Journal of Assisted Reproduction
2013

Vo l.16 No.2

Vol.16 No.2

日本IVF学会雑誌

ISSN 1881-9028

日本IVF学会雑誌
Vol.16 No.2

2 013

論文集

論 文
− テクニカルノート −経腟超音波ガイド下での簡便な胚移植法 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

2

古井 憲司，松浦 大創，藤田 智久，野村 昌男，北川 武司
医療法人愛育会クリニックママ−総説−
ガラス化法による卵巣組織凍結の実際 - 新たながん・生殖医療 ････････････････････････････････････････････････････････

7

鈴木 直 1，橋本 周 2，五十嵐 豪 1，高江 正道 1，洞下 由記 1，
杉下 陽堂 1，竹之下 誠 3，細井 美彦 4，石塚 文平 5，森本 義晴 21

聖マリアンナ医科大学産婦人科学 / IVF なんばクリニック / 3 イブバイオサイエンス / 4 近畿大学生物理工学部遺伝子工学科2/ 5 聖マリアンナ医科大学高度生殖医療技術開発講座

1

日本 IVF 学会雑誌 Vol. 1 6，No. 2 ，2 - 6，2013

ー テクニカルノート ー経腟超音波ガイド下での簡便な胚移植法
古井 憲司，松浦 大創，藤田 智久，野村 昌男，北川 武司
医療法人愛育会クリニックママ〒 503-0807

岐阜県大垣市今宿 3-34-1

要 旨： ART における胚移植法には，プローブを腹部に当てて行う経腹法と，プローブを腟内に挿入して行う経腟法がある．経腹法は，予め尿や生理食塩水で膀胱を充満させる必要があり，患者に苦痛を強いることとなる．一方経腟法は，患者に尿を溜めてもらう必要がなく，子宮内膜のように比較的腟に近い部
分において明瞭な断層像を得られ，ピンポイントで狙いどおりの位置に胚移植が可能であるが，従来の経腟法では手技に若干の慣れを必要とする．そこで，当院では従来の医師が 1 人で行う経腟超音波ガイド下胚移植法に工夫を加えた「医師と医療従事者（胚培養士）が協力して行う経腟超音波ガイド下胚移植法」を考案したので紹介する．我々が考案した経腟超音波ガイド下胚移植法による HRT 周期における臨床的妊娠率は 52. 4%（173/ 330）であり，着床率は 51. 3%（176/ 343）であった．
キーワード：胚移植法，経腟超音波，ET カテーテル，ET カテーテルガイド緒言腟超音波ガイド下に子宮底から 1. 0cm の位置にピンポ
イントに胚移植を施行している．
しかし，従来の経腟超

1980 年代後半より普及した経腟プローブの使用は， 音波ガイド下胚移植法では，医師が経腟プローブと ET
婦人科領域における超音波診断に大きな進歩をもたら

カテーテルガイドを片手で固定しながらもう一方の手

し，Assisted Reproductive Technology（ART）で は， で ET カテーテルを子宮腔内へ進めていく必要があるた
Wiklandら 1）により，初めて経腟超音波を用いた採卵が行め，子宮が左右に偏位している場合，プローブと ET カ

われた．
その後，経腟超音波ガイド下での採卵の安全性とテーテルガイドの方向が一致せず医師ひとりでの操作有用性が報告された ．

では無理が生じ ET カテーテルを進入していく過程で

2）

ART における超音波法には，胚移植などで広く行わ

ET カテーテルの先端を見失うことがある．

れているプローブを腹部に当てる経腹法と，採卵時に行

本稿では，当院で行われている従来の医師が 1 人で行われているプローブを腟内に挿入する経腟法がある．
経

う経腟超音波ガイド下胚移植法に工夫を加えた「医師と腹法は，3. 5 〜 5. 0 MHz と比較的低い超音波周波数を胚培養士が協力して行う経腟超音波ガイド下胚移植法」

使用するため，下腹部の脂肪が厚い場合などプローブかを紹介する．
これは，医師が経腟プローブと ET カテーテら観察対象までの距離が遠くなる程，明瞭な断層像が得

ルガイドを左右の手でそれぞれ固定し，ET カテーテル

られなくなる．
その上，子宮や卵巣を描出する場合は，予は胚培養士が医師の指示に従って子宮腔内へ進めていめ尿や生理食塩水で膀胱を充満させガスを含む腸管をき胚移植を行う方法である．

