論文集

論 文
−総説−
卵成熟における紡錘体の形成メカニズムと加齢による紡錘体への影響 ･･･････････････････････････････････････････････

2

星野 由美
東北大学大学院農学研究科 動物生殖科学分野−原著−
胚盤胞のグレードと出生時体重の比較検討 ･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

8

岩佐 由紀，菊地 裕幸，鈴木 麻美，山田 健市，
菅野 弘基，村川 晴生，松原 雄，吉田 仁秋
吉田レディースクリニック ART センター

1

日本 IVF 学会雑誌 Vol. 1 7，No. 2 ，2 - 7，2014

ー総説 ー

卵成熟における紡錘体の形成メカニズムと加齢による紡錘体への影響
星野 由美
東北大学大学院農学研究科 動物生殖科学分野〒 981-8555

宮城県仙台市青葉区堤通雨宮町 1-1

要 旨： 加齢などにより卵巣年齢が高まると，卵巣内で機能するホルモンにも影響が生じ，その結果として卵巣内卵子の質にも影響が現れる．一般的に卵巣年齢の高い卵巣内には成熟可能な卵子は少なく，その卵子の受精・発生能力も低く，卵子の染色体異常が主な原因であると考えられている．染色体の分配は紡錘体によってなされているため，染色体分配には紡錘体が正常に機能することが必須である．紡錘体は細胞質内に存在する最も大きな構造体であり，その有無や位置は ICSI などの顕微操作の際の一つの指標になっている．最近，我々は，紡錘体形態によって受精・発生能を評価できる可能性を報告した．本稿では，卵子の紡錘体に着目して，その制御メカニズムと成熟能評価の可能性について研究を通じて得られた最近の知見を紹介する．
キーワード：卵子，紡錘体，メカニズム，受精・発生能，加齢はじめにしく変化しているのである．
そのような変化を繰り返しながら，紡錘体の微小管は染色体の動原体部位を接着し卵子が減数分裂を再開し卵成熟をはじめると，卵細胞て両極に引っ張ることで染色体を分配する．
微小管の接質内では染色体の凝集・整列や紡錘体の形成などが観着が未完了の場合や，不適切な接着が起きた場合には，察される．
卵子が受精・発生可能な状態まで成熟するた紡 錘 体 形 成 チ ェ ッ ク ポ イ ン ト（spindle assembly

めには，紡錘体の形成とそれに続く染色体の分配は必須

checkpoint: SAC）と呼ばれる監視機構が活性化して，の現象である．紡錘体は細胞内の大きな構造体であり， すべての動原体が微小管によって正しく捕捉されるま
顕微鏡下でその形態を捉えやすい特徴があることから， で細胞周期を分裂中期（metaphase）に停止させる．
卵成熟の指標にもなり得る．
我々はこれまでに，マウス

Mad 2 や Bub 1 などのチェックポイント因子は酵母かによる研究で，紡錘体の形態，特に紡錘体極の幅が受精

らヒトまで真核細胞生物で幅広く保存されている 1，2）．

能と相関があることを報告している．今日では，ICSI
操作に関わる光学機器の進歩や Poloscope などの導入などにより，ART の現場でも成熟卵子の紡錘体の有無

紡錘体形成に影響を与える要因

や位置について確認されるようになっている．
このよう前述のとおり，紡錘体を構成する微小管は絶えず入れに，紡錘体は，体外操作において重要な指標であること

替わっているが，温度変化には敏感である．
ヒトの第一から，紡錘体について詳しく知る必要もある．
本稿では， 減数分裂中期（metaphase I: MI）または第二減数分裂中
卵成熟における紡錘体の形成メカニズムに触れながら， 期（metaphase II: MII）の卵子を４℃以下の温度にさら受精・発生能評価の可能性を紹介したい．

すと，微小管の脱重合が進み，約 10 分で微小管の極性が消失することが報告されている 3）．また，0℃の環境に紡錘体形成に関わる因子

却開始 2 分で紡錘体は縮小をはじめ染色体の整列もば

紡錘体は微小管を束ねた構造体であり，微小管はらばらになり，10 分後には微小管が細胞内に認められチューブリンが重合することにより構成されている．

なくなるとの報告もある 4）．このように紡錘体は，動的チューブリンは数十秒単位で常に重合と脱重合を繰りでありながら温度変化に敏感な構造体であるため，体外返しながら入れ替わっている．
一見，変化がなさそうにで操作を行う際には，紡錘体の特性を念頭に置きながら，見える紡錘体であるが，その構成成分である微小管は激適切な環境で作業を行うよう工夫する必要がある．

