News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

日本ゲノム微生物学会
ニュースレター
近年のコレラ流行株は CTX Φプロファージゲノムを複製できない
今村 大輔（法政大学 生命科学部）

コレラ菌はコレラ毒素遺伝子を持った CTXΦ ファージが Vibrio cholerae に感染・溶原化しコレラ毒素生産性になることにより発生する（図 A 下）。第６次までのパンデミックを起こした Classical 型のコレラ菌は CTXΦ プロファージゲノムを単独または不完全なコピーと共に有していた（図 B a）。現在の第７次パンデミックを起こしている El Tor 型は CTXΦ プ
ロファージゲノムをタンデムまたは RS1 という関連配列と共に持っていることが知られている（図 B b）。この構造の違いにより、Classical 型コレラ菌は CTXΦ ゲノムを複製することができず、ファージ粒子を生産できないが、El Tor 型はCTXΦ ゲノムを複製し、ファージを放出することができる（図 B b-e）。近年のコレラ流行株の完全ゲノム配列を解析した
ところ、CTXΦ プロファージと RS1 の並びに変化があり、CTXΦ ゲノムを複製できなくなっていることを見出した（図 Bf）。また、この複製系を再構成することにより、並びの変化が複製能を失った原因であることを明らかにした。そこで、デー
タベース上に完全ゲノム配列のあるコレラ菌を CTXΦ 複製能の有無で分類したところ、第７次パンデミックでは、1970年頃から 30 年以上に渡って CTXΦ 複製株（図 C 緑）が流行していたものの、2010 年頃から世界中で CTXΦ 非複製株（図C 青）に変化したことが分かった。これらの結果は、現在のパンデミックでは、CTXΦ の放出と感染による新たなコレラ
菌の発生は起こらず、糞口経路による伝播に限定されていることを示している（図 A 上）。
発表論文：Ochi K, Mizuno T, Samanta P, Mukhopadhyay A, Miyoshi S, and Imamura D. Recent Vibrio cholerae O1 epidemic strains
are unable to replicate CTXΦ prophage genome. mSphere. 6:e00337-21 (2021)

1

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

宿主細胞環境に適応的なウイルスゲノムの方向性のある変化
岩﨑 裕貴
長浜バイオ大学 メディカルバイオサイエンス学科
子に適応できているとは考えづらい。ヒトという新宿主環境で

1. ゲノム微生物学におけるウイルスゲノム解析の位置付け
近年、微生物ゲノム解析の分野において、感染症ウイルス類の大規模ゲノム解析が注目されている。インフルエンザウイル

流行を開始したウイルスが能率的に生育するためには、新環境に適応するための変化が求められる。

スやコロナウイルスなどの RNA ウイルスの場合、進化速度が一般的に、ウイルスのゲノムには変異が入りやすいと言われ

速く、短時間で変異が蓄積されやすい。ワクチン開発を含む防ており、RNA ウイルスではその性質は特に顕著である。加えて、疫対策の必要上、世界的規模での大規模なゲノム配列解読がな

世代時間も非常に短く、短期間でゲノム配列が大きく変化する。

され、新型コロナウイルス (SARS-CoV-2) については、100 万

例えば、インフルエンザウイルスはスパイクタンパクの抗原性を超えるゲノム配列が公開されている。ビッグデータ解析に適に関わる領域のアミノ酸配列に変異が蓄積されやすく、ヒト

した、様々な統計解析が重要になっている。我々のグループでの免疫システムから逃げ続けることを可能としている。SARS-

は、この急速に発展しているウイルスゲノム研究について、AI

CoV-2 においても、流行開始から 1 年の間に様々な変異が報告を含む大規模解析に適した手法を用いて取組んでいる。本稿でされており、中には感染性を強めていると考えられている変異は、私が関わってきた感染症 RNA ウイルスゲノムについての(3) も複数特定されている。このように、ウイルスはヒトを新研究動向を紹介する。

たな宿主として適応するために、自身のゲノムに様々な変化を蓄積している。

2. ウイルスの宿主適応メカニズム
ウイルスの最大の特徴は、多様な宿主の因子に依存して増殖

3. 配列アラインメントに依存しないゲノム比較 : 連続塩基組成することである。そのため、ウイルスが能率的に増殖するには、ウイルスに限らず、ゲノム配列の比較で最もよく使われてい如何に宿主生物種の細胞内環境に適応し、宿主の抗ウイルス機る手法は、配列アライメントに基づいた系統樹作成である。こ構から逃れるのかが重要である。ウイルス別に感染可能な宿の手法は塩基配列やアミノ酸配列の比較解析において最も重要

主、あるいは体内での増殖可能組織が異なるということも知らな手法ではあるものの、近年のゲノム解析において解決困難なれているが、普段流行している自然宿主とは別の生物種にウイ

問題点も抱えている。従来のアラインメントベースの解析手法

ルスが感染するというケースも知られている。人獣共通感染症

は、解析対象となる配列の数が増えれば解析に必要な計算機資ウイルスが代表例であるが、ヒト以外の生物種集団で流行して源や計算時間も膨大になってしまう。近年の配列決定技術の劇いたウイルスがヒトへ感染するというケースが多く報告されて的な進歩により、短期間で膨大な量の配列情報を決定することいるものの、ヒト - ヒト間での感染が拡大する確率は低い。しが可能になり、社会的に重要性の高い対象においては、ゲノム

かしながら、他生物種から伝播してきたウイルス株がヒト集団

データが膨大な量になってしまう。例えば、SARS-CoV-2 は流での流行を開始すると、そのウイルスに免疫を持たない人類に行開始から 1 年の間に 約 100 万件以上のゲノム配列が GISAID

とっては脅威となる。例えば、2009 年にパンデミックを引き起

データベースに登録されているが、これら全ての配列を対象にこしたインフルエンザ H1N1 (H1N1pdm) 株は、ブタ集団で流行

アラインメントベースの解析を実施することは容易ではなく、していた株由来であることが知られている (1)。同様に 2019 年

個人や小グループでの研究を困難にしている。

から流行を開始して現在でもパンデミックを引き起こしている

私が学生時代に所属していた研究室 ( 長浜バイオ大学 池村研

SARS-CoV-2 は、コウモリ集団で流行していたコロナウイルス

究室 ) では、アラインメントベースでは扱うのが困難な大量デー

株が別の中間宿主を経て、ヒト - ヒト感染を起こしたと考えらタを対象とした解析手法の開発に取り組んでいた。具体的には、れている (2)。ウイルスの増殖には様々な宿主因子が関与する

生物種間のゲノム配列中の連続塩基組成の違いに注目した解析ため、他生物種で流行していたウイルス類は、元宿主の細胞環を行なっていた。生物種のゲノム配列の特徴を記述する際に一境では効率よく宿主因子を利用して増殖していたとしても、ヒ

般的に使われる指標として GC% がよく知られている。しかし、トという新しい宿主環境に侵入した時点では、十分に新宿主因

生物種間のゲノムの特徴の違いを説明するには GC% だけでは

2

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

だけでは単純すぎて不十分である。カーリンらのグループは、(BLSOM) を用いた解析を行なっていた。この BLSOM は膨大なゲノム配列中の 2 連以上の連続塩基の出現頻度を調べたところ、量のゲノム情報から、連続塩基組成の特徴に基づいたクラスタ

生物種ごとに大きく異なることを見出し、この特徴を genome

リングが可能であり、” どのような要因でクラスタリングされsignature と呼んだ (4)。我々の研究室では、この連続塩基組成

たか ” についての情報も得られる。

に注目した解析に取り組んでおり、様々なウイルスを含む多様

学生時代より、この BLSOM を用いてインフルエンザウイル

なゲノムを対象とした解析を行なってきた (5,6,7)。

スゲノムの宿主適応に関わる特徴抽出を行なってきた。国際塩
基配列データベースに登録されていた全インフルエンザウイ
ルスを対象に BLSOM を用いてクラスタリングを行なったとこ

4. AI を用いた大量のウイルスゲノム情報からの知識発見
連続塩基組成は数値データとして取り扱うことが可能なたろ、インフルエンザウイルスのゲノムは、機械学習の過程でそめ、様々な統計解析に応用可能であり、特に AI を用いた解析

れらの連続塩基組成の情報しか与えていないにも関わらず（教が有望に思える。ウイルスゲノムの連続塩基組成には、そのウ

師無し学習）、分離された宿主ごとに明確に分離していた。まイルスが流行している宿主に特有な性質が反映されている可能

た、その分離に寄与する連続塩基を特定することにも成功し性が考えられる。膨大かつ複雑な情報の中から意味のある情た（図１）(10)。前章でも記述したように、ウイルスの増殖は

報の抽出は簡単ではないが、AI の一種である機械学習を用い様々な宿主因子に依存している。AI での分離に寄与した連続塩ることにより、ウイルスゲノムの中に潜んでいる宿主に関す基が、インフルエンザウイルスがヒトという新宿主に適応する

る特徴の抽出が期待できる。例えば、Babayan らは、Gradient

ために重要な役割を果たしている可能性が考えられる。このよboosting machines を用いてヒトへの感染が知られている RNA ウ

うに、ゲノム解析に AI を活用することによってウイルスゲノ

イルスの自然宿主の予測を行なった (8)。Li らは、support vector

ム中に内在する宿主適応に関連した重要な特徴を抽出すること

classifier を用いてインフルエンザウイルスのヒトへの適応度をを可能にした。また、これらの解析で得られた結果の検証とし調べた (9)。このように、AI を用いることによって、ウイルスて、インフルエンザウイルスゲノムの連続塩基組成について、ゲノム中に内在する特徴の検出が可能になってきている。しかヒト集団内での流行過程における時系列変化にも注目した。そしながら、一般的な機械学習を用いた手法において、その手法の試みの一つとして、2009 年にパンデミックを引き起こしたで分離した結果の根拠となる情報が得られていない ( ブラック

H1N1pdm 株の連続塩基組成の時系列変化を調べた。興味深い

ボックス化 ) という難点がある。分離することのみに焦点を当ことに、ヒトに適応するために重要であると推定される連続塩てるなら問題はないが、宿主適応に関わる特徴の分子メカニズ

基の組成の変化に注目したところ、H1N1pdm 株の組成が、ヒムの解明を目指す場合、AI による予測の根拠となる情報が重要

トで流行を繰り返している B 型を含む季節性インフルエンザ

な手がかりになる。この課題を解決するため、我々の研究室でウイルス株の組成に近づくように変化していることを見出したは説明可能型 AI の１種である一括学習型自己組織化マップ法(10)。

図１．インフルエンザウイルスを対象とした 4 連続塩基組成の BLSOM 解析(A) 4 連続塩基組成に基づいた BLSOM 解析の結果。ヒトから分離されたウイルスゲノムを含む領域を緑、トリから分離されたウイ
ルスゲノムを含む領域を赤、ブタから分離されたウイルスゲノムを含む領域を青で表している。インフルエンザウイルスゲノムは、分離された宿主ごとに明確に分離していた。(B, C) ヒトから分離されたウイルスで特異的に高頻度 (B) 及び、低頻度 (C) の連続塩基のヒートマップ。BLSOM マップ上で頻度が高い領域を紫、低い領域を緑で表している。

3

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

こ の 解 析 に よ り、2009 年 か ら ヒ ト 集 団 で 流 行 を 開 始 し た

引用文献

H1N1pdm 株のゲノムにおいて、宿主適応に重要であると推定

1) Smith G. J., Vijaykrishna D., Bahl J., et al. Nature. 459:1122–5

された特徴が蓄積されて行く過程を観察することができた。こ(2009)の成果は、ウイルスゲノムの変化の近未来予測への応用が期待

2) Singhal T. Indian J. Pediatr. 87(4):281–6 (2020)できる。また、連続塩基組成が、ヒトへの適応についての重要

3) R at h n a si ng he R ., Ja ng r a S., C upic A. et a l. me d R x iv.

