報文
スダチ果皮抽出物のスダチチン量と抗酸化活性
Sudachitin Contents and Antioxidative Activities of Sudachi Peel Extracts
新居 佳孝*1，岡久 修己*1，高田 次郎*1，三野 幸人*2，敷島 康普*3
Yoshitaka Nii, Naoki Okahisa, Jiro Takata, Yukihito Mino and Yasuhiro Shikishima
抄 録

スダチチンはスダチ果皮から初めて同定されたポリメトキシフラボンの一種であるが，これまでその生理機能性は十分知られていなかった．そこで，スダチ果皮抽出物のスダチチンおよびデメトキシスダチチン量ならびに H-ORAC 法による抗酸化活性を測定した．スダチ果皮をエタノールで抽出し，合成吸着剤を用いて粗精製したスダチ果皮抽出液（E-2G）のスダチチンおよびデメトキシスダチチン量はスダチ果皮に比べて約4.8 倍に濃縮することができた．これを粉末化したスダチ果皮エキス末（S-2G）ではさらに 2 倍以上濃縮された．抗酸化活性についても同様の傾向を示した．スダチチンおよびデメトキシスダチチンの精製品の抗酸化活性を測定したところ，デメトキシスダチチンがスダチチンよりも高いことが分かった．メトキシ基の数が抗酸化活性に影響している可能性がある．
１ はじめにスダチ（Citrus sudachi Hort. ex Shirai）は徳島県にファージにおける抗炎症作用 7)および食事誘発性肥おいて年間5,379トンの収穫量があり1)，全国収穫量

満マウスにおける内臓脂肪の蓄積抑制効果 8)が報告の約98％を占めている．その半分は生果として流通されている．一方，デメトキシスダチチンはスダチしているが，残りは搾汁した後，果汁がポン酢，ジチンから 3’位のメトキシ基が除かれた構造のフラボュースおよび菓子などの原料として利用されている．

ンであるが 9)，生理機能性についての報告はこれま

搾汁時に発生する搾汁残渣（主に果皮）は，大半がで見当たらなかった．

堆肥化されているが，さらなる有効利用が望まれている．

抗酸化活性とは酸化を防ぐ能力のことを指し，生体内において起こり得る過酸化脂質の生成，タンパ

柑橘類の果皮には，多くのポリメトキシフラボンク質の変性および遺伝子障害などを防ぎ，生活習慣類が含まれており，発がん抑制作用，さらに糖尿病病の予防をもたらすと考えられている 10)．これまでや高脂血症などの生活習慣病の改善効果などが報告

抗酸化活性の測定は測定原理の異なる多種多様な方されている

2) - 5)．

法で行われてきたが，生体内での酸化反応に近い状態で抗酸化活性が評価できる系である酸素ラジカル吸収能力（oxygen radical absorbance capacity: ORAC）
法が有用であると報告されている 10,11)．特に，ポリフェノールやアスコルビン酸などの成分に由来する抗酸化活性を評価できる親水性 ORAC（H-ORAC）
法は渡辺ら 12)により妥当性の確認が終了している

図１

スダチチンの化学構造

スダチチン（図 1）は堀江らによりスダチ果皮か分析法であるため，それぞれの実験室で得られた測定値の比較が可能である．

ら初めて同定されたポリメトキシフラボンの一種でそこで，スダチ果皮抽出物（抽出液，エキス末）あるが 6)，これまでその生理機能性は十分知られてについてスダチチンおよびデメトキシスダチチン量いなかった．近年，スダチチンによるマウスマクロならびに H-ORAC 法による抗酸化活性を測定した．

*1 食品・応用生物担当，*2（株）マリン大王，*3 池田薬草（株）

あわせて，スダチチンおよびデメトキシスダチチンの精製品についても抗酸化活性を測定し，他のポリ料中のポリフェノール量を没食子酸換算で表した．

フェノールと比較した．
２ 実験方法（３）ORAC 法による抗酸化活性測定
スダチ果皮抽出物を 1g 精秤し，ヘキサン 10mL を２・１ 試料の調製（１）スダチ果皮凍結乾燥粉末加え，遠心分離（3,000rpm，10 分）した後，上清をスダチ果皮（種子などを除去した搾汁残渣）は除去した．沈殿に含まれる溶媒を窒素気流下で除去

2012 年に JA 徳島市より購入した．スダチ果皮を凍した後，MWA 溶液（メタノール：水：酢酸＝90：結乾燥（FZ-12, LABCONCO）した後，ミルサー

