アーユルヴェーダ生薬および熱帯植物からのアンチエイジングを志向した抗糖化および美肌薬の創薬研究
広島大学大学院医歯薬保健学研究科

杉本幸子

Advanced glycation endproducts (AGEs), which readily form and accumulate with sustained hyperglycemia, contributeto the development of diabetic complications and, as such, are considered a potential therapeutic target. Some isolated
compounds from two plants showed strong inhibitory activity toward AGEs formation, the inhibitory activity of a positive
control, aminoguanidine, being 1 . 29 mM. The current results ndicate that, in comparison with the reference compound,)aminoguanidine, which once entered phase II clinical trials, but was withdrawn because of its side effects 1 , flavonoid
glycosides were clearly more efficient in inhibiting the formation of AGEs. Thus, these compounds seem to be worthy of
consideration as potential therapeutic agents for diabetic complications and related diseases though additional biologicalevaluation. Among the isolated compounds, isolinariins C, D and E ( 1 , 2 and 3 ) showed inhibition toward AGE formation(IC 50 values of 34 . 8 , 35 . 0 and 19 . 5 µM, respectively). Collagenase is an enzyme that is known to be a member of matrix
metalloproteinase (MMP) family. The agents that inhibit collagenase may have beneﬁcial effects for maintaining healthyskin by preventing dermal matrix degradation. Therefore, the isolated compounds were evaluated the collagenase inhibitory
activity. The results showed that linariin ( 4 ) and pectolinarin ( 5 ) exhibited weak inhibition with IC 50 values of 79 . 4 and78 . 6 µM, respectively. Luteolin ( 8 , 40 . 5 µM) showed stronger inhibitory activity than that of a positive control, caffeic acid)(an IC 50 value of 120 µM) as reported previously 2 .

1. 緒や動脈硬化症などの発症に関与することが知られている

言

Advanced glycation end-products（AGEs）の生成阻害活

機能性食品や飲料、健康食品、サプリメント、医薬品な性を有する化合物を天然物素材より探索する。AGE はタ

ど幅広い産業へと美白・アンチエイジング市場が拡大してンパク質と糖によりメイラード反応や褐変反応といった非おり、
特に医療と美容が融合したコスメシューティカル（機酵素反応で形成される。簡潔に書くとメイラード反応は二能性化粧品）が注目されている。その中でも特に美白機能段階で起こり、最初のグリケーションは可逆的で、還元糖を中心とした機能性化粧品が近年大きな市場となり、また、のカルボニルからのシッフ塩基の保護、タンパク質（リジ

若年層をターゲットとした初期段階からの美白・老化症状

ン、アルギニン）の第一級アミノ基の保護を含んだ反応での予防なども求められており、日本のみならず海外でも活あり、イミン付加体は再転位して HbA1c のようなアマド発に研究がなされている。

リ化合物を形成する。アマドリ化合物は糖尿病のコントロ本研究では、探索対象の植物が未利用植物、もしくはアールマーカーとして広く使われている。後の反応では複合ーユルヴェーダ生薬であってもその含有成分や、薬理活性体は不可逆的酸化反応、縮合と環化を起こし分子内外で架が未解明の植物が主であるため、Entada 属植物で得られ橋形成をして、AGE を形成する 6）。

た含硫含窒素化合物のような 3-5）、既存のものとは異なる

また、皮膚の老化や骨粗しょう症などの代謝性疾患、関新しいタイプの美容薬のリード化合物が期待できる。近年、節炎などの緩和に有効とされるコラゲナーゼ阻害化合物に活発に美白に関する研究は行われているが、実際の市場調ついても合わせて探索している。コラーゲンは動物の結合査などによると、それら美白薬を使用して効果があると実組織を構成する皮膚の弾力性やハリを保つ真皮の大部分を感しているのは少数例である。そこで、遺伝的多様性に富占める主要タンパク質であり、コラーゲンの減少・変性にむ亜熱帯、熱帯地域産の未利用植物資源から抽出・単離を

よってシワ、シミ、タルミなどの皮膚の老化現象が引き起行い、美容薬の医薬シード化合物を見出すことを研究目的こされる。種々の組織においてⅠ型～ⅩⅢ型の 13 種類のとする。

