平成25年度

鹿児島県水産技術開発センター事業報告書

公募型試験研究事業－Ⅳ（ブリ類のノカルジア症に対する既承認抗菌性薬剤の有効性の検証）
柳宗悦，今岡慶明【目的】ノカルジア症は国内では1967年8月に，三重県尾鷲において養殖ブリ及びカンパチで初めて報告された疾病で １,２），現在ではブリ属養殖魚類において最も被害が大きい感染症となっている。
本疾病への対策として，これまでさまざまなワクチンによる予防方法が検討されてきたが，実用化には至らず ３,４），養殖現場における治療方法は，スルファモノメトキシンナトリウム（SMMNa）を主成分とするサルファ剤の投薬があるにすぎない。また，本症はブリ類ではこれまで主に秋季に発生していた疾病であるが，近年，春先に海外から輸入されたカンパチ種苗からも確認されている。
一方，本症の分離株のほとんどは，従来の寒天培養法では低感受性であり効果の判定が非常に困難なことから水産試験場等で感受性を現場評価できる手法が確立されていない状況にある 。
本研究では，ノカルジア症について，①疫学情報の収集(近年の発生状況)，②サルファ剤の効果を評価する標準法の確立，③最適治療方法の検討（サルファ剤の治療投薬方法の整理，既存魚病薬剤(エリスロマイシン(EM)，塩酸オキシテトラサイクリン(OTC))の治療効果の調査・検討)を研究課題として掲げ，取り組むこととした。

過去２年間の調査・研究では，まず疫学調査で，近年，カンパチで春先から発生が確認されているノカルジア症の多くが当歳魚であることを明らかにし ５,６），抗体価測定による感染動態調査で，カンパチは種苗導入時点で感染を受けている可能性が推察された ６）。また，
野外分離株のα－グルコシダーゼ活性の有無は SMM-Na， OTC， EM らの薬剤感受性と関連性が高いことが窺われた ６）。次に ，サルファ剤の効果を評価する標準法の確立として ，Ca，Mg
イオンを調整した1/2濃度のミューラーヒントン液体培地にレサズリンを添加することで，視覚により正確かつ客観的に判定できる MIC 値測定法( REMA 法)を開発し，水産試験場等
で 参 考 と す る た め の REMA 法 の マ ニ ュ ア ル を 作 成 し た ５ , ６ ）。 最 適 治 療 方 法 の 調 査 で は ，Nocardia seriolae 対する SMM-Na の効果的な投薬方法として，投薬→休薬→投薬→休薬のパターンが最も効果的であったこと，同投薬パターンでEMが SMM-Na とほぼ同等の治療効果があることを確認し ５），さらには OTC の治療効果の可能性が示唆された ６）。
本年度は，昨年度に引き続き，①疫学調査（魚病診断データの分析，野外分離菌株のα－グルコシダーセ゛活性とMIC測定値の関連性に関する調査 ），②既存魚病薬剤（ OTC）の治療効果の探索（再確認 ），③プロバイオティクス（ Probiotics）の予防効果の評価の３点について，調査・研究を行った。

【方法】

１．疫学調査(1)魚病診断データの分析

鹿児島県水産技術開発センターが，2004～2013年度の10年間にブリ類について検査依- 260 -

平成25年度

鹿児島県水産技術開発センター事業報告書

頼を受けたものを対象とし，県内養殖場におけるノカルジア症の発生状況についてデー
タ分析を行った。なお，診断件数として示す“件”は，１回の検査依頼につき通常，複数の検体（複数の生簀を含む）が持ち込まれるが，その診断結果が全て同一の疾病だった場合は１件として，複数の疾病が確認された場合は複数件として集計したものを示す。
(2) 野外分離菌株の α －グルコシダーゼ活性と MIC 測定値の関連性に関する調査

2007年～2013年にかけて鹿児島県内で分離されたノカルジア症の野外分離株62株（ブリ由来23株，
カンパチ由来19株，クロマグロ由来4株，ヒラメ由来16株）について，REMA 法によりSMM-Na，

OTCおよびEMに対するMIC値を測定し，当該菌株の薬剤感受性評価を行った。併せて，API ZYM
市販キット又は chromID™ MRSA（シスメックス・ビオメリュー㈱）を使用し α －グルコシ
ダーゼ活性を調べた。

