ごあいさつ

本年は 20 世紀最後の年であり、当財団としましても設立 10 周年という記
念すべき年にあたります。この間に 622 件の応募があり、その内 170 件の研究課題に対し研究助成を行うことができました。バブル崩壊・低金利政策による財政上の試練もありました中で、このように多くの優れた研究を世に送り出せましたことは、ひとえに関係各位のご支援ご協力の賜と感謝を申し上げる次第でございます。
最近では、ヒトゲノムの塩基配列は 90％以上が解析されたといわれ、再生医療や臓器移植への期待が高いヒトＥＳ細胞の研究が倫理上の問題として論議されています。このように 20 世紀は機能性素材、電子情報工学の進歩と共にバイオテクノロジー進化の時代であったといえるのではないでしょうか。そして 21 世紀は人の成分設計の解明からその作用機序や心・意志の本
質解明へと踏み込む脳科学発展の時代になるであろうと予測されます。
化粧品学も従来は素材・薬剤の発展にともなう身体の美化・健康化とともに心の健康、満足を一貫して追求してきましたが、これから始まる 21 世紀
は心へのアプローチに必要な科学的基盤が整備される時代となることが想定されます。そして、心の解明には自然科学だけではなく、人文・社会科学との文理融合的なアプローチが必要であろうと思われます。このような時代の趨勢を念頭におきながら化粧品学の発展を目指して、幅広い研究課題への助成活動に向けてより一層の努力を続けていきたいと考えております。
今後とも、皆様方の益々のご協力とご支援をお願い申し上げます。
平成 12 年８月
財団法人

コスメトロジー研究振興財団
理事長

小林

礼次郎

目

次

■ ごあいさつ■研究報告
Ⅰ．素材、物性に関する分野
・ 微粒子酸化チタンに形成された多鎖型界面活性剤吸着層への紫外線吸収剤の吸着可溶化…………… 2江 角

東京理科大学理学部

邦男

・ 脂質エマルション表面単分子膜とリポソーム表面２分子膜の示す顕著なバイオ機能の差異——血漿アポリポ蛋白質の認識について——

半 田

京都大学大学院薬学研究科
・ 凝集性蛋白質溶液のゲル化現象の解明……………7

哲郎………………………………………………………………………13

柴 山

京都工芸繊維大学繊維学部
・ 化粧品による皮膚かぶれを防ぐ菌類成分の探索

充弘……………………………………………………………17

藤 本

千葉大学薬学部
・ DNA 複製開始タンパク質（DnaA）の活性発現と相分離した混合二分子膜の関連性……………………24

石 川

九州大学有機化学基礎研究センター
・発光、電子分光スペクトルによる酸化亜鉛中の表面・欠陥の状態解析と発光特性制御
東京工業大学大学院理工学研究科

治宏
雄一…………………29

大 橋直樹

Ⅱ．生体作用、安全性に関する分野
・ 新規蛍光プローブを用いた一酸化窒素（NO）の生細胞における作用解析………………………………36

東京大学大学院薬学系研究科
・ 老化による皮膚色素沈着の画像定量自動解析システム確立のための基礎研究

和也…………………………43

慶應義塾大学医学部
・ 紫外線吸収効果をもつ酸化チタンの光触媒作用と生体適合性

菊 地
田 中

勝

……………………………………………48

東京理科大学基礎工学部

鈴 木

高広

・ 皮膚の老化に伴うテロメア短縮化とフリーラジカル障害に対する、細胞内アスコルビン酸のエンリッチング化による防御効果……………………53

広島県立大学生物資源学部 三 羽 信比古・ 老化抑制遺伝子 klotho の結合織細胞老化における病態生理学的意義の解明と治療法開発への応用 ……59
東京大学医学部・ 紫外線による Ret チロシンキナーゼ活性化のメカニズム

永 井

良三

…………………………………………………64
名古屋大学医学部

・ 太陽光紫外線変異原性の作用スペクトラムとサンスクリーンの効果

加 藤

昌志

……………………………………70

岡山大学薬学部

根 岸

友惠

目

次

・ ヒト毛細胞特異的ペプチジルアルギニンデイミナーゼの
cDNA クローニングと毛髪新生における生理機能の解析……………………78

近畿大学医学部 川 田・ 美白剤の紫外線色素沈着制御機構とその安全性に関する研究

暁……………………………………………82
神戸大学医学部 船 坂

陽子

Ⅲ．精神、文化に関する分野
・ シルバーファッションショー出演者の被服に関する意識…………………………………………………88

京都大学大学院教育学研究科 西 尾・ 健康な笑いづくりの方法について

新……………………………………………………………………………93
福岡大学人文学部 髙下・ 環境芳香の与える心理的影響に関する研究

保幸…………………………………………………………………98
早稲田大学国際情報通信研究センター 河 合

隆史

■記念講演
平成 11 年度記念講演 『紫外線とコスメトロジー』 …………………………………………………………107
京都大学大学院医学研究科 宮 地■コスメトロジー研究雑感■ 付良樹………………………………………………………………………………………………117

録
平成 11 年度事業報告
役員一覧……………………………………………………………………………………………131……………………………………………………………………………………………………………137

研究助成課題一覧…………………………………………………………………………………………………138

微粒子酸化チタンに形成された多鎖型界面活性剤吸着層への紫外線吸収剤の吸着可溶化
東京理科大学

江

角

理学部

邦

男

When surfactants are adsorbed on particles, micelle-like surfactants are often formed on particles, which are called admicelles.
Admicelles exhibit an incorporation of hydrophobic compounds as well as micelles. This incorporation has been referred toadsolubilization. The objective of this work was to investigate adsolubilization of 4-tertbutyl-4'-methoxydibenzoylmethan (Parsol)
into surfactant adsorbed layer on titanium dioxide. The surfactants used were single-chained, double-chained, and gemini
cationic surfactants. At first, since Parsol was not soluble in water, solubilization behavior of Parsol into cationic surfactants wascharacterized. It was found that the solubilized amount of Parsol increased with the surfactant concentration where the doublechained surfactants provided higher solubilized amount compared with the others.
Adsolubilization experiments were conducted as a function of feed concentration of Parsol under a constant surfactant
concentration. The constant surfactant concentrations were above the cmcs of the respective surfactants. The adsolubilized
amount of Parsol increased with increasing feed concentration of Parsol; the order of the adsolubilized amount by the surfactant
was double-chained > single-chained > gemini surfactant. From the admicellar partitioning coefficients of Parsol it was foundthat Parsol was preferencially adsolubilized into the single-chained and double-chained surfactants compared to that of gemini
surfactants. In addition, the surfactants having bromide as counter ion showed greater admicellar partitioning coefficients thanthose having chloride as counter ion.

１

緒

言

２

オゾン層の破壊にともない紫外線がますます人間に照射

２. １

試

実

験

料

される機会が増し、特に人間の肌への害は近年深刻化して実験に用いた界面活性剤は２種類の一鎖型、２種類のジいる。もちろん肌への影響を防ぐために紫外線吸収剤や散ェミニ型、２種類の二鎖型陽イオン性界面活性剤でそれら乱剤などを含む化粧品が盛んに利用されている。一般に散の構造を図１に示す。ジェミニ型の界面活性剤は合成した乱剤として酸化チタン、酸化亜鉛などが用いられている。

ものであり７）、他の界面活性剤は市販品を用いた。

われわれは以前から微粒子と界面活性剤の相互作用に関する研究を行ってきた。微粒子に界面活性剤を吸着させる

紫 外 線 吸 収 剤としては日本ロシュ㈱ 製の 4tertbutyl—4'—
methoxydibenzoylmethan（Parsol 1789）を用いた。

と二層吸着層がしばしば形成される。その吸着層の環境は微粒子酸化チタンは石原産業製のルチル型であり、比表

プローブなどで測定すると疎水性を示す。その結果、水に面積は 53 . 3 m 2 g −１であった。水はミリポアで精製したも溶けにくい化合物が界面活性剤の吸着層に取り込まれるよのを使った。他の薬品は特級のものを用いた。

うになる。この現象は吸着可溶化と呼ばれている１）。今ま
でに吸着可溶化の研究に用いられてきた化合物に芳香族化

２. ２

ロイド

３）

４）

方法と実験

先ず Parsol の界面活性剤溶液中への飽和可溶化量を測

合物 、モノマー 、油溶性染料 、アルコール 、ステ２）

５）定した。界面活性剤水溶液 10 mL に Parsol をスパチュラなどがある。

６）

本研究では微粒子酸化チタン表面に多鎖型を含む界面活

１杯分程度加え、20 分間超音波分散器で処理し、25℃

性剤の吸着層を構築し、かつその吸着層への紫外線吸収剤

で 48 時間振盪し、Parsol の可溶化平衡を得た。可溶化さの吸着可溶化挙動を検討することを目的とした。このようれない Parsol をフィルターで濾過し、採取した溶液中のな基礎研究は安全かつ効率の良い紫外線吸収剤の開発のたParsol 濃度を 360 nm での吸光度から求めた。吸光度の測めの知見を与えると考えられる。

定には Hewlett Packard 社製 8452 A Diode Array 分光計を用いた。
吸着可溶化実験は次のように行った。各界面活性剤溶液

Adsolubilization of an UV absorbent
into Multi-chained Surfactant Adsorbed
Layer on Titanium Dioxide

中での飽和可溶化量の知見から界面活性剤の濃度を固定

Kunio Esumi

液 10 mL に酸化チタン 0 . 1 g を加え、25℃で 24 時間振盪しFaculty of Science, Department ofApplied Chemistry,   Science Universityof Tokyo

吸着可溶化平衡を得た。遠心分離後、フィルターで濾過し、し Parsol の可溶化濃度の異なる溶液を調製する。この溶得られた溶液中の Parsol 濃度を分光計より求めた。また、溶液中の界面活性剤の濃度は東ソー㈱社製高速液体クロマ−2−微粒子酸化チタンに形成された多鎖型界面活性剤吸着層への紫外線吸収剤の吸着可溶化

トグラフィーを用いて決定した。
Parsol の溶解性を高めるために水に 10％のエタノールを加えた系についても上と同様な実験を行った。

３
３. １

結果および考察

Parsol の可溶化挙動

Parsol はほとんど水に溶けないので吸着可溶化実験の前に先ず種々の界面活性剤溶液での可溶化挙動について調べた。それらの結果を図２〜４に示す。Parsol の可溶化量は界面活性剤のある濃度から急激に増加していることがわかる。この濃度は臨界ミセル濃度に対応する。図２に示す DTAB での可溶化量は DTAC に比べて大きくなっている。この傾向はエタノール添加系でより明確になっている。
一般にイオン性界面活性剤のミセルの大きさならびに会合
数は対イオンのミセルへの固定度に大きく依存しており、−Fig.2 Solubilized amount of Parsol with DTAB and DTAC.

−

Br は Cl に比べて固定されやすい。したがって DTAB ミ
セルの会合数は DTAC に比べて大きくなり、その可溶化量も増えることになる。また、エタノール添加の効果は二つ考えられ、ひとつは界面活性剤ミセルとの混合ミセルの形成を促進させることである。もうひとつは界面活性剤の溶解性を高めるために界面活性剤ミセルの形成を妨げることである。図２からエタノール添加により DTAB ミセルの可溶化は高められるが DTAC ミセルではほとんど影響ないことがわかる。図３、４においても同様な対イオンの効果が Parsol の可溶化挙動にみられる。また、界面活性剤の可溶化能（界面活性剤一分子当たりに可溶化される分子数）は図から二鎖型

＞

一鎖型

＞

ジェミニ型とな

Fig.3 Solubilized amount of Parsol with 2RenQ Br and
2RenQ Cl.

Fig.1

Fig.4 Solubilized amount of Parsol with DODAB and
DODAC.

Surfactant structures used in this study.

−3−

ることがわかる。特に、二鎖型界面活性剤の場合、それらの臨界ミセル濃度は非常に低く、水中ではベシクルとして存在していると考えられている。ベシクルは疎水性環境の占める割合が大きいので可溶化能も大きくなることが当然示唆される。

３. ２

界面活性剤の吸着等温式

まず、Parsol の吸着可溶化挙動を調べる前に用いた界面活性剤の二酸化チタンへの吸着等温線を作成した。その結果を図５〜７に示す。どの吸着等温線でも界面活性剤濃度の増加に伴い吸着量も増え、高い濃度で飽和に達する。また、二鎖型やジェミニ型に比べ一鎖型の界面活性剤の吸着量が大きくなるのがわかる。これは分子の大きさに依存していることが考えられる。さらに、エタノールを添加すると界面活性剤の吸着量は増加する。これは界面活性剤吸着

Fig.5

Adsorption isotherms of DTAB and DTAC an TiO2.

分子同士の反発を吸着するエタノール分子によって弱められてためと推定される。

３.３ Parsolの吸着可溶化
前に述べたように Parsol は難水溶性であるから吸着可
溶化実験での平衡状態では Parsol 分子は吸着可溶化される分子と可溶化される分子に分配される。したがって界面活性剤溶液の濃度は臨界ミセル濃度以上が必要となる。 こ の 実 験 に お い て DTAB（30 mmoldm 3）、DTAC（40 mmoldm 3）、2 RenQBr（3 mmoldm- 3）、2 RenQCl（9 mmol
、DODAB（8 mmol dm- 3）、DODAC（6 mmol dm- 3）
dm- 3）とした。図８〜 10 に吸着可溶化の結果を示す。全ての吸着可溶化において仕込みの Parsol 濃度の増加にともない吸着可溶化量も増加している。図８の DTAB、DTAC の場合、エタノール添加により Parsol の吸着可溶化量は増加する。一方、図９からジェミニ型ではエタノール添加に

Fig.6

Adsorption isotherms of 2RenQ Cl on TiO2.

よる効果はあまりみられない。エタノールを含む系では酸化チタン表面で界面活性剤、エタノール、Parsol 分子との複雑な相互作用が考えられる。二鎖型である DODAB、DODAC では吸着可溶化量は他の界面活性剤に比べてかな
り大きくなるがこれは仕込みの Parsol 濃度が高いためとも考えられる。
種々の界面活性剤を用いて吸着可溶化挙動を比較するために次のようなアドミセル分配係数（Kadm）を定義する８）。
Kadm ＝Xadm/Xaq
Xadm＝ Cadm/（Cadm + Sads）
Xaq ＝ Ceq/（Ceq + 55.55）
ここで C adm と C eq は難水溶性物の吸着可溶化量と平衡濃度である。S ads は界面活性剤の吸着量である。また、55 . 55
は 1 L の水のモル数である。この分配係数を求めるために
C adm、C eq、S ads が必要となる。すでに C adm と C eq は既知であるが S ads を決定しなければならない。界面活性剤濃度がFig.7 Adsorption isotherms of DODAB and DODAC on TiO2.

−4−

微粒子酸化チタンに形成された多鎖型界面活性剤吸着層への紫外線吸収剤の吸着可溶化

臨界ミセル濃度よりかなり高い場合の吸着量の測定に置いて吸着前後での界面活性剤濃度の差から求めることは非常に困難である。一般に臨界ミセル濃度以上では界面活性剤の吸着量は飽和になると考えられるので S ads は臨界ミセル
濃 度 前 後 で の 値 を 採 用 し た。 図 11 〜 12 に DTAB、
DTAC、2 RenQBr、2 RenQCl ならびに DODAB,DODAC
による Parsol のアドミセル分配係数を仕込みの Parsol 濃度の関数として示す。図 11 から明らかなように Parsol 分子は酸化チタン粒子表面に形成された DTAC 吸着層よりも DTAB 吸着層の方に吸着可溶化されやすいことがわかる。また、ジェミニ型では一鎖型界面活性剤に比べてアドFig.8 Adsolubilized amount of Parsol with DTAB andDTAC on TiO2.

Fig.9 Adsolubilized amount of Parsol with 2RenQ Br and
2RenQ Cl on TiO2.

Fig.11 Admicellar partitioning coefficient of Parsol with
DTAB, DTAC, 2RenQ Br and 2RenQ Cl.

Fig.10 Adsolubilized amount of Parsol with DODAB and
DODAC on TiO2.

−5−

Fig.12 Admicellar partitioning coefficient of Parsol with
DODAB and DODAC.

ミセル分配係数は小さい。図 12 の DODAB、DODAC でのadsorbed Bilayer Formed on the Surface of Inorganic
Pigments, Bull. Chem. Soc. Jpn., 59, 3019-3021 (1986 ).

アドミセル分配係数はあまり変わらないがその値は大きい。

４

総４）K.Esumi, Y. Sakamoto, T. Nagahama, K. Meguro:括Adsolubilization Behavior of Dyes Caused by Mixed

以上、本研究では紫外線散乱剤である酸化チタン粒子表

Surfactant Bilayers Formed on Alumina, Bull. Chem. Soc.

面に形成される界面活性剤吸着層への Parsol の取り込み

Jpn. 62, 2502-2506 (1989 ).

挙動（吸着可溶化）について検討した。その結果、Parsol

５）C. Lee, M. A. Yeskie, J. H. Harwell, E. A. O'Rear:   

の吸着可溶化は界面活性剤の構造に大きく影響することがTwo-Site Adsolubilization Model of Incorporation of Alcohols

あきらかになった。酸化チタンの表面に種々の官能基を付

into Adsorbed Surfactant Aggregates, Langmuir, 6, 1758-

与できるので表面処理した後の吸着可溶化の研究は今後の1762 (1990 ).

課題となるであろう。

６）J. Jansen, C. Treiner, C. Vantion: Coadsorptionof Steroids and Nonionic Surfactants on Polystyrene Latex（参考文献）

Particles from Aqueous Solutions, J. Colloid Interface Sci.

１）江角邦男 : 微粒子表面に形成される界面活性剤の吸着層の特性

179, 578-586 (1996 ).

とその利用、色材、70, 675-685 (1997 ).

７）K. Esumi, K. Taguma, Y. Koide: Aqueous Properties of２）K. Esumi, S. Uda, M. Goino, K. Ishiduki, T. Suhara, H.

Multichain Quaternary Cationic Surfactants, Langmuir,

Fukui, Y. Koide: Adsorption of Cationic Surfactants on

12,4039- 4041(1996 ).

Titanium Dioxide with a Hydrophobic Group Anchor and８）K. E sumi, H. Toyoda , M. G o ino, T. Suha ra , H.

Their Adsolubilization Behaviors, Langmuir, 13, 2803-2807

Fukui:Adsorption of Sodium Dodecyl Sulf ate and(1997 ).

2-Naphthol Adsolubilization on Titanium Dioxide with

３）K. Meguro, T. Yabe, S. Ishioka, K. Kato, K.Esumi:
Polymerization of Styrene Adsolubiloized in a Surfactant-−6−

Quaternary Ammonium Groups, Langmuir, 14, 199-203(1998 ).

脂質エマルション表面単分子膜とリポソーム表面２分子膜の示す顕著なバイオ機能の差異 ── 血漿アポリポ蛋白質の認識について──
京都大学大学院

薬学研究科

半

哲

田

郎

Triacylglyceride (TG)/phosphatidylcholine (PC) -emulsions and PC-vesicles are protein-free models for TG-rich plasma
lipoproteins and biological membranes, respectively. Both have been utilized for drug delivery systems. We have found that
PC monolayers of emulsion particles and PC bilayers of vesicles have different interfacial properties and metabolic fates inanimal plasma. In this study, plasma apolipoprotein binding to emulsion and vesicle particles are studied in terms of interaction
between amphiphilic helices of apolipoproteins and surface PC layers of the lipid particles, and the physiological relevance ofthe results is discussed. Binding amounts of apoC-2 and apoE to PC/TG-emulsions were about 10 times larger than those to
PC-vesicles in plasma. Accordingly, the plasma-clearance of emulsions through apoE receptors was more rapid than vesicles
in rat. The maximum binding amount of the isolated apoA-1 was 4 times larger for emulsions than vesicles. Apolipoproteins
are thought to interact surface PC layers of lipid particles ,with the amphiphilic helices nestled between the PC head groups.
The different binding capacities between emulsions and vesicles are explained by the interaction of surface (PC) and core (TG)lipids. Although binding of apolipoproteins to surface PC layers may produce the packing defects, the penetration of TG into
the surface monolayers of emulsions could fill the packing defects, resulting the increased binding capacity.

１緒

シクル粒子への血漿アポリポ蛋白質選択的結合のメカニズ

言ムを考察する。特に、脂質表面膜の両親媒性構造とアポリ

トリグリセライド—rich な血漿リポ蛋白質、カイロミク

ポ蛋白質のヘリックスの両親媒性構造の適合性、表面膜のロン（Chylomicrons）や VLDL は脂質エマルションを基

水和など、アポリポ蛋白質の選択制や活性化に重要な因子

本構造としている。その代謝過程で種々の可溶性のアポリについて議論する。なお、本研究では、エマルションやベ

ポ蛋白質の結合が変化し、これがトリグリセライドの分シクル粒子径を一定（約 100nm）に保って比較した。

解（リポリシス）やレセプターを経由した細胞取り込みを２調製すると考えられる１）。アポリポ蛋白質の脂質表面膜に実験

エマルションとリポソームの調製

対する親和性は、リポ蛋白質のみならず人工のエマルショ

エマルションのコ

ンの体内動態にも重要である。我々は、リポ蛋白質の代謝

アを形成する中性脂質トリグリセライド（triolein, TO or

過程での脂質組成の変化が可溶性アポリポ蛋白質との親和TG）、またはコレステリルオレート（CO）を、エマルショ

性を変化させ、その代謝を制御すると位置づけている。実ン表面単分子膜を構成する卵黄レシチン（PC）、あるいは際、エマルションを利用して、一部これを証明してきた

これとコレステロール（Chol）の混合物を（乳化剤として）

２〜６）。２分子膜（リポソーム or ベシクル vesicles）とレシ

用い、粒子径約 100nm のエマルションを調製した（高圧乳

チン単分子膜（エマルション emulsions）は、それぞれ生化機：800 〜 1300 気圧）。共存するリポソームは超遠心法

体膜と動物血漿リポ蛋白質の蛋白質フリーモデルと考えらで取り除いた２）。リポソームは、PC あるいは PC—Chol 混れる（Fig. １参照）。単分子膜（monolayers）と２分子膜合物を水溶液に分散し、これを 100nm のポアを持つポリカ（bilayers）では、血漿アポリポ蛋白質 apoA—1、ApoC—II、ーボネート膜に押し出して調製した（Extrusion method）２）。

および apoE の結合性に著しい差異があり、これに応じて膜流動性の評価 エマルションのコアは蛍光プローブ 1,6

動物血漿中での代謝が変化する。また、膜へのコレステロ—diphenylhexatriene（DPH）で、表面 PC 膜はそのカチオールの添加も、apoA—1 の結合に対し単分子膜と２分子膜

ン性誘導体 TMADPH あるいはリン脂質誘導体 DPHpPC

では逆方向の効果を示す。これらの結果に、脂質粒子の表で、それぞれ標識し、蛍光異方性を測定して流動性を評価

面膜とコアの物理化学的研究をあわせ、エマルションとベした。また、ナノ秒時間分割蛍光異方性の測定も行った２、３）。
膜中の Chol の位置 蛍光性の Chol アナログ dehydro-

Distinct Plasma ApolipoproteinInteractions   with Emulsion Monolayers
and Vesicle Bilayers

ergosterol（DHE）で Chol の一部を置き換え、水溶性の NaI

Tetsurou Handa

Chol のロケーション（メヂウムへの露出度）を評価した３）。

Graduate School of Pharmaceutical
Sciences, Kyoto University

で蛍光を消光し、これを解析して単分子膜と２分子膜中のアポリポ蛋白質の結合性

ヒト serum 中の apoC—II とapoE のエマルションとリポソームに対する（飽和）結合量を、１次元免疫拡散法によるアポリポ蛋白質定プレート−7−

Fig. １

TO-PC emulsions（PC momolayers）and PC liposomes（PC bilayers）

Fig. ２

apoC-II and apoE binding to emulsions and vesicles in human serumを用いて測定した３、４）。単離した apoA—1 や apoE の結合晶の CO に置き換えると、apoC—II と ApoE の結合量が減

等温線は、脂質粒子を分離する前後のメヂウム中のフリー

少することも認められる。なお、ここで、apoC—II は血漿蛋白質を蛍光（tryptophan）分析して求めた５）。

リポ蛋白質（エマルション）コアの TG を加水分解する酵

ウイスター系ラット血中からの（蛍光脂質 cholesteryl

素 LPL の活性化因子（ペプチド）であり、apoE は、肝臓

1-pyrene decanoate で標識した）脂質粒子の肝臓取り込み

実質細胞の LDL やレムナント（remnant）レセプターのによる消失（クリアランス）は、粒子投与後の血中の蛍光

特異的リガンド蛋白質である３）。

脂質を追跡して評価した

３。

Fig. ３は、ラット血中に投与されたエマルションとベ

４、６）シクルが肝臓の取り込みにより血漿中から消失される様結果と考察子を示す。粒子径は 100nm と同じであるが、TO/PC—

Fig. ２は、TO/PC—、CO/PC—、TO—CO/PC—emulsions

emulsions ＞ TO—CO/PC—emulsions ＞ CO/PC—emulsionsと PC—liposomes（vesicles）に対する、apoC—II と apoE

＞ PC—vesicles の順に肝臓への移行が速い。この順序は、の serum 中での飽和結合量を示す。apoC—II と ApoE のFig. ２で示された apoE の結合性の順序と一致する７）。

結合量は、共にエマルション（PC 単分子膜）に比較してFig. ４は、エマルション表面 PC 単分子膜とコアの堅さ

ベシクル（PC ２分子膜）では 10 分の１以下に低下していを、蛍光異方性をより評価した結果である。TO を CO でる。また、エマルションのコアの脂質を液体の TO から液置き換えるとコアの蛍光異方（すなわち、堅さ）は高くな−8−

脂質エマルション表 単分子膜とリポソーム表 ２分子膜の示す顕著なバイオ機能の差異——
血漿アポリポ蛋白質の認識について——分子間に挿入されると考えられている。
Fig. ６に示すように、単離した apoA—1 もエマルションの PC 単分子膜の方が圧倒的に高い結合量を示した（右図）。また、
コアを液体の TO から液晶の CO の置き換えると、

５）

アポリポ蛋白質の結合量が減少した（左図）５）。アポリポ
蛋白質の粒子への結合は、表面 PC 単分子膜上のイベントである。コア脂質はどのように関与するのであろう？
Fig. ７に、アポリポ蛋白質と PC 膜の相互作用の模式図を示す。アポリポ蛋白質の脂質結合部位は両親媒性の α—
helix である。PC 分子の臨界充填パラメータは約１、自発的曲率はほぼ０である８）。また、脂質粒子は 100nm なので、粒子表面は分子レベルでは平面と見なせる。血漿アポリポ
蛋白質の両親媒性ヘリックスは、一般に、親水面が大き
Fig. ３

Clearance of emulsions and vesicles in rat blood

く親油面が小さい（親水性の高い）構造を持つので９）、表面膜に結合して＋の曲率（positive curvature）あるいは

るが、PC 表面単分子膜の堅さは一定である 。それでは、＋の曲げ（positive bending）をもたらす。この膜の曲げコアの組成によりアポリポ蛋白質の表面膜結合性や（Fig.

は、表面エネルギーを高め２）、蛋白質を脱着させる方向に

７）２）血中からの消失（Fig. ３）が変化するのはどのようなメカニズムによるのであろうか？

これを考察する前に、単離した apoA—1 のエマルションとベシクルへの結合性を見てみよう。
apoA—1 は、動物体内でコレステロールの代謝に重要な役割をはたしている。この蛋白質は Fig. ５に示されるよ
うに、７〜８本の両親媒性 α—ヘリックス（amphiphilic
helices）から構成されており、水中ではこれらのヘリック
スは球状蛋白質へと畳み込まれている。脂質粒子表面では、
apoA—1 の高次構造はほどけ、両親媒性ヘリックスは PC

Fig. ４

Fig. ５

Plasma apoA-1 in the unfolded state

Fluorescence anisotropy or rigidity of surface layer and core of emulsion particles−9−

Fig. ６

ApoA-1 binding to emulsion and vesicle particles作用する。エマルション（PC 単分子膜）はコアに中性脂質（親油性の TO）を有し、その表面膜への移動は−の曲げ（negative bending）を誘導し、蛋白結合による膜のフラストラションを緩和する。
コアを持たないベシクル（PC ２分子膜）では、このよ
うな曲げエネルギー低減効果は期待されない。また、エマ
ルションのコアを液体の TO から液晶の CO に置き換えると、中性脂質の表面膜への移動が抑制され表面フラストラ
ションの緩和も減弱する。
Fig. ８では、エマルションとベシクルへの apoA—1 の結合に対する Chol の効果を示す。TG—PC エマルション表面の PC 単分子膜へ Chol を 20mol％以上添加すると apoA—1の結合は減少する 。40mol％の Chol は蛋白結合量を半分５）Fig. ８Fig. ７ Interaction between amphiphilic helix of apolipoprotein and PC molecules at surface layer

Distinct effects of Chol on apoA-1 binding between emulsions and vesicles− 10 −

脂質エマルション表 単分子膜とリポソーム表 ２分子膜の示す顕著なバイオ機能の差異——
血漿アポリポ蛋白質の認識について——Fig. ９Chol in PC bilayrs and emulsion PC momolayersに減少する。一方、PC ベシクル２分子膜への Chol の添加は apoA—1 結合量を急増させる５）。40mol％の Chol は結合量を５倍にまで上昇させる。このように、エマルションとベシクルでは Chol の効果は逆転する。
Fig. ９で apoA—1 の結合に対する、エマルションとベ
シクルでの対照的な Chol の効果を考察しよう。エマル
ション表面の PC monolayers とベシクルの PC bilayers
中 の Chol の ご く 一 部 を、 蛍 光 性 の Chol ア ナ ロ グ、
dehydroergosterol（DHE）で置き換える。水溶性の蛍光
消光剤 NaI による膜中の DHE の消光実験の結果、DHE

Fig.10

ApoA-1 induced leakage of calcein out of vesicles（Chol）は PC bilayers では水溶液に接して存在するが（左下図）、PC monolayers では膜のより内側に取り込まれ、子膜からなる超分子構造（Fig. ７）の形成に Chol が重要

水溶性の消光剤に完全には曝されていない（右下図）こな役割をもっていると推定され、血漿中の Chol 代謝ともとがわかった 。ベシクルの PC ２分子膜はそれ自身のア関連して注目される。

３）

ポリポ蛋白質の結合容量は小さいが、自発的曲率が負の

４

Chol は−の曲げを表面に誘導し、蛋白質による膜の＋の曲げを相殺する。これにより、表面フラストラーションも４. １

緩和され、アポリポ蛋白質結合容量が増大すると考えられ

総括

エマルション表面の PC 単分子膜は、ベシクル２分子膜に比べアポリポ蛋白質の結合容量が大きい。TOる。

—PC エマルションは動物血中では PC ベシクルより速く

Fig.10 は、apoA—1 により誘起される蛍光色素 calceinのベシクル２分子膜からの漏出を示す。apoA—1 が外水（apoE レセプター経由で）肝に取り込まれる。
４. ２

エマルションコアの TO を CO に置き換えると、相にないとき、蛍光色素の漏れは認められない。動物血

アポリポ蛋白質の結合容量が低下し、動物血中での肝取漿中のフリー濃度に相当する 4μM apoA—1 により、PC

り込も遅延する。

vesicle bilayers から急速に大量の蛍光色素が漏出する。

４. ３

アポリポ蛋白質の PC 表面膜結合は膜に＋の曲げ

PC bilayers に 40mo％の Chol を添加するとこの漏出は大をもたらす。TO—PC エマルションでは TO がコアから幅に抑制される。一方、apoA—1 の結合量は、Chol 含有

表面膜へ移行して、表面膜に−の曲げを誘起しこれを打ベシクルのほうが PC のみのベシクルより５倍も大きい５）

ち消す。

（Fig. ８参照）。この結果より、アポロポ蛋白質と脂質２分

４. ４− 11 −

Chol は、アポリポ蛋白質の結合に関して、エマル

ション表面の PC 単分子膜とベシクル２分子膜で逆の効

Miyajima, J. Biol. Chem. 271 , 15515-15520（1996）

果を示す。PC ２分子膜では Chol は−の曲げを誘起して、

４）I. Arimoto et al., Lipid 33 , 773-779（1998）; I.

アポリポ蛋白質の誘起する + の曲げを打ち消す。PC 単

Arimoto, M. Fujita, H. Saito, T. Handa, K. Miyajima,

分子膜では Chol は膜とコアの境界に局在し、アポリポ

Colloid Polymer Sci. 275 ,   60-66（1997）

蛋白質の結合容量を低下させる。
４. ５

５）H. Saito, Y. Miyako, T. Handa, K. Miyajima, J. Lipid

また、エマルション表面にスフインゴミエリンを添加するとアポリポ蛋白質や TG を分解する LPL の結Res. 38 , 287-294（1997）６）T. Handa, Y. Eguchi, K. Miyajima, Pharm. Res.11 ,合性を低下し、その代謝に顕著に影響することも明らかになった。

1283-1287（1994）
７）Saito et al, J. Lipid Res , submitted.

10）８）A. Kabalnov et al., Langmuir, 12 , 276-292（1996）:（参考文献）

J. Colloid Interface Sci. 184 , 227-235（1996）１）例えば , A M. Gotto, Jr et al., Method Enzymol. 128 ,９）J. P. Segrest, D. W. Garber, C. G. Brouillette, S. C,

3-31（1986）

Harver, G. M. Anantharamaian, Adv. Protein Chem.45

２）H. Saito, K. Nishiwaki, S. Ito, T. Handa, K. Miyajima,  Langmuir 11 , 3742-3747（1995）, 303-369（1994）10）I. Arimoto, H. Saito, Y. Kawashima, K. Miyajima, T.

３）H. Saito, T. Minamida, I. Arimoto, T. Handa, K.

− 12 −

Handa,  J. Lipid Res. 39 ,143-151（1998）

凝集性蛋白質溶液のゲル化現象の解明
京都工芸繊維大学

柴

山

繊維学部

充

弘

The aggregation mechanism and aggregated structure of globular protein, β-lactoglobulin (β-LG), have been studied bydynamic light scattering (DLS) and small angle neutron scattering (SANS). DLS shows that time intensity correlation functionsfor β-LG solutions prepared at pH 2 and 7 indicated a power law behavior around gelation threshold. The critical exponent
related to the relaxation time, n, was 0.5 at pH2 and 0.7 at 7, which can be explained by percolation theory without and with
excluded volume effect, respectively. It is known that the value n ≅ 0.66 suggests a highly branched percolated cluster. On
the other hand, a lower value of n is expected for a chain-like structure where the excluded volume is screened. SANS results
show that the scattered intensity for β-LG at pH 2 increased with heat-induced aggregation, while that at pH 7 exhibits adistinct maximum at the scattering vector, q = 0.025Å-1. This is due to microphase separation, which was well reproduced by
the Borue-Erukhimovich theory of weakly charged polyelectrolyte solutions.

１.

緒

２.

言

実

験

高分子ゲルは、従来から食品工学や高分子加工においてDLS 測定：SIGMA 社製の β-LG（L0130, Lot114H7055）

重要な位置を占めてきたが、最近ではその保湿性、薬剤保水溶液（0.05, 0.1g/mL）を HCl を用いて pH2 及び pH7 に持性、形状安定性など、ゲル特有の機能を生かした化粧品調整した。その各試料を約 75℃に温度制御されたサンプや医薬品などが次々に開発されてきている。しかしながら、ルホルダーの中に入れ、熱凝集する過程を動的光散乱装ゲル化のメカニズムや構造といったゲルの本質にかかわる置（ALV 社製）を用いて測定した。光源には 22mW のような重要な問題の多くは未解明なままである。これまで

He-Ne レーザー（波長 632.8nm）を用い、散乱角 90°で我々は動的光散乱法（DLS）によるゲルの多面的解析法を

測定を行なった。

提唱し、その有用性を合成高分子を用いて検証してきた１- ５)。

SANS 測定：DCl により pH2 及び pH7 に調整した β

この手法をコスメトロジーにとって興味ある蛋白質のゲル-LG 重水溶液（0.09g/mL）を約 75℃で加熱し、その凝集化現象の研究に応用し、熱変性過程にある蛋白質の構造変過程を時系列的に測定した。測定には SANS-U（東大物性化を実時間で観察することで、凝集およびゲル化機構の研研究所；茨城県東海村）を用い、波長７Å、散乱ベクトル究を行った。試料として用いた乳清蛋白質の主成分である

0.01<q <0.08Å − 1 の条件で行った。

β- ラクトグロブリン（β-LG）は pH 変化に対して可逆的

３.

な monomer-dimer 転移を示す球状タンパク質である。pH

結果と考察を変化させるとアミノ酸側鎖のイオン状態が変化し、電荷

まず動的光散乱から得られた結果を Fig.1 に示す。上の分布や水素結合性に影響するため、蛋白質の変性機構なら段に pH2 および pH7 の時間に対する散乱強度の変化を示

びに凝集機構に大きな影響を及ぼす。本研究では、異なるしており、下の段には相関関数の時間ゼロに対応する初期

pH の β-LG 水溶液を加熱し、ゲル化するまでの構造変化

振幅（σ21）の変化を示したものである。

ならびにダイナミクス変化を DLS によるゲル化点の決定やゲル化点近傍のフラクタル構造解析法

６）を用いて解析

散乱強度は熱凝集が進むにつれて上昇し、やがて pH7、

0.05g/mL の試料を除いて強度が急激に揺らぎ始める。こした。また小角中性子散乱測定（SANS）を行うことにより、の点がゲル化点であり、図中の矢印で示している。また下

ナノメーター領域の微視的構造変化についても検討した。

段を見てみるとゲル化点に対応する時間で初期振幅が減少し始めている。この現象はエルゴード性を保持する溶液か
ら制限エルゴード性を示すゲルが形成したことを意味する

Study on the gelation process ofaggregative protein solutions
Mitsuhiro Shibayama
Department of Polymer Scienceand Engineering, Kyoto Institute ofTechnology

ものである。次に pH2 と pH7 の初期の凝集過程を比較してみると、pH2 は数時間かけて散乱強度が徐々に上昇しているに対して、pH7 は最初の数十分の間に急激に散乱強度が上昇するという結果が得られた。次にゲル化時間に注目すると、pH2 の 0.1g/mL 試料は約 2 時間後にゲル化し、0.05g/mL のの試料は約４時間後にゲル化した。すなわち濃度が半減するとゲル化時間が倍となっている。pH7 の場− 13 −

Fig.1

Variation of the scattered intensity, <I>T, and the initial amplitude of the intensity correlation function, σI2.

合、0.1g/mL の試料は約 30 分であり同濃度の pH2 試料に比べて早くゲル化したが、0.05g/mL の試料はゲル化せず、散乱強度はすぐに定常値になり、初期振幅にも変化は見られなかった。こういったことから、pH2 と pH7 では凝集機構が異なることが考えられる。これらの結果はシリカゲ
ルの酸性触媒と塩基性触媒下での重合方法の違いで観察された散乱強度の挙動変化７）と大変よく合致しており、pH2の場合が酸性触媒系に、pH7 の場合が塩基性触媒系に挙動に酷似している。
次に Fig.2(a)、(b) に強度相関関数の時間変化を示す。
pH2 及び pH7 ともに凝集が進むにつれ相関関数は長時間側にシフトし、Fig.1 のゲル化点に対応する時間で相関関数が Power law decay を示した。この Power law decayを示した相関関数を以下の Martin らによる式８）でフィッ
ティングした結果を Fig.3 に示す。
＊ （n−1）/2
g （q,τ）−1＝σ（1＋ττ）［A exp（−Γτ）＋（1−A）
］
（2）

I

2

2

この臨界指数 n はゲル化点において粘弾性測定から得られる臨界指数｛G’（ω）
= G’
（ω）
’
∝ ωn ｝と等価なものである。
pH ２の臨界指数 n は二種類の濃度によらず約 n ≈0.5 という値が得られた。この値は Winter ら９）が粘弾性測定によって報告した値とほぼ一致しており、クラスターの成長過程において分岐が少ないものであることを示唆している。
一方 pH7 で得られた約 n≈0.7 という値はパーコレーショ
ン理論から予測される値に大変近いものであり、クラスタ

Fig.2

ーの成長が多分岐であることを示唆する結果である。

− 14 −

Intensity correlation function of β-LG during gelation.
(a) pH2, (b) pH7.

凝集性蛋白質溶液のゲル化現象の解明

このような pH2 及び pH7 での凝集構造の成長の違いは、

pH7 の場合、ゲル化後の試料（▲）を除いて散乱ベクト

変性温度 T d とチオール基（-SH）の反応性の違いが要因

ル約 0.025Å− 1 付近に顕著なピークが発現し、時間とともであると考えられる。pH2 の T d は約 78℃、pH7 の T dにピークが成長するという興味ある結果を得た。このピーであるため、本測定温度（75℃）では pH7 のクは蛋白質が熱変性過程において荷電化（三次構造が変化

方がより unfolding している。そのために pH7 では β-LGしイオン基を外に向ける形態変化）することを示すもので分子に存在するフリーのチオール基（-SH）とジスルフィ

あり、弱荷電系高分子が貧溶媒に置かれたときに発現するド基（R-SS-R’）の交換反応などが生じやすくなり、さらミクロ相分離構造（ナノメートルオーダーでの相分離）とにチオール基（-SH）の反応性は弱アルカリ性側で高いこ同等と考えられる 12,13）。そこで貧溶媒中での高分子電解質とが要因であると考えられる。そのために pH7 の臨界指の散乱関数（構造因子）を平均場理論により導出した以下

数 n が pH2 の場合より多分岐を示す値になると考えられる。

の式の様な Borue-Erukhimovich（BE）散乱理論 14）を用は約 67℃

10）

11）

次に Fig.4 に SANS 測定から得られらた pH2 および pH

いて解析を試みた。

x ＋s
2
2（x ＋ t）（x ＋ s）＋1７の β-LG の凝集機構の変化を示す。散乱関数を比較す

S（x）＝

ると pH2 の場合、加熱時間が増すにつれて、散乱関数がここで x、t、s、はそれぞれ還元散乱ベクトル、還元温度、小角側で徐々に立ち上がっているのがわかる。ところが

還元塩濃度である。
この BE 理論によると良溶媒系（還元温度 t > 0）であ
れば還元塩濃度 s に依存せず散乱極大は出現しないが、貧溶媒（還元温度 t < 0）でなおかつ還元塩濃度（0< s < 1）が低い場合に散乱極大が現れる。図のように pH7 の場合、後者の条件でうまく再現することができた。すなわち pH2の場合は静電相互作用が溶媒中の電荷によって遮蔽されるが、pH7 の場合は遮蔽されないため静電反発力が作用し、凝集力と拮抗することによってミクロ相分離構造が発現すると考えられる。

４.

総括

これまで我々が提唱してきた動的光散乱法によるゲル化点の決定法やフラクタル解析法などの多面的解析法が天然
Fig.3

Power law analysis of intensity correlation function
under pH2 and pH7.

Fig.4

高分子である球状タンパク質のゲル化現象の測定においても有効であることがわかった。その結果、pH2 およびSANS results of β-LG of (a)pH2, (b)pH7− 15 −

pH7 水溶液の凝集及びゲル化機構に違いがあることが明hydrolysis on static inhomogeneities of poly(acrylamide)

らかとなり、pH2 の場合は分岐が少ないクラスター成長

gels : Macromolecules 32, 3989 (1999).

であり、pH7 の場合はクラスターの成長が多分岐であり

５） F. Ikkai, and M. Shibayama, : Static Inhomogeneities

パーコレーション的であることがわかった。また小角中性

in thermoreversible physical gels : Phys. Rev. Lett., 82,

子散乱測定においても pH2 と pH7 の凝集機構に顕著な違いが観察され、特に pH7 の試料では貧溶媒中における弱4946 (1999)  
６） 柴山充弘 , : ゲルのフラクタル解析 : 高分子 , 48, 78

電解質系高分子のミクロ相分離構造と類似の構造を持つ凝集体が形成されることがわかった。本研究で明らかになっ(1999).
７） T. Norisuye, M. Inoue, M. Shibayama, et. al., :たように、蛋白質の凝集およびゲル化現象において普遍的

Dynamics of silica gels during gelation under acidicに見られる現象や球状タンパク質の凝集機構の特殊性の解and basic conditions : Macromolecules, 33, 900. (2000).

明に、静的・動的散乱法が非常に有効であることが示され

８） J. E. Martin, J. Wilcoxon, and J. Odinek, : Decay

た。今後、さらに温度、pH、塩濃度などの様々な因子とof density fluctuations in gels : Phys. Rev. A, 43, 858

凝集機構の相関関係を明確にしていく予定である。

(1991).

５.

総９） H. H. Winter and F. Chambon, : Analysis of Linear

括

Viscoelasticity of a Crosslinking Polymer at the Gel

本研究をご支援いただきましたコスメトロジー研究振興

Point : J. Rheology, 30, 367 (1986).

財団に対しまして、厚く御礼申し上げます。また、本研究

10） Y. V. Griko, and P. L. Privalov, : Calorimetric studyを遂行するにあたり、ご助力をいただきました田中直毅博

of the heat and cold denaturation of β-lactoglobulin :士、高田慎一氏に深謝いたします。

Biochemistry, 31, 8810, (1992)
11） W. G. Griffin, M. C. A. Griffin, and S. R. Martin, et.

（参照文献）

al., : Molecular Basis of thermal aggregation of bovine

１） M . S h i b a y a m a , S . T a k a t a , a n d T . N o r i s u y e , :β-lactoglobulin A : J. Chem . Soc. Faraday Trans., 89, 18

Static inhomogeneities and dynamic fluctuations oftemperature sensitive polymer gels : Physica A 249,
245 (1998).

(1993)
12） F. Schosseler, F. Ilmain, and S. J. Candau, : Structure
and properties of partially neutralized poly(acrylic acid)２） M. Shibayama, : Spatial inhomogeneity and dynamic
fluctuations of polymer gels : Macromol. Chem. Phys.
199, 1 (1998).

gels : Macromolecules, 24, 225 (1991).
13） M. Shibayama, and T. Tanaka, : Small-angle neutron
scattering study on weakly charged poly(N-isopropyl

３） T. Norisuye, M. Shibayama, and R. Tamaki, et. al.,: Time-resolved dynamic light scattering studies ongelation process of organic-inorganic polymer hybrid :Macromolecules 32, 1528 (1999).

acrylamide-co-acrylic acid) copolymer solutions : J.
Chem. Phys., 102, 9392 (1995)  
14） V . Y . B o r u e , a n d I . Y a . E r u k h i m o v i c h , : A
statistical theory of weakly charged polyelectrolytes

４） S . T a k a t a , T . N o r i s u y e , a n d M . S h i b a y a m a , :Preparation temperature dependence and effects of: fluctuations, equation of state, and microphaseseparation : Macromolecules, 21, 3240 (1988).

− 16 −

化粧品による皮膚かぶれを防ぐ菌類成分の探索
千葉大学

藤

本

薬学部

治

宏

In order to protect a person from allergic skin inflammation caused by some cosmetics, survey to discover new fungal immunosuppressive constituents which are helpful to induction of immunotolerance against such allergy, was executed in the use of more than
170 Ascomycetous fungi. On the survey, it was found out that Gelasinospora multiforis, G.heterospora, G.longispora, G.kobi,
Diplogelasinospora grovesii, and Microascus tardifaciens produced appreciably immunosuppressive constituents. Solvent partition
followed by repeated chromatographic fractionations of crude extracts obtained from the six fungi under the guidance of bioassay totest suppressive activity against proliferation of mouse splenic lymphocytes stimulated with mitogens afforded many immunosuppressive
features. Namely, nine new 2-pyrones named multiforisins A-I from G.multiforis, some of the multiforisins together with a known
metabolite sordarial from both G.heterospora and G.longispora, a novel bicyclic sesterterpene named kobiin and three new 2-furanones
named kobifuranones A-C from G.kobi, two known metabolites macrophin and colletodiol together with a new stereoisomer ofcolletodiol named 10-epi-colletodiol from D.grovesii, and six known metabolites, questin, rubrocristin, cladosporin（asperentin）,
cladosporin 8-O-methylether, 5,7-dihydroxy-4-methylphthalide and asperflavin, together with two new 2,5-dioxopiperazines named
tardioxopiperazines A and B from M.tardifaciens, were isolated as immunosuppressive features on this study. It was further examined
whether interleukin-2（IL-2）recovered proliferative suppressions of the lymphocytes caused by eight sample compounds, which wereselected from these immunosuppressive constituents isolated this time from fungi, or not. It has been shown up to now that IL-2 has notrecovered proliferative suppressions of the lymphocytes due to the eight compounds, indicating that they have not inhibited biosynthesis
of IL-2.

１．緒なって都合が良い。本研究では、この様な目的に合う新し言い免疫抑制物質を天然素材から探索することを目指した。

化粧品により皮膚かぶれ（皮膚の炎症）を起こす人が時

探索対象の天然素材としては、既に、いくつかの免疫抑に見られる。この様な皮膚かぶれは、多くの場合、化粧品

制成分が得られて実績がある菌類を考えたが、これまで得中に存在する生体にとって異物の成分（抗原、
アレルゲン）られたものの多くが不完全菌や放線菌から見出されたものに対し、生体が過剰に免疫応答して起きたアレルギ−であであったため、今回は、新しいタイプのものを見出そうと、る。化粧品による皮膚かぶれを防ぐ方法の一つとして、化

従来、比較的成分研究例が少なかった子嚢菌を選んだ。生粧品に対し免疫寛容を誘導することが考えられる。もし、体がアレルゲンの侵入に対し発動させる細胞性、体液性免化粧品中の特定のアレルゲンに対する免疫寛容を誘導でき

疫の一連の免疫応答の開始過程であるアレルゲン刺激によれば、皮膚かぶれを起こさずに化粧品を安全に使えること

る T、B 細胞活性化の in vitro モデルとされるマイトゲンになる。免疫寛容の誘導には、免疫抑制剤を緩和に使用し刺激による T、B 細胞幼若化（増殖）に対する抑制活性（LTてアレルゲン特異的な IgE 抗体の生産を低下させておきな活性）を指標として、これまでに 170 余種の子嚢菌につきがら、生体を徐々にアレルゲンへ曝し、長時間かけて生体検索を行った。その結果、多数の新化合物を含む免疫抑制をアレルゲンへ馴化させて行く方法が考えられる。この際活性成分を見出した。しかしながら、LT 活性には、一般使われる免疫抑制剤には、個々の体質による適不適がある

的な細胞増殖抑制活性も含まれることがある。そこで、検ため、色々な体質の人向けに様々なタイプのものが準備さ体化合物が免疫担当細胞へ特異的な抑制活性を有するか否れていることが望ましい。化粧品による皮膚かぶれに対すかを調べる方法の一つとして、今回、活性化 T 細胞から分る免疫寛容の誘導の様な目的に相応しい免疫抑制剤は、臓泌されて T 細胞の増殖、細胞障害性 T 細胞や B 細胞の活性器移植や骨髄移植などに際して用いられるcyclosporin Aや化などを誘導するリンホカインである interleukin 2（IL- 2）

tacrolimus（FK506）の様な強力なものよりも、作用が比較の存在が、検体によるリンパ細胞増殖抑制を取り止めさせ的緩和なものの方が副作用も少なく長期間の使用も可能とるか否かを in vitro で試験する方法を採用し、本研究で得Search for Fungal Constituents to Protect
a Person from Allergic Skin Inflammation
Caused by Cosmetics

られた免疫抑制活性成分中の主なものへ適用してみた。これらの研究結果について、以前の関連研究における結果も含めて以下に述べる。

Haruhiro Fujimoto
Faculty of Pharmaceutical Sciences,
Chiba University

２．実
２. １

験

LT 活性検索用子嚢菌脱脂画分の作製

精白米培地 200 g をいれたルー培養瓶を高圧滅菌し、子− 17 −

嚢菌を接種して、25℃暗所で、時々振り混ぜながら、静置

中圧カラム、高速液体カラム、薄層などによるクロマトグ

培養を、各菌の生育状態により 10 − 30 days 行った。LT 活

ラフィ−を適宜用いて、分画精製を繰り返し行ない、更に性検索には、各菌当り精白米培地 800g（ルー瓶４本）を再結晶等によって精製して、各菌の活性成分を単離した。

用いて行ない、培養終了後、かび米へ AcOEt 1 . 2 L を加え、室温振盪抽出 5 hr を 2 回繰り返して行ない、抽出液を減圧

２. ４

活性成分の構造解明

溶媒留去して、AcOEt エキスを得た。次に、同エキスへ n単離された各菌の活性成分については、mp、[α] D、各−hexane 5 − 10 mL を加え、超音波処理により n−hexane 可種呈色反応、溶解性等の物性を測定し、如何なるタイプの溶成分を溶解させて除去し、n−hexane 不溶性の脱脂画分

化合物であるかを推定し、更に、1 H-NMR、13 C-NMR、IR、を得て、この脱脂画分を LT 活性検索用検体とした。

UV、MS（低分解能の EI-MS、FAB-MS、高分解能の EIMS、FAB-MS）、CD スペクトルを測定して検討した。特２. ２

LT 活性試験に NMR で は、 通 常 測 定 の ほ か に、spin-decoupling

マウス（BALB/C、雄、７− 11 週齢）の脾臓由来リンパ1

H-NMR、NOE 1 H-NMR、二次元の 1 H- 1 H シフト相関

細胞のマイトゲン刺激増殖に対する検体の抑制活性を試験（COSY）、1 H- 13 C シフト相関（HMQC）、1 H- 13 C 遠隔シフした。マイトゲンとしては、T 細胞には concanavalin A

ト相関（HMBC）スペクトルを測定し検討した。その結果、（Con A）を、B 細胞には lipopolysaccharide（LPS）を用

活性成分が既知化合物と推定された場合は、その文献記載

いた。活性の測定には、リンパ細胞をマイトゲン、検体との各種物性やスペクトルデータとの比較を行って、標品が共にマイクロタイタープレートの well 内で、37℃、５％入手可能なら直接比較して同定した。活性成分が新化合物

CO 2 存在下、48 hr 培養した後、[methyl- H]thymidine をと推定された場合は、各種スペクトルデ−タの詳細な検討、培地に添加し、更に 22 hr 培養した際にリンパ細胞中に取誘導体の作製、或いは、X 線解析（10 - epi- colletodiol の場合）り込まれる 3 H 放射能から、細胞増殖抑制率を算出する 3 H

等を適宜用い、化学構造を解明した。

3

標識法（実験の詳細は既報

１）参照）か、又は、上記マイ

クロタイタープレートで培養を 72 hr 行った後、MTT[ 3 -２. ５

免疫抑制活性が IL-2 の存在により拮抗される（4 , 5 -dimethylthiazol- 2 -yl）- 2 , 5 -diphenyltetrazolium

か否かを調べる実験

bromide] を培地に添加し、更に 4 hr 培養した際に、リンリンパ細胞溶液は２. ２の際と同様に作製し、マイトゲ

パ生細胞の mitochondria 内膜中の呼吸鎖関与酵素により

ン と し て は、Con A の 代 わ り に ionomycin と phorbol

MTT が還元されて生成する MTT-formazan の量を 57 nm

12 -myristate 13 -acetate（PMA）を用いた。活性の測定は、で比色定量し（対照波長 630 nm）、細胞増殖抑制率を算出

リンパ細胞をマイトゲン、検体と共にマイクロタイタープ

する MTT 法（実験の詳細は既報２）参照）か、いずれかのレートの well 内で LT 試験に類似した方法で培養して進め方法を用いた（ H 標識法での算出値と MTT 法での算出値られるが、IL- 2 生合成阻害の有無を調べるために、培地はほとんど同じであった）。171 種の子嚢菌の一斉 LT 活性に IL- 2 を添加して培養する実験と添加しないで培養する

検索では、各検体は 50、10、2 . 0、0 . 4 µg/mL の濃度にお実験を常に平行させて行う。培養は 37℃、５％ CO 2 存在下、いてそれぞれ triplicate で活性を測定した。

48 hr 培養した後、MTT を培地に添加し、更に４hr 培養し3た後、MTT が還元されて生成する MTT-formazan を比色２. ３

活性成分の単離

定量し、IL- 2 を添加した場合と添加しない場合のリンパLT活性検索で、濃度依存性を示す高い活性を示した菌の細胞増殖抑制活性を比較し、検体による細胞増殖抑制が、中で、活性成分が未解明と考えられた菌については、精白培地への IL- 2 添加により拮抗されるか否かを試験した（実米培地 20 − 60 kg（ルー瓶 100 − 300 本）を用い、２. １と同

験の詳細は既報２）参照）。

様の条件で大量培養を行った。培養終了後、AcOEt 30 −３．結果と考察90 L を用いて室温振盪抽出５hr を２回繰り返して行ない、
抽 出 液 を 減 圧 溶 媒 留 去 し て、AcOEt エ キ ス を 得 た。

３. １

子嚢菌の LT 活性検索と LT 活性子嚢菌からのAcOEt 抽出エキスをn−hexane-AcOEt（１:１, v/v）を用いて免疫抑制活性成分の単離

n−hexane可溶部と不溶部に分け、n−hexane 不溶部は、更に、

当研究室保存の子嚢菌中、不整子嚢菌綱（Plectomycetes）

AcOEt-H 2 O（１:１）を用いてAcOEt可溶部とH 2 O可溶部に分に 属 す るEmericella 属 13 種、Eupenicillium 属 16 種、けた。n-hexane、AcOEt、H 2 O可溶部につき、LT 活性を試験

Eurotium属 16 種、Hemicarpenteles属３種、Neosartorya属５種、したところ、AcOEt可溶部に活性が集約したので、AcOEt可Talaromyces属４種など、並びに核菌綱（Pyrenomycetes）に溶部を、更にLT活性を指標にしながら、順相のsilica gelや属するChaetomium属５種、Gelasinospora属 20 種、Microascus

逆相のoctadecyl silica gel（ODS）を用いたオ−プンカラム、

属３種、Thielavia属４種などこれまでに合計 171 種につき、− 18 −

化粧品による皮膚かぶれを防ぐ菌類成分の探索

リンパ球幼若化抑制活性（LT 活性）の有無を検索した。

り、multiforisin G-I（7 - 9）（Fig. １）と命名された。なお、

その結果、濃度依存性の高い活性を示した菌は 38 種も見

同菌からは、Sordaria macrospora から単離されていた出されたが、それらの中で、新しい免疫抑制活性成分の単

sordarial（10）３）（Fig. １）も活性成分として得られたが、離を目的として、これまで系統立った成分研究が比較的行

側鎖の絶対配置が未定であったので、絶対配置を（3 ' R ,なわれていない属に分類される菌からの系統的な活性本体

4 ' S）と決定した。なお、10 に免疫抑制活性が知られたのの解明を目指した。今回は、その様な菌の中から、核菌綱は 今 回 が 初 め て で あ る。7 - 9 に つ い て は、 そ の 後 G.