他方に圧排し尿の充満した膀胱を acoustic window（音響窓）とする必要があるため，患者には苦痛を強いることとなる．
一方経腟法は，プローブを直接腟内に挿入す対象と方法

るためプローブと観察対象との距離が大幅に短縮でき，

新鮮胚移植後の余剰胚および選択的全胚凍結症例に尚且つ 5. 0 〜 8. 0 MHz と比較的高い超音波周波数を使おける 5 日目，6 日目胚盤胞を Gardner 分類 3）により胚用するため，子宮内膜のように比較的腟に近い部分におの評価を行った後，超急速ガラス化法 4）によって凍結保いて明瞭な断層像を得ることが可能である．
さらに経腹

存した．
凍結融解胚移植は，子宮内膜を厚くするエスト法のように膀胱を充満させる必要がないため，患者に強ラーナテープ 0. 72 mg（久光製薬）を使用した HRT 周

融解胚移植は，胚移植用培養液としいる苦痛は軽減できる．
そのため，当院では2006年以降， 期により施行した．
経腟超音波のメリットを最大限に利用し明瞭に描出さて UTM（Medi-Cult，Denmark）を使用し，キタザト

れる子宮内膜を観察しながら ET カテーテルを進め，経ETカテーテル（ET-TUC3040SM5-17;北里メディカル;

受付 2013 年１月21日／受理 2013 年４月12日
著者連絡先：古井 憲司 e-mail［ furui@clinicmama.jp ］

2

長さ 400 mm，外径 1. 0 mm）とキタザト ET カテーテルでの胚移植法および従来の経腟超音波ガイド下での胚ガイド（ET-TUG 3017ART- 30; 北里メディカル ; 3. 0 Fr， 移植法を図 1-a，1-b，図 2-a，2-b，2-c に示す．
ET カテーテル用ガイド 30°）を用いて経腟超音波ガイ

臨床成績は 2011 年 12 月から 2012 年 11 月に経腟超ド下にて施行した．経腟超音波は SONOVISTA-MSC

音波ガイド下で胚移植を施行した 330 症例を対象とし，（MODEL:MEU- 1585; 持田シーメンスメディカルシス

臨床的妊娠率，
着床率を算出した．

テム）を使用した．
我々が考案した経腟超音波ガイド下

図 1-a 従来の胚移植法 : 子宮が正中に位置し，且つ後屈の場合

図 1-b 従来の胚移植法 : 子宮が正中に位置し，且つ前屈の場合

3

4

図 2-a

我々が考案した胚移植法 :ET カテーテルガイドと経腟プローブの位置関係

図 2-b

我々が考案した胚移植法 : 子宮が正中に位置し，且つ後屈の場合

図 2-c

我々が考案した胚移植法 : 子宮が正中に位置し，且つ前屈の場合

表1

経腟超音波ガイド下胚移植法施行症例の患者背景と臨床的妊娠率・着床率
対象症例

330

患者平均年齢35.8 ± 4.5（歳）

胚移植時の子宮内膜厚10.9 ± 3.1（mm）

既往妊娠回数1.0 ± 1.1（回）

既往流産回数0.8 ± 0.8（回）胚移植数

1.0 ± 0.2（個）良好胚盤（3BB 以上）移植率

75.5％（259/343）

臨床的妊娠率（％）

52.4％（173/330）

着床率（％）

51.3％（176/343）

結のようにプローブの長軸と ET カテーテルガイドの長果軸が一致しない時に特に有効であるが，実際にはプロー

臨床的妊娠率は 52. 4%（173/ 330）であり，着床率
は 51. 3%（176/ 343）
であった
（表 1）
．

ブの長軸と ET カテーテルガイドの長軸が一致しない
場合が非常に多い．
これが従来法の第 1 の問題点である．
また，子宮が正中で且つ後屈の場合は，図 1-a のように考従来法でも医師は左手でプローブと ET カテーテルガイ

察ドの両方を同時に把持し右手で胚移植することができ

Porter ら は，経腟超音波ガイド下での胚移植によっるが，子宮が正中であっても前屈の場合は図 1-bのようて，着床率，妊娠率，出生率を向上させることができるとに，ET カテーテルガイドの ET カテーテル挿入口が左報告している．
今回我々の経腟超音波ガイド下での胚移

