2010 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡二級技士技術認定試験問題
問１．ライソソームで正しいのはどれか．

Ｃ．揮発性が高い

Ａ．塩基性領域で高い活性を示す加水分解酵素を含む

Ｄ．リン脂質をよく固定する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．異物や不要になった細胞小器官の分解を担う
Ｃ．代表的な指標酵素はグルコース 6- ホスファターゼである

問 10．緩衝液で正しいのはどれか．

Ｄ．酵母や植物では，液胞がライソソームに相当する役割を担う

Ａ．ホスファターゼ類の酵素を検出する際はリン酸緩衝液を使用する

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．カコジル酸緩衝液にはヒ素が含まれている

問２．大きさの順に並んでいるのはどれか．

Ｃ．主に固定液の pH 調整のために使用する

1．肝細胞＞酵母菌＞ミトコンドリア＞ウイルス＞リボソーム

Ｄ．ミロニック液はカコジル酸緩衝液の一つである
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

2．酵母菌＞肝細胞＞ミトコンドリア＞ウイルス＞リボソーム
3．肝細胞＞ミトコンドリア＞酵母菌＞ウイルス＞リボソーム問 11．脱水で正しいのはどれか．

4．酵母菌＞肝細胞＞ミトコンドリア＞リボソーム＞ウイルス

Ａ．エタノールはアセトンより組織内の物質の流出が少ない

5．肝細胞＞酵母菌＞リボソーム＞ミトコンドリア＞ウイルス

Ｂ．脱水剤の分子量が小さいほど脱水が速い

問３．動物の細胞分裂で正しいのはどれか．

Ｃ．低濃度エタノール脱水は低温で行う方がよい

Ａ．有糸分裂と無糸分裂がある

Ｄ．試料は収縮しない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．細胞質の分裂と核分裂は同時に起こる
Ｃ．核膜は分散する

問 12．通常，紫外線重合を行う樹脂はどれか．

Ｄ．染色体の移動には中間径線維が関与している

Ａ．Epon 812

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．LR Gold問４．リボソームで正しいのはどれか．

Ｃ．Lowicryl K4M

Ａ．ミトコンドリアにも存在する

Ｄ．Spurr 樹脂
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．ATP が合成される
Ｃ．タンパク質と DNA から構成される

問 13．エポキシ系の樹脂はどれか．

Ｄ．粗面小胞体は小胞体にリボソームが結合したものである

Ａ．LR Gold

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．Araldite

問５．ゴルジ装置で正しいのはどれか．

Ｃ．Lowicryl K4M

Ａ．ゴルジ層板の数は１～２層である

Ｄ．Spurr 樹脂
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．DNA を持っている

問 14．Luft 法で使用されるＢ液の成分はどれか．

Ｃ．分泌顆粒はトランス側で形成される

Ａ．Epon 812

Ｄ．真核細胞に存在する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．DDSA問６．ホルムアルデヒドで正しいのはどれか．

Ｃ．MNA

Ａ．グルタルアルデヒドに比べて架橋が安定している

Ｄ．DMP-30
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．カルノフスキー固定液はグルタルアルデヒドとの混合液である
Ｃ．グルタルアルデヒドに比べて速やかに組織内へ浸透する

問 15．試料切削で正しいのはどれか．

Ｄ．タンパク質を架橋する速度は 4°C の方が室温より速い

Ａ．試料とナイフの距離は切削面に映るナイフの影の幅で測る

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．ナイフボートの水位は刃先の位置よりも高くする

問７．固定剤で正しいのはどれか．

Ｃ．ナイフの逃げ角は 10° に設定する

Ａ．パラホルムアルデヒドは酸化剤である

Ｄ．灰色の干渉色を示す切片の厚さは約 60 nm である
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．四酸化オスミウムは組織タンパク質を破壊することがある
Ｃ．アクロレインは毒性が強い

問 16．ミクロトーム室の環境として適切なのはどれか．

Ｄ．グルタルアルデヒドは脂質をよく固定する

Ａ．湿度が高い

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．埃が少ない

問８．グルタルアルデヒドで正しいのはどれか．

Ｃ．空気流が強い

Ａ．常温では無色の針状結晶である

Ｄ．振動が少ない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．固定された組織は淡黄色で硬くなる
Ｃ．タンパク質を固定する

