News No.101(2002)

No.101
2002■ Review

新たな蛍光ゲノム比較解析法とその応用
山下秀次■ Topics on Chemistry

蛋白質を増幅するープリオン病の早期診断に向けて
佐々本一美

■ 連載

ケミストからみたポストゲノム1
片山佳樹

ISSNO385-1516

News No.101(2002)

目次

お知らせ
春の学会展示ご案内 ................................................................ 4
カスタマーサービス部新設のお知らせ ................................... 4

Review
新たな蛍光ゲノム比較解析法とその応用
九州東海大学農学部 山下秀次 ............................................ 1
ケミストからみたポストゲノム 1
九州大学工学研究院 片山佳樹 ............................................ 6-Nucleostain-DNA Damage Quantification Kit-AP site Counting

仕様変更のお知らせ ................................................................ 8
販売中止品のご案内 .............................................................. 16
ラベル材質変更のお知らせ ................................................... 17
フォーラム・イン・ドージン開催報告 ................................. 18

Topics on Chemistry
蛋白質を増幅するープリオン病の早期診断に向けて .............. 5

Commercial
Q&A
Self Assembled Monolayers(SAMs)研究用試薬 .......... 12
新製品
専用規格品 .............................................................................. 4
Get pureDNA Kit-Agarose ................................................. 10

新製品案内
容量、価格は下記ページをご覧ください。
Ca( Ⅱ)-EDTA （薬添規）........................................................... 4
CyDTA（オートアナライザー用）.............................................. 4
Get pureDNA Kit-Agarose .................................................... 10

12th フォーラム・イン・ドージン
オーガナイザー・演者の先生方と弊社スタッフ

News No.101(2002)

新たな蛍光ゲノム比較解析法とその応用(Fluorescence representational genomic profiling method and its various applications)山下 秀次(Hideji Yamashita)
九州東海大学農学部[ Summary ]The fluorescence representational genomic profiling (FRGP) method is capable ofmaking a genome-wide survey of many loci. This method employs PCR-mediated size
selection and FITC-labeling of restriction fragments containing landmark sites. Using
this method with methylation-sensitive restriction enzyme Eag I as a landmark enzyme,
we scanned quail genomic DNAs from several tissues to detect the transcriptionallyactive regions. This approach is based on the assumption that CpG methylation,
particularly of CpG islands, might be associated with gene transcriptional regulation.
Sixty out of 520 FRGP spots were identified as tissue-specific changes of the DNA
methylation state. One of the spots, which show a testis-specific appearance, wascloned and sequenced to identify the gene. The spot clone contained the segment of
the quail orthologue of FOXF1 gene, one of members of the forkhead gene family oftranscription factors. The FOXF1 gene encodes the winged helix class of DNA-binding
protein and is expressed in lung and placenta. The RT-PCR analysis of quail mRNAs
from various tissues revealed that the quail orthologue is also lung-specific expressed.
Thus, FRGP using methylation-sensitive restriction enzyme can offer a mean for
detecting systematically the gene in which the state of DNA methylation.

キーワード：DNA メチル化、CpG アイランド、遺伝子発現、メチル化感受性
制限酵素、PCR 法、蛍光標識、二次元電気泳動法

1．DNA メチル化と遺伝子発現

接に連携しながら、ゲノム中の各座位の遺伝子発現を制御している
シトシンのピリミジン環5位にメチル基が付加した5-メチルシト
ことから、ゲノム DNA のメチル化が遺伝子発現調節機構の最上位
シン（5mC）は、脊椎動物のゲノム中に見出される唯一の生理的修に位置するものと考えられている 8)。これらのことから、CG メチ
飾塩基であり、その出現は CpG 配列に限られている。5mC は化学
ル化感受性制限酵素による切断片は全ゲノム領域から活発に転写さ的に不安定であり、脱アミノ反応を起こしてチミンに変換されやすれている遺伝子を探索する際の目印となるものと考えられる。
く、CpG 配列は TpG 配列へと定常的に変換されていると考えられている。脊椎動物のゲノム全体では、 GC 含量は約 40％と低く、 2．新たな genomic differential cloning 法
CpG 配列も塩基組成から確率論的に期待される 20 〜 25％程度し1990 年代初めにゲノム全体を高速に検索する genomic differか存在しない。しかし、ゲノム中には非メチル化 CpG 配列の密度
ential cloning法として、Restriction Landmark Genomic Scanが高く、 GC 含量も 60 〜 70％と非常に高い領域が散在している。 ning（RLGS）法9)および Representational Difference Analysis
このような領域は CpG アイランドと呼ばれており、すべてのハウ （RDA）法 10)が相次いで開発された。 RLGS 法はゲノム上の位置
スキーピング遺伝子や約40％の組織特異的遺伝子の転写調節領域あ指標となるランドマーク制限酵素切断部位（restriction landmark）
るいはその近傍に存在することが示唆されている 1-3)。また、Eag I
を放射性標識し、二次元電気泳動によって検出される数千にも及（C ↓ GGCCG）や BssH II（G ↓ CGCGC）などの CpG 配列をぶスポットの差異を検索する方法である。他方、RDA 法は制限酵
含む GC 塩基のみからなる配列を切断する制限酵素は 5mC を含む
素消化と PCR によってゲノムの複雑度を 1 ／ 100 〜 1 ／ 10 にし認識配列を切断できないという特性（メチル化感受性）を有しておた amplicon と呼ばれる PCR 産物（representation）を作製し、り、その認識配列は CpG アイランド中に高頻度で存在している 4)。 amplicon間での競合的ハイブリダイゼーションによりゲノム差異
ゲノム DNA のメチル化は、遺伝子の発現抑制に関与しているこを検索する方法である。RLGS 法ならびに RDA 法は強力な geとが古くから知られていたが、最近になって遺伝子機能抑制の二つ
nomic differential cloning 法であり、様々な遺伝子探索に多用さの分子機構に関与していることが明らかになってきた。一つはれている 11-14)。しかしながら、両方法ともにゲノム変異の検出工
5mC を認識して結合するメチル化 CpG 結合タンパク質（MeCP2） 程あるいはクローニング工程において一長一短がある。
が、遺伝子の転写調節領域に結合して転写因子の結合を抑制する機
筆者は、RLGS 法および RDA 法からそれぞれ restriction landmarkおよびrepresentationという概念を導入し、新たなgenomic
構である 5)。他の一つはヒストン脱アセチル化酵素と複合体を形成
differential cloning 法として Fluorescence Representational
した MeCP2 が 5mC を認識し、ヒストン脱アセチル化酵素の作用
Genomic Profiling（FRGP）法を考案・開発した。FRGP 法とによってメチル化部位近傍のクロマチン構造が凝縮して転写が抑制
は、制限酵素断片を PCR によってサイズ選択的に増幅するとともされる機構である 6、 7)。これらは互いに独立した現象ではなく、密1

News No.101(2002)に、ランドマーク制限酵素切断部位のみを蛍光標識した後、二次元電気泳動によって展開したスポットパターン（ゲノムプロファイル）からゲノム差異を検出する方法である。本法の考案に際しては、①多量の DNA サンプルを必要としないこと、②放射性標識を用いずに一度に短時間で多数のゲノム座位を視覚化できること、③煩雑な操作によらずに変異DNA断片が確実にクローニングできることなどに留意した。

↓Extraction of genomic DNA
A

B

C

2

2

D
1

1 3

2

DNA
a

c

b

d
y

x
↓Landmark cleavage with restriction enzyme 1↓Fragmentation with restriction enzyme 2↓Ligation with restriction site specific adaptors

a

c

b

d

The limited size for PCR amplification↓PCR-amplification with FITC-labeled primers
Amplicon A

Amplicon C

Amplicon D↓1st fractionation by agarose disk gel electrophoresis (1D)
↓Fragmentation of amplicons with restriction enzyme 3↓2nd fractionation by PAGE (2D)
↓Detection of FITC-labeled DNA fragments
d

a

kb

←2D

Amplicon D Amplicon Ac

Fig.1 に示すように、FRGP 法は①ゲノム DNA 抽出、②ランド
マーク制限酵素（制限酵素 1）消化、③制限酵素 2 による再断片化、④制限酵素切断部位への特異的アダプターの連結、⑤ FITC 標識プ
ライマーによる PCR、⑥一次元アガロースディスクゲル電気泳動、⑦制限酵素 3 によるゲル中消化、⑧二次元ポリアクリルアミドゲル
電気泳動、⑨蛍光イメージアナライザーによるスポット検出という9 つの工程からなる。
この FRGP 法の中で最も注目されるのが、5 番目の PCR の工程である。この工程は、制限酵素断片長の違いを PCR 産物の存在の有無に転換するrepresentationという概念、ならびに特定の制限酵
素切断部位のみを視覚化してゲノム上の位置指標とするrestriction
landmarkという概念の両側面を兼ね備えている。実際の操作では、ランドマーク制限酵素切断部位に特異的なプライマーの5'末端のみを FITC 標識し、約 2kb 以下の DNA 断片のみが指数関数的に増幅するような条件下で PCR を行っている。Fig.1 によると、DNA 断
片CとDはランドマーク制限酵素切断部位がFITC標識されたPCR
産物（Amplicon C と D）を生じ、DNA 断片 A は FITC 標識されていない PCR 産物（Amplicon A）を生じる。しかし、DNA 断片 B
は PCR 増幅限界鎖長よりも長いために増幅されない。次に、二次
元電気泳動によって PCR 産物を分離・展開すると、Amplicon D、ならびに Amplicon C に由来する制限酵素 3 による切断片（x と yの長さの断片）は蛍光検出によって視覚化されるが、Amplicon Aは検出されない。したがって、サイズ選択的に増幅された制限酵素
断片のうちランドマーク制限酵素切断部位を有するもののみによってゲノムプロファイルが構成されることになる。また、検出されるスポットは PCR 産物であるために容易にクローニングすることが
できる。

kb

Amplicon C

←1D

a
y
d

x

Fig.1 The procedure of FRGP. 1-3, restriction sites for restriction enzyme
1 (landmark enzyme), 2 and 3, respectively; A-D, restriction
fragments digested with enzyme 1 and 2; a-d, the length of fragments
A-D; x and y, the length of fragment C digested with enzyme 3; □and , adaptors for restriction sites of enzyme 1 and 2, respectively;○ , FITC.

