共役リノール酸単独または他の脂肪酸との混合投与による皮膚特性の修飾
九州大学大学院農学研究院

古 瀬

充 宏

The effects of conjugated linoleic acid (CLA), γ-linolenic acid (GLA) and linoleic acid (LA), and their
combinations, on skin properties were investigated in mice. Mice (8-week-old) were orally administrated witheither LA, GLA, CLA, LA + GLA, LA + CLA, or CLA + GLA for 4 weeks. Then, the skin was analyzed for
triacylglycerol content, fatty acid composition, and collagen content. Additionally, thicknesses of the dermis
layer and subcutaneous tissue layer, and the size and number of adipocytes were measured histologically. The
skin fatty acid composition was modified depending upon the fatty acid composition of supplemented oils. In eachoil-alone group, skin triacylglycerol content was the highest in LA, followed by GLA and CLA. Combinations
with CLA reduced triacylglycerol content comparable to the level of CLA alone. No significant changes incollagen content were observed among any treatments. The results for the thickness of subcutaneous tissue weresimilar to the results obtained in triacylglycerol contents, while no significant difference was detected in the
thickness of the dermis layers. The numbers of adipocytes were also reduced by CLA. These results suggestthat supplementation with CLA alone or in combination with other fatty acids has an anti-obesity effect on skinproperties in mice.

１

GLA が豊富に含まれるが、これら植物油の補給で消炎や緒言

免疫調節性効果が報告されている 6, 30）。PGE1 または 15-

細菌や紫外線などの外部環境から生命を保護するために3）ヒドロキシエイコサトリエン酸（15-HETrE）は、シクロ皮膚は重要な役割を果たしている 。表皮、真皮および皮

オキシゲナーゼまたは 15- リポキシゲナーゼで DGLA か

下組織の３層に皮膚は分けられるが、真皮は皮膚の弾力性ら産生され、生理活性脂質として作用するロイコトリエンや柔軟性に関わり、皮下組織は脂肪細胞として脂質を蓄積を阻害する 31）。

する。その皮膚の機能と魅力さは栄養状態によって大き共役リノール酸（CLA）は、LA の構造および幾何異性

く変化を受ける。例えば、摂取した脂肪酸は皮膚特性に影体の総称であって、主に反芻動物から作り出される食品

３）

響を及ぼす 。長鎖 n-6 系および n-3 系不飽和脂肪酸は必材料に含まれる。CLA は、精巣上体と腸間膜の白色脂肪

須脂肪酸であり、伸長反応や不飽和化を受け代謝される。

組織重量と皮下の組織の脂肪細胞を減少させることが報

n-6 系不飽和脂肪酸において、リノール酸（LA）は、γ- リノ

告された 19, 21, 28）。CLA は n-6 系不飽和脂肪酸における LA

レン酸（GLA）、ジホモ -γ- リノレン酸（DGLA）、プロス

から GLA への代謝を阻害する 4）。結果としていくつかのタグランジン E（PGE
やアラキドン酸（AA）へと代謝さ
11）

組織において AA と PGE2 の水準は減少する 1）。さらに、れる。プロスタグランジン E 2（PGE 2 ）やロイコトリエン B4

CLA は癌細胞の成長を阻害し、肝臓と脂肪組織において（LTB 4 ）などの AA 由来のエイコサノイドは、皮膚においてアポトーシスを誘発することも知られている 1）。

炎症やアレルギーを引き起こすことが報告されている

加えて、摂取した CLA は皮膚に容易に移行 21） し、ア

10, 12）。

また、LA 欠乏によって、ラットで皮膚の角質化が観察さレルギー性そう痒症に影響を及ぼすことが報告 11）された。

れた 25）。この事実は、LA が皮膚の健康維持における重要

これらの点から、CLA は皮膚性状に有益であると理解さな因子の一つであることを示唆する。一方、LA は皮膚にれる。しかし、CLA はマウスにおいて肝臓の重量を増加

