ハウス栽培（抑制栽培）におけるトマト青枯病の次世代土壌病害診断マニュアル（指導者向け）

１．トマト青枯病とはトマト青枯病とは細菌（バクテリア）によっておこるトマトの重要病害です。
感染し、発病したトマトは緑のまま、急激に萎れます。そして枯死します。
病原細菌はラルストニア・ソラナセアラム（Ralstonia solanacearum）です。

写真２ 青枯病のトマト株の導管褐変

写真１ 青枯病で萎れたトマト

２.トマト青枯病防除の現状○耐病性台木を使った接ぎ木栽培（高接ぎ木を含む）○土壌燻蒸剤を使った土壌消毒○ふすまや糖蜜を使った土壌還元消毒○耕種的防除・◎課題・青枯病菌は、土壌消毒を行っても、消毒効果の及ばない下層で生存し、発病につながる・耐病性品種による接ぎ木でも条件によっては発病につながる・発病の予測法がなく、防除対策の選択が難しい

３.診断の手順
定植前（土壌消毒前）にほ場の調査をします① 発病履歴の調査② 病原菌の生息深度の調査③ 土質の調査④ 総合リスクの評価⑤ 防除対策の選択・実施

栽

培

前年の診断結果も加えて、診断します。
年々診断精度が上がります。

翌年の診断および栽培診断項目の１～３について生産者への聞き取り調査と土壌調査を行い、それぞれの項目についてのリスクポイントを合計して、総合的な発病リスクを推定します。
そして、総合的なリスクに見合った防除対策を選択します。

４.診断の内容
４-1）診断項目①

発病履歴

診断項目

調査（聞き取り）内容

発病履歴

・これまでに発病があったか？

備考

・いつ発病があったか？
・発病程度（発病株率はどの程度であったか）
・発病があった作型は接ぎ木か実生か

診断項目① 発病履歴
近年（5 年程度）発病無し
近年抑制作型で発生あり
前年抑制作型で発生有り
直前の作型（促成や半促成など）で発生あり＋０＋２＋４＋６

前年に抑制作型があれば、その発病程度で、どの程度の発病するかが、予測できます。しかし、リスクを下げるため、同じハウスで、抑制作型を連続して行わない場合もあります。そのような場合でも、ハウス内外や下層土壌に生き残った青枯病菌によって発病する場合があるため、リスクの評価が必要です。

４-2)診断項目②
診断項目

病原菌の生息深度調査方法

備考

病原菌の生息 ・検土壌を用い、層別に土壌をサンプリン

微生物遺伝資源利用マニュア深度

グします（土壌サンプリング方法参照）

ル(12)改訂第２版

・選択培地を用いて、青枯病菌の検出をしhttp://www.gene.affrc.go.jpます。

/pdf/manual/micro-12.pdf（土壌からの青枯病菌の検出方法参照）
・どの層から検出されるかでリスクを評価します。

（診断項目②）病原菌の生息深度
下層土まで検出なし＋０下層土でのみ検出＋２

中層で検出あり（下層土の検出に限らない）＋６

表層で検出あり104cfu/g 乾土未満の濃度＋８

表層で検出あり104cfu/g 乾土

以上の検出

＋10

＊複数箇所を検定した結果から、最も浅い層から検出した深さを判定に用います。

青枯病菌は地下深さ１ｍでも生息します。そのため、作土層で病原菌を検出しなかった場合でも発病につながる場合があります。さまざまな土壌消毒により、青枯病菌を死滅させる方法がありますが、どの層まで消毒効果がおよんでいるかで、発病程度が異なるため、深さ別に土壌をサンプリングし、青枯病菌の生息する深さを確認します。

〈土壌のサンプリング方法の詳細〉
土壌消毒の処理を行う前、もしくは定植前に土壌のサンプリングを行います。サンプリング位置は、5点法（図１）を基本としますが、生産者からの聞き取りで事前に、青枯病が発生しやすい箇所があれば、その場所を必ず入れておきます。
検土杖（大起理化工業株式会社製ルートオーガー）を用います。刃先の長さ 30cm ずつ、土壌がサンプリングできます。表層から 30cm、30～60cm、60～90cm と３層に分けてサンプリングします。 刃先、検土杖はサンプリング毎に、ワイヤーブラシで土を落とし、消毒用エタノールを噴霧して消毒します。

