2009 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡二級技士技術認定試験問題
問１．細胞骨格について正しいのはどれか．

Ｂ．60 ～ 70°C に加温しながら撹拌する

Ａ．微小管，中間径線維，およびアクチンフィラメントに大別される

Ｃ．室温に戻してから，蒸留水を加えて全量を 100 ml にする

Ｂ．微小管は直径 10 nm の細管構造をなす

Ｄ．1N NaOH 水溶液を数滴加えて溶解する

Ｃ．中間径線維は細胞の形態を保持する働きがある

Ｅ．蒸留水を約 90 ml 入れる

Ｄ．アクチンフィラメントは紡錘体を形成する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡＢＣＤＥ

2．ＡＣＤＢＥ

5．ＡＥＢＤＣ6．ＡＣＢＤＥ

3．ＡＤＢＥＣ

4．ＡＥＤＣＢ問２．ミトコンドリアについて正しいのはどれか．

問 10．緩衝液について正しいのはどれか．

Ａ．二重の単位膜で構成されている

Ａ．ホスファターゼ類の酵素を検出する場合はリン酸緩衝液を使用する

Ｂ．外膜と内膜の間の区画をクリステとよぶ

Ｂ．カコジル酸塩にはヒ素が含まれている

Ｃ．内膜に囲まれた区画をマトリクスとよぶ

Ｃ．主に固定液の pH 調整のために使用する

Ｄ．マトリクスには電子伝達系の酵素群が存在する

Ｄ．ミロニック液はカコジル酸緩衝液の一つである

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問３．大きさの順について正しいのはどれか．

問 11．Luft 法で使用される A 液の成分はどれか．

1．真菌＞動物細胞＞細菌＞プリオン＞ウイルス

Ａ．Epon 812

2．動物細胞＞真菌＞プリオン＞細菌＞ウイルス

Ｂ．DDSA

3．動物細胞＞細菌＞真菌＞ウイルス＞プリオン

Ｃ．DMP-30

4．真菌＞動物細胞＞細菌＞プリオン＞ウイルス

Ｄ．MNA

5．動物細胞＞真菌＞細菌＞ウイルス＞プリオン

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問４．DNA を含む細胞小器官はどれか．

問 12．エポキシ系樹脂で使用される置換剤はどれか．

Ａ．リボソーム

Ａ．キシレン

Ｂ．ペルオキシソーム

Ｂ．プロピレンオキサイド

Ｃ．葉緑体

Ｃ．n- ブチルグリシジルエーテル（QY-1）

Ｄ．ミトコンドリア

Ｄ．クロロホルム

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問５．細胞壁について正しいのはどれか．

問 13．脱水について正しいのはどれか．

Ａ．細菌の細胞壁はペプチドグリカンを主成分とする

Ａ．脱水剤の分子量は脱水速度と関係する

Ｂ．グラム染色法は細胞壁の構造の違いに基づく

Ｂ．脱水過程で脂質は溶出しない

Ｃ．真菌の細胞壁はクチクラで構成されている

Ｃ．高濃度の脱水液を最初から使用すると試料の収縮率が高まる

Ｄ．植物の細胞壁にはキチンが沈着する

Ｄ．エタノールはアセトンに比べ吸湿性が高い

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問６．グルタルアルデヒドはどれか．

問 14．包埋剤として必要とされる条件について誤っているのはどれか．

1．HCHOn1．重合硬化反応が均一に進む

2．CHO-CH2-CH2-CH2-CHO

2．モノマーは粘性が高い

3．OsO43．廃棄可能な物質である

4．CH2 = CHCHO

4．透明かつ無色に近い

5．KMnO45．重合体の硬さの調節が容易である

問７．化学固定法について正しいのはどれか．

問 15．樹脂切片の干渉色が薄い方から順に並んでいるのはどれか．

Ａ．生体成分を凝固させる

1．銀灰金青紫

Ｂ．生体成分のすべてを保存する

2．金銀灰紫青

Ｃ．生体成分を架橋する

3．灰銀金紫青

Ｄ．急速凍結固定法より生体に近い状態を保持できる

4．銀金青灰紫1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

5．灰銀金青紫問８．還元剤はどれか．

問 16．薄切時にボートの切片がよく見えない理由はどれか．

Ａ．グルタルアルデヒド

Ａ．ボートの水量が少なすぎる

Ｂ．四酸化オスミウム

Ｂ．樹脂の重合が不完全である

Ｃ．過マンガン酸カリウム

Ｃ．照明の角度が不適切である

Ｄ．パラホルムアルデヒド

Ｄ．ナイフの締め付けがゆるい

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問９．8％パラホルムアルデヒド水溶液を 100 ml 作製したい．下記の手順

