日本IVF学会雑誌 Journal of Assisted Reproduction（JAR）

論 文
ー原 著 ー
次世代シーケンサーを用いた 3 前核由来胚盤胞の染色体解析････････････････････････････････････････････････････････

4

兼子 由美 1，松井 有紀 1，土屋 翔太郎 1，板倉 和也 1，和田 淳史 1，尾崎 智哉 1，田村 結城 2，三東 光夫 2, 3，
荒木 泰行 3, 4，荒木 康久 2, 3, 4，西村 満 1
西村ウイメンズクリニック／２日本リプロジェネティクス株式会社／ 3 群馬パース大学／ 4 株式会社高度生殖医療技術研究所

１

ー原 著 ー
Noninvasive embryo evaluation method combining time-lapse images with biomarkers in follicular fluid
and serum･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 10
Rumi Nakazawa1, 2, Takehiko Matsuyama1, Atsuko Shiota2
Department of Gynecology, Koujin Hospital, Marugame, Japan ／２Graduate School of Kagawa Prefectural University of Health Sciences,
Takamatsu, Japan１−原 著 −
当院における卵管鏡下卵管形成術後の不妊治療成績について････････････････････････････････････････････････････････ 19
須賀 真美，兵頭 慎治，鍋田 基生
つばきウイメンズクリニック

ー原 著 ー
東京の不妊症症例における新型コロナウィルス抗体（SARS-CoV-2 IgG）測定の結果･････････････････････････････ 25
中川 浩次，堀川 隆，月花 瑤子，三井 悠，石山 俊輔，板倉 彰子，中尾 佳月，森山 梓，片岡 尚代，壽圓 裕康，黒田 恵司，
小代 裕子，高見澤 聡，杉山 力一
杉山産婦人科新宿ー原 著 ーHIV-1 感染男性精液からのウイルス除去における sil-selectTM と PercollTM の臨床的有用性･･････････････････････ 29
嶋田 秀仁１，久慈 直昭 2
1

銀座こうのとりレディースクリニック／ 東京医科大学 医学部 産科婦人科学教室
２

第24 回 日本 IVF 学会学術集会 開催概要 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････

35

日本 IVF 学会雑誌発行における投稿論文募集のお知らせ･･････････････････････････････････････････････

36

日本 IVF 学会雑誌 投稿規定･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

37

一般社団法人 日本 IVF 学会 定款･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

39

一般社団法人 日本 IVF 学会 役員･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

45

編集委員会･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

46

日本 IVF 学会雑誌 Vol. 24，No. 1，4 -9，2021

ー原著 ー

次世代シーケンサーを用いた 3 前核由来胚盤胞の染色体解析
兼子 由美 1，松井 有紀 1，土屋 翔太郎 1，板倉 和也 1，和田 淳史 1，尾崎 智哉 1，
田村 結城 2，三東 光夫 2, 3，荒木 泰行 3, 4，荒木 康久 2, 3, 4，西村 満 1
1

西村ウイメンズクリニック 〒 433-3122 静岡県浜松市中区上島 6 丁目 30-3
日本リプロジェネティクス株式会社 〒 371-0031 群馬県前橋市下小出町 2 丁目 20-4
3
群馬パース大学 〒 370-0006 群馬県高崎市問屋町 1 丁目 7-1
4
株式会社高度生殖医療技術研究所 〒 371-0105 群馬県前橋市富士見町石井 909 番地 212

要 旨： ART における 3 前核（3PN）胚は，三倍体が危惧されているが染色体核型は不明なことが多い．
次世代シーケンサー（NGS）は，染色体の異数性の検出には優れているが，倍数体の区別ができない欠点がある．一方，タイムラプスインキュベーターによる胚発育の観察は，胚の染色体構造の解析はできない
が，第二極体（2PB）放出や PN の動態観察に優れている．そこで，NGS 解析結果にタイムラプス所見を加味することで 3PN 由来胚盤胞の倍数性の判定の一助になると考え検討を行った．その結果，三倍体胚は21. 4％，三倍体を疑う胚は 21. 4％，二倍体を疑う胚は 14. 3％，判別困難胚は 42. 9％と推定できた．三倍体胚では PN の大きさが均等かつ 2PB を認めず，二倍体を疑う胚では PN の大きさが不均等かつ 2PB を認めた．NGS による三倍体の判定が困難な時は，2PB の有無および PN の大きさの均等性を評価項目に加えることで，3PN 由来胚盤胞における倍数性評価の補助となる可能性が示された．
キーワード：NGS，3PN，タイムラプス画像解析，倍数性
ランニングヘッド：3PN 由来胚盤胞に PN/PB 所見を加味した NGS 解析

緒

諸外国で広く臨床に導入されている 7）．NGS 解析は全言

ゲノム DNA を断片化し配列情報を増幅して網羅的に体外受精において，受精確認時に 3 個の前核（3PN） 検査する方法であり，従来の G バンド分染法よりも高を認める受精卵が時々観察される．これらは三倍体の速，かつ高分解能で正確に検査できる新しい胚評価法

可能性が高く，移植すると流産や胞状奇胎のリスクがであるが，性染色体の X のみを有し Y を有さない胚の高くなることが知られている．3PN の発生原因は， 二倍体と三倍体の区別ができず，倍数性異常の検出は

1, 2）

一般体外受精（c-IVF）では多精子受精に起因するもの

できない．
一方，胚培養に普及しつつあるタイムラプス

一方，卵細胞質内精子注入法

インキュベーターによる胚発育の観察は，染色体解析が多いと考えられる

2, 3）（ICSI）では注入される精子の数は１ 個であることから， はできないものの，従来の定点観察では発見困難な事
第二極体（2PB）放出不全に起因すると考えられてい象について発育過程を振り返って分析することが可能

る 2- 6）．現在のところ，3PN 発生機序は十分解明されてであり，胚の動態を把握するうえで有用な形態解析手おらず，3PN 胚は染色体倍数性異常が危惧されるため

今回，3PN 由来胚盤胞の染色体核段となっている 8, 9）．

移植対象から除外され，培養を中断し廃棄されるのが型の解明を目的として，NGS 解析所見にタイムラプ

一般的であり，3PN 由来胚盤胞の染色体核型について

ス観察所見を加えた倍数性評価について検討を行ったは不明な点が多い．

ので報告する．

近年，胚の染色体異常の検出を目的とした着床前診断
検査（preimplantation genetic testing：PGT）において，次世代シーケンサー（next generation sequencer：
NGS）の導入が進んでいる．
特に不妊治療において，染2014 年 1月から2017 年 12月に，インフォームドコンセ

色体数に異常のある胚（異数性胚）の選別を目的とした

ントのうえ患者から同意の得られた廃棄予定の ICSI 由来

PGT for aneuploidy（PGT-A）
は，流産の予防策として

3PN（ICSI- 3PN）胚のうち，胚盤胞で凍結保存した14 個

受付 2020 年 9 月 2 日 / 受理 2020 年 10 月 13 日
責任著者：兼子 由美 e-mail［wanwan.yumi@gmail.com］

4

対象および方法

の胚を対象とした．
凍結胚盤胞の融解過程の途中に透明た画像を専用のソフト（EmbryoViewer™，Virtolife）を帯切開法による孵化補助を行い，継続培養後に栄養外胚用いて，2PB 放出の確認および PN 直径の計測を行った．

葉（trophectderm：TE）細胞が開口部から脱出を開始し1 個の胚内に確認された 3 個の PN は，直径の大きい順た胚にレーザー（OCTAX™，Vitrolife）照射を行い，TEに PN 1，PN 2，PN 3 とし，その最大径と最小径の計細胞を3 ～ 5 個採取した．
得られた細胞は凍結状態（−

測値の差（最大小径差，PN 1 ー PN 3）を NGS による

20 ℃ 以 下 ）で検 査ラボに 輸 送し，Sure Plex DNA

倍数性の推定結果と照合し，関係性について検討した．

Amplification Kit（Illumina）を用いてDNAを抽出して統計学的解析は，t 検定あるいはχ² 検定を用いて行

全ゲノム増幅を行い，DNA 増幅の有無を電気泳動で確認

い，p ＜ 0. 05 を有意差ありと判定した．
なお，本研究はした．
次に，VeriSeq PGS Assay Kit（Illumina）を用い

院内倫理委員会の承認を得て実施した．

てライブラリーを調整後，NGS（MiSeq，Illumina）
を用いて配列情報を取得し，BlueFuse Multi（Illumina）にて結得られた解析チャート（プロ
染色体数の解析を行った 10）．
ファイル）から染色体核型と倍数性の推定を行った．
培養中のタイムラプスインキュベーターから得られ果対象とした ICSI- 3PN 由来胚盤胞 14 個の患者（妻）平均年齢は 36. 2 ± 4. 5 歳であった．
各胚の TE 細胞採取時

図1 倍数性判別不明胚のプロファイル（第一群）

No.12

No.5

No.7

染色体 copy number

No.3

No.11

No.13

A

bar=50μm
染色体番号

図2 二倍体を疑う胚のプロファイル（第二群）

図1

倍数性判別不明胚のプロファイル．
（第一群）

No.1

染色体 copy number（A）No. 12．No. 3，5，7，11，13 も同様の形状を示した．

A

染色体 copy number

染色体番号

No.9

B

bar=50μm

図2

染色体番号

二倍体を疑う胚のプロファイル．
（第二群）
A：胚 No. 1，B：胚 No. 9．矢印の copy number 値は 3.0 を示している（A，B）
．

5

No.8

染色体 copy number

図3 三倍体胚（X，Y染色体あり）のプロファイル（第三群）
A
X 染色体
Y 染色体

染色体 copy number

染色体番号

No.10

B

No.14

染色体 copy number

染色体番号

C

bar=50μm

図3

染色体番号

三倍体胚（X，Y 染色体有り）のプロファイル．
（第三群）（A）胚 No. 8，（B）胚 No. 10，（C）胚 No. 14．
X 染色体（copy number 値約 1.3）と Y 染色体（copy number 値約 0.67）を認めた（A，B，C）．
点線矢印の copy number 値は約 2.7，実線矢印は約 1.3 を示している（B）．

No.2

染色体 copy number

図4 三倍体（X染色体のみを有する）を疑う胚のプロファイル（第四群）
A

染色体 copy number

染色体番号

NO.4

B

No.6

bar=50μm

図4

染色体 copy number

染色体番号

C

染色体番号

三倍体（X 染色体のみを有する）を疑う胚のプロファイル．
（第四群）
A）胚 No. 2，（B）胚 No. 4，（C）胚 No. 6．
点線矢印の copy number 値は約 2.7，実線矢印は約 1.3 を示している（A，B，C）

6

の形態は様々な脱出状態が観察された（図 1 ー 4）．
プロ

群と異常核型群はほぼ同率で存在していた（表 1）．

ファイルの特徴から四群に分類した．第一群は，常染色タイムラプス画像を用いて，2PB 放出の確認および体の他，X 染色体を有する正常核型であるが，二倍体と消失直前の PN 直径を計測した結果，X および Y 染色体

三倍体等の倍数性判別不明型で 42. 9％（6/ 14）認めらを有する胚で三倍体と強く推定できた第三群の胚盤胞れた（図 1）．第二群は二倍体でトリソミーを疑う型で3 個（胚 No. 8，10，14）のうち 2 個（胚 No. 8，10）は

14. 3％（2/ 14）認められた（図 2）．
第三群は性染色体 X， 2PB の放出を認めず，他 1 個（胚 No. 14）
は 2PB 放出後
Y を有する三倍体型で 21. 4％（3/ 14）
認められた
（図 3）
． に再吸収される現象を確認した．
これら3 個（胚 No. 8，10，
第四群は性染色体Xのみ有する三倍体を疑う型で14）の胚盤胞は，PN の最大小径差はいずれも1 µmと小21. 4％（3/ 14）認められた（図 4）．NGS による正常核

さく，3 個の PN の大きさは均等傾向にあった．
それに対し型と判定した胚は，第一群の 6 個で 42. 9％（6/ 14）でて二倍体の疑いがあると判定された第二群の 2 個（胚 No.

あった．第三群の 1 個（胚 No. 14）の常染色体核型は正1，9）の胚盤胞は，どちらも2PB の放出を認め，PN の最常型であったが，NGS 解析により X，Y を有する三倍

大小径差は各々 10 µm，7 µmと大きく，3 個の PN の大体であることから異数性胚の異常核型とした．従って， きさは不均傾向にあった（表 1，図 5）．
異数性胚，
すなわち異常核型胚は 8 個（胚 No. 1，2，4，6，
8，9，10，14）で 57. 1％（8/ 14）であった．正常核型

表1
ICSI-3PN由来胚盤胞の染色体解析結果とPNサイズの関係
表 1 ICSI-3PN 由来胚盤胞の染色体解析結果と PN サイズの関係
胚No. 妻年齢（歳） 胚日齢 グレード＊NGSの核型判定
2PBの有無(正常/異常）PNサイズ（µm）
PN1 PN2 PN3

最大小径差（µm）（PN1-PN3）

倍数性の予測

2
9

40
41

5
5

4AC
4AA

異常
異常

+
+

26
25

25
24

16
15

10
10

三倍体の疑い二倍体の疑い

1

26

5

4AA

異常

+

22

22

15

7

二倍体の疑い

7

37

5

4AB

正常

-

24

19

17

7

判別不明

13
4

33
41

5
6

3BB
3A-BC

正常
異常

おそらく+
おそらく-

21
20

19
19

17
18

4
2

判別不明
三倍体の疑い
判別不明

5

29

5

4AA

正常

+

24

23

22

2

11

41

5

4AB-C

正常

-

23

22

21

2

判別不明

6
8

37
37

5
5

4AB
4AA

異常
異常

-

22
25

21
24

21
24

1
1

三倍体の疑い
三倍体

10

35

5

4CA

異常

-

18

18

17

1

三倍体

3

39

5

4AA

正常

-

22

21

21

1

判別不明

12
14

34
37

5
5

4AA
4BA

正常
異常＊＊

+ →吸収

24
23

23
23

23
22

1
1

判別不明
三倍体

＊ Gardner 分類 23） ＊＊ 常染色体は正常であったが，性染色体は XXY を示したため異常核型に分類した．
表は最大小径差の大きい順に整列．

図5 2PBの有無およびPNサイズの均等性
B

A

2PB

1PB
図5

1PB

2PB の有無および PN サイズの均等性（A）三倍体胚．2PB を認めず，
PN サイズが均等．
（B）二倍体を疑う胚．2PB を認め，
PN サイズが不均等．

7

考

察

ところが，これ
倍体胚を区別することができない 14, 15）．
らの胚発育を受精から胚盤胞までタイムラプスイン

体外受精において受精を確認する最も一般的な観察

キュベーターで培養・観察している形態所見と併せて法は，媒精後 20 時間前後に PN の存在およびその数を判定できないかと考えた．記録された 2PB 放出の有無チェックすることである．その時点で 1PN であったりおよび形成された3個のPNの大きさを測定して均等性

