ごあいさつ
当財団は 14 年前の 1990 年に設立されました。人々が美しく豊かな生活を実現することに寄与するため、化粧品学の振興を目指して今日まで 247 件の研究に対して助成を行い、研究分野での海外交流を促進させるために受け入れ・派遣を含めて 31 件の助成をしてきました。
この 14 年間を振り返ってみますと、素材や薬剤、あるいは化粧品そのものに関する研究から、肌の生理、肌細胞がもつ機能に関する研究、紫外線など肌に直接影響を及ぼす環境要因に関するものまで、さまざまな分野の研究を助成してきました。最近では化粧と心の健康に関する研究など、心理学の分野に関するものも増えてくるなど、新しい動きも見られます。
今回の研究報告書でも大衆文化と化粧の関係、顔の魅力に関する因子分
析、歯の噛み合わせと顔貌の関係など興味深い研究がいくつも報告されています。もちろん、皮膚科学やナノテクノロジー、バイオテクノロジー等を駆使した素材研究など、化粧品の発展に結びつくものも数多く報告されていま
すし、研究分野での文理融合が進んでいることを実感いたしました。
本年 4 月より国立大学の独立行政法人化がスタートしましたが、知的財産の活用が注目されていることもあり、産学共同研究も今まで以上に進むものと思われます。企業の側からの、大学や公的機関による研究に対する期待は
かつてなかったほど高まっていますし、実際に大きな成果をあげていることも事実です。
当財団といたしましても、化粧品学のさらなる発展と体系化のために、分
野の枠、さらには大学や公的研究機関など公私の別にとらわれることなく、真に優れた研究に対して積極的な助成活動を堅持していきたいと考えております。
今後とも皆様のますますのご協力とご支援をお願い申し上げます。

平成 16 年 8 月
財団法人

コスメトロジー研究振興財団
理事長

小林

禮次郎

目

次

■ ごあいさつ■研究報告
Ⅰ．素材、物性に関する分野
・ナノ構造配列制御を基盤とする光学活性材料の開発………………………………………………………… 2
山口大学工学部

・再構築機能を有する新規の粘土材料の作製とその吸着特性

鬼 村 謙二郎………………………………………………… 8

東京工業大学大学院理工学研究科 亀 島
・独自のチタン反応を利用するムスク・ジャスミン系高級香料の実用的化学合成…………………………14

関西学院大学理工学部 田 辺
・環境に適した新規な糖型界面活性剤の開発と応用

陽……………………………………………………………20
東京理科大学理学部 吉 村・生体内環境を再現するポリホスフェートヒドロゲルの調製と機能

倫 一…………………………………………24

東京医科歯科大学生体材料工学研究所 岩 崎
・コラゲナーゼ抑制作用をもつ天然物の探索

欣 一

泰 彦

……………………………………………………………………31
千葉大学大学院薬学研究院 石 橋

・生体適合性超薄膜の吸水および保湿特性の評価

正 己………………………………………………………………35
東北大学大学院薬学研究科 安 斉・紫外線遮断剤用単分散球状酸化セリウムナノ粒子の低環境負荷な製造法の開発

順 一…………………………40

千葉大学工学部 上 川

直 文・新規な化粧品素材としてのコウジ酸、β- ツーヤプリシン、p - アミノ安息香酸、及び、アルブチンのさらなる高機能化を目的とした酵素的分子設計…………………………45

岡山県立大学保健福祉学部 中 島
・集合して生体に作用する有機分子の設計と合成および機能評価

伸 佳……………………………………………52

東京大学大学院薬学系研究科 大和田 智 彦

Ⅱ．生体作用、安全性に関する分野
・接着分子シグナルを利用した皮膚老化防止の新戦略…………………………………………………………58
群馬大学生体調節研究所 的 崎

・皮膚の老化によるⅦ型コラーゲンの代謝及び遺伝子発現調節機構について………………………………63

弘前大学医学部 今・皮膚表皮細胞への生理活性タンパク遺伝子のデリバリーと分泌方向性の制御

淳……………………………66

京都大学大学院薬学研究科 高 倉・早老性疾患遺伝子による皮膚線維芽細胞の老化とテロメア制御

尚喜 信……………………………………………74

京都大学放射線生物研究センター 小 松

賢 志目・エストロゲンの皮膚老化防御における分子構築の解明

次……………………………………………………78
金沢大学医学系研究科

井 上

正 樹

・正常皮膚角化における蛋白質脱イミノ化の役割解明−瑞々しい肌をいつまでも保つために−…………………………82

東京老人総合研究所 石 神・毛包、汗腺、皮脂腺など皮膚附属器官の形成に関わる細胞内シグナル伝達経路の解明
東京大学医科学研究所
・皮膚における生体リズムの分子機構

昭 人…………………85

井 上 純一郎……………………………………………………………………………94
神戸大学大学院医学系研究科

・トリクロロ酢酸とフェノールの生体におよぼす安全性に関する研究

古 川

福 実

………………………………………………103

筑波大学応用生物化学系
・コラーゲン経口摂取が結合組織（骨、皮膚）におよぼす作用均………………………………………99

和歌山県立医科大学皮膚科
・リボザイムを用いた皮膚細胞新規老化遺伝子の単離と解析

岡 村

柳 澤

純

………………………………………………107

東京医科歯科大学大学院医歯学総合研究科

春 日 井

昇

Ⅲ．精神、文化に関する分野
・かみ合わせのずれが大きく笑った顔貌の非対称性に及ぼす影響…………………………………………114

大阪大学大学院歯学研究科
・アトピー疾患者の自尊感情の向上を目指した集団認知行動療法の開発

隆 志…………………………………117

宮崎大学教育文化学部
・顔の魅力を規定する要因の実験計量心理学的分析

中 村
富 家

直 明

…………………………………………………………124
東北大学大学院文学研究科

行 場

次 朗

・奇抜な化粧─文化の表現と表情？（ヴィジュアル系の顔：原因と影響） …………………………………131
千歳科学技術大学

Johnathon John■ 記念講演平成 15 年度記念講演 『色白美人はなぜ永遠か ─日本人の化粧に見られる美意識─』 …………………147
駒沢女子大学人文学部 石 田 かおり■ コスメトロジー研究雑感■付……………………………………………………………………………………………157

録
平成 15 年度事業報告
役員一覧……………………………………………………………………………………………173……………………………………………………………………………………………………………176

ナノ構造配列制御を基盤とする光学活性材料の開発
山口大学

鬼工学部応用化学工学科

村謙二郎

    Asymmetric synthesis of optically active compounds from prochiral substrate using chiral catalysts is a very
attractive methodology in organic chemistry.  However, removal of the expensive chiral catalyst from the crude reaction
product after the completion of reaction is a tedious job.  Polymer-supported catalysts are advantageous, as they can berecovered from the reaction product by simple filtration and can be reused, thus, making the process economically viable.  
A study of the addition of ketoester to α, β-unsaturated ketones in the presence of cinchona alkaloids as chiral catalyst
has been reported.  Polymer-supported cinchona alkaloids have been synthesized chemically.  2-Methacryloyloxyethyl
isocyanate (MOI) is a bifunctional monomer with both a reactive isocyanate group and a polymerizable double bond,and in convenient and widely used for crosslinking agents.  It has been reported that in trans-carbamylation reaction
catalyzed by 4-N,N'-dimethylaminopyridine (DMAP), the secondary -OH group of cinchonine was carbamoylated by MOI.  
This article describes the syntheses and polymerizations of new chiral cinchoninyl (2-methacryloyloxyethyl) carbamate(CIMOC) from 2-methacryloyloxyethyl isocyanate (MOI) and cinchonine.  Radical homopolymerizations were performed
with AIBN as initiator in suitable solvent in a sealed tube at 60℃ .  Number average molecular weights (Mn) of poly
(CIMOC) were 2.6 〜 11.8×103.   Specific optical rotations ([α]435) of poly (CIMOC) were +84.0°〜 0.72° in THF.   Thepolymers obtained were tested for their efficiency in catalyzing the Michael addition of ethyl 1-oxo-2-indan carboxylate
to methylvinyl ketones.  The Michael adducts using poly (CIMOC-co-styrene) showed higher enantio excess (20％ ee)
compared to those obtained by using non-polymeric catalyst CIMOC (14％ ee) and poly(CIMOC) (13％ ee).  This method
may be of importance in the synthesis of the compounds, where selectivity as well as mild reaction conditions is requiredby simultaneously replacing conventional catalysts with environment-friendly 'green catalysis'.  

１．緒

高分子触媒を有機反応に用いることにより操作性を大幅に言向上することができ，反応の自動化も可能と成りえる。こ

天然蛋白質を構成するアミノ酸は主としてＬ体の α—アのような利点を持つ高分子試薬，高分子触媒の側鎖に光学ミノ酸である。α—アミノ酸は，化学合成法，発酵法，酵

活性部位，即ち不斉配位子を担持した高分子を合成し，不素法等により製造される。化学合成法は大量合成には適し斉合成反応に用いた場合，不斉源はほぼ定量的に回収されているが，ラセミ体が得られる。発酵法や酵素法では光学再利用することも可能となる。これら高分子触媒の性質を活性体が得られるが，多くの場合Ｌ体のみが得られて，Ｄ利用することで，省資源化，廃棄物の低減が実現でき，環体の合成は困難である。そのためＤ体の化学合成法の確立

境に優しい有機合成法と成りえる１，２）。

が急務となった。この問題の解決策として，不斉合成が考本研究では窒素の非共有電子対を利用した光学活性ルイえられる。従来の低分子不斉触媒は生成物の不斉収率およス塩基触媒としてシンコナアルカロイドを用いることとし

び化学収率の向上を第一目標として開発され，幾つかの例た。また，重合性官能基と不斉触媒部位の連結する場合，は実用的レベルに達してきている。一方，高分子試薬また選択的に不斉触媒部位の特定官能基に導入する必要があは高分子触媒を有機反応に用いた場合，通常の低分子触媒る。この課題に対して本研究では重合性基と反応性基を合に比べ次のような利点が期待される。

わせ持つ 2—メタクリロイルオキシエチルイソシアネートⅰ）高分子触媒は主鎖構造，即ちモノマーや架橋構造の（MOI）を用いることにした（Fig. 1）。

有無により溶解性を制御することが可能であり，均一系あ２．実験方法るいは不均一系での不斉反応が行える。
ⅱ）さらに反応終了後，濾過等の操作により反応系から容易に分離でき，再使用もできる。したがって高分子試薬，
Synthesis of Optically Active Materials
Based on Nano Structure
Kenjiro Onimura
Department of Applied Chemistry& Chemical Engineering, Faculty ofEngineering, Yamaguchi University

２．１ シンコナニルメタクリロイルオキシエチルカ
ルバメート（RMOC）の合成３, ４）合成経路を Scheme 1 に示す。
窒素雰囲気下でシンコナアルカロイドとジブチルスズ
ジラウラート（DBTDL）の THF 溶液に MOI を滴下し，40℃で 24 時間撹拌した。反応終了後，再結晶により精製を行い，無色の針状結晶として RMOC を得た。得られた
RMOC は 1H NMR，13C NMR，融点，比旋光度を測定し，構造を確認した。

−2−

ナノ構造配列制御を基盤とする光学活性材料の開発

Fig. 1

Scheme 1

Cinchoninyl（2-methacryloyloxyethyl）carbamate（CIMOC）：

ルエン溶液を加え，室温で 48 時間攪拌した。反応後，不Yield 75％ , mp 113-115.8℃ , [α]435 +110.4°（c=1.0 g/dL,

斉触媒を除き，Michael 付加体を得た。Michael 付加体のl=10 ㎝ , THF）

光学純度は CHIRALPAK AD（hexane/2—propanol=9/1）

Cinchonidinyl（2-methacryloyloxyethyl）carbamate（CDMOC）：

にて測定した。

Yield 52％ , mp 143-144℃ , [α]435 +0.7°（c= 1.0 g/dL, l=10

３．結果及び考察㎝ , THF）
Quininyl（2-methacryloyloxyethyl）carbamate（QNMOC）：
Yield 53％

３．１ RMOC のラジカル重合による高分子不斉触媒の合成
本研究で使用する不斉触媒部位を有するモノマーはシン２．
２

高分子不斉触媒の合成

コナアルカロイドと MOI を触媒存在下で撹拌することに反応管に所定のモノマーを秤量し，所定の溶媒に AIBN

より高収率で得ることができた。次に新規モノマーであるを溶解させた開始剤溶液を加え，60℃で 24 時間重合を行っ

RMOC の重合性と旋光性について検討した。Table 1 にた。重合後，大量のメタノールに投じて，さらにポリマー

RMOC のラジカル重合の条件及び結果を示す。種々の溶を THF—メタノール系で再沈殿することにより精製した。

媒中において AIBN を開始剤として 60℃，24 時間重合を行った。Fig. 2 に CDMOC とそのスチレン（St）との共２．
３高分子不斉触媒を用いた不斉 Michael 反応

重合体（poly（CDMOC—co—St））の 1H NMR スペクトル

不斉触媒とエチル 1—オキソ—2—インダンカルボキシレーを示す。重合は 6.04, 5.52 ppm の二重結合に由来するピート（EOIC）とのトルエン溶液にメチルビニルケトンのトクが完全に消失したことから，重合は完全に進行している−3−

Table 1 Radical polymerizations of CIMOC（M1）or CDMOC（M1）with St（M2）in THF（1mL）at 60℃ a

Fig. 2 1H NMR spectra for CDMOC and poly（CDMOC-co-St）（run 4 in Table 1）in CDCl3 at 23℃（270MHZ）と判断した。また，共重合体の組成比は 1H NMR スペク

したため重合が停止し，低分子量になった可能性があるが，トルから決定した。

肉眼で確認できる様なポリマーの析出は認められなかった。

得られたポリマーは殆どの有機溶媒には可溶であった

以前，DMF 中で得られた poly（CDMOC）は THF 中で得が，poly（CDMOC）のみは DMF 以外の溶媒には溶けなられた場合より分子量が大きくなることを報告している５）。  

かった。ポリマーの数平均分子量（Mn）は 2.6 〜 11.8×

その結果 poly（CDMOC）の Mn は THF 中では 7300，DMF

10 であり，CDMOC 系ポリマーより CIMOC 系ポリマー

中では 21400 と溶媒効果を大きく受けた。この原因は明らかの方が Mn は大きくなる傾向がった。poly（CIMOC）のではないが，分子内あるいは分子間で高分子側鎖が水素結合数平均分子量（Mn）が poly（CDMOC）より大きい理由

等の相互作用によりクラスターを形成し，接近するため重合として，重合中ある分子量以上の poly（CDMOC）が析出が阻害され，より極性の低い THF の方が低分子量になった

3−4−

ナノ構造配列制御を基盤とする光学活性材料の開発

ガラス転移温度（Tg）と融点と帰属した。
poly（CIMOC）と poly（CDMOC）の THF 中での比旋光度はそれぞれ＋ 84.0°と＋ 0.72°であった。poly（CIMOC—co—St） の 比 旋 光 度 は ＋ 54.4 ° で あ り， 共 重 合 体 中 のCIMOC ユニットの重量比とほぼ一致した。一方，poly（CDMOC—co—St）の場合は CDMOC と St のシークエンスに大きく影響を受けた。

３．２

高分子触媒を用いた不斉反応への展開

シンコナアルカロイド類を用いた不斉反応として本研究ではシンコニジンのルイス塩基性を活かした Michael 付
加反応について検討した（Scheme 2）。本反応終了後，濾過操作で触媒を回収でき，付加体はカラムクロマトグラフ
ィーにより精製した。回収された触媒は 1H NMR から反Fig. 3 DSC curves for（A）poly（CDMOC）（run 3 in Table 1）and（B）poly（CDMOC-co-St）（run 4 in Table 1）.
Heating from 30 to 250℃ at a heating rate of 5℃ min-1.

応前後で変化は認められなかった。エチル 1—オキソ—2—イ
ンダンカルボキシレート（EOIC）とメチルビニルケトンとのトルエン溶液に不斉触媒を添加することで行い，条件と結果を Table 2 にまとめた。

可能性がある。しかし本研究の目的の高分子触媒として使用

付加体の絶対立体化学は比旋光度の符号と既知の報告にする場合，反応後の処理を考慮して低沸点である THF に可より決定した 6）。モノマーの CDMOC を触媒と用いた場

溶なポリマーを合成したほうが有利と考えられる。

合以外は付加体の化学収率は定量的であった。この収率低Fig. 3 に poly（CDMOC）および poly（CDMOC—co—下の原因はウレタン結合を側鎖に有する RMOC 及びそのSt）の熱分析結果を示す（run 4,5）
。poly（CDMOC）（A）

ホモポリマーは分子内または分子間で水素結合により複合

は 196℃に融点による吸熱が観られるが，相転移による吸体を形成すると考えらる３，４）。そのため不斉触媒の活性能

熱ピークは観測されなかった。しかし poly（CDMOC—co—が塩基性の低下や立体障害により著しく阻害されているこ

St）では 89℃と 242℃に吸熱ピークが観測され，それぞれとが推定される。この錯体形成は CIMOC より CDMOC

Scheme 2
Table 2 Enantioserective addition of methyl vinyl ketone to β-ketoester in toluene（3ml）at r. t.a−5−

Fig. 4 Two possible orientations of enolate in the transition states of the cinchonidine or quinine derivative-catalyzed addition to a methylvinylketone:（A）leading to R enatiomer,（B）leading to S enatiomer.

の方がより強固に起こるため不斉反応や重合収率が低下したと考えられる。
モノマーである CIMOC や CIMOC ホモポリマーを触媒とした場合，得られた付加体の光学純度は 13 〜 14%ee であった（Run 1, 2）が，共重合体 poly（CIMOC—co—St）を触媒とした場合，付加体の光学純度は 20％ ee に向上した（Run 3）。CDMOC 系でも共重合体の方が光学収率は向上
した（Run 5）。この立体選択性の向上はポリマーマトリッ
クスの高次構造に起因していると考えられる。シンコニン
系から得られた付加体は S 体が主生成物，シンコニジン系
からは R 体が主生成物として得られている。またシンコナ
アルカロイドの類縁体のキニンを用いた QNMOC においては R 体が 9.2％ ee で得られた。シンコナアルカロイドを不斉触媒に用いた場合，不斉選択性は C—8, C—9 位に大きく依存する。本不斉反応における遷移状態を Fig. 4 に示した。

Fig. 5 Effect of polymer unit on stereoselectivity.

（1） シンコナアルカロイドのキヌクリジン窒素が 1—インダノンの水素を引き抜き，エノラートが生成する。
（2）ウレタン結合と MVK が水素結合により配位して 3ン部の立体反発により R 体を主生成物として与えた。共重合体では疎水性のスチレンユニットが隣接しているため分子錯体を形成する。
（3）エノラートの二重結合への付加は速度論支配により他の触媒部位との錯体形成を立体的あるいは活性部位の疎水性が増加し，その結果より強く基質を補足する事ため不2 つの経路が考えられる。
（4）エノラートの si 面から付加体は R 体，あるいは re

斉収率が向上したと考えられる（Fig. 5）。
またシンコナアルカロイドの不斉収率は 9 位の水酸基が面から付加体は S 体をそれぞれ与える。
CDMOC 系ではインダノンの芳香族部と触媒のキノリ

重要な役割を果すことが知られているが 7，本研究で用い−6−

ナノ構造配列制御を基盤とする光学活性材料の開発

た RMOC やその重合体では 9 位をウレタン結合により重（参考文献）

合性基やポリマー主鎖と結合している。そのため基質と不１） D. E. De Vos, I. F. J. Vankelecom, and P. A. Jacobs, Eds.

斉炭素との距離が離れ有効な不斉空間を構築することが困In Chiral Catalyst Immobilization and Recycling; Wiley-

難になる。そのため一般的なシンコナアルカロイド触媒のVCH: Weinheim, Germany, 2000.

不斉収率よりも低くなったと考えられる。さらに 9 位以外

２） For a recent review on the use of polymeric catalystsに重合性基を結合させた高分子触媒を開発できれば高い不

see:（a）Q.-H. Fan, Y.-M. Li, and A. S. C. Chan, Chem. Rev.,

斉収率も期待できる。

102, 3385（2002）;  （b）B. Clapham, T. S. Reger, and K.

総Janda, Tetrahedron, 57, 4637（2001）.

括３）（a）Y.-K. Lee, Y. Nakashima, K.Onimura, 他２名 ,本研究ではシンコナアルカロイドと側鎖に有するキラル

Macromolecules, 36, 4735（2003）;  （b）Y.-K. Lee, N.

メタクリレート誘導体を新規に合成し，単独重合およびス

Hisamitsu, K. Onimura, H., 他２名 , Polym. J., 34, 9（2002）.

チレンとの共重合を行った。得られた高分子を不斉触媒と４）（a）Y.-K. Lee, K. Onimura, H. Tsutsumi, 他１名 , Polym.

して用いた Michael 反応を検討し，その有効性や不斉選J., 33, 411（2001）;  （b）Y.-K. Lee, K. Onimura, H. Tsutsumi,

択性について検討した。高分子の溶解性の相違を利用して他１名 , Polym. J., 32, 1007（2000）;  （c）   Y.-K. Lee, K.

生成物の分離・精製を簡略化することに成功した。不斉選

Onimura, H. Tsutsumi, 他１名 , J. Polym. Sci., Part A,
Polym. Chem., 38, 4315（2000）.

択性はスチレンとの共重合体の方が高い結果となり，触媒部位の有効利用が可能となった。不斉収率は通常のシンコ

５） Y.-K. Lee, K. Yamashita, M. Eto, K. Onimura, 他２名 ,Polymer, 43, 7539（2002）.

ナアルカロイドを使用した場合より低下したが，重合性基を連結させる部位や不斉反応の最適化により今後高い不斉６）（a）M. Nakajima, Y. Yamaguchi, and S. Hashimoto,Chem. Comm., 2001, 1596;  （b）M. Nakajima, S. Yamamoto,

収率が期待できる。

Y. Yamaguchi, 他２名 , Tetrahedron, 59, 7307（2003）.

謝辞実験を担当した松崎

７） A. Sera, K. Takagi, H. Katayama, H. Yamada, J. Org.
公平氏に感謝いたします。最後に本研究を遂行するにあたり助成金を賜わりました財団法人
コスメトロジー研究振興財団に心から感謝いたします。

−7−

Chem., 53, 1157（1998）.

再構築機能を有する新規の粘土材料の作製とその吸着特性
東京工業大学大学院

亀島

理工学研究科欣

一Clay materials form an important group of inorganic layered compound and are useful materials with a great variety
of applications as adsorbents, decolorizing agents, and ion exchangers. In this work, composites of smectite with layered
double hydroxide (LDH) were synthesized by various methods and their porous properties and microstructures examined.
Commercial saponite and co-precipitated LDH [Mg6Al2(CO3)(OH)16-4H2O] powders were used. Composites prepared by dry
mechanical mixing, wet mechanical mixing and soft-chemical processing were characterized by XRD, FT-IR, XPS, SEM,
TEM, and N2 and H2O adsorption and desorption. The specific surface area of saponite / LDH composites were intermediate
between those of LDH and saponite. The value for the dry milled sample (167 ㎡ /g) was smaller than for the other samples(about 250 ㎡ /g). The pore size distributions of the saponite / LDH composites differ from those of saponite and LDH, thepeaks ranging from 1nm to 30nm according to the synthetic method. The resulting porous properties depend on the laminate
structure. The specific surface area estimated from H2O adsorption of the saponite / LDH composites were ranged from 326
to 390 ㎡ /g. These values were very higher than that estimated by N2 adsorption because of peculiar adsorption of H2O. A
hydrophilicity of these composites was evaluated using a coefficient of specific surface area by H2O and N2, described as SH2O
/ SN2. The estimated coefficient of the saponite / LDH composites were ranged from 1.2 to 2.1. The value for the dry milled
sample (2.1) was extremely higher than for the other samples (1.2 ~ 1.5).  Consequently, dry milling was the most effective
method for modifying the porous properties of the composites. Furthermore, the reconstructing function of the laminate
structure was controllable by heat treatment in the dry-milled composite.

１．緒が剥離してバラバラとなってしまう．このような性質を言

無限膨張性と言う．このバラバラの層は，乾燥時には再び

粘土は，粒径で言えば 2 µm 以下の粒子のことを指す言

元の 00l 方向の積層を復元する．この機能を利用して，有葉である．その主成分は粘土鉱物であり，粘土鉱物の多く

機物，あるいは無機物をピラーとして層間に立て，細孔特は無機層状化合物に分類される．無機層状化合物は，主に性を制御する研究が行われている２）〜５）．これに対して，

SiO2 の層構造を基本とした積層構造から成り立っており，

LDH は 500℃の焼成で層間の炭酸塩を完全に分解させた積層状態の違いで分類される ．この SiO2 層の Si 原子は後に，試料を水中に保持させるだけで，元の構造にまで戻

主に Al 原子に置換されることが多く，このために層が負ることが知られている．これを再構築機能という．この時，に帯電する．これを補うために層間に陽イオンが配位して溶液中の陰イオンを任意に制御することで細孔特性を制御いるのが一般的である．また，これとは逆に層が正に帯電する研究６）〜８） やイオン交換による有害物質の除去９） にした粘土鉱物としてハイドロタルサイトがある．これは利用されている．

１）

Mg（OH）2 八面体層が層構造を構成し，Mg 原子の一部が一方，異なる層状化合物が組み合わさった物質に，混合Al 原子に置換している．このために層は正に帯電し，層層鉱物がある．これは，例えば雲母の層間のアルカリイオ

間に負イオンが配位する．この一連のグループは層状複水ンがスメクタイトの層構造で置き換わることで，各々の積酸化物（LDH）と呼ばれる．どちらの物質も，層間を有層構造とは異なる新たな周期性が生じた鉱物であり，種々する高比表面積な材料であり，イオン交換性能を持つ．

の系が研究されている 10) 〜 13)．しかし，前述のような機能

この粘土鉱物が持つ機能の中に「再生機能」がある．こ性を持つ物質ではない．天然鉱物のクロライトは，負電荷

れは，物理的に層構造を壊された層状化合物が自己組織化の層がスメクタイトと同構造，正電荷の層が LDH 同様のして元の構造に戻る現象のことである．例えば，スメクタ

ブルーサイト構造という異なる層状化合物の複合体であイトのように層電荷が弱い物質は，水中に投じるだけで層

る．クロライトでは多孔体特性は見られず，これは 2 種類

Preparation of clay materials withreconstructive function and theiradsorption propertiesの層が同サイズであるためと考えられる．ここで，比較的粒子の小さいスメクタイトと粒子成長が容易な LDH（ハイドロタルサイト）の組み合わせで多孔化を図ると，前述

Yoshikazu KAMESHIMAの各相の機能面が利用可能となり，新たな機能性の付与がDepartment of Metallurgy and Ceramic
Science, Graduate School of Science andEngineering, TOKYO INSTITUTE ofTECHNOLOGY期待できると考えられる．そこで，本課題ではスメクタイ
ト／ LDH 複合体を合成して，細孔構造と吸着性能の異なる新しい粘土材料の可能性を検討した．

−8−

再構築機能を有する新規の粘土材料の作製とその吸着特性

この複合粘土材料を作製するにあたり，まず前述した再変化とそれに伴う発熱・吸熱挙動を，示差熱重量分析装置

生機能を活かした手法を考えた．1 つは LDH の再構築機（DTA/TG：サーモプラス TG—8120，リガク㈱製）を用いて，能を複合化に用いる方法で，LDH の再構築中に負の層電細孔構造の測定は窒素吸着法により行い，全自動型窒素吸荷を持つ分散したスメクタイトを層間に取り込ませる．こ着測定装置（オートソーブ 1，カンタクローム㈱製）を用

れにより，均質な複合化が達成され，新たな細孔を有するいてそれぞれ測定した．さらに，水蒸気吸着装置（ベルソ

多孔体材料の作製が可能である．もう 1 つは，LDH を熱ープ 18，日本ベル㈱製）を用いて水蒸気吸着の測定を行分解させずにスメクタイトと複合化させる方法で，層構造った．
試料の微構造，および形態を走査型電子顕微鏡（SEM：の複雑化（デラミネーション）による反応サイトの拡大が期待される．これにより，熱分解後の再構築時に長鎖の有JSM—5310，日本電子データム㈱製）と透過型電子顕微鏡

機酸取り込む等の新たな機能の発現が可能である．

（TEM：H—9000，日立㈱製）で観察した．

本研究では，スメクタイトとしてサポナイトを，LDHとして Mg6Al2（CO3）（OH）16・4H2O を選択して，実験を

２．４

機能性の評価行った．作製した複合体の多孔体特性と再構築性，および細孔特性などで特異な結果を示した dm 試料について，

機能性について評価し，新たな機能を有する粘土材料の創

その機能性の評価を行った．dm 試料を 300，及び 500℃製を目的とした．

で 12 時間熱処理し，試料 0.1g を 50mL の蒸留水中に分散

２．実
２．
１

させて 1 晩静置した．その後，110℃の恒温槽で乾燥させた．

験

静置前後の変化を XRD と窒素吸着法により評価した．

試料調製

３．結果と考察

原料には市販のサポナイト粉末（スメクトン SA：クニ
ミネ工業㈱製）と共沈法により作製した LDH（ハイドロ

３．１

結晶相

タルサイト：Mg6Al2（OH）16CO3･4H2O）を用いた．硝作製した複合試料及び出発原料の XRD 回折パターンを酸マグネシウム六水和物と硝酸アルミニウム九水和物をFig. 1 に示す．尚，ここでは良好な結果が得られたサポナ

Mg/Al 比が 3 となるように所定の濃度に調製し，ここに

イト：LDH の重量比が 1：0.157 の試料について報告する．

水酸化ナトリウムと炭酸ナトリウムの混合溶液を投入し，参照の mix 試料では混合比に応じた回折強度が観察され，共沈ゲルを作製した．室温で 2 時間熟成した後，遠心分離

LDH のピークも明確に認められた．これに対して複合試器を用いて固液分離・水洗を行い，110℃の恒温槽で乾燥

料では LDH の回折強度が著しく低下した．これは，複合させ，乳鉢で解細して試料粉末とした．

化の過程で 00l の積層を完全に復元できなかったことが原因と考えられる．また，サポナイトの 00l に対応するピー

２．
２

複合化処理

ク形状にも変化が見られた．

試料の混合比は，サポナイトと LDH の重量比が 1：1 と，
全層電荷量が等しくなる 1：0.157 とした．複合化には 3つの方法を用いた．1 つはボールミルを用いたメカノケミ
カル効果を利用して混合・複合化を進行させる方法であり，混合粉末を遊星ボールミル中で乾式粉砕（300rpm—1h）して複合粉末を得た [dm]．もう１つは熱分解した LDH の水中での再構築反応を利用して複合化させる方法であり，500℃で 1 時間熱処理した熱分解 LDH とサポナイトの混合粉末を蒸留水中に固液比 0.6：100 で 5 時間攪拌し，110℃で乾燥させて複合粉末を得た [sol]．さらに両方を組み合わせた方法として，500℃で１時間熱処理した熱分解 LDHとサポナイトの混合粉末を蒸留水中で湿式粉砕（300rpm—1h）し，110℃で乾燥させて複合粉末を得た [wm]．対象試料には，同じ重量比で乳鉢混合した試料を用いた [mix]．

２．
３

キャラクタリゼーション

試 料 の 結 晶 相 は， 粉 末 X 線 回 折 装 置（XRD：XRD—
6100，島津製作所㈱製）を用いて調査した．また，熱重量

Fig. 1 XRD patterns of smectite / LDH composites preparedfrom various method（a）dry-mill [dm],（b）wet-mill [wm],（c）solution reaction [sol] and（d）only mix[mix], comparedwith starting materials.

−9−

３．
２

比表面積と細孔径分布

比較的ブロードなメソ孔の生成が認められた．

窒素吸着における各複合試料の吸・脱着等温線をサポ

Fig. 4 に各試料の水蒸気吸着における吸・脱着等温線をナイトと LDH の等温線とともに Fig. 2 に示す．いずれのサポナイトと LDH の結果とともに示す．窒素吸着の結果

試料もヒステリシスが見られ，BDDT の分類 14）によれば
LDH は V 型，他の試料は IV 型であった．mix 試料では，相対圧が 0.8 以下の領域ではサポナイトと同様の等温線を示し，0.8 以上の高相対圧側では LDH 様の立ち上がりが観察された．これはサポナイトと LDH の両方の特徴を有しているためと考えられる．これに対して，wm・sol 試
料では全体についてサポナイトと同様の変化が観察された．この時，各々の吸着量の差に応じてヒステリシスの大きさに違いが見られた．一方，dm 試料の等温線は明らかに他の試料とは異なり，高相対圧での急激な立ち上がりを示した．この違いはメソ領域において何らかの微細構造の変化が生じたことに対応する結果と考えられた．
そこで，各試料の脱離曲線をもとに BJH 法 15）を用いて細孔径分布を見積もった．この結果を Fig. 3 にサポナイ
トと LDH の結果と伴に細孔分布曲線として示す．なお，
2nm に見られる鋭いピークは計算課程で生じる false ピー
クであり，ここでは無視して構わない．サポナイトの細孔はミクロ孔が主であり明確な細孔は見られないのに対して，LDH では 8nm を中心としたメソ孔が見られた．この8nm を中心とするメソ孔は，参照である mix 試料でも見られた．一方，複合試料では 8nm のメソ孔は全く見られなかった．wm・sol 試料では 1nm 以下のミクロ孔の増加

Fig. 3 Pore size distribution of smectite / LDH composites
prepared from various method（a）dm,（b）wm,（c）sol and（d）mix, compared with starting materials.

が認められたのに対し，dm 試料では 30nm を中心とした

Fig.2 N2 adsorption and desorption isotherms of smectite /LDH composites prepared from various method（a）dm,（b）wm,（c）sol and（d）mix, compared with starting materials.

Fig.4 Isotherm curves of smectite / LDH composites prepared from various method（a）dm,（b）wm,（c）sol and（d）
mix, compared with starting materials.

− 10 −

再構築機能を有する新規の粘土材料の作製とその吸着特性とは異なり，脱着曲線はどの試料でも閉じなかった．これは水蒸気と試料表面との間に何らかの親和性があることに対応した結果である．LDH の等温線は低相対圧で急峻な立ち上がりを示
す特異な形状を示していた．これは，LDH に含まれる OH 基がTable 1 Specific surface area (SSA) and total pure volume (TPV) for nitrogen and water adsorption
SampleN2 adsorption

H2O adsorption
TPV [ml/g]

SSA [m2/g]

TPV [ml/g]

SSA [m2/g]

167
268
251
256
305
104

0.40
0.29
0.22
0.30
0.31
0.52

353
326
357
390
351
563

dm
wm
sol
mix
SmectonSA
LDH syn

105
97
106
116
104
168

Hydrophilicity（SH2O/SN2）
2.1
1.2
1.4
1.5
1.2
5.4

低相対圧で急激に水蒸気と水素結合を生じることが原因と考えられる．しかし，複合試料では LDH のような変化は見られず，サポナイトの等温線に類似の吸着・脱離等温線が見られた．mix 試料はほぼサポナイトと同様の結果であった．これに対し，複合試料ではヒステリシスが大きくなり，それとともに最大吸着量は減少した．また，dm 試料のヒステリシ
スが最も大きく，脱着曲線の戻りも悪いことから，水に対する親和性が他の試料と異なっていることが示唆された．
複合試料の窒素吸着による比表面積と細孔容積の算出結果
を，水蒸気吸着の結果より求めた比表面積と細孔容積と併せて Table 1 に示す．水蒸気吸着による比表面積（SH2O）と窒素吸着による比表面積（S N2）の値から S H2O/S N2 を求め，この比率で試料の水との親和性を判断する方法が Saada らによって提案されている 16）．この値も Table 1 に併せて示した．
複合体試料の比表面積は 170 〜 270 ㎡ /g となり，これはサポナイトと LDH の間に位置した．しかし，単純な混合比から算出した理論比表面積 278 ㎡ /g よりも小さな値であった．dm 試料の比表面積は 167 ㎡ /g で，他の試料に比べ顕著に小さな値であった．乾式粉砕ではメカノケミカル効果により粒子同士の凝着が生じ，これにより比表面積が低下するという報告 17，18）があり，dm 試料ではこの効果が顕著であったと考えられる．一方，細孔容積は 0.22 〜 0.40mL/g となった．
理論細孔容積を求めると 0.34mL/g となった．dm 試料ではこの理論値を超える細孔容積を持っており，複合化の効果が大きく現れていた．一方，他の試料ではいずれも理論値を超えることはなく，mix 試料は理論値とほぼ同じ値であった．
水蒸気吸着から算出した比表面積は，窒素吸着による比表

Figs.5 SEM and TEM photographs of smectite / LDH composites;（a）dm,（b）wm,（c）sol.

面積のような大きな差は複合試料間に見られなかった．wm
試料の 326 ㎡ /g が最も小さく，mix 試料の 390 ㎡ /g が最もの値は複合試料の割には高い値を示しており，複合化にとも大きな値であった．窒素吸着同様に算術値を求めたところ，なう親水性の発現と考えられる．これは乾式粉砕により生じ380 ㎡ /g となったことから，mix 試料は単純な混合物の値

る 30nm を中心としたメソ孔が，想定通りに LDH と粘土のを示しており，他の複合試料は複合化に伴い水蒸気でも比表複合構造で構成されていることと，粉砕によるメカノケミカ

面積が低下したことが明らかになった．また，全細孔量に関ル効果の導入により生じた親水性と言える．これとは逆に，しても同様な結果であった．

他の複合試料ではサポナイトと LDH のそれぞれの凝集構造

各比表面積から算出した試料の親水性には，複合試料間で大きな差が見られた．dm 以外の試料では大きな差は見られが生じてしまい，dm 試料のような顕著な変化が現れなかったと推察される．

ず，サポナイトと同程度の値であった．一方，dm 試料では他の試料が 1.2 〜 1.5 であるのに対して，2.1 という大きな値３．３であった．混合比率から求めた値は 1.4 になることから，こ− 11 −

微構造

Figs. 5 に各試料の SEM 写真と TEM 写真を示す．SEM

写真では，各複合試料は数 µm の凝集粒子で構成されてい細孔径分布の変化では，各試料による差がより顕著であるが，その表面形態が試料により異なることが観察された．

った．未熱処理試料ではサポナイトによるミクロ孔の増加

dm 試料では微細な粉末に覆われた形態が観察されたのにと複合化の特徴であった 30nm 付近のメソ孔の減少が見ら

対し，wm 試料ではそのような微細構造は僅かにしか観察れた．10nm に現れた細孔は LDH の再生によるものと考されず，sol 試料では表面が平坦な粒子のみが観察された．

えられる．300℃熱処理試料では，ミクロ孔の増加は観察

また，TEM の結果から，dm 試料では数 10nm 程度の細されたが，メソ孔付近は未熱処理試料ほど顕著な変化は孔を有する多孔構造が形成していることが観察された．一

見られず，全体にブロードな分布となった．これに対し，方，wm 試料と sol 試料では明確なメソ細孔は観察されな

500℃熱処理試料では細孔径分布に大きな変化は観察されかった．特に，sol 試料では TEM 像でも明確な細孔構造

ず，メソ孔については水処理前処理も水処理後の方が増加は観察できなかった．この結果は，各試料の細孔径分布のした．これは複合化で導入した細孔構造が，500℃の熱処結果と一致した．

理により強固に保持された結果である．

３．
４／ LDH 複合多孔体は，その後の熱処理により再構築機能

これらの結果，乾式粉砕処理により合成したサポナイト

再構築機能

水中で静置させる前後の XRD 回折パターンと窒素吸着を制御でき，また合成時に導入したメソ孔を 500℃の熱処より求めた細孔径分布を Figs. 6 に示す．未熱処理，およ理で保持できる多機能な多孔体であることが明らかになっび 300℃焼成試料では水処理後に 8°付近のサポナイトのた．

00l ピークが現れた．また，未熱処理の試料では LDH の

４．総

00l ピークも観察された．これに対して，500℃焼成試料

括では，このようなサポナイトや LDH の復元は観察されな再構築機能を有する粘土の合成に，サポナイトと LDH のかった．この変化は，未熱処理試料では，サポナイトと複合体を用いることについて検討した結果，以下のこと

LDH の両方の再構築が生じ，300℃熱処理試料ではサポナが明らかになった．（1）乾式粉砕，熱分解 LDH を用いた

イトの再構築のみが生じたのに対し，500℃熱処理試料で湿式粉砕，および熱分解 LDH の再構築反応を利用した溶はどちらの再構築も生じなかったことを示している．

液処理の 3 つの手法を検討したところ，乾式粉砕試料でFigs.6 XRD patterns and pore size distribution of（a）500oC,（b）300oC heated and（c）as prepared samples. [solid: after water treatment, broken: before one]

− 12 −

再構築機能を有する新規の粘土材料の作製とその吸着特性30nm 程度を中心とした新しいメソ孔を有するサポナイト

８） I.Y.Park, K.Kuroda & C.Kato, Chem. Lett., 1989, 2057

／ LDH 複合多孔体が作製できた．
（2）この多孔体は比表（1989）

面積が 167m2/g と低いものの細孔容積は 0.4ml/g で単純

９） 山岸俊秀 , 大柳祐一 , 成田栄一 ,: ハイドロタルサイト比より求まる容積を凌駕した．これはサポナイトと LDH

様層間化合物の形成と熱処理による有害重金属オキソ酸

がミクロなレベルで均質混合体となった為であることがイオンの除去・固定化 , 日本化学会誌 , 1993, 329（1993）

TEM 観察より明らかになった．
（3）この多孔体を熱処理

10） J.Srodon: Syntheis of mixed-layer kaolinite / smectite, Clays Clay Miner., 28, 419-424（1980）

することで，500℃の熱処理では堅固なメソ多孔体，300℃の熱処理でサポナイトの再生能を有する多孔体，および熱11） D.D.Eberl, B.Velde, T.McCormick: Synthesis of illite-

処理無しでサポナイトの再生能と LDH の再構築能の両機

smectite from smectite at Earth surface temperatures

能を持つ多孔体という機能性の制御が可能であることが示

and high pH, Clay Miner., 28, 49（1993）
12） T.Matsuda: Synthesis of a regularly interstratified

唆された．

2:1 margarite and beidellite（34 angstroms phase), Clay謝辞

Miner., 33, 363-367（1998）

本研究を遂行するに当たり，御支援を頂きました（財）

13） D.Guillaume, A.Neaman, M.Cathelineau, 他 7 名 :Ex-

コスメトロジー研究振興財団，および共同研究者に深く感

perimental synthesis of chlorite from smectite at 300oC
in the presence of metallic Fe, Clay Miner., 38, 281-302

謝いたします．

（2003）（引用文献）

14） S.J.Gregg & K.S.W.Sing, "Adsorption, Surface Area,

１） R.E.Grim, Clay Mineralogy-2ndand Porosity", 2nd Ed., Academic press（1982）

ed., McGraw-Hill（1968），森本伸男，砂川一郎，都城秋穂，鉱物学，岩波15） E.P.Barrett, L.G.Joyner and P.H.Halenda, J. Amer.
Chem. Soc., 73, 373（1951）

書店（1975）
２） R.M.Barrer & D.M.MacLeod, Trans. Faraday Soc.,51,

16） A.Saada, B.Sifert and E.Papirer, "Comparison of thehydrophilicity / hydrophobicity of illites and kaolin-

1290（1955）

ites", J. Colloid & Interface Sci., 174, 185（1995）

３） G.W.Brindley & R.E.Semples, Clay Miner., 12, 229

17） G.Suraj, C.S.P.Iyer, S.Rugmini and M.Lalithambika,（1977）"The effect of micronization on kaolinites and their

４） S.Yamanaka, T.Doi, S.Sakako & M.Hattori, Mater.Res

sorption behaviour",Applied Clay Sci., 12, 111（1997）

Bull., 19, 161（1984）

18） P.J.Sanchez-Soto, A.Wiewio'ra, M.A.Avile's, 他４５） S.Sterte, Clays Clay Miner., 34, 658（1986）
６） S.Miyata & T.Kumura, Chem. Lett., 1973, 843（1973）

名 , "Talc from Puebla de Lillo, Spain. II. Effect of dry７） T.Kwon & T.J.Pinnavaia, Chem. Mater., 1, 381（1989）

grinding on particle size and shape", Applied Clay Sci.,
12, 297（1997）− 13 −

独自のチタン反応を利用するムスク・ジャスミン系高級香料の実用的化学合成関西学院大学

理工学部化学科田陽辺

We engage in the exploitation of new practical organic reactions directed toward the process chemistry utilizing ouroriginal reactions.   Especially, we focused our attention on the Ti-Claisen condensation and aldol additions from a recent
standpoint of the environmentally benign organic synthesis for the valuable perfumes such as macrocyclic musks (civetone
and muscone), jasmine (furanone analogs of jasmone), and mints, and for 1β-methylcarbapenem antibiotics (meropenem).
(1) Practical synthesis of natural macrocyclic musks, especially civetone and muscone, is one of the most important topics
in perfume chemistry. An efficient, practical, and stereocontrolled synthesis of natural Z-civetone, a representative musk
perfume, was performed utilizing a Ti-Dieckmann (intramolecular Ti-Claisen) condensation of dimethyl Z-9-octadecanedioate
as the key step.  This cyclization reaction to afford the 17-membered β-keto ester has some advantages compared with thetraditional basic Dieckmann condensation such as higher concentration (100~300 mM), lower reaction temperature (0 − 5 ℃), shorter reaction time (1 − 3 h), use of environmentally benign (low toxicity and safe) reagents (TiCl4 and Et3N or Bu3N),and economical reagents and solvents.  
(2) A laboratory scale synthesis was also performed utilizing intermolecular the Ti-Claisen condensation of methyl
10-decenoate followed by an intramolecular olefin metathesis using the Grubbs' reagent afforded the 17-membered β-ketoester.  Characteristic features of this synthesis are as follows; simplest synthesis ever reported, highest overall yields, notonly a stepwise but also a one-pot procedures.  
(3) A formal synthesis of R-muscone was achieved utilizing the intramolecular powerful Ti-aldol addition of available
2,15-hexadecanedione to afford the 15-membered aldol.   Salient features are as follows.   Aldol adduct was obtained forthe first time.   The reaction proceeded with a higher concentration (10-50 mM) compared with ring closing metathesis.  
Stereoselective dehydration of aldol adduct using Ti(Oi-R)4 afforded E-3-methylcyclopentadecenone, which is a key
precursor of the Noyori asymmetric hydrogenation using Ru-BINAP.  
(4) TiCl4-Bu3N-mediated condensation of ketones with α,α-dimethoxyketones afforded trialkylsubstituted 2(5H)-furanones ina one-pot manner, wherein aldol addition and furanone formation occurred sequentially.  Its application to straightforward
synthesis of (R)-mintlactone and (R)-menthofuran, two representative natural mint perfumes, was demonstrated.  Because of
their interesting structure and usefulness, these compounds have been challenging synthetic targets.  Our present methodof (R)-mintlactone seems to be the simplest of the reported methods, because of the one-step synthesis.
(5) We developed the present protocol for the aldol-type addition using simple phenyl esters and its application to a short step
synthesis of the lactone analogs of dihydrojasmone and jasmone, which are representative perfumes with jasmine odor.  
The analogs were found to possess unique odor for fragrance.  
(6) As a notable recent application of the present reagent (TiCl4 - Bu3N), the Merck process group demonstrated a multikilogram scale practical synthesis of the anti-MRSA carbapenem intermediate utilizing the TiCl4 - Bu3N reagent as its key
step.  We found that Ti-reaction successfully applied to a couple of key reactions to construct 1β-carabapenem skeleton.  In
particular, a short step synthesis of 1β-methylcarbapenem, ex. Meropenem® was performed utilizing a new dehydration
Ti-Claisen condensation.

１．緒

カルバペネム抗生物質の生産においては，向山・野依・村言

橋教授法という純国産の独自技術が医療に寄与した．すな

21 世紀の現在，人間生活を強く支える有機合成化学は

わち，これらプロセス化学という科（化）学技術が人類に環境問題を踏まえた新たな局面を迎えている．すなわち，

貢献し，大きなインパクトを与えた事実は記憶に新しい．

いわゆるグリーンケミストリーを考慮した有機反応の開発

私達は，数年前からこの考えに共鳴し，グリーンなチタと合成への適用が急務である．例えば，野依教授らによる

ン＝クライゼン縮合・アルドール付加という独自反応の開不斉合成反応の開発が天然香料 l −メントールの工業生産

発と有用ファインケミカルズ合成への応用（プロダクトアに結びつき，天然植物の伐採による環境破壊を防ぎ，また，

ウト指向）（Fig. １），さらには各種エステル化・アミド化・Practical chemical syntheses of highgrade musk and jasmine perfumes
utilizing original titanium mediatedreactions.
Yoo Tanabe
Department of Chemistry, School of
Science and Technology, Kwansei Gakuin
University

スルホニル化・シリル化などの汎用反応の実用的合理化（マーケットイン指向）を行ってきた．
すなわちコスメトロジーの分野に展開すべく，特に，香料業界最大のテーマの一つである天然大環状ムスク香料（＝ Z −シベトン・R −ムスコン等）の実用的化学合成を行い，初期の成果を得ている．これらの天然ムスクの有用性は，
言うまでも無く香料化学で認められており，その実用生産− 14 −

独自のチタン反応を利用するムスク・ジャスミン系高級香料の実用的化学合成

エネルギー３）が最大の懸案である．また，植物性香料シス−ジャスモンの新規フラン誘導体を合成を行い，調香にかけたところ非③塩基法に比べ温和・実用的な温度条件（− 40 〜 +50 ℃），

常に残効性の優れた個性的なメンズフレグランスとして期

安価・安全な反応剤・溶媒（トルエン・ジクロロメタ

待されることが分かった．さらに，
閾値が非常に小さい（香ン）で可能（高価で，工業的に不利なエーテル系溶媒，

気が強い）天然ミント香料であるミントラクトンやメント
フランの最もシンプルで短段階な合成法を見出した．加えLDA 反応剤を使用しない）④塩基に不安定な官能基（ハロゲン・ケトン・アルコール・て，最も進化した抗生物質である 1β −メチルカルバペネム

トシルオキシ）共存する基質への適応には２つの炭素骨格形成鍵段階があるが，そのいずれにも⑤極めて低毒で，安価な Ti，Zr 試剤の使用にて環境調和型

Ti −反応を適用した．特に後段の Ti −クライゼン縮合は従⑥ Zr 試剤法は熱力学的不利で従来困難であった α,α −二置来の塩基法と異なり脱水型で進行することを見出した．高換エステルのクライゼン縮合が可能（最強のクライゼン縮活性・高性能で重要なメロペネム中間体にも適用できる．

合）これらの化合物の合成はチタン＝アルドール・クライゼ⑦ルイス酸で困難である単純エステルの直接アルドール型

ン反応で初めて可能になり，工業的にも期待できる方法で反応が可能（適応範囲の大幅な拡大）ある（Fig. ２）．

２．
３． 実験・結果
２．３．１ チタン＝クライゼン縮合・アルドール付加の基本的性能２．３．２ 天然大環状ムスク香料：Z- シベトン・Rムスコンの短段階・実用合成
天然大環状ムスク香料である Z −シベトン・R −ムスコ
ンの実用合成は，香料化学の最重要課題である．まず，Ti

クライゼン縮合は有機合成上基本的に重要であるが，従−クライゼン縮合を利用して，シベトンの合成を２つの方

来塩基法は反応性や選択性に限界があった．チタン（Ti）

法で行った．一方は実験室的に効率的な方法で，他方は工［ジルコニウム（Zr）］−クライゼン縮合や類型の重要なア業化を志向した実用的製法である．さらに，R −ムスコン

ルドール付加は以下の優れた特徴を有す．

の実用合成へ向けての展開を行った．

①塩基法（NaH, LDA 等）に比べ高い反応速度・強力な反②エノールシリルエーテル・ケテンシリルアセタールを基２．３．２．１ Ti −ディークマン（分子内クライゼン）
縮合を用いる Z −シベトンの実用合成４）質とする向山法２）と異なり，ケトン・エステルを用い

Z −オレイン酸を出発物質とする方法である．Z −オレイる直接法であるためアトムエコノミー大・低コスト・省

ン酸をジャパンエナジーで確立されている長鎖カルボン酸

応性・高収率・高立体選択性− 15 −

ルエステル化しジメチルエステルに導く（Fig. ３）．この２．３．２．２ Ti- クライゼン縮合およびメタセシス環化を利用したシベトンの短段階製法５）ジメチルエステルを分子内 Ti −クライゼン（ディークマン）

まず，末端に二重結合を持つメチル＝ 2 −デセノアート

縮合によって 17 員環状 β −ケトエステルに導くことがでを Ti −クライゼン縮合によって鎖状 β −ケトエステルにきた．引き続く加水分解・脱炭酸することで，天然物と同導く（Fig. ４）．この反応も従来塩基法に比べかなり優れ一である Z −体のシベトンを合成することに成功した（Fig.

ている．続いて最近天然物合成で盛んに用いられている

３）．この鍵段階である環化の最大の特徴は，強力な炭素

Grubbs 触媒を用いるオレフィンメタセシス環化により 17−炭素結合能を有す反応のため，類型の環化反応に比べ高員環状 β −ケトエステル（E/Z = ca. 3:1）を得ることがで

濃度，短時間で進行する点でいわゆるグリーンケミカルなきた．１. １の方法と同様に加水分解・脱炭酸することにものである．（Ti −ディークマン環化と TiCl3 − Zn/Cu をよりシベトン（E/Z = ca. 3:1）を合成することができた（Fig.

用いる McMurry カップリングを比較してみる．Ti −ディ４）．３段階の通算収率が 74％であり，これまでのシベトークマン環化 : ０−５℃ , 〜 100mM, １h. McMurry カップ

ン合成の中で最も高い．しかも興味深いことにこれら一連

リング : 80℃ , 〜５mM, 〜 50h）．

の反応がワンポットで進行することを見出した．すなわち，の末端酸化技術５） によりジカルボン酸とし，これをメチ

これは Z −シベトンの唯一ともいえる実用的合成であり，各段階の収率が高く同じトルエン溶媒を使用しているため天然品と同一の Z −体であるため製品の差別化が期待され可能であったが，脱メトキシカルボニル化まで反応が一気る．しかも，安価な原料（Z −オレイン酸）・反応剤（TiCl4，に進行するという，これまでの合成法の中で最もシンプル

Et3N 等）を使用しているため工業的に有望な製法である．

な製法となった．ただし，Grubbs 触媒が非常に高価であ− 16 −

独自のチタン反応を利用するムスク・ジャスミン系高級香料の実用的化学合成

ること，環化の容積効率が Ti −ディークマン縮合反応に比コンの形式合成に相当する．
また別の方法として，入手容易なエステルと安価な酸ク

べ約 30 − 100 倍の高希釈を必要とすることから大量合成にロリドを用いる交差型 Ti −クライゼン縮合・メタセシス

は不向きな実験室的な方法である．

環化を利用し，短段階の R −ムスコンの合成を達成した７）
２．３．２．３

Ti- アルドール付加・クライゼン縮合を用（Fig. ６）．

いる R- ムスコンの短段階合成
Ti −アルドール付加を利用して R −ムスコンの短段階形
式合成を行った（Fig. ５）．入手容易なジメチルジケトン

２．３．３

Ti- アルドール型付加を用いる天然ジャスミン

香料 cis- ジャスモンのラクトンアナログの創生と合成７）のアルドール反応は，従来法では縮合まで進行し，得られ代表的ジャスミン天然香料 cis −ジャスモンのラクトン

た α, β −不飽和エノンは E, Z 混合物となる．すなわち混合

アナログは合成香料としての期待されていたが，これまで物の状態では Ru-BINAP 不斉還元６）によって R −ムスコ

適当な合成法がなかった．すなわち，環状ケトンのラクト

ンを得ることはできない．最近，温和で強力な Ti −アルンへの等価変換は新規香料を探索する一手法であり，事実，

ドール付加を利用し初めて付加体を単離できた．引き続くデヒドロジャスモン（cis −ジャスモンの二重結合飽和体）

立体選択的脱水で，E-rich の α, β −不飽和エノン（E/Z =のアナログはジ・ボーダン社が合成している．筆者らは温ca. 9:1）を得ることができた．このエノンを既知の Ru-

和で強力なエステルの Ti −アルドール型付加を利用して合を想定すれば，約 80％ ee の R- ムス

成を可能にした（Fig. ７）．調香評価の結果，個性的な新BINAP 不斉水素化

６）

３ｄ）

− 17 −

規香料であることが分かった．低コストの製法となれば製幾つかの既存法は多段階を要した．すべて市販の原料・反品化が期待される．

応剤を用いる最もシンプルな合成と考えられる．今後，アメニティーライフの向上化に対しこの種の香料の利用が増

２．３．
４ Ti- アルドール縮合を用いる三置換フラノンの一段階合成と天然ミントラクトンの合成への応用８）すものと予想される．

中間体として基本的に重要な複素環であるが，三置換体の２．３．５ 新規 Ti −クライゼン縮合 1β −メチルカル
バペネムの短段階・実用合成９）

一般的・実用的合成法は少ない．最近筆者らは Ti −アルド

最も進化した抗生物質である１β −メチルカルバペネム

ール縮合を利用する一般法を見出し，その応用として，ミの実用合成法の確立ならびに合理化は重要な課題である．

ント香料として重要な（R）−ミントラクトン・（R）−メン

２つの炭素骨格形成鍵段階があるが，そのいずれにも Ti-

トフランの短段階合成を見出した（Fig. ８）．これまでの反応を適用した（Fig. ９）．特に後段の Ti −クライゼン縮2（5H）- フラノンは天然物の基本骨格としてまた合成− 18 −

独自のチタン反応を利用するムスク・ジャスミン系高級香料の実用的化学合成

This research was partially supported by a Grant-in-Aid for合は従来の塩基法と異なり脱水型で進行することが分かり，結果として従来法より短段階である．高活性・高性能

Scientific Research on Priority Areas (A) "Exploitation of Multi-

で重要なメロペネム中間体にも適用できる．

Element Cyclic Molecules" and on Basic Areas (C) from the

４．考Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology,

察Japan, and by the Cosmetology Foundation in Japan.

以上，チタン・ジルコニウムを利用するグリーンケミカ
ルなクライゼン縮合・アルドール付加反応の開発と有用香（参考文献）

料・医薬の実用合成法への応用について述べた．従来法で

１） a) Tanabe, Y., Bull. Chem. Soc. Jpn., 1988, 62, 1917.  

ある塩基反応剤を用いる方法と異なる特性を有すこの方法b) Yoshida, Y.; Hayashi, R.; Sumihara, H.; Tanabe, Y.

は，応用範囲が広く，今後も様々なファインケミカルズ合Tetrahedron Lett., 1997, 38, 8727.  c) Yoshida, Y.; Matsumoto,

成への展開が今後もなされると期待できる．

N.; Hamasaki, R.; Tanabe, Y. Tetrahedron Lett., 1999, 40,

特にコスメトロジーの分野における重要テーマである天4227.   d) Tanabe, Y.; Hamasaki, R.; Funakoshi, S. Chem.

然大環状ムスク香料（＝ Z −シベトン・R −ムスコン等）の
商業レベルでの化学合成が実現できればインパクトのある

Commun., 2001, 1674.  
２） a) Mukaiyama, T.; Banno, K.; Narasaka, K. Chem. Lett.,
1973, 1011; J. Am. Chem. Soc., 1974, 96, 7503.  b) Mukaiyama,

研究となろう．

５．総

T. Organic Reactions; Wiley: New York, 1982; Vol. 28, p. 203.  

括３） a) 1b,  b) 1c,  c) Tanabe, Y.; Matsumoto, N.; Funakoshi, S.;
Manta, N. Synlett, 2001, 1959.  d) Tanabe, Y.; Matsumoto N.;

これらの独自チタン反応の有用性を活かし，特に各種有用天然・合成香料化合物・医薬のこれまでにない斬新な実

Higashi, T.; Misaki, T.; Itoh T.; Yamamoto, M. Mitarai, K.;践的合成方法を提供することを目的とし，幾つかの実施例

Nishii, Y. Tetrahedron, 2002, 58, 8269.
４） Tanabe, Y.; Makita, A.; Funakoshi, S.; Hamasaki, R.;について紹介した．

Kawakusu, T. Adv. Synth. Catal., 2002, 344, 507.

なお，Z −シベトンの合成に関しては朝日・読売・日経新聞に掲載された＜朝日新聞夕刊（関西版）2000, 9/7; 読５） Hamasaki, R.; Funakoshi, S.; Misaki, T.; Tanabe, Y.
Tetrahedron, 2000, 56, 7423.

売新聞夕刊（関東版）2000, 9/14; 日本経済新聞朝刊（全国６） Ogura, S.; Yamamoto, T. JP 94192161; Chem. Abstr., 1995,

版）2000, 10/9 ＞．

122, 132836.

ところで，この独自チタン反応は，最近，世界最大の抗生物質メーカー・メルク社の抗院内感染抗生物質（anti-７） 田辺 陽，文科省科研費特定領域研究（Ａ）第２回公MRSA）合成で実際に工業化規模で実施された（当然火急

開シンポジウム「多元素環状化合物」（大阪大学）9 月 25

求められている医薬（Fig. 10）） ．これは，チタン反応日（2002 年）．

10）が十分に工業的に可能なプロセスであるという，一つの先

８） Tanabe, Y.; Mitarai, K.; Higashi, T.; Misaki, T.; Nishii, Y.
Chem. Commun., 2002, 2542.

駆けと見なせる．
最後に，本研究を遂行するに当たりお世話になりました

９） Tanabe, Y.; Manta, N.; Nagase, R.; Misaki, T.; Nishii, Y.;

コスメトロジー財団に感謝申し上げます．なお，発表したSunagawa, M.; Sasaki, A. Adv. Synth. Catal., 345, 967 (2003).

論文 3d, ４, ８に関しては，以下の Acknowledgement を

10） Humphrey, G. R.; Miller, R. A.; Pye, P. J.; Rossen, K.;
Reamer, R. A.; Maliakal, A.; Ceglia, S. S.; Grabowski, E. J.

付記しました．

J.; Volante, R. P.; Reider, P. J. J. Am. Chem. Soc. 1999, 121,
11261.

− 19 −

環境に適した新規な糖型界面活性剤の開発と応用
東京理科大学

吉

村

理学部

倫

一

Novel nonionic gemini surfactants such as N, N'-dialkyl-N, N'-dilactobionylamidoethylenediamine (2CnLac, n is hydrocarbon
chain length of 8, 10, and 12) and N-[2-(N'-alkyl-N'-lactobionylamino)ethyl]-N, N-dimethyl-1-alkylammonium bromide (2CnAmLac,n = 8, 10, and 12) were synthesized, and characterized by investigating surface tension, dynamic light-scattering, andfluorescence spectrum of pyrene.  2CnLac with two hydrocarbon chains and two sugar hydrophilic groups were obtainedby the reaction of ethylenediamine and alkyl bromide, followed by the reaction with lactobionic acid.   2CnAmLac with
two hydrocarbon chains and one ammonium and one sugar hydrophilic groups were prepared by the reaction of N,
N-dimethylethylenediamine and alkyl bromide, followed by the reaction with lactobionic acid.   The solution properties ofnonionic gemini surfactants, 2CnLac and 2CnAmLac, were influenced significantly by the hydrocarbon chain length, numberof chains, and nature of hydrophilic groups.  The critical micelle concentrations (cmc) of gemini surfactants shifted to lower
concentrations with increasing hydrocarbon chain length, and their values were smaller by about one to three orders ofmagnitude than those of the corresponding monomeric surfactants with the same chain length.   The areas per molecule
occupied by gemini surfactants were extremely small, showing they were highly compact at the air/water interface.   Inaddition, adsorption and micellization behavior of gemini surfactants was estimated by parameters such as pC20 (theefficiency of surface adsorption), cmc/C20 (the ease of adsorption relative to the ease of micellization), and Gibbs free energyof adsorption and micellization.  From the dynamic light-scattering measurements, the aggregates of gemini surfactants werevery small, and two hydrodynamic diameters above the cmc were observed.  The fluorescence intensity ratio of the firstto the third band in the emission spectra of pyrene started to lower from far above the cmc for gemini surfactants.  Thissuggests that loose micelles or premicellar aggregates are formed in solutions.  Thus, sugar-based gemini surfactants exhibited
unique properties superior to the conventional monomeric surfactants.  

１．緒されている。一般に，Gemini 型界面活性剤は，従来の単言

鎖型界面活性剤と比べて，高い水への溶解性，低い臨界ミ界面活性剤は非常に広範囲な用途を持つ化学工業製品のセル濃度（cmc）や高い表面張力低下能を有することで知１つであり，家庭用・業務用洗剤，化粧品，繊維，土木，られている。これまでに，Gemini 型界面活性剤の合成や建築などの様々な製品に用いられている。近年では，バイ物性に関する数多くの研究が報告されてきたが，構造と物

オテクノロジーやウイルス研究などの先端技術分野への界性との間には不明瞭な点が多く残されている。

面活性剤の応用拡大が図られ ，さらに最小限の量で最大

近年，グルコースやマルトースなどの糖を骨格とし，長限の効果を発揮する新規界面活性剤の研究・開発が進めら

鎖アルキル鎖をグリコシド結合により導入した糖型界面活れている。界面活性剤の向上・改良を進める上で，従来の性剤が注目されている５）〜７）。これらは，従来工業的に合性能と同等あるいはそれ以上の性能を持ち，低毒性で分解成されている界面活性剤とは異なる特異的な化学構造と界性が良くかつ環境にやさしいなどの機能を付した機能性界面活性，さらに優れた生分解性および生物活性などの特性面活性剤の開発が望まれている。界面活性剤の性能を向上を有している。そのため，資源，環境，安全をコンセプト

させるには，（１）異なる種類の界面活性剤を混合させる，とする次世代の工業資源として大きく期待されており，化（２）界面活性剤への新たな官能基の付与，（３）新しい構

粧品や石油三次回収において実用化が進められている。さ造を有する界面活性剤の分子設計・合成などが挙げられる。

らに，糖型界面活性剤は良好な起泡力と泡沫安定性を持ち，特に，１分子内に２本の疎水鎖と２個の親水基を持ち，ポ洗浄力が高く硬水中での使用も可能で，1980 年代後半か

リエチレンなどの短い連結基（スペーサー）によって繋いらは洗剤に使用されている。また，糖型界面活性剤のほとだ構造の Gemini 型界面活性剤

んどは１あるいは２本の長鎖アルキル基をグリコシド結合

１）

２）〜４）

は，近年多いに注目

Development and Applications of Novel
Sugar-Based Surfactants
Tomokazu Yoshimura
Faculty of Science, Tokyo University of
Scienceなどにより糖と連結させたものであり８）, ９），アルキル基含有の化合物に複数の糖鎖を導入した研究例 10）,11）は少ない。
本研究では，糖鎖を有する Gemini 型界面活性剤を分子設計，合成して，表面張力や光散乱測定などから界面化学的特性を評価し，さらに，化粧品や洗浄分野における分散剤，乳化剤，洗浄剤としての効果を調べ，実用条件で効率の優れた機能性界面活性剤の開発を目指すことを目的とする。

− 20 −

環境に適した新規な糖型界面活性剤の開発と応用

２．実
２．
１

チモールフタレインにより溶液が青色であることを確認し験た。反応終了後，メタノールを減圧留去して，残った粘状糖鎖を有する Gemini 型界面活性剤の合成

２．１．１

２鎖型化合物の合成

物をアセトンに溶解させて不溶物の塩を取り除いた。さらにアセトンを除いて，得られた固体を酢酸エチルおよびヘ

12）

１−プロパノールに溶解させたエチレンジアミンに，2.2

キサンで洗浄，酢酸エチルで再結晶して，N − [2 −（アル倍モルの臭化アルキル（オクチル，デシル，ドデシル）を

キルアミノ）エチル ] − N，N −ジメチル− 1 −アルキルアン

加え，還流下 30 時間加熱撹拌した。反応中はアルカリ条

モニウム臭化物を得た。構造は，IR および 1H NMR スペ

件を保つため，水酸化ナトリウム−メタノール溶液を滴下

クトル，元素分析により確認した。

しながら，チモールフタレインにより溶液が青色であることを確認した。反応終了後，１−プロパノールを減圧留去

２．
２．
２

糖鎖の導入

して，粘状物を pH13 の NaOH 水溶液で洗浄し，ろ過した。

メタノールに溶解させた N − [2 −（アルキルアミノ）エ

得られた固体をジエチルエーテルに溶解させて，この溶液

チル ] − N，N −ジメチル− 1 −アルキルアンモニウム臭化物に HCl ガスを約１時間流し，析出物をエタノールで再結に，大過剰量のラクトビオン酸を加え，窒素雰囲気，還流

晶することにより N，N’ −ジアルキルエチレンジアミン

下，50 時間加熱撹拌した。反応終了後，メタノールを減圧

塩酸塩を得た。IR および H NMR スペクトル，元素分析

留去して，残物をヘキサンで洗浄し，次いでメタノール‐により構造を確認した後，N，N’ −ジアルキルエチレンジ

クロロホルム‐アンモニア水の混合溶液（５：４：１）でアミン塩酸塩をアルカリ水溶液に入れて加熱撹拌した。室

２回洗浄して未反応のラクトビオン酸を除去した。得られ温に冷却した後、ジエチルエーテルで数回抽出を行い，エた固体を２−プロパノールで再結晶することにより N − [2 −ーテル層を減圧留去して得られた固体物をアセトンで再結（N’ −アルキル− N’ −ラクトビオニルアミノ）エチル ] − N，

晶して，N，N’ −ジアルキルエチレンジアミンを得た。

N −ジメチル‐1 −アルキルアンモニウム臭化物（2CnAmLac，

1

n は炭化水素鎖長で８，10，12）を得た（Fig.2）。構造は，
２．１．２

糖鎖の導入

IR および 1H NMR スペクトル，元素分析により確認した。

メタノールに溶解させた N，N’ −ジア
ルキルエチレンジアミンに，大過剰量のラ
クトビオン酸を加え，窒素雰囲気，還流下，100 時間加熱撹拌した。反応終了後，メタノールを減圧留去して，残物をヘキサンで洗浄し，次いでメタノール‐クロロホルム‐アンモニア水の混合溶液（５：４：１）
で２回洗浄して未反応のラクトビオン酸を除去した。得られた固体を２−プロパノー
ルで再結晶することにより N，N’ −ジアル
キル -N，N’ −ジラクトビオニルエチレン
ジアミン（2CnLac，n は炭化水素鎖長で８，Fig.1

10，12）を得た（Fig.1）。構造は，IR および 1H NMR スペクトル，元素分析により確認した。

２．２ 糖鎖とアンモニウム基を有する
Heterogemini 型界面活性剤の合成
２．
２．
１ ２鎖１親水基型化合物の合成

メタノールに溶解させた N，N −ジメチ
ルエチレンジアミンに，2.0 倍モルの臭化
アルキル（オクチル，デシル，ドデシル）
を加え，還流下 10 時間加熱撹拌した。反応中はアルカリ条件を保つため，水酸化ナトリウム−メタノール溶液を滴下しながら，

Fig.2− 21 −

２．
３

界面化学的特性合成した新規な糖鎖を有する Gemini 型界面活性剤の表面張力を，自動表面張力計 Kruss K100 を用いてウイルヘ
ルミー法により 25℃で測定した。各濃度での平衡表面張力を得るために，表面張力値の変化が毎９分で 0.05 mN m − 1
以下となるまで測定を行なった。cmc と cmc における表面
張力は，表面張力と濃度の対数曲線の屈曲点から決定した。
会合体の流体力学的直径は，大塚電子製 DLS − 7000 装
置により 488 nm のアルゴンレーザーを用いて散乱角 90度で測定した。全ての溶液は，測定前にセルロースエステ
ル製の 0.2µm フィルターでろ過して用いた。解析はヒストグラム法により拡散係数を決定し，Stokes-Einstein の式を用いて流体力学的直径を算出した。
界面活性剤水溶液の蛍光測定は，日立 650-10S 蛍光分光
光度計によりプローブにピレンを用いて測定した。スペク

Fig. 3

トルは 335nm の励起波長，360 〜 400 nm で記録し，ピレンの濃度は１×10 −５mol dm − 3 とした。ピレン蛍光スペ
クトルの振動バンドの低波長側から数えて１番目と 3 番目の強度比（I1/I3）より，水溶液中の会合体の疎水的環境を評価した。

面活性剤は一層効率的に界面に吸着し，表面張力低下能は高くなる。cmc/C20 比が大きいと吸着が促進されたかある

いはミセル形成が吸着よりも阻害されたかであり，小さい

３．結果及び考察とミセル形成が促進されたかあるいは吸着がミセル形成よ合成した糖鎖を有する Gemini 型界面活性剤 2C n Lac おりも阻害されたことを意味する。糖鎖を有する Gemini 型

上げても溶液は濁ることなく，曇点は認められなかった。

C20 比は大きくなった。これは，単鎖から Gemini 型にな

よび 2C n AmLac は，高い水溶性を示し，室温から温度を界面活性剤の pC20 値は単鎖型に比べてやや小さく，cmc/

2C nLac および 2C nAmLac の水溶液は，従来型の界面活性

ると，ミセル形成よりも界面への吸着が促進され，その吸剤のドデシル硫酸ナトリウム SDS に劣らず高い起泡力と着はかなり強いことが示唆される。

泡沫安定性を示した。

糖鎖を有する Gemini 型界面活性剤の水溶液中での会合

糖 鎖 を 有 す る Gemini 型 界 面 活 性 剤 2C n Lac お よ

体の大きさを動的光散乱を用いて求めた結果，予想に反し

2C10Lac の表面張力と濃度の関係を，類似構造の単鎖型 Nた。これは，おそらくミセル以外にも大きな会合体が存び 2C n AmLac は， 水 溶 液 中 で 高 い 界 面 活 性 を 有 し た。

てかなり小さな値が得られ，数百 nm にも分布が認められ− decyllactobionamide（C10Lac）とともに Fig. ３に示す。

在することを示している。また，プローブにピレンを用い表面張力は濃度の増加とともに低下し，cmc と考えられる

た蛍光スペクトル法より，表面張力で得た cmc 以上の濃明瞭な屈曲点が認められた。Gemini 型 2C10Lac の cmc は，

度で Gemini 型界面活性剤のミセルにピレンが可溶化され，れたミセル形成能が見られた。2C10Lac の cmc におけるった。

単鎖型 C10Lac の cmc の約 100 分の１であり，低濃度で優表面張力は，C10Lac とほぼ同等の値であり，32.3mN m

濃度の増加とともに徐々に会合体が形成されることがわか

−１

４．総

であった。Gibbs の吸着等温式を用いて算出した 2C10Lacの表面過剰濃度と分子占有面積は，それぞれ 4.63×10 −６
mol m

このように分子設計，合成した糖鎖を有する Gemini 型となり，Gemini 型界面活

界面活性剤は，優れた界面活性を有するだけではなく，従性剤が水表面に効率よく高密度に吸着配向していることが来の単鎖型界面活性剤には見られない特異的な性質を持つわかった。

ことがわかった。特に，単鎖型から疎水鎖を２本にし，親−２，0.36nm molecule

括

2

−１

pC20 値は溶液の表面張力を 20mN m−１

低下させるの水基に糖を用いることにより気液界面での吸着効率が高くに必要なバルク液相の界面活性剤濃度（C20）の逆数の対なり，水溶液中では小さな会合体と大きな会合体が存在す数値であり，吸着効率を示す尺度として用いられ，また，ることが明らかとなった。これらの性質は大変興味深いも

cmc/C20 比の値は優先的に吸着するかあるいはミセルを形のであり，今後の研究が期待される。また，化粧品や洗浄成するかを相対的に示す値である。pC20 が大きくなると界分野で重要な分散剤，乳化剤，洗浄剤としての効果を調べ，− 22 −

環境に適した新規な糖型界面活性剤の開発と応用

実用条件で効率の優れた機能性界面活性剤の開発を進める

５） 石上裕：バイオサーファクタントの特性と機能，表面，27，457 − 472，1989．

予定である。

６） 石上裕：界面活性剤の化学構造と機能の相関に関す（参考文献）

る研究，日本油化学会誌，45，229 − 242，1996．

１） 堀内照夫，：機能性界面活性剤の開発技術．シーエム
シー７） 藤井富美子：バイオサーファクタント，日本油化学
会誌，45，1013 − 1021，1996．

1994

２） Z a n a R , : D i m e r i c ( G e m i n i ) - S u r f a c t a n t s , i n８） Wilk K A, Syper L, Burczyk B, Maliszewska I, Jon

Novel Surfactants: Preparation, Applications, and

M, Domagalska B W, J. Surfact. Deterg., 4, 155 - 161,
2001.