な指標を与えているのなら、ヒト以外の宿主で流行しているウ

2021.01.19.21249592. (2021)

イルス類の連続塩基組成を調べることで、そのウイルスが将来

4) Karlin S., Campbell A. M., Mrazek J. Annu. Rev. Genet. 32:185–

的にヒトへの流行を引き起こす危険性について評価できる。こ225 (1998)の可能性を調べるためにトリから分離された全インフルエンザ

5) Abe T., Kanaya S., Kinouchi M. et al. Genome Res. 13(4):693–702

ウイルス株の連続塩基組成を調べたところ、ヒトで流行してい(2003)るインフルエンザウイルス株の連続塩基組成と似た組成を持っ

6) Iwasaki Y., Wada K., Wada Y. et al. Chromoe Res 21, 461–474ている株を見出した (11)。このように、AI によって抽出された(2013)

宿主適応に関連した特徴をもとに、様々な応用が可能になった。

7) Iwasaki Y., Abe T., Okada N., Wada K., Wada Y., Ikemura T. DNA
Res. 21(5):459-67 (2014)

5. 新型コロナウイルスを対象としたゲノム解析
2019 年 12 月、中国の武漢で SARS-CoV-2 による最初の感染が確認され、このウイルスはわずか数ヶ月の間に世界規模のパンデミックを引き起こしている。世界中でこのウイルスのゲノム解析が進められ、様々な特徴が明らかになりつつある。我々のグループでは、まず、このウイルスゲノムの連続塩基組成の変化のパターンに注目した解析を行った。前章で述べたように、2009 年にパンデミックを引き起こした H1N1pdm 株では、新たな宿主であるヒトの中で流行を繰り返すうちに、自身のゲノムの中に宿主適応に関わる特徴が蓄積されていった。興味深いことに、SARS-CoV-2 のゲノム組成の時系列変化にも明確な方向性があり、ヒト集団で流行している他のコロナウイルス
株の連続塩基組成に近づくように変化していた（図 2 および図３）(12,13)。また、このウイルスのより詳細な特徴を調べるた
めに、AI を用いた解析も行なった。ヒトから分離された全ての
SARS-CoV-2 ゲノムを対象に BLSOM を用いた解析を行なった
ところ、SARS-CoV-2 のゲノムは BLSOM の map 上で Clade ( 系統 ) ごとに明確に分離しており、その分離に寄与している連続塩基の検出にも成功した (14)。このように、AI を用いること
によって新たにヒト集団でパンデミックを引き起こした SARSCoV-2 においても能率的な知識発見が可能になっている。
6. ウイルスゲノム解析の今後の展望
我々のグループを含む様々な研究グループが、ウイルスのゲ
ノム配列には宿主適応に関連した特徴が埋もれていることを明らかにした。しかしながら、これらの特徴が具体的にどのような分子機構と関係しているかについては、不明な部分も多い。
5 ～ 10 程度の連続塩基は、タンパク質との相互作用について、
15 〜 20 連塩基は miRNA を含む宿主 RNA との相互作用についての知見を与える可能性が考えられる。ウイルスゲノム配列中の連続塩基が、宿主のどのような因子と相互作用するか解明することができれば、そのウイルス感染に対する有効な治療法や、感染予防方法の開発にも貢献できると考えられる。これは、ウ
イルスゲノム解析という分野における次の大きな課題の１つと言えるだろう。

48) Babayan S. A., Orton R. J., Streicker DG. Science. 362(6414):577580 (2018).
9) Li J., Zhang S., Li B., Hu Y., Kang X. P., Wu X. Y., Huang M. T.,
Li Y. C., Zhao Z. P., Qin C. F., Jiang T. Mol. Biol. Evol. 37(4):12241236 (2020)
10) Iwasaki Y., Abe T., Wada K., Itoh M., Ikemura T. DNA Res.
18(2):125-136 (2011)11) Iwasaki Y., Abe T., Wada Y. et al. BMC Infect. Dis. 2013, 13, 386.
12) Wada K., Wada Y., Ikemura T. Gene. 2020, 5, 100038.
13) Iwasaki Y., Abe T., Ikemura T. BMC Microbiol. 2021, 1, 89.
14) Ikemura T., Wada K., Wada Y., Iwasaki Y., Abe T. bioRxiv 2020,
10.11.335406

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

図２．新型コロナウイルスの連続塩基組成の時系列変化
それぞれの Clade に分類される新型コロナウイルスについて、連続塩基組成の月毎の平均値を計算した。全ての Clade で共通した方向性をもって変化している連続塩基が見られた。

図３．ヒト株との連続塩基組成の類似度の時系列変化
それぞれの Clade に属する新型コロナウイルスの連続塩基組成と、ヒト集団で流行しているコロナウイルス株の連続塩基組成の類似度の時系列変化を調べた。新型コロナウイルスの連続塩基組成は、ヒト株の連続塩基組成 ( ヒト型 ) に近づくように変化していた。

5

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

日本ゲノム微生物学会研究奨励賞受賞にあたって
岩崎 渉
東京大学 大学院新領域創成科学研究科
か失われてしまったものに、再び目を向ける必要があるように思う。
一次配列があれば、タンパク質三次元構造は予測できる。
タ ン パ ク 質 立 体 構 造 予 測 コ ン テ ス ト CASP14 に お い て、
DeepMind の AlphaFold2 が 挙 げ た 成 績 は、2012 年 に ImageNet
でいわゆる AlexNet がトップに躍り出た時とも比較にならないほど、優れたものであった。タンパク質立体構造予測のバイオインフォマティクスの科学から工学への変質が、おそらくは、
その一つの含意だろう。
「ゲノム配列には基本的にほとんどのことが書かれており、それを正しく読み解けば必ず生命は理解できるはずである」
このたび、2021 年の第 15 回日本ゲノム微生物学会研究奨励

私が今後の研究者人生を見据えて、このことを改めて信じる

賞を受賞させていただきました。推薦いただいた先生、共同研（あるいは “ 信じてみる ”）ことにしたとき、微生物ゲノムがそ究や様々な形でお世話になった先生方、そして、過去と現在のの研究の中心的な舞台となることは、自然な帰結だろう。

研究室メンバーに、改めて感謝申し上げます。
ゲノム配列情報をいわば正面から見ることを出発点とした関連研究の多く、例えば分子機能・相互作用予測、表現型予測、合成生物学、システム生物学、そして進化学までが、遠くない
まるで「異世界転送」されたかのように静かなキャンパスと、どこからか聞こえてくる美しい鳥の鳴き声。 “ いながら ”

将来、構造プロテオーム情報を基盤として再構築されていくだ
ろう。

にしてバラエティ豊かな研究者のトークを（時にはラジオ代わりに？）聞くことができるようになった研究室で、「2020 年度、
生物学上最も重要だったニュースは何か？」という質問と、そその一方で、ゲノム情報を読み解くにはそれだけでは足りないというのもまた、私の直感である。

の意味を考える。
新型コロナウイルス感染症の流行、初めての RNA ワクチン
私の最初の研究成果は、超好熱古細菌 Pyrococcus horikoshiiの実用化。
タンパク質立体構造予測問題の進展を挙げる人はどの程度いが持つアスパラギニル tRNA 合成酵素の X 線結晶構造解析および変異体の生化学実験によって、アスパラギンとアスパラギ

るだろうか。

ン酸を区別した正確なタンパク質翻訳が起こる分子メカニズム
あらゆる意味で通常とは程遠かった１年が過ぎた今、「ゲノムが、水分子を介した水素結合ネットワークによって支えられては生命の設計図」という枕詞がかつて啓蒙の文脈を超えて確かいることを証明したことであった (1)。このときに培った構造に持ちえていたもの、そして、ポストゲノム時代にいつのまに生物学・分子生物学の経験や知識は、例えば、海洋細菌のゲノ

6News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

ム情報から新規微生物型ロドプシンを発見し、さらに立体構造

リアではなく β プロテオバクテリアにあり、根粒菌の起源に関解析および機能解析によって、塩化物イオンを細胞膜内向きにするこれまでの定説を見直す必要性の指摘 (19)、メタゲノム解ポンプする分子メカニズムが、ナトリウムイオンを外向きにポ析による 1,500 以上のプロテオロドプシン遺伝子の配列多様性

ンプする微生物型ロドプシンと極めて良く似た構造によって実および系統的分布・空間分布の解明 (20)、メチロトロフとメタ

現されているという、微生物型ロドプシンの分子メカニズムにノトロフの栄養共生がメタノール以外の物質を介して行われて関する研究にも繋がった (2)。また、巨大ウイルスシングルセいる可能性のトランスクリプトームによる示唆 (21) などがあげ

ルメタゲノム情報から新規ウイルス型ロドプシンを発見し、立られる。メタゲノム解析をエピゲノム解析と組み合わせること

体構造解析および機能解析によって、光感受性プロトンポンプ

で、難培養微生物のエピゲノムを解析する「メタエピゲノム解活性を持つことを明らかにし、「宿主微生物への光利用能力の析」を世界に先駆けて提唱し、琵琶湖の環境細菌叢から多様な付与」が巨大ウイルスにとって重要な役割を持つことを示唆し

DNA メチル化モチーフ配列を検出したほか、それらのモチーた成果にもつながっている (3)。

フ配列を認識する新規の DNA メチル化酵素の同定までを行っ一方で、微生物ゲノムから微生物の生理・生態・進化に関すた成果 (22) も、ゲノム微生物学を拡張する研究として位置付ける理解を深めていくために、多様な微生物ゲノム情報を多角的られると考えている。

に読み解くための情報解析技術の開発も進めてきた。具体的にまた原核生物にとどまらず、真核微生物ゲノム、特にそのは、大規模なゲノムデータをもとに遺伝子の不均一な獲得・欠特有のゲノム進化イベントであるハイブリッドゲノムの進化

失速度を最尤推定し、ゲノム進化過程を高速かつ高精度に再構について、近縁種で 2 度独立にハイブリッドゲノムが生じた

築するアルゴリズム (4)、グラフ理論に基づいて大規模な進化

Trichosporon 属真菌（酵母）を対象としたゲノム解析を行い、系統樹を高速に精度良く推定するソフトウェア (5)、同じ分子

そのゲノムの安定化に遺伝子の進化速度の低下や転写・翻訳に機能を持っていると推定されるオルソログ遺伝子グループを関わる遺伝子の欠失が関わっていることを解明し (23)、バック

超高速に推定することを可能にするソフトウェア (6)、さらに、

ボーン系統樹を推定することも行ってきた (24)。さらに、比較そうしたオルソログ遺伝子データから遺伝子間の複雑な機能依

トランスクリプトームとの統合解析により、遺伝子配列レベル

存関係を網羅的に推定することを可能にするソフトウェア (7)と遺伝子発現レベルでの進化がそれぞれ別々に、ハイブリッドなどの研究を進めてきた。加えて、微生物ゲノムから微生物のゲノム上で生じるゲノム不和合の解消に働くことを明らかにし生態環境を推定することを可能にするために、微生物の生息環た (25) ことも関連する成果として挙げられる。

境を配列データから予測するためのデータベースおよびパイプ
ラインの開発 (8,9) を行ったほか、大規模で複雑なデータの解釈を助けるための可視化ツールとして、遺伝子水平伝播の影
響なども考慮した大規模な系統樹の描画手法 (10)、代謝ネット

私は、微生物ゲノムが研究対象として特に魅力的なゆえんは、ワークなどの生命ネットワークデータの直感的な描画手法の開分子レベルのミクロの世界から、生態系や進化史などのマクロ

発 (11,12) を行ってきた。

の世界までが、「微生物ゲノム」という一つの確固たる基盤をさらに、開発した情報技術も活用しつつ実際の微生物ゲノム

元に直結することだと考えている。

データを解析することで、微生物の進化・生態の解明を目指し

しかし残念ながら（あるいはそもそも現代生物学全体を俯瞰た研究を進めてきた。具体的には、原核生物において遺伝子水すれば当然のことながら）、ゲノム微生物学は未だ、ゲノム情平伝播が代謝ネットワークの進化に重要な役割を果たしたとい

報さえ与えられればその微生物を十分に理解できるという段階

う仮説の提示 (13)、東北地方太平洋沖地震に伴う津波の影響をには至っていない。微生物ゲノムの理解を深める上では、必ず、受けた東北沿岸土壌における Arthrobacter 属細菌ゲノム進化の大規模データの存在を前提として、それをいま以上に多角的な解明 (14)、雨水の長期サンプリングによる雨水中微生物叢の全観点から解析し、知識を引き出すためのさらなるアプローチが体像解明および海洋性・土壌性微生物が大気を介して移動して必要となるだろう。新たな概念・現象・機能を発見することをいることの示唆 (15)、微生物生態系におけるジェネラリストと目的としつつ、同時に、新規性のあるアプローチを模索するこ