受付 2014 年 2 月 19 日 / 受理 2014 年 3 月 24 日
責任著者：星野 由美 e-mail［ hoshimi@bios.tohoku.ac.jp ］

2

おいて，MII 期卵子の紡錘体を継時的に観察すると，冷紡錘体に影響を及ぼす他の要因としては，エストロゲ

紡錘体形成・維持に関わる分子

ンレセプターに作用する環境ホルモンが挙げられる．
エストロゲンレセプターに作用する環境ホルモンとして紡錘体の形成維持に関わるものとして，MosやMAP

は，ポリ塩化ビフェニール（PCB），ビスフェノール A，フキナーゼ経路が知られている．Mos遺伝子の欠損マウス

タル酸エステル，ジエチルスチルベストロール（DES） 由来の成熟卵子を観察すると，自発的成熟培養で得られなどが報告されている．
特に，ビスフェノール A は，ヒトるような大きな紡錘体が形成される 11）．MAPキナーゼの血中や卵巣内の卵胞液中にも存在するとの報告があは，Mosの下流でリン酸化され活性化される分子であり，．
卵子受精能をもつ卵子では高い活性レベルを維持しているが，り，その影響は比較的よく研究がなされている

5，6）への影響を報告したものでは，ヒトやマウスの卵子にビ体外成熟培養（IVM）で長時間培養させた過成熟卵子ではスフェノール A を処理すると紡錘体形成不全や染色体

その活性レベルは低い．
また，MAPキナーゼは中心小体

分散などが高頻度で起こり，MII 期への進行が抑制され

このようの構成分子に影響を与えるとの報告がある 12）．

ると報告されている．

に，MosやMAPキナーゼを介したシグナル伝達経路は

6，7）

紡錘体形成・維持やその後の受精において重要な役割を

紡錘体形成の分子メカニズム果たしている．
著者らは，卵成熟に関わる分子を解析する中で Akt/

紡錘体が形成され，適切に機能するためには，非常にProtein kinase B（PKB）
が減数分裂特異的に発現し，分複雑な分子メカニズムによってその動的変化は調節さ

裂中期では紡錘体上に局在することを明らかにした 13）．

れている 8，9）．卵子の紡錘体形成メカニズムは，体細胞一 般 的 にAktの 活 性 化 に は，308番 目 の ス レ オ ニ ン（有糸分裂）のそれと異なる．
すなわち，哺乳動物の卵子 （Thr308）と473番目のセリン（Ser473）の２ヶ所のリンには中心体が存在せず，中心体非依存的に紡錘体形成が酸化が必須であると考えられているが，著者らは，マウス

そのメカニズムの概要は次の通りでなされる（図 1）10）．

の卵子においては2つのリン酸型Aktが異なる局在を示ある．
まず，卵成熟の開始準備が整った卵子では，細胞質し，特に分裂中期においてはThr308リン酸型Aktが紡錘内に多数の微小管形成中心（microtubule organizing

体極及び微小管形成中心に，Ser473リン酸型Aktが紡

center: MTOC）が形成される．
その MTOC は，細胞質中

錘体上に局在することを明らかにしている 14）．

の dynein などのモータータンパク質の作用を受けて核Aktの役割を調べるため，リン酸化特異的阻害剤（SH-6）

膜崩壊に寄与する（図 2）．
その後，dynein の作用によりを培地に添加して IVM を行ったところ，SH- 6 は濃度

MTOC は 2 つのまとまりになる．
このまとまりが，紡錘依存的に卵核胞崩壊後の核膜消失と減数分裂後期の紡体の極となり，Eg 5 により微小管が束ねられて，紡錘錘体形成・維持，さらに受精後の第 2 極体の放出を抑制体が形成される（図 3）．

一方，別の阻害剤（Akt inhibitor X）を用いてAkt
した 14）．

体細胞
MTOC

微小管

核
中心体
（星状体）

卵子

染色体

微小管
MTOC

卵核胞

図1

染色体

体細胞と卵子における紡錘体形成の比較

体細胞では，細胞質中に存在する 1 対の中心体（星状体）が紡錘体の極になる．一方，卵子では，細胞質中に散在する MTOC が寄り集まることで紡錘体の極を形成する．