90：9.5：0.5）を 10mL 加え，37℃で 5 分間超音波処（IFM-700G，岩谷産業（株））を用いて粉末化した．

理した．室温で 10 分放置した後，遠心分離（3,000rpm，（２）スダチ果皮抽出液10 分）し，上清を 25mL に定容した（親水性画分）．

スダチ果皮（JA 徳島市）を粉砕し，加水した後，スダチチンおよびデメトキシスダチチンの精製品酵素処理を行った．酵素を失活させた後，エタノーについては，各試料を 5mg 精秤し，MWA 溶液を加ルで抽出し，減圧濃縮した（E-1G）．次に，合成吸え，5mL に定容した．

着剤を用いて粗精製した後，エタノールで溶解させ得られた親水性画分の抗酸化活性（H-ORAC）をた（E-2G）．

渡辺らの方法 12)に従って測定した．測定には 96 穴（３）スダチ果皮エキス末

マイクロプレート（Greiner）を用い，蛍光強度の経スダチ果皮抽出液（E-1G および E-2G）をそれぞ時変化をインフィニット F200PRO（Tecan）を用いれスプレードライヤー（L-8，大川原化工機（株））て測定した．H-ORAC 値は試料 1g あたりの Troloxを用いて粉末化し，S-1G および S-2G を作成した．

相当量（μmolTE/g）として示した．
（４）スダチチン量と抗酸化活性の相関性

２・２ 分析方法

スダチ果皮抽出物のスダチチン量と抗酸化活性と（１）スダチチンおよびデメトキシスダチチンの分の相関性をピアソンの相関解析を用いて検定した

析16)

．

スダチ果皮抽出物を精秤後，遠沈管に入れ，メタノール：ジメチルスルホキシド混液（1:1）3mL，塩酸1mLを加えて70℃で1時間加温して抽出した．抽出３ 結果と考察
３・１ スダチ果皮抽出物のポリフェノール量

液を10mL に定容し，フィルターろ過した後，高速合成吸着剤を用いて粗精製したスダチ果皮抽出液

液体クロマトグラフ（HPLC）（LC-10AVP，（株）

E-2G は，E-1G に比べてスダチチン量を約 4.5 倍に島津製作所）を用いてスダチチンおよびデメトキシ濃縮することができた．これを粉末化したスダチ果

13)

スダチチンを分析した ．分析に用いた標準物質は，皮エキス末 S-2G ではさらに約 2 倍以上濃縮された．

当センターにおいてスダチ果皮から分離し，純度デメトキシスダチチンおよび総ポリフェノール量も14)95％に精製したものを用いた ．

ほぼ同様の倍率で濃縮された（表 1）．

（２）総ポリフェノールの分析

３・２ スダチ果皮抽出物等の抗酸化活性

試料の総ポリフェノール量はフォーリン−チオカ15)

合成吸着剤を用いて粗精製したスダチ果皮抽出液．スダチ果皮抽出物をビー

E-2G は，E-1G に比べて抗酸化活性が約 4 倍に増加

カーに精秤し，80％メタノールを 50mL 加え，20 分した．これを粉末化したスダチ果皮エキス末 S-2G間撹拌した．ろ過（No.5A）した後，水で 100mL にではさらに約 2 倍以上増加した．これはスダチチン定容し，試料原液とした．水で適宜希釈した試料液量と同様の傾向を示しているため，スダチ果皮抽出500µL にフェノール試薬（2 倍希釈）200µL，飽和炭物のスダチチン量と抗酸化活性との相関性を検討し酸ナトリウム溶液 500µL を加えた．さらに水を 4.3たところ，相関係数が 0.999 を示し，極めて強い相mL 加え，室温で 1 時間反応させた後，765nm の吸関があることが分かった（表 2）．

ルト法により測定した光度を分光光度計（UV-1800，（株）島津製作所）をスダチ果皮の抗酸化活性は，リンゴやミカン（と用いて測定した．標準として没食子酸を使用し，試もに可食部（果肉））よりも高く，さらにフクレミカ

ンの果皮（320 µmolTE/g）17)との比較でも高値を示

れ，デメトキシスダチチンでは有していないことがした．今後，食用とされる柑橘類の果皮についてもあげられる．また，スダチチンでは，この位置にあ測定し，比較検討する必要がある．また，スダチ果るメトキシ基も抗酸化活性に影響を及ぼしている可18)

汁の抗酸化活性はレモンジュース（12 µmolTE/g）能性がある．とほぼ同等であることが分かった．
表３ スダチチン精製品の抗酸化活性
表１ スダチ果皮抽出物のポリフェノール量
スダチチン

