Journal of Assisted Reproduction

Vol.23 No.2

2020

Vo l. 23 No. 2

2 02 0Vol. 23 No. 2

論文集

論 文
ー原 著 ー
子宮腺筋症の大きさは妊娠率に負の影響を与えるが卵巣子宮内膜症性嚢胞は影響しない･････････････････････････

2

山田 聡，江夏 徳寿，苔口 昭次，塩谷 雅英
英ウィメンズクリニック

ー原 著 ー
卵巣予備能低下症例に対する同一周期 2 回採卵の有用性と課題････････････････････････････････････････････････････････
勝 佳奈子 ，中岡 義晴 ，森本 義晴
1

1

7
2

IVF なんばクリニック／２HORAC グランフロント大阪クリニック

１

ー原 著 ー
体外受精における精液酸化還元電位を用いた受精予測 ･ ････････････････････････････････････････････････････････････････ 14
長谷川 久隆，鈴木 亮祐，塚本 佳奈，菊本 晃代，小林 充，京谷 利彦，小林 淳一
神奈川レディースクリニック

ー原 著 ー
精液の低温暴露によって起こる精子運動性の低下を防ぐ工夫～フードコンテナを用いた精液の保温効果と 20 ℃での精液保存の影響について～･･････････････････････････････････ 18
岸田 拓磨，菊地 裕幸，山田 健市，菅野 弘基，岸田 理英，佐藤 那美，結城 笑香，吉津 葵，佐々木 郁弥，片桐 未希子，吉田 仁秋
仙台 ART クリニック

ー原 著 ー
当院における Duostim 法による採卵成績の検討･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 24
石橋 めぐみ 1，2，松山 毅彦 1，中澤 留美 1，河戸 朋子 1，勝木 康博 1，菊池 咲希 1，三宅 君香 1，横田 智 1，真鍋 有香 1,
北岡 美幸 1，新田 絵美子 2，松山 幸世 1，金西 賢治 2
厚仁病院産婦人科／２香川大学医学部母子科学講座周産期学婦人科学

１ー原 著 ー
凍結前の胞胚腔収縮の確認は胚盤胞選択の評価因子となる････････････････････････････････････････････････････････････ 32
柴田 美智子 1，中野 達也 1，佐藤 学 1，中岡 義晴 1，森本 義晴 2
IVF なんばクリニック／２HORAC グランフロント大阪クリニック

１

1

日本 IVF 学会雑誌 Vol. 23，No. 2，2 -6，2020

ー原著 ー

子宮腺筋症の大きさは妊娠率に負の影響を与えるが卵巣子宮内膜症性嚢胞は影響しない山田 聡，江夏 徳寿，苔口 昭次，塩谷 雅英
英ウィメンズクリニック 〒 650-0021

兵庫県神戸市中央区三宮町 1-1-2

三宮セントラルビル

要 旨： 子宮内膜症を有する不妊患者に対しては症例ごとに薬物治療や手術療法の適応を考える必要があるが，その判断基準はいまだ明確ではない．本研究は当院において凍結胚移植した子宮腺筋症と卵巣
子宮内膜症性嚢胞（以下，内膜症性嚢胞）を合併する子宮内膜症 1787 周期について生化学的妊娠率，臨床
妊娠率及び流産率に対する影響を，重症度との関連を含めて後方視的に検討した．子宮腺筋症は生化学的妊娠率，臨床妊娠率を有意に低下させ，大きさは妊娠に影響した．子宮腺筋症は大きさに関わらず流産率には影響しなかった．内膜症性嚢胞は嚢胞径に関わらず生化学的妊娠率，臨床妊娠率を低下させなかった．
しかし流産率に関して，内膜症性嚢胞は腫瘍径に関係なく流産率を上昇させる可能性を否定できなかった．
キーワード：子宮内膜症，卵巣子宮内膜症性嚢胞，子宮腺筋症，妊娠率，流産率
ランニングヘッド：卵巣子宮内膜症性嚢胞の着床に与える影響

緒

言

対象と方法

子宮内膜症の発生頻度は生殖年齢女性の 10% とも2011 年〜 2017 年に当院で凍結胚移植を行った子言われ，不妊女性の５ 人に 1 人に発症するとされてい宮内膜症 2180 周期（妊娠 1118 周期）のなかで，転帰やる 1）．なかでも子宮腺筋症の単独発生率は 25 〜 64％

超音波所見が不明なもの及び内膜症所見の無いものを前後と報告され，それに伴い妊娠率が低下し，流産率が除いた 1787 周期（妊娠 901 周期）に対して，子宮腺筋症

上昇するとされており，着床不全の原因の一つとされの程度や内膜症性嚢胞径による生化学的妊娠率，臨床

しかし，一方で無症候患者の妊娠率などに影ている 2- 7）．

妊娠率及び流産率について，ロジスティック回帰分析

響しないという報告もみられるため ，子宮腺筋症のを用いて後方視的に検討を行った．
全患者の背景は，年ART 結果に対する影響については必ずしも議論の一致

齢は 25- 47 歳（36 ± 4. 2）．37 歳以上は 47% を占めた．

をみていない．
さらに，子宮腺筋症の治療には外科的治

移植回数は1-13回（2.2±1.5），
流産回数は1-7回（0.8

療あるいは保存的治療の選択が必要になることがある± 1. 0）であった．
不妊原因は 60%（n= 532）が卵管因子

が，判断根拠となる妊娠率の低下や流産率の上昇を重症で，男性因子は 19%（n= 166）であった（重複あり）．

8）

度によって解析した報告はほとんどみられない．
一方，内膜症性嚢胞の治療は子宮腺筋症同様に挙児希

婦人科手術歴は内膜症性嚢胞摘出術 4. 9%（n= 44），
子宮筋腫核出術1.2%（n=11），
片側付属器切除術0.6%

望がある場合は対症療法と保存手術を中心として行わ （n= 5）など合計で 7. 2%（n= 65）であった．
本研究では，
内膜症性嚢胞が子宮腺筋症と同様に着床れている 9- 12）．

子宮内膜症には骨盤痛や月経困難症の自覚症状や超音不全と関連するのであれば，特に難治性症例には早期の波を用いた臨床的子宮内膜症も含まれている．移植前治療介入を要とするため，やはり重症度による妊娠へのの経腟超音波所見で，筋層の不均整な肥厚，筋層内嚢胞

影響を評価することが必要である．

の存在，子宮内膜と子宮筋層の明瞭な境界の消失を子そこで今回，
本研究では2011年〜 2017年の間に当院

宮腺筋症と診断し，最大筋層厚が 5cm 以上を腺筋症高で凍結胚移植を行った子宮内膜症2180周期（妊娠1118

度肥大とした 13）．内膜症性嚢胞は腫瘍内に微細点状エ

周期）
を検討し，
子宮腺筋症や内膜症性嚢胞の存在ならびコーを認める嚢胞性病変とした．
すべて経腟超音波によにその大きさが着床に与える影響について検討した．

る画像で同一検者が診断した．生化学的妊娠は月経30­­日目（妊娠 4 週１ 日）に血清β -hCG 値が 1. 0 ml/L 以

受付 2020 年 5 月 9 日 / 受理 2020 年 6 月 10 日
責任著者：山田 聡 e-mail［yamada@hanabusaclinic.com ］

2

上を陽性とした．
臨床妊娠は超音波検査で胎嚢が認めら各群における臨床妊娠率と流産率を比較したところ，れたことで判断した．
妊娠率，臨床妊娠率については症

A 群及び C 群は B 群に比較して有意に臨床妊娠率が低例あたりの率とした．

かった（p< 0. 001）
．また流産率は C 群が A 群に比べて流産は当院で卒院まで妊娠管理を行っている妊娠 10週までの初期流産とした．

有意に高かった（p< 0. 05）（表 2）．
次に子宮腺筋症を合併した A 群と C 群，合計 1471 周

数値的データについては，結果は平均値（Mean）±標期の腺筋症の程度を最大筋層厚 5cm 未満と以上に分け準偏差（SD）または％（number）で表し，統計学的解析て臨床妊娠率と流産率を検討した（表 3）．5cm 未満のは対応の無い Student の t-test またはχ -test を用い， 腺筋症群（軽症例）が 1280 例と殆どであり，5cm 以上
２

３ 群以上の検定では Bonferroni の方法で調整を加えた． の腺筋症高度肥大群（重症例）
は191例であった．
両群のロジスティック回帰分析の結果についてはオッズ比と臨床妊娠率と流産率を比較すると，有意な差は認められ95％信頼区間を示し同時に P 値を記した．本研究におなかった．

ける患者同意取得及び個人情報保護に関して，患者には内膜症性嚢胞を合併した 1360 例を腫瘍径 4cm 未この臨床データを匿名にて報告する旨の同意を得た．
．

満及び以上に分けて臨床妊娠率と流産率を検討した（ 表 3）．4cm 未 満 群 が 1284 例 と 大 部 分 を 占 め，

結

4cm 以上群は 76 例であった．4cm 未満と 4cm 以上

果群では臨床妊娠率と流産率に差は認められなかった．

超音波検査等で子宮腺筋症または内膜症性嚢胞が疑

次に生化学的妊娠，臨床妊娠，流産の結果について，子われた症例 1787 周期の内訳を表１ に示した．
これら症

宮腺筋症及び内膜症性嚢胞の大きさの影響をロジス

例のうち，子宮腺筋症（+）内膜症性嚢胞（-）（A）群がティック回帰分析により検討した（表 4）．
子宮腺筋症の427 周期で，子宮腺筋症（-）
内膜症性嚢胞（+）（B）
群は

有無は腺筋症の大きさに関わらず生化学的妊娠に関連

316 周期，子宮腺筋症（+）内膜症性嚢胞（+）（C）群はしていたが（OR; 0. 56, 95%CI; 0. 45- 0. 70, P< 0. 01），

1044 周期と最も多かった．患者背景を 3 群で比較する

内膜症性嚢胞の有無は嚢胞の大きさにかかわらず生化と，B 群の平均年齢が A 群及び C 群に比べて若かった

学的妊娠との関わりはなかった．

（P< 0. 05）（表１）．
また，移植回数，流産回数，卵管因子

臨床妊娠と子宮腺筋症の間には関連が見られの関与ならびに男性因子の関与については 3 群間の背 （OR; 0. 66, 95％ CI; 0. 517- 0. 801, p< 0. 01），これは子景に差はなかった
（表１）
．

表1

宮腺筋症 5cm 未満あるいは 5cm 以上の大きさに関わら

表1

各群ごとの患者背景

各群ごとの患者背景

症例群

A

B

C

各群の定義

⼦宮腺筋症(+)
内膜症性嚢胞(-)
N=427

⼦宮腺筋症(-)
内膜症性嚢胞(+)
N=316

⼦宮腺筋症(+)
内膜症性嚢胞(+)
N=1044

年齢 （歳）

37.6 ±4.3*

36.0±4.3* **36.7±4.0**

移植回数

2.2±1.6

2.1±1.3

2.3±1.6

流産回数

0.8±0.9

0.8±0.8

0.8±1.0

卵管因⼦（％）
括弧内患者数30.6%(131)28.5%(90)27.6%(288)

男性因⼦（％）
括弧内患者数

8.0%(34)

10.8%(34)

5.7%(60)

年齢、移植回数、流産回数は平均値±標準偏差で表記 P<0.05（Bonferroni の調整）
年齢，移植回数，流産回数は平均値±標準偏差で表記 ＊t-test（Bonferroniの調整）により年齢の項で、A と B 間P<0.05、及び(Bonferroniの調整)
B と CM 間＊＊に有意差が認められた（ｐ<0.05）
t-test（Bonferroniの調整）により年齢の項で、AとB間*、およびBとC間** に有意差が認められた（p<0.05）

3

表2

表2

各群における臨床妊娠率と流産率

各群における臨床妊娠率と流産率
症例群

A

B

C

各群の定義

⼦宮腺筋症(+)
内膜症性嚢胞(-)
N=427

⼦宮腺筋症(-)
内膜症性嚢胞(+)
N=316

⼦宮腺筋症(+)
内膜症性嚢胞(+)
N=1044

臨床妊娠率33.2（142) *45.2(143) * **33.1(345) **流産率

22.5(32) ***30.8(44)30.7(106) ***％（number）に有意差が認められた（p<0.001）
２ χ２-testにより臨床妊娠率の項で、AとB間*、およびBとC間**＊＊＊χ -test により臨床妊娠率の項で
A と B 間 、及び B と CM 間 に有意差が認められた流産の項で、AとC間***に有意差が認められた（p<0.05）。
（ｐ<0.001）%(number)
流産の項で、A と C 間＊＊＊に有意差が認められた（ｐ<0.05）

表3

⼦宮腺筋症(1471例)は腺筋症の程度を筋層厚5cm未満と以上、

表内膜症性卵巣腫瘍(1360例)は腫瘍径4cm未満および以上に分けた
3 子宮腺筋症（1471 例）は腺筋症の程度を筋層厚 5 ｃｍ未満と以上、各群の臨床妊娠率と流産率
内膜症性卵巣腫瘍（1360 例）は腫瘍径 4cm 未満及び以上に分けた各群の臨床妊娠率と流産率
⼦宮腺筋症

<5cm

>5cm

内膜症性卵
巣嚢胞

<4cm

>4cm

n

1471

1280

191

1360

1284

76

臨床妊娠率

34(500)34.5(441)

31(59)

36.2(493)

36.6(470)

30.3(23)

流産率

27.6(138)

26.8(118)

33.9(20)30.4(150)

30(141)39.1(9)％（number）%(number)

ず認められた（表 4）．
一方，内膜症性嚢胞の存在は嚢胞
径 4cm 未満及び以上に関わらず臨床妊娠に影響を与えていなかった
（表 4）
．

考

察

子宮内膜症は生殖年齢の 10 人に１ 人が罹患してい流産との関連に関しては，子宮腺筋症の存在は影響

るともいわれる発症頻度の高い疾患であり，子宮内膜症がなく（OR; 0. 82, 95%CI; 0. 58- 1. 14, p= 0. 24），またが関連する不妊症の患者も高齢化に伴い増加すると考腺筋症の大きさを５cm 以上及び 5cm 未満に分けたとえられている 1）．子宮内膜症の治療は薬物治療と手術療

きにも，いずれの群でも関連性は低かった．
一方，内膜法が一般的であるが，挙児希望がある場合は対症療法と症性嚢胞ではすべての症例，ならびに腫瘍径 4cm 以上

保存手術が中心である．
子宮内膜症の一つである子宮腺と未満，腫瘍径２cm 以上と未満（data not shown）に分筋症の場合は，ROS（reactive oxygen species）や炎症けた群でも有意差は認められなかったが，内膜症性嚢性物質による腺筋症筋層内の穿通動脈のリモデリング

胞を認めなかった群と比較するとオッズ比は高かった

異常やプロゲストンに対する抵抗性の上昇などが原因（表４）．

で，着床不全や流産率が上昇し，妊娠率の低下を招き，その結果胎盤形成の異常が起きるという報告が多くみら
しかしながら手術を考慮する場合 14）もあるが，れる 2- 7）．

4

殆どが対症療法を行っているのが現状である．
本報告では子宮腺筋症は臨床妊娠率を有意に低下させたが，どの程度の大きさが妊娠に影響を与えるかが不いて年齢が有意に高かったため，患者年齢が生化学的妊娠率及び臨床妊娠率に影響を及ぼした可能性は否定できなかった．

明なために，ロジスティック回帰分析を用いて重症度別

内膜症性嚢胞の治療も子宮腺筋症同様に挙児希望がに解析した．
子宮腺筋症の程度を最大筋層厚として5cmある場合は対症療法と保存手術が中心となるが 10- 12），未満と 5cm 以上に分けて生化学的妊娠率，臨床妊娠率

30 歳後半で腫瘍径が６cm 11）を超えるものは破裂，感染との関連を検討した．
その結果，筋層厚が 5cm 未満の軽予防，特に病理学的診断の観点から手術療法が優先さ症例と５cm 以上の重症例のいずれの群においても生化れる場合がある．一般不妊患者に対しては腫瘍径が４

学的妊娠率，臨床妊娠率を低下させると考えられるが，cm 前後では腹腔鏡による手術か ART を用いた不妊治

オッズ比を比較すると，重症例の方が生化学的妊娠率が療のどちらかを優先させるかに対して統一した見解は低下する傾向がみられた．
これは子宮腺筋症が重症にな無い 12）．本症において着床不全や流産を繰り返す難治

るほど生化学的妊娠及び臨床妊娠に強く影響するもの

性不妊患者の場合は，高齢化に伴う卵巣予備能の低下やと考えられる．
一方，流産率は子宮腺筋症の影響がなく， 悪性化の問題 10）など様々なケースが考えられ，手術を内膜症性嚢胞
また子宮筋層厚を 5cm 未満と以上に分けたときにも， 含めた治療の介入開始時期が重要である．
いずれの群でも関連性は低く有意な差がなかった．
卒院

が着床に与える影響があるならば，一般不妊治療からのため妊娠管理を行っている妊娠 10 週までを流産症例

ART へ早期方針転換や移植の前に積極的な治療を行うとしており，胎児因子の影響が寄与しているためか腺筋ことが望まれる．2012 年度生殖・内分泌委員会の「本症の存在と流産の関連性が低い結果になったと思われ邦における子宮内膜症治療が妊孕能に与える影響に関る．
しかし，子宮腺筋症を有する症例群は患者背景におする検討小委員会」で妊娠率，流産率に有意差はなく嚢

表4

ロジスティック回帰分析による妊娠に対する⼦宮腺筋症
および内膜症性卵巣腫瘍の影響
表 4 ロジスティック回帰分析による妊娠に対する子宮腺筋症及び内膜症性卵巣腫瘍の影響
⽣化学的妊娠

odd⽐ (OR)

95%信頼区間(CI)P値

⼦宮腺筋症(+)

0.56

0.45-0.70

0.0000002

<5cm

0.56

0.45-0.70

0.0000002

>5cm

0.41

0.29-0.58

0.0000005

内膜症性嚢胞(+)

0.91

0.75-1.11

0.34

<4cm

1.02

0.84-1.24

0.85

>4cm

1.07

0.66-1.73

0.78

⼦宮腺筋症(+)

0.64

0.52- 0.80

0.00008

<5cm

0.62

0.50-0.77

0.00002

>5cm

0.55

0.39-0.79

0.0013内膜症性嚢胞(+)

0.90

0.74-1.11

0.39

<4cm

1.04

0.85-1.27

0.72

>4cm

0.81

0.48-1.35

0.41

臨床妊娠

流産
⼦宮腺筋症(+)

0.82

0.58-1.14

0.24

<5cm

0.79

0.56-1.11

0.17

>5cm

1.17

0.650-2.09

0.61

内膜症性嚢胞(+)

1.30

0.92-1.84

0.13

<4cm

1.24

0.87-1.76

0.24

>4cm

1.37

0.61-3.08

0.44

内膜症性嚢胞(-)

0.75

0.53-1.06

0.11

5

胞の存在は卵の質や着床を阻害することも無いことが

8） Benaglia L , Cardellicchio L , Leonardi M, Faulisi S ,Vercel l i n i P, Pa f fon i A , S om ig l i a n a E , Fedele L .
示された ．ロジスティック回帰解析の結果は内膜症
Asymptomatic adenomayosis and embryo implantation in性嚢胞で生化学的妊娠率，臨床妊娠率の低下は無かった
IVF cycles. Reprod Biomed Online, 29: 606-611, 2014.
が，既に着床不全の報告のある子宮腺筋症や２- 7），内膜症 9） 日本産婦人科学会編．産婦人科診療ガイドライン - 婦人科外来編，2017．https://www.jsar.or.jp/files/web_provision.pdf
性嚢胞無し群に比べ，内膜症性嚢胞では有意差は無いも
10） 日本産婦人科学会，生殖・内分泌委員会報告．日産婦誌，のの腫瘍径に関係なくオッズ比は高く，流産率を上昇さ
63：1306-1313, 2011.
せる可能性も否定できなかった．
11） 日本産婦人科学会．子宮内膜症取り扱い規約 第２部（治療
内膜症性嚢胞が着床や胚発育に関与するかどうかに編 診療編）
ついての報告は殆ど無いが，嚢胞内溶液に含まれるサイ 12）Working group of ESGE, EHSRE and WES, Saridogan E,
Becker CM, Feki A, Grimbizis GF, Hummerlshoj L ,トカイン，鉄，ROS，Nitrogen Oxide（NO），凝固系関Keckstein J, Nisolle M, Tanos V, Ulrich UA, Vermeulen N,
連物質などの有害物質が toxic network を作っており，
Deeee Willldeee RL: Recommendations for the Surgical
これらは他の良性嚢胞性腫瘍よりも高濃度で，悪性腫瘍
Tr e a t m e n t o f E n d o m e t r i o s i s . P a r t 1 : O v a r i a n
Endometrioma. Hum Reprod Open, 2017（4）, 2017. https://
内容液と同等の濃度といわれ，嚢胞周辺の正常卵子に影
16）
doi.org/10.1093/hropen/hox016.
すなわち，内膜症性嚢胞響を及ぼすとの報告がある ．
13） 日本産婦人科医会．子宮内膜症・子宮腺筋症 研修ノート，の存在は，特に反復移植不成功患者（RIF）
に対しては胚102: 49-86, 2019.
や胎児の発育障害を引き起こす可能性が考えられる．
14）廣田泰・大須賀穣 : 子宮腺筋症．産婦人科の実際，67: 863868, 2018．
今後，さらに症例を増やした臨床研究が必要であるが，
15） 日本産婦人科学会．生殖・内分泌委員会報告．日産婦誌，
難治性不妊患者や RIF には子宮内膜症に関わる重症度
65：1355-1373, 2013．
を考慮した上で，着床環境を改善するための手術や偽閉16） Sanchez AM, Viganò P, Somigliana E: The distinguishing
経療法などの時期も踏まえた治療介入が必要であると
cellular and molecular features of the endometriotic
ovarian cyst: from pathophysiology to the potential
考えられる．
endometrioma-mediated damage to the ovary. Hum
Reprod, 20: 217-230, 2014.
15）

参考文献
1） 国立社会保障・人口問題研究所編．
第 15 回出生動向基本調査（結婚と出産に関する全国調査）, 平成 27 年度版，2015. http://
www.ipss.go.jp/ps-doukou/j/doukou15/doukou15_gaiyo.asp.
2） Naftalin J, Hoo W, Pateman K, Marvelos D, Foo X,
Jurkovic D. Is adenomyosis associated with menorrhagia?
Hum Reprod, 29: 473-479, 2014.
3） Puente JM, Fabris A, Patel J, Patel A, Cerrillo M, Raquena
A, Garcia-Velasco JA. Adenomyosis in infertile woman:prevalence and the role of 3D ultrasound as a marker ofthe disease. Reprod Biol Endocrinol, 14: 60, 2016.
4） L eone Robert i Magg iore U, Ferrero S , Ma ng ili G ,Bergamini A , Inversetti A , Giorgione V, Viganò P,
Candiani M: A systematic review on endometriosis during
pregnancy: diagnosis, misdiagnosis, complications andoutcomes. Hum Reprod Update, 22: 70-103, 2016.
5） Vercellini P, Consonni D, Dridi D, Bracco B, Frattaruolo
MP, Somigliana E: Uterine adenomyosis and in vitro
fertilization outcome: a systematic review and metaanalysis. Hum Reprod, 29: 964-977, 2014.
6） Leonardi M, Papaleo E, Reschini M: Risk of miscarriage inwomen with endometriosis: insights from in vitro
fertilization cycles. Fertil Steril, 106: 386-392, 2016.
7） Kohl Schwartz AS, Wolfler MM, Mitter V, Rauchfuss M,
Haeberlin F, Eberhard M, von Orelli S, Imthurn B, Imesch
P, Fink D, Leeners B: Endometriosis, especially mild
disease: a risk factor for miscarriages. Fertil Steril, 108:806-814, 2017.

6日本 IVF 学会雑誌 Vol. 23，No. 2，7 -13，2020

ー原著 ー

卵巣予備能低下症例に対する同一周期 2 回採卵の有用性と課題
勝 佳奈子 1，中岡 義晴 1，森本 義晴 2
1

2

IVF なんばクリニック 〒 550-0015 大阪府大阪市西区南堀江 1-17-28
HORAC グランフロント大阪クリニック 〒 530-0011 大阪府大阪市北区大深町 3-1 グランフロント大阪タワー B15F

要 旨： 卵巣予備能低下症例の ART 治療は 1 回の採卵で獲得できる卵子数が少なく，数周期にわたり採卵を実施している症例も多い．このような症例に対して同一周期に 2 回卵巣刺激および採卵をおこなう
Double Stimulation（Duo Stim）を実施し，その有用性を検討した．58周期でDuo Stimを実施し，卵胞期・黄体期ともに採卵まで至った症例は 40 周期であった．採卵数は黄体期で有意に多かったが，卵子成熟率
や受精率は両群で差は認めなかった．卵胞期 10 例，黄体期 8 例で成熟卵の獲得に至らず，トリガーの選択や黄体期卵巣刺激の管理など課題もみられたが，65％の症例で Duo Stim により 1 周期 1 回採卵と同等
かそれ以上の卵子・胚の獲得に至っており，Duo Stim は卵巣予備能低下症例の ART 治療において，その成績を向上し Time-To-Live Birth を短縮するための有益な選択肢の一つになると考える．
キーワード：卵巣予備能低下 , Duo Stim, Double Stimulation, 黄体期卵巣刺激ランニングヘッド：卵巣予備能低下症例における同一周期 2 回採卵緒

うち小卵胞を，黄体期の卵巣刺激により発育させ採卵言することでより多くの卵子を獲得することを目的とし卵巣予備能は ART 成績に大きな影響を及ぼす．卵巣
予備能は年齢とともに低下し，獲得できる染色体正常て Duo Stim を実施し，その有用性および課題について検討した．

そのため，卵巣
胚盤胞の数も年齢とともに低下する ．
1）

予備能低下症例の ART 治療ではできるだけ短期間で多くの卵子獲得を目指す必要があるが，1 回の採卵で獲得できる卵子数は少なく，数周期にわたり複数回採卵を実施している症例も多い．

対象と方法
卵 巣 予 備 能 が 低 下 し て い る 状 態 い わ ゆ る Poor
Responder の定義については，1）高齢（40 歳以上）ま2011 年頃より ART 治療の時間的制約のある挙児希

たは卵巣低反応のリスク（卵巣手術歴など）があること，

望がん患者に対して月経周期に関係なく卵巣刺激を開

2）卵巣低反応の既往があること（以前の卵巣刺激で採が登場し，従来の月経周

卵数が3個以下），
3）
卵巣予備能の検査で異常がある（胞期に合わせた卵巣刺激と同等の採卵成績が得られてい状卵胞数 5- 7 個以下または AMH 0. 5– 1. 1 ng/ml 以下）

る．2014 年にはランダムスタート法を応用し，卵巣予のうち少なくとも 2 項目当てはまる場合といわれてい備能低下症例に対して 2 回卵巣刺激をおこなう方法がる 5）が，本検討では卵巣予備能低下症例を，1）40 歳以報告され 3），以降同一月経周期に 2 回卵巣刺激および採上，2）AMH 1. 20 ng/ml 未満，3）月経期の胞状卵胞数

卵をおこなう卵巣刺激法は Duo Stim 4）と呼ばれ広く6 個以下，4）調節卵巣刺激周期で ART 成績不良，のう認識されている．Duo Stim はがん患者のみならず，卵ちいずれか 1 つ以上を満たすものとし，FSH 基礎値が巣予備能低下症例に対しても有効な治療法となる可能

20 mIU/mL 以上の症例は除外した．

始するランダムスタート法

2）性が示唆されている．

2019 年 10 月から 2020 年 4 月の間に卵巣予備能低

また，卵巣予備能低下症例では主席卵胞の発育とと下症例で低刺激もしくは完全自然周期での採卵を予定

もに小卵胞の発育，いわゆる不均一卵胞発育を認めるされている患者で，卵胞期の採卵決定時に 10mm 前後症例も多い．
本検討では，卵胞期に認めた不均一卵胞のの小卵胞を認めた症例に対して Duo Stim による卵巣受付 2020 年 5 月 22 日 / 受理 2020 年 6 月 17 日
責任著者：勝 佳奈子 e-mail［katsu 492@ivfjapan.com］

7

刺激を提案し，治療についての同意を得られた 52 例に径が 10mm 未満の場合は経口排卵誘発剤の内服で，対して実施した．

10mm 以上の場合は HMG 連日投与で黄体期卵巣刺激

当院での Duo Stim プロトコールを図 1 に示す．卵胞

を開始した
（図 3）
．
黄体期は原則卵胞径による GnRH ア

期の卵巣刺激法は月経期の基礎ホルモン値および胞状

ンタゴニストの投与はなしとしたが，血中 LH 値の上昇

卵胞数と，これまでの ART 治療歴を考慮し個々の症例などホルモン値に応じて個々の症例で投与を考慮した．

で選択した（図 2）．
卵胞径 10mm 以上で HMG を，主席

主席卵胞径が 17mm に到達したら GnRH アゴニストと卵胞径 14mm 以上もしくは血中 LH 12 mIU/mL 以上で

HCG を投与し，35 ～ 36 時間後に採卵を実施した．

GnRH アンタゴニストの投与を開始した．
主席卵胞径が52 例 58 周期（5 例で複数周期実施あり）について後17mm に到達したら GnRH アゴニストを投与し，35

方視的に検討し，統計学的解析には Student-t 検定およ～ 36 時間後に採卵を実施した．卵胞期採卵の当日は卵びχ 2 検定を用い，P< 0. 05 をもって統計学的有意差

胞径 12 ～ 14mm 以上の卵胞のみ穿刺した．

ありと判定した．

卵胞期採卵から 2 日後に再度卵胞計測をし，主席卵胞8

図1

図1 当院でのDuo Stimプロトコール
当院での Duo Stim プロトコール

図2

図2 卵胞期の卵巣刺激方法の内訳
卵胞期の卵巣刺激方法の内訳

図3

図3 黄体期の卵巣刺激方法の内訳
黄体期の卵巣刺激方法の内訳

結果

52例の平均年齢は40.3±3.4歳，
AMH値は1.3±1.4
ng/ml であった．58 周期の採卵実施状況を図 4 に，治療転帰を表 1 に示す．
卵胞期採卵が中止となったのは5例で，いずれも卵胞発育は認めたものの採卵までに排卵が起こった症例であった．
黄体期採卵が中止となったのは17例で卵胞期よりも多く，その理由として，患者が黄体期採卵を希望しなかったのが7例，黄体期卵巣刺激を開始したが卵胞発育停滞などにより採卵決定までに中止を希望したのが7例，採卵決定したが採卵当日に排卵したのが3例であった．
Duo Stim を提案した 58 周期のうち，卵胞期・黄体期
ともに採卵まで至った症例は 40 周期（68. 9％）であっ
図4

た．40 周期の卵胞期採卵と黄体期採卵の ART 経過を

図4 Duo Stim 58周期の採卵実施状況
Duo Stim
58 周期の採卵実施状況

表 2 に示す．

表1 Duo Stim 58周期の治療転帰
表 1 Duo Stim 58 周期の治療転帰
卵胞期採卵

黄体期採卵

採卵実施

53周期（91.3%）41周期（70.6%)

採卵数0

7周期（13.2%）6周期（14.6%）

採卵数≧146周期（79.3％）35周期（60.3％）

成熟卵0

3周期（5.1%）

2周期（3.4％）

受精0

3周期（5.1%）

2周期（3.4%）

胚凍結0
採卵中止

5周期（8.7%）

4周期（6.8％）5周期（8.7%)

17例（29.4%）・採卵当日に排卵4周期（6.8％）

・黄体期採卵希望なし

・採卵決定までに排卵1周期（1.7％）

・卵胞発育停滞により中止

7周期（1.2％）7周期（1.2％）

・採卵当日に排卵3周期（5.1％）

表2
表 2同一周期2回採卵を実施した40周期のART経過
同一周期 2 回採卵を実施した 40 周期の ART 経過
卵胞期採卵

黄体期採卵

P値

刺激日数（日）11.3±2.3

8.1±3.9＜0.05

HMG投与量（IU）

936±7631738±1280＜0.05≧14mm卵胞数（個）2.1±1.0

3.4±1.9＜0.05

採卵数（個）

1.9±1.4

3.1±2.6＜0.05

成熟卵数（個）1.8±1.0

3.1±2.5＜0.05

卵成熟率（成熟卵数/採卵数）

85.2%

85.6%

0.86

82.4%

84.2%

0.35

（n=34）（n=33）

受精率（正常受精数/成熟卵数）
total
c-IVF
ICSI
良好胚率（良好胚数/受精卵数）
平均±標準偏差

82.6%

76.4%

（n=12）（n=11）

82.3%

89.6%

（n=22）（n=22）

76.1%

71.2%

（n=32）（n=31）

0.31
0.20
0.22

平均±標準偏差9卵巣刺激日数（採卵までに要した日数）は卵胞期採卵

分類グレード 1- 3 の 7 細胞以上の胚を良好胚とした良11. 3 ± 2. 3 日，黄体期採卵 8. 1 ± 3. 9 日で卵胞期採卵が好胚率（良好胚数 / 受精卵数）
は，卵胞期採卵 76. 1%，黄有意に長かった（P< 0. 05）が，HMG 投与量は卵胞期採

体期採卵 71. 2% で有意差は認めなかった。

卵 936 ± 763 IU，黄体期採卵 1738 ± 1280 IU で黄体胚凍結まで至った症例を採卵成績良好群とし，採卵数

期採卵が有意に多かった（P< 0. 05）．
卵胞径 14mm 以上

0 個または成熟卵 0 個であった症例を採卵成績不良群の卵胞数は卵胞期採卵2.1±1.0個，黄体期採卵3.4±1.9として卵胞期採卵・黄体期採卵それぞれで比較をおこ個，
採卵数は卵胞期採卵 1. 8 ± 1. 0 個，
黄体期採卵 3. 1 ±なった．両群のホルモン動態を図 5 に示す．卵胞期採卵2.5個でともに黄体期採卵で有意に多かった（P＜0.05） では卵巣刺激開始前，採卵決定時，採卵当日でのホルモが，卵子成熟率は卵胞期採卵 85. 2%，黄体期採卵 85. 6%

ン値すべてで両群に差は認めなかった（図 5：A・B）が，で有意差は認めなかった．また受精率（卵胞期採卵 vs.

