抗消化性潰瘍効果を示す漢方薬の有効成分としてのリン脂質メディエーター研究
申 請 代 表 者
所外共同研究者
所内共同研究者
所内共同研究者

田中藤川
渡辺
藤田保
昂樹
志朗
恭輔

徳島大学大学院医歯薬学研究部（薬学系）衛生薬学分野
徳島大学大学院医歯薬学研究部
栄養代謝学分野
栄養代謝学分野

准教授
大学院生
准教授
助教

【報告セミナー要旨】【目的】
リゾホスファチジン酸 (LPA) は特異的受容体を介し、細胞増殖や細胞遊走を誘導するリン脂質メディエーターで、血管新生や創傷治癒に関わっている。最近、我々は経口投与したホスファチジン酸(PA) が胃内で LPA に変換されること、胃の表層粘液細胞は 2 型 LPA 受容体を発現しており、この受容体の活性化は胃粘膜防御因子のプロスタグランジン E2 産生を増強させることを見出した (Tanakaet al. BioFactors, 2014)。実際、LPA やその前駆体としての PA の経口投与はアスピリン誘導性胃潰瘍を効果的に抑制した (Tanaka, et al. Dig. Dis. Sci., 2013)。
PA は動物脂質に少なく、植物脂質に多い。
本研究では、PA や LPA は抗胃潰瘍を効能とする生薬の有効成分の一つではないかと考え、胃腸障害に効くとされる生薬の PA および LPA 含量を調べ、その脂質抽出物の抗 NSAIDs 潰瘍効果を調べた。
【方法】
胃腸障害に効くとされる生薬として、ウイキョウ、ガジュツ、エンゴサクなど、21 種をリストアップした。粉末素材から常法により脂質を抽出し、TLC を用いて PA および LPA を単離後、定量した。
LPA および PA の分子種は MALDI-TOF MS により調べた。カルボキシメチルセルロースに懸濁させた脂質液をマウスに経口投与し、その 30 分後にアスピリンあるいはインドメタシンを経口投与した。
3 時間後、単離した胃をホルマリンで固定し、胃表面にできる潰瘍の長さを測定し、胃潰瘍の程度を数値化した。
【結果と考察】調べた中でキキョウが最も豊富に PA を含んでいた（1900 nmol/g）。PA はパルミトイル／リノレオイル型 (16:0/18:2) やジリノレオイル型 (18:2/18:2) であった。一方、LPA を最も豊富に含む生薬はシャクヤクで（560 nmol/g）、16:0 や 18:2 を含む LPA 分子種が主であった。これらの生薬から抽出した脂質の抗インドメタシン誘導性潰瘍効果について調べたところ、キキョウ脂質はリン脂質量として 1.2 mg/kg の投与で、シャクヤク脂質はリン脂質量として 4mg/kg で共に総潰瘍長を 50% に縮小させた。対象に用いた卵黄脂質は同量で有意な効果を示さなかった。以上より、少なくともキキョウやシャクヤクの抗潰瘍作用の有効成分に PA や LPA が関与している可能性が考えられた。

－ 43 －

■背景・目的
リゾホスファチジン酸 (LPA) は多くの動物細胞に作用して , 増殖や遊走などの応答を誘導する増殖因子様リン脂質である。血液を始め体液中に存在する LPA の役割の１つは創傷治癒と考えられており , 傷ついた皮膚への LPA の塗布は傷の治癒を促進させる（1）。LPA は消化管においても組織の修復や維持に関与しており , 経口投与した LPA が放射線や抗がん剤処理によって誘導した小腸粘膜のアポトーシスを回避させること (2), 直腸投与した LPA が 2,4,6- トリニトロベンゼンスルホン酸で惹起される炎症性大腸炎を緩和することが示されている (3)。我々も LPA の経口投与が拘束ストレスやアスピリン誘導性の胃潰瘍形成を有意に抑制すること（4,5）やヒト胃由来 HGC-27 細胞の遊走を促進すること (9) を見出している。既に Li らにより 2 型 LPA (LPA2) 受容体が小腸由来細胞の管腔側の頂側膜に発現していることが示されているが (6), 我々も LPA2 がマウス胃の表層粘液細胞に存在することを確認した (5,7)。我々は LPA2 を発現するヒト胃由来 MKN74 細胞において , LPA はシクロオキシゲナーゼ 2(COX2) の mRNA のアップレギユレートを介してプロスタグランジン E2 (PGE2) の産生を促進させることを見出している (7)。PGE2 は代表的な胃粘膜防御因子で , 粘膜血流量を増加させ , 炭酸水素イオンの分泌を促進し , 胃酸分泌を抑制する。この PGE2 促進作用は先に示した抗アポトーシス作用と共に , LPA の消化管粘膜保護作用を説明する機序と考えられる。
消化管における LPA 源には唾液や胃液などの分泌液がある。実際 , 唾液には LPA が含まれている(8)。もう１つの LPA 源は食物とその消化物である。我々は以前 , キャベツやダイコンといったアブラナ科の野菜に LPA が多く含まれていることを見出した (9)。一方 , 我々は胃において , ホスファチジン酸 (PA) のホスホリパーゼ A2(PLA2) 消化物として LPA が生じることを明らかにしている（5,9）。
天然物にはリゾ型よりも対応するジアシル型の方が多く , キャベツの場合 , LPA よりも PA の方が 10倍以上多い。従って , 胃以降の消化管において , 食に含まれる LPA そのものよりも , PA の PLA2 消化がより多くの LPA をもたらすと考えられる。現在 , 理由は解析中であるが , 我々が行った抗アスピリン潰瘍モデルマウスにおいて , PA の傾向投与は LPA よりも効果的であることも判明している (5)。
以上のことを考え合わせると , LPA や PA を多く含む素材が漢方薬などの天然医薬品に使われている可能性は高い。
本研究ではこの可能性を調べるため , 胃腸障害に効くとされる生薬における LPA/PA 含量を調べた。また , PA や LPA を多く含むものについて抗胃潰瘍効果を調べることとした。