3

A

B

C

+

+

ｰ

ｰ

MTOC

卵核胞

dynein

ｰ

+
+

D

E

図2

F

核膜崩壊のメカニズム

GV 期で減数分裂を停止している卵細胞質中にはほとんど MTOC は見られないが（A），やがて細胞質中に多数の MTOC が形成され（B），dynein 等の微小管をプラス方向に移動するモータータンパク質が核膜や微小管に結合する（C）．モータータンパク質の作用により MTOC は互いに集合し，さらに核に向けて移動する（D）．モータータンパク質が微小管を引き，微小管に生じた張力が核膜に伝わり（E），核膜が裂ける（F）．

染色体

Eg5

染色体

Eg5

dynein

図３

卵子の紡錘体形成メカニズム

Dynein 等のモータータンパク質の作用により MTOC は 2 つのまとまりになる．さらに，2 本の微小管に結合しマイナス方向に向かって移動するモータータンパク質（Eg5）によって微小管は束ねられ紡錘体が形成される．

のリン酸化および下流標的（mTOR，p 70S 6 キナーゼ） 局在を示す．
特異的ペプチドを用いて，それぞれのリンのリン酸化を阻害すると MTOC の形成が誘起され，卵酸化を個別に阻害すると，Thr 308 リン酸型 Akt の阻害

核胞崩壊が早期に観察された．
さらに，微小管を束ねるは，分裂中期の紡錘体形態が維持されず，受精後の第２モータータンパク質（Eg 5）が早期に発現することによ

極体の放出が不完全となった．一方，Ser 473 リン酸型

り，紡錘体の形成が早まった．このことから，Akt のキ

Akt の阻害は，受精後の第２ 極体の放出を抑制した 14）．

ナーゼ活性のレベルが紡錘体形成・維持に影響するこ

このことから，2 つのリン酸型 Akt は独立して機能し，とが明らかとなった．

分裂中期における紡錘体維持と受精後の第 2 極体放出

前述の通り，Akt の 2 つのリン酸化は卵子では異なる4に関与することを明らかにした．

CLIP- 170）および微小管抑制因子（微小管不安定化因

紡錘体形態と受精能との関係

子；MCAK）の発現と局在を調べたところ，受精能の高IVM で得られた成熟卵子の紡錘体形態は，体内成熟卵

い卵子では，CLIP- 170 が紡錘体上に強く発現し，微小子のものと異なる．
また，IVM の培養条件によっても紡管の重合が促進されているのに対し，第１ 極体放出直錘体形態は異なる．
すなわち，ゴナドトロピン成熟培養後や過成熟の卵子では MCAK の発現が強く，脱重合がでは紡錘体が小さく体内成熟卵子に近い形態であるの促進されていることが明らかとなった（未発表データ）．

に対し，自発的成熟培養では大きな紡錘体が形成される． これらの結果は，紡錘体の形態，
特にPCMの動態観察にまた，基礎培地の違いによる影響を調べてみると，HTF

より，卵子の受精能を評価できる可能性を示している．

培地よりも Waymouth’s 培地で体内成熟に近い形態が観察される 15）．一般的に，IVM で得られた成熟卵子の加齢（過成熟）卵子の特徴

受精・発生率は，体内成熟卵子と比べて低い傾向にある．
そこで，成熟卵子の紡錘体形態と受精・発生能について

過成熟によるエイジング卵子では，MII期の染色体の散解析したところ，紡錘体の形態が受精・発生に影響を与在や早期染色体分離（premature chromatin separation:

また，紡錘体形態を経時えることが明らかとなった 15）．

PCS）が高頻度で観察される．
また紡錘体は伸長し，タル型

的 に 観 察 す る と 中 心 小 体 周 辺 物 質（pericentriolarの大きな形態を示す（図5）．
これは前述の通り，
紡錘体極にmaterials: PCM）の 2 点の局在に特徴的な変化が見ら存在する2点のPCMが離れ，微小管の脱重合が進行した

れた．
すなわち，第１ 極体放出直後の第二減数分裂中期

結果，生じるものと考えられている．
さらにエイジングが（MII 期）卵子の PCM は離れているが，時間の経過に伴進むと中心小体の機能が低下し，紡錘体極が複数形成されいその 2 点は近接し，再び離れるという変化が観察されるため，受精により精子が卵細胞質に侵入しても，第２極た．
それぞれのタイミングで体外受精を実施したところ， 体を放出できなくなる．
PCM が一時的に寄るタイミングが受精能の最も高いポ
15）
．さらに，
イントであることが明らかになった（図 4）