Biodegradability, In : Holmberg K, (ed) : Surfactant
Science Series Vol. 74, Marcel Dekker, New York, 1998,

９） Burczyk B, Wilk K A, Sokolowski A, Syper L, J.
Colloid Interface Sci., 240, 552 - 558, 2001.

241 - 260.  
３） Zana R, : Dimeric (Gemini) Surfactants, in Structure10） Pilakowska-Pietras D, Lunkenheimer K, Piasecki A,
J. Colloid Interface Sci., 271, 192 - 200, 2004.

- Performance Relationships in Surfactants, 2 nd., In :Esumi K, Ueno M, (eds) : Surfactant Science Series Vol.

11） Komarek U, Wilk K A, J. Colloid Interface Sci., 271,
206 - 211, 2004.

112, Marcel Dekker, New York, 2003, 341 - 380.  
４） Rosen M J, : Geminis : A New Generation of12） Yoshimura T, Esumi K, for submitted.

Surfactants, CHEMTECH, 23, 30 - 33, 1993.  

− 23 −

生体内環境を再現するポリホスフェートヒドロゲルの調製と機能
東京医科歯科大学

生体材料工学研究所有機材料分野

岩

崎

泰

彦

Hydrogels are insoluble, cross-linked polymer networks that can absorb significant amounts of water.   From abiological viewpoint, hydrogels are as flexible as soft tissues, which minimize their potential irritation to surrounding
tissue.   More recent trends in hydrogel research are macromolecular drug delivery and cell entrapment for tissue
engineering.  For these applications, biodegradability and biocompatibility of hydrogels are important.
There has been a great deal of interest in polyphosphates, which are biodegradable through hydrolysis, and possibly
enzymatic digestion of phosphate linkages under physiological conditions.  These biodegradable polyphosphates appear
interesting for biological and pharmaceutical applications because of their biocompatibility and structural similarities tothe naturally occurring nucleic and teichoic acid.  
To obtain a novel biodegradable cross-linker, polymerizable polyphosphate (PIOP) was synthesized by ring-opening
polymerization of 2-i-propyl-2-oxo-1,3,2-dioxaphospholane with 2-(2-oxo-1,3,2-dioxaphosphoroyloxyethyl methacrylate)(OPEMA).  The number averaged molecular weight of the PIOP was 1.2x104 and the number of OPEMA units in one
PIOP molecules was 2.2.   Nonenzymatic degradation of the PIOP was evaluated in various pH aqueous media.   Thedegree of hydrolysis was dependent on the pH, that is, it increased with an increase in the pH of the medium.  At pH
11.0, the PIOP completely degraded only 6 days.   The poly[2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC)] crosslinked with the PIOP was prepared by radical polymerization.  This polymer could form hydrogel and the free water
fraction in the hydrogel was high.   The enzymatic activity of trypsin in contact with the hydrogel was similar tothat in buffer solution.  There is no adverse effect caused by the hydrogel to reduce the function of the trypsin.  Thecytotoxicity of poly(MPC) and degraded PIOP was evaluated using v79 cells and it was not observed in either case.
In conclusion, PIOP is a hydrolyzable polymer, which can be used as a cross-linker, and novel hydrogels having
biodegradability and biocompatibility were prepared from poly(MPC) cross-linked with the PIOP.

ゲルは、物質透過性を周囲の環境に応じて変化させること

１．はじめにができるため、薬物徐放担体としての利用が検討されてい軟組織を対象とした医療において、柔らかく、ある程度る。特にタンパク質などの生体高分子の徐倣担体や細胞をの体積をもち、ひずみをかけると変形し、可逆的に元に戻天然の状態で内包することができる人工細胞外マトリック

るポリマーゲルは非常に効果的である。

スとしての利用が、ヒドロゲルの新たな展開として注目さゲルを定義すると “三次元の網目構造をもった分子量がれている。

無限大の物質”、“あらゆる溶媒に不溶の三次元の網目構造

生体内での安定性と適度な強度を考慮すると化学結合型をもつポリマーおよびその膨潤体” あるいは “液相と固相のゲルが有効であるが、架橋剤には毒性を示すものもあるとが同時に存在している状態” などがあげられる。ゲル化

ため、分解生成物と同様に生体に悪影響を及ぼさない分子は架橋によってもたらされるが、架橋構造の生成は必ずしを選択する必要がある。一方、物理架橋型ゲルは、架橋剤

も化学反応による必要はない。

を必要としないため、安全性、分解性の面で有利である

近年、ヒドロゲルの分子設計は多岐にわたり、その機能が、生体分子やイオン強度によってゲルの性質変化しやすも単に高吸水を目的とするだけでなく、物理的または化学

いため、生理的条件下で安定に存在し、ある特定の刺激に的刺激に応じて物性を変化させるインテリジェントゲル

応じて解離もしくは分解するゲルを調製することが課題で

、

１、２）

分子の選択的に認識できる分子インプリントゲル３）、生体ある。

内で一定期間存在した後、分解吸収されるバイオデグラダ

生体内におけるポリマーの分解機構は、酵素的、非酵素

ブルゲル（生分解性ゲル） が調製されている。これらの的分解の二つに分けられる。前者は、生体内に存在する酵

４）

A novel biodegradable polyphosphatecross-linker for making biomimetic
hydrogel

素による特異的な分解であるのに対し、後者は、水との接触にともなう加水分解である。このような機構により分解され得る官能基をポリマーの主鎖に導入することにより、Yasuhiko IWASAKI

生分解性を有するポリマーを得ることができる。その多く

Tokyo Medical and Dental University

は、天然の代謝物であるアミノ酸、糖、α- ヒドロキシ酸、あるいは脂肪酸をポリマーの主鎖に含むポリマーが合成される。

− 24 −

生体内環境を再現するポリホスフェートヒドロゲルの調製と機能

天然ポリマーであるゼラチンのヒドロゲルやコラーゲン

いる。化学架橋のゲルはデキストラン等の多糖を縮合や付スポンジは、組織工学に用いられている分解性ゲルの代表

加反応により架橋したものや酵素でペプチド結合を形成さ例である。特にコラーゲンは天然の細胞外マトリックスにせたゲルも報告されている。一方、物理的に架橋したゲル含まれ、細胞の接着、増殖には非常に適したマテリアルでは、様々な分子間相互作用を巧みに利用しゲル化を誘導しある。これらのゲルに様々な細胞増殖因子を含ませ徐放すている。すなわち、ポリマー自身の分解が起らなくとも、ることにより、心臓冠動脈の再建や脂肪組織の再生が可能

何らかの外的要因にともない分子間相互作用が阻害される

５）なることが報告されている 。一方、天然ポリマーを原料ことにより、ゲルは崩壊する。物理架橋の現象は天然ポリとした場合、ポリマーの構造安定性や生物学的安全性がしマーに多く見られる。天然ポリマーのゲル化は調理法を含

ばしば問題となるため、これらの点を十分に注意しなけれ

む食品関係と伴に、薬剤にも広く用いられており、アルギ

ばならない。

ン酸とカルシウムイオンを混ぜることにより得られるゲル本研究では、
生体に優しいヒドロゲルの創製を目的とし、はその代表例である８）。また、温度に応答してゲル化する

生体の構造に注目して新たに分子設計された分解性ゲルをポリマーには、ゼラチン、アガロース、アミロース、アミ

合成し、その特性を詳細に評価した。

ロペクチン、セルロース類縁体、カラギナン、Gellan® に代表される多糖などがあげられる。ここにあげた全ての天

２．生分解性ゲル

然ポリマーは有機溶媒中にくらべ水中でゲルを形成しやす

生体内で分解するポリマーは、縫合糸、硬組織の修復材、い。その機構はポリマーが３重螺旋構造（ゼラチン）や２癒着防止膜、徐放性医薬等、医療に関係した様々な用途に

重螺旋構造（多糖）を形成することによって結晶化がすす用いられている。これまで透水性に分解性を制御するため

み、この結晶の成長に伴いゲル化がおこる９）。高い温度でポリ乳酸やポリグリコール酸など、比較的疎水性の高い脂は、これらのポリマーはランダムコイル状態をとっている肪族ポリエステルが用いられる。これら脂肪族ポリエステ

おり、温度を下げることにより、螺旋構造が形成される。

ルは酵素的、非酵素的に加水分解し、分解生成物が生体の一方、温度に応答してゾルーゲル相転移を示すポリマー

代謝経路に取り込まれるため、生体適合性に優れているとも分子間力を巧みに利用して形成されるヒドロゲルとし考えられ、旧来の生分解性ポリマーの用途に加え、組織をて興味深い。親水性ユニット（HPL）と疎水性ユニット

再生するための細胞の足場となる多孔質体（スキャホール（HPB）を交互に結合したトリブロックコポリマー（HPL-ド）にも利用されている。しかしながら、ポリマー自身のHPB-HPL）水溶液が温度変化に伴いゾルーゲル相転移を示

生体適合性に関する検討は十分でなく、分解速度が小さい

すことが報告されている 10、11）。HPL にポリエチレングリコ

ことや高い結晶性と乏しい溶解性によるポリマーの生体内での残留６）、
分 解 に よ る 極 度 な pH 低 下 が 細胞、組織にあたえる影響 ７） など危惧される点も多い。また、タン
パク質やペプチドを医薬として連続的に徐放するための担体や、細胞を患部に注入し一定期間留めておく担体として分解性ポリマーが有効と考えられるが、疎水性の高
い旧来の分解性ポリマーでは、タンパク質や細胞を失活させずに内包することは不可能であり、生体と同様な高い含水特性を有するハ
イドロゲルタイプの分解性ポリマーが必要となる。
表 - １に分解性ゲルの架橋の方法とその例をまとめた３）。この表に示すようにゲルの分子設計は様々であり、化学架橋、物理架橋
それぞれ多くのゲルが設計されて− 25 −

ール（PEG）に HPB にポリプロピレンオキシド（PPO）をであり、非特異的なタンパク質吸着はポリマーに対する生有する PEG-PPO-PEG はその代表例である。PEG-PPO-PEG

体の異物認識反応の原因となる。高い親水性を示しながらは Pluronic®または Poloxamer®と称され、非イオン性界面活

水の構造を破壊しない MPC ポリマーは、タンパク質と非性剤として一般に使用されている。Alexandridis らは PEG-

特異的に相互作用せず、生体と伴に用いられるヒドロゲル

PPO-PEG 水溶液の物理化学的性質やその応用を明確に報告を調製するための最適なポリマーであると言える。

している 12）。一方、Kim らは HPB に分解性ポリマーである

Nam らは MPC と BMA のコポリマーと MPC とメタク

ポリ -L- ラクチド
（PLLA）を有する PEG-PLLA-PEG を合成し、リル酸のコポリマーの水溶液を混合することにより、容易

このブロックポリマーも温度に依存したゾルーゲル転移をにヒドロゲルが形成されることを見出した 24）。両者のポ示すことを見出した 13）。この他にも HPB にポリ -L- ラクチ

リマーは水溶液中で疎水性相互作用と水素結合を駆動力とドとポリグリコリドのコポリマー（PLGA）を有する PEG-

しゲル化することが、ラマン分光分析法から明らかとなっ

PLGA-PEG 、PEG とポリ（ε- カプロラクトン）（PCL）のマルている（図 - ２）。すなわちこれらの相互作用を利用する

14）

チブロックコポリマー 、PLGA に PEG をグラフトしたコポことにより、ゲルの形成、崩壊を自由にコントロールする

リマー 16）や PEG に PLGA をグラフトしたコポリマー 17）がことが可能になる。彼等は、この物理ゲルをタンパク質のゾルーゲル転移を示すことが明らかとなっている。

担体とし用いることを考えた。MPC ポリマーはタンパク

15）

一方、ポリマーの立体構造を制御することによりゲルを質等の生体ポリマーとの相互作用が極めて弱く、MPC ポ

調製することも可能である。ポリラクチドの L 体、D 体をリマーがタンパク質の構造変化や機能低下を惹起しないた

PEG 両端にもつトリブロックポリマーを水中で混ぜること

め、このような目的には最適なマテリアルと言える。インによりポリラクチドがステレオコンプレックスを形成し、スリン等のポリペプチドを体内に投与する場合、消化器官

これが架橋点となりゲル化する。ステレオコンプレックを利用することが得策である。しかしながら、消化器官にスの形成により物理架橋型ゲルの中でも比較的強固なゲルはタンパク質分解酵素が存在するため、ポリペプチドを保が調製できる。Hennik らは、デキストランに L 体と D 体

護し、消化器官に吸収されやすくするために水溶性ポリマのラクチドオリゴマーを導入し、ラクチドオリゴマー間のーで覆うことにより効率の良い送達が期待できる。

18）

ステレオコンプレックス形成を介したヒドロゲルの調製に

筆者らは脂肪族ポリエステルに代わる分解性結合を主鎖成功した 19）。このように２種類のポリマーを混ぜることににもつポリマーとしてポリホスフェートを採用し、新しいより得られるゲルは、温度などの外的な環境を変化させる

ヒドロゲルを調製した 25）。ホスフェート結合は核酸をはじことなくゲルを調製できるため非常に有効である。

３．生体に倣って設計された分解性ヒドロゲル
筆者らは、これまでに生体膜の構造に着目し、図 - １に示した MPC を一成分とする種々のポリマーを合成し、これらのポリマーが優れた生体適合性を示すことを明らかにした 20。MPC および MPC ホモポリマーは水溶性であり、疎− 22）

水性のアルキルメタクリレートと共重合することにより、その溶解性を制御できる。例えば、MPC とブチルメタク
リレート（BMA）とのランダムコポリマーでは分子量により多少の変動はあるものの、MPC 組成が 30％を境に水に対するポリマーの溶解性が変化する。このように MPC ユ
ニットは非常に高い親水性を示すが、旧来の親水性ポリマ
ーとは異なり、水との相互作用が極めて小さいことが MPC
ポリマーの特徴である。MPC ポリマーに含水した、もしく
は、MPC ポリマーを溶解した水の構造を調べてみると、自由水の割合が非常に多い 20）。全ての生体反応の媒体として働く水の構造がポリマーとタンパク質との相互作用に影響をあたえることが近年報告されている 23）。すなわち、水の構造を壊すことにより、ポリマー表面へのタンパク質吸着や吸着タンパク質の変性が誘導される。タンパク質吸着は生体とポリマーが接触した際に最も短時間に見られる現象− 26 −

生体内環境を再現するポリホスフェートヒドロゲルの調製と機能め生体内に存在し、この結合を主鎖にもつポリホスフェー

フェート結合をもつ新しい分解性ゲルの検討もすすめられ

トは非酵素的な加水分解および酵素的に分解される。ポリている。Wang らはポリ（２- ヒドロキシエチルメタクリ

ホスフェートの合成の検討は比較的古くから行われ、環状

レート）（PHEMA）とポリエチレンオキシドをホスフェ

リン酸化合物の開環重合、塩化リン化合物の重縮合によりート結合でつなぎ含水ゲルを得た 28）。この含水ゲルは細ものが一般的である。最近では、リパーゼを用いた酵素重胞を生存させたまま内包することが示されている。しかし

合でもポリホスフェートが得られることが明らかとなってながら、分解生成物の中に水に不溶な PHEMA が含まれいる。ポリホスフェートの溶解性は側鎖の構造によって制るため、更なる分子設計が望まれる。

御可能であり、イソプロピル基や t- ブチル基等のアルキ

筆者は、重合性をもつポリホスフェートを得るために２ル鎖を有するポリマーは、水に不溶であるが、加水分解に種類の環状リン酸化合物、2-i- プロピル -2- オキソ -1,3,2- ジ

伴い脱アルコール化されることにより、水に可溶となる。

オキサホスホラン（IPP）と 2-（2- オキソ -1,3,2- ジオキサ

近年、このホスフェート結合を主鎖にもつポリマーのバ

ホスホロイルオキシ）エチルメタクリレート（OPEMA）

イオマテリアルとしての有効性が認められはじめている。

は既報に従い合成した 29）。トリイソブチルアルミニウ

Wang らは、エチルジクロロホスフェートを鎖延長剤としム（TIBA）を開始剤として用い、開環重合により IPP とてポリエチレンテレフタレートをホスフェート結合でつな

OPEMA のコポリマー (PIOP) を合成した。PIOP の構造をいだポリホスホエステルの中空糸を調製し、神経再生のガ

図 - ３に示す。ゲル浸透クロマトグラフィー（GPC）およ

イドチューブとしての有効性を見出した。Leong らは、

び 1H-NMR により PIOP を解析したところ、トリイソブチ

側鎖にスペルミジン等のカチオン性基を有する水溶性ポリ

ルアルミニウム（TIBA）と OPEMA の濃度を 0.3 mol%、

ホスフェートはポリエチレンイミンに比べ細胞毒性がほと2.0 mol% とした時、分子量（Mw）11000、分子量分布 1. ３

んど認められず、DNA と安定なコンプレックスを形成すと単分散に近いポリホスフェートが得られ、PIOP の単分ることから、カチオン性ポリホスフェートが遺伝子キャリ

子当たりの OPEMA のユニット組成が 2.2 となった
（表 - ２）。

アとして有効に働くことを明らかにしたPIOP はエタノール、THF、DMSO、クロロホルムに溶解し、

26）

。

27）

ポリホスフェートは溶解性や分解性が典型的な脂肪族ポ

水、ジエチルエーテル、ヘキサンに不溶であった。

リエステルに比べ優れており、化学修飾も容易なため新規

pH を 変 化 さ せ て PIOP の 加 水 分 解 を 調 べ た と こ ろ、な生分解性バイオマテリアルとしてとても興味深い。ホスpH4.0 で PIOP の分解は極めて遅く、40 日後も 95％残存− 27 −

していたのに対し、pH11.0 では６日でほぼ完全に分解した。PIOP の加水分解は pH 環境に大きく影響を受けることが分かった。Penczeck らは、ポリホスフェートの加水分解と pH の関係について詳細に検討しおり、PIOP の加水分解と pH の関係は彼等の見解に一致していた。また、
彼等は塩基性条件下では側鎖と主鎖の分解がほぼ同時に、酸性条件では主鎖より側鎖の方が早く分解することも明らかにしている [30]。
続いて所定濃度の PIOP と MPC、および重合開始剤である 2,2'- アゾビスイソブチロニトリルをエタノールに溶
解し、溶液を十分脱気した後、ポリエチレン製の型の中で重合することにより PIOP で架橋した無色透明の PMPC
ゲル（PCPG）を得た。図 - ４に PCPG の写真を示す。このゲルは水中で膨潤し、PIOP の仕込み濃度により膨潤度が変化した（表 - ３）
。PCPG 中に含まれた水の構造を示
差走査熱量計（DSC）により解析し、自由水と束縛水の割合を求めた。MPC と PIOP によるヒドロゲル（PCPG）に含まれる自由水含率は高く、平衡膨潤時に PCPG に含まれた水の 77％が自由水であったの対し、MPC の代わりにポリエチレングリコール鎖を有するメタクリレートを用い調製したゲル (PEPG) に含まれる自由水の割合は 56% であった。すなわち PCPG は含水した水の構造からも生体との相互作用を惹起し難いこと理解できる。PCPG および
PEPG に所定時間接触させたトリプシンの活性を図 - ５に示す。トリプシンは自己消化により、水溶液の状態で経時的にその活性が低下する。PCPG に接触したトリプシンの活性は緩衝液に溶解したトリプシンと同様な活性を維持していることがわかった。一方、PEPG に接触したトリプシンの活性は有意に低下した。PCPG はトリプシンの活性に全く影響を与えず、生体分子に対し不活性なゲルであることが明らかとなった。
図 - ６に PCPG ゲルの加水分解特性を示す。pH ４.0 お
よび pH7.4 では分解速度が極めて小さく、40 日後でも重量が初期値の 80％以上であるのに対し、pH11.0 では 40 日間で PCPG は消失した。すなわち塩基性環境下で PCPGの加水分解は著しく、架橋剤である PIOP の分解性と一致していた。分解生成物の化学構造を 1H-NMR、分子量をGPC で確認すると、pH4.0 および pH7.4 で分解した物質には、主に低分子量のリン酸系化合物が確認されたのに対し、
pH11.0 の分解生成物には、リン酸化合物に加え、分子量10 万程度の MPC のホモポリマーが存在することを確認した。
分解生成物の毒性をハムスター繊維芽細胞（v79 細胞）のコロニー形成能に与える影響により調べた。PIOP の分
解生成物および MPC ホモポリマーが v79 細胞のコロニー形成におよぼす結果を図 - ７に示す。コントロール試薬として用いた亜鉛化合物は細胞毒性を示し、濃度の増加に伴− 28 −

生体内環境を再現するポリホスフェートヒドロゲルの調製と機能

methods to design hydrogels, Adv. Drug Deliv. Rev.,54, 13-36, 2002.
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９） Park K, Shalaby W, Park H (eds), :Biodegradable
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い、コロニー形成は阻害された。一方、PIOP の分解生成

Lancaster,1993.

物および MPC ホモポリマーが共存してもコロニー形成に

10） Jeong B, Kim SW, Bae YH, :Thermosensitive sol-gel

全く影響なかった。

reversible hydrogels, Adv. Drug Deliv. Rev., 54, 37-51,

４．まとめ

2002.

本研究では、生体の構造に倣った分子設計手法に基き、

11） Kissel T, Li Y, Unger F, :ABA-triblock copolymers

新しい生分解性ヒドロゲルを調製した。ヒドロゲルは生体

from biodegradable polyester A-blocks and hydrophilicと同様な高含水特性を有することから、生体に適したポリ

poly(ethylene oxide) B-blocks as a candidate for in situ

マーマテリアルと考えられているが、生体適合性に優れ生

forming hydrogel delivery systems for proteins, Adv.

体内環境に応じて分解する架橋材や、分子間相互作用を巧Drug Deliv. Rev., 54, 99-134, 2002.

みに利用した架橋形態を利用することにより、より高度な

12） Alexandridis P, Hatton TA, :Poly(ethylene oxide)-

生分解性ヒドロゲルを得ることができる。ポリホスフェー

block-poly(propylene oxide)-block-poly(ethylene oxide)

トで架橋した MPC ポリマーヒドロゲルは、分子設計によcopolymer surfactants in aqueous solutions and at

り分解の制御が可能であり、生体適合性にも優れているこinterfaces: thermodynamics, structure, dynamics,とから、コスメトロジーへの利用はもちろんのこと、医療and modellingColloids Surfaces A: Physicochem. Eng.

や薬学でも非常に有効なヒドロゲルとして期待できる。

Aspects, 96, 1-46, 1995.
13） Jeong B, Bae YH, Lee DS, Kim SW, :Biodegradable
block copolymers as injectable drug-delivery systems,

貴財団にご支援頂きましたこの一年間、生体に優しい新Nature, 388, 860-862, 1997.

たなポリマーの開発を遂行しすることが出来ました。謹ん

14） Jeong B, Choi YK, Bae YH, Zentner G et al., :New

で感謝いたします。

biodegradable polymers for injectable drug delivery
systems, J. Controlled Release, 62, 109-114, 1999.

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cross-linked with vinyl-functionalized polyphosphate,
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コラゲナーゼ抑制作用をもつ天然物の探索
千葉大学大学院

薬学研究院

石

正

橋

己

In order to maintain the elasticity of the skin it is important to prevent reduction of collagen with collagen decomposition
enzyme (collagenase).  Search and development of a compound with collagenase inhibitory activity is therefore one effective
method for aging prevention of the skin.   During our studies on search for new biologically active natural products from
unexploited tropical plants, marine algae, and nudibranchs, here we investigated a search for collagenase-inhibitory
substances from natural resources.   As a result of our screening program against collagenase inhibitory activity using
extracts of 92 medicinal tropical plants, 100 marine algae, and 27 nudibranchs, we selected 7 plants, 6 algae, and 3 nudibranchs
as active samples.  The leaves of Melastoma polyanthum (Melastomataceae), collected in Thailand, were extracted methanol,and the methanol extract was successively partitioned with ethyl acetate and water.   The ethyl acetate soluble fraction,
which was found to be active against collagenase inhibitory test, was subjected to repeated chromatographies on silica gelcolumn and reverse-phase HPLC to isolate four flavonoids,   kaempferol 2,4-di-O-(trans-p-coumaroyl)-β-D-galactopyranoside,
3-O-kaempferol 2-cis-p-coumaryl-6-trans-p-coumaryl-β-D-galactopyranoside, 3-O-kaempferol 2-trans-p-coumaryl-6-cis-pcoumaryl-β-D-galactopyranoside, and 3-O-kaempferol 6-galloyl-β-D-galactopyranoside, and these compounds exhibitedcollagenase inhibitory activity.  From a brown alga Ishige okamurai (Ishigeaceae), collected at Boso Peninsula, a phlorotannin,
diphlorethohydroxycarmalol, was first isolated as a naturally occurring form and was fully characterized here, while fromanother brown alga Undaria pinnatifida (Phaeophyceae), two sterols, 24-methylenecholesterol and fucosterol, were isolated.  
From a nudibranch Pleurobranchus hirasei (Pleurobranchidae) collected also at Boso Peninsula, a sterol peroxide, 5,8α-epidioxy5α-cholest-6-en-3β-ol, was obtained and identified on the basis of spectral data.  While extracts of these algae and nudibranchs
showed collagenase inhibitory activity, isolated sterols did not show the inhibitory activity and active components of these
extracts have not been isolated yet.

１．緒することを第一の目的とする．

言

一方，コラーゲンは，いわゆる細胞外マトリックスの一種

皮膚は表皮と真皮から構成されており，中でも，表皮のである．ここ十数年程の細胞生物学，分子生物学の飛躍的内側で皮膚の構造の大部分を占める真皮が，皮膚の弾力性な進歩により，細胞間の接着あるいは細胞内外でのシグナやハリを保つ役割を担っている．真皮の約 9 割は膠原線維

ル伝達等多様な生物現象において，細胞外マトリックスがからなり，その主要成分はコラーゲンである．シワやタル

きわめて重要な役割を果たしていることが次第に明らかと

ミ，シミなどの皮膚の老化現象は，この真皮の主要成分でなり，今後，最も注目される分子の一つとも考えられていあるコラーゲンの減少・変性に起因することが多いと考える．従って，細胞外マトリックス分解酵素（別名，マトリられる．従って，皮膚の弾力性やハリを保つためには，コックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ））の一つとして位置

ラーゲンの減少を防ぐことが重要であり，また一方，コラ付けられるコラゲナーゼの作用を抑制する低分子化合物をーゲンの分解はコラーゲン分解酵素（コラゲナーゼ）によ発見できれば，コスメトロジーへの貢献はもちろんであるって引き起こされる．以上のことから，コラゲナーゼの作が，それに加えて，コラーゲンが関わる多様な生理現象の用を抑制することは皮膚の老化防止のための一つの有効な分子機構の解明等に寄与することも大いに期待される．

方法であると考えられる．従って，コラーゲンを分解する

コラゲナーゼ群には，4 種の MMP（すなわち，MMP-1,

コラーゲン分解酵素（コラゲナーゼ）を抑制する作用をも

MMP-8, MMP-13, および MMP18）が属することが知られつ化合物の探索および開発が強くのぞまれる．
本研究では，ている．これまでに MMP 阻害物質の天然物からの探索に

コラゲナーゼ抑制作用を示す低分子化合物を，とくに天然

関しては，伏谷，清木らによるマトリックスプロテアーゼ

物を素材として探索し，皮膚老化防止に役立つ物質を発見（＝コラゲナーゼ）阻害剤を海綿動物から探索したという

Search for Natural Products with
Collagenase Inhibitory Activity
Masami Ishibashi
Chiba University

報告はあるものの，まだそれほど研究例は多くない．合成
化合物に関しても MMP 阻害作用を示すいくつかのペプチド性合成化合物が知られているものの，コラゲナーゼに特異的に結合する有効な低分子化合物の開発のためにさらに異なったタイプの基本構造をもつ低分子リード化合物の出
現がのぞまれている．

− 31 −

２．実
2. １.

験

スクリーニング

実験試料として，熱帯薬用植物 92 種，千葉県房総半島産海藻 100 種，千葉県房総半島産ウミウシ 27 種を用いて，コラゲナーゼ阻害作用に関するスクリーニングを行った．
コラゲナーゼ阻害活性試験は，96 穴プレートを用い，次のような方法で行った．
①サンプル溶液（1% MeOH 水溶液）を 1 穴あたり 50 L
分注する．
②酵素溶液（10 g/mL, pH7.4, 50 mM Tris-HCl 溶液）を 1
穴あたり 100 L 分注する．
③ 37℃にて，10 分間プレインキュベーション後，基質溶液（5 M, pH7.4, 50 mM Tris-HCl 溶液）を 50 L 分注する．
④ 37℃にて，60 分間インキュベーション後，励起波長320nm，検出波長 405nm で測定する．
⑤ 60 分間の MOCAc 遊離量をコントロール（サンプル 0μg/mL）と比較し，MOCAc 遊離率とする．遊離率が低いほど酵素が阻害されている［遊離率（%）＝ 100 −阻害率（%）］．

ち，まず，ノボタン科 Melastoma polyanthum の成分研究を行った．

ここで，基質としては，MOCAc-Pro-Leu-Gly-Leu-A2pr

今回入手した Melastoma polyanthum の葉のメタノー（Dnp）-Ala-Arg-NH2（MOCAc :（7-Methoxycoumarin-4-

ル抽出物 6.9 g を用いて，まず，溶媒分配により，酢酸yl）acetyl , Dnp : Nε-（2,4-Dinitrophenyl））を用いる．まエチル可溶部 1.94g，ブタノール可溶部 2.07g，水可溶部

た，Phosphoramidon（N-（α-Rhamnopyranosyloxyhydroxy

2.7g を得た．各画分のコラゲナーゼ抑制活性は 100 g/mL

phosphinyl)-Leucyl-Tryptophan）を陽性対照として用いた．

で，各々，15.6，38.0，および 33.9％であった．従ってまスクリーニングの結果，熱帯薬用植物７種，海藻６種，ず，最も顕著な活性が認められた酢酸エチル可溶部についウミウシ３種を活性サンプルとして選別した（表１）．

て，シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル系およびクロロホルム／メタノール系）を行っ

２. ２.

活性成分の分離・精製た後，最も顕著な活性を示したフラクションを最終的に

2. 1. で選別した活性サンプルをメタノールで抽出し，続逆相 HPLC（Develosil RPAQUEOUS-AR-5, 10×250 mm;

いて溶媒分画により数種の画分に分配した．得られた画分

70% MeOH; UV 220 nm）にて精製し，4 種のフラボノイ

について、各種分離用担体を用いたカラムクロマトグラフ

ド配 糖体 MP1 〜 MP4 を各 々 19.5，3.0，1.0， および 1.1

ィーを行い，化学成分を単離した．

mg 単離した．MP1 〜 MP4 は各種スペクトルデータの文
献値１）との比較により，3-O-kaempferol 2,4-di-O-(trans-p-

２. ３.

単離された成分の化学構造の決定

coumaroyl)-β-D-galactopyranoside，3-O-kaempferol 2-cis-

2. 2. で分離された成分に対して，核磁気共鳴法や高分解

p-coumaryl-6-trans-p-coumaryl-β-D-galactopyranoside,

能質量分析法などの最新の各種機器分析法を駆使すること

3-O-kaempferol 2-trans-p-coumaryl-6-cis-p-coumaryl-β-D-により，化学構造の解明を行った．

galactopyranoside, および 3-O-kaempferol 6-galloyl-β-Dgalactopyranoside と同定した（図１）．これらのうち，

２. ４.

単離された成分の生物活性の測定

MP2 と MP3 は新規化合物であった．

2. 2. で分離された成分に対して、コラゲナーゼ抑制活性

MP1 〜 MP4 の他にも，同抽出物から 4 種以上の類縁化に関する再測定を行った．以下，これらの実験の結果につ合物を単離しており，それらの化学構造の決定について検いて，その概要を記す．

討している．

３．結
３. １.

単離した MP1 〜 MP4 についてコラゲナーゼ抑制活性果を調べたところ，MP1 に最も強い活性が認められた（表植物成分の研究２）．しかしながら，MP1 〜 MP4 だけでは粗抽出物の活

コラゲナーゼ抑制活性を示した熱帯薬用植物７種のう性の強さを説明できなかった．

− 32 −

コラゲナーゼ抑制作用をもつ天然物の探索

３. ２.
２. １.

海藻成分の研究で選別した海藻６種のうち，まず，褐藻 Ishige

okamurae および Undaria pinnatifida の成分研究を行った．
房総半島・天津小湊町で採取した褐藻 Ishige okamurae（湿重 280 g）のメタノール抽出物 21.7 g に対して，ヘキ
サンと 90％メタノールで溶媒分配を行った．90％メタノール可溶部（17.8 g）について，ダイヤイオン HP-20 によるカラムクロマトグラフィーを行って色素を除去した後，シリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返し行い （[ i）
2.0 ×18 cm, クロロホルム／メタノール（5:2）;（ii）1.5×22cm, クロロホルム／メタノール／水（16:8:1）]，最終的にセファデックス LH-20 カラム（1.0×38cm, メタノール）にて精製し，
1 種のフロロタンニン IO1 を 153 mg 単離した．
IO1 は褐色非晶質固体として得られ，高分解能マススペク
トルにより分子式 C24H16O13 をもつことが分かった（m/z512.0589, Δ -0.2 mmu）
．各種スペクトルデータの解析の結果，IO1 は以前，褐藻 Carpophyllum maschalocarpum
より分離されていた diphlorethohydroxycarmalol ２）と同定した（図２）．ただし，diphlorethohydroxycarmalol は
以前はノナアセタート体として単離され，ヒドロキシ型では単離された報告はなかったため，今回詳細にスペクトル
データの帰属を行った（表３）．
一方，同様に房総半島・天津小湊町で採取した褐藻
Undaria pinnatifida のメタノール抽出物 36.8 g を用いて，まず，溶媒分配により，酢酸エチル可溶部 2.6 g，ブタノ− 33 −

ール可溶部 1.7 g，水可溶部 30.9 g を得た．各画分のコ性を調べたが，活性が認められなかった．

ラゲナーゼ抑制活性は 100μg/mL において，各々，42.8,

４．考

93.8，および 100％であった．従って酢酸エチル可溶部に察

本活性が集約したため，酢酸エチル可溶部について，シ

熱帯薬用植物，海藻，ウミウシを材料として，コラゲ

リカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エ

ナーゼ抑制成分の探索を行った．これまでのところ，活チル系およびクロロホルム／メタノール系）を行った後，性成分として，ノボタン科植物 Melastoma polyanthum

ダイヤイオン HP-20 カラムにて色素を除去し，最終的から 3-O-kaempferol 2,4-di-O-(trans-p-coumaroyl)-β-D-に逆相 HPLC（Develosil ODS HG-5, 20 x 250 mm; 100%

galactopyranoside（MP1）を得た．同時に，MP1 に関連

MeOH; UV 220 nm）にて精製し，2 種のステロール UP1する構造をもつ新規化合物を単離した．一方，他の材料か

お よ び UP2 を 各 々 1.2 お よ び 1.3mg 単 離 し た．UP1 おらは現在のところ，明確な活性成分の単離には至っていな

よび UP2 は各種スペクトルデータの解析の結果，各々い．これまでのスクリーニングの結果を概観すると，植物

24-methylenecholesterol および fucosterol と同定した（図に含まれるタンニン類等，高極性のフェノール系化合物に３）．単離した UP1 および UP2 についてコラゲナーゼ抑はコラゲナーゼ阻害活性を有する可能性が高いことが示唆

制活性を調べたところ，これらの化合物には活性が認めらされた．さらに研究を継続して，当研究室内でこれまでにれなかった．

構築した未開拓天然物材料ライブラリーを素材として，総合的かつ系統的な材料の確保およびスクリーニングを行え

３. ２.
２. １.

ウミウシ成分の研究

ば，新しいタイプのコラゲナーゼ抑制物質の発見が可能でで選別したウミウシ 3 種のうち，まず，カメノあると考えられる．

コフシエラガイ Pleurobranchus hirasei の成分研究を行っ謝た．
房総半島・天津小湊町で採取したカメノコフシエラガイ
Pleurobranchus hirasei（湿重 25.7g）のメタノール抽出物

辞本研究を遂行するに当たり，ご支援をいただきましたコス
メトロジー研究振興財団に感謝申し上げます．

0.97 g に対して，酢酸エチルと水で溶媒分配を行った．コラゲナーゼ抑制活性が認められた酢酸エチル可溶部につ（文

献）いて，シリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い（1.0１） Romussi G, Bignardi G, Pizza C, De Tommasi N,:

×35 cm, ヘキサン／酢酸エチル系），つづいて逆相 HPLC

Constituents of Cupuliferae.   XIII.   New and revised（Develosil RPAQUEOUS-AR-5, 10×250 mm; 70% MeOH;

structures of acylated flavonoids from Quercus suber

UV 220 nm）にて精製し，１種のステロールパーオキシ

L., Archiv der Pharmazie, 324, 519-524, 1991.

ド PH1 を 0.5 mg 単離した．PH1 は各種スペクトルデータ

２） L i S M , G l o m b i t z a K W , : C a r m a l o l s a n dの解析の結果，5,8α-epidioxy-5α-cholest-6-en-3β-ol と同定

phlorethofuhalols from the brown alga Carpophyllum

した（図４）．単離した PH1 についてコラゲナーゼ抑制活

maschalocarpum, Phytochemistry, 30, 3417-3421, 1991.

− 34 −

生体適合性超薄膜の吸水および保湿特性の評価
東北大学大学院

薬学研究科

安

順

斉

一

Polyelectrolyte multilayer films were prepared using polysaccharides as materials to elucidate the wetting propertiesof the thin films.   Glycogen was successfully assembled into multilayer films using poly（ethyleneimine）（PEI）asa counterpart of the alternating deposition, probably through hydrogen bonding as driving force.   On the other
hand, anionic polysaccharides including dextran sulfate（SD），chondroitin sulfuric acid（SC），alginic acid（Alg），
and sulfonated α- and β-cyclodextrins（α-SCD and β-SCD）can be assembled into thin films using PEI as a cationiccomponent of the films.  The kinetics of evaporation of water from the swelled films was studied using quartz crystal
microbalance（QCM）．The kinetics are composed of an initial fast evaporation and consecutive slow process.  Thus, itis speculated that water is entrapped in the two different kinds of environment in the films.

１．緒

作用による引力を利用する方法も確立されており、水素言

結合や生物的特異結合なども利用できる。この方法により、各種の高分子化合物は薄膜形成が可能であり材料の表面

タンパク質や DNA などを利用した超薄膜の研究も進んで処理などに幅広く利用されている。また、生体適合材料のいる２−５）。これまでに、種々の材料がこの方法により薄膜開発という観点から、生体類似高分子や生体親和性高分子に形成されて物性が研究されているが、吸水特性や保湿性

で材料表面に処理を施すことも行われている。生体適合材に関する検討は行われていない。良好な吸水および保湿特料は、人工臓器や生体センサーの開発など広範囲な利用分性の生体適合性交互累積膜が開発されれば、皮膚保護材料

野があり、高機能材料の開発はきわめて重要な課題である。

としての利用も可能であろう。

生体適合材料としては生体高分子を用いることが最も容易

２．実であるが、製膜特性などの性質が必ずしも好適であるとはかぎらない。特に、薄膜として利用する場合には、良好な

２- １

験

材料

物性の薄膜を得るためには製膜方法などに工夫が必要であ

ポリエチレンイミン 30％水溶液（PEI、分子量 60,000-

る。とりわけ、膜厚や膜構造を精密に制御することが、膜80,000）およびポリアリルアミン 20％水溶液（PAA、分子物性を向上させるためには重要である。

量 10,000）は市販品を所定の濃度に希釈して用いた。グリ

本研究では、生体適合性超薄膜を作製するために交互累コーゲン（Gly）、デキストラン（Dex）、デキストラン硫

積膜法を採用し、高分子材料として多糖類を用いた際の超酸（SD）、コンドロイチン硫酸（SC）、アルギン酸（Alg）、

薄膜の吸水および保湿特性について検討した。交互累積膜

α-, β-, γ- シクロデキストリン（α-, β-, γ-CD）、および硫酸化

法は約 10 年前に Decher 教授らにより確立された超薄膜

シクロデキストリン（α-SCD, β-SCD）は市販品を精製す作製法で、正および負の電荷を持つ高分子化合物の希薄溶ることなくそのまま使用した。実験に用いた材料の化学構

液にガラスや金属の基板を交互に浸すことにより、基板表

造を図１にまとめて示した。これらの材料の水溶液は精製面に正負の高分子化合物を静電的引力により交互に吸着固水を使用した緩衝液で作製した。

定化する方法である 。ナノメーター程度の厚さの超薄膜１）が作製できることや、累積回数を加減して膜厚を任意に制

２- ２

装置

御できることなどの利点があり、簡便な薄膜作製技術と交互累積膜の評価と水分含量の測定には、水晶振動子ミして注目されている。Decher らの方法は、正負の電荷にクロバランス（QCA920、セイコー EG & G）を用いた。プロ

よる静電的引力に基づくものであったが、その他の相互ーブとして用いた水晶振動子は、基準振動数９M H z の AT

Evaluation of wetting and dewetting
properties of biocompatible thin films
Jun-ichi Anzai
Graduate School of Pharmaceutical
Sciences, Tohoku University

カット素子で表面に直径 0.4mm の円盤状に白金が薄く被覆してある。このプローブでは、水晶振動子への物質１ng の吸着量を約 0.9Hz の振動数変化として検出することができる。

２- ３

超薄膜の作製と吸水量および保湿特性の評価

本研究では、交互累積膜の作製には２種類の異なる駆動力を用いた。すなわち、正負の静電的引力による吸着によ− 35 −

H
N

N

NH n

n
NH2

NH2

ポリエチレンイミン

ポリアリルアミン

CH2OH
O

COOH
O

OH

O

CH2OH
O
O

O

O

OH

CH2

OH

n
CH2
O
HO

CH2OH
O

OH

OH

O
OH

CH2OH
O
O

O

OSO3H

HO

O
O

OH

n

OSO3H

デキストラン硫酸
O
CH2

O

O

OH

O

O
OH

OH

OH

CH2

O

OSO3H

OH
CH2OH
O

HO
O

n

O

グリコーゲンCH2OHONHCOCH3

コンドロイチン硫酸
OH

OH

O

O

OSO3H

OH

O

CH2OSO3H
O

OH

CH2OH
O

O

OH

O
OH

O

HO

COOH
O

COOH
O

OH OH O

OH

O
OH

n

n

アルギン酸

OH
デキストラン

CH2OH
OO

CH2OSO3H
O

OH

O
OH

O
n

n=6 α-シクロデキストリン
n=7 β-シクロデキストリン
n=8 γ-シクロデキストリン

図１

OH

O
OSO3H

n

n=6 α-硫酸シクロデキストリン
n=7 β-硫酸シクロデキストリン

本研究に用いた多糖類など高分子材料の化学構造

る方法と水素結合による方法である。前者には、多糖類と表面を水でよく洗浄した水晶振動子を、はじめ PE I また

して Gly、Dex、α-, β-, および γ-CD を用いて PEI と交互

は PAA 溶液に 30 分間浸して吸着させ、つづいて蒸留水で累積膜とした。この際には、これらの膜材料は２mg mL −10 分間洗浄した。次に、多糖類の溶液に 30 分間浸して吸の濃度のリン酸緩衝液（pH7）として累積膜作製に用いた。

着させた後同様に洗浄した。この操作をくり返して任意の総

また、後者には、SD、SC、Alg 、α-SCD および β-SCD を数の交互累積膜を作製した。水晶振 動子に上述の材料を

負電荷を有する多糖類とし、正電荷を持つ PAA と累積膜を吸着させた後に乾燥して QCM による振動数の測定を行った。

1作製した。この場合には、溶液濃度は 0.1mg mL

−1

とした。

− 36 −

表面に累積膜を被覆した水晶振動子を蒸留水に浸して充生体適合性超薄膜の吸水および保湿特性の評価

分に吸水させてから空気中に引き上げて、そのまま風乾して水を蒸発させた。この過程の振動数変化を QCM により
追跡した。

３．結
３- １

果

多糖類の累積膜の調製はじめに、電荷を持たない多糖類と PEI を用いて交互累積膜を作製することを試みた。Gly と PEI を用いて交互累積膜を作製した際の QCM における振動数変化を図２に示した。縦軸に Gly と PEI を吸着させた後に乾燥させて測定した振動数を、横軸には累積膜の層数を示した。図から明らかなように、Gly および PEI を吸着させるたびに振図２

PEI/Gly 交互累積膜の調製：水晶振動子ミクロバランス
による評価

動数が減少することがわかった。QCM の振動数変化（∆F／ Hz）と吸着物質の質量には式（１）の関係があるので、振動数が減少したことは、水晶振動子表面に Gly と PEIが交互に吸着していることを示している。振動数変化は、５層の累積膜、５（Gly ／ PEI）膜、で− 10,700Hz、10（Gly／ PEI）膜で− 25,100Hz であった。質量に換算するとそれ
ぞれ 12mg および 28mg の（Gly ／ PEI）が累積膜として吸着したことを示している。
振動数変化（∆F ／ Hz）=−0.91× 吸着質量（Ｍ／ng）──（１）同様にして、Dex、α-, β-, および γ-CD 用いた累積膜の調製を試みた。５層の累積膜を作製したときの振動数変化は、-550Hz（Dex）、− 730Hz（α-CD）、− 760Hz（β-CD）、および -430Hz（γ-CD）であった。これらの値は、同条件で累積膜を作製したにもかかわらず Gly に比べて 10％以下であり著しく低いものであった。すなわち、PEI とこれらの多糖類は良好な交互累積膜になりにくいことを示している。

図３

次に、正負の電荷の静電的引力を利用して多糖類累積膜

種々の多糖類の累積膜の調製を作製するために、SD、SC、Alg、α-SCD, および β-SCDを用いた。これらの多糖類はいづれも分子中にスルホン酸

３- ２多糖類交互累積膜の吸水量および保湿特性またはカルボン酸に基づく負電荷を有している。正電荷をPEI と Gly を用いて作製した５層の累積膜を蒸留水に浸もつ高分子材料として PAA を用いた。上記の５種の負電して充分に吸水させた後に、空気中で自然乾燥したとき

荷多糖類と PAA から交互累積膜を作製した際の QCM にの QCM の振動数の経時変化を図４に示す。はじめの１分おける振動数変化を図３にまとめて示した。いづれの場合程度で振動数の急激な増大がみられ、引き続いて振動数はにも、累積操作を重ねるに伴って振動数の減少が観察さ徐々に増大して約 20 分後にほぼ一定の値になった。このれた。これは、良好に交互累積膜が作製できたことを示

過程の振動数変化は、急激な変化は約 10,000Hz、後続のしている。それぞれ５層の交互累積膜としたときの振動

遅い過程の変化量は約 8,500Hz であった。振動数が増大し数変化は、− 4,200Hz（SD）、− 6,800Hz（SC）、− 4600Hz

たことは、水晶振動子表面に形成された多糖類累積膜中か（Alg）、− 6,200Hz（α-SCD）、および− 4,200Hz（β-SCD）

ら水が蒸発したために、振動子表面の質量が減少したことであった。重量に換算すると、4,700ng（SD）、
7,500ng（SC）、を示している。累積膜中から蒸発したと考えられる水の量

5,100ng（Alg）、
6,900ng（a-SCD）、
および 4,700ng（b-SCD）

は、それぞれの過程で 11mg および 9.4mg と計算される。

であった。これらの値は、静電的引力を利用しないで作製

既に述べたようにこの累積膜の重量は 28mg なので、膜重を試みた累積膜に比べてかなり大きな値であり、良好な累量にほぼ匹敵する水が累積膜の中に含まれていたと思われ積膜が形成されていると判断できる。

る。他の多糖類を用いた累積膜を用いた実験結果も、振動− 37 −

図４

PEI/Gly 交互累積膜からの水の蒸発過程

数変化の値は異なるが Gly と同様に振動数変化の速い過程と遅い過程が観察された。
次に、SD、SC、Alg 、α-SCD, および β-SCD を用いて

図５作製した累積膜についても同様の検討を行った。QCM

種々の多糖類累積膜からの水の蒸発過程による結果を図５にまとめて示した。いづれの累積膜でも、リゴ糖も含まれ、これらも静電的引力により薄膜となるこ

図４に示した（PEI／Gyl）
累積膜と同様の挙動が観察された。
水の蒸発に伴う振動数とは興味深い。今回の研究目的からは逸脱するが、CD 化

変化果から、これらの累積膜中に含まれていた水の重量は、合物は溶解補助や除放の目的で食品や医薬品の広く利用さ

7,800ng（SD）、8,800ng（SC）、10,000ng（Alg）、5,000ng

れており、CD 含有超薄膜として新たな用途が広がるかも（a-SCD）、および 7,800ng（b-SCD）と計算される。

知れない６、７）。

４．考作製した多糖類累積膜の吸水過程については本研究で察は明らかにすることはできなかったが、累積膜中に含ま

図 ２ の 結 果 は、PEI と Gly を 用 い る と 交 互 累 積 膜

れる水が蒸発する過程に関して興味ある現象が観察されを 作 製 で き る こ と を 示 し て い る。PEI は 中 性 付 近 のた。すなわち、QCM により累積膜からの水の蒸発を追pH で ア ミ ノ 基 の 一 部 は 水 素 イ オ ン が 付 加 し て 正 電 荷跡した結果、急激に振動数変化が起きる初期の過程とを 有 し て い る と 考 え ら れ る が、Gly は 電 荷 を も た な い

後続する緩慢な過程が、いづれの累積膜でも観察されの で、 こ の 両 者 は ア ミ ノ 基 と 水 酸 基 の 水 素 結 合 を 介た。これは、累積膜の表面付近に存在する水の蒸発と累して結合したのではないかと考えられる。また、Dex、積膜内部に存在する水の蒸発過程に対応するのではない

α-CD、β-CD、および γ-CD でも僅かの振動数変化が観かと推定される。本研究で使用した多糖類累積膜の厚さは、察され、これらの物質が吸着していることが示唆されたが、用いた材料の密度を 1.2 g cm− 3 と仮定すると８）、例えば 10

吸着量は Gly を用いた場合に比べて非常に少なかった。こ層の 10（Gly ／ PEI）膜で約 700 ナノメーター程度、５層

れは、水素結合は弱い結合であり、結合点間の距離や配向の５（Alg ／ PEI）膜では約 130 ナノメーターと計算されに依存する性質をもっていることから理解できる。換言するが、このように薄い膜においても膜表面と膜内部に存在

れば、用いる材料間の構造的な相補性がよくないと良好なする水の蒸発過程（保湿特性）に差異があることは興味深

累積膜は形成されないことを示唆している。

い。これは、内部の水が蒸発する過程は水の膜表面までの一方、正負の電荷の間に作用する静電的引力を利用する

拡散速度も蒸発速度に影響する重要な因子であり、膜表面

累積膜では、材料の構造に著しく依存することなく概ね良と内部では蒸発速度を決める過程が異なることに起因する

好な累積膜が作製できた。各種の合成高分子を用いた交ものと推定される。

互累積膜の作製条件は詳細に検討されており、多糖類を本研究では、多糖類高分子として合計 10 種の材料を用材料として用いる場合にもこれらの条件は適用できるもいたが、吸水および保湿特性に関しては、材料の構造によのと思われる。したがって、多糖類の累積膜を作製する

る明確な相違を明らかにすることはできなかった。また、場合には、水素結合などによって吸着させるよりも静電多糖類累積膜の膜厚を変えて実験を行ったが、厚い膜には的相互作用による方が汎用性に富むものと思われる。なお、多量の吸水が観察された以外、蒸発速度に関しては膜厚の今回用いた多糖類材料の中には、SD、SC、Alg のような影響は観察されなかった。これらの点に関しては今後の検鎖状多糖類とともに α-SCD および β-SCD のような環状オ

討課題として残った。

− 38 −

生体適合性超薄膜の吸水および保湿特性の評価（参考文献）

４） J. Anzai, Y. Kobayashi, Construction of Multilayer
Thin Films of Enzymes by Means of Sugar-Lectin１） G . D e c h e r , J . D . H o n g , B u i l d u p o f U l t r a t h i n

Interactions, Langmuir, 16, 2851-2856, 2000.

Multilayer Films by a Self-Assembly Process: II.
Consecutive Adsorption of Anionic and Cationic５） J. Anzai, T. Hoshi, N. Nakamura, Construction of

Bipolar Amphiphiles and Polyelectrolytes on Charged

Multilayer Thin Films Containing Avidin by a Layer-

Surfaces, Ber. Bunsenges. Phys. Chem., 95, 1430-1434,

by-layer Deposition of Avidin and Poly（anion）s,

1991.

Langmuir, 16, 6306-6311, 2000.

２） Y. Lvov, G. Decher, G. Sukhorukov, Assembly of６） K . S a t o , I . S u z u k i , J . A n z a i , P r e p a r a t i o n o fThin Films by Means of Successive Deposition ofPolyelectrolyte-Layered Assemblies Containing

Alternate Layers of DNA and Poly（allylamine）,

Cyclodextrin and Their Binding Properties, Langmuir,

Macromolecules, 26, 5396-5399,1993

19, 7406-7412, 2003.

３） J. Anzai, Y. Kobayashi, N. Nakamura, M. Nishimura,

７） K. Sato, I. Suzuki, J. Anzai, Layered Seemblies

T. Hoshi, Layer-by-layer Construction of Multilayer

Composed of Sulfonated Cyclodextrin and PolyThin Films Composed of Avidin and Biotin-labeled（allylamine）, Colloid Polym. Sci., 282, 287-290, 2004.

Poly（amine）s, Langmuir, 15, 221-226, 1999.

− 39 −

紫外線遮断剤用単分散球状酸化セリウムナノ粒子の低環境負荷な製造法の開発
千葉大学

上工学部物質工学科

川直

文

Cerium (IV) oxide (CeO2) is an n-type semiconductor and an oxygen ion conductor.  It has many applications, such as insolid oxide fuel cells and oxygen sensors.  Furthermore, the use of CeO2 to shield materials from ultraviolet light has been
intensively investigated.  For these applications, regulation of the particle size distribution and the morphology are important
issues.   Furthermore, the processes by which CeO2 particles are prepared must be as simple as possible.   Here, we havereported that polyethylene glycol (PEG HO-(-CH2CH2O)n-H) can be used as a solvent for inorganic salts, with the ether
oxygen in the PEG acting as a base.  In this research, the novel preparation method of CeO2 fine particles were developed byusing PEG solution of cerium nitrate hydrate.
Cerium oxide (CeO2) nanoparticles were obtained by heating a polyethylene glycol solution (PEG) of cerium nitrate hydrate(Ce(NO2)2 6H2O) at 383 K for 3h.   When the PEG whose molecular weight was 20000, was used for the preparation, themonodispersed CeO2 , whose particle size was ca. 102 nm, was obtained.   When the mixture of PEG20000 and ethylene
glycol (EG) was used to prepare the PEG solution of cerium nitrate hydrate, the average particle size increased from 102
nm to 660 nm with an increase in the EG content of the solution.  In order to investigate the formation mechanism of CeO2 ,UV-VIS spectra and FT-IR spectra of the PEG solution of cerium nitrate hydrate were measured.  According to the FT-IR
spectra, the strength of hydrogen bond of water molecules in the PEG solutions was stronger than that of the pure water.  
Furthermore, the coordination strength of EG to cerium ion was stronger than that of PEG20000.  These facts affected theolation and oxolation process to form CeO2 particles from the aquo complex of cerium ion.

１．緒

近年、低エネルギーな無機微粒子合成プロセスとして

言水溶液を用いた様々な合成法が報告されている。CeO2 に

日焼け止めとして様々な紫外線遮断材料・サンスクリー

おいても、水酸化セリウム（Ce（OH）3 ）の水熱処理によニング剤が用いられてきた。また、近年のオゾン層破壊にる CeO2 粒子の調製法、ヒドラジン法、尿素を用いた均一よる地上への有害紫外線照射量の増加による皮膚障害の増沈殿法など様々な合成法が報告されている４−６）。しかし、

加、そして様々な化学物質の影響による光線過敏症の問題

これらの合成法においても、ナノレベルの粒径を有するなど有害紫外線の皮膚に与える影響が問題となっており、CeO2 粒子を効率よく合成し、粒子形態を制御するなど研有害紫外線が皮膚に与えるダメージを防止するためにも紫究すべき課題が残されている。

外線遮断材料の重要性が高まっている

本研究者らは、水溶性有機高分子であるポリエチレング

。

１−３）

紫外線遮断材料に要求される機能は、単に紫外線を吸収

リコール（PEG，HO（CH2CH2O）nH）が無機塩を溶解する

するのみでなく、その効果の安定性と持続性を有しかつ生性質があることに注目した。そして、PEG を溶媒として体に対する安全性を有していなければならない。また、皮用いる無機合成反応について検討を行ってきた７, ８）。本研

膚に塗布した場合における色調の問題など紫外線防止材料

究では、PEG 分子中に存在するエーテル酸素が塩基としとして様々な観点から最適な特性を有する材料を開発してて作用することに着目した。ここで、セリウム塩の PEG

行かなければならない。今現在、以上の様な要求を満たす溶液を加熱処理することで PEG が溶媒としてだけでなく材料として酸化セリウム（CeO2）が注目されている。そ塩基としても作用することで溶液中で均一な粒子生成が起して更に、CeO2 の持つ機能を有効に活用した材料を開発

こり粒径の均一性の高い粒子が得られると期待される。さするには、粒径と形態の揃った特に球状の CeO2 粒子を合らに、溶媒として用いる PEG の分子量により粒子の成長成する方法を開発する必要がある。また、この合成法は環速度が制御可能であり、それによって粒径や粒子形態の制境負荷の低いものでなければならない。

御が可能であると考えられる。本研究では PEG を溶媒かDevelopment of Spherical CeO2 Particles
for UV Shield Material with Low
Environmental Load Process.

つ沈澱剤として用いる新しい溶液プロセスにより CeO2 粒子を合成する方法について検討した。

２．実

Naofumi  Uekawa
Faculty of Engineering, Chiba University

２．１

験

CeO2 微粒子の合成

平均分子量 1000 の PEG（PEG1000）10.0g をビーカーに秤取り 80℃で融解した後、硝酸セリウム６水和物（Ce− 40 −

紫外線遮断剤用単分散球状酸化セリウムナノ粒子の低環境負荷な製造法の開発（NO3）3・6H2O）5.0g を加え攪拌し溶解した。得られた透ルおよび UV-VIS（HITACHI U2000A）スペクトルの測明で均一な硝酸セリウム水和物の PEG 溶液を油浴中 110定を行った。

℃、３h 静置し加熱処理することで沈殿物が生成した。そ３．結果・考察

こで、この沈殿物を分離するために、加熱処理が終わった
PEG 及びセリウム塩を溶解し、遠心分離により得られた

３．１ 硝酸セリウム水和物の PEG 溶液からの球状
CeO2 粒子の析出現象

沈殿物を分離した。この沈殿物を 75℃，６h 乾燥し粉体

Fig. １に硝酸セリウム水和物の PEG 溶液から得られた後の PEG 溶液を蒸留水 100ml 中に分散した後、未反応のを得た。

生成物の XRD パターンを示す。溶媒として EG, PEG1000,以上の調製法を、モノマーであるエチレングリコール

PEG7500, PEG20000 を用いた場合すべてにおいて CeO2 に（EG）、平均分子量 7500 の PEG（PEG7500）、平均分子量帰属される回折ピークが得られた。これより、硝酸セリウ

20000 の PEG（PEG20000）を用いて同様の操作により合ム水和物の PEG 溶液を 110℃ , ３h 加熱処理するという非成を行った。また、EG と PEG20000 の混合溶液を用いて常に簡便な合成法により CeO2 が得られる事がわかった。

も同様の方法で調製を行った。

また、原料である硝酸セリウム水和物中の Ce イオンは３価であるが溶液中に共存する硝酸イオンによって酸化され２．
２

キャラクタリゼーション

Ce4+ が生成し CeO2 が得られたと考えられる。また、水溶得 ら れ た 粉 体 に つ い て、XRD（BRUKER AXS

液中での CeO2 粒子の生成は通常塩基性条件下で起こるが、MXP18VAHF，Cu Kα 40kV, 200mA）による結晶構造及PEG 溶液を用いた場合新たに溶液に塩基を添加すること

び結晶化度の検討をおこなった。また、FE-SEM（JEOL  

なく CeO2 が生成した。これは PEG が塩基として作用しJSM-6330）により粒子の形態及び粒径の検討を行った。

たことを示している。

さらに、77K での窒素吸着等温線測定により BET 比表面

Fig. ２は得られた CeO2 粒子の FE-SEM 像である。Fig.

積を求め細孔構造を調べた。次に、PEG 溶液からの CeO2

２（a）より、エチレングリコール（EG）を用いた場合

粒子の生成過程について検討するために、硝酸セリウム水は、粒径が 50nm 以下の微細な粒子が不規則に強く凝集し和物の PEG 溶液の FT-IR（JASCO FT/IR-350）スペクトた構造が見られた。また Fig. ２（b）より、PEG1000 を

Fig.1 The XRD patterns of the powders
prepared by heating the PEG solution of cerium nitrate hydrate.

Fig.2 The FE-SEM images of the obtained CeO2 particles from the PEG solution of cerium nitrate hydrate. The PEGs used for preparing PEG solution
were : (a)EG. (b) PEG1000, (c)PEG7500, and (d)PEG20000.

− 41 −

用いた場合は粒径が 40nm から 300nm の球状粒子が得られ

CeO2 粒子と PEG20000 溶液から得られた CeO2 粒子はまっる事がわかった。さらに、Fig. ２（c），（d）
より、PEG7500，

たく異なった粒子形態を有していた。そこで、これらの異PEG20000 を用いた場合、それぞれ平均粒径が 140nm となる特性を有する EG と PEG20000 の混合物を溶媒として用

105nm の粒径が比較的揃った球状 CeO2 粒子が得られる事いた場合にどのような CeO2 粒子が得られるかを検討した。

がわかった。以上より、分子量が 1000 以上の PEG を用い

Fig. ３は、EG − PEG20000 混合物を溶媒として用いて得らることによって球状に近い形態を有する CeO2 粒子が得られた CeO2 粒子の FE-SEM 像である。調製に用いた EG −れる事が明らかとなった。この様に PEG 分子量によって粒PEG20000 混合溶液中の EG 含有割合（EG/(EG+PEG20000)

子形態が変化したのは PEG 溶液中での CeO2 核発生頻度と重量比）が 0.05、0.1、0.2、0.5 の時、得られた CeO2 粒子の粒子成長速度が PEG 分子量により影響を受けたためである

平均粒径は 0.14µm、0.27µm、0.52µm、0.66µm であった。こと考えられる。また、本反応は主に水溶性化合物のみ用いの様に、硝酸セリウム水和物溶液中の EG 含有割合が増加すられており、揮発性の高い有機溶媒を一切用いていないこるに従い得られる粒子の粒径が増加し、EG 含有割合によっとから環境負荷の点からも好ましい合成法であるといえる。

て粒径が制御可能である事がわかった。

３．２ 硝酸セリウム水和物の EG − PEG 混合溶液からの CeO2 粒子の析出現象

３．３ 硝酸セリウム水和物の PEG 溶液のキャラクタ
リゼーションと CeO2 粒子生成機構

前節でも述べたが、Fig. ２より EG 溶液から得られた

酸化セリウム粒子の粒子形態や粒径をより精密にコント

Fig.3 The FE-SEM images of the CeO2 particles prepared by heating the PEG
solution of cerium nitrate hydrate at 383K for 3h. The weight ratios EG/(EG+PEG20000) of the PEG solution were (a) 0 (PEG20000), (b) 0.05, (c)0.1, (d) 0.2, (e) 0.5, and (f) 1 (EG).

− 42 −

紫外線遮断剤用単分散球状酸化セリウムナノ粒子の低環境負荷な製造法の開発

ロールするためには硝酸セリウム水和物の PEG 溶液の加振動の吸収ピーク位置は水素結合の強さが強くなるほど低熱処理による CeO2 粒子の生成機構について詳しく検討し波数側へシフトすることが知られている 11）。Fig. ４
（b）
,（c）

理解する必要がある。一般に溶液中で CeO2 結晶の核が生に示された FT-IR スペクトルから PEG20000 溶液と EG成した後粒子が成長し、さらにその表面に新たな結晶核が溶液の吸収ピーク位置は、3413cm − 1 と 3363cm − 1 であった。

発生して粒成長する過程を繰り返して球状粒子の生成が水素結合した OH 基は硝酸セリウム水和物の結晶水およ起こったものと考えられる。CeO2 粒子表面での核発生は、び EG、PEG20000 分子の分子末端に存在する水酸基に由溶液からの核発生と比べてより容易に起こるもと推測され来する。これより、EG 溶液中の H2O 分子は PEG20000 溶る。そして、溶液から直接 CeO2 核が発生する頻度が粒子

液中に存在する H2O 分子より強い水素結合相互作用をし径などに大きな影響を与えると考えられる。そこで硝酸セている事がわかる。また、EG 溶液および PEG20000 溶液

リウム水和物の PEG 溶液中の Ce イオンの存在状態につの吸収波数位置は、純粋な液体状態の H2O の場合の吸収

いて FT-IR および UV-VIS スペクトル測定によって検討

ピーク位置である 3450cm − 1 よりも低波数側であった 11）。

した。

これは PEG 溶液中での H2O 分子は通常の液体の H2O 分

Fig. ４は硝酸セリウム水和物の PEG 溶液の FT-IR ス

子より強い水素結合相互作用有している事を示している。

ペ ク ト ル で あ る。Fig. ４（a）,（b） に 示 し た 硝 酸 セ リ

Table １は EG-PEG20000 混合溶液の FT-IR スペクトルか

ウム水和物の EG 溶液および PEG20000 溶液に見られるら求めた OH 伸縮振動による吸収ピーク位置と溶液中の3400cm-1 付近の吸収は、水素結合した OH 基によるもの

EG 含有割合の関係である。EG 含有割合が増加するにしである。Fig. ４（b），
（c）に見られる 2800cm − 1 付近の吸

たがって吸収ピーク位置は低波数側へシフトしている。こ収は CH2 基の伸縮振動によるものである。また、
Fig. ４（b），

れより、EG 含有割合が増加すると EG-PEG20000 混合溶（c）に見られる 1600cm

付近の吸収は H2O の変角振動

液中に存在する H2O 分子間の水素結合が強くなることがによるものである。さらに Fig. ４（a）-（c）に見られるわかった。この様な水素結合相互作用によってアコ錯体中1400cmの吸収はそれぞれ CH2 基の H2O 分子が解離しやすくなりヒドロキソ錯体が生成すの変角振動と C-O-C エーテル結合の伸縮振動によるもの

ることで CeO2 核が生成すると考えられる。そしてこの様−1−1付近および 1113cm

−1

である 。

なプロセスによって塩基を加えることなく CeO2 粒子が生９）水溶液から CeO2 粒子が生成する場合、溶液中に存在す
るアコイオン（Ce（H2O）n3+）が脱水縮合反応を起こしながら CeO2 核を生成し粒子の成長が起こると考えられ
る９, 10）したがって硝酸セリウム水和物の PEG 溶液中での
H2O 分子の存在状態が CeO2 粒子生成過程に重要な影響を成したと考えられる。
Table 1 Peak position of the FT-IR absorption bands corresponds to the stretching vibration of the hydrogen-bonded
OH group in PEG solution of cerium nitrate hydrate.

及ぼすと考えられる。したがって、PEG 溶液中の H2O の存在状態について検討する必要がある。ここで、OH 伸縮

Fig.4 The FT-IR spectra of the PEG solution of
cerium nitrate hydrate. (a) EG solution, (b)PEG20000 solution, and (c) pure PEG20000.

Fig.5 The UV-VIS absorption spectra of the PEG solutions of cerium nitrate hydrate. The weight ratios EG/(EG+PEG20000)
of the PEG solutions were : (a) 0 (PEG20000), (b) 0.2, (c)0.5, (d) 1 (EG), and (e) aqueous solution of cerium solution of
cerium nitrate hydrate..

− 43 −

次に、PEG と Ce イオンの相互作用について検討するために硝酸セリウム水和物の PEG 溶液の UV-VIS 吸収スペクトルを測定した。この結果を Fig. ５に示す。波長400nm 以下での強い吸収 Ce イオンと O2 −イオン間の電荷移動吸収によるものである。そして、EG-PEG20000 混合
溶液中の EG 含有割合が増加するとその吸収端は短波長側へシフトすることがわかった。この事実は、PEG20000 より EG の方がより強く Ce イオンに配位することを表している 12）。そして、EG および PEG20000 の Ce イオンへの配位は、溶液中でのアコ錯体およびヒドロキシ錯体の脱水
縮合反応による CeO2 核の生成および粒成長を抑制する。
従って、Ce イオンにより強く配位する EG 溶液から得られた CeO2 粒子は非常に微細な粒子が強く凝集した構造を有したと考えられる。また、PEG の Ce イオンへの配位は、Fig.6 Schematic representation of CeO2 formation in the
PEG solution of cerium nitrate hydrate.

CeO2 表面での核発生より溶液からの CeO2 核生成に大き（参考文献）

な影響を与える。従って、EG-PEG20000 溶液を用いた場

１） H. Inaba and H. Tagawa, Solid State Ionics, 83, 1

合 EG 含有割合が増加すると溶液からの CeO2 核の発生頻(1996).

度が低下し、その事によって得られた粒子の粒径の変化が

２） S. Yabe, M. Yamashita, S. Momose, K. Tahira, S.

増加したと考えられる。以上を踏まえ、PEG 溶液からのYoshida, R. Li, S. Yin, and T. Sato, Int. J. Inorg. Mater., 3,

CeO2 粒子の生成過程について Fig. ６に模式的にまとめた。

４．総1003 (2001).
３） R. Li, S. Yabe, M. Yamashita, S. Momose, S. Yoshida, S.

括

Yin, and T. Sato, Mater. Chem. Phys., 75, 39 (2002).

本研究では、溶媒かつ塩基として作用することのできる

４） M. Hirano and E. Kato, J. Am. Ceram. Soc., 79, 777 (1996).

ポリエチレングリコール（PEG）に注目して新しい CeO2

５） X. Yang and M. N. Rahaman, J. Eur. Ceram. Soc., 17,

微粒子の合成法について検討を行った。溶媒分子に塩基としての機能を持たせることによって、溶液内で非常に高い

525 (1997).
６） P.-L. Chen and I.-W. Chen, J. Am. Ceram. Soc., 76,

均一性を保持したまま核発生と粒成長を起こさせることが可能になった。この結果、硝酸セリウム水和物の PEG

1577 (1993).
７） N. Uekawa, M. Endo, K. Kakegawa, and Y. Sasaki,

溶液を 110℃で加熱処理するという非常に簡便なプロセス
によって粒径の揃った CeO2 球状粒子の調製が可能になっPhys. Chem. Chem. Phys., 2, 5485 (2000).
８） N. Uekawa, T. Sukegawa, K. Kakegawa, and Y.

た。さらに、溶媒として EG と PEG20000 の混合溶液を用い、EG 含有割合を変えることで CeO2 粒子の粒径制御がSasaki, J. Am. Ceram. Soc., 85, 329 (2002)
９） J. Livage, M. Henry, and C. Sanchez, Prog. Solid St.

可能であることが明らかとなった。本研究において、現在

Chem., 18, 259 (1988).

まで無機合成反応の溶媒としてまったく用いられることの10） J. P. Jolivet, Metal Oxide Chemistry and Synthesis

なかった PEG に注目することによって、非常に簡便で環(Jhonn Wiley & Sons: New York, U. S. A., 2000), Chap.

境負荷の低い合成条件及び方法で形態および粒径のコント

5.

