コラーゲンの線維形成を調節するプラチナ錯体に関する研究

早稲田大学理工学術院

小 出

隆 規

Excessive deposition of collagen fibers in tissues causes various fibrotic diseases. Inhibition of the collagen fibrilformation is thus regarded as a promising mechanism for the development of antifibrotic drugs. A cisplatin-DMSO complex,
which was obtained as a potential inhibitor of the in vitro collagen fibril-formation, was revealed to interact with specificsites on the collagen triple helix. Collagen fibril-deposition in a cell culture system was inhibited by the treatment with thecisplatin-DMSO complex. The cisplatin-DMSO complex was revealed to be less toxic to cultured cells than cisplatin.

１．緒る。この抗体は in vitro でⅡ型コラーゲンの細線維形成を言阻害するが、Ⅰ型コラーゲンに対する阻害能は有していな

コラーゲンは生体内で最も多量に存在する、３重らせん

かった 10）。また、テロペプチドのアミノ酸配列を模した合構造を持つ細胞外マトリックスタンパク質である。コラー

成ペプチドもコラーゲン細線維形成を阻害することが報告

ゲンには 28 種類の異なる型が存在し、高次構造により複されている。この実験では、Ⅰ型コラーゲンの C 末端のテ数のサブファミリーに分類される。その中でも全コラーゲ

ロペプチドを模したペプチドがⅠ型コラーゲンの細線維形ンの９割を占めるⅠ型コラーゲンに代表される、線維形成成を阻害することが示されている 1 , 4）。

型コラーゲンに着目する。線維形成コラーゲンの３重らせ

本研究の目的は、低分子量のコラーゲン細線維形成阻害

ん分子は、長軸方向に約４分の１ずつずれながら自己集合

物質を探索し、得られた化合物を線維化疾患治療薬のリーし、細線維を形成する。細線維はさらに集合してコラーゲ

ドとして応用することである。我々は、以前報告したハイン線維を形成する。コラーゲンの規則正しい自己集合におスループットスクリーニングシステム 11）を用いて探索を行い、いて、コラーゲン分子が全て同じ方向を向いていること、

コラーゲンの細線維形成を阻害する化合物として、抗がんコラーゲンの N および C 末端に存在する非３重らせん領域

剤 で あ る、cis-diamminedichroloplatinum（II）（cisplatin）（テロペプチド）のアミノ酸配列の重要性などが報告されてを見出した。しかし、コラーゲン細線維形成阻害効果を有1−4）しているのは、cisplatin そのものではなく、溶媒であるジコラーゲン線維は組織や臓器の強度を維持するだけでな

メ チ ル ス ル フ ォ キ シ ド（DMSO）と 反 応 し て 生 成 し た

いるが、その詳細なメカニズムは未だ解明されていない。

く、細胞の接着・移動・分化などの制御など生体維持にも

cisplatin 誘導体であることが示唆された。

重要な機能を発揮している。しかし、コラーゲン線維が過本報告では、cisplatin 誘導体のコラーゲン細線維形成阻剰に生成されると、肝硬変、肺線維症、強皮症などの線維害効果の解析、cisplatin 誘導体とコラーゲン間の相互作用、化疾患を引き起こす。これまでに、コラーゲンの線維形成

他のプラチナ系抗がん剤を用いた構造活性相関、cisplatinを阻害する戦略として、（1）コラーゲンの生成を促進する誘導体の活性本体の推定、および培養細胞系を用いた検討

5 − 7）

8）、（2）コラーゲンの合成を阻害する 、についてその結果を述べる。なお、以下では cisplatin と（3）コラーゲン分子間のクロスリンクを阻害する 9）など、

