごろである。

対象にした吸光測定に関する研究を進め、大学に職を得て光計測はかならずしも専用機器を用いるとは限らない。

からは可視光を取り扱った蛍光測定を行ってきた。最近は目による観察も光計測のひとつであるといえる。しかも大赤外からテラヘルツ域の光を扱っている。光は紫外―青―変高機能である。医師は患者の皮膚を肉眼観察することで緑―黄―赤―赤外―遠赤外…という順にエネルギーが小さ

形態情報と分光情報を瞬時に取得し、的確な診断を行う。

くなっていくが、この色順と人生とは同期しているように現存の光計測機器を駆使してもそれにはかなわない。しか思える。青春時代はエネルギーレベルが高く、気持ちも青し、肉眼観察の弱点は皮膚の内部まで見通せないことでああおしている。大人からは尻が青いなどと言われるし、反る。光計測のよいところは非接触・非侵襲である。この利発（散乱）も大きい。壮年になってエネルギーは少し衰え点を活かして皮膚内部の構造情報を得たいと思い、今回のるが、成果の蓄積が実りのある緑の季節をもたらす。しか

研究を行った。幸い各種レーザーが手に入ったので、報告

し 60 歳を迎えるともはや老境の入り口であり、赤い衣をしたように経皮で深さ 300 ㎛までのコラーゲン分布画像を着る儀式も待っている。そしていつかは終焉を迎える。そ取得することができた。安全性も十分に確保できた。次はんなことを考えると、赤外レーザーを使って皮膚を測りだ

ぜひ人の皮膚に関する in vivo 計測へと発展させたい。こしたのは自然の成り行きのようにも思える。それにしてもの一連の研究が皮膚科学に寄与することを願う。さまざま

コラーゲンからの発光は面白い。800nm の赤外パルス光

な世代の研究者が自身の色に基づく研究を創意工夫するこを照射して 400nm という青色光が得られる。これが非線とで、新しい彩（いろどり）が生まれる。これこそ「コス形現象である。中高年パワーを結集すれば若者同様のエネ

メトロジー研究」が目指すところであろう。
（大阪大学大学院基礎工学研究科）

ルギーが生まれるということか。我々団塊の世代はまだま

平成 19 年度

研究助成

コスメトロジーとは？
伊藤

敬

今回コスメトロジー研究振興財団から助成金をいただいいのではないだろうか。科学、特にバイオロジーが寄与すて、改めてコスメトロジーとは何かということを考えてみることが出来るのはどちらかと言えば前者ではなく後者でた。普段、基礎研究に盲進している身としては、毎日メラあろう。実際、科学技術が発達した現代では、美のためにノサイトを培養し、ディッシュが黒々としていくのを目の様々な処方が主に外科の技術を用いて行なわれている。今当たりにしていたとはいえなかなか難しい。Cosmetology

後さらに科学技術が進んでいくことで、コスメトロジーはの語源としては装飾技術の学問ということになるようだが、どのようになるのだろうか？例えば最近巷でも話題になる

実際の化粧品、美容技術は 2 つの方向性があるように思わ

iPS 細胞は自身の細胞一片からあらゆる細胞を作り出す可れる。一つは加工、つまり新しく何かを付け加えるもので、能性を持っている。もちろん主たる目的は医療と言うこと

マスカラ、マニキュアなどがこれに相当するだろう。こちになるが、コスメトロジーにも十分応用できるだろう。火らの方が語源には合っているように思える。もう一つは、傷の跡、取れないシミ、たるんだシワなど、、、あらゆるも若さの維持とでもいうのだろうか、主に肌を若く、健康なのと言ってしまうと一気に非科学的な雰囲気になってしま状態に留める努力である。面白いのは、前者は地域、時代、うが、数多くの応用例が考えられる。ヒトが見た目だけと文化によって大きく異なるのに対し、後者は（おそらく）は言え念願の不老不死を手に入れることができる日も近い

有史以来、常に変わらず人間の中にある願望であるというのではないだろうか。 （東北大学大学院生命科学研究科）

ことだ。これは言葉を変えて言えば、不老不死の願望に近− 157 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009平成 19 年度