サンプリング地点

図１ 調査を行うハウスのサンプリング地点写真３

サンプリングに用いる検土杖（下層土を採取しやすいように延長している状態）

写真４

専用のヘラを用いて土壌をサンプリング袋へ入れる。
（下層の土壌を取る際には、表層土から落下した周辺土壌が混ざることがあるため、刃先に取れてきた土壌の上から 5cm 程度は除去します。
）〈土壌からの青枯病菌の検出方法の詳細〉
微生物遺伝資源利用マニュアル(12)改訂第２版の方法を用います。培地は原・小野培地もしくは改変
SMSA 培地を使用します。
土壌と滅菌水を 1:1～1:10 に混合し、10 分以上振とう、またはタッチ・ミキサー等で充分に攪拌後、上清を段階稀釈して培地に拡げ、30℃で静置培養します。培養 3 日目以降に乳白色で内部に輪紋状模様を呈する流動性コロニーを青枯病菌としてカウントします。菌密度が低い（10cfu/g 程度）場合は、コロニー形態の類似した他の土壌細菌との判別が難しいため、同培地で純粋培養した青枯病菌を比較に用います。

４-3)診断項目③土性の調査診断項目

調査方法

備考

土性の調査

・診断項目②でサンプリングした土壌を用います。
・土性の確認方法としては適当な水分を加えて、指先でこねるとひも状に彫塑できる（重粘土～埴土）ことで判断します。

（診断項目③）土性の調査
下層土まで砂質中層、下層に粘土質土壌あり
全層粘土質土壌＋０＋１＋２

青枯病菌が砂質土壌に比べ、粘土質土壌で生存しやすいこと（岡山）、床土が砂質土壌であれば、下層土場へ移動しやすいと考えられていることなど（中曽根）、発病ほ場の土質の特徴が、病原菌の生存および発病に影響を与えていると考えられます。また、大雨が降った場合に、粘土質土壌があった場合、ほ場外の深層土壌で生存している青枯病菌が、施設内に流入しやすく、被害につながるケースも考えられています。

４-４)総合リスクの評価
診断項目１～３のポイントを下表で合計して、合計点からリスクのレベルを評価します。
発病リスクポイント
診断項目
近年まで①発病履歴なし
0②病原菌の生 下層まで存検出なし
0下層まで
③土質
砂質
0ポイント
近年抑制作型で発生あり
2

前年抑制作 直前の作型で型で発生あり 発生あり
46中層で検出 表層で検出あ 表層で検出あり
下層で検出ありあり
り４乗未満
４乗レベル以上
26810
中層、下層に粘粘土質土壌
土質土壌あり1
2合計ポイント＝発病リスク《総合発病リスクポイントとリスクレベル》
１～５
６～９
10～18

リスクレベル１
リスクレベル２
リスクレベル３

５.対策技術の選定４-４)で算出されたリスクレベルに合わせた防除対策を行います。

○リスクレベル１の場合の対策
慣行接ぎ木（台木品種：B バリアなど青枯病に対して最も有効なレベルの耐病性を持つ品種）○リスクレベル２の場合の対策
高接ぎ木（品種：B バリアなど）
深層土壌消毒（糖蜜土壌還元消毒、ｸﾛﾙﾋﾟｸﾘﾝの深層処理など）＋慣行接ぎ木○リスクレベル３の場合対策
深層土壌消毒＋高接ぎ木（品種：B バリアなど）

６．診断表の記載例
登録者氏名登録年月日
生産者、栽培履歴
圃場地点情報
対象作物
品 種
接ぎ木

茄子野 桃次郎2013 年 1 月 1 日

兵庫県○○市トマト
無有（台木品種：）

調査項目
①発病履歴
②病原菌の生存③土性の調査前年抑制作型で発生あり中層で検出あり中層、下層に粘土質土壌あり

総合判定〈例〉リスクレベル２ と判定されました。

コメント〈例〉○リスクレベル２の場合の対策
・高接ぎ木（品種：B バリアなど）
もしくは・深層土壌消毒（糖蜜土壌還元消毒、ｸﾛﾙﾋﾟｸﾘﾝの深層処理など）＋慣行接ぎ木

発病リスクポイント
診断項目
近年まで
①発病履歴
なし
0
②病原菌の生 下層まで
存
検出なし
0
下層まで
③土質
砂質
0ポイント
近年抑制作型
で発生あり
2

前年抑制作 直前の作型で型で発生あり 発生あり
46
中層で検出 表層で検出あ 表層で検出あり
下層で検出ありあり
り４乗未満
４乗レベル以上
26810
中層、下層に粘粘土質土壌
土質土壌あり12合計ポイント＝発病リスク