卵子の質の評価

卵成熟促進因子（maturation promoting factor: MPF）の活性を調べたところ，PCM の２ 点が寄り，受精・発

本稿で述べたとおり，紡錘体の形態は卵子の受精・発生能が高まるポイントで最も高くなることが明らかと生能と相関があり，卵子の質を評価するひとつの指標と

なった．

なり得る．
紡錘体形成・維持に関わる分子メカニズムの

この過程の微小管形成促進因子（微小管安定化因子；

詳細が明らかになれば，科学的な知見に基づき紡錘体形

PCM 2 点間の長さ
長
高

短

長

第 1 極体放出
PCM

MTOC 活性MPF 活性
受精・発生能低phaseⅠ
MⅠ期

図４

phaseⅡ

phaseⅢ時間

MⅡ期

MII 期卵子の形態的変化と受精・発生能との関係

第１極体放出直後（phase I）の MII 期卵子では，紡錘体の両極に 2 点ずつ形成されている PCM は離れているが，時間の経過にともないその 2 点は近接し (phase II)，再び離れる (phase III)．受精・発生能は，PCM が一時的に寄るタイミングで最も高く，MTOC 活性と MPF 活性が高まるポイントと
一致する．

5

新鮮卵子

エイジング卵子
極体
透明帯
囲卵腔

MAPK

紡錘体

ATP

MPF

表層顆粒

MAPK

ATP

MPF

ミトコンドリア

エイジングにともなう卵子細胞小器官の形態変化
新鮮卵子

図５

エイジング卵子
退行が進んだ状態で紡錘体から離れる

極体

インタクトな状態で紡錘体付近に位置

透明帯

網目状の糖鎖構造をもつ

硬質化する

囲卵腔

小さい

大きい

表層顆粒

卵母細胞膜下に均一に存在

表層から移動し一部エキソサイトーシスする

ミトコンドリア

インタクトな状態で存在

膜電位が低下染色体

インタクトな状態でメタフェイズプレート上に整列

PCSを示すあるいは散在する

紡錘体

紡錘糸が極で束ねられコンパクトな形態を維持

形態が伸長する

哺乳動物卵子における新鮮卵子とエイジング卵子の形態的変化の比較

受精能の高い卵子では，MAP キナーゼ（MAPK）や卵成熟促進因子（MPF）の活性が高く維持されているのに対し，エイジングが進むとこれらの活性は急激に低下し，それと同時に形態的変化も生じる．

態で卵子の受精・発生能を評価できる可能性がある．
こof chilling to 0 degrees C on the morphology of meiotic
spindles in human metaphase II oocytes. Fertil. Steril., 75:れが実現されれば，多数の卵子から受精・発生能の高い
769-777, 2001.
（質の高い）卵子を選別することが可能となる．
体細胞に 5） Peretz, J., Craig, Z. R., Flaws, J. A.: Bisphenol A inhibits
おける研究では，紡錘体形成チェックポイントの破綻が，follicle growth and induces atresia in cultured mouse antral
follicles independently of the genomic estrogenic pathway.
染色体の異数性を誘発させる直接的な原因であると報16）Biol. Reprod., 87: 63, 2012.
告されている ．染色体や紡錘体の動的変化をもたら
6） Machtinger, R., Combelles, C. M., Missmer, S. A., Correia, K.
す分子メカニズムを解明できれば，受精能の高い成熟卵
F., Williams, P., Hauser, R., Racowsky, C.: Bisphenol-A and子の獲得に繋がると考えられる．
human oocyte maturation in vitro. Hum. Reprod., 28: 27352745, 2013.
7） Lenie, S., Cortvrindt, R., Eichenlaub-Ritter, U., Smitz, J.:
Continuous exposure to bisphenol A during in vitro follicular
参考文献
development induces meiotic abnormalities. Mutat. Res., 651:
1） Sun, S. C., Kim, N. H.: Spindle assembly checkpoint and its
71-81, 2008.
regulators in meiosis. Hum. Reprod. Update, 18: 60-72, 2012.
8） Helmke, K. J., Heald, R., Wilbur, J. D.: Interplay Between2） Suijkerbuijk, S. J., Kops, G. J.: Preventing aneuploidy: theSpindle Architecture and Function. Int. Rev. Cell. Mol. Biol.,contribution of mitotic checkpoint proteins. Biochim. Biophys.
306: 83-125, 2013.
Acta., 1786: 24-31, 2008.
9） Lara-Gonzalez, P., Westhorpe, F. G., Taylor, S. S.: The spindle
3） Gomes, C., Merlini, M., Konheim, J., Serafini, P., Motta, E. L.,
assembly checkpoint. Curr. Biol., 22: R966-980, 2012.
Baracat, E. C., Smith, G. D.: Oocyte meiotic-stage-specific10） Manandhar, G., Schatten, H., Sutovsky, P.: Centrosome
differences in spindle depolymerization in response to
reduction during gametogenesis and its significance. Biol.
temperature changes monitored with polarized field
Reprod., 72: 2-13, 2005.
microscopy and immunocytochemistry. Fertil. Steril., 97: 71411） Coticchio, G., Sereni, E., Serrao, L., Mazzone, S., Iadarola, I.,
719, 2012.
Borini, A.: What criteria for the definition of oocyte quality?
4） Zenzes, M. T., Bielecki, R., Casper, R. F., Leibo, S. P.: Effects
Ann. N. Y. Acad. Sci., 1034: 132-144, 2004.

