2015.5No.

49

非アルコール性脂肪性肝疾患モデル（SHRSP5 ／ Dmcr）を用いた肝腫瘍発症モデル作成
島根大学医学部附属病院

飛田博史、佐藤秀一

肝臓内科

非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）は非アルコール性脂肪肝（NAFL）と非アルコール性脂肪肝炎（NASH）を含む疾患概念であり、肝硬変（burned-out NASH）や肝癌に進展する可能性がある。
NAFLDの有病率は、肥満人口および平均BMIの増加に伴って、わが国を含め世界的に増加傾向にある1）。NASHの有病率は、NAFLDの有病率および肥満人口の増加に伴って増加傾向にあると推測される。肝細胞癌患者の背景慢性肝疾患におけるNAFLD/NASHの罹患率は、日本では2 〜 5%と報告されているが2）、NASHの有病率と共にNASHを背景とした肝癌も増加すると推測される。そこで、NASH肝癌の病態と治療に関する研究を行うことを目的として、その際に必要なNASH肝腫瘍発症モデルを作成した。
脳卒中易発症高血圧自然発症ラッ ト（SHRSP/Izm）の 亜 系 統 で あ るSHRSP5/Dmcr（別 称ALR（Arteriolipidosis-prone rats））に高脂肪・高コレステロール（HFC）飼料を与えるとNASHを発症することが報告されている3）。私たちは、HFC飼料（㈱フナバシファーム）あるいはコントロール飼料であるSP飼料（㈱フナバシファーム）と共に、肝癌の発症を促進させる目的でdiethylnitrosamine（DEN）をSHRSP5/Dmcrに与えて、ラット肝癌に発現するグルタチオンS-トランスフェラーゼ（GST）の胎盤型アイソザイム（GST-P）を免疫染色で評価した。
10 週 齡 の 雄 性 SHRSP5/Dmcr を HFC 摂 餌 群 で あ る HFC 群（HFC 飼 料）、HFC10 群（HFC 飼 料+DEN10ppm（自 由 飲 水））、HFC30群（HFC飼 料+DEN30ppm）とSP摂 餌 群 で あ るSP10群（SP飼 料+DEN10ppm）、SP30群（SP飼料+DEN30ppm）の5群（各群6匹）に分けて、8週間飼育した。
350120

体重（g）

60摂餌量（kcal/day/body）

摂水量（mll/day/body）

30080250**

400350200100

前*100***25040200

40100

HFC

HFC10HFC30

SP1020

4週

6週

100SP30

8週後の体重（g）
2週

3020508週

0HFC

HFC10HFC30SP10

1週

2週

4週

0SP30

平均摂餌量（kcal/day/body）
前*

402060150050*80300

HFC
HFC10HFC30SP10SP30150

40

6週

8週

0HFC

HFC10HFC30SP10SP30

平均摂水量（ml/day/body）
前

1週

2週

4週

6週

8週Mann-Whitneyʼs U test(*p＜0.05, * *p＜0.01)

図１

肝重量（g）
5045*40*

精巣上体周囲脂肪組織（g）

**

1000

0.7

900

300.5

250.4

200.3

15ALT（IU/L）
100450**-GTP（IU/L）

500

**

800

0.635AST（IU/L）

0.8

700

350

70600

300

60500

250

50400

200

40300

150

30200

100

200.1

1005000000.2

HFC

HFC10 HFC30

SP10SP30

HFC

ALB（g/dl）

SP10SP30350

**

31.5

100

1500.5

HFC10 HFC30SP10SP300HFC

HFC10 HFC30SP10SP30

HFC10 HFC30SP10SP30020090180**HFC60601205050100404080303060202040101000SP30

HFC10 HFC30SP10SP30**

160140SP10**Glu（mg/dl）

10070

HFC10 HFC30**

10HFC80*

HFC*TG（mg/dl）

**

70150

2SP30**

80

200

2.5SP10HDL-C（mg/dl）
90*250

HFC10 HFC30100**

300

43.5

HFC

HFC

T-CHO（mg/dl）

54.50

HFC10 HFC30****

80510*90**

40020HFC

HFC10 HFC30SP10SP300

HFC

HFC10 HFC30SP10SP30

Mann-Whitneyʼs U test(*p＜0.05, * *p＜0.01)

図２

体重、摂餌量、摂水量の変化を図1に示す。8週間後の体重は既知の報告と同様に、
SP摂餌群と比較してHFC摂餌群の方が軽く、両群共にDEN濃度に依存して減少する傾向を認めたが、両群間の平均摂餌量と平均摂水量に差を認めなかった。
肝重量は肝脂肪化を反映して、SP摂餌群よりもHFC摂餌群の方が重いが、内臓脂肪を反映する精巣上体周囲脂肪組織量に差を認めなかった。また、肝障害を反映して、HFC摂餌群はSP摂餌群よりも血清AST値、ALT値とγ-GTP値が上昇し、アルブミン（ALB）値、中性脂肪（TG）値と血糖（Glu）値が低下
HE：HE染色（組織構造の光顕レベルの全体像の把握を目的とする染色）Azan：Azan染色（膠原線維をアニリン青で染める染色）していた。HFC摂餌群における総コレステロール
図３（T-CHO）値とHDLコレステロール（HDL-C）値の上昇は肝障害に伴う胆汁うっ滞の影響によると推測した（図2）。
HFC群の肝臓は白色調で腫大し、組織学的には既知の報告と同様に、肝脂肪沈着と小葉内炎症細胞浸潤（黒矢印）と共に、肝細胞の風船様腫大（青矢印）、Mallory body（黄矢印）、Azan染色では線維化を認め、NASHの病像を示していた（図3）。
HFC10群とHFC30群の肝臓の外観はHFC群と変わりなく、病理組織像もNASHの所見を示していた。抗GST-Pポリクローナル抗体（（株）医学生物学研究所）による免疫染色では、SP30群、HFC10群、HFC30群に顕微鏡観察下でGST-P陽性領域を認めたが、SP10群には認めなかった。ルーペ像で検討すると、HFC30群のGST-P陽性領域がSP30群と比較して有意に増加していた。HCF30群とSP30群との間で、DENの摂取量に差を認めなかったので、背景肝であるNASHが肝腫瘍の発症を促進していると考えられた（図4）。
以上のように、SHRSP5/DmcrにHFC飼料を与えて作成されたルーペ像で評価したGST-P陽性領域（％）
NASHモデルにDENを自由飲水60p＜0.05させることによってNASH肝腫50(Mann-Whitneyʼs U test)瘍発症モデルを作成することが4030できた。NASHを背景とする肝20腫瘍モデルは少なく、NASH肝10
発癌の病態研究や治療介入研究
0HFC30群
SP30群などに有用なモデルであると考えられる。
GST-P：GST-P免疫染色（グルタチオンーS−トランスファラーゼP型）
図４

参考1).Hamabe A, et al. Impact of cigarette smoking on onset ofnonalcoholic fatty liver disease over a 10-year period. J
Gastroenterol 2011;46:769-778
2).Nagaoki Y, et al. Recent trend of clinical features in patientswith hepatocellular carcinoma. Hepatol Res 2012;42:368-375

文献3).Kitamori K, et al. Development of novel rat model forhigh-fat and high-cholesterol diet-induced steatohepatitis andsevere ﬁbrosis progression in SHRSP5/Dmcr Environ
Health Prev Med 2012;17:173-182

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