微小透析法を用いた皮膚内の化粧品素材動態および生体成分動態の系統的解析法の確立
長崎大学

佐 々 木

医学部附属病院薬剤部

均、中

嶋

幹

郎

Microdialysis is a relatively new technique for sampling tissue extracellular fluid that is gaining popularity inkinetic and dynamic studies of drugs in experimental animals. Intradermal microdialysis permits us to measure
directly the concentration in dermis of test substances applied to the skin without loss of fluid volume. In thisstudy, we have attempted to use this technique for characterizing the kinetic behavior in dermis of cosmetic
compounds applied to living skin and evaluating the effect of cosmetic compounds permeated through the skin on
biological elements in the surrounding dermal tissue of the rats. In general, several cosmetic compounds showing
pharmacological activity were formulated in commercially provided cosmetics with various additives. It is importantto evaluate the adequacy of intradermal microdialysis to quantify the interest cosmetic compound in cutaneous
tissue following the topical application of its commercial product including various the other cosmetic compounds.
Therefore, first we used Sandimmun that is 10% oily pharmaceutical preparation of cyclosporin (CYA), a low skinpermeable peptide, as the model product reflecting commercial cosmetics and measured the dermal concentrationof CYA applied topically alone or with absorption enhancers. As the results, intradermal microdialysis enabled
us to monitor cutaneous CYA quantitatively in proportion to its applied concentration to the skin. In addition, we
found suitability of glycerin as an enhancer in the cutaneous penetration of CYA from its commercial product.
Subsequently, the effect of barrier perturbation by delipidization on the cutaneous penetration of salicylic acid (SA)and the effect of SA permeated through the skin on the dermal endogenous homovanillic acid (HVA) were examined.
SA was chosen as the model cosmetic compound because it is extensively used in the commercial cosmetics. As theresults, enhanced cutaneous penetration of SA was correlated with the increase in barrier perturbation activity bydelipidization. However, the dermal endogenous HVA levels were virtually unaffected by the increase in cutaneous
penetration of SA in the various delipidized skins. A correlation between the dermal endogenous HVA levels andthe cutaneous concentrations of SA was not found in the barrier-damaged skins.
This technique must become an available tool for kinetic analysis in dermis of cosmetic compounds and evaluationof their effects on biological elements in the surrounding dermal tissue.

１．緒

しかし、吸収促進剤の応用には、それら自身が皮膚内に浸言

透し、刺激性や毒性を発現する可能性も懸念される。この

近年、美白剤など様々な新しい化粧品素材が開発されてように、市販の化粧品には様々な薬用成分や添加剤が配合いるが、市販の化粧品には、香料や色素のほか、薬理活性されているにもかかわらず、皮膚内における化粧品成分のを示す化合物が保湿剤や血行促進剤として配合され、経皮動態や相互作用、化粧品使用時における皮膚内生体成分の的な適用が行われている。しかし、皮膚表面の最外層に位変動に関する情報は極めて少ない。従来、化粧品成分の皮置する角質層が、外部から皮膚内への物質の透過に対す

膚内濃度や生体成分への影響などに関しては、動物レベル

るバリアー機能として働いているため、経皮適用された物

で放射性物質を用いた研究が行われてきた。それらは被験

質が皮膚内へ浸透するには、著しい制限が加えられてい物質を経皮適用した後、動物を屠殺して皮膚組織を採取し、る。この透過障壁においては、角質細胞間隙脂質が重要な

皮膚内濃度を測定する方法が主なもので、通常、１試料に因子であることが明らかとなってきた１）。そこで、市販の１個体を必要とするため、実験には多くの動物が必要とさ化粧品に含有されている薬用成分の経皮吸収性を向上される。このことがこの分野の系統的な研究の妨げとなってせる試みとして、角質層と親和性の高い油性基剤の利用

２）

きた。
微小透析法は、血管または任意の組織中に、先端に半透や、従来、薬物の皮膚透過性改善の目的で利用されてきた
経皮吸収促進剤の化粧品への応用

３）等が報告されている。

膜のついた小型の透析プローブを挿入することにより、非侵襲的に近い状態で、血液や組織の細胞外液中に存在する

Application of Microdialysis to In Vivo
Kinetic Analysis in Dermis of Cosmetic
Compounds and Biological Elements