の Gelasinospora multiforis、G.heterospora、G.longispora、

multiforis からも得られた。G.longispora からも 1 , 7 - 9 並

G.kobi、Diplogelasinospora grovesii および Microascus

びに 10 が活性成分として単離された２, ４）。

tardifaciensの６種の LT 活性菌について得られた結果につき

新しい免疫抑制活性成分として得られた multiforisin 類
1-9 中、活性が高いものは 1、7、8 である[リンパ球の Con述べる。

A 誘導（T 細胞）、LPS 誘導（B 細胞）増殖に対する 1 の３. １. １ Gelasinospora、Diplogelasinospora 属菌の免IC 50 は 0 . 6、0 . 6 µg/mL]。1 に 比 較 し、1 の acetyl 体

疫抑制活性成分[multiforisin B（2）に一致する ] では活性は大きく低下し、LT 活 性 を 示 す 菌 が 多 数 見 出 さ れ た Gelasinospora、

1 の dihydro 体（11）では活性はやや低下した。multiforisin類

Diplogelasinospora 属の菌については、従来系統立った成分とその誘導体の活性比較から、multiforisin類では、３に研究があまり行なわれていなかったので、これらの属に分hydroxymethyl 基、５に formyl 基が存在するか、３と５のど類される活性菌中、比較的高い活性が示された菌につき活

ちらか一方に hydroxymethyl 基、他方に acetoxymethyl 基性成分の単離を目指した。

が 存 在 す る と 高 い 活 性 を 示 す が、 ３、 ５ が 共 に先ず、G.multiforisについて、溶媒分画によって LT 活性

acetoxymethyl 基である 8 の acetyl 体（12）では活性がやの集約した AcOEt 可溶部から、主活性成分として単離さや低下し、共に hydroxymethyl 基の 9 では活性が大きく低れた化合物は構造研究の結果、
5 -formyl- 3 -hydroxymethyl- 4 -下する、2 -pyrone 環と共役した６位側鎖中の二重結合は活

methoxy- 6 （1- E - propenyl ）- 2 -pyrone の構造を有する新性の増強に寄与することなどが判明した（Fig. １、Table １）。

2 -pyrone（α-pyrone）と判明し、multiforisin A（1）（Fig. １）

一方、10 は 1、7、8 等に比べ活性は低かった（Table １）。

と命名された。同菌からは、更に同族体 5 種が単離され、Table １には、本研究で見出された LT 活性代謝産物についそれぞれ multiforisin B-F（2 - 6）と命名された。続いて、て の Con A、LPS 誘 導 増 殖 に 対 す る IC 50 の 値 を 数 種 の

同 属 のG.heterosporaよ り 単 離 さ れ た 活 性 成 分 ３ 種 もpositive control 化合物のそれと共に示す。

multiforisin 類と構造関連の新 2 -pyrone であることが分か

G. kobiからは LT 活性を示す成分として、15 員環と 5 員

Fig. １− 19 −

環から成る新 sesterterpenetriol が単離されて kobiin（13）（18）7 - 11） 及び 18 の 10 位立体異性体と判明した新化合物と命名され絶対配置を含めて構造が決定されたほか、新10 -epi-colletodiol（19）が得られた（Fig. ３）12）。なお、

2 -furanone が３種得られて kobifuranone A、B、C（14 - 16）

17、18 に免疫抑制活性が知られたのは今回が初めてであと名付けられた（Fig. ２） 。13 の活性は中程度であるがる。D.grovesii の主活性成分 17 が multiforisin 類と構造類（Table １）、大環状のユニ−クな構造を有しており興味深

似の 2 -pyrone 化合物であったことは構造活性相関の意味

い。14 - 16 の活性は 13 のそれよりも低かった（Table １）。

から興味深く、その活性も multiforisin 類と同様に高かっ

D. grovesii からは主活性成分として、Macrophoma

た（17 の Con A、LPS 誘 導 増 殖 に 対 す る IC 50 は 0 . 4、commelinae から得られていた macrophin（17） が単離

0 . 3 µg/mL）（Table １）。一方、18、19 の活性はやや低かされたほか、Colletotricum capsici や Chaetomium funicola

った。

５）

６）

から得られていた 14 員環を有する大環状化合物 colletodiol

Fig. ２

Fig. ３− 20 −

化粧品による皮膚かぶれを防ぐ菌類成分の探索

３. １. ２

M.tardifaciens の免疫抑制活性成分

産 物 で あ り、20、21 は anthraquinone、22、23 は

M.tardifaciensからは、８種の活性成分が得られたが、そoctaketide に属する。M.tardifaciens から新化合物としてれらの中の６種は既知菌類代謝産物に一致するものであっ得られた２種のものは、いずれも 2 , 5 -dioxopiperazine でた。即ち、それらは Penicillium frequentans等から得られてあることが判明し、tardioxopiperazine A（26）、B（27）といた questin（20） と Aspergillus cristatusから得られてい命名された（Fig. ４）19）。anthraquinone 類の免疫抑制にた rubrocristin（21）14）、Cladosporium cladosporioides や

ついては、既に emodin での例が知られているが 20）、今回、Aspergillus flavusから得られていたcladosporin（asperentin）

20、21 にも活性が見出され、いずれも高い活性を示した（22）、Aspergillus flavus から得られていた cladosporin（Con A、LPS 誘導増殖に対する IC 50 は 20 は 0 . 3、0 . 3、

13）

15 - 17）

8 -O -methylether（23） 、Aspergillus flavus から得られ21 は 0 . 8、0 . 1 µg/mL）（Table １）。多数の関連するて い た 5 , 7 -dihydroxy- 4 -methylphthalide（24） とanthraquinone 化合物との活性の比較から、β 位に遊離のasperflavin（25） であるが、これらのいずれについても

OH 基を有するものが活性を示すものと考えられた。新化

16）

18）

免 疫 抑 制 活 性 が 知 ら れ た の は、 今 回 が 初 め て で あ る。

合物２種中では、26 がやや高い活性を示した（Table １）。

20 - 25 はいずれも酢酸−マロン酸経路で生合成される代謝

その他の化合物の活性は低かった。

Fig. ４
Table 1 Suppressive Effects of Compounds 1 − 27, and Emodin,
Azathioprine, CyclosporinA, and FK506 on ConA and LPS-Induced
Proliferations of Mouse Splenic Lymphocytes [IC50(μg/mL)]− 21 −

３. ２

免疫抑制活性が IL-2 生合成阻害によるものか否かの検定

粧品による皮膚かぶれを防ぐ目的を始め、色々な目的のために有効に利用できる道を探って行きたい。

上述の３. １で得られた免疫抑制活性成分中、活性が比較的高く、量的にも実験が可能であった化合物につき、そ（引用文献）の免疫抑制活性が IL- 2 の存在によって拮抗されるか否か

１）F u j i m o t o H . , N a k a y a m a Y . , Y a m a z a k i M . :を調べることによって、その免疫抑制活性が活性化 T 細胞

Identification of immunosuppressive components of aにおける IL- 2 生合成の阻害により起きているか否かを検mushroom, Lactarius flavidulus, Chem.Pharm.Bull.,

定 し た。 こ の 検 定 に 用 い た 検 体 は、2 -pyrone ３ 種

41 , 654 - 658（1993）.

[multiforisin G（7）、dihydromultiforisin A（11）、macrophin（17）２）Fujimoto H., Sumino M., Nagano J., Natori H.,]、hexaketideとoctaketide各 1 種[sordarial（10）、cladosporin

Okuyama E., Yamazaki M.: Immunomodulatory（22）]、大環状化合物２種[kobiin（13）、colletodiol（18）]、

constituents from three ascomycetes, Gelasinospora

及びanthraquinone１種[questin（20）]のz合計８種の化合物

heterospora, G. multiforis, and G. longispora, Chem.  

である。これらのほかに positive control として，既にそPharm.Bull., 47 , 71 - 76（1999）.

の作用発現機構が IL- 2 生合成の阻害にあることが判明し３）Bouillant M.L., Bernillon J., Favre-Bonvin J., Salin N.:ている FK 506 を用いた。その結果、Fig. ５に示す様にNew hexaketides   related to sordariol in Sordaria
macrospora, Naturforsch., 44 c, 719 - 723（1989）.

､FK 506 では、IL- 2 が培地中に存在しない場合はリンパ細
胞増殖は強く抑制されるが、IL- 2 が培地中に存在すると

４）Fujimoto H., Satoh Y., Nakayama M., Takayama T.,

リンパ細胞増殖抑制は IL- 2 により拮抗されるためわずか

Yamazaki M.: Isolation of some immunosuppressiveとなって、IL- 2 が存在しない場合のリンパ細胞増殖抑制

components from an ascomycete, Gelasinosporaと、存在する場合のそれとの間に大きな差異が見られた。

multiforis, Chem.Pharm.Bull., 43 , 547 - 552（1995）.

一方、検体である 8 種の化合物では、いずれにおいても、

５）Fujimoto H., Satoh Y., Yamazaki M.: Four new

Fig. ５に示す 7 と同様に、IL- 2 が存在しない場合のリンパimmunosuppressive components, kobiin and

細胞増殖抑制と、存在する場合のそれとの間に差異は見らkobifuranones A, B, and C, from an ascomycete,

れなかった。それ故、これら８種の化合物による免疫抑制

Gelasinospora kobi, Chem.Pharm.Bull., 46 , 211 - 216

活性は IL- 2 生合成阻害によるものではないと考えられた。

（1998）.

免疫発現の機構は多数の段階から成る複雑なものであり、

６）Sakurai I., Shimizu S., Yamamoto Y.: Studies on

いずれかの段階が阻害されても、総体としての免疫阻害がmetabolites of Macrophoma commelinae. III. isolation of起こる。今後、本研究で見出された多数の LT 活性天然成

new metabolites and biosynthesis of macommelin

分が如何なる機構で活性を発現しているのかを解明し、化group, Chem.Pharm.Bull., 36 , 1328 - 1335（1988）.

Fig 5 Effects of Multiforisin G(7) and FK506 (a Positive Control) on the Proliferation of Mouse Splenic Lymphocytes Stimulated with Ionomycin and PMA in Cultivation with and without Exogenous IL-2

− 22 −

化粧品による皮膚かぶれを防ぐ菌類成分の探索

７）Grove J.F., Speake R.N., Ward G.: Metabolic products

Metabolic products of microorganisms. 185 . theof Colletotrichum capsici : isolation and characterisation

anthraquinones of the Aspergillus glaucus group. I.

of acetylcolletotrichin and colletodiol, J.Chem.Soc.（C）,occurrence, isolation, identification and antimicrobial

1966 , 230 - 234 .

activity, Arch.Microbiol., 126 , 223 - 230（1980）.

８）Powell J.W., Whalley W.B.: The chemistry of fungi.

15）S c o t t P . M . , W a l b e e k W . V . , M a c L e a n W . M . :part LVIII. structure of colletodiol, a metabolite ofCladosporin, a new antifungal metabolite from

Chaetomium funicola, J.Chem. Soc.（C）, 1969 , 911 -Cladosporium cladosporioides, J. Antibiotics, 24 , 747 -912 .

755（1971）.

９）MacMillan J., Simpson T.J.: Fungal products. part V.

16）Grove J.F.: New metabolic products of Aspergillus

the absolute stereochemistry of colletodiol and theflavus. part I. asperentin, its methyl ethers, andstructures of related metabolites of Colletotrichum

5 '-hydroxyasperentin, J.C.S.Perkin Trans. I, 1972 , 2400 2406 .

capsici, J.C.S.Perkin Trans. I, 1973 , 1487 - 1493 .
10）MacMillan J., Pryce R.J.: The structure of colletodiol,17）Springer J.P., Cutler H.G., Crumley F.G., Cox R.H.,

a macrocyclic dilactone from Colletotrichum capsici,

Davis E.E., Thean J.E.: Plant growth regulatory

Tetrahedron Lett., 1968 , 5497 - 5500 .

effects and stereochemistry of cladosporin, J.Agric.
Food Chem., 29 , 853 - 855（1981）.

11）Amstutz R., Hungerbühler E., Seebach D.: Revidierte
struktur des makrodiolids colletodiol, Helv.Chim.Acta,18）Grove J.F.: New metabolic products of Aspergillus
flavus. part II. asperflavin, anhydroasperflavin, and64 , 1796 - 1799（1981）.

5 , 7 -dihydroxy- 4 -methylphthalide, J.C.S.Perkin Trans. I,12）Fujimoto H., Nagano J., Yamaguchi K., Yamazaki M.:

1972 , 2406 - 2411 .

Immunosuppressive components from an ascomycete,
Diplogelasinospora grovesii, Chem.Pharm. Bull., 46 , 423 -19）Fujimoto H., Fujimaki T., Okuyama E., Yamazaki M.:
Immunomodulatory constituents from an ascomycete,

429（1998）.

Microascus tardifaciens, Chem.Pharm. Bull., 47 , 1426 -13）Mahmoodian A., Stickings C.E.: Studies in the1432（1999）.

biochemistry of microorganisms. 115 . metabolites ofPenicillium frequentans Westling: isolation of sulochrin,20）Huang H.-C., Chang J.-H., Tung S.-F., Wu R.-T., Foegh

asterric acid,（+）-bisdechlorogeodin and two new

M.L., Chu S.-H.: Immunosuppressive effect of emodin, asubstituted anthraquinones, questin and questinol,

free radical generator, European J. Pharmacol., 211 ,Biochem.J., 92 , 369 - 378（1964）.

359 - 364（1992）.

14）Anke H., Kolthoum I., Zahner H., Laatsch H.:− 23 −

DNA 複製開始タンパク質（DnaA）の活性発現と相分離した混合二分子膜の関連性
九州大学

有機化学基礎研究センター、大分大学

石

川

雄

工学部応用化学科

一

DnaA protein is the initiator of chromosomal DNA replication in Escherichia coli. We examined the influenceof artificial mixed membrane composed of synthetic anionic (phosphate) lipid and cationic (ammonium) lipid on theaffinity of DnaA protein for ATP. Two sets of anionic and cationic lipids with distinguishable numbers of hydrophobic
alkyl chains were devised for regulating the cluster (phase separated) formation of anionic lipid around the cationicmatrix. Anionic lipid, not cationic membranes, inhibited the ATP-binding and stimulated ATP-release from the ATPDnaA active form. In the case of the mixed membrane, only anionic lipids forming cluster structures inhibit of ATPbinding and stimulate the ATP release. These results suggest that in mixed membrane a cluster formation (phaseseparated state) of anionic lipids seems to be an important factor to affect the affinity of DnaA protein for ATP.

１

緒伝子の複製を開始するこのタンパク質 DnaA の活性発現に言は ATP が不可欠である。ATP の結合を DnaA タンパク機

細胞の自己増殖（複製）が考慮される時、多くの研究は、

能の「on—off 制御」の鍵として使用することができる６、７）。

遺伝情報を担う DNA の親から娘への伝達の素過程に主眼

大腸菌の二分子膜は、単一の脂質でなく数種類の脂質のを据えている。染色体 DNA の複製は、脂質膜の増殖と同混合膜として存在する。具体的には、四本鎖のカルジオリ

調しバイオクロックに従って進行するため、脂質二分子膜

ピン型アニオン性の脂質と二本鎖のフォスファチジルエタの分離、融合などと遺伝子の増殖のシステムは親密な関係

ノールアミン型の双性イオン（中性）の脂質が混合していにあろう。しかし、脂質膜を視点に据えた細胞膜の中でのる。これらの中で、アニオン性の天然脂質は、DnaA とDNA の複製や分裂に関する研究はほとんど無く、モデル

ATP との親和性に影響する事が報告されている。しかし系での研究は全くない。本研究は、遺伝子複製システムにながら、その結果は全て単独のアニオン性脂質膜と DnaA

「能動的」に関与できる界面活性剤「人工の脂質膜」を開タンパク質との実験から出されており、実際の細胞膜のよ発する事を意識している。ここでは、遺伝子の複製の「開うな混合膜での取扱いはなされていない。異種の構成成分

始」プロセスに作用する混合脂質膜のクラスター形成能力からなる混合膜の最大の特徴は、ある特定構成分子が集合（相分離特性）の重要性について検討した。また、この目したクラスター形成（相分離）能８—10）があるが、アニオン

的とは直接関係しないが、本研究と並列して実行していた性脂質の相分離性と DnaA タンパク質の機能発現との関フォトダイナミックセラピー（PDT）用のポルフィリン

係は今まで一切実験されてこなかった。とりわけ、上述し性色素として混乱（反転）ポルフィリンの一重項酸素発生

た四本鎖と二本鎖の脂質の組み合わせのように異なる鎖数

効率をコーセー中央研究所の荒金博士に評価して頂いた結の混合膜は、膜化学的に相分離しやすい事を考えると、相果についても簡単にまとめる。

分離クラスターからの検討が必要なことは明確である。

DNAの複製を開始するタンパクは、遺伝子の複製開始

合成の脂質膜の特徴は、天然膜と異なり分子設計により点に結合し、二重鎖をゆるめ、そこにヘリカーゼ活性を持

その分子の並び方や流動性を制御できる点から生まれる。

つ次のタンパクを導く１、２）。従って、遺伝子の複製を開始

アゾベンゼンを含む一本鎖脂質（1 P、1 N）は、グルタミするタンパクを制御することは、最も効率の良い、細胞複

ン酸型（2 P、2 N）の二本鎖型脂質の母体膜中で容易に相製の「スイッチング」を意味する。最も複製系が単純で、分離クラスターを形成することが既に知られている８〜 10）。

且つ、そのプロセスに広く一般性を持つ大腸菌の DNA 複本研究では、この明確なクラスター状態の混合膜を利用し製の開始は、｢DnaA｣ タンパク質に司られている

。遺

３〜５）

て、その DnaA タンパク質に与える効果を検討した 11 〜 12）。

２

Synthetic membrane lipids regulating the
DNA duplication.
Yuichi Ishikawa
Department of Applied Chemistry, Oita
University

実験

実験に用いた合成脂質の構造を図１に示す。これら四種の化合物は、文献に従って合成した 10、13 〜 15）。脂質粉末は、プローブ型の超音波照射により、10 〜 20 mM の濃度で１mL の分散液を調整した。リン脂質の場合、等量モルのトリスヒドロキシメチルアミノメタンを中和のために添加した。

− 24 −

DNA 複製開始タンパク質（DnaA）の活性発現と相分離した混合二分子膜の関連性

DnaA タンパク質は、水島らにより文献に従って調整されレントなのでマトリックス母体膜として混合膜に使用できた 。このタンパク質の比活性は、0 . 7 × 106 unit/mg である事を確認した。

４）、
る。タンパク質と脂質膜は、50 mM HEPES—KOH（pH 8 . 0）

図３にアニオン性脂質を 1 / 10 等量ゲスト膜としカチオ

0.5mM Mg（OAc）2、0.3mM EDTA、5mM dithiothreitol、

ン性のマトリックス膜に混合した分散液の DSC 吸熱サー

10 mM（NH 4）2 SO 4、17（v/v）％グリセリン、0 . 005（v/v）

モグラムを示している。二本鎖のマトリックス膜に同じ鎖％ Triton X—100 の緩衝液に分散させた。

数のアニオン性ゲスト膜が混在する場合（2 P/ 2 N：図３A）

示差走査熱量計（DSC）は、Seiko SSC—5200（DSC 120）
により、銀製サンプルパンを用いて行った。

は、マトリックス 2 N 単独膜のゲル−液晶相転移温度の49℃とほぼ等しい温度に一つのブロード（吸熱幅約５℃）

ATP と DnaA タンパク質の親和性は、０℃の結合過程と、37℃での解離過程を評価した。DnaA タンパク質が、定量的に Millipore 0 . 45 µm の membrane filter に結合する事を利用した。ATP の結合かは、α 32 P—ATP 同位体を使用して先の良く洗浄された filter をシンチレーション
カウンターにより計測して、定量した。

３
３. １

結果と考察

カチオン性母体膜におけるアニオン性脂質膜のクラスター相分離特性
図２は、「単独」膜によりどの程度 ATP の DnaA タン
パク質に対する親和性が低下するのか示している。一本鎖、二本鎖の鎖数に依らずカチオン性の 1 N、2 N 膜は ATP を取り込んだ DnaA タンパク質から ATP の解離をほとんど促進させない。これに対して、アニオン性の 1 P、2 P 膜は、

図２ ATP—DnaA タンパク質複合体からの ATP 放出過程の動力学
Ct、Co は ATP—DnaA の残存濃度と初濃度を示す。○：
1P、●：1N、□：2P、■：2N、37℃［ATP—DnaA］＝ 0.03
μM、［膜］＝ 30μM

ATP の解離を促進している事が明かである。即ち、カチオン性膜は DnaA タンパク質の ATP 親和性に対してサイ

図１

合成樹脂の分子構造
アラニン骨格の一本鎖脂質とグルタミン酸骨格の日本鎖脂質を「１」と「２」で表わしている。リン酸親水基とアンモニウム親水基を大文字の P と N で示している。

図３ 二本鎖型マトリックス膜 2N（A）および一本鎖型マトリックス膜 1N（B）との混合膜分散液の DSC サーモグラム［アニオン性脂質］＝５mM、［カチオン性マトリックス
膜］＝ 50mM、［トリスヒドロキシアミノメタン］＝５mM、17％（v/v）グリセリン水溶液− 25 −

な吸熱ピークを与える。二本鎖のマトリックス膜と異なる

３. ３

ATP—DnaA 複合体からの ATP 解離に対する鎖数である一本鎖のゲスト膜が混在すると、マトリックス

混合膜の添加効果。

膜の 50℃近傍の比較的鋭い（吸熱幅 2 . 2℃）主転移（80％）

ATP と DnaA タンパク質との親和性を、高温における解に加えて、35℃前後に約 15％、62℃付近に５％前後の副離挙動からモニターした。図５にその結果を示している。

転移を持つ。この場合の主転移の吸熱幅は、2 N 膜単独に

縦軸は、ATP が結合した DnaA タンパク質の変化量を対数比較し約二倍と幅広いが、同じ鎖数の混合膜のそれの半分で、横軸を時間で示している。どの系も直線で減少していの鋭さである。これらの DSC 曲線は、次の二つの点を意ることからその直線の傾斜から見かけの一次の反応速度定

味している。

数を見積もる事が可能である。1 P、1 P/ 1 N、1 P/ 2 N、2 P、⑴同じ鎖数のアニオン性のゲスト膜がカチオン性のホスト

2 P/ 2 N、2 P/ 1 N 膜の解離速度定数は、各々、8 . 5 m、5 . 7 m、膜中でクラスタードメインを形成する事無く静電的に分7 . 6 m、11 m、6 . 6 m、9 . 2 m（s—１）である。ATP の解離は、散して存在している。その結果、マトリックス膜内に分鎖数の組み合わせに大きく依存している。異なる鎖数の組

散したゲスト膜によりマトリックス膜の協同性が低下しみ合わせの混合膜（1 P/ 2 N、2 P/ 1 N）は、同じ鎖数の組み

主吸熱ピークのブロード化となっている。

合わせよりも ATP がより高速に解離している。これらの⑵異なる鎖数のゲスト膜は、マトリックス膜から弾き出さ

傾向は、低温での ATP 結合過程の動向と一致している。

れクラスター相分離化し主転移以外の吸熱ピークを示し

３. １節で述べたように、異なる鎖数の組み合わせの混ている。また、マトリックス内に取り込まれているゲス

合膜は、アニオン性脂質のクラスター相分離を母体膜中でト膜分子が少ないため主転移は比較的鋭い。

取り易い。マトリックス膜中でのアニオン膜のクラスター

一本鎖脂質はアゾベンゼンを剛直基として含んでいる。

構造は、アニオン膜単独と同じように作用する事が推察さ

この発色団は、分子会合をその UV—vis 吸収スペクトルかれる。

ら簡単に評価できる。即ち、頭−頭型の会合状態にあれば、360 nm から数重 nm 短波長シフトする。1 P ゲスト膜は、
2 N マトリックス膜中、37℃で 336 nm に λmax を示し、
70 ℃ で 完 璧 に 会 合 が 解 け た 360 nm を 示 す。 こ の 事 も、
DSC から得られる相分離クラスターの形成と矛盾しない。
1 N をマトリックス膜として使用したときも同じ傾向が認められる（図３B）。即ち、マトリックス膜と異なる鎖数の組み合わせ（1 P/ 2 N）ではクラスター形成にともな
う吸熱が 74℃にマトリックス膜の吸熱 81℃に加えて存在
す る。 こ れ に 対 し、 同 じ 鎖 数 の 組 み 合 わ せ の 混 合 膜（1 P/ 1 N）では、84℃に一つの吸熱ピークを示すのみである。疎水基が全く同じ構造のアニオン脂質はカチオン母体
膜に完全に均一分散していることが明かである。
まとめると、鎖数が同じ組み合わせの混合膜（1 P/ 1 N）、
（2 P/ 2 N）は、均一分散し、今なる鎖数の混合膜（1 P/ 2 N）、
（2 P/ 1 N）は、クラスター相分離している。

３. ２

ATP の DnaA タンパク質への結合に与える混合膜の添加効果
カチオン性の膜は、ATP と DnaA タンパク質との親和性にほとんど影響を与えない事を上述した。図４には、低温でのATP の結合に対する混合膜の添加効果を示している。横軸
は、アニオン脂質の量である。縦軸が大きい程 ATP との親和性が高い事を意味している。アニオン性脂質の添加効果が、二つのパターンに分類できる。相分離してアニオン脂質のクラスターが形成されている組み合わせの混合膜は、アニオン膜
単独に匹敵する ATP 結合の阻害効果を示している。これは一本鎖アニオン膜でも二本鎖アニオン膜でも同じである。

図４ DnaA タンパク質の ATP 取り込みに与える脂質膜の添加効果
図１と同じ濃度条件で行っている。４℃。
A，○ 1P；● 1P/2N，□ 1P/1N
B，○ 2P；● 2P/1N，□ 2P/2N［アニオン膜］/［カチオン膜］＝ 1/10

− 26 −

DNA 複製開始タンパク質（DnaA）の活性発現と相分離した混合二分子膜の関連性

４

総括（クラスター相分離脂質と DnaA タンパ
ク質との相互作用）５

その他（反転（N—混乱）ポルフィリンの光による一重項酸素発生効率）

本研究では、混合膜におけるクラスター形成に焦点を当

本プロジェクトと並んで、我々の研究グループは、反転て、その DnaA タンパク質との相互作用に与えるインパ環をもつ全く新しいポルフィリンを扱っている。一般に、クトを明らかにした。アルキル鎖数について同質でない組

通常のポルフィリンは、光物理化学適療法（photodynamic

み合わせの混合膜は、アニオン性脂質のクラスターを形成

therapy : PDT）において、癌細胞に濃縮しやすく、さらする。これに対して、疎水部が同じ構造の組み合わせではに三重項酸素を効率良く一重項酸素へ光増感するため

親水基間の静電相互作用によりアニオン性膜はカチオン性

PDT の治療剤の一つの候補として知られている。癌細胞

母体膜に分散してしまう。カチオン性の膜成分に取り囲ま近傍での光照射による反応活性な一重項酸素の発生が制ガれたアニオン性脂質は、その DnaA タンパク質に対するン効果につながっているものである。いかに効率的な一重親和性を低下させる。これに対し、アニオン性脂質同士が項の発生が可能で代謝に負担が掛からない色素であるかど

集合して一塊になりカチオン性膜に分散していれば、アニ

うかは、PDT 治療剤としての一つの重要な評価ポイント

オン性の単独膜と同様な DnaA タンパク質との親和性をである。幸い、本研究助成財団の一つの基礎研究所である示す。母体膜中のアニオン性クラスタードメインの大きさ

コーセー基礎研究所の荒金久美博士グループが、この一重に分布があり、これが、わずかな DnaA タンパク質との項評価システムをたちあげられておられ、ご厚意により、親和性の差として現れていると考えている。

図５ ATP—DnaA 複合体からの ATP 放出の動力学に与える脂質膜の添加効
37℃、濃度条件はず４と同じ。
［ATP—DnaA（仕込み）］＝ 1.1pmul/40L、［アニオン性脂質］＝ 30μM、［カチオン性脂質］＝ 300μM
A：○ 1P；● 1P/2N；□ 1P/1N
B：○ 2P；● 2P/1N；□ 2P/2N

図６− 27 −

各種ポルフィリンの分子構造と吸収スペクトル

私どもの新しいポルフ
ィリンの一重項酸素の発生について定性的な評価を行って頂いた。
忙しい中で、この様な門外漢からの申し出を快く引き受けて頂き感謝して致します。
使用した化合物の分子構造とそれらの吸収スペクトルを図６に示す。測定条件は、Ar レ
ーザー：波長 514nm（強度 100 mW）
、試料濃度
0.1mM で行った。相対標準化合物として
TPP を利用している。
514nm の吸光度の化合物間の比は、TPP 1 に対し、その他の反転体
ポ ル フ ィ リ ン は、 約
1/3 から 1/4 の強度で

図７

各種ポルフィリンを光増感剤とした時の一重項酸素の発生の比較ある。オーダーが異なる様な差はない。一重項酸素の発生は、その 1268nm の吸光

６）T. Katayama, J. Biol. Chem., 269 , 22075 - 22079（1994）.

度の相対比から求めた。図７に化合物１から４の増感剤とし

７）T. Katayama and E. Crooke, J. Biol. Chem., 270 , 9265 -てのプロファイルを比較している。TPP が明確に 1268nm

9271（1994）.

にピークとして一重項酸素の存在を示しているのに対し、全８）T. Kunitake, N. Kimizuka, N. Higashi, and N.

く同じ条件のもと反転環を持つポルフィリンの場合は、肩とNakashima, J. Am. Chem. Soc., 106 , 1978 - 1983（1984）.

なって現れるのがやっとである事が判る。また、反転体の二９）M. Shimomura, and T. Kunitake, J. Am. Chem. Soc.,

つの互変異性体の効果を検討している。どちらの構造でも著

104 , 1757 - 1759（1982）.

しい一重項酸素の発生は認められなかった。これ以上、踏み

10）T. Kunitake, Angew. Chem., Int. Ed. Engl., 31 , 709 -込んで検討していない。通常のポルフィリンが一重項酸素の726（1992）.

発生能力に優れている事が明かである。

11）T. Mizushima, Y. Ishikawa, E. Obana, M. Hase, T.

（引用文献）

Sekimizu, J. Biol. Chem., 271 , 3633 - 3638（1996）.

１）T. Atlung, Mol. & Gen. Genet., 197 , 125 - 128（1984）.

12）M. Hase, T. Yoshimi, Y. Ishikawa, A. Ohba, L. Guo, S.

Kubota, T. Katayama, T. Kunitake, E. Watanabe, and K.

２）A. van der Ende, T. A. Baker, T. Ogawa, and A.

Mima, M. Makise, Y. Yamaguchi, T. Tsuchiya, and T.

Kornberg et al., Proc., Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82 , 3954 -Mizushima, J. Biol. Chem., 273 , 28651 - 28656（1998）.

3958（1985）.

13）T. Kunitake, and N. Yamada, J. Chem. Commun., 655 -３）A. Kornberg, and T. A. Baker, in DNA Replication, 2 nd656（1986）.

Ed., W. H. Freeman and Company, New York（1992）.

14）Y. Ishikawa, and T. Kunitake, J. Am. Chem. Soc., 113 ,４）Y. Hirota, J. Mordoh, and F. Jacob, J. Mol. Biol, 53 ,621 - 630（1991）.

369 - 387（1970）.

15）T. Kunitake, J-M. Kim, and Y. Ishikawa, J. Chem.

５）S. R. Fuller, and A. Kornberg, Proc. Natl. Acad. Sci.,

Soc. Perkin Trans. II, 6 , 885 - 890（1991）.

U.S.A., 80 , 5817 - 5821（1983）.

− 28 −

発光、電子分光スペクトルによる酸化亜鉛中の表面・欠陥の状態解析と発光特性制御
東京工業大学大学院

大橋

理工学研究科直樹

Zinc oxide is an oxide semiconductor having direct band gap of 3.3 eV. It has been applied to white paint or additive for rubber
forming. Recently, some new applications of ZnO have been developed because of its wide bandgap and capability of electron
doping. For example, transparent electrodes for displays and solar cells, UV cut filters and coatings (sunscreen foundation), andlight emitting diode including UV laser. For all electrical and/or optical applications, controlling of electronic states of defects andimpurities is the most important technology to realize useful and efficient devices or components. Thus, in this study, growth ofhigh quality ZnO single crystals, doping defects into them, and characterization of their electro-optical properties were carried out inorder to investigate the electro-optical properties of ZnO.
The single crystals grown by CVT method exhibited high efficiency for UV emission, while the flux grown crystal showed
relatively lower UV emission efficiency and/or relatively strong visible light emission originated by defects and impurities.
The origin of the visible light emission has been investigated by doping experiments and the following conclusions were given,(1) the green emission due to deep donor is diminished by heat treatment, while that due to Cu impurity appear after thetreatment.
(2) the yellow emission appears in the ZnO doped with donor (Al) and acceptor (Li, Na), simultaneously. Further, the reduction,
which increase donor concentration, makes yellow emission intensity higher.
(3) red light emission was found by heavy doping of acceptors (Na, Li).
It is plausibly said that the understanding and controlling of light emission properties of ZnO will provides highly functionalsunscreen cosmetics.

１．緒５）。同じく 1998 年に、パルスレーザーを用いた真空蒸着

言プロセスによって形成された亜鉛薄膜が、室温においても酸化亜鉛は室温で約 3 . 3 eV という広いバンドギャップ

紫外線励起子レーザーとして機能することが報告された６）。

をもつ１） 直接遷移型の半導体である。そのため、酸化亜

また、先述した広いバンドギャップに起因する紫外線吸収

鉛粉末は白色であり、白色顔料として利用されてきた。ま

特性や白色性を応用し、化粧品用顔料として応用されていた、特定の手法で合成された再結合中心を有する酸化亜鉛

る。また、可視光に対する透明性やキャリアー注入の容易

粉末は、低速の電子による励起に対して極めて高い効率でさから、各種発光表示板や太陽電池用の透明電極へ向けて

青緑色の発光を与えるため、蛍光表示管などの発光・表示の開発研究が進められている。

デバイス用の蛍光剤として利用されてきた。また、光、な

ここに紹介したように酸化亜鉛の新たな用途はいずれも、

いし、電子励起によって酸化亜鉛中に形成される励起子はそのバンドギャップに起因する短波長発光、紫外線吸収、

60 meV という高い結合エネルギーを持つことが知られてい可視透明性を利用している。そこで、本研究では、酸化亜る。1970 年代に励起子発光の同定２） や低温での励起子レ鉛の光特性を支配する欠陥や不純物の状態を分析し、また、

ーザー発振

３）

の確認など、多くの研究がなされた。

その欠陥を積極的に制御することによって酸化亜鉛の光機

近年、高純度化された亜鉛金属、酸化亜鉛原料の入手が能の向上に資することを目的としている。

容易になり、また、酸化物作製プロセスが高度化し、後そのため、単結晶や粉末などの種々の形態を持つ酸化亜に述べるような新たな応用が検討され、また、実用化さ鉛を作製し、それらに熱処理、不純物の拡散などの処理をれつつある。材料合成においては、1998 年に Reynolds ら

ほどこし、その発効特性を中心に評価した。また、酸化亜４）鉛中の欠陥・不純物濃度を変えることで、欠陥発光特性をが気相輸送（CVT）法によって直径５cm、厚さ数セン

チにもなる高純度酸化亜鉛単結晶の育成に成功した。こ積極的に変化させることを試みた。

の CVT 法で育成された結晶は、低温においては、強度のカソードルミネッセンス（CL）法は電子線を用いた発低い励起光によってもレーザー発振することが報告された

光測定である。フォトルミネッセンス法に比べて励起エネ

Spectroscopic analyses of surface
and defects states of zinc oxide andcontrolling of its emission properties

ルギーが高いため、試料中に存在する発光中心を網羅的に探すには有効な手段である。また、試料の微細構造と対応した発光スペクトルの観測が可能である７）。

Naoki Ohashi

２．実Graduate school of science and technology,
Tokyo Institute of Technology

験

粉体試料には市販の酸化亜鉛粉体、酸化亜鉛蛍光体粉体を用いた。欠陥量、欠陥の状態を変化させるため、粉体に− 29 −

は熱処理を施した。熱処理は 800 〜 1200℃においてアルった。図２に写真を示す。本研究で得られた CVT 結晶でゴン、酸素などのガス中で行った。

最大の物は、太さ約１mm、長さ１cm 程の六角形の自形

単 結 晶 試 料 は、CVT 法、 フ ラ ッ ク ス 法 で 育 成 し た。

をもつ結晶であった。フラックス法と異なり、炉壁の浸食

CVT 法では蒸発・輸送を担うガスとしてアルゴン / 水素は見られず、そのため、より高純度の結晶が得られた。そ混合ガスを用い、再酸化・析出のためのガスとして酸素ガの結果、電子濃度は、フラックス法の 1 / 10 以下にあたる、

スを用いた。結晶育成にあたっては、原料および結晶析出

1016 cm- 3 のオーダーであった。

部の温度（1000 - 1350℃）、アルゴン / 水素混合ガスの混抵抗率、ホール係数の温度依存性から、フラックス法、合比（水素 : 0 - 30％）と流量（10 - 200 SCCM）、酸素ガス

CVT 法で得られた結晶とも室温ですでにキャリアーが出の流量（0 - 50 SCCM）の３種の育成条件を検討した。

払った状態にあり、キャリアーを与えているドナー準位はフラックス法では、原料として ZnO 粉末、融剤として極めて浅いことが示唆された。

弗化鉛を用いて、1150℃で溶融した後、毎時 5 - 10℃で徐先に述べた比較的大型の CVT 結晶はキャリアーガス中冷することで結晶を得た。不純物による欠陥発光の変化をの水素濃度を高め、育成部位での亜鉛の濃度を高めた結果検討するため、原料中にアルミ、リチウム、銅等の添加物得られたものである。しかし、CVT 法では、一般に、核を加えた。

生成が顕著であり、供給した原料が核形成に消費され、小CL ス ペ ク ト ル は、 室 温 か ら 10 Ｋ の 範 囲 で、1 . 5 〜型の結晶の集合体となりやすかった。また、原料の蒸発量、

4 . 0 nm の波長域で測定した。励起電子線は、５keV、１すなわち、結晶成長部位への亜鉛の供給量が低くなると、nA とした。装置の詳細は、引用文献８に示されている。

より結晶が細く針状になる傾向が認められた。

３
３−１

結果と考察

３−２

酸化亜鉛単結晶の育成

単結晶の発光フラックス法で得られた結晶では、不純物量に対応した

図１にフラックス法で育成された酸化亜鉛単結晶を示す。

発光スペクトルの変化が確認された。特に、リチウムとア長手方向で 20 mm、厚さ 0 . 5 mm 程の結晶が得られた。組

ルミの濃度が高い結晶において欠陥に起因する可視光の発成分析の結果、電気炉の耐火物に由来するリチウム、アル光が認められた。図３に代表的な発光スペクトルを示す。

ミニウムが不純物として検出された。フラックスに用いた

特に、育成直後の結晶に比べて、育成後に熱処理を加えた

弗化鉛によって炉壁が浸食され、それが原因となって不純結晶において欠陥に由来する可視発光が顕著であった。

物が混入した物と推定された。アルミニウムは数百 ppm、

一方、CVT 法で得られた結晶では強いバンド端発光がリチウムは数十 ppm の濃度であった。このアルミニウム認められ、欠陥発光は認められなかった。この結果は、キ

不純物により、キャリアーが導入され、ホール計数測定に

ャリアー濃度の測定結果と良く対応しており、欠陥が少な

17-3より室温で 10 cm の電子濃度を持つことが確認された。

いために、再結合中心の濃度が低く、酸化亜鉛本来のバン

これに対して、CVT 法で得られた結晶は針状結晶であド端発光が強調されたものと考えられる。CVT 結晶の発光の特徴は、励起子発光のフォノンレプリカが強調されており、室温では、３次の TO フォノンレプリカが最も強い発光を与えた。すなわち、室温における発光は、可視と紫外にまたがった発光となっている。

図1

フラックス法で育成した酸化亜鉛単結晶

図2− 30 −

CVT 法で育成した酸化亜鉛単結（方眼は 1mm）

発光、電子分光スペクトルによる酸化亜鉛中の表面・欠陥の状態解析と発光特性制御

図４に市販蛍光体粉末の熱処理前後の発光特性を示す。
熱処理によって、発光ピークが若干長波長側にシフトとしており、熱処理によって発光機構が変化したことが分かる。
特に、熱処理を施した後の試料では、低温においてフォノンとの相互作用に起因する 60 - 70 meV 間隔の微細構造が観測された。
銅を添加した酸化亜鉛単結晶の発光スペクトルの温度依
存性９）は、発光の強度が温度に対して単調増加ではなく、
130 K 付近に発光強度の最大値をもっていた。この特徴は、熱処理後の市販蛍光体と一致した。これに対して、市販の青緑色光を発する酸化亜鉛蛍光体は、温度に対して発光強度があまり変化しなかった。これまで、緑色の発光について多くの議論がなされてきたが、酸素欠陥 10）、不純物銅11）などの諸説が存在し、明確な発光機構は明かされていなかった。上記の結果は、市販蛍光体粉末には、不純物銅が含まれているにもかかわらず銅を再結合中心としない発光が現れるが、熱処理によって、不純物銅の配位状態が変化し、発光中心となることが示唆された。
（A）As − grown 結晶（低純度） （B）熱処理後の結晶（低純度）（C）As − grown 結晶（低純度） （D）熱処理後の結晶（低純度）
図3

フラックス法で育成した酸化亜鉛単結晶の CL スペクトル

一方、図３に示したように不純物濃度が比較的高い、フラックス育成単結晶に熱処理を施すと、黄色（2 . 0 eV）の発光が顕著となった。この黄色の発光は、これまでに Liが関与した発光であるとされている12）。しかい、フラックス結晶の主な不純物であるリチウムとアルミニウムを積極的３−３に加えた結晶の発光特性を評価した結果、この黄色の発光

欠陥発光の同定

ここで、フラックス法で得られた結晶の欠陥発光を同定が単純に Li の濃度との対応を示す物ではなく、酸化亜鉛

するため、各種の添加物を加えた酸化亜鉛粉末や、酸化亜中のドナー濃度とも強い相関を示すことを見いだした 13）。

鉛単結晶の発光スペクトルを測定し、可視発光の同定を試

すなわち、図５に示すようにアルミとリチウムを同時に添みた。

加した場合に黄色の発光強度が増した。特に、アルミを添加した試料を Ar 中で熱処理した際に、酸素中で熱処理し

図４ 市販の酸化亜鉛蛍光体に熱処理を施した際の発光スペク
トルの変化。測定は、20°K（A）熱処理前の市販品、（B）熱処理後− 31 −（A）熱処理後の無添加結晶（低純度）（B）熱処理前のアルミ添加結晶 ( 高純度 )（C）熱処理後のアルミ添加結晶 ( 高純度 )図５

アルミを添加した酸化亜鉛単結晶の CL スペクトルた試料よりも強い黄色発光が観測された。また、図 6 に示すように酸化亜鉛中のドナーに関連した ESR シグナル
（g= 1 . 96）の強度と黄色の発光の強度が相関していることも確認された。これらのことから、黄色の発光強度が、単純にアクセプターである Li を介した発光ではなく、ESR
シグナルを与えるドナーと相関していることがわかった。
また、リチウム、ナトリウムなどのアルカリのみを添加した酸化亜鉛では、紫外線照射時に目視で赤色の発光が観測された。このことからも、アルカリ添加のみでは、2 . 0 eVの発光が得られず、ドナーとアルカリの共ドープによって実現することが確認された。
なお、紙面の都合で割愛した、助成に関連するその他の成果は、引用 13）− 19）に詳細が報告されている。

４

結論

本研究で得られた実験結果から酸化亜鉛のコスメトロジ
ー応用に関連して以下の知見が得られた。
①高純度結晶CVT 法が高純度酸化亜鉛結晶の育成に効果的であることが確認された。CVT 成長結晶では、励起子のフォノン

図６

レプリカによる発光が顕著で、見かけ上、3 . 3 eV 以上のエ

アルミを加えた酸化亜鉛の ESR スペクトル

ネルギーの紫外線を吸収し、紫色（約３eV）の光に変換する。そのため、化粧品応用においては必ずしもこの高純

表１ 添加物と酸化亜鉛の発光の関係

度・高品質結晶が有用ではないと考えられる。

欠陥種

発光のエネルギー

ドナー（酸素欠陥）

2.3eV
（青緑）

アクセプタ
（リチウム・ナトリウム）

1.7eV
（赤色）

共ドープ
（アルミ＋アルカリ）

2.0eV
（黄色）

②可視発光の長波長化
可視発光に関して、表１に示すの関係が導かれた。化粧品応用、特にサンスクリーン応用の観点からは、アルカリ
ドープの赤や共ドープの黄色の色調が有用と考えられる。
特に、ストロボ光などに含まれる紫外線成分を高効率で肌色に近い色に変換するという機能をもつことが可能と考えられる。

８）T.Sekiguchi and K.Sumino, Rev. Sci. Instrum., 66（引用文献）( 1995 ) 4277

１）D.M.Kolb and H.-J.Schulz, "Current Topics in９）N . O h a s h i , T . O h g a k i , T . N a k a t a 他 ,Materials Science Vol. 7 ", Ed. E.Kaldis, Pub. North-"Cathodoluminescence and Photoluminescence of Zinc

Holland Publishing Company, Amsterdam ( 1981 ), p 226 -Oxide Single Crystals Grown by a Flux method" J.

268 .

Kore. Phys. Soc.. 35 ( 1999 )S 287 - 290２）Tomizg and Helbig: J.Luminescence, 14 ( 1972 ) 403

10）K.Vanheusden, W.L.Warren, C.H.Seager, D.R.Tailant,

３）C.F.Klingshirm, "Semiconductor Optics" Springer

J.A.Voigt and B.E.Grande, J. Appl. Phys., 79 ( 1996 )４）D.C.Look, D.C.Reynolds, J.R.Sizelove 他 , Solid State

7983 .

Commun., 150 ( 1998 ) 399

11）R.Dingle, Phys. Rev. Lett., 23 ( 1969 ) 579 .

５）D. C. Reynolds, D.C. Look, and B. Jogai, J. Solid State

12）O.F.Schermer and D.Zwingel; Solid State. Commun.,

Commun., 99 ( 1996 ) 869 .

8 ( 1970 ) 1559

６）P.Zu, Z.K.Tang, G.K.L.Wong 他 , J. Solid State

13）N.Ohashi, K.Nakata, T.Sekiguchi 他 , "Yellow

Commun., 103 ( 1997 ) 459 .

Emission from Zinc Oxide giving an electron spin

７）S.Tanaka, T.Takahashi, T.Sekiguchi 他 J.Appl. Phys.
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resonance signal at g= 1 . 96 " Jpn. J. Appl. Phys. 38( 1999 ) L 113 - 115− 32 −

発光、電子分光スペクトルによる酸化亜鉛中の表面・欠陥の状態解析と発光特性制御

14）N.Ohashi, S.Mitarai, T.Tsurumi 他 "Magnetization and

バルト添加酸化亜鉛バリスタのオージェ電子スペクトル ",Electric Properties of Pr-doped ZnO" , J.Electroceram

日本セラミックス協会学術論文誌 106 ( 1998 ) 914 - 919

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Lattice Relaxation of ZnO Single Crystal ( 0001 )ZnO Bicrystals doped with Co or Mn and Electric
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19）T. Tsurumi, S. Nishizawa, N. Ohashi 他 "Electric16）N.Ohashi, Y.Terada, T.Ohgaki 他 "Fabrication of ZnO

Properties of Zinc Oxide Epitaxial Films Grown by Ion

bi-crystals with twist boundary using Co doped ZnO

Beam Sputtering with Oxygen-Radical Irradiation", andsingle crystals", , J. Kore. Phys. Soc. 35 ( 1999 )S 213 -S 215

T. Ohgaki, Jpn J. Appl. Phys., 38 ( 1999 ) 3682 - 88 .

17）大橋直樹、田中 滋、鶴見敬章他 " プラセオジム・コ− 33 −

新規蛍光プローブを用いた一酸化窒素（NO）の生細胞における作用解析
東京大学大学院

菊地

薬学系研究科和也

Nitric Oxide (NO) is produced by a variety of cells and is involved in a broad array of physiological and pathophysiologicalprocesses. It is reported that NO perform in vasodilation, immunoregulation and neurotransmission. However, many proposed
physiological roles of NO were not proved directly by measuring NO. One of the reasons for this is the difficulty of direct, real-time
detection of this gaseous, free radical species. Although several methods of detecting NO, which is unstable and produced at low
concentration, have been developed, a new method is required which is satisfactory for studies in living cells in terms of selectivity,
sensitivity, and experimental feasibility. In order to obtain direct evidence for NO functions in cultured dermatological cells, I
designed and synthesized fluorescent NO indicators to detect NO in living cells as a means to examine the physiological functions of
NO. First, the reactivity of NO was examined in order to find a suitable reaction for selective NO trapping. I found that aromatic
amines react with NO in the presence of dioxygen to produce the corresponding triazenes.
We started to investigate the design and synthesis of fluorescent compounds based originally on 2,3-diaminonaphthalene as a
vicinal diamine. Based on these findings, we designed diaminofluoresceins (DAFs, Figure 1) as indicators for NO. The N-nitrosationof DAFs, yielding the highly green-fluorescent triazole form, offers the advantages of specificity, sensitivity, and a simple protocol forthe direct detection of NO (detection limit: 5 nM). Fluorescence detection with visible light excitation and high sensitivity enabled
the practical assay of NO production in living cells. These dyes were applied to NO detection from cultured macrophages, whichhave inducible NO synthase. The macrophages were cultured in a plate reader wells and the extracellular NO production wasmeasured by their fluorescence intensity. These results were successfully shown to establish the basic fundamental of detectiong
NO from cultured dermatological cells.