スペシャリストの共存のバランスが「ジェネラリストによってとを、今後も続けていければと考えている。

駆動される進化」によって保たれていることの解明 (16)、海洋
表層の微生物が光エネルギーを利用する「ソーラーパネル型」と色素で光を遮る「パラソル型」の２つの適応戦略をとっていることの示唆 (17)、深海熱水噴出孔に生息する無脊椎動物の外日々の研究生活の中で、どこまで本質に近づいているのだろ

部共生微生物叢のメタトランスクリプトーム解析による極限環うかという疑問はもちろん尽きない。それでも、方向性のよう境における微生物代謝機能の遺伝子基盤の全体像の解明 (18)、なものは、見えてきたようには感じている。

根粒菌が持つ根粒形成遺伝子 nodIJ の起源が α プロテオバクテ

私の大学院の指導教員である高木利久先生が、折々に語って

7

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

くれた言葉を思い出す。
方向性が見えたなんてそれは勘違いだと、そして同時に、研究者にはどこかで勘違いのようなものが必要だと、言ってくれ
るのではないかという気がする。

デザインに向けたバクテリアのもちろん、それ自体も私の勘違いかもしれない。

ゲノム情報構造理解

引用文献

河野 暢明

1) Iwasaki W. et al., J. Mol. Biol., 360:329-342 (2006)

慶應義塾大学 先端生命科学研究所

2) Hosaka T. et al., J. Biol. Chem., 291:17488-17495 (2016)3) Needham D.M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A., 116:2057420583 (2019)4) Iwasaki W. and Takagi T., Bioinformatics, i230-i239 (2007)
5) Matsui M. and Iwasaki W., Syst. Biol., 69:265-279 (2020)
6) Cosentino S. and Iwasaki W., Bioinformatics, 35:149-151 (2019)
7) Fukunaga T. and Iwasaki W., PLOS One, 15:e0232106 (2020)
8) Yang C.C. and Iwasaki W., PLOS One, 9:e87126 (2014)9) Mise K. and Iwasaki W., iScience, 23:101624 (2020)
10) Iwasaki W. and Takagi T., Syst. Biol., 59:584-93 (2010)11) Praneenararat T. et al., Bioinformatics, 27:1121-1127 (2011)12) Praneenararat T. et al., BMC Genomics, 13 Suppl 7:S24 (2012)13) Iwasaki W. and Takagi T., PLOS Genet., 5:e1000402 (2009)14) Hiraoka S. et al., BMC Genomics, 17:53 (2016)15) Hiraoka S. et al., Front. Microbiol., 8:1506 (2017)

この度は栄えある日本ゲノム微生物学会の若手賞をいただ

16) Sriswasdi S. et al., Nat. Commun., 8:1162 (2017)

き、とても光栄に思っております。まずはじめに今回推薦して17) Kumagai Y. et al., ISME J., 12:1329-1343 (2018)

くださった多くの先生方、審査してくださった先生方、そして

18) Motoki K. et al., mSystems, 5:e00551-20 (2020)

これまで共に研究をしてくださった多くの方々に心より御礼申

19) Aoki S. et al., Mol. Biol. Evol., 30:2494-2508 (2013)

し上げます。

20) Olson D.K. et al., ISME J., 12:1047-1060 (2018)

私はこれまで一貫して生命のデザイン原理について研究を

21) Takeuchi M. et al., PLOS One, 14:e0213535 (2019)

行ってきました。大腸菌や枯草菌ゲノムから、時に真核生物や

22) Hiraoka S. et al., Nat. Commun., 10:159 (2019)

その生産産物たるバイオマテリアル（クモやミノムシの糸）に23) Sriswasdi S. et al., Genome Res., 26:1081-1090 (2016)至るまで、多様な規模を対象に、その設計原理理解を目指し

24) Takashima M. et al., Yeast, 35:99-111 (2018)てきました。どの様なルールに則って進化してきたのかを理

25) Sriswasdi S. et al., Commun. Biol., 2:263 (2019)

解することは、生命理解という理学的な成果を得るだけでな
く、生物利用という工学あるいは持続可能な未来社会の実現へとつながっていくことになるでしょう。そうした研究理念において、「全ゲノム合成」というキーワードはボトムアップアプ
ローチの一つとして重要な役割を担います。合成生物学分野では数年前より HGP-write（the Human Genome Project-write）というプロジェクトの活動が盛んになってきました。ヒトゲノム計画（Human Genome Project: HGP-read）から十数年、ゲノムを読む時代から書く時代へ。微生物ゲノムスケールでのコドンの書き換えなど、ヒトゲノムに限定しない GP-write として様々な成果を達成しています。「ゲノムを書く」ために達成すべき鍵となる技術として４つの項目、「DNA synthesis」、「Genome
editing」、「Chromosome construction」、 そ し て「Genome design」
が挙げられることがあります (1)。PAM の制約から解き放たれた CRISPR/Cas9 システムによるゲノム編集や、ゲノムスケール

8News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日の大規模アセンブル技術などは着実に発展してきています。特また私はこれまで何度かこのゲノム微生物学会ニュースレターに昨今、技術革新が目覚ましく話題を集めているのが DNA 合に記事を掲載していただいております通り、2017 年より日本

成関連技術です。従来用いられているホスホロアミダイト法

ゲノム微生物学会若手の会の世話人をさせていただいておりまに代わる DNA 合成法として、TdT（Terminal Deoxynucleotidyl

す。代表としては３年目となります。今回若手賞受賞を受けて、Transferase）を用いた酵素法が注目を集めています (2)。酵素法

今一度若手の会の在り方についてご承知いただきたく、最後には化学薬品を用いずに安全に DNA を合成できる技術であるが、述べさせていただきます。日本ゲノム微生物学会若手の会は日

その実用性はまだ検証されていませんでした。ところが 2019

本ゲノム微生物学会の入門編、あるいは単に初学者が学ぶ場で年に DNA Script 社が 150-mer の DNA 合成に成功したと発表しはありません。少なくとも近年、この若手の会に学会員の先生て以降、天然 TdT を改変することでスループットやコストの向方がご自身の研究室に所属する「若手」を参加させる動きは、上が計られ、実用化に向けて一気に動き出しています。同様に

ほとんどございませんでしたので、きっとそうした認識は共通

George Church らの Nuclear 社や Jay Keasling らの Ansa Bio 社なしていると思われます。その上で我々世話人一同は、若手の会

ども参画し、DNA 合成業界はバイオベンチャーの乱立で盛りは所属や立場に限定されることもなく、分野や技術に制限され上がりを見せています。こうして「DNA synthesis」、「Genome

ることもなく、より新しいことに挑戦したい気概のある学際的editing」、「Chromosome construction」の技術革新に関しては将なフロンティアの集まりとして、創造的で凛とした会であるべ

来性が見えてきた一方で、「Genome design」を達成する兆しはきであると考えております。世話人は挙手制で、特に募集期間あまり見えていません。遺伝学分野では、遺伝子の配列設計、などは設けておりません。微生物やゲノムを軸に、あるいはそプロモーターの選択、あるいはコドンの最適化などは日常的にれらを飛び越えた分子生物学をキーワードに、分野発展を共に行われており、ノウハウは十分に蓄積していると思われます。

してくださる方がいらっしゃいましたら、是非お声がけくださ

しかしながらその一方、もう少し全体を俯瞰してゲノムスケー

い。

ルでの設計を想定すると、我々はゲノムを自在に設計することが叶うか不安を覚えてしまいます。そして実際に私の知る限り

引用文献

そのための条件はまだ揃っていません。例えば遺伝子同士をど

1) Ostrov N, et al. Science 366(6463):310-312 (2019)の程度の間隔でどういう向きに配置すれば良いのか、複製開始・

2) Palluk S, et al. Nat. Biotechnol. 36(7):645-650 (2018)

終結点の対称性はどれほど維持すれば良いのか、ゲノム上のタ

3) Kono N., Arakawa K., Tomita M. BMC Genomics 1219 (2011)

ンパク結合サイトであるオリゴ配列分布のロバスト性は如何ほ

4) Kono N, Tomita M, Arakawa K. BMC Genomics 18(1):784 (2017)

どか。ここに例示した疑問はすべて、まだ我々が全ゲノム合成

5) Kono N., Arakawa K., Tomita M. PloS One 7(4):e34526 (2012)

を達成できていないがために顕在化していない課題であり、い6) Kono N., Tomita M., Arakawa K. Genome Biol. Evol. 10(11):3110-

ずれ近い将来掌握しなければならないゲノムの基本的な設計原3117 (2018)

理です。こうした基本原理を理解し、生命の基本動機である増殖戦略を基盤から普遍的にモデリングできるようにならなければ、真の意味で生物を理解・利用できるようにはなりません。
今回の若手賞ではこうした背景に基づいた「デザインに向けたバクテリアのゲノム情報構造理解」という研究課題を評価していただきました。各研究成果に関する詳細は省きますが、これまで私は計算機シミュレーションで確からしい細胞内のゲノ
ム複製終結モデルの候補を挙げ (3)、細胞内の複製挙動をモニタリングする技術 (4) を用いて予測された複製終結モデルの正しさを実験的に証明してきました。その検証過程で我々は複製機構が大規模なゲノム改変にも適応できるほどのロバスト性を有していることも明らかにしました (5)。さらに我々は複製や転写などの生命システムの中で、最もゲノムに変異を与えるプ
ロセスが複製であり、遺伝子の変異蓄積はその複製プロセスによって方向付けられていた事実を実験室進化によって明らかにし、遺伝子の配向性に関する基礎的な指針の提唱に成功しました (6)。こうした成果はまだ Genome design のほんの一部にすぎませんが、今後も研究に邁進していきたいと思います。

9News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

環境ホロゲノム解析
藤吉 奏

アンダーセンエアサンプラー
９段階捕集>11.0 μm~ <0.43 μm

広島大学 学術・社会連携室

富山市

土壌や植物関連菌が有意

350 km横浜市

人の皮膚関連菌が有意

人の健康は身の回りに生息する多種多様な微生物に影響を受けています。特に空気中に浮遊する微生物は、呼吸系を通して健康に大きな影響を与えています。屋内の浮遊性微生物の種類と量は、屋外やヒト、建築物などと密接に関係していることから、屋内微生物環境の動態を理解するためには、居住者をはじめその環境に存在する（微）生物のゲノム総体（環境ホロゲノ
ム）を捉える必要があります。そこで、2017 年以来、フィール
ドワークを含む実験とゲノム情報解析の両面から本研究課題に取り組んでいます。その結果、屋内においては温湿度、空気交
換率、居住者密度が細菌の種類や量を左右する要素となるのに対し (1)、屋外の場合は、細菌群集構造自体に季節性があり、それには温湿度以外にエアロゾルが関連している可能性があることを総説で提唱しました (2)。
空気は流動性が高いため、これまで浮遊性微生物も均一拡散すると考えられていました。しかし、屋外の浮遊性微生物群集
構造をアンプリコン解析および系統解析したところ、たとえ近い距離（富山市 ― 横浜市：350 km、富山市 ― 立山 : 40 km）であっても構造が異なること（地域特異性）、また、微生物種にエ
アロゾルの粒径依存性が見られ、その中にはエアロゾル感染症の原因となるレジオネラ属細菌が存在することが見えてきました (3, 4)。また、微生物群集構造の分布からみた場合、世界的に大気質指数の一つとして測定されている粒子状物質 PM2.5 より
も、PM1.1 の方がより重要であることが分かりました（図１）。
「蟲師」第５巻「山抱く衣」に産土（うぶすな）という蟲が出

5

4

3

2

1

1.1 µm以下の粒子

ハイブリッドアプローチによる

横浜市

Aug-S2
Aug-S5
Aug-S9Aug-S7
Aug-S8Aug-S1
Aug-S3Oct-S6Oct-S1Oct-S3Oct-S4Oct-S2Oct-S5
Sep-S3
Sep-S6
Aug-S6
Aug-S4
Sep-S5
Sep-S1
Sep-S2
Sep-S4
Sep-U5
Sep-U9Sep-S7
Sep-U3
Aug-U5
Sep-S8
Sep-U8
Aug-U7
Sep-U4
Aug-U2
Aug-U6Oct-S7
Sep-S9Oct-S8
Sep-U6Oct-S9
Aug-U8
Sep-U7
Oct-U8
Aug-U9Oct-U9Oct-U7
Oct-U1
Oct-U6
Oct-U5
Oct-U3Oct-U4
Oct-U2
Aug-U1
Sep-U1
Aug-U4
Aug-U3
Sep-U2