黄体期採卵では採卵決定時のE2値が成績良好群

黄体期採卵）
は，
total（82.4% vs. 84.2%），
c-IVF（82.6%

1395. 6 ng/mL，成績不良群 591. 5ng/mL で成績良好

vs. 76. 4%），ICSI（82. 3% vs. 89. 6%）でいずれも両群群が有意に高かった（P< 0. 05）．
また、両群（成績良好群に有意差は認めなかった．
受精後 3 日目において Veeckvs. 成績不良群）の ART 経過を表 3 に示す．
卵胞期採卵で

表3
表
3 採卵成績良好群と成績不良群の比較
採卵成績良好群と成績不良群の比較
卵胞期採卵
不良群n=10

刺激日数（日）10.8±1.911.8±2.3

0.09

HMG投与量（IU）

947±741750±471

0.22

穿刺卵胞数（個）2.4±1.0

1.5±0.7＜0.05

4.9±2.9平均±標準偏差

図5

10

黄体期採卵

良好群n=31

採卵成績良好群と成績不良群のホルモン動態

P値

良好群n=27

不良群n=8P値

9.3±3.6

2.7±2.0＜0.05

2013±1359

450±426＜0.05

3.1±2.0

0.06

平均±標準偏差は刺激日数（10. 8 日 vs. 11. 8 日）
，HMG 投与量（947 IU

treatment の可能性も示唆される．
しかしながら，黄体期

vs. 750 IU）は両群において差はなかったが，穿刺卵胞

採卵は高プロゲステロンにより下垂体抑制状態にあり数（2. 4 個 vs. 1. 5 個）は成績良好群が有意に多かった

同容量の GnRH アゴニスト投与により誘発された LH（P< 0. 05）．
黄体期採卵では，穿刺卵胞数（4. 9 個 vs. 3. 1

サージが黄体期採卵は卵胞期採卵の 1/ 2 であった 3）こ個）は両群で差はなかったが，刺激日数（9. 3 日 vs. 2. 7とから，特に卵巣予備能低下症例では十分なブースト効日），HMG 投与量（2013 IU vs. 450 IU）ともに成績良果が得られない可能性が考えられ，さらに HCG 投与に好群が有意に多かった（P< 0. 05）

よる OHSS リスクが高くないことから，黄体期採卵は原則ダブルブーストが適していると考える．

考

卵胞期採卵の穿刺卵胞径については，当初 14mm 以察

上の卵胞のみを穿刺としていたが，卵胞期採卵当日にDuo Stim は 2014 年に初めて提唱されて以降多くの12mm 前後であった卵胞が黄体期卵巣刺激開始時に施設で実施され治療成績について報告されているが，卵16- 18m 前後となり，十分な卵巣刺激をしないまま採卵

巣刺激法や採卵決定時のトリガーなどについて Duo

決定に至ったほとんどの症例で卵子獲得に至らなかっ

Stim の標準的プロトコールはなく，個々の施設で選択た．また 12mm 前後の卵胞でも卵子採取と成熟卵子獲しているのが現状である．
本検討では，卵巣予備能低下

得が期待できる 11）ことから，卵胞期採卵の穿刺卵胞径症例に対して Duo Stim を実施するにあたり，まずプロ

は 12mm 以上のものとし，黄体期採卵で十分な卵巣刺

トコールの作成段階で卵巣刺激法，トリガー，穿刺卵胞激ができるよう試みていく必要があると考える．
卵巣刺激日数については，卵胞期採卵と黄体期採卵で径の目安について考察した．
Duo Stim の卵巣刺激については，クロミフェンやレ差を認めなかった 4），卵胞期採卵より黄体期採卵のほう

トロゾールに HMG を併用するもの や，アンタゴニスが有意に長かった 3）など報告があるが，本検討では卵胞ト法で実施しているもの 4）があったが，本検討では卵胞期採卵より黄体期採卵のほうが刺激日数が有意に短い期採卵の卵巣刺激に関しては卵胞径 10mm 以上を認め結果となった．
この理由として，本検討ではDuo Stim実るまで排卵誘発剤の内服もしくは投薬なしでフォロー

施の目的を卵胞期採卵の不均一卵胞を黄体期採卵で回し，10mm 以上の卵胞を認めた段階で HMG 投与を開収することを主とした点が挙げられる．本検討の Duo

始した．
ただし月経中の基礎ホルモン値や胞状卵胞数にStim プロトコールでは卵胞期採卵は 10mm 以上の卵胞より卵巣刺激に対する反応が期待できると予測されたを認めるまで HMG 投与は開始しないが，黄体期採卵で症例に対しては，連日の排卵誘発剤内服と HMG の隔日は卵胞期採卵の翌々日診察時にすでに 10mm 以上の卵投与により mild stimulation をおこなった．

胞を認める症例が多かったため，結果として卵胞期採卵3）

採卵決定時のトリガーについては，通常の 1 周期 1 回採卵の場合，高ゴナドトロピンである卵巣予備能低下症

より黄体期採卵のほうがスケジュール開始から採卵まで至る日数が短くなったと考えられる．

例では GnRH アゴニスト投与に対する感受性が低下し黄体期採卵の HMG 投与量については，黄体期採卵でている可能性があり ，recombinant-HCG 投与で対回収された卵子あたりの HMG の平均投与量（total

応していた．しかし，卵胞期採卵ではトリガーとして

HMG ／採卵数）は，卵胞期採卵で回収された卵子あたHCG を投与することにより遺残卵胞が増加し，次周期

りの HMG 平均投与量のほぼ 2 倍であると報告されてい以降の卵胞発育に影響を及ぼす可能性があり ，Duoる 12）ことから，多くの症例で卵胞期採卵よりも HMG 投

Stim では黄体期の卵胞発育が停滞する可能性が示唆さ

与量を増やし卵巣刺激を開始した．HMG 投与量は卵胞れた．
また recombinant-HCG 250 μ g，u-HCG 5000

期採卵より黄体期採卵が有意に多かったという報告 3）4）

IU，GnRH アゴニスト 600 μ g 点鼻投与での三者間でが多く，この原因として黄体期採卵は高プロゲステロン

成熟卵子回収率に差はなかったという報告 もあり，卵状態にあり HMG 刺激に対する卵巣の反応が卵胞期採

胞期採卵はトリガーに GnRH アゴニストを使用した．

卵に比べ低下しているためと考えられる．
そのため，黄黄体期採卵のトリガーは，卵子成熟率の上昇を期待

体期卵巣刺激開始後もエストロゲン値の上昇がなくプ

GnRH アゴニストと recombinant-HCG による

ロゲステロン値が上昇していたり，超音波所見で黄体径

ダブルブーストをおこなった．
ただし卵胞期採卵・黄体の縮小がみられない場合などは卵胞発育に時間を要す

期採卵ともに GnRH アゴニストの単回投与で卵子成熟る可能性があり，早い段階でプロゲステロン値と黄体退率に有意差を認めなかったという報告 3）4）もあることか

縮に留意して HMG 投与量・投与期間を必要最小限にら， 本 検 討 の 黄 体 期 採 卵 の ダ ブ ル ブ ー ス ト は over

コントロールすることが今後の課題である．

6）

7）

8）

し

9）10）

11

採卵数については，卵胞期採卵と黄体期採卵で差を認めなかった 4），卵胞期採卵より黄体期採卵のほうが有意に多かった 3）などの報告があるが，本検討では卵胞期採
卵より黄体期採卵のほうが採卵数が有意に多い結果となった．
この理由として，卵胞期採卵は原則 12mm 以上の卵胞のみを穿刺しているのに対して、黄体期採卵では穿刺しうる卵胞はすべて穿刺していること，および黄体期のトリガーをデュアルトリガーとしたことで、小卵胞からも卵子が得られ獲得卵子数が卵胞期採卵よりも多くなった可能性が考えられる．
本検討では卵胞期採卵と黄体期採卵ともに採卵に至った 40 周期のうち 26 周期（65％）で Duo Stim により 1 周期 1 回採卵と同等かそれ以上の獲得卵子・胚の増加が認められたが，一方で卵胞期採卵または黄体期採卵で採卵数 0 個または成熟卵 0 個で卵子獲得に至らなかった採卵成績不良群も認めた．
卵胞期採卵の採卵成績良好群と成績不良群のホルモン動態に有意な差はな
かったものの，卵巣刺激開始前から採卵決定時および採卵当日のエストロゲン値とLH値の変化が成績不良群では緩やかであり，GnRH アゴニストによる LH サージが不十分であった可能性が考えられる．
この場合は排卵のリスクを十分説明した上でトリガーから採卵までの時間を 36 ～ 39 時間まで延長したり 13），早期排卵が予想される症例では黄体期採卵の卵胞発育が停滞する可能性を説明した上で卵胞期採卵のトリガーにHCGを使用することを考慮しなければならない．
黄体期採卵の採卵成績不良群に関しては，前述のとおり卵胞期採卵での穿刺卵胞径を工夫し黄体期採卵で十分な卵巣刺激をおこなうことで，回収卵子数の改善を期待したい．
本検討では，Duo Stim 実施症例の妊娠成績および児の予後については未だ検討に至っていないが，妊娠率については卵胞期採卵と黄体期採卵で得られた卵子で統計的有意差はみられず 3）4），また黄体期採卵で得られた卵子から生まれた児についても先天異常率は卵胞期採卵と差がないといわれている 14）．今後症例の蓄積を重ね長期予後についても検討したい．
今回，卵巣予備能低下症例に対して Duo Stim を実施した結果，採卵成績不良群からみる卵胞期採卵のトリ
ガーの選択や方法，黄体期採卵の卵胞モニターやホルモ
ン動態の管理など課題も多く挙げられたが，多くの症例
でより短期間で多くの卵子や胚を獲得することができた．Duo Stim は卵巣予備能低下症例の ART 治療において，その成績を向上し Time-To-Live-Birth を短縮するための有益な選択肢の一つになると考えている．

12

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13

日本 IVF 学会雑誌 Vol. 23，No. 2，14 -17，2020

ー原著 ー

体外受精における精液酸化還元電位を用いた受精予測
長谷川 久隆，鈴木 亮祐，塚本 佳奈，菊本 晃代，小林 充，京谷 利彦，小林 淳一
神奈川レディースクリニック 〒 221-0822

神奈川県横浜市神奈川区西神奈川 1-11-5 ARTVISTA 横浜ビル

要 旨： 精液酸化ストレスマーカーとして酸化還元電位（oxidation reduction potential: ORP）の有用性が報告されている . 本研究では ORP による cIVF の受精予測が可能か検討した . 解析の結果，静的 ORP（static ORP: sORP）は受精に影響を及ぼす因子であった（オッズ比 : 0. 42，95%Cl: 0. 25- 0. 72）. cIVFの受精において，ROC カーブの sORP カットオフは 2. 23 であり，AUC は 0. 687 であった . sORP カッ
トオフ未満の症例の cIVF 受精率は 79. 2% でカットオフ以上の症例（40. 0%）に比べ有意に高く，ICSIの受精率はカットオフ前後の症例間で有意差はなかった．よって ORP による受精予測は可能であることが示唆され，sORP 2. 23 以上の症例では ICSI を選択することで受精率を向上させると考えられた．
キーワード：酸化還元電位，酸化ストレス，MiOXSYS，IVF，ICSI

緒

言

対象と方法

酸 化 ス ト レ ス は， 活 性 酸 素 種（reactive oxygen

対象

species: ROS）の過剰な生産または抗酸化物質の欠乏

2019 年 4 から 7 月までの間に神奈川レディースクリ

により発生する．
精液中の酸化ストレスは男性不妊の指ニックにて初回採卵を行い，split 媒精を施行した 19 症

標の一つと言われており，精液中の高い ROS は , 細胞例，成熟卵 266 個（cIVF : 112 個，ICSI : 154 個）を対膜や DNA の損傷による精子の質の低下を引き起こし男象とした．

性不妊の原因の一つとなることが報告されている

．

1- 4）

精液中の酸化ストレスの評価法はこれまで，ROS, 抗酸

精液の解析と精子調整

化能 , 脂質過酸化マーカーについてそれぞれ単体を測

精液所見は精子運動解析装置 SMAS（DITECT 社）を定する方法が用いられてきた．不妊男性では精液中の用いて解析した．
精液ORPはMiOXSYS（Aytu BioScience

ROS が高く 5），抗酸化物質の濃度が低い 6, 7）ことが報告社）を用いて測定した．
得られた静的ORP（static ORP:されているが，酸化ストレスは酸化物質の活性が抗酸化sORP）を，既報 11）に基づき精子濃度で割り，精子数の物質の活性を上回る酸化還元状態を指し ，精液中の酸違いを正規化した．
正規化した sORP は単位を mV/ 106

化力のみではなく，抗酸化力（還元力）とのバランスを総sperm/ml と し， 解 析 に 使 用 し た．精 子 の 調 整 に は合的に評価することが望ましい．2016 年 Agarwal ら

Fertilization Medium（COOK 社）を用い swim up 法に8）により報告された MiOXSYS

TM

system は，酸化力と抗より調整した．

酸化力の関係の指標である酸化還元電位（oxidation
reduction potential: ORP）として精液中の酸化ストレ媒精および受精確認

スを数値化する機器である．ORP は精子濃度，運動率，

cIVF の媒精は Fertilization Medium（COOK 社）を用

運動速度などの精液所見のパラメーターと逆相関を示

媒精 5 時間後にい，5. 0 × 104/ml の精子濃度で行った．

し，妊孕性に関与していることが報告された ．これま

卵丘細胞を除去し，この時点で第一極体または第二極で先行研究により，ROS と体外受精における受精の関体を放出しており成熟が確認できた卵子のみを以降の連が報告されており，ROS の体外受精における低受精

解析の対象とした．ICSI は，卵丘細胞裸化処理後 , 紡錘

9）

．本研究

体の有無を IX 73/IX- 3-IMSI（Olympus 社）により確認

では，新規酸化ストレスマーカーである ORP を用いてし施行した．
紡錘体が観察された第二減数分裂中期の成体外受精における受精予測が可能かを明らかとするこ

熟卵のみを以降の解析の対象とした．ICSI は , ピエゾとを目的とした．

マイクロマニピュレーター PMM 4G/ ドライブユニッの予測因子としての可能性が示されている

10）

受付 2020 年 7 月 6 日 / 受理 2020 年 8 月 12 日
責任著者：長谷川 久隆 e-mail［h.hasegawa@klc.jp ］

14

ト MB-S（プライムテック社）を用いて行った．cIVF の

表 1 ロジスティック回帰分析と cIVF 受精への回帰

卵 丘 細 胞 除 去 後， お よ び ICSI 後 の 卵 子 の 培 養 に はGlobal total（LifeGlobal 社）を用い，受精の確認はEmbryoscope+（Vitrolife 社）
により行った．
統計解析
連続データは中央値（25- 75 パーセンタイル値）で表した．算出した sORP および受精結果の関連について，以下の解析を行った．
① cIVF を施行した 112 個の卵子に関して多重ロジス
ティック回帰分析を行い，受精に影響する変数を特定した（説明変数 : 妻年齢，原精液精子濃度，原精
液精子運動率，総運動精子数，sORP）．
② cIVF を施行した 112 個の卵子に関して，ROC カー
ブを用いて受精を最も予測する sORP 基準（カットオフ，曲線下面積 , 特異度 , 感度）を同定した．
③ sORP のカットオフ前後の cIVF および ICSI の受精率を解析し比較検討した，受精率の比較はカイ二乗検定により行った．
以上の統計解析は R ver 3. 3. 2 を用いて行った．

結果

19症例の妻年齢の平均値±SDは36.9±5.3歳であった．原精液精子濃度の平均値± SD は 58. 5 ± 60. 8 ×
106/ml，原精液精子運動率の平均値± SD は 50. 6 ±15. 8 %，原精液総運動精子数の平均値± SD は 80. 9 ±

図 1 sORP の ROC カーブ

75. 6 個 で あ っ た．sORP の 平 均 値 ± SD は 2. 08 ±2. 12mV/ 106 sperm/ml であった．
① 多重ロジスティック回帰分析の結果を表1示す. 年齢，
原精液精子濃度，原精液精子運動率，原精液総運動精
子数で補正した結果，sORP は cIVF の受精に影響を及ぼす因子であり，sORP の上昇は受精を有意に減 少 さ せ た（ オ ッ ズ 比 0. 421，95% 信 頼 区 間
0. 252- 0. 71，P= 0. 00116）.
② 作成したROCカーブを図1に示す. cIVFの受精に関するsORPのカットオフを2.23 mV/106 sperm/mlとすると，AUCは0.687，特異度0.880，感度0.541，
95%Cl 0. 568- 0. 806 であった .
③ 各媒精法の受精率は cIVF 67. 0%（75/ 112）
，ICSI
91. 6%（141/ 154）であり，cIVF で有意に低率であった（P< 0. 001）．
各媒精法の sORP カットオフ前後の受精率を図 2 に示す . cIVF における受精率は，
sORP カットオフ未満の症例（79. 2%）に比較し，カットオフ以上の症例（40. 0%）で有意に低率であった（P= 0. 000043）．ICSIにおける受精率は， 図 2 各受精法の sORP カットオフ前後の受精率15カットオフ未満の症例（94. 1%）と，カットオフ値以分未満）で結果が得られる．これは，採卵当日の IVF ラ

上の症例（86. 8%）で有意な差は認められなかった．

ボにおける酸化ストレス評価に非常に有用であり，従来の原精液のパラメーターに加え，治療に用いる原精考察液の酸化ストレス状態を考慮した媒精法の決定を可能にするものと考えられる．

体外受精における媒精法は，一般的に原精液のパラ
しかし，多重ロジ
メーターにより決定されている 12- 14）．
スティック回帰分析の結果，本研究で split 媒精適用と謝

辞した精液所見良好な症例においては，原精液精子濃度，

本研究の遂行にあたり多くの御指導を頂いた，横浜

原精液精子運動率および原精液総運動精子数に有意差

市立大学附属市民総合医療センター生殖医療センターは認められず，cIVF の受精の予測因子ではなかった．

泌尿器科准教授 湯村寧先生に深謝申し上げる．

一方，sORP では有意な差が認められ，さらに ROC カー
ブからカットオフを 2. 23 mV/ 106 sperm/ml とした場
合，cIVF でのみカットオフ以上の症例で受精率が有意に低下し，ICSI では受精率に有意な差は認められなかった．
これらのことから精液所見が良好な症例に対して，cIVF において受精の独立した強力な予測因子であり，sORP を媒精法の決定に用いることの有用性が示
唆された．
酸化還元系のバランスは，成熟精子におけるクロマチ
ン凝縮，キャパシテーション，ハイパーアクチベーショ
ン，先体反応，精子―卵子融合などの必須生理機能の為. 過剰な ROS が生産される，または抗に重要である 15- 17）
酸化活性が下がると，酸化還元系が破壊され酸化ストレス状態となり，脂質過酸化，DNA 損傷，アポトーシスの．また，脂質過酸化は精子の濃度お誘導を引き起こす 18）
よび運動性に悪影響を及ぼすことが報告されている 19）.
ROS に関しては，cIVF における受精との関連がある
ことが報告されており 20），本研究も酸化ストレスによる精子の運動性の低下が cIVF の受精率を低下させるという報告を支持するものである．
本研究では，受精後の胚発育に関する評価を行っていない．ROS についての研究では，ICSI においては受精については関連が認められないが，胚発育を予測する可能性が報告されており，これは酸化ストレスによる精子
DNA の損傷による長期的な影響であると考えられている 21）．sORP も ROS と同様に精子 DNA の断片化との負の相関が報告されており 22），胚発育にも関連を持つ可能性がある．
本研究では，精液 ORP を用いた受精予測が可能であることが示唆された . sORP が 2. 23 mV/ 106 sperm/
ml を上回る症例に対しては，ICSI を施行することによって受精率が向上する可能性が示された . sORP を用いた受精予測の利点として，ROS や抗酸化物質と比較し検査が簡便かつ迅速に行える点が挙げられる . sORPの測定は少量（30µl）の精液を使用し，リアルタイム（5

16

参考文献
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17

日本 IVF 学会雑誌 Vol. 23，No. 2，18 -23，2020

ー原著 ー

精液の低温暴露によって起こる精子運動性の低下を防ぐ工夫～フードコンテナを用いた精液の保温効果と20℃での精液保存の影響について～
岸田 拓磨，菊地 裕幸，山田 健市，菅野 弘基，岸田 理英，佐藤 那美，結城 笑香，
吉津 葵，佐々木 郁弥，片桐 未希子，吉田 仁秋
仙台 ART クリニック 〒 983-0864

宮城県仙台市宮城野区名掛丁 206-13

要 旨： 精液を低温保存することで，精子の運動性の低下が報告されている．検討 1 では，精液を 5 ℃の環境で 1 時間保存する際，フードコンテナによる保温が精子の運動性を改善するか検討し，検討 2 では，精液を 20 ℃で 1 時間保存することによる精子の運動性への影響について調査した．検討 1：フードコン
テナを用いた群の精子運動率，前進運動率 , 調整後の精子濃度は , フードコンテナを用いなかった群と比較して有意に高かった．検討 2：20 ℃群の精子運動率 , 前進運動率は 25 ℃群と比較して有意に低かったが，症例の中には20 ℃と25 ℃で保存後の精子の前進運動率がほぼ同等の成績を有する症例もあった．
今回，低温環境でフードコンテナによる精液の保温は精子運動性の維持に有効であることと，20 ℃以下
での精液の保存は，精子運動性の低下を引き起こす可能性があることが判明した．
キーワード：精液，精子運動性，低温保存，フードコンテナ
ランニングヘッド：低温下での精液保存方法の改善について

緒言

保温方法は，精液採取カップを断熱することが容易な方法であると考え、フードコンテナ（JBU-380，THERMOS，

我々は以前に，AIH を行った症例の精液検査結果を

底面内径80 mm，容積380ml，
図1）の中に精液採取カッ比較して，冬期に自宅採精した精液は，夏期に採取したプを入れて保温することを試みた． フードコンテナは精液や，冬期に院内採精した精液よりも精子運動率と調魔法瓶構造になっており，優れた保温能力を有する 5）.

整後の運動精子濃度が低下することを報告 1）し，これはしかし，数 ml 程度のごく少量である精液の保温に有効

自宅から病院へ移動中に精液が冷気に曝されることがであるかは不明である .

原因ではないかと推測した．ART において調整後の運
動精子濃度の低下は，コンベンショナル IVF を希望する患者であっても，ICSI を選ばざるを得なくなり，治療の選択の幅が狭まってしまう可能性がある．
精液を低温保存することにより，精子の運動性に負の影響を及ぼすことは以前から報告されている 2- 4）．そのため今回我々は，自宅からの移動中に精液を保温することで，精子運動率や調整後の運動精子濃度の低下が改善されるのではないかと考え，検討を行った．
本研究の予備調査として，自宅から病院までの所要時間について，患者に対しアンケート調査を行い、保温効
果が何時間持続する必要があるのか調査した．
その結果、平均所要時間は 34. 5 分であり，90 % の患者で 1 時間以内との回答が得られた（未発表データ）．この結果か
ら，今回の研究での保存時間を 1 時間と設定した．
受付 2020 年 7 月 8 日 / 受理 2020 年 8 月 6 日
責任著者：岸田 拓磨 e-mail［labo@sendai-art-cl.jp ］

18

図 1 今回使⽤したフードコンテナ（右，JBU-380，
THERMOS，底⾯内径 80 mm，容積 380 ml）と 精液採取カップ（左，底⾯直径 40 mm，容積70 ml）

一方で，これまでの精液の低温保存に関する研究 2- 4）

保存後の精液温度と，運動率，前進運動率，調整後の精は，精液を 4 ～ 5 ℃で保存しており，何℃以下であれば

子濃度と運動率を各群間で比較した．
なお，フードコン

精子の運動性に影響を及ぼすのか報告した研究は見当

テナは 25 ℃の室内に保管していたものを使用し，精液たらず，精液保存の適温は明らかになっていない． 仮に， 温度は市販のデジタル水温計（精度 ± 1 ℃）を用いて冬期の一般家庭における室温と想定される 20 ℃前後測定した．

の温度でも，精子の運動性に影響を及ぼす場合，採精直
後から保温するなどの対処が必要になってくる．

検討 2：精液を 20 ℃で保存することによる精子の運動

今回の研究は，精液保存方法の改善を目的として，性への影響（1）精液を低温保存することで引き起こされる精子運

精液を 1 ml ずつ精液採取カップ（底面直径 40 mm，動性への負の影響が，フードコンテナによる精液の保温

容積 70ml）に分注し，
下記の条件下で 1 時間保存した．

で改善されるか，（2）精液を 20 ℃で保存することに25 ℃群（対照群）: 精液採取カップを 25 ℃で保存よる精子の運動性への影響，について調査した．

20 ℃群 : 精液採取カップを 20 ℃で保存
保存後の運動率と前進運動率，調整後の精子濃度と運

対象と方法2018 年 3 月から 2020 年 1 月に，当院にて採精し，液化のために 20 分以上 25 ℃で保管後，精液検査を実施

動率を比較した．
また，症例ごとに前進運動率比（20 ℃
で保存後の前進運動率／ 25 ℃で保存後の前進運動率）
を求め，保存温度の低下によって起こる前進運動率の変化に個体差があるのか調査した．

した症例の余剰精液を用いた．なお，本研究はインフォームドコンセントを行い，研究使用に同意が得られ各種の設定温度について，25 ℃は室内（実測 24. 0

た 22 症例を対象とし，仙台 ART クリニックの倫理委員℃～ 26. 0 ℃）で保存し，5 ℃，20 ℃は冷蔵庫で保存会の承認を得て行った（承認番号 1903）．

した． 冷蔵庫内の実測温度は，開扉の影響で保存開始
直後は設定温度から2 ℃ほど上昇したが，その後は設定精液検査について，精液量はシリンジ法を用いて測定

温度 ± 1. 0 ℃を推移し安定していた．

し，精子濃度，運動精子濃度，前進運動精子濃度は ISAS®
disposable counting chamber（PROiSER）を用いて統計解析にはフリードマン検定とボンフェローニの目視でカウントした . 今回の研究において，濃度カウン

多重比較検定，マン・ホイットニーの U 検定，ウィルコ

トは全て同一の胚培養士が実施した．

クソンの符号順位検定を用い，有意水準を 5% として有意差検定を行なった．

精子調整は 25 ℃の室内環境下で密度勾配遠心法を
用 い て 行 っ た．精 液 を 5 ml の SepaSperm® Solution（KITAZATO）に重層し，300 g で 20 分間遠心分離を結行った．遠心分離後，上澄みを除去し，沈渣を 5 ml のSepaSperm® Wash Solution（KITAZATO）で懸濁し，300 g で 5 分間遠心分離を行った．
最終的に液量が 0. 5

果各検討に使用した症例の患者背景 , 研究使用前の精液検査結果を表 1 に示した .

ml になるように上澄みを除去した．
検討 1
検討 1 : 精液を低温保存することによる精子運動性への影響と，フードコンテナによる精液保温の効果について

検討 1 の結果を表 2 に示した .
それぞれの条件下で 1 時間保存後の精液温度の中央値は , 25 ℃群が 25. 0 ℃ , 5 ℃コンテナ群が 20. 7 ℃ ,精液を三等分し，5 ml チューブ（FALCON）に入れ， 5 ℃群が 10. 9 ℃であり，5 ℃群が他の 2 群よりも有意下記の条件下で 1 時間保存した．
25 ℃群 : チューブを 25 ℃で保存
5 ℃コンテナ群：チューブをフードコンテナに入れ，5 ℃で保存5 ℃群：チューブを 5 ℃で保存に低かった（P < 0. 05）. 5 ℃コンテナ群は 25 ℃群よりも有意に低かった（P < 0. 05）.
各群の 1 時間保存後の運動率と前進運動率，調整後の精子濃度の中央値について，25 ℃群はそれぞれ 56. 6%，38. 9 %，18. 8 × 106 個 /ml，5 ℃コンテナ群は

19

表1

表2

各検討に用いた検体の患者背景と精液検査結果

精液の冷蔵保存による精子運動性への影響とフードコンテナによる精液保温の効果（検討 1）

52. 1 %，43. 7 %，16. 8 × 106 個 /ml，5 ℃群は 43. 2 %， 後の精子濃度の中央値はそれぞれ40.0 %，22.2 %，
2.3
7. 5 %，3. 5 × 106 個 /ml であり，それぞれの項目にお× 106 個 /ml であり，対照群である 25 ℃群の結果（そいて 5 ℃群が他の 2 群よりも有意に低かった（P <れぞれ 55. 5 %，46. 6 %，6. 5 × 106 個 /ml）よりも有

0. 05）が，25 ℃群と 5 ℃コンテナ群の間には有意な意に低かった（P < 0. 05）．
調整後の運動率については，

差は認められなかった . 調整後の運動率については 3 群

20 ℃群が 81. 0 %，25 ℃群が 90. 0 % であり有意な差間で有意な差は認められなかった .

は認められなかった（表 3）．
症例ごとの前進運動率比は，中央値が 0. 52，最小値が 0，最大値が 1. 04 であり，保存検討 2
20 ℃群の 1 時間保存後の運動率と前進運動率，調整20

温度を 25 ℃から 20℃に低下させることで，前進運動率の変化に個体差が認められた（図 2）
．

考

察

が引き起こされることも明らかとなった . 当院では精子調整に密度勾配遠心法を採用しているが，密度勾配遠今回の研究は，精液保存方法の改善を目的として， 心法では成熟精子と未成熟精子の比重の違い（成熟精フードコンテナによる保温の効果と，精液保存温度を子；1. 1 g/ml 以上，未成熟精子；1. 09 g/ml 以下）を利

20 ℃とした場合の精子運動性への影響について調査

そのため，今用して，良好精子の選別を行なっている 6）．

した .