3PN，もしくはそれ以上の PN らしき多核形状を有するを精査してみたところ，2PB が放出された胚は 42. 9％

異常胚に遭遇することがある．1PN であっても胚盤胞 （6/14）であり，半数近くの胚で認められた．
中には2PBまで発育した胚を移植後，妊娠し分娩に至った報告例はを放出後に再吸収された例も 1 例観察された．2PB をある 11, 12）が，3PN 由来胚を移植した妊娠報告例は極め認めなかった 3 個の PN の大きさは均等傾向にあり，て少ない．
その理由は染色体異常の発生する頻度が高く， NGS 解析で三倍体と強く推定できた胚盤胞は全てこの積極的に臨床に用いるメリットが少ないからだと思わグループに属していた．一方，2PB を認めた 3PN 胚はれる．しかしながら，3PN 由来胚の染色体がどのよう3 個の PN の大きさが不均等であることが多く，二倍体な構造であるかは興味があり，特に良好胚盤胞まで発育の疑いがあると推定した胚盤胞は全てこのグループにした胚を見ていると染色体は正常であるのではないか

属していた（表 1）．
これらのことから，2PB が認められと考えてしまう．
最近の PGT-A に使用される NGS を用ず，かつ 3 個の PN の大きさが均等であった胚盤胞は三いた 3PN 胚の染色体について検討した Mutia らの報告

倍体の可能性が高く，2PB を認め，かつ 3 個の PN の大によると，33. 3％は正常核型で 66. 7％は異常核型できさが不均等の場合，その胚盤胞は二倍体である可能性

あ り， そ の 異 常 の 内 訳 は 三 倍 体 43. 3 ％， モ ザ イ クが高いと推察された．

している．
我々の 3PN 由NGS とタイムラプス画像の形状動態を勘案して推察

来胚盤胞 14 個を NGS で検査した結果，正常核型胚は 6すれば，3PN 由来胚盤胞の二倍体は 2/ 14（14. 3％）～個（42. 9％）であった．
しかし，性染色体が X 染色体のみ

8/ 14（57. 1％）であり，三倍体は 6/ 14（42. 90％）～であるため正常核型であっても本測定キットの特性か

12/ 14（85. 7％）の出現頻度と考えられる．ICSI- 3PN

ら二倍体か三倍体か区別することはできない（図 1）．

由来胚に二倍体が含まれる報告があるので，3PN が全

Mutia らの結果では正常核型のプロファイルから二倍て三倍体になるのではない 16- 18）．Capalbo らによれば，体としているが，X 染色体のみ有する胚であれば三倍2 個の同等大きさの PN と 1 個の小さい PN で構成され体と区別することはできないと思われる．
今回の研究でた 2. 1PN と称した受精卵由来の胚盤胞の染色体解析の

二倍体のトリソミーと判定された 2 個の胚が存在して結果，約85％が二倍体であり，残り15％は三倍体であっいた（図 2）．
この 2 個とも X 染色体のみの性染色体を有たと報告している 19）．

13. 4％，異数体 10％と報告

13）

することより，二倍体か三倍体か区別することはできな

正常受精由来胚の異数性胚の割合は，約 45％と報告い．
それゆえ，ここでは二倍体の疑いとして分類した．
性

今回，倍数性判定が不明とした胚のプロされている 20）．

染色体が X，Y を有する三倍体は明らかに特徴あるプファイルは正常核型で 42. 9％（6/ 14）であり，残りロファイルを示すことから，比較的容易に判定すること

57. 1％（8/ 14）が異常核型と考えれば，2PN 由来でもができる（図 3）．つまり，X 染色体，Y 染色体の copy

3PN 由来胚の胚盤胞でも染色体正常核型と異常核型のnumber 値が各々，1. 33 と 0. 67 に位置しているからで出現頻度は類似しているものと考えられた．
また，正常

ある．
性染色体が X 染色体のみを有し，加えていずれか受精から発育した胚の NGS 解析による染色体モザイクの常染色体が 1 本分 gain あるいは loss している近三倍率は年齢に関わらず 10- 20％と示されている 21, 22）が，体と推定できる胚が 3 個（21. 4％）含まれていた（図 4）． 3PN 由来胚のモザイク率は同程度の出現頻度なのか，
仮に明確な三倍体と判定できた 3 個（図 3）と，三倍体をさらに検査数を増やして検討する必要がある．

疑う胚3個
（図4）
と更に倍数性判別不明とした6個（図1）

NGS による三倍体の判定が困難な時，タイムラプス

を三倍体として加えれば，三倍体は 85. 7％（12/ 14）
存

画像解析による 2PB の有無および PN の大きさの均等在することになり，3PN 由来胚盤胞の大部分は三倍体性に着目した所見を評価項目に加えることで，3PN 由の可能性を否定できない．
ただし，倍数性判別不明とし

来胚盤胞における倍数性評価の一助となる可能性が示

た 6 個（図 1）を二倍体と仮定すると，二倍体を疑う 2 個

唆された．本研究により，胚盤胞まで発育した ICSI-（図 2）と併せてみると 3PN 由来胚盤胞の二倍体は3PN 由来胚には，三倍体の他に二倍体と推定できる胚57. 1％（8/ 14）と推定することもできる．

も含まれていることが判明した．
しかし，その取り扱い

NGS による本キットで解析する限り，二倍体胚と三8には症例数を増やして検討する必要がある．

参考文献
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9日本 IVF 学会雑誌 Vol. 24, No. 1, 10 -18, 2021

ー原著 ー

Noninvasive embryo evaluation method combining timelapse images with biomarkers in follicular fluid and serum
Rumi Nakazawa1, 2, Takehiko Matsuyama1, Atsuko Shiota2
12

Department of Gynecology,  Koujin Hospital,  Marugame,  Japan
Graduate School of Kagawa Prefectural University of Health Sciences,  Takamatsu,  Japan

ABSTRACT： To increase the success rate of assisted reproductive technologies, embryoswith high developmental and implantation potential should be identified and selected. Here, wesought to establish a noninvasive and highly accurate embryo selection method by combining
time-lapse monitoring parameters（at S 2 and S 3）with the following biomarkers in the follicular
fluid（FF）and serum samples obtained from study subjects（using 70 eggs, FF, and serum in 58
cycles of conventional in vitro fertilization [c-IVF]）: dehydroepiandrosterone sulfate（DHEA-S）,
insulin-like growth factor 1（IGF- 1）, reactive oxygen metabolites（d-ROMs）, biologicalantioxidant potential（BAP）, and an oxidative stress index（OSI: d-ROMs/BAP × 100）. Our
analyses revealed significant positive correlations between some of the biomarkers in FF andserum: DHEA-S（r= 0. 88; p< 0. 01）, IGF- 1（r= 0. 83; p< 0. 01）, d-ROMs（r= 0. 55; p< 0. 01）, andOSI（r= 0. 45; p< 0. 01）. The BAP value was higher in FF than in serum in many cases. The
follicular OSI in the abnormal fertilization（AF）group tended to be higher than that in the normalfertilization（NF）group. The FF values of DHEA-S and IGF- 1 and the serum DHEA-S tended tobe higher in the NF group and blastocyst formation（BF）group. S 2 and S 3 were shortened in
the NF and BF groups. These findings suggest that（1）oxidative stress is related to abnormal
fertilization,（2）DHEA-S and IGF- 1 are associated with normal fertilization and blastocyst
formation, and（3）S 2 and S 3 are useful timepoints for evaluating embryos.
K e y W o r d s：B i o m a r k e r , E m b r y o e v a l u a t i o n , E m b r y o - s y n c h r o n o u s d e v e l o p m e n t t i m e ,Noninvasive, Time-lapse imaging
Running Head：Embryo evaluation by time-lapse and biomarkers

INTRODUCTION

potential embryos for transfer. We conducted thepresent study to explore a combined evaluation

To increase the success rate of assisted

method with additional parameters. Our main goal isreproductive technologies, it is important to selectto establish a more accurate embryo evaluationembryos with high developmental and implantation

method.

potential from among the eggs and embryos

A human egg matures in the follicle, and after

obtained by egg retrieval, prior to embryo transfer. A

ovulation it is taken into the fallopian tube with themorphological evaluation is used in many centers tofollicular fluid（FF）, where it is fertilized and divides.

. The use of a time-

In this study, we tested the hypothesis that thelapse imaging incubator system has allowed us tocomposition of the FF is important for oocyte

observe the embryos, and such a system has beenmaturation and fertilization, and we attempted toused to test the usefulness of dynamic

predict the quality of oocytes by measuring. However, there is still room forbiomarkers in the FF in which the oocytes

improvement in the process of selecting high-developed. We used dehydroepiandrosterone sulfate

select the transferred embryos

parameters

6, 7）

1–5）

受付 2020 年 10 月 19 日 / 受理 2020 年 11 月 20 日
責任著者：中澤 留美 e-mail［rnakagawa@koujinkai-kagawa.net］

10

（DHEA-S）and insulin-like growth factor 1（IGF- 1） and the quality of each oocyte, we targeted only theas biomarkers of oocyte growth and aging 8– 10）. We

FF from which the oocyte was collected; no otheralso measured reactive oxygen metabolite-derived

FF was contaminating.

compounds（d-ROMs）and the biological antioxidant

After confirmation of the second polar body（2PN）

potential（BAP）, and we used the oxidative stressat 4– 5 hr post-fertilization（c-IVF）, the embryos

index（OSI: d-ROMs/BAP × 100）.

（Vitrolife,
were cultured in EmbryoScope®（ES+）

It has been reported that with age, the production

Gothenburg, Sweden）in separate culture wells.

of free radicals increases and the endogenous

When we confirmed blastocyst formation, the cells

defense mechanisms decrease 11） and may affectwere frozen by rapid vitrification using a Vitrification

12, 13）. We therefore examined

Kit and Cryo-top（Kitazato Co. Fuji, Japan）andthe relationships between the above-citedstored in liquid nitrogen. After the next cycle,

biomarkers and fertilization and embryo

thawing was performed using a Vitrification Kit

embryonic developmentd e v e l o p m e n t . W e s p e c u l a t e d t h a t i f t h e s e （Kitazato）for 3– 5 hr of recovery incubation inbiomarkers are revealed to be useful for selecting

natural cycles or hormone replacement cycles.

high-potential embryos, then evaluations of theSingle-blastocyst transfer was performed byquality of oocytes and embryos could be easilytransvaginal ultrasound using an ET catheter

accomplished by measuring biomarkers in the （Kitazato）.
patient's serum, which is easier to collect than FF.

Pregnancy was determined by blood humanWe therefore determined the correlations betweenc h o r i o n i c g o n a d o t r o p i n （H C G） l e v e l s a n d

the levels of the biomarkers in both serum and FF.

transvaginal ultrasound to confirm the fetal sac.

We also determined the correlation between these

Our further investigation was performed in twobiomarkers and the patient's age at oocyte pick-up

parts. In Part 1, we determined the correlation of（hereinafter referred to as the 'age'）.

each biomarker's values between the serum and FF

We used time-lapse monitoring to assess earlyof the respective patient. The correlations between

embryos because of the small number of cells, as

age and biomarker levels was also examined. In Part

we and other observers have found that the findings

2, we performed difference tests between the normal.

fertilization（NF）group and abnormal fertilization（AF）

We focused on the three-cell stage（S 2: t 4–t 3）andgroup, between the blastocyst-forming group andthe stage from five cell to eight cells（S 3: t 8–t 5）tonon-forming group, and between the pregnant group

investigate the relationship between fertilization andand non-pregnant group. In each of these groups, weembryo development.

identified the levels of the biomarkers in both serum

revealed by this monitoring are a stable marker

14, 15）and FF（DHEA-S, IGF- 1, d-ROMs, BAP, OSI）and

MATERIALS AND METHODS
The subjects were a retrospective cohort study ofevaluated the embryonic development（at S 2 andS 3）and clinical parameters, i.e., the age and bodymass index（BMI）of the patients.

70 eggs, FF, and serum in 58 cycles of assisted

For our examination of the factors that may

reproductive technology（c-IVF）conducted at

influence normal fertilization, blastocyst formation

Koujin Hospital from October 2018 to April 2019.

and pregnancy, we performed a logistic regression

Blood E 2 levels and follicle development wereanalysis（forward stepwise）to identify variables

monitored. When the primary follicle was > 18 mm,

that met the criteria as influencing factors. The

an Ovidrel Syringe 2 5 0 μ g or Buserelin Nasal

dependent variables were the presence/absence of

Solution 0. 15% "ILS" was administered by nasal

normal fertilization, the presence/absence ofspray. Next, 3 4– 3 5 hr later, the follicles were

blastocyst formation, and the presence/absence ofpunctured under transvaginal ultrasound guidance.

pregnancy. The covariates in the analysis were the

The FF was then aspirated, and the oocytes wereFF biomarker levels, the serum biomarker levels, S2,collected. To investigate the environment of the FF

S 3, BMI, and Age.

®

11

Collection of FF and serum

moment correlation. We performed a logistic

The collected FF was centrifuged（300 g for 1

regression analysis using a stepwise variablemin）, and the supernatant was collected and stored

increase. The logistic regression model was used toin a deep freezer at −70℃ . Serum was collectedcalculate the adjusted odds ratio（OR）over the 95%

on the day the egg collection was performed andconfidence interval（CI）to calculate the risks. The

frozen in a deep freezer at −70℃ .

effect size calculation used Cohen's d.

Embryo evaluation

Ethical considerations

All embryos were cultured with ES+, and time-

This study was explained to the subjects, andlapse images of each embryo were analyzed. 2PN

their consent was obtained in accordance with theconfirmation was judged as normal fertilization,code of ethics of Kojin Hospital. The Graduate

whereas other nuclei were judged as abnormal

School of Kagawa Prefectural University of Healthfertilization. We conducted a morphological

Sciences Ethics Review Committee approved theevaluation to calculate the timing of thestudy（approval no. 263）.

2-Blastomere（t 2）, 3-Blastomere（t 3）, 4-Blastomere（t 4）and 8-Blastomere（t 8）division times. We also

RESULTSmeasured the synchronization of the second（s 2:t 4–t 3）and third cell cycles（s 3: t 8–t 5）.

From 5 8 cycles, 7 0 serum samples, FF, andoocytes were collected. Normal fertilization resulted

Method for measuring biomarkers in FF and serumin 56 cells, of which 40 formed blastocysts. A single

The d-ROMs and BAP values were measured

blastocyst transfer was performed in 28 cycles, and.
using FREE Carrio Duo System（Wismerll, Tokyo）

a pregnancy was achieved in 10 cycles, of whichT h e o x i d a t i v e s t r e s s i n d e x （O S I） w a s t h e nseven were births and three were miscarriages.

calculated as: d-ROMs/BAP

Twelve blastocysts were cryopreserved.

®

× 1 0 0. A detailed

description of d-ROM and BAP has been reported 16）.

The characteristics of the patients are summarized

DHEA-S was assayed using a fully automatedin T a b l e 1. The age at oocyte pick-up（OPU）

enzyme immunoassay system, the AIA -2000（Tosohranged from 2 6 to 4 6 years（mean 3 9. 2

Bioscience, Tokyo）, and the reagent used was theyears）. All of the biomarker levels（mean ± SD）

Ectest Tosoh® II, which is a dedicated reagent for

were lower in the FF than in the serum for each of

the system. IGF-1 was assayed by thethe patients.

®

± 5. 0electrochemiluminescence immunoassay（ECLIA）
cobas® e 411（Roche Diagnostics, Indianapolis, IN,
USA）, and ECLusys （Roche Diagnostics）was®

used as the reagent for this system.

