皮膚の糖脂質
東京都臨床医学総合研究所

山口労災病院

浜

中

すみ子

•

鈴

木

賞

Human epidemis gave two glycolipid bands that migrated faster than glucosyl­
ceramides and two bands that migrated like glucosylceramide and galactosylceramide,
respectively, on TLC. The two faster migrating glycolipids (GL- I and GL- II), which
exhibited alikali-lability, were purified by conventional DEAE and silica gel column
chromatographies, and further by HPLC on a silica gel column. Structure determina­tion of the two components, n 血ed GL- I 3 and GL- II 3, which were finally purified
from GL- I and GL- II, respectively, by HPLC on a reversed column, was performedby means of 'H-NMR spectroscopy, fast atom bombardment mass spectrometry, andcomponent analysis involving GLC-mass spectrometry. GL- I 3 was determined to bea mixture of glucosyl/3 1-N- ( w -0-linoleoyl ) triacontanoyl and -dotriaconta­
monoenoyl-eicosasphingenine, and one of the two components of GL- II 3 was deter­
mined to be glucosyl /31-N- (w -0-linoleoyl) triacontanoy1-trihydroxyeicosasphinge­nine. GL- I 3 and GL- II 3 were the major components of GL- I and GL- II, respective­
ly, and both the latter contained additional four components, which were heterogeneous
as to the ceramide portion. This paper reports the structures of acylglucosylceramides
isolated from human epidermis together whth 'H-NMR spectra and mass spectra
demonstrating their molecular weights. The structure of molecular species containing
trihydroxysphingosine having a double bond is novel.

はじめに

臨床症状はリノ ー ル酸を50%含む大豆油を原料とした乳化脂肪の投与で改善された。 必須脂肪酸

1929年

Burr と Burr によって初めて必須脂欠乏時には多くの症状が報告されている 3) が*I'

肪酸の概念が提唱された ！） 。 ラットを無脂肪食で臨床的にとくに注目されるのは皮膚症状， 易感染

飼育すると ， 皮膚の落屑体重減少， 不妊， 水分性 2' 血小板数減少およびその機能低下， 体重増

消費の増加， 尿量減少を生じ， 易感染性となり死加不良などがあげられる 4) 。 これらの症状のうちに至る。 これらの症状は w-6 不飽和脂肪酸（リ

体重減少，尿量減少， 水分消費の増加は皮膚から●ノ ー ル酸， ァ ー リノレン酸，ジホモ ー 7 ー リノレンの水分漏出の結果生じる二次的変化であり， 水分酸， アラキドン酸）の投与で著しく改善されるこ

漏出はリノ ー ル酸を外用するだけでも阻止できるとから， 生存に必須の脂肪酸の存在することが認ことが明らかとなると ， 皮膚に水分漏出を防ぐ保識された。 その後，臨床的に必須脂肪酸欠乏症が護バリア ー が存在するのではないかと想定される

注目されるようになったのは 1970 年代に高カロようになった5) 0

リ ー の非経口的栄養補液（経静脈投与）が盛んに行なわれるようになってからである 2) 0

Glycolipids of Mammalian Epidermis
Sumiko Harnanaka· Minoru Suzuki-72-

皮膚の糖脂質表11. 皮膚脂質の研究

脂人体の約7096を占める水分を保持し， 紫外線や異物・微生物などから人体を保護することは皮膚の重要な機能である。皮膚が基底細胞 ， 有棘細胞，
顆粒細胞と分化し， 最終的に角質細胞となっ て角層を形成する目的の1つは， 角層で水分保護バ リ
ア ー (transepidermal

water per�eability

barrier) をつくることである（図1) 6)。角層には細 胞 間 に 脂 質 の 層 状 構 造 (intercellular lipid

lamellae) が観察され， この脂質構造がバリア ー

ル，

ステロ ー ル／ワックスエステル ，

質

底層／
基有棘
層

顆粒層 角

層

44. 5
極性脂質
コレステロ ー ル硫酸塩
2.6
51.0
中性脂肪
11. 2
遊離ステロ ー ル
7.0
遊離脂肪酸
12. 4
トリグリセリド
ステロ ー ル／ワックスエステル 5.3
スクアレソ
4.9
3.9
n-アルカソスフィソゴ脂質
7.3
グルコシルセラミド
3. 5
七ラミド
3. 8

