Bull. ToyamaP
ref.Fish.Res.Inst.No.
ll， 1‑8 (1999)

ハタハタに発生した非定型 A
eromonαssαlmonicida感染症
反町稔*堀田和夫*大津(1999年 3月25日受理))
1貢*AtypicalAeromon
αssαlmonicid
αinf
ectioninJapanesesandfish，Arctoscopu
sjα.
pomcusMinoru SORIMACHI，KazuoHOTTAandJun OHTSU
Abstractisease occurred among Japanese sandfish，In 1998， a sub‑acute dArctoscopu
sj
αponicus， culturedi
nToyamaPrefectural Fisheries ResearchInstitute. The affecte
dfis
hwere characterized byu
lce
rativ
elesions on t
hetrunkandhemorrhagearoundt
heeyeandt
hel
ip.A kindo
fbacteriumwas
isolated from t
he kidney ofthedisease
dfish. The bacteria were Gramnegative，non‑motiles
hortrod. Cytochromeoxidase and catalase were posi‑tformedbrownpigment.Thei
solatewasi
denti
fie
dasanatypi
caltiv
e，andiAeromonαss
αlmonicid
αont
heb
as
isoft
hosec
har
acter
istic
s.Intrape
ritonealαdusm
αcrocephalus，confirmedt
hev
irulenceinjectionofanisolatetocod，Galmonicid
αisthoughtt
obet
hecausativ
e agentoft
ocod. ThisatypicalA.sthemortalityofJapaneses
and
fish.

rctoscopusj
α.
ponicus，atypical Aeromon
αs sαlmonicidα，bacte‑
Key words: Ar
iald
isease，Japanesesandfish
Aeromonαsαsl
monicidαは淡水のサケ科魚類の病原細菌として著名であるが，それらと一部
almonicidαも我が国ではコイ，フナ，キンギョの穴の性状が一致しない，いわゆる非定型 A.sあき病 (ElliottandShotts1980) やウナギの頭部漬傷病の原因菌(大塚ら 1984，飯田ら 1984，
Kitaoetal.1984) として報告されている。また，非定型 A.salmonicidαは，近年，海産魚に986)，ムシガレイ(中津川 1994)，アイナメ，ヒラメ，クロソイ
おいてもイシガレイ(大滝ら 1997)，ク ロソイ (泉川・植木 1997) から報告されている 。一方海外においては，海産(飯田ら 1almonicidαは比較的古くから分離されており， sablefish(Evelyn
魚においても非定型 A.sCornicketal.1984)， sand‑eels (Dalsgaard and Paulsen1986)，太平1971)，大西洋タラ (洋ニシン (TraxlerandBell
1988)， pike (Wiklund 1990)，flounder (Wiklund and Bylundurbot(Pedersenet al.1994)， European flounder， dab， plaice (Wiklund and1993)， t*富山県水産試験場 (ToyamaPrefecturalFisheriesResearchInstitute，Namerikawa，Toyama93ら0861，Japan)

2

富山県水産試験場研究報告第11号(1999)

Dalsgaard 1995) などで報告されている。
1998年 3月から 5月 に か け て ， 富 山 県 水 産 試 験 場 で 飼 育 し て い た ハ タ ハ タ Arctoscop山
jαpomcusに，長期間にわたって死亡が続く病気が発生した。それらの原因を調べたところ，非定型 A.salmonicidαによる感染症であることが明らかになったので報告する 。

オキと事ヰ方法

本病の発生状況

1997年 2月に秋田県で採卵し，日本栽培漁業協会能登島事業場において鮮化・育成されていたハタハタ稚魚を，同年 5月に富山県水産試験場に搬入し，上屋付きの屋外コンクリート水槽 (2X4XO.8m) で当初は表層海水と深層海水を混合した調温水で6月 上 旬 以 降 は 調 温 し た 深 層