回の研究で見られた調整後の精子濃度の低下は ， 成熟

精液の低温保存に関する研究は以前から報告されて精子の比重が軽くなったことが原因と推測される．
細胞

おり，いずれの研究でも低温保存によって運動率の低下

を低温保存すると，細胞内外のイオン濃度を調整していが引き起こされることを報告している 2- 4）. 今回の研究

その後 Na イオン
る Na,K-ATPase の活性が低下する 7）．

では運動率の低下に加え，精子調整後の精子濃度の低下の細胞内流入が起こり，細胞外自由水が流入し，細胞の表3

精液を 20 ℃で 1 時間保存することによる精子の運動性への影響（検討 2）

図2

各症例の 1 時間保存後の前進運動率比
前進運動率比 = 20 ℃群の前進運動率／ 25 ℃群の前進運動率21

膨化が起こる 8）．精子でも同様の現象が起こり，精子のること，精液を 20 ℃以下で保存することは，精子の運膨化によって比重が軽くなったのではないかと推察さ

動性の低下と調整後の精子濃度の低下を引き起こす可れる．
実際に，精子を数日間低温保存することで，尾部の能性があることが判明した．
一般家庭において，冬の朝膨化が起こることが報告されている ．しかし，1 時間の室内温度は 20 ℃を下回ることも予想されるため，病程度の低温保存で尾部が膨化するのか不明であり，今回院への移動中だけではなく室内での保管時から保温すの研究を通じて，尾部の膨化は観察していないため，原ることが重要であり，患者へ啓蒙する必要がある．
今後，因の究明には今後更なる研究が必要である．

適切な精液の保存温度を解明するため，目視による精子

9）

今回の研究から，5 ℃コンテナ群の精液温度は，25

カウントのみではなく，精子運動解析システム（CASA）℃群よりも有意に低かったものの，保存後の運動率や前を用いた解析や，DNA 損傷精子の割合，受精後の胚発進運動率，調整後の精子濃度については有意な差は認め

生への影響など，多方面から研究を進める所存である．

られなかった．
一方で，5 ℃コンテナ群と25 ℃群の精液
温度，運動率，前進運動率，調整後の精子濃度は5 ℃群よりも有意に高かった．
これらのことから，フードコンテナを用いた精液の保温は，1時間程度の短時間の低温保存

参考文献

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那美・結城笑香・吉津葵・佐々木郁弥・片桐未希子・吉田仁秋：に対して，精子の運動性の低下を防ぐことが可能である
寒冷地において自宅採取した精液が病院への移動中に冷却さことが判明した．
フードコンテナによる保温は簡便で経れる影響について．日本臨床エンブリオロジスト学会雑誌．
費が少なく，
患者が取り入れやすい方法であると考える．
21 : 1-5, 2019.
検討 2 では精液を 20 ℃で保存することによる精子 2） Appell RA, Evans PR: The effect of temperature on sperm
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20 ℃で保存することは精子の運動性に影響を及ぼす
temperature on sperm motion characteristics and reactive
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可能性が考えられた。一方で，前進運動率比が０ に近4） Suzuki K, Shin T, Shimomura Y, Iwahata T, Onota S,く，保存温度を 25 ℃から 20 ℃に下げることで前進運
Kobori Y, Miyata A, Okada H: The influence of the storage
動率が大幅に低下した症例や，前進運動率比が 1 に近く，
temperature on the semen parameter: storage at 37 ℃ might
20 ℃で保存しても前進運動率がほとんど変わらない
not be suitable. Hum Reprod, 32（Supp 1）: i141, 2017.
症例まで幅広く存在した．
このことから，症例の中には 5） フード コン テ ナ の 製 品 情 報．THERMOS ホ ームページ .
https://www.thermos.jp/product/list/foodcontainer.html,
20 ℃前後の温度でも運動性が低下することなく保存（入手日 2020.4.15）
可能な症例が存在し，個々の症例で精子の低温耐性が
6） 宮本敏伸・安孫子公香・千石一雄：精子調整法 . 日本卵子学
異なることが推測された．精子の低温耐性が異なる原会 編集．生殖 補助医療（ART）胚培養の理論と実 際，pp221-225, 近代出版，2017.
因は不明であるが，原因が判明することで精液保存方
7）
Gruener N, Avi-Dor Y: Temperature-dependence of法の改善につながるものと考える．
a c t ivat i o n a nd i n h i bit i o n o f r at- br a i n adeno s i ne
精液の保存方法を検討する際，精子の運動性を維持
triphosphatase activated by sodium and potassium ions.
することの他に，精子の DNA 損傷を防ぐことも重要な
Biochem J, 100: 762-767, 1966.
ポイントである．精子の DNA 損傷は胚発生や妊娠，流 8） Armstrong CM: The Na/K pump, Cl ion, and osmotic
stabilization of cells. Proc Natl Acad Sci. U. S. A, 100:
産に影響することが報告されている 10，11）．Suzuki ら 4）6257-6262, 2003.
は，5 ℃で保存した精液の精子 DNA 損傷率は，25 ℃9） Kanno H, Saito K, Ogawa T, Takeda M, Iwasaki A, Kinoshita
で保存した精液のそれと比較して有意な差は認められ
Y: Viability and function of human sperm in electrolyte-freecold preservation. Fertil Steril, 69: 127-131, 1998.
なかったと報告しており，25 ℃以下での保存は精子
10）Simon L, Zini A, Dyachenko A, Ciampi A, Carrell DT: Aの DNA 損傷を増加させないと考えられる．一方で，精systematic review and meta-analysis to determine the
液を 37 ℃で保存することによって，25 ℃で保存する
effect of sperm DNA damage on in vitro fertilization andよりも DNA 損傷率が有意に高くなることが報告されintracytoplasmic sperm injection outcome. Asian J Androl,
19: 80-90, 2017.
ており 12），体温に近い温度で精液を保存することは精11）Deng C, Li T, Xie Y, Guo Y, Yang QY, Liang X, Deng CH,
子の DNA 損傷を引き起こし，胚発生や妊孕能の低下を
Liu GH: Sperm DNA fragmentation index influences
引き起こす可能性が考えられる．
assisted reproductive technology outcome: A systematic
今回の研究では，フードコンテナを用いた精液の保温
review and meta-analysis combined with a retrospective
cohort study. Andrologia, 51: e13263, 2019.
は，精子の運動性と調整後の精子濃度の改善が期待でき

2212）Matsuura R, Takeuchi T, Yoshida A: Preparation andincubat ion condit ions a f fect t he DNA integ r ity of
ejaculated human spermatozoa. Asian J Androl, 12: 753759, 2010.

23

日本 IVF 学会雑誌 Vol. 23，No. 2，24 -31，2020

ー原著 ー

当院における Duostim 法による採卵成績の検討
石橋 めぐみ 1，2，松山 毅彦 1，中澤 留美 1，河戸 朋子 1，勝木 康博 1，
菊池 咲希 1，三宅 君香 1，横田 智 1，真鍋 有香 1，北岡 美幸 1，
新田 絵美子 2，松山 幸世 1，金西 賢治 212

厚仁病院産婦人科 〒 763-0043 香川県丸亀市通町 133
香川大学医学部母子科学講座周産期学婦人科学 〒 761-0793 香川県木田郡三木町大字池戸 1750-1

要 旨： 卵巣予備能が低下している不妊患者では，卵巣刺激により発育する卵胞数は限られ，キャンセ
ル率も高い傾向がある．より多くの卵子を獲得するため当院では Duostim 法の実施を開始した．2019
年 11 月から 2020 年 5 月に実施した Duostim 法での採卵成績を後方視的に解析した．Duostim 法を試みた例は 88 周期で，黄体期スタートがキャンセルとなった例は 24 周期あった．残りの 64 周期において卵胞期スタートと黄体期スタートの採卵成績を比較したところ，成熟卵数，凍結卵数は黄体期スタート
で有意に少ない結果となった．AMH 1. 00ng/ml 以下の周期について Dustim 法実施群と非実施群を比較したところ，成熟卵数，凍結卵数は実施群で多い傾向であったが，良好胚凍結数は有意に少ない結果となった．しかし，AMH 0. 50ng/ml 以下の群に限ると有意差は出なかった．Duostim 法を行うことにより，周期全体の卵子獲得数が増加し，受精卵獲得周期も増加した．さらなる成績向上のため，黄体期スタート
群（特に AMH 0. 50 ～ 1. 00ng/ml 群）の対策が必要と思われた．
キーワード：黄体期スタート，Duostim 法，卵巣予備能低下，
卵胞期スタート

緒に至った 64 周期を対象とし，獲得卵子数，凍結胚盤胞

言数について後方視的に検討した．当院での卵巣刺激法

Duostim 法とは，若年がん患者の妊孕性温存のためは、
まずClomiphene内服+HMG注射周期を選択するが、に行われるランダムスタート法の応用であり，卵胞期

AMH 値が 0. 10ng/ml を下回るような症例に関しては初期から卵巣刺激を行い１ 回目の採卵を実施後，同一

持続的エストロゲン製剤投与周期の選択を検討した。

周期の黄体期から同様に卵巣刺激を行い 2 回目の採卵

また、Clomiphene 内服 +HMG 注射周期を選択したとを行う方法である．卵巣予備能が低下している不妊患

ころ、卵胞発育が不均衡であったり獲得卵子数が少な

者では，IVF のために過排卵刺激を行っても発育するかった患者に関しては、個別に相談し HMG 注射 + アン

卵胞数は少ないこともあり，また発育する卵胞のサイタゴニスト周期を選択する場合もあった。1 回目のズが不均衡となることも多く，採卵そのもののキャン

Clomiphene 内服 +HMG 注射周期，持続的エストロゲ

セル率も高い傾向がある．採卵周期のキャンセルを減ン製剤投与周期，HMG 注射 + アンタゴニスト周期採卵らし，より多くの卵子を獲得するためには，卵巣刺激開始時に，あらかじめ Duostim 法実施希望の有無を患法の工夫が必要と考えられる．当院では，特に卵巣予者に確認し，1 回目，すなわち卵胞期スタートが終わっ

備能低下の不妊患者において，より多くの卵子を獲得た時点で実施可能な状況であれば再度卵巣刺激を行いする目的で Duostim 法による採卵を開始した．当院に2 回目の黄体期スタートを試みた．2 回目，すなわち黄おいて Duostim 法を行った症例のデータを解析する

体期の卵巣刺激方法は 1 回目の卵胞期刺激と同様の方ことによりその有効性を検証した．

法で行った．Clomiphene 内服 +HMG 注周期は，月経 3日目より Clomiphen 錠を 1 日 50mg もしくは 100mg

方法

で連日内服し，月経 7 ～ 8 日目より HMG（HMG 注射用）1 日 150 単位を 2 ～ 3 日ごとに筋肉注「フェリング ®」対象は，2019 年 11 月から 2020 年 5 月までの間に射した．
持続的エストロゲン製剤投与周期は，プレマリ

医学的適応による胚凍結を目的とし Duostim 法によるン ® 1 日 0. 625mg もしくは 1. 25mg を連日内服した．

卵巣刺激周期を試みた 69 名，88 周期のうち採卵まで

HMG 注射 + アンタゴニスト周期は，月経 3 日目より

受付 2020 年 7 月 29 日 / 受理 2020 年 8 月 25 日
責任著者：石橋 めぐみ e-mail［ ishibash@med.kagawa-u.ac.jp ］

24

HMG を 1 日 150 単位連日投与し，最も大きい卵胞が周期含まれていた．卵胞期スタート開始時の AMH の平15mm 前後になった時点で，GnRH アンタゴニスト製

均値は 2. 02ng/ml（標準偏差 2. 9），中央値 0. 87ng/ml，

いずれも卵胞径剤（レルミナ ）の併用投与を開始した．

血中 FSH の平均値は 11. 6ng/ml（標準偏差 8. 1），中央が 18 ～ 20mm ほどになったところで，r-hCG（オビド値 9. 8mIU/ml であった．

®

レル®）250 μ g を皮下注射もしくはブセレリン酢酸塩

88 周期のうち，黄体期スタートがキャンセルとなっ（ブセレキュア ）の点鼻投与を行い，約 34 時間後に採た例は 24 周期あり，Duostim 法を試みた症例全体の卵を行った．卵巣刺激法の選択は，採卵開始時の血中27. 3% を占めた．
キャンセルの理由は，刺激を続けたがAMH 値を参考に決定した．採卵された卵子が未成熟卵

卵胞発育が無いか，卵胞数が少なく患者本人の希望が®

子 で あ っ た 場 合 は， 体 外 成 熟 培 養 液（SK-IVMS， あ っ た 場 合 な ど で あ っ た．残 り の 64 周 期 で 実 際 に
KITAZATO 社）を使用し IVM を行った．
受精卵はほぼ全

Duostim 法による採卵を行った．64 周期中 59 周期で例胚盤胞まで培養し，凍結を行っているが，何度も採卵卵子が獲得でき，37 周期で受精・分割し凍結ができた．

を行っているにもかかわらず，受精・分割がストップ （図１）．
し胚盤胞凍結に至らないなどの症例で，患者の強い希望があったため初期胚を凍結したケースもあった．

Duostim 法実施症例において，卵胞期スタートと黄体期スタートの結果を表 1 に示す（表 1）．
卵胞期スタートのみで卵子が獲得された周期は 52 周結

果期あり，総獲得卵子数の平均値は 1. 8 個（標準偏差 1. 5），
中央値は 1 個であった．未熟卵が獲得された周期は 17

以下より，Duostim 法の 1 回目の採卵を卵胞期スター周期で，未熟卵数の平均値が 0. 3 個（標準偏差 0. 6），
中央ト，2 回目の採卵を黄体期スタートと記す．88 周期の値は 0 個だった．
成熟卵が獲得された周期は 50 周期で，患者の背景として、平均年齢は 39. 1 歳（標準偏差 4. 5）， 成熟卵数の平均値は 1. 5 個（標準偏差 1. 2），中央値は 1
中央値は 40 歳，BMI の平均は 23. 5（標準偏差 3. 9），中個であった．
受精・分割し，凍結ができた周期は 29 周期

央値は 22. 4 であった。
すべて医学的な適応で卵巣刺激， あり，28 周期は胚盤胞を凍結し，1 周期においては初
胚 凍 結 を 行 っ た．卵 巣 刺 激 法 は，Clomiphene 内 服

期胚を 1 個凍結した．凍結卵数の平均値は 0. 6 個（標準+HMG 注射周期が 80 周期，持続的エストロゲン製剤投偏差 0. 8）
，中央値は 0 個であった．1 個凍結できたのは与周期が 7 周期，HMG 注射 + アンタゴニスト周期が 122 周期，2 個凍結が 5 周期，3 個凍結が 2 周期であった．

図1

Duostim 法を試みた 88 周期の経過

25

表1

Duostim 法を実施した 64 周期における周期内の卵胞期採卵と黄体期採卵の比較結果

未熟卵を獲得した周期と成熟卵を獲得した周期は一部重複している．

胚盤胞は GARDNER 分類 BB 以上の良好胚が 34 個，そ卵子が獲得できた周期数について表２ にまとめる．

れ以下の不良胚は 3 個あった．初期胚は Veeck 分類で上記のデータを総合すると，Duostim 法実施例全体のGrade 2 であった．

総卵子獲得周期は 59 周期で，Duostim 法実施例全体の黄体期スタートで卵子が獲得された周期は 47 周期で92. 2% となった．卵胞期スタートでは，1 個獲得が 21あり，Duostim 法実施例の 73. 4% を占めた．特に卵胞周期，2 個獲得が 12 周期，3 個獲得が 10 周期，4 個獲期スタートでの獲得卵子数が 0 個であったが，黄体期ス

得が 4 周期，5 個獲得が 4 周期，6 個獲得が 1 周期あった．

タートで獲得できた周期が 6 周期あった．
総卵子獲得数黄体期スタートでは，1 個獲得が 27 周期，2 個獲得がの平均値は1.2個（標準偏差0.9），
中央値は1個であった． 13 周期，3 個獲得が 7 周期であった．Duostim 法全体
未熟卵を獲得したのは 7 周期，成熟卵を獲得したのはでは，1 個獲得が 7 周期，2 個獲得が 17 周期，3 個獲

37 周期あった．黄体期スタートのみの未熟卵獲得数の得が 11 周期，4 個獲得が 11 周期，5 個獲得が 7 周期，

平均値は 0. 3 個（標準偏差 0. 6），中央値は 0 個であった． 6 個獲得が 5 周期，8 個獲得が 1 周期であった（表 2）．
受成熟卵獲得数の平均値は 0. 8 個（標準偏差 0. 9），中央値

精・分割し凍結できた周期は 37 周期で，Duostim 法実

は 1 個であった．受精・分割し凍結ができた周期は 18

施例全体の 57. 8% となった．
うちわけは，卵胞期スター

周期あり，すべて胚盤胞で凍結した．
受精卵凍結数の平トでは，1 個凍結が 22 周期，2 個凍結が 5 周期，3 個

均値は 0. 3 個（標準偏差 0. 5），
中央値は 0 個であった．1

凍結が 2 周期あった．黄体期スタートでは，1 個凍結が個凍結した周期は 16 周期，2 個凍結が 2 周期であった． 16 周期，2 個凍結が 2 周期あった．全体では，1 個凍結
胚盤胞は GARDNER 分類 BB 以上の良好胚が 13 個，そが 22 周期，2 個凍結が 11 周期，3 個凍結が 3 周期，5れ以下の不良胚が 7 個あった．

個凍結が 1 周期であった
（表 3）
．

26

表2

Duostim 法において，卵子が獲得できた周期数

表3

Duostim 法において，受精・分割し凍結できた周期数

Duostim法を実施した64周期において，卵胞期スター

意に少ない結果となった（ｐ＜ 0. 05）．

トの結果と黄体期スタートの結果について，二群間の比

表 4 は，特に AMH 値の低い症例において，Duostim

較検討を行い，表１ に列記した．
獲得卵子について，総法有効性についての比較検討を行った結果である（表卵子獲得数は黄体期スタート群で，有意をもって少ない

4）．
同時期に実施した採卵症例で，Duostim 法を実施し結果となった（ｐ＜ 0. 05）．
そのうち，未熟卵獲得数につなかったAMH1.00ng/ml以下の症例を無作為に抽出し，いては二群間で有意差を認めず（ｐ＝ 0. 69），成熟卵獲

同じく AMH 1. 00ng/ml 以下の Duostim 法実施群と比得数については黄体期スタート群の方が，有意をもって較した．
非実施群は 42 周期，実施群は 42 周期である．
採少ない結果であった（ｐ＜ 0. 05）．
また，受精・分割し凍卵開始時の平均年齢は，非実施群で 40. 6 歳（標準偏差結を行った受精卵の数も，黄体期スタート群が有意を

4. 5），実施群で 40. 4 歳（標準偏差 3. 7）であり，有意差をもって少ない結果となった（ｐ＜ 0. 05）．
凍結した受精認めなかった．BMI の平均は非実施群が 22. 3（標準偏卵は，卵胞期スタート群で 1 個のみ初期胚であり，それ差 3. 5），実施群が 22. 9（標準偏差 3. 3）と有意差を認めを除くその他の胚盤胞での GARDNER 分類を比較したなかった．すべて医学的な適応で卵巣刺激，胚凍結をところ，黄体期スタート群の方が BB 以上の良好胚が有行った．
卵巣刺激法は，Clomiphene 内服 +HMG 注射周

27

表4

AMH1.00ng/ml 以下の患者における Duostim 法非実施群 42 周期と実施群 42 周期の採卵結果の比較

未熟卵を獲得した周期と成熟卵を獲得した周期は一部重複している。

期が 34 周期，持続的エストロゲン製剤投与周期が 8 周たので，それを除く胚盤胞の GARDNER 分類で比較し期含まれていた．採卵開始時の平均血中 AMH 値は非実

たが，Dustim 法実施群の方が BB 以上の良好胚が有意

施群 0. 41ng/ml（標準偏差 0. 29），
実施群 0. 52ng/ml（標に少ない結果となった（ｐ＜ 0. 05）．

準偏差 0. 29），中 FSH 値は非実施群 14. 4 mIU/ml（標準

さらに，上記の集団を AMH 値が 0. 50ng/ml 以下の周偏差 9. 7）
，実施群 13. 4 mIU/ml（標準偏差 10. 1）
で，そ期，AMH 値が 0. 50ng/ml より高く 1. 00ng/ml 以下のれぞれ有意差を認めなかった．
総卵子獲得数の平均値は， 周期にわけて比較した（表 5）．
非実施群で 1. 9 個（標準偏差 1. ２），実施群で 2. 7 個（標AMH 値が 0. 50ng/ml 以下で，Duostim 法非実施群

準偏差 1. 6）となり実施群の方が多い結果となったが， は 26 周期，実施群は 20 周期であった．
採卵開始時の平有意差は認めなかった（ｐ＝ 0. 07）．
未熟卵獲得数の平均年齢は，非実施群 40. 3 歳（標準偏差 5. 5），実施群で均値は非実施群では 0. 4 個（標準偏差 0. 7），実施群では

40. 4 歳（標準偏差 4. 0）であり，有意差を認めなかった．

0. 5 個（標準偏差 0. 7）で有意差を認めず（ｐ＝ 0. 57），成

採卵開始時の平均血中AMH値は非実施群0.21ng/ml（標

熟卵獲得数の平均値は非実施群では 1. 5 個（標準偏差準偏差 0. 15），実施群 0. 26ng/ml（標準偏差 0. 13）
，平均

1. 6）
，実施群では 2. 2 個（標準偏差 1. 5）となり有意差は血中 FSH 値は非実施群 16. 2 mIU/ml（標準偏差 11. 7），

認めなかった（ｐ＝ 0. 52）．
凍結に至った受精卵の個数

実施群 15. 6 mIU/ml（標準偏差 13. 7）
で，それぞれ有意の平均値は，
非実施群で 0. 6 個（標準偏差 0. 9），
実施群で差を認めなかった．
総卵子獲得数の平均値は，非実施群

0. 8 個（標準偏差 1. 0）で有意差を認めなかった（ｐ＝で1.5個（標準偏差1.1），
実施群で2.4個（標準偏差1.9）

0.92）．Duostim法実施群では凍結卵に1個初期胚があっとなり実施群の方が多い結果となったが，有意差は認め

28

表5

AMH0.50ng/ml 以下の患者群と AMH0.50ng/ml ～ 1.00ng/ml の患者群における Duostim 法非実施群と実施群の採卵結果の比較

未熟卵を獲得した周期と成熟卵を獲得した周期はそれぞれのグループで一部重複している．

なかった（ｐ＝ 0. 14）．
未熟卵獲得数の平均値は非実施

下の，Duostim 法非実施群 16 周期と，実施群 22 周期を群では 0. 4 個（標準偏差 0. 8），実施群では 0. 6 個（標準偏比較した．採卵開始時の平均年齢は，非実施群 41. 0 歳

差 0. 8）で有意差を認めず（ｐ＝ 0. 75），成熟卵獲得数の （標準偏差 2. 3），実施群で 40. 5 歳（標準偏差 3. 6）であり，平均値は非実施群では 1. 1 個（標準偏差 1. 0），実施群で有意差を認めなかった．採卵開始時の平均血中 AMH 値

は1.9個（標準偏差1.6）となり有意差は認めなかった（ｐ

は非実施群0.72ng/ml（標準偏差0.16），
実施群0.77ng/＝ 0. 28）．
凍結に至った受精卵の個数の平均値は，非実ml（標準偏差 0. 14），平均血中 FSH 値は非実施群 11. 5

施群で 0. 3 個（標準偏差 0. 6），実施群で 0. 9 個（標準偏差mIU/ml（標準偏差 3. 4），実施群 11. 4 mIU/ml（標準偏差1. 2）で有意差を認めなかった（ｐ＝ 0. 08）
．胚盤胞の

4. 5）
で，それぞれ有意差を認めなかった．
総卵子獲得数GARDNER 分類で比較したが，BB 以上の良好胚の獲の平均値は，
非実施群で 2. 6 個（標準偏差 1. 1），
実施群で得数はそれぞれの群で有意差を認めなかった（ｐ＝

3. 0 個（標準偏差 1. 3）となり実施群の方が多い結果と0. 26）．

なったが，有意差は認めなかった（ｐ＝ 0. 35）．
未熟卵獲

次に，AMH 値が 0. 50ng/ml より高く 1. 00ng/ml 以

得数の平均値は非実施群では 0. 4 個（標準偏差 0. 6），実29施群では 0. 5 個（標準偏差 0. 8）で有意差を認めず（ｐ＝いとの結果が多い６，７）．Danilo らは，卵胞期スタートよ

0.46），
成熟卵獲得数の平均値は非実施群では2.3個（標り黄体期スタートの方が，獲得卵子数が有意に多かった

準偏差 1. 2），実施群では 2. 5 個（標準偏差 1. 3）となり有と 報 告 し て い る ８）．一 方， 当 院 の 検 討 に お い て，

意差は認めなかった（ｐ＝ 0. 65）．
凍結に至った受精卵

AMH 1. 00ng/ml 以下の Duostim 実施群と非実施群間の個数の平均値は，非実施群で 1. 1 個（標準偏差 1. 1），
実の比較では，獲得卵子数や成熟卵獲得数，凍結受精卵数

施群で0.7個（標準偏差0.8）で有意差を認めなかった（ｐ

は実施群の方が多い結果となったが，有意差は出なかっ

また，凍結胚盤胞の GARDNER 分類においては実施＝ 0. 19）．胚 盤 胞 の GARDNER 分 類 で 比 較 し た が， た．
Dustim 法実施群の方が BB 以上の良好胚が有意に少な群の方が有意をもって良好胚が少ない結果となっていい結果となった（ｐ＜ 0. 05）．

る．
この結果は，Duostim 法実施群の中で，卵胞期スター
ト群と黄体期スタート群を比較した結果として，黄体期考察

日本産科婦人科学会の報告によると，2017 年の全刺激群の卵子獲得数が有意をもって少なく，特に成熟卵獲得数において有意差が出ていることに起因していると思われる．
すなわち，黄体期スタート群において，成熟

国統計で凍結胚移植の移植あたりの妊娠率は 34. 4％で， 卵獲得数が有意をもって少ないことが，結果として胚盤生産率は 23. 9% であった 1）．Qianqian らは，初回 IVF

胞の獲得数とグレード評価に影響していると考えられにおいて採卵数 25 個までは数に比例して出生率が上る．
ランダムスタート法，もしくは Duostim 法の報告は，がったと報告している 2）．採卵においては，複数卵子をゴナドトロピン＋ GnRH アンタゴニストによる卵巣刺より多く獲得することが出生率の上昇につながると考激が多いが，当院では Clomiphen ＋ HMG による卵巣刺

えられるが，卵巣予備能が低下している不妊患者では獲激を主に実施しており，Fillipo ら６），Cakmak ら７）の

得卵子数を増やすのは難しい．
このような患者での体外結果との違いの要因の一つではないかと考えられた．
さ

受精で出生率を上昇させるためには，排卵誘発および採らに Danilo らは報告で，黄体期スタート群での卵子獲

卵方法の工夫なども必要と思われる．

得数が有意に多かった理由として，黄体期に高濃度のエ以前は，前胞状卵胞のリクルートは前周期の黄体後期

ストロジオールにさらされるため顆粒膜細胞の FSH レに起こり，卵胞期中期に主席卵胞が選択されるとその他

セプターの発現が高まる可能性，血管新生因子により顆

は 閉 鎖 卵 胞 と な る と 考 え ら れ て い た．し か し， 粒膜細胞の FSH の感受性が高まる可能性を指摘していBaerwald らは，近年の報告で卵胞のリクルートには複る８）．FSH レセプターの発現が高まっている黄体期に数の波があるという説が支持されると報告している３）． 多数の卵子を獲得するためには，卵胞期に比較して高い
卵胞期後期や黄体期に見られる前胞状卵胞がそのまま

ゴナドトロピンの刺激が必要であると考える．
実際，黄閉鎖せずにリクルートされているとすれば，月経のどの体期での卵巣刺激にはゴナドトロピン投与量が有意を時期に卵巣刺激を行っても卵胞発育が見られる，との原

もって増加するという報告は多数ある８，９，１０）．当院で理でランダムスタート法が始まり，数々の有効性が報告の黄体期スタートにおいて，卵子獲得数，特に成熟卵獲されている４，５）．特に若年がん女性に対する妊孕性温存

得 数 が 有 意 を も っ て 少 な い 結 果 と な っ た の は，目的での卵巣刺激は，短時間で卵子獲得を目指すためラClomiphen による卵巣刺激が黄体期のゴナドトロピン

ンダムスタート法が有用である．Duostim 法はランダ

刺激として弱かった可能性が考えられた．

ムスタート法の卵巣刺激法を応用することにより，卵巣

当院で Duostim 法を試みた患者は，もともと卵子獲

機能低下の不妊患者に応用できると考えられる．
まず卵得が難しい傾向があったため，AMH 1. 00ng/ml 以下

胞期初期から卵巣刺激を行い１回目の採卵を実施後，同の症例に絞って検討を行ってみたが，GARDNER 分類

一周期の黄体期から同様に卵巣刺激を行い 2 回目の採での良好胚獲得数の比較において有意差が出るという卵を行う．
日常臨床において，採卵開始時にすでに排卵

結 果 と な っ た．そ こ で， 同 じ 症 例 を さ ら に 二 分 し直前の大きな卵胞を認めたためその周期はキャンセル

AMH 0. 50ng/ml 以 下 の 患 者 群 と AMH 0. 50ng/ml ～となった，あるいは卵巣刺激により卵胞径にばらつきが1. 00ng/ml の 患 者 群 に お い て そ れ ぞ れ 検 討 し た．

出る，などの症例がよく見られる．
そのような患者の獲GARDNER 分 類 に お い て の 良 好 胚 獲 得 数 が得卵子を増やすことを目的として，当院でも Duostim

AMH 0. 50ng/ml 以下の群では有意差が出なかったも

法の導入を決定した．ランダムスタート法，もしくはの の，AMH 0. 50ng/ml ～ 1. 00ng/ml の 群 で は，Duostim 法による採卵結果の報告では，いずれの月経周Duostim 法実施群で有意に少ない結果となった．
卵子獲

期で採卵しても採卵数や凍結卵の獲得数に有意差はな

得数，成熟卵獲得数，凍結受精卵数においてはいずれの

30

群も Duostim 法実施群と非実施群で有意差は出なかっ

7） Hakan Cakmak, Audra Katz, Marcelle I Cedars, Mitchell
P Rosen: Ef fective method for emergency fertility
た．しかし，AMH 0. 50ng/ml ～ 1. 00ng/ml の群では，
preservation: randam-start controlled ovarian situmilation.
獲得数の平均値において，獲得卵子数，成熟卵獲得数がFertil Steril. 2013; 100: 1673-1680.
実施群で多いにもかかわらず，凍結した受精卵数では非 8） Danilo Cimadomo, Alberto Vaiarelli, Silvia Colamaria,
Elisabetta Trabucco, Carlo Alviggi, Roberta Venturella,
実施群の方が上回るという結果となっていた．AMH 値
Erminia Alviggi, Ramona Carmelo, Laura Rienzi, Filippoのみが基準値となるわけではないが，黄体期スタートでMaria Ubaldi: Luteal phase anovulatory follicles result inのゴナドトロピンの必要量に関しては，今回の結果から，
the production of competent oocytes: intra-patient paired
AMH 0. 50ng/ml 以上の症例で増量を検討すべきであcase-control study comparing follicular versus luteal phasestimulations in the same ovarian cycle: Hum Reprod. 2018;
ると考えられた．
また，当院では採卵開始時に AFC もカ33（8）: 1442–1448.
ウントしているが，目視によるカウントであるため検者
9） Wakimoto Y, Ukita Y, Shibahara H: Fertility preservation
間で差が出やすいことが想定され，今回の検討には利用
for adolescent and young adult women in Hyogo College of
していない．今後は AMH 値と FSH 値および AFC につ
Medicine College Hospital: Acuta Med Hyogo. 2017; 42:
101-107.
いても検討を行っていく必要があると思われた．
10） Michael von Wolff, Christian J Thaler, Torsten Frambach,
今回の検討では，Duostim法における黄体期スタート
Cosima Zeeb, Barbara Lawrenz, Roxana M Popovici,
周期で，良好胚の凍結数が増加するという結果には結びThomas Strowitzki: Ovarian stimulation to cryopreserve
つかなかったが，周期全体としてみた場合，表２に示す
fertilized oocytes in cancer patients can be started in theluteal phase. Fertil Steril. 2009; 92: 1360-1365.
ように卵子が獲得できた周期の割合は明らかに増加した．
表３ に示すように受精卵が凍結できた周期も増えた．
今後は，
特にAMH0.50 ～ 1.00ng/mlの群の黄体期における卵巣刺激法を工夫し，周期全体の成熟卵獲得数の増
加および，良好胚の獲得率をあげるようにしていきたい．

参考文献
1） 登録・調査小委員会／ ART オンライン登録．公益社団法人
日本産科婦人科学会．http://fa.kyorin.co.jp/jsog/readPDF.
php?file=71/11/071112509.pdf,（2020.6.30）
2） Qianqian Zhu, Qiuju Chen, Li Wang, Xuefeng Lu, Qifeng
Lyu, Yun Wang, Yanping Kuang: Live birth rates in the firstcomplete IVF cycle among 20687 women using a freeze-all
strategy: Hum Reprod, Vol.33, No.5 pp.924–929, 2018.
3） Angela R Baerwald, Gregg P Adams, Roger A Pierson:
Ovarian Antral Folliculogenesis During the Human
Menstrual Cycle: A Review: Hum Reprod Update. 2012; 18（1）: 73-91.
4） Hakan Cakmak, Audra Katz, Mitchell P Rosen: Effective
method for emergencyfertility preservation: randomstartcontrolled ovarian stimulation: Fertil Steril. 2013; 100（6）: 1673-80.
5） Hakan Cakmak, Mitchell P Rosen: Random-start Ovarian
Stimulation in Patients With Cancer: Curr Opin Obstet
Gynecol. 2015 Jun; 27（3）: 215-21.
6） Filippo Maria Ubaldi, Antonio Capalbo, Alberto Vaiarelli,
Danilo Cimadomo, Silvia Colamaria , Carlo Alviggi,
Elisabetta Trabucco, Roberta Venturella, Gábor Vajta,
Laura Rienzi: Follicular Versus Luteal Phase Ovarian
Stimulation During the Same Menstrual Cycle（DuoStim）
in a Reduced Ovarian Reserve Population Results in a
Similar Euploid Blastocyst Formation Rate: New Insight inOvarian Reserve Exploitation: Fertil Steril. 2016; 105（6）:1488-1495.