Part 1: Correlations between serum and FF andbetween age and each biomarker's levels
As illustrated in Figure 1, the correlation between
the biomarkers levels in the FF and serum was

Statistical analysis
The result of the difference test was confirmed bystrong and positive for DHEA-S（r= 0. 88, p< 0. 01）
and IGF-1（r=0.83, p<0.01）. The levels of d-ROMs

the Levene test, and the two-sample t-test was （r= 0. 55, p< 0. 01）and the OSI（r= 0. 45, p< 0. 01）
performed when equal variance was observed. The

had a moderately positive correlation. However,two-sample t-test as a modification of Welch's test

there was no correlation between the BAP values in

was used when the data were not equally dispersed.

the FF and those in the serum（r= 0. 22, p= 0. 66）. It

The significance of the results was assessed byis interesting to note that BAP was found in 45. 7%

SPSS Statistics 26 software（IBM, New York）using （32/ 70）of the cases, with higher levels in the FF
Student's t-test and the chi-square test. Differences

than in the serum. The dotted area in Figure 1D

were considered significant at p< 0. 05. Multivariate

shows the plot where the FF levels were higher thancorrelations were calculated using Pearson's

the serum levels.

12

Table 11Characteristics
of patients
Table
Characteristics
of patients
Mean ±SD

FactorTotal number of patients

58

Total number of follicles

70

Age of participants (years old)39.2±5.0

BMI (kg/m2 )22.7±3.7

S2(t4-t3) （h）

2.5±4.5

S3(t8-t5) （h）

10.0±9.7

Biomarker

Follicular fluid level

Serum level

DHEA-S(μg/dL)

199.8±102.4

225.9±106.1

IGF-1

97.3±27.5

130.1±32.8

d-ROMs (U.CARR)

324.0±59.6

393.9± 61.3

BAP (μmol/L)

2057.9± 323.1

2098.3± 200.9

16.0±3.2

18.9±3.0(ng/mL)

OSI (%)

A

B

C

D

E

Figure 1 The relationship between the biomarkers' levels in follicular fluid（FF）and serum.
A: DHEAS. B: IGF-1. C: d-ROMs. D: BAP. E: The OSI. The dotted area in panel D is the plot in which the patient's FF level was
higher than her serum level. *p<0.05, **p<0.01.

Fig. 1. The relationship between the biomarkers' levels in follicular
fluid (FF) and serum. A: DHEAS. B: IGF-1. C: d-ROMs. D: BAP.

E: The OSI. The dotted area in panel D is the plot in which thepatient's FF level was higher than her serum level. *p<0.05,

13

The correlation between age and biomarkers is

S 2 and S 3 were delayed in the non-forming groupdepicted in Figure 2. There was a weak negative

compared to the blastocyst-forming group, but notcorrelation between FF-DHEA-S and age（r = −0.25,

significantly. The logistic regression analysis

p< 0. 05）, but Serum-DHEA-S was not correlated

revealed that the two factors with significant ORs

with age（r =− 0. 1 9, p= 0. 1 0）. There was a （9 5%CI）in the final model were age（OR 0. 7 2,

moderately negative correlation between FF-IGF- 1

9 5%CI: 0. 5 4– 0. 9 5）and S 3（OR 0. 8 8 9, 9 5%CI:

and age（r = − 0. 43, p< 0. 01）and between Serum-

0. 81– 0. 98）.

IGF- 1 and age（r = − 0. 41, p< 0. 01）. In both the FF

Table 4 summarizes the results of our comparisonand serum, the values of d-ROMs, BAP, and OSIof biomarker levels in FF and serum between thewere not correlated with age.

pregnant and non-pregnant groups. None of thebiomarker levels and neither S 2 nor S 3 differed

Part 2: Test for differences and factor analysis of
influence between each group

significantly between these groups. The pregnant
group was significantly younger than the non-Table 2 summarizes the results of our comparison

pregnant group（34. 6±3. 9 vs. 40. 1±3. 8; p< 0. 05）.

of the biomarker levels in FF and serum between the

The results of the logistic regression analysis

NF and AF groups. The normal fertilization rate wasshowed that age was a significant factor in the final

80. 0%（56/ 70）. There was no significant difference

model（OR 0. 67. 95%CI: 0. 49– 0. 92）.

in any of the biomarkers or in embryonicdevelopment between the NF and AF groups.
However, the values of the following markers tended
to be higher in the NF group compared to the AF

DISCUSSION
Many embryo evaluation methods using time-± 1 0 9. 9 v s .

lapse imaging have been reported 17– 19）, and we have179. 9 ± 63. 8）, Serum-DHEA-S（229. 5 ± 113. 7 vs.

used such imaging as one of the methods for2 1 1. 6

g r o u p : F F - D H E A - S （2 0 4. 7

± 2 6. 1 vs.

evaluating embryos. In this study, we focused on the88. 7 ± 31. 9）, and Serum-IGF- 1（133. 5 ± 33. 3 vs.

synchronization of S 2 and S 3, as they are stages at116. 5 ± 27. 8, respectively）.

which it is easy to determine cell division stably with

± 6 9. 1）, FF-IGF- 1（9 9. 5

The d-ROMs values and the OSI tended to besmall errors among observers. Our observations

lower in the NF group compared to the AF group.

revealed that S 2 was shortened in the normal-

The results of the logistic regression analysis

fertilization group, blastocyst-formation group anddemonstrated that none of the factors that we

pregnancy group, although there was no significant

examined affected the presence or absence ofdifference. S 3 was also shorter in the blastocyst-

normal fertilization.

formation group than in the non-formation group. It

Table 3 summarizes the results of our comparisonhas been suggested that a shorter S 2 has a higherof the biomarker levels in FF and serum between theblastocyst formation rate 20）, and that embryos thatblastocyst-forming group and the non-forming group.

divide properly at the optimal time are good-quality

The blastocyst formation rate was 71. 4%（40/ 56）.

embryos 6, 21）. Our present findings also indicate that

There was no significant between-group difference

evaluations of S 2 and S 3 is an effective method forin any of the biomarkers, but the values of theembryo selection. Since the goal of this study wasfollowing markers tended to be higher in theto develop a method to select more high-potential

blastocyst-forming group compared to the non-embryos, the combined method that we used wasforming group: FF-DHEA-S（217. 0 ± 115. 2 vs.

designed to evaluate a composite of embryos with

174. 1 ± 91. 6）, Serum -DHEA-S（242. 1 ± 118. 2 vs.

the addition of biomarkers as new parameters.

198. 1 ± 98. 0）, and FF-IGF- 1（100. 5 ± 26. 3 vs.

Our results did not confirm the validity of the± 2 6. 2, respectively）. The patients wereaddition of five biomarkers for the assessment ofyounger in the blastocyst-forming group than in thefertilization, blastocyst formation, or pregnancy

non-forming group.

establishment. However, two of the biomarkers, i.e. ,9 7. 014

Fig.
2. relationshipThe relationshipbetweenagebiomarkers'
andbiomarkers'
the biomarkers'
levelsthe follicular2.
The
betweenage theandtheinfolliculartheinfollicularFig. Fig.
2. Therelationshipbetweenage
andlevelslevelsin theFigure 2 The relationship between age and the biomarkers' levels in the follicular fluid and serum.
The serum.
values
DHEA-S,
IGF-1,
theareshown.
The
x-axisshowsd-ROMs,thepatient's
ageBAP,atoocytepick-up.
fluid
andserum.
The
valuesofOSIDHEA-S,
IGF-1,
andthe OSIand ofserum.
Thed-ROMs,
valuesofandDHEA-S,
IGF-1,
d-ROMs,
BAP,
and
the
OSI
fluidfluid
andThevaluesof BAP,
DHEA-S,
IGF-1,
d-ROMs,
BAP,
and
the
OSI
*p<0.05, **p<0.01.

areTheshown.
The
x-axisthe agepatient's
age
atoocytepick-up.
*p<0.05,
are shown.
The x-axisshows
the patient's
age
atoocytepick-up.
*p<0.05,
are shown.
x-axisshows
theshows
patient's
atoocytepick-up.
*p<0.05,**p<0.01.
**p<0.01.
**p<0.01.

15

Table 2 Comparison between normal fertilization group and abnormal fertilization group:
Table 2 Comparison
normal fertilization
abnormal fertilization group: levels in follicular fluid and serum
levelsbetween
in follicular
fluid group
and andserum
Factornormal(n=56)

abnormal(n=14)

P-valueeffect size dAge (years old)39.2±4.639.1±6.6

0.949

0.02

BMI (kg/m2 )22.4±3.7

23.7±3.3

0.236

0.36

S2(t4-t3) （h）

2.1±4.2

4.3±5.7

0.251

0.49

S3(t8-t5) （h）

9.6±9.712.4±10.1

0.414

0.29

Follicular fluid level (Mean ±SD)

Serum level (Mean ±SD)

Biomarker

normal(n=56)

abnormal(n=14)

P-valueeffect size dnormal(n=56)

abnormal(n=14)

P-value

DHEA-S(μg/dL)

204.7±109.9

179.9±63.8

0.278

0.24

229.5±113.7

211.6±69.1

0.575

0.17

IGF-1

99.5±26.1

88.7±31.9

0.191

0.40

133.5±33.3

116.5±27.8

0.083

0.53

d-ROMs(U.CARR)

320.6±53.1

337.4±81.9

0.349

0.28

390.8±59.0

406.2±70.8

0.404

0.25

BAP (μmol/L)

2082.2±338.8

1960.6± 235.9

0.210

0.38

2094.4±203.5

2113.7±196.6

0.750

0.10

15.7±3.0

17.3±3.7

0.094

0.51

18.8±2.919.3±3.7

0.534

0.16

(ng/mL)

OSI (%)

effect size dEffectsized.
Effectsize calculation
calculation usedused
Cohen'sCohen'sd.

Table 3 Comparison between blastocyst forming group and non forming group:
Table 3 Comparison
blastocyst forming
non forming group: levels in follicular fluid and serum
levelsbetween
in follicular
fluidgroup
andandserum
Factorformation(n=40)

non formation(n=16)

P-valueeffect size d

OR

95% ClP-valueAge (years old)38.5±4.6

41.0±4.0

0.074

0.56

0.72

0.54-0.95

0.021

BMI (kg/m2 )22.0±3.523.4±4.2

0.236

0.38

S2(t4-t3) （h）

1.7±2.9

3.3±6.3

0.206

0.39

S3(t8-t5) （h）

7.5±6.3

16.0±14.8

0.066

0.90

0.81-0.98

0.018

0.89

Follicular fluid level (Mean ±SD)
Biomarker

formation(n=40)

non formation(n=16)

DHEA-S(μg/dL)

217.0±115.2

IGF-1

100.5±26.3

d-ROMs(U.CARR)
BAP (μmol/L)(ng/mL)

OSI (%)

Serum level (Mean ±SD)
P-valueeffect size dformation(n=40)

non formation(n=16)

P-valueeffect size d174.1±91.6

0.190

0.39

242.1±118.2

198.1±98.0

0.193

0.39

97.0±26.2

0.659

0.13

132.7±30.6

135.6±40.5

0.767

0.09

322.3±49.1

316.4±63.5

0.708

0.11

390.4±58.6

392.0±62.1

0.929

0.03

2063.4±222.0

2129.3± 538.2

0.642

0.19

2088.0±209.2

2110.6±194.4

0.711

0.11

15.8±2.715.4±3.7

0.696

0.13

18.8±3.0

18.6±2.5

0.780

0.07

Effectsizesize
calculation
used
Cohen'sd.
Effectcalculation used
Cohen'sd.

Table 4 Comparison between pregnant group and non pregnant group:
Table 4 Comparison
pregnant groupnon pregnant
levelsbetween
in follicular
fluidandandserumgroup: levels in follicular fluid and serum
Factorpregnant (n=10)

non pregnant(n=18)

P-valueeffect size d

OR

95% ClP-valueAge (years old)34.6±3.940.1±3.80.001 *

1.43

0.67

0.49-0.92

0.013

BMI (kg/m2 )21.4±3.1

21.6±3.1

0.460

0.06

S2(t4-t3) （h）

0.7±0.7

2.1±3.7

0.145

0.46

7.4±6.4

6.7±6.7

0.879

0.11

S3(t8-t5) （h）

Follicular fluid level (Mean ±SD)
Biomarker

pregnant (n=10)

non pregnant(n=18)

DHEA-S(μg/dL)

216.5±108.4

224.6±119.2

IGF-1

98.2±33.1

105.4±23.8

d-ROMs(U.CARR)

321.3±29.2

315.8±55.7

BAP (μmol/L)

2130.0±141.9
15.2±1.5

OSI (%)(ng/mL)

Serum level (Mean ±SD)
P-valueeffect size dpregnant (n=10)

non pregnant(n=18)

P-valueeffect size d

0.860

0.07

226.2±110.3

258.9±134.3

0.518

0.26

0.508

0.26

126.4±38.3

136.5±25.0

0.409

0.33

0.774

0.11

395.3±44.1

375.3±55.4

0.336

0.39

2124.8± 218.4

0.951

0.03

2162.2±237.0

2075.4±212.2

0.329

0.39

15.0±2.9

0.891

0.08

18.6±3.618.1±2.4

0.685

0.17

Differences were considered significant when ＊ P values < 0.05.

Differences were considered s,giuficant when ＊ P values < 0 05
Effect size calculation used Cohen's d.
Effect size calculation used Cohen's d.

16

DHEA-S and IGF-1 have been reported to be factors

division caused by sperm quality. In addition,

involved in follicle development, oocyte maturation,

because we examined minimum ovarian stimulation. We observed strong positive

cycles and natural OPU cycles, there was no room

correlations of DHEA-S and IGF- 1 between serum

to choose a single embryo to be transferred in eachand FF levels in the present investigation, and wecycle. These limitations may have affected ourtherefore speculate that the measurement of seruminability to identify useful biomarkers as indicatorslevels could be used to estimate FF levels and could

for embryo evaluation. In the future, the ovarianserve as a measure of egg maturation and embryo

stimulation protocol should be used and larger

evaluation.

sample sizes should be tested.

and embryo quality

22）

reported that d-ROMs, BAP, and the

If an evaluation method for selecting embryos

OSI in the follicular fluid were involved in fertilization

based on embryonic developmental dynamics andand cell division. Our present analyses demonstrated

biological biomarkers can be confirmed, the methodthat the values of d-ROMs, BAP, and the OSI were

could become a promising tool for noninvasively

not affected by age factors. We thus speculate thatpredicting blastocyst formation and successful

if d-ROMs, BAP, and the OSI are involved in

pregnancy.

Terao et al.

23）

fertilization and cell division, measuring them could
be useful for predicting embryo quality without the

Conflicts of interest

use of the age factor.
It is interesting to note that among the biomarkers
examined in this study, only BAP was not correlated

The authors report no conflicts of interest in thisstudy.

between the serum and FF. Locally generated
reactive oxygen species（ROS）have been reported
to play an important role in follicle development, egg

Acknowledgements

maturation, and ovulation 24）, but it has been reported

We thank Dr.Takehiro Nakamura, The Graduatethat high levels of ROS can cause oxidative stress

School Kagawa Prefectural University of Healthin the oocytes and granulosa cells in the follicle,

Science, and Dr.Takehiko Matsuyama, President of

which may lead to a decrease in the quality of theKoujin Hospital, for their guidance and advice on

oocytes 25）. On the other hand, antioxidants have

graduate school admission, and all of the members

been reported to act as scavengers to protect DNA

of the Koujin Hospital laboratory for theirand cellular components. We observed herein that26）

cooperation in the data collection.

