はじめに結内臓肥満、耐糖能異常、高血圧および脂質異常症を特徴とするメタボリックシンドロームは２型糖尿病や動脈血栓（アテローム動脈硬化）症の主要な原因となっている。
内臓肥満の状態においてみられる脂肪組織における炎症性および抗炎症性アディポサイトカインの産生バランスの破綻がメタボリックシンドロームに関連していることから、脂肪組織における炎症性変化がメタボリックシン
ドロームの様々な症状の進展に関与し、2 型糖尿病や血栓症の原因となることがこれまで示唆されてきた。
エンザミンは、枯草菌の１種である AK 株（赤澤菌）から産生される物質である。我々は以前の研究において、エンザミンが線溶活性亢進作用などの抗血栓効果を有することを、マウス生体内レベルおよび血管内皮細胞を用いた細胞レベルで証明してきた。
しかしながら、メタボリック・シンドロームに対する効果については評価されてこなかった。

Fig. 1

肥満マウスの体脂肪組成に対するエンザミンの効果

m (lean)db Enm 0.1% db Enm 1.0%

影響を及ぼさなかった。CT 画像から計算した肥満マウス
における体脂肪率、内臓脂肪量および皮下脂肪量へのエンザミン投与による影響は認められなかった。

Fig. 2肥満マウスにおける脂質代謝に対するエンザミンの効果

本研究では、インスリン抵抗性およびアディポサイトカインの発現に対するエンザミンの効果を肥満・糖尿病モデルである db/db マウスを用いて、検討することが目的である。

(a)

実験手順
6週齢

8週間
エンザミン不含飲水 (n=6)

14週齢

(b)
2.0

*

1.5
1.0
0.5
0- - 0.1 1.0 (%)
mdb(* : p<0.05 vs db(-))

S e rum T-C ho (nmo l l )的痩せ型マウスdb con

腹部の第２腰椎における CT 画像が示すように、エンザミン投与は、肥満マウスの内臓脂肪および皮下脂肪領域にS e rum T G (nmo l l)

目果6543210*- - 0.1 1.0 (%)
mdb

１％濃度のエンザミン投与は、肥満マウスの血清トリグリセリド濃度 (a) と総コレステロール濃度 (b) を有意に減少させた。

エンザミン不含飲水 (n=10)
エンザミン +0.1% (n=9)

Fig. 3肥満マウスにおける糖代謝に対するエンザミンの効果

エンザミン +1.0% (n=8)db(-)
db Enm 0.1%
db Enm 1.0%(b)50*403020100m- 0.1 1.0 (%)
db

P la s ma ins ulin (ng/ml)(a)

P la s ma gluc o s e (nmo l/l)

肥満型マウス

m43210- m0.1 1.0 (%)
db1/3

9080706050403020100**3060(min)90**0(d) Insulin tolerance test (i.p.)

P la s ma gluc o s e(% ba s a l va lue )P la s ma gluc o s e (nmo l/l)(c) Glucose tolerance test ( i.p.)

110
100
9080
7060
504030*030**60 90(min)120*

１％濃度のエンザミン投与は、肥満マウスの空腹時血漿グルコース濃度を有意に減少させた (a)。
１％濃度のエンザミン投与は、肥満マウスの空腹時血漿インスリン濃度には影響しなかった (b)。
１％濃度のエンザミン投与は、肥満マウスにおける耐糖異常 (c) とインスリン抵抗性 (d) を有意に改善した。

Fig. 6肥満マウスの脂肪組織へのマクロファージ浸潤と活性化に対するエンザミンの効果

db/+m

db/db condb/db Enm 0.1%

db/db Enm 1.0%

Fig. 4肥満マウスの筋肉における GLUT4 および CPT1ｂの発現に対するエンザミンの効果

0.8**

0.60.40.20- - 0.1 1.0 (%)
mdb

1.4
1.2
1.00.80.6
0.40.20**- m(d)