31

日本 IVF 学会雑誌 Vol. 23，No. 2，32 -35，2020

ー原著 ー

凍結前の胞胚腔収縮の確認は胚盤胞選択の評価因子となる柴田 美智子 1，中野 達也 1，佐藤 学 1，中岡 義晴 1，森本 義晴 2
1

2

IVF なんばクリニック 〒 550-0015 大阪府大阪市西区南堀江 1-17-28
HORAC グランフロント大阪クリニック 〒 530-0011 大阪府大阪市北区大深町 3-1 グランフロント大阪タワー B15F

要 旨： 胚盤胞において胞胚腔の収縮回数が増えるほど凍結融解胚の着床能が低下する．収縮回数を確認するには経時的観察が必要だが，できない場合は収縮回数の評価が不可能である．そこで収縮回数の代わりとなる指標として，凍結時の観察画像のみで胞胚腔収縮の有無を確認し，移植予後を予測できるか後方視的に検討した．凍結前の胞胚腔の収縮の有無を確認し，拡張群と収縮群に分け妊娠率・流産率を比較したところ，拡張群で有意に妊娠率が高かった（p< 0. 01）．さらに胚齢別，栄養外胚葉のグレード別，拡張
ステージ別に分けて比較したところ 5 日目胚で拡張群の妊娠率が高く（p< 0. 01），BL 4 で拡張群の妊娠率が高かった（p< 0. 05）．以上から凍結時の胞胚腔収縮の有無は胚盤胞選択の指標の一つとして有用である可能性があり，収縮が見られる場合は胚盤胞の TE グレード，拡張ステージに関わらず優先順位は下げる必要があると考えられる．
キーワード：胞胚腔収縮，凍結融解胚盤胞移植，移植胚選択，妊娠率，胚凍結
ランニングヘッド：凍結前の胞胚腔収縮が臨床成績に与える影響

緒

言

対象と方法

近年，不妊治療において凍結融解胚移植が一般的とな2013 年 1 月から 2016 年 2 月に Gardner 分類 3- 5 のり，どの胚を優先し移植するかという判断が重要である． 胚盤胞を単一融解移植した 24 歳から 39 歳の 1568 周
特に胚盤胞移植は分割期胚移植と比較し，妊娠率，生産期を検討対象とした．

率が高く ，良好胚選別法の一つとして普及している．

調節卵巣刺激もしくは自然周期にて HCG 投与から良好胚盤胞を選択する指標は Gardner 分類が一般的に

36 時間後に採卵し，回収した卵子は IVF もしくは ICSI

用いられ，胞胚腔拡張に伴った発育ステージ 6 段階に加で受精させた．
受精から 5- 6 日目に Gardner 分類 3 以上

1）え，内細胞塊（inner cell mass: ICM）と栄養外胚葉

かつ ICM のグレード B 以上の胚盤胞を凍結可能胚と定（trophectoderm: TE）をそれぞれ細胞数と細胞密度で 3義してガラス化凍結保存した．凍結操作直前に胚観察

近年タイムラプ段階（A，B，C）に分類して評価する ．

と画像撮影を行った後に凍結保存した．凍結及び融解

スモニタリングシステムの普及により胚の経時的形態

はすべて Cryotop システム（KITAZATO Corporation，変化を解析することが可能となり，収縮回数が少ない胚Japan）
をデバイスとして用い，凍結試薬は VT 507，融

盤胞は良好な妊娠率が得られ 3，4），また頻回の収縮は胚

解試薬は VT 508 を使用して製品プロトコールに従い2）のクオリティを低下させる

報告がされている．
しかし， ガラス化凍結と融解を実施した．

5）

すべての胚の収縮回数をカウントすると胚あたりの観胚融解 2 時間後に回復観察を行い，胞胚腔拡張もしく

察時間は長くなり，培養業務のスムーズな進行を妨げかは細胞の生存が確認できれば移植可能と判断しねない．
また，全症例でタイムラプス観察ができない施

Gardner 分類 5 以外の胚盤胞にはレーザーで透明帯開

設では，経時的観察を行えず収縮回数を確認することは口を実施し，
融解から約3-4時間後に胚移植を実施した．

不可能である . そこで，凍結前の観察画像のみで収縮有胚移植は経腹超音波下で行った．
胚移植後，子宮内に胎無を確認することに限定し，着床能の高い胚盤胞を簡便嚢を認めた症例を臨床妊娠とした．
また，胎嚢確認後在に選別可能であるか検討を行った．

胎 22 週まで妊娠継続できなかった場合を流産とした．
胞胚腔の拡張と収縮の分類は胚凍結直前の観察画像を用いて行った．
胞胚腔が拡張し，囲卵腔のない胚盤胞

受付 2020 年 8 月 1 日 / 受理 2020 年 8 月 25 日
責任著者：柴田 美智子 e-mail［ shibata@ivfnamba.com ］

32

を拡張群，収縮し囲卵腔がわずかでも見られる場合は胚齢別収縮群とした（図 1）．

5 日目胚，6 日目胚の比較を表 1 に示した．移植時の拡張群と収縮群における妊娠率及び流産率の比較を

母体年齢は，5 日目胚と 6 日目胚でそれぞれ両群間に行った．また，拡張群と収縮群をそれぞれ胚齢，TE の差はなかった．また，5 日目胚と 6 日目胚で胞胚腔の収グレード，拡張ステージ別に分け収縮胚の割合，妊娠率

縮 率 に 差 は な か っ た．妊 娠 率 は 5 日 目 胚 の 拡 張 群

及び流産率を検討した．統計解析には t- 検定を用い， （57. 4 ％） が 収 縮 群（37. 7 ％） に 比 べ 有 意 に 高 く
p< 0. 05 を統計学的に有意差ありと判定した．

（p< 0. 01），6 日目胚では差はなかった．流産率は 5 日目胚，6 日目胚ともに両群間に差はなかった．6 日目胚結果において妊娠率，流産率ともに両群間に差がなかったた
め，以降の検討は 5 日目胚のみで行った．

移植時の母体年齢は拡張群 34. 8 ± 3. 1 歳，収縮群
35. 0 ± 3. 3 歳で両群間に差はなかった．対象としたTE グレード別1568 個の胚盤胞を拡張群と収縮群に分けたところ，拡TE のグレードを良好群（A もしくは B）と不良群（C）

張群が 1476 個（94. 1%），
収縮群が 92 個（5. 9%）であっに分けて比較した．
移植時の母体年齢はそれぞれ両群間た．
妊娠率は収縮群（34. 8％）に比べ拡張群（52. 8％）でに差はなかった．
胞胚腔の収縮率は良好群より不良群で有意に高かった（p< 0. 01）．流産率は両群間に差はな

有意に高かった（p< 0. 01）．TE 良好群，TE 不良群にお

かった
（図 2）
.

いて，それぞれ妊娠率，流産率とも両群間に差はなかっ
た
（表 2）
．

図 1 胚盤胞凍結時における胞胚腔拡張の分類

図 2 拡張胚盤胞と収縮胚盤胞の妊娠率・流産率

33

表 1 胚齢別の収縮率と妊娠率・流産率

表 2 TE グレード別の収縮率と妊娠率・流産率（Day5）

表 3 発育ステージ別の収縮率と妊娠率・流産率（Day5）胞胚腔の拡張ステージ別
胞胚腔の拡張ステージを BL 3，BL 4，BL 5 に分けて比較した．移植時の母体年齢はそれぞれ両群間に差率が高い傾向にあった（p= 0. 087）．
一方で BL 3 では両群の妊娠率に差はなかった。流産率は拡張ステージ毎に両群で差はなかった（表 3）．

はなかった．胞胚腔の収縮率は拡張ステージ毎に差はな い も の の，BL 5 よ り BL 3 で 高 い 傾 向 に あ っ た（p= 0. 051）
．次 に 妊 娠 率 は BL 4 に お い て 拡 張 群

考察（57. 0％）が収縮群（36. 0％）に比べ有意に高かった胚培養のエンドポイントである胚盤胞凍結前の胞胚（p< 0. 05）．
また，BL 5 でも拡張群が収縮群に比べ妊娠

腔収縮の有無に着目し本研究を行った．
その結果，凍結34

前の観察画像での胞胚腔の収縮を確認することで移植していない．軽度の収縮を起こした胚盤胞と強度の収胚盤胞選択の一つの指標となる可能性が示された．こ縮を起こした胚盤胞では，再拡張にかかる時間や所要の胞胚腔収縮は患者背景（年齢や卵胞刺激など）に依存

エネルギーに違いがあることが考えられる．タイムラ

せずに起こり，臨床成績を低下させる ことが知られてプス観察ができなければ分類することは難しいので，いるが，年齢による染色体異常増加による影響を考慮追加検討することでより有効な指標になる可能性があし，本検討では移植時 39 歳以下に条件設定した . 胚齢

る．
また，凍結前に収縮を確認した場合に再拡張を仮にで比較すると，5 日目胚において収縮胚の妊娠率が低待って凍結すれば凍結順位が下がらない状態にはなる下した．
流産率に差はないものの 5 日目胚では収縮群でものの，本検討の結果を踏まえると収縮を確認していおよそ 15％上昇している．Marcos らは一度でも胞胚る胚は臨床成績が低下していることから正しい胚選択

腔の収縮が見られた胚盤胞では妊娠率や出生率の低下ができない可能性が考えられる．

3）を報告している ．一方，6 日目胚では妊娠率と流産率

以上より，凍結融解胚盤胞移植を行う際には，凍結前に差はなかった．凍結融解胚移植において 6 日目胚は 5の収縮有無は胚盤胞選択の指標の一つとして有用であ

日目胚に比べ移植成績の有意な低下があることが報告る可能性があり，胚盤胞の TE グレード，拡張ステージ，異常卵割に代表される胚質低下や発生に関わらず優先順位は下げる必要があると考えられる．

4）

されており

6，
7）

遅延など，胞胚腔収縮以外にも妊娠率低下に影響を及ぼす要因を 6 日目胚は多く含んでいることが原因ではないかと推察された．

参考文献

次に 5 日目胚における TE は不良の方が胞胚腔収縮は

1） Gardner DK，Schoolcraft WB，Wagley L，Schlenker T，Stevens J，Hesla J: A prospective randomized trial of
張に伴って TE 一個あたりの細胞膜伸展が増大して胞
blastocyst culture and transfer in in-vitro fertilization.
Hum Reprod，13: 3434-3440，1998.
胚腔拡大に耐えられなくなり，TE 細胞もしくは TE 細2） Ga rd ner DK ， L a ne M ， Stevens J， S ch len ker T，
胞同士の接着部分の一部に虚脱が生じやすいからであSchoolcraft WB: Blastocyst score affects implantation andることが考えられる．妊娠率は TE 良好不良に関わらず
pregnancy outcome: towards a single blastocyst transfer.
凍結時に収縮が見られれば有意差はないものの妊娠率、Fertil Steril，73: 1155-1158，2000.
流産率ともに拡張群を上回ることはなかった．
有意差が 3） S cior io R ， Thong KJ， P icker ing SJ: Spont a neous
Blastocyst Collapse as an Embryo Marker of L ow
なかった原因として本検討で収縮に分類された胚盤胞
Pregnancy Outcome: A Time-Lapse Study. JBRA Assistの割合が約 6％と少なかったことが一因と考えられる．
Reprod. 30; 24（1）: 34-40，2020.
最後に 5 日目胚における拡張グレード別では BL 3 で 4） Marcos J，Pérez-Albalá S，Mifsud A，Molla M，Landeras
J，Meseguer M. Collapse of blastocysts is strongly related
収縮率が高かった．これは収縮が生じると特に BL 3 の
to lower implantation success: a time-lapse study. Hum
完全胚盤胞から BL 4 へ拡大していく際は透明帯を引き
Reprod.30: 2501–2508.2015
延ばす必要が生じるが，その途中で収縮が起こった場 5） 渡辺真一・上畑みな子・永川恵介・見田渉・三浦恵・小林勇毅・合は透明帯が元の厚さに戻ろうと弾性力が働くため，
宮田佳苗・田中豊美・松永利恵・山中菜保子・与那覇斉・桑波田暁子・越知正憲・堀内俊孝：ヒト胚盤胞の収縮が凍結融
BL 3 の直径に戻ってしまう胚が多く見られる可能性が解胚移植成績に及ぼす影響：タイムラプス動画を用いた解析 .
考えられた．
また，BL 4 と BL 5 の収縮群で妊娠率、流産
日本受精着床学会雑誌，32（1）: 45-48，2015
率が悪化した . これは拡張胚盤胞に至り収縮が起きる 6） Romualdo Sciorio， K J Thong， Susan J Pickering:と，胞胚腔液の流出量が完全胚盤胞よりも多くなり，非Increased Pregnancy Outcome After Day5 Versus Day6
Transfers of Human Vitrified-Warmed Blastocysts. Zygote
収縮の胚盤胞との妊娠率に差が出たのではないかと考
Oct; 27（5）: 279-284，2019
えた．見尾らは胞胚腔の収縮は TE の一部に破綻が生じ，
7） H a a s J i g a l M e r i a n o ， J i m L a s k i n ， C a r l B e n t o v，胞胚腔液の流出に伴って虚脱したもので，明らかに虚YaakovBarzilay， EranCasper Robert FCadesky Ken:
脱を伴わない，あるいは軽度虚脱に止まった胚は孵化
Clinical pregnancy rate following frozen embryo transfer
is higher with blastocysts vitrified on day5 than on day6.
率が高く，高度虚脱を伴った胚では変性に至る胚が多J Assist Reprod Genet，33（12）:1553-1557，2016
8）
本検討では BL 4 及び 5く認められたと報告している ．
8） 見尾保幸・岩田京子・湯本啓太郎・井庭裕美子：Time-lapseの割合が BL 3 に比べ多いがこれは BL 4 及び 5 が BL 3
映像で見る体外培養中のヒト初期胚の胚盤胞期における諸問よりも当院の移植順位で優先されているためであると
題 . J Mamm Ova Res，28: 152-158，2011.

起こりやすかった．TE 細胞数が少ない場合，胞胚腔拡考えられる．本検討は簡便に着床能の高い胚を選別する目的で行ったため，胞胚腔収縮の度合いなどを考慮

35

第23 回

日本 IVF 学会学術集会
共催

日本臨床エンブリオロジスト学会
メインテーマ

新時代の ART 医療とは〜 Ultimate ART for New ERA 2020 〜
会期

2020 年 10 月31日（土）〜11 月1日（日）会場

広島コンベンションホール

学術集会抄録集

理事長挨拶（一般社団法人 日本ＩＶＦ学会 理事長 / 塩谷 雅英）･･･････････････････････････････････････････････ 44
学術集会長挨拶（第23回 日本ＩＶＦ学会 学術集会長 / 向田 哲規）･････････････････････････････････････････ 45
Program ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 46
会場アクセス ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 48
フロアマップ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 49
お知らせ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 50
生殖細胞のエネルギー代謝解析から ART へのトランスレーション
座長：広島大学 / 島田 昌之

精子，卵，受精卵の代謝機構とその人為的制御，ART への応用 ･･････････････････････････････････････････････････ 52
広島大学 / 島田 昌之

ミ
トコンドリアに着眼した加齢や肥満に伴う卵巣線維化メカニズムと代謝改善によるその治療法の構築 ････････ 53
広島大学 / 梅原 崇

包括的な着床前診断・出生前診断の今後の展開
座長：HORACグランフロント大阪クリニック / 森本 義晴

生殖医療に携わる者が知っておくべき出生前診断とその効率的利用法 ･････････････････････････････････････････････ 54
クリフム夫律子マタニティクリニック臨床胎児医学研究所・胎児診断センター / 夫 律子

PGT-A 現状と今後の展開 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 55
レディスクリニックコスモス / 桑原 章

日本臨床エンブリオロジスト学会「Piezo ICSI の今後の展開と有用性」
座長：楠原ウィメンズクリニック / 沖津 摂
杉山産婦人科 新宿 / 渡邉 英明

当院における Piezo-lCSI の変遷について･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 56
英ウィメンズクリニック / 古橋 孝祐

Piezo-lCSI の当院における運用方法と手技を習得していく中で感じたこと･････････････････････････････････････････ 57
クリニックママ / 小熊 惇平

当院におけるPiezo-lCSIの運用 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 58
IVFなんばクリニック / 佐藤 学

Piezo-lCSIの原理と有用性（基礎分野の経験的立場から） ･ ･････････････････････････････････････････････････････････ 59
おち夢クリニック名古屋先端生殖医学研究所 / 堀内 俊孝

40

Evening Seminar
座長：木場公園クリニック / 吉田 淳

Euploid 時代の着床不全対策 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 60
杉山産婦人科 新宿 / 中川 浩次

ART 医療者が知るべき患者へのメンタルサポート
座長：松田ウイメンズクリニック / 松田 和洋

ART 医療者が患者からの信頼を得るための何気ないかかわり････････････････････････････････････････････････････････

61

東京 HART クリニック / 平山 史朗

タイムラプスシステムとAl技術の融合（日本語解説）
座長：広島HARTクリニック / 向田 哲規

TLC, IT and Artificial intelligence ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 62
IVF Australia / Simon Cooke

Piezo-ICSI は新時代の顕微授精法となり得るか（日本語解説）
座長：広島HARTクリニック / 向田 哲規

With PIEZO into the future of ICSI ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 63
University of Veterinary Science / Csaba Pribenszky

Luncheon Seminar
座長：アイブイエフ詠田クリニック / 詠田 由美

月経困難症に対するホルモン治療〜オフィスギネコロジーと不妊クリニックを繋ぐために〜･････････････････････ 64
茶屋町レディースクリニック / 奥 久人

今後の日本の ART 医療の方向性
座長：醍醐渡辺クリニック / 渡邉 浩彦

日本の ART が目指すべき方向性･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 65
IVF 大阪クリニック / 福田 愛作

座長：クリニックママ / 古井 憲司

日本のART医療の方向性 −10年後を見据えて−････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 66
英ウィメンズクリニック / 塩谷 雅英

座長：古賀文敏ウイメンズクリニック / 古賀 文敏

私が考えるART医療 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 67
木場公園クリニック / 吉田 淳

41

学術集会抄録集

一般演題〔口頭発表〕
O- 1

タイムラプスインキュベーターの導入により培養室業務の負担が減るのか ････････････････････････････････････ 68
IVF大阪クリニック / 山田 悠太

O- 2

KID SCORE™️D5は6日目胚盤胞の妊娠率も予測する ････････････････････････････････････････････････････････ 68
高橋ウイメンズクリニック，千葉大学大学院医学研究院生殖医学 / 塩谷 仁之

O- 3

フラグメンテーション含有率が高い分割期胚への広範囲な透明帯開口術の試み ････････････････････････････ 69
仙台ARTクリニック / 岸田 理英

O- 4

タイムラプス観察による胚盤胞期胚の収縮と臨床成績について ･･････････････････････････････････････････････ 69
高橋ウイメンズクリニック / 杉浦 朝治

O- 5

3PN胚における倍数性解析の検討 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 70
広島HARTクリニック / 後藤 優介

O- 6

DuoStim法により良好な凍結成績を得られた１例 ･･････････････････････････････････････････････････････････････ 70
HORACグランフロント大阪クリニック / 森下 みどり

O- 7

タイムラプスを用いた受精操作直後の細胞質収縮による受精予測の試み ････････････････････････････････････ 71
小牧市民病院生殖医療センター / 山口 桂子

O- 8

TLCを用いて胚発達を改善させるEmbryo Plastyの臨床成績の検討 ･････････････････････････････････････････ 71
広島HARTクリニック / 渡邉 華

O- 9AIを用いた胚画像認識と臨床データ解析の融合による妊娠予測 ･････････････････････････････････････････････ 72
英ウィメンズクリニック / 江夏 徳寿

O- 10 卵管膨大部特異的に発現するLipocalin-2は精子運動性と受精を促進する ･･････････････････････････････････ 72
県立広島大院総合学術 / 李 周蓮

O- 11 マウスにおける鉄欠乏は卵胞発育不全による雌性不妊を引き起こす ･･････････････････････････････････････ 73
県立広島大院総合学術 / 藤内 慎梧

O- 12 精子グルコース応答性に起因するRNAウイルス感作反応の動物種間差解析 ････････････････････････････････ 73
広島HARTクリニック / 田口 新

O- 13 当院において透明帯欠損卵子が見られた症例の分析 ･･････････････････････････････････････････････････････････ 74
蔵本ウイメンズクリニック / 水本 茂利

O- 14 凍結保存タンクの容量が大きいほど真空漏れを起こしても保存効果を長く保つことができる ･･･････････････ 74
IVF大阪クリニック / 水野 里志

O- 15 閉鎖型胚凍結デバイスを用いた出生児予後への影響 ･･････････････････････････････････････････････････････････ 75
HORACグランフロント大阪クリニック / 的場 麻理

O- 16 クラウド技術とマスキング技術を用いた臨床データの共有と匿名加工の方法－個人情報保護に重点をおいて－ ･･ 75
英ウィメンズクリニック / 犬伏 美喜

42O- 17 SMASを用いた質の高い精子の運動パラメーターによる指標の検討 ･････････････････････････････････････････ 76
絹谷産婦人科 / 久田 尚人

O- 18 精液の温度低下による精子の運動率及びSMIの低下があった場合の加温の有用性 ･ ･･･････････････････････ 76
IVFなんばクリニック / 阪本 なつき

O- 19 精液の酸化還元電位とストレス因子との関係性 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････ 77
HORACグランフロント大阪クリニック / 金子 眞弓

O- 20 AIを用いたスマートフォン精液検査の精度向上への試み ･･････････････････････････････････････････････････････ 77
英ウィメンズクリニック / 中川 奈緒子

O- 21 PGT-Aの処分胚の検討 ･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 78
西山産婦人科 / 西山 幸江

O- 22 子宮内フローラの結果とART成績の関連－複数の臨床パラメータとの比較検討－･･･････････････････････････ 78
つばきウイメンズクリニック / 坂井 和貴

O- 23 NeurotensinはERK1/2系の持続的リン酸化を促進し排卵を誘起する････････････････････････････････････････ 79
県立広島大院総合学術研究科，倉敷芸術科学大生命科学部 / 岡本 麻子

O- 24 顆粒膜細胞で発現上昇するSREBPは，排卵期のプロゲステロン産生に必須である ･ ･･･････････････････････ 79
県立広島大院総合学術 / 中西 寛弥

O- 25 ニュートリションサポートセンターにおける栄養指導の不妊治療への効果････････････････････････････ 80
英ウィメンズクリニック / 植田 歩唯

O- 26 レルゴリクスはARTにおいてセトロレリクスの代替薬となり得るか ････････････････････････････････････････ 80
IVF大阪クリニック / 矢野 未来

O- 27 男性不妊治療患者の睡眠に関する検討 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 81
英ウィメンズクリニック / 藤井 美喜

学術集会

共催・協賛企業・後援一覧 ････････････････････････････････････････････････････････････････････

82

日本IVF学会雑誌発行における投稿論文募集のお知らせ ･･･････････････････････････････････････

83

日本IVF学会雑誌 投稿規定 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

84

一般社団法人 日本IVF学会 定款 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････

86

一般社団法人 日本IVF学会 役員 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････

92

編集委員会 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

93

43

ごあいさつ第 23 回日本 IVF 学会学術集会は，広島にて開催されます．向田哲規会長は学術集会のテーマを，「New ERA の ART 医療を考える」とされました．期せずして，新型コロナウイ
ルス感染症に対して緊急事態宣言が発令されるなど，我々生殖医療に従事する医療者は，「With コロナ」や「Post コロナ」時代における ART を模索する必要に迫られています．
さて，1978 年に英国にて ART による最初の出産が報告されて以来，すでに 40 年以上の歳月が経過しました．この間，現在に至るまで様々な進歩，工夫，技術革新がありました．
40 年前の ART と昨今の ART とは隔世の感があるといっても良いでしょう．マイルストー
ンとなる例をあげるなら，経膣超音波下採卵法の導入，排卵誘発における GnRH アナログの使用，受精障害に対する ICSI（Piezo も含め），培養液の改良に伴う胚盤胞培養・移植，ガラス化凍結・融解技術，タイムラプス培養，着床のウインドウを考慮した移植，そして，着床前遺伝診断技術の開発などでしょう．ART の現場で働く私たちにとりましては，これらの進歩を治療に取り入れるのに精一杯という感もぬぐえません．またややもすると現状に満足して進歩の歩みを止めがちになります．しかしながら，向田大会長はもっと ART の質を高めるべき，歩みを止めるな，と日々我々を叱咤激励してくれる存在です．今大会のテーマはまさにそのような向田先生の思いが込められたものだと思います．
いつの時代においても現状に満足しない良い意味での異端者が現れて，科学の進歩が導かれるものだと思います．「New ERA の ART 医療を考えなさい」と言われてももう何も捻りだせないよ，と感じた方もいらっしゃるのではないでしょうか．それなのに敢えてこのようなテーマを掲げて我々に勇気と希望を与えてくださるのが向田先生です．この向田先生の思惑が 第 23 回日本 IVF 学会学術集会を通じてどのように実現するのか，今から楽しみです．
それでは皆様，秋たけなわの広島にてお会いしましょう．多くの皆様のご参加をお待ちしております．宜しくお願いいたします．

令和 2 年秋
一般社団法人 日本IVF学会
理事長 塩谷 雅英

44

ごあいさつこのたび第 23 回日本 IVF 学会学術集会を 2020 年 10 月 31 日～ 11 月 1 日，広島
において「新時代の ART 医療とは～ Ultimate ART for New ERA 2020 ～」というテーマで開催する運びとなり，今回大会長を務めさせていただくことは大変光栄に思い身を引き締めて鋭意努力しております．2020 年 4 月に新型コロナウイルス感染症（COVID-19）
に対して日本で初めて緊急事態宣言が発令され，現在も第 2 波，第 3 波を警戒しながら，感染予防と経済回復に向けた新たな日常を確立すべく日本だけでなく世界中が日々模索している状況です．将に今回の学会の表題に掲げました新たな時代（New ERA）の ART
医療を考える必要に迫られています．
日本 IVF 学会の総会・学術講演会は生殖医学会や受精着床学会などの日本産婦人科傘下の学会とは違い，ART 医療に携わるすべての医療関係者や研究者がそれぞれの知識や医療レベルを高めるべく真摯な情報交換の場として考えています．23 年前に大阪兵庫生殖医療懇話会として，会員同士が顔を合わせて忌憚ない意見交換を目的としてスタートした会です
ので，Web 開催などではなく，On Site での開催を目指すべく準備をし，この抄録集に掲載されているような Program を用意いたしました．ART 医療に関する基礎的な知識から臨床的な情報に，日本産婦人科の臨床研究として開始された着床前胚染色体診断，そこから発展して出生前診断の現状から未来に関する講演を予定しております．
また今回の大会の結びには，お互いの意思疎通が Smooth に行えること，「思いを伝える」
ことの重要性について，ジャパネットたかた創業者である髙田明氏より，「伝わるコミュニケーション」，「伝わらなければ，ないのと同じ」という観点から，「夢持ち続け日々精進」というテーマで，なぜ髙田明が語ると伝わるのか？

の極意について，90 分の講演を準備しております．ART に携わる医療関係者にとって明日から役に立つ情報と将来へ向けての活力を得る学会になると思いますので，実際に広島にお越しいただき，コロナ禍の経験をもとに新たな日々の ART 医療を語り合う機会になればと思います．

令和 2 年秋
第23回 日本 IVF 学会
学術集会長

向田 哲規

45

2020 年 10 月 31 日（土）第１会場 2 階
時間
11:45～

区分／テーマ

演題

演者

レジストレーション

12：55～13：00 開会の辞

塩谷 雅英 （英ウィメンズクリニック）

13：00～13：10 学術集会長挨拶

新時代のART医療とは〜Ultimate ART for New ERA 2020〜 向田 哲規 （広島HARTクリニック）

13：10～14：10 生殖細胞のエネルギー代謝解析からARTへのトランスレーション

精子，卵，受精卵の代謝機構とその人為的制御，ARTへの応用

島田 昌之 （広島大学）

ミトコンドリアに着眼した加齢や肥満に伴う卵巣線維化メカニズ
ムと代謝改善によるその治療法の構築

梅原 崇（広島大学）

生殖医療に携わる者が知っておくべき出生前診断とその効率的利用法

夫 律子（クリフム夫律子マタニティクリニック）

PGT-A 現状と今後の展開

桑原 章（レディスクリニックコスモス）

当院におけるPiezo-lCSIの変遷について

古橋 孝祐 （英ウィメンズクリニック）

Piezo-lCSIの当院における運用方法と手技を習得していく中で感じたこと

小熊 惇平 （クリニックママ）

当院におけるPiezo-lCSIの運用

佐藤 学

Piezo-lCSIの原理と有用性（基礎分野の経験的立場から）

堀内 俊孝 （おち夢クリニック名古屋
先端生殖医学研究所）

17：40〜18：20 Evening Seminar

Euploid 時代の着床不全対策

中川 浩次 （杉山産婦人科 新宿）

19：00～20：30 懇親会（意見交換会）

ホテルグランヴィア広島「悠久」

14：10～14：30 Coffee

break

14：30～15：00 包括的な着床前診断・出生前診断の今後の展開
15：00～15：45
15：45～16：00 Coffee

break

16：00～17：30 日本臨床エンブリオロジスト学会「Piezo ICSIの今後の展開と有用性」

17：30～17：40 Coffee（IVFなんばクリニック）

break2020 年 11 月 1 日（日）第１会場 2 階
時間
9：30～10：00

区分／テーマ
ART医療者が知るべき患者への
メンタルサポート10：00～10：10 Coffee

演題

演者

ART医療者が患者からの信頼を得るための何気ないかかわり

平山 史朗 （東京HARTクリニック）

break

10：10～10：40

タイムラプスシステムとAl技術の融合（日本語解説）TLC, IT and Artificial intelligence

Simon Cooke（IVF Australia）

10：40～11：10

Piezo-ICSIは新時代の顕微授精法となり得るか（日本語解説）

With PIEZO into the future of ICSI

Csaba Pribenszky（University of Veterinary Science）

月経困難症に対するホルモン治療〜オフィスギネコロジーと不妊クリニックを繋ぐために〜

奥 久人 （茶屋町レディースクリニック）

日本のARTが目指すべき方向性

福田 愛作 （IVF大阪クリニック）

日本のART医療の方向性 —10年後を見据えて—

塩谷 雅英 （英ウィメンズクリニック）

私が考える日本のART医療吉田 淳（木場公園クリニック）

夢持ち続け日々精進髙田 明（株式会社A and Live）

村上 節（滋賀医科大学）

11：20～12：20 Luncheon Seminar
12：20～12：35 Coffee

break

12：35～13：05 年次総会および優秀演題表彰
13：05～14：20 今後の日本のART医療の方向性

14：20～14：30 Coffee

break

14：30～16：00 特別講演
16：00～16：05 閉会の辞／次期会長挨拶

46

座長

専門医機構
領域講習受講単位

第 2 会場 3 階
時間

区分／演者

座長

島田 昌之 （広島大学）○

森本 義晴 （HORACグランフロント大阪クリニック）

口頭演題発表 A

4 題（O-1 〜 4）

浅田 義正 （浅田レディースクリニック）

14：06～14：42 口頭演題発表 B

4 題（O-5 〜 8）

吉田 仁秋 （仙台 ART クリニック）

口頭演題発表 C

4 題（O-9 〜 12）

三谷 匡

13:30～14：06

14:42～15：18（近畿大学）○
15：18〜15：54 口頭演題発表 D 4 題（O-13 〜 16）

沖津 摂（楠原ウィメンズクリニック）

渡邉 英明 （杉山産婦人科 新宿）

吉田 淳

髙見澤 聡 （杉山産婦人科 新宿）

16：00〜17：00 理事会（3 階 会議室 3A・3B）（木場公園クリニック）

座長

専門医機構
領域講習受講単位

松田 和洋 （松田ウイメンズクリニック）

時間
9：30～10：06

向田 哲規 （広島HARTクリニック）

詠田 由美 （アイブイエフ詠田クリニック）

第 2 会場 3 階
区分／演者
口頭演題発表 E

4 題（O-17 〜 20）

座長
村上 節

（滋賀医科大学）

10：06～10：42 口頭演題発表 F

4 題（O-21 〜 24） 中岡 義晴 （IVF なんばクリニック）

10：42～11：09 口頭演題発表 G

3 題（O-25 〜 27） 和田 龍

（広島 HART クリニック）○

渡邉 浩彦 （醍醐渡辺クリニック）
古井 憲司 （クリニックママ）○

古賀 文敏 （古賀文敏ウイメンズクリニック）

堤治（山王病院）

47

会場アクセス
交通アクセス・周辺地図※広島駅から会場までの詳しい道のりについては、学会ウェブサイトをご確認ください（https://23th.ivf-et.net/）

広島コンベンションホール（JR 広島駅新幹線口北口より徒歩4分）
住所：〒732-8575 広島県広島市東区二葉の里3丁目5番4号 広テレビル
TEL：082-567-2300■ J R 広 島 駅（ 在 来 線・新 幹 線 ）◦ 飛 行 機 をご 利 用 の 場 合【 広 島 空 港 リム ジ ンバ ス 】 広 島 空 港 か ら J R 広 島 駅 新 幹 線 口 行 き
所要時間約50分■ 学会受付◦ 会 場 内1階 エ ントラ ン ス に て 受 付 を 行 って お りま す48

フロアマップ
広島コンベンションホール 1 階／ 2 階／ 3 階
1階

1階
受付

クローク

エンブリオロジスト学会
受付

2階
2階

事務局
控室

第 1 会場（メインホール A・B）

情報コーナー

控室
A

PCデータ
受付

3階
3階

理事会兼
学会事務局

企業展示

第 2 会場（大ホール 3A・３B）（大ホール 3C）

控室
B

49

お知らせ
第23回 日本IVF学会 学術集会
共催：日本臨床エンブリオロジスト学会◦概 要

会期：2020年 10月 31日（土 ） 11：45 〜 11月 1日（日） 16：05
会場：広島コンベンションホール
〒732-8575 広島県広島市東区二葉の里3丁目5番4号 広テレビル
TEL: 082-567-2300

学術集会参加者へのお知らせ◦参加証

参加受付時に領収証兼用の参加証を受付窓口にてお渡しいたします．
会場内ではホルダーに入れて必ずご着用ください．
◦参加費

会員
大会参加費
非会員
懇親会

事前参加登録割引（2,000 円割引）

当日

医師20,000 円

22,000 円

医師以外

10,000 円

12,000 円

医師23,000 円

25,000 円

医師以外

13,000 円

15,000 円

一律 3,000 円（事前登録のみ）※事前参加登録割引は 2020 年 10 月 12 日（月）12：00 までのお申込みに適用されます．
※懇親会ご参加の受付は事前登録のみとなります．当日参加は原則受け付けておりません．なお，席数に限りがございますので，期日前に受付を終了させていただ
く場合がございます．何卒ご了承ください．
◦プログラム抄録集

学会雑誌が学術集会講演抄録集を兼ねておりますので，会員の方は当日ご持参ください．お忘れの方には学会当日に 3,000 円で販売いたします（数に限りがございます）．

