プロスタグランジンＤ２受容体を標的とした皮膚アレルギー炎症治療法開発
東京医科歯科大学大学院皮膚科学分野

佐 藤貴 浩

Biological activities of prostaglandin D2 (PGD2) are thought to be mediated by the classical DP receptor andCRTH2 (chemoattractant receptor-homologous molecule expressed on Th2 cells). In the present study, to examine
the role of PGD2-CRTH2 interaction in development of allergic inflammation, we generated mice that containa targeted disruption of the CRTH2 gene. We used these mice to characterize chronic cutaneous inflammatory
processes, including IgE-mediated ver y-late-phase responses and chronic contact hypersensitivity induced byrepeated hapten application. The present findings indicate that IgE-mediated cutaneous responses are dependent
on PGD2. Ear swelling responses were suppressed by administration of HQL-79, which is a PGD synthase inhibitor.
CRTH2-deficient mice failed to develop IgE-induced very-late-phase cutaneous responses, which are histologicallycharacterized by a decrease in infiltrative lymphocytes, eosinophils and basophils, associated with inhibited
production of MDC and RANTES. However, local production of IL-4 and IFNγ was not affected by lack of CRTH2.
In chronic contact hypersensitivity models, CRTH2 deficiency also resulted in diminished skin responses andserum IgE production. These findings indicate that PGD2 signaling via the CRTH2 receptor plays important roles
in IgE-mediated cutaneous responses and chronic contact hypersensitivity reactions. CRTH2 may represent a novel
therapeutic target for the treatment of chronic allergic skin inflammation, such as atopic dermatitis.

1．緒

役割を解析し、これらを標的とした治療法を開発、検討す言ることを主な目的としている。

PGD2 は主に肥満細胞から分泌され、血管拡張作用や気アレルギー性皮膚炎として知られる代表的な皮膚疾患は管支収縮作用などの生理活性をもつ物質としてしられる。

アトピー性皮膚炎である。そこで今回はマウスモデルとしまたかねてより炎症反応においても何らかの役割を果たて IgE 依存性皮膚反応とハプテン繰り返し塗布による慢す可能性のあることが示唆されてきていた。最近になり性接触過敏反応を選び検討を加えた。

PGD 合成酵素を恒常的に発現するマウスにおいて気管支２．実

喘息反応の増強や好酸球浸潤など、いわゆる Th2 型反応
1）の亢進のみられることがわかり 、アレルギー性炎症にお2．1

ける PGD2 の役割があらためて大きな注目を集めるようになってきている。

験CRTH2 欠損マウスの作成

CRTH2 欠損マウスは図１にしめす方法で作成した。その後 BALB/c マウスと 10 代以上交配して用いた。

PGD2 の受容体として古くから DP 受容体が知られている。そして DP 受容体の欠損マウスでは気管支喘息反2．22）IgE 依存性皮膚反応の誘導応が弱まるとされる 。一方最近になってもう一つ受容マウス耳介皮下に抗 dinitrophenyl（DNP）特異 IgE 抗体として CRTH2（chemoattractant receptor homologous

体を投与（1.25μg）。その翌日に 0.5% のジニトロフルオ

molecule expressed on Th2 cells）が知られるようになっロベンゼン（DNFB）を塗布（20μℓ/耳介）して、その後た。これは当初、Th2 細胞に特異的に発現される分子と経時的に耳介腫脹を測定した。

してクローニングされたものであるが、その後、好酸球や好塩基球などの表面にも発現していることがわかり、さら2．3

慢性接触過敏反応の誘導に PGD2 の受容体として機能し、細胞の遊走や活性化にマウス剃毛腹部に５％トリニトロクロロベンゼン関わることが明らかにされた 。今回の研究は、PGD2 ま（TNCB） を 塗 布 し て 感 作 し た。 そ し て ５ 日 後 に 1 ％たはそれらの受容体の慢性アレルギー性皮膚反応におけるTNCB を耳介に塗布して惹起を行った。その後惹起を２3）日ごとに繰り返し 25 日目までおこなった。
Therapeutic approach for allergic skindiseases via blocking prostaglandin D2
receptors
Takahiro SatohDepar tment of Dermatology Graduate
S c h o o l , To k y o M e d i c a l a n d D e n t a l
University

2．4

浸潤細胞数の測定

耳介皮膚の浸潤細胞は組織切片をギムザ染色し、光学顕微鏡下においてカウントした。また好塩基球の測定は皮膚組織を collagenase III で処理後、浸潤細胞を回収。FITC標識抗 Fc εRI 抗体、R-PE 標識抗 c-kit 抗体、PE-Cy5.5 標− 32 −

プロスタグランジンＤ２受容体を標的とした皮膚アレルギー炎症治療法開発図１

識抗 Gr-1 抗体にて染色してフローサイトメトリーにて観その一方、IL-4, IFN-γ, eotaxin は CRTH2 欠損の影響をう察。FcεRI（+），c-kit（-），Gr-1（-）細胞を好塩基球としてけなかった（図３）。

カウントした。

3．2 血球型 PGD 合成酵素（H-PGDS）抑制薬の効果
2．5

サイトカイン・ケモカインの測定

CRTH2 欠損において IgE 依存性皮膚反応が減弱してい耳介皮膚を 0.1％ Tween 20 含有 PBS を用いて粉砕しホたことから、PGD2 の合成にかかわる酵素（H-PGDS）のモゲネートを作成。15,000g で 10 分遠心後に上清を回収。