海水のみで飼育していたところ，翌年 3月頃から慢性的な死亡が発生したことか ら，死亡状況を調査するとともに原因解明のため細菌検査を行った 。
細菌検査

199
8年 3月 14日および 3月 23日に，死亡魚(瀕死魚を含む)をそれぞれ 4尾ずつ計 8尾 (体重16 .4 ~35.5g) 取りあげ，肉眼的に症状を観察した後，腎臓からブレインハートインフュージョン(BHI) 寒天培地(ニッスイ)に塗抹して 15Cで培養し，細菌分離を行った 。
0生化学的性状試験
病死魚 4個体から 3月 23日に分離した 4株を試験に供した。生化学的性状は常法により，グラム染色性，運動性，オキシダーゼ，カタラーゼ，OF試験，硝酸塩還元，インドール産生能，硫化水素産性能， MR.VP反応，炭水化物分解能などを検査した 。発育可能塩分濃度は，1%ブト.
5， 1， 2， 3， 3.
5， 4， 4.
5， 5お よ び 7 %添
ウ糖・トリプトン・ペプトン水に NaClを 0，0加して 5日間培養し，発育の有無を肉眼観察によって判定した。培養温度はすべて 20Cとした 。
0. salmonicid
α家 兎 血 清 ; 動 生
供試菌のスライド凝集反応は，せっそう病診断用抗血清(抗 A協作製)を用い，常法により行った。
薬剤感受性試験

BHIブイヨン(ニッスイ)で前培養した上記 4株を，パールコア感受性ディスク用培地(栄研化学)に塗抹後，トリディスク(栄研化学)を用いて 20C，24時間培養して感受性を判定した 。
0試 験 に は 硫 酸 カ ナ マ イ シ ン (5，10，30μg)，エリスロマイシン (0.
5， 2， 10μg)，塩酸ドキシ
サ イ ク リ ン (2， 5，30μg)，アミノベンジルペニシリン(2， 5，20μg)，ナリジクス酸 (2，5， 15μg)，チアンフェニコール(5，10，60μg) の 6種の薬剤を用いた。
病原性試験
上記菌株のうちの l株を用い，マダラ当歳魚、に対する病原性試験を 2回実施した 。試験には 30X

7て量約 30e)を 用 い ， 表 層 海 水 と 深 層 海 水 を 混 合 し て 調 温 し ， 流 水
60X40cmの ア ク リ ル 水 槽 (1中で飼育した。試験期間中，供試魚には市販配合餌料(大洋飼料;ひらめ 1号)を 1日 2回，適量投与した。

e/尾の菌液を各 5尾に，第 1回の試験では，平均体重 9.
4gの魚に1.7X107およぴ、 106CFU/0.1m

1me/尾を 10尾にそれぞれ腹腔内接種し， 10日間観察して死亡の有無を対照として生理食塩水 0.W

反町・堀田・大津：ハタハタの非定型ルyom･us

sa隔o溺ｄ面３調べた。試験期間中の水温は8.8〜10.3でであった。なお，すべての死亡魚ならびに10日後の生残魚の腎臓からBHI寒天培地を用いて接種苗の再分離を行った。
第２回の試験では，平均体重9.0gの魚に5.3×108，107，106，105CFU/0.1m仁/尾の菌液を各５尾に，対照として生理食塩水0.1r｢/尾を10尾にそれぞれ腹校内接種し，12日間観察した。試