50◦専門医などの出席証明について

1）日本産科婦人科学会専門医研修出席証明「e 医学会カード」による専門医研修出席証明を行いますので，会員の皆様
は「e 医学会カード」をご持参ください．
2）日本産婦人科医会研修参加証
研修参加証シールを発行いたします（1 日 1 枚）．
3）日本生殖医学会生殖医療専門医
日本生殖医学会生殖医療専門医更新ポイント 5 点が加算されます．
当日受付にて
芳名帳を用意いたします．会員カードをご提示のうえご記名をお願いいたします．
4）日本専門医機構単位付与講習「e 医学会カード」による講習受講証明を行いますので，「e 医学会カード」
をご持参ください．日本専門医機構学術集会参加単位 3 ポイントが付与されます．また，プログラム「専門医機構領域講習受講単位」に〇印がついているセッション（2 日間合計 4 セッション）については，それぞれ１セッ
ションごとに１ポイントの日本専門医機構産婦人科領域講習受講単位が付与されます．
◦懇親会

日時：10 月 31 日（土）19：00 より
会場：ホテルグランヴィア広島（4 階「悠久」）
アクセス：学会 会場向かい 徒歩 2 分51

生殖細胞のエネルギー代謝解析から ART へのトランスレーション

精子，卵，受精卵の代謝機構とその人為的制御，
ART への応用
島田 昌之
広島大学
大学院統合生命科学研究科教授

略 歴1998 年
広島大学大学院生物圏科学研究科 博士課程前期修了修士（農学）1999 年
広島大学生物生産学部助手
2003 年
山口大学連合大学院獣医学研究科博士（獣医学）
2004 ～ 2005 年 米国 Baylor College of Medicine 客員研究員
2006 年
広島大学大学院生物圏科学研究科准教授
2017 年
広島大学大学院生物圏科学研究科教授
2019 年～ 広島大学大学院統合生命科学研究科教授

子宮内の精子は，ミトコンドリアで合成した ATP細胞を早期に除去した時だけでなく，加齢化卵でもにより直進運動し，卵管では嫌気的解糖系を活性化認められた．そして，ミトコンドリア機能低下によさせ zig-zag 運動を行う．また，卵は受精までは解糖り，成熟卵の紡錘体が維持されない，あるいは放出系を利用していないが，受精後に解糖系が活性化さされた極体と卵との分離を保持できなくなり，単為れる，といったように精子，卵，受精卵は時期特異

発生や異常受精が引き起こされた．ミトコンドリア

的にエネルギー生産機構を変えていくと考えられての機能が低いならば，細胞質の嫌気的解糖系を活性いる．私達は，それぞれの代謝機構を活性化させる化できる（イタコン酸が合成されていない）と仮説立

スイッチの ON/OFF 制御メカニズムや，その ON/て，このような低 ATP 産生卵を高濃度グルコース添OFF の時期が狂うことがどのような影響を与えるの加培養液で培養した．その結果，ATP 量が増加し，か，について検討を行ってきた．

第二減数分裂中期で維持されたことから，卵の加齢

細胞質の嫌気的解糖系（グルコースからピルビン酸への変換）とミトコンドリアにおける呼吸代謝化の防止，あるいは裸化卵の培養に応用できると考えられた．

（TCA サイクルから電子伝達系）の ON/OFF 制御につしかし，高濃度グルコース添加培養液で成熟卵やいて，精子をモデルに解析した．精子は，ミトコン

受精卵を培養した時，グルコースから合成されたピ

ドリアの呼吸代謝が活性化されると嫌気的解糖系がルビン酸はアセチル CoA ではなく乳酸へと変換され不活性化されることが分かった．そこで，ミトコン

る．乳酸は，乳酸トランスポーターにより排出されドリアから細胞質への代謝制御因子を探索した結果，れば細胞質内に影響を与えないが，成熟卵や受精直TCA サイクルの副産物であるイタコン酸が，嫌気的後では乳酸トランスポーターの発現が低値である．

解糖系の酵素活性を抑制することを明らかとした．

その結果，乳酸の蓄積により細胞質内の pH が低下し，さらに，高濃度グルコース存在下において，イタコ

受精卵の発生率の低下，特にマウスでは 2 cell block

ン酸添加が精子の代謝機構をミトコンドリアへとシを引き起こすことが明らかとなった．これらの研究フトさせたことから，イタコン酸はミトコンドリア

結果は，目先の ATP 合成が，後に活性酸素や乳酸にの代謝スイッチを ON にする因子であることが明確よる発生異常を引き起こす可能性を示しており，未化された．この結果から，イタコン酸添加培養液に成熟卵，成熟卵，受精卵の最適培養環境を構築する

より，精子の直進運動を持続させることに成功した．

ため，内因性抗酸化因子（グルタチオン）の合成機構，

卵成熟には，減数分裂再開後にミトコンドリア数

外因性抗酸化因子の効果検証，乳酸トランスポーが増加し，多量の ATP が合成される必要がある．裸化卵を成熟培養した時，ミトコンドリア数が増えな
いため，数少ない・機能の低いミトコンドリアが一過的に著しく活性化する．しかし，活性酸素を除去できない結果，代謝活性が持続せず，成熟卵で必要な ATP 量を合成できない．このような現象は，卵丘52

ターの発現機構の探索を行っている．

生殖細胞のエネルギー代謝解析から ART へのトランスレーション

ミトコンドリアに着眼した加齢や肥満に伴う卵巣線維化メカニズムと代謝改善によるその治療法の構築
梅原 崇
広島大学
大学院統合生命科学研究科

略 歴2015 年
広島大学大学院生物圏科学研究科 博士課程前期修了修士（農学）2015 ～ 2018 年 日本学術振興会特別研究員（DC 1）
2018 年
広島大学大学院生物圏科学研究科 博士課程後期修了博士（農学）2018 ～ 2019 年 広島大学グローバルキャリアデザインセンター特別研究員
2019 年～
広島大学大学院統合生命科学研究科助教
2019 ～ 2020 年 豪州 The University of Adelaide 客員研究員

加齢に伴う妊孕性の低下は，雌のほ乳類におけるる酵素類をコードする遺伝子の発現や，ミトコンド

普遍的な現象である．我々のグループでは，早期にリア活性が有意に低下していた．そして，このよう妊孕性が低下する早期加齢化マウスにおいて，卵巣な代謝異常が生じる肥満マウスや加齢マウスの卵巣の間質細胞にコラーゲンが沈着し，卵巣間質が線維

間質では共通して，細胞ストレスの上昇や炎症の亢化すること，それが卵胞発育の停滞を誘導し，妊孕

進が認められた．このような表現型は，ミトコンド

性を著しく低下させることを見出した．近年，卵巣リアにおける ATP 代謝異常を導くロテノンを 3 週間

間質の線維化は，卵胞発育だけでなく卵胞破裂も抑に渡って給餌したマウスでも同様に認められたこと

制すること，ヒトや霊長類においても加齢に伴い認から，ミトコンドリアにおける ATP 産生異常を中枢められていることが報告されており，卵巣線維化は，として，細胞ストレスの上昇や炎症が誘起され，卵ほ乳類に共通して加齢に伴って発生し，卵胞発育か巣線維化が生じていることが明らかとなった．このら排卵に渡るすべての卵巣機能を低下させるキー

ようなミトコンドリア ATP 産生異常に起因して卵巣ファクターであると示唆される．このような線維化

線維化が起こるという知見に基づいて，加齢マウスであるが，これは肝臓や腎臓の機能疾患でよく認めと肥満マウスにミトコンドリア特異的な機能改善薬られる症状（肝硬変や慢性腎臓病）であり，肥満や糖（BGP15）の投与試験を行った．その結果，驚くべき尿病のような代謝疾患と強く関連している．具体的ことに，わずか4日間の投与で，卵巣間質のエネルギーに，代謝疾患では，細胞内小器官であるミトコンド

代謝が改善するだけでなく，卵巣間質の脱線維化がリアの機能不全や酸化ストレスの上昇といった細胞

起こり，外因性ホルモン投与による排卵数が上昇した．

ストレスに伴って炎症が起こる．そして，炎症が常以上のことから，卵胞発育や排卵を担保する卵巣態化（慢性炎症）すると，過剰にコラーゲンが組織内

間質が加齢や病態（肥満）によって線維化し，妊孕性に蓄積した結果，組織線維化が導かれる．しかしなを低下させること，卵巣線維化はミトコンドリア機がら，卵巣線維化と代謝異常や細胞ストレス，炎症能低下に起因しており，薬剤投与による機能改善にとの関係は全く明らかとなっていない．

よって回復し得ることが明らかとなった．これら成そこで我々は，代謝異常と卵巣線維化の関係性を

果より，ミトコンドリア改善薬の投与が，加齢に伴っ検討するため，細胞代謝に重要な役割を果たす Alms1て低下する女性の卵巣機能を改善させる可能性を有遺伝子に変異を加えることで肥満を呈する Blobby 系すると考えられた．

統マウス（肥満マウス）を用いて解析を行った．その結果，予想通り加齢マウスと同様に肥満マウスでも，重篤な卵巣線維化が認められると共に，妊孕性が低下することを突き止めた．興味深いことに，これら卵巣線維化が生じた卵巣間質細胞では，ATP 産生に必須であるミトコンドリアの酸素消費量や解糖系の活性が著しく低下していた．また，ATP 産生に関わ53包括的な着床前診断・出生前診断の今後の展開

生殖医療に携わる者が知っておくべき出生前診断とその効率的利用法
夫 律子
クリフム夫律子マタニティクリニック
院長

略 歴1983 年 3 月
1990 年 3 月
4月
2003 年 4 月
2006 年 6 月
2011 年2013 年2015 年2017 年
2018 年

慶應義塾大学法学部法律学科卒業
徳島大学医学部卒業
徳島大学医学部産婦人科学教室入局
香川小児病院総合周産期母子医療センター産婦人科医長
クリフム夫律子マタニティクリニック臨床胎児医学研究所院長
Cornell 大学（米国）産婦人科客員教授
国際 Dubrovnik 大学（クロアチア）Human Science 教授
Pirogov 国立研究医科大学（ロシア）名誉教授
International Academy of Perinatal Medicine（国際周産期医学アカデミー）副会長
Cornell 大学 , Johns Hopkins 大学（米国）産婦人科客員教授
NIH Perinatal Research Branch, Wayne 州立大学（米国）産婦人科客員教授
Baylor 医科大学（米国）産婦人科客員教授
Wayne 州立大学（米国）産婦人科特命客員教授

専門領域
周産期医学・出生前診断・胎児超音波医学（超音波発生学・超音波遺伝学）・胎児神経学

産科領域における NIPT，生殖医療における PGT の導入，さらに分子遺伝学の急速な発展により出生前診断においても遺伝学的知識が要求されるようになってきた．PGT, NIPT はあくまでスクリーニング検査であり，PGT, NIPT で正常結果でも多くの先天異常が確認されている．できる限り胎児期に正確な胎児情報を得て適切なマネージメントにつなげることが必要である．以下の形態診断・遺伝学的診断，問題点，解決法などを理解し，いかに合理的に効率的に利用するかを考えなければならない．
妊娠 7-10 週で発見できる形態異常
生殖医療に関わる施設では妊娠 10 週あたりまで管理することが多い．この時期に見つかる形態異常はそれほど多くはないが胎芽期早期の発達異常はこの時期に発見可能である．クリフムではこの時期のアーリースキャンを推奨している．
妊娠 11 週以降のトリソミースクリーニング検査
1. NIPT（10 週から可能）
2. 初期超音波検査（11+0-13+6 週スキャン）NT, NT プラス
3. 初期血清マーカー組み合わせ（NT+PAPP-A, freeβhCG）検査（11-13 週）
4. 母体血清トリプル・クワトロマーカーテスト（15週から）
妊娠初期から中期の形態学的診断
妊娠初期から中期において多くの形態異常が超音波検査にて診断される．形態異常がある場合には絨毛検査・羊水検査などで遺伝学的要因がないか確認することも必要となる．
遺伝学的診断検査（確定検査）: 絨毛検査・羊水検査
絨毛検査の利点は週数が早いため妊婦の精神的負担が少なく，羊膜破綻や児への接触がないことが挙54げられる．絨毛検査リスクは 0.20％，羊水穿刺リス
ク 0.30％，リスクプロファイル類似患者での検討では絨毛検査リスク− 0.11％，羊水穿刺リスク 0.12％と非常に低く，実際にはほとんど無侵襲検査と言えるが，NIPT に比べはるかに得られる情報が多いた
め，見直されている．
遺伝学的診断検査の問題点とクリフムでの解決法
1. 従来の出生前検体でのGバンドの弱点とそれを補う
新法
出生前検体での G バンドでは微小染色体異常の判定が困難で出生後に染色体異常と診断されるケースがある．これを補うため筆者の施設では全例において G バンドの補填検査として NGS を用いた D-Karyo（デジタル染色体）検査を新法として2020 年 3 月より行なっている．これにより多くの微小染色体異常が検出され，不要なマイクロアレ
イを減らせるようになった．
2. PGT-A モザイク卵移植例の取り扱い
PGT-A モザイク卵移植後，胎児期の遺伝学的検査を行う場合には羊水の未培養細胞からの DNA によるマイクロアレイを選択している．
合理的かつ効率的な出生前診断を行うためには，
超音波所見が決め手になることも多く，遺伝学的検
査の選択も PGT 結果や胎児の超音波検査結果などにより考慮し，これらの検査について十分熟知した上で遺伝カウンセリングを行わなければならない．

包括的な着床前診断・出生前診断の今後の展開

PGT-A

現状と今後の展開

桑原 章
レディスクリニックコスモス院長

略 歴1990 年３ 月 徳島大学医学部卒業
1995 年３ 月 徳島大学大学院修了
1998 年５ 月 米国ユタ大学研究員
2006 年４ 月 徳島大学病院講師
2013 年７ 月 徳島大学病院准教授
2020 年 4 月 レディスクリニックコスモス院長
専門領域
日本産科婦人科学会倫理委員会登録・調査小委員会委員（ART 登録）
日本生殖医学会生殖医療専門医，日本人類遺伝学会臨床遺伝専門医
日本産婦人科内視鏡学会技術認定医

着床前胚異数性検査（PGT-A）は，ART における妊

大学病院において研究倫理審査およびゲノム倫理審

娠率を高め，流産率を減少させる画期的な技術とし査を行った上で，臨床研究として多施設共同研究をて，生殖補助医療に携わる多くの専門家から期待さ進めており，現在，データの蓄積が行われているとれている．

ころである．

一方で，日本産科婦人科学会「着床前診断に関する

PGT-A/SR の実施には生殖医療と遺伝，両方の知見解」は，着床前診断は「重篤な遺伝性疾患を診断す

識を兼ね備えた専門職によるカウンセリング，ART

る以外の目的に使用しない」と定義し，将来予想されと遺伝学的解析の両面での精度管理が必須となる．

る遺伝子スクリーニングを防止すると解説している

今回の講演では，倫理的検討課題にも触れつつ，特（2019 年 6 月改訂）．

に日本産科婦人科学会倫理委員会が実施している「5. 診断情報および遺伝子情報の管理

PGT-A 臨床研究と諸外国の現状，そして今後の課題

診断する遺伝学的情報は，疾患の発症に関わる遺伝に関する議論を深めたい．

子・染色体に限られる．遺伝情報の網羅的なスクリー
ニングを目的としない．目的以外の診断情報については原則として解析または開示しない．また，遺伝学的情報は重大な個人情報であり，その管理に関しては「ヒトゲノム・遺伝子解析研究に関する倫理指針」，「人を対象とする医学系研究に関する倫理指針」
および遺伝医学関連学会によるガイドラインに基づき，厳重な管理が要求される．
」
遺伝学的解析手法の発展の結果，現在，着床前診
断は遺伝子情報を解析する PGT-M と，染色体の量を解 析 す る PGT-A/SR に 大 き く 区 別 さ れ て い る．
PGT-M は，遺伝医学，医療倫理の両面から高度なプ
ロフェッショナリズムが求められ，そのあり方を改めて見直す時期となっている．一方，PGT-A は流産防止や一定期間内の生児獲得率に寄与することが期待される生殖医療の新しい技術として，科学的検討が今も尚，必要とされている．日本産科婦人科学会
倫理委員会は 2017 年から 2019 年にかけて PGT-A に関する探索的パイロット試験を行い，2020 年からは現行見解および細則（下記参照）を守りながら，徳島
55日本臨床エンブリオロジスト学会「Piezo-ICSI の今後の展開と有用性」

当院における Piezo-ICSI の変遷について

古橋 孝祐
英ウィメンズクリニック
培養部門 統括部長

略 歴2005 年 3 月
4月
2011 年 4 月
2016 年 4 月
2019 年 4 月

北里大学獣医畜産学部卒業（現：北里大学獣医学部）
英ウィメンズクリニック入職
英ウィメンズクリニック培養部門主任
英ウィメンズクリニック培養部門部長
英ウィメンズクリニック培養部門統括部長

日本卵子学会認定胚培養士，日本臨床エンブリオロジスト学会認定臨床エンブリオロジスト，
日本不妊カウンセリング学会認定体外受精コーディネーター，医療福祉検定協会認定医療環境管理士，医療福祉検定協会認定医療福祉環境アドバイザー，第一種衛生管理者

胚培養士が習得すべき技術のなかで，顕微授精手

その後，Piezo-ICSI の再評価を行う際に技術の見技は最も高度な技術の一つであることは議論の余地直しをゼロから行い，技術のバラツキが影響しないの無いことであろう．顕微授精手技の巧拙によってようにするため，手技者は熟練技術者一人に固定し患者は得られる受精卵の数が減ることもあれば，増検討した結果，35 歳以上症例において，有意な培養えることもあるため，その技術の習得は非常に重要

成績の向上を認めたため，各手技者に Piezo-ICSI のである．当院では安定した高い受精率かつ，低い変技術を再教育し，2019 年 1 月より 40 歳以上患者の性率を達成できる顕微授精手技を習得できるよう教

顕微授精は全例 Piezo-ICSI を行うという治療方針に育プログラムを構築しており，このプログラムに基再び変更した結果，前年（2018 年）と比較し受精率・づいてトレーニングを行っている．2000 年の開院以

胚盤胞発生率などが有意に上昇した．このように

来， 当 院 に お い て 顕 微 授 精 操 作 は，Conventional

Piezo-ICSI といってもその技術が未熟であれば，良ICSI を 第 一 選 択 と し て き た が，1995 年 に

好 な 成 績 に 繋 げ る こ と は 出 来 な い が， 安 定 し た

Yanagimachi らによってマウスにおける Piezo-ICSI

Piezo-ICSI 技術を確立さえすれば，胚発育の向上にの有用性が報告され，また，1998 年には，Yanagida

寄与することが示唆された．本講演では当院におけらによって Piezo-ICSI の有用性がヒトにおいても報る Piezo-ICSI の変遷について言及していきたい．

告された．その後，2013 年に平岡らによって Ultrathin Micropipette を用いた Piezo-ICSI の有用性が報告されたことを受けて，当院でも Piezo-ICSI の有用性を検討した．その結果，42 歳以上の高齢患者においては Piezo-ICSI で有意に高い胚盤胞発生率を認め，
この結果は学会等でも発表してきた．この検討以降，当院では老化した卵子において Piezo-ICSI がより有効であろうと考え，2016 年 7 月より，40 歳以上の患者における顕微授精は全例 Piezo-ICSI を行うという治療方針としたが，期待したほどの受精率及び胚盤胞発生率の向上が認められず，2017 年からは再びConventional ICSI を第一選択に戻したという経緯があ る． こ の 原 因 と し て， 当 ラ ボ で は Conventional
ICSI を迅速に行う技術を習得することを第一の目標にしていたため，Piezo-ICSI に必要な精緻で時間のかかるセッティングに違和感のある施行者もあり，その結果施行者間に技術のバラツキが生じたため，結果的に成績に負の影響があったと考えられた．
56

日本臨床エンブリオロジスト学会「Piezo-ICSI の今後の展開と有用性」

Piezo - ICSI の当院における運用方法と手技を習得していく中で感じたこと
小熊 惇平
クリニックママ

略 歴2016 年 3 月 日本獣医生命科学大学卒業
4 月 クリニックママ入職（現在に至る）

Piezo - ICSI は従来の方法に比べて，受精率，胚盤
胞発生率の向上が数多く報告されている．また，習むことができるのか，ステップアップのためのマニュ
アル作りが重要と考える．

得までに比較的時間がかからないことや手技の統一

当院における Piezo - ICSI の運用方法と一緒に，私が容易であり，複数の培養士で ICSI を施行しても安が手技を習得していく中で感じたことを発表したい．

定した培養成績を維持することができる．これらの理由から Piezo - ICSI を導入している施設が増えてきている．
当院の Piezo - ICSI の導入は 2015 年 12 月であり，当初から全ての ICSI 症例に対して Piezo - ICSI を施行している．２台の Piezo を設置することで，機器に不具合が起きた場合は早急に対処できるよう準備を整えている．私は 2016 年に入職し，２年後に初めて
ICSI を施行した．よって私は Piezo しか ICSI を行ったことがない．日本臨床エンブリオロジスト学会で初めて参加したワークショップは Conventional - ICSI
初級ではなく Piezo - ICSI 初級から参加させていただ
いた．しかし，当時は Conventional - ICSI を習得してからの Piezo - ICSI という流れが一般的であったため，
マニュピレーターが上手く扱えない私に講師の先生は困惑されていた．その後手技を習得し，日本臨床
エンブリオロジストの認定資格試験は Piezo - ICSI の手技動画で合格させていただいた．
幸運だったのは 2016 〜 2019 年は多くの学会でPiezo - ICSI のワークショップを行っており，Piezo ICSI の第一線で活躍される先生方の技術と知識を学べたことである．施設毎に少しずつ異なる精子不動化から精子注入までの方法を知ることで Piezo - ICSIの発展と可能性を肌で感じることができた．
今後，私のような Piezo - ICSI のみを行う世代（Piezo- ICSI 世代）は Piezo - ICSI の発展に伴い増加すると考える．Piezo - ICSI 世代がどのようにトレーニングを積み，どのような課題をクリアできたら臨床へと進57

日本臨床エンブリオロジスト学会「Piezo-ICSI の今後の展開と有用性」

当院における Piezo-ICSI の運用

佐藤 学
IVF なんばクリニック
生殖技術部門技師長

略 歴2003 年

弘前大学大学院農学研究科修了修士（農学）IVF 大阪クリニック入職
2006 年 近畿大学生物理工学研究科入学（博士課程）2007 年 生殖補助医療胚培養士資格取得
2009 年 近畿大学大学院生物理工学部研究科修了博士（工学）2012 年 生殖補助医療管理胚培養士資格取得
2020 年現在 IVF なんばクリニック生殖技術部門技師長

顕微授精（ICSI）は生殖補助医療において今や必言うまでもない．当然のことではあるが Piezo-ICSI のシ須の技術であり，ICSI の技術や成績は医療施設のレステムと特性を十分に理解して運用することが必要で，ベルを示すインジケーターの一つとも言える．ICSI の手

不十分であると成績の低下を引き起こすことになりかね

法は Conventional-ICSIとPiezo-ICSI に大きく分けない．特にパルスの設定，パルスの「効き」，セッティン

られる．以前からPiezo-ICSI は生殖補助医療の現場

グは重要であって単純に Piezo-ICSIはとりあえず「やれで活用されてきていたが2010 年代から国内で広く普及ばできる，簡単」というものではないことは念頭においてした印 象が強い．当 院でも 2011 年に Piezo-ICSIをおくべきであると考える．発表ではこれまでの運用の経導入して 9 年ほど経過している．国内のその当時の状緯と結果，注意点について述べたい．

況は団塊ジュニア世代が治療を受ける中心となり，体外受精件数は増加の一途をたどるとともに治療を受ける患者の平均年齢も上昇し，高齢卵子の品質低下への対処が必要であった．そこでダメージの少ない Piezo
パルスを用いて「優しい ICSI」を行うことで成績の低下を防ぐ一手とならないか，というモチベーションで PiezoICSIを導入した．また，全面的に Piezo-ICSI に変更
するのではなくオプションとしてスタートし，現 在ではConventional-ICSIとPiezo-ICSI の 実 施 比 率 はほぼ 1：1 である．Piezo-ICSIとConventional-ICSI での受精率にほぼ差はなく，どちらかが適正と判断される症例の場合は医師と相談のもとで ICSI の方法を選択する場合があるが，指定がない場合はランダムに選択して実施している．
当 院 の Piezo-ICSI の 受 精 成 績は ConventionalICSIと同等であった．培養成績も同様である．PiezoICSI の利点は確実な精子不動化と透明帯と細胞膜の穿破ができること，そのステップが機械化され設定が数値化されていることであると考えている．ConventionalICSIが Piezo-ICSI に比べ劣っているとは考えておらず，
成績に違いがあれば何かしら課題が残っていると判断す
ることも一つの考え方ではないだろうか．ただし，その課題を克服するために Piezo-ICSIが糸口になるのであれ
ば，Piezo-ICSI への変更が解決法の一つであることは58日本臨床エンブリオロジスト学会「Piezo-ICSI の今後の展開と有用性」

Piezo-ICSI の原理と有用性（基礎分野の経験的立場から）

堀内 俊孝
おち夢クリニック名古屋
先端生殖医学研究所所長

略 歴1977 年
1982 年
1983 年
1984 年
1988 年
2005 年
2020 年
2020 年

広島大学水畜産学部卒業
東北大学大学院農学研究科博士課程修了，農学博士
宮城県畜産試験場技師（1988 年 3 月まで）
ハワイ大学医学部生殖生物学（柳町研究室）留学（1 年）
広島農業短期大学講師（2002 年 3 月まで）
県立広島大学生命環境学部教授（2020 年 3 月まで）
県立広島大学名誉教授
おち夢クリニック名古屋先端生殖医学研究所所長（現在に至る）

これまでに，ウシの Piezo-ICSI による受精と胚発

卵細胞膜を破ることができるのか？

ピペット先端生の研究を行い，ピエゾ・マニピュレータシステム

を透明帯表面に接触あるいは少し隙間をあけてピエの構築，フロリナートシステムへの移行を経験し，ゾをかけることで透明帯にスリットが入る．ピエゾ

その過程において多くのことを学んだ．本講演では，パルスをかけながら手動で少しずつ前にピペットを基礎分野の経験的立場から Piezo-ICSI の原理と有用進めることで，透明帯を円筒状にくり抜くことができ，性について，話題を提供する．

くり抜かれた透明帯チップはインジェクションピ

1992 年 Palermo らがヒト精子の卵細胞質内精子注入法（ICSI）による初めての妊娠，出産の成功を報告

ペット内に吸引される．このことはピペット側壁における先端の液流が鋭く動くことを示している．

した．ICSI は，男性不妊症のみならず，IVF の受精障

ピエゾ振動に影響する要因の理解は，Piezo-ICSI で害の症例等に適応が広がり，不妊治療では基幹技術

トラブルが生じるリスクを低下させる．ピエゾ端子となっている．

（発振体）からピペット先端部の距離が短いほど，ピ

ヒト卵子の ICSI では，先端にスパイクの付いたイ

エゾ振動は強くなる．また，PVP 濃度が薄いほどピンジェクションピペットを卵子に突き刺し，卵細胞

エゾ振動は強くなるが，PVP 濃度が薄くなると精子膜を吸引によって破り精子を注入する方法の操作性は低下する．ピペット内のフロリナート量，（Conventional-ICSI: C-ICSI）が広く普及している．近インジェクションピペットの形状やガラスの厚さも年，ピエゾ圧電素子を用いた Piezo-ICSI がヒト不妊影響する．

治療分野でも普及しはじめ，C-ICSI と比べ受精率がPiezo-ICSI は，そのシステムの構築に少し時間がか高く，変性率が低いことが報告されている．さらに，かるが，ヒトの不妊治療分野において有用な技術で技術的にも簡易で再現性があり，技術者の養成も容あり，さらに普及していくことが期待される．

易である．
ピエゾはギリシャ語で圧力を加えるという意味で，電圧が加えられると伸縮する構成要素が圧電素子である．これは，入力されたエネルギーを物理的運動に変換し能動的に駆動するアクチュエータに利用されている．当初は，マイクロマニュプレータの自動化システム開発の一環として圧電素子を用いた細胞操作用マニュプレータの開発が行われた．
現在のPiezo-ICSIは，
1995年のKimura&Yanagimachi
によるマウスICSIの報告からはじまり，多くの動物種で使用されている．Piezo-ICSI は，C-ICSI と異なり，インジョクションピペットの先端は平坦である．なぜピペット先端が平坦でありながら透明帯をくり抜き，
59

Evening Seminar

Euploid 時代の着床不全対策

中川 浩次
杉山産婦人科 院長

略 歴1990 年３ 月
５月
1996 年４ 月
2000 年４ 月
2001 年４ 月
2002 年５ 月
2008 年４ 月
2018 年１ 月
現在に至る

自治医科大学卒業
徳島大学医学部産婦人科にて研修開始
徳島大学医学部産婦人科医員
徳島大学医学部付属病院助手
愛媛県立中央病院産婦人科医長
国立成育医療センター不妊診療科医員
杉山産婦人科生殖医療科
杉山産婦人科院長資格
医師免許（1990 年），学位取得（2000 年），生殖医療専門医（2007 年），
産婦人科内視鏡技術認定医（2008 年）

移植可能な胚を 3 回以上移植しても着床しない場合一つである．我々の施設では，RIF の場合は子宮内膜

は， 体 外 受 精 反 復 着 床 不 全（repeated implantation

組織検査で CE の有無をチェックしている．CD138

failure; RIF）と定義され，その原因は多岐にわたると陽性細胞が 10 視野で 5 個以上認めれば，「陽性」と判考えられる．明らかな原因が見つからなかった際に断し，5 個以下になるまで，徹底的に抗生剤による治は，我々は通常，胚の染色体異常が原因と，胚因子療を実施する．

を RIF の原因としてきた．

免疫学的拒絶のチェックは，以前から使用してい2020 年に日本産科婦人科学会の PGT-A 臨床研究がる 1 型ヘルパー T（Th1）細胞と 2 型ヘルパー T（Th2）開始され，RIF 症例に対して euploid 胚を移植するこ細胞の比（Th1/Th 2 比）を用いて行っており，Th1/とが可能になった．このことは，医療者や患者自身

Th2比が基準値以上を示す症例に対して免疫抑制剤でに“ほぼ着床する胚を移植している”つもりにさせる．

あるタクロリムスを用いて治療を行っている．最近

しかし，日本産科婦人科学会の PGT-A パイロット研までの成績では，症例あたりの妊娠率は 47.2％であっ究のデータからは，日本人の場合でも約 30％の症例た．投与するタクロリムスの量に関しては，既報

は着床しないことが明らかとなった（Euploid 胚の妊（AJRI 2015）の基準に従って 1 〜 4mg/ 日の範囲で

娠率は 70.8％）．つまり，この 3 割の症例に対して，行っているが，最近はタクロリムスの血中濃度を測

説得力のある説明が求められるようになった．この定し管理している．タクロリムスは服用後速やかにような時代だからこそ，RIF の原因としての胚以外の最高血中濃度に達し，さらに半減期が 24 時間を超え因子の抽出，正しい評価と対策が求められてくる．

ているため，1 日 1 回の投与で効果は十分に期待でき

本講演では，好ましい着床環境を作るためのプロゲると考えている．

ステロンの役割，RIF の原因とて注目されている慢性上記以外は，VitD の低値，潜在性甲状腺機能低下，

子宮内膜炎（CE）の管理と対策，免疫学的着床不全の等を比較的頻度の多い RIF の原因として挙げることが対策について当院での取り組みを中心に述べることでき，これらを補正することで多くの RIF 症例を解決とする．

することが可能と考える．現在進行中の日本産科婦

受精卵は移植免疫学的には“semi-allograft”である

人科学会の PGT-A 臨床研究が終了した後は，「Euploid

ため，移植される側（女性）の免疫担当細胞から攻撃胚の移植」が当たり前の時代が到来する．妊娠しないを受ける（拒絶反応を惹起する）可能性があることは理由を胚のせいにできなくなることにより，我々臨容易に想像がつく．しかし，通常はプロゲステロン

床医にとっては，益々厳しい（いや燃える！）時代がの免疫抑制作用（免疫寛容）により，これらの拒絶反

もう目の前に迫っている．

応は減弱され，受精卵は子宮内膜に着床することができる．黄体補充にプロゲステロン製剤を使用することで理想的な免疫寛容状態を惹起できると考える．
慢性子宮内膜炎（CE）も，確認しておくべき原因の60

ART 医療者が知るべき患者へのメンタルサポート

ART 医療者が患者からの信頼を得るための何気ないかかわり
平山 史朗
東京 HARTクリニック
生殖心理カウンセラー（公認心理師・臨床心理士）

略 歴1993 年 広島大学教育学部心理学科卒業
1997 年 広島 HART クリニック常勤心理カウンセラー
1998 年 Center for Reproductive Psychology（San Diego, CA)にて生殖心理カウンセリングの研修を受ける2001 年 厚生科学審議会生殖補助医療部会委員（〜 2003 年）
2002 年 東京 HART クリニック生殖心理カウンセラー（現職）2013 年 厚生労働省不妊に悩む方への特定治療支援事業等のあり方に関する検討会委員
資 格
生殖心理カウンセラー，公認心理師，臨床心理士，家族心理士 他
所属学会 日本生殖心理学会（副理事長），日本家族心理学会（代議員），日本心理臨床学会，
日本受精着床学会，日本生殖医学会，アメリカ生殖医学会（メンタルヘルス専門家
グループ），欧州生殖医学会（心理学 & カウンセリンググループ） 他
著 書 「妊活に疲れたら，開く本」（主婦の友社）他「こころのケア」というと専門的な心理支援を想像

断の努力を要する．

する医療者も多いと思うが，実は日常的なかかわり

生殖医療を利用する患者が望む医療者のかかわりの中にこそ患者からの信頼を得，この施設に通ってとして，患者と「向き合って」「親身になって」「話を聞よかったという患者満足を向上させるポイントがあいてくれ」「安心させてくれる」ということがよく言わる．ESHRE の心理学・カウンセリング専門グループ

れる．しかし具体的に“どうすれば”患者がそのようが発表した「不妊とMAR(医療的に補助される生殖)にに感じることができるのかについては言及されるこおける日常的な心理社会的ケア―生殖医療スタッフとは少ない．ともすればお題目のように「受容と共感のためのガイド」（2015）は，心理支援の専門家でなが大事」と言われてしまい，これでよいのかと悩みな

い生殖医療スタッフが日常臨床で留意すべき患者へ

がら日々の診療で患者に接している医療者も多いとの心理支援についてエビデンスベースでまとめられ思われる．本講演では，心理支援の専門家でない医た世界初のガイドラインである．ここで推奨されて療者が，負担なく日常臨床に取り入れることで患者いる心理社会的ケアには，待ち時間を短くすることとの関係の質を向上させるかかわりについて，できなどの環境的配慮等に加え，スタッフのコミュニケー

るだけ実践的に解説したい．

ションスキルの重要性が記されている．日常における何気ないかかわりこそが医療者が行うべき心理支援の大きな柱であることを自覚すべきである．
しかしながら，現実的に忙しい日々の診療の中で個々の患者とかかわることは容易ではない．まず患者との間に関係を結び，患者の訴えを聴取し，その中から必要な情報を分析し，的確な診断のもとに治
療法の選択肢を提示し，患者治療の同意を得てその治療のために必要な医療行為を指示し実施する，これらを効率よく短時間のうちに行わなければならない．また，生殖医療は成功よりも不成功の機会が多く，治療期間の予測も最終的な目標である妊娠の保証もできないという医療不信を招きやすい性質を本質的に内包している．しかも悪性腫瘍のように致死性でない疾患ゆえに患者の治療への動機づけを保つことも難しく，治療のドロップアウトや患者側からの転院などが起こりやすく，患者と良好な信頼関係を保ち妊娠まで治療を継続させることには医療者側の不61

タイムラプスシステムと AI 技術の融合（日本語解説）

TLC, IT and Artificial intelligence

Simon Cooke
IVF Australia, Sydney,
Australia,

Simon is the Scientific Director of IVFAustralia, and is responsible for 7 Embryology
and 11 diagnostic Andrology laboratories.
Working in and overseeing the management of embryo and sperm laboratories since
1992, Simon has also driven multiple automation projects within the IVFAustralia
labs, from Automated Semen Analysis, to the new Artificial Intelligence technology
allowing the best embryo to be selected from the patient’s cohort, with the aim toshorten the time to pregnancy.