2

3．FRGP 法の実際

4．FRGP 法による組織特異的遺伝子の単離・同定
脊椎動物の体は、形態的・機能的な違いが著しい約 200 種類の細胞から構成されているが、元をたどれば1個の受精卵にたどり着く。
受精卵は分化全能性をもっているが、発生の進行に伴って細胞系列の限定された遺伝子群だけが発現し、その他の遺伝子群の発現は抑制され、細胞の種類に特徴的な性質が備わるとされている。つまり、ゲノムの塩基配列の変化を伴わずに遺伝子機能が選択的に活性化あるいは不活性化される分子機構が存在する。この機構は後成的遺伝
子発現修飾（epigenetics）と呼ばれており、その中心的な役割をゲ
ノム DNA のメチル化が担っているものと考えられている。
筆者は、ウズラ雄 1 羽の脳、心臓、腎臓、精巣より抽出したゲノム DNA を材料として、ランドマーク制限酵素に CG メチル化感受性制限酵素 Eag I、二次元展開制限酵素に Hinf I を用いた FRGP 法
により組織特異的遺伝子の単離・同定を試みた。4 組織のうち精巣のゲノムプロファイルを Fig.2 に示している。4 組織のゲノムプロ
ファイルにはそれぞれ約 520 個のスポットが検出され、これらのうち60 個に組織特異的なスポットの有無あるいは蛍光強度の差異が認められた。同一個体の各組織から抽出したゲノム DNA を用いていることから、
スポット変異が塩基置換によって生じた切断片長多型であるとは考えられず、Eag I 認識配列中のメチル化状態の差異に起因するものと考えられた。

News No.101(2002)

kb

0.7

1.0

1.5

変異スポットのうち精巣ゲノムにのみ検出されたスポット

QTEH56（Fig.2 の矢印、Fig.3）をプローブとして脳、肺、心臓、

TestisMuscleKidneyPancreas

Liver

Heart

Brain

0.5

Lung

肝臓、膵臓、腎臓、浅胸筋、精巣についてサザンブロット解析を行ったところ、肺と精巣にはゲノム差異の起因となった Eag I 認識配列が非メチル化状態にある細胞が特異的に存在することが明らかとなった。また、QTEH56 の塩基配列解析の結果、ヒトの肺や胎盤で特異的に発現している転写因子フォークヘッドファミリーの1つである Forkhead Box F1（FOXF1）と非常に高い相同性を示し、
QTEH56 は FOXF1 遺伝子のウズラオーソログの一部であることが明らかとなった。さらに、サザンブロット解析に用いた 8 組織について RT-PCR 解析を行ったところ、Fig.4 に示すように肺においてのみ強いシグナルが認められた。これらの結果より、FOXF1
遺伝子はウズラにおいてもCpG配列のメチル化によって転写調節がなされ、肺で特異的に発現していることが明らかとなった。

1.5

FOXF1
β–actinFig. 2 FRGP profile of quail testis DNA. Eag I and Hinf I were used as alandmark enzyme and restriction enzyme 3, respectively (Fig.1). The
arrow indicates the testis-specific spot (QTEH56).

Brain

Kidney

(–)

(–)

Heart

Testis(–)(+)

Fig.3 Parts of FRGP profiles surrounding Spot QTEH56 in four different
tissues. The arrows indicate Spot QTEH56. (-) and (+) represent
disappearance and appearance of Spot QTEH56, respectively.

Fig.4 Expression of FOXF1 gene measured by quantitative RT-PCR ineight different tissues. The upper and lower bands indicate FOXF1
gene and β-actin gene as an internal control, respectively.

5．FRGP 法の利点
以上のようにFRGP法は一度に多数のゲノム差異を視覚的に捉え、そのゲノム差異から容易に遺伝子にたどり着くことが可能である。本法の利点として次のような点が挙げられる。①１枚のゲル上に 500 個以上のスポットとして restriction landmark を検出することができる。②異なる制限酵素の組み合わせを用いることで解析するゲノム領域を拡大できる。③スポットの蛍光強度がrestriction landmark のコピー数を反映しており、diploid と haploid の識別も可能である。④認識配列に GC 塩基が豊富な制限酵素を用いると、遺伝子転写単位の近傍に存在するとされている
CpG アイランドを特異的にスクリーニングできる。⑤ CG メチル
化感受性制限酵素を用いると、ゲノム DNA のメチル化状態をスク
リーニングできる。
従って、本法は oligogene や polygene の量的・閾値的な効果
によって左右される量的形質や成人病（通常疾患）などの多因子
遺伝形質のゲノム解析に有効であると考えられる。現在、１枚のゲル上で多検体のゲノムプロファイルを作成できる多重蛍光標識
FRGP 法についての検討も行っている。

3

News No.101(2002)

新製品
参考文献
1) F. Larsen, G. Gundersen, R. Lopez and H. Prydz, Genomics, 13,

専用規格品1095 (1992).
2) F. Antequara and A. Bird, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 11995(1993).
3) P. A. Jones, Trends Genet.,15, 34 (1999).
4) W. A. Bickmore and A. P. Bird, Methods Enzymol., 216, 224 (1992).
5) X. Nan, F. J. Campoy and A. Bird, Cell, 88, 471 (1997).
6) P. L. Jones, G. J. Veenstra, P. A. Wade, D. Vermaak, S. U. Kass, N.
Landsberger, J. Strouboulis and A. P. Wolffe, Nat. Genet., 19, 187(1998).
7) J. Ahringer, Trends Genet.,16, 351 (2000).
8) H-H. Ng and A. Bird, Curr. Opin. Genet. Dev., 9, 158 (1999).
9) I. Hatada, Y. Hayashizaki, S. Hirotsune, H. Komatsubara and T.
Mukai, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 9523 (1991).
10) N. Lisitsyn, N. Lisitsyn and M. Wigler, Science, 259, 946 (1993).
11) J. Kuromitsu, H. Yamashita, H. Kataoka, T. Takahara, M. Muramatsu,
T. Sekine, N. Okamoto, Y. Furuichi and Y. Hayashizaki, Mol. Cell.

Biol., 17, 707 (1997).
12) S. Komatsu, Y. Okazaki, M. Tateno, J Kawai, H. Konno, M. Kusakabe,
A. Yoshiki, M. Muramatsu, W. A. Held and Y. Hayashizaki, Biochem.

Biophys. Res. Commun., 267, 109 (2000).

• Ca(II)-EDTA（薬添規）

医薬品添加物規格（薬添規）に相当した品質です。
規格 1）純度：97.0 〜 102.0％2）水溶状：試験適合
3） pH(20%)：6.5 〜 8.04）水分：13.0％以下
5）強熱残分（硫酸塩）：71.0 〜 76.0％
6）シアン化物：0.0001％以下
7）重金属（pb として）：0.002％以下
8）ヒ素：0.0002％以下
9）エデト酸ナトリウム：限度内• CyDTA（オートアナライザー用）

ブランルーベ社のオートアナライザーでのアンモニア分析専用
規格品です。
規格 1）純度：99.0％以上2 ）重金属(Pb として)：0.001 ％以下
3）オートアナライザ用試験：試験適合

13) T. Ushijima, K. Morimura, Y. Hosoya, H. Okonogi, M. Tatematsu, T.
Sugimura and M. Nagao, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 2284 (1997).
14) K. Muller, H. Heller and W. Doerfler, J. Biol. Chem., 14, 14271 (2001).

品名

容量

価格（￥）

Ca (Ⅱ)-EDTA （薬添規）500g
RequestCyDTA（オートアナライザー用）
100g
24,000

メーカーコードC421
C420

春の学会展示ご案内
薬理学会において、試薬新製品の展示を行ないます。皆様のご来場をお待ちいたしております。

• 第 75 回日本薬理学会
3 月 13 日（水）〜 15 日（金）熊本県立劇場
著者紹介
氏
名：山下 秀次（Hideji Yamashita）
所
属：九州東海大学農学部 バイオサイエンス学科 講師
出身大学：鹿児島大学大学院連合農学研究科
学
位：博士（農学）
現在の研究テーマ：
1）ウズラの組織特異的遺伝子の単離・同定
2）ニワトリの抗病性に関与する遺伝子の探索
3）精神神経疾患成因に関与する DNA メチル化機構の解明
連 絡 先： 〒 869-1404 熊本県阿蘇郡長陽村河陽
Tel：09676-7-3932 Fax：09676-7-3960
e-mail：hideyama@as-1.ktokai-u.ac.jp

4

カスタマーサービス部新設のお知らせ
昨年 8月より弊社製品の技術的なお問い合わせに対応するた
め、カスタマーサービス部を新設しました。フリーダイヤル
0120-489548 で専任スタッフ 2 名が承っております。
その他のお問い合わせは、096-286-1515 マーケティング部
で承ります。

News No.101(2002)

Topics on Chemistry
蛋白質を増幅するープリオン病の早期診断に向けて（株）同仁化学研究所

狂牛病（BSE）のパニックが日本を襲っているが、本場イギリ
スでも BSE からの感染と考えられる変異型クロイツフェルト・ヤ
コブ病（vCJD）の患者数は既に 110 名を越え、依然として増加している。 これまで、牛の病気で人への感染はないと考えられていた BSE だが、1996 年 3 月、イギリス健康保険省が公式に感染を認めたのが今日のパニックの発端となっている。 良く知られているように、原因となるプリオン蛋白質は正常脳組織にも発、これが何らかの作用で β- シー
現しており（正常プリオン PrPC）
ト構造に富んだアイソフォームに移行し（異常プリオン PrPSc）、
脳内に凝集することで神経疾患を引き起こすと考えられている。
最大の謎は、PrPC から PrPSc への 2 次構造の変換がどのように起こるかであるが、アミロイドーシス同様、詳細な機構は分かっていない。 β- シート蛋白質が自己触媒的に凝集していくのは他のアミロイド蛋白質と同じだが、大きな違いはプリオン蛋白質が感染することである。 生命体とは言えない単なる物質が感染・伝播していく不思議さは、多くの科学者の関心を引いている。
現在 PrPSc の検出は、脳組織をホモジネートし、プロテアーゼで処理し得られるＮ末端側が除去された 142 アミノ酸からなるコ
ア部分（PrP27-30、図 1）を、抗体を用いて検出する方法で行われている（BSE の場合、ELISA による一次スクリーニング、更にWestern blot及び組織免疫染色による確定診断が行われている）。
vCJD の場合は若年で発症しており、しかも、発症してからの進行が早い。 PrPSc は、例外的に羊のリンパ組織で検出されるが、それ以外、BSE や vCJD では潜伏期の生前診断は不可能である。

佐々本 一美Saborio ら は protein-misfolding cyclic amplification（PMCA）。 スクレイピー感染と呼ばれる増幅システムを考案した（図 2）
ハムスターの脳ホモジネートを PrPSc が検出できなくなるまで希釈し、それを正常のハムスターの脳ホモジネートと 37 ℃でイン
キュベートすると PrPSc が検出されてくる（proteinase K で処理。 界面活性剤の存在下で超音波処理を行し、PrP27-30 を検出）
1)

うと凝集体を分散させることができるので、更に同様のサイクルで増幅することが可能である。 原理は簡単だが、重要なポイン
トは PrPC の供給源として脳ホモジネートを用いていることである。 精製した PrPC を PrPSc と接触させることで、PrPC → PrPScの変換が起こることは知られていたが2)、
その系では効率は非常に悪く増幅することはできない。 つまり、凝集反応を促進する何らかの因子（例えば Protein X3)）の存在が必須で、ホモジネートを用いる必要がある。 PrPC から PrPSc へのリフォールディングを触媒するシャペロン分子の存在が疑われているが、それはPrPSc
自身かも知れない。

PrP C
インキュベーション

超音波処理+
PrP ScN末端

N末端（第2サイクル）?

