アプリケーションノート

農薬分析、食品検査、水質検査

親水性相互作用液体クロマトグラフィー (HILIC) とLC/MS によるパラコートとジクワットの高速分離

著者

Andrew Kennedy andAdam Bivens
Agilent Technologies, Inc.

概要

このアプリケーションノートでは、次世代の Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z カラムと親水性相互作用液体クロマトグラフィー (HILIC) を用いて、特に分析が困難なパラコートとジクワットのペアを分離する方法について説明します。パラコートとジクワットは、含有する 2 つの 4 級アンモニウム基が原因で高極性になるため、逆相クロマトグラフィーでは保持や分離が簡単には行えません。従来は、これらの化合物の保持を誘発するために、一般的にイオンペアリング剤が用いられていました。しかし、この手法は、システムの汚染、高いバックグラウンド、シグナルの抑制などの制限によって悪影響を受けるため、これらの問題を解決するために、HILIC カラムを用いて分析をしました。

はじめに

逆相クロマトグラフィーでは 非極性固定相 が経過すると LC/MS システムを汚染する試薬および薬品試薬 はすべて、HPLC グレード以上 のものを使用しました。超高純度 LC/MS グレードのア
セトニトリルは J. T. Baker (センターバレー、ペンシル ベ ニア 州、 米 国) から 購 入 しました。純水 は、EMD Millipore Milli-Q Integral
System (ダルムシュタット、ドイツ) を 使 用しました。ギ 酸 (FA、p/n G2453-85060) はAgilent Technologies から入手しました。ギき起こしたり、カラムの選択性 を変更さ

ワット標準は Sigma-Aldrich (セントルイス、ミイオンペアリング剤 を 分析 するた めの実験器具と材料•
Agilent InfinityLab フィッティング

用いられていますが、これにより多数 の極性農薬の保持と分離が妨げられています。

イオンペアリングは、極性化合物の保持と分離に使用されている従来の手法です。ただし、この手法には次に示す 2 つの大きな欠点があります。

•イオンペアリング剤は、使用後長時間が可能性があり、高いバックグラウンドを引•実験方法せたりする原因にもなります。

モードで動作させると、バックグラウンドが 非常 に 高くなり分析対象物 の 信号 が•オン化モードでの動作に限定されてしまさせずに、極性化合物の保持と分離を行える手法です。

ただ HILIC での 分析 が 困難 な 原因 は、 パラコートとジクワットに 強 い 正 の 電荷 を与 えていることです。この 場合、表面 のシラノールとの 相互作用 により深刻 なテーリングを引き•Poroshell 120 HILIC-Z カラムは、新しい両性イオンベース相を採用することでこの制限を克服しており、優れたピーク形状を得られます。

••••

Agilent 1290 Infinity LC シリーズ用
Agilent 超低分散キット(p/n 5067-5189)•Agilent MassHunter ワークステーション

ソフトウェアAgilent 6470 トリプル四重極 LC/MS

Agilent Jet Stream エレクトロスプレー

イオンソース

サンプル前処理は行わずに分析しました。

バイアル、スクリュートップ、茶色、ラベル付、認定、2 mL、100 個

Agilent 圧着スクリューキャップ、PTFE/赤シリコンセプタム

Agilent バイアルインサート、250 µL、不活性ガラス、樹脂足付

エッペンドルフピペットおよびリピーター

超遠心機 (VWR、ラドナー、ペンシルベニア州、米国)

Vortexer および Multi-Tube Vortexer(VWR、ラドナー、ペンシルベニア州、米国)

Agilent InfinityLab 溶媒ボトル、茶色、1,000 mL (p/n 9301-6526)•サーモスタット (G7116B)(p/n 5067-5966)

カラム出口: Agilent クイックターン(p/n 5181–8872)•Agilent InfinityLab セーフティキャップ、
GL45、3 ポート、ベントバルブ x 1(p/n 5043-1219)

2•

Agilent 1290 Infinity II マルチカラムパラコートおよびジクワット標準 は 0.25 mM(p/n 5190–7024)

起こし、 カラム上で過剰 に長い時間保持されてしまいます。次世代 の Agilent InfinityLab•

コネクト (p/n 5067-5965)(p/n 5182-0716)•

Agilent 1290 Infinity II バイアルサンプラ(G7129B)•います。

方で、イオンペアリングが原因の問題を発生•ズーリ州、米国) から購入しました。

カラム入口: Agilent クイック

Agilent 1290 Infinity II バイナリポンプ(G7120A)••

フィーと同じシステムと溶媒を使用している一•酸アンモニウム、パラコート標準、およびジク抑制されてしまうため、MS 分析は 1 イ

これとは 反対 に、HILIC は 逆相クロマトグラ

装置構成

水溶液に混合し、それ以上のサンプル前処理

移動相前処理200 mM ギ酸 アンモニウム 原液 を水 で調製し、ギ酸で pH 3 に調整しました。移動相 A (水性) は 原液を水で 9:1 に希釈して調製し、移動相 B (有機) は 原液 をアセトニトリルで 9:1に希釈して調製しました (両移動相の最終イオン強度 = 20 mM)。

分析条件
HPLC

Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z、2.1 mm × 100 mm、2.7 µm (p/n 685775-924)

カラム

移動相 A

20 mM ギ酸アンモニウム水溶液、pH = 3流量0.80 mL/min

移動相 B

20 mM ギ酸アンモニウム、pH = 3、90 % アセトニトリル

カラム温度30 °C

注入量0.25 µL

合計分析時間8分

時間 (分)

01568グラジエント%B8080738080MS

イオン化モード

ESI ポジティブ

ガス流量

7.0 L/min

ガス温度300 °C

ネブライザ

45 psi

シースガス流量

11 L/minシースガス温度

400 °C

キャピラリ電圧3,500 V

ノズル電圧

0V

結果×102
1.1

パラコート
ジクワット

1.0

2.246

0.9
0.8
0.7

カウント (%)

0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0

0.2

0.6

1.0

1.4

1.8

2.2

2.6

3.0

3.4

3.8

4.2

時間 (分)

4.6

5.0

5.4

5.8

6.2

6.6

7.0

7.4

7.8

図 1. Agilent 6470 トリプル四重極 LC/MS システムと Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z カラムによるパラコートとジクワットの分離

3

結論
Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z

カラムにより、分析困難 なパラコートとジクワットのペアを適切に分離することができ、条件と溶媒 によってイオン抑制や汚染 が 発生することはなく、MS に適したワークフローが得られました。

ピークは 最小 のテーリングでベースライン分離されており、電荷中性表面の重要性とカラムの高い分離能力が示されました。

InfinityLab Poroshell HILIC-Z カラムを用いた HILIC ワークフローは、従来のイオンペアリングと比較して、システムを汚染せず MS の高い性能 を制限 なく活 かすことができ、極性化合物の高品質なクロマトグラフィーを実現します。

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