グ法である（Fig. １）４）。
本法は、主として神経薬理学研究の領域で、脳内の薬物

Hitoshi Sasaki, Mikiro Nakashima

濃度や内因性神経伝達物質の検出に用いられてきた５）。しDepartment of Hospital Pharmacy,
Nagasaki University School of Medicine

かし、実験動物を屠殺せずに１個体から多数の試料を採取＊＊

物質の濃度を連続測定できる独創的な in vivo サンプリン

することが可能で、被験物質の非結合型濃度を直接測定できるといった優れた利点を有しているため、近年では、様々− 69 −

動態との関連性の解析を試みた。

２．実
２. １

験

試料ならびに試薬

市販医療用製剤としては、主成分であるシクロスポリン（CYA）に種々の添加剤を加え、エタノールとオリーブ油に混合し 10％油性溶液とした
Sandoz Pharma 製のサンディミュン
内用液を用い、オリーブ油で希釈することにより CYA の 0 . 5、２および８％濃度油性溶液を調製した。化粧品に適用可能な吸収促進剤の候補として、広く化粧品に用いられているグリ
Fig.1 Schmatic representation of solute recovery in vivo and in vitro during microdi- セリンと、経鼻吸収型カルシトニン製
alysis. Cited from reference 4.
剤に吸収促進剤として添加されている

ピロチオデカン（久光製薬より供与）な組織中における薬物濃度の測定に用いられるようになっ４）

12、13）を選び、それらを種々の濃度（１、３、６、10 およてきた 。著者らもこれまで微小透析法を用いて、各種薬

び 20％）で加えた２％ CYA 油性溶液を調製した。化粧品

物動態の詳細な解析に成功している６〜 11）。経皮吸収動態

成分のモデルである SA はナカライテスクの特級試薬を用の解析においては、皮膚内から抜去可能なガイドカニュー

い、皮膚に適用する際にはエタノールに混合し５％ SA 溶

レを利用した透析プローブのみの皮膚内挿入法を世界に先液とした。角質細胞間隙脂質の除去溶媒として用いたアセ

駆けて試み、ラットへ経皮適用した抗炎症薬の皮膚組織中

トン、ジエチルエーテル、クロロホルムならびにメタノー濃度の連続測定に、本法が適用できることを明らかにした

ルは全てナカライテスクの特級試薬を用いた。CYA の蛍

11）。組織中物質濃度の in vivo 定量法として本法を適用す

光偏光免疫測定用試薬キットはダイナボットから購入しる際には、被験物質の組織細胞外液中からプローブ灌流液

た。カテコールアミン類（ドーパミン塩酸塩、ノルエピネ

中への回収率（透過率）を厳密に算出することが必要であ

フリン塩酸塩、DOPAC、ホモバニリン酸；HVA）は全てる。しかし、その回収率の正確な測定は難しく、本実験法

Sigma の特級試薬を用いた。オクタンスルホン酸ナトリウ

は、組織における被験物質動態の相対的変化を検討する方

ムは Aldrich の特級試薬を用いた。過塩素酸、塩酸、リン法としては極めて高い有用性を示すが、絶対量を検討する

酸一カリウム、リン酸ならびにエチレンアミン四酢酸二ナ

方法としては限界があるとも考えられる。

トリウム（EDTA・2 Na）は全て和光純薬の特級試薬を用

今回著者らは、様々な薬用成分を含有する市販化粧品をいた。その他の試薬についても全て特級品を使用した。

皮膚表面へ適用した際の被験成分の皮膚内動態や他成分との相互作用、皮膚内生体成分への影響等を in vivo の状態

２. ２

微小透析装置で定量的に評価する簡便な実験系として、この微小透析法

Carnegie Medicin 製の CMA/ 100 微量注入ポンプにを応用することを考案した。本研究では、まず最初に、市CMA/ 10 透析プローブ（透析膜の長さ 10 mm）を接続し、販化粧品のモデルとして、被験化合物に加えて他の化合物