富山市

2021 年 7 月 5 日

0

図１．富山市と横浜市にて、９段階サイズ分画可能なエアロゾ
ルサンプラーを用いて同日に採取した微生物群集構造の比較。
富山由来の 1.1 µm 以下の粒子に含まれる微生物群集が、横浜の群集に入り込んでいる。((3) の図３を改変 )。
従って、オンサイトで微生物群集構造を解析し、迅速に病原菌を含め微生物の有無を確認できたら、自分が普段どんな微生
物と共に暮らしているのかを知ることができるので、衛生微生
物学的観点からも重要となることでしょう。特定の遺伝子を検出するためのポータブル実験機器システム（通称スーツケースラボ）は完成し、既に公表しています（日本ゲノム微生物学会
ニュースレター No. 22, 学会員の最新の論文紹介コーナーにも掲載させていただきました）(6)。現在はこれを基に、メタゲノム
解析可能なアップデート版の製作を進めています。今後は、人と密接に関わる空気中の微生物の実態・機能・環境相互作用・
健康影響評価、新たな生物資源の探索などを、国内外の研究者と協力しながら推進し、現場で活かせるゲノム微生物学の発展に貢献していきたいと考えています。
最後になりましたが、この度はゲノム微生物学会から若手賞をいただき、大変嬉しく光栄に存じます。お忙しい中選考いた
だいた委員の先生方に厚く御礼申し上げます。そして、これまでご指導下さった先生方、ご指導いただいている先生、共同研
究者の皆様にこの場をお借りして心より感謝申し上げます。

てきます (5)。ここで、蟲とは動物でも植物でもない生命の原生

引用文献

体という設定です。この産土は各土地に固有で、それを口にす

1) Fujiyoshi et al., Front Microbiol. 8:2336 (2017)

ると生涯他の様々な蟲から守られること、子供の頃に産土

2) Ruiz et al., Environ Int. 145:106156 (2020)を十分取れなかった人は成長が遅いという説明がありました。

3) Tanaka et al., Sci Rep. 10:12406 (2020)

もちろんこの話はフィクションですが、生活環境に存在する微

4) Tanaka et al., Front Bioeng Biotechnol. 7:12 (2019)

生物と人の健康は、我々が思っているよりも密接にリンクして

5) 漆原友紀 . 蟲師 . 第５巻 . 講談社 . (2004)

いるのではと思えてなりません。

6) Fujiyoshi et al., Environ Sci Pollut Res. 28(11):14144–55 (2020)10

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

事ができれば、各現生種が持っている遺伝子セットの情報をもとに、ある遺伝子をこれから獲得 / 欠失しそうな種を予測できると考えられる。例えば、遺伝子 A を獲得してから遺伝子機械学習による微生物生命システム

B を獲得するという順序のパターンがある場合には、既に遺伝
子 A を持っている種の方がそうでない種よりも、今後遺伝子 B

進化の法則解明と未来予測を獲得する確率は高いと予測できる（図 1）。このような予測

今野 直輝ができれば、例えば薬剤耐性遺伝子を今後獲得する危険性が高い種を予測することや、有用遺伝子を人為導入しやすい種を予東京大学 大学院理学系研究科

測することにも繋がるだろう。しかしこれまでの進化の予測研
究は１個から数個の遺伝子の塩基配列レベルの進化を主な対象にしており (2-4)、各遺伝子の獲得 / 欠失のような生命システム
レベルの進化の予測可能性を網羅的に検証した研究は存在しない。そこで本研究では、生物情報科学という筆者のバックグラ
ウンドを生かしながら、機械学習を用いてバクテリアの遺伝子
獲得 / 欠失による進化の予測可能性を明らかにすることを目指した。
まずは過去の進化で生じた各遺伝子の獲得 / 欠失のタイミングを推定するため、40 門 3,171 株のバクテリアの遺伝子セットの情報 (5) とその系統樹の情報 (6) を用いて、系統樹上の各祖
先種について各遺伝子の有無の祖先状態推定を行った。そして、系統樹上の各枝について、その枝の直前の祖先の遺伝子セットの情報から、ある遺伝子をその枝で獲得 / 欠失する確率をロジ
スティック回帰モデルで予測する機械学習モデルを構築した。

地球上には多様な微生物が存在し、それぞれが多数の機能を系統樹上の枝をランダムに２グループに分け、片方のグループ

組み合わせた生命システムとして振る舞っている。そのシステ

で進化順序のパターンを学習して、もう片方のグループに対しムの「設計図」であるゲノムは、様々な遺伝子を獲得 / 欠失して進化の予測精度を測定した。

ながら多様化してきた訳だが、その未来の進化を予測すること

その結果、全代謝酵素遺伝子の傾向として、獲得 / 欠失ともはできるのだろうか？一見すると、突然変異、水平伝播や遺伝に予測の正確性がランダム予測よりも有意に高い事が示され的浮動のような偶発的な現象によって進化はランダムに起きるた。興味深いことに獲得を予測可能な遺伝子群は芳香族化合物

ように思える。しかし、異なる系統間に共通の自然選択があるの分解経路に特に集中していたため、この経路においてどのよ

ことで収斂進化・平行進化が起きたり、進化制約によって獲得うな進化順序のパターンがあるのか解析した。すると３種類の/ 欠失しうる遺伝子が制限されたりすることによって、異なる

芳香族化合物の分解経路について、分解産物から分解対象の化系統が共通の遺伝子を共通の順番で獲得 / 欠失するという「進合物に向かって反応経路が伸びるように進化するというパター

化順序のパターン」が生じることも知られている (1)。

ンが見つかった。この順序で遺伝子を獲得すれば、遺伝子を獲従って、この進化順序のパターンを網羅的に検出・考慮する得する度に代謝可能な化合物の範囲が広がり適応度が上昇する

図１．機械学習による遺伝子獲得／欠失進化の予測

11News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日と考えられるので、この順序の進化が異なる系統で共通に見られるのはリーズナブルである。このことから、本研究の進化予測モデルが生物学的に解釈可能な進化の傾向を捉えられることが示唆された。
さらに、この進化予測を現生種の遺伝子セットに対して適用することで、各現生種がある遺伝子を未来に獲得する確率を予枯草菌 sigK 再編成に関与する
新規溶原性ファージの機能解析伊藤 光瑠測した。予測の妥当性を検証する上で現生種 114 種に対して代

法政大学 生命科学部

表株以外のゲノムも加えて解析した結果、予測された獲得確率が高い種では、その種に属する一部の株が既にその遺伝子を獲得しているという傾向が見出された。このことから、ある遺伝
子を未来に獲得しそうな種や今まさに獲得しつつある種も予測可能であることが示唆された。
本研究ではバクテリアの代謝酵素遺伝子群を対象に獲得 / 欠
失による進化の予測可能性を網羅的に検証した。その結果、様々な遺伝子について獲得 / 欠失する種を予測できることが明らかになった。しかし、なぜ予測できるのか、つまり実際にどのような進化順序のパターンがあるのかは解釈できていないものが多い。今後はその解釈をさらに深めると共に、薬剤耐性遺伝子を獲得する種の未来予測や有用代謝経路の人為導入可能な種の予測など、応用研究にも繋げたいと考えており、情報解析に加えて実験によるアプローチも取り入れて研究を進めていく予定である。

溶原性ファージ DNA の挿入と欠失は、att 部位と呼ばれる短い配列を介して、インテグラーゼ (Int) と欠失因子 (RDF) によっ

最後に、この度は栄誉ある賞を頂きまして大変嬉しく思ってて行われます。挿入の際は Int、欠失の際には Int に加え RDF

おります。進化、生態から構造、生理機能まで非常に多様な専が必要とされます (1)。従って、部位特異的組換え (SSR) の方

門の方々と議論させて頂き、微生物のゲノムを眺めるときの視向（挿入 or 欠失）は Int と RDF の濃度比によって決定されます。

野も広がったように感じます。今年はオンライン開催という新さて、枯草菌は栄養源が枯渇すると細胞内に胞子を形成しま

しい形でしたが、特に Zoom のブレークアウトルーム機能のおす。胞子形成は σ 因子の逐次的な機能発現により進行します。

陰で、非常に快適に議論する事ができて大変ありがたかったで

その σ 因子の１つである σ は sigK によってコードされています。頂いた多くのフィードバックを糧に今後も研究を深めて参す。sigK は skin element(48 kb) と呼ばれる欠陥プロファージにります。議論して下さった方や発表を聞いて下さった方、そし

よって分断されていますが、胞子形成期後期母細胞内でのみ部て年大会をご企画・ご援助下さった皆様に改めて深く感謝申し

位特異的組換えによって skin が切り出され、再編成されます

上げます。是非また次の機会にも議論させて頂けたら幸いです。

(2)。sigK 再 編 成 に 働 く Int は SpoIVCA、RDF は Skr で す (3)。

K

一般に溶原性ファージの int と rdf は独立の転写単位で制御さ
引用文献

れ、構成的に int が発現している場合は挿入、int に加えて rdf

1) Press M. O. et al., Genome Biol., 26(6):826-833 (2016)が発現すると欠失というように組換えの方向が制御されていま

2) Salverda M. et al., PLoS Genet., 7(3):e1001321 (2011)

す。しかし、skr と spoIVCA は同じ転写単位であるため欠失し

3) Hosseini S. et al., Bioinformatics, 35(14):i389-397 (2019)

か制御できません。さらに skr の 3’ 末端側と spoIVCA の 5’ 末

4) Hie B. et al., Science, 371(6526):284-288 (2021)

端側は重複しているという特徴を持っています。skin は欠陥プ

5) Kanehisa M. et al., Nucleic Acid Res., 45(D1):D353-D361 (2017)

ロファージですが、もし skin の SSR 装置 (Int, RDF) を持つ溶

6) Parks D. H. et al., Nat. Biotech., 38(9):1079-1086 (2020)

原性ファージが存在した場合、それは rdf-int が同一転写単位を構成し、かつ挿入と欠失を行うことのできる溶原性ファージであるということになります。そこで、私たちはこのような組換え機構を持つ sigK に感染する溶原性ファージの単離を目指しました。本研究室において、特定の att 部位を標的とする溶原性ファージのスクリーニング法が開発されています。このスク
リーニング系を用い、全国の土壌から分離した溶原性ファージの中から sigK を標的して溶原化する φshrK を得ることに成功
しました。

12

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

驚いたことに、φshrK(42 kb) は、skin element とほぼ同一のついて、重複部分に見られる配列構造に着目して考察してみま

SSR 装置を持ち、かつファージの構造に関与する遺伝子領域にした。H I V や SARS-Cov などのウイルスにおいては RNA 上

おいて、枯草菌の溶原性ファージ φ105 (39 kb) と 88% の相同でステムループを形成し、その直前にある slippery sequence に

φ105 と skin の間で、性があることが分かりました。このことは、

より、リボソームがフレームシフトを起こします。これによSSR 装置の交換がおき、skin の SSR 装置を持つ φshrK が誕生

り２種類のタンパク質の生産量を調節しています。実は、このしたことを示しています。sigK を標的に溶原化した φshrK は、構造が φshrK の rdf-int の重複領域に存在しています。slipperyskin と同様に胞子形成期後期に切り出され、sigK を再編成する

sequence 上でフレームシフトが起こると不完全な 15 aa の RDF

ことが確認されました（図１）。一方で、φshrK の RDF=Skr (65が生産されます。一方、フレームシフトが起こらないと 65 aaaa) と Int =SpoIVCA (500 aa) は skin と同様に、rdf の 3’ 側の半の RDF が産生されます。つまり、挿入か欠失か？という方向

分の領域 (33 aa) が int の 5’ 側領域と 1 フレームずれて重複しの選択は、フレームシフトにより、調節されているのではないてコードされていました。また、rdf-int は、同じ転写ユニット