研究助成

ひとの幸不幸大津浩

わたしは、今回「遺伝子改変マウスを用いたヒスタミン

も実は社会にとってかけがえも無いほど重要なことであるの接触性皮膚炎に与える影響」についての研究で財団からと思えます。新しい事物は、ひとにとって幸福をもたらすご支援をいただきました。考えてみますと、何事をやるにものと、不幸をもたらすものとがあります。幸福面のみにあたっても、ひとの幸不幸を考えずに行動することが必要

とらわれると、とんでもない不幸に見舞われることがあり、であり、今回の支援を受けて実際に実験に移す際もそのこ十分な注意が必要です。こういう観点で仕事を進めるときとを念頭に実験したいと思いました。機会があって今回皮は、明るい面を強調してすすめるときに比べて財政的な支膚のアレルギーについて仕事をすすめましたが、これはコ援を受けにくいのが一般的です。こういう意味から今回貴スメトロジーに積極的に寄与するというよりはむしろ有害財団からの支援をいただいたことは大きな意義があり、不な副作用を事前に防ぐという性質の仕事で、不幸をおこさ

幸を防ぐことによって幸福を得ることに加担していただいないように予防するという意味合いでひとを幸福にしていていると思い、鼻息荒く持論を展開いたしました。また、「コ

くことに繋がると思っています。近年の社会を鑑みるに幸スメトロジー雑感」のような企画も持論を展開できる場で福になることが宣伝され、実際に踏み込んでみると不幸にあり、報告書には書けないようなことを読んでいただけて、なることが数多くあります。それなら、むしろ何もしない

ちょっと「幸福」になりました。ひとの幸不幸は複雑ですね。

方がよかったとなるのですが、この何もしないことを選（東北大学大学院工学研究科応用量子医工学）

択させるような選択肢を選ぶに充分な情報が与えられる事

平成 18 年度

研究助成

コスメトロジーと心の美しさ
政岡ゆり

どんな著名な画家でも目に映るものや写実的な絵画を描

我々の脳がいかに敏感に反応し、自らの感情に働きかける

くことに飽き、抽象的なものや概念を表出した絵を描く。

かがよく理解できる。表情の豊かさは内面の輝きそのもの

それは恐らく既存の物質を表現することに限界を感じ、自であり人に与える影響力も大きい。

分の内面を描くこと、さらに自分というフィルターを介し

それではコスメと内面の美しさをいかに結びつけるかという疑問が起こる。

て表出することに価値をみいだすとも考えられる。
それを人の美しさに置き換えるなら、このようなことが我々の研究では香りによる情動の変化を明らかにしてきいえるのではないか。誰もが美しさには限界があるというた。香りの情報は直接、情動の中心である辺縁系に投射をことを知る。それは年齢を重ねて鏡の前で初めて気づかさする唯一の感覚である。またその香りは呼吸の吸息とともれる老いという悲しみである。しかし、鏡に映るその顔にに感じる感覚である。呼吸することは生きるためであり、刻まれた皺や、日に照らされて作り出された生理現象の跡

また香り、感じることである。良い香りに伴う呼吸の変化にはその人の歴史が刻まれ、また表情には感じてきた情動が脳に与える影響は大きい。記憶に働きかけ、気分がすぐが表現される。物質的な美しさに限界を感じたとき、人間に変化するのが嗅覚の特徴である。さらに香りによるイメの美しさは内面にあり、表情の豊かさが年齢や性別を超えージや記憶の想起は視覚や聴覚よりも容易であり、言葉以た真の美しさということに気づくのである。

前の概念に働きかける。

これまでのヒトにおける表情認知の研究では恐怖の表情

コスメによる皮膚への効果、美しく見せる様々な物質的を提示すると、見ている側の恐怖の情動の中枢である扁桃

効果には限界がある。その先にあるものは、人の情動に働体が賦活するという報告がある。また逆に楽しい表情を提きかけるもの、自分さえも意識できない脳内の部位に影響示すると楽しい気分になるという報告がある。人の表情に力を与える要素を作り出すことではないだろうか。香りの− 158 −