DMSO を混合して生じた活性物を cisplatin（DMSO）と表

いくつかのメカニズムが提示されている。 本研究では、記する。

因子を阻害するコラーゲン分子に直接働いてその細線維形成を阻害する方２．実法に着目した。

験

これまでに、コラーゲンの分子間の自己集合を阻害する

2 .1 コラーゲン細線維の走査型電子顕微鏡
（SEM）
観察

物質として、Ⅱ型コラーゲンに対する抗体が報告されていⅠ型コラーゲン溶液 20 µl をカバーガラスにコートし、自然乾燥させた。コラーゲンをコートしたカバーガラスを、
buffer（20 mM sodium phosphate（pH 7 . 4）、100 mM
NaCl、10 µM cisplatin（DMSO））２ml に入れて、37℃で

A platinum complex that inhibits thecollagen fibril-formation
Takaki Koide
Faculty of Science and Engineering,
Waseda University

２時間インキュベートした。室温で２% グルタルアルデヒ
ド水溶液にて１時間固定した後に、濃度の異なるエタノー
ルで段階的に脱水した。次に t -ブタノール溶液にて置換し、凍結乾燥した。白金を約３ nm 蒸着した後に SEM（HITACHI− 99 −

コスメトロジー研究報告 Vol.22, 2014

2 . 5 HUVEC の タンパク 質 産 生 に お けるcisplatin（DMSO）の影響（Western Blotting）

S- 3000 N）装置を用いて加速電圧 15 kV にて観察した。

2.2

コラーゲン細線維化阻害アッセイ

HUVEC を EGM- 2 培 地 中 100 µM cisplatin（DMSO）
、
11）

。

0 . 1 % DMSO、0 . 2 mM L - アスコルビン酸リン酸エステル

吸光度測定には Greiner 384 well UV-star plate を用いた。

マグネシウム塩 n 水和物となるようにサンプルを加え、37

プレート上で、コラーゲン溶液を含む反応溶液の調製を行℃で３日間培養した（毎日培地交換とサンプルの添加を行い、プレートリーダーを用いて、37℃で 2 . 5 時間、５分ごい、回収した培地は４℃で保存した）。この際、cisplatinとに 313 nm における吸光度を測定した。

（DMSO）なしで 0 . 1 % DMSO、0 . 2 mM L- アスコルビン酸

アッセイは、Okano-Kosugi らの論文に従って実施した

細線維化阻害能評価は、コラーゲンのみの場合の最終測

リン酸エステルマグネシウム塩 n 水和物のみとなるように定点（145 分）における 313 nm の吸光度の値を線維形成 100

サンプルを加えたものをコントロールとして作製した。イ％とし、サンプル存在下での吸光度を線維形成（%）で表

ンキュベート後、PBS で細胞を洗浄し、抽出バッファー

すことにより評価した。

（50 mM Tris-HCl（pH 8 . 0）、150 mM NaCl、5 . 0 mM

線維形成（%）= A× 100 /Δ

EDTA、１% NP- 40、2 . 0 mM N- ethymaleimide、2 . 0 mM

（A : サンプル存在下の吸光度変化、Δ: コラーゲンのみ

4（- 2 - aminoethyl）benzensulfonyl fluoride、1 µg/mlの吸光度変化）

leupeptin、1 µg/ml pepstatin）を１ml 加えて４℃で 15 分

特に記述がない場合、濃度はすべて仕込み終濃度とした。

間放置した。細胞を剥離回収し、1 . 5 ml tube に溶液を移して遠心分離を行い（13 , 000 min−1、４℃、15 分間）、上

2.3

ペプチド合成清（コントロール、cisplatin（DMSO）添加サンプル共にペプチド鎖の合成は、Rink amide resin を担体として通1 . 45 ml）と沈殿に分けた。以下、ⅰ上清、ⅱ沈殿、ⅲ保存

常の Fmoc 固相法により行った。ペプチドの脱保護及び固していた培地の SDS - PAGE のサンプル作製法を示す。

相担体からの切り出しは、水 : m- クレゾール : チオアニソ

ⅰ上清：上清の全量（1 . 45 ml）に２% デオキシコール酸ナール : エタンジチオール : TFA（2 : 2 : 2 : 1 : 33 , v/v, ５トリウム 10.3µl、100% トリクロロ酢酸 124.7µl を加えて、ml）中で１時間（Arg がペプチド鎖に含まれている場合は４℃で 30 分間放置した後に遠心分離（13 , 000 min−1、４