ロールされた CeO2 微粒子を得る方法を開発することが出

11） K. Nakamoto, Infrared and Raman Spectra of

来た。今後の研究の展開により、より粒径の小さな 10 nm

Inorganic and Coordination Compounds (John Wiley &〜 20 nm レベルの粒径を有する CeO2 ナノ粒子の調製と応Sons: New York U. S. A., 1986), Chap. 2, pp. 115.

用法の開発について検討していく。

12） N. _zer, Solar Energy Materials & Solar Cells, 68,
391 (2001).

− 44 −

新規な化粧品素材としてのコウジ酸、β- ツーヤプリシン、p-アミノ安息香酸、及び、アルブチンのさらなる高機能化を目的とした酵素的分子設計
岡山県立大学

中

保健福祉学部栄養学科

島

伸

佳

Kojic acid, β -thujaplicin, and p -aminobenzoic acid were glucosylated to their monoglucosides by UDP-glucosyltransferase
reaction.  Arbutin and polyphenol glucosides (naturally occurring plant pigments) were acylated with aromatic acids to theiracylated forms by lipase or acyltransferase reactions.  As the results, further stabilization and functionarization of the naturalbioactive compounds as the cosmetic materials has been achieved by the enzymatic-modification method.

１.

緒ール）グルコシドの芳香族酸エステル化を行なった。

言

また、アシル CoA 合成酵素とフラボノイド：アシル転

近年、自然環境の破壊や環境汚染、生活習慣の変化や食移酵素を含むムラサキイモ培養細胞由来の無細胞抽出液

生活の多様化により、「人類を取り巻く地球環境に関わる（粗酵素液）を生体触媒として、ATP と Coenzyme A の諸問題」が注視されるに至っている。このような状況下に存在下、フラボノイドグルコシドの糖部分への遊離の芳香

おいて、天然資源の大量消費による有用な植物資源の枯渇

族酸によるアシル（エステル）化について検討した。

にも伴い、天然由来の生薬成分や生理機能性物質の価値がこれらの機能性物質の中で、広義の植物性（ポリ）フェ

2．2 化粧品素材としての（ポリ）フェノール性化合物の酵素的グルコシル化

ノール関連化合物は、抗菌作用、抗酸化作用やラジカル消（ポリ）フェノール類 10µmol、UDPglucose 70µmol、及び、去能などを有し、さらには免疫力の向上効果、抗ウイルス100 µmol Tris-HCl buffer（pH 7.8）を含む１ml の反応液作用や制癌作用などの様々な有用生理機能を示すことか

中に、ユーカリ培養細胞由来の UDP- グルコシルトランス

ら、最近では、化粧品、食品添加物、医薬品などとしてもフェラーゼ含有膜画分 0.1g（湿潤状態、培養細胞 0.5g に注目されている。

相当）を加え、30℃で緩やかに撹拌しながら、一昼夜グル

見直されてきた。

本研究では、
植物色素類を始めとした天然由来の（ポリ）コシル化反応を行なった。

フェノール化合物の、「化粧品素材」としての使用上の安さらに、ユーカリ膜画分を用いて連続的にグルコシル化

全性と有効性を拡大させること、すなわち、安定化と高機反応を行う「膜型バイオリアクターシステム」の開発や、能化を通して、これらの機能性物質の薬理・生理活性を向パン酵母による UDP- グルコース発酵を同時進行させた

上させ、有効に活用できる新機能性成分へと「分子設計」

UDP- グルコシルトランスフェラーゼ共役反応系による効を行うことを主目的に、「グルコシル化とアシル化を介し果的なグルコシル化について検討した。

た酵素的機能改変」の方法を開発した。

２.
2．1

実

３.

験

化粧品素材としての（ポリ）フェノールグルコ

シド類の酵素的アシル化

結果と考察

3．１ 化粧品素材としての（ポリ）フェノールグル
コシド類の酵素的アシル化による機能改変
3．1．1

アルブチンの芳香族酸エルテル化

リパーゼ（主に、Chirazyme L-2、10mg）のエステル交

天然植物色素（ポリフェノールグルコシド類）は、ある換反応を利用して、ポリフェノールグルコシド 10mg、及種の植物細胞中において、そのグルコシド糖の一部が様々

び、
芳香族酸ビニル 100mg を、アセトン 10ml 中で、数日間、な芳香族酸によりエステル化された「アシル化植物色素」

37℃で撹拌しながら反応させ、フラボノイド（ポリフェノとして、光や熱に対して安定に存在し、抗酸化性を始めとEnzymatic Stabilization and Functionarization of Natural-Bioactive Compounds
as the Cosmetic Materials

した有用な生理機能を発揮していると考えらている。そこ
で、本研究においては、リパーゼのエステル交換反応を応用して、（ポリ）フェノールグルコシド類の安定化と高機Nobuyoshi Nakajima

能化（機能改変）を主目的に、アルブチンや天然植物色素

Department of Nutritional Science,
Okayama Prefectural University

類（フラボノイド系、並びに、アントシアン系植物色素）の、芳香族酸（桂皮酸や p- クマール酸）ビニルによる酵素的エステル（アシル）化を可能にした。

− 45 −

まず、美白作用を有することが報告されているハイドロ
キノンの β - グルコシドであるアルブチンをアシル基受容おり、他の水酸基はエステル化されていないことが確認された４, 15）。

体に、桂皮酸ビニルをアシル基供与体として、リパーゼのまた、そのアグリコンであるクエルセチンやグルコシド

エルテル交換反応を利用することによりアルブチンシンナ

であるイソクエルシトリンと比較して、イソクエルシト

メートを合成した。本エステル化反応は、アルブチンのグ

リン p- クマレートやイソクエルシトリンシンナメートが、ルコシド糖であるグルコースの C6 位の一級 OH 基に位置

熱や光に対して最も安定であることが確認された（図３）。

１）

特異的であった（図１） 。

しかも、ラジカル消去能も保持していた（表１）13,15）。

3．1．2 イソクエルシトリン（フラボノイド系植物
色素）の芳香族酸エルテル化

3．1．3 クリサンテミン（アントシアン系植物色素）の芳香族酸エステル化

リパーゼのエルテル交換反応を利用して、フラボノイド

リパーゼのエルテル交換反応を利用して、アントシア

系植物色素のひとつであるイソクエルシトリン（クエルセ

ン系植物色素のひとつであるクリサンテミン（シアニジ

チン -3-O-β - d - グルコピラノシド）と各種の芳香族酸ビニ

ン -3-O-β -d- グルコピラノシド）と各種の芳香族酸ビニル６）ル（桂皮酸ビニルや p - クマール酸ビニル等）６）を原料に、を原料に、そのグルコシド糖への位置特異的な芳香族酸エ

そのグルコシド糖への芳香族酸エステル化を行った（図ステル化を行った４,13）。

２）。

これらの酵素的に合成したアシル化クリサンテミン類

各種のアシル化イソクエルシトリンの収量は、30 〜の中で、クリサンテミン p- クマレートやシンナメートが、60% であった。単離精製した芳香族酸エステル誘導体に

熱や光に対して最も安定であることが確認され（図３）、

13

ついて、 C-NMR 測定を行い、糖の一級アルコール（C6）ラジカル消去能も保持していた（表１）13,15）。

部位由来のシグナルにおいて高磁場側へのシフトが認められた。また、芳香族酸の酸部分のカルボニル炭素由来のピークの低磁場側へのシフトも観測された。しかし、ポリフ

3．1．4 植物培養細胞由来の酵素反応系を用いたフラボノイド系植物色素のアシル化

ェノール骨格のフェノール性水酸基やグルコシド糖の二級

ムラサキイモ細胞由来の酵素反応系を用いて、遊離の芳

水酸基の炭素については、ピークのシフトは全く確認され香族酸を原料としたフラボノイド系植物色素のアシル化法なかった。以上の結果から、イソクェルシトリンの糖部分を開発した。

の一級水酸基に芳香族酸が位置特異的にエステル化されて

図1

図2

Reaction scheme for lipase-catalyzed regioselective transesterification to synthesize arbutin cinnamate.

Reaction scheme for lipase-catalyzed regioselective transesterification to Synthesize isoquercitrin cinnamate.

− 46 −

新規な化粧品素材としてのコウジ酸、β - ツーヤプリシン、 p- アミノ安息香酸、及び、アルブチンのさらなる高機能化を目的とした酵素的分子設計

図3

Comparison of the Light-resistance of the Flavonoid Compounds.
The acylated flavonoid gulucosides were systhesized from their non-acylated forms with vinyl cinnamate or vinyl pcoumarate in dry acetone by Chirazyme L-2, and their structures were elucidated by NMR(1H-and13C-) and MS analyses
as described previously. The residual amounts of the plant pigments without incubation are expressed as 100%. A:
anthocyanins(450mM) were incubated at room temperature in 1 ml of a 100mM McI vain buffer (pH6.0) under illuminationby white fluorescent light (one side, 5,000 lx) for various times; chrysanthemin p-coumarate (500nm, ● ), chrysanthemin
cinnamate (500nm, ▲ ); chrysanthemin (530nm, △ ), cyanidin (580nm, ○ ). B: flavonols (40mM) were incubated under illumination by light (one side, 20,000lx) in 1 ml of the buffer (pH7.0); isoquercitrin p-coumarate (350nm, ● ); isoquercitrin
cinnamate (350nm, ▲ ); isoquercitrin (350nm, △ ); quercetin (350nm, ○ ).
表１

Radical-scavenging abilities of plant pigments and their derivatives

本反応に用いたムラサキイモ培養細胞由来の無細胞抽出
液中には、芳香族酸からアシル -Coenzyme A を合成する
酵素（アシル -CoA リガーゼ）と、アシル -CoA をアシル

3．1．5 ポリフェノールジグルコシドの芳香族酸エ
ステル化基供与体として、ポリフェノールグルコシド類の糖の一級リパーゼのエステル交換反応を利用して、植物性ポリフ

OH 基に対してアシル基転移反応を触媒するトランスフェェノールジグルコシドのひとつであるルチン、及び、ナリラーゼが存在すると考えられ、イソクェルシトリンの、特ンギンへの芳香族酸エステル化を行った。

にカフェー酸、及び、p- クマール酸によるそれぞれのアシその結果、ナリンギン（図５）の場合は、ジグルコシド

ル化が可能となった。本アシル化反応においても、ポリフ構造のグルコースの C6 位の一級 OH 基がアシル化されたェノールグルコシド糖の一級 OH 基に対して位置特異的でが、グルコシド糖に一級 OH 基が存在しないルチン（クェ７）あることが確認された（図４） 。

− 47 −

図4

Structure of acylated flavonoid glucosides (isoquercitrin aromatic acid esters).
R1=R2=OH: isoquercitrin caffeate; R1=H, R2=OH: isoquercitrin p-coumarate;
R1=OMe, R2=OH; isoquercitrin ferulate; R1=R2=H; isoquercitrin cinnamate.

図 5 Reaction scheme for lipase-catalyzed regioselective acylation for synthesis of naringin cinnamate.

ルセチンルチノシド）（図６）においては、主としてグルコースの C3 位の二級 OH 基へのアシル化が生じていることが確認された 11）。

3．2 化粧品素材としての（ポリ）フェノール化合物の酵素的グルコシル化による機能改変
3．2．1 グルコシルトランスフェラーゼによる β-thujaplicinのグルコシル化

図 6 Regioselectivity of the enzymatic acylation to rutin.

グルコシル化は、様々な外来物質の効果的な構造改変法の一つであり、不安定で疎水性の高い、すなわち水への溶

3．2．2

グルコシルトランスフェラーゼによる p- アミノ

解度が低い化合物を、より安定で、かつ親水性の高い化合

安息香酸のグルコシル化物に変換することができる。

次に、ユーカリ培養細胞由来の UDP- グルコシルトラン

本研究においては、有用な生理機能を持つ様々な難溶性

スフェラーゼ反応系を用いて、「UV プロテクター」としフェノール化合物の β - グルコシル化を可能にした。そのて用いられている p- アミノ安息香酸のモノグルコシル化

具体例として、ユーカリ培養細胞由来の膜結合型 UDP- グを可能にした。

ルコーストランスフェラーゼを用いた、β- thujaplicin（ヒ

本法により可能となったグルコシル化は、p- アミノ安息

ノキチオール）、p - アミノ安息香酸、サリチルアルコール、

香酸の COOH 基への位置特異的なモノグルコシド化であ

コウジ酸、ダイゼイン、及び、フラボノイド化合物等の酵った。変換率は上記のヒノキチオールの場合とほぼ同様で

素的グルコシル化による機能改変を行った。

あった２, ５）。

まず、天然の抗菌成分であるヒノキチオールの酵素的モ
ノグルコシル化を可能にした。ヒノキチオールモノグルコ

3．2．3

シドへの変換率は約 45％であった。本反応系では、ユーアルコールのグルコシル化

カリ培養細胞由来の膜結合型 UDP- グルコシルトランスフ
ェラーゼが、糖供与体である UDPglucose の存在下、（ポリ）

グルコシルトランスフェラーゼによるサリチル

さらに、サリチルアルコールのサリシンへのグルコシル化も可能であった２）。

フェノール類の「フェノール性 OH 基」へのグルコシル化を位置特異的に触媒していると考えられる。また、糖供与3．2．4

体は CDPglucose を用いても同様に進行した。

グルコシルトランスフェラーゼによるコウジ酸のグルコシル化

さらに、ユーカリ膜画分を用いて連続的にグルコシル化

メラニン沈着を防ぐ働きを保持し美白作用を示すと考え反応を行う「膜型バイオリアクターシステム」を開発した

られているコウジ酸の酵素的グルコシル化を可能にした（図７） 。
２）− 48 −

新規な化粧品素材としてのコウジ酸、β - ツーヤプリシン、 p- アミノ安息香酸、及び、アルブチンのさらなる高機能化を目的とした酵素的分子設計

図 8 Structures of kojic acid glucosides. (A) Kojic acid 7-O-β-dglucopyranoside; (B) kojic acid 5-O-β-d-glucopyranoside.

図7

Continuous enzymatic glucosylation of β -thujaplicin to
the monoglucoside in a membrane reactor system. (A)Schematic diagram of repetitive batch system; (B) Continuous conversion of β-thujaplicin to the monoglucoside. The
glucosylation reaction was performed at 30℃ with gentle
stirring in a stirred cell (10ml, Filtron Co., USA) equippedwith an ultrafilration membrane (M.W. 100,000 cut).

図9

Structures of daidzein glucosides. (C) Daidzein; (B)daidzin(daidzein 7-O-β -d-glucopyranoside).

（図８）。コウジ酸の約 40％がモノグルコシドへと変換さ並びに、エキナチン（カルコン）や上述したダイゼイン（イれた。また、5-O-β - d - グルコピラノシドが、7-O-β- d - グル

ソフラボン）の位置選択的なモノグルコシル化が確認され

９）

コピラノシドよりも圧倒的に優位に生産された 。

た２）。

3．2．5

3．2．7

グルコシルトランスフェラーゼによるダイゼイ

ン のグルコシル化

せ同様の方法により、植物エストロゲン、イソフラボンの

パン酵母による UDP- グルコース発酵を共役さ

UDP- グルコシルトランスフェラーゼ反応系によるグ

ルコ

シル化

ひとつであるダイゼインも本酵素反応を用いて、約 20％

マグネシウムイオンとリン酸イオンの存在下、AMP との変換率でダイジン（ダイゼイン 7-O-β -d- グルコピラノシ

グルコースを原料に、「パン酵母」による UDPglucose 発ド）に変換することが可能であった（図９）９）。

酵により生産させた UDPglucose を糖供与体として、ユー
カリ培養細胞由来の UDP- グルコシルトランスフェラーゼ

3．2．6

グルコシルトランスフェラーゼによる各種のフラボノイド化合物のグルコシル化

によるモノグルコシル化を行う「共役反応系」を構築した（図 10）５）。

フラボン類、フラボノール類、イソフラボン類、並びに、カルコン類等の植物性ポリフェノール類を基質として、ユ3．2．8

植物培養細胞変換法と酵素法によるカプサイシーカリ培養細胞由来の UDP- グルコシルトランスフェラー

ン関連化合物のグルコシル化

ゼによるグルコシル化を検討した。

ヨウシュヤマゴボウ培養細胞によるカプサイシン関連化

その結果、本酵素反応によるグルコシル化は、アピゲニ

合物のフェノール性 OH 基へのモノグルコシル化（図 11）

ンやルテオリン（フラボン類）のモノグルコシド化、ケンを経て、さらに、デンプンを糖供与体とした CGTase に

フェロール（フラボノール類）のアストラガリンへのモ

よるカプサイシンオリゴサッカライド類の合成を可能にしノグルコシル化、クェルセチン（フラボノール類）のモ

た 10,12）。

ノグルコシドであるイソクェルシトリン（クェルセチン
-3-O-β-d- グルコピラノシド）やクエルシメリトリン（クェルセチン -7-O-β- d - グルコピラノシド）へのグルコシル化、− 49 −

４.

総

括

以上、
「化粧品素材」として有用な天然植物色素を始め

図 10 Reaction scheme for systhesis of β -d-glucosides by the coupled enzymatic reaction
with UDP-glucosyltransferase and yeast cells.

図 11 Synthesis of capsaicin β -d-glucopyranoside (3) and 8-nordihydrocapsaicin β-d-glucopyranoside (4)from 1 or 2 by the cultured cells of P.americana.

とした（ポリ）フェノールグルコシド類の安定化と生理機

S. Mizobata, and H. Hamada, Effective Production

能の高機能化を目指して、微生物由来のリパーゼのエステ

o f β - T h u j a p l i c i n 2- O - β - d - g l u c o s i d e b y U D P -ル交換反応や植物細胞由来の酵素共役反応系を利用した、

glucosyltransferase Fraction from Cultured Cells of

ポリフェノールグルコシド類の芳香族酸エステル化（アシEucalyptus perriniana in a Membrane Reactor. J.

ル化）のための方法を開発した。

Ferment. Bioeng., 84(5), pp. 455-460, 1997.

さらに、抗酸化性（ポリ）フェノール化合物等の機能改

３） H. Hamada, Y. Miyamoto, N. Nakajima, and T.

変と「化粧品素材」としての有効利用方法のさらなる拡大

Furuya, High Selective Transformation by Plantを主目的に、植物や微生物由来の酵素反応を利用した、各Catalysts. J. Mol. Catal. B: Enzymatic, 5, pp. 187-189,

種のフェノール性化合物やフラボノイド類のグルコシル化

1998.

による構造機能改変を可能にした。

４） N. Nakajima, K. Ishihara, T. Itoh, T. Furuya, and H.
Hamada, Lipase-catalyzed Regioselective and Direct

謝辞

Acylation of Flavonoid Glucoside for Mechanistic
Investigation of Stable Plant-pigment. J. Biosci. Bioeng.,

本研究を遂行するにあたり、ご支援をいただきました

87(1), pp. 105-107, 1999.

（財）コスメトロジー研究振興財団に深謝いたします。

５） N . N a k a j i m a , K . I s h i h a r a , H . H a m a d a , S .
（引用文献）

Yamane, K. Nakamura, and T. Furuya, Multi-

１） N. Nakajima, K. Ishihara, S. Matsumura, H. Hamada,enzymatic Glucosylation Using Eucalyptus UDP-

K. Nakamura, and T. Furuya, Lipase-catalyzed

glucosyltransferase Coupled UDPglucose-fermentation

Synthesis of Arbutin Cinnamate in Organic Solvent

by Bakers' yeast. Biosci. Biotech. Biochem., 63(5), pp.
934-936, 1999.

and Application of Transesterification to Stabilize
Plant Pigments. Biosci. Biotech. Biochem., 61(11), pp.

６） K. Ishihara, N. Nakajima, T. Itoh, H. Yamaguchi, T.
Furuya, and H. Hamada, A Chemoenzymatic Synthesis

1926-1928, 1997.
２） N. Nakajima, T. Furuya, K. Ishihara, S. Matsumura,− 50 −of Aromatic Carboxylic Acid Vinyl Esters. J . Mol.

新規な化粧品素材としてのコウジ酸、β - ツーヤプリシン、 p- アミノ安息香酸、及び、アルブチンのさらなる高機能化を目的とした酵素的分子設計

Catal. B: Enzymatic, 7, pp. 307-310, 1999.

11） K. Ishihara, Y. Nishimura, T. Kubo, C. Okada,７） N. Nakajima, K. Ishihara, H. Hamada, S. Kawabe,

H. Hamada, and N. Nakajima, Enzyme-Catalyzed

and T. Furuya, Regioselective Acylation of Flavonoid

Acylation of Plant Polyphenols for Interpretation of

Glucoside with Aromatic Acid by an Enzymatictheir Functions. Plant Biotechnol., 19(3), pp. 211-214,

Reaction System from Ipomoea batatas. J. Biosci.
Biotech., 90(3), pp. 347-349, 2000.

2002.
12） H. Hamada, S. Ohiwa, T. Nishida, H. Katsuragi, T.

８） K. Sanada, A. Kawaguchi, T. Furuya, K. Ishihara,

Takeda, H. Hamada, N. Nakajima, and K. Ishihara, One-N. Nakajima, and H. Hamada, High Production of

step Glucosylation of Capsaicinoids by Cultured Cells

β-Thujaplicin with Thuja dolabrata var. hondai cellsof Phytolacca americana. Plant Biotechnol., 20(3), pp.

in a Semi-continuous Culture System. J. Mol. Catal. B:

252-255, 2003.

Enzymatic, 11, pp. 59-61, 2000.

13） N. Nakajima, M. Sugimoto, H. Yokoi, H. Tsuji, and

９） N . N a k a j i m a , K . I s h i h a r a , a n d H . H a m a d a ,K. Ishihara, Comparison on Acylated Plant Pigments:

Functional Glucosylation of Kojic acid and DaidzeinLight-resistibility and Radical Scavenging Ability.

with the Eucalyptus Membrane-Associated UDP-

Biosci. Biotech. Biochem., 67(8), pp. 1823-1832, 2003.

Glucosyltarnsferase Reaction System. J. Biosci. Biotech.,14） K. Ishihara, H. Hamada, T. Hirata, and N. Nakajima,

92(5), pp. 469-471, 2001.

Biotransformation using Plant Cultured Cells. J. Mol.

10） H. Hamada, K. Nishida, T. Furuya, K. Ishihara,
and N. Nakajima, Preparation of a New Papper:

Catal. B: Enzymatic, 23, pp. 145-170, 2003.
15） K. Ishihara and N. Nakajima, Structural Aspects of

Chemoenzymatic Synthesis of Capsaicin oligosaccharide

Acylated Plant Pigments: Stabilization of Flavonoid

and 8-Nordihydrocapsaicin oligosaccharide. J. Mol.

Glucosides and Interpretation of their Functions. J.

Catal. B: Enzymatic, 16, pp. 115-119, 2001.

Mol. Catal. B: Enzymatic, 23, pp. 411-417, 2003.

− 51 −

集合して生体に作用する有機分子の設計と合成および機能評価東京大学大学院

薬学系研究科分子薬学専攻 薬化学教室

大 和 田

智

彦

A synthetic method was developed for synthesizing α,α--disubstituted glycines bearing a large hydrophobic ring
(more than 15-membered ring) based on ring-closing metathesis. Ring-closing metathesis reactions of the dialkenylated
malonate precursors turned out to proceed efficiently, particularly when long methylene chains adequately tether bothterminal olefin groups.   Surprisingly, the amino groups of the α,α-disubstituted glycines bearing a large hydrophobic
ring are inert to conventional protective reactions (e.g., N-Boc-protection: Boc2O/DMAP/CH2Cl2; N-Z-protection: Z-Cl
(benzyloxycarbonyl chloride)/DMAP/CH2Cl2).   The Curtius rearrangement of the carboxylic acid functionality ofthe malonate derivatives, obtained after the ring-closing metathesis, to an amine functionality can be catalyzed bydiphenylphosphoryl azide (DPPA), but unexpectedly, only the intermediate isocyanates can be isolated, even in thepresence of alcohols such as benzyl alcohol.   Thus, the corresponding isocyanates were isolated in high yields when
this Curtius rearrangement was carried out in an aprotic solvent (benzene).   The resultant isocyanate was treatedwith 9-fluorenylmethanol in a high boiling point solvent such as toluene under reflux to give the N-Fmoc-protectedaminomalonate derivatives in high yield. These hydrophobic amino acids can be incorporated into a peptide by Fmocsolid phase peptide synthesis using the acid fluoride activation method. In a 17-amino-acid peptide sequence known totake a monomeric α-helix structure, the replacement of two alanines with two new hydrophobic amino acids bearing acyclic 18-membered ring enhanced the stability of the helical structure.  Assembly to hexamers was also suggested by
the results of sedimentation equilibrium studies in the presence of 100 mM NaCl.

１．緒言

Aib（α-aminoisobutyric acid）などの C α,α - 二置換グリ
シン誘導体は β -bend、310 もしくは α ヘリックス構造をとり

2118

やすく，またこれらの構造を安定化させることが知られてい15る。なかでも、C α のジ置換基をシクロアルカンとしたものは
H2N

1-aminocycloalkane-1-carboxylic acid 残基（Acnc）として知られ、Toniolo らを中心に現在までに Ac3c（３員環）-Ac12c

1

ゴマー中への挿入ペプチドの構造特性が調査されている１）。

CO2H

2

２．実

一方、天然に存在する疎水性アミノ酸、特にアルキン、イソロイシンなどで、アルキル炭素数も１〜４とそ

H2N

H2N

CO2H
3

Figure 1（12 員環）の合成および数残基のホモオリゴマーもしくはオリル側鎖をもつアミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシ

CO2H

験

2．1 大きな疎水性領域を持つ α,α- 二置換グリシン
誘導体の合成法の疎水性の違いが比較的小さい。疎水性領域を大きく変

今まで Toniolo らによって報告され構造解析がされた化させたアミノ酸の機能は不明である。さらに、長いペ

Acnc の合成法は Strecker 反応を用いたものがほとんどでプチド鎖に C α, α - 二置換グリシン誘導体を導入した際のある１）。しかし、この合成法では無保護のアミノ酸を合成

単独ペプチド構造および自己組織化構造への効果は未知

してから NH2 および CO2H に保護基を導入する必要があである。このような考えのもとに、本研究者は新規疎水る。環が小さい場合はあまり問題にならないが、環が大き性 α,α- 二置換グリシン誘導体 1, 2, 3 を設計し、その自己くなった場合、無保護のアミノ酸の溶解性の低さ、立体障

組織化構造への効果を調査した（Figure １）。

害が問題となり保護基を導入することが困難になってくる

Design, synthesis and functions of selfassembled biomolecules.

事が予想される。そこで本研究者はマロン酸誘導体を出発物質とし、Grubbs 触媒を用いた Ring Closing Metathesis

Tomohiko  Ohwada（ROM）による環形成の後 Curtius 転位反応を行うこと

Graduate School of Pharmaceutical
Sciences The University of Tokyo

すなわち、マロン酸誘導体４をジアルケニル化後（6）、閉で大環状アミノ酸誘導体の合成を計画した（Scheme １）。
環オレフィンメタセシス反応を用いて環化を行い（7）、それに続く Curtius 転位反応を経て（9）アミノ酸誘導体 12− 52 −

集合して生体に作用する有機分子の設計と合成および機能評価

H

H

a

b

m

X Y

X

4

5

m

c

n

Y

X

m

n

Y

X

6

Y
7

Reagents a,b and c are shown in Scheme 2

Scheme 1

H

H

a

4c

n

HO2C CO2t Bu
ring size = 21 8A 83%
ring size = 18 8B 82 %ring size = 15 8C 88 %

e

m

c

n

R1O2C CO2t Bu

m

n

f

m

n

O C N CO2t Bu

R2HN CO2t Bu

9A 83%
9B 82 %
9C 88 %

10A 96 %10B 98 %10C 93 %n

R1O2C CO2t Bu

6c : m=n=9 84 %6m: m=6,n=9 86 %6h : m=n=6 64 %5c: m=9 68 %5h: m=6 67 %

R1=Bn

m

m

R1O2C CO2t Bu

R1O2C CO2 Bu

d

b

m

t

7c 84%
7m 92 %
7h 72 %g, hmn

R2HN COX
X=OH

11A
11B
11C

X=F

12A 96 %12B 98 %12C 93 %R2=Fmoc
a: CH2=CH(CH2)m Br, NaH, DMSO, rt

b: CH2=CH(CH2)nBr, NaH, DMSO, rtc: (PCy3)2Cl2Ru=CHPh, CH2Cl2, reflux d: H2, Pd/C,AcOEt e: DPPA, Et3N, benzene, reflux
f: 9-fluorenylmethanol, toluene, reflux g: TFA, CH2Cl2, rt

h: DAST, CH2Cl2,rt

Scheme 22．1．3を得る合成法を計画した（Scheme ２）
。

2．1．1

ジエン 6 の合成

Z-Acnc-F18 の合成（合成経路の探索研究）

21,18,15 員環をもったアミノ酸誘導体の N-Z（benzyloxy

マロン酸エステルからは Curtius 転位反応により α アミ

carbonyl）- 酸フッ化物の合成を t-butylbenzyl malonate

ノ酸を、ニトリル化合物からは還元により β アミノ酸を（4c）を用いての合成を行った（Scheme ２）。Pd/C を用合成できると考え、基質としてマロン酸ジエステル、シア

いて７のオレフィンを接触還元すると同時にベンジルエステル

ノ酢酸エチル、マロノニトリルを用いた。これらの基質４をカルボン酸としてモノエステル８を得た。得られた８に対しに塩基存在下、alkenyl bromide を付加させることでジエ

DPPA（diphenylphosphoryl azide）を用いた Curtius 転位

ン６を得た。反応の副生成物を避けるため、一気にジアル反応を検討した。アルコール存在下でカルボン酸を DPPA とケニル化する方法ではなく、モノアルケニル体５を経てか反応させると通常はイソシアネートを経由してアルコールがらジアルケニル化する方法を用い、比較的高収率で６を得

反応して一気にウレタン誘導体を与えるが（Table １）３）、α のた。

二置換基のアルキル鎖が大きくなるとアルコール共存下でも2．1．2

閉環メタセシス反応（ROM）

イソシアネートが単離されることが判明した（Table 1）。そこ

市販の第一世代の Grubbs 触媒を用いて、様々な置換基、でモノエステル８を非プロトン性溶媒（ベンゼン）中 DPPA

アルキル鎖をもつジエン６の閉環メタセシス反応を行ったと加熱環 流下反応させると、イソシアネート９が収率良く（Scheme ２） 。その結果、置換基とアルキル鎖の長さに得ることが出来た。イソシアネート９をベンジルアルコール２）より反応の効率が異なることがわかった。特に、ニトリル

中 neat で加熱することで Z - 保護アミノ酸エステルを得た

置換基を持つ化合物や一方の炭素鎖が短い場合（n=2）の（Table 1）。この反応スキームは N-Fmoc 保護体の合成に収率は低かったが，それ以外では比較的高い収率で環化体も適用した。一方，別法で得たアミノ基を塩化メチレン溶液７が得られた。反応によっては分子間で反応が進行したダ

中触媒量の DMAP（N,N-dimethylaminopyridine）存在下イマーも得られた。環化した７のオレフィンの E/Z 比をN-benzyloxycarbonyl chloride（Ｚ -Cl）で N-Z 化や DMAP

13

CNMR の積分値から見積もったところ、E 体が優先的に存在下塩化メチレン溶液中 B oc2 O で処理し，N-B oc 化を試得られていることがわかった。

みても反応せず，先の合成法の有効性が判明した。

− 53 −

Table 1
R2

R1
HO2C

CO1Et
R1

R1

PhCH2OH
reflu xR2

HN

a n-propyl
n-propylundecylb udecylundecylc octyl
2-membered ringd
1-membered ring
e

2．1．4

R2

DPPA, Et3N

R1

R2

N

CO2Et

+
CO2Et

O C

Z
time
68 %
0%
0%
0%
0%

47 hr
20 hr
20 hr
26 hr
15 hr

Fmoc-Ac20c-F の合成

trace
82 %
82 %
47 %
68 %

ックス性が増大する可能性が考えられ、また、α へリック

Fmoc 固 相 合 成 法 を 用 い て ペ プ チ ド を 伸 長 す る た

ス性が変化しないとしても、安定性に大きな違いがみられめ、N-Fmoc 保護のアミノ酸を合成した（Scheme ２）。

る可能性があり，疎水性アミノ酸の評価方法として適当で21,18,15 員環をもった benzylt-butyl malonate（4c）をあると考えたからである。

Pd/C を用いて接触還元してモノエステル体８とし、得なお、ペプチド合成は N-Fmoc と酸フルオライドを用られた８に対し、DPPA を用いた Curtius 転位反応を行い Rink amide resin を用いた固相合成法によって行った。

い、イソシアネート９とした。９をトルエン中、高濃度のAc-AE3AAAKEAA10AKEAAAKA-NH2

9-fluorenylmethanol と加熱還流することで N-Fmoc アミ

Ac-AE（2,C18）AAKEAA（2,C18）KEAAAKA-NH2 peptide IIノ酸 t-butyl エステル 10 とし、10 を TFA で処理するこ

Ac-AEAAAKEAA（2,C18）KEAAAKA-NH2

peptide IIとによりカルボン酸 11 とした。11 を DAST
（diethylamino）

Ac-AE（2,C18）AAKEAAAKEAAAKA-NH2

peptide IV

peptide I（native）

sulfur trifluoride）を用いて酸フッ化物とし目的物 12 が（A=Ala, E=Glutamic acid, K=Lysine）得られた。ここで得られた酸フッ化物はカラムクロマトグ

水溶液中の CD 測定から大きな疎水性領域を持つ α,α-ラフィーで分離精製可能である。

二置換グリシン誘導体を一つまたは二つアラニンの代わりに置換したアミド鎖は Baldwin の原形と同じく α- ヘリク

２．２ 大きな疎水性領域を持つ α,α- 二置換グリシン誘導体の置換による α ヘリックス構造への効果ッスを取ることが分かった（Figure ２（A））。すなわち、

2．2．1（peptide I）より増強されていた。peptideII では大きな疎疎水性アミノ酸の評価

２を二つ置換基した peptide II の α ヘリシティーは原形

通常ペプチドは水溶液中では、水との水素結合が優先

水性領域を持つ α,α- 二置換グリシン誘導体がヘリックス

し、ペプチドは規則構造は取らない。TFE（tetrafluoro

鎖に沿って重なるように位置を選定している。一方１つ置

ethananol）などの疎水性有機溶媒の共存化で分子内水素換した peptideIII もしくは Peptide IV では α ヘリシティ

結合を形成し α ヘリックスなどの自己組織化構造を形成

ーは原形（peptide I）より減弱している。さらに温度上することが知られている。そのため α ヘリックス構造は昇によるヘリックス構造の減少速度から２を二つ置換基し分子間や分子内で会合しその疎水性ゆえに安定化される。

た peptide II はヘリックス構造の安定化の亢進が観測され一方、Baldwin らは Ac-（N）Ala-Glu-Ala-Ala-Ala-Lys-

た（Figure ２（B））。

Glu-Ala-Ala-Ala-Lys-Glu-Ala-Ala-Ala-Lys-Ala（CO）NH2

また，peptide II は塩濃度増加（10mM->100mM）により（peptide I）の配列をもつペプチドが水溶液中で会合する

CD 曲線から α ヘリシティーの増加が観測された（データ省略）。

ことなく単独で α へリックスをとることを報告していると塩基性アミノ酸の Lys（+）の塩橋（salt bridge）が存

２．３ 大きな疎水性領域コアを持つ α ヘリックスペプチドの自己集合構造

在し α ヘリックスを安定化すると考えられている。本研

peptideII の 40000 回転（一分間当たり）における遠心究者はこのペプチドの疎水性アミノ酸である Ala を１つ

沈降実験を行ったところ５）、100mM の塩濃度でテトラマ

または２つ新規疎水性アミノ酸２（12B）に置換したものーを形成することが分かった。特にモノマー⇔テトラマーを合成し，CD スペクトルを用いて大きな疎水性領域を持間の直接的な会合現象であり、途中にダイマーやトリマー

つ α,α- 二置換グリシン誘導体の α へリックス構造への効は存在しない。ペプチド鎖は大きな疎水性コアによって会果を調査した。大きい疎水場を持つアミノ酸を導入するこ

合し、ヘリックスバンドル間水素結合の関与も考えられる。

とで塩橋による固定化が壊れ α へリックス性が減少する

ペプチド鎖同士は双曲子モーメントをうち消すアンチパラ

可能性と，疎水場を中心に集合体をつくることで α へリレル構造を取ると推測している。

。このペプチドはらせんに沿って酸性アミノ酸の Glu（-）

４）− 54 −

集合して生体に作用する有機分子の設計と合成および機能評価

A

B
1 .2

0

1

[θ] 222 / [θ ini ]222

[θ] (deg·cm 2 /dmol )5000- 5000

IV

III
20000

I

0 .6

0 .4

III
IV

I

0 .2

II

-2

II

0 .8

0
2 00

220

240

2 60

0

Wavelength (nm )

10

20

30

40

50

60

Te mperat ure (°C)

Figure 2とが明らかとなった。導入効率などの改善点は残こるもの

３．結果と考察の、今後、これらのアミノ酸を導入したペプチドの性質を本研究において本研究者は新規疎水性アミノ酸 1, 2, 3

詳細に検討し、本研究で示した疎水性コアによる水溶液中を得るため、マロン酸誘導体４をジアルケニル化後（6）、でのヘリックスペプチドの自己集合組織化の一般性の調査

閉環オレフィンメタセシス反応を用いて環化を行い（7）、を行うことは今後の重要な課題である６）。従来にない新しそれに続く Curtius 転位反応を経てアミノ酸誘導体 11 をい構造とそれに由来する生体機能を持ったペプチドの創製得る、という合成法を計画し、N-Fmoc 化されたアミノ酸を目指したいと考えている。

11 を得ることに成功した。大環状疎水基を持つアミノ酸において無保護のアミンを Z 化することができず、カル

本研究は、小嶋大輔修士、京都大学化学研究所

黄檗達

ボン酸も無保護の場合には有機溶媒に不溶であることなど

人博士、二木史朗博士、杉浦幸雄教授、大阪大学大学院薬から推測すると、Strecker 合成を用いてアミンを保護し学研究科

た 1, 2, 3 を合成するのは非常に困難であると考えられる。

ンター山口健太郎博士との共同研究である。

西義則博士、小林祐次教授、千葉大学分析セ

本合成法は Strecker 合成と異なり、無保護のアミノ酸を保護する過程がなく、合成の各段階において比較的高収率１） a) A.Moretto, F.Formaggio, M.Crisma, C.Toniolo,

で目的物を得られる。また、最初のジアルケニル化に用い

M.Saviano, R.Iacovino, R.M.Vitale and E.Benedetti,

るアルキル基の長さを変えることにより、様々な大きさのJ.Pept.Res., 57, 307 (2001). b) M.Saviano, R.Iacovino,環をもつアミノ酸誘導体を得ることができる。さらに、安V.manchise, E.Benedetti, G.M.Bonora, M.Gatos, L.Graci,

定に単離できるイソシアネート９と反応させるアルコール

F.Formaggio, M.Crisma and C.Toniolo, Biopolymers, 53,

を変えることにより、アミンの保護基も選択できるなど、200 (2000).

様々な利点を有する。今後、この合成法を用いて様々な大２） a) R.H.Grubbs and S.Chang, Tetrahedron, 54, 4413

きさの環や原子種を持つ新規疎水性アミノ酸を合成する予(1998) b) T.A.Kirkland and R.H.Grubbs, J.Org.Chem., 62,

定である。

7310 (1997).

本合成法の key step である閉環オレフィンメタセシス反

３） T. Shioiri; K. Ninomiya; S. Yamada, J. Am. Chem.

応を様々な基質６を用いて調査した結果、置換基とアルキ

Soc. , 94, 6203-6205 (1972). b) K. Ninomiya; T. Shioiri; S.

ル鎖の長さにより反応の効率が異なることがわかった。ニYamada, Tetrahedron, 30, 2151-2157 (1974).

トリル置換基を持つ化合物や、一方の炭素鎖が短い場合の４） S.Marqusee and R.L.Baldwin, Proc.Natl.Acad.Sci., 84,

収率が低かったが、それ以外では比較的高収率で環化体７8898 (1987).

が得られ、反応によっては分子間で反応が進行したダイマ

５） M. Doi; Y. Nishi; S. Uchiyama; Y. Nishiuchi; T.

ーも得られた。この結果から、反応には置換基のかさ高さ

Nakazawa; T. Ohkubo; Y. Kobayashi, J. Am. Chem.

による立体的な影響，触媒と置換基のキレーションによる収率の変化など様々な要因が関与していると考えられる。

Soc., 125, 9922-9923 (2003).
６） T. Ohwada,; D. Kojima; T. Kiwada; S. Futaki;
Y. Sugiura; K. Yamaguchi; Y. Nishi, Y. Kobayashi,

まとめ

Chemistry-A European Journal, 10, 617-626 (2004).

本研究により、高次構造をとり得るような長さのペプチ
ドに 1, 2, 3 などの大環状疎水性アミノ酸を導入できるこ− 55 −

接着分子シグナルを利用した皮膚老化防止の新戦略
群馬大学

的生体調節研究所崎尚

SHPS-1 is a transmembrane protein whose extracellular region interacts with CD47 and whose cytoplasmic region
undergoes tyrosine phosphorylation and thereby binds the protein tyrosine phosphatase SHP-2. Formation of thiscomplex is implicated in regulation of cell migration by an unknown mechanism. A CD47-Fc fusion protein or antibodies
to SHPS-1 inhibited migration of human melanoma cells or of CHO cells overexpressing SHPS-1. Overexpressionof wild-type SHPS-1 promoted CHO cell migration, whereas expression of the SHPS-1-4F mutant, which lacks thephosphorylation sites required for SHP-2 binding, had no effect. Antibodies to SHPS-1 failed to inhibit migration of
CHOcells expressing SHPS-1-4F. SHPS-1 ligands induced the dephosphorylation of SHPS-1 and dissociation of SHP2. Antibodies to SHPS-1 also enhanced Rho activity and induced both formation of stress fibers and adoption of a lesspolarized morphology in melanoma cells. Our results suggest that engagement of SHPS-1 by CD47 prevents the positive
regulation of cell migration by this protein. The CD47-SHPS-1 system and SHP-2 might thus contribute to the inhibitionof cell migration by cell-cell contact.

１．緒子 CD47 と相互作用することにより新しい細胞間シグナル

言伝達系（CD47-SHPS-1 系）を形成していることを明らか

皮膚は、年令変化が最も顕著に認められる組織の１つでにしつつある３）。

ある。皮膚老化のバイオロジーを研究することは、生命科

SHPS-1 は、その細胞外領域に３個の免疫グロブリン様学における老化の基本メカニズムを明らかにする上におい構造をもち、さらにリン酸化を受ける複数のチロシン残基ても、また皮膚の老化を防止あるいは遅延させて美容に役を細胞内領域にもつ蛋白質である。一方、CD47 は、細胞立つ薬剤の開発を行う面においても、極めて意義深い成果

接着分子であるインテグリンに関連する分子として同定さをもたらすと考えられる。私共は、これまで蛋白質チロシ

れ、組織普遍的に発現する５回細胞膜貫通型の蛋白質であンリン酸化を介した細胞内シグナル伝達系の役割を中心とる。CD47 は、その細胞外領域に１個の免疫グロブリン様して、細胞の増殖と接着の制御機構につき研究を継続して構造をもち、これが SHPS-1 の N 末端側の免疫グロブリいる。特に、私共は、SH2 ドメインを有しているチロシン

ン様構造に結合する。

ホスファターゼ SHP-2 が、増殖因子刺激による Ras 低分

SHPS-1 と CD47 は相互作用することにより双方向性に

子量 G 蛋白質の活性化に重要な役割を果たしていること

シグナルを伝えると考えている。そこで本研究では、将来

１）を明らかにした 。また、SHP-2 の脱リン酸化基質蛋白質

皮膚の再生や老化の防止につながる手法や薬剤の開発の端として、イムノグロブリンファミリーに属する受容体型の緒を得ることを目的として、細胞接着や細胞運動の制御に蛋白質 SHPS-1

２）

およびドッキング蛋白質 Gab-1 を見い出しており、SHPS-1/SHP-2 系や Gab-1/SHP-2 系が細胞接着

おける CD47-SHPS-1 系によるの機能を分子レベルでさらに詳細に検討しようと試みた。

装置であるインテグリン系やカドヘリン系と相互作用して、

２．実

Rho 低分子量 G 蛋白質の活性化を介して細胞運動をも制御することを示した。即ち、SHP-2 は、増殖因子と細胞接

2．1

験

細胞、抗体および融合蛋白質

着の両方のシグナル経路の下流に位置し、２つの異なる低細胞として、ヒト悪性黒色腫細胞 W M239a と CHO 細胞

分子量 G 蛋白質 Ras と Rho を制御する多機能なシグナルを用いた。CHO 細胞には外来性にヒトまたはラット SHPS-1分子であることを明らかにした。私共は、最近、SHPS-1

遺 伝 子を導入し、 安 定 発 現 株とした。 抗 体 は、 抗ヒトがその細胞外領域の生理的なリガンドである受容体型の分

SHPS-1 抗体（SE12C3）および抗ラット SHPS-1 抗体（2F34,A new strategy for protection ofskin senescence by utilizing adhesion
moleclues

9F10）を用いた。さらに、C D47 の細胞外領域と Ig- Fc との融合タンパク質（CD47-Fc）を分泌する CHO 細胞株を樹立し、この細胞培養上清より CD47-Fc を回収し Protein-Aを用い精製して、これを SHPS-1 リガンドとして用いた。

Takashi Matozaki
Biosignal Research Center, Institutefor Molecular and Cellular Regulation,
Gunma University

2．2− 58 −

SHPS-1 および CD47 の発現の検討

悪性黒色腫細胞および CHO 細胞での SHPS-1、CD47 の接着分子シグナルを利用した皮膚老化防止の新戦略

発現は、Flowcytometry またはウェスタンブロッティン

2．6

グ法で検討を行った。

Rho 活性の測定

GST 融合 Rhotekin を用いて活性化 Rho を沈降させ、Rho の活性化状態の検討を行った。

2．3

細胞運動の測定

３．

細胞運動の測定には、Transwell apparatus (Corning社 ) を用い、既報４）に基づき行った。また同様に Wound

3．1

healing assay 法によっても検討を行った。

結果細胞運動に対する SHPS-1 リガンドの効果

CD47-SHPS-1 系による細胞運動の制御機構を詳細に解析するために、SHPS-1 を発現する種々の培養細胞の運動能を

2．4

SHPS-1 リガンド処理による細胞形態への影響解析できるシステムを構築した（図１）。特に、ヒト悪性黒色腫細胞に SHPS-1 を発現することを確認し、これをモデ

蛍光免疫染色法で細胞形態の観察を行った。

ル細胞として用い、この系における CD47 と SHPS-1 の相

2．5

シグナル分子のチロシンリン酸化の検討

互作用による細胞運動への影響を検討した。悪性黒色腫細各種分子のチロシンリン酸化を免疫沈降法と抗チロシン胞に SHPS-1 抗体あるいは CD47-Fc を作用させると、細胞運動の抑制が観察された（図２、３）。この効果は、２次抗

リン酸化抗体を用いて検討した。

図１

図２

Ａ細胞運動測定系の概念図
Ｂヒト悪性黒色腫細胞上での CD47，SHPS-1 の発現

細胞運動に対する SHPS-1 リガンドの効

図３− 59 −

SHPS-1 リガンドによる細胞運動抑制

体の添加によりさらに増強された。すなわち、SHPS-1 抗体あるいは CD47-Fc による細胞運動の抑制は、細胞表面

3．2 細胞内シグナル分子への SHPS-1 リガンドの効果

上の SHPS-1 の ligation によるものと考えられた。

ヒト悪性黒色腫細胞に、抗 SHPS-1 抗体をリガンドとし

SHPS-1 抗体あるいは CD47-Fc による細胞運動の抑制て用い、処理したところ、SHPS-1 が脱リン酸化され、同は、SHPS-1 を外来性に発現させた CHO 細胞においても時に SHP-2 との結合も見られなくなった（図５）。この効認められ、この効果は SHP-2 を結合しないタイプの変異

果は抗体処理後 15 分後より著明となり、60 分後も持続し型 SHPS-1 発現 CHO 細胞では観察されなかった（図４）。

た。同様の結果が、CD47-Fc 処理によっても得られた。

図４ 細胞運動抑制に対する SHPS-1 細胞内領域
チロシンリン酸化部 の役割
SHPS-1 4F（リン酸化をうけるチロシンをフェ
ニルアラニンに置換した変異体）では SHPS-1リガンドによる細胞運動抑制効 を認めない。

図５

SHPS-1 リガンド処理による SHPS-1 リン酸化への影響
Ａ：SHPS-1 抗体処理により SHPS-1 は脱チロシンリン酸化され、SHP-2 との結合も解除される。
Ｂ：この効 は 15 分後より著明となり、60 分後も持続する。
Ｃ：可溶性 CD47 処理によっても脱リン酸化が認められる。

− 60 −

接着分子シグナルを利用した皮膚老化防止の新戦略

3．3細胞形態に対する SHPS-1 リガンドの効果

3．4

SHPS-1 リガンド処理による Rho 活性への影響

ヒト悪性黒色腫細胞を抗 SHPS-1 抗体処理することにアクチンストレスファイバーの増強を認めたため、細胞より、紡錘形を示す悪性黒色腫細胞が多角化し、アクチ骨格系の制御に関与する Rho 活性への影響を検討したとンストレスファイバーの増強を認めた（図６）。Vinculin、ころ、抗 SHPS-1 抗体処理により Rho 活性の上昇を認め

Paxillin といった接着斑関連蛋白質には著明な変化を認めた。また Rho のエフェクターである p160ROCK の阻害剤なかった。

Y-27632 処理により、SHPS-1 リガンドによる細胞運動抑制の部分的な解除を認めた（図７）。

図６

SHPS-1 リガンドによるアクチン及び細胞形態の変化
SHPS-1 抗体処理により悪性黒色腫細胞は、多角化し、アクチンストレスファイバーの増強を認める。

図７

SHPS-1 リガンドによる Rho 活性への影響
Ａ：SHPS-1 抗体処理５分後より、Rho の活性化を認めた。
Ｂ：ROCK 阻害剤（Y-27632）処理により、SHPS-1 リガンドによる細胞運動抑制が部分的に解除された。

− 61 −

４．考

察

本研究では CD47-SHPS-1 系が、普遍的な細胞運動の負の制御に関与していることを明らかにした５）。
CD47-SHPS-1 系はこれらの分子を各々発現する細胞同士の接触により双方向性に細胞運動を抑制すると想定され、
CD47-SHPS-1 系が接触阻害の分子機構に関わっている可能性が高い（図８）。この結果から、例えば CD47-SHPS-1系のがんにおける異常が、浸潤・転移の分子機構に関与する可能性が考えられる。皮膚においては、メラノサイ
ト以外にケラチノサイトにも SHPS-1 の発現が観察される。
CD47 は、かなり普遍的に発現しており、CD47-SHPS-1 系
が皮膚を構成する細胞群の増殖、接着、運動の制御に重要

図８

な役割を果たしていることが想定される。最近、T 細胞上CD47-SHPS-1 系による細胞運動抑制機構のモデルの CD47 が、樹状細胞上の SHPS-1 と相互作用することにより互いの細胞機能を負に調節することも報告されている

regulation of platelet clearance and of the macrophage

６）。皮膚のランゲルハンス細胞には SHPS-1 の高い発現がphagocytic response by the transmembrane

あることから、CD47-SHPS-1 系が皮膚の免疫系において

glycoprotein SHPS-1. J Biol Chem 277: 39833-39839,

も重要である可能性が高い。今後、これらの点につき詳細

2002.

な検討を行う予定である。

４） Longo N, Yanez-Mo M, Mittelbrunn M, et al.:R e g u l a t o r y r o l e o f t e t r a s p a n i n C D9 i n t u m o r -（参考文献）

endothelial cell interaction during transendothelial

１） Noguchi T, Matozaki T, Horita K, et al.: Roleinvasion of melanoma cells. Blood. 98: 3717-3726, 2001.

of SH-PTP2, a protein-tyrosine phospha-tase with

５） Motegi S, Okazawa H, Ohnishi H, et al.: Role of the

Src homology 2 domains, in insulin-stimulated Ras

CD47-SHPS -1 System in Regulation of Cell Migration.

activation. Mol Cell Biol. 14: 6674-6682, 1994.

EMBO J. 22: 2634-2644, 2003

２） Fujioka Y, Matozaki T, Noguchi T, et al.: A novel６） Latour S, Tanaka H, Demeure C, et al.: Bidirectional

membrane glycoprotein, SHPS-1, that binds the SH2

negative regulation of human T and dendritic cells bydomain-containing protein tyrosine phosphatase SHP-

CD47 and its cognate receptor signal-regulator protein-

2 in response to mitogens and cell adhesion. Mol Cellalpha: down-regulation of IL-12 responsiveness andBiol. 16: 6887-6899, 1996.

inhibition of dendritic cell activation. J Immunol. 167:

３） Yamao T, Noguchi T, Takeuchi O, et al.: Negative− 62 −

2547-2554, 2001.

皮膚の老化によるⅦ型コラーゲンの代謝及び遺伝子発現調節機構について
弘前大学

医学部生化学第１講座

今淳Type Ⅶ collagen is the major component of anchoring fibrils, attachment structures stabilizing the association of
cutaneous basement membrane to the underlying dermis. Previous studies have shown that the reduction of type Ⅶ
collagen expression and anchoring fibril formation may involve intrinsic-/photo-aging of the skin, including wrinkle
formation, laxity, and roughness. In order to understand the molecular mechanisms underlie these clinical features, I
investigated 1)the transcriptional mechanisms of type Ⅶ collagen gene (COL7A1) and 2)the effects of ultraviolet (UV)radiation-induced cytokines (TNF-α, IL-1β) on COL7A1 expression. 1)Transient cell transfection assays with COL7A1
promoter/luciferase reporter gene construct into epidermal keratinocytes and dermal fibroblasts revealed that a GC
box (-155/-150) as well as a GT box (-512/-505) previously published are crucial for the high basal activity of COL7A1
promoter. Electrophoresis mobility shift assays revealed that transcription factors Sp1 and Sp3 bind to this region. Cotransfection experiments of COL7A1 promoter constract with Sp1 and Sp3 expression vectors demonstrated that Sp1
is essential for high COL7A1 expression, whereas Sp3 represses Sp1-mediated transcriptional activation. However,point mutation into -155/-150 site markedly reduced the activity of the promoter, suggesting -155/-150 is an Sp1-familymediated cis-acting element involved in transcription of COL7A1. 2)Northern blot analyses   demonstrated that both
TNF-α and IL-1β reduced COL7A1 mRNA levels in epidermal keratinocytes in a dose- and time-dependent manner,
whereas they enhanced the expression of COL7A1 in dermal fibroblasts. The inhibitory effects were also observedat the protein level as well as at the mRNA level. In addition, nuclear run-on assays revealed that TNF-α and IL-1β
reduced the COL7A1 transcripts, suggesting that the inhibitory effects of TNF-α and IL-1β on COL7A1 expression was
occurred, at least in part, at the transcriptional level. Thus, COL7A1 regulation by these inflammatory cytokines is cell
type-specific. Down-regulation of COL7A1 expression in epidermal keratinocytes may contribute to the reduction ofanchoring fibrils formation, resulting in intrinsic- /photo-aging of the skin, characterized by wrinkle formation.

１．緒

言
表皮

皮膚のⅦ型コラーゲンは，表皮角化細胞及び真皮線維芽細胞により生合成され，細胞外に移動した後，基底膜（BM）

表皮角化細胞に結合してアンカーリングフィブリル（AF）を形成する（図1）。そして，このⅦ型コラーゲン /AF は，基底膜と真皮LL 基底膜LD

基底膜との結合を強固にし，皮膚の構築を維持する重要な役割をアンカーリングフィブリル

担っていると考えられている１）。
皮膚の老化には，加齢に伴い全身の皮膚に生じる自然老真皮化と，紫外線暴露により生じる露光部の光老化が存在する
が，何れの老化した皮膚においても AF の減少が認めら，しかも光老化皮膚ではその程度が更に増強していることから２），所謂 “皺” など皮膚の老徴出現にはⅦ型コラーゲンが何らかの関与をしていると考えられる。

真皮線維芽細胞図 1. 皮膚基底膜領域へのアンカーリングフィブリルの結合
表皮角化細胞と真皮線維芽細胞で生合成されたⅦ型コラーゲン
は，lamina lucida（LL）及び lamina densa（LD）からなる基底膜領域に移動・結合し，アンカーリングフィブリルを形成する。

本研究完了報告では，最終的に，いつまでも “皺” を生じない若々しい皮膚を保つ方法の確立を目的とし，その一COL7A1 の発現と老化との関係について報告する。特に，端としてⅦ型コラーゲンタンパク質及びコードする遺伝子

1）皮膚の COL7A1 基本転写調節機構，2）光老化に関与

Metabolism and gene regulation of type
VII collagen in skin aging.

膚の COL7A1 発現調節機構の解析結果を報告し，老化にKon  Atsushi

する各種炎症性サイトカイン（TNF—α, IL—1β）による皮よる皮膚の老徴との関連についても考察する。

Department of Biochemistry, Hirosaki
University School of Medicine

２．実
２．１

験

ルシフェラーゼアッセイ法

培養ヒト表皮角化細胞及び真皮線維芽細胞における− 63 −

胞に導入して co—t ra nsfect ion 実験を行った結果，Sp1 は

COL7A1 の転写制御領域の解析・同定は，ルシフェラーゼア
３）ッセイ法を用いて行った 。尚，
ルシフェラーゼコンストラクト（—

ルシフェラーゼ活性を促進し，Sp3 は Sp1 の作用を抑制し

1804COL7A1—Luc）は，PCR 法により増幅した COL7A1 プ

た。そこで，上記 GT box 及びこの GC box に変異を入れた

ロモーター領域（− 1804/ ＋ 108）をインサートとし，これを− 524COL7A1/ Luc を各細胞に導入して，同様にルシフェ

ルシフェラーゼ発現ベクターに組み込み調整した。また，イラーゼアッセイ法を行った結果，活性は著しく低下するもの

ンサートの 5' 末端からプロモーター領域を順次欠失させた各の完全には消失しなかった。即ち，これら GT/G C box は種欠失変異体も同様にして調製した。

COL7A1 転写の initiation を制御する領域ではなく，エンハ
ンサーとして互いに協同しながら COL7A1 の転写を制御して

２．
２

ゲルシフトアッセイ法

いた（図 3）。

COL7A1 の転写制御領域に結合する転写因子の解析・同３．２ 各種サイトカインによる皮膚の COL7A1 発現
調節機構

定は，ゲルシフトアッセイ法を用いて行った３）。

２．
３

ノーザンブロット法

皮膚が紫外線に暴露されると，“皺” などの老徴に代表

炎症性サイトカイン（TNF—α, IL—1β）による，培養ヒト表される光老化が生じる。この光老化の生じた皮膚では，

皮角化細胞及び真皮線維芽細胞の COL7A1 mRNA の発現

AF の形成が低下しており，この機構にⅦ型コラーゲンが４）

変化は，ノーザンブロット法で解析した 。
Antibodies

－

Sp1

Sp3

Ap-2

JunB

1

2

3

4

5

２．
４ ウエスタンブロット法
炎症性サイトカイン（TNF—α, IL—1β）による，培養ヒト表Supershifted

皮角化細胞及び真皮線維芽細胞のⅦ型コラーゲンタンパク質の発現変化は，ウエスタンブロット法で解析した５）。

Shifts２．
５

核 run-on アッセイ法

2

1
3
4

炎症性サイトカイン（TNF—α, IL—1β）による COL7A1 の転写産物量の変化を，核 run—on アッセイ法によって解析した６）。

３．結果及び考察
３．
１

COL7A1 の基本転写調節機構

既に約 3.8kb のヒト COL7A1 プロモーター領域がクローニングされ，解析された。しかし，（1）COL7A1 が TATA—less
遺伝子であること，（2）プロモーター領域− 512/− 505（転写
開始点を＋1 とする）の GT box が基本転写の cis—element であり，Sp1 の結合する，こと以外明らかにされておらず３），皮膚の COL7A1 基本転写調節機構の詳細を更に解析した。
− 1804COL7A1/ Luc 及びその欠失変異体を培養ヒト表Free Probe

皮角化細胞及び真皮線維芽細胞にそれぞれ導入して，ルシ
フェラ−ゼアッセイ法を行った結果，両細胞とも，− 458 まLane

で欠失させると活性が 40％にまで低下した。これは，上記

図 2. -155/-150 の領域への Sp1 及び Sp3 の結合
GC box である -155/-150 領域をプローブとしてスーパーシ
フトアッセイ法を行った結 ，Sp-family の Sp1 及び Sp3 のスー
パーシフトのバンド（Supershifted bands, ★印）を認めた。

− 512/ − 505 の GT box が欠失したためであった。更に−
230 までは変化しなかったが，− 144 まで欠失させると活性が消失した。以上から，− 230/ − 140 にも cis—element が存在すると考えられた。コンピューターによるモ

COL7A1 promotor

チーフ解析を行った結果，− 155/ − 150 に Sp1の結合し得る G C box が存在していた。ゲルシ
フトアッセイ法で確認したところ，この領域には

-512

-505
Sp1/Sp3-155

150
Sp3/Sp1

Sp1—family の Sp1 及び Sp3 が結合していた（図+12）。次に，Sp1 及び Sp3 の発現ベクターを各細図 3. Ⅶ型コラーゲン遺伝子 COL7A1 の基本転 調節機構

− 64 −

皮膚の老化によるⅦ型コラーゲンの代謝及び遺伝子発現調節機構について関与するのではないかと考えられている

表皮角化細胞２）。 最 近， 紫 外 線 UVA に よ る COL7A1

control

TNF-α

真皮線維芽細胞IL-1βcontrol

TNF-α

TNF-1βの発現調節に関する報告がなされ，表皮角化細胞における COL7A1 の発現を抑制し， COL7A1
逆に真皮線維芽細胞は促進することが明らかになった５）。更に，紫外線により誘導される炎症性サイトカイン TNF—α, 及び IL— GAPHDH
1β も，COL7A1 の発現を制御していることが報告され４），真皮線維芽細胞におけるCOL7A1 の発現を促進し，特に TNF—α は
NF—κB を誘導して，これが COL7A1 プロモ

図 4. 表皮角化細胞及び真皮線維芽細胞の COL7A1 の発現に対する，炎症性サイト
カイン TNF—α 及び IL—1β の影響
TNF—α（10 ng/mL）及び IL—1β（100 U/mL）で培養ヒト表皮角化細胞を刺激すーター領域の応答配列に結合，転写レベル ると，COL7A1 の発現は抑制された。一方，真皮線維芽細胞では促進され，組織特で発現を促進することが明らかになった７）。 異的発現調節機構が認められた。
しかし，表皮角化細胞に対する機構は全く不明であり，その詳細を解析した。

解・低形成を引き起こしている可能性が否定できない。従っ培養ヒト表皮角化細胞に TNF—α（10 ng/mL）,IL—1βて，皮膚の老徴出現の解析には，Ⅶ型コラーゲンの生合成，（100 U/mL）を添加して 24 時間培養し，次いで細胞を回収，

COL7A1 の発現調節機構のみならず，異化分解系の関与も

COL7A1 の発現をノーザンブロット法で解析した。その結検討する必要があると考えられた。

果，両炎症性サイトカインとも COL7A1 の発現を抑制した（図 4）。しかも，この抑制効果は濃度及び時間依存的（参考文献）であった。培地中にタンパク質合成阻害剤 cycloheximide

１） 今 淳： 表皮角化細胞及び真皮線維芽細胞におけⅦ型コを添加すると，この抑制効果が消失したことから，この反ラーゲン遺伝子の発現調節機構について. Connec Tissue 34:

応には de novo のタンパク質新生を必要とした。次に，核127- 135, 2002.

run-on アッセイでにより，各炎症性サイトカインの作用

２） Craven NM, Watson RE, Jones CJ et al.: Clinical featuresが転写レベルで行われているかを解析した。その結果，各of photodamaged human skin are associated with a

炎症性サイトカインの刺激により転写産物量が減少し，抑reduction in collagen Ⅶ . Br J Dermatol 137: 344-350, 1997.

制効果は転写レベルでの調節を受けていた。ウエスタンブ

３） Vindevoghel L, Kon A, Lechlerider RJ et al.: Smad-

ロット法で，培地中に分泌されるⅦ型コラーゲンタンパク

dependent transcriptional activation of human type Ⅶ

量を解析したところ，発現が抑制されており，遺伝子レベ

collagen gene（COL7A1）promoter by transforming growth

ルのみならずタンパクレベルでも抑制効果を認めた。この

factor-beta. J Biol Chem 273: 13053-13057, 1998.

様に，炎症性サイトカインの表皮角化細胞及び真皮線維芽

４） Chen YQ, Mauviel A, Ryynanen J et al.: Type Ⅶ細胞における COL7A1 発現調節機構は全く異なっており，

collagen gene expression by human skin fibroblasts and

組織特異的発現調節機構の存在が示された。

keratinocytes in culture: influence of donor age and cytokine

以上から，光老化の原因となり紫外線で誘導される炎症性responses. J Invest Dermatol 102: 205-209, 1994.

サイトカイン TN F—α 及び I L—1β も，紫外線 U VA の場合と５） Chen M, Petersen MJ, Li HL et al.: Ultraviolet A

同様に表皮角化細胞の COL7A1 の発現を抑制しており，AF

irradiation upregulates type Ⅶ collagen expression inの低形成への関与が考えられた。A F の低形成は基底膜領

human dermal fibroblasts. J Invest Dermatol 108: 125-128, 1997.

域を脆弱にし，そこに外力が掛かることで深い溝ができ，皺

６） Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T: Molecular Cloning.

形成に繋がる可能性が考えられた。しかしながら，真皮線維A laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory

芽細胞における効果も U VA と同様促進的であり，発現したPress, Cold Spring Harbor, NY, 1989.

Ⅶ型コラーゲンがどの様な機構で A F を形成するのか，今後

７） Kon A, Vindevoghel L, Kouba DJ et al.: Cooperation

更なる解析が必要である。事実，表皮角化細胞と真皮線維

between SMAD and NF-kappaB in growth factor regulated

芽細胞の何れが A F を形成するのか，例えば表皮角化細胞

type Ⅶ collagen gene expression. Oncogene 18: 1837-1844,
1999.

由来のⅦ型コラーゲンが優位に形成するのかなど不明な部分が多い。更に，各炎症性サイトカインはⅦ型コラーゲンの異

８） Salo T, Makela M, Kylmaniemi M et al.: Expression of

化分解酵素の一つである matrix metalloproteinase-9（MMP

matrix metalloproteinase-2 and -9 during early human

８）—9）の発現も促進することが知られ ，このことも A F の分

− 65 −

wound healing. Lab Invest 70: 176-182, 1994.

皮膚表皮細胞への生理活性タンパク遺伝子のデリバリーと分泌方向性の制御
京都大学大学院

薬学研究科

高

喜

倉

信

Epithelial cells, generally displaying cell polarity, are considered to be good targets for gene therapy because of theirdistribution of enormous surface area of various tissues and organs in animal bodies. Polarized epithelial cells possess
two functionally and compositionally distinct cell surface domains that are separated from each other by tight junctions.
They play fundamental roles in the specialized vectorial transport and secretion of proteins in tissue and organs.
Newly synthesized domain-specific membrane proteins are conveyed through the endoplasmic reticulum (ER)-Golgi
apparatus to the trans-Golgi network (TGN), and packaged into transport carriers for membrane integration. The
destination of the membrane proteins seems to be determined by interrelation between some signal sequences on theprotein and various cellular components playing roles in sorting and trafficking. Secretory proteins are also considered
to be transported in the same manner as the membrane proteins. In spite of many investigations of the issue, themechanisms regulating apical or basolateral sorting of secretory proteins remain elusive.
The green fluorescent protein (GFP) of the jellyfish Aequorea victoria and its variants are widely used in cell imaging
applications to reveal the location of proteins. Results from those applications are providing new insights into proteinfunction and cellular processes in the complex environment of the cell. The GFP-tagging technology is useful for directly
investigating the intracellular localization, movement and fate of secretory proteins of interest in living cells.
We have recently examined the mode of secretion polarity of interferon (IFN)-β expressed exogenously in several
epithelial cell lines. The secretion of constitutive IFN-β from the stable transformants was apparently unpolarized.
Meanwhile, intriguingly, IFN-β transiently expressed by gene transfection was predominantly secreted from the cell
membrane side to which the transfection or the induction was carried out.   In this study, we have investigated thesubcellular localization of the cytokine using GFP-tagged IFN-β under confocal laser scanning microscopy (CLSM). Our
results suggested that IFNs expressed stably and transiently are transported via different post-TGN vesicles. The
same secretory protein, at least as far as IFN is concerned, can be sorted to the apical or basolateral membrane side
depending on the gene expression strategy, which deems to be regulated at the post-TGN stages.

１．緒

リーが可能になると考えられる。この際 ､ 遺伝子産物の言

分泌方向性 ､ すなわち apical, basal どちら側に分泌され上皮細胞は体表面や体腔の表面を覆う極性を有する細胞てくるかは、効果を左右する重要な因子となる。細胞生１、２）、広大な表面積を有しており遺伝子治療の重要なタ

物学の分野では、発現したタンパク質は、それ自身のシーゲットと考えられる。その形質膜はタイトジャンクシ

グナルと細胞選別機構によって、存在するべき場所へとョンにより頂側膜（apical）側と基底膜（basal）側に物輸送されることが知られている。しかしながら、我々は理的に隔てられ、膜を構成するタンパク質や、脂質の組

既に多孔性フィルター上でモノレイヤーを形成した上皮で３）成も異なっている 。このように、性質の異なる形質膜細胞において、インターフェロン - β（I F N - β）をモデル

ドメインを持つことで、上皮細胞は外から内、または内とした遺伝子導入実験を行った結果、I F N β を構成的にから外へと一方向性の物質の流れを生み出し ４−６）、生体発現させた場合には、極性を示すことなく apical 側及び内の恒常性を保つ重要な働きを担っている。このようなbasal 側にほぼ同量の IFNβ が分泌され、一過性に発現さ性質を利用して、上皮細胞にサイトカインなどの分泌性せた場合には、a p i c a l 側から遺伝子導入した場合には生理活性タンパク質をコードした治療用遺伝子を導入・

apical 側へ、basal 側から遺伝子導入した場合には basal発現させた後、方向選択的に分泌させることができれば、側への導入方向選択的な分泌が観察され、同一タンパク

タンパク質医薬品の局所あるいは、全身循環へのデリバ

質であるにも関わらず、遺伝子発現様式に依存した異なControl of secretion polarity of bioactive
protein after gene delivery to the skin

る分泌方向性を示すことを見出している７）（F i g . １）。そこで、Green fluorescent protein（GFP）とヒト IFN-β

Yoshinobu Takakuraとの融合タンパク質発現ベクターを作製し、発現させた

Graduate School of Pharmaceutical
Sciences, Kyoto University

輸送過程について、イヌ腎上皮細胞株 M D C K 細胞を中IFN のトランスゴルジネットワーク（TGN）以降の小胞心に用いて詳細な検討を行った。

− 66 −

皮膚表皮細胞への生理活性タンパク遺伝子のデリバリーと分泌方向性の制御測定し、安定発現における分泌方向性を評価した。一方、一過性の遺伝子発現実験においては、プラスミド DNA（３µg/mL）と LipofectAMINE2000TM（10µg/mL）の複合体
を、多孔性フィルター上で 5 日間培養した細胞の apical側及び basal 側から導入した。複合体を含む Opti-MEM
培地で 4 時間培養後、通常の培地と交換し、導入後 24 時間までに各コンパートメント中へ分泌した IFN 量を測定した。いずれの実験においても、IFN の細胞層を介した漏出の有無を調べるために、遺伝子導入したものとは異種の IFN をマーカーとして添加し、透過の有無を確認した。

2．4 遺伝子導入により発現した融合タンパク質の局
在の観察
HuIFNβ-GFP 及び GFP 安定発現株は、フィルター上で5 日間培養後固定した。固定前に５µg/mL の brefeldin A（BFA）で 30 分間処理 ､ もしくは 20℃の 10mM HEPES
Fig. 1 Secretion polarity of stably or transiently expressed human IFN-β in Pam-T and MDCK cells. Cells were culture
on Transwell for 5 days. In transient expression experiments, human IFN-β gene was transfected onto apical orbasal side. Open bars and gray bars showed human IFN
activities in Pam-T and MDCK cells, respectively. The values represent the mean of three determinations with S.D.