リンゲル液を 2 . 5 µL/min の微小速度で灌流した。

が添加剤として配合されている医療用油性製剤を選び、ラット皮膚表面へ製剤適用後の被験化合物の経皮吸収動態を

２. ３

動物実験

経皮微小透析法により種々検討し、市販化粧品を皮膚適用

Wistar 系雄性ラット（体重 250 〜 270 g）をウレタンした際の皮膚内における特定成分濃度定量法としての本法

1 . 5 g/kg の腹腔内投与による麻酔下、腹部皮毛を電気バリの有用性について評価した。さらに、化粧品成分として繁カン（動物用 900 型、大東電気工業）で除毛した。透析プ用されているサリチル酸（SA）をモデルに選び、ラット

ローブを皮膚から抜去可能な自製の経皮用ガイドカニュー

皮膚表面へ SA を適用した際の SA の経皮吸収速度に及ぼレ（ポリエチレン製）を用いてラットの皮膚内へ挿入し、す角質層の脱脂方法の影響と、その時の内因性カテコール

自製のガラスリザーバー（内径 20 mm）をプローブ挿入部

アミン濃度の変動を本法により検討し、物質浸透性が変化

位の皮膚上にアロンアルファＡ（三共）にて固定した 11）。

した皮膚における化粧品成分の吸収動態と皮膚内生体成分

CYA 油性溶液を用いた実験では、ガラスリザーバー固− 70 −

微小透析法を用いた皮膚内の化粧品素材動態および生体成分動態の系統的解析法の確立

定１h 後に種々の CYA 油性溶液２mL をその中に充填し、で pH を 2 . 95 に調整した 0 . 05 M リン酸カリウム緩衝液を適用６h 後まで透析液を１h 毎に皮膚内より回収し、全量移動相とし、室温で、ポンプ流速を 1 . 0 mL/min に設定しを CYA 濃度測定用に供した。

て行った。

SA エタノール溶液を用いた実験では、ガラスリザーバーを固定した後、アセトン、ジエチルエーテルまたはクロ２. ５

速度論的解析

ロホルム / メタノール（２：１）混合液２mL をそれぞれ皮膚内から回収された透析液中における CYA および SA

リザーバー中に加え、１h にわたって角質層の脱脂を行っの累積回収量を時間に対してプロットし、各プロットの直た。コントロールについては生理食塩水を加えた。脱脂溶

線部分の傾きおよび時間軸に対する切片より、透析液中へ媒除去１h 後に５％ SA エタノール溶液２mL をリザーバの CYA および SA の回収速度およびラグタイムを算出しー中に充填し、適用６h 後まで透析液を１h 毎に皮膚内よた。なお、皮膚透析液中での物質の時間変化は皮膚内へのり回収し、100 µL を SA 濃度測定用に、40µL をカテコー

物質の累積吸収量の時間変化と等しいと仮定できるため 15）、

ルアミン測定用に供した。なお、カテコールアミン測定用

上述の回収速度とラグタイムは、CYA および SA のみかの試料には酸化を防ぐ目的で 1 M 過塩素酸 10 µL を加えた。

けの経皮吸収速度と経皮吸収のラグタイムに相当する。

２. ４

２. ６

定量

透 析 液 中 の CYA は、TDX 自 動 測 定 装 置（Abbott
Laboratories）を用いた蛍光偏光免疫測定法により定量した。

統計処理

得られた実験値の有意差の検定は Student の t 検定を使用した。

透析液中の SA は、先に報告した方法 14）を参考にし、得３．結果と考察られた試料にアセトニトリルを等容量加えた混合物を調製した後、高速液体クロマトグラフィー蛍光検出法により定

種々の添加剤が配合されている市販品から調製した量した。高速液体クロマトグラフは LC- 6 A 型ポンプ
（島津）

CYA の油性溶液を、ラット皮膚表面へ適用した後の CYAを用い、RF- 535 型蛍光検出器（島津）を励起波長 300 nm、の経皮吸収動態を経皮微小透析法を用いて種々検討するこ

測定波長 410 nm において用いた。カラムは Cosmosil 5 C 18 -とにより、市販化粧品を皮膚適用した際に皮膚へ吸収さMS（4 . 6 × 150 mm、ナカライテスク）を用いた。溶出は、れた特定成分の定量法としての本法の有用性を評価した。