25.3
5. 5
56. 5
11. 5
9. 2
24. 7
4. 7
4.6
3. 8
II.7
5. 3
8. 8

4. 9
1. 5
77.7
14. 0
19.3
25. 2
5. 4
4.8
6. 1
18. I

99.1

101.1

99.3

計

の本体であろうと考えられている ” 。角層を構成する脂質はトリグリセリド， セラミド， ステロ ー

ヒト表皮細胞の脂質組成

trace

18. I

ロキシ脂肪酸で， そのQ末端にリノ ー ル酸がエス

テル結合をしている 9) 。

アルカン，

スクワレンであり， リン脂質や糖脂質はほとんど

このアシルセラミドは脂質を層状に構築するの含まれていない（表1) 8) 。角層の脂質はセラミドに必要であろうと考えられている。バ リア ー を形を豊富に含み， しかもセラミドの分子種は7種と成する脂質がどこから由来するのか明らかにする多様である。もっとも特徴的なセラミドはアシル

ために緻密な電顕的観察が続けられた結果 ， 顆粒

セラミドであり， 酸アミド結合脂肪酸がQー

ヒド細胞に存在する小器官である層板顆粒 Oamellar

body, keratinosome, cementosome, Odland
body, membrane coating granule などの名称でよばれる）で生成されることが明らかとなった 10 l 。層板顆粒は100-300nmの球形ないし卵表皮形の顆粒で， 生体膜に包まれ， 内部に disc と表現される層状構造をもつ（図2) II l 。内容物はクロロホルム ー メタノール処理により消失すること 12 l
水分の保持能力が衰え た皮膚では層板顆粒は空虚となること 13 l から内容物は脂質であり， 水分保

真皮護に重要な役割を担うことが推定された。電顕的に． 層板顆粒がゴルジ体から細胞膜へと移動し．

図1

*1
*2

皮膚の構造
茎底層 ， 有棘層 ， 顆粒層 ， 角層は ， それぞれ基底細胞 ， 有棘細胞， 顆粒細胞， 角質細胞よりなる。 〔標準皮膚科学（医学書院）を 一 部改訂〕

膜と融合したのち内容物を細胞外の角層直下に放出 するのが観察された。放出された層板構造物は角層細胞間に伸展し． 層状脂質となる（図3) 14) 0①肉眼的所見：成長停止 ， 体重減少 ， 皮贋乾燥， 落屑 ， 肥厚 ， 脱毛 ， 生殖異常 ， 血尿 ， 創傷治癒遅延 ， 易感染性など。 ②顕微鏡的所見：皮膚の角質異常 ， 肝の脂肪浸潤 ， 腎壊死など。 ③生理• 生化学的所見：水分消費塁
や基礎代謝の増加 ， 血小板減少症， 血清および各臓器脂肪酸構成の変化 ， 細胞膜透過性の変化 ， ミトコンドリ
ア細網内皮系などの機能変化など。
必須脂肪酸欠乏時には肺炎に罹患しやすい。

-;]3-

らかとなった。 このことから， 表皮では糖脂質は細胞分化に従って著明に変化し， また， 水分保護
バリア ー である層状脂質に形成するために， まず
拿が切断されアシルセラミドとなることにより， 重
要な脂質 成分の1つが供給されて い ると考えられ

令

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屑仮馴粒

る。 そこで， 表皮糖脂質の解析， とりわけアシル

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令 9 ，絡グルコシルセラミドの解析が注目された。

9

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、

2. 表皮糖脂質の構造研究

}

會

図2

アシルグルコシルセラミドが合 成され ， ついで糖

ケラトヒア
リン馴粒

顆粒細胞の電顕像
層板顆粒を示す。

〔Dermatology, Sandoz 著(Medical Publications) より抜粋〕

表皮脂質の分析が進むにつれ， 顆粒層で糖脂質

Grayはプタとヒト表皮から糖脂質を単離• 構
造解析を行ない． 各種グルコシルセラミドの構造解析に関して報告した I 5 l。 これらグルコシルセが増加すること（表1 )'さらに層板顆粒にはめず