２．既存魚病薬剤の治療効果の探索

すずき目魚類の既存魚病薬剤である OTC（水産用 OTC 散20％「 SP」；(株)インターベット）と既承認薬である SMM-Na（水産用ダイメトンソーダ；明治製菓(株)）について，
平均体重約40ｇの人工種苗カンパチを用いて感染，治療試験を行った。供試菌株は OTCに対する MIC 値の低い菌株(２ μg/mL，2011年に鹿児島県内の養殖カンパチから分離された KGN1136 株，α－グルコシダーゼ陰性株）を使用し， BHI 寒天培地で25℃で５日間培養後，滅菌生理食塩水に10 ７ CFU/mL になるよう懸濁し，供試魚の腹腔内に0.1 mL（接種菌量10 ６ CFU/fish）接種した。なお，対照区は他の試験区と同様に菌接種を行った。接種後，各区20尾を200Ｌ水槽（20回転 /日の濾過海水をかけ流し）に収容し，１日１回，エクストルーデッド飼料（ extruded pellet： EP）を魚体重の１～２％を目安に給餌し， OTC お
よび SMM-Na の投薬は菌接種の５時間後から開始し，投薬量は 50mg/kg 魚体重・日を基準とした。なお，投薬パターンは１週目投薬，２週目休薬，３週目投薬（投薬の週は月曜から金曜まで５日間連続投与後，２日間休薬）とし，21日間飼育観察を行い，治療効果について調べた。試験終了後，生残魚の外部（体表，鰓の潰瘍の有無）および内部（腎臓，脾臓等の結節の有無）所見により，ノカルジア症の発症の有無を観察し，併せて 7H11 寒天培地( Mycobacteria 7H11 Agar ， Difco ， USA )と１％小川培地（日水製薬(株)）に臓器片を接種後25℃で２週間以上培養し，黄白色のコロニーの発育の有無を観察した。試験期
間中の水温および溶存酸素( DO )は ，ポータブル水質測定器( YSI 社製 Model85)で測定した 。

３．プロバイオティクス（エンテロコッカス・フェシウム）の予防効果の評価
プロバイオティクスとしてのエンテロコッカス・フェシウム(ビオフィード1000(飼料用乳酸菌
Enterococcus faecium BIO 株生菌)； コーキン化学(株) )の予防効果を探索するため ， エンテロコッ
カス・フェシウム区には感染試験の４日前から当該添加物を１％外添した EP 飼料を供試魚に与え，その後， N. seriolae による感染試験を行った。試験は 平均体重約220ｇの天然種苗カンパチと平均体重約40ｇの人工種苗カンパチを用いて，計２回実施した。なお，供試菌株は２の治療試験と同様の株を使用した。
１回目の試験では供試菌株をBHI寒天培地で25℃で５日間培養後，滅菌生理食塩水に10６CFU/- 261 -

平成25年度

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mLと10７CFU/mLになるよう懸濁し，供試魚の腹腔内にそれぞれ0.1mL（接種菌量：①10５CFU/fish，②10６CFU/fish）接種した。なお，対照区はエンテロコッカス・フェシウム区と同様に菌接種（接種菌量①： 10５CFU/fish，②10６ CFU/fish）を行った。２回目の試験では 供試菌株をBHI寒天培地で25℃で５日間培養後，滅菌生理食塩水に10７CFU/mLになるよう懸濁し，供試魚の腹腔内に0.1mL（接種菌量 10６CFU/fish）接種した。なお，対照区はエンテロコッカス・フェシウ
ム区と同様に菌接種（接種菌量 10６CFU/fish）を行った。菌接種後，１回目は各区15尾を，２回目は各区20尾を200Ｌ水槽（20回転/日の濾過海水をかけ流し）に収容し，１日１回，EP飼料を魚体重の１～２％を目安に給餌し，１回目は28日間，２回目は21日間飼育観察を行い，予防の可能性について調べた。なお，給餌は菌接種の５時間後から開始し，エンテロコッカス・
フェシウムの添加量は給餌量の１％を外添し，１週間当たり５日間連続投与とした（月曜から金

曜まで５日間連続投与後，２日間無給餌）。試験終了後，生残魚の外部（体表，鰓の潰瘍の有無）および内部（腎臓，脾臓等の結節の有無）所見により，ノカルジア症の発症の有無を観察し，併せて 7H11 寒天培地(Mycobacteria 7H11 Agar， Difco，USA)と１％小川培地（日水製薬(株)）に臓器片を接種後25℃で２週間以上培養し，黄白色のコロニーの発育の有無を観察した。試験期間中の水温および溶存酸素(DO)は，ポータブル水質測定器(YSI社製Model85)で
測定した。