２．実

入り DMEM に培地を交換後 20℃で２時間処理し、固定した。また、一過性の遺伝子発現実験においては ､ 融合タ
ンパク質発現ベクターを導入して ､10 時間後に固定した。
固定前に、BFA 処理 ､ 及び 20℃低温度処理を行った。固定、透過後、免疫染色により各オルガネラを染色あるいは
propidium iodide（PI）で核を染色し、共焦点レーザー顕微鏡で観察した ｡ 一次抗体に小胞体、ゴルジ体、トランスゴ
ルジネットワーク（TGN）のマーカータンパクである験

protein disulfide isomerase（PDI）（1D3）
、
Golgi-58K（58K-9）、

2．1 ヒトIFN-βと GFP との融合タンパク質（HuIFN
β-GFP）発現ベクターの作製
ヒト IFN-β 遺伝子をコードした pCMV-HuIFNβ のヒト

furin convertase に対する抗体を用いた。いずれの場合も二次抗体に、Alexa Fluor 594 標識 2 次抗体を用いた。免疫染
色後共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察を行った。

IFN-β cDNA 部位を PCR で増幅し、GFP 発現ベクターのレポーター遺伝子の N 末に組み込み、
ヒト IFN-β（HuIFNβ）と GFP との融合タンパク質（HuIFNβ-GFP）を発現する

2．5 シクロヘキシミド（CHX）及び 20℃低温度処
理の IFN-β 分泌過程に与える影響
CHX 及び 20℃低温度処理の融合タンパク質細胞内輸送

ベクター（pCMV-HuIFNβ-GFP）を作製した。

に与える影響を観察するため、1×105 個の融合タンパク質2．2

安定発現細胞をカバーグラス上に播種し、１日間培養した。

安定発現株の作製

播種後 24 時間培養した細胞に対し、ベクターとカチオ

その後、0、10、20µg/mL の CHX を含んだ 20℃または 37との複合体℃の DMEM に培地を交換して２、４時間培養し、固定後を用いてトランスフェクションを行った。細胞を 100 mm

共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察を行った。また、分泌培養皿に移し、抗生物質 G418 で培養した。G418 耐性コに与える影響を調べるため 1×105 個の融合タンパク質安定

ロニーを回収して、さらに培養後、上清中の IFN 量をバ

発現 MDCK 細胞を 24 穴プレートに播種し、0, 10, 20 µg/

８）

イオアッセイにより定量し 、最も活性が高かったものを

mL の CHX を含んだ 37℃の DMEM に培地を交換して 2 時

安定発現株として確立した。同様の方法を用いて蛍光の有間培養後、CHX を含有しない DMEM に交換してさらに 10、無を指標に GFP 安定発現株を樹立した。

30、60、120 分間培養した上清を回収し、IFN 量を測定した。

TM

ン性リポソームである LipofectAMINE2000

2．3

2．6

分泌方向性の検討

TGN 以降の小胞輸送過程の解析）上でカバーグラス上で MDCK 細胞及び融合タンパク質安定

５日間培養後、培地を交換し、24 時間までに細胞層の発現細胞を 1 日間培養した。MDCK 細胞に対しては、マapical 側及び basal 側に分泌された細胞上清中の IFN 量を

ウス IFN-β 発現プラスミド（pCMV-MuIFNβ）及び pCMV-

安定発現株を、多孔性フィルター（TranswellTM− 67 −

HuIFNβ を同時に導入し、融合タンパク質安定発現細胞に対しては pCMV-MuIFNβ を導入した。導入後 8 時間から、10µg/mL の cycloheximide（CHX）、10mM HEPES を含んだ DMEM で、20 ℃ ２ 時 間 培 養 し た。 そ の 後、37 ℃ の10µg/mL の CHX を含んだ培地に交換し、0、5、10、15、
30 分間培養後、固定した。固定後、一次抗体にマウス
IFN-β 抗体９）
（6D-G8）、２次抗体に Alexa Fluor 546 標識二次抗体を用いて、免疫染色を行い、共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察を行った。画像解析は Image-Pro Plus ver. 4.5を用いて作製した Fluorogram の対角線上の任意の場所を選び、コロカライゼーション係数 M1、M2 を算出した 10）。

３．結
3．1

果

融合タンパク質の分泌方向性の検討

まず、Pam-T 細胞及び MDCK 細胞において、融合タン
パク質を安定に発現させた場合と一過性に発現させた場合の分泌方向性について検討した（Fig. ２）｡ その結果、安定発現株からは両方向にほぼ均等な分泌が見られたのに対し ､ 一過性に発現させた場合には ､ 遺伝子導入方向選択的な分泌を示した ｡ これより ､GFP と融合させた場合でもFig. 2 Secretion polarity of stably or transiently expressed
HuIFNβ-GFP in Pam-T and MDCK cells. Cells were culture
on Transwell for 5 days. In transient expression experiments, HuIFNβ-GFP gene was transfected onto apical orbasal side. Open bars and gray bars showed human IFN
activities in Pam-T and MDCK cells, respectively. The values represent the mean of three determinations with S.D.

IFN-β の活性は失われず、IFN-β 単独の場合の一過性及び構成的な発現パターン（Fig. １）と同様の細胞外への分泌方向性を示すことが明らかとなった。

3．2

融合タンパク質の細胞内オルガネラへの局在解析

遺伝子発現様式に依存した IFN-β の分泌方向性の違い
が細胞内のいずれの部位において生じるかを解明するため､ 共焦点レーザー顕微鏡を用いて Pam-T 及び MDCK 細胞に発現させた融合タンパク質の細胞内における局在を X-Z
軸方向のスキャンにより観察した（Fig. ３）。その際 ､ 融合タンパク質を細胞内に蓄積させて観察を容易にするため
BFA 及び 20℃低温度処理を行った。BFA は、ゴルジ体を分解させる化合物としてよく知られており、タンパク質の分泌を阻害することが報告されている 11、12）。20℃低温
度処理は新たに生合成されたタンパク質を TGN に蓄積させる方法として知られている 13）。
ま ず、BFA を 用 い て 観 察 を 行 っ た 場 合（Fig. 3A）、
GFP 安定発現株では両細胞において細胞内全体に強い
GFP 由来のシグナルが局在していた ｡ これに対し、融合
タンパク質安定発現細胞では、融合タンパク質は Pam-T
細胞では核周辺に局在が認められ、その分布は核をはさんで apical 側及び basal 側にほぼ均等に観察された。また
MDCK 細胞では、主として核に対して apical 側にその局在が偏っている様子が観察された。一方 apical 及び basal側から遺伝子導入後、一過性に発現させた融合タンパク質の細胞内局在は、各々の細胞の融合タンパク質安定発現株
における局在パターンと同様であることが示された ｡ 以上

Fig. 3 Confocal microscopic observation of stably or transiently
expressed HuIFNβ-GFP in Pam-T and MDCK cells (X-Z section). A shows the intracellular localization of stably or transiently expressed HuIFNβ-GFP in Pam-T and MDCK cells
under BFA treatment. B shows that in MDCK cells under
20℃ temperature treatment. N.D. indicates not detection.

− 68 −

皮膚表皮細胞への生理活性タンパク遺伝子のデリバリーと分泌方向性の制御

より、安定及び一過性に発現させた融合タンパク質の細胞定発現株の場合と同様、主に TGN/Golgi 体への分布が観外への分泌方向性は異なるにも関わらず、BFA 処理下の察された（Fig. 4B, control）。また、BFA 及び 20℃低温

細胞内局在パターンは同様であることが示された ｡

度処理を行った場合にも同様の結果が得られた（Fig. 4,

BFA は MDCK 細胞における選別輸送を消失させるこ

BFA, 20℃）。これより、HuIFNβ-GFP を安定に発現させとや、オルガネラに対し様々な形態変化を起すことが知らた場合及び一過性に発現させた場合の細胞内局在は BFA、れている。そこで MDCK 細胞については、20℃低温度処

20℃低温度処理の有無によらず同様であり、主として理により融合タンパク質を TGN に蓄積させた場合につい

TGN/Golgi 体に局在していることが示された。

ても検討した。しかしながら、この場合にも BFA 処理の次に、MDCK 細胞において発現させた融合タンパク質

3．3 異なる様式により発現させた IFN-β の TGN 以降における小胞輸送過程の解析の細胞内オルガネラへの局在について解析した。その際、次に、同一細胞において異なる様式により発現させた融BFA 及び 20℃低温度処理を行った場合についても検討し合タンパク質とマウス IFN-β の TGN 以降の小胞輸送課程た。まず、いずれの処理も行わずに検討した結果、融合タ

について検討した。実験方法は、カバーグラス上で培養しン パ ク 質 を 安 定 に 発 現 す る MDCK 細 胞（MDCKた MDCK（HuIFNβ-GFP）に対してマウス IFN-β を一過（HuIFNβ-GFP））では ､ 融合タンパク質は主として核に対性に発現、あるいは MDCK 細胞に対して融合タンパク質

して apical 側にその局在が偏っており、オルガネラ染色と、マウス IFN-β を同時に一過性に発現させた。発現さとの比較により、主に TGN/Golgi 体に局在していること

せた 2 種類の IFN-β を CHX 含有培地で、20℃低温度処理が示された（Fig. 4A, control）。一方 ､apical 側からの遺により TGN へ蓄積させ、その後 37℃で培養することによ

伝子導入により、一過性に発現させた HuIFNβ-GFP も安り TGN 以降の輸送を再開させ、経時的に細胞を固定し、時とほぼ同様の細胞内局在パターンを示した（Fig. 3B）。

Fig. 4 Relative localization of HuIFNβ-GFP expressed in MDCK monolayers to various organelles.
MDCK(HuIFNβ-GFP) (A) and parental MDCK (B) monolayers were grown on Transwell for 5 days. The
latter monolayers were apically transfected with HuIFNβ-GFP gene and incubated for 10 h. Either monolayer was treated with 20℃ for 2 h or with BFA (5μg/mL) for 30 min just prior fixation, followed by staining with the ER- (a-c, m-o), Golgi- (d-f, p-r), or TGN-specific antibodies (g-i, s-u) and appropriate secondary
antibodies, or alternatively with PI for nuclei (j-l, v-x). In control experiments, no 20℃ treatment or BFA
treatment was carried out. Typical x-z sections of the confocal images are shown.

− 69 −

CHX 除去後の融合タンパク質の分泌について検討した結果、観察した。
まず、実験に先立ち、タンパク質合成阻害剤である CHX
及 び 20 ℃ 低 温 度 処 理 の 最 適 条 件 を 検 討 し た。MDCKIFN-β は新たに細胞内で合成されてから分泌されるまでに少なくとも 30 分を要することが示された（Fig. 5C）。

（HuIFNβ-GFP）をカバーグラス上で培養し、0、10、20µg/

また、HuIFNβ-GFP とマウス IFN-_ を異なる様式から発mL の各濃度の CHX 存在下、20℃（Fig. 5A）及び 37℃（Fig.

現させた場合、それぞれ異なる分泌方向性が維持されるか5B）で２、４時間培養し観察した。その結果、37℃においどうかを検討するため、フィルター上で培養した MDCKて 10µg/mL 以上の CHX では２時間以上処理を行った場合、 （HuIFNβ-GFP）に対し、マウス IFN-β を一過性に発現させ発現させた融合タンパク質が細胞内において観察されなかた。その結果、両方向へほぼ均等に分泌する融合タンパクったのに対し（Fig. 5B, h, i, k, l）、20℃で培養した場合には、質の分泌方向性に影響を与えることなく、マウス IFN-β は細胞内に蓄積した融合タンパク質が確認された（Fig. 5A, b,

導入方向選択的な分泌を示すことが確認された（Fig. ６）。

c, e, f）
。以上より、発現させた融合タンパク質を TGN に蓄

Fig. ７ は、 カ バ ー グ ラ ス 上 で 培 養 し た MDCK積させるための最適条件として、10µg/mL CHX 処理下、

（HuIFNβ-GFP）に対してマウス IFN-β を一過性に発現、20℃、２時間培養を選択し、以下の実験条件とした。また、あるいは MDCK 細胞に対して GFP 融合タンパク質とマ

Fig. 5 Effects of CHX and temperature on cellular processing and secretion of HuIFNβ-GFP.
Stable MDCK(HuIFNβ-GFP) cells cultured on coverslips were treated for 2 or 4 h with
0, 10 or 20μg/mL CHX at 20℃ (A) or 37℃ (B), followed by fixation and confocal microscopy. In parallel, secretion of the IFN activity from MDCK(HuIFNβ-GFP) (C) was
examined; After treatment with 0, 10 or 20μg/mL CHX for 2 h, cells were incubatedin regular medium without CHX at 37℃ . During the incubation, aliquots of culture fluids
were picked up at indicated time points and assayed for antiviral activity. Each value represents the mean ± SD of three separated experiments.

− 70 −

皮膚表皮細胞への生理活性タンパク遺伝子のデリバリーと分泌方向性の制御

Fig. 6 Secretion of IFN-β from MDCK(HuIFNβ-GFP) cells following transfection of the mouse
IFN-β gene. pCMV-MuIFNβ was applied to the apical side (A) or to the basal side (B). Shaded
and open bars indicate mouse and human IFN activities, respectively. The values represent
the means of three determinations with S.D.

Fig. 7 Post-TGN localization of mouse IFN-β and HuIFNβ-GFP expressed in MDCK cells. In A,
stable MDCK(HuIFNβ-GFP) cells were transfected with MuIFNβ gene. In B, parental MDCK
cells were co-transfected with pCMV-HuIFNβ-GFP and pCMV-MuIFNβ. After transfection,
cells were incubated for 8 h and then subjected to 20℃ -treatment for 2 h. Thereafter, cells
were warmed to 37℃ (time 0) (a, k) and incubated for 5 min (b, l), 10 min (c, m), 15 min (d,n) and 30 min (e, o), followed by fixation and immunostaining of mouse IFN-β (red signal). N
indicates the nucleus area. Notice that several orange-yellow spots are pointed by arrowheads
in panels m-o. Scatter-plots of the pixel fluorogram (ordinate for green; abscissa for red) of themerged images (a-e, k-o) are shown in the respective lower panels (f-j, p-t), and colocalization coefficients, M1 (contribution of green) and M2 (contribution of red), which were computedfor intensity ranges defined by arbitrary area of interest (AOI) along the diagonal line of eachpanel, are shown at the bottom of the panels. The scale bar in panel a represents 10µm.

− 71 −

ウス IFN-β を同時に一過性に発現させた場合の結果で、TGN で選別を受けた後、遺伝子発現様式に依存した異な赤いシグナルは免疫染色したマウス IFN-β を、緑色が融る経路を介して輸送されると考えられた。

合タンパク質を示している。上段は同一細胞において安定

この可能性について検討するため、同一細胞において融に発現させた融合タンパク質と一過性に発現させたマウス

合タンパク質とマウス IFN-β を異なる様式で発現させた

IFN-β の分布を（Fig. 7A）、下段はコントロールとして、場合の TGN 以降における小胞輸送過程を解析した。トラ

同一細胞において一過性に発現させた両タンパク質の分布

ンスウェル上で培養した細胞を用いた場合、遺伝子導入効を示している（Fig. 7B）。その結果、それぞれ０分におい率も低く蛍光のシグナルも弱いため、カバーグラス上で培ては両タンパク質が共に TGN に蓄積している像が観察さ養した非極性細胞を用いた。非極性状態の細胞においてれたが、時間の経過と共に、異なる様式により発現させたも、apical 側へ輸送されるタンパク質、basal 側へ輸送さIFN-β のそれぞれのシグナルは別々に分布した。一方、両れるタンパク質はそれぞれ TGN 以降、異なる小胞によっタンパク質とも一過性に発現させた場合には、時間が経過て輸送されることが報告されている 14）。また、この実験

しても、矢印で示すように、それぞれのシグナルが一部共にはマウス IFN-β を用いたが、MDCK 細胞において一過存 し て い る 様 子 が 観 察 さ れ た。 画 像 解 析 か ら 求 め た性に発現させた場合には導入方向選択的に分泌されるこ

colocalization coefficients（M1, M2）も 10）、これらの結論と、ヒト IFN-β との間にはアミノ酸配列の相同性（約を支持していると考えられる。以上より、MDCK 細胞に50%）があることから、ヒト IFN-β と同様の分泌経路によおいて異なる様式により発現させた IFN-β は、TGN 以降って輸送されると考えられる。また実験に先立ち、MDCK異なる小胞輸送系により運ばれる可能性が示された。

細胞の融合タンパク質安定発現細胞に対してマウス IFN-β

4．考を apical 側あるいは basal 側から導入した場合、両方向に

察

ほぼ均等に分泌する融合タンパク質の分泌方向性に影響を

我々は既に、外来性の IFN-β 遺伝子を特定の上皮細胞与えることなく、マウス IFN-β は導入方向選択的に分泌において発現させると、同一タンパク質であるにも関わらされることを確認しており、それぞれ異なる経路を介してず、遺伝子発現様式に依存した異なる分泌方向性を示すこ

輸送されている可能性が考えられる（Fig. ６）。検討の結果、とを明らかにしている。そこで、GFP をヒト IFN-β の C

MDCK 細胞に対して融合タンパク質とマウス IFN-β を同末端に結合させた融合タンパク質発現ベクターを作製し、時に一過性に発現させた場合、時間が経過してもそれぞれ発現させた融合タンパク質の細胞内における局在を可視化のシグナルが一部共存している様子が観察され、両タンパすることで、一過性及び構成的に発現させた IFN-β の異ク質が TGN 以降共通の経路により輸送されている可能性

なる分泌方向性が細胞内のいずれの部位において生じるかが示唆された（Fig. 7B）。これに対し、融合タンパク質安を詳細に検討した。

定発現細胞に対してマウス IFN-β を一過性に発現させた

発現させた融合タンパク質の細胞内局在について場合では、時間の経過と共に、異なる様式より発現させた

Pam-T 細胞及び MDCK 細胞を用いて検討した結果（Fig.

IFN のそれぞれのシグナルが別々に分布している様子が３）、異なる様式において発現させた IFN-β の分泌方向性観察され、両タンパク質が異なる経路を介して輸送されては異なるにも関わらず、細胞内局在パターンは同様である

いる可能性が示された（Fig. 7A）。

ことが明らかとなった。Pam-T 細胞と MDCK 細胞におい観察に使用した共焦点レーザー顕微鏡の実験条件におけるて細胞内融合タンパク質の局在パターンに違いが生じたの分解能の問題や、カバーグラスとトランスウェルでの培養

は、おそらく、これらの細胞におけるオルガネラの局在パ

条件の違い、生細胞におけるリアルタイムイメージングのターンが異なるためと考えられる。

必要性などはデータ解釈の際に留意するべき点ではある

また、分泌経路に関わるオルガネラを免疫染色し、発現が、得られた結果は MDCK 細胞において安定及び一過性させた HuIFNβ-GFP と細胞内オルガネラとの局在を比較に発現させた IFN-β は、TGN 以降それぞれ異なる経路を検討した。MDCK 細胞を用いて解析した結果、HuIFNβ-GFP

介して輸送される結果、分泌方向性が異なる可能性を示すを安定に発現させた場合及び一過性に発現させた場合のいものである。

ずれにおいても、融合タンパク質は主に TGN/Golgi 体に局在しており、BFA、20℃低温度処理の有無によらず同（引用文献）様であった。よって、MDCK 細胞において発現させた融１） Lau C, Soriano HE, Ledley FD, et al. Retroviral gene

合タンパク質は、分泌方向性が異なっても同様の細胞内局

transfer into the intestinal epithelium. Hum. Gene

在パターンを示したため、異なる様式により発現させたTher. 6, 1145-1151, 1995.

IFN-β は小胞体で生合成後、TGN/Golgi 体まで見かけ上

２） Lozier JN, Yankaskas JR, Ramsey WJ, et al. Gut

選別を受けることなく輸送され、他のタンパク質と同様に

epithelial cells as targets for gene therapy of− 72 −

皮膚表皮細胞への生理活性タンパク遺伝子のデリバリーと分泌方向性の制御

monoclonal antibodies to mouse interferon-_ and -_. In :hemophilia. Hum. Gene Ther. 8, 1481-1490, 1997.
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Brefeldin A rapidly disrupts plasma membranelines. Arch. Biochem. Biophys. 402, 201-207, 2002.

polarity by blocking polar sorting in common

８） Watanabe Y, Kawade Y. : Induction, production andpurification of natural mouse IFN-_ and -_. In : Clemens

endosomes of MDCK cells. J. Cell Sci. 114, 3309-3321,

MJ, Morris AG, Gearing AJH. (eds) : Lymphokines and2001.

Interferons: a practical approach. IRL Press, Oxford,

14） Rustom A, Bajohrs M, Kaether C, et al. Selective
delivery of secretory cargo in Golgi-derived carriers of

1987, 1-14.
９） Kawade Y, Watanabe Y. : Characterization of rat− 73 −

nonepithelial cells. Traffic 3, 279-288, 2002.

早老性疾患遺伝子による皮膚線維芽細胞の老化とテロメア制御
京都大学

小放射線生物研究センター

松

賢

志

Nijmegen Breakage Syndrome (NBS) is an autosomal recessive disorder characterized by chromosome
instability, defect in repair of double strand break and high incidence of lymphoid cancers .  Here, we showthat NBS1 is recruited to telomere ends by alternative mechanism, in which NBS1 interacts with TRF2,
possibly through telomeric DNA, and forms discrete foci in ATM-independent manner.  This is demonstrated
by the evidences that NBS1 foci are formed in ATM-defective cells, and that both NBS cells lacking FHA/
BRCT domains and S278/343A clone, mutated in ATM-phosphorylated sites, can interact with TRF2.  
Moreover, C-terminus of NBS1, MRE11 nuclease-binding region, was essential for the interaction with TRF2.  
It is consistent that NBS1 lacking the C-terminus was failed to elongate the short telomere length in NBS
cells, although transfection both with full length of the NBS1 cDNA and of the S278/343A cDNA restored thetelomere length.  Furthermore, the short G-tail length of NBS cell line has not changed significantly following
transfection with NBS1 cDNA lacking of the C-terminus region, while the full length of cDNA complements
the G-tail length.   These findings suggest that NBS1 is recruited to telomere by MRE11/RAD50/NBS1
complex formation in ATR- and ATM-independent manner and is implicated in telomere length maintenance,
possibly through G-tail regulation.

１. 緒

言

２．実

験

老化に伴い細胞の染色体異常や突然変異の増加などゲノ

NBS1 蛋白によるテロメア延長機構：NBS 及び AT 初

ム不安定性が誘発される事は以前から知られていたが、最代培養細胞の分裂テロメア短縮を TTAGGG リピートを

近、モデル動物の線虫の研究からゲノム不安定性が逆に老プローブとしたサザン法、AE プローブによる加水分解時化を促進する事が明らかになってきた。実際ゲノム不安定の発光を比較する HPA 法、テロメア FISH のシグナル強性を呈するヒト遺伝病では、がんや免疫不全と共に早期老度の高精度計測により分裂毎のテロメア長減少を正常細化を示す。本研究ではゲノム不安定性による老化機構を明胞の 150bp/ 分裂と定量比較する。また S1 ヌクレアーゼ

らかにするために、研究材料として染色体不安定症候群のによる 5’ 一本鎖 DNA 生成能や細胞内 ECR などによりナイミーヘン症候群（NBS）及び毛細血管拡張性運動失調

テロメア異常短縮の原因を解明する。続いて、NBS 細胞症（AT）のゲノム不安定性を呈するヒト遺伝病を用いる。

が NBS1cDNA 導入後にテロメアが延長することを確認しこれらの細胞では細胞老化の原因となる染色体テロメアがた後に、その延長機構を明らかにする。すなわち、ChIP

異常に早く短縮する可能性が指摘されている。恐らくゲノ法でテロメア複製期の NBS1 と TRF2 の相互作用、NBS1

ム安定化に関わるこれら遺伝病の蛋白が直接 DNA 末端のリン酸化と hTERT など関連蛋白との相互作用、免疫染

テロメア延長制御に関わっていると思われる。このために色による共局在そして G—tail やテロメア長を指標とした染色体不安定症候群におけるテロメア長の測定を行う。さdeletion mutant 実験によりテロメア蛋白の作用機序を解らに、テロメア長の延長機構を解明するために、テロメア

析する。NBS 患者の皮膚由来の線維芽細胞を SV40 で不Ｇテールの測定やテロメア蛋白 TRF2 相互作用について死化した GM07166VA7 細胞、及び正常細胞として子宮内解析する。また、ナイミーヘン症候群（NBS）のノックア腫由来の HeLa 細胞、ヒト肺由来細胞を不死化した MRC—

ウトマウス細胞作製によるテロメア短縮機構を明らかにす

55V 細胞と GM07166VA7 に全身 NBS1 cDNA を発現ベクる事を目的とする。

ター pIRES-hyg で導入した放射線感受性が回復したクローンを用いる。

Celluar aging and abnormal regulationof telomeres in skin fibroblasts froma patient with an accelerated aging
disorder.
Kenshi Komatsu
Radiation Biology Center, Kyoto
University

細胞同調は aphidicolin 2 µg/mL で 16 〜 20 時間培養後に、通常培地に戻して行う。除去後 0 〜 3 時間が G1/S 期、
3 〜 5 時間後が S 期初期、5 〜 8 時間後が S 期後期、8 時間以降が G2/M 期に対応することをフローサイトメトリーで確認する。
NBS1 と TRF2 の 二 重 免 疫 染 色 は 細 胞 を Triton X—
100 で処理後に NBS1（rabbit）抗体と TRF2（goat）抗− 74 −

早老性疾患遺伝子による皮膚線維芽細胞の老化とテロメア制御

体でインキュベートし、それぞれ anti-goat IgG—TRITC

NBS1 蛋白のリクルート機構は DNA 修復とテロメア維持と anti-rabbit IgG—Alexa 488 で染色する。また、細胞をでは異なることが確認された。

lysisbuffer で抽出した lysate を NBS1 抗体で沈殿した免NBS1 抗体及び TRF2 抗体を用いて MRC—5SV 細胞の免疫複合体を NBS1 抗体及び TRF2 抗体を用いたウエスタ

疫染色を行った結果、NBS1 及び TRF2 ともに細胞周期依

ンブロット法で解析する。

存性にフォーカスを形成することが示された。特に NBS1

G-tail 長の測定は細胞から抽出した DNA を二本鎖のまフォーカスは S 期初期にドット状のフォーカスを形成しまゲル上でハイブリダイズする in gel hybridization を行て、NBS1 と TRF2 の二重染色は両フォーカスが一致する

う。プローブには 5'（CCCTAA）43' オリゴヌクレオチことが確認された。また、テロメア FISH 法により細胞内ドを、そして 3'—エキソヌクレアーゼとして Mung Bean

局在を検討した結果、両フォーカスはテロメア上に存在す

Nuclease（MBN）を用いる。

ることが判明した。一方、NBS1 と TRF2 の生体内での結チキンＢ細胞由来の DT40 細胞は遺伝子ノックアウト

合が免疫複合体での解析により明らかになった。つまり、の効率が通常の高等真核細胞の数百倍高頻度であるので

NBS1 抗体での複合体を TRF2 抗体を用いてウエスタンブ

ノックアウト細胞の作製に良く使用される。我々は初め

ロット解析したところ、TRF2 の存在が確認された。このに NBS1 の N 末側保存領域 FHA/BRCT ドメインに設計

両者の結合は、NBS1 と TRF2 フォーカスの共局在の結果した変成プライマーを用いて、RT—PCR によりチキン胚と一致して、S 期初期においてのみ検出された。

由来の cDNA ライブラリーをスクリーニングする。続い続いて、テロメア端に存在する一本鎖 DNA（G—tail）て、ノックアウトコンストラクトを作製するためにエクを in gel hybridization により測定した結果、NBS 細胞のソン 2 からエクソン 6 に相当する約 5.5kb のゲノム DNA

G—tail は正常 HeLa 細胞及び NBS1 タンパクを強制再現さを用いて DT40 細胞の Nbs1 遺伝子をターゲッティングす

せた NBS 細胞よりも約 80％短いことが明らかになった。

る。Nbs1 の個体レベルでの発現解析のためノックアウト

テロメアプローブが G—tail のみに Hybrize していること

マウスを作製する。Nbs1 のエキソン 2 部位に PGK—neo—

は、MBN 処理によりサザン法のシグナルが消失したこと

poly A/HSD—tk ターゲティングベクター導入によりヌルにより確認できた。

突然変異 ES 細胞を得る。この変異 ES 細胞のターゲテン

個体レベルでの発現を比較するためにマウス Nbs1 遺伝

グベクターを Cre—Loxp で除去した細胞あるいは除去しな

子のエキソン 4 以降をターゲテングしたマウス二種類のい ES 細胞を、C57BL/6 の 3.5 日胚から回収したブラスト

性質を比較した。ターゲテングベクターがそのままのノシスト内に移入する。続いて偽妊娠 ICR マウスの子宮内ックアウトマウスでは胎生 8.5 日で致死になるが、細胞株に戻して得られるキメラマウス交配により F1 の尾 DNA

は樹立可能であった。これに対して、Cre—Lox によりタの PCR 法により変異マウスを確認する。このマウス肺線

ーゲティングベクターを除いたノックアウトマウスでは胎維芽細胞を樹立後、放射線致死感受性や染色体異常頻度な

生 3.5 日で致死になり、細胞株化も不可能であった。両者

らびに遺伝子突然変異頻度を比較し、個体レベルの発現をのノックアウトマウスの違いは Nbs1 の C 末側蛋白の発現

リンパ球サブセット解析、Nbs1 蛋白発現の組織特異性をにあるので、ヒト NBS 細胞同様に生存にはＣ末側蛋白が測定する。

必要であることが示された。一方、正常細胞が極一部存在

３．結果するキメラマウスが偶発的に発生した。このマウスは免疫

NBS1 がテロメア維持に関わっていることは NBS 患者

グロブリンの低下や性腺低形成などヒト NBS 患者の臨床の皮膚線維芽細胞の細胞分裂によるテロメア長をサザン法

症状を呈すると共に、放射線照射後に体毛が早期に白色化により測定した結果、テロメア短縮が促進される事から明して正常マウスに比較して老化傾向を示した。また、このらかとなった。そこで二重免疫染色法によりテロメアに於マウスから樹立した Nbs マウス細胞は、ヒトマウス細胞

ける NBS1 フォーカス形成を観察した結果、フォーカスはと同程度の放射線感受性を示した。このため、テロメア結細胞周期のＳ期において見られた。また、この時期に一致

合蛋白 TRF2 と NBS1 との相互作用を解析した。免疫共してテロメア蛋白 TRF2 と NBS1 が結合していることが沈法及び細胞のフォーカス形成による共局在は NBS1 とIP—ウエスタン法により確認できた。DNA 修復では NBS1

TRF2 は S 期初期に相互作用することを示した。NBS 細蛋白の損傷部位へのリクルートに ATM が関与している

胞ではテロメア G-tail が短いことから、NBS1 と TRF2 がので、ATM が欠損している毛細血管拡張性運動失調症細

G-tail の延長とテロメア安定に機能していると思われる。

胞を用いて S 期でのテロメアへの NBS1 蛋白のリクルー

また、Nbs1 マウスと ATM 及び Ku マウスとの交配では、トを検討した。しかしながら、毛細血管拡張性運動失調症

これらの遺伝子のダブルノックアウトマウスは作製出来な細胞でも正常細胞と同様に NBS1 は TRF2 と結合が出来、かった。恐らく胚発生の極く初期に致死になると思われる。

またフォーカスが形成されることが判明した。この事から

しかしながら、同時に作成したチキン Nbs1 エクソン 2− 75 −

からエクソン 6 に相当する約 5.5kb のゲノム DNA をターる不死化細胞では、S 期初期に G—tail をプライマーにテロ

ゲティングした DT40 細胞は生存しており実験に使用可能

メアが延長することが知られている。これと一致して、我々であった。Nbs1 ノックアウト細胞はヒト NBS 細胞と同じの結果は NBS1 が G—tail 形成に重要であること、そしてく生存可能であるが、野性型 DT40 細胞と比較して顕著に

NBS1 が TRF2 と S 期初期に複合体を形成することを示し

増殖速度が低下していた。また、ヒト NBS 細胞と同様にた。NBS1 のテロメア維持機構は S 期初期に G—tail を延長

自然及び放射線誘発染色体の高頻度の発生と放射線致死高することが示唆されるが、その詳細は不明である。我々感受性を示した。一方、ターゲットインテグレーションをは既に NBS1 が放射線誘発 DNA 二重鎖切断の再結合過指標に相同組換え能を野性型 DT40 細胞と比較した結果、程である相同組換えに必要であることを示しているので、

Nbs1 ノックアウト細胞では顕著に相同組換え能が低下し相同組換えに必要な 5'—突出型単鎖 DNA 形成と同様の機ている事が判明した。また姉妹染色分体交換（SCE）は相構による可能性が指摘される。G—tail は染色体末端の T—

同組換えによることが知られているが、MMC 誘発の SCE

loop の開環や G カルテットの解消にも関与しているので、頻度はチキン Nbs1 細胞で極端に低下していることが示さ

NBS 細胞におけるこれらの解析が哺乳動物細胞でのテロれた。これらの結果は SC—neo を導入した細胞で、I—Sce1

メア維持機構の解明につながると期待される。

制限酵素を細胞内に一時的に発現させて DNA 二重鎖切断

我々が作製した二種類のノックアウトマウスのうち、を発生させて相同組換えをアッセイする実験系とも良く一

Cre—Loxp で Neo 遺伝子を除いたコンストラクトでは胚発致して、Nbs1 ノックアウト細胞では相同組換えが野性型

生の極く初期（E3.5 日以前）に致死になった。これに対に比較して 1/100 以下に低下していた。もう一方の DNA

して Neo 遺伝子が存在するマウスでは少しでも E7.0 〜 8

二重鎖切断の再結合過程である非相同 DNA 末端再結合

日迄生存可能であった。後者では Nbs1 の C 末が発現してを pDVH14 レポーター遺伝子を用いてアッセイした結果、いることが確認されており、C 末側の存在が発生に大きな

direct joining と micro-homology associated joining のい

影響を及ぼすことが確認出来た。チキン Nbs1 ターゲティ

ずれも Nbs 細胞では正常であることが確認された。これ

ング細胞を用いた解析では Nbs1 はエンドジョイニングよは ATM 欠損の AT 細胞で異常な相同組換え能を呈する

りも相同組換えの蛋白であることが示された。この点はが、非相同 DNA 末端再結合が正常であることと一致する。

高等真核生物と酵母での機能の大きな違いである。既に４．考

我々は Nbs1 C 末側がヌクレアーゼ活性を有する Mre11/

察

Rad50 との結合に必須であることを示したので、相同組

NBS は歴史的に AT のバリアントに分類されてきた。

換えの初期に必要な突出型 1 本鎖 DNA が出来ないことが実際、本研究で示したように放射線損傷の修復に対して

Nbs1 の相同組換え能や胚発生初期での死に繋がると思わ

AT と同じ修復経路の欠損を示した。しかしながら、テロれる。従ってテロメア維持に重要な G—tail も同様の一本メア維持に関してはＡＴ細胞でも NBS1 フォーカス形成の鎖 DNA から構成されるので Nbs1 もテロメアの異常短縮、異常が見られない。また、NBS1 の TRF2 や hMre11 へのそして今回示された個体レベルでの老化の原因であると考結合も正常細胞と同様にＳ期前期で観察された。このことえられる。ATM や DNA—PK（Ku70/80）はヒストンのから上述の DNA 損傷と異なって、ATM が NBS1 と同一

リン酸化に相補的に作用していることが知られているのでのテロメア維持経路で機能しているとは言い難い。テロメ

そのダブルノックアウトマウスはクロマチン・リモデリン

ア複製の場合には染色体上の定まった位置テロメアで起こグの失敗から致死になると予想される。Nbs1 とのダブルる現象であり、しかもそこには hMre11/Rad50 が細胞周ノックアウトマウスについても他の原因が予想されるので期を通じて結合していることからヒストン H2AX リン酸

今後さらに解析が必要である。

化による蛋白のリクルートが必要でないと思われる。テロ

５．総

メア維持に於ける魅力的な ATM の機能は、何らかの原因

括でテロメアが短縮した細胞をアポトーシスに誘導する事でNBS1 のテロメア維持における役割を解析した結果、ある。アポトーシス誘導は DNA 損傷応答における ATM

NBS1 蛋白はテロメア結合タンパク TRF2 とテロメア部の重要な機能であり、本研究のＡＴ細胞を使用した実験結位で共局在することが免疫染色法により示された。また、果とも矛盾しない。しかし、ATM の酵母ホモログ TEL1

NBS1 抗体を用いた免疫共沈物のウエスタンブロット解析

がテロメア維持で重要な機能をしていると思われている酵は、TRF2 と NBS1 が物理的に結合していることが確認さ母ではアポトーシスが確認されていないことから、さらにれた。この結合は細胞周期依存性で S 期初期のテロメア

重要なテロメア維持機能が ATM に存在すると思われる。

が延長する時期と一致した。NBS1 はヌクレアーゼ活性をテロメレース活性のないヒト組織の初代培養細胞は細胞有する Mre11/Rad50 と複合体を形成することから、テロ

分裂毎にテロメアが短縮するが、テロメレース活性を有す

メレースによるテロメア延長に必要な一本鎖 DNA の G—

− 76 −

早老性疾患遺伝子による皮膚線維芽細胞の老化とテロメア制御

tail を測定したところ、NBS 細胞では正常細胞に比較して見られない。また、NBS1 の TRF2 や hMre11 への結合も短いことが判明した。一方、Nbs1 のノックアウトマウス

正常細胞と同様にＳ期前期で観察された。このことから上を 2 種類のターゲティングベクターを用いて作製した結述の DNA 損傷と異なって、NBS1 が ATM とは別経路の果、Nbs1 の C 末側が発現した ES 細胞では胎生 7.5 日まテロメア維持機能を有していることが示唆された。

で生存したが、ヌル変異体のマウスでは 3.0 日以前に胚が消失した。Nbs1 のＣ末側発現の変異体からは細胞株樹立（関連論文）が可能で、患者細胞と同様の放射線感受性を示した。また、

１） H. Tauchi, J. Kobayashi, K. Morishima, et al.: Nbs1 isNbs1 の野性型と変異体から構成されるキメラマウスでは

essential for DNA repair by homologous recombination

免疫不全や性腺低形成、そしてマウス由来細胞は放射線高in higher vertebrate cells. Nature, 420:93-98, 2002

感受性及び染色体不安定性など、ヒト疾患と同様の症状を

２） J. Kobayashi, H. Tauchi, S. Sakamoto, et al.,: NBS1

呈して病態解析に有用であることを示した。一方、チキン

localizes to g-H2AX foci through interaction with theB 細胞由来の DT40 細胞を用いて Nbs1 のターゲティング

FHA/BRCT domain. Curr. Biol., 12:1846-1851, 2002を行った結果、相同組換え能が野性型の 1/100 以下に低下

３） H. Tauchi, S. Matsuura, J. Kobayashi, et al.,:

していることから、ATM 同様に Nbs1 は相同組換え修復

Nijmegen breakage syndrome gene, NBS1, andの蛋白であることが判明した。しかしながら、テロメア維moleculer links to factors for genome stability.

持に関してはＡＴ細胞でも NBS1 フォーカス形成の異常がOncogene, 21: 8967-8980, 2002

− 77 −

エストロゲンの皮膚老化防御における分子機構の解明
金沢大学医学系研究科

井

分子移植学（産婦人科学講座）

上

正

樹

Telomerase activity is present in most malignant cells and provides a  mechanism for the unlimited potential for divisionon neoplastic cells.   Although telomerase is known to be regulated by several factors, the roles of sex steroid hormones
have not been understood in target tissues such as breast, uterine endometrium and skin. In the series of our studies, wehave examined the effect of sex steroid hormones including estrogen, progesterone and SERM on the telomerase activity
and investigated the molecular mechanism of their effects.   Estrogen has up-regulated telomerase activity as well as
hTERTmRNA in ER-positive cells. Gel shift and luciferase assays have revealed that estrogen-responsive element of hTERT
promoter sequences is responsible for transcriptional activation by activated ER.  Estrogen has also activated c-Myc expression
and then it has been cleared that c-Myc/Max play additional role in estrogen-induced transactivation of hTERT. On the other
hand, progesterone significantly induced hTERT mRNA expression in short-time exposure and inhibited the estrogen-induced
activation of hTERT expression in long time exposure. The p21/Waf1/Cip1 played an integral role in this inhibition.  SERM
has up-regulated hTERTmRNA in uterine endometrial cells and down-regulated in breast cancer cells.   hTERT protein
was immunohistochemically detected in stem cells of the skin. The immortalized cells with normal structureal and functional
characteristics which we have established could be a powerful tool for the understanding of the roles of sex steroid in aging
and the clinical application.

１．緒に与える影響や各種ホルモン剤の相互作用を分子生物学的言に調べ、中高年者の皮膚老化防止に対するホルモン治療の日本においては高齢化が進み、高齢者の生活習慣に関連

効 、最適のホルモン剤の組み合わせやその薬剤 を探るこした慢性疾患克服が国民の福利厚生上重要な課題となってと、さらにはホルモンの生命維持機構の解明を本研究の一いる。これら疾病の予防的見地から、欧米を中心に最近で連の目的とする。

は日本においても閉経後におけるホルモン補充療法が推奨

２．実験と結されている。これらエストロゲンを主軸にした補充療法は皮膚の幼若化を促すことが臨床的に示されている。
しかし、

2．1

hTERT プロモーターのクローニング

エストロゲンなどステロイドホルモンの皮膚構成細胞に与テロメアの伸長作用を有する酵素；テロメラーゼは３える影響、特に細胞寿命に与える効 について細胞分子レつのサブユニット（hTR: human telomerase RNA, TP1:ベルでの解明はなされていない。

telomerase associated protein, hTERT: human telomerase

最近の分子生物学の研究成 により、細胞の老化機構がreverse transcriptase）からなることが明らかとなり、1997

明らかになりつつある。即ち、細胞の老化は染色体末端に

年８月には Nakamura らと Myerson らによって hTERT: 遺存在する６塩基（TTAGGG）の繰り返し配列（テロメア）

伝子がクローニングされた２）。さらに ､1999 年には蛋白発が細胞分裂ごとに短縮し、老化、細胞死に至るいわゆる “テ

現にきわめて重要な役割を担うプロ - モターのクローニン

ロメア分子時計” により制御されている。この分子時計のグは世界に先駆け我々によってなされた３）。ｈ TERT 遺伝

制御にはテロメア - の短縮や延長が関与することが示唆さ

子プロモーターは TATA-box と呼ばれる転   開始配列を有れている。テロメアを延長させる酵素、テロメラーゼは細し CG 塩基配列に極めて富んでいた（図１）。各種癌細胞や胞が増殖に際するテロメアの短縮を防ぎ、細胞に永久分裂

正常細胞に hTERT プロモ−ターをルシフェラーゼ遺伝子１）

寿命を与えうると考えられている 。

の上流に組み込んだレポーター遺伝子を導入して活性を調

そこで、エストロゲンを初めとする女性ホルモンがテロべたところ癌細胞にはテロメラーゼの転   活性が強く見ら

メア・テロメラーゼ分子を介して細胞老化を刻む分子時計れた。転   活性化に必要な部は 18 ０bp であり、ｃ− MYC

Molecular mechanism of estrogen against
the senescence of skin cells.

や SP1 が転  因子として作動する事も示してきた４）。

Masaki Inoue

2．2

TERT の組織学的局在

Department of reproductive biology,
Medical science, Kanazawa University

成し免疫染色にて蛋白の局在を調べた。皮膚組織に於いて

テロメラーゼ活性を担う hTERT 蛋白に対する抗体を作は正常の成熟角化細胞には hTERT の蛋白発現はないが、基底の顆粒細胞には癌細胞と同様の強い発現を認めた。抗

− 78 −

エストロゲンの皮膚老化防御における分子機構の解明

原の発現は細胞核のみならず細胞質にも認めた（図２）
。

2．3

５）

しかし、細胞質における存在の意味は現在不明である 。
若年者皮膚には蛋白発現が強い事も判明した。

ホルモンのテロメラーゼ活性に対する影響

これまで、テロメラーゼ活性は弱いながらも血液幹細胞、消化管クレプトの幹細胞に観察されることは知られていた。我々は女性ホルモン（エストロゲンとプロゲステロ

図１

hTERT プロモーターの塩基配列。CG 配列に富み TATA-box を有する。主たる転 領域には SP1､cMyc などの転 因子の結合部 が存在する。

図２

上皮細胞における hTERT 蛋白の局在。hTERT 蛋白は扁平上皮細胞の顆粒層細胞（上皮幹細胞）には発現を見るが、分化した角化層には認めない。免疫組織染色ｘ 33− 79 −ン）によって月経周期を惹起する子宮内膜に周期的にテロ点である。

メラーゼ活性と hTERT 遺伝子の発現が同期して強く発現する事を見出した６, ７）。即ち、ホルモンによりテロメラー

2．4

ゼ活性が制御されテロメアの延長を介して細胞寿命に影響を与える事が示唆された。

エストロゲンの皮膚に対する細胞生物学的変化

文献的にはエストロゲンが皮膚の弾力性増強のために必
要なコラーゲンの産生能に対する影響、皮膚の保水性維持

そこで、エストロゲンとプロゲストロゲンの両者を発現のために必要なヒアルロン酸の分泌能、などを上昇させる

する内膜癌細胞株（Ishikawa 株、
HEC 株）や乳癌株（T47D）

事が知られているが、その分子機構には不明な点が多い。

を用いてルシフェラーゼアッセイ、ゲルシフト法を用いてこれらについてはについてホルモン受容体を有する細胞株

ホルモンによるテロメラーゼ活性や hTERT の制御機構をで検討中である。純正の女性ホルモンのみならず SERM

調べた８）。

や女性ホルモン作用を有する内分泌撹乱物質いわゆる環境

エストロゲンの標的細胞である皮膚のケラチノサイト、

ホルモンついても興味ある点である。正常細胞に腫瘍抑制

皮下の繊維芽細胞、骨細胞、乳癌細胞、内膜癌細胞につい遺伝子を抑制した後に hTERT 遺伝子を導入すれば容易にてエストロゲン付与するとテロメア長やテロメラーゼ活性正常機能を持つ正常不死化細胞を作る事が可能となったのが上昇する事が判明した。ルシフェラ−ゼアッセイでエス

で 11）、皮膚細胞においても同様に不死化細胞株を樹立し、トロゲン受容体結合部   が hTERT プロモーター上流の約細胞レベルでのアポトーシスや増殖能、形態変化など老化

1500pb に存在しエストロゲン添加でテロメラーゼ活性やとの関連について今後検討する。

ルシフェラーゼ活性が増加する事が示された。ゲルシフト
アッセイでも受容体が結合する事が確認された。即ち、エ2．5

紫外線や活性酸素の皮膚障害に対する効

ストロゲンが hTERT プロモーターに受容体を介して結合

テロメラーゼの酵素活性の中心をなす hTERT はテロメ

しテロメラーゼ活性を増加しテロメアを延長する事によりア延長を介して老化防止機能を有するのみならず、
   の作

細胞老化に抵抗性に作用する事が示された。さらに、エス用もあることが推測されている。即ち DNA 複製時の遺伝

トロゲンは c Ｍ yc 蛋白を活性化してテロメラーゼ活性を

子エラーや外部刺激による遺伝子障害の修復作用である。

挙げる間接的な作用も判明した。

皮膚由来の正常不死化細胞を用いて、放射線や紫外線さら

一方、プロゲステロンは hTERTmRNA の発現を短時には活性酸素による遺伝子障害に対する修復機構の分子メ間では有意に誘導した。即ち、この活性増加は一過性であカニズムの解明と臨床応用への展開を図る予定である . 癌

り、３時間から有意に増加し 12 時間でピークに達しそのの放射線感受性の回復や外部刺激からの皮膚の保護薬や基後減少した。しかし、24 時間以上の長時間作用させると材の開発に道を開く可能性がある。

プロゲステロンはエストロゲンによる hTERT 発現増強作

３．考用を抑制した。プロゲステロンによる抑制作用は MAP・察

ERK キナーゼインヒビターにより抑制される事が判明し我々の研究成   によってホルモン特にエストロゲンがテた。従って、プロゲステロンによるテロメレース制御機構

ロメラーゼ活性化機構を介して細胞寿命延長に作用する事には MAP キナーゼを介する経路が極めて重要である事がが示された。一方、エストロゲンや黄体ホルモンなどの女

明らかとなった。プロゲステロン添加により初期変化とし性ホルモンはホルモン補充療法として既に臨床の現場で使ては未知の転  因子のリン酸化を  じて活性化された転  因

用されている。その効   として保水性の維持や弾力性の増子が作動しテロメレース活性を挙げるが、晩期には P21

加が示唆されているが、皮膚老化の側   から分子レベルでの誘導を   じて転   を抑制する２相性の作用を有する事がの検討はされていない。女性ホルモンや関連物質がどのよ

明らかとなった 。

うな作用を持つのか、有効性のみならず副作用を検討する

９）

エストロゲンと同様にエストロゲン受容体に作用して抗上でも、これら分子機構の解明に大変興味が持たれている。

エストロゲン作用を有する SERM（選択的エストロゲン

我々の実証した方法で正常不死化細胞株を樹立し ､ それら受容体制御因子）であるタモキシフェンは乳癌細胞株では細胞を用いた実験系でその効   が解明されるものと期待さ

hTERT を抑制的に、子宮内膜癌細胞株では促進的に作用れる .

する事が示された 10）。タモキシフェンは実際に臨床的に正常細胞は分裂回数が有限で、この限界状態を細胞の乳癌治療薬として使用されているが、副作用として内膜癌

senescence（老化）という。この細胞老化は細胞分裂を重発生が高まる事が知られている。我々の結   は臨床的な事ねることで生じるが、分子レベルでの調節はテロメアを短実に対して分子生物学的な根拠を与えるものである。これ縮することで成り立つ。この分子時計を巻き戻し、細胞のはホルモン剤が臓器によりその作用が微妙に異なる事を示

若々しさを維持するにはテロメラーゼを活性化させることしており、皮膚細胞における効   や作用の結   は興味あるにより可能となる。従来より、女性ホルモンは個体の発− 80 −

エストロゲンの皮膚老化防御における分子機構の解明

生・発育・若年性維持に生理的な役割をなすことが知られていたが、分子レベルでの研究は進んでいない。エストロ
ゲンの分子標的としてテロメラーゼ hTERT 遺伝子プロモーターが解析され、女性ホルモンが直接あるいは間接的に
hTERT 遺伝子を制御し、テロメア長の支配を介して生命維持現象に関与する事が本研究で明らかになった（図３）。
臨床の現場ではエストロゲンが更年期後の女性にホルモン補充療法として、欧米では DHEA, 成長ホルモンや甲状腺ホルモンなどの混合薬が老化防止薬として使われ始めている現在、早急にこれらホルモン剤の分子レベルでの生命機能に関する検討は独創的で且つ時代の要請でもある。さ図３

hTERT の転 制御。エストロゲンを始めとした種々の転 因子が hTERT プロモーターに間接的あるいは直接的に結合して転 を制御する。テロメラーゼ活性を支配する事により細胞老化を制御する。

らに、皮膚由来の正常機能を持つ不死化細胞株の樹立はコ
スメトロジー研究に利用できるだけではなく、将来の再生医療に利用できるものと期待される .

（文

献）K, Nishio Y, Orimo A, Inoue M.   Estrogen activates

１） Heyflick L, et al. The serial cultivation of human
diploid strains. Exp Cell Res, 25:585-621, 1961.

telomerase.  Cancer Res. 59:5917-5921, 1999.
８） Tanaka M, Kyo S, Takakura M, Kanaya T, Sagawa

２） Nakayama J et al. TLP1: a gene encoding a protein

T, Yamashita K, Inoue M.   Expression of telomerase

component of mammalian telomerase is a novel

activity in human endometrium is localized to epithelial

member of WD repeats family. Cell, 88:875-884, 1997.

grandular cells and regulated in a menstrual phase-３） Takakura M, et al. Cloning of human telomerase

dependent manner correlated with cell proliferation.  

reverse transcriptase (hTERT) gene promoter and

Am. J. Pathology 153: 1985-1991, 1998.

identification proximal core promoter sequences

９） Wang Z, Kyo S, Takakura M, Tanaka M, Yatabe N,

essential for transcriptional activation in immortalized

Maida Y, Fujiwara M, Hayakawa J, Ohmichi M, Koike

and cancer cells. Cancer Res. 59:551-557, 1999.

K, Inoue M.  Progesterone regulates human telomerase４） Kyo S, Inoue M. Complex regulatory mechanisms

reverse transcriptase (hTERT) gene expression viaof telomerase activity in normal and cancer cells. How

activation of MAP kinase signaling pathway. Cancer

can we apply them for cancer therapy? Oncogene

Res. 60: 5376-5381, 2000.
10） Wang Z, Kyo S, Maida Y, Takakura M, Tanaka M,

21:688-697, 2002.
５） Kyo S, Masutomi K, Maida Y, Kanaya T, Yatabe

Yatabe N, Koike K, Hayakawa J, Ohmichi M, Inoue

N, Nakamura M, Tanaka M, Takarada M, Sugawara

M.   Tamoxifen regulates human telomerase reverse

I, Murakami S, Taira T, Inoue M. Significance oftranscriptase (hTERT) gene expression differently

immunological detection of human telomerase reverse

in breast and endometrial cancer cells.   Oncogene,transcriptase. Am J Pathol 163:859-867, 2003.

21:3517-3524,2002.

６） K y o S , T a k a k u r a M , K o h a m a T , I n o u e M .

11） Kyo S, Nakamura M, Kiyono T, et al. Successful

Telomerase activity in human endometrium. Cancer

immortalization of endometrial glandular cells with

Res.57:610-614, 1997.

normal structure and functional characteristics. Am J

７） Kyo S, Takakura M, Kanaya T, Wang Zhuo, Fujimoto− 81 −

Pathol 163:2259-2269,2003.

正常皮膚角化における蛋白質脱イミノ化の役割解明
─ 瑞々しい肌をいつまでも保つために ─
東京都老人総合研究所

石神

加齢臓器障害研究グループ

昭人

Peptidylarginine deiminases (PADs) are a group of enzymes which convert protein arginine residues to citrulline residues
in the presence of calcium ion. Enzymatic deimination abolishes positive charges of protein molecules inevitably causing
significant alteration in the structure and function of native proteins. In mammalian tissues, PADs are found as four different
isoforms (type I, type II, type III and type IV), which differ in specificity for various synthetic substrates and in tissue
distribution. We have previously reported that multiple deiminated proteins, composed largely of keratins and filaggrin, which
is a keratinocyte terminal differentiation marker synthesize in granular cell layers, were present and localized in the granularand cornified cell layers of the epidermis. The presence of deiminated proteins in such a restricted region of the epidermis
strongly suggests that PAD enzyme is involved in the cornification of epidermal keratinocytes.
In this study, we analyzed the localization of deiminated proteins in psoriatic epidermis and atopic epidermis.
Immunostaining based on chemical modification of citrulline residues showed that both the psoriatic epidermis and atopic
epidermis had no detectable levels of deiminated proteins. On the other hand, immunostaining with polyclonal antibody
against filaggrin showed no significant change in psoriatic epidermis and atopic epidermis. These results indicated that thecauses of psoriasis vulgaris and atopic dermatitis may be defective in protein deimination.

１．緒

蛋白質脱イミノ化反応は、蛋白質脱イミノ化酵素（ペプ言

チジルアルギニンデイミナーゼ、PAD）により触媒され蛋白質翻訳後修飾は情報伝達、遺伝子発現、細胞分化やる。遺伝子解析により生体内には、４種類の異なるアイソ

老化に深く関与している。特に、蛋白質中のアルギニン残フォーム（I, II, III, IV 型）が存在し、表皮では、I, II, III,

基がシトルリン残基に変わる脱イミノ化反応は、アルギニ

IV 型全ての PAD が発現している４−６）。同じ活性を持つ４ン残基の塩基性が失われる分、蛋白質の等電点が酸性側に種類の酵素がどうして皮膚で発現しているのか、その生理シフトするなど、蛋白質の本来の電化や高次構造に著しい的意義については現在明らかではない。

変化をもたらすことから機能解明が急がれている。ヒトの本研究は、正常皮膚角化における蛋白質脱イミノ化の役

皮膚角層や毛嚢には脱イミノ化蛋白質が多く存在する。プ

割解明を目的としている。特に、乾癬と同じように皮膚炎

ロテオーム解析により中間径フィラメント蛋白質のケラチ症症状を呈するアトピー性皮膚炎での脱イミノ化蛋白質のン K1 や K10、皮膚水分保湿に重要なフィラグリンやトリ動態を詳細に解析した。歳をとってもしわのない瑞々しいコヒアリンが高度に脱イミノ化していることを明らかにし肌をいつまでも保ち、化粧と健康とのバランス良い関係をた１−３）。興味深いことに、炎症性角化症の１つである乾癬

保つことを最終目的とした基礎的研究である。

では脱イミノ化蛋白質がまったく検出されなかった。乾癬

２．実

は、表皮の角層と有棘層が肥厚し、少し盛り上がった赤い皮疹（紅色局面という）ができるのが特徴である。また、

2.1

験

皮膚組織

皮膚表面には、白くてかさかさした乾燥した厚い垢（鱗屑

正常なヒト皮膚組織は、整形外科時に患者同意を得て採−りんせつという）が付着する。乾癬の原因の１つは、不取した。また、乾癬やアトピー性皮膚炎の皮膚組織は、外完全な角化にあると考えられている。乾癬では、脱イミノ

科的処置時に患者同意を得て採取した。本研究は、東京都

化蛋白質がほとんど検出されないことから、蛋白質脱イミ

老人総合研究所倫理委員会、東京都老人医療センター倫理

ノ化反応は、正常な表皮角化に重要な役割を果たしている

委員会の承認を得ている。本研究では、個人の情報は、公ことが推察される。

表しない。個人や病院の承諾書を得る。研究により生じた

Role of the protein deimination
during the cornification of epidermal
keratinocytes

対象者への不利益及び危険性はない。など倫理面において最大の配慮をしている。

2.2

Akihito Ishigami
Tokyo Metropolitan Institute ofGerontology（TMIG）Organ Disorder andAging Research Group

脱イミノ化蛋白質の免疫組織化学的染色

皮膚組織は４% パラホルムアルデヒド固定し、OCT
compound 4583（Miles）で包埋した。次に、6µm 厚に切片化し、スライドガラスに接着させた。脱イミノ化蛋白質− 82 −

正常皮膚角化における蛋白質脱イミノ化の役割解明の検出は、以下のように行った７）。

３．結果と考察

皮膚切片を 2.5% グルタルアルデヒドで後固定した。次に、誘導体化溶液 * を切片にかけ、37℃の保温器で３時間3.1保温してシトルリン残基を誘導体化した。１次抗体には、ウサギ抗誘導体化シトルリン抗体

８）

皮膚での脱イミノ化蛋白質の役割

ヒト皮膚における脱イミノ化蛋白質の局在を免疫組織化を用いた。呈色には、学的検出法を用いて調べた。脱イミノ化蛋白質の検出は、Elite ABC kit（Vector Laboratories）と発色基質として我々が独自に開発した化学修飾したシトルリン残基に特異ジアミノベンチジンを用いた。組織観察のため、ヘマトキ

的な抗体、組織切片上でのシトルリン残基の化学修飾法をシリン染色を行った。

用いている。この方法では、シトルリン残基の前後のアミ＊誘導体化溶液は、蒸留水と下記の保存溶液１および２を、ノ酸配列に拘わらず、微量の脱イミノ化蛋白質を高感度に

容積比で１: １: ２の割合で使用時に混合して使用。

検出できる。ヒト正常皮膚では、表皮顆粒層上部から角層

保存溶液１（２% ジアセチルモノキシムと１% アンチにかけて脱イミノ化蛋白質が陽性であった（図 A）。特に、

ピリンを含む 1N 酢酸）。

角層下部には脱イミノ化蛋白質が多く存在しており、基底保存溶液２（0.025% FeCl3 を含む水と 85% リン酸およ層や有棘層ではまったく検出されなかった。また、真皮

び 95% 硫酸を 55 : 20 : 25 の容積比で混合した溶液）。

においても脱イミノ化蛋白質は陰性であった。一方、フィラグリンは有棘層上部から角層下部にかけて陽性であった

2.3

フィラグリンの免疫組織化学的染色（図 D）。
表皮では、I, II, III, IV 型全ての PAD が発現している 4 −皮膚組織を OCT compound 4583 で包埋し、6µm 厚に切片化した。１次抗体としてウサギ抗ラットフィラグリ
ン抗体

１）

6）

。免疫組織染色により、I, II 型 PAD は基底層から有棘層、を用いた。呈色には、Elite ABC kit（Vector

顆粒層に分布しており、角層では検出されなかった。何れ

Laboratories）と発色基質としてジアミノベンチジンを用の PAD も酵素活性発現にカルシウムイオンを必要とする。

いた。組織観察のため、ヘマトキシリン染色を行った。

図

ヒト皮膚における脱イミノ化蛋白質、フィラグリンの免疫組織染色
A, D : 正常、B, E : 乾癬、C, F : アトピー性皮膚炎
A, B, C : 脱イミノ化蛋白質、D, E, F : フィラグリン

− 83 −

表皮は、基底層から表層に移行するに連れ、カルシウム

歳をとってもしわのない瑞々しい肌を維持することは、女濃度が高くなるよう濃度勾配が形成されている。PAD は、性のみならず男性でも望みである。皮膚における脱イミノ

基底層、有棘層、顆粒層の細胞で発現し、そのほとんどが化蛋白質、PAD の役割がもっとはっきりすれば、様々な活性化されない状態で蓄積し、顆粒層上部まで移行する。

皮膚疾患の治療のみならず、瑞々しい肌を保つための美容顆粒層の外側では、細胞核消失、ケラチン繊維の凝集、辺療法に新しい光を浴びせかけるものと期待している。

縁帯形成を含む急激な形態変化（角化）が起こり角層を形成する。顆粒層上部では、細胞内カルシウム濃度が臨界点

謝に達し、一気に蛋白質脱イミノ化反応が進行すると考えられる。この時、脱イミノ化される蛋白質は、角層のケラチ

辞本研究に対して助成いただきました財団法人コスメトロ
ジー研究振興財団に深謝いたします。

ン模様を構成するケラチン K1 や K10、皮膚の水分保湿因子として働くフィラグリンを同定した１−３）。特に、ケラチ（文

ンの脱イミノ化は、ケラチン繊維の凝集や辺縁帯形成に重１） Senshu T, Akiyama K, Kan S, Asaga H, Ishigami A,

要である。また、フィラグリンの脱イミノ化は、ケラチン

Manabe M: Detection of deiminated proteins in rat skin:との電気的相互作用を弱め、ケラチン繊維からの離脱と分

probing with a monospecific antibody after modification

解に働いていると考えられる。フィラグリンは、角層上部

of citrulline residues, J. Invest. Dermatol., 105, 163-169,

でアミノ酸にまで切断されて皮膚の保湿成分として働く。

献）

1995.
２） Senshu T, Akiyama K, Ishigami A, Nomura K: Studies

3.2

皮膚疾患における PAD の関与

on specificity of peptidylarginine deiminase reactions

乾癬では、脱イミノ化蛋白質がほとんど検出されなかっusing an immunochemical probe that recognizes an

た（図 B）。しかし、フィラグリンの分布に特に異常は認

enzymatically deiminated partial sequence of mouse

められなかった（図 E）。乾癬は、ウイルスや細菌、かびkeratin K1, J. Dermatol. Sci., 21, 113-126, 1999.

が原因となる皮膚疾患ではないため、ヒトにうつる心配は

３） Ishiga mi A , Asaga H , Ohsawa T, Akiya ma K ,ない。また、乾癬の根本的治療法や有効な医薬品は、未だMaruyama N: Protein deimination and peptidylarginine

確立されていない。従ってその治療法は、対症療法的なも

deiminase expression during cornification of rat epidermalのとなり、症状が良くなっている期間をできる限り長くす

keratinocytes, Biomed. Res., 23, 145-151, 2002.

ることが治療の目的になる。乾癬の角層では、脱イミノ化

４） Ishiga mi A , Asaga H , Ohsawa T, Akiya ma K ,蛋白質が検出されないことからも、表皮角化に蛋白質脱イ

Maruyama N: Peptidylarginine deiminase type I, type

ミノ化反応が非常に重要であることがわかる。では、同じ

II, type III and type IV are expressed in rat epidermis,

ような皮膚炎症反応を呈するアトピー性皮膚炎の皮膚でBiomed. Res., 22, 63-65, 2001.

は、脱イミノ化蛋白質は存在するのであろうか。アトピー

５） Ishiga mi A , Ohsawa T, Asaga H , Akiya ma K ,性皮膚炎における脱イミノ化蛋白質の動態を調べた。そのKuramoto M, Maruyama N: Human peptidylarginine

結果、アトピー性皮膚炎では、乾癬同様に角層に脱イミノ

deiminase type II: molecular cloning, gene organization,

化蛋白質がまったく検出されなかった（図 C）。また、フand expression in human skin, Arch. Biochem. Biophys.,407, 25-31, 2002.

ィラグリンの分布には、特に異常は認められなかった（図F）。アトピー性皮膚炎での PAD の発現は、未だ明らかで

６） Guerrin M, Ishigami A, Mechin MC, Nachat R ,はない。しかし、フィラグリンの発現に異常が見られない

Valmary S, Sebbag M, Simon M, Senshu T, Serre G:

ことから、PAD の正常な発現が予想される。PAD は、酵cDNA cloning, gene organization and expression analysis

素活性発現にカルシウムイオンを必要とする。アトピー性

of human peptidylarginine deiminase type I, Biochem. J.,

皮膚炎では、カルシウム濃度勾配がきちんと形成されてい370, 167-174, 2003.
７） Asaga H, Ishigami A: Protein deimination in the rat

ない可能性がある。

４．総

brain: Generation of citrulline-containing proteins in括

cerebrum perfused with oxygen-deprived media, Biomed.
Res., 21, 197-205, 2000.

今回の研究により、アトピー性皮膚炎の原因が皮膚角層での蛋白質脱イミノ化の機能不全による可能性が強く示唆

８） Senshu T, Sato T, Inoue T, Akiyama K, Asaga H:された。また、アトピー性皮膚炎の治療への可能性として

Detection of citrulline residues in deiminated proteins on

次のように考える。『皮膚軟膏へのカルシウムの添加』でpolyvinylidene difluoride membrane, Anal. Biochem., 203,ある。これは、化粧品への応用も可能であると考えている。

94-100, 1992.

− 84 −

毛包、汗腺、皮脂腺など皮膚附属器官の形成に関わる
細胞内シグナル伝達経路の解明
東京大学医科学研究所

井癌・細胞増殖大部門

上

分子発癌分野純 一 郎

Tumor necrosis factor receptor (TNFR)-associated factor 6 (TRAF6) transduces signals from members of the Toll/interleukin-1 (IL-1) receptor and members of the TNF receptor super family including CD40 and RANK. We havereported recently that TRAF6 deficiency results in defective development of epidermal appendices including guard
hair follicles and sweat glands. Furthermore, our results suggest that this defect may be due to the impaired signalingof EDAR, XEDAR or TROY, members of the TNFR super family expressed in skin. Although TRAF6 plays a crucialrole in formation of the skin appendices, the molecular mechanisms underlying regulation of TRAF6 are largely
unknown. Thus, we began to search for proteins that bind to and activate TRAF6. We have identified TIFA, a TRAFinteracting protein with a forkhead-associated (FHA) domain. The FHA domain is a motif known to bind directly tophosphothreonine and phosphoserine. In transient transfection assays, TIFA activates NFκB and JNK. However, TIFA
carrying a mutation that abolishes TRAF6 binding or mutations in the FHA domain that are known to abolish FHA
domain binding to phospho-peptide fails to activate NFκB and JNK. TIFA, when overexpressed, binds both TRAF6
and IRAK-1 and significantly enhances the IRAK-1/TRAF6 interaction. Furthermore, analysis of endogenous proteinsindicates that TIFA associates with TRAF6 constitutively, whereas it associates with IRAK-1 in an IL-1 stimulationdependent manner in vivo. Thus, TIFA is likely to mediate IRAK-1/TRAF6 interaction upon IL-1 stimulation. These
results suggest that TIFA may be involved in signaling that leads to the development of skin appendices. In such acase, TIFA could be important target molecule for drugs that affect skin condition. Inhibition of TIFA or TRAF6 may
reduce the number of hair follicles. In contrast, activation of TIFA or TRAF6 may increase their number. Thus, TIFA
and TRAF6 could be target molecules for developing compounds that could used by hairy or bald-headed persons.

１．緒るシグナル伝達因子に４）遺伝子レベルで異常が存在すること言が報告されている。すなわち、EDA → EDAR → EDARADD

毛包、汗腺、皮脂腺などいわゆる皮膚附属器官の形成のと伝達されるシグナルが皮膚附属器形成に必須であることを分子機構は、不明な点が多い。我々は最近、細胞内シグナ示している。一方で、皮膚には EDAR に類似した受容体分子

ル伝達因子 TRAF6 の遺伝子欠損マウスを作成し、その表

XEDAR ５）や TROY ６）が発現しておりやはり皮膚附属器形成

現型の一つがヒト遺伝性疾患である無汗性外胚葉形成不全に関与していると考えられている。我々の実験から TRAF6症（Hypohidrotic ectodermal dysplasia:HED）のモデル

はいずれの受容体からのシグナルにも関与していると判断さマウスである Tabby（Ta），downless（dl），crinkled（cr）

れることから１）、TRAF6 のシグナル伝達機構を解明することといった変異マウスに酷似していることを報告した１）。こにより本研究の目的が達成されると考えた。我々は、TRAF6の疾患を有するヒトやマウスでは汗腺や皮脂腺などの顆粒

シグナルの解明を目指し、TRAF6 に結合し TRAF6 の活性を分泌腺、毛包の形成が著しく阻害されている。本研究では、制御する分子を探索してきた。新規 TRAF6 結合分子の同定

これら皮膚附属器官の形成機構を TRAF6 を中心に明らかに関して以下に報告する。

にし皮膚を標的とする化粧品の開発、皮膚に副作用を有す

２．実

る化粧品の改良及び、毛生え薬や脱毛剤の開発などの基礎

2.1となる成果を挙げることを研究目的とした。

験

酵母 two-hybrid スクリーニングとノザーンブロッティング

前述の HED のモデルマウス Ta では EDA と呼ばれる
２）

TNF ファミリーリガンドタンパク質に 、dl では EDAR と

全長マウス TRAF6 を pBD-GAL4-Cam（Stratagene, La呼ばれる TNF 受容体ファミリータンパク質に３）、さらに cr

Jolla, CA）にサブクローニングし餌として pAD - GAL4-2.1

では EDAR の細胞質領域に結合する EDARADD と呼ばれ（Stratagene）で作成した ICR マウス（８−週齢メス）骨髄Identification of signal transduction
pathways involved in formation of skinappendices including hair follicles, sweat
glands and sebaceous gland.
Jun-ichiro Inoue
Division of Cellular and Molecular Biology
Department of Cancer Biology
Institute of Medical Science, University ofTokyo

cDNA ライブラリーをスクリーニングした。ヒトTIFA cDNA
はヒト B-cell cDNA ライブラリーからクローニングした。マウス
及びヒトTIFA の配列については DDBJ/EMBL/GenBank に
accession number AB062111 及び AB062110 として各々登録した。マウス組織 RNA ブロット（Clontech, Palo Alto, CA）
を [32P]- ラベル全長マウス TIFA cDNA または β-actin cDNA
で 65 ℃においてハイブリダイズした。フィルターは 0.5 X− 85 −

と 20µl の kinase buffer（20mM HEPES pH7.5, 20mM

SSC, 0.2（w/v）% SDS、65℃、30 分洗浄した。

MgCl2, 5µCi [γ-32P]ATP（3000Ci/mmol））の中で 30℃、302.2 GST 沈降アッセイ、免疫沈降アッセイ、ウェス
ターンブロッティング

分反応させた。

３．結GST 沈降アッセイでは、まず HEK293T 細胞に図に示した組み合わせと量で遺伝子導入した。36 時間後、細胞3.1

果TRAF6 結合タンパク質としての TIFA の同定

を 500 µl の TNE buffer（50mM Tris-HCl pH8.0, 1% NP-

TRAF6 を餌として酵母 two-hybrid 法によりマウス骨40, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl, 0.5 mM dithiothreitol）

髄 cDNA ライブラリーをスクリーニングして 184 アミノ

破砕後、遠心し未破砕細胞を除去した sup を得、それを酸からなるタンパク質をコードする cDNA を得た。この細胞破砕液とした。細胞破砕液を Glutathione-Sepharose

タンパク質が動物細胞内で TRAF6 と結合すること、一過（Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ）と混合性の遺伝子導入により NFκB や JNK を活性化すること及し，吸着複合体を 8.5% polyacrylamide/SDS ゲルで分離

び分子中央に Forkhead-associated（FHA）ドメイン７）をした。免疫沈降アッセイでは同様に調製した細胞破砕液に有することから、このタンパル質を TRAF-interacting

示 さ れ た 抗 体 と protein G-Sepharose（Amersham

protein with an FHA domain（TIFA）と呼ぶことにした

Pharmacia Biotech）を混合した。免疫沈降複合体を 10 %（Fig.1 A, C, D）８）。ノザーンブロット解析から TIFA はまたは 12.5% polyacrylamide/SDS ゲルで分離した。各々脾臓に非常に多く発現し他の組織での発現は低かったのタンパク質の発現チェックの場合は細胞破砕液をそのま（Fig.1 B）。FHA ドメインは 60 から 100 アミノ酸からなま用いた。ゲルで分離されたタンパク質は PVDF メンブ

り主に真核細胞の核において細胞周期、DNA 修復や転位

レン（Millipore, Bedford, MA）にトランスファーした後、に関与するタンパク質に同定されている９）,10）。さらに重要な特異抗体と適当な horseradish peroxidase（HRP）- ２次

ことに FHA ドメイン中にはリン酸化セリンやリン酸化ス

抗 体、ECL Western blotting system（Amersham

レオニン残基に直接結合する機能を有するものが報告されPharmacia Biotech）を用いて同定した。

ていることである 11）,12）。これはちょうど SH2 ドメインがリン酸化チロシンに結合することがシグナル伝達で重要な2.3 リコンビナント TIFA タンパク質のゲルろ過カラムクロマトグラフィーによる分離
Maltose-binding protein（MBP）-TIFA 融合タンパク役割を果たしていること 13）を考えると TIFA の機能解析により TRAF6 のリン酸化が関与する新しい制御機構の解明につながる可能性を示唆する。

質（MBP-TIFA）を E. coli BL21 で発現させ Amylose-

TIFA による NFκB や JNK 活性化における TRAF6 のresin（New England BioLabs, Beverly, MA）をもちいて関与を解明するため、TIFA における TRAF6 結合部位をアフィニティー精製した。MBP-TIFA（24µg）を 2.4U の同定した。種々の TIFA 欠失変異体を用いた結合実験か

PreScission Protease（Amersham Pharmacia Biotech）

ら TIFA の C- ドメインが TRAF6 との結合に十分である

で 4℃、4 時間反応させ MBP と TIFA の境界を切断した。

ことが判明した（Fig.2A, B）。さらのその C- ドメイン内

その反応液を Superdex 75 column（0.32×30cm）にて分にこれまで CD40, RANK, IRAK-1 で同定された TRAF6

離し、各々のフラクションを 10 % polyacrylamide-SDS ゲ

結合配列 XXPXEXX-（armatic/acidic）に合致する配列

ルで分離した。ゲルをクマシー染色しタンパク質を同定した。

が存在していた 14）。我々はすでに CD40 と TRAF6 との結合実験から結合配列中の E を A に置換するとその結合能2.4 ルシフェラーゼリポーターアッセイと JNK の invitro キナーゼアッセイ

が全く喪失することを明らかにしている 15）。そこで TIFAHEK293T 細胞に１ng の 3xκB-luc または 3xMκB-luc

ろ TRAF6 結合能が喪失すると同時に TIFA による NFκB

（mutant κB sites）, 10ng の β-actin-β-gal と図に示されたや JNK の活性化能もなくなった（Fig.2C, D）。即ち、こ種々の発現プラスミドを遺伝子導入した。36 時間後、ルの結果は TIFA のシグナル伝達に TRAF6 との結合が必の同配列に同様の変異を導入した（E178A 変異体）とこ

シフェラーゼ活性を Luciferase Assay System（TOYO須であることを示している。次に FHA ドメインの機能をINK, Tokyo）で測定した。また β-galactosidase 活性を測解析した。そのために TIFA の 50 番目のグリシンをグル定し遺伝子導入効率の換算に用いた。JNK キナーゼアッ

タミン酸にしかつ 66 番目のセリンをアラニンに置換した

セイでは、まず HEK293T 細胞に 10ng の pEF-T7-JNK と（G50ES66A）変異体を作成した。なぜならば、FHA ドメ

図に示した量の pME-FLAG-TIFA を遺伝子導入した。36インを持つシロイヌナズナの KAPP タンパク質において

時間後 His-JNK を抗 T7 抗体で免疫沈降後、2µg の GST-

同じ変異体が本来の結合相手であるリン酸化タンパク質にc-JUN（1-89）融合タンパク質（New England BioLabs）

結合しないことが報告されているからである 16）。興味あ− 86 −

毛包、汗腺、皮脂腺など皮膚附属器官の形成に関わる細胞内シグナル伝達経路の解明ることに G50ES66A 変異体は TRAF6 と結合するもののシグナルを伝達することが報告されている 17）。また同じ

NFκB や JNK の活性化能を持っていなかった（Fig. 2C, D）。

TRAF ファミリーである TRAF2 の結晶解析から TRAF2

この結果は TIFA のシグナル伝達において TRAF6 とのはホモ３量体であると考えられている 18）。従って我々は結合は必須であるが、十分でなく FHA ドメインの何らか

TIFA が TRAF6 の 多 量 体 形 成 を 促 進 す る こ と に よ りの機能が必要であることを示唆している。

TRAF6 を活性化するという仮説を立てた。この仮説を検討するためまず TIFA 自身の多量体形成とその活性との関

3.2 TRAF6 活性化における TIFA の自己集合能の関与係を検討した。GST-TIFA と FLAG-TIFA と共発現させTRAF6 を細胞内で強制的に多量体形成させると下流にGST 沈降法により検討したところ TIFA は自己集合するこ

Figure 1
TIFA contains an FHA domain and activates NFκB and JNK. (A) Diagram of the overall structure of
TIFA and alignment of the FHA domain of TIFA with that of other proteins. Amino acids identical or similar inleast six proteins are indicated by gray boxes. Asterisks indicate amino acids selected for site-directed mutagenesis. (B) Multiple-tissue Northern blot. A mouse multiple-tissue Northern blot (Clontech) was probed with a cDNA
fragment of mouse TIFA (upper) or β-actin (lower). (C) Activation of NFκB by TIFA. HEK293T cell were transfected with 1 ng of 3xκB-luc or 3xMκB-luc (mutant κB sites), 10 ng of β-actin-β-gal and the indicated amounts of
TIFA expression plasmid. Thirty-six hours after transfection, luciferase assays were performed. The results shown
are the mean of duplicate experiments. (D) Activation of JNK by TIFA. HEK293T cells were transfected with 10
ng of pEF-T7-JNK and the indicated amounts of pME-FLAG-TIFA. Thirty-six hours after transfection, His-JNK
was immunoprecipitated with anti-T7 antibody. Immunoprecipitates were subjected to an in vitro kinase assay using GST-Jun as a substrate. The results shown were representative of duplicate experiments.