4 時間）振とうすることにより行った。ペプチドの精製お℃、５分間）を行い上清と沈殿に分けた。沈殿をアセトよび純度の確認は逆相 HPLC を用い行い、MALDI-TOF

ンで３回洗浄した後に、デシケーターで乾燥させた。乾型質量分析により目的物であることを確認した。

燥した沈殿を 145 µl の 1 ×SDS- サンプルバッファーに溶解し、SDS- サンプルとした。

2.4細胞が分泌したコラーゲンの共焦点顕微鏡観察

ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）を EGM- 2 培地を用い

ⅱ沈殿：沈殿を 145 µl の 1 ×SDS- サンプル buffer に溶解し、SDS- サンプルとした。

てガラスベースディッシュ上でコンフルエントになるまで

ⅲ培地：回収した培地 10 ml に２% デオキシコール酸ナト

培 養 を 行 っ た 後 に、100 µM cisplatin（DMSO）、0 . 1 %リウム 71 µl、100 % トリクロロ酢酸 860 µl を加えて、４

DMSO、0 . 2 mM L -アスコルビン酸リン酸エステルマグネ℃で 30 分間放置した後に遠心分離（13 , 000 min−1、４℃、シウム塩 n 水和物となるようにサンプルを加え、37℃で３５分間）を行い上清と沈殿に分けた。沈殿をアセトンで日間培養した（毎日培地交換とサンプルの添加を行った）。

３回洗浄した後に、乾燥させた。乾燥した沈殿を 500 µl

この際、cisplatin（DMSO）なしで 0 . 1 % DMSO、0 . 2 mMの 1 ×SDS- サンプルバッファーに溶解し、電気泳動用サ

L -アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩 n 水和物

ンプルとした。

のみを加えたものをコントロールとした。培養後、PBS（+）

ⅰ、ⅱ、ⅲで作成した SDS - サンプルを５% ゲルにて電（1 . 0 mM CaCl 2、0 . 5 mM MgCl 2）で 細 胞 を 洗 浄 し、 ４%気泳動し、PVDF に３時間トランスファーを行った。トラホルムアルデヒド /PBS にて４℃で 15 分間固定した。PBS

ンスファー後、メンブレンを５% スキムミルク /TBS に浸（+）で洗浄した後に 10 % FBS、５% スキムミルク /PBS

け、終夜４℃でブロッキングを行った。メンブレンをにて室温で 30 分間ブロッキング処理を行った。PBS（+）

TBS -T（１% Tween 20）で洗浄した後に、1 / 1000 anti-

で 洗 浄 後、1 / 100 anti-collagen type I, rabbit polyclonalcollagen type Ⅰ , rabbit polyclonal antibody/ １% スキム

antibody/ 10 % FBS、５% BSA/PBS を添加し、室温で１

ミルク /TBS を５ml メンブレンに乗せて室温で 50 分間静時間静置した。PBS（+）で洗浄後、1 / 20 FITC-goat anti-

置した。TBS - T で洗浄した後に、1 / 2000 goat anti-rabbit

rabbit IgG antibody/ 10 % FBS、５% BSA/PBS を添加し

IgG-AP antibody/１% スキムミルク /TBS を５ml メンブ

室温で１時間静置した。PBS（+）で洗浄後、共焦点顕微

レンに乗せて室温で 30 分間静置した。TBS -T で洗浄した鏡にて観察を行った。

後に、alkaline phosphatase conjugate kit（BIO RAD）を− 100 −

コラーゲンの線維形成を調節するプラチナ錯体に関する研究

存在下で形成したコラーゲン細線維（Fig. 1 B）は線維の直用いて、バンドを可視化した。

径が小さく、また線維の全体量が減少していることがわか

2.6

Cisplatin（DMSO）の細胞毒性の検討った。この結果より、cisplatin（DMSO）はコラーゲンの

HeLa 細 胞 を 96 穴 マ イ ク ロ プ レ ー ト に 無 血 清 培 地
HFDM- 1 を用いて 100 µl ずつ播種し（3000 cells/well）、37集合を阻害し、細線維の形成を抑制していることがわかった。

