第17回

日 本 IVF 学 会
学術集会
共催：日本臨床エンブリオロジスト 学会

2014 年 9 月13 日（土）〜 9 月14 日（日）会場：大阪国際会議場
メインテーマ「ART beyond」

学術集会抄録集

理事長挨拶 （日本ＩＶＦ学会 理事長 / 森本 義晴）････････････････････････････････････････････････････････････････････ 22
学術集会長挨拶 （第17回 日本ＩＶＦ学会 学術集会長 / 福田 愛作）･････････････････････････････････････････････ 23
Program ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 24
交通のご案内 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 26
ポスター掲載場所 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 27
お知らせ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 28
e-Question について ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 29
会長講演

座長：生殖バイオロジー東京シンポジウム 代表   /  鈴木 秋悦

ART beyond ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 30
IVF 大阪クリニック 院長 / 福田 愛作

生殖医学講演Ⅰ

座長：近畿大学 生物理工学部 教授  /  細井 美彦

生殖と時間生物学 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 31
京都府立医科大学大学院 医学研究科統合生理学 教授 / 八木田 和弘

生殖医学講演Ⅱ

座長：山下レディースクリニック 院長  /  山下 正紀

染色体の動態解析 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 32
IVFなんばクリニック / 中岡 義晴

生殖医療ブレイク・スルー

座長：木場公園クリニック 院長  /  吉田 淳

ヒト円形精子細胞の臨床応用とその成績向上のための検討 ･･･････････････････････････････････････････････････････････ 34
セントマザー産婦人科医院 院長 / 田中 温

エポック メイキング レクチャー

座長：クリニックママ 院長  /  古井 憲司

光が働きかける細胞機能 −生命科学・医学とのかかわり− ･･･････････････････････････････････････････････････････････ 36
防衛医科大学校 准教授 / 櫛引 俊宏

16日本臨床エンブリオロジスト学会セッション「卵子凍結」

座長：リプロサポートメディカルリサーチセンター 所長  /  桑山 正成
山下レディースクリニック 胚培養室長  /  岩山 広

ウシ未成熟卵母細胞におけるガラス化保存の影響 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 38
帯広畜産大学 原虫病研究センター 特任研究員 / 阿部 靖之

当院における乳がん患者の卵子凍結の現状 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 39
加藤レディスクリニック 培養室長 / 内山 一男

凍結融解卵子を用いた TESE-ICSI の臨床成績 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 41
京野アートクリニック / 中條 友紀子

リジェンド特別講演

座長：近畿大学 理事  / 入谷 明

The dawn and future of IVF ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 43
University of Hawaii Medical School, HI, USA / Ryuzo Yanagimachi

ART update1

座長：広島 HART クリニック 院長  /  向田 哲規

Culture media in the future ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 44
Sage IVF / Patrick Quinn, Ph.D.

ART update2
座長：ミオ・ファティリティ・クリニック 院長  /  見尾 保幸

Time-lapse imaging: the future has arrived ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 46
CEO iLabCoMM / Markus Montag, M.Sc., Ph.D., Prof.

基調講演

座長：京都大学大学院 医学研究科婦人科学産科学 教授  /  小西 郁生

日本の生殖医療を考える ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 48
慶應義塾大学 名誉教授 / 吉村 泰典

招請講演

座長：聖マリアンナ医科大学 名誉教授  /  石塚 文平

Pragmatic approach to the older patient and failed patients by ART in the U.S.A. ････････････････････････････ 49
University of California, San Francisco, USA / Marcelle I. Cedars, M.D.

17

学術集会抄録集

ランチタイムセッション
座長：関西医科大学 産科学婦人科学講座 教授  /  神崎 秀陽

ART 時代の子宮内膜症治療････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 51
東京大学大学院 医学系研究科 産婦人科学講座 教授 / 大須賀 穣

ワークショップ「がんと生殖医療」
座長：IVF JAPAN CEO  /  森本 義晴

Breast Cancer and ART･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 52
University of Kansas Medical Center / S. Samuel Kim, M.D., FACOG.

卵巣組織凍結・移植とがん・生殖医療 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 54
聖マリアンナ医科大学 産婦人科学 教授 / 鈴木 直

カレント トピックス
座長：京都大学大学院 医学研究科人間健康科学系専攻 教授  /  菅沼 信彦

卵子保存：過去・現在・未来････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 56
リプロサポートメディカル リサーチセンター 所長 / 桑山 正成

シンポジウム〜これからの不妊治療を考える〜

座長：広島 HART クリニック 顧問  /  高橋 克彦
アイブイエフ詠田クリニック 院長  /  詠田 由美

ART による不妊予防 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 57
日本不妊予防協会 理事長・渋谷橋レディースクリニック 院長 / 久保 春海

卵子提供の実際と現況 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 58
OD-NET 卵子提供登録支援団体 理事長 / 岸本 佐智子

提供卵子を用いた ART ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 59
英ウィメンズクリニック 理事長 / 塩谷 雅英

教育講演
座長：京野アートクリニック 理事長  /  京野 廣一

早発卵巣不全や不妊治療終了後のヘルスケア― ホルモン補充療法の重要性 ― ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 60
東京歯科大学市川総合病院 産婦人科 教授 / 髙松 潔

日本 IVF 学会臨床研究報告

座長：いしかわクリニック 院長  /  石川 元春

国内の ART におけるホルモン補充を考える･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 62
KKR 札幌医療センター斗南病院 生殖内分泌科 指導医 / 東口 篤司

18

ポスターセッション
P- 1 胚の動的解析を加味した胚の分類法と臨床妊娠率の検討 ･･････････････････････････････････････････････････････････ 64
松田ウイメンズクリニック / 末永 めぐみ

P-2 ガラス化加温後ヒト胚盤胞の胞胚腔のコラプスが着床率に及ぼす影響 ･･････････････････････････････････････････ 64
山下レディースクリニック / 石山 舞

P- 3 採卵から cIVF までの時間の差が受精率および胚発生に及ぼす影響 ･････････････････････････････････････････････ 65
浅田レディース名古屋駅前クリニック / 加藤 道高

P- 4 精巣内精子における極少精子凍結の有用性 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 65
岡山二人クリニック / 川上 典子

P- 5 非ヒト霊長類動物モデルを用いた子宮移植モデルの開発
～子宮性不妊患者に対する妊孕性再建技術の可能性を探って～ ･･････････････････････････････････････････････････ 66
慶應義塾大学医学部産婦人科学教室 / 木須 伊織

P- 6 胚培養士による個別相談（たまご相談室）を行って ･･･････････････････････････････････････････････････････････････ 66
IVFなんばクリニック / 大住 哉子

P- 7 ヒアルロン酸含有培養液が胚に与える影響について ･･･････････････････････････････････････････････････････････････ 67
英ウィメンズクリニック / 阿部 礼奈

P- 8 精液所見と精漿総カルニチン濃度の相関についての検討 ･･････････････････････････････････････････････････････････ 67
英ウィメンズクリニック / 魚住 卓矢

P- 9 ICSI 時の卵子形態は受精結果に影響するのか ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 68
浅田レディース名古屋駅前クリニック / 木田 雄大

P- 10 卵細胞膜の伸展性を考慮した脆弱な卵子に対するピエゾ ICSI の新しいアプローチ ･･････････････････････････ 69
山下レディースクリニック / 岩山 広

P- 11 ヒト卵母細胞の成熟過程においてミトコンドリアはアクチンフィラメントを介して局在を大きく変化させる ･･･････････････････････････････････････････････････････

IVFなんばクリニック / 天羽 杏実

69

P- 12 グレード別にみた２段階胚移植の有用性 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 70
吉田レディースクリニック ART センター / 鈴木 麻美

P- 13 未成熟卵体外受精胚移植法における採卵決定時卵胞径と血中エストラジオール値との関係性に対する臨床成績の検討 ･･･････････････････････････････････････････････････ 70
IVF大阪クリニック / 灘本 圭子

P- 14 長期治療の末に挙児を得た IV 期子宮内膜症 ART 症例：15 回の採卵手術からの考察 ･･･････････････････････ 71
豊橋市民病院 総合生殖医療センター / 安藤 寿夫

P- 15 卵細胞質直径 130 μ m 以上の卵子は Giant oocyte なのか
−細胞質直径測定と蛍光免疫染色による検討− ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 71
浅田レディース勝川クリニック / 小森 佑奈

P- 16 精子成熟因子としての自然免疫因子リポカリン２ ････････････････････････････････････････････････････････････････ 72
京都大学再生医科学研究所 附属再生実験動物施設 / 渡邊 仁美

19

学術集会抄録集

P- 17 良好胚盤胞を含む２個胚移植の影響 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 73
浅田レディース名古屋駅前クリニック / 北坂 浩也

P- 18 カルシウムイオノファ処理による受精補助症例の出生児調査 ･･･････････････････････････････････････････････････ 73
IVF大阪クリニック / 渡邊 千裕

P- 19 DNA メチル化修飾の違いを利用した雌雄前核の識別によるヒト異常受精卵の解析 ･･････････････････････････ 74
ミオ・ファティリティ・クリニック リプロダクティブセンター / 田中 藍

P- 20 BDI・HADS スコアと精液所見の関連 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 74
東京慈恵会医科大学 産婦人科 / 拝野 貴之

P- 21 本抗核抗体染色型別にみた多前核胚出現頻度の検討 ･･････････････････････････････････････････････････････････････ 75
IVF大阪クリニック / 大垣 彩

P- 22 ART 施設での oncofertility の現況；当院での経験から ･ ･････････････････････････････････････････････････････････ 75
IVF 詠田クリニック / 西村 佳与子

P- 23 超音波診断法を用いた凍結融解胚移植（cryo - ET）周期における子宮筋層後壁厚と妊娠転帰の検討 ･･････ 76
IVF 詠田クリニック / 本庄 考P- 24 ウサギ冷蔵保存卵巣から得られた卵子−顆粒膜細胞複合体の体外発育・成熟培養より得られた成熟卵の受精能の検討，および卵巣の組織学的解析 ･･･････････････････････････････････ 76
近畿大学大学院生物理工学研究科 / 森 樹史

P- 25 試薬添加によるマウス初期二次卵胞における２段階培養法の改善の試み ･･････････････････････････････････････ 77
近畿大学大学院生物理工学研究科生物工学専攻 / 印部 遼子

P- 26 連続培養系の確立～ 15μL drop での連続培養は可能なのか？～ ･･･････････････････････････････････････････････ 77
浅田レディース名古屋駅前クリニック / 渡邊 紘之P- 27 採精から媒精までの時間が体外受精の臨床成績に及ぼす影響 ･･･････････････････････････････････････････････････ 78
田園都市レディースクリニック / 工藤 祐輔

P- 28 胚発育速度に基づく新鮮胚移植の臨床成績 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 78
ART 岡本ウーマンズクリニック / 秋吉 俊明

P- 29 完全合成ガラス化凍結保存液を用いたヒト胚盤胞の凍結保存−ヒト血清アルブミン（HSA）は polyvinylpyrrolidone（PVP）で代替可能か？− ･･･････････････････････････ 79
三宅医院 生殖医療センター / 沖津 摂

20

学術集会 共催・協賛企業一覧 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

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日本 IVF 学会雑誌発行における投稿論文募集のお知らせ･････････････････････････････････････････････

81

日本 IVF 学会雑誌 投稿規定 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

82

日本 IVF 学会会則 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

83

日本 IVF 学会役員 ･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

85

編集委員会 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････

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ごあいさつ
皆様お待ちかねの日本 IVF 学会の季節がやって参りました．今年も，アイディアにあふれる福田愛作先生のプログラムは魅力で一杯です．特に，今年は多くのスピーカーが海外から招聘されていますので，内容の極めて濃い学術集会となるものと予想されます．じっくりと講演の 1 つひとつをお楽しみ頂きたいと存じます．
さて，日本 IVF 学会では，日本 IVF 学会誌（英文名 Journal of Assisted Reproduction）
を刊行しております．現在我が国には，生殖医学関連分野で和文投稿のできる雑誌が少なく，この雑誌に多くの優秀論文が掲載されるようになったことは嬉しいことです．折角学会で発表をしても，これが形にならないと消えてしまって業績とは認められません．研究を文章にすることは億劫ですが，是非どしどし投稿頂きたいと存じます．
さらに，本学会は日本学術会議に登録を申請中です．日本学術会議には医学分野だけでな
い何千もの学会が申請を出してきますので，現在その認定は困難なものとなっております．
しかし，本学会の果たす役割の大きさを認めて頂いておりますので早晩認定が下りるものと確信しております．
体外受精が始まってもう 36 年が経過し，この技術による出生数も 600 万人を超えようとしています．ここに至って，再生医療の生殖医療への介入が目前まで来ています．具体的には，幹細胞からの配偶子作製です．ご存じの様に，動物レベルではすでに成功しています．体外受精成功と同じかまたはそれ以上のエポックメーキングな革新的変動が生殖医療に起こる日
は遠くはありません．日本 IVF 学会は，わが国唯一の ART を中心とする学会として，こういった動きに即応した情報発信をする責任があると考えております．会員の皆様のより一層の学会活動をお願い申し上げます．

平成 26 年秋
日本IVF学会
理事長 森本 義晴

22ごあいさつ我が国の生殖医療の歴史を見ますと，1983 年の東北大学における日本で最初の体外受精児の誕生から昨年で満 30 年が経過し，2014 年は 31 年目ということになります．人生で 31 歳と言えば壮年期もしくは成熟期といったところでしょうか．日本の ART の実情を見てみますと，
海外より進んでいる部分もあるのですが，ART を取り巻く状況を見れば，まだまだそうは言えないようです．そこで，第 17 回日本 IVF 学会のメインテーマを“ART beyond”といたしました．我が国の ART には他の国々と違った問題点があります．第一は社会構造の変化による不妊女性患者の急速な高齢化．第二に，患者の高齢化にも関わらず，さまざまな規制により他の国々では通常の選択肢として用いられている技術を使うことが出来ない状況．第三に，生殖医療に関する法整備の遅れ，が挙げられます．以上のような状況を鑑み，現在の日本の ART が置かれた状況を直視するとともに，ART を取り巻く環境にいかに対処すべきか，もしくは我々がいかに改善できるか，を参加者の皆様と一緒に議論したいと思います．
基調講演として，このような日本の現状に対するお考えを，小西郁生日本産科婦人科学会
理事長の座長のもと，吉村泰典日本生殖医学会前理事長からお伺いすると共に，参加者を交えたディスカッションの時間を設けています．安倍首相がアベノミクスの次に掲げるのが，これからは女性の時代，ウイメノミクスと言われています．ART では日本の先を行く米国での実情を，本学会では初めての女性のメインゲストとなる Marcelle Cedars 教授にお話ししていただきます．その他，海外からは，今日の ART で必携の技術となりつつある Timelapse について Markus Montag 博士，新しい培養液の概念について IVF ラボのパイオニア
Patrick Quinn 博士に講演していただきます．また昨年日本でも公式に可能となりました卵
子凍結について，凍結では世界の第一人者である桑山正成博士に卵子凍結の現状を示していただきます．そのほか現在日本の ART が直面している第三者を介した生殖医療，がんと生殖医療，ART 終了後の高齢患者のケア，染色体に関する最新研究など多岐にわたり“ARTbeyond”のテーマに則したお話をしていただく予定です．例年通り，共催の日本臨床エンブ
リオロジスト学会のセッションでは卵子凍結に関する技術的側面が論議されます．
また通常プログラム以外に本年はリジェンド特別講演として当学会顧問である生殖生物学のパイオニア，柳町隆造博士（ハワイ大学名誉教授）より，先生の長い研究生活における経験から我々に対する示唆に富んだ講演をいただける予定です．ご期待ください．
日本 IVF 学会の主役は参加者の皆さんです．多くの生殖医療に携わる方々に活発な議論に加わっていただき，日本の新しい ART の扉を開けることができればと考えております．
なお，本学会と並行して同一フロアにて日本生殖看護学会が開催されております．自由に参加できるようになっておりますので，是非お顔を出していただきたいと思います．

平成26年秋
第17回 日本 IVF 学会
学術集会長 福田 愛作

23

「ART beyond」

メイン
テーマ

第17 回

2014 年 9月13日（土）時間11：45〜区分

テ−マ

レジストレーション

12：55〜13：00

開会の辞

13：00〜13：15

会長講演

ART beyond

13：15〜13：40

生殖医学講演Ⅰ

生殖と時間生物学

13：40〜14：05

生殖医学講演Ⅱ

染色体の動態解析

14：05〜14：30

生殖医療ブレイク・スルー

ヒト円形精子細胞の臨床応用とその成績向上のための検討

14：30〜14：50 コーヒーブレイク

光が働きかける細胞機能 ‒生命科学・医学とのかかわり‒14：50〜15：30

エポック メイキング レクチャー

15：30〜17：20

日本臨床エンブリオロジスト学会セッション 卵子凍結：過去・現在・未来「卵子凍結」
ウシ未成熟卵母細胞におけるガラス化保存の影響
当院における乳がん患者の卵子凍結の現状
凍結融解卵子を用いたTESE-ICSIの臨床成績

17：20〜17：50

ポスターセッション

ポスター閲覧

17：50〜18：20

ポスター優秀演題発表

口頭発表（3 演題）

18：20〜20：20

バンケット

大阪国際会議場‒イベントホール

2014 年 9月14日（日）8：30〜 9：10 リジェンド特別講演

The dawn and future of IVF

9：10〜 9：40

ART update1

Culture media in the future

9：40〜10：10

ART update2

Time-lapse imaging: the future has arrived

10：10〜10：55

基調講演

日本の生殖医療を考える

10：55〜11:10

コーヒーブレイク

11：10〜11：50

招請講演

Pragmatic approach to the older patientsand failed patients by ART in the U.S.A.

11：50〜12：40

ランチタイムセッション

ART 時代の子宮内膜症治療

12：40〜13：30

ワークショップ「がんと生殖医療」

Breast Cancer and ART

13：30〜13：50

年次総会

13：50〜14：20

カレントトピックス

卵巣組織凍結・移植とがん・生殖医療
卵子保存：過去・現在・未来

14：20〜14：40 コーヒーブレイク
14：40〜15：40

シンポジウム〜これからの不妊治療を考える〜

ARTによる不妊予防
卵子提供の実際と現況
提供卵子を用いたART

15：40〜16：05

教育講演

早発卵巣不全や不妊治療終了後のヘルスケア‒ホルモン補充療法の重要性‒

16：05〜16：20

日本 IVF 学会臨床研究報告

国内のARTにおけるホルモン補充を考える

16：20〜16：25

閉会の辞
次期学術集会長挨拶

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日本 IVF 学会 学術集会

会場：大阪国際会議場
共催：日本臨床エンブリオロジスト学会

www.ivf-et.net/17/
演者

座長

IVF JAPAN CEO / 森本 義晴
IVF大阪クリニック 院長 / 福田 愛作

生殖バイオロジー東京シンポジウム 代表 / 鈴木 秋悦

京都府立医科大学大学院 医学研究科統合生理学 教授 / 八木田 和弘

近畿大学生物理工学部 教授 / 細井 美彦

IVFなんばクリニック 院長 / 中岡 義晴

山下レディースクリニック 院長 / 山下 正紀

セントマザー産婦人科医院 院長 / 田中

温

木場公園クリニック 院長 / 吉田淳

防衛医科大学校 准教授 / 櫛引 俊宏

クリニックママ 院長 / 古井 憲司

リプロサポートメディカルリサーチセンター 所長 / 桑山 正成

リプロサポートメディカルリサーチセンター 所長 / 桑山 正成

帯広畜産大学原虫病研究センター 特任研究員 / 阿部 靖之

山下レディースクリニック 胚培養室長 / 岩山広

加藤レディスクリニック 培養室長 / 内山 一男
京野アートクリニック 培養部主任 / 中條 友紀子

University of Hawaii Medical School, HI, USA / Ryuzo Yanagimachi

近畿大学 理事 / 入谷 明

Sage IVF / Patrick Quinn, Ph.D.

広島HARTクリニック 院長 / 向田 哲規

CEO iLabCoMM / Markus Montag, Ph.D.

ミオ・ファティリティ・クリニック 院長 / 見尾 保幸

慶應義塾大学 名誉教授 / 吉村 𣳾典

京都大学大学院医学研究科婦人科学産科学 教授 / 小西 郁生

University of California, San Francisco, USA /聖マリアンナ医科大学 名誉教授 / 石塚 文平

Marcelle I. Cedars, M.D.
東京大学大学院医学系研究科産婦人科学講座 教授 / 大須賀 穣

関西医科大学産科学婦人科学講座 教授 / 神崎 秀陽

University of Kansas Medical Center / S. Samuel Kim, M.D.

IVF JAPAN CEO / 森本 義晴

聖マリアンナ医科大学産婦人科学 教授 / 鈴木直

IVF JAPAN CEO / 森本 義晴
リプロサポートメディカルリサーチセンター 所長 / 桑山 正成

京都大学大学院医学研究科人間健康科学系専攻 教授 / 菅沼 信彦

日本不妊予防協会 理事長 / 久保 春海

広島HARTクリニック 顧問 / 高橋 克彦

OD-NET卵子提供登録支援団体 理事長 / 岸本 佐智子

アイブイエフ詠田クリニック 院長 / 詠田 由美

英ウィメンズクリニック 理事長 / 塩谷 雅英
東京歯科大学市川総合病院 産婦人科 教授 / 髙松潔

KKR札幌医療センター斗南病院 生殖内分泌科 指導医 / 東口 篤司

京野アートクリニック 理事長 / 京野 廣一
いしかわクリニック 院長 / 石川 元春

IVF大阪クリニック 院長 / 福田 愛作
アイブイエフ詠田クリニック 院長 / 詠田 由美

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交通のご案内
会場アクセス （所要時間は乗り継ぎ時間等を含みません）
車の場合

阪神高速

関西国際空港

中之島西 出口阪神高速 1 号環状線

土佐堀 出口空港バス（30 分）

北新地駅

空港バス（60 分）
南海電鉄
特急ラピート飛行機 ／ 電車の場合

JR 関空快速（60 分）

なんば駅（30 分）

JR 東西線

新福島駅（1 分）
地下鉄千日前線

阿波座駅

（2 分）

徒歩（10分）徒歩（10分）

市バス（15分）/ タクシー（10分）

新大阪駅
地下鉄
御堂筋線
（10 分）

大阪駅

JR 東海道本線（4 分）

阪神梅田駅
京阪本線

徒歩（7 分）福島駅

阪神本線（2分）

大江橋駅

阪神福島駅

徒歩（10分）徒歩（1分）

（3 分）

阪

梅田

田
東梅

大

阪神

西梅田

線
本
神
阪

谷町線

北新地

線
東西
JR

福島

島

新福

御堂筋線

福島

阪神

四つ橋線

JR

中之島駅

京阪中之島線

JR
東海
道本
線

線
環状
大阪

徒歩（10分）

（7 分）

天満橋駅

（3 分）

淀屋橋駅

JR大阪環状線（2分）

大阪国際会議場︵グランキューブ大阪︶（伊丹空港）

大阪国際空港阪神高速 3 号神戸線

朝日放送本社

大江橋

渡辺橋

関西電力病院

福島小

京阪中之島
線

厚生年金
病院

島
之
中

堂島大橋

リーガロイヤル
ホテル

堂
島
川

堀川
土佐

通

京阪本線

堀

佐

土

淀屋橋

大阪市立
科学館

肥後橋

下福島公園

御堂筋

筋
だ池
あみ
靭公園

本町

阿波座

本町

なにわ筋

線
日前
鉄千
地下

四つ橋筋

大阪国際会議場

地下鉄中央線●大阪国際会議場 〒530-0005 大阪府大阪市北区中之島５丁目3-51 Tel：06-4803-5555

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ポスター掲載場所

ポスター展示
P-24

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P-4

P-3

P-2

P-1

ロビー
大阪国際会議場（グランキューブ大阪）
3F イベントホール

P- 1

末永 めぐみ   松田ウイメンズクリニックP- 11 天羽 杏実   IVF なんばクリニックP- 21 大垣 彩   IVF 大阪クリニックP- 2

石山 舞   山下レディースクリニックP- 12 鈴木 麻美   吉田レディースクリニックP- 22 西村 佳与子   IVF 詠田クリニックP- 3

加藤 道高   浅田レディース名古屋駅前クリニックP- 13 灘本 圭子   IVF 大阪クリニックP- 23 本庄 考   IVF 詠田クリニックP- 4

川上 典子   岡山二人クリニックP- 14 安藤 寿夫   豊橋市民病院

P- 24 森 樹史   近畿大学

P- 5

木須 伊織   慶應義塾大学

P- 15 小森 佑奈   浅田レディース勝川クリニックP- 25 印部 遼子   近畿大学P- 6

大住 哉子   IVF なんばクリニックP- 16 渡邊 仁美 京都大学再生医科学研究所

P- 26 渡邊 紘之   浅田レディース名古屋駅前クリニックP- 7

阿部 礼奈   英ウィメンズクリニックP- 17 北坂 浩也   浅田レディース名古屋駅前クリニックP- 27 工藤 祐輔   田園都市レディースクリニックP- 8

魚住 卓矢   英ウィメンズクリニックP- 18 渡邊 千裕   IVF 大阪クリニックP- 28 秋吉 俊明 ART 岡本ウーマンズクリニックP- 9

木田 雄大   浅田レディース名古屋駅前クリニックP- 19 田中 藍 ミオ・ファティリティ・クリニックP- 29 沖津 摂   三宅医院

P- 10 岩山 広   山下レディースクリニックP- 20 拝野 貴之   東京慈恵会医科大学

27

お知らせ
第17回日本IVF学会学術集会
共催：日本臨床エンブリオロジスト学会◦スケジュール

会期：2014 年 9 月 13 日（土）
～ 14 日（日）
会場：大阪国際会議場（グランキューブ大阪）〒 530-0005 大阪府大阪市北区中之島 5-3-51

TEL:06-4803-5555（代表）

学術集会参加者へのお知らせ◦参加証

参加受付時に領収証兼用の参加証を受付窓口にてお渡しいたします。会場内ではホルダーに入れて必ずご着用ください。
◦参加費
事前参加申し込み

会員
非会員

医師

22,000 円

医師以外

12,000 円

医師25,000 円

医師以外

15,000 円

懇親会

3,000 円

※事前参加申し込みの締め切り 2014 年８月 29 日
（金）16：00
当日参加申し込み

会員
非会員

医師

25,000 円

医師以外

15,000 円

医師28,000 円

医師以外

18,000 円

懇親会

3,500 円◦プログラム抄録集

学会雑誌が学術集会講演抄録集を兼ねておりますので、会員の方は当日ご持参ください。お忘れの方には、学会当日に 3,000 円で販売致します（数に限りがございます）。
◦日本産科婦人科学会専門医シール・日本産婦人科医会研修シール

日本産科婦人科学会専門医 10 単位シール・日本産婦人科医会研修シールを交付いたします。参加証・領収証を係にご提示のうえ、参加記名帳にご記帳ください。
◦日本生殖医学会 生殖医療専門医資格更新ポイント

参加証・領収証を係にご提示のうえ、参加記名帳にご記帳ください。旧制度５点、新制度５ポイントとなります。

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29

会長講演

ART beyond

福田 愛作
IVF大阪クリニック 院長

略 歴1978 年
1980 年
1984 年
1987 年
1988 年
1989 年
1990 年
1998 年

関西医科大学卒業
市立舞鶴市民病院産婦人科部長
京都大学大学院医学研究科（88 年修了）
東京大学医科学研究所（免疫研究部）特別大学院生
京都南逓信病院（現 NTT 京都病院）産婦人科部長
京都大学医学博士
East Tennessee State Univ.（1992 年より准教授）
IVF 大阪クリニック勤務（2003 年より院長）

日本生殖医学会生殖医療専門医，関西医科大学非常勤講師，東テネシー州立大学医学部客員教授，
米国バイオアナリスト協会（ABB）
認定ラボディレクター（HCLD）（日本人で唯一）

1978 年７ 月に英国でルイーズ・ブラウン嬢が世界で初めて IVF により誕生した．その誕生を牽引したのは，言わずと知れたノーベル賞（2010 年）受賞者ロバート・エドワーズ博士である．しかし，この偉業はエドワーズ
博士一人では到底なし得なかったことは言うまでもな
い．当時，エドワーズ博士は現在でいえばプログラム全体を指揮するプログラムディレクターであり，また胚培
養士の役割も担っていたといえるであろう．臨床面は婦人科内視鏡の専門医であったステップトー博士が受け持っていた．それ以外に，この世界的偉業達成には看護師やコーディネーターなど多くの人々の助けを必要とした．このように生殖医療，特に IVF に代表される現代の生殖医療はチーム医療なくしては存在し得ない．私は1983年，舞鶴市民病院勤務時代に両側卵管閉塞の症例に遭遇し，その当時東北大学で日本初のIVF 妊娠出産が報告されていたこともあり，本症例がIVF の最適症例と考え西日本で唯一IVF を既に開始していた徳島大学森崇英教授へ紹介した．この症例が徳島大学で２例目，日本で６ 例目のIVF 妊娠出産成功例となった．
これが私と生殖医療の出会いである．その当時の生殖医
療では，IVF が不妊治療の最終手段と考えられ，不妊治療の過程で IVF 治療を受けられること自体がラッキーであった．IVFを受けられればたとえ妊娠が不成立に終
わろうともそれは仕方のないことで，医師や医療関係者
がその後をケアするという状況にはなかった．それから30年が経過し，生殖医療の現場は30 年前と比べ全くと言ってもいいほど様変わりしている．チーム医療としての生殖医療が定着し，医師，胚培養士，看護師，カウンセラーなどの役割分担がほぼ明確となっている．治療対象となる患者の状況もおおいに変化している．以前は30代前半が主体であり不妊原因も概ねあきらかであった．近年は，患者層が 30 代後半から 40 代前半という高年齢者が中心となり，不妊原因の大きな要因に年齢因子が加わっている．さらに，海外では早くから行われている第三者を介する生殖医療や着床前診断の本邦への波及が，不妊治療の現場を複雑な状況にしている．このよ30