豊富に存在するが 21）、過剰な LA の摂取は皮膚を含む様々させることが報告されていた 18, 28）。その後、Nakanishi etな器官で炎症やアレルギー反応の原因となる 7, 9）。

al.18） は CLA と GLA の組合せが CLA によって誘発されマ ツ ヨ イ グ サ 油、 ク ロ ス グ リ 油 と ボ ラ ー ジ 油 に は、る脂肪肝を予防すると報告した。これらの事実は、CLAによって修飾される皮膚性状が他の脂肪酸との相互作用にModification of skin properties by CLA
alone or with combination of other fatty
acids
Mitsuhiro Furuse
Faculty of Agriculture, Kyushu
University

より影響を受ける可能性を示唆する。
本研究の目的は、マウスの皮膚性状における CLA, GLA
あるいは LA 単独の効果とそれぞれの組合せによる効果を調査することである。

− 52 −

共役リノール酸単独または他の脂肪酸との混合投与による皮膚特性の修飾

2２．
１

後、蒸留水で希釈した。サンプル 0.2mL とイソプロパノ

実験ール 0.4mL を混ぜ、そして 0.2mL のオキシダント溶液
（75%

動物

wt/vol のクロラミン T と酢酸塩 / クエン酸塩バッファー

雄マウス（８週齢、Sea:ddY 系統、セアック吉冨、福岡（pH 6.0）を３：１の比率で混合したもの）を混合した。

県より購入 ) は 24℃、12 時間照明条件で個別飼育し、市

室温で 4 分間保った後に 2.6mL のエールリッヒ試薬溶液

販飼料（MF、オリエンタル酵母、東京）と水を自由摂取

を加え、60℃で 25 分間培養した。冷却後、6.6mL のイソさせた。マウスは体重によって 5 匹ずつで 6 つのグループ

プロパノールで希釈した。サンプル溶液の中のヒドロキシに分けた。LA、GLA および CLA 単独投与区はそれぞれ

プロリン濃度は、分光光度計で 560nm の波長で測定した ２）。

の油脂を毎日 250 μℓずつ 4 週間経口投与した。組み合わせ
は各油脂をそれぞれ 250 μℓ ずつ（計 500 μℓ ずつ）を毎日 4

２．４ トリアシルグリセロール含量および脂肪酸組成の測定

週間経口投与した。LA 区を対照区とし、71.8％ LA を含

皮膚の総脂質は Folch の変法で抽出した 8, 24）。トリアシル

む紅花油（リノール油脂、名古屋）を与えた。GLA 区はグリセロール含量は、市販キット（トリグリセリド−ワコ

95.0% GLA（出光テクノファイン、東京）を、CLA 区はー、和光純薬、大阪）で、脂肪酸組成は、ガスクロマトグ

70.8% CLA（リノール油脂、名古屋）を含む油脂を用いた。

ラフィーで測定した 14）。

投与区（LA + GLA、
LA + CLA ならびに CLA + GLA 区）

CLA の 内 訳 は、9c, 11t-CLA が 32.4%、10t, 12c-CLA が33.2% であった。これらの油脂の脂肪酸組成を表１に示す。

２．５

皮膚層の観察皮膚サンプルは常法により処理を行った 20）。標本はリ２．
２

皮膚組織の採集

ン酸緩衝液（pH 7.5）で希釈した３％グルタルアルデヒ

実験終了時にジエチルエーテル麻酔によりマウスを屠殺

ドを用い 4℃で固定した。固定サンプルは、4 日間 10%し、毛と共に全皮膚を剥がした。皮膚シート（1 ㎝ ×1 ㎝）

NaOH に、それから 3 日間蒸留水に浸漬した。その後、１を組織学検討のために背側から切り取った。残りの皮膚の% タンニン酸溶液に 2 時間、２% 四酸化オスミウム溶液

半分はコラーゲン分析のために、他の半分は脂肪酸組成測に 1 時間浸漬した。エタノールにより脱水後、t- ブチルア

定のために用いた。重量測定後、皮膚は分析まで−80℃でルコールに留置し、凍結乾燥した。サンプルを、アルミニ保存した。

ウムホルダーにのせ、Pt Pd で蒸着し、ss-550 走査型電子顕微鏡で観察を行った。真皮層および真皮層と筋膜にはさ

２．
３コラーゲン含量の測定

まれた皮下組織層の厚さを顕微鏡写真で測定した。

皮膚サンプルは、10mL の 0.15M NaCl 溶液中で 1 時間
超音波破砕を行った。その後、20mL の６N HCl を加え、２．６

脂肪細胞のサイズの測定

懸濁液を 20℃で 24 時間加水分解した後、120℃で 10 時間

標本はリン酸緩衝液（pH 7.5）で希釈した３％グルタル保った。加水分解したサンプルは、フィルター後、蒸留アルデヒドを用い 4℃で固定した。その後、１% タンニン

