Proc.Arthropod. Embryol.Soc.Jpn.3
5，27‑
28(2000)(C)2000A
rthropodanEInbryologicalSocietyo
fJapan

27

ISSN1
341‑
1
527

アブラゼミ(半麹目・同盟亜目)の卵黄蛋白質 (Vg) cDNAのクローニングとその構造解析
李載日文・畠山正統・大石陸生
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iology，FacultyofScience，Kobe University，Nada，Kobe，Hyogo 657‑
8501，Jap仰J}多くの昆虫の主要卵黄蛋白質は v
itellin (Vn) と呼ばれ、雌の脂肪体で合成され、体液中に放出され、卵母細it巴llogenin(Vg) と呼んでい胞に選択的に取り込まれたものである。取り込まれる前の卵黄蛋白質の前駆体を vる (Raikheland Dhadialla，1992)0 Vg遺伝子は、昆虫以外に、さまざまな卵生の無脊椎動物や脊椎動物でクローニングされ、最近の研究からその遺伝子構造はよく保存されており、同じ遺伝子スーパーファミリーに属し

tal.，1997; Sappington and Raikhel，1998; Hagedorn eta，.
l 1998)0ていることが分かつてきた (Chen e
完全変態昆虫 6種の Vgのアミノ酸配列を用いて近隣結合法により分子系統樹を作成したところ、形態学的特徴を用いた系統樹、および 18SrRNA遺伝子を用いた系統樹とよく一致したことから、私たちは、 Vgのアミノtal.，1997)。これまで酸配列は昆虫の系統樹作成のための分子マーカーとなり得る可能性を指摘した (Nose eVgのゲノム DNAあるいは cDNAの全長がクローニングされているのは、完全変態昆虫 6種、不完全変態昆虫l種(ホソヘリカメムシ、半麹日・異麹亜日:Hiraietal.，1998) のみである。そこで、半麹目昆虫のアブラゼミ(同麹亜日)の VgcDNAをクローニングし、構造解析を行い、これまでに報告されている 7種の昆虫 Vgアミノ酸配列とあわせて系統樹を作成した。今回アブラゼミを材料としたのは、コチニールカイガラムシの一種
Dactylopiusconfusus (同麹亜目)の卵黄蛋白質は Vnではないとの報告があり (Ziegleretal.，1996)、同麹亜
日全体が Vn以外の卵黄蛋白質をもっ可能性があるため、この確認も意図してのものである O
アブラゼ、ミ成虫雌脂肪体から抽出、精製した poly(A)+ RNAから cDNAライブラリーを作成し、アブラゼ、ミ43kDa) に対するボリクローナル抗体を用いてスクリニーングした。さらに主要卵黄蛋白質のひとつ (5' RACE (5'rapidamplificationofcDNA ends) 法を用いて翻訳領域の全長を含むクローンを得た。ノーザ、ンブロット解析の結果、アブラゼミの VgmRNAは雌特異的に発現しており、また、化学的に決定した主要卵
200kDa，43 kDa) の N末端アミノ酸配列が、推測されるアミノ酸配列と完全に一致したことか
黄蛋白質 (、 16アミノ酸残基のシグら、得られたクローンはアブラゼ、ミ VgcDNAであると結論した。全長は 6205bpでナルペプチドを含む 1987アミノ酸残基をコードしていた。 Vgの前駆体が切断される直前に保存されているRXXR配列と、 C末端付近で見られる GLCGモチーフやその下流のシステインの位置が保存されており、これtal.(1997) が示している昆までにクローニングされている Vgと非常に高い相同性があった。また、 CheneFig.1)。
虫、無脊椎動物、脊椎動物の Vgの全体でよく保存されている領域 I‑Vも存在した (今回クローニングしたアブラゼミのものを含めて、完全変態昆虫 6種、不完全変態昆虫 2穫の Vgアミノ酸配列全体を使って、近隣結合法を用いて分子系統樹を作成したところ、半麹目の 2種が一つの群を、鱗麹目と双麹目、膜麹目と鞘麹目がそれぞ、れ一つの群を形成したが、これまでにいわれているような系統関係を反映するような系統樹ではなかった。一つの目あるいは一つの亜日で少なくとも 2種以上の Vgアミノ酸配列を用いて解析する必要があるかもしれない。これまでに得られている見虫の Vgアミノ酸配列の情報は新麹群のうち貧新麹群、

ホAbstractofpaperreadatthe35thAnnualMeetingofArthiopodanEmbryologicalSocietyofJapan，June4‑5，1999(Okayama，Okayama)

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準新麹群のものである。今後、さらに新麹群の多新麹群と、旧麹群のいくつかの種を選んで Vg cDNAをクローニングし、 Vgアミノ酸配列が見虫の系統関係を反映しているかを検討する予定である。
引用文献
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