水─メタノール─酢酸（58：38：4）の混合液を移動相とし、CYA 油性溶液を単独で皮膚適用した際に、経皮微小透析

室温で、ポンプ流速を 1 . 0 mL ／ min に設定して行った。

法により得られた皮膚内 CYA 濃度とその累積量の経時変

透析液中のカテコールアミン類は、高速液体クロマトグ

化を Fig. ２に示す。いずれも適用直後から皮膚内に CYA

ラフィー電気化学検出法により定量した７）。高速液体クロが検出され、その濃度は速やかにプラトーに達した。また、マトグラフは LC- 6 A 型ポンプを用い、L-ECD- 6 A 型電皮膚表面に適用した油性溶液中の CYA 濃度を増加させる

気化学検出器（島津）を設定電位 800 mV において用いた。

と、皮膚内の CYA 濃度も増大した。

カラムは TSK‒GEL ODS‒ 80 TM（4 . 6 × 150 mm、東ソー）

そこで、皮膚内累積量の経時変化から、みかけの経皮吸を用いた。溶出は、1 . 1 mM オクタンスルホン酸ナトリウム、

収速度とラグタイムを算出した結果（Table １）、皮膚表

1 mM EDTA・2 Na および 15％メタノールを含みリン酸面に適用した CYA 濃度の上昇と CYA のみかけの経皮吸

Fig.2 Level A and cumulative amount B profiles of CYA in the skin dialysate after topical application of 0.5％（●）, 2％（▲）
and 8％（■）CYA oily solutions in rats. Data represent the mean±SE of 5 rats.

− 71 −

収速度の増加には良好な正の相関が認められた（Fig. ３）。

する分子量約 1200 の皮膚透過性の極めて低い環状ポリペ

このことより、経皮微小透析法は、皮膚内へ浸透した被験プチドである。Hermann ら 16） は、ヒト摘出皮膚を拡散

物質の吸収量の変化を in vivo の状態で正確にモニターでセル装置に装着し、in vitro で透過性を検討する実験を行きる方法であることが立証された。

い、CYA 自身の皮膚透過性の低さは、アルコール類、非CYA は、11 個のアミノ酸からなる免疫抑制作用を有

プロトン性極性溶媒、Azone など既存の経皮吸収促進剤を併用した場合においても改善されなかったと報告している。一方、Duncan ら 17）および Cole ら 18）は、本研究とTable 1 In vivo skin apparent absorption parameters
for CYA after topical application of CYA oily solutions
in rats.
CYA
concentration（w/v%）
0.5
2.0
8.0

Apparent absorption
rate in skin dialysate（ng/h）
0.85±0.39
2.78±0.89
19.02±2.08

同様、種々の添加剤が配合されている CYA の市販品から試験製剤を試作し、ヒト摘出皮膚を用いた種々の検討を行い、CYA が皮膚透過性を示すことを報告している。しLag time（h）

かし、CYA の皮膚透過性に関して、Duncan ら 17）はアルコール類と Azone の添加により改善されると報告してい0.21±0.14
0.18±0.22
0.06±0.05

るが、Cole ら 18）は吸収促進剤としてアルコール類を添加しても改善されなかったと報告している。これら CYA の
経皮吸収性における研究結果の相違は in vitro での実験条

Values represent the mean±SE of 5 rats.

件の違いに起因するものと考えられる。従来、物質の経皮吸収性を評価する実験法としては、除毛した実験動物の摘出皮膚を拡散セル装置に装着し、in vitro でその透過性を検討する方法が繁用されてきた 19）。しかし、同法は、非生理的条件下での実験法であるため、摘出皮膚間の含水量の違い 20）、や微生物の繁殖 21）などの問題点があり、実際の生体での経皮吸収状態を反映することが難しい。経皮微小透析法による in vivo 経皮吸収実験法においては、皮膚内で微小灌流を行うため水分含量も一定で、生理的条件に近い状態で被験物質の経皮吸収性を検討できる利点がある。
そこで次に、化粧品にも適用可能な吸収促進剤の候補として、実際に化粧品に広く用いられているグリセリンと医療用製剤の添加剤として実用化されているピロチオデカンをFig.3. Correlation between topically applied CYA concentration and in vivo skin apparent absorption rate of CYA.
Data represent the mean±SE of 5 rats.