抑制薬（HQL-79）がこの反応に対して治療効果をもたそれぞれにおけるサイトカイン・ケモカインを ELISA 法らすか否かを検討した。その結果 IgE 依存性皮膚反応はにて測定した。

HQL-79 の経口投与により著明に抑制された（図４A）
。

3結果

3．3

CRTH2 拮抗薬の効果の検討

3．1 CRTH2 欠損マウスにおける IgE 依存性皮膚反応

PGDS 抑制薬の効果が CRTH2 受容体を介したものであ

まず、CRTH2 の in vivo における役割を IgE 依存性皮ることを確認するため、CRTH2 拮抗薬であるラマトロバ

膚反応を用いて検討した。その結果、皮膚反応の顕著な減ンの投与効果を観察した。その結果、IgE 依存性皮膚反応弱が確認された（図２A,B）。また浸潤細胞の変化を検討

は CRTH2 欠損マウスにおいてみられたように減弱していしたところリンパ球、好中球、好酸球、肥満細胞のいずれた（図４B）。

もが CRTH2 の欠損により減少した（図２C）。さらに興味深いことに IgE 依存性の第 III 相反応の成立に必須とされる好塩基球4）の浸潤も減少していた（図２D）。

3．4

CRTH2 欠損マウスにける慢性接触過敏反応

アトピー性皮膚炎にみられる慢性皮膚反応のもう一つの次に局所におけるサイトカイン・ケモカインの産生量モデルである慢性接触過敏反応の変化を CRTH2 欠損マウを測定した。その結果、CRTH2 欠損マウスにおいてはスを用いて観察した。慢性接触過敏反応は 5％ TNCB にMDC, RANTES, TARC の産生が少ないことがわかった。て感作後、1％ TNCB による惹起を隔日で繰り返すことに− 33 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図２

図３− 34 −プロスタグランジンＤ２受容体を標的とした皮膚アレルギー炎症治療法開発

図４− 35 −コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図５− 36 −プロスタグランジンＤ２受容体を標的とした皮膚アレルギー炎症治療法開発

より誘導した。図５Ａにみるように皮膚反応は５日目でTh1 細胞にも発現されていることに起因すると考えられは 24 時間後にピークがみられるが、惹起を繰り返すごとる 。

5）に早まり 25 日目には２から５時間目にピークをむかえる

今回は CRTH2 受容体を中心に慢性皮膚アレルギー性反ようになる。CRTH2 欠損マウスでは反応ピークの移動は応における役割を解析してきた。今後、もう一つの受容みられるものの、その強さは惹起を繰り返すごとに wild体 DP についても同様の解析を行い、さらに他のハプテンtype マウスに比して減弱しその差が明瞭になっていくこに対する反応を含めて種々の皮膚炎症反応にける CRTH2,とがわかった。さらに 27 日目での耳介皮膚全体の厚さもDP, PGD2 の重要性を検討したい。そして疾患ごとの治療

wild type マウスより薄く（図５Ｂ）、また血清 IgE の産の標的と治療の選択につき検討を進めたい。

生も少なかった（図５C）。

４考（引用文献）

察１）Fujitani Y, Kanaoka Y, Aritake K, et al.: Pronounced

今回の研究において PGD2 受容体の一つである CRTH2

eosinophilic lung inflammation and Th2 cytokine

が IgE 依存性皮膚反応の成立において重要であることがrelease in human lipocalin-type prostaglandin D

CRTH2 欠損マウスを用いた実験によって初めて明らかとsynthase transgenic mice. J. Immunol., 168, 443-449,なった。さらに H-PGDS 抑制薬である HQL-79 や CRTH2

2002.

拮抗薬のラマトロバンが治療効果をもたらすことも見出さ

２）M a t s u o k a T , H i r a t a M , T a n a k a H , e t a l . :れた。CRTH2 の重要性は慢性接触過敏反応においても確

Prostaglandin D2 as a mediator of allergic asthma.

認された。以上のことから PGD2 または CRTH2 受容体をScience. 287, 2013-2017, 2000.

標的とした治療法はアトピー性皮膚炎を含めて一部のアレ

３）Hirai H, Tanaka K, Yoshie O, et al.: Prostaglandin D2

ルギー性皮膚疾患において有用である可能性があると思わ

selectively induces chemotaxis in T helper 2 type cells,れる。

eosinophils and basophils via seven-transmembrane

IgE 依存性皮膚反応の抑制機序についてはまだ十分にはreceptor CRTH2. J. Exp. Med., 193, 255-262, 2001.

解明できていないが、おそらく CRTH2 を介した PGD2 に４）Mukai K, Matsuoka K, Taya C, et al.: Basophils play

対する炎症細胞の遊走が抑制されたためと推測される。まa critical role in the development of IgE-mediated

た IgE 依存性第 III 相反応に必須とされる好塩基球の浸潤

chronic allergic inflammation independently of T cellsが抑制されたために、その後に生じる種々の炎症カスケー

and mast cells. Immunity, 23,191-202, 2005.
５）Abe H, Takeshita T, Nagata K. et al.: Molecularドが影響を受けたためとも考えられる。
CRTH2 はヒトのリンパ球においては Th2 細胞に発現さcloning, chromosome mapping and characterization

れているが、CRTH2 欠損マウスでの局所サイトカインプ

of the mouse CRTH2 gene, a putative member of the

ロフィールは必ずしも Th1,Th2 のいずれへの偏りもみら

leukocyte chemoattractant receptor family. Gene, 227,れなかった（図３）。これはマウスにおいては CRTH2 が71-77, 1999.

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