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ニュースリリース

令和６年 4 ⽉ 17 ⽇
国⽴⼤学法⼈ 千葉⼤学
東海国⽴⼤学機構 名古屋⼤学
国⽴研究開発法⼈ 理化学研究所

組換え植物細胞を⾃発的に分化させる技術の開発
ー細胞・組織培養の省⼒化に貢献ー

千葉⼤学⼤学院園芸学研究院の井川智⼦准教授らの研究グループ、千葉⼤学国際⾼等研究基幹の南川舞准教
授、名古屋⼤学⼤学院⽣命農学研究科の榊原均教授、理化学研究所環境資源科学研究センター（理研 CSRS）の⼩嶋美紀⼦専⾨技術員らとの共同研究により、植物の発⽣過程において細胞分裂や形態形成を制御する役割を持つ遺伝⼦を細胞に導⼊して発現させることで、培地にホルモンなどの植物成⻑調節物質（Plant GrowthRegulator: PGR）注１）を加えなくても組換え細胞が⾃発的に分裂・増殖し、器官分化する技術を開発しました。さらに、分化過程における細胞内ホルモン濃度の変化と発現パターンを変化させる遺伝⼦を明らかにしました。
この成果により、植物細胞の分化制御に適切な PGR を添加するための条件を模索する作業を割愛でき、培養による分化制御⽅法を⼤きく変⾰できる可能性を⽰しています。
本研究成果は、2024 年 4 ⽉ 3 ⽇に国際学術誌 Frontiers in Plant Science にオンライン公開されました。
■研究の背景植物では１つの細胞から新しい個体を再⽣する「分化全能性」が 1950 年代に実験的に証明されていました。これは培養培地への植物成⻑調節物質（PGR）添加によって達成されたため、証明から約 70 年経った現在でも植物細胞の分化制御には培地に PGR を加える⽅法がとられています。
遺伝⼦導⼊やゲノム編集といったバイオテクノロジー育種によって改良植物を作製するためには、ゲノムを改変した細胞を分化させて植物体にまで再⽣させる必要がありますが、分化を導くPGR 添加条件は改変対象の植物種ごとに異なるため、バイオテクノロジー育種に取り組む前提として、細胞から個体を分化させる培養技術を個別に構築しておく必要があります。しかし、最適な分化誘導条件を確⽴するまでには、多くの試験区での検証が必要となり、作業が煩雑となるケース

図１ 従来の組織培養による植物の体細胞からの個体発⽣技術を基盤とした遺伝⼦組換え体作出が多い点が現状と課題です（図１）。

近年、植物の発⽣や形態形成を制御する転写因⼦注 2）（Developmental Regulator: DR）が複数同定され、これらを組織⽚の体細胞で過剰発現させると従来法よりも分化誘導効率が促進される効果が報告されていました。しかし、培養中の培地への PGR 添加は依然として要求されており、完全な PGR フリー培養条件下での組織培養における分化誘導例はありませんでした。
■研究の成果本研究ではシロイヌナズナ（Arabidopsis thaliana）由来の BBM（BABYBOOM）注 3）と WUS（WUSCHEL）

注 4）の 2 種類の DR 遺伝⼦をタバコ（Nicotiana tabacum）の葉⽚細胞へ導⼊し，その後 PGR フリー培地上で培養して分化誘導における効果を評価しました。解析では、様々な発現制御法および DR 遺伝⼦の改変を検証しました。その結果、遺伝⼦を導⼊しなかった葉⽚、BBM または WUS のみを導⼊した葉⽚、改変しない
BBM と WUS を導⼊した葉⽚は培養 4 週間後に枯死したのに対して、BBM の転写活性増強型（BBM-VP16）

および WUS を導⼊した葉⽚からは、培養 4 週間後に細胞が脱分化を起こしてカルス注 5）が形成されました(図２上段︔△)。さらに BBM-VP16 と WUS 転写抑制増強型の改変遺伝⼦（SRDX-WUS または SRDX-WUSm1）を導⼊した葉⽚からは培養 2 週間後にカルスが発⽣し、その 4 週間後には再分化が起こり芽も発⽣しました（図２下段;⇧）。

図２ BBM-VP16 と SRDX-WUSm1 遺伝⼦を共導⼊すると PGR フリーの培地上で培養しても脱分化（△）に加えて再分化（⇧）も誘導される△︓カルス（脱分化した細胞の塊）、⇧︓再分化した芽

これら分化体であるカルスや芽は組換え細胞から構成され、導⼊した BBM や WUS 遺伝⼦が発現していることも確認されました。再分化も誘導された BBM-VP16＆SRDX-WUSm1 を導⼊した葉⽚では、細胞内のオーキシンとサイトカイニンの上昇がより顕著であり、オーキシン応答、アミノ酸代謝、器官形成に関与する遺伝⼦の発現変動が顕著に検出されました。オーキシンとサイトカイニンは植物の細胞の分化を引き起こす代表的な PGR として知られており、従来の細胞・組織培養では合成 PGR を培地に添加して分化制御に利⽤されています。本研究では改変型の BBM と WUS 遺伝⼦を共導⼊した結果、細胞内の天然のオーキシンとサイトカイニン濃度が上昇して、分化反応を導いたと考えられました。そのため、発現が変化した遺伝⼦中にオーキシン応答性のものが検出された、と考えられます。また、アミノ酸代謝や器官形成に関与する遺伝⼦の発現が変化していたのは、細胞の分化反応に伴う細胞内の⽣理や形態の変化を反映していると考えられます。
■今後の展望本研究で開発した⽅法はレタスやペチュニアなどの園芸植物種でも、葉⽚細胞からの分化を誘導しました（図３）。分化反応⾃体が遺伝⼦組換え細胞であることの指標ともなるため、DR と同時に⽬的遺伝⼦を導⼊することで、組換え体を作製しやすくなります。
本成果を基盤として、現在は他植物種での汎⽤性拡⼤を⽬標に、異種間での BBM および WUSの機能保存性の追究や、望みのタイミングで分化を誘導するために厳密な発現制御法の開発を展開させています。

図３ シロイヌナズナ由来の BBM-VP16 と SRDX-WUSm1
はナス科ペチュニア、キク科レタスでも機能して分化を誘導した

■⽤語解説注１）植物成⻑調節物質 (PGR)︓植物ホルモンのような分化誘導物質
注 2）転写因⼦︓他の遺伝⼦の発現を調節するタンパク質
注 3）BBM タンパク質︓植物の受精卵からの胚発⽣に関与する転写因⼦
注 4）WUS タンパク質︓植物の形態形成に関与する転写因⼦
注 5）カルス︓器官や組織を構成していた細胞がその個性を失い、分裂を優先させて形成された細胞の塊■研究プロジェクトについて
本研究は、以下の事業の⽀援を受けて⾏われました。
・科学研究費助成事業（JP17K07600，JP19H04852，JP23H04732）
・JST 次世代研究者挑戦的研究プログラム■論⽂情報
タイトル︓Autonomous differentiation of transgenic cells requiring no external hormone application:
the endogenous gene expression and phytohormone behaviors.
著者︓Sato Y., Minamikawa M.F., Pratama B.B., Koyama S., Kojima M., Takebayashi Y.,Sakakibara H.,
Igawa T.
雑誌名︓Frontiers in Plant Science
DOI︓https://doi.org/10.3389/fpls.2024.1308417