図2

PMCA サイクル

PrP27-30

GPI anchor

GPI anchor

PrP C
図1

PrP Scプリオン蛋白質の 2 次構造（209 アミノ酸）

無論、血液などを用いる生前診断を可能にする抗体の開発は世界中で競って行われているが、そのためには、血中などの微量
PrPSc を検出できる感度が必要である。 勿論それは、単に現在の抗体検出の感度では検出できないだけで、極微量は存在しているという前提である。 そうであれば、PCRのように人工的にPrPScを増幅できれば解決する。 僅かの PrPSc が核となって、体内で次々にPrPCをPrPScに変えていく感染のプロセスと基本的に同じである。

報告された検出感度は、10,000 倍以上の希釈で、10 回の PMCA
サイクルを行い、6~12 pg（0.2~0.4 amol）の PrPSc の検出が可能である。 PrPSc というテンプレート無しでは、in vitro で PrPSc
を作り出すことができないなど、プリオン病の謎はまだ多いが、少なくとも in vivo での現象を利用した今回の技術は、プリオン病の早期診断に貢献することは確かである。

参考文献
1) G. P. Saborio, B. Permanne and C. Soto, Nature, 411, 810 (2001).
2) D. A. Kocisko, J. H. Come, S. A. Priola, B. Chesebro, G. J. Raymond,
P. T. Lansbury amd B. Caughey, Nature, 370, 471 (1994).
3) S. B. Prusiner, Proc. Natl. Acad. Sci., 95, 13363 (1998).

5

News No.101(2002)

新連載
1．はじめにケミストからみた
ポストゲノム1

ヒトゲノム計画により、ヒトの全ゲノムの塩基配列が明らかになろうとしている。その直接の成果は、これから本格化する網羅的、体系的な遺伝子の発現解析と多型解析、機能解析にあるといえる。ゲノム研究とポストゲノムの流れに関する総説は、すでに非常に多く存在することもあり、本連載では、工学あるいはケミストの立場から見たポストゲノムとして、今回、全体像を概説した後、次回より今後有用となるであろう技術についてご紹介していきたいと考えている。分析技術はこれまで、大規模な装置を用いて感度や性能を競うところがあったが、これからのゲノム研究
では、迅速、安価が極めて重要なキーワードになろう。

2．ゲノム研究の流れとポストゲノム〜 Overview 〜
九州大学工学研究院応用化学部門

片 山 佳 樹ゲノムとは、染色体上に存在する全遺伝子の総体である。ゲノム研究は、これまでの研究手法と異なり、一つ一つの遺伝子やタンパクに着目するのではなく、全体を網羅的に解釈するところに違いがある。例えば、ある遺伝子の機能が特定の疾患に関連付けられたとして、現実にはその遺伝子の機能のみが変化してその疾患が起こるわけでは無い。特に、多くの疾患、特に Common diseases と呼ばれる疾患は、多くの遺伝子が関わる多遺伝子疾患であり、これらの理解には、遺伝子機能全体の動きの理解が必須となる。

2.1．ゲノム研究の流れ

プロフィール
片山佳樹（Yoshiki Katayama） 41 歳
所属：九州大学工学研究院応用化学部門・応化分子教室
連絡先：〒 812-8581 福岡市東区箱崎 6-10-1

TEL：092-642-3608 FAX：092-642-3611
e-mail:ykatatcm@mbox.nc.kyushu-u.ac.jp
出身学校：九州大学工学研究院合成化学専攻

学位：工学博士

現在の研究テーマ：
細胞情報と化学情報を相互変換する分子の創製と機能（科技団さきがけ）
各種細胞シグナル伝達計測系の開発
ポストゲノムを指向したタンパク間相互作用や細胞表現系ハイスループットアッセイ系の開発
主な著書：

NO 放出薬の臨床応用の可能性、循環器科、44(4)、344(1998)
ケージド化合物、蛋白質、核酸、酵素、43(12)、397(1998)
趣味：ドライブ、イラスト

6

ゲノム研究の内容としては、全塩基配列の解読による物理地図の作成後、遺伝子配列の決定、遺伝子のゲノム上での位置決定（マッピング）、遺伝子多型の解析、刺激や疾患などに伴う発現変化、遺伝子機能の解析（タンパクの同定と発現解析、機能解析）などが挙げられる。ゲノムの物理地図作成後、このデータを用いてその後の研究が可能となり、これらがポストゲノムと呼ばれる研究である。
ゲノムの塩基配列が分かったことと、全遺伝子配列が分かることとは同じではない。真核生物の遺伝子は多くの場合、介在配列により分断されており、また、遺伝子の開始部分を予測することも困難である。EST（発現配列タグ：cDNA の一部に相当する短い DNA 断片）を収集することで、ゲノム上の発現可能な部分を調べることはできるが、遺伝子配列そのものを解析するには、タン
パクをコードするメッセンジャー RNA から逆転写して得られる
cDNA の配列を解析するのが最も効率がよい。しかしながら、全長の cDNA を得ることはそれ程容易なことではない。現在では、
オリゴキャップ法1)やキャップトラッパー法2)などの技術が利用される。また、遺伝子のマッピングのためには、ポジショナルクロー
ニングなどの技術がある。ゲノム塩基配列決定からこの部分までは、いわばゲノム研究の土台にあたる部分であり、コストがかかろうと既存の技術でかなりのところまでこなしてしまえる。しかしながら、その先にある種々の研究カテゴリーは、産業に直結するため、現状の技術ではクリアできない効率的技術が必要とされ、事実、現在極めて多くの技術開発が進行している。本連載では主としてこの部分の技術について述べる。

News No.101(2002)

2.2．遺伝子多型解析
異なる個体間で遺伝子上の同一箇所の塩基配列が異なる場合、その頻度がその種全体の 1％以上である時に、これを多型、1％以下のものを突然変異という。多型には、塩基配列が挿入されたもの（挿入多型）、欠失したもの（欠失多型）、繰り返し配列の長さの異なるもの（ミニサテライトやマイクロサテライト）、一塩基が変化したもの（一塩基多型）などがある。多型は、それが遺伝子上に存在し、機能に関係する場合は、疾患に直結する場合がある。
また、遺伝子の近傍にある場合も含めて、特定の遺伝子のゲノ
ム上での位置決定に有用なマーカーとなる。多型のこのような利用法は、特に疾患関連遺伝子などの特定に効果的である。ある疾患関連遺伝子が遺伝した固体は、その近傍にある多型部分も同時に引き継いだ可能性が高いため、ある疾患を有する群に特異的な変異を見つければ、その近傍に疾患遺伝子が見つかる可能性が高い。多型をゲノム上のマーカーとする場合、マーカーの数は多いほど、位置決定が容易かつ正確になるのは言うまでも無い。その意味で、最も高頻度に表れる一塩基多型（SNP）が最も注目されている。SNP は 1000 塩基に一つくらい存在し、ゲノム中に 300
万〜 1000 万個あるといわれている。

3．SNP 解析
SNP の解析といっても、ゲノム上のどこに SNP が存在するのかを調べる SNP マッピングと、明らかになった SNP をそれぞれの個体で分析し、どの塩基に置換しているかを明らかにする SNP
タイピングがある。前者では、少数のサンプルにおいて多数の
SNP を検出し、その位置を決めることが必要であり、後者では、多数のサンプルで特定（少数）の SNP を解析できることが必要となる。従って、どちらの手法かで解析技術に要求される条件が異なる。SNP マッピングは、すでにかなりの成果がでており、SNP
コンソーシアムなどによりデータベース化が進められている。しかし、SNP 解析で産業上より重要なのは、疾患関連遺伝子の探索などに直結する SNP タイピングである。最近、Table 1 のような
SNP タイピングを指向した種々の技術が開発されている。それらは大別すると、蛍光を用いる方法とマススペクトルを用いる方法に大別できる。各々については、次回より詳しく解説するが、これらの中でも、Invader assay3)や Luminex 法 4)は、実用化が始まっている。また、マススペクトルで用いられるプライマー伸長法を蛍光と組み合わせた DOL assay5)や molecular beacon を用いる Sniper assay6)も期待される手法である。タグ DNA をアレ
イにすることで一般性を持たせた Tag アレイ 7)も有力な手法である。一方、マスを用いる手法は、主としてプライマー伸長法を基本とするものが多い。この手法は、SNP の一塩基 5 端側までに相補的なプライマーをハイブリダイズさせておいて、そこからサンプルを鋳型として伸長反応を行い、SNP の種類により伸長生成
物の分子量が変わるようにする手法である。一般に ddNTP と
dNTP を組み合わせて用いる。その組み合わせ方により Pinpoint
assay8)や PROBE 法 9)などがある。また、更に高感度化を狙って、dNTP に化学修飾したり、逆に残った ddNTP を測定するな
どの方法もある。その他にオリゴプローブを用いる手法がある。
こちらは、SNP 部位を含む領域に相補的なプローブを用いて 2本鎖形成させ、2本鎖を形成したプローブの分子量を計測するものが代表的である 10)。プローブとして PNA を用いたり、SNP 領域
を翻訳してペプチドで計測する手法もある。

Table 2 RNA(DNA)-Protein display
Phage display
Ribosome display
RNA-protein fusion using puromycin
STABLE assay