BAP was higher in the FF than in the serum in mostcases, which suggests that there are moreantioxidants in FF than in serum, and that theoocytes in the follicles may be protected byantioxidant effects. These findings suggest thatoxidative stress is related to abnormal fertilization.
Further research is needed to determine whether
this phenomenon（i.e. , the higher BAP values in
F F）i s r e l a t e d t o e g g q u a l i t y a n d e m b r y o n i cdevelopment.
Our present findings do not support a noninvasive,
simple and accurate embryo selection method by
combining biomarkers with parameters from timelapse monitoring. However, our sample size wassmall because the study was limited to c-IVF inorder to eliminate the differences in the speed ofReferences
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日本 IVF 学会雑誌 Vol. 24，No. 1，19 -24，2021

ー原著 ー

当院における卵管鏡下卵管形成術後の不妊治療成績について
Outcomes of infertility treatment after falloposcopic tuboplasty at our hospital

須賀 真美，兵頭 慎治，鍋田 基生
Mami Suga，Shinji Hyodo，Motowo Nabeta
つばきウイメンズクリニック 〒 791-1104 愛媛県松山市北土居 5 丁目 11 番 7 号
TSUBAKI Women’s Clinic

要 旨： 当院では，卵管通過障害の不妊患者に対し積極的に卵管鏡下卵管形成術（FT： falloposcopic
tuboplasty，以下 FT）を行っている．当院での FT 後の妊娠率，妊娠に関連する因子，その後の治療経過について検討した．2017 年 1 〜 9 月に FT を施行した 121 例のうち，除外症例を除く 98 例を対象とした．
1，3，6，9 ヶ月後までの妊娠率，年齢，血中 AMH 値，クラミジア感染既往，子宮内膜症，開腹歴，またART 移行例について検討した．FT 後 non-ART 妊娠は，1 ヶ月後 10 例（11. 2％），3 ヶ月後 26 例（29. 2％），6 ヶ月後 30 例（33. 7％），9 ヶ月後 31 例（34. 8%）であり，ART 妊娠は 6 ヶ月後 14 例（15. 7％），
9 ヶ月後27例（30.3％）であった.また，血中低AMH値，子宮内膜症，開腹歴，卵管閉塞を有する症例は，FT 後の一般不妊治療において，妊娠予後不良となる可能性があることが示唆された．
キーワード：不妊症，卵管因子，卵管鏡下卵管形成術（FT）
ランニングヘッド：当院における卵管鏡下卵管形成術後の不妊治療成績
英文要旨： At our hospital，we actively perform falloposcopic tuboplasty （hereinafter，FT）for
infertile patients with tubal obstruction. We examined the pregnancy rate after FT，factors
associated with pregnancy，and the subsequent course of treatment. Of the 121 patients who
underwent FT between January and September 2017，98 patients were enrolled after excluding
the ineligible patients. The pregnancy rate; age; blood anti-Müllerian hormone （AMH）level;
history of chlamydial infection and laparotomy; endometriosis; and transition to assisted
reproductive technology（ART）were evaluated after 1，3，6，and 9 months. Non-ART
pregnancies after FT were observed in 10 patients（11. 2%）after 1 month，26 patients （29. 2%）
after 3 months，30 patients（33. 7%）after 6 months，and 31 patients （34. 8%）after 9 months，and ART pregnancies were observed in 14 patients （15.7%）after 6 month，27 patients （30.3%）
after 9 months. Moreover，it was suggested that patients with low blood AMH level，endometriosis，a history of laparotomy，and fallopian tube obstruction have poor pregnancy
prognosis in general fertility treatment after FT.
キーワード：infertility，tubal factor，falloposcopic tuboplasty

緒言（目的，背景）
女性側の不妊原因のうち約 3 割が卵管因子といわれ妊症患者に対し，積極的に FT を行っている．
当院における FT 施行後の妊娠率，妊娠に関連する因子，その後の治療経過について検討した．

ている．
その原因は，上行性感染，子宮内膜症，器質的な圧迫や癒着，異物などがあげられる．
卵管鏡下卵管形成術（FT： falloposcopic tuboplasty）
は，卵管通過障害が対象と方法あり，自然妊娠を望む患者に対する有効な治療手段とし当院では，スクリーニング検査として全症例に子宮卵．
当院では，卵管通過障害を有する不管造影検査（HSG :Hysterosalpngography）を施行し，て知られている1）
2）

受付 2020 年 12 月 8 日 / 受理 2021 年 3 月 30 日
責任著者：須賀 真美 e-mail［suga@tsubaki-wc.com］

19卵管狭窄もしくは閉塞と診断された症例に積極的に FT

後 31 例（34. 8％）
であった．
また，
ART 累積妊娠が，6ヶを施行している．閉塞と診断した症例には直ちに FT を

月後 14 例
（15. 7％），9 ヶ月後 27 例（30. 3％）であった．

勧めている．
また，狭窄と診断した症例のうち過去に不FT 施行後 9 ヶ月には，non-ART 妊娠および ART 妊娠

妊治療歴がある場合は，閉塞症例と同様に直ちに FT をの計 58 例（66. 3％）が妊娠に至った（図 1）．

勧めているが，過去に不妊治療歴がない症例には，タイ

FT 後 9 ヶ月時点での妊娠状況は，non-ART 妊娠群

ミング療法や人工授精（AIH）を複数回行っても妊娠成31 例，ART 妊娠群 27 例，3 ヶ月以降で治療中止した

立しない場合に FT を施行するようにしている．
また，明症例を含む未妊娠群 40 例であった（図 2）．この 3 群間

らかな卵管水腫は適応から除外している．

で妊娠関連因子について比較検討を行った．

2017年1 〜 9月に当院でFTを施行した121例のうち，手術施行時年齢は 23 〜 43 歳で，non-ART 妊娠群が3 ヶ月未満に受診を中止した 23 例を除く 98 例を対象

平均 33. 7 歳，ART 妊娠群が平均 34. 5 歳，未妊娠群がとした．
本研究は，当院の倫理審査委員会で承認を受け

平均 35. 2 歳であった．
同順で上昇傾向にはあったが，そた後，当該期間に同意を取得した患者に対して行われた． れぞれの対象間に有意差はなかった （図 3）．
1，3，6，9 ヶ月後までの妊娠率と，9 ヶ月後の時

不妊期間は 3 〜 120 ヶ月で，non-ART 妊娠が平均点での non-ART 妊娠，ART 妊娠，未妊娠の 3 群間にお25. 6 ヶ月，ART 妊娠が平均 23. 9 ヶ月，未妊娠が平均いて，
年齢，
血中AMH値，
クラミジア感染既往，
子宮内膜

34. 7 ヶ月であった．未妊娠群でやや長い印象はあった症，開腹歴，卵管障害の程度と部位について，それぞれ比が，有意差は認めなかった （図 4）．

較検討した．
検定には F 検定，Sidal 法を用いた．

血中 AMH 値は 0. 15 〜 22. 8ng/mL で，non-ART 妊
娠が平均 5. 45ng/mL，ART 妊娠が平均 4. 36 ng/mL，

結果

未妊娠が平均 3. 98ng/mL で non-ART 妊娠群で高値であったが、有意差は認めなかった （図 5）．

FT による合併症の発症はなかった．3 例が卵管通過

クラミジア感染の既往では，non-ART 妊娠が 9. 7％，

困難で手術を完遂できず，4 例が術後卵胞発育を認め

ART 妊娠が 11. 1％，未妊娠が 5％であり、妊娠率に関与なかった．また，3 例に高度な男性不妊が判明した．そしていなかった （図 6）．

れらはいずれも，3 ヶ月以内に ART に step up していた．

子宮内膜症有病率は，non-ART 妊娠が 6. 5％，ART

FT 施行後の妊娠率は，タイミング妊娠・AIH 妊娠を妊娠が 7. 4％，未妊娠が 15％であった．
有意差はなかっ含むnon-ART累積妊娠が，1 ヶ月後10例（11.2％），
3ヶたものの，未妊娠群では non-ART 妊娠群と比較して 2

月後 26 例（29. 2％），6 ヶ月後 30 例（33. 7％），9 ヶ月

倍以上の有病率であった（図 7）．

図120

FT 後の累積妊娠率

図2

FT 施⾏後の経過

図3

⼿術施⾏時年齢

図4

FT 施⾏までの不妊期間

21

22

図5

AMH

図6

クラミジア感染

図7

内膜症

図8

開腹歴

図9

卵管通過障害の部位と程度

開 腹 歴 は，non-ART 妊 娠 が 9. 7 ％，ART 妊 娠 が
11. 1％，未妊娠が 30％と増加傾向にあり，non-ART 妊
娠群と未妊娠群間で有意差を認めた （図 8）．

考察

FT 施行後、同一周期でも妊娠しており，FT は施行後

卵管通過障害の部位と程度について比較した．
多くの直ちに効果があることがうかがえた．また，non-ART

場合，障害部位は１ヶ所ではなく多発しており，狭窄部

妊娠は，6 ヶ月後の 33. 7％までは増加傾向にあったが ，位が近位と遠位部にある場合は遠位狭窄とした．
卵管閉

9 ヶ月後は 34. 8％と，妊娠率に大きな変化はなかった．

塞症例では，
non-ART妊娠率は12.9%と低い傾向にあっ末岡らは，FT 治療後の妊娠成績に関して，FT 成功例

た．また，近位狭窄例では non-ART 妊娠率が 50％以上のうち約 30％が妊娠に至り，妊娠が成立するまでの期あり，FT の有効性が示されたものの，遠位狭窄例では間は平均 7. 3 ヶ月で，妊娠症例のうちの 87％が 1 年経

3 群間に差がなかった（図 9）．

過するまでに妊娠を成立させていたと報告している 2）．
当院でも FT 後 6 ヶ月以降の non-ART 妊娠は約 30％でプラトーとなっており，
妥当な結果と考える．
今回の検討では，年齢，不妊期間，クラミジア感染既往

23

の有無で non-ART 妊娠，ART 妊娠，未妊娠の 3 群間に大きな差はなかった．
しかし，塩谷らは，FT 後であっても 39 歳以上で妊娠率は低下するため，年齢にも留意が必要であると報告している 3）．また，FT 後 6 ヶ月で累積妊娠率は 80％以上となるため，術後早期に ART を選択すべき症例にはタイミングを逸さないよう助言が必要との提言もある 3）．今回の我々の検討では，年齢因子で差を認めなかったが，年齢を考慮して FT 後の治療戦略を考える必要があるだろう．
また，
血中AMH値での比較検討では，有意差はなかったものの non-ART 妊娠，ART 妊娠，未妊娠の順に低下傾向にあった．AMH は，生殖補助医療における妊娠率との関連性は弱いが、不妊治療を受けている女性，特にAMH が非常に低い患者へのカウンセリングには臨床的に有要である 4），という報告もあり，FT 後に患者と治療方針について相談する際に，留意したい項目である．
子宮内膜症の有病率は，non-ART 妊娠群で低い傾向にあり，子宮内膜症は以前から報告があるように，卵管通過障害の原因にとどまらず，体内受精に影響があると示唆された 5）．
開腹歴のある症例では，non-ART 妊娠群と比較して未妊娠群が多かった．
卵管近位狭窄の症例は，non-ART 妊娠群が多い傾向にあり，Tanaka らの報告にもあるように，FT のよい
また、卵管閉塞を有する症例は，適応であるといえる 6）．
non-ART 妊娠で低い傾向にあり，たとえ FT で閉塞卵管が開通しても，卵管の機能的障害があり妊娠に至らない可能性がある，または術後早い段階で再狭窄・再閉塞している可能性があると考えられた．
以上から，卵管通過障害のある不妊患者において，血中低AMH値，子宮内膜症，開腹歴，卵管閉塞を有する症
例は，FT後であっても妊娠予後不良となる可能性があり，早期にARTにstep upをすすめる指標となると考える．
また，FT は卵管通過障害のある不妊患者にとって，
一般不妊治療での妊娠成立に効果的な治療方法であるが，年齢やその他の妊娠関連因子を考慮し，術後の治療方針や step up を決定していくことが重要と考える．

利益相反状態の開示
今回の論文に関して開示すべき利益相反はありません．

24

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日本 IVF 学会雑誌 Vol. 24，No. 1，25 -28，2021

ー原著 ー

東京の不妊症症例における新型コロナウィルス抗体（SARS-CoV-2 IgG）測定の結果
The measurement of SARS-CoV-2 IgG among the infertile patients in Tokyo

中川 浩次，堀川 隆，月花 瑤子，三井 悠，石山 俊輔，板倉 彰子，中尾 佳月，森山 梓，
片岡 尚代，壽圓 裕康，黒田 恵司，小代 裕子，高見澤 聡，杉山 力一
Nakagawa K, Horikawa T, Gekka Y, Mitsui Y, Ishiyama S, Itakura A, Nakao K, Moriyama A, Kataoka H, Juen H, Kuroda K,
Ojiro Y, Takamizawa S, Sugiyama R
杉山産婦人科新宿 〒 160-0023 東京都新宿区西新宿 1-19-6 山手新宿ビル
Sugiyama Clinic Shinjuku

要 旨： 2020 年 5 月〜 6 月の第 1 回目の緊急事態宣言解除直後の当院へ通院中の性成熟期の不妊女性
1, 500 名を対象に新型コロナウィルス抗体陽性率を検討した．
方法としては，書面による本人の同意を得た後ホルモン採血の際の余剰血清を用い，新型コロナウィルス抗体は SARS-CoV- 2 IgG 抗体測定キット（ELISA; DARUI BIOTECH 社製）を用いて測定した。対象者の平均年齢は 38. 4 歳であった。1, 500 名のうち 17 名（1. 1%）において SARS-CoV- 2 IgG が陽性を示した．これら 17 名のうち海外渡航歴を有していたのは 3 名（17. 6％），発熱の既往を認めたのは 2 名（11. 8％）であり，残りの 12 名（70. 5％）は本人に全く心当たりのないままに不顕性感染をしていたと推測された．不顕性感染者が他者への感染を起こす
ことは十分に予測されるため，我々，生殖医療に携わる医療従事者であっても，一人一人が感染しないよ
うな対策を十分に講じる必要があると考えられる．
キーワード：新型コロナウィルス抗体 IgG，発熱，不妊女性，不顕性感染，海外渡航歴
ランニングヘッド：不妊症患者の新型コロナウィルス抗体陽性率
英 文 要 旨： The COVID- 19 has been pandemic since February, 2020, and in April, 2020,declaration of the state of emergency applied to the whole nation in Japan. Moreover, the JSRM
suddenly issued the recommendation stating that the start of new treatment cycle for infertility
treatment had better be postponed. Therefore, the clinicians dealing with infertility treatment inJapan were confused what and how they have to do, because there was little accurate
information about COVID- 19 available. While meantime, we measured and evaluated the SARSCoV- 2 IgG among the infertile patients living in Tokyo. Between May and June in 2020, the totalof 1, 500 infertile women who wished to have a baby were recruited in this evaluation. After
written informed consent was obtained from all subjects, the extra blood sample was kept in thefreezer（- 1 8 ℃）until its use. The SARS-CoV- 2 IgG ELISA kit was used for measuring theantibodies and the sample showing higher titer than the control was judged as positive. The 17
women showed positive and the prevalence was 1. 1%（17/ 1, 500）. Among them, only 2 women（11. 7%）had a history of fever-up, and 3 had oversea travel records（17. 6%）, and 12 women（70. 5%）might be latently infected. Since these women might be contagious, the clinicians haveto pay attention not to catch the COVID- 19.
キーワード：SARS-CoV- 2 IgG, Fever up, Latent infection, Oversea travel