４６１１１

７.参考資料
7-1)土壌からの青枯病菌検出法の代替方法
診断項目２の青枯病菌の検出方法は選択培地の作成やコロニーの判別にある程度の設備と経験が必要であることから、どこでもできる技術ではありません。そこで、イムノ
クロマト法を使用し、およその菌密度の推定を可能にする簡易な手法を紹介します。

〈トマト青枯病菌の土壌トラップ検定法〉○検定用苗の作り方①イチゴパックなどのプラスチック容器の底に４つ程度キリで穴を開け、未使用の園芸培
土を厚さ１ｃｍ程度敷きます。
②そこへ青枯病に耐病性を持たないトマト品種（大型福寿、強力米寿など）の種子を必要個数（検定サンプル数×15 個程度）播種します。
③①と同じ土壌で覆土します。
④十分に水をやり、バットなどで底面給水します。
（発芽まではラップをかけておく）⑤20～25 日程度、そのまま管理します。室内の明るい場所でよい。
（青枯病菌が混入する危険性がない室内で育成する方がよい）

写真５トラップに用いるトマト苗（播種 25 日後の苗）

写真６

苗を土壌懸濁液に差し込んだ状態○トラップの方法①検定するほ場から土壌をサンプリングします。
②ビニール袋の中でよく攪拌します。
③自立式の 30ml プラスチック遠心管（未使用または滅菌したもの）に、土壌１０ｇを計り、入れます。
④水道水 10ml を加え、ふたをしてよく攪拌します。 写真７ サーモを使って温度保持をする

⑤育成したトマト苗 10 本を地際５mm～１ｃｍのところで切り、さしこみます。
⑥直射日光の当たらない、明るい室内で管理します。
温度を一定に保つため、バットに水を張り、熱帯魚飼育用のサーモスタットを使い、27℃程度に設定します（エアレーションを加えれば対流により温度ムラが減ります）。
⑦水が減少すれば、最初の量まで、水道水を加えます。
（人工気象器に入れると吸い上げが悪く、株が弱り、菌の増殖がよくない）○検定方法①トマト苗の萎れ、枯れ程度を観察、記録する。
１日後と５日後（現在検討中）の２回検定を行う②トマトの苗を３本抜き、付いている土壌をよく洗い流します。
③ティッシュの上にのせ、水分をとります。
③３本をまとめ、先端から２～３ｃｍの位置をカッター等で切ります。
（3 本の合計重量が 0.2g 程度になるように長さを調整します）④イムノストリップ（Ｒｓ：Agdia 社製）付属のバッファーパックに 3 本まとめて入れて、すりつぶします⑤バッファーにイムノストリップを付けて発色を確認します。
＊カッターはサンプルを替えるごとに、洗浄し、エタノールで消毒する。

株に付いている土壌をよく洗い流す

よく水分を拭き取り、切断する。

○注意点
トマト苗の体内で菌の増殖を行って、その菌を検出しているため、選択培地による検出よりも、検出感度が高まる場合があります。そのため、診断項目②に活用する場合は、選択培地を使用するより、リスク値が高くなる可能性があります。

7-2)類似病害
トマト青枯病の類似病害で、同じく、細菌性病害のかいよう病があります。兵庫県内の抑制栽培では青枯病との併発は問題になっていませんが、高冷地の夏秋栽培では併発することがあり、判別が必要になります。
症状ですが、青枯病は、葉の黄化はせず、緑のまま、急激に萎れます。それに対して、かいよう病は葉が巻き上がったり、黒ずんだりして枯れていきます。それぞれの選択培地（原・小野培地、SMCMM）や、それぞれに販売されているイムノストリップでも判別は可能です。

7-3)その他
注意点
・トマト青枯病は土壌伝染性の病害ですが、生産現場では罹病株の腋芽除去や整枝時の汁液伝染が 3 割を占めていると言われています。そのため、発病ほ場ではハサミ等の消毒により、二次伝染を防ぐ必要があります。
・罹病株を放置すると、その株で青枯病菌が増殖し、周辺の健全株への伝染源となります。
そのため、罹病株の早期抜き取りで発病株率の増加を抑制することができます。
・青枯病は高い土壌水分で発病が増えるため、予想されるリスクが低い場合でも水管理によって、発病が高まる可能性があるので、注意が必要です。
・台風等の大雨等により、施設内に雨水が流入するなど、予想されるリスクより発病が増える可能性があるため、施設周りの明渠を深くするなど排水対策をしっかり行う必要があります。