【結

果】

１．疫学調査(1)魚病診断データの分析

2004～2013年度の10年間の魚病診断件数を分析した結果，ブリ類におけるノカルジア症の診断割合は全診断件数の9.9％(266件/2,682件)であり，2009～2013年度の５年間は12.9％(144件/1,117件)と，診断割合が増加する傾向にあった（図１，２）。
ノカルジア症は，県内のほぼ全域で発生が確認され，ブリ類全体では夏季から秋季にピークが見られたが，カンパチでは近年，春先から初夏の種苗導入時期（４～７月）にも発生が確認される傾向（通称「春タイプのノカルジア症 」）があった（表１ ）。 なお， 本
年度はカンパチによる春先から初夏にかけての発生は少なく，従来の夏季から秋季にかけての発生が比較的多く見られ，水温が低下した12月でも継続して確認された。
ノカルジア症2004 30
2005 21314
239

2006 28
2007 23
年 2008 20
度 2009 38
2010 32

260
298
331
227
297

2011 24122

2012 262013 24

125

0

その他疾病

202

50

100

150

200

250

300

350

図１ ブリ類の診断件数に占めるノカルジア症の件数（鹿児島県）- 262 -

400（件）

平成25年度

鹿児島県水産技術開発センター事業報告書

ノカルジア症

その他疾病

2004
2005

9

91

8

92

2006
2007

10

90

7

93

年 2008度 2009

6

2010
2011
2012

94
14

86

10

90

16

84

17

2013

83

11

89

0

20

40

60

80

100

図２ ブリ類の診断件数に占めるノカルジア症の割合（鹿児島県）（％）

表１ カンパチにおけるノカルジア症の年度別・月別診断件数の推移（単位：件）
4月
2004年

5月

6月

1

7月

8月

9月

3

4

10

6

1

3

3

4

2

1

13

5

5

4

1

17

2

4

2

1

2

5

3

4

6

6

7

3

3

4

2

4

3

5

3

1

2

4

2

2

2

2

9

3

1

2

2005年
2006年
2007年

1

2008年

1

1

1

1

1

2

2009年
2010年

4

1

2011年
2012年
2013年

1

1

2

2
3

10月 11月 12月

1月

2月

3月

合計
25

12
1
4

14
1

2

30
21
14

1

17
20

合 計
5
3
6
19
23
52
39
19
11
3
0
3
183
（注） 鹿児島県水産技術開発センターの魚病診断データによる（平成26年1月末現在）。

(2)野外分離菌株の α －グルコシダーゼ活性と MIC 測定値の関連性に関する調査
2007年～2013年の野外分離株62株について，SMM-Na，OTCおよびEMに対するMIC値を測定した結果，SMM-NaのMIC分布は4～32μg/mL で，そのうちα－グルコシダーゼ陽性株は21株確認され，その全数がMIC値が高い16～32μg/mL の範囲で確認された（図３）。
OTCのMIC分布は1～64μg/mL で，そのうちα－グルコシダーゼ陽性株は4～64μg/mL の範囲で確認された。SMM-Naと同様，陽性株はMIC値が高いところに多く分布する傾向にあり，32μg/mL
以上は全て陽性株であった（図４）。
EMのMIC分布は二峰性を示し，<0.5μg/mL と128～>512μg/mL の範囲で確認された。α－グ
ルコシダーゼ陽性株はMIC値が低い<0.5μg/mL でのみ確認された（図５）。
今回確認されたα－グルコシダーゼ陽性株の魚種別の確認状況では，カンパチが11株と最も多く(11株/19株≒57.9％），以下ブリ4株(4株/23株≒17.4％），クロマグロ4株(4株/4株＝100％)，ヒラメ2株(2株/16株＝12.5％)の順であった（図６）。また，カンパチで確認された陽性株11株のうち10株(10株/11株≒90.9％)は当歳魚で（図７），4～8月に多く確認された（図８）。