問 17．ダイヤモンドナイフで正しいのはどれか．

Ｄ．分子量は約 1,000 である

Ａ．刃角 6° のナイフを使用する

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．ガラスナイフで試料面を平滑にしてから使用する

問９．四酸化オスミウムで正しいのはどれか．

Ｃ．刃先にはできるだけ触れないようにする

Ａ．精製直後の紫外線吸収スペクトルのピークは約 280 nm にある

Ｄ．アセトン液につけて洗浄する

Ｂ．分子量は約 54 である

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ（ 1 ）問 18．樹脂切片の干渉色が切片厚の薄い方から順に並んでいるのはどれ

2．レクチン法

か．

3．メセナミン銀法

1．銀

灰金 青

2．金銀

灰紫 青

4．ルテニウムレッド法

3．灰銀金青

4．銀金

青

灰 紫

Ａ．細胞表面の抗原検出に適している

5．灰銀金

紫 青

Ｂ．標識物質としては直径 10 nm 前後のコロイド金を使用することが多紫

5．セリウム塩法

紫問 28．免疫電顕法の包埋前染色法で正しいのはどれか．

問 19．超薄切片にチャターが起こる原因はどれか．

いＡ．薄切面の幅が大きい

Ｃ．通常，Lowicryl K4M 樹脂に包埋する

Ｂ．室温が低い

Ｄ．包埋後染色法と比較して抗原性が保存されている
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．切削速度が速すぎる
Ｄ．ナイフの逃げ角が小さすぎる

問 29．免疫電顕法の包埋後染色法を行ったところ，非特異的反応が強1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤかった．対策として正しいのはどれか．

問 20．電子染色で正しいのはどれか．

Ａ．抗体の希釈率を上げる

Ａ．酢酸ウラニル水溶液はアルカリ性である

Ｂ．反応温度を高くする

Ｂ．酢酸ウラニルはリン酸緩衝液と混ざると沈殿を生じる

Ｃ．反応時間を長くする

Ｃ．クエン酸鉛染色液は中性である

Ｄ．切片の洗浄回数をふやす
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．クエン酸鉛染色液は炭酸ガスに触れると沈殿を生じる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 30．免疫電顕法の包埋後染色法で正しいのはどれか．

問 21．超薄切片の染色で正しいのはどれか．

Ａ．抗体の浸透性を考慮する必要がある

Ａ．四酸化オスミウムには染色効果がない

Ｂ．標識物質としてはコロイド金を使用することが多い

Ｂ．グルタルアルデヒドには染色効果がある

Ｃ．二重免疫染色はできない

Ｃ．二重染色は酢酸ウラニル，鉛塩の順で行う

Ｄ．半定量的検討が可能である
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．原子番号の大きい金属を結合させることにより電子の散乱を増す
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 31．氷包埋法で正しいのはどれか．

問 22．トルイジンブルー染色で試料の中心部分が周辺より薄く染色されＡ．生体高分子やウイルスの観察に適するた．正しいのはどれか．

Ｂ．試料の冷却には液体窒素が適する

Ａ．エポキシ樹脂の浸透が不十分である

Ｃ．液体窒素で冷却したクライオトランスファーホルダーを使用して観察

Ｂ．中心部分は細胞成分が一部溶出している

する
Ｄ．散乱コントラストを利用して観察する

Ｃ．周辺部分は固定がよい

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．染色液の調整が不十分である
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 32．急速凍結法で正しいのはどれか．

問 23．脱樹脂しなくても染色できる染色剤はどれか．

Ａ．塩類濃度が高い試料では氷晶形成は起こりにくい

Ａ．ヘマトキシリン

Ｂ．浸漬法では融点 - 沸点間の温度差が小さい冷媒を選ぶ

Ｂ．エオシン

Ｃ．金属圧着法では冷却した純銅を使用する

Ｃ．トルイジンブルー

Ｄ．氷晶は凍結速度が速いと大きくなる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．メチレンブルー
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 33．オートラジオグラフィーで正しいのはどれか．