うなIVF治療技術に派生する様々な要因（ART beyond）
が密接に関わる状況において，不妊治療に携わる臨床医はその場その場の対応に追われるのではなく，患者の年齢や病態に応じて先を見据えた対応が必要となる．近年，従来のFSHに加えAMH という新たな卵巣予備能の指標が得られ，患者の治療成功に関する予測がある程度可能となっている．特に，妊娠成立の可能性が極めて低いと考えられる，早発閉経や染色体異常症例，また高齢患者に対して，より早い時期から患者の治療意欲をそがないよう，なおかつ教育的配慮を持って，治療不成功
時の選択肢を示しながら治療を継続していく必要がある．一定の方法があるわけではないが，個々の医師がそれぞれの人生観を踏まえた診療をすることにより，たとえ不妊治療が不成功に終わっても，患者がその先の選択肢を受け入れられる状況を作りだす必要があると私は考えている．日本の置かれている現在の不妊治療の状況を検証するとともに私の行っている診療方法を紹介したい．今回の日本IVF学会が不妊専門医にとって，現在の不妊治療の現場における患者対応の参考になれば幸いである．

生殖医学講演Ⅰ

生殖と時間生物学

八木田 和弘京都府立医科大学大学院
医学研究科統合生理学 教授

略 歴1995 年 3 月
4月
1997 年 4 月
		2000 年 5 月
6月
2004 年 3 月
2006 年 11 月
2010 年 9 月

京都府立医科大学医学部医学科卒業
研修医（京都府立医科大学部附属病院）（第 3 内科）
京都府立医科大学大学院博士課程入学（解剖学 井端泰彦教授）
同時に神戸大学に国内留学（岡村均教授）
京都府立医科大学大学院医学研究科博士課程修了
神戸大学医学部第 2 解剖学講座助手（岡村均教授）
名古屋大学大学院理学研究科システム生命科学 COE 助教授
大阪大学大学院医学系研究科神経細胞生物学講座准教授
京都府立医科大学大学院医学研究科統合生理学教授

一生にわたって刻み続ける概日時計は，生体機能に周期性を与える内因性の自律振動体である．哺乳類の場
合，睡眠覚醒，体温，血圧，心拍数，肝機能，消化管蠕
動運動，内分泌，エネルギー代謝，自然分娩における出産のタイミングなど，極めて多岐にわたる生理現象の日内変動を制御している．概日リズムの中枢は視交叉上核であり，行動リズムなど全身の機能リズムを調節している．一方で，概日時計はほとんどの末梢細胞にも存在しており，細胞レベルでの概日時計が制御する細胞機能も重要であると考えられている．
全身にあり，一生にわたって刻み続ける概日時計だが，例外的に生殖細胞には存在しないことが知られている．さらに，受精卵にもリズムがなく，発生過程において形成される可能性が示唆される．我々は，マウスES細胞を用いて，概日時計の成立過程を解析した．その結果，ES 細胞には概日時計の振動は見られないこと，しかし，in vitroで ES 細胞を分化させると，概日時計が次第に形成されてくることが分かった．つまり，細胞レ
ベルの概日時計の成立に個体発生は必要ではなく，個々の細胞にもともとプログラムされたメカニズムに従って，自律的に約 24時間周期の時計が形成されることを明らかにした．しかも，この概日時計の成立は，細胞分化と密接に関連しており，体細胞をリプログラミングし
iPS 細胞にすると，概日時計の振動が ES 細胞と同様に消失することを示した．
また，生殖細胞と発生過程における細胞レベルの概日
時計の成立とは別に，個体レベルでの生殖の成立に概日時計が重要な役割を果たしていることも知られている．
今回，生殖と概日リズムの関わりについて我々の知見を中心に紹介する．

31

生殖医学講演Ⅱ

染色体の動態解析

中岡 義晴 1）
橋本 周 1），中野 達也 1），
山縣 一夫 2），森本 義晴 1）
1） IVFなんばクリニック
2）大阪大学略 歴1988 年		
1988 ～ 1989 年
1989 ～ 1991 年
1991 ～ 1994 年
1998 年		
1994 ～ 2000 年
2000 ～ 2003 年
2003 ～ 2009 年
2009 年 6 月		
2013 年 7 月～現在

広島大学医学部医学専門課程卒業
広島大学医学部産科婦人科学教室
広島県立安芸津病院
広島大学医学部産婦人科
広島大学にて学位取得
尾道総合病院産婦人科
IVF大阪クリニック副部長
IVF大阪クリニック副院長
IVFなんばクリニック副院長
IVFなんばクリニック院長

日本産科婦人科学会専門医，生殖医療専門医，臨床遺伝専門医

はじめに生殖補助医療の実施によりヒトの配偶子や胚の染色体分析が可能となり，着床前診断（PGD）の実施により臨床レベルにおいて多数の胚の染色体を詳細に解析できるようになった．その結果，分割胚の多くにモザイクを含めた染色体異常が存在し，発育した胚盤胞においても約半数が異常であることが分かってきた．さらに，染色体異常は女性の年齢に伴い著明に増加する一方，胚の形態学的にはその異常を判断できないことも明らかとなってきた．
胚の異数性異常の多くが卵子や精子の配偶子の異常に起因する一方，多核（MNB）の存在や，１回の分裂で１ 細胞が３ 細胞以上に異常分割する胚は染色体モザイ
クの原因となり胚発生を障害している．
今回，一般臨床で用いているタイムラプスによる胚の観察，および培養器一体型共焦点顕微鏡を用いた蛍光染
色後の胚の核動態を観察し，胚形態と核動態との関連性を検討した．また，その動画を供覧していただく．
対 象と 方 法①タイムラプスによる観察
現在，臨床の場で体外受精胚移植を行っている症
例を対象として，Primo Vision（Vitrolife）を用いて胚の形態および胚発育を観察した．核の状態および分裂様式の観察は主として第二分割までを行い，その後の胚発生を検討した．
②共焦点顕微鏡を用いた核動態観察
余剰PN 胚を患者の同意および倫理委員会の承認のもとに，当研究に利用した．PN胚にmRNA（ヒストン H 2B とα -Tubulin をコード）を注入したのちに，培養器一体型共焦点顕微鏡（図１）を用いて５日間培養し，核の動態と胚の発育を観察した 1）．
また，胚盤胞となった胚をarray comparative genomic
hybridization法（aCGH法）を用いて染色体分析した．

結果①タイムラプスによる観察
胚 197 個のうち，２ 細胞期で MNB を認めたものは
97 個（49. 2％）あり，MNBの有無による良好胚盤胞到
達率はそれぞれ25. 0％，28. 4％で差は認めなかった．
また，１ 回の分裂で３ 個以上に分裂する異常分割を認めた胚は85個（43. 1％）であり，第一分割時での異常分割は48個，第二分割時では37 個とほぼ同頻度で認められた．異常分割を生じた良好胚盤胞到達率は，第一分割時が8.7％，第二分割時が14.8％であり，分割異常のない胚の40.4％と比較して有意に低値であった．
② 共焦点顕微鏡を用いた核動態観察
Day3 胚で形態良好胚（移植可能胚）であった41 個のうち，MNBを認めたものは28個（68. 3％）であり，
MNBを認めない胚は13 個（31. 7％）であった．異常分割を認めたものは13 個（31. 7％）であり，そのすべてにMNBを認めた．１ 細胞が３ 細胞に異常分裂する
時の分裂中期に，Y 字型の染色体配列が認められた（図２）．
Day 3時でのMNBの有無および異常分割の有無による胚盤胞到達率は，図３ に示すごとく，異常分割

共焦点レーザー
顕微鏡
本体

ステージ型
培養器
35mm
ディッシュ

５％O2, ５%CO2 下で培養．

図132

培養器一体型共焦点顕微鏡（CV1000 横河電機 )

ガス混合器
電力供給

分裂中期

分裂後期

できなかった可能性が考えられる．胚の異常は最終的に卵子などの配偶子形成時に生じた異常が原因となっている可能性が高いと考えられた．
今後
卵子の減数分裂で生じる染色体異常についての動態解析を，今後実施したいと考えている．

多核（MNB）

図２

Y 字染色体配列

3 方向へ分離異常分割の核と染色体の分裂

（％）
100

参 考文献
1）Yamagata, K., Suetsugu, R., Wakayama, W.: Assessment ofchromosomal integrity using a novel live-cell imaging techniquein mouse embryos produced by intracytoplasmic sperm
injection. Hum. Reprod.，24: 2490-2499, 2009.

84.6％

80
60
33.3％

40
20
0

26.7％

14.3％

第一分割時

第二分割時

異常分割ありMNB 胚

MNB なし異常分割なし＊:p<0.05

図３異常分割，核の状態と胚盤胞到達率が第一分割で認められた胚では14.3％（1/7），第二分割で認められた胚では33.3％（2/6），異常分割がなく
MNBを認める胚では26.7％（4/15）であり，MNBを認めない胚の 84.6％（11/13）は異常のものと比較し有意に高率であった．
染色体分析を行った11個の胚盤胞のうち，染色体異 常 率 はMNB の な い 胚 が 14. 3 ％（1/7） で あ り，
MNB胚が 50. 0％（2/4）
であった．
まとめ
体外受精胚移植における胚培養過程で実施する光学
タイムラプス観察においても，異常分割が多発していることが観察された．
胚を蛍光染色し共焦点顕微鏡にて観察することで，細胞分裂の進んだ胚においても核の状態を明瞭に観察す
ることが可能となり，光学顕微鏡下での診断困難な４細胞期胚以降で多核が認められる場合にはその後の発生能が低下することが分かった．
ただ，MNB 胚の胚盤胞における染色体分析においては，必ずしもすべてに異常が認められるわけではないことも示された．MNB胚は胚盤胞にまで発育せずに淘汰されているものがあること，全胚の細胞を用いて実施した aCGH 法による染色体分析のため，モザイクを分析

33

生殖医療ブレイク・スルー

ヒト円形精子細胞の臨床応用とその成績向上のための検討

田中 温
セントマザー産婦人科医院
院長

略 歴1976 年
1978 年
1982 年
1983 年
1990 年

順天堂大学医学部卒業
順天堂大学医学部産婦人科教室入局
順天堂大学医学部産婦人科大学院入学
順天堂大学医学部産婦人科大学院卒業
順天堂大学医学部第一病理学教室入局
越谷市立病院産婦人科医長
セントマザー産婦人科医院院長

臨床遺伝専門医，日本生殖医学会生殖医療専門医，日本受精着床学会副理事長，
厚生労働科学研究（成育疾患克服等次世代育成基盤研究員），日本臨床細胞学会細胞診専門医・指導医，日本超音波医学会認定超音波専門医

目的
1996年Tesarikらはヒトで初めて円形精子細胞を用いた出産例を報告した１）．その後，多くの妊娠例が世界中で報告されたが出産率は非常に低く，2000年以降はほとんど臨床に応用されなくなった．その原因は２ つある．
第一は，円形精子細胞の細胞識別が非常に困難であり，間違った細胞を注入している可能性が高い点である．第二は，第II成熟分裂中期で排卵した卵子はスパームファ
クターにより活性化され，受精に至るが，この受精現象のもととなるスパームファクターが円形精子細胞に不足しているため，発生能力が不十分となり臨床成績が低値となる点である２）．この卵子の活性化に対し，我々は従来より電気刺激を行い150名の出産例を得ている．卵子の活性化３，４）を科学的に証明するためにCaオシレーショ
ンの発現の有無，波形分析を行い検討したので報告する．
方法（１）MD-TESE にて採取した精細管をトリプシンで融解し，ノマルスキー微分干渉装置のもとで細胞の同定を行った．円形精子細胞と最も判別不能な細胞は，
精粗細胞およびリンパ球などの体細胞であり，共に５～８μmの大きさかつ円形で，N/C 比が高い核が大きな細胞である．体細胞と精子細胞との大きな差
は，後者は細胞質が非常に脆く，吸引ピペットの中で簡単に核と細胞質が分かれる点であり，その点より両者の鑑別は容易である．精祖細胞と円形精子細胞は，次の３点により鑑別可能である．精祖細胞は，１.一回り大きい（６～８μm），２.核膜，核縁が明瞭であり，核縁に隣接した複数個の核小体を認める，
３.しばらく放置しているとそのうちの数％は義足の発生を認める，の以上３点である．この結果は，ニグロシン染色，マウスなしでの注入後のMII期染色
体検討およびFISH検査より得たものであり，両者の（写真１）．
鑑別はほぼ完全にできると思われる５-７）（２）電気刺激は，交流５V/cm 1, 000KHz ８sec，＋直流
1,200V/99μsecの条件で施行した（NEPAGENE）．

34

顕微授精時，７～８μmのインジェクションピペッ
トで円形精子細胞を吸い，ガラス管の中で核と細胞質を分類させ，この両者を細胞質内に注入した（写真２）．注入後は通常の ICSI と同じ方法で卵を培養した．テサリック等の方法は，10μmと８μmの２ 種類のインジェクションピペットで卵細胞質を

18

Y

X
a

b

18

c
Y

18
d

X

e

f
Y
18

g

写真 1

写真 2

h

X

18
i

Chromosomal analysis and 
FISH results in interphase nuclei

a

b

c

d

Round spermatid injection

強く吸引・注入を３回繰り返した．次に，Caオシレー
ションの測定方法を示す．まず，Caインジケーター
であるFluo-8H AM（コスモバイオ，21091）50μgに F 127/DMSO 20％（フナコシ，84041）50μLを添加し，５分間温室で遮光し転倒混和後，４μLを
１mL SPSに加えてタッピングした．このbufferで卵 子 をincubateし 室 温 で30分 浸 透 さ せ た 後，
mediumで３回洗浄後に電気刺激や細胞質穿刺刺激を施行し観察開始した．撮影条件は，卵子はチャンバー内で 37℃，５％ CO 2 ガス下で40倍対物レンズで測定した．CCDカメラ（DP73，Olympus）
で８bit， 露 出 時 間 769sec，ND Filter（OK- 32ND 6，
Olympus），タイムラプスは１sec intervalとした８）．
結果（１）円形精子細胞を用いた顕微授精の対患者当たりの妊娠率，流産率および出産率は，表１の通りであった．
非閉塞性無精子症の中で精子が認められた症例は12％であったが，その大半は奇形または不動精子であった．
精子細胞が認められた症例は27％，最も発育した造精細胞が円形精子細胞であった症例は12％であった．以上の細胞学的診断法を用いることにより，正確に円形精子細胞を選定し，注入することが可能となった．
（２）電気刺激により正常なCa オシレーションが誘発されているかを明らかにするため，Fluo-8H AMを
Caインジケーターとして用い，電気刺激後のCa濃度の変化を経時的に観察した．電気刺激による活性化では，刺激後15分で１st Ca spike が認められた．

表 1 Clinical data of round spermatid injection
Pregnancyrate（%）

Miscarriage
rate（%）

Deliveryrate（%）

Fresh Embryo

14.0
a（179/1282）

44.1
b（79/179）7.8
c（100/1282）

Freezing-thawed
Embryo22.7
a’（74/326）

32.4（24/74）b’

15.3
c’（50/326）

Fisher’s exact test a-a’, c-c’: p ＜ 0.05 b-b’: p ＞ 0.05
（M：F ＝ 72：78）

Fluorescent Intensity (A.U)

140

a

b

120
100

ー Electrical stimulation
ー Mechanical stimulation

80
60
40
20

図1

0

0

10

20
30
40
50
60
Time after stimulation (min)70

Calcium oscillations after electric
stimulation, cytosolic aspiration andinjection

また，spikeの頻度は８ 分であり，IVFで認めるCa
オシレーションと類似したパターンであった．また，
CCDカメラの感度，励起光の開放およびCaインジ
ケーターのリークにより60分以降のオシレーションの有無およびその持続時間は不明であった（図１）．
卵細胞質の機械的注入・吸引後のCaオシレーショ
ンは刺激後15分，撮影開始直後に一過性のspikeを認めるが，その後spikeを認めることはなかったため正常なCaオシレーションは起きておらず，活性が十分に起きているとはいえない．しかし，蛍光顕微鏡下で穿刺刺激をしていないため穿刺前後のCa濃度の測定ができていないので，今後改善していく必要がある．
結論
卵子の活性化が卵子の臨床成績を大きく左右する重要な操作である．電気刺激によるCaオシレーションは自然の受精時と同様のパターンをとることはなかった．
一方，テサリック等の報告した卵細胞質の機械的な吸引・注入による操作では，Ca オシレーションが十分に発生しないことが観察され，卵子の活性化が必要である
ことが証明された．
以上の精子細胞の卵子活性化や正確な選別を行うこと
により，現在までに150名（M：F＝72：78）の出生児が生まれ，この中で異常児は４ 例で2.7％のみであった．染
色体検査は83例に行い，１例に均衡型の転座が認められたが，これは父親由来であった．流産率は41％であった．
参考文献
1）Tesarik, J., Rolet, F., Brami, C., Sedbon, E., Thorel, J., Tibi, C.,et al.: Spermatid injection into human oocytes. II. Clinicalapplication in the treatment of infertility due to non-obstructive
azoospermia. Hum. Reprod., 11: 780-783, 1996.
2）The Practice Committee of American Society for Reproductive
Medicine, Practice Committee of Society for Assisted
Reproductive Technology: Round spermatid nucleus injection(ROSNI). Fertil. Steril., 90: S199-201, 2008.
3）Miyazaki, S., Ito, M.: Calcium signals for egg activation in
mammals. J. Pharmacol. Sci., 100: 545-552, 2006.
4）Miyazaki, S., Shirakawa, H., Nakada, K., Honda, Y.: Essential
role of the inositol 1, 4, 5-trisphosphate receptor/Ca2+ releasechannel in Ca2+ waves and Ca2+ oscillations at fertilizationof mammalian eggs. Dev. Biol., 158: 62-78, 1993.
5）Tanaka, A., Nagayoshi, M., Awata, S., Mawatari, Y., Tanaka, I.,
Kusunoki, H.: Completion of meiosis in human primary
spermatocytes through in vitro coculture with Vero cells. Fertil.
Steril., 79: 795-801, 2003.
6）Tanaka, A., Nagayoshi, M., Awata, S., Tanaka, I., Kusunoki,
H.: Differentiation of human round spermatids into motile
spermatozoa through in vitro coculture with Vero cells. Reprod.
Med. Biol., 8: 169-175, 2009.
7）Tanaka, A., Nagayoshi, M., Awata, S., Himeno, N., Tanaka, I.,
Kusunoki, H.: Isolated spermatogonia protrude active
pseudopodia in vitro. Fertil. Steril., 90: 453-455, 2007.
8）Ito, M., Shikano, T., Kuroda, K., Miyazaki, S.: Relationshipbetween nuclear sequestration of PLCzeta and termination of
PLCzeta-induced Ca2+ oscillations in mouse eggs. Cell
Calcium, 44: 400-410, 2008.

35

エポック メイキング レクチャー

光が働きかける細胞機能 −生命科学・医学とのかかわり−

櫛引 俊宏１）
石原 美弥 2）
１）防衛医科大学校 准教授
２）防衛医科大学校 教授

略 歴2005 年 3 月 京都大学再生医科学研究所生体材料学分野博士後期課程修了博士（工学）2005 年 4 月 大阪大学 21 世紀 COE プログラム「細胞・組織の統合制御にむけた総合拠点形成」特任研究員
2006 年 4 月 同特任助手
10 月 大阪大学大学院工学研究科グローバル若手研究者フロンティア研究拠点特任講師
		 科学技術振興機構さきがけ「光の創成・操作と展開」研究者（兼任）2008 年 10 月 Harvard Medical School 客員准教授（Department of Dermatology）
		 Massachusetts General Hospital, Wellman Center for Photomedicine
客員研究員
2011 年 4 月 大阪大学臨床医工学融合研究教育センター招聘准教授
11 月 防衛医科大学校医用工学講座准教授

レーザーや光を用いた医療・生物学への応用は多岐に
副作用について完全に明らかになっているわけではな
わたっており，生体組織・臓器の切削や蒸散だけでなく， い．1971年の Mester らの最初の報告では，創傷治癒効
内視鏡と組み合わせた診断装置の開発や光線力学療法
果を得るためには照射パワー５〜25mW のヘリウムネ（Photodynamic Therapy: PDT）が行われている．生命オンレーザーを１〜1. 5 J/cm 2 の照射エネルギー密度（フルエンス）で患部に照射することを提唱している３，５）．
科学の基礎研究分野においてもレーザーや光はすでに実際，そのレーザー照射条件によって多くの有効な報告
欠かせないツールとなっており，各種測定装置だけではが出ているが，必ずしも効果の再現性が得られていないなく顕微鏡やイメージング分野へ幅広く応用されていといった報告もある．一方では，レーザー照射による単る．それらの中でも，私たちはレーザー光に対する生体なる温度上昇による効果であるといった意見や，術者や反応に関する研究を中心に行っている．
施設により異なった結果が表れているという意見もあ1967年，Mester らは生体組織へのレーザー照射による．LLLTは歴史ある治療方法であるが，発展がめざまる発がん性をテストするため，低エネルギーのレーザー
しい分子生物学的手法などを用いて治療メカニズムを（波長 694 nmのルビーレーザー）を剃毛したマウス背部解明し，治療効果を詳細に検証しなければならない新しへ照射した．その結果，発がんという結果は認められな
い学際的な研究領域といえる．そのためにも，これまでかったが，レーザー照射部位の体毛成長速度が非照射部積み上げられている臨床報告例を丹念に精査し，分子生位に比べて促進されていることを発見した１）．この現象
は生体に対する初めてのレーザー作用の確認といわれ，物学的知見を踏まえた生物作用，細胞作用についての研
低出力レーザー治療（Low reactive level laser therapy:
究を行うことが重要であると私たちは考えている．レー
LLLT）の始まりであるとされている．そもそも，光をザーによるLLLTが始まってすでに40年以上になる今日，用いた治療は古くから行われており，紫外線療法も100
毎年100件を超える臨床報告例，in vitro研究，多数の２）
年以上前より行われていたが ，光のなかでも単色性お
動物実験の結果が得られているにもかかわらず，“Why
よび干渉性に優れるレーザーによる生物作用は初めて
doesn't everyone use it？”なのか．総説論文でよく拝見の 報 告 で あ っ た．Mesterら は 引 き 続 い て1971年 にする原因は，レーザー照射パラメータが統一されていな
LLLTの創傷治癒促進効果に関する報告を行っている３）． いということであるが，レーザーが照射される側の生体
それ以降，多くの研究者によってLLLT に関する報告が（細胞）にも目を向ける必要がある．もし種々の生物学的なされ，皮膚潰瘍治療効果，細胞増殖促進，ATP産生
な要因が複雑に絡み合うために適切な治療法が確立さ促進，コラーゲン合成促進，炎症抑制，疼痛緩和，骨折れていないとするならば，それらを網羅的に整理し，問治癒促進や局所の血流改善など広範な生物学的効果が
題点を洗い出し，有効な治療方法の確立に向けて研究を報告されている．
行わなければならない．
一方で，Mesterらの報告から35年余りを経た2003年
そこで本発表では，まずLLLTにおける治療パラメーのJournal of Clinical Laser Medicine and Surgeryに，タを列挙する．続いて，生体側からみた細胞のレーザー
LLLT分 野 で は 著 名 なLanzafameが，“Why doesn'tに対する応答例を挙げる．著者らのこれまでの研究結果
４）
everyone use it？”という簡明な問いを投げかけている ． から，①細胞内光受容体の存在と光受容に続く生理活性
LLLT は，これまでの多数の臨床経験により，副作用の変化，②レーザー照射後の細胞内シグナルカスケードの少ない治療方法として広く普及しても問題ないように
変化，③レーザー照射後の遺伝子発現調節が起こることも思えるが，Lanzafame の論文からさらに 11年を経たを確認している．①から③は単独で起こっているのでは
現在もLLLTの生物作用メカニズムやレーザー照射後のなく，相互作用しながら最終的にレーザー照射後の細胞36

機能変化が起きていることを中心に考察する．生命誕生
当初から利用してきた光エネルギーを，これからは診断・治療に積極的に利用できる技術・方法の開発を目指
している．
参考文献
1）E. Mester, B. Szende, P. Gartner: The effect of laser beams on
the growth of hair in mice. Radiobiol. Radiother. (Berl), 9: 621626, 1968.
2）R. Roelandts: The history of phototherapy: something newunder the sun?. J. Am. Acad. Dermatol., 46: 926-930, 2002.
3）E. Mester, T. Spiry, B. Szende, J. G. Tota: Effect of laser rays
on wound healing. Am. J. Surg., 122: 532-535, 1971.
4）R. J. Lanzafame: Why doesn't everyone use it?. J. Clin. Laser.
Med. Surg., 21: 335-336, 2003.
5）E. Mester, E. Jaszsagi-Nagy: Biological effects of laser
radiation. Radiobiol. Radiother. (Berl), 12: 377-385, 1971.

37日本臨床エンブリオロジスト学会セッション「卵子凍結」

ウシ未成熟卵母細胞におけるガラス化保存の影響

阿部 靖之

略 歴
東北大学大学院農学研究科博士課程修了
2005 年（博士（農学）取得）
2004 年 4 月～ 2006 年 3 月
日本学術振興会特別研究員（DC 2）
帯広畜産大学機関研究員
2006 年 4 月～ 2009 年 3 月
2009 年 4 月～ 2009 年 12 月 日本学術振興会特別研究員（PD）
2010 年 1 月～ 2014 年 3 月
山形大学大学院理工学研究科助教
帯広畜産大学原虫病研究センター特任研究員
2014 年 4 月～現在

帯広畜産大学
原虫病研究センター
特任研究員

著 書
冷凍空調便覧 Ⅳ巻 食品・生物編（第 6 版；冷凍空調便覧改訂委員会編）第８ 章３ 節 動物胚お
よび卵子
（哺乳類）
（分担）

方法
ウシ卵巣より採取した卵丘細胞-卵母細胞複合体（COCs）をガラス化保存し，成熟培養後にミトコンドリ
アおよびアクチン，紡錘体の分布・形態，呼吸量を指標とした機能，遺伝子発現について解析した．
結果
成熟卵母細胞の活性型ミトコンドリア分布は，均一型および凝集型，減少型の３ タイプに分類され（図１），
均一型は受精・発生能が最も高かったが，ガラス化卵における出現頻度が新鮮卵に比べ約半数に減少していた．
酸素消費量もそれに対応するように均一型が最も高く，ガラス化卵では均一型と他の２ タイプとの間で大きな差異がみられた（図２）．また，細胞分裂において重要な

均一型

凝集型

B

A

減少型

C

B

図１
38

成熟培養後の活性型ミトコンドリアの分布C

アクチンフィラメント
（細胞骨格）
および紡錘体に異常が生じていたが，サイトカラシンDなどの細胞骨格安定剤
でガラス化前処理することで，その異常を軽減することができた．一方で，遺伝子発現はアポトーシス抑制因子
Bcl-2が新鮮卵と同程度であったにもかかわらず，アポトーシス誘導因子Baxが高く，ミトコンドリア分裂因子Drp-1が低いという違いがみられた．
考察
凍結処理の刺激がミトコンドリアおよび微小管に作用して局在を変化させるとともに，アポトーシスが誘導されミトコンドリアの膜透過性亢進および機能低下が起こったと考えられる．また，成熟能を有するガラス化卵であっても受精能が低い一方で，胚発生能は正常であり，卵子側の受精関連因子であるCD9遺伝子発現は新鮮卵と同程度であったことから，細胞骨格安定剤による前処理や受精法の改良によって，障害を回避できるかも
しれない．
参考文献
１）Abe, Y., Hara, K., Matsumoto, H., Kobayashi, J., Sasada, H.,
Ekwall, H., Rodriguez-Martinez, H., Sato, E.: Feasibility of anylon-mesh holder for vitrification of bovine germinal vesicle
oocytes in subsequent production of viable blastocysts. Biol.
Reprod., 72: 1416-1420, 2005.