612） Sun, Q. Y., Schatten, H.: Regulation of dynamic events by
microfilaments during oocyte maturation and fertilization.
Reproduction, 131: 193-205, 2006.
13） Hoshino, Y., Yokoo, M., Yoshida, N., Sasada, H., Matsumoto,
H., Sato, E.: Phosphatidylinositol 3-kinase and Akt participate
in the FSH-induced meiotic maturation of mouse oocytes.
Mol. Reprod. Dev., 69: 77-86, 2004.
14） Hoshino, Y., Sato, E.: Protein kinase B (PKB/Akt) is required
for the completion of meiosis in mouse oocytes. Dev. Biol.,
314: 215-223, 2008.
15） Sakai, C., Hoshino, Y., Sato, Y., Sato, E.: Evaluation of
maturation competence of metaphase II oocytes in micebased on the distance between pericentriolar materials of
meiotic spindle: distance of PCM during oocyte maturation. J.
Assist. Reprod. Genet., 28: 157-166, 2011.
16） Dobles, M., Liberal, V., Scott, M. L., Benezra, R., Sorger, P. K.:
Chromosome missegregation and apoptosis in mice lacking
the mitotic checkpoint protein Mad2. Cell, 101: 635-645, 2000.

7

日本 IVF 学会雑誌 Vol. 1 7，No. 2 ，8 - 11，2014

ー原著 ー

胚盤胞のグレードと出生時体重の比較検討
岩佐 由紀，菊地 裕幸，鈴木 麻美，山田 健市，
菅野 弘基，村川 晴生，松原 雄，吉田 仁秋
吉田レディースクリニック ART センター

〒981-1105

宮城県仙台市太白区西中田 2 丁目 23-5

要 旨： 近年，生殖補助医療により出生した児の体重について，後方視的に検討した文献が散見される．
今
回我々は，単一胚盤胞移植にて，妊娠，出産に至った症例を対象とし，内部細胞塊，栄養外胚葉それぞれのグ
レードと出生時体重，胎盤重量に関連が認められるか検討を行った．
内部細胞塊のグレードによる比較では，
出生時体重，胎盤重量ともに差は認められなかったが，栄養外胚葉のグレードで比較すると，グレードが良好な胚由来の方が出生時体重，胎盤重量とも増加していた．
新鮮胚と凍結融解胚に分けて行った検討でも同様に，栄養外胚葉のグレードの良好な胚で出生時体重，胎盤重量が増加する傾向が認められた．
着床まではもちろんのこと，
その後の胎児の発育にも栄養外胚葉の評価が深く関わっている可能性が示唆された．
キーワード：栄養外胚葉，
内部細胞塊，
凍結融解胚，
出生時体重，
胎盤重量緒

言

TEのグレードの評価が可能であった143 例を対象とした．
〈検討①〉

生殖補助医療（assisted reproductive technology :Gardner 分類にて ICM 評価が A の群（ICM-A 群）と B

ART）において，良好胚を選択するための手段として胚または C の群（ICM-BC 群）に分け，出生時平均体重と盤胞培養は広く普及し，vitrification 法による凍結保存

平均胎盤重量を比較した．また，TE についても同様にも確立しているが，安全性については未知の部分も多い． TE 評価が A の群（TE-A 群）と B または C の群（TE-BC
近年，ART により出生した児を後方視的に検討した文献が散見される群）に分け，
比較を行った．