かということです。現在、この仮説が正しいか各フレームとのとして発現しており、それぞれの欠失解析から RDF、Int をコ

翻訳融合システムを構築して検証しています。

ードしていることが明らかとなりました。さらに、rdf の 3’ 末

最後になりますが、この度は名誉あるポスター賞に選んでい端領域 33 aa は、int の 5’ 末端領域と 1 フレーム読み枠がずれ

ただき大変嬉しく思います。本研究では法政大学生命科学部て重複しているため、翻訳されても整ったタンパク質構造を取佐藤 勉 教授や今村 大輔 准教授をはじめとした研究室メンバー

らないと予測されました。では、この RDF の C 末端側半分のに日頃よりご指導、ご助言をいただきました。また φshrK 全ゲ

領域は機能しているのでしょうか？

次に、この重複領域にノム配列決定において国立遺伝学研究所 仁木 宏典 先生、岡本

ついて Int のアミノ酸配列の変化がないように、点突然変異を尚 氏にご協力いただきました。加えて、コロナ禍で大変な中、導入し、RDF のみに生じる段階的欠失株を作製しました。そこのような発表の場を設けてくださった学会組織委員の皆様をの結果、全ての欠失株において sigK 再編成が確認されました。

はじめとした関係者の皆様に心より感謝いたします。

つまり、RDF の 3’ 末端領域の 33 aa は、欠失には関与していないことが明らかになりました。即ち、重複領域は存在しても引用文献

RDF としての機能には影響なく、かつ除去されても RDF とし

1) Fogg P. C. M. et al., J. Mol. Biol., 426: 2703-2716 (2014)て機能するということです。

2) Stragier P. et al., Science, 243: 507-512 (1989)

本研究で行った実験はここまでなのですが、rdf と int が同時

3) Suzuki S. et al., iScience, 23(1): 100805 (2020)に転写されるのにも拘らず、組換えの方向を調節できることに

図１． 枯草菌の φshrK プロファージの挿入と欠失左）φshrK DNA の sigK 遺伝子への挿入による遺伝子分断。右）胞子形成母細胞と DNA 損傷時に起こる φshrK プロファージの欠失。
母細胞での φshrK プロファージの欠失により σK をコードする sigK が再編成し、胞子形成が進行する。rdf と int は同じ転写単位
であるが、挿入時には Int のみが、欠失時には Int に加え RDF が機能する。

13

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

抗生物質アラレマイシン合成酵素から5- アミノレブリン酸合成酵素への
進化仮説
川口 潤
東京工業大学 生命理工学院
図１．抗生物質合成酵素（AlmA）から ALA 合成酵素（ALAS）
への進化仮説
ALA 合成酵素となったと考えるよりも、近縁の AlmA からわず
かな変異によって ALAS が成立したと考えた方が自然です。また、抗生物質合成酵素は欠失可能なため、生育に必須な酵素よりも変異が入りやすいといえます。私はこの進化仮説を検証することを目的に、主に 2 つの方向性から研究を行ってきました。
ポルフィリンは、呼吸や光合成に欠かせないヘムやクロロ

まず取り組んだことは、部位特異的変異導入による AlmA から

フィルといった分子の基本骨格です。そのため、およそ 40 億

ALAS への機能改変実験です。AlmA の基質ポケット周辺に変年という生命の進化の歴史において、ポルフィリンの獲得は非異を導入することで、AlmA の基質を本来のセリンから ALAS

常に重大なイベントであったといえるでしょう。私たちはポルのグリシンへと改変することを試みました。この実験により、フィリン生合成経路の進化過程を紐解くことで、生命の進化の

AlmA と ALAS の基質特異性を左右する要因が特定されると期一端を明らかにすることができるのではないかと考えていま待されました。AlmA と ALAS の配列アライメントや既知のす。

ALAS 立体構造から基質特異性に関与するアミノ酸残基を推定

私たちが特に焦点を当てているのは、ポルフィリン生合成のし、それらのアミノ酸残基を ALAS 型に置換した変異型 AlmA

第 1 段階である ALA（5- アミノレブリン酸）の合成経路です。

を複数作製しました。その結果、AlmA はたった 2 つのアミノ

ALA からポルフィリンまでの 6 段階の反応は幅広い生物種にお酸残基を置換することで、その基質が本来のセリンからグリシ

いて共通であるのに対して、ALA の生合成には 2 つの経路があンへと変化することが確認されました。これにより、AlmA はることが知られており、それぞれ C5 経路と Shemin 経路と呼ばわずかな変異によって ALAS へと進化する可能性が示唆されまれています。C5 経路はほとんどの細菌やアーキアが用いるこした。

とから、最初に登場した経路である考えられます。一方 Shemin

次 に、AlmA と ALAS の 祖 先 配 列 復 元（ASR: Ancestral

経路はヒトを含む動物や真菌が用いるため、こちらは後発的なSequence Reconstruction）を行いました。ASR は現代の生物から経路といえるでしょう。しかし、Shemin 経路がどのような経緯得られた配列情報を基に系統解析によって祖先配列を復元するで出現したかは明らかになっていません。

手法であり、タンパク質の進化を研究する際にしばしば用いら

Shemin 経路ではグリシンとスクシニル CoA が縮合されるこれる手法です [2]。NCBI の Protein データベースから取得したとで ALA が合成され、その反応は ALAS（ALA 合成酵素）によっ

AlmA ホモログと ALAS ホモログのアミノ酸配列、計 65 配列て触媒されます。そのため、ALAS の起源を明らかにすること

から系統樹を作成し、PAML ソフトウェア [3] を利用して祖先で、Shemin 経路の起源も明らかとなるでしょう。ここで私の所

AlmA、祖先 ALAS、および AlmA/ALAS 共通祖先の配列を復属研究室において抗生物質アラレマイシンが発見され [1]、興元しました。ALA 要求性大腸菌株の相補試験から、祖先 ALAS

味深いことに、その合成酵素として見出した AlmA は ALAS とは ALA 合成活性を持つことが示唆されました。一方、祖先高い配列相同性を有していました。その相同性は約 50％と高く、AlmA および AlmA/ALAS 共通祖先の発現は宿主大腸菌の生育

触媒反応も類似していたため、両者の間には進化的な関連性がを阻害したため、これらは抗生物質を合成していると示唆されあると予想されました。こうした背景から私たちは、AlmA のました。AlmA/ALAS 共通祖先が抗生物質を合成しているといような抗生物質合成酵素が進化して Shemin 経路の ALAS となっうことは、ALAS の起源が抗生物質合成酵素であるという仮説

た、という進化仮説を提案し、その検証を行っております（図１）。

を支持する結果であります。

ALAS（つまり Shemin 経路）はすでに C5 経路が広まった状況

冒頭で述べたように、ポルフィリンは呼吸や光合成に欠かせで出現したと予想されるため、遠縁の酵素から徐々に進化してない分子であるため、その生合成経路の進化過程を解明するこ14

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日とは、生命の進化の一端の解明につながると考えています。さよってラットの血清中から見出された (1)。また、L-form は細らにこの進化仮説は、抗生物質合成酵素から生体物質の合成酵

菌感染したヒトからも単離されている (2, 3)。L-form は細胞壁素へと進化するという点でも興味深く、これまで知られていなを持たないので、不定形となるが、細胞壁合成を再開することかった抗生物質の新たな一面ではないかと期待しています。

で通常の増殖形態へと戻ることが可能である (4)。L-form は細胞壁を失うことで、宿主の免疫から逃れているが、細胞壁を再引用文献

合成できる環境になれば、再び通常の増殖を開始し、病原性を

1) Awa et al., Biosci. Biotechnol. Biochem. 69, 1721-5 (2005)示すと考えられる。

2) Randall et al., Nat. Commun. 7, 12847 (2016)

細胞壁を持つ通常の状態では、大腸菌の細胞分裂は、FtsZ を3) Yang, Mol. Biol. Evol. 24, 1586-91 (2007)

中心とした複数のタンパク質からなる Z-ring と呼ばれる分裂装置による制御を受ける。細胞分裂が進むにつれて Z-ring の収縮が起こり細胞は分裂する (5)。そのため、FtsZ は細胞分裂に必須である。しかしながら、L-form の分裂は FtsZ に依存せず、

大腸菌 L-form における分裂装置の膜増加に伴って分裂するとされている (4）。一方で、L-form が制御メカニズムる (6)。このような場合、L-form は FtsZ 非依存的な分裂から、桿菌へと戻る際には FtsZ が必須となることも報告されていFtsZ 依存的な分裂へと変化する必要があるが、細胞内の分裂装

林 匡史

置がどのように制御されているのかは不明である。本研究では、

立教大学 理学部 生命理学科

L-form の増殖過程と L-form から桿菌に戻る際の分裂装置の制御メカニズムを明らかにすることを目的とした。
本 研 究 で は、L-form の 観 察 に 液 体 培 地 還 流 装 置 (CellASIC
ONIX, Merck) を 用 い た。 こ れ に よ り、 実 験 室 環 境 に お け る
L-form 化の条件 ( 細胞壁合成阻害、高浸透圧、高濃度 Mg2+ イ
オン、嫌気 ) を満たした上で、「細胞の L-form 化」、「L-form の分裂と増殖」、「L-form から桿菌への変換」という 3 つのステッ
プを経時的に観察することが可能になった (7)( 図 1)。図１に示したように、野生型大腸菌は L-form 化することで、大きく丸い形状もしくは細長い形状へと変化する。また、L-form が分裂する様子や、L-form から桿菌へと転換し、分裂する様子も観察された (7)( 図 1)。ftsZ 欠損株の L-form でも同様の分裂・増殖

グラム陰性細菌である大腸菌の表層構造は内膜、外膜とそれの様子が観察された。一方で、桿菌に戻ることはできずに放射に挟まれたペプチドグリカン層 ( 細胞壁 ) の 3 層からなってい状に細胞が伸び、分裂できなかった。液体培地還流装置によっる。中でも細胞壁は細胞形態の決定や、膨圧から細胞を守る上て、先行研究と一致したデータを経時的に観察することに成功

で非常に重要であり、ペニシリンなど様々な抗生物質が細胞壁した。

合成経路に関与するタンパク質や細胞壁を標的としている。こ

次に、L-form において、Z-ring の形成や局在がどのような制れらの抗生物質存在下では、通常、細菌は溶菌する。しかし、御を受けているのかを明らかにするために、Z-ring の観察を行後述するような特殊な条件下では一部の細菌は細胞壁が無くてった。Z-ring の可視化には ZapA-GFP 株を用いた。ZapA は FtsZも生存可能な状態に移行し、増殖する。このような細菌の増殖

結合タンパク質として知られており、FtsZ に結合することで、形態は L-form と呼ばれる。L-form は 1935 年に Klieneberger に

Z-ring の安定に寄与している (8)。FtsZ に直接 GFP を融合した

図１．大腸菌の L-form 化と L-form から桿菌への転換
液体培地還流装置を用いて大腸菌を L-form 化の条件下（細胞壁合成阻害、高浸透圧、高濃度 Mg イオン、嫌気）で培養すると、細胞は L-form 化し、分裂・増殖する。L-form は細胞壁合成を再開させることで桿菌へと転換し、分裂・増殖する。Scale bar = 5 µm

15News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

株を用いて実験を行った。実験を始める前は、桿菌の時に存在

8) Huang et al. J Bacteriol. 195(9):1859–1868 (2013)

していた Z-ring が L-form 化に伴って霧散し、桿菌に戻る際に9) Osawa et al. Science. 320(5877):792–794 (2008)

再度集合するのではないかと予想していた。ところが、予想に反して、Z-ring は脱重合せずに構造を保ち続けていた。L-formに見られる Z-ring の特徴として、「①細胞中に複数の Z-ring が存在」、「② L-form の分裂箇所とは異なる場所に局在」、「③収
縮しない」の３点が挙げられる。「①細胞中に複数の Z-ring が存在」については、細胞壁を持つ大腸菌で細胞分裂の後期因子