問 24．透過電顕観察の操作で正しいのはどれか．

Ａ．放射物質量が半分に減少する時間を半減期と呼ぶ

Ａ．像がドリフトしたので試料に弱い電子線をしばらく照射した

Ｂ．潜像形成能は放射線エネルギーによるＢ．撮影倍率より高倍率で焦点合わせを行った

Ｃ．β 線の飛程は α 線より短い

Ｃ．生物切片で撮影する際，わずかに過焦点にした

Ｄ．3H の半減期は約 12 年である
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．撮影倍率より高倍率で非点補正を行った
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 34．走査電子顕微鏡の生物試料処理で正しいのはどれか．

問 25．２万倍で撮影したネガを 1.2 倍に引き伸ばしてプリントした．

Ａ．赤血球を固定するには浸透圧が 200 mOsm の固定液を使用する

1 μm のスケールバーを入れるには，長さを何 mm にすればよいか．数値

Ｂ．試料をタンニン酸と四酸化オスミウムで処理すると二次電子の発生効を解答欄に記入しなさい．

率がよくなる

問 26．酵素と細胞内局在の組合せで正しいのはどれか．

Ｃ．O-D-O 法は細胞内の膜構造を剖出する方法の一つである

Ａ．アルカリホスファターゼ ― ライソソーム

Ｄ．臨界点乾燥法で酢酸イソアミルを使用するのは気化しやすいからであＢ．酸性ホスファターゼ ― 細胞膜る

Ｃ．チトクロームオキシダーゼ ― ミトコンドリア

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．チアミンピロホスファターゼ ― ゴルジ装置問 35．走査電子顕微鏡で加速電圧を下げた際に生じる現象として正しい

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤのはどれか．

問 27．ペルオキシダーゼの細胞化学で使用される方法はどれか．

Ａ．エッジ効果が軽減する

1．ジアミノベンチジン法

Ｂ．試料ダメージが増加する（ 2 ）Ｃ．焦点深度が深くなる

2．白金＜白金パラジウム＜金パラジウム＜金Ｄ．試料表面の情報が得られやすくなる

3．白金＜金パラジウム＜白金パラジウム＜金

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

4．金パラジウム＜白金＜白金パラジウム＜金
5．白金＜白金パラジウム＜金＜金パラジウム

問 36．電子で正しいのはどれか．
Ａ．正の電荷を持つ問 45．支持膜で正しいのはどれか．

Ｂ．電界中では電界の向きと逆の向きに力を受ける

Ａ．プラズマ重合膜は電子線に弱い

Ｃ．磁界中では磁界の向きと同じ向きに力を受ける

Ｂ．カーボン支持膜は高倍率撮影に適している

Ｄ．10 kV で加速されたときの波長は可視光線の波長に比べて非常に短い

Ｃ．ネガティブ染色ではグリッドに支持膜を貼る必要がある

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．膜が厚いほど電子散乱は少ない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 37．透過電子顕微鏡のレンズで正しいのはどれか．
Ａ．温度を一定に保つために冷却水を流す

問 46．透過電子顕微鏡の試料汚染防止で正しいのはどれか．

Ｂ．照射系レンズの励磁電流を変化させると像が回転する

Ａ．試料周辺を冷却する

Ｃ．ポールピースの材料は非磁性である

Ｂ．真空ポンプの油は交換せずに使用する

Ｄ．対物レンズの像面は制限視野絞り位置と一致している

Ｃ．写真フィルムは購入したままで使用する

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．試料への電子線照射を少なくする1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 38．電子レンズの収差で正しいのはどれか．
Ａ．回折収差は電子が波動性を有するために生じる

問 47．写真特性曲線で正しいのはどれか．

Ｂ．球面収差は絞りの孔径を小さくするほど大きくなる

Ａ．縦軸はネガの濃度，横軸はポジの濃度を示す

Ｃ．レンズの励磁電流が変動すると色収差が生じる

Ｂ．Ｕ字形の曲線である

Ｄ．歪像収差があると像のボケが生じる

Ｃ．感度の目安となる

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．傾きはコントラストを表す
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 39．電子銃で正しいのはどれか．
Ａ．電界放出型電子銃の陰極にはホウ化ランタン（LaB6）が使用される

