福岡県保健環境研究所年報第39号, 99－100, 2012

資料福岡県におけるヒトパレコウイルス検出状況
吉冨秀亮・石橋哲也・世良暢之
平成22年度及び23年度に感染症発生動向調査事業で搬入された糞便96検体（22年度：38検体、23年度：58検体）について、ヒトパレコウイルス(Human Parechovirus：HPeV)の検査を行った結果、13検体からHPeVが検出された。遺伝子解析を実施した結果、HPeV-1が9検体、HPeV-3が2検体、HPeV-4が1検体、HPeV-6が1検体であった。日本国内で流行するHPeVは1型と3型であり、今回の調査結果と一致した。一方で、4型と6型の検出例は稀であり、今後も調査を継続する必要があることが示唆された。
［キーワード：ヒトパレコウイルス、感染症発生動向調査］
１ている HPeV-1、HPeV-2、HPeV-3、HPeV-4、HPeV-5 及びはじめに
HPeVは、主に小児の胃腸炎や呼吸器疾患患者から分離

HPeV-6 の VP3/VP1 領域の塩基配列を収集した。

されるピコルナウイルス科に分類されるウイルスである。

表1

HPeV 検出用プライマー

1999年にエコーウイルス22型及び23型が独立しHPeV-1及プライマー名 5'-3' 塩基配列

びHPeV-2と改名された。H23年度の全国における感染症発
1st PCR

生 動 向 調 査 に お い て HPeV の 検 出 状 況 は
HPeV-NT(NotTyped)が27検体、HPeV-1が71検体、HPeV-31）

2nd PCRが222検体であり 、一部の自治体では調査が行われているが、福岡県ではこれまで調査を行っていない。そこで、福サイズ（塩基）2090

GAYAATGCYATMTAYACWATYTGTGA2523

ACWGTRAARATRTCHACATTSATDG

2159

TTYTCMACHTGGATGMGGAARAC

2458

DGGYCCATCATCYTGWGCTGA

433
299

岡県におけるHPeV流行を知る手がかりとして過去に感染症発生動向調査事業で搬入された感染性胃腸炎検体につ３結果及び考察
表 2 に HPeV 検出結果を、図 1 に系統樹解析結果を示す。

いてHPeVの検出を試みた。

表2２方法

２・１ 検査材料
平成 22 年度および平成 23 年度に感染症発生動向調査事
業で搬入された糞便 96 検体を材料とした。
２・２ 検査方法
糞便検体を PBS で 10%乳剤とし、10000 rpm、20 分遠心後の上清から QIAamp Viral RNA Mini Kit (QIAGEN)を用いてウイルス RNA を抽出し、DNase 処理した。SuperScript III(Invitrogen)により RNA から cDNA を作成した。得られた
cDNA を用いて、EmeraldAmp PCR Master Mix (TakaraBio)

HPeV 検出結果

番 号 採取年月 年 齢 性 別 型別結果
12010.57ヶ月
男
HPeV-122010.10
1歳
男
HPeV-1
3
2010.11 8ヶ月
男
HPeV-1
4
2011.1
1歳
女
HPeV-45
2011.41歳
女
HPeV-3
6
2011.49ヶ月
男
HPeV-3
7
2011.10 10ヶ月
男
HPeV-68
2011.11 9ヶ月
男
HPeV-19
2011.112歳
男
HPeV-1
10
2011.113歳
男
HPeV-1
11
2011.111歳
女
HPeV-1
12
2011.12 8ヶ月
女
HPeV-1
13
2011.12 10ヶ月
女
HPeV-1*Noro：ノロウイルス

同時に検出されたｳｲﾙｽ

NoroGⅡ/4
NoroGⅡ/4
RotaG3P[8]RotaG3P[8]NoroGⅡ/3
NoroGⅡ/6

NoroGⅡ/6,Polio2

Rota：ロタウイルス

Polio：ポリオウイルスにより 1stPCR 及び 2ndPCR を 94℃ 3min→ 94℃ 30sec、50℃ 30sec、72℃ 30sec (35 サイクル)→ 72℃ 5min の反応

平成 22 年度及び 23 年度の感染症発生動向調査検体 96

条件で行い、VP1 遺伝子領域を増幅した。PCR に用いたプ検体中 13 検体から HPeV 遺伝子が検出された。ダイレクライマーを表 1 に示す 2)。電気泳動を行い、陽性バンドがトシーケンスにより決定した塩基数 167bp を用いて遺伝確認された場合は、PCR 産物の精製後、ダイレクトシーケ

子系統樹解析を行い、型別を行った結果、HPeV-1 が 9 検ンスを行い、近隣結合法を用いて分子系統樹を作成し、レ体、HPeV-3 が 2 検体、HPeV-4 が 1 検体、HPeV-6 が 1 検