酸素消費量（10-15/ mol s-1）

はじめに
近年，卵子
（卵母細胞，胚）の凍結保存（ガラス化保存）などの生殖補助技術は目覚ましい発展を遂げ，産業動物の生産に大きく貢献しているばかりでなく，その技術はヒト不妊治療にも応用され，重要性が増している．筆者
らは，ウシを対象として未成熟卵母細胞（卵核胞期）のガラス化保存法を改良し高い成熟能を実現したが，受精能は低かった．このように，凍結保存した卵母細胞は品質が低下することが問題であるが，そのメカニズムは未だ不明である．そこで，より安全な卵母細胞のガラス化保存を目的として，凍結卵母細胞の特徴を解析した．

6
a

ac
ab

5

b

ab

bc

4

0

新鮮
ガラス化
a-c

P＜0.05．

~~

図2

均一

凝集

減少

活性型ミトコンドリア分布別の酸素消費量

日本臨床エンブリオロジスト学会セッション「卵子凍結」

当院における乳がん患者の卵子凍結の現状

内山 一男
高山 優子，森 智絵美，
薮内 晶子，沖村 匡 史，
加藤 恵一
加藤レディスクリニック

略 歴1981 年
1981 〜 1994 年
1993 年
1994 〜 2008 年
2008 〜 2010 年
2010 年〜現在

はじめに
近年，若年がん患者の罹患率増加，がんに対する診断
および治療の進歩などにより生存率が向上している．それに伴いがん患者に対するquality of life（QOL）への配
慮，特に生殖年齢患者に対する化学療法，放射線療法などでおこる任孕性の低下，喪失が新たな問題として取り上げられている．
がん患者における任孕性温存法の１ つとして配偶子または受精卵の保存が挙げられる．既婚患者では治療前のIVFにより受精卵ないし胚として凍結保存を行い，未婚患者では精子または卵子を受精前の段階で凍結保存することで，治療後の妊孕性を温存することが可能となる．当院では 2001 年 11 月から乳がん患者を対象とした凍結保存を行っており，当院における乳がん患者の卵子または胚の凍結保存について現状を報告する．
乳 がん 患 者 の 当 院 受 診 まで の 流 れ
患者対応は電話での問い合わせに対し受診条件の説明から始まる．受診条件は，①43歳以下であること，②現疾患の主治医の了承が取れていること，③乳がんの治療スケ
ジュールが決まっているか，である．これは当院での採卵をいつまでに終わらせる必要があるかを把握するためであり，②③が不十分の場合は主治医と直接相談し，当院での治療の可否を判断している．３条件を満たした患者には採卵，凍結融解方法，生存率，ICSI，受精率，分割率，妊娠率，治療費および保存費用について説明を行っている．
最終的に患者から質問，不明点がないか再度確認し，後日改めて採卵するか否かの判断を書面にて行っている．
対 象 および 方 法
今回対象とした患者は，問い合わせの段階の266名，内訳は未婚者 152名（39.1±5.1歳），既婚者114名（38. 1± 4. 5 歳）とした．検討項目は，問い合わせから受診を行った患者数，卵子，胚の凍結保存を行った患者数および患者１ 人あたりの凍結保存卵子，胚数，患者の年齢
分布，融解後の結果とした．

宇都宮医学技術専門学校卒業
獨協医科大学勤務
1 級臨床病理技術士資格認定
加藤レディスクリニック勤務
みなとみらい夢クリニック出向
加藤レディスクリニック勤務

結果
2001年から2013 年の患者問い合わせ件数の変遷で2009年から増加傾向となり，2012年は未婚55件，既婚
31 件，2013 年は未婚 25 件，既婚 26件であった．未婚患者は問い合わせ152件で受診89件（58. 6％），うち採卵に至ったのは74件（83.1％）であった．卵子が凍結できたのは71件（95. 9％）でトータル141個の卵子（平均1. 99 個）が凍結された．既婚患者は問い合わせ114件で受診68件（59.6％），うち採卵に至ったのは50件（73. 5％）であった．
凍結胚が確保できたのが39件（78. 0％）で，トータル 128個の胚（平均3. 28個）が保存された．
年齢分布では未婚患者 35 〜 39 歳が 32 件（45. 1％），
40 〜 44 歳が 20 件（28. 2％）と多かった．既婚患者は35 〜 39 歳が19件（48. 7％），30 〜 34 歳および40 〜 44歳
が７件（17. 9％）と続いた．現在までの乳がん治療後の不妊治療施行状況は，未婚患者１ 名，既婚患者10 名で，未婚１ 症例においては凍結融解後の卵子は生存するも受精が認められず，既婚 10症例からは５ 名の健児が得られた．
結論
乳がん患者においても採卵し，卵子および胚の凍結保存が可能であった．また，ホルモン受容体陽性の患者でも自然周期での採卵が可能であった．既婚者の凍結胚移植においては健児が得られ一定の成果が得られたが，未婚乳がん患者における治療後の不妊治療施行状況については融解例数が殆ど無く，当院において明確な成果は証明できず，長期的な検討が必要であった．
当院においてがん患者以外の卵子の凍結は，採卵当日に精子の確保ができず止むを得ず行っているケースがある．その場合，次周期以降にTESEを含め精子の確保ができた患者は融解し，ICSIを行っている．2010年から2014年に実施した35症例（36.9±4.5歳）61個の結果を示
すと，生存率80.3％（49/61），正常受精率71.4％（35/49），
分割率88.6％（31/35）であった．移植はDay2分割胚２例，
凍結胚盤胞移植５例で４名の健児が得られ，凍結卵子の39

融解あたりの生産率は6.6％（4/61）となった．
以上のことから，エンブリオロジストから見た乳がん患者の卵子凍結として，今後の課題に挙げられるのは生存率および受精率の向上である．そのうえで，現疾患治療背景を考慮し，適正な凍結個数とは果たして何個なのか検討していく必要があると示唆された．

40

日本臨床エンブリオロジスト学会セッション「卵子凍結」

凍結融解卵子を用いたTESE-ICSI の臨床成績

中條 友紀子
京野 廣一
京野アートクリニック

略 歴2001 年 3 月

2007 年 3 月
2012 年 9 月
2013 年 9 月

宮城県総合衛生学院卒業
臨床検査技師資格取得
レディースクリニック京野入職
京野アートクリニック開設に伴い異動
京野アートクリニック高輪開設に伴い異動
京野アートクリニック異動

日本卵子学会認定胚培養士，日本臨床エンブリオロジスト学会理事

はじめに
当院では，精巣内精子回収法（以下，TESE）を実施す
る症例に対し，状況に応じてTESE前に卵子凍結を行っている．
卵子凍結による最初の妊娠は1986 年にChen C らにより報告され１），その後も生殖医療における臨床的技術として多くの施設によって取り組まれ，当院でも臨床成績を報告している２）．2013年にはASRM（米国生殖医学会）
より卵子凍結のガイドラインが発表され，臨床治療の技術と認められた３）．卵子凍結の技術は，化学療法や放射線療法が必要ながん患者にとって，妊孕性温存の選択肢の一つとなる（医学的適応）４，５）．また，日本国内において将来の妊娠に備え，健康未婚女性の卵子凍結が増加することが予測される（社会的適応）．
今回，TESE-ICSI における凍結卵子と新鮮卵子の臨
床成績の比較と凍結卵子のtime-lapse観察による胚発生の動態について検討した．
対 象と 方 法
臨床成績の比較については，対象を1996年４ 月から2013 年 12 月までに当院で採卵およびTESEを行い，新鮮 TESE 精子によるICSIを行った246症例269周期とした．新鮮卵子を ICSI に供した群を新鮮卵子群，凍結融
解卵子をICSI に供した群を凍結卵子群とし，さらにOA 群，NOA 群，KS群の３群に分け，受精率，胚発生，妊娠率，流産率について検討した．
Time-Lapse cinematography（TLC）を用いた動的形
態解析は，2012 年９ 月から2013年12月までに当院で採卵を行い，TESE 症例に限らず，TLC観察を行った症例について，PN 出現時間（tPNa）
・消失時間（tPNd），２，
３，４，５，８ 細胞までの分割完了時間（t2，t3，t4，t5，
t8），第一分割終了から第二分割開始までの時間（cc2），３ 細胞から４ 細胞に到達するまでの時間（s2）を凍結卵
子と新鮮卵子について比較検討した．
統計処理は，χ2 検定もしくはt検定を用いて行った．

結果
TESE後 の 精 子 回 収 率 はOAで95.1%（174/ 183），
NOAは26. 0%（75/288），KSは37. 0%（20/54）であった．
凍結卵子群の融解後の生存率は87.2%（348/399）であった．
新鮮卵子群と凍結卵子群の各々の臨床成績を表１ に示す．受精率に有意差は認められたものの，その他の項
目で有意差は認められなかった．
TLC観察を行った凍結卵子と新鮮卵子の各々の時間について，胚盤胞に到達した胚の２ 群間の分割時間を比較検討した結果，凍結卵子群において新鮮卵子群と比較し，t4，t8，s 2について有意に分割の遅延が認められ た．
（t4：41.2±5.2 vs. 38.9±4.6，t8：67.9±12.2 vs.
59.7 ±10. 8，s 2：3.8±4. 5 vs. 1. 8±3.1:P= 0. 057）
考察
今回の結果より，受精率は，OA群において新鮮卵子群と比較し凍結卵子群で有意に低い結果（P＜ 0. 01）であったが，NOA群とKS群では有意差は認められなかった．その後の胚発生や妊娠率，流産率は各群において有意差は認められなかった．
卵子凍結のメリットとして，TESE精子の凍結よるダ
メージの回避が挙げられる．NOA症例おいては，回収される精子が極少数である可能性が高く，凍結によるダメージも大きいこと，また，凍結TESE精子を用いた
ICSIにおいて妊娠率が低いとの報告もあり６），なるべく新鮮なTESE精子を用いることが望ましいのではないかと考える．また，TESE組織を凍結している症例では，少数の卵子しか採卵できない場合，より多くの卵子を集めてから凍結精子を融解するほうが再度のTESEを行う
可能性も低くなり，患者負担も減少する可能性はある．
しかしながら，NOA症例のTESEの精子回収率はOA症例に比べて低く，
TESE前の卵子凍結は患者にとって身体的，経済的，精神的負担は増大するであろう．また，胚盤胞に到達した凍結卵子は，胚盤胞に到達した新鮮卵子の胚発生と比較し，第二分割完了時間やその後の分割時間が遅延している傾向にあり，卵子凍結の影響が

41

表１

OA 群，NOA 群，KS 群の臨床成績
OA

NOA
新鮮卵子

凍結卵子

新鮮卵子

凍結卵子

新鮮卵子

周期数

25

135

26

64

10

11

卵数

211

1647

142

487

53

78

受精率（%）

59.6 ＊a（118/198）

69.7 ＊b57.0（906/1300） （81/142）

58.9（287/487）56.6（30/53）

66.7（52/78）

Day3 良好胚率（%）

37.5（39/104）35.8（230/642）

35.0（28/80）42.2（89/211）58.6（17/29）41.2（21/51）

胚盤胞到達率（%）

45.9（39/85）50.7（272/537）

39.3（22/56）56.0（94/168）52.4（11/21）65.0（26/40）良好胚盤胞率（%）

20.0（17/85）19.2（103/537）

16.1（9/56）

24.4（41/168）

18.2（4/22）

22.5（9/40）

妊娠率（%）（/ET）

37.2（16/43）44.1（101/229）

28.6（10/35）41.4（36/87）43.8（7/16）

61.5（8/13）

流産率（%）

18.8（3/16）

21.8（22/101）30.0（3/10）

25.0（9/36）

28.6
（2/7）

25.0
（2/8）

＊a，b: p ＜ 0.01

推察された．そのような点については，インフォームドコンセントをしっかり得たうえで進めなければならず，考慮が必要である．
今回の検討において，凍結卵子を用いた治療により，22 名（OA 12 名，NOA ６名，KS ４名）の児が出生しており，出生時の異常は認められていないものの，予後調査についてはまだ始まったばかりである．凍結卵子を用いた出生児の予後調査は，大規模では行われておらず，
長期的かつ大規模な予後調査が必要不可欠である．
卵子凍結による治療は，卵子凍結を行うメリットとデメリットをよく考慮したうえで進める必要がある．
参考文献
1）Chen, C.: Pregnancy after human oocyte cryopreservation.
Lancet, 1: 884–886, 1986.
2）Nakajo, Y., Hattori, H., Sato, Y., Kanto, S., Araki, Y., Kyono, K.:
Vitrified-Warmed and Fresh Oocytes Yield Comparable
Outcomes When Fresh Testicular Sperm Is Utilized. J. Clin.
Embryol., 16: 138-144, 2013.
3）The Practice Committees of the American Society for
Reproductive Medicine and the Society for Assisted
Reproductive Technology. Mature oocyte cryopreservation: aguideline. Fertil. Steril., 99: 37-43, 2013.
4）Kyono, K.: Fertility Preservation. J. Mamm. Ova. Res., 30: 101108, 2013.
5）Doshida, M., Nakajo, Y., Toya, M., Kyono, K.: A live birth fromvitrified-warmed oocytes in a Philadelphia chromosomepositive acute lymphoid leukemia patient 5 years following
allogenic bone marrow transplantation and after a magnitude
9.0 earthquake in Japan. Reprod. Med. Biol., 12: 187-191,
2013.
6）Fukunaga, N., Haigo, K., Kyono, K., Araki, Y.: Efficiency of using
frozen-thawed testicular sperm for multiple intracytoplasmic
sperm injections. J. Assist. Reprod. Genet., 18: 634-637, 2001.

42

KS

凍結卵子

リジェンド特別講演

The dawn and future of IVF

Ryuzo Yanagimachi

Past and present employment
Research scientist. Worcester Foundation for Experimental Biology,
1960- 1964
University of Hawaii Medical School,
Shrewsbury, MA, USA (Mentor: Dr. M.C. Chang)
HI, USA
Lecturer (temporal), Faculty of Science, Hokkaido University,
1964-1966
Sapporo, Japan
1966-2004
Assistant Professor, Associate Professor and Professor, Departmentof Anatomy and Reproductive Biology, University of Hawaii Medical
School, Honolulu, HI, 96822
Director, Institute of Biogenesis Research, University of Hawaii
1999-2004
Medical School, Honolulu, HI 96822
2005- present
Professor Emeritus, University of Hawaii Medical School, Honolulu,
HI 96822

Before 1950s very little was known about mammalianfertilization. This was mainly due to the difficulty incollecting eggs from the female tract and examining themunder controllable conditions. It was Thibault and his
associates (1954, 1956) who first presented unequivocal
evidence of successful IVF in mammals. They
demonstrated the presence of spermatozoa in rabbit eggs
after in vitro insemination using the spermatozoa
collected from the female genital tract of mated animals.
It was Chang (1952) and Austin (1952) who first reported
that mammalian spermatozoa require a physiologicalchanges - called“capacitation”within the female tract
before they become fertilization-competent. Thesestudies triggered intensive studies of mammalianfertilization. IVF is a powerful tool to study the process
and mechanism of mammalian fertilization. It was also
expected to enhance reproduction of laboratory and farmanimals and serve as a powerful tool to overcome certain
types of human infertility.
In 1960s only handful of researchers were interested
and tried to fertilize human eggs in vitro. Motoyuki
Hayashi (Toho University, Japan), Pierre Soupart(Vanderbilt University, USA), Howard Jones (Eastern
Virginia Medical School, USA), Alex Lopata (Universityof Melbourne, Australia) and Robert Edwards (Cambridge
University, England) were among them. All of themstruggled with repeated unsuccessful attempts. They
faced ethical resistance and criticism from religious
people and even from some science colleagues. The birthof the first IVF baby in 1978 changed the field of humanassisted reproduction. Thanks to a steady improvementsof IVF-ET technologies, many infertile couples today areable to have their own children. However, 50-70% of all
couples visiting infertility clinics today still remainchildless.
The world we live in is by no means risk-free. This istrue for pregnancy. In humans, it is estimated that about
4 0% of fertilized eggs after natural conception havechromosomal aberrations. Although most of them areaborted before or during post-implantation development,few (~0.6 % or higher ) reach the term. About 3% of newborn
infants are born with birth defects even after naturalconception. The incidence seems increase with theadvancement of maternal age. Recently, it has become clearthat gene expression of gametes, zygotes and developing
embryos is affected by the environment in which they aredeveloping. Although it may be impossible to eliminate or
prevent all genetic and non-genetic (epigenetic) errors, weshould at least try to minimize them. Pregnancy throughassisted reproduction can be and should be as safe as (andeven safer than) natural conception.

43

ART update1

Culture media in the future

Patrick Quinn,
Ph.D.
Sage IVF

Dr. Quinn graduated with a Bachelor of Agricultural Science degree from The Universityof Adelaide, Australia, in 1 9 6 8 and undertook his PhD studies at The University ofSydney in Australia from 1969- 72 under the supervision of Dr. Ray Wales. He obtained
a postdoctoral fellowship at The Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine, USA during
1972- 73, sponsored by Dr. Wes Whitten. From 1974 until 1981 he had an academic
appointment at The University of Newcastle, Australia, rising to the rank of Senior Lecturer
by 1980. He spent 1980 on sabbatical leave at the MRC Mammalian Development Unit
in London, working with Dr. David Whittingham and Anne McLaren. In 1982 he joined the
IVF program at The Queen Elizabeth Hospital, Adelaide, Australia with Dr. John Kerin andbegan his work with human IVF. While in this position, he developed his culture medium,HTF (Human Tubal Fluid). He went to the USA in 1986 to work with Dr. Richard Marrs
and held several IVF laboratory director positions in Los Angeles until 1996. Dr. Quinnbecame involved in the commercial field of IVF culture media manufacture in 1996. He
then held the position of Vice President of Research and Development at Sage In-Vitro
Fertilization. He retired from CooperSurgical in June 2013 and retains the position as
Emeritus VP of R&D and consultant to Cooper. Dr. Quinn has over 200 authored or coauthored peer reviewed papers, book chapters, abstracts and invited lectures over a career
spanning more than four decades in reproductive biology.

Historical development of 
culture media in human ART
The first culture media for culture of preimplantation
mouse embryos were those designed by Whitten. Studies
by Brinster clarified the requirement of both lactate andpyruvate and Whitten subsequently added all threeenergy sources, glucose, lactate and pyruvate that wereable to support blastocyst development of mouse zygotes
from certain strains of mice. This basic formulation is thebasis for all subsequent media for preimplantation
mammalian embryos and, in particular mouse and humanembryos.
The development of specific media for human IVF
began in the 1980s. Initially two subsets of media wereused, simple media such as HTF and complex media suchas Ham’s F10. The simple media prevailed in use forculture of human embryos during the first 2-3 days ofdevelopment because few embryo were available.
However, better stimulation protocols which produced
more embryos for continued culture required better
culture media to support development to the blastocyst
stage. In the late 1990s Gardner and Lane (5) added
amino acids to a basic medium in a combination thatprovided good embryo development during theprecompaction phase (Days 1-3) of development and thepost-compaction phase (Day 3-5/6). Development ofsimilar media by most commercial media producers hasensued. Gardner and Lane’s approach of using two
different media for the pre- and post-compaction phasesof development have been called“back to nature”.
Another approach has been to use the same medium for44

both the pre- and post-compaction phases ofdevelopment; this approach has been called“let theembryo choose”.
Current and new media components
i. Inorganic Ions
All ART media contain the ions present in Krebs-Ringer
bicarbonate solution. There are variations in the ratio andconcentration of some of the inorganic components. When+I developed HTF Medium I found that increasing K tolower the ratio of Na + to K + increased the rate ofdevelopment of mouse zygotes. Another modulation of ioncontent in media is with Ca2+ and Mg2+. In 1- and 2-cell
hamster embryos there is an excessive uptake of Ca2+
occurring by inappropriate handling, metabolic
perturbations and just by the act of collecting the embryos
and placing them in culture, that reduces further
development in vitro. The increase in intracellular Ca2+ ispartly due to influx from the medium through calcium
channels but it can be lessened by increasing Mg 2+
concentration in the medium. This strategy has been
adopted by several commercial ART media companies. For
fertilization however that there is a Ca 2+ spike inspermatozoa during the fertilization process so a lower Mg2+
concentration is required in fertilization medium.
Removal of phosphate and glucose from medium
resulted in good human IVF outcomes. This wasprobably due to the excessive stimulation of glycolysis by
the high levels of glucose and phosphate in control media.
The addition of amino acids to media has negated thiseffect and most commercial ART media now containbetween 0.25 and 0.35 mEq/L of phosphate ions.

from one species to another.

ii. Energy substrates
This is a diverse topic that has been studied over the
past 50 + years. Oocyte and early cleavage stage embryos
do not utilize glucose but have low levels of oxidation of
pyruvate. In later development, the utilization of
glucose by glycolysis increases as does TCA cycle
activity. This increases the rate of oxidative
phosphorylation to provide greater amounts of ATP for
biosynthesis and blastocoel cavity formation during thelater stages of preimplantation development. Hence theconcentration of glucose in increased in Blastocyst media.
Glucose is required for sperm function in Fertilization
Medium. On a practical note, care is needed with thestorage of sodium pyruvate raw material. Pyruvate has
limited aqueous stability converting to parapyruvate which
is a metabolic inhibitor. Ethyl pyruvate and, to a lesser
extent, methyl pyruvate, more stable esterified forms of
pyruvate, improve mouse embryo development in vitro.

iv. Vitamins
G 2 Blastocyst medium was one of the first of themodern day media to contain vitamins based on positive
results with mouse embryos. In studies of hamster
embryos, only the water soluble vitamin pantothenate
was found to stimulate the development of zygotes to theblastocyst stage. Cook IVF have added calcium
pantothenate to both their Cleavage and Blastocyst
media. Obviously this topic needs further study todetermine which, if any, vitamins would help in ART
media.

iii. Amino acids
Amino acids have varied and important roles during
early mammalian embryo development which range
from biosynthetic precursors and energy sources toosmolytes, intracellular pH buffers, antioxidants,
chelators and regulators of differentiation. Not only doamino acids alleviate stress on embryos and oocytes
during culture, their presence prevents efflux ofendogenous amino acids from the embryo during
handling procedures such as oocyte collection,
micromanipulation, cryopreservation and embryotransfer. The concentration and necessity for all aminoacids during all of the preimplantation period have been
debated. Gardner & Lane used non-essential amino acids
during the precompaction phase whereas both nonessential and essential amino acids were present inmedium for the post-compaction phase. Initially aminoacids were used at the same concentration as in Eagle’smedium. It is now recommended that the concentrationof both non-essential and essential amino acids in media
be half the concentration in Eagle’s medium. The
problems with ammonium accumulation in medium canbe lessened by renewing the medium at least every 48 h
and also substituting glutamine with the stable dipeptide,alanyl-L-glutamine or glycl-L-glutamine which areostable at 3 7 C. Despite the suggestion that glycylglutamine may be a better source of stable glutamine formouse embryos[45], there is a report in which human
IVF was performed using KSOMAA containing either
alanyl-glutamine or glycyl-glutamine and the alanylglutamine gave superior ART outcomes than glycylglutamine [46] This illustrates the risk of extrapolatingv. Fatty acids, nucleic acid precursors, chelators
and antioxidants
Fatty acids are beneficial for the development of mouseembryos in vitro but are inhibitory to fertilization. It is
unknown whether nucleic acid precursors have any
effect on embryo development in vitro. The majorchelators and antioxidants that are known to function in
IVF media are EDTA, pyruvate and low atmospheric O2
concentration.
vi. Proteins and growth factors
HSA is the traditional protein source used in human
IVF. Supplementation with α and β globulins improves
success rates. Growth factors (GF) added to human ART
media have stimulated the formation of blastocysts. So
far, only one GF, granulocyte-macrophage colony
stimulating factor (GM-CSF) has been clinically tested
and although there was some moderate increase inpregnancy rates and live births, using a mixture of GFs
added to culture medium has been proposed rather than asingle GF but more studies are required to determine
dose and combination of GFs to use.
In addition to the composition of IVF medium, the way
it is used has a major role in the success rates obtained.
One needs to consider factors such as the oil overlay, gas
phase, incubation chamber, embryo density, contact
supplies and quality control/quality assurance practices.
Emerging technology for the IVF lab are morphokinetic
analysis for selection of embryos, vibration during culture
and whether success rates are influenced by sequential
media culture or a 1-step continuous culture medium.
The bottom line is“good”medium used badly gives poor
results.
References and a more detailed discussion of this topic
is available in Quinn, P 2014 Culture Media, Solutions,and Systems in Human ART, Cambridge University
Press.

45

ART update2

Time-lapse imaging: the future has arrived

Markus Montag,
M.Sc., Ph.D., Prof.
CEO iLabCoMM

Markus Montag obtained his PhD at the German Cancer Research Centre, Heidelberg in 1992.
He then worked at NUH, Singapore with Prof SC Ng, the father of the first SUZI baby. In 1995
he became the laboratory director of the IVF Laboratory at the University of Bonn and was
appointed Professor for Experimental Reproductive Medicine in 2009. In 2011 he became
head of IVF Laboratory at the University of Heidelberg and founded a company, ilabcomm
GmbH, for international consulting of reproductive laboratories and selected companies.
Since June 2013 Markus works exclusively as CEO of ilabcomm; a major contractor of his
consulting activity is FertiliTech, Denmark.
Markus has published more than 200 papers (> 130 peer reviewed) and more than 20 bookchapters. He is actively involved in counselling IVF centres and educating young people
worldwide and is a frequent lecturer.

Since the beginning of human IVF, embryo selection
procedures are mainly based on morphological evaluationof the embryos at distinct time points during development
followed by an evaluation at the time of transfer using
standard microscopy. In combination with standard
incubation technology, this does lead to disturbed culture
conditions. In addition, only a minor part of the wholedevelopmental process of an embryo can be assessed.
These shortcomings were already known in the earlydays of IVF and one dream of that time was to visualize
the entire development of an embryo without
interruption.
It was the group of Mats Wikland from Gothenborg in
Sweden, which first reported on time-lapse imaging inhuman IVF at the 1st Bourn Hall Meeting in 1 9 8 1.
However, it took more than another decade until further
data were presented and the major players at that time
were groups in Australia, Sweden and Japan. The
solutions for time-lapse imaging were either inverted
microscope equipped with an incubation hood at the
microscope stage or smaller microscopes with adapted
camera systems that were placed inside an incubator.
Time-lapse at those times was hosted in academic
research settings and far from being a technology that
could be readily used in routine IVF.
The adaption of day 5 culture to blastocyst revealed
the necessity to enable better embryo evaluation byqualitative as well as quantitative approaches. A major
focus was towards predicting embryo implantation
potential. As part of this and in search of making
morphological evaluation of embryos comparable, Alphaand ESHRE produced a consensus paper recommendingtime-points that were considered to be crucial for embryo
evaluation. However, although the consensus paper wasa major step forward, it still relied on a few daily
observations and did not attempt to quantify the dynamic

46

morphological changes over time, which is often referred
to by the term morphokinetics. Routine clinical use ofmorphokinetic embryo analysis was until the recent
introduction of commercial time-lapse based imaging
systems not feasible.
The first two systems, which were introduced, followed
different concepts. One was an insert for placement in astandard incubator; the other was a stand-alone,benchtop-like incubator with an integrated time-lapse
system. Both systems were based on the use of Hofman
modulation contrast. A third system – which was also
following the concept of an insert into a standard
incubator – used dark field imaging and a software
detecting features of the first two cell divisions andpredicting blastocyst development.
A general working principle is, that time-lapse imaging(TLI) provides automated acquisition of images for one
or more embryos at pre-set time intervals. In combination
with an integrated closed incubation system, it further
enables the undisturbed culture of embryos. Recent
publications highlight the benefit of undisturbed culture,
which does result in better embryo development andhigher blastocyst formation rates. The additional
information gained by time-lapse allows then to de-selectembryos based on criteria, which are known to have an
impact on implantation. One such criterion is the fastdivision to the 3-cell stage after fading of the pronuclei.
This so-called direct cleavage is associated withextremely low implantation rates. In view of this it isobvious, that time-lapse imaging does reveal cell cycle
characteristics of developing embryos that werecompletely inaccessible before the era of time-lapse. Bylooking on the course of development rather than acertain cell stage at a distinct point in time, continuous
embryo monitoring has introduced a paradigm shift inembryology. The major outcome is no longer if anembryo has reached the blastocyst stage, but how it
developed to blastocyst and if there were cell cycle
characteristics that are considered as being unfavorable
in the light of implantation.
Some studies have investigated the potential use ofmorphokinetic parameters to predicting the likelihood ofan embryo for being aneuploid. Although this topic is still
under debate, it seems clear that time-lapse is not a
substitute for Preimplantation Genetic Screening (PGS)
but that it can supplement PGS in different ways.
A hot topic in time-lapse is the use of models or
algorithm that may enable to select embryos that fallwithin a certain scheme or pattern and can be ranked
according to a morphokinetic score that may then belinked to the developmental viability of these embryos.
Numerous attempts are currently undertaken in thisrespect and this topic will clearly dominate the coming
years. However, already now time-lapse has changed theway in which embryo culture as well as evaluation andselection is performed. The ease of being always able tolook on how an embryo developed and what it did atcertain time-points is a relief in the sometimes hectic andtime-pressed IVF routine. Being able to document
continuous embryo development and showcase embryo
characteristics that are suspicious or even clearly out of
the normal range is a new base for education and evenmore for the discussion between all parties involved in an
IVF treatment: the patients, the clinicians and theembryologists. Combined with the newest technologies
in IT and the World Wide Web, time-lapse offers new
possibilities for interaction within and between clinics
and also new business approaches.
For sure time-lapse will not be a stand-alone techniquein the laboratory, but it will very likely constitute thebase for other technologies that give diagnostic insight
into embryo physiology. The future will rely on
combining the most effective means in order to get the
best“picture”of the potential of an embryo. Incubationof embryos in a controlled environment and underconstant assessment by time-lapse imaging will be one
essential part of this.