１

緒は細胞をすりつぶさないで、生きたまま機能を調べるこ言とができれば多くの情報が得られると考えられる。生体

本研究は一酸化窒素（NO）をターゲットとして、蛍光内分子を標的として生きたままの状態で可視化すること測定で可視化できるプローブを合成し、生きた状態での分は、Ca ２＋を測定する蛍光色素の合成より細胞生理学的研子の作用を明らかにし、生細胞における NO の作用を示す

究に広く用いられるようになった１）。この成功の理由は、ことを目的とする。具体的には、まず、一酸化窒素（NO）

従来電極などで局部的に調べていた生理学的現象が、細胞と反応して蛍光特性の変化する蛍光プローブを、分子種のあるいは組織全体として刻々変化する様子が観察でき新し

化学反応性に基づいてデザイン・合成する。次に、作成しい情報を得ることが出来るからである。

たプローブを用いて生理活性物質をリアルタイムで画像とさて、NO は 1987 年に EDRF であると報告されて以来２）、して捉えること（バイオイメージング）で、動的作用機序

循環系のみならず３）、免疫系や中枢系においても４）、そのの解明を行う。

役割が論じられるようになっている。この発見が 1998 年

細胞生物学研究のゴールの１つは生きている状態におけのノーベル賞受賞対象になったことは記憶に新しいところる分子の働きをその場で明らかにすることである。細胞内である。しかし、その真の活性に関しては未だに議論のあでの情報伝達物質やその物質を認識する分子が単離され、るところで、混沌としているのが現状である。その原因の試験管内での性質が明らかにされるにつれ、次の目標であ一つとして、NO が生理的条件下不安定であり、低濃度でる生理的条件での機能が重要視されるようになってきた。

の放出のために測定が困難であることから、生理的に機能

具体的には、細胞のどこで、いつ、どれくらい情報伝達物している「生きた」NO の動きを直接捉え、議論すること質が生成し作用するか？

ができないことが挙げられる５〜７）。この状況下、NO の作

情報伝達物質の濃度変化の分布や時間経過が異なるとシグナルの意味が異なるか？

情報

用解析に有効な検出法という観点から、特異的な検出に向伝達物質のシグナルが細胞内のある一部に対してのみ向け

けた分子デザインが可能な蛍光法に基づくことにした。蛍られるか？

光法に基づく測定法を開発し、バイオイメージングできれ等である。これらの問題点を解決するためにば NO の役割の解明に寄与できると考えた。

Detection and Functional Analysis of
Nitric Oxide on Living Cells Using Novel
Fluorescence Probe（DAN）を用いる NO 2−の測定法が知られていた８）。申請者

Kazuya Kikuchi

らは、NO の反応性を精査したところ、この様なジアミン

Graduate School of Pharmaceutical
Sciences, The University of Tokyo

で NO をダイレクトに測定できることを見出し、新しい測蛍光法に基づく方法としては、2 , 3—diaminonaphthalene

定法を開発した９）。しかし、DAN をそのまま用いたのでは。
様々な化合物をデザイン・合成しつつ検討した結果、ジア− 36 −

新規蛍光プローブを用いた一酸化窒素（NO）の生細胞における作用解析

ミノフルオレセイン（DAF 類、Fig. １）の開発に至った 10、11）。

２
２. １

実

100 mM）中に 10µM の濃度で DAF—2 を溶かし、100 µMの NO 溶液を各最終濃度になるよう添加した。撹拌後、蛍験

光 強 度 が 安 定 し た 後、 各 ス リ ッ ト 幅 2 . 5 nm で 励 起 光

ジアミノフルオレセイン（DAF）類の合成（515 nm の蛍光測定）及び蛍光（495 nm の励起光測定）（Fig. １）

をスキャンして測定した。

2 , 3—Dimethyl—6—nitroacetanilide （Ⅰ）
25 . 3 g の 2 , 3—Dimethyl—6—nitroaniline を 290 mL の酢酸
中、15 mL の無水酢酸を加え、１h 還流する。溶媒溜去後、

２. ３ DAF- 2 の NO Donor による蛍光強度変化の時
間経過の測定（Fig. ３）

EtOH から再結晶。
（29 . 3 g、y. 98％）

ナトリウムリン酸緩衝液（pH 7 . 4、100 mM）中に 10µM

3—Acetamido—4—nitrophthalic acid （Ⅱ）の濃度で DAF—2 を溶かし、各濃度の NO 放出生化合物

29 . 2 g の（Ⅰ）を１L の水に懸濁させ、100 g の MgSO 4を加え、還流させ、133 g の KMnO 4 を合計２L の水に懸（NONOate）を添加した。37℃で撹拌後、蛍光強度の時間変化を 495 nm 励起、515 nm 蛍光において測定した。

濁させながら、小分けにして入れる。熱時ブフナー濾過し、濾液に食塩を飽和させ、冷後 HCl で酸性にし析出物を濾取、濾液は AcOEt で抽出し、溶媒を溜去する。
（19 . 6 g、y. 52 ％）２. ４ DAF を用いたマクロファージ（RAW 264 . 7）からの NO の測定

3—Acetamido—4—nitrophthalic anhydride （Ⅲ）

96 穴マイクロプレート上でマクロファージ（RAW 264.7）

0 . 538 g の（Ⅱ）を 10mL の無水酢酸に 80℃で溶かし AcCl

を 10％ FBS、13mM NaHCO3、20mM glucose、70 mg/mL

１mL を加え、２h そのまま撹拌。溶媒を溜去し、少量のbenzylpenicillin、100mg/mL streptomycin を含む DMEM 中 5％

無水 CH ２Cl ２を加え、析出物を濾取。
（0 . 29 g、y. 58％）
3—Amino—4—nitrofluorescein（Ⅳ）（Ⅲ）と２当量の Resorcinol を
180℃で溶融し、２h 後 0 . 25 当量の ZnCl 2 を加え、210℃で乾燥固化させる。黒い固まりを砕いた後、0 . 6 N HCl を加え、２h 還流。冷後沈殿物を濾取し、乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製。
（y. ５％以上）
3 , 4—Diaminofluorescein（DAF—1）（Ⅳ）を Na2S および NaSH の水溶液中、24h 還流し、冷後 HCl でpH4 にし、沈殿物を濾取。乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製。
（y. 76%）必要であれば、硫黄を除くため、2N HCl で再結晶した後、NaOH 水溶液に溶かし、再度 HCl で pH４にし、沈殿物を濾取。
DAF—2、DAF—3 も同様の手順で作成した。

２. ２ DAF—2 の NO による蛍光スペクトルの変化の測定（Fig. ２）ナトリウムリン酸緩衝液（pH 7 . 4、fig. １ 1DAF—1，2，3 の合成スキーム− 37 −

激し、i—NOS を誘導する。16 時間後、２回 Krebs Ringer
Phosphate（KRP） で 洗 い、DAF—2（10mM）、L—Arg（ １mM）、NOS 阻害剤等を溶かした KRP（200mL/well）に取り替えて更に培養する。２時間後、培養液の上清を蛍光測定用
マイクロプレートに取り（180mL/well）、蛍光用マイクロプレー
トリーダーにて蛍光強度を測定した（Ex.485nm —Em.538nm）。

２. ５

血管平滑筋細胞のイメージングの方法

細胞培養：雄性 Wistar ラットの大動脈血管平滑筋細胞を Ross らの方法により摘出し 12）、10％ FBS と抗生物質を含む DME 培地で培養する。底がガラス製のシャーレ（MatTek 社 P 35 G—101）上に移して培養する。実験の前に無血清の DME 培地に取り替え、24 時間培養後、25 U/
mL IL—1β、30 ng/mL TNF—α、150 U/mL IFN—γ、12 . 5 mg/mL LPS を培地に加え、細胞を刺激し、さらに12 時間ほど培養する。
実験には 10 〜 20 代の細胞を用いた。
イメージング：それぞれの色素（10 mM）の KRP 溶液（0 . 2％ DMSO 含）に細胞の上清を取り替え、37℃で１時間ほ
ど か け て 色 素 を 負 荷 す る。wash out 後 L—Arg、L—
NMMA を含む KRP に取り替え、DAF—2 誘導体の場合、励起フィルター 490 nm、dichroic mirror 505 nm、バリア
Fig. ２フィルター 515 nm（long pass）の付いた蛍光顕微鏡（オNO 添加による DAF—2 の蛍光スペクトル変化（A）515nm 蛍光測定による励起光変化（B）495nm 励起光変化による蛍光変化

リンパス IX—70）で観察する。なおステージは 37℃に保った。露光時間、撮像間隔は DAF—2 誘導体の場合 132 ms、30 s に設定した。
Charge—coupled device カメラに取り込んだ画像はMCID（Imaging Research 社）で処理、記録した。

３
３. １

結果と考察

NO 検出蛍光プローブ DAF—2 の開発とその化

学的性質
申請者はすでに DAN のジアミノ基と NO が特異的に反応してトリアゾール体を生成することを見出したため９）、プローブをさらに最適化し生体サンプルから容易に NO を測定することを目指した。高感度かつ特異的に NO を検出できる蛍光プローブのデザインにあたり着目した点は、
１）生理的な pH 及び温度で水中において NO と速やか
Fig. ３

NONOate から生成する NO による蛍光強度変化（A）長寿命型 NOC12（半減期 327min）
による用 依存的時間経過（B）短寿命型 NOC13（半減期 13.7min）
による用 依存的時間経過に反応が進行すること
２）NO との反応により水中において量子収率が大きく増大すること
３）可視光領域に励起光を持ち光照射により細胞内分子の自家蛍光が無視でき光照射により細胞への傷害が小さいこと

CO 2 / 95 ％ air incubator に て 培 養（37 ℃） す る（1 ×の３点である。フルオレセインは 500 nm 付近の長波長に106 cells/well）。
実験の前に無血清の D—MEM に取り替える。24 時間後励起光を持つ。また、水中でも量子収率が減ぜず蛍光強度

各種濃度の LPS、IFN—γ を含む DMEM で培養細胞を刺が環境要因によって影響されにくいため広く生物応用が行− 38 −

新規蛍光プローブを用いた一酸化窒素（NO）の生細胞における作用解析

われている。モノアミノフルオレセインは量子収率が小さいことが報告されているが 13）、この理由は電子供与性のアミノ基がフルオレセインのフタル酸部分に入り、キサン
テン環とフタル酸部分の両方とも電子供与を行い電子の非局在化が起こりにくいためと考えた。この原理を利用し、ジアミノフルオレセイン（DAF）類を合成すれば量子収率が小さくなり、NO との反応でトリアゾール体を形成してはじめて蛍光強度が強くなることをもくろんだ。これをもとに DAF—1、DAF—2、DAF—3 をデザインし Fig. １に示すスキームで合成した。これら３つの分子ともそれ自身ではほとんど蛍光を持たなかった。
作成した分子のうち DAF—2 は NO との反応で 100 倍もの蛍光増強が確認された。DAF—2 による NO の検出限界
は５nM 程度であり、これは DAN に比べ約 30 倍、検出感度が改良されたことになる。NO との反応により、励起波長が 495 nm、蛍光波長が 515 nm（黄緑色）の蛍光が増Fig. ４

強し、前述の可視光励起という目標を達成することができ

トリアゾール体の蛍光強度への pH の影響た（Fig. ２）。中性のバッファーへの溶解度も良いので、使用濃度の 10 mM で析出することはなく扱いやすい。NO
溶液だけではなく、NO を自然分解により生成する分子NONOate を用いた場合でも、蛍光強度が時間を追って容量依存的に増強した（Fig. ３）。
pH 変化における蛍光強度の変化を Fig. ４に示した。
DAF—2 とそのクロル化体である DAF—4 について示したが、pH が６以下になると蛍光強度は大きく減弱する。この原因はフェノール性水酸基の脱プロトン化であると考えられたため、クロル化体の DAF—4 を合成した。DAF—4
ではフェノール性プロトンの pKa が小さくなったが、中性付近での蛍光安定性が低くなった。この原因はトリアゾール環上のプロトンの脱プロトン化によると考えられる。
これらの結果より、細胞系の実験では、中性付近での蛍光強度のより安定な DAF—2 を用いることにした。

３. ２

培養細胞を用いた NO 検出系の確立

生体サンプルとして、培養細胞から生成する NO を測定した。マクロファージの誘導型 NO 合成酵素（i—NOS）の発現量は LPS 及び IFN—γ の濃度に伴い増加することが知られている 14）。i—NOS は一旦誘導されれば酵素自身の発現量が増加するため、c—NOS とは異なり Ca 2 ＋非依存的に NO を産生し続けるので、LPS 及び IFN—γ の濃度依存的に NO 生成量は増加する。そこで、刺激する LPS、IFN—γ 及び細胞数を変化させてマクロファージを一定時間培
養後、DAF を添加し、２時間後の蛍光強度を測定した。
なお、マクロファージは D—MEM 中で培養するのが一般的であるが、培地中のフェノールレッドおよび FBS による蛍光の消光を懸念したため DMEM は用いず、DAF を用いる際には KRP 中に溶解して用いた。

Fig. ５ マクロファージを用いた DAF—2 と Griess 反応による
NO 検出の比較（A）DAF—2 を用いたマクロファージ（106cells/well）からのNO 検出。LPS 各濃度による i—NOS 誘導後、L—Arg 刺激２
時間後の測定（B）Griess 反応による NO 検出。L—Arg 刺激 48 時間後の培養
土清の測定− 39 −

Fig. ５は IFN—γ を加えない時の蛍光強度の増加率で、細胞数が 106 cells/well と多いものの２時間の培養時間で蛍光強度は LPS 濃度依存的に増加した。吸光度法を利用した既存の NO 2−測定法であるグリース法でも同様の結果（Fig. ５）であったが、感度が低いため９〜 40 時間の培養時間が一般的には要求される 15、16）。両方法を比較して分かるように、DAF を用いることによってより短時間での簡便な手法による NO 測定が可能となった。
更に、この蛍光強度の増加は IFN—γ の添加によって顕著に増加した。マクロファージにおいては LPS と IFN—γを同時に刺激することによって、相乗的に NO 産生能が増大することが知られており 15）、以上の結果はマクロファー
ジが生成する NO を DAF が捉えていることを示している。

３. ３

DAF 誘導体を用いたバイオイメージング

DAF を用いた NO 測定法が確立したので、培養細胞内での NO 産生の検出に応用することにした。そこで細胞に局在化のため、DAF- 2 を誘導化した。
３. ３. １

NO イメージングプローブ（DAF—2 誘導体）のデザイン、合成
細胞膜を透過し、細胞内のエステラーゼにより加水分解を受けるものとして DAF—2 DA の２つのフェノール性水

Fig. ６

DAF—2 誘導体を用いたバイオイメージングの原理

酸基をアセチル化することでデザイン、合成した（Fig. ６）。
Rotman らはフルオレセインのジアセチル体が細胞の中のエステラーゼにより加水分解を受けることを報告しているは蛍光が増加、d では最初は阻害剤が効いていない細胞も

17）。アセチル体はフェノール性水酸基及びカルボン酸の負あるが徐々に増加が止まる、e では全く蛍光が増加しない

電荷がなくなっており、脂溶性のため細胞膜を通過する。

という結果になり、NO を DAF—2 DA により捕らえてい通過後、エステルの加水分解により再び電荷を生じ、細胞ることが分かる。b では蛍光の増加が阻害されていく様子

質内にとどまる。

が、c では蛍光の増加が NOS の基質の L—Arg の供給により復活する様子が分かる。この様子を Fig. ８に画像とし３. ３. ２

DAF—2 DA を用いた血管平滑筋細胞の産生す

る NO のイメージングて示す。個々の細胞が NO 産生により、蛍光を生じるようになる経時変化が示された。

DAF—2 DA は非蛍光性であるため、エステルが加水分

DAF—2 が捕らえるのは NO 自身ではなく、酸化した

解されない限り蛍光を発しない。これを細胞外に加えるこNO ＋等価体である。このため NO の持つ薬理作用はブロとで、ラット大動脈由来血管平滑筋培養細胞に適用した。

ックしない。この性質は Ca 2 ＋等の他の生理活性物質との血管平滑筋細胞は i—NOS を有することが知られている。

同時変化を調べるときに有利であると考えられる。

細胞に DAF—2 DA を負荷後細胞を観察すると明らかに蛍４

光強度は負荷していない細胞よりも強く、エステラーゼによりエステルが加水分解されていることが分かった。

総括NO の特異的蛍光プローブを作成するために、ジアミノ

Fig. ７a は刺激により NOS を誘導した細胞の上清に１ベンゼン誘導体（DAF 類）をデザイン・合成した。この

mM の L—Arg があるときの蛍光強度の経時変化、b は a

うち DAF—2 は感度、蛍光波長ともに最適であり生体サンの増加している後で上清を１mM の L—NMMA に置換しプルから発生した NO を測定するために有用であった。生たときの経時変化、c はその後、さらに 10 mM の L—Arg

体サンプルとして誘導型 NOS を持つマクロファージを用に 置 換 し た と き の 経 時 変 化、d は １mM の L—Arg にいた結果、細胞外に放出された NO を蛍光強度変化として

10 mM の L-NMMA を添加したもの、e は無刺激の細胞の捉えることに成功した。細胞内に細胞無侵襲に加えること

上清に１mM の L—Arg を加えたときのものである。a でのできる DAF—2 の誘導体を合成し、細胞内の NO の産生− 40 −

新規蛍光プローブを用いた一酸化窒素（NO）の生細胞における作用解析

a：刺激した細胞の１mM L -Arg を含む培養液
下での変化
b：a の後、培養液を１mML-NMMA に置換したときの変化
c：さらに b の後、培養液を 10mML-Arg に置換したときの変化
d：刺激した細胞の１mML-NMMA と１mM LArg を含む培養液下での変化
e：無刺激の細胞１mM L -Arg を含む培養液下での変化＊細線は個々の細胞の蛍光強度を示し、太線はその平均値を示す。

Fig. ７

各条件下における個々の血管平滑筋細胞の蛍光強度変化

Fig. ８

ラット大動脈血管平滑筋細胞が生成する NO の可視化を画像化することに成功しfluorescence properties, J. Biol. Chem., ２６０, 3440 -た。これらの結果は、種々の培養細胞や組織に応用が可能

3450 , 1985 .

であると考えられ、皮膚細胞及び組織の NO 産生機構を明２）Palmer RMJ, Ferrige AG, Moncada S,: Nitric oxide

らかにする上での基盤的研究である。

release accounts for the biological activity ofendothelium-derived relaxing factor, Nature.,（参考文献）

３２７, 524 - 526 , 1987 .

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oxide is an intermediate, Biochemistry, ２７, 8706 - 8711 ,indicators: Diaminofluoresceins, Anal. Chem., ７０,1988 .

2446 - 2453 , 1998 .

4）Bredt DS, Hwang PM, Snyder SH,: Localization of12）Ross R, Glomset J, Kariya B, et al. : A platelet-

nitric oxide synthase indicating a neural role for nitric

dependent serum factor that stimulates theproliferation of arterial smooth muscle cells in vitro,oxide, Nature, ３４７, 768 - 770 , 1990 .

Proc. Natl. Acad. Sci. USA, ７１, 1207 - 1210 , 1974 .

５）長野哲雄，: NO の検出・測定法 . NO 化学と生物，日本化学会編，: 季刊化学総説，30，学会出版センター，13）M u n k h o l m C , P a r k i n s o n D R , W a l t D R , :Intramolecular fluorescence self-quenching of

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time measurement of nitric oxide production ex vivo
by luminol-H 2 O 2 chemiluminescence method, J. Biol.

14）Lorsbach RB, Murphy WJ, Lowenstein CJ, et al., :Expression of the nitric oxide synthase gene in mouse

Chem., ２６８, 23106 - 23110 , 1993 .
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macrophages activated for tumor cell killing. Molecularmeasurement of nitric oxide production in rat brain bybasis for the synergy between interferon-gamma andthe combination of luminol-H 2 O 2 chemiluminescence

lipopolysaccharide,   J. Biol. Chem., ２６８, 1908 - 1913 ,1993 .

and microdialysis, Neurosci. Lett., ２３３, 157 - 159 ,15）Gross SS, Levi R, : Tetrahydrobiopterin synthesis.

1997 .

An absolute requirement for cytokine-induced nitric８）Misko TP, Schilling RJ, Salvemini D, et al., : A
fluorometric assay for the measurement of nitrite inoxide generation by vascular smooth muscle. J. Biol.

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Chem., ２６７, 25722 - 25729 , 1992 .

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16）Lewis RS, Tamir S, Tannenbaum SR, et al., : Kinetic

of a fluorescent indicator for the bioimaging of nitricanalysis of the fate of nitric oxide synthesized bymacrophages in vitro, J. Biol. Chem., ２７０, 29350 -oxide, Biol. Pharm. Bull., ２０, 1229 - 1232 , 1997 .

29355 , 1995 .

10）Nakatsubo N, Kojima H, Kikuchi K, et al., : Direct
evidence of nitric oxide production from bovine aortic17）Rotman B, Papermaster BW, : Membrane properties

endothelial cells using new fluorescence indicators:of living mammalian cells as studied by enzymatic

diaminofluoresceins, FEBS Lett., ４２７, 263 - 266 , 1998 .

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and imaging of nitric oxide with novel fluorescent− 42 −

USA, ５５, 134 - 141 , 1966 .

老化による皮膚色素沈着の
画像定量自動解析システム確立のための基礎研究
慶應義塾大学

田

医学部

中

勝

A computer assisted area of involvement measurement of skin lesions would be useful for the assessment of psoriatic patients.
It is, however, sometimes difficult when lesions cannot simply be separated using the normal threshold tool of an image analyser.
Because of the body curvature, the peripheral site of the body is usually shaded and the central site has glare. Shade correction isusually performed by use of the brightest point or the darkest point choosing programs in the small kernel basis, such as 5 ｴ 5 or 9 ｴ 9.
However, when the objectives are large such as psoriatic lesions, the procedure will have to be repeated several times. To avoid
this repetition and to obtain a well fit curved line to account for the body curvature induced glare and shadow, we have devised a
simple C-program for averaging from linear neighbouring pixels.
We used an Optomax V image analysis system and Image Pro Plus. An image from a patient with psoriasis was captured froma colour slide through a video camera attached to the system. Turbo C++ Ver 1.01 (Borland) was used for programming andcompiling. First, 49 pixel moving point average was programmed. The image data were read line by line and the new grey level
data for the averaged image were calculated. Secondly, the program written above was developed into the program for n pixels(3<n<499, n; odd number).
Execution of the pixel averaging program with the original image resulted in the background brightness image file. When thiswas subtracted from the original image, Optomax produced an image which was easily detected using the standard thresholding
tool and the percentage of area involved was calculated.
The pixel averaging was used in this study, because the size of the lesions was relatively small. If the plaque of the psoriaticlesion is very large, planimetry might be a better method. These methods are accurate enough to measure the area of lesions forassessment of disease severity.
We further applied the method to measure skin lesions in patients with pemphigus. The programs were run with images and theprocessed images were analyzed with an image analyzer, Image Pro Plus. The processed images were compared with the original
images and shown to correspond to most of the lesions, which included blisters, erosions and erythemata. It was more difficult in
pemphigus than in psoriasis, because the lesions in the former consist of new and old skin lesions and of more polymorphous lesions.
Although there still are some difficulties in detecting polymorphous lesions, this method would be a useful and powerful tool when
considering the statistical relationship, for example, between severity and ELISA titers for Desmogleins 1 and 3.

１

緒

今回これらの問題点を解決するため、陰影補正プログラ言

ムの開発と適応、新しいイメージアナライザーを利用した

皮膚病変の定量方法には、熱傷範囲を概算する、“９”エッジ部の判定、色分析、画像の背景の平坦化を行いさまの法則による方法、塩ビシートを用いてトレースする方法、

ざまな皮膚病変の定量を試みた。分析定量には、まず紅斑

画像解析を用いる方法などがある。しかし、測定者によるを主体とする病気である尋常性乾癬の患者の画像を用いたばらつきが大きかったり、手技が煩雑であるなど、問題はが、色素沈着などの病変に応用するため、多様性のある皮多い。通常、皮膚病変の重症度や改善度は主治医の主観や、膚症状を有する紅斑性天疱瘡にも応用した。

その都度定義された項目によって、便宜上、分けられるこ

本研究の最終的な目的は、画像処理解析法を応用して、とが多い。著者らは、画像処理プログラムを開発し、コン

色素沈着性皮膚病変の面積および色の自動定量化をおこな

ピュータ上で皮膚病変を自動定量する方法を報告してきい、色素沈着の程度や治療効果を判定するための客観的な

１〜３）

た

。しかし、これらのプログラムも個々の症例ごとに条件を変えねばならず、いまだ完全に自動定量するには至指標をつくること、および老化に関連した色ベクトルの変化を定量的に解析することである。

っていない。画像解析上の主な問題点はコントラスト、境２

界部の判定、影による画像の濃度偏りなどである。これら

験

まず初めに、皮膚病変を定量化するのに必要な解析ブロのすべてがある程度解決しないと自動定量は困難となる。
Basic research for the development of
automatic image analysis system on skinpigmentation due to ageing

実

グラムが、確実に病変部の辺縁を認識し、オリジナルの病変を検出していることをイメージアナライザー上で確認した。紅斑性病変において、著者らが開発したプログラム

Masaru Tanaka（Figure １）を実行し、画像処理したものを用いて画像解

Department of Dermatology, Keio
University School of Medicine

析定量を行った。
次に、慶応病院皮膚科における色素沈着を伴う皮膚疾
患の臨床写真を収集し、デジタル画像に変換、JPEG 形式− 43 −

#include <stdio.h>main(){
char
Header[94];unsigned char
GreyLevel[721];
int
greylevel[720];
float
newgreylevel[720];
int
retgreylevel[720];
unsigned char
NewGreyLevel[721];
int
loopcount;
long
loop;
int
i;
int
ip;
FILE
*infile;FILE*outfile;
char
FName[20];charfname[20] = “masnew.dat”;
printf(“Input odd number of pixel for average (3-499) : “);scanf(“%d”,&ip);
printf(“Welcome to %d pixels averaging program!\n”,ip);
printf(“\nInput an image file name : “);scanf(“%s”,FName);
infile = fopen(FName, “rb”);
fseek(infile,0L,SEEK_SET);
fread(Header,sizeof(Header)-1,1,infile);
Header[93]=’\0';
outfile = fopen(fname,”a+b”);
fwrite(Header,sizeof(Header)-1,1,outfile);for(loop = 1; loop < 561; loop ++){fseek(infile,(loop-1L)*720L+93L,SEEK_SET);
printf(“\nSeeking to : %ld”, ftell(infile));fread(GreyLevel,sizeof(GreyLevel)-1,1,infile);
GreyLevel[720]=’\0';for(loopcount = 0; loopcount < 720; loopcount ++){greylevel[loopcount] = (int)GreyLevel[loopcount];}
newgreylevel[0] = greylevel[0];for(i = 1; i < (ip+1)/2; i ++){newgreylevel[i] = ((2*i-1)*newgreylevel[i-1]+greylevel[2*i-1]+greylevel[2*i])/(2*i+1);}
for(i = (ip+1)/2; i < (1441-ip)/2; i ++){newgreylevel[i] = (ip*newgreylevel[i-1]+greylevel[i+(ip-1)/2]-greylevel[i-(ip+1)/2])/ip;}for(i = (1441-ip)/2; i < 720; i ++){newgreylevel[i] = ((1441-2*i)*newgreylevel[i-1]-greylevel[2*i-721]-greylevel[2*i-720])/(1439-2*i);}for(i = 0; i < 720; i ++){retgreylevel[i] = (int)newgreylevel[i];}for(i = 0; i < 720; i ++){NewGreyLevel[i] = (char)retgreylevel[i];}NewGreyLevel[720]=’\0';
fwrite(NewGreyLevel,sizeof(NewGreyLevel)-1,1,outfile);}/*Close the file*/
fclose(infile);
fclose(outfile);
printf(“\nThe output file is ‘masnew.dat’\n”);}

Figure １The computer program to calculate averages of grey levels from n pixels in the neighbourhoodの圧縮ファイルとして、フロッピーまたは光磁気ディスクの環境を設定した。画像は、まず横 720 ピクセル、縦 560（MO）に保存した。これらの画像を著者らが開発したプロ

ピクセルの画像として photoshop 上で白黒の raw data としグラムで処理できるよう、プログラムの移植を行い、さらに、て保存し、著者らの開発したプログラムを実行できるよう、

ウインドウズ 95 上で実行できるよう、また、Photoshop

93 bytes の header を付加した。これらを用いて、さまざまver. 4 . 0 for Windows の画像ファイルを読み込めるようにな色素沈着性皮膚疾患の面積、色の定量化を試みた。

プログラムをインストールした。これにより、著者らが開最初に用いた疾患は尋常性乾癬であり、ここでは主とし発したプログラムと新しいイメージアナライザーの両方をて紅斑部の面積定量を試みた。次に、より多様性のある病

同じ画像ファイルに対して使うことができるようシステム

変を有する天疱瘡の画像定量を試みた。

− 44 −

老化による皮膚色素沈着の画像定量自動解析システム確立のための基礎研究

３

結

果

研究代表者らは画像解析により、乾癬の病変定量を行うためのプログラ
ムの開発をし、患者の臨床写真の撮影
状態を補正し、紅斑面積の画像解析による自動的定量に成功した。これらを用いて、皮膚病変を画像解析法によって定量化したところ、エッジ部の検出、紅斑性の病変定量については、ほぼ、オリジナルの病変を反映する結果が得られた（Figure ２ a-e）。すなわち、オリジナルの臨床写真においては体の側面に近づくにつれて陰影が強くなり、このため、単純な画像の２値化を行うと、病変部と側面健常皮膚がほぼ同じ
Figure ２a-e. Image analysis for erythematous
lesions. a. An original image for the patientwith psoriasis vulgaris. b. Detection of thedark lesion without image processing. Both lesions and shadow are detected. c. The image
processed with an averaging program. d. The
subtracted image. e. Detection of the dark lesion after image processing. Only lesions arecompletely detected.

明るさであるため、影の大部分を病変として認識してしまう。このオリジナ
ル画像を水平方向 49 画素を平均化す
るプログラムにて処理し、オリジナル
画像から引き算をすると、ほぼ背景の明るさが平坦化した画像に変換される。
これを２値化すると、イメージアナラ
イザーが影の部分を認識することなく病変部のみを定量することができる。
色素沈着性病変においては、ほぼオリジナルの画像を描出できたものの、一部色素沈着の程度が２段階に変化している部分などで、若干読みとられな
くなる部分がみられた（Figure ３ a-e）。
すなわち、大きめの色素沈着において、辺縁部が淡褐色、中心部が濃褐色の部
位では辺縁部の淡褐色の部分が欠落し、中心部の色の濃い部分のみ、病変として、認識された。また、バックグラウ
ンドの色が完全に黒でないため、平均化の過程で、側面の陰影部とバックグ
ラウンドが相互作用を生じ、一部の影の部分も病変として認識されてしまった。したがって計測前にマニュアルでFigure ３a-e. Image analysis for pigmented lesions. a. The original image. b. Detection
without image processing. Only shadow andvery dark areas are detected. c. The image
processed with an averaging program. d. The
subtracted image. e. Detection of the dark lesion after image processing. Most of the pigmented lesions are detected, but comparedwith the original image, some areas with lightpigmentation are not detected.

修正を行う必要性が生じた。完全に自動定量するためにはこれを解決する方法が、必要と思われた。
天疱瘡の皮膚病変定量においては、症例によりうまくいくものと、かな
り大きな誤差を生じるものに分かれた。紅斑以外に落屑、びらん、色素沈− 45 −

着などが混在する病変においては目標をどの色に置くかで、定量に大きな違いを生じることがわかった。紅斑部を主として認識させる設定に
おいてはびらん部や濃い色素沈着部は同時に認識されたが、淡い色素沈着部は検出されなかった（Figure ４ a-c）。今後自動定量するには、いくつかのカラーセグメントに分けたり、病変を区切って定量するなどの方法を考える必要性が

Figure ４a-c. Image analysis for
pemphigus lesions. a. The original
image. b. The subtracted image.
c. Detection of the dark lesion
after image processing. Most of
the erythema, erosion, and darkly
pigmented lesions are detected,
however compared with the original image, some areas with lightpigmentation are not detected.

あると思われた。

４

考察

病変を正確に描出するためには、やはり、オリジナルの写真の出来に大きく依存する部分がある。人間のからだは丸くできているため、常に写真の辺縁部には影ができやすい。フラッ
シュや照明を工夫することも必要であるが、自ずから限界がある。できあがった写真を最大限に生かすた

５

めには、画像処理を用いた、画像の明るさの平坦化が必須

総括である。著者らは、オリジナル画像の病変の大きさにより、本研究の実現により、今まで難しかった病変定量の方法

水平方向に平均化するピクセル数を変えることのできる平が一般化され、治療効果判定や重症度判定を客観的におこ均化プログラムを開発した。これにより、ちょうどからだ

なうことができるであろう。たとえば、新しいタイプの化の丸みを横方向にのみ平均化するという非常にシンプルな粧品を開発したときの効果を判定するための基準を数値に

画像処理による陰影補正が可能となった。プログラムが簡より明確にできるという点で、きわめて実用的な意義が大単なため、その実行にはほとんど時間がかからず、また使きいと思われた。また老化に伴う皮膚の色調や凹凸の変化

用メモリーも少なくて済む。このプログラムは、比較的小を客観的に数値で判定することができれば、それらをカバさな病変が多数存在し、その融合傾向が少ないときに特にーするような化粧品の開発にも応用できる可能性があると有用であった。

思われた。

欠点としてはやはり、病変が多様化した場合に単純な平しかしながら、コンピュータ上の処理には限界があるた均化だけでは病変認識率が低下し、一部にマニュアルでのめ、やはり、まず撮影条件を最適にする必要があり、特に修正の必要性を生じた点である。また、バックグラウンド

フラッシュや撮影ランプ、反射を防ぐための偏光フィルタ

は黒い反射の少ない暗幕などの布を用いるのが適切であるー、コントラストをあげるためのカラーフィルターを使用と思われた。コントラストはコンピュータ上である程度ますることが重要である。また、複数の写真を経時的に撮影では修正可能であったが、その分雑音も拾ってしまうため、していき比較する場合の撮影条件の統一が必要である。こあとからフィルター処理が必要であった。紅斑性病変を撮のような条件の統一は比較していく場合には最も重要な点影するときは黄色またはグリーンのフィルターをカメラにである。そのためには同じ場所で撮影すること、被写体を装着してから撮影することで、よいコントラストの写真が同じ場所にたたせること、カメラマンが同一の場所で、同得られた。目標とする病変の色により、撮影時に使用する一の構えで撮影すること、などが求められる。

レンズのフィルターを変えることが、コントラストをあげ

６

るために必要であると思われた。

今後の研究

多様性のある病変定量には、さらなるプログラムの開発

画像解析のための基本的なデータは今回の実験で多く得が必要であると思われる。すなわち、まず、色によりいくられた。今後はいろいろな症例に応用したり、健常人でのつかのセグメントに分けるプログラムそのセグメントごと

データを集めて比較していくことが有用ではないかと思わに定量を行うことができるようなプログラムなど、複数のれる。また、人形などのモデルを使うことにより、照明のプログラムの統合が必要かもしれない。これらについては問題を少しでも解決して、よりよい画像を得られるような今後の課題といえよう。

撮影条件をそろえることも必要ではないかと考えられた。
集めたデータを集計し、疾患による色ベクトルの違い、経過に伴う面積および色ベクトルの変化を定量し、統計学− 46 −

老化による皮膚色素沈着の画像定量自動解析システム確立のための基礎研究的に解析する。

area of involvement measurement by image analysis in

解析した結果を用いて、新たな症例の主成分分析、判別分析を行い、得られたデータを用い、特に老化に伴う色素psoriasis. J Invest Dermatol 105: 497, 1995 .
２）Tanaka M, Edwards C, Gaskell S, et al.: An efficient

沈着性皮膚病変の画像診断法の有用性を検討する。

method for shade correction in the image analysis of

さらに、健常部の色ベクトルに関しても年齢との相関関係を求め、最も老化との関連が高いと考えられるベクトル

psoriatic lesion. Br J Dermatol, 134 : 591, 1996 .
３）Tanaka M, Edwards C, Gaskell, et al.: The usefulness

量を設定する。

of computer programs for shade correction in the image
analysis of psoriatic lesions. J Invest Dermatol, 109 : 457,

（ 参考文献）1997.

１）Tanaka M, Edwards C, Marks R: Methods to improve− 47 −

紫外線吸収効果をもつ酸化チタンの光触媒作用と生体適合性
東京理科大学

基礎工学部

鈴

高

木

広

Antimicrobial activity and the biocompatibility of titania were investigated using glass plates and beads coated with thephotocatalyst. The activity of photocatalyst was stepwise regulated by the thickness of titania layer on the surface of soda-lime
glass plates. Time-dependent growth profiles of E. coli cultured on the glass plates showed that the viability decreased due to thephotocatalytic reaction induced by UV radiation. On the other hand, the UV absorption by titania powder was found to be effective
on decreasing the damages for microbial cells. Similarly, the medium components including serum proteins for tissue culture ofepithelial cell line were effective on protecting cells from the damages by UV radiation.
These results suggested that the UV
absorbent reaction is effective on protection of cells rather than damaging by the photocatalytic reaction.

１

緒

銀系無機抗菌剤研究会がフィルム密着法を用いた試験方法

言を規格化し，抗菌剤や抗菌製品の評価指標としている。そ

二酸化チタンの光触媒作用による環境浄化と抗菌技術がこで，このフィルム密着法に基づき酸化チタン材料の抗菌注目されているが，抗菌および滅菌効果を定量的に評価す

効果を評価する試験方法を検討した。酸化チタンの光触媒る技術が十分に確立されていないことが，光触媒技術の実の抗菌作用を医療・衛生機器や環境浄化に利用するための用化において障害の一つとなっている。従来の無機系抗菌

研究は，近年活発に行われており，通常は，数時間の光照剤の多くは無機担体に銀を主剤，および銅，亜鉛を副剤と射による微生物の生菌率の変化を計測することによって比して混入し，これらの金属イオンが徐々に溶出することに較検討されている７）。しかし，多くの細菌の比増殖速度はより，微生物の細胞膜を損傷したり電子伝達系を阻害する

15 分〜１時間以内であることから再現性が乏しく，迅速ことが知られている。一方，銀担持リン酸ジルコニウムは，な定量的評価技術の確立が望まれている。

結晶構造に組み込まれた銀イオンが光照射下で活性酸素の二酸化チタンは，歯磨き粉の添加剤や食品添加物として生成を促進し，殺菌作用が得られる 。同様に，二酸化チも利用されるほど安全性の高い物質であるとされており，タンの光触媒作用による殺菌効果も活性酸素の生成に依存

その紫外線吸収効果により化粧品の添加剤としても利用さ

１）。二酸化チタン（nれている。大気汚染によるオゾン層の減少により紫外線が型半導体）にそのバンドギャップ以上のエネルギーをもつ

強まり皮膚癌の増加が危惧されており，紫外線吸収効果を光を照射すると，伝導体に電子が，価電子帯に電子の抜けもつ二酸化チタンは，紫外線から皮膚を保護する目的で化殻である正孔が生じる。この電子，正孔を半導体表面に取粧品の添加剤として用いられている。しかし，屋外におけり出し，表面接触物質と反応させることで，二酸化チタン

る化粧品としての使用においては，二酸化チタンによる紫表面で酸化と還元の両反応が進行する。水や酸素が吸着し外線の吸収に伴い上述のように活性酸素の生成が避けられした反応であることが知られている

２、３）

た場合の酸化，還元反応は次のように考えられている
酸化；

。

４〜６）

ず，このような光触媒剤に接している皮膚組織に影響を与

OH ＋

h →

・OH

えることも危惧される。従来このような皮膚組織に対する

＋

e −→

O2 −

光触媒作用の影響は十分な検討が行われてこなかったのが還元； O2−＋

このとき生じるヒドロキシラジカルやスーパーオキシド

現状である。そこで，上記の抗菌性評価試験方法に基づき，イオンなどの活性酸素や正孔が接触分子と反応する。二酸

二酸化チタンによる光触媒作用が皮膚組織に対する影響を化チタンの正孔の酸化力はオゾンよりも強く，たいていの解析するための評価試験方法も検討した。二酸化チタン材

有機化合物を水と二酸化炭素にまで分解することができる。

料が光照射下で皮膚組織に与える影響を明らかにするため

このような無機系抗菌剤の抗菌効果試験方法としては，に，組織培養において細胞の生育と損傷に与える影響を定Effect of Photocatalytic Reaction on the
Biocompatibility of UV Absorbent Titania
Takahiro Suzuki
Department of Biological Science andTechnology, Science University of Tokyo

量的に測定する試験方法を検討し，さらに細胞炎症のメカニズムを解明することを試みた。皮膚に接する化粧品成分
が，光照射下で直接的あるいは間接的に影響を与えていることは現実的であり，組織培養によりその影響を再現することが可能となれば，より生体に安全で生体保護作用を持
つ化粧品や生体移植材料の開発と評価に役立つ。また，個体差や再現性に問題がある動物実験の代替試験法としても− 48 −

紫外線吸収効果をもつ酸化チタンの光触媒作用と生体適合性有望である。

いて実験を行った。スライドグラスへの TiO 2 コーティン

以上の背景に基づき本研究ではこれまでに，二酸化チタ

グと同様に，ガラスビーズ（φ3 mm）に 10 層の TiO 2 をンの抗菌性を迅速に評価するための試験方法を検討し，そコーティングした試験材料，および，シリカゲルビーズ（φの結果に基づき組織培養で二酸化チタンの光触媒反応の影

3 mm）に TiO ２をコーティングした試験材料を使用した。

響を解析する方法を検討した。

振 盪 フ ラ ス コ へ 各 試 料 100 cc を 添 加 し， 試 験 用菌 液 を

2
２. １

実

200 mL 加え，室温（約 20℃）で光照射しつつ 160 rpm で験

往復振盪を行った。光照射時間が５，10，20，30 分間に抗菌性評価試験

２. 1. 1

達した時点で，サンプル液を少量抜き取り，適宜希釈し寒検定用菌液の調製天培地で CFU を計測した。この撹拌式滅菌試験では，菌検定用菌株には E.coli W 3110 株を用いた。前培養には株に E.coli と一般細菌の混合菌液を使用し，それぞれ初期

基本培地として，ラクトトリプトン；10 g/L，酵母エキス；

菌体濃度は約 200 cells/mL および 2000 cells/mL に設定し５g/L，NaCl；５g/L，pH；7 . 0 に調製した培地を用いた。また，菌体分散液には発酵廃液（廃糖蜜，コーンステた。この基本培地 10 mL を試験管に取り，120℃で 15 分

ィープリカー培地）を蒸留水で 100 倍希釈した水溶液を使間オートクレーブ滅菌したのち，冷蔵保存した寒天培地ス用した。

ラントから１白金耳を接種し，37℃で 12 時間振盪培養した。前培養時の菌体増殖は濁度計を用いて 610 nm の濁度が約 1 . 0 に達した時点で培養を終了し，回収した菌液を基本菌液とした。この時点で菌数は約 10 ９cells/mL に達した。光照射試験には，この菌液をさらに希釈し 10 ５〜 10 ７
cells/mL に調製し，初期菌数の影響を比較した。この基本菌液の希釈には，基本培地を 100 倍に希釈した培地（希釈培地）を用いた場合と，蒸留水を用いて希釈した場合を比較した。

２. 1. ２

スライドグラス試験法

チタンのイソプロポキシドからチタニアゾルを調製し，ディップコーティングによりスライドグラス（76 × 26 ×1 mm）面上に二酸化チタンの薄膜を形成した。乾燥の後，焼成する工程の回数により３，５，10 層の TiO 2 薄膜を用意し試験片とした。
図１に試験装置の概略図を示す。各スライドグラス面へ

図１

スライドグラスを用いた光触媒反応実験の操作手順

試験用菌液を 100µL 塗付し，この菌液をカバーガラスで覆い，図に示すように２本の紫外線ランプ（UV；10 W）
または蛍光灯（10 W）の中間の位置に置き，UV または蛍光灯で一定時間照射したのち菌液を回収し，寒天培地上で１日後のコロニー数（CFU）を調べた。光照射時のスラ
イドグラス面の乾燥を防ぐために，シャーレをポリエチレ
ンフィルムで蓋をするとともに，シャーレ内には無菌水を満たした。また，短時間での光触媒作用を解析するために，
光照射時間を１，３，５，10 分間と設定した。
ス ラ イ ド グ ラ ス 試 験 法 で は 初 期 菌 体 濃 度 を 約 ６×
10 cells/mL に設定した。光照射後は，無菌蒸留水 1 . 9 mL
5で洗浄しすべての菌液を回収し，光触媒作用による生菌数の変化を比較した。

２. 1. ３

ガラスビーズ試験法

光触媒作用による空間的な連続接触滅菌効果を解析するために，図２に示す振盪撹拌フラスコ（容積 500 mL）に
UV ランプ（６W）を挿入した光触媒反応試験装置を用− 49 −

図２

振盪フラスコを用いた光触媒反応実験装置

２. 1. ４

ガラスビーズ試験法

分解産物が付着したことが考えられる。

各種酸化チタン材料による細胞損傷レベルを定量的，且以上の結果，TiO ２層の光触媒反応による抗菌性試験を，つ迅速に評価する条件を検討するために，ヒト口腔類表再現性良く，ある程度定量的に行うための実験条件を設定

皮癌由来の上皮系 KB 細胞を用いた。抗菌性試験に用いたすることが可能となった。

TiO2 スライドグラス上に KB 細胞を播種した後，シャーレ内の培地に浸漬し 5％ CO 2 インキュベーター内で静置培養した。培地には牛胎児血清を 10％添加した MEM 培地（10％ FBS/MEM）を使用し，24 時間静置培養した後，培地を除去し，リン酸緩衝液（PBS）で洗浄後，図１に示した実験装置を用いて，蛍光灯または UV ランプで一定時間光照射し，細胞の生育へ与える影響を比較した。

3
３. １

結

果

スライドグラス抗菌性評価試験

試験菌液の条件，培地条件，および播種菌数の影響を検討したところ，通常の前培養操作では菌の生育活性が不均一なため，光触媒反応の抗菌効果を定量的に評価することが困難であった。そこで，対数増殖期の前培養液を回収し分注液を− 80℃に保存し，冷凍種菌液を各試験毎に融解
し，そのまま希釈して使用することで再現性の良い結果が
図３得られることがわかった。また，LB 培地で希釈した菌液

蛍光灯および UV ランプの照射時間と残存生菌数を使用すると光照射中に増殖が進み，抗菌効果を得るまでに数時間の照射を要するとともに，試験液の乾燥や温度変化が大きく影響することがわかった。そこで，蒸留水を希釈に用いるとともに，乾燥を防ぐ方法を検討したところ，
コーティング層に依存した生菌率の変化が 10 分間の光照
射時間により定量的に再現性よく得られることがわかった。
このようにして最適化した実験条件下で行ったスライド
グラス試験法における，光触媒反応による抗菌性試験の結果を図３に示した。初期菌体濃度を約６× 10 ５cells/mL に設定した場合に光照射後の回収液中の菌体濃度は約３×10 3 cells/mL となり，図に示すように TiO 2 のコーティン
グ層数に依存して殺菌効果が変化した。図４には各死滅曲線から計算した死滅速度定数をまとめた。その結果，UV

図４

照射の場合には TiO 2 ５層の場合に死滅速度がほぼ最大に酸化チタン被膜層数による死滅速度ｒ変化

達したが，蛍光灯の場合には，コーテ
ィング層数に依存して死滅効果が高まることがわかった。比較のために
TiO 2 スライドグラスを用いて乳酸の分解を試みたところ，図５に示すように反応初期には TiO 2 層による分解反応が顕著であるが，徐々に反応性が低
下し，TiO 2 層数の差の影響も見られなくなった。これらの結果は，TiO 2層の表面へ乳酸の分解生成物が蓄積したことを示唆しており，抗菌性試験においても，死滅菌体や溶菌による菌体

図５

TiO2 被膜スライドグラスによる乳酸の分解− 50 −

紫外線吸収効果をもつ酸化チタンの光触媒作用と生体適合性

３. ２

ビーズ抗菌性評価試験

表１

ガラスビーズおよびシリカゲルビーズに TiO 2 をコーテ

振盪処理による濁度

		
菌体液 UV 処理液 ガラスビーズ TiO ２ シリカゲル TiO ２
				/UV 処理液/UV 処理液

ィングし，振盪フラスコを用いて空間的な抗菌性効果試験

濁度を行った結果を図６に示す。いずれの場合にも 30 分以内

0.018

0.020

0.50

1.08

の UV 照射により，E. coli および一般細菌の生菌数は急速に減少した。しかし，光触媒ビーズを添加せずに UV 照射を行った場合よりも，滅菌速度が低下していることがわかった。
表１には，処理前の菌液と各 30 分間の振盪
後の，610 nm における濁度の変化を示した。
UV 照射下での振盪では，濁度にはほとんど変化は認められなかったが，ビーズを添加した場合には著しく濁度が上昇したことがわかる。すなわち，振盪によりビーズ表面の崩壊と TiO 2 の剥離が起きたために試験菌液が白濁し，その結果溶液の透光性が低下し，UVによる殺菌効果が抑えられたことがわかった。
このように，光触媒反応を空間的に利用す

図６

振盪フラスコを用いたビーズ材の抗菌性評価試験

る場合には，溶液中の透過光量を高く維持す
ることが不可欠であった。すなわち，粉末状の TiO 2 を分散させた場合には，TiO 2 表面積が増大し光触媒反応量や菌体との接触効率を増加させる効果よりも，濁度が上昇すること
により透過光量が減少し，UV の殺菌力が低下するために，死滅速度が減少することがわ
かった。

３. ３

ビーズ抗菌性評価試験

光触媒スライドグラス上で KB 細胞に一定時間光照射した後，生細胞数を測定した。図７は通常の 10％ FBS/MEM 培養液に浸漬したまま光照射した場合の生細胞数の変化を示す。UV および蛍光灯を照射したが，比較に

図７

10％ FBS/MEM 培養液中の KB 細胞に対する光触媒作用用いたスライドグラス素面上の生細胞数といずれも大差なく，光触媒作用による細胞毒性は認められなかった。この結かから，培地中の各種成分が光エネルギーを吸収していると考えられたため，PBS 中に浸漬し光照射を行ったところ，図８に示すように 30 分間の光照射により細胞の死滅率に顕著な差が認められた。死滅速度は蛍光灯よりも UV の方が大きく，また，いずれの場合も TiO 2 のコー
ティング層数に依存して死滅率が大きくなる
ことがわかった。これらの結果は，TiO 2 面における光エネルギーの利用効率が大きく影響していることを示しており，細胞密度にも影響されることが示唆された。そこで，細胞

図８− 51 −

PBS 中の KB 細胞に対する光触媒作用

とはないことが示唆される。また，抗菌性試験において濁度の上昇により光触媒作用が失われたことからも，光触媒反応による毒性作用よりも，紫外線による直接的な毒性作用の方が細胞に対する影響が顕著であり，TiO 2 により紫外線を吸収することで細胞保護効果が高まると考えられる。
各種生体材料開発において組織炎症マーカーとしての酵素系が見い出されてきており，中でも活性酸素の生成に関与する NO合成酵素の誘導発現は，組織の炎症と再構築の過程で重要な役割を担っていることが明らかにされつつある。したがって，NO
図９合成酵素と光触媒作用により活性酸素の生

PBS 中の高密度 KB 細胞に対する光触媒作用

成が相乗的に高められる可能性も残されて密度を２倍に高め，光触媒層の全面が細胞で覆われる条件

おり，これらの反応性と影響を皮膚組織培養において解析

下での影響を調べたところ，図９に示すように，光触媒のすることで，さらに詳細に光触媒の保護作用と副作用を評

影響が消滅することがわかった。以上の結果，培地成分や価することが可能となるのではないかと考えられる。

細胞構成成分により光エネルギーが吸収され，TiO 2 面での光触媒作用は細胞の生育にほとんど影響を与えることが（引用文献）

ないという結論に達した。

１）鈴木昌二：抗菌剤及び抗菌加工製品の抗菌効力評価

４

考

法 , セラミックス , 31 , 590 - 593 , 1996 .

察２）橋本和仁，藤島昭：ニューセラミックス , 2 , 55 - 61 ,1996 .

酸化チタンの紫外線吸収効果と活性酸素生成が，培養組織に与える影響を解明するために，抗菌性試験および細胞

３）垰田博史：抗菌性セラミックス製品 - 酸化チタン光触媒 , セラミックス , 31 , 587 - 589 , 1996 .

毒性試験を行った。光触媒面で反応が著しい場合には，培養組織に対しても毒性をもつことがわかった。しかし，抗４）Ishibashi K, Nosaka Y, Hashimoto, K, Fujishima A: J.
Phys. Chem., 102 , 2117 - 2120 , 1998 .

菌性および細胞毒性のいずれの場合でも，通常用いられる
各種蛋白質やアミノ酸含有培地中では，光触媒作用が無視

５）Hoffmann MR, Martin ST, Choi W, Bahnemann SW:
Chem. Rev., 95 , 69 - 96 , 1995 .

できる程低下することがわかった。これは，生体分子が光のエネルギーを吸収したり透過光量を減少させるため

６）Salama SB, Natarajan C, Nogami G, Kennedy JH: J.
Electrochem. Soc., 142 , 806 - 810 , 1995 .

に，光触媒面に達する光エネルギー量が減少するためであると考えられた。これらの結果から，紫外線吸収剤として

７）砂田香矢乃，橋本和仁，藤島昭：酸化チタン光触媒反化粧品に混合される酸化チタンの光触媒作用は，太陽光等応による抗菌効 , J. Antibact. Antifung. Agents, 11 , 611 -にさらされる分散剤表面層でのみ反応しており，皮膚との620 , 1998 .

接触面側では皮膚組織に影響を与える程の作用を及ぼすこ− 52 −

皮膚の老化に伴うテロメア短縮化とフリーラジカル障害に対する、細胞内アスコルビン酸のエンリッチング化による防御効果横尾誠

広島県立大学

生物資源学部生物資源開発学科

一、長

尾

則

男、三

羽

信 比

古

Genuine degrees of cellular senescence of human skin are not necessarily in accordance with calender ages, and wereshown in the present study to be potently evaluated by measurement of length of telomeric DNA for a trace amount of
human skin trash prepared with the ordered instrument rasp. Telomeric DNA was shortened in a manner dependent on
calender ages (0-72 years old, n=28) of donors as shown by Southern blot using epidermal DNA isolated from human skin.
Prevention of age-dependent telomere shortening was achieved by pro-vitamin C, ascorbate-2-O-phosphate (Asc2P), but notby ascorbic acid(Asc) itself administered to human skin epidermal keratinocytes NHEK-F, which also acquired an elongatedlife span by 5.1 population doubling levels when administered with Asc2P but not Asc. UV-B induced cell mortality in humanskin epidermal cells HaCaT was prevented by Asc2P but not Asc. Thus, Asc2P but not Asc is shown to protect humanskin keratinocytes against telomere shortening, cellular senescence and UV-B injury.