コスメトロジー研究雑感

持つ神秘性、香りが作り出すイメージそのものが一呼吸一が望ましいのではないだろうか。

呼吸によって脳の中で膨らんでいくような、そんなコスメ（昭和大学医学部第二生理学教室）

平成 18 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
元吉

忠寛

もともと、社会生活の中に存在する人々のリスク認知に

とんどいなかったようである。これは、調査対象者が大学ついて研究していたことから、化粧品のリスクについて女生だったことによるかもしれないが、化粧品に使用される性がどのような認識をしているのかに興味を持ち、女子大

数多くの成分のうち、自分の肌に合わないものを事前に把学生の化粧品に対するリスク認知についての意識調査を実握しておくことが困難であることも影響していると考えら施して、検討を行った。食に関する安全については、マスれる。調査対象者をもう少し上の年齢層に広げて、改めてコミで繰り返し大きく取り上げられ、消費者の意識も高ま調査をすることも必要であろう。個人的には、化粧品リスっているため、直接的な健康被害のない商品や製品に対しクに関しては、「天然」とか「無添加」など、一見すると、ても厳しい規制や不買運動が起こることもある。しかし、肌に対するリスクがないというイメージを消費者に与える

どうやら化粧品に対しては、被害にあってはじめて、製品

不正確なメッセージ戦略が多い気がして、多少の不安を感を使うのをやめればよいという行動パターンが示唆された。

じる。リスク・コミュニケーションの観点からすると、消すなわち、少なくとも今回の調査対象者においては、化粧費者の立場に立ったリスク情報の発信や商品の提供を行う品に関して、多少の肌トラブルのリスクは受容されていることも、必要なのではないかと感じている。
（名古屋大学大学院教育発達科学研究科）ということである。食の安全には、非常に敏感でも、肌トラブルにあわないための予防的な行動を取っている者はほ

平成 18 年度

研究助成

高齢者を対象としたコスメトロジー研究に取り組んで
徳丸治

今回の助成によりコスメトロジー研究を行うに当たり，

ランティア団体等にお願いしたものの，なかなか引き受け

2 つの困難にぶつかった。1 つは自分が化粧について無知てくださる方がみつからなかった。奥様は興味をもってくであったことであり，もうひとつは高齢の男性を研究対象ださるのだが，ご主人が首を縦に振らないケースが続出しとしたことである。

たのである。研究期間が残り半年になった時点でまだ被験研究を開始するに当たり，まず自分が化粧について全く無者が 4 組しか集まらないというありさまであった。最後の知であるということに気付いた。このままでは何も始めら頼みの綱とばかりに，我が家の菩提寺に頼んで檀家に片っれないと頭を抱えていたところ，医学生の中に大手化粧品

端から被験者をお願いしてもらった。そこでも，奥様がメーカーで商品開発に従事した経験のある学生がいるとい

参加したいと希望してもご主人がうんと言わないケースがううわさを聞いた。藁にもすがる思いで研究への参加を懇数多くあったそうである。幸いご住職の熱心な勧誘のおか

願したところ，二つ返事で承諾してくれたのみならず，同げで，研究期間残り 1 ヶ月で 8 組を追加することができた。

級生 2 人を引き入れて，本研究の強力な推進力となってく

被験者集めに難渋したことから，高齢のご夫婦においてはれた。彼女の本研究への取り組みが，日本学生支援機構か

奥様とご主人との間に化粧に対する興味の乖離が少なからら評価され表彰につながったことは望外の喜びである。

ず存在すると推察する。今回研究に参加してくださった男

医学生 3 名の参加でようやく研究体制が整ったものの，被性被験者は，お断りになった方よりも化粧に対する興味が験者をいかに集めるかが次の難題であった。大学病院のボ元々あった可能性がある。今後は，このバイアスを考慮し− 159 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