0.1 1.0 (%)
db

エンザミン投与は、肥満マウスの筋肉内においてグルコー
スの輸送担体である GLUT4( a) と脂質酸化に関与する酵素であるカルニチン・パルミトイル・トランスフェラーゼ（CPT)1b (b) の mRNA 値を有意に増加させた。このことは、エンザミン投与が肥満マウスの筋肉内におけるグルコース吸収と脂質酸化を改善することを示唆している。
Fig. 5肥満マウスにおけるアディポサイトカイン発現・分泌に対するエンザミンの効果(* : p<0.05 , ** : p<0.01 vs db(-))

1.00.80.6*0.40.20- - 0.1 1.0 (%)
mdb

25605040302010020*15*

10- - 0.1 1.0 (%)
mdb*

0.60.40.20.8*

0.60.40.2- - 0.1 1.0 (%)
mdb

0- - 0.1 1.0 (%)
mdb

CD68 と TLR４のグラフ (ｄ，ｅ) は、それぞれのマーカーの生産量を表しており、エンザミン投与が炎症やマクロファージの浸潤を減少させていることを示唆している。
Fig. 7- - 0.1 1.0 (%)
mdb

エンザミン投与は、肥満マウスにおいて脂肪組織のTNF-α(a)、MCP-1, IL-6 および PAI-1 のｍRNA 値と血清
TNF-α値 (b) を抑制し、かつ血清アディポネクチン（善玉アディポサイトカイン）値 (c) を増加させた。
このことは、エンザミン投与が肥満マウスのアディポサイトカイン産生障害を改善することを示唆している。

(* : p<0.05 vs db(-))

(b)

(a)

1.2

1.2

50

1.00.8肥満マウスの脂肪組織における酸化ストレスに対するエンザミンの効果(c)
S e rum a dipo ne c tin( μg/ml)

T NF -α mR NA (AU)

1.2

1.2

1.00No x2 mR NA (AU)(b)
- (pg/ml)S e rum T NF-α(a)

(e)
1.2

TLR-4 mR NA (AU)

1.0

1.00.8*0.6
0.40.20- m

p2 2 phox mR NA (AU)C P T 1 b mR NA (AU)

1.2

G LUT 4 mR NA (AU)(** : p<0.01 vs db(-))(b)

組織学的分析により、肥満マウスの脂肪組織への F4/80陽性細胞（成熟マクロファージ）の浸潤がエンザミン投与により抑制されたことが示された。加えて、マクロファージの活性化マーカーである CD68、炎症状態のマーカーである Toll like receptor 4（TLR4）のそれぞれｍRNA値も肥満マウスの脂肪組織においてエンザミン投与により減少した。

CD68 mR NA (AU)(a)

F4/80 / DAPI

0.1 1.0 (%)
db

1.0

*0.8
0.6
0.4
0.20- m

0.1 1.0 (%)
db

2/3

１％濃度のエンザミン投与は、NADPH オキシダーゼのサブユニットである Nox2 (a), p22phox (b) および p47phoxなどのｍRNA 発現を肥満マウスの脂肪組織において有意に抑制した。このことは、エンザミン投与が肥満マウスの脂肪組織における酸化ストレスを抑制できることを示唆している。

Fig. 8

試験管内マクロファージにおいて LPS で誘導された炎症反応に対するエンザミンの影響****

12T NF -α mR NA (AU)10(** : p<0.01)

864**

20_ 0.01 0.1
Enm (%)__LPS (1 μg/ml) __ 0.01 0.1+ ++0.01％濃度および 0.1％濃度エンザミン投与により、LPSで誘導された TNF-α発現の上昇は、どちらの濃度でも有意に抑制された。このことは、エンザミンがマクロファージにおける炎症反応を抑制することを示唆している。
要

約■ エンザミン投与は、以下の点を改善する。
肥満マウスにおける脂質及び糖代謝異常

Fig.2 -3肥満マウスの脂肪組織におけるアディポサ
イトカインの分泌障害

Fig. 5■ エンザミンは以下の点を抑制する。

結肥満マウスの脂肪組織における酸化ストレス

Fig. 7肥満マウスの脂肪組織におけるマクロファージ浸潤

Fig. 6

試験管内マクロファージにおける炎症反応

Fig. 8

論

エンザミンは、肥満状態の脂肪組織における炎症と酸化ストレスを抑制することにより、インスリン抵抗性を改善できると考える。
このことからエンザミンは、メタボリックシンドローム予防に有用なサプリメントであると示唆される。

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