．特に出生児の平均体重に関して 〈検討②〉1- 3）は，移植胚の発育時期での比較では，初期胚と胚盤胞で新鮮胚移植群（新鮮群）と凍結融解胚移植群（融解

差はないという報告がある 一方，初期胚よりも胚盤胞群）のそれぞれにおいて，検討①同様の比較を行った．
統で増加するとの報告もある 2）．また，新鮮胚と凍結融解

計学的有意差検定は Student’s t 検定を用いた．

1）

胚の比較では，凍結融解胚で出生児の体重が増加するとしかし，胚盤胞のグレーの報告が多くなされている 2- 4）．

結ドについては，グレードの良好な胚ほど高い妊娠率が得

果られ，流産率は低下することが知られているものの，出 〈検討①〉
生児の体重との関連を検討した報告はほとんどない．
今

ICMの比較では，ICM-A群83例，ICM-BC群60例で回我々は，胚移植時の胚盤胞のグレードと出生時体重，あり，母体の妊娠時年齢，平均在胎日数に差は認められな．ICM-A群の出生時平均体重，平均胎盤
胎盤重量について，
内部細胞塊（inner cell mass : ICM） かった（表1-1）と栄養外胚葉（trophectoderm : TE）それぞれのグレー

重 量 は そ れ ぞ れ3169.5±388.3g，586.4±96.3g，ドと関連が認められるか検討を行った．

ICM-BC群 で は そ れ ぞ れ3124.8±369.4g，596.8±
102.4gで両群間に差は認められなかった（表1-1）．TE対 象・方 法の比較では，TE-A群73例，TE-BC群70例であり，母体の妊娠時年齢，平均在胎日数に差は認められなかった

当院は産科を併設していることから，ART 後の分娩の （表1-2）．TE-A群の出生時平均体重，平均胎盤重量はそフォローを行っている．
当院にて2007年 4月〜 2012年 4

れ ぞ れ3224.5±349.2g，609.4±92.2g，TE-BC群

月の間に，新鮮胚移植周期または凍結融解胚移植周期にでは3073.7±397. 3g，571. 4 ± 102. 1g であり，出生て単一胚盤胞移植を施行し，妊娠・分娩まで経過を追跡

時体重，
胎盤重量とも TE-A 群が TE-BC 群より有意に重できた症例のうち，Gardner 分類 3 以上で移植胚のICM， かった（P ＜ 0. 05）（表 1- 2）．
受付 2014 年 1 月 6 日 / 受理 2014 年 5 月 17 日
責任著者：岩佐 由紀 e-mail［ repro@yoshida-lc.jp ］

8

表 1-1

ICM のグレード別での出生児平均体重，平均胎盤重量の比較
ICM による比較

ICM-A 群ICM-BC 群

出生児数

83

60

（経腟：帝王切開）（54：29）（40：20）＊
妊娠時年齢（歳）32.9 ± 3.3

33.8 ± 3.3

NS在胎日数 ＊

277.1 ± 8.4

279.1 ± 8.7

NS＊
出生時体重（g）

3169.5 ± 388.3

3124.8 ± 369.4

NS＊
胎盤重量（g）

586.4 ± 96.3

596.8 ± 102.4

NS＊ : mean ± S.D.

表 1-2

P値

NS : not significant

TE のグレード別での出生児平均体重，平均胎盤重量の比較
TE による比較

TE-A 群

TE-BC 群

出生児数

73

70

（経腟：帝王切開）（50：23）（44：26）＊
妊娠時年齢（歳）33.3 ± 3.5

33.2 ± 3.2

NS在胎日数 ＊

277.4 ± 8.4

278.5 ± 8.8

NS＊
出生時体重（g）

3224.5 ± 349.2

3073.7 ± 397.3

P ＜ 0.05＊
胎盤重量（g）

609.4 ± 92.2

571.4 ± 102.1

P ＜ 0.05＊ : mean ± S.D.