- 263 -

平成25年度

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25

α-グルコシダーゼ陽性株
α-グルコシダーゼ陰性株

20

（ ）

分
離 15
数
株 10
5
0
<0.5

1

2

4

8

16

32

64

128 256 >512

MIC（μg/mL）
図３ REMA法を用いたSMM-NaのMIC分布25

α-グルコシダーゼ陽性株
α-グルコシダーゼ陰性株

20

（ ）

分
離 15
数
株

10
5
0
<0.5

1

2

4

8

16

32

64

128 256 >512

MIC（μg/mL）
図４ REMA法を用いたOTCのMIC分布25
α-グルコシダーゼ陽性株
α-グルコシダーゼ陰性株

20

（ ）

分
15
離
数
10
株
5
0
<0.5

1

2

4

8

16

32

64

128

MIC（μg/mL）
図５ REMA法を用いたEMのMIC分布- 264 -

256>512

平成25年度

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α-グルコシダーゼ陽性株

11

カンパチ

魚
種

ブ

α-グルコシダーゼ陰性株

8

4

リ

19

2

ヒ ラ メ

14
4

クロマグロ
0

5

10

15

20

25

分離数（株）
図６．α-グルコシダーゼ陽性株の魚種別確認状況

当歳
9.1
%

２歳

90.9%

図７ カンパチのα-グルコシダーゼ陽性株の年齢構成

4α-グルコシダーゼ陽性株

3

2

（ ）

分
離
数
株

1

0
1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

月
図８ カンパチのα-グルコシダーゼ陽性株の月別出現割合- 265 -

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２．既存魚病薬剤の治療効果の探索

試験結果を表２に，試験期間中の生残率の推移を図９に，生残魚におけるノカルジア症の外部症状および内部症状発生率を図10に，試験期間中・終了時の供試魚の状況写真
を図11にそれぞれ示した。
菌接 種21日後の生残率は，SMM-Na投与区(80％)，対照区(20％)，OTC投与区(5％)の順であった。OTC投与区は８日後までは高い生残率を示したものの，その後急激に低下した。
生残魚におけるノカルジア菌分離率は， SMM-Na 投与区が43.8％であったのに対し，対照区， OTC 投与区はいずれも100％であった。生残魚におけるノカルジア症の外部症状および内部症状発生率は，共に SMM-Na 投与区(外部12.5％，内部75.0％)より対照区（外部100％ ，内部100％)が明らかに高かった 。なお ，試験期間中の水温は26～23℃で推移し ，溶存酸素( DO )は概ね5 mg/L で推移した。
表２ 治療効果試験の結果
ダイメトン（SMM-Na）
投与区
試験区１（投薬→休薬→投薬）
20
41.5
5
11
80.0

飼育尾数（尾／水槽）
平均体重（ｇ／尾）
投薬開始時間（時間後）
死亡初発日（日後）
生残率（％）
生残魚における
ノカルジア症の外部症状発生率（％） ※１

生残魚における
ノカルジア症の内部症状発生率（％） ※２

生残魚における※３
ノカルジア菌分離率（％）

ｵｷｼﾃﾄﾗｻｲｸﾘﾝ(OTC)
投与区
試験区２（投薬→休薬→投薬）
20
39.7
5
6
5.0

対照区
試験区３
（無投薬）
20
41.6
－
5
20.0

12.5 （2/16）

0 （0/1）100 (4/4)

75.0 （12/16）

100 （1/1）

100 （4/4）

43.8 （7/16）

100 （1/1）

100 （4/4）（注） ①用量はダイメトン（SMM-Na），オキシテトラサイクリン（OTC）とも50mg/kg・日を基準に，１週間当たり５日間連続投与とした。
②KGN1136株の由来（2011年鹿児島由来，カンパチ，α-グルコシダーゼ陰性株，OTCのMIC2μg/mL，SMM-NaのMIC16μg/mL,③ＯＴＣは「水産用ＯＴＣ散20％」，ＳＭＭ-Naは「水産用ダイメトンソーダ」を使用。
※1 外部症状発生率は，体表潰瘍の有無を確認した尾数の割合。
※2 内部症状発生率は，腎臓及び脾臓の結節の有無を確認した尾数の割合。
,※3 菌分離率は，7H11培地又は1%小川培地に臓器片を接種後25℃で2週間以上培養し，黄白色のコロニーの発育の有無を観察した尾数の割合。
SMM-Na