問 48．透過電顕用スロースキャン CCD カメラによる画像記録で正しいの

Ｂ．ヘアピン型タングステンフィラメントの寿命はホウ化ランタンチップ

はどれか．の寿命より短い

Ａ．蛍光体で電子のエネルギーを可視光に変換する

Ｃ．冷陰極タイプの電界放出型電子銃は 10−8 Pa 以下の真空環境が必要である

Ｂ．デジタル信号を出力する
Ｃ．CCD を冷却すると感度が高くなる

Ｄ．熱電子放出型電子銃の電子線強度はフィラメント電流に比例する

Ｄ．フィルムよりダイナミックレンジが狭い

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 40．透過電子顕微鏡の焦点合わせで正しいのはどれか．

問 49．走査電顕像の分解能を高めるための操作で正しいのはどれか．

Ａ．正焦点で膜孔のコントラストが最も高い

Ａ．コンデンサーレンズを弱励磁にする

Ｂ．不足焦点の場合は膜孔の縁に明るい縞が現れる

Ｂ．加速電圧を高くする

Ｃ．高圧ワブラー機能を利用できる

Ｃ．対物絞りの孔径を大きくする

Ｄ．通常，生物試料の切片ではわずかに不足焦点で写真撮影を行う

Ｄ．作動距離を短くする

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 50．EDS と WDS による元素分析で正しいのはどれか．

問 41．透過電顕像のコントラストで正しいのはどれか．
Ａ．対物絞りを小さくすると位相コントラストが高まる

Ａ．極微量元素の分析に EDS を使用した

Ｂ．フレネル縞は位相コントラストにより生じる

Ｂ．多元素同時分析を行うために WDS を使用した

Ｃ．加速電圧を高くすると散乱コントラストが高まる

Ｃ．絶縁物試料には一般にカーボンを蒸着する

Ｄ．電子染色の目的は散乱コントラストを高めることである

Ｄ．WDS 分析では試料表面を平坦にする

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 42．走査電顕像のコントラストで正しいのはどれか．
Ａ．試料を傾斜させるとコントラストが低くなる
Ｂ．試料表面の凹凸が大きいとコントラストは高くなる
Ｃ．試料の組成の違いによるコントラストも含まれる
Ｄ．加速電圧を高くするとコントラストが高くなる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 43．電子顕微鏡の真空ポンプで正しいのはどれか．
Ａ．油拡散ポンプは大気圧から使用できる
Ｂ．油回転ポンプは粗排気用ポンプである
Ｃ．油拡散ポンプは粗排気用ポンプと組合せて使用する
Ｄ．油回転ポンプは冷却水を必要とする
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 44．コーティング粒子が小さい順に並んでいるのはどれか．
1．白金パラジウム＜白金＜金＜金パラジウム（ 3 ）1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

2010 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡技術認定試験問題一級技士Ⅰ（生物）12 題の問題のうち，問１～問６は全問解答し，問７～問 12 はその中から４問を選んで解答しなさい．なお，選択しなかった問の解答欄には，大きく×印を記入しなさい．とされている．また，（【必須問題】

７）は（８）や（９）等アクリル系樹脂では重合不全を起こすため，使用を避けた方がよい．なお，脱水に問１．図は長さの単位を示している．図中の１～ 10 の大きさに該当する語句を語群より選び，記号で答えなさい（10 点）．