１緒④マウスでの皮膚癌転移の阻害効果。

言

この技術蓄積を活かして本研究では、次の点を解析する：

年齢を経るに伴って皮膚に各種の「老化症状」を生じる①ヒト皮膚表皮の角化細胞を用い、老化に伴うテロメア短が、この根本的な原因の一つとして、皮膚を構成する細胞縮化を解析し、皮膚老化の新規の指標になりうるかを明の「分裂速度」の低下が重要である

１−３）

らかにする、｡ この細胞老化

や細胞寿命を規定する要因として、細胞分裂に伴う「テロ②老化に伴うテロメア短縮化を細胞内アスコルビン酸エン

メア（46 本の染色体の両端を保護する DNA 繰り返し構造）

リッチングによって人為的に防御できるかを調べる、の短縮化」が極めて本質的であるとして、近年急速に着眼③この作用機序として細胞内フリ−ラジカルの消長と皮膚老化との相関性を明確にするされ始めた。テロメアが短くなると、染色体が不安定となり、細胞寿命が尽きることが知られている

４）

｡

２

一方、アスコルビン酸（ビタミンＣ）は、36 億年もの生物進化の過程で淘汰選抜されてきた優れた抗酸化性の体内

２. １

験

皮膚老化の新規の指標としての、テロメア長とテロメラーゼ活性の定量分子であるが、それにも関わらず、従来の研究では、外来的に動物に投与しても劇的な生物学的効果は少なかった。

実①テロメア長は、（TTAGGG）4 を DNA プローブとして用このため我々は、アスコルビン酸に酸化抵抗性を付与した

い て、Southern blot を 行 な い、TRF（telomere

誘導体を用いて、各種の動物細胞の細胞内アスコルビン酸

ristriction fragment）として求める。我々は既にヒト臍

濃度を、細胞外濃度よりも 67 〜 120 倍もの「高濃度化」（エ

帯静脈の血管内皮 HUVE 細胞でテロメア長を求めた４）。

ンリッチング効果）することを可能にした１−９） が、未修

②テロメラーゼは、癌細胞と生殖細胞では強い活性である

飾のアスコルビン酸では９〜 21 倍に過ぎなかった。我々ため、僅か 10 〜 100 細胞でも検出できるが、正常な体はこの酸化抵抗型アスコルビン酸誘導体によって、従来は細胞では従来 10 ５〜 10 ６細胞でも検出できないことが多見られなかった顕著なフリ−ラジカル制御効果の幾つかをく、殆ど活性がないと見なされてきた。我々は、Shay

下記の通り見出した：博士による TRAP 法を改良して 10 ４個の正常細胞でも４−９）測定できる高感度な測定系を確立済みである４）｡①ウシ血管内皮細胞の過酸化脂質障害の防御、②ラット肝臓・心臓の虚血障害の防御、③これらの方法により、
ヒト皮膚表皮の角化細胞で加齢（継③ヒト皮膚角化細胞の UV 障害の防御、代培養）に伴ってテロメアが短縮化し、テロメラーゼ活

Preventive effects of enrichment of
intracellular ascorbate on age-dependent
telomeric DNA shortening and free
radical injury in the skinSeiichi YOKOO, Norio NAGAO, Nobuhiko
MIWA
＊

＊

性が消失することを示せると予想する。

２. ２

皮膚老化モデルとしての、ヒト皮膚表皮の角化細胞 NHEK-F の継代培養２、４）①この正常細胞（2 倍体の染色体）は，細胞分裂する積算

Laboratory of Gene Control Technology,
Department of BioTechnology, Hiroshima
Prefectural University School of BioSciences− 53 −

回数（populatio doubling lebel）が 27 〜 29 に達すると、それ以上は分裂できなくなり「分裂寿命」となる（Hayflick'slimit）。この１ラウン
ドに３〜４か月を必要とする。
②各継代培養ごとに一部の 細 胞 を 冷 凍 保 存 し、
後 日 一 括 し て 解 凍 し、
テロメア長とテロメラーゼ（テロメア伸長酵素）活性を測定する。

図１

AlkPhos 標識プローブ／化学発光法によるテロメア計測の原理
制限酵素（HinfI）はサブテロメアの特定の塩基配列の部 で切断するが、テロメア部 では切断しないので、取得された DNA 断片（TRF：terminal restriction fragment）はテロメア全長を含む。
⑴ TRF の中のテロメア部分を認識する DNA プローブである（TTAGGG）4（分子 、約 7900）に酵
素 AlkPhos（分子 、約 80000）を架橋剤 FA で結合させて、AlkPhos で標識した DNA プローブを作製する。⑵この場合に、DNA プローブによるテロメア認識力も、AlkPhos の酵素活性も，いずれをも低下させないような結合反応条件が求められる。⑶架橋剤の添加 が多過ぎると、特に酵素の側の多数の部 で分子内架橋を引き起こすので不適切である。⑷と同時に、酵素と DNA プローブとは結合反応での混合比や添加濃度によっては、１：１（mol/mol）から逸脱した結合比となってしまい、テロメア検出に不適切となる。⑸発色団を含むリン酸エステル基質が酵素によって加水分解されてテロメアの 置で化学発光を生じる。

③各継代培養ごとに、細胞の継代直前密度（飽和細胞密度の 75％）と細胞サイズ分布をコー
ルター・カウンターとチャネライザーで定量
する。

２. ３

細胞内アスコルビン酸エンリッチング（高濃度化）による皮膚老化の人為的防御４、５、６）①各種の酸化抵抗型アスコルビン酸誘導体を細胞に投与し続けて、細胞内フリ−ラジカルを消去した場合、テロメ
ア短縮化を防御して、細胞寿命を延長するかを調べる。
②この逆に、細胞死を起こさない程度のＨ２O ２や紫外線Ｂ波を弱いストレスとして負荷し続けた場合、テロメア短縮化が促進して、細胞寿命を縮めるかも、併せて調べる。

３
３. １

結

果

テロメア計測技術の高感度化

従来のテロメア測定法はテロメアを識別する（TTAGGG）４
DNA プローブの 5 ' 末端を［32 P］標識してサザンブロッ
トで検出していた。著者らは 300 bp 未満の DNA には不向きとされてきた AlkPhos/FA 標識を 24 bp のプローブでも高率化でき、これに適した ECL で強い化学発光を生じさせ従来の 15 〜 100 倍ほど高感度に初めて非放射能（NonRI）法での検出を可能とした（図１）２）｡DNA 20 ng（従来の検出限界は 300 〜 2000 ng）を用いて AlkPhos/FA—
ECL サザンブロットで定量できた（図２）。
テロメア測定工程としては①皮膚擦過屑を回収②界面活性剤による細胞膜の溶解、RNA と蛋白の除去でDNA を抽出③ DNA をサブテロメア部分で制限酵素（HinfI）で切る④ DNA 断片の混合液をアガロースゲル電気泳動で分離

図２ AlkPhos 標識プローブ／化学発光法によるテロメア計測の感度
左 か ら 順 に 各 々 約 71000、43000、29000、14000、
7100 個のヒト皮膚表皮細胞からの抽出に相当する 100、60、40、20、10 ng の DNA を制限酵素 HinfI で切断してテロメア
を化学発光法で検出した。20 ngDNA（14000 細胞）で検出できることが示された。従来の放射能標識法は 100 万細胞が必要だった。

⑤ DNA 断片を別の膜に転写
４DNA プローブが⑥ AlkPhos 結合させた（TTAGGG）⑦酵素作用で化学発光を生じる反応物を与えるとテロメア部分だけが化学発光し、これをＸ線フィルムで感光。

テロメア含有 DNA 断片だけと結合− 54 −

皮膚の老化に伴うテロメア短縮化とフリ−ラジカル障害に対する、細胞内アスコルビン酸のエンリッチング化による防御効果

３. ２

ヒト皮膚表皮のテロメアの年齢依存性

短 縮化し 72 才までほぼ直線的に短縮化していることを

Cooke のグループはヒト皮膚片が年齢に伴ってテロメア

AlkPhos 標識プローブ法で見出した（図３、４）。ヒト皮短縮化を受けると報じたが、表皮・真皮の他に皮下組織も

膚表皮がテロメア短縮化を伴って老化していることを初め含みその含有率も不揃いだった。著者らは各年令のヒト皮て示し、日本人の基準となる皮膚表皮テロメアの年齢依存膚片から表皮側を単離して DNA 抽出した結果、TRF（テ性の１次方程式も算出した。

ロメア全長含有 DNA 断片）は０才の 11 . 6 kb から次第に

図３

ヒト皮膚表皮のテロメア長の年齢依存的な短縮
サザンブロットでの TRF（テロメア全長含有 DNA 断片）の電気泳動パターンにおいてスミア（ホウキ星状の感光部分）の「位置」が上であるほどテロメアが長いことを示す。したがって、若年→中年→老年……と老化するに伴ってテロメアの位置が下になってきているが、これはテロメア短縮化を意味する。テロメアは０才の 11.6kb から次第に短縮化し 70 才までほぼ直線的に短縮化していることを AlkPhos 標識プローブ法で見出した
図４ ヒト皮膚表皮のテロメア年齢における診断シ
ステムの検 基準線の作成
サザンブロットをデンシトメトリによってピーク 置と半値幅を求めてグラフ化した。年齢に伴ってテロメアが直線的に短縮化するが、10 才ほど
年を取るとテロメアは約 1kb ずつ短くなることを示す。日光への露出部 と非露出部 との皮膚で短縮化率に違いがあるかは未確定だが、少なくとも圧倒的な差異があることはなかった。

− 55 −

３. ３

ヒト皮膚表皮の角化細胞 NHEK—F のテロメア

短縮化
ヒト表皮角化細胞 NHEK—F は細胞分裂回数を経るに伴ってテロメアが短縮化していた。我々は既にヒト静脈血管内皮細胞が細胞分裂回数を経るに伴ってテロメア短縮化が見られることを見出した４）が、これと同様な結果だった。
ところがプロビタミン C の Asc 2 P を継続的に投与しておくと、テロメア短縮化が抑制され、細胞寿命も増大した。
NHEK—F は 9 . 0 回まで細胞分裂して分裂停止した。プロ ビ タ ミ ン Ｃ の ascorbic acid—2—O—phosphate—Mg 1 . 5（Asc 2 P）を添加しておくと、13 . 7 回まで細胞分裂できるようになり細胞寿命が延長されたが、Asc（未修飾ビタミ
ン C）添加では 8 . 9 回の分裂に止まった（図５）。これは通常１mm 2 にしか細胞増殖しない皮膚細胞が Asc 2 P による細胞寿命延長で、24 mm 2 の皮膚面積にまで達する生涯
細胞供給能をもたらすことを意味する（図６）。Asc 2 P 添
加は細胞増殖速度の点でも対照の 2 . 6 倍に増大させ、皮膚の細胞供給速度も供給細胞数も向上させると示唆された（図７）。テロメア長（TRF）は分裂停止前の対照細胞が6 . 8 kb、Asc は 6 . 3 kb であるのに比し、7 . 3 kb と維持することが示された（図８）。

３. ４

皮膚の近い将来の老化度を予測する先行指標

皮膚テロメア診断は「肌の今の外見は良いが、今後は急

図６ 正常ヒト皮膚表皮由来の角化細胞 NHEK—F の生涯細胞供給力（Life-long Cell Supplying Ability）
ヒト新生児の皮膚 1mm2 の表皮細胞 NHEK—F は、細胞寿命が尽きるまで 477mm2 相当（「切手」サイズ）の 算 積分にまで増殖する。しかし、Asc2P 投与によるテロメア維持を介して、54％多くの回数分、細胞分裂するので 算 積 13300mm2（一万円札サイズ）にまで増殖し、生涯での細胞供給総数を 27.9 倍に増大したことになる。

変するのか、維持されるか」を明確にする。このため化粧

図５ 正常ヒト皮膚表皮由来の角化細胞 NHEK—F の細胞分裂
寿命
この角化細胞は 8.9 回まで細胞分裂してその後に分裂停止した。プロビタミンＣの ascorbic acid—2—O—phosphate—
Mg1.5（Asc2P）を添加しておくと、13.7 回まで分裂できるようになり細胞寿命が延長されたが、Asc（未修飾ビタミ
ンＣ）添加では 8.9 回の分裂までに止まった。

図７ 正常ヒト皮膚表皮由来の角化細胞 NHEK—F の細胞増殖速度
Asc2P 投与は無投与の 2.6 倍の細胞増殖速度に増大させ、皮膚の細胞供給速度も供給細胞数も向上させるので、老化防御に働くと考えられる。

− 56 −

皮膚の老化に伴うテロメア短縮化とフリ−ラジカル障害に対する、細胞内アスコルビン酸のエンリッチング化による防御効果①今まで肌の受けた環境要因や肌ケアの良悪を判定する②外見の肌状態からは判らない近い将来に起こる皮膚変化
を予測する
にある。
テロメア計測の従来技術は、多量の細胞（100 万個以上）が必要なため、人体から外科手術で 5 mm 2 程度の組織を摘出する必要があった。しかし、人体の皮膚などから微量の皮膚擦過屑を苦痛なく採取することは従来は困難だった。
著者らは顔の皮膚のテロメア長を計測して DNA レベルでの肌年齢が判る診断システムを確立した。
①針の形状・材質、植込み密度・角度、植針面に各種の工夫を凝らしたラスプ（極細径ステンレス極短針を高密度に植えたディスポブラシ）で頬の皮膚を無痛、無出血、無痕跡に擦る。テープストリピングは局所的に皮膚を損傷し、DNA が粘着剤に包埋され後工程に支障を来す。
図８ 正常ヒト皮膚表皮由来の角化細胞 NHEK—F の細胞分裂に伴うテロメア短縮化
この角化細胞は細胞分裂に伴ってテロメアが下限（TRF6.8kb）まで短縮化する。一方、Asc2P 投与による細胞寿命延長の場合はテロメア短縮化が緩慢で済んだ。しかし、寿命延長の場合もテロメア下限に近づくと同様に寿命が尽きる。この事実はテロメア短縮化速度が寿命の長短を決めると共に、一定値のテロメア下限までの短縮化が寿命の長短に関わらず寿命限界をもたらすことが示された。無投与細胞が分裂停止する直前の時点で比較すると、無投与細胞のテロメア
長（TRF）は 6.8kb、Asc 投与では 6.3kb であるのに比し、Asc2P 投与では 7.3kb と維持されている。

②皮膚擦過屑の付いたラスプ部分を切り離して搬送する。
③ 48 —72 時間後に DNA 肌年齢が分かる。
テロメアとテロメラーゼの実体と生物学的意義の解析は
近年、急展開した。老化に伴ってテロメア長が 12 〜 15 kb
から５〜８kb に短縮化する（Nature 1990）が、これはヒト肺の繊維芽細胞についてであり、本研究の皮膚の角化細胞ではわかっていない。血管内皮細胞では我々が初めて見出した（Life sci., 1998 ; Fragr. J. 1997）。癌のテロメア長は細胞によって極端に長いか（> 15 kb）、短いか（< ５kb）が多いが、その周辺の正常組織は一定範囲内（６〜
13 kb）だった（Int.J. Oncol. 1995）。テロメラーゼは癌と品消費者は今の肌の手入れ法や使用化粧品が適正かどうか生殖組織で高活性で、正常成人の体細胞は活性がないと見を知る客観的な判断材料となる。「細胞の増殖速度」は死なされていたが、PCR を用いた TRAP 法で測定が高感度

んだ皮膚細胞を補充する迅速性に関わるが、細胞増殖速度となった（Methods Cell Sci.' 95）。テロメア長は DNA 複

は暦年齢に画一的に規定されるのではなくテロメアの長短製の度に 50 〜 150 bp ずつ短縮する（EMBO J. ' 92）が，によって規定されていることを著者らは示した

高酸素圧／フリ−ラジカルよる DNA 障害でもテロメア短

。

２、４）

①テロメア短縮化の急激な進行中で細胞増殖が維持されて縮化が起こる（Exptl. Cell Res. 1995）。この逆に、テロメ

いてもその直後に細胞増殖が遅延し始めることになる。

ア短縮化への抑制効果は、我々による細胞内アスコルビン②一方、テロメアが維持されていると相当期間に及んで未酸の高濃度化だけが有効例であり２、４）、他に報告例はない。

だ盛んな細胞増殖を維持できることを意味する。よって、

我々は、ヒト臍帯静脈の血管内皮 HUVE 細胞を継代培

見掛けの細胞増殖や外見だけでは「肌の曲がり角」に近養すると、細胞分裂の積算回数（PDL）が 27 で分裂が停

いかまだまだかは判別できず、テロメア計測でだけ判別止したが、細胞に酸化抵抗型

できることになる。

ビン酸—2—O—リン酸（Asc 2 P）を 50 〜 130 µM 継続投与

４考

ビタミンＣの L—アスコル

すると、PDL 42 まで延命し、テロメア短縮化も減速させた。

察

継代開始で 12 kb あったテロメア長は７kb にまで短縮化

従来は肌年齢を科学的に実証する客観的な方法が殆どなすると、細胞分裂が停止することは違いないが、テロメア

かった。皮膚では真皮よりも表皮の方が紫外線Ｂ波・皮脂・短縮化の減速が細胞寿命の延長に直結するを初めて示した。

微生物の影響を受けて老化が進行するので、表皮角化細胞

我々は HUVE 細胞がテロメラーゼ活性を微弱ながらものテロメア長を測定することが皮膚老化度の評価に有意義

つことを、PCR を用いた TRAP 法で見出だし、かつ、細となる。テロメア長は測定時直前の生理状態や気候条件に胞の加齢に伴ってテロメラーゼ活性が次第に消失するが、左右されない真の皮膚老化度（肌年齢）を客観的に算定で延命効果のある Asc 2 P を投与した HUVE 細胞ではテロきる。肌年齢を診断する意義は、

メラーゼ活性が長期間に及んで保持できることも示した。

− 57 −

細胞外のアスコルビン酸（Asc）は細胞内に取込まれて、 （参考文献）
細胞外濃度の８〜 22 倍に濃縮蓄積される程度であるが、

１）三羽信比古・編「バイオ抗酸化剤プロビタミン C 〜

Asc 2 P は細胞内取込みに伴って脱リン酸化され Asc の形

皮膚傷害・ガン・老化の防御と実用化研究〜」フレグラ

で 67 〜 120 倍という高濃度に細胞内に濃縮蓄積される

ンスジャ−ナル社（1999）

ことを、各種（血管内皮・線維芽・表皮角化・悪性黒色腫）

２）横尾誠一ら：Fragrance J. 27（7）: 69 - 74（1999）; 日

細胞で我々は見出した４〜６、８、９）｡ ヒト・マウス皮膚表皮の角化細胞への紫外線Ｂ波の照射による細胞死は、Asc は本香粧品科学会第 24 回学術大会 ,p. 67（1999）
３）三羽信比古：「ビタミンＣの知られざる働き」、Sci &

抑えないが、Asc 2 P 投与で抑制されることを我々は WST—１法（ミトコンドリア脱水素酵素活性）と Ethidium

Technol Series 第 33 巻、丸善（1992）
４）Furumoto K, Inoue E, Nagao N, Hiyama E & Miwa

homodimer ／蛍光プレートリーダー法（細胞膜障害）で見出した（Cell. Mol. Biol. Res. ' 95）。今回ヒト皮膚表皮のN :  Life Sci. 63 : 935 - 948（1998）
５）Fujiwara M, Nagao N & Miwa N : Free Radical  Res.

角化細胞でも同様な細胞防護効果を見出したことになる。

27 : 97 - 104（1997）

この時、Asc 2 P は脱リン酸化されて細胞内 Asc を高濃度

６）Kanatate T, Nagao N & Miwa N : Cell.Mol.Biol.Res.,化し、紫外線による DNA 鎖上のシクロブタン型ピリミジ

41 : 561 - 567（1995）; Biomed.Gerontol. 19 : 78 - 81（1995）

ン２量体の形成（Anti—CPD—Ab を用いた Slot blot）、ヌ

７）Saitoh Y, Nagao N   & Miwa N : Mol. Cell.Biochem.,

クレオソーム間 DNA ２本鎖切断（共焦点レーザー顕微鏡

173 : 43 - 50（1997）を用いた TUNEL 法、アガロース電気泳動）、癌抑制遺伝

８）Kageyama K, Nagao N & Miwa N : Anticancer Res.

子 p 53 発現（野生型と変異型 p 53 を識別した免疫染色，19（5）: 4321 - 4326（1999）; J. Cancer Res. Clin. Oncol.

ウエスタン・ブロット）のいずれもを抑えた。紫外線を照122 : 41 - 44（1996）; Cancer Biochem. Biophys. 14 : 273 -

射された皮膚の角化細胞の内部にはフリ−ラジカルが多量生じることは、蛍光色素 CDCF Ｈ／共焦点レーザー顕微

280（1995）
９）Liu J-W, Nagao N & Miwa N : Anticancer Res. 20（1）

鏡法、スピントラップ剤 DMPO ／電子スピン共鳴（ESR）
法で定量したが、今後 Asc 2 P による防護効果におけるフリ−ラジカル消長をより詳細に解析する予定である。

− 58 −

113 - 118（2000）;Oncol Res. in press（2000）

老化抑制遺伝子 klotho の結合織細胞老化における病態生理学的意義の解明と治療法開発への応用
１）東京大学医学部循環器内科

２）群馬大学医学部第二内科

永 井 良 三１）、須賀達夫２）、山洞善恒２）、倉 林 正 彦２）
Homozygous mutant klotho（KL-/-）mice exhibit multiple phenotypes resembling human aging. In the present study, we focusedon examining the pathology of the lungs of klotho mice and found that it closely resembled pulmonary emphysema in humans
both histologically and functionally. Histology of the lung of KL-/- mice was indistinguishable from those of wild-type littermates
up to 2 wk of age. The first histological changes appeared at 4 wk of age, showing enlargement of the air spaces accompanied bydestruction of the alveolar walls, and progressed gradually with age. In addition to these changes, we observed calcium deposits intype I collagen fibers in alveolar septa and degeneration of type II pneumocytes in 8- to 10-week-old KL-/- mice. Pulmonary function
tests revealed prolonged expiration time in KL-/- mice, which is comparable with the pathophysiology of pulmonary emphysema.
The expression level of messenger RNA for type IV collagen, surfactant protein-A was significantly increased in KL-/- mice, which
may represent a compensatory response to alveolar destruction. The starvation of human lung fibroblast cells（MRC-5）for 96
hours decreased their 3H-thymidine uptake up to 75%. The transfection of the klotho gene into MRC-5 cells using adenovirus vector,
however, prevented their decline in 3H-thymidine uptake. These results implied that connective tissue including fibroblasts played
an important role in the pathogensis of pulmonary emphysema in KL-/- lung.

１

緒化を早期に表現する。

言

肺は皮膚と同様に、直接外気と接し、しかも結合織の老現在、日本は高齢社会へと急速に変貌しつつある。個体化が肺胞破壊（肺気腫）として形態的・機能的に敏感に反の老化機構の解明は、医学的のみならず社会学的にも最も映されうる臓器である。そこで、本研究では klotho 遺伝

重要な課題のひとつとなっている。個体の老化は、全身の子欠損マウスにおける肺の変化を生理学的、形態学的にま諸臓器における老化のインテグレーションとも考えられるず検討した。次に、肺培養線維芽細胞にアデノウィルスベ

が、各臓器の老化はある程度、歩調を合わせて進行するのクターを用いて klotho 遺伝子を導入し、導入前後の細胞が普通である。この臓器間の老化の同時進行性には結合織増殖能の変化を観察した。

が深く関与していると考えられる。なぜなら、線維芽細胞

２をはじめとする結合織細胞は、全身臓器に遍く存在し、形態の維持ばかりでなく、器官形成、炎症、創傷治癒機転な

2.1

実

験

klotho 遺伝子欠損マウス肺の容積測定

どにおいて中心的な役割を果たしているからである。した肺気腫では気管支を外側に引っ張る elastic recoil の力

がって、個体老化機構の解明には、結合織細胞の老化を細が減少するため、胸腔内が陽圧になる呼気時に気道は狭窄・

胞生物学的に解明することが不可欠である。

閉塞してしまう。そのため air trapping が起き、肺は過膨

我々は黒尾・鍋島らと共同で、個体老化に密接に関わる
klotho という新規遺伝子を発見した（１）。klotho 遺伝子は張所見を呈する。そこで、klotho 遺伝子欠損マウスの肺容積を測定し、過膨張所見があるか否かを検討した。
、
対象は 6 − 8 週令の klotho 遺伝子ホモ欠損マウス（KL-/-）

分子量が約 14 kDa で、β-glucosidase と 40％のホモロジー
を示す膜蛋白または分泌蛋白をコードする。klotho 遺伝子、野klotho 遺伝子ヘテロ欠損マウス（以下 KL +/- と記載）

ホモ欠損マウス（以下 KL -/- と記載）は、寿命の短縮、動生型マウス（以下 KL +/+ と記載）を用いた。マウスをウレ

脈硬化、異所性石灰化、骨粗鬆症、皮膚真皮層の菲薄化、タンで麻酔後、脱血屠殺した。気管内に４% パラフォルム

皮下脂肪層の消失、脱毛などヒト老化に見られる多彩な変アルデヒドを20 cm 水柱の一定圧で 24 時間注入し、肺を進展固定した。進展固定後の肺を水没させ、肺容積を測定しBiological Role of Klotho Protein in
Ageing of Connective Tissue and Its
Therapeutic Application to Skin Diseases
Ryozo Nagai １）, Tatsuo Suga ２）,

た。

2.2

Yoshichika Sando ２）,
Masahiko Kurabayashi ２）＊

klotho 遺伝子欠損マウス肺の組織学的検討

対象は 2、4、8 − 10 週令の KL-/-、KL+/+ である。2 . 1 と＊同様の方法で肺の進展固定を行った。進展固定した肺標本

１）The Department of Cardiovascular
Medicine, Graduate School of Medicine,
University of Tokyo
２）The Second Department of Internal
Medicine, Gunma University, School of
Medicineはパラフィンに包埋し、4 µm の厚さの切片を作成、ヘマト
キシリン・エオジン染色を施した。また、連続切片にコッ
サ染色を行い、石灰化病変を確認した。肺胞の破壊の程度の指標である Destructive index（D.I.）を Saetta らの方法（２）− 59 −

に準じて計算した。さらに、隣接する肺胞間の平均距離でcitrate（SSC）（0 . 15 M NaCl and 0 . 015 M sodium citrate,

ある Mean linear intercept を計測し、肺胞腔の拡大の程pH 7 . 0）/ 0 . 1 ％ SDS で 二 度 室 温 で 10 分 間 洗 浄 し た 後、度を評価した（３）。

0.1× SSC/0.1％ SDSで二度 42℃で 10 分間洗浄し、Kodak
XR film に− 80℃で 48 時間オートラジオグラフィーを行った。

2.3 klotho 遺伝子欠損マウス肺の電子顕微鏡による検討
８週令の KL -/- と KL +/+ を対象とした。サンプル肺は４2.6 線維芽細胞への klotho遺伝子導入による細胞増殖の変化℃の２％グルタールアルデヒドで前固定を、室温の１％オ

klotho 遺伝子が線維芽細胞の増殖能に及ぼす影響につい

スミウム酸で後固定を行った。緩衝液で洗浄後、エタノーて検討した。klotho 遺伝子の発現が予め確認されているヒルで脱水し、エポキシレジンに包埋した。厚さ 60 nm の超ト肺線維芽細胞（MRC- 5）に、adenovirus vector を用い薄切片を作成し、酢酸ウランとクエン酸鉛で二重染色をして klotho 遺伝子または LacZ 遺伝子を導入・過剰発現させた後に電子顕微鏡で観察した。

た。 導 入 24 時 間 後 よ り 飢 餓 状 態 と し、96 時 間 後 に
3

2.4

klotho 遺伝子欠損マウスの肺機能検査

H-Thymidine 取り込みを測定し、klotho 遺伝子導入群、

LacZ 遺伝子導入群、コントロール群で比較した。

6 − 8 週令の KL -/-、KL +/-、KL +/+ を対象とし、ウレタン（1 . 5 g/kg）を腹腔内注射した麻酔状態で自発呼吸下に

2.7

統計処理

肺機能を測定した。すなわち、短いポリエチレン製チュー

各測定値は、平均 ± 標準偏差の形式で記載した。また

ブを気管内に挿入し、Lilley 型ニューモタコグラフ（日本

群間の有意差の検出には analysis of variance（ANOVA）

光電社製 TV- 241 T と TP- 602 T）を用いて呼吸気流を測分析を用いた。

定した。胸腔内圧は下部食道内圧を代用し、肺容積はコン３ピュータを用いて気流を電気的に積算し求めた（４, ５）。実
験中のマウス体温は 37℃の一定に保ち、呼吸状態が 10 分

3.1

結

果

klotho 遺伝子欠損マウス肺の容積以上安定するのを待って、呼吸回数、一回換気量、分時換

6 − 8 週令における KL-/-、KL+/-、KL+/+ の平均体長はそ

気量、呼気時間、動的コンプライアンス、総肺抵抗を測定

れぞれ、68 . 3 ± 4 . 7 mm、91 . 8 ± 2 . 4 mm、91 . 5 ± 1 . 0 mm で、した。動脈血液ガス分析も併せて行った。

。KL-/-、
KL-/- は他に比べ有意に体長が短かった（ｐ < 0 . 05）
KL +/-、KL +/+ の 平 均 肺 容 積 は そ れ ぞ れ、703 ± 306 µL、

2.5

klotho 遺伝子欠損マウス肺における肺気腫関連653 ± 180 µL、663 ± 122 µL で３群間に有意差はなかった。

遺伝子の発現状況の検討したがって、KL-/- は KL+/-、KL+/+ に比較し体長が短いに

7 − 9 週令の KL-/-、KL+/-、KL+/+ 肺における以下の遺伝もかかわらず肺容積は不変で、KL -/- 肺は過膨張状態である子の発現をノーザンブロット法により検討した。これらはと推測された。

いずれも肺気腫発症と関連すると考えられている遺伝子である；マンガン superoxide dismutase（Mn-SOD）、グル

3.2

klotho 遺伝子欠損マウス肺の組織変化

タチオンペルオキシダーゼ、カタラーゼ、transforming

生後 2 週では KL-/- の肺（Fig. 1 A）は KL+/+ の肺（Fig. 1 B）

growth factor-beta 1（TGF-β 1）、Early growth resonse- 1と組織学的に全く区別不能であった。肺胞破壊の程度を指（Egr-1）、Ⅳ型コラーゲン、サーファクタント蛋白 A（SP-A）、

標する Destructive index（D.I.）にも差がなかった（KL-/-

specificity protein 1（Sp 1）。すなわち、標本肺より全。しかし生後４週になると
1 . 7 ± 0 . 8 vs. KL+/+ 1 . 5 ± 0 . 8）RNA（ribonucleic acid）を抽出し、１レーンあたり 20 µg

KL -/- 肺は肺胞腔の拡大と肺胞壁の破壊所見が認められるの RNA をホルムアルデヒド−１％アガロースゲルで電気ようになった（Fig. 1 C）
。この週令における KL -/- の D.I.

泳動し、ナイロンメンブレン（Hybond-N; Amersham,Arlington（12 . 0 ± 1 . 5）は、KL +/+（2 . 7 ± 0 . 5）に比べ有意に大きかHeights, IL）に転写し、紫外線固定した。18S と 28S リボソームった。明らかな炎症細胞浸潤や間質の線維化の所見は認めRNA をメチレンブルーで染色し、RNA の量と質を評価した。

ず、４週令の KL -/- の肺は組織学的に肺気腫と診断できた。

メンブレン は 50 ％ ホ ル ム ア ミ ド、5 ×saline sodium

8 − 10 週齢になると KL -/- 肺の気腫性変化は更に進行し、

phosphate ethylenediaminetetraacetic acid、10 ×

肺胞壁の石灰化所見も認められるようになった（Fig. 1 D）。

Denhardt's solution、１％ sodium dodecyl sulfate（SDS）、

肺胞腔の拡大の指標である Mean linear intercept は、８0 . 1 mg/mL herring sperm DNA を含む液でプレハイブリ

週 令 の KL -/- で は 104 . 8 ± 28 . 1 µm で あ り、 同 週 令 のダイズした後、[ 32 P]deoxycytidine triphosphate（dCTP）

KL +/+ の 58 . 3 ± 24 . 2 µm と比較して有意に大きかった。

（Amersham）でラベルした DNA プローブで 42℃で 20

KL +/+ 肺の組織像は生後 2 週、4 週、8 − 10 週の間で大き

時間ハイブリダイズした。メンブレンは２×saline sodium

な変化は無かった。

− 60 −

老化抑制遺伝子 klotho の結合織細胞老化における病態生理学的意義の解明と治療法開発への応用

3.3

klotho 遺伝子欠損マウスの電子顕微鏡像

8 週令の KL

3.4

klotho 遺伝子欠損マウスの肺機能

肺の電子顕微鏡による観察では、肺胞壁

6 〜 8 週齡のマウスの肺機能解析結果を Table 1 にまとのⅠ型膠原線維へのカルシウム沈着を認めたが（Fig. ２）、

めた。KL -/- では呼気時間（Te）の延長（p< 0 . 01）と動肺

肺胞基底膜の主要構成成分であるⅣ型膠原線維には異常をコンプライアンス（Ctb）の増大傾向（p = 0 . 09）を認めた。

認めなかった。また、いくつかのⅡ型肺胞上皮細胞の変性

KL-/- の一回換気量（TV）は KL+/+ の TV より小さかった所見を認めた。８週令の KL +/+ 肺では明らかな電顕的異が（p < 0 . 01）、呼吸数や、体重あたりの分時換気量（Ve）

常を認めなかった。

には KL -/- と KL +/+ の間に差を認めなかった。KL -/- マウ-/-スの動脈血ガス所見は WT マウスと差を認めず、酸素分圧の低下も二酸化炭素分圧の上昇もみられない。したがって、KL-/- マウスの直接死因は呼吸不全とは考えにくい。

3.5

klotho 遺伝子欠損マウス肺における肺気腫関連遺伝子の発現状況
すでに著明な肺気腫が認められる 7 〜 9 週齢の KL -/- マ

Fig.1
A 生後 2 週の KL-/- 肺（ヘマトキシリン・エオジン染色）
B 生後 2 週の KL+/+ 肺（ヘマトキシリン・エオジン染色）
C 生後 4 週の KL-/- 肺（ヘマトキシリン・エオジン染色）
D 生後 10 週の KL-/- 肺（ヘマトキシリン・エオジン染色、
右上挿入図は Kossa 染色（強拡大））
２週令では KL -/-、KL +/+ とも肺胞の破壊は認められない。しかし 4 週令になると KL -/- 肺には肺胞壁の破壊と気腔の拡大を認めた。10 週齢の KL -/- 肺は気腫性変化が更に進行性し、肺胞壁の石灰化も認めた。（石灰化は Kossa 染色で黒色に染色される）（Scale bar=100μm）

Fig.2 ８週令の KL-/- 肺の電子顕微鏡 真肺胞壁のⅠ型膠原線維へのカルシウム沈着を認めた（矢印）（Scale bar=1μm）

Table 1 ６〜８週令のマウスの肺機能検査所見
KL-/- マウスでは呼気時間（Te）の延長所見と動肺コンプライアンス（Ctb）の増加傾向を認めた。

− 61 −

ウスの肺における Mn-SOD、グルタチオンペルオキシダ

は生後約 3 週までは野生型マウス（KL +/+）と同様に発育ーゼ、カタラーゼ、TGF-β1、Egr- 1 の mRNA 発現は、するが、以後発育が停止し、平均寿命は 60 日で非常に短WT マウスと差を認めなかったが、基底膜の構成成分であ命である。加えて、生後 3 〜 4 週頃より動脈硬化、異所性るⅣ型コラーゲンと SP-A の mRNA 発現が増加していた

石灰化、骨粗鬆症、皮膚の萎縮、性腺の萎縮などが出現する。

（Fig. ３）
。反対に転写因子 Sp 1 の発現は明らかに減少しklotho 遺伝子は分子量が約 14 kDa で、β-glucosidase と 40ていた。

％のホモロジーを示す膜蛋白または分泌蛋白をコードしている。その発現は主に腎と脳に限局し、肺での発現は認め

3.6

線維芽細胞への klotho 遺伝子導入による細胞増られていない。

殖の変化

肺気腫は高齢者の慢性呼吸不全・死亡の主要原因であり、非飢餓状態における 3 H-Thymidine 取り込みは、コント

社会の高齢化に伴いその重要性は増している。医学的には肺ロール群、LacZ 遺伝子導入群、klotho 遺伝子導入群で差気腫は、肺胞壁が破壊された結果末梢気腔が病的に拡張するを認めなかった。飢餓状態 96 時間後の H-Thymidine 取疾患で明らかな肺線維化は伴わないと定義されている（６）。

り込みは、コントロール群では非飢餓状態の約 25％に減軽い肺障害では肺胞上皮の変性・脱落が生じるものの肺胞少した。この H-Thymidine 取り込みを１とした場合、壁の修復は可能であるが、肺胞基底膜などの結合織が障害

LacZ 遺伝子導入群では 0 . 8 ± 0 . 3 と差を認めなかったが、される強い肺傷害では、肺胞壁の修復は最早不可能となり、

klotho 遺伝子導入群では 2 . 5 ± 0 . 3 と有意に取り込みが多肺胞壁は破壊され末梢気腔の病的な拡張が出現する。一般

かった。この値は非飢餓状態の約 80％に相当することかには、過度の喫煙が肺胞壁破壊の原因であり（７）、非喫煙

ら、klotho 遺伝子導入が飢餓状態による細胞増殖能の低下

者における肺気腫の発症は例外的である（８）。

33

今回の組織学的検討から、生後４週以降の KL -/- 肺は肺を抑制している可能性が示唆された。

４

考

胞壁破壊と末梢気腔の拡大を明らかに認め、肺気腫の発症

察が確認された。また、生理学的にも肺気腫に矛盾しない肺老化抑制遺伝子 klotho のホモ欠損マウスに肺気腫の発機能検査結果であった。すなわち、KL -/- は呼気時間の延症を確認した。肺気腫は肺結合織の不可逆的な損傷により長と動肺コンプライアンスの上昇を認めた。しかしながら、生じると考えられること、また、klotho 遺伝子の強制発現

動脈血ガス分析では明らかな酸素分圧や二酸化炭素分圧のは飢餓による肺線維芽細胞の細胞増殖能低下を抑制するこ異常を認めず、KL -/- の寿命短縮は呼吸不全以外の原因にとから、klotho は結合織細胞の老化抑制に重要な役割を果よるものと考えられた。
KL -/- 肺の電子顕微鏡による検討では、肺胞壁のⅠ型コたしていると考えられた。
klotho 遺伝子は我々が黒尾・鍋島らと共同で発見した新ラーゲン線維への石灰沈着とⅡ型肺胞上皮細胞の変性の所（１）。klotho 遺伝子をただ一つ見が得られた。Ⅱ型肺胞上皮細胞は、障害された肺胞の修だけ欠損したマウスは、ヒトの老化に類似した多彩な兆候

復に中心的な役割をすることが明らかにされており（９）、を呈する。すなわち klotho 遺伝子ホモ欠損マウス（KL-/-）

Ⅱ型肺胞上皮細胞の変性は KL -/- における肺修復機能の減

しい老化抑制遺伝子である

弱の可能性を示唆した。
すでに肺気腫が認められる 7 〜 9 週令の KL -/- 肺における遺伝子発現の検討では、基底膜の構成成分であるⅣ型コ
ラーゲンと SP-A の mRNA が著明に増加していた。この二つの蛋白は肺損傷に対し防御的に作用するため（９, 10）、
これらの遺伝子発現の増加は肺損傷に対する代償的反応であると推測された。また、Ⅳ型コラーゲンと SP-A 遺伝子のプロモーター領域には両遺伝子の発現を促進する多数のSp 1 結合部位を有している（11 , 12）。しかし、KL -/- 肺における Sp 1 遺伝子の発現は減少していたため、KL -/- 肺におけるⅣ型コラーゲンと SP- Ａの遺伝子発現増強は Sp 1 以外の経路を介して行われると考えられた。
Fig.3 ７〜９週令のマウス肺における Northern blot 解析
この週令の KL -/- 肺にはすでには著しい気腫性変化が認められる。KL-/- 肺ではⅣ型コラーゲンとサーファクタント蛋白のmRNA 発現の増加を認めた。

klotho 遺 伝 子 の 導 入 は、 飢 餓 に よ る 線 維 芽 細 胞 の3H-Thymidine 取り込み減少を抑制した。したがって KL-/-における肺気腫発症には、線維芽細胞をはじめとする結合織細胞の機能障害が関与している可能性がある。しかし、− 62 −

老化抑制遺伝子 klotho の結合織細胞老化における病態生理学的意義の解明と治療法開発への応用

ヒト肺気腫における結合織細胞の関与についてはいまだ明らかでなく、今後の検討課題である。

５

総the rat. J Appl Physiol 1969 ; 27 ( 1 ) : 149 - 56 .
５. Onodera M, Kuwaki T, Kumada M, Masuda Y.
Determination of ventilatory volume in mice by whole括klotho 遺伝子ホモ欠損マウス KL

body plethysmography. Jpn J Physiol 1997 ; 47 ( 4 ) : 317 -/-は生後 4 週より肺気26 .

腫を発現することが組織学的、生理学的に確認された。7

６. Snider GL, Lucey EC, Stone PJ. Animal models of〜 9 週令の KL -/- 肺では、Ⅳ型コラーゲンと SP-A 遺伝子

emphysema. Am Rev Respir Dis 1986 ; 133 ( 1 ) : 149 - 69 .

の発現が増強しており、これは Sp 1 以外の経路を介して

７. Snider GL. Chronic obstructive pulmonary disease:いると考えられた。klotho 遺伝子の導入は、飢餓による線

risk factors, pathophysiology and pathogenesis. Annu

維芽細胞の 3 H-Thymidine 取り込み減少を抑制したことか

Rev Med 1989 ; 40 ( 411 ) : 411 - 29 .

ら、KL -/- における肺気腫発症には、線維芽細胞をはじめ

８.Bascom R. Differential susceptibility to tobacco smoke:とする結合織細胞の機能障害が関与すると推測された。

possible mechanisms. Pharmacogenetics 1991 ; 1 ( 2 )以上の概略は Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2000 ; 22 ( 1 ): 26 - 33 に報告した。

: 102 - 6 .
９. L w e b u g a M J . M a t r i x - d r i v e n p n e u m o c y t edifferentiation. Am Rev Respir Dis 1991 ; 144 ( 2 ) : 452 - 7 .

（文献）10 . Otto VC, Ten HOA, Franken C, Hermans J, Dijkman

１. Kuro-o M, Matsumura Y, Aizawa H, Kawaguchi H,

JH. Protective effect of pulmonary surfactant on

Suga T, Utsugi T, Ohyama Y, Kurabayashi M, Kaname

elastase-induced emphysema in mice. Eur Respir JT, Kume E, Iwasaki H, Iida A, Shiraki-Iida T,

1992 ; 5 ( 10 ) : 1223 - 30 .

Nishikawa S, Nagai R, Nabeshima YI. Mutation of the

11 . Young PP, Mendelson CR. A GT box element ismouse klotho gene leads to a syndrome resembling

essential for basal and cyclic adenosine 3 ', 5 '-ageing. Nature 1997 ; 390 ( 6655 ) : 45 - 51 .

monophosphate regulation of the human surfactant

２. Saetta M, Shiner RJ, Angus GE, Kim WD, Wang N,

protein A 2 gene in alveolar type II cells: evidence forKing M, Ghezzo H, Cosio MG. Destructive index: athe binding of lung nuclear factors distinct from Sp 1 .

measurement of lung parenchymal destruction in

Mol Endocrinol 1997 ; 11 ( 8 ) : 1082 - 93 .

smokers. Am Rev Respir Dis 1985 ; 131 : 764 - 9 .

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３. Dunnill MS. Quantitative methods in the study of
pulmonary pathology. Thorax 1962 ; 17 : 320 - 328 .

divergent transcription of the genes coding forbasement membrane type IV collagen. Ann N Y Acad

４. Palecek F. Measurement of ventilatory mechanics in− 63 −

Sci 1990 ; 580 ( 44 ) : 44 - 54 .

紫外線による Ret チロシンキナーゼ活性化のメカニズム
名古屋大学

医学部免疫

加

昌

藤

志

The cellular proto-oncogene c-RET encodes a receptor-tyrosine kinase. The catalytic activities of Ret kinases as the productsof oncogene RET with multiple endocrine neoplasia type 2A (Ret-MEN2A) or 2B (Ret-MEN2B) mutations and the hybrid genefrom c-RET and RFP (Rfp-Ret) were higher than those of c-Ret. Here we demonstrate that ultraviolet light (UV) irradiationinduced activation of c-Ret and superactivation of genetically activated Ret-MEN2A, Ret-MEN2B and Rfp-Ret. The UV-induced
activation and superactivation of Ret was closely associated with the redox reaction-mediated dimerization or polymerization of
the Ret proteins. UV also induced intracellular dimerization and activation of the extracellular domain-deleted mutant Ret (RetPTC-1). Overexpression of Cu/Zn superoxide dismutase in cells due to gene transfection prevented the promotion of UV-mediateddimerization and the superactivation of Ret-MEN2A kinase. These results suggest that the UV-induced intracellular oxidative
condition mediates dimerization and the activation of Ret kinases.

１

緒

２. １

言

Ret 変異体蛋白質を発現した細胞株の樹立

Figure １に示すように、c-RET（Figure 1 A）、RET-

皮膚の老化は、シワやシミ（肝斑）を誘導し、美容上のMEN 2 A（c-RET の 634 番目のシステインをアルギニンに大きな問題となる。紫外線は、酸化ストレスの一種１、２）で、変異；Figure 1 A）
、RET-MEN 2 B（c-RET の 918 番目の皮膚の老化を促進したり、悪性黒色腫などの皮膚癌を誘発

メチオニンをスレオニンに変異；Figure 1 A）および細胞する可能性が、古くより報告されている。近年、紫外線が外領域を欠損した RET-PTC- 1（Figure 1 B）
、RET-PTC-

細胞内シグナル伝達の初期段階であるチロシンキナーゼを

1 -C 365 A（RET-PTC- 1 の 365 番目のシステインをアラニ活性化することが、報告された 。Src などのチロシンキ

ンに変異；Figure 1 B）
、RET-PTC- 1 -C 376 A（RET-PTC- 1

ナーゼの活性化は、コラーゲン分解酵素の生成を誘導するの 376 番目のシステインをアラニンに変異；Figure 1 B）

ので、紫外線は、チロシンキナーゼを活性化を介しての遺伝子を NIH 3 T 3 細胞に導入し、これらの Ret 変異体

コラーゲン分解酵素の生成と活性化を誘導し、シワを誘導

蛋白質を発現した細胞株の樹立した。また、HA のタグを２）

３）する可能性がある。ゆえに、紫外線によるチロシンキナー
ゼの活性化のメカニズムを解明することは、紫外線によるシワの形成などを防ぐために有用であると考えられる。
c-RET は、レセプタータイプのチロシンキナーゼをコードしており、腎臓や腸管神経節の形成に不可欠な遺伝子である４- ６）。c-RET は、点変異やリアレンジメントを起こすことにより、ヒトの多発性内分泌腺腫 2 A 型（MEN 2 A）
や 2 B 型（MEN 2 B）および甲状腺癌（PTC）の発生に関与していると考えられている７- 12）。
本研究では、紫外線が Ret キナーゼを活性化するメ
カニズムを一部解明した。さらに、Cu/Zn superoxide
dismutase（SOD 1）が、紫外線による Ret チロシンキナーゼ活性化作用を抑制できることを示した。

２

実

験

Control of ultraviolet light-mediated Ret
tyrosine kinase activation
Masashi Kato
Department of Immunology, Nagoya
University School of Medicine

Figure 1. Schematic illustration of mutant RET cDNA constructs.
(A) RET cDNA encoding a long (1114 amino acids) isoform inwhich cysteine at codon 634 was replaced by arginine (C634R;
RET-MEN2A), or methionine at codon 918 by threonine (M918T;
RET-MEN2B). (B) Mutant RET cDNA encoding a long isoform inwhich the extracellular domain was deleted (RET-PTC-1). RETPTC-1 in which cysteine at codon 365 or 376 was replacedwith alanine (Ret-TPC-1-C365A, Ret-TPC-1-C376A). SS, signal
sequence; CAD, cadherin-like domain; CYS, cysteine-rich region;
TM, transmembrane domain; TK1, tyrosine kinase domain 1; TK2,
tyrosine kinase domain 2; aa, amino acids.
（参考文献 1 より引用）− 64 −

紫外線による Ret チロシンキナーゼ活性化のメカニズム

つけた Cu/Zn superoxide dismutase（HA-SOD 1）遺伝子

トアンプメーター（UVR- 3036 /S; Topcon Corporation,

を RET-MEN 2 A 遺伝子と同時に NIH 3 T 3 細胞に導入し、Tokyo, Japan）にて測定した。

Cu/Zn superoxide dismutase（SOD 1）と Ret-MEN 2 A の

３

蛋白質を両方発現した細胞株も作製した。

３. １
２. ２

結

果

Ret キナーゼは遺伝子レベルの変異により活性化される

ウエスタンブロット、免疫沈降、キナーゼアッセイFigure ２に示したように、Ret-MEN 2 A および Ret-

本研究で施行したウエスタンブロットについては、以前記載した方法に準じた。また、免疫沈降およびキナー

13）

MEN 2 B は、Figure １で示したような遺伝子レベルの変異により、c-Ret に比較して２倍から数倍活性化されていた。

ゼアッセイについても、同様に以前記載した方法に準じて施行した 14、15）。

３. ２

Ret キナーゼは紫外線により活性化される

２. ３

た（Figure 3 A-C）
。さらに興味深いことには、遺伝子レ

c-Ret は、紫外線 B 照射後５分後に、著明に活性化され紫外線照射細胞に対する紫外線の照射は、Dhanwada et al. の方法

ベルの変異によりすでに活性化されている Ret-MEN 2 Aに準じて施行された。紫外線 B の照射量はミクロボル

および Ret-MEN 2 B は、紫外線 B の照射によりさらに活16）

Figure 2. Comparison of kinase activity between c-Ret,
Ret-MEN2A, and Ret-MEN2B.
Lysates from NIH 3T3 cells transfected with cRET (lane 2 in A-C), RET-MEN2A (lane 3 in A-C)
or RET-MEN2B (lane 4 in A-C) and non-transfected
control NIH 3T3 cells (lane 1 in A-C) were immunoprecipitated with anti-Ret antibody. Then, those were
subjected either to Western blotting with anti-phosphotyrosine antibody (A) or anti-Ret antibody (B) or toin vitro kinase assay (C). SDS-PAGE was done in 5
% (A-B) or 13 % (C) polyacrylamide gel. pRet (doubletband): autophosphorylated c-Ret, Ret-MEN2A or RetMEN2B; pMBP: phosphorylated MBP. All measurements were repeated 4 times with basically the same
results. Representative results are provided.（参考文
献 1 より引用）

Figure 3. UV irradiation induces superactivation of mutant Ret.
Lysates from the NIH 3T3 cells transfected with c-RET (A-C), RETMEN2A (D-F) or RET-MEN2B (G-I) after sham or UV irradiation were
immunoprecipitated with anti-Ret antibody, and the resulting immunoprecipitates were subjected either to Western blotting with antiphosphotyrosine antibody (A, D, G) or anti-Ret antibody (B, E, H) or toin vitro kinase assay (C, F, I). SDS-PAGE was done in 5 % (A, B, D, E,
G, H) or 13 % (C, F, I) polyacrylamide gel. (A-I) lane 1: sham irradiation; lane 2: 5 min after 600 J/m2 of UVB irradiation. pRet (doubletband): autophosphorylated c-Ret (C), Ret-MEN2A (F) or Ret-MEN2B(I); pMBP: phosphorylated MBP. All measurements were repeated 3-4times with basically the same results. Representative results are provided. The exposure times to X-ray film for autoradiography for Figure
A, D and G, and for Figure C, F and I were adjusted to develop bands
with comparable density for lane 1 as sham irradiated control; see
Figure 2 for comparison of the density of bands among c-Ret, RetMEN2A and Ret-MEN2B which were developed by the same exposure time.（参考文献 1 より引用）− 65 −

性化された。我々は、この反応を紫外線によるスーパーア

３. ４

紫外線は Ret 分子の二量体形成を促進させ、Ret キナーゼを活性化させる

クティベーションと呼んだ。

Figure ５および Figure ６に示したように、紫外線 B は、

３. ３

Ret キナーゼの下流に位置するシグナル伝達

c-Ret、Ret-MEN 2 A、Ret-MEN 2 B 分子の SS 結合を介し分子も紫外線により活性化されるた二量体形成の促進し、それらのキナーゼを活性を亢進さ

Figure 4 A-H に示したように、Ret-MEN 2 A の下流に位せた。

置するシグナル伝達分子である ERK、JNK、p 38、cJun は、
c-Ret のそれらに比較して活性化されていた。紫外線 B の

３. ５

Ret 分子の細胞内領域は、紫外線のターゲッ

照射は Ret-MEN 2 A の下流に位置するシグナル伝達分子

トになるを、さらに活性化（スーパーアクティベーション）させた

Figure ７に示したように、紫外線 B は細胞外領域を欠（Figure 4 I-L）。

落した Ret-PTC- 1 の SS 結合を介した二量体形成の促進し、

Figure 4 UV irradiation promotes phosphorylation of MAPK family
and c-Jun.
Lysates from the NIH 3T3 cells transfected with c-RET (lane 2 inA-H) or RET-MEN2A (lane 3 in A-H, lane 4 and 5 in I-L) and nontransfected control NIH 3T3 cells (lane 1 in A-H) without stimulation (lane 1-3 in A-H, lane 4 in I-L) or 10 min after 600 J/m2 of
UVB irradiation (lane 5 in I-L) were subjected to Western blottingwith anti-ERK (A), anti-phospho-ERK (E, I), anti-JNK (B), anti-phospho-JNK (F, J), anti-p38 (C), anti-phospho-p38 (G, K), anti-c-Jun(D) and anti-phospho-c-Jun (H, L) antibodies. SDS-PAGE was donein 10 % polyacrylamide gel (A-L). All measurements were repeated
3 times with basically the same results. Representative results areprovided.（参考文献 1 より引用）− 66 −

Figure 5 UV promotes dimerization of c-Ret.
Lysates from NIH 3T3 cells transfected with cRET after sham or UV irradiation were subjected toWestern blotting with anti-Ret antibody (A, B) or toin vitro kinase assay (C-E) after immunoprecipitation
with anti-Ret antibody. SDS-PAGE was done under
reducing (A, C, E) or unreducing (B, D) conditionsin 5 % (A-D) or 13 % (E) polyacrylamide gel. (A-D)
lane 1: sham irradiation; lane 2: 5 min after 600 J/
m2 of UVB irradiation. (E) Ret proteins were immunoprecipitated from the lysate of the transfectants
that had received 600 J/m2 of UVB irradiation 5
min before. The immunoprecipitated Ret proteins
were untreated (lane 1) or treated with 5% 2ME for
30 min (lane 2), followed by 5 times washing forremoving 2ME, and then subjected to in vitro kinase
assay. pRet (doublet band): autophosphorylated cRet; pMBP: phosphorylated MBP; M: monomer Ret;
D: dimer Ret. All measurements were repeated 3
times with basically the same results. Representative results are provided.（参考文献 1 より引用）

紫外線による Ret チロシンキナーゼ活性化のメカニズム

キナーゼ活性を亢進させた。これは、Ret 分子の細胞内領亢進を抑制できた。

域が、紫外線の標的になることを示している。

３. ６

４

Ret-PTC-1 分子の 376 番目のシステインは、

考察

本研究では、試験管内において紫外線が c-Ret のみでな

紫外線のターゲットになる

くすでに遺伝子の変異により活性化されている MEN 2 A

Figure ８ に 示 し た よ う に、 紫 外 線 B は Ret-PTC- 1 -型 Ret（Ret-MEN 2 A）や MEN 2 B 型 Ret（Ret-MEN 2 B）

C 365 A の SS 結合を介した二量体形成の促進し、そのキを活性化する（スーパーアクティベーション）ことを示

ナーゼ活性を亢進させた。しかし、紫外線 B 照射によりした１）。さらに、紫外線が、Ret 分子の SS 結合を介した

Ret-PTC- 1 -C 376 A の二量体形成とキナーゼ活性の亢進は二量体形成を促進し、その活性を増強することを示すととおこらなかった。これらの結果は、Ret-PTC- 1 分子の 376

もに、紫外線の標的となるアミノ酸を一つ特定した。また、番目のシステインが、紫外線の標的であることを示していSOD 1 を用いて、これらの紫外線の作用を緩和することにる。

成功した。これらの結果は、皮膚の老化や悪性黒色腫などの皮膚癌を誘発する紫外線に対する防護対策をこうじるた

３. ７ SOD1 は、紫外線を介する Ret のスーパーア

めの基礎データとして、有益であると考えられる。

クティベーションを抑制できる

一方、我々は Metallothionein-I（MT）をプロモーター

Figure ９に示したように、Ret-MEN 2 A と SOD 1 を同時に導入することにより紫外線 B 照射による SS 結合を介した Ret 分子の二量体形成を阻害し、そのキナーゼ活性のFigure 6. UV promotes dimerization of Ret-MEN2A and RetMEN2B.
Lysates from NIH 3T3 cells transfected with RET-MEN2A (AE) or RET-MEN2B (F-I) after sham or UV irradiation were subjected either to Western blotting with anti-Ret antibody (A, B, F,G) or to in vitro kinase assay (C, D, E, H, I) after immunoprecipitation with anti-Ret antibody. SDS-PAGE was done under
reducing (A, C, E, F, H) or unreducing (B, D, G, I) conditionsin 5 % polyacrylamide gel. (E) The dimerized bands in D were
cut out from the gel and separated under reducing condition.
(A-I) lane 1: sham irradiation; lane 2: 5 min after 600 J/m2
of UVB irradiation. M: monomer Ret; D: dimer Ret. For directcomparison of kinase activity between Ret-MEN2A and RetMEN2B, see Figure 2. All measurements were repeated 3
times with basically the same results. Representative results
are provided.（参考文献 1 より引用）

Figure 7. UV promotes activation and dimerization of extracellular domain-deleted Ret.
Lysates from NIH 3T3 cells transfected with RET-PTC-1 after
sham or UV irradiation were analyzed either by Western blotting with anti-Ret antibody (B, C) or in vitro kinase assay after
immunoprecipitation with anti-Ret antibody (A, D, E). SDSPAGE was done under reducing (A, B, D) or unreducing (C, E)
conditions in 7 % (B-E) or 13 % (A) polyacrylamide gel. (A-E)
lane 1: sham irradiation; lane 2: 5 min after 600 J/m2 of UVB
irradiation. M: monomer Ret; D: dimer Ret. All measurements
were repeated 3 times with basically the same results. Representative results are provided.（参考文献 1 より引用）− 67 −

. エンハンサーに用い、癌遺伝子 ret を導入することによ（参考文献）り、メラノサイト系良性腫瘍を必発するが、悪性転化しな

１．Kato, M., Iwashita, T., Takeda, K., Akhand, A.A.,

い MT/ret トランスジェニックマウス 192 系を樹立した

Liu, W., Yoshihara, M., Asai, N., Suzuki, H., Takahashi,。さらに、このトランスジェニックマウスに発症したメM . a n d N a k a s h i m a , I . ( 2000 ) . U l t r a v i o l e t l i g h t

17）

ラノサイト系良性腫瘍に対する紫外線照射が、腫瘍細胞にinduces redox reaction-mediated dimerization and

おける Ret キナーゼの活性の増強を伴い、悪性黒色腫へのsuperactivation of oncogenic Ret tyrosine kinases. Mol.

転化を誘導することことを見出した（Kato et al., 投稿中）。

Biol. Cell 11 , 93 - 101 .

これは、紫外線による Ret キナーゼのスーパーアクティベ

２．Devary, Y., Gottlieb, R.A., Smeal, T., Karin, M. ( 1992 ).

ーションの生物学的意義を示していると考えられる。

The mammalian ultraviolet response is triggered by
activation of Src tyrosine kinases. Cell 71 ,  1081 - 1091 .

Figure 8. UV does not promote activation and dimerization of
extracellular domain-deleted Ret whose cysteine 376 was
replaced with alanine.
Lysates from NIH 3T3 cells transfected with original RETTPC-1 (lane 4 in D and E), RET-TPC-1-C365A (A, lane 1
in C, lane 1-3 in D) and RET-TPC-1-C376A (B, lane 2 in C,
lane 1-3 in E) after sham or UV irradiation were analyzed
either by in vitro kinase assay after immunoprecipitation
with anti-Ret antibody (A, B) or by Western blotting with
anti-Ret antibody (C-E). SDS-PAGE was done under reducing (A-C) or unreducing (D-E) conditions in 8 % (C-E) or 13% (A, B) polyacrylamide gel. (A, B) lane 1: sham irradiation;lanes 2-4: 5 min (lane 2), 10 min (lane 3) and 15 min (lane4) after 600 J/m2 of UVB irradiation. (D, E) lane 1 and
4: sham irradiation; lanes 2-3: 5 min (lane 2) and 15 min(lane 3) after 600 J/m2 of UVB. pRet: autophosphorylated
Ret-TPC-1-C365A (A) or Ret-TPC-1-C376A (B); pMBP:
phosphorylated MBP. M: monomer Ret; D: dimer Ret. All
measurements were repeated 3 times with basically thesame results. Representative results are provided.（参考文
献 1 より引用）

Figure 9. Over-expression of SOD1 in cells prevents UVmediated superactivation of Ret.
Lysates from the HA-SOD1- (C, lane 1 in A and B) or HASOD1+ (D, E, lane 2 in A and B) NIH 3T3 cells transfected with Ret-MEN2A were analyzed either by Western
blotting with anti-HA (A) or anti-Ret antibody (B, E), or byin vitro kinase assay (C, D) after immunoprecipitation with
anti-Ret antibody. SDS-PAGE was done under reducing (AD) or unreducing (E) conditions in 5 % (E), 10% (A, B) or
13 % (C, D) polyacrylamide gel. (C-E) lane 1: sham irradiation; lanes 2-4: 5 min (lane 2), 10 min (lane 3) and15 min(lane 4) after 600 J/m2 of UVB irradiation. pRet (doublet− 68 −band): autophosphorylated Ret-MEN2A with (C) or without(D) SOD1; pMBP: phosphorylated MBP; M: monomer Ret; D:
dimer Ret. All measurements were repeated 3 times withbasically the same results. Representative results are provided.（参考文献 1 より引用）

紫外線による Ret チロシンキナーゼ活性化のメカニズム

３．Sato H., Kita M., Seiki M. ( 1993 ). v-Src activatesin the tyrosine-kinase catalytic domain of the RET

the expression of 92 -kDa type IV collagenase geneproto-oncogene is   associated with multiple endocrine

through the AP- 1 site and the GT box homologous

neoplasia type 2 B. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 , 1579 -to retinoblastoma control elements. J Biol Chem 268 ,

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30 .

The herbal medicine Sho-saiko-to inhibits growth and７．Grieco, M., Santoro, M., Berlingieri, M.T., Melillo,

metastasis of malignant melanoma primarily developed

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a novel rearranged form of the ret proto-oncogene

14．Kato, M., Takahashi, M., Akhand, A.A., Liu, W., Dai,

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17．Iwamoto, T., Takahashi, M., Ito, M., Hamatani,

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10 , 3167 - 3175 .

− 69 −

太陽光紫外線変異原性の作用スペクトラムとサンスクリーンの効果
岡山大学

根

岸

友

薬学部

惠、豊

島

め ぐ み

The use of sunscreen seems to be important to avoid the damage caused by sunlight.   There are numerous
epidemiological investigations showing that the sunlight is carcinogenic to humans. The biological activity of sunscreen
is evaluated by its ability to protection from erythema.   However, we consider that the sunscreen's protective effectagainst sunlight induced-mutation should also be taken into account.  In this study we examined the protective effectof two commercial sunscreens   against the mutagenicity induced by natural sunlight and against the DNA damage
induced by sunlight or UVB-irradiation.   The mutagenicity was detected by the Drosophila wing spot test and DNA
damaging activity was estimated by the Drosophila in vivo DNA repair test.  When the sunscreen was pasted on the
cover of petri dish in which Drosophila larvae were exposed to the sun, the mutagenicity was suppressed down toalmost the control level.  We prepared by ourselves sunscreens containing UVB absorbents at various concentrations,and measured the transmittance. From the results, it is suggested that the protection against the light of wavelength
was shorter than 320 nm may be important to avoid the genotoxicity of sunlight.