OTC

対照区

100

80

60

（

生
残
率

40

）

％

20

0

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
攻撃後日数

図９ 治療効果試験（SMM-Na，OTC）の生残率の推移- 266 -

平成25年度

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（％）
100

100

％

40

（ ）

60

20

100

OTC区

対照区

75

80
発
生
率

100

12.5
0

0
SMM-Na区

OTC区

対照区

外部症状

SMM-Na区

内部症状

図10 生残魚におけるノカルジア症の外部・内部症状発生率

攻撃後９日目（OTC投与区）

攻撃後９日目（OTC投与区）

内臓全体に結節が形成（内臓が癒着した状態）

鰓の結節が顕著に見られる
試験終了時（SMM-Na投与区）

試験終了時（対照区）

内部症状：ほとんど結節は見られない

図11

内部症状：内臓全体に結節を確認

試験期間中・終了時の供試魚の症状- 267 -

平成25年度

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３．プロバイオティクス（エンテロコッカス・フェシウム）の予防効果の評価
１回目の試験結果を表３に，試験期間中の生残率の推移を図12に，２回目の試験結果を表４に，試験期間中の生残率の推移を図13に，試験期間中・終了時の供試魚の状況写真を図14にそれぞれ示した。
１回目の試験では接種菌量10５CFU/fish，10６CFU/fishとも，対照区に比べエンテロコッカス

・フェシウム区は生残率(10５CFU/fish：対照区93.3％，エンテロコッカス・フェシウム区100％，10 ６CFU/fish：対照区80.0％，エンテロコッカス・フェシウム区93.3％)はやや高く，菌分離率(10５CFU/fish：対照区64.3％，エンテロコッカス・フェシウム区40.0％，10６CFU/fish：対照区83.3％，エンテロコッカス・フェシウム区71.4％)は低い結果を示したが，２回目の試験では効果は確認できなかった（生残率：対照区20.0％，エンテロコッカス・フェシウム区0％）。
表３ 第１回予防効果試験の結果
対照区
５（10 CFU／Fish）
試験区１
15
221.6
22
93.3

対照区
６
（10 CFU／Fish）
試験区２
15
223.2
7
80.0

エンテロコッカス・フェシウム
５（10 CFU／Fish）
試験区３
15
236.9
－
100

エンテロコッカス・フェシウム
６（10 CFU／Fish）
試験区４
15
225.7
24
93.3

飼育尾数（尾／水槽）
平均体重（ｇ／尾）死亡初発日（日後）
生残率（％）
生残魚における
0 （0/14）0 （0/12）0 （0/15）0 （0/14）※１
ノカルジア症の外部症状発生率（％）
生残魚における
50.0 （7/14）
58.3 （7/12）
6.7 （1/15）
21.4 （3/14）※２
ノカルジア症の内部症状発生率（％）
生残魚における
64.3 （9/14）
83.3 （10/12）
40.0 （6/15）
71.4 （10/14）※３
ノカルジア菌分離率（％）（注） ①ｴﾝﾃﾛｺｯｶｽ・ﾌｪｼｳﾑの添加量は給餌量の１％を外添し，１週間当たり５日間連続投与とした。また，添加開始は攻撃試験開始４日前からとした。
②KGN1136株の由来（2011年鹿児島由来，カンパチ，α－グルコシダーゼ陰性株，OTCのMIC2μg/mL，SMM-NaのMIC16μg/mL）※1 外部症状発生率は，体表潰瘍の有無を確認した尾数の割合。
※2 内部症状発生率は，腎臓及び脾臓の結節の有無を確認した尾数の割合。
,※3 菌分離率は，7H11培地又は1％小川培地に臓器片を接種後25℃で2週間以上培養し，黄白色のコロニーの発育の有無を観察した尾数の割合。