た研究を工夫していく必要があるが，そこがクリアできれ

本助成により，いままで全く知らなかったコスメトロジー

ば高齢者に対する化粧の影響に関して一歩進んだ知見が得の世界に興味を広げることができました。どうもありがとられる可能性があると考える。

うございました。

（大分大学医学部神経生理学講座）

平成 19 年度

研究助成

インドの化粧品の昨今
岡光

私がインド調査を始めた時期は、インドの経済政策が保信子

商品の多様化は、化粧品も例外ではありません。かつて、

護主義から開放政策に転換する 1990 年代の初頭に遡りま

インドで入手できる化粧品の種類は非常に限定されています。それ以降、短・長期の滞在を通して、インドの様々なした。私の調査地は南インドの村落部にあり、日本では当

変化を目の当たりにすることができました。この長くもあたり前の化粧水やリンスですら、調査地の人々はその存在

り短くもある年月の中、貴重な友人・知人と出会いました。

すら知りませんでした。当然、こうした商品は現地では手彼らの小さかった子供たちが成長し、進学・就職や結婚をに入らない貴重品でした。

する姿を見るだけでも、インド社会が着実に変化している

現在、都市部で入手できる化粧品は、国内外の化粧品メーカーのものだけでなく、インドの伝統医学を売りにしたことを実感します。
開放政策以降、インドは外資投資や外国企業の進出もめものまで多数あります。消費者が商品を取捨選択できる

ざましく、IT と医薬品の分野における躍進により高い経状況になりました。それどころか、日本で流布していな済成長を達成しました。その結果、優秀な人材がインドでい、ヨーロッパの製薬会社の敏感肌用の商品がインドで製も高い給与を得られる状況が生まれ、頭脳流出組が母国で産・販売されています。多種多様な化粧品が広範囲に流通働くという現象も珍しくなくなりました。こうした帰国組する環境が整い、村落部でも安価な化粧品が売られていまは、高い給与を得ているため、高額でも高品質な消耗品をす。古代から女性は美を追究してきました。インド女性が好む傾向があり、実際にこうした高所得をターゲットに開

今後どのような化粧品を選択するのか、学術的にも個人的発された商品も多数見られます。安価なものから高額なもにも非常に興味がそそられます。
（東北大学大学院文学研究科）のまで、商品のバリエーションが以前とは比べられないほ
ど増えました。

平成 19 年度

研究助成

スリランカ ―光り輝く島― との交流
井上

英史

私が交流しているスリランカは，かつてはセイロンと呼ている．彼は時折来日して，本国では困難な研究を私のとばれた島国である．スリランカとは，シンハラ語で“光りころで熱心に行う．今回は，スリランカで身近な材料から輝く島”という意味であり，その名の通りとても美しく豊彼らの健康に役立つ物質を探すことがテーマであった．モ

かな国と聞く．しかし，現在は長年の内戦によって疲弊しデル生物として線虫を用いて，その寿命を延ばすものを探苦しんでいる．国は，予算を戦費に回さなければならず，索した訳だが，長寿命化活性を見つけることは毒性を見つ

人々の生活を支える部分では経済的な困難を抱えている．

けることに比べてはるかに難しい．今回の探索では，本来国内で高度な科学研究を行うことは極めて困難であり，多の目的とは逆の殺線虫作用がいくつかの植物性食材から見くの優秀な人材が海外に流出している．それでも国内に踏出された．そのような植物が彼らの国で日常的によく食さ

みとどまり，頑張っている人達がいる．

れていることは，寄生線虫に感染する危機に常に脅かされ今回招聘した研究者と私は 20 年に渡り研究交流を続けている彼らの生活において必要なことなのかもしれない．

− 160 −

コスメトロジー研究雑感

スリランカの研究者と研究交流を続けるためには，“本国有の素材の中から見出すことを願っている．そして次に来でしかできないことを本国でできるようにする”ことが重日するときは，その有効成分の分離と同定を主題としたい．

要と考えている．今回，構築したアッセイ系は，スリラン“光り輝く島”から人々を元気に美しくする物質を見つけ

カに帰国しても遂行が可能であることを考慮した．本国にること．そのことが彼らを支え，彼らの美しく豊かな国を戻った彼が，彼の学生達と一緒にそのアッセイ系を用いて，取り戻すことにつながることを願っている．