（５）を使用してエポキシ系樹脂に包埋する際は，樹脂に移行する前10 ）で置換した方がよい．に（

【語群】

【語群】

Ａ．ヒト肝臓Ａ．アセトン

Ｂ．Araldite

Ｂ．ヒト肝小葉Ｅ．LR White

Ｆ．グリコールメタクリレート

Ｃ．ヒト肝細胞Ｈ．Spurr

Ｊ．Durcupan Ｋ．Lowicryl K4M

Ｌ．高Ｄ．原子Ｎ．小さい

Ｏ．大きい

Ｒ．脂質

Ｅ．リボソーム

Ｔ．タンパク質

Ｆ．細胞膜の厚さ

問３．浸漬固定法および灌流固定法について，それぞれの手技および長所

Ｇ．ヒト眼球Ｃ．エタノール

Ｐ．膨張

Ｑ．収縮

Ｄ．Epon 812
Ｇ．酸化プロピレン
Ｍ．低Ｓ．糖と短所を説明しなさい（10 点）．

Ｈ．DNA 分子の幅

問４．以下の文章は免疫電顕法について記述したものである．次の各設問

Ｊ．ミトコンドリアに答えなさい（10 点）．
組織を４％ホルムアルデヒドと 0.1％グルタルアルデヒド / 0.1 M リン酸

Ｋ．ヒト成熟卵細胞緩衝液（pH 7.4）で 4°C，２時間固定した．凍結切片を作製し，抗 X マウ

Ｌ．ヒト赤血球スモノクローン一次抗体とペルオキシダーゼ標識二次抗体を使用して免疫組織化学を行うと，核内に陽性反応が認められた．組織を同様に固定
後，エポキシ樹脂に包埋し，包埋後染色法を用いて抗原 X の検出を試みた．超薄切片をニッケルメッシュに載せ，１％牛血清アルブミン / PBS で30 分間処理した後，抗 X マウスモノクローン一次抗体を 4°C で一晩，続いて protein A 標識金コロイド（20 nm 粒子径）と室温１時間反応させた．
PBS と蒸留水で洗浄後，酢酸ウラニルとクエン酸鉛溶液で電子染色をして透過電顕観察したが，反応は陰性であった．
１）反応が陰性である理由にはどのようなことが考えられるか．理由として可能性のあるものを列記しなさい．
２）同じブロックを使用して再度染色を試みる場合，染色過程をどのように改良したら陽性反応が得られる可能性があるか．１）で列記した各理由についてそれぞれの改良法を記しなさい．
）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号問５．次の（で答えなさい（10 点）．
組織細胞化学には，酵素反応を組織上の反応産物として見る（と，特異抗体を使用して特定の分子の局在を見る（

１ ）２ ），塩基配列の相補性を利用した核酸プローブで特有の DNA や RNA の局在を見る（

３）がある．

電顕レベルで（
問２．以下の文章は脱水について記述したものである．
（）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい（10 点）．
樹脂包埋するためには組織の水分を除去する必要があり，そのために行う操作が脱水である．脱水剤の分子量が（１）ほど脱水効果が強く，速く脱水できるが，その代わり試料の（２）が大きくなるといわ１の保存ができるよう（）を行う際には，酵素活性を保存しつつ微細形態４）を検討する必要がある．また，酵素反応液に浸漬する際，反応を均質に起こさせるため，試料を（（２）を行う際，抗原性の回復を目的として（いる．近年，（かった可溶性（きるようになってきている．

４３）が，四酸化オスミウム固定試料では，膜系以外）が脱水操作中にそれぞれ流出する可能性がある．これらの流出を抑えるためには，脱水剤として最もよく使用される（合，低濃度では（６使用される（）の場合は（７）温で脱水した方がよい．（５５５）の場）の次によく）よりも組織内の物質の流出が少ないといわれている反面，吸湿しやすく，脱水が不完全になりやすい）にして反イサー等を用いる．

れている．また，グルタルアルデヒド固定試料では，強固に固定されなの（５応液に浸漬する．これを作製するには，クライオスタット，マイクロスラ（３は，（９７）による（６６）を行う際に考慮すべき条件として（８）がある．これ）が（ 10 ）になる温度を示す．
（８）が高いとハイブリッドの安定性が高く，特異性が高いことを示す．
【語群】
Ａ．糖質組織化学（ 4 ））が行われて）によって，多くの抗原を検出でＢ．免疫組織化学