水で 100mL に定容した。サンプル（１mL）は蒸発乾固酸溶液に 30 分、１% 四酸化オスミウム溶液に 1 時間浸漬

表１

試験油脂の組成（脂肪酸の％）した。その他は、上述通りであった。皮下組織層の脂肪細胞のサイズと数を測定した。脂肪細胞のサイズは、細胞の長径と短径の平均で求めた。1 ㎟当たりの直径 10 μm 以上の脂肪細胞の数を測定し、20 μmの間隔でグループ分けした。

２．７

統計方法

データは、一元配置分散分析法によって統計学的に解析した。有意な効果が検出された時、Fisher の PLSD 検定
または Tukey-Kramer の検定を行い個々のグループを比較した。統計的な有意差は、P<0.05 とした。結果は、平
均値 ± 標準誤差で示した。

３

結果

図 1 には皮膚トリアシルグリセロール含量に及ぼす− 53 −

コスメトロジー研究報告 Vol.14, 2006

CLA、GLA、LA あるいはそれらの組み合わせの効果を示した。個々の油脂間の比較では、LA 区が最も高く、GLA、
CLA の順となった。LA と GLA を組み合わせるとトリア
シルグリセロール含量は LA 単独よりむしろ GLA 単独区に近かった。LA+CLA あるいは CLA+GLA 区のトリアシ
ルグリセロール含量は CLA 単独区に近いものであった。
コラーゲン含量には、どの区間においても有意な差は認められなかった（データは示さず）。
皮膚の脂肪酸組成に及ぼす油脂源とそれらの組み合わせ効果については表 2 に示す。脂肪酸組成は明らかに投与した油脂に依存して変化した。特に、LA, GLA および CLAの量は投与した油脂により修飾を受けた。LA 単独区または LA+GLA および LA+CLA 組み合わせ区の LA 含量は33％以上であったが、残りの３区では 28％以下であった。
GLA 含量は、GLA 単独区よりも GLA と他の油脂を組み合わせた区で高くなった。しかし、CLA 含量においては
表2

図 1 LA、GLA、CLA またはそれらの組合せを投与したマウスの皮膚のトリアシルグリセロール含量。マウスは 1 区当たり 5 頭用いた。値は平均値 ± 標準誤差で示す。異なる文字間に有意差あり (P<0.05)。

皮膚の脂肪酸組成（％）− 54 −

共役リノール酸単独または他の脂肪酸との混合投与による皮膚特性の修飾

CLA 単独区の方が CLA と他の油脂を組み合わせた区よ子顕微鏡写真を示す。真皮層の厚さにおいては処理間に有り も 高 か っ た。CLA の 異 性 体 で は、9c, 11t-CLA が 10t,

意な差は認められなかった。一方、皮下組織層においては

12c-CLA に比して高かった。AA 含量に関しては処理の効処理による有意な効果が検出され、他の区に比して LA 区

果は認められなかった。

で最も厚かった（図３）。また、LA+CLA 区で最も薄く

図 2 には CLA、GLA、LA あるいはそれらを組み合わせて投与したマウスの真皮ならびに皮下組織層の走査型電なった。
図 4a は、走査型電子顕微鏡による皮下組織層の代表的な写真を示す。図 4b は、皮下組織の脂肪細胞の数を 20μmの間隔で区分した結果を示す。脂肪細胞の数は、LA+ GLA
区で最も多かった。割合では、CLA 区で 10 ─ 30μmの直径の脂肪細胞が高かった。

