測定フロー
1.検体抽出■品質チェック : 総RNA濃度50〜800ng / μL、OD260 / OD280値1.9〜2.1を推奨

or

FFPE組織

新鮮凍結組織

FFPE
セルブロック【測定のポイント】

3時間

1 検 体 材 料 は、腫 瘍 細 胞 の細胞診検体

1 腫瘍細胞確認

スライド作製推奨
RNA濃度:50〜800ng/μL
OD 260 / OD 280 値 1.9〜2.1

RNA抽出

2.本キットによる検査

3時間
4

3 抽出済みRNA 6μL

Ct値にて陽性/陰性を判定

Plateau

本キット

Fluorescence

PositiveSample

汎用PCR装置の使用が可能

cDNA合成ThresholdExponential
Phase

Ct

Baseline
0Cycles

RT-PCR（検体毎に4ウェルを測定）

2 推奨のRNA抽出試薬で検体からRNAを抽出し、吸光度測定によりRNAの量と品質をチェックして下さい。

3 RNA溶液6uLからcDNAを合成し、4本のチューブに分けてリアルタイムPCRを行って下さい。

4 汎 用 のリアルタイムP C R

For Bet ter Life ,Across the World装 置 の 使 用 が 可 能で す。
装置から得られたCt値をもとに 判 定を行って下さい。(⇒「判定フロー」をご参照下さい)

Negative Sample
20

製造販売承認番号：22900EZX00002000

存在が確認されたものをご利用下さい。
（ 検体中の腫瘍細胞の割合30%以上を推奨します）。

2 RNA品質チェック

or

体外診断用医薬品

40

測定結果

判定フロー
検体
RNA抽出

逆転写反応
(cDNA合成)

PC

検体(RNA)ROS1逆転写反応Mix
ROS1逆転写酵素

6 μL
18.5μL
0.5μL

検体（cDNA）

各5μL(Negative Control)

PC

NC×4
ROS1反応Mix（①〜④）
ROS1酵素Mix
混合液（①〜④）

PCR(2段階)

各5μL

各35 μL

HEX：24未満

いずれも満たす

結果判定

HEX:20超FAM:30以上

FAM:30未満

陰性陽性

OncoGuide® AmoyDx® ROS1 融合遺伝子検出キット
ROS1融合遺伝子検出キット

製造販売業者

株式会社理研ジェネシス

判定不可（必要時は再検査）装置・抽出キット推奨品
リアルタイムPCR装置（ 製造販売承認番号：22900EZX00002000)（製品番号：A163）

一般的名称

FAM:30以上※FAM : カルボキシフルオレセイン（いずれも蛍光標識物質）

本キットの概要

使用目的

HEX：30以上

FAM：30以上
いずれかを満たさない

HEX:20以下※HEX : ヘキサクロロフルオレセイン

各5μL

各35 μL
各0.3μLFAM：24未満

Ct値の算出

製品名

NC(Positive Control)

癌組織又は細胞診検体から抽出したRNA中のROS1融合遺伝子mRNAの検出（クリゾチニブ及びエヌトレクチニブの非小細胞肺癌患者への適用を判定するための補助に用いる）

測定原理

RT-PCR法（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応 / Reverse Transcription PCR）

構成試薬

8種の試薬（凍結溶液）

検体材料

腫瘍細胞の存在が確認されたFFPE組織、新鮮凍結組織、細胞診検体、または細胞診検体由来FFPEセルブロック

保険点数

2,500点（D004-2 悪性腫瘍組織検査）（2018年4月1日現在）

包装

1キット
（24テスト）

保管方法−20±5 ℃（遮光）製造元

Amoy Diagnostics Co., LTD（中国）•Stratagene Mx3000P ( アジレント・テクノロジー株式会社 )•ABI StepOnePlus ( サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社 ）•ABI 7500、
ABI 7900HT ( サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社 ）•LightCycler 480 II ( ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社 )•RG-6000 (72ウェル) ( 株式会社キアゲン )•Rotor-Gene Q (72ウェル) ( 株式会社キアゲン )RNA抽出キット[FFPEの場合]•AmoyDx FFPE RNA Kit /Cat No. ADx-FF04 ( アモイ ダイアグノスティクス社)•RNeasy FFPE Kit /Cat No. 73504 ( 株式会社キアゲン )[未固定凍結検体、細胞診検体の場合]•AllPrep DNA /RNA Mini Kit /Cat No. 80204 ( 株式会社キアゲン )ROS1融合遺伝子検出キット