For two decades, almost all clinics in the world

systems, which mostly revolve around the ability

have used a variation of the original Gardnerfor AI to differentiate between embryos of differing

1）alpha-numeric blastocyst grading methodology ,morphology 5）. Laboratory methods, and mostto try and determine which blastocyst should be

importantly the usage and degree of automation

ranked higher than the rest of the cohort, and beof AI will be discussed, and the differences

selected for embryo transfer. Some manufacturers

explained, and compared to published accuracies.

have tried to improve on this with inbuilt

An exciting new era of embryo assessment based

annotated algorithms , with other independent

on pure mathematics and proof has alreadyauthors demonstrating their own in-house

begun.

2）algorithms have limited use . The time taken for3）

lab staff to perform these annotation processes（particularly in large labs）, whilst reducing theintra-observer errors during annotation is a major
drawback, and has fueled the desire for fullautomation.
As systems move away from using 2D static
images, and into 3D and 4D decision making, andwith the advent of timelapse incubators with
operating software that captures huge amounts ofdata, the next challenge is“how to manage andanalyse”these mountains of new data. This has
pushed researchers into the area of complex
mathematics and computer modelling, and into
the world of Artificial Intelligence（AI）to build
accurate models that are independent of labs,
countries, patient age and culture medium used.
Indeed, the world’s first automated timelapse AI
analysis system that can accurately predict the
fetal heart potential in a cohort of blastocysts withan AUC of 0.93 has recently been published4）.
Deep learning has also been used in other621）Gardner et. al.（2000）. Fertil Steril 73: 1155–1158.
2）Petersen et. al.（2016）. Hum Reprod 31: 2231-2244
3）Storr et. al.（2015）. J Assist Reprod Genet 32: 1151-1160
4）Tran et. al.（2019）. Hum Reprod 34: 1011-1018
5）Khosravi et. al.（2019）. Npj Digital Medicine 21: 1-8

Piezo-ICSI は新時代の顕微授精法となり得るか（日本語解説）

With PIEZO into the future of ICSI

Csaba
Pribenszky
Associate professor,
principal investigator andsenior lecturer atUniversity of Veterinary
Science, Hungary

Csaba Pribenszky obtained his PhD at the University of Veterinary Science,
Budapest, Hungary and worked as senior researcher and lecturer in different
ART research institutes in Brasil, USA, France, Denmark and at numerous ART
labs worldwide. He published the birth of the first baby where a single embryo
was selected via time-lapse. His research led to the development of the firstcommercially available time-lapse system for the routine. His team has publishedthe first protocols for the stress-preconditioning of gametes, embryos and stem
cells. His main research areas include time-lapse imaging, embryo selection, cellstress, cryopreservation and new technologies for ART. He is an assoc prof at the
University of Veterinary Science, Budapest and a senior researcher at Vitrolife AB
Sweden.

A recent meta-analysis has summarised thecytotoxic and is an obstacle for the safe use,

data from 9 studies and compared the laboratory

further registration and widespread of theresults of ICSI with or without piezo. The data oftechnique.

17584 fertilisations showed a significant increase

A new operating liquid have been developedof 2PN and blastocyst rates and a decrease inthat is completely free of toxic impurities andoocyte degeneration if piezo-ICSI was used forconstituents. The studies show zero cytotoxicity

fertilisation. Nevertheless, the studies are mainly

and an improved efficacy in the piezo ICSI

retrospective ones so proper randomised trials areprocedure. The standardised piezo-ICSI procedureneeded to support these findings. The major

together with the use of the medical operatingteaching of the studies however is that the piezo

liquid ensures a significant leap in the ICSI

technique lays the foundations of standardisingtechnique benefiting both patients and clinics.

the ICSI procedure by significantly simplifying the
movements and by eliminating the need foroolemma aspiration.
The preparations for piezo-ICSI include thebackfilling of an operation liquid into the injecting
microcapillary. The application of the operating
liquid is fundamentally important as it ensures thesafe and effective piercing procedure andminimizes oocyte degeneration. It stabilizes thelateral vibrations of the pipette tip, intensifies axial
vibrations and generates a slight vacuum inside of
the capillary. First mercury then fluorocarbons andfluoroethers (from the Fluorinert and Novec
families by 3M, USA) have been used for piezoICSI. They contain a mixture of fully fluorinatedcompounds together with a fraction ofunderfluorinated impurities. The unidentified
constituents of Fluorinert and Novec and theimpurities coming essentially from their
manufacturing process poses a risk for the safe
operation as these substances are severely63Luncheon Seminar

月経困難症に対するホルモン治療～オフィスギネコロジーと不妊クリニックを繋ぐために～
奥 久人
茶屋町レディースクリニック
院長

略 歴1999 年
2002 年
2004 年
2005 年
2006 年
2014 年

兵庫医科大学卒業
兵庫医科大学大学院卒業
宝塚市立病院
パルモア病院
倉敷成人病センター
健康保険組合連合会 大阪中央病院
現職

日本産科婦人科学会専門医，日本産科婦人科内視鏡学会技術認定医・技術認定医審査委員

近年，女性のヘルスケアへの注目とともに女性医療は急速に進歩している．

やすくなったことがある．また，高血圧や片頭痛・
50 歳以上等 OC ／ LEP 製剤の禁忌であった多くの症

当クリニックは，大阪の交通的要所となる梅田か

例に対し治療が可能になった．価格的にも LEP 先発

ら徒歩圏内にあり，更年期や月経困難症，性感染症，製剤と大差はなく使えることもメリットと思われる．

低用量経口避妊薬等の扱いなどに特化した，オフィ

当院では，2020 年 8 月 15 日現在 69 名に処方（平均

スギネコロジーといわれている領域にあたる．患者

35.6 歳：20-55 歳）し，①前兆を伴う片頭痛 26 名，

層は 13-60 歳と幅は広く，婦人科領域の窓口になる②年齢を考慮した者 20 名が LEP 製剤を使用しなかっクリニックと考える．中でも，この数年急増していた理由として多く，その他にも高血圧や血栓素因保るのが月経困難症や PMS，不順等，月経にまつわる因者など LEP 禁忌症例への投与を認めた．投与期間

トラブルの受診である．これらの症状には子宮内膜が数か月のため薬効への効果の報告は難しいものの，症や子宮筋腫等の疾患が背景に潜んでいることも多使用している印象としては治験データと概ね差異はく，医療介入初期の診断が非常に重要である．当クない．

リニックは 4 名の内視鏡外科医を有し，それら妊孕性

しかし，我々は疾患コントロールに関しては経験にかかわる疾患の薬物療法及び手術時期の相談に強を有するが，不妊治療に関する経験は乏しい．その為，みがあるのが特徴となる．

妊娠を考える際には適切な時期に専門施設への紹介

月経困難症や子宮内膜症・子宮筋腫に対する治療を要することが多くなり，我々クリニックと不妊専

は急速に進歩し，LEP 製剤，ジエノゲスト 2mg 投与

門機関とのより密な連携が必要と考える．子宮内膜（1mg 錠× 2 ／日），GnRH 製剤，レルゴニクス錠，レ症や子宮筋腫の手術相談に関しては不妊治療の進捗

ボノルゲストレルキット等の様々な治療薬が使用さ状況を踏まえ適切に相談できる環境を築き，手術施れるようになった．一番大きな変化は，器質性月経設とも連携をできればと考えている．

困難症に対する，『婦人科特定疾患治療管理料』の加何よりも，子宮内膜症や子宮筋腫は妊娠・出産後算が可能になったことである．我々は，患者年齢やも継続管理が必要であり，産後の管理を含めた医療

生活背景などを考慮しつつ薬剤選択（OC ／ LEP の種

施設間の連携を築けることを願う．

類選択等）を行う．しかし，月経困難症に対するこれまでの薬剤には，薬物の禁忌・年齢や使用期間の制限等多くの制約があり，薬物選択に悩む症例も存在した．
今回，ジエノゲスト 1mg 投与（0.5㎎錠× 2 ／日）の認可（2020 年 5 月）で，さらに月経困難症に対する治療の幅が広がった．薬剤の特徴として，従来のジエノゲスト 2㎎投与と比べ血中のエストラジオール濃度が 80-100pg ／ ml 程度維持され，若年者に使用し64今後の日本の ART 医療の方向性

日本の ART が目指すべき方向性

福田 愛作
IVF 大阪クリニック
院長

略 歴1978 年 関西医科大学卒業
1978 年 京都大学産婦人科研修医
1984 〜 1988 年 京都大学大学院
1989 年 京都大学医学博士
1990 年 米国東テネシー州立大学医学部産婦人科准教授
1996 年 米国バイオアナリスト協会（ABB）資格（HCLD）取得（日本人唯一）
1998 年 IVF 大阪クリニック勤務
産婦人科専門医，生殖医療専門医，日本産婦人科学会倫理委員会PGT-Aに関する小委員会委員，
日本産婦人科学会生殖内分泌委員会 POI に関する小委員会委員，関西医科大学非常勤講師
受 賞
米国不妊学会賞（ASRM，
1992年），関西医科大学同窓会賞（1993年），SIGMA 科学写真賞（1998年），
日本受精着床学会世界体外受精会議記念賞（2000 年）
所属学会，研究会（役職）日本受精着床学会理事，日本臨床エンブリオロジスト学会顧問，日本 IVF 学会常務理事，
日本レーザーリプロダクション学会名誉理事長，JAPCO（日本 PGD コンソーシアム）世話人

昭和 53 年（1978 年）に体外受精は Robert Edwards博の治療であり，すべての不妊症はこれで解決されると期待

士（生物学者）とPatrick Steptoe博士（医師）の二人の力でされた．ところが，男性因子に対しては無力であった．

誕生したというのが定説である．しかし，その他にもJeanICSI の登場で男性因子の部分は補完された．しかし，高Purdy 女史や Barry Bavister 博士の存在が無ければ起こり

齢不妊患者の増加も相まって，やはり妊娠に至らない症例えなかった．顕微 鏡下に世界で初めて2 前核期受精卵が依然として多数出現している．そこに救世主として現れ（2PN）を観察したのはPurdyである．Purdyが実体顕微鏡たのが PGS（PGT-A）であった．PGT-Aの知見が海外で蓄下に 2PNを見て驚き「Edwards博士！受精してますよ，見て積されることにより，PGT-A がオールマイティーでないこと，ください！」とEdwards に声を掛け Edwardsが 2PNを確

それと同時に現在のARTの弱点が浮き彫りにされた．

認した．Edwardsは1968 年にヒトの胚盤胞培養に成功しこの事実を踏まえ日本のARTの目指すべき方向性を私のているが，Bavister の 協力を得て初めて成 功している．

経験をもとに考えてみた．卵巣刺激には標準的なプロトコー

1990 年にイギリスで行われた世界で最初の PGD 成功例

ルは存在するが，ゴナドトロピンの日々の投与量調節やアは，伴性劣性遺伝性疾患（男児の発症率 50％）の児をもつ

ンタゴニスト開始のタイミング，採卵決定のタイミングなど可能性のあるカップルに対して，発症率の低い女児の受精すべて担当医の腕にかかっている．採卵や胚移植の技術は胚を選別する方法であった．この方法を提案したのが当時医師により大きく異なる．培養室においても，卵子の皮む培養士であった Alan Handyside博士である．即ち，体外きの技術，媒精，ICSI による受精率，胚の発育率．タイ

受精には多くの人々の協力が必要であるとともに胚培養士

ムラプスで自動化が普及しても培養士の感性によりその成の力が不可欠である．体外受精の生みの親 Edwardsは「胚

績は大きく異なる．即ち，人的要因がARTではその成績をは病気や異常の発見や治療にとって，医療・医学の対象そ大きく左右することになる．

のものである」と述べている．現在この言葉通りのことが生
殖医療の中で起こりつつある．

第三者を介する医療については日本では禁止されているが，解禁されたとしても日本人の国民性から海外ほどの増日本では1983 年に初めての体外受精成功例が報告され， 加はないと考えられる．この事実が困難症例に対する克服
奇しくも平成元年（1989 年）から日本産婦人科学会のART方法を探求する要因ともなっている．

統計グラフが公表されるようになり，同じく令和元年（2019

私は，ART（生殖補助医療）はART（芸術）だと考えている．

年）から条件付きではあるが PGT-A（従来 PGSと呼ばれて医師，培養士一人一人が感性を磨き，日々神経を研ぎ澄ませいた着床前スクリーニング）が可能となった．昭和から平て，生殖医療に勤しむことが，日本のARTの目指すべき方成を経て令和時代に突入し，日本でも世界標準の生殖医

向性だと考えている．AIを用い様々な機器が開発されても，療が可能となったと言える．

結局はヒトの手で行われる部分が，ART 臨床成績のボトル

日本で開始されたばかりの PGT-Aについて，世界では既ネックとなっている．生殖においても最高の職人技を可能とに多くの知見が集積されている．IVF 開始当初はIVFが夢するのが，日本人の生まれ持った特性ではないかと考えている．

65

今後の日本の ART 医療の方向性

日本の ART 医療の方向性 -10 年後を見据えて-

塩谷 雅英
英ウイメンズクリニック理事長

略 歴1985 年 3 月
1988 年 9 月
1994 年 4 月
2000 年 3 月

島根医科大学卒業，京都大学医学部婦人科学産科学教室
京都大学医学部婦人科学産科学教室医員
神戸市立中央市民病院産婦人科医長
英ウィメンズクリニック開設

医学博士（京都大学），日本産科婦人科学会専門医 ･ 指導医，日本生殖医学会生殖医療専門医，
臨床遺伝専門医，日本臨床細胞学会専門医
日本 IVF 学会理事長，生殖バイオロジー東京シンポジウム世話人，日本受精着床学会評議員，
日本卵子学会理事，日本生殖心理学会理事，日本生殖発生医学会理事，日本レーザーリプロ
ダクション学会副理事長，日本生殖医療支援システム研究会副理事長，JISART 副理事長，
日本生殖医学会代議員，近畿産婦人科学会内分泌 ･ 生殖研究部会委員，兵庫県産婦人科学会
学術委員

新たな時代（New ERA）の ART 医療を予測するこできないかどうか考察したい．

とは簡単ではない．我々は，急速な進化を遂げてき「調節卵巣刺激法」10 年前，当院ではショート法をた ART 医療の足跡を過去に遡って振り返ることで，選択するケースが最も多かった．しかし 2 年前から調未来へのヒントを見出せるのでは無いかと考えた．

節卵巣刺激法は一変し，今やショート法やロング法

今回の講演では，胚培養室（技術），妊孕能温存治療，を選択するケースは非常に少なくなり，主流は PPOS

男性不妊治療，調節卵巣刺激法，そして ART の負の法となった．このように過去 10 年で様変わりした調側面としての一卵性双胎や癒着胎盤の予防などにつ節卵巣刺激法であるが，さらに 10 年後のあり方について，過去と現在を比較し，この対比を通して 10 年

いて予測してみたい．

後の ART 医療を予測してみた．

「妊孕能温存治療」卵子凍結による出産は 1986 年に，「胚培養室（技術）」10 年前，加湿型培養庫がところ

そして卵巣組織凍結による出産は 2004 年に報告され狭しと並べられていた培養室には，いまやタイムラ

た．今や卵子凍結は確立された治療として認められプス型培養器が整然とならび，胚培養士のワークフている．2012 年には日本がん生殖医療学会設立，そローは一変した．精液検査はカウンターを用いて目して 2017 年には日本がん治療学会がガイドラインを視をしていたが，CASA による自動検査となっている．

発行するなど，がん患者の妊孕能温存治療は確立し精液調整は遠心分離を必要としない方法にシフトしつつあるように思える．この間には，Random-Start

つつある．Conventional ICSI は PIEZO ICSI にとっや Duo-Stimu などの卵巣刺激法の工夫もあった．10て代わられつつあり，取り違え防止はマンパワーを年後のあり方についても予測してみたい．

活用したダブルチェックからバーコード認証システ「 男 性 不 妊 治 療 」精 子 の 発 見 は 1677 年 に 遡 る．

ムになった．この 10 年の進化には目を見張るものが1993 年には精巣精子による出産が報告された．今やある．

1 個でも精子があれば挙児の可能性が開けている．今「一卵性双胎や癒着胎盤の予防」過去 10 年における後はより良い精子を確保，あるいは選別することの当院の一卵性双胎発生率は 1.5% と自然妊娠に比べお重要性が増して行くことであろう．10 年後の男性不よそ 2 倍の頻度であった．一卵性双胎は早産や TTTS

妊治療のあり方についても予測してみたい．

のリスクファクターとなり，周産期予後に悪影響を及ぼす．10 年後の ART には一卵性双胎を無くす工夫が求められる．ART で発症率が高まると懸念される
癒着胎盤も周産期予後を左右する重要な疾患である．
当院における過去 10 年間の凍結胚融解移植後妊娠の癒着胎盤発症率は 1.9% であり，自然妊娠よりも高いものであった．癒着胎盤のリスク因子を解析することで，10 年後の ART ではその発症率を下げることが66

今後の日本の ART 医療の方向性

私が考える ART 医療

吉田 淳
木場公園クリニック院長
つくば木場公園クリニックCEO略 歴
愛媛県松山市生まれ 59 歳 男性
1986 年 3 月 愛媛大学医学部卒業
1986 年 5 月 東京警察病院産婦人科
1991 年 8 月 池下レディースチャイルドクリニック
1992 年 4 月 日本産科婦人科学会専門医
1993 年 10 月 高度医療研究所・中央クリニック非常勤医師
1994 年 7 月 東邦大学医学部第一泌尿器科学講座特別大学院研究生
1997 年 11 月 医学博士（男性不妊症と染色体異常）
11 月 日本不妊学会賞受賞
1999 年 1 月 木場公園クリニック院長（不妊センター）
生殖医療専門医（2007 年 4 月），臨床遺伝専門医（2009 年 10 月）
産婦人科医，生殖医療専門医，臨床遺伝専門医，MBA

私は，今回の日本 IVF 学会開催地である広島市の瀬戸内海を挟んで対岸の愛媛県松山市の出身で，父親の源流を辿ると，村上水軍の末裔で，小さい頃は，瀬戸
内の海や島々を眺めるのが大好きでした．
女性・男性不妊症の両方を一人の医師が診察・治療とできるような，リゾートに来ているような癒しの空
間作りを心がけました．
私の頭の中のトータルイメージは，外はサンフランシスコ近郊にあるワインで有名なナパバレー，中はシリコンバレーです．

できる施設として，1999 年に都市型のビル診察の木

建物はワイナリーの中にあるイメージで，一人目不場公園クリニックを東京都江東区で開業して，約 22

妊治療側の階段とテラスは，国際空港の駐機場が見え年が経過しました．

るラウンジのイメージです．

ART は生き物だとよく言われますが，ART に関する技術は日進月歩で進化を続けています．
開業当時は 2 日目や 3 日目の初期胚移植が主流でし

一人目不妊治療と二人目不妊治療の入り口を建物のみでなく，駐車場の入り口からセパレートしました．
また，セキュリティ度を高めるために，駐車場と建たが，培養液が進化し胚盤胞到達率が高くなったため， 物の入口は患者様のスマホに表示した開錠用 QR コー
5 日目や 6 日目の胚盤胞まで培養することが多くなりました．
また，胚凍結の方法もプログラムフリーザーを使用
した緩慢凍結法を行なっていましたが，現在は超急速ガラス化法が主流となりました．
胚はインキュベーター（培養器）で培養され，胚を観察するときは培養器から外に出して顕微鏡で観察していましたが，現在ではカメラ付きの培養器（タイム
ラプスシステム）が開発され，器械が10分毎に胚を自動で観察するため，胚を培養器から外に出さなくてよくなりました．
このように医療技術は進化しましたが，不妊症の患

ドを使用した電子Keyを採用しました．
患者様に安心して体外受精や顕微授精の治療を受けていただくために，患者様がガラスを通して培養室内が見える，オープンな培養室を作りました．
日本で，ART を受けている患者様の約半数は 40 歳
代です．
卵子や精子は，患者さん自身の体から作られている
ため，いい体づくりは必修です．
レーザー療法，鍼灸治療，整体など多方面から患者様にアプローチをする必要があります．
また，食事，睡眠，運動などの生活習慣の見直しも大切です．

者さんが受けているストレスは以前と変わっていません．

すべての患者様に妊娠していただき，子供を家に連

昨年 12 月に郊外型の不妊治療専門施設として，茨れて帰って欲しいと考えて医療を行っていますが，す城県つくば市につくば木場公園クリニックを二か所目のクリニックとしてオープンしました．

べての患者様が妊娠できないのが現実です．
妊娠が出来ずに不妊治療を卒業する時に，患者様がメインコンセプトは，ART RESORT®構想です．

納得できる不妊治療を受けることが出来てよかったと

建物や木などのランドスケープ全体で，高いストレ感じられる生殖医療を我々は提供し続けなければならスを受けている不妊症の患者様が来院された時にほっないと思います．
67

一般演題〔口頭発表 〕
O-1

タイムラプスインキュベーターの導入により培養室業 務の負担が減るのか

山田 悠太 1），樽井 幸与 1），入江 真奈美 1），水野 里志 1），
福田 愛作 1），森本義晴 2）
1）IVF 大阪クリニック
2）HORAC グランフロント大阪クリニックを D 群，自動化タイムラプスインキュベーター Geri+/Geri Assess®2.0（メルクバイオファーマ社，以下 Geriとする）で培養した群を T 群と定義し，両群間で下記のデータを比較した．まず，受精確認あるいはDay 5 において，卵あるいは胚1個当たりの観察からデータベースに登録するまでの時間をそれぞれ D 群とT 群で比較した．次に，両群の1周期当たりのランニングコスト（培養液を含む培養に必要な消耗品と点検費を含めた維持費の合計）を比較した．なお，ランニングコストは，周期当たりの培養ディッシュの使用は 1枚，年間稼働率80％の条件で
算出した．
【結果】
受精確認に要する時間は，胚１個あたりD 群が 72.4±6.9秒，T 群が【目的】

88.4±23.9秒とT 群が 16秒ほど多くの時間がかかった．観察時間の検近年，タイムラプス付インキュベーターが広く導入され，その有用性

討については，胚１個あたり総処理時間において D 群が 40.8±2.2秒，が報告されている．インキュベーターの性能を評価するうえで，培養成T 群が 35.7±3.6秒と T 群のほうがが５秒ほど多くの時間がかかった．

績や臨床成績だけではなく，胚の培養や観察に必要な労力やランニン

一方，1周 期あたりのラン ニングコストは D 群 が 5196.4円，T 群 がグコストを評価することも重要である．胚培養や観察に関するポリシー

1965.4円であり，T 群が 3231円高くなった．

は施設によってさまざまであり，同じインキュベーターを使用していても，労力やコストの評価は施設によって異なると考えられる．今回我々【考察】

は，タイムラプス付インキュベーターの性能を評価するため，当院の一T 群の方が 1症例あたりの点検費とランニングコストは高くなり，受精

般的な胚培養法であるドライインキュベーターを用いた場合と胚培養・確認の時間で 16秒，観察時の総処理時間で 5秒と差はあったが有意な観察に要する労力とランニングコストを比較した．

差ではなかった．このように今回 Geri が培養室業務の負担を減らす結果には至らなかった．そのため，反復不成功例などの継続的な観察が【方法】

必要と考えられる症例を選び，Geri で培養することが望ましいと考え

今回の検討では，ドライインキュベーター（ASTEC）で培養した群

O-2

KID SCORE™️D5 は 6日目胚盤胞の妊娠率も予測する

塩谷 仁之 1,2），
小林 達也２,3），
杉浦 朝治 1），
明石 佐奈子 1），1）1）1）
岡部 美紀 ，中野 俊 ，山内 久美子 ，小島 勝志 1），
藤田 真紀 1），高橋 敬一 1）
1）高橋ウイメンズクリニック
2）千葉大学大学院医学研究院生殖医学
3）千葉大学医学部附属病院婦人科られた．

た．KIDS D5（ver.3）は Embryoviewer™️（Vitrolife）により算出し，各胚盤胞に最小値1 〜最大値9.9 のスコアをつけた．臨床妊娠は超音波検査による，胎嚢確認により評価した．KIDS D5 によるROC 曲線を
AUC で評価し，臨床妊娠に対する cut off 値を求めた．統計 解析は
JMP Pro 15.00（SAS）にて行った．
【結果】
培養5日目
（D5）と培養6日目（D6）の胚盤胞の KIDS D5平均値はそれぞれ 7.06±1.7（n=162），3.7±1.47（n=72）であり，D6胚 盤 胞の KIDS
D5 は D5胚盤胞と比較して有意に低下した（p<0.0001, willcoxon test）．
ROC 解析の結果，KIDS D5 の臨床妊娠に対するAUC は D5胚盤胞で 0.62（cut off 値は 5.6），D6胚盤胞で 0.72
（cut off 値は 4.9）であった．

【緒言】

D5胚 盤 胞における臨 床妊 娠 率は cut off 値（5.6）以 上の胚で 60.9%

KID SCORE™️D5（KIDS D5）は，胚盤胞の形態学的評価に加え人（78/128），cut off 値未満の胚で 35.3%（12/34）であった．また，D6胚

工知能による解析補助を行うことで，妊娠胚の予測が可能であり，効

盤 胞における臨床妊娠率は cut off 値（4.9）以上の胚で 47.4%（9/19）,

果を予測するarea under the curve（ AUC）の値は 0.6と報告されていcut off 値未満の胚で 7.55%（4/53）であり，D5, D6 の両方で cut off 値

る（Reignier et al., 2019）．しかし，KIDS D5 の開発は，培養5日目

以上の胚盤胞の妊娠率が有意に高値であった（p=0.0075, 0.0001）．ま

胚盤胞を基にしているため，培養6日目胚盤胞の妊娠予測に適している

た，採卵時年齢を考慮した多変量解析の結果においても，KIDS D5か不明である．今回，培養6日目胚盤胞においてもKIDS D5 による胚は D5胚盤胞，D6胚盤胞ともに臨床妊娠率に影響を与えた（p=0.0239,

選択が有効であるという知見を得たため報告する．

0.0127）．

【方法】

【結論】

2019年1月～ 12月に高橋ウイメンズクリニックにて ICSI を施行した

KIDS D5 は D5胚盤胞の妊娠予測に寄与し，さらに D6胚盤胞への146症例234個の移植済み胚盤 胞を後方視的に解析した．体外培養，応用も可能であることが示唆された．KIDS D5 を導入することで，移タイムラプス観察には Embryo Scope+™️（Vitrolife）を用いた．胚盤胞

植成績の向上，効率的な着床前診断候補胚の選択に寄与することがはすべてクライオトップ法（Kitazato）を用いたガラス化凍結にて凍結し期待される．

68

O-3

フラグメンテーション含有率が高い
分割期胚への広範囲な透明帯開口術の試み

岸田 理英，菊地 裕幸，山田 健市，岸田 拓磨，菅野 弘基，
眞山 那美，結城 笑香，吉津 葵，佐々木 郁弥，吉田 仁秋
仙台 ART クリニック

49% が 15個，50% 以上が 1個とし，4 ～ 10cell までの胚を発育状態に差が出ないように配分した．培養はタイムラプスインキュベーター（TL）
を用い，frag の動向や胚の発育過程を観察した．培養開始から72時
間目に 胚 盤 胞 発 生率，Gardner 分 類で 3BB 以 上の良 好 胚 盤 胞 率，
Hatching 率を比較検討した．
【結果】
TL 観察において，開口群の正常発育細胞が開口部から透明帯外へ脱出しながら発育していく様子を確認できた．frag は透明帯内に残存するもの，外に排出されるもの，正常割球に付着したままのものなど様々であった． 胚 盤 胞 発 生 率 は 非 開口 群 で 38.7%（12/31）， 開口 群 で【目的】

32.3%（10/31）となり，有意差は認められなかった．良好胚盤胞率は非胚のフラグメンテーション（frag）発生は，培養環境や染色体異常な開口群で 16.7%（2/12），開口群で 70.0%（7/10）となり，開口群で有意

ど様々な要因が関与していることが知られている．frag は正常割球にに高くなった（p<0.05）．Hatching 率は非開口群で 0.0 %，開口群で悪影響を及ぼし，胚発育を阻害していることが報告されており，frag

100 %となり，開口群で有意に高くなった（p<0.01）．

含有率の高い胚では妊娠率が低下する．一方で，frag 含有率の高い分割期胚から，細いピペットを利用し，frag を吸引除去して培養，移植【考察】を行うことで胚盤胞発生率の向上や，妊娠率の上昇が報告されている．

frag 含有率の高い胚において，培養３日目に広範囲で透明帯を開口す

しかし，frag 除去は高度な技術が必要となる．そこで，レーザーシス

るという簡便な方法で，70.0% の良好胚盤胞率を得ることができた．培

テムを使用し，透明帯を広範囲に開口することで frag が排出され，同

養3日目以降，開口群と非開口群での胚盤胞発生率は変わらず，D3以降

様の効果が得られないかを検証した．

の胚発育に透明帯の欠損は影響しないと考えられる．今回，開口群において良好胚盤胞発生率が高くなった．発育細胞が開口部から透明帯【方法】

外へ移動していく様子が観察されたことから，frag の存在が胚発育を阻患者から同意が得られた培養3日目凍 結廃棄胚を用いた．対象は害している可能性とともに，胚の発育環境が物理的に広がったことが良4cell 以上かつ fragを10% 以上有する 62個の胚とした．融解後に透明好胚の作出に寄与している可能性も考えられた．さらに，非開口群で帯の約半分にレーザーを照射，開口した群を開口群，コントロール群

Hatchingしてきた胚が一つもなかったことから，frag が Hatchingを阻を非開口群とした．両群ともに，frag 含有率が 10-29% が 15個，30-

害していることが示唆された．

O-4

タイムラプス観察による胚盤胞期胚の収縮と臨床成績について

杉浦 朝治 1），小林 達也 1,2），明石 佐奈子 1），岡部 美紀 1），
中野 俊 1），塩谷 仁之 1,2），小島 勝志 1），山内 久美子 1），
藤田 真紀 1），高橋 敬一 1）
1）高橋ウイメンズクリニック
2）千葉大学大学院医学研究院生殖医学講座

での収縮様式について比較検討した．収縮様式は収縮率20-50 ％を
contraction（収縮），50.1％以上を collapse（ 虚脱）とした．
【検討2】ES 観察での gardner 分類による形態評価および形態動的評（以後 KID）（Ver.3）によりスコア化し，良好胚価を KIDSCORE TM D5と不良胚の収縮胚率と収縮様式との関連を検討した．
【検討3】良好胚盤胞（BB 以上）による単一凍結融胚移植を行った，39
歳以下，96症例128周期における胚収縮と妊娠転機について検討した．
【検討4】Gardner 分類 AA に絞って，収縮の影響を 94周期の妊娠転機について検討した．
【結果】