P値

NS : not significant〈検討②〉
新鮮群 48 例と融解群 95 例の比較を表 2 に示す．出考察

生時体重，平均胎盤重量は新鮮群でそれぞれ 3025. 2

近年，体外受精児の予後調査において，特に出生時体± 316. 2g，571. 3 ± 90. 3g， 融 解 群 で は 3214. 2 ±重に着目した報告 1- 5）が散見される．俵ら 5）は移植時の394. 7g，600. 6 ± 101. 7g と，新鮮群より融解群で児胚盤胞のグレードを ICM と TE で分け，それぞれで出生の体重は有意に増加しており（P< 0. 05），胎盤重量も時体重との関連を調査し，ICM・TE ともに評価が下が増加する傾向が認められた．さらに，分娩時出血量も新るにつれ，出生児の体重が減少したと報告している．
今

鮮群 485. 0 ± 306. 6g，融解群 620. 2 ± 375. 5g と融解

回我々の検討では，ICM のグレードによる児の体重，胎群で有意に増加していた（P< 0. 05）（表 2）．新鮮群と盤重量に差は認められなかったが，TE の比較では俵ら

融解群のそれぞれで検討①と同様の比較を行った結果の報告と同様にグレードの良好な胚由来で児の体重，胎を表 3- 1，3- 2 に示す．ICM のグレードによる比較で盤重量は増加していた．
新鮮胚と凍結融解胚のそれぞれは新鮮群，融解群とも出生時平均体重，平均胎盤重量にで検討を行った結果でも，ICM のグレードによる差は差は認められなかったが，TE の比較では新鮮群で出いずれにも認められなかったが，TE のグレードで比較

生 時 平 均 体 重 が TE-A 群 3121. 2 ± 224. 9g，TE-BC

すると，新鮮胚のグレードの良好な胚由来でより出生時

群 2943. 9 ± 361. 2g と TE-A 群 で 有 意 に 増 加 し た

体重が増加することが認められた．

（P< 0. 05）．融解群の出生時体重，胎盤重量についても

TE は胎盤へ分化していく細胞であるが，Ahlström

有意差は認められなかったものの，いずれも TE-A 群

ら 6）は Gardner の分類に用いられる胞胚腔の拡がりとで増加する傾向が認められた（表 3- 2）．分娩時出血量hatching の程度，ICM の細胞数，TE の細胞数という 3については，グレードによる差はいずれにも認められつの形態学的評価のうち，特に生産率の重要な予測因子なかった（表 3- 1，3- 2）．

は TE であり，着床後の ICM の発育にも TE の機能が重9表2新鮮群と融解群における出生時平均体重，平均胎盤重量の比較
新鮮群

融解群

出生児数

48

95

＊
妊娠時年齢（歳）32.9 ± 3.3

33.4 ± 3.4

NS

在胎日数

276.9 ± 7.7

278.4 ± 9.0

NS（経腟：帝王切開）（34：14）（60：35）＊
出生時体重（g）

3025.2 ± 316.2

3214.2 ± 394.7

P ＜ 0.05＊
胎盤重量（g）

571.3 ± 90.3

600.6 ± 101.7

NS（P=0.09）＊
分娩時出血量（g）

485.0 ± 306.6

620.2 ± 375.5

P ＜ 0.05＊＊ : mean ± S.D.

表 3-1

P値

NS : not significant

新鮮群における，ICM，TE それぞれのグレード別での出生児平均体重，
平均胎盤重量の比較
ICM

ICM-A 群ICM-BC 群

出生児数

26

22

＊
出生児体重（g）

3019.7 ± 291.5

3031.6 ± 350.0

NS

556.3 ± 82.0

589.1 ± 98.1

NS

分娩時出血量（g）

441.8 ± 296.6

534.0 ± 317.1

NSTE

TE-A 群（ｎ）

TE-BC 群（ｎ）

P値

出生児数

22

26

＊
出生児体重（g）

3121.2 ± 224.9

2943.9 ± 361.2

P ＜ 0.05＊
胎盤重量（g）

589.2 ± 73.2

556.2 ± 101.4

NS（P=0.21）＊
分娩時出血量（g）

502.1 ± 280.6

471.2 ± 330.9

NS＊
胎盤重量（g）＊＊ : mean ± S.D.

P値

NS : not significant

表 3-2 融解群における，ICM，TE それぞれのグレード別での出生児平均体重，
平均胎盤重量の比較
ICM

ICM-A 群ICM-BC 群

出生児数

57

38

出生児体重 (g) ＊3237.8 ± 409.4

3178.8 ± 374.1

NS

胎盤重量 (g)600.1 ± 99.8

601.3 ± 105.9

NS

分娩時出血量 (g) ＊601.1 ± 395.9

649.7 ± 344.8

NSTE

TE-A 群

TE-BC 群

P値

出生児数

51

44

出生児体重 (g) ＊3269.1 ± 384.2

3150.5 ± 401.5

NS(P=0.14)

胎盤重量 (g) ＊618.0 ± 98.7

580.3 ± 102.5

NS(P=0.07)

分娩時出血量 (g) ＊641.3 ± 402.1

595.1 ± 344.3

NS＊ : mean ± S.D.