− 87 −

とが明らかとなった（Fig. 3A）。さらに種々の欠失変異体

さを調べるため大腸菌で TIFA 及びその G50ES66A 変異を用いて検討したところ自己集合能には FHA ドメインと体のリコンビナントタンパク質を発現後精製しC ドメインが両方とも必要でこれは欠失変異体の NFκB

Superdex75 ゲルろ過カラムで解析した（Fig. 3B）。そのや JNK の 活 性 化 能 と 一 致 し た（Fig. 2C, 3A）。 即 ち、

結果、TIFA の野生型が３量体に相当する大きさのところ

TIFA の自己集合能が TRAF6 の活性化に必要であることに溶出されたのに対して G50ES66A 変異体は５量体あるが強く示唆された。ところが G50ES66A 変異体においていは６量体に相当する大きさのところに溶出された。従っNFκB や JNK の活性化能がないのに自己集合能があるこて TRAF6 の活性化には TIFA の３量体形成が必要であとから、単に TRAF6 と結合して自己集合するのでは十分

りそれよりも大きい複合体を形成した場合には TRAF6 をでないことがあきらかとなった。そこで自己集合体の大き活性化できないと考えられた。

Figure 2
Both the TRAF6 binding site and the intact FHA domain are required for TIFA-induced activationof NFκB and JNK. (A) Structure of TIFA and its mutants and alignment of TRAF6 binding sites. (B) Identification of the TRAF6 binding site in TIFA. HEK293T cells were cotransfected with pME-GST-TIFA or pMEGST-TIFA mutant and pME-FLAG-TRAF6. Thirty-six hours after transfection, cell lysates were subjected to
GST pull-down assay. (C) Activation of NFκB by TIFA mutants. HEK293T cell were transfected with 1 ng
of 3xκB-luc or 3xMκB-luc (mutant κB sites), 10 ng of β-actin-β-gal and 5 µg of expression plasmid for TIFA
or its mutants. Thirty-six hours after transfection, luciferase assays were performed. Results shown are themean ± sd of triplicate experiments and are representative of two independent experiments. (D) Activationof JNK by TIFA mutants. HEK293T cells were transfected with 10 ng of pEF-T7-JNK and the indicatedamounts of expression plasmid for TIFA or its mutants. Thirty-six hours after transfection, His-JNK was immunoprecipitated with anti-T7 antibody. Immunoprecipitates were subjected to in vitro kinase assay using
GST-Jun as a substrate. The results shown are representative of duplicate experiments.

− 88 −

毛包、汗腺、皮脂腺など皮膚附属器官の形成に関わる細胞内シグナル伝達経路の解明

3.3

TIFA による TRAF6 と IRAK-1 の相互作用の促進

合することから FHA ドメインの標的リン酸化タンパク質

これまでの実験から TIFA は TRAF6 の上流で働くとが存在するとしても IRAK-1 ではないと考えられた。つぎ考えられたので、既に報告されている TRAF6 の上流分子に TIFA が TRAF6 と IRAK-1 の両方に結合することからと TIFA の結合を調べたところ IRAK-1 と結合した（Fig.

TIFA が TRAF6 と IRAK-1 との結合を促進する可能性を4A）。しかし、G50ES66A 変異体も IRAK-1 と効率良く結検討した。一定量の TRAF6 と IRAK-1 を発現させそこにFig. 3Self-association of TIFA. A, Identification of the domain required for TIFA self-association. GST-TIFA
or its mutants were coexpressed with FLAG-TIFA or FLAG-G50ES66A in HEK293T cells. GST pull-down
assays were performed, and coprecipitated FLAG-TIFA was analyzed by Western blotting with anti-FLAG
antibody. B, Oligomer formation of recombinant TIFA protein and that of mutant TIFA protein. MBP-TIFA(24 µg, upper) or MBP-TIFA-G50ES66A (lower) was cleaved with 2.4 U of PreScission Protease (GST-3C)
at 4℃ for 4 hr. The reaction mixture was applied to a Superdex 75 column, and fractions (20 µl) were collected. Fractions were analyzed on 10% polyacrylamide-SDS gel and proteins were visualized by coomassie
brilliant blue staining. Arrows indicate the elution profile of the molecular-weight marker proteins (158 kDa,
γ-globulin; 44 kDa, ovalbumin; 17 kDa, myoglobin) and the position of the void volume.

− 89 −

TIFA の量を変えて加えた場合での TRAF6 と IRAK-1 と成し、内在性 TIFA が TIFA cDNA から発現するタンパの結合を調べたところ、TIFA が存在しない場合に比較しク質と一致することを確認した。IL-1 刺激有無で内在性て TIFA の適当量添加により顕著に両者の結合が増加しTRAF6 と TIFA の結合を調べたところ両者の結合は刺激た（Fig. 4B）。 こ の 結 果 は TIFA が シ グ ナ ル 伝 達 時 にに依存せず恒常的であることが明らかとなった（Fig. 5A）。

TRAF6 と IRAK-1 の相互作用を促進する可能性を示唆し

つぎに IRAK-1 と TIFA の結合を調べた。まず FLAG-ている。次にこのことが生理的条件下に in vivo で再現さ

TIFA を発現するレトロウイルスベクターをマウス胎児線れるか否かを検討した。まず抗 TIFA 抗体をウサギで作

維芽細胞に感染させた。この際 FLAG-TIFA の過剰発現

Figure 4
TIFA enhances the association of TRAF6 andIRAK-1. (A) Interaction of TIFA with IRAK-1. HEK293T cells
were cotransfected with pME-GST-TIFA, pME-GST-TIFA
mutant or pME-GST and pEF-IRAK-1. Thirty-six hours after
transfection, cell lysates were subjected to GST pull-down
assay. (B) TIFA links TRAF6 to IRAK-1. HEK293T cells were
cotransfected with 0.2 µg of pME-FLAG-TRAF6 and/or pEFIRAK-1 and increasing amounts of pME-Myc-TIFA. FLAGTRAF6 was immunoprecipitated with anti-FLAG antibody.

Figure 5
Interaction of TIFA with TRAF6 and IRAK-1 invivo. (A) Interaction of TRAF6 with TIFA in 70Z pre-B cells.
Lysates prepared from 70Z cells with (+) or without (-) IL-1
stimulation (20 ng/ml, 5 min) were immunoprecipitated witheither anti-TIFA, control rabbit IgG or anti-TRAF6 antibody.
Immunoprecipitates were analyzed by Western blotting with
anti-TIFA, anti-IRAK and anti-TRAF6 antibodies. Lysates
prepared from HEK293T cells transfected with pME-TIFA
or control vector were analyzed on identical gels. Open andsolid arrowheads indicate the Ig light chain and non-specificbands, respectively. (B) IL-1 stimulation-dependent interactionof TIFA and IRAK-1 in MEF cells. Wild-type MEFs were infected with retrovirus expressing FLAG-TIFA or control virus.
Both types of MEFs were unstimulated (-) or stimulated (+)
with IL-1 (20 ng/ml, 5 min). Anti-FLAG antibody immunoprecipitates were analyzed by Western blotting with anti-IRAK
antibody. Solid arrowhead indicates Ig light chain. Lysates
were also subjected to immunoblotting directly to analyze
IRAK-1 expression.

− 90 −

毛包、汗腺、皮脂腺など皮膚附属器官の形成に関わる細胞内シグナル伝達経路の解明を避けるためウイルス量を低く設定した。その結果内在性

４．考FLAG-TIFA の発現は内在性 TIFA の約３倍であり、無察

刺 激 時 の NFκB や JNK の 活 性 化 も 起 こ っ て お ら す、

これらの結果から IL-1 刺激において TRAF6 と結合しFLAG-TIFA を内在性 TIFA と考えて実験を進めて良いてシグナル伝達に関与する分子 TIFA を同定できたと考と判断した。IL-1 刺激有無において TIFA を免疫沈降しえる。また、IL-1 と同様に IRAK-1 や TRAF6 が関与する

共沈してくる IRAK-1 を調べたところ、両者は無刺激時にTLR シグナルにおいても TIFA が関与することが十分には結合しておらず、刺激依存的に結合することが明らかと考えられる。実際、TIFA-DN は TLR4 による NFκB 活性

なった（Fig. 5B）。さらに TIFA と共沈する IRAK-1 がリ化を抑制する。また、内在性 TIFA が恒常的に TRAF6

ン酸化 IRAK-1 であることから、IRAK-1 が刺激により受と結合していることから皮膚附属器形成に関与する

容体複合体にリクルートされた後に複合体から解離してきEDAR, XEDAR, TROY などのシグナルに TIFA が関与す

た IRAK-1 が TIFA と結合すると考えられた。IRAK-1 はる可能性も十分に考えられ現在解析中である。

IRAK-4 によりリン酸化されるともに複合体から解離しTRAF6 と結合すると考えられている 19）。

毛包、汗腺及び皮脂腺などの皮膚から派生する皮膚付属器は、外胚葉由来の表皮の細胞と中胚葉由来の真皮との細胞とのシグナルの相互のやり取りによって形成される。近3.4 NFκB 活性化における TIFA/IRAK-1/TRAF6 の
位置関係

年、皮膚付属器形成に必須な細胞間や細胞内シグナル伝達

さらに NFκB 活性化シグナルにおける TIFA/IRAK-1/

機構は今だ不明な点が多い。また発生学的な観点とは別

TRAF6 の位置関係を確認するためドミナントネガティブに、臨床的にも、毛髪を喪失した患者、火傷などで皮膚を変異体（DN）として機能する G50ES66A 変異体の NFκB

失った患者、あるいは遺伝的疾患で皮膚付属器に欠陥が存活性化に与える影響を NFκB- ルシフェラーゼリポーター

在する患者などにおいて皮膚付属器を再生することは、患

プラスミドを用いて行った。IL-1 受容体、TLR4 による者の日常生活の QOL（Quality of Life）を高める意味で重NFκB 活性化は TIFA-DN により抑制されたが TNFα に要である。前述にように皮膚付属器形成に TRAF6 を介す

よる NFκB 活性化には影響がなかった（Fig. 6A）。TNFα

るシグナルが必須である。また最近、毛包原基形成のかなのシグナルには TRAF6 が関与しないことからこの結果はり 初 期 の 段 階 で TNF 受 容 体 フ ァ ミ リ ー で あ る

TIFA が TRAF6 特異的に働くことを強く示唆するもので

EDAR → TRAF6 シグナルが働いていることを見い出しある。次に TRAF6 の上流で働く MyD88, IRAK-1 によるた 20）。即ち表皮細胞における TRAF6 シグナルは皮膚付

NFκB 活 性 化 は 抑 制 さ れ た が、TRAF6 の 下 流 で 働 く

属器形成におけるキーポイントであり、TRAF6 の活性化

TAK1 による NFκB 活性化は抑制されなかった（Fig. 6B）。

を人工的に制御することにより皮膚付属器の人為的形成

これは「TIFA が IRAK-1 と TRAF6 の間で働く」という（再生）を可能にすると考えられる。本研究から明らかに考 え を 指 示 す る も の で あ る。 と こ ろ が TRAF6 に よ る

なったように TIFA は TRAF6 の活性化因子と考えられ

NFκB 活性化は TIFA-DN によりさらに活性化されてしま

しかもタンパク質としては分子量が小さい。従って、もしった（Fig. 6C）。これはおそらく TRAF6 がある程度活性

適当な方法で TIFA タンパク質を皮膚細胞内に導入でき化されていると TIFA-DN である G50ES66A 変異体でもるならば毛包や汗腺の人為的な形成も可能になると考えら

TRAF6 結合能と自己集合能があるため TRAF6 をさらにれる。従来活性化型 β-catenin の発現による毛包形成が報活性化できると考えられる。従って、「TIFA が IRAK-1

告されているが、そのあとにそこから腫瘍が発生していと TRAF6 の間で働く」という考えに特に矛盾しないと考る。本申請では TRAF6 シグナルを適時 OFF にすることえられる。次に TIFA のよる NFκB 活性化に他のシグナにより腫瘍発生の抑制を実現し得る可能性もあり、検討す

ル伝達因子の DN がどのような影響を及ぼすかを解析しる価値が十分に存在すると考えられる。また、化粧品におた。MyD88-DN は何も影響を与えなかったが、TRAF6-

いては特に皮膚に悪影響を与えるものは避けなければなら

DN, TAK1-DN, Ubc13-DN は TIFA のよる NFκB 活性化ない。例えば、それが TIFA/TRAF6 経路を活性化してを抑制した。また TIFA の上流と思われる IRAK-1 の DN

しまう作用があれば、毛包形成が起こり毛深くなってしまも抑制した（Fig. 6D, E）。たとえ上流であっても TIFA

う可能性も考えられる。従って、今後開発された化粧品にの活性化に必要なプロセス（例えば３量体形成）を IRAK-

ついて TIFA/TRAF6 経路に何らかの影響を与えないか

1-DN が抑制することは考えられる。従っていずれの結果チェックすることが必要かもしれない。

に関わるタンパク質が同定されているが、その詳細な分子も「TIFA が IRAK-1 と TRAF6 の間で働く」という考えを指示するものである（Fig. 6C）。

− 91 −

Figure 6
TIFA functions upstream of TRAF6 and downstream of IRAK-1. (A) HEK293T cells or HepG2 cells
were transfected with 3xκB-luc and increasing amounts (0, 3 or 10 µg) of pME-GST-G50ES66A. Thirty
hours after transfection, cells were either stimulated with TNFα(10 ng/ml, HEK293T) or IL-1 (20 ng/ml,
HepG2) for 6 hr. (B, C) HEK293T cells were transfected with an expression plasmid encoding one of the
NFκB activators including MyD88, IRAK-1, TAK1/TAB1 or TRAF6 in the presence of increasing amounts(0, 3 or 10 µg) of pME-GST-G50ES66A. (D, E) HEK293T cells were transfected with 0.1 µg of pME-TIFA
in the absence or presence of expression vector encoding MyD88(152-296), IRAK-1(1-211), TRAF6(275530), TAK1(K63W) or Ubc13(C87A). Thirty-six hours after transfection, luciferase activity was measured.
Relative values in which the fold activation in the absence of each dominant-negative mutant was set to
100 (A, B, D, E) or in which the luciferase activity with reporter alone was set to 1 (C) are shown. Results
shown are the mean ± sd of triplicate experiments and are representative of two independent experiments.
(F) hypothesis of the TIFA-mediated signal pathways.

− 92 −

毛包、汗腺、皮脂腺など皮膚附属器官の形成に関わる細胞内シグナル伝達経路の解明（引用文献）

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− 93 −

Dermatol, 119, 632-638, 2002.

皮膚における生体リズムの分子機構
神戸大学大学院

医学系研究科脳科学講座分子脳科学分野

岡

村

均

Most organisms living on earth have an internal clock and thus circadian rhythm represent a basic feature of life. In
mammals, as in other many organisms, cellular circadian core oscillator is thought to be composed of an autoregulatorytranscription-(post)translation-based feedback loop involving a set of clock genes. Although master clock of the bodywas localized in the suprachiasmatic nucleus of the brain, the molecular core clock oscillatory loop is known to exist
in most of the cells in the body including skin. Here we investigated the expression of mPer1 and mPer2 genes in theskin, and found that skin keratinocytes and fibroblasts rhythmically expressed mPer1 and mPer2 genes. Clock signals
were transmitted from the SCN to peripheral tissues through oscillation conducting systems, in which corticosterone
and adrenergic signals may play the important part. Arrived clock signals entrain the cell-clock in the skin, and theintracellular oscillating loop coordinates the timing of the expression of a variety of genes with specific cellular function.

１．緒

言

２．実

験

自転する地球の環境変動に適応するため地球上の生命が

２．１ マウス皮膚における時計遺伝子の発現のサーカディアンリズム獲得した基本的な生命原理である。この体内時計を司る、

時計遺伝子 mPer1, mPer2 の皮膚における日周変動を、長らく嘱望されていた哺乳類時計遺伝子 clock, mPer1 が、

ノーザンブロットにて４時間毎、12 時間明・12 時間暗の我々を含む複数グループにより、1990 年代後半に発見さ明暗条件下で検索した。次に、これらの変化が、光刺激にれたのをきっかけに、哺乳類リズム研究は全く新しい局面

よるものか、内因性リズムによるものかを判別するため、を迎え急速に仕事が進んでいる。

恒常暗条件下で検索した。

体内時計（生物時計 biological clock）は 24 時間周期で今回着目するのは、皮膚における時計遺伝子の発現であ以外の皮膚を含む末梢臓器に時計遺伝子がリズミックに発

２．２ マウス皮膚における時計遺伝子の発現のミク
ロ的解析

現することが注目された。今回、この分子メカニズムを解哺乳類 mPer2 遺伝子の産物である mPER2 蛋白質に対明する。この末梢臓器における時計機構の発見により、体する特異的抗血清を用いて、マウス皮膚における時計蛋白

内の 24 時間リズムは、視床下部の視交叉上核を頂点とし、発現のサーカディアンリズムを検索した。

る。時計遺伝子の発見とともに体内時計のある視交叉上核

他の神経系や内分泌系を中間とし、末梢臓器を底辺とする
階層的時計機構により精妙に制御されていると想定されて２．３

時計遺伝子の転写制御機構いる。従来より、皮膚の代謝・血管・運動・立毛・発汗・時計遺伝子の発振機構で注目されるのは、転写から行動

細胞分裂像が日内リズムを呈する事は知られているが、体まで、地球上の生物で共通する法則があることである。そ系的に検索はされていない。今回我々は、正常マウスにおれは、時計遺伝子が転写・翻訳後産生された時計蛋白質

ける時計遺伝子の日内リズムを検索し、皮膚のサーカディ

が、自分自身の転写制御を抑制するというオートフィー

アンリズムと活動の相関を検索した。

ドバックループによる発振分子機構である。哺乳類では、
コア振動体を構成する発振の中心となる振動子は、mPer1と mPer2 の２つの遺伝子である。mPer1、mPer2 の転写によって産生された mPer1 mRNA, mPer2 mRNA から、

Molecular Mechanisms of Biological
Clocks in the Skin
Hitoshi Okamura
Division of Molecular Brain Science,
Department of Brain Sciences, Kobe
University Graduate School of Medicine.

PER1 蛋白質、PER2 蛋白質ができる。これが、細胞質から核の中へ入って CRY 蛋白と結合して、ポジティブ因子の転写を押さえる。これでループが閉じ、転写減少に続く
PER1、PER2 蛋白減少にともなう抑制効果の減少により、
mPer1,mPer2 時計遺伝子の転写が再開される１）。mPer1 の５つの E-box（CACGTG, CACGTT）を介する転写制御
を、bHLH-PAS 蛋白である CLOCK と BMAL1、CRY1、− 94 −

皮膚における生体リズムの分子機構

CRY2 を用いて検索し、DBP 結合部位（D-box: RTTAY-

約 24 時間の時計遺伝子の振動が認められるという事実を発

GTAAY (R: purine 、Y: pyrimidine)）の PAR 蛋白質群

見した３）。このリズムは１）、mPer1 mRNA, mPer2 mRNA

（HLF, TEF, DBP）と転写抑制因子である E4BP4 との結と PER1 蛋白質、PER2 蛋白質の発現差異が４−８時間あ-/-/ること２）、Cr y1 Cr y2 のダブルノックアウトマウスがリ合解析を行った。

ズム消失すること、Cry1 が短周期を示すこと、Cry2
-/-

-/-

が

２．４ 時計遺伝子の転写制御と時計蛋白質 PER2 の細胞内での時間的・空間的位置変化

長周期を示すことなど、行動リズムと全く同じ変異を示し

時計遺伝子の単純なフィードバックループにさらに、蛋で、末梢臓器の時計も視交叉上核と同じ完全なサーカディ

白質レベルの修飾が加わり、24 時間リズムができると考た。行動リズムの性質は視交叉上核で完全に決定されるのアン時計があるといえる。

えられる。まず初めは、リン酸化による分解制御である。

次に、この末梢時計が自律的なリズムを持つかどうか決

まず、できた PER1, PER2 蛋白質モノマーは、細胞質中に定するため、視交叉上核を電気凝固の方法で破壊した後の、存在する caseine kinase Iε（CKIε）によりリン酸化され末梢臓器の末梢時計の時計遺伝子の発現リズムを経時的に

２）

免疫組織化学とノーザンブロットにて検索した。

、リン酸化された PER1, PER2 は分解される。時計蛋白

質 PER1, PER2 の分解に、ユビキチン・プロテアソームが３．結関与しているかどうかを検索した。

２．５ 視交叉上核の中枢時計が末梢臓器の末梢時計に与える影響果

３．１ マウス皮膚における時計遺伝子の発現のサーカディアンリズム
時計遺伝子 mPer1, mPer2 の皮膚における日周変動を、

視交叉上核では mPer1, mPer2 を中心とする分子時計がノーザンブロットにて４時間毎、12 時間明・12 時間暗の昼をピークとする発現振動を起こし、これが全身のリズム

明暗条件下で検索すると、著明な昼夜差が認められた。次を引き起こすと考えられている（図１）。 1998 年 Schiblerに、これらの変化が、光刺激によるものか、内因性リズムのグループは rat1 線維芽細胞系に血清刺激を加えると、によるものかを判別するため、恒常暗条件下で検索しても、

図１

哺乳類における時計のコア・ループ
時計遺伝子群の E-box に CLOCK/BMAL1 のヘテロ二量体が結合し、mPer1, mPer2 転写を促進する。
mPER1, mPER2 はカゼインキナーゼ Iε (CKIε) によるリン酸化を受けた後分解されるため、蓄積するのに時間がかかる。核・細胞質にはシャトリング機構があり、これも PER2 の核内移行に時間をかからせる原因である。核内では、PER2, CRY1, CRY2 抑制性の複合体が CLOCK/BMAL1 による転写の活性化を解除し、自分自身（時計遺伝子群）の転写を抑制することによりループが取れる。この繰り返しが約 24 時間の周期を作り出す。

− 95 −

著明な昼夜差が認められた（図２）。この結果は、皮膚にも内因性リズムが存在すること、時計のコア・ループによる発振が行われていることを示唆する。

３．２ マウス皮膚における時計遺伝子の発現のミク
ロ的解析
哺乳類時計遺伝子の中でリズム発振に最も重要な遺伝子

図２

皮膚の mPer2 mRNA 発現の昼夜差
恒常暗条件で、CT4（体内時計の朝）、CT12（体内時計の夕刻）、CT16（体内時計の夜半）の時期での皮膚 mPer2
mRNA のノーザンブロットによる検出。

と目される mPer2 遺伝子の産物である mPER2 蛋白質に対する特異的抗血清を用いて、皮膚におけるサーカディア
ンリズムを検索した。ケラチノサイトに時計遺伝子が体内時計の夜の時間に強く発現していることを見出した。これは、上記のノーザンブロットの結果とよく一致して、転写証明した５）。この NLS-NES によるシャトリング機構によの増大は、時計蛋白の増大を引き起こすことを示している。

り PER1, PER2 蛋白質の核内濃度は調節される。
この核—細胞質間の平衡状態を打ち破るのが、核蛋白３．
３

時計遺伝子の転写制御機構

CRY1, CRY2 である。CRY1,CRY2 の核内出現は厳密に時

mPer1, mPer2 の 転 写 は、bHLH-PAS 蛋 白 で あ る

間によりコントロールされているが、これが核内に多量にCLOCK と BMAL1 のヘテロダイマーが mPer1, mPer2 のなると、PER2 と結合し、安定な PER2-CRY1 及び PER2-

プロモーターの E-box にポジティブ因子として結合してCRY2 複合体を形成し、これがポジティブ因子に結合して促進される（図１）。また mPer1 プロモーターには、転写引き剥がし、Per1, Per2 の転写を阻害する。これで時計発促進因子である PAR 蛋白質群（HLF, TEF, DBP）と転写

振のフィードバックループが閉じると考えられる。この抑制因子である E4BP4 があり、D-box での競合制御が重PER2, CRY1, CRY2 による抑制を解除するのが、ユビキチ要である。PAR 蛋白質は昼間に発現し転写を促進するが、ン・プロテアゾームによる分解である。この抑制因子の分４）

E4BP4 は夜に発現し、転写を抑制した 。

解により、転写は再開される。

３．４ 時計遺伝子の転写制御と時計蛋白質 PER2 の細胞内での時間的・空間的位置変化

３．５ 視交叉上核の中枢時計が末梢臓器の末梢時計に与える影響PER1, PER2 の 蛋 白 質 分 解 は、MG132 で 抑 制 さ れ、

全身のマスター時計は脳の視交叉上核にある。最近我々

MG132 で処理した PER2 はユビキチン化されていた。従は、Per1 プロモーター・ルシフェラーゼ（mPer1-luc）をって、PER2 分解にはユビキチン・プロテアソームが関与

導入したトランスジェニックマウスを開発し、細胞組織レ５）していると想定される 。従って、転写のはじめの段階でベルで mPer1 の転写発現を可視化することで長時間リア

は、RNA はできても、蛋白質は次々に分解されて、いっ

ルタイムで観察することに成功した７、８）。この mPer1-luc

こうに貯まらないという状態が続く（図３）。ところが、から取った視交叉上核のスライス培養系を極微弱光検出冷

mPer1, mPer2 の転写は刻々と増大し、PER1, PER2 蛋白

却 CCD カメラにて観察することにより、細胞一個一個の質もたくさんできてくると、CKIε は一日中一定であるのリズムを観察することが可能となった８）。この結果、驚く

で、蛋白質をリン酸化し分解しきれない状態となる。リン

べきことに、視交叉上核の一つ一つは独立した細胞時計で酸化が時計ループの周期を決定する重要な過程であるこあり、各々のリズム位相は微妙に違い、最大では 10 時間とはヒトでも示されている。最近米国の家系調査により、ものピーク位相の格差が存在する。お互いの細胞時計は連PER2 のリン酸化の障害を示す家系が、体内時計の周期が絡しており、全体は絶妙なハーモニーを奏でて視交叉上核

短いことで、時計遺伝子の転写フィードバックループの存の強力な振動を生み出すことが明らかとなった。このよう

６）

在とリン酸化反応の重要性が劇的に証明された 。

な検出システムは、細胞内の遺伝子振動がいかにしてトー分解されなかった PER1 と PER2 は、PER3 等とダイマタルとしての脳・生体機能である行動にまで至るかを解析ー形成し、自身の NLS（nuclear localization signal）を利する有力な実験系として、今後末梢組織のサーカディアン

用して、核内に移行する。ここで、第二の抑制遅延機構がリズムの研究に広く用いられて行くであろう。

存在する。それは、PER2 蛋白内の NES（nuclear export

末梢組織では、血管平滑筋の時計遺伝子が非常に大きい

sequence）による制御であり、核内から細胞外に PER2

振幅を持って振動すること９）、線維芽細胞でもペプチド刺

蛋白は排出される。このシャトリングは mPER2（1-916）

激により時計遺伝子の 24 時間周期のリズムが数周期惹起

GFP を発現する NIH3T3 細胞と Hela 細胞の細胞融合系でされた 10）。従来リズム発振機能が全く無いとされてきた− 96 −

皮膚における生体リズムの分子機構

図３

哺乳類におけるコア・ループを構成する時計蛋白質の分解
コアループの抑制機構を司る PER1, PER2, CRY1, CRY2 はユビキチン化されプロテアソーム
により分解され、再びフリーとなった CLOCK/BMAL1 が E-box に再結合し、転写が再開する。

肝臓や胃腸などの末梢臓器にも、食餌に同調する、基本的
11）細胞時計として働き、さまざまな細胞内プロセスに時刻シ。では、視交叉上核とグナルを伝達する。時計シグナルにより転写レベルで制同様、末梢臓器の時計は自律発振能を持っているのであろ

御されている遺伝子を被時計制御遺伝子 clock controlled

うか？最近、リズム異常の線維芽細胞を正常の個体に移植

genes（ccg）と総称しているが、この ccg が想定されてしてこの線維芽細胞の時計遺伝子発現を検索すると、正常いるよりもはるかに多く、少なくとも数百の遺伝子にのぼな時計発振機構が備わっているのリズムを示すことがわかった

12）。これは、末梢臓器のることは、最近のジーンチップ解析から明らかとなった

時計は自律振動能が弱く、中枢時計の支配下にあることを13）示している。今回、視交叉上核を破壊したマウスでは、末ムを引き起こす最初の機序は、やはり BMAL/CLOCK の梢臓器のリズムは消失していた。

E-box への結合だと考えられている。

４．考。このコア・ループのシグナルが、これら遺伝子のリズ

CLOCK/BMAL1 ヘテロダイマーは vasopressin、dbp

察など多くの遺伝子が持つプロモーターの部位にある E-box

皮膚における発汗、皮膚血流、表皮細胞分裂など、さまに結合し、転写を増大させる。また、先ほど述べた、転ざまな皮膚組織で起こる現象に概日リズムがあることがわ

写促進因子である PAR 蛋白質群（HLF, TEF, DBP）とかっているが、その詳細は未だ検索されていない。前記し転写抑制因子である E4BP4 との DBP-bs での競合制御もたように、この数年間で生体リズムの分子機構が次々に解重要である。PAR 蛋白質は昼間に発現し転写を促進する

明されつつあり、時計遺伝子の発振シグナルが、コレステ

が、E4BP4 は夜に発現し、転写を抑制する４）。これにより、ロール合成酵素、アルブミン産生、各種ミトコンドリア酵

アルブミン、cholesterol 7α hydroxylase、ドーパ脱炭酸

素など生体機能のベーシックな遺伝子の転写をコントロー

酵素などの遺伝子が転写制御されると考えられる。夜に発ルすることが知られている。

現する多くの遺伝子は抑制性の転写因子 RevErbα によっ皮膚組織は、ケラチノサイトを中心とした表皮、線維芽て引き起こされる。

細胞が主たる真皮、血管・神経の豊富な疎な結合組織であ多細胞生物において、非常に分化した多種類の細胞に時る皮下組織よりなる。今回の検索で皮膚組織もサーカディ

計機能が存在することは、その細胞に特殊化した機能にリアン振動体を持つことがわかった。細胞内のコア振動体はズムがあることが想定される。ケラチノサイトでにおいて− 97 −

も各種酵素の発現の日内リズムはあるであろう。エネルギ

５） Yagita K, Tamanini F, Yasuda M et al.: Nucleocyto-

ー代謝、膜蛋白の機能、さらに細胞周期のコントロールな

plasmic shuttling and mCRY dependent inhibition of

ど多くの必須の細胞機能に時計シグナルは利用されている

ubiquitination of the mPER2 clock protein.   EMBO J.,と考えられる。

21, 1301-1314, 2002.

皮膚の細胞種のうち、どれがもっとも時計遺伝子の発振

６） Toh KL, Jones CR, He Y, et al.,: An hPer2 phosphor-がなされているのかは、非常に重要な問題である。この解

ylation site mutation in familial advanced sleep phase

明により、皮膚の粘性、湿潤など、時間特異的な化粧品のsyndrome. Science, 291, 1040-1043, 2001.

開発が可能になるかもしれない。また、細胞増殖の時期や

７） Asai M, Yamaguchi S, Isejima H, et al.,: Visualization

その制御因子がわかれば、紫外線などによる皮膚の障害に

of mPer1 transcription in vitro by luciferase mediated「時間特異的に」防護できる新しい方法が可能になるのか

bioluminescence: NMDA induces a rapid phase-shift ofもしれない。リズム遺伝子が高いときは効率的な代謝変動

mPer1 gene in cultured SCN. Curr. Biol., 11, 1524-1527,
2001.

になり、リズム遺伝子が低いときは非効率となる。したがって、時計遺伝子の転写変動が滞ると、代謝が低下し、細８） Yamaguchi S, Isejima H, Matsuo T, et al.,: Synchro-

胞ダメージが増大する。従って、ストレスなどによるリズ

nization of cellular clocks in the suprachiasmatic nucle-

ムの乱れが、代謝の滞りを引き起こし、細胞障害を急速に

us. Science, 302, 1408-1412, 2003.

増大する可能性が高い。これを防止する化粧品の開発が可

９） Nonaka, H., Emoto N., Ikeda K., et al.,: Angiotensin
II induces circadian gene expression of clock genes in

能かもしれない。

cultured vascular smooth muscle cells. Circulation, 104,（文献）1746-1748, 2001.

１） Okamura H, Yamaguchi S and Yagita K,: Molecular10) Yagita K, Tamanini F, van der Horst GTJ, et al.: Mo-

machinery of the circadian clock in mammals. Cell Tis-

lecular mechanisms of the biological clock in cultured

sue Res., 309: 47-56, 2002.

fibroblasts.  Science, 292, 278-292, 2001.

２） Lowrey PL, Shimomura K, Antoch MP, et al,: Posi-

11) Hara R, Wan K, Wakamatsu H, et al.: Restricted feed-tional syntenic cloning and functional characterizationing entrains circadian clock in the mouse liver withoutof the mammalian circadian mutation tau. Science, 288,

participation of suprachiasmatic nucleus. Genes Cells,
6, 269-278, 2001.

483-492, 2000.
３） Balsalobre A, Damiola F, Schibler U,: A serum shock

12) Pando MP, Morse D, Cermakian N, et al., : Phenotypic

induces circadian gene expression in mammalian tissue

rescue of a peripheral clock genetic defect via SCN hi-

culture cells. Cell, 93, 929-937, 1998.

erarchical dominance. Cell, 110, 107-117, 2002.

４） Mitsui S, Yamaguchi S, Matsuo T, et al.: Antagonis-

13) Panda S, Antoch MP, Miller BH, et al.,: Coordinatedtic role of E4BP4 and PAR proteins in the circadian os-transcription of key pathways in the mouse by the cir-cillatory mechanism. Genes Develop. 15, 995-1006, 2001.

cadian clock. Cell, 109, 307-320, 2002.

− 98 −

トリクロロ酢酸とフェノールの生体におよぼす安全性に関する研究

古川

和歌山県立医科大学

皮膚科

福

本

実、山

有

紀

Chemical peeling is one of dermatological treatments for certain cutaneous diseases or conditions or aesthetic
improvement; it consists of the application of one or more chemical exfoliating agents to the skin. Recently inJapan, chemical peeling has been very popular in medical as well as aesthetic treatment. Because the scientificbackground and an adequate approach are not completely understood or established, medical and social problems
have been reported. To address these issues, we evaluated the chemical peeling agents such as phenol andtrichloroacetic acid (TCA).  The studies of human skins revealed that topical treatment of phenol induced deeper
degeneration of the skin than that of 40-60% TCA. Under the careful monitoring and examinations, such agents had
little damages to the skins. In addition, when compared with standard surgical therapy and some of non-invasive
therapies, the chemical peeling therapy by phenol and TCA have several advantages such as easy procedures,
non time-wasting, no requirements of special equipments, easy control of pain and easy post-treatment follow-up.  
Phenol and/or TCA peeling will be a new tool for the aged patients with skin tumors, although the careful followup will be needed to determine the ratio of recurrence and appropriate intervals of peeling.

１．緒

言

表1

ケミカルピーリング適応疾患＋状態

ケミカルピーリングは、いわゆる、しみ、しわ、色素沈
着、にきびなどに広く用いられている美容皮膚科の標準的な手技である（表１）。皮膚科医、形成外科医、美容関係の医師によって、年々普及している。その基本は、創傷治
癒機転による皮膚の再生が主なものであり、皮膚科学に立脚した施術がなされなければならない。美容的な側面のみが注目されるためか、ケミカルピーリングが安易に行われる傾向にある。このような観点から、日本皮膚科学会ケミ
カルピーリングに関するガイドラインが作成された１）。しかし、その評価や皮膚科学に立脚した学問的裏付けは未だ十分でなく多くの解決すべき問題が存在する。
ケミカルピーリングは、皮膚（肌）の性状によって、その効果は全く異なってくる。振り返って、日本人の皮膚による発表を調べるに、研究成果に見るべきものはほとんどない。多くが、欧米の知見をそのまま採用しているに過ぎ無いのが現状である。また、2002 年の日本皮膚科学会では、ない。一方、マウスを用いた研究は、サリチル酸のヘアレ

マウスを用いた実験からケミカルピーリングに頻用される

スマウス皮膚への影響に関する優れた論文が Ueda らによ

TCA の発癌性が指摘された４）。

って発表されている２）。また、培養細胞を用いた検討も、われわれは、２年半前より、さまざまな理由で手術できグリコール酸に関し国内外から幾つか論文が発表されてない患者の治療方法のひとつとして、TCA やフェノールいる３）。しかし、ヒト皮膚に関する長期的あるいは短期的を用いたケミカルピーリングを行っている５）。このような観察の報告は、とりわけトリクロロ酢酸（trichloroacetic

経緯の中でヒト皮膚を用いた研究も行ってきたので、そのacid：TCA）とフェノールに関しては、信頼すべきものが一部を紹介する。

Studies on the safety of agents forchemical peeling

２．実験と結果

Fukumi Furukawa, Yuki Yamamoto

組織学的検討Department of Dermatology, Wakayama
Medical Universityある６）。この中で、しばしば用いられるのがグリコール酸、＊

ケミカルピーリングに用いられる試薬は、表２の如くでサリチル酸、TCA、フェノール等である。これらの試薬＊がどのようにヒト皮膚に組織障害を与えるかは、十分には− 99 −

表2

ケミカルピーリングの使用薬剤例

表3

剥離深度と使用薬剤例

分かってはいない。グリコール酸はレベルⅠ、TCA、フェノールは主にレベルⅡ、Ⅲの深達度の組織障害をしめす（表３）。なお、実験方法の詳細は、原著に譲る７- ９）。本研
究は本学の倫理委員会で承認されている。

グリコール酸ピーリングに一番よく使われているグリコール酸には、①急性バリア障害と②グリコール酸自体の作用がある。①は表皮角化細胞に IL-1α、表皮基底層の分裂、表皮肥厚、真皮肥厚やコラーゲンの増生、ヒアルロン酸の増生、角層のヒアルロン酸の増生を促す。②は線維芽細胞への直接作用があり、チロシナーゼの活性を抑制する。塗布に際して

図１

グリコール酸塗布後の皮膚の組織学的変化（ HE 染色）
成人上腕内側の健常皮膚に塗布。グリコール酸は 50％とし、塗布１，５，10 分後に生検。左は pH0.9 右は pH2.5に調整した試薬による変化を示した。

は、濃度、pH、塗布時間、塗布方法、塗布量、患者の皮膚の状態や部位がキーポイントとなる。塗布時間、塗布方
法、塗布量は個人の技量、経験に大きく依存する。また、濃度についても、ウェイト／ウェイト（Ｗ／Ｗ）とウェイ
ト／ボリューム（Ｗ／Ｖ）の二つの表記法があり、例えば濃度表示が同じでも塗布される試薬の絶対量は濃度が大きくなるにつれてその差異が大きくなる。
図１は 50％グリコール酸によるヒト皮膚の組織傷害である。pH0.9 と pH2.5 の試薬による、１分、５分、10 分後の所見を示している（左 pH0.9、右 pH2.5）。pH2.5 の 1 分後、
pH0.9 の 1、5、10 分後で、角層の配列の乱れが観察される。
その角層の変化は、HE 所見では反映されない表皮細胞の変性、あるいは当然その次に起こるサイトカインの変化を示唆する。
真皮（例えば５分後）では、pH0.9 は pH2.5 に比べ、真皮中層までに多数の apoptosis のマーカーである TUNEL

図２

TCA、フェノール塗布後２日、７日後の臨床像
成人上腕内側の健常皮膚に塗布。

陽性細胞を誘導することも分かっている。

特に真皮の血管内皮細胞の変性がフェノールで目立つ（図TCA とフェノール

３）
。７日目
（図３）
になると、
液体窒素や 40％の TCA では、

２日目と７日目の、TCA40％・60％とフェノールで起こった肉眼的変化を図２に示す。塗布後２日目の組織では、コントロールの液体窒素に比較して、表皮の変成が著明で、表皮の再生性の変化が観察されるが、60％ TCA やフェノールでは真皮の変成が主体となっている。
TUNEL 法で真皮の血管内皮細胞をみると、フェノール− 100 −

トリクロロ酢酸とフェノールの生体におよぼす安全性に関する研究

表４

図３

ケミカルピーリングによる皮膚腫瘍患者内視−和歌山県立医科大学皮膚科外来−

液体窒素、TCA、フェノール塗布後２日後の HE 組織像
表５

ケミカルピーリング（TCA とフェノール）による皮膚腫
瘍への効果

図４

液体窒素、TCA、フェノール塗布後７日後の HE 組織像

は TCA に比べて、早期にかつ深部に変性をもたらしてい

２）方法る。このような真皮での変化は血管内皮のみならず beta-

主に無水フェノールを用いているが、多量に使用した場

1 integrin や tenascin などの細胞接着分子の発現の変化を合に心毒性や腎毒性があるため、広範囲に治療が必要な場

７、８）。さらに、再生性変化が表皮に及んだ場合、合や表皮が薄いため浸透率が高いと推測される部位に対し

P-cadherin がユニークな発現を示すことも判明している９）。

ては、40％や 60％ TCA を使用している。TCA 液は蒸留

TCA の組織障害は経時的に表皮から真皮へと変成して

水 100ml にトリクロロ酢酸 40g あるいは、60g を溶解した

誘導する

いくが、フェノールは真皮の血管内皮細胞が表皮の変化にものである。

先行して変性が誘導される。この変性の違いが、何故生じ皮膚腫瘍に対するケミカルピーリングの試薬としては、るのかは不明であるが、下記に述べる腫瘍へのケミカルピ

前述した組織学的検索からフェノールが最も有効であるとーリング療法の基礎的背景として重要である。

考えている。部位により綿球、綿棒、爪楊枝などを用い、単純塗布を原法としているが、症例により重ね塗り等の工腫瘍へのケミカルピーリング療法の概要

夫をしている。

１）対象疾患2001 年１月より 200 ３年４月までに、当科で治療を行

３）結果ったのは計 42 人（男性 21 人、女性 21 人）で、平均年齢表４に示した症例の内、少なくとも１年以上の経過を観は 78 歳であった。日光角化症が 16 例と最も多く、ボーエ

察し得た 34 例のうち、CR(complete remission) を認めた

ン病 11 例、表在性基底細胞癌 10 例等となっている。この患者数とその平均塗布回数を示した（表５）。日光角化症、患者数は、同じ期間に同じ対象疾患で受信した患者（183

表在性基底細胞癌、ボーエン病では良好な成績を示してい名）の 23％を占める（表４）。尚、この治療は、本学の倫る。平均塗布回数は、疾患によって異なり、表在性基底細理委員会の許可を得ている。

胞癌、ボーエン病では７回以上の塗布が必要であった。し− 101 −かし、それぞれの疾患で組織学的に毛包に及んだり腫瘍病

Chemical peeling with salicylic acid in polyethylene

変が深い場合は PR（partial remission）や NC（no change）

glycol vehicle suppresses skin tumour development inが少数みられた。日光角化症では組織学的な異型性の程度もhairless mice. Br J Dermatol. 148:906-912、2003.

治療効果を予想するうえで重要で、最近、初診時の臨床像と３） Funasaka Y, Sato H, Usuki A, Ohashi A, Kotoya H,

生検像より TCA による非観血的治療での根治が可能と考え

Miyamoto K, Hillebrand GG, Ichihashi M: The efficacy

たが、結局根治に到らなかった日光角化症を経験した 10）。

of glycolic acid for treating wrinkles: analysis using

３．考

newly developed facial imaging systems equipped with察

fluorescent illumination. J Dermatol Sci. 27 Suppl 1:S53-

フェノールや TCA による治療は簡便であり、治療に伴59,2001.

う疼痛も、患者や治療部位にもよるが許容範囲内である。

４） 上田説子、磯田美登里、大日輝紀、古賀哲也、古江増隆：

また、凝固壊死となるために自宅での処置も不必要で、患TCA ピーリングへの警告、日本皮膚科学会雑誌 112：

者の日常の生活に支障をきたさない。手技的に熟練した場
合は、特に瘢痕を伴うようなざ瘡に対しても極めて有効性が高い。従って、日常診療で用いられる濃度・頻度で、な68、2002（抄録）５） 山本有紀：ケミカルピーリング、皮膚腫瘍、皮膚臨
床 44：42；1219 − 1223, 2002

おかつ皮膚の病態に精通している皮膚科専門医クラスの医

６） 古川師の管理下で施術されれば、安全性並びに有効性は高いと菊地判断される。

野

TCA はマウスの紫外線発癌の実験系で興味深い作用を
有する

11）

。即ち、コントロール（非塗布）に比べると皮福実、松永佳世子、伊藤正俊、上田

克子、戸佐
有紀、山本

真弓、船坂

陽子、宮崎

説子、

孝夫、久

有紀、岸岡亜紀子、北島康雄、古江増隆：日本皮膚科学会ケミカルピーリングガイドライン
2004、日本皮膚科学会雑誌 （印刷中）

膚腫瘍の発生は抑制されるが、塗布部と非塗布部の境界領

７） Yamamoto Y, Uede   K, Ueda   M, Furukawa F:

域にあっては、一見すると腫瘍発生が増加したような変化

Characterization of monoclonal anti-human skin basalが生じる。その機序は不明であるが、ヒト皮膚に TCA を

cell antibody 3B4-6 and its reactivity to the skin peeled

塗布すると細胞増生のマーカーである PCNA が表皮に増with phenol or trichloroacetic acid (TCA). Aesthet

加する。従って、TCA を塗布した場合、特に塗布回数がDermatol 12: 70-76

多い患者においては慎重な長期観察が必要である。

８） Yamamoto Y, Uede K, Yonei N, Kaminaka C,

フェノールや TCA によるケミカルピーリングは、それ

Furukawa F: Expression of tenascin and human

ぞれの試薬の浸透性に特徴があり、それらを踏まえて適正_ -1 i n t e g r i n i n t h e s k i n p e e l e d w i t h p h e n o l o rに使用すれば、安全性にも優れ、臨床的応用範囲が広いとtrichloroacetic acid. Aesthet Dermatol 13: 17-24, 2003

判断された。

９） Y a m a m o t o Y , U e d e K , O h t a n i T , W a k i t a W ,Furukawa F: P-cadherin expression in skin peeled with

（文献）

phenol or trichloroacetic acid (TCA). J Dermatol 30:

１） 古川福実、松永佳世子、上田節子、菊地克子、戸佐真弓、
船坂陽子、宮崎隆夫、藤沢有紀、山本有紀、飯塚一、伊920-923, 2003
10） 山本有紀、岸岡亜紀子、浜野理佐、古川福実：トリ

藤雅章、片山一郎、川島眞、塩原哲夫、島田眞路、中クロロ酢酸治療に抵抗性であった日光角化症の 1 例、日川秀巳、橋本公二、橋本隆、古江増隆（日本皮膚科学

本美容皮膚科学会雑誌会ケミカルピーリングに関する検討委員会）：日本皮膚13: 180-184, 2003

11） Dainichi T, Koga T, Furue M, Ueda S, Isoda

科学会ケミカルピーリングガイドライン 2001、日本皮M:Paradoxical effect of trichloroaceticacid( TCA) on

膚科学会雑誌

ultraviolet B-induced skin tumor formation. J Dermatol

111：2081-2085,

2001

２） Dainichi T, Ueda S, Isoda M, Koga T, Kinukawa

Sci 2003; 31:229-231

N, Nose Y, Ishii K, Amano S, Horii I, Furue M：− 102 −

リボザイムを用いた皮膚細胞新規老化遺伝子の単離と解析
筑波大学

柳

応用生物化学系

澤純

In the somatic cells of humans, the telomere repeats have been proposed to provide each cell with a counting mechanismthat helps prevent the unlimited proliferation of wayward cells in adult tissues. According to this idea, somatic cells are bornwith a full complement of telomeric repeats; howevwr, the telomerase enzyme, hTERT, is turned off in a tissue like theskin, so that each time a cell divides, it loses 50-100 nucleotides from each of its telomeres. After many cell generations, thedescendent cells will inherit defective chromosomes and consequently will withdraw permanently from the cell cycle andcease dividing-a process called replicative cell senescence. In theory, such a mechanism could provide a safeguard against theuncontrolled cell proliferation of abnormal cells in somatic tissues.
The idea that telomere length acts as a “measuring stick” to count cell division and thereby regulate the cell’ s life time
has been tested in several ways. For certain types of human cells grown in tissue culture, the experimental results support
the theory. However, the molecular mechanism of replicative cell senescence remains unknown. To investigate this process,we tried to identify new genes, those are involved in the process of replicative cell senescence by the method using ribozyme
library. In addition, we examined the transcriptional regulation of hTERT, a human telomerase enzyme. hTERT expression
is regulated by the methylation status of its promoter region. To express the TERT, the promoter region should be
hypermethylated. In contrast, in somatic cells, the promoter region of TERT is hypomethylated to inhibit the expression of
TERT gene. Therefore, we tried to examine the regulation mechanism for DNA methylation and demethylation.

１．緒ら細胞増殖抑制を制御する因子が細胞の老化に関与してい言ることが示唆される。増殖抑制に関わる因子の多くは癌抑ヒト正常体細胞を培養すると無限には分裂できず、分列制因子として知られており、p53 や p21 のように老化関連

可能回数には限界がある。これを体細胞の有限分裂寿命、因子・癌抑制因子両方の因子として機能しているものも知または発見者の名をとって Hayflick の分裂限界と呼んでられている。そこで新規癌抑制遺伝子を探索するとともにいる。“細胞の老化” とはこの分裂限界に近づくその過程

これらの遺伝子と老化との関連を解析する。

のことをいい、ヒトでは細胞分裂回数が 50 〜 70 回と決ま

テロメアの長さは、テロメラーゼ（hTERT）と呼ばれるった範囲内で停止する。この分裂寿命は細胞自身の持つテロ酵素によって調節を受けている。HTERT は germ cell と

メア短縮という現象と関連が深いことが明らかになっている。

stem cell において発現が認められ、normal somatic cell でテロメアとは染色体の両末端に存在する部分で６塩基は発現が見られない。HTERT 遺伝子の normal somatic（− TAAGGG −）の反復配列からなる 12kbp（ヒト）のcell での発現は、テロメアの伸長による細胞の不死化とそ

塩基配列からなる。DNA 複製の際に約 50 〜 150bp ずつれに引き続く癌化を引き起こす可能性がある。したがって、短縮していき、テロメアサイズが 5000bp に近づくと増殖

TERT 遺伝子の発現調節は極めて厳密に行なわれなくては停止機能を持つ CDK inhibitor 遺伝子ファミリーなどの遺ならない。近年、hTERT 遺伝子の発現調節に TERT 遺伝

伝子群の発現が上昇することにより、細胞増殖を停止する。

子プロモーター上の DNA メチル化状態が関与することがこのようにテロメア短縮、それに伴う CDK inhibitor 遺報告された。ゲノム DNA の CpG シトシンのメチル化修飾

伝子ファミリーの発現と細胞の分裂停止には相関関係があは哺乳類や植物などで広く認められる。DNA のメチル化ると推測されるが、その分子機構については未だ不明のま修飾は遺伝子発現を調節するエピジェネティクス機構の一まである。本研究では未だ明らかにされていない細胞老化

つとして知られており、遺伝子の転写抑制やへテロクロマの分子機構の解明を目的とし、老化を規定する新規の因子

チン形成を介して、初期発生や分化・X 染色体の不活性化・の同定を試みる。老化に伴い細胞増殖が抑制されることか

インプリンティングなど様々な生命現象に関わっていると

Molecular cloning of novel genes involvedin the aging
Jun Yanagisawa
Institute of Applied Biochemistry,
Tsukuba University

考えられている。また、多くの腫瘍でメチル化異常は癌抑制遺伝子を不活性化したり、ゲノムの不安定化を助長することが知られている。ゲノムのメチル化シトシンは脱アミノ反応で値チミンに変化しやすく、この結果生じた T-G ミ
スマッチが修復されないと、様々な疾患を引き起こす。
現在、DNA メチル化はメチル化維持活性をもつ Dnmt1と de novo メチル化活性をもつ Dnmt3a および Dnmt3b に− 103 −

よって調節されていると考えられている。一方、DNA 脱

チル化・脱メチル化は、シトシン残基に起こり、hTERT

メチル化はその現象は捕らえられているものの、制御機構

のみならず、多くのプロモーター活性を制御し、転写の活についてはほとんど明らかになっていないが、受動的脱メ

性化・不活化において重要な役割を担っているものと考え

チル化と能動的脱メチル化機構があると考えられている。

られているが、その分子機構についてはほとんど明らかに

受動的脱メチル化とは、DNA 複製後の新規の DNA 鎖になっていないのが現状である。そこで、今回はとくに不明

メチル化がおこらずに維持されることである。能動的脱メな点が多い DNA の脱メチル化機構に焦点をあて、その解チル化とは、複製に依存せずに酵素などの働きによってメ析を行なうこととし、まず、DNA 脱メチル化が認められチル基が外れることである。

る細胞株を探索することとした。

また、メチル化 DNA に特異的に結合するタンパクの存在も明らかになった。現在、MeCP2・MBD1・MBD2・

２．２．１

ヒト IL-2 遺伝子の刺激による脱メチル化誘導

MBD3・MBD4 の５種類が知られており、主に DNA メチ

2003 年３月にマウス T リンパ球では IL-2 遺伝子プロモル化とヒストンの修飾やクロマチンとの相互作用を仲介しーターが刺激により脱メチル化し、IL-2 の分泌が高まるとている。MBD4 は T-G ミスマッチに対するグリコシラー

報告された。（nature immunology, 4,235,2003）この脱メ

ゼ活性をもち、その他は転写抑制に働くと考えられている。

チル化反応は 20min で生じ、複製に関わらず脱メチル化

そして、これらメチル化 DNA 結合タンパクの異常が遺伝することも明らかとなった。そこで、我々は T リンパ球系の細病や腫瘍で認められている。

胞株である Jurkat 細胞を用いて、脱メチル化が誘導されこのように、DNA メチル化脱メチル化がさまざまな生

るか否か検討した。Jurkat 細胞株に PMA（Phorbol-12-

命現象に関わり、また、疾患の原因にもなりうることが明Myristate-13-acetate）20ng/ml および Ca-ionophore1_M

らかとなってきた。しかしながら、どのようにして DNA

処理を 24hr 行い、RT-PCR にて IL-2mRNA の発現誘導を検メチル化パターンが決定し維持され、そして解除されるか討し、さらに、Bisulfite を用いてメチル化状態を検討した。

という DNA メチル化の時間的空間的制御ネットワークの分子基盤はほとんど解明されていない。そこで我々は hTERT

２．２．２

マウス APRT 遺伝子の in vivo, in vitro aasay

遺伝子の DNA メチル化・脱メチル化による転写制御機構を用いた脱メチル化誘導を明らかにするため、DNA 脱メチル化に関する因子の取Cedar らは teratocarcinoma 由来の F9 細胞内で、APRT

得と、脱メチル化機構の解明を目的とし研究を行なった。

遺伝子の脱メチル化が誘導されることを報告した。彼等は２．実

plasmid に CpG を含む APRT 遺伝子上流の 2.5Kb をサブクロー験

ニングし、それを F9 細胞に transfection することによって、脱２．
１ リボゾームライブラリーを用いた老化遺伝子・
癌抑制遺伝子のスクリーニング

メチル化が誘導されること（nature 371,435,1994）、また、F9 細上記のように、老化遺伝子は、癌抑制遺伝子としての性とを反応させることによって、脱メチル化されることを明らか

胞の細胞抽出液と APRT 遺伝子上流のメチル化 DNA fragment

質を併せ持つ可能性が高い。そこでリボザイムライブラリにした（Cell, 86, 709, 1996）。そこで、彼らのデータの再現性ーを用い、癌抑制遺伝子のスクリーニングを試みた。リボを調べるため、同様の実験を行なった。

ザイムライブラリーとは、酵素 RNA で特異的 mRNA にアニールし触媒活性によりｍ RNA を破壊するリボザイム

２．２．３

TAT 遺伝子のグルココルチコイドによる脱メの集合である。癌抑制因子ｍ RNA が破壊されると細胞はチル化誘導

癌化し、足場依存性が低くなるため、軟寒天培地中での増Tyrosine aminitransferase（TAT）遺伝子は肝臓特異的殖が可能になる。そこでランダムに基質ｍ RNA を破壊すに発現している。肝細胞において、この遺伝子上流約るリボザイムライブラリーを正常細胞に導入し、癌抑制因

2.4Kb 付近の４つの CpG は脱メチル化していることが知ら

子ｍ RNA の破壊された細胞株について、軟寒天培地中でれている。一方、発現していない組織では TAT 遺伝子上の増殖を指標にクリーニングすることを試みた。

流の CpG はメチル化していることが報告されている。また、肝細胞ではグルココルチコイドによりこの領域の脱メチル

２．
２hTERT 遺伝子プロモーター上の脱メチル化機化を誘導できると報告されている。そこで、まず、Bisulfite

構の解明を用いて実際にグルココルチコイド（Dexamethasone）で、前述したように hTERT 遺伝子プロモーターはメチル

脱メチル化が誘導されるかどうかの検討を行なった。Dex

化・脱メチル化によってその活性の制御が行なわれている。

10 − 7M で 24 時間処理した後、Bisulfite sequence を行なった。

HTERT の発現は、プロモーターの hypermethylation で次に、TAT 遺伝子の Dex による脱メチル化反応が複製に関わ促進し、逆に hypomethylation で抑制される。DNA のメっているかどうかを検討した。ミモシン mimosine という− 104 −

トリクロロ酢酸とフェノールの生体におよぼす安全性に関する研究

Dex 処理行なった。なお、mimosine の効果は細胞内への３．２ hTERT 遺伝子プロモーター上の脱メチル化機
構の解明

BrdU の取込みの有無で確認した。あらかじめ mimosine0.5mM

３．２．１

G1 期での細胞周期停止薬で処理して、複製を止めた状態で、−7

ヒト IL-2 遺伝子の刺激による脱メチル化誘導で 12 時間処理した細胞に、Dex 10 M を加え、さらに 12 時

Jurkat 細胞では刺激処理によって IL-2 遺伝子の発現が間処理した。その後、bisulfite にてメチル化状態を検討した。

確認されたが、DNA のメチル化については刺激により誘導されておらず、刺激処理前よりすでに脱メチル化されて① Dexamethasone（dex）による TAT 遺伝子発現誘導いることが明らかになった。この細胞株は T 細胞系由来

肝細胞に合成グルココルチコイドである dexamethasone−7のものであり、すでに分化が終了しているものと考えられ（Dex）[10 M] 処理を 24 時間行い、TAT 遺伝子の上流る、したがって、刺激前より CpG は脱メチル化状態であ-2.5kb 付近の CpG に脱メチル化誘導をかけた。同時にったと考えられる。この細胞を使って、脱メチル化酵素の細胞から RNA を抽出し、RT-PCR を行い、dex による精製は行えないと判断した。また、in vitro の脱メチル化

Tat 遺伝子発現を確認した。

活性測定系を用いて、Jurkat 細胞の細胞抽出液中の脱メ② TAT 遺伝子プロモーターのメチル化確認

チル化活性を測定したが、測定可能な脱メチル化活性はBisulfite sequencing PCR（DNA の CpG ジヌクレオチ

Jurkat 細胞抽出液中には存在しないことが明らかとなった。

ドのシトシンをチミンへ化学変化させる方法。メチル化
シトシンはチミンに変化しないので、シーケンスにより

３．
２．
２ APRT 遺伝子の in vivo, in vitro aasay を用いた

メ チ ル 化 を 確 認 で き る。
） 肝 細 胞 の ゲ ノ ム DNA を脱メチル化誘導Sodium bisulfite で処理し特定の部分（図１参照）をク

Cedar らとまったく同じ実験系を用いて teratocarcinoma
由来の F9 細胞内で、APRT 遺伝子の脱メチル化が誘導さローニングし、シーケンスを行った。
③細胞周期を同調させた場合の脱メチル化確認れるか否かを検討した。plasmid に CpG を含む APRT 遺細胞を Mimosine[0.5mM] 処理を 12 時間行い、細胞周期−7

伝子上流の 2.5Kb をサブクローニングし、それを F9 細胞

Ｍ ] 処理を 12に transfection することによって、脱メチル化が誘導され時間行った。その後、Bisulfite sequencing 法を用いて、ること、また、F9 細胞の細胞抽出液と APRT 遺伝子上流

メチル化状況を調べた。なお、肝細胞の同調は、BrdUのメチル化 DNA fragment とを反応させることによって、の取り込みにより確認した。

脱メチル化されることを同様の実験系を用いて確認した。

を G1 終盤に同調させて、続いて dex[10しかしながら、実際に Bisulfite PCR を行い sequence を

３．結果と考察調べてみると、脱メチル化は誘導されていなかった。以上

３．
１ リボゾームライブラリーを用いた老化遺伝子・
癌抑制遺伝子のスクリーニングの結果から、Ceder らの Nature と Cell は実験操作の問題

軟寒天培地中での増殖を見るため、メチルセルロース濃論に至った。F9 細胞内で脱メチル化が起こるという報告

度 1.8％で癌細胞（HeLa）、正常細胞（NIH3T3）をそれぞ

は、実験操作上のアーティファクトであり、事実ではない。

で脱メチル化が誘導されたように見えただけであるとの結れ培養した。その結果、HeLa 細胞は癌化しコロニーを形成したが NIH ３T3 細胞も増殖してしまった。そこで、

３．２．３

TAT 遺伝子のグルココルチコイドによる脱メ

NIH ３T3 細胞が増殖を示さない至的培地条件の検討をメ

チル化誘導

チルセルロース濃度を変えて行った。
（図）

肝細胞の TAT 遺伝子は、dex 処理によって遺伝子発現

その結果、NIH ３T3 細胞はメチルセルロース濃度 2.0%が強く誘導されることを RT-PCR で確認した。次に TAT

以降増殖を示さなくなった。一方、HeLa 細胞は 3.0% 以

遺伝子プロモーターのメチル化状態をみるため、Bisulfite

降コロニー形成率が半分ほどに落ち込んだ。これは、メチ

sequencing PCR を行った。その結果、CpG 3-5 では dex

ルセルロースが細胞増殖に悪影響を与えたためと考えられた。

処理前は 65％メチル化していたが、処理後メチル化は４

これらの結果から、メチルセルロース濃度を 2.4％とし、% へと減少した。このことから、dex 処理によって TAT

リボザイムライブラリーをレトロウイルスを用いて遺伝子プロモーターの脱メチル化が誘導されることが明ら

NIH3t3 に感染させスクリーニングを行なった。３回の独かとなった（Fig. １ A）。そこで、この脱メチル化が複製立したスクリーニングを行なったが、足場非依存的増殖を依存的かどうかをみるために、細胞周期の同調を施し、示すクローンが得られなかった。良好な結果が得られない

dex 処理による脱メチル化誘導を行った。その結果、CpG

原因として、リボザイムライブラリーの品質とリボザイム

3-5 では dex 処理により、脱メチル化が誘導された。このによるターゲットの切断効率の低さが考えられるため、今ことから、脱メチル化が複製依存的ではなく、積極的な機

後改良を加え続行をする予定である。

構によることが証明された（Fig. １ B）。

− 105 −

一方、GREs より上流の部分の CpG 1,2 については、にくいという可能性がある。第二に、GRE の上流のクロ

dex 処理により特に脱メチル化されることはなかった（細マチン構造が密になっているために、クロマチンのリモデ

胞周期の同調を行った場合も、同様の結果が得られた）リングが起こりにくく、脱メチル化機構が抑えられている（Fig.1 A,B）
。Dex 刺激により、GREs の上流で脱メチル可能性がある。今後、本系を用いて脱メチル化の分子機構

化されず、下流で脱メチル化する理由としては、次に示すの解析を行い、hTERT 遺伝子制御機構の解明へとつなげように様々なものが考えられる。第一に、CpG 1,2 は CpGたいと考えている。

3-5 よりも GREs から離れているために、脱メチル化されFig. １ TAT 遺伝子のグルココルチコイドによる脱メチル化誘導
Ａ．TAT 遺伝子プロモーターの dexamethasone による脱メチル化誘導
H4IIE 細胞をグルココルチロイドの合成リガンドである dexamethasone（10 − 7M）で処理し、24 時
間後、Bisulfite sequencing 法でメチル化状態について検討した。
Ｂ．複製非依存的な脱メチル化誘導
G1 期への細胞周期同調剤である mimosine（0.5mM）を 12 時間処理後、dexamethasone（10 − 7M）
で 12 時間処理し、Bisulfite sequencing 法でメチル化状態について検討した。

− 106 −

コラーゲン経口摂取が結合組織（骨、皮膚）におよぼす作用
東京医科歯科大学

大学院医歯学総合研究科

インプラント・口腔再生医学分野＊、株式会社ニッピ バイオマトリックス研究所＊＊

春 日 井

昇

平＊、小

山

洋

一＊＊

Gelatin or gelatin peptide are called "collagen" and "collagen" is a nutritional supplement, which is believed to exert
cosmetic effect and to promote health. However, these effects of collagen intake have not been clarified. In the present
study, effects of collagen intake on connective tissues were examined. In the first experiment, forty female students
in their twenties were divided into two groups. One group was given a drink containing 10g collagen (porcine gelatin
peptide) per day whereas another group was given a drink without collagen. At eight weeks, in the collagen intake
group, water sorption-desorption test with Skicon-200EX on the skin of the upper arm revealed that the ability to keep
water in the skin increased slightly but significantly, compared to the one of the same group at the beginning of theexperiment. However, bone mineral density of the heel and bone metabolic markers (bone-type alkaline phosphatase,osteocalcin, Ca, pyridinolin and deoxypyridionolin ) were not affected. In the second experiment, the lower incisors ofmale Wistar rats (13 weeks) were extracted and divided into 5 groups. Each group was given one of the four different
powder foods (14% casein; 6% casein + 8% collagen; 10% casein; 6% casein + 4% collagen) or solid food (14% casein).
At 4 weeks measurement of bone mineral density of the extracted region of the mandible with a dual- energy X-ray
absorptiometry demonstrated no significant difference between the groups. In the third experiment, 5 mm incisions weremade on the back skins of Hairless male mice (6 weeks). The animals were divided into 3 groups and each group was
given one of the three different foods: 8% casein; 4% casein + 4% collagen; 14％ casein. At 7 days and 13 days, tensile
strength test of the incised skin did not show any difference between the groups. Conclusively, collagen intake increased
skin moisture slightly; however, it did not affect bone metabolism and healing process of bone and skin lesions.