47

基調講演

日本の生殖医療を考える吉村 泰典
慶應義塾大学 名誉教授

略 歴1975 年
1983 年
1984 年
1986 年
1990 年
1995 年
2014 年

慶應義塾大学医学部卒業
米国ペンシルバニア病院 research fellow
米国ジョンズホプキンス大学 instructor
藤田保健衛生大学医学部産婦人科専任講師
杏林大学医学部産婦人科助教授
慶應義塾大学医学部産婦人科教授
慶應義塾大学名誉教授
新百合ヶ丘総合病院名誉院長

主な学会活動
日本産科婦人科学会理事長（2007 〜 2011 年），日本生殖医学会理事長（2010 年），日本産科婦人科内視鏡学会理事長（2011 年）
主な学会外活動
厚生科学審議会専門委員，法制審議会委員，内閣府総合科学技術会議専門委員，文部科学省科
学技術・学術審議会専門委員，日本学術会議生殖補助医療の在り方検討委員会委員などを歴任
いのち2013 年一般社団法人吉村やすのり生命の環境研究所 代表理事
2013 年より内閣官房参与（少子化対策・子育て支援担当）
受賞歴
松本賞，日本産科婦人科学会栄誉賞，福澤賞

地道な生物学の成果と不妊治療が合従して登場した体外受精・胚移植（IVF-ET）
技術は宿志を実現した感があり，革新的な不妊症の治療法として導入され，瞬く間に全世界に普及していった．これまでに全世界で500万人以上，わが国でも27万人以上の子どもがこの生殖補助医療技術（ART）によって誕生している．エドワーズ博士はこの
IVF-ETを開発し，生殖医療にブレークスルーを起こした業績により，2010年のノーベル医学・生理学賞を受賞した．生殖医療に従事するわれわれ臨床医にとって正し
く宿望を遂げた受賞といえる．
近年の生殖医学の進歩にはめざましいものがあり，生殖現象の解明のみならず，ヒトの生殖現象を操作する新しい技術も開発されている．細胞生物学や生殖工学の飛躍的進歩に伴って生殖医学も革命を受けつつあるといっても過言ではない．近年，がん患者に対する治療法の進
歩に伴う治療成績の向上により生存率の改善がみられるようになってきており，卵子や卵巣の凍結保存による妊孕能温存技術が臨床応用されるようになっている．このような生殖医学の発展は，実は発生生物学や生殖内分泌学の進歩に負うところが大きい．
この生殖現象に深くかかわる生殖医療は，新しい生命の誕生がある点で，すでに存在する生命を対象とする他の医療と根本的に異なった特性をもっている．今世紀に入り，ますます先端生殖工学技術は進歩をつづけている．
とりわけ体細胞クローン技術や胚性幹細胞，iPS細胞の再生医療への応用は，今後の生殖医療の展開にブレークスルーをもたらしてくれるかもしれない．

48

受賞

招請講演

Pragmatic approach to the older patient andfailed patients by ART in the U.S.A.
Marcelle I. Cedars,
M.D.

Professor and Vice Chair
Department of Obstetrics, Gynecology
and Reproductive Sciences
Director, Division of Reproductive
Endocrinology and Infertility
University of California, San Francisco,
USA

Dr. Cedars has almost 30 years of experience in ART including over 15 years
directing IVF laboratories. She has a special interest in PCOS and Reproductive
Aging. At UCSF, she has helped to build a partnership between the strong basic
science and clinical care to accelerate the pace of learning and improve care forwomen.
Dr. Cedars is a Past President of the Society of Reproductive Endocrinology andInfertility, has been a member of the Executive Board of the American College ofObstetricians and Gynecologists and currently serves on the Executive Board of
ASRM and as Chair of the Publications Committee. She has authored more than
150 peer-reviewed publications and is an NIH-funded researcher. She served
as Chair of the FDA Panel for Obstetrical and Gynecologic Devices and is an
Associate Editor for Fertility Sterility and Human Reproduction Update.

Abstract
Age is strongest predictor of reproductive success. With
increasing maternal age, monthly fertility rates decline andrisk for spontaneous pregnancy loss increases. While we do
not fully understand the underlying biological mechanisms,
this impact is driven by the decline in oocyte numbers, andperhaps more importantly, the increase in oocyte
aneuploidy. Thus, assessment of ovarian“age”and its
impact on reproduction are critical as we manage patients inthe clinic. This presentation will include information
regarding the assessment of ovarian age, the usefulness of
this information, and how this information impacts patientcare. Additionally, we will discuss newer options for treating
women with low ovarian reserve. We will discuss
stimulation options as well as issues relating to genetic
screening of embryos and the potential for oocyte“regeneration”through medical and manipulativetechniques. Lastly, we will discuss 3rd party reproduction
and its impact on considering family building options forcouples.
Getting Older Women Pregnant
Spontaneous conception – The earliest study to evaluateovarian reserve markers and spontaneous conception foundno additive benefit of assessing either AMH or AFC in agroup of patients with unexplained infertility or mild male
factor. Lowered levels of both AMH and AFC have been
associated with increased time to conception in fecundibilty
studies. Where only a single follicle is produced monthly
and thus“response”(oocyte number) does not play a role,
the fertilization and implantation of a single oocyte – hence“quality”– seems to be reflected by known markers ofoocyte quantity.
Intrauterine Insemination (IUI) – There have been only afew studies evaluating ovarian reserve markers in IUIcycles. While limited in number, the studies found no

additive benefit over age. It is not clear if stimulation withIUI may overcome some of the“subfertility”noted in
spontaneous conception since the number of follicles
produced during stimulation has been shown in all studies
to correlate with successful pregnancy.
The impact of age, alone, is appears to be high for IUI
success perhaps more so than for other treatments. It is notclear, given the importance of oocyte number (due to highaneuploidy risk) in older women, that stimulation withgonadotropins might not have increased this low successrate. Studies to address this question have been small andincreasingly, the recommendation is to move directly to
IVF for older patients (although it should be remembered
for many of the same reasons – decreased oocyte quantityand quality – success rates with IVF are also low in women> 42 years of age utilizing their own eggs).
Assisted Reproductive Technology (ART) – AMH and
AFC serve a primary role in determining stimulation
protocols. This is helpful both in terms of counselingregarding expectations for oocyte number but also ultimate
pregnancy success – especially as women age and a higher
percentage of retrieved oocytes are geneticallycompromised.
As discussed above, age impacts both quantity andquality of oocytes. And while there is intrinsic variability
in the quantity of oocytes/follicles for any given age,evidence suggests age is still the strongest predictor oflive birth in ART. As previously discussed, withincreasing age there is an increasing percentage ofgenetically abnormal oocytes. Thus, it would potentiallytake more oocytes to“identify”one that is normal andcapable of healthy development and delivery. Thus, it is
not illogical to think, especially with increasing age, thenumber of oocytes retrievable would play a much greaterrole in ultimate pregnancy outcome. And, as both AMH
and AFC predict oocyte number, there is an additive benefit49

to age alone, particularly in older women.
Additional effects of increased maternal age – Regardlessof how conception occurs, the increasing risk for aneuploidy
with increasing age, increases the risk for spontaneous
pregnancy loss. These rates approach 65% in the oldest
women even with ART. The potential benefit ofcomprehensive chromosomal screening may be seen mostclearly in a decrease in risk for subsequent pregnancy loss.
Older women are also at increased maternal and neonatal
risk including stillbirth, gestational diabetes, pre-termdelivery and operative delivery.
Importance of mitochondrial function – Older infertility
patients appear to have abnormal mitochondrial activity inoocytes and reduced production of ATP, which limits
normal oocyte chromosomal disjunction and embryo
development. Without sufficient ATP, the meiotic spindle
may not form properly and altered spindles result in
aneuploidy embryos. In older women, the cumulus oocyte
complex in the primordial follicles is exposed to low levels ofreactive oxygen species produced by mitochondrial
respiration over decades.
Options for treatment include medical enhancement of
mitochondrial function by supplying required coenzymes,
by reducing oxidative stress and by supplementation withyounger, healthier mitochondria. Studies with any of these
options are quite limited but data will be presented. A
thorough understanding of the origin of human aneuploidyis critical to the expectations for success with any of thesestrategies.
In vitro activation – Recent publications have suggested
the ability to develop functional oocytes in women withprimary ovarian insufficiency. The technique of ovarianfragmentation to inhibit PTEN pathway is still fairly grossand refinements will be required. A single healthy birth has
resulted (in Japan) utilizing this technology.
Third Party reproduction - Assisted Reproduction has
enabled the separation of genetic and gestational
parenthood. As such, it is possible for a child to have five“parents”– the two genetic parents (egg/sperm“donor”),
the“gestational mother”, and the“rearing”parents. Whilethese options offer the only opportunity for family building
for many individuals and couples, they are questioned andrestricted in many countries – and even individual states in
the U.S. However, availability in many U.S. states,
including California, makes these options available tointernational families.
Summary
Increasing maternal age (and perhaps paternal age)makes chances for conception lower and risk of pregnancy
loss higher. This decline in fertility efficiency is largely due
to the increased risk for oocyte aneuploidy. Biomarkers ofovarian aging are increasingly being utilized in fertility care,50

and now in the evaluation of normal cycling women prior toconception attempts. These biomarkers correlate well withoocyte number but do not correlate well with aneuploidy
risk, the strongest ultimate driver of success. A recent
evidence-based review, from the Society of Obstetricians
and Gynaecologists of Canada, pointed out the highest
success rate for older women occurs with oocyte donation.
While this recommendation may be sound, as clinicians, we
frequently find ourselves faced with counseling and caring
for women who are not yet ready for this choice. We must
continue to improve our ability to identify women at risk foraccelerated ovarian aging and to counsel themappropriately. Whether new technologies on the horizon
with change the landscape for older women is still unclear.
Whether our abilities to identify these women prospectively
and the new availability for oocyte cryopreservation will“level
the playing field”, and whether this is the direction weshould be moving, remains to be decided.

ランチタイムセッション

ART 時代の子宮内膜症治療

大須賀 穣
東京大学大学院医学系研究科
産婦人科学講座 教授

略 歴1985 年
1995 年
1995 ～ 1997 年
2004 年
2011 年2013 年

東京大学医学部卒業
医学博士（東京大学）
米国スタンフォード大学産婦人科留学
東京大学医学部附属病院女性診療科・産科講師
東京大学大学院医学系研究科産婦人科学講座准教授
東京大学大学院医学系研究科産婦人科学講座教授

日本産科婦人科学会代議員，日本産科婦人科内視鏡学会理事，日本生殖医学会理事ほか多数

子宮内膜症は不妊症の主たる原因の一つである．その機序として解剖学的異常や腹腔内環境，子宮内膜の異常などが示唆されている．ARTは子宮内膜症にともなう解剖学的異常に対して非常に有効な治療法であることは間違いない．一方で，子宮内膜症の存在がARTに与える影響については種々の意見がある．メタアナリシスによるデータから子宮内膜症の存在がARTの成績を低下させるといわれてきたが，最近の報告では子宮内膜症性嚢胞の存在を除外すると卵管因子における成績と変わりがないとされている．
子宮内膜症性卵巣嚢胞についてはその存在が採卵数を低下させることが報告されている．一方で，子宮内膜症
性卵巣嚢胞の摘出手術を受けた卵巣では卵巣刺激の際の発育卵胞数が低下することも知られており，その取り扱いは難しい．このため，ART施行がすでに決まっている患者の場合は，そのままARTを施行するのが妥当と思われる．ただし，子宮内膜症性卵巣嚢胞は悪性化しやす
いことも知られているため，悪性所見がないことをMRI，
必要に応じてはPETなどで確認しておく必要がある．また，ARTを繰り返している間に悪性化することもあり得るので，子宮内膜症性卵巣嚢胞がある状態でART治療を続ける場合は注意が必要である．同様に，感染症にも十分な注意を払う必要がある．採卵後に嚢胞に感染すると，腹膜炎などを発症して妊孕性そのものを失う危険性がある．
未婚の患者で若年者の場合，４～６cm以上の子宮内膜症性卵巣嚢胞については腹腔鏡下での摘出術が原則である．手術についてはできるだけ卵巣を愛護的に扱い，卵巣実質の損失を最小限にする必要がある．すなわち，子宮内膜症性卵巣嚢胞の摘出術は難度の高い手術であり，経験の乏しい術者が安易に手術を行うべきではない．また，嚢胞摘出後は高率に再発をきたすため，低用量エス
トロゲン・プロゲスチン製剤もしくはプロゲスチン製剤などにより長期間にわたり再発の抑制を行うことが望ましい．卵巣嚢胞が小さい場合，もしくは存在しない場合の子宮内膜症は薬物療法が選択される．

海外においては，子宮内膜症患者のARTにおいてART施行前にGnRHアナログを３〜６ カ月使用すると妊娠率が向上するというRCTがいくつかある．しかし，対象が本邦のARTの対象よりはるかに若年であり，一般化できるとはいえない．
最近の話題として，ART妊娠が周産期予後に影響を与える可能性があるが，なかでも，子宮内膜症はART妊娠における早産を増加させるという報告がある．また，
前置胎盤や分娩後出血を増加させるという報告もされており，今後，子宮内膜症患者におけるART妊娠が増加していくと考えると，周産期予後については一層のデー
タの集積と検討が必要である．
ARTと子宮内膜症についての今後の展望としては，第一に，国民全体において子宮内膜症そのものを予防し，発症を減らすことが期待される．一方で，子宮内膜症がIVM，卵子凍結に与える影響などは今後の検討課題である．

51

ワークショップ「がんと生殖医療」

Breast Cancer and ART

S. Samuel Kim,
M.D., FACOG.
Professor and Head,
Reproductive Endocrinology
and Infertility
University of Kansas
Medical Center

S. Samuel Kim, M.D., has contributed to the advances of fertility preservation as a pioneerin ovarian tissue cryopreservation and transplantation, and his seminal work has beenrecognized worldwide. Prof. Kim founded the International Society for Fertility Preservationand served as the 2nd President of the Society. Prof. Kim graduated from Seoul National
University College of Medicine. Thereafter, he completed his resident training at theTemple University in Philadelphia and fellowship at the University of Washington in
Seattle. In addition, he served as a post-doctoral research fellow at the University of Leeds
in England. Prof. Kim is Professor and Head of the Division of Reproductive Endocrinology
at the University of Kansas School of Medicine in Kansas City. He currently serves as an
editorial board member of four reputable journals including Fertility Sterility.

Breast cancer is the most common cancer in women.
Currently, more than 13 million cancer survivors areliving in the USA. Among those, breast cancer survivors
are approximately 2.6 million. New regimens andstrategies for cancer therapy resulted in increased cancer
survival rates, especially in breast cancer patients. As aconsequence, fertility is a very important quality of life
issue for cancer survivors who are in reproductive age.
Although breast cancer is treated surgically, adjuvant
chemotherapy and/or hormone therapy are required after
surgery in most cases. Indeed, adjuvant or neo-adjuvant
chemotherapy is partially responsible for improvement inbreast cancer specific survival. However, it is frequently
gonadotoxic and causes loss of fertility (especially withregimens containing high dose alkylating agents). Most
women in reproductive age desire to preserve fertility,
but frequently they do not receive adequate information
about fertility preservation. Failure to discuss fertility
before cancer treatment can fuel later feelings of grief andregret. Therefore, it is important to address issues related
to fertility including fertility preservation options prior toinitiating gonadotoxic cancer treatment.
Fertility preservation before cancer treatment isstrongly recommended and ideally, all young cancer
patients in reproductive age should be offered for
consultation. There are several factors to be considered
before fertility preservation which include treatment
regimens (type and dose of chemotherapeutic agents,
number of cycles), age and ovarian reserve, how soon
to start chemotherapy, prognosis of the disease, andfinancial issues. Of ovarian reserve markers, AMH and
AFC are more reliable in women with breast cancer.
The main strategies for fertility preservation are
based on assisted reproductive technologies, such as
cryopreservation of embryos or oocytes. Both embryoand oocyte cryopreservation are well established52

technologies, which require controlled ovarian
stimulation (COS). Gonadotropin, the main agent for
COS, increases the peak estradiol (E2) level and may
accelerate the tumor growth in ER+ breast cancer. To
lower the serum E2 levels, use of low dose gonadotropin
in combination with tamoxifen or letrozole has been
attempted with good results. When letrozole plus
gonadotropin is use for COS, recurrence rates of breast
cancer do not appear to increase at 2 years of follow-up.
Another problem with COS in breast cancer patients is atime factor, as it can delay cancer treatment. It usuallytakes for approximately 2 weeks of stimulation before egg
retrieval. However, it can further delay cancer treatment
up to 6 weeks depending on where in the menstrual
cycle the patient presents. To minimize the delay ofcancer treatment, random start COS has been proposedin cancer patients as a method for urgent fertility
preservation. Contrary to the conventional COS, ovarian
stimulation can be started anytime of the menstrual
cycle with random start COS. Indeed, scientific studies
showed that multiple follicular waves exist not only inanimals but also in humans. Thus, synchronization offollicular wave emergence to gonadotropin can be doneeven during the luteal phase.
Ovarian tissue cryopreservation is another strategy for
fertility preservation, and it may be the only option forbreast cancer patients who need treatment without delay(such as rapidly growing tumor) or who are unwillingto undergo ovarian stimulation. Cryopreservation ofovarian tissue has been successful, although it may needfurther optimization. The bigger issue with this option
is how to mature primordial follicles in stored ovariantissue when the patient is ready to have a child. At
present, autotransplantation of frozen-thawed tissue isthe only realistic method to restore fertility. To date,more than 30 healthy babies have been born worldwide

after transplantation of frozen-thawed ovarian tissue tothe orthotopic site except one (which was heterotopic).
In summary, team work between cancer specialists
and fertility specialists is imperative to provide anappropriate medical care for cancer patients who desire
fertility preservation. Fertility preservation would not
be possible without the emergence of various ART
and cryotechnologies. For women with breast cancer,
oocyte or embryo cryopreservation should be thefirst-line option if there is sufficient time for ovarian
stimulation. However, ovarian tissue cryopreservation isrecommended if cancer treatment cannot be delayed or
the safety issue is a concern for women with ER+ tumor.

53

ワークショップ「がんと生殖医療」

卵巣組織凍結・移植とがん・生殖医療鈴木 直
聖マリアンナ医科大学
産婦人科学 教授

略 歴1990 年 3 月 慶應義塾大学医学部卒業
4 月 慶應義塾大学医学部産婦人科入局 研修医
1993 年 4 月 慶應義塾大学大学院（医学研究科外科系専攻）
入学（指導：野澤志朗教授）
1996 年 4 月〜 1998 年 9 月
米国カリフォルニア州バーナム研究所 postdoctoral fellow
1997 年 3 月 慶應義塾大学大学院（医学研究科外科系専攻）
博士
（医学）
取得
2005 年 8 月 聖マリアンナ医科大学産婦人科学講師
2011 年 4 月 聖マリアンナ医科大学産婦人科学教授
2012 年 4 月 聖マリアンナ医科大学産婦人科学教授（講座代表）
日本産科婦人科学会専門医，日本がん治療認定医，日本婦人科腫瘍学会専門医，
日本臨床細胞学会細胞診専門医，緩和ケアの基本教育に関する指導者（日本緩和医療学会）

若年がん患者に対する卵巣組織凍結施行に関するDonnez による初めての報告１）から16 年が経過し，ホジ
キン病患者による初めての生児出産の報告２）から10年が経過した現在，欧米では本技術は全ての若年女性がん患者に選択肢として提供すべき医療行為の一つと認識されている．卵巣組織の凍結保存は，受精卵凍結や卵子凍結と比べて，①原始卵胞の数をより多く保存できる，②月経周期に関係なく施行（卵巣摘出）
できる，③経腟操
作の難しい小児がん患者にも適応できる，または未婚女性も適応となる，④生着卵巣組織からのエストロゲン分
泌によるホルモン補充ができる，などというメリットがある．Donnez，Andersen，そして Pellicer らの３ つの研究グループによると，卵巣組織凍結・移植はこれまでに60 名に施行されており，そのうち73％の患者で化学療法施行前に卵巣が摘出されている３）．卵巣組織凍結が適応された疾患は血液腫瘍疾患が35％，それ以外の悪性腫瘍疾患が 45％，ターナー症候群や早発閉経の家族歴などの非悪性疾患が20％であった．なお移植後，93％の患者で卵巣機能の回復（卵胞の発育）がみられ，回復が確認できなかった患者の多くは組織学的検査で残存卵胞が確認できなかったと報告している３）．
現在標準的な卵巣組織凍結法は緩慢凍結法であり，残存卵巣（同所）移植の利点を活かし半数以上は自然妊娠後に出産に至っている４）．なお，妊娠例の多くは 30歳未満であり，卵巣組織凍結時の年齢は結果予測因子となるとしている．一方，卵巣組織凍結法の新しい技術としてガラス化法を用いた基礎的な実験報告が 2009 年以降散見されている．Kerosらは，ヒト卵巣組織を緩慢凍結法
あるいはガラス化法で凍結した後に電子顕微鏡で形態を観察した結果，ガラス化法による凍結で間質の形態が有意に良好であったと報告している５）．本邦からは，Kagawa らがウシとヒト卵巣組織を用いてガラス化法にて卵巣組織を凍結し，融解後の卵巣組織内の卵子のバイ
オアベイラビリティーを検討した結果，対照群である新鮮卵巣組織と比較して同等であったと報告し，ガラス化
卵巣組織凍結用デバイスを作成している（Cryto Tissue

54

６）
．
キット：北里バイオファルマ）
一方，我々の研究グループ（IVFなんばクリニック：森
本義晴先生，橋本周先生：近畿大学，細井美彦先生ら）
は，
ガラス化法の新しいデバイスを作成し（Ova Cryo Device
Type Mキット：北里バイオファルマ），卵母細胞へのダメージを評価（電子顕微鏡）する目的で，２種類の耐凍剤
VSEGP：35 ％（v/v）Ethylene glycol（EG）＋ ５ ％（w/v）
PVP＋0.5 M sucroseと，VSED：20 ％（v/v）Ethylene
glycol（EG）＋20％（v/v）DMSO＋0.5 M sucroseを用い，
５ 分，10分，20分という３ 種類の凍結時間で至適なガラス化の条件を比較検討した７）．その結果，VSEGP を用いた５ 分間の浸透時間による条件で，組織学的に卵巣皮質内の卵胞および細胞小器官の形態をより安定させる事実を確認した 13）．さらに，カニクイザルを用いてその条件で卵巣組織凍結（ガラス化）
・融解移植を施行した結果，良好な胚の獲得に成功した８）．そして，本前臨
床試験の結果 14）を踏まえて，2010年１ 月に聖マリアン
ナ医科大学倫理員会によって承認された臨床試験「若年女性がんおよび免疫疾患患者のQOL向上を志向した卵
巣組織凍結ならびに自家移植」を開始している．2012 年12月には，ガラス化法による卵巣組織・融解移植による世界初の生児獲得（早発閉経患者）に成功し９），2014 年
５ 月現在２ 例の生児を得ている．緩慢凍結法は高額な機器を購入する必要性があることから，ガラス化法の最大の利点は，キットさえ用いればどこでもいつでも実施可能な点にある．しかしながら，より安全性が高く至適な卵巣組織凍結法がどちらの凍結方法であるかに関して，さらなる検討が必要である．最新のがん患者における妊孕性温存の指針である米国臨床腫瘍学会2013 指針
では，卵巣組織凍結は依然として実験的段階の診療である と 記 さ れ て い る（http://www.asco.org/qualityguidelines/fertility-preservation-patients-canceramerican-society-clinical-oncology）．しかし，卵巣組
織凍結保存はより多くの卵子を保存できるだけでなくエストロゲン分泌によるホルモン補充ができるというメリットがあり，妊孕性の温存だけでなく卵巣欠落症状

の改善やエストロゲン低下による心血管系障害の予防
や骨密度低下を緩和することができる可能性も有している．日本産科婦人科学会は2014年５ 月に会告として「医学的適応による未受精卵子および卵巣組織の採取・凍結・保存に関する見解」を発表した 10）．その内容の一部を以下に抜粋する．
「悪性腫瘍など（以下，原疾患）に罹患した女性に対し，その原疾患治療を目的として外科的療法，化学療法，放射線療法などを行うことにより，その女性が妊娠・出産を経験する前に卵巣機能が低下し，その結果，妊孕性が失われると予測される場合，妊孕性
を温存する方法として，女性本人の意思に基づき，未受
精卵子を採取・凍結・保存すること（以下，本法）が考えられる．本法は，原疾患治療で発生する副作用対策の一環としての医療行為と考えられるので，治療を受ける時期に挙児希望がない場合でも，本人が希望する場合には医療行為として認める必要がある．
」「なお，同じ目的で行われる卵巣組織の採取・凍結・保存については未受精卵子の場合と同じ医療行為に属するものであり，基本的に本法に含まれるものと考え，本見解を準用する．
」
今後，より至適な卵巣組織凍結法が開発され，日本産科婦人科学会の会告に従って高い倫理観を持ってその技術が臨床応用され，医師のみならず患者にも本技術が浸透されることが望まれる．本講演では，卵巣組織凍結・移植に関するこれまでの流れから最近のトピックスに関して解説させていただく．

for infertility treatment. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 110:
17474-17479, 2013.
10）日本産科婦人科学会倫理委員会：医学的適応による未受精卵子および卵巣組織の採取・凍結・保存に関する見解．日産婦誌，66,1291-1293, 2014.

参考文献
1） Donnez, J., Dolmans, M. M., Demylle, D., et al.: Livebirth after
orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue.
Lancet, 364: 1405-1410, 2004.
2） Donnez, J., Bassal, S.: Indications for cryopreservation ofovarian tissue. Hum. Reprod. Update, 4: 248-259, 1998.
3） Donnez, J., Dolmans, M. M., Pellicer, A., et al.: Restoration ofovarian activity and pregnancy after transplantation of
cryopreserved ovarian tissue: a review of 60 cases ofreimplantation. Fertil. Steril., 99: 1503-1513, 2013.
4） Donnez, J., Silber, S., Andersen, C. Y., et al.: Children
born after autotransplantation of cryopreserved ovariantissue. A review of 13 live birth. Ann. Med., 43: 437-450,
2011.
5） Keros, V., Xella, S., Hultenby, K., et al.: Vitrification versus
controlled-rate freezing in cryopreservation of human ovariantissue. Hum. Reprod., 25: 1670-1683. 2009.
6） Kagawa, N., Silber, S., Kuwayama, M.: Successful vitrification ofbovine and human ovarian tissue. Reprod. Biomed. Online, 18:568-577, 2009.
7） Hashimoto, S., Suzuki, N., Yamanaka, M., et al.: Effects of
vitrification solutions and equilibration times on themorphology of cynomolgus ovarian tissues vitrified ultrarapidly by direct plunging into liquid nitrogen. Reprod. Biomed.
Online, 21: 501-509, 2010.
8） Suzuki, N., Hashimoto, S., Ishizuka, B., et al.: Assessment oflong-term function of heterotopic transplants of vitrified ovariantissue in cynomolgus monkeys. Hum. Reprod., 27: 24202429, 2012.
9） Kawamura, K., Suzuki, N., Hsueh, A. J., et al.: Hippo
signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles

55

カレント トピックス

卵子保存：過去・現在・未来

桑山 正成
リプロサポートメディカル
リサーチセンター 所長

略 歴1997 年
1999 年
2010 年

北海道大学大学院獣医学研究科（博士号）
加藤レディスクリニック先端生殖医学研究所代表
リプロサポートメディカルリサーチセンター所長

J. Reproductive BioMedicine Online エディター，明治大学，国際医療福祉大学非常勤講師，
先端不妊治療施設学術技術顧問（12 カ国，58 施設），公表論文数 102 報，学会発表数 364 報

1986年，ヒト卵子保存成功例が初めて報告されたが，その後10年間余りも再現されず，胚の凍結利用が急速に普及する中で，卵子凍結は困難な技術とされた．一方，同じ1986 年ガラス化保存を用いた哺乳類胚初の成功例が報告され（Rall & Fahy），その後，ガラス化溶液や冷却・加温法の改良により，ついに1998 年，最も凍結が困難とされたブタ卵子の凍結もガラス化保存の応用により可能となった（Nagashima & Kuwayama）．日本で生まれたこの急速冷却ガラス化保存法は翌年，ヒト卵子に応用されて初の臨床成功例が得られ（Kuwayama），
直ちに2000 年，再現性の高い実用的な手法（Cryotop
method:Kuwayama）へ改良されて急速に世界へ広がって行った．その後，40 カ国以上で数 10 万例を超える膨大で良好な臨床実績により，卵子ガラス化保存の高い臨
床的有効性と安全性が証明され，長い倫理課題の検討を重ねながら，現在では我が国でも生殖医療の一オプションとして定着してきた．近年，この急速冷却ガラス化保存法はさらに溶液やプロトコールが大きく改良され，未成熟卵子から成熟卵子において，特にデリケートながん患者や高齢患者由来の卵子においても解凍後ほぼ100％の生存率が得られる極めて有効で安全な非侵襲的ガラス化保存法（Cryotech method:Kuwayama，2012）として完成し，再び日本発で世界中に広まりつつある．
凍結保存とは，生きた細胞に，使用するまでの時間的，距離的余裕を与えるものである．すなわち，Cryotech
method に代表される非侵襲卵子ガラス化保存が技術的に可能になったことで，現時点で正常な卵子を有するす
べての女性の将来への妊孕性温存が現実的となった．
個人レベルでの妊孕能温存の適応例としては，がん治療など原疾患の治療により妊孕能を喪失する可能性がある女性患者，社会的，個人的理由により卵子老化による妊孕能を失うすべての女性や性転換，出兵前の卵子保存がすでに実現している．細胞レベルでは，卵子提供プ
ログラムでの利用が圧倒的に多く，また非刺激周期の成熟卵子の IVF 治療用のストックやIVF ラボを持たない地域への凍結卵子／胚輸送を含んだ IVCサービスにも56応用されている．
本講演では2001年に加藤レディスクリニックで加藤修院長の英断の下で実施された，ガラス化法を用いた初めての血液がん女性の妊孕能温存症例の経過も紹介する．
名古屋日赤より依頼を受けた悪性リンパ腫の女子高生から２個の卵子を採取，ガラス化保存した．12年後（2013年），
患者が結婚し，IVF治療を開始，２個のガラス化卵子を解凍し，顕微授精，胚培養および移植を行った．
未来へ：我々は現在，すべての妊孕能温存がん患者に対してsingle port laparoscopyを用いた低侵襲的な GV
卵子／片卵巣の採取，保存を実施している．将来の挙児への保険として充分数の卵母細胞を保存でき，完成しつつある有効なIVMさらにoocytes growth技術と組み合
わせて，さらに確実な妊孕能温存技術となっていくであろう．未成熟卵子の保存は，さらに近い将来，ホルモン刺激を必要としないIVF治療の実現を促進するだけでなく，すでに現在，個体の老化により発生能が低下した
不育卵子の治療にも繋がるであろう．

シンポジウム〜これからの不妊治療を考える〜

ARTによる不妊予防

久保 春海
日本不妊予防協会 理事長
渋谷橋レディースクリニック
院長

略 歴1966 年

医師免許取得以後ずっと産婦人科医

近年，我が国を含めた先進諸国では晩婚，晩産傾向による加齢不妊が急激に増加していることは周知の事実である．約 20％の既婚カップルは，35歳過ぎるまで第１ 子を設けようとしない．しかし，生物学的にヒトでも他の哺乳類と同様に，加齢とともに生殖能力が衰えて，次第に妊孕性を失うことは明らかであり，これにより妊娠率が低下するのは加齢に基づく生理的変化である．このような生理的変化は20 代後半から 30 代前半頃にかけて始まるということを，ほとんどの女性は認知していない．女性は70 ～ 80万個以上の卵子を持って生まれてくるが，徐々に閉鎖卵胞となり思春期には30万個ほどになる．それ以降も，女性の生涯の間にヒト卵子は決して新生されることはないと考えられる．このため，卵子数は加齢とともに着実に減少する．また，加齢卵子
は経年変化により染色体異常（異数体）の頻度が増加し，その結果，流産率が加齢とともに上昇する．20歳代までは 10％以下の不妊率であるが，30 歳前半で 15％，30
歳代後半で，約 22％に妊孕能力に問題が起きてくるし，
40 歳以降では約 30％が自然妊娠の望みが無くなると推定されている．生殖年齢の加齢速度は個人差があり，個々の女性の妊孕能力を正確に判定する基準はまだ無い．しかし，AMHや基礎レベルにおけるFSH，LH，E 2 を測定することにより，間接的に，加齢による卵巣予備能を判定することが可能であり，我が国では不妊治療の予後判定にも用いられており，欧米では，life-stylechoice として卵巣年齢が実年齢より高ければ卵子凍結を選択する女性もいる．また，加齢とともに増悪する子
宮筋腫，子宮内膜症なども生殖能力を左右する重要な因子である．加齢による社会性不妊は近代社会における男
女共同参画時代の副産物であり，リプロダクティブヘル
ス・ライツに関する意識改革をすることが重要である．
加齢による生殖時計の老化をリセットする方法が基礎的，臨床的に研究，応用されつつあるが，抗加齢薬の臨床応用以外は，基礎的，臨床的研究段階であり，卵子若返り法などのように倫理的にモラトリアムになっている手段もある．現時点で加齢に基づく不妊予防にもっとも現実的かつ有効な手段は，35歳までの若年夫婦による受精卵凍結保存である．我が国における女性の平均初婚年齢が28. 9歳であり，結婚後35 歳までに受精卵凍結保存をしておけば，10数年のスパンにわたって子育てに煩わされずに，仕事と家庭を両立させることができる．このような社会的理由による胚凍結保存（embryo
self –banking; ESB）が将来の加齢不妊の予防にとって重要であり，我が国でも不妊予防法としてのART の実
施と経済的支援を認めるべきであろう．
参考文献
1）Hull, M. G., Evers, J. L.: Population study of causes, treatment,
and outcome of infertility. Br. Med. J., 291: 1693-1697, 1985.
2）J. Menken, J. Trussell, and U. Larsen: Age and Infertility.
Science, 233: 1389-1395, 1986.