手掌で隠れてしまうため胚移植操作が困難になる．
また，

植における臨床的妊娠率は 52. 4%，着床率は 51. 3% で従来法は，医師が右手で受精卵を充填した ET カテーテあり，また患者に尿を溜めてもらう必要がないなど患者

ルを子宮腔内へ挿入する際に，医師の左手はプローブとに負担の少ない経腟超音波ガイド下での胚移植は臨床

ET カテーテルガイドの両方を同時に把持しているため成績と患者への精神的な負担の軽減から，推奨すべき手ET カテーテル先端を追跡するためにプローブの先端を技であると考えられる．

左右に振ることはできてもローリングすることはでき

5）

胚移植の位置は，その後の妊娠率に影響を及ぼすことない．これが従来法の第 2 の問題点である．我々が考案

胚移植後のエアーが報告されている．Friedmanら は，したこの胚移植法は，介助者（胚培養士）
が受精卵を充填

6）

バ ブ ル の 位 置 が 子 宮 底 か ら < 10 mm，10- 20 mm， した ET カテーテルを子宮腔内へ挿入する際に，医師が> 20 mm の 3 群に分け，臨床的妊娠を検討したところ， 右手でプローブのみ把持していることによってプロー
妊娠率は<10 mmでは62.5%，10-20 mmでは42.0%， ブの先端を左右に振るだけでなく細かくローリングす>20 mmで は38.3%で あり，<10 mmは10-20 mm， ることができるので，ET カテーテル先端をリアルタイ>20 mm と比較して有意に妊娠率が高いことを報告しムに追跡することができ，ET カテーテルを進入していた．
我々が考案した経腟超音波ガイド下での胚移植法は， く過程でその先端を決して見失うことはない．
特に，胚経腹超音波ガイド下での胚移植法よりも明瞭に ET カ移植の経験が浅い医師にとっては，こうした技術的な工テーテルの先端を確認できるためピンポイントで狙い

夫が着床率の向上に繋がる可能性が大きいものと思わ

通りの位置に胚移植することが可能であり，そのようなれる．
ただし，医師の指導下であっても，胚培養士が患者観点からも着床率の向上に貢献するものと考えられる． の子宮内にカテーテルを挿入していく行為の妥当性は我々の技術的な工夫は，医師が左手でプローブを保持し検討，改善の必要がある．
日本臨床エンブリオロジスト

右手で ET カテーテルガイドを固定し，医師ではなく介学会，日本哺乳動物卵子学会などの学会では，胚培養士

助者（胚培養士）が ET カテーテルを子宮腔内に挿入する， を育成し認定している．
教育機関として胚培養士教育プ
つまり，医師と胚培養士が二人三脚で行うところにある． ログラムを開設している大学，大学院は数校（北里大学，
これによって，我々が考案したこの胚移植法は，図 2-a

麻布大学，国際医療福祉大学大学院，徳島大学大学院，近5畿大学大学院）存在する 7）．それらの教育プログラムには，胚移植時の介助（カテーテルの子宮内への挿入）に関する教育内容が含まれているものもあるが，生殖医療現場における医療従事者の職域の妥当性を考慮すると，カテーテルの子宮内への挿入行為は看護師が実施し，ET
カテーテル内への胚のローディングは胚培養士が実施するとういう選択肢が望ましい．
胚移植を施行する医師間の技術的な格差をなくし，適切な位置に胚移植することが妊娠率の安定化あるいは向上に繋がるが，我々が考案したこの胚移植法は，従来の胚移植法よりも技術的に簡便であり誰でもが容易に習得できる点が優れていると考えられる．

