アメリカトリパノソーマ症に有効な治療薬の開発を目的とした和漢薬エキス及び含有成分の探索研究
申 請 代 表 者

中村憲夫

同志社女子大学薬学部生薬学研究室准教授■背景・目的
アメリカトリパノソーマ症（シャーガス病）は鞭毛虫類キネトプラスト類トリパノソーマ属の原虫
Trypanosoma cruzi の感染が原因で起こる疾患である．中南米でよくみられ，感染者は 4000 万人以上と推定されている．T. cruzi は，吸血昆虫サシガメによって媒介されヒトに感染する．また，輸血による感染も問題となっている．T. cruzi に感染してもすぐに発症することは少ない．感染者の 3 ～4 割程度が有症化し，さらにその 1 割が重篤な慢性末期症状（巨大結腸，巨大食道，拡張型心筋症など）を呈するといわれている．特に拡張型心筋症へと病態が進展した場合には，突然死につながることがある．現在，極めて初期の感染時のみに効果を発揮する治療薬として Nifurtimox，Benznidazole が開発されているが，慢性期発症に至った患者に対する治療薬はまだ無い．
今回，アメリカトリパノソーマ症に有効な治療薬の開発を目的として，抗トリパノソーマ活性を指標に和漢薬エキス及び生薬成分について検討（スクリーニング）を行った．

■結果・考察
富山大学和漢医薬学総合研究所より提供していただいた 120 種の生薬熱水抽出エキス及び 95 種の生薬含有成分から 4 ～ 8 段階の濃度の試料溶液を調製した．96 穴プレートにリン酸バッファー 185
μL 及び T. cruzi の増殖型 epimastigote 培養液 10 μL を加えた後，試料溶液 5 μL を添加し，27℃でインキュベートした．24 時間後，原虫を顕微鏡下観察し，最小致死濃度 (MLC) を求めた．
表１に生薬エキスの抗トリパノソーマ活性の結果を示す．生薬エキスの多くは 200 μg/mL で無効であり，ケイケットウ（鶏血藤），チョウジ（丁子），ボクソク（樸樕）の 3 種のみが弱いながら 100μg/mL の MLC を示した．著者はこれまでにいくつかのショウガ科生薬のメタノール抽出エキスに抗トリパノソーマ活性があることを見出している．しかし，これらの熱水抽出エキスでは抗トリパノソーマ活性は見られず，効果を示す可能性のある物質の多くは水に難溶と考えられる．
また，表２には生薬含有成分の抗トリパノソーマ活性の結果を示す．最も強い活性を示したのはナフトキノン類の Alkannin と Shikonin で，MLC はそれぞれ 0.195 μM，0.39 μM であった．またSaikosaponi d と Timosaponin A-III にも効果が見られ，MLC は共に 6.25 μM であった．次いで強い活性を示したのは Glabridin (12.5 μM)，Atractylodin (25 μM)，Bisdemethoxycurcumin (25 μM)，
Honokiol (25 μM) であった．
Alkannin と Shikonin はシコンに含まれるナフトキノン類で鏡像異性体の関係にある．サイコサポニン類では Saikosaponin a と d に効果が見られたが，Saikosaponin b2 と c は無効であった．
Saikosaponin a や d は b2 と糖部分が同じであるため 13，20 位のアリールエーテル部分が活性発現に大きく関与していると考えられる．また，Saikosaponin a と d では 16 位のヒドロキシ基の配置が異なっており，β体よりα体の方が強い効果を示した．多くのフラボノイド類は無効であったが，イソ－ 94 －

フラボノイド系イソフラバンである Glabridin のみに効果が見られたことは興味深い．また，コウボクに含まれるネオリグナン Honokiok，Magnolol には効果が見られたが，ゴミシのリグナン Gomisin
A, N や Rosmarinic acid には効果が見られなかった．リグナンの立体構造もしくはフェノール性ヒドロキシ基が活性発現に関与しいるのではないかと思われる．ウコンに含まれるジアリールヘプタノイ
ド類では，Bisdemethoxycurcumin が Curcumin や Demethoxycurcumin より強い活性を示した．