４

考察

本研究で用いた CLA 油脂は、主に 9c, 11t-CLA（32.4%）と 10t, 12c-CLA（33.2％）から構成された。しかし、CLA
区における 9c, 11t-CLA の割合は、10t, 12c-CLA の 1.7 倍となった。この結果は前報と良く一致している 21）。他の脂肪酸と混合して与えた際にも 9c, 11t-CLA の割合は 1.7倍（LA+CLA 区 ） と 1.5 倍（CLA+GLA 区 ） 高 か っ た。
CLA を投与しなくともマウスの皮膚にはわずかながらの CLA が含まれ、9c, 11t-CLA の割合は 10t, 12c-CLA の図 2 LA、GLA、CLA またはそれらの組合せを投与したマウスの真皮と皮下組織の代表的走査電子顕微鏡写真。略語 : D,
真皮層 ; S, 皮下組織層。バーは 200 μm を示す。

図 3 LA、GLA、CLA またはそれらの組合せを投与したマウスの皮下組織層の厚さ。マウスは 1 区当たり 5 頭用いた。
値は平均値 ± 標準誤差で示す。異なる文字間に有意差あり(P<0.05)。

図 4 a; LA、GLA、CLA またはそれらの組合せを投与したマウスの皮下組織の代表的走査電子顕微鏡写真。略語 : Ma、
長径；Mi、短径；S, 皮下組織層。バーは 100 μm を示す。b;
LA、GLA、CLA またはそれらの組合せを投与したマウスの脂肪細胞の総数。マウスは 1 区当たり 5 頭用いた。値は平均 値 ± 標 準 誤 差 で 示 す。 異 な る 文 字 間 に 有 意 差 あ り(P<0.05)。

− 55 −

コスメトロジー研究報告 Vol.14, 2006

2.2 ─ 3.6 倍高いものであった。これらの結果は、CLA は（引用文献）

天然に存在する脂肪酸であり、9c, 11t-CLA は皮膚に移行

１）Belury MA, :Dietary conjugated linoleic acid in health:

しやすい脂肪酸であることを示す。また、9c, 11t-CLA と

Physiological effects and mechanisms of action, Annu

10t, 12c-CLA の比は同時に投与される脂肪酸により変化

Rev Nutr., 22, 505–531, 2002.

5）を受けることが示唆される。一方、Brown et al. は 10t,２）Bergman I, Loxley R, :Two improved and simplified

12c-CLA が体脂肪の蓄積を抑制すると報告している。そmethods for the spectrophotometric determination of

れは肝臓のステアロイル− CoA 不飽和化酵素を阻害する

hydroxyproline, Anal Chem., 35, 1961–1965, 1963.

17）３）Boelsma E, Hendriks FJH, Roza L, :Nutritional skinからである。まとめると、本研究で得られたトリアシル

care: health effects of micronutrients and fatty acids, Am

グリセロール含量の減少や皮下脂肪組織の薄さは、9c,

J Clin Nutr., 73, 853-864, 2001.

効果

22）

やリポタンパク質リパーゼの活性に影響を及ぼす

４）Bretillon, L, Chardigny JM, Gregoire S, et al., :Effects

11t-CLA よりはむしろ 10t, 12c-CLA によるものかもしれない。

of conjugated linoleic acid isomers on the hepatic

CLA は内臓脂肪の蓄積を阻害する 19, 28）。その反面、過剰 の CLA 摂 取 は マ ウ ス に お い て 脂 肪 肝 を 誘 発 す る

microsomal desaturation activities in vitro, Lipids, 34,18）。

965–969, 1999.

CLA によって誘発される脂肪肝は、GLA を同時に投与

５）Brown JM, Halvorsen YD, Lea-Currie YR, et al.,することにより抗肥満効果を有したままで改善されると:Trans-10, cis-12, but not cis-9, trans-11, conjugatedNakanishi et al.

18）は報告した。本研究でも、CLA+GLA

linoleic acid attenuates lipogenesis in primary cultures

区と CLA 単独区が皮膚のトリアシルグリセロールと皮下of stromal vascular cells from human adipose tissue, J

組織層の厚さを抑えた（図 1 と 3）
。CLA の効果は内臓脂

Nutr., 131, 2316–2321, 2001.
６）Chung S, Kong S, Seong K, et al., :γ-linolenic acid in肪ばかりか皮膚にも及ぶことが明らかとなった。
GLA の 割 合 は、GLA 単 独 区 よ り も LA+GLA 区 とborage oil reverses epidermal hyperproliferation in

CLA+GLA 区 で 高 く な っ た。LA+GLA 区 に お い て は、

guinea pigs, J Nutr., 132, 3090–3097, 2002.