参考文献
1） Wikland, M., Enk, L., Hamberger, L.: Transvesical andtransvaginal approaches for the aspiration of follicles by useof ultrasound. Ann. N. Y. Acad. Sci., 442: 182-194, 1985．
2）El-Shawarby, S., Margara, R., Trew, G., Lavery, S.: A review
of complications following transvaginal oocyte retrieval for
in-vitro fertilization. Hum. Fertil（Camb）., 7（2）: 127-133, 2004.
3） Gardner, DK., Schoolcraft, WB., Wagley, L., Schlenker, T.,
Stevens, J., Hesla, J.: A prospective randomized trial of
blastocyst culture and transfer in in-vitro fertilization. Hum.
Reprod., 13（12）:3434-3440, 1998．
4）Kuwayama, M., Vajta, G., Kato, O., Leibo, SP.: Highly
efficient vitrification method for cryopreservation of humanoocytes. Reprod. Biomed. Online., 11（3）:300-308, 2005．
5） Porter, MB.: Ultrasound in assisted reproductive technology.
Semin. Reprod. Med., 26（3）: 266-276, 2008．
6） Friedman, BE., Lathi, RB., Henne, MB., Fisher, SL., Milki，
AA.: The effect of air bubble position after blastocyst
transfer on pregnancy rates in IVF cycles. Fertil. Steril., 95:944-947, 2011．
7）遠藤克：生殖補助医療胚培養士の誕生と今後について．日本
IVF 学会誌，13: 24-25, 2010．

6日本 IVF 学会雑誌 Vol. 1 6，No. 2 ，7 - 11，2013

ー総説 ー

ガラス化法による卵巣組織凍結の実際 新たながん・生殖医療鈴木 直 1, 橋本 周 2 五十嵐 豪 1, 高江 正道 1, 洞下 由記 1, 杉下 陽堂 1, 竹之下 誠 3,
細井 美彦 4, 石塚 文平 5, 森本 義晴 21

聖マリアンナ医科大学産婦人科学 〒 216-8511 神奈川県川崎市宮前区菅生 2-16-1
IVFなんばクリニック 〒 550-0015 大阪市西区南堀江 1 丁目 17-28 なんば SS ビル 3F
3
イブバイオサイエンス 〒 648-0003 和歌山県橋本市隅田町山内 513
4
近畿大学生物理工学部遺伝子工学科 〒 649-6433 和歌山県紀の川市西三谷 930
5
聖マリアンナ医科大学高度生殖医療技術開発講座 〒 216-8511 神奈川県川崎市宮前区菅生 2-16-1
2

要 旨 : 近年のがん医療全般における診断法ならびに治療法の着実な進歩によって，がんを克服する患者（Cancer Survivor）が増加している．また，それに伴い Cancer Survivor の生活の質についても大きな関心が寄せられており，特に生殖年齢がん患者に対する化学療法や放射線療法によって生じる妊孕性の喪失は非常に大きな問題であると認識されてきている．一般的に医療者と若年がん患者は，まずは何よりも病気を乗り切ることが唯一のゴールであるという共通の概念を有するため，がん医療によるこれらの合併症を許容せざ
るを得ない現状がある．一方，若年がん患者は「がん」による将来の恐怖のみならず，若年だからこそ「妊孕性消失」に関する将来の不安も抱えることとなる．がん患者に対する妊孕性温存の診療は古くから試行されてきたが，新たな妊孕性温存療法として卵巣組織凍結・移植の技術が注目されている．本稿では，ガラス化法による卵巣組織凍結の実際に関して最近の知見を含めて概説する．
キーワード : がん・生殖医療，卵巣組織凍結，卵巣組織移植，妊孕性温存，ガラス化法緒言

若年がん患者に対する卵巣組織凍結に関する指針

1998 年に Donnez がヒトで初めて卵巣組織凍結を施本技術の臨床応用への成功を機に，International

行した 4 症例に関して Human Reproduction Update

Society for Fertility Preservation（ISFP: 初代 ISFP 会「卵巣組織あるいは卵誌に報告している ．その中で，長 Donnez）による第 1 回会議が 2009 年にベルギーでの凍結は実現可能となったのかもしれない．
しかし，現開催され（World Congress of Fertility Preservation），

状では倫理的，医学的そして社会的な議論がまだ必要で2年に1度世界中の研究者が集まり議論を展開している．

ある．
母親と出生児に対する危険性は？ 本技術によるそして，ISFP 2 代目会長の Kim らにより「若年がん患

出産の際に遺伝的な危険性は？ 本技術による治療後者に対する妊孕性温存療法の推奨」が 2012 年 6 月にの妊婦の心理的サポートの必要性は？」と記している．

JARG（Journal of Assisted Reproduction andDonnez による初めての卵巣組織凍結施行の報告からGenetics）
誌に掲載され，本推奨が若年がん患者の妊孕15 年が経過し，初めてのホジキン病患者における生児性温存療法に関する最新の指針となっている 4）．ISFP