存在が知られている。コラゲナーゼは、コラーゲンタンパ

特に、皮膚の老化にかかわるだけでなく、糖尿病合併症

ク質を特異的に切断する酵素であり、加齢や紫外線による皮膚のシワの発生や粘弾性の低下、骨粗しょう症等の代謝性疾患、炎症性疾患、リウマチなどの関節性疾患など多くの疾患に関与する。このコラゲナーゼ活性を阻害すること

Search for anti-aging drugs from ayurbedic
and tropical plants
Sachiko Sugimoto
Graduate School of Biomedical & Health
Sciences, Hiroshima University

により、上述した疾患の改善につながると考えられる。このような背景のもと、我々は美容薬として有効な化合物を
天然物素材から探索している。

−9−コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

2. 実

2. 3. コラゲナーゼ阻害活性試験

験96 ウ ェ ル に サ ン プ ル、50mM Tricine 緩 衝 液、20µg/

2. 1. 植物抽出エキスおよび各溶出画分からの化合物の精製・解析

mL コラゲナーゼを加えて、37 度で 10 分間培養後、40µg/
mL の基質を加える。すぐに蛍光光度計で Ex（測定励起波

本研究で用いた植物サンプルはいずれも乾燥物を室温で長）=320nm、Em（測定蛍光波長）=405nm で測定し、こ

1 週間メタノールに浸し、得られた抽出液はエバポレータの時を 0 分後とし、15 分後、30 分後に測定をする。なお、ーを用いて溶媒を留去させ、エキスを得た。そのエキスを測定するまでの間は常に 37 度にキープした。この活性試

ヘキサン、酢酸エチル、ブタノール、水を用いて溶媒分配

験の原理は、基質 MOCAc - PRO - Leu -Gly - Leu - A2pr（Dnp）

を行い、各移行部について、順相カラムシリカゲルクロマ-Ala-Arg-NH2 の Leu-Gly の結合を特異的にコラゲナーゼがトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、および高切断し、切断された部分構造が蛍光光度計では Ex 320nm、

速液体クロマトグラフィーを用いて化合物を単離した。単Em 405nm で測定されることより、阻害化合物を添加する

離した化合物については、薄層クロマトグラフィーで確ことによって、コントロールに比べどの程度阻害されたの認後、化学構造を決定するために、まず核磁気共鳴装置

かが判断できる。

（NMR）を用いて化学構造を推定し、質量分析装置（MS）でポジティブコントロールはカフェイン酸（IC50=2.91mg/

その分子式を決定した。さらに、不斉炭素のある化合物に

mL、東京化成工業株式会社、CAS 番号：331-39-5）
を用いた

ついてはその旋光度測定や分解反応を行い立体配置を決定（Fig. 2）。コラゲナーゼは Collagenase from Clostridium

した。

histolyticum（Sigma Aldrich Japan、C9263）を使用し、基測定機器に関しては、NMR は Bruker Avance III 600

質はMOCAc-PRO-Leu-Gly-Leu-A2pr（Dnp）-Ala-Arg-NH（ペ2spectrometer、MS は LTQ Orbitrap XL、 赤 外 吸 収 ス

プチド研究所、Code：3163-v Lot：630316）を、Tricine は（東

ペ ク ト ル は HORIBA FT-710、UV ス ペ ク ト ル は JASCO

京化成工業株式会社、CAS 番号：5704-04-1）を用いた。

V-520 UV/Vis spectrophotometer を用い、旋光度測定には JASCO P-1030 digital polarimeter、CD スペクトルには