ラミドはシリカゲルTLC上で4成分に分離され，らし い糖脂質アシルグルコシルセラミドが豊富に

このなかでも っとも非極性な成分はグルコ ー スの存在し， 角層に至ると糖脂質が消失することが明3位に脂肪酸を有するアシルグルコシルセラミド
であることを示した。 そしてこの脂肪酸はリノ ール酸が主で ， プタで77.4%,
ることを報告した
グル

ー

16)

ヒトで56.2% を占め。 1983年，

Downingらの

プはプタ表皮を用いて追試を行ない． その結果 セラミドを構成する酸アミド結合脂肪酸はGrayの報告とは異なりQ ー ヒ ド ロキシ脂肪酸であることを報告した

17)

0

2年後の1985年， 同グル ー プは， このアシルグ
ルコシルセラミドの構造解析を再度行なって． リ
ノ ール酸は糖ではなくo ー ヒドロキシ脂肪酸とエス
テル結合をしていることを初めて明らかにした 18) 0
時をほぼ同じくしてBowserらのグル ー プがプタ
表皮から 1 9), 内田らがモルモット表皮から 2 0 l ,ほぼ同様の構造のアシルグルコシルセラミドを検出し報告した。 他にラット 2 1 > , ウマ 22) のアシル

令

グルコシルセラミドも解析された。

三
彦多
図3

これらの研究結果から． 哺乳類の表皮糖脂質に水分保護バリア ー としての脂質構造が形成される過程の電顕的模式図 I 4)
Granular cell : 顆 粒 細胞， I ntercel I u I ar
space : 細胞間隙 ， Horny cell : 角質細胞 ，gr : ゴルジ体、gem: 顆粒細胞膜 ， icl: 細胞
間層状脂質， hce : 角質細胞膜， kl : ケラチン
フィラメント ， lb : 層板顆粒。

は以下の特徴が認められた（図4)。
①動物種属間に差は認められない。②糖脂質は薄層クロマト上で4成分検出され， これらはすべて糖としてグルコ ー スをもつ。③主 成分はアシル
グルコシルセラミドであり ， その構造はグルコ ー-74-

皮膚の糖脂質゜(a)

図4 表皮アシルグルコシルセラミドの構造研究（哺乳類）(a) 1-(3'-0-acy1)- P -glucosyl-N-dihydroxypentatriacontadienoyl-sphingosine。［ヒト ， ブタ](Gray,
G. M., White, R. J., Majer, J. R., 1978)(b) (JJ ヒドロキシ脂肪酸の同定。［ブタ](Wertz, P. W., Downing, D. T., 1983),[ラット] (Wertz, P. W.,
Cho 、 E. S., Downing, D. T., 1983)(C) リノ ー ル酸は (JJ- ヒドロキシ脂肪酸の (JJ 末端にエステル結合 〇 [ブタ](Bowser, P. A り N四ぉ心几D. H.,
White, R. J., Houtsmuller 、 U. M. T., Pretty, C., 1985; Abraham, W., Wertz 、 P.W., Downing, D. T.,
1985), [モルモット](Uchida, Y., lwamori, M., Nagai, Y., 1988)ー

3. ヒト表皮の糖脂質エピデルモシドの構造解析 2 4)ス lmol. スフィンゴシンにきわめて長鎖のw­
ヒドロキシ脂肪酸が酸アミド結合を形成したセラ
ミド lmol,

さらにそのQ ー ヒドロキシ脂肪酸 のo 末端に脂肪酸 lmol がエステル結合を形成してヒト表皮糖脂質をシリカゲル TLC で分析するいる糖脂質である。④エステル結合脂肪酸としてとセレプロシドに相当する位置に4成分の糖脂質

