医療環境委員会主催セミナー

E. coli

医療環境中の給水について考える〜病院の水は安全ですか？〜

2024年1月12日

P. aeruginosa

対象とする微生物とその検査法
大阪大学大学院医学系研究科
変革的感染制御システム開発学寄附講座/感染制御学講座
大阪大学感染症総合教育研究拠点(CiDER)
大阪大学医学部附属病院感染制御部

山本 剛

E. faecium
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control1926年 大腸菌群を協定上水試験法の附則として採用
1932年 大腸菌の判定基準（常水判定基準及試験方法）が設けられた1950年 水道協会協定の上水判定標準と日本薬局方による常水判定標準が厚生省の飲料水検査指針に統一
・「一般細菌数は１ml中100を超えてはならない」ことが定められた。
1966年 水質基準に関する省令（厚生省令第11号）で「大腸菌群は検出してはならない」ことを規定

1978年「第4条に基づく水質基準に関する省令」（厚生省令第56号）それまでの普通寒天培地から標準寒天培地に変更された。
・培地の組成が統一
・糞便性細菌の検出に適した培地から従属栄養細菌の検出に向けた修正
第６回厚生科学審議会生活環境水道部会水質管理専門委員会資料
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

病院内の給水・給湯水における微生物汚染調査
R2A培地

標準寒天培地Methylobacterium spp.
Sphingomonas paucinmobilis

Methylobacterium spp.
Sphingomonas paucinmobilis

Alcaligenes xylosoxidans
Enpedobacter brevis
Chryseobacterium
meningosepticum
Acinetobacter lwoffii
Alcaligenes spp.
Gram Negative Rod

Alcaligenes xylosoxidans
Enpedobacter brevis
Chryseobacterium
meningosepticum
Enterobacter cloacae
Gram Negative Rod（水道法、従属栄養細菌） （水道法、一般細菌）

GVPCα寒天培地（レジオネラ症防止指針推奨培（NHS Pseudomonas属菌培地）地）
Methylobacterium sp.
Legionella pneumophilia
NAC寒天培地

Alcaligenes xylosoxidans
Agrobacterium radiobacter
Burknolderia cepacia
Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas stutzeri
Pseudomonas spp.

Bacillus spp.
Staphylococcus epidermidis

Bacillus spp.,Bacillus cereus
Staphylococcus epidermidis

糸状菌
糸状菌
Mycobacterium mucogenicum
環境感染 Vol.24 No.5 pp.303-311, 2009
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

水の検査に使う寒天培地
日本環境感染学会誌 2009 年 24 巻 5 号 p. 303-311

R2A寒天培地

標準寒天培地Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

水の検査に使う寒天培地
培地の種類

R2A寒天培地

標準寒天培地SCD寒天培地

5g

15g

カゼイン製ペプトン
カゼイン製・肉製ペプトン
大豆製ペプトン
酵母エキス
カザミノ酸
NaCl
ピルビン酸Na
MgSO4・2H2O
KH2PO4
溶性デンプン
ブドウ糖
寒天

0.3g
0.05g
0.3g
0.5g
0.5g
15g

1g
15g

15g

寒天以外の分量

3.2g

8.5g

25g

少多中中多少

栄養分
生育数

0.5g
5g
0.5g
0.5g

2.5g
5g

Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

水道における一般細菌の位置付け
水処理工程における細菌学的な水質改善効果の判定等
・現存量（浄水の保有する生物（細菌）量）の指標
・塩素消毒の効果判定
・糞便汚染の指標
ろ過等の処理で除去できなかった残存細菌に、配管系を含む上水システ
ム全体での微生物の再増殖した菌量も含まれる。
第６回厚生科学審議会生活環境水道部会水質管理専門委員会資料
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

従属栄養細菌
従属栄養細菌とは生育に有機物を必要とする多様な細菌のことで、浄水処理過程や消毒過程での細菌の挙動を評価するのに適している。
また、配水系における塩素の消失や滞留に伴い増加することから、配水系の微生物学的状態を把握するには有用である。

・糞便や下水等に見られる従属栄養細菌は比較的高栄養（現行の標準寒天培地）の培地に成育し、36℃付近で比較的速やかに生育する。
・環境由来の従属栄養細菌は生育し難く、増殖速度も遅い。
第６回厚生科学審議会生活環境水道部会水質管理専門委員会資料
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

大腸菌群
糞便汚染の代替指標菌
水系感染の原因菌は人を含む温血動物の糞便を由来とするため、大腸菌群を検知することで病原体混入の危険性を探知する
温血動物の腸管内に常在する菌の内で最も数の多い

Escherichia属、Citrobacter属、Enterobacter属、およびKlebsiella属を含む腸内細菌目細菌細菌類の構成比率は常に流動的である。したがって、大腸菌群には糞便汚染の指標性は低いという認識が今日の国際的な理解
第６回厚生科学審議会生活環境水道部会水質管理専門委員会資料
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