選び、CYA の経皮吸収性に及ぼす促進効果を経皮微小透析法により測定し、得られた結果を比較した。
２％ CYA 油性溶液の皮膚適用６h 後までの皮膚内 CYA
蓄積量に対する種々の濃度でピロチオデカンまたはグリセ

Fig.4. Ratio of total CYA recovery in the skin dialysate for 6 h after topical application of 2％ CYA oily solutions with pirotiodecane A and glycerin B at various concentrations to that without them in rats. Control value was 16.5±5.1 ng. Data represent
the mean±SE of 3-5 rats.

− 72 −

微小透析法を用いた皮膚内の化粧品素材動態および生体成分動態の系統的解析法の確立

リンを添加した２％ CYA 油性溶液の適用６h 後までの皮溶媒を用いる方法が報告されているが、大きく分類すると、

膚内 CYA 蓄積量の割合を Fig. ４に示す。ピロチオデカン

メタノール、エタノールおよびアセトン等の水と混和性のは、添加濃度が６％以下では経皮吸収性の改善を認めなか

溶媒を使用する方法と、ヘキサン、ジエチルエーテルおよったものを、10％まで上げると CYA の皮膚内への吸収量

びクロロホルム等の非混和性の溶媒を使用する方法であるは著しく増大し、みかけの経皮吸収速度は 4 . 9 倍有意に増22）

大した（Table ２）。しかし、添加濃度を 20％まで上げる

混和性、非混和性の溶媒の混合系についても、クロロホとその効果は消失した。これらの結果より、油性溶液中

ルム／メタノール（２：１）混合液が報告されている 23）。

CYA の経皮吸収性改善の目的でピロチオデカンを用いる

これら種々の溶媒の脱脂効果については、水の透過性の変場合には、その効果発現に至適濃度が存在することが示唆化を指標とした報告があり、エタノール＜アセトン＜ジエ

された。一方、グリセリンの場合は、添加濃度が３〜 10

チルエーテル＜クロロホルム＜クロロホルム／メタノール％の範囲でその濃度上昇に比例した経皮吸収性の改善効果（２：１）混合液の順であることが確認されている 22）。一方、が認められ、10％を超えるとその効果が飽和するといっ

経皮微小透析法による皮膚内生体成分の検出は、一酸化窒

た一般的な吸収促進剤の特性が認められた。油性溶液中

素 24）、ヒスタミン 25）およびグリセロール 26）等が、ヒトま

CYA のみかけの経皮吸収速度は、６％のグリセリンの添たはラットの正常皮膚を用いて報告されている。しかし、

加で 3 . 0 倍、10％以上の添加では 6 . 4 〜 6 . 9 倍有意に増大

化粧品成分浸透の障壁となる角質細胞間隙脂質を脱脂したした（Table ３）。今回の研究結果から、広く化粧品に用皮膚を用いて、皮膚内生体成分量の変化を測定した報告はいられているグリセリンが、皮膚透過性の低い物質の経皮見当たらない。著者らは、これまでラットの血液中、脳内吸収性改善のためにも利用できることが示唆された。

および胎仔組織中等において内因性カテコールアミン量を。その他、より脂質の脱脂効果の強い溶媒として、水と次に、化粧品成分として繁用されている SA の５％エタ

測定し、その結果を報告してきた７、27）。そこで、本研究でノール溶液を用いて、皮膚内への化粧品成分の吸収速度とは、脱脂効果の異なるアセトン、ジエチルエーテル、クロ

皮膚内生体成分動態に及ぶす角質層の脱脂方法の影響を経

ロホルム / メタノール（２：１）混合液の３つの溶媒によ

皮微小透析法により検討した。一般に物質の皮膚浸透性は、り脱脂したラット皮膚を用いて、５％ SA エタノール溶液

正常皮膚に比べて、角質層除去皮膚（stripped skin）およ

適用後に、物質浸透性が変化した状態の皮膚から吸収され

び脱脂皮膚（delipidized skin）では上昇することが知らた SA 動態を求めると同時に、皮膚内の内因性カテコールれている。角質細胞間隙脂質を脱脂するには、種々の有機

