Proc.Arthropod.E
mbryol.Soc.Jpn.(34)，49‑
51(1999)(C)1
999ArthropodanEmbryologicalSocietyofJapan

49I
SSN1
341
‑
1527

RAPD法によるカブラハバチの DNA多型の検出と連鎖解析
西森善克・畠山正統・大石陸生
2YoshikatsuNISHIMORl1)，
MasatsuguHATAKEYAMAndKugaoOISHl1，2):Detection)aofRAPD (random amplifie
dpolymorphic DNA) markers and linkageanalysisintheAthaliarosae(Hymenoptera)*sawfly，Department 01 B
iology，Graduate School 01 Science and Technology，Kobe University，Nada，Kobe，J)

Hyogo 657‑8501，JapanDepartment01Biology，Faculty01Science，Kobe University，Nada，Kobe，Hyogo 657‑8501，Japan2)

わたしたちは、膜麹目昆虫のカブラハバチ A
thaliarosaeの様々な利点、例えば、成熟未受精卵を蒸留水に浸Naito，1982)、昆虫で唯一卵内への精子注入により人工授精が可
すだけで単為発生を開始させることができる (ishi，1989)、などを用いて発生生物学的な研究を行ってきた。発生生物学の代表的なモ能である (Sawaand Orosophilamelanog
ωterであるが、これを用いた研究は確立されデル生物(昆虫)の一つはショウジヨウバエ Dた遺伝学的パックグランドを利用することにより発展してきた。一方、カブラハバチは遺伝学的パックグランド

YJb， cec，sw) のみである O そこで、カフ守ラノ¥ノ tチの遺伝学的に乏しく、可視突然変異は現在のところ 3種類 (パックグランドを得る一端として、まず、 DNA多型を検出し、得られた DNA多型マーカーについて連鎖解析を行った。
カブラハパチの DNA多型の検出は、 RAPD (randomamplifiedpolymorphicDNA) 法を用いた。これは、polymerasechainr
巴action) を行った場合、
ゲノム DNAと任意の塩基配列をもっプライマーを用いて PCR (ゲノム DNA中に存在するプライマー結合部位における塩基置換を多型 (RAPDマーカー)として検出するとWilliamsetal.，1990)(
Fig.1)。プライマ ‑44種類を用いて、カブラハバチ雌 1個体から得いう方法である (0個体 (Gt) について DNA多型を検出した。その結果、 44種類のうち 23種類のプライマーで 29の RAPDた雄4マーカーを得た。これらの RAPDマーカーを連鎖解析ソフト MAPMAKERver.2.
0(Landeretal.，1987)で解析したところ、得られた 29マーカーのうち 10マーカーで四つの連鎖群ができた。また、可視突然変異遺伝子座yJbに連鎖しているマーカーも得られた (Fig.2)0RAPDマーカーは再現性に多少の問題があり、連鎖解析の精度に影響を与えるという指摘がある。そのた哉 (STS:sequencetaggedsit巴s) 化する必要がある (Olsonetal.，
め、 RAPDマーカーをゲノム中の同定襟 51989)0 STS化は、 RAPDマーカーの塩基配列を決定した後、 RAPDマーカーを特異的に増幅するようなプライマーを設定して PCRを行い、 RAPDマーカーと同ーの断片が増幅されることにより、 RAPDマーカーの再現性を確認するものである (HuntandPage，1994; Kurataetal.，1995)。
今後、さらに多くの RAPDマーカーを検出し、主なマーカーについては STS化を行えば、詳細な遺伝子連鎖地図を作成することが可能であると思われる また、他の昆虫では、 rDNA、テロメアなどの繰り返し配列が、FISH (fluorescenceinsituhybridization) によって染色体上にマップされている (Okazakietal.，1993; BeyeandMoritz，1995; Meyne etal.，1995)0 同様の方法で、カブラハパチですでに単一コピー遺伝子としてクローVg) 遺伝子 (Noseetal.，1997) や RAPDマーカーを染色体上に位置づけ、染色ン化されている卵黄蛋白質 (O体遺伝子マッピングの可能性を検討したい。

*Abstractofpaperreadatthe3
3rdAnnualMeetingofArthropodanEmbr
yologicalSocietyofJ
apan，May21‑22，
1998(Mikawa，Aichil.

50M

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 1415161718192021 22f

一一一<+‑+‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑++‑‑

M 232425262728293031 32333435363738394041 42ー=23222027""‑1057‑770ーー<++++++++‑+‑+雌++‑++++Fig.1 An exampleo
fDNA polymorphisminAthaliarosae. PCR productswereobtainedb
y usingt
heechnology，Alameda，CA)，indiv
iduallyfromtemplateDNAsamplesofpr
imer，OPD‑04 (OperonTadiploidfemaleparentheteroz
ygou
sforyello
wf
atbody Oane 2)andher40haploi
dsons(wildtype:lan
es3‑22，yellowf
atbo
dy:lanes23‑42，sizemarker: M，neg
ativ
ec
ontrol:lane1)，andw
ereseparated on a 1ι% agarosegel.Arrowheads: RAPD marker， +: RAPD marker present，‑'RAPD marker absent

引用文献
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C10‑1200004・
950

2.
8十…
。
C08・
600

14.
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18.
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8A02‑1100

18.
8A18‑2200

25.
0

A18‑1500
Fig.2 Linkage groupso
f1
0 RAPD loc
i and theyellowfatbody (yjる)locusinAthaliarosae.M
arkersarenamedbypr
imerdesi
gnationoft
hesupplier(aletterfollow
edbyanumberfo
rpr
imer
sfrom
OperonTechnologies)followedbyad
ashandappr
oximatesizeofthea
mplifiedfragmenti
nbases.Allofthemarkers were mapped with a minimumLOD scor
eforl
inkageof3.
0. Marker
P血 rdistancesar
egiv
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ncentimor
gans.