Ｃ．酵素組織化学

Ｄ．in situ hybridization
Ｇ．20 μm の切片

Ｅ．二本鎖Ｆ．固定条件

Ｈ．二本鎖 DNA（RNA）の半数

Ｊ．固定処理Ｋ．一本鎖 DNA（RNA）の総数

Ｌ．加熱処理Ｎ．抗原の賦活化

Ｐ．一本鎖 DNA（RNA）の半数Ｑ．Ｔ値

Ｏ．反応条件Ｒ．二本鎖 DNA（RNA）の総数

Ｕ．1 μm の切片

Ｍ．抗原の活性化

Ｓ．Tm 値Ｔ．一本鎖Ｗ．1 mm 角

問６．以下の文章は，走査電子顕微鏡を使用して細胞の内部構造を観察する方法（O-D-O 法）について記述したものである．
（）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい（10 点）．
走 査 電 子 顕 微 鏡 を 使 用 し た 細 胞 内 部 の 観 察 で は， 試 料 を 固 定 後，（１）する必要がある．そのために（２ ）を使用して（３ ）の 防 止 を 行 っ た 後， 液 体 窒 素 を 使 用 し て 試 料 を 凍 結 し， そ の 中 で（１）を行い，内部構造を剖出する．その後，（し，組織を洗浄後，（４）でオスミウム（７５２）の中で解凍）を行い，細胞基質と（６）等を除去して（後，（８）を使用して真空中で凍結乾燥を行う．乾燥した試料は金，）を剖出する．続いて脱水を行った（９），オスミウム等を使用してコーティングするが，帯電の防止と（10 ）発生効率の増大の効果もある．

１）矢印の細胞小器官の名称を解答欄に記しなさい．
２）＊の細胞小器官の名称を解答欄に記し，その構造の特徴を説明しなさい．

【語群】
Ａ．氷晶形成Ｂ．帯電性

Ｅ．100％ DMSO

Ｃ．

Ｆ．浸軟処理白金

Ｄ．50％ DMSO

Ｇ．二次電子Ｋ．分解処理Ｌ．0.1％ OsO4 液

Ｏ．細胞骨格Ｐ．t-ブチルアルコール

Ｓ．反射電子Ｔ．膜構造３）＊の構造には極性がある．写真中のＡとＢの各領域の名称を語群１かＨ．切断

Ｍ．1％ OsO4 液

Ｑ．エタノール

らそれぞれ一つずつ選び，記号で答えなさい．

Ｊ．臨界点

４）一般的にタンニン酸の使用に適した観察目的とタンニン酸の性質を語

Ｎ．入射電子群２と語群３からそれぞれ一つずつ選び，記号で答えなさい．

Ｒ．凍結割断【語群１】Ｕ．細胞外基質

ア．クリステイ．チラコイド膜

ウ．外葉

エ．内葉

オ．シス側（形成面） カ．トランス側（成熟面）【語群２：観察目的】【選択問題】

キ．核の明瞭な観察
問７．下の写真はある組織の透過電顕像である．スケールバーは 1 μm をク．ミトコンドリアのマトリックスの観察

ケ．微小管のサブユニットの観察

コ．ライソソームの内部構造の観察【語群３：タンニン酸の性質】示している．次の各設問に答えなさい（10 点）．

サ．包埋効果がある

シ．緩衝液の効果がある

ス．脱水効果がある

セ．染色に近い効果がある
問９．下の写真はダイズ葉肉細胞の一部の透過電顕像である．スケール
バーは 1 μm を示している．次の各設問に答えなさい（10 点）．

１）写真中の①～⑤の名称を記しなさい．ただし，①と②は核質の電子密度が高い部分であり，③は逆に電子密度の低い部分である．
２）④と⑤のような構造体および滑面小胞体がよく発達している細胞では，
１）葉緑体（C）内の構造や部位を示す名称を三つあげ，それぞれの働きどのような物質を合成していると考えられるか．

を簡潔に記しなさい．

３）上記のような組織の例を一つあげなさい．
問８．次の写真はある両生類の上皮細胞を示している．2.5％グルタルア
ルデヒドと 0.2％タンニン酸で固定し，１％四酸化オスミウムで後２）ミトコンドリア（M）内の構造や部位を示す名称を二つあげなさい．
３）＊の構造の名称と働きを記しなさい．