SanA による大腸菌の新規バンコマイ
シン耐性機構の解析

を機能欠損すると、伸長した細胞中に複数の Z-ring が観察されることから、L-form でも似た表現型が観察されたのではないか

山口 穂野香と考えた。また、Z-ring が「② L-form の分裂箇所とは異なる場

立教大学 理学部 生命理学科

所に局在」、「③収縮しない」点については L-form が ftsZ 欠損
株でも分裂可能な点と一致している。一方、桿菌へと戻る過程
では、L-form の時に存在していた Z-ring の収縮が始まることで分裂を開始していたことから、この過程で FtsZ が必須という先行研究と一致した。以上の結果から、L-form は分裂・増殖にFtsZ を必要としないにも関わらず、細胞内に Z-ring が形成されていることを明らかにした。以前の研究で、膜小胞内に膜結合ドメインを付加した FtsZ を取り込ませた場合、Fts Z の働きによって、小胞にくびれができることが報告されている (9）。そのため、FtsZ はそれ自身でくびれを形成する能力を持っている大腸菌は、グラム陰性細菌に属しており、その表層構造は、と考えられている。ところが、L-form では Z-ring の局在する場

外膜・ペプチドグリカン層・内膜の 3 層からなる。ペプチドグ

所にくびれが観察されなかったことから、L-form では Z-ring がリカンは、N- アセチルグルコサミン（GlcNAc）と N- アセチ

収縮しないように制御されている可能性がある。これに加えて、ルムラミン酸（MurNAc）が交互に連なった糖鎖と、N- アセチ

L-form の Z-ring は桿菌に戻る際に利用されることから、収縮す

ルムラミン酸に結合した数アミノ酸からなるペプチドから構成る能力を持たないわけではない。そのため、どのような因子がされている（図 1）。これらが架橋されて巨大分子を構成する。

集まって Z-ring を形成しているか、何をトリガーとして Z-ring

ペプチドグリカンの架橋は、ペプチドの 3 番目のアミノ酸ジア依存的な分裂を開始しているか調べることで、L-form の分裂装

ミノピメリン酸（meso-Dap）と、別のペプチドの 4 番目のア

置制御メカニズムだけではなく、桿菌の際に働く未解明の分裂

ミノ酸 D-Ala の間で起こるが、この架橋を行うのは、PBP1A・装置制御メカニズムを知ることができるかもしれない。

PBP1B・PBP2・PBP3 のようなトランスペプチダーゼ（TPase）

この度は素晴らしい賞をいただきありがとうございました。

活性を持つ酵素である (1, 2)。TPase は、ペンタペプチド末端

新型コロナウイルスが社会に影響を与える中、年会を主催いた

D-Ala 切断とペプチド架橋を連続的に行う。一方で、PBP4・だいた学会関係者の皆様に厚く御礼申し上げます。本研究は、PBP5 のような DD- カルボキシペプチダーゼ（DD-CPase）活性

立教大学・理学部・生命理学科・細胞機能制御研究室にて行いを持つ PBPs は、ペンタペプチド末端の D-Ala 切断のみを行う。

ました。ご指導いただきました塩見大輔教授ならびに研究室の主要な DD-CPase である PBP5 を欠損させると、末端の D-Ala

方々に深く感謝いたします。また、ポスター討論の際にはたくが切断されていないペンタペプチドが多く残ることに加えて、さんの方々にお越しいただき、様々なご意見、ご討論をいただ

細胞形態も異常になること (3) から、DD-CPase は、架橋の調節きました。今後の実験の参考にし、より良い報告ができるようおよび細胞形態の維持に寄与していると考えられている。この努めて参ります。

ように、大腸菌の細胞形態は、ペプチドグリカンの構造により決定されるため、細胞形態の維持には、ペプチドグリカン合成

引用文献

が正しく制御されることが重要である。また、ペプチドグリカ

1) Klieneberger. J Pathol Bacteriol. 40:93–105 (1935)

ンおよびペプチドグリカン合成酵素（PBPs）は、様々な抗生物

2) Domingue and Woody. Clin Microbiol Rev. 10(2):320–344 (1997)

質の標的となることから、ペプチドグリカン合成制御機構の理3) Mickiewicz et al. Nat Commun. 10(1):4379 (2019)

解を深めることは、抗生物質耐性機構の解明につながると考え

4) Leaver et al. Nature. 457(7231):849-853 (2009)

られる。

5) Monteiro et al. Nature. 554(7693):528–532 (2018)

大腸菌において、細胞伸長時のペプチドグリカン合成を担

6) Billings et al. Mol Microbiol. 93(5):883–896 (2014)

う Rod 複合体では、構成因子である膜貫通タンパク質 RodZ

7) Chikada et al. Front Microbiol. 12:645965 (2021)

が、ペリプラズムでのペプチドグリカン合成と細胞質での合成

16

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

酵素複合体形成の局在を決定する MreB アクチンの機能を橋渡

響が、欠損株のバンコマイシン感受性の表現型に現れたと考えししていると考えられている (4)。当研究室の先行研究により、られる。また、dacA (PBP5) 欠損株と、dacA sanA 二重欠損株のRodZ 機能欠損株は、増殖遅延と形態異常を示すことが明らか

表現型が完全に一致し、どちらも強いバンコマイシン耐性になになった。さらに、同じく先行研究において、RodZ 機能欠損

ったことから、PBP5 が SanA の制御下にある可能性が示唆され株から増殖速度が回復した抑圧変異株を複数単離し、その変異た。さらに、PBP1B は、Bacterial two-hybrid 法による解析から部位を特定したところ、sanA 遺伝子に変異を持つ株が見出され

SanA との相互作用も示され、SanA が PBPs によるペプチドグた。以上の結果は、SanA がペプチドグリカン合成に関与する可リカン構築の制御に関与している可能性が強く示唆された。今能性を示唆しているが、その分子機構は、現時点では明らかに

後は、PBPs を始めとするペプチドグリカン合成関連タンパク質

なっていない。

と SanA との相互作用や、SanA がペプチドグリカン組成（D-Ala-

SanA は、推定膜貫通型タンパク質で、Rod 複合体との関係に

D-Ala の量）に与える影響を定量的に示し、SanA による大腸菌

ついては報告されていない。一方で、SanA は、バンコマイシンのペプチドグリカン合成制御機構およびバンコマイシン耐性機

感受性の大腸菌変異株をバンコマイシン耐性にする因子として構の解明を目標に、本研究を継続していきたいと考えている。

同定されたこと、および、sanA 欠損株はバンコマイシン感受性

最後に、本研究の抑圧変異株の全ゲノムシークエンスは、国になることが報告されている (5)。したがって、SanA は大腸菌

立遺伝学研究所・仁木宏典教授、岡本尚博士との共同研究で行がバンコマイシン耐性になるために必要な因子であると考えらいました。また、本研究を行うにあたって、塩見教授を始めとれるが、SanA によるバンコマイシン耐性化機構は不明である。

する研究室の方々には、日頃より温かく丁寧なご指導、アドバ

また、sanA は、大腸菌の近縁種のみに保存されている遺伝子で、イスをいただきました。この場を借りて、深く感謝申し上げま

その配列はグラム陽性細菌などではほとんど見られない。以上す。この度は、新型コロナウイルスの影響で行動が制限されるのことから、SanA タンパク質の機能を解析し、SanA が関与す状況下ではありましたが、オンラインという形で学会に参加でるペプチドグリカン合成制御機構およびバンコマイシン耐性機

きたこと、そして、優秀ポスター賞に選んでいただけたことを構の解明を目的とする本研究は、将来的には、大腸菌のような

大変嬉しく思います。学会関係者の皆様、発表を聞きにきてく

特定の細菌を標的とした薬剤開発への応用が期待される。

ださった皆様に、心より感謝申し上げます。ポスター討論の際

バンコマイシンは、ペプチドグリカンのペンタペプチド末端の D-Ala-D-Ala 部分に結合し、PBPs によるペプチドグリカン合にいただいた沢山の貴重なご意見を生かし、今後も本研究をより発展させられるように励んでいきたいと思います。

成を阻害する抗生物質である（図１）。細胞表層がペプチドグリ
カン層と内膜の 2 層からなるグラム陽性細菌はバンコマイシン
に対して感受性を示すが、大腸菌は、一般的にはバンコマイシ
ン耐性であることが知られている。これは、大腸菌のようなグ
ラム陰性細菌は外膜を有しているため、分子量の大きいバンコ
マイシンは透過しにくいためであると考えられる。しかし、高濃度（＞ 100μg/ml）のバンコマイシン存在下では、大腸菌は野生株であってもバンコマイシン感受性の表現型を示す。したがって、大腸菌のバンコマイシン感受性の度合いは、外膜の透過性あるいはペプチドグリカンの構造を反映していると考えられる。SanA と Rod 複合体との関連が示唆されたことと、sanA 欠
損は外膜透過性に影響しないこと (6) から、sanA 欠損株がバン
コマイシン感受性になる原因はペプチドグリカンの構造にあると予想した。

図１．ペプチドグリカンの構造とバンコマイシンの作用機序。

本研究では、SanA による大腸菌の新規バンコマイシン耐性機構を解明するため、バンコマイシンの作用機序から考えて、ペペプチド間の緑色の実線は架橋を、緑色の破線は架橋の加水分解を示している。CM: 内膜、OM: 外膜

プチドグリカン構築を行う酵素、すなわち、D-Ala-D-Ala の切断や架橋に関わる因子に着目した。各因子の欠損株のバンコマ

引用文献

イシン感受性を調べた結果から、（mrcB 遺伝子にコードされる）

1) Typas et al. Nat Rev Microbiol. 10(2): 123-136 (2012)

PBP1B と（dacA 遺伝子にコードされる）PBP5 は、SanA との

2) Egan et al. Nat Rev Microbiol. 18(8): 446-460 (2020)

遺伝的相互作用がある可能性が示唆された。PBP1B（TPase）と3) Potluri et al. Mol Microbiol. 84(2): 203-224 (2012)

PBP5（DD-CPase）は、いずれもペンタペプチド末端の D-Ala を

4) Ago and Shiomi. Aims Microbiol. 5(4): 358-367 (2019)

切断する点が共通しているため、バンコマイシンの基質である

5) Rida et al. J Bacteriol. 178(1): 94-102 (1996)

D-Ala-D-Ala の量の制御に SanA が関与しているために、その影

6) Paradis-Bleau et al. Plos Genet. 10(1): e1004056 (2014)17

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日トなどに優れており、「柔軟な発表形式」には最適でした。一方、双方向コミュニケーションの方では chat を採用しており不便さがあります。そこで「臨場感」「ライブ感」「双方向同時コミュ

第 15 回年会を完全オンラインでニケーション」を支えるため ZOOM との併用としました。こ

開催いたしました

こでは通信キャパシティーの問題に心配もありましたが、実際

片山 勉

並行して、本学会の特長を生かすため、年会の全体様式は例

はその様な問題は起こらず幸いでした。
年通り、一会場での口頭発表、および、ポスター発表としました。

九州大学 薬学研究院

口頭発表では、質疑応答は口頭で行うこととしました。質問者

第 15 回年会を 2021 年 3 月 4 日から 6 日まで完全オンライン
形式にて開催いたしました。受賞講演 5 題、口頭発表 29 題、ポスター発表 63 題からなる昼間のアカデミックプログラムに加え、夜間に行った２つウェビナーでは計４題の講演が実施されました。参加者総数は 285 名となりました。本学会では初めての完全オンライン形式ということでご心配もされたかと思いますが、おかげさまで、大きなトラブルは 1 つもなく、活発な熱い議論が終始展開されました。全ての参加者、発表者、講演者、座長、ウェビナーのオーガナイザーの方々、また賛助いた
だいた団体・企業の方々に厚く御礼申しあげます。今回はコロナ禍のため社会状況が変動する時期と重なり、開催の経緯には
本来いろいろとご報告すべきことがあるのですが、ここでは紙面の限りもありますので、結果的な部分についてご報告させていただきます。
まずオンライン開催にあたって、アカデミックプログラムの実施様式についての検討に時間を費やしました。オンライン会
議では、現実感の低下、効率的なコミュニケーションや人間的交流の阻害、情報のセキュリティーなどが問題となります。まず情報のセキュリティーについてはすでに先行していた海外のオンライン学会などの方式を取り入れました。決して完全ではありませんが、実際的にはほとんどのオンライン学会が同様の方式で開かれています。活気あるオンライン年会とするため、「臨場感」「ライブ感」「双方向同時コミュニケーション」「柔軟な発表形式」の実現を重要方針として掲げました。そしてこれらの条件にできるだけ見合い、かつ、運用面でも合理的なオンラインシステムとして、口頭発表では ZOOM、ポスター発
表では LINC Biz と ZOOM とを併用する形式を採用しました。
LINC Biz は、発表一覧の作成、発表資料の多様性、慣れれば実際のポスター会場の様にも思える簡便な掲示・閲覧法、コス18