元気に健康に寿命を全うできるような活性をスリランカ特− 161 −

（東京薬科大学生命科学部）

●
事業報告書（平成20年度）
役

員●

事業報告書事 業 報 告 書

（自平成 20 年 4 月 1 日

至平成 21 年 3 月 31 日）《研究助成等の選考関連》
2008

5

7

公募開始

全国 265 ヶ所の大学・病院・研究機関等、関係学術雑誌８誌、当財団 HP
他２HP に掲載

7

2

公募締切り

応募数 120 件

9

4

選考委員会（分科会１）

素材、物性に関する分野の選考

9

11

選考委員会（分科会２）

生体作用、安全性に関する分野の選考

9

9

選考委員会（分科会３）

精神、文化に関する分野の選考

925

本選考委員会

各分科会の結果を総合的に判断して研究助成 28 課題、国際交流援助１課
題を選考

11

12

表彰贈呈式

記念講演：｢ 見た目を磨く、内面を磨く ｣

11

12	〜

助成課題の公表

当財団 HP 他関係学術雑誌に掲載

持ち回り企画委員会

平成 21 年度の研究助成課題選考に関して

通常理事会

平成 19 年度事業報告ならびに収支決算報告、第 10 期評議員の選任、理事

比較社会文化博士、劇作家、演出家
2009

2 中旬

竹内 一郎 先生

《理事会関連》
2008

6

12

長及び専務理事の互選、選考委員の選任、事務所所在地の変更等承認、株主としての議決権行使、助成金の返還、報告事項
11

12

通常理事会

平成 20 年度（第 19 回）研究助成者等の承認、
平成 21 年度事業計画及び予算案の承認、報告事項《評議員会関連》
2008

6

12

通常評議員会

平成 19 年度事業報告及び収支決算報告、第 10 期理事及び監事の選任、報
告事項

11

12

通常評議員会

平成 20 年度（第 19 回）研究助成者等の承認、
平成 21 年度事業計画及び予算案の承認、理事の補欠選任、報告事項

《その他》
2008

3

末

6

末

12

財団活動の情報更新

当財団 HP へ平成 20 年度事業計画等を記載
当財団 HP へ平成 19 年度事業報告等を掲載

コスメトロジー研究報告「コスメトロジー研究報告」16 号の概要を当財団 HP に記載− 165 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009