■結果・考察１）生薬の選定および PA/LPA 分子種分析
日本薬学会編 「薬学生・薬剤師のために知っておきたい生薬 100」を参考に , 胃腸障害への効能 ,特に胃潰瘍を抑制あるいは予防するとの記載がある生薬 21 種をリストした。これらの生薬より脂質を抽出し , TLC を用いて LPA および PA を単離した。単離した PA および LPA についてリン酸モノエステル捕獲試薬の Phos-tag を用いたマトリックッス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析(MALDI-TOF MS) を行い , 構造を確認すると共に分子種分析を行った。典型的な結果としてシャク
ヤクの PA および LPA のマススペクトルを図１A, B にそれぞれ示す。図 1-A において高いイオン強度で観察される m/z1259.77 および m/z1283.76 はそれぞれ , 16:0/18:2-PA および 18:2/18:2-PA と帰属可能である。また , これらよりも 2 マス低い質量数を有するイオンも存在するが , これらは 16:0/18:3PA および 18:2/18:3-PA と帰属可能である。一方 , シャクヤク LPA の MALDI-TOF MS（図 1-B）に－ 44 －

表 １ 抗胃潰瘍など消化管を丈夫にする効能を示す生薬リスト
抗胃潰瘍など消化管を丈夫にする効能を示す生薬リスト
表１

図１
シ ャ ク ヤ ク 由 来 PA(A)あ る い は LPA(B)の Phos-tag の 複 合 体 の マ ト リ ッ ク ス 支 援 レ ー ザ ー 脱 離イオン化法によるマススペクトル

Am/z 1259.77
16:0/18:2 PA

Bm/z 997.47
16:0 LPA

m/z 1021.475
18:2 LPA

m/z1283.76
18:2/18:2 PA

図１ シャクヤク由来 PA(A) あるいは LPA(B) の Phos-tag の複合体のマトリックス支援レーザー脱離イオン化法によるマススペクトルて検出される m/z997.47 および m/z1021.48 はそれぞれ , 16:0-LPA および 18:2-LPA である。このようにしてリストした生薬から PA および LPA を単離し , MALDI-TOF MS による分子種分析を行った。
得られたそれぞれのイオン強度の和より各分子種の相対的な割合を計算し , 分子種組成のめやすとした。この結果を表２および表３に示す。

－ 45 －

表 ２ 胃 腸 障 害 に 効 く と さ れ る 生 薬 の PA 分 子 種 組 成
表２
表 ２ 胃腸障害に効くとされる生薬の胃 腸 障 害 に 効 く と さ れ るPA
生分子種組成薬 の PA 分 子 種 組 成
Name

Name

% of each molecular species

Name
カンキョウ

% of each molecular species
100% 18:2/18:2 PAName
ガジュツ% of each molecularspecies% of each molecularspecies----ガジュツ
エンゴサク