欧米では
「卵巣組
獲得の報告から9年が経過した現在 2），推奨の適応疾患（がん）はリンパ腫と乳がんとなってお織凍結保存は，早期閉経発来や緊急体外受精を施行しなり，一方白血病は卵巣内におけるがん細胞の存在の可能ければならない卵巣毒性を有する治療を受ける全ての性によって適応から除外されている．
しかし，リンパ腫

若年女性がん患者に，選択肢として提供すべき医療行為に対する標準的化学療法であるABVD療法（アドリアマしかし，本技術の安全性やである」と認識されている ．

イシン，ブレオマイシン，ビンブラスチン，ダカルバジ

有効性などに関する再評価が必要である．

ン）は卵巣機能不全リスクが低い治療法であることから，

1）3）リンパ腫での骨髄移植 / 造血幹細胞移植施行症例かあ
るいは緊急的な妊孕性温存療法として行う場合にはオプションとして卵巣組織凍結が適応となるとしている．
受付 2013 年２月１日／受理 2013 年４月５日
著者連絡先：鈴木 直 e-mail［ nao@marianna-u.ac.jp ］

7

また，卵巣機能不全リスクが高い治療法を受ける思春期患の上位となっている．

前のリンパ腫患者に対しては卵巣組織凍結が唯一の妊孕性温存療法となる．
一方，2006 年に The American Society of Clinical

卵巣組織凍結法ー緩慢凍結法

Oncology（ASCO）は，がん患者における妊孕性温存に現在の標準的な卵巣組織凍結保存は緩慢凍結法であ関する指針を示している ．その中で既に確立された治り，これまで卵巣凍結によって得られた生児は全て緩慢療法として胚凍結，放射線療法時の卵巣遮蔽，卵巣位置

しかし，緩慢凍結法によっ
凍結法によるものである 2, 3）．

5）

移動術などが記されており，卵凍結や卵巣組織凍結， て移植後の内分泌機能がどの程度維持されるかに関し
GnRHアナログやアンタゴニストによる卵巣機能の保護てはまだ十分に検証されておらず，採卵で卵子が回収では臨床試験の段階の技術として記されている ．ASCO

きない empty follicle の増加，得られた卵子の発育能ののがん患者における妊孕性温存に関するガイドライン

最近 Andersen らは，がん低下も明らかにされている 9）．

は近日中に見直しが計画されているが（Oktay 私信），し患者に対する緩慢凍結法による妊孕性温存療法に関す

かし Oncofertility という概念の生みの親でもある米国

報告によると，18
る 18 症例の経験を報告している 10）．

の Woodruf が構築した Oncofertility コンソーシアム

例の患者の年齢の中央値は 28. 5 歳（9- 38）で，卵巣を片においても，卵巣組織凍結は研究的技術ではあるが早急側摘出した後，卵巣組織片は 5 × 5 × 1mm の大きさでに妊孕性温存を考慮する際の最高のオプションとなり緩慢凍結が施行されている．
移植までの期間は中央値でうると推奨されている．Oncofertility コンソーシアム

2 年（1- 5），また移植の際全患者は無月経（FSH の 中央における卵巣組織凍結の適応外疾患は白血病，リンパ腫値 74IU/L（43- 200））であり，保存してある卵巣組織のそして卵巣がんとなっている（http://oncofertility.

20 〜 60%（6- 12 片）が同所性あるいは異所性（前腹壁northwestern.edu）．同様に，2006 年に世界で初めてあるいは骨盤壁）に移植され，移植片が機能した期間ののがん患者の妊孕性温存ネットワークとして構築され中央値は 26 カ月（0- 88）であったという．
なお，対象患たドイツ語圏を中心とした FertiPROTEKT（http://者は以下の如くである：ホジキン病 5 例，乳がん 4 例，

www.fertiprotekt.de）
でも，卵巣組織凍結の適応外疾患

非ホジキンリンパ腫 2 例，自己免疫性血管炎 2 例，そのとして白血病と卵巣がんをあげている．
凍結卵巣を移植す他5例（ユーイング肉腫，子宮頸がん，再生不良性貧血，る際には卵巣組織内の微小残存がん病巣（MRD: Minimal