緒

言したが，現在でも新規感染者数や新型コロナウィルス
関連の死者数も増加の一途をたどり，我々の生活様式

2020 年 1 月に新型コロナウィルスの新規感染者がも大きく変化した．2020 年 1 月の段階では新型コロナ

本邦で初めて確認され，2021 年 2 月で 1 年以上が経過

ウィルスの生態や特徴が何も分かっていなかったため

受付 2021 年 2 月 7 日 / 受理 2021 年 3 月 11 日
責任著者：中川 浩次 e-mail［awaodori 84057@gmail.com］

25

日本中が大騒ぎとなり，さらに新規感染者数の増加に社製）を用いて測定した．

伴い2020年4月に政府から緊急事態宣言が発出された．

判定は新型コロナウィルス陰性血清の抗体価との比

この緊急事態宣言の発出後、産婦人科領域でも大きな較をすることで判断し，試薬メーカーの推奨する基準よ変化を強いられ，2020 年 4 月に日本生殖医学会から， り上昇している血清を「陽性」と判断した．
陽性の判断は，「不妊治療に関して新規治療の開始を見合わせること， また，測定を行った時期より遡って直近 3 か月以内の外不妊治療に関するその他の非緊急処置をすべて延期す

国への渡航歴，本人及び家族の発熱（37. 5℃以上）の有ることを推奨いたします」という内容のメールが会員

無に関してもアンケート法にて調査した．

全員へ通知され，臨床の現場で様々な葛藤が生じた．
2020 年春の段階では，新規感染者数は新聞やテレビ等

結で連日繰り返し報道されていたが，我々生殖医療に従果事する者にとっては性成熟期の女性がどの程度感染し対象症例 1, 500 名の平均年齢は 38. 4 歳であった．こているのかは全く不明であった．そのような状況下にの 1, 500 名のうち，新型コロナウィルス IgG 抗体が陽性

おいて我々は，2020 年 5 月〜 6 月の緊急事態宣言下を示したのは 17 名（1. 1％）であった（表１）．
抗体陽性の時期に東京や東京近郊に在住している性成熟期女性

17名のうち、
海外渡航歴を有していたのは3名（17.6％）の新型コロナウィルス抗体保有率を調査する機会を得であり，発熱の既往を認めたのは2名（11.8％）であった．

たので報告する．

これらの 5 名（直近 3 か月以内の外国への渡航歴，もしくは 37. 5℃以上の発熱を認めた）に重複している症例はなかったため，17 名中 12 名
（70. 5％）
は、
本人に全く

対象と方法

心当たりのないままに不顕性感染をしていたと推測さ

挙児希望のため杉山産婦人科新宿を受診した女性に対して新型コロナウィルスに対する抗体測定を行うこ

れる
（図１）
．
一方，この 12 名，本人ではなく家族に発熱を認めた症例は３ 名に認めた．

とに関して院内の倫理委員会の承認を得た．2020 年 5
月 22 日〜 6 月 24 日までの間に，当院を受診し，さらに考

不妊治療のためのホルモン採血が必要であり，かつ新型察

コロナウィルス抗体測定に関して書面による同意を得

新型コロナウィルス感染を診断するには，主に２ 通られた 1, 500 名の女性を対象とした．抗体測定のためりの方法があり，鼻腔内や口腔内の検体を PCR で検査の検体は，ホルモン検査のために採取した血液の残血清

方法と血清中の新型コロナウィルスに対する抗体を測を用いた．
まず，ヘパリンナトリウム添加のベノジェク

定する方法とである．PCR 検査は，症状の有無に関わト真空採血管で血液を 5ml 程度採取し，転倒・混和したらず，ウィルスが検査部位（鼻腔内や口腔内等）に一定数後，速やかに 3, 300rpm で 5 運管遠心分離を行う．血漿以上存在していることで感染と診断する検査である．
新

成分を凍結用スピッツに移し - 18℃にて抗体測定まで型コロナウィルスそのものを直接検出しているので，

しかし，感染能を
凍 結 保 存 し た．新 型 コ ロ ナ ウ ィ ル ス 抗 体 は SARS- 「今現在」感染していることが分かる．
CoV- 2 IgG 抗体測定キット（ELISA; DARUI BIOTECH

表1

検査対象の背景

測定時期

当院

東京 A#1

東京 B#22020 年 5 月，6 月

2020 年 6 月

2020 年 12 月

対象症例数（人）

1,500

1,971

3,399

年齢（歳，平均）

38.4

-

性別

女性

男女

男女

コロナ抗体陽性者数（人）

17

2

31

抗体陽性率（％）

1.1

0.1

0.91

#1 厚生労働省：抗体保有調査結果 HPより抜粋

26

有するウィルスが体内に存在している（例えば腸管内-#2 厚生労働省：抗体保有調査（第２回）速報結果 HPより抜粋

図1

新型コロナウィルス抗体陽性者の内訳（ｎ＝ 17）

抗体陽性 17 名のうち，発熱の既往を認めたのは２名（11.8％），
海外渡航歴を有していたのは 3 名（17.6％）であった．
これらの 5 名（直近３か月以内の外国への渡航歴，もしくは 37.5℃以上の発熱を認めた）に重複している症例はなかったため，17 名中 12 名（70.5％）は，本人に全く心当たりのないままに不顕性感染をしていたと推測される．

等）
が，鼻腔内や口腔内にウィルスを認めないか，或いは （17/ 1, 500）であったことから，検討を行った時期では，少量の場合は，PCR 検査では検出できない．
一方，抗体

少なくとも 100 名に 1 人程度の割合でコロナウィルス

検査は，症状の有無に関わらず，ウィルスに感染したこに感染していたことが明らかとなった．
また，これらのとを証明する検査となるが，現在，ウィルスに感染中か陽性者のうち，70. 5％では，本人の発熱の既往もなく，

あるいは，感染し治癒した後なのか，さらには，治癒してまた，直近 3 か月の海外渡航歴がない，いわば本人としからの期間等を明確に明らかにすることは不可能であては，全く心当たりのない女性であった．
これらの結果る．感染既往を検出するには適している検査である．今から，1, 500 名中，本人に新型コロナウィルスに感染し回抗体測定に使用した検査キットは，中国製の Durai

た，と心あたりがあったのは 5 名，0. 3％であり，非常にBiotech 社製の ELISA キットを用いた．
本キットを用い少数であることが明らかとなった．

て測定したところ，
健常成人/結核患者
（80名）
を用いた

現在では新型コロナウィルス感染症の典型的な症状

偽陽性率は 2. 5％（2/ 80）
であり，一方，新型コロナウィ

は「発熱」
「倦怠感」
「空咳」であるが，2020 年 5 月当時

ルス陽性患者（79 名）の陽性率は 82. 3％（65/ 79）と報では，新型コロナウィルスに感染した際の典型的な症状

告されている ．

は、「発熱」であったため，我々もこの症状に焦点を絞っ1）

東京都の新型コロナウィルス感染症対策サイトによて解析をした．
しかし，我々の検討では，感染者 17 名のると，2020 年 4 月 1 日〜 6 月 30 日の 3 か月間の東京の う ち「 発 熱 」 と い う 形 で 症 状 を 呈 し た の は ２ 名

都におけるコロナウィルスの新規陽性者数は 3, 584 名 （11. 8％）であった．
つまり，88. 2% の症例では「発熱」
これらの新規陽性者の年齢分布についてであったが 2），いう形での症状を呈さず，不顕性感染が成立していたとは詳細には報告されていない．日本生殖医学会からは， 考えられた．2021 年現在でも，不顕性感染は他者への一方的に不妊治療に関して新規治療の開始を見合わせ

感染のリスクを負っているので，隔離が必要とは考えらること，という通達が届いたが，発熱等の症状を有したれるが，現実的には不顕性だとなかなか見つけ出すこと

患者が受診したり高血圧，糖尿病などの生活習慣病の管が困難である．

理を主に行っている内科系のクリニックとは違い，受診抗体保有者の割合に関して，厚生労働省は 2020 年 6

者全員が性成熟期の健常女性であるという点から非常

月に東京都の一般住民 1, 971 名を対象として調査をに特徴的な年齢層の女性のみが受診する不妊クリニッ

行っており 3），その時の陽性率は 0. 1％（2/ 1, 971）でクにおける新規感染者数や感染既往者の現状が調査さあった．一方，2021 年 2 月の調査では東京都の抗体陽れていない状況でのこの通達は，ただただ我々不妊クリ

性率は 0. 91％（31/ 3, 399）と若干の上昇を認めている

ニックの不安を煽るものでしかなかった．
今回の我々のが，集団免疫獲得には程遠い状態であると考えられる 4）．

検 討 で は、 性 成 熟 期 女 性 の 抗 体 陽 性 率 は 1. 1 ％我々の検討では、2020 年 6 月の段階でのコロナ抗体の27

抗体陽性率は 1. 1％と，東京都の同時期の 0. 1％と比して統計学的に有意に（P< 0. 001）高い抗体陽性率を示した．
東京都の検討では，対象者の性別や年齢層は公表されてはいないが，幅広い年齢層の男女を対象としていると推察され，その点が我々との相違点（我々の対象は性成熟期女性）であると考えられる．
新型コロナウィルスの抗体が陽性であったということは，新型コロナウィル
スの感染既往を示していると考えることができるため，
これらの対象年齢や性別が異なることで，不顕性感染のリスクが異なるのか興味のあるところである．
この度，2020 年 5 月〜 6 月の第１ 回目の緊急事態
宣言解除直後の東京における性成熟期女性での新型コ
ロナウィルス抗体陽性率を検討した．
同時期の東京都の一般住民男女における抗体陽性率より高い値を示した
ことは，大変興味深い結果となった．
これらの抗体陽性者の約７ 割は発熱なし，海外渡航歴なし，不顕性感染を示したことになる．
不顕性感染者が他者への感染を起こすことは十分に予測されるため，我々、生殖医療に携わる医療従事者であっても，一人一人が感染しないような対策を十分に講じる必要があると考えられる．

参考文献
1） 	 Lin D, Liu L, Zhang M, Hu Y, Yang Q, Guo J Dai Y, Xu Y,
Cai Y, Chen X, Huang K, Zhang Z: Evaluations of theserological test in the diagnosis of 2019 novel coronavirus（SARS-CoV-2）infections during the COVID-19 outbreak.
Eur J Clin Microbiol Infect Dis,
https://doi.org/10.1007/s10096-020-03978-6, 2020.
2） 	 東京都の新型コロナウィルス感染症対策サイト．報告日別による陽性患者数の推移．
https://stopcovid19.metro.tokyo.lg.jp/,（2021.02.01）
3） 厚生労働省 HP. 抗体検査について．抗体保有調査結果
h t t p s : // w w w . m h l w . g o . j p /s t f /s e i s a k u n i t s u i t e /bunya/0000121431_00132.html,（2021.02.06）
4）   厚生労働省 HP：抗体検査について．抗体保有調査（第２回）
速報結果．
h t t p s : // w w w . m h l w . g o . j p /s t f /s e i s a k u n i t s u i t e /bunya/0000121431_00132.html,（2021.02.06）

28

日本 IVF 学会雑誌 Vol. 24，No. 1，29 -33，2021

ー原著 ー

HIV-1 感染男性精液からのウイルス除去における
sil-selectTM と PercollTM の臨床的有用性
Clinical efficacy of semen processing for HIV-1 positive male semen using sil-selectTM and PercollTM

嶋田 秀仁１，久慈 直昭２Hideto Shimada1, Naoaki Kuji2
1

銀座こうのとりレディースクリニック 〒 104-0061  東京都中央区銀座 1 丁目 3-9 マルイト銀座ビル 7F
2
東京医科大学 医学部 産科婦人科学教室 〒 160-0023  東京都新宿区西新宿 6-7-1
1

Ginza-Kounotori ladies clinic
Department of OB/GYN, Tokyo Medical University2

要 旨： HIV-1感染男性精液からのウイルス除去における，silane-coated colloid silicagel（sil-selectTM）を用いた精液処理（連続密度勾配遠心法＋ swim up）による精子回収率と，回収精子の妊孕性を検討した．
洗浄精子を用いた不妊治療のために当院を受診した HIV- 1 感染男性と陰性女性夫婦で二種類の密度勾配
溶剤で洗浄を希望した 31 例の検討では，swim up 後の回収精子濃度は PercollTM と sil-selectTM それぞれ 4. 41 ± 6. 04，5. 56 ± 11. 44（x 106/ml）で，有意差は認められなかった．sil-selectTM を用いて精液処理を行ったのち，この精子を用いて行った 103 症例の顕微授精の成績は移植当たり妊娠率 26%（68/ 262），着床率 21%（75/ 361）で，精液洗浄例のうちこれまで 48 例の生産分娩を得ており，妻への水平感染も，児の先天異常の発生も認められていない．sil-selectTM を用いた精液処理は従来の PercollTMと比較して HIV- 1 治療奏功例においては精子回収率に差がなく，回収精子による不妊治療の結果も良好であると考えられた．
キーワード：HIV- 1，Silane，Percoll，顕微授精，密度勾配
ランニングヘッド：sil-selectTM を用いた HIV- 1 感染男性からのウイルス除去
英 文 要 旨： To evaluate clinical efficacy of semen processing for HIV- 1 positive male semen
using silane-coated colloid silicagel（sil-select TM）, sperm recovery was compared with theprocessing using PercollTM. Sperm concentration after processing（continuous density gradientand swim up）using sil-selectTM and PercollTM for 31 semen specimens were 4. 41 ± 6. 04, 5. 56± 11. 44（x 106/ml）, respectively. Utilizing recovered sperm, 26%（68/ 262）pregnancy rate per
embryo transfer and 2 1%（7 5/ 3 6 1）implantation rate were achieved by ICSI. Out of 1 0 3
couples, forty-eight live birth were achieved. No congenital anomaly and no infection to female
partner were recognized so far. In conclusion, sil-select TM has the similar clinical efficacy as
PercollTM on semen processing for HIV- 1 positive male.
キーワード：density gradient，HIV- 1，ICSI，Percoll，silane

緒言（目的，背景）Human Immunodeficiency virus- 1（以下 HIV- 1）は現在でも世界の多くの罹患者を持つ感染症であり，我が国でもいまだに新規感染者が発生している 1）.

遊液にウイルスが存在しないことを確認した後にこれを用いて人工授精・体外受精などの不妊治療を行う試
みがなされてきた 2）.
PercollTM（ポリビニルピロリドン添加コロイドシリカゲル）は 1977 年に発売開始された密度勾配溶剤で，HIV- 1 は精液を介して水平感染することが確認され物理学的特性や分離への応用について詳しく研究されているため，1990 年代より密度勾配溶剤を用いた洗ており 3），現在でも細胞や細胞内小器官，ウイルスなど

浄操作により精液中のウイルスを除去，洗浄後の精子浮様々な粒子の分離・濃縮に用いられている . ただこの受付 2021 年 3 月 11 日 / 受理 2021 年 3 月 17 日
責任著者：嶋田 秀仁 e-mail［hidetoddler@yahoo.co.jp］

29

溶剤は研究目的に開発された薬剤であるため組織反応

ナショナル）にそれぞれ Hanks 液を重層，傾斜回転式密性 ，エンドトキシンの混入 などの潜在的な危険性が度勾配作成機にて垂直から 76 度傾斜させ回転，それぞ提起され，実施に臨床上有害事例の報告はないものの，

れ 2 本 の 連 続 密 度 勾 配 を 作 成 し た 8）.