℃で 24 時間培養した。培地を新しいものに交換した後に、各濃度の cisplatin（DMSO）（あるいは cisplatin（saline））、
１% DMSO（saline に 溶 解 し た サ ン プ ル の 場 合 は 0 %3 . 2 Cisplatin（DMSO）がコラーゲン３重らせん構造に与える影響DMSO）となるようにサンプルを加え、37℃で 48 時間培養

Cisplatin（DMSO）と反応させたコラーゲンの円偏光二した。その後、cell counting kit- 8 を 10 µl 加え 37℃で１時

色性（CD）スペクトルを測定した。その結果、３重らせん

間インキュベートして生細胞を呈色し、450 nm における構造に特有の 225 nm 付近の正のコットン効果が観察され吸光度を測定することにより生細胞数を定量した（n= 3）。

た（Fig. 2 ）。算出した Rpn 値（CD 極小絶対値と極大絶対値の比）は 0 . 11 であり、天然のコラーゲン（0 . 13）と同程度

３．結果と考察の値であった 12）。このことから、cisplatin（DMSO）を作

3 .1 Cisplatin（DMSO）存在下で形成したコラーゲン
細線維の形態用させたコラーゲンは、元の３重らせん構造をほぼ保持しCisplatin（DMSO）存在下でコラーゲンの細線維を形成のコラーゲン細線維形成阻害効果は、コラーゲンの３重らさせ、それを SEM にて観察した。その結果、正常なコラ

せん構造を変性させることによるものでないことが強く示

ーゲン細線維（Fig. 1 A）と比較して、cisplatin（DMSO）

唆された。

A

ていることがわかった。これにより、cisplatin（DMSO）

B

Fig. 1 SEM images of the collagen fibrils. A, Type I collagen only; B, Type I collagen plus
cisplatin（DMSO）．Scale bar = 2 µm.

Fig. 2

CD spectrum of cisplatin（DMSO）-bound type I collagen.

− 101 −

コスメトロジー研究報告 Vol.22, 2014

3 . 3 コ ラ ー ゲ ンとcisplatin（DMSO）と の 結 合 の
stoichiometry

るために cisplatin（DMSO）と相互作用するアミノ酸を調

コラーゲン１分子に結合する cisplatin（＝ Pt）の数を定

らせんペプチドを合成した（Table 1）。合成したペプチド量した。Ⅰ型コラーゲンと cisplatin（DMSO）を溶液内でが ３ 重 ら せ ん 構 造 を 保 持 で き る よ う に、Gly-Pro-Hyp

べた。そのために用いるツールとして、コラーゲン様３重相互作用させ、限外濾過により遊離の cisplatin を分離した。 （Hyp= 4 -hydroxyproline）繰り返しをホスト配列として用遊離の cisplatin を原子吸光測定により定量し、仕込んだい、プラチナ原子に対して配位能を有する側鎖を持つアミcisplatin 量から差し引くことにより、コラーゲンに結合しノ酸（Met, His, Ser, Thr, Glu, Asp, Lys, Arg）をそれぞれている cisplatin の数を見積もった。その結果、未変性コラ

ホスト配列ではさんだ。これらペプチドが 37℃で、３重ーゲン１分子に対して cisplatin は約３〜４個結合しうるもらせん構造をとっていることは CD スペクトル測定によりのと見積もられた（Fig. 3）。一方、熱変性させたコラーゲ

確認した。

ン（ゼラチン）を用いた場合には、明確な結合飽和曲線をペプチドと cisplatin（DMSO）を中性バッファー内でプ描かず、非特異的吸着が示唆された。これにより、コラー

レ イ ン キ ュ ベ ー ト し た 後 に コ ラ ー ゲ ン 溶 液 と 混 合 し、ゲンが３重らせん構造を取ることによって特異的な結合部

cisplatin（DMSO）のコラーゲン細線維形成阻害効果を実位がコラーゲン上に生じ、そこに cisplatin（DMSO）が結験 2 . 2 に示した方法によって調べた。このアッセイで、合合するものと考えられた。