は発表時間中に chat で「質問」と書いて送るだけで、質疑応答の時間に座長に指名していただきました。そこで質問者はマイクオンにして質疑応答となります。この方式で問題なく、活発な討論ができました。「臨場感」のため、参加者の方々にも「カメラオン（顔出し）」をお勧めしました。現地での学会でも、発表者が講演中に参加者のお顔を認識できるのは前列のせいぜい数列くらいです。数名でもカメラオンにしてくれれば、それに近づくという思惑でした。ここでも通信キャパシティーの心
配もありましたが、実際は全く問題ありませんでした。かつて
慶応大で行った年会では当時の板谷年会長が、拍手が大事と力説し私も共感しました。しかし多くの参加者の拍手を音声で送ることは ZOOM でうまくできません。カメラオンもせっかくしていただいても、ZOOM の画面に入る上位に来るとは限りません。このあたりはオンライン会議システムの進歩に期待したいところです。
現地開催の学会では、口頭発表の合間の休み時間に、参加者が発表者をつかまえて質問したり、発表者を取り囲んで討論が進むことがあります。その様なイメージで、口頭発表のセクショ
ンごとに ZOOM ブレイクアウトルーム（個別の小会議室）を活用した「ブレイクアウトディスカッション」の時間を設けました。とても多くの方々が積極的にここに参加していただけました。ポスター発表でも同じですが、オンラインでは、この様なグループディスカッションで参加人数が現地開催より多く取れます。ディスカッションに参加するチャンスも増えますし、またそこで理解や考察も深まるので聞いているだけでも面白かったとか、現地開催の場合より画面が見やすく討論も聞き取りやすいという感想も聞きました。また追加で参加者が自由に使えるブレイクアウトルームも複数設け、交流促進や打ち合わせに利用していただきました。

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

ポスター発表では発表資料本体の形式も、オンラインシステム（LINC Biz）が可能な範囲で自由としました。資料説明や質疑応答は ZOOM によるライブです。なるべく多くの時間を双方向の自由討論に向けるため、ポスター発表のショートトーク
は取りやめ、代わりにオンラインの柔軟な発表形式を生かしてgraphic summary を１枚スライドで投稿していただくこととしま
した。さらに多くの発表者が発表資料本体に加え、発表の動画を投稿してくれました。動画については、あえて任意としておりました。しかし実際はそれでも多くの動画の投稿があり、今後のオンライン年会の実施について参考になることでしょう。
事前に発表動画を閲覧することで、当日の討論にもスムーズに参加できるメリットは大きいと実感しました。ほとんどの発表
者は動画と当日の発表とで内容的にうまく使い分けており、両方を聴講する意義も十分感じました。異なるポスターの巡覧でも、ZOOM の切り替えも含め、大きな不便を感じるほどの問題はありませんでした。ポスター賞にも、多くの発表のエントリーがありました。その選考には、例年どおり参加者の投票を設けました。
若手賞、奨励賞の受賞講演は計５名の会員によって行われました。昨年度は受賞講演もありませんでしたので、５名のうち、２名は昨年度の受賞者です。多数の聴衆がカメラオンで参加いただきました。懇親会がないので受賞講演にも質疑応答の時間を設け、交流の機会としました。
ボトムアップのシンポジウム企画として、夜の時間を活用して、公募ウェビナーを行いました。オーガナイザー（学会員）のおかげで、本学会に属さない先端研究者の講演や外国人研究者による英語での講演など、学際性、国際性を補強する有意義なセミナーを実施することができました。タイトなスケジュールとなったにも関わらず、ここでも多くの方が参加され活発な討論が繰り広げられました。
まだいろいろな対応や、アカデミックプログラム以外の部分
でも、今回は特別に対応しなくてはならないことが多々ありましたが、紙面の制約もありますのでここでは割愛させていただ
きます。
最後になりましたが、今回の年会実施は、仁木会長（当時）、
年会組織委員、および、オンライン開催検討委員の皆様の多大なご尽力無くしては、到底不可能でした。特に組織委員の川上先生、尾崎先生には、年会ホームページや参加募集システムの設定・運営から当日の ZOOM、LINC Biz の管理・運用まで、全ての実務のため大変なご尽力をいただきました。その過程で色々なアイデアも出していただきました。この場を借りて改めて御礼申し上げます。そして年会に参加された皆様の大いなる発展を願っております。

写真提供：福岡市

19

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

L-alanine prototrophic suppressors emerge from L-alanine

Extreme C-terminal element of SprA serine integrase is

auxotroph through stress-induced mutagenesis ina potential component of the “molecular toggle switch”

Escherichia coli

which controls the recombination and its directionality

三嶋 玄隆、渡邉 裕一、内ヶ崎 啓、下田 蒼、関 翔太、

安部 公博、高橋 匠、佐藤 勉

熊谷 俊高、野地 智法、安藤 太助、米山 裕

Molecular Microbiology 115(6):1110-1121 (2021)

Microorganisms 9(3): 472 (2021)

https://doi.org/10.1111/mmi.14654

https://doi.org/10.3390/microorganisms9030472 (Open access)

現在のライフサイエンスの著しい発展を支える知識と技術の基盤は細菌の研究に負うところが大きい。アミノ酸代謝も例
外ではなく、アミノ酸生合成経路のほぼ全ては細菌の栄養要求性変異株の分離とその遺伝学的・生化学的研究から解明されてきた。しかし、興味深いことに解糖系産物であるピルビン酸の一段階アミノ化反応で生成する L-alanine (L-Ala) の生合成経
路は 21 世紀に至るまで L-Ala 要求性変異株が分離されていなかったことから不明であった。著者らはこれまでの遺伝学的な手法を用いる研究で L-Ala 要求性変異株の分離に成功し、大腸菌の L-Ala 合成酵素は３つのアイソザイム（AvtA, YfbQ, YfdZ）
であることを明らかとした。
それに続く本研究において、１）L-Ala 要求性変異株から出現する L-Ala 非要求性サプレッサー変異株は、自然突然変異より遙かに高い頻度で生じるストレス誘導性突然変異によって出現すること、２）40 株のサプレッサー変異株ゲノムを解析した結果、ピルビン酸脱水素酵素（16 株）と酢酸生成（PTA-ACK）
経路（18 株）を構成する酵素遺伝子に点変異をもつクローンが大半を占めること、３）それら変異酵素の活性は低下していることを明らかとした。
以上より、これらのサプレッサー変異株は、L-Ala 飢餓ストレス感知後突然変異頻度の上昇が起こり、細胞内ピルビン酸レベ
ルの上昇をきたす突然変異導入の結果、本来 L-Ala を合成しない promiscuous enzyme が関与する multicopy suppression に関連した現象によって出現したことが明らかとなった。

20

溶原性 phage において、溶原サイクルにおける phage DNAの 宿 主 genome へ の 挿 入 反 応 と 溶 菌 サ イ ク ル に お け る 切 り
出 し 反 応 は、phage integrase と 呼 ば れ る site-specific DNA
recombinase が担う。挿入 / 切り出しの反応の方向性は厳密に制御されているが、その機構は不明な点が多い。
本 研 究 に お い て、 枯 草 菌 溶 原 性 phage SPβ に コ ー ド さ れ る
phage integrase で あ る SprA は、 単 独 で は 挿 入 反 応 の み を、
SprA の C 末端 (Extreme C-Terminal region; ECT) に低分子量タ
ンパク質 SprB が結合すると、切り出し反応のみを触媒することを明らかにした。また、ECT は、SprB 非存在下では、挿入反応における SprA4 量体形成を安定化することで、反応性を向上させる働きがあることがわかった。今回得られた知見は、
溶原性 phage の生活環の理解だけでなく、宿主遺伝子内に挿入された溶原性 phage 様配列の切り出しによる遺伝子再編成のメ
カニズムの解明にも大きく寄与する。

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

The physiological potential of anammox bacteria as

Transcriptome profile of carbon catabolite repression in an

revealed by their core genome structure

efficient l-(+)-lactic acid-producing bacterium Enterococcus

大久保 卓、豊田 敦、福原 康平、内山 郁夫、mundtii QU25 grown in media with combinations of

針ヶ谷 優生、黒岩 恵、鈴木拓磨、村上由夏、諏訪 裕一、

cellobiose, xylose, and glucose

髙見英人

志波 優、藤原 治子、沼口 真緒、Mohamed Ali Abdel-

DNA Research 28 (1): dsaa028 (2021)

Rahman、鍋田 啓介、兼崎 友、田代 幸寛、善藤 威史、

https://academic.oup.com/dnaresearch/article/28/1/

田中 尚人、藤田 信之、吉川 博文、園元 謙二、

dsaa028/6046978?searchresult=1 (Open access)門多 真理子PLoS ONE 15(11): e0242070. (2020)
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0242070 (Open access)

真正細菌は一般に、混合糖存在下でその同時消費を妨げ
嫌気性アンモニア酸化反応による (anammox) 窒素除去リア
ク タ ー の メ タ ゲ ノ ム か ら anammox 細 菌 Ca. Brocadia pituitae
及び共存する亜硝酸酸化細菌と NO reductase を欠く 2 種の不完全脱窒菌のゲノムを全解読した。 NO2 の NO への還元は-anammox の 最 初 の ス テ ッ プ で あ る が、Ca. B. pituitae は、 この 反 応 を 担 う nitrite reductase 遺 伝 子 (nirK, nirS) を 欠 い て いた。Ca. B. pituitae、Ca. Kuenenia stuttgartiensis 及び完成度の高いゲノムを持つ 6 種の anammox 細菌との比較ゲノム解析により 1,152 の連続的な並びのオーソログからなるコアゲノムを定義した。しかし、他の Brocadia 2 種に検出された nirK, nirS はコアに含まれておらず、これらの遺伝子は複数の系統からの水平伝播により獲得されていた。一方、これら以外の nitrite
reductase の候補遺伝子 (hao2、hao3) を含む少なくとも 5 つのNH2OH oxidoreductase のパラログがコアに含まれていた。また、Metatranscriptome 解析の結果、メタゲノム中に存在する不完全脱窒菌由来の多くの nirS, nirK 遺伝子や、Ca. B. pituitae の
hao2、hao3 遺伝子の発現が確認された。したがって、Ca. B.
pituitae は、不完全脱窒菌から供給される NO だけでなく、自己産生による NO や NH2OH も anammox 代謝に利用可能と考
えられた。

21

るカーボンカタボライト抑制 (CCR) を示すが、Enterococcus
mundtii QU25 株は、セロビオースとキシロースからの同時乳酸発酵が可能な菌株である。本研究では、単糖条件 (G: グルコー
ス , C: セロビオース , X: キシロース ) と混合糖条件 (CX, GX)で培養した QU25 株のトランスクリプトーム解析を行い、セロビオース存在下でのキシロース代謝遺伝子群の発現プロファ
イルを明らかにした（上図）。その結果、セロビオースとキシロースの混合糖条件の発現プロファイルは、キシロース単糖条
件に類似している一方、キシロースオペロンに対する弱い転写抑制が認められた。本研究成果は、遺伝子改変による QU25 株の混合糖の同時乳酸発酵能のさらなる改良につながることが期待される。

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

A specific combination of dual index adaptors decreases

Protocols for monitoring harmful algal blooms forthe sensitivity of amplicon sequencing

sustainable aquaculture and coastal fisheries

with the Illumina platform

in Chile

広瀬 侑、塩崎 拓平、濱野 樹、吉原 静江、徳本 勇人、

鎗水 京子、藤吉 奏、丸山 史人

浴 俊彦、原田 尚美

Int. J. Environ. Res. Public Health 17 (20):7642 (2020)

DNA Research 27(4): dsaa017 (2020)

https://doi.org/10.3390/ijerph17207642 (Open access)https://doi.org/10.1093/dnares/dsaa017 (Open access)

赤潮は、プランクトンの異常増殖により引き起こされる水域汚染を指し、世界的な現象である。しかしながら赤潮を早期

Illumina 社の MiSeq は、比較的長いリードをシークエンス

警告するための海水モニタリング手法は、未だ標準化が進んでできるため、菌叢解析においてよく使われています。Illumina

いない。本論文は、物理的、化学的、微生物学的、分子生物学

社のシークエンスでは、デュアルインデックスによって識別的な様々な分析方法を統合し、赤潮モニタリング手法として標した複数のライブラリをプールし、１度にランを行います。

