腫瘍（肝胆膵）グループ

中本 裕紀（2014年卒）

佐藤

肝再生機構におけるDiacylglycerol kinaseの機能解析

彩（2015年卒）

肝細胞癌進展における分子シャペロンPFDN六量体の各サブユニットの特異的機能の解析

2021年度より研 究に従 事させて 頂いております。肝 切 除

HCCのヒト臨 床 検 体を用いたプロテオーム 解 析 により、は 肝 腫 瘍 の 有 効な 治 療 法 でありますが、 術 後 肝 不全（postHCC低 分 化 群においてPrefoldin subunit2（PFDN2）が 高hepatectomy liver failure, PHLF）を生じ致死的経過を辿る発現していることが同定された（Orimo T et al. Hepatology.

ことがあり、残肝率が低い症例では肝不全発症率・肝不全由来2008）。PFDNは1998年に初めて報告されたタンパク質の折の死亡率が有意に高いdataがあります。そのため有効肝切除率り畳みを制御する分子シャペロンであり、1-6のサブユニットなどによる肝切除アルゴリズムが定められ、場合によっては門脈からなる六量体として機能している（Vainberg IE, et al. Cell.

塞栓術、ALPPS等により残肝率増大を図る必要があります。こ1998）。近年、PFDNの各々のサブユニットがアルツハイマーのように肝再生を前提とした治療が普及しており、肝再生機能の病や2型糖尿病、または癌に対してモノマーとして関与してい詳細な機序解明は重要な課題であると考えます。今回私は細胞るという報告が散見される（Mo SH, et al. Cancer Manag.

膜上の脂質メディエーターであり、肝悪性腫瘍の増殖・進展とのRes. 2020）。The Human Protein Atlas（https://www.

関連性が研究されているDiacylglycerol（DAG）に着目し、肝proteinatlas.org/）を利用し肝癌についてPFDN 1-6各々の再生との関連性についての検討を開始致しました。miceで70%発現と予後を評価したところ、PFDN1-6それぞれでPFDN発現肝切除（PH）モデルを確立し、DGK knock out（KO）mice

量が多い群は予後不良である傾向がみられた。PFDNサブユニッを用い各種解析を行っております。肝組織にはDGKサブタイプ

トがHCCに対し何らかの形で関与している可能性が示唆された。のうち、DGKα（アルファ）、DGKζ（ゼータ）が特異的に発現

本研究では、HCCにおけるPFDNサブユニットの特異的機能しておりますが、現段階ではDGKα KO miceは野生型マウスの解明を通じて、新たな治療ターゲットやバイオマーカーとなるに比して術後死亡率が有意に高く、PH後早期に肝胆道系酵素可能性を模索することを目的とする。先行研究でHCC低分化群の上昇、著明な脂肪沈着等の所見を認め、DGKαが70%PH後において高発現が示唆されたPFDN2を中心として、PFDNの各の肝再生において重要な役割・機能を有している可能性が考えら

サブユニットについて細胞実験によるIn vitro解析、HCC切除検れました。DGKの機能 解明のた体265例を対象とした臨床データ・免疫染色結果の解析を行う。

め、関与が想定されるカスケード・

Tissue microarrayを用いて免疫染色し臨床データを解析し

標 的 分 子をwestern blottingやたところ、PFDN2高発現群で脈管侵襲、低分化腫瘍の割合がPCR法、免疫組織染色等で解析有意に高く、OS・RFSともに有意に低く予後不良であった。Inを行っております。

vitroではPFDN2高発現Huh7株で遊走能が向上している可能性もあり、既報検索も併せて更なる検証を予定している。

70%肝切除モデル 生存カプランマイヤー曲線

TMA PFDN2免疫染⾊．評価はIntensity Score．
0+1+3RFS

OS

生存率がDGKαKOにより低下+2― PFDN2 Low― PFDN2 High

5年⽣存率
67.1% vs 54.8%

p=0.0257― PFDN2 Low― PFDN2 High

5年無再発率
26.9% vs 19.7%p=0.0255

TMA染⾊の結果，臨床データとの相関から関連のありそうなassayを⾏い，In vitroで検証していく.

消化器外科学教室Ⅰ 教室年報202343

齋藤 智哉（2015年卒）

小林 正幸（2015年卒）

肝細胞癌におけるEB1とOATP1B3の分子病理学的関連性の解明

肝発癌におけるHBV既感染の臨床的意の解明
肝細胞癌の原因は従来ウイルス性肝炎を背景とするものが当教室ではこれまで肝細胞癌（以下、HCC）において、微大半を占めていたが、近年ではB型肝炎ウイルス（HBV）に小管関連タンパク質の1つであるEnd-binding protein1（以対する核酸アナログ製剤の投与や、C型肝炎ウイルス（HCV）下、EB1）が、予後及び再発予測バイオマーカーとして有用に対する直接作用型抗ウイルス剤の投与により、ウイルス性であることを報告してきました。 また、肝癌細胞株から作成肝炎を背景とする肝細胞癌の割合は減少している。一方でアルしたEB1KO細胞株とEB1再導入株によるRNA microarray