【緒言】
タイムラプス観察（以後 ES 観察）を行うと，ヒト胚盤胞では胚の収縮①胚収縮の頻度は定点観察群8.3%，ES 観察群41％であり，ES 観察により胚収縮の検出率が有意に上昇した（p<0.001）．

が頻回に観察される．収縮胚では非収縮胚と比較して正倍数性胚が少②良好胚と不良胚の収縮胚率は 33％，60％で，不良胚では収縮胚のなく，妊娠能が低下するとされている．本研究では当院の収縮胚率や割合が高かった（p<0.001）．収縮胚の KID は 4.9，非収縮胚で 6.7

妊娠能を検討するために，良好胚と不良胚での収縮胚率と収縮胚の収縮様式を解析した．さらに単一胚盤胞胚移植における妊娠転機との関連を検討した．

であり，収縮胚の KID は有意に低値であった（p<0.001）．
③臨床妊娠率は，収縮群44％，非収縮群69％で，収縮群で有意に低下した（p<0.01）．流産率は収縮群25％，非収縮群10％で差が認めなかった（p=0.09）．

【方法】
ES 観察は 2019年1月～ 12月に高橋ウイメンズクリニック（千葉市）にて ICSI を施行した 734個を対象とした．単一凍結融胚移植の臨床妊娠④ AA 胚に絞った臨床妊娠率は収縮群45%，非収縮群69%で，収縮群で有意に臨床妊娠率が低下した（p<0.05）．流産率は収縮群33％，
非収縮群8％で，収縮群で有意に高かった（p<0.05）．

の検討は 96症例128周期を対象とした．胚盤胞収縮の観察は Embryo
Scope+TM（Vitrolife）によるES 観察で行い，EmbryoviewerTM により【結論】

胚盤胞面積を測定し収縮率（収縮後面積 / 収縮前面積）を算出した．対ES 観察を行うことで収縮胚の検出感度が上昇した．また，胚盤胞

象として実体顕微 鏡観察（定点観察）は IVF または ICSI を施行した

形態，KID は胚収縮と関連する結果であった．また胚収縮は妊娠率，2418個を対象とした．

流産率に影響を与えており，移植胚の選別の際は胚収縮も考慮するこ【検討1】定点観察と ES 観察での胚盤胞期胚の，収縮胚率と ES 観察とで妊娠率を向上させることが示唆された．

69

一般演題〔口頭発表〕

O-5

3PN胚における倍数性解析の検討なったので報告する．
【対象と方法】

後 藤 優 介 1）， 寄 田 朋 子 1）， 渡 邊 華 1）， 田 口 新 1），
原田 祐紀 1），芦川 享大 2），長井 陽子 2），桜庭 善行 2），
向田 哲規 1）
1）広島 HART クリニック
2）Varinos 株式会社

患者から本研究に同意の得られた 3PN 由来胚盤胞のうち，過去にNGS のみの解析で異数性異常と判断されなかった胚6個（A 群），および新たに biopsyを行った胚５個（B 群）について SNV を加えた倍数性解析を行い正確な診断を施行した．本検討の倍数性解析は Varinos 社
において SNVジェノタイピング法により行った．
【結果】

【目的】

倍数性解析の結果 A 群では２倍体が 50％（3/6），3倍体が 33.3%（2/6），

受精判定時に前核が 3個以上確認できる多前核胚については倍数性異常と判断し廃棄となることが一般的である．しかしながら，異常受判定不能が 16.7%（1/6）だった．B 群では 2倍体が 40%（2/5），3倍体が60%（3/5）であり両群において 2倍体の胚が存在した．

精の胚においても培養を継続した場合，一定の割合で胚盤胞への発生を認めることがあり，これらの胚においては 2倍体の胚が存在するとの【考察】報告もある．当院でも過去に本学会（2018）において 3PN 胚を含む多今回解析した 3PN 由来胚盤胞において 2倍体の胚が存在することが前核胚について NGS を用いて解析し2倍体の胚が存在する可能性を報示された．今後3PN 胚も倍数性解析を行うことで移植の対象になりう

告した．しかしながら，一般的な PGT-A に用いられるNGS の解析でることが示唆された．倍数性異常は流産に繋がる可能性が高いだけに，

は正確な倍数性の判定は困難である．そのため今回廃棄予定となった

今後 PGT-A による染色体異数性の解析には，倍数性解析を併用する

3PN 由来胚盤胞に対して，NGS に加えて SNVジェノタイピング法も併ことはとても有用であると考えられる．

用して倍数性解析を行い3PN由来胚盤胞の臨床的有用性の検討をおこ

O-6

DuoStim法により良好な凍結成績を得られた１例

森下 みどり，貫井 李沙，小宮 慎之介，浅井 淑子，
姫野 隆雄，井上 朋子，森本 義晴
HORAC グランフロント大阪クリニック

が流産となり，その後より体外受精を開始した．AMH1.73ng/ml 採卵5回施行するが良好胚盤胞は凍結できず，凍結融解分割期胚移植を2回施行したが妊娠成立せず．6回目の卵巣刺激中に，17mmまで発育した卵胞を認めたが他に 10mm 以下の小卵胞を多数認めたため，Duo
Stim 法での採卵を提案し希望された．hCG 注射を行い，36時間後に主席卵胞1個を採卵．MⅡ卵1個，体外受精で受精，Day3胚1個（Mo）を凍結した．1回目の採卵2日後に診察を行い，HMG 注射とGnRH ア
ンタゴニスト経口薬を卵胞径が 18 ㎜になるまで投与し，1回目の採卵と同様に採卵を行った．採卵数6個，MⅡ卵6個，体外受精で 4個受精，【背景】

Day3胚1個（G1b9），胚盤胞2個（BL4AB,BL4BB）を凍結した．2回目の採卵で良好胚盤胞を凍結できたため，次周期も同様の方法で採卵を近年，不妊治療患者の高齢化に伴い，卵巣機能低下や胚質不良など希望された．1回目の採卵で採卵3個，MⅡ卵3個，体外受精で 3個受精，の要因で採卵するも凍結できない反復不成功患者が増加している．若胚盤胞3個（BL3AA,BL5BB,BL4BB）を凍結．2回目の採卵で採卵5個，年癌患者の妊孕性温存を対象としたランダムスタート法では，採卵数・

MⅡ卵5個，体外受精で 3個受精，胚盤胞2個（BL4BB,BL4BB）を凍

良好胚数，染色体異常率など，通常の体外授精と変わらない結果となっ結した．今後凍結融解胚移植を行っていく予定である．

ている．近年，通常体外受精でも同様に黄体期に卵巣刺激・採卵を行うことで採卵数や凍結胚数が増加すると報告されている．今回，当院にて Duo Stim 法での採卵を行い，良好胚盤胞を凍結できた症例を経験したため報告する．
【症例】
44歳女性．4経妊1経産．43歳時に当院初診，初診後自然妊娠する

70

【考察】
高齢女性での不妊治療では，良好な胚を獲得するのに時間がかかり治療期間が長引く可能性が高い．今回，DuoStim 法を使用することで１回の月経周期での採卵個数・凍結個数を以前の周期と比較して増やすことができた．また，良好胚を凍結できたことにより，治療期間を短くできる可能性もあると思われる．

O-7

タイムラプスを用いた受精操作直後の細胞質収縮による受精予測の試み

山口 桂子，糸井 史陽，藤田 京子，関 友望，藤井 詩子，
池田 沙矢子，佐野 美保
小牧市民病院生殖医療センター

り，受精操作後0.6時間から 0.4時間おきに 3.3時間までを 7区画に区切り比較検討した．
また，2PN 群のうち，第一極体が細胞質の円周上に位置するか否かでの比較や，第二極体放出時間の違いにより収縮率に差がみられるかを検討した．
【結果】
2PN 群における第二極体放出の平均時間は 2.8時間であった．受精
操作後0.6時間から 3.3時間までの細胞質面積の収縮率は，0PN 群で99.8，99.0，98.8，98.3，98.1，98.1，98.0（ ％），2PN 群で 98.8，97.8，
96.8，95.7，94.8，94.0，93.3（ ％）であり，すべての時間において有【目的】

意差がみられた．2PN 群では，時間経過とともに有意に細胞質面積の顕微授精当日にレスキュー活性化処理（ROA）をすることで翌日ROA収縮がみられた．各区間におけるROC 曲線を求めた結果，3.0-3.3時を実施するよりも，受精率が向上するとの報告がある．受精操作当日

間 に お いて カットオ フ 値：97.1 ％， 感 度：0.880， 特 異 度：0.952，に第二極体放出の有無を観察し受精予測を行い，ROAを実施するこAUC：0.94となった．

とがあるが，第二極体の放出が確認出来ない場合，受精予測に時間を要することがある．
これまでに，顕微授精において精子注入後から細胞質が収縮することが報告されており，早期に ROAを実施するための受精予測の基準の一つとして，この現象を応用できないか後方視的に検討した．

また，第一極体の位置については，細胞質の円周上に認めた卵の方がより収縮が観られたものの有意差は認めなかった．第二極体放出時間の違いにおいても，2.9時間以内の卵は 3.0時間以上の卵に比べ収縮が観られたものの有意差は認めなかった．
平均直径を用いた収縮率でも同様の結果が得られたが，細胞質面積での検討に比較し，収縮度合いは少なかった．

【方法】
2018年7月から2020年4月に当院において採卵し，顕微授精を実施し【考察】た成熟卵のうち受精操作後0.5時間以内にタイムラプスにて観察を開始

受精操作後，3.0-3.3時間以内に明らかな収 縮の見られない卵は，した 67症例97周期を対象とした．受精確認にて，第二極体を放出せ翌日受精していない可能性が高く，ROA 実施の判断基準の一つとして，ず不受精であった卵を 0PN 群（25個），正常受精卵を 2PN 群（126個）

細胞質面積の収縮率を応用できる可能性が示唆された．

とし，観察を開始した時点を基準として細胞質面積および平均直径の収縮率を比較検討した．タイムラプスの観察は 20分間隔に設定しておO-8

TLC を用いて胚発達を改善させる
Embryo Plastyの臨床成績の検討

渡邉 華，寄田 朋子，後藤 優介，田口 新，戸水 桐子，
近藤 希衣，原田 祐紀，井上 果咲，飯田 ちひろ，
向田 哲規

解析数が少ないことから今後も継続的に測定し，収縮の見られない卵に対しては，早期に ROA 実施の判断をしていきたい．

確認できた胚のうち胚盤胞まで培養を行った 4831個を対象とした．
検討①：EP 施行の割合とEP 施行胚のうち凍結もしくは移植ができた胚の割合を調べた．
検討②：EP 施行胚1個を移植した 47周期について妊娠成績を後方視的に検討した．妊娠判定は胎嚢（GS）の確認で臨床的妊娠とした．
【結果】
検討 ①：2PN 胚におけるEP 施行の割合は 20.1%（969/4831）であり，
EP 施行胚のうち凍結または移植に供することができたのは広島 HART クリニック

51.9%（503/969）だった．
検討②：移植の内訳はホルモン補充周期（E+P 群）が 16周期（平均年齢39.9歳），排卵周期（OV 群）が 17周期（平均年齢36.9歳），新【目的】

鮮胚移植周期（Fresh 群）が 14周期（平均年齢36.4歳）だった．

近年，ART Labo の現場において胚の培養観察に TLC が多く用い各群における妊娠率は E+P 群31.3%（5/16），OV 群41.2%（7/17），

られるようになってきたが，TLC では基本的に培養観察であり，胚発Fresh 群 7.1%
（1/14）， 流 産 率 は E+P 群 20.0%（1/5），OV 群

達の経過を細かく観察し詳細な情報を胚発達の予測，胚選択に用いる

14.3%（1/7），Fresh 群0.0%（0/1）だった．

という受動的な使用が中心である．我々は経時的観察の中で胞胚腔形成に関係しない遊離割球や細胞割球間の fragmentation（frag）が多く【考察】存在する場合，胞胚腔形成時の細胞割球同士の融合阻害現象や胞胚

EP は全2PN 胚の 20.1% に施行しており，EP 施行胚のうち 51.9% の腔の拡大が阻害される現象を確認した．これを改善する目的で遊離割胚が凍結もしくは移植に供されていた．これより胚発達不良のため移球や frag が接する部分の透明帯を LAH（Laser Assisted Hatching）

植も凍結保存も難しいと判断された胚に EPを施行することで，胚発達により大きく開口することを EmbryoPlasty（EP）と定義し，EP の施行を改善し，着床に繋げることは臨床成績の向上に大きく寄与すること示により胞胚腔拡大に伴って遊離割球や frag が胚外に押し出されることされた．また EP 施行の可否は TLCを用いた細かい胚観察が不可欠でによる胚盤胞発達に対する改善効果を本学会でも報告してきた．今回あり，TLCを用いた胚質改善の試みという能動的利用法である．

EP の臨床的有用性について更に検討したので報告する．
【対象と方法】
2019年6月から2020年8月までに IVF もしくは ICSI を施行し2PN が71

一般演題〔口頭発表〕

O-9

AIを用いた胚画像認識と臨床データ解析の融合による妊娠予測

江夏 徳寿 ，宮塚 功 ，犬伏 美喜 ，古橋 孝祐 ，
山上 一樹 1），大月 純子 1），松本 由紀子 1），苔口 昭次１），
塩谷 雅英１）
1）

2）

1）

1）

1）英ウィメンズクリニック
2）ネクスジェン株式会社【結果】
胚盤胞画像19,342枚のうち17,984枚を教師データとして用いて機械学習を行った後，1,358枚のデータを用いて正確度判定を行ったところ，
正確度62.7％であった．続いて，胚盤胞画像データに年齢，採卵回数，
AMH 等の臨床データを加えて同様に検討を行ったところ，正確 度
65.2%と改善を認めた．一方，初期胚移植のデータを用いた分類学習においては，妊娠陽性，陰性を予測できる有効な画像の特徴をつかめなかった．次に，臨床妊娠と相関の強かった因子について相関度を基に順位付けを行ったところ，胚盤 胞画像（31.0%），年齢（19.7%），妊娠歴（8.6%），AMH（7.7%）の順になった．さらに，胚盤胞画像においてどの 部 位 が 妊 娠と関 連する特 徴 量を有するか可 視化したところ，
inner cell massと trophectoderm それぞれに hot spotを認めている【目的】

ことが確認された．

体外受精において，良好胚を選別して移植することは臨床上重要な意
味を持つ．胚の評価としては初期胚の評価法であるVeeck分類や胚盤胞【考察】の評価法であるGardner 分類が広く用いられているが，必ずしも結果とAI を用いた胚盤胞画像判定は，従来の Gardner 分類による妊娠予

一致しないことも多く改善の余地がある．本研究では大量の胚画像デー

測のベンチマークとされている59.8%を上回っており，現時点で臨床上タおよび臨床データを用いて，受精卵ごとの妊娠率を人工知能（artificial

有用なツールになり得ると考えられた．臨床データを組み合わせて予測

intelligence; AI）によって自動判定するシステムの構築を目指す．

することにより更に正確度が増すことが確認されており，今後のデータの蓄積により更に精度の向上が見込まれる．また，AI がとらえた特徴【方法】

量を可視化できたということは，臨床での使用を想定した際に，結果

英ウィメンズクリニックにて 2011年～ 2019年に採卵，移植を行ったの解釈や説明が容易に行える様になることを示しており，意義深いと考9,961人の臨床データおよび 548,855枚の画像データに匿名加工を施しえられた．今後はタイムラプス動画の情報も解析することにより，膨大

ネクスジェン株式会社とデータ共有を行った．そのうち単一胚盤胞移な情報量をもとに，より正確な妊娠予測が得られる様になると考えて植を行った症例において，臨床妊娠（心拍確認）をエンドポイントとしている．また，妊娠後の経過も解析に加えることによって，生産率や流機械学習を行った．学習の正確度は 10- 分割交差検証を用いて判定し産率も算出可能になることが見込まれ，将来的には現在の着床前診断た．また，予測の因子解析として妊娠と相関の強かった特徴量についに相当する診断を非侵襲的に行うことを目標としている．

て分析を行った．

O-10 卵管膨大部特異的に発現する

Lipocalin-2は精子運動性と受精を促進する

李 周蓮 1），岡本 麻子 1，2）
，島田 昌之 3），山下 泰尚１）1）県立広島大院総合学術
2）倉敷芸術科学大生命科
3）広島大院統合生命科学

卵管膨大部での LCN2 の局在を調べた．実験2. 精巣上体から回収した精子を HTF 培地（Control 区）とLCN2を添加した区（LCN2区）で 0，
30，60分間培養し，受精能獲得の指標であるチロシンリン酸化を検出した．実験3. Control 区とLCN2区で 0，15，30，60，90分間培養した精子を精子運動解析システム（CASA）により運動解析を行った．実験4. Control 区とLCN2区で 60分間培養した精子を用いて体外受精を
行った．
【結果】
実験1. Lcn2 mRNA 発現は NSと比べ hCG 刺激12，16，20h 後の卵管で有意に上昇しており，LCN2タンパク質発現は hCG 刺激16h 後に上昇した．またこの時の LCN2量は NSと比べ有意に増加していた．

【目的】

さらに NS および hCG 刺激16h 後の卵管峡部では LCN2 の発現はほぼ

哺乳動物の受精過程の解明には，卵子と精子のみならず卵管の 3方認められなかった．一方，hCG 刺激16h 後の卵管膨大部の卵管上皮細向のコミュニケーションを解明する必要がある．当グループでは，卵巣胞において LCN2を示す強いシグナルを検出した．実験2. Control 区

内で卵成熟を誘導する因子として同定した Neurotensin（NTS）とそのと比べ LCN2区で 30分間培養した精子においてチロシン残基のリン酸受容体（NTSR1）が卵管にも発現することを見出し，NTS 依存的に卵化を示すバンドが強く検出された．実験3. Control 区と比べ LCN2区管で発現する受精促進候補因子をトランスクリプトーム解析により探索で培養した精子において，精子の運動率（90min）および良好な運動精した結果，分泌型糖タンパク質の Lipocalin-2（LCN2）の発現を見出し

子率（60min）が有意に上昇し，培養90分後においてもLCN2区の精子た．本研究では，卵管で発現するLCN2 の発現変化および局在，または活発に運動していた．実験4. LCN2区の精子を用いて体外受精した

LCN2 がマウス精子の運動性および受精に及ぼす影響を調べた．

ときの卵割率が有意に上昇した．

【方法】

【考察】

実験1. 無刺激（NS）および PMSGと hCG を投与した C57BL/6雌マ

卵管において発現するLCN2 は，排卵・受精期に卵管膨大部の卵管

ウスの各時間の卵管を回収し，Lcn2 mRNA 発現および LCN2タンパ上皮細胞特異的に発現することが明らかになった．LCN2 は精子の運ク質発現を調べた．また，NS および hCG 刺激16時間（h）後の卵管の動性と受精率を向上させたことから，卵管膨大部特異的に発現する

LCN2量を定量した．さらに NS および hCG 刺激16h 後の卵管峡部，LCN2 は精子に作用し受精を誘導する因子であると考えられた．

72

O-11 マウスにおける鉄欠乏は卵胞発育不全による雌性不妊を引き起こす藤内 慎梧 ，河端 茜 ，島田 昌之 ，山下 泰尚
1）

1）

2）

1）

1）県立広島大院総合学術
2）広島大院統合生命科学

収し，排卵数，受精率および胚盤胞率を調べた．実験4. 離乳後6週間飼育した Normal マウス，6週間飼育した LF マウスおよび，3週間飼育した LF に通常飼料をさらに 3週間給餌した LF Rescue（LFR）マウスを作製し，Normal，LF，LFR から回収した血清中の鉄量，性周期変動，妊娠率が鉄の補給により回復するか調べた．
【結果】
実験1. 血清と卵巣中の鉄量は LF で有意に低い値を示し，低鉄飼料
給餌により鉄欠乏が誘導されることが明らかになった．Normal では発【目的】

情休止期，発情前期，発情期，発情後期と6日平均で規則的な性周期

鉄欠乏は妊娠期の胎児の発育や正常な出産に影響を与えると知られが認められたが，LF の性周期は発情休止期から全く進行しなかった．

ているが，卵胞発育期，排卵期への影響は明らかになっていない．当また，Normal ではすべての個体が妊娠したが，LF では全く妊娠に至グループでは卵胞発育期のブタ卵胞液に，鉄の輸送タンパク質のトランらなかった．実験2. 発情休止期の LF の卵巣では Normalと比較してスフェリンが血中の 4倍以上もの高濃度で蓄積することを見出した．本

二次卵胞数は高い値を示したが，胞状卵胞数は低い値を示した．さら

研究では，卵巣における鉄の役割を調べる目的で，低鉄飼料を給仕しに PMSG 刺激48h 後の後期胞状卵胞数もLF において有意に低い値をた鉄欠乏モデルマウスを用いて，鉄が卵巣機能へ果たす役割を検討し示した．卵巣の Fshr，Cyp19a1，Ccnd2 mRNA 発現とE2量は LF にた．

おいて有意に低い値を示した．実験3. Normalと比べ LF では，排卵数，受精率，胚盤胞率は有意に低い値を示した．実験4. 血清中の鉄量が【方法】

LFR で Normal と同 程 度 まで 回 復し，LFR の 性 周 期， 妊 娠 率 は，

実 験1. 3週齢の C57BL/6雌マウスに，3週間通常飼 料を給 餌した

Normalと同レベルまで回復した．

Normal マウス，低鉄飼料を 3週間給餌した Low Fe（LF）マウスを作製し，血清および卵巣中の鉄量，性周期変動，妊娠率を調べた．実験2.

【考察】

鉄欠乏による卵胞発育への影響を調べる目的で，発情休止期または本研究により，鉄欠乏条件は卵胞発育不全を呈し，卵成熟を著しく

PMSG 刺激後48時間（h）の卵巣切片を HE 染色し，卵胞数を調べた．

低下させることが明らかになった．鉄を含む飼料で 3週間飼育すると鉄さらに Normal および LF における卵 巣の卵胞 発育マーカー（Fshr，欠乏による性周期の停止や妊娠率の低下が回復したことから，貧血に

Cyp19a1，Ccnd2）の mRNA 発現および卵胞発育を誘導するエストロ

より損なわれる卵巣機能は，患者への鉄剤の補完により回復すると考ゲン（E2）量を測定した．実験3. Normal および LF から排卵卵子を回えられた．

O-12 精子グルコース応答性に起因する

RNAウイルス感作反応の動物種間差解析

田口 新 1），近藤 希衣 1），辻田 菜摘 2），梅原 崇 2），
島田 昌之 2），向田 哲規 1）1）広島 HART クリニック
2）広島大院統合生命科学

して，浸透圧を変化させずにグルコース濃度を 5mM，10mM，15mMに調整した．この培養液で精子を培養し，運動パターンを解析した．
また，TLR7/8 のリガンドであるR848 を 3nM，30nM 添加し，その精子運動パターンに及ぼす影響を解析した．
【結果】
ブタとウシ精子は，グルコース濃度依存的に直進速度が低下し，頭部振幅幅と曲線速度が有意に増加する zig-zag 運動を示した．高グル
コース環境では，ミトコンドリアの電位活性低下と嫌気的解糖系の活性上昇が認められたこと，嫌気的解糖系は尾部に強局在していたことから，グルコース濃度依存的に代謝機構と ATP 産生部位がシフトし，
運動パターンが変化することが示された．一方，ヒト精子では，1検体【目的】

はグルコース濃度依存的に運動パターンの変化が認められたが，他のマウスやブタ精子は，高グルコース環境で嫌気的解糖系により尾部13検体では，グルコース濃度の増加による影響は認められなかった．

を激しく振幅させ受精能獲得状態となる．この嫌気的解糖系は，RNA

ブタ，ウシと一部のヒト精子では，TLR7/8 の刺激により精子運動パター

ウイルスに対する受容体であるTLR7/8 を活性化させることで抑制され，ンが，頭部振幅が減少し，曲線速度が低下する結果，直進運動へと精子は不動化する．RNAウイルスであるコロナウイルスやジカウイルス

変化した．しかし，多くの症例では TLR7/8 による運動パターンの顕著などが，精液中や子宮，卵管でも検出されるという報告があることから，な影響は認められなかった．

ウイルス感染および培養液への混雑が精子の受精能獲得を抑制し，受精障害を引き起こす可能性がある．しかし，ヒトの射出精子において【考察】はグルコース濃 度の違いが精 子 運 動 性に及ぼす影 響は不明であり，ブタ精子は子宮内に直接射出されるが，ヒトやウシ精子は膣内に射

TLR7/8 の役割も全くわかっていない．そこで本研究では，ブタ，ウシ

出され，子宮頚管を通過する必要がある．ウシとヒトの違いとして，子およびヒト精子を用いて，グルコース応答性の違いを運動パターンから

宮頚管粘液のグルコース濃度は，ヒトでは排卵期に低値であり，ウシ

解析し，その応答性の違いが RNAウイルス疑似感作反応に及ぼす影では高値である．この違いと低グルコース反応性により，射出直後のヒ響について検討した．

ト精子は直進運動を維持するようプログラムされており，zig-zag 運動を誘導するのが難しい可能性がある．この抑制機構の解明と効率的な【方法】
ブタ，ウシおよびヒト射出精液を遠心分離し，HTF 培地で 2回洗浄

グルコース反応性獲得法の考案により，IVF の成功率向上に寄与すると期待される．

した．培養液は通常の HTF（グルコース濃度2.8mM）をコントロールと73

一般演題〔口頭発表〕

O-13 当院において透明帯欠損卵子が見られた症例の分析

水本 茂利，渡辺 瞳，長尾 洋三，田中 啓子，大塚 未砂子，
吉岡 尚美，蔵本 武志
蔵本ウイメンズクリニック

不妊原因，患者年齢，BMI，AHM 値，治療回数，卵巣刺激法，採卵数とした．ZF 卵子は，紡錘体観察によりMII 期と判断出来た場合に ICSI を施行し，同一周期の正常卵子と2PN 率，Day3良好胚率，胚盤胞到達率，良好胚盤胞率の比較を行った．
【結果】
ZF 症例の不妊期間（2.67年），BMI（20.94kg/m2），AMH 値（2.91ng/ml），治療回数（3.68回），採卵数（9.02個）に対照症例との差は見られなかったが，妻年齢は有意に若かった（37.4 vs 38.8 ; P<0.05）．ZF 症例における不妊原因の内訳は，男性因子：27.4%，卵管因子：6.0%，【目的】

PCOS：9.5%，子宮内膜症：14.3%，卵巣機能不全：1.2%，卵巣予備

透明帯の形態異常や脆弱性により，稀に透明帯を欠損する卵子（以能低下：23.8%，受精障害：4.8%，原因不明：13.1%であった．PCOS

下 ZF 卵子）が見られる．ZF 卵子は正常な受精・発生能を有しており，の割合は対照症例（4.1%）より有意に高く（P<0.05），ZF 症例の 20.5%

胚 盤 胞 移植による生児獲得例が 報告されている（Ueno et.al. Fertil（8/39症例）に見られた．また，E2高値にて全胚凍結した割合も有意にSteril. 2014; 101: 1001–7）．また，我々は ZF 卵子の ICSI 成績および高かった（19.4 vs 26.0%；P<0.01）．卵巣刺激法の内訳に差は見られな発生速度が正常卵子と同様である事を報告している（第74回九州・沖

かった．

縄生殖医学会）．
しかしながら，ZF 卵子は正常卵子と比較して操作が困難であるため，症例あたりの ZF 卵子の割合は 12.5%（41/327個；1-2個 / 症例），成熟率は 78.0%（32/41個）であった．ZF 卵子と正常卵子における，2PN

透明帯の剥離を未然に防ぐ事が望ましい．そこで本演題では，ZF 卵率（68.8 vs 74.5%），Day3良好胚率（54.5 vs 48.0%），胚盤胞到達率子が生じる要因を明らかにするため症例の分析を行うと共に，ZF 卵子（45.5 vs 65.2% ; P=0.07），良好胚盤胞率（50.0 vs 44.3%）に差は見らのICSI 成績を再集計したので報告する．

れず，対照症例とも同等であった．

【対象・方法】【展望】

2013年7月～ 2020年８月に当院で採卵を行い，卵丘細胞除去後に ZF

本検討の結果，ZF 卵子が見られる症例の特徴が一部明らかとなっ卵子が確認された 39症例（ZF 症例）を対象とし，その患者背景についた．今後更に検討を重ねる事で，ZF 卵子の発生を防ぐ方法に繋げてて同一期間の他の症例（対照症例）と比較した．検討項目は，不妊期間，

いきたい．

O-14 凍結保存タンクの容量が大きいほど真空漏れを起こしても保存効果を長く保つことができる

水野 里志 1），入江 真奈美 1），小橋 朱里 1），明角 一平 2），
福田 愛作 1），森本義晴 3），
1）IVF 大阪クリニック
2）アステック株式会社
3）HORAC グランフロント大阪クリニック㎜の穴をあけることで真空漏れを誘起した．真空漏れ後の LN₂残量及びタンク内の温度を 1時間毎に測定することで，LN₂ の減少速度，温度が上昇するタイミングと-80℃に達する時間を比較した．なお，最初の一時間及び温度上昇が始まってからは 15分毎に測定し，測定は温度が -80℃に達するまで行った．また，真空漏れ前のデータとして，それぞれのタンクで 7日間，24時間毎に同項目を測定した．
【結果】
LN₂ の減少速度は 10，20，35 Lタンクで，それぞれ 4.6，4.5，2.8
cm/hであった．全てのタンクで測定開始時の温度は -196℃であった．
温度上昇は，10 LタンクでLN₂残量が1 cm ，20と35 Lでは0 cmになったときに始まった．10，20，35 Lタンクで温度上昇が始まった時間は 6【目的】

時間45分，8時間00分，11時間45分，温度が -80℃に達した時間は 7

ART 施設にとって凍結保存タンクの管理は極めて重要である．海外時間54分，8時間41分，14時間14分であった．真空漏れを起こしていなでのタンク事故が示すように，タンクに事故が起きた場合の被害は深いタンクにおいて，10 Lでは 2 cm，20と35 Lタンクでは 4 cm，7日間刻である．しかし，タンクが破損した場合の対応について詳細な情報

で LN₂ が減少した．温度は全てのタンクで -196℃を維持していた．

はない．これまでに，我々は，重大なタンク事故につながる真空漏れを起こしたタンクであっても，一定以上の LN₂残量があれば，凍結検【考察】

体の保存効果が数時間維持されることを明らかにした．今回，我々は今回の検討で，真空漏れ後の LN₂減少速度は，10，20 Lタンクと比容量の異なる 3 つのタンクを意図的に破損させ（真空漏れを誘起），タ

べて 35 Lタンクのほうが緩やかであった．容量が大きくなるにつれて真ンクに起きる変化を経時的に観察することで，容量の違いが保存効果

空漏れ後からタンク内の温度上昇が始まる時間，さらに -80℃に到達す

継続時間に与える影響を解析した．

るまでの時間が長くなり，タンク間で最大5時間40分の差が生じた．このように，タンクが真空漏れを起こした場合の保存効果継続時間は，【材料と方法】
10，20及び 35 Lタンクに LN₂ を満タンまで充填し，真空弁に直径274

容量が大きくなるほど長くなり，胚の救出可能な時間に猶予が与えられることが示された．

O-15 閉鎖型胚凍結デバイスを用いた出生児予後への影響

的場 麻理 1），幸池 明希子 1），柴田 美智子 2），佐藤 学 2），
森本 義晴 1）
1）HORAC グランフロント大阪クリニック 2）IVF なんばクリニック時の先天異常率を比較した．次に KIDS 乳幼児発達スケール（KIDS）
を用いて 1歳半での発達について比較検討した．なお，今回の対象患者は，児の発育に関する任意の調査に同意を得ている．
【結果】
CL 由来児とTOP 由来児にて，在胎週数（mean±SD; 39.2±1.6 vs39.3±2.0週），性比（男児／女児 ; 1.04 vs 0.97），出生時の体重・身長（3116.0±421.2 vs 3051.1±488.0g, 49.5±2.3 vs 48.9±2.5cm），及び1歳半時の体重・身長（10.5±1.1 vs 10.7±3.7kg, 80.5±3.0 vs 80.2±
4.3cm）では有意差は認められなかったが，出生時の先天異常率では【目的】

有意差を認めた（4.2% vs 0.9%）．また，KIDS アンケート項目である

胚及び卵子凍結では現在，国内では開放型デバイスCryotop（TOP）

運動発達，操作発達，理解言語発達，表出言語発達，概念発達，対が広く使用されている．しかし，昨今の感染症対策の観点から，開放

子ども社会性発達，対成人社会性発達，しつけ発達，食事発達，総型デバイスでは胚及び卵子の液体窒素を介した感染の可能性が危惧さ合発達においても，有意差は認められなかった．

れている．この為，国内でも今後閉鎖型デバイスの需要がより高まると予想される．既に，閉鎖型デバイスと開放型デバイスの違いによる胚【考察】の生存率や臨床妊娠率において，両法間で差がないことが報告されて閉鎖型デバイスと開放型デバイスにおける胚凍結において，出生時いるが，出生児の予後に関する報告はほとんどない．本研究では，閉及び 1歳半時の身体発育に加えて，1歳半時の精神発達においても差が鎖型デバイスCryotop CL（CL）由来の出生児予後について後方視的検なかった．今回の検討で差が認められた先天異常については，ヒトで討を行った．