2. 4. 細胞増殖抑制試験

JASCO J-720 spectropolarimeter を用いた。

ヒト肺がん上皮細胞（A549）を用いて化合物の細胞増
殖 抑 制 活 性 を 検 討 し た。10 %FBS Dulbecco’ s modified

2. 2. AGEs 形成阻害活性試験

Eagle’ s medium に 100 µg/mL の kanamycin および 0.5µg/

96 ウェルプレートに、10mg/mL ウシ血清アルブミン

mL の amphotericin B で培養した A549 細胞を、96 ウェル

BSA（0.02% アジ化ナトリウムを添加した 50mM リン酸

プレートに 5 × 103cells/well になるように播種し、サンプ

緩衝液）に、0.5 M リボース溶液を加えたのち、サンプル

ルを添加後二酸化炭素存在下 37 度 72 時間培養した。ポを添加した。24 時間 37 度で培養後、その蛍光を測定した

ジティブコントロールは doxorubicin を用いた。培地を（EnSpire，PerkinElmer Japan；Ex：370nm，Em：440 nm）。

吸引後 MTT 溶液を加え、1.5 時間さらに同様に培養した。

ポジティブコントロールとして、アミノグアニジン塩酸

MTT 溶液を吸引し、DMSO を添加し、マイクロプレート

塩（東京化成工業株式会社、CAS 番号：1937-19-5）を用いリーダー（Abs：540 nm）でその吸光度を測定した。

た（Fig. 1）。

3. 結阻害の程度については以下の式で算出した。

果 7-9）

3. 1. ウンランからの化合物の単離・構造解析
ゴマノハグサ科ウンラン属 Linaria japonica、和名：ウ
ンラン（海蘭）は海岸の砂地を這うように自生する多年草で、

sample：試料添加
blank of sample：試料添加、リボースを添加せずに、BSA

高さは 10 〜 15 cm 程度であり、葉は対生か 3~4 枚の輪生を代わりに添加で楕円形をしている。花は黄白色の地上部の大きさに比べ、

control：試料添加なし

大きな花を咲かせる。近年は自然海岸が減少していること

blank of control：試料添加なし、リボースを添加せずに、から、それに伴い、ウンランの自生地も減少していると言BSA を代わりに添加

Fig. 1 Aminoguanidine Hydrochloride

Fig. 2 Caffeic acid− 10 −

アーユルヴェーダ生薬および熱帯植物からのアンチエイジングを志向した抗糖化および美肌薬の創薬研究

Fig. 3 Isolated compounds from Linaria japonica

われている。利尿作用や、緩下作用があり、乾燥した全草

ピーク δH 6.68（s）および 6.89（s）、そして AA’ BB’ のカッ5 〜 10 g を煎じて服用する。

プリングパターンを示したピーク δH 7.08（d, J = 8.1 Hz）おウンランの全草をメタノールで抽出し、溶媒分配後、各

よび 7.95（d, J= 8.1 Hz）が観測された。
13

種カラムクロマトを用いて含有化合物の単離を行ったとこ

C NMR スペクトルでは計 33 本の炭素が確認され、ろ、いずれもフラボノイド骨格を有する化合物が単離さHSQC スペクトルから ラムノースの 6 位のメチル（δC

れた（Fig. 3）。化合物 1~5 はフラボノイドの配糖体であり、18.0）、2 個のアセチル基に由来するピーク（δC 20.6，171.5

そのうち 1 〜 3 は新規化合物であったことから、各化合物

および δC 20.8，172.1）、2 個のメトキシ基由来のピーク（δCをそれぞれ 5mg 秤量し、1M の塩酸を用いて酸加水分解後、

56.2，61.7）、酸素官能基に結合したメチレン（δC 67.5）、糖

amberlite IRA-400 を用いて中和後、溶媒を留去した。残部分の 8 個の酸素官能基に結合したメチン（δC 70.0，71.1，

渣および糖の標品をそれぞれ 0.2mL ピリジンに溶解させ

71.3，
71.6，
73.3，
74.8，
77.3，
77.9）、4 個の二重結合のメチン（δC

L-cysteine methyl ester（15 mg/mL）を加えて 60 度で一95.5，104.5，115.8，129.8）、2 個のアノメリックカーボン

時間反応させた10）

由来のピーク（δC 99.3，101.6）、2 個の四級炭素（δC 108.0，。

標品との比較の HPLC 条件

124.7）、6 個の二重結合の四級炭素由来のピーク（δC 134.0，［Cosmosil 5C1 8 AR II（2 5 0 × 4.6 mm i.d., Nacalai Tes-

154.3，154.3，158.0，164.5，166.9）、およびカルボニルカー

que）；溶出溶媒 25% CH3CN 50mM H3PO4；流速 0.8 mL/

ボン δC 184.6 が観測された。
糖鎖構造のうち、グルコースのアノマーカーボン δCmin；カラム温度 35 ℃；検出波長 250nm］
サンプル誘導化合物および標品の誘導化合物の保持時間

101.6 に対応するプロトンは HSQC より（δH 5.19）であり、は D-glucose が 18 分、L-rhamnose は 30 分であり、相違な

そのカップリング定数は（J = 7.2 Hz）であったことから、グいことを確認した。

ルコースは β 結合していることが明らかとなった。さらに、

化合物 1 は負の旋光性（-4.81、MeOH）を示す淡黄色のラムノースは同様に、アノマーカーボン（δC 99.3）に対応す粉末として得られ、高分解能マススペクトルから、そのるプロトンは（δH 4.72）に観測され、これは brs に観測され分子式が C33H38O17 であると分かった。IR スペクトルより、たことから、ラムノースは α 結合していることが判明した。