57

シンポジウム〜これからの不妊治療を考える〜

卵子提供の実際と現況

岸本 佐智子OD-NET 卵子提供登録支援団体
理事長

略 歴1993 年
2001 〜 2003 年
2010 年
2012 年

25 年前，ターナー症候群の娘を出産，22年間ターナー症候群患者会のお世話をしている．ターナー女性は卵巣機能不全のため自然妊娠の確率は１～２％である．ター
ナー女性にとって将来の選択に悩む．子どもを産まない
選択，養子を迎える選択，卵子提供によって子どもを産む選択．それ以前の問題として，妊娠できないことで恋愛さえも諦めている女性も少なくない．海外では 20年以上前から実施されている卵子提供が日本においてできないのである．私はそのような女性の悩み苦しんでいる声を長年聴いてきた．11年前，厚生科学審議会生殖補助医療部会の委員として議論を重ねてきたが，未だに法整備されていないため，匿名の卵子提供は実施されていない．アメリカやタイに渡り不安な中で卵子提供をされたターナー女性もいる．1999 年に日本産科婦人科学会などに「提供卵子による不妊治療促進についての要望書」を提出．2001年には「近親者からの卵子提供についての要望書」を提出．日本において卵子提供という選択ができるように活動してきた．選ばないのと選べないのとでは全く違う．多様な選択肢ができるように体制を整えてほしいと願う．このような経緯から2012年卵子提供登ターナー症候群患者団体（ひまわりの会）初代会長
厚生科学審議会 生殖補助医療部会委員
TSSJ（ターナー症候群患者団体・連合会）会長
OD-NET（卵子提供登録支援団体）理事長

録支援団体を設立，卵子を提供してくださるドナーの募集を開始した．今日まで 224 名のドナー希望者からの申し込みがある．すべてボランティアでの申し出である．
ドナーの条件は35 歳未満で既に子のいる成人女性が対象である．現在まで24 名のドナー登録が完了している．
レシピエントの条件は 40歳未満で早発閉経やターナー症候群など卵子がない女性が対象である．現在レシピエントの募集はしていない．レシピエントとドナーの組み合わせが 19組決定し，そのうち６ 組がご辞退されたため13 組がカウンセリング等進められている．NPO 法人
卵子提供登録支援団体設立以降，早発閉経，ターナー症
候群，がん治療後，卵巣欠損の女性達から辛く悲しい思いが届く．やるせない気持ちである．ようやく国が動きだした．レシピエントが子どもを持つ権利，生まれてくる子どもが幸せになる権利，そしてドナーの意見も反映されるような体制作りが重要．すべての人を尊重できるように，そしてすべての立場の人が幸せな人生を歩める
ように社会で議論し，早急に特定生殖補助医療の法整備が確立することを心から願っている．

ドナー希望者の背景

ターナー女性出産報告

224 名の方とは？？
・35 歳未満で，すでに子のいる成人女性…166 名
・35 歳以上（最高 50 歳）…20 名
・未婚で子どもがいない…12 名
・既婚で子どもがいない…4 名
・海外在住の日本人（インドなど）…4 名
・妊娠中…4 名
・授乳中…4 名・夫婦で，子どもは生まないと決めている…3 名・子宮がない…3 名・卵子はあるが，妊娠できない…2 名・同性愛者…2 名

出産報告 6 例→男児 5 例
性別不明 1 例▶

母体年齢→30 歳代 1 例
20 歳代 5 例▶

58

提供の報告 11 例
出産報告 8 例→男児 2 例→女児 6 例
（内３例は双胎）
提供後着床せず→2 例（米 1，日 1）
妊娠中→1 例（日 1）
海外 8 例（米 5，韓 2，タイ 1）
国内 3 例（姉妹間 ,1 例は未婚妹）

▶
▶

▶
▶

ターナー女性の自然妊娠の可能性は 1％（2013 年 1 月 15 日〜2014 年 6 月 10 日）

図1

卵子提供による妊娠

自然妊娠

図2

▶
▶

シンポジウム〜これからの不妊治療を考える〜

提供卵子を用いた ART

塩谷 雅英
英ウィメンズクリニック 理事長

略 歴1985 年 3 月 島根医科大学卒業
6 月 京都大学医学部婦人科学産科学教室入局
1986 年 6 月		 福井赤十字病院産婦人科 医員
1990 年 4 月		 京都大学医学部婦人科学産科学教室 医員
1993 年 6 月		 医学博士（京都大学）
1994 年 4 月		 神戸市立中央市民病院産婦人科 医長
2000 年 3 月		 英ウィメンズクリニック開院 現在に至る

はじめに卵巣形成不全や加齢に伴う卵巣反応性低下により自己卵子での妊娠を望めなくなった患者など，妊娠するた
めには卵子提供を受ける以外に方法の無い患者に直面することは少なくない．卵子提供治療について，当院に通院する不妊治療中の患者にアンケート調査を行った
ところ，69％の患者が我が国でも積極的に実施されるべきであると回答した．同様のアンケートを一般の妊婦にも行ったが，ほぼ同様の結果であった．このことから，不妊患者のみならず一般女性の大半が卵子提供治療を容認している実態が浮かび上がる．
卵子提供治療における我が国の現状
1985年，我が国では45歳以上の母親から245人の出生が報告されている．一方，2011年にはその数は843人と３ 倍以上となっている．45歳以上になると自己卵子での妊娠は容易ではないことを考慮すると，この増加の大部分は若年時の凍結胚を利用したものと考えられるが，卵子提供治療による出生数の増加も背景にあるものと推察される．一方，我が国では1983年に日本産科婦人科学会から出された「体外受精・胚移植」に関する見解を尊重し，第三者配偶子の使用は施行しないこととして自主規制しているため国内での治療の受け皿は限定されている．したがって卵子提供による治療を望む夫婦の多くは，治療先を求めて海外に渡航しているのが現状である．
日本生殖医学会の提言
2009 年の日本生殖医学会倫理委員会からの提言によれば，「医学的適応の限定，十分な情報提供と同意の任意性の確保，子の出自を知る権利への配慮など厳密な条件を設定した上で提供配偶子を使用することの合理性は十分ある」「卵子提供者は匿名の第三者を優先するが本人の実姉妹や知人などからの提供も可能とする」としている．しかし，実際の実施にあたっては法律（親子法）の整備および公的機関による文書の80年間におよぶ保管を前提条件としており，これらの整備が整っていない

現状では国内で広く治療が開始される状況ではない．
JISART 非配偶者間体外受精実施の経緯
2003年，厚生科学審議会は，医学的適応がある場合に限って匿名の第三者配偶子を用いる生殖医療を条件付きで容認すると報告した．しかし，患者は条件とされた制度整備を待つ間に年を重ね貴重な機会が失われていく状況が続いた．また，匿名かつ無償での卵子提供者を見つけることは非常に困難な状況であった．そのような中，2006年，JISART会員施設から，知人からの卵子提供のケースおよび姉妹からの卵子提供のケースの実施要請があった．JISART倫理委員会では9回におよぶ審議を重ね，2007年に2ケースの実施を承認した．実施に当たっては日本産科婦人科学会，日本学術会議，厚生労働省母子保険課に対して実施の可否の判断を仰ぐこととした．
しかしその後も日本学術会議で審議されることがなく，実施を待っている患者および提供者をこれ以上待たせる
わけにはいかないとの判断から，2008年，治療の実施容認に踏み切った．治療の結果，幸いこの２ 例ともに出産に至っており，経過は順調である．その後，2008年に精子・卵子の提供による非配偶者間体外受精に関する
JISARTガイドラインを策定，公表した．JISARTに所
属する５ 施設では，このガイドラインに基づき顕名の提供卵子による生殖補助医療を実施している．現在までに44件の申請，そのうち43件が承認され，47周期の採卵，44周期の移植，41周期の妊娠，19例の出産を得ている．
終わりに国内での治療の門戸が閉ざされた状況下，卵子提供を希望する多くの夫婦は海外渡航をせざるを得ない状況が続いている．これら患者の中には十分なカウンセリン
グを受けることなく，生まれてくる子の福祉に対する十分な配慮がなされていないケースもあることが懸念される．また，患者の高齢化に伴い，貴重な治療のタイミ
ングを逸しているケースもある．制度整備の早急な実現が望まれる．

59

教育講演

早発卵巣不全や不妊治療終了後のヘルスケア― ホルモン補充療法の重要性 ―髙松 潔
東京歯科大学市川総合病院
産婦人科 教授略 歴1986 年		
		
1992 年 		
1994 年		
1995 年		
2000 年		
2002 年		
2004 年～現在
2007 年～現在
2008 年～現在

60

れており，明確に不妊治療により閉経が早くなることは示されてはいないものの，交絡因子を考慮すれば可能性は否定できないと考えられる．女性はエストロゲンで護られているといっても過言ではなく，早い閉経は更年期障害，心血管疾患や骨粗鬆症といった退行期疾患のみならず，皮膚や口腔など全身に影響を及ぼす．また，心理的な問題も大きいことが知られており，元々不妊患者にはうつや不安が多く，年齢とともに頻度が増加することも報告されていることから，対応は必須であると考えられる．一方，不妊外来でよく見られる多嚢胞性卵巣症候群（PCOS）はメタボリック症候群との関連が知られており，閉経後には肥満や脂質プロファイルの悪化が懸念される．
これらの不妊治療終了後あるいは早発卵巣不全において起こりうる諸症状に対して最も適切な対応方法は，消退したホルモンを補う理に適った方法であるホルモン補充療法（HRT）であることには言をまたない．HRTとは，エストロゲン欠乏に伴う諸症状や疾患の予防ない
し治療を目的に考案された療法で，エストロゲン製剤を投与する治療の総称である．HRTには症状の緩和や疾患の治療を目的とするもの，あるいは無症状の閉経後女性においてエストロゲン欠落に伴う諸疾患のリスク低Japan Nurses Health Study

閉経のオッズ比

不妊治療を終了することは患者にとって大きな決断である．しかし，実際にはタイミング法，人工授精，体外受精 - 胚移植（IVF-ET）それぞれ仮に40％の妊娠率としてステップアップしたとしても，最終的に約20％は妊娠に至らないことになる．また，日本人女性の平均寿
命は 86.41歳と世界一の長寿を誇っており，不妊治療により挙児が得られようともそうでなくともその後には約40年の人生があるが，その間を高いQOLを維持して，いかに華麗に生きることができるかということに思い至っている者は，患者はもちろん医療サイドにも多くはないと思われる．
不妊治療がその後の女性の心身に与える影響については２ つが考えられる．１ つはこれまでの治療，つまり卵巣刺激や体外受精時の採卵などが卵巣予備能や閉経年齢に影響するかどうかという問題であり，もう１つは不妊であったこと，あるいは不妊となる要因を持っていることが将来の心身に及ぼす影響である．
閉経年齢は約50％が遺伝的な因子によって規定されるともいわれているが，日本人における検討において，不妊の既往がある女性はそうでない女性と比較して閉経が早く，特に子宮内膜症による不妊の場合，閉経が早くなるオッズ比は 1.33（95％信頼区間 1.05 〜 1. 68）と有１），欧米において意であることが報告されており（図1）も同様の報告が多い．一方，原因不明の不妊は閉経年齢には関連しないという報告や，調節卵巣刺激は卵巣予備能に悪影響を与えないとの報告もある．IVFについては
周期数が増えるとわずかではあるが閉経年齢に影響するという報告がある一方，３ 周期までは関連しない，
あるいは６ 周期までは関連しないとも報告されている．
しかし，これらの検討では採卵数などで検討しており，年齢が上昇するにつれ必要なゴナドトロピンは増える
ので，年齢の因子を考慮する必要がある．また，poor
responderでは閉経年齢が早いという．もちろん手術は卵巣のう腫摘出術はもちろんのこと，たとえ腹腔鏡下卵
巣ドリリングにおいても卵巣予備能を低下させ，閉経を早める．一方，出産数が少ないと閉経が早いことも知ら慶應義塾大学医学部卒業
慶應義塾大学医学部産婦人科学教室入局
ドイツ国ベーリングベルケ社リサーチラボラトリー留学
慶應義塾大学にて学位取得
慶應義塾大学医学部産婦人科学教室診療医長
東京女子医科大学産婦人科学教室講師
国立成育医療センター第二専門診療部婦人科医長
東京歯科大学市川総合病院産婦人科部長
東京歯科大学教授
慶應義塾大学医学部客員教授（産婦人科学）兼任

5.0
4.0
3.0
2.0
1.0

不妊の既往

図1

排卵因子 卵管因子

子宮内膜症

不妊原因が閉経年齢に与える影響（参考文献１より引用）

男性因子

表1

HRT のベネフィット（参考文献 2 より引用）◦ 更年期症状緩和◦ 骨吸収抑制・骨折予防◦ 糖・脂質代謝改善◦ 血管機能改善効果◦ 血圧に対する作用◦ 中枢神経機能維持◦ 皮膚萎縮予防◦ 泌尿生殖器症状改善◦ 大腸がん（結腸がん・直腸がん）◦ 口腔における効果

表2

HRTに予想される有害事象（参考文献 2 より引用）◦ 不正性器出血
◦ 乳房痛
◦ 片頭痛
◦ 乳がん
◦ 動脈硬化・冠動脈疾患◦ 脳卒中◦ 静脈血栓塞栓症◦ 子宮内膜がん◦ 卵巣がん◦ その他のがん，腫瘍，類腫瘍

下やヘルスケアを目的として行うものの２ つの側面がある．前者としては，更年期障害，骨粗鬆症など，後者には萎縮性腟炎，骨量減少・骨粗鬆症，脂質代謝異常，
動脈硬化，皺の改善やコラーゲン維持などの皮膚領域などが挙げられる．さらに，近年では痛風やメタボリック症候群などの代謝性疾患の改善や歯周病といった口腔領域などへの有効性も注目されており，いわゆるアンチ
２）．実
エイジングとしての効果も報告されている（表1）
際，死亡率も約 30％低下する．国際閉経学会（IMS）の推奨においても「HRT は症状を有する閉経後女性に対する治療の第一選択として考慮されるべきである」となっているとおり，広く閉経以降の愁訴や疾患に対する治療薬として HRT を選択肢に加えることが勧められており，中高年女性におけるQOLの維持・向上に欠かすことのできないツールである．
しかし、副作用のない治療法はないことには言を待たない。HRTには表2に示すような有害事象も存在する。
中でもエストロゲンは古くから発がんリスク，特にエストロゲンに依存する組織のがんである子宮内膜がんや乳がんの問題が取り上げられてきた諸刃の剣のような存在でもある．特に2002年，米国の大規模ランダム化
比較試験
（RCT）
であるWomen’s Health Initiative（WHI）
研究における HRT試験において，有子宮者に対するエストロゲン＋黄体ホルモンによる併用試験が乳がんリスク上昇の問題から途中中止となって以来，HRTの有害事象に対する報告が相次ぎ，逆風が吹いている状態であった．このインパクトが強烈であったためか，いまだに「HRT＝乳がんリスク」と考えている医師もいるようであるが，その後の再解析から乳がんについては少なく
とも 5 年未満の施行であれば安全と考えられるようにな
り，有効性についても再評価がなされている．５ 年以上の施行により上昇する乳がんリスクも肥満や飲酒などによるリスク上昇と同程度以下ということも分かってきた．また，乳がんリスクへ関連するのはエストロゲ
ンではなく，有子宮者において併用される合成黄体ホルモンであることも明らかとなっている．現在では HRTの適応拡大は世界的な流れである．また，2009年には日本産科婦人科学会と日本更年期医学会（現日本女性医学学会）とが共同でHRTガイドラインを策定，2012 年
度には改訂版も発刊されており，日本においても安全・
安心かつ有効にHRTが施行できる環境にある．さらに，
従来の経口剤に加えて，経皮貼付剤，経皮ゲル剤なども導入され，個々人のライフスタイルに応じた対応も可能
である．日本人女性，あるいは医師の間にもホルモン剤
に対するアレルギー的な感覚と誤解があるが，不妊治療を受けていた女性は比較的ホルモン剤に対して抵抗感がないことも有利な点になろう．
このように不妊治療終了後の長い人生を華麗に過ごすためにHRTという方法もあるため，挙児希望が無いからといって終診にするのではなく，医師としてその患者の一生におけるヘルスケアの重要性を認識して正確な情報を提供すること，また，自院にてフォローアップ
するか，適切な施設へ紹介することは生殖医療に従事する者の責務であると言えよう．
参考文献
1）Yasui, T., Hayashi, K., Mizunuma, H., Kubota, T., Aso, T.,
Matsumura, Y., Lee, J. S., Suzuki, S.: Association ofendometriosis-related infertility with age at menopause.
Maturitas, 69: 279-283, 2011.
2）日本産科婦人科学会・日本女性医学学会：ホルモン補充療法ガイ
ドライン 2012 年度版，日本産科婦人科学会，2012．

61

日本 IVF 学会臨床研究報告

国内のART におけるホルモン補充を考える

東口 篤司
KKR 札幌医療センター斗南病院
生殖内分泌科 指導医

略 歴1975 年
1981 年
1987 年
2000 年

札幌医科大学 卒業
札幌医科大学大学院 卒業
斗南病院 産婦人科
斗南病院 生殖内分泌科

日本産科婦人科学会専門医，日本生殖医学会生殖医療専門医，日本産科婦人科内視鏡学会技術認
定医（子宮鏡），日本受精着床学会評議員，日本生殖再生医学会評議員，日本 IVF 学会評議員
受 賞
2012 年度 世界体外受精会議記念賞（臨床）

PubMed による文献検索１）や IVF に関する世界的ア
ンケート調査のウェブサイト IVF-Worldwide.com の調査によると，世界の ART において補充されている卵胞 ホ ル モ ン 製 剤 の ほ ぼ 100 ％ は 天 然 型 ホ ル モ ン のestradiol であり，黄体ホルモン製剤のほぼ 100% は天然型ホルモンの progesterone である．一方，2013 年２月日本 IVF 学会が行った国内の ART 実施施設へのア
ンケート調査２）によると，国内のARTにおいて補充されている卵胞ホルモン製剤では conjugated estrogenが14 ～ 19％と比較的多くの施設で使用されており（図１），
黄体ホルモン製剤では合成の黄体ホルモンなど
progesterone 以外の黄体ホルモンが 50％以上の施設で補充されていた（図２）．また，世界では全く使用されない避妊用ピルが５～ 13％の施設で補充されていた．
ARTにおけるホルモン補充として，どんな卵胞ホル
モン製剤，黄体ホルモン製剤を選択すべきかを考える
時，その薬剤が有効でかつ安全であることが重要である
ことは言うまでもないが，もう一つ重要なことは，その

⑨13
（7%）
⑧24
（13%）

②27
（14%）

⑥84
（19%）

⑥27
（14%）

②85
（19%）

⑤17
（4%）
④28
（6%）

⑤7
（4%）
④7
（4%）

62

（1%）
⑧26
（6%） ⑨ 5
①18
（4%）
⑦2
（0.5%）

①10
（5%）

⑦1
（0.5%）

図1

薬剤が添付文書でどう取り扱われているかということである．医師が有効でかつ安全と認める薬剤が必ずしも添付文書の中で適応を認められているわけではなく，それどころか，ほとんどの卵胞，黄体ホルモンが適応外使用である．しかし，適応外ならどんな場合にでも使用できないかというと決してそうではない．適応外の薬剤を使用する時のルールとして，産科診療ガイドライン産科編2014 では，１）内外の研究報告からその薬剤のその使用法が有用であり，２）
informed consentのもとに行う必要がある，との条件が述べられている．
今日まで，ARTの分野では適応外使用のホルモン製剤が法的に問題になったことはないと思われる．しかし，他の分野では最近，適応外とされている薬剤を処方して有害事象が発生し裁判になる事件が散見される．これらの判例はARTの分野でも適応外の薬剤で有害事象が発生した場合，合理的な理由，手続きがなければ，将来何らかのかたちで問題にされる可能性があることを示している３）．

③178
（40%）

③73
（39%）

新鮮胚移植（189施設）

凍結胚移植（443施設）①エステル型Estradiol経口剤（プロギノーバなど）②Micronized estradiol（ジュリナなど）③Estradiol patch（エストラーナなど）④Estradiol gel（ディビゲルなど）⑤エステル型Estradiol筋注剤（オバホルモンデポーなど）⑥Conjugated estrogen（プレマリンなど）⑦Mestranol（デボシンなど）⑧Ethinylestradiol（プラノバールなど）⑨回答なし

国内の ART ではどんな卵胞ホルモン製剤が使用されているか？（文献２より引用）

（2%）
⑨32
（6%） ⑩8⑧16（3%）（0.7%）⑨29（5%）⑩4
⑧22
（4%）
①113
（19%）

①97
（19%）

⑦101
（17%）
⑦ 95
（19%）

②25
（5%）

②37
（6%）
③4
（0.7%）③4（0.8%）
④80
（16%）

⑤57
（11%）

⑤82
（14%）

新鮮胚移植（513施設）

凍結胚移植（595施設）①Progesterone筋注（プロゲホルモンなど）②Micronized progesterone腟剤（ウトロゲスタンなど）③Micronized progesterone経口剤（ウトロゲスタンなど）④自家製Progesterone腟剤⑤Chlormadinone acetate（ルトラールなど）

図２
表1

④97
（16%）

⑥106
（18%）

⑥99
（19%）

⑥Dydrogesterone（デュファストンなど）⑦Hydroxyprogesterone caproate（プロゲデポーなど）⑧Medroxyprogesterone acetate（プロべラなど）⑨Norgestrel（プラノバールなど）⑩回答なし

国内の ART ではどんな黄体ホルモン製剤が使用されているか？（文献２より引用）

ART で補充される卵胞ホルモン製剤，黄体ホルモン製剤の特徴
卵胞ホルモン

投与経路

体内で作用する時の構造

妊娠中の取り扱い（添付文書）

１）エステル型 Estradiol（プロギノーバなど）

経口

Estradiol

国内にはないので添付文書がない

２）Micronized estradiol（ジュリナなど）

経口

Estradiol

禁忌３）Estradiol patch（エストラーナなど）

経皮

Estradiol

禁忌４）Estradiol gel（ル・エストロジェルなど）

経皮

Estradiol

禁忌５）エステル型 Estradiol（オバホルモンデポーなど）

筋注

Estradiol

禁忌または妊娠中の取扱いの記載なし

６）Conjugated estrogen （プレマリンなど）

経口

Estrone Equilin など 10 種類以上

禁忌７）Mestranol（デボシンなど）

経口

Ethinylestradiol

妊娠中の取扱いの記載なし

黄体ホルモン

投与経路

体内で作用する時の構造
Progesterone

妊娠中の取り扱い（添付文書）

１）Progesterone（プロゲホルモンなど）

筋注

禁忌（切迫流早産に適応あり）

２）Micronized Progesterone 腟剤（ウトロゲスタンなど）

経腟

Progesterone

国内にはないので添付文書がない

３）Micronized Progesterone 経口剤（ウトロゲスタンなど）

経口

Progesterone

国内にはないので添付文書がない

４）自家製 Progesterone

経腟Progesterone

医薬品ではないので添付文書がない

５）Chlormadinone（ルトラールなど）

経口

Chlormadinone

妊娠中の取扱いの記載なし
切迫流産に適応あり

６）Dydrogesterone（デュファストンなど）

経口

Dydrogesterone７）エステル型 Hydroxyprogesterone（プロゲデポーなど）

筋注

Hydroxyprogesterone

禁忌（切迫流早産に適応あり）

８）エステル型 Medroxyprogesterone（プロべラなど）

経口

Medroxyprogesterone

切迫流産に適応あり

卵胞ホルモン＋黄体ホルモンの合剤
１）避妊用ピル（プラノバールなど）

投与経路
経口

表１ に示されたホルモン製剤のすべてに，有効性と安全性が検証されていることに基づくinformed consent
を 得 る こ と が で き る だ ろ う か？ 著 者 は 天 然 型 のestradiol，progesteroneの み がinformed consentの 取得を可能にすると考えている． 何故なら，世界でARTが始められて以来，約30 年間，約500 万人といわれる体外受精児に補充されたホルモン剤のほぼ 100％は天然型の estradiol，progesterone であり，有効性と安全性が十分検証されているからである．

体内で作用する時の構造
Ethinylestradiol ＋ Norgestrel など

妊娠中の取り扱い（添付文書）
禁忌

参考文献
１）東口篤司：凍結胚移植におけるホルモン補充―世界の標準―. 日
IVF 会誌，16: 46-53, 2013.
２）東口篤司：ART におけるホルモン補充の現状―日本 IVF 学会によるアンケート調査の結果―．日 IVF 会誌，17: 25-33, 2014.
３）東口篤司：国内の ART におけるホルモン補充を考える．日受精着
床会誌，31, 2014（印刷中）.