は， リノ ー ル酸の含有率が高い。

が認められた（図 5) 。 シリカゲルを用いた HPLC

②項に関して ， 筆者らはプタ表皮に少量のガラ
クトシルセラミドが存在することを認めている。

令. ,.,
唸,..,,_

筆者らは基底層を含む表皮を真皮から分離することに成功し． そこから抽出した脂質を解析に使用

疇心とした。 基底層にはメラノサイトが存在しており ，
ガラクトシルセラミドはメラノサイトから由来し

図5

-75-

起廿

封栖

で． プタで成功した表皮調製法を用いてヒト表皮を調製し ， 糖脂質を分析することにした。

-19
Iと表皮についての解析が Gray 以来報告がないの

A,19
I

ひ

T9
A,

。 次に筆者らは，

I
F I9

l

AI-1�

23

nI
,19

たと考えることができる

表皮糖脂質の薄層クロマトグラム
Glc-Cer: グ ル コシルセラミ ド ， GL-1-VI:
ヒト表皮糖脂質 ， 中性：ヒト表皮穂脂質の中性画分。

で分離すると6成分に分けられた。 アルカリ処理

m/z1370 および 1396 (図 7C) にそれぞれ観察されを行なって TLC で分析してみると， 非極性の2成ている。 このことから GL-I3および GL-Il3は分(Rf 値の大きい成分を GL- I. 小さい成分をそれぞれ， 分子量1201および1227と， 1217および

GL-II とする） は Rf 値のより小さい 糖脂質と1243 のi昆合物であることがわかった。

なった（図 6) 。 その際 GL-Iと GL-Il はそれ

次に， アルカリ処理後の FAB マススペクトル

ぞれ脂肪酸を遊離していた。 遊離脂肪酸はリノ ー

では ([M-H] )および([M+NBA] うに起因するル酸であり． 他の脂肪酸は 検出されなかった。

ピ ー クが 262amu シフトした形 [m/z938 および

GL-Iと GL-IIの構成糖はおのおのグルコー ス

964と m/z1092および 1118(図 7B). m/z954およ―1糖であった。 すなわちヒト表皮糖脂質には2成分

び 980と m/zll08および1134(図 7D)] で出現してのアシルグルコシルセラミドが存在し． エステルいる。 アルカリ処理後のこの262amu の質量差は，結合脂肪酸はリノ ー ル酸であると結論された。

リノ ー ル酸脱離の質量差に完全に一致している。
これら GL-I3および GL-Il3の 1 H-NMR ス

GL- I , GL- II を ODS カ ラ ム を用い た
HPLC で精製したところ ， それぞれ大きく 5成分

ペクトルでは， ともに共通して出現しているシグに分離された。 HPLC クロマトグラムから各成ナル， すなわちシグナルe (2.30ppm : エステル

GL- Iの主成分である

結合カルボニル基のa ー メチレンプロトン）， f

分の構成比を算出し，GL-I3 と GL-IIの主成分である GL-II3 につ(2.77ppm : 二重結合間のメチレンプロトン）， g

いて構造解析を行なった。 GL-I3および GL­(4.06ppm : エステル結合に隣接したメチレンプ

II3の負イオン FAB( 高速原子衝撃）マススペクトロトン）が観察されている（図8)。 常法に従ってア

ルでは ， 擬似分子イオン ([M-Hr) が rn/zl200

ルカリ処理を施し，

および 1226(図7A). rn/z1216および1242(図7C)のそれぞれの H-NMR スペクトルでは， シグナ

ODS カラムで精製したあと1にそれぞれ明瞭に検出されている。 さらにマトリックスである3 ー ニ ト ロベンジルアルコ ー ル(NBA)が分子に付加したことに起因するイオン([M+MBA] うも rn/z1354 および 1380(図 7A).

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図6

アルカリ処理をほどこした GL- IとGL-11 の薄層クロマトグラム
GL- I A: アルカリ処理後の GL- I, GL-11
A: アルカリ処理後の GL-11。 CMH 画分：
ヒト表皮糖脂質のセレブロシド画分。

図7

-76-

400

800

BOO

1000

1200

1●00

(mlz I

負イオン FAB マススペクトル(A)GL- I 3 (8) アルカリ処理後の GL- I 3,
(C)GL-113, (D) アルカリ処理後の GL-113。

皮膚の糖脂質

(A)

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(g)

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図8 'H-NMRスペクトル(A) G L- I 3, (B) G L- II 3。