ファレンス株と比較することによって遺伝子型別を行っ体であった。現在、HPeV は 1 型から 14 型まで報告された。レファレンス株は既報 3)を参考に GenBank に登録されているが、7 型から 14 型に含まれるウイルスは検出例が福岡県保健環境研究所（〒818-0315 太宰府市大字向佐野 39）－99－

され、ノロウイルス GII が 5 検体、A 群ロタウイルスが 2FS96-2010

3319EU024632

6検体から検出された。ノロウイルスとの複合感染は、

EU024636
FS153-2011

6

HPeV-1 が 3 検体、HPeV-4 が 1 検体、HPeV-6 が 1 検体でEF051629
1AB112485

41861あった。A 群ロタウイルスとの複合感染は、HPeV-3 が 2

AB112486

EU024633
44検体であった。単独感染の 5 検体からは、すべて HPeV-1

AB112487

0EU024634

HPeV-1

FS166-2011
2199が検出された。今回、過去に遡って詳細な患者情報等の入手ができなかったために HPeV と他のウイルスの複合感FS155-2011
FS12-2010

染と病原性に関しては明らかにはできなかった。今後は、

EU024635
79

FS167-201127

詳細な臨床症状等の情報の入手を含めた継続調査を行っFS164-2011

25

FS156-2011

935964ていくことが必要である。

FS99-2010
EU024630

31

HPeV は、エンテロウイルスと比較して低年齢者からのL02971
AJ005695

41

HPeV-2検出が多い傾向があると報告されている 5) 。今回の調査に97 EU022171

EU024629

FS144-2011

74
82

AB252582

AB434673

４

FS211-2010
98
67

以下が 11 名、2 歳、3 歳がそれぞれ 1 名ずつであり同様のHPeV-4

DQ315670

36

おいても、HPeV が検出された検体提供者の年齢は、1 歳傾向を示していた。

AM235750

826038

HPeV-6

EU077518

99

FS3-2011

まとめ
感染症発生動向調査事業で搬入された糞便検体のおよFS5-2011
AJ889918

99AB084913

HPeV-3

AB112483

な流行型と類似しており、発生が稀な亜型も検出された。

98 AB112484

AB112482

また、他のウイルスとの複合感染が約半数の割合で起こっ

AF055846
99AM235749

HPeV-5ている可能性が示唆された。今回の調査では糞便検体のみを対象にHPeVの検出を行ったが、HPeVの実態を把握する

0.02

図1

そ10%からHPeVが検出された。検出された亜型は全国的

HPeV 遺伝子系統樹解析結果○は平成 22 年度、ためには、咽頭ぬぐい液などからも検出を試みる必要があると思われる。今後もHPeVの検出および型別を行うこと●は平成 23 年度に当所で検出した HPeV を示すが、公衆衛生学的な観点からも重要である。
少なく、型それぞれの詳細なデータも少ない。そのため、今回は 1 型から 6 型までのレファレンス株を用いて遺伝子系統樹解析を行った。日本で主に流行している HPeV は 1型と 3 型とされている 4)。今回検出された亜型も HPeV-1と HPeV-3 で 82%を占めており、国内での主な流行型と類似していた。HPeV-4 及び HPeV-6 については日本国内では報告が数例しかない 4)。詳細な解析を行うために培養細胞によるウイルス分離を行い、全塩基配列の決定を行う必要があると思われた。
系統樹解析の結果、HPeV-1 では、レファレンス株である Harris 株(L02971)とやや離れたクラスターに位置し、遺文献
1) 国立感染症研究所

感染症情報センター

病原体検出

情報：Vol.33, No.6, 2012.
2) H. Harvala,et al.: J Clin Microbiology, 3446-3453, 2008.
3) 若月紀代子、川本大輔、樋脇弘：平成19年度福岡市保健環境研究所所報33号, 122-125, 2007.
4) 伊藤雅、山下照夫、皆川洋子：臨床と微生物, 36 巻, 3号, 187-192, 2009.
5) N. R. Grist, F. J. Bell, F. Assaad: Prog Med Virol, 24,114-157, 197.

伝学的多様性がみられた。HPeV-3 ではレファレンス株である Can82853-01 株(AJ889918)と近縁に位置していた。
HPeV-4 （ FS211-2010 ） で は レ フ ァ レ ン ス 株 で あ るK251176-02 (DQ315670)及び T75-4077 (AM235750)とは遺伝学的に異なるクラスターに位置していた。細胞分離を行い、より詳細な遺伝学的な解析が必要であると思われた。
HPeV-6 で は レ フ ァ レ ン ス 株 で あ る NII561-2000 株(AB252582)と近縁に位置していた。
検出された 13 検体中 7 検体からは他のウイルスも検出－100－