OncoGuide® AmoyDx® ROS1融合遺伝子検出キット
クリゾ チ ニ ブ 及 び エ ヌトレ ク チ ニ ブ の 非 小 細 胞 肺 癌 患 者 へ の 適 応 の 判 定 を 補 助【お問合せ先】
株式会社理研ジェネシス 営業部〒141-0032 東京都品川区大崎1-2-2 アートヴィレッジ大崎セントラルタワー8F
TEL: 03-5759-6042 / FAX: 03-5759-6043 / MAIL: info2@rikengenesis.jp®：弊社または各社の商標または登録商標です
C01-010-22H-05

表4表1

OncoGuide® AmoyDx® ROS1融合遺伝子検出キット

多様な検体種に対応

3

本キットが対象とする検体種および取扱について

本キットの特徴

クリゾチニブ及びエヌトレクチニブに対するコンパニオン診断薬

1

検体種

クリゾチニブの国際共同第Ⅱ相試験において、ROS1融合遺伝子陽性患者の選択に関する本品の臨床性能が示された

高い検出感度

2・長期保存に向いている・固定条件により品質にばらつきが出る

新鮮凍結組織（FF）

検体の劣化が少ない

細胞診検体

患者様の侵襲性が低い
細胞診標本

腫瘍細胞の存在が確認された4種類の検体種から抽出したRNAを用いた測定が可能●細胞診検体●細胞診検体由来FFPEセルブロック

RNA抽出の前処理・ホルマリン固定(48時間以内)・パラフィン処理

脱パラフィン処理

凍結保存（液体窒素も可）

不要

遠心分離
凍結保存不要※1 実際に必要な検体量については、ご依頼先の検査センターなどにお問合せ下さい。

製品内観※2 各検体の取扱については、
日本肺癌学会バイオマーカー委員会作成「肺癌患者におけるROS1 融合遺伝子検査の手引き（第1.0 版）」等のガイドラインをご参照下さい。
※3 気管支鏡検査で採取された生検検体は微量であることが多く、FFPE 組織からは充分量のRNA が抽出できない場合があるため、検体が微量のときは腫瘍細胞の含有が確認された新鮮凍結検体を検査に提出することが推奨されます。
（出所）
日本肺癌学会編、「肺癌患者におけるROS1 融合遺伝子検査の手引き（第1.0 版）」RT-PCR法（AmoyDX社）における検体の取り扱い（P-15）を一部改変

クリゾチニブに対するコンパニオン診断薬
臨床性能試験

クリゾチニブの国際共同第Ⅱ相試験 (OO12-01試験)
試験の相Phase Ⅱ

試験番号
OO12-01

症例数
N=127

対象集団
未治療・既治療例（他の治療薬）奏効率（ORR）(95%CI)69%(61, 77)

ROS1融合遺伝子の特徴

FISH法との一致

本キット※CI：信頼区間陽性陽性

陰性

100

合計

10陰性FISH法
0

判定不可32329211

合計19■ 非小細胞肺がん（NSCLC）のドライバー遺伝子の１つ■ EGFR遺伝子変異、ALK融合遺伝子とは排他的な関係■ 日本人のROS1陽性患者は、NSCLC患者の1〜2%3453

本キットを用いてROS1融合遺伝子陽性と判定された非小細胞肺癌患者127例(うち日本人患者26例)にクリゾチニブを投与した結果、主要評価項目である奏効率(RECIST)は69%(95%信頼区間：61%,77%)であり、臨床的に意義のある抗腫瘍効果を示した(独立判定委員会による評価）