----

カンキョウ
チクセツニンジン

エンゴサク

----

チクセツニンジン

オウバク

----

オウバク
ウイキョウ
ウイキョウ

オウレン
オウレン
サイコ
サイコ
ゴミシ
ゴミシ
クジン
クジン
キキョウ
キキョウ
カンゾウ
カンゾウ

---- 16:0/18:2PA,32%
16%
32% 16:0/18:1PA
16:0/18:2PA,
16%
16% 18:2/18:2PA
16:0/18:1PA
22%18:1/18:2PA,
16% 18:2/18:2PA
14%18:1/18:1PA
22%18:1/18:2PA,
14%18:1/18:1PA
60%
16.:0/18:2PA
40%
60% 18:2/18:2PA
16.:0/18:2PA
40% 18:2/18:2PAPA
100%16:0/18:2
100%16:0/18:2 PA
77 % 16:0/18:2PA
23%
PA
77 %16:0/18:1
16:0/18:2PA
23% 16:0/18:2
16:0/18:1 PA53%
47%
53% 18:2/18:2
16:0/18:2 PAPA
47% 16:0/18:2
18:2/18:2 PA
62%
38%16:0/18:2
18:2/18:2PAPA
62%
38%16:0/18:2
18:2/18:2PA
PA
62%
38%
16:0/18:2 PAPA
62% 18:2/18:2

100%16:0/18:2
18:2/18:2PA
PA
60%
16%
60% 16:0/18:1
16:0/18:2 PAPA
24%
16% 18:2/18:2PA
16:0/18:1 PA

ショウマ

24% 18:2/18:2PA
100%
16:0/18:2 PA

ショウマ
ショウキョウ

100%16:0/18:2
16:0/18:2PA
PA75%
18:2/18:2
16%
75% 16:0/18:3
16:0/18:2 PA.9%
PA

ショウキョウ

16% 16:0/18:3 PA.9% 18:2/18:2

シュクシャ

48% 16:0/18:2 PA.52 % 16:0/18:1 PA

シュクシャ
ビャクジュツ

48% 16:0/18:2 PA.52 % 16:0/18:1 PA
67% 16:0/18:2 PA,33% 18:2/18:2 PAビャクジュツソウジュツ

67% 16:0/18:2 PA,33% 18:2/18:2 PA
66% 16:0/18:2 PA,34% 18:2/18:2 PA

ソウジュツ
ボタンピ

66% 16:0/18:2 PA,34% 18:2/18:2 PA
55% 16:0/18:2 PA,45% 18:2/18:2

ボタンピ
シャクヤク

55% 16:0/18:2 PA,45% 18:2/18:2
53% 16:0/18:2 PA,28% 18:2/18:2
PA,10%18:2/18:3
PA,9%18:2/18:2
16:0/18:3 PA
53% 16:0/18:2 PA,28%

シャクヤク
ブクリョウ

---PA,10%18:2/18:3 PA,9% 16:0/18:3 PA

ブクリョウ

----

38% 18:2/18:2 PA

表 ３ 胃腸障害に効くとされる生薬の胃 腸 障 害 に 効 く と さ れ るLPA
生薬の LPA 分 子 種 組 成
表３分子種組成
表 ３ 胃 腸 障 害 に 効 く と さ れ る 生 薬 の LPA 分 子 種 組 成
Name
Name
ガジュツ
ガジュツ
エンゴサク
エンゴサク
オウバク
オウバク
ウイキョウ
ウイキョウ

% of each molecularspecies% of each molecularspecies------37% 16:0 LPA,
63%18:2LPA
16:0 LPA,
37%63 %18:2LPA
39 %16:0 LPA
61%18:2LPA,,
39 %16:0 LPA
61%18:2LPA,,
41% 16:0LPA
27%
41% 18:1LPA,
16:0LPA
32%
27% 18:2LPA,18:1LPA,

Name% of each molecular species

Name
カンキョウ
カンキョウ
チクセツニンジン% of each molecular species
22% 16:0 LPA
78%
22% 18:216:0 LPA
100%
16:0LPA78%
18:2LPA

チクセツニンジン

100% 16:0 LPA

ショウマ
ショウマ

46% 16:0 LPA,45% 18:2 LPA,9% 18:1
LPA
46% 16:0 LPA,45% 18:2 LPA,9% 18:1

ショウキョウLPA
44% 16:0 LPA,46 % 18:2 LPA

ショウキョウ

44% 16:0 LPA,46 % 18:2 LPA

オウレン

32%------ 18:2LPA,

シュクシャ

オウレン
サイコ

-----100% 16:0 LPA

シュクシャ
ビャクジュツ33% 16:0 LPA,67 % 18:2 LPA

サイコ
ゴミシ

100% 16:0 LPA-----ビャクジュツ
ソウジュツ

33% 16:0 LPA,67 % 18:2 LPA

ゴミシ
クジン

----------ソウジュツ
ボタンピ

クジン
キキョウ
キキョウ
カンゾウ
カンゾウ

-----12% 16:0 LPA
4%16:0LPA
LPA
12%18:318:2LPA
LPA
83%
4% 18:322%
18:2LPA
LPA
83%16:078%
16:0 LPA
LPA
22% 18:2

ボタンピ
シャクヤク

21% 16:0 LPA,14% 18:1 LPA,57%
18:2
LPA,8%18:3
LPA,14%LPA
18:1 LPA,57%
21% 16:0
45%
LPA,55%LPA
18:2 LPA
18:2 16:0
LPA,8%18:3