第 19 回研究助成を受けられたかたがた（J：一般研究助成、H：国際交流援助）

管理番号J-08-01

J-08-02J-08-03J-08-04

J-08-05

J-08-06

J-08-07J-08-08J-08-09J-08-10J-08-11

研

究

課

題

分

マイクロエマルションを利用したポリフェノールの

製剤学
香粧品科学

皮膚へのデリバリーと光老化防御
皮膚組織再生を目的とした生体組織類似コラーゲン

新素材開発と
再生医療

組織体の作製
紫外線遮蔽剤用単分散板状酸化セリウムマイクロ粒

無機機能材料子の合成及びその形態に由来する付加機能性の実現

タンパク質化学
ペプチド化学
酵素化学
応用微生物学

細胞外マトリックス分解性微生物酵素を用いた動物
原料からコスメトロジー素材への実用的アプローチ

高分子材料化学
生化学

物質保持能を制御できるコラーゲン擬似分子の作製

酵母由来の機能性糖脂質（バイオサーファクタント）の構造及び機能の拡充に関する研究
皮膚の老化予防を目的としたコラーゲンのAGE化

製剤学
物理薬剤学
薬物送達学

アスコルビン酸誘導体を用いた新規薬物含有ナノ微粒子製剤の開発
抗酸化性乳化剤の機能性化粧料としての利用に関す

生物化学工学
食品工学

る基礎的研究おけるミトコンドリア移行の意義

微生物工学
酵素化学
有機化学
界面化学
医学薬学基礎
研究領域

阻害物質の探索

コエンザイムQ10（CoQ10）の美肌、抗老化作用に

野

代

表

研

究

河

修

者

神戸薬科大学教授

北治

東京医科歯科大学
生体材料工学研究所 特任助教

南

広

祐

東北大学多元物質科学研究所
准教授

殷

澍

京都府立大学大学院
生命環境科学研究科 教授

渡

部

邦

彦

大阪府立大学大学院工学研究科
助教

児

島

千

恵

独立行政法人産業技術総合研究所
研究員

福

岡

徳

馬

熊本大学医学薬学研究部
助教

藤

原

章

雄

千葉大学大学院薬学研究院
准教授

森

部

久仁一

近畿大学工学部
講師

義之

生化学、細胞生物学 同志社大学生命医科学部
講師
分子生物学
抗酸化物質
斎 藤 芳
酸化ストレス郎

形成外科領域におけるヒト間葉系幹細胞移植を用いた瘢痕形成抑制の実現ならびに問題点の抽出と改善

再生医療
分子発生学
病理学
形成外科学

邉

国立成育医療センター研究所
生殖医療研究部部長

梅

澤

明 弘

色素産生細胞（メラノサイト） 名古屋市立大学大学院医学研究科
表皮細胞
加齢・環境皮膚科学 准教授
真皮線維芽細胞
アンチエイジング
老人性白斑 他

J-08-12

手のひら・足のうらで発現が高いWnt阻害剤・Dickkopf 1がアンチエイジング（抗しわ、美白、色素再生、毛髪再生、除毛、皮膚再生）に及ぼす影響

J-08-13

ビタミンＣを合成できない毛のないSMP30/GNL遺伝子破壊ヘアレスマウスを用いた皮膚におけるビタ
ミンＣの美白、抗しわ効果の科学的実証

皮膚老年学
皮膚科学
香粧品学

J-08-14角層の若返りが皮膚の若返りに果たす役割

皮膚科学

J-08-15ニッケルの溶出と炎症誘発作用機構の解析

アレルギー・炎症− 166 −

渡

山 口 裕

史

東邦大学薬学部生化学
准教授

石

神

昭

人

久留米大学医学部皮膚科学教室
講師

大 日 輝

記

東北大学大学院薬学研究科
准教授

平

澤

典

保

事業報告書

管理番号

J-08-16

J-08-17

J-08-18

J-08-19

J-08-20

J-08-21

J-08-22

J-08-23

J-08-24

J-08-25

J-08-26

J-08-27

J-08-28

研

究

課

題

分

cAMPシグナルを標的にしたヒアルロン酸産生制御
メカニズムの研究

野代

石

放射線生物学

制御因子スクリーニング法の開発

基礎老化学

障害のメカニズム解析
タンパク質分解酵素を応用した新しい皮膚代謝促進
治療薬の開発

皮膚科学

医学
薬学

表皮ケラチノサイトの角化プロセスにおけるPLD/
mTORシグナリングの関与
妊娠期における肌の乾燥メカニズムの究明
エストロゲン過剰分泌状態にも関わらず皮膚が乾燥する原因はなにか
化粧が更年期女性に及ぼすストレス軽減効果についての検討
顔の魅力と人物の印象の相互作用メカニズムに関する認知神経科学的研究
耳鼻咽喉科を受診する心身症患者に対する心理治療の化粧関連行動による評価の試み
身体加工と化粧に関する日本及び英語圈における文化表象の分析
皮膚科メイクアップケア外来が色素異常症患者および外来化学療法中がん患者のquality of life（QOL）に与える影響
香料によるメタボリックシンドローム改善効果（内臓型肥満とストレスの関係に着目したアプローチ）

究

者

義 弘

東京都老人総合研究所
主任研究員

浦 ゆ り

大分大学医学部皮膚科
准教授

片

桐

一

元

長崎大学大学院医歯薬学総合研究科
医療科学専攻生命医科学講座
口腔病態薬理学分野 教授

生化学
細胞生物学
薬理学

の関連：アクアポリン3（AQP3）は諸刃の剣か？

川三(皮膚免疫と皮膚バリア機能の複合領域)