63ポスターセッション
P-1

胚の動的解析を加味した胚の分類法と臨床妊娠率の検討

末永 めぐみ，篠原 真理子，江口 明子，川崎 裕美，
松下 富士代，山口 弓穂，伊藤 正信，松田 和洋
松田ウイメンズクリニック

なお，当院独自のグレーディングは良好胚盤胞（Day5）へ成長した胚に影響を与えた因子や胚の発育時間を当院の過去の報告より再検討し，動的解析（分割のタイミング・前核数・割球数・多核の有無・第一分割の形態・fragmentation の量等をヒエラルキーにて分類）を加味し，考
案した．
【結果】
当院でのグレーディングではグレード１，２，３，４の順に臨床妊娠率
が Day2ET31.3％，25.0％，14.3％，0.0％，Day3ET34.3％，25.0％，【目的】

12.5％，0.0％となり，有意差は認められないもののグレードの低下とと初期胚移植においては胚の形態評価を重視したVeeck の分類が主にもに妊娠率が低下傾向を示した．一方，Veeck の分類を適用した場合用いられることが多いが，胚の発育動態は考慮されておらず，必ずしもはグレード１，２，３，４の順に Day2ET23.1％，47.1％，13.3％，0.0％，

着床能を正確に反映しているとはいえない．さらに，Embryo Scope

Day3ET38.9 ％，16.7 ％，25.8 ％，14.3 ％となり，グレードと臨床妊などを用いたタイムラプス観察の導入により胚の形態評価以外にも受精

娠率にばらつきが見られた．さらに，当院でのグレーディングでの胚盤から発育に関しての様々な情報を得られるようになり，Veeck の分類で胞 発 生 率 はグレ ード１，２，３，４の 順 に 97.3 ％，72.2 ％，39.5 ％，のグレーディングに苦慮するケースが散見される．これまでに当院は25.5％，良好胚盤胞獲得率は 87.7％，40.5％，14.0％，11.8％となり，Embryo Scope による胚の動的解析により，初期胚の形態や発育速度

発生率・獲得率ともにグレード１は他３群に対して，グレード２はグレーと発育予後に関連がある事を報告してきた．そこで動的解析を加味し

ド３および４に対し有意に高い値を示した．

た当院独自のグレーディングを考案し，検証した．
【結論】【対象および方法】

Day2 および Day3 においてグレードの低下とともに臨床妊娠率が低2013年１月から12月までの期間に 39歳以下採卵回数３回以内の症例下したことから， 当院の胚の動的因子を加味したグレーディングはで SET を実施した 101症例112周期を対象とし，後方視的に移植前のVeeck の分類と比較してより胚の着床能を反映していると思われた．さ

胚の状態について当院での胚の動的因子を加味したグレーディングをらに，余剰胚での胚盤胞発生率・良好胚獲得率においてもグレード間適用した場合とVeeck の分類を適用した場合とで臨床妊娠率を比較・に有意差を認めたことから胚盤胞への発育をある程度予測できると思検討した．さらに，余剰胚246個72症例78周期について当院での Day3

われた．今後は着床胚の動的因子を分析することで着床能に関わる因での胚の動的因子を加味したグレーディングを適用した場合の胚盤胞子をグレーディングに加味できればと考えている．

発生率および良好胚盤胞（3BB 以上）獲得率についても検討を行った．

P-2

ガラス化加温後ヒト胚盤胞の胞胚腔のコラプスが着床率に及ぼす影響

石山 舞，岩山 広，下田 美怜，中谷 絢乃，山下 正紀
山下レディースクリニック

C-/E+ 群，コラプスを起こしたものの再拡張がみられた胚を C+/E+ 群，
コラプスを起こし，かつ再拡張が起こらなかった胚を C+/E- 群とし，各群の着床率を比較した．また，ガラス化保存前後の ICMとTE のグ
レード（ガードナー分類）の分布について各群で比較検討した．
【結果】
胞胚腔のコラプスと再拡張に着目した分類において，着床率は C-/
E+ 群（46％ , n=426）とC+/E+ 群（41％ , n=221）が，C+/E- 群（18％ ,【目的】

n=33）よりも有意に高くなった（p＜0.05）．

ガラス化加温後に広範囲にアシステッドハッチングを施した胚盤胞をガラス化前の TE においてグレードC の割合は，C+/E- 群（42％）が観察すると，順調に再拡張を続ける胚盤胞の他に，ある時点で収縮しC-/E+ 群（14％）とC+/E+ 群（17％）よりも有意に高くなった（p ＜0.05）．

たのち再拡張を続ける胚盤胞，あるいは胞胚腔を形成するものの収縮
し再拡張が起こらない胚盤胞がみられる．

加温後の TE においてグレードC の割合は，C+/E- 群（79％）が，C-/E+ 群（14％）と C+/E+ 群（26％）よりも有意に高くなった（p ＜0.05）．

本研究では，ガラス化加温後の胚盤胞における回復培養中の再収縮

また，コラプスの起こった C+/E+ 群および C+/E- 群において，ガラ（コラプス）と再拡張が，着床にどのように影響しているか検討した．まス化保存を介して，TE のグレード C の 割 合が増 加した（ それ ぞれた，コラプスおよび再拡張の動態と，ガラス化保存前後の胚盤胞のグ17％→26％ および 42％→79％）．

レードとの間にどのような関係性があるのか検討した．
【考察】
【方法】
ガラス化加温後，単一融解胚移植に用いられた 680個の胚盤胞を対象とした．

ガラス化加温後の回復培養において，約４割の胚盤胞にコラプスが生じたが，コラプスを起こしても３時間目までに再拡張が認められれば着床率に影響がないことが確認された．

回復培養０時間目（耐凍剤希釈直後），そして，１，２および３時間目

再拡張が認められなかった胚盤胞は，凍結時の ICMとTE のグレーの胚盤胞について，２次元画像上の面積をそれぞれ測定した．コラプス

ドがCである割合が高いことから，再拡張の有無は凍結前の胚のグレー（Collapse: C）は，前の時間と比較して面積が相対的に小さくなった現

ドが大きく関わっていることが考えられた．

象とし，また，再拡張（re-Expansion: E）は，回復培養０時間目と比コラプスが生じた胚盤胞では，ガラス化前と比較して加温後の TE の

較して，回復培養３時間目の面積が相対的に大きくなった現象とした．

グレード C の割合が増加していることから，ガラス化加温の作業工程

３時間の回復培養において，コラプスが起こらずに再拡張した胚を64

を介して TE が何らかのダメージを受けていることが予測された．

P-3

採卵から cIVF までの時間の差が受精率および胚発生に及ぼす影響加藤 道高，福永 憲隆，北坂 浩也，吉村 友邦，田村 総子，
長谷川 望，中山 要，青柳 奈央，大野 浩史，渡邊 紘之，
木田 雄大，小森 佑奈，小沼 よしみ，下村 海咲，加藤 大和，
金山 真己，辻 暖永，中野 千春，浅野 恵美子，香ノ木 早紀，
小島 正愛，野老 美紀子，服部 幸雄，若原 靖典，木下 孝一，
近藤 麻奈美，薬師 義弘，羽柴 良樹，浅田 義正
浅田レディース名古屋駅前クリニック 浅田レディース勝川クリニック
浅田生殖医療研究所

分（B 群），221 ～ 280分（C 群）および 281 ～ 340分（D 群）に分け，正常
受精率，不受精率および異常受精率（１PN，≧３PN）を比較した．また，各群におけるDay3良好胚形成率，Gardner 分類によるBlast ３以上の胚盤胞形成率および良好胚盤胞形成率を比較検討した．
【結果】
正常受精率は A 群61.2％（175/286），B 群66.1％（925/1399），C 群
66.9 ％（604/903），D 群68.5 ％（139/203）， 不 受 精 率 は A 群28.0 ％（8 0/2 8 6），B群2 3 . 9％（3 3 4 /13 9 9），C群2 6 . 8％（2 4 2/9 0 3），D群
22.2％（45/203），異常受精率（１PN）は A 群4.5％（13/286），B 群4.1％（57/1399），C 群4.0％（36/903），D 群3.9％（８/203）で有意な差はなかった． 異 常 受 精 率（ ≧ ３PN）は A 群 14.7 ％（42/286），B 群 10.9 ％（152/1399），C 群8.1％（73/903），D 群10.3 ％（21/203）となりC 群は
A 群，B 群よりも有意に低い値となった（P ＜0.05）．Day3良好胚形成【目的】

率は A 群45.3（24/53），B 群56.1％（115/205），C 群48.3％（84/174），D

Conventional IVF（cIVF）の課題は正常受精率を向上させることで群63.0％（17/27）で有意な差はなかった．また，Blast ３以上の胚盤胞ある．現在まで当院では正常受精率を向上させるために，sperm 処理

形成率および良好胚盤胞形成率は A 群52.8％（28/53），49.1％（26/53），

後の運動精子数ではなく運動精子濃度が高いことが重要であること，

B 群55.1％（113/205），43.9 ％（90/205），C 群52.3 ％（91/174），40.8 ％sperm 処理における swim up の妥当性などについて検討し報告してき（71/174），D 群51.9％（14/27），44.4％（12/27）で各群間に有意な差はな

た．当院では年間約3,000周期もの採卵を行っており，１日あたり平均

かった．

11件の採卵を行っている．通常の調節卵巣刺激，簡易卵巣刺激，予想採卵数などを考慮して採卵を施行する順番を決定している．媒精は採【考察】卵を施行した症例の順番で行っているため，症例により採卵から媒精

一般的に卵子のエイジングが進むことで受精率や胚発生に負の影までの時間が一定にならず差が生じる．この時間差が cIVF の受精率響を与えるといわれており，卵子のエイジングは確実に生じているといにどのような影響を及ぼすかについて十分な情報はない．そこで，ヒト

うことは様々な報告から明らかである．そのため，できる限り早い時

卵子の採卵から cIVF までの時間経過が受精率および胚発生にどのよ

間に媒精を行う必要があるのではないかと考えてきた．しかし，今回

うな影響を及ぼすかについて今回検討を行った．

の結果より採卵から cIVF までの時間は正常受精率や胚 発生に影響を与えないことから，少なくとも今回検討した採卵から cIVF までの【材料および方法】
2013年１月～ 2013年12月に cIVFを施行した 539症例569周期を対象

時間（100 ～ 340分）であれば卵子のエイジングの影響を受けずに cIVFを施行できることが示唆された．

とした．採卵から cIVF までの時間を100 ～ 160分（A 群），161 ～ 220

P-4

精巣内精子における極少精子凍結の有用性

川上 典子，井上 聖子，岩澤 未来，中戸 可奈，中務 結貴，
新藤 知里，斉藤 寛恵，平田 麗，青井 陽子，寺田 さなえ，
吉岡 奈々子，羽原 俊宏，林 伸旨
岡山二人クリニック

は TESE 組織の中から精子をインジェクションピペットで採取した後，Cryotop のシート上に作成した 0.2M シュクロース液１μL の drop に
１〜５精子を入れ，液体窒素の液面から４cm の蒸気上で２分間冷却後，液体窒素内に投入した．融解は血清添加した modified HTF の２μLの drop を３個作成しオイルカバーした Dish に，Cryotop の精子を乗せた面を下にしてdrop に順に漬け，drop 内の精子を探索した．
【結果】
対象期間に TESEを施行し精子が回収できた 26症例のうち，10症例において極少精子凍結を実施した．この極少精子凍結を融解して４症【目的】

例の ICSI に用いたが，融解後の精子回収率は 86.5％（32/37），探索

精巣内精子回収法（TESE）により得られた精子を凍結保存する際，時間は１本あたり３〜 20分程度であった．新鮮胚移植を１症例に施行

従来はセラムチューブあるいはストローなどを用いて処理した組織液をしたが妊娠は確認できず，その後の融解胚移植により胎嚢が確認でき

凍結していた．しかし，組織や液量が多いため凍結前に精子を確認した症例は２症例であった．

ていても精子数が少ない場合は融解後の精子の探索に時間がかかり，発見が困難な場合もある．そこで，凍結前に回収できた精子を極少凍結する操作手順を追加し，その有用性を検討した．

【考察】
極少精子凍結は，操作方法が簡便であり良好な回収率が得られた．
従来の凍結方法では探索に数時間を要することもあったが，探索範囲【方法】

が２μL の drop ３個に限定されているため短時間に確認できた．妊娠

2012年８月から2014年４月に TESEを施行した症例のうち，回収し例も出ていることから極少精子凍結による精子への影響は少ないと思た組織の所見から融解後の精子探索が困難と予想された症例についてわれるが，今後，症例数を増やし検討が必要である．以上から，極少従来の凍結方法と併せて新しく極少精子凍結を行った．極少精子凍結

精子凍結は融解後の捜索時間を短縮させるために有用と考えられる．

65

ポスターセッション

P-5

非ヒト霊長類動物モデルを用いた子宮移植モデルの開発
～子宮性不妊患者に対する妊孕性
再建技術の可能性を探って～木 須 伊 織 １）， 三 原 誠 ２）， 原 尚 子 ３）， 飯 田 拓 也 ３），
梅根 紀代子１），安達 将隆１），阪埜 浩司１），菅沼 信彦４），
青木 大輔１）
１）慶應義塾大学医学部産婦人科学教室
２）済生会川口病院血管外科
３）東京大学医学部形成外科・美容外科
４）京都大学大学院医学研究科人間健康科学系専攻

で４℃に冷却しながら灌流液で摘出子宮を灌流させた．その摘出子宮を自家移植では同所性に戻し，同種移植では他個体に移植した．腟吻
合後 , 血管柄付きの摘出子宮を顕微鏡下で血管吻合を行い，同種移植では術後に免疫抑制剤の投与を行った．術後の子宮機能評価および拒絶反応の評価のために，月経の確認，経腹超音波断層法，子宮頸部生検を定期的に施行した．
【結果】
自家移植１件，同種移植１件において，術中管理や薬剤誤投薬が原因ですべての個体が術中死した．生存した自家移植２匹において，術後両者に月経を認め，そのうち１匹においては，術後116日目に自然妊娠を確認し，満期に帝王切開により児を娩出した．生存した同種移植
２匹においては，術後の免疫抑制剤（タクロリムス）の内服コンプライア
ンスの低下により，術後11日目に血中濃度が低下し，両者に子宮頸部組織生検で拒絶反応が見られた．１匹は術後23日目には拒絶反応は消【目的】

失し，術後３カ月後に一時的に月経が回復した．他方はエコーで子宮近年，子宮性不妊女性に対する挙児の解決策として子宮移植が１つ

動脈血流が次第に観察されなくなり，術後３カ月の開腹所見で索状のの選択肢として考えられ，様々な動物モデルでの基礎研究だけでなく，萎縮子宮を認めた．手術所要時間は自家移植で平均12時間23分，同

ヒトへの臨床応用も報告されている．ヒトへの臨床応用には様々な課種移植で平均12時間48分であった．

題が挙げられるが，技術面においては，解剖生理学的にヒトに類似している霊長類動物での検証が必要である．今回我々は，カニクイザル
を用いて子宮移植モデルの作製に試みたので報告する．

【考察】
我々はカニクイザルを用いて子宮自家移植後の出産例および子宮同種移植後の月経回復例を経験した．ヒトへの臨床応用の可能性を探るため【方法】には，非ヒト霊長類動物におけるさらなるデータの蓄積や術式の確立が動物実験施設の倫理委員会承認のもと，カニクイザル（３〜４kg）を求められる．しかしながら，カニクイザルを用いた子宮移植モデルの開用いて，６件（自家移植３件，同種移植３件）の子宮移植手術を施行し発はヒトと比して体格が小さいため，手術手技が極めて難しいこと，周た．これまでの探索的子宮移植手術の経験や結果を踏まえ，全例に術期管理および免疫抑制剤血中濃度コントロールが十分に行えないこと，

手術前に自己血貯血を行い，術中に返血した．カニクイザルの臍横部

生殖補助医療技術が確立されていないことから，ある程度の限界があり，から恥骨部まで皮膚縦切開を行い，血管柄付きの子宮を摘出し，体外子宮移植モデル作製にはさらなる検討が必要であると考えられた．

P-6

胚培養士による個別相談（たまご相談室）を行って

大住 哉子，佐藤 学，中岡 義晴，森本 義晴
IVFなんばクリニックた人は 16.8％であった．たまご相談室を利用した患者平均年齢は 38.5
歳（27 〜 49歳 ）で， 年 齢 別 の 割 合 は，30 歳 未 満4.4 ％，30 ～ 39歳
50.4％，40歳以上45.2 ％であった．これは当院での 2013年胚移植実
施 者平均年 齢の 38.2歳， 年 齢別の割 合30歳 未満3.3 ％，30 ～ 39歳
54.7％，40歳以上41.6％とほぼ同等であった．相談室利用時点での当院での採卵実施平均回数は 3.4回（０〜 15回）で，64.4％が採卵３回目までに相談室へ来室していた．また，胚移植平均回数は 1.8回（０〜９回）であり，今後胚移植を行う予定の胚移植０回目の患者が一番多く【目的】

28.9％で，74.8％が胚移植２回目までに来室していた．多かった質問

当院では，体外受精を実施した患者，もしくはこれから体外受精を

内容は，順に 1. 卵子，2. 胚のグレード，3. 凍結胚（移植），4.今後の治行う患者に対して胚培養士から卵子，精子，胚に関しての説明を直接療へのアドバイス，5. 胚盤胞（移植），6. 高齢，7. 精子について，であっ受けることができるたまご相談室を週一回（二枠），無料で実施している．

た．アンケート調査より，95.3％が培養士の説明は分かりやすかったと

この相談室を通して，相談を希望する患者の背景や患者からの質問内

回答し，92.9％が培養士の説明は納得できたと回答していた．再度利容，またアンケートにより相談室の満足度を調査した．

用したいと回答したのは 86.6％であった．

【対象・方法】【考察】

2012年１月から 2014年３月までにたまご相談室を訪れた患者113人

事前に配布する質問用紙により，相談担当胚培養士は患者の体外受（135回）を対象とした．たまご相談室予約時，患者に質問用紙を配布し，精における興味の対象や不安要素を十分把握でき，必要に応じてデー

相談日前日までに質問事項を記入し提出していただくようにお願いした．

タを収集し，適切な回答をスムーズに行うことができた．90％以上の相談可能な胚培養士は日本卵子学会認定生殖補助医療胚培養士資格

患者が培養士の説明が分かりやすく，納得できたと回答していることよ取得者で，相談時間は 30分間とした．相談室終了後，アンケートに協りたまご相談室は診察での医師の説明を補足し，患者の不安や疑問を力いただき，回収率は 94.1％であった．

取り除くための情報提供の場として有益であり，今後も継続して続けていく必要はあると考えられる．そのために胚培養士は，常に患者に最【結果】
たまご相談室の予約占有率は 60.3％で，この期間中に複数回利用し66

新の情報提供ができるよう，体外受精におけるデータの収集，分析のほか知識向上のために学会参加や勉強会の開催が不可欠である．

ヒアルロン酸含有培養液が胚に与える影響についてP-7

阿部 礼奈，緒方 洋美，岩崎 利郎，角本 知世，十倉 陽子，
山田 聡，緒方 誠司，水澤 友利，岡本 恵理，松本 由紀子，
苔口 昭次，塩谷 雅英
英ウィメンズクリニック【目的】
培養液にヒアルロン酸を添加することで，妊娠成績が向上したことが報告されている（Bontekoe et al., 2010）．そこで，今回我々は，ヒアルロン酸を含む培養液と，ヒアルロン酸を含んでいない培養液の胚培養の成績と妊娠成績について検討したので報告する．
【方法】

良好胚盤胞率とした．さらに，凍結融解胚移植を施行した 49周期において心拍陽性率を検討した．
【結果】
受精率，分割率，分割期良好胚率，胚盤胞発生率，良好胚盤胞率において両群に有意な差は認めなかった．心拍陽性率では有意差はな
いものの，含有群において高くなる傾向を認めた．
ヒアルロン酸非含有群

含有群

受精率（%）

75.9 （245/323）

73.0 （222/304）

分割率（%）

88.6 （217/245）

87.4 （194/222）（%）
分割期良好胚率＊153.9 （117/217）

49.5 （ 96/194）

胚盤胞発生率（%）
【Day5】

53.0 （115/217）

51.5 （100/194）（%）
良好胚盤胞率＊2

49.6 （ 57/115）

51.0 （ 51/100）

心拍陽性率（%）

33.3

58.3 （ 14/24 ）（ 8/24 ）＊１

良好胚【Veeck 分類：採卵後２日目にて４細胞グレード１, ２および５細胞以上のグレード１～３】＊２良好胚【Gardner 分類グレード３BB 以上】

2013年６月～ 10月に採卵を行い本検討に同意が得られた全胚凍結症例，
50症例を対象とした．採卵時に得られた卵を，採卵後０～１，
１～６日目ま【考察】

で Origio 社Universal IVF とLife Global社 global medium（１％ HSA）

本検討では，検討したすべての項目において有意差は認めなかったを用いて培養した群（以下非含有群）と採卵後０～１，１～２，２～６日目まが，ヒアルロン酸含有培養液を用いて培養した胚は，非含有培養液とで Origio 社 Sequential Fert
（0.5％ HSA）とSequential Cleav（ ヒアルロ

比較し心拍陽性率が高い傾向にあった．この結果から，ヒアルロン酸

ン酸および0.5％ HSA）
およびSequential Blast（ヒアルロン酸および0.5％

含有培養液にて胚を培養することで，胚の quality が高まる可能性やHSA）を用いて培養した群（以下含有群）の２群に分けて検討を行った．

胚の着床能を向上させる可能性が示唆された．

検討項目は，受精率，分割率，分割期良好胚率，胚盤胞発生率，

精液所見と精漿総カルニチン濃度の相関についての検討

P-8

魚住 卓矢１），王堂 哲２），緒方 洋美１），岩崎 利郎１），
松本 由紀子１），苔口 昭次１），高津 寛２），山口 耕平１），
石川 智基１），塩谷 雅英１）
１）英ウィメンズクリニック
２）株式会社 AA プロジェクト【結果】
総カルニチン濃度（平均値± SD）は，A 群574.8±276.4μM，B 群
326.1±176.4μM，C 群 498.4±279.7μM，D 群 398.7±224.6μM，E
群286.0±149.6μMとなり，A 群と比較し，B 群，D 群，および E 群で，有意に少なくなった．
また，総カルニチン濃度は，精子濃度および運動精子濃度との間に正の相関（R=0.443とR=0.424）を認めた．一方，運動率は総カルニチ
ン濃度との間に相関関係は認めなかった．
【考察】

【目的】

精液所見正常精液と比較し乏精子症，乏精子・精子無力症および無精漿中のカルニチン濃度は，精子濃度および精子運動率と正の相関

精子症患者の精液では，精漿カルニチン濃度が低下することが示唆さをもつことが諸外国から報告されている（Sheikh et al. 2007）．しかし，れた．また，精漿カルニチン濃度と精子濃度および運動精子濃度との日本人男性における精漿カルニチン濃度と精液所見との関連を示し検討

間には正の相関が存在することが示唆された．今後は，カルニチンをした報告は少ない．そこで，今回我々は，精漿総カルニチン濃度の測定

サプリメントとして摂取することで精液所見の改善が見られるかどうかを行い，精子濃度および運動率との相関性を検討したので報告する．

検討していく予定である．

【方法】
2013年５月～７月までに男性不妊外来を受診した患者のうち検査に同表1

精液所見別にみた総カルニチン濃度
平均総カルニチン濃度 ± SD（μM）

意を得た 69例を対象とした．これら 69例を WHO ラボマニュアル第４A 正常精液（n=25）

574.8 ± 276.4a

B 乏精子症（n=17）326.1 ± 176.4b未満），D群（n=16）；乏精子かつ精子無力症（B群且つC群），E群（n=９）；

C 精子無力症（n= ３）

498.4 ± 279.7

無精子症（精液中に精子を認めない）の５群に分けて検討した．精漿は，－20℃にて凍結保存し検査に供した．精漿総カルニチン濃度は，アシD 乏精子症・精子無力症（n=16）

398.7 ± 224.6c

ルカルニチンエステラーゼによってアシルカルニチンを遊離体に誘導しE 無精子症（n= ９）286.0 ± 149.6d版を基準に，A 群（n=25）；正常精液，B 群（n=17）；乏精子症（精子濃度6；精子無力症（前進運動精子が 50 ％が 20×10 /mL 未満），C 群（n=3）

た後，酸化還元酵素系反応を用いた吸光度によって測定した．

（a，b p＜0.005）（a，c p＜0.05 ）（a，d p＜0.001）

67

ポスターセッションICSI 時の卵子形態は受精結果に影響するのかP-9

木田 雄大，福永 憲隆，北坂 浩也，吉村 友邦，田村 総子，
長谷川 望，加藤 道高，中山 要，青柳 奈央，大野 浩史，
渡邊 紘之，小森 佑奈，小沼 よしみ，下村 海咲，辻 暖永，
加藤 大和，
金山 真己，
浅野 恵美子，香ノ木 早紀，
小島 正愛，
野老 美紀子，服部 幸雄，若原 靖典，木下 孝一，近藤 麻奈美，
薬師 義弘，羽柴 良樹，浅田 義正
浅田レディース名古屋駅前クリニック 浅田レディース勝川クリニック
浅田生殖医療研究所群に分けた．今回解 析の対 象とした形態異常は Centrally LocatedCy t opl a s m ic G r a nu l a r it y（CL C G），S m o ot h E m d opl a s m ic
Reticulum Clusters（sERC），小胞（vesicle），膜弱い，黒い，細胞質粗雑，いびつ，zona 関連，PB 関連，PVS 広い，PVS 内夾雑物ありの11項目とした．
【結果と考察】2013年度における当院の ICSI 成 績は２PN：81.3 ％，１PN：2.6 ％，NF：5.6％，＞２PN：4.1％，分割：0.3％，Deg：6.2 ％であり，全体の46.9％に形態異常が見られた．また，形態異常の有無で受精結果を比較すると，形態異常が無い群の２PN 率が有意に高かった（74.1％ vs 87.7％
P＜0.05）．このことから，卵子の形態異常は受精結果に影響を及ぼすことが示された．各受精結果におけるICSI 時の形態異常を有する割合を解析した 結 果， ２PN：42.7 ％， １PN：62.4 ％，NF：54.7 ％，＞２PN：【目的】

64.5％，分割：93.0％，Deg：74.5％であった．このことから，特に分割

現在のARTにおいて，ICSIは無くてはならない技術であるが，ICSI

やDegとなる卵子には ICSI 時に何らかの形態異常が見られるものが多い

はあくまで受精を補助する技術であるため，その後の受精や発生は卵子ことが示された．また，各卵子形態の受精成績を解析した結果，vesicleの質に大きく左右されると考えられる．しかしながら，ICSIを施行するや膜弱い，細胞質粗雑，いびつ，PB 関連，夾雑物ありの２PN 率が70％

卵子すべてが同様の形態であるわけではなく，様々な形態異常が観察さ未満と低率であることが分かった（図１）．特に膜弱いにおける２PN 率はれ ICSI 後の発生に懸念を抱く症例がみられる．当院では特徴的な形態

44.9％と低く，41.7％と高い割合で Degとなることが示された．一方で，異常について ICSI 時のコメントとして残している．そこで，今回我々はCLCG や sERC，黒い，zona 関連は２PN 率にはあまり影響しないことがICSI 時の卵子形態は受精結果に影響するのか解析を行った．

示された．各受精結果における各卵子形態の頻度を解析した結果，分割になる胚には形態異常であるsERC や細胞質粗雑，PB 関連，PVS 広い【材料および方法】の頻度が高いことが示された（図２）．また，sERCの分割率は 1.5％と高対象は 2013年１月～ 12月にICSIを施行した1,578症例2,780周期14,239

くないが，分割におけるsERCの頻度が高いことから，分割となる要因で個とし，ICSI 時の卵子形態と受精結果についての相関を調べた．受精結あることが推察される．今回は受精結果のみの解析であったため，今後

果は２PN 群，１PN 群，NF 群，＞２PN 群，分割群，Degeneration（Deg）

年齢や卵巣刺激刺との形態異常の関連を調べる必要がある．

100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%

2PN
異常なし
細胞質粗雑

図1

1PN
CLCG
いびつ

NF
sERC
zona 関連

＞2PN
vesicle
PB 関連

分割
膜弱い
PVS 広い

Deg
黒い
夾雑物あり

各卵子形態の受精成績

70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%

2PN
異常なし
細胞質粗雑

図2

68

1PN
CLCG
いびつ

各受精結果における各卵子形態の頻度

NF
SERC
zona 関連

＞2PN
vesicle
PB 関連

分割
膜弱い
PVS 広い

Deg
黒い
夾雑物あり

P-10 卵細胞膜の伸展性を考慮した脆弱な卵子に対するピエゾ ICSI の新しいアプローチ

岩山 広，石山 舞，下田 美怜，中谷 綾乃，山下 正紀
山下レディースクリニック

ゾパルスの適用前に穿破された卵子において，そのまま１回目の穿刺で精子を注入した（Single injection）卵子をLow/Single 群，
それに対して，１回目の穿刺で精子を注入せずに再穿刺を試みて卵 細 胞 膜 の 十 分に伸展した部 位 から精 子を注 入した（Reinjection）卵子をLow/Re 群とした．また，膜伸展度が 75％以上（High stretchiness）ありピエゾパルスにより穿破され，１回目の穿刺で精子を注入した卵子をHigh/Single 群とした．上記３群間の，卵子生存率および正常受精率を比較検討した．
【結果】

【目的】
卵細胞膜の伸展性はピエゾ ICSI 後の卵子生存性に影響を及ぼす要検討１： 膜 伸 展 度 は， サイトカラシン B 処 理 に より有 意 に 増 加し因の１つであり，高い膜伸展度の観察された卵子はほぼ 100％の生存率（51→100％ , p ＜0.01），ジャスプラキノライド処理により有意にを示す．その膜伸展性は，卵成熟とともに変化する細胞骨格のアクチンが関係していることが予測される．また，アクチンは動的であり，その重合－脱重合あるいは分布には局所性があることがわかっている．
本研究では，アクチンの重合－脱重合が卵細胞膜の伸展性に及ぼす低下した（48→13％ , p ＜0.01）．
検討２：同一卵子内の異なる部位における膜伸展度には，有意な相関関係（r=0.20, p=0.11）は認められなかった．
検討３：臨床において，Low/Re 群の卵子生存率および正常受精率（94

影響と，同一卵子内の異なる場所における膜伸展度の局在性を調べた．

および 83％）は，Low/Single 群（59 および 46％）よりも有意そして，卵細胞膜の脆弱な卵子に対して，得られた知見に基づく新しい（p ＜0.01）に高くなった．

ピエゾ ICSI を施行し，卵子生存率および正常受精率を検討した．
【考察】
【方法】

人為的に起こしたアクチンの重合－脱 重合に膜伸展度が依存的で本研究における廃棄 MII 卵子の使用および臨床でのピエゾ ICSI のあったことから，卵子表層のアクチンの動態が，卵細胞膜の伸展性を適用は，患者同意のもとに行われた．膜伸展度は，卵細胞膜の伸展長決定づける要因の１つであることが確認された．また，注目すべきこと（穿刺部位から穿破点まで）の卵子直径に対する割合として定義された．

として，卵細胞膜の伸展性は１個の卵子としての性質ではなく局所的な検討１： アクチンの重合－脱重合と膜伸展度との関係は，サイトカラシ

ものであり，同一卵子内の異なる部位では膜伸展度が異なることが明ン B（重合阻害）あるいはジャスプラキノライド（脱重合阻害）の処理前後で，同一卵子内の同一部位を穿刺し膜伸展度を比較することで評価した．
検討２：膜伸展度の局在性は，同一卵子内の異なる部位を穿刺し，それらの膜伸展度について相関解析を行い評価した．