固定を行った．エタノール脱水，エポキシ系樹脂で包埋した．ただし，写真中 ISG は未熟な分泌顆粒を示している．次頁の各設問に答えなさい（10 点）．

（ 5 ）問 10．下の写真はある植物組織中の隣り合う二つの細胞の細胞壁を中心にした透過電顕像である．スケールバーは 100 nm を示している．次の各設問に答えなさい（10 点）．

１）一般的な細胞壁の構造を，セルロース微繊維，ヘミセルロースおよびマトリクスという語句を使用して 100 字以内で説明しなさい．
２）一次細胞壁と二次細胞壁の語句を使用して，写真の細胞の細胞壁の状態を 50 字以内で説明しなさい．
３）矢印で示した構造の名称を記し，さらに，その構造の細胞壁形成における役割を 100 字以内で説明しなさい．
問 11．病原性カンジダ細胞では写真Ａと写真Ｂの二種形状で観察される場合が多い．次の各設問に答えなさい（10 点）．

１）Ａは酵母形である．カビに似たＢの形状名を記しなさい．
２）出芽期における核形態の変化を超薄切片法で三次元的に観察したい．
次の各手順における要点を具体的に述べなさい．①固定法，②薄切，③グリッド回収法
問 12．下の写真はある微生物の透過電顕写真である．次の各設問に答えなさい（10 点）．

１）この微生物の名称を語群より選び，記号で答えなさい．
【語群】
Ａ．大腸菌

Ｂ．クリプトコックス・ネオフォルマンス

Ｃ．クラミドモナスＤ．プリオン

Ｅ．ヘリコバクター・ピロリ

２）この写真はどのような方法で撮影されたものか．方法の名称と試料作製の具体的手順を詳しく述べなさい．

（ 6 ）2010 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡技術認定試験問題一級技士Ⅱ（鏡体・共通技術）
13 題の問題のうち，問１～問７は全問解答し，問８～問 13 はその中から３問を選んで解答しなさい．なお，選択しなかった問の解答欄には，大きく×印を記入しなさい．

を語群より選び，記号で答えなさい（10 点）．

【必須問題】

電子線照射により試料の（問１．電子に関する各設問に答えなさい．なお，１）と２）は記号で答えなさい（10 点）．

（１）①電子は電界中で電界の向きに対して，Ａ：（同じ向き），Ｂ：（逆向き），Ｃ：（垂直な向き）のいずれの向きに力を受けるか．

１ ）が変化することを（う．特に有機・生物系試料のように（２３）を受けやすい．この影響を少なくするには（たり，（５２ ）とい）で構成されている試料では４）を弱くし）を短くしたりするなどの方法がある．

【語群】②また，この場合，電子の速さはＤ：（変わる）か，それともＥ：（変わらない）か．

Ａ．照射時間
Ｆ．軽元素

Ｂ．重元素

Ｃ．種類

Ｇ．機械的損傷

Ｄ．焦点距離Ｈ．照射強度

Ｅ．構造・組織

Ｊ．支持膜

Ｋ．電子線損傷

２）①速度を持った電子は磁界中で磁界の向きに対して，Ｆ：（同じ向き）

問６．真空ポンプには気体をポンプの外に排気する開放型と気体をその内Ｇ：（逆向き），Ｈ：（垂直な向き）のいずれの向きに力を受けるか．

部に溜め込むことによって真空を作り出す非開放型ポンプがある．

②さらに，この力の向きは速度の向きに対して，Ｊ：（同じ向き），Ｋ：それぞれ一つ例をあげ，原理を簡単に説明しなさい（10 点）．

（逆向き），Ｌ：（垂直な向き）のどれか．

問７．写真特性曲線に関する次の各設問に答えなさい（10 点）．

③また，この場合，電子の速さはＭ：（変わる）か，それともＮ：（変１）横軸と縦軸の量はそれぞれ何か．また，横軸の目盛のとり方を簡単にわらない）か．

説明しなさい．

３）フレネル縞は電子が波動性を持つために生じる．この縞の成因となっ

２）特性曲線におけるガンマ（γ）とは何か．簡単に説明しなさい．ている波動に特有な現象を二つあげなさい．
問２．以下の文章は電子レンズの収差について記述したものである．文中の（）にあてはまる最も適切な語句を解答欄に記しなさい【選択問題】（10 点）．
１）回折収差は電子が（１）を有するために生じる収差である．この収差を小さくするには，電子線の波長を（電子線の開き角を（３２）球面収差はレンズの（２）するか，あるいは