１．緒

言

２．実

太陽光紫外線はヒトの皮膚にさまざまな影響を与える重

２. １

験

ショウジョウバエ体細胞突然変異検出系

要な因子であり、その作用は波長により大きく異なっていショウジョウバエは卵、幼虫、蛹、成虫と約 10 日間でることは知られているが、その詳細な波長特性は未だ不明

完全変態する昆虫である。孵化後の体細胞分裂は幼虫期のである。従来、地表に届いている太陽光紫外線は波長によっ４日間、成虫原基（将来成虫の器官となる組織）でしか行て UVB（290 - 320 nm）、UVA（320 - 400 nm）に分けられなわれない。したがって突然変異を検出できるのはこの時ている 1）。一般に UVB は紅斑生成作用、UVA は黒化作

期に幼虫を処理したときに限られる。体細胞突然変異を検用があると言われている。しかしながら、紫外線のスペク

出する系として、ショウジョウバエ翅毛スポットテストをトラムが連続的なものである以上、このような分類は不完用いた 3）。これは翅毛形態マーカーとして炎毛（flr）を持全なものである。太陽光紫外線の作用を解析するには、太つ雄（y; Dp（1;3）scJ 4 , y+ flr/TM 1 , Me ri Sbd 2）と多翅毛

陽光そのものを材料とする研究と合わせて、単色光照射に（mwh）を持つ処女雌（y; mwh j v）を交配させて得た三齢より個々の波長における作用を調べる詳細な実験が必要で幼虫を被験体として用い、成虫になったときのハネ翅毛にある。また、従来 UVA 領域の光は UVB あるいはそれ以現れる形態の変化を指標として調べる方法である。すなわ

下の波長の光に比べてあまり研究されてこなかったが、短

ち標的器官とする成虫原基は翅原基である。この翅原基は波長紫外線と違って大気や窓ガラスなどで吸収されず、ヒ図１のように成虫原基としては表皮近くに存在し、紫外線トの皮膚においても UVB に比べて表皮の内部まで透過すへの曝露が可能と考えられる。この試験系では遺伝子突然る ことから、その重要性が見直されてきている。太陽光2）

紫外線の最も重大な作用は発がん作用であるが、発がん作用のスクリーニング法として、変異作用を指標とすることは広く認められている。そこで本研究では、UVB から
UVA 領域の種々の波長の光の変異作用と自然太陽光の変異作用を詳細に検討すると同時に、サンスクリーン塗布による変異抑制の実験を行った。
Mutagenicity of solar UV in Drosophila
and its protection by sunscreen
Tomoe Negishi, Megumi Toyoshima＊

Faculty of Pharmaceutical Sciences,
Okayama University＊− 70 −

太陽光紫外線変異原性の作用スペクトラムとサンスクリーンの効果

変異のみでなく、組換え、端部欠失、不分離等真核生物特し、UVA 量は UVX- 36 センサーで測定した。曝露後、幼有の染色体レベルでの変化も検出される。処理した三齢幼虫をインスタント培地に移し暗所で成虫まで飼育し、翅虫はインスタント培地（Formula 4 - 24 , Carolina Biological

毛スポットの観察あるいは性比の計数を行った。曝露後

Supply Co.）に移し、成虫になるまで 25℃で飼育する。羽の幼虫の取扱は光回復の影響を避けるために黄色ランプ化したハエのハネを集め、スライド標本とした後、翅毛の下で行った。サンスクリーンの効果を調べる時は、原の形態変化を顕微鏡で観察する。変異した翅毛の集団を則として日本化粧品工業 SPF 測定法基準及び UVA 防止

スポットと呼び、染色体組換えによってのみ生じる双子

効果測定法基準に従い、シャーレのフタに 2 mg/cm 2 あ

スポット（炎毛と多翅毛のスポットが隣接して存在するもるいは 2 µL/cm 2 になるように塗布した。サンスクリーンの）、どちらか一種類のみのスポットであるシングルスポッ

としては市販のものを用い、SPF 16 と SPF 87 の製品のトに分類して計数する 3）。

効果を比較した。サンスクリーン塗布時の透過波長、透過率は分光光度計（Hewlett Packard 8452 A Diode Array

２. ２

ショウジョウバエ DNA 傷害修復試験

Spectrophotometer）を用いて、フタを光路上において測4)

この試験系に用いる株（sc z 1 w+（TE） mei- 9 a mei- 41 D 5 /定した。

C( 1 )DX, y f）は図２に示したように常に雄は除去修復欠損、複製後修復欠損となるように工夫された株である。し２. ４

健康線用蛍光ランプ照射

たがって雄はその体細胞 DNA に何らかの損傷を受けた場

ブロードな波長域を持つ実験光として健康線用蛍光ラ

合、修復ができずに生存率が減少する。それに反して雌はンプ（FL 20 S・E、Toshiba、波長 275 - 400 nm、ピーク波

正常に損傷を修復できるので生存数に変化は見られない。

長 310 nm）（健康ランプ）を用いた。照射装置は図４に示

そこで成虫での雌雄の比を求めることによって DNA 損傷の程度を知ることができる。スポットテスト同様に処理し、羽化してきた成虫の雌雄の個体数を計数して性比を得る。
本研究で用いたショウジョウバエは梁治子博士（大阪大学医学部）並びに藤川和男博士（近畿大学原子力研究所）に分与していただいた。

２. ３

太陽光曝露方法 5)

シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ 三 齢 幼 虫 を 集 め、
1 . 5 mL ショ糖溶液の入ったプラスチック
シャーレ（ADVANTEC）におよそ 150 匹の幼虫を入れ、曝露に用いた。長時間曝露中の幼虫の逃亡を避けるために、嫌気性菌培養用シャーレを用い、通気用にフタに径 5 mm の穴を開けメッシュを張った。岡山大学のキャンパス草地に図３のような装置を組み、曝露中の温度を一定に保つために循環装置付きの恒温水槽の水面すれすれにシャーレを置いた。曝露中の温度はシャーレ内に張ったサーモテープでチェックし、25 ± 2℃に保った。日射量は MED（minimum erythemadose）を Erythema UV Intensity &Dose Meter（Solar Light Co.）で測定した。UVB は UVX radiometer（UVP,
Inc.）に UVX- 31 センサーを付けて測定− 71 −

した。２. ３で述べたものと同様のシャーレを用いて照射し、線量測定はシャーレのフタの下で行なって、約 3 mW/m 2 であった。サンスク
リーンの実験は太陽光曝露と同様にシャーレのフタに塗布して行なった。市販の製品に加えて、UVB 吸収剤として 4 -dimethylaminobenzoicacid（東京化成）を吸水軟膏（Merk）を基剤として一定量混和したものを用意した。また、UVA 吸収剤として 2 -（2 -benzotriazolyl）-p-cresol（東京化成）を吸水軟膏製剤としたものを作製して効果を比較した。それぞれの吸収剤の紫外部吸収曲線は図５のようである。吸収剤：基剤が１：40、１：４、５：４の製剤を調製した。また、吸水軟膏の代りに紫外部に吸収が無い流動
パラフィン（シオエ製薬）を溶剤として用いた製品を調製し、効果の検討を行なった。

２. ５

単色光照射の変異原性

太陽光紫外線の波長による生物活性を見るために単色光照射による変異原性及び DNA 傷害性を検察した。かなり広い範囲に一定波長の光が照射できる装置が必要であり、この実験は国立岡崎共同研究機構基礎生物学研究所にある大型スペクトログラフ 6）を用いる共同研究グルー
プ（代表者：檜枝光太郎（立教大学））で行った。
水平方向に分光された光を鏡を使って垂直方向に方向を変え、先の実験と同様にプラスチック
シャーレの上方から光が照射されるようにした。光強度はフォトダイオード（S 1337 - 66 BQ,
Hamamatsu Photonics）でモニターしながら光電子密度計（photon density meter HK- 1）を用いて測定した。照射時の室温は 25℃に保たれるように空調した。照射および照射後の操作は太陽光ならびに健康ランプの実験と同様に行っ
た。

３．結
３. １

果

太陽光および健康線用蛍光ランプの活性とサンスクリーンの効果
翅毛スポットテストを用いた太陽光変異原性の２年間のモニター実験により、年間を通じて太陽光に変異原性が観察された。その強さは日射量に比例しており、冬期は夏期の 1 / 3 〜
1 / 5 であった 5）。今回、日差しの強くなる４月
末にサンスクリーンによる効果を調べた。太
陽光の変異原性と曝露時にサンスクリーンを
フタ全体に約 40 mg 塗布した場合の結果を図− 72 −

太陽光紫外線変異原性の作用スペクトラムとサンスクリーンの効果６に示した。４時間曝露時の MED は８、UVA は 170 kJ/が得られた。ここで MED 3 に相当する積算紫外線量は 11m 、UVB は 57 kJ/m であった。サンスクリーンの塗布

月９日では５時間、11 月 11 日では３時間で達成されておにより、ほぼコントロールレベルまで変異原性が抑えらり、同じ MED でも短時間で曝露されたときの方が致死作れた。このときサンスクリーンを塗布したシャーレのフ用が強いことが示された。この時の UVA および UVB は

タの紫外線透過率は、SPF 値に関わらず、図７のように

11 月９日がそれぞれ、60 . 4 kJ/m 2、19 . 6 kJ/m 2、11 日は300 nm 以下の光はほとんど透過せず、また 320 nm 以上の25 . 5 kJ/m 2 となり、
UV でも 11 日の方が高かっ
89 . 3 kJ/m 2、

紫外光でも 80％以上の遮光効果が見られた。このことはた。天候が良好で紫外線量が多いときには SPF 値の違い

変異原活性がいずれのサンスクリーンでもほぼ 15 - 20％にによる効果の差が明らかであり、紫外線量が多いときは高なったことと良く一致していると言える。一方、太陽光のい SPF 値のサンスクリーンを用いる必要があると言える。

細胞傷害は DNA 傷害修復試験を用いることにより、より

このとき用いたサンスクリーンは 5 mg/ 20 cm 2 とした。こ

高感度に検出されることがわかったので、この試験系を用の SPF 値の違いによる効果の違いは健康ランプを用いた

いてサンスクリーンの効果の検討を行なった。少し天候のUVB 照射実験においてより顕著に見られた。図９に見ら違う日に２回の実験を行なったところ、図８のような結果れるように線量が高くなると SPF 16 のサンスクリーンを2

2

塗布した場合は雄に顕著な致死作用が観察された。それぞれのサンスクリーン塗布状態での透過光の波長と透過率に差がある（図 10）のでこれらのどちらの違いがこの致死作用に寄与しているか調べる必要がある。

３. ２

紫外線吸収剤を用いた実験

市販のサンスクリーンでは UV 吸収剤の成分が不明なので、吸収される紫外線領域と活性抑制の関係が明らかにしにくい。そこで、サンスクリーンの成分として使用されている UVA および UVB 吸収剤を用いて、研究室でサンス
クリーンを調製して健康ランプの DNA 傷害作用に対する効果を調べた。基剤に吸水軟膏を使用して、UVB 吸収剤の製剤を調製したところ図 11 のような結果を得た。UVA
吸収剤ではいずれの混合比でも健康ランプによる致死傷害を抑制できなかった。UVB 吸収剤では吸収剤が 20％以上

シャーレのフタに SPF87（ ）あるいはSPF16（ ）のサンスクリーンを塗布した場合と何も塗布しなかった場合（ ）の性比の減少を示す。

− 73 −

混合されることで顕著な抑制効果がみられた。しかしながり抑制作用が見られた。従って抑制作用は 320 nm 以下のらこの時、塗布されたシャーレにおける各波長の光の透過

紫外線を透過しなくなることによって発現すると考えられ率を見ると、図 12 のように 20％以上混合した場合は波長る。

と透過率に差が見られた。長波長側での透過率の差を無くすために流動パラフィンを用いて製剤したところ、図 13３. ３

単色光照射の変異原性と致死傷害性のような透過率になり、長波長側での透過率の差は解消さ

サンスクリーンの吸収剤の吸収波長と作用スペクトル

れ、それぞれの製剤の差は透過波長の違いと考えることがの関係を調べるため、まず単色光照射による変異原性とできた。その時の致死傷害抑制作用は図 11 とほぼ同様な致死傷害性を調べた。310 nm、320 nm、330 nm、340 nm、結果を示した。すなわち UVB 吸収剤 20％以上の混合によ

360 nm、380 nm、400 nm の 光 を 照 射 し 変 異 原 性 を 調 べ− 74 −

太陽光紫外線変異原性の作用スペクトラムとサンスクリーンの効果たところ、340 nm までの光で線量依存的に有意に突然変異を検出できた（図 14）7）。DNA 傷害性は図 15 のようになった。320 nm の光は修復欠損の雄に致死作用を示した。
330 nm、340 nm の光は長時間照射することによって傷害が発現した。しかし 360 nm 以上の長波長の紫外線では傷害は観察されず、突然変異が 360 nm 以上の光でほとんど誘発されなかったことと一致した。

４．考察

本研究においてわれわれは、太陽光紫外線の生物影響のうち発がんに関わるとされる体細胞突然変異について、
ショウジョウバエの系を用いて検討した。さらに太陽光の生物活性障害を防御するために使用されるサンスクリーンの活性評価に抗変異原性を加えることができるかどうかを検討した。
太陽光曝露時におけるサンスクリーンの効果は SPF 値に関わらず、基準量の 40 mg/ 20 cm 2（20 cm 2 はおよそのシャーレフタの面積）を塗布することによって顕著な防御効果が見られた（図６）。しかしながらこの時、図３からもわかるように、シャーレの表面は白塗りの状態で肉る致死作用は曝露約 1 . 5 時間（MED １）で顕著に見られた。

眼的にも光を透過しない状態と予想された。実際に図７

DNA 傷害修復試験では紫外線量の違いに対する SPF 値のに示したように 320 nm 以下の光はほとんど透過していな差が一層はっきり観察された（図９）。すなわち線量が強い。そこで、以後の DNA 傷害修復試験を用いた実験にいときには SPF 値の低いサンスクリーンでは効果が弱い

は 5 mg/ 20 cm のを塗布し、肉眼的には透明感が残った

ことが示された。この時サンスクリーンを塗布したフタの状態で効果を調べた。DNA 傷害修復試験は翅毛スポット

紫外線透過の状況は図 10 に示したように、それぞれのサ

テストによる突然変異検出より高感度であり、雄に対す

ンスクリーンで透過波長と透過率いずれも違っていた。サ2− 75 −

ジョウバエ幼虫に対して紫外線は、波長が長くなるに従って変異原性が指数関数的に減少し、360 nm 以上の光はほとんど傷害を示さなかった 7、8）。培養細胞やある種の魚を用いた研究で 360 nm 付近に変異原性や発がん性が見られるという報告 9、10）があるが、ショウジョウバエ翅原基ではそのような活性は観察されなかった。これは生物材料の感受性の違いや、用いた検出方法においてどのような変化が検出されるのか、等の条件によるものと考えられる。
サンスクリーンを用いた太陽光や UVB の実験において示唆された、320 nm 以下の光をカットすることが傷害を防御するために必要である可能性を確かめ、SPF 値との相関性を明らかにしていくために、さらに単色光での研究を進める必要がある。
なお、今回の実験ではサンスクリーンの適用をシャーレのフタに塗布するという方法で行ったが、実際にヒトに適用する場合は細胞に直接サンスクリーンが接触することになる。したがってショウジョウバエの系でも直接接触した場合の効果および有害性についても検討していく必要があ
る。

５．謝

辞

本研究は岡山大学遺伝子実験施設根岸和雄博士、ならびに岡崎国立共同研究機構基礎生物学研究所大型スペクトロ
グラフにおける檜枝光太郎博士（立教大学）、古澤佳也博
士（放射線医学総合研究所）との共同研究であります。関
係諸氏に深く感謝致します。また、本研究の遂行を可能に
ンスクリーンの防御効果は、透過率をさげることによるのし御援助いただいた岡山大学薬学部早津彦哉教授並びにコ

か、透過波長が長くなることが原因なのかは興味深い問題

スメトロジー研究振興財団研究助成に感謝致します。

である。そこで、紫外部に吸収の無い流動パラフィンを用いた実験を行ったところ、サンスクリーンの効果は主に短（引用文献）

い波長の光（320 nm 以下）を透過しなくなることによって

１）Roy CR, Gies HP, Lugg DJ, et al., : The measurement

示されることが示唆された（図 12、13）。またここではデーof solar ultraviolet radiation, Mutation Res., 422 , 7 - 14 ,タを示していないが、UVA 吸収剤（2 -（2 -benzotriazolyl）

1998 .

- p - cresol）を用いて調製した製剤では透過率のみ変化

２）Bruls WAG, Slaper H, van der Leun JC, et al.,

し、いずれの混合比でも 290 nm 以上の光を透過しており、: Transmission of human epidermis and stratum

DNA 傷害作用の抑制効果が全く見られなかったことは、

corneum as a function of thickness in the ultraviolet

先の考察を支持するものであろう。従ってサンスクリーンand visible wavelength, Photochem. Photobiol., 40 , 485 -製剤としては 320 nm 以下の紫外線を透過しないものが望ましいと考えられる。

494 , 1984 .
３）Graf U, Wügler FE, Katz AJ, et al., : Somatic mutation

本研究のこのような結果は、紅斑生成に対する効果だけ

and recombination test in Drosophila melanogaster,

でなく、DNA 傷害性あるいは変異原性の防御作用の強さを考慮してサンスクリーンの評価を行う必要があることをEnviron. Mutagen., 6 , 153 - 188 , 1984 .
４）Negishi T, Shiotani T, Fujikawa K, et al., : The

支持するものである。

genotoxicities of N-nitrosamines in Drosophila

さらに太陽光紫外線のどの領域の波長が変異原活性や

melanogaster in vivo: the correlation of mutagenicity in

DNA 傷害性発現に寄与しているかを調べ、サンスクリー

the wing spot test with the DNA damages detected by

ンの各波長での効果を検討するため、単色光照射による変the DNA-repair test, Mutat. Res., 252 , 119 - 128 , 1991 .

異原性と DNA 傷害作用の検出を行った。その結果ショウ

５）Negishi T, Takinami S, Nikaido O, et al., : Somatic cell

− 76 −

太陽光紫外線変異原性の作用スペクトラムとサンスクリーンの効果

mutation induced by sunlight in Drosophila, J. Epidem.,

cell mutation induced by UVA- and monochromatic

9 , s 66 -s 71 , 1999 .

UV-radiation in repair-proficient and -deficient６）Watanabe M, Furuya M, Miyoshi Y, et al., : Design

Drosophila melanogaster. in preparation.

and performance of the Okazaki large spectrograph９）Coohill TP, Peak MJ, Peak JG, : The effects of thefor photobiological research, Photochem. Photobiol., 36 ,ultraviolet wavelength of radiation present in sunlight

491 - 498 , 1982 .

on human cells in vitro. Photochem. Photobiol., 46 ,７）Takinamai S, Mochizuki M, Hayatsu H, et al., :Somatic cell mutation and photoproduct formation

1043 - 1050 , 1987 .
11）Setlow RB, Grist E, Thomson K, et al., : Wavelengths

i n d u c e d b y s o l a r U V - r a d i a t i o n i n D r o s o p h i l a ,  effective in induction of malignant melanoma. Proc.

Environmental Toxicology,  in press.

Natl. Acad. Sci. USA, 90 , 6666 - 6670 , 1993 .

８）Negishi T, Nagaoka C, Hayatsu H,   et al., : Somatic− 77 −

ヒト毛細胞特異的ペプチジルアルギニンデイミナーゼの
cDNA クローニングと毛髪新生における生理機能の解析
近畿大学

川医学部皮膚科学教室

田暁

Peptidylarginine deiminase (PAD) catalyzes the post-translational modification of proteins through the conversion of arginine
to citrulline in the presence of calcium ions.
In rodents, PAD has been classified into four isoforms, types I, II, III, and IV, which are distinct in their molecular weights,
substrate specificities, and tissue localization. Of these isoforms, only type III was detected in epidermis and hair follicles.
Although the role of this enzyme in these tissues is not yet clear, indirect data have shown that several structural proteinssuch as filaggrin, trichohyalin, and keratin are substrates for PAD. In this study, we cloned the full-length cDNA of human
PAD type III (3,142 bp) from cultured human keratinocytes by the reverse transcription-polymerase chain reaction and by
rapid amplification of cDNA ends methods. This cDNA contained a 1,995 bp open reading frame encoding 664 amino acids(Mr = 74,770). To explore the physicochemical and enzymatic properties of human PAD type III, we constructed a plasmid for
producing a recombinant human PAD type III in bacteria. The enzymatic characteristics of the recombinant enzyme werevery similar to those of the rodent PAD type III. Based on the enzyme's activity towards human filaggrin and trichohyalin,
it appears that the enzyme prefers catalyzing the modification of arginine residues in filaggrin. These data imply that human
PAD type III may function as a modulator of filaggrin in these tissues.

１．緒を用いた大腸菌での大量発現系の構築が極めて重要である。

言本研究では、ラット・マウスの PAD type III cDNA の塩

ペプチジルアルギニンデイミナーゼ［英名；Peptidylarginine

基配列に基づくホモログ PCR による cDNA クローニング

deiminase, EC 3.5.3.15］（以下 PAD と略記）は、蛋白質のから研究に着手した。これまでに得られた研究成果を項目

Arg 残基を脱イミノ反応により Ci t 残基に変換する極めに分けると、１）ヒト PAD type III の cDNA クローニンてユニークな蛋白質修飾酵素であるが、その生理機能につグとその塩基配列の決定

いては未だ不明の点が多い。しかし、最近、表皮・毛嚢組

ベクターの構築と組換え型酵素の精製方法の確立

織に存在するケラチンならびにケラチン結合蛋白質に Ci t

組換え型酵素の蛋白質化学的並びに酵素化学的性質の解明

残基が存在することやこれら蛋白質の脱イミノ化に伴いトである。以下にこれらの成果の内容について紹介する。

ランスグルタミナーゼによる分子間架橋反応が著しく促進

２．実されることが明らかとなった。これらの知見は、PAD が表皮・毛嚢細胞の角質分化に大変重要な役割を果たすこと

２）同 cDNA の大腸菌での発現
３）同験

１）ヒト PAD type III の cDNA クローニングとそのを示唆している。我々は、以前より表皮・毛嚢組織特異的

塩基配列の決定に発現する PAD（PAD type III）が存在することを見出し

まず、培養ヒト表皮細胞から poly（A）+mRNA を調製、ており、本酵素の上記表皮・毛嚢蛋白質の脱イミノ化へのランダムプライマー法により一本鎖 cDNA を合成、これを関与を推定している。

鋳型として PCR を行い、DNA 断片を増幅した。尚、プラ

我々は、同酵素の生化学的並びに分子生物学的な研究をイマーはＮ末端側最上流の相同アミノ鎖配列（ILLVNCD）

まずラット・マウスの実験動物から開始し、その cDNAとＣ末端側最下流配列（HCGTVRR）からデザインした合成

クローニングとその全一次構造を解明した１、２）。ついで、DNA を用いた。ついで、増幅 DNA をＴ -plasmid にクロー

これらの知見を参考にし、ヒト PAD type III の表皮・毛ニングし、得られたクローンの塩基配列分析を行った。さ

嚢組織ならびに細胞内局在と分化に伴う発現変化、さらにらに、未決定の 5 ' 並びに 3 ' 領域については RACE 法を用は表皮・毛嚢蛋白質への作用とその機能変化を通じ、本酵

いてクローニングし、得られたクローンの塩基配列分析を素の生理機能を解明を目指すこととした。そのためには、行った。以上の実験により同 PADcDNA の全塩基配列を決本酵素の cDNA クローニングが不可欠であり、同 cDNA

定した。

Molecular cloning of human hair follicle
specific peptidylarginine   deiminase
cDNA and its function of hair regeneration２）ヒト PAD type III cDNA の大腸菌での発現ベクターの構築と組換え型酵素の精製
本 cDNA を大腸菌で発現させるために用いた発現ベク

Akira Kawada

ターは、先に報告した独立型 Two-Cistron 発現ベクター３）

Department of Dearmatology, Kinki
University School of Medicineを用いた。翻訳領域にフレームが合うよう制限酵素サイトを付与したプライマーを合成後、上記 cDNA を鋳型として PCR により翻訳領域を増幅、配列を確認後、制限酵素− 78 −

ヒト毛細胞特異的ペプチジルアルギニンデイミナーゼの cDNA クローニングと毛髪新生における生理機能の解析処理し上述のベクターに挿入した。発現酵素の精製は、大cDNA の全塩基配列と推定アミノ酸配列である。本 cDNA

腸菌抽出液を調製後、30-50％飽和硫安分画、ついで DEAE-

は全長 3 , 142 bp から成り、1 , 995 bp のオープンリーディ

Sepharose Fast Flow カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー、

ングフレームから推定されるアミノ酸残基数は 664 残基、Aminohexyl-Sepharose カラムクロマトグラフィーにより分子量は 74 , 770 と計算された。すでに明らかにしている行った。

ラット、マウスの PAD type III １、２）とはそれぞれ 87 . 2％、３．結

87 . 3 % の極めて高い相同性を示し、本 PAD が動物種を越果えて保存されている酵素であることが判った。

１）ヒト PAD type III cDNA の全塩基配列と推定ア

２）大腸菌組換え型ヒト PAD type III の性質

ミノ酸配列

精製した大腸菌組換え型ヒト PAD type III を用い、各Figure １は本研究により決定されたヒト PAD type III

種の蛋白質化学的性質ならびに酵素化学的性質を明らかに

Figure １ Nucleotide sequence and deduced amino acid sequence of human PAD
type III. The DNA sequence is numbered from the first nucleotide of the cDNA. The
numbers are on the right of each line. The deduced amino acid sequence is displayed
below the nucleotide sequence in one letter code starting from the putative initiation
methionine. A putative polyadenylation signal is underlined. The amino acid sequence
indicated by wave line is that of a synthetic peptide for producing antiserum.

− 79 −

し た。 本 酵 素 は SDS-PAGE で 算 出 さ れ る 分 子 量 が課題である。Table １は、各種のアルギニン誘導体に対す

66 . 0 kDa で あ り、 ア ミ ノ 酸 配 列 か ら の 推 定 分 子 量

る 本 酵 素 の 反 応 性 を 比 較 し た も の で あ る。 本 酵 素 は74 . 77 kDa と大きな隔たりがあった。これに関して質量分

benzoyl-arginine-ethylester, benzoyl-arginine-amide には析計を用いて詳しく分析を行った結果、本酵素の分子量は高い活性を示し、また天然のモデル基質であるプロタミン

アミノ酸配列からの推定分子量と一致することが確認されには特に強い活性を示すことが判った。これらの性質は、た。

マウスの野生型 PAD type III と共通した性質４）であり、本酵素が SDS-PAGE で示す挙動については今後の研究

本組換え型酵素が野生型酵素と大きな性質の変化が生じてTable １ Substrate specificities of the recombinant human PAD type III towards various arginine derivatives.
Substratea

Recombinant Type III
Native Type IIIb
mol/min/mg Relative activity (%)c Relative activity (%)c

Bz-L-Arg-O-Et
Bz-L-Arg-O-Me
Bz-L-Arg-O-NH 2
Tos-L-Arg-O-Me
Ac-L-Arg-O-Me
Bz-L-Arg 0 . 39
Ac-L-Arg 0 . 14
L-Arg-O-Me
L-Arg
0 . 08Protamine

1 . 961 . 13
1 . 430 . 36
0 . 5219 . 77.2
0 . 11
4.2
4 . 28100 . 057 . 673 . 118 . 226 . 5
11 . 6
11 . 6
5.7
8.9
218 . 6

100 . 026 . 888 . 427 . 432 . 115 . 3141 . 1

Concentration of each arginine derivatives were 10 mM and that of protamine
was 4 mg/ml.
b
Terakawa et al, 4）cRelative activity was calculated on the basis of the activity towards Bz-L-ArgO-Et.
aFigure ２ Time course of deimination of filaggrin unit and trichohyalin
by human PAD type III. Each protein was deiminated by the enzyme
as described in Materials and Methods. At the indicated times, thereaction was terminated by EDTA, and the citrulline residues ineach preparations were determined by amino acid analysis. Conversion rate of arginine residues to citrulline residues of each protein (○ -, filaggrin unit; - ● -, trichohyalin) was shown.

− 80 −

ヒト毛細胞特異的ペプチジルアルギニンデイミナーゼの cDNA クローニングと毛髪新生における生理機能の解析

いないことが確認された。ついで、本酵素のフィラグリン

最近、リュウマチ性慢性関節炎の患者の血中には Cit 化

及びトリコヒアリンに対する反応性について解析した。

されたフィラグリンのみを認識する自己抗体が含まれるこFigure 2 は本酵素と各蛋白質を１対 50 のモル比で反応させ５）とが報告され 、慢性関節炎の発症と Cit 化フィラグリン

た時の結果である。本酵素はフィラグリンの Arg 残基を最の免疫感作の成立との間の相関性に興味が持たれている。

大 60％修飾して Cit 残基に変換するに対し、トリコヒアリ

本研究により PAD type III がフィラグリンを標的蛋白質

ンでは 13％程度であり、本酵素がフィラグリンを効果的にとしている可能性が高くなったことから、本酵素遺伝子の修飾することが明らかとなった。

発現制御機構に関する基礎的研究が今後大変重要であると

４．考

思われる。

察

本研究では、ヒトの表皮培養細胞から mRNA を得て、

（文

献）

ホモログ PCR より PAD type III の cDNA のクローニン

１. Nishijyo T, Kawada A, Kanno T, Shiraiwa M, Takahara

グに成功した。今回得た cDNA が実際にヒト PAD type

H: Isolation and molecular cloning of epidermal- and hair

III をコードするものであることは、本 cDNA から推定さfollicle- specific peptidylarginine deiminase（type III）

れるアミノ酸配列がすでに明らかとなっているラット、マfrom rat, J. Biochem., 868 - 875 , 1997 .

ウスのそれらと極めて高い相同性を有すること、また、実

２. Rus'd AA, Ikejiri Y, Ono H, Yonekawa T, Shiraiwa M,

際に本 cDNA を大腸菌で発現させた酵素の基質特異性はKawada A, Takahara H:Molecular cloning of cDNAs of

天然の PAD type III と変わらないことから判断できる。

mouse peptidylarginine deiminase type I, type III and

本酵素のアミノ酸配列の特徴としてＮ末端領域に Cys 残type IV, and the expression pattern of type I in mouse,  基が多く存在していることが挙げられる。今回の研究によEur. J. Biochem., 259 , 660 - 669 , 1999 .

り、本酵素は低イオン強度化においても高い安定性を有し

３. Ohsugi I, Takahara H, Shiraiwa M, Sugawara K:ていることが判ったが、本酵素のこのような安定性は、本Expression of mouse uterine peptidylarginine

酵素が常に外的刺激に晒される細胞表層において機能する

deiminase in Escherichia coli: construction of

ために必要であり、そのためにの強固な立体構造の維持に

expression plasmid and properties of the recombinant

Ｎ末端領域の多数の Cys 残基が必要となっているのでは

enzyme. Arch. Biochem. Biophys., 317 , 62 - 68 , 1995 .

ないかと推測される。PAD type III が表皮・毛嚢組織に４. Terakawa H, Takahara H, Sugawara K: Three types

おいてどのような蛋白質を標的としていることを明らかに

of mouse peptidylarginine deiminase: characterization

することは、本酵素の生理機能の解明のうえで大変重要で

and tissue distribution, J. Biochem., 110 , 661 - 666 , 1991 .

ある。本研究において、PAD type III の標的蛋白質とし

５. Girbal-Neuhauser E, Durieux JJ, Arnaud M, et al: Theて推定されているフィラグリン及びトリコヒアリンに対す

epitopes targeted by the rheumatoid arthritis-

る反応性を調べた結果、フィラグリンに対する反応性がト

associated antifilaggrin autoantibodies are

リコヒアリンに比べ迅速に且つ多くの Arg 残基を修飾す

posttranslationally generated on various sites of (pro)ることが判った。このような結果は、トリコヒアリンが本

filaggrin by deimination of arginine residues, J.

酵素の標的蛋白質である可能性が低いことを示唆するもの

Immunol., 162 , 585 - 594 , 1999 .

である。

− 81 −

美白剤の紫外線色素沈着制御機構とその安全性に関する研究
神戸大学

医学部皮膚科学教室

船坂陽子

α-Tocopheryl ferulate (α-TF) is a compound of α-tocopherol (α-T) and ferulic acid connected by an ester bond; ferulic acidis also an antioxidant, and could scavenge free radicals induced by ultraviolet (UV) radiation, and thus maintain the long-lastingantioxidative effect of α-T. α-TF inhibited melanogenesis in human melanoma cells by inhibiting tyrosinase activity. The
strong inhibitory effect of α-TF on UVB-induced melanogenesis and erythema formation was observed in guinea pigs. α-TF
inhibited the formation of not CPD or 6-4 photoproducts but 8OHdG. Taken together, α-TF could be a good candidate for thewhitening agent which suppresses UV-induced melanogenesis with sparing DNA damages induced by oxidative stress.

１

緒を通じて抗酸化作用を示す。この構造的特徴より α- トコ

言フェロールはトコフェロキシラジカルを形成し、脂質の過顔面の色素沈着を引き起こす最も大きな要因の一つとし酸化を防ぐ９）。トコフェロキシラジカルはビタミン C、還て紫外線があげられる１）。紫外線の色素沈着誘導機序とし

元型グルタチオン、セレニウムなどの酸化還元物質との共ては、表皮メラノサイトへの直接作用と他の皮膚細胞、特役反応により還元されて、再度フリーの α- トコフェローに紫外線照射を受けた周囲ケラチノサイトから分泌されるルが再生される９）。

因子の paracrine による間接的な作用のあることが明らか

そこで、我々は紫外線吸収作用と抗酸化作用を有するにされている 。美白剤の開発は、主としてメラノサイト

フェルラ酸と、ビタミン E をエステル結合させたビタミへ直接働いて、メラニン生成における律速酵素 tyrosinase

ン E フェルラ酸エステル（d,l -α- tocopheryl ferulate, 以下を抑制する化合物のスクリーニングにより検討されてきたTF）（図１）の、美白剤としての効能を培養ヒトメラノサ

２）。最近では、後者の paracrine 機序に注目して、紫外線イトを用いて検討した。さらに、TF が効率のよい抗酸照射を受けたケラチノサイトから分泌される endothelin- 1化作用を有することより、UVB により誘導される色素沈（ET- 1）が中波長紫外線（ultraviolet B, UBV）による色素着・紅斑形成あるいは DNA 損傷への抑制効果を、既に多沈着に大きく作用することより、この ET- 1 に対するメラ

くの施設で研究が進められている α- トコフェロール（αノサイト上の受容体の活性化を抑制するカミツレエキスの- tocopherol、T）と比較検討したので以下に述べる。

１）

開発が注目を集めている３）。しかしながらメラニン、特に２

黒いメラニンである eu-melanin は紫外線に対する一種の実

験SOS 反応の産物であり、紫外線による DNA 損傷からの防２. １ 培養ヒトメラノサイトにおけるメラニン生成抑御を担うことが明らかにされている 。従って美白剤によ

制実験（メラニン量、tyrosinase 活性、DOPAchrome

り melanin 産生を抑制した場合に、紫外線による DNA 損

tautomerase 活性、DHICA polymerase 活性）傷が増強するか否かの検討が、安全性の点から重要である 。

TF は脂溶性であるので、0 . 5％（w/v）レシチンに 0 . 1４）５）抗酸化剤であるビタミン E（α- トコフェロール）の経口
摂取が、顔面の色素沈着の治療に有効であること、特に、ビタミン C 内服との併用療法にて、より効果的であることが報告されてきた６、７）。ビタミン E には α-、β-、γ-、δ- トコフェロールおよびトコトリエノールの 8 種の同族体があるが、α- トコフェロールが最も生物活性が強い８）。細
胞膜の脂質層に入って、クロマン環とフェノールの OH 基
The inhibitory effect of α-tocopherylferulate
on UVB-induced melanogenesis
accompanied with protective effect of
DNA damages
Yoko Funasaka
Department of Dermatology Kobe
University School of Medicine− 82 −

図１

ビタミン E フェルラ酸エステルの構造

美白剤の紫外線色素沈着制御機構とその安全性に関する研究％（w/v）となるよう TF を混合（即ち、レシチンは TF

反応について観察した。

の５倍濃度、以下レシチン可溶 TF を TFL と呼ぶ）し、

UVB による DNA 損傷は、照射 30 分、１時間、３時

これをストック液とした。TF の溶媒コントロールとして、間、24 時間後に皮膚を採取し、チミン２量体、6 - 4 光産物、レシチン（以下 L と略す）添加による影響も検討した。また、

8 -OHdG を認識する特異抗体で染色して評価した。

TF の、T やフェルラ酸（ferulic acid, F）との比較のため、

３

これらをエタノールに溶解したものとの比較実験も施行した。メラノテイックなヒト黒色腫細胞（HM 3 KO）に対し

３. １

結

果

培養細胞におけるメラニン生成抑制能

T、TF、TFL、L においてメラニン抑制効果を認め、て、細胞毒性を示さない濃度（30 ないしは 100 µg/mL）で５日間培養した後、細胞をアルカリ処理し、メラニンを可これは tyrosinase 活性と DHICA polymerase 活性の抑制

溶化してメラニン量を、また蛋白を抽出し、以下の如く酵能と相関していたが、DOPAchrome tautomerase（TRP- 2）

素活性を測定した。Tyrosinase 活性は、トリチウム標識

活性は、これらの処理にてほとんど影響を受けなかった（図チロシンを用い、tyrosinase の働きで、チロシンがドーパ

２）。

になる際に生成されるトリチウム標識水量を測定することにより評価した。DOPAchrome tautomerase（TRP- 2）活３. ２

TF は in vivo における UVB による色素沈着及び紅斑・DNA 損傷誘導に対する防御効果を示す

性は DHICA の消失率を分光光度計で測定して評価した。

図３に示すように、TF において明らかに色素沈着の形

DHICA polymerase 活性は、DHICA メラニンの生成量を成抑制が認められた。

400 nm の吸光度で測定して評価した。

T と F 外用では、紅斑の抑制がみられるモルモットと

２. ２

UVB による色素沈着及び紅斑・DNA 損傷誘みられないモルモットがそれぞれ約半数ずつ観察されたが、導に対する防御効果（in vivo）

TF 外用では、検討した 10 匹のモルモット全てにおいて、茶色モルモット背部に、１％濃度のエタノールに溶解

著明な紅斑抑制がみられた。

した T、TF および TFL を UVB 照射前後に外用し、1 J/

TF 外用にて 8 -OHdG 形成の明らかな抑制がみられたが、

cm の UVB を１週間に２回、連続２週間照射し、第３週

チミン２量体および 6 - 4 光産物の生成、および消退スピー

めに色素沈着度を、色差計を用いて測定した。

ドにおいてはコントロールとの比較において TF、T, F い

2

白色モルモット背部に、１％濃度のエタノールに溶解した T、TF、F および TFL、L を外用し、同様に 1 . 5 - 3 J/
cm 2 の UVB を照射して、４時間および 24 時間後の紅斑

図２ α- トコフェロール、フェルラ酸、ビタミン E フェルラ酸、ビタミン E フェルラ酸レシチン、レシチンのメラニン生成抑制効 比較（文献 10）を改変）
ヒト黒色腫細胞 HM3KO を各種化合物の存在下に 5 日間培養した。Control: 無処理、T: α- トコフェロール、F: フェルラ酸、TF: ビタミン E フェルラ酸、TFL: ビ
タミン E フェルラ酸をレシチンに可溶化、L: レシチン。図中バーは標準誤差（n=3）。

− 83 −

図３ 茶色モルモット背部皮膚に形成された紫外線誘発色素沈着の L 値におよぼす各種抗酸化剤塗布の影響
Control: 無処理、T: α- トコフェロー
ル、TF: ビタミン E フェルラ酸、TFL:
ビタミン E フェルラ酸をレシチンに可溶化。図中バーは標準誤差（n=4）。

ずれにおいても明らかな差は認められなかった。

４

考損傷が一つの共通の機点に基ずくものであるのか否かは不
明である。

察

培養ヒト色素細胞を用いた in vitro の結果より、TF はUVB 照射ヘアレスマウス皮膚での T の作用について

強力にメラニン合成を抑制して、美白へと導くことを明らはすでに多くの施設で検討が進められてきた。UVB 照射

かにした。メラニンが少なくなると、ケラチノサイトの紫後皮膚の T 濃度が 50％に減弱することがしられており 11）、

外線による DNA 損傷がより高度になり、紫外線発癌につこれを補充することも兼ねて、外用による UVB の急性反ながる危険性が増すと考えられている 17）。しかしながら、応の抑制について検討された結果、紅斑反応やサンバーン

TF は美白を保ちながらも、その抗酸化作用により紫外線。UVB の慢性効果としてによる皮膚の損傷（DNA 損傷および紅斑反応として認めは、皮膚のしわ、膠原線維の損傷、そして腫瘍形成につられる炎症反応）をも同時に防御しうると考えられる。今いて検討され、T 外用によりこれらがいずれも減弱する

後、TF の生物効果をより詳細に分子生物学的に明らかに。腫瘍形成抑制の機序としては、していくことは、紫外線に曝露される顔面皮膚の光老化の細胞の形成抑制が認められたことが報告されている

12）

13）

UVB による細胞増殖、DNA 損傷を T が抑制する可能性

防御や治療剤を開発していく上で重要と思われる。

が考えられるが、McVean らはマウス皮膚に UVB を照射する実験系で、T を紫外線照射前に塗るとチミン二量体の形成が抑制されることを示した。Berton らは紫外線照14）（参考文献）
１）船坂陽子、：メラノサイトと増殖因子、皮膚臨床、35、

射後に T を外用し、１MED の UVB 照射後のチミン二量体および 6 - 4 光産物の修復が T により増強すると報告している

1371 - 1379、1993
２）船坂陽子、市橋正光、：色素沈着の外用療法、臨皮、。しかし、細胞周期調節因子である cyclinD 1 や51、144 - 147、1997

15）

P 21 の発現パターンが変化するにもかかわらず、DNA 合３）Imokawa G, Kobayashi T, Miyagishi M et al,: The

成能には影響を及ぼさなかった。UVB による腫瘍形成発

role of endothelin- 1 in epidermal hyperpigmentation

現時期を遅らせ、また腫瘍部のテロメレース活性が T 外

and signaling mechanisms of mitogenesis and

用群では低いことを見い出している。T はその吸収極

melanogenesis, Pigment Cell Res, 10 , 218 - 228 , 199716）

大は 295 nm であり、UVB を直接吸収して分解する。従４）Eller M, Ostrom K, Gilchrest BA,: DNA damageって、McVean らの結果は一種のサンスクリーン効果によenhances melanogenesis, Proc Natl Acad Sci, USA, 93 ,り少量 UVB 照射により誘導されるチミン二量体の形成を

1087 - 1092 , 1996

抑制したと考えられる。我々の系で、チミン二量体および５）Funasaka Y, Komoto M, Ichihashi M,: Depigmenting

6 - 4 光産物の形成抑制作用が認められなかったのは、照射

effect of α-tocopheryl ferulate on normal human

量が多いためにサンスクリーンとしての効果を発揮できな

melanocytes, Pigment Cell Res, in press, 2000

かったものと思われる。実際、コントロールとして用いた

６）ビタミンＥ，Ｃ配合剤臨床研究班、：顔面色素沈着症

サンスクリーン剤外用群では、これら DNA 損傷の形成はにたいするビタミンＥとビタミンＣの配合剤および単味全て抑制された。Berton らが観察したチミン二量体およ剤の治療効果 , 西日皮膚、42、1024 - 1034、1980

び 6 - 4 光産物の修復が T により増強したという点は、興７）YEC- 1 研究班、
：女子顔面色素沈着症に対する YEC-

味深いものの、この修復増強効果の機序については全く不１（ユンケル（r）ＥＣ）の使用経験、基礎と臨床、25、明である。8 -OHdG は酸化ストレス即ち、ヒトロキシラジ

312 - 323、1991

カルや一重項酸素を介して形成されるとされているが、水

８）赤田陽児、：ビタミン E と化粧品、フレグランス

溶性のビタミン E にて、この DNA 損傷が抑制されることが報告されている。我々の系で、チミン二量体および

16）

ジャーナル、19、68 - 76、1976
９）古瀬一磨、：ビタミンＥと過酸化脂質、フレグランス

6 - 4 光産物のような UVB の直接作用による DNA 損傷でジャーナル、14、53 - 56、1986

はなく、この 8 -OHdG が選択的に抑制されたのは、TF が10）Funasaka Y, Chakraborty AK, Komoto M, et al,:

その抗酸化作用を効率よく発揮したためと考えられる。さDepigmenting effect of α-tocopheryl ferulate on

らに、TF が UVB による色素沈着、紅斑、8 -OHdG 形成

human melanocytes, Br J Dermatol, 141 , 20 - 29 , 1999

抑制に α- トコフェロールよりも強力にその作用を発揮し11）Fuchs J, Huflejt ME, Rothfuss LM et al,: Impairment

た理由として、エステル結合したフェルラ酸が α- トコフ

of enzymic and nonenzymic antioxidants in skin byェロールの近傍に存在することより、抗酸化剤としてそのUVB irradiation, J Invest Dermatol, 93 , 769 - 773 , 1989

効果を示した可能性が考えられる。しかしながら、TF に12）Trevithick JR, Xiong H, Lee S, et al,: Topicalより抑制されたこれら UVB による色素沈着、紅斑、DNA

tocopherol acetate reduces post-UVB, sunburn-− 84 −

美白剤の紫外線色素沈着制御機構とその安全性に関する研究

associated erythema, edema, and skin sensitivity in15）Berton T., Conti CJ, Mitchell DL, et al,: The effect ofhairless mice, Arch Biochem Biophys, 296 , 575 - 582 ,

vitamin E acetate on ultraviolet-induced mouse skin

1992

carcinogenesis, Mol Carcinog, 23 , 175 - 184 , 1998

13）B i s s e t t D L , C h a t t e r j e e R , H a n n o n D P , :16）Stewart MS, Cameron GS, Pence BC,: Antioxidant

Photoprotective effect of superoxide-scavenging

nutrients protect against UVB-induced oxidative

antioxidants against ultraviolet radiation-induced

damage to DNA of mouse keratinocytes in culture, J

chronic skin damage in the hairless mouse,

Invest Dermatol, 106 , 1086 - 1089 , 1996

Photodermatol Photoimmunol Photomed, 7 , 56 - 62 , 1990

17）Kobayashi N, Muramatsu T, Yamashina Y, et al,;14）McVean M, Liebler DC,: Inhibition of UVB induced

Melanin reduces ultraviolet-induced DNA damage

DNA photodamage in mouse epidermis by topicallyformation and killing rate in cultured human melanoma

applied α-tocopherol, Carcinogenesis, 18 , 1617 - 1622 ,cells, J Invest Dermatol, 101 , 685 - 689 , 19931997

− 85 −

シルバーファッションショー出演者の被服に関する意識
京都大学大学院

片

本

恵

利、木

村

教育学研究科

大

生、西

尾

新

The purpose of this study is to investigate the effects of clothing on self-awareness of aged person. The subjects aremodels and audiences of two fashion shows for aged. We investigated their attitudes to clothing for aged with observation,questionnaire, interview, and "the Clothing Completion Test" that we have developed in this study. "The Clothing completion
Test" is a kind of drawing test and aimed for measuring interest in clothing numerically.
Some cases we met at the fashion shows imply that aged participants have changed their self-images by clothing. Thus,
we may suggest that the important factor for aged person's clothing is not only design such as colors or materials, but also
opportunities where aged people can experience change of their self-images by changing clothing. In addition, it is very
important point that they can share the opportunities with others such as their families or their caretakers.
In conclusion, we would like to say that what is important for all of us is to produce wide choice of clothing for aged
people and assist them in creating new self-images with clothing.
The results of the questionnaires on self-awareness and the Clothing completion Test show correlation between public
self-awareness and the form quality of the Clothing Completion Test. This correlation may show the validity of the test.

ない」などの、被服に無関心、あるいは関心を持つべきではじめにないという反応がほとんどであった。これらの高齢者は嘘

近年、急激な高齢化社会に対応するため、高齢者の生きを言っているわけではないが、高齢者への社会的圧力やイがいや生活の質（QOL）に関する研究や取り組みが増えてンタビューという特殊な状況が、彼らに遠慮や過剰適応をきたことは周知のとおりである。しかし、個人の生活を「衣・促し、被服への無関心を強調させている可能性がある。こ

食・住」に分けて考えた時、とりわけ「衣」への取り組みのように考えると、彼らの言語による報告は、必ずしもは不充分であると言えよう。わが国における高齢者の被服

彼らの心の真実を反映しているとは言えない。そこで、筆についての研究はほとんど蓄積がなく、それぞれの現場で者らは、塗り絵の手法を応用した「被服構成法」と、シル

暗中模索が続いているのが現状である。そこで、高齢者のバーファッションショーという二つのアプローチを用いて、被服について研究するには、先入観を排して事実を観察し、高齢者の着装行動に関する探索的研究を試みた。本研究で収集したデータを丁寧に検討し、考察を得ることから始めは、このうちのシルバーファッションショーを取り上げる。

るべきである。しかし、高齢者が被服に関する意識を言語

目によって直接表現することには多くの困難を伴う。高齢者

的の多くは、これまで装うことを「贅沢」として抑圧する環

本研究では、シルバーファッションショーを一つの実験境の中で過ごしてきた。また、痴呆や言語障害から言葉に状況と捉え、高齢者の着装行動の観察結果をもとに分析をよるコミュニケーション自体がスムーズに行かない場合も加えることによって、シルバーファッションショー出演者多い。実際、筆者らがこれまでインタビューなどで被服にの自己意識の変化について考察を得ることを目的とする。

関して高齢者の意見を求めても、「年を取ったら服装など方

どうでもいい」・「年寄りになったら皆が勧めてくれる服を法

着ていればよい。あれこれいうのはみっともない」・「そん高齢者の被服に関する取り組みの一つとして、各地でシな話は若い人に聞いてほしい」・「年寄りをからかったらいルバーファッションショーが催されるようになった。機能

かん」
・「今のままで十分ありがたい。これ以上言ってはぜを重視したもの、リフォームを生かしたものなどさまざまいたくだ」
・「男は服装など構うものではない」・「目立たななものがあるが、筆者らのファッションショーの特徴は、

いのが一番。自分がどういうのを着たいなどということは「衣裳やモデルに制限を設けないで、高齢者自身の装いた

Participants' awareness about clothing ina fashion show for aged
Eri Katamoto, Taisei Kimura, Arata Nishio＊

Graduate School of Education Kyoto
University

いという気持ちを重視する」
ことである。
「制限を設けない」
ことで普段の生活に「非日常」を持ちこむ本研究のショー
は、「日常着」を「元気な高齢者」をモデルとして見せることが多かったこれまでのショーに比べて、普段は見られな
い高齢者の被服への関心、着装行動の特徴が表れやすくなることが期待される。具体的には、以下の事柄を柱とする。

＊

１）モデルの選択に制限を設けない− 88 −

シルバーファッションショー出演者の被服に関する意識

誰でも、年をとり、身体が弱っても、自分の着たい被服

衣後、本番後）撮影、本番のビデオ撮影と、後日、面を身に着けたいと願うであろうし、被服は生涯身につけ続接法による被服構成法およびインタビューを行った。

けるものである。本人の希望があれば、危険のない範囲で観客への調査：ショーのプログラムに、モデル・ファッシ

生活自立度（ADL）にかかわりなくモデルになれるようにョンショーへの感想を質問項目とした記述式質問紙をスタッフが努力する。

添付し、ショー終了時に回収した。

２）衣裳に制限を設けないスタッフへの調査：ショー終了直後、モデルの表情・行動

特別な日の装いなら、着脱は互いに助け合えばよい、転の変化に関する質問紙調査を行った。

倒防止にはエスコートがつけばよいという考えに基づいて結いる。着脱のしやすさや転倒防止など機能・安全面を考え

果

るとボタンやファスナーのデザイン、丈やフレアーに制約

１．モデル（注１）が加えられやすいし、「高齢者らしい」となると地味で無ⅰ）赤い衣裳が着たかったが落ち着いた色の衣裳しかなか

難な色・形になりがちである。しかし、本研究におけるフったところ、気がすすまない様子であったが、スタッファッションショーでは、本人が着たいと思うデザイン、着が衣裳のエレガントさ、似合っていることを強調すると、た人を美しく輝かせるデザインを重視する。

次第に受け入れ、本番では堂々とパフォーマンスを披露

調する（女・75）。

査ⅱ）本人の選んだ明るい色の衣裳に家族が反対し、地味な

１．ファッションショー１

ものを選びなおす（女・75）。

日

時：1997 . 11 . 23 .

場

所：京都市内の特別養護老人ホーム

ⅲ）当初、モデル出演には慎重な態度を取っていたが本番では喜んで「冥土の土産にします」と言っていた。とこ

モデル：上述の特養入所者 15 名。（うち男性３名、女性ろが後日写真を見て、思い描いていたイメージとの差に12 名。自力歩行６名、歩行器使用３名、車椅子６名。

がっかりし、不満をスタッフに直接向ける替わりに「若痴呆のある方を含む。）

い人（＝ 80 代以下）に比べて自分は美しくない」と自己モデルへの調査：卑下する（女・93）。

ⅰ）事前調査。調査内容は、被服構成法およびインタビ

２．観ュー、写真・ビデオ撮影である。
ⅱ）当日調査。継時的な写真（更衣前、化粧後、更衣後、客ⅰ）有効回答 51。うち男性６名、女性 45 名。

本番、本番終了後）撮影、ショー本番のビデオ撮影をⅱ）年代別内訳；10 代３名、20 代４名、30 代１名、40 代６名、行った。

50 代４名、60 代 10 名、70 代 20 名、80 代３名。

ⅲ）直後調査。調査内容は、事前調査と同じである。

ⅲ）回答例

ⅳ）事後調査。調査内容は、事前調査と同じである。当・モデルが生き生きしている、楽しそう、美しい、笑顔

日には、スタッフへの調査；シルバーファッションシが印象的（多数）／若い人には似合わない服を高齢者

ョー終了後、付き添い・カメラ・ビデオスタッフに、が着こなせる（女・76，26）。
・デザインをもう少し機能的に（転倒の危険、着脱の便）

質問紙調査を行った。
施設スタッフへの調査：付き添いスタッフらと同じ質問紙（女・67，46，16）／普段でも着れる服、楽に着れる服が見たかった（女・39，13）。

調査を、後日回収という方式で行った。

・高齢者には勇気がいる、派手（女・80、24）。

２．ファッションショー２

・明るい色がよい、赤い色がよい（女・82，76，69、62，日

時：1999 . 3 . 13 .