問 17．超薄切片にチャターが起こる原因はどれか．

で正しいのはどれか．

Ａ．ナイフの刃先にごみがついている

Ａ．フラスコにパラホルムアルデヒド 8 g を量りとる

Ｂ．薄切面が大きすぎる（ 1 ）Ｃ．ナイフの逃げ角が小さすぎる

2．ブロッキング

Ｄ．切削速度が速すぎる

3．一次抗体反応

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

4．ペルオキシダーゼ標識二次抗体反応
5．電子染色問 18．薄切時に試料ブロックの切削面が濡れる原因はどれか．
Ａ．ボートの液面が刃先より高い

問 27．免疫電顕法の包埋前染色法について正しいのはどれか．

Ｂ．ナイフの逃げ角が大きすぎる

Ａ．包埋にはエポキシ樹脂を使用する

Ｃ．樹脂が硬すぎる

Ｂ．抗体の浸透をよくするためにサポニンを使用することがある

Ｄ．切削速度が遅すぎる

Ｃ．超薄切片上で免疫反応を行なう

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．メタ過ヨウ素酸ナトリウムで前処理する必要がある
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 19．ダイヤモンドナイフについて正しいのはどれか．
Ａ．刃角 6° のナイフを使用する

問 28．免疫電顕法の包埋後染色法（post-embedding method）に適した包Ｂ．ガラスナイフで試料面を平滑にしてから使用する

埋樹脂はどれか．

Ｃ．刃先のクリーニングはアセトンで行う

Ａ．Araldite
Ｂ．Lowicryl K4M

Ｄ．使用後はデシケータに保管する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 20．電子染色について正しいのはどれか．

Ｃ．LR WhiteＤ．Spurr 樹脂
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．無染色では像を見ることはできない
Ｂ．二重染色は酢酸ウラニル→鉛の順に行う

問 29．免疫電顕法の包埋後染色法について正しいのはどれか．

Ｃ．グルタルアルデヒドには染色効果がある

Ａ．超薄切片上で免疫反応を行うので銅グリッドを避ける

Ｄ．金属は電子の散乱を増す

Ｂ．コロイド金の粒子径が小さいほど標識効率がよい

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 21．酢酸ウラニルについて正しいのはどれか．

Ｃ．グルタルアルデヒドの濃度が高いと抗原性の保持がよい
Ｄ．免疫電顕法は特異性が高いので対照実験は必要ない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．購入する為には文部科学省の許可を得なければならない
Ｂ．受け入れ，使用，保管，廃棄は，年に１回報告する

問 30．フリーズフラクチャ―法について正しいのはどれか．

Ｃ．廃液は重金属として廃棄する

Ａ．グリセリン処理により生体膜はよく保存される

Ｄ．原子力基本法第三条で核燃料物質に指定されている

Ｂ．生体膜の親水基のところで割断される

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 22．脱エポンしなくても染色できる染色剤はどれか．

Ｃ．試料を割断後に蒸着する
Ｄ．膜内粒子の観察に適している
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．ヘマトキシリン
Ｂ．エオシン

問 31．急速凍結置換固定について正しいのはどれか．

Ｃ．トルイジンブルー

Ａ．置換を行う温度は通常 −80°C である

Ｄ．メチレンブルー

Ｂ．凍結置換剤にはアセトンがよく使用される

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 23．準超薄切片のトルイジンブルー染色について正しいのはどれか．

Ｃ．塩類濃度が高い試料ほど氷晶形成が起こりやすい
Ｄ．氷晶が形成されても膜構造が壊れることはない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．加温すると速く染まる
Ｂ．濃度は 10％を使用する

