技術ノート

ラットにおける経口投与光毒性試験−有色動物を用いた光毒性・光皮膚小核併合試験法の検討
森村智美1，関剛幸1，豊泉友康2，高岡裕1，斉藤義明3

Oral dose phototoxicity study in rats
- A study of combined phototoxicity and photochemical skin micronucleus test method
Tomomi MORIMURA1, Takayuki SEKI1, Tomoyasu TOYOIZUMI2, Yutaka TAKAOKA1, Yoshiaki SAITO3

光毒性を検出する試験法としては，培養細胞グエバンス系ラットを用いて光毒性試験法を検討しを用いた in vitro 光毒性試験と動物を用いた inたので報告する．今回の試験では，これまでと同vivo 光毒性試験がある．In vitro 光毒性試験法ガ様に光毒性試験後の皮膚を用いて光皮膚小核試験をイドラインは，欧州を中心に主として化粧品およ行ったほか，光毒性物質による影響が懸念される眼び外用薬の光毒性を評価するために整備され ，球 2, 3）についても検査したので，併せて報告する．

1）

現在，FDA および EMEA により取りまとめられた光安全性試験のガイダンス 2, 3）の中でも光毒性材料および方法評価法として掲載されている．一方，in vivo 光

1．投与物質毒性試験は，in vitro 光毒性試験にて陽性反応が投 与 物 質 と し て， 秦 野 研 究 所 で 経 口 投 与 光認められた場合，あるいは，経口投与など光毒性毒性試験の陽性対照物質として使用している物質の全身暴露による影響を考慮する場合に実施

既知の光毒性物質である 8- メトキシソラレンされることがあるが，試験法についてのガイドラ（8-methoxypsoralen: 8-MOP， シ グ マ ア ル ド

イン整備は進んでいない．

リッチ，東京）およびロメフロキサシン塩酸塩

われわれは，これまで，マウス，ラットおよび（lomeﬂoxacin HCl: LMFX，シグマアルドリッチ，

モルモットを用いた経口投与による光毒性試験を東京）を選択した． 8-MOP は，経皮および経口行ってきた．さらに，動物を有効利用する観点か投与によって強い光毒性を示す．また，ヒトのら，経口投与光毒性試験と光皮膚小核試験との併PUVA 療法に用いられているほか，「医薬部外品合試験の有用性についても検討を加えてきた．併の製造販売承認申請及び化粧品基準改正要請に添合試験では，これまでいくつかの既知光毒性物質付する資料に関する質疑応答集（Q&A）についについてアルビノ動物を用いて検討してきたが，て」（平成 18 年 7 月 19 日，厚生労働省医薬食品

メラニン親和性を有する化学物質の光毒性の評価局審査監理課事務連絡）において，光毒性試験のにおいては，ヒトと同様に皮膚や眼にメラニン顆陽性対照物質として記載されている．ロメフロキ

粒が分布する有色動物を用いた光毒性試験が有効

サシンはフルオロキノロン系抗菌剤の一種で，経であると考えられる．

口投与によって光毒性を示す．メラニン親和性が今回，経口投与光毒性試験の検討の一環として，確認されている 4） ほか，マウスで光毒性が現れ皮膚に有色部分とアルビノ部分の両方を有するロンることが報告されており 5-7），マウスを用いた抗菌剤の経口投与光毒性試験における陽性対照物質

1 毒性学第 2 研究室
2 遺伝学研究室
3 病理学研究室
32として使われることもある 7）．また，ヒトの紫外線による最小紅斑量を低下させること 8），疫学調
査で 30 日以上服用した人々の光線過敏症発症率

技術ノートが 1.03％であったこと 9）などが報告されている．

最終日の体重を基に体重別層化無作為抽出法によ8-MOP はコーン油（ナカライテスク，京都）を，り群分けした．なお，観察第 2 日の眼科学的検

LMFX は 0.5 w/v% カルメロースナトリウム水溶査時，保定の過誤に起因すると考えられる呼吸停液（carmellose sodium: CMC Na，丸石製薬，大止により 8-MOP の 5 mg/kg 反復投与群の 1 例が阪）を，それぞれ媒体として用い懸濁液とした．