44）
。

場

所：ハートピア京都

全体的には肯定的な意見・感想や新鮮な発見への驚き

モデル：24 名。（うち老人クラブ会員

男性２名、女性 10を述べたものが多かった一方で、安全性や便利さを気に名、計 12 名。全て ADL 自立。特別養護老人ホーム入するもの、普段着られる服がよい、などの機能重視を求所者める意見、派手過ぎるといった拒否的な意見も見られた。

男性３名、女性９名、計 12 名。自力歩行３名、歩行器使用５名、車椅子４名、痴呆のある方を含む。
）

考老人クラブ会員モデルへの調査：継時的写真撮影

察（更衣前、更衣・化粧後、本番後）、本番のビデオ撮影、筆者らは当初、「ファッションショーによって高齢者のショー終了直後の集団法による被服構成法を行った。

自己イメージが変わり、自己評価が向上する」という仮説

特養入所者モデへの調査 : 継時的写真（更衣前、更を考えていた。しかし、実際に起こったことはより複雑で− 89 −

あった。本研究から見えてきたことの一つに、高齢者の被自己イメージの変容とは、高齢者が「私らしい」と感じら

服と公的自己意識と私的自己意識との関係がある。興味深

れ、周囲も承認できる被服が増えることであると言うこと

いのは、観客調査で、高齢者の観客の方が、明るい色がよも出来る。したがって、被服が高齢者の心理に及ぼす影響

いという回答が派手で嫌というものより多数だったこと、について考える時には、「この色を身につければ元気にな

逆に 50 代以下の観客に「高齢者には勇気がいる」という形

る」というような、特定の効果を狙って被服のデザインそで派手さに懸念を示したり、はっきり「派手過ぎる」と拒のものを検討することよりも、装う本人も周囲の者も心か否反応を示す回答が見られたことである。事例からも分か

ら「素敵」
・「似合っている」と思える被服を身につける「場」

るように、選択肢が示されれば明るい色の服を着たいと思をつくることこそが重要である。筆者らの関わったファッ

い、着てみると似合うと感じる高齢者も多いし、加齢に伴ションショーも、装う人を輝かせる衣裳をつくり、強制はい心身の機能が衰えた者にも、ハレの日の特別な一着があせずに心をこめて衣装を勧め、本人が納得のいく衣裳を選ってもよいはずである。ところが、周囲の者が、高齢者のび、周囲が自然に承認を与えるプロセスが不可欠であった。

被服は機能を重視し無難なデザインにするべきである、と「いい衣裳を作ったから嬉しいだろう、これを着れば元気の先入観から抜けられないために、装う本人の意思が必ずになるだろう」という一方的な考えでは、本研究で観察さしも反映されず、機能的・安全・無難などの理由で周囲にれたような自己イメージの変化は起こらなかったであろう。

承認されやすい被服を選んでしまう可能性が示唆される。

勿論、これらのことから直ちに被服のデザインや機能の被服は、社会的コミュニケーションの道具の一つであり、開発・研究が無駄だということにはならない。高齢者の被装い、周囲に見せることによって一つの「記号」となり「意服は極端に選択肢が少ないのが現状である。事例にもある味」を持つ。しかも、事例でみたように、最初は気に入らように、明治から戦前生まれまでの実に幅広い年齢層をひなかった衣裳を受け入れ、周囲に承認されることによってとくくりに「高齢者」と呼ぶことにも限界がある。高齢者

自己イメージが膨らんだり、逆に本人の望む衣裳に周囲がが「私らしい」と感じられる被服をさらに増やすためにも、承認を与えなかったために自己イメージの変容の機会が我々の側の先入観を排して地道に研究を重ね、選択肢を増失われたりする。このように、ひとつの衣裳が与える「意やすことこそ、高齢者が生き生きと暮らせる真の高齢化社

味」は一義的に決まっているのではなく、常に変容しうる会の実現に向けて我々が出来ることなのではないだろうか。

のである。被服による自己イメージの変化は、決して装う
本人の内側だけで起こるのではない。被服による高齢者の［資）内は性 ・

年齢。

本被服構成法では、描かれたアイテム（注３）や使用された料］ 被服構成法の作成
目

注１：スタッフへの質問紙調査の結 による。（

色、描き方に注目することにより、高齢者が被服に対して抱いている興味・関心を数 化する技法の開発を目指した。

的

被服構成法

本文で述べたようにインタビュー調査によって、高齢者が被服に対して持つイメージを知ることは難しい。その原

１.

実施方法

因としてインタビューを受けた高齢者がインタビューに慣図

版：冊子形式の下絵（図１）。

れていないことに加えて、「被服」のイメージを言語化す

用具：サクラクレパス 25 色セット太巻き、鉛筆。

ることが困難であり、また被服に対するイメージを表現す

手続き：調査にあたり、各被験者に冊子とクレパスを配布

ることへのてらいがあったと考えられる。そこで筆者らはし、集団により実施する。教示は以下のように行なう。
「自被服のイメージを比較的容易に表現できる非言語的手段と分が着てみたいと思う服を自由に描いて下さい」描画はして、クレヨンを用いた塗り絵形式の描画法を採用し、被被験者ペースで行なう（以下、下絵の上からクレヨンに服構成法と命名した。この被服構成法において塗り絵形式

よって描かれた絵をサンプルと呼ぶ）。

の描画法を採用した理由は以下の４点である。第１に非言語的表現にすることで、イメージの表現という困難な課題

２.

採点方法

を容易にしたこと。第２に下絵があることにより、描画へ得られたサンプルについて、（１）アイテムの数、（２）の抵抗感を低減させられること。第３にクレヨンを用いる使用された色数、（３）形態水準の３つの基準から採点し、ことで，細かい描画を要求しないこと（注２）。第４に標準化サンプルに関する数 的分析を行なう。

が可能となること。

− 90 −

シルバーファッションショー出演者の被服に関する意識

女性用

男性用
図１

被服構成法図版（１）アイテムに関する数 化
衣服（計 11 項目）とアクセサリー／化粧（計14 項目）の下 カテゴリーに項目を分類する（表１）。
１）衣服アイテムはジャケット類・シャツ類・スカート類・ズボン類・ワンピース類・セーター類・ベスト類・コート類・靴下類・着物類が描かれていれば、各１点と点数化し、その合寧度の４指標により点数化を行い、４指標の点数を合計し計を衣服アイテム得点とする。なお上記カテゴリーでたものを形態水準合計得点とする。

は分類できないアイテムはその他として扱い、各１点

１）輪郭の有無として点数化する。

輪郭の有無はさらに（1 - 1）外側の輪郭、（1 - 2）内側の

２）アクセサリー／化粧アイテムに関して，髪・靴類・輪郭、（1 - 3）髪型の輪郭の３下 カテゴリーに分けられる。

帽子類・イヤリング・ネックレス・ブローチ・ネクタ

外側の輪郭とは下書きの線にとらわれないアイテムの輪

イ・メガネ類・指輪・時計・口紅・頬紅・アイメイク・

郭のことである。一方内側の輪郭とは１つのアイテムのマニキュアのいずれかのアイテムが描かれていれば各内部を線で分節化しているものであり、アイテム間の境１点として点数化し、その合計をアクセサリー／化粧界ではない。ここではポケット・襟・ボタン・袖の折りアイテム得点とする。

返しなどを指す。また後述の柄とも区 される。
（1 - 1）外側の輪郭（２）使用された色に関する数 化

外側の輪郭がないものを「０点」、

下書き内部にアイテムの輪郭を作っているものを「１（計８色：筆記用具の 25 色を予備調査（注４）によって明色群

点」、さらに下書き内部の輪郭に加えて下書きを越えて

だいだい・きみどり・黄色・あか・むらさき・レモン色・アイテムの輪郭を作っているものを「２点」とする。

みどり・みかん色）と中間色群（計９色：ぐんじょう・朱色・（1 - 2）内側の輪郭

明るいむらさき・ももいろ・みずいろ・あお・あいいろ・

アイテム内部を分節しているものを「１点」、アイテム内おうど色・しろ）と暗色群（計８色：はだいろ・ふかみどり・部の分節が複数箇所見られるものを「２点」とする。

ちゃいろ・はいみどり・くちばいろ・はいいろ・くろ・こ（1 - 3）頭髪の輪郭

げちゃ）の３カテゴリーに分ける。数 化に際しては、サに対して整合性のない頭髪を「１点」、普 の頭髪を「２点」

ンプルに使用された色を数え、各カテゴリーの合計点を算出する。

内側の輪郭がないものを「０点」、

頭髪がないものを「０点」
、頭の形

とする。
２）表 の様子
表 の様子は下 カテゴリーとして（2 - 1）柄、
（2 - 2）混色、（３）形態水準に関する数 化（2 - 3）頭髪の混色の３カテゴリーに分ける。

輪郭の有無、表 の様子、言語的説明の有無、塗りの丁（2 - 1）柄− 91 −

柄がないものを「０点」、１アイテムが色分けされているか、あるいは塗り方による織・編み柄の表原（1984）の自己意識尺度を同時に実施した。被服構成法

現がされているものを「１点」とする。

の各尺度と自己意識尺度との相関（ケンドールの順 相関係（2 - 2）混色数）を求めたところ、形態水準合計得点と公的自己意識尺混色が見られないものを「０点」、複数色の重ね塗りが見られたものを「１点」とする。

度得点との間に、正の相関（ｒ＝ 0 . 561，p < . 05，n= ７）（2 - 3）頭髪の混色

頭髪の色がないものを「０点」、単が見出されたのに対し、私的自己意識尺度得点との間には一色の場合を「１点」、複数色の場合を「２点」とする。

相関は見出されなかった。この結 は，形態水準が自己意

３）言語的説明の有無

識の中でも「見られる自己」あるいは「場に規定される自己」

描画に現れていない情報への言及を表わす公的自己意識と関係していることから、被服構成

言及がないものを「０点」、言及があるものを「１点」

法の妥当性を部分的に示している。しかしサンプル数が少とする。

ないので、今後のさらなる検討が必要である。

４）塗りの丁寧度全く塗られていないものを「０点」、輪郭からのはみ

注２：描画法の１つにバウムテストがある．高齢者に対する実施は非常に困難であった．

だしや斜線による表現でアイテムの内側に白い部分が残るものを「１点」、アイテムの内側がほぼ塗りつぶされ

注３：描かれた衣服や化粧・アクセサリーのパーツを指す．

ているもの（意図的に空白を用いた表現もこれに含める）

注４：大学生・大学院生を被験者（n= 15）として用具のクレヨ
ン 25 色各々につき，形容詞対「地味−派手」を５件法によっを「２点」とする。

まとめて評定させた．

本テストの構成概念妥当性を検証する手段として、被服（引用文献）

構成法の各尺度と自己意識尺度との相関の検討が考えら菅原健介

れる。筆者らは 1999 年３月のシルバーファッションショ

本語版作成の試み，心理学研究，55，184 - 188 .

ーの際に、ショーの出演者を対象にして被服構成法と菅（注：代表研究者が吉川左紀子助教授から西尾新氏に代わって報告されたものです。
）− 92 −

1984

自意識尺度（self-consciousness scale）日健康な笑いづくりの方法について
福岡大学

髙

下

人文学部

保

幸

KUBOTE WARAI-KOU(KUBOTE Laughers Club)is the friendly group whose members meet together in the foot ofMountain Kubote once a month and laugh voluntarily to promote their health. This study aims at finding the way of
spontaneous laughing of the group members and the differences between voluntary laughs and happy-felt laughs.
As the first step of this investigation, two hundred and seventy-nine subjects watched the video-taped voluntarylaughter scene (about five minutes)of the members and appreciated the laughs in comparison with natural laughs. It issuggested that voluntary laughs of the group members is regarded as exaggerated in both strength and length. Andso, observing repeated laughter didn't raise energetic arousal(or evoke positive mood) as the previous studies of humor
indicated the stress-moderating effects of humorous experiences and laughing.

１ 緒

参加して「一緒に」車座になって笑うことで健康づくりを言進める親睦団体ならびにその活動である（図１）。

１. １ 笑い・ユーモア療法の実践

この月例会での笑う活動が笑う人自身の健康に即時的にこれまで巷間で「笑う門には福来る」といわれてきた笑及ぼす効果に関しては、（質問票「日本版 POMS」３）による

いやユーモア体験がもたらす幸福、すなわち効用のひとつ

測定では）その場で笑うことが不快な気分や感情を軽減しが健康を支援し維持することであろう。その効用の現代にて快適な気分をより高揚させるという意味での精神的健康

おける実証の先駆けは、ようやく 1970 年代に米国のジャをもたらすものであった。またわらい講での笑う活動や訓ーナリストであるノーマン・カズンズ（Norman Cousins）

練が日常生活に及ぼす効果として、ほとんどの会員が全版

が自らが罹患した膠原病を喜劇映画を視聴しジョーク集を的に適応した健康な生活を送っていること（質問票「日本看護婦から読んでもらうことに伴う笑いやユーモア体験を、さらには楽天的版 GHQ 精神健康調査票」４）による測定）

通して治癒したというエピソード１）にみられる。これを発端として、笑うことやユーモア体験が、呼吸・循環機能やなものの見方をするようになったこと（日常生活での効用に関する調査に基づく）などがあげられている５）。

免疫機能を活性化する、肯定的なものの見方へ転換させる、対人関係を宥和化するなどの身体、感情、認知、社会の諸１. ３

実験や調査によって確かめられている２）｡

求菩提わらい講の会員の笑いのつくり方

この月に１回の月例会で会員がうまく笑う方法としては、側面からストレスを緩和し健康を維持することが、多くの他の人の笑いをひきがねにする、つまりは他の人の笑いに

これらの研究成果をふまえて、笑うことやおかしさ（ユ

つられて笑うという要領を会員の多くが用いるものであっーモア）を体験をすることが健康支援の手軽な方法のひとた（表１）。このことから、こうした一緒に笑う会合に直つとして、食事の制御、各種の運動やスポーツ、自律訓練

接に参加しなくても側でみているだけで、笑ったり楽しん

法などのセルフコントロール法などとならんで、日常生活だりして、特に精神的健康によい影響をうけるように思わに取り入れられようとしている。こうした笑いによる健康れる。ただし、わらい講での笑いは基本的にはつくった笑づくりの実践をより積極的に目指した先駆的な活動が「求い、作為の笑いであることから、人から好意的に受け入れ

菩提（くぼて）わらい講」である。

１. ２

求菩提わらい講の健康づくり活動

求菩提わらい講は、福岡県の東部、周防灘に面する豊前市の求菩提山の山麓で毎月１回、男女の会員 20 名ほどがVoluntary Laughter for Promoting Good
HealthYasuyuki Takashita
Faculty of Humanities, Fukuoka
University
図１「求菩提わらい講」の笑い場（視聴ビデオの１シーン）− 93 −

た。
この２種のビデオは、半暗室照明下の講義室の正面の大型スクリーンに投影して被験者に提示された（図２）｡

２. ３ わらい講の笑い場面に対する評定
わらい講の笑い場面のビデオを被験者が視聴して、その笑いに対して感じた印象を、「ふだん自分や他の人が笑っている場合」との比較によって、「笑いの顔面表情の強さ」「笑う表情の左右対称性」「笑い声の大きさ」「笑い声の高さ」「笑うときの体の動き」「１
回の笑いの時間」「笑いが繰り返し持続する時間」「全般的印象」に関して５段階（１が「非常に強い」「大きい」など、
５が「非常に弱い」「小さい」など）で評定を求めた。
られないこともあるのではないかと推測される。

さらに「わらい講の笑っている人が楽しそうにみえるか」「笑っているのを見ていて被験者自らが笑ったか」「楽し１. ４ 研究の目的くなったか」についても５段階（１が「大いにそうである」、

ここでは、わらい講の会員が一緒に笑っている場面のビ

５が「まったくそうでない」）で評定を求めた。

デオ録画を被験者（大学生）に視聴させることで、不快な気分の解消、逆に快適な気分を高揚させる効果があるか、

２. ４

笑い場面の視聴による気分の変化の測定

さらには観察者として大学生がわらい講の笑いをふだんの笑いビデオと講義ビデオの各々の視聴が被験者の２種類

楽しいときの笑いに近いものとしてみなすかを確認するこの気分、「緊張覚醒 Tense Arousal : TA」ならびに「エネとで、今後の笑いを取り入れた健康づくりの活動を進める

ルギー覚醒 Energetic Arousal : EA」の変化に及ぼす影響

上での手がかりとする。

を「日本語版 UMACL（UWIST 気分形容詞チェックリス

２
２. １

実

ト）」６、７）に対する自己評定によって測定した。緊張覚醒験とは緊張などのストレス状態、不快な気分の状態にあるも被験者ので、「緊張している」「びくびくしている」など 10 項目

大学の２つの講義クラス（「心理学」の講義）の受講生での形容詞によって測定される。他方エネルギー覚醒とは活ある男性 103 名、女性 172 名。年齢は 18 歳から 26 歳の範

動的な状態、快適な気分の状態にあるもので、「活動的で囲で、大半が１年生である。

ある」「元気がある」などの 10 項目の形容詞にあてはまる程度で評定される。合計 20 項目と項目数が少ないことか

２. ２

提示刺激

ら、その場の、そのときの気分の測定に利便性のある尺度「求菩提わらい講」の月例会（平成９年 11 月 16 日日曜である。石田ほか７）の実験研究では、ユーモアのあるア

日、午前 11 時開始）での女性 13 名、男性２名の出席会員
が車座になって一緒に笑うセッションを８ミリビデオカメラで収録した（図１）。車座になっている全景から始まって、座っている各会員の上半身ならびに顔面の笑う様子を横に移動するショットで撮影した。会員が声を合わせて笑い始めてから全体の笑いがおさまるまでが５分 10 秒ほどの時間であった。
この笑いビデオの効果を比較するための「笑いを喚起しない」対照用ビデオとして、放送大学の講義ビデオ・ライ
ブラリーのなかの「数量化」に関する講義の第１回入門編の冒頭の約５分ほどを提示した。この講義ビデオのほとん
どの時間が、男性講師が教卓から語りかける形式で推移し− 94 −

図２「求菩提わらい講」の笑い場 のビデオ視聴健康な笑いづくりの方法について

ニメ（スラップスティック形式のコメディ・アニメ）のビ

提示（２つのクラス間で順序を入れ替えた）後に調査した。

デオの視聴後は緊張覚醒の低下とエネルギー覚醒の上昇が、わらい講の笑いに対する評定は、笑いビデオ提示後の覚醒

単調な講義のビデオ視聴後は逆に緊張覚醒は高まりエネルの調査に続いて被験者に求めた。最後に「ユーモアのセン

ギー覚醒の低下がみられた。本研究での笑いビデオと講義

ス」「ACT」の順序で各調査票の回答を求めた。

ビデオの視聴実験でも、同様の効果がみられると期待され３た。なお比較条件としてビデオ提示前の覚醒の水準の調査

３. １

を行った。

結果と考察

わらい講の笑いに対する評定

わらい講の笑いに対して「ふだんの自分や他の人が笑

２. ５

ユーモアのセンスと感情表出性の測定っている場合」との比較による評定に関して被験者全体

笑いビデオを視聴する際に、わらい講の会員の笑いにつの平均値は、顔面表情の強さ（M= 1 . 68 , SD= 0 . 84）、顔られて笑ったり楽しんだりする被験者の背景にあると思わ面表情の左右対称性（M= 3 . 65 , SD= 1 . 05）、声の大きされる資質として、「ユーモアのセンス」と「感情表出性」に（M= 1 . 33 , SD= 0 . 65）、声の高さ（M= 1 . 60 , SD= 0 . 73）、笑

ついて測定した。

うときの体の動き（M= 1 . 71 , SD= 0 . 84）、１回の笑いの８）

は 15 項目の質問紙で、ユー

時間（M= 1 . 74 , SD= 0 . 85）、笑いが繰り返し持続する時間

モラスな刺激に気づく程度に関する「メタメッセージに対（M= 1 . 36 , SD= 0 . 73）、全般的印象（M= 1 . 48 , SD= 0 . 78）

する感受性」、ユーモアを価値あるものとみなす程度の「ユのほとんどの項目で５段階評定の１（「非常に強い」「非常ーモアに対する好み」、笑いを含めた情動全般に関してそに大きい」など）と２（「やや強い」「やや大きい」など）のの情動を表出する程度である「情動の表出性」の３つの下間にあった（評定段階１を「非常にきれい」とした「顔面表位尺度から構成される。

情の左右対称性」の評定平均値は 3 . 65 で「やや歪んでいる」「ユーモアのセンス」尺度

もうひとつの被験者の資質として取りあげた「感情表出に近い判定であった）。全体としてわらい講の笑いはふだ

性」とは、対人場面で適切に感情を表出できる程度を意味

んの自然の笑いよりも、誇張されている、やや歪んでいる、するもので、「電話ででもたやすく感情を表すことができ笑い声も唐突に大きく、かん高い、異様に体が動く、ひとる」など全部で 13 項目に対して自分があてはまる程度をつの笑いも妙に長い、５分間も持続することが普通ではな

回答する「感情表出的コミュニケーションテスト Affective

いと見なされたと言えよう（図３）。このようにわらい講

９）の笑いをふだんの笑いから区別する手がかりは、過剰な強ユーモアのセンスのなかでも特に情動の表出性の側面が度という量的な面での違いにあったが、調査項目にもある

高い人、ならびに ACT による感情表出性の高い人が笑い表情の対称性の有無などの微妙な質的違いによっても見分

ビデオを刺激として自ら笑ったり進んでユーモア体験を求けている可能性もうかがわれた。

Communication Test : ACT」 によって測定した。

める傾向のある人ではないかと予測された。

以上のようにかなりの被験者がわらい講の笑いを自然の笑いとして認めていないことと関係してか、評定の平均値

２. ６

手続き

が「笑っている人が楽しそうにみえる程度」について 2 . 63

大学の 300 人収容の大講義室と 150 人収容の中講義室で（SD= 1 . 24）、「笑っているのを見ていて自分も笑ったか」の２つのクラスの講義のなかで調査を行った。覚醒に関しについて 3 . 03（SD= 1 . 29）、「楽しくなったか」についてては、まずビデオ提示前に、次いで２種類のビデオの各− 95 −

3 . 67（SD= 1 . 23）と５段階評定の３（「いずれでもない」）のいビデオ視聴後の順により高くなっていた（p<. 01）。予測前後に位置しており、笑いビデオの視聴によって笑いと陽に反して笑いビデオ視聴後がより不快なストレス状態にあ気さが強く引き起こされたとは言えない（図３）。またこった。

の３項目の評定の標準偏差が大きかったことから、笑い視

ま た 快 適 な 気 分 状 態 に 対 応 す る「 エ ネ ル ギ ー 覚 醒 」

聴による笑いの喚起や気分の変化の程度の個人差が大きいに つ いてビ デ オ 視 聴 前（M = 24 . 41）、講 義 ビ デ オ 視 聴 後ことがうかがわれた。

（M = 22 . 49）、笑いビデオ視聴後（M= 24 . 25）の平均値の比較をすると有意な差がみられた（F= 18 . 85 , df= 2 , 548 ,３. ２

笑いの視聴が気分の変化に及ぼす効果

p<. 01）。多重比較（テューキの HSD 検定）によると、ビデ

ビデオ視聴前、そして２種類のビデオ視聴後の緊張覚醒

オ視聴前ならびに笑いビデオ視聴後は講義ビデオ視聴後よとエネルギー覚醒の変化をみた（図４）。

りも有意に高かった（p<. 01）。このエネルギー覚醒についまず不快な気分状態を示す「緊張覚醒」についてビデオては笑いビデオ視聴による快適な気分の促進効果があった

視聴前（M= 19 . 28）、講義ビデオ視聴後（M= 18 . 25）、笑いが、ビデオ視聴前の水準からの上昇はなくて不十分な効果

ビデオ視聴後（M= 20 . 39）の平均値の間に有意な差がみらでしかなかった。

れた（F= 19 . 66 , df= 2 , 548 , p <. 01）。多重比較（テューキの
HSD 検定）すると、講義ビデオ視聴後、ビデオ視聴前、笑３. ３

わらい講の笑いに対する反応の個人差全体として笑いビデオ視聴による不快な気分の軽減ならび快適な気分の促進という効果がみられなかった理由として、笑いビデオの視聴による功罪が相半ばすることが推測される。すなわち笑いビデオのなかの笑いにひかれて笑う人、逆に反発や反感をもって笑えない人に分かれるのではないかと考えられる。そこで笑いビデオ視聴後にビデオ視
聴前に比べてエネルギー覚醒が上昇して緊張覚醒が低下した人（それぞれ１得点以上の上昇と低下）——「快覚醒喚起群」（男性 25 名、女性 29 名）、逆にエネルギー覚醒が低
下して緊張覚醒が上昇した人（それぞれ１得点以上の低下と上昇）——「不快覚醒喚起群」（男性 21 名、女性 46 名）を取り出した。
わ ら い 講 の 笑 い の 評 定 に 関 し て は、 快 覚 醒 喚 起 群（M= 3 . 54）の方が不快覚醒喚起群（M= 4 . 00）よりも「笑い顔が歪んでいる」とはみなさなかった（t= 2 . 69 , df= 119 ,p<. 01）。また「笑っている人たちは楽しそうである」（快− 96 −

健康な笑いづくりの方法について

覚醒喚起群 M= 2 . 39、不快覚醒喚起群 M= 2 . 82 ; t= 2 . 26 ,

（引用文献）

df= 119 , p<. 05）、「自分も笑った」（M= 2 . 70 と M= 3 . 52 ;１）Cousins, N. : Anatomy of an Illness as Perceivedbyt= 3 . 54 , df= 119 , p<. 01）、そして「楽しくなった」（M= 3 . 26

the Patient. W.W.Norton & Company, New York, 27 - 48 ,と M= 4 . 27 ; t= 4 . 93 , df= 119 , p<. 01）についても、快覚醒

1979 ［. カズンズ，N.（松田 銑 訳），：笑いと治癒力，岩波書店，東京，1996，1 - 30 頁．
］

喚起群の方がより肯定的な評定をしていた（図５）。
笑っている人を好意的にみて自らも笑い楽しむから、よ２）髙下保幸，上野良重，：ストレス緩和剤としてのユー

い気分や覚醒に転じたと推測することができよう。ただこ

モアのセンス，現代のエスプリ，No. 290，204 - 215 頁，のように笑いに志向させる人的資源として予測されたユー

1991．

モアのセンスや感情表出性の２つの側面については、両群

３）横山和仁，荒木俊一，：日本版 POMS の手引き，金子書房，東京，1994．

間で差がみられなかった。ここでは笑い志向性の違いを発生させる何らかの要因が他にあるのではないかと提起する

４）中川泰彬，大坊郁夫，：日本版 GHQ 精神健康調査票
──手引，日本文化科学社，東京，1985．

にとどめておく。

４

総５）髙下保幸：「求菩提わらい講」の健康づくり活動につい括て，健康文化（明治生命厚生事業団健康文化研究助成論「求菩提わらい講」の会員は、笑いをつくる訓練のなか

文集），No. 3，75 - 84 頁，1997．

からその笑いをふだんのの笑いに近づけて、それを健康維

６）Matthews, G., Jones, D.M. & Chamberlain, A.G. :持に生かそうと試みている。ただ現状ではまだ作為の強い

Refining the measurement of mood : The UWIST

笑いであり、外部からの観察者の多くはふだんの笑いに比Mood Adjective Checklist. British Journal of Psycholgy,

べて過剰な強度と持続性がみられることから不自然な笑い

81 , 17 - 42 , 1990 .

とみなしている。この外部からの評価はこれからの自然な

７）石田多由美，髙下保幸，原口雅浩，ほか１名，：日本

笑いづくりをするための重要な手がかりとなろう。

語版 UMACL の検討──ユーモア体験が EA、TA に及また人が笑っているのを見ているだけで気分が軽くなる

ぼす効果，九州心理学会第 54 回大会発表論文集，26 頁，

効用があるかに関しては、提示する笑いの素材として用い1993．

たわらい講の笑いが不自然であまり受け入れられなかった

８）上野良重，髙下保幸，原口雅浩，ほか１名，：ストレ

ためか部分的にしか確認されなかった。ただ被験者の大学

ス緩和要因としてのユーモアのセンス，人間性心理学研

生のなかには、その不自然な笑いでもつられ笑いを促され

究，10，69 - 76 頁，1992．

る人もかなりいた。こうした「笑い志向性」の背景にある

９）大坊郁夫，：非言語的表出性の測定：ACT 尺度の構成，

人的要因は、本調査で取りあげた限りのユーモアのセンス
や感情表出性とは関連がみられず、他に探索の目を向けるべき問題として残された。

− 97 −

北星学園大学文学部論集，28，1 - 12 頁，1991．

環境芳香の与える心理的影響に関する研究
１）早稲田大学国際情報 信研究センター

河

合

隆

２）早稲田大学人間科学部

史１）、萩

原

子２）

彰

Two experiments to examine the environmental fragrances on the emotional states confirmed the following:⑴ Environmental fragrances have psychological effects.
⑵ The effects continue in a constant time.
⑶ Favorable impression vary in the strength of the fragrance.
⑷ Psychological effects vary in the favorable impression.

１

緒

ことによって、環境芳香を用いた実験的研究における刺激言

選択の指針を得ることである。

化粧品は香粧品とも言われることから、化粧品と芳香は密接な関係にある。実際に化粧をするときを考えても、化

２. ２

方法

粧をすることによって得られる外見的な美しさと同時に、調査に使用した 16 種類の精油（JULIQUE 社）とその解快い芳香を演出するという、眼に見えない美しさを装うこ

説５）について、表１に示した。健常な大学生 50 名（男性とができる。また、身体に添付すること以外でも、快適な

25 名・女性 25 名）を対象として、16 種類の香りをランダ

空間を演出するための要素として、環境芳香が注目を集め

ムに呈示し、大変好ましい場合を 100 点、大変好ましくなている。ここでの空間とは、オフィス環境やシアターなど、い場合を０点、どちらでもない場合を 50 点とする 100 点

幅広い領域を対象とする。

満点方式で、それぞれ採点を求めた。被験者に香りを呈

しかしながら快い芳香には、個人差が大きく関わること示する際には、その種類が分からないよう注意した。また、が指摘されている１〜２）。また、芳香の種類や濃度といった、調査中に被験者が嗅覚疲労を生じた場合には、休憩を取る

実用レベルでの呈示・演出に関する研究は、乏しいのが現ように教示した。

状である。筆者らは、これまで立体映像シアターにおいて、
環境芳香を随伴した演出を行ってきた３）。同時に、立体映像に環境芳香を随伴した際の、心理的影響に関する実験を実施した。結果から、心理効果を考慮した環境芳香の呈示法について、検討する必要性が示唆された４）。

表１

調査に使用した精油

イランイラン

エキゾチックで官能的な、甘く重い香り

オレンジ

甘くフレッシュな、やや軽めのシトラス系の香り。

クラリセージ

甘くフローラルな、ハーブ調の香り。

グレープフルーツ ビターでフレッシュさを感じる、シトラス家の香り。

そこで本研究では、特定の効果を意図した空間演出におサンダルウッド

スパイシーな、オリエンタル調の木の香り。

いて、環境芳香を有効に用いるための基礎的な知見を得る

シダーウッドサンダルウッドに似た、乾いた木の香り。

ジャスミン

甘く、エキゾチックな香り。

ゼラニウム

甘く、ローズに似た、フローラル系の香り。

ティートリー

清潔感がありフレッシュな、やや鋭い香り。

ネロリ

優雅で甘みのある、印象的なフローラル系の香り。

ベルガモット

甘くフレッシュな香り。レモンやオレンジよりもことを目的とし、２つの実験を行った。具体的には、環境
芳香の種類や濃度の観点から、さまざまな条件の空間を設定し、その心理的影響の検討を行った。実験にあたっては、
香りの種類に対する嗜好性について、併せて調査を行った。

２
２. １

フローラルである。

香りの種類に対する嗜好性の調査

目的

本調査の目的は、香りの種類に対する嗜好性を調査する
A Study on Psychological Effects ofEnvironmental Fragrances
Takashi Kawai １）, Akiko Hagiwara ２）＊＊

１）G l o b a l I n f o r m a t i o n a n d
Telecommunication Institute, Waseda
University (Tokyo)
２）School of Human Sciences, Waseda
University (Saitama)

ユーカリ

ショウノウのような、クリアで鋭い香り。

ラベンダー

さわやかでライトなフローラル系の香り。

レモングラス

レモンを強くしたような、鮮烈な香り。

ローズ

甘く深い、フローラル系の気品のある香り。

ローズマリーフレッシュでウッディな、ハーブ調の強い香り。

２. ３

結果

本調査の集計結果について、表２に示した。男性・女性
共通して、グレープフルーツ、オレンジの順に好感度が高かった。３位以降については、男性のレモングラス、ラベ− 98 −

環境芳香の与える心理的影響に関する研究

ンダー対し、女性はローズ、ネロリを高く採点していた。

好感を抱かないことがわかった。ただしこの傾向は、ウッ

男性・女性の平均点について、図１に示した。１位〜３ド系の香りに日常的に接する機会の少ない、大学生を対象

位は柑橘系、４位〜９位はフローラル系、10 位以下はウとしたことが影響している可能性があり、他の年齢層を対ッド系の香りという一定の傾向が認められた。

象とした場合には、異なる結果が得られることも予想され
る。

２. ４

考察

３

環境芳香の呈示条件の与える心理的影響 ⑴

３. １

目

結果から、性別による傾向と同時に、男女共通の嗜好傾向を把握できた。男女別の傾向としては、上位３種類の香的りについては共通であったが、４位以降では、男性はすっ本研究課題の領域では、通常、芳香を呈示しない状態をきりした香りを好み、女性は甘い香りを好む傾向がみられベースラインとして芳香の呈示を行い、その際の効果を検た。また、男女共通の傾向として、柑橘系の香りを最も好み、討する場合が多い。これに対して本実験においては、芳香

次にフローラル系を好むが、ウッド系に対しては、あまりを呈示した実験室から呈示しない実験室へ移動するという

表２

条件を設定することにより、環境芳香によって与えられた、

集計結果

順位

香りの種類（女性） 香りの種類（男性）

１位
２位

グレープフルーツオレンジ

グレープフルーツ
オレンジ

３位
４位
５位
６位
７位

ローズ
ネロリ
レモングラス
ラベンダー
ジャスミン

ローズ
ラベンダー
ベルガモットローズ
イランイラン

８位
９位
10 位
11 位
12 位

イランイラン
ベルガモットサンダルウッドクラリセージ
シダーウッドネロリ
サンダルウッド
サンダルウッドクラリセージ
ユーカリ

13 位
14 位

ゼラニウム
ユーカリ

シダーウッド
ゼラニウム

15 位
16 位

ティートリー
ローズマリー

ローズマリー
ティートリー

心理効果の継時的な変化について検討することを目的とし
た。

３. ２

方法

３. ２. １

刺激

呈示する環境芳香として、一般にリラックス効果が高いとされている６）ラベンダーの精油（JULIQUE 社）を選択した。
３. ２. ２

測定項目

心理反応の測定にあたって、気分調査票を使用した。これは、ある特定の時点における気分の状態を調査することを目的とした質問票７）である。質問は 32 項目から成り立っており、緊張と興奮、爽快感、抑うつ感、不安感の４因子で形成されている。

図１

男性・女性の平均結− 99 −

３. ２. ３

手続き

環境芳香の有無を作り出すために、同体積で隣り合った２つの実験室を用意した。一方の実験室にラベンダーの環境芳香を呈示し、もう一方の実

図２

験室は無臭状態とした。実験室の脱臭には、最も実験の流れ効果の高いとされている８）光脱臭機（ダイキン工業）を用いた。環境芳香の強度は、予備調査を行い、ほのかに香る程度に調節した。具体的には、体積が 54 m 3 の実験室に対して、0 . 1 mL の香料を使用した。芳香の呈示では、空調設備の送風口へ香料を設置することで、実験室内全体に循環させた。
被験者は、健常な大学生 10 名（男性 5 名・女性５名）を対象とした。被験者には、無臭の実験室、環境芳香を呈示
した実験室、無臭の実験室の順に移動を求め、各室において気分調査票への回答を求めた。また、環境芳香を呈示し

図３

気分調査結

た実験室においては、ラベンダーの香りについて、大変好ましい場合を 100 点、大変好ましくない場合を０点、どちらでもない場合を 50 点とする 100 点満点方式での採点を求めた。本実験のながれについて、図２に示した。

３. ３

結果

気分調査票の結果について、最初に入室した無臭の実
験室における評定点をベースラインとした変化率に変換
し、環境芳香を呈示した直後、５分後、15 分後の心理的変化の検討を行った（図３）。環境芳香の呈示直後において、緊張と興奮、抑うつ感、不安感は減少し、爽快感は増加した。

図４

緊張と興奮の変化

これは、心理的な安静化方向の変化として、とらえることができる。その後、無臭状態においても、その変化は維持されていた。気分調査票による各因子と測定時期を要因とした、４× ３の２要因の分散分析を行った結果、因子の主効果について有意差が認められた（F= 11 . 610、P ＜ . 01）。
下位検定の結果、他の因子に比べ、爽快感が有意に上昇していることが分かった。同時に、測定時期に有意差が認められなかったことは、環境芳香によって与えられた心理効
果が持続したことを示唆している。

図５

爽快感の変化

図６

抑うつ感の変化

次に、呈示したラベンダーの香りの好ましさについて、100 点満点中 0 〜 50 点を回答した群と 51 〜 100 点を回答した群を、それぞれ高好感度群と低好感度群に分類し、各因子と香りの好ましさとの関連について検討した（図４〜７）。高好感度群では各因子において、環境芳香を呈示した直後から 15 分後にかけて、心理的変化が維持されていた。一方、低好感度群では、緊張と興奮、抑うつ感、不安感において、徐々に減少方向への変化が大きくなる傾向がみられた。各因子の変化について、被験者群と測定時期を要因とした、２× ２の２要因の分散分析を行った。その
結果、不安感において、群の主効果に有意差が認められた− 100 −

環境芳香の与える心理的影響に関する研究

い、弱い芳香と強い芳香を呈示するための濃度の調整を行った。具体的には、ほのかに香る程度の弱い環境芳香を呈示する際には、体積が 54 m 2 の実験室に対して、ラベン
ダーの精油を 0 . 1 mL、グレープフルーツの精油を 0 . 1 mL使用した。一方、香っていることが明らかに分かる程度の強い環境芳香を呈示する際には、ラベンダーの精油を
0 . 7 mL、グレープフルーツの精油を 0 . 9 mL 使用した。芳香の呈示では、空調設備の送風口へ香料を設置することで、実験室内全体に循環させた。
図７

被験者は、健常な大学生 20 名（男性 10 名・女性 10 名）

不安感の変化を対象とし、ラベンダーの環境芳香を呈示する群と、グ（F= 4 . 916、P ＜ . 05）。

レープフルーツの環境芳香を呈示する群の２群を設定した。被験者には、無臭の実験室、環境芳香を呈示した実験

３. ４

考察

室の順に移動を求め、各室において気分調査票への回答を

本実験では、環境芳香の与える心理効果の継時的変化に求めた。この手続きを１セッションとし、弱い芳香と強いついて検討を行った。その結果、ラベンダーの環境芳香の芳香の実験室への入室をランダムに求めることにより、合呈示によって安静化方向の変化を誘発し、無臭状態におい

計２セッションを１試行とした。さらに、環境芳香を呈示ても、一定時間は、その変化を維持することが認められた。

した実験室においては、香りについて、大変好ましい場合

また、香りに対する好感度によって、時間経過に伴う心理を 100 点、大変好ましくない場合を０点、どちらでもない的な変化の大きさや傾向が、異なることが分かった。

場合を 50 点とする 100 点満点方式での採点を求めた。

４

環境芳香の呈示条件の与える心理的影響 ⑵

４. １

目的

４. ３

結果

４. ３. １

解析方法

ある物質の香りの強さは、感覚を引き起こすのに必要な気分調査票の結果について、最初に入室した無臭の実験

濃度の最小限で表すことができるが、同じ物質であっても室における評定点をベースラインとした変化率に変換し、９）濃度によって感じ方は異なる 。例えば、好ましい香りで検討を行った（図８〜 11）。

あっても、濃度が強ければ不快臭にもなり得ることは、広ラベンダーの環境芳香を呈示した群では、弱い芳香の条

く体験されることである。そこで本実験においては、環境件において安静化方向の心理的変化がみられたが、強い芳芳香の呈示条件を、濃度によって変化させた際の心理的影香の条件においては逆方向の心理的変化がみられた。一方、響について検討を行った。

グレープフルーツの環境芳香を呈示した群では、芳香の強度に関わらず、一貫して安静化方向の心理的変化がみられ

４. ２

方法

４. ２. １た。気分調査票による各因子に対して、芳香の種類（ラベ刺激

ンダー・グレープフルーツ）と強度（弱い・強い）を要因呈示する環境芳香として、前章の実験において心理的とした、２× ２の２要因の分散分析を行った。緊張と興な安静化方向への変化が認められたラベンダーの精油

奮では、交互作用が認められ（F= 10 . 707，P ＜ . 01）、ラベ（JULIQUE 社）と、本研究での調査において最も好感度のンダーの強い芳香条件において、有意な上昇が認められた。

高かったグレープフルーツの精油（JULIQUE 社）を選択し爽快感では、交互作用が認められ（F= 4 . 984、P ＜ . 05）、

た。

ラベンダーの強い芳香条件において、有意な下降が認められた。抑うつ感では、芳香の強度の主効果に有意差が認め

４. ２. ２

測定項目られた（F= 5 . 428、P ＜ . 05）。不安感では、交互作用が認

心理反応の測定にあたって、気分調査票を使用した。

められ（F= 5 . 069、P ＜ . 05）、ラベンダーの強い芳香条件
において、有意な上昇が認められた。

４. ２. ３

手続き

また、環境芳香の種類に対する好感度の調査において、

環境芳香の有無を作り出すために、同体積で隣り合った

ラベンダーは、弱い芳香条件では高得点であったが、強い２つの実験室を用意した。一方の実験室に環境芳香を呈示

芳香条件においては低得点であった。これに対してグレー

し、もう一方の実験室は光脱臭機（ダイキン工業）を用い

プフルーツは、芳香の強度に関わらず高得点であった（図て無臭状態とした。環境芳香の強度について予備調査を行12）。

− 101 −

４. ４

考察

本実験では、環境芳香の濃度を変化させた際の心理的変化について検討を行った。その結果、弱い芳香条件では、ラベンダーとグレープフルーツ共に安静化方向の変化を示していたが、強い芳香条件では、ラベンダーの芳香を呈示した群において、逆方向の変化が認められた。また、好図８

緊張と興奮の変化

感度の調査からは、ラベンダーの強い芳香条件が、顕著に低く採点されていることが分かった。これらの結果は、同一の環境芳香であっても、強度によって好ましさが変化し、それに伴って心理効果が変化する可能性を示唆している。

５

総

括

本研究では、環境芳香の呈示条件を変化させた際の、心理的影響を検討するための２つの実験を行った。結果から、以下の４点が考察としてあげられた。
図９

爽快感の変化⑴環境芳香の呈示は、心理的な変化の影響源となり得る。
⑵環境芳香の与える心理的影響は、一定時間、持続される。
⑶同一の環境芳香であっても、強度によって好感度は異なる。
⑷芳香に対する好感度によって、心理効果が変化する。
これらは、住まいやオフィスといった日常空間での快適性の向上と同時に、劇場空間などでの非日常性の演出において、基礎的な知見を与えるものである。さらに、本研究で得られた知見を、今後の環境芳香を用いた空間演出へ応用していくためには、以下の３点が課題として残されてい図 10

抑うつ感の変化る。
⑴環境芳香の生理反応への影響調査と、簡易な測定方法の検討。
⑵複数の芳香の組み合わせや呈示順序による影響調査。
⑶映像や音響など、他の感覚刺激の随伴による影響調査。
謝

辞本研究の推進にあたっては、早稲田大学人間科学部の野呂影勇教授より、多大なるご指導を頂きました。ここに感謝の意を表します。
図 11

不安感の変化

（参考文献）
１）鳥居鎮夫：香りの謎，フレグランスジャーナル社，1996．
２）高木貞敬，他：匂いの科学，朝倉書店，1989．
３）T a k a s h i K a w a i , e t a l : V i r t u a l m u s e u m o f
Japanese-Buddhist temple features for interculturalcommunication, Proc. of SPIE 3295 , 144 - 147 , 1998．
４）Takashi Kawai, et al : Psychological Effect of
Stereoscopic 3 -D Images with Fragrances, Ergonomics,

図 12

芳香（種類・強度）に対する好感度

Vol. 39 , No. 11 , 1364 - 1369 , 1996．
５）黒澤路可：香りの事典，フレグランスジャーナル社，− 102 −

環境芳香の与える心理的影響に関する研究

1995．

妥当性の検討：心身医学，Vol. 34 , No. 8 , 629 - 636 , 1994．

６）鳥居鎮夫：香りからみたハーブの生理・心理作用，

８）臭気対策研究協会 編：21 世紀に向けての新しい脱臭

Food Style 21 , Vol. 2 , No. 7 , 49 - 52 , 1998．

装置開発，臭気の研究，Vol. 29 , No. 6 , 405 - 439 , 1998．

７）坂野雄二，他：新しい気分調査票の開発とその信頼性・

９）篠原 昭，他：感性工学への招待，森北出版，1996．

− 103 −

コスメトロジー研究振興財団
第 10 回表彰・贈呈式記念講演

紫外線とコスメトロジー
京都大学大学院医学研究科

宮

地

皮膚病態学

良

樹
場所
日時

１

太陽紫外線の人の健康へのメリット

日本薬学会長井記念ホール
平成 11 年 11 月 15 日㈪為に、かつては害のない波長と考えられてきました。しか今日は紫外線というものが皮膚にどういう影響があるか

し、最近の研究でこの A 紫外線も B 紫外線の作用を増強ということをコスメトロジーの視点からわかりやすくお話するとか、あるいはとりわけ老化の反応とか、アレルギー

したいと思います。今日のように雨模様の日、あるいはこの反応に大きな役割を果たすことがわかってまいりまして、んな暗い部屋よりも太陽が燦燦と降り注ぐ明るい日の方がA 紫外線、B 紫外線のどちらも皮膚に対して悪い影響があ人間は誰でも気持ちがよいものです。これは主に可視光線ることが示されるようになってまいりました。B 紫外線はが眼から入って脳を刺激するトニック効果があるためです

波長が短いですから皮膚の浅いところ、表皮・真皮境界部

し、またエネルギーもありますからポカポカと暖かいとい位までしか届きません。一方、A 紫外線は真皮の奥深くまった恵みもあるわけです。私たち人間はその恵みを享受しで届きます。従って、老化現象のシワというものは主に真ながら、進化してきたわけですが、その恵みの大部分は実皮の変化ですので、この A 紫外線が重要な役割を果たす

は紫外線とは無縁なものです。この太陽光線の中に含まれことが推測されます。紫外線が皮膚に対してどういう功罪ている一部の紫外線はとりわけ皮膚に関していくつかの功があるかということをまとめてみますと、メリットは唯一、罪があることがわかってまいりました。

ビタミン D を合成するということだけであります。それご存知のように太陽からはいろいろな波長の光が出てに対しまして幾つかの悪い点があるということになります。

おります。ポカポカと暖かい赤外線が 42％あり、目に見功罪の功と思われるビタミン D についても、確かに 19

える７色の可視光線が 51％ですから、これをあわせます

世紀の産業革命のあとの劣悪な環境下や、我が国でも戦後と 90 数％が赤外線と可視光線で占められています。生物

北海道の炭坑などでは、ビタミン D の不足によるくる病

学的に特に皮膚に対して大きな影響を与える光、これは紫がでました。ではどのくらいの紫外線を浴びればビタミン

外線であります。紫外線は波長によって長い方から A、B、D が作られるのかといいますと、最近の研究によれば、我C と分けますが、幸いにしてオゾン層のバリアーがありま

が国の栄養学的なビタミン D の所要量は子どもと妊婦をすので、非常に毒性が強く試験管の中で発ガンの実験に使除きますと、普通 100 国際単位と言われています。このうような C 紫外線というものは皮膚あるいは地上には殆量のビタミン D を作るためには顔と手で大体 600 cm あ

ど届いておりません。この A 紫外線と B 紫外線を合わせりますが、これをどの位露出すればよいかを計算しますと、ても僅か 6 . 1％しかありませんが、皮膚に対する影響の殆

夏の神戸のデータからは 30 分で数百国際単位が作られまどのものはこの２つの波長によって起こります。日焼けですから、今日のような雨の日であってもこの程度外を歩け

すとか、日焼けの後の色をつくるシミとか、あるいは光老ば、必要な量は概ね作られると考えられています。しかも、化と呼ばれる紫外線によって起こる老化現象、またはガン

最近では口からもビタミン D が充分に摂れますので、くといった悪いことは全て B 紫外線（これは全体の 0 . 5％しる病を恐れるあまりに肌を紫外線に晒すという必要はない。

かありません）によって起こります。そして、唯一紫外線というのが皮膚科医の一致した意見であります。

2のメリットとされているビタミン D の合成もこの B 紫外線によって行われています。一方、A 紫外線は紫外線の２

太陽紫外線による生理的健康傷害

中の９割を占めていますが、エネルギー的には非常に弱い

２. １

急性反応

２. １. １

Photo dermatology in Cosmetology

サンバーン

誰でも一定以上の紫外線を浴びれば起こり得る現象とし

Yoshiki Miyachi
Department of Dermatology, Kyoto
University Graduate School of Medicineてサンバーンという日焼け、皮膚の老化、シミ、シワ、それからガンという問題があります。これはいろいろなバッ
クボーンの違いもありますが生理的変化といわれています。
それに対してごく一部の方々には紫外線によるアレルギー
反応が起こることがあります。まず日焼けでありますが、− 107 −

誰でも海に行って赤くなってヒリヒリして、そしてやがてサンターンというのは要するに大量の紫外線を浴びますと皮が剥けるという経験をお持ちだと思いますが、この中で私たちの皮膚は防御反応をします。つまり角層という皮膚

まず赤くなる日焼けを、まさに太陽によるヤケドという意の死んだ細胞の重なり合った層がありますが、ここを分厚味でサンバーンと呼んでいます。つまり B 紫外線が皮膚くして紫外線を吸収したり、散乱したり、反射をして、もに加わってさまざまな生理活性物質、とりわけプロスタグ

うこれ以上皮膚に紫外線をくれるなという反応をおこしま

ランジンが作られて血管を拡張させ、24 時間後をピークす。又、もう少し深いところにいきますとメラニンキャッとして皮膚が赤く脹れる現象がサンバーンであります。

プと申しますが、メラノサイトという色素細胞がメラニンという黒い色素を作って、これを周りの細胞に丁度帽子を２. １. ２

日焼け細胞

かぶせるように DNA に蓋をして紫外線の傷害から守ろう

ところがこの皮膚の組織を取ってみますと、皮膚の表皮とする防御反応を起こします。

細胞の個別死、これをアポトーシスと言いますが、そうい

一般には小麦色の肌といって非常に好ましいものと錯覚

う細胞が散見されることがわかっています。これをサンバをされていますが、これは実は生体からの警告の反応であーンセル、日焼け細胞といって皮膚科では昔から注目してるといってもよろしいかと思います。色素細胞というのは参りました。このメカニズムが何故起こるのか、というとちょうどタコの足のように樹状突起という足を沢山出して、ころから紫外線による皮膚の組織傷害の研究が始まったわ

周りの表皮細胞の DNA を守るためにメラニンという色素けであります。紫外線、特に B 紫外線は直接 DNA に傷害を配っています。メラニンキャップをかぶりますと上からを及ぼしますし、一方、A 紫外線は主に活性酸素を作る

紫外線が来ても DNA が守られます。

ことによって細胞膜あるいは DNA にダメージを与えます。

こういう防御反応、これがサンターンのメカニズムであ

この結果として、日焼け細胞というものが作られるというります。実際にサンターンをした皮膚を生検しますと、こ状況証拠が出てまいりました。

のようにメラノサイトから配られたメラニンがたっぷりあ

例えば、私が 80 年代の研修医のころにやった仕事で、って私たちの皮膚を不断の酸素のストレスあるいは光酸素

20 年以上も前ですから、かなり簡単な実験ですが、紫外ストレスから守っています。このメラニンには単なるフィ

線を当てますと日焼け細胞が dose—dependent に増えてまルター作用だけではなく、活性酸素を消去する作用があるいります。そこに SOD のような抗酸化剤を添加しておき

こともわかっています。かつては色素細胞に直接紫外線がますと、やはり dose に応じて日焼け細胞の形成が抑制さ当たって、この酸化反応が進むのであろうと考えられていれる。ということは日焼け細胞の形成のメカニズムの一部

ましたが、最近の研究ではその間には１クッションがあっに活性酸素による酸化的な組織傷害が介在するのではないて B 紫外線が表皮細胞にまず当たって、それからさまざ

か、と私共は考えたわけであります。紫外線を浴びること

まなメディエータ、特にエンドセリンのようなものが出て、によって、皮膚では活性酸素、あるいはフリーラジカル

エンドセリンレセプターを介してメラニン産生を刺激するというものが不断に作られています。何故かといいますと、という違うステップもわかってまいりました。今、美白剤

皮膚は酸素に絶えず接する臓器であり、紫外線も浴びる、の開発が盛んでありますけれども、単純にこのチロシナー

更には皮脂という油もありますので、活性酸素あるいは過ゼというメランニンを作る酵素の活性を制御するだけでは

酸化脂質を作りやすい状況にあるからです。このフリーラ

なくて、その他のステップをブロックするような方法やそジカルが産生されて、さまざまな影響が表皮あるいは真皮れ以外にも美白剤の研究のターゲットとなるような物質が、の奥深くまで到達するということで、いくつかの病態が説

最近続々とわかってきていますから化粧品業界でもこれに明されるようになってまいりました。従って、このレベル

対する研究が進んでいるものと思います。

でのフリーラジカル産生を抑制するということ、コスメト

シミというものは本来は防御反応であるメラニン産生がロジーの領域でいえばスキンケアというドラッグデリバリ

いつまでたっても続くこと、つまりメラニンのサイトが暴ーで制御することが可能であると思われます。今のところ走することによって起こるわけですが、これはある日突然はサンスクリーンという紫外線をブロックするような方法

シミができるわけではなく、特殊な方法で調べますと見えが唯一でありますが、今後はこのような抗酸化的なアプロているシミは氷山の一角であって、その下にはいくつものーチというものが注目されるべきではないかと思っていま予備軍があることがわかります。従って、単に見えるシミす。

がないからいいんだということではなくて、絶えず私たちはシミを抱えているんだということを頭に入れる必要があ

２. １. ３

サンターンの意味とメカニズム

ると思いますし、一般の人々にも啓発する必要があると思

さて、赤い日焼けを過ごしますと今度は皮がボロボロ剥います。

けて茶色になってきます。これをサンターンと申しますが、− 108 −

紫外線とコスメトロジー

２. １. ４

光線過敏症

る人は 70 代に見えるというようになってくる。つまり、ここまでは誰でもが経験しているような生理的な、しか私たちは顔を見て相手の見かけの年齢を判断しているといも、急性の紫外線による傷害としてのサンバーンあるいはうことがあります。なにも腕の内側とかお尻を見て判断す

サンターンのご説明をしましたが、それ以外にもいくつかるわけではありません。これはとりもなおさず、顔というの反応があります。光アレルギー反応はここにおられるす

日光露出部の過去数十年間の日光曝露の結果としての皮膚

べての方が被るわけではありません。しかし、皮膚科の外の老兆を見て、即座にああこの人は 40 代だ、この人は 60

来では時々光線過敏症の方がみえます。例えば、テニスを代だと判断するわけですね。このようなことを私たちは普してひじが痛い、そして非ステロイド系の鎮痛剤を外用し通の生理的な老化とは区別して光老化といっています。こながら、又、テニスをする。そうしますと半袖で隠れるとれは何故かといいますと、単に生理的な老化現象が促進さころは、塗っただけではカブレていないわけですね。しかれただけではなく、いろいろな証拠から質的に違う人為的し、塗って、しかも紫外線を浴びたところでは湿疹ができな環境要因による老化現象であることがわかってきたためてしまったという症例。これを光アレルギー性の接触皮膚です。この光老化は紫外線に当たった時間と強さにほぼ比炎と私たちは呼んでいます。これはケトプロフェンという

例しますし、顔のような日光露出部の皮膚の老兆の約 80

薬剤が原因だったわけですが、こういう患者さんのテスト％は紫外線曝露によるものといえます。従って、老化に限をしますと、単純に貼るパッチテストでは何もでません。

らず、ガンもそうですが、光防御によって制御が可能な皮

しかし、貼った後に A 紫外線を当てますと陽性にでると膚加齢現象であるという事が重要な点であり、研究のターいうわけです。こういったことを繰り返していきますと慢ゲットに成り得るわけであります。これに対して、高齢者

性の光線皮膚症と申しますが、皮膚がゴワゴワと盛り上がの非露出部、お腹とか太股を見ますと、縮緬状の細かいシってきて難治性の病気になってしまいます。こうなります

ワがあります。これは生理的な老化現象といわれまして、と非常に治療に苦慮します。近々予定されている FK 506

表皮と真皮をつないでいるファイバーの老化によってズレという免疫抑制外用剤がでますと、こういう患者さんが治が生じる結果であり、今の医学では乾燥をケアすることは療可能になると思いますが、今までは、なかなか遮光する

できても治すことはできません。

以外にいい治療がなかったわけですね。ですから、カブレの段階で原因を見つけてあげて未然に防ぐことが、唯一の２. ２. ２

光老化のメカニズム予防と治療であったわけです。

深いシワの刻まれた組織をとってみますと、病理学的には日光変性といいますが、真皮の上層部に紫外線によ

２. ２

慢性反応

２. ２. １って起こる変性物質、主に弾性線維の変性物質といわれていますが、こういったものが累々と貯まっている。これが光老化

サンバーンに続いてもっと大事な、特にこのコスメト

光老化の典型的な組織像と考えられています。この要因

ロジーの領域で最も関心が高いと思われる病態。これがとして、私共は 10 数年前からフリーラジカル説を提唱し

photoaging（光老化）と呼ばれる現象であります。例えば、ていますが、いち早く一般向けの化粧品の宣伝にこれが取お母さんと娘さんの写真を合成したものを見ますと、同じり上げられまして、「皮膚の老化の主な原因は紫外線で起ような肌質であても、生まれて何十年もたった母親の皮膚こるフリーラジカルである。これが DNA にダメージを与には深く刻まれたシワが出て、たるんで見える。これは皮え、真皮のさまざまな成分を傷つける」という謳い文句の膚の老化現象でありますが、こういう深く刻まれたシワと下に、いくつかの抗酸化剤が化粧品の中に配合されるよういうものは陽の当たらないところには決して出ないシワでになってまいりました。先ほど申しましたように紫外線をす。つまり、これは紫外線による産物であると考えられて浴びる、そして皮脂がある、酸素がある。そうしますと活いまして、そういう状況証拠は沢山あります。例えば、同性酸素あるいは過酸化脂質が作られて、このダメージの蓄