問 32．オートラジオグラフィーで正しいのはどれか．

Ｃ．脱樹脂しないと染まらない

Ａ．α 線はヘリウム（He）核である

Ｄ．0.5 ～ 1 μm の厚さの切片を使用する

Ｂ．放射性ヨード（125I）の半減期は 60 日である

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 24．ライソソームの指標酵素はどれか．

Ｃ．β 線の飛程は α 線より短い
Ｄ．化学的カブリは湿度の作用による

1．5′-ヌクレオチダーゼ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

2．酸性ホスファターゼ

問 33．倍率 8,000 倍の電顕写真に 2 μm のスケールバーを入れるには，長3．グルコース 6-リン酸―ホスファターゼさを何 mm にすればよいか．

4．チトクロームオキシダーゼ

問 34．試料作製法と観察目的の組合せで正しいのはどれか．

5．コハク酸脱水素酵素

Ａ．ギ酸消化法―弾性線維

問 25．遺伝子細胞化学法（in situ hybridization 法）について正しいのはど

Ｂ．ODO 凍結割断法―細胞骨格

れか．

Ｃ．塩酸コラゲナーゼ法―基底膜

Ａ．細胞組織の形態を保ちながら遺伝子の局在や発現を解析できる

Ｄ．アルカリ・水浸軟法―結合組織
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．検出には抗原物質等で標識された核酸プローブを使用する
Ｃ．二本鎖の核酸のすべてが一本鎖に解離する温度を Tm 値とよぶ

問 35．
走査電顕試料の金属コーティングの目的について正しいのはどれか．

Ｄ．反応の特異性は反応温度が低い方が高い

Ａ．試料組成の違いを際立たせる

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．二次電子の発生量を増す

問 26．免疫電顕法の包埋前染色法（pre-embedding method）のグルタル

Ｃ．試料の内部構造を観察する

アルデヒド固定は，どの処理手順の後に行うのが適当か．

Ｄ．試料表面に導電性を与える

1．グリッドへの載物

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ（ 2 ）問 36．電子について正しいのはどれか．

Ｃ．親水化のためにカーボン蒸着する

Ａ．電流の向きと逆向きに移動する

Ｄ．粘着処理にはメッシュセメントを使用する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．一様な磁界の向きと同じ方向に進む電子は円軌道を描く
Ｃ．波動性を示す

問 44．支持膜について正しいのはどれか．

Ｄ．電荷の単位はアンペア（A）で表す

Ａ．水面展開法で作製したコロジオン膜の厚さは干渉色で青色程度がよい

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．水面展開法でコロジオン膜を作製する時は水温を室温より高くする

問 37．対物レンズの非点収差補正に使用されるものはどれか．

Ｃ．水面剥離法では薄膜と基盤の間に水を入れ剥離する

Ａ．マイクログリッドの孔の縁に見られるフレネル縞Ｄ．ホルムバール支持膜作製では基盤を引き上げる速度が速いほど膜厚はＢ．イメージワブラー機能

薄くなる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．カーボン薄膜の像に見られる粒状性
Ｄ．制限視野絞り

問 45．透過電子顕微鏡の試料汚染防止について正しいのはどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．照射時間を長くする

問 38．冷陰極電界放出型電子銃について正しいのはどれか．

Ｂ．ターボ分子ポンプよりも油拡散ポンプを使用した方がよい

Ａ．陰極材料にはヘアピン型タングステンを使用する

Ｃ．写真フィルムは真空乾燥して使用する

Ｂ．熱電子放出型電子銃より高真空を必要とする

Ｄ．冷却装置を使用する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．ショットキー効果を利用している
Ｄ．ビームの干渉性は熱電子放出型より高い

問 46．フィルムと印画紙の現像処理について正しいのはどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．同じ処方の現像液を使用する

問 39．透過電顕観察時の操作について正しいのはどれか．

Ｂ．同じ処方の停止液を使用する

Ａ．試料上の電子ビーム照射範囲を調整するために制限視野絞りを挿入しＣ．同じ処方の定着液を使用する

た

Ｄ．乾燥時には同じ濃度の界面活性剤を使用する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．コントラストを高めるために加速電圧を下げた
Ｃ．電圧軸を合わせるためにスチグマトールを調整した

問 47．走査電子顕微鏡の操作について正しいのはどれか．

Ｄ．フレネル縞がなくなるように対物レンズ電流を調整した

Ａ．分解能を高めるために短い作動距離で観察した

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．試料の組成コントラストを得るために二次電子情報を検出した

問 40．透過電顕像のコントラストについて正しいのはどれか．

Ｃ．焦点深度を深くするために対物絞りの孔径を小さくした

Ａ．電子染色の目的は散乱コントラストを高くすることである

Ｄ．チャージアップ現象を軽減させるためにビーム電流を増加させた
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．加速電圧を高くすると散乱コントラストが高くなる
Ｃ．フレネル縞は位相コントラストにより生じる