死亡したため，この群については死亡例を除く 48-MOP 懸濁液は投与当日に調製した．冷蔵，遮光例のデータを採用した．

条件下で 8 日間の安定性が確認されている LMFX

3．照射装置

懸濁液については調製後 4 日以内に使用した．

光 線 は A 領 域 紫 外 線（ultra violet A: UVA）

今回の実験では，これまでの試験で使用してきを選択した．今回の投与物質は吸収波長に UVAた用量である 10 mg/kg（8-MOP）および 80 mg/を含む．また，UVA は可視光線と比較して光化kg（LMFX）を選択し，単回投与後，紫外線を単学反応に必要な光エネルギーが高く，UVB と比回照射した．また，投与物質のメラニン親和性に較して皮膚の深部まで到達することから，体内よる皮膚への蓄積性を考慮し，5 mg/kg（8-MOP）に吸収された化学物質が励起され，光毒性反応および 40 mg/kg（LMFX）の用量で 7 日間反復投が生じやすい波長とされている．実験には，光与後，紫外線を単回照射した．なお，媒体は全て源 と し て 14 本 の UVA 灯（FL32S・BL/DMR，反復投与と同様，7 日間反復投与後，紫外線を単回352 nm）を装備した紫外線照射装置デルマレイ照射した．また，投与容量は全て 5 mL/kg とした．

（M-DMR-100 型，東光電気，東京）を用いた．

2．動物

紫外線照射時には，光線単独でも紅斑を起こしや動物は，有色動物として眼科領域の実験や光安

すい B 領域紫外線（ultra violet B: UVB）を減全性試験に広く用いられているロングエバンス系弱させるため，ガラスフィルターを用いた．

（Iar:Long-Evans，SPF，財団法人動物繁殖研究

4．投与および紫外線照射所，茨城）ラット（図 1）を選択した．試験には，非絶食下で，ラット用胃管を用いて強制経口投1 週間の検疫馴化期間を経た 5 週齢の雄ラット（体与した．7 日間反復投与群では第 7 日の投与に先重 122.7 ～ 147.4 g，体重平均値 137.2 g）を使立ち，単回投与群では投与に先立って，刈毛およ用した．動物数は 1 群 5 匹とし，検疫馴化期間び剃毛した．なお，各動物の投与液量（mL）は反復投与群では最新時，単回投与群では投与日の体重を基に算出した．投与後，各動物を照射用金網ケージに個別に収容した．均一に紫外線を照射するために動物を回転台に乗せ，投与後約 1.5時間（8-MOP）または投与後約 1 時間（LMFX）経過したのち，約 1 時間かけて 10 J/cm2 の UVAを照射した．また，照射に先立ち，紫外線強度計（UVR-3036/S 型，トプコ ン，東京 ）を 用 い毛刈り前て，およその照射位置における UVA の照射強度（mW/cm2）を測定し，10 J/cm2 の照射線量が得られるよう照射時間を設定した．
5．検査項目
1）皮膚反応の評価および耳介厚の測定
投与前，照射後 2，24，48，72 および 96 時間に耳介厚を測定し，皮膚反応を観察した．耳介厚

毛刈り後
図1

ロングエバンス系ラット

は，シックネスゲージ（547 シリーズ，ミツトヨ，神奈川）を用いて左右の耳介について計測し，左右の平均値を各個体の耳介厚とした．耳介および33

秦野研究所年報 Vol. 33. 2010

背部の皮膚反応については，Draize らの方法 10）

個 /4 人 / 匹）
，そのうち小核を有する表皮細胞数に準じて，アルビノ部分と有色部分に分けて，紅を小核出現頻度とした．

斑および浮腫を 0（反応なし），
1（軽微），2（軽度），6．データ解析

3（中等度）および 4（強度）の 5 段階に評点化した．
2）一般状態の観察および体重測定

皮膚反応は，耳介および背部の部位別に，観察期間中の紅斑または浮腫の評点を個体別に合計し，一般状態の観察は，投与期間中には投与前および各個体の評価点とした．また，皮膚反応が認めら投与後に 1 日 2 回，照射日（= 観察第 1 日）には投れた場合を陽性とし，群ごとに陽性率を算出した．

与前，投与後および照射後の 3 回，照射日の翌日以耳介厚は，投与前を基準に個体別に増加量を算

降は 1 日 1 回行った．体重は，投与第 1，4 および出し，この増加量について各群の平均値および標7 日の投与前ならびに観察第 4 日に測定した．また，準偏差を求めた．また，媒体対照群と被験物質死亡動物については，死亡時に体重を測定した．