１．緒

ゲンを経口摂取させることが行われているようである。し言たがって、コラーゲンの経口摂取が皮膚や骨の結合組織に

健康や美容に対する関心が高まり、多種多様な健康補助

対して何らかの作用を示す可能性が考えられる。本研究の食品（サプリメント）が市場に登場している。そのような目的はコラーゲンの経口摂取が結合組織（骨、皮膚）に及サプリメントの一つに「コラーゲン」がある。ゼラチンおぼす作用を実験的に検証することである。

よびその分解産物であるゼラチンペプチドは、
「コラーゲ

２．実

ン」という名称で健康食品に幅広く利用されている。結合
組織の最大の構成要素であるコラーゲンには、美容と健康に有効な作用があると言われている。コラーゲンを含有す

験

２．１ コラーゲンの経口摂取がヒトの皮膚と骨に及ぼす作用る化粧品の皮膚に対する保湿作用は明らかである。しかし、

コ ラ ー ゲ ン（ ゼ ラ チ ン ペ プ チ ド、 ブ タ 由 来、 分 子 量サプリメントとしてコラーゲンを経口摂取した場合におい3,000-5,000）10 g を含む 100ml のドリンクを作成し茶色のても、皮膚や骨の結合組織に対して有効な作用が表われる

ガラスビンに密封した。試験開始前に健康状態に問題の無かについては科学的には検証されていない。

い 20 代の女性 40 名（本学歯学部学生ボランティア）の踵

コラーゲンを経口摂取した場合の作用として、骨関節炎の骨密度を骨密度測定装置（UXA-300、アロカ社）によの症状を緩和する作用１）、毛髪を太くする作用２）、ツメのり測定し、２群に分けた。一群にはコラーゲンを含むドリ

３）

４）

ンクを、他群は対照群としてコラーゲンを含まないドリン等が報告されてクを一日一本任意の時間に経口摂取させた。本試験においいる。また、最近我々はコラーゲンをマウスに摂取させるては、被験者がコラーゲンを摂取しているか否かについてと骨量が増加することを観察した６）。さらに、一部の国には知らせず、また測定者も被験者がどちらの群に属するかおいては外科手術後の治癒促進を期待して、患者にコラーが判らない二重盲検法をおこなった。

状態を改善する作用 、指の血流量を増加させる作用 、胃潰瘍を予防する作用や血圧下降作用

５）Effect of Collagen Ingestion on
Connective Tissues（Bone and Skin）
Shouhei Kasugai1,  Yoichi Koyama2＊

Tokyo Medical and Dental University1，
Nippi Research Institute of Biomatrix2

実験開始時、４週後、８週後に、表皮角層の水分量をSkicon-200EX（アイ・ビー・エス社）で電気伝導度（µS）
として測定した。測定は高橋の方法７）に順じておこない、角層水分量、角層吸水能、水分保持能を得た。被験者を室温 23−26℃、湿度 40−45％の環境に 20 分間順化させた後、左上腕内側の電気伝導度を 10 回測定し、数値が安定する＊

後半５回の測定の平均値を「角層水分量」の測定値とした。

− 107 −

次にこの測定部位に 200µl の水を滴下し、10 秒後に濾紙

その後経時的にマウスを屠殺し、創部を中央に含むようにで拭き取り電気伝導度を測定しこの値を「角層吸水能」と約 10 ㎜長さに背部皮膚を切り取った。創部を中央にしてした。その後、30 秒毎に３分後まで電気伝導度を測定し皮膚の両端を５㎜離して引っ張り試験機に固定し、１分間これらの値を「水分保持能」とした。

に５㎜の速度で引っ張り、創部破断時の力を測定した。

実験開始時、４週後、８週後に、血液中の骨型アルカリ

６週齢の Hairless mouse を３群に分け、表２に示した

フォスファターゼ（ALP）活性とカルシウム（Ca）、オス

３種類の異なる飼料を与え６週間飼育した。本来 AIN-

テオカルシン（Oc）、尿中のピリジノリン（PYR）、デオ

93M はミルクカゼインを 14％含んでおり、今回調整したキシピリジノリン（DPYR）量を測定した。また、８週後

飼料のタンパクの不足分はコーンスターチを加え補正しに踵の骨密度を測定した。

た。上記と同様にマウスの背部に切開創を作成し縫合し、切開創を作成して 7 日後と 13 日後に屠殺し、同様に創部

２．２ コラーゲン摂取が抜歯後の治癒過程に及ぼす作用の破断時に必要な力を測定した。さらに、大腿骨を摘出して二重エネルギーＸ線吸収法を用いて骨密度を測定した。

13 週齢の雄性 Wistar ラットを使用した。エーテル麻酔

３． 結下で３日毎に３回下顎右側切歯の歯肉から上に露出した部

果

除して３日後に切歯を抜去した。その後経時的にラットを３．１ コラーゲンの経口摂取がヒトの皮膚と骨に及ぼす作用

屠殺し、下顎骨を摘出し中性ホルマリンに浸漬固定した。

表皮角層の水分量は、皮膚の電気伝導度によって表わす

下顎骨を軟 X 線撮影装置（SPO-M50; Sofron 社）を用いことができる。皮膚の電気伝導度の測定結果を図２に示して撮影し、抜歯した部位（図１）の骨密度を二重エネルギ

た。図２のグラフにおいて、角層水分量は一番左側の点、ーＸ線吸収法（DCS-600R, アロカ社）を用いて測定した。

角層吸水能は左から二番目の点、水分保持能は左から三番分を歯科用の切削器具を使用した削除した。最後に歯を削次に上記と同様に下顎右側切歯を抜歯したラットに、目以降の点によって示される。

AIN-93M（OYC 改変 AIN-93 精製飼料、オリエンタル酵

角層水分量は、コラーゲン摂取群と対照群のいずれにお母工業株式会社）を基本にして成分を表１に示すように改いても、実験開始時に比較して４週後と８週後において有変した粉餌を与えて飼育した。コラーゲンとして株式会社

意に増加していた（p<0.05, paired t-test）。しかし、実験

ニッピ製のコラーゲンペプチド（タイプ PRA、ウシ皮由来、

開始時、４週後、８週後の３時点において、角層水分量は酵素分解されており分子量 4000 〜 5000）、カゼインとしコラーゲン摂取群と対照群の間で有意な差はみとめられなては AIN-93M に添加されているものを使用した。抜歯しかった（unpaired t-test）。

て 4 週後に屠殺し、下顎骨を摘出し中性ホルマリンに浸漬

角層吸水能は、実験開始時、４週後、８週後の３時点に固定し、軟 X 線撮影をおこない抜歯した部位の骨塩量測

おいて、コラーゲン摂取群と対照群の間で有意な差はみと定をおこなった。

められなかった（unpaired t-test）。統計的に有意な差ではないが、角層吸水能は４週後と８週後においてコラーゲ

２．３

コラーゲン摂取が皮膚の創傷治癒に及ぼす作用

ン摂取群が対照群に比較して上昇していた。コラーゲン摂６週齢 Hairless mouse（HR-1）を使用した。ネンブタ

取群の角層吸水量は、実験開始時に比較して８週後においール麻酔下で背部に、体軸に平行に左右対称に５㎜の切開て有意に増加していた（p<0.05, paired t-test）。一方対照創を作成し、ナイロン糸を用いて１糸縫合をおこなった。

図１

骨量を測定した部位
ラット下顎切歯を抜去して１ヶ月後に、臼歯前方の四角で囲った抜歯した部位の骨量を測定した。

− 108 −

コラーゲン経口摂取が結合組織（骨、皮膚）におよぼす作用

図２

皮膚の水分量の測定結果
20 代の女性 40 名を２群に分け、一群は１日 10gのコラーゲンを摂取し、対照群は摂取しなかった。
実験開始時、４週後、８週後に左側上腕内側の電気伝導度を測定し、皮膚の水分量とした。測定方法の詳細については、本文中に記述した。

群の角層吸水量は、実験開始時に比較して４週後と８週後において有意な差は認められなかった。
骨密度および骨代謝マーカーの測定結果を表３に示した。実験開始時、４週後、８週後の３時点において、コラーゲン摂取群と対照群の間で、これらの測定値に有意な差は認められなかった（p>0.05, unpaired t-test）。また、そ
れぞれの群内で、実験開始時に比較して、４週後と８週後のこれらの測定値に有意な差は認められなかった（p>0.05,
paired t-test）。
なお、実験期間中コラーゲン摂取群と対照群全ての被験

図３

抜去したラット下顎切歯（A）と切歯抜歯後の下顎の軟Ｘ線像（B,C）
B：抜歯直後 C：抜歯の１ヶ月後者の中に、何らかの不快症状を訴えた者はいなかった。

３．２ コラーゲン摂取が抜歯後の治癒過程に及ぼす作用

顎骨全体のかなりの部分を占めているため、抜歯後には大ラット下顎切歯の歯肉から露出した部分を３回３日毎になように抜歯窩には新生骨が形成された。この抜歯窩の新削除することで、この切歯を容易に抜歯することが可能と生骨の形成によって、抜歯した部位の骨密度は次第に増加なった。図３に示したように、ラットの切歯は大きく、下した（図４）。

きな抜歯窩が形成される。軟Ｘ線写真（図３ C）で明らか− 109 −

図４

ラット下顎切歯を抜歯した後の抜歯した部位（図１）の骨密度の変化

この実験モデルにおいて、抜歯後に 5 種類の組成の異なる飼料を与え１ヶ月飼育し、抜歯部の骨量を測定した結果を表４に示した。各群間に統計的な有意な差は認められなかった。

３．３ コラーゲン摂取が皮膚の創傷治癒過程に及ぼす作用
Hairless マウスの背部に切開創を作成し、経時的に創部の強度を引っ張り試験により測定した。結果を図５に示した。時間の経過とともに創部の強度は増大し、10 日でほぼプラトーに達して 13 日で安定した値を示した。

図５

Hairless マウス背部の切開創と創部強度の経時変化

Hairless マウスに 3 種類の組成の異なる飼料を与え 6 週間飼育し、背部に切開創を作成した。7 日後と 13 日後に測定した創部の強度、さらにそれらのマウスの大腿骨骨密度を表５に示した。３つの群の間で、創部の強度と大腿骨の骨密度に有意な差はなかった。

４．考察

コラーゲンを含有する化粧品が保湿効果を示すことは明らかである。しかし、経口で摂取したコラーゲンが皮膚に対して何らかの有効な作用を示すかについては明らかでない。本実験において、20 代の女性にコラーゲンを含有す

名にコラーゲンを一日５g、６週間摂取させた場合、上腕るドリンクを８週間摂取させ、種々の計測をおこなった。

と背中の皮膚の水分量が上昇し、皮膚の柔軟性と弾力性が

本実験は２重盲検法でおこなわれた実験であり、可能な限上昇したという結果が報告されている。この実験においてり客観的な結果が得られるように実験をおこなった。実験は、実験開始時と実験終了時の測定値の比較がおこなわれ開始時、４週後、８週後の３時点において、コラーゲン摂ており、２群に分けておこなった我々の実験とは実験のデ取群と対照群の間に皮膚の水分量に有意な差はなかった。

ザインが異なる８）。また、被験者数を含め実験の詳細は不しかし、コラーゲン摂取群においては、実験開始時に比較明であるが、10 − 40 代の女性に一日１g のコラーゲンをして８週後において角層吸水能が統計的に有意に上昇して8 週間摂取させた場合、プラシーボを摂取した場合や何もいた。それ以外の測定値は有意な差を示さなかったが、こ摂取しなかった場合に比較して、上腕の皮膚の水分保持能の結果からコラーゲンを経口摂取することで皮膚の保湿度が高くなることが報告されている９）。いずれにせよ、これが改善されることが示唆される。

らの実験結果は我々の実験結果を支持するものである。

論文に発表された結果ではないが、20 − 50 代の女性 25

本実験において、20 代の女性にコラーゲンを含有する− 110 −

コラーゲン経口摂取が結合組織（骨、皮膚）におよぼす作用

ドリンクを８週間摂取させ、踵の骨密度と 5 種類の骨代謝切開創の治癒に影響を与えなかった。これらの結果から、マーカーを測定した。コラーゲン摂取群と対照群のこれら

コラーゲンを摂取することによって、骨組織修復や皮膚損

測定値の間に有意な差は認められなかった。骨組織におい傷の治癒が促進される可能性は少ないと考えられる。

ては骨のリモデリング（改造）すなわち破骨細胞による骨

最近我々はコラーゲンをマウスに摂取させると骨量が増加

吸収と骨芽細胞による骨形成がおこなわれており、骨の吸することを観察した６）。この実験は以下のようにおこなわ収量と形成量の収支によって骨量が決まる。本実験においれた。通常の飼料は 14％のタンパクを含んでいる。このては、コラーゲン摂取が８週間の期間が短期間であったた

タンパク量を 10％に減少した２種類の異なる飼料（10％め骨密度の変化として表れなかった可能性が考えられる。

カゼイン、６％カゼイン + ４％コラーゲン）をマウスに骨型アルカリフォスファターゼ（ALP）は骨芽細胞に存

10 週間与えた後、大腿骨の骨密度を測定した。すると６在する酵素であり、オステオカルシン（Oc）は骨芽細胞％カゼイン + ４％コラーゲンの飼料で飼育したマウスのが分泌する基質タンパクであり、これらの血中濃度は骨芽

大腿骨骨密度は、10％カゼインの飼料で飼育したマウスの細胞の活性を表わし、骨形成マーカーである

10）

。骨基質

大腿骨骨密度に比較して高かった。しかし、14％のタンパ

中のⅠ型コラーゲンはピリジノリンおよびデオキシピリジ

クを含む 2 種類の異なる飼料（14％カゼイン、６％カゼイ

ノリンにより架橋結合している。破骨細胞による骨吸収に

ン + ８％コラーゲン）でマウスを飼育した場合には、大より、これらの架橋成分が血液中に放出され尿中に排泄さ腿骨骨密度に差はなかった。これらの結果は、タンパク摂れる。尿中のピリジノリン（PYR）とデオキシピリジノ

取量が少ない状態では、コラーゲン摂取により骨密度が上リン（DPYR）の濃度は、骨吸収のマーカーと考えられる。

昇するが、タンパク摂取量が充分な状態では、コラーゲン

本実験のおいて、これらの骨代謝マーカーに変化が観察さ

摂取は骨密度上昇作用を表さないことを示している。
本研究においては、上記の我々の以前の実験に比較してれなかったことから、コラーゲン摂取は健康な 20 代女性

さらに低栄養の８％タンパク量の飼料を用いたにもかかわの骨のリモデリングに影響を与えないと考えられる。
歯を失った後にその部位の骨の減少が起き、その後の義らず、コラーゲン摂取はマウスの大腿骨骨密度に影響を与

歯やインプラントによる治療が難しくなることが多い。抜えなかった。その理由としてはマウスの系統の違いや摂取

歯窩の治癒を促進することにより、歯を失った部位の骨の期間が 6 週間であったことが考えられるが、明確ではない。

減少を予防することが可能になる。抜歯窩の治癒を促進さ

ところで、卵巣摘出ラットは閉経後骨粗鬆症の動物実験モせる方法を検討するためには、簡便な実験動物モデルが必デルであり、この動物においては骨が減少する。我々の共要である。ラットの臼歯を抜去する実験モデルが多く用い同研究者の野村は、低タンパク食で飼育した卵巣摘出ラッ

られてきた。しかし、ラットの臼歯は多根であり根が肥厚トにおいては、コラーゲン摂取が骨密度上昇作用を示すこしているため根を破折することなく抜歯することが困難でとを報告している 12）。したがって、正常動物に通常の栄ある。さらに、抜歯窩の治癒を定量するためには組織切片

養状態でコラーゲンを摂取させた場合には、骨量に変化をを作成する必要がある。一方、ラットの切歯は巨大であおよぼさないが、卵巣摘出した骨減少症の動物に低栄養状り、抜歯後に顎骨に大きな欠損を生じる。ラットの切歯は態でコラーゲンを摂取させた場合には骨量が増加すると考生涯萌出を続ける歯であり、先端を削除することで萌出速えられる。本研究においては、正常動物にコラーゲンを摂度が増加し、容易に抜歯することが可能になる。本研取させた場合、抜歯窩の治癒や皮膚の切開創の治癒に影響究で示したように、ラットの下顎切歯を抜歯した場合、Ｘを与えなかった。しかし、骨粗鬆症や糖尿病の疾患動物モ

線を用いて抜歯窩の治癒過程を容易に定量することが可能

デルに低栄養状態でコラーゲンを摂取させた場合には、治である。この実験動物モデルは、抜歯窩の治癒を促進させ癒促進効果が表れる可能性も考えられる。

11）

る方法を検討するために有用な実験モデルであると考えら

５． 総

れる。

括

本研究では、Hairless マウスの背部に切開創を作成し20 代の健康な女性において、コラーゲン摂取は皮膚のその強度を測定した。他の系統のマウスやラットを用い保湿度を増加させた。しかし、骨密度と骨代謝マーカーにて同様の実験が他の研究者によっておこなわれている。

は影響を与えなかった。また、コラーゲンを含む飼料でのHairless マウスは文字通り毛がないため切開創を作成し易飼育は、ラットの切歯抜歯窩の治癒と、マウスの背部切開

く、創部の治癒状態を観察し易い利点がある。この実験動創の治癒と大腿骨骨密度に影響を与えなかった。したがっ物モデルは、切開創の治癒を促進させる方法を検討するたて、実験動物の骨や皮膚の修復過程に対しては、コラーゲ

めに有用な実験モデルであると考えられる。

ン摂取は顕著な作用を示さないと考えられる。サプリメン

本研究において、コラーゲンを含有する飼料を与えるこ

トとしてコラーゲンを摂取することの有効性に関しては、とは、ラット切歯抜歯後の抜歯窩の治癒と、マウスの背部

今後その機序を含めてさらに検討をおこなう必要がある。

− 111 −

謝辞６） Koyama Y et al. Ingestion of gelatin has differential

本研究は、株式会社ニッピの桑葉くみ子様と広田亜里彩

effect on bone mineral density and body weight in様、東京医科歯科大学医学部付属病院整形外科の宗田大教

protein undernutrition. J Nutr Sci Vitaminol 47(1):84-86,

授、さらに東京医科歯科大学大学院医歯学総合研究科先端2001

材料評価学分野の高橋英和助教授、東京医科歯科大学大学
院医歯学総合研究科摂食機能制御学分野大学院生の角田愛
美君と石岡樹成君と佐藤大輔先君のご協力によりおこなわ

７） 高 橋 元 次． 皮 膚 保 湿 効 果 の 測 定 法 と そ の 評 価．
Fragrance Journal

臨時増刊 17:61-70, 2000８） http://net.meiji.co.jp/health/amino/verify1.html

明治製菓ホームページ

れました。ここに深く感謝致します。

９） 田口靖希

他．経口投与したニワトリ由来コラーゲ（参考文献）

ンペプチドが皮膚の組織再生および保水能におよぼす影

１） Adam M. Welche Wirkung haben Gelatinepraeparate?

響、ならびに血中濃度の検討．第 42 回日本食肉研究会（2001.3.29 仙台）講演要旨 :23-25, 2001

Therapiewoche 38:2456-2461, 1994
２） Scala J, Hollies NRS, Sucher KP. Effect of daily gelatine
ingestion on human scalp hair. Nut Rep Int 13:579-592,

10） 井上俊

他．骨代謝マーカー測定の意義．The Bone12(4):35-39, 1998
11） Chiba M et al. Effects of repeated shortenings and

1976３） Schwimmer M, Mulinos MG. Salutary effects ofof artificial restraint on the tensile strength of thegelatin on nail defects in normal subjects. Antibiotic

periodontium of the rat mandibular incisor. Arch Oral

Med Clin Ther 4:403-407, 1957

Biol 26: 135-41, 1981

４） Mulinos MG, Kadison ED. Effect of gelatin on the12） Nomura Y et al. Effect of the administration of sharkvascularity of the finger. Angiology 16:170-176, 1965

type I collagen to ovariectomized rats. 第 34 回日本結５） 梶原苗美等．コラーゲン由来ペプチドの栄養・生合組織学会学術大会（2002.4.4-5 浜松） 講演要旨 , 2002

理機能特性について．必須アミノ酸研究 140:43-46, 1994

− 112 −

かみ合わせのずれが大きく笑った顔貌の非対称性に及ぼす影響
大阪大学大学院中村隆

歯学研究科顎口腔咬合学

志、若

林

一

道

There are few people who can make the natural smile in the presence of other people or a camera, a lot of people
cover their mouth and control their smile. Until now, many books say “To make good smile, it is important to have highself-esteem and improve themselves.” In dentistry, it is often said that white and well-arranged teeth is necessary to
make good expression (smile), it was thought that this matter is expected on the psychological implication. But focusing
attention on our specialized area, prosthodontics, the jaw of recent young people is smaller than before, based on this,malocclusion is occurred and the jaw position is not locate normal position. It was reported that the jaw displacement
makes effort to the cervical or facial muscle, it was suggested that this result prevent to make good smile physically.
The aim of this study is to analyze objectively the effect of the jaw displacement on the asymmetry of the big smile
on face and to obtain the suggestion to obtain good smile. The nine subjects’ normal and smiling face were measured
three-dimensionally. And the length between the center of upper and lower labial and the both sides of the angle ofthe mouth was measured. To analyze asymmetry on the normal and big smiling face, the asymmetry index (AI) wereused. As a result, for the big smiling face of the 3 in 4 subjects, the length of labial in the displacement side of the jaw
is longer than the other side. For 4 in 5 subjects without jaw displacement, the longer side of labial in normal face islonger than the other side in smiling face.

１．緒

言

２．実

人前やカメラの前で自然な笑顔を作れる人は少なく，多験

２．１．被験者

くの人が口（歯）を隠し，笑いを抑えようとする．それは被験者は本学歯学部学生および職員より，矯正治療およ

よい形が作れず，顔が崩れてしまうためと考えられる．

び顎顔面外傷の既往がない 20 歳代９名（男性７名，女性

これまで多くの本などで，よい表情（笑顔）を作るために２名）を選択した．

は自分に自信を持ち内面を磨くことが大事であると述べられている．我々歯科の分野においても，白い歯やきれいな歯並びなどがいい表情を作るために必要であるとよくいわ
れるが

１, ２）

，これも心理的な要因を期待しているものが大２．２．計測装置
非接触式三次元形状計測装置 VIVID900（株式会社ミノルタ，大阪）を使用した（図１）．この装置は，ラインレーザを装置上部から走査し，計測対象に照射する．その反きいように思われる．
しかし，我々の専門分野であるかみ合わせに着目して考射光を装置下部の CCD 素子で受光し，三角測量法の原理

えてみると，現代の若年者の顎は一昔前と比べ小さくなっによって，計測対象の三次元形状データを得る．走査時間ており，それに伴い不正咬合が生じ，下顎の位置が上顎には１計測あたり１秒と非常に高速である．装置から計測対

対して３次元的にずれている．顎のずれは，頸部や顔面周

象の顔面までの距離は１m とした．計測ピッチは約 0.2 ㎜

囲の筋肉に影響を及ぼすことがわかっており

３, ４）

，これら

が原因で肉体的にもよい形（よい笑顔）を作ることが困難であり，得られたデータは，等間隔のＸ軸座標とＹ軸座標の点のＺ座標を表記した形式である．

な状況であるものと考えられるが，これまで顎のずれと微笑時顔貌について客観的に評価した研究はみられない．
そこで本研究の目的は，かみ合わせのずれが大きく笑った時の顔貌の非対称性に及ぼす影響を客観的に分析することにより，よい表情（笑顔）を得るための示唆を得ることである．
The effect of jaw displacement on theasymmetry of big smile on face
Takashi Nakamura, Kazumichi
Wakabayashi
Division of Oromaxillofacial Regeneration,
Osaka University Graduate School of
Dentistry

図１− 114 −

本実験に用いた非接触型 3 次元形状計測装置 VIVID900

かみ合わせのずれが大きく笑った顔貌の非対称性に及ぼす影響２．
３．顔面正貌三次元データの取得および分析
顔面正貌三次元データの取得は，VIVID900 を被験者との距離１m に，高さが被験者の鼻尖と一致になるように三脚に固定して行った．そして，被験者に自然頭位の座位をとらせ，安静時および大きく笑ったときの正貌三次元データを計測した．安静時の顎位は咬頭嵌合位とした．計測
した顔面三次元データをフォーマット変換し，三次元デー
タ解析ソフト3D-Rugle3（㈱メディックエンジニアリン

グ，京都）を用い顔面形態の分析を行った．分析時は左右瞳孔の中心点のＹ座標（上下）およびＺ座標（前後）が同
じ座標となるように座標変換を行った．計測基準線は鼻尖を通り，左右瞳孔を結んだ直線に垂直となる直線を正中線と設定した．そして上下口唇の上部および下部と正中線の交点をそれぞれ UU，UL，LU，LL とし，各点から左右の口角までの距離Ｒ UU，Ｒ UL，Ｒ LU，Ｒ LL，Ｌ UU，

図２

左右対称性分析における計測基準線および計測項目

Ｌ UL，Ｌ LU，Ｌ LL を計測した（図２）．
顔貌の左右非対称性の判定には，左右非対称性指数と同側の方が距離が長いものは４名中３名であった．下顎（Asymmetry Index, 以下 AI と略す）を用いた．

がほぼ顔面の正中に位置している者に関しては，５名中４AI(Asymmetry Index)=｛(R − L)/(R+L)｝×100

名が安静時距離の長い側が笑ったときも距離が長かった．

４．考そして，VIVID900 により同時に撮影した顔面テクスチャ
ーから，下顎の正中が左右どちらに偏位しているかを分析

４．１．実験方法についてし，各被験者の AI と比較検討を行った．

３．結察

顔貌の左右対称性を検討する方法として，顔面正貌写真５），
頭部Ｘ線規格写真６），モアレトポグラフィー７, ８）が用いら

果

れる．顔面正貌写真では写真撮影の際の頭部の向きが，左各被験者における上下口唇の上部および下部それぞれ

右対称性に影響を及ぼす可能性が高いと考えられる．またの距離および AI を表１に示す．上口唇に関して，大きく笑

頭部Ｘ線規格写真やモアレトポグラフィーは，頭部を固定うことにより AI の増加した者は全体の 33％に認められた．

した状態で撮影を行うため，被験者の自然な状態を記録す

44％の者は大きく笑った際，AI は減少した．また大きくることができない．これらの問題点を考慮し，本研究では笑うことにより安静時に比べ反体側に非対称性が移行す

非接触型三次元計測装置を用いた．本装置を用いることにる者は 22％認められた．下口唇に関して，大きく笑うこより，頭部を規制することなく自然な状態で静止時およびとにより AI の増加した者は全体の 44％に認められた．33

笑った際の顔面を計測できた．また得られた三次元データ％の者は大きく笑った際，AI は減少した．安静時に比べはコンピュータ上で自由に座標変換を行えるため，安静時

反体側に非対称性が移行する者は 22％認められた．また，および笑った際の頭部のずれを可及的に補正することがで

下顎偏位と正中と口角との距離については，下顎の偏位側きた．また二点間距離の分析は三次元座標を用いて行なえ

表１

安静時および大きく笑った際の各被験者における上下口唇の AI と下顎偏 側− 115 −

るため，顔面の向きによる影響をより少なくしかつ正確な

２．笑った際、顎偏位側に口唇の距離が長くなる被験者が４名中３名認められた．また顎偏位を有しない被験者

分析項目の距離を計測することができた．

に関しては安静時に口角への距離の長い側が笑ったと

左右対称性の判定には，顔面の正中線の設定が必要とな

きも長くなる被験者が５名中４名認められた．

る．正中線の設定には，必ずしも一致した見解はないが，本研究では過去の報告でも用いられることの多い左右の瞳

本実験結果から、安静時における筋緊張が笑ったときの孔の中心点を，前後的および左右回転の補正のための基準

顔貌の左右非対称性に影響を及ぼすものと推測された。ま点とした．また分析時口唇周囲のデータから正中線を決定た、下顎偏位を有する者の多くは、同側に筋緊張が認めらできるよう，鼻尖部を通り瞳孔線に直交する直線を顔面正れ、大きく笑った時の顔貌の非対称性にもかみ合わせのず

中線に設定した．

れが影響を及ぼす傾向が示唆された。

４．
２．実験結果について（参考文献）

人の顔の表情は，精神活動のなかでも特に感情状態を最も顕著に反映し，その感情の伝達に重要な役割を果たしている．とりわけ笑顔は相手に好意と安心を与える貴重な財産とされている．顔の表情における非対称性には左右の筋

１） Claude R. Rufenacht: Fundamentals of Esthetics.
Quintessence Publishing, 1990.
２） Ronald E. Goldstein: Change Your Smile Quintessence
Publishing, 1990.

活動量の差や下顎偏位によるものなどが考えられる．当講

３） Bakke, M. and Moller, E. : Craniomandibular座東らは，「笑い」の表情が表出されたときの表情筋の筋

disorders and masticatory muscle function.

活動について評価を行った結果，表情の大きさと，下唇下Scandinavian Journal of Dental Research, 100, 32-38,

制筋，大頬骨筋，口輪筋の筋活動量との間には，正の相関を示す傾向がみられたと報告している９）．また，モアレト

1992.
４） 中村隆志，宇田恵子，小路芳子，岡本啓，丸山剛

ポグラフィーによる顔貌の非対称性について分析を行った

郎 : 顔貌の左右対称性と全身症状の関連性に関する研究．

筆者らの研究では，下顎偏位者の左右非対称性は健常者よ全身咬合 5，34-38, 1999.

りも大きく，下顎偏位は，顔貌の三次元的な左右対称性に影響を及ぼすことを報告している 10）．

団団，上田路和子，佐藤義孝，中村昌幸 : 顔（正貌）と咬合との研究−正貌顔面規格写真の本実験結果では，笑った際、顎偏位側に口唇の距離が長くなる被験者が４名中３名認められた．また顎偏位を有しない被験者に関しては安静時に口角への距離の長い側が笑ったときも長くなる被験者が５名中４名認められた．本実
験結果からも，安静時における筋緊張が笑ったときの筋緊分析− . ベッグ矯正歯科ジャーナル ８, 47-51, 1997.
６） 原

三正 : 顔面及び頭部の非対称性について . 歯界展

望 9, 186-187, 1952.
７） 河相安彦 : モアレトポグラフィーによる顔面形態に関する研究−咀嚼の習慣が顔面形態に及ぼす影響について− . 日大口腔科学 18, 1-4, 1992．

張にも影響を及ぼすものと推測された．

５．総

５） 大作武彦，李８） 北條健三 : モアレ縞による顔面の対称性に関する研究 .

括

歯科学報

かみ合わせのずれが大きく笑った時の顔貌の非対称性に及ぼす影響を９名の被験者について３次元計測装置を用い

９） 東

81, 1203-1235, 1981.

和生，丸山剛郎 : よい表情を生みだす筋肉 . 微笑

みをあなたに 7, 6, 1995.
10） 中村隆志，岡本

分析した結果、啓，池田友紀，もて木伸子，東和生，

１．３次元データを用いて分析を行うことにより、安静時

高島史男，丸山剛郎 : 顔貌の左右対称性に関するモアレ

および笑った際の頭部のずれを可及的に補正すること

トポグラフィーによる観察−健常者および下顎偏位者にができ、顔面の向きによる影響をより少なくしかつ正

ついて−．歯科審美 12, 30-36, 1999.

確な分析項目の距離を計測することができた．

− 116 −

アトピー疾患者の自尊感情の向上を目指した集団認知行動療法の開発
宮崎大学

富教育文化学部家直明The purpose of this study is the development of the group cognitive behavioral therapy ( group-CBT)  programfor Atopic Dermatitis. The technique of attributional training and assertion training is included for this program.
Whether this program contributes to the improvement in the self-estimation of the AD patient is verified. In the
study 1, we investigate the relevance to attributional style and assertiveness style for high school student including
AD patient. In the study 2, the treatment by group-CBT was carried out for the ED patient and AD patient group.  
As the result, the improvement on the self-estimation was also confirmed both groups.

緒

言

アトピー性皮膚炎（Atopic dermatitis; AD）は、増悪・寛解を繰り返して掻痒性に湿疹病変を主体とする疾患であり、患者の多くはアトピー素因を有している。日本における総患者数は 30 万人程度と推定されている。特に、思春期（12 歳以後）のアトピー性皮膚炎は、顔面等に苔癬化
局面が広がり、淡紅色丘疹を混じて赤みのある皮膚を呈する。眉毛の外側 1/3 が薄くなる Hertoghe 徴候を示す場合

ことは、対人関係ストレスを軽減することのみならず、自もある。多くは小児期より症状が継続しており、顔面部皮

己評価の向上に結びつくことが知られている (Rees.S ら、

膚症状の増悪・寛解を繰り返しながら現在に至っている。

1991）。しかし、本人に帰属の偏りがある場合、アサーテ掻くという行為には、症状の炎症悪化という結末と同時

ィブネスの獲得が困難になりやすい。このことは、アサーに、快感によるストレス解消の効果が現れる（図１）。そ

ティブネスの獲得にあたって、帰属療法を加える必要性をのため、ストレス低減効果の効用ゆえに掻くことをなかな示唆する。

かやめられない。症状悪化とその持続は AD 患者の二次本研究の目的は、思春期 AD 患者の対人ストレスの改善

的集団対人適応の障害をきたし、自尊感情を適切に維持に及ぼす、帰属変容、及びアサーション・トレーニングをできなくなる心理的弊害をもたらす。心理的ストレスの増主体とする集団認知行動療法を開発することである。こう加は、典型的な皮膚心身症である本疾患の治療経過にとっした治療技法の適用の結果、自己評価の向上が観察されるても、また精神的健康や社会適応にとっても望ましいこかどうかを検証したい。研究１においては、健常者と ADとではない。AD 患者のストレスに着目した研究によれば、患者を対比しながら、帰属とアサーションの関連性を検討

AD 患者は健常者に比較して抑うつ、不安、怒りなどの心し、帰属とアサーティブネスのタイプ分類を解明した。次理的ストレス反応が高いという（奥野他、2000）。AD 患に、研究２において、集団認知行動療法のパッケージを作者のストレッサーは、症状、治療の困難さ、対人関係、行成し、AD 患者と摂食障害患者を比較しながら適用し、そ動の制約、周囲の人の理解の５因子に及び、特異的な因子の効果を検証した。その際、とりわけ自尊心の向上に及ぼ構造を有する（奥野他、1999）。

す影響を分析した。

ところで、自分の意見や感情を余さず表現し、また、他者の気持ちを十分に斟酌できる対人関係の状態をアサーテ

研究１：帰属とアサーティブネスのタイプ分類の解明

ィブネス（対人主張性）と呼ぶ。対人主張性を身につける
Development of Group cognitive
behavior therapy for self-esteem in Atopic
Dermatities.

相手に対し主張的であるということは自己表現が十分に行われていることを意味し、その結果、高い自己評価が保持しやすいと考えられる（Rees.S ら、1991）。
しかし、対人コミュニケーションが上手にできるかどう

Tadaaki  Tomiie

かは相手次第でもある。その失敗に相手側の要因が過剰にMiyazaki University, Faculty of Education
and Culture

関与した場合、自己のコントロールの限界を超えたと判断して自己関与性を低めなければならないであろう。対人コ
ミュニケーションが相手側の要因によってうまくいかなか− 117 −

った場合に、どのような認知的要因が作用して自己評価をGoldstein(1980) らのリストをもとに菊池によって開発された、社会的スキルの度合を測定する尺度であり、18 項

守るかは明らかでない。
そこで、健常群と AD 群を対比させながら、主張スキ目からなる。本尺度は、主張性項目を多く含んだものであルが自己評価を高める心理学機序に認知要因が影響を及ぼるため、本研究では、主張的スキルの度合を測る尺度とししているか否かを検証する。とりわけ帰属認知は失敗経験て使用した。６件法を用いて得点化した。

からの感情立ち直りに寄与する重要な要因として考えられ

３）SES（Self-Esteem Scale）ている（Weiner、1974）。ネガティブ感情は主張スキルのRosenberg（1965）が作成したものを山本 ･ 松井 ･ 山成

妨害因子であり（相川、1999）、帰属認知が感情調整に寄が邦訳したもの（1982）で、自尊感情を測定する尺度。10

与して緩衝的役割を果たす可能性がある。

項目からなり、得点化には 6 件法を用いた。

【方

【結

法】

Ⅰ．調査対象果】

表１は、PPG、Kiss18 および SES それぞれの尺度得点

有意抽出法で得られた宮崎県内の健常高校生（総合進学の平均値および標準偏差を、学年別、性別に示したもので科、英語進学科、情報ビジネス学科、情報デザイン学科、ある。それぞれの尺度得点平均値において統計的に有意な普通科）
８校 2408 名（１年生：男 494 名 ･ 女 664 名、２年生：性差および学年差は認められなかった。また各尺度得点分

男 237 名 ･ 女 474 名、３年生：男 208 名 ･ 女 331 名）

布の正規性に問題はなかった。したがって以下の分析は性高等学校養護教諭によってリクルートされた、医療機関

差および学年差を考慮せず全データを集約した。楽観的帰において AD 疾患と診断され、かつ現在も治療を継続し属、主張性、自尊心のいずれも AD 患者が低位であった。

ている AD 高校生男女 53 名（１年生：男 12 名 ･ 女８名、次に、社会的スキル獲得の程度と楽観的原因帰属様式の２年生：男５名 ･ 女 15 名、３年生：男３名 ･ 女 10 名）。

関係が自己評価に及ぼす影響を探るため、Kiss18 と PPG

Ⅱ．調査材料の得点に基づいて、対象者の中から４群を抽出し、自己評

１）楽観的帰属様式尺度—「正−（永続性＋全体性）」

価（SES）得点を従属変数とした一要因の分散分析を行っ

Seligman（1991）が開発した楽観的帰属様式尺度をた。４群の抽出方法は、Kiss18 の平均得点から 0.5SD 以

沢宮 ･ 田上が日本版に改変したもの（1997）で、全 23 項

上を H 群、平均− 0.5 以下を L 群とし、PPG の平均得点

目 か ら な り、 二者択一方式である。
「負−（永続性＋全から 0.5SD 以上をｈ群、平均− 0.5SD 以下をｌ群として体性）」（Permanence & Pervasiveness Bad）
「負−内在

H/h、H/l、L/h、L/l を組み合わせた。各群の人数、平均性」（Personalization Bad）
「正−（永続性＋全体性）」

得点を表２に示す。また、H/h 群と H/l 群の差異は、と（Permanence & Pervasiveness Good；以下 PPG）の３つ

もに高い主張スキル得点を有しながらも、楽観的帰属の強の下位尺度からなるが、本研究ではこのうち PPG のみを

弱に違いを認めるものである。その違いは Kiss-18 のどの使用した。正の出来事を永続性次元と全体性次元に、これ項目得点に反映されているかを検討するために、対応のなは自分にとってよい出来事つまり正の出来事が起きたとき、いｔ検定を行った。さらに、L/h と L/l の間でも同様の検その原因を永続性（永続的か、
一時的か）または全体性（全定を行った。結果を表３に示す。

体的か、特異的か）のいずれかに帰属する次元であり、尺度得点が高いものほど楽観的な帰属様式であることを意味している。

研究２：アトピー疾患者を対象とした集団認知行動療法の適用
日本皮膚科学会が提案する思春期 AD の治療目標とは、

２）Kiss-18（Kikuchi’ s Social Skill Scale･18 項目版）

− 118 −

アトピー疾患者の自尊感情の向上を目指した集団認知行動療法の開発

１）症状はないか、あっても軽く、日常生活に支障がなく、実態の手がかりを得るために日記分析を行った。

薬物療法もあまり必要としない．２）軽い症状は続くが、皮膚科通院中の AD 疾患者 17 名（高校生 13 名大学生

急激に悪化することはまれで、悪化しても持続しない、と４名、全員女子）に２ヶ月間日記をつけてもらい、皮膚症

いうものである。これらの目的を達成するためには、認知状の増悪、軽快の原因を記載するように指示した。分析は行動的な変容とその維持が有効であろう。そこで、AD 疾日記の文章中から、軽快・悪化の事由に相当する記述を抜患の症状を有し、現在も専門医で治療を継続している中学

き出した。２ヶ月の期間に、１人が複数回軽快と悪化を繰から大学期までの思春期事例を対象に予備調査を行い、そ

り返し、その都度、推測する原因も異なるので、表４に示

こであられた知見と上記研究を参考にしながら、AD 患者

す結果は延べ 60 日間、17 名の AD 疾患者が記述したすべ

向け集団認知行動療法を計画した。これはリラクセーショての事由の個数である。

ンの習得、帰属認知の変容、対人コミュニケーションの向

この結果から、AD 疾患者の帰属様式が、①アレルゲン

上、適切なスキンケアと健康習慣行動に関する心理教育か除去食固執型・・・症状増悪が食事のコントロールに起因らなる。その結果、AD 疾患者の自己評価が向上するか否するという考え方、②季節・湿度固執型・・・季節や湿度か検証した。

に関連して増悪するという考え方、③薬剤固執型・・・特定の薬剤の効用に固執する考え方、④行動制御型・・・自【方法】

分の行動が影響を持っているという考え方、に大別できる

予備調査：と思われる。帰属の変容が適応行動をもたらす可能性は十皮膚科通院 AD 患者の皮膚症状の増悪・軽快と帰属の分に考えられるので、AD 向け集団認知行動療法の役割を− 119 −

日常的に経験している思考上の癖が、感情や行動に強い影響を及ぼしていることを知る。特に原因帰属が動機づけや自己評価に及ぼす影響の強いことを知り、そのコントロール方法を体験する。多様な原因を考えられることと、そ表５に示すように、帰属変容法を中心に計画した。

の中から適応的なものを自由に選択する方法を知る。参加
集団認知行動療法の介入研究：者に対しては、原因帰属のことを「原因選び」というわか

被験者：AD 患者 17 名。いずれも皮膚科に通院している

りやすい用語に直し、親和性を保つことにする。

高校生女子で、年齢は 15 歳３名、16 歳７名、17 歳６名、 〈方法〉
18 歳１名、平均年齢 16.2 歳。参加にあたっては書面でホームワークのセルフモニタリングにもとづいた話し合いを行う。Good 大賞と Bad 大賞に選ばれた事項を板書し、インフォームドコンセントを得た。
方法：集団認知行動療法の構成内容（富家他、2000）は以生じた状況を説明する。１つの事象に対するさまざまな原因が列記されたところで、「原因は１つではなく、人によ

下の通りである。
１）心理教育—嗜癖化した掻破行動の消去、２）リラってさまざまに想起されうるものである」ことを指摘する。

クセーション、３）帰属認知の改善、４）対人主張性

さらに、さまざまな原因が列記されているのを見て、そのの獲得、５）母子関係の改善

中でどれが一番受け入れやすい原因であるかを問う。どの

実施期間：８週間８回の集団認知行動療法

原因を選ぶかによって、受け取る感情が異なることを考え

アセスメント：視察による皮膚医学的診断（軽、中、重のる。帰属のレーダーチャートを示し、原因が運・能力・努力・３段階評価）及び心理社会的アセスメントを実施した。

体調・他人・時期に分類できることを説明する。また、各カテゴリーについて具体的に何を思いつけるかを考えさせセッションの構成る。これまでが自由想起であったのに対して、これは課題

第１セッション（リラクセーション）

想起となっている。さらに、レーダーチャートに 10 点満

不安・緊張が強いときは指先などの末梢の循環が悪くな点で当てはまると思う程度を記入し、プロットする（図２）。

っており、リラックスしているときは逆にその部位が温まっているときであることを説明する。

第３セッション（再帰属療法—帰属レーダーチャートと自あらかじめ各患者の前に２つの洗面器をおき、片方に氷由討議）

冷水、片方に温水をいれておく。氷冷水に両手をつけて、宿題にしていたレーダーチャートを発表してもらい、み３０秒程度数える。そのときどのような感じがするかをよなでもっと違った帰属はないか考える。大勢の知恵でたくく味わうように教示する。次に温水に手を入れる。このとさんの帰属が考え出されることを経験する。その後、どうき指先が次第に温まっていく感覚や、リラックスする気持
ちをよく味わうようにする。この動作を２、３回反復した
のち、感想を聞きあう。冷水時、指先の冷たさ以外に頭痛や呼吸の乱れなどを体感できたかどうか確認する。温水時には指先の温感が手のひらの付け根から指先にかけてゆっ
くりと上っていく様子や、そのときに心臓や呼吸、筋肉の弛緩などにどのような変化が現れたかを確認させる。冷水につけたあと、温水につけないで温感イメージだけで温度の回復を試行する。指先まで温まりきらない人もいるが、手のひらの部分は十分に温まることをお互いに触って確認する。
第２セッション（再帰属療法）〈ねらい〉− 120 −

アトピー疾患者の自尊感情の向上を目指した集団認知行動療法の開発

いう帰属がもっとも気持ちによい影響を与えるかについて自身で告げるよりも、分身役に代理で告げてもらった方が、全員の意見を聞く。

強く緊張しなくてすみ、かつ分身役の技術を観察学習できるメリットがある。

第４セッション（アサーショントレーニング第１回—アサーション宣言）うまくできない場合、その原因を考えさせる。たいてい
はコミュニケーションの推移を悲観的に予測しているなど、対人関係の仕組みについて学び、アサーショントレーニ

妨害的な認知要因を持っている。的確な「原因選び」がでングの説明を受ける。はじめに、対人関係のさまざまな場

きているかどうかを確認し、本人にフィードバックする。

面（客であるあなたにウエイトレスが間違えたお皿を持っ時間になったら終了し、講評を行う。評価ポイントは 12てきてしまったとき、あなたは間違いを指摘して正しいお項目ある。１；表情の豊かさ、２；視線の一致、３；正し皿を持ってこさせる、など）というような対人主張性を測い姿勢の保持、４；ジェスチャーの有無、５；声の適切なる質問紙に回答させる。回答終了後、質問項目の中でもっ大きさ、６；相手に伝わりやすい言葉を選んだか、７；自とも苦手とする対人場面について１つ選ばせる。どの場面分の気持ちを正直に述べたかどうか、８；相手の気持ちをを選んだかを集団全員に回答させるが、同時に「なぜそれ確認する言葉やゼスチャーを入れたかどうか、９；臨機応が苦手であるか」という原因も聞く。そのときの理由はさ変な応対ができたかどうか、10；不安の程度、11；思考のまざまに回答されるが、それとは異なる原因を考えた人が混乱の有無、12；無気力、やる気のなさ、の合計 12 項目

いないかを確認する。
「苦手である」と感じている人はたである。最後に、「アサーションのコツ」という小冊子をくさんいても、その原因の選び方にはさまざまな個人差が配布してヒントになりそうな部分を読み上げる。

あることを知ってもらうためである。また、自分はその項
目は苦手でないとする人がいないかも確認する。苦手でな

第６セッション（アサーショントレーニングー伝言ゲーム

いと感じるのはどうしてか、その原因を聞く。このように式ロールプレイング拒否場面）
今回のテーマは拒否場面であるので、断ったり誤ったりして、質問紙をネタにして皆で意見を出し合い、多様な考する場面を選ぶ。また拒否された側の気持ちも聞きだす。

え方が可能であることを知ってもらう。
モデル提示を行う。治療者２名が、円座の前に出て要求①〜⑥までの流れはほぼ同様。

—拒否のやりとりを実演する。その際、ノンアサーティブ、
アグレッシブ、アサーティブの３つのパターンを例示する。

第７セッション（アサーショントレーニングー伝言ゲーム

また、ゼスチャーやボリュームコントロールなどノンバー式ロールプレイング感情表出場面）
感情表出場面とは、単なる用件の伝達ではなく、現在のバル行動の例についてもモデル提示する。
動機づけを高めるために、「私のアサーション宣言５か条」を暗記する。その場で暗記できる人に対しては暗誦させて自分の気持ちや気分を述べる、相手に対する感想を伝える、挨拶をする、などのことである。

みる。そうでない人に対しては暗誦することをすすめる。
第８セッション（アサーショントレーニングー伝言ゲーム
第５セッション（アサーショントレーニングー伝言ゲーム

式ロールプレイング総合場面）

式ロールプレイング要求場面）

基本的な流れは同じであるが、最後は、要求、拒否、感〈ねらい〉

情表出の３つの場面を自由にとりまぜてロールプレイング

ロールプレイングにより、要求場面のアサーションがでを行う（図３）。総合的な評価を中心にする。

きるように練習する。参加予定者の不安が高いことも予想されるため、開始前夜、または数時間前には状況を観察し【結たり声がけをしておく。当日は治療者が部屋の前で迎えて立ち、ひとりひとりに握手してもよい。また、円座の部屋作りを全員で行っても不安軽減作用がある。全員がそろったら、入室者にウォームアップとして温感リラクセーショ
ンか軽い体操を行う。要求場面の伝言ゲームに関する言語教示を行う。伝言ゲームとは、まず隣人とペアになりお互
いに分身役となる。そして、自分が要求したい内容を告げる相手（会場の中から自由に選ぶ）に対して要求内容（自由想定でもヒント集から選んでもよい）を自分の分身役に伝言してもらうという方法である。自分の要求内容を自分− 121 −果】

AD 群の８週間にわたる認知行動療法（CBT）の治療結果を表６に示す。８週間の集団療法期間の前後で比較する

楽観的帰属と主張スキルの間には特徴的な相互補完的関係と、自己主張性（P<0.05）、相手への配慮（P<0.05）、自尊があることが明らかになった。AD 者は健常者に比べてす感情（P<0.05）はいずれも有意に改善していた。

べての心理検査値が悪かった。帰属と主張性の組み合わせ

また、介入期間中は毎日日記をつけるように指示し、特から４分割すると、AD 群も健常群も、自己評価に及ぼすに良かったことと嫌であったことを記載するよう指示した。

影響は高い主張スキルと強い楽観帰属傾向を有する H/h

この快・不快各事態に対する帰属表現部分を抜粋し、帰属群がもっとも良性であり、L/l 群が悪い結果であった。こ

表現数に占める分量を 100％で表記したものが図４である。

のことは、自己評価との関連を論じた従来のスキル研究

再帰属法が話題になる第２セッションまでの日記（約１や帰属研究を鳥瞰しても何ら矛盾しない（Rees&Graham、ヶ月）を Pre の解析に用い、介入終了前最後の１ヶ月を1991;Weiner、1979）。

Post の解析に使用した。Pre においては、快・不快の事態

また H/l 群は L/h 群と自己評価への影響に有意な差が間で差異があった。すなわち、快事態における帰属は「努ないことから、主張スキルに楽観的帰属が伴わない場合、力」などの比較的個人裁量性の高い帰属が可能であるのにスキルの効果は半減する。このことから、主張性と帰属は対して、不快事態になると一転して「努力」帰属が困難に

互いに補完し合いながら自己評価に寄与していると考えらなる。また、不快事態では体調、能力、季節などの裁量性れる。さらに興味深いことは、Kiss-18 全項目を H/h 群との低い原因に帰属する傾向が顕著であった。このことから、

H/l 群、及び L/h 群と L/l 群ので比較したところ、６項目

特に不快経験をしたときに不適応をきたしやすい帰属思考で有意差が出たが、その中の半数は “対人トラブルへの対の特徴を有しているといえよう。これらの現象が Post で処” に関連した項目であった、主張スキルが良くても楽観は改善され、快不快の事態間差がなくなっており、適応的的帰属が未熟なタイプは、“対人トラブルへの対処” を苦帰属が可能になったといえる。

手としていることが判明した。

さらに、掻破行動の自己観察を行い、介入後に掻破行動

では、なぜ “対人トラブルへの対処” には帰属の良し悪が有意に減少（p<0.05）し、その効果が介入終了後２ヶ月

しが効力をもつのであろうか。Graham、S.（1990）は帰は持続していた（図５）。

属スタイルが対人トラブルの行動過程に影響することを指摘し、Milner(1993) は社会的認知理論の中で、帰属の歪み【考察】が正確な対人情報のインプットを妨害することを明らかに

研究１の結果、AD 群において、また健常群においてもしている。また Weiner（1974）は、帰属は失敗経験時の− 122 −

アトピー疾患者の自尊感情の向上を目指した集団認知行動療法の開発

感情の調整に寄与すると指摘している。悪化した感情はス（文

献）

キルの妨害因子であり、対人トラブル場面におけるアサー

１） 奥野英美・勝岡憲生他

2000

成人アトピー性皮膚ティブコミュニケーションを阻害し得るのではないかと考炎患者の心理・社会的要因の研究．

えられる。それに対して、良い帰属は失敗経験後の感情の誌、110、837-844．

悪化を防ぐ機能を持ち、このことは “対人トラブルへの対

２） 奥野英美・上里一郎

処” をスムースに遂行させる要因になるだろう。

1999のストレッサー尺度の作成

アトピー性皮膚炎患者

日本カウンセリング学会第研究２の結果は、AD 患者に対して、集団認知行動療法

３２回大会発表論文集、207-208．

は主張性の向上、及び帰属認知の改善に寄与し、また掻破

３） 富家直明・松坂香奈枝・内海

行動を減少させた。このことは、皮膚科医療や学校保健室などで AD 患者向けに実施する心理的サポートが本人のの再帰属療法と主張訓練

教育科学

2000

摂食障害

6、13-25．

York: A.A.Knopf.
５） 山本真理子・松井豊・山成由紀子

で、主張行動の改善が自尊心を向上させた他に、おそらく社会的ストレスを減少させた可能性がある。今後はスト厚４） Seligman、M..E.P. 1991 Learned Optimism. New

状態を改善することを示す。今後の同疾患者に対するケアのあり方に対し、１つの重要な提言となるだろう。ところ

日本皮膚科学会雑た自己の諸側面の構造

1982

認知され

教育心理学研究30

64-68６） シェーン・リー /R.S. グレイアム共著

1996

高山巌・

レス関連変数を加味した AD の認知行動モデルを検証し、吉牟田直孝・吉牟田直（共訳） 自己表現トレーニング -より改善効果の高い認知行動的介入パッケージを作成した

ありのままの自分を生きるために -い。

67-83 113-129− 123 −

岩崎学術出版社

顔の魅力を規定する要因の実験計量心理学的分析
東北大学大学院文学研究科人間科学専攻心理学講座＊、ATR 人間情報科学研究所＊＊

行 場

次 朗＊、伊 師

華 江＊、蒲 池 み ゆ き＊＊

Two experiments were conducted in order to investigate the psychological factors affecting attractiveness oncomposite faces. Feminized or juvenilized Japanese faces were created by morphing between average male andfemale adult faces or between average male (female) adult and boy (girl) faces. In Experiment 1, the participants
were asked to rank the attractiveness of these faces. The results showed moderately juvenilized faces tobe highly attractive. In Experiment 2, we analyzed the impressions on the composite faces by the semantic
differential method and determined the factors that largely affected attractiveness. Based on the factor scores,
we plotted the faces in factor spaces and analyzed the locations of attractive faces. We found that most of theattractive juvenilized faces involved impressions corresponding with the augmentation of femininity characterized
by the factors of “elegance”, “mildness”, and “youthfulness”, which the attractive faces potentially had.

１．緒

可能性が高いという。この指摘に関して、Perrett et al ６）

言は、成長期において男性の顔は子供の顔から大きく変形す

顔の魅力の評価は、文化的な要因や個人的な好みによっるのに、女性の顔はわずかしか変形しないので、女性的特て左右されると思いがちであるが、近年の研究では、異文性と若年的特性はもともと複雑に交絡していると主張して化間でも個人間でも魅力の評定にかなりの一致がみられるいる。

ことが報告されている１）。それらの研究では、平均顔や対称性の問題が取り上げられることが多い

２, ３, ４）

顔の魅力とネオテニー（幼態成熟）の間には関連性があることが以前から指摘されてきたが７）、男性顔と女性顔に。

最近、男性顔でも女性顔でも、平均顔を適度に女性化す

女性化ならびに子供化変形を施し、それらの顔の魅力度をると魅力が増すことが報告されている。この要因として定量的に比較検討した実験的研究はほとんどない。そこでPerrett et al ３）は、女性的な顔が温和性や誠実性などのポ

今回の研究では、日本人男性、女性、男児、女児の平均顔ジティブな性格特性を感じさせるのに対し、男性的な顔はをそれぞれ作成し、女性顔と男性顔の間でモーフィングを

支配性、攻撃性、冷徹性などのよりネガティブな性格特性行うだけでなく、女性顔と女児顔、男性顔と男児顔の間でを感じさせることをあげた。

もモーフィングを行って合成顔を作成した。そして、実験

しかし、Meyer & Quong ５）は、女性化の効果は、３つ１では、被験者にそれらの合成顔の魅力度を順位付けしての異なった側面、つまり生物学的、画像的、心理的側面か

もらい、女性化変形と子供化変形のどちらが魅力度をよりら注意深く考察する必要があると説いた。生物学的側面と高めるのか検討した。実験２では女性化変形と子供変形のは、成長に伴うホルモン変化によって、顔の形態がどのよ

心理的側面を分析するために、セマンティックディファレ

うに変容するかに対応する。画像的側面とは、モーフィン

ンシャル（SD: semantic differential）法８）をもちいてそグによって作り出される男性顔と女性顔の間を連続的に移れらの変形を施した顔が生み出す種々の印象を測定し、主行する変形特性にあたる。心理的側面は、種々の形状の顔要因子を抽出した。そして、それらの因子の中で、魅力度からどのような印象が感じられるか、人間の感受特性に対に特に大きな影響を与える因子を確定し、従来の知見もふ応する。Meyer & Quong

５）

は、顔の画像的変形は生物学

まえて包括的な考察を行った。

的変形とは異なるものであり、心理的側面でも予想外の影

２．実験１

響があらわれる場合があることを指摘した。例えば、画像的に女性化された顔は、生物学的側面における女性的特性

女性化ならびに子供化変形を施した合成顔の魅力度を測を増強させたというより、むしろ若さが強調されてしまう

定する際に、本研究では順位法を用いた。これは、複数のPsychophysical investigation of factors
affecting facial attractivenessJiro Gyoba
Department of Psychology, Graduate
School of Arts & Letters, Tohoku
University

合成顔を同時に被験者に見せ、その中から魅力度が高いと感じられるものを第１位から３位まで順位をつけて選んでもらう課題である。このような方法を採用した理由は、平均顔をモーフィングして作成される合成顔は、一般にどれも整った顔立ちで類似性が高いので、それらの間で魅力度の相対的違いを判断するには、同時比較を行い、高低を決− 124 −

顔の魅力を規定する要因の実験計量心理学的分析める必要があったためである。

mf50 と fm50 は男性平均顔と女性平均顔の特性を 50% ず
つ含む画像なので両者は同一の画像となるが、本実験では、

２．
１．方

法

それらを男性の顔、あるいは女性の顔として取り扱う場合

２．１．１．被験者があるので、別の名前を付けて呼ぶことにする。合成顔は男女大学生それぞれ 28 名ずつが実験に参加した。平均
年齢は 21.02 歳であった。

全部で 80 パタン作成され、楕円形のフレ−ムをつけて切り出したのち、高画質プリンター（Epson MP840C）を使って A6 サイズで印刷された。

２．１．２．顔画像の作成
最初に日本人女性、男性、女児、男児の平均顔を作成

２．
１．
３．顔画像の提示した。図１に示すように以後、それぞれの平均顔を F100、

図２に示すように男性の平均顔 M100 を中心として女性

M100、G100、B100 とよぶことにする。平均顔のモデルとなったのは、年齢が 20 歳から 30 歳の成人女性と男性それぞれ 20 名、6 歳から 7 歳の女児と男児それぞれ 20 名であった。顔画像はすべて特定の表情を表出していない真顔を正面から撮影したもので、FUTON システム９） を用いて 87 個の特徴点にもとづいて数値化され、XY 座標値とRGB 値について平均値が計算された。すべての顔画像のサイズは、瞳孔間距離が一定になるように標準化された。
顔のテクスチャーについても標準化してから一定に設定されたが、これは今回の実験では顔の魅力度に及ぼす形状的要因に焦点をあてて検討するためである。
つ ぎ に、F100 と M100、F100 と G100、M100 と B100の間で 10％きざみでモーフィングを行った（図２）。例え
ば、mf90 という符号がつけられた合成顔は、男性の平均顔の特性を 90％と女性の平均顔の特性を 10％含むように作成された中間的画像である。一方、mf110 と呼ばれる合図１

成顔は、男性の平均顔を女性の平均顔からより反対方向に離れるように 10％誇張した画像である。図２において

図２

本研究で用いられた平均顔（左上：男児の平均顔、右上：
女児の平均顔、左下：男性の平均顔、右下：女性の平均顔）。
その他の合成顔はこれらの平均顔に基づいて作成された（図２参照）。

合成顔の作成方法を図式的に示したもの（詳しくは本文参照）。左下の円内の合成顔は男性顔に対応し、右下の円内のそれらは女性顔に対応する。

− 125 −

化変形と子供化変形の２方向にわたってモーフィングされより魅力度を増強しているといえる。男性顔では、女性化

た 21 個を男性合成顔として提示した。同様に、女性の平変形と子供化変形をしたものの両方において魅力度が高い

均顔 F100 を中心としてモーフィングされた 21 個を女性顔として選定されているが、上位にあげられた合成顔の魅顔として提示した。すべての顔画像は A6 サイズのカード

力度得点の差はわずかである。

ケースに入れて被験者に提示された。

つぎに、女性化変形率と子供化変形率を説明変数として、魅力度得点を予測する重回帰分析を行った。その結果を表

２．
１．４．手続き２に示す。男性顔では回帰式の重相関係数は高く、女性化

被験者は２グループ（それぞれ男女 14 名ずつ）に分け

変形率と子供化変形率の標準偏回帰係数はともに有意であられ、各グループの被験者は、11 個の男性顔と 11 個の女った。女性顔でも回帰式は有意であったが、子供化変形率

性顔を別々に評価した。それらの合成顔は 20％きざみでの標準偏回帰係数のみが大きく、有意であった。これらのモーフィングした 10 個に M100 あるいは F100 を加えた

結果は、表１の結果と同じ傾向を示しており、男性顔におものである。２グループの被験者は、相補的に異なったモ

いては女性化変形と子供化変形の両方が魅力度を増加させーフィング率の合成顔を評価したので、両グループのデー

るのに有効であるのに対し、女性顔においては、子供化変

タをあわせれば結果として 10％きざみに変形されたすべ形のほうが魅力度をあげるより優勢な要因になっているこての合成顔についてデータが集められた。両グループの評とを示している。

価の等質性はすべての被験者に提示された M100 と F100に対する判断に差がないことをチェックすることで確認された。各グループにおいて、半数の被験者は男性顔を先

２．３．考

察

Perrett et al ３）の研究では、被験者は女性化変形を連続に、残りの半数は女性顔を先に評価した。いずれの場合でも被験者の課題は、同時に机の上にランダムに並べられた11 個の合成顔の中から、魅力度が高いと感じられるもの

表１

を第１位から３位まで順位をつけて選んでもらうことであ
った。

２．
２．結

果

魅力が高いと判断された上 ５つの合成顔。
魅力度得点（attractiveness score）は順 法（本文参照）に基づいて算出されたものである。選出頻度（percent frequency）は、全被験者の判断を して、それぞれの顔がどれくらいの確率で上 ３ 内に選ばれたのかを示す。

被験者が第１位に選んだ場合には３点、第２位は２点、第３位は３点を与え、各合成顔で合計して魅力度得点（attractiveness scores）を算出した。この得点は、それぞれの顔の絶対的な魅力度を表すものではなく、男性顔、女
性顔内の相対的な魅力度の違いをあらわす。魅力度得点が高かった合成顔を表１に示した。
被験者間の判断の一致性をみるために、それぞれの顔を第３位以内に選んだ被験者の人数をカウントした。表１に示された魅力度得点が高い顔はどれも多数の被験者が選んでおり、被験者間の一致性は高いといえる。特に女性顔でその傾向が顕著である。
表１にあげられた高魅力度得点の女性顔は、大部分が子供化変形を施した合成顔であることがわかる。このデータを見る限り、女性顔では、女性化変形よりも子供化変形が
表２

女性化変形率と子供化変化率を説明変数とした魅力度得点の重回帰予測。

− 126 −

顔の魅力を規定する要因の実験計量心理学的分析的に施した合成顔の一覧からもっとも魅力度が高いものをプロセスは、種々の印象によって影響を受けるが、それら選ぶように教示された。その結果、男性顔でも女性顔でも、の印象は、比較的少数の潜在的な心理的要因にまとめられ女性化変形を適度に施した顔が好まれた。今回の実験では、ると考えられる。もしそうなら、顔の魅力とそれらの要因

女性化変形だけではなく、子供化変形についても実験的検の間には相関関係があるはずである。

討がなされたが、特に女性顔については女性化変形よりも実験２では最初に SD 法を用いて合成顔の印象を複数の子供化変形のほうが魅力度を増加させるのに有効であるこ評定尺度で測定した。つぎにそれらの印象を規定する因子とを示す結果が得られた。

と、実験１で求めた魅力度得点の間の相関係数を算出し、10）は以前より、若年性は魅力を規定する重魅力度に有意に影響を与える主要因子を抽出した。それら

要な要因の一部であることを主張している。また、若年性の主要因子で規定される空間上に平均顔とともに高魅力のは Meyer and Quong ５）によって、画像的女性化により潜合成顔をプロットし、それらの位置関係の意味を考察した。

Cunningham

在的にもたらされる効果であることが指摘されている。実
際、若い女性の顔が小さくて狭い顎、大きな目と短い鼻な３．１．方

ど、物理的にも子供に似た特徴をもっていることが示され

３．
１．
１．被験者

ている 11,12）。また、コンピュータグラフィックツールを用いて、被験者のイメージにもとづいて顔を生成させると、

法日本人大学生および大学院生男女各 27 名で、全員、実験１に参加しておらず、平均年齢は 20.95 歳であった。

女性の顔と子供の顔は計量的には同一のカテゴリーに分類できることが報告されている 13）。これらの結果は魅力的

３．
１．
２．顔画像

な女性の顔と子供の顔には、心理的に共通する意味や特性が含まれる可能性を示唆している。

実験１で作成した 80 個の合成顔について、半数の被験者が半数の顔画像を、残りの半数が残りの顔画像を評定ししたがって、つぎの実験では、女性化変形や子供化変形た。

を施した合成顔が、実際にどのような印象をかもしだすのか SD 法を用いて調べ、顔の魅力度に実質的な影響を与え

３．
１．
３

SD 尺度の選定と手続き

実験２に先立って行われた予備実験では、SD 法を用いる心理的要因を抽出する。

た顔印象の測定でよく使われる 31 個の形容詞対を用いた。

３．実験２

被験者は実験１に参加しておらず、実験２にも参加する予実験２の主要な目的は、合成顔が生み出す種々の印象と定のない 20 名であった。40 個の顔を被験者間で統制され魅力度の関係を分析することである。顔の魅力を評価する

た順序で提示し、７段階尺度で評定を行った。得られた評定値について予備的な因子分析を行い、因子負荷量と共通

表３

SD 法により得られた合成顔の印象の因子構造− 127 −

性を考慮して有効性の高い形容詞対を 18 個選定した（表Adult、Boy、および Girl という記号で図３にプロットした。

３参照）。実験２の被験者はそれらの尺度で評定行った。

さらに、それぞれの平均顔（M100, F100, B100, G100）と、その他の手続きは予備実験と同じであった。

魅力度得点が高かった上位３つの合成顔（mb60, mb70,
mb80、ならび fg60, fg80, fg70）も同時にプロットした。

３．
２．結果と考察「美感性 - 柔和性」の因子空間では（図３A）、Girl の「美３．
２．１

感性」が最も高く、つぎに Female Adult、Boy の順にな

因子分析

全被験者の評定データはまとめて直交解主因子法によるっている。Male Adult の「美感性」
はかなり低い。
「柔和性」

因子分析にかけられ、バリマックス回転が施された。固有に関しては、Female Adult が最も高く、Girl が２番目で値が１以上の因子が４つ抽出されたが、それらの因子負荷ある。Boy と Male Adult の「柔和性」得点はともに低い。

量を表３に示す。これらの因子はそれぞれ、「柔和性」（代

同様の傾向は、平均顔である M100, F100, B100, G100 の間

表的形容詞：やさしい、あたたかい）、「美感性」（美しい、でも認めることができる。最も魅力度得点が高かった女性

上品な）、「若年性」（若い、こどもらしい）、「活力性」（元

顔（fg60）は、Female Adult や Girl よりも「美感性」が気な、活発な）と名づけられ、累積寄与率は 63.5％であった。

高く、「柔和性」に関しては、Female Adult と同じくらいの得点であった。興味深い点は、fg60 は 40％女児化した

３．
２．２

因子得点と魅力度得点の相関のにもかかわらず、この因子空間内では、Male Adult と実験１で求めた魅力度得点と因子得点の相関を求めた

Female Adult を結んだ線の延長上にあることである。同ところ、有意な相関が得られたのは「柔和性」（男性顔、様の傾向は、魅力度得点の高い fg80 と fg70 についてもいr=0.558 p < .05; 女性顔、
r=0.460 p < .05）
「
、美感性」
（男性顔、

える。このことは、画像的に子供化した高魅力の女性の顔

r=0.814 p < .01; 女性顔、r=0.576 p < .01）、そして「若年性」

は、実は心理的には女性的印象の増強に対応した特性を持（男性顔、
r=0.490 p <.05; 女性顔、
r=0.406 p < .05）
であった。

つことを示している。一方、男性顔でもっとも魅力度得点

したがって、これら３つの因子が魅力度を規定しているこが高かった mb60 は、「柔和性」に関しては Male Adult ととが示された。

同程度であったが、「美感性」は Male Adult よりも Boyに近かった。

３．
２．３

因子得点による魅力度得点の重回帰分析「美感性 - 若年性」の因子空間では（図３Ｂ）、Girl の

表４に３つの因子得点を説明変数として、魅力度得点を「若年性」得点が最も高く、つぎに Boy、Female Adult、

重回帰予測した結果を示す。男性顔における重相関係数はMale Adult の順であった。同様の傾向は、平均顔である

2

2

R =0.73、女性顔のそれは R =0.38 であり、どちらも有意M100, F100, B100, G100 の間でも認められた。非常に興味であった。標準偏回帰係数をみると、「若年性」につく係

深い点は、この因子空間上では、魅力度得点が高かったす

数に比べて、「柔和性」と「美感性」には比較的大きな係

べての合成顔（mb60, mb70, mb80, fg60, fg80, fg70）は、数がついていることがわかる。このことは、心理的な要因

Male Adult と Female Adult を結ぶ直線上か、その延長では、「柔和性」と「美感性」のほうが「若年性」よりも上にあり、しかもより女性的特性を強める方向に位置する

魅力度に大きな影響を与えていることあらわしている。

ことである。
これらの結果は、男性顔でも女性顔でも、画像的に子供

３．
２．４

因子空間上での高魅力度合成顔のプロット化され、魅力度が高いと評価された合成顔は、心理印象空

合成顔ごとに因子得点を求めた。さらに、それぞれ 21
枚ずつの男性、女性、男児、女児の合成顔について、それ間上では、実は女性的特性を増強した特性を持っていることを示している。

らの平均因子得点を求め、それぞれ Male Adult、Female

表４

因子得点に基づく魅力度得点の重回帰予測− 128 −

顔の魅力を規定する要因の実験計量心理学的分析

図３

因子空間上での魅力的な顔のプロット。Male Adult、Female Adult、Boy、Girl などの記号は、それぞれ男性、女性、男児、女児の合成顔の平均因子得点をあらわす。その他の記号については図２を参照のこと。Male Adult と Female Adult をつなぐ点線は、心理印象空間上における男性顔と女性顔の連続的変化に対応する。Ａ）横軸は「美感性」因子、縦軸は「柔和性」因子の高低をあらわす。
Ｂ）横軸は「美感性」因子、縦軸は「若年性」因子の高低をあらわす。

化された顔に魅力を感じるのは、心理的側面から分析する

４．総合考察と、子供らしい印象に依拠するものではなく、むしろ女性本研究では、日本人男性と女性の平均顔間でモーフィン

顔が潜在的にもつ「美感性」や「柔和性」に代表される特グを行い、女性化変形をかけた合成顔だけでなく、男性と性を強めた印象に基づくものであることが明らかにされ男児、女性と女児の平均顔間でもモーフィングを行い、子た。

供化変形を施した合成顔についても魅力度や印象特性を調べる２つの実験が行われた。

最後に、本研究では顔形状の効果に焦点をあてたために、合成顔のテクスチャーは一定に操作されたが、テクスチャ

実験１では、順位法によって魅力度得点を求め、女性化

ーが魅力におよぼす影響は重要であることが知られており変形と子供化変形のどちらが魅力度を増大させるのに効果

14）

的であるのかを調べた。その結果、女性顔では女性化変形

化変容を施し、より総合的に顔の魅力を規定する心理的要

よりも子供化変形を施した合成顔のほうがより魅力度が高因を検討する研究が望まれる。

、今後はテクスチャー情報についても女性化および子供

いと評価された。男性顔では、両変形が同程度に好まれた。
これらの傾向は、女性化変形率と子供化変形率を説明変数付記に用いて魅力度得点を予測した重回帰分析でも確かめられ載された同内容の論文 15）を和訳し、編集したものである。

本稿は著者らにより執筆され、Perception 誌に掲た。
しかし、実験２で合成顔の種々の印象を SD 法によって（引用文献）

分析したところ、魅力度が高いと評価された合成顔の大部

１） Langlois, J. H., Kalakanis, L., Rubenstein, A. J.,

分は、画像的に子供化変形を施したものでも、実際には女Larson, A., Hallam, M., and Smoot, M. 2000 Maxims

性的印象を増強した特性をもっていることがわかった。因or myths of beauty? A meta-analytic and theoreticalreview. Psychological Bulletin, 126, 390-423.

子得点から魅力度得点を予測する重回帰分析では、「若年性」因子の効果はそれほど強いものではなく、むしろ「美２） Langlois, J. H. and Roggman, L. A. 1990 Attractive

感性」や「柔和性」が魅力度を増強するのに大きな影響力

faces are only average. Psychological Science, 1, 115-を持っていることが明らかになった。

121.

本研究で得られたこれらの結果は、顔の魅力を考察する

３） Perrett, D. I., Lee, K. J., Penton-Voak, I., Rowland, D.,

際に、生物学的側面や画像的側面だけでなく、心理的側面

Yoshikawa, S., Burt, D. M., Henzi, S. P., Castles, D., andの考察が重要であることを示すものである。画像的に子供

Akamatsu, S. 1998 Effects of sexual dimorphism on− 129 −

10） Cunningham, M. R. 1986 Measuring the physicalfacial attractiveness. Nature, 394, 884-887.
４） Rhodes, G., Yoshikawa, S., Jeffery, L., Clark, A., Lee,in physical attractiveness. Quasiexperiments on

K., McKay, R., and Akamatsu, S. 2001 Attractivenessthe sociobiology of female facial beauty. Journal ofof facial averageness and symmetry in non-western

Personality and Social Psychology, 50, 925-935.

cultures: In search of biologically based standards of11） Montague, A. 1989 Growing young. 2nd edition (NewYork: Bergin & Garrey Publishers)

beauty. Perception, 30, 611-625.
５） Meyer, D. A. and Quong, M. W. 1999 The bio-logic of12） Zebrowitz, L. A. 1997 Reading faces - Window to theSoul? (Westview Press, A Division of HarperCollins

facial geometry. Nature, 397, 661-662.
６） Perrett, D. I. and Penton-Voak, I. S. 1999 Reply: The

Publishers, Inc.)
13） Yamaguchi, K. M. and Oda, M. 1996 Study on

bio-logic of facial geometry Nature, 397, 662.
７） J o n e s , D . 1995 S e x u a l s e l e c t i o n , p h y s i c a lcreating different facial images for age and sex.

attractiveness, and facial neoteny cross-cultural

Information Processing Society of Japan, SIG Notes,

evidence and implications. Current Anthropology, 36,

HI64-2, 7-12. [in Japanese]
14） Fink, B., Grammer, K., and Thornhill, R. 2001 Human723-748.
８） Osgood, C. E., Suci, G. J., and Tannenbaum, P. H.

(Homo sapiens) facial attractiveness in relation to skin1957 The measurements of meaning. Univ. of Illinois

texture and color. Journal of Comparative Psychology,

Press, 275-284.

115, 92-99.

９） Kamachi, M., Bruce, V., Mukaida, S., Gyoba, J.,15） Ishi, H., Gyoda, J., Kamachi, M., Mukaida, S., andYoshikawa, S., and Akamatsu, S. 2001 Dynamic

Akamatsu, S. 2004 Analyses of facial attractiveness onproperties influence the perception of facial

feminized and juvenilized faces. Perception, 33, 135-145.

expressions. Perception, 30, 875-887.

− 130 −

奇抜な化粧─文化の表現と表情？（ヴィジュアル系の顔：原因と影響）
千歳科学技術大学

Johnathon John
The Harajuku Jingu-bashi cosplay is a remarkable expression of youth sub-culture which, through Media attention
inside and outside of Japan, has come to represent: 'The Face of Japan'. The sources of the cosplay are the costume,hairstyles and make-up of Japanese Visual Bands (Visual Kei). Though the use of eXtreme make-up by rock bands
is not unknown outside Japan, and though the mimicking of bands' style by fans is nothing new, yet the Jingu-bashi
phenomenon is unique in itself, and the Visual Kei trend is uniquely Japanese-not least in that Japan has a traditionof eXtreme make-up in Popular Culture: Kabuki, Geisha, Takarazuka. Though these have had and do have a strong
following of dedicated-even fanatical-fans, none of them have had the direct spill-over effect of the Visual Kei.
Since my research interests lie in various aspects of 'face'-physical and metaphorical-and even though in actuality 'face'cannot be isolated from other aspects of human display, I was motivated to delve into the significance of the phenomenon
in general and, more specifically, to search for meaning in the eXtreme make-up tradition:◦ What is the significance of the eXtreme make-up tradition?
◦ Are Japanese Visual Kei a manifestation of this tradition?
◦ Is the Jingu-bashi phenomenon indicative of traits in Japanese self-expression?
◦ What conclusions (if any) can be drawn with regard to Japanese face, make-up, and self-expression?
It is a complex matter, overlapping several fields and eras. Simply:◦ Traditional geisha and kabuki faces (modes of facial-display using eXtreme make-up) have come to be symbolic ofJapan and Japanese-and they express certain ideals of demeanor and expression.
◦ Though the roots go back further in time, these faces are redolent of the Edo era-in particular the ethos of the'Floating World'.
◦ Such ideals and ethos have been powerful influences on the cultural psyche of contemporary Japan, perpetuating
traditions of facial-display in relation to status, gender, and emotions. These traditions seem to be based on theconcept of 'ideals'.
◦ The Visual Kei ethos exhibits many parallels with that of the 'Floating World', but a sub-culture of young Japanese
are using it to subvert the traditions of facial- display and self-expression.
◦ Though Visual Kei Cosplay is, in its entirety: 'copying'-yet it is seen as 'self-expression' by those who do it.
Though it is impossible to assess the historical or socio-cultural significance of trends and events while they are
happening, my personal sense is that the Visual Kei / Cosplay phenomenon represents tradition in transition.