アミン量を測定し、それらの関連性を解析した。

Table 2 In vivo skin apparent absorption parameters for CYA after topical application of 2% CYA oily solutions
with various concentration of pirotiodecane in rats.
Parameter

Pirotiodecane concentration （w/v%）
0

1

3

Apparent absorption
2.78±0.89
rate in skin dialysate（ng/h）

2.09±0.21

3.27±0.65

5.40±1.93 13.67±5.17* 2.64±0.71

Lag time（h）

0.10±0.10

0.18±0.16

0.15±0.04

0.18±0.22610

0.14±0.1920

0.18±0.13

Values represent the mean±SE of 3-5 rats. *P<0.05 compared with value obtained without pirotiodecane（Student s t -test）.

Table 3 In vivo skin apparent absorption parameters for CYA after topical application of 2% CYA oily solutions
with various concentration of glycerin in rats.
Parameter

Glycerin concentration（v/v%）
0

1

3

Apparent absorption
2.78±0.89
rate in skin dialysate（ng/h）

2.93±0.50

4.78±1.67

8.39±2.78* 17.67±4.46* 19.21±1.37*

Lag time（h）

0.04±0.05

0.19±0.24

0.21±0.11

0.18±0.22610

0.05±0.05

20

0.01±0.01

Values represent the mean±SE of 3-5 rats. *P<0.05 compared with value obtained without glycerin（Student s t -test）.

− 73 −

５％ SA エタノール溶液を正常皮膚または脱脂皮膚の表

らびに脱脂皮膚に表面適用する検討を行っているが、アセ面に適用した際、いずれも適用直後から皮膚内に SA が検トンによる脱脂皮膚からの SA の経皮吸収量は、正常皮膚

出され、その濃度は２h 以降からプラトーに達した。そこでの結果と変化なかったと報告している。SA の経皮吸収で、SA の皮膚内累積量の経時変化から、みかけの経皮吸性に関するアセトンの脱脂効果についての我々と Benfeldt

収速度とラグタイムを算出した結果（Table ４）、脱脂皮ら 29）の研究結果の相違は、使用した実験動物の違いに起膚では正常皮膚に比べて、みかけの経皮吸収速度が、アセ因するものと考えられる。

トン＜ジエチルエーテル＜クロロホルム / メタノール（２：

内因性のカテコールアミン類は、一般にストレスにより

１）混合液の順番で増大した。特に、クロロホルム / メタ

大きく濃度が変動することが知られているが、著者らは、

ノール（２：１）混合液による皮膚脱脂後には、SA のみ

ラットの脳内へ透析プローブ挿入後、１h 以上経過すると、かけの経皮吸収速度は正常皮膚に比べて 3 . 7 倍有意に増大

ドーパミンをはじめ、ノルエピネフリン、DOPAC およびした。この結果は、溶媒の脱脂効力の強さの順番

22）

と一

HVA いずれも内因性物質量は安定することを報告してい致するもので、SA の皮膚吸収量は、角質細胞間隙脂質がる７）。また、ラットの血液中や胎仔組織中でも、透析プロ脱脂される程度に依存し、増大することが示唆された。一ーブ挿入１h 後には HVA の内因性物質量が安定すること

方、SA の経皮吸収ラグタイムに関しては、有意差は認めを報告している 27）。そこで、本研究では、ガラスリザー

られなかったものの、溶媒の脱脂効力の強さの順番 22）に

バー中から皮膚脱脂用の溶媒または生理食塩水を除去した

符号し、減少する傾向が示された。これらの結果は、洗顔直後から、皮膚透析液中のカテコールアミン量の測定を用化粧品等の使用により皮膚が脱脂された場合には、化粧開始した。その結果、ドーパミン、ノルエピネフリンおよ

品成分の皮膚浸透性が、容量的および時間的に変化するこび DOPAC はいずれの透析液中でも検出されなかったが、とを示唆するものである。

HVA は検出された（Table ５）。しかし、正常皮膚へ SA

微小透析法を用いた SA の経皮吸収性に関する検討は、
28）

29）

エタノール溶液を適用する前のコントロールに比べて、皮によっても報告され膚透析液中の HVA 量が有意に変化したのは、クロロホルている。前者は、種々の基剤による SA の軟膏剤を試作

