光誘導型Creリコンビナーゼをコードしたクローニングベクター

PA-Cre with Magnet-System®
生命科学分野において、遺伝子の機能解析や病態モデルの作製手段として、時間・空間分解能が高く、薬剤投与では難しい精密なコントロールを実現可能な光操作技術が求められています。本製品は、Creリコンビナーゼに、光スイッチタンパク質Magnet System®を組み合わせた、光誘導型のCreリコンビナーゼ（Photoactivatable Cre; PA-Cre）です。
この製品を用いることで、遺伝子の働きを、光刺激で時間・空間特異的にコントロールすることが可能になります。

PA-Cre with Magnet-System®の作用機構
Inactive PA-Cre

NLS

COOH

Active PA-Cre

NLS

loxP

Dimerization

loxP

pMag

nMag

CreN59(19-59)

Blue light (BL)NH₂

Recombination

CreC60(60-343)
NH₂

COOH

Complementation

PA-Cr e with Magnet Sys tem®は、Cr eリコンビナーゼを二分割してDNA 組 換 え活 性を失わせた断片（split-Cr e︔
CreN59とCreC60）に光スイッチタンパク質Magnet System®（ nMagとpMag）を連結しています。PA-Creは、暗所ではloxP（塩 基 配列）に対するDNA 組 換 え 活 性を示しません（Inac tive PA- Cr e）。青 色光（470±20nm）を照 射すると、PA-Creに導入したMagnet System®（ nMagとpMag）の結合により、Creリコンビナーゼの分割体（CreN59とCreC60）の相補化（complementation）が起こり、PA-Creは速やかに活性を回復します（Active PA-Cre）。この作用機構により、2つのloxPで挟まれたDNA配列の組換え反応を、青色光を照射したタイミングで、青色光を照射した細胞でのみ起こし、遺伝子の働きを、時間・空間特異的にコントロールすることが可能になります。
参考文献︓”A photoactivatable Cre-loxP recombination system for optogenetic genome engineering”

Nature Chemical Biology, 12, 1059-1064 (2016). DOI: https://doi.org/10.1038/nchembio.2205

会社紹介
株式会社ミーバイオ

株式会社ミーバイオ HP
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株式会社ミーバイオは、東京大学 佐藤守俊教授の「光スイッチタンパク質」を活用し、本技術を用いて研究用試薬・コンディショナルノックアウトマウスの製品化、および共同研究を実施しています。
生命科学分野における研究者の皆様の「これまでできなかった」を克服し、サイエンスの発展に貢献します。

製品情報
製品名

pPA-Cre with Magnet-SystemR

容量

参考価格(\)

製品番号10 µL

照会

49328-01※ 本製品はプラスミドの状態での販売となります。詳細については本リーフレットp.3をご確認ください。
※「Magnet System」は株式会社ミーバイオの登録商標です。

本製品の活用例
任意の遺伝子の発現を時空間的にON/OFF制御

Magnet System®
光刺激で活性化したPA-CreによってDNA組換え反応が起きることにより①任意の時間 ②任意の部分 での遺伝子のノックアウト・発現を制御可能に。

Split-Cre

遺伝 子ノックアウトloxP

ターゲット遺伝子

遺伝 子 発 現loxP

loxP

P

GeneloxP

毒性遺伝子やレポーター遺伝子他

Promotor

遺伝子ノックアウト

loxP

STOP

遺伝子発現

loxP

P

GeneGene

アプリケーションデータ_光スイッチ・コンディショナルノックアウトマウス
PA-Creをノックインしたマウスを作製することで、超時空間特異的にマウスの任意の遺伝子の破壊を制御することができます。
以下の実験では、青色光照射部位でのみCre-loxP反応が起こり、部分特異的にレポーター遺伝子が光るのが確認できました。

肝臓筋肉（ 左 足のみ ）また、外部照射により青色光は頭蓋骨を通過し、脳の中枢神経でも発現することが確認できました。

脳の中枢神 経※PA-Creノックインマウスの作製に関しては株式会社ミーバイオにご相談ください。
参考文献︓”Photoactivatable Cre knock-in mice for spatiotemporal control of genetic engineering in vivo”

Laboratory Investigation.2020 DOI: https://doi.org/10.1038/s41374-020-00482-5

製品情報●本製品は「PA-Cre with Magnet System®」のクローニングに適したプラスミドベクター（pUC57）です。細胞などに発現させる場合は、発現ベクターへの導入が必要となります。
●本製品は株式会社ミーバイオによる事前の承認なしに、第三者への譲渡、再販、再販のための修正、商用製品の製造または第三者へのサービスに提供することはできません。詳しくは、お問い合わせください。
●本製品は「試験研究用」です。ヒトや動物を対象にした医療や臨床診断の目的では使用しないでください。

pPA-Cre with Magnet System®

製 品 名: 1_pUC57-PA-Cre.ape ( 環状 / 4124 bp)
シークエンス678 の内の40 ）酵素:
独特な 6+ カッター（合計:フィーチャー15 合計