１．緒
１．
１

状

にした。日本人の若者たちが、お気に入りのヴィジュアル

言系バンド─その突飛な化粧と衣装のためにそう呼ばれる─

況と張り合うように、手の込んだ衣装、ヘヤースタイル、化

この研究の出発点は原宿神宮橋コスプレ現象であった。

粧を身に着け神宮橋周辺を練り歩いていた。同じ興味を共そのような現象が組織も経済的基盤もなく、階級制度もな有する人間のどの集団でも明白である一種の仲間意識とはく、いかなる種類の計画もマネージメントもなく何年もの別に、そこにパフォーマンスあるいはディスプレイの大き間起こっているということは、私にとって驚くべきことでな要素も見られる。そして常にコスプレイヤーと同じくらあった。それはサブカルチャーの純粋な現れであるばかり

い多くの見物人─一般大衆やマスメディア─がいて、写真

でなく、顔に関する研究のいくつかの関心事という見地かに撮られたり撮ったりで周辺は大変な活気である。また、らまた私の興味を惹いた。

一人一人が、そしてお互いに、化粧や髪直しといった身づ今から８、９年前に私は偶然神宮橋コスプレイヤーを目
eXtreme Make-up ─ eXpression(s) ofa Culture?（The Faces of 'Visual Kei':
Origins & Influences）

くろいに多くの時間をかける。これらの活動は儀式的で部族的に見え、民族誌研究の写真や 'Decorated Skin' １）のよ
うなボディディスプレイの本や Leni Riefenstahl のアフリカの写真を思い出させる。このような本はナショナルジオ

Johnathon John

グラフィックのような雑誌と同様、そのような人間の行動

Chitose Institute of Science & Technology

を「異国風の別のもの」─ 一種の文化覗き趣味─として常に視線を向けている。そしてマスメディアの神宮橋への大規模な取材には大いにその傾向が見られる。

− 131 −

神宮橋現象がマスメディアの注目を大いに集めていると─の一部であるため、いくつか副題をつけ説明することにいう事実は、小サブカルチャーの数百人の参加者たちを現より論を進めていくことにする。

代日本の世界的な代表という立場まで押し上げているとい⃝ The Face of Japan' ─日本と日本人の本質─「日本人う理由で興味深い。eXtreme ディスプレをしたこれらのらしさ」を描 し分類するためにマスメディアで頻繁に少女たち（ほとんどが少女である）は、
世界中で「日本の顔」

使われる言葉となった。実際彼女たちは、自分たちに刺激を与えたバン⃝「顔」と日本に関連する典型表現、決まり文句

ドよりもはるかに世界的なマスメディアに登場している。

⃝「顔」の形象と象徴表現を通しての日本のマスメディア

最も驚くべきことは、それが公衆の出来事であるというの代表表現─特に、謎、仮面、二重性、反射鏡２）（図１〜８）

事実である。私には現代若者文化─（おそらく他の国より⃝徳川時代の「顔」図像研究─芸者、歌舞伎を通しての日も日本で）社会に幅広く普及する影響を持つ文化─の強力

本のマスメディアの代表表現（図１〜８）な流れを示唆しているように思えた。実際のところ最初は⃝性の伝統的、現代的代表表現

若者の間でさえも主流のファッションでもなく一般的な公⃝顔、謎めき、表情、自己表現

衆の行動でもなかったが、ファッションに広く及ぼす影響はすでに明確で、最も顕著なのは、最近日本中のストリー

原宿コスプレ現象は、'Looking Japanese' に総体的に関トで見られるゴシックロリータスタイルである。また化粧連するものとして私の関心を惹き、特に以下のことについ法にも変化の形跡が見られ、直接的にヴィジュアル系に帰ての調査を思い立った。

属していてもそうでなくても、発展し続ける流行の徴候で⃝全ヴィジュアル系・コスプレ現象の魅力あることは明らかである。

⃝表現方法としての奇抜な化粧の個人的および社会文化的１．
２⃝ヴィジュアル系・コスプレに見られる化粧 / フェイシャ

意義とは？

状況１：ヴィジュアル世界［ここからはヴィジュアル世界とその精神を意味するの

ルディスプレイと、日本の大衆文化における伝統的なそにヴィジュアルという言葉を用いる。これはこの世界で一れとの関係

般的に使われている意味である。視覚の要素に触れるときこれらのことは厳密に求められるとは思わないが、このは英語の「visual」を用いる。
］
神宮橋現象は、驚くほど広範囲で複雑で変化に富んだ世研究を進めることによって人と顔に関する何かを発見し、界─ヴィジュアル世界─であると私が感じたこの国の若者

現代日本人の「顔表現」の諸局面をまとめようと思った。

の流行の最も人目を引いた現れである。

２．方

ヴィジュアル世界：⃝多数のヴィジュアル系、幅広い音楽、視覚的な概念の多
様性

２．１

目

法：目標・内容・意義

標

日本の社会におけるサブカルチャーのある行動パターン⃝ライブコンサートに向けられる全国的規模の演奏会場ネやそれらの成り行きを同時代的に実証しようとすることは、ットワーク、無数のバンドが日本国内で演奏を展開

困難な仕事である。実際のところ、私は後付で文脈を整え⃝月刊または月２回発行の専門誌、CD、DVD、書籍、ポるというぜいたくなことはしないで社会の歴史を目指してスター、他の商品等を扱う専門店

いた。このように当研究を進めるうちにいくつか困難な面⃝個々のバンドのホームページ、ファンによって作られた非が持ち上がってきた。解明すると以下のようになる。

公式サイト、VISUNAVI.COM のような専門のウェブサイト
⃝ Punk の K.Naoto から「ゴシックロリータ」の Atelier

２．１．１

内

容

Boz、Alice Aluua の暗鬱な S/M に影響されたスタイル⃝前述のようにヴィジュアル世界は広大で複雑である。─

に至るまで、「盛装」の全サブカルチャーに深く浸透し従って私は読み手側の予めの知識を想定しないことにしたその全国的なファッションレーベル

た。
⃝実際のところ化粧の役割とコスプレの他の面（衣装、ポ一口に言えば、事実と心象と感銘の紛れもない万華鏡によって、私の知識は拡張し、私の視野は広がり、私の見地は変わったのであった。

ーズ、表情）との間に一線を画すのは不可能であるため、これらのことも同様に考慮に入れている。
⃝ヴィジュアル系の視覚的な局面は、日本の他の形の大衆
文化─特に、歌舞伎、浮世絵、芸者の世界、宝塚、アニ

１．
３

状況２：'Looking Japanese'

メ、そして少女漫画─と密接に相互の原点を同じくする

この研究は私の「顔」に関する全調査─ 'Looking Japanese'

ものである。そのためこれらを切り離して考えることは− 132 −

奇抜な化粧—文化の表現と表情？ ( ヴィジュアル系の顔：原因と影響）

図１〜８

The Face of Japan：仮 と二 性と江戸時代のスタイル

ァン─は「このテーマに関して誰でも深く考察できると不可能と言える。

は夢にも思わなかった」と述べた。

⃝世界的大衆文化の現代世界においては、外国の影響もまたプレイに入り込んでいる。例えば、Glam、Glitter、

彼女はその後、実に詳しくそして非常に啓発的に２時間

Punk などでそれらはより複雑さをもたらしている。

話し続けた。残念ながらそのような思慮深く一貫した入力情報はヴィジュアル系のファンの間では珍しく、私が関心を持つ要素は意識的な意義を持っていない。

本テーマはこのように非常に広範囲に及んだため、私の収集した情報と構築した考えは、複雑で、様々で、幾重に⃝同様に私は東京で Shoxx 誌の編集長と話してみた。熱も重なり、そして明確な表現法には十分に適しているとは狂的な音楽信者（週４回のライブ）であるが、彼にとっ言えない。しかしながら、私はできるだけ首尾一貫した包ての「顔」の局面はまったく関係のないものであった。

括的な方法を用いて、前述の「事実、心象、
感銘 ... の万華鏡」⃝このように直接的な情報は私が期待したよりも乏しかった。

を可能な限り多く表すように努めたい。
２．
１．
２

３．結

意義：主観的さ・客観的さ

中間報告書で述べたように、世界間の接点を見出すこと

３．１

果：ヴィジュアル系・コスプレ・自己表現
ヴィジュアル系

は問題の余地を残している。私が捜し求める意義はただバ十分興味深いことであるが、私が 'eXtreme make-up' とンドメンバーとコスプレーヤーを考えるのに何の役割も持いう表現を用いて以来、ヴィジュアル系現象を呼び起こし

たない。─主観的な見方と客観的な見方の間に以下のようていると常に信じられていた日本のバンドは、X と呼ばれに格差がある。

た。後に X Japan と名前を変えるが、この名前で彼らは⃝バンドメンバーに配られた約 100 のアンケートのうち、広く知られている。
「X Japan は、その独特な化粧、重力に戻ってきたのはわずか２枚であった。

逆らうカラフルな髪型、風変わりな衣装、そして芝居がか⃝コスプレーヤーへの 120 のアンケートのうち７枚だけがったステージ上の奇怪な行動で、間違いなく伝説と呼ぶことができる数少ないロックバンドのうちの一つである。
」３）

戻ってきた。
⃝私の研究に興味を持つ学生の一人─ヴィジュアル系のフ− 133 −

驚くべきことに、visual 要素はヴィジュアル現象全体にとって明らかに中心的なものなので、私が接近した情報源

率いる Culture Club がある。

は衣装や化粧にほとんど注意を向けていない。音楽評論家（しかしまた私は、Kiss や David Bowie は歌舞伎からのイの市川哲史はヴィジュアル系へのアメリカの影響としてメージに影響を受けたということを読んだことがある。従

Kiss や The New York Dolls を、イギリスの影響としてって、X Japan やヴィジュアル系に影響したものは再び廻David Bowie や Marc Bolan を挙げているけれども、かなってきたのかもしれない。）

りの情報を載せている「X Japan と「ヴィジュアル系」黄金伝説」の中でさえも visual はほとんど考慮されていな

市川哲史はまた、日本にはロックンロールの土台がないい。社会の流行は空白の中には存在しない、がそのようなので、ミュージシャンたちは音楽的にも他の面でもあらゆ

流行を追跡することは厳密な科学ではない。いずれにしてる種類の影響を受け入れることができ、そのため日本独特

も、文化の同化作用は常に大部分が無意識の過程なのであのスタイルを「何でも通用する」方式で創り出すことがでる。従って、ヴィジュアルの情報源やインスピレーション

きた、と述べている。

を正確に量ることは不可能である。しかしながら、

けれどもヴィジュアル系は決して X Japan のクローン⃝文書化はされていないが、X Japan と歌舞伎の間には明らかに visual 関連があると思われる（図９）。

ではなく、かなりの多様性を持っている。それでは、ある
一つのバンドをヴィジュアルと分類するためにいかなる基⃝ X Japan が解散したとき、Shoxx 誌の特集で、大衆文準を用いればいいのであろうか？

それは音楽に基づくも化の様々な分野で働く日本人の反応を載せていた。歌舞のではないことは確かである。なぜなら音楽は、ヘビーメ

伎役者の坂東亀三郎は、「同じ匂いがした ...。僕たちのタルからインダストリアル−ゴス、ロック、ポップロック、

パクリ！！って思った。
」

４）

バラードに至るまで幅広く網羅するからである。

と述べた。

⃝私は、X Japan 創設メンバーの一人である Yoshiki が、

visual 面は明らかに主要な部分である。前述のように、

Glam や Punk が流行っていた 1970 年代に登場した Kiss、

ヴィジュアルは舞台での演奏と同じく個人のディスプレイ

T-Rex、Queen ５）のようなバンドのファンであったといにまで及ぶ。私の焦点は「ディスプレイ」であり、この中うのを読んだことがある。これらのバンドのスタイルがにはまたかなりの多様性が存在している。

影響していたということは驚くことではない。

⃝宝塚風の La Reine.

⃝別のメンバーである Hide は、「Kiss を崇拝していた」６）⃝アニメらしい Psycho le Ce Mu.
⃝ Gothic-Versailles っぽい Moi dix Mois.

と言われている。
⃝ The New York Dolls（1970 年代のアメリカのバンド）⃝または美少年っぽい人格ラジオもまた影響を与えたとして引き合いに出される。
⃝その原点として時折話題に上るバンドには、Boy George

図９⃝ダンジョン風 Deadman か Schwartzstein。
⃝または Kagrra の徳川時代スタイル

X Japan と歌舞伎

− 134 −

奇抜な化粧—文化の表現と表情？ ( ヴィジュアル系の顔：原因と影響）

その後主流の座を獲得していった」９）。

⃝またはヘビーメタル陰陽座の平安時代スタイル⃝または幾何学的な Pierrot

３．２．２⃝そして（将来性のある）Malice Mizer

神宮橋カルチャー 10）

ヴィジュアル系現象の最も人目を引く影響が見られるの
このような多様性を持ち合わせる状態で共通の要素を見は神宮橋コスプレであり、それはこの研究へのインスピレ

分けることは実際に可能であろうか？ 「X Japan と「ヴーションとなった。中間報告書で述べたように、「実際そィジュアル系」黄金伝説」の中で、ヴィジュアル系のメンれは極めて有名でかつ独特なので、コスプレーヤーの数と、バーであるための必要事項が、幾分冗談混じりだが目立っそれを見物したりビデオや写真に撮るために（一緒に撮らた一覧表となって出ている。タイトルの下には、美しい誕れるために）やって来る「旅行者」の数とがしばしば同じ

生し、美しい生き、美しい終わるべし７） とある。基準のになるほどである。それは見物人もまた参加できるかもし中には、れない「見物人のスポーツ」となった。このイベントは世⃝派手である化粧、髪は奇抜な色に染めるべし。

界の出版─スクリーン媒体にとって一般的と言えるほど世⃝バンドの歴史にはドラマがなくてはならない。

界的に有名な日本の典型となったのである。すなわち、数⃝体はあまり丈夫じゃない事だ。最低ツァー、ライブ中に年の間に、世界中の観客の注目を浴びそしてまた影響を一度は倒れる事或いはそう言う虚弱なイメージを積極的与える非常に注目を集める毎週のイベントとなったのであに演出する事。

る。
」
原宿コスプレに関しては次のような様々な出版物で見⃝衣装は中性ヨーロッパ風もしくはニューロマ風（つまりることができる。ウィンズ（JAL 機内誌）、J magazine ─

昔の少女漫画的であればよい）。

表紙に 「The Changing Face of Japan」11）の見出しと共これらの基準は大まかに visual であるけれども、visualに原宿コスプレーヤーを掲載、Time 誌。ほとんどの場合、を通してある感性が表現されている。それはロマン主義や強調されているのは、「奇抜さ」と抑圧された社会におけ優雅さや退廃や感情の脆さへの傾向を持つかなり刹那的なる自己表現である。

ものである。別の記事では、ヴィジュアルの中核は「変わ⃝ Time 誌、「現実逃避」の見出し：「日本の傲慢で押し付ったことをする」、「現実を避ける」、無邪気なままでいる、

けがましい秩序がウサギ穴に逃げ込みたいという強い衝

自己表現に集中する、ということへの願望であると言われ動を駆り立てる。技術力とマスメディアはその願望を満

８）

ている 。

たすのに役立っている。バーチャルペットや毎週末原宿で見られるゴシック風豪華さで盛装した「コスプレ」少このような考え─感性が若者を惹きつけているというこ女を考えればいい。」12）とがわかる。そして（非常に商業的に進められた）この巨
大な努力の結果的分野は、確かに大衆の要求がなければ存⃝ West East Magazine 誌：「われわれ西洋人は、日本の在しないであろうが、それでは一体なぜ若いファンはこれ文化を、別の惑星から来たような服装と髪を染めたティらのバンドやスタイルや表現法に惹き付けられるのであろーンエージャーのイメージで見ているように思われる。

うか？なぜそのようなサブカルチャーがそもそも存在する（中略）原宿ムーブメントは、Goth から漫画のヒーローのであろうか？

コスプレとして分類するだけで十分なのまであらゆるものを身に着けた若者と共に 1980 年代のであろうか？どこまでが日本人の本質で、どこまでが単に後半にピークに達した。（中略）今日では「個人」表現「人間」の本質なのであろうか？

への必要性が 10 代の多くに広がっている。」13）⃝「V」誌、２ページに渡る大判の写真付き：「この万華３．２ コスプレ：コスプレカルチャー・神宮橋カル
チャー・コスプレのプレイ・自己表現

鏡像は過去数年間で発達してきた日本のサブカルチャ

３．２．１

略）これは変化している Face of Japan に対応して発達ーの目を見張る奇抜さにスポットライトを当てた。
（中

コスプレカルチャー

ある意味で、人生はコスプレである。われわれは皆社会背景に応しているサブカルチャーの肖像写真である。それは個々じて表現法（衣類、アクセサリー、化粧、髪型、振舞を用いる。しの本質を探し求める世代の始まりである。彼女たちは日かしながら、
コスプレは一般的に、大衆文化、特にアニメや漫画や「ゲ本のアニメから飛び出してきた何かに見えるかもしれなーム」のキャラクターを真似した衣装で正装することを言い。が、この少女たちはテクニカラーの現実なのである。
」

う。コスプレは日本だけに限られたものではないが、特に14）［下線部筆者強調］

日本では支持され流行している現象である。そしてこのよ⃝再び West East Magazine 誌、神宮橋で撮った 20 人のうにしてヴィジュアルの中心となっている。Wired 誌にあコスプレーヤーの写真：「私が日本を旅し生活した２ヶるように、「1990 年代には一部で流行っていたコスプレが月間で体験した中で最も心を動かされたのは、日本の若− 135 −

い女性の文化であった。これらの少女たちは ... 奇妙な⃝「彼女たちのほとんどは単に盛装を楽しんでいるだけでゴシック風、Lolita-esque、Holly Hobbie、Clockwork

ある。純粋に部分的な美学を身にまとい正に流行そのもOrange、レイヴァー、Leigh Bowery-ish、血まみれののである。そしてそのほとんどが 25 歳くらいまでに大看護婦や外科医や患者の格好や化粧 ... を身につけ、全体人になり、スーツを着て、みんなと同じように会社へ行的に狂気じみて、セクシーで、野性的で、愚かで、何か

く。
」18）

に取り付かれたようで、多くの点で一風変わっていた。」
15）⃝「明らかにここには仕事からの現実逃避の要素がある。
個人よりも集団に重点を置く厳しい任務と規則を持つ堅苦しさで有名な日本の社会は、大きな変化の真っ只中にしかしながら、そのような注目は雑誌文化以外にも広ある。」19）

がっている。2000 年７月、日本とオランダの 400 年の国
際関係を印して、Amsterdam の Arti et Amicitiae Art

社会は若者に「遊ぶ」ことは許すが実際は何も変わらな

Gallery が日本と他の国からの芸術家による作品を含む

いという意見もあれば、「遊び」は実は変化を表している

COS-PLAY と銘打った展覧会を開いた。ウェブサイトにという意見もある。いずれにせよ事実としては、若者が新

よれば、「展覧会の中心はコスプレや盛装といった日本のしいアイコンになったということである。

現象である

16）

。この現象が起こった理由として、工業化が Brave New World のほとんど不気味な反響音となり、従業員の生活はレジャー費を稼ぐための仕事で占拠され、

３．２．３

コスプレのプレイ

これは全て客観的見解の産物である。参加するものにとプライバシーが贅沢品となり、生産性に全精力が注がれ、ってそれはどんな意味があるのだろうか？

創造力は端へ追いやられた社会では、個人的な本質で遊ぶがこれに対する鍵であると思う。ディスプレイのスタイル

ことは集団の単調さからの逃避を可能にするということがは時間と空間を隔てたそれと類似点を見せるかもしれない

17）

私は「遊び」

言い換えれば、こういう状況により、日本のが、その精神は、神宮橋であろうとライブであろうと、非社会は個人の本質や個性や自己表現のための余地がないと常に日本的である。ライブでは 30 分から 40 分の間、痛いうことが言える。

めつけられたギターを激しくたたき、ボーカルは叫びながある。」

これらの例は、明らかに矛盾しているのであるが、風変

ら頭をぶつけまわり、観客に唾を飛ばしていたバンドだが、わりな個人の表現に集中することにより広く普及した代表

それが終わると天気のことを礼儀正しく話したり、少女た的な見解となっていて、芸術 / 学問団体と同様にマスコミ

ちをやさしくからかったりする。雰囲気は常に穏やかで、組織は、自己表現は日本では抑圧されていないと事実上指楽しく、非攻撃的で、脅迫的でもない。─まさしくこれは摘している。

遊びである。

実際、原宿の若者の光景は、特にこの極めて突飛に映る

一方海外では、若者は、自分がある思想や行動（punk、形において新しいメディアの典型─新しい Face of Japan

goth、mod、rocker）のグループの一員であることを示すになった（図 10 〜 12）。この現象の意義は、しかしながために、Goth のようなスタイルを取り入れ、常にその「衣ら以下のように解釈されている。
：

装」を身に着けるという傾向がある。日本のヴィジュアル

図 10 〜 12

新しい Face of Japan− 136 −

奇抜な化粧—文化の表現と表情？ ( ヴィジュアル系の顔：原因と影響）

系コスプレーヤーにとってそれはパーティや結婚式のためのボディペイントを手伝う。前に触れたように、神宮橋イに盛装するようなもので、毎日の自己認識表現ではない。

ベントは「部族的」である。上記のコメントは単に所属し、たとえば Punk スタイルは怒りの批判声明であり、社会へ共有する必要性を表しているのである。これらは基本的なのある政治的な姿勢であった。しかし日本のコスプレーヤ

人間の欲求であるが、若者の視野が広がり、行動半径が伸ーの場合は、「外見から見れば彼女たちは反逆者や過激主

び、選択肢が劇的に増えてきている情報世界では、伝統的義者であると思われるかもしれないが、（中略）政治的なな慣習や価値観や人間関係は不適切あるいは不十分であり、ものは何も存在しない。彼女たちのほとんどはただ盛装し直接的な社会環境の外からの影響は必ず行動パターンに作20）て遊んでいるだけである。
」

それは本質的に異なった行

用し、個別性の問題を引き起こしてくる。

動なのである。
３．２．４

なぜ盛装して遊ぶのか？

コスプレでは表現の要素が強いので、カメラのレンズを⃝「自分と似たような趣味を持つ人と会うのにいい方法だ
から」

自己表現

通してもそうでなくても、コスプレーヤーにとって見られ21）⃝「同じような趣味を共有する人に会い、典型的な「色のることは明らかにどういう意味を持つのかを私は時間をか

22）ない」日本の社会と何か違ったことを体験するため」けて多くのコスプレーヤーたちに尋ねた。「なぜ？」に対⃝「アーティストのようになるため」、「美しくなるため」、

して、彼女たちは常に「自己表現」をコスプレをする第一「美しい顔を見せるため」、「理想」、「目立つために」、「違の理由として答えた。しかし、彼女たちが実際にやっていう自分になるために」23）

るのは、お気に入りのアーティストをできるだけ忠実に「真⃝明治神宮の入り口に立つ警備員の話：「彼女たちは主に東似る」ことである。従って、「彼女たちは自分自身になる京周辺から集まって来て、地元では個性を出す機会のなためにここへ来る」（上記引用コメント）に関しては、私

い若者たちだ。自分自身になるためここへやって来る。
」24）

はむしろ、彼女たちは他の誰かになるために来る、と言いたい。実際、彼女たちは自分自身を変えるためにやって来

私はここで、神宮橋での雰囲気がここ数年のうちに変わるのである。

ってきたことを書くべきであろう。最近、参加者の年齢が事実、日本の大衆文化で繰り返されるテーマの一つは圧倒的に低くなってきており、化粧や衣装に向けられる細変身である。：新世紀エヴァンゲリオン、セーラームー

かな注意のレベルが下がってしまった。すなわち、その効

ン、Akira、Ghost in the Shell ─攻殻機動隊、一般少女漫

果が数年前ほど本物ではなくなってきている。私には動機画。変身は、イメージ、アイデンティティー、個人、社会、付けが変化したように思われる。活動が「一般的」になり、セックス、性別などと関係している。最後の項目に関してコンセプトを強調しないファッションの一例になったのだ。

は、先述のように、コスプレーヤーのほとんどは女性であ

今や若者は、最新流行を創り出すよりもファッションを追る。しかし、ヴィジュアル系のほとんどすべては男性であいかけているようだ。従って神宮橋現象に関しては、私がり、彼らは主として、スタイルや振る舞いの中で極端な女

ここで書いていることはすでに過去のことであり、広く社

性らしさやあるいは少なくとも幾分女性的な男性を描いて会に浸透してほとんどファッションの本流となった事柄でいる。私達は向かい合う性の興味深い状況に包まれる。ヴある。ヴィジュアル系の中で最も将来性があり、最も独創ィジュアル系のメンバーは女性の性役割を取り入れて、次的であった Malice Mizer と Shazna の二つのバンドが解にそれを女性のコスプレーヤーが「再生」し、女性と張り散したということにはおそらく意義深いことである。

合い、女性の典型を表してさえいる男性に共鳴し、張り合「本物のヴィジュアル系コスプレ」（私がこう呼ぶ）をもう女になる。

はやファッショントレンドとしてしか見ないのはあまりに主題が非常に複雑な方向に進むのはすべて知識の分野がも短絡的であると考える。全ての人間社会は個人の、また幾重にも重なるからである。しかしながら、この問題に触は部族の儀式に関連してなんらかのディスプレイの型─通れている文献に不足はないけれども、そのうちで「顔」の例 eXtreme ─に携わっている。本質的にそのような儀式役割に注目しているものはない。
「顔」は明らかに人のコ的「盛装」活動は、それがオーストラリアのアボリジニ

ミュニケーションとディスプレイの中心にあるものであ人のボディペインティングであろうと、イギリス王室の結り、変身と自己表現のために最もよく使われる身体の部分婚式であろうと、あるグループの一員であることを確認し、なのであるが。われわれが自己表現をする場合は孤立して変身を印すのに役立つ。そしてそのような活動ではお互いやるのではない。文化の様々に重なる影響を受けながら行に装飾しあうことがしばしば起こる。花嫁の付添い人はうのである。自分自身を表現するときにはまた、自分たち

花嫁が白いガウンを着るのを手伝い、着付け人は日本の花の文化的背景について発言をしているのである。
「Anime:

嫁に伝統的な着物を着せ、Ethiopian Surma 部族民は友達

from Akira to Princess Mononoke」の中で Susan Napier− 137 −

は、アニメの変身テーマの研究は、日本人のアイデンティに関連性を持たないけれども、いやまさに持たないからこ

ティーにおける原型を表面に出すばかりでなく、最も劇的

そ、一貫して流れる筋道なのである。バンドが自分たちのな問題のいくつかを浮き出させる、と述べている。
「…世

visual イメージのために参考にするものが、アニメまたは代間の分裂、両性間の緊張、そして男性らしさと女性らし中世ヨーロッパまたはニューロマまたは Gothic Horror で

25）

さに関する問題…」

この発言の中ではヴィジュアルをあろうと、そのスタイルの中のどれも化粧が用いられる方法の説明にはならないし、「eXtreme make-up」という事アニメと入れ替えることができると考える。

実の説明にはならない。

３．
３ eXpression(s) of a culture?
情か？

文化の表現と表「eXtreme make-up」にはまた日本の歴史において先例があり、その起源ははるか昔に遡るけれども、そのような「自己」─個人のアイデンティティー─を表現する場合

化粧が、特に歌舞伎場を通して、今日日本のアイコン─

に、人は同時に、自分が自己同一視するグループやサブカ

the Face of Japan になるような方法で発達したのは江戸

ルチャーに関する何かを表現している。そしてまた自分が時代であった。

その産物であるより広い文化─実際その文化を映している、
３．３．２

について何かを表している。

The 'Face of Japan'

世界のマスメディアは日本の社会を「顔」という見地か
３．
３．
１

What is Japanese about Japanese ヴィジ

らしばしば言及し、「顔」のイコノグラフィーを通して日

ュアル系？

本人を特徴付けている。そのようなアイコンの中で最も広海外のバンドの中には化粧を彼らのステージパフォーマ

く用いられたのは芸者と歌舞伎役者（特に荒事や女形）でンスの一部として用いるものもいるが、その目的はかなりある。これらの「顔」は西洋人が非常に意識を集中する部

異なっていると思われる。The New York Dolls、David

分なので日本の同義語になってしまった。似たような同義

Bowie、Alice Cooper、Kiss、Marc Bolan、Roxy Music、語として、日本人は不可解である、言い換えると、日本人

Gary Glitter、Boy George、Marilyn Manson のようなミは顔の表情で考えや感情を表現したり明かしたりはしない、ュージシャンたちが用いた奇抜な化粧は、以下の二つの分という概念がある。
もちろん日本人にとっても歌舞伎や芸者の顔はアイコン類のどちらかに入る傾向を持っていた。
：⃝政治的な声明：同性愛宣言や反社会声明のような衝撃戦的である。これらは日本人の精神の中に日本らしいという術認識でしっかり張り巡らされている。そしてその認識で、⃝ Camp ─ふざけたドラッグクイーンのペルソナか両性に関するものから郵便切手に至るまであらゆる商品とし性具有の Bowie/Bolan 型または Glam/Glitter の Lasて用いられたことがあった。
これらのアイコン的な顔は日本人の日常の顔とほとんど

Vegas/Liberace スタイルのどちらか似ているところはないが、それでも長い伝統を通して一つ
私は、日本のヴィジュアル系の化粧は先述のようにあるの文化の表現、一つの民族の表現になっている。これらの感性を表現するという異なった目的を持っていると考え

顔は、その民族の本質や、そしてどのようなフェイシャル

る。
：やや悲劇的な不気味さや「変わったことをする」こディスプレイ法が受け入れられ好まれてきたかを知る手掛とを通しての自己表現。これらの概念は私に江戸時代の大かりを映し出す鏡である。そしてこれらは江戸時代─浮世衆文化─物の哀れや歌舞伎物の概念を匂わせる。

─の大衆文化の顔なのである。

さらに、ヴィジュアルにはかなりの多様なスタイルがある。「ヴィジュアル系ファッションは Goth、Punk、Rock

３．３．３

大衆文化の顔のスタイルに見られるファッショントレンドを包含しておいかなる時代でも大衆文化というものは、一般的に普及り、バロック風のガウンから未来的な Matrix スタイルのしている振舞、ファッション、慣習を映す時代の鏡としてコートに至るまで、あらゆるものを大量に混ぜ合わせている。

現れる。社会を映す一方で、新しい着想やスタイルや行動…」方法として活動しながら社会に影響を与えている。

26）

そしてそれは明確に分類することを難しくしている。

そして、ヴィジュアル系について書かれたものには化粧に

伝統的な日本の「eXtreme make-up」は芸者や歌舞伎

特別な焦点を当てたものはない。けれども音楽的、演奏スの世界では現存している。歌舞伎は、今日では「芸術」とタイル的な範囲を超えて、visual スタイルの原典間の複雑して分類されるけれども、江戸時代の初期では最先端の大さを通り抜けて、一つ普遍的なものは化粧である、と思わ

衆文化で遊郭の一部であった。江戸吉原の歓楽地帯の「魅れる。それは奇抜さのスタイルや程度においてあまりにも惑的な」世界では、芸者や花魁や歌舞伎役者や美少年たち

大きく変化するが、化粧はそれが用いられている状況と特がその当時の状況に絶えず挑んでいた。この歓楽世界の住− 138 −

奇抜な化粧—文化の表現と表情？ ( ヴィジュアル系の顔：原因と影響）民たちは、直接的にまた間接的に、大衆の幅広い層に影響する歌舞伎や芸者の明らかな影響がわかる。

を与えた。一気に全人口へ流出したこのサブカルチャーの歌舞伎が庶民の文化に影響を及ぼしたように、「…舞台構成員たちの間で、「…ファッションや言葉や他の新しいで見られるファッションは真似され…人気役者のせりふや文化の流動的な交換」27）が行われた。

特徴を張り合った。
」32）、コスプレーヤーたちの振舞も同「売春宿での流行りの方法と最新のスラングが遊びのじで、写真用にポーズを取るときは、特に Shoxx、Fool's

中に入ってきて一般大衆へと広まっていった。衣服のMate、UV、Cure、Zy のような雑誌の広告写真に出てい28）るように、バンドと競うため典型的なポーズやしぐさや「…舞台で見られるファッションはそっくり真似され表情を取り入れることになる（図 18 〜 20）。実際これら

色や型、化粧品、そして髪型におけるスタイル…」
29）の雑誌はまさしく浮世−絵と同じ役割を果たしている。そ…人気役者のせりふや特徴を張り合った。
」

もう一つ大きな影響力を持っていたのは浮世−絵であっれは確かに広告であり、事実上のコマーシャルである、が、た。これも「芸術」として安置されるようになった別の形

衣服、髪、フェイシャルディスプレイ、振舞、そして姿勢の徳川大衆文化である。これらの版画の多くは歓楽地帯のなどのライフスタイルに影響する効果を付属している。実有名人や活動やスタイルを描いており、それゆえ、当時の際、それらの雑誌は、衣装や化粧がライブコンサート用よ

大衆文化と大衆との関係の記録であり、顔や化粧や一般的りも念入りで、ポーズをとるためにより型通りのものとなな「ディスプレイ」に関する visual 情報を少なからず与るスタジオでの写真撮影を広める傾向がある。それらはかえてくれている。浮世−絵の発達は「…都市生活の共有さなり理想化されたものを提供しているのである。

れた経験から切り離すことができなかった。
」30）

ここでは歌舞伎や芸者の顔以外に影響を与えるものはな

図 13 〜 17 では、ある音楽ライターがそのスタイルを「glam-kabuki-drag」

31）と描写した、ヴィジュアル系に対

図 13 〜 17

いと言っているのではない。３．１ではわれわれがヴィジ
ュアル系ジャンルと呼ぶものを図解している。しかしなが歌舞伎と芸者に受けた影響− 139 −

ら、ジャンルに拘らずヴィジュアル系の顔に関しては、化者／女性、歌舞伎／男性、両性具の三つに分類できるかも粧は eXtreme である傾向がある。この例外が美少年顔でしれない。この三つの原型は、日本の大衆文化や社会におある（図 21 〜 22）。それに匹敵するものはこのほかに浮いて明白な歴史的一貫性を呈している。このほかに、と言

世絵や Shoxx の中で描かれている。そのようなペルソナってもこれらと密接に結びついているのだが、服装倒錯やは日本の大衆文化では長い間に渡って登場している、そし性変換の伝統がある。ここでて、浮世−絵、少女漫画、アニメ、ポップグループ、宝塚

性の概念を明らかにするために以下を引用する。：のキャラクターの人気に証明されるように、あらゆる時代…「セックスロール」と「ジェンダーロール」の間には大きな違いがある。前者は、男性と女性の生殖器の多様なの女性たちの心を引き付けている。

能力に関連があり、後者は、男性、女性それぞれの属性で

３．
４

顔

３．４．
１

ある立ち振舞や服装の、社会文化的、歴史的取り決めなの
典型

である 33）。

ここでは簡潔にするために、ヴィジュアル系の顔を、芸図 18 〜 20

これは、全部の役が女性によって演じられる宝塚レビュ

コスプレーヤーの見え

図 21 〜 22

美少年モード− 140 −

奇抜な化粧—文化の表現と表情？ ( ヴィジュアル系の顔：原因と影響）ーについての記事の中に書かれたことである。歌舞伎はこと、望ましい女性の顔は、実際、「顔がない」ということの正反対で、役の全てが男性によって演じられる。350 年なのである。型は実際のものよりも重要となってくる。

続いている歌舞伎の歴史の中で、その初期に、女性はその男版の歌舞伎顔は、隈取の力強い色やデザインが極めて状態が刺激的過ぎる、あまりにも聖像破壊的であるという表現豊かなので、初めは全く異なった問題であるように見理由で舞台に出ることを禁じられた。
（意義深いことには、える。Ruth Shaver によれば：

歌舞伎をやる人は当初、「変わったこと」をする人という「隈取を用いるのは、個人的な感情の即座の反応、ほと意味で、かぶき物と実際に呼ばれていた。
）その後少年たんどの場合、怒りを表現するためである。... 隈取の特質は、

ちも、かき乱し過ぎるという理由で禁止されるまで女性の舞台の登場人物の精神状態を生き生きと表す技術にある。
」

役を演じていた。

38）

こうして女性らしさの理想を演じると言われる女形は進

しかしながら、この化粧の目的は、化した。女形役者の芳沢あやめ（1673 〜 1729）は次のよ「... 人の顔に表現の演技を与えることであり、... もし可うに考えていた。
：

能であれば、個人としての役者の肉体的個性を消し、彼のもし女性の役者が舞台に立っても自分の肉体の特徴に頼ってしまうので理想的な女らしさを表現することはできな

顔の表情を、演じる役と伝統的に結びついている顔の表情まで変えることである。」39）

い、そのため合成的な理想を表すことは不可能である…34）

すなわち、男性も女性も型または典型として表現されている。両者ともある意味で、全く顔ではなく、概念や願望

女形の顔は、白く、目や口に鮮明な色を付ける花魁や芸や典型の表現なのである。それらは象徴なのである。それ者に見られる女性の顔の男性的描写である。芸者の顔は以らはある特定の型、すなわち、伝統という琥珀のなかで固下のように描写されてきた。
：「その白い顔は、いかなる個

定されてきた特定の振舞と結びついた化粧スタイルからな

人の本質も切り捨てて芸者の外観を様式化している。…」

る「表現方法」なのである。従って、そこには男性と女性（現

さらに、「匿名であることが、その顔を、客が自分の願

実の男、女というよりはむしろ）の理想の典型的な表現の35）

言い換えると、一つの伝統があるばかりでなく、これらの典型は「無表情」

それは個人のアイデンティティーを表しているのではなく、

─謎めいたもの、と言い換えてもよい─の強い要素を合わ表現の一つの型を表していて、実際、個人のアイデンティ

せ持っているのである。

いを投影するスクリーンにしている。
」

ティーの仮面としての役割を果たしてしる。女形の場合は日本の大衆文化の中で一貫性を示す他の原型には、浮世その工程が非常に完璧であるため、性のアイデンティティ−絵、少女漫画、アニメに代表される美少年のそれがあり、ーでさえも消されてしまう。もちろん、ここで顔、化粧、

今ではヴィジュアル系に引き継がれて見られる。実際、こ振舞、衣装を切り離すことはできない、しかし、顔は人のれはヴィジュアル系ディスプレイの顕著な原型であり、よ相互作用の中心であり、その顔─ペルソナ─を特定の個人り荒事的 visual スタイルにまで浸透している。「彼らの外でなくしているのは、白い化粧と様式化された目や口なの観は、男性でも女性でもないある種の典型を表そうとしてである。

いる両性具有のものである。
」40） しかしながら、海外のその「白い顔」が、平安時代から現代まで、女性の美しミュージシャンたちはこの外観を同性愛を宣言するためにさ、優雅さ、高貴さの社会文化的表示であるということは用いてきたが、一方、日本の場合はそうではなく、純粋によく知られている。しかし、その「謎めいたもの」は、女美の表現であり、より曖昧なものである。

性の美しさや女性の好ましさにおける要因である、と言えるであろうか？

望ましい女性の顔は匿名であることにより特徴付けられるのであろうか？

もし実際にここで示されている歴史的一貫性があるならば、もし日本の社会のいくつかの局面を、謎めいたもの、
匿名性、曖昧さを含む個人の表現を受け入れる水準を持つ「このようにして昔から、隠すということ、隠れている
36）

体制の中で、自己を押さえつけるという典型によって特徴

ことは美しさへの手段であると考えられた。
」

付けることができるならば、ヴィジュアルの鼓舞された表「…伝統的な日本の美意識は、化粧品や指示された顔の現方法を通してそれらの水準を覆そうとする試みを理解す

表情や肉体的特徴でさえもその使い方を口述することに帰るのは困難ではない。これが事実そうであれば、伝統的な着した。それは、顔を、…何か隠されたものとしてみなし型─ eXtreme ディスプレイ（化粧、顔の表情、髪、衣装）た美の概念を理想化した。そしてそれは顔の存在を認めな

─はこの目的の道具として用いられているということは興37）

味深いことである。

い美の概念であった。…」

日本を典型的に表すのによく用いられるアイコン的な女

そうなれば eXtreme 化粧は、ヴィジュアル系 / コスプ

性の顔は、化粧によって謎めいたものとなっている。─そレにおける主要な共通要素であると思われる。吉村栄一は、れは「合成的な理想」となっているのである。言い換える人格になるために、雰囲気作り化粧は不可欠のものである− 141 −

41）

た社会にとってある徴候であり隠喩なのである。
（中略）

化粧は写実主義とは無関係であるということである。それわれわれの時代のおそらく最も重要な問題、絶えず変化すは衣装や ...（中略）... ポーズと正に同じくらい型の一部なる社会におけるアイデンティティーの移り変わる本質をつ、と述べている。
「しかしながら理解すべき重要なことは、

のである。
」

４．考

42）

かむための完璧な手段なのかもしれない。」44）察１） Groning, Karl (ed) : Decorated Skin - A World
この研究は元来試験的なものとして開始したのであるが、Survey of Body Art, Thames & Hudson, London 2001

終わりに当たっていながら始まりのような思いであると言

２） ' B e h i n d J a p a n ' s M a s k ' , ' B e h i n d T h e M a s k ' ,うのが適切であろう。私には答えよりもはるかに疑問点'Unmasking Japan: myths and realities about theの方が多いが、常に興味の対象となるのは以下の事柄であemotions of the Japanese', Unmasking Japan Today',る。
：

Japan Behind the Fan',

日本人の精神、認識、原型、ディスプレイ法に見られる'Caught in a Mirror: Reflections of Japan', 'A Japanese

明らかな一貫性。

Mirror: Heroes and Villains of⃝ロマン主義、空想と劇；優雅さと退廃─物の哀れ

many more.

Japanese Cutlure', and⃝「変わったことをする」、自己表現、変身

３） http://www.tomobiki.com/wagaku/artists/x.html⃝振舞や個人の表現に関する独特の歴史的姿勢─合成的な

４） Fool's Mate No.242 December 2001 p.14

理想、謎めき、匿名性、曖昧さに本来備わっていると思

５） notice-board at Japan Forum Archive.

われる、日本の大衆文化における extreme 化粧の伝統<http://forum.japan.com/archive/topic/989-1.html>⃝大衆文化の専門家と、服装や振舞の受容できるスタイル６） Spotlight, In: Eye-Ai August 1998, p.8 Riverfield
Inc. Tokyo.

（型）の間の現在も続く関係

７） 吉村栄一 , : 美しい誕生し、美しい生き、美しい終わ
そして、ヴィジュアル系現象の複雑さと微妙さ。私にとるべし in: 'X Japan と ｢ ヴイジウアル系 ｣ 黄金伝説 ' 高島社ってその本質は以下の言葉に表されている。
：

東京

2003

p.78．

⃝美しい誕生し、美しい生き、美しい終わるべし。

８） 'X Japan と ｢ ヴイジウアル系 ｣ 黄金伝説 ' p.72⃝「アーティストとファンはお互いに助け合っている。誰９） Getting Into Character, In: Wired 09/2003 p.062

かを愛することは、人に大きな力をくれる。だからわれ

10） It should be noted that the phenomenon as it

われは彼らが必要なのだ！特にヴィジュアルバンドはそis reflected regionally is a rather more tame andのファンを大事にする。そしてファンもまたバンドを心

self-conscious version. At ラ イ ブ I went to in

から愛する。両者は情熱的な愛でお互いに結びついてい

Fukushima, Naha, Osaka, and Sapporo costumes areる。ファンはヴィジュアルバンドと同じ気持ちを味わう

not so authentic, make-up much less extreme, and in

ことができる。なぜなら彼女たちはコスプレをすること

general the occasions are used merely as an excuse/ができるし、ライブコンサートに行くことができるから

opportunity to dress more extravagantly than usual,である。
」

with a prevalence of Gothic Lolita. Cosplayers even43）

refused to take a questionnaire,
われわれは「伝統」を、普通長い期間を超えて過去から引き継がれるものと考える傾向がある。しかしながら、伝11） J Select vol.7 No.8 Business World Corp. Tokyo
August 1999

統はすべて、歌舞伎や浮世−絵、そして振舞や身のこなし

12） Frederick, Jim, : A History of Japanese Cool, In:の標準のように、かつては「新しいもの」であった。それ

Time August 11, 2003, p24. Time Asia, Hong Kong.

ゆえ、フェイシャルディスプレイにおける流行は今、未来

13） Pernet, Diane, : the glittery tide, In: WestEastの伝統の萌芽を表しているのかもしれない。ヴィジュアル

Magazine 04, Autumn 2002, p.38. WestEast Publishing,系 / コスプレ現象は変化の中における伝統を象徴している
その伝統は変身の一つであり、─個人的そして社会文化的なもので、この研究の範疇の外にある日本の社会の様々な局面において明白なのである。─

Hong Kong
14） Godoy, Tiffany, :In Living Color, In: V17 May/Juneのではないだろうか。

再びアニメとヴィジュ

2002, V Magazine, New York.
15） Collins, Liz, :wild in the streets, In: WestEast
Magazine 04, Autumn 2002, p.74. WestEast Publishing,Hong Kong

アルへ触れて：「［ヴィジュアル］は、変化とスペクタクルに取り付かれ16） exhibition information at: <http://cosplay2000.cjb.

− 142 −

奇抜な化粧—文化の表現と表情？ ( ヴィジュアル系の顔：原因と影響）

In : Takie Sugiyama Lebra (ed) Japanese Social

net=20>Organization, University of Hawaii Press 1992 166.

17） ibid.

34） Deutsch, Sanna Saks, : An Abstract from 'Patchwork:18） Godoy, Tiffany, : ibid.

A History of Women in Japan' In : The Feminine

19） Escape Artists, In: Cosplay Girls, (Introduction),

Image: Women in Japan, Honolulu Academy of Arts

DH Publishing, Tokyo, 2003

1985 24.

20） Godoy, Tiffany, :In Living Color, In: V17 May/June

35） Saller, Martin, : Japan: painted skin, decorated bodies,

2002, V Magazine, New York.
21） quoted in: Larking David, :All Harajuku's a Stage

In: Groning, Karl (ed) Decorated Skin - A World(Quick-change teens strut 'visual music' In: The Japan

Survey of Body Art. Thames & Hudson, London 2001,

Times, July 28, 2000.

p.213
36） Yokoyama, Masami, : Whitening: The rise of a new22） ibid.
23） respondents to questionnaires.

standard in beauty In: 家庭画報 International Edition24） quoted in: Larking David, :ibid.

Inaugural Issue 2003 p.140

25） Napier, Susan J, :Anime: from Akira to Princess37） Murasawa, Hiroto, : Untitled Document, http://www.
linkclub.or.jp/murasawa/e/bibou.html

Mononoke, Palgrave, New York 2001 p.36
26） Heard Jodi, :J-Rock: Visual Kei, <http://www.

38） Shaver, Ruth M, : Kabuki Costume, Charles Tuttle,
Tokyo 1966 338.

akadot.com/article-visualkei-01.html>
27） Shively, Donald H, : The Social Environment39） Halford, A.S. & G.M. : The Kabuki Handbook, Charles
Tuttle, Tokyo 1998 [1956] p.436.

Tokugawa Kabuki, In : Studies In Kabuki, The40） Heard, Jodi J-Rock: Visual Kei @:University Press of Hawaii, 1973, 51

www.akadot.com/article/article-visualkei-01.html

28） ibid.

41） 吉村栄一 , : 美しい誕生し、美しい生き、美しい終わ

29） ibid. 55

るべし in: 'X Japan と ｢ ヴイジウアル系 ｣ 黄金伝説 ' 高30） Guth, Christine, : Japanese Art of the Edo Period, :島社Calmann and King 1996 89.
31） Caffrey, Rori,:The Many Faces of the Ever-

東京

2003 p.78．

42） Halford, A.S. & G.M. : The Kabuki Handbook, Charles
Tuttle, Tokyo 1998 [1956] p.436

changing Hyde, (Popcetera), In: The Daily Yomiuri

43） T s u d a N a n a e ,Nov. 29 2001, 8: Visual bands(Course of:The Social Environment

International and Cultural Studies, Kyoto Nishi Highof Tokugawa Kabuki In : Studies in Kabuki, The

School) <http://www.ma.ultranet.com/~knhsinne/sgvis.

32） Shively, Donald H,

html> 1998

UniversityPress of Hawai'i 1973 55.
33） Robertson, Jennifer, : Doing and Undoing "Female"and "Male" in Japan: The Takarazuka44） Napier, Susan J, :ibid. p.12

Review,− 143 −

●
平成15年度記念講演
●

石田かおり

コスメトロジー研究振興財団
第 14 回表彰・贈呈式記念講演

色白美 人はなぜ 永 遠か
─日本 人の化 粧に見られる美意 識 ─
駒沢女子大学人文学部人間関係学科、資生堂客員研究員

石

田

か お り
場所
日時

Ⅰ

はじめに

㈱コーセー本社２階会議室
平成 15 年 11 月 19 日水

では、バリ島の人が美白をしているかというと、全然見た

私は化粧文化研究を専門にしています。文化研究の範囲はことも、そんな話を聞いたことがありません。赤道と南回帰

広く、何を専門にしているか分かりにくいと思います。私の線の間ですからものすごく日差しが強いのですが、日よけに場合は大学時代に西洋哲学が専門でしたので、哲学的な方法

気をつけているかというと、全くそういうこともせずに焼けを、生活の中の化粧という人間の行動や人間の生きざまに応放題です。髪の毛もアップヘアにするので整髪料で固めてい

用し、生活行動に焦点を当てて化粧を哲学的に考えるというるのですが、整髪料と日差しが相俟って非常に髪の毛が傷んことをしています。大学の授業では「きれいを学問する」といでいて、しかし傷みを気にしていないというのが実態でした。

うコンセプトを掲げ、そこに全ての授業を位置づけています。

美人が色白だからといっても、日焼けをしないように努力

今回は、色白美人というものを捉えてみようという試みをする、あるいは美白に努力することと必ずしも結びついていしました。本日の内容は、1．永遠の色白美人、2．肌色意識ないことが、いろんな調査でわかっています。けれども、この大革命、3．美人とはという章立てとなっています。

こに書いてありますように「近年少し変化あり」とは、「美白」という言葉は日本でつくられたのですが、「美白」の文字を書Ⅱ

永遠の色白美人いて韓国や台湾に行きますと完全に通じる時代になりました

Ⅱ−１ 色白は世界の憧れし、中国でも通じるようになり始めています。徐々に日本の色白は世界の憧れという事実があります。
「どんな女性を近隣の国々から美白という運動が広がりつつあるところです。

美人というのか」という質問を世界各地で発すると、「色白」
Ⅱ−２ 色白が美人の条件であり続ける歴史という答えが非常に多いという結果が得られています。日本
は言うまでもなく、日本の近隣の東アジア地域、もう少し離いま、色白ということを地域的な広がり、つまり現在といれた東南アジア地域、中東、欧米、アフリカでも色白が挙がう同時代で切って、空間的な広がりで見てきました。今度はっています。オセアニアと南アメリカでは、まだ質問してい時間軸で見てみると、色白は歴史上ずっと美人の条件でありないのですが、多分色白という答えが返ってくるのではない

続けています。
幾つか例を挙げます。１番目は「ネロ帝の后ポッパエアのかと予測されます。このように世界中で色白が女性の美しさ

ミルク風呂」。最初はよい政治を行っていたローマ皇帝ネロでの条件として挙がってくる事実があります。
ところが、現地の人たちはどんな肌の色をしているのかをすが、途中から豹変して暴君になり、ローマの町に火までつ

見ると、土地の人の肌色と色白の美意識は必ずしも一致してけてしまいました。その后がポッパエアです。彼女のミルクいるわけではありません。また、美白行動とも無関係という風呂が、西洋古代の色白を求める行動として知られています。
このミルクは牛ではなくロバです。ポッパエアは旅行に行傾向が、調査をしてみるとわかっています。
私もバリ島に行ったときに「どんな人が美人か」と聞いてくときにロバを 6 〜 7 頭連れていったという記録があります。

みました。ちょうど日本の秋田美人みたいに、ある特定の地

旅先でもミルク風呂に入れるように連れていったのです。そ域で美人の産地として有名なところがあると言うのです。
「そのくらい美容に常に熱心でした。朝起きてからお昼まで丸々の女性は一体どういうタイプか」と聞くと、丸顔で色白で長半日、毎日大勢の女奴隷を使い、自分の全身を洗わせ、磨かせ、い黒髪、目がぱっちりとしていると言うのです。

マッサージをさせ、香油をすり込ませていました。それと同

Why Light Skin Has Been So Important for
Beauty?  ─ A Historical Approach in Makeup and Skincare ─
Kaori Ishida
Faculty of Humanities Department of
Human Relations Lecture, Komazawa
Women’s University
Shiseido Guest Researcher

時に髪にはパーマをかけさせました。このように毎日「半日エステ」をしていたという記録もあります。
2 番目が東洋古代の色白美人で、それは「殷の紂王の后、
妲己の白粉」です。殷の紂王も圧制を敷き「酒池肉林」で知られる暴君です。この紂王の后、妲己が中国で初めて白粉を使ったという伝説があります。実はこれは伝説で、実際の調査では、既に妲己の時代に宮廷の人たちが白粉をじゅうぶん− 147 −

ています。

に使える状態になっていたということです。
妲己は非常な美人として知られ、また、大変な悪女としてこのように時間軸で見ても、いつの時代も色白は美人の条も有名です。少し前、テレビゲームと漫画を通して小学生ぐ

件であり続けました。そして空間軸で見ても、世界中で女性

らいの男の子を中心に「封神演義」という中国の伝説が流行の美しさにとって色白が重視されているわけです。

りました。その中で妲己はその正体が人間ではなく「千年の古代ローマの貴婦人の壁画。頭頂部にパーマをかけて形を女狐」で、美貌で紂王をたぶらかして世界全体を支配下に置つくった絵が描かれています。ローマの貴婦人は白粉もたく

いてしまおうという企みを持っていたと描かれています。ポさん使った記録があり、剥落が激しいのですが、鼻のあたり

ッパエアも妲己も悪女として知られ、美容に熱心で暴君の妻にちょっと白いのが残っているのが白粉かもしれません。
それからエリザベス 1 世の衣装。全身にパールが縫い付けという不思議な共通点があります。
時代を少し下ると、「エリザベス 1 世の厚塗りとメアリ・スチュワートのワイン洗顔」が挙げられます。エリザベス 1世は、若いころはそうではなかったのですが、晩年には白粉てあり、ふんだんに宝石を使っています。襟にも注目してください。メークも服に負けないくらい厚塗りでした。
古代中国の宮廷女性を描いた壁画。こちらも剥落が激しく、お化粧の様子がはっきりしませんが、中国では古くから白粉を 3 センチくらい厚塗りしていたことで知られています。
なぜ、そんなに厚塗りにしたかというと、「バージンクィが発達していました。

ーン」として生涯独身だった女王ですが、それは下手にどこかの国王からの求婚を受け入れて結婚してしまうと、イギリ

Ⅱ−３ なぜ色白は美人かスが乗っ取られてしまうからです。国を背負い、大変な責任では、なぜ色白は美人なのでしょうか。1 番に、「色白イ

感を持っていた女性で、ヨーロッパの権力構造を読みながら、

コール日焼けしない肌」ということがあります。サンスクリ

大航海時代に植民地政策を強力に進めてイギリスを世界一のーン剤が発明されたのは 1950 年代、普及したのは 60 年代以帝国に導いた。大きな野望も持ち、自分の位置づけを大変に降です。それまでの長い歴史は、日焼けをしたくなかったら気にしていた人です。女王というのは人々から見られる国の物理的に焼かないことしかなかった、反対に言えば、嫌でもシンボルですから、若く美しくあらねばならない、人々の憧

焼けてしまう時代が長かったと言えます。
すると、色白は日焼けをしないことだから、労働をしない

れるような人間でなくてはいけないと考えていたのです。
エリザベス 1 世の肖像画を見ると大変に豪華な衣装で、全ことの証にもなります。外出するときには乗り物に乗る、あ身にパールを縫い込み、襟にはレース。きわめて高価なレー

るいは傘や帽子や被ぎなどの覆い下にある人、つまり身分のス生地を、宮廷の襟専門の係がきれいに洗ってのりをつけて高い人ということになります。下働きの、洗濯や買い物など

折りたたんで管理していました。それだけ手間のかかった衣をしなければいけない女性は、焼けたくなくても焼けてしま

装を身につけていました。衣服と並んで化粧も、高価な白粉うわけです。

をたくさん塗ることができるのは富と権力の象徴としての自2 番目に、「色白イコールスキンケアができること」。それは１つには高価な化粧品が使えることです。化粧品は 20 世

分自身を演出するためであったのです。
それに対して、同じ時代に王女メアリ・スチュアートがい紀になってから誰でも簡単に手に入るようになりましたが、ました。エリザベス 1 世は当時のファッションリーダーでし

時代が遡れば遡るほど、貴重で高価なものになっていきます。

たが、彼女自身が美人だったかわかりません。しかし、メア

また、スキンケアをする時間があること。身分の低い人た

リ・スチュアートは生まれながらの美人として知られていま

ちは仕事のためにスキンケアをする時間がありません。身分す。彼女はスコットランド女王でフランス王女でもあったのの高い人は、ポッパエアのように半日座っていれば使用人がですが、夫を殺害した嫌疑のためにエリザベス 1 世との戦い

全部やってくれたわけです。

に敗れ、エリザベス 1 世のもとに幽閉され、そこで亡くな

それから、人手の余裕があること。さらに、スキンケアをってしまいます。その牢獄の中からエリザベス 1 世に大量した肌を傷めない生活をしていることも挙げられます。今ネのワインを要求しました。それは飲むためのものではなくて、

イルアートが流行っていますが、きれいにネイルアートをし

ワイン洗顔を欠かさなかったためです。ワインには、ブドウた人に「お米をどうやって研ぐのか」と聞くと、「やらない」の皮の AHA のために美白作用があります。エリザベス 1 世という答えが返ってきます。今は無洗米もありますからそれは白塗りの色白ですが、メアリ・スチュアートは美白の色白でも済みますが、台所仕事などの家事をするとネールアートだったのです。結局、この闘いは白塗りが勝ったと見ることがとれるし、指先が痛んでしまいます。スキンケアをしたもできます。

きれいな肌を傷めないのはとても大変なことだと痛感します。

日本では「色の白いは七難隠す」という諺があります。調だから、やはり色白は高貴な人の証拠になるのです。

べてみると、この諺がいつできたかわからないくらい古く、3 番目に、「色白イコール望んでも手に入らない」という人口に膾炙しています。長い間の日本人の色白信仰を物語っことです。1 番目と 2 番目の条件を満たしていないと色白で− 148 −

色白美人はなぜ永遠かいられないわけですから、生まれたときに色白でも、だんだ

飛鳥時代から平安初期になると、中国大陸から白粉が入ってんと日焼けをし、それが蓄積してしまう。色白は望んでも手きます。それで白塗りになったかというと、そうではなく、白に入らない時代が長かったのです。

粉に赤い粉を混ぜます。ベンガラだったり紅花だったり、色ですから、色白が憧れの対象になり、高嶺の花のイメージ

んな粉がありますが、それらを使って濃いピンク色の粉を作り、になった。お姫様や深窓の令嬢と聞きけば思い浮かぶのは色

それを額や頬といった顔の広い面積の部分に塗っていきます。

白の人です。現実はそうではないのかもしれませんが、そうだから、パッと見ると赤い印象の顔になっているわけです。
縄文時代は赤い顔料がたくさん出土しています。縄文土器

いうイメージが成り立ってしまったというわけです。
まとめれば、色白は高貴さの象徴であり、富と権力の象徴の中に赤い顔料が詰まっていて、それがベンガラです。貝殻であり、そして希少価値だということです。だから、時代との裏側にも詰められています。大体縄文時代はベンガラが多地域を問わず色白が美人になったのだと思います。

い。土器に模様を描くときに漆にまぜて塗られましたが、これを人体に塗っていなかったかというと、塗っていたかもし

Ⅱ−４ 色白美人の２タイプ

れないのです。

さらに詳しく調べてみると、色白美人の中には 2 つのタイ

埴輪のお化粧には、額に三日月型の少し黒っぽくなった部

プがあります。1 番目は、白粉できれいな色白肌になるとい分が見られます。目の下から頬にかけても少し黒っぽくなっうタイプ。先のエリザベス 1 世対メアリ・スチュアートの例ています。それから鼻筋、そしておとがいも黒くなっていま

ではエリザベス 1 世のタイプです。妲己もそうです。日本ですが、この黒い部分は赤く塗られていました。人間が埴輪のは平安貴族がそうです。しかも日本では、平安貴族以来ずっ格好をして行列して歩いている写真は、千葉県芝山町の「埴と京の美意識として今日まで受け継がれています。

輪祭り」の模様です。

2 番目は、素肌がきれいな色白です。それが現代人にとっ白粉が入ってきてからの時代です。唐と奈良の宮廷女性のての色白美人です。しかし、日本で最初に登場したのは江戸

化粧の様子。有名な正倉院の「鳥毛立女屏風」では、頬の広末期の辰巳芸者からです。ヨーロッパでは先のメアリ・スチ

い範囲が赤くなっています。唐の「弃棋図」の女性の絵は、

ュアートのほかに、ナポレオンの皇后ジョゼフィーヌもそう

眉の下から頬にかけ広い範囲で赤くなっています。これらはです。

白粉を顔全体に 1 回塗ってから、頬、瞼、広い範囲に白粉に日本の女性は世界で一番スキンケアに熱心です。スキンケ

紅をまぜた粉をつけ、しかも濃くつけている。当時の記録を

ア商品の消費量をみてれば明らかですが、価格で比べるとち読んでも、「最近女性が顔を赤々とさせていて、お化粧が濃す

ょっと微妙です。ヨーロッパでは、お金持ちの高齢の方がス

ぎてけしからん」なんて記述が出てくるのです。いつの時代

キンケアにとても熱心で、高い商品をたくさん買います。しにも「化粧が濃すぎてけしからん」という話はあるのですね。

かしそうしたお客さんの人数は少ないのです。むしろ日本は、ほとんど全員と言っていいくらいの一般の人たちがスキンケ【あかあかの美意識】

アをするので、スキンケアに対する意識と行動の平均水準が万葉集の時代に「あかあかの美意識」というものがあり高いです。つまり、人々の生活の隅々にまでスキンケアといます。
「春の苑紅にほふ桃の花、下照る道にいで立つをとめ」、う意識が普及しているとも言えます。

大伴家持の有名な歌です。これは桃の花の下に若い女性がなぜそうなったのでしょうか。これには幾つか原因が考え立っている、その女性の輝くような美しさを歌っています。

られるのですが、今回の色白美人という観点からしますと、桃の花は桜の花に比べるとピンクがとても濃く、桃の花が素肌美そのものを重視する美意識と、化粧美の土台として満開の下に立っている女性の肌の色も赤々としている風景の素肌美の重視、つまりメークをしたときにきれいに仕上がが思い浮かびます。

るためには素肌もきれいでなくてはいけないという意識です。

「あからひく色妙の子をしば見れば、人妻ゆゑに我恋ひめ

この両方を求めるようになったためと考えられます。

やも」、柿本人麻呂の歌です。こちらは万葉集には採録されていません。この「あからひく」は枕詞です。
「子」にかかⅢ 肌色意識の大革命る枕詞で、「子」というのは親しみを込めて女性を呼ぶとき

Ⅲ−１ 赤から白への呼び方です。
「色妙」は「美しい色をした肌」という意味で、

さて、日本人の肌の美意識ですが、化粧史の上で大きなタ「あからひく」には「赤みを帯びた美しい肌」という意味をーニングポイントがありました。
「肌色意識の大革命１、赤か持っています。歌の意味は、「赤みを帯びた美しい肌をしてら白へ」。縄文時代から平安時代の初期までは赤い印象のメーいるあなたをちらっと見てしまったので、（ここでの「ゆゑクをしていました。これを一言で「赤化粧の時代」と言います。

に」は理由ではなくて逆接ですが、）人妻であるにもかか

まず縄文時代から古墳時代までを見ると、顔や体に直接赤いわらず、あなたに恋をしてしまった」という歌です。肌の顔料を塗布するメークがされていたと考えられています。

美しさはあかあかとした美しさ、赤みを帯びている美しさ、− 149 −

それがこの時代です。お化粧にもそれが反映されているとます。1900 年のパリ万博に出演したマダム貞奴が、当時の考えることができるのではないかと思います。

ヨーロッパの女性たちを見て日記に、「パリの女性たちは日本の女性と違って、自分の肌の色に近い色の白粉を選んで【白化粧の時代】

つけている。やがて日本の女性もそうなるだろう」と書い

ところがこの後、お化粧が突然真っ白になってしまいまている。彼女の予言は当たり、1906 年、明治 39 年に黄色、す。白化粧の時代です。平安時代の中期、国風文化の時代

肉色と、初めて日本で国産の有色白粉が発売されています。

に、顔から赤みが消滅します。いわゆる白塗りメークです。

1917 年になると、「七色粉白粉」というものが発売されます。

以後、素肌に近い色の白粉が普及する昭和初期まで、白化

自分の肌の色に合わせて何色か選んで調製して使うもので粧は約 1000 年間続きました。

す。今コントロールカラーという発想があります（特にベ

国風文化は遣唐使の廃止によってもたらされました。中ースクリーム）。顔に赤みがあって、それを気にし、もう国からの文化の輸入が途絶えて日本独自の文化がつくられ

少し白くなりたいという人は例えばグリーンのベース、コていった時代です。
日本独特の美意識もここで登場しました。

ントロールベースを塗る。逆に血色が悪いので、オレンジ

源氏物語絵巻の平安貴族。この頃には男性も女性と同じ系のコントロールベースを塗ることもありますが、その発メークをするようになっています。院政が始まった頃です。

想が既に大正時代にはあったのです。

女性と男性とが全く同じ顔になりました。最初に眉を剃る

こうした経過を辿り、現在は素肌に近い色のファンデー

か抜くかして取り去ってしまい、顔全体に白粉を塗ります。

ションを使うようになりました。とは申しても、購買行動

額の高いところに円形、または楕円形で眉を描き、お歯黒を調べると、60 代から上の方は自分の肌の色よりは少しをして、ほんの小さく口紅を点す。今の若い人は「口紅を明るく見える色を選びがちです。その方が顔が映えて若く塗る」と言いますが、まさに点状に赤を点します。服には見えるという気持ちもあると思うのですが、やはりまだ白

お香を焚きしめました。

粉は白という時代の記憶というのも影響しているのではな

以後ずっとこの色白の美意識が続き、白塗りが続いていいかと考えられます。

きます。月岡芳年の絵にある大奥の女中は、顔全体を白

江戸時代の白粉の模様。渓斎英泉の「美艶仙女香」は宣塗りにしている上に、額とそれから鼻筋、いわゆる T ゾ

伝の絵です。枠で区切った中に白粉のパッケージがあり、ーンが特に白くなっています。さらに白を強調することで商標が書いてあります。刷毛にも書いてあり、美人画であ鼻筋を通ってみせています。それから眉の下あたりにうっると同時に宣伝画でもあるものが江戸時代にたくさんあり

すらと、紅をぼかし、シャドーとして上手に使っています。

ました。江戸時代は白粉のブランド品がたくさん出ていま

実物は眉が薄い青で描かれています。これは剃り跡です。

す。ファッションリーダーとして歌舞伎役者がいましたが、この剃り跡の青さというのも女性の色気にとって大切なも役者ブランドの白粉もたくさんあり、有名な白粉専門店にのだったのですが、色白の美人ならではの美しさです。そ女性が行列をして買うように、既にマスコミとブランドがれから口が開いていますが、お歯黒をした黒く小さい歯が確立していた時代です。
江戸時代の白粉と白粉道具。三段のお重があり、1 つの並んでいるのが見えます。先ほどの平安貴族のときに確立

段には粉白粉を入れます。錦絵が印刷されているものは白した同じパターンのメークをしていました。
伊東深水の美人画も、江戸時代ほど白塗りではありませ

粉のパッケージです。この中に入っている粉を 1 つの段にんが、やはり白っぽい白粉を塗っている時代の美人画です。

入れます。もう 1 つの段には水を入れます。残りの１段で博多人形と御所人形。女性の理想の肌の 1 つに「博多混ぜ合わせて、練り白粉にして塗っていきます。
練り白粉は英泉の絵の人が持っている平刷毛で塗り、そ人形のような肌」という言い方がありますが、やはり白くの後ボタン刷毛で粉を塗っていく。ちょうど現在のリキッてなめらかな肌をしています。
御所人形は、全身、顔から足の裏まで真っ白にきれいに

ドファンデーションの後に粉おしろいを塗るのと同じテク塗られています。胡粉（ハマグリの裏側）を何十回と塗ニックで使っていまり重ね、厚さが 0.5 ミリぐらいという大変精緻な作業です。

した。

今の女性の理想の肌が赤ちゃん肌ですが、まさにこの御所

「かへで」
と
「はな」

人形の肌の白さでしょう。しみもしわも吹き出物も何もなの最初の広告と、「七い、ツルッと均一な、色の白い、そういう肌です。

色粉白粉」の写真
で す（ 図 1）。この【白粉の色革命】

7 色の中から自分の有史以来白粉は世界中で白しかありませんでした。ようなりたい肌色、あるやく 1900 年ごろにヨーロッパで素肌に近い色が登場していいは自分自身の肌− 150 −

図１〔資生堂企業資料館提供〕

色白美人はなぜ永遠かに合った色を何色か選んで混ぜて使うというものでした。

いきのいいお祭りが江戸の祭りです。
そしてお化粧では、京は化粧美、つまりメークしたとき

Ⅲ−２ 白粉から素肌への美しさを求めたのに対して、江戸は素肌美を求めたので

今迄は白粉の肌の色革命の１として「赤から白へ」でした

す。

が、今度は 2 の「白粉から素肌へ」という変革です。化政

有職柄の十二単と京友禅。鈴木春信の絵（風流四季哥仙）

文化の時代です。史上初の江戸からの文化発信が行われたのですが、縞柄で黒と茶を軸にコーディネートしています。

がこの化政文化の時代です。それまではずっと京都、それか

鮫小紋は江戸小紋を代表するもので、針で刺したような細ら元禄も大阪で、上方からでしたが、ここで初めて箱根の山

かな型紙で染められている。遠くから見ると無地に見えるを越えて江戸から文化が発信されました。江戸っ子は京文化柄です。

に大変な対抗意識を燃やしました。そこで登場したのが薄化

雅な宮廷女性と粋な辰巳芸者の絵。辰巳芸者は紺と茶と黒を軸に、裏にちょっと赤をきかせてコーディネートして粧、素顔を評価するという美意識です。
江戸の美人と言ったら辰巳芸者（今深川の芸者さんはいないます。

くなってしまいましたが）でした。それから湯上がり女、そお祭りの写真。葵祭と三社祭です。

して洗い髪。いかに薄化粧であったかがわかります。

辰巳芸者は薄化粧で、冬でも絶対足袋をはかないで素足

素肌そのものが美しいということと、化粧美の土台としてです。
「素」という感覚で非常に気風のいい芸者さんです。

の素肌美を追究するようになったのもこのときからです。そそれに憧れた江戸の女性たちは湯屋、現在の銭湯で、一生して、その傾向から、当然スキンケア意識と行動が芽生え、懸命糠袋で全身を磨いて、全身スキンケアをしたのです。

普及するのです。その典型的なものが「糠袋」というわけです。

「糠袋美人図」には、糠袋を口にくわえている女性の絵が描かれています（図 2、月岡芳年画）。化政文化から大【京と江戸、美意識の対比】

正時代まで、糠袋をくわえた女性が美人画の定番ポーズと京都、江戸の美意識というものを比較してみたいと思いして確立していまし
たが、糠袋をくわえます。
京で「はんなり」という言葉は最高の美しさをあらわすていることはイコー

形容詞ですが、江戸は「いき」です。
「粋」と書き、江戸

ル湯上がりなのです。

では「いき」と読み、京では「すい」と読むという違いも湯上がりということあります。九鬼周造の『粋の構造』に詳しく書かれています。

は素肌美人なわけで、京では華やかな色彩、赤や金を多用しているが、江戸でそういうポーズです。

好まれたのは渋い色彩で、茶、鼠、黒、藍でした。特に「四十八

糠というのはスキン

茶百鼠」という言葉があり、茶色は「いろは」の 48 文字

ケア、汚れを落とす

あるくらい、茶色にこだわった。鼠色も 100 色あるくらい、のではなくて、油分

非常に微妙な鼠色の違いにこだわったのが江戸の人です。

が入っていますし、

今、東京駅の通路、八重洲側と丸の内側を結ぶ通路で南口

ビタミン類も豊富で、の通路を歩きますと、その横の壁のタイルに日本の伝統色

本当にいいスキンケ

名で「百鼠」の一部が実際に焼きつけてあり、見ることがアです。実際私も使できます。

ってみて、とてもびっくりしました。

図２ 〔資生堂企業資料館提供〕

江戸時代の後期の化政文化にスキンケアの意識と行動がそれから、紫は京では京紫、江戸では江戸紫です。
京の人が好んだのが有職柄、友禅柄。有職柄というのは芽生えて普及しました。現代の日本女性のスキンケア意識