グリセリンによる皮膚湿潤、皮膚再生促進、癌促進

研

横浜市立大学大学院医学研究科
教授

細胞生理学

放射線・紫外線適応応答マーカーを指標とした老化

神経ペプチドおよびストレスによる皮膚バリア機能

表

筑

波

隆

幸

橋

賢

一

明治薬科大学教授

石

財団法人岐阜県研究開発財団
岐阜県国際バイオ研究所 主任研究員

生化学
細胞生物学
皮膚科学

大 口 健

司

京都大学大学院医学研究科
人間健康科学系専攻 助教

助産学
美容学
皮膚学

山 口 琴

性差医学
内分泌代謝学
加齢医学
美容医学
認知神経科学美東京女子医科大学東医療センター
美容・性差医療部 准教授

片

井

みゆき

東北大学加齢医学研究所
准教授

月

浦

崇

心身医学
耳鼻咽喉科
臨床心理学

慶應義塾大学医学部耳鼻咽喉科
非常勤講師

ジェンダー論
比較文化研究
文化理論研究お茶の水女子大学人間文化研究科
大学院生

五

島

英

史

行

美 由 紀

京都大学大学院
医学研究科皮膚科学 助教

化粧によるQOLの変化谷

内分泌代謝学岡未樹

福島大学保健管理センター
准教授

渡

辺

英

綱

ペラデニア大学医学部講師

H-08-01

Senarath B. P. Athauda

C .elegansを指標とした長寿命化作用をもつ化合物の検索と作用機構の解析受入責任者

東京薬科大学大学院生命科学研究科 教授

井

上

英

史

（敬称略・分野順）※第１回〜18回の研究助成課題はホームページ（http://www.cosmetology.or.jp/）
でご覧ください。

− 167 −

コスメトロジー研究報告 Vol.17, 2009役

員
平成 21 年３月 31 日現在

理事長

小林礼次郎

専務理事（常勤） 有本
理

監

事

事

評議員

磯邊

㈱コーセー取締役相談役

亨
律男㈱博報堂相談役

宇佐美昭次

早稲田大学名誉教授

内山充

一般社団法人薬剤師認定制度認証機構理事長

小林保清㈱コーセー代表取締役会長

新村嘉也

高砂香料工業㈱取締役相談役

髙橋

久

西川

武二

慶應義塾大学名誉教授

花輪

隆昭

昭和館館長

廣部

雅昭

静岡県学術教育政策顧問

内田康策

日本化粧品工業連合会専務理事

帝京大学名誉教授

小田倉正典

公認会計士

黒田

節哉

弁護士

石倉

伸治

㈱コーセー常務取締役

上野芳夫

元東京理科大学薬学部教授

緒方宏泰

明治薬科大学教授

北原文雄

東京理科大学名誉教授

近藤保

東京理科大学名誉教授

齊藤

勲㈶日本食品化学研究振興財団専務理事

多島新吾

防衛医科大学校教授

長野

哲雄

東京大学大学院薬学系研究科教授

西岡清

横浜赤十字病院院長

野呂影勇

早稲田大学名誉教授

溝口昌子

聖マリアンナ医科大学名誉教授

宮㟢榮三

東京工業大学名誉教授

山崎幹夫

新潟薬科大学学長（専務理事以外は全員非常勤）− 168 −

＊本財団についてのお問い合わせは下記にお願いいたします。

財団法人 コスメトロジー研究振興財団〒104−0032 東京都中央区八丁堀一丁目９番９号
電話 03（3206）7721

コスメトロジー研究報告

Vol.17／2 009

非売品

2009年９月１日発行

編集責任者
発
行

制

作

印

刷

有本 亨
財団法人

エイエム企画〒170− 0013 東京都豊島区東池袋三丁目15番２号
電話 03（3590）5375

太陽印刷工業

表紙デザイン監修：㈱コーセー
2009

コスメトロジー研究振興財団〒104− 0032 東京都中央区八丁堀一丁目９番９号
電話 03（3206）7721

商品デザイン部デザイン室不許複製

禁無断転載