-1-1ヒドロキシ基（3437cm ）、メチレン（2933cm ）、エステル

これらの NMR データは 2"' と 3"' 位の値を除いて linariin（1746 cm-1）、α , β - 不飽和結合（1653 および 1606 cm-1）、芳と非常に類似していた（Fig. 4）９）。低磁場に観測されたプ

香環（1566 および 1509cm-1）およびエーテル結合（1251cm-1）

ロトンおよび δH 5.15、カーボン δC 71.1 の値から、アセチ

1を有することが示唆された。 H NMR スペクトルより、ラル基の一つは 2"' に結合していると推測された。また、同

ムノースの 6 位のメチル基に由来するピーク δH 1.17（d,様に δH 5.01 に観測されたプロトン、δC 73.3 に観測された

J= 6.2 Hz）、2 個のアセチル基のメチル部分に由来するピーク δH 1.75（s）および 1.93（s）、グルコースの酸素官能基に結合した 2 つのピーク δH 3.76（m）、4.05（d, J = 9.9 Hz）、
6H 分に積分値で観測された 2 個のメトキシ基由来のピー
ク δH 3.89（s）、2 個のアノメリックプロトン由来のピーク
δH 4.72（br s）および 5.19（d, J=7.2 Hz）、2 個の芳香環の− 11 −

Fig. 4 Linariin

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

カーボンから 3"' 位にもう一つのアセチル基が結合していったのに対し、得られた新規化合物 1 から 3 の IC50 値はそることも推測された。これらはいずれも、二次元 NMR のれぞれ 34.8 μM、35.0 μM、19.5 μM であり、ポジティブコ

測定方法の一つである HMBC 相関から区別され、結合位ントロールよりもかなり 36 ～ 60 倍程度強い阻害活性を示置が決定できた。すなわち、H-2'''（δH 5.15）と 3'''（δH 5.01）

した。また既知化合物である化合物 8 の IC50 は 85.8 μM ではそれぞれ δC 171.5（2'''OAc）と 172.1（3'''OAc）に相関があり、こちらも中程度の阻害活性を示した。なお、活性試観測された。また、グルコースのアノマープロトンから

験の回数は 3 回行っている（Fig. 5）。

7 位の δC 158.0（C-7）に HMBC 相関がみられ、ラムノース
δC 67.5（C-6''）に HMBC 相関が観測されたことから、それ

3. 3. ウンランから単離された化合物のコラゲナーゼ
阻害活性

ぞれ糖鎖の結合位置の決定をした。以上のように、各種物単離した化合物に対して、活性試験を検討した結果、化理化学データの解析および酸加水分解を行い、化合物 1 を合物 4 と化合物 5 の IC50 は 79.4 および 78.6 μM であり、単pectolinarigenin-7-O-β-D-glucopyranoside- （1 → 6）

離した化合物のうち一番活性が強かったのは luteolin（化-2''',3'''-O-diacetyl-α-L-rhamnopyranosideであると決定した。

合物 8, 40.5 μM）であった。ポジティブコントロールのカ

他の化合物も同様の手法を用いて、その構造解析を行っフェイン酸の IC50 は 0.12 mM であったので、有意な阻害た。また既知化合物については報告のある文献をもとに、活性を示すことを明らかとした。しかしながら、新規化合同定を行った。

物 1~3 には有意な活性が認められなかった（Fig. 6）。

3. 2. ウンランから単離された化合物のAGEs 形成阻
害活性3. 4. ウンランから単離された化合物の細胞増殖抑制
活性単離した全化合物について AGEs 形成阻害活性試験を行得られた化合物について細胞増殖抑制試験を行っった結果、ポジティブコントロールとして用いたアミノグ

た。その結果、ポジティブコントロールとして用いた

アニジン塩酸塩（図中は AG と表記）は IC50 が 1.29 mM であdoxorubicin の IC50 は 0.70 μM で あ り、 化 合 物 6 お よ び 8のアノマープロトンからはグルコースの 6 位である 6'' 位