10＊

NS : not significant

P値

要であると報告している．さらに，TE の評価が下がる

検討．日 IVF 会誌，15: 7-9, 2012.
3） 溝部大和・福嶋倫子・秋吉俊明・南 志穂・松尾 完・山口
につれ，妊娠高血圧症候群の頻度が増加する傾向がある
敦巳・岡本純英：新鮮胚移植および保存胚移植により妊娠しとの報告もあり 5），着床まではもちろんのこと，その後出生した児の比較検討．日受精着床会誌，30: 265-267, 2013.
の妊娠，胎児の発育，
分娩経過にもTEのグレードが深く 4） Pelkonen, S., Koivunen, R., Gissler, M., Nuojua-Huttunen,
S., Suikkari, A.-M., Hydén-Granskog, C., Martikainen, H.,
関わっている可能性がある．
Tiitinen, A., Hartikainen, A.-L.: Perinatal outcome of
今回の我々の検討からも ICM より TE のグレードがchildren born after frozen and fresh embryo transfer : the
出生児の体重に影響を及ぼしていることが示唆された．
Finish cohort study 1995-2006. Hum. Reprod., 25: 914-923,
また，凍結融解胚由来の児で新鮮胚由来の児より出生体2010.
重が増加することから，凍結・融解の過程を経ることが 5） 俵 史子・石井美都・平林由佳・金山尚裕：胚盤胞の評価と妊娠合併症，出生児との関係．日受精着床会誌，25：199-203，
出生児の体重増加の一因となることが推察される．
新鮮2008．
胚由来の児においてはTEのグレードが良好な胚由来で 6） Ahlström, A., Westin, C., Reismer, E., Wikland, M., Hardarson,
より出生時体重が増加したが，凍結融解胚由来の児にお
T.: Trophectoderm morphology: an important parameter forpredicting live birth after single blastocyst transfer. Hum.
いてTEのグレードによる出生時体重の差が認められなReprod., 26: 3289-3296, 2011.
かったことから，凍結・融解による影響を受ける程度が
7） 澁谷ゆり・西中千佳子・中條友紀子・京野廣一：アンケートに胚により異なっている可能性も推察される．
よる凍 結胚移植児の発育調査．日受精着床会誌，27: 297出生児の体重については，新鮮胚と比較して凍結融解
303，2010．
胚で増加することが近年多く報告されている 2- 4）．凍結 8） Wikland, M., Hardarson, T., Hillensjö, T., Westin C., WestlanderG., Wood M., Wennerholm U.B：Obstetric outcomes after transfer
融解胚由来の児の発育調査によると，6 歳までの身体的，
of vitrified blastocysts. Hum. Reprod., 25: 1699-1707, 2010.

運動的発育には新鮮胚由来の児と差がないと報告されており 7），このことから，凍結融解操作が出生後の児の発育へ及ぼす影響は少ないと考えられる．
しかし，凍結融解胚盤胞由来の妊娠では分娩時の出血量が多くなるとの報告もあり 8），今回我々の検討においても同様の結果が得られた．
凍結，融解といった体外操作の過程で，胚にいつ，どのような影響が与えられているのかは不明であるが，分娩時の出血傾向，胎児の体重に関してみると，胎盤へと分化していくTEの細胞により強い影響が与えられている可能性がある．
今回の検討は，当院での分娩症例かつ正期産のみを対象としており，基本的にリスクの低い症例での検討となっている．
移植胚のグレード別，妊娠週数を加味したデータなど，細かく検討していくためには対象を拡大し，データを増やしていくことが不可欠となる．ART における安全性を確立するためにも，胚の評価と分娩予後までの関連を検討し，更にエピジェネティックな問題も含
めて今後データの蓄積をしていくことが重要と考える．

参考文献
1） 沖津 摂・高橋沙織・森脇良夢・小橋未和・清川麻知子・小田隆司・三宅 馨：初期胚の体外培養期間の延長が ART 出
生児の体重および性比に及ぼす影響．日受精着床会誌，27:281-285，2010.
2） 角本知世・片岡信彦・緒方洋美・十倉陽子・山田 聡・緒方
誠司・水澤友利・松本由紀子・岡本恵理・苔口昭次・塩谷雅英：
凍結融解胚移植と新鮮胚移植により妊娠し出生した児の比較

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