クリゾチニブの国際共同第Ⅱ相試験(OO12-01試験)のスクリーニングを目的として採取された非小細胞肺癌患者53例のFFPE検体を用いて、本キット、および、事前に性能確認されたROS1FISH法による検査を行った結果、ROS1融合遺伝子または転座の有無に関する結果判定は全て一致した（出所）Goto K et al., Journal of Clinical Oncology MAY2016 より理研ジェネシス抜粋（出所）本キット添付文書を一部改変

14種類のバリアント、既知遺伝子の96%に相当するROS1融合遺伝子の検出が可能
ROS1融合遺伝子の種類および本キットにより検出が可能な融合遺伝子のタイプ
融合遺伝子No.

4343SLC34A2

13del32567

最小検出感度

精製プラスミドDNAを使用した系での確認

8

ROS1融合型細胞由来RNAを使用した系での確認

検出対象のROS1融合型塩基配列を含有する14種の精製プラスミドDNAを用いて検討を行ったところ、1検査反応あたり125コピーで安定的に検出された

8.084%

130.146%150.007%17200400（出所）本キット添付文書より抜粋

121.184%

140.154%160.003%

18

ROS1野生型、及びGOPC-ROS1融合型の細胞株からRNAを抽出して一定濃度に調製し、様々な比率でROS1融合型細胞由来のRNAを含有するように混合したものを検体として用いて検討を行ったところ、本キットにより95%の確率で陽性判定が可能な検体のROS1融合RNA含有率(LoD C95)は上表の通り

表2SDC40.120

LRIG38GOPC4CD74

KDELR2
CCDC6LIMA1MSN

21

CLTC22232354TPM3192016SDC4GOPC

3461048Unknown
9%346CD74EZR

3213delCD74

11104

SLC34A2SDC4

LoD C95（融合RNA含有率）

10

SLC34A29

RNA濃度[ng/μL]
1

ROS1エキソン

SLC34A22

高い検出感度

ROS1パートナーとエキソン

142

FFPEスライド

ブロック・スライド作製

保存処理

FFPEスライド

多様な検体種に対応●FFPE組織
●新鮮凍結組織

1FFPE組織、
FFPEセルブロック

製品内観製品外観

RT-PCR（reverse transcription polymerase chain reaction）法を使用しており、検出感度が高い

3HE染色による腫瘍細胞確認特徴3432

本キットの検出対象：
開発時に報告されていた融合遺伝子（14種類）

TPM37%

323534EZR10%

35746109TMEM106B

3TPD52L133136343434353533

新たに報告された
融合遺伝子（主に2013年以降）

CD7439%

既知遺伝子（14種）のSLC34A2
カバー率18%：96%
SDC413%

3236

本キット

Unknown
9%

SLC34A218%（注）Unknownも含めた本キットでの検出確率88%、既知の融合遺伝子だけでの検出確率96%（88%/91%）（出所）2007年から2016年までの論文28報より理研ジェネシス作成。Unknownの検体には融合遺伝子を決定していないものも含まれる。

※No.15の融合遺伝子は構造がNo.6と近いため、検出可能

表3

測定フロー
1.検体抽出■品質チェック : 総RNA濃度50〜800ng / μL、OD260 / OD280値1.9〜2.1を推奨

or

FFPE組織

新鮮凍結組織

FFPE
セルブロック【測定のポイント】

3時間

1 検 体 材 料 は、腫 瘍 細 胞 の細胞診検体

1 腫瘍細胞確認

スライド作製推奨
RNA濃度:50〜800ng/μL
OD 260 / OD 280 値 1.9〜2.1

RNA抽出

2.本キットによる検査

3時間
4

3 抽出済みRNA 6μL

Ct値にて陽性/陰性を判定

Plateau

本キット

Fluorescence

PositiveSample

汎用PCR装置の使用が可能

cDNA合成ThresholdExponential
Phase

CtBaseline
0Cycles

RT-PCR（検体毎に4ウェルを測定）

2 推奨のRNA抽出試薬で検体からRNAを抽出し、吸光度測定によりRNAの量と品質をチェックして下さい。

3 RNA溶液6uLからcDNAを合成し、4本のチューブに分けてリアルタイムPCRを行って下さい。

4 汎 用 のリアルタイムP C R

For Bet ter Life ,Across the World装 置 の 使 用 が 可 能で す。
装置から得られたCt値をもとに 判 定を行って下さい。(⇒「判定フロー」をご参照下さい)