Table 1 New technique for SNP typing
Technique using fluorometry as detection

Technique using Mass spectrometry

Without PCR
Invader assay
Sniper assay
With PCR
DOL assay
Luminex assay
Oligo-Tag array
LCX® assay
Kinetic PCR + PicoGreen
TaqMan PCR
Pinpoint assay

Based on primer extention
Pinpoint assay (four kind of ddNTP)
Primer extention with three kind of ddNTPs and a dNTP
PROBE assay (in solution, on chip)
Survivor assay
Primer extention with labeled ddNTP
Primer extention with 15N/13C-labeled NTP
GOOD assay
Using oligo-probe
Using PNA probe
Using biotinylated primer(for short tandem repeat)
Using chaperon probe
Invader assay
Using translation to the peptide

7

News No.101(2002)

4．RNA(DNA)- タンパクをセットで取り扱う
遺伝子の機能解析としてタンパクを調べる場合、それをコードする遺伝子とセットで取り扱うと有用である。例えば、ファージディ
スプレイは、その代表で、ある機能を有するタンパクをスクリーニ
ングすれば、同時にその遺伝子が得られる。これを in vitro で行う方法として、Table 2 に示すような手法が報告されている 11-13)。

5．プロテオーム解析
遺伝子の総体がゲノムであるのに対し、タンパクの発現プロ
フィール全体をプロテオームという。ゲノムプロジェクトの究極の目的である、遺伝子の機能の解析とそのネットワークの解明は、
このプロテオーム無くしては解析できない。プロテオーム解析に関連する技術（Table 3）は大別すると、タンパク間相互作用を見る方法と、タンパクを同定する手法、それを発展させてタンパク発現の変化を見る方法（RNA での differential display に相当）である。
タンパク間相互作用を見る手法としては、
Yeast Two Hybrid14)が有名であるが、その欠点の克服や種々の応用を目指してタンパ
ク再構成を利用する手法 15) やイースト以外で行う手法、ハイス

ループット化等多くの方法が生まれている。また、タンパクだけではなく、小分子とタンパクの相互作用を見る手法も開発されている。これらの手法とは別に、タンパク機能解析に蛍光を用いる
方法があるが、通常の蛍光標識では機能を損なうなど、種々の弊害がある。最近、これを克服するための種々のユニークな蛍光標。また、蛍光タグとして同一励起波長で多識法がある（Table 4）
くの色を出せる蛍光タグも開発されている。
マススペクトルは、遺伝子だけでなく、プロテオーム解析技術としても注目される。タンパク同定やシーケンシング、発現変化の解析では、ペプチド配列解析や同定の効率を上げる種々のテクニック 16)や発現比較を定量的に行う ICAT 法 17)などが開発されている。また、プロテオーム全般に関連することであるが、種々のプロテインチップ開発が始まっている。

6．おわりに
上述した技術以外にも、ユニークなタンパク複合体精製法や、電気化学的にSNPを解析したりタンパク相互作用を検出したりする手法もある。また、これまでと全く違ったイオンチャネルを利用して遺伝子のシーケンシングを行うナノポアシーケンシングのよ

Table 3 Various techniques for proteome analysis
For protein indentificationand differential display
Peptide sequence using charged tag(SMA or SPA reagent)
Isotope label
ICAT assay
ICAT assay with 15N-enrich medium
2-dimensional PAGE
Capillary LC
Identification of phosphorylation site
Protein array

Table 4 Fluorescence labeling for proteome research
GFP fusion
Protein insertion into GFP
Fluorescence labeling using puromycin
Fluorescence correlation spectroscopy
Energy transfer cassette
Quantum dot
FLASH

8

For the investigation of protein-protein (ligand)interaction
Based on two-hybrid system
Yeast two hybrid system (Y2H)
Large scale Y2HY2H in mammalian cellThree hybrid system
One hybrid system
Based on protein complementation assay
Using Dihydroforate reductase(DHFR)
Split Ubiquitin
Using protein splicing
Using β-galactosidase
Using rasGEF+V-src myristoylation signal
Using adenylyl cyclase
Other
Using isotope-labeled crosslinker
Protein array

News No.101(2002)

うな技術も生まれつつある。産業に直結する技術として、今後開仕様変更のお知らせ
発の意義が大きいものは何であろうか。SNP のマッピングは、これから技術開発しても間に合わない可能性がある。ゲノム研究の基盤として力を発揮した DNA チップのような技術は、今後は、改-Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit-AP site Counting
良研究が主となろう。SNP タイピングに関しては、迅速性と経済性を競う技術がまだ開発される余地は残っている。しかし何と-Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit-AP site Counting
いっても、今後、必要となるのはプロテオームの関連した諸技術
は、酸化ストレスなどの障害により生じる DNA 損傷部位（APであろう。また、ゲノムから得られた情報をできるだけ効率よく、 site）数を測定するキットとしてこれまでご好評戴いております。
薬剤などの商品開発に結びつける質的に新しい技術革新が待たれしかしながら、そのキットを構成する HRP-streptavidin は現行のる。例えば、ゲノム研究が進めば、個人レベルで薬物の最適化等
キットでは容量が少なく、その希釈溶液を調製する場合、溶液をが図れるテーラーメイド医療が実現するなどというのはよく耳に採取しにくい場合があり皆様には大変ご迷惑をお掛けしておりますることであるが、現実には、少なくとも現在の技術でそれは極した。また、保存安定性の問題もあり、この溶液は常に冷蔵保存
めて困難であろう。個人向けの薬物が調合されるということは、開しておく必要がありました。
発する薬ひとつひとつの市場が小さくなることを意味する。現在
今回、様々な検討を重ねた結果、この HRP-streptavidin を安定化剤の技術で、製薬会社がこの開発費―市場規模の問題をクリアできを添加した状態で1/100に希釈することで安定性が向上すると共に、るとは考えられず、今のままでは利用できるのは、せいぜい、薬溶液が少なく取りづらいという問題を解決することが出来ました。
物代謝遺伝子の利用による副作用の回避程度であろう。本連載が、 これまでのキットとの変更点は以下の通りです。
ゲノム研究に横たわる問題を考えるための一助となれば幸せであ 〈現行〉
る。
HRP-streptavidin
・容量 10 µl
・溶液調製法

HRP-streptavdin 8 µl を TE buffer で 40 ml に希釈する。
参考文献

〈改定〉

紙面の都合もあり、ここでは代表的な幾つかを挙げる。次回以降の各項目で詳し

HRP-streptavidin

く列挙する。

・容量 500 µl
・溶液調製法

1) Y. Suzuki, K. Yoshimoto-Nakagawa, K. Maruyama, A. Suyama, S.
Sugano, Gene, 200, 149 (1997).
2) P. Carninci, C. Kvam, A. Kitamura, T. Ohsumi, Y. Okazaki, M. Itoh,
M. Kamiya, K. Shibata, N. Sakaki, M. Izawa, M. Muramatsu, Y.
Hayashizaki, C. Shneider, Genomics 37, 327 (1996).
3) V. Lyamichev, A.L. Mast, J.G. Hall, J.R. Prudent, M.W. Kaiser, T.
Takova, R.W. Kwiatkowski, T.J. Sander, M. de Arruda, D.A. Acro,
B.P. Neri, M.A.D. Brow, Nature Biotechol, 17, 292 (1999).
4) J. Chen, M.A. Iannone, M-S. Li, J.D. Taylor, P. Rivers, A.J. Nelsen,
K.M. Slentz-Kesler, A. Roses, M.P. Weiner, Genome Res, 10, 549(2000).
5) X. Chen, B. Zehnbauer, A. Gnirke, P-Y. Kwok, Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 94, 10756 (1997).
6) A.S. Piatek, S. Tyagi, A.C. Pol, A. Telenti, L.P. Miller, F.R. Kramer,
D. Alland, Nature Biotechnol., 16, 359 (1998).
7) J-B. Fan, X. Chen, M.K. Halushka, A. Berno, X. Huang, T. Ryder,
R.J. Lipshutz, D.J. Lockhart, A. Chakravarti, Genome Res, 10, 853(2000).
8) P. Ross, L. Hall, I. Smirnov, L. Hall, Nature Biotechnol, 16, 1347
(1998).
9) A. Braun, D.P. Little, H. Koster, Clin. Chem. 43, 1151 (1997)
10) T.J. Griffin, W. Tanng, L.M. Smith, Nature Biotechnol, 15, 1368 (1997).
11) J. Hanes, A. Pluckthun, Proc. Natl. Acad, Sci. USA, 94, 4937 (1997).
12) R.W. Roberts, J.W. Szotak, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 12297(1997).
13) N. Doi, H. Yanagawa, FEBS Lett., 457, 227 (1999).
14) C-T. Chien, P.L. Bartel, R. Sternglanz, S. Fields, Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 88, 9578 (1991).
15) J.N. Pelletier, F-X. Campbell-Valois, S.W. Michenick, Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 95, 12141 (1998).
16) F. Karimi-Busheri, G. Daly, P. Robin, B. Canas, D.J.C. Pappin, J.
Sgouros, G.G. Miller, H. Fakhrai, E.M. Davis, M.M. Le Beau, M.
Weinfeld, J. Biol. Chem., 274, 24187 (1999).
17) S.P. Gygi, B. Rist, S.A. Gerber, F. Turecek, M.H. Gelb, R. Aebersold,Nature Biotechnol., 17, 994 (1999).