現在日常臨床での使用が困難となっている . そのためHanks 液にて 2 倍希釈したのち，計 4 本に 1- 2ml の希釈

精子洗浄の目的で現在わが国でも用いられているのは液化精液を重層，1600g，10 分間遠心分離した .

Isolate ，Sepaspermなどの silane-coated colloid

清を廃棄，沈渣を 0. 5ml に懸濁し，1ml の培養液に二重ポリビニルピロリドンと異なってのチューブを用いて沈渣を下層に静かに静置，45 分間

silane は製造工程における滅菌や洗浄が容易であり，こswim up し，上層 0. 5ml を採取して精子濃度を測定するれを用いた密度勾配溶剤ではエンドトキシンの混入がとともに，HIV- 1 遺伝子の有無を nested–RTPCR 法に少ない．

て検索した 9）.

4）

5）

TM

silicagel である .

TM

液化精液を
上

HIV- 1 感染男性の精液から HIV- 1 ウイルスを分離す
る 場 合， 我 々 は silane-coated colloid silicagel が

2. sil-selectTM による精液処理後の顕微授精の臨床成績

PercollTM に比較して洗浄効率が低くなる可能性を見出2014 年 4 月から 2018 年 12 月までに sil-select を用したため ，Percoll
6）TMの潜在的な有害作用を含めて患いて洗浄を行った 103 症例について，洗浄精子を用い者の同意を取ったうえでこの密度勾配溶剤を用いてた顕微授精の精液を検討した . 顕微授精の卵巣刺激は，

HIV- 1 感染男性の精液を洗浄，洗浄後精子をもちいて顕

hMG/recombinant FSH 150- 225IU 連 日 投 与 で，微授精を行って多数の妊娠出産例を得てきた 7）. しかClomiphene citrate 併用，GnRH antagonist 併用法

し HIV- 1 感染症に有効な薬剤が次々に開発され，この治あるいは GnRH agonist 併用 long 法を，患者の特性に応療を求めて来院する患者の殆どで血中ウイルス量が測じて選択した . hCG 5000 単位（ゴナトロピン 5000，

定感度以下となってきたため，洗浄にかかわる密度勾配ASKA）による trigger 後，34- 35 時間で経膣採卵，3- 4についても，ウイルスの除去効率より，できるだけ人体

時間の前培養後 ICSI を行った .

に害の少ない溶剤が望ましいと考えられる .

medium（SydneyIVF

そこで我々は 2014 年から従来の Percoll

TM

と並行し

培養液は sequential

Fertilization，Cleavage，Blastocyst medium, Cook Medical; 東機貿）
を用い，採て，endotoxin 含有量の少ない silane-coated colloid

卵後 72- 144 時間で全胚凍結した．全胚凍結した理由は，

silicagel である sil-selectTM を用いて精液洗浄を行っ

胚培養液の HIV- 1 の有無を再度 PCR で確認したためでてきた . 今回，2 種の密度勾配溶剤の洗浄効率の比較， あり，凍結は Cryotop（北里コーポレーション）
にてガラ
および sil-selectTM 処理でえられた精子を用いた生殖補ス化凍結を行った . 凍結胚移植は全例，ホルモン補充

助医療（ICSI）の臨床成績を検討したので報告する .

周期での胚移植を行っており，月経 3 日目からエストラ
ジオールパッチ 0. 72mg（エストラーナ，久光製薬）4 枚
隔日貼付を 2 週間続けたのち，内膜厚が 7 ｍｍ異常と対象と方法なっていることを確認，その後エストラーナに加えてプ

1. PercollTM と sil-selectTM の洗浄効率の比較

ロゲステロン膣坐剤 100mg（ルティナス膣錠，フェリン

2014 年 4 月から 2016 年 2 月までに，当院で患者のグファーマ）
1 日 3 錠を開始，開始 6 日目に胚盤胞を移植と sil-selectの二つの溶剤を用した . 以後，エストラジオールパッチおよびプロゲス

いて精液洗浄を行った 31 症例について解析した . こ

テロン膣坐剤を継続し，胚移植後 2 週間で血中 hCG 測の間，従来型の PercollTM を用いるか，あるいは新しい培定（妊娠判定基準；hCG ≧ 2mIU/mL）にて妊娠成立をを用いるか，または二つの方法確認した．
妊娠成立した場合，ホルモン補充は妊娠 12 週

同意のもと Percoll

TM

養液である sil-selectTMTMを同時に行うかは患者の選択とした. なおsil-selectTMのみで洗浄する症例は，原則血中ウイルスが直近 6 か月になるまで継続した .
統 計 学 的 検 討 は，swim up 精 子 濃 度 に つ い て は
PercollTM 群，sil-selectTM 群 で そ れ ぞ れ 2 回 行 っ たで測定感度以下の症例のみとした .
精液は 3- 5 日間の禁欲期間ののち，用手法にて清潔なswim up 濃度を平均した値を，t 検定にて比較解析し、
P< 0. 05 を有意差ありとした .

容器に採取した .
精液洗浄の方法は以下の通りである . 試験管（Round

なお，本研究は東京大学倫理委員会にて臨床研究とし

tube, # 2059, Falcon）中に 2ml の 80% PercollTM（北里て認可を受けている . 研究参加者には文書による同意

コーポレーション），あるいは 2ml の 90% sil-selectTMを得て研究参加を募った .

7）（FertiPro NV, Belgium;30

メディー・コンインター

結sil-select で低下する懸念があり 6），また sil-select にお果

ける HIV- 1 合併重度男性不妊症例での精子回収効率が1．Percoll と sil-select による洗浄結果
TM

TM

不明であったことから，血中ウイルス量の高い症例，または重度の男性不妊症例では PercollTM のみ，あるいは

31 例全例で swim up 運動精子が得られた . swim
up 精 子 濃 度 は Percoll 群 4. 41 ± 6. 04 ｘ 106/ml，sil-

sil-selectTM と PercollTM 二つの方法で洗浄を行った .

selectTM 群 5. 56 ± 11. 44 ｘ 106/ml で，有意な差はみ2014年4月より2018年12月までにsil-selectTM にられなかった（表 1）.

より洗浄した精子を用いて行った生殖補助医療の結果

31 例中，28 例が直近 6 か月までの血液中ウイルス遺を表２ に示す. 洗浄総数は103 症例，妻の平均年齢は伝子検査で測定感度以下（20-40copies/ml以下）
であっ

34.8歳と比較的若年である. 妊娠率は採卵あたり29%，

たが，測定感度以上であった 3 例も含め，31 例全例で胚移植あたり26%，着床率は21%であった（生化学的妊TM

Percoll 群，sil-select 群いずれも洗浄後の精子浮遊娠も含む）. 生化学的妊娠も含めた妊娠数は68 例で，う液には PCR で HIV- 1 遺伝子は検出されなかった .

ち48 例
（71%）
が生産分娩に至っている. 現在のところ

２．sil-selectTM による洗浄精子を用いた生殖補助医療

妻への水平感染も，児への先天異常もみられていない.

TMの結果
swim up および除去に PercollTM と差がないことが確考認されたため，2016 年 3 月以降は HIV- 1 治療奏功例に察

は原則全例 sil-selectTM による洗浄を勧めた . ただし，今回の検討では，従来用いられていた PercollTM の代

前述したようにウイルス量が高い症例では洗浄効率が用として，silane-coated colloid silicagel が同等に有

表1

PercollTM と sil-selectTM による精液洗浄
PercollTM

Sil-selectTM

31

31

症例数
原精液

濃度
（× 10 /ml，mean ± SD）

71.0 ± 60.6

運動率（%，mean ± SD）

49.8 ± 17.0

6swim up 精子濃度（× 10 6/ml）

表2

4.41 ± 6.04

5.56 ± 11.44

sil-selectTM 洗浄精子による生殖補助医療n.s（2014/4-2018/12）

n
洗浄総数

p

（%）

103

夫年齢（歳，mean ± SD）

36.9 ± 5.0

妻年齢（歳，mean ± SD）

34.8 ± 4.9

精子濃度（× 10 /ml, mean ± SD）

51.6 ± 38.9

精子運動率（%，mean ± SD）

62.3 ± 76.4

swim up 精子濃度（× 10 /ml, mean ± SD）

0.14 ± 0.26

66

血中ウイルス濃度測定感度以下

89/103（86）

妊娠（採卵あたり）55/192（29）

68/262（26）

妊娠（胚移植あたり）
平均移植胚数（mean ± SD）

1.38 ± 0.39

着床率75/361

総妊娠数

68

生産

48

（21）
（71）

31

用であるかを，sil-selectTM を用いて検討した .

その染男性精液の処理においてどちらが有効であるかは現

結果重症男性不妊以外で，かつ治療が奏功して HIV- 1 血

時点では不明である . 実際我々の経験では，血中ウイ

中 濃 度 が 測 定 感 度 以 下 の 症 例 に 対 し て は，80 ％

ルス量が高い症例で洗浄精子液に PercollTM 処理ではを用いても swim

HIV- 1 遺伝子が検出されなかったが，sil-select 処理でup で回収される精子濃度は有意差がなく，またこの精は検出された例が複数存在し，PercollTM 処理が適当で子を用いた生殖補助医療においても水平感染を起こすある症例の存在が示唆されている . さらに密度勾配処ことなく，良好な治療成績を得ることができた .

理自体が精子に悪影響を与える可能性も近年指摘されPercollTMに代えて 90% sil-selectTM

近年の HIV- 1 治療の進歩により，一定期間血中のウイ
ルス量が測定感度以下である患者については，性交を含ており 16- 17），今後密度勾配溶剤自体を使用しない精液処理法を検討する必要もあるだろう .

む接触による水平感染の危険性は無視できるとする意

HIV- 1 治療が進んで治療が奏功する患者が多くなっ

見が強くなっている . すでに 2009 年に，HIV- 1 感染ても，結婚したカップルの 6 人に一人と言われる不妊症男性であっても血中ウイルス濃度が感度以下，血中患者は HIV- 1 感染男性カップルにも存在する . 従って

CD 4 が一定期間以上持続すれば自然性交による妻への妊娠のために生殖補助医療を必要とする HIV- 1 感染男，これ

性と非感染女性の夫婦はこれからも皆無にはならない

らの事実から適切な HIV 化学療法施行時に男女間感染であろうし，そのほかにも治療が奏功せず血中ウイルスがおこる確率はおよそ 1 万回の性交渉につき 1 件と推量が測定感度以下にならない患者や，妻の年齢の関係で計されている 11）.

できるだけ早い治療を望む患者も一定数存在するであ

感染リスクは極めて低いとする報告がなされ10）

このような事実から，接触による感染の危険性が実際にろう . その際，密度勾配溶剤処理がもつ潜在的な害をは天文学的に少ないにも関わらず，現在でも診療拒否を含考慮しながらも，適切な密度勾配溶剤の選択を含む洗浄

む社会的差別の標的となってしまうHIV- 1 感染症患者の法の知識はやはり必要であると考えられる .

状 況を打 破しようと，2 0 1 6 年より U n d e t e c t a b l e= Untransmittable（U = U；
「血中 HIV- 1 遺伝子量が測

メディーコンインターナショ
なおsil-selectTM は現在，

定感度以下であれば性行為を含む接触による感染は無ナル（大阪府）より，「精子密度勾配遠心用培地」（Extra

視しうる」）という認識が HIV- 1 診療を行う医療者の間

Sperm SelectionTM）として販売されているが，内容はで共有され始め 12），我が国でも日本エイズ学会が 2018

sil-selectTM 90% と全く同一である .

年にこのキャンペーン支持を打ち出している 13）.
我々は 2002 年から PercollTM による精液洗浄と，洗浄精子浮遊液による顕微授精治療を行ってきたが，このような HIV- 1 感染症診療の変化により，精液に含まれる
HIV- 1 ウイルス量も飛躍的に低減していることが予想される . そうなると，洗浄効率が高いために緊急避難的に使用されていた PercollTM の使用が，risk-benefit の面からその妥当性に疑問が生じる .

そこで我々も2014 年より，通常の生殖補助医療で用いられている密度勾配溶剤が PercollTM の代替となるかどうかを確認することとした .
silane-coated colloid silicagel 密度勾配による精液処理は，PercollTM と同等の精子回収率があることが報告されてきた 14- 15）. ただ，その時点で密度勾配を使用
しないswim upのような方法もあり，また製造物責任法の関係から生産企業そのものが PercollTM の使用を勧め
な い 立 場 を 示 し た こ と か ら，PercollTM と silanecoated colloid silicagel の分離効率を詳細に比較した
文献は少ない . 今回の結果は精液所見の比較的良い，治療が奏功している男性の精液についてのものであり，
重症男性不妊や，血中ウイルス量が感度以上の HIV- 1 感

32

参考文献
1） 	 令和元（2019）年エイズ発生動向年報（1 月 1 日～ 12 月 31 日）。
エイズ予防情報ネット．
https : //api-net .jfap.or.jp/st atus/japa n /nenpo . ht ml，（2021.2.28）
2）  	S empr in i A E , L ev i - S ett i P, B ozzo M , R av i zza M ,Taglioretti A, Sulpizio P, Albani E, Oneta M, Pardi G:
Insemination of HIV-1-negative women with processedsemen of HIV-1-positive partners. Lancet, 340（8831）:
1317-1319, 1992.
3） Pertoft H: Fractionation of cells and subcellular particles
with Percoll. J Biochem Biophys Methods, 44（1-2）: 1-30,
2000.
4） Arora M, Carver-Ward JA, Jaroudi KA, Sieck UV: Is Percoll
safe for in vivo use? Fertil Steril, 61（5）: 979-981, 1994.
5） Scott L, Smith S: Mouse in vitro fertilization, embryo
development and viability, and human sperm motility in
substances used for human sperm preparation for assisted
reproduction. Fertil Steril, 67（2）: 372-381, 1997.
6） Kuji N, Yoshii T, Hamatani T, Hanabusa H, Yoshimura Y,
Kato S: Buoyant density and sedimentation dynamics ofHIV-1 in two density-gradient media for semen processing.
Fertil Steril, 90（5）: 1983-1987, 2008.