投与群との平均値の差について，Bartlett の方法

3） 眼科学的検査および病理組織学的検索による分散の一様性を検定した後，一元配置型

検疫期間中および照射前日，照射日（照射後）の分散分析および Dunnett 検定（パラメトリッ

以降 1 日 1 回，肉眼的に観察した後，スリットク），または Kruskal-Wallis の順位和検定およランプ（興和，愛知），眼底カメラ（興和，愛知）

び Dunnett の検定（ノンパラメトリック）によっおよび双眼倒像鏡（キーラー，Windsor）を用いて多重比較検定を行った．なお，いずれの検定もて前眼部，中間透光体および眼底を観察した．観有意水準は 5 % とした．

察期間終了後，ペントバルビタールナトリウム（ソ小核出現頻度について , 有色部分の各媒体対照ムノペンチル）麻酔下で放血により全例を安楽致群と各被験物質投与群との間で , 条件付二項検定死させ，眼球を摘出した．右眼球はグルタールア（Kastenbaum and Bowman の表）を行った．検ルデヒド液に，左眼球はダビッドソン液にて固定

定の有意水準は 5% とした．

した．病態の把握に努めるため，眼科学的検査において認められた変化（第一選択に水晶体皮質混結果

濁，第二選択に角膜混濁）の強い動物から各群 2

1．皮膚反応の評価（表1）例を選抜し，その眼球について組織標本（HE 染1）8-MOP色）を作製し，病理組織学的に検索した．
4）小核観察5 mg/kg 反復投与群では有色部分とアルビノ部分ともに背部皮膚の反応は照射後 24 時間から病理組織学的検査のための採材に引き続き，認められはじめ，照射後 72 時間にかけて次第に背部（照射部位）および腹部（非照射部位）の皮顕著となった．有色部分のみから成る耳介では，膚の一部（有色部分とアルビノ部分を含む）を採72 時間に皮膚反応（紅斑）が 1 例で観察された．

材した．採取した皮膚のうち，全ての動物の背部照射後 24，48 および 72 時間の陽性率は，有色および腹部の有色部分から 2 ～ 3 cm 角の皮膚片部分で 25，50 および 75%，アルビノ部分で 25，を，さらに，8-MOP の媒体対照群および 10 mg/75 および 75% となった．10 mg/kg 単回投与群kg 単回投与群ならびに LMFX の 80 mg/kg 単回でも背部皮膚の反応は有色部分とアルビノ部分と投与群の各 2 例については，背部のアルビノ部

もに照射後 24 時間より時間経過とともに増強さ分からも同様に皮膚片を採取した．採取した皮膚れ，耳介では，照射後 48 および 72 時間に皮膚片は 4℃で一晩トリプシン処理した後，表皮細胞反応が観察された．陽性率は照射後 24 時間からを単離した．次いで，低張処理およびカルノア固全て 100% となった．なお，5 および 10 mg/kg定を行い，表皮細胞懸濁液を調製した．表皮細胞投与群ともに背部皮膚では有色部分と比較してア懸濁液をスライド上に滴下してスライド標本を作

ルビノ部分において評価点が高い傾向にあり，個製し，このスライド標本をコード化した．アクリ体別に紅斑および浮腫の評点を比較した場合，5ジンオレンジ染色したスライド標本を蛍光顕微鏡mg/kg 投与群の 1 例を除き，浮腫の評点に差は（B 励起）下で観察して表皮細胞を計測し（2000なく，紅斑の評点がアルビノ部分で高値となった．

34

技術ノート

表1皮膚反応の評価

Pigmented area
Mean score of skin reactions（time after irradiation, hr）
Positive rate（%）
Numberb）
of--------- Ears -------------- Dorsal skin -------------- Total --------（time after irradiation, hr）
animals Pre. 2 24 48 72
Pre. 2 24 48 72
Pre. 2 24 48 72
Pre.
2 24 48 72

GroupCorn oil

50 a） 000000000000000000040000*000*11000*11002550

758-MOP5 mg/kg c）
10 mg/kgd）

0500026001230015900 100 100 100

50000000000000000000040 mg/kg c）

500*0000000000*000040000d）

5010000

0*0000

20000 10000

00.5% CMC
LMFX
80 mg/kg
Albino area

Positive rate（%）
Number Mean score of skin reactions（time after irradiation, hr）
of------ Dorsal skin -----（time after irradiation, hr）
animalsPre. 2 24 48 72
Pre.
2 24 48 72

