LGI-X100 Application Note

No. AS201201

SPE-LC-GCシステムを用いた農作物中のクロロタロニル（TPN）分析

はじめに今回、新たに開発したSPE-LC-GCシステム[LGI-X100]は、固相精製–LC分取–GC/MS分析の工程をLGI-X100
for SPE-LC-GC system

オンライン化した自動分析システムです。このシステムでは試料（抽出液）を固相カートリッジに通して予め精製することで、LCの汚染を低減し、さらにLCで分離したフラクションをGC/MS分析します。LC分離と熱分離のSample組み合わせで高選択性が得られることで、夾雑成分を多く含む試料においても、単成分または複数成分をターゲットとした分析が可能となります。当アプリケーションでは様々な食品中のクロロタロニル(TPN)分析についてご紹介します。
システムの概要
LC分取

固相精製

GC/MS分析

固相保持・乾燥

Information（公社）日本食品衛生学会創立60周年記
念第116回学術講演会（WEB開催）
固相カートリッジによる精製(LCカラムに吸着する無極性成分の除去)

逆相HPLCによる画分分取(LCカラムによる精製)

GCカラムでの沸点差による分離

抽出およびSPE-LC-GC精製フロー
対象作物・玉ねぎ・白菜・大根・キャベツ・ピーマン

Key Word
残留農薬分析
固相抽出オンライン SPE-LCGC System

精製フロー詳細 ①固相抽出(LC分取前)
試料吸引

試料負荷

ターゲットを溶出してサンプルループに注入。
無極性の夾雑物を固相で除去。

AiSTI SCIENCE②LC分離
バルブを切り替え、ループ内の試料をLCカラムへ導入。
ターゲットをLCで分離する。

Product

サンプルループ④GC/MS測定③固相抽出(LC分取後)
ターゲットが溶出されたら、混合注入バルブ内で希釈水と混合し、溶媒濃度を下げ、固相へ保持させる。

窒素パージにより固相を乾燥。

溶出溶媒を流し、固相からの溶出とGC注入を同時に行う (溶出溶媒約40µL大量注入)。

LGI-X100
LVI-S250
Flash-SPE C18
予冷式ドライアイス
凍結粉砕キット

株式会社アイスティサイエンス

溶出溶媒シリンジポンプ〒640-8390
和歌山市有本18-3TEL. 073-475-0033
FAX. 073-497-5011

www.aisti.co.jp

AiSTI Application Note

No. AS201201

測定条件
装置構成

LC条件
LGI-X100 (アイスティサイエンス)
LVI-S250 (アイスティサイエンス)
LC2030 (島津製作所)
TQ8040 (島津製作所)

SPE-LC-GC:
大量注入口装置:
LC:
GCMS:

GCMS条件超純水
ACN
0.6 mL/min
40°C
254 nmInertsil ODS-3

移動相A:
移動相B:
流速:
オーブン温度:
検出波長:
カラム:[内径3 mm×長さ100 mm,粒子径5 µm (GLサイエンス)]

カラム:

VF5-MS

キャリアガス:
カラム流量:
IF温度:
イオン源温度:MS測定モード:ヘリウム
1.0 mL/min
290°C
260°C
SCAN (m/z 50-480)[20 m×0.25 mm (0.25 µm)]

スプリットタイムプログラム:

グラジエントプログラム:
Bconc. 10%(1min hold), 10→50%(12min), 50→60%(2-9min), 60→95%(910min), 95%(5min hold), 95→10%(1516min), 10%(4min hold) [total 20min]

スプリット 1:100 (0.42min hold)→スプリットレス(0.42-4min)→スプリット 1:50

オーブン昇温プログラム:
80°C(4min)-35°C/min-310°C(3min)[total 14min]

LVI条件
注入口昇温プログラム: 70°C(0.42min)-120°C/min-240°C-50°C/min-290°C(9min)[total 11 min]システムの性能
精製と測定を効率的に処理できるシステム

逆相HPLC分取による精製効果

SPE-LC-GCシステムはLC精製工程(固相精製+LC分取)とGC測定をオーバーラップさせて効率的に処理サイクルを回すことが可能です。夾雑
成分を多く含む食品試料を対象とした場合でも、1検体の処理時間を20分以内に収めることができました。

大根と玉ねぎのLCクロマトグラム(上段)と分取画分を測定したGC/MSクロマトグ
ラム(下段)を示しました。夾雑物の影響なくピークを検出できました。
試料: 254nm
試料: 230nm

LCクロマトグラム
1300000

uV
データ1:ﾀﾞｲｺﾝ_01.lcd 検出器A Ch1:254nm
データ2:ﾀﾞｲｺﾝ_01.lcd 検出器A Ch2:230nm
データ3:10ppmTPN-RTcheck_04.lcd 検出器A Ch1:254nm

大根1200000

STD(10ppm): 254nm [RT確認のため]uV
1300000 データ1:10ppbﾀﾏﾈｷﾞ-3_01.lcd 検出器A Ch1:254nm
データ2:10ppbﾀﾏﾈｷﾞ-3_01.lcd 検出器A Ch2:230nm
データ3:10ppmTPN-RTcheck_04.lcd 検出器A Ch1:254nm
1200000

玉ねぎ

1100000

1100000
1000000

1000000
900000900000800000800000700000700000600000600000500000500000400000400000300000300000200000

200000100000100000

000.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

GCクロマトグラム (m/z 266)

5.0

5.5

6.0

6.5

7.0

7.5

8.0

8.5

9.0

9.5min

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

分取画分(RT 8.1-9.1min)

分取

試料中濃度: 0.01ppm

7.0

7.5

8.0

8.5

9.0

9.5min分取

試料中濃度: 0.01ppm
TPN

TPN(RT 8.8min)

SPE-LC-GCシステムの処理サイクル時間

SPE-LC-GCシステムの精製効果

添加回収試験
TPNの添加回収試験の結果と玉ねぎとキャベツの定量イオ
ンクロマトグラムの重ね描きを示しました。5種類の作物での試験において回収率、再現性ともに良好な結果が得られました。
添加回収試験
添加濃度: 試料中0.01ppm (n=5)

1.75(x10,000)(x10,000)

試料中濃度: 0.01ppm

玉ねぎ

1.50

1.75

試料中濃度: 0.01ppm

キャベツ

1.50

1.25

1.25

1.00

1.00

0.75

0.75

0.50

0.50
0.25

0.25
0.00
8.6

8.7

8.8

8.9

9.0

9.1

8.5

8.6

8.7

8.8

8.9

9.0

9.1

定量イオンクロマトグラムの重ね描き (定量イオン: m/z 266, n=5)
回収率は1点(絶対検量線)により算出

まとめ
今回、食品中残留農薬分析における個別分析の迅速・簡便かつ自動化が可能な装置システムの開発を目的とし、TPN分析法の検討を行いました。予冷式ドライアイス凍結粉砕法+QuEChERS法を参考とした抽出+SPE-LC-GCシステムを用いることにより、5種類の作物において安定した回収率と再現性が得られ、本システムが異なる夾雑成分を含む試料においても汎用的に使用可能であることが示されました。また、抽出後の固相精製～GC測定までの時間を1検体20分サイクル以内に収めることが可能であり、時間効率においても本システムが優れた処理性能を有する結果が得られました。