■結論
120 種の和漢薬熱水抽出エキス及び 95 種の生薬成分について抗トリパノソーマ活性を検討した．
残念ながら和漢薬熱水抽出エキスでは効果を示すものを見出すことはできなかった．生薬成分ではナフトキノン類の Alkannin や Shikonin に強い効果が見られた．また，サポニン類では Saikosaponind 及び Timosaponin A-III にも効果があることを見出した．

－ 95 －

表１
表１生薬エキスの抗トリパノソーマ活性
生薬エキスの抗トリパノソーマ活性No.
123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

生薬名
最小致死濃度（μg／mL）
イレイセン（威霊仙）>200
インチンコウ（茵陳蒿）>200
ウコン（鬱金）>200
ウヤク（烏薬）>200
エンゴサク（延胡索）>200
オウギ（黄耆）>200
オウゴン（黄芩）200
オウバク（黄柏）>200
オウヒ（桜皮）>200
オウレン（黄連）>200
オンジ（遠志）>200
ガイヨウ（艾葉）>200
カシュウ（何首烏）>200
ガジュツ（莪朮）>200
カッコン（葛根）>200
カロコン（栝楼根）>200
カンキョウ（乾姜）>200
カンゾウ（甘草）>200
キキョウ（桔梗）>200
キクカ（菊花）>200
キジツ（枳実）>200
キョウカツ（羌活）>200
キョウニン（杏仁）>200
クジン（苦参）>200
クマザサ（熊笹）>200
ケイガイ（荊芥）>200
ケイケットウ（鶏血藤）100
ケイヒ（桂皮）>200
ゲンジン（玄参>200コウカ（紅花）>200
ゴウカンヒ（合歓皮）>200
コウジン（紅参）>200
コウブシ（香附子）>200
コウボク（厚朴）200
ゴシツ（牛膝）>200
ゴシュユ（呉茱萸）200
ゴボウシ（牛蒡子）>200
ゴマ（胡麻）>200
ゴミシ（五味子）>200
サイコ（柴胡）>200
サイシン（細辛）
>200
サフラン
>200
サンキライ（山帰来）>200
サンシシ（山梔子）>200
サンシチニンジン（三七人参） >200
サンシュユ（山茱萸）>200
サンショウ（山椒）>200
サンソウニン（酸棗仁）>200
サンヤク（山薬）>200
サンリョウ（三稜）>200
ジオウ（地黄）>200
シゴカ（刺五加）>200
ジコッピ（地骨皮）
200
シツリシ（蒺蔾 子）>200
シャクヤク（芍薬）>200
シャゼンシ（車前子）>200
ジュクジオウ（熟地黄）>200
シュクシャ（縮砂）>200
ショウキョウ（生姜）>200
ショウマ（升麻）
>200

No.
61
626364
6566
67
68
6970
71
7273
7475
76
77
78
79
80
81
82
83
8485
86
87
8889
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120

－ 96 －

生薬名
最小致死濃度（μg／mL）
シンイ（辛夷）>200
ジンギョウ（秦艽）>200
セキシャク（赤芍）>200
センキュウ（川芎）>200
キボシニンジン（生干人参） >200
ソウジュツ（蒼朮）>200
ソウハクヒ（桑白皮）>200
ソウヨウ（桑葉）>200
ゾクダン（続断）>200
ソヨウ（蘇葉）>200
ダイオウ（大黄）>200
タイソウ（大棗）>200
タクシャ（沢瀉）>200
タンジン（丹参）>200チクジョ（竹茹）>200
チクセツニンジン（竹節人参） >200
チモ（知母）>200
チョウジ（丁子）100
チョウトウコウ（釣藤鈎）>200
チョレイ（猪苓）>200
チンピ（陳皮）>200
テンマ（天麻）>200
テンモンドウ（天門冬）>200
トウガシ（冬瓜子）>200
トウキ（当帰）>200
トウジン（党参）>200
トウニン（桃仁）>200
ドクカツ（独活）>200
トチュウ（杜仲）>200
ニクジュヨウ（肉蓯蓉）>200
ニンジン（人参、湯通し）>200
バイモ（貝母）>200
ハクセンピ（白鮮皮）>200
バクモンドウ（麦門冬）>200
ハッカ（薄荷）>200
ハンゲ（半夏）>200
ビャクシ（白芷）>200
ビャクジュツ（白朮）>200
ビワヨウ（枇杷葉）>200
ビンロウジ（檳榔子）>200
ブクリョウ（茯苓）>200
ボウイ（防已）>200
ボウコン（茅根）>200
ボウフウ（防風）>200
ホウブシ（炮附子）>200
ボクソク（樸樕）
100
ホコツシ（補骨脂）>200
ボタンピ（牡丹皮）>200
マオウ（麻黄）>200
マシニン（麻子仁）>200
マンケイシ（蔓荊子）>200
モッコウ（木香）>200
モツヤク（没薬）>200
ヤクチ（益智）>200
ヤクモソウ（益母草）>200
ヨクイニン（薏苡仁）>200
リュウタン（竜胆）>200
リョウキョウ（良姜）>200
レイシ（霊芝）>200
レンギョウ（連翹）>200