(ppm I

ルeとfは消失し， かつgは3.63ppmに高磁場シランスニ重結合由来であろうと考えられた。

ドがアルカリ処理により脂肪酸すなわちリノ ール析を行なった。 アシルグルコシルセラミドのセラしていることを示している。 またアルカリ処理に

FABマススペクトルから得られた分子量を考慮フトする。 このことは各アシルグルコシルセラミ
酸を遊離した結果Qーヒドロキシ基が新たに生成よりシグナルaでは2個のメチル基(6H)が1個分

次に， GLC/MSを用いてセラミド側の構造解ミドを構成するQ ー ヒドロキシ脂肪酸は， 前述のすると ， きわめて長鎖なものであろうと考えられ(3H)減少していることも上述の結果を支持してた。 そこでTMS誘導体に比べ安定で ， かつ低温

度はそれぞれ約25%減少したことから， シスニ重を行なった。 加えて， このメチル誘導体のマススいる。 さらにアルカリ処理によりシグナルiの強結合由来のプロトンの75% がリノ

残り25%が 酸アミド結合のQ ーール酸由来で，

で分析可能なメチル誘導体としてGLC/MS分析

ペクトルは， 特徴的なフラグメントイオンを生成

ヒドロキシ脂肪酸することが知られており， 解析が容易になると予jは， スフィンゴシンのトランスニ重結合由来で-Il3のGLC/MS分析の結果 GL-I3のスフィのと異なり． フィトスフィンゴシンに存在するトキシ脂肪酸はC30:0およびC32:1と同定された。

由来であろうと考えられた。 GL-I3のシグナルあるものの． 一方GL-Il3におけるjは上述のも測された。 アルカリ処理後のGL-I3およびGL

ンゴシン塩基はd20:1. 酸アミド結合Q ー ヒドロ-77-CII,Oll

GL-13:『;『•『『C -(CIT, 畑CH,
11- H

oc
uo� O=C-CH -C 7H,.-CII
Oll

1
or
(-C,,!-156-)·0
CII,-(CI I2),-CII=CIICII2Cl I= CH-(CH,),-C =0222

して生体に要求される脂肪酸であったと結論される。 エピデルモシドは明らかに機能を有する糖脂質であり ， その特有な構造が， 層板顆粒内の脂質をディスク状に保つように役だっていることが想像されるが， 詳しい局在， 他の成分とどのように相互作用して脂質の層板構造をつくるのか ， 長鎖Cll,01!

GL-ll3:"�のQ ー ヒドロキシ脂肪酸とリノ ー ル酸のエステル,〗 \「『 冒�Ol!

occu C,.11,.-CH,t

O=C-CH,-(CH 2 ),,-Cl! 2

持の分子機作は何なのかなど， 今後の研究に期待したい。
また ， 必須脂肪酸欠乏時あるいは高カロリ ー

Cl1,-(Cl l,),-Cl l = ClIC! 1 2ClI= CII-(Cl 1 2 ) 7 -C= 0

図9結合でなければならないのはなぜなのか ， 水分保ヒト表皮アシルグルコシルセラミド（エピデルモシド）の構造

このことは， GL-I3のセラミド部分はd20:1-

補液時に投与される乳化脂肪の役割が， ともすれ
ばエネルギ ー 論に偏りがちな今日の医療において，
リノ ー ル酸はそれ自身人体に必須要素であることを強調しておきたい。

C30:0-C18:2およびd20:1-C32: 1-C18: 2の2種類

本研究は山口大学医学部皮膚科の麻上千鳥教授，の存在を示しており ， この結果は前述のFAB/

東京都臨床医学総合研究所の鈴木明身博士（生体MSの結果ときわめてよく 一致している。 一方 ，膜） ， 稲垣冬彦博士（生理活性物質）各氏との共同

GL-Il3では， スフィンゴシンは二重結合の位置研究であり ， ここに深謝します。 また， つねに暖はまだ決定されていないものの ， t20:l,w—

ヒかいご支援をいただいた恩師山川民夫先生に深謝

ドロキシ脂肪酸としては C30:0が同定された。

いたします。

GL- I 3はこれまでプタ， モルモットで確認され，

文

ウマ ， ラ ットにも共通する物質である。 しかし
GL-Il3はこれまで報告されていない糖脂質であり，

献1) Burr, G. 0., Burr, M. M.: J. Biol. Chem., 82,
345-367(1929)

ヒト表皮に特有のアシルグルコシルセラミドである可能性がある（図9)。 このような表皮特有

2) Collins, F. D., Sinclair, A. J., Royle, J. P.,のアシルグルコシルセラミドに対し ， エビデルモ

Coats, D. A., Maynard, A. T., Leonard, R.