表４ 第２回予防効果試験の結果
対照区
６（10 CFU／Fish）
試験区１
20
41.6
5
20.0

エンテロコッカス・フェシウム
６（10 CFU／Fish）
試験区２
20
38.1
5
0

飼育尾数（尾／水槽）
平均体重（ｇ／尾）死亡初発日（日後）
生残率（％）
生残魚における
100 (4/4)
0 （0/0）※１
ノカルジア症の外部症状発生率（％）
生残魚における
100 （4/4）
0 （0/0）※２
ノカルジア症の内部症状発生率（％）
生残魚における
100 （4/4）
0 （0/0）※３
ノカルジア菌分離率（％）（注） ①ｴﾝﾃﾛｺｯｶｽ・ﾌｪｼｳﾑの添加量は給餌量の1％を外添し，1週間当たり５日間連続投与とした。
また，添加開始は攻撃試験開始４日前からとした。
②KGN1136株の由来（2011年鹿児島由来，カンパチ，α－グルコシダーゼ陰性株，OTCのMIC2μg/mL，SMM-NaのMIC16μg/mL）※1 外部症状発生率は，体表潰瘍の有無を確認した尾数の割合。
※2 内部症状発生率は，腎臓及び脾臓の結節の有無を確認した尾数の割合。
,※3 菌分離率は，7H11培地又は1％小川培地に臓器片を接種後25℃で2週間以上培養し，黄白色のコロニーの発育の有無を観察した尾数の割合。

- 268 -

平成25年度

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対照区10５
対照区10５

対照区10６
対照区10６

ｴﾝﾃﾛｺｯｶｽ・ﾌｪｼｳﾑ区10５
ｴﾝﾃﾛｺｯｶｽ・ﾌｪｼｳﾑ区10５

ｴﾝﾃﾛｺｯｶｽ・ﾌｪｼｳﾑ区10６
ｴﾝﾃﾛｺｯｶｽ・ﾌｪｼｳﾑ区10６

100

80

（ ）

生
残 60
率
％

40

20

0

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31

攻撃後日数
図12 第１回予防効果試験（エンテロコッカス・フェシウム）の生残率の推移

対照区

ｴﾝﾃﾛｺｯｶｽ・ﾌｪｼｳﾑ区

100

80

60

（

生
残
率

40

）

％

20

0

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
攻撃後日数

図13 第２回予防効果試験（エンテロコッカス・フェシウム）の生残率の推移
攻撃後８日目（対照区）

攻撃後８日目（エンテロコッカス・フェシウム区）

内臓全体に結節が形成（内臓が癒着した状態）

内臓全体に結節が形成（内臓が癒着した状態）

試験終了時（対照区）

試験終了時（エンテロコッカス・フェシウム区）

対 照 区（４尾生残）エンテロコッカス・フェシウム区（１尾死亡）

外部症状：全個体で体表に潰瘍を確認

外部症状：腹部，腹鰭・尻鰭に潰瘍を確認- 269 -

平成25年度

鹿児島県水産技術開発センター事業報告書

図14

【考

試験期間中・終了時の供試魚の症状

察】

１．疫学調査(1)魚病診断データの分析

2013年度のブリ類のノカルジア症の診断件数(24件)は，平年値(2004～2012年度の平均
値，27件)と大きな違いはなかったが，本症の診断割合はブリ類の診断件数の約１割を占め，近年増加傾向にあることから，その発生動向には引き続き注意が必要である。本症の診断割合が近年増加する傾向にある背景には，ワクチン普及による連鎖球菌症，類結節症，マダイイリドウイルス病等の主要感染症の減少が大きな要因と考えられ，ノカルジア症に対する早急なワクチン開発，新薬開発が望まれる。
(2)野外分離菌株の α －グルコシダーゼ活性と MIC 測定値の関連性に関する調査

α－グルコシダーゼ活性の有無はSMM-Na，OTC，EMの薬剤感受性との関連性が高く，当該活性のモニタリングは薬剤耐性菌の出現の有無を評価する上で，有益な指標になり得るものと推察された。すなわち，α－グルコシダーゼ陽性株はSMM-Na，OTCに対しては低感受性を示し，EMに対しては感受性を示す傾向にあった。対して，α－グルコシダーゼ陰性株はSMM-Na，OTCに対しては感受性を示し，EMに対しては低感受性を示す傾向にあった。これらのことから，S
MM-Naと併せてOTC，EMのMIC値をモニタリングすることは，ノカルジア症に対するブリ類の既存薬剤による治療の可能性と選択肢を見出す資料に成り得るものと思われた。 なお， 現時点の野外分離株のSMM-Naに対するMICの最大値は32μg/mL であることから，これより高いMIC値を有する細菌が出てきた場合は，既承認薬剤の耐性菌である可能性が高いことから注意する必要がある。
また，α－グルコシダーゼ陽性株はカンパチに出現する割合が高く，年齢別ではその大半が当歳魚であり，４～８月に多く出現する傾向にあった。これらのことから，近年，
カンパチで４～７月に発生が見受けられる「春タイプのノカルジア症」については，α－グルコシダーゼ陽性株が高い割合で混入している可能性が示唆された。嶋原 ７ ） は N．
seriolae 菌株を表現型（酵素活性， API ZYM 市販キット使用）および遺伝型（パルスフィ
ールド電気泳動）により型別を行い，2000～2005年に分離された菌株の多くは，1970～1990年の菌株とは異なる表現型を示し（1970～1990年は全てα－グルコシダーゼ陽性株，
2000～2005年はカンパチ由来菌株の一部を除き，α－グルコシダーゼ陰性株 ），遺伝的な相関性も低く，近年流行している菌株の多くは，過去に流行していた菌株の再現ではな
く異なるタイプの菌株によるものであると推察している。春先から発症が確認されている菌株と従来の秋季に発生する菌株との間には，遺伝タイプが異なる可能性も推察されることから，今後も両者についての表現型（α－グルコシダーゼ活性）を継続的に調査し，さらには遺伝子型についても，詳細に調査する必要があるものと思われた。
２．既存魚病薬剤の治療効果の探索