験期間中の水温は8.4〜9.3℃であった。供試魚の処理は第１回と同様に行った。

果結
本病の発生状況↓997年11月中旬に，飼育中のハタハタ約970尾を上記コンクリート水槽に再度絞首し，生餌（コウナゴ）を投与して養成していたが，1998年２月までは目立った死亡は認められなかった。
死亡魚は２月下旬からみられ始め，３月中旬から増加した。３月下旬には，チアンフェニコールを50mg/kg体重／日で６日間経口投与したが，その後も死亡魚は慢性的にみられ，５月中旬までに約570尾が死亡した。この間の累積死亡率は60％程度と推定された。なお，２月上旬から５月中旬までの飼育水温は6.5〜9,5℃であったが，死亡が増加した３月中旬以降は7cC以上であっ仁病魚の症状は，外観的には頭部，背鰭基部，躯幹の出血・潰傷形成と一部融解，眼球周辺，口唇部の出血などが特徴であり，剖検すると鰹の貧血や肝臓の琵琶も顕著であった。血液が少量混ざった腹水が貯溜している個体もあった。
細菌検査
供試した８個体のいずれの腎臓からも露滴状の半透明，灰白色のコロニーがほぼ純粋にに分離され，３〜４日経過すると褐色色素の産生か認められた。
生化学的性状試験
供試した４株の生化学的性状試験の結果をTable1 に示した。４株の性状はすべて一致した。主な性状は，グラム

薬剤感受性
供試した４株は，いずれもチアンフェニコール，塩酸ドキシサイクリンおよびアミノベンジルペニシリンに対して顕著な感受性を示した。カナマイシン，エリスロマイシンに対する感受性は低く，ナリジクス酸には感受性を示さなかった。
病原性試験
第１回の試験では1.7×107CFU/0.1m4?

/尾接種したマダラ当成魚は，３，４日目にそれぞれ２尾が，1.7×106CFU/4

富山 県水 産試験場研究報告第11号(1999)

Table1. B
iochemicalcharacteristicsoftheisolate
sfromdiseasedJapanesesandfish.

*lShortrod

本++SR*l+F*2
十+Growth in0%NaCl
3%NaCl
5%NaClGas from Glucose
Acid fromD‑Galactose
Glucose
InositolLactose
MaltoseMannitolMannose
Rhamnose
Salicin
Sucr
ose++十+++++

Gram stain
Cytochrome oxidase
Catalase
Motility
FormBrown pigment
OF testGelatinase
NitratereductionIndole production
H2S production
LysineVP testM RtestMalonateCitrate+2Fermentativeかった。

3， 4日目のものでは特徴的な症状は乏しかったが， 5， 6日目のもの
では頭部の発赤，問、蓋や躯幹部の出血などが認められた 。剖検すると，いずれの個体にも鯨と肝死亡魚は外観的には，臓の槌色がみられ，一部の個体の偲には部分的な出血も認められた 。
第 2回目の試験では，死亡は接種菌量が多いほど早く， 5.
1X 108， 107， 106， 105CFU/0.
1mE/尾の接種で，死亡率はそれぞれ 100，80，40，および 20%であった 。第 1回の試験と同様に死亡魚からはすべて接種菌が再分離されたが，生残魚からは再分離されなか った。症状も第 1回と類似するものであった 。

考察

ハタハタ由来の分離菌株は，性状試験の結果から A.salmonicidα に同定されるも の と考えられる 。 しかし ， A.salmonicidα3亜種， subsp.salmonicidα， subsp.α chromogenes， subsp.

mαsoucidαの性状と比較したところ (Table2)，いずれとも一致しなかったことか ら， 非定型

A.salmonicidαとするのが妥当であると考える 。
海産魚から分離された非定型 A.salmonicidαには，前述したように大滝ら(1986)，中津川94)，飯田ら(1997)，泉川・植木(1997) などの報告があるが，ハタハタから分離された菌(19はそれらと褐色色素産生能，インド ール産生能， VP反応，リジン脱炭酸酵素などで，また，海‑￣￣￣反町・堀田・大津：ハタハタの非定型/Wツ7loussα池o厨ｄ面５Table 2.Comparisonof biochemical characteristicsbetween the isolate usedin this study and 3 subspecies ofλeromonαss ｢瓜o ｢c ｢α.
lsolateCharacteristicusedin this study｢αsubsp.