スダチ果皮（乾燥粉末）
スダチ果皮抽出液
E-1G
E-2G
スダチ果皮エキス末
S-1G
S-2G(mg/100g)
550

デメトキシ
スダチチン
(mg/100g)
100

総ポリフ
ェノール
(g/100g)
1.9

594
2,693

128542

1.96.8

896
6,060

208
1,2114.7
17.3

表２ スダチ果皮抽出物等の抗酸化活性
スダチ果皮（乾燥粉末）
スダチ果汁
スダチ果皮抽出液
E-1G
E-2G
スダチ果皮エキス末
S-1G
S-2G

H-ORAC(µmolTE/g)
624
13

リンゴ*
ミカン*

713
3,062

スダチチン
デメトキシスダチチン
ヘスペレチン*(+)-カテキン** 参考文献 12）より抜粋．可食部（果肉）の分析値．

３・３ スダチチン精製品の抗酸化活性
スダチチンの抗酸化活性を測定したところ，代表的なポリフェノール成分よりも低値を示した．
また，デメトキシスダチチンの抗酸化活性がスダチチンよりも高いことが分かった（表 3）．
フラボノイド類の抗酸化活性は，①水素供与基としての B 環の 3’位と 4’位に水酸基をもつ構造（カテコール構造）②4-オキソ基と共役した 2,3-二重結合③3 位と 5 位の水酸基をもつことが重要とされている 19)．カテキンは 2,3-二重結合をもたないが，カテコール構造をもつため抗酸化活性が高い．ヘスペレチンは，5 位と 3’位に水酸基をもつが，2,3-二重結合はもたない．一方，スダチチンは 5 位と 4’位に水酸基をもち，あわせて 2,3-二重結合を有しているにもかかわらず，抗酸化活性はヘスペレチンより低かった．構造的な相違としては，ヘスペレチンの 3’位にある水酸基が，スダチチンではメトキシ基に置換さ22.8
58.9*参考文献 12）より抜粋．

ノビレチンでは，代謝過程で脱メチル化され，水酸基に置換された代謝物の生理活性の方が高いと報告されている 20,21)．このため，水酸基とメトキシ基を両方有するスダチチンおよびデメトキシスダチチンには新たな生理機能性を有する可能性があり，これらの生体内での代謝を含め今後さらに検討する必
要がある．

1,139
6,913
120
150

H-ORAC(mmolTE/g)
10.0
16.4

４ まとめ
（１）スダチ果皮をエタノールで抽出し，合成吸着剤を用いて粗精製したスダチ果皮抽出液（E-2G）のスダチチンおよびデメトキシスダチチン量はスダチ果皮に比べて約 4.8 倍に濃縮することができた．これを粉末化したスダチ果皮エキス末（S-2G）ではさらに約 2 倍以上濃縮された．また，抗酸化活性についても同様の傾向を示した．
（２）スダチチンおよびデメトキシスダチチンの精製品の抗酸化活性を測定したところ，デメトキシスダチチンがスダチチンよりも高いことが分かった．
メトキシ基の数が抗酸化活性に影響している可能性がある．
謝辞スダチチンの精製に関してご協力いただきました徳島大学名誉教授・津嘉山正夫先生に感謝いたします．なお，本研究は，文部科学省・地域イノベーション戦略支援プログラム（グローバル型）の一環として実施した．

参考文献

１１）渡辺純, 沖智之, 竹林純, 山崎光司, 津志田藤

１）農林水産省生産局園芸作物課. “種類別栽培状況

二郎. 食品の抗酸化能測定法の統一化を目指して（全国）, かんきつ類の果樹”. 農林水産省/特産果樹

ORAC 法の有用性と他の測定法との相関性. 化学と生産動態等調査. 平成 23 年産特産果樹生産動態等調

生物. 2009, 47, p. 237-243.

査, 2013,１２）Watanabe, J.; Oki, T.; Takebayashi, J.; Yamasaki,

http://www.maff.go.jp/j/tokei/kouhyou/tokusan_kazyu/.

K.; Takano-Ishikawa, Y.; Hino, A.; Yasui, A. Method２）Nogata, Y.; Sakamoto, K.; Shiratsuchi, H.; Ishii, T.;

validation by interlaboratory studies of improved

Yano, M.; Ohta, H. Flavonoid composition of fruit

hydrophilic oxygen radical absorbance capacity methods

tissues of citrus species. Biosci. Biotech. Biochem.,

for the determination of antioxidant capacities of2006, 70, p. 178-192.

antioxidant solutions and food extracts. Anal. Sci. 2012,３）Sergeev, I.N.; Li, S.; Colby, J.; Ho, C.T.; Dushenkov,2+28, p. 159-165.

