コラーゲン検出用プローブ（ CHP ）CHP（ Collagen Hybridizing Peptide ）とは3Helix 社（スリーヘリックス）が提供する Collagen Hybridizing Peptide（ 以 下 CHP ）は、各 種 病 態マーカーとして注目される変 性コラーゲンに特 異 的に結 合し、三 重らせ ん 構 造を形 成するプローブです。

特徴●

動物種やコラーゲンタイプに関わらず、変性コラーゲンに特異的に結合いたします。

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抗原賦活化を必要とせず、凍結切片、パラフィン切片どちらでも使用可能です。

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抗体と比較して分子量が IgG の 2% 程度の大きさのため、組織への浸透性が高く、薄片化せずとも染色ができます。

原理
生 体 内に存 在 するほとんどのコラーゲンは、コラーゲンタイプに関わらず、三重らせん構造を有しています。

コラーゲンが変性

CHP が結合

このコラーゲンはコラゲナーゼによる分 解や機 械 的 損 傷を受けることで 三重らせん構造が崩れ、変性することが知られています。CHP は変性コラー

要 因

ゲンに特異的に結合するプローブです。

・ 組織損傷・ コラーゲンのリモデリング・ 機械的過負荷・ 化学的変性

CHP

CHP を用いた染色例

F-CHP（ Fluorescein 標識）

R-CHP（ Cy3 標識）

B-CHP（ Biotin 標識）

Collagen Hybridizing Peptide (CHP)

組織病理学
酵素で分解された後のコラーゲンは熱的に不安定になり、体温で変性するようになります。このような変性したコラーゲンは、病的状態下での炎症や組織損傷のマーカー、または生理学的発達における組織リモデリングのマーカーとなります。

CHP は、ほぼ全ての組織に適応しており、心筋梗塞、関節炎、腎炎、繊維症などの幅広い疾患の研究にご使用いただけます。

使用例●変形性膝関節疾患

変形性膝関節症

サンプル

患者関節軟骨組織

染色

F-CHP（緑）Hoechst 33342（青）変性した軟骨には、高度に分解されたⅡ型コラーゲンが見られます。

●糸球体腎炎
疾患

糸球体腎炎

サンプル

ラット腎臓

染色

F-CHP（緑）抗コラーゲン IV 抗体（赤）F-CHP（緑）は炎症を起こした糸球体の損傷したコラーゲンにのみ反応していますが、抗コラーゲン IV 抗体（赤）は組織内全てのコラーゲン IV に反応しています。

●骨格筋組織の発達
サンプル

マウス胚（14〜18日齢）

染色

F-CHP（オレンジ / 黄色）
Hoechst 33342（青）CHP が検出するコラーゲン分解により、骨格筋組織の発達する過程が観察できることを示しています。
写真は、あらかじめ形成されていた軟骨が再吸収され、石灰化した骨に置換されるという、軟骨内骨化の過程を追った写真です。CHP は、軟骨内骨化が進行中の骨格組織にのみ、局在しています。

●肌の老化
サンプル
染色

マウス皮膚切片
21日齢（左）、9ヶ月齢（右）B-CHP+Alexa647-Streptavidin（黄色）Hoechst 33342（青）9ヶ月齢マウス皮膚の真皮では、多量の変性したコラーゲンが見られます。CHP は他にも光老化、皮膚の炎症及び自己免疫性皮膚疾患におけるコラーゲン損傷を検出し、スキンケア製品と成分の有効性と安全性を評価するために用いることが可能です。

機械的損傷コラーゲンは、腱、靭帯、骨および軟骨を含む、全ての荷重支持組織における主要な構成要素です。
これらの組織への機械的損傷は、コラーゲンを変性させ、マクロスケールで検出可能な形態学的変化なしに、病的変化を起こす可能性があります。CHP を使用することで、機械的に引き延ばされた腱線維束コラーゲンの損傷状態を分子レベルで検出することが可能になります。

ラット尾腱束の引張試験

左：ラット尾腱束をサンプルに、5, 10.5, 15% と引張率を変えた引張試験を行い、損傷具合を CHP で検出した結果です。
引張率が増加するにつれ、コラーゲンの損傷が増え、それに伴い F-CHP の蛍光も増加していることが分かります。
右：応力 - ひずみ曲線（黒線）が線形成領域（赤破線）から逸脱すると、ベースラインから CHP の蛍光強度が上がり始めます。
これは、コラーゲン分子の展開が機械的損傷の開始に対応することを示唆しています。

組織の脱細胞化
脱細胞化組織から得られた天然の細胞外マトリックス（ ECM ）は、再生医療に幅広い用途で使用されています。
しかし、脱 細 胞 化 の 手 法により ECM の 組 成や 微 細 構 造 が 変 化 すると、生 物 学 的 活 性と組 織 修 復 機 能にも影 響を及ぼします。従来の組織学的染色、SEM（走査型電子顕微鏡）、TEM（透過型電子顕微鏡）では行えませんでしたが、CHP は簡単な画像解析で分子レベルの変性コラーゲンを定量的に観察することが可能です。

ブタ膀胱 基底膜複合体の各界面活性剤による脱細胞化の評価
SDS

CHAPS

SD

Triton X-100

F-CHP

Col l Ab

Native4 種の界面活性剤（1 ％ SDS、8 mM CHAPS、4 ％ SD、3 ％ Triton X-100）で脱細胞化された、ブタ膀胱 基底膜複合体中のコラーゲンを抗 Collagen I 抗体（上段）で、変性コラーゲンを F-CHP（下段）で染色した写真です。
1 ％ SDS と3 ％ Triton X-100 のコラーゲンが変性しており、中でも1 ％ SDS は変性効果が強いことが分かります。

Collagen Hybridizing Peptide (CHP)

変性コラーゲンの検出
SDS-PAGE でコラーゲンを電気泳動すると、SDS や熱によりコラーゲンが変性します。CHP は、この変性コラーゲンを容易かつ特異的に検出します。ウエスタンブロットのようなメンブレンへの転写やブロッキングの作業が不要な為、時間や手間を節約できます。

SDS-PAGE での検出

左：段階希釈したⅠ型コラーゲンを SDS-PAGE ゲル中で F-CHP を用いて検出した結果、検出下限値は 5ng でした。
中央、右：CHP はコラーゲンのタイプを問わず検出できますが、フィブロネクチンやラミニンなどには反応しません。

製品ラインナップ
標識

製品名

略称

Fluorescein

Collagen Hybridizing Peptide,
5-FAM Conjugate

F-CHP

Cy3

Collagen Hybridizing Peptide,
Cy3 Conjugate

R-CHP

BiotinCollagen Hybridizing Peptide,
Biotin Conjugate

B-CHP

輸入販売元

代

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https://www.iwai-chem.co.jp/▶資料請求・製品に関するお問合せは企画開発課 TEL：03-3241-2573 FAX：03-3279-6397※本品は研究用試薬です。研究目的以外の用途にはご使用できません。
※商品内容は予告なく変更することがございます。
※本紙に記載されている情報は 2023 年 2 月 1 日現在のものです。

理店

製品番号

容量価格

FLU60

60 µg

¥50,000

FLU300300 µg¥137,000

RED6060 µg¥50,000

RED300300 µg¥137,000

BIO6060 µg¥50,000

BIO300300 µg¥137,000