成したペプチド自身がコラーゲンの細線維形成に影響を及
ぼさないことは別途確認した。Fig. 4 に示すように、Met

3 . 4 コラーゲン上におけるcisplatin（DMSO）結合部
位の推定及び His を含んだペプチド pep-H、pep-M の共存によって、

次に、cisplatin のコラーゲン上の特定結合部位を推定すわかった。これは、cisplatin（DMSO）が３重らせんペプ

cisplatin（DMSO）の線維形成阻害効果が減弱することがTable 1 Collagen-like peptides tested for the cisplatin（DMSO）- binding.

Fig. 3 Binding of platinum to native and denatured type I
collagen.

Fig. 4 Identification of amino acids responsible for the cisplatin（DMSO）- binding.

− 102 −

コラーゲンの線維形成を調節するプラチナ錯体に関する研究

チド上のペプチドに含まれた Met 及び His に結合し、コラ

NH 3 の２つが DMSO に置換した２置換体錯体が生成する

ーゲンと結合することができなくなったためであると考えことがわかった。

られる。この結果から、コラーゲン上の cisplatin（DMSO）

Cisplatin の構造異性体であるtransplatin、そしてcisplatin と結合部位には Met あるいは His 残基が含まれるものと推定

同 様 に プ ラ チ ナ 系 抗 が ん 剤 で あ る carboplatin とされた。

oxaliplatin（Fig. 6 ）の DMSO 溶液および水溶液について
もコラーゲン細線維形成阻害効果を有するかを、同様の方

3.5

Cisplatin（DMSO）に含まれる活性本体の推定法によって調べた。その結果、transplatin の DMSO 溶液

Cisplatin と DMSO との反応による生成物を調べるため

のみが、cisplatin（DMSO）と同程度の阻害効果を有するに、cisplatin（DMSO）を ESI-TOF MS によって分析した。

ことがわかった（Table 2 ）。次に cisplatin と同様に、化合その結果、m/z = 257 , 288 , 307 , 343 , 367 , 403 の６つのピ

物 の DMSO 溶 液 を ESI-MS に よ り 分 析 し た。 そ の 結 果、ークが検出された（Fig. 5）。解析の結果、m/z = 288 , 307 ,Fig. 5 に 示 し た 構 造 と 推 定 さ れ る ピ ー ク が 検 出 さ れ た

343 , 367 , 403 それぞれのピークは、［Pt（NH 3）（DMSO）］， （data not shown）。この結果より、阻害能を持つ cisplatin［Pt（NH 3）］，［Pt（NH 3）（DMSO）］+，［Pt
2（DMSO）
2（Cl）と transplatin の DMSO 溶 液 に は 共 通 し て Cl − の 1 つ が+（NH 3）（DMSO），［Pt（NH 3）（Cl）（DMSO）
2］2］ に相当した。

DMSO に 置 換 し た 錯 体 が 検 出 さ れ た。 こ の 結 果 よ り、

今回得られた MS の結果は以前報告されたものと同様であDMSO の １ 置 換 体 で あ る［Pt（NH 3）（Cl）（DMSO）］+ が2

13）

った 。これにより、cisplatin は DMSO と反応すると少活性本体の候補として考えられた。

なくとも、Cl − が DMSO に置換した１置換錯体と、Cl − とFig. 5

ESI-MS analysis of cisplatin after incubation in DMSO.

Table 2 Inhibitory activity of platinum-containing cancer drugs
against collagen-fibril formation.

Fig. 6Structures of platinum-containing anticancer drugs.