HRP-streptavidin 400 µl を TE buffer 19.6 ml に希釈する。
今回の改定は HRP-streptavidin の容量と希釈方法のみとなります。その他の操作方法等は全く現行の方法と変わりません。
得られる実験結果は現行のキットと全く違いはございません。
〈輸送および保存条件について〉
現行のキットでは輸送条件は冷蔵でなければならず、輸送状態の不安定な海外については性能を保証できないため、お出しすることができませんでした。今回安定性が大幅に向上した新しいキッ
トにおきましては、海外への輸送に際しても安心して性能を保証できることから、今後は海外のお客様へも本製品を提供できるよ
うになりました。しかしながら国内のお客様に対しましては、輸送条件および保存条件は、これまで通り冷蔵輸送・冷蔵保存とさせていただきます。お手元にて保存する場合は確実に冷蔵保存していただきますようお願い申し上げます。
今回のキット内容の変更に伴い、取扱説明書を一部変更させていただきました。使用前に取扱説明書をお読みになり使用方法をご確認の上ご使用下さい。また、クイックリファレンスを添付致しております。実験時にお隣に置いてご利用下さい。

品名

容量

価格（￥）

メーカーコード-Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit-AP site Counting

5 samples

21,000

DK02

9

News No.101(2002)

新製品
Get pureDNA Kit-Agarose
Get pureDNA Kit-Agarose〈特長〉• 70% 以上の回収率で高純度の DNA が得られる• 広範なサイズの DNA ( 0.05 – 50 kbp )の抽出が可能• DNA をペレットで回収でき、目的濃度の DNA 水溶液を容易に調製できる• 短時間で回収できる• TAE および TBE buffer で泳動したゲルの使用が可能• 低融点・高強度タイプのアガロースからの回収が可能• 1sample あたり 75 円と低コスト
アガロース電気泳動後の目的 DNA の回収には、透析膜を用いた電気泳動濃縮法、アガラーゼのようなゲル分解酵素を用いた方法、シリカ担体を用いた方法等が汎用されています。中でもシリカ担体を用いた方法はキットとして市販されていますが、1)処理するゲ
ルの使用量に制限がある、2)高分子量の DNA では回収量が低い、という問題がありました。
Get pure DNA Kit-Agarose はゲル溶解剤、ゲル除去剤およびDNA 共沈剤で構成され、目的 DNA を簡便に高回収率で回収します。DNA はペレットで回収されますので、バッファーで目的濃度の水溶液に調製でき、PCR、ライゲーション等にそのままご使用頂けます。

Get pureDNA Kit-Agarose を使った DNA 回収例
1

2

3

4

5

6

7

Lane 1 23kbp
Lane 2 9.42kbp
Lane 3 6.56kbp
Lane 4 4.36kbp
Lane 5 2.32kbp
Lane 6 2.02kbp
Lane 7 回収前
0.8％Agarose, 100V, 60min
λDNA/Hind III

1

2

3

4

5

6

7

8
Fig.2

〈キット以外に必要な試薬・機器類〉• 100％エタノール、70％エタノール• 1.5 ml 遠心チューブ• マイクロピペット及びチップ• 遠心分離器• ボルテックスミキサー• 60℃恒温槽〈保存方法〉
本キットは 冷蔵保存（0 〜 5℃）して下さい。

pUC19/Msp I の各フラグメントの回収

Lane 1 501bp
Lane 2 404bp
Lane 3 331bp
Lane 4 242bp
Lane 5 190bp
Lane 6 147bp
Lane 7 111bp〈キット内容〉• Gel lysis buffer
65 ml x 1 本• Precipitation solution
65 ml x 1 本• Co-precipitation solution (20 mg/ml glycogen)
0.5 ml x 1 本

Fig.1 λDNA/Hind III の
各フラグメントの回収

Lane 8 回収前
pUC19/Msp I

3％Agarose, 100V, 60min

なしでも DNA は回収できますが、ペレットとして確認できないことがありますのでご注意下さい。尚、Co-precipitation solution(glycogen)は PCR、ライゲーション等阻害致しませんので、そのままご使用頂けます。

〈操作方法〉
ゲルスライスは 200 mg 以下でご使用下さい *1。

Step 1
Step 2

EB等で染色したアガロースゲルから目的のバンドを切り出す*2。
切り出したゲルを 1.5 ml 遠心チューブに入れ、ピペットチップなどで細かく砕く。

本キットを用いて pUC19/Msp I 及び λDNA/Hind III の各フラグメントを回収し、再び電気泳動した結果を Fig.1,2 に示します。
いずれの DNA フラグメントも、70％以上の回収率で得られます。
また、DNA をペレットとして得ることができるため、バッファー
で目的の濃度の DNA 溶液を調製することが可能です。
本キットでは、Co-precipitation solution (glycogen)を使用することで目的の DNA を目視出来るため、エタノール沈殿後の上澄み除去の際に失うことがありません。Co-precipitation solution

10

Step 3Gel lysis buffer 300 µl を加え、 60℃で 10 分間インキュベー
ションする。 2 〜 3 分毎に vortex する。*3

Step 4
Step 5
Step 6
Step 7
Step 8

ゲルが完全に溶解したことを確認後、室温に 2 分静置する。

Precipitation solution 300 µl を加え、転倒混和する *4。
13,000 × g 以上で 5 分間遠心分離する。
上澄みをピペットで新しい 1.5 ml 遠心チューブに移す *5。
Co-precipitation solution 2 µl を加え、5 秒間 vortex する。更にエタノール 800 µl を加え 5 秒間 vortex する。
13,000 × g 以上で 3 分間遠心分離し、上澄みをピペットで除去

News No.101(2002)

Get pureDNA Kit-Agarose
下で行って下さい。

する *6。

Step 9DNA ペレットに 70% エタノールを 1 ml 加え、5 秒間 vortex する。13,000 × g 以上で 3 分間遠心分離し、上澄みをピペットで除4)取り出した DNA の純度が低い。

• Step 6 で白色沈澱物をピペットで吸いこまないようご注意くださ去する。同じ操作をもう一度繰り返す。

Step10 DNA ペレットはそのまま保存するか、 TE buffer (10 mmol/lTris、1 mmol/l EDTA)等に溶解する。

い。
上澄みに不溶物が混入している際は再度遠心分離し上澄みのみを回収して下さい。

• Step 8 及び 9 において上澄み除去の最終段階では、最小容量用のマイクロピペットを使用し、上澄みを完全に除いてください。

〈注意事項〉*1 ゲル重量が 200 mg 以上の場合は、ゲル重量の 1.5 倍容量の Gel lysis
buffer 及び Precipitation solution、4 倍容量のエタノール及び 70％
エタノールをご使用下さい。Co-precipitation solution は 2 µl ご使用下さい。またその際 1.5 ml チューブはご使用になれませんのでご〈試作品の評価にご協力頂いた先生方の感想〉• 「電気泳動（TAE）後のプラスミド(3kb)バンドから、プロトコルに従注意下さい。

い抽出でき、形質転換に使用できました。サンプル数が少ない場合は勿*2

TAE 及び TBE buffer で泳動したゲルがご使用できます。
ゲル濃度 3% 以内でご使用下さい。

論、多い場合でもステップ数が少ないので極めて便利だと感じました。
」*3

ゲルが完全に溶解していない場合は加温時間を延長し完全にゲルを溶解させてください。

用いた場合より優れていると思います。また作業時間も非常に短時間で*4*5

Precipitation solution を添加すると沈殿が析出します。

済み、効率よく実験が進められることを実感いたしました。今回この上澄みに沈殿物が混入している際は、再度遠心分離し上澄みのみを回キットを用いて抽出した DNA はサザンハイブリ用のプローブに使用し収して下さい。

*6（香川大学）• 「回収率に関しては 70％以上あり、ガラスパウダーや遠心フィルターをましたが、全く問題なく使用できました。」（姫路大学）

上澄みを完全に除去してください。微量の上澄みの残存により、• 「アガロースゲルから回収した vector と cDNA の制限酵素断片を使用

PCR 反応を阻害することがあります。完全に上澄みを除去するために、除去の最終段階では、最小容量用マイクロピペット(<20 µl)のして問題無くライゲーションできました。①何度も洗浄しなくてよい点

ご使用をお勧めします。

②マトリックスなどの混入が無い点③最終産物を小さな体積で得られる点は非常に良いと感じました。」（大阪大学）• 「染色体 DNA を制限酵素 EcoR1 処理後、約 20 kb 付近の断片を精製してみました。かなり収量はいいようです。」（崇城大学）※ Gel lysis buffer および Precipitation solution は、一旦開封するとボ• 「操作が簡単・短時間でしかも高回収できました。遠心操作において沈

トルの口に白く析出する場合がありますが使用には差し支えありません。

殿が明確であり操作性が高いと感じました。常法（シリカマトリックス
を使った手法）に比べると約半分の時間で終了するため、学生には好評でした。ただ Step 6 で上清を全て回収すると 1.5 ml のチューブでは溢〈トラブルシューティング〉
1) DNA が回収できない、または回収率が低い。
• ゲルスライスを完全に溶解してください（トラブルシューティング2）を参照）。
• 遠心操作後、使用するチューブによっては DNA ペレットがチュー

2)

れてしまいます。上清のうち 0.6 ml だけ用いると 100-150 µl のロスが出ますが、十分な量の DNA が回収されていました。」（九州東海大学）• 「思ったよりも時間が掛かってしまいました。御社のキットは 100-200mg以下というゲル量で行うため、普段使っているゲル量（300-400 mg）
よりも少ないという点で不便を感じました。
（中略）シリカビーズを使う

ブ壁面にしっかりと付着していない場合があります。
上澄み除去の他社キットではビーズに DNA が吸着しているため、DNA を目視出来ま

際に、DNA ペレットを吸い込まないようご注意ください。

せん。でもこのキットはエタ沈法なのでその後の工程は、確実に DNA がゲルが溶解しにくい。

回収できているのが目で見えるので安心して使えました。
」（早稲田大学）• 1.5mlチューブ内でゲルスライスをあらかじめ細かく刻んでくださ

平成 13 年 10 月

い。

3)

• 加温溶解の際、サンプル溶液を 2 分毎にピペッティングまたはvortex してください。
• 加温時間を延長し完全にゲルを溶解させてください。
Step 6 の遠心分離後の沈殿物が固くパックされていない。
• ゲルスライスを十分に溶かしてPrecipitation solutionを加えてく

モニター調べ

本品開発に際し、試作品評価にご協力頂きましたことを厚くお礼申し上げ
ます。

ださい。

• Precipitation solution を加えた後、均一になるようタッピングまたは vortex を行ってください。
• 13,000 × g 以上の遠心が困難な場合は、遠心時間を長くし沈殿物
が完全にパックされるまで遠心して下さい。尚、遠心操作は室温以

品名

容量Get pureDNA Kit-Agarose
200 samples

価格（￥）

メーカーコード

15,000GK01

11

News No.101(2002)

Q＆A
自己組織化単分子膜(Self-Assembled Monolayers : SAMs)
Q1
A1

Q2
A2

SAMs とは、どのようなものですか。
固体表面に種々の分子が自発的に高密度・高配向な分子膜を形成することを自己組織化(Self-assembly : SA)といい、形成された分子膜を自己組織化単分子膜(Self-Assembled
Monolayers : SAMs)と言います。

SAMs を構成する分子には、どのようなものが在るのですか。
主に固体表面と結合性部位、アルキル鎖、機能性部位の 3 つから構成されており、本稿で述べるチオール誘導体の他に、有機シリコン誘導体、脂肪酸誘導体などが知られています。