独特なカッター
太字

濃度

1.0 μg/μL

容量10 μL

溶媒

10 mM Tris-HCl, pH8.0, 1 mM EDTA
-20 ℃

保管温度Esp3I(4059) AatII(4057) ZraI

(3)

PfoI

(46)

PfoI

(3941) SspI

OliI (70)Start codon
XmiI (353)
Bst1107I(3617) ScaI(354)

Ppu21I (474)
AarI (522)
BbvCI - Bpu10I(3507) PvuI(524)

NLS
SspDI (706)
NarI (707)
EheI (708)
PluTI (710)
NgoMIV (736)
PdiI (738)AjiI (744)(3309) VspI

(3198) Eco31I(3137) Eam1105I

pPA-Cre with Magnet SystemR

NLS

4124 bp

Bsp1407I(971)

XapI (1173)
Bsp68I - RruI (1199)

BpiI (1342)BglII (1381)

PsyI (1510)
Mva1269I
PasI (1722)(2128) LguI

SapI
Stop codon

Cfr9I - Eco88I
SmaI (1855)
Bsp120I* (1856)
ApaI* - Eco24I (1860)(1661)(1853)

試薬の使用・カスタマイズについて
Magnet-System®はCre以外にも様々なタンパク質で活用が可能なシステムです。
ベクターのカスタマイズに関してご要望がございましたら、関東化学株式会社までお問い合わせください。

関連製品
核酸精製試薬製品番号

製品名

08088-96

保管温度

シカジーニアス トータルDNAプレップキット（組織用）Ⓡ

Cica Geneus Total DNA Prep Kit (for Tissue)

容量

希望価格

100 回分

¥42,000

250 回分

¥82,000

100 回分

¥58,000

50 回分¥33,000

50 回分¥68,000

50 回分¥13,000

200 回分

¥42,000

50 回分¥15,000

200 回分¥45,000Ⓡ

08088-9708089-9608090-9608142-96
08140-96

シカジーニアス DNAプレップキット（植物用）Ⓡ

Cica Geneus DNA Prep Kit (for Plant)Ⓡ

シカジーニアス DNAプレップキット（糞便用）Ⓡ

Cica Geneus DNA Prep Kit (for Stool)Ⓡ

シカジーニアス DNAプレップキット（土壌用）Ⓡ

Cica Geneus DNA Prep Kit (for Soil)Ⓡ

シカジーニアス プラスミドプレップキット2Ⓡ

Cica Geneus Plasmid Prep Kit2Ⓡ

08140-9708141-96

室温

シカジーニアス PCR & ゲルプレップキットⓇ

Cica Geneus PCR & Gel Prep KitⓇ

08141-9708156-96

シカジーニアス DNA/RNAプレップキット（ウイルス用）

50 回分¥36,000

08144-96

シカジーニアス RNAプレップキット（組織用）2

50 回分¥45,00008055-96

シカジーニアス RNAプレップキット（植物用）DNase同梱品
Cica Geneus RNA Prep Kit (for Plant) with DNaseⅠ

50 回分¥48,00008056-96

シカジーニアス RNAプレップキット（種子＆果実用）

50 回分¥50,000Ⓡ

Cica Geneus DNA/RNA Prep Kit (for Virus)ⓇⓇ

Cica Geneus RNA Prep Kit (for Tissue)2
Ⓡ

Ⓡ

Ⓡ

Ⓡ

Cica Geneus RNA Prep Kit (for Seed & Fruit)Ⓡ※ 各キットの一部構成バッファーは、使用前にエタノール添加が必要となります。

製品番号

製品名14032-08

エタノール(99.5)

規格

容量希望価格

分子生物学用500 mL

¥5,600● 本記載の製品は､試薬 ( 試験､研究用として用いる化学薬品 ) としての用途にご利用ください｡ ● 本記載価格に､消費税等は含まれておりません｡● 本記載の製品情報は予告なく変更する場合があります。 最新情報は､弊社ホームページ｢Cica-Web｣をご確認ください。
【販売元】

試薬事業本部〒103-0022

東京都中央区日本橋室町2丁目2番1号

TEL：03-6214-1090
HP：https://www.kanto.co.jp

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