公家の衣装で、伝統がある。友禅柄というのは金や赤が使と行動の原点は、化政文化の江戸期に求めることができま

われた華やかな柄です。それに対して江戸はしま柄や細かす。日本人の薄化粧好みの原点というのもここにあると考い小紋柄を好みました。

えられます。

京は上品で奥ゆかしくてしっとりした美しさを求めたのにここから明治、大正、昭和、そして平成とずっと素肌美

対して、江戸は生きのいい単純明快でさっぱりした美しさを求めて日本の女性は生きてきたのですが、それだけではを求めました。

ありません。他人を見るときに肌の状態を大変に気にしま

京の人たちの憧れは宮廷人ですが、江戸の人たちは辰巳す。特にあら探しの視線がそうです。知らず知らずのうちに吹き出物のところに目が行ってしまうとか、黒子のとこ芸者に憧れた。
お祭りをとりましても、葵祭や祇園祭といった奥ゆかし

ろに目が行ってしまうというのが日本人の不思議な心情で、

くしっとりしたお祭りに対して、三社祭や神田祭といった世界でどこもそうかというと決してそうではない。とにか− 151 −

くしみとかそばかすを大変に嫌い、しわも嫌い、それからいます。でも、もっと黒子も嫌い。そういうものを「汚点」と考えるのが日本人

日焼けしているのが夏の大きな特徴です。汚点をとにかくどんどん消していって

目雅子さんのポスター

理想を求めていくと、赤ちゃん肌になるわけです。生まれ

で、だんだんと日焼け

たての、本当に無垢の状態というイメージを追求している。

の度合いと露出の度合
いがエスカレートして【小麦色の衝撃】

きているのがわかりま

ところが、こういうことがありました。小麦色の衝撃です。そしてガングロのす。1950 年代に欧米で日焼け肌が流行しました。日焼け肌

女子高生の集合写真。

というのはバカンスを享受することができるステータスシ
ンボルだった。今でも、ヨーロッパのお金持ちは 2 カ月ぐ

III −３

化粧は高らい夏にお休みがあって、地中海沿岸、アメリカ人ですと度な文化

フロリダや西海岸に行きますね。すると、真っ黒に日焼け

こうして見て来ます

図３ 〔資生堂企業資料館提供〕

して帰ってくる。夏休み明けに日焼けをしているのがステと、化粧というのは高度な文化であるということがわかりまータスシンボルでした。

す。化粧の変遷を見ると、時代ごとの美意識の変化を知るこ1950 年代の末に日本に入り、ちょうど高度成長期ですが、「小麦色の肌」という流行になりました。時代背景は高度とができます。何を美しいとするか、何をよしとするかには時代の価値観が反映されています。

経済成長が始まり、レジャーブーム。
「レジャー」という同時に、どんな外見にするかは本人の価値観や生き方が反言葉が初めて普及した時代です。自動車が 1 家に 1 台普映されている。つまり時代の価値観と当人の価値観が相俟っ及するようになり始めた時代です。それと、企業では夏休て、1 つの表現形となって化粧に出ていると考えることがで

みが 2 日か 3 日とることができるようになったという時代きるわけです。

です。日焼けした肌は日本では健康美と受け取られました。

化粧を考えるということは人がいかに生きるべきか、自分

この小麦色の肌は、70 年代になりサーファーファッシ

はどう生きるかを考える手がかりにもなるわけです。ですかョンという形で、色白とはまた別の流れとなり、若者ファ

ら、化粧は人をつくると言うことができるのではないかと思ッションとして定着しています。

います。

少し前にガングロというのが渋谷にもいっぱいいました

私の専門は哲学で、化粧は人間にとってどういう意味を持し、当時非常勤で行っていた大学にも結構いたのですが、っているのかを、ずっと一貫したテーマで考え続けてきてい今はすっかりガングロはいなくなりました。日焼け肌といます。お手許の資料（2002 年 3 月 16 日毎日新聞記事）、「化

うのは、ときどき流行っては廃れるということを繰り返し

粧が感動を呼ぶわけ」に書いてあります（資料参照）。
歴史上、化粧が悪用された例はたくさんあります。日本でてきています。
今年の春・夏にブロンズのような肌が各メーカーから出は太平洋戦争中の国家によって人々の外見が統制され、それました。実は私もブロンズパウダーを買って、きょうも実によって人々の気持ちまで統制する 1 つの力になっていましは使っているのですが、この通り、だからといってブロン

たし、文化大革命中の中国もそういう政策がありました。少ズ色の顔かというとそうではありません。このブロンズ商

し前に犯罪を犯した宗教団体がそういったことをしていたと品、売れたのですが、どこに消えたのだろう。考えてみるいう例もあります。化粧というのはアイデンティティに非常と、日本人は明治以降、ずっと顔の立体化を追求してきてに大きくかかわっています。自分が自分のアイデンティティ

います。日本人は扁平な顔ですので、欧米人のように彫りをどうつくっていくかということに自由がある間はよいのでの深い顔になりたい。それを演出するのにこのブロンズ商

すが、何かの権力に個人の外見を握られたときの怖さともあ

品が便利なのです。例えば U ゾーンに塗るとか、頬紅とるわけです。

してちょっと入れるなど。私もそうですが、どうやらそう

化粧を考えることが「人はいかに生きるべきか」、「自分はいう人が非常に多い。このように日焼け肌は流行はするけ

どう生きるべきか」を考える手がかりにもなる。だから、「化

れど定着はせず、流行になり、廃れ、流行り、廃れという

粧は人をつくる」ということができると言うわけです。
化粧の持つ力も取り込んで化粧をよりよく生きる手段にす

形で今日まで続いてきています。
1966 年の「小麦色の肌」のポスター写真。前田美波里

ることもできるし、反対に自己抑圧や自己喪失のきっかけにさんのデビューポスターと言ってもいいくらいの作品でもなり得る。その化粧の力の例として、老人性痴呆症や鬱病す（図 3）。当時、この角度からこの水着を着て写真を撮の患者さんに対し、それから PTSD（心的外傷性ストレス障

るというのは大変センセーショナルなことだったと聞いて害）など、いろんなショックを受けた後の精神的な状態の症− 152 −

色白美人はなぜ永遠か状の軽減や改善に役立っています。またお化粧で対人積極性

うことが起こったかを考えると、美しさの基準が個人の外にが出る、あるいは社会性が回復するという例がたくさんあり

置かれているからです。個人に外在的な美の基準がもたらすます。それから、社会性が拡大していくという例もたくさんものとして何があるかといいますと、美的基準と異なる人物、あり、そういう化粧の力を上手に生かしていくことが、1 人

ファッションモデルや女優などですが、それは社会の中に 1

ひとりが生きやすい社会をつくる上で特に重要になってくる

人、またはごく少数しか存在していない。ごく少数の人しかのではないかと思います。

美しさの基準として社会の中にないわけです。それ以外の一般人は、自分とそのモデルを比較すると、美容上の欠点を抱Ⅳ 美人とは何かえているということになるのです。美容指導は現に欠点克服

Ⅳ−１ 美人の基準型です。
「あなたはここが少し出っ張り過ぎだから引っ込ん

これまでのことを踏まえて、最後に「美人とは何か」につで見せるようにしましょうね」と、そういうやり方をしているのです。

いてお話ししたいと思います。
歴史を通じて普遍の美人の基準、世界中どの地域にも共通

大正時代に女性雑誌が次々と創刊されて、美容相談コーナする基準があります。これは若さです。デズモンド・モリス

ーができて、以来ずっとありますが、それもやはりずっと悩という動物行動学者がいます。動物をずっと観察していたみ克服型です。すると、目指す顔が同じパターンになってしのですが、人間の行動も観察し続けて、『マンウオッチング』

まいます。実際、資生堂の実験結果からも、メークをするとや『裸のサル』などを書いている人です。彼と対談したとき

だれもが同じ顔になってしまうという傾向が確かにあります。

に、彼は 200 の文化を調べた結果、美しさの基準の中で唯一
Ⅳ−２ 新しい「美人」とは共通しているのが若さだったと言うのです。この若さの美し

これからの時代をよく生きる、充実して生きるために必要さというのは確かにだれが見てもわかりやすい。単純明快で、なことは発想の転換、価値観の転換ではないでしょうか。そ現在、大変に強力な美しさの基準にもなっています。
肌の美しさというのも色白、つまりしみとか吹き出物とかれは美しさの基準が個々人の内にある、「人それぞれの美し

しわがないということは、若さの証でもあるわけです。それさ」ということです。これは、社会の中で価値基準を多様化

が現在も最強の女性美になっています。また、若い世代になするということでもあります。

ればなるほどこの傾向が強まるような気がしてなりません。

「人それぞれの美しさ」で個人の中に基準を置いただけで少し前ですが、電車に乗っていたときに、自分のすぐ後ろではまだ足りないのです。年を重ねることに対する美的価値

男の子 3 人組が話しているのが耳に入ってきました。どうもの転換というものも併せて必要です。例えば 10 年前の私と、高校の卒業式が終わって間もないらしいのですが、「もう人現在の私と、10 年後の私を比較したときに、どれも違って、生終わりだな」という話をしていました。社会の中で自分のどれもよくて、どれが一番いいかというのはもうナンセンス、価値が最も高く流通する年齢があります。それが高校生、今それが実現できたら、こんなにいいことはないのではないで

ちょっと中学生に移りつつありますけれども、もう高校出たしょうか。
これを「年それぞれの美しさ」と名づけます。これは個人

ら、あとはおしまいだという話になるわけです。若い人ほどそれを敏感に感じ取っています。

の内部での美的価値の基準の多様化です。女性にこの話をす「若さイコール美しさ」という価値観に由来する現象には、るとすごくよくわかってくれます。例えば「1 年前の自分が女性の価値は若いうちだけというものがあります。女性には一番よく見えるヘアスタイルとメークと服装を思い出してみ経験と円熟よりかわいさと初々しさが求められる傾向が強い。

てください」。
「では、現在自分が一番よく見えるヘアスタイ

男性には「いい顔」という表現がありますが、女性ではどう

ルとメークと服装はどうですか、1 年前と同じですか」。違でしょうか。アイドルやスポーツ選手の年齢が急速に低下しいます。毎年毎年自分は変わっていくのです。その年その年て、今やオリンピックでは美しさを競う競技、例えば床運動の美しさというものがあるわけです。もちろん流行の違いもやアイススケートなど、特に床運動は「お子様スポーツ大会」

反映されていますが、流行のピークは結構若いところにありみたいになっています。アイドルタレントも今や 10 代です。

ます。それを超えると、むしろその年の自分が、どれが一番

20 代になるとアイドルおしまいという時代になってきていまよく見えるかがより実感としてわかってくると思います。先す。

ほどは社会の中の価値基準の多様化、「人それぞれの美しさ」

平均寿命が 80 歳という現在、ある年齢を過ぎるとあとの長い人生はどんどん価値が下がっていくことになってしまう。

でしたが、今度は個人の内部の価値基準の多様化、「年それぞれの美しさ」です。

するとエイジング、つまり年を重ねることは不幸が増すのみ

新しい美人というのは「人それぞれ・年それぞれの美しさ」ということになってしまうわけで、本当におかしな話です。

です。こういう考え方で周りの人も評価し、本人もまたそれ

実際美人に関する現状というのはこうです。どうしてこういを実現していく、こういう方向にあるべきではないでしょう− 153 −

か。本人がひとりでいくら頑張っても周りが認めてくれない

増えたけど美人は減った」という感じを強く持っています。

と挫折するのです。ちゃんとそうやっている人を周りが評価

つまり今の若い人というのは、安い物を上手に組み合わせしてあげるということは非常に大事です。特に化粧品メーカて自分なりのファッションをつくっていく。メークにしてもーにはプロがたくさんいますので、プロの目でその人なりの服装にしても、美しさの表現はとても上手になっているのに、美しさの基準というのを見出してあげて、表現している人の話をしてみると、一言口を開けたらがっくりくる子がたいへ

表現を応援してあげるということ、それがとても大事なこと

んに増えているような気がしてなりません。自分のことを棚ではないかと思います。

に上げて言うのもなんですが、教育者という視点から言わせ

実は「人それぞれ・年それぞれの美しさ」という活動は資てもらいますと、何かとても品がない感じがするのです。ど生堂が「サクセスフル エイジング」という活動を 89 年から

うしてなのかは 2 〜 3 年の間わからなかったのですが、ある

始めて、97 年の段階で、「サクセスフル エイジング」イコー

とき気がつき、その気がついたことを書いています。

ル「美しく年を重ねる」の「美しさ」の部分の解釈として、「人

私は「きれいを学問する」というコンセプトのもとに講義それぞれ・年それぞれの美しさ」というのを社長、会長にま型の授業と、実習型の授業と、演習型、つまりゼミの授業で認めていただいて、そこに付け加える形で現在展開していと、それからグループ学習の授業と、4 つのパターンの授業ます。資生堂の外でも私はこういう活動をずっと行なってきを展開しています。実習型の授業として「ライフスタイル論」ています。

を持っていますが、伝統的なライフスタイルの中から日本人

この「人それぞれ・年それぞれの美しさ」が求められる背の伝統的な美意識をもう一度学び取って、自分の体を使って、景ですが、ちょうど今流行っている歌にスマップの「世界に頭と体の間を往復しながら考えていくことで、自分の美しさ

1 つだけの花」があります。大ヒットして、しかもかなり長をつくっていく態度を身につけてほしいと思って行なっていい間ヒットしています。あの歌詞は「ナンバーワン」より「オます。どんな美しさを身につけたいか、最初に目標を立てさンリーワン」という意味です。ナンバーワンというのは価値せて、授業の終わりにはフィードバックの自己評価をします。

の基準がごく少数しかなくて、その同じ基準の中で競争してこの授業では学生が和服を着ます。それは大きなモードチェ

いく、それがナンバーワンです。ところが、オンリーワンとンジになります。和服を着ると自分の行動が一々気になるはいうのは価値基準が社会の中に多様化している。自分の中ずです。美しさということを自分でもう一度意識するために、でもナンバーワンとオンリーワンというのを考えてみますと、和服はとてもいい道具だと私は考えています。また日本舞踊

若いある年齢に美しさのピークがあって、そのときの自分がに代表される美しい動作の訓練にも和服が非常に役に立って美的にナンバーワンだった。あとはだんだん下がっていくといます。そうした私の経験からも、このような授業を展開しいうわけですが、その年その年しかない自分の美しさというています。
また、最近研究を始めたばかりの「これからの時代の新しのはオンリーワンなわけです。
自分価値、自分基準の時代というのを現在迎えています。

い美しさ」のテーマにも和服が大いにかかわっています。ここれからさらにボーダレス化が進展し、それから高齢社会もうしたことから、最近人様の前でお話しするときには和服をますます進みます。成熟型社会、スローライフということも着ることが多くなっています。

今言われていますけれど、スマップの歌も「人それぞれ・年それぞれの美しさ」というこの価値観も、まさに成熟型社会

Ⅴ 最後にのあり方です。そういう時代は多様な価値基準が必要とされ最後に今日お話ししたことの参考文献です。化粧を哲学的てきています。美しさの基準や美容の発想、美容の方法といに考えるのは『おしゃれの哲学』という本に書きました。今

うのも変わるべきときに来ているのではないでしょうか。

日お話しした中の多くは歴史研究から採っていまして、それ「毎日新聞」の記事、「躾は美しさの第一歩」（2003 年 9 月 6 日）

は『化粧せずには生きられない人間の歴史』（講談社現代新書）と、「化粧を子供にどう教える」（2003 年 11 月 4 日）というに書いたものがたくさんあります。そして、小学校の 5 年

資料ですが、今日私が和服を着てきているのも実は大いに関生から中学生向けに化粧の歴史と化粧教育を書きました『お係をしています。私は和服が大好きで、小さいときから日本

化粧大研究』は、つい先日出たばかりです。今日のお話でご舞踊も習っています。たしかに好きで着ているのですが、そ興味を持ってお読みいただきましたら幸いに存じます。

れだけではないのです。

本日はありがとうございました。

女子大学で教えるようになり、学生たちを見て、「美女は− 154 −

コスメトロジー研究雑感

平成 13 年度

研究助成

コスメトロジーと高分子化学
鬼村謙二郎

コスメトロジー（化粧品学）は人類が誕生し最初の「文れた科学技術を結集して一つの化粧品が出来上がるため、化・学問」ではないだろうか。例えば祭りや信仰、あるい一個人としては化粧品を開発することは困難である。私がは部族間の区別や階級、職種など原始時代から現代に至る専門としている化学、特に高分子化学や有機化学分野でのまで世界中で行われている。科学的な面から考えると、太化粧品開発への貢献は新素材の開発、平たく言うとより新

古では鮮やかで神秘的な色を求めて顔料の探索や調合が日

しい色を発する物質や肌への低刺激性化粧品の開発などが常的に行われ、天然の植物（花や実、根）、動物、さらにあげられる。最近はナノテクノロジーという言葉をよく耳岩石などの鉱物に至るまで調査が行われていた。これらのにする。ナノとは 10 の− 9 乗を意味するが、化粧品との探索過程で薬理作用がある植物が見つかり、金や銀などの関係ではナノ粒子の活用が実用化されている。ナノ粒子は

貴金属やダイヤモンドが発見され、さらに調合過程では化

無機あるいは有機化合物を数ナノ〜数百ナノメートルの粉学反応により全く新しい色や機能を持つ顔料が見つかったにして化粧品に混ぜ肌のきめ細かさを表現している。ナノのだろう。現代風に言えば化学、生物学、薬学、医学、地メートルの大きさは化学で言うと分子がたくさん繋がった

球科学といった重要な科学分野にあたる。即ち人がより美高分子の領域である。高分子化学や有機化学は比較的個人しく見せたいという願望、欲求がサイエンスを発展させてレベルの考え（アイデア）で全く新しい物質を世に産み出いったのだと思う。

せる学問の一つだと思う。今後、人類の「美しく見せたい」

一方、現代の化粧品学はどうであろうか。化学、生理学、という根底にある願望が科学技術の発展の力になるだろう。

生物学、物理学、医学、薬学、色彩学、工学など細分科さ（山口大学工学部応用化学工学科）

平成 13 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
亀島
この度，コスメトロジー振興財団の研究助成金を頂き，

欣一
るいはアイシャドーやマニキュアに均質に色づけする基材として使われていますし，子供の頃にお世話になったベビ

心から御礼申し上げます．
コスメトロジーという言葉は，化粧などに関する言葉だーパウダーも主成分はタルクという粘土です．最近では，とは知りつつも，私などが普段使う言葉ではありませんで

乾燥肌対策の保湿成分として粘土の保湿性や保油性が利用した．言葉の本来の意味は「美容術」というのが正しいよ

されています．

うで，つまりは「化粧」と同義と考えて良いのでしょう．

本研究では，この粘土材料が持つ再生性というユニーク

この為，男性にとって馴染みが薄い言葉ですが，女性にとな機能を上手く活かすことで，クレンジングや肌の保護なっては敏感に反応する言葉であると思われます．普段は理どに活かせる新しい用途開発が行えると考えました．ここ

系的なことには関心を示さない女性でも，「コスメトロジ

で，本研究で得られた粘土材料の特徴について簡単に述べーに絡んだ研究」と言うと理解して頂けたことに，少し驚ます．比較的大きな細孔であるメソ孔を保持した粘土材料

きつつもなるほどと感心したものです．

では，より長鎖の脂肪酸の吸着が可能となります．サポナ

似たようなことが「粘土」という言葉にも見られます．

イトの再生性を有する粘土材料では，サポナイトの膨張性

粘土というと大多数の方は陶芸などの「焼き物の原料」をを制御することで，吸着性能などを制御した粘土材料です．

思い浮かべますが，女性の場合は泥パックなどの「美容」

また，層状複水酸化物とサポナイトの両方の再生性を有すに関することも連想するそうです．泥パックに代表されるる粘土材料では，陽・陰の両方を取り込むという「複吸着ように，粘土と化粧の関係は古くから続いてきました．現能」が生じることで新たな用途が期待できます．これらの在でも，ファンデーションに伸びを与える材料として，あ

材料について，今後はいかに制御性を向上させるか検討し− 157 −

ていきたいと考えています．

がらそのお役に立てる研究が続けられれば幸いです．

今後の粘土材料に関する研究の発展がコスメトロジーの（東京工業大学大学院理工学研究科）

発展にも寄与するものと確信しております．また，微力な

平成 13 年度

研究助成

コスメトロジーに興味を持った理由田辺陽

私は、独自の有機反応を開発し、それを有用ファインケ

これを契機に，コスメトロジー研究に興味を持ち，このミカルズ合成に応用する、すなわち実験室レヴェルから工独自チタン反応を最も閾値が低い（最も強力な）天然香料

業的規模まで視野に入れた研究を行っている。企業（住友とされるミント系香料である R −ミントラクトンや R −メ化学）で 10 年、さらに５大学で研究したことがこのようントフランの非常に短段階のシンプルな合成や植物性香料な研究に取り組む経緯である．

シス−ジャスモンの新規フラン誘導体（調香で残効性の優特に若いころ東大理学部向山研究室で研究生として学れた個性的なメンズフレグランスとしての商品価値）の合

び，「チタン＝クライゼン縮合」に出会え，学位論文とし成に展開できた。ところで、この独自チタン反応は、最近、てまとめた．最近，この反応の大幅な合理化をテーマにしメルク社の抗院内感染抗生物質（anti-MRSA）合成で実際ていたところ，タイミング良くジャパンエナジーから「ジに工業化規模で実施され，さらに現在，最高性能の抗生物ャコウネコから採取される天然ムスク香料：シベトン」へ質とされるメロペネムの短段階合成法も可能となった．

実用合成に応用できないかとの要請を受けた．シベトンやひょんなことからコスメトロジーに関わることになった

ムスコンなどの天然ムスクの実用化学合成は香料業界の最というところが実感である．個人的には「シベトン」の方

大テーマの一つである．ワシントン条約に謳われる野生動が「ムスコン」より好きである．おかげ様で最近は香水に物の乱獲虐待防止の観点からも重要である．

興味を持つようになり，デパートの一階でのショッピング

おかげで初期の成果，「チタン＝クライゼン縮合」を利用する，現在まで唯一ともいえる「シベトン」の実用合成法を確立できた．＜朝日新聞夕刊（関西版）2000, 9/7; 読
売新聞夕刊（関東版）2000, 9/14; 日本経済新聞朝刊（全国を楽しむようになった．仕事から趣味が広がったことを関係の方々に感謝する次第です．
最後にお世話になりましたコスメトロジー財団に感謝申し上げ同時にますますのご発展をお祈り申し上げます．
（関西学院大学理工学部化学科）

版）2000, 10/9 掲載＞。

平成 14 年度

研究助成

界面活性剤とコスメトロジー
吉村倫一

私は，化粧品や洗浄剤などに含まれる界面活性剤の研究剤の開発を目指して研究に取り組んでいます。いろいろなを行っています。具体的には，目的や使用に応じて分子を分野で「環境にやさしい」とか「地球にやさしい」などとデザインして実際に合成し，これらの性質について様々な言われていますが，私も環境や人体にやさしく，害のない測定によって詳しく調べています。また，工業的に有用で界面活性剤を作り出したいと強く思い，現在では，糖やアあるか評価しています。界面活性剤は水表面や水と油の界ミノ酸を用いた新規な界面活性剤の開発に精力的に取り組面などに吸着して配向し，水溶液中ではミセルのような会んでいます。自ら分子設計して合成した新規界面活性剤に合体を形成して，その結果，乳化や洗浄などの効果を発揮

は予期せぬ優れた性能の発見があり，非常に興味が持たれしています。現在，化粧品などに使用されている界面活性ます。

剤と同等，あるいはそれ以上の性能を有する新規界面活性私の開発した界面活性剤が，将来化粧品などの成分表示− 158 −

コスメトロジー研究雑感に記載されることを夢見ながら研究を進めていますが，こできたら研究もさらにやりがいのあるものとなります。人

れからは材料などのコスト面や界面活性剤の機能性という体や環境にやさしくかつ機能的な化粧品を創り出すコスメ面についても重要であると思われます。自ら分子設計してトロジーの研究が，今後ますます発展することを期待して合成した界面活性剤が実用化され，少しでも世の中に貢献おります。

（東京理科大学理学部）

平成 14 年度

研究助成

コスメトロジーに役立つマテリアル
岩崎泰彦

生体に優しいポリマーマテリアルの研究を始め、およそ在し、外界からの刺激に対する見えない手袋として働くこ

10 年が経ちました。生体と伴に用いるマテリアルに安全とも認められ、現在では、多くの化粧料や洗髪料など幅広性が問われることは、言うまでもなく、生体の構造や機能く用いられるようになっています。

に倣って分子設計することが極めて重要です。しかしなが最近、私の３歳の娘がお化粧に夢中です。お化粧は年齢

ら、生体に関連して用いられているポリマーマテリアルのを問わず女性（最近は男性も？）を外見のみならず精神的

多くは、機能のみが優先され、生体のことを考慮して設計にも豊かにすることを、娘の楽しくも真剣な姿をみながらされておりません。そのため、これらのマテリアルは生体実感しています（娘の練習相手には少々困っておりますがと接触した瞬間から生体の巧みな防御反応の対象となり、..）。そのため、多くの人に受け入れられる生体に優しいマ

生理的環境においてマテリアル本来の機能を発揮できない

テリアルを作ること極めて大切なことであり、私たちのマことが問題となっています。

テリアルがその一端を担っていることをうれしく思ってい私たちは、生体反応を制御できる究極の界面は生体膜にます。

より構築されるとの考えから、生体膜を構成するリン脂

貴財団にご支援頂きましたこの一年間、生体に優しい新質と同じ構造を持つポリマーを合成しました。その結果 、

たなポリマーの開発を遂行してきました。核酸の構造をモ

このポリマー表面では、様々な生体反応の原因となるタンチーフとしたこのポリマーが、代表的な生分解性ポリマー

パク質吸着や細胞粘着が起こらない、すなわち生体がこのであるポリエステルに比べ優れた溶解性と分解性を示し、ポリマーを異物として認識しないことがわかりました。現

ポリマーおよび分解生成物の細胞毒性は認められなかった

在このポリマーは、血液と接触して用いられる医療用デバ

ことから、極めて安全であることを明らかにできました。

イスの表面改質に用いられております。

本研究で生まれたマテリアルが近い将来、コスメトロジー

一方、このポリマーが肌に対し高い親和性を示すこともの分野で重宝されることを確信しておりますし、これから明らかにされ、さらに肌の木目を整える効果があること、も貴財団を通じ優れた多くのマテリアルが生み出されるこポリマーであるがゆえに皮膚に吸収されず表面に長期間存とを祈念いたします。

− 159 −

（東京医科歯科大学）

平成 14 年度

研究助成

コスメトロジーと天然物化学
石橋正己

薬学部に所属し，有機化学を専攻している者として，コ

世紀初頭のモルヒネの発見以降，20 世紀の抗生物質の登

スメトロジーに役立つ低分子の探索というテーマで研究課場など，天然物（天然資源に含まれる化合物）は人々に対題を提案したところ，研究助成を賜り心から感謝申し上げ

してきわめて大きな役割を果たしてきた．当研究室では，ます．有機化学でも天然物化学を専門としているので，提天然成分探索の素材として，とくに未利用資源に着目して案した研究課題は低分子探索の素材を合成化合物でなく天いる．本研究課題の報告書では，熱帯薬用植物，海藻，ウ然物に求めている点が特徴であると考えている．スクアレ

ミウシの研究を取り上げたが，この他に変形菌というユニンをはじめとして，これまでにもコスメトロジーに対してークな生物も対象として研究している．元気な学生さんた

天然成分は大きく貢献してきている．合成化合物が危険で，ちと森に入って採集も行う．ただし，研究の遂行のためとい

天然成分が安全だといった風潮があることは否めないが，っても，人間と地球環境との共存・保全の立場から，貴重なそのこと自体は科学的には決して正しくない．しかしなが

植物・海洋生物等の材料生物を大量採取する方法は可能な限ら，天然成分からは人知の及ばない化学構造と作用をもつり回避する必要がある．それを補う方法の一つとして，人工ものが見出されることが期待され，天然成分の探索の重要

培養または栽培による再生産による目的物質の持続的供給の性は今後も変わることはないと考えられる．

実現を重視することが大切である．また，天然物分析技術

今でも世界の人口の 60％は普段の病気やけがの治療に植物あるいは植物由来の生薬にたよっているという．19の超高効率化をはかり，一連の実験を格段に小スケール化することに努めたい．

（千葉大学大学院薬学研究院）

平成 14 年度

研究助成

超薄膜とコスメトロジー
安斉

順一

タンパク質や脂質のような生体物質や合成高分子などのわたる。特に、タンパク質などの生体材料を用いた薄膜は材料を利用して、分子レベルで構造の制御された超薄膜をそれらの生物機能を膜中で発揮させることができるので、設計製造することを専門としている。これらの薄膜は、厚生体膜の機能を模倣するには格好であり、電極などのトラさにすればナノメータサイズなので、肉眼にも見えずそれ

ンスジューサー表面に被覆された薄膜では信号変換を同時自身で取り出すことは困難なことがほとんどで、金属やガに行える（言うのはやさしいが実現するのはけっこう難し

ラスなど種々の固体基板表面に被覆された形で研究対象とい）。すでに存在する物質や材料の構造や機能を解明するしている。このような研究の目的を一言で言うならば、固ような目指す頂が明確な研究と異なり、はじめの見通しが体と液体または気体の接するところ（界面）で何らかの機はずれると全く意味のない（と思われる）珍品を設計して能を発揮させることにある。すなわち、界面に材料を組織しまうことも希ではない。他人と違う面白い系を設計した化することにより、均一な溶液中では実現できないようないというのが第一の研究動機なので、平均点でまとまるよ機能を達成したいと思っている。考えられる機能は沢山ありはいいとも言える。さて、このような研究の一端であっり、材料の表面保護などごく初歩的なものから、化学物質

た今回の私の研究結果がコスメトロジーの発展に少しではの選択的透過や分離機能、固体表面での化学反応（触媒）、あっても貢献できたのであろうか？

溶液や気体中の物質のセンシング、情報変換、など多岐にことを願う。

− 160 −

答えがイエスである（東北大学大学院薬学研究科）

コスメトロジー研究雑感

平成 14 年度

研究助成

コスメトロジーと材料科学
上川直文

コスメトロジーは、人が健康で生き生きと人間らしく生まうことが多い。また、薬学やバイオマテリアルの研究分きていくための学問として、自然科学を専門とする研究者

野においては常に病的な状態を有する人を念頭において研にとっても様々な学問領域にまたがる非常に学際的で興味究が行われるわけであるが、材料科学にコスメトロジーと深い研究対象である。たぶん人類がこの地球上に誕生したいう視点をより多く取り入れることで普通の人が普通に生時から体を美しく彩るための顔料の探索という形でコスメきるための材料開発といういままでともすると軽視されがトロジーと材料科学は切っても切れない強い関係を有してちであった分野に光をあてこれからの社会の発展に寄与しきたと考えられる。そして、これからの 21 世紀においてうる新しい研究開発分野を創造できると期待しているとこ

コスメトロジーは性別、年齢の枠を超えこれまで以上に多ろである。そして、コスメトロジーと材料科学が共に協調

くの人々の生き方にも影響をおよぼす非常に重要な学問分

しあうことで、ライフスタイルの創造から新しい文化の創野へと成長していくと期待される。そしてこれに伴い、材造へとその学問領域を広げ、これからの 21 世紀を我々人

料科学の観点からも人と地球に優しく作りそして使うこと

間がより人間らしく生きられることを可能にしてくれるとの出来る化粧品用材料の開発が重要になっていることを研期待している。そして、一つの学問分野としてコスメトロ

究を通して実感しているところである。材料を開発する研ジーがこれまで以上に多くの人の関心を集めることを願っ

究者は、ともすると材料自身の機能や製造法にのみ関心がている。

（千葉大学工学部）

向いてしまい、それを使う人の側に立った視点を忘れてし平成 14 年度

研究助成

コスメトロジーと研究事例
中島伸佳「化粧」という言葉から私が連想するものは、「幼きころが、私の知人に「浜田博喜博士」という「大学発のバイオの故郷・古都奈良の時代祭の武者化粧」、そして「大学生ベンチャー企業」も手掛ける有名な大学教授がいる。彼は時代に過した我が第２の故郷・南国土佐の飲み屋のお姉さ飛び抜けたバイタリテイーと学際的な研究連携体制を持っんの少し暑苦しい程のファンデーション」と「大学院時代て、ご自身の所属大学である岡山理科大学理学部に、今春の京都の下町の舞妓さんのきらびやかな風情」というよう

より「臨床生命科学科」を新設し、その学科長も引き受け

な俗びたものばかりであり、普段、男性用化粧品も殆ど使る多忙な人物である。

わない私は、「コスメトロジー」には全く無縁であった。

彼は「医食同源」という観点のもとに、しかも、ヒトがしかし、今回、私の専門である「応用酵素学」を基礎と手にする食品、化粧品、医薬品の全てを一元的に、かつ有した「化粧品素材としての生理機能性物質の安定化と機能機的に位置付けるという現代社会に先見的な発想で、「有改変に関する研究」が「ご縁」となり、コスメトロジー研

用な生理活性成分や医薬品の経皮吸収法の開発」、「新しい究振興財団から研究助成を戴く機会を得て、幸いにも私の免疫療法や制癌剤の開発」、「新規な経口サプリメントの開研究対象に広がりを持たせることができた。

発」、あるいは「東洋医学やアロマテラピーを念頭に入れ

近年、「コスメトロジー」は、単に肌につけるだけの従た様々な疾患や成人病の予防・治療法の開発」、
さらには「未来の化粧品や香水の領域から、医薬品、食品、そして健康、知の有用生理機能性物質の探索と創造」に日夜取り組んで福祉、あるいは環境の分野までへと大きな広がりを成し得おられる。近く「付加価値のある疾患予防化粧品」なるもてきた事は周知の事実である。

のも開発されると期待して止まないところである。

ここで、私の近縁の大学でのこの分野の研究事例を取り上げるのは、いささか「手前味噌」になるような気もする− 161 −

（岡山県立大学保健福祉学部）

平成 14 年度

研究助成

コスメトロジーは未来を映す鏡？
大和田

智彦

私たちの分野では、現実的な問題はあるもののテーラーと（そのため私たちが研究助成金を頂戴する機会を与えてメイド（もしくはパーソナライズド）医療もしくは医薬のいただいているのだが）美容術という技術的な側面の両方実現が揚げられている。これは個人のもつ遺伝子のわずかの意味があるようだ。同じ○○ロジーという言葉でもバイな相違（例えば DNA １塩基の相違）によって医薬品の効オロジー（生物学）は学問的な側であり、テクノロジーはき目や毒性の発揮に違いがあることが知られているため、まさに技術そのものであり、本当の意味でカタカナで書か

遺伝子を調べ、理想的にはその個人に合った最適な医薬をれたコスメトロジーの意図するものは分からないが、この提供すべきだという方向である。確かに、薬には副作用が言葉が広い意味を持つことは理解できる。この財団のネーあり、薬を飲むと体がかゆくなったり、眠くなったり、場

ミングには先見性が感じられる。パーソナライズド医療の合によっては症状が悪化する場合すらあることを私たちは根拠となるのは個人情報である。情報の蓄積とその科学的経験によって知っている。くすりにはリスク（くすりをな解析により、このような遺伝子をもつ人にはこのような逆から読むと）を伴うことが多い。そのため処方箋を持っ化粧品が適切といったテーラーメイド（パーソナライズド）て薬局で薬を買う場合、医薬品情報提供と称して薬の飲みコスメトロジーが出現する可能性もある。また化粧品（特方、薬の効果や伴う副作用が私たちに伝えられるようになに女性用の基礎化粧品）は概して価格が高い。健康保険制った。しかし考えてみるとこのようなパーソナライズドな度がさらに後退した際の私たちが薬局で薬代として支払う

処方（？）や情報提供は化粧品の世界では既に対面販売と金額が化粧品なみになることは想像外ではない。コスメトいう形で以前から行われていたのではないであろうか。コ

ロジーと医薬は思った以上に似ているのかもしれない。

スメトロジーという言葉には化粧品学という学問的な側面（東京大学大学院薬学系研究科）

平成 13 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
的崎

尚

私の所属する研究所の所在地群馬県前橋市は、関東平野

境でも常に外気にさらされている。化粧品も季節にあわせの奥まったところに位置し、雄大な自然を眺めつつ研究をた色合いばかりではなく、皮膚防御成分の配合も変えられおこなっている。こちらに赴任するまでは、ずっと関西にているのであろうか。不勉強にして、実際はどうだか知ら住んでいたため、ことあるごとに関東平野の広さに圧倒さないが、こんなことをふと考えたりしている。

れ、関西とはまた違った自然の移り変わりを楽しんでいる。

上州名物といえばからっ風の他にカカア天下が有名であ

上州前橋名物といえば、からっ風も有名で、これにはいまるが、こちらで一緒に仕事をしている女性陣は皆、勤勉でだに慣れることができないでいる。秋も深くなると、新潟

しっかりしたかたばかりである。女性が働き者であるとい

県側で雨や雪を降らし、水分をそぎ落とし乾燥した北風が、うことが、カカア天下というようにひろめられただけで、山脈をこえ吹き下ろしはじめる。私などは、冬場は室内で

これは男性陣のやっかみであろう。冬場は天気も曇りがちの加湿器が手放せない。

で、街の景色も何となく暗い印象があるが、そんな中で華今回、本研究助成をいただいて、改めて皮膚の防御機構

やいだ女性の装いとお化粧が、雰囲気を明るくしてくれる。

の重要性を考え直した。表皮は外界からの異物の侵入を防北風にも負けない、皮膚に優しい化粧品が、今後とも街のぐとともに、体内の水分を保つのに必須である。皮膚が老景色を飾っていくことを期待する。

化したり、損傷したりすれば、美容上のみならず、医療上も多大な問題が起こる。特に顔の部分は、厳しい冬場の環− 162 −

（群馬大学生体調節研究所）

コスメトロジー研究雑感

平成 13 年度

研究助成

皮膚の研究はおもしろい今淳

昨年の４月，これまで所属していた弘前大学医学部皮膚さて，本助成では VII 型コラーゲンと皮膚の老化との関係

科学講座から同・生化学第１講座へと移動し，皮膚の再を研究しました。VII 型コラーゲンの機能として，基底膜生，創傷治癒，老化に関する糖鎖医学的研究を開始しましと真皮とを結合させ皮膚を強固にする重要な役割を担うこた。皮膚科医として様々な皮膚病の患者さんを診察していとが既に知られていましたので，研究開始当初は，「老化

ると，「病気自体は完全に治らないまでも，見た目だけはとは関係無いよ！そんな研究やってどうするの！」と言う何とかしてほしい」ということを強く希望される方に多く方もいました。しかし，「石の上にも三年」の気持ちで，出会います。この様な訴えを聞く度に，ずうずうしくも私

そして目の前に助成金もあるわけですから奮闘努力しない

は，自分の力で何か出来ないかと思い上がり，研究の世界

わけにはゆきません，その結果，皮膚老化，特に " 皺 " 形にどっぷりと浸かることを決意しました。現在，ひどい爛

成への関わりの扉が見えてきました。今後はこの結果を予れ・傷跡が残らない皮膚を再生・修復する研究，加齢や太防や治療に関する研究へと活かし発展させる予定です。

陽光紫外線の暴露により生じる“皺”など皮膚老化を予防

最後に，私の夢物語？に対して研究費を助成下さいまし及び治療することを目指した研究を行っています。しかしたコスメトロジー研究振興財団に心から感謝するとともにながら，生命科学研究の進歩は速く，周りも優秀な研究者

今後の更なる御発展をお祈りいたします。また，私をスタばかりで，生き残りには必死な状態です。そのため，当たッフとして快く迎えて下さり，私の研究を講座プロジェク

り前ではありますが，自分独自の発想による研究を行うこトの一つとして立ち上げて下さった生化学第１講座の高垣と，人の後ろを追いかける研究は決して行わないことを強啓一教授並びにスタッフの皆様にも感謝申し上げます。

く心に誓っています。

（弘前大学医学部）

平成 13 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
高倉喜信

世紀末から、「21 世紀の夢の治療法」と言われ続けてきの研究でも、表皮細胞やメラノーマ細胞が遺伝子を導入する

た遺伝子治療には、今なお大きな期待が寄せられているが、直接のターゲットにされたり、表皮細胞に治療用遺伝子を発新世紀に入ってしばらく年月が経過した現在でも、まだ夢現させ、そこで治療用タンパクを作らせ、皮膚局所や全身への続きの状態である。まだまだ、この病気にはこの遺伝子のデリバリーを狙う研究も進められている。ますます、コス治療をというわけにはいかない様である。しかしながら、

メトロジーと薬学は近い関係になっていくような感じがする。

遺伝病や癌やエイズなど、これまでの治療法では不治の病

もともと遺伝子治療は、不治の病の治療法として開始さとされてきた病気がこの新しい方法で直るようになるかもれたが、最近は動脈硬化症や糖尿病など致死的な病気ではしれないとの強い期待に支えられて、基礎研究、臨床研究なく極めて患者の QOL を損なう疾病にも展開されている。

が続けられている。

もちろん、今は治療目的以外の応用、例えば頭を良くした

私の専門であるくすりの研究とコスメトロジーは「皮膚り運動能力を高めたりする目的には、倫理的観点から望まに塗る」という接点において古くから非常に密接な関係にしくないので禁止されている。しかし、22 世紀くらいにある。化粧品のターゲットである角質層は塗り薬の適用部

遺伝子治療が当たり前の治療法になっていれば、美容のた位でもあり、くすりの全身作用を望む場合にはバリアーとめに皮膚に遺伝子を入れることが許され、人々が新しい美もなる。角質層の下にある表皮細胞もまた同様であり、皮白獲得法を手にしている時代が来るかも知れない。コスメ

膚にできる癌、メラノーマも重要な標的である。最近は、トロジーも大きな変貌をとげているに違いない。

遺伝子治療や遺伝子をワクチンとして使う DNA ワクチン− 163 −

（京都大学大学院薬学研究科）

平成 13 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
小松賢志

私の故郷の秋田には小町伝説がある。小野小町は県南のすると加齢による皮膚の黒ずみをある程度押さえることが湯沢市に近い小野町で生まれたと言われている。これが秋出来るが、非可逆的であることを考えると原因は別のとこ

田には美人が多いと言われる所以であろう。しかしながら、ろにあると思われる。メラニン色素誘導系の破綻も考えら

小野小町は謎の多い女性で秋田生まれとする根拠は希薄でれるが、生体内で発生したチミンダイマー様の化合物がメあり、確かなのは彼女が残した数編の和歌だけだそうであ

ラニン色素を誘導する説は魅力的である。染色体末端を構る。和歌の中では、深草の少将を 100 日間通わせた美人も成するテロメアは TTAGGG の繰り返し配列からなり、チ寄る年波には勝てない例の「花の色はうつろいにけり」がミンを多く含む化学構造と細胞分裂ごとにエキソヌクレア

特に有名である。前置きが長くなったが、美しさと加齢はーゼにより除去されることからその有力候補である。実際、昔からの女性の関心事である。誰もがいつまでも若くと願Eller らは細胞に TTAGGG の繰り返し配列からなるオリゴ

いながらも、年齢とともに皮膚はたるみ、乾燥そして黒ずマーを導入するとメラニン色素の合成が促進されると報告んでくる。太陽光の紫外線に当たると皮膚は黒ずんでくるしている。本研究では、ナイミーヘン症候群ではテロメア

が、しばらくすると元の色に戻り可逆的である。これに対短縮が促進、つまり患者皮膚細胞では正常人よりも多くのして加齢による黒ずみは不可逆的である。紫外線照射の場

TTAGGG オリゴマーが細胞に放出される可能性を示した。

合にはチミンダイマーのような DNA 損傷がヌクレオチド

今後は患者皮膚が正常人よりも老化による皮膚の黒ずみが除去修復によって取り除かれ、これがメラニン色素を誘導促進されているのかどうかの実証が必要であろう。

する細胞の防御機構の一つと思われている。それでは老化（京大放射線生物研究センター）による皮膚の黒ずみも防御機構であろうか。紫外線を遮蔽
平成 14 年度

研究助成

コスメトロジー雑感井上正樹

平家物語を紐解くまでもなく「盛者必衰の理」があるこ

させ、テロメアの再延長をはかることにより可能となる。

とは誰もが承知している。生命には寿命があり次世代の誕

古くから女性ホルモンは個体の発生・発育・若年性維持に生を持って今日まで種が保存されてきた。生命体の躍動期

生理的な役割をなすことが知られていたが、分子レベルでには各臓器は活発に機能を発揮し、老齢期にはその機能はの機能解析は進んでいない。エストロゲンの分子標的とし衰退する . これを如実に示してくれるのが生命体を覆う皮てテロメラーゼｈ TERT 遺伝子プロモーターが解析され、膚である。しかし、この皮膚を構成する個々の細胞にも固分子レベルでの女性ホルモンの生命維持現象の解明をなす

有の寿命がある事は認知されてもその分子機構は理解されことはコスメトロジーの本質に迫るものと言える。

ていない。

将来は皮膚細胞にｈ TERT 遺伝子導入する事で皮膚の不個体を構成する正常細胞は個体固有の寿命がある。正死化細胞株の樹立が可能となろう。さすれば、各個人が自常細胞は分裂回数が有限で、この限界状態を細胞の senes-

前の皮膚細胞株を持ち表面を覆うことで化粧品を表面に塗cence( 老化 ) という。この細胞老化は細胞分裂を重ねるこることで見た目の若さを保つのではなく皮膚を器官としてとで生じるが、分子レベルでの調節は染色体末端構造のテの再生させる事が可能となる日も近いのではと思う。

ロメアを短縮することで成り立つ。この分子時計を巻き戻し、細胞の若々しさを維持するにはテロメラーゼを活性化− 164 −

（金沢大学医学系研究科）

コスメトロジー研究雑感

平成 14 年度

研究助成

コスメトロジーと老化研究
石神昭人

最近、元気で肌のきれいな高齢者が増えています。高齢ませんが、極端にはずれることはありません。例えば、15

者とは一体、幾つからなのでしょうか？「高齢者」の定義

歳の青少年を見て 65 歳以上の高齢者とは思わないでしょとして、総務省のホームページには「一般的には 65 歳以う。私は、皮膚の老化研究を通して老化機構の本質に迫れ

上の者をいう」とあります。毎年、9 月の「敬老の日」にるのではと思い、研究を行ってきました。皮膚老化を抑え総務省から我が国の高齢者人口の統計データが発表されまられれば、元気で活発な高齢者が増えるのではないかと考す。今年度（2003 年）の統計データによると我が国の 65えたからです。皮膚老化研究は、予想外に困難を極めまし

歳以上人口は 2431 万人、総人口の 19.0％を占め、人口、た。しかし、皮膚老化研究からは少し外れるかもしれませ

その割合とも過去最高となりました。また、平成 27 年
（2015

んが、最近になって、少しづつ灯りが見えてきた気がしま

年）には総人口の 26.0％（3277 万人）と、およそ 4 人に 1す。それは、年齢を推察できない程にきれいな肌を持つ高人が 65 歳以上になると見込まれています。

齢者が増えてきたからです。決して効果的な皮膚老化抑制

私は、老化研究に携わってから今年でちょうど 20 年目薬が開発されたからではありません。きっと、歳をとってになります。研究開始当初、高齢者人口も少なかったですもきれいでありたいという高齢者の気持ちが、化粧に表れし、地味な老化研究はほとんど見向きもされませんでした。

ているのではないでしょうか。

しかし、急速に発達した高齢化社会に於いて老化研究の重私は、誰もがやがて訪れる「老い」に対して恐れること

要性は誰も疑う余地がありません。街中で行き交う人を見なく、天寿を全うできるような社会を構築するため、今後て、その人の年齢が幾つぐらいかを判断する基準として、も老化研究を継続して行きたいと考えています。

始めに挙げられるのが、皮膚の色艶や皺などの皮膚形状で（東京都老人総合研究所

加齢臓器障害研究グループ）はないでしょうか。この基準は、多少誤差があるかもしれ平成 14 年度

研究助成

皮膚と免疫
井上

純一郎

「皮膚は体の最も外側にあり、生体防御の第一線である。

も判明した。皮膚での NFκB の活性化を抑制するような遺だから皮膚は、免疫系で重要な役割を果たしている。
」と伝的変化があると外胚葉形成不全、表皮細胞の形成異常やいうよく免疫の教科書に書いてあることを言いたい訳では色素失調症などが発症することが明らかになってきた。そない。私と皮膚研究との出会いを説明したいのである。そんな皮膚での NFκB の役割が明らかになりつつあったころ、もそも大学院を出てヒト T 細胞白血病ウイルスの研究に

私の研究室で作成した TRAF6 ノックアウトマウスも TRAF6従事した。このウイルスは Tax というタンパク質を発現すが皮膚での NFκB の活性化に関与していたために外胚葉形成ることにより宿主の転写因子 NFκB を活性化して宿主細胞不全症であることがわかった。実は「NFκB は免疫に関わる」(T 細胞 ) の増殖因子受容体（IL-2R）遺伝子を発現誘導させと一つ覚えであった私は研究室の学生が皮膚や毛の異常をる。それにより自分自身が組み込まれた細胞の増殖を誘導指摘しても「そんなものはストレスだよ！」と言ってしばして生き残ろうとする優れものである。私はこのウイルス

らくの間取り合わなかったのである。やはり思い込みは新研究を介して NFκB と出会いそれ以降 NFκB と離れていしいものの発見を邪魔するようだ。常に心に余裕を持ってない。NFκB は当初 B 細胞の抗体発現を制御する転写因子

広い気持ちであらゆる可能性について公平な目でみることとして研究が始まり、リンパ球を中心にした獲得免疫におが大切であることをこの時痛感した次第である。前出のヒいて重要な働きをしていると考えられていた。最近になっト T 細胞白血病ウイルスほど優れものでない私は皮膚とのて NFκB は、自然免疫でも必須な転写因子であることがわ

苦い出会いを思い出しながら二度と失敗はしまいと心に念じ、かり、さらに皮膚の正常な分化に欠くことができないこと

今も学生と話している。

− 165 −

（東京大学医科学研究所）

平成 14 年度

研究助成

皮膚とリズム岡村均

ヒトは死ぬ存在であり、受精により次世代を作り出すこ

るか昔から開発されてきた。化粧は主に対症療法であり、とにより、ヒトは存続している。ここでは、老化および死

根本的な老化を防止する化粧法が待たれているが、生体リは、ヒトという種を存続させるためにきわめて重要な過程

ズムはそのヒントになるのではと考えている。

である。皮膚は神秘的な臓器である。特に、乳幼児、青年、我々の研究する時計遺伝子が、なぜ皮膚で２４時間リズム

壮年、老年とヒトの一生があるとき、「しっとりなめらか」を形成するのか？発汗、皮膚血流、表皮細胞分裂など、さから「かさかさしわしわ」まで皮膚に全てその変貌が現れ

まざまな皮膚組織で起こる現象に概日リズムがある。なぜてくる。言い換えれば、皮膚を見れば年齢がわかるのであ皮膚にあるかということであるが、この組織では毎日活動る。老化の特徴的な皮膚所見の出現は、そのヒトの生物学に伴い活性酸素が大量に発現して、その除去が毎日必要だ的な個体としての種の維持から開放されたことを意味するからではないか。したがって、ストレスなどによるリズム

ことで、それはそれでめでたいことである。

の乱れが、時計遺伝子の転写変動の変調を来たし、細胞ダ

しかし、ヒトは個体としての自由度が高く、発達した「脳」

メージが増大する可能性は高い。生体リズムの発振機構がは個体としての完結を求める。言い換えれば、脳にとってわかれば、皮膚のリズムを保つ方策がわかり、皮膚の老化

は、自分が無くなれば、全て消滅するのである。脳は死をを防止する化粧品の開発が可能かもしれない。これは、対連想させる老化を恐れる。いつまでも活動的であることが症療法を越えた、根本的な皮膚の若返りにつながるのでは自分の力を示すことであるから、若さを求める。視覚が認ないだろうか。この治療が完成されると、ヒトはまた一段

知の最も主要な感覚受容器であるヒトは、他人の年齢を判と一般の生物から離れるが、それも壮大な夢の一歩であろ断する最も有力な方法は皮膚の観察である。従って、老化う。

（神戸大学大学院医学系研究科）の変貌を押しとどめたように見せる「化粧」は、人類のは
平成 14 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
古川

福実

一昨年から、日本美容皮膚科学会の理事を拝命し、しかしかし、 美容皮膚科の皮膚科学における位置づけを、もその機関誌の編集長を押し付けられている（？）。もと

どのように考えるかは、簡単なようで難しい。患者の目線

もと、美容皮膚科には全く興味もなかった。しかし、このとか皮膚科学に立脚した視点とか、言葉を羅列するのは比学会を科学的な批判に耐え得るようにしようとの、日本皮較的容易であるが、それらを語る自らの人生観とか哲学が膚科学会の強い意向があり、指名を引き受けることとした。

色濃く反映されないと空虚なものになってしまいます。逆学会員も 700 名を越え、日本皮膚学会の認定学会となり前・に、色濃く反映されすぎるとドグマになってしまう。

後実績が与えられ、機関誌の論文も日本皮膚科学会専門医

また、当然のことながら、基礎的な研究なくして、美容資格の為の論文と認定された。今まで、４回雑誌を発刊し皮膚科学はあり得ない。基礎的な研究が美容皮膚科というているが、その中で思いついたことを書いてみたい。

何となくファジーな分野をより科学的に検証していくこと

21 世紀を迎え、美容皮膚科を取り巻く環境は激しく動につながる。本財団の研究助成の目的もまさにこの点にあいている。美容皮膚科に開業医のみならず勤務医も診療にるのではなかろうか。個人的には、二度目の助成をいただ

積極的に取り組むようになった。この背景には、皮膚科診いた訳であるが，一回目はほとんど貢献できなかったと自療の領域を拡大し経営的な基盤を強化しようという目的の負（？）しているが，今回は立派に役目を果たせた。

ほかに、皮膚に関すること（人々の美しくありたいとの思い）に皮膚科医が目を背けてはならないという意識が確立

ちなみに，上記機関誌の名は，日本美容皮膚科学会雑誌
AESTHETIC DERMATOLOGY です。

しつつあることがあげられる。

（和歌山県立医科大学皮膚科）− 166 −

コスメトロジー研究雑感

平成 14 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
柳澤純

化粧品というと「イメージ」で売るものという先入観がせる、美しく見せるというのはすべての女性の極めて強いあったが、「コスメトロジー」の報告書に目を通すとさま願望なのである。なぜそのような強い願望を持つのかは謎

ざまな方面から研究がなされていることがわかる。しかしだが、まわりの女性がそう言うのだからそうなのだ。男性ながら、医薬品などと比較すると、分子生物学的には立ちもきれいな女性が増えれば毎日が楽しくなるので、それは遅れており、顔面を painting するという一種の対症療法がそれでいいことだ。肌を若く、美しく見せるには、皮膚の行われている。顔面の painting には“若く見せる”“美し老化の研究が必須である。皮膚の老化を遅らせることがでく見せる”といった意味合いだけでなく、“変身願望”やきれば、40 歳でも 10 歳児の皮膚をもつことが可能だ。80

ら“宗教上の理由”やら「分化人類学的？」背景があるに歳でも３歳児の皮膚を持つことも可能になるかもしれない

違いないので、それには一定の価値があるのであろう。化

が、これは少々気味が悪いかもしれない。

粧気のない私にはわからないが・・・。一方、肌を若く見（筑波大学応用生物化学系）
平成 14 年度

研究助成

コラーゲンの不思議
春日井昇平

医食同源とは「病気をなおすも食事をするのも、生命をす。しかし、コラーゲン摂取によるこれらの効果は科学的養い健康を保つためで、その本質は同じだということ」（広に充分に検証されていません。そこで、我々はコラーゲン

辞苑より）を意味しており、この考えは中国から伝わった

摂取が皮膚や骨の結合組織に及ぼす効果について検討をおといわれています。古来より中国では「臓器の機能が低下

こないました。健康な 20 代女性に１日 10 ｇのコラーゲン

した場合は、動物の同じ臓器を食すると良い」と言い伝えを８週間摂取させたところ、皮膚の保湿性の増加が観察さられているそうです。例えば、肝機能が低下した場合はレれましたが、骨の密度と骨代謝マーカーは変化しませんでバーを、関節（軟骨）が弱った場合は大変高価ですが軟骨した。また実験動物において、コラーゲン摂取は抜歯後のであるフカヒレを食べると効果があるようです。近年健康抜歯窩の治癒や切開創の治癒に影響を与えませんでした。

や美容に対する関心が著しく高まり、様々な栄養補助食品

一方、骨粗鬆症の動物実験モデルや低栄養状態で飼育した

いわゆるサプリメントが登場しています。コラーゲンは皮動物では、コラーゲン摂取によって骨密度が増加したとい

膚や骨の結合組織の主要なタンパクです。中国の言い伝え

う報告があります。コラーゲン摂取が結合組織にとって良を当てはめれば、コラーゲンを摂取することで結合組織のい作用を示すことは確かなようですが、その効果について改善効果が期待できるということになります。

は作用機序を含めて今後さらに検討する必要があると考えコラーゲン摂取は、高血圧や骨粗鬆症の予防、関節症状ています。

の軽減、皮膚の保湿性の増加に効果があると言われていま− 167 −

（東京医科歯科大学歯学部）

平成 13 年度

研究助成

かみ合わせから美と健康を
中村
私が診療に携わっている大学の歯学部附属病院では、数年前から各診療科がそれぞれモットーを表示することになりま隆志（歯科治療への美学の適用）という視点からスマイルづくりに貢献できないだろうかと考え研究を行いました。

した。私の診療科は顎関節・咬合科といい、クラウンやブリ今回の研究において痛感したのは、カメラの前ではみんなッジとよばれる修復物や入れ歯といった一般的な歯科治療だ

本当に笑えないということでした。表情において歯と口もとけでなく、あごの関節の痛みや開口障害を訴えて来院されるは大きな役割を果たし、第一印象を左右しています。乏しい

患者さんの治療にあたっています。実際の治療では、正しい

表情、あいまいな返事や笑いに代表される日本人の自己表現

かみ合わせをつくることが重要であり、当科のモットーも「かの下手さが、国際的にしばしば誤解を生んでいます。自分をみ合わせから美と健康を」となりました。このフレーズが意味

主張し、賛否をはっきりさせることが当たり前の欧米では、するとおり、我々はかみ合わせをなおすことによって患者さ

スマイルは絶対に必要です。笑顔の良い人が成功し、よき友んの美しさと健康を回復しようと日々診療に励んでいます。

人を得て、人生を豊かにすることができるでしょう。

歯科医の仕事を通して、人間の顔や表情、心理などを見『機能美』という言葉がありますが、機能的に優れたもつめていくと実に興味深いことが多数あります。スマイルのは美しさをもっています。治療した歯の多くで機能美がは、顔の中でも目と口の周辺が関与しており、中でも口の見られないのは、歯科医が『医療』という目的を未だ見極部分の比重は特に大きいものと思われます。日本人は西洋められていないためではないかもしれません。今回このコ

人と比べ笑うのが下手といわれています。このようなスマ

スメトロジー助成金での研究で得られた経験を活かし、日イルの後進性を認識したとき、歯科医療の目的である、も本人のスマイルづくり、しいては歯科医療の向上に貢献しのをかむ機能の回復や、痛みをなくす治療以外に審美歯科ていきたいと思います。

（大阪大学大学院歯学研究科）
平成 13 年度

研究助成

アトピーを活かす
富家直明

私は教員養成系学部の教員をしている。そこで出会った

楽しくないことであっても、自分の思いのままになってある女子学生のアトピーがひどかった。年頃の女性としていると考えるか、運命や他人に操作されていると考えるか

はいたく心を傷つけられたことだろう。この学生はたいへ

によって気分は異なる。これをローカスオブコントロール

んアグレッシブな性格であった。ツンケンしていてズケズ（統制の位置）という。アレルゲン除去固執型というのは、ケ言うので、友だちが少しずつ去っていき、最後はほとん

アトピーの原因をアレルゲンに求めている考え方である。

ど１人ぼっちになった。彼女のアトピー対策はアレルゲン

もちろんそれは一理あるが、人体はそれほど直球型の反応除去固執型で、これはもっともストレスがたまる割には症をするものではない。生活習慣全般が複雑に作用して症状状改善に成果のみられないタイプである。

が生じる。柔軟に考えた方がよいのだ。アレルゲン除去固ある時、彼女が教員採用試験を受験すると言い出した。

執も、病者差別で訴えるという考え方もどちらも他人のせ

しかし私は落ちるだろうと言った。給食指導ができないかいである。これでは楽しくない。自分の人生は自分で操縦らだ。そうしたらそれは病者への差別である、訴える、としていった方が楽しい。

言う。私は彼女の他罰的な考えを否定して、新しい考え方

アトピー疾患者への心理的ケアは上記の考えにそって計を提案した。
「自分はアレルギーがひどくてほとんどの食画された。このようにして緩和されたストレスは間接的に事が食べられない。給食も食べられないことが多い。しか病状を和らげる。その後、くだんの彼女はつっかえ棒がとしその苦労を通じて、子ども達にアレルギーとは何か、食れた樹木のようにすくすく成長し、この４月から教壇に立事の大切さとは何か、食事の楽しみ方とは何かを教えていっている。

きたい」という風に考えて欲しいのだ、と。

− 168 −

（宮崎大学教育文化学部）

コスメトロジー研究雑感

平成 13 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
行場次朗

成長期において男性の顔は子供の顔から大きく変形する

元型への回帰傾向と受け取られなくもない。また、画像的のに比べると、女性の顔はわずかしか変化しないことが知に子供化された顔に魅力を感じることがあるが、今回、実られている。今回助成を受けた研究でも、SD 法によって

験計量心理学的に分析を行うと、それは子供的な印象に依得られた心理印象空間に男性、女性、男児、女児の平均顔拠するものではなく、むしろ女性顔が潜在的にもつ「美感をプロットしてみると、男性だけが大きく逸脱した位置に性」や「柔和性」に代表される特性を強めた印象に基づくあり、あとの３者間の距離は小さかった。やはり顔の印象ものであることが明らかにされた。これは元型を増強するを取り上げてみても女性が元型であることが実感できたよ

方向に対応していると考えることができよう。そうするとうに思う。最近、男性の顔でも適度に女性化したほうが魅化粧も基本的には、女性的元型を志向する行為とみなすこ力的であることが報告されているが、これも大きく見ればとができるのだろうか。

（東北大学大学院文学研究科）

平成 13 年度

Facial Display

研究助成

ディスプレーとしての顔

johnathon john（ジョナソン・ジョン）
このプロジェクトまでほとんどの顔の研究は社会・文化

このプロジェクトと関係がある「変身の伝統・伝統の変身」

的な要素に集中していましたが、この事を通じて、いろいという事を調査する予定で、今年の日本顔学会フォーラム

ろな新しい事を試みて、または化粧に初めて集中してみてで発表するつもりです。研究の内容以外にはこのプロジェ

たいへん面白くて楽しかったです。しかし回顧してみるとクトを通じて日本の社会に更に深く入り込むことが出来ま

方法と結果にあまり満足していませんがこれからの顔研究したので非常にいい事でした。このプロジェクトをする機のテーマの準備としては大いに役に立ちました。これから会を頂いたことに感謝します。

− 169 −

（千歳科学技術大学）

平成 15 年度

外国人招聘助成

外国人研究者招聘助成による国際交流菊地和也
この度はコスメトロジー研究振興財団の助成金をいただ

れたことを報告いたします．まず，私どもの研究室にとっきまして大変有り難うございました．おかげさまで国際交ては Muir 教授の講演を聴くこととで，自分たちが直接活流を行うことができ研究推進にあたって有用な情報を得る

用することができる技術につきまして論文には書いてないことができました．

実験レベルでの議論ができました．この結 ，時間の節約

今回，ロックフェラー大学の Tom W. Muir 教授を招聘とともに具体的な応用案に気がつくことができました．こし，第一回生命化学国際シンポジウム (ISBC2003) におけの議論は私ども研究室のスタッフだけでなく大学院生ともる招待講演と私が所属する東京大学大学院薬学系研究科薬一緒に行われます．私どもが大学院生の教育上教えられな

品代謝化学教室における講演及び研究討論を行う機会が得い限界に研究を進める臨場感があります．外国の有名なられました．日本の大学の研究レベルは相当高くなってき研究者を身近に感じることで自分達が研究の進行に寄与たため，国際交流自身は今では昔ほどの有り難みがないのしているという実感がわいたのではと思いました．次に，ではと言う人もいますし，実際にこの様な助成金は減って

ISBC2003 について簡単に紹介いたします．この学会は日いるそうです．しかし，研究を行う上での大切な要素に人

本化学会の生命化学研究会が主催する初めての国際会議で的交流が挙げられます．これは時代がどのように変化しよした．この会は私ども若手研究者が自分達の力で開いた会

うとも，特に欧米から距離的に離れた日本で研究する私たで３００名近くの参加者があり大盛況になりました．このちにとっては大切にすべき要因です．確かに，コンピュー会の中でも Muir 教授の講演は大変着目されるものでした．

ターの発達と日本の研究レベルの向上により国際的な垣根

今回の交流のおかげで今後の共同研究や議論が大変行いは以前より小さくはなっています．しかし，国際交流は研やすくなりました．この様な機会をいただきまして本当に究の向上のため是非とも必要です．今回の国際交流で得ら有り難うございました． （東京大学大学院薬学系研究科）− 170 −

●
事業報告書（平成15年度）
役

員●

− 172 −事業報告書事 業 報 告 書
（自平成 15 年 4 月 1 日

至平成 16 年 3 月 31 日）《研究助成等の選考関連》
2003 5

6

公募開始

				

全国 277 ヶ所の大学・病院・研究機関等に掲示案内、関係学術
雑誌８誌及び当財団 HP 他３HP に掲載

7

4

公募締切り

8

28

選考委員会（分科会１） 素材、物性に関する分野の選考

91

選考委員会（分科会３） 精神、文化に関する分野の選考

9

9

選考委員会（分科会２） 生体作用、安全性に関する分野の選考

926

本選考委員会

				
11

19

応募数 84 件

各分科会の結 を総合的に判断して研究助成 20 課題、国際交流援助１課題を選考

表彰贈呈式

記念講演：｢ 色白美人はなぜ永遠か ｣				

駒沢女子大学文学部人間関係学専任講師

				

資生堂生活者情報研究部客員研究員

1119 〜 助成課題の公表

2004 2 中旬

石田

かおり氏

関係学術雑誌７誌、当財団 HP に掲載

持ち回り企画委員会

平成 16 年度の研究助成課題選考に関して

常理事会

平成 14 年度事業報告及び収支決算報告、株主としての議決権《理事会関連》
2003 6

19

				
11

19

行使について、報告事項

常理事会

				

平成 15 年度（第 14 回）研究助成者等の承認、
平成 16 年度事業計画及び予算案の承認《評議員会関連》2003 619

常評議員会

平成 14 年度事業報告及び収支決算報告、報告事項

11

19

常評議員会

平成 15 年度（第 14 回）研究助成者等の承認、

				

平成 16 年度事業計画及び予算案の承認《その他》
2002 3
6

末

財団活動の情報更新

末		

12		

当財団 HP へ平成 15 年度事業計画を掲載
当財団 HP へ平成 14 年度事業報告を掲載

コスメトロジー研究報告 「コスメトロジー研究報告」11 号の概要を当財団 HP に掲載− 173 −

第 14 回 研究助成を受けられたかたがた
管理番号

研

究

課

題

分

（ J：一般研究助成

H：国際交流援助）

野

研

代

表

究

者

千葉大学大学院薬学研究部教授

J-03-01

化粧品としてのヒアルロン酸およびその誘導体の物
性と生理的安全性に関する研究

分析化学

J-03-02

半導体ナノ粒子の紫外光吸収による活性酸素生成とその抑制に関する研究

無機材料化学J-03-03

ダイエット効果を有する脂質が皮膚の状態に及ぼす
影響

動物栄養学

J-03-04

性ホルモンと性ホルモン結合蛋白による皮膚メラニ
ン産生の検討

色素細胞

J-03-05

統合失調症における化粧顔の認知に関する研究

精神医学

大阪大学大学院医学系研究科
精神医学教室助手

J-03-06

ヒト皮膚における血管新生刺激サイトカインの発現とその作用機序に関する包括的研究

皮膚科学

聖マリアンナ医科大学皮膚科助教授

J-03-07

タイ産マンゴスチン果実抽出物の多機能性化粧品へ
の応用研究

天然物薬理

J-03-08

生体適合性アパタイト粒子の結晶形態制御プロセスの確立とその応用

無機材料合成生体材料

J-03-09

メラニン産生の制御機序の解析を介して新しい美白剤を開発するための研究

分子生物学
皮膚科学
環境医学

J-03-10

機能性香料の開発：匂い物質による月経前緊張症（PMS）の治療

神経内分泌学J-03-11

SOD1欠損マウスを用いた皮膚炎の発症とケラチノサ
イト増殖における活性酸素の役割の解明

生化学
分子生物学

J-03-12XVII型コラーゲン異常に起因する表皮真皮結合破綻の分子機構

遺伝性皮膚疾患

J-03-13

熱応答性インテリジェント高分子の皮膚ゲル化機能を付与した新規化粧品素材の開発

臨床薬剤学

J-03-14

哺乳動物におけるフェロモンの受容機構と生理作用
の解析

感覚生理学

J-03-15太陽紫外線による皮膚タンパク質の損傷と老化

生命科学− 174 −戸井田敏

彦

東北大学多元物質科学研究所教授

佐

藤

次

雄

九州大学大学院農学研究院教授

古

瀬

充

宏

大阪大学医学部皮膚科学教室講師

田
岩
相

所
瀬
馬

丈
真
良

嗣
生
直

東北大学大学院薬学研究科教授

大

泉

康

明治大学理工学部工業化学科
助教授

相

澤

守

金沢大学大学院医学系研究科
助教授

加

藤

昌

志

長崎大学医歯薬学総合研究科医療科学専攻病態解析・制御学講座教授

篠

原

一

之

山形大学医学部教授

藤

井

順

逸

北海道大学大学院医学研究科
皮膚科学分野教授

澤

村

大

輔

北海道医療大学薬学部教授

宮

崎

正

三

北海道大学大学院薬学研究科
助教授

柏

柳

誠

京都大学原子炉実験所教授

藤

井

紀

子

事業報告書

管理番号

研

究

課

題

分

野

代

表

研

究

者

関西学院大学理工学部教授

J-03-16近赤外分光法による毛髪中の自由水、結合水の非破壊構造解析

J-03-17

動的特性が表情認知に与える影響
─皮溝（シワ）の分析─

認知心理学

J-03-18

超臨界二酸化炭素を用いたナノポーラスシリコーン
ゲルの合成とその構造特性

高分子合成
構造解析

疾患をカバーするための化粧の有効性と自己意識に与える影響─顔に疾患を抱える女性たちへのインタ

社会学

お茶の水女子大学大学院人間文化研究科大学院生

細胞生物学

岡山大学大学院医歯学総合研究科教授

J-03-19

化学

ビュー調査から─
J-03-20

H-03-01

骨髄細胞を用いた皮膚の構築

新規のタンパク質改変法の開発による、タンパク質機能の解明研究

尾

崎

幸

洋

立教大学文学部教授

長

田

佳

久

京都大学化学研究所構造解析基礎研究部文部科学教官助手

妹
西

尾
倉

許

政
実
南

宣
季
浩

ロックフェラー大学
合成タンパク化学科教授
バイオ有機化学

Tom W. Muir

受入責任者
東京大学大学院薬学系研究科助教授

菊

地

和

也

（敬称略・受付順）※第１回〜12回の研究助成課題はホームページ（http://www.cosmetology.or.jp/）でご覧ください。

− 175 −

平成16年3月31日現在

理事長

小林禮次郎

専務理事（常勤） 有本

亨
律男㈱コーセー代表取締役会長（元厚生省薬務局安全課長）

理

事

磯邊

㈱博報堂相談役（元国税庁長官）

理

事

宇佐美昭次

早稲田大学名誉教授

理

事

内山

充

㈶日本薬剤師研修センター理事長

理

事

小林

保清

理

事

髙橋

久

理

事

新村

嘉也

理

事

西川 武二

慶應義塾大学医学部教授

理

事

花輪

隆昭

昭和館 館長（元厚生省援護局長）

理

事

廣部

雅昭

静岡県立大学学長

理

事

牧野

利孝

日本化粧品工業連合会専務理事㈱コーセー代表取締役社長
帝京大学名誉教授
高砂香料工業㈱代表取締役会長（元厚生省生活衛生局食品化学課長）
監

事

小田倉正典

公認会計士

監

事

黒田 節哉

弁護士

評議員

上野

芳夫

元東京理科大学薬学部教授

評議員

緒方

宏泰

明治薬科大学教授

評議員

北原

文雄

東京理科大学名誉教授

評議員

近藤

保

東京理科大学名誉教授

評議員

齊藤

勲

㈳日本製薬団体連合会理事長（元厚生省大臣官房審議官）

評議員

長野

哲雄

東京大学大学院薬学系研究科教授

評議員

西岡

清

評議員

野田 裕充

㈱コーセー顧問

評議員

野呂 影勇

早稲田大学大学院人間科学研究科教授

評議員

溝口 昌子

聖マリアンナ医科大学教授

評議員

宮﨑

榮三

千歳科学技術大学教授

評議員

山崎

幹夫

千葉大学名誉教授

東京医科歯科大学医学部教授（専務理事以外は全員非常勤）− 176 −

＊本財団についてのお問い合わせは下記にお願いいたします。

財団法人 コスメトロジー研究振興財団〒104−0061 東京都中央区銀座三丁目 5 番12号
電話 03（3564）6731

コスメトロジー研究報告

Vol.12／2 004

非売品

2004年９月１日発行

編集責任者
発
行

制

作

印

刷

Ⓒ2004

有本 亨
財団法人

コスメトロジー研究振興財団〒104− 0061 東京都中央区銀座三丁目５番12号
電話 03（3564）6731

エイエム企画〒170− 0013 東京都豊島区東池袋三丁目15番２号
電話 03（3590）5375

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禁無断転載