機能性部位
van der Waals力

アルキル鎖

化学吸着

結合性部位
金基板

図１．金表面に形成した SAMs の模式図

Q3
A3

Q4
A4

Q5
A5

12

アルカンチオール化合物 SAMs の特徴はどのようなものですか。作製は簡単ですか。
SAMs の中でも、アルカンチオール化合物は金と反応してAu-S 結合すると共に、アルキル鎖同士の van der Waals
力によって高い配向性を持つ単分子を形成すると報告されています。SAMs の作製には、特殊な装置を必要とせず、チオール溶液中に基板を浸漬するだけで容易に単分子膜を構築できます。
チオール誘導体として、どのようなものが使用可能ですか。
結合性部位はチオール(-SH)の他に、ジスルフィド(-SS-)やスルフィド(-S-)が使用されています。基板結合部位とは反対側のアルキル鎖末端に種々の機能性部位を導入することで、種々の機能を固体表面に導入することが可能です。
チオール誘導体は、基板にどのように結合しているのですか。
チオール誘導体の金への化学的吸着は、以下の反応が自発的に起こる結果であると考えられています。但し、実際に水素分子は確認されていません。
R − SH + Au → R − S − Au + 1/2 H2
R − S − S − R + 2Au → 2(R − S − Au)

Q6 SAMs の用途にはどのようなものがありますか。
A6 アルキルチオール類を金表面に吸着させた SAMs は、金修飾
電極や表面プラズモン共鳴(SPR)、水晶発振子マイクロバ
ランス(QCM)等に利用されています。いずれも、基板となる金表面にチオールやジスルフィドを用いてプローブ分子を固定化し、ターゲット分子との相互作用をそれぞれ電流、
共鳴吸収の角度変化、振動子変化として検出しています。
どのようなタイプの試薬があり、どのような特徴を持つのですか。
A7 弊社では、以下の7種類のチオール誘導体を取り扱っています。以下に特徴と製品群（メーカーコード表示）を記します。
（1）様々なペプチドやタンパク質、その他の分子認識サイトを導入する際に有用なチオール誘導体• 末端アミノ基型チオール：A423、A424、A425• 末端 Fmoc 基型チオール：F287、F288、F289（アミノ基を Fmoc 保護した化合物であり、脱保護に
よりアミノ基を露出させることが可能）• 末端カルボキシル基型チオール：C385、C386、C387• 末端カルボキシル基型ジスルフィド：C404、C405、
C406、D524（チオールに比べ臭気が少なく、取扱いが容易）• 末端 NHS エステル型：D537、D538、D539（既に活性エステル化してあるため、分子を共有結合する際、活性化の操作が必要ありません。
）（2）酸化還元反応を示し、分子修飾電極センサーへの応用等に利用されているチオール誘導体• 末端フェロセニル基型チオール：F246、F247、F269（3）生体関連物質を検出する際に問題となる非特異吸着を抑制するために有用な、混合 SAMs 形成に利用されているチオール誘導体• 末端ヒドロキシル基型チオール：H337、H338、H339

Q7

Q8
A8

膜の形成過程や配向構造はどのようにして調べれば良いですか。
水晶振動子マイクロバランス(QCM)、走査型プローブ顕微鏡( STM / AFM )、FT-IR スペクトル、X 線電子分光(XPS)、
エリプソメトリーなどによって詳細に検討されています。

Q9

サイクリックボルタンメトリー(CV)では、どのようなことがわかるのですか。
SAMs の CV から得られたサイクリックボルタモグラムとしては、チオール類の還元脱離に伴うピーク電位から、吸着量を見積もることができ、化学種が金表面にどの程度吸着しているかを知ることができます。また、ピーク電流値の変化で、SAMs 形成によるレドックス分子のブロッキング能を見ることも可能です。 C V の他、表面プラズモン共鳴(SPR)や QCM でも、吸着量を見積もることができます。

A9

News No.101(2002)

Q10 SAMs を形成する基板は、どのような物が使用可能ですか。
A10 金以外に銀、白金や銅などの貴金属、種々の半導体や金属
酸化物などを用いた報告があります。チオール誘導体のSAMs 作製基板としては、ガラス基板などに金を真空蒸着して作製した金基板、金板や金線など測定系に合わせて任意の形状のものが使用可能です。ガラス基板に金蒸着した
市販品もあります。

Q11 SAMsの電気化学的な測定などで再現性良く結果を得るために注意すべき点は何ですか。

A11 金表面の性質（結晶面など）と SAMs 修飾後の処理に気を付けて下さい。
金表面は単結晶など、結晶表面の状態が解っている方が良いですが、いつも同じ処理を行い、且つ表面の平滑性が一定であれば、再現性は得られると思われます。また、SAMs
修飾後、金表面に吸着していないと推察される過剰のチ
オール誘導体を除去することが重要です（A.16（4）参照）。

Q12 金表面は金(111)面でなければならないのでしょうか。
A12 A11. とも関連しますが、SAMs を作製する基板の表面状態により、吸着量や検出される特性の実験結果に差を生じる為、SAMs や機能性物質の性質や性能を反映せず、金基板の表面状態の影響が評価結果に反映されることになります。そのため、チオール類の吸着挙動を調べる用途などでは、規則正しく原子配列した表面をもつ金(111)などの単結晶基板上での、限定した表面で研究が行われているようです。用途や目的によって、要求される金基板表面の状態が異なります。

Q13 基板の洗浄方法を教えてください。
A13 付着している有機物等を取り除き、金表面を清浄化するため、Piranha 溶液（硫酸：30％過酸化水素水＝ 3：1）に10 〜 15 分間浸漬後、純水で洗浄します。Piranha 溶液は、強力な酸化力を有し、多くの有機化合物と反応するので、取扱い及び廃棄には注意して下さい。但し、この方法は金基板表面のみの洗浄方法であり、例えば金電極の回りを樹脂でコートした物には樹脂を劣化させる可能性があるた
め、不適当です。
また、金基板の研磨による洗浄、および鏡面処理方法として、エメリーペーパーの♯ 1000、♯ 1500、♯ 2000 で順
番に磨き、最後に粒経サイズ 1 µm のアルミナ粉末を懸濁させた水（アルミナ研磨剤として市販されている）をフェ
ルト布に少量含ませて研磨する方法があります。または、
粒経サイズ 1 µm のダイヤモンドペーストで研磨します。
ガラス基板などに金を真空蒸着して作製した基板では、水素炎アニールにより有機物等を除去後、水洗して使用する

方法や UV ランプによるオゾン照射法なども行われています。

Q14 SAMs を形成するための基板の浸漬条件（溶媒、溶液安定
性、濃度、浸漬時間）を教えてください。

A14 溶媒や濃度、および浸漬時間に制限はありませんが、膜の密度や配向に影響を与える可能性があります。目的に応じて調整、検討を行ってください。下記に報告されている浸漬条
件の一例を記します。
（1）溶媒：チオール類が溶解し、それらと化学反応しないものが使用可能です。
エタノールを使用した報告例が比較的多く見受けられます。必要に応じて蒸留したもの
や、溶液中の溶存酸素を除去するために不活性ガス（窒素ガスまたはアルゴンガス）
バブルを行なったものを使用します。また、末端 NHS エステル型などは、アルコー
ル類やアミン類、及びチオール類と反応する恐れがあり、溶媒中の水で分解する恐れもありますので、脱水した溶媒を使用するなど、試薬によっては使用時に注意が必要な場合があります。
（2）溶液安定性：溶媒中の溶存酸素によるチオールからジスルフィドへの酸化や、水分による分解が考えられる
為、溶液の用時調製をお勧めします。チオール溶液保存中に生成する副生成物は主にジスルフィドです。
（3）濃度：数 µ 〜数 10 µmol / l で一般的に行われているようです。
（4）浸漬時間：数 10 分〜数時間。濃度にもよりますが、チオール類の吸着は、
比較的短時間でもかなり飽和吸着に近い形で吸着しますが、その後ゆっくりと時間をかけて配向性が高くなると言われています。

Q15 溶解性を教えてください。
A15 表 1．に各溶媒への溶解性データを記します。
Q16 SAMs の作製手順を教えてください。
A16 以下に簡略な操作方法の流れを記します。
。
（1）SAMs 作製基板を用意します（A.10 参照）。
（2）基板を洗浄します（A.13 参照）（3）チオール類の数 µ 〜数 10 µmol / l エタノール溶液に所。
定の時間浸漬します（A.14 参照）（4）エタノール、純水の順に金表面を洗浄し、過剰に吸着しているチオール類を除去します。末端 NHS エステル
基型など、水で分解する可能性のあるものは、水洗しません。適切な溶媒で洗浄し、乾燥させるだけに留めます。
（5）必要であれば、金表面を窒素（アルゴン）雰囲気下で乾燥させます。

13

News No.101(2002)

Q17 SAMs 表面にタンパクを結合させたい。
A17 末端カルボキシル基を有するチオール類を用いた一例を以下に記します。生体物質の固定化に関しては、他の方法も報告されています。
（1）末端カルボキシル基の SAMs を作製します（A.17 の操
作参照）。
（2）100 mg / ml NHS 水溶液 100 µl を SAMs 表面に滴下（または、その水溶液中に SAMs 基板を浸漬）した後、100 mg / ml WSC 水溶液 100 µl を加え、SAMs 表面
で数時間反応させます。
（3）抗体を溶解する溶媒などで SAMs 表面を洗浄後、抗体溶液を SAMs 表面に滴下（または、その水溶液中にSAMs 基板を浸漬）します。

品名 〈略名〉容量

価格（￥）

メーカーコード

11-Amino-1-undecanethiol,hydrochloride〈11-AUT,HCl〉
10 mg
13,100A423
100 mg39,400A423
8-Amino-1-octanethiol, hydrochloride〈8-AOT,HCl〉
10 mg
13,100A424
100 mg39,400A424
6-Amino-1-hexanethiol, hydrochloride〈6-AHT,HCl〉
10 mg
13,100A425
100 mg39,400A425
N-Fmoc-Aminoundecanethiol〈11-FAUT〉
10 mg
14,800F287
50 mg
45,000F287
N-Fmoc-Aminooctanethiol〈8-FAOT〉
10 mg
14,800F288
50 mg
45,000F288
N-Fmoc-Aminohexanethiol〈6-FAHT〉
10 mg
14,800F289
50 mg
45,000F289
10-Carboxy-1-decanethiol〈10-CDT〉
10 mg
11,300C385
100 mg31,000C385
7-Carboxy-1-heptanethiol〈7-CHT〉
10 mg
11,300C386
100 mg31,000C386
5-Carboxy-1-pentanethiol〈5-CPT〉
10 mg
11,300C387
100 mg31,000C387
10-Carboxydecyl disulfide〈10-CDD〉
10 mg
11,300C404
100 mg33,000C404
7-Carboxyheptyl disulfide〈7-CHD〉
10 mg
11,300C405
100 mg33,000C405