らかになった．
このような卵細胞膜の性質を考慮し，卵細胞膜が脆弱な卵子においては，低伸展を示した部位からの精子注入を避け，高伸展部位より再度精子注入を試みることで，ピエゾ ICSI 後の卵子生存率および正常受精率は大幅に改善されることが示された．

検討３：臨床において，膜伸展度が75％未満（Low stretchiness）でピエ

P-11 ヒト卵母細胞の成熟過程においてミトコンドリアはアクチンフィラメン
トを介して局在を大きく変化させる

天羽 杏実，橋本 周，山中 昌哉，矢持 隆之，後藤 大也，
井上 正康，中岡 義晴，森本 義晴
IVFなんばクリニック

ター形成も観察した．Mtとアクチンの関連性：マウス卵母細胞で Mt
動態にアクチンが関与している可能性が示された．そこで，本研究では 0.1µg/mL のサイトカラシン B（CB）を添加してライブイメージングを行い，Mt 占有割合変化を算出した．
【結果】
Mt 動態：GVBD 前120分（76.3％）から GVBD 後120分で急激に Mt
占有面積が増加した（89.3％，p ＜0.01）．また，TEM の観察結果より，80％（11/14）の GV 期卵母細胞で細胞膜下に Mt が存在しなかったが，
GVBD 以降では細胞質内に均一に分布していた（100％：21/21）．細胞骨格との関連性：細胞周期の進行に伴い微小管の局在様式が変化した．

【目的】

一方でアクチンは細胞周期に関わらず，細胞膜近傍に局在していた．ヒ

雌性生殖細胞である卵母細胞は受精可能な成熟卵子まで細胞周期

ト卵母細胞では細胞骨格とMtとの共局在は認められなかった．免疫染を 進める．その過程でミトコンドリア（Mt）局在変化が 観 察される．

色でもライブイメージングと同様に，GV 期で細胞膜下のMt が少ない領

Hela 細胞では細胞骨格を介して Mt が移動する．しかし，卵母細胞で域をもつが（83％：39/47），GVBD-TI や MII ではこの領域はなくなったのMt分布変化が細胞骨格を介しているかは不明である．本研究ではヒ（GVBD-TI：16％（８/51）, MII：０％（０/ ６））．また，GV 期では Mt

ト卵母細胞が成熟卵子にまで進行する間の Mt 動態を明らかにし，アのクラスター形成が観察されたが（58％：28/48），GVBD 後 MII 期へとクチンとの関連性を調べた．

細胞周期が進むにつれ，少なくなった（GVBD-TI：25％（13/51），MII：
17％（１/ ６））．Mtとアクチンの関連性：CB 添加区では，GVBD 前120

【対象と方法】
インフォームドコンセントの後，ICSI 時に未成熟であった卵母細胞分（67.2％）からGVBD 後120分にかけて Mt占有面積の増加は認められなかった（62.0％）．

162個を使 用した．Mt 動態：卵母 細胞23個を MitoTracker Orange
染色後15分間隔で 40時間撮影し，経時的な Mt の局在変化像を得た．

【考察】

その際，卵母細胞の赤道面面積におけるMt 占有面積割合を GVBD

GVBD 前の卵母細胞では，細胞膜下に Mt のない領域が存在し，細前後120分で計測した．透過型電子顕微鏡（TEM）を用いてGV：14個，胞質中に Mt はクラスター構造を形成していた．GVBD に伴い，Mt が細GVBD-Telophase （TI）
I
：15個，第二減数分裂中期（MII）：６個の胞膜下に急激に移動し，クラスター化が解消された．一方，アクチンのMt 分布 様 式を観 察した． 細 胞骨 格との関 連性：104個（GV：47個，重合を阻害することにより，GVBD 後のMt占有面積の増加が見られな

GVBD-TI：51個，MII：６個）で免疫蛍光染色を行い，Mtと微小管，かったことから，卵母細胞の成熟におけるMt 分布への関与が示唆された．

Mtとアクチンの局在を観察した．卵母細胞での Mt 分布様式とクラス

69

ポスターセッション

P-12 グレード別にみた２段階胚移植の有用性

群4.5回，C 群3.8回で，A 群が B，C 群に比べ有意に少なかった（P＜0.05）．A 群，B 群，C 群それぞれの妊娠率は 38.6％，47.8％，25.7％
で，C 群 は A，B 群 に 比 べ 有 意 に 低 か った
（P＜0.05）． 流 産 率 は21.8 ％，30.3 ％，48.1％で，C 群が A 群に比べ 有意に高かった（P＜

鈴木 麻美，菊地 裕幸，山田 健市，岩佐 由紀，菅野 弘基，
佐藤 那美，馬場 由佳，三嶋 玲美，村川 晴生，片桐 未希子，
吉田 仁秋
吉田レディースクリニック ARTセンター

0.005）．多胎率は 1.8％，30.3％，3.7％で，B 群が A，C 群に比べ有意に高かった（P ＜0.01）．グレード別では，３BB 以上のA 群，B 群，
C-g 群，C-p 群それぞれの妊娠率は 44.2％，52.7％，41.2％，25.6％で，C-p 群がA，B 群に比べ有意に低かった（P ＜0.05）．流産率は 21.4％，
20.7％，85.7％，27.3％で，C-g 群がA，B，C-p 群に比べ有意に高かった（P ＜0.05）．多胎率は 1.6％，27.6％，０％，０％で，B 群が A 群に【目的】

比べ 有意に高かった（P ＜0.005）．３BB 未満のA 群，B 群，C-g 群，

近年，多胎妊娠防止や良好胚選択のため単一胚盤胞移植が行われ，高C-p 群それぞれの妊娠率は，22.1％，28.6％，30.8％，15.6％で有意い妊娠率が得られるとの報告がある．しかし，高年齢や複数回単一胚盤差は認められなかった．流産率は 24.2％，100％，25.0％，60.0％で，胞移植を行っても妊娠に至らない反復不成功例患者は，採卵数や良好胚B 群が A，C-g 群に比べ有意に高かった（P ＜0.05）．多胎率は 3.0％，

数が少ない場合も多く，その後の治療に苦慮することも多い．また，胚盤50.0％，25.0％，０％で，B 群がA 群に比べ有意に高かった（P ＜0.005）．

胞２個移植の妊娠率は単一胚盤胞移植に比べ若干の上昇は見られるが，多胎率増加は回避できず，周産期リスクは高くなる．そこで，単一胚盤胞移植の次策として２段階胚移植の有用性をグレード別に比較検討した．

【考察】
２段階胚移植の妊娠率は，胚盤胞１個移植，胚盤胞２個移植に比べ低く，流産率は高くなっていた．また，多胎率は胚盤胞２個移植が胚【方法】

盤胞１個移植，２段階胚移植に比べ高くなっていた．グレード別に比2012年１月～ 2014年３月に Blasto3以上の凍結融解胚移植を行った

較すると，胚盤胞３BB 以上の妊娠率は，Day3良好胚を用いた２段階

35歳以上または移植回数３回目以上の症例を対象とした．胚盤胞１個

胚移植の場合，胚盤胞２個移植と同等の成績が得られている．しかし，移植：417症例583周期（A 群），胚盤胞２個移植：58症例69周期（B 群），

Day3不良胚を用いた２段階胚移植の場合，妊娠率が低く，これは対Day3分割胚と胚盤胞の２段階胚移植：84症例105周期（C 群）において，象症例の平均年齢が高いことが影響している可能性がある．流産率は，胚盤胞のグレード別［Gardner 分類：Blasto3BB 以上，3BB 未満］，CDay3良好胚を用いた２段階胚移植で高く，これは妊娠例の平均年齢群についてはさらに分割胚のグレード別［C-g：良好胚（good），C-p：が比較的高いのも要因の一つと考えられる．また，胚盤胞３BB 未満

不良胚（poor）］に分類し臨床成績を比較検討した．なお，良好胚は６の妊娠率でも，Day3良好胚を用いた２段階胚移植の場合，胚盤胞２

細胞期胚以上かつVeeck 分類 G2以上とした．

個移植と同等の成績が得られていた．これらの結果より，Day3良好胚と組み合わせることで胚盤胞グレードに関わらず胚盤胞２個移植と同【結果】

等の妊娠率が得られることから，単一胚盤胞移植の次策として Day3

患者平均年齢は，A 群37.5歳，B 群37.4歳，C 群38.8歳で，C 群がA，B 群に比べ有意に高かった（P ＜0.05）．平均移植回数は A 群2.4回，B

P-13 未成熟卵体外受精胚移植法における採卵決定時卵胞径と血中エスト
ラジオール値との関係性に対する臨床成績の検討

灘本 圭子 ，今田 絢子 ，中野 真夕 ，尾形 龍哉 ，
福田 愛作１），森本 義晴２）
１）

１）

１）

１）

１）IVF大阪クリニック
２）IVFなんばクリニック

良好胚を用いた２段階胚移植を選択してもよいのではないかと考える．
今後はより症例数を増やし検討していきたい．

【対象と方法】
2007年１月から2013年８月の期間に IVM-IVFを施行した 39歳以下
142症例250周期を対象とした．採卵は最大卵胞径が８mm 以上に達した時点で決定した．同日に hCG を10,000単位もしくは GnRH アゴニストを投与し，36時間後に採卵および E 2値の測定を行った．また，採卵決定時の子宮内膜厚が８mm 以上で新鮮胚移植とし，８mm 未満の場
合は凍結胚移植として前核期にて全胚凍結とした．胚移植は３日目にassisted hatchingを施行後に行った．採卵決定時の最も大きい卵胞と次に大きい卵胞の直径の平均値を算出し８mm 以上11mm 未満を A 群，
11mm 以上13mm 未満を B 群に分けた．さらに A 群では採卵当日に測定した E 2 値が 75pg/mL 未満を a 群，75pg/mL 以上140pg/mL 未満を
ｂ群，140pg/mL 以上をｃ群とし，B 群では E 2値が 90pg/mL 未満をｄ群，90pg/mL 以上200pg/mL 未満をｅ群，200pg/mL 以上を f 群とし，各【目的】
当院では，ART の選択 肢の一つとして未熟卵体外受 精胚移植法

群における採卵数，成熟率，受精率，新鮮胚移植においては着床率，胚移植キャンセル率についてそれぞれ比較検討した．

（IVM-IVF）の臨床応用に取り組んでいる．この方法では基本的に卵巣刺激を必要としないため，多嚢胞性卵巣症候群（PCOS）の患者にお【結果】ける卵巣過剰刺激症候群の回避に有効であり，治療費や来院回数の面

採卵数は A-a 群8.7±5.7個・A-c 群8.7±6.2個に比べ A-b 群13.2±9.9でもストレス低減につながるメリットがある．また我々は，PCOS 患者個（p ＜0.05），着床率は B-d 群０％・B-f5.6％に比べ B-e 群44.4％（p ＜以外の難治性不妊に対しても新たな選択枝として IVM-IVF を行って0.01），ＥＴキャンセル率は A-b 群10.5％に比べ A-a 群38.7％・A-c 群

いる．しかし，その妊娠率は刺激周期体外受精胚移植法と比べ低率で47.1％（p ＜0.05），B-d 群13.0％に比べ B-f 群47.1％（p ＜0.01）が有意あり，今後のさらなる改善が必要であると考えられる．

に高い結果となった．その他の指標には有意な差は認められなかった．

血中エストラジオール値（E 2値）は卵胞発育の重要な指標であり，体外受精においては採卵決定などの有力な情報となっているが，卵胞径【考察】との関係性を指標とした報告はされていない．このため，卵胞発育に

IVM-IVF における採卵時の最適な卵胞径とE 2値の関係は，卵胞径おける卵胞径とE 2値の関係が，IVM-IVF における臨床成績に及ぼすが８～ 11mmであれば E2 値が 75 ～ 140pg/mL，11 ～ 13mmであれば影響について検討したので報告する．

90 ～ 200pg/mLで IVM-IVF ET を行えば卵胞発育の有効な指標となり，高い臨床成績が得られることが示唆された．

70

P-14 長期治療の末に挙児を得た IV 期

子宮内膜症 ART 症例：15 回の採卵手術からの考察

安藤 寿夫１），池田 芳紀２），鈴木 範子１），髙柳 武志１），皆元 裕子１），
松尾 聖子２），甲木 聡２），矢吹 淳司２），北見 和久２），伴野 千尋２），
山口 恭平２），吉田 光紗２），廣渡 芙紀２），松川 哲２），矢野 有貴２），
小林 浩治２），梅村 康太２），岡田 真由美２），河井 通泰２）１）豊橋市民病院 総合生殖医療センター ２）豊橋市民病院 産婦人科

アロマターゼ阻害剤単独あるいは FSH/hMG 併用など，多様なプロトコー
ルで臨み，周期によっては GnRH アンタゴニストをこれらに追加した．刺激が強ければ採卵数は微増したが卵巣は常に低反応であり，変性卵を含めれば毎回卵子を得たものの，MII 卵数は３個が２周期，２個が４周期，
１個が６周期，０個が３周期だった．媒精法については，２回目の採卵後に IVFにて受精卵が得られなかったこともあり，その後 ICSI で実施されてきた．しかし，15回目の採卵手術で得られた１個の卵子に対して IVFを実施した後，健児を得るに至った．この周期では late start HMG 法にて４日間のみ刺激を行い，最後の２日間のFSH/hMG は本症例では未経験の 600 IU/日となった．15回の採卵手術では，累計20個のMII 卵に対して，16個の受精卵（うち１個は３PN）が得られ，タイムラプス観察を経て胚移植に至ったのは６個／６回で，いずれも分割胚期または桑実胚期移植だった．
【考察】

【目的】
当院ではセンターで実施した 70％以上の子宮内膜症手術症例で挙児

本症例では，もともと卵巣予備能が低く子宮内膜症の卵子への影響を得ており，そのほとんどが手術後１年以内の妊娠成立であるが，中にが術前の段階で既に無視できないほど存在したと推察される．このたは術後長期の治療期間を必要とする症例も散見される．今回の報告でめ正常卵巣組織の温存に十分配慮して手術しても，多様な調節卵巣刺は，術後２年を経て妊娠成立に至った難治症例のART 成績を報告し，激に対して常に低反応であった．それでも最終的に挙児を得たのは，若干の考察を行った．

累計での採卵数等で考えれば一般的な患者の何回分の採卵周期に相当するかというような視点からのコメントや，タイムラプス動画などのエ【症例】

ンブリオロジーも含めて的確に情報提供を行い，次回のトライアルにつ

初診時37歳，未経妊で２年以上の不妊歴と３回のAIHの経験を有し，なげていった粘り強さだと考える．ただし，ICSI により高い受精率を

rASRM 分類 IV 期と診断した両側卵巣子宮内膜症の手 術後に１回の維持することができ治療継続意思を安定して得られた良い面はあるも

AIHを経て２年間に15回の採卵手術を実施した．妊娠成立は 15回目ののの，受精はしても一度も良好な最終結果が得られなかったことは課

採卵手術後のみで，その後順調に経過し満期産帝王切開にて健児を得た．

題である．結果論ではあるが，アップデートな医学情報をもう少し早く

帝王切開時の子宮内膜症進行期は II 期だった．この患者の調節卵巣刺から前面に出して IVF をより多く実施していれば，より少ない採卵手激法としては，FSH/hMG 単独強刺激あるいは弱刺激，種々の doseでの術回数で挙児を得ていたかもしれない．

P-15 卵細胞質直径130μm 以上の卵子は Giant oocyte なのかー細胞質直径測定と蛍光免疫染色による検討ー

小森 佑奈，
福永 憲隆，
北坂 浩也，
小沼 よしみ，野老 美紀子，
吉村 友邦，田村 総子，長谷川 望，加藤 道高，中山 要，
青柳 奈央，大野 浩史，渡邊 紘之，木田 雄大，下村 海咲，
辻 暖永，加藤 大和，金山 真己，中野 千春，服部 幸雄，
若原 靖典，近藤 麻奈美，木下 孝一，薬師 義弘，羽柴 良樹，
浅田 義正
浅田レディース勝川クリニック 浅田レディース名古屋駅前クリニック
浅田生殖医療研究所

帯を含めた全体の直径）および蛍光免疫染色を行った．蛍光免疫染色は 130μm 以上の卵子と比較対象群（cIVF 施工後不受精であった MII
期卵子 n=４）に対して行った．免疫染色抗体には雌性染色体を認識す
るAnti-dimethyl-Histone H3Lys9（Millipore），および紡錘体を認識するMonoclonal Anti-α-Tubulin antibody produced in mouse（SIGMA）を使用した．また，核染色には DAPI を使用した．染色結
果を紡錘体および GV 数より３群，A 群（紡錘体または GV 数：２），B
群（紡錘体数または GV 数：１），C 群（紡錘体数または GV 数：０）に分類した．さらに，紡錘体赤道面の長さを画像解析ソフトで測定し，紡錘体数および赤道面長を対象群と比較した．
【結果】
検討期間中，総採卵数中の卵細胞質直径130μm 以上卵子の出現頻度
は 0.25％（25/9974）であった．直径の測定結果は，細胞質が 134.0 ～
155.8μm（ 平 均 値143.0μm）， 透 明 帯を 含 む 合 計 の 長さが 143.2 ～
293.5μm（平均値205.25μm）であった．GOとして選別した 25個中，【目的】

媒精していない状態で研 究解 析した９個は MII 期６個，MI 期２個，ヒト卵子は直径が 120μm 前後，その細胞質直径は 100μm 前後とさGV 期１個であり，免疫染色結果からA 群５/ ９（MII；n= ３，MI；n=

れ る が（Combelles et al., 2002 ），100μm 以 上 の 巨 大 卵 子（ 以 下

１ GV； n= １），B 群２/ ９（MII；n= ２），C 群２/ ９（MII；n= １，MI；

giant oocyte: GO）が確認されることがある．GO は通常の２倍以上染

n= １ ）に分類した．紡錘体の赤道面長は A 群が 7.58 ～ 12.12μm（平色体を有するため MII・MI 期では複数の紡錘体が，germinal vesicle

均9.85μm），B 群が２個とも15.15μmであり，B 群の赤道面長は対象（GV）期では複数の GV が確認され，染色体数異常の原因となり当院群（平均10.23μm）に対し約1.48倍であった．

では原則的に媒精を行わない．しかし，GOを選別する卵細胞質直径の基準は存在しない．そこで GO は通常 MII 期卵子（100μm）の約1.3倍で【考察】あるという報告（Balakier et al., 2002）より，本検討では 130μm 以上を本検討よりMII，MI，GVの各期で細胞質直径130μm 以上の卵子

GO の暫定的な基準とした．そして，この基準が GO の判断基準としてが確認された．そのうち，A 群は紡錘体および GV が２個確認された有用であるか検討を行った．

ため GOであると考えられた．一方，GO の紡錘体は通常の２倍以上相同染色体を有するという報告（Rosenbuch et al., 2002）より，紡錘体【対象および方法】

数は１個だがサイズが対象群の約1.5倍であった B 群は染色体数異常の当院で 2014年１月～５月中に調節卵巣刺激により採卵を行った患者影響を受けたため紡錘体が巨大化した可能性が推察された．よって，本1,320名1,447周期で採取された卵子9,974個を対象とし，明視野下で通検討の基準を満たす卵子の半数以上は GOである可能性が示唆された．

常の MII 期卵子より大きい卵子を選別し，細胞質直径測定を行い130μm

しかし，紡錘体が確認されない群は GOであるか判断できず「130μm 以

以上の卵子を解析対象とした．解析方法はサイズ測定（細胞質直径・透明上」を GO の判断基準として断定できなかった．

71

ポスターセッション

P-16 精子成熟因子としての自然免疫因

子リポカリン２

熟誘導を確認した．
２）LCN2タンパク質を用いて IVFを行い，受精率の検定をした．
３）LCN2タンパク質を用いて精子の体外培養を行い，精子成熟誘導を確認した．

渡邊 仁美，近藤 玄【結果】

京都大学再生医科学研究所 附属再生実験動物施設

野生型マウスの卵管に遊走した精子では，細胞膜ラフトの再構成やGPI アンカー型タンパク質の遊離が起こるが，Lcn2ノックアウトマウス【目的】

ではその変化が顕著に減少していた．

哺乳類動物の精子は，段階的な成熟過程を経て完全な受精能を獲Lcn2 は細胞膜を構成する主要リン脂質の一つであるフォスファチジ

得するが，雌生殖路内での詳細な分子メカニズムはわかっていない．

ルエタノールアミン（PE）と直接結合するとほぼ同時にラフトの再構成を

我々は今回，雌生殖路内で精子成熟を誘導する因子としてリポカリン２誘導した．またこの反応が PKA 活性に依存しているが，PI3-K，Raf-（Lipocalin2: Lcn2）を見出したので報告する．

MAPK，チロシンリン酸化には依存していないことがわかった．

【材料および方法】【考察】

１）EGFP-GPI トランスジェニック雄マウスとLcn2ノックアウト雌マウ

これらの結果より，哺乳類動物にはアルブミンを介する精子成熟メスおよび Lcn2ワイルド雌マウスを交配し，卵管内における精子成

カニズムに加えて，もう一つの精子成熟経路が存在することを示した．

LCN2(+): normal state
Capacitation reactions
proteintyrosine
phosphorylation&
modulation of
Raf-MAPK
pathway

albumin

LCN2

binding
tosaturated acyl-PE

LCN2(-): alternative state

LCN2

図1

72

lipid raft
reorganization

binding
tosaturated acyl-PE

Acrosome reaction

Ca2+

Capacitation reactions
proteintyrosine
phosphorylation&
modulation of
Raf-MAPK
pathway

albumincholester ol
eﬄux

lipid raft
reorganization

Acrosome reaction

cholester ol
eﬄux
Ca2+

P-17 良好胚盤胞を含む２個胚移植の影響
北坂 浩也，福永 憲隆，吉村 友邦，田村 総子，長谷川 望，
中山 要，加藤 道高，青柳 奈央，大野 浩史，渡邊 紘之，
木田 雄大，小森 佑奈，小沼 よしみ，下村 海咲，辻 暖永，
加藤 大和，金山 真己，浅野 恵美子，香ノ木 早紀，小島 正愛，
野老 美紀子，服部 幸雄，若原 靖典，木下 孝一，近藤 麻奈美，
薬師 義弘，羽柴 良樹，浅田 義正
浅田レディース名古屋駅前クリニック 浅田レディース勝川クリニック
浅田生殖医療研究所【目的】
ART において多胎妊娠は深刻な問題の一つであり，母児への医学的なリスク上昇や周産期医療への負担増加など様々な問題点が指摘され，学会からのガイドラインや施設側の努力により移植胚数は制限されてきている．ART で多胎を防ぐには移植胚数を１個にするのが最も有効な手段であるが，高年齢患者，反復不成功症例や患者の強い希望な

２個以上確認できた症例を多胎妊娠とした．また，今回は日本生殖医学会ガイドラインに明記されている良好胚盤胞移植基準を遵守した．
【結果】
移植胚数決定の基準となる患者年齢については SETとDET に差はなく，移植回数については，DET が SET に比較し有意に高い値となった．良好胚盤胞１個を含む２個胚移植または良好胚盤胞のみでの２個胚移植は，良好胚盤胞１個胚移植と比較し，多胎率は有意に高い値であり，妊娠率，妊娠継続率には差はなかった
（表１）.

表１

SET と DET における臨床成績

年齢
移植回数
胚評価
移植周期数
妊娠率
多胎率
流産率
妊娠継続率

SET
34.6 ± 3.7
3.7 ± 3.7b
G
F
P
3405
598
20
48.8a
22.1b
0
1.4b
0.8b
0
23.5
32.6
0
36.7a
13.0b
0

DET
35.0 ± 3.2
6.5 ± 3.1a
G/G
G/F
G/P
191
72
4
55.5a
48.6a
0
45.3a
34.3a
0
22.6
22.9
0
42.9a
37.5a
0

P値
n.s.
<0.05
<0.05
<0.05
n.s.
<0.05

同一項目異符号間に有意差あり

どにより２個胚移植をしているのが現状である．そこで，本検討では多胎率の減少を目的とし，学会ガイドラインに従った良好胚盤胞を１個以上含む胚盤胞２個胚移植の妥当性について，後方視的に検討した．

【考察】

【方法】

胚盤胞２個胚移植は妥当ではなく，年齢や移植回数のみでの胚盤胞の結果より，学会ガイドラインで許容される良好胚盤胞を１個以上含む
2010年１月～ 2013年６月までに胚盤胞を２個胚移植した 40歳未満か２個胚移植決定についても妥当ではないことが示唆された．以上より，

つ移植回数２回以上の 230症例283周期を対象（DET）とし，同期間に妊娠率，妊娠継続率を維持し，多胎率を減少させるには患者背景に関おける胚盤胞を１個移植した 40歳未満かつ移植回数２回以上の 2,506

わらず良好胚盤胞は原則１個移植とするのが望ましいと思われ，胚盤症 例4,023周 期を control 区とした（SET）． 移 植 胚 評 価については

胞の２個胚移植の基準については今後の検討課題であり，ガイドライン

Gardner 分類を使用し，当院独自の評価方法により，グレードを Goodの見直しが望まれる．また，胚盤胞における２個胚移植の現状は患者（G），Fair（F），Poor（P）に評価した．DETについてはそれぞれのグレー

希望が多数を占めており，本検討のような evidence based medicine

ドの組み合わせ毎の（３種類）妊娠率，多胎率，流産率および妊娠継続を用い治療方針を提示し，互いに納得した治療を実施していくことが，率について比較検討した．Good（G）を良好胚盤胞と定義し，胎嚢数が今後のART の質の向上に繋がると思われる．

P-18 カルシウムイオノファ処理による受精補助症例の出生児調査

渡邊 千裕１），水野 里志１），大垣 彩１），古武 由美１），
藤 岡 聡 子 １）， 森 梨 沙 １）， 井 田 守 １）， 福 田 愛 作 １），
森本 義晴２）
１）IVF大阪クリニック
２）IVFなんばクリニック

至った 11例13児を対象とした．この出生児に対して在胎週数，性別，
出産時の身長，体重および先天異常の有無を調査した．なお，体重および身長については在胎週数別に厚生労働省の平成22年度乳幼児身体発育調査と比較した．
【結果】
平均在胎日数は男児268±10日，女児274±０日で，出生時の平均身長は男児47.24±1.84cm，女児48.0±3.54cm，平均体重は男児2,709±401g，女児3,068±81g であった．なお，出生時の身長および体重は，
男児１名を除いて，平成22年度乳幼児身体発育調査のパ－センタイル
曲 線 内に 収 まって いた． 性 別 の 割 合 は男児 84.6 ％（11児 ）， 女 児【目的】
顕微授精後の受精障害症例に対し電気刺激，カルシウムイオノファ

15.4％（２児）と男児出生の割合が高かった．先天異常については１児にダウン症を認めた．

やストロンチウム処理などの卵子活性化処理法による受精補助が行われることがある．しかし，これらの方法に対して児の予後を含めた安【考察】

全性に関する報告は少ない．当院でも受精障害症例に対し，カルシウ

今回の検討の範囲では，出生時の体重や身長にカルシウムイオノファ

ムイオノファ処理を施行している．今回，カルシウムイオノファ処理を処理の影響は認められなかった．これまでの報告では，卵の人為的活施行した症例の児に対し出生児調査を行ったので報告する．

性化を実施した症例の出生時に男児が多いという報告はない．我々の検討では極端に男児の割合が多かったが，症例数が少ないため，この【対象および方法】

偏りがカルシウムイオノファ処理の影響なのかまでは結論付けることが当院で 2004年４月から2014年１月の間に体外受精を実施し，受精障できなかった．ダウン症の発生についても同様である．今後，予後調害と判断された症例に対し，カルシウムイオノファ処理を施行し妊娠に査を続け，特に性比および奇形発生について注意深く見守っていきたい．

73

ポスターセッション

P-19 DNA メチル化修飾の違いを利用した雌雄前核の識別によるヒト異常
受精卵の解析

田中 藍，甲斐 義輝，岩田 京子，湯本 啓太郎，杉嶋 美奈子，
溝口 千鶴，古山 紗也子，的場 由佳，山内 至朗，岡田 直緒，
松田 有貴，井庭 裕美子，見尾 保幸
ミオ・ファティリティ・クリニック リプロダクティブセンター【結果】
2PN 胚において，5mCと5hmC のシグナルがそれぞれ１個検出され，前核期における雌雄前核の識別が可能であることが示された．1PN 胚の解析では，４個において単一前核内に 5mC および 5hmC の両方のシグナルが検出された．また，前核内に 5mC シグナルのみ，前核外に5hmC シグナルが認められ，雄性前核の核膜形成不全と考えられる胚が１個，前核内に 5mC シグナルのみであり，単為発生と考えられる胚が２個確認された．3PN 胚の解析では，5mC シグナル１個と5hmC シ
グナル２個が認められ，多精子受精と考えられる胚19個と，5mC シグ
ナル２個と5hmC シグナル１個が認められ，第２極体放出不全と考えられる胚２個が確認できた．

【目的】
異常受精卵の発生機序を明らかにするため，前核期において，雄性【考察】

ゲノムの５-メチルシトシン（5mC）が５-ヒドロキシメチルシトシン（5hmC）

本研究から，ヒト胚における雌雄前核の識別法が確立され，異常に変換されるメカニズムを利用し，ヒト胚の雌雄前核の識別および解受精卵の発生機序の解析が可能となった．1PN 胚の 50％以上におい析を行った．