Negative Sample
20

製造販売承認番号：22900EZX00002000

存在が確認されたものをご利用下さい。
（ 検体中の腫瘍細胞の割合30%以上を推奨します）。

2 RNA品質チェック

or

体外診断用医薬品

40

測定結果

判定フロー
検体
RNA抽出

逆転写反応
(cDNA合成)

PC

検体(RNA)ROS1逆転写反応Mix
ROS1逆転写酵素

6 μL
18.5μL
0.5μL

検体（cDNA）

各5μL(Negative Control)

PC

NC×4
ROS1反応Mix（①〜④）
ROS1酵素Mix
混合液（①〜④）

PCR(2段階)

各5μL

各35 μL

HEX：24未満

いずれも満たす

結果判定

HEX:20超FAM:30以上

FAM:30未満

陰性

陽性OncoGuide® AmoyDx® ROS1 融合遺伝子検出キット
ROS1融合遺伝子検出キット

製造販売業者

株式会社理研ジェネシス

判定不可（必要時は再検査）装置・抽出キット推奨品
リアルタイムPCR装置（ 製造販売承認番号：22900EZX00002000)（製品番号：A163）

一般的名称

FAM:30以上※FAM : カルボキシフルオレセイン（いずれも蛍光標識物質）

本キットの概要

使用目的

HEX：30以上

FAM：30以上
いずれかを満たさない

HEX:20以下※HEX : ヘキサクロロフルオレセイン

各5μL

各35 μL
各0.3μLFAM：24未満

Ct値の算出製品名

NC(Positive Control)

癌組織又は細胞診検体から抽出したRNA中のROS1融合遺伝子mRNAの検出（クリゾチニブ及びエヌトレクチニブの非小細胞肺癌患者への適用を判定するための補助に用いる）

測定原理

RT-PCR法（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応 / Reverse Transcription PCR）

構成試薬

8種の試薬（凍結溶液）

検体材料

腫瘍細胞の存在が確認されたFFPE組織、新鮮凍結組織、細胞診検体、または細胞診検体由来FFPEセルブロック

保険点数

2,500点（D004-2 悪性腫瘍組織検査）（2018年4月1日現在）

包装1キット（24テスト）

保管方法−20±5 ℃（遮光）製造元

Amoy Diagnostics Co., LTD（中国）•Stratagene Mx3000P ( アジレント・テクノロジー株式会社 )•ABI StepOnePlus ( サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社 ）•ABI 7500、
ABI 7900HT ( サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社 ）•LightCycler 480 II ( ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社 )•RG-6000 (72ウェル) ( 株式会社キアゲン )•Rotor-Gene Q (72ウェル) ( 株式会社キアゲン )RNA抽出キット[FFPEの場合]•AmoyDx FFPE RNA Kit /Cat No. ADx-FF04 ( アモイ ダイアグノスティクス社)•RNeasy FFPE Kit /Cat No. 73504 ( 株式会社キアゲン )[未固定凍結検体、細胞診検体の場合]•AllPrep DNA /RNA Mini Kit /Cat No. 80204 ( 株式会社キアゲン )ROS1融合遺伝子検出キット

OncoGuide® AmoyDx® ROS1融合遺伝子検出キット
クリゾ チ ニ ブ 及 び エ ヌトレ ク チ ニ ブ の 非 小 細 胞 肺 癌 患 者 へ の 適 応 の 判 定 を 補 助【お問合せ先】
株式会社理研ジェネシス 営業部〒141-0032 東京都品川区大崎1-2-2 アートヴィレッジ大崎セントラルタワー8F
TEL: 03-5759-6042 / FAX: 03-5759-6043 / MAIL: info2@rikengenesis.jp®：弊社または各社の商標または登録商標です
C01-010-22H-05

表4

表1