問 48．低真空走査電顕について正しいのはどれか．

Ｄ．位相コントラストは球面収差に依存しない

Ａ．水分・油分を含んだ試料の観察が可能

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．試料室の真空度は 10−2 Pa 程度

問 41．走査電顕像のコントラストについて正しいのはどれか．

Ｃ．EDS 分析は不可能

Ａ．平坦な試料はコントラストが低い

Ｄ．無蒸着観察が可能
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．加速電圧を高くするとコントラストが高くなる
Ｃ．作動距離を短くするとコントラストが低くなる

問 49．元素分析の方法について正しいのはどれか．

Ｄ．試料を傾斜するとコントラストが高くなる

Ａ．多元素同時マッピングを行うために EDS を使用した

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．微量元素の分析には EDS が適している

問 42．真空計および真空ポンプについて正しいのはどれか．

Ｃ．絶縁物の分析を行う場合は金（Au）を蒸着する

Ａ．ペニング真空計はピラニー真空計よりも高真空領域を測定できる

Ｄ．WDS 分析の場合は試料表面を平坦にする
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．油拡散ポンプは冷却水を止めた後に電源を切る
Ｃ．油拡散ポンプは大気圧から作動できない

問 50．走査プローブ顕微鏡について正しいのはどれか．

Ｄ．油回転ポンプは回転翼で排気する

Ａ．略称を SPM とよぶ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．レンズを使用せずに拡大像を作る

問 43．グリッド（メッシュ）とその処理法について正しいのはどれか．

Ｃ．試料と探針の間に生じる化学現象を利用する

Ａ．200 メッシュは 100 メッシュより孔径が小さい

Ｄ．表面構造の観察には適していない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．銅グリッドは蒸留水で保存する（ 3 ）2009 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡技術認定試験問題一級技士Ⅰ（生物）13 題の問題のうち，問１～問７は全問解答し，問８～問 13 はその中から３問を選んで解答しなさい．なお，選択しなかった問の解答欄には，大きく×印を記入しなさい．

【必須問題】
問１．次の文章は包埋樹脂について記述したものである．
（）にあ

複数回選択してもよい．

てはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．
エポキシ系樹脂は（１）すると硬化が不十分になり超薄切し難くなる．アクリル系樹脂およびポリエステル系樹脂は（
在下で（

３

）が（

４

冷媒の沸点と融点の差が（２）の存）される．これを回避するた めに，具体的にはアクリル系樹脂では脱水剤に（５）の使用は避ける．包埋

の際，（

６

て（

７

）と極力触れさせないようにする．厳密には樹脂混合時や

（

）時に（

３

）の中に樹脂が満杯となるまで入れ，蓋をしっかり閉め
７ ）を（

８

）に置換して行ったほうがよい．また，低温重合する場合，四酸化オスミウムは（アクリル系樹脂の（
場合は（
（

５

３ ）を（

９

10 ）に溶けないので（

Ｂ．空気

Ｇ．酸化

Ｋ．アセトン

Ｃ．長期保存Ｍ．窒素ガス

Ｏ．n- ブチルグリシジルエーテル
Ｑ．脱水

Ｒ．エタノール

５

Ｅ．赤外線

Ｎ．吸湿

３

Ｂ．液化

Ｇ．液体

Ｆ．固体

Ｐ．プロピレンオキサイド
Ｔ．重合

問２．次の文章は細胞接着装置について記述したものである．
（）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．
細胞接着装置は隣接する細胞間で細胞どうしを接合し，組織の形態を維

（

）は熱伝導

Ｃ．小さい

Ｄ．気体
Ｊ．固化

Ｅ．大きい
Ｋ．気化

）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．
生 物 の SEM 観 察 用 に 試 料 を 乾 燥 す る 場 合，（
２