病院内の給水・給湯水における微生物汚染調査
R2A培地

標準寒天培地Methylobacterium spp.
Sphingomonas paucinmobilis

Methylobacterium spp.
Sphingomonas paucinmobilis

Alcaligenes xylosoxidans
Enpedobacter brevis
Chryseobacteriummeningosepticum
Acinetobacter lwoffii
Alcaligenes spp.
Gram Negative Rod

Alcaligenes xylosoxidans
Enpedobacter brevis
Chryseobacterium
meningosepticum
Enterobacter cloacae
Gram Negative Rod（水道法、従属栄養細菌） （水道法、一般細菌）

GVPCα寒天培地（レジオネラ症防止指針推奨培（NHS Pseudomonas属菌培地）地）
Methylobacterium sp.
Legionella pneumophilia
NAC寒天培地

Alcaligenes xylosoxidans
Agrobacterium radiobacter
Burknolderia cepacia
Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas stutzeri
Pseudomonas spp.

Bacillus spp.
Staphylococcus epidermidis

Bacillus spp.,Bacillus cereusStaphylococcus epidermidis

糸状菌
糸状菌
Mycobacterium mucogenicum
環境感染 Vol.24 No.5 pp.303-311, 2009
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

製薬用水（常水）日本薬局方の医薬品各条で規定されており、第４条に基づく水質基準に適合した水のこと。工業用水や井戸水は各施設で適切な管理を実施する。一時保管する場合は微生物の増殖を抑えるように管理すること。

原薬中間体

Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

製薬用水（精製水）「精製水」は、原水として「常水」を用い、必要な前処理を経て、イオン交換，蒸留，逆浸透（RO）、又は分子量約 6000 以上の物質を除去できる限外ろ過（UF）などを単独であるいは組み合わせて用いたシステムにより製造する。イオ
ン交換，RO又は限外ろ過により製造するときは、微生物の増殖抑制を図るか又は定期的な殺菌処理を行う。

なお、「滅菌精製水（容器入り）」は、「精製水」を密封容器に入れて滅菌したもの、又はあらかじめ滅菌した「精製水」を無菌的な手法により無菌の容器に入れた後、密封したものである．

点眼剤，眼軟膏剤、液剤，カプセル剤，顆粒剤，懸濁剤・シロップ剤など
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

製薬用水（注射用水）「注射用水」は，「常水」にイオン交換，逆浸透等による適切な前処理を行った水又は「精製水」の，蒸留又は超ろ過（RO/UF）により製造する。
・蒸留法からの製造：飛沫同伴による汚染が起こらないように留意する。

・超ろ過法により製造：蒸留法により製造した水と同等の品質の水が恒常的に製造されることが保証される必要がある。
・逆浸透膜又は限外ろ過膜を単独であるいは組み合わせて用いた注射用水製
造：前処理装置を含む製造システム全体によって保証されること。

注射剤、点眼剤、眼軟膏剤など
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

製薬用水の生菌数評価法
製薬用水

常水
精製水
注射用水
平板混釈法
平板混釈法
計測方法
メンブランフィルター法
またはメンブランフィルター法
またはメンブランフィルター法
最小試料量 1mL
1mL
1mL
R2A寒天培地
検査用培地
R2A寒天培地
R2A寒天培地
標準寒天培地
R2A寒天培地 20〜25℃、20〜25℃、20〜25℃、培養温度
または30〜35℃
または30〜35℃
または30〜35℃
標準寒天培地 30〜35℃
R2A寒天培地 4〜7日、4〜7日、4〜7日、培養期間
またはそれ以上
またはそれ以上
またはそれ以上
標準寒天培地 48〜72時間
100/mL
100/mL
10/mL
評価法（標準寒天培地）（R2A寒天培地）（R2A寒天培地）
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

作り直しOsaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

培地の性能試験
R2A寒天培地

Methylobacterium extorquens：NBRC 15911
Pseudomonas fluorescens：NBRC 15842，ATCC 17386など「精製水」中で飢餓状態にした菌液を更に「滅菌精製水」で希釈し，生菌数50 〜200 CFU/mLの菌液を調製する．使用するR2Aカンテン培地に1 mLを接種し，20 〜 25℃で4 〜 7 日間培養するとき，十分な接種菌数の回収が認められなければならない．

Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

培地の性能試験
標準寒天培地黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）：ATCC 6538，NCIMB 9518，
CIP 4.83 又は NBRC 13276
緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）：ATCC 9027，NCIMB 8626，CIP 82.118 又は NBRC 13275
大腸菌（Escherichia coli)：ATCC 8739，NCIMB 8545，CIP 53.126 又はNBRC 3972

調製した菌液を使用する標準カンテン培地に 1 mL を接種し，30 ～ 35℃で48 時間培養するとき，十分な接種菌数の回収が認められなければならない．
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

シート状培地
メンブレンフィルター法
Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control

Osaka University Graduate School of Medicine/CiDER/Hospital Infection Control