Fig. 5 AGEs formation inhibitory activity of compounds 1-8

Fig. 6 Collagenase inhibitory activity of compounds 1-8− 12 −

アーユルヴェーダ生薬および熱帯植物からのアンチエイジングを志向した抗糖化および美肌薬の創薬研究の IC50 は 91.1 および 82.6 μM であり、ポジティブコントロ

円形で細鋸歯があり、三出複葉で対生する。山斜面の道端ールに比べて弱いものであった。

などに生え、新芽や若葉は山菜として食されてきた。果実に鎮咳去痰作用、根に活血作用がある。本植物の葉部に関3. 5. Ixora undulataからの化合物の単離して当研究室から新規メガスティグマン配糖体等を報告し

アカネ科イクソラ属 Ixora undulata は東南アジアでは寺ているが 11）、機能性についての詳細な検討はこれまであ院への参拝の際に用いられる植物であり、赤やピンクなどまり行われていない。そこで、ミツバウツギ葉部の成分分の花を咲かせる。同属植物の Ixora chinensis はイリドイド

析および各種活性評価試験を通して、本植物の機能性成分化合物などがこれまでに、単離報告があるが、本植物につについての研究を行うこととした。

いては未詳であった。また、本植物は日本には自生しておミ ツ バ ウ ツ ギ 乾 燥 葉 5.71 kg の MeOH 抽 出 物 をらず、今回使用したものはエジプトで採取したものである。

n-Hexane、EtOAc、1-BuOH、H2O で順次分配後、これら本植物も同様に化合物を探索し、その化学構造を決定したの画分について各種生物活性試験を行った結果、EtOAc（Fig. 7）。

可溶画分にコラゲナーゼ阻害活性を見出し EtOAc 可溶画分について、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに

3. 6. Ixora undulataから単離された化合物のAGEs
形成阻害活性
得られた化合物に活性試験を行った結果、化合物 9、10、より 11 フラクションに分画し、活性試験を行った（Fig. 8）。
そのうち、活性の比較的強かった fr. 2、3 は、TLC および
HPLC 分析を詳細に行った結果、脂肪酸類、クロロフィル、

12 それぞれの IC50 は 76.6 μM、98.6 μM および 86.0 μM でカロテノイドなどを主に含むことが示唆された。これらのあった。ウンランから得られた化合物ほどではないが、本成分は植物には普遍的な成分であることから、これ以上の植物からも抗糖化抑制化合物が単離された。また、いずれ

解析は行わなかった。
そこで、残る fr. 4~11 について、活性を指標に逆相シリの化合物にも細胞毒性は認められなかった。

カゲルカラムクロマトグラフィー、HPLC を用いて分離・

3. 7. ミツバウツギからの化合物の単離およびコラゲナー
ゼ阻害活性精製を行った結果、12 種の化合物を単離することに成功

ミツバウツギ（Staphylea bumalda DC.）は山菜としての活性試験を行った結果、終濃度 100 μg/mL において化合

食経験を有する植物であり、アジアに分布する落葉低木でした（Fig. 9）。単離した化合物についてコラゲナーゼ阻害
物 14、16~18 に阻害活性が見られた（Fig. 10）。

樹高は約 3 ～ 5 m、5 ～ 6 月に白い花を咲かせる。葉は楕

Fig. 7 Isolated compounds from Ixora undulata

Fig. 8 Collagenase inhibitory activity of EtOAc layer after silica gel cc− 13 −

コスメトロジー研究報告 Vol.25, 2017

Fig. 9 Isolated compounds from Staphylea bumalda DC.

源の有効活用と創薬の両観点から重要である。
今後は、当研究室に保有するメガスティグマン化合物群について、抗糖化抑制試験を行い、その構造活性相関研究を行いたい。
謝辞本研究を行うにあたり、多大なるご援助を賜りました公益財団法人コスメトロジー研究振興財団に深く感謝いたし
Fig. 10 Collagenase inhibitory activity of compounds 14-21

4. 考

ます。
（参考文献）

察

1） Reddy V. Prakash, Beyaz Ayse: Inhibitors of the

天然物素材は研究をやり尽くせないほどの数が存在し、Maillard reaction and AGE breakers as therapeutics

まずは植物の選定が非常に重要となる。そこで特に含有成for multiple diseases. Drug Discov. Today 11, 646‒654(2006).