表２生薬含有成分の抗トリパノソーマ活性
生薬含有成分の抗トリパノソーマ活性
表２No.
1
2
3456789101112131415
16171819202122232425
2627282930
3132
33
3435363738
39404142434445464748

生薬成分名
最小致死濃度（μM）
Aconitine>100Albiflorine>100Alisol A
100Alisol B
50Alkannin
0.195
Amygalin>100Arbutin>100
Astragaloside Ⅳ>100
Atractylenoside Ⅲ>100
Atractylodin
25Atropine Sulfate>100Aucubin>100Baicalein
100Baicalin>100Barbaloin>100
Benzoylmesaconine Hydrochloride >100
Berberine Chloride>100Bergenin>100
Bisdemethoxycurcumin
25Bufalin>100
Bufotalin>100Capillarsin
サンプル無(E)-Capsaicin>100
Catalpol>100(E)-Chlorogenic Acid
>100(E)-Cinnamic Acid
>100
Cinobufagin>100
Cinobufotalin>100
Coptisine Chloride>100Corydaline>100
Costunolide50Curucummin
50
Dehydrocorydaline Nitrate>100
Dehydrocosrtuslactone
50
demethoxycurucumine
50
Dihydrocapsaicin
100
Dimethylesculetin>100
Eleutheroside B>100(-)-Epigallocatechin Gallate
50
Epihesperidin>100
Ergosrterol>100
β-Eudesmol>100
Evodiamine>100(E)-Ferulic Acid>100
Geniposide>100
Geniposidic Acid>100
Gentiopicroside>100[6]-Gingerol>100No.
49
50
5152
5354
55
56
57
58
5960
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
8182
8384858687
8889
90
91
92
939495
96－ 97 －生薬成分名
Ginsenoside-Rb1Ginsenoside-Rc
Ginsenoside-Rd
Ginsenoside-Re
Ginsenoside-Rg1
Glabridin
Glycyrrhizic Acid
Gomisin A
Gomisin N
Hesperidin
Hirsutine
HonokiolHypaconitine
IcariinIsofraxidine
Isorhynchopylline(Z)-Ligustilide
LimoninLiquiritin
Loganin
Luteolin
Magnolol
Mesaconitine
Naringin
Nodakenin
OstholeOxymatrine
Paeoniflorin
Paeonol
Palmatine Chloride
Perillaldehyde
Praeruptorin A
Puerarin
Rhynchophylline
Rosmarinic Acid
Saikosaponin a
Saikosaponin b2
Saikosaponin c
Saikosaponin d
Schizandrin
Sennoside A
Sennoside B
Shikonin[6]-Shogaol
SinomenineSwertiamarin
Timosaponin A-Ⅲ
Wogonin

最小致死濃度（μM）>100>100>100>100>10012.5>100>100>100>10010025>100>100>100>100>100>100>100>100>10050>100>100>100>100>100>100>100>100
50>100>100>100>100
50>100>1006.25>100>100>1000.39
100>100>1006.25>100