｢ααc八ro肌ogeyles

ｍａｓｏびｃ一一一十｢ａ(十)＋ ＋Lysine
MR testvP testL‑arabinose
LadoseSalicin
Sucrose｢c｢c十 一十 一

Hydrogen sulfideGelatinase｢mo｢mo十 一

十 一

Brown pigmentlndolesÅ.s一一＋一
十一ＡＧAG−一一(AG)ＡＧ一一(A)ＡAGＡＧ∩;Weakly，A;Acid，G;Gas

外の海産魚からの分離菌とも何らかの性状で異なっていた。したがって，今回ハタハタから分離された菌は非定型Å.s｢nっ｢ｄ＆バこ分類されるものの，既報の菌の性状と完全に一致するものはなかった。
ハタハタと同様に低水温の環境で生育するマダラを用いて病原性を調べたところ，自然発病魚と類似する出血性の病変を形成して致死せしめた。ハタハタに対する病原性試験は行っていない
ことから断定することはできないが，このたびハタハタに発生した病気は，非定型Å。
s回心ｍ凶必による感染症であると考えてよいであろう。しかし，マダラに対しては105〜106
CFU/尾程度の大量の菌の腹腔内攻撃でのみ病原性を示した。飯田ら（1997）はヒラメに対して
水温15〜16℃で，2.5×105CFU/g魚体重以上の腹腔内攻撃で，泉川・植木（1997）はクロソイに対して12〜14cCで，0.36CFU/尾以上の筋肉内接種で病原性を示したことを報告している。後者と比べると今回の分離菌の病原性はかなり低いものであった。今回の攻撃試験は，分離菌の至適増殖温度よりもかなり低いと考えられる8〜10℃で行ったこともその一因と考えられる。また，分離菌に対するハタハタとマダラの感受性の差異については調べていないが，自然発病時の死亡状況などから考えると病原性はさほど高いものではないと思われる。
ハタハタでの発病は，１〜２月の最低水温期を過ぎ，水温が上昇し始めた３月中旬以降，７℃以上の水温でみられた。ハタハタは成育期は水深150〜300m，水温2〜4cCの水域を中心に生息していると考えられている。水温からみれば，７℃以上の環境はハタハタにとって正常な生育環境を超えたストレスの高い状態にあるともいえよう。そのような状況下で病原細菌に遭遇すれば，温度条件から急性発病の可能性は低いが，慢性的に感染・発病が繰り返されるものと推察される。

6富山県水産試験場研究報告第11号(1999)

病気の抑制を目的に，ハタハタにチアンフェニコールの経口投与を行ったが，効果は認められなかった。分離菌はチアンフェニコールに比較的高い感受性を示したが生餌のミンチに薬剤を混ぜて投与した際に，摂餌が不活発で規定量の薬剤が摂取されなかったこと，低水温の影響で、薬剤の吸収が悪かったことなどが原因として考えられる。
ハタハタから分離された非定型 A. salmonicidα の発育可能塩分濃度は 1株を除き O~3% であった。ムシガレイ由来株(中津川 1994) は 5 %まで，アイナメ，ヒラメ，クロソイ由来株(飯田994) は4.5%まで発育可能であったが，それらと比べると塩分耐性は低く，ウナギ由来の非ら 1almonicidα(Kitao etal.1984) や，サケ科魚類由来の A.salmonicidα と近いもので
定型 A. sあった。本菌の海水中での生存能については調べていないが本菌がどこから来て海水環境にどの程度順応しているのか，どのような伝播様式をとるのか，病害防除の観点からも明らかにする必要があろう 。

.salmoηicidα感染症は，全国各地の海産魚の種苗生産施設や養殖場において発生が非定型 A問題となりつつある。海外では我が国以上に多魚種で発病が報告されており今後も養殖対象魚種の拡大とともに擢病魚種の増大が懸念されることから，種百生産施設等では防疫対策に十分注意をはらう必要があろう。

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