）乾燥や（

３

１

）を使用した）を使用した凍結乾燥法がある．乾燥した生物

試料には（

４

）がほとんどなく，SEM 観察する場合，照射電子が試

料に（

５

）して（

料に（

４

）を与える目的で試料を脱水・乾燥する前に（６）像に著しい像障害が生じる．そのため，試８）や乾燥した試料表面に（

７

７

５

発生効率の（10 ）の効果もある．

９）と試料損傷の（）を試）をコーティ

ングする方法がある．この方法には（）の防止以外に（

６

）の

【語群】
Ａ．アセトン

Ｂ．帯電性

Ｅ．エタノール

Ｃ．ブロック染色

Ｆ．超臨界

Ｊ．臨界点

①（

Ｎ．液化二酸化炭素）は，隣接する細胞膜の外葉どうしが癒着し，１層となるた

４

問４．次の文章は走査電顕試料の作製技術について記述したものである．

持するための特殊な構造体である．
１）と，試料冷却時に冷媒が試料によ

Ｈ．冷やされ料中に結合させる（

Ｓ．ポリエチレンカプセル

１）する．試料を取り囲んだ（）液体窒素は冷媒として適さない．

Ａ．暖められ（Ｊ．ゼラチンカプセル

）て（

【語群】

５ ）脱水せざるをえないが，

Ｄ．紫外線

Ｈ．炭酸ガス

Ｌ．酸素（

４ ）する．ポリエステル系樹脂の）が残らないように注意する．

Ｆ．熱

２が悪く，冷却速度を低下させる．したがって，沸点―融点の温度差が）を妨げるため，

【語群】
Ａ．阻害

り（

Ｋ．導電性

Ｈ．凍結

Ｍ．増大

Ｌ．免疫染色Ｏ．金属

Ｒ．反射電子

Ｄ．非金属

Ｇ．二次電子

Ｐ．t-ブチルアルコール

め，明暗５層の膜構造として認められる．細胞間隙は存在しない．まＱ．帯電た，この部位の細胞膜の内側にマイクロフィラメントが見られないの

問５．単層培養細胞のミトコンドリア内の抗原を免疫電顕法で観察したい．

Ｓ．導電染色Ｔ．軽減が特徴である．この接合面の凍結割断レプリカ像では（２）に膜固定から電顕観察までの手順を記し，重要なポイントについて説明

内粒子が紐状につながった隆起が網状に広がり，また（

３

）には

しなさい．

（

２

）に対応する溝が観察される．

②（

４

）は，
（

１

）の中にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，

問６．次の（）と類似の構造を示すが，2 nm の間隙を持つ結記号で答えなさい．

合である．接着する細胞間で，この結合を介して，代謝的，電気的刺激

組織細胞化学には，酵素反応を組織上の反応産物として見る（が伝達されるので伝達結合ともよばれる．

）と，特異抗体を用いて特定の分子の局在を見る（

③（

５

）は，（

１

）に連続して細胞間を結合する．細胞間隙は約20 nm となり，電子密度が高くなっている．（
り囲み，この直下の細胞内面には（
④（

７

）は，（

５

６

５

）は細胞全体を取）が多数付着している．

る（

３）がある．（８）とよばれる細胞（膜に沿った電子密度の高い板状構造がある．（

８）には細胞骨格でる．良い抗体とは（）が集中しているのが特徴である．（

10 ）は，上皮細９胞基底部に存在し，細胞側だけに（

７）は抗体を蛍光物質，酵素，（
５

），（

４

４

）な

）などの分

６

）であるが，（

２
７）において，抗体の良し悪しが最も重要であ）と親和性がともに高い抗体をさす．

免疫電顕法では，固定条件が重要で，（８）以下でも（９）を加えると，形態の保持に効果がある．包埋前免疫電顕法と（ 10 ）樹）様構造が見られる．

【語群】

脂包埋法による包埋後免疫電顕法がよく行なわれている代表的な免疫電顕

Ａ．閉鎖帯（tight junction） Ｂ．接着帯（zonula adherence）法である．

Ｃ．接着斑（desmosome） Ｄ．半接着斑（hemidesmosome）【語群】

Ｅ．ギャップ結合（gap junction） Ｆ．P 面

Ａ．糖質組織化学

Ｈ．アクチンフィラメント

２

布や局在として見る方法である．抗体は様々な抗原を特異的に認識する細胞間を結合し，対応する細胞質内側にも，（
ある（

１

），塩基配