− 103 −

コスメトロジー研究報告 Vol.22, 2014

3 . 6 HUVEC が分 泌するコラーゲン細線 維に対するcisplatin（DMSO）の影響を 知 る た め に、cisplatin（DMSO）が 含 ま れ た 培 地 で

培 養 細 胞 が 分 泌 す る コ ラ ー ゲ ン に 対 す る cisplatin

画分および培地の３種類に関して Western Blotting を行（DMSO）の 細 線 維 形 成 阻 害 効 果 の 作 用 を 評 価 し た。

い、コラーゲンの含有量を評価した（Fig. 8）。その結果、

Cisplatin（DMSO）を含んだ培地で HUVEC を培養し、細cisplatin（DMSO）を添加した場合と添加していない場合

胞外のコラーゲンを免疫染色した後に共焦点顕微鏡にて観における cell layer の可溶性画分、不溶性画分および培地察を行った。その結果、層状に蓄積したコラーゲン線維がに含まれるコラーゲン量はほぼ変わらないことが示された。

染 色 さ れ て い る コ ン ト ロ ー ル（Fig. 7 A）と 比 較 し て、したがって、cisplatin（DMSO）のコラーゲン細線維形成

cisplatin（DMSO）を作用させた場合、細胞付近に細い線

阻害効果は、細胞のコラーゲン産生阻害によるものではな

維が凝集し、ドット型の染色が見られた（Fig. 7 B）
。つまく、分泌後の細線維形成阻害によることが明らかになった。

HUVEC を３日間培養し、cell layer の可溶性画分、不溶性

り細胞が分泌したコラーゲン分子に cisplatin（DMSO）が作用することで、正常なコラーゲン細線維形成が阻害されたと考えられる。

3.8

Cisplatin（DMSO）の細胞毒性

Cisplatin（DMSO）の細胞毒性を調べるために、HeLa細胞を cisplatin（DMSO）および生理食塩水に溶解した

3 . 7 培 養 細 胞 のタンパク質 産 生に 対 するcisplatin（DMSO）の影響

cisplatin を含んだ培地で 48 時間培養し、細胞の生存率を

3 . 6 で示した cisplatin（DMSO）による細線維形成阻害

存的な細胞毒性が、cisplatin（DMSO）では大幅に低くなっ効果が細胞によるコラーゲン産生阻害によるものかどうかていることが示された（Fig . 9）。Cisplatin の DMSO 溶液測定した。その結果、cisplatin（saline）に見られる濃度依

Fig. 7 Confocal microscopic images of collagen fibrils secreted by HUVEC. A,
control; B, treated with 100 µM cisplatin（DMSO）．Scale bar = 30 µm

Fig. 9Fig. 8 Collagen production by HUVEC is
not inhibited by the treatment with cisplatin（DMSO）．

Cytotoxicity of cisplatin（saline）and cisplatin（DMSO）to HeLa cells.

− 104 −

コラーゲンの線維形成を調節するプラチナ錯体に関する研究の細胞毒性が減少する例は以前に報告されているが 13 − 15）、

J.Cell Sci., 108 , 985 - 1002 , 1995 .

本実験では無血清培地を用いることにより、血清に含まれ６）Serra R, Crowley MR,: Mouse models of transforming

るアルブミン等のタンパク質への cisplatin の非特異的な結growth factor beta impact in breast development and合の可能性を排除した条件で行ったため、より正確な

cancer, Endocr.Relat.Cancer, 12 , 749 - 760 , 2005 .

cisplatin（DMSO）の細胞毒性についての結果を得ること

７）Rhett JM, Ghatnekar GS, Palatinus JA, O’
Quinn

ができたものと考えられる。以上の実験結果より、cisplatin

M, Yost MJ, Gourdie RG,: Novel therapies for scar

は DMSO に 溶 解 す る こ と で DMSO と 反 応 し、 低 毒 性 のreduction and regenerative healing of skin wounds,

cisplatin 誘導体を生成することが推定された。

Trends Biotechnol., 26 , 173 - 180 , 2008 .

４．総８）Riley DJ, Berg RA, Edelman NH, Prockop DJ,:

括Prevention of collagen deposition following pulmonary

In vitroでのランダムスクリーニングから得られたcisplatin（DMSO）は、コラーゲンの細線維化を培養細胞レベルでoxygen toxicity in the rat by cis- 4 -hydroxy-L-proline,
J.Clin.Invest., 65 , 643 - 651 , 1980 .