は 3 ～ 5％の頻度で発生すると言われており，CL 由来児の先天異常率
はこの範囲にある．だが，今後も長期的な調査を継続する必要である．

【対象と方法】
2015年8月から2017年12月の間に凍結融解胚移植を施行し，単児出産に至った CL 由来の 47児，TOP 由来の 234児を対 象とした．まず，凍結融解時の胚生存率に差がないという過去の報告も踏まえると，今後の感染症対策のひとつとして，ヒト胚の凍結保存には閉鎖型デバイ
スが非常に有用である．

それぞれの在胎週数，性比，出生時及び 1歳半時の体重・身長，出生O-16 クラウド技術とマスキング技術を用いた臨床データの共有と匿名加工の方法－個人情報保護に重点をおいて－

犬伏 美喜，江夏 徳寿，古橋 孝祐，中川 奈緒子，魏 興強，
松本 由紀子，苔口 昭次，塩谷 雅英
英ウィメンズクリニックは，臨床データを匿名加工した後，クラウド（Dropbox business）を用
いてネクスジェン社と共有する方法をとった．本研究は当院及び社外倫
理委員会の承認を得て始められた．
当院では電子カルテ（RACCO：システムロード社）とデータ管理シス
テム（FileMaker Pro）を併用し診療を行っている．また，培養業務においてはタイムラプスシステム（iBIS：アステック社）を導入している．
匿名化の方法として臨床で使用する患者番号とは別に，AI 開発用として暗号化識別コードを付与した．また，提供するデータであるART 関
連情報，iBIS から抽出した培養動画に対する匿名加工法として，全ての情報において提供前にマスキング処理を行うこととした．一括マスキ
ング処理（患者番号の変更，動画の個人情報表示場所のマスキング）を行うため，汎用プログラミング言語であるpython（パイソン）を使用した．

【目的】

まず，臨床上の患者番号と AI 開発用の暗号化識別コードを CSV ファ

昨今，多分野でAI（artificial intelligence; 人工知能）の開発及び導イル内で紐づけし，対象フォルダに iBIS 動画を格納する．その後，コ入が急速に進んでおり，生殖医療分野においてもその取り組みは加速

マンドプロンプトにて実行することにより，一括マスキング処理が可能

している．AI 開発は膨大な情報を基にプログラム作成を行うため，豊となった．このマスキング作業をクリニック内で行うことにより，要配慮

富な臨床件数を持つ施設と解析技術を持った専門機関との連携が重要

個人情報が匿名加工情報に変換されることとなり，匿名加工後のデーとなる．当院では，ネクスジェン社と AI の共同開発を行っており，臨タのみをクラウドに上げることによってネクスジェン社と迅速なデータの床データをクラウド上で共有しながらプログラムの開発を行っている．

共有を行うことができる．クラウドは共同開発者のみがアクセスできる

本検討における，個人情報保護と迅速な情報共有の両立手法を，法的よう設定し，データをアップロードする際は，Zipファイルに変換及びパ側面と技術的側面から紹介したい．

スワード保護処理を施し，個人情報の保護に細心の注意を払っている．

【方法】

【結語】

改正個人情報保護法によると，個人情報を加工して匿名加工情報に要配慮個人情報であっても仮想 ID を用いた匿名化とpythonを用いすれば，第三者へのデータ提供も可能とされている．そのため臨床デー

たマスキング処理によって匿名加工情報として共同研究者と共有可能でタの様な要配慮個人情報が含まれている場合でも適切な匿名加工を行ある．また，クラウドを用いることにより，安全かつ効率的にデータのうことによりAI 開発業者に情報提供することが可能である．本研究で共有ができることが確認された．

75

一般演題〔口頭発表〕

O-17 SMASを用いた質の高い精子の運動パラメーターによる指標の検討

久田 尚人，
原田 義久，
福永 恵美，
前田 智世，
笹川 ひより，
池田 真妃，芝 令子，岡野 真一郎，絹谷 正之
絹谷産婦人科

Sperm Washing Medium（Irvine）中で約3時間室温で静置した後，IVF に用いた．
検討1では 301症例を高受精率（60% 以上）の 229症例と低受精率（60% 未満）の 72症例に分け，遠心処理後からIVF 直前までの精子運動パラメーターの継時的変化をそれぞれ解析した．検討2 では，高受精率群および低受精率群の IVF 直前の各運動パラメーターを比較する
ことにより，質の高い精子の運動パラメーターの指標を探索した．
【結果】

【背景】

高受精率群の精子は遠心処理後と比べ IVF 直前において直線速度，

体外受精（IVF）に用いる精子の評価は顕微鏡下でマクラー計算盤

直線性が有意に減少し，平均速度，曲線性が有意に増加した．一方，などを用い，算出した精子濃度や運動率を指標に行うことが一般的で低受精率群では遠心処理後と比べ IVF 直前において直線性が減少し，ある．しかし，IVF において高い受精率を予測するためには，精子濃平均速度が増加したものの，高受精率群で見られた直線速度の減少お度や運動率だけでなく，正確に精子の運動の質を評価する必要がある

よび曲線性の増加は見られなかった．また，高受精率群と低受精率群と考えられ，それらの指標を明らかにすることは臨床上有用である．精の IVF 直前における運動パラメーターを比較したところ，高受精率群

子運動解析装置（Sperm Motility Analysis System: SMAS, ディテの 曲 線 性 は 低 受 精 率 群 と 比 べ 有 意 に 高 か った（0.589 vs. 0.572;

クト社）は精子の運動パラメーターを客観的に評価できる機器である．

P<0.01）．

本研究ではSMASを用いてIVFにおける受精率と精子の運動パラメー
ターの関連性を評価することにより，質の高い精子の特徴とその指標を探索することを目的とした．

【結論】
高受精率群において IVF 直前の精子の曲線性が低受精率群と比べ有意に高かったことから，精子の曲線性が質の高い精子の指標になる【対象と方法】

ことが明らかとなった．さらに，高受精率群における精子の運動性は，

2018年1月から 2020年2月までの間に当院で 3個以上の卵子に対し時間の経過に伴い直線運動性から曲線運動性に推移するが，低受精

IVFを行った 301症例（夫平均年齢37.2歳，妻平均年齢35.8歳）を対率群では曲線運動性が高まらず，直進運動性を有したままであること象とした．SMAS により各症例の精子の運動パラメーター（直線速度，が明らかとなった．以上のことから，上記のような精子運動パラメーター

直線性，曲線速度，曲線性，頭部振幅，平均速度）を密度勾配法にの変化が，良好な精子の新たな基準となることが示唆された．

よる遠心 処 理 後と IVF 直 前の 2回 測 定した． 遠心 処 理した 精 子はO-18 精液の温度低下による精子の運動率及びSMIの低下があった場合の加温の有用性

阪本 なつき１），佐藤 学１），中岡 義晴１），森本 義晴 2）
1）IVF なんばクリニック
2）HORAC グランフロント大阪クリニック

濃度1500万以上及び運動率40％以上）を対象とした．総精子数，運動率，SMI 及びエオジン染色による生存率の計測を行った．
（検討１）まず精液を 3等分し，1つはコントロールとして 3時間室温静置した．残り
2 つは４℃の条件下に２時間静置し総精子数，運動率及び SMI 及びエオジン染色による生存率の計測を行った．その後37 ℃のインキュベー
タ内にて 1時間加温した加温群と室温（26℃）にて静置した室温群に分けた．1時間後，加温群と室温群の総精子濃度，運動率，及び SMIの計測を行い，加温で状態が復元するか検討した．
（検討２）検討１終了後に加温 群， 室 温 群， コントロールを 15分300G で密度勾配 遠心（DGC）後，回収ペレットを培養液で遠心洗浄し，総精子数と運動率を比較した．

【目的】
人工授精や体外受精などを行う場合，夫の都合により自宅から精液【結果】を持参することも多い．また新型コロナウイルス感染症の蔓延により極（検討１）4℃暴露後の運動率，SMI ならびに生存率はそれぞれ有意

力来院を減らすために自宅から精液を持参するケースが増加しているとに低下した（P<0.01）．加温群の運動率とSMI は 4℃暴露後に比べ，有思われる．日本は季節ごとに外気温の変動が大きく，特に冬季には低意に回復した（P<0.01）．一方で，室温群の運動率は有意に回復しなかっ温になるため精液を入れた容器に何らかの対処をしていない場合は低たものの，SMI は有意に回復した（P ＜0.05）．
（検討２）DGC 後の運動温に曝され精子の運動率は低下する．しかし，低温暴露後の精子運動

率 は， コントロール に 比べ 室 温 群 で 低 下した（52.1 ％ vs. 72.2 ％，性の復元ができれば治療キャンセルや受精法変更などのリスクを回避

P<0.01）．加温群とコントロールで差はなかった（58.2％ vs. 72.2％）．

できる可能性があるため，今回は低温暴露による精子の運動性低下のリカバリー方法として低温精液への加温の有用性を検討した．

【考察】

【方法】

しかし，完全に復元することは難しく生存率も低下していることから精低温精液への 37 ℃加温は室温よりも有用である可能性が示唆された．
患者同意のもと，2019年10月～ 2020年3月に当院で精液検査のためにクリニックで精液を採取した余剰精子（精液量2.0 ml 以上，総精子76

液の低温暴露を少なくする工夫が好ましいと考えられた．

O-19 精 液の酸 化 還 元電 位とストレス因子との関係性金子 眞弓 1），冨田 和尚 1），井﨑 顕太 1），幸池 明希子 1），
佐藤 学 1，2），森本 義晴 1）1）HORAC グランフロント大阪クリニック 2）IVF なんばクリニック

従い行った．夫の平均年齢は 38.0歳，禁 欲 期間3.9日，総精子濃度72.7×10 6 sperm/mL，運 動率56.2%，Sperm motility index（SMI）
174.1であった．sORP 値と夫の年齢，原精液所見，血中酸化ストレス（d-ROM，BAP），血中 LH，FSH，テストステロンの値，及び喫煙との関係を示すブリンクマン指数との関係を単回帰分析を用いて調べた．
【結果】
平均 sORP 値は 8.8±129.2 mV/10 6 sperm/mLであった．sORP 値と夫の年齢（r：0.179），禁欲期間（r：0.146），LH（r：0.2），FSH（r：0.156）との間に有意な正の相関が，SMI（r：0.184）との間には負の相関が認【目的】められた．一方，総精子濃度（r：0.077），運動率（r：0.072），精液量（r：男性不妊症の原因の1 つに精液中の酸化ストレスがある．精液中の0.089），WBC（r：0.004），採精してから検査までの経過時間（r：0.014），

酸化ストレスは精子細胞膜や DNA 断片化の要因として知られており，

d-ROM（r：0.012），BAP（r：0.017），テストステロン（r：0.022），ブリ

男性側の妊孕力を間接的に反映する．酸化ストレスを測定する際は酸

ンクマン指数（r：0.046）との間に相関は認められなかった．

化力と抗酸化力を同時に評価する必要がある．MiOXSYS Ⓡ（AYTU
Bioscience 社 , USA）により原精液中の酸化力と抗酸化力の総和を標【考察】

準酸化還元電位（static oxidative reduction potential : sORP）とし

sORP が低いほど，精子は酸化されておらず正常な状態である．加て測定することができる．これまでに sORPと原精液所見の相関性にえて SMIとsORP が負の相関を示したことから，ORP 値を改善するこ

ついての報告は多くされているが，血中酸化ストレス度や喫煙量などととによって精子運動性を改善できる可能性が示唆された．sORPと血の関係性は明らかになっていない．本研究は sORPとこれらストレス因

中酸化ストレスとの間に関係性がみられなかったので，血中酸化ストレ子との関係性を調べることを目的とした．

スよりむしろ精液中の酸化ストレスの程度を直接測定する必要があると考えられた．また，ブリンクマン指数とsORPとの間に関係性はみられ【方法】なかった．ブリンクマン指数より喫煙量との関係性が強い尿中コチニン

2018年5月から2019年5月に当院で精液検査を行い，sORPを測定しとの関係性をみる必要が考えられた．

た 483症例を対象とした．sORP の測定は MiOXSYS Ⓡ の使用手順にO-20 AIを用いたスマートフォン精液検査の精度向上への試み

中川 奈緒子，江夏 徳寿，片田 雄也，古橋 孝祐，岩﨑 利郎，
松本 由紀子，苔口 昭次，塩谷 雅英
英ウィメンズクリニック

デバイスを用いた測定結果を照合し，精子濃度，運動率，前進運動率，
運 動 速 度 につ いて 相 関を 調 べ た． スマ ートフォン 検 査 は 市 販 のiPhone® Galaxy®，Pixel®，Xperia®の 4機種で行った．データのばらつきを評価するために，測定はそれぞれ 3回ずつ行った．
【結果】
SMASとスマートフォン精液検査の結果をそれぞれ比較した場合，相関係数は精子濃度，運動率において 0.62，0.55と一定の相関を認めた．一方で，前進運動率と運動速度に関しては 0.25，0.01とほとんど相関を認めず，標準偏差も SMAS の10倍以上認めたことからデータの【目的】
近年男性不妊に対する世間的な認識，ニーズが高まってきている．

再現性が乏しいと考えられた．そこでデータ動画の再解析をリクルート
社に依頼し，AI を用いた精子認識力の向上と認識確度の調整を行った．

スマートフォンアプリを用いた，自宅での精液検査は簡易で時間がかか調整後のプログラムを用いて再度同じ精子動画を解析したところ，精子らないため，男性の治療の第一歩として注目されている．現行のスマー

濃度，運動率，前進運動率，速度において相関係数0.79，0.59，0.58，

トフォンアプリプログラムでは，iPhone® にて，精子濃度，運動率の測0.40と相関の改善を認め，データのばらつきも軽減した．スマートフォ定が可能であるが，専門病院での検査と比較し検査項目が少なく精度

ン4機種間で，得られた数値は同程度であった．

も十分ではないという問題があった．今回，①精子濃度・運動率測定の精度の向上，②検査項目に前進運動率と運動速度を追加すること，【考察】③ iPhone® のみでなくGalaxy®，Pixel®，Xperia® においても同様のAI を用いて，精子認識力の向上と認識確度の調整を行うことで，各測定結果を得ること，を目的としプログラムの共同開発を目指した．

検査項目の精度向上を認めた．またスマートフォンの使用機種の違いに関わらず精子濃度や運動率を正確に測定できた．前進運動率と運動【方法】

速度については，観察視野が狭いためデータにばらつきが出る傾向を

2019年1 ～ 5月にかけて当院で精液検査を行った検体のうち SMAS®

認めたが，AI を用いたプログラムの改良により補完可能である可能性

にて計測可能であった 100症例を対象とした．SMAS® での検査結果と，が示唆された．今後さらにデータを蓄積し，より正確な測定ができるシ

リクルートライフスタイル株式会社の開発したスマートフォン精液検査

ステムを目指していく．

77

一般演題〔口頭発表〕

O-21 PGT-Aの処分胚の検討に参加同意された３例（40–43歳）の処分胚４つを対象とした．
【方法】

西山 幸江 1），朝日 啓司 1），清水 勇輔 1），北村 智志 1），
青木 淳子 1），倉橋 浩樹 2），西山 幸男 1）1）西山産婦人科
2）藤田医科大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

顕微授精にて得られた胚盤胞の TEを 5 から 8細胞生検し，PGT-A
解析施設で染色体解析を行った．解析結果にて異数性胚又はモザイク胚の結果にて処分胚の同意を得た凍結胚を同様に TE の再生検したものと残った胚全体にわけ，再度染色体解析を行い，初回生検と再生検と胚全体との結果を比較した．
【結果】

【背景】
PGT-A は染色体の正二倍体胚と異数性胚を区別し，正二倍体胚を症例1の初回生検は 16 モノソミーの 50％モザイク，再生検では 16 モノ

移植することで，ART の成功率向上が期待される技術である．PGT-A

ソミーの 20％モザイク，胚全体は正二倍体．症例2 の初回生検は 15トリの解析の多くは胚盤胞の栄養外胚葉細胞（TE）の一部を用いるが，体ソミーに加えて 11モノソミーの 40％モザイク，再生検では 15トリソミー，

細胞モザイクが存在しうるため，TE 生検の採取部位による結果の不一胚全体は 15トリソミー．症例3 の初回生検は 19 モノソミーの 50％モザイ

致や，内細胞塊（ICM）の結果との不一致が起こりえる．このことはモザ

ク，再生検は初回生検同様の 50％モザイク，胚全体では 19 モノソミー

イク胚を移植胚か処分胚とすべきかに大きく影響する現象である．

の 60％モザイク．症例4 の初回生検は 21テトラソミー，再生検は 21テト
ラソミーに加えて 18 モノソミーの 80％モザイク，胚全体では 21テトラソ【目的】

ミーがあり，初回生検との結果が一致しないものが多かった．

本研究では次世代シーケンサーを用いて，生検の採取部位による結果の不一致や，内細胞塊（ICM）の結果との不一致が起こりえるかについて検討を行うことを目的とした．

【結語】
配偶子形成過程でできた異数性は生検部位の違いによる影響を受けないが，受精後の体細胞分裂で生じた染色体分配の異常であるモザイ【対象】

クは生検部位によって影響を受け，ICM の結果を反映しない可能性が日本産婦人科学会より2019年12月26日に承認された「反復 ART 不成
功症例および反復流産症例および染色体構造異常例を対象とする継続示唆された．モザイク胚の移植に関しては十分な遺伝カウンセリングを行うことが重要であると思われた．

妊娠率向上を目的とした PGT-Aの有用性を検討する多施設共同研究」

O-22 子宮内フローラの結果とART成績の関連－複数の臨床パラメータとの比較検討－

坂井 和貴 1），田中 克 2），田中 志穂 1），大西 弘法 1），
野手 健造 1），長谷川 麻理 1），伊木 朱有美 1），荒井 渉 2），
長井 陽子 2），鍋田 基生 1）1）つばきウイメンズクリニック
2）Varinos 株式会社

パラメータを測定した．得られたデータを用いて，FET の妊娠成否との関連性を検討した．2018年10月以降に初めて FETを施行した症例に限定して解析を行った．
【結果】
複数の臨床パラメータからFET の妊娠成否を予測するロジスティッ
ク回帰モデルを構築した結果，Lactobacillus 属占有率と胚グレードが説明変数として選択された．このモデルを用いて ROC 解析を実施した
ところ，高精度で FET の妊娠成否を予測でき（AUC=0.839），成否を分ける上で最適な線形予測子のカットオフ値を発見した（p=0.007）．該
当のカットオフ値を満たす胚グレードとLactobacillus 属占有率の条件
は，胚グレードAB 以上かつLactobacillus 属占有率5.3% 以上（条件1），あるいは胚グレード BB 以上かつLactobacillus 属占有率49.1% 以上
（条

【目的】

件2）であった．検証の結果，条件1を満たす群と逸脱する群では FET

凍結融解胚移植（FET）の妊娠成否には複数の要因が関わっておの妊娠率はそれぞれ 89.5%と40.0%で，有意差が得られた（p=0.042）．

り，近年，子宮内フローラ等の子宮内環境も妊娠に関与することがまた， 条 件2 を満たす 群と逸 脱する群では FET 妊 娠 率はそれ ぞれ明らかとなってきた．FET の妊娠成否にどのような臨床パラメータが81.0%と50.0%で，有意差は得られなかった（p=0.290）．

影響を及ぼすのかを明らかにするため，それらの関連性について後方視的に検討した．

【考察】【対象と方法】

Lactobacillus 属占有率と胚グレードが大きく寄与していることが明ら

ロ ジ スティック 回 帰 モ デル か ら FET の 成 否 を 予 測 する 上で，患者同意を得て 2018年10月から2019年12月までに当院にて FETかとなった．また，胚グレードAB以上かつLactobacillus属占有率5.3%を行い，臨床妊娠の成否が得られている1,126周期を対 象とした．

以上，あるいは胚グレード BB 以上かつLactobacillus 属占有率49.1%

FET 以前に子宮内フローラ，BMI，酸化ストレス度等の複数の臨床以上であれば，FET にて妊娠成立する可能性が高いことが示唆された．

78

O-23 Neurotensin は ERK1/2 系 の持続的リン酸化を促進し排卵を誘起する

岡本 麻子１，2），島田 昌之 3），山下 泰尚 1），
1）県立広島大院総合学術研究科
2）倉敷芸術科学大生命科学部
3）広島大院統合生命科学研究科

黄体数を調べた．実験3: PMSG/hCGまたは PMSG/hCG+SRを投与したマウスから CCを回収し，経時的 ERK1/2リン酸化パターンを比較した．実験4: PMSG/hCG および PMSG/hCG+SRを投与したマウス
から GC および CC を 回 収し，GC の EGF-like factors（Areg，Btc，Ereg，Nrg1）とCC の ErBbs（Erbb1，Erbb2，Erbb3，Erbb4）の発現を比較した．
【結果】
実験1: Nts mRNAは hCG 刺激前まではGCとCCで低値であったが，
hCG 刺激4h 後以降に両細胞で有意に上昇したが，Ntsr1 mRNA は
GCとCC で恒常的に発現していた．NTS 量は排卵刺激後に増加し，【目的】

NTS，NTSR1 タンパク質も排卵刺激後の GC，CC に局在していた．

LHサージ刺激後の顆粒膜細胞が放出するEGF-like factor は卵丘細実験2: 排 卵数，産仔数，黄体 数は SR 投与により減少した．実験3:

胞のEGF受容体を介して ERK1/2を活性化し排卵を誘導する．当研究グ

hCG 投与した CC では排卵時まで継続的に ERK1/2 のリン酸化が認め

ループでは，野生型マウスと卵巣特異的Erk1/2欠損マウスの排卵期顆粒

られたが，hCG+SR では継続的な ERK1/2リン酸化は認められなかっ膜細胞におけるアレイデータベースの比較解析から，ERK1/2依存的に発た．実験4: GC でのEregとNrg1，CC のErbb2 とErbb3 mRNA 発現

現する分泌因子の探索を行った．その結果，神経ペプチドのNeurotensin

は SR により完全に抑制された．

（NTS）を見出したことから，本研究では NTSとその受容体（NTSR1）の発現と機能解析を行った．

【考察】

【方法】

CCのEGF受容体のうちErBb2とErBb3の発現をそれぞれ亢進し，排卵本研究の結果，NTSはGCのEGF-like factorのうちEREGとNRG1，
実験1: PMSG/hCG を投与した 3週齢の C57BL/6雌マウスから卵巣，期間中の継続した ERK1/2のリン酸化を誘導する因子であることが明らか

顆粒 膜 細胞（GC），卵丘細胞（CC）を各時間に回収し，NTS およびになった．さらに，この結果，受精能を有する卵の成熟と排卵が誘導され

NTSR1の遺伝子とタンパク質発現，局在を調べた．実験2: マウスにると考えられた．

PMSG/hCGまたは hCG+SR（NTSR1阻害剤）投与し，排卵数，産仔数，

O-24 顆 粒 膜 細胞で発 現 上昇する

SREBP は，排卵期のプロゲステ
ロン産生に必須である

中西 寛弥１），田中 里沙 2），島田 昌之 3），山下 泰尚１，2）
1）県立広島大院総合学術
2）県立広島大生命環境
3）広島大院統合生命科学剤（Fatostatin; Fato）を投与し，6h 後に hCG を投与した．hCG 投与
2h 後と12h 後の卵巣を回収し，GC の Cho 合成酵素発現（2h），Cho 量（2h），P4量（12h）を調べた．実験3. PMSG 投与48h 後の GCを回収し，Scap siRNAを導入後，EGF-like factor（AREG）添 加 培 地で 12h，
16h 培養した．GC の Cho 合成酵素群の mRNA 発現（12h）とCho 局
在の蛍光像（12h），P4量（16h）を検出した． 実 験4. 実 験2 と同様にFato 処理した 6h 後に hCG あるいは hCGと P4 を投与し，16h 後の卵管の排卵数と48h 後の黄体数とその形態を調べた．
【結果】
実験1. Srebp-1，Srebp-2，Scap mRNA 発現，SREBP-1，SREBP-2【目的】

発現は PMSG 投与48h 後から hCG 投与後に高い発現量を示し，GC

後期胞状卵胞の顆粒膜細胞に LH が作用するとEGF-like factor のに局在していた．Cho 合成酵素発現は hCG 投与後に有意に増加した．

発現を介してプロゲステロン（P4）を産生し，排卵が誘導される．P4 は，実験2. Fato 処理によりCho 合成酵素発現，Cho 量，P4量は有意に低肝臓で新規合成されるコレステロール（Cho）を基質とすると考えられて下した．実験3. Scap siRNA 処理によりCho 合成酵素発現，Cho 量，

きたが，hCG 刺激後の卵巣のトランスクリプトーム解析結果から，肝P4量は有意に減少した．実験4. Fato 処理により排卵数，黄体数は減臓の Cho 合成経路に必須の転写因子（Srebp）の発現を見出した．本研

少し，排卵不全を呈したが，この低下は P4投与により回復した．

究では，hCG 刺激前後の顆粒膜細胞における SREBPとその制御因子（SCAP）の発現とそれらの役割を検討した．

【考察】

【方法】

Cho 量，P4量が低下したことから，SREBPとSCAP は，排卵刺激後

Fato 処 理とScap siRNA 処 理により Cho 酵 素 群 の mRNA 発 現，
実 験1. 3週 齢 の C57BL/6 雌 マウスに PMSG 投与 48 時 間（h）後にの速やかな Cho 合成とP4産生に重要であることが明らかになった．さhCG を投与し顆粒膜細胞（GC）を回収した．GC のSrebp-1, Srebp-2,

らに Fato 処理は排卵不全を呈したことから，SREBPとSCAP により

Scap および Cho 合成酵素（Hmgcr, Cyp51, Dhcr7）の経時的発現を調誘導される Cho 合成経路は排卵に必須であり，この経路の破綻は排べた．また SREBP-1，SREBP-2，SCAPタンパク質の発現と局在を卵不全の要因となると考えられた．

調べた．実験2. PMSG 投与 42h 後に SREBP-SCAP 複合体形成阻害

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一般演題〔口頭発表〕

O-25 ニュートリションサポートセンター

における栄養指導の不妊治療への効果

植田 歩唯，土井 麻莉子，山本 健児，藤井 美喜，
苔口 昭次，塩谷 雅英
英ウィメンズクリニック

BMI の改善，不妊治療の種類および妊娠の有無について後方視的に
調べた．
【結果】
対象患者43例の平均年齢は 35.6歳，NS 開始時の BMI の平均値は30.8 であった．NS 後に BMI が 減少したのは 35例（81.3%）で， そのBMI 平均値は 27.9 であった．そのうち 5例が BMI25未満まで改善した．
NS 後 BMI<25となるまでに要した期間は平均139.6日であった．また，対象 患者43例の不妊治療の内容と妊娠の有無について調べた結果，
NS 後に妊娠した症例は，タイミング 14例中6例（42.8%），AIH4例中2例（50%），ART25例中16例（64.0%）であった．BMI が 25未満まで改【目的】

善した 5例で妊 娠したのは 3例（60.0%）（ タイミング 1例

当院では 妊 娠するための健 康的な体づくりをサポートするために2015年8月よりニュートリションサポートセンター（以下 NSC）を開設し，

AIH1例

ART1例）であった．一方で BMIの改善が見られなかった 8例で妊娠したのは 4例（50.0%）（タイミング 1例

ART3例）であった．

管理栄養士による栄養指導（以下 NS）を行っている．中でもNSC で指導を行うケースの 67％は体重管理が目的となっている．

【考察】

そこで BMI25以上の肥満傾向の方への NS を通じて，妊娠しやすい

NS の前後で 81.3％の症例で BMI の改善が見られたこと，目標であ

体づくりのサポートを行った結果，不妊治療の成績にどのような効果がるBMI<25 まで改善できた症例の 60.0% が妊娠に至ったことは，NS にあったかを検証したので報告する．

一定の効果があったと考える．一方で BMI<25 を達成できた症例の割合が 43例中5例（11.6％）と少なかったのは，定期的に継続して NSC で【方法】

フォローできた症例が少なかったことが一因と考えられる．また，診察

NSC では，患者が 作成した食事記録をもとに栄養 価計算を行い，時に体重を測定する機会が少なく，評価対象となった症例が少なかっ

食事の傾向や問題点を把握し，適切な栄養摂取となるようNS を行ってたことが課題としてあげられる．今後はできる限り定期的に NS を受けいる．2015年8月～ 2019年12月までに NS を行った BMI25以上の患者るよう指導し，体重測定を毎回行うなど BMI の目標到達度を患者とと124例のうち NS の前後で BMI の測定が 行われていた 43例についてもに確認しながらサポートを行っていきたい．

O-26 レルゴリクスはARTにおいてセト

ロレリクスの代替薬となり得るか

矢野 未来 1），辻 勲 1），前田 優磨 1），大垣 彩 1），
水野 里志 1），菊川 忠之 1），福田 愛作 1），森本義晴 2）
1）IVF 大阪クリニック
2）HORAC グランフロント大阪クリニック（セトロレリクス群）と，レルゴリクスを経口投与した 81症例86周期（レルゴリクス群）のART 治療成績を後方視的に比較検討した．レルゴリ
クスとセトロレリクスは，主席卵胞が 14mm に達した時点から排卵誘起の当日または前日まで連日投与した．本研究は当院倫理委員会の承認を得て行った．
【結果】
採卵直前の LH 値は，レルゴリクス群がセトロレリクス群より有意に低値であった（2.1±2.0 mIU/mL vs 3.3±5.0 mIU/mL, P<0.05）．な
お，排卵後のため採卵がキャンセルになった周期は両群ともなかった．
受精率は，レルゴリクス群がセトロレリクス群より有意に高率であった【目的】
生殖補助医療（ART）における調節卵巣 刺激において，従来から（83.9% vs 80.2%，P<0.05）．レルゴリクス群とセトロレリクス群において， 採 卵 数（11.1±7.8個 vs 14.2±9.0個）， 成 熟 卵 数（9.0±6.3個 vs

GnRH アゴニスト製剤であるセトロレリクスが用いられている．近年，11.0±7.4個），胚盤胞到達率（64.7% vs 63.2%），良好胚盤胞到達率

子宮筋腫の治療薬として，新たな GnRH アゴニスト製剤であるレルゴリ（54.7% vs 50.2%），新鮮胚移植の臨床的妊娠率（63.5% vs 56.9%）は

クスが開発された．レルゴリクスは経口薬で利便性が高く，安価である

有意差を認めなかった．

ことから，セトロレリクスの代替薬となる可能性がある．本研究では，
レルゴリクスがART に応用できるかを検討することを目的とする．

【結論】【対象と方法】

はセトロレリクスとほぼ同等であったことから，レルゴリクスは ART に

レルゴリクスを用いた GnRH アンタゴニスト法によるART 治療成績
当院で 2019年6月から2020年7月の期間に，GnRH アンタゴニスト法
による調節卵巣刺激を用いて採卵し，顕微授精を施行した患者148症
例162周期を対象とした．セトロレリクスを皮下注射した 72症例76周期

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応用できる可能性が示唆された．ただし，本研究は症例数が少なく，後方視的検討であるため，さらなる検討が必要である．

O-27 男性不妊治療患者の睡眠に関する検討

藤井 美喜，江夏 徳寿，苔口 昭次，塩谷 雅英
英ウィメンズクリニック【考察】
対象はアンケートを回収できた 187名とした（回収率89.0％）．平均年
齢は 36.5歳．睡眠障害の程度は，睡眠障害なし76.5％，軽度睡眠障
害21.4％，高度睡眠障害2.1％であった．睡眠時間は平均6時間が最も多く，6時間以内が 51.9％であった．睡眠時間と精液所見の相関を検討すると，精液量・精子運動指数において 6-7時間をピークとして逆 U
字型の緩やかな相関を認めた．睡眠時間6-7時間，6時間＜ および ＞
7時間の 2群間の比較をすると，精子運動率はそれぞれ 45.4％，38.7％【目的】
睡眠は身体の回復を促し，ホルモンバランスを整える役割がある．
妊孕性向上のためには睡眠を良好に保つことが大切とされている．そこで，睡眠状態が精液所見に与える影響，男性の睡眠に与える影響因子を調査した．
【方法】
2019年5月～ 2019年6月に，男性不妊外来を受診した患者を対象にアンケートを実施した．アンケートは，睡眠障害の評価項目7要素にて内容が構成されている「ピッツバーグ質問票（SQI）日本版」，および「睡眠に影響する因子（高年齢・アルコール摂取・喫煙・就寝前に PC・足の冷え・夜勤ありの仕事）」を含めた内容とした．

と睡眠時間6-7時間の群で有意に良好だった（P＞0.05）．精子濃度とPSQI 評価，および精子運動率とPSQI 評価の間には有意な相関を認めなかった．PSQI 評価と各因子の関連解析結果は，“喫煙あり”（オッ
ズ比2.34，95%CL 1.07-5.12，P 値0.032）で有意差を認めたが，他の睡眠影響因子との関連は認めなかった【考察】
精液所見と睡眠時間の間には，6-7時間をピークとして逆 U 字型の緩やかな相関を認め，6-7時間の睡眠時間が精液所見に最も良いという結果が得られた．その一方で睡眠障害と精子濃度，精子運動率との関連は確認できなかった．ただ喫煙が，男性の睡眠障害のリスク因子となることから，禁煙指導の必要性が改めて認識された．

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Journal of Assisted Reproduction

Vol.23 No.2

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