列の相補性を利用して核酸プローブで特有の DNA や RNA の局在を見どで標識し，抗原との結合部位を蛍光，（）から少し離れて，数箇所にわたって，斑状に

２

Ｇ．E 面

Ｊ．サイトケラチン

問３．浸漬凍結固定の冷媒について，次の（Ｂ．免疫組織化学

Ｋ．接着斑板Ｄ．In situ hybridization）にあてはまる最も適Ｇ．酵素反応産物

切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．但し，語群の語句は（ 4 ）Ｅ．アビジンビオチン

Ｈ．アゾ色素Ｋ．イムノグロブリン

Ｃ．酵素組織化学
Ｆ．金属

Ｊ．イムノブロット

Ｌ．フォスファターゼ

Ｍ．0.1％

Ｎ．2.5％

Ｏ．タンニン酸

Ｐ．四酸化オスミウム

B 液：Epon 812

Ｑ．グルタルアルデヒド

100 ml

MNA

78 ml

Ｒ．ELISA 法 Ｓ．特異性 Ｔ．普遍性 Ｕ．LR White Ｖ．クエトール

この処方に則って A：B = 3：7 の少し硬めの包埋剤を 100 ml 調整する

問７．エポキシ樹脂の調製は通常 Luft の処方で行う．エポキシ当量が 150

場合，Epon 812，DDSA，MNA の容量は各々どのくらいになるか，計算の場合の Luft の処方は以下の通りである．
A 液：Epon 812

71 ml

DDSA

しなさい．また，DMP-30 は何％加えればよいか，さらに DMP-30 を過剰

100 mlに加えると包埋剤はどのようになるのか，記しなさい．

【選択問題】
問８．下の写真はあるタンパク質に対する抗体を使用して，動物の上皮細問10．下の写真はシロイヌナズナ根冠のコルメラ細胞（平衡細胞）とよ

胞を免疫電顕法で観察したものである．可視化にはプロテイン A-

ばれる細胞の透過電顕像である．この細胞ではアミロプラスト（D）

金（径 15 nm）を使用した．

が重力方向（写真下方向）に沈降することが知られている．次の各設問に答えなさい．スケールバーは 1 μm を示す．

標本ブロックは LR White 樹脂に包埋された．金粒子は細胞内のライソ
ソーム様の顆粒内に多数見られた（矢印）．次の各設問に答えなさい．

１）この免疫電顕法は包埋前染色法か，あるいは包埋後染色法か，妥当な方を理由とともに解答欄に記しなさい．
２）包埋前染色法と包埋後染色法の操作手順として最も適切な語句を下記の語群より選び，それぞれ順に矢印でつなぎなさい．但し，語群の語句は両法で重複選択してもよい．
（例）包埋前染色法
包埋後染色法ａ→ｃ→ｄ→ｅ→ｆ→ｈ
ｈ→ｇ→ｆ→ｅ→ｃ→ｂ→ａ１）写真中のＡ，Ｂ，Ｃ，Ｅの構造の名称を記しなさい．

【語群】

２）この図のように，重力方向に対応した細胞内構造の局在を観察するた

ａ．電顕観察
ｆ．脱水

ｂ．超薄切

ｇ．固定

ｃ．包埋

ｄ．染色

ｅ．免疫反応と後固定めに，試料の固定から超薄切片作製までの過程で留意すべき点を一つ

ｈ．前処理（抗原露出処置）

記しなさい．

３）プロテイン A- 金が使用されるのは直接法か，間接法か，正しい方を

３）アミロプラストの沈降の他に，この写真の細胞にはどのような特徴が解答欄に記しなさい．

見られるか，二つ記しなさい．

問９．ラットを灌流固定して肝臓の透過電顕試料を作製したい．麻酔から問11．下の写真はある植物組織中の隣り合う二つの細胞の透過電顕像である．次の各設問に答えなさい．スケールバーは 1 μm を示す．

樹脂包埋までの一連の手技を簡単に説明しなさい．

１）写真中のＡと矢印の名称を記しなさい．
２）Ａの形状からこの細胞の成育段階を推測し，50 字以内で記しなさい．
100 字以内で記しなさい．
３）矢印の形状からこの細胞の生理状態を推測し，（ 5 ）問12．下の写真は B 型肝炎ウイルスコアの高倍率ネガティブ染色像であ

問13．下の写真は手指や鼻腔からよく分離される細菌の走査電顕像である．次の各設問に答えなさい．

る．写真Ａはコロニーの全体像，ＢはＡの部分拡大像である．次の各設問に答えなさい．

１）写真Ａは寒天培地上のコロニーを金属コーティング法で観察している．試料作製の操作手順と培養時における留意点を具体的に述べなさ
１）ネガティブ染色法に使用される染色剤を記しなさい．