GroupCorn oil

500000000004000*

22002575

758-MOP5 mg/kg c）
10 mg/kgd）

50013400 100 100 100

5000000000040 mg/kg c）

50100008000080 mg/kg d）

5020000 100

0000.5% CMC
LMFXa）評価点（各動物の紅斑・痂皮の評点+浮腫の評点）の平均値b）個体別に耳介の評価点と背部皮膚の評価点を合計し、その平均値を算出
c）7日間反復投与群d）単回投与群* 一部陽性例を含む

表 2 耳介厚増加量
Group

Numberofanimals

Increase in ear thickness a）（mm）----------- Time after irradiation（hr）----------2

2448

72

5-0.01

0.00

0.00

-0.02

5 mg/kg b）

4-0.010.00

0.010.00c）

50.00

0.03*

0.19*

0.39*

5-0.01

0.00

0.00

-0.02

40 mg/kg b）

5-0.01

0.01

0.00

-0.01

80 mg/kg c）

50.00

0.01

0.00

-0.01

Corn oil
8-MOP
10 mg/kg
0.5% CMCLMFXa）照射前の耳介厚を基準として動物毎に照射後の耳介厚増加量を算出
b）7日間反復投与群c）単回投与群* 媒体対照群と比較して有意差あり（p<0.01）
35秦野研究所年報 Vol. 33. 2010

表 3 眼科学的検査結果（水晶体の混濁）GroupOpacity of cortex, lens a）

Numberofanimals----------- Time after irradiation（hr）----------Pre.

2244872-± + 2+ Pos.

-

± + 2+ Pos.

-

± + 2+ Pos.

-

± + 2+ Pos.

-

± + 2+ Pos.

550000

50000

50000

50000

500005 mg/kg b）

44000040000

40000400002200210 mg/kg c）

550000500005000032103013155500005000050000500005000040 mg/kg b）

5500005000050000500005000080 mg/kg c）

55000050000500005000050000

Corn oil
8-MOP

0.5% CMCLMFXa）指標: 所見が認められた例数b）7日間反復投与群c）単回投与群

2） LMFX

では水晶体皮質の変化は観察されなかった．また，

40 mg/kg 反復投与群および 80 mg/kg 単回投それぞれの媒体対照群を含む各群で角膜混濁が観

与群ともにアルビノ部分の背部皮膚において照射察され，いずれの群でも照射後，頻度および程度後 2 時間に皮膚反応が観察され，背部の有色部ともに増強されたが，群間に差はなかった．

分では皮膚反応は観察されなかった．有色部分の5．小核出現頻度（表4）みから成る耳介では，40 および 80 mg/kg 投与

1）8-MOP

群ともに照射後 2 時間に皮膚反応（80 mg/kg 投

有色部分の照射部位では，5 mg/kg 反復投与群

与群の 1 例を除き紅斑のみ）が観察された．

および 10 mg/kg 単回投与群ともに媒体対照群と2．耳介厚（表2）比較して小核出現頻度が有意に増加した．アルビ

1）8-MOP

ノ部分でも照射部位では，観察を行った 10 mg/10 mg/kg 単回投与群では，照射後 24 時間かkg 単回投与群において小核出現頻度の増加が認ら 72 時間にかけて時間の経過とともに耳介が肥められた．なお，非照射部位では，各媒体対照群厚し，各媒体対照群と比較して有意な増加となっと比較して各被験物質投与群で有意差は認められた．5 mg/kg 反復投与群では耳介厚の変化は観察なかった．

されなかった．

2）LMFX

2） LMFX
40 mg/kg 反復投与群および 80 mg/kg 単回投有色部分の照射部位では，80 mg/kg 単回投与群で媒体対照群と比較して小核出現頻度がわず与群ともに耳介厚の変化は観察されなかった．

かに増加したが，有意な変化とはならなかった．

3．一般状態および体重アルビノ部分の照射部位では，観察を行った 80

実験期間中，一般状態の変化は観察されなかっmg/kg 単回投与群において小核出現頻度の増加た．また，体重も媒体対照群を含めて各群順調なは認められなかった．なお，非照射部位では，媒増加を示し，群間差は認められなかった．