問８．電子回折に関する各設問に答えなさい（10 点）．
１）三種類の試料の電子回折パターンを観察したところ，それぞれリング）する必要がある．
４状，ハロー状，および斑点状のパターンが得られた．試料はそれぞれ）を通る電子線がレンズの（５）をどのような結晶性を有するか．また，中間レンズの物面は対物レンズ通る電子線よりも強く曲げられるために生じる収差である．この収差は電子線の（６）の３乗に比例するので，孔径の（７のどの面になるか．

）絞り２）制限視野回折では絞りを対物レンズのどの面に入れて視野を制限して３）加速電圧が変動すると，電子の速度にバラツキが生じる．色々な速度

３）電子線が結晶性試料を透過する際，回折波が生じる．その際，透過波を使用するほど小さくできる．

いるか．
９ ）

のみで得られる像と回折波のみで得られる像の名称をそれぞれ記しな

電子よりも強く曲げられるために，像のボケが生じる．この場合の収の電子がレンズに入射すると，速度の（さい．さらに，それらの像中で試料の存在しない部分の見え方の違い差を（８）電子は速度の（10 ）収差という．

を述べなさい．

問３．熱電子銃のフィラメント交換作業において，ウェーネルト電極に対問９．透過電顕像のコントラストに関する各設問に答えなさい（10 点）．

するフィラメント位置の設定に関する注意事項を二つ記しなさい

１）コントラストは二種類に大別できる．それぞれの名称を記しなさい．

（10 点）．

２）フレネル縞の成因となっているコントラストの名称を記しなさい．

問４．以下の文章は走査電顕像のコントラストについて記述したものである．（）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号３）結晶格子像の成因となっているコントラストの名称を記しなさい．
４）材質は同じで厚さが場所により異なる非晶質試料の像の成因となってで答えなさい（10 点）．

いるコントラストの名称を記しなさい．

走査電子顕微鏡では，試料表面から発生する二次電子を（１用している．二次電子の発生量は試料の表面状態に依存し，（対し（３２４）という．また，（５）や（６の場合の高めることができるコントラストの名称を記しなさい．
問 10．抵抗加熱法で金属蒸着やシャドーイングを行う場合，蒸着源と試料）では，を金属で覆い，絞りやスリットを設けることが望ましいとされてい７ ）により，平坦な部分よりも二次電子の発生量が多くなり，コントラストが高くなる．画面が異常に白く輝き，低いコントラストを示す場
合は（（５）生物試料では電子染色によりコントラストを高めることができる．こ）に）している表面部分では発生量が多くなり，コントラストが生じる．これを（（）に利８）によるものであり，この場合は試料表面に（９）をし，10 ）を良くすることにより，コントラストを高めることができる．

【語群】
Ａ．試料端

よく行われる．以下の各設問に答えなさい（10 点）．
１）使用する金属を四つ記しなさい．
２）それらの金属のコーティングにおける粒子径の大きい方から順に記し

Ｂ．エッジ効果

Ｅ．チャージアップ
Ｈ．導電性

る．その理由を二つ記しなさい（10 点）．
問 11．走査電顕観察において，試料の導電処理として金属コーティングがＣ．突起物

Ｆ．傾斜角効果Ｊ．反射電子Ｋ．傾斜Ｄ．像形成なさい．

Ｇ．金属コーティング
Ｌ．加速電圧効果

問 12．走査電子顕微鏡による低加速電圧観察のメリットとデメリットをそＭ．入射電子問５．以下の文章は透過電子顕微鏡の試料への電子線照射による影響について記述したものである．（

れぞれ二つ記しなさい（10 点）．
問 13．EDS に対する WDS のメリットとデメリットをそれぞれ一つ記しな）にあてはまる最も適切な語句（ 7 ）さい（10 点）．