じ 35 歳のチベットのシェルパの女性と日本の普通の女性積によって表皮並びに真皮の光老化が起こるということで、を比べますと、チベットのシェルパの女性は若い頃から紫そのメカニズムの一部が説明できるという状況証拠がいく

外線をたっぷり浴びてきており、勿論、遺伝的な差異もあ

つか蓄積されてまいりました。これを私共は光老化のフリるでしょうけれども、日光露出部だけを見る限りでは皮膚ーラジカル説といって、コラーゲンやエラスチンのクロスの老化の兆しがかなり進んでいます。しかし、陽の当たらリンクですとか、あるいは抗酸化酵素が不活化されるとか、ないところでは恐らく余り差がないのではないかと思いま

最近では AGE といわれるような advancedglycationend—

す。大学を出る頃は多少老け顔もいますけれども大体年相products が貯まるとか、いろいろなことがわかってきま

応の顔をしています。しかし、それから 40 年後に、同窓したが、これらはすべて状況証拠でありまして、まだこの会を開きますと、ある人はまだ 40 代に見える。また、あフリーラジカル説のみによって光老化のすべてが説明でき− 109 −

るには至ってはいません。一方、皮膚には紫外線の酸化的け皿の方、ホストの側の皮膚のタイプによっても随分違うなストレスに対して、幾重にもわたる防御機構があります。

わけです。日本人でも色白の人はすぐ赤くなりますが、黒

例えば、先ほど角層の話もしましたし、メラニンの話もしくならない。それに対して地黒の人はあまり赤くならずに、ました。しかも DNA の修復をするというメカニズムもあ

黒くなる一方の方がおられます。日本人でもこのようにスります。いろいろなメカニズムによって、我々は自分で紫キンタイプといいますか、皮膚の紫外線に対する反応性は外線の酸素ストレスから皮膚を守っているわけですが、私違っています。それを米国の Fitzpatrick 博士が、外国人たちが持っている防御機構を凌駕するような大量の紫外線はケルト人のような赤毛の人から黒人まで肌質を１〜６のを浴びた場合にいくつかのダメージが加わり、これが繰りタイプに分けました。日本人は大体この真ん中位にありま返されることによって光老化というものが作られると考えすので、日本の佐藤先生達が JapaneseSkinType（JST）とられます。想定されるメカニズムとして、例えば中波長のして、色白ですぐ赤くなる人と、それから地黒で黒くな

紫外線は表皮レベルで活性酸素を出し、あるいは過酸化脂る一方の人、その中間というように３つのタイプに分けて質を作ることがわかっています。又、長波長のものはもっいます。要するに色白のタイプの方がガンになり易いといと深くまで入り、酸化的傷害によって関与するであろうとうわけです。実際にタイプ１というのは、すぐ赤くなるけ考えられるいくつかの実験データが報告されています。

れども黒くなりにくい。こちらの方が紫外線に対する感受

実際にシワというものが何故できるのかは、まだ詳し性が高く、弱いわけです。従って、自分の皮膚がどういうくはわかっていません。しかし、シワというのは表皮のタイプであるかということを頭に入れて、紫外線に対する変化ではなく真皮の変化です。真皮の構造は簡単に申し上防御を考える必要があると思います。弘前大学のデータにげますと、建物に例えればコラーゲンという鉄骨が組まれよりますと日本人では、大体真ん中のタイプ２が一番多く、ていて、そこにエラスチンというゴムバンドが巻かれていその次にタイプ１そしてタイプ３の順のようです。

て、そしてその間の壁土のようにムコ多糖が詰まっている。
こういう構造をしています。従って、紫外線によってこの２. ２. ４光発ガン

主な構成成分である線維成分とムコ多糖に影響があることそうしますとスキンタイプというものは、なにもシミがで、このシワの形成の説明がつくべきであります。今申しでき易いというだけでなく、当然、皮膚ガンとも関係する上げた日光変性というものは主にエラスチンの変性と考えわけです。皮膚が紫外線に対して感受性が高いか低いかとられていますし、このコラーゲンやエラスチンの変性物質いうことは、この紫外線による発ガンということを大きくが貯まることによって、深く刻まれたシワができるわけで左右します。オーストラリアのデータによりますと、黒くす。加齢に伴って、つまり、日光曝露の蓄積の量に応じてなるタイプの人、これを１としますとホクロのガンである真皮の層に変性した elastoticmaterials といいますか、エメラノーマ、基底細胞ガン、それから扁平上皮ガンなど

ラスチンの変性物質が貯まるということが昔から病理の組の、いわゆる皮膚ガンの発生頻度がどの位変わるかといい

織所見からわかっていました。また、実際に動物実験をやますと、黒くならないタイプの人ですと皮膚ガンは 12 倍ってみますとこのエラスチンという線維は正常ではまっすも増えています。我が国でも神戸大学のグループが、兵庫

ぐ伸びているわけですが、ゴムバンドを長時間日向に置い県の加西市という所で調べたところ、やはりこれ程の差はておきますと、ある時プッツリ切れてしまいます。それとありませんが数倍の差があることがわかりました。従っ同じようにもう伸びのない、変性してクルクルと巻き上がて、スキンタイプと皮膚ガンは大きく関係することが日本ったようなエラスチンになってしまうことが報告されてい人のデータからもわかってまいりました。勿論、ご存知のます。それ以外にも私共はムコ多糖の変性を報告してます

ように一度 DNA のダメージが起こっても、私たちは絶えし、コラーゲンの架橋のことも報告しています。それ以外

ず DNA の修復をしていますからすぐにガンになるわけでにもコラーゲナーゼのようなプロテアーゼに対しても影響はありません。当然タイムラグがあって、ある日発ガンががある。いろいろなことがわかっていて、その総和として起こるわけです。従って、戦後の太陽崇拝世代がアウトド疾患ができるであろうというのが今の推測であります。こアスポーツを始めて 40 年、50 年経った今、皮膚ガンが日れらに関して、化粧品技術者向けに「皮膚の老化と活性酸本でも増えているわけです。その状況証拠は山ほどありま

素・フリーラジカル」という本を数年前に出しております。

が、一番の証拠は動物実験です。紫外線一本で 100％皮膚にガンを作ることができますし、それ以外にも日本人の皮２. ２. ３

紫外線と肌タイプ

膚ガンの 90％は日光露出部にできます。あるいはハワイ

日本人ではあまり見られませんが、赤毛のアンのようにの日系人は日本にいる日本人より 88 倍も皮膚ガンが多い

色が白くて、毛が赤くてといった人達には若い時から沢山とか、いろいろな疫学的なデータがあります。また、緯度のシミが見られます。このように、メラニンの増え方は受が 10 度赤道に近づきますと、皮膚ガンは２倍になります。

− 110 −

紫外線とコスメトロジー

このように紫外線と皮膚の発ガンということを示唆するよ

いったストラテジーがあるわけです。

うな疫学データは枚挙にいとまがありません。例えば、以これを更に越えてしまったものをどうするか。これは先前私が居ました群馬大学のデータでは、日光角化症というほど来、お話しているように、ここでは酸化反応、酸化ス

紫外線によって起こる表皮内ガンがありますが、これも最トレスが起こりますから、抗酸化的対応がやはり研究のタ

近の５年間とその前の５年間を比べますと群馬県ではほぼーゲットになると思います。

倍増していますし、全国の調査においても過去 15 年間に
日光角化症は 5 . 5 倍に増えていますから、明らかにライフ

３. １

物理的紫外線防御

スタイルの変化によって、我が国の日本人の肌においても先ず物理的な防御、これが一番安上がりで最も効果的で紫外線によるガンが増えていることは疑いの余地がないとす。例えば、皮膚科領域では項部菱形皮膚といいまして、思います。このようにシミ、シワといった整容的というか首の後ろにあるひし形のシワ、これはよく農業とか、漁業

美容的な光老化というものだけではなくて、皮膚ガンを制を長くやってこられた患者さんを見ますと殆どの方にこれ御するということも極めて重要です。これからは医療経済があります。これは典型的な光老化の皮膚の症状ですが、が段々厳しくなりますから、いたずらに日光浴をしてガングサリと交叉する線状のシワがあります。しかし、恐らくを作った人を皮膚科が治すだけではなくて、予防すること

このような方はシャツ一枚を着て、過去何十年間か作業をの方が経済面からもメリットがあるといえます。そういっしてきたと思われますが、シャツの下の皮膚は隣り合ったた意味で、私たち皮膚科医の責務としてはコスメティック

皮膚であるにも拘らず全く光老化の老兆がない。というこな面だけでなくて、皮膚ガンを予防するために一般の人たとは物理的に紫外線をカットするだけで多くの光老化は防ちに対する啓発活動が求められると思います。

御できるということを如実に物語っているわけです。もと
もと、日本人の女性は肌が美しいといわれてましたが、昔

３太陽紫外線防御と健康の農作業の格好を見ても、手甲、脚半というのか、長袖を我々が子供の頃、学校保健の場では夏休みが終わって色

着て紫外線防御という意味ではかなり理想的な格好をしてが白いと、何をしてたんだ、何故黒くならないといわれまるわけです。顔しか出さない、帽子を被る、日傘をさす、したし、日焼け大会をやってみたり、そういう無駄なこと

あるいは今日はお話してませんが、眼も白内障を中心としを随分やったわけですが、この結果として、18 歳までにて光酸素ストレスによって起こる光老化の病気が沢山あり生涯に浴びる紫外線の 50％を既に被曝しています。しかますからサングラスも重要な光防御の手段になります。例も動物実験のデータを見ますと、若い頃に浴びた紫外線のえば、眼に入る紫外線に関していえば、野球帽を被ります

方が皮膚ガンのリスクを倍増させます。また、例えばハとかなり紫外線がカットされます。最近の若い人は野球帽

ワイに４泊６日で行って短い間に大量に紫外線を浴びた方を後ろに被っていますから、あまりメリットはないかもしがガンを作り易い。逆に少量を長く当てる場合にはガンのれませんが帽子一つでも眼や皮膚に入る紫外線がかなり

リスクは減ります。大切なことは光防御によって光老化も減るんだということは重要なポイントだと思います。ま光発ガンも、どちらも 80％防止が可能であるという推計

た、洋服もジーンズのようなものであれば 100％紫外線をがあるということです。こういう点から光防御というもの

カットしますし、女性のストッキングのようにあんなに薄は極めて重要なテーマになってまいります。19 世紀まで

いものでも半分くらい紫外線をカットしますから、物理的は色が白いことが美の象徴でしたが、戦後日本においては防御というものは侮り難い効果があります。しかし、それ

小麦色の肌の方が健康的でいいんだという審美観の変化がでも無理な場所に関してはサンスクリーンによって紫外線あったために我が国においても皮膚ガンが増えていると考を吸収させたり、あるいは反射、散乱させることが行われえられます。ではどうやって紫外線を防ぐかといいますと、ています。但し、紫外線吸収剤はどうしてもカブレを起こ

太陽と皮膚との間になんらかのバリアーを作る、これが一すことがありますので、最近のストラテジーとしては微粒番単純な防御法であります。一番のバリアーはオゾン層で子のチタンを使って見栄えを良くしながら吸収剤を除こう

すが、将来に亘ってオゾン層が破壊されることが予想されという、安全性を重視した日焼け止めクリームが主流に成ていますから、オゾン層を越えてきてしまった紫外線が皮りつつあると思います。また、紫外線はなにも太陽の方向

膚に到達して光生物学的な反応を起こす前にブロックする。

からだけくるわけではありません。下からも反射してきま

そのためにはまず安全な方法としては物理的に帽子を被る

す。ゴルフ場の芝生はいいんですが、砂浜とか、あるいはとか、長袖を着るとか、日傘をさすとかいったことでブロ

水とか、雪では反射します。スキー場にいきますと思いのックできますし、それでもブロックできない顔とか手に関ほかの日焼けを経験すると思いますが、雪ですとほぼ 80

しては、これはまさに化粧品として作られているサンスク〜 100％反射しますから２倍の紫外線を受けることになりリーンによって紫外線を散乱したり、あるいは吸収するとます。従って、紫外線を浴びる状況に応じて、どのような− 111 −

光防御を心がけるべきかということを頭に入れる必要があ

もっと高いものが必要となります。ですから健康な人と光るわけです。

線過敏のある患者さんとは区別して考えますが、いたずらな SPF 競争はもう終わりを告げて、今後は安全に、しか３. ２

サンスクリーンと SPF

もいかに合理的に紫外線をカットするか、ということに議サンスクリーンはいろいろな会社から多彩な製剤が出て論が移るつつあることは、極めて好ましい現象であろうといます。これは要するに皮膚に到達する前に未然に紫外線思っています。ここまで、光老化に対するストラテジーのを吸収したり、反射して皮膚に到達させなければ、どんな中で紫外線の物理的、あるいはサンスクリーンを使ったよ光生物学的な反応あるいは光化学反応も起こりませんか

うな物理化学的な防御のお話をしましたが、これは既に実ら、そういうコンセプトで作られたのがサンスクリーンで用化しています。

あります。丁度スクリーンを張るように紫外線をブロックするわけです。最近は SPF という数字がトピックスになっていますが、これは紫外線の防御能を表す指標として使

３. ３

抗酸化剤による傷害回避

もう一つのストラテジーは何度も申し上げているように、われるもので、B 紫外線をカットする指標がこの SPF です。

酸素ストレスで起こっているという状況証拠があるわけでそれから、最近、化粧品工業連合会では A 紫外線をカッ

すから、この錆を止める、身体の錆びるのを止める方法がトする指標として PA（ProtectiongradeofUV—A）という挙げられます。最近は活性酸素という言葉は、溜まるもの

ものが作られまして、サンスクリーン商品を見ますとこれではないのですが、ストレスと同じような意味で使われまらの表示が見られます。そして過去５年位の間に化粧品メす。しかし、私たち現代人の生活を見ますと紫外線に限らーカーの間で SPF 競争という無駄な競争が行われてまい

ずタバコですとか、例えばタバコを一服吸いますと 10 のりました。例えば、沖縄で一日中日光浴をしても、SPF 17

16 乗のフリーラジカルが肺で作られているといいますが、があれば理論的にはカットできる位の紫外線しか浴びるこ

その他にも薬剤とか、あるいは過度の有酸素運動とかいろとはありません。ですから余程の光線過敏のある患者さ

いろなことによって身体の内外で不断に活性酸素が作られんとか、或いはエベレストに登るとかいう場合を除けば、て、その酸素ストレスを私たちは受けているわけです。こSPF は 20 もあれば普通の日常生活には充分対応できます。

れに対して何をすればいいか、といえば一番理想的な方法（但し、現実的には汗をかくとか、泳ぐとかでとれてしま

は酸素との接触を断つことです。例えば、クッキーを買いいますから、もう少し高いものが必要な場合もあります。）

ますと、エイジレスという名前の脱酸素剤が入っています。

にも拘らず、先ほど申し上げました SPF 競争で、一部のつまり酸素と接しなければ、あらゆるものは老化しないわ

サンスクリーン商品には 100 を超えるものが出てまいりまけです。私たちが使うディスポーザブルの注射器でも、窒した。しかし、今年、京都で私共が「紫外線防御研究委員

素を充填した袋に入れて酸素と接触を断てば、日向に置い会のシンポジウム」を開きまして、化粧品工業連合会の方ておいてもボロボロにならない。しかし、袋を破いて日向にもご参加を頂きました折りに、近々我が国では SPF 50に長時間置いておけば、それはボロボロになってしまいま

以上はもう表示をしない。従って、SPF 50 或いは 50＋とす。このように、酸素との接触を断つのが理想的な抗老化、いう表示になるやに聞いていますので、やっとこの無駄

光老化に対するストラテジーです。しかし、残念ながら我々な SPF の競争が終って、今後はいかに安全に SPF を獲得

は酸素をエネルギー代謝に利用して生きている好気性の生するかという、つまり、SPF が 20 位でも良いから安全で、物でありますから、酸素との接触を断って生き永らえるこしかも安いサンスクリーンというものが求められてくるととは不可能です。従って、この方法は採れません。そうし思います。この SPF というのは防御率を縦軸にとります

ますと、次の方法はなにかといいますと酸素のストレスとと、SPF が大体 20 位までいきますと、ほぼ 90 数％ B 紫呼ばれる酸素の毒性から身を守る方策として昔からいわれ

外線をカットします。これをたとえ SPF 100 にしてもそてますのはビタミン剤です。ある OTC のビタミン剤の宣の防御率の上昇はほんの数％なんですね。その僅かの遮断伝の中に「シミは過酸化脂質のせいである。ビタミン E が率を上げるためにいろいろな製剤を入れるわけです。それ

過酸化脂質の発生を防ぎます。活性酸素が脂質過酸化を起が、さまざまな化学反応を起こして副作用となり得るわけ

こす。ビタミン E はこれを防ぐ抗酸化剤です。
」と一般向ですから、このデータを見る限りは SPF 20 〜 30 位で充分

けのパンフレットにこういう難しいキーワードがちりばめであろうということもわかりますし、先ほど申し上げましられているようになりました。実際ビタミン E は脂溶性

たように、私たちが浴びる紫外線の量からも SPF 20 あれのものですから細胞膜に溶け込んで、活性酸素の攻撃を受ば充分ですから、普通の日常生活で浴びるような生活紫外

ける時に自らが身代わりとなって細胞膜の油が酸化される

線であれば、私共は SPF 15 〜 20 位を必要に応じて塗り替のを防ぐ。そして、その時にビタミン C があるとこれがえるということを勧めています。但し、光線過敏の場合はもう少し何遍も繰り返されるということが昔からいわれて− 112 −

紫外線とコスメトロジー

ますように、確かに抗酸化剤として使われているものではす。今オゾン層がだんだん破壊されているようですが、オあります。しかし、なにも薬だけではなく、一つは食生活

ゾンが１％減りますと、紫外線が２％増えて、皮膚ガンがで緑黄色野菜とか、β—カロチンは最近議論がありますけ

数％増えるという３段論法の推計があります。ですから太れども、ビタミンを摂ること、それから、光老化に関して

陽をよく知って、そして自分の皮膚のレベルでのライフス

はサンスクリーンなどでブロックする。それから物理的なタイルを検証するという作業、これも当然求められるわけ

防御、さらにはライフスタイルの工夫です。甲羅干しなどです。紫外線がどのように変化しているのかということをで不要な紫外線を浴びないことが重要となります。こうい

お話したいと思います。例えば、日本気象協会の調べたもうことを私たち、皮膚科医としては是非一般の人々に知っのを拝借しましたが、我が国、北半球では当然６月が紫外て欲しいと思っています。

線が一番多いはずです。しかし、日本では梅雨があります
ので６月よりもむしろ春先、４月とか５月の方が実質的に

３. ４

紫外線組織傷害修復

浴びる紫外線量は多くなります。つまり、日本ですと冬のもう一つの方法、これは壊れてしまった皮膚の組織を元間あまりどこへも出なかった人が丁度ゴールデンウィークに戻そうという方法があります。欧米ではレチノイドといになって行楽シーズンになり、一気に紫外線を浴びるよううものがあります。この外用剤は元々ニキビの薬でしたが、になるわけです。この時期にいろいろな紫外線をめぐる皮光老化によるシワを元に戻すことがわかって、今かなり使膚のトラブルが増えてまいりますし、光線過敏が発生する

われています。残念ながら我が国では刺激が強いために、時期でもあります。紫外線予防というのは夏の間だけと考

このレチン A というものは許可されていません。しかし、えがちでが、勿論、夏も大切ですけれども春先から紫外線

化粧品の中にはレチノールというものを配合した化粧品がに対する防御というものを考える必要があるわけです。一

市販されていますし、近々皮膚科領域では、もう少し安全

日の中で見ますと、朝 10 時から午後２時の４時間で大半なレチノイドが医薬品として開発されようとしていますかの紫外線、50％以上の紫外線を浴びていることがわかってら、近い将来我が国でもこういったレチノイドが紫外線組います。ですから、テニスをするにしても２時からにする。

織傷害修復に使われる時代が来ると思われます。又、私共買い物は 10 時までに済ませるといった一寸した気配りでの教室では動物実験の段階で未だ実用化には至っていませも皮膚に当たる紫外線量は大きく変わるわけです。今日んが、リポソームの中に回復酵素を入れてダメージを修復のような小雨の日でも、晴れの日を 100％とした場合、大しようという試みも行っていますから、こういうドラッグ

体 30％くらい、それから曇りの日でも半分の紫外線が来デリバリーによって組織傷害が修復できる時代が来るかもています。やはり晴れているとどうしても暖かいし、明るしれません。

いからチリチリと紫外線を浴びているという病識を持ちますが、雨であると、今日は大丈夫と思ってしまいます。し３. ５

外科的手法による傷害修復

かし、それは錯覚であって、どんな日であっても紫外線は

それ以外の方法としては、我が国でも美容外科の領域で眼にも見えませんし、暖かくもありませんので忘れがちでは、壊れたコラーゲンの代わりに牛のアテロコラーゲンをすが、紫外線を浴びていることを意識すべきです。例えば、注射してシワを取ろうという方法があります。但し、この主婦の場合ですと、特に泳いだり、スポーツするのでなけ

方法は場合によってはアレルギーを起こすことがあります。

れば、朝一回、ファンデーションに入ったようなサンスク

それから皮膚科では最近、コスメトロジーの領域にどんどリーンを一度塗るだけで一日有効になると思いますから、ん進出してまして、例えばレーザーの治療があります。赤そういうライフスタイルも考えるべきではないかと思いま

アザでも青アザでも、美容的なシミに対してはなかなか効す。日本は意外と赤道に近い所にあることも忘れてはいけかない面がありますが、いずれハード面が進歩すれば効くません。ロンドンとかパリに比べますと東京は遥かに緯度ものがでると思います。このようなレーザーとか或いはケが低くアルジェリアとかアフガニスタンとほぼ同緯度にあミカルピールといったようなコスメトロジーに密着したよります。勿論、インドネシアとかタイ比べれば北にありまうなジャンルに対して、私たちはそのスペシャリティーをすけれども、やはり他の先進国に比べると私たちはかなり今展開しようとしてますから、将来的にはコスメトロジー

南側に住んでいることを銘記する必要があります。

と皮膚科医というものは臨床皮膚科という領域でかなりリ
４. ２

ンクし、今以上に密接な関係になると思います。

紫外線知識の啓発

これは東京のデータで一寸古いものですが、日本人の意
４

太陽紫外線を知る

４. １

識調査をしますと、「日光は健康に良いからできるだけ肌

紫外線の強さと付き合い方を焼いた方が良い」と思う人は、男性では大体外国並みでもう一つ大切なポイントとしてライフスタイルがありま

すが、女性では半分くらいの人がそうだと思っています。

− 113 −

これは一寸特異なフランス人を除けば、他の外国に比べていますけれども、これは何が問題かといいますと皮膚をてかなり高いデータで、私たち日本人の紫外線傷害に対す黒くするためには、今の方法では一旦皮膚を赤くしないとる認識はやはり遅れていると言わざるをえないと思います。

黒くはできないわけです。勿論、ほとんどの日焼けサロン

こういったものを啓発することによって、コスメティック

は紫外線 A を使っていますが、５％ほどの紫外線 B が入な問題、或いは将来的には皮膚のガンというものを減少さっています。紅斑の作用波長と光発ガンの作用波長はほとせることが可能ではないかと思います。私はこのような啓んど一緒です。もしも、これが解離できれば安全な日焼け

発活動を 10 数年前からやってきています。例えば、京大というものが可能になると思いますが，今のレベルでは全の講師の頃ですから 12・3 年前になりますが、ウォークマ

く紅斑を作る波長と発ガンの波長は一緒ですから、安全なンブックスから「素敵な女性は肌を焼かない」という本を日焼けというものは今のところないといわざるを得ません。

出したのですが、見事に売れませんでした。当時はやはりアメリカのガン協会のポスターでは日焼けサロンの暗い側

小麦色の肌が一番もてはやされた時代であったため、敢え面ということで、「皮膚にガンを作る、あるいは白内障をなく絶版になったというわけです。それが悔しかったもの

作る、シミ、シワといった老化を進める。それから一部のですから群馬に移ってから、今度は素敵な女性などといっ患者さんでは光アレルギー反応を起こしますよ」という啓て女性にこびるのはやめて、「知的なスキンケア Q ＆ A」

発活動をしています。ですから私共も日焼けサロンというという本を出しました。これは紫外線に限らずドライスキ

ものに対してはその功罪を充分に周知する必要があると思ンとかアトピーの問題なども書きまして、これはそこそこいます。また、アメリカの皮膚ガン協会では、子供のころ売れました。ところが、最近、台湾でこの翻訳本が出たとから日光に対する認識を高めて、必要な防御をする。そうのことで、今年改訂版を出すことになりました。私共はこいったことを啓発するポスターを作っています。更に、ア

うして少しでも、一般の方々に紫外線も含めたスキンケア

メリカの皮膚科学会のポスターでは、「日光浴、これはもにもっと関心を持って欲しいと考えているわけです。

う犯罪である」という程に過激なポスターを作っています。

最後に一般の人々に私がどういうことを言いたいかと紫外線にはいくつかの功罪があり、その罪の方が多いわけ申しますと、一つは紫外線はやはり皮膚に有害な面が多です。従って、皮膚科医としては太陽の恵みをすべての人いのですから殊更、紫外線を浴びない、くる病を恐れて日が享受できて、すべての人が太陽の下で楽しく生活ができ光浴をするとか、あるいは小麦色の肌が欲しいから肌を焼ることを目的として、「光線過敏の人であっても、健康なくとかといった無用なことをしない。それから大量の紫外人と同じように太陽の下で生活ができること」と、逆に、「健

線を浴びることが予想される場合、山に行くとか、スキー

康な人がその知識がないがゆえに紫外線の害に泣くことのに行くとか、泳ぎに行くとか、そういった場合には今日申ないようにすること」の両方を啓発する必要があるわけでし上げたように必要な防御手段を講じて欲しいということす。今後益々この紫外線の研究を続ける中で、私たちは紫です。日本人の場合であれば、この２つだけを守れば、そ外線による皮膚のダメージというものを一般の人に知ってれ程神経質になる必要はないと思っていますし、実現可能

いただいて、一人でもガンとか光老化によって、精神的にな光防御の方法ではないかと思います。我が国でもそうでも容貌的にもダメージを受けることがないようにしたいとすが、米国でも日焼けサロンというのが随分増えてまいり

考えています。

ました。アメリカのいくつかの州では法的な規制が始まっ− 114 −

コスメトロジー研究雑感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成９年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
コスメトロジーとコロイ
ド化学□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

江角□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

邦男□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

基財団の助成金による研究報告書をまとめている間に二□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

子表面処理を目的に水中でこれらの粒子に陰イオン性界面□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

つの事柄がふと脳裏に思い浮かびました。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

活性剤であるドデシル硫酸ナトリウム（SDS）を添加、吸□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ひとつはコスメトロジーの基礎となりますコロイド化学□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

着させ、さらに難水溶性のスチレンモノマーを加える実験□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□との出会いです。今から28 年前、目黒謙次郎先生にコロ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

でありました。この結果、SDSの吸着層中にスチレンモ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

イド化学ならびに応用コロイドに関するわかりやすくかつ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ノマーが取り込まれ、それらを重合することで微粒子表面□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

興味ある講義を受けたことです。目黒謙次郎先生の研究に□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□にポリスチレンの膜が形成されることが明らかになりまし□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

対する情熱に感銘し、またいろいろな界面での現象や界面□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□た。ほぼ同じ時期にアメリカのオクラホマ大学のHarwell□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

活性剤の役割など我々の生活に密着する対象が多いことか□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

らにより全く同じ発想でアルミナ粒子へのポリスチレン膜□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ら、現在までの20 年間の研究を界面ならびにコロイド化□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の形成に関する研究が行われていました。このような事柄□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

学に集中させてきました。最近は特に多鎖型界面活性剤の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

はよくあることですがいざ自分たちに起こると研究成果の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

水溶液物性、微粒子表面への高分子、界面活性剤の動的吸□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

的確な発表がいかに重要かがわかります。この吸着可溶化□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

着挙動、樹状型高分子であるデンドリマーをテンプレイト□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

に関する研究はアルコール、染料、医薬剤などに拡張し、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

として貴金属超微粒子の調製などの研究に取り組んでいま□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

また界面活性剤の構造と吸着可溶化の効率との関係につい□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□す。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□て研究をさらに進めています。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

もうひとつは今回の研究と関わりある“吸着可溶化” に纏□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

最後に本研究に当たり、多大なご支援を頂きましたコス□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

わることです。我々が吸着可溶化の研究を始めたのは今か□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

メトロジー研究振興財団に厚く御礼申し上げます。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ら
15 年前です。このときは二酸化チタンや酸化鉄の微粒□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□（東京理科大学理学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成９年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
不精者とコスメ
トロジー□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

半田□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□哲郎□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

若い頃から頭髪が少しうすいことに気づいていたが、そ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

今のところどれも私にはあまり効果がない。整髪液として□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

れでもよいという女性と出会うことができ、無事に結婚し□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

使わせていただいている。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□た。以来20 数年間、散髪は彼女がやってくれていた。15□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

そのように、結構、無頓着にやってきたが、近頃はそう□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

分間程度で終わるいかにも素人の簡単なかり方であったが、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

も言っておれなくなってきた。日頃接している大学院生や□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

あまり気にしなかった。私は決して質実剛健であるとかバ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

教室員との年齢差が広がり、写真を見ると私の歳が露にわ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ンカラであったわけでない。もともと不精な田舎者なので、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

かるようになってきた。それはそれで良いが、若い人たち□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

特に噂の高い養毛剤やかつらなどにも関心をもたなかった。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の中に入り彼らとサシでやりあうには、お互いに違和感の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ただ、ここ数年来、夏や冬の盛りには直射日光や冷気が気□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ない気持ちの良い雰囲気が必要である。人のなかに積極的□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□になり帽子をかぶって自転車通勤をしている。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□に入り自分の考えを伝えたり他人の意見を受け入れるには□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

30 代半ばの海外出張中に、それでもささやかなおしゃ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

それなりの雰囲気作り、互いのムード作りが必要と気づい□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

れ心から口ひげ（mustache）をはやしたことがあったが、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□てきた。それで、数年前から顔のスキンケア液体を使った□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

その手入れは結構大変だった。忙しい日本に帰国する前に□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□り、散髪も理髪店に行くようになった。それまで散髪をし□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

そり落としてしまった。もっと几帳面であれば口ひげは残□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□てくれていた女性も面倒がなくなったと思っているようで□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□っていたかもしれない。製薬会社などに務める元学生から□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ある。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

養毛剤の新製品を試してくれと言われることがよくあるが、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

私たちの意味も幸福も、結局は、人と人の結びつきにあ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□− 117 −

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
るとするならば、コスメトロジーとは科学的のみならず哲□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□てきたこの頃である。
（京都大学大学院薬学研究科）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
学的な意味内容をもつことが無精者にもようやく気が付い□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 10 年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
日本人の美肌学□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

柴山充弘□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

今から 20 年ほど前、まだ学生のころ、恩師の京大教授□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ないだけでなく、湿度も高いからです。現在のコスメトロの家で、ポーランドの科学アカデミー所長とマサチューセ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ジーでいかなる審判が下っているかは知りませんが、結局、ッツ大学教授とともに談笑したときのことを思い出しま□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
こうしたファクターの複合効果であると言うことで素人にす。それは今日、若い女性の間で関心が高い美肌に関する□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
よる美肌に関するコスメトロジー会議は終わりました。

ものでした。所長曰く、「世界各国を回ったが日本の子供□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
あれから 20 年の間に、私はアメリカをはじめ、フランが一番かわいらしく肌もきめ細い」。私はテレビなどで見□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
スやドイツはもとより、カナダ、メキシコ、ロシア、イス

る西洋の子供の方が、人形のようではるかにかわいいとい□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ラエル、チェコ、香港、韓国、インドネシアなどを訪問しうのが万人の認めるところであり、多くの日本人もそう信□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ましたが、「日本人が一般的に若く見える」という真理（？）

じているものと確信していましたので、断固その説に反対□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
を確信しつつあります。この研究報告の読者の中にも外国しました。これが発端となって、どこの国の人々が年齢よ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□人から10 歳も 20 歳も若く見られたことを経験した方が多り若く見えるかどうかについて日、欧、アメリカ代表（？）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
くおられることと思います。その意味で、日本は美肌先進の間で議論を戦わせることになりました。結論は、やっぱ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□国なのかもしれません。気候風土の恩恵にとどまることなり「日本人が一番若く見える」でした。これは、欧代表の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
く、現代美肌学はシミを隠し、皺を伸ばし、肌の色を変え

日本人美肌説と相通じるものであるため、次にその理由付□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
るなどして、30から 40 歳も若く見せることを可能にしまけをする事になりました。もちろん、「見た目の若さ」は□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□した。

肌のつやだけでなく、頭髪や人相などの諸因子を含めて総□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
この例は随分矮小化したコスメトロジーではありますが、合的、しかし多分に主観的に判断するものでありますので、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
どんどん進む高齢化社会においてコスメトロジーが果たす

肌のきめ細かさや皺の多さに限定して議論しました。最初、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
役割はますます大きくなると確信しています。私は、美肌

肌のきめ細かさは人種に因るものだという意見が出ました。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
学とはほど遠い高分子物性という視点から乳性蛋白質であしかし、欧代表は「東洋人でも中国人の方が皺の多い人が□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
るラクトグロブリンの凝集機構について基財団からご支援

多く、老けてみえる。
」と主張し、人種説は否定されました。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□をいただいた者ですが、合成高分子に比べてはるかに複雑

その後、食べ物説、紫外線説などがでてきましたが結論は□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
な蛋白質の凝集・ゲル化機構にますます魅せられ、私なり出ませんでした。そこで、私は「秋田美人」の例を持ち出□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□のコスメトロジーを展開していきたいと考えています。

して、紫外線説のみならず「湿度」が重要なファクターで□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□（京都工芸繊維大学繊維学部）

あると湿度説を展開しました。雪国では紫外線被曝量が少□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 10 年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
私のコスメトロジー観と本研究について□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

藤本□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

治宏□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

先日、テレビで偶然視た取材番組の中に化粧品のルーツ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

住み今日なお石器時代の生活を営む或る原住民部族を取材□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□を見た。それは、南米はブラジルのアマゾン河流域奥地に□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

したものであったが、彼等も、人目を意識するときや特別□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□− 118 −

コスメトロジー研究雑感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□な行事のときには、男も女も念入りな化粧をしていた。例

対象として、これらの欲求を満たすために、実に様々な用□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
えば、お祭りの日に部落の広場で踊るとき、友好関係を築途の化粧品や装身具が存在している。さて、太古には草木、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
くために他の部族を訪問するときなどには、草木や岩石か岩石から直接得られていた化粧品の内容も、時代の進展に□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
らつくった着色液体（彼等の化粧品）を顔、腕、脚などに伴って大いに改良され進歩して、今日では、肌に塗ったり□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
丁寧に塗り、髪、鼻、腕、腰などには色々な飾りを付けてつけたりした場合に、視覚的、嗅覚的な魅力を増進させる□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
全身を飾り立てていた。その様子から、人は太古から、他効果だけに注目するのではなく、肌の衛生、安全性、栄養、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の人から好ましく思われたい、
或は、何か大事な行事（仕事）

老化防止なども考慮に入れた製品化が計られるようになっ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
をうまく行いたいと、化粧をし、身なりを整えてきたもた。しかしながら、時には、化粧品中の成分によって皮膚□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□のと思われた。石器時代人が既に持っていたこれら二つのかぶれなどのアレルギー症状が起こる事例も見られる。そ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
欲求は、後世の人達に脈々と受け継がれ、しかも、文明がの様な禍を防止するために、発症原因となる成分に対し免□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
進み社会機構が複雑になるにつれてより強まった形で受け疫寛容を誘導することが考えられ、その誘導のために役立□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
継がれて、現代人まで至ったものであろう。今日では、こつ新免疫抑制成分を天然から探索する本研究の意義がある。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
れらの欲求が男よりもより強いと思われる女の人を主たる（千葉大学薬学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 10 年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
私にとってのコスメトロジー研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

石川雄一□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

私、貴研究財団の助成金を「遺伝子の増殖を制御する人□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

所の「一重項酸素検出装置の開発」を知る事ができました。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

工の脂質膜の開発」の題目で頂きました。大分大学を親大□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

まさに偶然ですが、貴財団の母体研究所でこのような装置□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

学として「流動定員」として九州大学の有機化学基礎研究□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

を開発されているとは全く知らず、驚き、早速測定をお願□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

センターに２年間お世話になり、2000
年の春に大分へ戻□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

いしました。荒金久美博士から、測定のご快諾頂き、お忙□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ります。大分大学と九州大学との往復で不安定な時期での□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

しいところいくつかの試料の一重項酸素の発生率の測定を□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

研究助成金であり、有意義に研究に使用させて頂きました。
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お願いできました。この場をお借りして御礼申し上げます。
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ありがとうございました。私、この目的に関連した研究と□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

研究の結果は、直接、皮膚に還元できるものでは無かっ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

して、一重項酸素を発生させて皮膚にダメージを与える事□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

たかもしれません。しかし、自己複製と脂質の観点から新□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

として知られているポルフィリン色素の合成化学的な展□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

しい結果を出せたものと考えております。今後、貴財団の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

開も同時に進めております。新しい光増感剤としてのポル□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

研究助成が、多様な生命科学の発想に対して広く支援され□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

フィリンの評価のために「一重項酸素」の発生率を決定し□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ていかれる事を望んでおります。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

たく考えておりましたら、本助成金のつてでコーセー研究□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□（九州大学有機化学基礎研究センター）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 10 年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
コスメトロジー雑感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

大橋□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□直樹□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

幸いにも、財団より研究助成を頂戴するに至り、半導体□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

光と紫外線の境目の領域に急峻な光吸収端を有し、その粉□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□と化粧の関係、というあまり普段気にすることのない両者□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

末は純度が高いほど真っ白になる。しかし、真っ白だけで□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の関係を考察する機会をえた。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

は芸がないので色を着けようというのが発想である。方法□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

半導体の基本はバンドギャップである。酸化亜鉛は可視□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

は、①バンドギャップを狭くする、②光吸収準位を作る、③□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□− 119 −

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
発光準位を作る、の３つである。

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
できる。光る顔、というと不気味だが、完全に紫外線を遮□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□①は難しい。格子定数を大きくすればバンドギャップが□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
断したい場合、吸収した紫外線の全てを熱に変えてしまう□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
狭まり、吸収端が可視光側に移動する。すなわち、格子を□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
か、あるいは、熱と可視光に変換して放出させるしかない。

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
伸ばせば黄色の酸化亜鉛になる。しかし、格子を大きくす□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
本研究の提案は、紫外線を吸収し、青、黄色や赤の可視光□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
る適当な添加物が見あたらない。酸化亜鉛はウルツ鉱型の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□を発する酸化亜鉛である。ストロボの光が当たったとき、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
構造を持つが、酸化物でこの構造を持つものが少なく、混□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
最も生気のある色を与えるような発光が実現できたら、そ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□晶を形成しにくい。

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
れは、すばらしいに違いない。

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□②は可能である。たとえば、酸素欠陥を導入してやると□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
しかし、あまりにも効率よく紫外線を可視光に変換でき□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
薄黄色の色を持たせることが可能である。もちろん、マン□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□た場合、少々困った問題も生じてしまう。南国のビーチで□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ガン、鉄などを固溶させればかなりの色のバリエーション□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
楽しんだ晩、リゾートのディスコに行くとしたら、化粧直□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□が望める。最も簡単な方法である。

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
しをしなければならない。なぜならば、可視光発光タイプ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□③が今回の研究の中心である。サンスクリーンとは、紫□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の酸化亜鉛サンスクリーンを使っているあなたの顔だけが、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
外線の遮断である。極めて純度の高い酸化亜鉛では、吸収□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ディスコのブラックライトで、たとえば、黄色く発光して□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
した紫外線の一部は、若干波長の伸びた紫外線となり再び□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
しまうからである。しかし、それも一興かもしれない。化□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
酸化亜鉛から発せられ、残りは熱に変わる。これを紫外線□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
粧は個性を強調するための手段でもあるわけだから。

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□や熱ではなく、適当な可視光に変換してやることで、着色□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□（東京工業大学理工学研究科）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成９年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
香りの感じ方についての文化的違い□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

菊地和也□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

６年前に米国に留学が決まった時、洋行経験のある友人□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□た。汗はきれいに拭いているのでしょう、疲れては見える□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□に「異国文化に触れたときは、今までの価値観で良いとか□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□のですが余裕があるというか、ある意味すきがなく見えて□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

悪いとかすぐに判断しないで、とりあえず受け入れてから□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

感心しました。私にとってコロンによって人に好感を持つ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

時間をかけて好き嫌いを決めればよい。
」とアドバイスし□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

初めての体験でした。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□て□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

考えてみると、香水の匂いは以前からすごく好きだった□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

もらいました。これはなかなかあたってるアドバイスであ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□のです。体に直接つけるということに抵抗があったのです。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

り、この言葉の重さを、良い悪いにかかわらず経験を積む□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

そういえば、日本古来の文化としてお香を焚く香道があり□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ごとに感じました。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ます。日本人は環境にある自然の香りは好きでも、体につ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ひとつのきっかけで、それまでの価値観がゆらいだ経験□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

けることは多用しなかったのでないかと考えました。コロ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□のある人は多いと思います。私は以前、自分についても他□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ンが好きになって日本に戻ってみると、適量つけている人□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

人についてもコロンをつけることは好きではありませんで□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

は少ないと思いました。つけている人は極端に強く臭うと□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

したが、ここに書くきっかけをもとに、現在では好きにな□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

思い、また体臭が気になることもあり、コロンや人から発□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□りました。勿論、適量はあります。留学中にグランドキャ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

せられるにおいで良い経験をしたことはありません。勿論、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ニオンを下りた時です、上って戻るのは大変疲れるため休□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

何もにおわないのは気になりません。日本には香水をつけ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

憩を高頻度で取るのですが、休憩所で一人で歩いているア□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

る文化は、それほど強くは根付いていないということでし□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

メリカ人女性と話す機会がありました。その女性はTシ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ょうか。これ以降、文化的な良い悪いはぬきにして香りを□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ャツとジーンズに大きなリュックサックという格好なので□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

楽しみ、香りが生活にもたらす豊かさについて考えるよう□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

すが、きれいに化粧をし、ほど良くコロンの匂いがしまし□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□になりました。
（東京大学大学院薬学系研究科）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□− 120 −

コスメトロジー研究雑感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成９年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
皮膚とコスメトロジー□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

田中□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
皮膚科ではたいていの場合、明らかに病的な皮膚を見てような微妙な変化もあるかもしれません。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
いますが、コスメトロジーの対象は健常な皮膚のごくわず

今回の私のテーマは皮膚病変の定量ですが、人間の目で□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
かな変化だと思います。皮膚の微妙な変化を読みとるのはは明らかにその差を認識できているのにコンピュータがそ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
たいへん難しいことだと思いますが、化粧をされる方といれを同じと判断してしまうところに画像定量の難しさがあ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
うのは、そのわずかな変化だけでも大きな違いだと感じるりました。しかしながら、人間がそのわずかな違いを判断□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□のではないでしょうか？したがって、その要求を満たすたするときの情報を解析していくことにより、将来的にはよ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
めにはちょっとした違いでも見逃さずにとらえて、その差り一層正確な画像処理、画像解析が可能になるのではない□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
を認識しなければならないと思います。一方、皮膚科におかと思われました。そこには、色の違い、凹凸、影などが□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
いても、異常であることは一目瞭然であるが鑑別診断に苦大きく影響していますが、さらに、その柔らかさや光の透□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
慮する、ということがよくあります。そのような場合に大過性、吸収性、温度、真皮内の沈着物質など、さまざまな□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
切なことは、皮膚病変の細かい特徴をよく観察することに情報が微妙に影響を与えているに違いありません。今後、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
より、疾患ごとの違いをひとつずつ正確に認識していくこ

さらに細かい点に注意しながら日常の診療に、また、皮膚□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□とでしょう。正常な皮膚の加齢に伴う変化も、ごくわずか

病変の画像解析の仕事に役立てたいと思います。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ずつ進んでいくものですが、それを毎日見ている本人より（慶應義塾大学医学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
も他人の目に明らかな場合と、逆に本人にしかわからない□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成９年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

勝□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
コスメトロジーの観点から見た本研究の展開□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

鈴木□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

高広□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

紫外線吸収効果をもつ酸化チタンの光触媒作用を生体適□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

確立されているわけではなく、現在、評価方法の規格化が□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

合性の観点から評価することを目的に本研究を進めた。二□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

進められている。したがって、UV
カット剤として用いら□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

酸化チタンの光触媒作用は、近年、環境浄化や抗菌技術の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□れる二酸化チタンの酸化力が、生体に対してどのような影□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

面から注目されている。例えば、ビルの壁面や道路の側壁、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

響を与えているかは未解明な点が多い。過剰な酸化力が生□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

舗道の表面などを二酸化チタンでコーティングすることに□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

体組織の炎症を起因することも危惧される。しかしながら□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

より、車の排気ガスによる大気汚染物質を分解したり、あ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

本研究では、生体に対する影響は二酸化チタンの酸化力に□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

るいは抗菌力をさまざまな医療・衛生機器に応用すること□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

よる毒性よりも、紫外線吸収効果により紫外線から皮膚を□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□が期待されている。二酸化チタンの光触媒作用による抗菌□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

保護する効果の方が大きいと考えられる結果を得た。皮膚□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

効果は、活性酸素の生成に依存した反応であることが知ら□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

組織に対する二酸化チタンの酸化力の影響は、今後さらに□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□れており、その酸化力はオゾンよりも強く、たいていの有□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

評価検討を要するが、適度な酸化力は生体組織を活性化す□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

機化合物を水と二酸化炭素にまで分解することができる。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ることも考えられる。皮膚に接する成分が、光照射下で直□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

このような、強力な酸化力や抗菌力をもつ二酸化チタンが、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

接的あるいは間接的に生体組織の活性化を促すような化粧□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

UV
カット剤として化粧品にも利用されていることは意外□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□品の開発も可能になるであろう。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□と知られていない。日焼け防止剤の中に含まれる二酸化チ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

研究室に隠りっぱなしの生活をしていると、太陽光の紫□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

タンを、環境浄化や衛生機器の開発に利用することが可能□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

外線にさらされる機会も少なく、自身は日焼け防止剤のお□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□になったのは、コーティング技術などが進歩したためでも□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

世話になったこともない。光触媒の研究者としては、やや□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ある。このような光触媒剤の抗菌効果試験方法は、十分に□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

反省すべき点でもある。

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（東京理科大学基礎工学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成９年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

真の老化防御化粧品はテロメア□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□DNA の短縮化を抑制する□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ヒトの一生で出る垢（皮膚細胞の死骸）は日本人の平均れる25 才以降、様々な皮膚老化の症状が現われる主因と□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
寿命と体格を基礎にすると平均
409 kg に達すると試算さして、細胞供給速度の遅滞を考慮すべきである。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
れる。これだけの大量の死細胞の穴埋めとして細胞補給す

ヒト皮膚の角化細胞において、今までの研究では、細胞□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
るためには、・どれだけ迅速に細胞分裂するか（分裂速度）、
・増殖速度の低減はカレンダー年令に伴う必然的なものと受□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
分裂する残余回数がどれだけあるか（分裂寿命）が重要でけ取られていたが、今回の我々の研究では、テロメアＤＮ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ある。

Ａの短縮化が進行するに伴って細胞増殖速度が低減し、テ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
紫外線や過酸化脂質などで皮膚細胞が定常以上に大規模

ロメア短縮化を遅延すれば細胞増殖速度の低減を抑制でき□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□に死んだ場合、それを迅速な細胞分裂で穴埋めできなけれることが分かった。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ば、皮膚にはシワ・タルミ・シミ・ソバカスなどが生じる。

今後テロメア計測なくしては真の老化防御化粧品は語れ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
個体レベルでより重要なことは、ヘイフリック限界になる

ないのではないかと考える次第である。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
前段階でＤＮＡ合成の低下や細胞分裂の遅延といった細胞（広島県立大学生物資源学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
老化が分裂停止の「予兆」として起こるという事実である。

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
これは、死細胞を穴埋めするための細胞供給が遅滞するこ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□とを意味する。皮膚細胞において、お肌の曲がり角といわ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 10 年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

三羽 信比古□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
klotho 遺伝子とコスメトロジー□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

永井□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

良三□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

コスメトロジーすなわち化粧品学の目的は多岐にわたる。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

や皮下脂肪層の消失、脱毛が同時に観察される。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

素肌を傷害から守るスキンケアは日常生活に不可欠であり、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

臓器別の発現状況を調べると、klotho 遺伝子は主に腎と□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

特に最近著しく増加したアトピー性皮膚炎の治療の基本で□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

脳で発現し、骨、肺、皮膚などの変化の強い臓器では発現□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ある。より魅力的に自分を表現するメーキャップは、女性□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

していないことがわかった。このことから、klotho
遺伝子□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ばかりでなく男性にも浸透しつつあり、若者の重大な関心□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

産物の外因性投与による治療の可能性が示唆される。換言□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

事となっている。しかしながら、皮膚をとわに若く美しく□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

すれば、klotho
遺伝子産物を皮膚に塗布することで皮膚老□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

保つことがコスメトロジーの最も重要な課題の一つである□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□化を抑制できるかもしれない。また、一方では、klotho
遺□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ことは明白である。そのためには、皮膚の老化機構の解明□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

伝子ホモ欠損マウスでは皮膚の老化が骨粗鬆症、動脈硬化□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□が不可欠である。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□などと同時に進行していることから、皮膚の老化抑制には□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

我々は黒尾・鍋島らと共同で個体老化に密接に関わる□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

全身的な対応が必要であることが示唆される。実際、糖尿□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

klothoという新規遺伝子を発見した。この klotho 遺伝子□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

病や肝硬変や腎不全患者の皮膚は張りがなく、がさついて□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□が発現していない（ホモ欠損）マウスでは、寿命の短縮、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□いる。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

動脈硬化、異所性石灰化、骨粗鬆症、肺気腫などのヒト老□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

いずれにしても klotho 遺伝子の研究がコスメトロジー□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□化に見られる多彩な変化が早期に出現する。興味深いこと□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の進歩に大きく貢献することが期待される。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□にklotho 遺伝子ホモ欠損マウスでは皮膚真皮層の菲薄化□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□（東京大学医学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□− 122 −

コスメトロジー研究雑感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 10 年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
本研究成果のコスメトロジーに及ぼす影響と今後の展開□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

加藤□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

昌志□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
研究完了報告書にも記載したように、本研究では、試験に生物は、自身の作り出す酸化ストレスにより、様々な障□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
管内において紫外線がプロトオンコジーンのみでなく、遺害を受けることになった。現在では、老化にかかわる遺伝□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
伝子の変異によりすでに活性化されているオンコジーンの子が、ミトコンドリアでの細胞内呼吸に関与していること□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
スーパーアクティベーションに関与していることを示した。

が、わかりつつある。SOD
1 などの、抗酸化剤は、老化を□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
さらに、紫外線が、Ret分子の SS 結合を介した二量体形防ぐ物質として、近年注目されているが、その作用機序は、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
成を促進することにより、その活性を増強することを示す

完全には解明されていない。特に、生体に対する薬剤およ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
とともに、紫外線の標的となるシステインを特定した。しび化粧品としての応用は、これからの段階である。リポゾ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
かし、コスメトロジー上、最も重要であるのは、スーパーームなどを用いることにより、皮膚に対する遺伝子治療法□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
オキサイドディスミュターゼ（SOD 1）が、紫外線によるは、確立されつつあるので、化粧品にSOD 1 の遺伝子治□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
Ret
分子の SS 結合を介した二量体形成の促進を阻害する療を導入することにより、皮膚の老化や紫外線の発癌作用□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ことにより、紫外線の作用を緩和することができることをを安全にしかも、有効に抑制できる時代が、到来するかも□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
示したことである。

しれない。化粧品会社との共同研究というかたちで、我々□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
生物は、その進化の過程で、ミトコンドリアにおいて、の研究をさらに発展させることが、もし可能であれば、我々□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
酸素を利用することにより、以前と比較にならないほどエにとっても至上の喜びである。
（名古屋大学医学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ネルギーを効率よく得る機構を発達させた。しかし、同時□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 10 年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
女性と化粧□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

根岸□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

友惠□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

女性にとって化粧は縁の切れないものであろう。私自身□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ようなものであると信じて疑わない。その点、最近化粧品□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

化粧品というものに最初に触れたのは、母の鏡台のいたず□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□に紫外線防御の姿勢が強くなったことは皮膚細胞を守り、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

らであったらしい。証拠写真が残されている。鏡台をいた□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

さらに個体レベルでの傷害をさけるためにも大変よい傾向□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ずらするのは誰が教えるでもなく女児特有のことかもしれ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□であると喜んでいる。但し、正しい評価のもとに正しく使□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ないと思ったのは、自分の子供を見てからである。男児は□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

用されているかは、まだ議論の余地が残されているように□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

全く関心を示さなかったが、女児の一人はいつの間にかい□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

思う。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

じって、口紅で赤鬼の如き化粧をしていたのである。最近□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ソラレンとの共同作用から紫外線の生物影響に興味を持□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

は年頃になると男性もエステだとかで、化粧に気を使う人□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□って研究を始めて、太陽光に本当に突然変異を起こす力が□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□も出てきて話題になっているが、実は男性の化粧は、毛髪□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

あるのか、SPF
100 を越えるようなサンスクリーンは必要□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

に対するものなどを含めて昔からたくさんの商品があった□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

なのか、冬になるとサンスクリーンを入手するのが困難な□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□のではないかと思う。私自身の経験でも、物心付いてから□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

状況になるのはいいのか、などの疑問から私は太陽光の変□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

は、母が化粧気のない人であったこともあって、むしろ父□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

異原性とサンスクリーンの評価という研究テーマに取り組□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□のポマードのほうが視覚的にも嗅覚的にも印象深い。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

むことになった。ここで得た結果から、私はあまり化粧は□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ともかく化粧に気を配り美しく見せたいというのはヒト□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

しないが、サンスクリーンだけは天候や季節に合わせて使□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の本能と思われる。しかしながら最近の化粧は、生物とし□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

用している。冬でも天気の良い日はサンスクリーンが必要□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ての営みを乱すものも多いように思う。私は、黒髪を脱色□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

だし、夏の快晴では
SPF 値のある程度大きいサンスクリ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

して染めることなど、頭皮の細胞を無駄に痛め付けている□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ーンを使用する必要がある。

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□− 123 −

□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
サンスクリーンの使用は女性の化粧にとどまらず、子供□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□に広がることを望んでいる。
（岡山大学薬学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
や、紫外線の強いところで労働する人々の健康を守るため□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 10 年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
コスメトロジー雑感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

今回助成金をいただき有り難うございました。助成金に□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

状況が、ご本人にとってどれだけ辛いかを思い浮かべると、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

よって行った研究は、ペプチジルアルギニンディミナーゼ
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

皮膚科医としての無力さを痛感してしまいます。どのよう□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□という、蛋白質のArg 残基を脱イミノ反応により Cit 残□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□な患者さんにも、魔法のように毛髪が生えてくるような薬□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

基に変換するユニークな蛋白質修飾酵素についての研究で□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□があったら、どんなにいいでしょう。21
世紀中にはそん□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

す。詳しくは研究報告書に書きましたが、この酵素が表皮□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□な薬が生まれることを願っています。そこで私が努力すべ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□や毛嚢細胞の分化に重要な役割をしている可能性が高いと□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

きことは、今回の研究をさらに進めて、毛髪に関して新し□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

考えています。しかし、その生理機能については未だ不明□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

い科学的な
evidence を見つけて、少しずつ積み重ねてい□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の点が多く、少しずつ明らかにしたいと考えています。特□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

くことだと考えています。そしてそこからbreakthrough□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□に毛嚢細胞でのこの酵素の働きがわかって、毛についての□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□が生まれるように絶えず努力することだと思います。
「雨□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

疾病の病因や治療に結びつかないだろうか、と夢のような□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

垂れ石をうがつ」という言葉がありますが、ささやかな努□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ことを考えています。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

力でも継続していくことが、いい結果にむすびつくと信じ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

毛の病気として私がまず考えるのは、円形脱毛症です。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ています。
（近畿大学医学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

皮膚科医として、円形脱毛症の患者さんを診ていますと、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

なかには色々な治療の効果があまりみられない患者さんも□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

いらっしゃいます。本来頭に生えていた毛髪がないという□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 10 年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

川田暁□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
私のコスメトロジー感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

船坂□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

陽子□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

化粧品のコマーシャルで、これを使うと肌がツルツルに□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□る
skin rejuvenation が欧米の白人を対象に一大ブームと□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□なるとか聞いたり、また店頭で販売のお姉さん方に奨めら□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

なり、実際その劇的な効果が確認されている。しかし、そ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

れると、何となくそうかなと思っていろいろな化粧品を購□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の作用機序を詳細に検討した研究は寡少なため、その手法□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

入してしまう。皮膚の質を改善することは、病気の治療で□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□などにおいても、経験則に頼っているのが現実である。皮□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□はないので、そんなに良くならなくて元々、少しでも改善□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