14OOH WSC, NHS

Au

O N

Au

O

O

O

図２．SAMs 表面の活性化の模式図

参考事項

NHSエステルアルカンジスルフィドを使用する場合は、既に活性エステル
化してあるため、末端部分を活性化（上記の操作（1）（2））せずに、タン
パクを固定化することができます。

品名 〈略名〉容量

価格（￥）

メーカーコード

5-Carboxypentyl disulfide〈5-CPD〉
10 mg
11,300100 mg33,0004,4'-Dithiodibutyric acid 〈DDA〉
500 mg14,000Dithiobis (succinimidyl undecanoate) 〈DSU〉
10 mg
13,20050 mg
39,800Dithiobis (succinimidyl octanoate) 〈DSO〉
10 mg
13,20050 mg
39,800Dithiobis (succinimidyl hexanoate) 〈DSH〉
10 mg
13,20050 mg
39,80011-Ferrocenyl-1-undecanethiol〈11-FUT〉
10 mg
11,800100 mg36,0008-Ferrocenyl-1-octanethiol〈8-FOT〉
10 mg
11,800100 mg36,0006-Ferrocenyl-1-hexanethiol〈6-FHT〉
10 mg
11,800100 mg36,00011-Hydroxy-1-undecanethiol〈11-HUT〉
10 mg
11,500100 mg34,0008-Hydroxy-1-octanethiol〈8-HOT〉
10 mg
11,500100 mg34,0006-Hydroxy-1-hexanethiol〈6-HHT〉
10 mg
11,500100 mg34,000

C406
C406
D524
D537
D537
D538
D538
D539
D539
F246
F246
F247
F247
F269
F269
H337
H337
H338
H338
H339
H339

News No.101(2002)

表 1 SAMs 関連試薬類溶解性データ 溶解：○ 不溶：× 微量沈澱有り：△ 未測定：− 単位 mol/lMethyl alcohol

メーカーコード

Chloroform

Ethyl alchool

Dichloromethane

Tetrahydrofuran

10 m

1m

100 µ

10 µ

10 m

1m

100 µ

10 m

1m

100 µ

10 µ

10 m

1m

100 µ

10 m

1m

100 µ

10 µ

A423

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Acetonitrile

メーカーコード

Ethyl acetate

DMSO

Hexane

DMF

Water

10 m

1m

100 µ

10 µ

10 m

1m

100 µ

10 µ

10 m

1m

100 µ

10 µ

10 m

1m

10 m

1m

10 m

1m

100 µ

10 µ

A423

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C387

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C404

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C405

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D524

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F247

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15

News No.101(2002)

販売中止のご案内
弊社都合により下記製品の販売を中止いたしますのでご連絡申し上げます。
ただし在庫あるものに限り対応できますので、弊社または販売店までお問い合わせください。
品名

10x TAE
10x TNE
10x TPE
1H-1,2,4-Triazole
1H-1,2,4-Triazole
2-Aminoperimidine HBr
2-Aminoperimidine HCl
2-Furildioxime
2-Iminopiperidine
3-Br-7-Nitroindazole
4TF
5-F-BAPTA
5-F-BAPTA-AM
5-Nitro-2-PDS
6TF
7-Nitroindazole
8-AcetoxyquinolineAA
AB-NTA
Acetone,(Sp)Acetonitrile,(Sp)
Acridinium-I
ACVJ
Ag(I)-CHBA,(AS)Ag(I)-CHBA,(AS)AO-10-Dodecyl bromide
Azido-FDA
Azidoluminol
Ba(II)-CHBA,(AS)BBD
BDC-OH
Benzene,(CV)Benzene,(Lu)Benzene,(Sp)Benzene,(Sp)
BNBAC3 Sulfo-OSu
BNBAC3-OSu
BNBAC5-OSu
BNBA-OSu
BPR
BPR
BT Standard
Butyl-PBD
Butyl-PBD
Butyl-PBD
Caged aspartic acid
Caged ATP dimethoxy
Caged cAMP
Caged cGMP
Caged fluorescein
Caged fluorescein DPPE
Caged fluorescein Sulfo-OSu
Caged GABA
Caged glutamic acid
Caged glycine
Caged GTP
Caged GTP dimethoxy
Caged proton
Caged proton dimethoxy
Calcichrome
CAPSO
CAPSO

16

容量

和光コード

メーカーコード

1L
500 ml
1L
100 g
25 g
1g
1g
5g
100 mg
25 mg
100 mg
50 mg
50 mg
1g
100 mg
50 mg
5g
25 g
1g
500ml × 6
500ml × 6
10 mg
25 mg
1g
5g
100 mg
100 mg
10 mg
1g
1g
1g
1L
250 ml500 ml
500ml × 6
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
1g
5g
1g
250 g
25 g
5g
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
5 mg
1g
100 g
25 g

347-07501
341-07565
341-07521
345-06561
343-06562
344-03971
347-03961
344-01293
346-07331
342-07291
340-04811
344-05791
347-05801
340-03451
347-04821
343-07221
347-00063
344-00012
344-07653
340-00031
323-00043
347-06521
342-07051
344-03231
340-03233
346-04911
349-04901
340-06871
341-03241
340-03711
340-03691
343-03941
349-00241
347-00225
345-00221
340-06251
346-06231
343-06241
349-06221
349-00361
345-00363
349-00383
340-00411
348-00412
346-00413
349-06081
342-05971
340-05891
347-05921
348-06311
349-06341
342-06331
346-06091
349-06101
346-06111
343-05901
348-05951
343-06121
340-06131
344-00453
345-05461
343-05462

MB03
MB09
MB05
NX05
NX05
A008
A009
F006
I012
B350
T017
B038
B039
N023
T018
N408
A002
A001
A296
SP01
SP02
A060
A313
A017
A017
A011
A014
A307
A018
B022
B024
CV01
LU02
SP03
SP03
B293
B292
B294
B233
B013
B013
B016
B017
B017
B017
CC18
CC05
CC03
CC04
C299
C260
C261
CC15
CC17
CC16
CC02
CC06
CC13
CC14
CC03
GB21
GB21

品名

Carboxyarsenazo
CCVJ
Cd(II)-CHBA,(AS)CDCQ
Ce(III)-AA
Chloranilic acid
Chloroform,(Sp)Chol-AECM-mannan
Chol-AECM-pullulan
Chromazurol B
Chromazurol S
Chromazurol S
Co(II)-CHBA,(AS)Co(III)-AA
Colloid Titration Reagent A
Colloid Titration Reagent B
Colloid Titration Reagent C
Colloid Titration Reagent D
Colloid Titration Starter Kit
Cr(III)-AA,(AS)
Cu(II)-AA,(AS)
Cu(II)-CHBA,(AS)Cyclohexane,(Sp)CyDTA(for amino acids analysis)
CyDTA(for amino acids analysis)
DABITCDABITC
DAHP
DAMP・HCl
DCQ
DDD
DDPC
Detergent Starter Kit
Detergent Starter Kit II
DHEG
Dibenzyl-bis(12-crown-4)
Dichloro-CFSE
Didodecyl-bis(12-crown-4)
DIDS
DIDS
Dimercaptosuccinic acid
Dimethoxyethane,(Sc)Dimethyl-CFSE
Dimethyl-POPOP
Dimethyl-POPOP
Dimethylsulfonazo-III
Dimethylsulfoxide,(Sp)Dioxane,(Sc)
DIPSO
DNBC
DPTA-OH
DPTBA
DTAN
DTBPA
Eu-DPM
Eu-FOD
Eu-PTAFTA
GHAGood's Buffer Starter Kit-I
Good's Buffer Starter Kit-II
Good's Buffer Starter Kit-III
GTB
HABT
HDTA
Hexanes,(Sp)Ins(1,3,4,5)P4 (synthetic)
iso-Octane,(Pr)iso-Octane,(Sp)iso-Propyl alcohol,(Lu)iso-Propyl alcohol,(Sp)

容量

和光コード

メーカーコード

1g
25 mg
1g
25 mg
5g
10 g
500ml × 6
100 mg
100 mg
1g
5g
25 g
1g
25 g
1 Set
1 Set
1 Set
1 Set
1 Kit
1g
1g
1g
500ml × 65g
10 g
100 mg
1g
1g
5 mg
25 mg
5g
10 mg
Set
Set
25 g
100 mg
25 mg
100 mg
100 mg
500 mg
1g
250 ml
25 mg
25 g
5g
1g
500ml × 6
250 ml
25 g
1g
25 g
1g
100 mg
100 mg
1g
1g
1g
5g
1g
Set
Set
Set
1g
25 g
5g
500ml × 6
100 µg
250 ml
500ml × 6
250 ml
500ml × 6

349-00523
349-07061
340-00531
345-07041
344-00551
341-00561
342-00574
342-05591
345-05581
340-04051
340-00651
348-00652
342-03151
344-00752
349-07701
346-07711
343-07721
340-07731
346-07691
347-00781
347-00801
344-00811
342-00851
340-00891
346-00893
345-05101
341-05103
345-07301
348-06431
348-07031
344-00914
345-05601
343-05381
341-06541
345-00922
341-06301
341-06781
348-06291
340-05271
346-05273
345-00961
346-00991
344-06771
341-01002
349-01003
346-01013
341-01024
345-01061
347-04142
343-03821
341-01122
344-05213
349-04803
348-05691
345-01201
342-01211
349-01221
347-01261
341-01323
342-05471
349-05481
346-05491
348-01333
341-01362
343-05641
347-01401
349-05861
343-02101
340-02091
349-02321
342-02311

C006
C340
A019
D406
A034
C009
SP06
C036
C037
C011
C012
C012
A020
A036
C024
C025
C026
C027
C029
A021
A022
A023
SP07
C019
C019
D004
D004
D462
D351
D407
D002
D044
DS01
DS02
D007
D349
D353
D210
D032
D032
D010
SC05
D352
D011
D011
D012
SP10
D012
GB08
D005
D019
D036
D003
D046
E019
E020
E021
F003
G003
GB51
GB52
GB53
G004
H002
H016
SP14
I008
PR05
SP18
LU16
SP19