発作性夜間血色素尿症，溶血性尿毒症症候群）．12 症例

residual disease）が問題となることから適応疾患を慎で計 72 周期の ART 治療の結果，65 個の卵が獲得され，重に選択すべきであり，白血病では組織所見ならびに免受精率は 40% で最終的に 5 症例に妊娠が成立し（妊娠

疫組織化学染色で MRD が認められなかった症例の率：6. 9%（5/ 72）），2 例の生児が獲得された（生産率：75% で染色体異常が PCR 法にて検出されたとの報告

2. 8%（2/ 72）．対象疾患などのバイアスなどから生産もあることから ，これまで述べてきたように白血病は率 2. 8% に関する評価は難しいが，Andersen らは満足

卵巣組織凍結の適応とはならない．また Andersen らにのいく結果ではないと謙虚に述べている．
緩慢凍結法で

よる同様の報告も存在し，免疫組織染色にて残存腫瘍細は細胞外に形成される氷晶による細胞への物理的障害

胞が陰性であった組織に対して Real time qPCR を施が予想されるため，融解後の卵胞発育過程における卵母

行した結果，7 例中 4 例が陽性であったという ．しか細胞の発育と顆粒膜細胞の成熟のバランスが損なわれしそれらの組織をヌードマウスに移植し，5 カ月後にているとも考えられている 11）．

5）

6）

7）

がん細胞の再発について検索を行ったが，Real time

一方，ヒト卵巣組織におけるガラス化法による基礎的

qPCR では再発を確認できなかったことから，ヌードマ

研究報告も散見されており，Hovatta らは，ヒト卵巣組

ウスへの移植によって悪性腫瘍の発生の有無を確認す

織を緩慢凍結法あるいはガラス化法で凍結した後に電る実験系の限界が示唆されている ．
7）

ロパンダイオール，エチレングリコール，DMSOやPVP

ならびに WT- 1 を用いた免疫組織化学染色による報告

を用いた溶液）で間質の形態が良好であったと報告してでは卵巣組織に転移は認められなかったという結果もさらに近年 Amorium らも，ヒト卵巣組織を用いいる 12）．

ある ．現在，欧米においては進行乳がん患者が妊孕性たガラス化法（エチレングリコールとトレハロースと温存療法の適応とならないことから，卵巣組織凍結適応

FBS を用いた溶液）を組織学的に評価しており，長年緩となる乳がん患者は卵巣への転移に関して安全である

慢凍結法による卵巣組織凍結を行ってきた Donnez らとされており，乳がん患者が卵巣組織凍結保存の適応疾のグループもガラス化法の臨床応用へ模索している 13）．

8）8子顕微鏡で形態を比較した結果，有意にガラス化法（プ

乳がんに関しては，初期の乳がん患者 51 症例の HE

液（Ethylene glycol（EG），Polyvinylpyrrolidone

卵巣組織凍結におけるガラス化法の開発
ーカニクイザルを用いた前臨床試験（PVP），0.5 M Sucrose）とVSED 溶液（EG, DMSO, 0.5
M Sucrose）の溶液を作成し，平衡時間は 5 分，10 分，

我々の研究グループ（IVF なんばクリニック：森本義晴， 20 分で検討し，評価方法は卵巣組織片の HE 染色ならび
橋本周，矢持隆行，近畿大学生物理工学部遺伝子工学科：に電子顕微鏡像で判定を行った 15）．その結果，VSEGP

細井美彦，イブバイオサイエンス研究所：竹之下誠，聖溶液で平衡時間 5 分の条件で研究を進めることとした．
カニクイザルを用いた卵巣組織ガラス化凍結なら
マリアンナ医科大学産婦人科学：石塚文平，五十嵐豪， （表 1）
洞下由記，高江正道，杉下陽堂；敬称略）
は霊長類であるびに移 植の結 果を表２，３ に示す．ストロー（1×1×

カニクイザルを用いて卵巣組織凍結・移植の前臨床試験

1mm：n=4）
ならびに新しいデバイスであるクライオサポーを行った．
卵巣組織凍結の標準的方法は緩慢凍結法であっト（10×10×1-2 mm：n=3）（表２）を用いて検討したたことから，①ガラス化法による新しい卵巣組織凍結方

結果，中央値 131 日目（116- 207）にホルモン周期の回復法の開発を目的とし，さらに実験モデル上異所性移植モが確認され，最終的に 2 頭から 3 回異所性移植卵巣組織から質の高い卵子のデルとなることから，②異所性卵巣組織移植部位の検討 （大網，卵管間膜，後腹膜，子宮漿膜）も同時に目的として研究を2006年に開始した．
まず予備