膚でのその機序を明らかにすると共に、安全かつ有効な治□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

されれば得をしたような気になる。化粧品は大抵、その使□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

療法、そしてその効果を維持するための安全性の高い化粧□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

用感がとても良く、宣伝のイメージと重なって精神的な因□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□品の開発が望まれる。皮膚科医の存亡を危惧する声も高い□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

子が働くのか、何となく使っていると皮膚の状態が改善さ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

が、まだまだやるべきことは多い。皮膚科のみならず、異□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

れてくる。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

なる分野の専門知識を互いに共有して、コスメトロジー、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

近年では、平均寿命の延長と女性の社会進出および経済□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

サイエンスを光老化の研究に活かしていくことが必要とさ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

的な安定などの理由から、皮膚の若返りを願う要求が高ま□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

れているのではないだろうか。
（神戸大学医学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□っている。その結果として、ケミカルピーリングなどによ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□− 124 −

コスメトロジー研究雑感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成９年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
高齢者研究の中で感じた予感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

西尾□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
高齢者を対象に研究を進める中で，私には一つの予感がそしてこの変化は，まず最初に都市で生活する高齢者に顕□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ある．結論から言えば，おそらくこの
10 年で，「高齢者」

著に表れるに違いない（もう既に始まっているのかもしれ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□と呼ばれる人達の，考え方や生活スタイル，趣味，嗜好なないが）．
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ど，精神性あるいは思考様式とも呼べるものが，これまで

このような，大きな変化の予感があるにもかかわらず，□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□のものと大きく変化する，ということである．

相変わらずわれわれの高齢者に対する認識は変化してい□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
もちろん，実際に調査してみたわけでなく，単なる感触ないように見える．それは，現在マスメディアから流され□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□にすぎない．しかし，考えてみれば，今 60 代で「高齢者」ているような，「日本の田舎のお年寄り」像に象徴される．
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□と呼ばれ始めた人たちは，1950
年代に青春時代を過ごし

しかしこのことは，単なる認識のギャップにとどまるもの□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□てきた世代である．ダッコちゃんを腕に，フラフープを回ではない．これは現実のお年寄りに対して，ある種のノス□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
し，ウエスタンカーニバルで失神し，プレスリーに憧れた

タルジーに彩られた高齢者像を押し付けることに他ならな□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
若者たちなのだ．そのかつての若者たちが，
今まさに，
「高

い．そしてこの両者のギャップは，家庭というミクロレベ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
齢者」と呼ばれる時期に差し掛かってきたのである．

ルから，社会経済というマクロレベルにおいてまで，大き□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
青春時代という，自己形成にとって重要な時期を，戦前な問題を引き起こしかねないことがらである．
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の日本で過ごしたこれまでの「高齢者」と，大量のアメリ

あと 10 年もすれば，武道館でビートルズに失神した少□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
カ文化流入後の，戦後の日本で過ごした，これからの
「高

女たちが，
「高齢者」と呼ばれる時代が確実にやってくる．
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
齢者」とでは，その趣味，嗜好は言うに及ばず，意識や行

その時私たちは，「高齢者」像の急速な変化に柔軟に対応□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
動様式まで，かなり違ったものになることが予想される．

してゆけるのだろうか？
（京都大学大学院教育学研究科）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成９年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

新□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
コスメトロジーとしての笑顔術□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

髙下□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

保幸□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

私が「異性の魅力」について大学生を対象に行った調査□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□る。彼は医学生になった当初、人と気持ちを交わすことが□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

では、「魅力的な女性」の外見の特徴として男性回答者の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

できるのが医者としての出発点だと街中での実習を試みる。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

７割近くが「よく笑う」を「華やかな」「健康的な」「セクシー」□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

パッチが通りですれ違いざまに笑って声をかけた老婦人は、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□などの他の項目を引き離してあげていた。これは「魅力的□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

私の知らない人とばかりに戸惑いながらも振り返ってにっ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□な男性」の外見の特徴についても同様で、女性回答者の６□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

こり応えたのである。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

割近くが「よく笑う」をあげていた。笑顔はこうした男女□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

この映画を観ての帰りの電車でのこと、降りる際にドア□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の間のみならず、上司と部下、教師と生徒など様々な人間□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□に近い席の母親に連れられた４､５歳の男の子と目が合っ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

関係の形成や維持に大いに効果がありそうである。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□たとき、先ほどのパッチと老婦人との笑顔のやり取りの映□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

平成 11 年の春に封切られて人気を博したアメリカ映画□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

画のシーンが思い出された。私もパッチ・アダムスになり□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□『パッチ・アダムス』
では、医者と患者の関係における笑□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

きって、男の子に満面の笑みを投げかけた。すると男の子□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

顔の効用を示していたように思われる。
ハンター（パッチ）・□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□は笑って応えるどころか、私を指さしては母親になにやら□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

アダムスという実在の人物が、生きる意欲をなくして入□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

言っている。
「変なおじちゃんよ」とばかりに。そして私□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

院した精神病院の他の患者を励ました、特にユーモラスに□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

が駅に降りてからも私の方を指さしていた。私の笑いは、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

励ましたことを契機に、患者を笑わすことを通して患者の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

子どもの目にはひきつった笑いにしかみえなかったのであ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

生きる活力を取り戻す助けとなる医者を目指す奮闘話であ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ろう。

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□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
しかしこの失敗にも懲りずに、機会あるごとにまずは自うございます。キャンパスでまたあう機会には、あの笑顔□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
分の気持ちをたのしくして人に笑顔で対応することを心がを見せて下さい」と文面にあったのもので、「笑いの使い手」□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
けるようになった。そうしたなか、今年の学生から届けらを目指した笑顔術修得の日頃の訓練もまったく実りのない□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
れた年賀状のなかに、「昨年はユニークな授業をありがとものではなかったようである。
（福岡大学人文学部）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 10 年度 研究助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
コスメトロジー雑感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

河合□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

隆史□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

私の研究テーマは、マルチメディアが人間に与える影響□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□に、国宝の仏像や外科手術における手技などのアーカイブ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

について、評価を行うことです。具体的には、立体映像や□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

を手がけてきました。このような研究活動は、一見、コス□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

立体音響、環境芳香などが、生理・心理的な側面に、どの□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

メトロジーと無関係のように思えますが、美しさ、という□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ような影響を与えるか、実験的に検討しています。それ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

点で、私は共通性を感じています。つまり、双方とも造形□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□と併行して、マルチメディアを用いた作品制作（最近では、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

や動きの美しさを表現するメディアの研究として理解でき□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

コンテンツと呼ばれていますが）を行っているのが、私の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

るということです。人間には、自らが美しくありたいとい□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

特徴といえるかもしれません。今年は、スペイン北部の修□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

う欲求と同時に、知覚できる情報を、美的観点からもコン□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

道院をテーマにした作品を制作し、アメリカのシリコンバ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

トロールしたいという欲求があると思います。私の場合は、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

レーで発表しました（於：Electronic Imaging 2000）。こ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

仮想的な環境を、美しく構築し、それを表現することです。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□の作品は、ロマネスク彫刻の特徴や、グレゴリオ聖歌のロ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

今後は、それら仮想世界と現実世界での美しさの共存につ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

マンチックな美しさを、立体映像と立体音響を用いて表現□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

いても、検討していく必要があります。コスメトロジー研□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

することを目指しました。文化財をはじめとする知的情報□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

究振興財団に助成して頂いた、今回の研究テーマも、この□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

を、デジタルメディアを用いて記録・保存・再生・共有す□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ような目的を背景としています。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ることを、デジタルアーカイブといいます。私はこれまで□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□（早稲田大学国際情報信研究センター）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

平成 11 年度

外国人招聘助成

皮膚におけるヒアルロン酸の機能解析□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
招聘研究者： School of Medicine, University of California
Davis 助教授 Andrew Paul Spicer□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
受入責任者：理化学研究所 フロンティア研究システム
生体超分子システム研究グループ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
今回、コスメトロジー財団の国際交流助成を受けて、カ

功し、ヒアルロン酸の生物機能の解析を行っており、世界□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
リフォルニア大学デービス校
Andrew Spicer 博士を招聘

的なレベルで研究が展開されています。このような状況で、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
することができ、財団及び財団関係者の皆様に深く感謝申博士を招聘し、親しく討論できる機会を持てたことの意義□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
し上げます。博士はヒアルロン酸合成酵素遺伝子のクローは大変大きいものがあります。皮膚でのヒアルロン酸の重□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ニングに成功し、さらに、酵素遺伝子の破壊マウスを作成、要性は多くの研究者によって、既に認識されており、今後□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ヒアルロン酸の機能解析に、大きな進歩をもたらす業績をの研究の展開によって得られる情報は、コスメトロジーの□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
上げている新進気鋭の研究者で、今後の研究の発展が大い分野にも応用され、その成果が期待されるところです。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□に期待されています。一方、日本では愛知医科大学の木

一方で、私達の研究グループは皮膚特異的な脂質の研究□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
全弘治教授のグループが同様に遺伝子のクローニングに成にも関心を持っております。皮膚には、水分の漏出を防止□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

グループディレクター（元㈶東京都臨床医学総合研究所）− 126 −

鈴木明身

コスメトロジー研究雑感□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
するために重要なウォーターバリアーがあり、それを構成を果たしている可能性が指摘されていますが、その実体は□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
する成分として、セラミドやアシルセラミドなどの特徴的まだ解明されていません。皮膚の脂質を研究しているグル□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□な脂質が存在しています。これらの脂質の存在は表皮に特ープは世界でもさほど多くはなく、今後とも、これらのグ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
異的であり、ウォーターバリアーの形成とともに、ケラチ

ループとの情報交換を通じて、コスメトロジーの進歩に寄□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
ノサイトの分化、さらに、プログラムされた細胞死によっ与できたらと考えております。財団のさらなるご発展を祈□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□て、物理的、化学的に耐性の角化層を作るのに重要な役割

念いたします。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
平成 11 年度 外国人招聘助成□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
哺乳動物における皮膚、毛髪、目に存在するメラニン色素の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
レベルを regulate する細胞、メラノサイトの役割について□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

招聘研究者：米国 National Institutes of Health（NIH）, Chief, Pigment Cell Biology Section,□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

Laboratory of Cell Biology,□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

Vincent
J. Hearing 博士□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

第 17 回国際色素細胞会議が名古屋市の名古屋国際会議□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

外国人招聘助成をいただき、平成
11 年 10 月 28 日から同□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

場で、平成
11 年 10 月 30 日から 11 月４日まで行われた。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

年
11 月 5 日までの期間、この国際会議での特別講演者と□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

この国際会議は、生物学、化学、薬学、医学（基礎系と皮□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

して招聘することができた。彼の研究の一つには、メラノ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

膚科）という、まったく異なった分野からの色素細胞を共□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

サイトに存在するメラニン顆粒、メラノソームの膜構成タ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

通テーマに研究する科学者約300 人が最新のデータを発表□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ンパクであるチロシナーゼおよびチロシナーゼ関連蛋白□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□-

するというユニークな会議であり、したがって、講演会場□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

１（TRP- １）、- ２
（TRP- ２）に関する in vitro の研究を主に□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□には基礎科学者や臨床医が混在し、自分の専門分野以外の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

分子生物学的手法を用いた、これら酵素の機能発現に関す□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

知識が得られる。おかげで、私もメラノーマについて少し□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

る作用機序の解明がある。今回は、「哺乳動物における皮□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

は詳しくなった。この学会は、日本、ヨーロッパ、パンア□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

膚、毛髪、目に存在するメラニン色素のレベルを
regulate□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

メリカンの地域学会が３年のローテーションで主催してお□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□する細胞、メラノサイトの役割について」と題して講演し、□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

り、今回は私どもがお世話することになった。５人の特別□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

生物学的応答機構を解明するためのメラノソームの役割に□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

講演者を選考するに当たり、その一人に米国
NIH のヴィ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ついて詳細に述べていただいた。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

ンセント・ヒアリング（Vincent J. Hearing）博士を選考し□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

本国際会議は 20 ヶ国、300 余人の参加者があり、その□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□た。選んだ理由としては、Hearing
博士が、米国 NIH の□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

うち海外からは
170 名の参加があった。海外からの参加が□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

主任研究員で、細胞生物学における研究の第一人者の一人□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

多い国際会議というのも珍しいと思われるが、これもこの□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

であり、多大な研究業績があること、また、これまでに多□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

会議の特徴の一つである。選りすぐられた
88 名の演者に□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

くの日本人留学生が同博士の指導を受けており（特にコス□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

よる口頭発表、164
題のポスター発表があり、活発な討論□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

メトロジー関係の企業や皮膚科からの留学生が多い）、日□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□と友好的な雰囲気のうちに終了することができた。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

本でもこの分野の研究者が多いため興味を持ってもらえそ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

最後に、この度の Hearing 博士の招聘にご援助いただ□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□う、などがその理由である。今回、貴財団の平成
11 年度□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□

いた㈶コスメトロジー研究振興財団に深謝申し上げます。
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
受入責任者：藤田保健衛生大学衛生学部化学教室□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
助教授 若松 一雅□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□− 127 −

− 130 −

事業報告書事 業 報 告 書

（自平成 11 年４月１日

Ⅰ.

至平成 12 年３月 31 日）

平成 11 年度（第 10 回）事業

昨年に引き続き以下のような事業を計画し、実行しました。
自然科学や社会科学の各分野にわたり、ひろくかかわりをもつ化粧品を総合的に体系化することを目的として①化粧品学の調査・研究に関して顕著な成績をあげた研究者や機関に対して功労金をもってこれを表彰する。
（１件あたり 100 万円）②皮膚の生理機能や老化機構の解明、美容に役立つ素材の研究等化粧品学に関連した生命科学、その他の分野の調査・研究に対する助成を行う。
（１件あたり 200 万円、100 万円、又は 50 万円）③化粧品学の調査・研究にたずさわる研究者の海外派遣や招聘に対して資金援助を行う。
（１件あたり 50 万円まで）

Ⅱ.

募集及び選考の経過

本年度の各事業につきましては平成 11 年５月６日より募集を開始し、同 11 年７月 9 日をもって締切りました。
研究助成事業は本年度も一般公募を原則とし全国 234 ヶ所の大学・病院・研究機関等にダイレク
トメールで推薦書を送付するほか、関係学術雑誌８誌にも広告し、その結果多数の応募をいただきました。応募者の研究分野が多岐にわたった為、選考委員会の中に３分科会を設け、それぞれにおいて予備選考を行い平成 11 年９月 24 日 ㈮ ルビーホールにおいて本選考委員会を開催して受賞候補者を決定し、11 月 15 日の理事会及び評議員会の議決を経て、受賞者を最終決定しました。

Ⅲ.

第 10 回功労賞・研究助成等の結果

以下のとおり合計 19 件が決定され研究助成金 2,000 万円、国際交流援助金 100 万円が交付され
ました。

Ⅳ.

功労表彰（小林 孝三郎賞）

０件

研究助成

17 件

国際交流援助２件

会議等
第１回常理事会
開催日時

平成 11 年６月７日㈪開催場所

東京都中央区日本橋３−６−２

理事総数 13 名
監事

２名

午後２時

本人出席

11 名

出席

２名

㈱コーセー
委任状出席

− 131 −

２階会議室
２名（賛成）

審議事項
第一号議案

平成 10 年度事業報告及び収支決算報告を承認する件配付された資料に基づき、平成 10 年度の事業内容が事務局より詳細に説明され、続いて収支計算、財産内容などが詳しく報告された。次いで小田倉監事より、上記内容が適正適法である旨の監査報告がなされた。
慎重審議の結果、本議案は書面表決者を含め全員一致で可決承認された。
報告事項
平成 11 年度の研究助成事業について研究助成事業、国際交流援助事業、功労表彰の実施計画及び事業経過の概要について
説明がなされ、了承された。
その他
本年９月中にコスメトロジー研究報告第７号（収載論文 18 編）を発行予定であること、また助成金贈呈式を平成 11 年 11 月 15 日に開催予定であること及び記念講演の演者候補の報告がなされた。最後に金利低下の影響で基本財産の運用益の減少が続いている状況下にあって、事務局として財団の適切な管理運営の努力をしたい旨の報告がなされ、いずれも了承された。

第１回 常評議員会

開催日時・場所は第１回 常理事会に同じ。
評議員総数

14 名

本人出席

８名

委任状出席

３名（賛成） 欠席

３名

上記理事会の決議を全員一致で確認した。

第２回 常理事会
開催日時

平成 11 年 11 月 15 日㈪開催場所

東京都渋谷区渋谷２− 12 − 15

午後２時 30 分

理事総数

13 名

本人出席

９名

監事

２名

出席

２名

日本薬学会長井記念館会議室
委任状出席

３名（賛成）

欠席

１名

審議事項
第一号議案

平成 11 年度（第 10 回）研究助成者等を承認する件配付された資料に基づき、平成 11 年度の研究助成課題（17 題）及び、国際交流援助
課題（２題）の選定経緯に関する説明がなされた。
慎重審議の結果、本議案は書面表決者を含め全員一致で可決承認された。
第二号議案

平成 12 年度事業計画及び予算案を承認する件配付された資料に基づき、平成 12 年度の事業計画及び、平成 12 年度予算案について− 132 −

事業報告書

詳細説明がなされた。
慎重審議の結果、事業計画は応募・推薦状況により事業総額を目安に多少弾力的な運用を行うこと並びに健全な財団運営の努力を続けることを含め、本議案は全員一致で可決承認された。
第三号議案

選考委員の選任に関する件

選考委員の植村展生氏の退任に伴い、後任として坂本純氏（厚生省医薬安全局審査管理課化粧品担当）を選考委員として選任したい旨の提案がなされた。
慎重審議の結果、本議案は全員一致で可決承認された。
報告事項
立川雅美理事が業務上の都合で辞任されること並びにこれに伴う理事現在数 12 名は、寄附行為で定める員数枠を満たしていることから、後任理事の選任は行わないことが報告され、了承された。

第２回 常評議員会
開催日時・場所は第２回 常理事会に同じ。
評議員総数 14 名

本人出席 ９名

委任状出席 ２名（賛成）

上記理事会の決議を全員一致で確認した。

− 133 −

欠席 ３名

選考委員会
分科会Ⅰ

開催日時

平成 11 年９月８日㈬開催場所

東京都千代田区大手町１−５−１

審議事項

素材、物性に関する分野の選考

午後６時
トップオブザスクエア会議室

分科会Ⅱ

開催日時

平成 11 年９月７日㈫開催場所

東京都千代田区大手町１−５−１

審議事項

生体作用、安全性に関する分野の選考

午後６時
トップオブザスクエア会議室

分科会Ⅲ

開催日時

平成 11 年９月 20 日㈪開催場所

東京都千代田区大手町１−５−１

審議事項

精神、文化に関する分野の選考

午後６時 30 分
トップオブザスクエア会議室

本選考委員会

開催日時

平成 11 年９月 24 日㈮開催場所

東京都千代田区丸の内１−９−１

審議事項

各分科会の結果を総合的に判断して助成候補者が決定された。

午後５時 30 分
ルビーホール会議室

表彰贈呈式

開催日時

平成 11 年 11 月 15 日㈪開催場所

東京都渋谷区渋谷２− 12 − 15

午後４時
日本薬学会長井記念ホール
以上− 134 −

事業報告書第 10 回 研究助成を受けられたかたがた

管理番号

研

究

課

題

（JA，JB：一般研究助成

H：国際交流援助）

分

研

野

代

表

究

者

九州大学大学院
システム情報科学研究科教授

JA-99-01

匂いの感性計測を行うセンサーシステムの開発

感性工学
センサー工学

JA-99-02

ヒト皮膚線維芽細胞における脂肪酸、コレステロー
ル代謝調節機構

分子細胞生物学
生化学

JA-99-03

高発現型メラニン色素産生遺伝子のコスメトロジー
への応用

遺伝子治療学
遺伝子工学

JB-99-01

新規化粧品素材としての植物由来クロロゲン酸代謝産物の配糖体合成と美白効果ならびに感作性の検討

有機合成化学

JB-99-02

ヒト脂腺細胞に代るハムスター脂腺細胞を用いた皮脂代謝に関する基盤的研究

生化学
分子生物学

東京薬科大学薬学部講師

JB-99-03

分散安定性に優れたサーファクタントフリーエマル
ションの調製法の確立とその凝集・合一過程の解明

界面化学
コロイド化学
物理化学

東京理科大学理工学部教授

JB-99-04

紫外線照射で生じるDNA損傷部位に特異的に結合す
るタン白 DDBp 48 の発現調節

細胞生理学

JB-99-05

サイトカインノックアウトマウスにおける免疫反応とストレス応答を指標とする皮膚機能の解析

毒性生化学
皮膚生化学

JB-99-06

糖転移酵素の関与するメラニン産生制御の解析

生化学
糖鎖生物学

JB-99-07

白血球分画が皮膚の健康状態と関連するメカニズム

免疫学
皮膚科学

JB-99-08

UVAによる酸化的遺伝子損傷の細胞内修復機構

生化学
放射線生物学

JB-99-09

化粧品素材としての含硫化合物の生産に関する研究

応用生物化学

JB-99-10太陽紫外線による細胞のアポトーシスとサンスクリーンの効果

放射線生物学都

甲潔

大阪大学大学院
薬学研究科助教授

佐

藤

隆一郎

広島大学医学部教授

杉山政

近畿大学工学部教授

野
佐
阿

村

正

藤
部

正

彦

熊本大学医学部附属
遺伝発生医学研究施設教授

山

泉

克

昭和大学薬学部教授

吉

田

武

美

大阪大学大学院
医学系研究科教授

谷

口

直

之

新潟大学医学部教授

安保徹

広島大学大学院
理学研究科教授

井出博

早稲田大学理工学部教授

木

野

邦

器

放射線医学総合研究所主任研究官

古

澤

佳

也

東京医科歯科大学
難治疾患研究所助手

ゼラチンによるアレルギー反応のエピトープ解析と安全なゼラチンの開発

細胞外マトリックスの分子医化学

JB-99-12口唇口蓋裂患者の顔面の非対称感の改善に対する化
粧の効果

顎顔面口腔外科学 大阪大学歯学部助手− 135 −人隆

JB-99-11

心理学

則

堀
飯

久
田

征

枝
二

管理番号

研 究 課 題分

JB-99-13

皮膚色素性病変の新しい診断法の開発〜デジタルマ
イクロスコープと病理組織三次元再構築法を用いた

野

皮膚科学

早期メラノーマ診断〜
JB-99-14

分子量および官能基を制御した新規キトサン系界面活性剤の機能化に関する研究

糖鎖工学
応用界面化学
生物化学工学代 表 研 究 者
北海道大学医学部助手

松 村 哲 理東京工業大学大学院
理工学研究科教授

梶 内 俊 夫
School of Medicine,
University of California Davis助教授

H-99-01

皮膚におけるヒアルロン酸の機能解析

糖鎖生物学

Andrew Paul Spicer

受入責任者㈶東京都臨床医学総合研究所

鈴 木 明 身H-99-02

哺乳動物における皮膚、毛髪、目に存在するメラニ
ン色素のレベルをregulateする細胞、メラノサイトの役割についてNational Institutes of Health
Assistant Chief
細胞生物学

Vincent J. Hearing

受入責任者
藤田保健衛生大学衛生学部

若 松 一 雅（敬称略

− 136 −

受付順）

役

役

員

平成 12 年３月 31 日現在

理事長

小林禮次郎

専務理事

宮澤

香

理 事

有本

亨

理 事

磯邊 律男

博報堂取締役相談役

理 事

宇佐美昭次

早稲田大学理工学部教授

理 事

内山

㈶日本薬剤師研修センター理事長

理 事

小林 保清

㈱コーセー代表取締役社長

理 事

菅原 正文

高砂香料工業代表取締役会長

理 事

髙橋

帝京大学名誉教授

理 事

西川 武二

慶應義塾大学医学部教授

理 事

花輪 隆昭

昭和館 館長理 事

廣部 雅昭

静岡県立大学学長

監 事

小田倉正典

公認会計士

監 事

黒田 節哉

弁護士

評議員

秋吉 信夫

㈱コーセー常務取締役

評議員

上野 芳夫

東京理科大学薬学部教授

評議員

緒方 宏泰

明治薬科大学教授

評議員

北原 文雄

東京理科大学名誉教授

評議員

近藤

保

東京理科大学名誉教授

評議員

齊藤

勲

㈳東京医薬品工業協会理事長

評議員

長野 哲雄

東京大学薬学部教授

評議員

西岡

東京医科歯科大学医学部教授

評議員

野呂 影勇

早稲田大学人間科学部教授

評議員

福内 靖男

慶應義塾大学医学部教授

評議員

溝口 昌子

聖マリアンナ医科大学教授

評議員

宮崎 榮三

千歳科学技術大学教授

評議員

山崎 幹夫

千葉大学名誉教授

評議員

渡辺

日本薬剤師会専務理事

充

久

清

徹

コーセー代表取締役会長
日本化粧品工業連合会専務理事− 137 −

員

研究助成課題一覧

１

素材、物性に関する分野
管理番号

J 90-03

J 90-06

研

究

課

題

分

リン脂質膜の表面修飾と分子集合体としての機能発現に関する研究
ヒアルロン酸で表面を修飾したリポソームからの内容物の温度による放出制御

野

界面物理化学

薬品物理化学代表

研

究

筑波大学化学系助教授

古

澤

邦

牧

野

公

高分子合成

J 90-15

皮膚への作用性を有する各種糖脂質の合成

有機合成化学J 90-16

新製剤法及び新素材を用いた化粧品の品質確保に関
する研究

衛生化学

J 91-02

生体適合性逆型ベシクルの生成、安定化と応用に関
する研究

溶液論
界面化学

J 91-05

新しいDDS剤型としての高分子ミセルの設計と機能
開発

高分子合成
DDS

J 91-06

化粧品素材としての利用が可能な乳酸菌の新規育種技術の開発

応用生物化学J 91-08

化粧品素材としての竹節人参並びに甘草の組織培養による物質生産並びに大量増殖に関する研究

生薬
薬用生物学

広島大学医学部助教授

J 91-10

界面活性剤を含む溶液混合系の相挙動と濡れの挙動に関する研究界面化学
物理化学

九州大学理学部助教授

J 91-11

超微粒子分散系の構造と物性及び自己制御コロイド
系の開発

高分子物性
コロイド物性京都大学工学部助手

J 91-20

各種界面活性物質によるマクロ及びマイクロエマル
ションの調製並びに物性に関する物理化学的研究

応用界面化学

ヒトリゾチームタンパク質を高分泌する酵母突然変

分子生物学

広島大学理学部助手

異体を用いた素材生産の効率化研究

遺伝学

鈴

化粧品の紫外線照射による光酸化メカニズムの研究

物理化学
界面化学

− 138 −

子

早稲田大学理工学部教授

皮膚DDSとしての高分子脂質リポソームの基礎研究

J 92-03夫

東京理科大学薬学部助手

J 90-07

J 92-01

者

西

出

宏

之

千葉大学薬学部助教授

中

川

昌

子

国立衛生試験所
環境衛生化学部長

武

田

明

治

横浜国立大学工学部助教授

国

枝

博

信

東京理科大学
生命科学研究所助教授

片

岡

一

則

早稲田大学理工学部専任講師

桐村 光太郎
神
荒
松

田

博

殿
本

史
誠

孝

芳

東京理科大学理工学部講師

阿

部
木

正
克

彦
周

明星大学理工学部教授

日

高

久

夫

研究助成課題一覧

管理番号

研

究

課

題

分

野

代

表

研

究

者

昭和薬科大学薬学部講師

J 92-04

水素添加大豆リン脂質を用いた油性ゲル及び水性ゲ
ルの保湿作用に関する研究

JA-93-05

細胞膜の脂質の物性と機能の基礎的な研究−リン脂質物性のコスメトロジーへの応用−

生体物性学
細胞生物物理学

東北大学理学部教授

JA-93-06

化粧品基本素材金属酸化物の酸性大気汚染物質との
相互作用

物理化学
固体界面化学

千葉大学理学部教授

JA-93-08

新規な構造を有するヒアルロン酸類似多糖の開発

糖鎖工学
高分子化学

東京工業大学生命理工学部助教授

JB-93-01

ペプチドシナージストによるビタミンＥの抗酸化能の向上−ヒト血清アルブミン由来のペプチドシナー
ジストの開発−脂質生化学

水産大学校講師

食品化学

幡JB-93-02

層状鉱物を用いたホスト−ゲスト反応による有機色

薬剤学

無機材料化学

藤 井
大
金
畑

ま き 子

木
子
中
手

和
克

一

英

雄

早稲田大学理工学部助教授

粘土科学

菅

ハーダー腺の分泌するアルキルジアシルグリセロー

生化学

東京大学医学部教授

ルの物性解明とその素材としての応用開発

脂質生化学

脊

JA-94-02

植物組織培養法を用いたクチナシ植物からの橙黄色
色素Crocin及び青色色素イリドイド配糖体の生成に関する研究

植物細胞工学

JA-94-04

植物培養細胞・組織による化粧品素材としての活性成分の生産と育種に関する研究

JA-94-07

遺伝子工学的手法を用いた必須脂肪酸γ−リノレン酸の高等植物における多量生産

JA-94-10遠赤外線の水の構造と物性に及ぼす影響及び遠赤水の保湿効果に関する研究

JB-94-05

弾 性 線 維 蛋 白 質 エ ラ ス チ ン の 自 己 組 織 化 集 合 体の 構
造、物性、機能に関する研究

物理化学
生体物性学

九州大学理学部助手

JB-94-06

バ イ オ シ グ ナ ル 分 子 を 固 定 化 し た 細 胞 成 長 促 進タ ン
パク質ハイブリッド材料の合成

生体材料化学
高分子化学

京都大学工学部助手

JA-95-01

材料表面−生体分子間相互作用の直接解析に基づく生体適合性の発現機構の解明

高分子化学− 139 −

原
山

義
洋

之
右

東京理科大学総合研究所助教授

生田 安喜良九州大学薬学部教授
生薬学
植物細胞・組織培養
正 山 征
植物生理学
植物細胞工学美研

素のカプセル化

JA-94-01

夫

洋

九州大学理学部助教授

射

場

厚

静岡県立大学薬学部助教授
物理化学（薬学・医学系）
片 山 誠 二

甲斐原
伊

藤

梢
嘉

浩

九州大学工学部助教授

高

原

淳

管理番号

研

究

課

題

分

野

JA-95-06

生体膜構造をもつ高分子中の水の構造解析と生体反応の解明に関する研究

高分子化学
生体材料学

JA-95-07

オリゴ糖による皮膚の耐乾燥保護の分子メカニズムに関する基礎的研究

生体分子工学

JA-95-10

両親媒性分子が構築する超分子の構造と機能性に関する研究

超分子物性化学
高分子物性

JB-95-02

光学活性化合物合成を目的とする新規不斉触媒及び新規不斉触媒サイクルの開発研究

有機合成化学

単分散無機顔料粒子のモルフォルジー制御とそのキ

コロイド化学

JA-96-02

ャラクタリゼイション

JA-96-05

合成糖脂質の超分子集合体に関する研究

JA-96-07

高分子経皮吸収促進剤の開発と応用研究

JA-96-08

界面化学
高分子化学
高分子物性
高分子化学
製剤学

新発見の糊代を持ったタンパク質の基礎と応用（タンパク質接着能を有する化粧品素材の開発）

生物化学

代

表

研

究

者

東京医科歯科大学
医用器材研究所助教授

石

原

一

彦

東京工業大学生命理工学部教授

井

上

義

夫

名古屋大学理学部助教授

今栄 東洋子早稲田大学理工学部助教授

中

田

雅

久

大阪教育大学教育学部助教授

神

鳥

和

彦

早稲田大学理工学部助教授

武

岡

真

司

相模中央化学研究所主任研究員

長

瀬

裕

東京工業大学生命理工学部教授

広

瀬

茂

生物材料化学
応用生物化学

新潟大学工学部教授

生薬学

北海道大学薬学部教授

久JB-96-02

食用乳酸菌による化粧品素材としての機能性多糖の生産とその改質

JB-96-03

メラニン生合成阻害作用を示す海洋天然物の探索

JA-97-01

微粒子酸化チタン上に形成された多鎖型界面活性剤
吸着層への紫外線吸収剤の吸着可溶化

JA-97-02

新規な機能を有するコラーゲンの創製

JA-97-03

脂質エマルション表面単分子膜とリポソーム表面２分子膜の示す顕著なバイオ機能の差異

界面化学
製剤物理化学

京都大学大学院薬学研究科教授

JB-97-03

植物由来環状ペプチド類のチロシナーゼ阻害活性に
関する研究

生薬
天然物化学

東京薬科大学薬学部助教授

天然物化学
コロイド
界面化学

谷
小

口
林

正
淳

之
一

東京理科大学理学部教授

江

角

邦

男

生物化学
東京工業大学生命理工学部助教授
分子生物学
斎 藤 佑 尚バイオテクノロジー− 140 −

半
竹

田
谷

哲
孝

郎
一

研究助成課題一覧

管理番号

研

究

課

題

分

野

代

表

研

究

者

静岡県立大学経営情報学部助教授

JB-97-07

逆ミセルを用いた水の構造化とその機能性に関する研究

JA-98-03

古細菌由来のエーテル型リン脂質の物性と機能に関する基礎的な研究

生物有機化学

JA-98-05

森林生物資源からの育毛活性化成分の探索

森林生物化学
天然物化学

九州大学農学部助教授

JB-98-01

動的光散乱法を用いた合成および天然高分子のゲル化機構の多面的解析

高分子物性
化学物理

京都工芸繊維大学繊維学部教授

JB-98-07

化粧品による皮膚かぶれを防ぐ菌類成分の探索

コロイド界面化学

島綾子

東京工業大学大学院
理工学研究科助教授

江

口

近藤

薬理活性天然物化 千葉大学薬学部助教授
学
藤 本 治

宏

遺伝子の増殖を制御する人工の脂質膜の開発

JB-98-13

発光、電子分光スペクトルによる酸化亜鉛中の表面・欠陥の状態解析と発光特性制御

JB-98-14

含フッ素非対称置換トレハロース誘導体の合成と皮膚に対する保湿性と親和性の検討

糖質生化学
有機合成化学

JA-99-01

匂いの感性計測を行うセンサーシステムの開発

感性工学
センサー工学

JB-99-01

新規化粧品素材としての植物由来クロロゲン酸代謝産物の配糖体合成と美白効果ならびに感作性の検討

有機合成化学

JB-99-03

分散安定性に優れたサーファクタントフリーエマル
ションの調製法の確立とその凝集・合一過程の解明

界面化学
コロイド化学
物理化学

JB-99-09

化粧品素材としての含硫化合物の生産に関する研究

応用生物化学

JB-99-14

分子量および官能基を制御した新規キトサン系界面活性剤の機能化に関する研究

糖鎖工学
応用界面化学
生物化学工学

山

隆一郎
弘

生物化学
脂質化学
界面化学

柴

正

充

JB-98-11− 141 −

五

九州大学有機化学
基礎研究センター助教授

石

川

雄

一

酸化物半導体物性 東京工業大学工学部助手
粉体の光学的性

大

橋

直

樹

北里大学看護学部助教授

森

島

直

彦

九州大学大学院
システム情報科学研究科教授

都

甲

潔

近畿大学工学部教授

野

村

正

人

東京理科大学理工学部教授

阿

部

正

彦

早稲田大学理工学部教授

木

野

邦

器

東京工業大学大学院
理工学研究科教授

梶

内

俊

夫

研究助成課題一覧

２

生体作用、安全性に関する分野
管理番号

研

究

課

題

分

野

J 90-01

染毛剤成分の代謝に関する研究

薬物代謝J 90-02

ドレイズ試験代替法の開発−ヒト細胞、昆虫細胞を用いた高感度迅速試験法の開発研究−

組織培養学

J 90-05

胆汁酸生合成のメカニズムに関する研究

生物有機化学J 90-08

皮膚の老化に伴うエラスチン遺伝子発現の動態

皮膚科学

J 90-09

Werner症候群患者皮膚由来培養線維芽細胞のサイト
カイン細胞成長因子に対する応答性

皮膚科学

J 90-10

光化学反応によるフリーラジカルの産生と表皮培養細胞に対する影響

医科学
生化学

J 90-11色素性皮膚病変に対するレーザー療法の研究

皮膚科学

J 90-12

表皮糖脂質の生化学的、形態学的並びに臨床的研究（エピデルモシド）

皮膚科学
生化学

J 90-13

生体の酸化的障害に対する防御機構の生化学的研究−ビタミンＥの活性発現機構の解析−

生化学

J 90-14

皮膚生理機能賦活物質の経皮吸収に対する評価解析
理論の確立

薬剤学

J 91-01

培養表皮細胞及び線維芽細胞におけるグリコサミノ
グリカン及びコラーゲンの代謝生化学

J 91-03

活性酸素、フリーラジカルによる生体膜障害の防止に関する研究有機生化学

J 91-04

パッチテスト結果のコンピューター処理システムの
開発

皮膚科学
接触皮膚炎

J 91-07

皮膚過敏症に対するマスト細胞の役割−マスト細胞
欠損動物を用いた検定法の開発−

実験病理学− 142 −

代

表

研

究

者

食品薬品安全センター秦野研究所

中尾 美津男理化学研究所副主任研究員

大

野

忠

夫

東京工業大学理学部助教授

藤

本

善

徳

慶應義塾大学医学部講師

多

島

新

吾

横浜市立大学医学部助手

佐々木 哲雄東京大学医科学研究所教授

金ヶ士朗

帝京大学医学部助教授

渡

辺

晋

一

山口労災病院皮膚科部長

浜中 すみ子東京大学薬学部助手

新

井

洋

由

京都大学薬学部教授

瀬仁

東京薬科大学教授

森

陽

東京大学

先端科学技術研究センター教授

二

木

鋭

雄

名古屋大学
医学部附属病院分院皮膚科長

早

川

律

子

大阪大学医学部教授

北

村

幸

彦

研究助成課題一覧

管理番号

研

究

課

題

分

J 91-09

マウス悪性黒色腫を用いたチロシナーゼ抑制因子の精製と応用

J 91-12

光アレルギーのスクリーニング及びサンスクリーン

接触光過敏症のマウスモデルを用いた化粧品によるの効果の評価J 91-14

メラニン生合成の調節

J 91-16胞の増殖とコラーゲン代謝調節機構の分子細胞生物学的研究

J 91-18

J 91-19

J 91-22

J 92-02

人工皮膚を用いた皮膚の形成機構及び皮膚の反応性試験に関する研究
サンスクリーンの紫外線性表皮障害に対する防御作用の免疫生物学的研究

研

究

光生物学
皮膚免疫

浜松医科大学教授

分子細胞生物学
医化学

細胞生物学

皮膚科学

老年病学
動脈硬化

フリーラジカルとポルフィリン代謝に関連する皮膚環境科学の老化機構解明に関する研究

毒性学

襲吸収計測法の開発

表

北里大学医学部講師

ダイレクトスキンセンサーを用いて測定した皮溝と加齢の関係

光熱変換分光法による薬物の組織及び細胞への非侵

代

皮膚科学
メラニン色素分子生物学

ビタミンＣと上皮成長因子によるヒト皮膚線維芽細

J 91-17野

分析化学

亀山 孝一郎
滝

川

雅

柴

原

茂

樹

東京医科歯科大学助手

畑隆一郎

広島大学理学部教授

吉

里

勝

利

京都大学医学部講師

古

川

福

実

慶應義塾大学医学部助手

本

間

聡

起

国立公衆衛生院
労働衛生学部室長市

川勇

東京大学工学部教授

澤田嗣

アスパラギン酸プロテアーゼ類の蛋白工学的機能改変によるケラチナーゼの開発

蛋白工学
生化学

東京大学理学部助手

J 92-06

神経ペプチドによる皮膚炎症反応の成立機序とその
特異的制御

内科学
アレルギー学

千葉大学医学部助手

J 92-07

皮膚の機能と脂質代謝に関する基礎的研究

J 92-08

転移因子を用いたアントシアニン色素生合成遺伝子とその発現調節因子遺伝子の解析

分子遺伝学
分子生物学

J 92-09

モノクローナル抗体を用いた紫外線誘発DNA損傷の定量とメラニン色素のサンスクリーン効果の実験的
証明

皮膚科学

− 143 −

浩

東北大学医学部教授

J 92-05

生化学

者

井
岩

上
本

英
逸

郎
史
夫

新潟大学医学部教授

小

野

輝

夫

東京理科大学基礎工学部教授

飯

田

滋

奈良県立医科大学大学院生

小

林

信

彦

管理番号

研

究

課

題

分

野

J 92-10

皮膚の老化における染色体構造の変化と遺伝子修復機構に関する研究

細胞生理学

J 92-11

アスコルビン酸２−グルコシドの生物学的有用性研
究−経皮吸収によるビタミンＣ活性発現の評価−

免疫薬理学

JA-93-01

還元型ネオプテリン（NPH−４）の紫外線照射皮膚障害に対する効果

JA-93-02

JA-93-03

JA-93-07

JA-93-09

JB-93-04

放射化学
薬理学

代

表

研

究

理化学研究所主任研究員

花

岡

文

山

本

格

東京理科大学
生命科学研究所講師

小

化粧品による光老化の抗酸化的制御に関する細胞生
物学的及び生化学的研究

皮膚科学
紫外線生物学

群馬大学医学部教授

宮

島
地

周
良

太陽光紫外線でヒトDNA中に誘発される損傷とその放射線生物学

金沢大学薬学部教授

修復に関する研究

細胞生物学

二 階 堂

色素化合物の光照射下での反応の解析

生物物理化学
光化学治療
光増感化学

しみ

（肝斑など）の発症機構とその増悪因子に関する研究
尋常性瘡の発症機序の解明のための皮膚の保湿機

能と脂質代謝に関する研究

皮膚科学

皮膚科学

二
樹
修

東京工業大学生命理工学部教授

大

倉

一

郎

東北大学医学部講師

富田靖

新潟大学医学部助教授

山

本

綾

JB-93-05

哺乳類皮膚細胞のアポトーシスと細胞接着をつかさどるセラミドの研究

糖生物学
発生生物学
生化学

JB-93-06

不飽和脂肪酸とその過酸化生成物の皮膚角質層への作用に関する研究

製剤学

JA-94-03

表皮ケラチノサイトにおけるヒト細胞老化因子の研究皮膚科学

JA-94-06

皮膚生理機能賦活物質の合理的吸収促進法の開発

薬剤学

JA-94-08

リポソーム封入薬剤の皮膚吸収過程の解析と皮膚内ラジカル消去への応用

生体物理化学
生体医用化学

九州大学薬学部教授

JA-94-09

表皮細胞の細胞接着と角化制御に関するシグナル伝
達

皮膚科学
細胞生物学

岐阜大学医学部教授− 144 −雄

岡山大学薬学部教授

生化学

いわゆる

者

子

九州大学理学部助教授

野

村

一

也

大阪薬科大学薬学部助教授

森

本

一

洋

大阪大学医学部助教授

橋

本

公

二

京都大学薬学部教授

橋
内
北

田
海
島

充
英
康

雄
雄

研究助成課題一覧

管理番号

研

究

課

題

分

野

代

表

研

究

東京工業大学
生命理工学部助教授

JA-94-11

微生物に由来する多糖分解酵素のコスメトロジーへ
の応用

遺伝子工学
生化学

JB-94-01

皮膚発現型レチノイン酸受容体のドミナントネガティブ・トランスジェニックマウスを用いた皮膚の成熟過程の検討

皮膚科学
遺伝子工学

京都大学医学部助手

JB-94-02

化粧が高温環境下の発汗反応及び選択的脳冷却機構に及ぼす影響

環境生理学
温熱生理学

金沢大学医学部助手

JB-94-03

サンスクリーン剤の光ハプテンとしての性格

皮膚科学

JA-95-02

脂質皮膚モデルを利用した化粧品及び水の浸透と安全性に関する基礎的研究

生物物理化学
高分子物性

JA-95-03

小分子化学物質によるアトピー性皮膚炎の発症と予防についての基礎研究

免疫薬理学

JA-95-04

ヒト皮膚移植SCIDマウスを用いた新しいコスメトロ
ジー研究

実験病理学

JA-95-08

接触皮膚炎におけるマスト細胞活性化反応の解析

生化学

JA-95-09

放射線照射あるいは制癌剤投与による脱毛の抑制

生化学
放射線生物学

星薬科大学講師

JB-95-01

皮膚表皮細胞におけるリピドバイオファクターの機
能発現機構

生化学
分子生物学

新潟大学医学部助教授

炎症後色素沈着におけるエイコサノイドによるメラ皮膚科学

京都大学医学部助教授

ノサイト活性化機構の解明

生化学

井九州大学理学部教授

JB-95-03

JB-95-04

細胞内小器官ペルオキシソーム：エーテルリン脂質の生合成と酸素ラジカルスカベンジャー機能及び欠
損症

細胞生化学
分子生物学

JB-95-06

多成分油性皮膚浸透促進システムの有効性及び作用機構に関する研究

製剤学

化粧用生理活性物質の皮膚透過と皮内貯留性及びヒ

生物薬剤学

ト皮膚と動物並びに培養皮膚との比較

皮膚科学

JA-96-01− 145 −

者

中
田
田

村
中

聡
俊

辺

宏
実

浜松医科大学医学部講師

戸

倉

新

樹

東京工業大学工学部助教授

谷

岡

明

彦

博

弌

岐阜薬科大学教授

永井

大阪大学医学部教授

野

村

大

成

昭和大学薬学部教授

工
太
藤

藤

藤
田

一

郎

節

子

井
階
木

博
幸
幸

一
夫

城西大学薬学部助教授

杉

林

堅

次

近畿大学薬学部教授

小木曽 太郎

管理番号

研

究

課

題

分

野

代

表

研

究

者

JA-96-03

酸化ストレスにより生体膜に生成する酸化型リン脂質の代謝機構の解明

生化学
薬学

北里大学薬学部教授

JA-96-06

HGFによる皮膚の再生促進と老化防止の基礎的研究

生化学
細胞生物学

大阪大学医学部助教授

JA-96-09

in vitroヒト樹状細胞培養系を用いた化学物質の感作性試験の可能性についての基礎的検討

皮膚科学
皮膚免疫

東北大学医学部講師

JA-96-10

ケラチノサイトの発現するエラスチンと皮膚老化の関連について

皮膚科学
生化学
分子生物学

防衛医科大学校助教授

JB-96-05

免疫不全マウス再構成皮膚における培養毛乳頭細胞による毛包形成の誘導と関連因子の検討

皮膚科学

JB-96-06

細胞増殖因子および接着分子による皮膚硬化制御に関する分子生物学的研究

皮膚科学
膠原病学

獨協医科大学助教授

JA-97-04

男性ホルモンによる毛の発育制御機序の解析

皮膚科学
内分泌学

大阪大学医学部助教授

JA-97-05

新規蛍光プローブを用いた一酸化窒素（NO）の皮膚における作用解析

有機化学
分析化学
細胞生物学

東京大学大学院薬学系研究科助手

JA-97-06

生体計測工学に基づいた非侵襲的な皮膚の性状の測
定法の開発

皮膚科学
化粧品科学
生体工学
医用工学

JA-97-07

老化による皮膚色素沈着の画像定量自動解析システ
ム確立のための基礎研究

皮膚科学

JB-97-01

接触過敏症の皮膚浸潤細胞に特異的に発現している遺伝子の解析

免疫学
分子生物学

JB-97-02

ノックアウトマウスをもちいたcell envelopeのバリア
ー機能解析

分子生物学
発生工学
遺伝子工学
皮膚科学

JB-97-04

JB-97-05

紫外線吸収効果をもつ酸化チタンの光触媒作用と生体適合性
日光老化について−とくに日光弾性線維症の発症機構ならびにUVＳ症候群の病態に関する研究−− 146 −

生体材料
皮膚科学
生化学
分子生物学

中
松
相
多

川
本
場
島

靖
邦
節
新

一
夫
也
吾

聖マリアンナ医科大学助教授

窪
山
板
菊

田
蔭

泰
明

見
地

夫
生
智

和

也

東北大学医学部教授

田

上

八

朗

慶應義塾大学医学部専任講師

田

中

勝

東邦大学理学部教授

小

林

芳

郎

京都府立医科大学医学部講師

山

西

清

文

東京理科大学基礎工学部助教授

鈴

木

高

広

熊本大学医学部教授

小

野

友

道

研究助成課題一覧

管理番号

研

究

課

題

分

野

代

表

研

究

JB-97-06

眼粘膜への障害を指標とした化粧品素材の安全性評
価 の た め の 基 礎 的 検 討 − 眼 内 動 態 の 定 量 的評 価 法 の確立

薬剤学

JB-97-08

紫外線誘発DNA損傷および修復酵素の細胞内分布状
態の三次元的表示

放射線生物学JB-97-10

皮膚器官培養系を用いた化学物質の刺激性、抗原性
の検討

免疫学
アレルギー
分子生物学

JB-97-11

皮膚の老化に伴うテロメア短縮化とフリーラジカル
障害に対する、細胞内アスコルビン酸のエンリッチ
ング化による防御効果

皮膚生化学
細胞薬理学

JA-98-01

紫外線ならびに放射線により皮膚で惹起されるラジカル反応の無侵襲測定と皮膚障害予防を目的とした
抗酸化剤評価への応用

生体物理化学

JA-98-02

ヒト角層細胞のcell envelopeの発生とその機能障害を来す病態の解析皮膚科学

JA-98-04

微小透析法を用いた皮膚内の化粧品素材動態および生体成分動態の系統的解析法の確立

臨床薬剤学

JB-98-02

接触性皮膚炎の研究：皮膚刺激とマクロファージ「細胞交通」の関与

免疫学
アレルギー学JB-98-03

老化抑制遺伝子klothoの結合織細胞老化における病態生理学的意義の解明と治療法開発への応用

老化学

JB-98-04

サンスクリーンの皮膚悪性黒色腫発症予防効果の解
析

免疫学
皮膚科学

名古屋大学医学部助手

アスコルビン酸膜透過促進キャリアーの開発と機構

薬品物理化学

東北大学薬学部講師

探求

生物有機化学鈴

表皮有棘細胞に特異的な遺伝子組み替えを用いた、ダメージスキンの修復機序の研究

皮膚科学
分子生物学
細胞生物学

JB-98-05

JB-98-06

JB-98-08

JB-98-09

太陽光紫外線変異原性の作用スペクトラムとサンス
クリーンの効果ヒト毛細胞特異的ペプチジルアルギニンデイミナーゼのcDNAクローニングと毛髪新生における生理機能の解析− 147 −

変異機構学
皮膚科学
生化学
分子生物学

者

長崎大学薬学部教授

中

村

純

三

奈良県立医科大学助教授

森

俊

雄

東京医科歯科大学医学部助教授

横

関

博

雄

広島県立大学大学院
生物生産システム研究科教授

三

羽

信比古

放射線医学総合研究所総合研究官

小

沢

俊

彦

慶應義塾大学医学部助手

秋

山

真

志

長崎大学医学部附属病院助教授

佐 々 木

均

静岡県立大学薬学部教授

今

井

康

之

群馬大学医学部教授

永
加

井
藤

良
昌

木

三
志
巌

京都大学大学院医学研究科助手

高

橋

健

造

岡山大学薬学部助教授

根

岸

友

惠

帝京大学
医学部附属市原病院助教授

川

田

暁

管理番号

研

究

課

題

分

野

代

表

研

究

者

神戸大学医学部附属病院講師

JB-98-12

美白剤の紫外線色素沈着抑制機構とその安全性に関
する研究

皮膚科学

JA-99-02

ヒト皮膚線維芽細胞における脂肪酸、コレステロー
ル代謝調節機構

分子細胞生物学
生化学

JA-99-03

高発現型メラニン色素産生遺伝子のコスメトロジー
への応用

遺伝子治療学
遺伝子工学

広島大学医学部教授

JB-99-02

ヒト脂腺細胞に代るハムスター脂腺細胞を用いた皮脂代謝に関する基盤的研究

生化学
分子生物学

東京薬科大学薬学部講師

JB-99-04

紫外線照射で生じるDNA損傷部位に特異的に結合す
るタン白 DDBp 48 の発現調節

細胞生理学

JB-99-05

サイトカインノックアウトマウスにおける免疫反応とストレス応答を指標とする皮膚機能の解析

毒性生化学
皮膚生化学

JB-99-06

糖転移酵素の関与するメラニン産生制御の解析

生化学
糖鎖生物学

JB-99-07

白血球分画が皮膚の健康状態と関連するメカニズム

免疫学
皮膚科学

JB-99-08

UVAによる酸化的遺伝子損傷の細胞内修復機構

JB-99-10

JB-99-11

JB-99-13太陽紫外線による細胞のアポトーシスとサンスクリ
ーンの効果

生化学
放射線生物学

放射線生物学

ゼラチンによるアレルギー反応のエピトープ解析と安全なゼラチンの開発

細胞外マトリックスの分子医化学

皮膚色素性病変の新しい診断法の開発〜デジタルマ
イクロスコープと病理組織三次元再構築法を用いた皮膚科学

早期メラノーマ診断〜− 148 −

船

坂

陽

子

大阪大学大学院
薬学研究科助教授

佐
杉
佐

藤
山

隆一郎
政

藤

則
隆

熊本大学医学部附属
遺伝発生医学研究施設教授

山

泉

克

昭和大学薬学部教授

吉

田

武

美

大阪大学大学院
医学系研究科教授

谷

口

直

之

新潟大学医学部教授

安保徹

広島大学大学院
理学研究科教授

井出博

放射線医学総合研究所主任研究官

古

澤

佳

也

東京医科歯科大学
難治疾患研究所助手

堀久枝

北海道大学医学部助手

松

村

哲

理

研究助成課題一覧

研究助成課題一覧

３

精神、文化に関する分野
管理番号

研

究

課

題

分

野

表

研

究

者

早稲田大学人間科学部教授

J 90-04

化粧が意識性に及ぼす効果の研究

J 91-13

香料に関する定量的解析

感覚生理学

J 91-15

アルツハイマー型老年痴呆症者と、いわゆる ぼけ症状を呈する人々への化粧による情動活性化の研究

感情心理学
臨床心理学

同志社大学文学部教授

J 91-21「色白」の嗜好構造に関する一考察

心理学
色彩心理学
造形心理学

早稲田大学
人間総合研究センター

Js-92-01

病院看護における化粧に関する研究

基礎看護学

Js-92-02

高齢者のおしゃれ行動とその評価に関する研究

人間行動科学

JA-93-04

色彩の心理学的意味空間の研究

計量心理学
認知心理学
行動計量学

JB-93-03

化粧の個人的効果と対人的効果に関する実証的研究

社会心理学

JA-94-05

化粧と痴呆老人に関する基礎的研究

脳神経外科学
心理学

産業医科大学名誉教授

JB-94-04

対人魅力の形成にかかわる顔の構造的特徴と化粧行動の影響の研究

社会心理学
対人魅力

北星学園大学文学部教授

化粧皿を通じた古代ヘレニズム世界における化粧文

装飾文化

神戸芸術工科大学助教授

化の研究

デザイン

JA-95-05

JB-95-05

心理学

代

化粧品の表示に関する研究−ことに警告表現につい
て−

社会心理学

JA-96-04

化粧品の香り表現に関する研究

心理学
官能評価

JB-96-04

高齢女性における情動活性化の試み：リハビリテー
ション・プログラムへの適用可能性の検討

情動心理学
発達心理学

− 149 −

春木豊

北海道大学薬学部教授

栗

原

浜

齋

堅

三

治 世 子

藤

美

穂

埼玉県立衛生短期大学教授

大河原

千鶴子

北海道教育大学教育学部助教授

藤

森

立

男

金沢大学文学部助教授

岡

本

安

晴

福島大学教育学部助教授

飛
松
大
服

田
岡
坊
部

操
成
郁
等

明
夫
作

筑波大学社会工学系講師

吉

川

肇

子

東京学芸大学教育学部助教授

神

宮

英

夫

同志社大学
文学部学生（博士課程）

伊

波

和

恵

管理番号

JB-97-09

研 究 課 題分

高齢者の被服行動の変容が、高齢者の自尊感情及び日常生活行動に与える影響野

代 表 研 究 者

行動学

京都大学教育学部助教授

老年心理学
臨床心理学
感情心理学

JB-97-12

健康な笑いづくりの方法について

JB-98-10

化粧とよそおいにおける非対称性−アシンメトリー流行の可能性−

造形心理学
社会心理学

JB-98-15

空間演出における環境芳香の与える心理的影響に関
する研究

人間工学

JB-99-12口唇口蓋裂患者の顔面の非対称感の改善に対する化
粧の効果

健康心理学

− 150 −

吉 川 左紀子
福岡大学人文学部教授

下 保 幸
神戸松蔭女子学院大学文学部教授

藤 本 浩 一早稲田大学人間科学部助手

河 合 隆 史顎顔面口腔外科学 大阪大学歯学部助手
心理学
飯 田 征

二

＊本財団についてのお問い合わせは下記にお願いいたします。

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電 話 東京 03（3564）6731

コスメトロジー研究報告

Vol.８／2000

非売品

2000年９月１日発行

編集責任者
発
行

制

作

印

刷

Ⓒ2000

宮澤 香
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