7） I noue O, Kuji N , Ito H , Ya mada M , H a mat a n i T,
Oyadomari A, Kato S, Hanabusa H, Isaka K, Tanaka M:
Clinical efficacy of a combination of Percoll continuous
density gradient and swim-up techniques for semen
processing in HIV-1 serodiscordant couples. Asian J
Androl, 19（2）: 208-213, 2017.
8） 	 吉田宏之・久慈直昭・吉井毅・田中雄大・橋場剛士・浅田弘法・
末岡浩・吉村泰典・野澤志朗・加藤真吾：連続密度勾配洗浄法の標準 化と精液よりの HIV-1 ウイルス除去．日産 婦誌，
55：274（Ｓ -256），2003.
9）  	Kato S, Hanabusa H, Kaneko S, Takakuwa K, Suzuki M,
Kuji N, Jinno M, Tanaka R , Kojima K, Iwashita M,
Yoshimura Y, Tanaka K: Complete removal of HIV-1 RNA
and proviral DNA from semen by the swim-up method:
assisted reproduction technique using spermatozoa freefrom HIV-1. AIDS, 20（7）: 967-973, 2006.
10） 	Attia S, Egger M, Müller M, Zwahlen M, Low N: Sexualtransmission of H I V-1 according to vira l load andantiretroviral therapy: systematic review and metaanalysis. AIDS, 23（11）:1397-1404, 2009.
11） 	S up e r v i e V, V i a rd J P, C o st a g l i o l a D , B r eba n R :Heterosexual risk of HIV-1 transmission per sexual act
under combined antiretroviral therapy: systematic review
and bayesian modeling. Clin Infect Dis, 59（1）: 115-122,
2014.
12） 	Undetectable=Untra nsmittable. Prevent ion AccessC a m p a i g n . h t t p s : //w w w. p r e v e n t i o n a c c e s s . o r g /undetectable. Published July 2016. Updated February 2021,（2021.2.28）
13）「U=U キャンペーン」支持について．日本エイズ学会．
https://jaids.jp/news/%e3%80%8cuu%e3%82%ad%e3%83%a3%e3%83%b3%e3%83%9a%e3%83%bc%e3%83%b3%e3%80%8d%e6%94%af%e6%8c%81%e3%81%ab%e3%81%a4%e3%81%84%e3%81%a6/ （2021.2.28）
14）Perez SM, Chan PJ, Patton WC, King A: Silane-coatedsilica particle colloid processing of human sperm. J Assist
Reprod Genet, 14（7）: 388-393, 1997.
15）Söderlund B, Lundin K:. The use of silane-coated silica
particles for density gradient centrifugation in in-vitro
fertilization. Hum Reprod, 15（4）: 857-860, 2000.
16）Zini A, Mak V, Phang D, Jarvi K: Potential adverse effectof semen processing on human sperm deoxyribonucleic
acid integrity. Fertil Steril, 72（3）: 496-499, 1999.
17）Zini A, Nam RK, Mak V, Phang D, Jarvi K: Influence ofinitial semen quality on the integrity of human sperm
DNA following semen processing. Fertil Steril, 74（4）:824-827, 2000.

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34

お知らせ
第24回 日本 IVF 学会学術集会
共催：日本臨床エンブリオロジスト学会

ご挨拶
COVID-19の第４波が日本全国に押し寄せ，10都道府県の緊急事
態宣言も延長が繰り返されている昨今，皆様如何お過ごしでしょうか．
さて，学術集会まであと4 ヶ月と迫り，参加登録と一般演題の募集を開始する時期となりました．
塩谷雅英理事長ともご相談させていただき，醍醐渡邉クリニックの
渡邉浩彦先生とともに進めております，第24回日本 IVF 学会学術集会および臨床エンブリオロジスト学会は，現在のところ現地開催する
予定で準備を進めております．
大会テーマの“Think of it!”に絡めた，“考えること”のラインアップもほぼ整いました．2021年10月2-3日に滋賀県の琵琶湖ホテルで皆様にお目にかかれることを楽しみにしております．
第24回日本 IVF 学会学術集会長

村上 節（滋賀医科大学産科学婦人科学講座教授）
学会概要（案）【10 月 2 日】

【10 月 3 日】・丁寧な不妊診療を考える（副会長講演）

・生殖医療の原点を考える

・着床環境改善策を考える（シンポジウム）

・自然の脅威への対応を考える

演者：渡邉浩彦先生

演者：中山貴弘先生 神谷博文先生
後藤 栄先生 宮崎 薫先生

・受精法のブレイクスルーを考える（日本臨床エンブリオロジスト学会）
演者：畠山将太先生 鈴木亮祐先生
前川朋広先生 佐藤琢磨先生

・産婦人科診療のマイルストーンを考える（イブニングセミナー）
演者：早川 智先生

対談：福田愛作先生

松元まろん様

演者：吉田仁秋先生

・卵巣刺激の個別化診療を考える
・精巣と卵巣の機能低下を考える
演者：島田昌之先生

・着床障害の原因を考える（ランチョンセミナー）
演者：木村文則先生

・ART の保険診療化を考える

演者：Chang-Woo Choo 先生 涌井菜央先生

杉山力一先生・MRK 症候群の妊孕性を考える
演者：木須伊織先生

根津八紘先生◦スケジュール

会期：2021年 10月 2日（土 ） 〜 10月 3日（日）		

会場：琵琶湖ホテル （滋賀県大津市浜町2-40）◦学術集会長村上 節（滋賀医科大学産科学婦人科学講座教授）◦学術集会副会長 渡邊 浩彦（醍醐渡辺クリニック院長）◦メインテーマ

Think of it!

◦その他ご案内

懇親会や会場などのご案内，参加登録の詳細は
学会ウェブサイト（ https://www.jsar.or.jp/ ）にてご案内予定です．
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日本 IVF学会雑誌発行における投稿論文募集のお知らせ
2012年より, 日本 IVF 学会では学会雑誌を新刊・発行する運びとなりました. 本雑誌は体外受精−胚移植に関する基礎的研究, 臨
床的研究に関する論文を掲載し, 新たな知見を広く世界に知らせることを目的としています.
対象読者は, 体外受精−胚移植に関連するすべての研究者, 臨
床医, 技術者で, 体外受精という技術を集学的に理解し, 評価し,そして高めることに目標を置き, 編集発行されます.
関係者の皆様には, ふるってご投稿をよろしくお願いいたします.
次号の発行は 2021 年 9 月 を予定いたしております．因みに原稿の締め切りは 2021 年 7 月 20 日（火）とさせていただきます．

取り扱いテーマ
妊能および不妊, IVFおよび生殖補助, 生殖内分泌学, 生殖生理学, 受精, 配
偶子提供 , 卵母細胞および卵巣発生学, 精母細胞および精巣発生学 , 着床前
遺伝子診断（PGD）, 胎児の遺伝性疾患 , 着床および器官形成 , 妊娠 , 胎児 ,出産, 倫理, カウンセリング

詳細はウェブサイト（https://www.jsar.or.jp/dissertation/submission/）をご覧ください．

一般社団法人

日本 IVF 学会

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日本 IVF 学会雑誌 投稿規定
2021年4月1日改定

１．本誌の目的と対象読者
本誌は生殖医療に関連する基礎研究，臨床研究に関する論文を対象とし，新たな知見を広く世界に知らせることを目的とする．対象読者は生殖医療に関わる全ての研究者，臨床医，技術者，培養士，検査技師，看護職，心理士等である．
２．投稿資格著者は原則として本学会会員に限る．ただし，編集委員会が認めた場合はこの限りでない．
３．投稿内容と種類
投稿論文は原著，短報，総説，レター，症例，その他とし，他誌に発表，掲載されていない学術論文に限る．
４．倫理的配慮
研究に際しては「ヘルシンキ宣言」，厚生労働省「臨床研究に関する倫理指針」，および外科関連学会協議会「症例報告を含む医学論文および学会発表における患者
プライバシイー保護に関する指針」などの倫理指針を遵守し，投稿に際しては倫理委員会の承認を得たことを論文中に記載する．
５．利益相反投稿者は本会にて定める「利益相反に関する指針」に従い，利益相反状態を明らかにするため，所定の申込書に記入し，投稿論文とともに提出し，開示すべき利益相
反関係があれば論文中に記載する．
６．投稿論文の採否
論文は編集委員会において審査・査読を行い，採用決定したものを掲載する．審査の結果，原稿の修正を求めることがある．
７．著作権
本誌掲載論文の著作権は本学会に帰属する．
８．執筆要項
１）原稿は，原則としてパーソナルコンピューター
上のWord で作成する．
２）原稿は原則として日本語とし，A4版横書き，11ポ
イント，1 ページに約1,200字（40字×30行）とする．
３）投稿原稿の1 編は，本文，文献，図表を含めて以
下の枚数以内とする．
原著論文 8 枚（約9,600字以内）
総
説 8 枚（約9,600字以内）
研究報告 8 枚（約9,600字以内）
短報 4 枚（約4,800字以内）
症例報告 4 枚（約4,800字以内）
レ タ ー 2 枚（約2,400字以内）
そ の 他 8 枚（約9,600字以内）＜原著論文／研究報告＞
原著論文は，表紙，要旨・キーワード，本文，参考文献，図・表・写真およびその説明文から構成される．※（和文・英文）
１）第１ページに表題※，著者名※，所属※，住所，連絡先（氏名，所属，住所，電話番号，FAX番号，
Eメールアドレス）を記載する．表題には略語を使用しない（以下の略語は本文中も含め使用可と す る：AID，AIH，ART，BT，E２，ET，
FSH，hCG，hMG，ICSI，IMSI，IVF，LH，
MESA，OHSS，P４，PCO，PCOS，PESA，
PRL，TESE，MD-TESE）．
２）第２ページには和文要旨（400字以内），キーワード（5個以内，50音順）およびランニングヘッド（25字以内）を記載する．
３）第３ページには英文要旨（250ワード以内），キーワ
ード（5個以内，ａｂｃ順）を記載する．
４）第４ページ以降の本文は緒言（目的，背景），対
象と方法，結果，考察，（謝辞），参考文献の順に記載する．
５）参考文献は引用順に記載し，本文中にも同じ文献番号をつける．著者名は全員とし，下記のように記載する．雑誌名については，原則として省略法で記載する（例：日IVF会誌，日受精着床
会誌，日産婦誌，Hum Reprod，Fertil Steril等）．
①雑誌
著者名：表題．雑誌名，巻（号）：頁－頁，発行年（西暦）．※（号数）の記載については有／無いず
れも可とする.
〈例１〉三宅麻喜・笠井剛・藤江道子・平田修司・
星和彦：アルギネート包埋法またはマイ
クロピペットを用いた極少数精子の凍結保存法について．日受精着床会誌，22：58-61, 2005．
〈例２〉Nakamoto T, Okada H, Nakajima T, Ikuta
A, Yasuda K, Kanzaki H: Progesterone
induces the fibulin-1 expression in humanendometrial stromal cells. Hum Reprod,
20: 1447-1455, 2005.
②書籍
著者名：表題．編集者名，書名，pp頁－頁，発行所，発行年（西暦）．
〈例１〉森崇英：ARTの倫理と体制．森崇英・久
保春海・岡村均編，図説ARTマニュアル，
pp 9-17，永井書店，2002．
〈例２〉Okamura H, Katabuchi H, Nagai R: Ultrastructure of human ovulation:
histofunctional parameters. In: Motta,
PM., ed. Microscopy of reproduction anddevelopment: a dynamic approach, pp 155161, Antonio Delfino Ediore, 1997.

37

③ウェブサイト
そのページの題名．ウェブサイト名．入手先URL，（入手日付）〈例１〉倫理に関する見解．公益社団法人日本産科婦人科学会．
http://www.jsog.or.jp/ethic/index.html，（2015.10.1）④ウェブサイトから入手した文献
著者名．文献名．版表示，出版年．入手先URL，（入手日付）〈例１〉厚生労働省編．最近の医療費の動向（年次版）．平成26年度，2015．
http://www.mhlw.go.jp/topics/medias/
year/14/index.html，（2015.10.1）⑤学会ガイドライン
インターネットから引用した場合は④（ウェブサイトから入手した文献）を，雑誌から引用した場合は①（雑誌）を参照のこと．
６）図・表・写真：図・表はパワーポイント，写真はjpegデータで作成する．個々に符号をつけ，本文中に挿入位置（図１，表１，写真１など）を明示する．掲載時のサイズは編集委員会に一任とする．写真は白黒印刷で掲載される．
７）表記が規定の通りではない原稿について，再提出をお願いする場合がある．
＜総説＞
最近における内外の研究または理論的技術的知識を総合してまとめたもので，できるだけ解説的な内容とする．
原著論文と形式は同様であるが項目分けについて
は特に定めず，著者の自由な構成とする．本文の後に謝辞，文献，表，図の順に記載する．
＜短報／症例報告＞
論文のうち臨床症例やより簡潔な形での研究の報告が可能なものについては症例報告ないし短報とする．
１）第１ページには原著論文と同様な内容を記載する．
２）第２ページには要旨（250字以内），
キーワード（３語）およびランニングヘッド（25字以内）を記載する．
３）第３ページ以降，症例報告では緒言，症例報告，考察の項目に分け，短報はこれらの区分をつけないこととする．
４）参考文献は10編以内とする．
＜レター＞
レターは原著や症例報告より簡潔な形で報告が可
能なもの，また検査・診断・治療などの技術に関する新知見や，臨床に関する興味深い経験を簡潔に解説したものとする．
１）第１ページには原著論文と同様な内容を記載する．
２）第２ページ以降にはキーワード（３語）およびランニングヘッド（25字以内）ならびに本文を項目分けせずに記載する．
３）参考文献は５編以内とし，文献の表題を省く．

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９．原稿の送付方法
投稿論文は，「投稿フォーマット」に準じて記載したものを，日本ＩＶＦ学会の論文投稿用指定アドレス宛に，
E-mailにて投稿する．
詳細はウェブサイト（https://www.jsar.or.jp/dissertation/submission/）をご覧ください .
１０．別刷申し込み
別刷を希望する場合，初校の校正時に必要部数を申し出ること．記入がない場合は別刷不要とみなし，掲
載後の別刷希望には応じられない．別刷料金は50部
10,000円（税抜）とする．

一般社団法人 日本IVF 学会 定款
第１章

総

則

（名 称）
第１条 当法人は，一般社団法人日本 IVF 学会と称する．学会の英文名称は，Japan Society of Assisted
Reproduction（略称 JSAR）とする．
（目 的）
第２条 当法人は，生殖補助医療である体外受精法 (In Vitro Fertilization( 以下「IVF」という．)) 及びその関連領域に関する研究の発展，知識の交流を図り，もって医学の進歩に寄与することを目的として，次の事業を行う．
(１) 学術集会の開催(２) 各種の学術的調査，研究(３) 内外関連学術団体との連絡及び提携(４) 学会雑誌の発行(５) その他当法人の目的達成に必要な事業（主たる事務所の所在地）
第３条 当法人は，主たる事務所を横浜市に置く．
（公告方法）
第４条 当法人の公告は，官報に掲載して行う．
（機 関）
第５条 当法人は，当法人の機関として社員総会及び理事以外に理事会及び監事を置く．

第２章

社員及び会員（会員の資格及び種別）
第 6 条 当法人の会員は，当法人の目的に賛同する医師，エンブリオロジスト ( 胚培養士），臨床検査技師，看護師，薬剤師，臨床心理士，研究者又は理事会の承認を得た者とし，次の４種に分類する．なお，名誉会員及び功労会員の資格並びにその他の事項については，本定款に定めるもののほか，理事会の定める規則による．
(１) 正 会 員 当法人の目的に賛同して当法人の活動に参画するために入会した個人(２) 名誉会員 当法人の目的に賛同して入会した会員のうち，IVF に関する研究の発展に関する貢献が顕著な者(３) 功労会員 当法人の進歩発展に特別の功績があり，当法人の発展に功労があった者(４) 賛助会員 当法人の目的に賛同し，当法人の事業を賛助するために入会した団体又は法人（社 員）
第 7 条 一般社団法人及び一般財団法人に関する法律（以下「法人法」という．
）第 11 条第 1 項第 5 号等に規定する社員は，正会員の中から理事会において選定された者とする．
２ 社員は，法人法第 35 条以下に規定する社員総会を組織し，当法人の重要事項を審議，議決する．