News No.101(2002)

品名

容量

L-NIL
25 mg
L-NNA
1g
Lumogallion
1g
Maleimido-C3-benzyl-EDTA
10 mg
MBD
500 mg
MBOTAD precursor
10 mg
MBPM
10 mg
Meldola's Blue
1g
MESS
10 mg
Methyl alcohol,(Pr)250 mlMethyl alcohol,(Sp)500ml × 6
Methylcyclohexane,(Sp)500ml × 6
Methyl-EDTA
25 g
Methylene chloride,(sp)500ml × 6
Mg(II)-CHBA,(AS)1g
MMTr-Cl
25 g
Mn(II)-CHBA,(AS)
1g
MTB
1g
MTB
5g
MXB
1g
N,N-Dimethylfprmamide,(Sp)500ml × 6
Na(I)-CHBA,(AS)1g
Naphthalene
100 g
NBDI
1g
NBHA
500 mgNeo-TB
1g
Neo-Thorin
1g
Neo-Thorin
5gn-Heptane,(Lu)250 mln-Heptane,(Sp)500ml × 6
Ni(II)-EDTA
25 g
NIPF
10 mg
Nitr 55 mg
Nitr 5-AM
1 mg
Nitr 75 mg
Nitroso-ESAP
100 mg
NOR 2
10 mg
NOR 2
50 mg
NOS Inhibitor Set I (arginine analogs)
1 Set
NOS Inhibitor Set II (for iNOS)
1 Set
NPDE
1g
o,o'-Dihydroxyazobenzene
1g
ODQ
10 mg
Pb(II)-CHBA,(AS)
1g
PBPB
1g
PBPB
5g
PC3P
25 mg
Phenyl phosphorodichloridate
500 g
Phenylarsonic acid
25 g
Phisyl-Cl
10 mg
PPC
1g
PPKO
1g
PPKO
10 g
Pr-DPM
1g
Pr-FOD
1g
PTA
5g
p-Terphenyl
100 g
PV
1g
PV
5g
Pyridine
100 mlPyridine
500 mlQuene 1
1 mg
Quene 1-AM solution
1 ml
Quin 2-AM
50 mg
S-Aminoethyl-ITU
1g
SAPH
1g
SAPH
10 g
SBD-Cl1g
Scintisol AL-1
3L
SCR
1g
S-Ethyl-ITU
1g

和光コード

メーカーコード

347-07241
346-07211
345-01603
345-06061
343-03723
346-06971
341-06281
343-03681
348-06551
347-01641
340-01631
341-01703
340-01712
349-01721
346-03171
341-06622
340-04671
344-01813
342-01814
342-01853
342-00971
343-03201
344-01891
347-03841
346-03833
348-01953
349-01961
345-01963
344-01391
341-01384
345-02002
342-06711
349-05741
348-06791
346-05751
348-04091
348-06931
344-06933
343-07581
340-07591
346-06731
348-00951
345-07781
348-02151
341-03981
347-03983
346-05871
349-07005
344-02212
340-07091
347-02263
348-02271
342-02274
342-02291
345-02301
343-02341
341-02641
340-02351
346-02353
341-06661
343-06665
345-05841
342-05851
342-04893
348-07271
341-02381
345-02384
342-04991
341-02401
345-02443
341-07261

I233
N410
L003
M031
M017
M319
M274
M001
M023
PR04
SP15
SP16
M006
SP17
A025
NX02
A026
M008
M008
M013
SP09
A027
N044
N021
N022
N006
N007
N007
LU10
SP13
E015
N372
N051
N376
N052
N009
N389
N389
NI01
NI02
N267
D009
O277
A029
P015
P015
P030
NX16
P008
P308
P010
P011
P011
P018
P019
P013
T016
P014
P014
NX29
NX29
Q004
Q006
Q002
A383
S002
S002
S012
SC01
S004
E259

品名

容量

和光コード

メーカーコード

S-Isopropyl-ITU
S-Methyl-ITU
S-Nitroso-L-cysteine 溶液
SNPA
SPADNSSPADNS
SPQ
Stilbazo
Stilbazo
Stilbenefluoblue-S
STTA
STTA
Sulfarsazene
Sulfochlorophenol-S
Sulfonazo-III
TAA
TAC
TAM
TAMSMBTAMSMB
TAN
TAR
TAR
TDBA
TDBA-OSu
TEMPO-T
TFPI
Thiooxine
ThorinThorintma-DPH
TMA-PTIO
TMA-PTIO
TMG
TMG
TPAC
TPAC
TPC
TPC
TPP
TPPC
TPPC
TTD-14-crown-4
Umbelliferone
Variamine Blue B, hydrochloride
VO(II)-AA,(AS)XB-IIZn(II)-CHBA,(AS)

25 mg
1g
5X1 ml
1g
5g
25 g
50 mg
1g
5g
1g
1g
5g
100 mg
1g
1g
5g
1g
1g
100 mg
1g
1g
1g
5g
10 mg
10 mg
25 mg
5 mg
1g
1g
5g
50 mg
10 mg
100 mg
25 ml
500 ml
1g
5g
1g
5g
1g
1g
5g
5 mg
5g
5g
1g
1g
1g
1 Set
500 ml500 ml

344-07371
344-07251
340-07351
346-03811
347-02481
345-02482
344-05671
340-02493
348-02494
343-02503
342-03031
348-03033
341-03861
340-02513
347-02523
348-02531
341-02543
348-02553
347-04201
343-04203
345-02563
349-02583
347-02584
343-07101
340-07111
343-05881
345-07801
342-02713
343-02721
349-02723
341-05201
342-07311
348-07313
348-06632
342-06635
348-02793
346-02794
341-02803
349-02804
342-03891
348-02813
346-02814
340-06751
347-02883
347-02903
347-04681
348-02933
341-03001
344-03851
346-01275
343-01285

I011
M358
N414
S014
S005
S005
S017
S006
S006
S007
S008
S008
S009
S010
S011
T005
T006
T007
T009
T009
T010
T011
T011
T323
T324
T038
T401
T019
T020
T020
T034
A375
A375
NX33
NX33
T025
T025
T026
T026
T002
T027
T027
T302
U001
V001
A031
X002
A032
D024
F004
F005

同仁式ヒ素定量器
複合滴定液 ( Ａ )複合滴定液 ( Ｂ )ラベル材質変更のお知らせ
昨年 10 月よりアルミ製のラベルを廃棄処理が容易な紙製のラベルへと段階的に変更いたしております。
引き続き、ご愛顧くださいますようお願い申し上げます。

旧

新

17

News No.101(2002)

第 12 回フォーラム・イン・ドージン開催報告「生物毒から生命現象を垣間見る」
昨年 11 月 30 日、メルパルク熊本に於いて、第 12 回フォーラ
ム・イン・ドージンが開催されました。 当日は前日までの雨も上がり、白川河畔の木々の紅葉を眺めながらの一日となりました。
今回は、「生物毒から生命現象を垣間見る」と題して、国内のこの分野のトップランナーの先生方8名に講演していただきました。
遠くは関東から参加された先生方も多く、参加者延べ 70 名以上と、盛況のうちに終えることができ、あらためて、ご尽力いただ
いた先生方に感謝する次第です。 実は昨年、自然免疫をテーマに開催した際に、「防御」としての免疫の次は「攻撃」としての生物毒をテーマにしてはどうかという話があがり、折しもタイミン
グ良く、「蛋白質・核酸・酵素」の 3 月号増刊「生物間の攻撃と防御の蛋白質」が刊行されたので、非常に順調に今回のフォーラムを準備することができました。 昨年同様、山本先生（熊本大）、
岩永先生には企画段階からご尽力いただきました。 今年から更に、前田先生に加え、中山先生（熊本大）にもアドバイスをお願いしました。

正木先生（東京大）は、生物界を全体として見た場合、「攻撃」と「防御」との区別は曖昧で、これらは生物間相互作用というより広い概念で理解すべきだという内容の講演をされ、本フォーラムの基調を成すものでした。 細胞膜結合性毒素については、梅田先生（東京都臨床研）がリン脂質フォスファチジルエタノールアミ
ン（PE）結合性ペプチドを用いて、PE が細胞骨格の制御に如何に関わっているかについて、また蛋白合成阻害毒については、遠藤先生（愛媛大）がリボソーム RNA の N-glycosidase の作用か
ら無細胞蛋白合成系構築に至るまでの話をされました。 両講演
とも、蛋白質のフォールディングとの関連に多くの質問が集中しホームページアドレス
URL : http:// www. dojindo.co.jp/
E-mail : info@dojindo.co.jpていました。 また、細胞内情報伝達に作用する毒としては、堀口先生（大阪大）が百日咳菌壊死毒についての紹介をされました。
さらに、もう一方の代表的な生物毒としてイオンチャネル・ブロッカーがありますが、これに関しては、川合先生（自治医大名誉教授）と佐藤先生（福岡女子大）とが、それぞれ、クモ毒、貝毒を例に紹介されました。 特に、佐藤先生はペプチドの固相合成技術を駆使した内容で、フォールディングの問題もジスルフィド結合を如何に架けるかという技術的なノウハウに集約できると感じました。 ディスカッションでもこの点に踏み込んだ内容が多かったように思います。
最後のセッションでは、森田先生（明治薬科大）が血液凝固系に作用するヘビ毒について、また、鎮西先生（三重大）が吸血昆虫の唾液腺成分についての講演をされました。 いずれも活発な
ディスカッションで、予定の時間を大きく上回り、関係者を心配させたようです。
今回のフォーラムでは代表的な生物毒について、それぞれ第一線の研究者に講演を行っていただきましたが、それらを通してど
こまで生命現象を垣間見ることができたかは分かりません。 しかし、生物毒が生命現象の根幹に深く結びついており、それの働きを理解することは、生命の営みを理解する重要な視点に他ならないと確信することができたと思います。 講演要旨集は若干の残部がございます。 ご希望の方は小社までお問い合わせ下さい。
（佐々本 一美）

フリーファックス
フリーダイヤル

0120-021557
0120-489548

ドージンニュース No.101 平成14年1月30日発行

News No.101
18

株式会社同仁化学研究所

DOJINDO LABORATORIES

熊本県上益城郡益城町田原2025-5 〒861-2202
発行責任者 石田和彦 編集責任者 斉藤素子

年４回発行

許可なくコピーを禁ず