ム / メタノール（２：１）混合液による脱脂皮膚へ SA エ

し、除毛したラットの正常皮膚と角質層除去皮膚に塗布す

タノール溶液を適用した後のみであった（1 . 7 倍有意な上る実験を行い、除去皮膚での SA 吸収量の変化は、水溶性

昇）。このことより、表面を溶媒で脱脂するストレスを加基剤を用いた軟膏剤の場合が最も大きかったと報告していえられ、物質の角質層浸透性が変化した皮膚では、SA のる。また後者は、本研究と同様、５％ SA エタノール溶液

経皮吸収量は有意に変化するものの、皮膚内カテコールアを試作し、へアレスラットの正常皮膚、角質層除去皮膚な

ミン量の変動は小さいことが示唆された。

Murakami ら

および Benfeld ら

Table 4 In vivo skin apparent absorption parameters for SA after topical application of 5% SA ethanol
solution to normal skin and verious delipidized skins in rats.
Parameter

Apparent absorption ratein skin dialysate（μg/h）
Lag time（h）

Normal skin

Delipidized skin
AcetoneDiethyl ether

Chloroform/methanol（2:1）

0.16±0.05

0.19±0.03

0.36±0.06*

0.59±0.21*

0.85±0.41

0.64±0.22

0.45±0.25

0.46±0.31

Values represent the mean±SE of 3 rats. *P<0.05 compared with value obtained normal skin（Student s t -test）.

Table 5 Endogenous HVA levels obtained in skin dialysates after topical application of 5% SA ethanol
solution to normal skin and verious delipidized skins in rats.
Parameter

Level before applicationof SA (pmol/h)Level after applicationof SA (pmol/h)1)

Normal skin

Delipidized skin
AcetoneDiethyl ether

Chloroform/methanol（2:1）

0.46±0.18

0.54±0.16

0.58±0.25

0.68±0.13

0.48±0.14

0.54±0.17

0.63±0.31

0.78±0.08*

Values represent the mean±SE of 3 rats. 1) average value for 6 h. *P<0.05 compared with value obtainedlevel before application of SA in normal skin（Student s t -test）.

− 74 −

微小透析法を用いた皮膚内の化粧品素材動態および生体成分動態の系統的解析法の確立

４．総

into brain tumour tissue after intracarotid infusion in括rats with 9 L malignant glioma, J. Pharm. Pharmacol.,49 , 777 - 780 , 1997 .

以上、経皮微小透析法を用いることにより、皮膚内へ浸透した化粧品成分の吸収量の変化を in vivo の状態で正確10）Tokunaga Y, Nakashima M, Sasaki H, et al., ：Localにモニターできることが明らかとなった。さらに、本法をdistribution into brain tumor and pharmacokinetics

用いて、ラットの脱脂皮膚表面へ適用した化粧品成分の経of 4 -pyridoxate diammine hydroxy platinum, a novel

皮吸収動態の定量を行うと同時に、皮膚内生体成分量の変cisplatin derivative, after intracarotid administration

動を測定することにより、角質層透過性が変化した皮膚でin rats with 9 L malignant glioma : simultaneous brainの化粧品成分吸収性と生体成分動態との関連性を解析する

microdialysis study, Biol. Pharm. Bull., 23 , 1491 - 1496 ,ことができた。経皮微小透析法による in vivo 経皮吸収実

2000 .

験においては、皮膚内で微小灌流を行うため水分含量も一11）Matsuyama K, Nakashima M, Nakaboh Y, et al., ：定で、生理的条件に近い状態で化粧品成分の経皮吸収性をApplication of in vivo microdialysis to transdermal

検討できる利点がある。経皮微小透析法を用いた評価法でabsorption of methotrexate in rats, Pharm. Res., 11 ,は、化粧品成分の皮膚内動態を、皮膚内生体成分動態と関

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連づけながら解析できるため、安全性と障害性の検討が同

12）Yano T, Higo N, Furukawa K, et al., ：Evaluationof a new penetration enhancer 1 -[ 2 -(decylthio)ethyl]-時にできる利点がある。

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