LA から GLA の代謝により GLA の割合が高くなったと考７）Fogh K, Kragballe K, :Eicosanoids in inflammatory skin

えられる。CLA+GLA 区で高くなった理由は明らかでな

diseases, Prostaglandins Other Lipid Mediat., 63, 43–54,

いが、何らかの代謝に CLA が影響した可能性がある。さ2000.

らに、皮下組織の厚さは LA 単独区よりも GLA 単独区で８）Folch J, Lees M, Stanley GHS, :A simple method for

薄くなった（図３）が、これは GLA によりカルニチン・

the isolation and purification of total lipids from animal

パルミトイルトランスフェラーゼとペルオキシソームの β-tissues, J Biol Chem., 226, 497–509, 1957.

酸化活性が高まったことによると考えられる

９）Gleich GJ, Kita H, :Bronchial asthma: Lessons from26, 27）。

16）

PGE2 はコラーゲン合成を高め 、PGE1 はヒトの培養線

murine models, Proc Natl Acad Sci USA, 94, 2101–2102,

維芽細胞においてコラゲナーゼの遺伝子発現を抑制した 23）。
本研究においてプロスタグランジンは測定していないが、1997.
10）Horrobin DF, :Essential fatty acid metabolism and its

１）

CLA によって減少することは報告されている 。しかし、modification in atopic eczema, Am J Clin Nutr., 71 suppl.,

真皮の厚さとコラーゲン含量に区間で差は認められなかっ367S-372S, 2000.

た。これらの結果は、前報と同様であった

21）。

11）Ishiguro K, Oku H, Suitani A, et al., :Effects of

食餌由来の LA は容易に皮膚に移行した（表２）。LA

conjugated linoleic acid on anaphylaxis and allergic

は AA を介して産生される PGE2 の起源であるために、過pruritus, Biol Pharm Bull., 25, 1655–1657, 2002.

剰の LA 摂取は皮膚に炎症を誘発することが報告されて12）J a m e s M J , G i b s o n R A , C l e l a n d L G , : D i e t a r y

いる 7, 9）。PGE2 は皮膚の炎症を強く誘導する 13）。CLA は

polyunsaturated fatty acids and inflammatory mediator

LA の不飽和化酵素

1, 15）

を阻害し、リン脂質からの AA の放出と AA からのエイコサノイドの産生を抑制する

29）

production, Am J Clin Nutr., 71 suppl., 343S-348S, 2000.

た13）Kabashima K, Sakata D, Nagamachi M, et al.,

めに、CLA により皮膚の PGE2 は減少する可能性がある。

:Prostaglandin E2-EP4 signaling initiates skin immune

結論として、CLA は皮膚の脂肪酸組成を変え、トリア

responses by promoting migration and maturation of

シルグリセロール含量と皮下組織の厚みと脂肪細胞の数を減少させる。その上、CLA の効果は他の脂肪酸を同時に

langerhans cells, Nat Med., 9, 744–749, 2003.
14）Kamegai T, Kasai M, Ikeda I, :Improved method for

投与しても機能することが明らかとなった。

preparation of the methyl ester of conjugated linoleic
acid, J Oleo Sci., 50, 237–241, 2001.

− 56 −

共役リノール酸単独または他の脂肪酸との混合投与による皮膚特性の修飾

15）Kavanaugh CJ, Liu KL, Belury MA, :Effect of dietaryphosphatidylcholine hydroperoxide fraction purified by

conjugated linoleic acid on phorbol ester-induced PGE2

two sep-pak cartridges in biological samples, J Pharm

production and hyperplasia in mouse epidermis, Nutr

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in mice, Nutrition, 20, 390–393, 2004.

accumulation accompanying an increase in uncoupling19）Nakanishi T, Ohgushi A, Yamashita T, et al., :Effectprotein 1 mRNA level in brown adipose tissue, Compof orally administered conjugated linoleic acids on

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chemiluminescent assay for hydroperoxide level of− 57 −