シャクヤク

45% 16:0 LPA,55% 18:2 LPA

ブクリョウ------ブクリョウ------

78% 18:2 LPA

２）胃腸障害に効くとされる生薬の LPA, PA 含量
現在までに 19 種の生薬について PA 含量を測定した。その結果 , PA 含量の高い生薬で 2000 nmol/gであったがほとんどの生薬は 700 nmol/g 以下であった。我々は食品に含まれる PA 含量を調べ , キャベツや大豆といった植物が約 700 nmol/g と , 高い PA 含量を示すことを明らかにしている。これらの野菜を食事の際に摂取する量（100 g 程度）を考えれば , 生薬乾燥粉末の PA 含量は 際立って高いわけ－ 46 －

ではない。一方、LPA 含量は少ない生薬で検出限界以下、多いもので 600 nmol/g であった。これまで調べた食品ではキャベツやブロッコリーが特に LPA を多く含んでいたが , その量は高々約 20 nmol/g である。一度に摂取する量を考えても 600 nmol/g の LPA 含量は際立っているように思える。予備的ではあるが , この生薬由来の脂質はインドメタシン潰瘍を抑制する効果を示した。現段階で、この効
果は乾燥粉末に含まれる LPA によるとは断言できないが、その可能性は十分にあると思われる。

■結論
経口摂取したホスファチジン酸 (PA) は消化管内でリゾホスファチジン酸（LPA）に消化される。
胃粘膜上皮細胞の管腔側には２型 LPA 受容体が発現しており , 抗アポトーシスやプロスタグランジンE2 産生を誘導し , 消化管粘膜の恒常性維持に関わっている可能性がある。我々は以前 , LPA やその前駆体の PA の経口投与は抗胃潰瘍効果を示すことを見出した。本研究では PA や LPA を薬効成分とする生薬について検索した。その結果 , 高度に LPA を濃縮した生薬が存在し、この生薬の抗胃潰瘍効果に LPA が関わっている可能性が示された。今後 , さらなる実験を通して生薬成分の薬効成分としてリゾリン脂質メディエーターが機能していることを明らかににしたいと考える。

■文献
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2) Deng, W., Balazs, L., Wang D-A., Van Middlesworth, L., Tigyi, G., Johnson, L.R.:
Lysophosphatidic acid protects and rescues intestinal epithelial cells from radiation- andchemotherapy-induced apoptosis, Gastroenterology, 123, 206-216, 2002
3) Sturm, A., Sudermann, T., Schulte, K-M., Goebell, H., Dignass, A. U., Modulation of intestinal
epithelial wound healing in vitro and in vivo by lysophosphatidic acid, Gastroenterology, 117,368-377, 1999
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Intragastrically administrered lysophosphatidic acid protect against gastric ulcer in rats underwater-immersion restraint stress, Dig. Dis. Sci., 56, 2252-2261, 2011
5) Tanaka, T., Morito, K., Kinoshita, M., Ohmoto, M., Urikura, M., Satouchi, K., Tokumura, A.:
Orally administered phosphatidic acids and lysophosphatidic acids ameliorate aspirin-induced
stomach mucosal injury in mice, Dig. Dis. Sci., 58, 950-958, 2013
6) Li, C., Dandridge, K.S., Di, A., Marrs, K.L., Harris, E.L., Roy, K., Jackson, J.S., Makarova, N.V.,
Fujiwara, Y., Farrar, P.L., Nelson, D.J., Tigyi, G.J., Naren, A.P.: Lysophosphatidic acid inhibits
cholera toxin-induced secretory diarrhea through CFTR-dependent protein interactions, J. Exp.
Med., 202, 975-986, 2005
7) Tanaka, T., Ohmoto, M., Morito, K., Kondo, H., Urikura, M., Satouchi, K., Tokumura, A.;
Type 2 lysophosphatidic acid receptor in gastric surface mucous cells: Possible implication ofprostaglandin E2 production, BioFactors, in press
8) Sugiura, T., Nakane, S., Kishimoto, S., Waku, K., Yoshioka, Y., Tokumura, A.: lysophosphatidic－ 47 －acid, a growth factor-like lipid, in the saliva, J. Lipid Res., 43, 2049-2055, 20029) Tanaka, T., Horiuchi, G., Matsuoka, M., Hirano, K., Tokumura, A., Koike, T., Satouchi K.:
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－ 48 －