体対照群と比較して各被験物質投与群で有意差は4．眼科学的検査（表3）認められなかった．

8-MOP の 5 mg/kg 反復投与群では照射後 72 時
間に 4 例中 2 例，10 mg/kg 単回投与群では照射

考察

後 48 時間に 5 例中 3 例，照射後 72 時間には全例

今回，光毒性試験法の検討の一環として，皮で水晶体皮質の混濁が観察された．LMFX 投与群

膚に有色部分のあるロングエバンス系ラットに

36

技術ノート

表 4 皮膚小核出現頻度
Pigmented area
Group

Numberofanimals

Corn oil

Irradiated area
Number of cells

Group Mean c）

Scored a） MN cells b） （%, Mean±SD）

Non-irradiated area
Number of cells

Group Mean c）

Scored a） MN cells b） (%, Mean±SD)

510000400.40±0.22

10000

100.10±0.07

48000

84*1.05±0.628000120.15±0.07

8-MOP
5 mg/kg d）
10 mg/kge）

510000140*1.40±0.58

10000

160.16±0.14510000440.44±0.27

10000120.12±0.08

40 mg/kg d）

510000380.38±0.22

10000

160.16±0.11e）

51000060

0.60±0.31

10000

120.12±0.10

0.5% CMC
LMFX
80 mg/kg
Albino area
Group

Numberofanimals

Corn oil

Irradiated area
Number of cells
Scoreda）

Group Mean c）

MN cells （%, Mean ± SD）
b）

2

4000

110.28±0.25e）

2

4000

581.45±0.14

80 mg/kg e）

24000

120.30±0.00

8-MOP
10 mg/kgLMFXa）観察した表皮細胞数b）観察した表皮細胞のうち、  小核を有する表皮細胞数（小核出現頻度）c）小核を有する表皮細胞数の割合
d）7日間反復投与群e）単回投与群* 媒体対照群と比較して有意差あり（p<0.01）

かったことから，今後，有色部分をより有効に活用する手法を検討する必要があると考えられた．
耳介の皮膚反応は，8-MOP 投与群および LMFX投与群で背部皮膚と同様の変化が観察されたが，耳介の皮膚は全て有色部分となることから，背部皮膚と同様，紅斑の評価には適さないと考えられ，今後，皮膚反応観察の実施の有無も含めて検討する必要があると考えられた．
耳介厚は，8-MOP 投与では時間経過とともに肥厚し，8-MOP の光毒性を良く反映していると考えられた．しかし，LMFX 投与により生じる照射後速やかに現れる一過性の皮膚反応は，耳介厚には反映されなかった．これは，通常用いてい8-MOP および LMFX を単回または 7 日間反復るアルビノ系ラットおよびマウスでも同様の結果投与し，以下の成績を得た．

が得られており，今回用いた系統でも同程度の感背部の皮膚反応は，アルビノ部分および有色部度であることが示唆された．

分ともに 8-MOP 投与では時間経過とともに増強

眼科学的検査では，8-MOP 投与群で水晶体皮され，LMFX 投与では照射後 2 時間のみ発現した．

質の混濁が観察された．8-MOP 投与による水晶これらの反応は SD 系ラットあるいはアルビノ系体への影響は，ヒトにおける PUVA 療法の副作マウスを用いた光毒性試験と同様の結果であり，用として知られているほか 11），ラット摘出水晶

ロングエバンス系ラットでも他の系統と同様，光体上皮を用いた in vitro 試験系によって，その標毒性の評価が可能であると考えられた．しかし，的が DNA であることが確認されている 12）．今

有色部分とアルビノ部分を比較した場合，有色部回認められた水晶体皮質の混濁も 8-MOP による分の方が紅斑の評点が低い傾向にあった．浮腫の光毒性の一つであると考えられた．また，各群で評点には差がないことから，有色部分の皮膚の反観察された角膜混濁の増強は，各媒体対照群でも応性が低い可能性よりも皮膚色が紅斑の評価を妨観察されたことから，紫外線による影響であるこげている可能性が考えられた．また，今回の結果とが示唆された．今回，投与物質の光毒性評価にからは，反復投与によるメラニンへの投与物質の直接は反映しないが，紫外線の影響が眼球で観察蓄積を示唆する光毒性反応の増強は明らかではなされた．この結果から，動物の頭部を固定するな
37