シドと命名した。

F.: Nutr. Metabol. , 13. 150-167(1971)3)田代亜彦・真島吉也• 山森秀夫· 林田和也• 堀部

おわりに和夫• 奥井勝二：小児外科 ， 19,1013-1021(1987)
4)村上龍助•藤田位• 木村彰宏・中村肇：日新生
児会誌 ， 17, 404-4110981)

必須脂肪酸欠乏時では， エビデルモシドのアシ
ル基はオレイン酸に置き換わっているのが観察さ2れたこと 5) , アラキドン酸を投与しても ， エビ

5) Hansen, H. S. : TIES, 11, 263-265(1986)
6) Elias, P. M.: Arch. Dermatol. Res., 270, 951170981)

デルモシドのアシル基はリノ ー ル酸であったこと（アラキドン酸がリノ

ー ル酸にretroconversion

されている） 26) から， 表皮はリノー7) Lavker, R. M. : J. Ultrastr. Res., 55, 79-86(1976)

ル酸を必須としていることは明らかである。 リノ ー ル酸はエビ

8) Lampe, M.A., Williams, M. I., Elias, P. M.:

デルモシドという表皮特有の糖脂質の必須成分と-78-

J. LiTJidRes., 24, 131-140(1983)

皮膚の糖脂質9) Wertz, P. W., Swartzendruber, D. C., Abra­ham, W., Madison, K., Downing, D. T. :Arch. Dermatol., 123, 1381-1384(1987)

19) Bowser, P.A., Nugteren, D. H., White, R. J.,
Houtsmuller, U. M. T., Prottey, C.: Biochim.
Biophys. Acta, 834, 419-428(1985)

10) Van Golde, L. M. G., Van den Bergh, S. : m20) Uchida, Y., Iwamori, M., Nagai, Y.: Jpn. JF.), Vol.1, pp.1-33, Plenum, New York

21) Wertz, P. W., Cho, E. S., Downing, D. T. :Mead, J. F.: Lipids, 16, 790(1981)22) Wertz, P. W., Colton, S. W. -Vi, Downing, D.

Lipid Metabolism in Mammals(ed. Snyder,(1977):Gan-Elepano, M., Aeberhard, E.,11) Odland, G. F. : J. Invest. Dermatol., 34, 456(1966)

12)鈴木啓之• 石川勝利：日皮会誌 ， 83, 616(1973)

Exp. Med., 58, 153-161(1988)

Biochim. Biophys. Acta, 753, 350-355(1983)

T : Comp. Biochem. Physiol.[B],75, 217-220(1983)

23) Hamanaka, S., Yamaguchi, Y., Yamamoto,13) Tezuka, T.: Dermatologica, 166, 57-61(1983)

14) Wertz, P. W., Downing, D. T. : Science, 217,
1261-1262(1982)

15) Feay, G. M., White, R. J. : J. Invest. Derma­tol., 70, 336-341(1978)16 ) Gray, G. M., White, R. J., Major, J. R. :T.,Asagami, C.: Biochim. Biopys. Acta, 961,

374-377(1988)

24) Hamanaka, S.,Asagami, C.,Suzuki, M., Ina­gaki, F., Suzuki, A. : J. Biochem., 105, 684690(1989)25) Melton, J. L., Wertz, P. W., Swartzendruber,
D. C., Downing, D. T. : Biochim. Biophys.

Biochim. Biophys. Acta, 528, 127-137(1978)17) Wertz, P. W., Downing, D. T., : J. Lipid Res.,24, 753-757(1983)

18) Abraham, W., Wertz, P. W., Downing, D. T.:

Acta, 921, 191-197(1987)

26 ) Hansen, H., Jensen, B., von Wettstem­

J. LipidRes., 26, 761-766(1985)-79-

Knowles, P. : Biochim. Biophys. Acta, 878,
284-287(1986)