い．

２）ウイルスの構造を 20 万倍以上で観察するとき支持膜の選択が重要で

２）この細菌は特徴的な菌配列を示すことが知られている．形状から菌名ある．どのような支持膜を使用するのがよいか．支持膜の名称と要求される特徴を記しなさい．

を記しなさい．
３）写真Ｂに示すスケールバーの長さはどのくらいか．次の中より選び，記号で答えなさい．
【ア．20 μm

（ 6 ）イ．10 μm

ウ．5 μmエ．2 μmオ．0.2 μm】

2009 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡技術認定試験問題一級技士Ⅱ（鏡体・共通技術）
12 題の問題のうち，問１～問７は全問解答し，問８～問 12 はその中から３問を選んで解答しなさい．なお，選択しなかった問の解答欄には，大きく×印を記入しなさい．

【必須問題】
問１．透過電子顕微鏡で以下のような像を観察したときに主として現れる

問５．下記写真Ａ，Ｂは，同一試料（試料はモロフォ蝶の鱗片断面）の同

コントラストの名称を記しなさい．さらに，それらのコントラスト

一視野を孔径の違う対物絞りで観察したものである．孔径の小さいの成因を簡単に説明しなさい．

対物絞りで観察した写真を選び，記号で答えなさい．また，その理

１）場所により厚さが大きく異なる試料の正焦点像

由を記しなさい．

２）小さな円形の孔が多数あるカーボン膜試料の焦点はずれの像
問２．次の文章は電子の性質について記述したものである．
（）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．
電子は（１ ）としての性質とともに（つ．これらのうち，（
（

４

電子源と（

５

）の少なくとも一方が障害物から（３ ）を（半平面に電子線を（

８

７

）と

３

も電子線は回りこみ，平面の端では（電子波とが（

４

）の距離に

６

）した電子波と（）して強度の極大と極小を生じ，（

９

一方，電子源と（５13 ）の距離にある場

14 ）とよばれる．円形孔により生じる14 ）では，（ 15 ）のまわりに（15 ）の部分を（現れる．
（

16 ）状の弱い（17 ）が18 ）とよび，その直径は（ 19 ）に

１）で細く絞り，（

２）の磁界変化により，真空中で電子線を試料表面に照射すると，電子と試料の相互作用より
（

３

），（

），特性 X 線，陰極光などが生じることが知られてい４

る．特に高い分解能の像を得る場合は（像を得る場合は（20 ）に比例する．

反比例し，電子の（４３）が，原子番号に依存した）が使用されている．

大半の SEM には，複数の異なる孔径を有する（

【語群】

５

）が備えられ，

必要に応じて観察中に孔径を交換できる．この孔径は電子線の（

ア．入射

イ．副極大

カ．観察面

ウ．回折

キ．試料

サ．加速電圧

エ．水平

ク．コイル

シ．有限

タ．同心円

ソ．波

走査電子顕微鏡（以下 SEM）は，電子銃から放出された電子をコン
デンサレンズと（表示 CRT の走査と同期して X-Y 二次元走査をしながら拡大像を得る．

）が，障害物から（３ ）は（）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．

10 ）とよば11 ）模様は透過電顕像のB

問６．次の文章中の（）

12 ）の確認に利用される．

合に生じる（A）の距離に）のために障害物の陰の部分に
３11 ）模様が観察される．この（れる（

６）とよぶ．例として，不透明な）に入射させ，平面から（ある面を観察する場合を考える．（

（

３

）がある．

ある場合に生じる（（

２ ）としての性質も持２ ）の性質に基づく現象として（

チ．粒子

テ．主極大

ト．倍率

ヌ．色収差

ネ．フレネル縞ヒ．ウェーネルト円筒

ケ．縞

ス．垂直

を決定するもので，プローブ電流，（コ．干渉

径が小さいほど（ツ．エアリーディスク【語群】

ホ．等厚干渉縞

Ａ．輝度

Ｂ．収差

Ｅ．電界放出型電子銃１）レンズの周辺部を通る電子線がレンズの軸近くを通る電子線よりも強Ｊ．走査コイル

Ｃ．対物レンズ

問３．電子レンズの収差について，以下の設問に答えなさい．
く曲げられるために生じる収差を何とよぶか．
て大きくなる収差を何とよぶか．

６ ））に影響する．孔９）を高く，対物レンズのＦ．焦点深度

Ｄ．分解能
Ｇ．二次電子

Ｈ．電子

Ｋ．チャージアップ（帯電） Ｌ．対物絞り
Ｏ．反射電子Ｐ．タングステンヘアピン電子銃
問７．引き伸ばし機は図（次ページ）に示すようなレンズ系で構成されて３）レンズ励磁電流の変動や電子の初速度の広がりが原因で生じる収差をいる．透過電子顕微鏡で撮影した円形の試料のネガを引き伸ばした