秦野研究所年報 Vol. 33. 2010

どして強制的に直接眼球へ紫外線を照射しなくても，毒性変化を及ぼす程度の紫外線が眼球に照射されていることが確認できた．
動物の有効利用の観点から実施した光皮膚小核試験では，8-MOP について有色部分およびアルビノ部分ともに小核出現頻度の増加が認められたが，LMFX についてはどちらの部位においてもProducts, 20024） 寺井正, 池尻芳文, 松本隆弘ら: 有色動物におけるLomefloxacinの眼内動態. あたらしい眼科, 1993;
10: 2067-2070
5） Mayne JT, Johnson NJ, Kluwe WM, et al.: A
study of the phototoxic potential of trovaﬂoxacin
in BALB/c mice. J. Antimicrob. Chemother. 1997;
39: 67-73

明らかな変化は認められなかった．LMFX につ6） Wagai N, Yamaguchi F, Sekiguchi M, et al.:いては，Hos:HR-1 ヘアレスマウスに擬似太陽光

Phototoxic potential of quinolone antibacterialを照射した試験条件において，今回よりも低い投与用量で光照射による小核出現頻度の増加が報告されていること 13），ICR 系マウスと SD 系ラットを用いた皮膚小核試験において，SD 系ラットのほうが媒体対照群の小核出現頻度がわずかに高いと報告されていること

14）などから，光毒性の検出感度を向上させるために，剖検時期，動物種および照射回数などの試験条件を検討する必要があると思われた．
今回，有色動物であるロングエバンス系ラットを用いて光毒性試験を実施した結果，眼球を含む光毒性試験と光皮膚小核試験が同一個体を用いて評価可能であることがわかった．今後，有色動物を用いることの有用性を確認するため，有色部分とアルビノ部分との比較方法，有色部分の評価方法，有色部分の光皮膚小核試験結果の意義などについて検討していく必要があると考えられた．

agents in BALB/c mice. Toxicol. Lett. 1990 ; 54:299-308
7） Owen K: Comparative grepaﬂoxacin phototoxicity
in mouse skin. J. Antimicrob. Chemother. 1998;
42: 261-2648） Ferguson J, McEwen J, Al-Aimi H, et al.: A comparisonof the photosensitizing potential of trovafloxacin
with that of other quinolones in healthy subjects. J.
Antimicrob. Chemother. 2000 ; 45 : 503-5099） Arata J, Horio T, Soejiam R, et al.: Photosensitivity
reactions caused by lomefloxacin hydrochloride: amulticenter survey. Antimicrob. Agents. Chemother.
1998 ; 42 : 3141-314510） Draize JH: Dermal Toxicity. In "Appraisal ofthe Safety of Chemicalsin Foods, Drugs andCosmetics" 3rd printing, The Association of Foodand Drug Officials of the United States, Texas,
1975 ; 49-5211） William B: Determination of 8-methoxypsoralen
in serum, aqueous, and lens: relation to longwave ultraviolet phototoxicity in experimental

謝辞and clinical photochemotherapy. Trans. Am.

今回の試験に携わった太田亮，川上久美子，須井哉，田面喜之，千坂亜希子，野口聡および松本亜紀の各氏に謝意を表します．
参考文献

Ophthalmol. Soc. 1979 ; 77: 464-514
12） Jose JG, Yielding KL: Photosensitive cataractogens,chlorpromazine and methoxypsoralen, cause DNA
repair synthesis in lens epithelial cells. Invest.
Ophthalmol. Vis. Sci. 1978; 17: 687-691
13） Itoh S, Katoh M, Furuhama K: In vivo photochemical

1） OECD guidelines for the testing of chemicals,micronucleus induction due to certain quinolone

Test No. 432: In Vitro 3T3 NRU Phototoxicity

antimicrobial agents in the skin of hairless mice.

Test, 2004

Mutat. Res. 2002; 520: 133-139

2） Guidance for industry photosafety testing,14） Nishikawa T, Haresaku M, Fukushima A, et al.:Center for Drug Evaluation and Research Food

Further evaluation of an in vivo micronucleus

and Drug Administration, 2003

test on rat and mouse skin: results with five skin3） Note for Guidance on Photosafety Testing, The
European Agency for the Evaluation of Medicinal

38

carcinogens. Mutat. Res. 2002; 513: 93-102