コール性肝障害や非アルコール性脂肪性肝炎（nonalcoholicanalysisの 結 果 か らEB1の 発 現 と 連 動 し てOrganic Anion

steatohepatitis：NASH）などが原因となる非B非C型肝細Transporting Polypeptide 1B3（以下、OATP1B3）
発現が増胞 癌（non-B non-C hepatocellular carcinoma：NBNC-減するという結果が先行研究から得られました。OATP1B3

HCC）の割合は増加しているが、その腫瘍学的、臨床学的特は種々の内因性、外因性物質の細胞内への取り込みを行って徴は十分解明されていない。当科での肝切除例においてもいる輸送体であり、肝細胞に特異的に発現しています。例えNBNC-HCCの割合は増加しており、近年では半数以上を占めば、HCCの診療で日常的に行われる画像検査であるEOB-MRIる割合となっている。NBNC-HCCの臨床病理学的特徴を把握で使用されるGadoxetate sodiumはこの輸送体の基質です。

することは、今後さらに増加してくるNBNC-HCCの早期発見

OATP1B3のisoformの一つであるCt-OATP1B3は、結腸、や治療に寄与する可能性があり、重要な課題である。

肺、膵臓等、通常OATP1B3が発現していない臓器の癌細胞

いわゆるNBNCはHBs抗原陰性かつHCV抗体陰性の症例とにおいて発現が確認されています。また、非小細胞肺癌での定義されているが、その中にはHBVに未感染のものも既感染研究からCt-OATP1B3の発現が癌細胞の増殖能、遊走能にのものも混在している。特に、HBV既感染（HBcAb陽性）関与していることが明らかとなっており、癌の発育･進展･転が発癌に影響を与える可能性が知られているが、その詳細な移に関与していることが考えられています。しかしながら、メカニズムは明らかになっていない。最近、NAFLD（非アルHCCにおいてはCt-OATP1B3に関して、その発現や機能等

コール性脂肪性肝疾患）症例におけるHCC発癌にHBcAb陽性

詳しいことはまだよくわかっておりません。

が関連していることが報告されており（Am J Gastroenterol

本研究ではEB1とOATP1B3の関連性を解明するべく、肝2020）、NBNC-HCCでもHBVが潜伏している症例があるこ

癌細胞株を用いた発現解析と、組織標本を用いた免疫組織化とが注目されている。HBVの増殖および再活性化のメカニズ

学 染 色 を 進 め て お り ま す。 ま た、OATP1B3 Knockdown

ムや、発癌に与える影響を明らかにすることは重要である。

vector、Ct-OATP1B3 Expression vectorの作製により、肝そこで、NBNC-HCC・HBcAb 陽性症例の癌組織にはHBV

癌細胞株を用いたCt-OATP1B3の機能解析も行っております。

ウイルス遺伝子が挿入されており、細胞レベルで肝発癌に関わっていることを明らかにすることを目的とする。

Ct‐OATP1B3

2801.870

Relative mRNA Expression

Relative mRNA Expression

Lt‐OATP1B3
1.61.41.2
10.80.60.40.20605040

NBNC型のHBc抗体陽性の癌部からDNAを抽出し、HBVDNAのプライマー配列でPCRを施⾏

3020100○

wound healing assay0h48h0h48h
112検体中22検体でHBVDNAの⼀部を有している可能性がある（代表的な⼀枚を表⽰）

Scramble

44

OATP1B3 Knockdown白川智沙斗（2015年卒）

消化器がんに対するDGKζを標的とした核酸医薬の開発研究
本研究ではDiacylglycerol kinase（DGK）を標的とした新規がん免疫治療法の開発およびメカニズム解明を目的としています。DGKは細胞膜上の脂質メディエーターを調節することで生理機能を制御します。これまでの先行研究でDGKαを阻害することによる抗腫瘍効果およびT細胞を介した免疫賦活が示されました。また一方で、DGKαと同様にT細胞で発現するとされるDGKζに関しての研究も進み、DGKζノックアウトによる抗腫瘍効果に加え、DGKαより強力な抗腫瘍免疫応答を示すことがわかりました。がん免疫におけるDGKのメカニズムについてはまだ未解明なところも多く、その解明に取り組むことで今後の治療対象となる可能性があります。
現時点でDGKζの特異的阻害剤は存在せず、各種がん細胞、免疫担当細胞でのDGKζの機能の解明および制御方法の探索によって、がん細胞および免疫担当細胞の双方へ作用し、より効果的な新規がん治療の発展につながる可能性があると考え、核酸医薬の一つであるsiRNAに注目し研究を行っています。培養細胞に加え、生体内におけるがん細胞、免疫担当細胞を標的としたDGKζsiRNAによる抗腫瘍メカニズム、免疫担当細胞の発現や機能を解明することを目的としています。
本年の3月より当初所属していた遺伝子制御研究所免疫機能学教室の北村秀光先生の異動に伴い、消化器外科Ⅰで継続して研究を行っております。宜しくお願い致します。
Effects of DGKζ inhibition for anti-tumor
DGKζ inhibition
activation of immune cells
Dendritic cells

Cancer cells
IFN-αIFN-βNK cells

Anti-tumor
immune response

消化器外科学教室Ⅰ 教室年報202345