採取と，
顕微授精による受精卵の獲得に成功した 14, 16）．

実験として至適なガラス化溶液の検討を行い，VSEGP溶

表1

ガラス化法の条件【ガラス化溶液：VSEGP 溶液】
5.64 M（35％ v/v）EG（ethylene glycol）+ 5％ PVP（Polyvinylpyrrolidone）+ 0.5 M sucrose【平衡時間】
5分◆EG は，最も一般的に使用される浸透性の耐凍剤◆EG は細胞毒性が低く，浸透も速い◆非浸透性耐凍剤：PVP や糖類（sucrose）などの高分子物質は，細胞を効果的に脱水させ，耐凍剤による暴露時間を減少させる◆耐凍剤による暴露時間の減少は，卵巣組織内の卵母細胞の生存能力を支えるために不可欠

表2

ガラス化凍結卵巣組織を用いた異所性自家移植実験（n=7）
No.

1

2

3

4

5

6

7

年齢（歳）

6

5

4

4

3

9

10

移植部位

R

R
U

R
O
U

O

R
O
M

R
O
M

R
O
U

卵巣組織
の大きさ

1×1×1
mm

1×1×1
mm

1×1×1
mm

1×1×1
mm

10 × 10 ×
1-2m m

ホルモン
周期の回復

127
日目

無し

207
日目

179
日目

116
日目

ガラス化凍結ストロー

10 × 10 × 10 × 10 ×
1-2 mm
1-2 mmNew
New
devicedevice
138
日目

131
日目

クライオサポート
R : 後腹膜O : 大綱U : 子宮漿膜M : 卵管間膜9

表3

異所性移植卵巣組織からの卵子回収と ICSI 後の発育能
移植部位

採卵数

受精卵数

胚の数
（8-16 細胞期）

No.5
1 回目

大綱

1

1

0

No.5
2 回目

大綱
卵管間膜

4

2

2

No.7

後腹膜
子宮漿膜

4

3

2

9

6

4

2）Donnez, J., Dolmans, MM., Demylle, D., Jadoul, P., Pirard, C.,
Squifflet, J., Martinez-Madrid, B., van Langendonckt, A.:
Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved
現在，聖マリアンナ医科大学倫理委員会によって承認
ovarian tissue. Lancet., 364: 1405-1410, 2004.
された臨床試験を進めており，2013 年 1 月現在 55 症 3） Donnez, J., Silber, S, Andersen, C., Demeestere, I., Piver, P.,
Meirow, D., Pellicer, A., Dolmans, MM.: Children born after
例（早発卵巣機能不全症例も含む）に対して卵巣組織凍
autotransplantation of cryopreserved ovarian tissue. A
結を施行している．Andersen の報告にもあるように，
review of 13 live births. Ann. Med., 43: 437-450, 2011.
緩慢凍結法による卵巣組織凍結の生児獲得率は決して
4）IFSP Practice Committee/ Kim, S., Donnez, J., Barri,P.,
満足のいく結果とはなっていない．
卵巣組織凍結保存は，
Pellicer, A., Patrizio, P., Rosenwaks, Z., Nagy, P., Falcone, T.,
Andersen, C., Hovatta, O., Wallace, H., Meirow, D., Gook, D.,
より多くの卵子を保存できるだけでなくエストロゲン
Kim, SH., Tzeng, CR., Suzuki, S., Ishizuka, B., Dolmans,
分泌によるホルモン補充ができるというメリットがあMM.: Recommendation for fertility preservation in patients
り，妊孕性の温存だけでなく卵巣欠落症状の改善やエスwith lymphoma, leukemia, and breast cancer. J. Assist.
トロゲン低下による心血管系障害の予防や骨密度低下
Reprod. Genet., 29: 465-468, 2012.
を緩和することができる可能性も有している．さらに， 5）Lee, SJ., Schover, LR., Partridge, AH., Patrizio, P., Wallace,WH., Hagerty, K., Beck, LN., Brennan, LV., Oktay, K.:
がんによる将来の「恐怖」
のみならず，若年だからこそ妊
American Society of Clinical Oncology recommendations on
孕性消失に関する将来の「不安」を抱える思春期患者も
fertility preservation in cancer patients. J. Clin. Oncol., 24:
含む若年がん患者においては，緊急対応可能な技術であ2917-2931, 2006.
る卵巣組織凍結による妊孕性温存はがん治療に臨む際 6） Ajala, T., Rafi, J., Larsen-Disney, P., Howell R.: Fertility
Preservation for Cancer Patients: A Review. Obstet.
の若年がん患者の精神的支えともなりうると考える．
現
Gynecol. Int., 160386, 2010.
在，本邦でも当学を含む 4 施設で卵巣組織凍結が実際に7）Greve, T., Clasen-Linde, E., Andersen, MT., Andersen, MK.,可能となり（2013 年 1 月現在）
，本技術が妊孕性温存可
Sørensen, SD., Rosendahl, M., Ralfkiaer, E., Andersen, CY.:
Cryopreserved ovarian cortex from patients with luekemia
能である若年がん患者にとって福音となっているが，しin complete remission contains no apparent viable malignant
かし，本技術の有効性と安全性に関しては引き続き検証
cells. Blood., 120: 4311-4316, 2012.
を行っていく必要性がある．
8） Rosenda hl , M . , Timmerma ns , W V. , Nedergaa rd , L . ,Kristensen, SG., Ernst, E., Rasmussen, PE., Anderson, M.,
Schmidt, KT., Andersen, CY.: Cryopreservation of ovarian
参考文献
tissue for fertility preservation: no evidence of malignant
1） Donnez, J., Bassil, S.: Indications for cryopreservation ofcell contamination in ovarian tissue from patients withovarian tissue. Human. Reprod. Update., 4: 248-259, 1998.
breast cancer. Fertil. Steril. 95: 2158-2161, 2011.