何とよぶか．

場合について，次の各設問に答えなさい．
１）ネガに写し込まれた 2 μm を示すスケールの長さは 4 cm であった．

４）３）の収差を生じる別の原因を一つ記しなさい．
５）絞りの汚れによる帯電が原因で生じる収差を何とよぶか．

撮影倍率は何倍か．

問４．以下の試料のうち，支持膜の使用が必須なものすべてを語群より選２）引き伸ばした写真に写し込まれたスケールの長さは 12 cm であった．

び，記号で答えなさい．また，支持膜はどのように処理して使用す

引き伸ばし倍率は何倍か．
３）円形の試料の直径を写真上で測定したら，1.2 cm であった．この試料の実際の直径は何 μm か．

【語群】
Ａ．エポン切片（肝臓） Ｂ．LR-White 切片（腎臓）８）は深くなる．

Ｍ．開き角（照射角） Ｎ．コンデンサ絞り２）電子線の波動性に基づく収差で，電子線の開き角が小さくなるにつれるかを解答欄に記しなさい．

８），（10 ）を小さくする必要がある．

（

ハ．波長

ヘ．位相

）は高く（

得られるが，そのためには電子銃の（

ニ．無限

ノ．レンズ

７

７

SEM で は 電 子 線 径（ ス ポ ッ ト サ イ ズ ） が 小 さ い ほ ど 高 い 分 解 能 がセ．フラウンホーファー回折

ナ．フレネル回折
フ．焦点

オ．孔径

４）焦点距離 90 mm の引き伸ばしレンズを使用して２）の倍率を得ると
き，a と b の距離は何 cm になるか．

Ｃ．凍結超薄切片（肝臓） Ｄ．ウイルスのネガティブ染色
Ｅ．フリーズレプリカ（ 7 ）【選択問題】
問８．透過電子顕微鏡を使用して試料の３次元立体構造を得るための手法

問11．油回転ポンプと油拡散ポンプを組み合わせて，真空容器の排気をを二つ記しなさい．そのうちの一つについて，観察の手順を簡単に行っている．V4 と V5 はリークバルブである．次の各設問に答え記しなさい．

なさい．

問９．シャドウイングアングルを θ とし，支持膜上に置いた微粒子のシャ
ドウイングを行った．次の各設問に答えなさい．
１）微粒子の高さを求めるために θ 以外に必要なものすべてを以下の語群より選び，記号で答えなさい．
【語群】
Ａ．加速電圧Ｂ．電顕写真で蒸着されない部分の長さ

Ｃ．対物絞りの大きさ

Ｄ．倍率

Ｅ．露出時間２）θ を変化させることによって期待できる効果を記しなさい．
３）シャドウイングに用いられる蒸着源は何か．その理由も記しなさい．

１）油回転ポンプは A，B ポンプのどちらか．

問10．次の各設問に答えなさい．

２）冷却が必要なのは A，B ポンプのどちらか．

１）走査電顕観察において，コーティングによる試料の導電処理がよく行

３）粗排気中の真空度を測定するために通常，使用される真空計は何か．

われる．コーティングの方法を二つ記しなさい．

４）上記３）の真空計の測定範囲を以下から選び，記号を解答欄に記入し２）１）で使用するコーティング材料を二つ記しなさい．

なさい．

３）コントラストが低い試料を走査電顕観察するとき，試料を傾斜させるとコントラストを高めることができる．このような効果を何とよぶか．

Ａ）1 ～ 10−1 Pa， Ｂ）1 ～ 10−2 Pa， Ｃ）1 ～ 10−3 Pa５）停止時のバルブ V1 ～ V5 のそれぞれの開閉状態を開か閉で記しなさ

４）３）でコントラストが高まるのはなぜか．

い．
問12．EDS のメリット・デメリットを WDS と比較して，それぞれ一つ記
しなさい．

（ 8 ）