39

（入 会）
第８条 当法人の会員となるには，当法人所定の入会申込方法により入会の申込みをし，会費を納入のうえ，
理事長の承認を得なければならない．再入会の場合も同様とする．
（会 費）
第９条 会員は，当法人の目的を達成するため必要とする経費として，別途定める規則に従い会費を支払う義務を負うものとする．ただし，名誉会員は会費を納めることを要しない．
（正会員の権利）第１０条 正会員は次の権利を有する．
(１) 当法人の主催する学術集会に定められた参加費で参加することができる．
(２) 当法人の雑誌に投稿することができる．
（退社又は退会）
第１１条 社員は，次に掲げる事由によって退社する．
(１) 正会員の資格を喪失したとき．
(２) 社員本人の退社の申し出．退社の申し出は 1 か月前にするものとするが，やむを得ない事由があるときは，会費をすべて支払った後にいつでも退社することができる．なお，既に支払った会費の払い戻しはしないものとする．
(３) 死亡(４) 除名２ 会員は，次に掲げる事由によって退会する．
(１) 会員本人の退会の申し出．ただし，既に支払った会費の払い戻しはしないものとする．
(２) 死亡又は解散(３) 会費の不払い（期限を定めて催告した場合に限る．）(４) 除名３ 社員の除名は，正当な事由があるときに限り，法人法第３０条及び第４９条第２項 第１号 の定める社員総会の特別決議によってすることができる．
４ 会員の除名は，正当な事由があるときに限り，理事会の決議によってするものとする．
（社員名簿及び会員名簿）
第１２条 当法人は，社員及び会員の氏名及び住所を記載した社員名簿及び会員名簿を作成し，当法人の主たる事務所に備え置くものとする．社員名簿をもって法人法第３１条に規定する社員名簿とする．
２ 当法人の社員及び会員に対する通知又は催告は，社員名簿及び会員名簿に記載した住所又は社員及び会員が当法人に通知した居所にあてて行うものとする．

第３章

社員総会

（招 集）
第１３条 当法人の定時社員総会は，毎事業年度末日の翌日から３か月以内に招集し，臨時社員総会は，必要に応じて招集する．
２ 社員総会は，法令に別段の定めがある場合を除くほか，理事会の決議に基づき理事長がこれを招集する．
理事長に事故若しくは支障があるときは，副理事長がこれを招集する．
３ 社員総会を招集するには，会日より１週間前までに，社員に対して招集通知を発するものとする．
４ 前項の招集通知は，書面による通知の発出に代えて，社員の承諾を得て，電磁的方法により通知を発することができる．

40

（招集手続の省略）
第１４条 社員総会は，社員全員の同意があるときは，招集手続を経ずに開催することができる．
（議 長）
第１５条 社員総会の議長は，理事長がこれに当たる．ただし，理事長に事故若しくは支障があるときは，副理事長又はその他の理事が当たる．
（決議の方法）第１６条 社員総会の決議は，法令又は定款に別段の定めがある場合を除き，総社員の議決権の過半数を有する社員が出席し，出席した当該社員の議決権の過半数をもって行う．
２ 書面による議決権の行使は，議決権行使書面に必要な事項を記載し，当法人に提出して行う．
３ 電磁的方法による議決権の行使は，当法人の承諾を得て，議決権行使書面に記載すべき事項を当法人に提供して行う．
４ 前２項の規定によって行使した議決権の数は，出席した社員の議決権の数に算入する．
（社員総会の決議の省略）
第１７条 社員総会の決議の目的たる事項について，理事又は社員から提案があった場合において，その提案に社員の全員が書面又は電磁的記録によって同意の意思表示をしたときは，その提案を可決する旨の社員総会の決議があったものとみなす．
（議決権の代理行使）
第１８条 社員は，当法人の社員又は議長を代理人として，議決権を行使することができる．ただし，この場
合には，社員総会ごとに代理権を証する書面を提出しなければならない．
２ 前項の社員又は代理人は，代理権を証明する書面の提出に代えて，当法人の承諾を得て，同書面に記載すべき事項を電磁的方法により提供することができる．
（社員総会議事録）
第１９条 社員総会の議事については，法令に定める事項を記載した議事録を作成し，議長及び議事録署名人が署名又は記名押印して１０年間当法人の主たる事務所に備え置くものとする．
２ 議事録署名人の選定は，議長が出席した社員の内１名を指名し，出席した当該社員の議決権の過半数をも
って行う．

第４章

役

員

（役員等）
第２０条 当法人に次の役員を置く．
(１) 理事長
１名(２) 副理事長
若干名(３) 常務理事
２０名以内(４) 理事
４５名以内(５) 監事
２名以内（役員等の職務）第２１条 当法人の役員等の職務は次のとおりとする．
(１) 理事長は，法令及び本定款で定めるところにより，当法人を代表し，業務の執行を統括する．
（２）副理事長は，理事長を補佐し，理事長が事故その他の事由により職務を執行できないときはその職務を代行する．
(３) 常務理事は，理事会において別に定めるところにより，当法人の業務を分担執行する．
41

(４) 理事は，理事会を構成し，法令及び本定款で定めるところにより，当法人の業務を執行する．
（理事の資格）第２２条 当法人の理事は，当法人の社員又は会員若しくはその関係者の中から選任する．ただし，必要があるときは，上記以外の者から選任することができる．
（理事及び監事の選任の方法）
第２３条 当法人の理事及び監事の選任は，社員総会において総社員の議決権の過半数を有する社員が出席し，出席した当該社員の議決権の過半数をもって行う．
２ 副理事長及び常務理事の選任規程は別に定める．
（代表理事）
第２４条 当法人に理事長１人を置き，理事会において理事の過半数をもって選定する．
２ 理事長は，法人法上の代表理事とする．
３ 理事長は，当法人を代表し会務を総理する．
４ 他の理事は理事長を補佐し，理事長に事故があるときは，理事長があらかじめ理事会の承認を得て定めた順位に従いその職務を代行し，理事長が欠けたときはその職務を行う．
（理事及び監事の任期）第２５条 理事及び監事の任期は，選任後 2 年以内に終了する事業年度のうち最終のものに関する定時社員総会の終結の時までとする．
２ 任期満了前に退任した理事又は監事の補欠として選任された者の任期は，前任者の任期の残存期間と同一とする．
３ 増員により選任された理事の任期は，他の在任理事の任期の残存期間と同一とする．
（報酬等）
第２６条 理事及び監事の報酬，賞与その他の職務執行の対価として当法人から受け取る財産上の利益は，社員総会の決議によって定める．
（監事の職務及び権限）
第２７条 監事は，理事の職務の執行及び会計を監査し，法令の定めるところにより，監査報告を作成する．
２ 監事は理事に対して，いつでも事業の報告を求め，当法人の業務及び財産の状況を調査することができる．

第５章

理 事 会

（招 集）
第２８条 当法人の理事会は，年２回招集し，臨時理事会は，必要に応じて招集する．
２ 理事会は，理事長がこれを招集し，会日の１週間前までに各理事及び各監事に対して招集の通知を発するものとする．ただし，緊急の場合にはこれを短縮することができる．
３ 理事長に事故若しくは支障があるときは，副理事長がこれを招集する．
（招集手続の省略）
第２９条 理事会は，理事及び監事の全員の同意があるときは，招集手続を経ずに開催することができる．
（議 長）
第３０条 理事会の議長は，理事長がこれに当たる．ただし，理事長に事故若しくは支障があるときは，副理事長がこれに代わるものとする．

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（理事会の決議）
第３１条 理事会の決議は，法令又は定款に別段の定めがある場合を除き，議決に加わることができる理事の過半数が出席し，その過半数をもって行う．
（理事会の決議の省略）
第３２条 理事が理事会の決議の目的である事項について提案をした場合において，当該提案につき議決に加わることができる理事の全員が書面又は電磁的記録により同意の意思表示をしたとき（監事が当該提案に異議を述べた場合を除く．
）は，当該提案を可決する旨の理事会の決議があったものとみなす．
（職務の執行状況の報告）
第３３条 理事長は，自己の職務の執行の状況を理事会に報告するものとする．
（理事会議事録）
第３４条 理事会の議事については，法令に定める事項を記載した議事録を作成し，出席した代表理事（代表
理事に事故若しくは支障があるときは議長たる副理事長）及び監事がこれに署名又は記名押印し，１０年間
主たる事務所に備え置くものとする．

第6章

会

計

（事業年度）
第３５条 当法人の事業年度は，毎年８月１日から翌年７月３１日までとする．
（計算書類等の定時社員総会への提出等）
第３６条 理事長は，毎事業年度，法人法第 124 条第 1 項の監査を受け，かつ同条第 3 項の理事会の承認を受けた計算書類 ( 貸借対照表及び損益計算書 ) 及び事業報告書を定時社員総会に提出しなければならない．
２ 前項の場合，計算書類については社員総会の承認を受け，事業報告書については理事がその内容を定時社
員総会に報告しなければならない．
（計算書類等の備置き）
第３７条 当法人は，各事業年度に係る貸借対照表，損益計算書及び事業報告書並びにこれらの附属明細書（監事の監査報告書を含む．
）を，定時社員総会の日の２週間前の日から５年間，主たる事務所に備え置くものとする．
（剰余金の不配当）
第３８条 当法人は，剰余金の配当はしないものとする．

第7章

解散及び清算（解散の事由）
第３９条 当法人は，社員総会の決議その他法令で定められた事由により解散するものとする．
（残余財産の帰属）第４０条 当法人が清算をする場合において有する残余財産は，社員総会の決議を経て，公益社団法人及び公益財団法人の認定等に関する法律第５条第１７号に掲げる法人又は国若しくは地方公共団体に贈与するもの
とする．

43

第8章

附

則

（設立時社員の氏名及び住所）第４１条 当法人の設立時社員の氏名及び住所は，次のとおりである．
神戸市
塩 谷 雅 英神戸市
森 本 義 晴岐阜県大垣市古 井 憲 司（設立時役員）第４２条 当法人の設立時理事，設立時監事及び設立時代表理事は，次のとおりとする．
設立時理事
塩 谷 雅 英設立時理事
古 井 憲 司設立時理事
石 川 元 春
設立時理事
沖 津
摂
設立時理事
藏 本 武 志
設立時理事
髙見澤
聡
設立時理事
詠 田 由 美設立時理事
福 田 愛 作設立時理事
細 井 美 彦設立時理事
向 田 哲 規設立時理事
山 下 正 紀
設立時理事
吉 田
淳
設立時理事
吉 田 仁 秋設立時代表理事
塩 谷 雅 英設立時監事
森 本 義 晴設立時監事
久 保 春 海（最初の事業年度）
第４３条 当法人の最初の事業年度は，当法人成立の日から平成２９年７月３１日までとする．
（定款に定めのない事項）
第４４条 この定款に定めのない事項については，すべて法人法その他の法令の定めるところによる．

以上，一般社団法人日本 IVF 学会設立に際し，設立時社員 塩谷 雅英 他 2 名 の定款作成代理人である 司
法書士 田近 淳 は，電磁的記録である本定款を作成し，電子署名をする．
平成２８年１０月２１日
設立時社員

塩 谷 雅 英設立時社員

森 本 義 晴設立時社員

古 井 憲 司上記設立時社員の定款作成代理人
横浜市
司法書士
田近
淳
（登録番号 第９８１号）
改訂：平成３０年１０月２８日
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一般社団法人 日本IVF学会 役員■理事長

塩谷 雅英 （英ウィメンズクリニック 理事長）

■副理事長

古井 憲司 （クリニックママ 理事長）

■常務理事

石川 元春
沖津 摂
蔵本 武志
柴原 浩章
杉山 力一
髙見澤 聡
詠田 由美
福田 愛作
細井 美彦
向田 哲規
山下 正紀
吉田 淳
吉田 仁秋
渡邉 浩彦

（いしかわクリニック 理事長）
（楠原ウイメンズクリニック 培養室 培養部長）（蔵本ウイメンズクリニック 理事長）
（兵庫医科大学 産科婦人科学 主任教授）（杉山産婦人科 理事長）
（杉山産婦人科 新宿 副院長）
（アイブイエフ詠田クリニック 理事長・院長）（IVF大阪クリニック 院長）（近畿大学 学長）
（広島HARTクリニック 理事長・院長）（山下レディースクリニック 院長）（木場公園クリニック 理事長・院長）（仙台ARTクリニック 理事長）
（醍醐渡辺クリニック 院長）

■理事

浅田 義正
東口 篤司
安藤 寿夫
岩㟢 利郎
岩瀬 明
大谷 徹郎
岡田 英孝
岡本 純英
河村 寿宏
北脇 城
古賀 文敏
菅沼 信彦
鈴木 直
竹下 直樹
戸枝 通保
徳永 義光
中岡 義晴
中山 貴弘
楢原 久司
藤原 敏博
藤原 浩
松田 和洋
三谷 匡
村上 節

（浅田レディースクリニック 理事長）
（札幌エンドメトリウムリサーチ 代表）（豊橋市民病院 総合生殖医療センター センター長）（英ウィメンズクリニック 研究開発部長・東京農工大学名誉教授）（群馬大学大学院 医学系研究科 産科・婦人科学 教授）（神戸ARTレディスクリニック 院長）（関西医科大学 産婦人科 教授）（ART岡本ウーマンズクリニック 理事長・院長）（田園都市レディースクリニック 理事長・院長）（京都府立医科大学 産婦人科学教室 教授）（古賀文敏ウイメンズクリニック 理事長・院長）（名古屋学芸大学 看護学部 看護学科 教授）（聖マリアンナ医科大学 産婦人科学 教授）（東邦大学医療センター佐倉病院 臨床遺伝診療センター 教授）（ARTレディスクリニックやまうち 顧問）（空の森クリニック 理事長）
（IVFなんばクリニック 院長）（足立病院 生殖内分泌医療センター長）（大分大学医学部 産科婦人科学 教授）（フェニックスアートクリニック 院長）（金沢大学 産婦人科学 教授）（松田ウイメンズクリニック 理事長・院長）（近畿大学 生物理工学部 遺伝子工学科 学科長・教授）（滋賀医科大学 産科学婦人科学講座 教授）■監事

久保 春海 （東邦大学 名誉教授／日本不妊予防協会 理事長）
森本 義晴 （HORACグランフロント大阪クリニック 院長／ IVF JAPAN CEO）
（50音順）■事務局〒226-0003 神奈川県横浜市緑区鴨居6-19-20 株式会社ヒューマンリプロ・Ｋ 内
TEL：045-620-7560 FAX：045-620-7563 E-mail：info@ivf-et.net
WEB SITE：https://www.jsar.or.jp/（2020年11月1日改訂）

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編集委員会■ 編集委員長髙見澤 聡（杉山産婦人科 新宿）■ 副編集委員長

沖津 摂
竹下 直樹
竹内 巧

（楠原ウイメンズクリニック）（東邦大学医療センター佐倉病院）（リプロダクションクリニック東京）■ 編集委員

岩﨑 利郎 （英ウィメンズクリニック）
緒方 洋美 （オガタファミリークリニック）
菅沼 信彦 （名古屋学芸大学）
平岡 謙一郎 （亀田総合病院）
福永 憲隆 （浅田レディースクリニック）
古井 辰郎 （岐阜大学大学院）
細井 美彦 （近畿大学）
水野 里志 （IVF大阪クリニック）
藪内 晶子 （加藤レディスクリニック）（50音順）■ 編集委員会事務局〒226-0003 神奈川県横浜市緑区鴨居6-19-20 株式会社ヒューマンリプロ・Ｋ 内（2020年11月1日現在）■ 発行責任者

理事長 塩谷 雅英

発行日：2021年6月21日
発行者：一般社団法人 日本ＩＶＦ学会

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制 作：株式会社デュナミス
印刷所：株式会社東光社

Journal of Assisted Reproduction
Vol.24 No.1
2021

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w w w . j s a r. o r. j p

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