て，核膜内に雌雄両ゲノムが認められ，これらは，雌雄ゲノムが融合し，１個の前 核が形成されたと考えられた．これは，これまでの我々の【方法】

TLC 解 析で確認している雌 雄前 核形成以降の前 核融合による1PN

本研究に同意が得られ，凍結保存継続意思がなく，今後治療予定のない正常受 精卵（2PN； n=３）と， 異常受 精卵（1PN； n=7，3PN；胚が認められていない事実とは異なる新たな 1PN 胚発生機序であると考えられる．

n=21）を融解後，前核期において抗5mC 抗体および抗5hmC 抗体を用いた免疫蛍光染色に供した．

P-20 BDI・HADS スコアと精液所見の関連

石澤 亜希，上條 真紀子，拝野 貴之，大野田 晋，鴨下 桂子，
加藤 淳子，山本 瑠伊，杉本 公平，岡本 愛光
東京慈恵会医科大学 産婦人科て通院する患者のうち，不妊原因を男性因子とするものを除き，かつ夫からの了解が得られた 30人（平均36.7歳）より精液採取当日の夫 BDI・HADS スコアリングアンケートを回収した．得られた精液の調整前後の精子数および同運動率との関連を単回帰分析により検討した．
【結果】
夫 BDI平均値：4.67±4.68（S.E.），夫 HADS 平均値：4.18±2.36，処
，処理後
理前精液
（精子数：62.5±47.2×106/mL，運動率：64.6±43.5％）
精液（精 子 数：61.8±43.5×106/mL，運 動率：79.6±18.0 ％）であった．

【目的】
一般不妊治療において夫の精液所見は特に重要である．現在，不安・抑うつ状態の評価として Beck Depression Inventory（BDI）スコアおBDI 値，HADS 値それぞれについて精液所見各変数との相関を見ると，BDI値と処理前精子数間（r=-0.234），HADS値と処理前精子数（r=-0.279）
・処理後運動率（r=-0.217）
間に弱い負の相関を認めた．

よび Hospital Anxiety and Depression Scale（HADS）スコアは医療界において広く汎用されている．今回我々は，夫の精液所見と精神【考察】

状態スケール評価との間に関連があるようであれば，特に一般不妊治

今回の我々の調査結果は一般不妊治療において夫の不安・抑うつ療においては夫側へのなんらかの介入サポートが必要になるのではない状態と精液所見との間に強い関連性はないというものであった．しかかと考えた．

し，症例の積み重ねにより，一定の傾向が認められるかどうかを注視していき，夫への心理的サポートを視野に入れた診療体制を整えてい【方法】
2014年4月～ 6月の間に当院不妊治療外来へ一般不妊治療を目的とし

74

きたい．

P-21 本抗核抗体染色型別にみた多前核

胚出現頻度の検討
１）１）として，抗体価と多前核受精多発症例の発生頻度の関係を解析した．
【結果】

大垣 彩 ，
水野 里志 ，
渡邊 千裕 ，
中野 真夕 ，
松本 寛史 ，
藤岡 聡子１），森 梨沙１），井田 守１），福田 愛作１），森本 義晴２）
１）

高頻度で多前核受精が出現した散在斑紋型（７症例18周期）を対象

１）

１）

１）IVF大阪クリニック
２）IVFなんばクリニック

１. 卵成熟率は授精方法にかかわらずANA 染色型による差は認めなかった．多前核胚出現率は一般体外受精では対象区9.0%（72/798），
均 等 型 11.7%（33/282）， 斑 紋 型 11.7%（58/495）， 核 小 体 型 7.4%
（8/108），散在斑 紋 型50.0%（27/54）， 顕微 授 精では対 象区4.6%（137/2974），均等型4.0%（27/683），斑紋型4.3%（66/1542），核【目的】

小体 型4.9%（５/102），散在斑紋型51.6%（16/31）で授精方法にか

抗核抗体（antinuclear antibody; ANA）は真核細胞の核成分を認識する自己抗体の総称であり，自己免疫疾患などの医療分野においてかわらず散在斑紋型が有意に高率であった．
２. 散在斑紋型抗体価別の多前核受精多発症例の発生頻度は，抗体汎用されている検査対象である．近年，ANA 散在斑紋型患者での体価80倍100%（2/2），160倍100%（3/3），320倍０%（0/1），640倍０%

外受精における卵成熟の異常や多前核受精卵の発生頻度の増加が報（0/1），1,280倍90.9%（10/11）であった．

告されているが，その他の染色型や抗体価の影響についての報告はない．そこで今回，ANA 染色型の相違および抗体価が卵成熟と多前核受精に及ぼす影響を検討した．

【まとめ】
本検討では，これまでの報告とは異なりANA 散在斑紋型の卵成熟への影響は確認できなかったが，多前核胚出現率に関しては有意に高いと【方法と対象】

いう結果であった．また，他の染色型の卵成熟や多前核受精への影響

１. 平成24年１月から平成25年12月に一般体外受精または顕微授精をは認められなかった．散在斑紋型の抗原はセントロメアであり，染色体実施した症例のうち，ANA 検査を実施した 131症例264周期およ分離に関わる部分に対する自己抗体であることから，前核形成過程の段

び 425症例1,221周期を対象とした．ANA 陰性症例を対照区とし階で何らかの影響を与えている可能性が考えられる．しかしながら，抗ANA 染色型（均等型，斑紋型，核小体型，散在斑紋型）と授精

体価と多前核胚出現率に明らかな相関は認められず，多前核胚とならな

方法別に成熟率，多前核胚出現率を後方視的に比較した．

い症例もあることから，さらなる解析が必要である．現在，このような

２. 多前核受精率が 25％以上の症例を多前核受精多発症例と定義し，P-22 ART 施設での oncofertility の現況；当院での経験から

西村 佳与子，本庄 考，
日高 直美，
古賀 真菜美，小原 由香子，得能 典子，
秋吉 弘美，
谷口 加奈子，
愛甲 恵利子，村上 真央，
木下 茜，早田 瞳，竹原 侑希，内村 慶子，国武 克子，泊 博幸，
詠田 由美
IVF 詠田クリニック

抗体陽性患者での正常胚獲得に向けた取り組みを行っている．

性白血病１例，再生不良性貧血１例，POEMS 症候群１例で，平均年齢
は 25.3歳（17歳～ 32歳）であった．３例は化学療法施行後で，全７例が当院での採卵術後に化学療法，放射線療法・造血幹細胞移植，免疫抑制剤療法を予定していた．
【結果】
化学療法後の３例は２カ月～８カ月の化学療法後来院，当院初診日より６〜 26日目に採卵を行った．３例とも低刺激法を行い，１個～７個の卵を採取，すべて卵子凍結を行った．全例採卵後７日以内に化学療法を再開，現在も卵子は凍結中である．化学療法前の４例は原疾患診断後，その治療開始前に当院を紹介受診となった．Antagonist 法２例，short【目的】

法２例で，当院初診日より２〜 23日目に採卵を行った．２個，１個，22個，近年，悪性腫瘍に対する治療法の進歩は目覚ましく，患者の予後は著し24個の卵を採取，２例は卵子凍結１個，１例は胚凍結12個 / 卵子凍結６個，く向上したが，一方で，その治療により卵巣機能障害をきたし，不妊に至る

１例は胚凍結18個であった．全例とも採卵後７日～ 30日以内に化学療法ことも少なくない．そこで，悪性腫瘍治療後の妊孕性低下を考慮し，卵子を開始，１例を除き現在も凍結中である．

や胚凍結を希望する者が増えている．今回，我々は当院でARTを施行した７例の悪性血液疾患患者について，原疾患治療時期とART 施行時期に関して検討したので，悪性血液疾患１例の症例報告とともにここに報告する．

【結語】
悪性血液疾患症例のART 施行では，患者の全身状態について主治医と密接な連携を取り，その後の治療開始時期を遅らせることなく，採卵【症例】

時期を考慮したプロトコールが必要と思われる．

検討した７例の内訳は，ホジキンリンパ腫２例，悪性リンパ腫２例，急75

ポスターセッション

P-23 超音波診断法を用いた凍結融解胚移植（cryo-ET）周期における子宮筋層後壁厚と妊娠転帰の検討

本庄 考，
日高 直美，
西村 佳与子，古賀 真菜美，
小原 由香子，
得能 典子，
秋吉 弘美，
谷口 加奈子，
愛甲 恵利子，村上 真央，
木下 茜，早田 瞳，竹原 侑希，内村 慶子，国武 克子，泊 博幸，
詠田 由美
IVF 詠田クリニック

部後壁筋層の最大径を測定し子宮筋層後壁厚とした．子宮筋層後壁厚分布で中央 値は 15.0mm，25% タイル 値は 11.9mm，75% タイル 値は19.2mmであった．そこで，子宮筋層後壁厚にて 12mm 未満（A 群）12周期，12 ～ 18mm
（B 群）106周期および 19mm 以上（C 群）32周期の３群に分類し，それぞれの流産率，早産率，子宮外妊娠率，満期産率，出生体重などを検討した．なお，今回の検討にあたり37歳以上，筋腫合併
例は対象より除外した．
【結果】
A 群，B 群，C 群の流産率はそれぞれ 41.7％（５/12），31.1％（33/106），31.3％（10/32）でA 群に多い傾向にあり，早産率は 0.0％
（０/12），4.7％（５/106），9.4％（３/32）とC 群において多い傾向にあった．A 群，B 群，C群 の 満 期 産 率と子 宮外 妊 娠 率 は 50.0 ％（ ６/12），63.2 ％（67/106），【目的】

53.1％（17/32），および 8.3％（１/12），0.9％（１/106），6.3％（２/32）と子宮腺筋症は晩婚化，不妊女性の高齢化により遭遇する機会の増加

A 群で子宮外妊娠率が高い傾向にあった．満期産例の出生体重は A 群した疾患である．今回超音波検査での子宮筋層厚測定評価法を用いて2847.1±378.7g，B 群3127.1±329.3g，C 群3070.0±310.2gとB 群と比較

cryo-ET 周期での，子宮筋層後壁厚と妊娠転帰の検討を行ったので報しA 群で有意に低い結果となった．

告する．
【考察】
【対象と方法】
2010年１月より2012年12月までに，cryo-ETを施行した 312周期中，B 群に比較し，子宮筋層後壁厚の薄いA 群では流産率，子宮外妊娠率が高い傾向にあり，子宮筋層後壁厚の肥厚したC 群では早産率，子宮臨床的妊娠に至った 150周期を対象とした．胚凍結は vitrification 法に外妊娠率が高い傾向が認められた．また，出生体重の検討では満期産て Day2 で施行し，融解後 Day3 での分割期胚，１個のみのETを施行において，A 群が B 群に比べ有意に低い結果となった．以上より胚移植した．子宮内膜作製法は全例ホルモン補充周期とした．胚移植決定時時の超音波診断法を用いた子宮筋層後壁厚の測定は妊娠転帰を推測すの経腟 UST にて内子宮口から子宮底部まで子宮内膜を描出し，子宮体る上で，簡便で有用と推測されるものの今後のさらなる検討が必要である．

P-24 ウサギ冷蔵保存卵巣から得られた卵子−顆粒膜細胞複合体の体外発育・成熟培養より得られた成熟卵の受精能の検討，および卵巣の組
織学的解析

森 樹史１），長谷 英里２），杉本 浩伸２），寺村 岳士３），竹原 俊幸３），
岸上 哲士２），松本 和也２），福田 寛二３），細井 美彦２）
１）近畿大学大学院生物理工学研究科 ２）近畿大学生物理工学部
３）近畿大学医学部高度先端総合医療センター

えているのか検討するために，保存温度の違いが卵巣組織（卵母細胞および顆粒膜細胞）の構造に対してどのような影響を及ぼすのか検討した．
【材料および方法】
本実験では，過剰排卵処理を行った雌のニュージーランドホワイト種
から卵巣を採取した．回収した卵巣は単純な組成であるPBS（-）内で37℃，15℃～ 25℃，４℃の条件下で保存した．その後，保存した卵巣から300 ～ 399μmの卵胞を単離し，卵子 - 顆粒膜細胞複合体を回収後，IVG および IVMを行った．また，それぞれの温度で６時間，12時間，24時間卵巣保存を行い，卵巣保存における最適な温度検討を行った．さらに最適温度で保存した卵巣から採取して発育・成熟させた卵子を用いて ICSIを行い受精能力の検討を行った．
次に各温度・時間による卵巣保存後の組織学的解析を行うために切片作製後ヘマトキシリン染色を行いそれぞれの条件下での組織学的差異の検討を行った．さらに細胞傷害性検出を計るために LDHの計測を行い，【目的】

各条件下でのLDH 活性の比較を行った．

哺乳類の卵巣には未成熟な卵母細胞が数多く含まれている．しかし，排卵に至る卵胞はごくわずかであり，多くは未発育な卵胞内に減数分裂を【結果および考察】

停止した状態で存在している．家畜の繁殖・遺伝資源の保存，ヒト不妊治

本研究の結果，卵巣を保存する温度の上昇および保存時間の経過に療への応用などを目的としてこれらの未成熟な卵母細胞を体外発育培養

伴い，IVG-IVM 卵のMII 期卵への発生率は有意に低下することが明ら（in vitro Growth: IVG）および体外成熟培養（in vitro Maturation: IVM）

かとなった．これらの低下は，組織学的解析により卵巣構造の崩壊およを行い，減数分裂再開能や受精後の胚発生能を有する卵子の作出が試み

び細胞死を生じていることが示された．また，卵巣保存溶液中においてられている．

細胞障害を示す乳酸脱水素酵素（LDH）活性が上昇していることが明ら

しかしながら，採取した卵巣から卵母細胞を単離し体外培養を実施すかとなった．しかしながら，４℃の条件下で卵巣を保存した場合，24時

るまでにかかる時間は環境や時間，温度など様々な要因によって常に一間の保存期間を介してもIVG-IVMを経て MII 期卵の獲得が認められ，定ではなく，卵巣内の卵母細胞の質や生存性を保つことができる保存条

その効率は新鮮卵巣と比較して有意な差は認められず卵巣組織において件は未だにわからないことが多いのが現状である．そこで本実験ではウも大きな影響は見られなかった．

サギをモデル動物とし，37℃，15℃～ 25℃（室温），４℃の条件下で卵以上の結果から，保存による卵巣内細胞の死滅や障害を防ぐために巣保存を行い，保存した卵巣から単離した卵母細胞を用いて，MII 期卵は，ウサギ卵巣の保存温度は４℃が最適であり，また，保存期間を経て子への成熟率を評価対象とし，最適な保存条件の検討を行った．その後，も新鮮な卵巣と同様に減数分裂再開能や胚発生能を有する卵子を作出

最適温度での受精能力を調べ，卵巣内の未成熟卵母細胞を用いて減数することが可能であることが明らかとなった．卵巣組織の長期保存が可分裂再開能や胚発生能を有する卵子の作出を試みた．

能となることは，培養開始時間にとらわれずに安定的に卵巣から発生能

また，卵巣の保存条件の違いが卵巣組織においてどのような影響を与76を有する卵母細胞の獲得が可能となると考えられる．

P-25 試薬添加によるマウス初期二次卵胞における２段階培養法の改善の試み

印部 遼子１），森 樹史１），長谷川 昭子３），柴原 浩章３），
寺村 岳士４），竹原 俊幸４），岸上 哲士２），松本 和也２），
福田 寛二４），細井 美彦２）
１）近畿大学大学院生物理工学研究科生物工学専攻
２）近畿大学生物理工学部遺伝子工学科
３）兵庫医科大学産科婦人科学講座
４）近畿大学医学部高度先端総合医療センター

害されることが知られている．そこで，本研究ではマウスを実験モデルとし，ストレスの緩和を中心とした培養環境を作り出すことで効率よく正常な卵母細胞が体外で得られないか検討を行った．
【材料および方法】
本研究では，７日齢のBDF1系統雌マウスの卵巣から採取した初期二次卵胞を用いて２段階の培養を行い，卵胞培養の実験モデルとした．まず，１段階目の培養では，コラーゲンゲルで９日間の包埋培養を行い，その後２段階目の培養として，コラーゲンコートディッシュ上で８日間培養を行った．ここまでの培養過程を体外発育期間とし，本研究ではこの体外発育期間において，酸化ストレスを緩和するためにシステインの誘導体であるN-acetylcysteine（NAC）を含む培養液中で培養を行った．
以上の条件で発育した卵胞を用いて体外成熟培養を行った．評価は主に，非添加区をコントロールとし，成熟卵子の数や形態的変化の観察に【目的】より行った．

哺乳動物の卵巣内には未成熟な原始卵胞が数多く存在している．これらを体外培養して成熟した卵母細胞を効率的に得ることが可能となれ【結果および考察】

ば，卵巣過剰刺激症候群のリスク回避や体外受精—胚移植が事前処理

NAC の培地への添加により，わずかではあるが成熟率を改善するこ無しで任意のタイミングで行える等，ヒト生殖医療分野への応用が期待とができた．NAC の添加濃度は実験結果より，10μM が最も適していされている．実際に，マウス卵巣において初期二次卵胞の体外培養によることが明らかとなった．この成熟率の改善は，NAC の添加により誘導り受精能を持つ卵母細胞の獲得が可能となることが報告されている．しされたシステインがグルタチオンの代謝量を増加させ，その抗酸化作用

かしながら，未だに体外培養を介して正常な卵母細胞を獲得できる効率

により酸化ストレスから卵胞を保護したためと考えられる．以上のことか

は低く，さらなる培養系の改善が必要とされている．特に，体外培養でら，２段階発育培養において培地へのNAC の添加は有効であるというは生体内と異なり，過剰な酸化濃度がストレスの原因となって発生が阻ことを明らかにした．

P-26 連続培養系の確立

てある前核期胚95個を使用した．培養は当院の現在の培養方法である～15μL drop での連続培養は可能なのか？～

渡邊 紘之，福永 憲隆，中山 要，下村 海咲，辻 暖永，
北坂 浩也，吉村 友邦，田村 総子，長谷川 望，加藤 道高，
青柳 奈央，大野 浩史，木田 雄大，小森 佑奈，小沼 よしみ，
加藤 大和，
金山 真己，
中野 千春，浅野 恵美子，
香ノ木 早紀，
小島 正愛，野老 美紀子，服部 幸雄，若原 靖典，近藤 麻奈美，
木下 孝一，薬師 義弘，羽柴 良樹，浅田 義正
浅田レディース名古屋駅前クリニック 浅田レディース勝川クリニック
浅田生殖医療研究所

15μL dropでの単一胚培養で行った．凍結胚を融解し「培養液交換無し」と当院の現在の培養方法である「培養液交換有り」の両実験区で症
例ごとに splitでの培養を行った．観察は Day3，5，6，7 で行い，胚盤胞発生率と良好胚盤胞率の比較を行った．
「培養液交換有り」の実験
区では Day3，5 で培養液交換を行った．Gardner 分類による 3BB 以
上の評価の胚を良好胚盤胞とした．
【結果】「培養液交換無し」の実験区では胚盤胞発生率が Day5，6，7 でそれ ぞ れ 45.8%，54.2%，54.2% となり， 良 好 胚 盤 胞 率 はそ れ ぞ れ
14.6%，31.3%，33.3%となった（n=48）．
一方，「培養液交換有り」の実験区では胚盤胞発生率が Day5，6，7でそれぞれ 46.8%，57.4%，59.6%となり，良好胚盤胞率はそれぞれ
25.5%，44.7%，48.9%となった（n=47）．

【目的】
胚培養において，いかに低酸素環境を維持して培養を行うかという

両実 験 区 間で胚 盤 胞 発 生率， 良 好 胚 盤 胞 率 共に有意 差は 確 認できなかった．

ことが非常に重要である．当院では以前，１well 30μL の培養液量でEmbryo Scope（ES，Unisence）による無培養液交換培養（連続培養）を行い，Day3，5 で移しかえ，観察を行う通常の培養方法と比較して，【考察】
当検討の結果から，有意差は見られなかったが，「培養液交換無し」胚盤胞発生率および良好胚盤胞率が有意に高くなるという結果が得らの実験区では現在の培養方法と比較して良好胚盤胞率が低くなる傾向

れた．しかし，ES １台で同時に培養できる症例は６症例のみであり，が確認できた．このことから，当院で現在使用している15μL の drop は全症例に対して胚盤胞までの連続培養を行うことは不可能である．そ連続培養に適していない可能性が考えられる．以前に行った培養液量

こで，当検討では ES を使用しない連続培養系の確立を目指し，当院

30μL のESを用いた検討において，培養成績は向上している．しかし，で培養に使用している15μL の drop による連続培養が可能かどうかを使用した培養液は当検討と同じだが，培養液量やデバイスの形状といっ確認することを目的として，検討を行った．

た違いがある．そのため，連続培養系の確立に向けて，今後はこの培養
液量やデバイスの形状といった点に着目して検討を行っていく必要がある．

【対象および方法】
検討には融解後の観察に同意を得た，研究利用胚として凍結保存し77ポスターセッション

P-27 採精から媒精までの時間が体外受精の臨床成績に及ぼす影響

工藤 祐輔，有地 あかね，村松 裕崇，伊藤 かほり，
大村 直輝，門前 志歩，遠藤 美幸，向井 直子，小峰 祝敏，
中橋 沙織，野木 世莉那，本藤 早紀，中岡 優希，原 愛弓，
遠藤美和，大竹 由希子，大原 基弘，清水 康史，依光 毅，
己斐 秀樹，河村 寿宏
田園都市レディースクリニック

時間以上の４群に分け，精子運動率，直線速度，正常受精率，Day3良好胚率，Day5胚盤胞発生率，臨床妊娠率，流産率を検討した．検討２.
検討１の結果を踏まえ，同対象のうち採精から３時間以内に精液処理を開始した255症例を対象とし，精液処理終了後から媒精までの時間を３時間未満，３～４時間未満，４時間以上の３群に分け，検討１と同様に臨床成績を検討した．
【結果】
検討1．精液処理開始までの時間別の妻平均年齢（35.43±2.17，35.71±
2.66，35.76±3.15，35.42±2.69）に有意な差は認められなかった．正常
受精率は１時間未満69.5%，１～２時間未満70.0%，２～３時間未満76.1%，
３時間以上64.1％であり，２～３時間未満と比較して３時間以上で有意に【目的】低下した（P＜0.05）．しかし，Day3良好胚率（59.1%，60.9％，64.7％，

精液は脱水や温度により質が変化するため，精液検査も採取後１時間

64.0％），Day5胚盤胞発生率（47.0％，50.0%，55.8％，47.0％），臨床妊以内に検査を始めることが望ましいとされている（WHOラボマニュアル，娠率（23.5%，29.6%，36.5%，27.9%），流産率（0.0%，24.6%，22.2%，

2010）．しかし，ARTを実施するにあたって，個々の患者の事情により，11.1%）に差は認められなかった．検討2. 媒精までの時間別の妻平均年齢

採精してから精液処理を開始するまでに要する時間が異なる．精子は精漿（36.07±2.17，35.34±3.18，35.83±2.69）に有意な差は認められなかった．

と分離することで受精能獲得抑制因子が除去され，capacitationを起こし

正常受 精 率（65.8%，75.2%，72.4%），Day3良 好 胚 率（61.6%，59.2%，やすくなる一方で，精漿が除去された精子は活性酸素等によりDNA 断片

63.7%），Day5胚盤胞発生率（50.7%，51.1%，53.0%），臨床妊娠率（30.0%，

化などの障害を受ける可能性がある．また，洗浄精液は必ずしも洗浄後

26.7%，32.5%），流産率（11.1%，31.6%，33.3%）に差は認められなかった．

すぐに体外受精に用いられるとは限らず，採精から媒精までの至適時間は明らかになっていない．そこで，採精から媒精までの時間経過が臨床成績に及ぼす影響について検討した．

【考察】
採精から精液処理開始までに３時間以上経過すると正常受精率は低下することが明らかとなった．しかし，Day3良好胚率，Day5胚盤胞発生率，【対象と方法】

臨床妊娠率，流産率に差は認められなかった．また，精液処理後から媒検討１．2010年１月〜 2013年12月に採卵を実施し，conventional IVF

精までの時間経過は臨床成績に差は認められなかった．このことから（cIVF）を施行した妻年齢39歳以下のうち，院外にて採精し持参した精液

cIVFを実施するにあたり，採精から３時間以内に精液処理を開始するこ

所見が WHO の基準を満たす 292症例を対象とした．採精時刻から精液とができれば，臨床成績には影響がないことが示唆された．

処理開始までの時間を１時間未満，１～２時間未満，２～３時間未満，３

P-28 胚発育速度に基づく新鮮胚移植の臨床成績

秋吉 俊明，松尾 完，南 志穂，西垣 みなみ，松崎 彰子，
福嶋 倫子，上田 泰子，松尾 恵子，佐藤 春菜，川口 由美，
山口 敦巳，岡本 純英
ART岡本ウーマンズクリニック

胞期到達時間 25.3hr，４細胞期胚 37.8hr および８細胞期胚 53.7hr とし，
基準時間よりも発育速度の速い胚と遅い胚に分けた．
Day2 にて基準値よりも速い胚は，syngamy，２細胞期胚，４細胞期胚の順に A，B，C 群とし，遅い胚を D，E，F 群とした．また，
Day3 にて基準値よりも速い胚を syngamy，２細胞期胚，４細胞期胚および８細胞期胚の順に G，H，I，J 群とし，遅い胚を K，L，M，N群とした．各群の妊娠率，流産率を求めた．
【結果】
各群の妊娠率と流産率は順に，A 群（31.8%；42.9％），B 群（30.4％；【目的】

42.9％），C 群（34.8％；25.0％），D 群（22.2％；0.0％），E 群（25.0％；

当院は，タイムラプスインキュベーターにより，syngamy から４細0.0％）
，F 群（12.5％；100.0％），G 群（27.8％；30.0％），H 群（26.5％；

胞期胚までの胚発育速度が胚盤胞形成の予測となり，８細胞期胚以降

22.2％），I 群（32.3％；30.0％），J 群（34.8％；25.0％），K 群（9.1％；の胚発育速度が胚盤胞形成時期の予測因子になることを報告した．そ

0.0％），L 群（15.4％；50.0％），M 群（6.3％；0.0％），N 群（12.5％；

こで今回は，Day2 および Day3 にて新鮮胚移植（以下 D2ET および

33.3％）であった．胚発育速度による胚盤胞形成と胚盤胞形成時期の基D3ET）を実施した胚の発育速度を先の報告から得た知見と比較し，臨準時間から臨床成績の有意差は認められなかったものの，４細胞期到達

床成績について検討した．

以降の早期到達胚は遅延胚よりも妊娠率が高値となった．流産率は，胚発育速度の速い胚において，胚発育が進むにつれて低値となった．

【方法】
2013 年１月から 10 月に ICSI を施行し，２個以上の受精卵を得た 78
件（D2ET 31 件，D3ET 47 件）を対象とした．すべての胚は ICSI 後，
すぐにタイムラプスインキュベーターによる培養を行った．
D2ET 胚は symgamy，２細胞期到達時間，４細胞期到達時間を測定
し，D3ET 胚は D2ET 測定項目に加え，８細胞期到達時間を測定した．
各基準時間は，先の報告から得られた知見より syngamy 23.3hr，２細

78

【考察】
ET 胚を選択する際，８細胞期到達時間から胚発育速度の速い胚を選択することで，臨床成績の向上の可能性が示唆された．これは，新鮮胚移植において，胚盤胞形成の予測因子による判断よりも胚盤胞形成時期の予測因子による胚選択が有用である可能性が示唆された．

P-29 完全合成ガラス化凍結保存液を用いたヒト胚盤胞の凍結保存−ヒト血清アルブミン（HSA）は
polyvinylpyrrolidone（PVP）
で代替可能か？−沖津 摂，小見山 純一，清川 麻知子，小田 隆司，三宅 馨
三宅医院 生殖医療センター【背景】
ART に用いられる胚培養液や凍結保存液には細胞内浸透圧や pHして利用可能か調べた．
【方法】
廃棄処分となった Day5 凍結保存胚を融解し，３～５時間の回復培養
後に形態評価を行って胚のグレードがほぼ均等になるよう２群に分けた．１% HSA（HSA 群）あるいは１% PVP（PVP 群）添加 mHTF を基礎溶液として作成した凍結・融解液を用い，Kuwayama et al.（2000）の方法に準じてガラス化凍結保存を行った．融解後，２～４時間の回復
培養後に形態評価を行った．なお，再拡張の確認された胚を生存胚とした．次に生存胚の一部を同様の手法で再度凍結・融解し，融解液（TS）
中でデバイス先端から胚が剥離されるまでの時間を最長で 180 秒まで測
定した．
【結果】

の調整，配偶子や胚の dish などへの接着防止を目的としてヒト血清

HSA 群と PVP 群間で凍結融解後の生存率（97.6 vs 87.8%），スコア

アルブミン（HSA）が添加されている．ドナー由来タンパクは潜在維持率（75.0 vs 63.9%）に有意差はなかった．剥離試験において，60

的に未知の病原性疾患への感染の可能性が指摘されており，その解決

秒以内にデバイス先端から胚が剥離した割合は HAS 群で 100% であ策の一つとして高価な組み換え型ヒトアルブミンが開発されている．

ったのに対し PVP 群では 18.5% と有意に低く（p＜0.0001），さらにPolyvinylpyrrolidone（PVP）は N-ビニル-２-ピロリドンの重合したPVP 群では 180 秒経過後でも剥離した胚の割合は 22.2% だった．

高分子化合物であり，化粧品や錠剤（医薬品または食品）の賦形剤や結合剤などとして使用されている．ART 分野では，ICSI 時の精子の【結論】

運動性を緩和する目的で用いられている．また，生存精子分離のため

ヒト胚盤胞の凍結保存において PVP は HSA の代替物として利用可に用いられるパーコールやその代替物質は PVP でコーティングされ能であるが，融解過程においてデバイス先端からの胚の剥離が困難になた直径 15 〜 30nm 程度のケイ酸コロイド粒子から成っている．今回，る現象が見られ，操作性に改善の余地がある．

我々は PVP がヒト初期胚の凍結融解液に含まれる HSA の代替物と79