おわりに

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9） Dolmans, MM., Donez, J., Camboni, A., Demylle, D.,Amorim, C. , Van Langendonckt , A. , Pirard, C. : I V F
outcomes in patients with orthotopically transplanted
ovarian tissue. Hum. Reprod., 24: 2778-2787, 2009.
10）Greve, T. , Schmidt , KT. , Kristensen, SG. , Ernst , E . ,Andersen, CY.: Evaluation of the ovarian reserve in womentransplanted with frozen and thawed ovarian corticaltissue. Fertil. Steril., 97: 1394-1398, 2012.
11）Nottola, SA., Camboni, A., Van Langendonckt, A., Demylle,D., Macchiarelli, G., Dolmans, MM., Martinez-Madrid, B.,
C or rer, S . , D on nez , J . : Cr yopre s er vat ion a nd
xenot r a nspl a nt at i on of hu m a n ova r i a n t i s sue : a nultrastructural study. Fertil. Steril., 90: 23-32, 2008.
12）Keros, V., Xella, S., Hultenby, K., Pettersson, K., Sheikhi, M.,
Volpe, A., Hreinsson, J., Hovatta, O.: Vitirification versus
controlled-rate freezing in cryopreservation of humanovarian tissue. Human. Reprod., 24: 1670-1683, 2009.
13）Amorium, CA., Davis, A., Langendonckt, AV., Dolmans,
MM., Donnez, J.: Vitirification of human ovarian tissue:
effect of different solutions and procedures. Fertil. Steril. 95:
1094-1097, 2012.
14）Iga ra sh i , S . , Su z u k i , N . , H a sh i moto , S . , Ta kae , S . ,Takenoshita, M., Hosoi, Y., Morimoto, Y., Ishizuka, B.:
Heterotopic autotransplantation of ovarian cortex incynomolgus monkeys. Hum. Cell., 23: 26-34, 2010.
15）Hashimoto, S . , Suzuki, N. , Yamanaka , M . , Hosoi, Y. ,Ishizuka, B., Morimoto, Y.: Effects of vitrification solutions
and equilibration times on the morphology of cynomolgus
ovarian tissues. RBM. Online., 21: 501-509, 2010.
16）Suzuki, N., Hashimoto, S., Igarashi, S., Takae, S., Yamanaka,
M., Yamochi, T., Takenoshita, M., Hosoi, Y., Morimoto, Y.,
I sh i zu ka , B . : As ses sment of long-ter m f unct ion ofheterotopic transplants of vitrified ovarian tissue incynomolgus monkeys. Human. Reprod., 27: 2420-2429, 2012.

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