S. Polymethoxylated flavones induce Ca -mediated１３）市川亮一. スダチのスダチチン等ポリメトキ

apoptosis in breast cancer cells. Life Sci. 2006, 80, p.

シフラボン. 食品中の健康機能性成分の分析法マニ245-253.

ュアル. 産技連／食品健康産業分科会食品機能成分４）Saito, T.; Abe, D.; Sekiya, K. Nobiletin enhances

分析研究会. 2011, p. 1-5.

differentiation and lipolysis of 3T3-L1 adipocytes.

１４）
津嘉山正夫, 佐々木貴啓, 山本幹二, 河村保彦,

Biochem. Biophys. Res. Commun. 2007, 357p. 371-376．

市川亮一. マイクロ波照射によるスダチ搾汁残渣５）Akachi, T.; Shiina, Y.; Ohishi, Y.; Kawaguchi, T.;

中のフラボン成分の迅速抽出および有用物質へのKawagishi, H.; Morita, T.; Mori, M.; Sugiyama, K.

変換. 食科工. 2010, 57, p. 427-433.

Hepatoprotective effects of flavonoids from shekwasha

１５）金谷健一郎. ポリフェノール類・総量. 新・食(Citrus depressa) against D-galactosamine-induced liver

品分析法［Ⅱ］.（社）日本食品科学工学会食品分析

injury in rats. J. Nutr. Sci. Vitaminol. 2010, 56, p. 60-67.

研究会, 光琳, 2006, p. 68-79．

６）堀江徳愛, 増村光雄, 奥村重雄. スダチ果皮中の１６）柳井久江. ピアソンの相関関係の検定. 4Steps

新フラボン（スダチチン）. 日化誌. 1962, 83, p.

エクセル統計（第 3 版）. オーエムエス出版, 2011,465-468.

p. 186-189．

７）Yuasa, K.; Tada, K.; Harita, G.; Fujimoto, T.;

１７）坂井祥平, 宇津野典彦, 武田文宣, 中川力夫.

Tsukayama, M.; Tsuji, A. Sudachitin, a

県産農産品の機能性成分の調査研究 フクレミカン

polymethoxyflavone from Citrus sudachi, suppressesの機能性成分探索. 茨城県工技セ研報第 36 号, 2008,

lipopolysaccharide-induced inflammatory responses inp. 25-27.

mouse macrophage-like RAW264 cells. Biosci. Biotech.

１８）Wu, X.; Beecher, G.R.; Holden, J.M.; Haytowitz,Biochem., 2012, 76, p. 598-600.

D.B.; Gebhardt, S.E.; Prior, R.L. Lipophilic and８）Tsutsumi, R.; Yoshida, T.; Nii, Y.; Okahisa, N.;

Hydrophilic Antioxidant Capacities of Common Foods inIwata, S.; Tsukayama, M.; Hashimoto, R.; Taniguchi, Y.;

the United States. J. Agric. Food Chem. 2004, 52, p.

Sakaue, H.; Hosaka, T.; Shuto, E.; Sakai, T. Sudachitin, a4026-4037.

polymethoxylated flavone, improves glucose and lipid１９）
東敬子. フラボノイドの抗酸化メカニズム. 食

metabolism by increasing mitochondrial biogenesis in

品機能性の科学. 食品機能性の科学編集委員会, 産skeletal muscle. Nutr. Metab., 2014, 11, 32.

業技術サービスセンター, 2008, p. 164-167.

９）堀江徳愛, 下尾弘茂, 増村光雄, 奥村重雄. デメ２０）矢野昌充. カンキツフラボノイドの発がん抑トキシスダチチン. 日化誌, 1962, 83, p. 602-604.

制作用. 食品機能性の科学．食品機能性の科学編集

１０）石川（髙野）祐子. 農産物・食品の抗酸化能委員会, 産業技術サービスセンター, 2008, p.183-184．

測定法（酸素ラジカル吸収能（ORAC）法）の妥当

２１）Li, S.; Sang, S.; Pan, M. H.; Lai, C. S.; Lo, C.Y.;

性確認. 食品の試験と研究. 2013, No. 48, p. 19-24.

Yang, C.S.; Ho, C.T. Anti-inflammatory property of theurinary metabolites of nobiletin in mouse. Bioorg. Med.
Chem. Lett. 2007, 17, p. 5177-5181.