抑 制 す る こ と が 明 ら か に な っ た。 そ の 活 性 発 現 に は９）Chang K, Uitto J, Rowold EA, Grant GA, Kilo

DMSO がプラチナ原子に配位していることが必須であっ

C, Williamson JR,: Increased collagen cross-

た。また、この誘導体化によって cisplatin の細胞毒性がほlinkages in experimental diabetes: reversal by beta-と ん ど 消 失 し た。 デ ー タ は 示 さ な か っ た が、cisplatinaminopropionitrile and D-penicillamine, Diabetes, 29 ,（DMSO）は、コラーゲンだけでなく他のタンパク質にも778 - 781 , 1980 .

作用するとの知見を得ており、このままのかたちで個体に10）G r a y R E , S e n g N , M a c k a y I R , R o w l e y M J , :応用することは困難であると予想される。一方、cisplatin

Mesurement of antibodies to collagen II by inhibition（DMSO）がコラーゲン３重らせん上の特異なアミノ酸配of collagen fibril formation in vitro, J. Immunological

列部位に結合することから、本プラチナ錯体は、コラーゲ

Methods, 285 , 55 - 61 , 2004 .

ン細線維化過程における分子間での相互認識の機構を研究

11）Okano-Kosugi H, Matsushita O, Asada S, Herr
AB, Kitagawa K, Koide T,: Development of a high-

する上で有用なツールになるものと考えられる。

throughput screening system for the compounds
謝辞that inhibit collagen-protein interactions, Analytical

本研究に協力いただいた全田未悠氏、大石真也博士、安Biochemistry, 394 , 125 - 131 , 2009 .
12）Feng Y, Melacini G, Taulane JP, Goodman M,: Acetyl-

井裕之博士に感謝します。

terminated and template-assembled collagen-based（引用文献）

polypeptides composed of Gly-Pro-Hyp sequences. 2 .

１）Fertala A, Prockop DJ,: Inhibition of the self-assemblyof collagen I into fibrils with synthetic peptides, J.Biol.

J.Am.Chem.Soc., 118 , 10351 - 10358 , 1996 .
13）Fischer SJ, Benson LM, Fauq A, Naylor S, Windebank
AJ,:Cisplatin and dimethyl sulfoxide react to form an

Chem., 273 , 15598 - 15604 , 1998 .
２）Orgel JPRO, Irving TC, Miller A, Wess TJ,:
Microfibrillar structure of typeI collagen in situ, Proc.

adducted compound with reduced cytotoxicity andneurotoxicity, Neurotoxicology, 29 , 444 - 452 , 2008 .
14）Garrone O, Rosso R, Dini D,: Topical dimethylsulfoxide

Natl.Acad.Sci.U.S.A., 103 , 9001 - 9005 , 2006 .
３）Chung HJ, Steplewski A, Chung KY, Uitto J, Fertalafor the prevention of soft tissue injury afterA, : Collagen Fibril Formation, J.Biol.Chem., 283 , 25879 -extravasation of vesicant cytotoxic drug : A prospective

25886 , 2008 .

clinical study. J. Clinical Oncology 13 : 2851 - 2855 , 1995 .

４）Kunii S, Morimoto K, Nagai K, Saito T, Sato K,

15）Dernell WS, Straw RC, Withrow SJ, Powers BE, Fujita

Tonomura B,: Actinidain-hydrolyzed type I collagen

SM, Yewey GS, Joseph KF, Dunn RL, Whitman SL,

reveals a crucial amino acid sequence in fibril formation,

Southard GL,: Apparent interaction of dimethylsulfoxide

J.Biol.Chem., 285 , 17465 - 17470 , 2010 .

with cisplatin released from polymer delivery devices５）Shah M, Foreman DM, Ferguson MW,: Neutralisationof TGF-beta 1 and TGF-beta 2 or exogenous addition of

injected subcutaneously in dogs. J. Drug Targeting
5 : 391 - 396 , 1998 .

TGF-beta 3 to cutaneous rat wounds reduces scarring,− 105 −