分や薬理活性が未詳の植物に限定して研究を行ったとこ
ろ、ウンラン、Ixora の抽出エキスが抗糖化抑制活性を有し、

2） Fumihiro Teramachi, Takashi Koyano, Thaworn

ウンラン、ミツバウツギの抽出エキスがコラゲナーゼ阻害

Kowithayakorn, Masahiko Hayashi, Kanki Komiyama,

活性を有することを見出した。続いてこれらの有効成分のMasami Ishibashi: Collagenase Inhibitory Quinic Acid

単離構造解析を行ったところ、いずれもフラボノイド骨格

Esters from Ipomoea pes-caprae. J. Nat. Prod., 6 8,を有する化合物が主な活性物質として得られた。一方、3．

794‒796 (2005).

5. で示した Ixora 属から単離されたメガスティグマン配糖

3） Sachiko Sugimoto, Katsuyoshi Matsunami, Hideaki

体は、天然物化学の分野ではあまり有用な活性が認められ

Otsuka: Medicinal plants of Thailand. I: structuresていなかった化合物群であり、今回、このメガスティグマ

of rheedeiosides A-D and cis-entadamide A β-D-ンに強い活性が認められたことは大変に重要な知見となる。

glucopyranoside from the seed kernels of Entada

さらに、抗糖化抑制活性のポジティブコントロールである、

rheedei Sprengel. Chem. Pharm. Bull., 5 9, 4 6 6‒4 7 1(2011).

アミノグアニジンは緒言にも書いたが、臨床試験にまで進んだ化合物でありながら、その副作用の為に薬となること

4） Y o s h i h i r o I w a m o t o , S a c h i k o S u g i m o t o , L i v aはなかった。そういった背景から、今回の研究で抗糖化抑Harinantenaina, Katsuyoshi Matsunammi, Hideaki

止活性を示しながら細胞毒性のない化合物が得られたこと

Otsuka: Entadosides A-D, triterpene saponins and a

は重要な知見である。未利用植物の成分分析を通してその

glucoside of the sulphur-containing amide

有用性を検証することや、様々な構造、薬効を持つ天然物

5） from the kernel nuts of Entada phaseoloides (L.)

を見出し、構造と薬効の情報を蓄積していくことが天然資− 14 −

Merrill. J. Nat. Med., 66, 321‒328 (2012).

アーユルヴェーダ生薬および熱帯植物からのアンチエイジングを志向した抗糖化および美肌薬の創薬研究

6） Sachiko Sugimoto, Katsuyoshi Matsunami, Hideaki

New isolinariins C, D and E, flavonoid glycosides from

Otsuka: Medicinal plants of Thailand. II: chemical

Linaria japonica, Chem. Pharm. Bull., 6 4, 5 1 7‒5 2 1

studies on the seed kernels of Entada rheedei(2016).
10）Sachiko Sugimoto, Samir Wanas Amira, Tsutomu

Sprengel. J. Nat. Med., 66, 552‒557 (2012).
7） Luc Séro, Lionel Sanguinet, Patricia Blanchard,

Mizuta, Katsuyoshi Matsunami, Hideaki Otsuka:

Bach Tai Dang, Sylvie Morel, Pascal Richomm,

Structure elucidation of secondary metabolites isolated

Denis Séraphin, Séverine Derbré: Tuning a 9 6-wellfrom the leaves of Ixora undulate and their inhibitory

microtiter plate fluorescence-based assay to identify

activity toward advanced glycation end-products
formation, Phytochemistry, 108, 189‒195 (2014).

AGE inhibitors in crude plant extracts. Molecules 1 8,11）Takashi Tanaka, Tatsuya Nakashima, Toshihisa

14320‒14339 (2013).
8） Retno Widyowati, Sachiko Sugimoto, Yoshi Yamano,

Ueda, Kenji Tomii, and Isao Kouno: Facile

Sukardiman, Hideaki Otsuka, Katsuyoshi Matsunami:

Discrimination of Aldose Enantiomers by Reversed-

New cis-ent-clerodanes from Linaria japonica,

Phase HPLC, Chem. Pharm. Bull., 55, 899‒901 (2007).
12）Hideaki Otsuka, Yu Qian, Katsuyoshi Matsunami:

Phytochemistry Letters, 14, 56‒62 (2015).
9） Retno Widyowati, Sachiko Sugimoto, Yoshi Yamano,
Sukardiman, Hideaki Otsuka, Katsuyoshi Matsunami:− 15 −

Bumaldosides A, B and C from the leaves of Staphylea
bumalda, Heterocycles, 80, 339-348 (2010).