OTC 投与区は，８日後までは85％の生残率を示し，対照区の50％と比べ明らかに高かったが，最終生残率は５％と最も低い結果であった。
山本ら ８）は，ノカルジア症の治療に関し，テトラサイクリン( TC)に対する MIC 値を測- 270 -

平成25年度

鹿児島県水産技術開発センター事業報告書

定し，感受性があったことを報告しており，前段の MIC 値測定結果においても， OTC は感受性があることを示しているが，今回の治療効果試験の結果からは治療効果は低いものと推察された。しかしながら，昨年度実施した接種菌量10 ７ CFU/fish の治療効果試験では，最終生残率は OTC 投与区が20％， SMM-Na 投与区が40％と共に低かったものの試験終了時まで生残し，９日後に全滅した対照区とは明らかな差が確認され， OTC による治療効果の可能性が示唆されていることから ６），再確認の必要があるものと思われた。
３．プロバイオティクス（ Probiotics）の予防効果の評価

今回の試験結果からは，エンテロコッカス・フェシウムの N． seriolae に対する明確な予防効果は確認できなかった。しかしながら，今回使用したエンテロコッカス・フェシ
ウムは，凍結乾燥した粉末状のものを EP 飼料に外添して予防効果を評価したため，摂餌後に腸管内に取り込まれたものの，エンテロコッカス・フェシウム自体が休眠の状態で，予防効果を発現する前に体外に排泄された可能性も否定できず，更なる試験研究が必要であると思われた。

【謝辞】

本研究を実施するに当たり，宮崎大学農学部の吉田照豊教授には各試験実施に関して多大なるご指導とご協力を頂いた。記して深謝する。

【参考文献】
１）室賀清邦．ブリのノカルジア症 ．「魚介類の感染症・寄生虫症 」（若林久嗣・室賀清邦編）
恒星社厚生閣，東京．2004;211-214．
２）楠田理一，中川敦史．ブリのノカルディア症．魚病研究，1978;13:25-31．
３）福田穣．ワクチン普及に伴うブリ養殖の再興疾病対策に関する研究．平成15年度養殖衛生対策技術開発研究成果報告書，社団法人日本水産資源保護協会，2004;35-43．
４）板野公一，川上秀昌．養殖ブリの再興疾病に関する研究．平成15年度養殖衛生対策技術開発研究成果報告書，社団法人日本水産資源保護協会，2004;46-60．
５）柳宗悦，村瀬拓也，吉田照豊，Tamer Fawzy Ismail． 養殖ブリの再興感染症(ノカルジア症)に関する研究．平成23年度養殖衛生管理問題への調査・研究成果報告書，養殖衛生対策推進協議会，2012；81-94．
６）柳宗悦，前野幸二，吉田照豊，嶋原佳子． 養殖ブリの再興感染症(ノカルジア症)の薬剤治療に関する研究．平成24年度養殖衛生管理問題への調査・研究成果報告書，養殖衛生対策推進協
議会，2013；31-48．
７）嶋原佳子．防疫 ノカルジア症の研究成果と今後の展望～感染時期，病原菌の由来，ワクチン開発への課題など～．月刊アクアネット，2009.１月号;54-57．
８）山本賢治，森実庸男．魚病研究・指定調査研究総合助成事業．愛媛県水産試験場報告書，1971；
177-178- 271 -