準化したものである。特に、将来的な赤潮発生機序の解明に資中 で も、Nextera XT Index kit ver. 2 は Illumina 社 の 公 開 プ ロ

するこをを期待し、大規模モニタリングには煩雑な 16S, 18S

ト コ ル（https://support.illumina.com/documents/documentation/rRNA 遺伝子の amplicon sequencing を盛り込んでいる点が特chemistry_documentation/16s/16s-metagenomic-library-prep-guide-徴である。現在、日本とチリにおける国際共同研究プロジェ

15044223-b.pdf）でも紹介されるなど、広く使われています。

クトのメンバー全員が、このプロトコルに従ってフィールド

私達は、Nextera 型のアダプター配列を有するライブラリにお調査と分析を実施している。この標準化されたプロトコルは、

いて、N704/S507 のインデックスを組み合わせると、得られ世界中の有害赤潮藻類研究者に有益で広く活用されることがたシークエンスのクオリティが低下することを見出しました

期待される（図）。この現象は、大腸菌ゲノム DNA のシークエンスでも見られたことからインサート配列とは無関係でした。豊橋技科大と大阪府立大の装置で同じ現象が見られたことから、装置固有の問題ではありませんでした（図）。N704 もしくは S507 いず
れか一方のインデックスを使用した時にはみられないことから、インデックスの組み合わせによって生じる現象で、ライブ
ラリの両端に相補的な配列が出現することが原因であると考えられました。この影響を QIIME2 を用いた菌叢解析で評価したところ、低頻度配列がノイズ除去の過程で失われてしまい、
多様性を正しく評価できないことがわかりました。菌叢解析はゲノム解析や RNA-Seq 解析と比べて、リードのクオリティが解析結果に大きな影響を与えるため、特定のインデックスやプライマーの組み合わせが悪影響を与える可能性があります。
ユーザーサイドでの対応策として、各サンプルで得られたリードのクオリティチェックが重要です。

図．赤潮モニタリングに必要な機材やサンプルの準備方法を示す（論文より引用）「論文紹介コーナー」での論文紹介を希望される方は、研究内容を表す１枚のイラストと簡単な説明を、下記の編集担当まで
お送りください（迷惑メール対策のため [at] を @ に変換してください）。みなさまからのたくさんの原稿をお待ちしております。

図．MiSeq の９回分のランにおけるエラー率の比較（論文より引用）

22

大坪 嘉行

yohtsubo[at]ige.tohoku.ac.jp

佐々木 裕子yuko[at]nih.go.jp

佐藤 勉		

t-sato[at]hosei.ac.jp

広瀬 侑 		

hirose[at]chem.tut.ac.jp

相馬 亜希子soma[at]chiba-u.jp

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

ト DNA にアダプターを酵素的に結合させるのに必要 (TruSeq
では Y 字アダプター形成、Nextera では Tn5 transpoase の認識
配列 ) だからであって、シーケンシングそのものには必要あり

イルミナシーケンスライブラリー、ません。むしろアンプリコンシーケンシングの時などは、末端ハイブリッド型のススメ

例えば、Nextera 型のアダプターではインデックスの組み合わが同じなのは PCR 増幅する上で望ましくないかもしれません。

大坪 嘉行

せによっては (N704 と S507)、取得リード数やクオリティに悪東北大学 大学院 生命科学研究科

DNA Res)、末端が inverted repeat になっていることと関係があ影響があることを広瀬さんが示していますが (Hirose et al. 2020
りそうです。

イルミナシーケンスライブラリーの構成の話です。イルミナ
社のシークエンサーでシークエンス可能なライブラリーの両端のアダプター配列は、2 通りが可能です。1 つは TruSeq 型（図上）、
もう 1 つは Nextera 型（図中央）です。実際の配列は図のようになっています。よく使われる 2-step PCR 法では、１回目のPCR で、TruSeq 型（紫色部分）もしくは Nextera 型（赤色部分）の配列を付加したプライマーで標的の DNA 配列を PCR によって増幅します。続いて、P5 もしくは P7 配列と Index 配列（黄緑色）を持ち、TruSeq 型（紫色部分）もしくは Nextera 型（赤色部分）にアニールするようなプライマーを用いて、２回目のPCR によって増幅します。以上により、図のような配列を有するライブラリーが調製できます。
ここで注目したいのは、TruSeq 型の場合は末端 13 塩基（図上、紫色中の黄色の部分）が、Nextera 型の場合は末端 19 塩基（図中央、赤色中の緑色の部分）が、inverted repeat の関係になっているということです。inverted repeat になっているのは、ゲアンプリコンシークエンスでは、標的のインサート DNA に
PCR によってアダプターを付加するため、P5 と P7 側の配列は別々に設計することが可能です。差し障りがないなら、P5 側の配列を Nextera 型、P7 側の配列を TruSeq 型のハイブリッド
型（図下）にしてしまうと良いのではないでしょうか？ ( 実際読めます )。なお、このようなハイブリッド型のライブラリでも読めるのは、イルミナ社のシークエンスにおいて、2 種類のシーケンス用 primer の mixture が使われているからだと思われます。TruSeq 型と Nextera 型のライブラリを混合してシークエ
ンスすることができるのも、これが理由と思われます。図中、index1 と index2 の配列部分は、他の Index kit などを参考に置
index 1 (P7 側 :き換えてください。また、イルミナ社の資料では、index i7 とも言う ) と index 2 (P5 側 : index i5 とも言う ) が間違
えて入れ替わって描かれているものがありますのでご注意くだ
さい ( 以前、イルミナ社にご連絡したのですが、間違えている
ものがまだ出回っているようです )。ご参考になれば幸いです。

ノム DNA や RNA のシークエンスの際、断片化したインサー

イルミナシークエンスにおいて、上記の矢印の部分にプライマーがアニールし、read1、index1、index2、read2 の順でシークエンスが進行します。primer のアニーリングの向きは、read 2 だけが逆向きです。この絵の PDF データは私が開発した SeqView
を使用して作成しました。SeqView データはこちらからどうぞ。

23

News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日

今年はこれまでのところ新型コロナの緊急事態宣言のためどこにも出かけず、ほぼ自宅に留まっていました。それでも 3 月はじめには六甲山の一角で今まで果たせなかったマンサクの花の写真を撮ることができました。オトメスミレという可愛らしい
名前のスミレは、どこにでもあるタチツボスミレの品種で、白い花がきれいです。また、ホタルカズラは六甲山では今年初めて見つけました。モチツツジは六甲山の至る所に咲くツツジで、名前の由来は花の根元がねばねばするからでしょう。
（磯野 克己）マンサク（マンサク科）
Hamamelis japonica Sieb. et Zucc.,
2021.3.8 六甲山

ハコベ（ナデシコ科）
Stellaria neglecta Weihe
2021.3.1 神戸市

オトメスミレ（スミレ科）
Viola grypoceras f. purpurellocalcarata (Makino) Hiyama
2020.3.11 神戸市

モチツツジ（ツツジ科）
Rhododendron macrosepalum Maxim.
2020.4.27 六甲山

ニガナ（キク科）
Ixeridum dentatum Tzvelev.
2021.4.26 六甲山

ホタルカズラ（ムラサキ科）
Lothospermum zollingeri A.DC.
2021.4.26 六甲山

24News Letter of the Society of Genome Microbiology, Japan (No. 23)

2021 年 7 月 5 日
２０２１年度日本ゲノム微生物学会役員

会長：黒川 顕第１６回日本ゲノム微生物学会

庶務幹事・会計幹事：大島 拓、渡辺 智

年会のお知らせ集会幹事：河野 暢明、森 宙史
広報幹事：矢原 耕史、大島 拓

塩見 大輔

ニュースレター幹事：

立教大学 理学部 生命理学科

佐藤 勉、相馬 亜希子、大坪 嘉行、佐々木 裕子、広瀬 侑
男女共同参画幹事：相馬 亜希子

第 16 回日本ゲノム微生物学会年会を 2022 年 3 月 2 日（水）から 4 日（金）の 3 日間開催致します。本原稿執筆時点（2021
年 5 月 10 日）では対面開催とオンライン開催または、ハイブリッ
ド開催のいずれの可能性についても考えた準備をしております。対面開催の場合は、立教大学池袋キャンパスにて開催致します。立教大学は、東京・池袋駅西口から徒歩 10 分程と、大変便利なところにあります。立教大学での年会開催は、2012 年の第 6 回大会（年会長：河村富士夫先生）以来 10 年ぶりとなります。再び、会員の皆様を立教大学にお迎えできることを嬉評議員 ( 会長推薦を含む ): 朝井 計，跡見 晴幸 , 飯田 哲也，
岩崎 渉，大西 康夫，永田 裕二，仁木 宏典，布浦 拓郎，
野尻 秀昭，林 哲也，本郷 裕一，南澤 究，市川 夏子，
大林 龍胆，神沼 英里，島田 友裕，
会計監査：阿部 貴志，伊藤 武彦
会員の動向
一般会員 347 名、学生会員 158 名、名誉会員 3 名賛助会員 12 名、機関会員 1 名（計 521 名）

しく思います。
昨年来のコロナ禍により、2020 年の第 14 回名古屋大会は中止（年会は成立）となり、2021 年の第 15 回九州大会はオンラ
インによる開催となりました。2022 年の第 16 回大会が対面で２２号のニュースレターより、Adobe の InDesign というソフの開催が可能な場合、口頭発表は 600 名程度収容できる大教室

トを使って編集を進めています。このソフトは便利なのですがで行い学内の複数の教室へも配信する、ポスター会場は十分な

多くの機能があり、使い方を習熟するまでに少し時間がかかりスペースを確保する、などして、できるだけ密を避けて開催すそうです。例えば、原稿 Word ファイルのテキストを、InDesign

る計画です。しかし、新型コロナ感染症の状況によっては再びの編集画面にコピペすると、イタリックなどの書式が保持されオンラインまたはハイブリッド開催での開催になる可能性もあないので、１つ１つの単語の書式を手作業で直していました。

ります。学会における年会の重要な機能のひとつは、会員間のよく調べてみると、Word で書式を整えた後に、ファイルを配交流と、そこから生まれる共同研究など、新たな研究の創出や置するという方法を使えば、元の書式が維持されることがわか発展であると考えられます。どのような開催形式になろうとも、りました。また、著者の皆さんは原稿の図を Word ファイルに

参加者間のインタラクティブな交流を可能な限り高めるような貼り付けてくださることが多いのですが、解像度の高い図を入工夫をしていきたいと考えています。

れるためには、貼り付けられた図を一度書き出す必要がありま

今後の開催方式などは決定次第速やかに、学会ホームページ

Word での図の大きさに依存するので、す。そのときの解像度も、などを通して、会員の皆様に情報発信していきます。年会開催

いくつか検討しています。この作業は手間なので、次号からはにあたって会員の皆様のご理解とご協力を頂けましたら幸いで

図のファイルを別添してもらうようにしたいと思っています。

す。そして、このような状況下ではありますが、できるだけ多

編集作業は手探りで進めていますので、もしかすると細かいミ

くの会員の皆様にご参加頂けますよう、心から願っております。

スなどあるかもしれませんが、どうかご容赦ください。
一方で、論文紹介コーナーを新設したり、年会での受賞者の第１６回日本ゲノム微生物学会年会

人数が増えたことで、ニュースレターのボリュームが増え、編

日程：2022 年 3 月 2 日（水）から 4 日（金）集作業の負担は大きくなっています。受賞には至らなかったけ

開催場所：立教大学池袋キャンパスでの現地開催、

れどもニュースレターに掲載する価値のある発表を紹介してはオンライン開催、もしくはハイブリッド開催を検討中

どうか、というアイディアも出ましたが、実現には至っていません。ニュースレターの編集は、Slack で情報共有しながら、

年会長：塩見 大輔
組織委員：関根 靖彦、末次 正幸、笠井 大司、鈴木 祥太、
野崎 晋五、向井 崇人

編集委員の佐藤さん、相馬さん、大坪さん、佐々木さんと一緒に時間を作って作業をしています。もしかすると、編集委員を増やしたほうがよいのかもしれません。もしご興味ある方いらっしゃいましたら、ぜひお声がけください。（広瀬）25